(57)【要約】【課題】創傷治癒のための組成物および使用方法を提供する。【解決手段】本発明は、被験体の創傷（例えば、局所的な創傷（例えば、皮膚の創傷））を処置する方法であって、この方法が、ポリグルコサミンまたは誘導体化されたポリグルコサミン（例えば、ＰＡＡＧ）を含む水性組成物を創傷に局所投与し、それによって被験体（例えば、ヒト被験体）の創傷を処置することを含む、方法を提供する。ある実施形態では、本発明は、特定の濃度、例えば、約５０〜約１０００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）（例えば、約１００〜約８００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約１００〜約６００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ））の濃度で、ＰＡＡＧの水性組成物を用いて創傷を処置する方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
この出願は、米国特許法§１１９（ｅ）の下、２０１３年３月１５日に出願された米国仮特許出願第６１／７９９，７５１号（これは、参考として本明細書に援用される）への優先権を主張する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、水溶性ポリグルコサミンおよび誘導体化されたポリグルコサミンを含む組成物および方法、および被験体の創傷を処置するためのこれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
創傷は、患者に対し、重篤な身体的、感情的、経済的な負担を与えることがある。ヒトおよび他の動物において、創傷は、創傷治癒に向かう一連の複雑な生体事象の引き金となる。創傷治癒がうまくいかないと、例えば、慢性疾患を有する被験体で、疾病率および死亡率が上がることがある。急性創傷および慢性創傷における細菌感染は、治癒を低下させ、患者の費用を高め、多くは、抗生物質への耐性が生じることに起因して、処理することができないことが多いため、関心が高まっている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、被験体の創傷（例えば、局所的な創傷（例えば、皮膚の創傷））を処置する方法であって、この方法が、ポリグルコサミンまたは誘導体化されたポリグルコサミン（例えば、ＰＡＡＧ）を含む水性組成物を創傷に局所投与し、それによって被験体（例えば、ヒト被験体）の創傷を処置することを含む、方法を提供する。ある実施形態では、本発明は、特定の濃度、例えば、約５０〜約１０００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）（例えば、約１００〜約８００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約１００〜約６００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ））の濃度で、ＰＡＡＧの水性組成物を用いて創傷を処置する方法を提供する。ある実施形態では、この濃度は、約５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約４００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約１００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約３００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、例えば、約１５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約２５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、例えば、約２００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）である。ある実施形態では、この濃度は、約２００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）である。ある実施形態では、この濃度は、約３００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約８００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約３５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約７５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約４００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約７００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約４５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約６５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、例えば、約５００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）である。ある実施形態では、この濃度は、約５００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）である。
【０００５】
別の態様では、本発明は、もっと高い濃度のＰＡＡＧを用い、感染した創傷（例えば、局所的な創傷（例えば、感染した皮膚の創傷））を処置する方法を提供する。ある実施形態では、このもっと高い濃度は、約３００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約８００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約３５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約７５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約４００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約７００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約４５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約６５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、例えば、約５００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）である。ある実施形態では、この濃度は、約５００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）である。
【０００６】
ある実施形態では、感染した創傷は、慢性創傷である。ある実施形態では、感染した創傷は、急性創傷である。
【０００７】
別の態様では、本発明は、もっと低い濃度のＰＡＡＧを用い、感染していない創傷（例えば、局所的な創傷（例えば、皮膚の感染していない創傷））を処置する方法を提供する。ある実施形態では、この濃度は、約５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約４００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約１００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約３００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、例えば、約１５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約２５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、例えば、約２００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）である。ある実施形態では、この濃度は、約２００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）である。ある実施形態では、感染していない創傷は、慢性創傷である。ある実施形態では、感染していない創傷は、急性創傷である。
【０００８】
水溶性ポリグルコサミンまたは誘導体化されたポリグルコサミン、例えば、ポリ（アセチル、アルギニル）グルコサミン、つまり、ＰＡＡＧを含む組成物、および関連する使用方法が本明細書に記載される。本明細書に記載する組成物を用いる例示的な方法としては、例えば、被験体（例えば、ヒト、飼育動物またはペット、大きな動物、例えば、厚皮動物、例えば、ゾウ、サイ、バク）の創傷（例えば、局所的な創傷（例えば、足または真皮の創傷））を処置する方法が挙げられる。ある実施形態では、被験体の創傷は、慢性疾患（例えば、慢性足疾患、例えば、割れた爪、膿瘍、病変、潰瘍、ひび割れ（ｆｉｓｓｕｒｅ））、慢性的な治癒しない真皮または皮下の創傷（例えば、慢性炎症、圧迫、損傷または細菌種によって引き起こされる）、創傷（例えば、割れた爪、膿瘍、病変、潰瘍、床擦れ、またはひび割れ、火傷、外科的創傷、慢性真皮病変を含む）、創傷（例えば、外傷性傷害、刺し傷、擦り傷、裂傷、切開部、引っ掻き傷、切除部分によって引き起こされる）、創傷（例えば、圧迫、血行停止による潰瘍形成、静脈の潰瘍形成、または糖尿病性の潰瘍形成によって引き起こされる）によって引き起こされる。
【０００９】
創傷を局所的に、水溶性ポリグルコサミンまたは誘導体化されたポリグルコサミン、例えば、本明細書に記載するポリグルコサミン化合物の水溶液を用いて処置してもよい。ある実施形態では、処置される創傷は、感染していない（例えば、慢性感染していないか、急性感染していない）、または細菌種によって感染している（例えば、慢性感染しているか、急性感染している）。ある実施形態では、本明細書に記載する組成物は、この組成物を使用し、第２の薬剤と組み合わせて被験体の創傷を処置した場合、相乗効果を得ることができる。可溶性ポリグルコサミンまたは誘導体化されたポリグルコサミン、例えば、ポリ（アセチル、アルギニル）グルコサミン、つまり、ＰＡＡＧを含む創傷ドレッシング材および医療デバイス、および関連する使用方法も本明細書に記載される。
【００１０】
一態様では、本発明は、被験体の創傷（例えば、局所的な創傷（例えば、足または真皮の創傷））を処置する方法であって、この方法が、ＰＡＡＧおよび滅菌水を含む（例えば、これらから本質的になるか、またはこれらからなる）水溶液を創傷に局所投与し、それによって被験体の創傷を処置することを含む、方法を特徴とする。
【００１１】
ある実施形態では、被験体は、ヒトである。
【００１２】
ある実施形態では、被験体は、免疫無防備状態である。
【００１３】
ある実施形態では、被験体は、１種類またはそれより多い抗生物質または消毒薬にアレルギー性である（例えば、この被験体は、抗生物質耐性菌を有する）。
【００１４】
ある実施形態では、被験体は、ゾウ科、サイ科またはバク科である。
【００１５】
ある実施形態では、被験体は、飼育動物またはペット（例えば、ウマ、イヌ、ウシ、ヒツジまたはネコ）である。
【００１６】
ある実施形態では、この溶液を、創傷を湿らせるのに十分な体積で投与する。ある実施形態では、この溶液を、創傷を洗い流す（例えば、創傷から物質を洗浄する）のに十分な体積で投与する。
【００１７】
ある実施形態では、溶液中のＰＡＡＧの濃度は、約５０〜約１０００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）（例えば、約１００〜約８００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約１００〜約６００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ））である。
【００１８】
ある実施形態では、創傷は、慢性疾患（例えば、慢性足疾患または慢性感染）によって引き起こされる。
【００１９】
ある実施形態では、創傷は、慢性であり、かつ治癒しない真皮または皮下の創傷（例えば慢性炎症、圧迫、損傷または細菌種によって引き起こされる）である。これらの実施形態のいくつかの態様では、創傷は、割れた爪、膿瘍、病変、潰瘍、床擦れまたはひび割れを含む。これらの実施形態のいくつかの態様では、創傷は、慢性真皮病変である。
【００２０】
ある実施形態では、創傷は、火傷である。ある実施形態では、創傷は、外科的創傷である。
【００２１】
ある実施形態では、創傷は、外傷性傷害によって引き起こされる。
【００２２】
ある実施形態では、創傷は、刺し傷、擦り傷、裂傷、切開部、引っ掻き傷または切除部分である。
【００２３】
ある実施形態では、創傷は、圧迫、血行停止による潰瘍形成、静脈の潰瘍形成、または糖尿病性の潰瘍形成である。ある実施形態では、創傷は、細菌感染している。これらの実施形態のいくつかの態様では、細菌は、大腸菌、ＭＲＳＡ、Ｋｅｌｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、ＶＲＥ、ムピロシン耐性ＭＲＳＡ、Ｓｔａｐｈｙｌｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓまたはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａまたはこれらの組み合わせである。
【００２４】
ある実施形態では、創傷は、感染した創傷である。これらの実施形態のいくつかの態様では、創傷は、慢性創傷である。これらの実施形態のいくつかの態様では、創傷は、急性創傷である。これらの実施形態のいくつかの態様では、溶液中のＰＡＡＧの濃度は、約５０〜約１０００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）（例えば、約１００〜約８００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約１５０〜約５５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、または約５００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ））である。これらの実施形態のいくつかの態様では、この溶液が、毎日投与される。これらの実施形態のいくつかの態様では、この溶液が、１日に１回、２回または３回投与される。これらの実施形態のいくつかの態様では、この溶液が１日おきまたは２日おきに投与される。これらの実施形態のいくつかの態様では、創傷が治癒するか、または閉じるまで、被験体が処置される。これらの実施形態のいくつかの態様では、被験体は、約２〜約５週間処置される。これらの実施形態のいくつかの態様では、被験体は、約６〜約１２週間処置される。これらの実施形態のいくつかの態様では、被験体は、約１週間処置される。これらの実施形態のいくつかの態様では、被験体は、約１週間から約２週間処置される。これらの実施形態のいくつかの態様では、この方法は、第２の治療の投与を含む。これらの実施形態のいくつかの態様では、第２の創傷治療は、抗生物質または抗細菌剤の使用、ステロイド系または非ステロイド系の抗炎症薬、壊死組織切除法、灌注、陰圧閉鎖創傷療法、加温、酸素化、湿潤創傷治癒、機械的な応力の除去、および治癒因子を分泌するか、または治癒因子のレベルを高めるための細胞の添加からなる群より選択される。これらの実施形態のいくつかの態様では、第２の治療は、全身性抗生物質またはステロイド治療である。これらの実施形態のいくつかの態様では、この方法は、第２の治療の投与を含まない。
【００２５】
ある実施形態では、創傷は、感染していない創傷である。これらの実施形態のいくつかの態様では、創傷は、慢性創傷である。これらの実施形態のいくつかの態様では、創傷は、急性創傷である。これらの実施形態のいくつかの態様では、この溶液中のＰＡＡＧの濃度は、約５０〜約８００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）（例えば、約５０〜約５００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約１００〜約３５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、または約２００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ））である。これらの実施形態のいくつかの態様では、この溶液が、毎日投与される。これらの実施形態のいくつかの態様では、この溶液が、１日に１回、２回または３回投与される。これらの実施形態のいくつかの態様では、創傷が治癒するか、または閉じるまで、被験体が処置される。これらの実施形態のいくつかの態様では、被験体は、約２〜約５週間処置される。これらの実施形態のいくつかの態様では、被験体は、約６〜約１２週間処置される。これらの実施形態のいくつかの態様では、被験体は、約１週間処置される。これらの実施形態のいくつかの態様では、被験体は、約１週間から約２週間処置される。これらの実施形態のいくつかの態様では、この方法は、第２の治療の投与を含む。
【００２６】
ある実施形態では、この方法は、溶液中、約５０〜約１０００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）（例えば、約１００〜約８００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約１５０〜約５５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、または約５００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ））の濃度でＰＡＡＧを１週間または２週間投与することを含み、創傷が治癒するか、または閉じるまで、溶液中、約５０〜約８００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）（例えば、約５０〜約５００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約１５０〜約４００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、または約３００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ））の濃度でＰＡＡＧを投与することをさらに含む。これらの実施形態のいくつかの態様では、この方法は、第２の治療の投与を含む。これらの実施形態のいくつかの態様では、第２の創傷治療は、抗生物質または抗細菌剤の使用、ステロイド系または非ステロイド系の抗炎症薬、壊死組織切除法、灌注、陰圧閉鎖創傷療法、加温、酸素付加、湿潤創傷治癒、機械的な応力の除去、および治癒因子を分泌するか、または治癒因子のレベルを高めるための細胞の添加からなる群より選択される。これらの実施形態のいくつかの態様では、第２の治療は、全身性抗生物質またはステロイド治療である。これらの実施形態のいくつかの態様では、この方法は、第２の治療の投与を含まない。
【００２７】
ある実施形態では、この方法は、創傷に灌注することをさらに含む。
【００２８】
ある実施形態では、この方法は、創傷の壊死組織切除法（例えば、壊死組織および／または感染した組織の除去）をさらに含む。
【００２９】
ある実施形態では、この方法は、創傷を覆うことをさらに含む。
【００３０】
ある実施形態では、この方法は、陰圧治療（ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ  ｔｈｅｒａｐｙ）をさらに含む。
【００３１】
ある実施形態では、この方法は、例えば、コントロールに対し（例えば、コントロールは、未処置の創傷、ＰＡＡＧ非存在下、全身性抗生物質で処置した創傷、および／またはＰＡＡＧ非存在下、包帯で処置した創傷である）、治癒時間を短くするか、または創傷の治癒速度を高める。これらの実施形態のいくつかの態様では、創傷の治癒時間が、溶液と接触しなかった創傷の治癒時間と比較して、少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％）短い。これらの実施形態のいくつかの態様では、創傷の治癒速度が、溶液と接触しなかった創傷の治癒速度と比較して、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間または１ヶ月高まる。
【００３２】
ある実施形態では、創傷が炎症を起こしており、この方法が、例えば、コントロールに対し（例えば、コントロールは、未処置の創傷、ＰＡＡＧ非存在下、全身性抗生物質で処置した創傷、および／またはＰＡＡＧ非存在下、包帯で処置した創傷である）、創傷に関連する炎症を減らす。
