(57)【要約】      （修正有）【課題】人工透析液の製造に使用する人工透析用水の品質管理方法の提供。【解決手段】逆浸透膜装置を含む装置（ただし、電気再生式脱イオン装置は含まない）を使用して製造した人工透析用水中のオリゴＤＮＡを濃縮した後、オリグリーン試薬を用いた蛍光法により測定する、人工透析用水の品質管理方法であって、人工透析用水中のオリゴＤＮＡの濃縮方法が、人工透析用水を加熱して水分を蒸発させることで、濃縮前初期容量の２０容量％以下になるまで濃縮して第１濃縮水を得る第１濃縮段階と、第１濃縮水を加熱して水分を蒸発させることで、濃縮前初期容量の５容量％未満になるまで濃縮して第２濃縮水を得る第２濃縮段階を有しており、第１濃縮段階と第２濃縮段階が無菌雰囲気中で実施されるものであり、オリグリーン試薬を用いた蛍光法により測定する方法が、第２濃縮水中のオリゴＤＮＡ濃度を測定する方法である、人工透析用水の品質管理方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
逆浸透膜装置を含む装置（ただし、電気再生式脱イオン装置は含まない）を使用して製造した人工透析用水中のオリゴＤＮＡを濃縮した後、オリグリーン試薬を用いた蛍光法により測定する、人工透析用水の品質管理方法であって、
前記人工透析用水中のオリゴＤＮＡの濃縮方法が、前記人工透析用水を加熱して水分を蒸発させることで、濃縮前初期容量の２０容量％以下になるまで濃縮して第１濃縮水を得る第１濃縮段階と、前記第１濃縮水を加熱して水分を蒸発させることで、濃縮前初期容量の５容量％未満になるまで濃縮して第２濃縮水を得る第２濃縮段階を有しており、前記第１濃縮段階と前記第２濃縮段階が無菌雰囲気中で実施されるものであり、
前記オリグリーン試薬を用いた蛍光法により測定する方法が、第２濃縮水中のオリゴＤＮＡ濃度を測定する方法である、人工透析用水の品質管理方法。
【請求項２】
前記測定対象となる人工透析用水が、前記逆浸透膜装置と電気再生式脱イオン装置を含む装置を使用して製造したものである、請求項１記載の人工透析用水の品質管理方法。
【請求項３】
第１濃縮段階の濃縮方法が、１０ｍｌ単位の目盛りの付いたガラス製の三角フラスコ中に人工透析用水中に入れた後、加熱することで水分を蒸発させて第１濃縮水を得る工程であり、
第２濃縮段階の濃縮方法が、０．１〜１ｍｌ単位の目盛りの付いたガラス製の試験管中に第１濃縮水を入れた後、前記第１濃縮水が入ったガラス製の試験管を湯煎することで水分を蒸発させて第２濃縮水を得る工程である、請求項１または２記載の人工透析用水の品質管理方法。
【請求項４】
第１濃縮段階の濃縮方法で使用するガラス製の三角フラスコと第２濃縮段階の濃縮方法で使用するガラス製の試験管が、２５０℃で３０分間以上の乾熱条件で殺菌されたものである、請求項３記載の人工透析用水の品質管理方法。
【請求項５】
第１濃縮段階の濃縮方法と第２濃縮段階の濃縮方法が、ホッティングスターラーを使用して、攪拌しないで加熱する方法である、１〜４のいずれか１項記載の人工透析用水の品質管理方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、人工透析用水の品質管理方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
人工透析液は、精製水（人工透析用水）と透析液原液を混合して製造されており、前記人工透析用水の製造装置および製造方法の発明が多数提案されている（特許文献１〜９）。
