(57)【要約】【課題】  クロマトグラフィーを行う際に、分離能を向上することを課題とする。さらには、試料の濃縮により感度を向上することも課題とする。【解決手段】  検出対象物を含む試料から、前記検出対象物を分離するクロマトグラフィー用のキットであって、担体を含むプレートと、前記担体に設けられた塩とを有し、前記担体は、第一の領域と、前記第一の領域とは異なり、かつ前記第一の領域と接する第二の領域とを含み、前記第一の領域には第一の塩が設けられ、前記検出対象物は、前記第一の領域又は前記第二の領域において分離されることを特徴とする。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
検出対象物を含む試料から、前記検出対象物を分離するクロマトグラフィー用のキットであって、
担体を含むプレートと、前記担体に設けられた塩とを有し、
前記担体は、第一の領域と、前記第一の領域とは異なり、かつ前記第一の領域と接する第二の領域とを含み、
前記第一の領域には第一の塩が設けられ、
前記検出対象物は、前記第一の領域又は前記第二の領域において分離されることを特徴とするキット。
【請求項２】
前記第二の領域には、前記第一の塩とは異なる第二の塩が設けられていることを特徴とする請求項１に記載のキット。
【請求項３】
前記第二の領域には、前記第一の塩が設けられ、前記第一の領域に設けられた前記第一の塩の濃度と、前記第二の領域に設けられた前記第一の塩の濃度とは異なることを特徴とする請求項１に記載のキット。
【請求項４】
前記第一の塩は、水溶液が塩基性を示す塩であることを特徴とする請求項１乃至３のいずれか一項に記載のキット。
【請求項５】
前記第一の塩は、Ｎａ２ＨＰＯ４、Ｋ３ＰＯ４、ＮａＨＣＯ３、ＫＨＣＯ３、Ｋ２ＣＯ３、ＣＨ３ＣＯＯＫ、ＣＨ３ＣＯＯＮａ、Ｎａ２Ｃ２Ｏ４、ＣａＣ２Ｏ４、ＨＣＯＯＮａ、ＮａＨ２（Ｃ３Ｈ５Ｏ（ＣＯＯ）３）、Ｎａ２Ｈ（Ｃ３Ｈ５Ｏ（ＣＯＯ）３）、Ｎａ３（Ｃ３Ｈ５Ｏ（ＣＯＯ）３）
で構成される群から選択される少なくとも一種であることを特徴とする請求項４に記載のキット。
【請求項６】
前記第一の塩はＮａＨＣＯ３あるいはＫＨＣＯ３であることを特徴とする請求項５に記載のキット。
【請求項７】
前記第二の塩は水溶液が中性あるいは酸性を示す塩であることを特徴とする請求項２に記載のキット。
【請求項８】
前記第二の塩はＮａＣｌ、ＮＨ４Ｃｌ、ＫＣｌ、ＫＮＯ３、（ＮＨ４）２ＳＯ４、ＮａＨＳＯ４、ＫＨ２ＰＯ４、ＮａＨ２ＰＯ４で構成される群から選択される少なくとも一種であることを特徴とする請求項７に記載のキット。
【請求項９】
前記第二の塩はＫＨ２ＰＯ４あるいはＮａＨ２ＰＯ４であることを特徴とする請求項８に記載のキット。
【請求項１０】
前記第一の領域、及び前記第二の領域における、前記第一の塩の濃度が１．０ｍｇ／ｍｍ３以上であることを特徴とする請求項１乃至７のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１１】
前記第一の領域、及び前記第二の領域における、前記第一の塩の濃度が２．０ｍｇ／ｍｍ３以上であることを特徴とする請求項１乃至７のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１２】
前記第一の領域、及び前記第二の領域と異なる位置に、さらに第三から第ｎの領域（ｎは３以上の整数）を有することを特徴とする請求項１乃至１１のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１３】
前記第１の領域から前記第ｎの領域のうち、第ｋの領域で測定した前記検出対象物のＲｆ値をＲｆｋとしたとき、Ｒｆｋ／Ｒｆｋ−１の値が２以上あるいは０．５以下となるようなｋ（ｋは２≦ｋ≦ｎ）が１つ以上存在することを特徴とする請求項１乃至１２のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１４】