【００３３】
ある実施形態では、この方法が、創傷の治癒を向上させ、創傷の治癒は炎症をもたらし、例えば、コントロールに対し（例えば、コントロールは、未処置の創傷、ＰＡＡＧ非存在下、全身性抗生物質で処置した創傷、および／またはＰＡＡＧ非存在下、包帯で処置した創傷である）、創傷の治癒から生じる炎症が低減される。
【００３４】
ある実施形態では、この方法は、例えば、コントロールに対し（例えば、コントロールは、未処置の創傷、ＰＡＡＧ非存在下、全身性抗生物質で処置した創傷、および／またはＰＡＡＧ非存在下、包帯で処置した創傷である）、瘢痕化の大きさまたは程度を低下させる。
【００３５】
ある実施形態では、創傷が、処置すると、例えば、コントロールに対し（例えば、コントロールは、未処置の創傷、ＰＡＡＧ非存在下、全身性抗生物質で処置した創傷、および／またはＰＡＡＧ非存在下、包帯で処置した創傷である）、細菌量が減る。
【００３６】
ある実施形態では、この方法が、創傷から細菌を物理的に除去する。
【００３７】
ある実施形態では、この方法が、創傷を洗い流し、創傷にＰＡＡＧの薄層の覆いを与えることを含み、このＰＡＡＧの薄層は、コントロールに対し（例えば、コントロールは、未処置の創傷、ＰＡＡＧ非存在下、全身性抗生物質で処置した創傷、および／またはＰＡＡＧ非存在下、包帯で処置した創傷である）、細菌が創傷に結合する能力を低下させる。これらの実施形態のいくつかの態様では、ＰＡＡＧの薄層が、創傷の上に３時間、６時間または１２時間とどまる。これらの実施形態のいくつかの態様では、ＰＡＡＧの薄層が、細菌が創傷に結合する能力を３時間、６時間または１２時間低下させる。これらの実施形態のいくつかの態様では、ＰＡＡＧの薄層が、細菌が創傷に感染する能力を３時間、６時間または１２時間低下させる。これらの実施形態のいくつかの態様では、ＰＡＡＧの薄層が、細菌が創傷にコロニー生成する能力を３時間、６時間または１２時間低下させる。
【００３８】
ある実施形態では、この方法が、環境に対して有害ではない。
【００３９】
ある実施形態では、この方法が、１種類またはそれより多い抗生物質に耐性がある細菌の選択を生じない（例えば、この方法は、被験体が１種類またはそれより多い抗生物質に対して耐性がある細菌を残すように、細菌を選択的に殺さない）。ある実施形態では、この方法は、抗生物質耐性に寄与しない。
【００４０】
ある実施形態では、この方法は、（例えば、細菌が存在しないことについて、成功裏の創傷治癒の指標について）被験体をモニタリングすることをさらに含む。これらの実施形態のいくつかの態様では、被験体をモニタリングすることは、被験体中に存在する細菌の存在量および種類を測定することを含む。これらの実施形態のいくつかの態様では、被験体をモニタリングすることは、細菌のＣＦＵを測定することを含む。これらの実施形態のいくつかの態様では、被験体をモニタリングすることは、処置の長さを決定する。
【００４１】
一態様では、本発明は、被験体の創傷治癒を促進する方法であって、この方法が、ＰＡＡＧおよび滅菌水を含む（例えば、これらから本質的になるか、またはこれらからなる）水溶液を創傷に局所投与し、それによって被験体の創傷治癒を促進することを含む、方法を特徴とする。
【００４２】
一態様では、本発明は、ポリ（アセチル，アルギニル）グルコサミン（ＰＡＡＧ）および滅菌水を含み（例えば、これらから本質的になるか、またはこれらからなり）、不純物を実質的に含まない、溶液を特徴とする。
【００４３】
ある実施形態では、ＰＡＡＧは、以下の式（Ｉ）
【００４４】
【化１】
2019104749.tif 000002
【００４５】
を含み、
式中、ｎは、２０〜６０００の整数であり；
各Ｒ１は、独立して、それぞれの場合に水素、アセチル
【００４６】
【化２】
2019104749.tif 000003
【００４７】
から選択され；
Ｒ１置換基の少なくとも２５％がＨであり、Ｒ１置換基の少なくとも１％がアセチルであり、少なくとも２％のＲ１置換基が
【００４８】
【化３】
2019104749.tif 000004
【００４９】
である。
【００５０】
これらの実施形態のいくつかの態様では、ＰＡＡＧの分子量が２０〜１５０ｋＤａである。これらの実施形態のいくつかの態様では、ＰＡＡＧの分子量が２０〜１２０ｋＤａである。これらの実施形態のいくつかの態様では、ＰＡＡＧの分子量が３０〜１２０ｋＤａである。これらの実施形態のいくつかの態様では、ＰＡＡＧの分子量が５０〜１００ｋＤａである。これらの実施形態のいくつかの態様では、ＰＡＡＧの分子量が２０〜８０ｋＤａである。
【００５１】
これらの実施形態のいくつかの態様では、ＰＡＡＧの多分散指数は、１．０〜２．５である。
【００５２】
これらの実施形態のいくつかの態様では、ｐＨは、約７〜約８である。
【００５３】
これらの実施形態のいくつかの態様では、ＰＡＡＧが、少なくとも１８％アルギニンで官能基化（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ）されている（すなわち、アルギニン官能化されている（ａｒｇｉｎｉｎｅ−ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ））。これらの実施形態のいくつかの態様では、ＰＡＡＧが、１８％〜３０％アルギニンで官能基化されている（すなわち、アルギニン官能化されている）。これらの実施形態のいくつかの態様では、ＰＡＡＧは、１８％より多くアルギニンで官能基化されている（すなわち、アルギニン官能化されている）。
【００５４】
一態様では、本発明は、ＰＡＡＧの溶液を製造する方法であって、この方法は、ＰＡＡＧの組成物に水性ビヒクルを加えることと、ＰＡＡＧの組成物を溶解することとを含む、方法を特徴とする。
【００５５】
ある実施形態では、水性ビヒクルは、滅菌水である。これらの実施形態のいくつかの態様では、この方法は、非活性薬剤（例えば、湿潤剤、増粘剤）を加えることをさらに含む。
【００５６】
ある実施形態では、ＰＡＡＧの組成物を、創傷を湿らせるのに十分な体積に溶解する。
【００５７】
ある実施形態では、この溶液が、創傷を洗い流す（例えば、創傷から物質を洗浄する）のに十分な体積で投与される。
【００５８】
一態様では、本発明は、ＰＡＡＧの組成物と、ＰＡＡＧの溶液を調製するための指示とを含むキットを特徴とする。
【００５９】
ある実施形態では、このキットは、創傷を処置するときに使用するためのものである。
【００６０】
ある実施形態では、ＰＡＡＧの組成物が、びん（例えば、褐色ガラスびん）で与えられる。
本発明の特定の実施形態では、例えば、以下の項目が提供される：
（項目１）
被験体の創傷（例えば、局所的な創傷（例えば、足または真皮の創傷））を処置する方法であって、前記方法は、ＰＡＡＧおよび滅菌水を含む（例えば、これらから本質的になるか、またはこれらからなる）水溶液を前記創傷に局所投与し、それによって前記被験体の前記創傷を処置することを含む、方法。
（項目２）
前記被験体がヒトである、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記被験体が、免疫無防備状態である、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記被験体が、１種類またはそれより多い抗生物質または消毒薬にアレルギー性である、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記被験体が、ゾウ科、サイ科またはバク科である、項目１に記載の方法。
（項目６）
前記被験体が、飼育動物またはペット（例えば、ウマ、イヌ、ウシ、ヒツジまたはネコ）である、項目１に記載の方法。
（項目７）
前記溶液を、前記創傷を湿らせるのに十分な体積で投与する、項目１に記載の方法。
（項目８）
前記溶液を、前記創傷を洗い流す（例えば、前記創傷から物質を洗浄する）のに十分な体積で投与する、項目１に記載の方法。
（項目９）
前記溶液中の前記ＰＡＡＧの濃度が、約５０〜約１０００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）（例えば、約１００〜約８００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約１００〜約６００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ））である、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記創傷が、慢性疾患（例えば、慢性足疾患または慢性感染）によって引き起こされる、項目１に記載の方法。
（項目１１）
前記創傷が、慢性であり、かつ治癒しない真皮または皮下の創傷（例えば慢性炎症、圧迫、損傷または細菌種によって引き起こされる）である、項目１に記載の方法。
（項目１２）
前記創傷は、割れた爪、膿瘍、病変、潰瘍、床擦れまたはひび割れを含む、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記創傷が、慢性皮膚病変である、項目１１に記載の方法。
（項目１４）
前記創傷が火傷である、項目１に記載の方法。
（項目１５）
前記創傷が、外科的創傷である、項目１に記載の方法。
（項目１６）
前記創傷が、外傷性傷害によって引き起こされる、項目１に記載の方法。
（項目１７）
前記創傷が、刺し傷、擦り傷、裂傷、切開部、引っ掻き傷または切除部分である、項目１に記載の方法。
（項目１８）
前記創傷が、圧迫による潰瘍形成、血行停止による潰瘍形成、静脈の潰瘍形成、または糖尿病性の潰瘍形成である、項目１に記載の方法。
（項目１９）
前記創傷が、細菌感染している、項目１に記載の方法。
（項目２０）
前記細菌が、大腸菌、ＭＲＳＡ、Ｋｅｌｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、ＶＲＥ、ムピロシン耐性ＭＲＳＡ、Ｓｔａｐｈｙｌｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓまたはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａまたはこれらの組み合わせである、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
前記創傷が、感染した創傷である、項目１に記載の方法。
（項目２２）
前記創傷が慢性創傷である、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記創傷が急性創傷である、項目２１に記載の方法。
（項目２４）
前記溶液中の前記ＰＡＡＧの濃度が、約５０〜約１０００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）（例えば、約１００〜約８００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約１５０〜約５５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、または約５００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ））である、項目２１、２２または２３に記載の方法。
（項目２５）
前記溶液が、毎日投与される、項目２１に記載の方法。
（項目２６）
前記溶液が、１日に１回、２回または３回投与される、項目２１に記載の方法。
（項目２７）
前記創傷が治癒するか、または閉じるまで、前記被験体が処置される、項目２１に記載の方法。
（項目２８）
前記被験体が約２〜約５週間処置される、項目２２に記載の方法。
（項目２９）
前記被験体が約６〜約１２週間処置される、項目２２に記載の方法。
（項目３０）
前記被験体が約１週間処置される、項目２３に記載の方法。
（項目３１）
前記被験体が約１週間から約２週間処置される、項目２３に記載の方法。
（項目３２）
前記方法が、第２の治療の投与を含む、項目２４に記載の方法。
（項目３３）
前記第２の創傷治療が、抗生物質または抗細菌剤の使用、ステロイド系または非ステロイド系の抗炎症薬、壊死組織切除法、灌注、陰圧閉鎖創傷療法、加温、酸素付加、湿潤創傷治癒、機械的な応力の除去、および治癒因子を分泌するか、または治癒因子のレベルを高めるための細胞の添加からなる群より選択される、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
前記第２の治療が、全身性抗生物質またはステロイドによる処置である、項目３２に記載の方法。
（項目３５）
前記方法が、第２の治療の投与を含まない、項目２４に記載の方法。
（項目３６）
前記創傷が、感染していない創傷である、項目１に記載の方法。
（項目３７）
前記創傷が慢性創傷である、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
前記創傷が急性創傷である、項目３６に記載の方法。
（項目３９）
前記溶液中の前記ＰＡＡＧの濃度が、約５０〜約８００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）（例えば、約５０〜約５００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約１００〜約３５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、または約２００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ））である、項目３６に記載の方法。
（項目４０）
前記溶液が、毎日投与される、項目３６に記載の方法。
（項目４１）
前記溶液が、１日に１回、２回または３回投与される、項目３６に記載の方法。
（項目４２）
前記溶液が１日おきまたは２日おきに投与される、項目３６に記載の方法。
（項目４３）
前記創傷が治癒するか、または閉じるまで、前記被験体が処置される、項目３６に記載の方法。
（項目４４）
前記被験体が約２週間〜約５週間処置される、項目３７に記載の方法。
（項目４５）
前記被験体が約６週間〜約１２週間処置される、項目３７に記載の方法。
（項目４６）
前記被験体が約１週間処置される、項目３８に記載の方法。
（項目４７）
前記被験体が約１週間から約２週間処置される、項目３８に記載の方法。
（項目４８）
前記方法が、第２の治療の投与を含む、項目３９に記載の方法。
（項目４９）
前記方法が、前記溶液中、約５０〜約１０００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）（例えば、約１００〜約８００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約１５０〜約５５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、または約５００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ））の濃度で前記ＰＡＡＧを１週間または２週間投与することを含み、前記創傷が治癒するか、または閉じるまで、前記溶液中、約５０〜約８００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）（例えば、約５０〜約５００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約１５０〜約４００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、または約３００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ））の濃度で前記ＰＡＡＧを投与することをさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目５０）
前記方法が、第２の治療の投与を含む、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
前記第２の創傷治療が、抗生物質または抗細菌剤の使用、ステロイド系または非ステロイド系の抗炎症薬、壊死組織切除法、灌注、陰圧閉鎖創傷療法、加温、酸素付加、湿潤創傷治癒、機械的な応力の除去、および治癒因子を分泌するか、または治癒因子のレベルを高めるための細胞の添加からなる群より選択される、項目５０に記載の方法。
（項目５２）
前記第２の治療が、全身性抗生物質またはステロイドによる処置である、項目５０に記載の方法。
（項目５３）
前記方法が、第２の治療の投与を含まない、項目４９に記載の方法。
（項目５４）
前記方法が、前記創傷に灌注することをさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目５５）
前記方法が、創傷の壊死組織切除法（例えば、壊死組織および／または感染した組織の除去）をさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目５６）
前記方法が、前記創傷を覆うことをさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目５７）
前記方法が、陰圧治療をさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目５８）
前記方法が、例えば、コントロールに対し（例えば、前記コントロールは、未処置の創傷、ＰＡＡＧ非存在下、全身性抗生物質で処置した創傷、および／またはＰＡＡＧ非存在下、包帯で処置した創傷である）、前記創傷の治癒時間を短くするか、または前記創傷の治癒速度を高める、項目１に記載の方法。
（項目５９）
前記創傷の治癒時間が、前記溶液と接触しなかった前記創傷の治癒時間と比較して、少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％）短い、項目５８に記載の方法。
（項目６０）
前記創傷の治癒速度が、前記溶液と接触しなかった前記創傷の治癒速度と比較して、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間または１ヶ月だけ高まる、項目５８に記載の方法。
（項目６１）
前記創傷が炎症を起こしており、前記方法が、例えば、コントロールに対し（例えば、前記コントロールは、未処置の創傷、ＰＡＡＧ非存在下、全身性抗生物質で処置した創傷、および／またはＰＡＡＧ非存在下、包帯で処置した創傷である）、前記創傷に関連する炎症を減らす、項目１に記載の方法。
（項目６２）
前記方法が、前記創傷の治癒を向上させ、前記創傷の治癒は炎症をもたらし、例えば、コントロールに対し（例えば、前記コントロールは、未処置の創傷、ＰＡＡＧ非存在下、全身性抗生物質で処置した創傷、および／またはＰＡＡＧ非存在下、包帯で処置した創傷である）、前記創傷の治癒から生じる前記炎症が低減される、項目１に記載の方法。
（項目６３）
前記方法は、例えば、コントロールに対し（例えば、前記コントロールは、未処置の創傷、ＰＡＡＧ非存在下、全身性抗生物質で処置した創傷、および／またはＰＡＡＧ非存在下、包帯で処置した創傷である）、瘢痕化の大きさまたは程度を低下させる、項目１に記載の方法。
（項目６４）
前記創傷が、処置すると、例えば、コントロールに対し（例えば、前記コントロールは、未処置の創傷、ＰＡＡＧ非存在下、全身性抗生物質で処置した創傷、および／またはＰＡＡＧ非存在下、包帯で処置した創傷である）、低減された細菌量を有する、項目１に記載の方法。
（項目６５）
前記方法が、前記創傷から細菌を物理的に除去する、項目１に記載の方法。
（項目６６）
前記方法が、前記創傷を洗い流し、前記創傷にＰＡＡＧの薄層の覆いを与えることを含み、前記ＰＡＡＧの薄層は、コントロールに対し（例えば、前記コントロールは、未処置の創傷、ＰＡＡＧ非存在下、全身性抗生物質で処置した創傷、および／またはＰＡＡＧ非存在下、包帯で処置した創傷である）、細菌が前記創傷に結合する能力を低下させる、項目１に記載の方法。
（項目６７）
前記ＰＡＡＧの薄層が、前記創傷の上に３時間、６時間または１２時間とどまる、項目６６に記載の方法。
（項目６８）
前記ＰＡＡＧの薄層が、細菌が前記創傷に結合する能力を３時間、６時間または１２時間低下させる、項目６６に記載の方法。
（項目６９）
前記ＰＡＡＧの薄層が、細菌が前記創傷に感染する能力を３時間、６時間または１２時間低下させる、項目６６に記載の方法。
（項目７０）
前記ＰＡＡＧの薄層が、細菌が前記創傷にコロニー生成する能力を３時間、６時間または１２時間低下させる、項目６６に記載の方法。
（項目７１）
前記方法が、環境に対して有害ではない、項目１に記載の方法。
（項目７２）
前記方法が、１種類またはそれより多い抗生物質に耐性がある細菌の選択を生じない（例えば、前記方法は、前記被験体に１種類またはそれより多い抗生物質に対して耐性がある細菌を残すように、細菌の選択的な殺傷をもたらさない）、項目１に記載の方法。
（項目７３）
前記方法は、（例えば、細菌が存在しないことについて、成功裏の創傷治癒の指標について）前記被験体をモニタリングすることをさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目７４）
前記被験体をモニタリングすることは、前記被験体中に存在する細菌の存在量および種類を測定することを含む、項目７３に記載の方法。
（項目７５）
前記被験体をモニタリングすることは、細菌のＣＦＵを測定することを含む、項目７３に記載の方法。
