(57)【要約】      （修正有）【課題】神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療するための、極めて低い用量のタクロリムス又は近い構造の類似体の使用。【解決手段】タクロリムス又は近い構造の類似体のトラフ全血レベルを少なくとも０．０５ｎｇ／ｍＬにする用量で、１日１回以下投与することを含む、方法により、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病等の疾患を治療するために使用することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療する方法であって、それを必要とするヒトに、免疫抑制を生じることなくタクロリムス又はその近い構造の類似体のトラフ全血レベルを少なくとも0.05ng/mLにする用量で、有効量のタクロリムス又はその近い構造の類似体を1日1回以下投与することを含む、上記方法。
【請求項２】
免疫抑制を生じることなくタクロリムス又はその近い構造の類似体のトラフ全血レベルを少なくとも0.05ng/mLにする用量で1日1回以下投与される、神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患の治療に使用するためのタクロリムス又はその近い構造の類似体。
【請求項３】
神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療するための医薬品の製造におけるタクロリムス又はその近い構造の類似体の使用であって、該医薬品が、1日1回投与されたときに免疫抑制を生じることなく少なくとも0.05ng/mLのトラフ全血レベルを有する量のタクロリムス又はその近い構造の類似体を含有する、上記使用。
【請求項４】
トラフ全血レベルが少なくとも0.075ng/mL、少なくとも0.2ng/mL又は少なくとも0.3ng/mLである、請求項1から3のいずれかに記載の方法、使用のための化合物又は化合物の使用。
【請求項５】
トラフ全血レベルが1.2ng/mL未満、1.1ng/mL未満又は1.0ng/mL未満である、請求項1から4のいずれかに記載の方法、使用のための化合物又は化合物の使用。
【請求項６】
タクロリムスを用いる、請求項1から5のいずれかに記載の方法、使用のための化合物又は化合物の使用。
【請求項７】
神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療する方法であって、それを必要とするヒトに有効量のタクロリムス又はその近い構造の類似体を1日1回以下投与することを含み、その用量が0.001mg/kgから0.02mg/kgである、上記方法。
【請求項８】
0.001mg/kgから0.02mg/kgの用量で1日1回投与される、神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患の治療に使用するためのタクロリムス又はその近い構造の類似体。
【請求項９】
神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療するための医薬品の製造におけるタクロリムス又は近い構造の類似体の使用であって、該医薬品が、0.001mg/kgから0.02mg/kgのタクロリムス又はその近い構造の類似体を含有する、上記使用。
【請求項１０】
0.001mg/kgから0.02mg/kgを用いる、請求項6から8のいずれかに記載の方法、使用のための化合物又は化合物の使用。
【請求項１１】
0.013mg/kg以下、0.01mg/kg以下、0.0085mg/kg、又は0.007mg/kgを用いる、請求項7から10のいずれかに記載の方法、使用のための化合物又は化合物の使用。
【請求項１２】
0.0014mg/kg超又は0.002mg/kg超を用いる、請求項7から11のいずれかに記載の方法、使用のための化合物又は化合物の使用。
【請求項１３】
0.0014mg/kgから0.0085mg/kg又は0.002mg/kgから0.007mg/kgを用いる、請求項7から12のいずれかに記載の方法、使用のための化合物又は化合物の使用。
【請求項１４】
タクロリムスを用いる、請求項7から13のいずれかに記載の方法、使用のための化合物又は化合物の使用。
【請求項１５】
有効量のタクロリムス又は近い構造の類似体を1日1回以下投与して後成的改変を行い、それによって自食作用の増進及び/又は酸化ストレスの低減をもたらすことによって、神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療する方法であって、それを必要とするヒトに投与することを含む、上記方法。
【請求項１６】
後成的改変を行うことによって自食作用の増大及び/又は酸化ストレスの改善をもたらす量を1日1回以下投与することによって、タンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療するのに使用するためのタクロリムス又はその近い構造の類似体。
【請求項１７】
1日1回以下投与することによって神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療するための医薬品の製造におけるタクロリムス又はその近い構造の類似体の使用であって、該医薬品が、後成的改変を行うことによって自食作用の増大及び/又は酸化ストレスの改善をもたらす量のタクロリムス又はその近い構造の類似体を含有する、上記使用。
【請求項１８】
タクロリムスを用いる、請求項15から17のいずれかに記載の方法、使用のための化合物又は化合物の使用。
【請求項１９】
0.05mgから1.3mgのタクロリムス又はその近い構造の類似体及び医薬として許容されるその担体を含有する、神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患の治療に使用するための、単位用量の医薬組成物。
【請求項２０】
1.2mg、0.75mg、0.6mg又は0.4mg超のタクロリムス又はその近い構造の類似体を含有しない、請求項19に記載の単位用量の医薬組成物。
【請求項２１】
0.06、0.1又は0.15mg以上を含む、請求項19又は20に記載の単位用量の医薬組成物。
【請求項２２】
口による投与に適合させた、請求項19から21のいずれかに記載の単位用量の医薬組成物。
【請求項２３】
疾患が筋萎縮性側索硬化症である場合に使用するための請求項1から22のいずれかに記載の方法、使用のための化合物又は医薬組成物、化合物又は医薬組成物の使用。
【請求項２４】
疾患がアルツハイマー病である、請求項1から22のいずれかに記載の方法、使用のための化合物若しくは医薬組成物、又は化合物若しくは医薬組成物の使用。
【請求項２５】
疾患がパーキンソン病である、請求項1から22のいずれかに記載の方法、使用のための化合物若しくは医薬組成物、又は化合物若しくは医薬組成物の使用。
【請求項２６】
疾患がハンチントン病である、請求項1から22のいずれかに記載の方法、使用のための化合物若しくは医薬組成物、又は化合物若しくは医薬組成物の使用。
【請求項２７】
疾患がシヌクレイン病又はタウオパシーである、請求項1から22のいずれかに記載の方法、使用のための化合物若しくは医薬組成物、又は化合物若しくは医薬組成物の使用。
【請求項２８】
認知症、例えばパーキンソン病認知症及び前頭側頭型認知症、又は加齢に関連する神経毒性タンパク質の凝集の増大及び/若しくは増大した酸化ストレス若しくは自食作用の欠陥に関係する他の認知症及び記憶喪失状態である、請求項27に記載の方法、使用のための化合物若しくは医薬組成物、又は化合物若しくは医薬組成物の使用。
【請求項２９】
タクロリムスを用いる、請求項23から28のいずれかに記載の方法、使用のための化合物若しくは医薬組成物、又は化合物若しくは医薬組成物の使用。
【請求項３０】
0.05mgから1.2mgのタクロリムス又はその近い構造の類似体及び医薬として許容される担体を含む、神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患の治療に使用するための、経口投与可能な医薬組成物の単位用量。
【請求項３１】
疾患が、ALS、パーキンソン病、アルツハイマー病、又はハンチントン病である、請求項30に記載の使用のための単位用量。
【請求項３２】
タクロリムスを含む、請求項30又は31に記載の使用のための単位用量。
【請求項３３】
0.9mg、0.75mg、0.65mg以下、又は0.5mg以下、又は0.45mg以下のタクロリムスを含む、請求項30から32のいずれかに記載の使用のための単位用量。
【請求項３４】
0.05mg以上、0.1mg以上、又は0.15mg以上のタクロリムス又はその近い構造の類似体を含む、請求項30から33のいずれかに記載の使用のための単位用量。
【請求項３５】
錠剤又はカプセル剤の形態である、請求項30から34のいずれかに記載の使用のための単位用量。
【請求項３６】
神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療する方法であって、それを必要とする患者に医薬組成物を経口投与によって投与することを含み、該医薬組成物が、請求項30から35のいずれかに記載の量のタクロリムス又はその近い構造の類似体を含む、上記方法。
【請求項３７】
タクロリムスが1日1回以下投与される、請求項36に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療するための、極めて低い用量のタクロリムス又は近い構造の類似体の使用に関する。より具体的には、本発明は、筋萎縮性側索硬化症を治療するための、極めて低い用量のタクロリムスの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
