(57)【要約】【課題】血管組織再生の増強、ならびに新生内膜過形成および線維増殖性疾患に関連する罹患率および死亡率の軽減のための組成物、デバイス、および方法を提供すること。【解決手段】ＬＹＳＴタンパク質の阻害が組織損傷の部位での炎症応答の軽減および血小板活性の軽減に関連することを明らかにした。ＬＹＳＴタンパク質の発現および機能の阻害のための組成物および方法を記載する。本組成物および方法は、再生促進性免疫応答を生じる、マクロファージ、血小板、およびナチュラルキラー細胞の機能を変更することによる新生内膜の形成および線維増殖性障害に寄与する免疫過程の調整に有用であり得る。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１４年５月２日に出願された「抗ＬＹＳＴによる免疫調整のための組成物及び方法」という名称の米国仮出願第６１／９８７，９１０号の優先権を主張し、その内容は、その全体が参照によって組み込まれる。
【０００２】
配列表への参照
テキストファイルとして２０１５年５月４日に提出され、「ＮＷＣＨ１００  ＰＣＴ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」という名前で、２０１５年５月１日に作成され、５１，０００倍とのサイズを有する配列表は、参照によって本明細書に組み込まれる。
【０００３】
政府支援の研究開発に関する声明
本発明は、米国国立衛生研究所によりＣｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ  Ｂｒｅｕｅｒに授与されたＮＩＨ助成金Ｒ０１  ＨＬ０９８２２８の下で政府支援によりなされた。政府は本発明の特定の権利を有する。
【０００４】
発明の分野
本発明の分野は、一般に、血管組織再生の増強、ならびに新生内膜過形成および線維増殖性疾患に関連する罹患率および死亡率の軽減のための組成物、デバイス、および方法に関する。
【背景技術】
【０００５】
発明の背景
組織修復は、傷害部位の局所炎症促進性細胞由来の刺激性サイトカインシグナル伝達に応答して死細胞または損傷細胞の順序付けた除去および置き換えを容易にする複雑な段階的過程である（Ｗｙｎｎ  ａｎｄ  Ｂａｒｏｎ，Ｓｅｍｉｎ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓ．，３０（３）：２４５−２５７（２０１０）；Ｗｙｎｎ，Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１７：５２４−５２９（２００７））。しかし、組織修復応答が不適切であるか、例えば、慢性疾患または傷害の繰返しに応答して長期間持続される場合、正常な再生機構が傷害部位での過剰な新組織（neotissue）成長および細胞外基質（ＥＣＭ）成分の蓄積に起因する病
的状況を生じさせ得る。
【０００６】
血管傷害の部位での炎症機構および凝血促進機構の過剰な活性化または活性化の繰返しは、内膜過形成の発症に有意に寄与すると考えられる。病的状態下で、血管傷害により、内皮層の裸出が生じ、種々の成長因子および炎症性サイトカインの産生を特徴とする一連の急性および慢性の炎症応答が誘発される（Ｍｕｒａｋａｍｉら，Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２７２：Ｌ１９７−Ｌ２０２（１９９７）；Ｃｏｔｒａｎら，Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ．，１：２２５−２３５（１９９０））。冠動脈疾患および／または末梢動脈疾患のための外科的手順（血管形成術およびステント留置など）、外科的バイパスまたは動脈内膜切除後に生じる内膜過形成により、８０％までの患者において血管の再狭窄が生じ得る（Ｓｅｅｄｉａｌら，Ｊ  Ｖａｓｃ  Ｓｕｒｇ．，５７（５）：１４０３−１４１４（２０１３）；Ｇｌａｇｏｖ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，８９：２８８８−２８９１（１９９４））。新生内膜形成が血管内のプロテーゼなどの外来物質の存在によって促進され得、無制御の新生内膜過形成が心血管介入の長期臨床効率を制限する主な障壁であることが示されている（Ｆｒａｎｋら，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｌｉｐｉｄｏｌ．，１５：５２３（２００４））。さらに、新生内膜形成は、いくつかの増殖性心血管疾患（アテローム性動脈硬化症、高血圧症、および糖尿病性血管合併症が含まれる）の発症および進行に関連する。
【０００７】
