(57)【要約】【課題】本発明の目的は関節リウマチ患者に生物学的製剤を投与する前に、簡便、廉価、且つ正確に、治療効果（特に、完全寛解状態になるか否か）、又は症状の改善度を判定する方法を提供することである。【解決手段】ｓｇｐ１３０、ＩＰ−１０、ｓＴＮＦＲＩ、ｓＴＮＦＲＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、Ｅｏｔａｘｉｎ、ＶＥＧＦ、ＭＣＰ−１、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ-γ、ＦＧＦｂａｓｉｃ、ＰＤＧＦ-ｂｂ、ｓＩＬ−６Ｒ、及びＭＩＰ−１αよりなる群から選択される１種又は２種以上の血清中濃度を利用することによって、炎症性サイトカインを標的にした生物学的製剤を投与する前に、関節リウマチ患者に対する治療効果（症状の改善度や寛解の可能性）を、簡便且つ廉価で、如何なる施設でも可能で、しかも高い正確性をもって予測判定できる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、関節リウマチ患者への生物学的製剤による治療効果を予測判定する方法に関する。より具体的には、本発明は、関節リウマチ患者に生物学的製剤を投与する前に、症状の改善度、寛解の可能性等の治療効果を予測判定する方法に関する。更に、本発明は、関節リウマチ患者への生物学的製剤による治療効果を予測判定するための診断薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
関節リウマチは、関節滑膜を病変の中心とする全身性の炎症性疾患であり、その患者数は日本で約７０万人にも及ぶといわれている。関節リウマチの治療には、炎症性サイトカインを標的にする多くの生物学的製剤が開発されており、近年では、ＴＮＦ−α又はＩＬ−６の作用を阻害する抗ＴＮＦ−α剤又は抗ＩＬ−６剤が臨床的に実用化されている。
【０００３】
これまでに、トシリズマブ、エタネルセプト、アダリムマブ、インフリキシマブ等の、炎症性サイトカインを標的にした生物学的製剤が関節リウマチの治療に使用されている。トシリズマブは、ヒト化ＩＬ−６受容体抗体であり、膜結合型ＩＬ−６受容体及び可溶性ＩＬ−６受容体に結合しＩＬ−６シグナルを抑制する作用によって関節リウマチを鎮静化させる薬剤である。また、エタネルセプトは、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域とヒト腫瘍壊死因子II型受容体の細胞外ドメインのサブユニット２量体からなる完全ヒト型可溶性ＴＮＦ／ＬＴαレセプター製剤であり、ＴＮＦα／βの両方に結合し、ＴＮＦ受容体へのシグナル伝達を阻害することにより、関節リウマチを鎮静化させる薬剤である。アダリムマブ及びインフリキシマブは、ヒト型及びキメラ型抗ＴＮＦ−α抗体であり、過剰に産生されたＴＮＦ−αに特異的に結合し、ＴＮＦ−αのＴＮＦ−α受容体への結合を阻害することによって、関節リウマチを鎮静化させる薬剤である。
【０００４】
このような生物学的製剤は、関節リウマチの治療において一定の有効性が確認されている一方で、薬価が高い、治療効果判定に時間がかかる等の欠点があることに加えて、無効例も一定の割合で存在しており、更に感染症、間質性肺炎等の副作用発現も認められることがあるため、生物学的製剤を使用可能な症例は限定されている。そのため、炎症性サイトカインを標的にした生物学的製剤の有効性を関節リウマチ患者毎に事前に推測できれば、関節リウマチ患者に福音をもたらし、医療経済にも寄与すことになる。
【０００５】
従来、炎症性サイトカインを標的にした生物学的製剤の関節リウマチ患者に対する有効性を予測するマーカーについて精力的に検討されている。例えば、トシリズマブによる関節リウマチの治療有効性を予測する方法としては、マイクロＤＮＡチップを使用する方法、ベースライン時のＣＲＰ値を指標とする方法、血中の可溶性ＩＣＡＭＩ濃度及びＣＸＣＬ１３濃度を指標とする方法、白血球のＡＤＡＭＴ５遺伝子発現量を指標とする方法（非特許文献４）、遺伝子多型を網羅的に解析する方法（特許文献１及び２）、ＩＬ−６受容体の遺伝子変異を解析する方法（特許文献３）等が報告されている。また、インフリキシマブによる関節リウマチの治療有効性を予測する方法としては、ＩＬ１０ＲＢ遺伝子、ＩＲＦ５遺伝子及びＩＲＦ５遺伝子の多型を解析する方法（特許文献４）が報告されている。更に、エタネルセプト、アダリムマブ、インフリキシマブ等の抗ＴＮＦ−α剤による関節リウマチの治療有効性を予測する方法として、遺伝子多型を網羅的に解析する方法（特許文献５）も報告されている。
【０００６】
しかしながら、従来の関節リウマチの治療効果の判定方法では、遺伝子解析等を要し操作が煩雑である、解析に時間又は費用がかかる、汎用性が乏しい、正診率が低い等の欠点がある。更に、従来の手法では、生物学的製剤の投与前に、関節リウマチを完全寛解できるか否かを正確に判定することができないため、生物学的製剤の投与前に、その治療効果を見越した適切な治療方針を確立できていないという問題点もある。
【０００７】
このような従来技術を背景として、簡便且つ廉価で、汎用性に富み、更に高い正確性をもって、関節リウマチ患者に対する生物学的製剤投与の治療効果を予測する技術を確立することが切望されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際公開第２０１１／１２８０９６号
【特許文献２】特開２０１１−１８２７８０号公報
【特許文献３】国際公開第２０１２／４１３３２号
【特許文献４】特開２００９−２２５７１３号公報
【特許文献５】特開２０１０−０８８４３２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、関節リウマチ患者に生物学的製剤を投与する前に、簡便且つ廉価で、汎用性に富み、更に高い正確性をもって、治療効果（症状の改善度や寛解の可能性）を予測判定する方法を提供することを目的とする。また、本発明は、当該方法を実施するための診断薬を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者等は、前記課題を解決すべく、生物学的製剤を投与した関節リウマチ患者の予後の状態と、生物学的製剤の投与前の当該患者の血清中のサイトカイン、ケモカイン及びそれらの可溶性受容体の濃度を分析したところ、ｓｇｐ１３０、ＩＰ−１０、ｓＴＮＦＲＩ、ｓＴＮＦＲＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、Ｅｏｔａｘｉｎ、ＶＥＧＦ、ＭＣＰ−１、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ-γ、ＦＧＦｂａｓｉｃ、ＰＤＧＦ-ｂｂ、ｓＩＬ−６Ｒ、及びＭＩＰ−１αよりなる群から選択される１種又は２種以上の血清中濃度を利用することによって、炎症性サイトカインを標的にした生物学的製剤を投与する前に、関節リウマチ患者に対する治療効果（症状の改善度や寛解の可能性）を、簡便且つ廉価で、如何なる施設でも可能で、しかも高い正確性をもって予測判定できることを見出した。
【００１１】
より詳細には、本発明者等は、以下に示す知見を得た。
(1-1) 線形単回帰分析によって、過去に抗サイトカイン療法（インフリキシマブ、エタネルセプト、アダリムマム、トシリズマブ等の投与）を受けていないリウマチ患者（（以下、「ナイーブ患者」と表記することもある）に対してトシリズマブを投与して治療した場合に、DAS-28値の改善度（治療前のDAS-28値−治療１６週後のDAS-28値）が、当該患者におけるトシリズマブ投与前のＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＰ−１０、及びＶＥＧＦの血清中濃度のｌｏｇ値と有意な相関があることを見出した。
(1-2) 線形単回帰分析によって、過去に抗サイトカイン療法を受けたリウマチ患者（以下、「スイッチ患者」と表記することもある）に対してトシリズマブを投与して治療した場合に、DAS-28値の改善度が、当該患者におけるトシリズマブ投与前のＩＬ−１β、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＦＧＦｂａｓｉｃ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ-γ、ＴＮＦ−α、及びＶＥＧＦの血清中濃度のｌｏｇ値と有意な相関があることを見出した。
(1-3) 線形単回帰分析によって、ナイーブ患者に対してエタネルセプトを投与して治療した場合に、DAS-28値の改善度が、当該患者におけるエタネルセプト投与前のＩＬ−６及びＩＰ−１０の血清中濃度のｌｏｇ値と有意な相関があることを見出した。
(1-4) 線形多重回帰分析によって、ナイーブ患者に対してトシリズマブを投与して治療した場合に、DAS-28値の改善度が、当該患者におけるトシリズマブ投与前のＩＬ−１β、ＩＬ−７、ＴＮＦ−α、及びｓＩＬ−６Ｒの血清中濃度のＬｏｇ値の組み合わせと有意な相関性があることを見出した。
(1-5) 線形多重回帰分析によって、ナイーブ患者に対してエタネルセプトを投与して治療した場合に、DAS-28値の改善度が、当該患者におけるエタネルセプト投与前のＩＬ−２、ＩＬ−１５、ｓＩＬ−６Ｒ、及びｓＴＮＦＲＩの血清中濃度のＬｏｇ値の組み合わせと有意な相関性があることを見出した。
(2-1) 線形単回帰分析によって、ナイーブ患者に対してトシリズマブを投与して治療した場合に、治療１６週後のDAS-28値が、当該患者におけるトシリズマブ投与前のｓｇｐ１３０の血清中濃度と有意な相関性があることを見出した。
(2-2) 線形単回帰分析によって、スイッチ患者に対してトシリズマブを投与して治療した場合に、治療１６週後のDAS-28値が、当該患者におけるトシリズマブ投与前のｓｇｐ１３０の血清中濃度、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−１５、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ-γ、及びＴＮＦ−αの血清中濃度のＬｏｇ値と有意な相関性があることを見出した。
(2-3) 線形単回帰分析によって、ナイーブ患者に対してエタネルセプトを投与して治療した場合に、治療１６週後のDAS-28値が、当該患者におけるエタネルセプト投与前のＩＬ−９の血清中濃度のＬｏｇ値と有意な相関性があることを見出した。
(2-4) 線形多重回帰分析によって、ナイーブ患者に対してトシリズマブを投与して治療した場合に、治療１６週後のDAS-28値が、当該患者におけるトシリズマブ投与前のｓｇｐ１３０の血清中濃度、並びにＩＬ−８、Ｅｏｔａｘｉｎ、ＩＰ−１０、ｓＴＮＦＲＩ、ｓＴＮＦＲＩＩ、ＩＬ−６、及びＶＥＧＦの血清中濃度のＬｏｇ値の組み合わせと有意な相関性があることを見出した。