（項目７６）
前記被験体をモニタリングすることは、処置の長さを決定する、項目７３に記載の方法。
（項目７７）
被験体の創傷治癒を促進する方法であって、前記方法は、ＰＡＡＧおよび滅菌水を含む（例えば、これらから本質的になるか、またはこれらからなる）水溶液を前記創傷に局所投与し、それによって創傷治癒を促進することを含む、方法。
（項目７８）
ポリ（アセチル，アルギニル）グルコサミン（ＰＡＡＧ）および滅菌水を含む（例えば、これらから本質的になるか、またはこれらからなる）溶液であって、前記溶液は、不純物を実質的に含まない、溶液。
（項目７９）
ＰＡＡＧが、以下の式（Ｉ）：
【化１９】
2019104749.tif 000005
を含み、式中、
ｎは、２０〜６０００の整数であり；そして
各Ｒ１は、独立して、それぞれの場合に水素、アセチル
【化２０】
2019104749.tif 000006
から選択され；
Ｒ１置換基の少なくとも２５％がＨであり、Ｒ１置換基の少なくとも１％がアセチルであり、そしてＲ１置換基の少なくとも２％が、以下：
【化２１】
2019104749.tif 000007
である、項目１に記載の溶液。
（項目８０）
前記ＰＡＡＧの分子量が２０〜１５０ｋＤａである、項目７９に記載の溶液。
（項目８１）
前記ＰＡＡＧの分子量が２０〜１２０ｋＤａである、項目８０に記載の溶液。
（項目８２）
前記ＰＡＡＧの分子量が２０〜８０ｋＤａである、項目８１に記載の溶液。
（項目８３）
前記ＰＡＡＧの多分散指数が１．０〜２．５である、項目７９に記載の溶液。
（項目８４）
ｐＨが約７〜約８である、項目７９に記載の溶液。
（項目８５）
前記ＰＡＡＧが、少なくとも１８％アルギニン官能化されている、項目７９に記載の溶液。
（項目８６）
前記ＰＡＡＧが、１８％〜３０％アルギニン官能化されている、項目８５に記載の溶液。
（項目８７）
前記ＰＡＡＧは、１８％より多くアルギニン官能化されている、項目７９に記載の溶液。
（項目８８）
ＰＡＡＧの組成物であって、前記ＰＡＡＧは、減圧乾燥され、凍結乾燥され、または噴霧乾燥されたＰＡＡＧの粉末を含み、ここで前記組成物が不純物を実質的に含まない、ＰＡＡＧの組成物。
（項目８９）
ＰＡＡＧの溶液を製造する方法であって、前記方法は、ＰＡＡＧの組成物に水性ビヒクルを加える工程と、前記ＰＡＡＧの組成物を溶解する工程とを含む、方法。
（項目９０）
前記水性ビヒクルが滅菌水である、項目８９に記載の方法。
（項目９１）
前記方法が、非活性薬剤（例えば、湿潤剤、増粘剤）を加える工程をさらに含む、項目９０に記載の方法。
（項目９２）
前記ＰＡＡＧの組成物を、前記創傷を湿らせるのに十分な体積に溶解する、項目８９に記載の方法。
（項目９３）
前記溶液が、前記創傷を洗い流す（例えば、前記創傷から物質を洗浄する）のに十分な体積で投与される、項目１に記載の方法。
（項目９４）
ＰＡＡＧの組成物と、ＰＡＡＧの溶液を調製するための指示書とを含むキット。
（項目９５）
創傷の処置に使用するための項目９４に記載のキット。
（項目９６）
前記ＰＡＡＧの組成物が、びん（例えば、褐色ガラスびん）で提供される、項目９３に記載のキット。
【図面の簡単な説明】
【００６１】
【図１】図１は、２００μｇ／ｍＬのＰＡＡＧの活性な洗浄により１ヶ月にわたり処置した、ゾウ１番の足蹠の創傷治癒の進行。（Ａ）初期の損傷０９年１０月１７日、（Ｂ）処置から７日後１０年３月２０日、（Ｃ）処置から１４日後１０年３月２７日、（Ｄ）処置から２４日後１０年４月１０日、（Ｅ）処置から６６日後１０年５月２２日、（Ｆ）治癒した足蹠１０年７月１７日。
【図２】図２は、左前側の爪４番の慢性病変について、２００μｇ／ｍＬのＰＡＡＧの活性な洗浄により毎日処置されたゾウ２番。すべての画像は、壊死組織切除法（切り取られた）後の病変の画像である。（Ａ）ＰＡＡＧの活性な洗浄で処置する前の病変０９年１１月２８日、（Ｂ）キトサン−アルギニンによる毎日の処置を２週間した病変１０年５月１５日、（Ｃ）毎日の処置を５週間した病変１０年６月５日、（Ｄ）毎日の処置を７週間した病変１０年６月１７日、（Ｅ）毎日の処置を１１週間した病変１０年７月１７日、（Ｆ）現在の解決状態。
【図３】図３は、２００μｇ／ｍＬのＰＡＡＧの活性な洗浄による創傷の洗浄で処置されたゾウ２番の埋没した側頭部の分泌腺。（Ａ）手に持ったポンプによる創傷噴霧投与を示す。（Ｂ）シリンジを用いた創傷への灌注を示す。
【図４】図４は、左後側の４番の爪底部に慢性潰瘍を有する雌ゾウ３番（Ａ）。パネルＢおよびＣは、５００μｇ／ｍＬのＰＡＡＧの活性な洗浄で９ヶ月間、１日に２回処置した後の進行性の損傷治癒を示す。
【図５】図５は、左足の底部に深部膿瘍を有するサイ（雌３４歳）。この画像パネルは、ＰＡＡＧの活性な洗浄による創傷洗浄を用いた毎日の処置のときに観察された治癒の進行を示す。（Ａ）１回目の処置１０年７月１６日、（Ｂ）処置から１週間後２０年７月２３日、（Ｃ）処置から３週間後１０年８月６日、（Ｄ）処置から５週間後１０年８月１７日、（Ｅ）処置から７週間後、（Ｆ）処置から１４週間後に、創傷は解決した。
【図６】図６は、臀部（上に示される左側の臀部）に圧迫潰瘍を有するサイ（雌３４歳）。この画像パネルは、ＰＡＡＧの活性な洗浄による創傷洗浄を用いて毎日処置したときに観察された、創傷治癒の週ごとの進行を示す。（Ａ）１０年９月３０日、（Ｂ）１０年１０月５日、（Ｃ）１０年１０月１２日、（Ｄ）１０年１０月１９日、および（Ｅ）１０年１１月２日。
【図７】図７は、ＭＲＳＡ感染が進行した左側臀部の慢性圧迫潰瘍を有する雌サイ１番。パネルＡ〜Ｃは、５００μｇ／ｍＬのＰＡＡＧの活性な洗浄による１日に２回の処置を６週間行った後の進行性の創傷治癒を示す。ＰＡＡＧの活性なゲルを、１０年１２月２日から毎日適用した。（Ａ）１０年１１月９日、（Ｂ）１０年１１月２３日、および（Ｃ）１０年１２月１４日。
【図８】図８は、ＭＲＳＡ感染が進行した右側臀部の慢性圧迫潰瘍を有する雌サイ１番。パネルＡ〜Ｄは、５００μｇ／ｍＬのＰＡＡＧの活性な洗浄（３７．０ｋＤａ、２２．８％の官能基化されたＰＡＡＧ）の洗浄による１日に２回の処置を６週間行った後の進行性の創傷治癒を示す。ＰＡＡＧの活性なゲルを、１０年１２月２日から毎日適用した。（Ａ）１０年１１月９日、（Ｂ）１０年１１月２３日、（Ｃ）１０年１２月１４日、および（Ｄ）１０年１２月２１日。
【図９】図９は、ブタの部分的な厚みの創傷モデルの実験的試験の設計。
【図１０】図１０は、ＰＡＡＧ処置（洗浄適用）の直後に調べたＭＲＳＡ。
【図１１】図１１は、ＰＡＡＧ処置（洗浄適用）の２４時間後に調べたＭＲＳＡ。
【図１２】図１２は、ブタの部分的な厚みの創傷モデルの実験的試験の設計。
【図１３】図１３は、異なるＰＡＡＧ配合物を用いて３日間処置した後に調べた、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉを用いたブタの部分的な厚みの創傷モデル。
【図１４】図１４は、ブタ火傷創傷モデルの実験的試験の設計。
【図１５】図１５は、ＰＡＡＧ（２５０および５００μｇ／ｍＬ）処置から５日後および７日後に評価した上皮の厚み。
【図１６】図１６は、ＰＡＡＧ（２５０および５００μｇ／ｍＬ）処置から５日後および７日後に評価した上皮形成率。
【図１７】図１７は、ブタのパンチ創傷モデルの実験的試験の設計。
【図１８】図１８は、ＰＡＡＧ（洗浄およびゲル、２００μｇ／ｍＬ）処置から５日後、７日後および２１日後に評価した上皮形成率。
【図１９】図１９は、ＰＡＡＧ（洗浄およびゲル、２００μｇ／ｍＬ）処置から５日後、７日後および２１日後に評価した上皮の厚み。
【図２０】図２０は、ＰＡＡＧ（洗浄およびゲル、２００μｇ／ｍＬ）処置から７日後および２１日後に観察した肉芽組織の生成。
【図２１】図２１は、評価期間にわたるＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉに感染した創傷の代表的な写真。
【図２２】図２２は、ＰＡＡＧ処置から３日後および４日後に評価した、１日に１回処置した後のＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉの細菌数。
【図２３】図２３は、処置の日の間にＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉに感染した、ＰＡＡＧで処置した創傷と、未処置の創傷の比較。
【図２４】図２４は、ＰＡＡＧ処置から３日後および４日後に評価した、１日に１回処置した後のＭＲＳＡの細菌数。
【図２５】図２５は、処置の日の間にＭＲＳＡに感染した、ＰＡＡＧで処置した創傷と、未処置の創傷の比較。
【図２６】図２６は、ブタの皮膚に残留するＰＡＡＧの細菌活性。
【図２７】図２７は、ＰＡＡＧで処置した後のＴＨＰ−１ヒト単核細胞におけるＩＬ−１０濃度（左側）およびＴＮＦ−α（右側）の濃度。
【図２８】図２８は、ＰＡＡＧで処置した場合、処置しなかった場合のＬＰＳで刺激されたＩＬ−８産生を測定するＵ９３７ヒトマクロファージアッセイ。
【図２９】図２９は、ＰＡＡＧで処置した場合、処置しなかった場合のＭＲＳＡ  ＤＮＡで刺激されたＩＬ−８産生を測定するＵ９３７ヒトマクロファージアッセイ。
【図３０】図３０は、０μｇ／ｍｌまたは２００μｇ／ｍｌのＰＡＡＧで前処置した後の細胞に付着するＡ．ｂａｕｍａｎｎｉｉの接種率。
【図３１】図３１は、鼻上皮細胞へのＭＲＳＡ付着を減らす、ＰＢＳ中のＰＡＡＧ。
【図３２】図３２は、鼻上皮細胞へのＭＲＳＡ付着を減らす、培地中のＰＡＡＧ。
【図３３】図３３は、ＰＡＡＧは、繰り返し曝露の後の感受性を下げない。
【発明を実施するための形態】
【００６２】
本発明は、被験体の創傷（例えば、局所的な創傷（例えば、皮膚の創傷））を処置する方法であって、この方法が、ポリグルコサミンまたは誘導体化されたポリグルコサミン（例えば、ＰＡＡＧ）を含む水性組成物を創傷に局所投与し、それによって被験体（例えば、ヒト被験体）の創傷を処置することを含む、方法を提供する。ある実施形態では、本発明は、特定の濃度、例えば、約５０〜約１０００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）（例えば、約１００〜約８００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約１００〜約６００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ））の濃度で、ＰＡＡＧの水性組成物を用いて創傷を処置する方法を提供する。ある実施形態では、この濃度は、約５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約４００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約１００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約３００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、例えば、約１５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約２５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、例えば、約２００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）である。ある実施形態では、この濃度は、約２００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）である。ある実施形態では、この濃度は、約３００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約８００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約３５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約７５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約４００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約７００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約４５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約６５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、例えば、約５００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）である。ある実施形態では、この濃度は、約５００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）である。
【００６３】
別の態様では、本発明は、もっと高い濃度のＰＡＡＧを用い、感染した創傷（例えば、局所的な創傷（例えば、感染した皮膚の創傷））を処置する方法を提供する。ある実施形態では、このもっと高い濃度は、約３００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約８００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約３５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約７５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約４００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約７００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約４５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約６５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、例えば、約５００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）である。ある実施形態では、この濃度は、約５００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）である。
【００６４】
ある実施形態では、感染した創傷は、慢性創傷である。ある実施形態では、感染した創傷は、急性創傷である。
【００６５】
別の態様では、本発明は、もっと低い濃度のＰＡＡＧを用い、感染していない創傷（例えば、局所的な創傷（例えば、皮膚の感染していない創傷））を処置する方法を提供する。ある実施形態では、この濃度は、約５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約４００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、約１００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約３００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、例えば、約１５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約２５０μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）、例えば、約２００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）である。ある実施形態では、この濃度は、約２００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）のＰＡＡＧである。ある実施形態では、感染していない創傷は、慢性創傷である。ある実施形態では、感染していない創傷は、急性創傷である。
【００６６】
ある実施形態では、ポリグルコサミンまたは誘導体化されたポリグルコサミンは、以下の１つであってもよい。
【００６７】
（Ａ）ポリグルコサミン−アルギニン化合物；
（Ｂ）ポリグルコサミン−天然アミノ酸誘導体化合物；
（Ｃ）ポリグルコサミン−非天然アミノ酸化合物；
（Ｄ）ポリグルコサミン−酸アミン化合物；
（Ｅ）ポリグルコサミン−グアニジン化合物；および
（Ｆ）中性ポリグルコサミン誘導体化合物。
【００６８】
（処置）
本明細書に記載される組成物および化合物（例えば、水溶性ポリグルコサミンまたは誘導体化されたポリグルコサミン、例えば、ＰＡＡＧを含む化合物および組成物）を、組織または被験体に投与し、本明細書で以下に記載されるものを含め、種々の創傷、火傷または障害を処置することができる。創傷は、感染している場合があり（例えば、細菌種（例えば、本明細書に記載されるような細菌種による）、急性感染した創傷、慢性感染した創傷）、または感染していない場合がある（例えば、急性感染していない創傷、慢性感染していない創傷）。例えば、化合物を、例えば、局所的に（例えば、溶液によって（例えば、噴霧または洗浄））投与することができる。ある実施形態では、ＰＡＡＧを含む水性組成物、例えば、本明細書に記載される組成物は、本明細書に記載される被験体（例えば、ヒト、大きな動物、例えば、ゾウ、サイまたはバク、または飼育動物またはペット（例えば、ウマ、イヌ、ウシ、ヒツジまたはネコ）の創傷に局所的に適用される。
【００６９】
本明細書で使用される場合、用語「処置する」または「処置」は、創傷または障害、障害の１つ以上の症状、または障害に対する傾向を治し、治癒し、軽減し、やわらげ、変え、矯正し、改善し、改良し、または影響を与えること（例えば、障害の少なくとも１つの症状を防ぐため、または障害の少なくとも１つの症状の開始を遅らせること）、および／または治療の副作用または有害な作用を治し、治癒し、軽減し、やわらげ、変え、矯正し、改善し、改良し、または影響を与えること目的として、組成物または化合物（例えば、本明細書に記載される化合物（例えば、可溶性または誘導体化されたポリグルコサミン）を、被験体（例えば、被験体）に適用または投与すること、または、被験体、例えば、創傷または障害（例えば、本明細書に記載される創傷または障害）、障害の症状、または障害に対する傾向を有する被験体から単離される組織に組成物または化合物を適用または投与することであると定義される。
【００７０】
本明細書で使用される場合、障害を処置するのに有効な組成物または化合物の量、すなわち、「治療に有効な量」は、組織を治療するときに、またはこのような処置が存在しないときに予想されるよりも障害を有する被験体を治し、軽減し、やわらげ、または改良するときに、被験体に単回または複数回投与すると有効な組成物または化合物の量を指す。
【００７１】
（組成物の投与）
本明細書に記載されるのは、望ましい処置が、局所適用によって簡単に到達可能な領域または臓器（例えば、皮膚、足蹠、爪）を含む、本発明の医薬組成物の局所投与である。本発明の医薬組成物は、局所的な洗浄、ゲル、乾燥粉末、エアロゾル化した液体、エアロゾル化した粉末、スプレー、例えば、きれいな適用補助物、例えば、スプレーびん、シリンジの使用を含む。ある実施形態では、本発明の医薬組成物を、創傷に投与する（例えば、洗浄する、コーティングする、灌注する、陰圧治療によって投与する、塗布する）。ある実施形態では、局所投与は、例えば、約４〜約１５ｐｓｉの圧力でスプレーびんまたはシリンジを用いる。
【００７２】
皮膚に局所適用する場合、医薬組成物は、場合により、担体に懸濁または溶解した活性成分を含有する適切な軟膏で配合される。本発明の化合物の局所投与のための担体としては、限定されないが、水、アルコール（例えば、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール）、不活性ポリマー（例えば、組成物中に約０．１％〜約２５％（ｗ／ｖ）、約０．２％〜約１０％（ｗ／ｖ）、最も好ましくは、約０．５％〜約５％（ｗ／ｖ））の量で存在する不活性ポリマー）。が挙げられる。
【００７３】
不活性ポリマーとしては、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）および架橋したＰＶＰ（クロスポビドン）；中性多糖（例えば、デキストラン、メチルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）（例えば、１２０ｋＤａのＨＰＭＣ））；ポリメタクリル酸ポリマーを含む直鎖ポリアクリル酸ポリマー；架橋したポリアクリル酸ポリマー（カルボマー）；および高分子量の直鎖および架橋した有機アルコール（例えば、直鎖ポリビニルアルコール）が挙げられる。
【００７４】
または、医薬組成物は、担体に適切な乳化剤を用いて懸濁または溶解された活性化合物を含有する適切なローションまたはクリームで配合されてもよい。ある実施形態では、本発明の化合物の局所投与のための担体は、非アニオン性薬剤である。ある実施形態では、医薬組成物は、本明細書に開示するＰＡＡＧと殺菌消毒剤および／または抗生物質の組み合わせを含む。
【００７５】