タクロリムス(フジマイシン又はFK506とも呼ばれる)は、例えば、臓器移植を受けた患者において、また潰瘍性大腸炎又はある種の皮膚状態を治療するために、免疫抑制剤として臨床的に用いられる。タクロリムスは、プログラフ(登録商標)、アドバグラフ(登録商標)及びプロトピック(登録商標)などの商品名で市販されている。市販されるタクロリムスの剤形には、0.5mg、1mg、3mg及び5mgを含有するカプセル剤、及び濃度が0.05%から0.19%である皮膚状態用軟膏剤が含まれる。タクロリムスは、免疫を抑制して移植組織の拒絶反応を防ぐために、最も一般的には1日2回投与される。拒絶反応を防止しようとするとき、臨床的に用いられる用量は一般に、全血トラフ濃度(whole blood trough concentration)が少なくとも4mg/mLとなるように調整される。これは、0.075mg/kg/日から0.2mg/kg/日の範囲内の推奨される初回経口用量(12時間毎に2回の分割用量)を用いることによって実現され、平均70kgの患者の場合、1日に2回で約2.5mgから14mgの用量が必要となる。タクロリムスは関節炎の治療にも一般に1日当たり3mgで用いられている。恐らく、臨床ルーチン免疫抑制に用いられた最も低い用量は、重症筋無力症の治療の場合に記録されており、1日当たり2〜3mgであったが(Kanshiら, J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry 2005、76: 448〜450)、これは1日当たり最大50mgまでのプレドニゾロンと併用されていた(また体重の少ない女性に投与された可能性もある)。関節リウマチの治療に低用量のタクロリムスを使用する臨床試験がRheumatology、2004、43; 946〜948の記事に記載されており、その試験では、フェーズIIで1日当たり1mg、3mg及び5mgの用量のタクロリムスが用いられ、フェーズII試験のデータを考慮した上で、フェーズIII試験は1日当たり2mg及び3mgのタクロリムスを使用して行われた。
【０００３】
これらの確立されたタクロリムスの臨床的使用は、カルモジュリンを介してカルシニューリンを活性化するように作用することによって、Tリンパ球シグナル伝達とIL-2転写の両方を阻害する機序を介して機能すると考えられる。これらは用量依存的な機序なので、投与されるタクロリムスの量が多いほど免疫が強く抑制される。この機序は本発明に関与しておらず、上述の状態を治療するときに免疫が抑制されることが望ましいのでこれは好都合であるが、それは免疫警戒(immunovigilance)の低減をもたらすので、感染症又はリンパ腫のリスクの増大などの不利な点がないわけではない。
【０００４】
WO 2011/004194は、タクロリムスをある種の障害の治療に使用できることを開示している。しかし、WO 2011/004194は、そのような疾患を治療するために従来の免疫抑制剤の用量とは異なる用量のタクロリムスを用いるべきであるとは開示していない。
【０００５】
WO 2000/15208は、タクロリムスをある種の疾患の治療に使用できることを開示しており、慢性使用の場合の日用量は0.1mg/kgから30mg/kgであると述べられているので、70kgの人の場合、日用量は7.5mgから210mgになると予想される。この範囲は、免疫抑制剤としてのタクロリムスの使用に提案される通常の用量範囲と少なくとも同程度に高い。US 2004/007767は、タクロリムスに存在するプロペニル基の代わりにC21においてメチル基を有する修飾タクロリムスの使用に関し、これも慢性使用の場合の日用量が0.1mg/kgから30mg/kgであることを開示している。
【０００６】
Gerardら、J. Neurosciences、2010、30(7):2454〜2463によれば、タクロリムスを含めたイムノフィリンリガンドがFKBPの阻害を介して神経保護的効果を呈する可能性があること、及び観察によってFKBPがパーキンソン病を標的とする新規な薬物であることが確認されたと述べられている。非免疫抑制性イムノフィリンリガンド(それにより所望されない効果が回避される)を開発しようとする他者による研究を参照すれば、そのような非免疫抑制性のタクロリムスの類似体の1つであるGP1-1485は、パーキンソン病を有する患者に利益を与えなかったことが述べられている。
【０００７】
WO 2010/056754において、加齢に関連する様々な障害に使用することができる、マイクロカプセル化したmTORのインヒビター、とりわけラパマイシンが開示された。0.001mgから100mgの範囲内であるか又はさらに高い個々の用量が開示され、特に5mg/kgから100mg/kgの用量範囲が述べられた。例示されたのはラパマイシンの効果のみであった。
【０００８】
Pongら、Current Drug Targets、2003、2: 349〜356は、神経変性疾患の治療のためにイムノフィリン(immunophilia)リガンドが考慮され得ることを開示している。それには、タクロリムス(acrolimus)がカルシニューリンを阻害することができること、及び神経保護における非免疫抑制性リガンドの作用機序が未知であることが述べられている。しかし、免疫原性分子から離れて、使用に適した異なる構造の非免疫抑制剤リガンドを提供しようとする試みが為されたことが述べられた。さらにそれには、タクロリムスがALSの治療に無効であることが示されたと述べられた。
【０００９】
Chattapadhangaら、Current Medicinal Chemistry、2011、18: 5380〜5397は、ニューロイムノフィリン(neuroimmunophilia)リガンドの役割を議論しており、第一世代リガンドとしてタクロリムス並びにそのC21エチル及びC18ヒドロキシル類似体を述べている。それは次に、神経変性障害に有効な医薬品を見出すことを期待して当業者がどのように第二及び第三世代リガンドに移行したかについて記載している。
【００１０】
US 2010/0081681及びUS 2013/0102569は、TORのインヒビター、例えばラパマイシン及び類似体を加齢に関連する疾患の阻害に使用できることを開示しており、ラパマイシン、シクロスポリンA及びタクロリムスの免疫抑制効果について言及している。実験データはラパマイシンに限られており、療法において免疫抑制剤の用量より少ない用量を用いることができるという示唆は為されなかった。
【００１１】
驚くべきことに、タクロリムスは、特定の遺伝子活性を調節する、例えば特定の遺伝子を、例えば酸化ストレス耐性になる密度にスイッチオン又は上方制御する後成的機序を通して作用することから、極めて低い用量のタクロリムスがALSの治療に極めて低レベルで利益をもたらすことができることが発見された。
【００１２】
タクロリムスの一般的な毒性作用は、その免疫抑制剤の機序に関連していると考えられるので(Dumantら、J. Exp. Med. 1992、176: 751〜760)、免疫抑制を生じる用量より少ない用量を使用すれば、一般毒性は同様に生じないようになる。酸化ストレスは多くの神経変性状態の要因と考えられることから(Smithら、Neurochemistry International、2013、62:764〜775)、極めて低い用量のタクロリムス又はその近い構造の類似体を使用することによって酸化ストレスを低減させれば有利である。これは、上で述べたような副作用及び他の副作用、例えば高血糖及びII型糖尿病を回避する上で利益がある。
【００１３】
筋萎縮性側索硬化症(ALS)は、特に運動皮質、脊椎及び脳幹中の運動ニューロンの死滅に起因する進行性麻痺を引き起こす致命的な神経変性疾患である。この疾患は、呼吸に必要な筋肉、例えば横隔膜の筋肉が萎縮することによって、3年以内に死に至ることが多い。ALSは脊髄又は中枢神経系の延髄領域に病巣を有することが多く、その場所で運動ニューロンの欠失が最も顕著であり、運動ニューロンの欠失はその部位から遠ざかるにしたがって減少する傾向がある。かなりの証拠から、スーパーオキシドジスムターゼ1(SOD1)などのオキシダーゼが、恐らくその突然変異型を通して、疾患の発生の一端を担っていることが示唆されている。酸化ストレスの結果、凝集体が形成され、これが細胞障害又は細胞死を伴うと考えられている。慣例的な臨床的使用において利用可能な、進行又は疾患を遅らせる又は逆行させる処置はない。
【００１４】
驚いたことに、適正な極めて低い用量のタクロリムス又はその近い構造の類似体を使用することによって、SOD1及び/又はSOD2などのオキシダーゼの発現を後成的に制御できることが今回見出された。驚いたことに、それが、酸化酵素の発現を正常化する(損傷を低減させる)という点及び細胞の健康を増進させることに関与する機序を増加させる(例えば、自食作用を増進させることによる)という点で、酸化ストレスの結果生じるニューロンの損傷に関与する機序に有益効果を有することがさらに見出された。
【００１５】
これは、ALSのために最優先で利用されるものであるが、細胞損傷がタンパク質凝集体の形成に関係する他の疾患の治療にも利益があると考えられる。
【００１６】
用いられるタクロリムス又はその近い構造の類似体の用量は、臓器拒絶反応又は関節炎若しくは重症筋無力症などの疾患を治療するときに、その臨床的な免疫抑制効果を生じるために使用される用量より少ない。
【００１７】
