(57)【要約】【課題】新規のラマン散乱光測定用セルを提供する。【解決手段】微粒子のラマン散乱光を測定するためのラマン散乱光測定用セルであって、微粒子保持ユニットと、カバーガラスと、を備え、前記微粒子保持ユニットは、複数のガラスプレートを備え、前記複数のガラスプレートは、プレート面が相互に対向し且つ前記微粒子の径より小さい距離で離間して配置されており、前記カバーガラスは、前記微粒子保持ユニットの一側面を覆うように、前記微粒子保持ユニットと離間して配置されている、ラマン散乱光測定用セル。【選択図】図１
2019095248.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
微粒子のラマン散乱光を測定するためのラマン散乱光測定用セルであって、
微粒子保持ユニットと、カバーガラスと、を備え、
前記微粒子保持ユニットは、複数のガラスプレートを備え、前記複数のガラスプレートは、プレート面が相互に対向し且つ前記微粒子の径より小さい距離で離間して配置されており、
前記カバーガラスは、前記複数のガラスプレートの一側面が集合して形成される、前記微粒子保持ユニットの一側面を覆うように、前記微粒子保持ユニットと離間して配置されている、
ラマン散乱光測定用セル。
【請求項２】
前記微粒子は、前記微粒子保持ユニットの前記一側面において、隣り合った前記ガラスプレート間の隙間に保持される、請求項１に記載のラマン散乱光測定用セル。
【請求項３】
前記微粒子が細胞である、請求項１又は２に記載のラマン散乱光測定用セル。
【請求項４】
前記微粒子が生細胞である、請求項３に記載のラマン散乱光測定用セル。
【請求項５】
前記複数のガラスプレートが、スペーサーを介して、相互に固定されている、
請求項１〜４のいずれか一項に記載のラマン散乱光測定用セル。
【請求項６】
前記複数のガラスプレートが、スペーサー部を備えたガラスプレート保持部材に保持されており、前記スペーサー部を介して相互に離間して配置されている、
請求項１〜４のいずれか一項に記載のラマン散乱光測定用セル。
【請求項７】
前記カバーガラスが、スペーサーを介して、前記微粒子保持ユニットに固定されている、
請求項１〜６のいずれか一項に記載のラマン散乱光測定用セル。
【請求項８】
前記微粒子保持ユニットの前記一側面に対向する側面を液体中に配置すると、前記液体が、毛細管現象により、前記複数のガラスプレート間の隙間を移動して、前記一側面に供給される、
請求項１〜７のいずれか一項に記載のラマン散乱光測定用セル。
【請求項９】
複数のガラスプレートと、カバーガラスと、液体を貯留した液体貯留槽と、を用いて、微粒子のラマン散乱光を測定する方法であって、
前記複数のガラスプレートは、前記複数のガラスプレートの一方の側面（第１側面）が、前記液体貯留槽に貯留された前記液体に接触し、且つ、前記第１側面に対向する側面（第２側面）が前記液体に接触しないように、前記液体貯留槽内に設置されており、
前記複数のガラスプレートは、プレート面が相互に対向し且つ前記微粒子の径より小さい距離で離間して配置されており、
前記微粒子を、前記複数のガラスプレートの前記第２側面間の隙間に保持させ、前記カバーガラスを、前記第２側面間の隙間に保持された前記微粒子を覆うように配置する工程と、
前記カバーガラスを介して、前記微粒子に光を照射して、前記微粒子のラマン散乱光を測定する工程と、を含む
微粒子のラマン散乱光の測定方法。
【請求項１０】
前記液体貯留槽に貯留された液体が、毛細管現象により、前記複数のガラスプレート間の隙間を移動して、前記第２側面間の隙間に保持された前記微粒子に供給される、
請求項９に記載の微粒子のラマン散乱光の測定方法。
【請求項１１】
請求項１〜８のいずれか一項に記載のラマン散乱光測定用セルを用いる、請求項９又は１０に記載の微粒子のラマン散乱光の測定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ラマン散乱光測定用セル、及びラマン散乱光の測定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
試料のラマン散乱光の測定において、試料を収容している容器由来のラマン散乱光を低減する技術として、ベンゼン環を含まない材質のシート部材を容器内に配し、当該シート部材上に試料を保持して、試料のラマン散乱光を検出する方法が提案されている（特許文献１）。
しかしながら、より簡易な構成で、且つ生きている細胞のラマン散乱光を高感度に検出できる方法が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２０１３−１７４４９７号公報