特定の被験体のための特定の投薬量および処置計画は、使用される特定の化合物の活性、年齢、体重、全体的な健康状態、性別、食事、投与時間、排泄速度、薬物の組み合わせ、疾患の重篤度および経過、状態または症状、疾患、状態または症状に対する被験体の傾向、および処置する獣医の判断を含む種々の因子によって変わるだろう。
【００７６】
被験体の状態を改良したら、必要な場合、維持投薬量の本発明の組成物または組み合わせを投与してもよい。その後、症状に応じて、投薬量または投与頻度、またはその両方を、症状が所望のレベルまで軽減するときに、その改良された状態が維持されるレベルまで減らしてもよい。しかし、被験体は、疾患の症状が再発したときに、長期間にわたって断続的な処置が必要な場合がある。
【００７７】
ある実施形態では、投与頻度は、１日に１回である。ある実施形態では、投与頻度は、１日に１回または２回である。ある実施形態では、被験体は、１週間、３週間、５週間、７週間、１１週間、１４週間、１７週間、または２０週間処置される。好ましい実施形態では、被験体は、約１週間処置される。ある好ましい実施形態では、被験体は、約１〜約２週間処置される。ある好ましい実施形態では、被験体は、約２〜約５週間処置される。
【００７８】
（陰圧閉鎖創傷療法）
陰圧閉鎖創傷療法（ＮＰＷＴ）は、局所的に負圧にし、大気圧未満の圧力のドレッシング材または減圧密封技術としても知られ、急性創傷または慢性創傷の治癒を促進し、感染と戦い、火傷の治癒を向上させるために用いられる治療技術である。減圧源を使用し、局所的な創傷環境で大気圧未満の圧力を作り出す。
【００７９】
ＮＰＷＴは、創傷を密閉し、縫合不全をガーゼまたはフォームフィラードレッシング材、ドレープおよび減圧源を用いて防ぎ、これはドレッシング材に通した管によって創傷床に負圧を与える。処置される創傷の種類および臨床目的に依存して、減圧を連続的に、または断続的に加えてもよい。使用される点滴液の断続的な除去によって、創傷床のクリーニングおよび廃液、感染材料の除去を補助する。
【００８０】
ＮＰＷＴは、主に、ＮＰＷＴを創傷表面に移動させるために使用されるドレッシング材の種類が異なる、ガーゼまたはフォームの２つの形態を有する。浅い創傷または不規則な創傷、傷つけられ（ｕｎｄｅｒｍｉｎｉｎｇ）または調査される（ｅｘｐｌｏｒｅｄ）管または経路（ｔｕｎｎｅｌ）を有する創傷を有する痛みに高感度の患者の場合、および創傷治癒を容易にするために、ガーゼは、創傷床のための良好な選択であってもよく、一方、フォームは、規則的な輪郭を有する患者の創傷に合うように簡単に切断され、攻撃的な肉芽生成および創傷の収縮が望ましい目的である場合、良好に行われるだろう。
【００８１】
廃液管を備えるドレッシング材は、深い創傷または不規則な形状の創傷の輪郭に合わせられ、透明フィルムで密閉される。この管を減圧源に接続し、創傷床から過剰な流体を除去しつつ、開放性創傷を、制御された非開放性へと変え、循環を高め、リンパ系から排出物を除去する。流体または処置は、フォームを介して創傷へと循環し、フォームから解離してもよい。この技術を慢性創傷、または治癒の間に困難が存在する（例えば、慢性疾患、例えば、糖尿病に関連するもの、または静脈または動脈が、血液を十分に供給または除去することができなくなる）と予想される創傷とともに使用してもよい。
【００８２】
（ポリグルコサミンまたは誘導体化されたポリグルコサミンを含む組成物）
本明細書に記載される組成物は、水溶性ポリグルコサミンまたは誘導体化されたポリグルコサミンを含む。ある好ましい実施形態では、水溶性ポリグルコサミンまたは誘導体化されたポリグルコサミンは、ポリ（アセチル、アルギニル）グルコサミン、つまり、ＰＡＡＧである。特に、本発明は、乾燥した組成物（例えば、凍結乾燥したもの、スプレードライしたもの）および再構築された組成物に関する。
【００８３】
溶液中、中性ｐＨで、周囲温度でのＰＡＡＧは、非常にゆっくりと加水分解する（例えば、４ヶ月で分子量の１０％未満）。ＰＡＡＧは、わずかに吸湿性であり、従って、ＰＡＡＧの乾燥した組成物は、溶液中のＰＡＡＧに対し、ＰＡＡＧの寿命（例えば、貯蔵寿命）が延びる。ＰＡＡＧの乾燥した組成物は、溶液中のＰＡＡＧよりももっと加水分解に耐性がある。
【００８４】
（乾燥した組成物）
本明細書に記載される組成物は、乾燥組成物中に存在していてもよく、例えば、減圧乾燥された組成物、凍結乾燥された組成物、またはスプレー乾燥された組成物であってもよい。
【００８５】
凍結乾燥は、水性混合物または懸濁物を凍結させて凍結固体とすることを含む、「フリーズドライ」と呼ばれることが多いプロセスの技術的な名称であり、一般的に、凍結した固体をかなりの時間減圧状態に置く。減圧によって、水分子が昇華する。本明細書に記載される方法は、活性成分（例えば、ＰＡＡＧ）を凍結乾燥する工程を含む。一実施形態では、凍結乾燥は、滅菌（例えば、加熱滅菌、濾過）の後に起こる。一実施形態では、滅菌は、凍結乾燥（例えば、照射）の後に起こる。一実施形態では、滅菌は、凍結乾燥の前および後に起こる。一実施形態では、凍結乾燥した製品は、滅菌されない。
【００８６】
一実施形態では、凍結乾燥プロセス中、使用される溶媒系（例えば、滅菌水）は、実質的に昇華によって除去される。別の実施形態では、約５％未満の残留溶媒が、凍結乾燥後に残る。別の実施形態では、約３％未満の残留溶媒が凍結乾燥後に残る。別の実施形態では、約２％未満の残留溶媒が凍結乾燥後に残る。別の実施形態では、約１％未満の残留溶媒が、凍結乾燥後に残る。別の実施形態では、約０．１％未満の残留溶媒が凍結乾燥後に残る。
【００８７】
ある実施形態では、凍結乾燥プロセスは、長期間室温で保存することができる活性化合物（例えば、ＰＡＡＧ）を含む組成物を与える。
【００８８】
本明細書に記載される凍結乾燥される形態の組成物は、実質的にもっと安定な形態で与えられ、必要な場合、許容される溶媒系（例えば、滅菌水）で再構築されてもよい。本明細書に記載される実施形態は、比較的短い期間内で再構築された形態を与える（例えば、親液性の配合物および許容される溶媒を含有するバイアルを２０秒振り混ぜる）。本明細書に記載されるこのような安定な形態は、他の実施形態では、種々の温度で長期間安定である。
【００８９】
スプレー乾燥は、熱い気体（例えば、空気、窒素）を用いて迅速に乾燥させることによって、液体またはスラリーから乾燥粉末を製造する方法である。スプレードライヤーは、ある種類のアトマイザまたはスプレーノズルを使用し、液体またはスラリーを、制御された粒径のスプレーに分散する。これらの最も一般的なものは、ロータリーディスクおよび単一の流体を高圧で回転させるノズルである。または、ある用途のために、２種類の流体または超音波ノズルを使用する。最も一般的なスプレードライヤー（シングルエフェクトと呼ばれる）では、気体（例えば、空気、窒素）を噴霧した液体と一緒の流れで吹き出す。従来のスプレー乾燥は、粉末の微粒子を与え、液体に溶解または分散したとき、一緒に塊になるだろう。スプレー乾燥した粒子は、直径が１５０μｍ未満であってもよい。
【００９０】
乾燥凍結した組成物を調製する方法は、当該技術分野で公知である。一態様では、調製方法は、減圧乾燥である。一実施形態では、調製方法は、減圧エバポレーションである（例えば、フラットエバポレーター、回転するエバポレーター、床型エバポレーター、減圧オーブンを用いる）。
【００９１】
一態様では、調製方法は、凍結して乾燥することである（例えば、凍結乾燥）。
【００９２】
別の態様では、調製方法は、スプレー乾燥である。
【００９３】
ある実施形態では、この調製方法によって、すでに滅菌濾過した溶液から、活性成分と任意の望ましい成分の粉末が得られる。好ましい実施形態では、この調製方法によって、不純物を実質的に含まない活性成分の粉末が得られる。
【００９４】
（再構築された組成物）
水溶性ポリグルコサミンまたは誘導体化されたポリグルコサミン組成物（例えば、ＰＡＡＧ）の乾燥した組成物を、必要な場合、適切な希釈剤（例えば、滅菌水）を用いて再構築してもよい。再構築された組成物は、水溶性ポリグルコサミンまたは誘導体化されたポリグルコサミン（例えば、ＰＡＡＧ）を望ましい濃度まで含む、再構築された乾燥組成物である。
【００９５】
ある実施形態では、本明細書に記載される凍結乾燥した組成物は、十分な量の医薬的に許容される担体と接触すると、簡単に再構築される。例えば、ある実施形態では、凍結乾燥した組成物を、バイアル内で、医薬的に許容され得る担体、例えば、滅菌水とともに約１〜約３分振り混ぜて混合し、局所投与に適した再構築された組成物（例えば、表面スプレー）を与える。一実施形態では、凍結乾燥された組成物は、比較的短期間で（例えば、１分未満、３０秒未満、他の実施形態では、約２０秒）で再構築される。特定の実施形態では、凍結乾燥された組成物は、２分未満で再構築される。これらの短い再構築時間は、投与前に長い時間かけて溶液にさらすことによって治療薬剤が分解することがないという利点を与える。一実施形態では、再構築された組成物は、局所投与に適している（例えば、表面スプレーまたは洗浄）。別の実施形態では、再構築された形態は、非懸濁物である。さらなる実施形態では、再構築された形態は、透明溶液であり、投与前に実質的に透明のままである。
【００９６】
本明細書に記載される主題の特徴は、不純物（例えば、界面活性剤）を実質的に含まないように配合され、短い期間で担体または希釈剤とともに完全に再構築するのに適合した、乾燥された（例えば、凍結乾燥された、スプレー乾燥された）組成物（例えば、ＰＡＡＧを含む）であり、担体または希釈剤を用いて短時間で完全に再構築することができるように修正することができる。
【００９７】
ある実施形態では、再構築された組成物は、ＰＡＡＧが約１００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）〜約１０００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）である。ある実施形態では、再構築された組成物は、ＰＡＡＧが約５００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）である。ある実施形態では、再構築された組成物は、ＰＡＡＧが約２００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）である。
【００９８】
適切な希釈剤としては、生体適合性の媒体、例えば、滅菌水、緩衝化された水性媒体、生理食塩水、緩衝化された生理食塩水、場合により、糖の緩衝化された溶液、場合により、ビタミンの緩衝化された溶液、場合により、合成ポリマーの緩衝化された溶液、およびオスモル濃度の非イオン性物質を含有する等張性のバランスが取れた溶液が挙げられる。好ましい実施形態では、希釈剤は、滅菌水である。
【００９９】
凍結乾燥した組成物を再構築し、望ましい治療濃度を有する組成物を製造してもよい。好ましい実施形態では、最終的な液体組成物中のＰＡＡＧの濃度は、約１００〜約７００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）である。好ましい実施形態では、最終的な液体組成物中のＰＡＡＧの濃度は、約５００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）である。別の好ましい実施形態では、最終的な液体組成物中のＰＡＡＧの濃度は、２００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）である。
【０１００】
好ましい実施形態では、組成物は、水（例えば、滅菌水）およびＰＡＡＧを含む。ある実施形態では、組成物は、殺菌消毒剤および／または抗生物質も含む。例示的な殺菌消毒剤は、クロロヘキシジン（ｃｈｏｒｈｅｘｉｄｉｎｅ）またはベタジンを含む。例示的な抗生物質は、銀を含有する化合物（例えば、ナノ銀粒子またはイオン性の銀）、過酸化水素または過酸化水素源（例えば、グルコースオキシダーゼを含有するハチミツベースの生成物）、またはヨウ素生成物（例えば、ベタジン）を含む。ある実施形態では、組成物は、希釈剤（例えば、水、例えば、滅菌水）およびＰＡＡＧ以外の成分を実質的に含まない。
【０１０１】
好ましい実施形態では、組成物は、水（例えば、滅菌水）と、ＰＡＡＧを約１０〜１０００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）で含む。一実施形態では、組成物は、ＰＡＡＧを約５００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）で含む。一実施形態では、組成物は、ＰＡＡＧを約２００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）で含む。
【０１０２】
本発明の態様によれば、乾燥した組成物（例えば、凍結乾燥した粉末、スプレー乾燥した粉末、凝集した粉末）を水に加える。粉末を完全に溶解させるために十分な水が存在すべきである。ある実施形態では、最終的な液体組成物中のＰＡＡＧの濃度は、約１００〜約７００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）である。好ましい実施形態では、最終的な液体組成物中のＰＡＡＧの濃度は、約５００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）である。別の好ましい実施形態では、最終的な液体組成物中のＰＡＡＧの濃度は、２００μｇ／ｍＬ（またはｐｐｍ）である。
【０１０３】
（被験体）
被験体は、ヒトまたは非ヒト動物であってもよい。適切なヒト被験体としては、例えば、創傷（例えば、本明細書に記載される創傷）を有するヒト患者、または正常な被験体が挙げられる。本発明の「非ヒト動物」という用語は、すべての脊椎動物、例えば、非哺乳動物（例えば、ニワトリ、両生類、爬虫類）および哺乳動物、例えば、非ヒト霊長類、例えば、ゾウ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウシ、ブタなどが挙げられる。適切な動物被験体としては、限定されないが、野生動物、農場動物、動物園の動物、サーカスの動物、愛玩（ペット）動物、家畜および／または農業で有用な動物が挙げられる。適切な動物被験体としては、霊長類、げっ歯類および鳥類が挙げられる。前記動物の例としては、限定されないが、サイ、ゾウ、バク、モルモット、ハムスター、アレチネズミ、ラット、マウス、ウサギ、イヌ、ネコ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ウシ、ヤギ、シカ、アカゲザル、サル、タマリン（ｔａｍａｒｉｎｄ）、猿人類、ヒヒ、ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、テナガザル、鳥類、例えば、キジ、ウズラ（または他の猟鳥）、水鳥、ダチョウ、ニワトリ、シチメンチョウ、アヒルおよびガチョウまたは自由に飛び回る鳥が挙げられる。
【０１０４】
ある好ましい実施形態では、被験体は、ヒトである。他の好ましい実施形態では、被験体は、ゾウ、サイまたはバクである。他の好ましい実施形態では、被験体は、イヌ、ネコ、ウマ、ブタまたは他の家畜または愛玩動物である。
【０１０５】
（創傷）
本明細書で使用される場合、創傷は、体の一部または組織、例えば、皮膚（例えば、表皮、真皮および皮下組織）および／またはその下にある組織、粘膜（例えば、口腔粘膜）、または他の上皮（例えば、角膜上皮）が損傷を受ける種類の損傷を指す。
【０１０６】
創傷は、開放性創傷に分類することができる。創傷は、慢性創傷または急性創傷にも分類することができる。創傷は、治癒しない創傷であってもよい。創傷は、感染した創傷であってもよい。
【０１０７】
開放性創傷は、組織（例えば、皮膚または粘膜）が裂け、切れ、または穴が開く種類の損傷を指す。開放性創傷は、さらに、創傷が引き起こされる物体に従って分類することができる。開放性創傷の種類としては、例えば、ナイフ、カミソリまたはガラスの破片のようなきれいな縁が鋭い物体によって引き起こされる、切開部または切除した創傷；鈍的（ｂｌｕｎｔ）外傷によって引き起こされる不規則な引裂き状の創傷である裂傷；皮膚の最上部（表皮）が引っ掻き傷を受けた、表面の創傷である擦り傷（すりむき）、多くは、粗い表面に滑って転ぶことによって引き起こされる；皮膚または粘膜を例えば、皮膚に穴をあける物体（爪または針で）によって引き起こされる、刺し傷による創傷；皮膚または粘膜に入り、出て行くナイフのような物体によって引き起こされる、貫通する創傷；銃弾または身体に入り、身体を通過する同様の発射体によって引き起こされる、銃弾による創傷（例えば、ある部位に入るもの、およびある部位から出るもの）が挙げられる。
【０１０８】
非開放性創傷は、組織（例えば、皮膚または粘膜）が破壊されることなく、例えば、鈍い力による外傷によって引き起こされる種類の損傷を指す。非開放性創傷の種類としては、例えば、皮膚または粘膜の下の組織が損傷を受ける、鈍い力による外傷によって引き起こされる挫傷または打撲傷；血管に損傷を受け、皮膚または粘膜の下に血液が集まることによって引き起こされる血腫または血液腫瘍；長時間にわたって大きな力または極端な量の力が加わったことにより引き起こされる圧挫傷傷；組織を破壊する損傷の結果である、急性創傷または外傷性創傷；および組織損傷を生じる比較的ゆっくりとしたプロセスによって引き起こされる、多くは、循環または他の組織の全身支持が不十分である時に、失敗し、崩壊する、慢性創傷（例えば、圧迫、静脈の潰瘍形成、口腔の潰瘍形成、消化液による潰瘍または糖尿病性の潰瘍）が挙げられる。次いで、感染は、創傷部位を保持し、慢性膿瘍になる場合がある。感染が臨界点を超えると、局所的に広がるか、または全身性になる場合がある（敗血症）。
【０１０９】
創傷治癒、または創傷の修復は、組織、例えば、皮膚または粘膜が、損傷後にそれ自体修復する複雑なプロセスを指す。正常な皮膚では、表皮および真皮は、安定な平衡状態にあり、外部環境に対して保護障壁を生成する。保護障壁が壊れると、創傷治癒の生理学的プロセスが、すぐに起動状態に設定される。創傷治癒プロセスは、細菌感染または局所的な急性または慢性の炎症によって制限され、遅れる。
【０１１０】
（慢性創傷）
慢性創傷は、秩序正しくおよび／または予測可能な期間に（例えば、３ヶ月以内に）治癒しない創傷である。慢性創傷は、二度と治癒しないか、または治癒するのに数年かかる場合がある。
【０１１１】
好ましい実施形態では、創傷は、慢性の治癒しない創傷、例えば、慢性足疾患、例えば、割れた爪、膿瘍、病変、潰瘍、ひび割れ、および／または慢性治癒しない真皮または皮下の創傷、例えば、膿瘍または床擦れを含む。これらの実施形態のいくつかの態様では、創傷は、感染している。これらの実施形態のいくつかの他の態様では、創傷は、感染していない。
【０１１２】
本明細書で使用される場合、慢性疾患は、疾患の症状が少なくとも１つの創傷を含む疾患を指す。本明細書に記載される慢性疾患は、感染、例えば、細菌感染の結果であってもよく、慢性疾患または創傷が処置されるときに、もはや感染は存在しなくてもよい。慢性疾患の症状は、時に、同じ疾患の急性段階よりも重篤度が低い場合があるが、長期間続く場合がある。慢性疾患は、進行性であってもよく、完全または部分的な障害を生じるか、または死に至る場合さえある。
【０１１３】
良くない創傷治癒またはゆっくりとした創傷治癒と関係があり得る慢性疾患の例としては、慢性炎症または細菌種によって引き起こされる創傷（例えば、好気性または通性嫌気性のグラム陽性菌および／またはグラム陰性菌、高感度の薬物耐性菌、例えば、複数薬物耐性形態）が挙げられる。例としては、慢性足疾患、例えば、割れた爪、膿瘍、病変、潰瘍、ひび割れ、または慢性治癒しないまたは真皮または皮下の創傷、例えば、膿瘍、床擦れ、埋没した側頭部の分泌腺が挙げられる。
【０１１４】
（急性創傷）
急性創傷は、分子、例えば、コラーゲンの生成および分解のバランスが存在する（例えば、生成よりも分解が実質的に多くない）創傷である。これらの実施形態のいくつかの態様では、創傷は、感染している。これらの実施形態のいくつかの他の態様では、創傷は、感染していない。
【０１１５】
ある好ましい実施形態では、創傷は、急性創傷、例えば、ナイフ、カミソリまたはガラスの破片のようなきれいな縁が鋭い物体によって引き起こされる、切開部または切除した創傷；鈍的外傷によって引き起こされる不規則な引裂き状の創傷である裂傷；皮膚の最上部（表皮）が引っ掻き傷を受けた、表面の創傷である擦り傷（すりむき）、多くは、粗い表面に滑って転ぶことによって引き起こされる；皮膚または粘膜を例えば、皮膚に穴をあける物体（爪または針で）によって引き起こされる、刺し傷による創傷；皮膚または粘膜に入り、出て行くナイフのような物体によって引き起こされる、貫通する創傷；銃弾または身体に入り、身体を通過する同様の発射体によって引き起こされる、銃弾による創傷（例えば、ある部位に入るもの、およびある部位から出るもの）が挙げられる。これらの実施形態のいくつかの態様では、創傷は、感染している。
【０１１６】
良くない創傷治癒またはゆっくりとした創傷治癒と関係があり得る急性創傷の例としては、炎症または細菌種によって引き起こされる創傷（例えば、好気性または通性嫌気性のグラム陽性菌および／またはグラム陰性菌、高感度の薬物耐性菌、例えば、複数薬物耐性形態）が挙げられる。
【０１１７】
（火傷）
火傷は、熱、電気、化学物質、光、放射線または摩擦によって引き起こされる種類の皮膚の損傷を指す。火傷は、皮膚（表皮組織および真皮）および／またはもっと深部の組織、例えば、筋肉、骨および血管に影響を与える場合がある。火傷の損傷は、ショック、感染、多臓器不全症候群、電解質の不均衡および呼吸困難によって複雑化する場合がある。