本明細書に記載する治療目的のためには、現在のところ、タクロリムスを使用する方が近い構造の類似体を使用するより好ましい。
【００１８】
本発明においてタクロリムス又は近い構造の類似体が望ましい効果をそれにもたらす機序は、免疫抑制を実現する機序とは無関係である。実際に、従来の免疫抑制剤の用量で使用すると、最良でも十分に無効ではないと考えられる。タクロリムス及びその近い構造の類似体は、従来の免疫抑制剤の用量よりよりはるかに低い上限カットオフ(upper cut off)を有する、顕著な釣鐘型の用量反応曲線を有することが今回見出された。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１９】
【特許文献１】WO 2011/004194
【特許文献２】WO 2000/15208
【特許文献３】WO 2010/056754
【特許文献４】US 2010/0081681
【特許文献５】US 2013/0102569
【非特許文献】
【００２０】
【非特許文献１】Kanshiら, J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry 2005、76: 448〜450
【非特許文献２】Rheumatology、2004、43; 946〜948
【非特許文献３】Gerardら、J. Neurosciences、2010、30(7):2454〜2463
【非特許文献４】Pongら、Current Drug Targets、2003、2: 349〜356
【非特許文献５】Chattapadhangaら、Current Medicinal Chemistry、2011、18: 5380〜5397
【非特許文献６】Dumantら、J. Exp. Med. 1992、176: 751〜760
【非特許文献７】Smithら、Neurochemistry International、2013、62:764〜775
【発明の概要】
【００２１】
本発明は、神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療する方法であって、それを必要とするヒトに、免疫抑制を生じることなくタクロリムス又はその近い構造の類似体のトラフ全血レベルを少なくとも0.05ng/mLにする用量で、有効量のタクロリムス又はその近い構造の類似体を1日1回以下投与することを含む方法を提供する。
【００２２】
そのような方法で治療するのに適切な疾患には、特にALS、パーキンソン病、アルツハイマー病及びハンチントン病が含まれる。
【００２３】
適切には、本明細書に記載される方法は、0.001mg/kgから0.02mg/kgの用量のタクロリムス又はその近い構造の類似体を1日1回以下投与することを含む。
【００２４】
本明細書に記載される方法は、自食作用の増大及び/又は酸化ストレスの改善をもたらすことができ、後成的改変を含むことができる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】図Ａは、アルファ-シヌクレインを発現する酵母における、タクロリムスの寿命中位数に及ぼす効果を示す図である。
【図２】図Ｂは、タクロリムスで処理したときに、酵母がその開始生存率の50%に至るのにかかった時間を示す図である。
【図３】図Ｃは、可視のp-GFP-asyn-A30P凝集体を有する酵母細胞の割合におけるタクロリムスの効果を示す図である。
【図４】図Ｄは、虫(線虫(C. elegans))の生存率に及ぼすタクロリムスの効果を示す図である。
【図５】図Ｅは、虫(線虫)におけるポリQ-YFPの形成(formulation)に及ぼすタクロリムスの効果を示す図である。
【図６】図Ｆは、潜在的に神経毒性であるアルファ-シヌクレイン(synclein)を発現する虫の寿命中位数に及ぼすタクロリムスの効果を示す図である。
【図７】図Ｇは、SOD1の毒性凝集体を発現する虫の寿命中位数及び最大寿命に及ぼすタクロリムスの効果を示す図である。
【図８】図Ｈは、SOD1の突然変異体AM263を発現する虫の寿命中位数及び最大寿命に及ぼすタクロリムスの効果を示す図である。
【図９】図Ｉは、家族性ALSに関係するSOD1-G93A突然変異を発現する哺乳動物細胞におけるタクロリムスの効果を示す図である。
【図１０】図Ｊは、過酸化水素で処理した酵母細胞に及ぼすタクロリムスの効果を示す図である。
【図１１】図Ｋは、過酸化水素で処理した酵母細胞における遺伝子発現に及ぼすタクロリムスの効果を示す図である。
【図１２】図Ｌは、SOD1及びSOD2の転写レベルについてヒト細胞に及ぼすタクロリムスの効果を示す図である。
【図１３】図Ｍは、加齢マウスの脳内の内在性のタウ及びアルファ-シヌクレイン凝集体の自然な蓄積に及ぼすタクロリムスの効果を示す図である。
【図１４−１】図Ｎは、マウスの脳領域内のリン酸化タウ(phosphor-Tau)及びアルファ-シヌクレインの病巣に及ぼすタクロリムスの効果を示す図である。
【図１４−２】図１４−１の続きである。
【図１５】図Ｏは、虫の寿命の延長に及ぼすタクロリムス及びアスコマイシンの効果を示す図である。
【図１６】図Ｐは、虫の寿命の延長に及ぼすタクロリムス及びジヒドロタクロリムスを示す図である。
【図１７】図Ｑは、ニューロン再生の促進を示す、ラットにおける6か月までのアンフェタミン誘導性回転非対称アッセイ(rotational asymmetry assay)に及ぼすタクロリムスの効果を示す図である。
【図１８】図Ｕは、パーキンソン病及びアルツハイマー病などの神経変性(neurodegenerational)障害の治療に有効性を示す、ラットの脳内でアルファ-シヌクレイン及びp-タウに及ぼすタクロリムスの効果を示す図である。
【図１９】図Ｒは、低い用量の方が有効性が大きいことを示す、タクロリムスで処理された虫における用量反応範囲を示す図である。
【図２０】図Ｓは、低い用量の方が高い用量より有効であることを示す、Bus5虫についてのタクロリムスの用量反応を示す図である。
【図２１】図Ｔは、タクロリムスを投与した結果、酵母(S. Cerevisiae)の寿命プロファイルが延長したことを示す図である。
【図２２】図Ｖは、タクロリムスにより起こったBus8バックグラウンドにおける虫の寿命の延長を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
したがって、本発明は、神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療する方法であって、それを必要とするヒトに、免疫抑制を生じることなくタクロリムス又はその近い構造の類似体のトラフ全血レベルを少なくとも0.05ng/mLにする用量で、有効量のタクロリムス又はその近い構造の類似体を1日1回以下投与することを含む方法を提供する。
【００２７】
同様に、本発明は、免疫抑制を生じることなくタクロリムス又はその近い構造の類似体のトラフ全血レベルを少なくとも0.05ng/mLにする用量で1日1回以下投与される、神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療するためのタクロリムス又はその近い構造の類似体を提供する。
【００２８】
同様に、本発明は、神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療するための医薬品の製造におけるタクロリムス又はその近い構造の類似体の使用であって、該医薬品が、1日1回投与されたときに免疫抑制を生じることなく少なくとも0.05ng/mLのトラフ全血レベルを有する量のタクロリムス又はその近い構造の類似体を含有する、使用を提供する。
【００２９】
トラフ全血レベルは、適切には少なくとも0.075ng/mLであってもよく、例えば少なくとも0.2ng/mL、例えば少なくとも0.3ng/mL、又は少なくとも0.1ng/mL又は少なくとも0.4ng/mLであってもよい。
【００３０】
免疫抑制を回避するために、トラフ血中レベルは、タクロリムスが免疫抑制剤として使用されるときに免疫抑制剤としてみなされるレベルの4分の1未満になると予想される。一般に、これは、移植の拒絶反応を防止するために用いられる4ng/mLの3分の1未満、すなわち1.3ng/mL以下であることを意味する。
【００３１】
タクロリムス又はその近い構造の類似体によって与えられる治療域から最大の利益を受けるために、全血トラフレベルは、1.2ng/mL未満、例えば1.1ng/mL未満、例えば1.0ng/mLであるべきであると考えられる。
【００３２】
適切には、治療しようとする疾患は、ALS、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病及び他のシヌクレイン病(syncleinopathies)及びタウオパシー(taupathies)、例えば、パーキンソン病認知症及び前頭側頭型認知症、並びに加齢に関連する神経毒性タンパク質の凝集の増大及び/又は増大した酸化ストレス又は自食作用の欠陥(損傷した細胞構成要素を除去するための細胞の機序)に関係する可能性がある他の認知症及び記憶喪失状態である。上述のそれぞれは、本発明による治療のために本明細書に個々に開示される。現在のところ、前記疾患のそれぞれが、本明細書に記載される通りの極めて低い用量のタクロリムスを使用して治療されることが好ましい。
【００３３】
タクロリムス又はその近い構造の類似体が酸化ストレスを軽減するだけでなく、自食作用も促進することは、そのような疾患の治療に特に有利である。
【００３４】
