(57)【要約】【課題】  本発明は、メラニン形成阻害作用が相加的ではなく相乗的に発揮されるメラニン形成阻害剤を提供する。【解決手段】  発明のメラニン形成阻害剤は、コウジ酸と３−トリヒドロキシゲルミルプロパン酸とを有効成分として含有することを特徴とする。又、本発明のメラニン形成阻害剤において、コウジ酸と３−トリヒドロキシゲルミルプロパン酸との量比としては、例えば１：０．５〜１：１００、好ましくは１：０．５〜１：５０という範囲を挙げることができる。更に、各有効成分の濃度としては、例えばコウジ酸が５０μＭ以上、３−トリヒドロキシゲルミルプロパン酸が５００μＭ以上という範囲を挙げることができる。【選択図】  図２
2019131493.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
コウジ酸と３−トリヒドロキシゲルミルプロパン酸とを有効成分として含有することを特徴とするメラニン形成阻害剤。
【請求項２】
コウジ酸と３−トリヒドロキシゲルミルプロパン酸の量比が１：０．５〜１：１００である請求項１に記載のメラニン形成阻害剤。
【請求項３】
コウジ酸と３−トリヒドロキシゲルミルプロパン酸の量比が１：０．５〜１：５０である請求項２に記載のメラニン形成阻害剤。
【請求項４】
コウジ酸の濃度が５０μＭ以上である請求項１に記載のメラニン形成阻害剤。
【請求項５】
３−トリヒドロキシゲルミルプロパン酸の濃度が５００μＭ以上である請求項１に記載のメラニン形成阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はメラニン形成阻害剤に関するものであり、更に詳しくは、含有する有効成分が相乗効果を発揮する優れたメラニン形成阻害剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
コウジ酸は、麹から発見された公知の化合物であり、非特許文献１に開示されているように、メラニン合成酵素であるチロシナーゼの活性を抑制し、メラニンの生成を抑える作用を有することから、美白剤として開発され、すでに医薬部外品の有効成分として承認が得られているものである。
【０００３】
一方、公知の有機ゲルマニウム化合物である３−トリヒドロキシゲルミルプロパン酸（以下、ＴＨＧＰと略記することがある。）は、これまでに抗炎症作用・鎮痛作用・免疫賦活作用等を示すことが報告されていて、近年の研究によって、ＴＨＧＰはシスジオール構造を有する物質と錯体を形成することが明らかとなった。
【０００４】
ところで、チロシンから上記チロシナーゼにより誘導されるドーパ（以下、Ｌ-ＤＯＰＡと略記することがある。）は、このシスジオール構造を有する分子であり、メラニンの前駆体として知られているので、ＴＨＧＰとＬ-ＤＯＰＡとが錯体を形成すれば、Ｌ-ＤＯＰＡからドーパキノンの生成を経由するメラニン生成を阻害すると考えられた。
【０００５】
本発明の発明者らは、更に検討を重ね、既にメラニンの生成を抑える作用を有することが知られている上記コウジ酸と、シスジオール構造を有するＬ-ＤＯＰＡと錯体を形成することが知られているＴＨＧＰとを組み合わせることにより、メラニン形成阻害作用が相加的ではなく相乗的に発揮されるのではないかとの知見を得て、本発明の完成に至った。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Pigment Cell Res. 1995, Oct; 8 (5): 234-40.Effect of kojic acid on the oxidation of DL-DOPA, norepinephrine, and dopamine by mushroom tyrosinase. KahnV
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