内皮層の再生は、新生内膜の発達を阻害し、血管修復を容易にする（Ｂａｕｔｅｒｓら，Ｐｒｏｇ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｄｉｓ．，４０：１０７−１１６（１９９７）；Ｋｉｎｌａｙら，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｌｉｐｉｄｏｌ．，１２：３８３（２００１））。しかし、現在利用可能な抗新生内膜薬は、内皮細胞（ＥＣ）および平滑筋細胞（ＳＭＣ）の両方の増殖を無差別に遮断し、それにより、再内皮化に悪影響を及ぼし、創傷治癒過程を長期化させる。ＳＭＣ感受性の抗増殖ストラテジーを開発することが依然として必要である。
【０００８】
反復組織損傷に対する無制御の炎症応答により、皮膚、肝臓、心臓、および肺などの組織および器官の病的な線維症も生じ得る（Ｈｕａｎｇ  ａｎｄ  Ｏｇａｗａ，Ｃｏｎｎｅｃｔ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｒｅｓ．，５３（３）：１８７−１９６（２０１２））。肝臓組織の慢性の損傷および炎症により、ＥＣＭタンパク質が蓄積し、それにより過剰な瘢痕形成が起こり、肝臓の構造を歪め、それにより肝硬変および肝不全に至る（Ｂａｔｔｌｅｒ  ａｎｄ  Ｂｒｅｎｎｅｒ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．，１１５：２０９−２１８（２００５））。同様に、肺内の線維症性組織の過剰な沈着により、肺構造の進行性の瘢痕化および不可逆的破壊が起こり、最終的に、臓器機能不全、ガス交換の破壊、および呼吸不全に由来する死亡に至る。
【０００９】
活性化血小板は、損傷内皮への白血球接着を増加させ、内皮上のケモカインの沈着を通じて白血球活性化を促進する。これにより、白血球が血管壁に強固に付着し、内皮下組織に遊出することができる。しかし、血小板由来ケモカインは、新生内膜増殖、動脈傷害後の再狭窄、およびアテローム性動脈硬化症で役割を果たすことも公知である（Ｃｈａｎｄｒａｓｅｋａｒら，Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ  ３５，Ｎｏ．３，ｐｐ．５５５−５６２（２０００））。異常な血小板機能を有する一定の患者群（腎疾患、糖尿病、および高脂血症を有する患者群が含まれる）も再狭窄リスクが高い。
【００１０】
線維増殖性障害は、米国における罹患および死亡の主因である（Ｂｉｔｔｅｒｍａｎ  ａｎｄ  Ｈｅｎｋｅ，Ｃｈｅｓｔ，９９（３）：ｓ８１−ｓ８４（１９９１））。特に、肝臓および肺の線維症性疾患は、典型的には処置に難治性であり、死亡率が高い。確立した肝硬変の１０年死亡率は３４〜６６％であり、米国のみで毎年およそ２７，０００人の死亡原因である。特発性肺線維症（ＩＰＦ）の有病率は、１００，０００人あたり１４人と４２．７人との間と推定され、この数字は、ここ３０年で１０年毎に上昇している（Ｏｌｓｏｎら，Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．１７６：２７７−２８４３（２００７）；Ｇｒｉｂｂｉｎら，Ｔｈｏｒａｘ，６１：９８０−９８５（２００６））。現在、肝臓または肺の線維症の最も有効な処置は、臓器移植である。
【００１１】
したがって、本発明の目的は、被験体において新生内膜形成、狭窄、再狭窄、またはその組み合わせを軽減または防止するために免疫過程を調整するための組成物、デバイス、グラフト、およびその使用方法を提供することである。
【００１２】
また、本発明の目的は、被験体において不適切なまたは有害な血小板活性化を軽減または防止するための組成物、デバイス、グラフト、およびその使用方法を提供することである。
【００１３】
また、本発明の目的は、被験体における植込み型プロテーゼ（implantable  prosthesis）に対する免疫応答を軽減または防止するための組成物、方法、およびデバイスを提供
することである。
本発明のさらなる目的は、被験体において治癒を促進し、瘢痕形成、癒着、および線維増殖性疾患を阻害するための組成物、方法、およびデバイスを提供することである。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Ｗｙｎｎ  ａｎｄ  Ｂａｒｏｎ，Ｓｅｍｉｎ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓ．，３０（３）：２４５−２５７（２０１０）；Ｗｙｎｎ，Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１７：５２４−５２９（２００７）
