(57)【要約】      （修正有）【課題】副作用を低減しつつ比較的安心に網膜変性疾患を予防または緩和することができる網膜変性疾患抑制剤を提供すること。【解決手段】玄米等の穀物由来のフェノール酸類を有効成分とし、フェノール酸類は、ヒドロキシ桂皮酸である網膜変性疾患抑制剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
穀物由来のフェノール酸類を有効成分とする網膜変性疾患抑制剤。
【請求項２】
前記穀物は、玄米、発芽玄米、黒米から選ばれる少なくとも一つである請求項１に記載の網膜変性疾患抑制剤。
【請求項３】
前記フェノール酸類は、下記一般式（１）で示されるヒドロキシ桂皮酸である請求項１または２に記載の網膜変性疾患抑制剤。
【化１】
2019104729.tif 000018
（上記一般式（１）において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ独立に、同一であっても、異なっていてもよく、少なくとも１つが、フェノール性水酸基（ＯＨ基）であって、フェノール性水酸基（ＯＨ基）、水素原子（Ｈ）、アルコキシ基（ＯＸ）、プレニル基のいずれかであり、アルコキシ基（ＯＸ）中、Ｘは、炭素数１〜５のアルキル基を表わす。）
【請求項４】
前記フェノール酸類は、下記一般式（２）で示されるヒドロキシ安息香酸である請求項１または２に記載の網膜変性疾患抑制剤。
【化２】
2019104729.tif 000019
（上記一般式（２）において、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６は、それぞれ独立に、同一であっても、異なっていてもよく、少なくとも１つが、フェノール性水酸基（ＯＨ基）であって、フェノール性水酸基（ＯＨ基）、水素原子（Ｈ）、アルコキシ基（ＯＸ）、プレニル基のいずれかであり、アルコキシ基（ＯＸ）中、Ｘは、炭素数１〜５のアルキル基を表わす。）
【請求項５】
前記ヒドロキシ桂皮酸は、フェルラ酸、シナピン酸、ｐ−クマル酸、コーヒー酸、イソフェルラ酸およびアルテピリンＣから選ばれる少なくとも一つである請求項３に記載の網膜変性疾患抑制剤。
【請求項６】
前記ヒドロキシ安息香酸は、バニリン酸、没食子酸、およびプロトカテキュ酸から選ばれる少なくとも一つである請求項４に記載の網膜変性疾患抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、網膜変性疾患抑制剤に関する。さらに、詳しくは、フェルラ酸等のフェノール酸類を有効成分とする網膜変性疾患抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
加齢黄斑変性症は、加齢を原因とし、網膜が変性することにより発症する。加齢黄斑変性症は、網膜の黄斑に障害が生じ、見ようとするところが見えにくくなる病気である。欧米では、加齢黄斑変性症は、成人の失明原因の第１位となっている。日本では、加齢黄斑変性症は、人口の高齢化と食生活の欧米化により、近年著しく増加し、失明の原因の第４位となっている。特に、日本では、世界に先駆けて高齢化が進んでおり、加齢黄斑変性症の患者が急増している。
【０００３】
加齢黄斑変性症の代表的な疾患として、脈絡膜血管新生を伴う、滲出型加齢黄斑変性症がある。この滲出型加齢黄斑変性症は、抗ＶＥＧＦ抗体を眼球の硝子体に直接注射することによって、網膜が変性することをある程度抑制することができる（特許文献１）。
【０００４】
しかしながら、長期間にわたり、抗ＶＥＧＦ抗体を眼球の硝子体に注射すると、網膜の地図状萎縮が進行してしまうという問題点がある。
【０００５】
また、加齢黄斑変性症等の網膜変性疾患に対する治療薬を慢性的に服用し続けると、治療薬の薬効の低下、治療薬の用量増加による副作用の増加、治療薬と併用する他の薬剤の服用による代謝阻害等の新たな副作用が発生等の問題点が発生する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特表２０１７−５１５５９６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、上記文献に記載の技術では、穀物由来の成分を有効成分として、網膜変性疾患を予防または緩和することができなかった。本発明の目的は、上述の課題を解決する技術を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の網膜変性疾患抑制剤は、穀物由来のフェノール酸類を有効成分とする。また、本発明の網膜変性疾患抑制剤は、穀物由来の下記一般式（１）で示されるヒドロキシ桂皮酸を有効成分とする。
【０００９】
【化１】
2019104729.tif 000002
（上記一般式（１）において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ独立に、同一であっても、異なっていてもよく、少なくとも１つが、フェノール性水酸基（ＯＨ基）である。Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ、フェノール性水酸基（ＯＨ基）、水素原子（Ｈ）、アルコキシ基（ＯＸ）、プレニル基のいずれかであり、アルコキシ基（ＯＸ）中、Ｘは、炭素数１〜５のアルキル基を表わす。）
さらに、本発明の網膜変性疾患抑制剤は、穀物由来の下記一般式（２）で示されるヒドロキシ安息香酸を有効成分とする。
【００１０】
【化２】
2019104729.tif 000003
（上記一般式（２）において、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６は、それぞれ独立に、同一であっても、異なっていてもよく、少なくとも１つが、フェノール性水酸基（ＯＨ基）である。Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６は、それぞれフェノール性水酸基（ＯＨ基）、水素原子（Ｈ）、アルコキシ基（ＯＸ）、プレニル基のいずれかである。アルコキシ基（ＯＸ）中、Ｘは、炭素数１〜５のアルキル基を表わす。）
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、比較的安心に網膜変性疾患を予防または緩和することができる網膜変性疾患抑制剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】穀物由来の有効成分を用いたヒト網膜色素上皮細胞株ＡＲＰＥ１９の酸化ストレスに対する低減効果を示すグラフである。
【図２】穀物由来の有効成分を用いたヒト網膜色素上皮細胞株ＡＲＰＥ１９の酸化ストレスに対する低減効果を示すグラフである。
【図３】穀物由来のフェノール酸を用いたヒト網膜色素上皮細胞株ＡＲＰＥ１９の酸化ストレスに対する低減効果を示すグラフである。
【図４】正常マウスの網膜部の光干渉断層イメージング（ＯＣＴ）を示した写真である。
【図５】穀物由来の有効成分をヨウ素酸ナトリウム誘発網膜変性モデルマウスに経口摂取させた場合のモデルマウスのＯＣＴ測定による網膜外層部の厚みを示したグラフである。
【図６】穀物由来の有効成分をヨウ素酸ナトリウム誘発網膜変性モデルマウスに経口摂取させた場合の網膜電図（ＥＲＧ）である。
【図７】シナピン酸、ルチンをヨウ素酸ナトリウム誘発網膜変性モデルマウスに経口摂取させた場合のモデルマウスのＯＣＴ測定による網膜外層部の厚みを示したグラフである。
【図８】シナピン酸、ルチンをヨウ素酸ナトリウム誘発網膜変性モデルマウスに経口摂取させた場合のモデルマウスの網膜電図（ＥＲＧ）である。
【図９】ｐ−クマル酸、バニリン酸、グリチルリチンをヨウ素酸ナトリウム誘発網膜変性モデルマウスに経口摂取させた場合のモデルマウスのＯＣＴ測定による網膜外層部の厚みを示したグラフである。
【図１０】ｐ−クマル酸、バニリン酸、グリチルリチンをヨウ素酸ナトリウム誘発網膜変性モデルマウスに経口摂取させた場合のモデルマウスの網膜電図（ＥＲＧ）である。
【図１１】フェルラ酸が有する炎症抑制効果を確認するために炎症性分泌たんぱく質（ＩＬ−６）の産生量を測定した結果を示すグラフである。
【図１２】所定の投与方法によって、フェルラ酸等をヨウ素酸ナトリウム誘発網膜変性モデルマウスに経口摂取させた場合のモデルマウスのＯＣＴ測定による網膜外層部の厚みを示したグラフである。
【図１３】所定の投与方法によって、フェルラ酸等をヨウ素酸ナトリウム誘発網膜変性モデルマウスに経口摂取させた場合のモデルマウスの網膜電図（ＥＲＧ）である。
【図１４】フェルラ酸（ＦＡ）を投与したモデルマウスの網膜全体の厚さの実測値を示したグラフである。
【図１５】フェルラ酸（ＦＡ）を投与したモデルマウスの網膜外層部の外顆粒層（ＯＮＬ）の層の厚さの実測値を示したグラフである。
【図１６】穀物由来の有効成分であるフェルラ酸エチル（ＥＦ）を用いたヒト網膜色素上皮細胞株ＡＲＰＥ１９の酸化ストレスに対する低減効果を示すグラフである。
【図１７】穀物由来の有効成分である没食子酸を用いたヒト網膜色素上皮細胞株ＡＲＰＥ１９の酸化ストレスに対する低減効果を示すグラフである。
【図１８】穀物由来の有効成分であるジンロゲンを用いたヒト網膜色素上皮細胞株ＡＲＰＥ１９の酸化ストレスに対する低減効果を示すグラフである。
【図１９】穀物由来の有効成分であるロスマリン酸を用いたヒト網膜色素上皮細胞株ＡＲＰＥ１９の酸化ストレスに対する低減効果を示すグラフである。
【図２０】穀物由来の有効成分であるシリビンを用いたヒト網膜色素上皮細胞株ＡＲＰＥ１９の酸化ストレスに対する低減効果を示すグラフである。
【図２１】各種フェノール酸をヨウ素酸ナトリウム誘発網膜変性モデルマウスに経口摂取させた場合のモデルマウスのＯＣＴ測定による網膜外層部の厚みを示したグラフである。
【図２２】ロスマリン酸をヨウ素酸ナトリウム誘発網膜変性モデルマウスに経口摂取させた場合のモデルマウスのＯＣＴ測定による網膜外層部の厚みを示したグラフである。
【図２３】各種フェノール酸をヨウ素酸ナトリウム誘発網膜変性モデルマウスに経口摂取させた場合のモデルマウスの網膜電図（ＥＲＧ）である。
【図２４】ロスマリン酸をヨウ素酸ナトリウム誘発網膜変性モデルマウスに経口摂取させた場合のモデルマウスの網膜電図（ＥＲＧ）である。
【図２５】正常な網膜外層部の光学顕微鏡写真である。
【図２６】異常を発生している網膜外層部の光学顕微鏡写真である。
【図２７】モデルマウスの外顆粒層（ＯＮＬ）のダメージ出現率を示したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下に、本発明の例示的な実施形態について、図面を参照して、以下に詳しく説明する。ただし、以下の実施形態に記載されている、構成、数値、機能要素などはあくまで一例であり、本発明の技術的範囲をそれらの記載のみに限定する趣旨のものではない。
【００１４】
［第１実施形態］
第１実施形態の網膜変性疾患抑制剤は、穀物由来のフェノール酸類を有効成分とする。網膜変性疾患抑制剤に含まれるフェノール酸類は、天然物である穀物を原料とする。このため、患者は、網膜変性疾患抑制剤を安全にかつ、長期間にわたり摂取することができる。なお、穀物由来のフェノール酸類は、穀物由来の成分を原料として合成された化合物であってもよい。