【発明の概要】
【０００４】
本発明の１実施形態は、微粒子のラマン散乱光を測定するためのラマン散乱光測定用セルであって、微粒子保持ユニットと、カバーガラスと、を備え、前記微粒子保持ユニットは、複数のガラスプレートを備え、前記複数のガラスプレートは、プレート面が相互に対向し且つ前記微粒子の径より小さい距離で離間して配置されており、前記カバーガラスは、前記複数のガラスプレートの一側面が集合して形成される、前記微粒子保持ユニットの一側面を覆うように、前記微粒子保持ユニットと離間して配置されている、ラマン散乱光測定用セルである。
【０００５】
また、本発明の１実施形態は、複数のガラスプレートと、カバーガラスと、液体を貯留した液体貯留槽と、を用いて、微粒子のラマン散乱光を測定する方法であって、前記複数のガラスプレートは、前記複数のガラスプレートの一方の側面（第１側面）が、前記液体貯留槽に貯留された前記液体に接触し、且つ、前記第１側面に対向する側面（第２側面）が前記液体に接触しないように、前記液体貯留槽内に設置されており、前記複数のガラスプレートは、プレート面が相互に対向し且つ前記微粒子の径より小さい距離で離間して配置されており、前記微粒子を、前記複数のガラスプレートの前記第２側面間の隙間に保持させ、前記カバーガラスを、前記第２側面間の隙間に保持された微粒子を覆うように配置する工程と、前記カバーガラスを介して、前記微粒子に光を照射して、微粒子のラマン散乱光を測定する工程と、を含む微粒子のラマン散乱光の測定方法である。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】本発明の１実施形態に係るラマン散乱光測定用セルの一例を示す斜視図である。
【図２】図１のラマン散乱光測定用セルをカバーガラス方向から見た平面図である。
【図３】図２のラマン散乱光測定用セルのＩＩＩ−ＩＩＩ切断面における断面図である。
【図４】図２のラマン散乱光測定用セルのＩＶ−ＩＶ切断面における断面図である。
【図５】図４の断面図において、微粒子保持部に微粒子が保持された状態を示す。
【図６】図２の平面図において、微粒子保持部に微粒子が保持された状態を示す。
【図７】図１のラマン散乱光測定用セルの使用方法の一例を示す図である。
【図８】ラマン散乱光測定用セルの変形例を示す斜視図である。
【図９】ラマン散乱光測定用セルの変形例を示す斜視図である。
【図１０】本発明の１実施形態に係るラマン散乱光測定用セルに微粒子が保持された状態を示す写真である。
【図１１】本発明の１実施形態に係るラマン散乱光測定用セルに微粒子が保持された状態の微粒子保持部の拡大写真である。
【図１２】本発明の１実施形態に係るラマン散乱光測定用セルを用いて取得された、ヒト末梢血単核細胞のラマンスペクトルの一例を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
≪ラマン散乱光測定用セル≫
１実施形態において、本発明は、微粒子のラマン散乱光を測定するためのラマン散乱光測定用セルを提供する。本実施形態のラマン散乱光測定用セルは、微粒子保持ユニットと、カバーガラスと、を備える。前記微粒子保持ユニットは、複数のガラスプレートを備え、前記複数のガラスプレートは、プレート面が相互に対向し且つ前記微粒子の径より小さい距離で離間して配置されている。前記カバーガラスは、前記微粒子保持ユニットの一側面を覆うように、前記微粒子保持ユニットと離間して配置されている。前記微粒子保持ユニットの一側面は、前記複数のガラスプレートの一側面が集合して形成される。微粒子は、微粒子保持ユニットの前記一側面において、隣り合ったガラスプレートの隙間上に保持される。
【０００８】
［第１実施態様］
本実施形態のラマン散乱光測定用セルは、微粒子のラマン散乱光を測定するために用いられる。微粒子は、例えば、５００μｍ以下、１００μｍ以下、５０μｍ以下、又は１０μｍ以下の粒子である。微粒子は、特に限定されないが、一例として細胞が挙げられる。例えば、細胞の大きさとしては、約５〜１００μｍが例示される。また、白血球の大きさとしては、約６〜２５μｍが例示される。細胞は、生細胞であってもよく、死細胞であってもよい。後述するように、本実施形態のラマン散乱光測定用セルは、ラマン散乱光測定中の微粒子の乾燥を防ぐことができる。そのため、生細胞の生存状態を維持したままで、ラマン散乱光を測定するのに適している。