(2-5) 線形多重回帰分析によって、ナイーブ患者に対してトシリズマブを投与して治療した場合に、治療１６週後のDAS-28値が、当該患者におけるトシリズマブ投与前のｓｇｐ１３０の血清中濃度、並びにＩＬ−８、Ｅｏｔａｘｉｎ、ＩＰ−１０、ｓＴＮＦＲＩ、ｓＴＮＦＲＩＩ、及びＩＬ−６の血清中濃度のＬｏｇ値の組み合わせと有意な相関性があることを見出した。
(2-6) 線形多重回帰分析によって、スイッチ患者に対してトシリズマブを投与して治療した場合に、治療１６週後のDAS-28値が、当該患者におけるトシリズマブ投与前のｓｇｐ１３０の血清中濃度、並びにＩＰ−１０及びＧＭ−ＣＳＦの血清中濃度のＬｏｇ値の組み合わせと有意な相関性があることを見出した。
(2-7) 線形多重回帰分析によって、ナイーブ患者に対してエタネルセプトを投与して治療した場合に、治療１６週後のDAS-28値が、エタネルセプト投与前のDAS-28値、並びにＩＬ−６及びＩＬ−１３の血清中濃度のＬｏｇ値の組み合わせと有意な相関性があることを見出した。
(2-8) 線形多重回帰分析によって、ナイーブ患者に対してエタネルセプトを投与して治療した場合に、治療１６週後のDAS-28値が、エタネルセプト投与前のＩＬ−９、ＴＮＦ−α及びＶＥＧＦの血清中濃度のＬｏｇ値の組み合わせと有意な相関性があることを見出した。
(3-1) ロジスチック多重回帰分析によって、ナイーブ患者に対してトシリズマブを投与して治療した場合の寛解の可能性を、トシリズマブ投与前のｓｇｐ１３０の血清中濃度と、ＩＰ−１０の血清中濃度のＬｏｇ値と、ｓＴＮＦＲＩＩの血清中濃度のＬｏｇ値と、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＭＣＰ−１又はＩＬ−１βの血清中濃度のＬｏｇ値との組み合わせによって予測判定できることを見出した。
(3-2) ロジスチック多重回帰分析によって、スイッチ患者に対してトシリズマブを投与して治療した場合の寛解の可能性を、トシリズマブ投与前のｓｇｐ１３０の血清中濃度と、ＩＰ−１０の血清中濃度のＬｏｇ値と、ｓＴＮＦＲＩＩの血清中濃度のＬｏｇ値と、ＩＬ−６又はＩＬ−１βの血清中濃度のＬｏｇ値との組み合わせによって予測判定できることを見出した。
(3-3) ロジスチック多重回帰分析によって、ナイーブ患者に対してエタネルセプトを投与して治療した場合の寛解の可能性を、エタネルセプト投与前のDAS-28値と、ＶＥＧＦ及びＰＤＧＦ-ｂｂの血清中濃度のＬｏｇ値の組み合わせによって予測判定できることを見出した。
(3-4) ロジスチック多重回帰分析によって、ナイーブ患者に対してエタネルセプトを投与して治療した場合の寛解の可能性を、エタネルセプト投与前のDAS-28値と、ＭＩＰ−１α及びＰＤＧＦ-ｂｂの血清中濃度のＬｏｇ値の組み合わせによっても予測判定できることを見出した。
(3-5) 線形多重回帰分析によって、ナイーブ患者に対してエタネルセプトを投与して治療した場合の寛解の可能性を、エタネルセプト投与前のＩＬ−９及びＴＮＦ−αの血清中濃度のＬｏｇ値の組み合わせによっても予測判定できることを見出した。
【００１２】
本発明は、これらの知見に基づいて更に検討を重ねることによって完成したものである。即ち、本発明は、下記に掲げる態様の発明を提供する。
項１．  関節リウマチ患者への炎症性サイトカインを標的にした生物学的製剤による治療効果を予測判定する方法であって、
生物学的製剤の投与前の関節リウマチ患者から採取された血清における、ｓｇｐ１３０、ＩＰ−１０、ｓＴＮＦＲＩ、ｓＴＮＦＲＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、Ｅｏｔａｘｉｎ、ＶＥＧＦ、ＭＣＰ−１、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ-γ、ＦＧＦｂａｓｉｃ、ＰＤＧＦ-ｂｂ、ｓＩＬ−６Ｒ、及びＭＩＰ−１αよりなる群から選択される少なくとも１種の判定マーカーの濃度を測定する工程を含むことを特徴とする、判定方法。
項２．  トシリズマブによる寛解の可能性を予測判定する方法であって、
前記判定マーカーが、ｓｇｐ１３０、ＩＰ−１０、ｓＴＮＦＲＩＩ、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＭＣＰ−１及びＩＬ−１βよりなる群から選択される少なくとも１種である、項１に記載の判定方法。
項３．  前記判定マーカーとして少なくともｓｇｐ１３０を使用する、項２に記載の判定方法。
項４．  トシリズマブが投与される患者が、過去に抗サイトカイン療法を受けていない関節リウマチ患者であって、
前記判定マーカーが、(i)ｓｇｐ１３０と、(ii)ＩＰ−１０と、(iii)ｓＴＮＦＲＩＩと、(iv)ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＭＣＰ−１又はＩＬ−１βとの組み合わせである、項２又は３に記載の判定方法。
項５．  トシリズマブが投与される患者が、過去に抗サイトカイン療法を受けている関節リウマチ患者であって、
前記判定マーカーが、(i)ｓｇｐ１３０と、(ii)ＩＰ−１０と、(iii)ｓＴＮＦＲＩＩと、(iv)ＩＬ−６又はＩＬ−１βとの組み合わせである、項２又は３に記載の判定方法。
項６．  過去に抗サイトカイン療法を受けていないリウマチ患者において、エタネルセプトによる寛解の可能性を予測判定する方法であって、
前記判定マーカーが、ＩＬ−９、ＴＮＦ−α、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ-ｂｂ、及びＭＩＰ−１αよりなる群から選択される少なくとも１種である、項１に記載の判定方法。
項７．  前記判定マーカーが、ＩＬ−９及びＴＮＦ−αの組み合わせ、ＶＥＧＦ及びＰＤＧＦ-ｂｂの組み合わせ、或いはＭＩＰ−１α及びＰＤＧＦ-ｂｂの組み合わせである、項６に記載の判定方法。
項８．  過去に抗サイトカイン療法を受けていないリウマチ患者において、トシリズマブによる治療後の疾患活動性指標を予測判定する方法であって、
前記判定マーカーが、ｓｇｐ１３０、ＩＬ−８、Ｅｏｔａｘｉｎ、ＩＰ−１０、ｓＴＮＦＲＩ、ｓＴＮＦＲＩＩ、ＩＬ−６、及びＶＥＧＦよりなる群から選択される少なくとも１種である、項１に記載の判定方法。
項９．  前記判定マーカーが、ｓｇｐ１３０、ＩＬ−８、Ｅｏｔａｘｉｎ、ＩＰ−１０、ｓＴＮＦＲＩ、ｓＴＮＦＲＩＩ、及びＩＬ−６の組み合わせ、或いはｓｇｐ１３０、ＩＬ−８、Ｅｏｔａｘｉｎ、ＩＰ−１０、ｓＴＮＦＲＩ、ｓＴＮＦＲＩＩ、ＩＬ−６、及びＶＥＧＦの組み合わせである、項８に記載の判定方法。
項１０．  過去に抗サイトカイン療法を受けているリウマチ患者において、トシリズマブによる治療後の疾患活動性指標の値を予測判定する方法であって、
前記判定マーカーが、ｓｇｐ１３０、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−１５、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ-γ、ＴＮＦ−α、及びＩＰ−１０よりなる群から選択される少なくとも１種である、項１に記載の判定方法。
項１１．  前記判定マーカーが、ｓｇｐ１３０、ＩＰ−１０、及びＧＭ−ＣＳＦの組み合わせである、項１０に記載の判定方法。
項１２．  過去に抗サイトカイン療法を受けていないリウマチ患者において、エタネルセプトによる治療後の疾患活動性指標の値を予測判定する方法であって、
前記判定マーカーが、ＩＬ−９、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＴＮＦ−α及びＶＥＧＦよりなる群から選択される少なくとも１種である、項１に記載の判定方法。
項１３．  前記判定マーカーが、ＩＬ−９、ＴＮＦ−α及びＶＥＧＦの組み合わせ、或いはＩＬ−６及びＩＬ−１３の組み合わせである、項１２に記載の判定方法。
項１４．  過去に抗サイトカイン療法を受けていないリウマチ患者において、トシリズマブによる治療後の症状の改善度を予測判定する方法であって、
前記判定マーカーが、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＰ−１０、ＶＥＧＦ、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、及びｓＩＬ−６Ｒよりなる群から選択される少なくとも１種である、項１に記載の判定方法。
項１５．  前記判定マーカーが、ＩＬ−１β、ＩＬ−７、ＴＮＦ−α、及びｓＩＬ−６Ｒの組み合わせである、項１４に記載の判定方法。
項１６．  過去に抗サイトカイン療法を受けているリウマチ患者において、トシリズマブによる治療後の症状の改善度を予測判定する方法であって、
前記判定マーカーが、ＩＬ−１β、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＦＧＦｂａｓｉｃ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ-γ、ＴＮＦ−α、及びＶＥＧＦよりなる群から選択される少なくとも１種である、項１に記載の判定方法。
項１７．  過去に抗サイトカイン療法を受けていないリウマチ患者において、エタネルセプトによる治療後の症状の改善度を予測判定する方法であって、
前記判定マーカーが、ＩＬ−６、ＩＰ−１０、ＩＬ−２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ｓＩＬ−６Ｒ、及びｓＴＮＦＲＩよりなる群から選択される少なくとも１種である、項１に記載の判定方法。
項１８．  前記判定マーカーが、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ｓＩＬ−６Ｒ、及びｓＴＮＦＲＩの組み合わせ、或いはＩＬ−６及びＩＬ−１３の組み合わせである、項１７に記載の判定方法。
項１９．  トシリズマブ及びエタネルセプトよりなる生物学的製剤の中から、過去に抗サイトカイン療法を受けていないリウマチ患者において治療により有効な生物学的製剤を選択する方法であって、
項４に記載の判定方法に従って、トシリズマブによる寛解の可能性を予測判定する工程、
項６に記載の判定方法に従って、エタネルセプトによる寛解の可能性を予測判定する工程、及び
前記工程で予測判定されたトシリズマブによる寛解の可能性とエタネルセプトによる寛解の可能性を対比し、寛解の可能性が高い生物学的製剤を選択する工程
を含む、生物学的製剤の選択方法。
項２０．  トシリズマブ及びエタネルセプトよりなる生物学的製剤の中から、過去に抗サイトカイン療法を受けていないリウマチ患者において治療により有効な生物学的製剤を選択する方法であって、
項１０又は１１に記載の判定方法に従って、トシリズマブによる治療後の疾患活動性指標を予測判定する工程、
項１２又は１３に記載の判定方法に従って、エタネルセプトによる治療後の疾患活動性指標を予測判定する工程、及び
前記工程で予測判定されたトシリズマブによる治療後の疾患活動性指標とエタネルセプトによる治療後の疾患活動性指標を対比し、治療後の疾患活動性指標が低い生物学的製剤を選択する工程