【００１５】
さらに、患者は、網膜変性疾患抑制剤を長期間にわたって服用しても、当該網膜変性疾患抑制剤による副作用の影響を受けることがない。また、患者は、網膜変性疾患抑制剤と併用する薬剤を必要としない。患者は、網膜変性疾患抑制剤と併用する薬剤を服用する必要がないので、当該薬剤による副作用の影響を受けることがない。このように、本実施形態の網膜変性疾患抑制剤は、長期間にわたって、継続して服用することができ、かつ、生体安定性にきわめて優れている。
【００１６】
日常の食生活において、患者は、特に穀物を多量に摂取しなくても、本実施形態の網膜変性疾患抑制剤を服用することによって、穀物に含まれるフェノール酸類を容易に摂取することができる。ここで、本実施形態の網膜変性疾患抑制剤において、網膜変性疾患を抑制するとは、網膜変性疾患が発症しないように、前もって防ぐことを意味する。また、網膜変性疾患を抑制するとは、網膜変性疾患の発症、進行を遅延すること、当該疾患を治療、改善することを包含する概念である。
【００１７】
本実施形態の網膜変性疾患抑制剤は、網膜にかかる酸化ストレスにより、網膜の代謝機能が低下することに発症する全ての網膜疾患に対して有効に作用する。本実施形態の網膜変性疾患抑制剤は、網膜の視細胞、網膜色素上皮、視神経細胞に作用する。
【００１８】
具体的には、本実施形態の網膜変性疾患抑制剤は、網膜変性疾患、加齢黄斑変性症、滲出型加齢黄斑変性症、萎縮型加齢黄斑変性症、地図状萎縮、網膜光受容体疾患、類嚢胞黄斑浮腫、黄斑円孔、黄斑部毛細血管拡張症、網膜色素変性症、網脈絡膜萎縮症に適用することができる。
【００１９】
さらに、本実施形態の網膜変性疾患抑制剤は、外傷性網膜損傷、医原性網膜損傷、神経節細胞疾患、視神経細胞疾患、緑内障または視神経症、虚血性網膜疾患、未熟児網膜症、網膜血管閉塞、虚血性視神経症に適用することができる。
【００２０】
本実施形態の網膜変性疾患抑制剤は、ヒトに用いてもよいし、ヒト以外の哺乳類動物、魚類に用いてもよい。本実施形態の網膜変性疾患抑制剤は、医薬品、または医薬部外品の素材として用いることができる。
【００２１】
本実施形態の網膜変性疾患抑制剤は、任意の形態を採用することができ、製剤化されてもよい。網膜変性疾患抑制剤は、製剤化されることにより、ヒト、またはヒト以外の哺乳類動物に経口投与することができる。製剤化の形態は、ヒト、またはヒト以外の哺乳類動物に経口投与することができるものであれば、特に限定されるものではない。製剤化の形態としては、例えば、タブレット、ハードカプセル剤、ソフトカプセル剤、錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、液体等を挙げることができる。特に、本実施形態の網膜変性疾患抑制剤は、フェノール酸類を有効成分としているので、液体として取り扱うことができるため、製剤化をし易い。
【００２２】
網膜変性疾患抑制剤を製剤化するために当該網膜変性疾患抑制に製剤原料を配合することができる。製剤原料としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、崩壊抑制剤、吸収促進剤、吸着剤、滑沢剤を挙げることができる。
【００２３】
賦形剤としては、ブドウ糖、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、カカオ脂、硬化植物油、タルク等を挙げることができる。結合剤としては、蒸留水、生理食塩水、エタノール水、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等を挙げることができる。
【００２４】
崩壊剤としては、アルギン酸ナトリウム、カンテン、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、乳糖、アラビアゴム末、ゼラチン、エタノール等を挙げることができる。
【００２５】
崩壊抑制剤としては、白糖、ステアリン、カカオ脂、水素添加油等を挙げることができる。吸収促進剤としては、第四級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウム等を挙げることができる。吸着剤としては、グリセリン、デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、硅酸等を挙げることができる。滑沢剤としては、精製タルク、ステアリン酸塩、ポリエチレングリコール等を挙げることができる。
【００２６】
網膜変性疾患抑制剤は、食品の素材として、食品に配合することができ、食品添加物としても使用することができる。網膜変性疾患抑制剤を配合することができる食品は、特に限定されない。
【００２７】
網膜変性疾患抑制剤を配合することができる食品としては、食パン、菓子パン、ドーナツ、ホットケーキ、ケーキ等の麺麭類、牛乳、加工乳、乳飲料、炭酸飲料、ジュース等の飲料水類を例示することができる。また、網膜変性疾患抑制剤を配合することができる食品としては、クッキー、ビスケット、クラッカー、ウエハース、スナック菓子、チョコレート、キャンディー、錠菓、飴、ガム、グミ、ゼリー等の菓子類を例示することができる。さらに、網膜変性疾患抑制剤を配合することができる食品としては、そば、うどん、中華麺、ジャージャー麺、パスタ、焼きそば用麺等の麺類、ドレッシング、トマトソース、カレーソース、クリームソース、パスタソース等のソース類を例示することができる。
【００２８】
本実施形態の網膜変性疾患抑制剤の有効成分であるフェノール酸類の原料となる穀物は、その成分として、フェノール酸類を含んでいる穀物であれば、特に限定されない。穀物としては、イネ科作物の種子である禾穀類、マメ科作物の種子である菽穀類、禾穀類と似ている穀物として利用される双子葉植物の種子である擬禾穀類を挙げることができる。
【００２９】
禾穀類には、玄米、発芽玄米、米糠、黒米、トウモロコシ（トウキビ）、大麦、小麦、小麦胚芽、ライ麦、カラスムギ、エンバク、ハトムギ、キビ、アワ、ヒエ、タカキビ、コウリャン、ソルガム、シコクビエ、トウジンビエ、テフ、フォニオ、コドラ、マコモ等が含まれる。
【００３０】
菽穀類には、ダイズ、アズキ、リョクトウ、ササゲ、インゲンマメ、ライマメ、ラッカセイ、エンドウ、ソラマメ、レンズマメ、ヒヨコマメ、ヘントウ、ベニバナインゲン、ケツルアズキ、モスビーン、テパリービーン、タケアズキ、フジマメ等が含まれる。
【００３１】
さらに、菽穀類には、ホースグラム、バンバラマメ、ゼオカルパマメ、キマメ、ナタマメ、タチナタマメ、グラスピー、クラスタマメ、シカクマメ、ハッショウマメ、イナゴマメ、ルピナスタマリンド等が含まれる。
【００３２】
擬禾穀類には、ソバ、ダッタンソバ、アマランス（アマランサス、センニンコク）、キヌア等が含まれる。これらの穀物の中でも、フェノール酸類の含有率が高く、有効成分を抽出し易いことから、玄米、古米、小米、有色米、発芽米、発芽玄米、黒米が好ましい。これらの穀物の中でも、玄米は、米糠成分を有しており、この米糠成分には、多くのフェノール酸類が含まれているので、特に好ましい。
【００３３】
本実施形態の網膜変性疾患抑制剤に含有されるフェノール酸類は、フェノール酸、およびフェノール酸と薬学的に許容される塩とを含む。フェノール酸は、下記一般式（１）および下記一般式（２）に示されるように、１つの芳香環に直接または２つの炭素原子を介してカルボキシ基が結合している基本構造を有している。フェノール酸は、１つの芳香環に結合している２つの炭素原子の有無によって、ヒドロキシ桂皮酸に属するフェノール酸と、ヒドロキシ安息香酸に属するフェノール酸とに分類されている。
【００３４】
本実施形態の網膜変性疾患抑制剤は、穀物由来の下記一般式（１）で示されるヒドロキシ桂皮酸を有効成分とする。
【００３５】
【化３】
2019104729.tif 000004
（上記一般式（１）において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ独立に、同一であっても、異なっていてもよく、少なくとも１つが、フェノール性水酸基（ＯＨ基）である。Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ、フェノール性水酸基（ＯＨ基）、水素原子（Ｈ）、アルコキシ基（ＯＸ）、プレニル基のいずれかであり、アルコキシ基（ＯＸ）中、Ｘは、炭素数１〜５のアルキル基を表わす。）
さらに、本実施形態の網膜変性疾患抑制剤は、穀物由来の下記一般式（２）で示されるヒドロキシ安息香酸を有効成分とする。
【００３６】
【化４】
2019104729.tif 000005
（上記一般式（２）において、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６は、それぞれ独立に、同一であっても、異なっていてもよく、少なくとも１つが、フェノール性水酸基（ＯＨ基）である。Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ、フェノール性水酸基（ＯＨ基）、水素原子（Ｈ）、アルコキシ基（ＯＸ）、プレニル基のいずれかであり、アルコキシ基（ＯＸ）中、Ｘは、炭素数１〜５のアルキル基を表わす。）
フェノール酸類には、フェノール酸と薬学的に許容される塩が含まれる。フェノール酸の塩としては、酸付加塩、金属塩、アンモニウム塩、有機アンモニウム塩、有機アミン付加塩、アミノ酸付加塩等が挙げられる。また、フェノール酸類には、穀類中にエステル化合物として存在するフェノール酸エステルが含まれる。フェノール酸類には、上記一般式（１）または（２）で示されるフェノール酸が有しているカルボキシル基と安定したエステル化合物を形成するフェノール酸エステルが含まれる。フェノール酸エステルとしては、γ−オリザノール、フェルラ酸エチルエステル、クロロゲン酸、ロスマリン酸、カフェイン酸フェネチル、生姜由来のジンゲロン等を挙げることができる。
【００３７】
酸付加塩としては、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、リンゴ酸塩、乳酸塩、α−ケトグルタル酸塩、グルコン酸塩、カプリル酸塩等の有機酸塩が挙げられる。
【００３８】
金属塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、亜鉛塩等が挙げられる。
【００３９】
有機アンモニウム塩としては、テトラメチルアンモニウム塩等が挙げられる。有機アミン付加塩としては、モノエタノールアミン塩、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、モルホリン塩、ピペリジン塩等が挙げられる。アミノ酸付加塩としては、グリシン塩、フェニルアラニン塩、リジン塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩等が挙げられる。
【００４０】
また、本実施形態の網膜変性疾患抑制剤には、有効成分であるフェノール酸類以外の他の穀物由来の成分を含んでいてもよい。フェノール酸類以外の他の穀物由来の成分としては、糖タンパク、ミネラル、ビタミン、フィチン酸、アラビノキシラン、イノシトール、ギャバ（アミノ酸）、ビオチン、葉酸、コリン、多糖体、抗酸化物質、不飽和脂肪酸等を挙げることができる。