以下、本実施形態のラマン散乱光測定用セルを図面を参照して説明する。
【０００９】
図１は、本実施形態のラマン散乱光測定用セルの構成例を示す斜視図である。ラマン散乱光測定用セル１は、微粒子保持ユニット１０と、カバーガラス２０とから構成されている。また、図２は、ラマン散乱光測定用セル１を、カバーガラス２０方向から見た平面図である。図３は、ラマン散乱光測定用セル１のＩＩＩ−ＩＩＩ切断面における断面図である。図４は、ラマン散乱光測定用セル１のＩＶ−ＩＶ切断面における断面図である。
【００１０】
微粒子保持ユニット１０は、複数のガラスプレート１１から構成されている。複数のガラスプレート１１は、プレート面が相互に対向するように配置されている。複数のガラスプレート１１は、互いに密着しておらず、ガラスプレート１１間には隙間１２が設けられている。すなわち、複数のガラスプレート１１は、相互に離間して配置されている。
微粒子保持ユニット１０を構成するガラスプレート１１の数は、２枚以上であれば特に限定されない。ガラスプレート１１の数としては、例えば、２〜３０枚、２〜２０枚、２〜１０枚等が例示できる。
【００１１】
ガラスプレート１１は、ガラス製であり、平板形状をしている。ガラスプレート１１の材質は、ガラスであればよく、特に限定されないが、石英ガラス、ケイ酸塩ガラス、ソーダ石灰ガラス、ホウケイ酸ガラス等が挙げられる。ガラスは、樹脂に比べて自家蛍光が少ないため、ガラスプレート１１を用いることにより、ラマン散乱光測定の際に、ラマン散乱光測定用セル１由来のノイズが低減される。
【００１２】
ガラスプレート１１の形状は、特に限定されず、任意の形状とすることができる。ラマン散乱光測定用セル１の例では、ガラスプレート１１のプレート面１１ｂは、正方形状となっているが、プレート面の形状は、正方形状に限定されない。プレート面の形状は、長方形状であってもよく、台形状であってもよい。また、プレート面の形状は、四角形状に限らず、他の多角形状（六角形、八角形など）であってもよい。また、プレート面の形状は、一部が曲線であってもよく、円形状、半円形状、部分円形状等であってもよい。プレート面の形状としては、１辺が直線である形状、対向する２辺が直線である形状等が例示される。
ガラスプレート１１のサイズは、特に限定されず、任意のサイズとすることができる。取扱いの利便性などから、例えば、プレート面が円形状等である場合、最小径が０．５ｃｍ程度以上、最大径が１０ｃｍ程度以下等が例示される。また、プレート面が四角形状等である場合、幅が０．５ｃｍ程度以上、長さが１０ｃｍ以上程度以下等が例示される。
ガラスプレート１１の厚さは、特に限定されないが、０．０１〜１ｍｍ、０．０５〜０．５ｍｍ、０．１〜０．３ｍｍ等が例示される。
なお、複数のガラスプレート１１は、必ずしも、全てが同じ形状、及び同じ厚さである必要はない。
【００１３】
微粒子保持ユニット１０において、複数のガラスプレート１１は、プレート面１１ｂが相互に対向するように離間して配置されている。これにより、複数のガラスプレート１１間には、隙間１２が形成されている。一例として、複数のガラスプレート１１は、相互にほぼ平行に配置される。
ガラスプレート１１を相互に離間して配置するために、微粒子保持ユニット１０では、スペーサー１５が用いられており、ガラスプレート１１は、スペーサー１５を介して、相互に固定されている。スペーサー１５の形状、材質等は、特に限定されず、任意のものを任意の方法で固定して用いることができる。一例として、スペーサー１５としては、マイクロビーズが挙げられる。例えば、隣り合うガラスプレート１１を、マイクロビーズを含む接着剤で固定することにより、ガラスプレート１１を相互に離間して配置することができる。接着剤は、ガラスを接着できるものであればよく、特に限定されない。一例として、接着剤としては、紫外線硬化接着剤が挙げられる。
複数のガラスプレート１１を離間して配置する方法は、スペーサーを用いる方法に限定されず、他の方法を用いてもよい。例えば、ガラスプレート１１を相互に離間して配置し、その状態を支持部材で保持するようにしてもよい。
【００１４】
ガラスプレート１１間の距離ｄ１２（隙間１２の大きさ）は、測定対象となる微粒子の径より小さく設定される。微粒子の径は、種々の方法によって当業者が適宜決定又は測定することができ、ある微粒子群の平均的な粒子径がすでに知られている場合は、その粒子径を微粒子の径として用いてもよい。例えば、一般に、ヒトの細胞の多くは１０〜２０μｍとされているので、微粒子がヒトの細胞の場合、ガラスプレート１１間の距離ｄ１２は１０μｍ未満とすることができる。また、ガラスプレート１１間の距離ｄ１２は、試料に含まれるすべての微粒子の径より小さくなくてもよく、試料に含まれる微粒子のうち測定対象の微粒子の径より小さければよい。すなわち、測定対象の微粒子のラマン散乱光が測定できる限り、ガラスプレート１１間の距離ｄ１２が、試料に含まれる微粒子の一部の径より大きくてもよい。