特許文献１０には、オリグリーン試薬を用いた蛍光法により人工透析用水中のオリゴＤＮＡを測定する人工透析用水の品質管理方法の発明が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特許第５４４９６６７号公報
【特許文献２】特許第５４８０５３４号公報
【特許文献３】特許第４４４０９８９号公報
【特許文献４】特許第５６５８９０８号公報
【特許文献５】特許第５３５７８３６号公報
【特許文献６】特開２０１３−１６６１３９号公報
【特許文献７】特開２０１４−９１０６８号公報
【特許文献８】特開２０１４−１１３５１２号公報
【特許文献９】特許第５５８４３２１号公報
【特許文献１０】特開２０１６−２２３９３２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、人工透析液に使用する人工透析用水の品質管理方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、逆浸透膜装置を含む装置（ただし、電気再生式脱イオン装置は含まない）を使用して製造した人工透析用水中のオリゴＤＮＡを濃縮した後、オリグリーン試薬を用いた蛍光法により測定する、人工透析用水の品質管理方法であって、
前記人工透析用水中のオリゴＤＮＡの濃縮方法が、前記人工透析用水を加熱して水分を蒸発させることで、濃縮前初期容量の２０容量％以下になるまで濃縮して第１濃縮水を得る第１濃縮段階と、前記第１濃縮水を加熱して水分を蒸発させることで、濃縮前初期容量の５容量％未満になるまで濃縮して第２濃縮水を得る第２濃縮段階を有しており、前記第１濃縮段階と前記第２濃縮段階が無菌雰囲気中で実施されるものであり、
前記オリグリーン試薬を用いた蛍光法により測定する方法が、第２濃縮水中のオリゴＤＮＡ濃度を測定する方法である、人工透析用水の品質管理方法を提供する。
【発明の効果】
【０００６】
本発明の品質管理方法によれば、人工透析液に使用する人工透析用水中のオリゴＤＮＡ濃度を従来技術より高い感度で測定することで、安定して高品質の人工透析用水を提供できるようになる。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】本発明の品質管理方法を適用できる人工透析用水の製造フローを示した図。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本発明の人工透析用水の品質管理方法は、オリグリーン試薬を用いた蛍光法により人工透析用水中のオリゴＤＮＡ（１本鎖ＤＮＡ；分子量1200〜5000）を測定する際、測定対象となる前記人工透析用水を濃縮処理してオリゴＤＮＡ濃度を高めることで定量限界を高め、より微量のオリゴＤＮＡでも測定できるようにすることによって、人工透析用水の品質管理をする方法である。
オリグリーン試薬を用いた蛍光法により人工透析用水中のオリゴＤＮＡの測定方法は、特開２０１６−２２３９３２号公報に記載された測定方法を使用する。
以下において、「オリゴＤＮＡ」は「ＯＤＮ」と略し、「オリゴＤＮＡを含有していない」は「ＯＤＮフリー」とする。
【０００９】
本発明の品質管理方法を適用する人工透析用水は、
（I）逆浸透膜装置（ＲＯ装置）を含む装置（ただし、電気再生式脱イオン装置は含まない）を使用して製造した人工透析用水、または
（II）逆浸透膜装置と電気再生式脱イオン装置（ＥＤＩ装置）を含む装置を使用して製造した人工透析用水である。
【００１０】