【００４１】
網膜変性疾患抑制剤がフェノール酸類以外の他の穀物由来の成分を含むことによって、当該穀物由来の成分に起因する効果を得ることができる。
【００４２】
さらに、網膜変性疾患抑制剤がフェノール酸類以外の穀物由来の成分を含むことによって、フェノール酸類に由来する効果と当該穀物由来の成分に由来する効果との相乗効果を得ることができる。
【００４３】
ヒトに対する網膜変性疾患抑制剤の摂取量は、患者の年齢、患者の病状に応じて適宜設定することができる。例えば、１日あたり、１０〜７００ｍｇであることが好ましい。上記摂取量が１０ｍｇ以上であると、網膜変性疾患の原因である酸化ストレスを効果的に抑制することができるため好ましい。また、上記摂取量が７００ｍｇ以下であると、網膜変性疾患抑制剤の摂取量が過剰とならないため好ましい。
【００４４】
ヒト以外の哺乳類動物に対する網膜変性疾患抑制剤の摂取量は、当該動物の年齢、当該動物の病状に応じて適宜設定することができる。例えば、１日あたり、１〜１００ｍｇ／ｋｇであることが好ましい。上記摂取量が１ｍｇ以上であると、網膜変性疾患の原因である酸化ストレスを効果的に抑制することができるため好ましい。また、上記摂取量が１００ｍｇ以下であると、網膜変性疾患抑制剤の摂取量が過剰とならないため好ましい。
【００４５】
［第２実施形態］
第２実施形態の網膜変性疾患抑制剤は、下記一般式（１）で示されるヒドロキシ桂皮酸が有効成分であることを特徴とする。下記一般式（１）で示されるヒドロキシ桂皮酸は、桂皮酸のヒドロキシ誘導体である。玄米等の穀物中には、ヒドロキシ桂皮酸がヒドロキシ安息香酸よりも多く含まれている。
【００４６】
穀物に含まれているヒドロキシ桂皮酸は、配糖体、キナ酸、シキミ酸等のカルボン酸が付加したエステルの形態で存在している。しかしながら、これらのエステルの形態で存在しているヒドロキシ桂皮酸は、凍結、殺菌、発酵等の処置により、容易に遊離する。このため、ヒドロキシ桂皮酸は、容易に生成される。このように、本実施形態の網膜変性疾患抑制剤は、穀物に多く含まれており、かつ、容易に生成することができるヒドロキシ桂皮酸を有効成分としている点に大きな技術的意義を有する。
【００４７】
【化５】
2019104729.tif 000006
（上記一般式（１）において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ独立に、同一であっても、異なっていてもよく、少なくとも１つが、フェノール性水酸基（ＯＨ基）である。Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、フェノール性水酸基（ＯＨ基）、水素原子（Ｈ）、アルコキシ基（ＯＸ）、プレニル基のいずれかであり、アルコキシ基（ＯＸ）中、Ｘは、炭素数１〜５のアルキル基を表わす。）
上記一般式（１）で示されるヒドロキシ桂皮酸は、Ｃ６−Ｃ３骨格を有するポリフェノールである。上記一般式（１）で示されるヒドロキシ桂皮酸は、芳香環に対して、２つの炭素原子を介して１つのカルボキシ基が結合している基本構造を有している。
【００４８】
上記一般式（１）で示されるヒドロキシ桂皮酸は、芳香環に結合しているカルボキシ基を基準として、メタ位とパラ位に３つの置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３を有している。ヒドロキシ桂皮酸が有している３つの置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３のうち、少なくとも１つは、フェノール性水酸基（ＯＨ基）である。ヒドロキシ桂皮酸が有している３つの置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ独立に、同一であっても異なっていてもよい。
【００４９】
上記一般式（１）において、ヒドロキシ桂皮酸が有している３つの置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、フェノール性水酸基（ＯＨ基）、水素原子（Ｈ）、アルコキシ基（ＯＸ）、プレニル基のいずれかである。上記一般式（１）において、アルコキシ基（ＯＸ）中、Ｘは、炭素数１〜５のアルキル基を示す。
【００５０】
炭素数１〜５のアルキル基としては、メチル基、エチル基、n−プロピル基、i−プロピル基、n−ブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、ネオペンチル基、イソペンチル基、sec-ペンチル、３-ペンチル、tert-ペンチル等を挙げることができる。
【００５１】
上記一般式（１）において、ヒドロキシ桂皮酸が有している置換基Ｒ２は、フェノール性水酸基（ＯＨ基）であることが好ましい。ヒドロキシ桂皮酸が有している置換基Ｒ２がフェノール性水酸基（ＯＨ基）であると、このフェノール性水酸基（ＯＨ基）が１つの芳香環に２つの炭素原子を介して結合しているカルボキシ基と共役系となり、電子的に安定となる。このため、穀物由来のヒドロキシ桂皮酸は、置換基Ｒ２にフェノール性水酸基（ＯＨ基）を有していることが多い。
【００５２】
上記一般式（１）において、ヒドロキシ桂皮酸は、３つの置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３のいずれかにプレニル基を有していてもよい。プレニル基は、グリコシルホスファジルイノシトール等のように、タンパク質の細胞膜への結合を促進する炭化水素基である。
【００５３】
プレニル基を有するヒドロキシ桂皮酸は、網膜に存在するタンパク質を構成する細胞の細胞膜と容易に結合する。プレニル基は、母核となるヒドロキシ桂皮酸の生理活性に影響を与える。網膜に存在するタンパク質のプレニル化は、プレニル基が当該タンパク質のＣ末端のシスティン残基に結合することによって起こる。
【００５４】
プレニル基は、炭素数５のイソプレンを構成単位とする炭化水素基の総称である。プレニル基は、イソプレンの構成単位の数によって、特定される。具体的には、以下のプレニル基を例示できる。イソプレンの構成単位が１であって、５個の炭素を有するジメチルアリル基。イソプレンの構成単位が２であって、１０個の炭素を有するゲラニル基。イソプレンの構成単位が３であって、１５個の炭素を有するファルネシル基。イソプレンの構成単位が４であって、２０個の炭素を有するゲラニルゲラニル基。イソプレンの構成単位が５であって、２５個の炭素を有するゲラニルファルネシル基。イソプレンの構成単位が６であって、３０個の炭素を有するヘキサプレニル基。イソプレンの構成単位が８であって、４０個の炭素を有するオクタプレニル基。イソプレンの構成単位が１０であって、５０個の炭素を有するデカプレニル基等である。
【００５５】
本実施形態の網膜変性疾患抑制剤に含まれるヒドロキシ桂皮酸は、フェルラ酸、シナピン酸、ｐ−クマル酸、コーヒー酸、イソフェルラ酸およびアルテピリンＣから選ばれる少なくとも一つであることを特徴とする。すなわち、ヒドロキシ桂皮酸は、フェルラ酸、シナピン酸、ｐ−クマル酸、コーヒー酸、イソフェルラ酸、およびアルテピリンＣから選ばれる１種類のヒドロキシ桂皮酸であってもよい。また、ヒドロキシ桂皮酸は、上記の２種類以上のヒドロキシ桂皮酸を組み合わせたヒドロキシ桂皮酸であってもよい。具体的に、本実施形態の網膜変性疾患抑制剤に含まれるヒドロキシ桂皮酸は、フェルラ酸とシナピン酸とを混合した酸、フェルラ酸とｐ−クマル酸とを混合した酸、フェルラ酸とコーヒー酸とを混合した酸であってもよい。これらの混合した酸において、それぞれのヒドロキシ桂皮酸の含有量は、適宜調整することができる。
【００５６】
上記一般式（１）で表わされるヒドロキシ桂皮酸としては、穀物に含まれる含有量が多いことから、フェルラ酸、シナピン酸、およびｐ−クマル酸が好ましく、フェルラ酸が最も好ましい。
【００５７】
フェルラ酸（３−メトキシ−４−ヒドロキシ桂皮酸）は、以下の構造式を有し、いわゆる「フィトケミカル」として穀物の細胞壁に最も多く存在するフェノール酸である。上記一般式（１）において、Ｒ１がメトキシ基（ＯＣＨ３）であり、Ｒ２がフェノール性水酸基（ＯＨ基）であり、Ｒ３が水素原子（Ｈ）である場合がフェルラ酸である。構造式を以下に示す。以下の構造式からも明らかなように、フェルラ酸は、桂皮酸を主骨格とする分子構造を有するポリフェノールの一種である。
【００５８】
【化６】
2019104729.tif 000007
フェルラ酸は、玄米に含まれる米糠に存在するフェノール酸である。米糠には、γ−オリザノール類が含まれており、これが加水分解されることにより、フェルラ酸が遊離するからである。また、フェルラ酸は、小麦、大麦、コーヒー豆、リンゴの種子、アーティチョークの種子、ピーナッツ、オレンジの種子、パイナップルの種子等にも含まれる。フェルラ酸は、玄米、小麦等の穀物類の糊粉層に１００〜４００ｍｇ／ｋｇ含まれている。フェルラ酸は、分子量が１９０程度であるので、水によく溶ける。このため、フェルラ酸は、液体として取り扱うことができる。なお、フェルラ酸は、水溶性であるので静脈内に投与することもできる。
【００５９】
フェルラ酸は、玄米、発芽玄米、黒米等の穀物を原料とし、公知の製造方法によって、製造される。穀物を原料としたフェルラ酸の製造方法は、特に限定されるものではない。例えば、フェルラ酸は、玄米を精米して生成する米糠から米油を製造する工程において排出される米糠ピッチを原料として利用して、製造することもできる。
【００６０】
具体的には、ヒドロキシ基およびアルキル基を有し、水にも油にも溶解する低級アルコールを米糠ピッチに添加し、米糠ピッチに含まれるγ−オリザノール類のアルカリ加水分解を行なってもよい。ヒドロキシ基およびアルキル基を有し、水にも油にも溶解する低級アルコールを採用することにより、アルカリ加水分解に用いられるアルカリ水溶液と、米糠ピッチとが懸濁する状態となる。このため、米糠ピッチに含まれるγ−オリザノール類のアルカリ加水分解が容易に起こる。
【００６１】
また、上記一般式（１）で示されるヒドロキシ桂皮酸は、下記構造式で表わされるｐ−クマル酸であってもよい。ｐ−クマル酸は、天然に最も多く存在し、穀類の中でもピーナツに多く含まれている。p−クマル酸は、常温で固体であり、結晶構造を有しており、水には、僅かに溶ける。p−クマル酸は、エタノールやジエチルエーテルには良く溶ける。このような、p−クマル酸の性質を利用して、本実施形態の網膜変性疾患抑制剤に好適に適用することができる。上記一般式（１）において、Ｒ１が水素原子（Ｈ）であり、Ｒ２がフェノール性水酸基（ＯＨ基）であり、Ｒ３が水素原子（Ｈ）である場合がp−クマル酸である。構造式を以下に示す。
【００６２】
【化７】
2019104729.tif 000008
さらに、上記一般式（１）で表わされるヒドロキシ桂皮酸は、下記構造式で表わされるシナピン酸であってもよい。シナピン酸は、天然に存在し、穀類であるクロガラシ種子に多く含まれている。シナピン酸は、穀類の細胞壁において、シナピン酸それ自身、またはフェルラ酸と二量体を形成できる。二量体を形成したシナピン酸は、細胞壁構造に対してジフェルラ酸と類似した効果を有する。上記一般式（１）において、Ｒ１がメトキシ基（ＯＣＨ３）であり、Ｒ２がフェノール性水酸基（ＯＨ基）であり、Ｒ３がメトキシ基（ＯＣＨ３）である場合がシナピン酸である。構造式を以下に示す。