ガラスプレート１１間の距離ｄ１２を微粒子の径より小さくすることにより、微粒子保持ユニット１０のガラスプレート１１間の隙間１２の上部、すなわち、隣り合ったガラスプレート１１の側面１１ａ間の隙間１２ａに、微粒子５０が保持される（図５）。ガラスプレート１１間の距離ｄ１２は、スペーサの大きさを選択することにより調節することができる。
【００１５】
また、ガラスプレート１１間の距離ｄ１２は、複数のガラスプレート１１の一側面を液体に接触させたときに、毛細管現象により、当該液体が、隙間１２を移動するような距離に設定してもよい。
【００１６】
例えば、距離ｄ１２としては、１〜５００μｍ、１〜１００μｍ、１．５〜５０μｍ、１．５〜２０μｍ、１．５〜１０μｍ等が挙げられる。距離ｄ１２は、複数のガラスプレート１１間に形成される複数の隙間１２において、必ずしも、全て同じである必要はない。また、１つの隙間１２においても、距離ｄ１２は、必ずしも一定である必要はない。
【００１７】
図５は、図４の断面図において、ガラスプレート１１の側面１１ａ間の隙間１２ａに微粒子５０が保持された状態を示す。以下の説明において、ガラスプレート１１の側面１１ａを含む微粒子保持ユニット１０の一側面を、微粒子保持部１３と呼ぶ。微粒子保持部１３は、複数のガラスプレート１１の側面１１ａが集合して形成されている。図６は、図２の平面図において、微粒子保持部１３に微粒子５０が保持された状態を示す。
【００１８】
カバーガラス２０は、微粒子保持部１３を覆うように、微粒子保持ユニット１０と離間して配置されている。カバーガラス２０は、ラマン散乱光測定時に、微粒子保持部１３に保持される微粒子５０を覆っている。ラマン散乱光測定のために微粒子５０に照射される照射光は、カバーガラス２０を透過して、微粒子５０に到達する。
【００１９】
カバーガラス２０は、ガラス製であり、平板形状をしている。カバーガラス２０は、ガラスであればよく、特に限定されないが、石英ガラス、ケイ酸塩ガラス、ソーダ石灰ガラス、ホウケイ酸ガラス等が挙げられる。上記のように、ガラスは、樹脂に比べて自家蛍光が少ない。カバーガラス２０を用いることにより、ラマン散乱光測定時に対物レンズが試料に接触するのを防ぐことができる。また、カバーガラス２０と微粒子保持部１３との距離を調節することにより、カバーガラス２０と微粒子保持部１３との間にも、毛細管現象で液体をいきわたらせて、微粒子保持部１３に保持された微粒子５０に液体を供給することができる。そのため、微粒子５０が生細胞である場合でも、細胞が乾燥することがなく、生細胞のままラマン散乱光を測定することができる。
【００２０】
カバーガラスの形状は、特に限定されず、任意の形状とすることができる。ラマン散乱光測定用セル１の例では、カバーガラス２０のプレート面は、正方形状となっているが、プレート面の形状は、正方形状に限定されない。プレート面の形状は、長方形状であってもよく、台形状であってもよい。また、プレート面の形状は、四角形状に限らず、他の多角形状（六角形、八角形など）であってもよい。また、プレート面の形状は、一部が曲線であってもよく、円形状、半円形状、部分円形状等であってもよい。
カバーガラス２０のサイズは、特に限定されず、微粒子保持部１３のサイズに応じて適切なサイズとすればよい。一例として、カバーガラス２０は、微粒子保持部１３のサイズよりも大きいサイズである。または、一例として、カバーガラス２０は、微粒子保持部１３のサイズと同等のサイズである。取扱いの利便性などから、カバーガラス２０のサイズとしては、例えば、微粒子保持部のサイズよりも０〜２ｃｍ程度大きいサイズ等が例示される。
カバーガラス２０の厚さは、特に限定されないが、０．００５〜０．５ｍｍ、０．０１〜０．３ｍｍ、０．０２〜０．１ｍｍ等が例示される。
【００２１】
カバーガラス２０は、微粒子保持部１３に対向しており、微粒子保持ユニット１０に対して離間して配置されている。これにより、カバーガラス２０と微粒子保持ユニット１０との間には、隙間３０が形成されている。