【０１１８】
火傷は、第１度、第２度、第３度または第４度に分類することができる。第１度の火傷は、表皮のみが関与し、損傷部位での赤み（紅斑）、白い斑点および小さな痛みのみである。例えば、ほとんどの日焼けは、第１度の火傷として含まれる。第２度の火傷は、皮膚表面の水ぶくれを伴う紅斑として現れ、神経が関与するレベルに応じて、多少の痛みを伴う場合がある。第２度の火傷は、表面の（乳頭状の）真皮が関与し、深部の（網様）真皮層も関与する場合がある。皮下組織への損傷を伴って表皮が失われたときに、第３度の火傷が起こる。火傷の被害者は、表皮が焼け（ｃｈａｒｒｉｎｇ）重篤な損傷を示し、時に、固い焼痂が存在するだろう。第３度の火傷によって瘢痕化が起こり、犠牲者は、毛幹およびケラチンの消失も示すだろう。第４度の火傷は、筋肉、腱および靱帯の組織の損傷を起こし、そのため、皮下組織の特徴的で壊滅的な損傷を生じる。ある場合には、皮下組織は、部分的または完全に焼け落ち、これにより、隔壁腔症候群と呼ばれる状態を引き起こす場合がある。
【０１１９】
火傷の深さは、表面、表面の部分的な厚み、深部の部分的な厚み、または完全な厚みとして記述される。
【０１２０】
火傷は、部分的な厚みまたは完全な厚みの火傷によって影響を受けるパーセントである合計身体表面積（ＴＢＳＡ）の観点で評価することもできる（紅斑／表面の厚みの火傷は数えない）。罹患したＴＢＳＡを概算するための迅速で有用な様式として、９のルールを使用することができる。もっと正確な概算は、成人および小児の身体の部分の異なる部位を考慮するＬｕｎｄ  ＆  Ｂｒｏｗｄｅｒ図表を用いて決定することができる。
【０１２１】
火傷は、多くの物質および外因、例えば、化学物質（例えば、強酸または塩基、腐食性化学化合物）、摩擦、電気（例えば、作業場所での損傷、導電性ゲルを用いずに除細動されるか、または心変換される、雷）、放射線（例えば、長時間のＵＶ光の露光、日焼けブース、放射線治療、太陽灯、Ｘ線）および熱（例えば、熱湯（ｓｃａｌｄｉｎｇ））によって引き起こされることがある。
【０１２２】
火傷の処置としては、例えば、外因での火傷のプロセスを止めること、火傷の創傷を冷やすこと、静脈内液、壊死組織切除法（死んだ組織および汚染を除去すること）、クリーニング、ドレッシング（例えば、生体合成ドレッシング）、疼痛管理（例えば、鎮痛剤（例えば、イブプロフェン、アセトアミノフェン）、麻薬、局所麻酔薬）、高圧酸素療法、手術管理、感染制御、過剰な代謝応答の制御が挙げられる。
【０１２３】
火傷を処置するための治療に有効な量の本明細書に記載される組成物を送達する投薬量を決定するための手引きは、火傷の動物モデル、例えば、Ｓａｎｔｏｓ  Ｈｅｒｅｄｅｒｏ  ＦＸら、Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｂｕｒｎｓ  ａｎｄ  Ｆｉｒｅ  Ｄｉｓａｓｔｅｒｓ、ＩＸ−ｎ．２（１９９６年６月）；およびＳｔｅｖｅｎｓｏｎ  ＪＭら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．２００３；７８：９５−１０５に記載されるようなものから得られてもよい。
【０１２４】
（慢性疾患）
本明細書で使用される場合、慢性疾患は、疾患の症状が少なくとも１つの創傷を含む疾患を指す。本明細書に記載される慢性疾患は、感染、例えば、細菌感染の結果であってもよく、慢性疾患または創傷が処置されるときに、もはや感染は存在しなくてもよい。慢性疾患の症状は、時に、同じ疾患の急性段階よりも重篤度が低い場合があるが、長期間続く場合がある。慢性疾患は、進行性であってもよく、完全または部分的な障害を生じるか、または死に至る場合さえある。
【０１２５】
（第２の創傷治療）
一実施形態では、この方法は、第２の創傷治療を被験体に投与すること、例えば、抗生物質または抗細菌剤の使用、壊死組織切除法、灌注、陰圧閉鎖創傷療法（減圧により補助される閉鎖）、加温、酸素付加、湿潤創傷治癒、機械的な応力の除去、および／または細胞（例えば、ケラチン生成細胞）または、他の材料（例えば、コラーゲンのマトリックス中の線維芽細胞および／または治癒因子（例えば、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、トランスフォーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）および表皮成長因子（ＥＧＦ））を分泌するか、またはこれらの量を高めるためのケラチン生成細胞を有する人工皮膚置き換え物）の添加をさらに含む。
【０１２６】
一実施形態では、第２の創傷治療は、陰圧閉鎖創傷療法（減圧により補助される閉鎖）を含む。
【０１２７】
一実施形態では、第２の創傷治療は、抗生物質を含む。一実施形態では、組成物は、創傷治癒の抗生物質の有害な影響を克服する（例えば、低下させる、減らす、防ぐ）。
【０１２８】
一実施形態では、第２の創傷治療は、ステロイド系または非ステロイド系の抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）を含む。一実施形態では、組成物は、ステロイド系または非ステロイド系の抗炎症薬と相加的または相乗的である。一実施形態では、組成物は、例えば、局所的な洗浄、ゲル、スプレー、経口、浣腸、吸入、乾燥粉末、エアロゾル化した液体、エアロゾル化した粉末または点眼によって、局所投与または経口投与される。ある実施形態では、組成物は経口投与され、胃腸管および／または炎症性胃腸管障害における創傷（例えば、損傷を受けた粘膜）を処置する。ある実施形態では、組成物は、局所投与され、創傷を処置するか、および／または例えば、目の傷跡を減らすか、または防ぐ。
【０１２９】
（化合物）
（可溶性ポリグルコサミンおよびポリグルコサミン誘導体）
被験体（例えば、本明細書に記載されるような被験動物）の創傷を処置するための可溶性ポリグルコサミンまたは誘導体化されたポリグルコサミン（例えば、ＰＡＡＧ）を含有する化合物および組成物（例えば、減圧乾燥したもの、凍結乾燥したもの、スプレー乾燥したもの、再構築されたもの）が、本明細書に記載される。
【０１３０】
ポリグルコサミンは、キチンまたはキトサンから誘導されてもよい。キトサンは、Ｎ−アセチルグルコサミンのポリマーであるキチンの脱アセチル化から誘導される不溶性ポリマーであり、甲殻類（例えば、エビ、カニ、ロブスター）の外骨格の主要な要素である。キトサンは、一般的に、β（１→４）ポリグルコサミンであり、５０％未満がアセチル化されており、一方、キチンは、一般的に、５０％より多くがアセチル化されていると考えられる。ポリグルコサミンは、種々の真菌および節足動物にもみられる。β（１→４）ポリグルコサミンの合成源および代替源は、ポリグルコサミン誘導体の出発物質として働くだろう。ポリグルコサミンは、ポリアセチルグルコサミンとは対照的に、５０％未満がアセチル化されていると本明細書では定義される。５０％より多いアミノ基がアセチル化されている場合、ポリマーは、ポリアセチルグルコサミンであると考えられる。
【０１３１】
本明細書に記載される可溶性ポリグルコサミンは、アセチル基以外のヒドロキシル部分またはアミン部分で誘導体化されていない、中性ｐＨの水溶性ポリグルコサミンまたはポリグルコサミンを指す。可溶性ポリグルコサミンは、グルコサミンおよびアセチルグルコサミンモノマーで構成される。一般的に、水溶性ポリグルコサミンは（中性ｐＨで）、分子量が約５，０００ｋＤａ未満またはそれに等しく、脱アセチル化度は、８０％に等しいか、それより大きい。
【０１３２】
本明細書に記載されるポリグルコサミン誘導体は、遊離のヒドロキシル基またはアミン基を、正に帯電した部分または中性部分によって官能基化することによって作られる。官能基化率は、ポリグルコサミン骨格のうち、正に帯電した部分または中性部分によって官能基化されたモノマーの合計パーセントとして定義される。脱アセチル化度および官能基化度は、官能基化されたポリグルコサミン誘導体に対し、特定の電荷密度を付与する。得られた電荷密度は、溶解度および処置の有効性に影響を与える。従って、本発明によれば、脱アセチル化度、官能基化度および分子量は、最適な効能のために最適化されなければならない。本明細書に記載されるポリグルコサミン誘導体は、生理学的（中性）ｐＨでの溶解度を含め、有利な多くの特性を有する。ある実施形態では、ポリグルコサミン誘導体は、ｐＨ１０までで可溶性である。ある実施形態では、ポリグルコサミン誘導体の分子量は、５〜１，０００ｋＤａである。ある実施形態では、ポリグルコサミン誘導体の分子量は、１５〜１，０００ｋＤａである。ある実施形態では、ポリグルコサミン誘導体の分子量は、２０〜３５０ｋＤａである。ある実施形態では、ポリグルコサミン誘導体の分子量は、２０〜１５０ｋＤａである。ある実施形態では、ポリグルコサミン誘導体の分子量は、２０〜１２０ｋＤａである。ある実施形態では、ポリグルコサミン誘導体の分子量は、３０〜１２０ｋＤａである。ある実施形態では、ポリグルコサミン誘導体の分子量は、５０〜１００ｋＤａである。ある実施形態では、ポリグルコサミン誘導体の分子量は、２０〜８０ｋＤａである。本明細書に記載されるポリグルコサミン誘導体は、ｐＨ２〜ｐＨ１１で可溶性である。
【０１３３】
脱アセチル化度（ＤＤＡ）が５０％より大きいポリグルコサミンは、本発明で使用され、官能基化度は、ポリグルコサミン骨格のモノマー全体の２％〜５０％である。脱アセチル化度は、ポリグルコサミンモノマー中のモノマー全体に対する遊離アミノ基の相対含有量を決定づける。ポリグルコサミンの脱アセチル化度を決定するために使用可能な方法としては、例えば、ニンヒドリン試験、線形電位差滴定、近赤外分光法、核磁気共鳴分光法、臭化水素滴定法、赤外線分光法および一次導関数ＵＶ−分光測光法が挙げられる。好ましくは、本明細書に記載される可溶性ポリグルコサミンまたは誘導体化されたポリグルコサミンの脱アセチル化度は、定量的な赤外線分光法によって決定される。
【０１３４】
アミンの活性な誘導体化（ｄｅｒｉｖｉｔｉｚａｔｉｏｎ）の官能基化率は、ポリグルコサミンポリマーのモノマーの合計数に対して決定される。好ましくは、本明細書に記載される誘導体化されたポリグルコサミンの官能基化率は、Ｈ−ＮＭＲまたは定量的な元素分析によって決定される。脱アセチル化度および官能基化度は、官能基化されたポリグルコサミン誘導体に特定の電荷密度を与える。得られた電荷密度は、溶解度および組織、バイオフィルム要素および細菌膜に対する相互作用の強度に影響を与える。分子量も、誘導体化されたポリグルコサミンの粘膜付着性およびバイオフィルムを破壊する能力において重要な因子である。従って、本発明によれば、これらの特性は、最適な効能のために最適化されなければならない。例示的なポリグルコサミン誘導体は、Ｕ．Ｓ．Ｐ．Ｎ．８，１１９，７８０号に記載され、その全体が本明細書に参考として組み込まれる。
【０１３５】
本明細書に記載されるポリグルコサミン誘導体は、多分散指数（ＰＤＩ）が約１．０〜約２．５の範囲である。本明細書で使用される場合、多分散指数（ＰＤＩ）は、所与のポリマーサンプルの分子量分布の指標である。計算されるＰＤＩは、重量平均分子量を数平均分子量で割ったものである。この計算は、ポリマーバッチ中の個々の分子量の分布を示す。ＰＤＩは、常に１より大きい値であるが、ポリマー鎖が均一な鎖長に近づくにつれて、ＰＤＩは、１に近づく。天然源から誘導されるポリマーのＰＤＩは、天然源（例えば、カニ  対  エビ  対  真菌に由来するキチンまたはキトサン）によって変わり、種々の反応、製造、処理、取り扱い、貯蔵および精製の条件によって影響を受けるだろう。多分散性を決定するための方法としては、例えば、ゲル浸透クロマトグラフィー（サイズ排除クロマトグラフィーとしても知られる）；光散乱測定；およびＭＡＬＤＩまたはエレクトロスプレー質量分光法からの直接的な計算が挙げられる。好ましくは、本明細書に記載される可溶性ポリグルコサミンまたは誘導体化されたポリグルコサミンのＰＤＩは、ＨＰＬＣおよび多重角度光散乱方法によって決定される。
【０１３６】
本明細書に記載されるポリグルコサミン誘導体（すなわち、誘導体化されたポリグルコサミン）は、中性および生理学的なｐＨで可溶性である、種々の選択された分子量を有し、本発明の目的のために、５〜１，０００ｋＤａの範囲の分子量を含む。誘導体化されたポリグルコサミンは、約１０までのｐＨで可溶性である。本明細書に記載される実施形態は、中程度の範囲の分子量の誘導体化されたポリグルコサミン（２０〜１５０ｋＤａ、例えば、約２０〜約１５０ｋＤａ）を特徴とする。ある実施形態では、誘導体化されたポリグルコサミンの分子量は、１５〜１，０００ｋＤａである。ある実施形態では、誘導体化されたポリグルコサミンの分子量は、２０〜１５０ｋＤａである。ある実施形態では、誘導体化されたポリグルコサミンの分子量は、２０〜１２０Ｄａである。ある実施形態では、誘導体化されたポリグルコサミンの分子量は、３０〜１２０ｋＤａである。ある実施形態では、誘導体化されたポリグルコサミンの分子量は、５０〜１００ｋＤａである。ある実施形態では、官能基化されたポリグルコサミンの分子量は、２０〜８０ｋＤａである。
【０１３７】
本明細書に記載される官能基化されたポリグルコサミン誘導体は、以下のものを含む：
（Ａ）ポリグルコサミン−アルギニン化合物；
（Ｂ）ポリグルコサミン−天然アミノ酸誘導体化合物；
（Ｃ）ポリグルコサミン−非天然アミノ酸化合物；
（Ｄ）ポリグルコサミン−酸アミン化合物；
（Ｅ）ポリグルコサミン−グアニジン化合物；および
（Ｆ）中性ポリグルコサミン誘導体化合物。
【０１３８】
（（Ａ）ポリグルコサミン−アルギニン化合物）
ある実施形態では、本発明は、ポリグルコサミン−アルギニン化合物に関し、アルギニンは、ポリグルコサミン：
【０１３９】
【化４】
2019104749.tif 000008
【０１４０】
のグルコサミン上の一級アミンに対し、そのカルボニルを介してペプチド（アミド）結合によって結合し、ここで式中、それぞれのＲ１は、独立して、水素、アセチルおよび以下の式：
【０１４１】
【化５】
2019104749.tif 000009
【０１４２】
の基またはこれらのラセミ混合物から選択され、
式中、Ｒ１置換基の少なくとも２５％がＨであり、少なくとも１％がアセチルであり、少なくとも２％が、上に示す式の基である。
【０１４３】
ある実施形態では、ポリグルコサミン−アルギニン化合物は、以下の式：
【０１４４】
【化６】
2019104749.tif 000010
【０１４５】
を有し、ｍは、０．０２〜０．５０であり；ｑは、０．５０〜０．０１であり；ｓは、１であり；ｐ＋ｑ＋ｍ＝１であり；官能基化率は、ｍ・１００％であり；Ｘは、
【０１４６】
【化７】
2019104749.tif 000011
【０１４７】
からなる群より選択され、
この調製物は、分子量が５ｋＤａ未満の化合物を実質的に含まない。
【０１４８】
（（Ｂ）ポリグルコサミン−天然アミノ酸誘導体化合物）
ある実施形態では、本発明は、ポリグルコサミン−天然アミノ酸誘導体化合物に関し、天然アミノ酸は、ヒスチジンまたはリジンであってもよい。アミノは、ポリグルコサミン：
【０１４９】
【化８】
2019104749.tif 000012
【０１５０】
のグルコサミン上の一級アミンに対し、そのカルボニルを介してペプチド（アミド）によって結合し、それぞれのＲ１は、独立して、水素、アセチルおよび以下の式：
【０１５１】
【化９】
2019104749.tif 000013
【０１５２】
の基またはこれらのラセミ混合物から選択され、式中、Ｒ１置換基の少なくとも２５％がＨであり、少なくとも１％がアセチルであり、少なくとも２％が、上に示す式の基であるか、以下の式：
【０１５３】
【化１０】
2019104749.tif 000014
【０１５４】
の基またはこれらのラセミ体混合物であり、式中、Ｒ１置換基の少なくとも２５％がＨであり、少なくとも１％がアセチルであり、少なくとも２％が、上に示す式の基である。
【０１５５】
（（Ｃ）ポリグルコサミン−非天然アミノ酸化合物）
ある実施形態では、本発明は、ポリグルコサミン−非天然アミノ酸化合物に関し、非天然アミノ酸は、ポリグルコサミン：
【０１５６】
【化１１】
2019104749.tif 000015
【０１５７】
のグルコサミン上の一級アミンに対し、そのカルボニルを介してペプチド（アミド）結合によって結合し、式中、それぞれのＲ１は、独立して、水素、アセチルおよび以下の式の基
【０１５８】
【化１２】
2019104749.tif 000016
【０１５９】
から選択され、
式中、Ｒ３は、非天然アミノ酸側鎖であり、Ｒ１置換基の少なくとも２５％がＨであり、少なくとも１％がアセチルであり、少なくとも２％が、上に示す式の基である。
【０１６０】
非天然アミノ酸は、生体系に通常は見られない側鎖を有するもの、例えば、オルニチン（２，５−ジアミノペンタン酸）である。任意の非天然アミノ酸を本発明に従って使用してもよい。ある実施形態では、ポリグルコサミンにカップリングする非天然アミノ酸は、以下の式：
【０１６１】
【化１３】
2019104749.tif 000017
【０１６２】
を有する。
【０１６３】
（（Ｄ）ポリグルコサミン−酸アミン化合物）
ある実施形態では、本発明は、ポリグルコサミン−酸アミン化合物、またはこれらのグアニジル化された対照物に関する。この酸アミンは、ポリグルコサミン：
【０１６４】
【化１４】
2019104749.tif 000018
【０１６５】
のグルコサミン上の一級アミンに対し、そのカルボニルを介してペプチド（アミド）結合によって結合し、式中、それぞれのＲ１は、独立して、水素、アセチルおよび以下の式：
【０１６６】
【化１５】
2019104749.tif 000019
【０１６７】
の基から選択され、
式中、Ｒ３は、アミノ、グアニジノ、およびアミノ基またはグアニジノ基で置換されたＣ１−Ｃ６アルキルから選択され、式中、Ｒ１置換基の少なくとも２５％がＨであり、少なくとも１％がアセチルであり、少なくとも２％が、上に示す式の基である。
【０１６８】
ある実施形態では、Ｒ１は、以下：
【０１６９】
【化１６】
2019104749.tif 000020
【０１７０】
のいずれかから選択される。
【０１７１】
（（Ｅ）ポリグルコサミン−グアニジン化合物）
ある実施形態では、本発明は、ポリグルコサミン−グアニジン化合物に関する。
【０１７２】
【化１７】
2019104749.tif 000021
【０１７３】
式中、それぞれのＲ１は、独立して、水素、アセチル、およびＲ１が、これらが結合する窒素とともにグアニジン部分を形成する基から選択され；Ｒ１置換基の少なくとも２５％がＨであり、少なくとも１％がアセチルであり、少なくとも２％が、結合する窒素と共にグアニジン部分を形成する。
【０１７４】
（（Ｆ）中性ポリグルコサミン誘導体化合物）
ある実施形態では、本発明は、中性ポリグルコサミン誘導体化合物に関する。例示的な中性ポリグルコサミン誘導体化合物は、ポリグルコサミン：
【０１７５】
【化１８】
2019104749.tif 000022
【０１７６】
の１個またはもっと多くのアミン窒素が、糖のような天然部分に共有結合したものを含み、
それぞれのＲ１は、独立して、水素、アセチルおよび糖（例えば、天然に存在する糖または改質された糖）またはα−ヒドロキシ酸から選択される。糖は、単糖類、二糖類または多糖類、例えば、グルコース、マンノース、ラクトース、マルトース、セルビオース、スクロース、アミロース、グリコーゲン、セルロース、グルコネートまたはピルベートであってもよい。糖は、スペーサーを介し、または末端の糖のカルボン酸基、ケトン基またはアルデヒド基を介して共有結合していてもよい。α−ヒドロキシ酸の例としては、グリコール酸、乳酸およびクエン酸が挙げられる。ある好ましい実施形態では、中性ポリグルコサミン誘導体は、ポリグルコサミン−ラクトビオン酸化合物またはポリグルコサミン−グリコール酸化合物である。例示的な塩および共誘導体としては、当該技術分野で公知のもの、例えば、ＵＳ  ２００７／０２８１９０４号に記載されるものが挙げられ、その内容は、全体的に本明細書に参考として組み込まれる。
【０１７７】
ある実施形態では、本明細書に記載される化合物または組成物、例えば、ＰＡＡＧを含む化合物または組成物は、別の薬剤と組み合わせて投与される。例示的な薬剤としては、殺菌消毒剤および抗生物質が挙げられる。ある実施形態では、殺菌消毒剤は、クロルヘキシジンまたはベタジンである。ある実施形態では、抗生物質は、クロルヘキシジン、ベタジン、過酸化水素、ハチミツ、シルバデン、スルファジアジン銀（ｓｉｌｖｅｒ  ｓｕｆａｄｉａｚｅｎｅ）、スルファセトアミドナトリウム、エリスロマイシン、ネオマイシン、ポリミキシンｂ、マフェニド（例えば、サルファマイロン）バシトラシン／ネオマイシン／ポリミキシンｂ（３種の抗生物質）、ムピロシン（例えば、バクトロバン）レタパムリン（アルタバ（Ａｌｔａｂａ））、またはテトラサイクリン（例えば、トピサイクリン）である。
【０１７８】
本明細書で使用される場合、２種類の薬剤を「組み合わせて投与する」または組み合わせた投与は、２種類またはもっと多種類の薬剤（例えば、本明細書に記載される組成物および化合物）を、同時に、または被験体に対するそれぞれの薬剤の影響が重複するように、ある間隔内で被験体に投与することを意味する。好ましくは、これらの薬剤を、互いに、６０分以内、１５分以内、１０分以内、５分以内、または１分以内に投与する。好ましくは、薬剤の投与は、組み合わせの（例えば、相乗作用の）効果が達成されるように、十分に近い間隔が置かれる。薬剤は、同時に、例えば、組み合わせた単位投薬量で投与されてもよい（両方の薬剤の同時送達を与える）。または、この薬剤を、特定の時間間隔で、例えば、数分間隔、数時間間隔、数日間隔、または数週間間隔で投与してもよい。一般的に、薬剤は、被験体で同時に生体利用可能であり、例えば、検出可能である。