現在のところ、本発明ではタクロリムスを用いることが好ましい。しかし、タクロリムスの近い構造の類似体を用いることも適切である。そのような類似体は、タクロリムスのC1〜C17、C19、C20及びC22〜C34までの構造を保持するが、C18及び/又はC21の修飾が許される。そのような修飾には、C18又はC21のいずれかの1つの水素原子をC1〜4アルキル、C2〜4アルケニル、ヒドロキシル又はメトキシル(methyoxyl)基で置換できることが含まれ、C21プロペニル基を水素原子、C1〜6アルキル基、他のC2〜6アルケニル基、ヒドロキシル基又はメトキシル基で置きかえることも含まれる。ある種の適切な化合物には、C21位が修飾された、例えばC21プロペニル基がメチル基、エチル基又はプロピル基で置きかえられた、タクロリムスの類似体が含まれる。他の適切な化合物には、C18水素原子がヒドロキシル基で置きかえられた類似体が含まれる。これらの化合物のあるものは、例えば、C21プロペニル基がメチル基で置きかえられた類似体、又はC18水素がヒドロキシル基で置きかえられた類似体(例えば、ここでは、C21プロペニル基が変わっていない又はメチル、エチル若しくはプロピル基で置きかえられている)は、タクロリムスより弱い免疫抑制剤である。米国特許第5,376,663号は、タクロリムスの類似体を調製する方法を開示している。タクロリムスのC21プロペニル基はまた、フルオロC1-6アルキル基、例えば2-フルオロエチル基、又は異なるプロペニル基、例えば1-メチルエテニル基で置きかえられてもよい。
【００３５】
用語「免疫抑制を生じない」は、免疫抑制の大きな副作用が通常起きないことを示す。これは、用いられるタクロリムス又は近い構造の類似体の用量が、患者においてTNFαレベルを実質的に低下させない用量である結果である。そのような化合物の用量が、70kgの成人において1日当たり1.3mg未満であれば(他の体重の場合は比例計算に従う)、免疫抑制をもたらさないとみなすことができると考えられる。しかし、人は個々に異なるので、当業者は、上記に示した通りに得られた血中レベルに従って行うことになる。
【００３６】
故に、70kgの患者に用いられることとなるタクロリムス又はその近い構造の類似体の最大日用量は、1.3mg(他の体重の場合は比例計算に従う)になると予想され、より適切には1.0mg以下の用量、好都合には0.9mg以下の用量が70kgの患者に用いられると予想され、例えば0.75mg(他の体重の場合は比例計算に従う)以下を任意の日に用いれば、所望の効果と副作用の間がより広がるものと予想される。
【００３７】
同一の発症機序が関与すると考えられる状態に関連する研究から、一部の治療においては用量を増加させると有効性が低減する可能性があるので、1日当たり0.6mg以下、例えば、1日当たり0.5mg以下、例えば1日当たり0.3μgの用量が特に適切であり得ることが示されている。
【００３８】
研究から、1日当たり0.05mg以上の用量のタクロリムス又は近い構造の類似体が適切であると予想され、時には、1日当たり0.1mg以上、例えば0.15mg以上の用量が好都合である場合があることが示唆されている。
【００３９】
故に、70kgの患者に適切な日用量(他の重量の用量は比例計算に従う)には、0.05mg、0.075mg、0.1mg、0.125mg、0.15mg、0.175mg、0.2mg、0.225mg、0.25mg、0.275mg、0.3mg、0.325mg、0.35mg、0.375mg、0.4mg、0.425mg、0.45mg、0.475mg、0.5mg、0.525mg、0.55mg、0.575mg、0.6mg、及び、0.625、0.65、0.675、0.7、0.725、0.75、0.775、0.8、0.825、0.85、0.85、0.875、0.9、0.925、0.95、0.975、1.0、1.025、1.075及び1.2のタクロリムス又はその近い構造の類似体(例えばタクロリムス)が含まれる。活性薬剤の用量は、適切には経口投与され、例えば、錠剤又はカプセル剤などの個別の単位用量として経口投与される。
【００４０】
投薬の提供の利便性のために、医師が一定用量のタクロリムスを一群の患者全員に用いたいと望むことが有利である場合もある。したがって、本明細書に提供されるのは、0.05mgから0.65mgのタクロリムス、例えば0.1mgから0.5mgのタクロリムス、例えば0.15mgから0.4mgのタクロリムス、例えば0.2mgから0.35mgのタクロリムス、特に0.3mgのタクロリムスを含む、上記に記載される通りの状態(及び、特に、ALS、パーキンソン病、アルツハイマー病又はホジキン病)の治療に使用するための医薬組成物である。そのような用量は、適切には1日1回以下投与され、好ましくは経口で投与される。
【００４１】
神経細胞内へのタンパク質凝集体の沈着によって特徴付けられる疾患の治療にタクロリムス及びその近い構造の類似体が有益な効果をもたらすのは、その後成的作用機序であることから、有益な結果は、1日1回未満、例えば、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30若しくは31日又はそれより長い日数毎に1回の投薬頻度によって得ることができる。1日1回以外に、患者の使い易さに特に適した間隔には、隔日、1週間に1回、10日に1回、1カ月に3回、2週間に1回、又は1カ月に1回が含まれてもよい。
【００４２】
本発明は、神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療する方法であって、それを必要とするヒトに有効量のタクロリムス又はその近い構造の類似体を1日1回以下投与することを含み、その用量が0.001mg/kgから0.02mg/kgである方法を提供することが、当業者であれば用量に関する前述の解説から理解されよう。
【００４３】
同様に、本発明は、0.001mg/kgから0.02mg/kgの用量で1日1回投与される、神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療するためのタクロリムス又はその近い構造の類似体を提供する。
【００４４】
同様に、本発明は、神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療するための医薬品の製造におけるタクロリムス又は近い構造の類似体の使用であって、該医薬品が、0.001mg/kgから0.02mg/kgのタクロリムス又はその近い構造の類似体を含有する、使用を提供する。
【００４５】
一般に、0.013mg/kg以下、例えば0.01mg/kg以下が用いられると予想される。適切には、0.0085mg/kg以下、例えば0.007mg/kgが用いられると予想される。
【００４６】
一般に、0.0014mg/kg超、例えば0.002mg/kg超が用いられると予想される。
【００４７】
現在のところ、0.0014mg/kgから0.0085mg/kg、例えば0.002mg/kgから0.007mg/kgのタクロリムスを用いるのが特に適していると考えられる。
【００４８】
そのような用量は、以前患者に用いられていた用量とはかなり異なることが理解されよう。
【００４９】
本発明は、有効量のタクロリムス又は近い構造の類似体を1日1回以下投与して後成的改変を行い、それによって自食作用の増進及び/又は酸化ストレスの低減をもたらすことによって、神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療する方法であって、それを必要とするヒトに投与することを含む方法を提供する。
【００５０】
同様に、本発明は、後成的改変を行うことによって自食作用の増大及び/又は酸化ストレスの改善をもたらす量を1日1回以下投与することによって、タンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療するのに使用するためのタクロリムス又はその近い構造の類似体を提供する。
【００５１】
同様に、本発明は、1日1回以下投与することによって神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療するための医薬品の製造におけるタクロリムス又はその近い構造の類似体の使用であって、該医薬品が、後成的改変を行うことによって自食作用の増大及び/又は酸化ストレスの改善をもたらす量のタクロリムス又はその近い構造の類似体を含有する、使用を提供する。
【００５２】
用いられる用量及び投与計画は上記に示す通りであってもよい。
【００５３】
さらなる態様では、本発明は、0.05mgから1.3mgのタクロリムス又はその近い構造の類似体及び医薬として許容されるその担体を含有する、神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患の治療に使用するための、単位用量の医薬組成物を提供する。
【００５４】
疾患は、上記に示した通りであってもよく、例えばALSであってもよい。
【００５５】
単位用量は、1.2mg以下、好都合には0.75mg以下、例えば0.6mg以下、例えば0.4mg以下の用量のタクロリムス又はその近い構造の類似体、好ましくはタクロリムスを含有してもよい。
【００５６】
単位用量は、0.06mg以上、好都合には0.1mg以上、例えば0.15mg以上のタクロリムス又はその近い構造の類似体、好ましくはタクロリムスを含有してもよい。
【００５７】
タクロリムス又はその近い構造の類似体は、溶媒和物、例えば、水和物又はアルコラートとして存在してもよい。適切なタクロリムスは、一水和物などの水和物として用いられる(本明細書で重量が言及されるとき、それらは溶媒和している分子の重量を含まない)。