カバーガラス２０を微粒子保持ユニット１０に離間して配置するために、ラマン散乱光測定用セル１では、スペーサー２１が用いられており、カバーガラス２０は、スペーサー２１を介して、微粒子保持ユニット１０に固定されている。スペーサー２１の形状、材質等は、特に限定されず、任意のものを用いることができる。一例として、スペーサー２１としては、マイクロビーズが挙げられる。接着剤は、ガラスを接着できるものであればよく、特に限定されない。一例として、接着剤としては、紫外線硬化接着剤が挙げられる。
カバーガラス２０を微粒子保持ユニット１０に離間して配置する方法は、スペーサーを用いる方法に限定されず、他の方法を用いてもよい。例えば、支持部材等を用いて、カバーガラス２０を、微粒子保持ユニット１０に対して離間した状態で、支持するようにしてもよい。
【００２２】
カバーガラス２０と微粒子保持ユニット１０との間の距離ｄ３０（隙間３０の大きさ）は、微粒子５０のサイズよりも若干大きく設定される。これにより、カバーガラス２０と微粒子保持ユニット１０との隙間３０から、微粒子５０の懸濁液を注入して、微粒子保持部１３に微粒子５０を保持させることができる。例えば、距離ｄ３０としては、５〜１０００μｍ、５〜５００μｍ、１０〜２００μｍ、２０〜１００μｍ等が挙げられる。距離ｄ３０は、隙間３０において、必ずしも、一定である必要はない。
【００２３】
上記のような構成を有するラマン散乱光測定用セル１の使用方法を、図７を参照して説明する。
【００２４】
ラマン散乱光測定用セル１は、微粒子のラマン散乱光を測定する際には、カバーガラス２０を上にして、液体貯留槽６０内に設置される。液体貯留槽６０には、液体７０が貯留されている。液体７０は、毛細管現象により、ラマン散乱光測定用セル１のガラスプレート１１間の隙間１２を移動し、微粒子保持部１３に供給される。微粒子保持部１３に供給される液体７０により、微粒子保持部１３に保持される微粒子５０の乾燥が防止される。
【００２５】
液体７０は、微粒子５０の種類に応じて適宜選択すればよい。例えば、微粒子５０が細胞、特に生細胞である場合には、液体７０として、各種緩衝液（リン酸緩衝液、リン酸生理食塩水、トリス緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液、クエン酸緩衝液など）、生理食塩水、当該細胞の培養用培地等が挙げられる。
【００２６】
液体貯留槽６０は、液体７０を貯留できるものであれば、特に限定されない。液体貯留槽６０の材質は、ガラス（英ガラス、ケイ酸塩ガラス、ソーダ石灰ガラス、ホウケイ酸ガラス等）、樹脂（アクリル系樹脂、オレフィン系樹脂、シリコン系樹脂、フェノール系樹脂等）、金属（鉄、アルミ、ステンレス等）等であってよい。
例えば、液体貯留槽６０として、シャーレ、トレー、ビーカー等を利用してもよい。また、液体貯留槽６０は、ラマン散乱光測定用セル１を保持可能な保持部材を備えていてもよい。あるいは、ラマン散乱光測定用セル１が、さらに液体貯留槽６０を備える構成であってもよい。この場合、液体貯留槽６０は、液体貯留槽６０に貯留された液体７０が、毛細管現象により、複数のガラスプレート１１間の隙間１２を移動して、微粒子保持部１３に供給されるように、配置される。
【００２７】
微粒子５０を微粒子保持部１３に保持させるためには、例えば、カバーガラス２０と微粒子保持ユニット１０との隙間３０から、微粒子懸濁液を注入する。微粒子懸濁液は、微粒子５０を適当な液体に懸濁することにより調製すればよい。微粒子懸濁液調製のための液体は、微粒子５０の種類に応じて適宜選択すればよい。一例として、液体７０と同じものを用いてもよい。微粒子懸濁液における微粒子濃度は、特に限定されず、微粒子懸濁液が適度な流動性を有する程度であればよい。例えば、１０１〜１０６個／ｍＬ程度が例示される。
別の方法として、カバーガラス２０を微粒子保持ユニット１０に固定する前に、微粒子保持部１３に微粒子懸濁液を配置して、微粒子５０をガラスプレートの側面１１ａ間の隙間１２ａに保持させ、その後、微粒子保持部１３を覆うように、且つ、微粒子保持ユニット１０と離間するようにカバーガラス２０を微粒子保持ユニット１０に固定してもよい。
【００２８】
カバーガラス２０と微粒子保持ユニット１０との隙間３０に、微粒子懸濁液を注入した後、微粒子保持ユニット１０の前面及び後面に位置するガラスプレート１１のプレート面１１ｂを、微粒子保持ユニット１０の中心部方向に数回押圧するようにしてもよい。これにより、ガラスプレート１１の側面１１ａ間の隙間１２ａへの、微粒子５０の移動が促され、隙間１２ａに保持される微粒子５０の数を多くすることができる。隙間１２ａに微粒子５０が保持されることにより、ラマン散乱光の測定中、微粒子５０の移動が防止され、微粒子５０を１箇所に固定しておくことができる。