前記Ｒｆｋ／Ｒｆｋ−１の値が５以上あるいは０．２以下となるようなｋが１つ以上存在することを特徴とする請求項１３に記載のキット。
【請求項１５】
前記プレートが長辺と短辺とを有する矩形であり、前記プレートの長辺方向に、前記第一から第ｋの領域が配置されていることを特徴とする請求項１３または１４に記載のキット。
【請求項１６】
前記プレートが長辺と短辺とを有する矩形であり、前記プレートの長辺方向及び短辺方向に、前記第一の領域から前記第ｋの領域が配置されていることを特徴とする請求項１３乃至１５のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１７】
前記検出対象物は、８オキソ２’デオキシグアノシンであることを特徴とする請求項１乃至１６のいずれか一項に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はクロマトグラフィー用のキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
薄層クロマトグラフィー（以下ＴＬＣともいう）は、ガラスやアルミなどの支持体上にシリカゲルやアルミナなどの担体を薄く塗ったプレートに試料を付与し、溶媒で展開することで、混合物を分離する手法である。安価で迅速な分析が可能であることから、化学反応の追跡や簡易的な薬物検査などに広く用いられている。
【０００３】
ＴＬＣを用いて混合物から対象物を分離する場合、担体、溶媒を選択し、試行錯誤によって分離能がよくなる条件を探すことになる。しかし、担体の種類は限られており、溶媒の種類と混合比の検討には時間を要するため、望みの分離能が得られないこともしばしばあった。
【０００４】
またＴＬＣは、ＨＰＬＣなどの高価な分析法に比べて感度が低い。したがって試料が希薄な場合には、何度も付与して感度を稼ぐ必要がある。また、付与した時点では見えていても、展開による拡散の影響で見えなくなってしまうこともある。特許文献１には、分離能と感度を向上させるものとして、濃縮部付きＴＬＣプレートが開示されている。濃縮部付きプレートとは、吸着層の手前に、比表面積が小さく吸着活性のない担体を塗布した部分を連結したプレートである。付与された試料は、濃縮部では吸着されないため、吸着層との連結部に濃縮され、分離能と感度が向上する。しかし、特許文献１の構成では、担体の種類によって、濃縮できる対象物が限られ、様々な検出対象物の濃縮を可能とする構成ではなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開昭５３−１４９３９３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
そこで本発明では、様々な検出対象物の濃縮を可能とするクロマトグラフィーを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明に係るクロマトグラフィー用のキットは、検出対象物を含む試料から、前記検出対象物を分離するキットであって、担体を含むプレートと、前記担体に設けられた塩とを有し、前記担体は、第一の領域と、前記第一の領域とは異なり、かつ前記第一の領域と接する第二の領域とを含み、前記第一の領域には第一の塩が設けられ、前記検出対象物は、前記第一の領域又は前記第二の領域において分離されることを特徴とする。
【発明の効果】
【０００８】