【非特許文献２】Ｍｕｒａｋａｍｉら，Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２７２：Ｌ１９７−Ｌ２０２（１９９７）；Ｃｏｔｒａｎら，Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ．，１：２２５−２３５（１９９０）
【非特許文献３】Ｓｅｅｄｉａｌら，Ｊ  Ｖａｓｃ  Ｓｕｒｇ．，５７（５）：１４０３−１４１４（２０１３）；Ｇｌａｇｏｖ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，８９：２８８８−２８９１（１９９４）
【非特許文献４】Ｆｒａｎｋら，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｌｉｐｉｄｏｌ．，１５：５２３（２００４）
【非特許文献５】Ｂａｕｔｅｒｓら，Ｐｒｏｇ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｄｉｓ．，４０：１０７−１１６（１９９７）；Ｋｉｎｌａｙら，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｌｉｐｉｄｏｌ．，１２：３８３（２００１）
【非特許文献６】Ｈｕａｎｇ  ａｎｄ  Ｏｇａｗａ，Ｃｏｎｎｅｃｔ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｒｅｓ．，５３（３）：１８７−１９６（２０１２）
【非特許文献７】Ｂａｔｔｌｅｒ  ａｎｄ  Ｂｒｅｎｎｅｒ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．，１１５：２０９−２１８（２００５）
【非特許文献８】Ｃｈａｎｄｒａｓｅｋａｒら，Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ  ３５，Ｎｏ．３，ｐｐ．５５５−５６２（２０００）
【非特許文献９】Ｂｉｔｔｅｒｍａｎ  ａｎｄ  Ｈｅｎｋｅ，Ｃｈｅｓｔ，９９（３）：ｓ８１−ｓ８４（１９９１）
【非特許文献１０】Ｏｌｓｏｎら，Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．１７６：２７７−２８４３（２００７）；Ｇｒｉｂｂｉｎら，Ｔｈｏｒａｘ，６１：９８０−９８５（２００６）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１５】
発明の概要
リソソーム輸送制御因子（「ＬＹＳＴ」）タンパク質の阻害が組織損傷部位の炎症応答の軽減に関連することを明らかにした。ＬＹＳＴタンパク質の発現および機能の阻害のための組成物および方法を記載する。組成物および方法は、再生促進性免疫応答を生じるマクロファージ、血小板、およびナチュラルキラー細胞の機能を変更することによる、新生内膜の形成および線維増殖性障害に寄与する免疫過程の調整に有用であり得る。
【００１６】
被験体における瘢痕組織の形成の軽減または防止に有効な量で１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを含む組成物を開示する。被験体における血小板の活性化の軽減または防止に有効な量で１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを含む組成物も開示する。
【００１７】
典型的には、組成物は、生理学的に許容され得るキャリアを含む。好ましい実施形態では、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターの量は、被験体における血管新組織の形成を妨害しない。典型的には、組成物は、０．１〜１０００ｍｇ／ｋｇヒト体重の間の量で１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを含む。
【００１８】
１つの実施形態では、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターは抗体である。
【００１９】
別の実施形態では、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターは機能的核酸である。例示的な機能的核酸には、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アプタマー、リボザイム、三重鎖形成分子、ＲＮＡｉ、および外部ガイド配列が含まれる。１つまたはそれを超える機能的核酸を、発現ベクターから発現することができる。
【００２０】