を含む、生物学的製剤の選択方法。
項２１．  トシリズマブ及びエタネルセプトよりなる生物学的製剤の中から、過去に抗サイトカイン療法を受けていないリウマチ患者において治療により有効な生物学的製剤を選択する方法であって、
項１４又は１５に記載の判定方法に従って、トシリズマブによる治療後の症状の改善度を予測判定する工程、
項１７又は１８に記載の判定方法に従って、エタネルセプトによる治療後の症状の改善度を予測判定する工程、及び
前記工程で予測判定されたトシリズマブによる治療後の症状の改善度とエタネルセプトによる治療後の症状の改善度を対比し、治療後の症状の改善度が高い生物学的製剤を選択する工程
を含む、生物学的製剤の選択方法。
項２２．  関節リウマチ患者への炎症性サイトカインを標的にした生物学的製剤による治療効果を予測判定するための診断薬であって、
ｓｇｐ１３０、ＩＰ−１０、ｓＴＮＦＲＩ、ｓＴＮＦＲＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、Ｅｏｔａｘｉｎ、ＶＥＧＦ、ＭＣＰ−１、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ-γ、ＦＧＦｂａｓｉｃ、ＰＤＧＦ-ｂｂ、ｓＩＬ−６Ｒ、及びＭＩＰ−１αよりなる群から選択される少なくとも１種のマーカーを検出可能な試薬を含む、診断薬。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、炎症性サイトカインを標的にした生物学的製剤を投与する前に、関節リウマチ患者に対する治療効果を正確に推測することができ、当該生物学的製剤によって関節リウマチが完全寛解状態になるか否かを高い精度で判定することができる。更に、本発明によれば、当該生物学的製剤の投与前に、関節リウマチ患者に対する症状の改善度を正確に判定することもでき、当該生物学的製剤による治療効果を見越した適切な治療方針を立てることが可能になる。また、本発明によれば、治療前の関節リウマチ患者にとって、どの生物学的製剤の投与が最も効果的であるかを予測することもできるので、患者毎に最適な生物学的製剤を選択して、患者毎に最も有効な治療方針を立てることも可能になる。
【００１４】
このように、本発明を利用することにより、生物学的製剤の投与が有効な関節リウマチ患者を識別することができるので、患者にとっては治療費の抑制、治療効果の予測による安心感の付与等のメリットがあり、医師にとっても生物学的製剤の有効性の正確な予測に基づく適切な治療方針の確立が可能になる。
【００１５】
更に、本発明では、汎用性に乏しく複雑で時間を要する遺伝子解析等を必要とせず、血清中の特定のサイトカイン、ケモカイン、及び／又は可溶性受容体の濃度を指標として使用するので、既存の測定法を用いて簡便且つ廉価に、炎症性サイトカインを標的にした生物学的製剤の有効性を患者毎に事前に推測することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】トシリズマブ治療患者及びエタネルセプト治療患者のトライアルプロファイルを示す図である。
【図２−１】図２−１〜２−４は、サイトカイン／ケモカイン／可溶性受容体の血清中濃度について、健常者と関節リウマチ患者のクリニカルベースラインの個体群統計を示す図である。
【図２−２】同上。
【図２−３】同上。
【図２−４】同上。
【図３】トシリズマブ治療患者及びエタネルセプト治療患者における、治療前のDAS-28値と治療１６週後のDAS-28値の関係を示す図である。
【図４】トシリズマブ療法を受けたナイーブ患者における、治療前のDAS-28値（PreDAS-28 score）と、治療前のDAS-28値から１６週後のDAS-28値を差し引いた値（PreDAS-28score−16W DAS-28 score）の関係を示す図である。
【図５】トシリズマブ療法を受けたナイーブ患者を対象として、治療前に回帰式（４）によって算出された治療１６週後のDAS-28値の予測値と、治療１６週後のDAS-28値の実際値との対比を行った結果を示す図である。
【図６】トシリズマブ療法を受けたスイッチ患者を対象として、治療前に回帰式（５）によって算出された治療１６週後のDAS-28値の予測値と、治療１６週後のDAS-28値の実際値との対比を行った結果を示す図である。
【図７】エタネルセプト療法を受けたナイーブ患者を対象として、治療前に回帰式（７）によって算出された治療１６週後のDAS-28値の予測値と、治療１６週後のDAS-28値の実際値との対比を行った結果を示す図である。
【図８】エタネルセプト療法を受けたナイーブ患者における、エタネルセプト療法の治療１６週後のDAS-28の実際値と、トシリズマブ療法を受けたと仮定して推測される治療１６週後のDAS-28値の予測値との関係を示す図である。
【図９】寛解と非寛解の患者について、血清中のｓｐｇ１３０濃度と治療前のDAS-28値の関係を分析した結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
１．判定方法
本発明は、関節リウマチ患者への炎症性サイトカインを標的にした生物学的製剤による治療の有効性を判定する方法であって、生物学的製剤の投与前の関節リウマチ患者から採取された血清における、ｓｇｐ１３０、ＩＰ−１０、ｓＴＮＦＲＩ、ｓＴＮＦＲＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、Ｅｏｔａｘｉｎ、ＶＥＧＦ、ＭＣＰ−１、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ-γ、ＦＧＦｂａｓｉｃ、ＰＤＧＦ-ｂｂ、ｓＩＬ−６Ｒ、及びＭＩＰ−１αよりなる群から選択される１種又は２種以上の濃度を測定する工程を含むことを特徴とする。以下、本発明の判定方法について詳述する。
【００１８】
判定対象となる生物学的製剤
本発明の判定方法は、関節リウマチ患者に対して、炎症性サイトカインを標的にした生物学的製剤の治療効果を予測判定する方法である。
【００１９】
炎症性サイトカインを標的にした生物学的製剤としては、関節リウマチの治療に使用される生物学的製剤であることを限度として特に制限されず、本発明の判定方法では、使用する生物学的製剤の種類に応じて、その治療効果を予測判定することができる。炎症性サイトカインを標的にした生物学的製剤としては、例えば、抗ＩＬ−６剤、及び抗ＴＮＦ−α剤が挙げられる。抗ＩＬ−６剤としては、具体的には、ヒト化抗ＩＬ−６受容体抗体、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域とヒト腫瘍壊死因子II型受容体の細胞外ドメインのサブユニット２量体からなるヒト型可溶性ＴＮＦ／ＬＴαレセプター、抗ＴＮＦ−α抗体等が挙げられる。前記ヒト化抗ＩＬ−６受容体抗体として、より具体的にはトシリズマブが挙げられる。また、前記ヒト型可溶性ＴＮＦ／ＬＴαレセプターとしては、より具体的にはエタネルセプトが挙げられる。また、前記抗ＴＮＦ−α抗体としては、より具体的には、アダリムマブ及びインフリキシマブが挙げられる。
【００２０】
これらの生物学的製剤の中でも、本発明の判定方法において、適用される好適なものとして、ヒト化抗ＩＬ−６受容体抗体、及びヒト型可溶性ＴＮＦ／ＬＴαレセプター、更に好ましくはトシリズマブ及びエタネルセプトが挙げられる。
【００２１】
判定対象となる患者
本発明の判定方法では、前記生物学的製剤を投与する前の関節リウマチ患者において、前記生物学的製剤の投与が有効であるか否かを判定する。
【００２２】
また、本発明の判定方法において、対象となる関節リウマチ患者については、前記生物学的製剤の投与前である限り、特に制限されず、メトトレキセート等のＤＭＡＲＤｓの投与薬を受けているか否かの別や、過去の抗サイトカイン療法（インフリキシマブ、エタネルセプト、アダリムマム、トシリズマブ等の投与）の投与履歴も問わない。本発明の判定方法では、過去の生物学的製剤の投与履歴に応じて所望の判定マーカーを選択することにより、生物学的製剤による治療効果を予測判定することができる。
【００２３】
判定マーカー
本発明の判定方法では、前記関節リウマチ患者の血清におけるｓｇｐ１３０（soluble gp130）、ＩＰ−１０（interferon-inducibleprotein 10）、ｓＴＮＦＲＩ（soluble receptors for tumor necrosis factor type I）、ｓＴＮＦＲＩＩ（solublereceptors for tumor necrosis factor type II）、ＧＭ−ＣＳＦ（granulocyte macrophage colony-stimulatingfactor）、ＩＬ−１β（interleukin-1β）、ＩＬ−２（interleukin-2）、ＩＬ−５（interleukin-5）、ＩＬ−６（interleukin-6）、ＩＬ−７（interleukin-7）、ＩＬ−８interleukin-8）、ＩＬ−９（interleukin-9）、ＩＬ−１０（interleukin-10）、ＩＬ−１２（interleukin-12）、ＩＬ−１３（interleukin-13）、ＩＬ−１５（interleukin-15）、Ｅｏｔａｘｉｎ、ＶＥＧＦ（vascularendothelial growth factor）、ＭＣＰ−１（monocyte chemotactic protein-1）、ＴＮＦ−α（tumornecrosis factor-α）、ＩＦＮ-γ（interferon-γ）、ＦＧＦｂａｓｉｃ（basic fibroblast growth factor）、ＰＤＧＦ-ｂｂ（platelet-derivedgrowth factor bb）、ｓＩＬ−６Ｒ（soluble receptors for interleukin-6）、及びＭＩＰ−１α（macrophageinflammatory protein-1α）よりなる群から選択される１種又は２種以上を判定マーカーとして使用する。
【００２４】
本発明の判定方法において、前述する特定のサイトカイン、ケモカイン、及び可溶性受容体の中の１種を単独で使用して判定マーカーとしてもよいが、より高い精度で生物学的製剤による治療効果を予測判定するという観点から、これらの中の２種以上を組み合わせて判定マーカーとすることが好ましい。
【００２５】
前記判定マーカーは、予測判定する治療効果の内容、投与する生物学的製剤の種類、過去の生物学的製剤の投与履歴等に応じて、適宜選択して使用される。以下、予測判定する治療効果の内容毎に、判定マーカーとして好適な例を具体的に示す。
【００２６】
＜生物学的製剤の治療後の症状の改善度（疾患活動性指標の値の改善度；治療前の疾患活動性指標の値−治療後の疾患活動性指標の値）を予測判定する場合＞