【００２９】
上記のような状態で、微粒子保持部１３に保持された微粒子５０にレーザー光を照射し、微粒子５０から放出されるラマン散乱光を測定する。微粒子保持部１３において、隙間１２ａに保持された微粒子５０には、ガラスプレート１１間の隙間１２を介して、液体貯留槽６０から、毛細管現象により移動した液体７０が供給されるため、ラマン散乱光の測定中、微粒子５０の乾燥が防止される。また、微粒子５０のラマン散乱光を１００箇所程度測定するために時間を要した場合であっても、当該測定時間中、微粒子５０は乾燥することがない。そのため、微粒子５０が生細胞である場合であっても、乾燥による細胞死の誘導を防止して、生細胞の状態でラマン散乱光を測定することができる。
【００３０】
また、本実施形態のラマン散乱光測定用セル１は、主要な部材がガラス製であるため、樹脂を用いた場合と比較して、セル由来の自家蛍光が低減され、ノイズの少ないラマン散乱光を測定することができる。ガラスは、樹脂に比べて自家蛍光が少ないが、加工性に難があった。しかし、本実施形態のラマン散乱光測定用セル１では、平板状のガラスプレート１１及びカバーガラス２０を用いており、複雑な加工を要しない。そのため、本実施形態のラマン散乱光測定用セル１は、簡易な方法で、安価に作製することができる。
【００３１】
本実施形態のラマン散乱光測定用セルは、上記で説明した態様に限定されず、本発明の趣旨を逸脱しない範囲で、各構成要素を適宜変更することができる。例えば、以下のような変形例も、本実施形態のラマン散乱光測定用セルの範囲内である。なお、図８及び図９において、上記態様と同様の構成には同一符号を付し、その詳細な説明は省略する。
【００３２】
［第２実施態様］
図８は、上記第１実施態様のラマン散乱光測定用セル１が、さらに脚部１６を備えた例である。脚部１６は、ラマン散乱光測定用セル１を、カバーガラス２０を上にして設置する際に、ラマン散乱光測定用セル１を安定させる役割を果たす。そのため、脚部１６を備えることにより、ラマン散乱光測定用セル１を、液体貯留槽６０内に、より安定して設置することができる。
脚部１６は、カバーガラス２０を上にしてラマン散乱光測定用セル１を設置した際に、ラマン散乱光測定用セル１を安定させるものであれば、位置、形状、材質等は特に限定されない。例えば、微粒子保持ユニット１０の前面及び後面に位置するガラスプレート１１のいずれか又は両方のプレート面１１ｂに、脚部１６を設置してもよい。あるいは、微粒子保持部１３を構成する側面１１ａ以外のガラスプレート１１の側面に、脚部１６を設置してもよい。
また、脚部１６の材質は、ガラス（英ガラス、ケイ酸塩ガラス、ソーダ石灰ガラス、ホウケイ酸ガラス等）、樹脂（アクリル系樹脂、オレフィン系樹脂、シリコン系樹脂、フェノール系樹脂等）、金属（鉄、アルミ、ステンレス等）等であってよい。
【００３３】
［第３実施態様］
図９は、ガラスプレート１１が、スペーサー部１１５を備えたガラスプレート保持部材１１６で保持されることにより、スペーサー部１１５を介して相互に離間して配置されている、ラマン散乱光測定用セル１００の例である。
保持部材１１６は、スペーサー部１１５を備え、複数のガラスプレート１１を相互に離間して保持可能なものであればよく、その形状及び材質等は特に限定されない。保持部材１１６の材質は、ガラス（英ガラス、ケイ酸塩ガラス、ソーダ石灰ガラス、ホウケイ酸ガラス等）、樹脂（アクリル系樹脂、オレフィン系樹脂、シリコン系樹脂、フェノール系樹脂等）、金属（鉄、アルミ、ステンレス等）等であってよい。また、保持部材１１６において、スペーサー部１１５は、別の材質で構成されていてもよい。
【００３４】
保持部材１１６は、例えば、平板状部材に、複数のスペーサー部１１５が配置された構成を有している。スペーサー部１１５は、複数のガラスプレート１１間の隙間１２を形成するためのものである。スペーサー部１１５の厚さとしては、例えば、１〜５００μｍ、１〜１００μｍ、１．５〜５０μｍ、１．５〜２０μｍ、１．５〜１０μｍ等が挙げられる。スペーサー部１１５の配置間隔は、ガラスプレート１１の厚さに対応させればよい。なお、図９の例では、スペーサー部１１５は、ガラスプレート１１の端部全体を支持しているが、スペーサー部１１５は、ガラスプレート１１の端部の一部を支持するものであってもよい。
【００３５】
保持部材１１６と複数のガラスプレート１１とは、保持部材１１６に複数のガラスプレート１１を保持させた状態で接着されていてもよく、保持部材１１６に複数のガラスプレート１１が着脱自在に保持されていてもよい。