【０１７９】
（抗細菌剤および消毒薬）
本明細書に記載される組成物および方法を、１種類またはもっと多種類の抗生物質と組み合わせて使用し、本明細書に記載される１つまたはもっと多くの疾患および状態を処置することができる。一般的な種類の抗生物質としては、例えば、アミノグリコシド、バシトラシン、β−ラクタム抗生物質、セファロスポリン、クロラムフェニコール、糖ペプチド、マクロライド、リンコサミド、ペニシリン、キノロン、リファンピン、糖ペプチド、テトラサイクリン、トリメトプリムおよびスルホンアミドが挙げられる。ある実施形態では、薬剤および治療薬の組み合わせの投与は、相乗効果が達成されるように十分に近い間隔が置かれる。上に引用した種類の中の例示的な抗生物質は、以下のように提供される。例示的なアミノグリコシドとしては、ストレプトマイシン、ネオマイシン、フラミセチン、パープマイシン（Ｐａｒｐｍｙｃｉｎ）、リボスタマイシン、カナマイシン、アミカシン、ジベカシン、トブラマイシン、ハイグロマイシンＢ、スペクチノマイシン、ゲンタマイシン、ネチルマイシン、シソマイシン、イセパマイシン、ベルダマイシン、アミキン、ガラマイシン、カントレックス、ネトロマイシン、ネブシンおよびフマチンが挙げられる。例示的なカルバセフェムとしては、ロラカルベフ（ロラビド）が挙げられる。例示的なカルバペネムとしては、エルタペネム、インバンズ（Ｉｎｖａｎｚ）、ドリペネム、フィニバックス、イミペネム／シラスタチン、プリマキシン、メロペネムおよびメレム（ｍｅｒｒｅｍ）が挙げられる。例示的なセファロスポリンとしては、セファドロキシル、デュリセフ（Ｄｕｒｉｓｅｆ）、セファゾリン、アンセフ、セファロチン、セファロチン、ケフリン、セファレキシン、ケフレックス、セファクロル、セクロール、セファマンドール、マンドール、セフォキシチン、メフォキシン、セフプロジル（Ｃｅｆｐｒｏｚｉｌｌ）、セフジル、セフロキシム、セフチン、ジンナット、セフィキシム、スプラックス、セフジニル、オムニセフ、セフジトレン、スペクトラセフ、セフォペラゾン、セフォビッド、セフォタキシム、クラフォラン、セフポドキシム、フォルタズ、セフチブテン、セダックス、セフチゾキシム、セフトリアキソン、ロセフィン、セフェピム、マキシピムおよびセフトロブリプロール（Ｃｅｆｔｒｏｂｒｉｐｒｏｌｅ）が挙げられる。例示的な糖ペプチドとしては、ダルババシン、オリタバンシン、テイコプラニン、バンコマイシンおよびバンコシンが挙げられる。例示的なマクロライドとしては、アジスロマイシン、ジスロマック（Ｓｉｔｈｒｏｍａｘ）、スマメド（Ｓｕｍａｍｅｄ）、ジトロシン（Ｚｉｔｒｏｃｉｎ）、クラリスロマイシン、バイアキシン、ジリスロマイシン、エリスロマイシン、エリトシン（Ｅｒｙｔｈｏｃｉｎ）、エリトロペド（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｅｄ）、ロキシスロマイシン、トロレアンドマイシン、テリスロマイシン、ケテックおよびスペクチノマイシンが挙げられる。例示的なモノバクタムとしては、アズトレオナムが挙げられる。例示的なペニシリンとしては、アモキシシリン、ノバモックス、アオキシル（Ａｏｘｉｌ）、アンピシリン、アロシリン（Ａｌｏｃｉｌｌｉｎ）、カルベニシリン、コキサシリン（Ｃｏｘａｃｉｌｌｉ���）、ジロキサシリン（Ｄｉｌｏｘａｃｉｌｌｉｎ）、フルクロキサシリン、フロキサペン（Ｆｌｏｘａｐｅｎ）、メズロシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンおよびチカルシリンが挙げられる。例示的なポリペプチドとしては、バシトラシン、コリスチンおよびポリミキシンＢが挙げられる。例示的なキノロン（ｑｕｉｎｉｏｌｏｎｅ）としては、シプロフロキサシン（Ｃｉｐｒｏｆｌａｘｉｎ）、シプロ、シプロキサン（Ｃｉｐｒｏｘｉｎ）、シプロベイ、エノキサシン、ガチフロキサシン、テクイン、レボフロキサシン、レバクイン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、アベロックス、ノルフロキサシン、ノロキシン、オフロキサシン、オクフロックス、トロバフロキサシンおよびトロバンが挙げられる。例示的なスルホンアミドとしては、メフェニド、プロントジル（アーカイック（ａｒｃｈａｉｃ））、スルホアセトアミド、スルファメチゾール、スルファミルアミド（アーカイック（ａｒｃｈａｉｃ））、スルファサラジン、スルフィソキサゾール、トリメトプリム、トリメトプリム−スルファメトオキサゾール（コトリムオキサゾール）、およびバクトリムが挙げられる。例示的なテトラサイクリンとしては、デメクロシリン（Ｄｅｍｅｃｌｏｃｙｌｉｎｅ）、ドキシサイクリン、ビブラマイシン、ミノサイクリン、ミノシン、オキシテトラサイクリン、テラシン（Ｔｅｒｒａｃｉｎ）、テトラサイクリンおよびスミシン（Ｓｕｍｙｃｉｎ）が挙げられる。他の例示的な抗生物質としては、サルバルサン、クロラムフェニコール（Ｃｈｌｏａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ）、クロロマイセチン、クリンダマイシン、クレオシン、リノマイシン（Ｌｉｎｏｍｙｃｉｎ）、エタンブトール、ホスホマイシン、フシジン酸、フシジン、フラゾリドン、イソニアジド、リネゾリド、ザイボックス、メトロニダゾール、フラジール、ムピロシン、バクトロバン、ニトロフラントイン（Ｎｉｔｒｏｆｕｒａｎｔｉｏｎ）、マクロダンチン、マクロビッド、プラテンシマイシン、ピラジナミド、キヌプリスチン／ダルホプリスチン（シンセリド（Ｓｙｎｃｅｒｉｄ））、リファンピン（リファンピシン）およびチニダゾールが挙げられる。例示的な抗生物質としては、キシリトールも挙げられる。
【０１８０】
（キット）
本明細書に記載される化合物または組成物は、キットの状態で提供されてもよい。キットは、（ａ）本明細書に記載される化合物を含む組成物と、場合により、（ｂ）情報資料とを含む。情報資料は、本明細書に記載される方法および／または本明細書に記載される方法のための本明細書に記載される化合物の使用に関する記述的、指示、マーケティング資料または他の資料であってもよい。
【０１８１】
キットの情報資料は、その形態に限定されない。一実施形態では、情報資料は、化合物の製造、化合物の分子量、濃度、有効期限に関する情報、バッチまたは製造場所の情報等を含む。一実施形態では、情報資料は、本明細書に記載される障害を処置するための本明細書に記載される化合物の使用に関する。
【０１８２】
一実施形態では、情報資料は、本明細書に記載される方法を行うのに適切な様式で、例えば、適切な投薬量、投薬形態または投与態様（例えば、本明細書に記載される投薬量、投薬形態、または投与態様）で本明細書に記載される化合物を投与するための指示を含んでいてもよい。ある実施形態では、投薬量、投与形態または投与態様は、例えば、経皮または経粘膜であってもよい。ある実施形態では、投薬量、投与形態または投与態様は、例えば、局所（例えば、皮膚上、皮内、皮下、舌下、口腔内、吸入、点眼、点耳）であってもよい。別の実施形態では、情報資料は、本明細書に記載される化合物を適切な被験体、例えば、動物、例えば、本明細書に記載される障害を有するか、または障害のリスクを有する大きな動物に投与するための指示を含んでいてもよい。例えば、この資料は、このような被験体に本明細書に記載される化合物を投与するための指示を含んでいてもよい。
【０１８３】
キットの情報資料は、その形態に限定されない。多くの場合に、情報資料（例えば、指示）は、印刷物、例えば、印刷した文書、図面および／または写真（例えば、ラベルまたは印刷したシート）であってもよい。しかし、情報資料は、他のフォーマットで提供されてもよい（例えば、コンピュータで読み取り可能な材料、ビデオへの記録、または音声の記録）。別の実施形態では、キットの情報資料は、連絡先情報（例えば、物理的な住所、ｅｍａｉｌアドレス、ウェブサイトまたは電話番号）であり、キットの使用者は、本明細書に記載される化合物および／または本明細書に記載される方法での化合物の使用についてのかなりの情報を得ることができる。情報資料は、任意のフォーマットの組み合わせで提供されてもよい。
【０１８４】
本明細書に記載される化合物に加え、キットの組成物は、他の成分、例えば、溶媒またはバッファー、安定化剤、防腐剤、および／または本明細書に記載される状態または障害を処置するための第２の化合物を含んでいてもよい。または、他の成分が、キットに含まれていてもよいが、本明細書に記載される化合物とは異なる組成物または容器に含まれていてもよい。このような実施形態では、キットは、本明細書に記載される化合物と他の成分とを混合するための指示、または本明細書に記載される化合物と、他の成分とを一緒に使用するための指示を含んでいてもよい。
【０１８５】
キットは、本明細書に記載される化合物を含有する組成物のための１個またはもっと多くの容器を含んでいてもよい。ある実施形態では、キットは、組成物および情報資料のための別個の容器、分割器または区画を含む。例えば、組成物は、びん、バイアルまたはシリンジに含まれていてもよく、情報資料は、プラスチックのカバーまたはポケットに含まれていてもよい。他の実施形態では、キットの別個の要素は、１つの分割されていない容器内に含まれる。例えば、組成物は、ラベルの形態の情報資料が付着したびん、バイアルまたはシリンジの形態で含まれる。ある実施形態では、キットは、複数の（例えば、パックの）個々の容器を含み、それぞれの容器は、本明細書に記載される化合物の１つまたはもっと多くの単位投薬形態（例えば、本明細書に記載される投薬形態）を含む。例えば、キットは、複数のシリンジ、アンプル、ホイルパケット、またはブリスターパックを含み、それぞれが、本明細書に記載される化合物の１回分の単位投薬量を含む。キットの容器は、密閉され、気密状態で水が入らない（例えば、水分量の変化または蒸発しないように不透過性）であり、および／または光が入らないようにすることができる。
【０１８６】
キットは、場合により、組成物の投与に適したデバイス、例えば、手で持つポンプイリゲーター、スプレー、シリンジ、ピペット、ドロッパー、スワブ（例えば、綿スワブまたは木のスワブ）、または任意のこのような送達デバイスを含む。
【実施例】
【０１８７】
特に指示のない限り、以下の実施例で使用されるＰＡＡＧ（ＰＡＡＧの活性な洗浄に含む）は、１８〜３０％官能基化された、２０〜１５０ｋＤａのＰＡＡＧである。また、特に指示のない限り、ＰＡＡＧの活性な洗浄は、ＰＡＡＧの水溶液配合物である。また、特に指示のない限り、ＰＡＡＧの活性なゲルは、水に０．５重量％または１重量％のＨＰＭＣを含むＰＡＡＧのゲル配合物である。
【０１８８】
動物園での試験（実施例１〜６）。動物園での試験は、ゾウおよびサイの足疾患、圧迫潰瘍、膿瘍および埋没した側頭部の分泌腺を処置するために使用するとき、ＰＡＡＧの活性な洗浄の有効性を示す。ＰＡＡＧの活性な洗浄およびＰＡＡＧの活性なゲル（１％（ｗ／ｖ）ＨＰＭＣ）配合物が、感染した創傷の治癒を高める能力は、標準的な処置を補助し、環境に常にさらされ、細菌感染しやすいという創傷の処置に伴う一般的な問題に対処する。創傷の治癒は、一般的に、平らな、縁部分に沿った良好な上皮の接着を有するものとして記載される。獣医は、治癒プロセスが、ＰＡＡＧの活性な洗浄を使用すると、通常よりも早く進行し続けることを示した。
【０１８９】
ブタの部分的な厚みの創傷モデル試験（実施例７〜１２）。ブタの部分的な厚みの創傷モデルを用い、これらの試験の目的は、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）に対する新しいＰＡＡＧ創傷洗浄配合物の活性を調べることであった（Ｄａｖｉｓら、２００５；ＤａｖｉｓおよびＢｏｕｚａｒｉ、２００４；Ｍｅｒｔｚら、２００３；Ｍｅｒｔｚら、１９９９）。ブタの皮膚は、形態学的にヒトの皮膚と似ているため、ブタのモデルを、実験研究の動物のために使用した（Ｍｅｙｅｒら、１９７５）。ブタモデルからの創傷治癒データは、げっ歯類よりもヒトにもっと密接に相関関係を示すことも示されている（Ｓｕｌｌｉｖａｎら、２００１）。
【０１９０】
（実施例１。ゾウの足蹠の創傷治癒におけるＰＡＡＧの活性な洗浄の有効性）
（ゾウ１番）
歴史：雄の１３，０００ポンドのアジアゾウは、２００９年に外傷性傷害を受け、左足の前側の足蹠に、浅い創傷として、直径が約６インチの剥離を生じている。
【０１９１】
プロトコル：足蹠に、全体的な壊死組織切除法のために、水道水を激しく灌注した。鉗子を用いた一般的な創傷の切除は、必要であれば完結させた。ＰＡＡＧの活性な洗浄（２１．３ｋＤａ、２５．０％官能基化されたＰＡＡＧ）２００μｇ／ｍＬの水性懸濁物を、手で持つポンプイリゲーターで、最後の創傷灌注および壊死組織切除法のために適用した。壊死組織切除法および創傷灌注は、２ヶ月間、毎日行った（図１）。
【０１９２】
観察結果：足蹠の創傷は、ＰＡＡＧの活性な洗浄の使用に関連する炎症または感染を示さず、良好に忍容性であった。灌注中に示される痛みまたは他の刺激の徴候はなかった。典型的には足の感染に関連する臭気の低下は、数日後に気づいた。ＰＡＡＧの活性な洗浄を灌注された創傷は、水道水または０．０５％クロルヘキシジン溶液を灌注された創傷よりも、付着性の滲出液およびフィブリン片が少ないようであった。臨床的な印象では、他の洗浄用液よりも、ＰＡＡＧの活性な洗浄を用いると創傷がきれいになり、良好に管理された。創傷は、他の処置の必要性なく、解決した。
【０１９３】
（実施例２。ゾウの左前側の爪の慢性病変におけるＰＡＡＧの活性な洗浄の有効性）
（ゾウ２番）
歴史：雌の７，０００ポンドのアジアゾウは、１９８０年代から、左前側の４番の爪の底部に慢性瘻／潰瘍を有していた。創傷の位置に起因して、これは慢性創傷であると考えられ、処置を継続中であった。
【０１９４】
プロトコル：この創傷を冷凍外科的（ｃｙｒｏｓｕｒｇｉｃａｌｌｙ）に処置し、ＰＡＡＧの活性な洗浄を用いた１回目の処置の前に、壊死した組織および感染した組織を清拭した。この洗浄を毎日使用した。潰瘍に、第１に、全体的な壊死組織切除法のために、水道水を激しく灌注した。鉗子およびウマのひずめ用のナイフを用いた一般的な創傷の切除の後、２００μｇ／ｍＬのＰＡＡＧの活性な洗浄（２１．３ｋＤａ、２５．０％官能基化されたＰＡＡＧ）を手で持つポンプによって適用し、最後の灌注を行った。壊死組織切除法および創傷灌注は、２ヶ月間毎日行った（図２）。
【０１９５】
観察結果：慢性創傷は、感染に関連する臭気がなくなり、空洞の大きさが小さくなり、きれいなままであった。肉芽および再上皮形成の移動は、処置から３週間後に、通常よりも迅速であった。この創傷は、創傷の周囲に、迅速に増殖する上皮と、ゆっくりと蓄積する肉芽床を示した。さらに、上皮は、創傷のかなり深い部分にも移動しているようであった。ＰＡＡＧの活性な洗浄を用いた処置によって、この慢性病変は、爪領域での典型的な創傷ともっと近くなった。処置から１週間後に、ゆるい肉芽組織はなく、創傷の清拭の必要性はなかった。このゾウは、まだ、感染がない小さな軽度の管理可能な創傷を有しており、必要ならば、１〜３週間ごとに対処される。
【０１９６】
（実施例３。ゾウの滲出液によって埋没した右側頭部の分泌腺に対するＰＡＡＧの活性な洗浄の有効性）
（ゾウ２番）
歴史：雌ゾウ２番は、右側頭部の分泌腺が滲出液によって埋没している。ＰＡＡＧの活性な洗浄の前に他の処置は試みなかった。
【０１９７】
プロトコル：顔の体臭腺の膿瘍に、ＰＡＡＧの活性な洗浄（２１．３ｋＤａ、２５．０％官能基化されたＰＡＡＧ）を２００μｇ／ｍＬ染みこませ、洗い流すとして穏やかに撹拌した（図３）。
【０１９８】
観察結果：ＰＡＡＧの活性な洗浄は、この材料をゆるめ、遮断された腺の中の材料の凝集を破壊するのに役立った。遮断された腺は、１週間処置した後、完全に解決した。
【０１９９】
（実施例４。ゾウの左後側の４番の爪の底部にある慢性腫瘍に対するＰＡＡＧの活性な洗浄の有効性）
（ゾウ３番）
歴史：４３歳の雌のアジアゾウは、左後側の４番の爪の底部に慢性潰瘍を有する。このゾウは、これまでの１０年間に足／爪の疾患歴がある。
【０２００】
プロトコル：創傷を、エプソム塩に最初に１０日間浸して処置し、その後に、５００μｇ／ｍＬのＰＡＡＧの活性な洗浄（２７．６ｋＤａ、２２．０％官能基化されたＰＡＡＧ）で処置した。第１に、全体的な壊死組織切除法のために、潰瘍に水道水を用いて激しく灌注した。２０１０年１２月から２０１１年８月まで、ＰＡＡＧの活性な洗浄（約５０ｍｌ）を手で持つポンプを用いて朝に１回、夜に１回適用した（図４）。
【０２０１】
観察結果：ＰＡＡＧの活性な洗浄は、他の処置を必要とすることなく、創傷を解決した。
【０２０２】
（実施例５。サイの前側左足の深部膿瘍に対するＰＡＡＧの活性な洗浄の有効性）
（サイ１番）
歴史：雌の３，３００ポンドの３４歳のサイは、前側の左足に深部膿瘍を患っている。
【０２０３】
プロトコル：ＰＡＡＧの活性な洗浄処置前に、膿瘍を毎日洗浄し、必要な場合、清拭した。２００μｇ／ｍＬのＰＡＡＧの活性な洗浄（８６．４ｋＤａ、２６．８％官能基化されたＰＡＡＧ）を手で持つポンプで１日に１回、５週間適用した。
【０２０４】
観察結果：ＰＡＡＧの活性な洗浄を用いて１日に１回処置すると、優れた治癒の進行を示した（図５）。前側左足の膿瘍は解決した。
【０２０５】
（実施例６。サイの両臀部にある圧迫潰瘍に対するＰＡＡＧの活性な洗浄の有効性）
（サイ１番）
歴史：雌の３，３００ポンドの３４歳のサイは、両臀部に数ヶ月にわたって圧迫潰瘍を患っている。これらの性質は変化し、１０年１１月１０日に、非常に濡れた、活動的で炎症を起こした状態になった。両臀部からのＭＲＳＡの単離（それぞれの臀部から異なる細菌株）が、１０年１１月２２日に報告された。
【０２０６】
プロトコル：ユニプリム処置（Ｅｑｕｉｎｅ  ＴＭＰＳ粉末を３，３００ポンドに対して投薬した）を、直腸的に、１日に１回投与した。潰瘍を壊死組織切除法のために切除し、５００μｇ／ｍＬ（３７．０ｋＤａ、２２．８％官能基化されたＰＡＡＧ）のＰＡＡＧの活性な洗浄で１日に１回洗浄した。連続的な放置処置を与えるために、１０年１２月２日に、洗浄液をＰＡＡＧの活性なゲル（１％ＨＰＭＣ）と交換した。
【０２０７】
観察結果：ＰＡＡＧの活性な洗浄（すすぎ）を用いた１日１回の処置は、左側臀部（図６〜７）および右側（図８）の両方の治癒の優れた進行を示した。
【０２０８】
（実施例７。創傷治療処置は、バイオフィルム生成を防ぐ）
手順：この試験に１匹の動物を使用した。体重が２５〜３０ｋｇの若い雌（約２〜３月齢）の特定の病原を含まない（ＳＰＦ：Ｌｏｏｐｅｒ  Ｆａｒｍｓ、ノースカロライナ）ブタを、実験を開始する前に２週間、室内に保持した。この動物に、自由に摂取できる状態で基本的な餌を与え、本願発明者らの温度（１９〜２１℃）および光（１２時間／１２時間ＬＤ）が制御された動物施設（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌの基準に合格）に、個別に収容した。
【０２０９】
１０ｍｍ×７ｍｍ×０．５ｍｍの深さを測定した４２の長方形の創傷を、７ｍｍのブレードを取り付けた特殊な電気切開刀を用いて傍脊椎および胸部の領域に作成した。これらの創傷を、１５ｍｍの創傷を受けていない皮膚によって互いに分離した。３つの創傷を、１４種類の処置群の１つにランダムに割り当て、次いで、図９に記載されるように接種し、処置した。
【０２１０】
メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＮＲＳ  ３８４／ＵＳＡ  ３００）の新しい培養物は、この試験で病原体として働いた。培養プレートから４．５ｍｌの通常の生理食塩水に一晩成長させたものを剥がすことによって、チャレンジ接種懸濁物を調製した。これにより、約１０１０コロニー生成単位／ｍｌ（ＣＦＵ／ｍｌ）の懸濁物濃度を得た。光学密度測定によって決定されるように、１０６ＣＦＵ／ｍｌ程度の濃度が達成されるまで、段階希釈を行った。懸濁物のさらなる段階希釈物を培地に接種（ｐｌａｔｅｄ）し、生きている有機体の実際の濃度を定量するために、このプレートを３７℃、好気性条件で一晩（１６〜２４時間）インキュベートした。この懸濁物をボルテックスで攪拌し、２５μｌをそれぞれの創傷に接種し、その後、滅菌スパチュラで３０秒間擦り、皮膚の細菌浸透を促進した。接種後、創傷をポリウレタン膜ドレッシング材で個々に２４時間覆い、バイオフィルムを生成した。
【０２１１】
バイオフィルムを生成して２４時間後、ポリウレタン膜ドレッシング材を除去し、それぞれの創傷に、１．５インチ長の２１ゲージ針を用いた１０ｍｌのシリンジを用い、３０．１％官能基化された８６．４ｋＤａのＰＡＡＧを１０００μｇ／ｍＬで、創傷に４５°の角度で２回または４回灌注した。Ｂ２群、Ｅ２群およびＦ２群のすべての創傷、およびＡ２群の５および６の創傷を、処置の前に、３ｍｌの滅菌生理食塩水に浸した滅菌ガーゼで１回拭き取った。灌注して５分以内に、これらの創傷は、回収した。ＰＡＡＧの活性なゲル（１％（ｗ／ｖ）ＨＰＭＣ、１％（ｗ／ｖ）ＰＡＡＧ、３０．１％官能基化されたおよび８６．４  ｋＤａ）処置を受けた創傷（Ｃ群、Ｇ群およびＨ群）を、創傷領域および周囲の正常な皮膚を完全に覆うのに十分な材料で処置した。これらの群のすべての創傷は、処置を適用して直後に、ポリウレタン膜ドレッシング材を用いて覆い、これを回収するまで２４時間放置した。実験の偏りを防ぐために、Ｇ群およびＨ群を２００μｌの未知の活性投薬量で処置した。Ｅ群およびＦ群は、洗浄ビヒクルのみで構成される処置を受け、一方、Ｄ群およびＪ群は、完全に未処置のまま放置した。これらの最後の４群は、ネガティブコントロールとしての役割があった。