前記（I）および（II）の人工透析用水は、例えば、特許文献１〜９に記載された発明を実施して製造することができるが、前記公報に記載の発明以外の公知の製造装置および製造方法で製造された人工透析用水でもよい。
特許文献９（特許第５５８４３２１号公報）には、（I）と（II）の両方の装置を使用した人工透析用水の製造方法が記載されている。
また、前記特許文献１〜９に記載された発明にも記載されているとおり、ＲＯ装置とＥＤＩ装置のほかにも、ＭＦ膜装置、ＮＦ膜装置、ＵＦ膜装置などの公知の膜分離装置、活性炭などの各種吸着剤を備えた装置、軟水化装置などを組み合わせることができる。
【００１１】
＜ＯＤＮの濃縮方法＞
以下、本発明の人工透析用水の品質管理中の人工透析用水中のＯＤＮの濃縮方法を説明する。
本発明の人工透析用水の品質管理中の人工透析用水中のＯＤＮの濃縮方法は、第１段階の加熱濃縮法と第２段階の加熱濃縮法からなる２段階の加熱濃縮方法を実施する。
【００１２】
第１段階の加熱濃縮方法は、試料となる人工透析用水をガラス製のフラスコ（１０ｍｌ単位の目盛りの付いた三角フラスコ）内に入れ、加熱することで水分を蒸発させて濃縮して、第１濃縮水を得る方法を適用することができる。
使用するフラスコは、試料となる人工透析用水が１００ｍｌであるときは、１００〜２００ｍｌのフラスコを使用することができる。なお、使用するフラスコは、予め２５０℃で３０分以上乾熱滅菌して、ＬＰＳ（リポ多糖）フリー（ＬＰＳを含まない）およびＯＤＮフリーにしておく必要がある。
ガラス製のフラスコは、乾熱滅菌操作がし易く、また、完全に滅菌することが容易である。さらに、底部の伝熱面積が大きく、上部のガラス壁での水蒸気の凝結がビーカーに比べ少なく、加熱濃縮操作が安定するので好ましい。
加熱装置は、例えばホッティングスターラーを使用する。但し、回転子（スターラー）は使用しない。
加熱は、落下菌などが混入しないように無菌雰囲気中（好ましくはクリーンベンチ内）で実施し、煮沸状態になるまで加熱することが好ましい。
クリーンルーム用のクリーン手袋、マスク、作業着を着用することが好ましい。
第１段階の加熱濃縮方法では、人工透析用水の濃縮前初期容量の２０容量％以下まで濃縮することが好ましく、１５容量％以下まで濃縮することがより好ましく、１０容量％前後まで濃縮することがさらに好ましい。
【００１３】
第２段階の加熱濃縮方法は、第１濃縮水をガラス製の試験管内に入れたものを湯煎することで水分を蒸発させて濃縮して、第２濃縮水を得る方法を適用することができる。
試験管は、１ｍｌ単位以下の目盛り、好ましくは０．１〜１ｍｌ単位の目盛り（０．１ｍｌ単位、０．２ｍｌ単位０．５ｍｌ単位または１ｍｌ単位の目盛り）の付いたものを使用する。
湯煎は、例えばビーカー内にＯＤＮフリー水、蒸留水、脱イオン水、水道水などの清浄な水を入れた後、第１濃縮水が入った試験管の底部を含む部分をビーカー内に浸した状態にて、ホッティングスターラーにより前記ビーカーを加熱する方法を適用することができる。前記ビーカーの加熱状態は、例えば、ビーカー内の清浄な水が煮沸された状態である。
第２段階の加熱濃縮方法では、人工透析用水の濃縮前初期容量の５容量％以下まで濃縮することが好ましく、３容量％以下まで濃縮することがより好ましく、１容量％前後まで濃縮することがさらに好ましい。
第２段階の加熱濃縮方法により得られた第２濃縮水は、必要に応じて、ＯＤＮフリー水を加えて、ＯＤＮの測定に適した量に調整することもできる。
【００１４】
＜ＯＤＮ濃度の測定＞
次に、オリグリーン試薬を用いた蛍光法により濃縮された第２濃縮水中のＯＤＮ濃度を測定する。