ナイーブ患者であってトシリズマブが投与される患者（以下、「トシリズマブ療法ナイーブ患者」と表記することもある）であれば、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＰ−１０、ＶＥＧＦ、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、及びｓＩＬ−６Ｒよりなる群から選択される少なくとも１種を判定マーカーとして使用することが好ましく、ＩＬ−１β、ＩＬ−７、ＴＮＦ−α、及びｓＩＬ−６Ｒを組み合わせて判定マーカーとして使用することが更に好ましい。
【００２７】
スイッチ患者であってトシリズマブが投与される患者（以下、「トシリズマブ療法スイッチ患者」と表記することもある）であれば、ＩＬ−１β、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＦＧＦｂａｓｉｃ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ-γ、ＴＮＦ−α、及びＶＥＧＦよりなる群から選択される少なくとも１種を判定マーカーとして使用することが好ましい。
【００２８】
ナイーブ患者であってエタネルセプトが投与される患者（以下、「エタネルセプト療法ナイーブ患者」と表記することもある）であれば、ＩＬ−６、ＩＰ−１０、ＩＬ−２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ｓＩＬ−６Ｒ、及びｓＴＮＦＲＩよりなる群から選択される少なくとも１種を判定マーカーとして使用することが好ましく、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ｓＩＬ−６Ｒ、及びｓＴＮＦＲＩの組み合わせが判定マーカーとして更に好ましい。
【００２９】
＜生物学的製剤の治療後の疾患活動性指標の値自体を予測判定する場合＞
トシリズマブ療法ナイーブ患者であれば、ｓｇｐ１３０、ＩＬ−８、Ｅｏｔａｘｉｎ、ＩＰ−１０、ｓＴＮＦＲＩ、ｓＴＮＦＲＩＩ、ＩＬ−６、及びＶＥＧＦよりなる群から選択される少なくとも１種を判定マーカーとして使用することが好ましく；ｓｇｐ１３０、ＩＬ−８、Ｅｏｔａｘｉｎ、ＩＰ−１０、ｓＴＮＦＲＩ、ｓＴＮＦＲＩＩ、及びＩＬ−６の組み合わせ、或いはｓｇｐ１３０、ＩＬ−８、Ｅｏｔａｘｉｎ、ＩＰ−１０、ｓＴＮＦＲＩ、ｓＴＮＦＲＩＩ、ＩＬ−６、及びＶＥＧＦの組み合わせが判定マーカーとして更に好ましい。
【００３０】
トシリズマブ療法スイッチ患者であれば、ｓｇｐ１３０、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−１５、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ-γ、ＴＮＦ−α、及びＩＰ−１０よりなる群から選択される少なくとも１種を判定マーカーとして使用することが好ましく；ｓｇｐ１３０、ＩＰ−１０、及びＧＭ−ＣＳＦの組み合わせが判定マーカーとして更に好ましい。
【００３１】
エタネルセプト療法ナイーブ患者であれば、ＩＬ−９、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＴＮＦ−α及びＶＥＧＦよりなる群から選択される少なくとも１種を判定マーカーとして使用することが好ましく、ＩＬ−９、ＴＮＦ−α及びＶＥＧＦの組み合わせ、或いはＩＬ−６及びＩＬ−１３の組み合わせが判定マーカーとして更に好ましい。
【００３２】
＜生物学的製剤の治療による寛解の可能性（寛解に至るか否か）を予測判定する場合＞
トシリズマブが投与される患者（トシリズマブ療法ナイーブ患者及びトシリズマブ療法スイッチ患者の双方を含む）であれば、ｓｇｐ１３０、ＩＰ−１０、ｓＴＮＦＲＩＩ、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＭＣＰ−１及びＩＬ−１βよりなる群から選択される少なくとも１種を判定マーカーとして使用することが好ましく；少なくともｓｇｐ１３０を使用することがより好ましく、(i)ｓｇｐ１３０と、(ii)ＩＰ−１０と、(iii)ｓＴＮＦＲＩＩと、(iv)ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＭＣＰ−１又はＩＬ−１βの組み合わせが更に好ましい。より具体的には、トシリズマブ療法ナイーブ患者の場合であれば、(i)ｓｇｐ１３０と、(ii)ＩＰ−１０と、(iii)ｓＴＮＦＲＩＩと、(iv)ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＭＣＰ−１又はＩＬ−１βの組み合わせが判定マーカーとして特に好ましい。また、トシリズマブ療法スイッチ患者の場合であれば、(i)ｓｇｐ１３０と、(ii)ＩＰ−１０と、(iii)ｓＴＮＦＲＩＩと、(iv)ＩＬ−６又はＩＬ−１βの組み合わせが判定マーカーとして特に好ましい。
【００３３】
エタネルセプト療法ナイーブ患者であれば、ＩＬ−９、ＴＮＦ−α、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ-ｂｂ、及びＭＩＰ−１αよりなる群から選択される少なくとも１種を判定マーカーとして使用することが好ましく；ＩＬ−９及びＴＮＦ−αの組み合わせ、ＶＥＧＦ及びＰＤＧＦ-ｂｂの組み合わせ、或いはＭＩＰ−１α及びＰＤＧＦ-ｂｂの組み合わせが判定マーカーとして特に好ましい。
【００３４】
判定マーカーとして使用される前記サイトカイン、ケモカイン及び可溶性受容体の血清中の各濃度は、ＥＬＩＳＡのような抗原抗体反応を利用した測定系によって測定できることは公知であり、これらの測定キットも市販されている。従って、本発明の判定方法において、前記サイトカイン、ケモカイン及び可溶性受容体は、公知の方法、公知の測定キットにより測定することができる。
【００３５】
生物学的製剤による治療効果の予測判定
前記判定マーカーの測定値に基づいて、生物学的製剤による治療効果を予測判定することができる。例えば、生物学的製剤による治療で完全寛解した患者、非寛解であった患者について、予め前記判定マーカーの測定を行い、回帰分析によって生物学的製剤の治療効果（目的変数）と前記判定マーカーの測定値（説明変数）の回帰式を求めておき、当該回帰式に、判定対象となる関節リウマチ患者の判定マーカーの測定値を当てはめる方法が挙げられる。なお、回帰式を求めるに当たって、前記判定マーカーの内、ｓｇｐ１３０以外については、血清中濃度（ｐｇ/ｍｌ）のｌｏｇ値を使用することが好ましく、ｓｇｐ１３０については血清中濃度（μｇ/ｍｌ）の値を使用することが好ましい。また、回帰式は、多重回帰分析によって導出することが好ましい。前記回帰式において目的変数については、予測判定すべき治療効果の内容に基づいて適宜設定すればよい。
【００３６】
例えば、生物学的製剤の治療後の症状の改善度を予測判定する場合であれば、目的変数を「治療前の疾患活動性指標の値から所定期間治療後の疾患活動性指標の値を差し引いた値」に設定し、線形多重回帰分析により解析すればよい。また、例えば、生物学的製剤の治療後の疾患活動性指標の値を予測判定する場合であれば、目的変数を「所定期間治療後の疾患活動性指標の値」に設定し、線形多重回帰分析により解析すればよい。ここで、疾患活動性指標の値としては、具体的には、DAS(Diseaseactivity score)-28値、CDAI(Clinical Disease Activity Index)値、及びSDAI(SimpleDisease Activity Index)値等が挙げられる。DAS-28値、CDAI値、及びSDAI値は、相互に相関しており、関節リウマチの症状を反映しているため、本発明の判定方法ではこれらの疾患活動性指標の値のいずれを使用してもよい。また、本発明の判定方法に使用される疾患活動性指標は、前記で例示したものに限定されず、将来新たに提唱され得るものを使用することもできる。
【００３７】
また、生物学的製剤の治療による寛解の可能性（寛解したか、しなかったかの結果）を予測判定する場合であれば、ロジスチック多重回帰分析により解析すればよい。
【００３８】
なお、前記判定マーカーの測定値を説明変数として利用した回帰分析では、必要に応じて治療前の疾患活動性指標の値（DAS-28値、CDAI値、SDAI値等）やBoolean法による評価結果も説明変数として利用してもよい。
【００３９】
以下、本発明の判定方法について、予測判定する治療効果を、治療後の症状の改善度と、治療後のDAS-28値と、寛解の可能性とに分けて、具体的手法を説明する。但し、本発明の判定方法は、下記具体的な手法に限定されて解釈されるものではない。
【００４０】
＜治療後の症状の改善度の予測判定＞
目的変数を「治療前の疾患活動性指標の値から所定期間治療後の疾患活動性指標の値を差し引いた値」、説明変数を「前記判定マーカーの測定値」に設定して線形多重回帰分析を行うことにより、生物学的製剤による治療後の症状の改善度を予測判定することが可能になる。
【００４１】
後述する実施例では、生物学的製剤による１６週間の治療後の症状の改善度（DAS-28値の改善度；治療前のDAS-28値−治療１６週後のDAS-28値）を予測判定する回帰式として、リウマチ患者の過去の投薬履歴及び生物学的製剤の種類に分けて、以下の式（１）及び（２）が見出されている。判定対象となる関節リウマチ患者の過去の投薬履歴と生物学的製剤の種類に応じて、下記回帰式（１）及び（２）のいずれかに当てはめて目的変数を求めることによって、１６週間の治療後の症状の改善度を予測判定できる。下記回帰式で算出される目的変数が大きい値になる程、当該患者は生物学的製剤によって症状の改善度が大きいと予測判定される。
【００４２】
［トシリズマブ療法ナイーブ患者の１６週間の治療後の症状の改善度（DAS-28値の改善度；治療前のDAS-28値−治療１６週後のDAS-28値）を予測判定する場合］
判定マーカー：ＩＬ−１β、ＩＬ−７、ＴＮＦ−α、及びｓＩＬ−６Ｒ
回帰式（１）：
目的関数（治療前のDAS-28値−治療16週後のDAS-28値）＝5.505＋(-3.618×A)＋(3.255×B)＋(1.475×C)＋(-1.841×D)
Ａ：血清中IL-1βの濃度（pg/ml）のlog値
Ｂ：血清中IL-7の濃度（pg/ml）のlog値
Ｃ：血清中TNF-αの濃度（pg/ml）のlog値
Ｄ：血清中sIL-6Rの濃度（pg/ml）のlog値
【００４３】
［エタネルセプト療法ナイーブ患者の１６週間の治療後の症状の改善度（DAS-28値の改善度；治療前のDAS-28値−治療１６週後のDAS-28値）を予測判定する場合］
判定マーカー：ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ｓＩＬ−６Ｒ、及びｓＴＮＦＲＩ
回帰式（２）：
目的関数（治療前のDAS-28値−治療16週後のDAS-28値）＝7.325＋(-1.567×E)＋(1.632×F)＋(-2.540×D)＋(1.973×G)
Ｅ：血清中IL-2の濃度（pg/ml）のlog値
Ｆ：血清中IL-15の濃度（pg/ml）のlog値
Ｄ：血清中sIL-6Rの濃度（pg/ml）のlog値