本発明に係るクロマトグラフィー用のキットによれば、試料から様々な検出対象物を濃縮することができる。その結果、特定の検出対象物を分離する能力が高い。さらに、検出対象物が濃縮されることにより、微量の検出対象物でも検出できる。すなわち、検出対象物の検出感度が高いキットを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】本発明の実施形態に係るクロマトグラフィー用のキットを説明するための図。
【図２】本発明の実施形態に係るクロマトグラフィー用のキットを説明するための図。
【図３】本発明の実施形態に係るクロマトグラフィー用のキットを説明するための図。
【図４】本発明の実施例１４に係るクロマトグラフィー用のキットを説明するための図。
【図５】本発明の実施例１９に係るクロマトグラフィー用のキットを説明するための図。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明の実施形態について、主に薄層クロマトグラフィーを例として説明するが本発明はこれらに限られない。
【００１１】
本実施形態に係るクロマトグラフィー用のキットは、検出対象物を含む試料から、前記検出対象物を分離するものである。キットは、担体を含むプレートと、担体に設けられた塩とを有する。担体は、第一の領域と、第一の領域とは異なり、かつ第一の領域と接する第二の領域とを含み、第一の領域には第一の塩が設けられ、検出対象物は、第一の領域又は第二の領域において分離される。このようなキットを用いることで、検出対象物を分離する能力を向上させることができる。また、試料が濃縮されることにより、キットによる検出対象物の検出感度を向上することができることも見出した。
【００１２】
薄層クロマトグラフィーでは、担体と対象物の相互作用の強さによって対象物の展開速度が変わると言われている。展開速度は相互作用が強いほど遅くなり、相互作用が弱いほど速くなる。そして、静電相互作用、特に酸塩基相互作用が展開速度に及ぼす影響が大きい。本実施形態においては、塩を含有させることで、シリカゲルの酸・塩基性が変化し、相互作用が変化する結果、展開速度が変化し分離能を向上することができるようになったと考えられる。また、この性質を利用し、一部の物質の展開速度のみを急激に遅くする塩を塗布すれば、それら一部の物質のみを選択的に濃縮することができるため、希薄な試料であっても感度を大きく向上させることができる。
【００１３】
すなわち、従来は、シリカゲルに化学修飾を施すことで酸塩基性の調整を行っていたが、本実施形態の手法を用いれば塩を含有させるだけで、様々な酸塩基性のシリカゲルを簡便に作成することができる。また、本手法を用いれば、１枚のプレートにいくつもの領域を配置することができる。これにより、対象物に合わせて自在に調整ができるため、分離しづらい物質の分離能を向上することができる。さらに、濃縮したい物質を選択的に濃縮し、感度を向上することもできる。
【００１４】
（プレート）
本実施形態に薄層クロマトグラフィー用のキットに含まれるプレートは、少なくとも担体を有する。なお、本実施形態において担体とは吸着等の性質を示し、他の物質を固定する土台となる物質のことである。本実施形態におけるプレートは支持体上に担体が設けられた構造を含み構成されていてもよいし、支持体がなく、担体のみを含み構成されていても良い。支持体上の担体は、所謂ＴＬＣのように薄層の形態でもよいし、所謂マイクロ流路プレートのようにカラム状の形態でもよい。
【００１５】
本実施形態に係るプレートの一例について図１を用いて説明する。本実施形態に係るプレートは支持体１０３上に担体１０６を有する。担体は、第一の領域１０１と、第一の領域１０１とは異なり、かつ第一の領域１０１と接する第二の領域１０２とを含み、第一の領域１０１には第一の塩が設けられている。また、第二の領域１０２には、第一の塩とは異なる第二の塩が設けられていてもよい。また、第一の領域１０１と第二の領域１０２にともに第一の塩が設けられていてもよい。この場合、第一の領域１０１に設けられた第一の塩の濃度と、第二の領域１０２に設けられた第一の塩の濃度とは異なるようにする。１０４あるいは１０５の方向に後述する展開液を導入して展開を行う。