本発明では、測定対象となる人工透析用水（第２濃縮水）のＯＤＮ濃度が高くなっているため、測定が容易であり、測定値と濃縮倍率（濃縮率／ＯＤＮフリー水希釈率）から、人工透析用水中のＯＤＮ濃度を求めることができる。
オリグリーン試薬を用いた蛍光法により人工透析用水中のＯＤＮを測定する方法は、特開２０１６−２２３９３２号公報に記載された測定方法を使用する。
【００１５】
本発明の人工透析用水の品質管理方法では、さらにエンドトキシン（ＥＴ）濃度と生菌数も測定することができる。
ＥＴ濃度と生菌数は、例えば、特許文献２（特許第５４８０５３４号公報）の実施例に記載されているＥＴ濃度測定装置（手動式）２０：トキシノメータミニ（和光純薬（株）製）と生菌数測定装置：Panasonic バイオプローラ ＢＰ−２（パナソニック（株）製）を使用して測定することができる。
【実施例】
【００１６】
実施例１
特開２０１４−９１０６８号公報の実施例２と同様にして、図１に示す装置を使用して、医療用精製水（人工透析用水）の製造運転を実施した。
各装置の仕様は次の通りである。
【００１７】
活性炭装置３：ダイセン・メンブレン・システムズ（株）製ジュラコールＭＡＣ７５０ＳＨ
ＲＯ装置５：ＲＯ膜モジュール；ダイセン・メンブレン・システムズ（株）製ＳＶ０８−ＧＰ−ＤＲＡ耐熱型
ＥＤＩ装置９：ダイセン・メンブレン・システムズ（株）製ＸＬ−５００−Ｓ耐熱型
ＲＯ水タンク６：ＳＵＳ３１６、２５０Ｌ
ＥＤＩ水タンク１０：ＳＵＳ３１６、２５０Ｌ
ＵＦ装置７：ＵＦ膜モジュール；ダイセン・メンブレン・システムズ（株）製ＦＳ１０ＦＣ−ＦＵＳＴ６５３
ＲＯ水タンク電気ヒーター６ａ：２０ｋｗ
ラインヒーター４：１０ｋｗ
熱交換器８：70000ｋｃａｌ
ＲＯ水製造水量：１０００Ｌ／ｈｒ
【００１８】
図１の装置を用いて医療用精製水の製造運転を実施した後で停止し、殺菌および冷却運転を行った。
ＲＯ水タンクヒーター６ａの加熱とラインヒーター４の加熱を開始するとともに、第１循環ラインと第３循環ラインの二つの循環ラインによる循環運転を並行して実施した。
ヒーター６ａとラインヒーター４による加温は、第３循環ラインのＲＯモジュール出口の昇温速度が０．５〜２．５℃／分となるように制御しながら、２０〜３０℃のＲＯ水タンク１０内の水が８０℃〜８５℃の熱水になるまで約６０分間かけて加温した。
その後、８０〜８５℃の熱水温度を保持しながら循環運転を３０分間継続して、熱殺菌運転を実施した。
【００１９】
熱水殺菌運転の終了後に、引き続き冷却運転を実施した。
冷却運転を行うため、ＲＯ水タンクヒーター６ａの加熱およびラインヒーター４の加熱を停止し、次いで開閉弁７３を開けて、ライン２４を通して熱交換器８に冷却媒体として原水を供給した。
第１循環ラインと第３循環ラインの二つの循環ラインは、殺菌運転の場合と同様に並行して循環運転を継続した。
熱交換器８による冷却は、第２循環ラインのＲＯモジュール出口の降温速度が１．０〜３．０℃／分となるように制御しながら、８０〜８５℃の熱水が２０℃〜３０℃になるまで約３０分間かけて冷却した。
【００２０】
上記の殺菌運転および冷却運転を週に１回の頻度で実施しながら、精製水の製造運転を行った。
熱水殺菌を一度実施した後に精製水の製造運転を継続し、次の熱水殺菌を実施する前に原水（水道水）、ＲＯ膜モジュール５の透過水、ＥＤＩ装置９の入口水およびＥＤＩ装置９の処理脱塩水をそれぞれサンプリングした。
【００２１】
＜サンプルの濃縮＞
合計４サンプルのサンプル水は、以下の２段階加熱濃縮方法で濃縮した。