即ち、従来は、メラニンの生成を抑える作用を有することが知られている上記コウジ酸と、シスジオール構造を有するＬ-ＤＯＰＡと錯体を形成することが知られている上記ＴＨＧＰとを組み合わせることは提案されていなかった。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明のメラニン形成阻害剤は、コウジ酸と３−トリヒドロキシゲルミルプロパン酸とを有効成分として含有することを特徴とするものである。
【０００９】
又、本発明のメラニン形成阻害剤において、コウジ酸と３−トリヒドロキシゲルミルプロパン酸との重量比としては、例えば１：０．５〜１：１００、好ましくは１：０．５〜１：５０という範囲を挙げることができ、更に、本発明のメラニン形成阻害剤において、コウジ酸の濃度としては例えば５０μＭ以上、好ましくは１００μＭ以上、３−トリヒドロキシゲルミルプロパン酸の濃度としては、例えば５００μＭ以上という範囲を挙げることができる。
【発明の効果】
【００１０】
メラニンの生成を抑える作用を有することが知られている上記コウジ酸と、シスジオール構造を有するＬ-ＤＯＰＡと錯体を形成することが知られている上記ＴＨＧＰとを組み合わせることにより、メラニン形成阻害作用が相加的ではなく相乗的に発揮されるメラニン形成阻害剤が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】ＴＨＧＰ及びコウジ酸のチロシナーゼ酵素実験におけるＬ-ＤＯＰＡからのメラニン生成への阻害効果を示すグラフである。
【図２】チロシナーゼ酵素実験におけるＬ−ＤＯＰＡからメラニン生成への阻害におけるＴＨＧＰとコウジ酸の併用効果を、両者を含まない陰性対照の吸光度に対する比率で示すグラフである。
【図３】チロシナーゼ酵素実験におけるＬ−ＤＯＰＡからメラニン生成への阻害におけるＴＨＧＰとコウジ酸の併用効果を抑制率で示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下に本発明を詳細に説明する。
【００１３】
本発明のメラニン形成阻害剤の第１の有効成分であるコウジ酸（5-hydroxy-2-hydroxymethyl-4-pyrone）は、式
【化１】
2019131493.tif 000003
で表され、上記のように麹から発見された公知の化合物であり、メラニン合成酵素であるチロシナーゼの活性を抑制し、メラニンの生成を抑える作用を有するものである。
【００１４】
又、本発明のメラニン形成阻害剤の第２の有効成分であるＴＨＧＰは、式
【化２】
2019131493.tif 000004
で表されるものである。このＴＨＧＰは、上記の通り例えば式
【化３】
2019131493.tif 000005
で表され、メラニン形成の前駆体であるＬ−ＤＯＰＡのような、シスジオール構造を有する物質と錯体形成することが解明されている。
【００１５】
尚、ＴＨＧＰは水溶液中でのみ上記構造をとるものであり、これを単離しようとすると、結晶化に際して脱水反応により重合して、式
Ｇｅ−（ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ）２Ｏ３
或いは式
[（Ｇｅ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ）２Ｏ３]ｎ
等で表される有機ゲルマニウム化合物となる。当該有機ゲルマニウム化合物は、重合度ｎを用いて表した場合は、重合度ｎ＝２〜∞のオリゴマー乃至ポリマー（poly-trans-[(2-carboxyethyl)germasesquioxane]）ということができるが、重合度ｎを用いずに表わした場合も同様である。
【００１６】
本発明のメラニン形成阻害剤は、上記第１及び第２の有効成分を含有するものであるが、必要に応じ、本発明の効果を失うことがない範囲で、他の成分を添加することもできる。
【００１７】
上記第１及び第２の有効成分の量比としては、例えば、コウジ酸：ＴＨＧＰ＝１：０．５〜１：１００、好ましくは１：０．５〜１：５０という範囲を例示することができる。又、それぞれの濃度は、コウジ酸が５０μＭ以上、好ましくは１００μＭ以上、ＴＨＧＰが５００μＭ以上という範囲を例示することができる。尚、それぞれの濃度の上限は特に存在しないが、本発明のメラニン形成阻害剤の効果が、コウジ酸及びＴＨＧＰの量に依存して最大限に向けて増大するので、コウジ酸が１０００μＭ程度、ＴＨＧＰが５０００μＭ程度と考えられる。