【００５８】
単位用量は、上記で述べた特定の量のいずれを含有してもよい。
【００５９】
現在のところ、単位用量が、タクロリムスを、例えばタクロリムス一水和物として含有すれば好ましい。
【００６０】
所望であれば、プログラフ(登録商標)などの既存の市販品を購入し、その内容物を分割して所望の用量にしてもよく、次いでそれを経口投与用の硬ゼラチンカプセル内に入れてもよい。
【００６１】
単位用量(unit dose)は、注射による投与に適していてもよいが、単位用量は口を介する投与に適していることが好ましい。単位用量は、液体、例えば、容器中の溶液又は懸濁液であってもよいが、単位用量は非液体が好ましいと考えられる。適した固体の単位剤形には、錠剤及びカプセル剤が含まれ、それらのうちカプセル剤の方が適切である。単位用量の調製のベースとなるタクロリムスを含有する医薬組成物は、熟練した医薬化学者により数十年にわたり研究されている。
【００６２】
場合によって、医薬組成物は経口投与用に製剤化される。場合によって、組成物は化合物の懸濁液を適したビヒクル中に含む。経口投与用のビヒクルの非限定的な例には、リン酸緩衝食塩水(PBS)、5%デキストロース水溶液(D5W)及びシロップが含まれる。組成物は、保管及び投与期間にわたって用量の濃度を安定化させるために製剤化されてもよい。場合によって、組成物は、許容可能な可溶化剤を任意選択で含有する希釈剤、例えば水、生理食塩水、及び緩衝液に溶解した活性化合物の溶液であってもよい。好都合な形態では、組成物は固体剤形を含む。場合によって、固体剤形は、カプセル剤、カプレット、舐剤、小袋(sachet)、又は錠剤を含む。場合によって、固体剤形は、液体を充填した剤形である。場合によって、固体剤形は、固体を充填した剤形である。場合によって、固体剤形は、固体を充填した錠剤、カプセル剤、又はカプレットである。場合によって、固体を充填した剤形は、粉末を充填した剤形である。場合によって、固体剤形は、微粉化粒子、顆粒又はマイクロカプセル化剤の形態の化合物を含む。場合によって、組成物は界面活性剤を含有してもよい乳濁液を含む。場合によって、固体剤形は、ラクトース、ソルビトール、マルチトール、マンニトール、コーンスターチ、ジャガイモデンプン、結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、アラビアゴム、ゼラチン、コロイド状二酸化ケイ素、クロスカルメロースナトリウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、医薬として許容可能な賦形剤、色素、希釈剤、緩衝剤、湿潤剤、防腐剤、香味剤、担体、及び結合剤の1種以上を含む。場合によって、固体剤形は、固体剤形又は香味剤の製造、加工又は安定性を容易にする1種以上の材料を含む。
【００６３】
そのような製剤を考慮するとき、当業者であれば、タクロリムスの製剤化及び低用量の薬剤の製剤化全般に関する当技術分野における長年にわたる経験に求めることができよう。
【００６４】
上記で示した通りに、タクロリムス又は近い構造の類似体を1日に1回より多く投与しないことが普通であり、非常に好ましい。しかし、はるかに好ましくない態様では、本発明はまた、タクロリムス又は近い構造の類似体が1日に2回投与される(2回の分割用量として)ように改変された、上記で定めた通りの方法及び使用を提供する。
【００６５】
出願人は薬物動態解析を行った。マウスでの2mg/kg/日の用量が、ヒトの経口用量0.44〜0.33mg/日(経口、70kgの人の場合)に相当することが見出された。タクロリムスによって効果が生じたマウスの研究からの好ましい用量により、70kgの人の場合、血中レベルが1〜0.4mg/mLとなる0.22〜0.16mg/日の経口用量が特に有効であることが示された。
【００６６】
さらなる態様では、本発明は、単位用量の医薬組成物であって、0.05mgから1.2mgのタクロリムス又はその近い構造の類似体及び医薬として許容されるその担体を含有する、神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患の治療に使用するための、単位用量の医薬組成物を提供する。
【００６７】
適切には、疾患はALSであり得る。適切には、疾患はパーキンソン病であり得る。適切には、疾患はアルツハイマー病であり得る。適切には、疾患はハンチントン病(Huntingdon's  disease)であり得る。
【００６８】
単位用量は、0.9mg以下又は0.75mg以下、例えば、0.65mg以下、例えば0.5mg以下又は0.45mg以下の用量のタクロリムス又はその近い構造の類似体、好ましくはタクロリムスを含有してもよい。
【００６９】
そのような単位用量は、本明細書に記載された通りの投与のためのものであってもよく、特に経口投与のためのものであってもよい。
【００７０】
単位用量は、0.05mg以上、好都合には0.1mg以上、例えば0.15mg以上のタクロリムス又はその近い構造の類似体、好ましくはタクロリムスを含有してもよい。
【００７１】
故に、適切には、単位用量は、0.05mgから0.9mg、例えば0.1mgから0.75mg、例えば0.15mgから0.6mg又は0.15mgから0.5若しくは0.45mgのタクロリムスを含有してもよい。そのような単位用量を、例えば錠剤又は好ましくはカプセル剤としての経口投与に適合させてもよい。
【００７２】
現在のところ、 骨粗鬆症の治療に好都合なタクロリムスの日用量は、0.05から0.65mg、例えば、0.1mgから0.5mg、例えば0.15mgから0.45mg、例えば0.3mgであると想定される。そのような用量は、適切には経口で、望ましくは1日1回以下、例えば1日1回、本明細書に記載される単位用量を使用して投与される。
【００７３】
本明細書における実施例から、タクロリムスの効果が酵母、虫及び哺乳動物に生じることが示され、それらから、酸化ストレス及び自食作用に及ぼすその能力が進化的に保存されることが示される。故に、ヒトの疾患は、マウスを含む他の種と同様に、タクロリムス(及び近い構造の類似体)で治療することができると予想される。
【００７４】
以下の実施例は、本発明を例示する。本明細書においてRDC5への言及はタクロリムスを指す。
【実施例】
【００７５】
[実施例1]
タクロリムスによる凝集体のクリアランスの実証
アルファ-シヌクレイン(A30P)を発現する酵母を使用して、凝集体の構築及び生存率に及ぼすその効果をモデル化した。酵母培養物を定常期まで増殖させ、老化させた(0日目)。その後の日に、種々のシヌクレインカセットを発現する菌株で、図Aに示される様々な処理下で、生存率の測定を行った。様々な培養物がその開始生存率の50%に至るのにかかった時間(日数)を算出し(図B中の寿命中位数)、生存率に及ぼす治療介入の効果の一般的尺度として使用する。a-シヌクレイン-A30Pの毒性作用は、寿命中位数を50%超低減させる(図B、又はp対照(図A中)をp-GFP-asyn-A30P(図A中、DMSO処理)と比較することによる)。タクロリムスを有するDMSOで処理したp-GFP-asyn-A30Pカセットを発現する培養物と比較すると、RDC5処理は、p-GFP-asyn-A30Pの発現が培養物に及ぼす負の効果を改良できることが示される。
【００７６】
これらの細胞の顕微鏡検査により、図Cに示す通りに、タクロリムスで処理すると可視のp-GFP-asyn-A30P凝集体を有する細胞の数も低減できることが示された。
【００７７】
[実施例2]
タクロリムスはポリq(HD)毒性を改良する
次に、タクロリムスを、様々な神経変性疾患に関係する凝集しやすいタンパク質を発現する、幾つかの虫のモデルで検査した。
【００７８】
培養物を同調させ、老化させることによって、虫(線虫)の生存率をアッセイした。所与の個体群中の各虫を、その頭を手作業で軽くたたき、動きを注視することによって、生存率について検査した。毎日繰り返して、下記に示すような生存率(経時寿命)曲線を決定する。
【００７９】
凝集しやすいポリQ-YFPタンパク質は、ハンチントン病における病原性タンパク質に関連する。虫で発現されると、それは虫の寿命を有意に短縮する(黒色対青色曲線の比較)。タクロリムスは、毒性のポリQタンパク質を発現する虫の寿命プロファイルを、野生型(WT)のそれに匹敵するプロファイルに回復させることができる(図D参照)。
【００８０】
タクロリムスで処理した虫を、それと同齢の対照と顕微鏡的に比較して、2つの個体群で生じた凝集の程度の尺度である、平均凝集体ピーク強度を各虫について決定した。タクロリムスで処理された虫及び対照で処理された虫におけるポリQ凝集体の数及び強度も調査した(図E参照)。
【００８１】
タクロリムスで処理された虫のピークは減少しないが、そのピークは有意に強度が低下していることから、それらの形成速度が低減する又は溶解速度が促進されることが示される(図E参照)。
【００８２】
[実施例3]
タクロリムスはアルファ-シヌクレイン(PD)の毒性を改良する
アルファ-シヌクレインは、パーキンソン病の病理に関わる凝集しやすいタンパク質である。A-synを発現する虫は、これらの凝集体の毒性のために寿命が短くなる。タクロリムスは、毒性のアルファ-シヌクレインを発現する虫の寿命中位数を有意に19%改善することができる。これは図Fに見られる。
【００８３】
[実施例4]
タクロリムスはSOD1(ALS)毒性を改良する
突然変異体のSOD1は、特定のALSの病理に関わる凝集しやすいタンパク質である。突然変異体SOD1(127X)を発現する虫は、これらの凝集体の毒性及びそれに続く酸化ストレスの増大のために寿命が短くなる(黒色対青色プロファイルの比較)。タクロリムスは、SOD1の毒性凝集体を発現する虫の寿命中位数を有意に37%改善することができる(黒色対赤色プロファイルの比較)。これは図Gに示される。