【００６３】
【化８】
2019104729.tif 000009
上記一般式（１）で表わされるヒドロキシ桂皮酸は、下記構造式で表わされるコーヒー酸であってもよい。コーヒー酸は、カフェ酸、カフェイン酸とも呼ばれ、リグニン生合成の重要な中間体であるため、穀物に含まれている。コーヒー酸は、キナ酸とエステルを形成してクロロゲン酸となる。すなわち、コーヒー酸は、エステルとして天然に広く存在しており、本実施形態の網膜変性疾患抑制剤に好適に適用することができる。上記一般式（１）において、Ｒ１がフェノール性水酸基（ＯＨ基）であり、Ｒ２がフェノール性水酸基（ＯＨ基）であり、Ｒ３が水素原子（Ｈ）である場合がコーヒー酸である。構造式を以下に示す。
【００６４】
【化９】
2019104729.tif 000010
上記一般式（１）で表わされるヒドロキシ桂皮酸は、下記構造式で表わされるイソフェルラ酸であってもよい。イソフェルラ酸は、加熱しても水に溶解しない。上記一般式（１）において、Ｒ１が水素原子（Ｈ）であり、Ｒ２がメトキシ基（ＯＣＨ３）であり、Ｒ３がフェノール性水酸基（ＯＨ基）である場合がイソフェルラ酸である。構造式を以下に示す。構造式からも明らかなように、イソフェルラ酸は、芳香環に結合しているカルボキシル基を基準にパラ位にある置換基Ｒ２がフェノール性水酸基（ＯＨ基）ではなく、メトキシ基（ＯＣＨ３）となっている。イソフェルラ酸は、芳香環に結合しているフェノール性水酸基（ＯＨ基）の位置がフェルラ酸と異なるため、その化学的性質および物理的性質が異なっている。例えば、本実施形態においては、フェルラ酸とイソフェルラ酸を混合した酸を本実施形態の網膜変性疾患抑制剤の有効成分としてもよい。
【００６５】
【化１０】
2019104729.tif 000011
また、上記一般式（１）で表わされるヒドロキシ桂皮酸は、下記構造式で表わされるアルテピリンＣ（ＡＣ）であってもよい。アルテピリンＣ（ＡＣ）は、アレクリン系を起源植物とするプロポリスだけに含まれている成分である。アルテピリンＣ（ＡＣ）は、ヒトに対する副作用を有しない。アルテピリンＣ（ＡＣ）は、置換基にプレニル基を有している。アルテピリンＣ（ＡＣ）が有しているプレニル基によって、アルテピリンＣ（ＡＣ）は、網膜細胞に有効に作用する。上記一般式（１）において、Ｒ１がプレニル基（Ｐｒｅ基）であり、Ｒ２がフェノール性水酸基（ＯＨ基）であり、Ｒ３がプレニル基（Ｐｒｅ基）である場合がアルテピリンＣ（ＡＣ）である。構造式を以下に示す。
【００６６】
【化１１】
2019104729.tif 000012
本実施形態の網膜変性疾患抑制剤は、２種類以上のヒドロキシ桂皮酸を組み合わせたヒドロキシ桂皮酸を採用してもよい。２種類以上のヒドロキシ桂皮酸を組み合わせたヒドロキシ桂皮酸である場合には、２種類以上のヒドロキシ桂皮酸のそれぞれが発揮する生体上の効果以上の相乗効果が発揮される。例えば、本実施形態の網膜変性疾患抑制剤に含まれるヒドロキシ桂皮酸がフェルラ酸、およびｐ−クマル酸であり、当該フェルラ酸と当該ｐ−クマル酸とが所定の割合にて混合されていてもよい。
【００６７】
［第３実施形態］
第３実施形態の網膜変性疾患抑制剤は、下記一般式（２）で示されるヒドロキシ安息香酸を有効成分であることを特徴とする。下記一般式（２）で示されるヒドロキシ安息香酸は、安息香酸のヒドロキシ誘導体である。玄米等の穀物中には、ヒドロキシ安息香酸が含まれている。
【００６８】
【化１２】
2019104729.tif 000013
（上記一般式（２）において、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６は、それぞれ独立に、同一であっても、異なっていてもよく、少なくとも１つが、フェノール性水酸基（ＯＨ基）である。Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６は、それぞれ、フェノール性水酸基（ＯＨ基）、水素原子（Ｈ）、アルコキシ基（ＯＸ）、プレニル基のいずれかであり、アルコキシ基（ＯＸ）中、Ｘは、炭素数１〜５のアルキル基を表わす。）
上記一般式（２）で示されるヒドロキシ安息香酸は、Ｃ６−Ｃ１骨格を有するポリフェノールである。上記一般式（２）で示されるヒドロキシ安息香酸は、芳香環の炭素原子に１つのカルボキシ基が結合している基本構造を有している。上記一般式（２）で示されるヒドロキシ安息香酸は、芳香環に結合しているカルボキシ基を基準として、メタ位とパラ位に３つの置換基Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６を有している。
【００６９】
ヒドロキシ安息香酸が有している３つの置換基Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６のうち、少なくとも１つは、フェノール性水酸基（ＯＨ基）である。ヒドロキシ安息香酸が有している３つの置換基Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６は、同一であっても異なっていてもよい。
【００７０】
上記一般式（２）において、ヒドロキシ安息香酸が有している３つの置換基Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６は、フェノール性水酸基（ＯＨ基）、水素原子（Ｈ）、アルコキシ基（ＯＸ）、プレニル基のいずれかである。上記一般式（２）において、アルコキシ基（ＯＸ）中、Ｘは、炭素数１〜５のアルキル基を表わす。
【００７１】
炭素数１〜５のアルキル基としては、メチル基、エチル基、n−プロピル基、i−プロピル基、n−ブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、ネオペンチル基、イソペンチル基、sec-ペンチル、３-ペンチル、tert-ペンチル等を挙げることができる。
【００７２】
上記一般式（２）において、ヒドロキシ安息香酸が有している置換基Ｒ５は、フェノール性水酸基（ＯＨ基）であることが好ましい。
【００７３】
上記一般式（２）において、ヒドロキシ安息香酸は、上記一般式（１）で示されるヒドロキシ桂皮酸と同様に、３つの置換基Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６のいずれかにプレニル基を有していてもよい。
【００７４】
本実施形態の網膜変性疾患抑制剤に含まれるヒドロキシ安息香酸は、バニリン酸、没食子酸、プロトカテキュ酸から選ばれる少なくとも一つであることを特徴とする。ヒドロキシ安息香酸は、バニリン酸、没食子酸、プロトカテキュ酸から選ばれる１種類のヒドロキシ安息香酸であってもよい。また、ヒドロキシ安息香酸は、２種類以上のヒドロキシ安息香酸を組み合わせたヒドロキシ安息香酸であってもよい。
【００７５】
上記一般式（２）で表わされるヒドロキシ安息香酸としては、穀物に含まれる含有量が多く、フェルラ酸を生成する過程において得られる、バニリン酸が最も好ましい。
【００７６】
バニリン酸は、以下の構造式を有する。バニリン酸は、ジヒドロキシ安息香酸の誘導体の一種であり、バニロイド類の一種である。バニリン酸は、バニリンの酸化により得られ、第２実施形態で説明したフェルラ酸からバニリンを製造する際の中間体として存在する。バニリン酸は、穀物のみならず、漢方薬として採用されているトウキの根にも多く含まれる。なお、バニリン酸は、ヒトが緑茶を飲用した際の茶カテキンの代謝生成物の一つでもある。上記一般式（２）において、Ｒ４が水素原子（Ｈ）であり、Ｒ５がフェノール性水酸基（ＯＨ基）であり、Ｒ６がメトキシ基（ＯＣＨ３）である場合がバニリン酸である。構造式を以下に示す。
【００７７】
【化１３】
2019104729.tif 000014
さらに、上記一般式（２）で表わされるヒドロキシ安息香酸は、没食子酸（３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸）であってもよい。没食子酸は、クルミ、カカオ、その他のナッツ類等の穀物に含まれている。没食子酸は、３つのフェノール性水酸基（ＯＨ基）を有する。すなわち、上記一般式（２）で表わされるヒドロキシ安息香酸が有する３つの置換基Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６の全てがフェノール性水酸基（ＯＨ基）である。没食子酸は、白色の吸湿性の結晶であり、水溶液とすることができる。  上記一般式（２）において、Ｒ４がフェノール性水酸基（ＯＨ基）であり、Ｒ５がフェノール性水酸基（ＯＨ基）であり、Ｒ６がフェノール性水酸基（ＯＨ基）である場合が没食子酸である。構造式を以下に示す。
【００７８】
【化１４】
2019104729.tif 000015
また、上記一般式（２）で表わされるヒドロキシ安息香酸（３，４−ジヒドロキシ安息香酸）は、プロトカテキュ酸であってもよい。プロトカテキュ酸は、穀物、タマネギの皮、よもぎ等に存在する。プロトカテキュ酸は、フェノール性水酸基（ＯＨ基）をメタ位とパラ位に有しており、ヒドロキシ桂皮酸であるコーヒー酸とも類似するポリフェノールである。プロトカテキュ酸は、コーヒー酸と同様に抗酸化作用を有する。プロトカテキュ酸は、抗酸化作用を発揮し、網膜細胞に有効に作用する。上記一般式（２）において、Ｒ４がフェノール性水酸基（ＯＨ基）であり、Ｒ５がフェノール性水酸基（ＯＨ基）であり、Ｒ６が水素原子（Ｈ）である場合がプロトカテキュ酸である。構造式を以下に示す。
【００７９】
【化１５】
2019104729.tif 000016
以上、実施形態を参照して本願発明を説明したが、本願発明は上記実施形態に限定されるものではない。本願発明の構成や詳細には、本願発明のスコープ内で当業者が理解し得る様々な変更をすることができる。また、それぞれの実施形態に含まれる別々の特徴を如何様に組み合わせた技術も本発明の範疇に含まれる。
【００８０】
［実施例］
以下、本発明の実施形態について、実施例を用いて説明するが、本発明は、当該実施例に何ら限定されるものではない。
【００８１】
＜ヒト網膜色素上皮細胞株を用いた酸化ストレスに対する低減効果の確認＞
（実施例１）
網膜の構造およびその機能を維持するためには、網膜細胞の代謝機能により、古くなった視細胞の貪食・消化、および視細胞への栄養供給を行なう必要がある。
【００８２】
実施例１においては、ヒト網膜色素上皮細胞株として、ＡＲＰＥ−１９細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）社製品）を採用した。実施例１においては、当該ＡＲＰＥ−１９細胞に網膜変性疾患の原因となる酸化ストレスを与えることによって、穀物由来のフェノール酸類が有する酸化ストレスに対する低減効果を確認した。なお、ＡＲＰＥ−１９細胞は、生物材料リソースセンター（ＡＴＣＣ）から容易に入手可能であり、当業界の技術・研究分野において、最も多く使われているヒト網膜色素上皮細胞株である。
【００８３】