いくつかの実施形態では、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターの組成物は、送達ビヒクルを含む。例示的な送達ビヒクルには、ナノ粒子、微粒子、ミセル、合成リポタンパク質粒子、リポソーム、およびカーボンナノチューブが含まれる。開示の組成物はまた、１つまたはそれを超えるさらなる治療剤を含むことができる。１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを含む血管グラフトおよび医療デバイスを開示する。いくつかの実施形態では、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターの組成物は、グラフトまたはデバイス上にコーティングされているか、グラフトまたはデバイス内に組み込まれている。例示的な医療デバイスには、ステント、植込物、針、カニューレ、カテーテル、シャント、バルーン、および弁が含まれる。医療デバイスは、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターの組成物を溶出する薬剤溶出性ステントなどのステントであり得る。例示的な血管グラフトには、自己グラフト、保存自己グラフト、同種異系グラフト、異種グラフト、または合成グラフトが含まれる。
【００２１】
被験体における瘢痕組織の形成を軽減または防止する方法であって、それを必要とする被験体に１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを含む組成物を投与することを含む方法も提供する。被験体における静脈血栓症または動脈血栓症の発達を軽減または防止する方法は、それを必要とする被験体に１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを含む組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、被験体は、再狭窄または他の血管増殖障害の発症リスクがあるか、発症していた。さらなる実施形態では、被験体は、血管外傷、血管形成術、血管手術、または移植動脈症を経験していたか、経験しているか、経験する。本方法は、非処置コントロール被験体と比較して被験体において治癒の促進、肥厚性瘢痕化、ケロイド、または癒着の発症の軽減または防止、肝臓の線維症、肺の線維症、心臓の線維症、または腎臓の線維症の軽減または防止、新生内膜形成、狭窄、または再狭窄の軽減または防止、またはその任意の組み合わせが可能である。本方法は、ペースメーカー、神経刺激器、ペースメーカーリード、置換心臓弁、および人工関節などの１つまたはそれを超える補綴具、またはその構成要素の組み込みを促進するが、その被包を遮断することができる。本方法は、非処置コントロール被験体と比較して被験体における血管植込物の植込の部位、血管傷害の部位、または手術の部位の新生内膜形成の処置または防止に有効であり得る。本方法は、非処置コントロール被験体と比較して被験体における血小板由来成長因子、トランスフォーミング成長因子β、またはその任意の組み合わせの発現の軽減または防止に有効であり得る。
本発明は、例えば、以下の項目も提供する。
（項目１）
ａ）被験体における（ｉｎ  ａ  ｓｕｂｊｅｃｔ  ｉｎ  ａ  ｓｕｂｊｅｃｔ）マクロファージ浸潤の軽減もしくは防止または血小板活性化の軽減もしくは防止に有効な量の１つまたはそれを超えるＬＹＳＴのインヒビター；および
ｂ）生理学的に許容され得るキャリア
を含み、
１つまたはそれを超えるＬＹＳＴのインヒビターの該量が該被験体における血管新組織の形成を防止しない、薬学的組成物。
（項目２）
０．１ｍｇ／ｋｇヒト体重と１０００ｍｇ／ｋｇヒト体重との間の量の１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを送達する投薬製剤中の項目１に記載の組成物。
（項目３）
マクロファージ浸潤を軽減または防止するのに有効な投薬量の項目１に記載の組成物。
（項目４）
血小板活性化を軽減または防止するのに有効な投薬量の項目１に記載の組成物。
（項目５）
１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターが、抗ＬＹＳＴ抗体の結合特異性を有する抗体、抗体フラグメント、またはタンパク質である、項目１に記載の組成物。
（項目６）
１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターが、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アプタマー、リボザイム、三重鎖形成分子、ＲＮＡｉ、および外部ガイド配列からなる群から選択される機能的核酸である、項目１に記載の組成物。
（項目７）