【００８４】
[実施例5]
自食作用の実証
タクロリムスは、SOD1を発現する線虫の生存率(寿命)を改善することが見られる(実施例4に見られる)が、機能的な自食作用を必要とする。bec-1は自食作用に不可欠な構成要素である。bec-1のRNAiノックダウンを使用することによって、タクロリムスには寿命を延長させるために自食作用が必要であり、故に自食作用が凝集体の毒性の低減におけるタクロリムスの作用モードの一部であることが示された。
【００８５】
bec-1は、哺乳動物の自食作用タンパク質Atg6/Vps30/Beclin1の線虫での相同分子種をコードする。相同性によって、BEC-1は、自食作用タンパク質を前オートファゴソーマル構造体(preautophagosomal structure)に配置する一端を担う、クラスIIIホスファチジルイノシトール3-キナーゼ複合体の一部であり得る。
【００８６】
図Hに見られる通り、SOD1突然変異体(AM263)を発現する虫は、対照の虫と比較して有意な寿命低減を示す(前節参照)。タクロリムスは、突然変異体の毒性作用を低減させ、低減した生存率の表現型を改良することができる。
【００８７】
SOD1突然変異体バックグラウンドでbec-1をRNAiノックダウンすると、寿命がさらにまた低減する(黄色と橙色曲線の比較)。しかし、bec-1がノックアウトされていると、タクロリムスは寿命プロファイルを(以前できたように)改善することができない(橙色と薄灰色曲線の比較)。
【００８８】
これにより、タクロリムスは寿命表現型を改善するために自食作用を用いることが明示されることから、自食作用がRDC5の作用モード(MOA)の一部であることが示される。
【００８９】
[実施例6]
タクロリムスは哺乳動物細胞においてSOD1の毒性を改良する
SOD1-G93A(家族性ALSを引き起こすことが知られている突然変異)及び対照ベクターを発現するNSC-34細胞を、100ng/mlのタクロリムス又は対照で24時間処理した。
【００９０】
次いで、トリパンブルーを排除できないことを使用して、細胞を死亡率について評価した。細胞がその細胞質からトリパンブルーを排除できないならば、それは死滅した又は死滅しかけていると分類する。したがって、トリパンブルーを蓄積する細胞集団の割合が下がれば、死滅した又は死滅しかけた細胞が少なくなることを示す。
【００９１】
図Iに見られる通り、対照で処理された、WT SOD1を発現する細胞株は、その細胞のおよそ15%がトリパンブルーを排除できない。これが、SOD1の病原性G93A突然変異型を発現する細胞株では40%に増加することから、これらの細胞のより多くの割合が死滅した又は死滅しかけていることを示している。これにより、SOD1の病原性対立遺伝子が細胞死を誘導するという、文献で為された以前の観察が確認される。
【００９２】
この細胞株を100ng/mlのRDC5で処理すると、トリパンブルーを排除することができる細胞の割合が25%に下がることから、対照で処理されたそれらの等価物と比較して、それより少ないタクロリムス処理細胞が死滅した又は死滅しかけていることが示される。
【００９３】
[実施例7]
酵母及びHela細胞における酸化ストレス耐性に及ぼすタクロリムスの効果の実証
酸化ストレスは、多くの神経変性疾患における重要な要因でもある。以下の実験は、如何にしてタクロリムスが酸化ストレスを低減させることができるのか、また如何にすればそうなるのかを示すように計画された。
【００９４】
酵母における酸化ストレス耐性
示した通りに処理した3日齢の酵母培養物を2つに分け、1つを過酸化物で処理した。両方の培養物を生存率についてアッセイした。図Jに提示するデータは、各群について、過酸化物で処理した培養物の生存率を、過酸化物で処理していない培養物の生存率で除したものとして表している。
【００９５】
図Jに示す結果を要約すれば、タクロリムスで処理すると、3日齢の酵母培養物において過酸化物耐性が増大する(過酸化物は酸化ストレスの代替として使用される)。
【００９６】
酵母における酸化ストレス耐性の作用モード
RDC5で処理された細胞が改善された酸化ストレス耐性を有することができるようになる遺伝子発現の相違を明らかにするために、対照又はタクロリムスで処理された酵母細胞で転写レベルを比較した。
【００９７】
図K中の2つのグラフに示すデータは、過酸化物及びRDC5処理下での酵母における遺伝子発現レベルを比較する。タクロリムスは、スーパーオキシドジスムターゼを含む、過酸化物で処理した場合と同様の遺伝子セットの転写を誘導する。
【００９８】
このことから、タクロリムスが、酸化ストレスに対処する細胞の自然な機序を促進することが明示される。
【００９９】
ヒトの細胞におけるタクロリムス及び酸化ストレス
次に、RDC5処理下でのHela細胞の遺伝子発現様式を解析して、RDC5又は対照での処理下でのSOD1の発現及びSOD2の遺伝子発現を観察した。
【０１００】
図Lの結果から、タクロリムスで処理されたHela細胞のSOD1及びSOD2転写レベルが高くなっていることが示され、タクロリムスで処理されたヒトの培養細胞は、酵母と同様に酸化ストレス耐性が改善していることが示唆される。
【０１０１】
[実施例8]
マウスモデル
MUS_ND_01
WTの加齢マウスを使用して、ヒトにおいて疾患の進行に関与すると考えられる加齢マウスの脳内の内在性のタウ及びa-シヌクレイン凝集体の自然な蓄積を試験した。その結果は図Mに見られる。
【０１０２】
IHCによって決定されたリン酸化タウ(phospho-Tau)及びα-シヌクレインの局在の画像をコンピュータで解析した。加齢によって誘導される、線状体内のα-シヌクレインとリン酸化タウの病巣の強度の増大は、両方とも0.5mg/kg/日のタクロリムスでの処理によって低減させることができる。加齢に依存しないが、黒質内のリン酸化タウの病巣の強度は、0.5mg/kg/日での処理によって低減させることができる。加齢によって誘導される黒質内のα-シヌクレイン及び視床内のリン酸化タウの病巣の強度の増大は、ここで検査したいかなる量のタクロリムスの処理によっても低減させることができない。視床内のα-シヌクレインの病巣の強度は、加齢によってもタクロリムス処理によっても影響を受けない。このデータから、タクロリムス処理は向神経活性であるだけでなく、リン酸化タウ及びα-シヌクレインの局在にも影響を及ぼすことができることが示唆される。
【０１０３】
これにより、タンパク質凝集体の蓄積の防止において、0.5mg/kg/日のタクロリムスが、それより高用量、例えば8mg/kg/日又は2mg/kg/日より優れた効果を有することが明示される。
【０１０４】
データはプログラムimage_read.mによって解析され、平均及び標準誤差エラーバーが図Nに示される通りに各群についてプロットされる。12か月齢の対照からの有意な逸脱は(p<0.05のt検定の結果によって評価した場合)、示す通りに印を付けた(特に示さなければ有意差はない)。
【０１０５】
これによって、2mg/kg/日又は8mg/kg/日のタクロリムス用量より0.5mg/kg/日のタクロリムス用量の方が効果が大きいことがやはり明示される。
【０１０６】
[実施例9]
タクロリムスの近い構造の類似体の効果
【０１０７】
【化１】
2019104746.tif 000002
【０１０８】
図Oに示す寿命プロットから、アスコマイシン(21-エチル類似体)がタクロリムスと同程度に有効に虫の寿命を延長させることができることが示される。図Oにおけるこのプロットから、異なる供給源のタクロリムスは、虫における寿命の延長に、恐らく供給源の品質に起因する多様な効力を及ぼすことも示される(Sigma対Evita)。
【０１０９】
図Pに示す寿命プロットから、ジヒドロタクロリムス(21-プロピル類似体)がタクロリムスとほぼ同程度に有効に虫の寿命を延長させることができることが示される。このプロットから、異なる供給源のRDC5は、虫における寿命の延長に多様な効力を及ぼすことも示される(Sigma対Evita)。
【０１１０】
図O及びPに提示されるこのデータから、極めて低い用量のタクロリムスがその効果を示す機序が、近い構造の類似体、例えばジヒドロタクロリムス及びタクロリムスの21-エチル類似体にも存在することが明示される。
【０１１１】
[実施例10]
神経細胞再生
試験の概要
18か月齢の雌のフィッシャーラットに1mg/kg/日のRDC5又はビヒクルを1週間に6日皮下投与(s.c.)し、6-OHDAを注入してから3週間後に開始してエンドポイント(およそ6か月)まで継続した。ラットの行動障害をアンフェタミンにより誘導される回転非対称検査によって評価し、それは6-OHDA傷害の2週間後から開始して、2か月に1回、追跡調査期間の終わりまで(およそ6か月)継続した。死後に神経試料にHPLCを使用して、ドーパミン及びその代謝産物のレベルを決定した。脳の非傷害側からの脳切片の組織診断を使用して、加齢に関連するp-タウ及びアルファ-シヌクレインの蓄積並びにドーパミン作動性神経細胞の数を調査した。3か月  n=5(選別)、6か月  n=20(選別)。
【０１１２】
回転非対称アッセイ