フェノール酸類の酸化ストレスに対する低減効果を確認することにより、当該フェノール酸類を有効成分とする網膜変性疾患抑制剤を評価した。網膜変性疾患抑制剤の評価は、各種フェノール酸類の添加による、ＡＲＰＥ−１９細胞の細胞生存率（％）により行なった。
【００８４】
具体的な評価は、以下の通りである。ＡＲＰＥ−１９細胞に対して酸化ストレスを与える前からＡＲＰＥ−１９細胞にフェノール酸類を添加して（以下、「前処理」：pre-treat）、ＡＲＰＥ−１９細胞の細胞生存率（％）を算出することによって、フェノール酸類の酸化ストレスの予防効果を確認した。
【００８５】
また、ＡＲＰＥ−１９細胞に対して酸化ストレスを与えた後にＡＲＰＥ−１９細胞にフェノール酸類を添加して（以下、「後処理」：post-treat）、ＡＲＰＥ−１９細胞の細胞生存率（％）を算出することによって、フェノール酸類の酸化ストレスの抑制効果を確認した。
【００８６】
実施例１の前処理（pre-treat）では、ＡＲＰＥ−１９細胞を９６ｗｅｌｌｐｌａｔｅに５，０００  ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの細胞密度で播種し、２時間以上培養した。その後、９６ｗｅｌｌｐｌａｔｅに培養されたＡＲＰＥ−１９細胞に、薬液であるフェノール酸類として、１.０ｍＭのフェルラ酸を採用し、１２〜１８時間培養した。
【００８７】
１２〜１８時間経過後、ＡＲＰＥ−１９細胞に酸化ストレスを与えるために過酸化水素水溶液（最終濃度０.２〜０.４ｍＭ）を当該ＡＲＰＥ−１９細胞に曝露した。その後、ＡＲＰＥ−１９細胞を１時間培養後、ＡＲＰＥ−１９細胞の培地をフレッシュな培地に置換した。
【００８８】
さらに、１２〜１８時間経過後、発色試薬として、水溶性テトラゾリウム塩（ＷＳＴ−８）を用いた。水溶性テトラゾリウム塩（以下、「ＷＳＴ−８」とする。）試薬をＡＲＰＥ−１９細胞に添加し、１.５〜３.０時間程度培養した。
【００８９】
ここで、ＷＳＴ−８は、還元されると４５０〜４６０ｎｍに極大吸収を持つ水溶性ホルマザンを生成する。水溶性ホルマザンの量は、生存するＡＲＰＥ−１９細胞の数に比例する。水溶性ホルマザンが生成した溶液の吸光度を測定することにより、９６ｗｅｌｌｐｌａｔｅに培養されたＡＲＰＥ−１９細胞のうち、生存するＡＲＰＥ−１９細胞の生存度合を測定した。生存するＡＲＰＥ−１９細胞の数から、ＡＲＰＥ−１９細胞の細胞生存率（％）を算出した。
【００９０】
実施例１の前処理（pre-treat）では、ＡＲＰＥ−１９細胞に対して酸化ストレスを与える前からＡＲＰＥ−１９細胞に１.０ｍＭのフェルラ酸を添加して、ＡＲＰＥ−１９細胞の細胞生存率（％）を算出することによって、フェノール酸類の酸化ストレスの予防効果を確認した。結果を図１に示す。
【００９１】
一方、実施例１の後処理（post-treat）では、ＡＲＰＥ−１９細胞を９６ｗｅｌｌｐｌａｔｅに５，０００  ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの細胞密度で播種し、２時間以上培養した。１２〜１８時間経過後、ＡＲＰＥ−１９細胞に酸化ストレスを与えるために過酸化水素水溶液（最終濃度０.２〜０.４ｍＭ）を当該ＡＲＰＥ−１９細胞に曝露した。その後、ＡＲＰＥ−１９細胞を１時間培養後、ＡＲＰＥ−１９細胞の培地をフレッシュな培地に置換した。
【００９２】
そして、９６ｗｅｌｌｐｌａｔｅに培養されたＡＲＰＥ−１９細胞に、薬液であるフェノール酸類として、１.０ｍＭフェルラ酸を採用し、１２〜１８時間培養した。さらに、１２〜１８時間経過後、発色試薬として、ＷＳＴ−８を用いた。ＷＳＴ−８試薬をＡＲＰＥ−１９細胞に添加し、３.０時間程度培養した。水溶性ホルマザンの量を測定することにより、９６ｗｅｌｌｐｌａｔｅに培養されたＡＲＰＥ−１９細胞のうち、生存するＡＲＰＥ−１９細胞の数を測定した。
【００９３】
実施例１の後処理（post-treat）では、ＡＲＰＥ−１９細胞に対して酸化ストレスを与えた後からＡＲＰＥ−１９細胞にフェノール酸類を添加して、ＡＲＰＥ−１９細胞の細胞生存率（％）を算出することによって、フェノール酸類の酸化ストレスの抑制効果を確認した。結果を図１に示す（図１中「Ｆ１」と表示する）。
【００９４】
（実施例２）
実施例２は、ＡＲＰＥ−１９細胞に添加する薬液であるフェノール酸類として、０.５ｍＭのフェルラ酸を採用した以外は、実施例１と同様にして、ＡＲＰＥ−１９細胞の細胞生存率（％）を算出した（図１中「Ｆ０．５」と表示する。）。結果を図１に示す。
【００９５】
（参考例１〜５、比較例１）
ＡＲＰＥ−１９細胞に添加する薬液として、０.５ｍＭのコウジ酸（（参考例１）、図１中「Ｋ０．５」と表示する。）、０.２ｍＭのコウジ酸（（参考例２）図１中「Ｋ０．２」と表示する。）、０.１ｍＭのルチン（（参考例３）、図１中「Ｒ０．１」と表示する。）、０.２ｍＭのγ−オリザノール（（参考例４）、図１中「ｇ０．２」と表示する。）、０.１ｍＭのγ−オリザノール（（参考例５）、図１中「ｇ０．１」と表示する。）を採用した以外は、実施例１と同様にして、ＡＲＰＥ−１９細胞の細胞生存率（％）を算出した。結果を図１に示す。
【００９６】
なお、比較例１は、ＡＲＰＥ−１９細胞に添加する薬液であるフェノール酸類の効果を明確にするために、ＡＲＰＥ−１９細胞に添加する薬液を添加していない場合のＡＲＰＥ−１９細胞の細胞生存率（％）を示した。結果を図１に示す（図１中「None」と表示する。）。
【００９７】
図１によれば、ＡＲＰＥ−１９細胞に添加する薬液として、穀物由来のフェルラ酸を採用することによって、フェルラ酸による前処理（pre-treat）、後処理（post-treat）のいずれの場合であっても酸化ストレスに対する低減効果を確認することができる。さらに、実施例１、２で用いられたフェルラ酸は、抗酸化物質として知られているコウジ酸（参考例１、２）、γ−オリザーノール（参考例４、５）よりも優れた酸化ストレスに対する低減効果を有する。
【００９８】
（実施例３〜４）
実施例３〜４は、ＡＲＰＥ−１９細胞に添加する薬液であるフェノール酸類として、０.１ｍＭのフェルラ酸（（実施例３）、図２中「Ｆ０．１」と表示する。）、０.０５ｍＭのフェルラ酸（（実施例４）、図２中「Ｆ０．０５」と表示する。）を採用した以外は、実施例１と同様にして、ＡＲＰＥ−１９細胞の細胞生存率（％）を算出した。結果を図２に示す。
【００９９】
図２によれば、ＡＲＰＥ−１９細胞に添加する薬液であるフェノール酸類の種類、その濃度を変化させた場合であっても、フェノール酸類であるフェルラ酸は、酸化ストレスに対する低減効果を有することが理解される。
【０１００】
（参考例６〜１０）
ＡＲＰＥ−１９細胞に添加する薬液として、０.１ｍＭのコウジ酸（（参考例６）、図２中「Ｋ０．１」と表示する。）、０.０５ｍＭのコウジ酸（（参考例７）、図２中「Ｋ０．０５」と表示する。）、０.０５ｍＭのルチン（（参考例８）、図２中「Ｒ０．０５」と表示する。）、０.０４ｍＭのγ−オリザノール（（参考例９）、図２中「ｇ０．０４」と表示する。）、０.０２ｍＭのγ−オリザノール（（参考例１０）、図２中「ｇ０．０２」と表示する。）を採用した以外は、実施例１と同様にして、ＡＲＰＥ−１９細胞の細胞生存率（％）を算出した。結果を図２に示す。
【０１０１】
（実施例５〜１１）
実施例５〜１１は、ＡＲＰＥ−１９細胞に添加する薬液であるフェノール酸類として、０.１ｍＭのフェルラ酸（（実施例５）、図３中「Ｆ０．１」と表示する。）、１.０ｍＭのシナピン酸（（実施例６）、図３中「ｓ１」と表示する。）、０.５ｍＭのシナピン酸（（実施例７）、図３中「ｓ０．５」と表示する。）、１.０ｍＭのｐ−クマル酸（（実施例８）、図３中「ｐ１」と表示する。）、０.５ｍＭのｐ−クマル酸（（実施例９）、図３中「ｐ０．５」と表示する。）、１.０ｍＭのバニリン酸（（実施例１０）、図３中「ｖ１」と表示する。）、０.５ｍＭのバニリン酸（（実施例１１）、図３中「ｖ０．５」と表示する。）を採用した以外は、実施例１と同様にして、ＡＲＰＥ−１９細胞の細胞生存率（％）を算出した。結果を図３に示す。
【０１０２】
図３によれば、ＡＲＰＥ−１９細胞に添加する薬液であるフェノール酸の種類、その濃度を変えた場合であっても、ヒドロキシ桂皮酸およびヒドロキシ安息香酸は、酸化ストレスに対する低減効果を有することが理解される。
【０１０３】
＜経口摂取によるヨウ素酸ナトリウム誘発網膜変性モデルマウスの薬効評価＞
（実施例１２）
網膜変性疾患の原因となっている酸化ストレスを誘発する薬剤として、酸化剤であるヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)を採用した。ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)を４０ｍｇ／ｋｇで成獣モデルマウスに腹腔内投与（ｉｐ)し、ヨウ素酸ナトリウム誘発網膜変性モデルマウスを作製した。
【０１０４】
なお、以前は、酸化ストレスを誘発する薬剤として、メチルニトロソ尿素が採用されていた。しかしながら、メチルニトロソ尿素は、発がん性が強いため、製造中止となっている。
【０１０５】
一方、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)は、投与量を調節することにより、網膜変性によるダメージを適宜調整することができ、比較的短期間で薬効評価をすることができる点において優れている。成獣モデルマウスは、一般的な近交系実験用マウスである、Ｃ５７ＢＬ／６を採用した。
【０１０６】
実施例１２では、フェノール酸として、フェルラ酸、シナピン酸を採択した。また、フェノール酸以外の成分として、ルチンを採択し、それぞれの水溶液を作製した。フェルラ酸水溶液、シナピン酸水溶液、ルチン水溶液の各水溶液を給水瓶に入れて、ヨウ素酸ナトリウム誘発網膜変性モデルマウスに経口摂取させた。なお、ヨウ素酸ナトリウム誘発網膜変性モデルマウスへの経口摂取量は、各フェノール酸水溶液の濃度が１０〜４０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙとなるように調製をした。
【０１０７】
その後、光干渉断層画像診断法(Optical Coherence Tomography、以下「ＯＣＴ」という。)に基づいて、フェルラ酸、シナピン酸、ルチンを経口摂取させた後のヨウ素酸ナトリウム誘発網膜変性モデルマウスの網膜外層部を観察した。さらに、フェルラ酸、シナピン酸、ルチンを経口摂取させた後のヨウ素酸ナトリウム誘発網膜変性モデルマウスの明順応電気生理的応答を測定した。当該網膜変性モデルマウスの明順応電気生理的応答は、網膜電図（以下、「ＥＲＧ」という。）により評価した。ここで、ＥＲＧは、網膜の明順応電気生理的応答を評価することにより、眼の機能を評価したものである。このように、実施例１２において、網膜変性モデルマウスを使用した薬効成分の評価は、ＯＣＴによる網膜外層部の構造の観察と、網膜変性モデルマウスのＥＲＧとを組み合わせて、総合的に行った。
【０１０８】