【００１６】
図２には、他の一例として矩形状のプレートの長辺方向に、塩を塗った領域を２つ、塩を塗っていない領域を３つ有するプレートを示している。支持体２０６上に担体２０７を有しており、また、第一の領域２０１、第二の領域２０２、第三の領域２０３、第四の領域２０４、第五の領域２０５を有しており、第二の領域２０２、第四の領域２０４にはそれぞれ異なる種類の塩が設けられる。または、５つの領域のうち接する領域同士に設けられる塩の種類が同じ場合、各々異なる濃度の塩が設けられる。なお、塩が設けられない領域を１以上含んでいても良い。塩が設けられない領域を２以上含む場合、塩が設けられない領域同士が接する構成とならないようにする。すなわち、互いに接する領域の一方には、塩が設けられる構成とする。
【００１７】
なお、第一の領域、及び第二の領域と異なる位置に、さらに第三の領域から第ｎの領域（ｎは３以上の整数）の領域を有していてもよい。だだし、第ｋの領域は少なくとも第ｋ−１の領域と接している（ｋは２≦ｋ≦ｎをみたす整数）。第ｋの領域は、塩の有無、濃度、種類によって第ｋ−１の領域と区別できるものとする。図２に示す２０８あるいは２０９の方向に、後述する展開液を導入して展開を行う。
【００１８】
図３には、さらに他の一例として、プレートの長辺および短辺方向に、塩を塗った領域を４つ有するプレートを示している。支持体３０５上に吸着層３０６を有しており、また、第一の領域３０１、第二の領域３０２、第三の領域３０３、第四の領域３０４を有している。第一の領域３０１は第二の領域３０２と接しており、第二の領域３０２は第三の領域３０３と接しており、第三の領域３０３は第四の領域３０４と接している。第一の領域３０１、第二の領域３０２、第三の領域３０３、第四の領域３０４にはそれぞれ種類かつ／あるいは濃度の異なる塩を含有する。図３に示す３０７あるいは３０８の方向に、後述する展開液を導入して展開を行う。
【００１９】
図５には、カラム状の担体を用いたプレートの一例を示している。支持体５０３上に吸着層５０６を有しており、さらに第一の領域５０１、第二の領域５０２を有している。図５に示す５０４あるいは５０５の方向に、後述する展開液を導入して展開を行う。
【００２０】
塩の濃度は１．０ｍｇ／ｍｍ３以上であることが好ましく、２．０ｍｇ／ｍｍ３以上であることがより好ましい。本発明において「濃度」とは、担体１ｍｍ３あたりの塩の質量を意味する。
【００２１】
（塩）
本発明における塩とは、酸由来の陰イオンと塩基由来の陽イオンがイオン結合した化合物のことを指す。無機塩としては、たとえば、ＮａＣｌ、ＮＨ４Ｃｌ、（ＮＨ４）２ＳＯ４、ＬｉＣｌ、ＣａＣｌ２、ＫＣｌ、ＮａＨＳＯ４、ＫＨ２ＰＯ４、ＮａＨ２ＰＯ４、Ｎａ２ＨＰＯ４、Ｎａ２ＳＯ３、Ｋ３ＰＯ４、ＮａＨＣＯ３、ＫＨＣＯ３、Ｋ２ＣＯ３、ＫＮＯ３、ＮａＢｒなどを用いることができる。有機塩としては、たとえば、ＣＨ３ＣＯＯＫ、ＣＨ３ＣＯＯＮａ、Ｎａ２Ｃ２Ｏ４、ＣａＣ２Ｏ４、ＨＣＯＯＮａ、ＮａＨ２（Ｃ３Ｈ５Ｏ（ＣＯＯ）３）、Ｎａ２Ｈ（Ｃ３Ｈ５Ｏ（ＣＯＯ）３）、Ｎａ３（Ｃ３Ｈ５Ｏ（ＣＯＯ）３）などを用いることができる。
【００２２】
第一の塩は、水溶液が塩基性を示す塩であることが好ましい。例えば、Ｎａ２ＨＰＯ４、Ｋ３ＰＯ４、ＮａＨＣＯ３、ＫＨＣＯ３、Ｋ２ＣＯ３、ＣＨ３ＣＯＯＫ、ＣＨ３ＣＯＯＮａ、Ｎａ２Ｃ２Ｏ４、ＣａＣ２Ｏ４、ＨＣＯＯＮａ、ＮａＨ２（Ｃ３Ｈ５Ｏ（ＣＯＯ）３）、Ｎａ２Ｈ（Ｃ３Ｈ５Ｏ（ＣＯＯ）３）、Ｎａ３（Ｃ３Ｈ５Ｏ（ＣＯＯ）３）で構成される群から選択される少なくとも一種を用いることができる。その中で、ＮａＨＣＯ３あるいはＫＨＣＯ３を用いることが好ましい。