Ｇ：血清中sTNFRII濃度（pg/ml）のlog値
【００４４】
前記回帰式（１）及び（２）では、生物学的製剤による１６週間の治療後のDAS-28値の改善度を予測判定するために使用される回帰式の例を示しているが、勿論、CDAI値又はSDAI値を用いて同様の手法にて線形多重回帰分析を行うことにより、生物学的製剤による１６週間の治療後のCDAI値又はSDAI値の改善度（CDAI値又はSDAI値の改善度；治療前のCDAI値又はSDAI値−治療１６週後のCDAI値又はSDAI値）を予測判定することもできる。また、生物学的製剤による治療１６週後であれば、治療効果が安定して現れるため、前記回帰式（１）及び（２）では１６週間の治療後の症状の改善度を予測判定するための回帰式を示しているが、勿論、生物学的製剤による治療１６週以前又は以降の症状の改善度についても、同様の手法にて線形多重回帰分析を行うことによって予測判定することが可能である。
【００４５】
また、後述する実施例では、生物学的製剤による１６週間の治療後の症状のDAS-28値を予測判定する回帰式として、リウマチ患者の過去の投薬履歴及び生物学的製剤の種類に分けて、以下の式（３）〜（７）が見出されている。判定対象となる関節リウマチ患者の過去の投薬履歴と生物学的製剤の種類に応じて、下記回帰式（３）〜（７）のいずれかに当てはめて目的変数を求めることによって、１６週間の治療後のDAS-28値を予測判定できる。下記回帰式で算出される目的変数が２．３以下になる場合、当該患者は生物学的製剤によって寛解に至ると予測判定される。
【００４６】
［トシリズマブ療法ナイーブ患者の１６週間の治療後のDAS-28値を予測判定する場合］
判定マーカー：ｓｇｐ１３０、ＩＬ−８、Ｅｏｔａｘｉｎ、ＩＰ−１０、ｓＴＮＦＲＩ、ｓＴＮＦＲＩＩ、ＩＬ−６、及びＶＥＧＦ
回帰式（３）：
目的関数（１６週間の治療後のDAS-28値）＝6.909＋（-5.341×Ｈ）＋（3.940×Ｉ）（-1.039×Ｊ）＋（-1.002×Ｋ）＋（-2.580×Ｌ）＋（1.407×Ｇ）＋（0.744×Ｍ）＋（-0.850×Ｎ）
Ｈ：血清中sgp130の濃度（μg/ml）
Ｉ：血清中IL-8の濃度（pg/ml）のlog値
Ｊ：血清中Eotaxinの濃度（pg/ml）のlog値
Ｋ：血清中IP-10の濃度（pg/ml）のlog値
Ｌ：血清中sTNFRIIの濃度（pg/ml）のlog値
Ｇ：血清中sTNFRII濃度（pg/ml）のlog値
Ｍ：血清中IL-6の濃度（pg/ml）のlog値
Ｎ：血清中VEGFの濃度（pg/ml）のlog値
【００４７】
［トシリズマブ療法ナイーブ患者の１６週間の治療後のDAS-28値を予測判定する場合］
判定マーカー：ｓｇｐ１３０、ＩＬ−８、Ｅｏｔａｘｉｎ、ＩＰ−１０、ｓＴＮＦＲＩ、ｓＴＮＦＲＩＩ、及びＩＬ−６
回帰式（４）：
目的関数（１６週間の治療後のDAS-28値）＝4.731＋（-5.433×Ｈ）＋（2.551×Ｉ）（-0.937×Ｊ）＋（-1.116×Ｋ）＋（-2.010×Ｌ）＋（1.630×Ｇ）＋（0.577×Ｍ）
Ｈ：血清中sgp130の濃度（μg/ml）
Ｉ：血清中IL-8の濃度（pg/ml）のlog値
Ｊ：血清中Eotaxinの濃度（pg/ml）のlog値
Ｋ：血清中IP-10の濃度（pg/ml）のlog値
Ｌ：血清中sTNFRIIの濃度（pg/ml）のlog値
Ｇ：血清中sTNFRII濃度（pg/ml）のlog値
Ｍ：血清中IL-6の濃度（pg/ml）のlog値
【００４８】
［トシリズマブ療法スイッチ患者の１６週間の治療後のDAS-28値を予測判定する場合］
判定マーカー：ｓｇｐ１３０、ＩＰ−１０及びＧＭ−ＣＳＦ
回帰式（５）：
目的関数（１６週間の治療後のDAS-28値）＝2.837＋（-6.037×Ｈ）＋（0.714×Ｋ）＋（-0.622×Ｏ）
Ｈ：血清中sgp130の濃度（μg/ml）
Ｋ：血清中IP-10の濃度（pg/ml）のlog値
Ｏ：血清中GM-CSFの濃度（pg/ml）のlog値
【００４９】
［エタネルセプト療法ナイーブ患者の１６週間の治療後のDAS-28値を予測判定する場合］
判定マーカー：ＩＬ−６及びＩＬ−１３、説明変数としてエタネルセプト投与前のDAS-28値も使用
回帰式（６）：
目的関数（１６週間の治療後のDAS-28値）＝0.081＋（0.522×ａ）＋（-0.969×Ｍ）＋（1.409×Ｐ）
ａ：エタネルセプト投与前のDAS-28値
Ｍ：血清中IL-6の濃度（pg/ml）のlog値
Ｐ：血清中IL-13の濃度（pg/ml）のlog値
【００５０】
［エタネルセプト療法ナイーブ患者の１６週間の治療後のDAS-28値を予測判定する場合］
判定マーカー：ＩＬ-９、ＴＮＦ−α及びＶＥＧＦ
回帰式（７）：
目的関数（１６週間の治療後のDAS-28値）＝0.703＋（0.646×Ｓ）＋（-0.551×Ｃ）＋（0.858×Ｎ）
Ｓ：血清中IL-9の濃度（pg/ml）のlog値
Ｃ：血清中TNF-αの濃度（pg/ml）のlog値
Ｎ：血清中VEGFの濃度（pg/ml）のlog値
【００５１】
前記回帰式（７）では、エタネルセプト投与前のDAS-28値を説明変数として使用しないため、医師による主観を排除して、１６週間の治療後のDAS-28値を予測できるので、前記回帰式（６）よりも好ましいといえる。
【００５２】
前記回帰式（３）〜（７）では、生物学的製剤による１６週間の治療後のDAS-28値を予測判定するために使用される回帰式の例を示しているが、勿論、CDAI値又はSDAI値を用いて同様の手法にて線形多重回帰分析を行うことにより、生物学的製剤による１６週間の治療後のCDAI値又はSDAI値自体を予測判定することもできる。また、前述するように、生物学的製剤による治療１６週後であれば、治療効果が安定して現れるため、前記回帰式（３）〜（７）では１６週間の治療後の疾患活動性指標の値を予測判定するための回帰式を示しているが、勿論、生物学的製剤による治療１６週以前又は以降の疾患活動性指標の値についても、同様の手法にて線形多重回帰分析を行うことによって予測判定することが可能である。
【００５３】
更に、後述する実施例では、生物学的製剤による１６週間の治療後の寛解の可能性（寛解又は非寛解のいずれであるか）を予測判定する回帰式として、リウマチ患者の過去の投薬履歴及び生物学的製剤の種類に分けて、以下の式（８）〜（１６）が見出されている。判定対象となる関節リウマチ患者の過去の投薬履歴と生物学的製剤の種類に応じて、下記回帰式（８）〜（１６）のいずれかに当てはめて１６週間の治療後の寛解の確率（ｐ）を求めることによって、１６週間の治療後に寛解に至るか否かを予測判定できる。下記回帰式（８）〜（１６）から推測される寛解の確率とは、DAS-28値が２．３以下の状態になる確率を指し、回帰式（８）〜（１６）で算出されるｐの値が１に近い程、１６週間の治療後に寛解になる可能性が高く、例えば、便宜上、当該ｐの値が０．５以上であれば寛解、０．５未満であれば非寛解と予測判定できる。ここで、DAS-28値が２．３の場合を寛解と非寛解の境界としているのは、ＩＬ−６を阻害することによって炎症とは無関係にCRP値が低下しやすくDAS-28値が低下することがあるので、寛解と予測判定する精度を高めるためであり、一般的な寛解と非寛解の境界とされているDAS-28値（２．６）よりも低い値に設定している。
【００５４】
［トシリズマブ療法ナイーブ患者の寛解の可能性を予測判定する場合］
判定マーカー：ｓｇｐ１３０、ＩＰ−１０、ｓＴＮＦＲＩＩ、及びＩＬ−６
回帰式（８）：
ｐ／（1-ｐ）＝ｅｘｐ｛（-5.095）＋（-36.648×Ｈ）＋（-4.004×Ｋ）＋（5.632×Ｇ）＋（1.658×Ｍ）｝
ｐ：１６週間の治療後の寛解の確率
Ｈ：血清中sgp130の濃度（μg/ml）
Ｋ：血清中IP-10の濃度（pg/ml）のlog値
Ｇ：血清中sTNFRII濃度（pg/ml）のlog値
Ｍ：血清中IL-6の濃度（pg/ml）のlog値
【００５５】
［トシリズマブ療法ナイーブ患者の寛解の可能性を予測判定する場合］
判定マーカー：ｓｇｐ１３０、ＩＰ−１０、ｓＴＮＦＲＩＩ、及びＩＬ−７
回帰式（９）：
ｐ／（1-ｐ）＝ｅｘｐ｛（-3.467）＋（-42.849×Ｈ）＋（-4.430×Ｋ）＋（5.736×Ｇ）＋（2.705×Ｂ）｝
ｐ：１６週間の治療後の寛解の確率
Ｈ：血清中sgp130の濃度（μg/ml）
Ｋ：血清中IP-10の濃度（pg/ml）のlog値
Ｇ：血清中sTNFRII濃度（pg/ml）のlog値
Ｂ：血清中IL-7の濃度（pg/ml）のlog値
【００５６】
［トシリズマブ療法ナイーブ患者の寛解の可能性を予測判定する場合］
判定マーカー：ｓｇｐ１３０、ＩＰ−１０、ｓＴＮＦＲＩＩ、及びＭＣＰ-1
回帰式（１０）：
ｐ／（1-ｐ）＝ｅｘｐ｛（-2.834）＋（-38.721×Ｈ）＋（-4.664×Ｋ）＋（5.369×Ｇ）＋（2.502×Ｂ）｝
ｐ：１６週間の治療後の寛解の確率
Ｈ：血清中sgp130の濃度（μg/ml）
Ｋ：血清中IP-10の濃度（pg/ml）のlog値
Ｇ：血清中sTNFRII濃度（pg/ml）のlog値
Ｐ：血清中MCP-1の濃度（pg/ml）のlog値
【００５７】
［トシリズマブ療法ナイーブ患者の寛解の可能性を予測判定する場合］
判定マーカー：ｓｇｐ１３０、ＩＰ−１０、ｓＴＮＦＲＩＩ、及びＩＬ−１β
回帰式（１１）：
ｐ／（1-ｐ）＝ｅｘｐ｛（-1.269）＋（-39.538×Ｈ）＋（-3.807×Ｋ）＋（5.086×Ｇ）＋（1.647×Ａ）｝
ｐ：１６週間の治療後の寛解の確率
Ｈ：血清中sgp130の濃度（μg/ml）
Ｋ：血清中IP-10の濃度（pg/ml）のlog値
Ｇ：血清中sTNFRII濃度（pg/ml）のlog値
Ａ：血清中IL-1βの濃度（pg/ml）のlog値
【００５８】
［トシリズマブ療法スイッチ患者の寛解の可能性を予測判定する場合］
判定マーカー：ｓｇｐ１３０、ＩＰ−１０、ｓＴＮＦＲＩＩ、及びＩＬ−６
回帰式（１２）：
ｐ／（1-ｐ）＝ｅｘｐ｛（-10.935）＋（-29.051×Ｈ）＋（4.466×Ｋ）＋（2.067×Ｇ）＋（-2.757×Ｍ）｝
ｐ：１６週間の治療後の寛解の確率
Ｈ：血清中sgp130の濃度（μg/ml）
Ｋ：血清中IP-10の濃度（pg/ml）のlog値
Ｇ：血清中sTNFRII濃度（pg/ml）のlog値
Ｍ：血清中IL-6の濃度（pg/ml）のlog値
【００５９】
［トシリズマブ療法スイッチ患者の寛解の可能性を予測判定する場合］
判定マーカー：ｓｇｐ１３０、ＩＰ−１０、ｓＴＮＦＲＩＩ、及びＩＬ−１β
回帰式（１３）：
ｐ／（1-ｐ）＝ｅｘｐ｛（-9.671）＋（-27.150×Ｈ）＋（3.205×Ｋ）＋（1.914×Ｇ）＋（-2.540×Ａ）｝
ｐ：１６週間の治療後の寛解の確率
Ｈ：血清中sgp130の濃度（μg/ml）
Ｋ：血清中IP-10の濃度（pg/ml）のlog値
Ｇ：血清中sTNFRII濃度（pg/ml）のlog値
Ａ：血清中IL-1βの濃度（pg/ml）のlog値
【００６０】
［エタネルセプト療法ナイーブ患者の寛解の可能性を予測判定する場合］