一試験では、加齢ラットを6-OHDAで非対称に傷害し、傷害から2週間後並びに2、4及び6か月後に、アンフェタミンによって誘導される回転非対称アッセイによって行動から評価した。傷害された動物には、傷害された側に向って自然に回転する傾向がある(すなわち、脳の左側が障害されたとき、時計回りから反時計回りを引くと(CW-CCW)正である)。これは、同側性運動として知られている。傷害の影響が神経再生性化合物の処置によって低減すれば、CW-CCWは、対照で処置された同齢の対照より0に近くなる、すなわち、同側性運動の程度が減少するはずである。
【０１１３】
本試験では、図Qに示す通りに、両方の群のラット(対照処置及びRDC5処置)を処置(15日)の前にアッセイし、自然な回転に有意差がなく、CW-CCWがおよそ2500であったことが示された。これにより、処置前に2つの群の間に相違がないことが示される。アッセイを2、4及び6か月のタイムポイントで繰り返したとき、対照で処置した群とRDC5で処置した群の間の相違は次第に大きくなり、RDC5で処置したラットは次第に同側性回転が少なくなったことが示された。対照的に、対照で処置したラットは、同側性運動の有意な減少を示さなかった。この動向の結果として、RDC5で処置されたラットでは、6か月のタイムポイントまでに対照に対して同側性運動が有意に低減する。これにより、RDC5は神経再生を促進できることが示唆される。
【０１１４】
p-タウ及びα-シヌクレインのIHC解析
IHCを使用して、α-シヌクレイン及びリン酸化タウ凝集体を含有する細胞の画分、並びにラットからの脳切片における凝集様式を評価した。結果を図Uに示す。
【０１１５】
データを、平均+SEMとして提示する。ビヒクル3か月、n=3;ビヒクル6か月、n=6;RDC5 1mg/kg 3か月、n=5;RDC5 1mg/kg 6か月、n=5である。データをビヒクル対RDC5のスチューデントt検定を使用して解析した。
【０１１６】
図Uに見られる通りに、RDC5 1mg/kg 3か月の群が、p-タウ陽性細胞とα-シヌクレイン陽性細胞の両方で対照処置より有意に低い数を提示した。
【０１１７】
このデータは、RDC5がパーキンソン病及びアルツハイマー病などの凝集体に基づく神経変性障害の治療に有益であるということに一致する。
【０１１８】
試験により(チロシンヒドロキシラーゼ(tyrosine  hydroylase)を用いた染色)、効果がドーパミンレベルの増大によって生じたのではないことが示された。
【０１１９】
[実施例11]
単位用量
硬ゼラチンカプセルに以下の組成物を充填した:
【０１２０】
【表１】
2019104746.tif 000003
【０１２１】
0.3mgのタクロリムスを含有する上記の通りのカプセル剤1つを(集団の)健康なヒトのボランティアに連続して3日間毎日投与した。投与の結果として、血中TNF-αレベルに有意な変化は起こらなかった。同様に、0.6mgのタクロリムスを健康なボランティアに毎日投与した結果として、TNF-αレベルに変化は起こらなかった。観察されたタクロリムスの平均トラフレベル(各用量の投与後24時間のレベル)はおよそ220pg/mLであった。観察されたタクロリムスの平均ピークレベルはおよそ3700pg/mLであり、曲線下の平均面積はおよそAUC O_t = 23500(h*pg/mL)であった。
【０１２２】
上のカプセル剤は、上文に記載された治療を施すために使用することができる。
【０１２３】
そのようなカプセル剤2つを同時に使用して単回用量を0.6にすると、トラフレベルが約440pg/mLとなることが予想される。
【０１２４】
[実施例12]
タクロリムスの用量の最適化
以下に概説することから、RDC5が虫の寿命延長、骨芽細胞の酸化ストレスに対する反応において釣鐘型の用量反応を生じることが示される。
【０１２５】
これらの用量から、RDC5の有効用量範囲が定められる。
【０１２６】
【表２】
2019104746.tif 000004
【０１２７】
1ug/ml及び10ug/mlという低い方の用量が、Bus5虫のCLSの延長に最も効力がある(20ug/mlは汚染されていた)。
【０１２８】
【表３】
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【０１２９】
10ug/mlという低用量が、Bus8虫の健康寿命の延長に最も効力がある。20ug/ml及び40ug/mlという高い方の用量は、寿命中位数及び最大寿命の延長では10ug/mlの効力に匹敵するが、健康寿命では匹敵しない。
【０１３０】
(大腸菌(Coli)食物源及びFUDRは、寿命に影響を及ぼす可能性があるので除外した。)
【０１３１】
図Rに示す通り、虫における用量反応、つまり用量の下端における→で示されるCLSの狭い有効域を検査したところ、10ug/mlが健康寿命を改善するのに一様に最も効力のある用量であり、さらに低い用量でも同様に有効な場合があり、40ug/mlという高用量は有効性が常に一番低い。
【０１３２】
Bus8虫では、健康寿命の有効用量範囲が小さく、寿命中位数を考慮するとそれより用量反応の範囲は広いが、10ug/mlのとき健康寿命の延長と寿命中位数の延長の両方で効力のピークとなる。これを図Sに示す。
【０１３３】
Bus8虫では、やはり健康寿命の場合は有効用量範囲が小さく、寿命中位数の場合はそれより用量反応の範囲が広い。健康寿命の延長の場合は1ug/mlのときに、寿命中位数の延長の場合は10ug/mlのときに効力のピークとなる。
【０１３４】
さらなる実験において、3日に2回投薬しても対照と比較して寿命の有意な増加が生じ、3日に1回投薬すると有意な寿命の増加が生じる(投薬が寿命の早期に開始されなかったときを除く)ことが判明した。これは、本明細書に記載する所望の治療効果が毎日の投与より少ない投与で実現されることと一致している。
【０１３５】
[実施例13]
タクロリムスは酵母及び虫の老化を遅延させる
酵母のバイオスクリーン(bioscreen)により、老化酵母培養物の経時寿命プロファイルが測定される。寿命中位数は、所与の個体群の50%が死ぬ時間として定義される。相対生存率(以下の図表で表される)は、培養物の生存率に及ぼす治療の効果を、対照ビヒクルで処理された培養物の割合として比較する。RDC5は、酵母の経時寿命プロファイルを増殖率に影響を及ぼすことなく延長することができることが確認された。
【０１３６】
RDC5で処理された酵母培養物は、対照で処理された培養物より寿命中位数が有意に長かった。よって、RDC5は、老化及び望ましくない脂肪蓄積などの加齢に関連する疾患の発症を遅延させることができると考えられる。寿命に及ぼす影響を図Tに示す。
【０１３７】
少なくとも虫80匹の虫培養物を、寿命が持続する間、手作業で毎日評価した。RDC5は、酵母と同様に虫の個体群の健康寿命及び寿命中位数も延長することができる。
【０１３８】
バックグラウンドがBus8である虫の寿命に及ぼすタクロリムスの効果を図Vに示す。
【０１３９】
10ug/mlという低用量がBus8虫における健康寿命の延長に最も効力がある。
【図１】
2019104746.tif 000006
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４−１】
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【図１４−２】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【手続補正書】
【提出日】平成31年3月14日(2019.3.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療する方法において使用するための、タクロリムス又はその近い構造の類似体を含む医薬組成物であって、それを必要とするヒトに1日1回以下投与され、タクロリムス又はその近い構造の類似体の用量は0.001mg/kg〜0.02mg/kgであり、
タクロリムスの近い構造の類似体が、C18又はC21位のいずれかの1つの水素原子がC1〜4アルキル、C2〜4アルケニル、ヒドロキシル又はメトキシル基で置換されているタクロリムス誘導体、又は、C21プロペニル基が水素原子、C1〜6アルキル基、フルオロC1〜6アルキル基、他のC2〜6アルケニル基、ヒドロキシル基又はメトキシル基で置きかえられたタクロリムス誘導体であり、
神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患が、
(i)筋萎縮性側索硬化症、
(ii)アルツハイマー病、
(iii)パーキンソン病、
(iv)ハンチントン病、及び
(v)シヌクレイン病又はタウオパシー、ここで、シヌクレイン病又はタウオパシーは、認知症、例えばパーキンソン病認知症及び前頭側頭型認知症、又は加齢に関連する神経毒性タンパク質の凝集の増大及び/若しくは増大した酸化ストレス若しくは自食作用の欠陥に関係する他の認知症及び記憶喪失状態である
からなる群より選択される、上記医薬組成物。
【請求項２】
用量が0.013mg/kg以下、0.01mg/kg以下、0.0085mg/kg以下、又は0.007mg/kg以下である、請求項1に記載の医薬組成物。
【請求項３】
用量が0.0014mg/kg超又は0.002mg/kg超である、請求項1又は2に記載の医薬組成物。
【請求項４】
用量が0.0014mg/kgから0.0085mg/kg又は0.002mg/kgから0.007mg/kgである、請求項1から3のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５】
タクロリムスを含む、請求項1から4のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項６】