【０２１２】
処置洗浄を適用した直後に、Ａ群、Ｂ群、Ｅ群、Ｆ群およびＪ群から３つの創傷を集めた（図１０）。他の処置群（Ｃ、Ｄ、Ｇ、ＨおよびＩ）から得た残りの創傷は、適用から２４時間後に回収した。創傷から細菌を抽出するために、滅菌シリンダ（内径２２ｍｍ）を創傷領域の周囲に配置した。１ｍｌのあらゆる目的の中和剤溶液をピペットでシリンダに取り、滅菌テフロンスパチュラを用い、部位を３０秒間擦った。すべての培養サンプルから段階希釈を行い、Ｓｐｉｒａｌ  Ｐｌａｔｅｒシステム（Ｓｐｉｒａｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、ノーウッド、ＭＡ）を用い、微生物汚染度を評価した。このシステムは、回転する寒天プレート表面に、５０μｌの擦り取った細菌懸濁物の小分け分を堆積させる。Ｏｘｉｃｉｌｌｉｎ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ａｇａｒ（ＯＲＳＡＢ）を使用し、ＭＲＳＡ  ＵＳＡ  ３００を単離した。すべてのプレートを好気性条件で３７℃、一晩（１６〜２４時間）インキュベートし、その後、生存コロニーの数を数えた。
【０２１３】
コロニーを数えた後、データを表にし、それぞれの創傷におけるＭＲＳＡ  ＵＳＡ  ３００のコロニー生成単位／ｍｌのＬｏｇ（Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌ）を決定した。Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌの平均および標準偏差を、それぞれの時間および処置について計算した。
【０２１４】
結果：処置から２４時間後の評価された創傷について、壊死組織切除法による拭き取りと、１０００μｇ／ｍＬでの３０．１％官能基化され、８６．４ｋＤａのＰＡＡＧと、１％ＰＡＡＧ／１％ＨＰＭＣゲルでの洗浄（群Ｉ）を受けた創傷は、７．９３±０．１４Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌでのＭＲＳＡの数が最も少なかった。これらは、未処置の創傷と比較して、９６．４５％（１．４５±０．０８Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌ）細菌が減少した（図１０）。活性成分を伴わないゲルビヒクル（予備的な拭き取り）のみ、または洗浄のみを受けた創傷（群Ｃ）は、細菌数の減少が最も少なかった。しかし、この計測数（８．７３±０．４６  Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌ）は、未処置の創傷よりも顕著に７７．９５％少なかった。１％ＰＡＡＧ／１％ＨＰＭＣゲルのみを含むゲル（群Ｈ）は、１％ＰＡＡＧ／０．５％ＨＰＭＣゲルのみ（群Ｇ）よりもわずかに高い有効な活性を示した。前者の処置を受ける創傷は、ＭＲＳＡ  ＵＳＡ３００病原菌が全体で９０．２３％（１．０１±０．０２Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌ）減少した。後者で処置された創傷は、８４．７５％（０．８２±０．２７Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌ）の減少を経験した（図１０）。
【０２１５】
群Ｂ２で使用した処置（拭き取り＋活性物質Ａの４回の洗浄）は、適用直後に評価した創傷において全体的に最も有効な計画であり、細菌数が、未処置の創傷に対し、９５．７７％減少した。処置２４時間後に評価した創傷という観点で、１％ＰＡＡＧ／１％ＨＰＭＣ（ゲル活性物質の投薬量Ｙ）は、１％ＰＡＡＧ／０．５％ＨＰＭＣ（ゲル活性物質の投薬量Ｘ）と比較して５．５５％減少した。壊死組織切除法による拭き取りと、２回の活性成分Ａの１０ｍｌの洗浄を組み合わせると、ＭＲＳＡ  ＵＳＡ３００の計測数は、さらに６．１５％減少し、全体で９６．４５％の低下を与える（図１１）。
【０２１６】
このブタの部分的な厚み創傷のモデルにおいて、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）に感染した創傷を、種々のＰＡＡＧ配合物で処置し、適用直後の、未処置の創傷に対し、平均で９５．７７％の細菌数の減少を示した。壊死組織切除法による拭き取りと組み合わせた処置から２４時間後に評価した創傷は、ＭＲＳＡの計測数のさらなる６．１５％減少を示し、処置からわずか１日後に、全体的に９６．４５％の減少を与える。
【０２１７】
（実施例８。Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍｍａｎｎｉバイオフィルム感染を減らすための創傷ケア処置）
概要：ＰＡＡＧは、創傷における確立されたバイオフィルム感染を標準的なケアと同様に減らすか、またはより良好に減らすことが示された。深部の部分的な厚みの創傷において、Ａ．ｂａｕｍａｎｎｉｉバイオフィルム感染のブタと、ＰＡＡＧの洗浄配合物の試験は、この試験のポジティブコントロールとして機能するシルバデン（登録商標）（銀スルファジアジン）よりも統計的に有意に高いレベルまで汚染微生物数を減少させた。さらに、ＰＡＡＧの継続的な使用は、細菌耐性に寄与することなく、創傷の完全な消毒を達成した。この試験の目的は、ブタの部分的な厚み創傷のモデルを用い、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍｍａｎｎｉ  ＡＴＣＣ１９６０６（ＡＢ）バイオフィルム生成の新規な洗浄およびゲルの微生物の予防および処置の能力を評価することであった。この実験において、３０．１％官能基化された、８６．４ｋＤａのＰＡＡＧを使用した。活性なゲルは、水中の１％（ｗ／ｖ）ＨＰＭＣおよび１％（ｗ／ｖ）ＰＡＡＧであり、活性な洗浄は、水中の１０００μｇ／ｍＬのＰＡＡＧであった。
【０２１８】
動物を準備し、すでに記載したように創傷を作成した。Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ  ＡＴＣＣ  １９６０６（ＡＢ）の新しい培養物をこの試験での感染物質として使用した。培養プレートから５ｍｌの通常の生理食塩水に一晩成長させたものを剥がすことによってチャレンジ接種懸濁物を作成した。これにより、約１０１０コロニー生成単位／ｍｌ（ＣＦＵ／ｍｌ）の懸濁物濃度を得た。光学密度測定によって決定されるように、１０６ＣＦＵ／ｍｌの濃度が達成されるまで、段階希釈を行った。それに加え、段階希釈物を選択的な培地に接種し、この試験のために使用された生きている有機体の実際の濃度を定量するために、このプレートを３７℃、好気性条件で一晩（１６〜２４時間）インキュベートした。創傷を作成した直後（０日目）、２５μｌの１０６ＣＦＵ／ｍｌの細菌懸濁物をそれぞれの創傷に接種した。すべての創傷を、１４種類の処置群の１つに割り当て（図１２の実験設計を参照）、次いで、処置され、覆い（処置Ａ−Ｈバイオフィルム予防）またはバイオフィルム生成のためにポリウレタン膜ドレッシング材で覆うのみ（処置Ｉ−Ｎバイオフィルム排除）であった。すべてのドレッシング材を覆い、自己付着性の弾性包帯（Ｃｏｂａｎ；３Ｍ、セントポール、ＭＮ）で動物を包むことによって固定した。すべての創傷について処置を再び適用し、毎日回収した（図１２）。処置群Ａ〜Ｈの創傷を、接種から３０分以内に処置し、処置群Ｉ〜Ｎの創傷を、接種から２４時間後に処置し、バイオフィルムを作成させた。処置をこれらの構成に従って種々の様式で適用した。ゲル化合物に関し、創傷および周囲の正常な皮膚を完全に覆うのに十分な試験材料を約２００μｌ適用した。洗浄剤を受けている創傷を、１．５インチ長の２１ゲージ針を用い、創傷に対して４５°の角度で保持した１０ｍｌのシリンジを用い、それぞれ２回洗浄した。それぞれの洗浄中に、群中の３つの創傷の２つは、滅菌１  １／２インチの金属キャップで覆われ、液体が流れるのを防ぐ。灌注の後、過剰な流体を滅菌ガーゼで拭き取った（取り囲まれた創傷の外側および創傷を受けていない領域）。
【０２１９】
３日間のブタの部分的な厚み創傷モデルにおいて、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ感染を用い、ＰＡＡＧ配合物は、処置から３日後に汚染微生物数を９９．９８％減少させ、その試験のためのポジティブコントロールとして機能する５％のサルファマイロン（登録商標）と同様のレベルまで減少させた（図１３）。この濃度で、サルファマイロンは、創傷治癒を遅らせることが観察された。
【０２２０】
（実施例９。創傷ケア処置は、持続性である）
背景：ＰＡＡＧは、粘膜接着剤であり、残留活性を有し、洗浄が終了した後であっても長期間にわたる保護を与える。ＰＡＡＧは、組織に接着し、標準的な殺菌消毒剤よりも長い細菌コロニー形成を防ぐ。その活性の持続は、損傷時にその後の感染を防ぐために送達する処置に重要である。
【０２２１】
概要：この試験の目的は、ブタモデルを用い、第２度の火傷創傷治癒での局所配合物の効果を調べることであった。実験室は、創傷治癒に対する種々の材料の効果を調べるために、２０年間以上にわたりブタモデルを使用してきた。この動物を、すでに記載したように準備した。それぞれ重さが３５８ｇの６個の特別に設計された円筒形の真鍮の棒を用い、１００℃の沸騰水浴で加熱し、６３の第２度の火傷創傷を傍脊椎および胸部の領域に作成した。棒をこの水浴から取り出し、水滴が皮膚に蒸気による火傷を作成するのを防ぐために、皮膚表面に適用する前に拭き取って乾燥させた。この真鍮の棒を、重力によって供給される全圧力を用い、皮膚に対して垂直な位置に保持し（６秒間）、８．５ｍｍ（直径）×０．８ｍｍ（深部）の火傷創傷を作成した。火傷作成直後に、滅菌スパチュラを用い、火傷の水ぶくれの上側を除去した。創傷を、７つの処置計画にランダムに割り当てた（処置あたり９の創傷）。すべての火傷の創傷を、以下の「処置計画」の章に記載されるような適切な処置で処置した。実験設計を図１４に示す。これらの実験において、５４ｋＤａ、２３％官能基化されたＰＡＡＧを使用した。活性物の投薬Ｘは、２５０μｇ／ｍＬのＰＡＡＧであり、活性物の投薬Ｙは、５００μｇ／ｍＬのＰＡＡＧであり、ゲル活性物質の投薬量Ｘは、水中の１％（ｗ／ｖ）ＰＡＡＧおよび０．５％（ｗ／ｖ）ＨＰＭＣであり、ゲル活性物質の投薬量Ｙは、水中の１％（ｗ／ｖ）ＰＡＡＧおよび０．５％（ｗ／ｖ）ＨＰＭＣである。
【０２２２】
９の創傷をそれぞれの処置群に割り当てた。処置群を、それぞれのブタの異なる解剖学的領域にランダムに割り当てた。創傷作成から２０分以内に、創傷を処置した（０日目）。十分なゲル処置、液体処置またはビヒクルを創傷に直接適用し、創傷全体を覆い（約２００μｌ）、次いで、ポリウレタン膜ドレッシング材（Ｔｅｇａｄｅｒｍ；３Ｍ、セントポール、ＭＮ）で覆った。処置を次の６日間、１日１回適用した。ポリウレタン膜ドレッシング材を処置適用後、１日に１回交換した。すべてのドレッシング材を覆い、自己付着性の弾性包帯（Ｃｏｂａｎ；３Ｍ、セントポール、ＭＮ）を用いて動物を包むことによって固定した。処置適用から７日後に、実験を止めた。
【０２２３】
創傷作成から５日後および７日後に、３の生検をそれぞれの処置群から採取した（注釈：３〜６日目に、ゲルで処置した創傷は著しい極端な刺激を示したため、２１日目に、生検を採取しなかった。以下の臨床観察結果を参照）。両側に正常な隣接皮膚を含む創傷の中央から、くさび状生検を得た。これらの標本をホルマリンに入れ、次いで、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。ブロックあたり１つの切断片を分析した。光学顕微鏡検査によって盲検で標本を評価し、潜在的な処置応答を決定するために以下の要素について調べた。
【０２２４】
（１）上皮形成した創傷の率（％）−上皮に覆われた創傷表面の長さの測定、および
（２）上皮の厚み（細胞層μｍ）−上皮の厚みは、生検内の領域ごとにさまざまであってもよい。生検において、それぞれ他から等しく離れた５箇所で、μｍでの上皮の厚みを測定し、平均した。
【０２２５】
結果：ＰＡＡＧの安全性、耐容性および創傷治癒の能力を、ブタの第２度の火傷モデルで評価した。上皮の厚みは、新しく生成した上皮の５つの点の平均厚みの指標である。この測定は、ケラチン生成細胞の増殖、分化および表皮成熟のプロセスを反映している。５日目および７日目の創傷作成後で、群Ｂは、Ａの他の３群よりも厚い表皮を有していた。未処置の空気にさらされた群は、両評価期間中、他の３群よりも厚い表皮を有していた。再上皮形成率は、ケラチン生成細胞の１つまたはもっと多い層で新しく生成した表皮によって覆われた創傷領域のパーセントを表し、ケラチン生成細胞の移動の速度および再上皮形成の第１の工程の良好な指数である（図１５）。創傷修復の初期段階である５日目に、群ＢおよびＣは、群Ｇよりももっと再上皮形成した。７日目に、未処置の創傷を除き、すべての群は、１００％再上皮形成した（図１６）。
【０２２６】
上皮形成および上皮の厚みに対する処置の効果は、５００μｇ／ｍＬのＰＡＡＧの毎日の処置によって改良したが、もっと低い投薬量およびビヒクルを用いた滅菌洗浄は、両方とも、処置をしていないよりも創傷治癒の改良を示した。これらの試験は、処置自体が、創傷を悪化させず、実際に、創傷治癒を促進することを示す。
【０２２７】
（実施例１０。創傷ケア処置は、治癒を刺激する）
背景：ＰＡＡＧは、細菌病原体を凝集させ、コロニー形成に対する障壁を与える。現在の創傷洗浄は、殺菌消毒剤、例えば、クロルヘキシジンまたは銀を含むが、これらの殺菌消毒剤は、組織に損傷を与え、治癒を制限する。ＰＡＡＧは、治癒を制限せず、ある場合には、生理食塩水に対する治癒速度が高い。完全な厚みのブタ創傷において、ＰＡＡＧは、コントロールに対する上皮形成を刺激し、ＰＡＡＧが組織に対して安全であるだけではなく、再生成の向上も与えることを示す。
【０２２８】
概要：この試験の目的は、ブタモデルを用い、完全な厚みの創傷の治癒に対する新しい配合物の効果を決定することであった。動物をすでに記載したように準備した。４５の完全な厚みの創傷を、１０ｍｍの円形生検パンチを用い、傍脊椎および胸部領域で作成した。創傷は、１５ｍｍの創傷を受けていない皮膚によって互いに分離した。創傷を、処置あたり９の創傷を５つの処置計画にランダムに割り当てた（図１７）。この実験において、活性物の投薬Ｘは、２００μｇ／ｍＬのＰＡＡＧ（８１ｋＤａ、２１％官能基化された）であり、ゲル活性物の投薬量Ｘは、５，０００μｇ／ｍＬのＰＡＡＧ（８１ｋＤａ、２１％官能基化された）である。
【０２２９】
９の創傷が、それぞれの処置群に割り当てられた。処置群は、それぞれのブタについて、異なる解剖学的領域にランダムに割り当てられた。創傷を、第１に、０日目の創傷作成の２０分以内に処置し（または、血行停止が達成された後）、次いで、その後の７日間、１日に１回処置した。処置を７日間、１日に１回適用し、ポリウレタン膜ドレッシング材（Ｔｅｇａｄｅｒｍ；３Ｍ、セントポール、ＭＮ）で覆った。十分な洗浄処置を適用し、それぞれの創傷を覆い、すべての創傷をポリウレタン膜ドレッシング材で覆った。７日目に、すべての創傷を非付着性のガーゼドレッシング材で覆った。すべてのドレッシング材を覆い、自己付着性の弾性包帯（Ｃｏｂａｎ；３Ｍ、セントポール、ＭＮ）で動物を包むことによって固定した。
【０２３０】
創傷作成から５日目、７日目および２１日目に、それぞれの処置群から３つの生検を採取した。生検は、くさび状切除生検であった。このくさび状生検は、両側に正常な隣接皮膚を確実に含むように、それぞれの創傷の中央から得られた。これらの標本をホルマリンに入れ、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。ブロックあたり１つの切断片を分析した。光学顕微鏡検査によって盲検で標本を評価し、潜在的な処置応答を決定するために以下の要素について調べた。
【０２３１】
（１）上皮形成した創傷の率（％）−上皮に覆われた創傷表面の長さの測定、
（２）上皮の厚み（細胞層μｍ）−上皮の厚みは、生検内の領域ごとにさまざまであってもよい。生検において、それぞれ他から等しく離れた５箇所で、μｍでの上皮の厚みを測定し、平均した。
【０２３２】
（３）白細胞の浸透物−白血球の浸透物と混合した上皮下の存在および量によって測定される。平均スコア：１＝非存在、２＝軽度、３＝中度、４＝顕著、５＝過増殖。
【０２３３】
（４）肉芽組織生成−新しい肉芽組織生成（真皮）のおおよその量は、以下のように分けられた。１＝≦５％、２＝６〜２５％、３＝２６〜５０％、４＝５１〜７５％、５＝７６〜１００％。および
（５）新しい血管の生成−新しい血管の存在（非定量的）。平均スコア：１＝非存在、２＝軽度、３＝中度、４＝顕著、５＝過増殖。紅斑、感染または創傷が閉じたことの徴候を示すために、それぞれの評価時間に代表的な創傷のデジタル写真を撮影した。
【０２３４】
結果：再上皮形成率は、ケラチン生成細胞の１つまたはもっと多い層で新しく生成した表皮によって覆われた創傷領域のパーセントを表し、ケラチン生成細胞の移動の速度および再上皮形成の第１の工程の良好な指数である。創傷修復の初期段階である５日目に、すべての処置群（活性な投薬量、ビヒクル、ゲル活性な投薬量およびゲルビヒクルの投薬量）は、群未処置のコントロール群よりももっと再上皮形成した。７日目に、活性物の投薬処置群は、ビヒクルまたはゲル（活性な投薬量またはビヒクルの投薬量のいずれかを用いる）を用いて処置された創傷よりもわずかに再上皮形成したが、未処置の創傷が残っている場合と比較して、差が見られなかった。２１日目に、すべての群は、１００％再上皮形成された（図１８）。
【０２３５】
上皮の厚みは、新しく生成した上皮の５つの点の平均厚みの指標である。この測定は、ケラチン生成細胞の増殖、分化および表皮成熟のプロセスを反映している。創傷作成から５日後に、ゲル（活性物またはビヒクルのいずれかを用いる）配合物で処置された創傷は、他の３群よりも厚い表皮を有していた。７日目に、ゲル（ビヒクルを用いる）で処置された創傷は、他の４群よりも厚い表皮を有しており、一方、ゲル（活性な投薬量を用いる）処置群は、２１日目に他の４群より厚い表皮を有していた（図１９）。
【０２３６】
真皮の再構築は、損傷後に約３〜４日間で始まり、典型的な特徴は、肉芽組織の生成に始まり、新しい血管の生成（血管新生）、および線維芽細胞およびコラーゲン細胞外マトリックスの蓄積を含む。肉芽組織の生成は、新しく生成した肉芽組織で満たされた創傷床のパーセントを測定する。初期段階の５日目の創傷治癒で、群ＣおよびＤのゲル（活性な投薬量）およびゲル（ビヒクル）は、他の３群よりも多い肉芽組織生成を有していた。すべての処置群で７日目、２１日目での差はなかった（図２０）。
【０２３７】
すべての処置は、未処置のコントロールと比較して、初期の上皮形成速度が上昇しているようであったが、７日目には、大きな差は示されなかった。任意の処置を用い、白細胞の浸透物によって測定されるような刺激に対する有害な影響は、示されなかった。ゲル配合物（活性物質およびビヒクルの両方）は、初期段階で（５日目）、肉芽生成量がわずかに増加したようであったが、７日目に、すべての処置群は、等しかったようであった。小さなサンプルサイズに起因して、処置間の統計的な差はみられなかった。全体的に、調べた薬剤は、治癒を悪化させなかったようであり、実際には、上皮形成速度を促進するだろう（初期の評価時間中にみられたような）。
【０２３８】
（実施例１１。深部の部分的な厚みのバイオフィルム予防のブタ創傷モデルにおける、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉおよびＭＲＳＡの増殖に対する抗菌洗浄の有効性）
概要：動物を記載したように準備した（上述）。１０ｍｍ×７ｍｍ×０．５ｍｍの深さの９６の長方形の創傷を、７ｍｍのブレードを取り付けた特殊な電気切開刀を用いて傍脊椎および胸部の領域に作成した。これらの創傷を、１５ｍｍの創傷を受けていない皮膚によって互いに１５ｍｍ分離し、個々にドレッシング材で覆った。次いで、創傷を接種し、治療した。Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ  ＡＴＣＣ  １９６０６またはメチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＮＲＳ  ３８４／ＵＳＡ  ３００）の新しい培養物をこれらの試験で使用した。培養プレートから５ｍｌの通常の生理食塩水に一晩成長させたものを剥がすことによって、チャレンジ接種懸濁物を調製した。これにより、それぞれの細菌について、約１０１０コロニー生成単位／ｍｌ（ＣＦＵ／ｍｌ）の懸濁物濃度を得た。１０６ＣＦＵ／ｍｌ程度の濃度が達成されるまで、段階希釈を行った。この接種物をボルテックスによって攪拌し、２５ｍｌの懸濁物をそれぞれの創傷に接種した。それに加え、懸濁物の段階希釈物を、選択的な培地に接種し、この実験で使用される生きた有機体の実際の濃度を定量するために、プレートを３７℃、好気性状態で一晩（１６〜２４時間）インキュベートした。この試験において、活性な洗浄は、水中の１０００μｇ／ｍＬのＰＡＡＧ（３０．１％官能基化された、８６．４ｋＤａのＰＡＡＧ）である。
【０２３９】