【００２３】
第二の塩は水溶液が中性あるいは酸性を示す塩であることが好ましい。例えば、ＮａＣｌ、ＮＨ４Ｃｌ、ＫＣｌ、ＫＮＯ３、（ＮＨ４）２ＳＯ４、ＮａＨＳＯ４、ＫＨ２ＰＯ４、ＮａＨ２ＰＯ４で構成される群から選択される少なくとも一種を用いることができる。その中で、ＫＨ２ＰＯ４あるいはＮａＨ２ＰＯ４を用いることが好ましい。
【００２４】
塩は水などの適切な溶媒に溶解あるいは分散させたものを、前述のプレートに塗布してもよいし、塩と担体を予め混ぜておいたプレートを用いてもよい。塗布する際は、筆やスプレー、ピペット、エアブラシなどを適宜使用すればよい。あるいは、塩の溶液にプレートを浸漬させてもよい。
【００２５】
（試料）
対象物を含有する試料としては特に限定されないが、本手法を用いれば、対象物の濃度が希薄であったり、複雑な組成の試料であったりしても分析することができる。たとえば、尿、血液、汗など複雑な組成の体液中の微量成分であっても分析することができる。
【００２６】
試料に含まれる物質としては、３−カルバミル−１−メチルピリジニウムクロリド、キナルジン酸、アデノシン、ウラシル、ニコチン酸、４−ピリドキシン酸、ニコチンアミド、４−ヒドロキシフェニル酢酸、４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル酢酸、テオフィリン、４−アミノ安息香酸、８オキソ２’デオキシグアノシン、カフェイン、テオブロミン等が挙げられる。その中で検出対象物は、８オキソ２’デオキシグアノシン等が挙げられる。
【００２７】
（支持体）
支持体１０３の材質は、ガラス、プラスチック、アルミ等が用いられ、試料の種類、展開液の種類等により適宜選択できる。支持体１０３の寸法や形状については、取り扱いの簡便さからは試料が移動する方向の長さ３ｃｍ〜１５ｃｍ、幅１ｃｍ〜５ｃｍの方形が好ましい。
【００２８】
（担体）
担体としては、シリカゲル、アルミナ、セルロース、けいそう土などを用いることができる。また、シリカゲル中のシラノール基に有機部位を化学結合した化学修飾型シリカゲルも用いることができる。化学修飾型シリカゲルは逆相、ＮＨ２、ＣＮ、ＤＩＯＬタイプなどが知られており、分析したい試料にあわせ、適宜選択すればよい。
【００２９】
（展開溶媒）
展開溶媒は、通常用いられている極性溶媒及び／または非極性溶媒を単独または混合して用いることができる。分析したい試料に合わせ、適宜選択すればよい。
【００３０】
（試料の付与方法）
試料はキャピラリーやマイクロピペットなどを用いて、点状や面状に付与することができる。あるいは、プレートの一辺を試料溶液に接触させ、吸い上げて付与することもできる。担体がカラム状の形態をとっている場合は、流路を通じて試料を付与することもできる。
【００３１】
（検出方法）
試料の検出は、ＵＶ光の吸収を目視やカメラなどで認識することで行うことができる。また、呈色試薬を用いて目的物質を呈色させたものを、目視やカメラなどで認識することでも行うことができる。
【００３２】
（Ｒｆ値）
本実施形態において、Ｒｆ値とは、展開を一方向に行った際の、（展開前の対象物質存在領域の重心から展開後の対象物質存在領域の重心までの距離）／（展開前の対象物質存在領域の重心から溶媒の先端までの距離）を意味する。Ｒｆ値を比較する際には、比較対象とする構成要素以外の構成や条件は互いに同じにする。例えば、プレートに設ける塩の種類を変えたときのＲｆの値を算出する際、検出対象物、担体、展開液といった他の構成要素や条件は同じにする。なお、二次元展開を行った際は、一回目と二回目でそれぞれＲｆ値を定義する。第ｋの領域と同様の組成を持つプレートで測定した、前記検出対象物のＲｆ値をＲｆｋとしたとき、Ｒｆｋ／Ｒｆｋ−１の値が２以上あるいは０．５以下となるようなｋが１つ以上存在することが好ましく、５以上あるいは０．２以下となるようなｋが１つ以上存在することがより好ましい。