網膜変性モデルマウスの網膜外層部のＯＣＴ解析、および網膜の明順応電気生理的応答は、塩酸メデトミジン等の三種混合麻酔薬を腹腔内投与して行なった。ＯＣＴ解析、および網膜の明順応電気生理的応答は、当該モデルマウスの安定した麻酔状態を確保して行なった。具体的には、成獣モデルマウスに散瞳薬サンドールを点眼して瞳孔を広げ、三種混合麻酔薬液を腹腔内注射し、麻酔状態を確保して、１０ｃｄ・ｓ／ｍ２、または３０ｃｄ・ｓ／ｍ２の刺激を与えて、明順応電気生理的応答のＥＲＧを測定した。なお、腹腔内投与に使用する生理食塩水として、（商品名「日本薬局方  生理食塩液  大塚生食注」（株式会社大塚製薬工場製）を採用した。
【０１０９】
明順応電気生理的応答のＥＲＧの測定において、いくつかの波形の中で最も測定が容易である、ｂ波の振幅を測定した。
【０１１０】
なお、三種混合麻酔薬は、塩酸メデトミジン（商品名「ドミトール」（日本全薬工業株式会社製）、ミタゾラム（商品名「サンド」（サンド株式会社製）、酒石酸ブトルファノール（商品名「ベトルファール」MeijiSeikaファルマ株式会社製）を混合して作製した。
【０１１１】
（比較例２、３）
比較例２、３として、フェルラ酸に代えて、玄米に含まれるフィチン酸（比較例２）、水（比較例３）を採用して、実施例１２と同様に、網膜変性モデルマウスのＯＣＴ解析を行なった。また、網膜の明順応電気生理的応答をＥＲＧにより評価した。評価結果を図５〜６に示す。
【０１１２】
図４は、網膜変性疾患を発症していない正常なモデルマウスの網膜部の光干渉断層のイメージングを示した写真である。図４に示されるように網膜部の光干渉断層は、眼球内と眼球外側との間に存在する網膜から構成されている。図４に示されるように、視細胞層を含んでいる網膜の外側部分をＯＣＴ測定の便宜上、「網膜外層部」と定義して、その厚みを測定した。ＮａＩＯ３誘発網膜変性モデルでは網膜色素上皮付近の変性により境界が明瞭でなくなるために脈絡膜まで含めた厚みを計測した。
【０１１３】
図５は、フェルラ酸（ＦＡ）を経口摂取させた場合のモデルマウスの網膜外層部の厚み（μｍ）と、米糠に含まれるフィチン酸（ＰＡ）を経口摂取させたモデルマウスの網膜外層部の厚み（μｍ）とを示したグラフである。
【０１１４】
図５によれば、無処理のcontrol群に比較して、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)を腹腔内注射して網膜変性を誘発させた群（実施例１２、比較例２、３）は、酸化ストレス等のダメージにより網膜の視細胞が存在する網膜外層部の厚みが減少していることが理解される。
【０１１５】
一方、実施例１２に示されるように、網膜変性モデルマウスにフェルラ酸（ＦＡ）を経口摂取させた群では、酸化ストレス等のダメージが低減され、網膜外層部の厚みが、比較例３に示された網膜外層部の厚みよりも大きくなっている。
【０１１６】
つまり、網膜変性モデルマウスの網膜外層部は、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)の投与によるダメージにより、その厚みが減少する。しかしながら、網膜変性モデルマウスにフェルラ酸（ＦＡ）を経口摂取させると、そのダメージ効果が低減されることが理解される。すなわち、本実施形態の網膜変性疾患抑制剤の有効成分であるフェルラ酸（ＦＡ）は、優れた網膜変性抑制効果を有している。
【０１１７】
図６は、実施例１２のフェルラ酸（ＦＡ）を経口摂取させた場合のモデルマウスの網膜外層部のＥＲＧと、比較例２の米糠に含まれるフィチン酸（ＰＡ）を経口摂取させたモデルマウス等のＥＲＧとを示したグラフである。
【０１１８】
図６によれば、無処理のcontrol群に比較して、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)を腹腔内注射して網膜変性を誘発した群（実施例１２、比較例２、３）は、酸化ストレス等のダメージにより網膜の電気応答の波形の振幅が減少していることが理解される。
【０１１９】
一方、実施例１２に示されるように、網膜変性モデルマウスにフェルラ酸（ＦＡ）を経口摂取させた群では、酸化ストレス等のダメージが低減され、網膜の電気応答の波形の振幅が増加している。
【０１２０】
つまり、網膜変性モデルマウスの網膜外層部は、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)の投与により、ダメージを受け、網膜の電気応答の波形の振幅が減少する。しかしながら、網膜変性モデルマウスにフェルラ酸（ＦＡ）を経口摂取させると、そのダメージ効果が低減されることが理解される。
【０１２１】
＜シナピン酸、ルチン経口摂取による網膜変性抑制効果の確認＞
（実施例１３〜１４、参考例１１〜１２）
フェノール酸として、シナピン酸を採択した。網膜変性モデルマウスへの自由摂取をシナピン酸（３０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ（実施例１３）、図７中「３０ＳＡ」と表示する。）、シナピン酸（１０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ（実施例１４）、図７中「１０ＳＡ」と表示する。）とした以外は、実施例１２と同様にして、網膜変性モデルマウスの網膜外層部を観察した。また、網膜変性モデルマウスへの経口摂取をルチン（３０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ（参考例１１）、図７中「３０Ｒ」と表示する。）、ルチン（１０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ（参考例１２）、図７中「１０Ｒ」と表示する。）とした以外は、実施例１２と同様にして、網膜変性モデルマウスの網膜外層部を観察した。結果を図７に示す。
【０１２２】
（比較例４〜５）
ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)に代え、生理食塩水を網膜変性モデルマウスに腹腔内注射して網膜変性を誘発させることなく、水を経口摂取させ（（比較例４）、図７中「Ｃｏｎｔ．」と表示する。）、正常なマウスの網膜外層部（１０日経過後）を観察した。
【０１２３】
また、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)を網膜変性モデルマウスに腹腔内注射して網膜変性を誘発させ、水を経口摂取させた（（比較例５）、図７中「Ｈ２Ｏ」と表示する。）以外は、実施例１２と同様にして、網膜変性モデルマウスの網膜外層部（１０日経過後）を観察した。結果を図７に示す。
【０１２４】
図７によれば、無処理のcontrol群（比較例４）に比較して、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)を腹腔内注射して網膜変性を誘発させた全ての群（実施例１３〜１４、参考例１１〜１２、比較例５）は、酸化ストレスのダメージにより網膜の視細胞が存在する網膜外層部の厚みが減少していることが理解される。
【０１２５】
一方、実施例１３〜１４、参考例１１〜１２に示されるように、シナピン酸（ＳＡ）、ルチン（Ｒ）を経口摂取させた群では、酸化ストレス等のダメージが低減され、網膜外層部の厚みが、比較例５に示された網膜外層部の厚みよりも大きくなっている。
【０１２６】
つまり、網膜変性モデルマウスの網膜外層部は、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)の投与によるダメージにより、その厚みが減少する。しかしながら、網膜変性モデルマウスにシナピン酸（ＳＡ）、ルチン（Ｒ）を経口摂取させると、そのダメージ効果が低減されることが理解される。
【０１２７】
さらに、上記実施例１３〜１４、参考例１１〜１２、比較例５において得られた網膜変性モデルマウスの電気生理的応答をＥＲＧにより評価した。結果を図８に示す。併せて、比較例４の正常なマウスの電気生理的応答をＥＲＧにより評価した。
【０１２８】
図８によれば、無処理のcontrol群（比較例４）に比較して、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)を腹腔内注射して網膜変性を誘発した群（実施例１３〜１４、参考例１１〜１２、比較例５）は、酸化ストレス等のダメージにより、網膜の電気応答の波形の振幅が減少していることが理解される。一方、実施例１３に示されるように、シナピン酸（ＳＡ）、ルチン（Ｒ）を経口摂取させた群では、酸化ストレス等のダメージが低減され、網膜の電気応答の波形の振幅が増加している。
【０１２９】
つまり、網膜変性モデルマウスの網膜外層部は、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)の投与により、ダメージを受け、網膜の電気応答の波形の振幅が減少する。しかしながら、網膜変性モデルマウスにシナピン酸（ＳＡ）、ルチン（Ｒ）を経口摂取させると、そのダメージ効果が低減されることが理解される。
【０１３０】
このように、フェノール酸であるシナピン酸は、酸化ストレスにより発症する網膜変性疾患を改善させ、眼の機能を回復できることが明らかとなった。シナピン酸等のフェノール酸類は、網膜変性部位に作用し、抗酸化作用、抗炎症作用、細胞保護作用によって、網膜変性疾患を抑制しているものと考えることができる。
【０１３１】
＜ｐ−クマル酸、バニリン酸等の経口摂取による網膜変性抑制効果の確認＞
（実施例１５〜１６、参考例１３）
フェノール酸として、ｐ−クマル酸、バニリン酸を採択した。網膜変性モデルマウスへの経口摂取をｐ−クマル酸（３０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ（実施例１５）、図９中「ｐＣＡ」と表示する。）、バニリン酸（３０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ（実施例１６）、図９中「ＶＡ」と表示する。）とした以外は、実施例１２と同様にして、網膜変性モデルマウスの網膜外層部を観察した。また、網膜変性モデルマウスへの経口摂取をグリチルリチン（３０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ（参考例１３）、図９中「ＧＡ」と表示する。）した以外は、実施例１２と同様にして、網膜変性モデルマウスの網膜外層部を観察した。結果を図９に示す。
【０１３２】
（比較例６〜７）
ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)に代え、生理食塩水を網膜変性モデルマウスに腹腔内注射して網膜変性を誘発させることなく、水を経口摂取させ（（比較例６）、図９中「Ｃｏｎｔ．」と表示する。）、正常なマウスの網膜外層部（１０日経過後）を観察した。また、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)を網膜変性モデルマウスに腹腔内注射して網膜変性を誘発させ、水を経口摂取させた（（比較例７）、図９中「Ｈ２Ｏ」と表示する。）以外は、実施例１２と同様にして、網膜変性モデルマウスの網膜外層部（１０日経過後）を観察した。結果を図９に示す。
【０１３３】