判定マーカー：VEGF及びPDGF-bb、説明変数としてエタネルセプト投与前のDAS-28値も使用
回帰式（１４）：
ｐ／（1-ｐ）＝ｅｘｐ｛（-19.058）＋（1.390×ａ）＋（-2.763×Ｅ）＋（4.962×Ｑ）
ｐ：１６週間の治療後の寛解の確率
ａ：エタネルセプト投与前のDAS-28値
Ｅ：血清中VEGFの濃度（pg/ml）のlog値
Ｑ：血清中PDGF-bbの濃度（pg/ml）のlog値
【００６１】
［エタネルセプト療法ナイーブ患者の寛解の可能性を予測判定する場合］
判定マーカー：MIP-1α及びPDGF-bb、説明変数としてエタネルセプト投与前のDAS-28値も使用
回帰式（１５）：
ｐ／（1-ｐ）＝ｅｘｐ｛（-18.491）＋（1.107×ａ）＋（-1.808×Ｒ）＋（3.930×Ｑ）｝
ｐ：１６週間の治療後の寛解の確率
ａ：エタネルセプト投与前のDAS-28値
Ｒ：血清中MIP-1αの濃度（pg/ml）のlog値
Ｑ：血清中PDGF-bbの濃度（pg/ml）のlog値
【００６２】
［エタネルセプト療法ナイーブ患者の寛解の可能性を予測判定する場合］
判定マーカー：ＩＬ−９及びＴＮＦ−α
回帰式（１６）：
ｐ／（1-ｐ）＝ｅｘｐ｛（-1.004）＋（1.711×Ｓ）＋（-1.031×Ｃ）｝
ｐ：１６週間の治療後の寛解の確率
Ｓ：血清中IL-9の濃度（pg/ml）のlog値
Ｃ：血清中TNF-αの濃度（pg/ml）のlog値
【００６３】
前記回帰式（１６）では、エタネルセプト投与前のDAS-28値を説明変数として使用しないため、医師による主観を排除して、寛解の可能性を予測できるので、前記回帰式（１４）及び（１５）よりも好ましいといえる。
【００６４】
前記回帰式（６）〜（１６）では、１６週間の治療後のDAS-28値が２．３以下になる場合を寛解、２．３超である場合を非寛解として、１６週間の治療後の寛解の可能性を予測判定する回帰式の例を示しているが、勿論、CDAI値又はSDAI値を用いて同様の手法にてロジスチック多重回帰分析を行うことにより、生物学的製剤による１６週間の治療後の寛解の可能性を予測判定することもできる。また、前述するように、生物学的製剤による治療１６週後であれば、治療効果が安定して現れるため、前記回帰式（６）〜（１６）では１６週間の治療後の寛解の可能性を予測判定するための回帰式を示しているが、勿論、生物学的製剤による治療１６週以前又は以降の寛解の可能性についても、同様の手法にてロジスチック多重回帰分析を行うことによって予測判定することが可能である。
【００６５】
投与すべき生物学的製剤の選定
本発明の判定方法は、生物学的製剤の投与前にその治療有効性を予測できるので、治療開始前に投与すべき最適な生物学的製剤の選択に利用することもできる。
【００６６】
例えば、ナイーブ患者の治療後の症状の改善度について、トシリズマブの投与の場合とエタネルセプトの投与の場合のそれぞれを前記方法で予測し、改善度が高い方の生物学的製剤を選択することにより、当該患者に最適な生物学的製剤を投与することが可能になる。具体的には、前記回帰式（１）を用いて予測したトシリズマブ療法による治療後の症状の改善度と、前記回帰式（２）を用いて予測したエタネルセプト療法による治療後の症状の改善度とを対比し、当該改善度が大きい方を最適な生物学的製剤として選択することができる。
【００６７】
また、例えば、ナイーブ患者の１６週間の治療後のDAS-28値について、トシリズマブの投与の場合とエタネルセプトの投与の場合のそれぞれを前記方法で予測し、１６週間の治療後のDAS-28値が低い方の生物学的製剤を選択することにより、当該患者に最適な生物学的製剤を投与することが可能になる。具体的には、前記回帰式（３）〜（５）のいずれかを用いて予測したトシリズマブ療法による１６週間の治療後のDAS-28値と、前記回帰式（６）又は（７）を用いて予測したエタネルセプト療法による１６週間の治療後のDAS-28値とを対比し、当該DAS-28値が小さい方を最適な生物学的製剤として選択することができる。
【００６８】
また、例えば、ナイーブ患者の寛解の可能性について、トシリズマブの投与の場合とエタネルセプトの投与の場合のそれぞれを前記方法で予測し、寛解の可能性が高い方の生物学的製剤を選択することにより、当該患者に最適な生物学的製剤を投与することが可能になる。具体的には、前記回帰式（８）〜（１１）のいずれかを用いて予測したトシリズマブ療法による寛解の可能性と、前記回帰式（１４）〜（１６）のいずれかを用いて予測した寛解の可能性とを対比し、当該寛解の可能性が高い方を最適な生物学的製剤として選択することができる。
【００６９】
２．診断薬
本発明は、更に前記検出方法を実施するための診断薬を提供する。具体的には、本発明の診断薬は、関節リウマチ患者への炎症性サイトカインを標的にした生物学的製剤による治療の有効性を判定するための診断薬であって、ｓｇｐ１３０、ＩＰ−１０、ｓＴＮＦＲＩ、ｓＴＮＦＲＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、Ｅｏｔａｘｉｎ、ＶＥＧＦ、ＭＣＰ−１、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ-γ、ＦＧＦｂａｓｉｃ、ＰＤＧＦ-ｂｂ、ｓＩＬ−６Ｒ、及びＭＩＰ−１αよりなる群から選択される少なくとも１種の判定マーカーを検出可能な試薬を含むことを特徴とする。
【００７０】
前記判定マーカーは、ＥＬＩＳＡ等の抗原抗体反応を利用した測定系によって測定でき、前記判定マーカーを検出可能な試薬としては、具体的には、前記判定マーカーに特異的に結合可能な抗体、及びそのフラグメントが挙げられる。また、前記判定マーカーに特異的に結合可能な抗体は、適切な支持体の上に結合させて抗体アレイとして提供してもよい。
【００７１】
更に、本発明の診断薬は、抗原抗体反応により前記判定マーカーを検出するために必要となる試薬（二次抗体、発色物質等）が含まれていてもよい。
【実施例】
【００７２】
以下に、実施例を挙げて、本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。
【００７３】
１．患者及び実験方法
（患者）
以下、過去に抗サイトカイン療法（インフリキシマブ、エタネルセプト、アダリムマム、トシリズマブ等の投与）を受けていないリウマチ患者をナイーブ患者と表記し、過去に抗サイトカイン療法を受けているリウマチ患者をスイッチ患者と表記する。
【００７４】
２００８年３月から２０１３年６月までに医療法人ヤマナ会東東広島記念病院にて、メソトレキセート療法が無効であった１５５名の関節リウマチ患者を登録した。１５５名のうち、９８名はトシリズマブの治療を受け、残り５７名はエタネルセプトの治療を受けた。トシリズマブの治療を受けた９８名のうち、５８名が以前に抗サイトカイン療法を受けていないナイーブ患者で、４０名が以前に抗サイトカイン療法を１〜３回受けたスイッチ患者である。エタネルセプト治療を受けた５７名のうち、４９名は以前に抗サイトカイン療法を受けていないナイーブ患者で、残り８名は以前に抗サイトカイン療法を受けたスイッチ患者である。これらの全ての患者からは、血液サンプルの供給を受ける前に、書面にてインフォームドコンセントを得た。また、本研究前に医療法人ヤマナ会東東広島記念病院の倫理委員会の許可を得た上で、本試験はその許可の下に行った。
【００７５】
表１に、クリニカルベースラインの個体群統計、臨床所見を示す。また、図１に、トシリズマブ治療患者及びエタネルセプト治療患者のトライアルプロファイルを示し、図２−１〜図２−４に、治療前のサイトカイン／ケモカイン／可溶性受容体の血清中濃度を示す。トシリズマブ治療患者中で、９名のナイーブ患者（副作用や他の疾患が生じた患者８名と、１６週間全体のデータが取得できなかった患者１名）については削除した。また、トシリズマブ治療患者中で、副作用が生じた１名のスイッチ患者（１６週間全体のデータが取得できなかった患者）も削除した。DAS-28値、CRP、腫脹関節数、圧痛関節数、Stage、Classは、群間で差は殆どなかった（表１）。また、羅患期間は、エタネルセプト治療患者がトシリズマブ治療患者に比べて短かった（表１）。
【００７６】
サイトカインのベースライン濃度を作成するために、Ｃ型肝炎とガンの罹患歴がない健常者（５６名；男性２０名、女性３６名）から血清を取得した。健常者は、財団法人パストゥール研究所又は医療法人ヤマナ会東広島記念病院による健康チェックを受け、健常者からは書面にてインフォームドコンセントを得た。このベースライン濃度は、サイトカイン／ケモカイン／可溶性受容体の分布パターンを求めるために使用した。
【００７７】
（実験手法）
治療を行う前に、関節リウマチ患者の血清におけるサイトカイン、ケモカイン及び可溶性受容体の濃度を測定した。
【００７８】
図１に、８ｍｇ／ｋｇのトシリズマブ又は５０ｍｇ／ｋｇのエタネルセプトを４週間に１回投与したナイーブ患者及びスイッチ患者の臨床結果を示す。治療１６週間後（４回の投与後）に、DAS-28-CRP値と、寛解か非寛解であるかに基づいて治療効果を判定した。更に、非寛解については、患者のDAS-28-CRP値に基づいて、低、中、高に分類した。DAS-28-ESR値は、関節リウマチ患者の症状を判定するために広く使用されているが、DAS-28-CRP値とDAS-28-ESR値は、殆ど互換性があり、同じ結果を導くことが報告されている（AnnRheum Dis.2007, March 407-409 Comparison of Disease ActivityScore(DAS)28-erythrocyte Sedimentation rate and DAS-C-reactive proteinthreshold votes. Inoue E, Yamanaka H, et al.）。
【００７９】
本試験では、DAS-28-CRP値を関節リウマチ患者の症状の判定に使用した。寛解はDAS-28-CRP値が＜２．３、非寛解はDAS-28-CRP値が≧２．３として分類した。非寛解した患者は、更に、Inoue等によって開発されたDAS-28-CRP分類システムを使用してその症状の重症度に応じて、低（DAS-28-CRP値＝２．３〜２．６）、中（DAS-28-CRP値＝２．７〜４．１）、高（DAS-28-CRP値＞４．１）に分類した。症状の判定を一定にするために、医療法人ヤマナ会東広島記念病院の同じ医師が全ての患者の最終の症状の判定を行った。また、図３に、図１に示す各患者の臨床結果の詳細、即ち、トシリズマブ療法を受けたナイーブ患者、トシリズマブ療法を受けたスイッチ患者、及びエタネルセプト療法を受けたナイーブ患者について、治療前と治療１６週後のDAS-28-CRP値を判定した結果を示す。以下、DAS-28-CRP値を単にDAS-28値と表記することもある。
【００８０】
（サイトカイン／ケモカイン／可溶性受容体の分析）