予め２５０℃、３０分の条件で乾熱滅菌した２００ｍｌのガラス製の三角フラスコ（１０ｍｌ単位の目盛り付き）、１０ｍｌのガラス製試験管（０．２ｍｌ単位の目盛り付き）、２００ｍｌのビーカーを用意した。
【００２２】
（１）第１段階の加熱濃縮方法
サンプル水から１００ｍｌをＯＤＮフリーなスポイドを用いて正確に採取した後、２００ｍｌのガラス製の三角フラスコ（１０ｍｌ単位の目盛り付き）内に入れた。これらの作業はクリーンベンチ内で行った。
サンプル水の入った２００ｍｌ三角フラスコをホッティングスターラー（Corning OC-620D；コーニング社製）の上に置き、加熱温度を３００℃に設定して煮沸させ、１０ｍｌまで濃縮して（１０倍濃縮）第１濃縮水を得た。
（２）第２段階の加熱濃縮方法
クリーンベンチ内において、第１濃縮水を２０ｍｌのガラス製試験管（０．２ｍｌ単位の目盛り付き）に入れたものを用意し、脱イオン水１５０ｍｌが入った２００ｍｌのビーカー内に前記試験管の底部側を浸した。
次に、試験管を浸したビーカーをホッティングスターラー（Corning OC-620D；コーニング社製）の上に置き、加熱温度を３００℃に設定してビーカー内の脱イオン水を煮沸させることで、試験管内の第１濃縮水を約１ｍｌまで濃縮して（１００倍濃縮）、第２濃縮水を得た。
なお、濃縮は４つのサンプル（各サンプルは２検体ずつ）を同時に濃縮して、それぞれの第２濃縮水を得た。
【００２３】
＜濃縮サンプル中のODNの分析＞
各サンプルから得た第２濃縮水から100μＬを採取し、特開2016-223932号公報の実施例１で使用した蛍光分析装置（蛍光マイクロプレートリーダーSPECTRA MAX GEMINI XＰS；モレキュラーデバイスジャパン（株）製）のスロットへ入れ、前記実施例１の＜オリゴＤＮＡの測定方法＞と同様の方法で、ODN濃度を分析した。
その後、濃縮倍率を正確に求め、各第２濃縮水中のODN濃度に換算し、結果を表１に記載した。
【００２４】
【表１】
2019213741.tif 000002
【００２５】
表１から明らかなとおり、１００倍濃縮（濃縮前初期用量の１容量％まで濃縮）することによって、より微量のＯＤＮを測定できるようになることが確認できた。
【産業上の利用可能性】
【００２６】
本発明の人工透析用水の品質管理方法を適用することで、病院などの人工透析をする医療施設において安全性の高い人工透析液を安定して使用できるようになる。
【符号の説明】
【００２７】
１  プレフィルター
２  軟水化装置
３  吸着装置（活性炭装置）
４  ラインヒーター
５  逆浸透膜処理装置（ＲＯ装置）
６  ＲＯ水タンク
６ａ  ヒーター６ａ
７  限外濾過膜装置（ＵＦ装置）
８  熱交換器
９  ＥＤＩ装置
１０  ＥＤＩ水タンク
１１  第１原水ライン
１２  第２原水ライン
１３  第３原水ライン
１４  前処理水ライン
１６ａ、１６ｂ  濃縮水ライン
１７  第１ＲＯ水ライン
１８  第１取水ライン
１９  第２取水ライン
２０  第３取水ライン
２１  入水ライン２１
２２  出水ライン
２３，２４  ライン
２５  原水の排水ライン
３１  第２ＲＯ水ライン
３２  ＥＤＩ水ライン
３３  濃縮水ライン
３４  開閉弁を備えた連通管
５０  人工透析液の調製装置
６１  原水ポンプ
６２  ＲＯ装置ポンプ
６３  取水ポンプ（ＵＦ装置ポンプ）
６４  濃縮水循環ポンプ
６５  送液ポンプ（ＥＤＩ供給ポンプ）
７１〜７７  開閉弁
【図１】
2019213741.tif 000003