【００３６】
図９の例では、保持部材１１６の長軸方向の長さが、ガラスプレート１１の、保持部材１１６に対向する辺の長さよりも若干長くなっている。そして、保持部材１１６にカバーガラス２０を設置することにより、微粒子保持ユニット１０とカバーガラス２０との間の隙間３０を形成している。カバーガラス２０は、保持部材１１６に接着してもよく、保持部材１１６にカバーガラス保持部を設けて、カバーガラス２０を着脱可能に保持部材１１６に保持させてもよい。なお、隙間３０の形成方法は、これに限定されず、第１実施態様と同様に、スペーサーを用いて、隙間３０を形成してもよい。
【００３７】
保持部材１１６は、液体貯留槽６０と一体になっていてもよく、液体貯留槽６０に着脱自在に設置されるものであってもよい。
【００３８】
≪ラマン散乱光測定方法≫
１実施形態において、本発明は、微粒子のラマン散乱光の測定方法を提供する。本実施形態の微粒子のラマン散乱光の測定方法は、複数のガラスプレートと、カバーガラスと、液体を貯留した液体貯留槽と、を用いる。前記複数のガラスプレートは、前記複数のガラスプレートの一方の側面（第１側面）が、前記液体貯留槽に貯留された前記液体に接触し、且つ、前記第１側面に対向する側面（第２側面）が前記液体に接触しないように、前記液体貯留槽内に設置されており、前記複数のガラスプレートは、プレート面が相互に対向し且つ前記微粒子の径より小さい距離で離間して配置されている。そして、本実施形態のラマン散乱光の測定方法は、前記微粒子を、前記複数のガラスプレートの前記第２側面間の隙間に保持させ、前記カバーガラスを、前記第２側面間の隙間に保持された微粒子を覆うように配置する工程（以下「工程（Ｉ）」という。）と、前記カバーガラスを介して、前記微粒子に光を照射して、微粒子のラマン散乱光を測定する工程（以下「工程（ＩＩ）」という。）と、を含む。
【００３９】
本実施形態の微粒子のラマン散乱光の測定方法は、上記実施形態のラマン散乱光測定用セルを用いて、微粒子のラマン散乱光を測定する方法であってもよい。
【００４０】
本実施形態の方法では、例えば、図７又は図９に示されるように、複数のガラスプレート１１と、カバーガラス２０と、液体７０を貯留した液体貯留槽６０と、を用いる。なお、上記実施形態のラマン測定用セルと同様の構成については、同一符号で説明し、その詳細な説明は省略する。
【００４１】
本実施形態の測定方法において、複数のガラスプレート１１は、複数のガラスプレート１１の一方の側面１１ｃ（第１側面）が、液体貯留槽６０に貯留された液体７０に接触し、且つ、第１側面に対向する側面１１ａ（第２側面）が液体７０に接触しないように、液体貯留槽６０内に設置されている。液体貯留槽６０内において、複数のガラスプレート１１は、プレート面１１ｂが相互に対向し且つ微粒子５０の径より小さい距離で離間して配置されており、隙間１２を形成している。
複数のガラスプレート１１の第２側面１１ａと、第２側面１１ａ間の隙間１２ａとは、微粒子保持部１３を形成している。
【００４２】
工程（Ｉ）では、複数のガラスプレート１１の第２側面１１ａの隙間１２ａに微粒子５０を保持ささせ、カバーガラス２０を、隙間１２ａに保持された微粒子５０を覆うように配置する。隙間１２ａに保持された微粒子５０には、液体貯留槽６０に貯留された液体７０が、毛細管現象により、複数のガラスプレート１１間の隙間１２を移動して供給される。これにより、微粒子５０の乾燥が防止される。
【００４３】
工程（ＩＩ）では、ラマン散乱光を測定するための照射光を、カバーガラス２０を介して、微粒子５０に照射する。そして、微粒子５０が放出するラマン散乱光をカバーガラス２０を介して測定する。
【００４４】
本実施形態の方法では、微粒子のラマン散乱光測定中に、複数のガラスプレート１１の第２側面１１ａ間の隙間１２ａに保持された微粒子５０に、ガラスプレート１１間の隙間１２を介して液体貯留槽６０から液体７０が供給される。そのため、ラマン散乱光の測定に時間を要した場合であっても、当該測定時間中、微粒子が乾燥することがない。したがって、微粒子５０が生細胞である場合であっても、乾燥による細胞死の誘導を防止して、生細胞の状態でラマン散乱光を測定することができる。
【００４５】
また、本実施形態のラマン散乱光の測定方法では、微粒子５０を保持するためにガラスプレートを用いている。そのため、微粒子保持部に由来する自家蛍光が低減され、ノイズの少ないラマン散乱光を測定することができる。また、ガラスプレート及びカバーガラスは、平板状ガラスであるため、複雑な加工を要することなく、簡易な方法で、安価に、微粒子のラマン散乱光を測定することができる。