図９によれば、無処理のcontrol群（比較例６）に比較して、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)を腹腔内注射して網膜変性を誘発した群（実施例１５〜１６、参考例１３、比較例７）は、酸化ストレス等のダメージにより網膜の視細胞が存在する外側部分の厚みが減少していることが理解される。
【０１３４】
一方、実施例１５〜１６に示されるように、網膜変性モデルマウスにｐ−クマル酸（ｐＣＡ）、バニリン酸（ＶＡ）を経口摂取させた群では、酸化ストレス等のダメージが低減され、網膜外層部の厚みが、比較例７に示された網膜外層部の厚みよりも大きくなっている。
【０１３５】
つまり、網膜変性モデルマウスの網膜外層部は、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)の投与によるダメージにより、その厚みが減少する。しかしながら、網膜変性モデルマウスにｐ−クマル酸（ｐＣＡ）、バニリン酸（ＶＡ）を経口摂取させると、そのダメージ効果が低減されることが理解される。
【０１３６】
さらに、上記実施例１５〜１６、比較例６〜７において得られた網膜変性モデルマウスの電気生理的応答をＥＲＧにより評価した。結果を図１０に示す。図１０によれば、無処理のcontrol群（比較例６）に比較して、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)を腹腔内注射して網膜変性を誘発した群（実施例１５〜１６、参考例１３、比較例７）は、酸化ストレス等のダメージにより網膜の電気応答の波形の振幅が減少していることが理解される。
【０１３７】
一方、実施例１５〜１６に示されるように、網膜変性モデルマウスにｐ−クマル酸（ｐＣＡ）、バニリン酸（ＶＡ）を経口摂取させた群では、酸化ストレス等のダメージが低減され、網膜の電気応答の波形の振幅が増加していることが理解される。
【０１３８】
つまり、網膜変性モデルマウスの網膜外層部は、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)の腹腔内注射によりダメージを受け、網膜の電気応答の波形の振幅が減少する。しかしながら、網膜変性モデルマウスにｐ−クマル酸（ｐＣＡ）、バニリン酸（ＶＡ）を経口摂取させると、そのダメージ効果が低減されることが理解される。
【０１３９】
このように、フェノール酸であるｐ−クマル酸、バニリン酸は、酸化ストレスにより発症する網膜変性疾患を改善させ、眼の機能を回復できることが明らかとなった。ｐ−クマル酸、バニリン酸等のフェノール酸は、網膜変性部位に作用し、抗酸化作用、抗炎症作用、細胞保護作用によって、網膜変性疾患を抑制しているものと考えることができる。
【０１４０】
＜フェノール酸類の炎症抑制効果の確認＞
（実施例１７〜１８、比較例８）
実施例１７〜１８は、ヒト網膜色素上皮細胞株であるＡＲＰＥ−１９細胞に対して、フェルラ酸等の穀物由来のフェノール酸類が炎症抑制効果を有することを確認した。
【０１４１】
フェノール酸類が有する炎症抑制効果を確認することにより、当該フェノール酸類を有効成分とする網膜変性疾患抑制剤を評価した。網膜変性疾患抑制剤の評価は、ＡＲＰＥ−１９細胞における酸化コレステロールである７−ケトコレステロール（７ｋＣｈ）、リポ多糖（ＬＰＳ）による炎症応答に対する抑制効果を確認することにより行なった。炎症応答に対する抑制効果は、酸化コレステロールにより産生される炎症性分泌たんぱく質（Inter leukin-6、以下「ＩＬ−６」とする。）の産生量を測定することにより行なった。
【０１４２】
具体的な評価は、以下の通りである。ヒト網膜色素上皮細胞株であるＡＲＰＥ−１９細胞を９６ｗｅｌｌｐｌａｔｅに１０，０００  ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの細胞密度で播種し、３時間以上培養した。その後、無血清培地に置換し、一晩培養した。一晩培養後、培養した無血清培地にフェルラ酸（ＦＡ）を添加した。
【０１４３】
フェルラ酸を添加した後、１時間経過後、無血清培地に炎症を誘発させるために、７−ケトコレステロール（７ｋＣｈ）と、リポ多糖（ＬＰＳ）とをそれぞれ追加添加して、４８時間培養した。その後、無血清培地の上清を回収して、human IL-6 ELISA kitを用いて、ＩＬ−６の産生量（ｐｇ／ｍｌ）を測定した。測定結果を図１１に示す。
【０１４４】
図１１において、無血清培地に添加されたフェルラ酸（ＦＡ）は、実施例１７（１.５ｍＭ）、実施例１８（０.５ｍＭ）、比較例８（０ｍＭ、フェルラ酸（ＦＡ）が添加されていない場合）である。図１１中の実施例１７〜１８からも明らかなように、所定量のフェルラ酸（ＦＡ）が無血清培地に添加されることによって、フェルラ酸（ＦＡ）が添加されない場合（比較例８）に比較してＩＬ−６の産生量は、約５０％減少する。つまり、所定量のフェルラ酸は、ヒト網膜色素上皮細胞株であるＡＲＰＥ−１９細胞に対して酸化コレステロール、ＬＰＳ等の誘発炎症を有効に抑制できることが理解される。
【０１４５】
＜フェノール酸類の投与方法による効果＞
（実施例１９〜２２、比較例９〜１０）
実施例１９〜２２、比較例９〜１０は、ＡＲＰＥ−１９細胞に添加する薬液であるフェノール酸類として、０.１８７mg/ｍlのフェルラ酸及び／又は水を採用し、以下の表１に示されるようにフェルラ酸及び／又は水の投与方法を変えた以外は、実施例１と同様にして、網膜変性モデルマウスのＯＣＴ解析を行なった。また、上記と同様にして、網膜の明順応電気生理的応答をＥＲＧにより評価した。評価結果を図１２〜１３に示す。なお、比較例９は、無処理のcontrolである。
【０１４６】
【表１】
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表１において、モデルマウスにヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)を投与した日を基準日とし、当該基準日をｄａｙ「０」と設定する。そして、表１において、当該基準日から３日前から１日後までを「−３〜＋１」、１〜１５日後を「１〜１５」と表示している。表１において、例えば、実施例１９は、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)を投与する３日前から、フェルラ酸（ＦＡ）を経口摂取させ、さらに、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)を経口摂取させた日の翌日から表１のpost-oralのように経口摂取の内容を変更し、フェルラ酸（ＦＡ）を経口摂取させた投与方法を採用した場合を示している。
【０１４７】
表１中、実施例１９（Ｆ／Ｆ）は、フェルラ酸を経口摂取させた後、フェルラ酸を経口させた投与方法を採用した場合であり、実施例２０（Ｆ／Ｈ）は、フェルラ酸を経口摂取させた後、水を経口させた投与方法を採用した場合であり、実施例２１（Ｈ／Ｆ）は、水を経口摂取させた後、フェルラ酸を経口させた投与方法を採用した場合であり、比較例１０（Ｈ／Ｈ）は、水を経口摂取させた後、水を経口させた投与方法を採用した場合を示している。
【０１４８】
図１２は、フェルラ酸（ＦＡ）及び／又は水を表１に示した所定の投与方法（実施例１９〜２１、比較例１０）によって、経口摂取させた場合の網膜変性モデルマウスの網膜外層部の厚み（μｍ）を示したグラフである。なお、図１２中、記号＊は、統計的有意差があることを示している。図１２によれば、フェルラ酸（ＦＡ）の投与方法により、網膜変性モデルマウスの網膜外層部の厚み（μｍ）が相違することが理解される。
【０１４９】
実施例１９〜２１と比較例１０との対比からも明らかなように、所定量のフェルラ酸を網膜変性モデルマウスに経口摂取させることによって、効果的に酸化ストレス等のダメージが低減され、網膜変性モデルマウスの網膜外層部の厚み（μｍ）が増加していることが理解される。特に、実施例２０〜２１からも明らかなように、モデルマウスにヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)を投与した３日前からフェルラ酸を経口投与した方が、より効果的に酸化ストレス等のダメージが低減されることが理解される。
【０１５０】
つまり、網膜変性モデルマウスの網膜外層部は、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)の投与による酸化ストレス等のダメージにより、その厚みが減少する。しかしながら、網膜変性モデルマウスにフェルラ酸（ＦＡ）を経口摂取させると、そのダメージ効果がさらに低減される。すなわち、本実施形態の網膜変性疾患抑制剤の有効成分であるフェルラ酸（ＦＡ）は、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)による誘発網膜変性を予防的に抑制し、優れた網膜変性抑制効果を有している。
【０１５１】
図１３は、フェルラ酸（ＦＡ）及び／又は水を表１に示した所定の投与方法（実施例１９〜２１、比較例１０）によって、経口摂取させた場合のモデルマウスの網膜外層部のＥＲＧを示したグラフである。なお、比較例９は、無処理のcontrolである。
【０１５２】
図１３によれば、無処理のcontrol（比較例９）に比較して、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３を腹腔内注射して網膜変性を誘発した群（実施例１９〜２１、比較例１０）は、酸化ストレス等のダメージにより網膜の電気応答の波形の振幅が減少していることが理解される。
【０１５３】
しかしながら、実施例１９〜２１と比較例１０との対比からも明らかなように、所定量のフェルラ酸を網膜変性モデルマウスに経口摂取させることによって、効果的に酸化ストレス等のダメージが低減され、網膜の電気応答の波形の振幅が増加する。特に、実施例２０〜２１に示されるように、網膜変性モデルマウスにフェルラ酸（ＦＡ）をモデルマウスにヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)を投与した３日前からフェルラ酸（ＦＡ）を経口投与すると、効果的に酸化ストレス等のダメージがより低減され、網膜の電気応答の波形の振幅がより増加している。
【０１５４】
つまり、網膜変性モデルマウスの網膜外層部は、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)の投与により、酸化ストレス等のダメージを受け、網膜の電気応答の波形の振幅が減少する。しかしながら、網膜変性モデルマウスにヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)が投与される前から予防的にフェルラ酸（ＦＡ）を経口摂取させると、そのダメージ効果がより低減されることが理解される。
【０１５５】