全てのサイトカイン測定は、マルチプレックスサイトカインアレイシステム（Bio-Plex 200、Bio-Rad Laboratories社製）を使用し、その製品プロトコールに従って実施した。全ての患者と健常者の血清は、１６００ｇ、１０分間の遠心によって回収した。全ての血清サンプルは、分析まで−８０℃で保存した。Bio-PlexHuman Cytokine 27-Plex Panelには、２７種のサイトカイン(IL-1β, IL-1RA, IL-2, IL-4, IL-5,IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12 (p70), IL-13, IL-15, IL-17, basic FGF,eotaxin, G-CSF, GM-CSF, IFN-γ, IP-10, ΜCP-1, MIP-1α, MIP-1β, PDGF-bb, RANTES,TNF-α, VEGF)が分析できるようになっている。また、これら以外に、sIL-6R, sgp130, sTNF-RI及びsTNF-RIIについても分析した(MilliplexRMAP, Human Soluble Cytokine Receptor anel: Millipore Co. MA)。本試験では、５６名の健常者についてこれらのサイトカイン、ケモカイン及び可溶性受容体の濃度を同時に測定し、それらの分布パターンを求めた。データの収集及び分析は、Bio-PlexManager software version 5.0を用いて行った。
【００８１】
（統計分析）
健常者におけるサイトカイン／ケモカイン値の分布を分析した。なお、ｓｇｐ１３０以外のサイトカイン、ケモカイン及び可溶性受容体は濃度（ｐｇ/ｍｌ）の値のｌｏｇ値を使用して分析し、ｓｇｐ１３０は濃度（μｇ/ｍｌ）の値をそのまま使用した。
【００８２】
先ず、線形単回帰分析及び線形多重回帰分析を行い、サイトカイン/ケモカイン/可溶性受容体濃度又は臨床検査値と、０週目の患者のDAS-28値から１６週後のDAS-28値を引いた値との間の関連性について調べた。次に、臨床検査値を導入した回帰計算値から１６週後のDAS-28値を推測した。更に、ロジスチック単回帰分析及びロジスチック多重回帰分析を行い、血清中サイトカイン濃度と寛解又は非寛解との関係について解析した。得られるパラメータのｐ値が＜０．０５であることは、有意差があることを示している。統計分析は、全てJMP9.0ソフトウェアを用いて行った。
【００８３】
２．結果
（臨床評価）
表１及び２に、患者のクリニカルベースラインの個体群統計、臨床所見、サイトカイン／ケモカイン／可溶性受容体の特徴を示し、図２−１〜図２−４に、治療前のサイトカイン／ケモカイン／可溶性受容体の血清中濃度について、健常者と関節リウマチ患者のクリニカルベースラインの個体群統計を示す。表１中、StageはSteinbrocker(1949)の分類（I〜IV；SteinbrockerO et al:Therapeutic criteria in rheumatoid arthritis. JAMA 140:659,1949）、ClassはHochberg(1992)の(I〜IV；HochbergMC et al, The American College of Rheumatology 1991 revised criteria for theClassification of global functional status in rheumatoid arthritis. Arthritisand Rheumatism, 35:498-502, 1992)に基づいて、関節リウマチの機能分類基準判定した結果である。これらの結果は、３つのリウマチ患者群の間で臨床的な有意差がなく、殆どのリウマチ患者において、サイトカイン／ケモカイン／可溶性受容体の血清中濃度が、健常者に比べて有意に高いことを示している。
【００８４】
【表１】
2019219422.tif 000002
【００８５】
４９名のナイーブ患者が１６週のトシリズマブ療法を受け、その５６％の患者（２７名）が寛解であり、残りの２１名は非寛解であった（図１）。更に、３９名のスイッチ患者が１６週のトシリズマブ療法を受け、その内、９名が寛解であり、残りの３０名は非寛解であった。
【００８６】
また、４９名のナイーブ患者が１６週のエタネルセプト療法を受け、その内、１８名が寛解であり、残りの３１名は非寛解であった（図１）。本試験では、スイッチ患者の数が非常に少なかったので、エタネルセプト療法に関しては、ナイーブ患者のみを分析に使用した。
【００８７】
図４に、トシリズマブ療法を受けたナイーブ患者における、治療前のDAS-28値（PreDAS-28 score）と、治療前のDAS-28値から１６週後のDAS-28値を差し引いた値（PreDAS-28score−16W DAS-28 score）の関係を示す。図４から、殆どのナイーブ患者において、トシリズマブ療法後にDAS-28値の改善が認められた。
【００８８】
（治療前のリウマチ患者におけるサイトカイン／ケモカイン／可溶性受容体の血清濃度を用いた、治療１６週間後のDAS-28値に基づくバイオマーカーの検索）
今回の結果から、ナイーブ患者の約５５％と、スイッチ患者の約２３％が、トシリズマブ療法後に寛解になると期待される。ナイーブ患者の約４５％と、スイッチ患者の約７７％は、最終の症状が同一ではないが、ある程度の症状の改善が認められる。また、ナイーブ患者の約３６．７％は、エタネルセプト療法後に寛解になると期待される。そして、残りの約６０％は、エタネルセプト療法後にある程度の症状の改善が認められる。
【００８９】
従来、Pers Y.M.ら（Rheumatology (2013) doi: 10.1093/rheumatology/ket301 Firstpublished online: September 19, 2013）は、日常診察からトシリズマブ治療で１２〜２４週後のDAS-28値を評価したところ、４０％の患者で寛解となり、主な予測マーカーは若年者、高ＣＲＰ値、そして心血管障害のない患者であることを報告している。また、KoikeT（J. Rheumatology 2013年11月）らは、トシリズマブ治療２８週後にDAS28-ESRで４７．６％の寛解を報告した。一方、エタネルセプトについては、MarkensonJA.ら（J.Rheumatology 2011、7月、p.1273-81）がRADIUS試験の中で、Curitis JR.ら（Ann RheumDis.2012.71.206-212）がTEMPO試験の中で、５２週後にDAS-28値≦3.2の低疾患活動と寛解が得られた患者は５３％でメソトレキセートを加えると６３％となったと報告している。また、KoikeT.ら（J.Rheumatology 2013年10月、p.1658-1668）は、２４週後のDAS-28値で評価すると、エタネルセプトとメソトレキセートを加えた治療が、単独又はメソトレキセート以外の抗リウマチ薬（DMARD）を加えた治療より有効であったことを示している。更に、CannonGW.ら（Clin Exp Rheumatol. 2013年11月）は、TEMPO及びRADIUS試験から３年間の観察で３５％が寛解になったと報告している。更に、CannonGW.らは低疾患活動の方が寛解になりやすいことを示している。但し、これらの報告では、生物学的製剤による治療効果を予測判定するためのマーカーは解明されていない。
【００９０】
そこで、サイトカイン／ケモカインの血清中濃度を使用して、治療１６週間後のDAS-28値に基づく関節リウマチの改善度の推測が可能になるかを検証した。
【００９１】
図２−１〜図２−４に、健常者と３つの群（トシリズマブ療法を受けたナイーブ患者、トシリズマブ療法を受けたスイッチ患者、エタネルセプト療法を受けたナイーブ患者）について、治療前のサイトカイン／ケモカイン／可溶性受容体のベースラインの個体群統計の比較を示す。図２−１〜図２−４から分かるように、ｓｐｇ１３０、ｓＩＬ−６Ｒ、及びｓＴＮＦＲＩ以外では、関節リウマチ患者における血清中の濃度が健常者に比べて有意に高かった。また、エタネルセプト療法を受けたナイーブ患者では、トシリズマブ療法を受けたナイーブ患者に比べて、サイトカイン／ケモカインの血清中濃度が低かった。また、この結果から、トシリズマブ療法を受けたナイーブ患者は、エタネルセプト療法を受けたナイーブ患者に比べて、治療前のＣＲＰ値が高いことも明らかとなった。
【００９２】
DAS-28値の改善度に関与しているサイトカイン／ケモカインを解明するために、線形単回帰分析を行った。DAS-28値の改善度（治療前のDAS-28値−治療１６週後のDAS-28値）を目的変数として使用し、サイトカイン／ケモカイン／可溶性受容体の血清中濃度については、そのまま又はｌｏｇ値に換算して独立変数として使用した。結果を表２に示す。表２に示すように、ｐ＜０．０５を示すｌｏｇ  ＩＬ−７，ｌｏｇ  ＩＬ−８，ｌｏｇ  ＩＬ−１２，ｌｏｇ  ＩＬ−１３，ｌｏｇ  ＩＰ−１０及びｌｏｇ  ＶＥＧＦは、トシリズマブ療法を受けたナイーブ患者におけるDAS-28値の改善度と有意に一致していた。また、トシリズマブ療法を受けたスイッチ患者では、ｌｏｇ  ＩＬ−１β，ｌｏｇ  ＩＬ−５，ｌｏｇ  ＩＬ−６，ｌｏｇ  ＩＬ−７，ｌｏｇ  ＩＬ−１０，ｌｏｇ  ＩＬ−１２，ｌｏｇ  ＩＬ−１３，ｌｏｇ  ＩＬ−１５，ｌｏｇ  ＦＧＦ，ｌｏｇ  ＧＭ−ＣＳＦ，ｌｏｇ  ＩＦＮ−γ，ｌｏｇ  ＴＮＦ−α及びｌｏｇ  ＶＥＧＦがDAS-28値の改善度と有意に一致していた。一方、エタネルセプト療法を受けたナイーブ患者では、ｌｏｇ  ＩＬ−６及びｌｏｇ  ＩＰ−１０がDAS-28値の改善度と有意に一致していた。
【００９３】
【表２】
2019219422.tif 000003
【００９４】
DAS-28値の改善度とサイトカイン／ケモカイン／可溶性受容体濃度との相関を求めるために、線形多重回帰分析を行った。その結果、段階的な多重回帰分析によって、トシリズマブ療法を受けたナイーブ患者において、ｌｏｇ  ＩＬ−１β，ｌｏｇＩＬ−７，ｌｏｇＴＮＦ−α及びｌｏｇ  ｓＩＬ−６Ｒの組み合わせが、DAS-28値の改善度と有意な相関性があることが見出された（表３）。
【００９５】
一方、エタネルセプト療法を受けたナイーブ患者では、ｌｏｇ  ＩＬ−２，ｌｏｇ  ＩＬ−１５，ｌｏｇ  ＩＬ−６Ｒ，及びｌｏｇ  ＴＮＦＲＩの組み合わせが、DAS-28値の改善度と有意な相関性があることが見出された（表４）。
【００９６】
【表３】
2019219422.tif 000004
【００９７】
【表４】
2019219422.tif 000005
【００９８】