神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患が筋萎縮性側索硬化症である、請求項1から5のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項７】
神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患が筋萎縮性側索硬化症であり、タクロリムスを含む、請求項1から6のいずれかに記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３９】
10ug/mlという低用量がBus8虫における健康寿命の延長に最も効力がある。
本発明の実施形態として例えば以下を挙げることができる。
［実施形態１］
神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療する方法であって、それを必要とするヒトに、免疫抑制を生じることなくタクロリムス又はその近い構造の類似体のトラフ全血レベルを少なくとも0.05ng/mLにする用量で、有効量のタクロリムス又はその近い構造の類似体を1日1回以下投与することを含む、上記方法。
［実施形態２］
免疫抑制を生じることなくタクロリムス又はその近い構造の類似体のトラフ全血レベルを少なくとも0.05ng/mLにする用量で1日1回以下投与される、神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患の治療に使用するためのタクロリムス又はその近い構造の類似体。
［実施形態３］
神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療するための医薬品の製造におけるタクロリムス又はその近い構造の類似体の使用であって、該医薬品が、1日1回投与されたときに免疫抑制を生じることなく少なくとも0.05ng/mLのトラフ全血レベルを有する量のタクロリムス又はその近い構造の類似体を含有する、上記使用。
［実施形態４］
トラフ全血レベルが少なくとも0.075ng/mL、少なくとも0.2ng/mL又は少なくとも0.3ng/mLである、実施形態1から3のいずれかに記載の方法、使用のための化合物又は化合物の使用。
［実施形態５］
トラフ全血レベルが1.2ng/mL未満、1.1ng/mL未満又は1.0ng/mL未満である、実施形態1から4のいずれかに記載の方法、使用のための化合物又は化合物の使用。
［実施形態６］
タクロリムスを用いる、実施形態1から5のいずれかに記載の方法、使用のための化合物又は化合物の使用。
［実施形態７］
神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療する方法であって、それを必要とするヒトに有効量のタクロリムス又はその近い構造の類似体を1日1回以下投与することを含み、その用量が0.001mg/kgから0.02mg/kgである、上記方法。
［実施形態８］
0.001mg/kgから0.02mg/kgの用量で1日1回投与される、神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患の治療に使用するためのタクロリムス又はその近い構造の類似体。
［実施形態９］
神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療するための医薬品の製造におけるタクロリムス又は近い構造の類似体の使用であって、該医薬品が、0.001mg/kgから0.02mg/kgのタクロリムス又はその近い構造の類似体を含有する、上記使用。
［実施形態１０］
0.001mg/kgから0.02mg/kgを用いる、実施形態6から8のいずれかに記載の方法、使用のための化合物又は化合物の使用。
［実施形態１１］
0.013mg/kg以下、0.01mg/kg以下、0.0085mg/kg、又は0.007mg/kgを用いる、実施形態7から10のいずれかに記載の方法、使用のための化合物又は化合物の使用。
［実施形態１２］
0.0014mg/kg超又は0.002mg/kg超を用いる、実施形態7から11のいずれかに記載の方法、使用のための化合物又は化合物の使用。
［実施形態１３］
0.0014mg/kgから0.0085mg/kg又は0.002mg/kgから0.007mg/kgを用いる、実施形態7から12のいずれかに記載の方法、使用のための化合物又は化合物の使用。
［実施形態１４］
タクロリムスを用いる、実施形態7から13のいずれかに記載の方法、使用のための化合物又は化合物の使用。
［実施形態１５］
有効量のタクロリムス又は近い構造の類似体を1日1回以下投与して後成的改変を行い、それによって自食作用の増進及び/又は酸化ストレスの低減をもたらすことによって、神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療する方法であって、それを必要とするヒトに投与することを含む、上記方法。
［実施形態１６］
後成的改変を行うことによって自食作用の増大及び/又は酸化ストレスの改善をもたらす量を1日1回以下投与することによって、タンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療するのに使用するためのタクロリムス又はその近い構造の類似体。
［実施形態１７］
1日1回以下投与することによって神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療するための医薬品の製造におけるタクロリムス又はその近い構造の類似体の使用であって、該医薬品が、後成的改変を行うことによって自食作用の増大及び/又は酸化ストレスの改善をもたらす量のタクロリムス又はその近い構造の類似体を含有する、上記使用。
［実施形態１８］
タクロリムスを用いる、実施形態15から17のいずれかに記載の方法、使用のための化合物又は化合物の使用。
［実施形態１９］
0.05mgから1.3mgのタクロリムス又はその近い構造の類似体及び医薬として許容されるその担体を含有する、神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患の治療に使用するための、単位用量の医薬組成物。
［実施形態２０］
1.2mg、0.75mg、0.6mg又は0.4mg超のタクロリムス又はその近い構造の類似体を含有しない、実施形態19に記載の単位用量の医薬組成物。
［実施形態２１］
0.06、0.1又は0.15mg以上を含む、実施形態19又は20に記載の単位用量の医薬組成物。
［実施形態２２］
口による投与に適合させた、実施形態19から21のいずれかに記載の単位用量の医薬組成物。
［実施形態２３］
疾患が筋萎縮性側索硬化症である場合に使用するための実施形態1から22のいずれかに記載の方法、使用のための化合物又は医薬組成物、化合物又は医薬組成物の使用。
［実施形態２４］
疾患がアルツハイマー病である、実施形態1から22のいずれかに記載の方法、使用のための化合物若しくは医薬組成物、又は化合物若しくは医薬組成物の使用。
［実施形態２５］
疾患がパーキンソン病である、実施形態1から22のいずれかに記載の方法、使用のための化合物若しくは医薬組成物、又は化合物若しくは医薬組成物の使用。
［実施形態２６］
疾患がハンチントン病である、実施形態1から22のいずれかに記載の方法、使用のための化合物若しくは医薬組成物、又は化合物若しくは医薬組成物の使用。
［実施形態２７］
疾患がシヌクレイン病又はタウオパシーである、実施形態1から22のいずれかに記載の方法、使用のための化合物若しくは医薬組成物、又は化合物若しくは医薬組成物の使用。
［実施形態２８］
認知症、例えばパーキンソン病認知症及び前頭側頭型認知症、又は加齢に関連する神経毒性タンパク質の凝集の増大及び/若しくは増大した酸化ストレス若しくは自食作用の欠陥に関係する他の認知症及び記憶喪失状態である、実施形態27に記載の方法、使用のための化合物若しくは医薬組成物、又は化合物若しくは医薬組成物の使用。
［実施形態２９］
タクロリムスを用いる、実施形態23から28のいずれかに記載の方法、使用のための化合物若しくは医薬組成物、又は化合物若しくは医薬組成物の使用。
［実施形態３０］
0.05mgから1.2mgのタクロリムス又はその近い構造の類似体及び医薬として許容される担体を含む、神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患の治療に使用するための、経口投与可能な医薬組成物の単位用量。
［実施形態３１］
疾患が、ALS、パーキンソン病、アルツハイマー病、又はハンチントン病である、実施形態30に記載の使用のための単位用量。
［実施形態３２］
タクロリムスを含む、実施形態30又は31に記載の使用のための単位用量。
［実施形態３３］
0.9mg、0.75mg、0.65mg以下、又は0.5mg以下、又は0.45mg以下のタクロリムスを含む、実施形態30から32のいずれかに記載の使用のための単位用量。
［実施形態３４］
0.05mg以上、0.1mg以上、又は0.15mg以上のタクロリムス又はその近い構造の類似体を含む、実施形態30から33のいずれかに記載の使用のための単位用量。
［実施形態３５］
錠剤又はカプセル剤の形態である、実施形態30から34のいずれかに記載の使用のための単位用量。
［実施形態３６］
神経細胞におけるタンパク質凝集体の沈着を特徴とする疾患を治療する方法であって、それを必要とする患者に医薬組成物を経口投与によって投与することを含み、該医薬組成物が、実施形態30から35のいずれかに記載の量のタクロリムス又はその近い構造の類似体を含む、上記方法。
［実施形態３７］
タクロリムスが1日1回以下投与される、実施形態36に記載の方法。