【００４６】
以上、本発明の実施形態について図面を参照して詳述したが、具体的な構成はこの実施形態に限られるものではなく、この発明の要旨を逸脱しない範囲の設計変更等も含まれる。
【実施例】
【００４７】
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００４８】
（ラマン散乱光測定用セルの作製）
ガラスプレートとして、松波  ＮＥＯカバーガラス（１８×１８ｍｍ、厚さ０．１２〜０．１７ｍｍ）を用いた。カバーガラスとして、松波  ＮＥＯカバーガラス（２５×２５ｍｍ、厚さ０．０４〜０．０６ｍｍ）を用いた。スペーサーとして、積水化学  ミクロパールＳＰ２（直径２μｍ）を用いた。スペーサーは、紫外線硬化接着剤（Ｎｏｒｌａｎｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＮＯＡ６３）と混合し、スペーサー入り接着剤として使用した。
ガラスプレートのプレート面の対向する２辺にスペーサー入り接着剤を塗布し、ガラスプレートを相互に接着した。スペーサーとしては、直径２μｍのミクロパールＳＰ２（積水化学工業）を使用した。ガラスプレート間には、スペーサーの直径分の隙間が形成された。このガラスプレートの集合体を微粒子保持ユニットとした。
上記の微粒子保持ユニットにおいて、ガラスプレートの側面と側面間の隙間とにより構成される面の１つを微粒子保持部とし、この面の四隅にスペーサー入り接着剤を塗布し、カバーガラスを接着した。このときのスペーサーは直径５０μｍのミクロパールＳＰ５０（積水化学工業）を使用した。微粒子保持ユニットとカバーガラスとの間には、スペーサー直径分の隙間が形成された。このようにして作製したラマン散乱光測定用セルを、以降の試験に使用した。
【００４９】
（微粒子保持試験）
上記のラマン散乱光測定用セルに対して、カバーガラスと微粒子保持部との隙間から、マイクロビーズ（直径６μｍ）懸濁液を注入した。ガラスプレートの側面間の隙間にマイクロビーズが保持されるように、微粒子保持ユニットの最外面に位置するガラスプレートのプレート面を、微粒子保持ユニットの中心面方向に数回押圧した。その後、微粒子保持部を顕微鏡で観察し、マイクロビーズの保持状態を確認した。
図１０は、微粒子保持部におけるマイクロビーズの保持状態を示す写真である。図１１は、ガラスプレートの側面間の隙間の１つを拡大した写真である。図１０及び図１１の写真から、ガラスプレートの側面間の隙間に、マイクロビーズが保持されていることが確認された。
【００５０】
（ラマンスペクトル測定試験）
ラマン散乱光測定対象の微粒子として、ヒト末梢血単核細胞（Ｌｏｎｚａ社）を用いた。上記のラマン散乱光測定用セルに対して、カバーガラスと微粒子保持部との隙間から、ヒト末梢血単核細胞の細胞懸濁液を注入した。ガラスプレートの側面間の隙間に細胞が保持されるように、微粒子保持ユニットの最外面に位置するガラスプレートのプレート面を、微粒子保持ユニットの中心面方向に数回押圧した。
ラマン散乱光測定用セルの微粒子保持部に保持された細胞に対しておおまかな領域を設定し、当該領域を１００箇所程度の単位領域に分割し、それぞれの単位領域に対し１μｍ程度のビーム径を有する波長５３２ｎｍのレーザー光を照射してラマン散乱光（反射光）を測定した。各単位領域について取得したスペクトルを平均し、当該スペクトルから、細胞の自家蛍光とガラスの自家蛍光とを公知のアルゴリズムにより除去した。このようにして取得した細胞のラマンスペクトルの一例を図１２に示す。
【符号の説明】
【００５１】
１，１００…ラマン散乱光測定用セル、１０…微粒子保持ユニット、１１…ガラスプレート、１１ａ…ガラスプレート側面（第２側面）、１１ｂ…ガラスプレートのプレート面、１１ｃ…ガラスプレート側面（第１側面）、１２…ガラスプレート間の隙間、１２ａ…ガラスプレート側面間の隙間、１３…微粒子保持部、１５，２１…スペーサー、１６…脚部、２０…カバーガラス、３０…微粒子保持ユニットとガラスプレートとの隙間、５０…微粒子、６０…液体貯留槽、７０…液体、１１５…スペーサー部、１１６…ガラスプレート保持部材
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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