【００１８】
以下に本発明を実施例に基づいて詳細に説明するが、これは本発明をなんら制限するものではない。
【００１９】
材料
チロシナーゼ  (Sigma-Aldorich)
Ｌ−ＤＯＰＡ  (東京化成工業)
コウジ酸  (和光純薬)
３−トリヒドロキシゲルミルプロパン酸（ＴＨＧＰ）
50mMリン酸緩衝液（pH7.0）
【００２０】
尚、３−トリヒドロキシゲルミルプロパン酸（ＴＨＧＰ）は発明者らが合成した前記poly-trans-[(2-carboxyethyl)germasesquioxane]を水に溶解して加水分解することにより得た。
【００２１】
手法
本実験では、細胞を使用しない酵素実験により、Ｌ−ＤＯＰＡからチロシナーゼによってメラニン生成が進んでいく系に、ＴＨＧＰ又はコウジ酸を添加してメラニン形成阻害作用を確認すると共に、或いは作用機構の異なるコウジ酸とＴＨＧＰとの強調作用を、コウジ酸及びＴＨＧＰの濃度を変化させて以下のように検討した。
【００２２】
メラニン代謝（酵素実験）
すべての試薬は50mMリン酸緩衝液（pH7.0）に溶解して試験に供した。10mMＬ−ＤＯＰＡ40μlと50U/mlチロシナーゼ40μlに、コウジ酸又はＴＨＧＰを加えた後、反応溶液100μlにして、96穴プレートに注入した。37℃で20分間インキュベートした後、吸光度を測定し阻害作用とした。吸光度は405nmを測定した。又、コウジ酸及びＴＨＧＰの濃度をそれぞれ変化させて、同様に阻害作用を確かめた。
【００２３】
結果
図１に示すように、ＴＨＧＰ単独では添加濃度依存的に500−5000μMの範囲で段階的に３０％程度に至る阻害作用を示した。又、コウジ酸は50−1000μMにおいて、同様に単独での阻害作用を示し、1000μMでは５０％程度の阻害作用を示した。
【００２４】
又、図２に示すように、ＴＨＧＰ単独の群（コウジ酸は0μM）では、図１と同様の結果を示し、これらに50−1000μMのコウジ酸を添加した群では、ＴＨＧＰ単独の群と同様の濃度依存的な阻害作用の結果を示した。即ち、コウジ酸を添加した群では、濃度の上昇とともに、全体として濃度依存的に阻害作用が強くなることが認められた。又、1000μMのコウジ酸を添加した群では、いずれも５０％以上の阻害効果が得られ、本試験におけるＴＨＧＰ最大濃度である5000μMとの同時添加は実に１０％程度まで阻害作用があることが明らかになった。
【００２５】
更に、図３に示すように、コウジ酸各濃度での、ＴＨＧＰ添加濃度を変えた場合のメラニンの産生抑制の変化を見ると、コウジ酸の添加濃度50−1000μM、特に100−1000μMの範囲で、ＴＨＧＰの濃度上昇と共にメラニン産生抑制率は上昇しており、両物質の同時添加（併用）が濃度依存的に未添加の場合より上昇を示すことから、両物質はメラニン産生に対して相加的ではなく相乗的に働くことが示され、その濃度範囲は、ＴＨＧＰは500−5000μMであり、コウジ酸が50−1000μM、特に100−1000μMであることが示された。尚、図３では、ＴＨＧＰが０μMの場合でのコウジ酸各濃度でのメラニン産生抑制率を０％として各濃度の産生抑制率を算出した。
【産業上の利用可能性】
【００２６】
メラニンの生成においてチロシナーゼの酵素活性を抑える作用を有することが知られている上記コウジ酸と、シスジオール構造を有するＬ-ＤＯＰＡと錯体を形成すること知られている上記ＴＨＧＰとを組み合わせることにより、即ち、メラニン形成阻害機構が異なる有効成分を組み合わせることにより、メラニン形成阻害作用が相加的ではなく相乗的に発揮されるメラニン形成阻害剤が提供される。従って、本発明は産業上の利用性を具えるものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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