１つまたはそれを超える機能的核酸が発現ベクターから発現される、項目６に記載の組成物。
（項目８）
ナノ粒子、微粒子、ミセル、エマルジョン、合成リポタンパク質粒子、リポソーム、カーボンナノチューブ、ゲル、またはコーティングからなる群から選択される送達ビヒクルをさらに含む、項目１に記載の組成物。
（項目９）
他の抗新生内膜剤、化学療法剤、ステロイド性および非ステロイド性の抗炎症薬、従来の免疫治療剤、免疫抑制剤、サイトカイン、ケモカイン、および成長因子からなる群から選択される１つまたはそれを超えるさらなる治療剤をさらに含む、項目１に記載の組成物。
（項目１０）
項目１〜９のいずれか１項に記載の組成物を含む血管グラフトまたは医療デバイス。
（項目１１）
前記組成物が前記グラフトまたはデバイス上にコーティングされているか、該グラフトまたはデバイス内に組み込まれている、項目１０に記載の血管グラフトまたは医療デバイス。
（項目１２）
前記デバイスが、ステント、植込物、針、カニューレ、カテーテル、シャント、バルーン、および弁からなる群から選択される、項目１１に記載の医療デバイス。
（項目１３）
前記デバイスがステントである、項目１２に記載の医療デバイス。
（項目１４）
前記ステントが、前記組成物を溶出する薬剤溶出性ステントである、項目１３に記載の医療デバイス。
（項目１５）
前記グラフトが、自己グラフト、保存自己グラフト、同種異系グラフト、異種グラフト、または合成グラフトである、項目１０に記載の血管グラフト。
（項目１６）
被験体において瘢痕形成または狭窄を生じさせ得るマクロファージ浸潤を軽減または防止する方法であって、それを必要とする被験体に項目１または３〜９のいずれか１項に記載の組成物または項目１０〜１５のいずれか１項に記載のデバイスを投与することを含む、方法。
（項目１７）
被験体において動脈血栓症または静脈血栓症を生じさせ得る血小板活性化を軽減または防止する方法であって、それを必要とする被験体に項目１〜９のいずれか１項に記載の組成物または項目１０〜１５のいずれか１項に記載のデバイスを投与することを含む、方法。
（項目１８）
前記被験体が、再狭窄または他の血管増殖障害のリスクが有るか、再狭窄または他の血管増殖障害を有する、項目１６または１７に記載の方法。
（項目１９）
前記被験体は、血管外傷、血管形成術、血管手術、または移植動脈症を経験していたか、経験しているか、経験する、項目１６または１７に記載の方法。
（項目２０）
前記組成物またはデバイスを、非処置コントロール被験体と比較して、被験体における瘢痕組織の形成の軽減または防止、治癒の促進、肥厚性瘢痕化、ケロイド、または癒着の発症の軽減または防止、肝臓の線維症、肺の線維症、心臓の線維症、または腎臓の線維症の軽減または防止、新生内膜形成、狭窄、または再狭窄の軽減または防止、血栓症の軽減または防止、またはその任意の組み合わせのために使用する、項目１６または１７に記載の方法。
（項目２１）
瘢痕組織の形成の軽減または防止により、ペースメーカー、神経刺激器、置換心臓弁、および人工関節からなる群から選択される１つまたはそれを超えるバイオプロテーゼデバイスの組み込みを促進するが、被包を遮断する、項目１６に記載の方法。
（項目２２）
瘢痕組織の形成の軽減または防止が、非処置コントロール被験体と比較して、被験体における血管植込物の植込の部位、血管傷害の部位、または手術の部位での新生内膜形成の処置または防止に有効である、項目１６に記載の方法。
（項目２３）
前記組成物またはデバイスを、非処置コントロール被験体と比較して、被験体における血小板由来成長因子、トランスフォーミング成長因子β、またはその任意の組み合わせの発現を軽減または防止するために使用する、項目１７に記載の方法。
（項目２４）
血管グラフトの狭窄または再狭窄を軽減する方法であって、被験体への該グラフトの植込前に項目１〜１０のいずれか１項に記載の組成物で該グラフトをｅｘ  ｖｉｖｏにて処置することを含む、方法。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】図１は、ベージュマウス（ｂｇ；黒色のグラフ）および野生型マウス（ＷＴ；灰色のグラフ）への植込から２週間後の生分解性導管グラフト内の導管の直径（ｍｍ）を示すヒストグラムである。それぞれ、ベージュマウスおよびＷＴマウスについてＮ＝１０およびＮ＝２５。
【００２３】
【図２】図２は、植込から２週間後にベージュマウス（Ｂｇ；灰色のグラフ）および野生型マウス（ＷＴ；黒色のグラフ）からそれぞれ外植した生分解性導管グラフト内のマクロファージ細胞数（細胞／ＨＰＦ）を示すヒストグラムである。Ｐ＝０．００４８。
【００２４】