接種から３０分以内にすべての創傷を処置した。処置ＡおよびＢを、１．５インチ長の２１ゲージ針を用いた１０ｍｌのシリンジを用い、創傷に４５°の角度で２回洗浄した。次いで、創傷を最初の処置から１日間および２日間処置した。それぞれの処置の間、それぞれの群の創傷を滅菌１  １／２インチの金属キャップで覆い、洗浄液が他の創傷へと流れるのを防いだ。ポジティブコントロールの創傷を、創傷および周囲の正常な皮膚を完全に覆うのに十分な試験材料（約２００ｍｇ）を適用することによって処置し、滅菌テフロンスパチュラで穏やかに広げた。処置適用の後、すべての創傷をポリウレタン膜ドレッシング材（Ｔｅｇａｄｅｒｍ；３Ｍ、セントポール、ＭＮ）で覆った。ポリウレタン膜ドレッシング材を、手術テープを用いて縁に沿って固定した。すべてのドレッシング材を覆い、自己付着性の弾性包帯（Ｃｏｂａｎ；３Ｍ、セントポール、ＭＮ）を用いて動物を包むことによって固定した。
【０２４０】
それぞれの創傷に、１０ｍｌの流体での２回洗浄を用いて灌注した。灌注後、過剰な流体を滅菌ガーゼで拭き取った（取り囲まれた創傷の外側および創傷を受けていない領域）。
【０２４１】
それぞれの評価の日に、それぞれの処置群から１２の創傷を回収した（３日目および４日目）。創傷から細菌を回収するために、滅菌の手術用鋼鉄シリンダ（内径２２ｍｍ）を創傷領域の周囲に配置した。１ｍｌのあらゆる目的の中和剤溶液をピペットでシリンダに取り、滅菌テフロンスパチュラを用い、部位を３０秒間擦った。すべての培養サンプルから段階希釈を行い、Ｓｐｉｒａｌ  Ｐｌａｔｅｒシステム（Ｓｐｉｒａｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、ノーウッド、ＭＡ）を用い、微生物汚染度を評価した。Ｌｅｅｄｓ  Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ培地を使用し、創傷からＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ（ＡＴＣＣ  １９６０６）を単離した。Ｏｘｉｃｉｌｌｉｎ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ａｇａｒ（ＯＲＳＡＢ）を使用し、ＭＲＳＡ  ＵＳＡ  ３００を単離した。すべてのプレートを好気性条件で３７℃、一晩２４時間インキュベートし、その後、生存コロニーの数を数えた。
【０２４２】
結果：ＡＢ感染した創傷の代表的な写真を試験中に撮影した。処置適用中および評価時間に観察を行った。膨潤および紅斑に関する記述的な言葉：非存在＜わずか＜軽度＜中度＜顕著＜過増殖。試験中に、紅斑または膨潤は観察されなかった。評価日のための写真を参照（図２１）。
【０２４３】
コロニーを数えた後、ＣＦＵデータを表にし、コロニー生成単位／ｍｌのＬｏｇ（Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌ）を決定した。Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌの平均および標準偏差を、それぞれの時間および処置について計算した。次いで、このデータを以前の試験結果と合わせ、ＡＮＯＶＡを用いた有意性について分析し、すべての処置間で合わせた動物データのための平均Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌを分析した。このデータのスチューデントのＴ検定を評価日間で比較した。３日目に、活性な洗浄液で処置した創傷は、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ（ＡＢ）の顕著なバイオフィルムの予防を示した。結果は、他の処置計画と比較して、ビヒクル洗浄および未処置のコントロールと比較したときのみ、活性な洗浄液が細菌数を減らす能力を示した（６．６０±０．６１Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌ）（差は、有意であった（ｐ＜０．０５））（図２２）。活性な洗浄液は、それぞれビヒクル洗浄および未処置のコントロールと比較して、細菌数を１．５３±０．１１および２．２４±０．１３Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌ有意に減少させた（ｐ＜０．０５）。これらの値は、創傷のＡＢの９７．０７％および９９．４２％の減少を示す。活性な洗浄および銀スルファジアジンで処置された創傷において、同様の細菌数が観察された（それぞれ、６．６０±０．６１および６．７０±０．５１）（有意な差はなかった（ｐ＜０．０５））。ビヒクル洗浄で処置された創傷は、３日目に、未処置の創傷から回収された細菌数と比較して（８．８４±０．４９Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌ）、ＡＢの８．１４±０．７２Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌを示した（有意な差があった（ｐ＜０．０５））（図２２）。
【０２４４】
ポジティブコントロール（銀スルファジアジン（ＳＳＤ））で処置された創傷は、３日目に、ＡＢの２番目に最も有意な（ｐ＜０．０５）細菌の減少を示し、ポリウレタンコントロールと比較して、２．１４±０．０１Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌ量が減少した。この値は、未処置の創傷と比較して、９９．２８％の減少を表す。それに加え、ＳＳＤコントロールで処置された創傷は、ビヒクル洗浄で処置された創傷と比較して、細菌数を１．４４±０．２３Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌ有意に減少させた（ｐ＜０．０５）（この日に、これらの群間で９６．３８％の減少）（図２２）。
【０２４５】
４日目に、示された傾向は、３日目の評価日に観察された傾向と似ていた。活性な洗浄をした創傷は、５．８０±０．３１Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌのＡＢを有しており、ほとんどのＡＢを排除した。活性な洗浄は、未処置の創傷と比較して、細菌を３．５１±０．１２Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌ有意に減少させた（ｐ＜０．０５）（９９．９７％の減少）。さらに、活性異な洗浄は、また、ビヒクル洗浄と比較して、ＡＢを有意に減少させ（ｐ＜０．０５）、２．６２±０．１５Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌの減少した値を示し（９９．７６％の減少）、最後に、活性な洗浄は、４日目に、ＳＳＤコントロールと比較して、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉを０．５４±０．１７Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌ有意に減少させた（ｐ＜０．０５）（７０．９９％の減少）（図２２）。
【０２４６】
ＳＳＤコントロールは、未処置のコントロール創傷と比較して、細菌数を２．９７±０．２９Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌ（９９．８９％の減少）有意に減少させ（ｐ＜０．０５）、それによって、合計で６．３４±０．４７  Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌのＡＢを含んでいる。さらに、ＳＳＤコントロールは、８．４３±０．４５Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌの細菌を有するビヒクル洗浄で処置された創傷と比較して、細菌を２．０９±０．０２Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌ（９９．１８％の減少）有意に減少させた（ｐ＜０．０５）、最後に、ビヒクル洗浄による処置は、未処置のコントロールの創傷と比較して、細菌数を０．８９±０．２７Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌ（８７．０４％の減少）有意に減少させた（ｐ＜０．０５）（図２３）。
【０２４７】
評価期間にわたり種々の処置が減少させる能力を比較すると、活性な洗浄の処置は、３日目から４日目に最も多くの量の微生物を首尾良く排除したことが明らかになった。活性な洗浄は、ＡＢ細菌を０．８０±０．３１Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌ有意に減少させ（ｐ＜０．０５）、８４．２１％の細菌減少を示した。活性な洗浄による処置は、細菌数を３日目から４日目に有意に減少させた唯一の処置群であった（ｐ＜０．０５）。ＳＳＤで処置された創傷は、３日目から４日目の間のＡＢの０．３６±０．０２Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌの減少（５６．０１％の減少）を示し、他の群は、３日目から４日目に細菌の量を増加させたため、評価日間のコロニーを減らすことができる唯一の他の処置群であった。ビヒクル洗浄は、４日目までに０．２９±０．２７Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌの細菌の量の増加（４８．５２％の増加）を示し、未処置の創傷は、４日目までにＡＢの量の有意な増加を示し（ｐ＜０．０５）、０．４７±０．３０Ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍｌ（６６．４４％の増加）より多い細菌が表された（図２３）。
【０２４８】
活性な洗浄は、未処置の創傷と比較して、評価日間に減少した量を考慮すると、全体的な細菌数を減らすのに最も有効な処置であった。合計で９９．４２％のＡＢが、この処置を用いて３日目の評価までに減少し、合計で９９．９７％が、試験終了時（４日目）までに減少した。
【０２４９】
銀スルファジアジンクリーム（ポジティブコントロール）は、すべての異なる処置群の中で、２番目のもっと大きな量の細菌を減少させ、両評価日に細菌量を有意に（ｐ＜０．０５）、未処置の創傷（（３日目に９９．２８％）および（４日目に９９．８９％）およびビヒクル洗浄（３日目に９６．３８％）および（４日目に９９．１８％））と比較して減少させた唯一の他の処置であった。
【０２５０】
ビヒクルの洗浄は、未処置の創傷と比較して、ＡＢの量を３日目に８０．１２％、４日目に８７．０４％減少させ、統計的有意性を与えるのに十分、微生物を減少させなかった。３日目に説明された減少にかかわらず、３日目から４日目に、創傷に感染する細菌の量を実際に高めた（４８．５２％）。
【０２５１】
ＭＲＳＡを調べる同様の試験は、グラム陽性菌を用いて同様な観察結果が観察されたことを示し、ポジティブコントロール、抗生物質ムピロシンおよび活性な洗浄が、有意にバイオフィルム感染を減少させたことを示す（図２４）。この試験は、バイオフィルム感染の有意な減少が、ポジティブコントロール群および活性な洗浄処置の日において、４日目と比較して、３日目に評価されたことも示した（図２５）。
【０２５２】
（実施例１２。ブタの皮膚に対する残留する抗細菌剤の活性）
背景：多くの局所的な抗細菌剤の処置は、接触状態で作用するが、残留する抗細菌剤の活性を保持する能力は、顕著な利点である。予防処置は、感染が確立された前に、コロニー生成プロセスの前または初期段階に適用された場合、感染を防ぐのに役立つ。初期の処置の後の抗細菌剤の活性の維持は、処置の数を減らすことができ、従って、さらなる感染のための機会を増やし得る創傷の治癒の妨害を制限する。
【０２５３】
プロトコル：ＰＡＡＧ（２５％、４３ｋＤａ）および他の局所生成物の残留する抗細菌剤の活性を、ＭＲＳＡ株ＭＷ−２に汚染されたブタの皮膚に対して評価した。このブタの皮膚をＳｉｎｃｌａｉｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｉｎｃ．（コロンビア、ＭＯ）から得た。この皮膚の毛を剃り、クリーニングし、１インチ四方の試験片に分け、試験のための準備のために滅菌ペトリ皿に入れた。ブタの皮膚（１×１インチ片、処置群あたり３個）をＵＶ放射線で滅菌して表面を滅菌し、以下の処置をした。無処置、７０％エタノール、７０％エタノール中、６０ｕｇ／ｃｍ２  ＰＡＡＧ、過酸化水素、またはＣｈｌｏｒａＰｒｅｐ（７０％エタノール中、２％クロルヘキシジンからなる市販製品）。表面を均一に覆うそれぞれの処置の容積は、約０．３ｍＬであった。皮膚の滅菌が行われたことを示すために、３個のブタ皮膚の試験片を、コントロールのために未処置のままにした。この処置を、皮膚表面上で１時間かけて乾燥させ、次いで、約１０３ＣＦＵのＭＲＳＡ株ＭＷ−２を表面に加えた。細菌を皮膚表面に１時間放置した。次いで、皮膚表面を寒天プレートに押しつけ、３７℃で２４時間成長させ、皮膚表面に残る細菌の量の定性的な指標を得た。
【０２５４】
結果：ＰＡＡＧは、皮膚表面にさらした後の寒天のＣＦＵの回収の減少が観察されたように、ブタの皮膚に対し、予防活性を維持する（図２６）。
【０２５５】
（実施例１３。炎症応答の調整）
背景：組織に複数の供給源により誘発された損傷の研究は、物理的、化学的、放射能または病原体によるメディエーターから生じる下流の共通の生体経路が存在することを示唆する。治癒は、炎症経路の下流の活性化によって制限され、反応性細胞種の初期の放出によって刺激される［Ｓｏｎｉｓ、２０１０］。この炎症による活性化によって、さらなる組織損傷が生じ、治癒を制限し、ある場合には、慢性炎症および相当の瘢痕化を生じる。近年の研究は、開始した後の粘膜、組織および上皮損傷の機構は、最も初期の生来の免疫応答のいくつかによって媒介される、例えば、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）およびＮｏｄ様受容体（ＮＬＲ）によって媒介されることを示唆する［Ｓｏｎｉｓ、２００４］。炎症の基本的なメディエーターは、病原体に関連する分子パターンの分子（ＰＡＭＰ）、損傷に関連する分子パターン分子（ＤＡＭＰ）および化学物質および放射能に関連する分子パターン分子（ＣＲＡＭＰ）によって誘発され得る共通の経路で結合する。この分子は、ＴＬＲとの相互作用によって、このプロセスを働かせるようであり、炎症、損傷および治癒不可能性と関連がある共通の経路の活性化を担う［Ｓｏｎｉｓ、２０１０］。
【０２５６】
プロトコル：ＴＨＰ−１ヒト単核細胞株は、急性リンパ球性白血病の１歳の男の子から誘導された。この細胞を懸濁培養物中で成長させ、カルシトリオール、ビタミンＤ類似体またはホルボールエステルＰＭＡ（ホルボール  １２−ミリステート  １３−アセテート）を用い、もっと多くのマクロファージ様の細胞に分化させることができる。ＰＭＡを使用する場合、この細胞は、接着性になり、この文献は、細胞はカルシトリオールで処置されたときよりももっと多く分化することを示唆する。ＴＨＰ−１細胞は、ＰＭＡ存在下、炎症誘発性サイトカインＴＮＦαの発現を引き起こす内毒素ＬＰＳを加えることによって刺激する前に、４８時間分化した。
【０２５７】
同様の試験において、ヒトＵ９３７マクロファージを１０７細胞／ｍｌに接種し、ＰＭＡを用いて２４時間活性化させた。上澄みを交換し、２４時間後、マクロファージを培地のみ、または２００μｇ／ｍＬ  ＰＡＡＧで１時間処置した。培地を交換し、マクロファージを細菌ＤＮＡ（５時間）またはＬＰＳ（４時間）のいずれかで刺激した。４時間目、５時間目および２４時間目に、マクロファージによって作られるＩＬ−８を、ＥＬＩＳＡによって測定した。
【０２５８】
結果：ＰＡＡＧ（１８ｋＤ、２５％官能基化された）存在下、ＴＨＰ−１ヒト単核細胞株におけるＴＮＦαの発現は、ＬＰＳのみで処置された細胞と比較して減少する（図２７）。本願発明者らは、抗−炎症性サイトカインＩＬ−１０の発現も調べ、その発現が、ＰＡＡＧの存在下で増加することがわかった（図２７）。これらのデータは、ＰＡＡＧが、活性化されたマクロファージからのサイトカイン産生のバランスに影響を与え得ることを示唆する。
【０２５９】
ＬＰＳ（図２８）またはＭＲＳＡ  ＤＮＡ（図２９）で処置してから４時間後および２４時間後のヒトＵ９３７マクロファージＩＬ−８の産生。２００μｇ／ｍＬ  ＰＡＡＧで１時間前処理したマクロファージは、ＬＰＳ処置のみと比較して、４時間後および２４時間後に、有意に少ないＩＬ−８（ｐ＜０．００２）を分泌させた。
【０２６０】
（実施例１４。ヒトの腸上皮細胞への付着は、粘膜付着性を示す）
プロトコル：ＰＡＡＧは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの上皮細胞および表皮細胞への細菌の付着および侵入を減らす。一例として、ＣａＣｏ２細胞をコンフルエンス状態になるまで成長させ、０または２００μｇ／ｍＬのＰＡＡＧ（２３％官能基化された、３７ｋＤａ）で１時間処置した。細部を培地で２回洗浄し、溶液中のＰＡＡＧを除去し、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉと共に３時間インキュベートした。
【０２６１】
結果：図３０は、時間的に同時に培養物をインキュベートした後の培養物中のＣａＣｏ２細胞のコンフルエントな単層に付着した細菌接種率（％）を示す。ＰＡＡＧが、細菌の付着に対する保護効果を有し、単純に洗浄した後に実質的に残る、粘性接着物（ｍｕｃｏａｄｈｅｓｉｖｅ）を有することを注記する。
【０２６２】
（実施例１５。鼻上皮細胞への付着は、粘膜付着性を示す）
プロトコル：Ｓ．ａｕｒｅｕｓ（ＭＷ２）がＲＰＭＩ  ２５６０鼻上皮細胞に付着する能力を評価した。ＲＰＭＩ  ２６５０細胞株（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）を２．５×１０５細胞／ウェルで、２４ウェル細胞培養プレートに接種した。細胞を、１０％の胎児ウシ血清、２ｍＭのＬ−グルタミンを含有し、抗生物質を含まないイーグル最小必須培地（ＥＭＥＭ）中、５％  ＣＯ２を含有する大気中で３７℃で２４時間成長させた。コンフルエント状態の単層をＤＰＢＳで１回洗い流し、実験開始２時間前に、血清を含まないＥＭＥＭと置き換えた。細胞を、血清または抗生物質を含まないＤＰＢＳまたはＥＭＥＭのいずれかの中、２００μｇ／ｍｌまたは５００μｇ／ｍｌのＰＡＡＧ（３０．１％官能基化された、８６．４ｋＤａ）のいずれかを用い、５分間または１時間かけて前処理した。ＰＡＡＧの前処置後、それぞれのウェルをＤＰＢＳで１回洗浄し、血清または抗生物質を含まないＥＭＥＭと交換した。実験１日前に、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  ＭＷ２について一晩の培養を開始し、その後、１：１００のＭＯＩを得るために、接種時に、一晩培養したものの光学密度を測定した。細菌は、接種開始から１時間で上皮単層に接着し、非特異的な結合を防ぐために、非付着性の細胞をＤＰＢＳで２回洗浄して洗い流した。上皮単層を０．１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００で溶解させた。溶解物の段階希釈物を接種することによって、細菌を定量した。すべての定量付着アッセイを３回行った。
【０２６３】
結果：もっと高い濃度およびもっと長い処置時間で、ＰＡＡＧは、鼻上皮細胞へのＭＷ２の付着を有意に防いだ。（ＥＭＥＭ）培地（図３２）またはＰＢＳ（図３１）のいずれかに溶解したＰＡＡＧは、付着を有意に低下させたが、ＰＢＳに溶解したＰＡＡＧは、もっと効果的であった。ＥＭＥＭ中のバッファー、栄養物およびタンパク質の量が増えると、ＰＡＡＧの活性が低下するようであるが、上皮細胞への細菌の結合を依然として有効に遮断する。
【０２６４】
（実施例１６。ＰＡＡＧは、耐性を高めない）
プロトコル：ＭＲＳＡ株ＭＷ−２を、ＰＡＡＧ（３０％官能基化された３５ｋＤａまたは４％官能基化された５９ｋＤａ）で繰り返し継代し、この株がＰＡＡＧに対する耐性を獲得する能力を調べた。ＭＲＳＡを、Ｔｏｄｄ  Ｈｅｗｉｔｔブロスで一晩成長させ、約１０５ＣＦＵ／ｍｌになるように再懸濁させ、次いで、ＭＲＳＡをバッファー単独または１００μｇ／ｍｌのＰＡＡＧで１時間処置した。生きている細菌をＴｏｄｄ  Ｈｅｗｉｔｔブロスで一晩成長させた。このプロセスを１０回繰り返した。３つの単一のコロニーをそれぞれの処置した培養物から単離し、成長させ、バッファーまたはＰＡＡＧのいずれかで最後に２０時間処置した。
【０２６５】
結果：生きている細菌の１００μｇ／ｍｌのＰＡＡＧ（４％または３０％官能基化された）の１０回の毎日の１時間の処置の後の耐性の上昇について、ＭＲＳＡ株ＭＷ−２を試験した。３つのコロニーを単離し、ＰＡＡＧまたはバッファーを用いた最後の２０時間の処置を終了したら、ＭＲＳＡ株ＭＷ−２は、このレベルの繰り返し曝露の後のＰＡＡＧに対する感度（ｓｕｓｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ）を維持していた（図３３）。株ＭＷ−２の感度を変えないことが観察された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【外国語明細書】
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