ダメージを受けた網膜外層部の外顆粒層（ＯＮＬ）の層の厚みは、例えば、以下のように測定する。マウス（ｄｄＹマウス）にメチルニトロソ尿素（ＭＮＵ）を６０ｍｇ／ｋｇで投与する。マウスへのメチルニトロソ尿素（ＭＮＵ）の投与は経口投与（po）であっても、腹腔内投与（ip）であってもよい。経口投与（po）の場合は、ゾンデで１日あたり２回投与し、腹腔内投与（ip）の場合は、１日あたり１回投与する。マウス（ｄｄＹマウス）にメチルニトロソ尿素（ＭＮＵ）を投与してから４日経過後、マウス（ｄｄＹマウス）を安楽死させる。安楽死させたマウス（ｄｄＹマウス）を解剖し、眼球を摘出する。摘出された眼球をホルマリン固定し、パラフィン包埋し、眼球の切片標本を作製する。作製された眼球の切片標本をヘマトキシリン・エオジン染色（ＨＥ染色）する。なお、マウス（ｄｄＹマウス）にメチルニトロソ尿素（ＭＮＵ）を投与するモデルでは、網膜全体の厚さと網膜外層部の外顆粒層（ＯＮＬ）の層の厚さの実測値を比較している。
【０１５６】
図１４は、フェルラ酸（ＦＡ）を経口投与（po）もしくは腹腔内投与（ip）したマウスの網膜全体の厚さの実測値を示している。また、図１５は、フェルラ酸（ＦＡ）を経口投与（po）もしくは腹腔内投与（ip）したマウスの網膜外層部の外顆粒層（ＯＮＬ）の層の厚さの実測値を示している。図１４〜１５によれば、生理食塩水（saline)をマウスに投与した場合に比較して、フェルラ酸（ＦＡ）をマウスに投与した場合は、網膜全体の厚さと網膜外層部の外顆粒層（ＯＮＬ）が増加している。このことから、フェルラ酸（ＦＡ）は、網膜外層部の外顆粒層（ＯＮＬ）のダメージを緩和できることが理解できる。
【０１５７】
＜フェノール酸エステルによる酸化ストレス抑制効果の確認＞
（実施例２２〜２３、比較例１１〜１２）
実施例２２〜２３は、ＡＲＰＥ−１９細胞に添加する薬液であるフェノール酸類として、フェルラ酸エチル（Ethyl Ferulate (ＥＦ)）等を採択し、実施例１と同様にして、ＡＲＰＥ−１９細胞の細胞生存率（％）を算出した。なお、フェルラ酸エチル(ＥＦ)の濃度は、実施例２２においては、０．０２ｍＭとし、実施例２３においては、０．０１ｍＭ、比較例１２においては、０ｍＭ（フェルラ酸エチル(ＥＦ)を添加していない）とした。なお、比較例１１は、無処理のcontrolである。
【０１５８】
実施例２２〜２３、比較例１１〜１２における、ＡＲＰＥ−１９細胞の細胞生存率（％）の算出結果を図１６に示した。図１６によれば、ＡＲＰＥ−１９細胞に添加する薬液として、フェルラ酸エチル(ＥＦ)を採択することによって、フェルラ酸（ＦＡ）と同様に酸化ストレスに対する低減効果を確認することができる。すなわち、ＡＲＰＥ−１９細胞にフェルラ酸エチル(ＥＦ)を添加した実施例２２〜２３におけるＡＲＰＥ−１９細胞の細胞生存率（％）は、フェルラ酸エチル(ＥＦ)を添加してない比較例１２におけるＡＲＰＥ−１９細胞の細胞生存率（％）に比較して高い。
【０１５９】
＜没食子酸等による酸化ストレス抑制効果の確認＞
（実施例２４〜３２）
さらに、実施例２４〜３２においては、フェノール酸類として、没食子酸、ジンゲロン、ロスマリン酸、ポリフェノールとして、シリビンを採択し、ＡＲＰＥ−１９細胞の細胞生存率（％）を算出し、没食子酸等の酸化ストレス抑制効果を確認した。結果を図１７〜２０に示す。実施例２４〜３２において、細胞への薬液暴露を没食子酸（８０μＭ（実施例２４）、５０μＭ（実施例２５）、図１７中「Ｇ８０」、「Ｇ５０」と表示する。）、ジンゲロン（０．５ｍＭ（実施例２６）、０．１ｍＭ（実施例２７）、０．０２ｍＭ（実施例２８）、図１８中「Ｚ０．５」、「Ｚ０．１」「Ｚ０．０２」と表示する。）、ロスマリン酸（２００μＭ（実施例２９）、１００μＭ（実施例３０）、図１９中「ＲＡ２００」、「ＲＡ１００」と表示する。）、シリビン（８μＭ（実施例３１）、３μＭ（実施例３２）、図２０中「８Ｓ」、「３Ｓ」と表示する。）とした以外は、実施例１２と同様にして、ＡＲＰＥ−１９細胞の細胞生存率（％）を算出した。
【０１６０】
図１７〜２０によれば、ＡＲＰＥ−１９細胞に添加する薬液として、没食子酸等の各種フェノール酸を採用することによって、ＡＲＰＥ−１９細胞の細胞生存率（％）が向上していることが理解される。このことから、没食子酸等の各種フェノール酸は、前処理（pre-treat）の場合、酸化ストレスに対する低減効果を有することが分かる。また、没食子酸等の各種フェノール酸は、後処理（post-treat）の場合であっても酸化ストレスに対する低減効果を有することが推定される。
【０１６１】
さらに、実施例２２〜３２において、実施例１と同様にして、網膜変性モデルマウスのＯＣＴ解析を行なった。実施例２３、実施例２５、実施例２８、実施例３２における、網膜変性モデルマウスのＯＣＴ解析結果を図２１に示した。また、実施例２９〜３０における、網膜変性モデルマウスのＯＣＴ解析結果を図２２に示した。
【０１６２】
図２１〜２２によれば、無処理のcontrol群（比較例１１）に比較して、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)を腹腔内注射して網膜変性を誘発した群（実施例２２〜３２、比較例１２）は、酸化ストレス等のダメージにより網膜の視細胞が存在する外側部分の厚みが減少していることが理解される。
【０１６３】
実施例２２〜３２に示されるように、網膜変性モデルマウスにフェルラ酸エチル(ＥＦ)等のフェノール酸、ポリフェノールを経口摂取させると、酸化ストレス等のダメージが低減され、網膜外層部の厚みは、比較例１２に示された網膜外層部の厚みよりも大きくなっていることが理解される。網膜変性モデルマウスの網膜外層部は、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)の投与によるダメージにより、その厚みが減少するが、網膜変性モデルマウスにフェルラ酸エチル(ＥＦ)等のフェノール酸類、ポリフェノールを経口摂取させると、フェルラ酸(ＦＡ)と同様にそのダメージ効果が低減され、その厚みが増加する。
【０１６４】
また、実施例２３、実施例２５、実施例２８、実施例３２、３１〜３２、比較例１１〜１２において得られた網膜変性モデルマウスの電気生理的応答をＥＲＧにより評価した。結果を図２３に示す。また、実施例２９〜３０において得られた網膜変性モデルマウスの電気生理的応答をＥＲＧの評価結果を図２４に示した。
【０１６５】
図２３〜２４によれば、無処理のcontrol群（比較例１１）に比較して、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)を腹腔内注射して網膜変性を誘発した群（実施例２２〜２８、３１〜３２、比較例１２）は、酸化ストレス等のダメージにより網膜の電気応答の波形の振幅が減少していることが理解される。
【０１６６】
実施例２２〜３２に示されるように、網膜変性モデルマウスにフェルラ酸エチル（ＥＦ）等のフェノール酸類、ポリフェノールを経口摂取させた群では、網膜変性モデルマウスに水のみを経口摂取させた群（比較例１２）に比較して、酸化ストレス等のダメージが低減され、網膜の電気応答の波形の振幅が増加していることが理解される。
【０１６７】
網膜変性モデルマウスの網膜外層部は、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)の腹腔内注射によりダメージを受け、網膜の電気応答の波形の振幅を減少させる。網膜変性モデルマウスにフェルラ酸エチル（ＥＦ）等のフェノール酸類、ポリフェノールを経口摂取させると、フェルラ酸と同様に、そのダメージ効果が低減される。
【０１６８】
＜外顆粒層（ＯＮＬ）のダメージ出現率の算出＞
実施例２２〜２８、３１〜３２において、外顆粒層（ＯＮＬ）のダメージ出現率（％）を算出した。ダメージを受けた網膜外層部の外顆粒層（ＯＮＬ）には、ダメージを受けていない正常な網膜外層部の外顆粒層（ＯＮＬ）と比較して、外顆粒層（ＯＮＬ）の層の厚みの変動、外顆粒層（ＯＮＬ）の密度の減少、外顆粒層（ＯＮＬ）の蛇行異常等の異常が発生している。そこで、ダメージを受けた網膜外層部の外顆粒層（ＯＮＬ）を光学顕微鏡により観察して、外顆粒層（ＯＮＬ）の全体の長さとダメージを受けた部分の長さを測定し、その割合としてダメージ出現率（％）を算出した。
【０１６９】
図２５は、ダメージを受けていない（ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)が処理されていない（control：（ＮａＩＯ３(−)と表示）正常な網膜外層部の光学顕微鏡写真である。図２６は、ダメージを受けた（ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３)が処理されている（ＮａＩＯ３(＋)と表示）異常を発生している網膜外層部の光学顕微鏡写真である。
【０１７０】
図２６に示されるように、ダメージを受けた網膜外層部の外顆粒層（ＯＮＬ）には、ダメージを受けていない正常な網膜外層部の外顆粒層（ＯＮＬ）と比較して、外顆粒層（ＯＮＬ）の層の厚みの変動、外顆粒層（ＯＮＬ）の密度の減少、外顆粒層（ＯＮＬ）の蛇行異常等の異常が発生している。
【０１７１】
実施例２３、実施例２５、実施例２８、実施例３２、比較例１１〜１２において得られたモデルマウスから作製された切片標本をヘマトキシリン・エオジン染色（ＨＥ染色）し、染色された切片標本を光学顕微鏡により観察する。光学顕微鏡による観察結果からモデルマウスの網膜外層部全体の厚さ及び外顆粒層（ＯＮＬ）の厚さを測定した。
【０１７２】
そして、実施例２３、実施例２５、実施例２８、実施例３２、比較例１１〜１２において測定された外顆粒層（ＯＮＬ）の厚さから、各実施例において得られたモデルマウスの外顆粒層（ＯＮＬ）のダメージ出現率と、比較例１２において得られたモデルマウスの外顆粒層（ＯＮＬ）のダメージ出現率を算出した。なお、モデルマウスの外顆粒層（ＯＮＬ）のダメージ出現率は、外顆粒層（ＯＮＬ）の異常が出現している部分の長さが外顆粒層（ＯＮＬ）の全体の長さに占める割合を算出することによって行なった。ダメージ出現率の結果を図２７に示す。
【０１７３】
図２７からも明らかなように、網膜変性モデルマウスにフェルラ酸エチル（ＥＦ）等のフェノール酸、ポリフェノールを経口摂取させると、網膜変性モデルマウスに水のみを経口摂取させた場合（比較例１２、図２７中「Ｈ２Ｏ」にて表示）と比較して、外顆粒層（ＯＮＬ）のダメージ出現率が低くなることが判明した。
【０１７４】
実施例１〜３２の結果からも明らかなように、フェルラ酸等のフェノール酸類、ポリフェノールは、網膜変性部位に作用し、抗酸化作用、抗炎症作用、細胞保護作用によって、網膜変性疾患を抑制しているものと考えることができる。
【０１７５】
以上の実施例、および比較例から明瞭に理解されるように、実施形態の網膜変性疾患抑制剤は、フェルラ酸等のフェノール酸類を有効成分とすることにより、酸化ストレスに起因する網膜変性を抑制することができる。すなわち、本発明の網膜変性疾患抑制剤は、酸化ストレスを低減し、網膜の代謝機能が低下することを抑制して、全ての網膜変性疾患に有効に作用する。特に、穀物由来成分であるフェルラ酸は、加齢等に伴って発生するホメオスタシス維持の調整能力の低下を防ぎ、網膜変性疾患を抑制できる有効成分であると考えられる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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