治療１６週後における最終評価のDAS-28値（16wDAS28）に関与しているサイトカイン／ケモカイン／可溶性受容体を解明するために、線形単回帰分析を行った。治療１６週後のDAS-28値を目的変数として使用し、サイトカイン／ケモカイン／可溶性受容体の血中濃度については、そのまま又はｌｏｇ値に換算して独立変数として使用した。表５に示すように、ｐ＜０．０５を示すｓｇｐ１３０では、トシリズマブ療法を受けたナイーブ患者における治療１６週後のDAS-28値と有意に一致していた。また、トシリズマブ療法を受けたスイッチ患者では、ｌｏｇ  ＩＬ−１β，ｌｏｇ  ＩＬ−２，ｌｏｇ  ＩＬ−５，ｌｏｇ  ＩＬ−１５，ｌｏｇ  ＧＭ−ＣＳＦ，ｌｏｇ  ＩＦＮ−γ，ｌｏｇ  ＴＮＦ−α及びｓｐｇ１３０が治療１６週後のDAS-28値と有意に一致していた。一方、エタネルセプト療法を受けたナイーブ患者では、ｌｏｇ  ＩＬ−９が治療１６週後のDAS-28値と有意に一致していた。
【００９９】
【表５】
2019219422.tif 000006
【０１００】
治療１６週後のDAS-28値とサイトカイン／ケモカイン／可溶性受容体濃度との相関を求めるために、線形多重回帰分析を行った。その結果、表６に示すように、段階的な多重回帰分析によって、トシリズマブ療法を受けたナイーブ患者において、ｓｇｐ１３０，ｌｏｇ  ＩＬ−８，ｌｏｇ  Ｅｏｔａｘｉｎ，ｌｏｇ  ＩＰ−１０，ｌｏｇ  ＴＮＦＲＩ，ｌｏｇ  ＴＮＦＲＩＩ，ｌｏｇ  ＩＬ−６，及びｌｏｇ  ＩＬ−ＶＥＧＦの組み合わせが、治療１６週後のDAS-28値と有意な相関性があることが見出された。また、ｌｏｇ  ＩＬ−ＶＥＧＦを使用しなくても、極めて有意な相関性があることが見出された（表７）。
【０１０１】
また、トシリズマブ療法を受けたスイッチ患者においては、ｓｐｇ１３０，ｌｏｇ  ＩＰ−１０，及びｌｏｇ  ＧＭ−ＣＳＦの組み合わせが、治療１６週後のDAS-28値と有意な相関性があることが見出された（表８）。
【０１０２】
一方、エタネルセプト療法を受けたナイーブ患者については、治療前のDAS-28値、ｌｏｇ  ＩＬ−６、及びｌｏｇ  ＩＬ−１３の組み合わせでも、DAS-28値の改善度と相関が認められた（表９）。また、エタネルセプト療法を受けたナイーブ患者において、治療前のDAS-28値を使用しなくても、ｌｏｇ  ＩＬ−９，ｌｏｇ  ＴＮＦ−α，及びｌｏｇ  ＶＥＧＦの組み合わせが、治療１６週後のDAS-28値と有意な相関性があることも見出された（表１０）。
【０１０３】
【表６】
2019219422.tif 000007
【０１０４】
【表７】
2019219422.tif 000008
【０１０５】
【表８】
2019219422.tif 000009
【０１０６】
【表９】
2019219422.tif 000010
【０１０７】
【表１０】
2019219422.tif 000011
【０１０８】
また、表７に示す線形多重回帰分析に基づいて求められた前記回帰式（４）を使用して、トシリズマブ療法を受けたナイーブ患者における治療１６週後のDAS-28値の予測値を求めた。図５に、回帰式（４）によって算出された治療１６週後のDAS-28値の予測値と、治療１６週後のDAS-28値の実際値との対比を行った結果を示す。この結果から、表７に示す線形多重回帰分析の結果から推測される治療１６週後のDAS-28値は、治療１６週後のDAS-28値の実際値とよく一致していることが確認された。
【０１０９】
また、表８に示す線形多重回帰分析に基づいて求められた前記回帰式（５）を使用して、トシリズマブ療法を受けたスイッチ患者における治療１６週後のDAS-28値の予測値を求めた。図６に、回帰式（５）によって算出された治療１６週後のDAS-28値の予測値と、治療１６週後のDAS-28値の実際値との対比を行った結果を示す。この結果から、表８に示す線形多重回帰分析の結果から推測される治療１６週後のDAS-28値は、治療１６週後のDAS-28値の実際値とよく一致していることが確認された。
【０１１０】
表１０に示す線形多重回帰分析に基づいて求められた前記回帰式（７）を使用して、エタネルセプト療法を受けたナイーブ患者における治療１６週後のDAS-28値の予測値を求めた。図７に、回帰式（７）によって算出された治療１６週後のDAS-28値の予測値と、治療１６週後のDAS-28値の実際値との対比を行った結果を示す。この結果から、表１０に示す線形多重回帰分析の結果から、治療１６週後のDAS-28値をある程度推測し得ることが確認された。
【０１１１】
また、エタネルセプト療法を受けたナイーブ患者において、仮にエタネルセプト療法を受けずにトシリズマブ療法を受けたと仮定して、治療１６週後のDAS-28の予測値を前記回帰式（４）を使用して求めた。図８に、エタネルセプト療法の治療１６週後のDAS-28の実際値と、トシリズマブ療法を受けたと仮定して推測される治療１６週後のDAS-28値の予測値を示す。この結果から、エタネルセプト療法を受けたナイーブ患者については、トシリズマブ療法を受けた方がより高い治療効果が予測される患者（図８のａ）、エタネルセプト療法とトシリズマブ療法に差が殆ど認められないと予測される患者（図８のｂ）、及びエタネルセプト療法を受けた方がより高い治療効果が認められると予測される患者（図８のｃ）に分類された。図８のａに示す患者については、実際に受けたエタネルセプト療法よりも、トシリズマブ療法の方が有効であると推測されることから、本発明によって、治療前にトシリズマブ療法及びエタネルセプト療法によるDAS-28値を推測しておくことにより、より有効な治療薬の選定が可能になることも明らかとなった。
【０１１２】
（治療前のリウマチ患者におけるサイトカイン／ケモカイン／可溶性受容体の血清濃度を用いた、寛解の可能性を予測判定するためのバイオマーカーの検索）
関節リウマチの治療において、患者の症状に一部でも改善が認められることは望ましいが、完全寛解に至ることが最も望ましい。そこで、更に、最終のDAS-28値を推測する諸因子に加えて、患者が完全寛解に至るか否かを予測するサイトカイン／ケモカイン／可溶性受容体の探索を行った。
【０１１３】
完全寛解と非寛解の患者群について、ロジスチック単回帰分析によって、サイトカイン／ケモカイン／可溶性受容体濃度のデータを分析した。また、トシリズマブ療法を受けたナイーブ患者及びスイッチ患者、並びに、エタネルセプト療法を受けたナイーブ患者について、ロジスチック単回帰分析によって、サイトカイン／ケモカイン／可溶性受容体濃度のデータを分析した結果を表１０に示す。ロジスチック単回帰分析によって、腫脹関節数（swollenjoint count）及び圧痛関節数（tender joint count）と、DAS-28値は、完全寛解と非寛解の群間で有意に異なっていることが明らかとなった。更に、ｓｐｇ１３０は、トシリズマブ療法を受けたナイーブ患者及びスイッチ患者において、完全寛解と非寛解の群間で有意に異なっていた（表１１）。一方、エタネルセプト療法を受けたナイーブ患者では、寛解と非寛解の群間でｓｐｇ１３０の有意な差異は認められなかった（表１１）。また、寛解と非寛解の患者について、血清中のｓｐｇ１３０濃度と治療前のDAS-28値の関係を分析した結果を図９に示す。図９から明らかなように、寛解に至った多くの患者では、ｓｐｇ１３０の濃度が高かった。
【０１１４】
【表１１】
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【０１１５】
段階的なフォワードロジスチック多重回帰分析によって、トシリズマブ投与前の患者におけるサイトカイン／ケモカイン／可溶性受容体の血清濃度に基づいて、寛解と非寛解の予測バイオマーカーとしての多変数モデルの検討を行った。段階的なフォワードロジスチック多重回帰分析とＲＯＣカーブに基づいて見出された寛解と非寛解の予測バイオマーカーの好適な組み合わせを表１２及び１３に示す。この分析結果から、トシリズマブ療法を受けたナイーブ患者では、ｓｇｐ１３０，ｌｏｇ  ＩＰ−１０，ｌｏｇ  ｓＴＮＦＲＩＩ及びｌｏｇ  ＩＬ−６が、寛解に至るか否かを高精度に判断する上での予測バイオマーカーとなり得ることが明らかとなった（ｐ＝０．０００４）（表１１ａ）。また、ｌｏｇ  ＩＬ−７（ｐ＝０．０００３），ｌｏｇ  ＩＬ−１β（ｐ＝０．０００５）又はｌｏｇ  ＭＣＰ−１（ｐ＝０．０００４）も、ｓｇｐ１３０、ｌｏｇ  ＩＰ−１０，及びｌｏｇ  ｓＴＮＦＲＩＩとの組み合わせについても、トシリズマブ療法を受けたナイーブ患者において、寛解に至るか否かを高精度に判断する上での予測バイオマーカーとなり得ることが明らかとなった（表１２ｂ〜ｄ）。
【０１１６】
また、トシリズマブ療法を受けたスイッチ患者では、ｓｇｐ１３０，ｌｏｇ  ＩＰ−１０，ｌｏｇ  ｓＴＮＦＲＩＩ及びｌｏｇ  ＩＬ−６の組み合わせが、寛解に至るか否かを高精度に判断する上での予測バイオマーカーとなり得ることが明らかとなった（ｐ＝０．００２）（表１３ａ）。更に、ｓｇｐ１３０，ｌｏｇ  ＩＰ−１０，ｌｏｇ  ｓＴＮＦＲＩＩ及びｌｏｇ  ＩＬ−１βの組み合わせでも、寛解に至るか否かを高精度に判断する上での予測バイオマーカーとなり得ることが明らかとなった（ｐ＝０．００３）（表１３ｂ）。
【０１１７】
一方、エタネルセプト療法を受けたナイーブ患者については、トシリズマブ療法で得られたロジスチック多重回帰分析とＲＯＣカーブに基づいて見出された寛解の可能性を予測判定するバイオマーカー群ではｐ＝０．２５７となり、このバイオマーカー群によって寛解に至るか否かを予測できないことが示された（表１４）。一方、別のロジスチック多重回帰分析により、表１５に示されるように、治療前のDAS-28値（0ｗDAS-28），ｌｏｇ  ＶＥＧＦ，及びｌｏｇ  ＰＤＧＦ-ｂｂの組み合わせによっても、ある程度は寛解の可能性を予測判定できることも示された。更に、表１６に示されるように、エタネルセプト療法を受けたナイーブ患者については、治療前のDAS-28値（0ｗDAS-28）を使用しなくても、ｌｏｇ  ＩＬ−９及びｌｏｇ  ＴＮＦ-αの組み合わせによっても、ある程度は寛解の可能性を予測判定できることも明らかとなった。即ち、関節リウマチ患者は、その病態が多様化しており、寛解の可能性を予測判定するバイオマーカーは、ＩＬ−６阻害が有効な患者とＴＮＦ−α阻害が有効な患者では異なっていることが示唆された。
【０１１８】
【表１２】
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【０１１９】
【表１３】
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【０１２０】
【表１４】
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【０１２１】
【表１５】
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【０１２２】
【表１６】
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【図１】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図２−４】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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