【００３３】
（用途）
本実施形態に係るクロマトグラフィー用のキットは、検出対象物の有無や濃度の検出をする用途のほかに、試料から特定の検出対象物を精製することにも使うことができる。
【実施例】
【００３４】
以下に、実施例および比較例を挙げて本発明をより詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００３５】
（サンプルの調製）
下記表１に記載の含有量（何れも単位は質量％）となるように各材料を混合した。
【００３６】
【表１】
2019095425.tif 000003
【００３７】
（展開液の調製）
下記表２に記載の含有量（何れも単位は体積％）となるように各材料を混合した。
【００３８】
ＩＰＡ：２−プロパノール
ＭｅＯＨ：メタノール
ＥｔＯＨ：エタノール
【００３９】
【表２】
2019095425.tif 000004
【００４０】
（プレート）
実験には下記表３に記載のプレートを用いた。
【００４１】
【表３】
2019095425.tif 000005
【００４２】
プレート１：平均細孔径６０Åのシリカゲル（蛍光指示薬Ｆ２５４含有）を、２５０μｍの膜厚でガラスに塗布したプレート
プレート２：表面に１，２−ジヒドロキシー３−プロポキシプロピル基を修飾した平均細孔径６０Åのシリカゲル（蛍光指示薬Ｆ２５４ｓ含有）を、２００μｍの膜厚でガラスに塗布したプレート
プレート３：表面にアミノ基を修飾した平均細孔径６０Åのシリカゲル（蛍光指示薬Ｆ２５４ｓ含有）を、２００μｍの膜厚でガラスに塗布したプレート
プレート４：表面にアルキルシアノ基を修飾した平均細孔径６０Åのシリカゲル（蛍光指示薬Ｆ２５４ｓ含有）を、２００μｍの膜厚でガラスに塗布したプレート
プレート５：表面にオクタデシル基を修飾した平均細孔径６０Åのシリカゲル（蛍光指示薬Ｆ２５４ｓ含有）を、２５０μｍの膜厚でガラスに塗布したプレート
プレート６：平均細孔径６０Åのシリカゲル（蛍光指示薬Ｆ２５４含有）を、２５０μｍの膜厚でガラスに塗布したプレートに不活性な担体からなる濃縮ゾーンを連結したプレート
プレート７：平均細孔径６０Åのシリカゲル（蛍光指示薬Ｆ２５４含有）を充填した直径３ｍｍの細管を有するガラス製マイクロ流路プレート
各実施例、比較例では、下記表４に記載のサンプル、展開液、プレートをそれぞれ用いた。
【００４３】
【表４】
2019095425.tif 000006
【００４４】
（塩の塗布）
実施例１から１８、比較例１から３では、３ｃｍ×５ｃｍに切断した薄層プレートを用いた。塩の塗布は、マイクロピペット（エッペンドルフ社製）を用いて塩の水溶液（９ｗｔ％）を付与することで行った。塩は、一方の短辺からもう一方の短辺に向けて、下記表５に記載の割合となるように均一に塗布した。
【００４５】
実施例１９では、カラムへの充填前に、あらかじめ塩水溶液に担体を浸漬させ、ろ過、乾燥することで塩の塗布を行った。
【００４６】
また、塩の濃度を下記表５に示した。
【００４７】
（展開方法）
＜展開方法１＞
薄層プレートの短辺の第一の領域側を底辺とし、底辺から１０ｍｍの位置に、ガラス管のスポイトにてサンプルを１μｌ付与した。サンプルは６０℃のホットプレート上で乾燥させた。ＴＬＣ用展開層（アズワン社製）の底部に２ｍｍ程度の深さとなるように展開液を入れ、展開層に蓋をして１０分静置した。その後、展開層中にシリカゲルプレートの底辺が下になるように入れ、展開液がサンプル付与位置から２０ｍｍ上に上がるまで静置した。
【００４８】
＜展開方法２＞
薄層プレートの短辺の第二の領域側を底辺とした以外は、展開方法１と同様の方法で展開を行った。
【００４９】
＜展開方法３＞
薄層プレートの短辺の第三の領域と第四の領域側を底辺とし、領域４内の底辺から１０ｍｍの位置に、ガラス管のスポイトにてサンプルを１μｌ付与した。サンプルは６０℃のホットプレート上で乾燥させた。ＴＬＣ用展開層（アズワン社製）の底部に２ｍｍ程度の深さとなるように展開液を入れ、展開層に蓋をして１０分静置した。その後、展開層中にシリカゲルプレートの底辺が下になるように入れ、展開液がサンプル付与位置から２０ｍｍ上に上がるまで静置した。次に、プレートを取り出し、６０℃のホットプレート上で乾燥させ、常温に戻るまで放置した。その後、領域１と領域４の側が下になるように展開層中に入れ、展開液がサンプル付与位置から２０ｍｍ上に上がるまで静置した。
【００５０】
＜展開方法４＞
薄層プレートのどちらか一方の短辺を底辺とした以外は、展開方法１と同様の方法で展開を行った。
【００５１】
＜展開方法５＞
ＰＥＥＫチューブ（仁礼工業製）とマイクロシリンジポンプＭＳＰ−１Ｄ（アズワン社製）をマイクロ流路プレートに接続し、流速５００μＬ／分で展開をおこなった。シリンジにはガスタイトシリンジ（ハミルトン社製）を用いた。
【００５２】
各実施例における展開方法は、下記表５中に記載した。
【００５３】
【表５】
2019095425.tif 000007
【００５４】
なお、表５において、実施例１〜１３、及び１５〜１８は、図１で示す構成のプレートを用いており、第一の領域が１０１、第二の領域が１０２に対応する。実施例１５は、図４で示す構成のプレートを用いており、第一の領域が４０１、第二の領域が４０２、第三の領域が４０３、第四の領域が４０４となっている。
【００５５】
（評価）
＜分離能の評価＞
各スポット同士のＲｆ値の比を１以上になるように算出したときの最小値が１．５以上である場合はＡＡ（特に好ましいレベル）、１．２以上である場合はＡ（好ましいレベル）、１．１以上である場合はＢ（許容できるレベル）、それ以外をＣとした。なお、１成分しか含まれない場合は、未評価とした。実施例１４については、１回目、２回目の展開においてそれぞれＲｆ値を求めて算出した。
【００５６】
＜濃縮能の評価＞
各対象物質について、（展開前の対象物質存在領域の展開方向の最大幅）／（展開後の対象物質存在領域の展開方向の最大幅）の最大値が５以上である場合はＡＡ（特に好ましいレベル）、２以上である場合はＡ（好ましいレベル）、１以上である場合はＢ（許容できるレベル）、それ以外をＣとした。実施例１４については、２回目の展開時の濃縮幅を用いて算出した。
【００５７】
＜総合評価＞
分離能、濃縮能の評価で、どちらもＣ評価がない場合○（好ましいレベル）、どちらか一つでもＣ評価がある場合は×（許容できないレベル）とした。
【００５８】
各評価結果は下記表６に記載した。
【００５９】
【表６】
2019095425.tif 000008
【符号の説明】
【００６０】
１０１  第一の領域
１０２  第二の領域
１０３  支持体
１０４  展開方向
１０５  展開方向
１０６  担体
２０１  第一の領域
２０２  第二の領域
２０３  第三の領域
２０４  第四の領域
２０５  第五の領域
２０６  支持体
２０７  担体
２０８  展開方向
２０９  展開方向
３０１  第一の領域
３０２  第二の領域
３０３  第三の領域
３０４  第四の領域
３０５  支持体
３０６  吸着層
３０７  展開方向
３０８  展開方向
５０１  第一の領域
５０２  第二の領域
５０３  支持体
５０４  展開方向
５０５  展開方向
５０６  吸着層
【図１】
2019095425.tif 000009
【図２】
2019095425.tif 000010
【図３】
2019095425.tif 000011
【図４】
2019095425.tif 000012
【図５】
2019095425.tif 000013