【図３】図３は、野生型（ＷＴ）マウスおよびベージュ（Ｂｇ）マウスのエクソン５２上のＬＹＳＴ遺伝子中のヌクレオチド配列（上）の間の相違を示す略図である。ＷＴマウスおよびＢｇマウスのＬＹＳＴタンパク質のアミノ酸配列間の対応する相違もアミノ酸配列アラインメント中に示す（中央）。アミノ酸配列アラインメント（下）は、ヒト、マウス、およびラット由来のＬＹＳＴポリペプチドのアミノ酸配列間の保存を示す。ベージュ（Ｂｇ）マウスのＬＹＳＴ内の欠失の位置を、＊で示す。核酸およびアミノ酸を、それぞれ標準的な一文字表記を使用して示す。
【００２５】
【図４】図４は、それぞれ野生型マウス（ＷＴ−１（１）；ＷＴ−２（２））、ベージュマウス（Ｂｅｉｇｅ−１（３）；Ｂｅｉｇｅ−２（４））、または標準的な「Ｒａｗ」細胞株（５）から得た細胞中での５つの各々の異なるオリゴヌクレオチドプライマー（ＬＹＳＴ−１、ＬＹＳＴ−３、ＬＹＳＴ−４、ＬＹＳＴ−５、およびＬＹＳＴ−６）を使用して増幅したＬＹＳＴ遺伝子産物に対応する相対ｍＲＮＡレベルを示すヒストグラムである。
【００２６】
【図５】図５は、２週間の植込後のＣ５７ＢＬ／６（野生型）マウスおよびＣ５７ＢＬ／６Ｌｙｓｔｔｍ１ｂノックアウトマウスの各々（ｎ＝５）における狭窄発生率（％）を示すヒストグラムである。＊＊＊ｐ＝０．０００１。
【００２７】
【図６】図６は、静止（コントロール）マウスおよびトロンビン活性化Ｃ５７ＢＬ／６（野生型）マウス、ならびにＣ５７ＢＬ／６ベージュ（Ｂｇ）マウスのそれぞれにおけるＰＲＰ由来の血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）の分泌量（μｇ／ｍｌ）を示すヒストグラムである。各群（ｎ＝７）由来のＰＤＧＦの総分泌濃度を、静止非活性化コントロール（ｎ＝５）と比較した。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
発明の詳細な説明
Ｉ．定義
用語「狭窄」は、血管壁（内皮）傷害後に生じる血管の異常な狭小化をいう。いくつかの実施形態では、狭窄は、５０％またはそれを超える管腔外周の減少を含む。用語「再狭窄」は、既存の狭窄部位の狭窄または介入手順使用後の血管の管腔もしくは合成グラフトの狭小化をいう。再狭窄は、本明細書中で使用する場合、閉塞を含む。狭窄または再狭窄に至る例示的な傷害には、アテローム硬化性病変（血管形成術またはステントに伴って認められる）、病変切除（動脈内膜切除に伴って認められる）、外的傷害（例えば、クロスクランピングによる傷害）、または外科的吻合に対する外傷が含まれる。
【００２９】
用語「新生内膜性狭窄」は、新生内膜形成に起因する血管中の異常な狭小化をいう。
【００３０】
用語「新生内膜」は、傷害を受けた内皮細胞由来のシグナルに応答して血管中に形成される内膜（内層）の再生または肥厚した層をいう。
【００３１】
用語「瘢痕組織」および「瘢痕化」は、傷害後に損傷組織を置き換えるために生成された線維状組織をいう。
【００３２】
用語「線維増殖性障害」、「ＦＰＤ」、および「線維症性疾患」は、互換的に使用され、結合組織の異常且つ過剰な沈着に起因する良性および悪性の疾患または状態が含まれる。
【００３３】
用語「血小板活性化」は、内皮の損傷または妨害などの組織傷害に応答して循環血小板の接着および凝集が起こる段階的な生理学的過程である。血小板活性化は、走化性作用因子（血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）およびトランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦβ）など）を発現および分泌させる。
【００３４】
「薬学的に許容され得るキャリア」は、任意の標準的な薬学的キャリア（リン酸緩衝食塩水、水、およびエマルジョン（水中油型または油中水型のエマルジョンなど）など）、ならびに種々のタイプの湿潤剤を含む。
【００３５】
「阻害する（ｉｎｈｉｂｉｔ）」またはこの用語の他の形態（「阻害すること（ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ）」または「阻害（ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）」など）は、特定の特徴を妨げるか制限することを意味する。これは、典型的には、いくつかの標準または期待値との比較であり、すなわち、相対的であるが、必ずしも参照すべき標準または相対値が必要というわけではないと理解される。例えば、「ＬＹＳＴを阻害する」は、標準またはコントロールと比較してＬＹＳＴ遺伝子活性を妨げること、それに干渉すること、またはそれを制限することを意味する。「ＬＹＳＴを阻害する」は、標準またはコントロールと比較してＬＹＳＴタンパク質の合成、発現、または機能を妨げるか制限することも意味し得る。
【００３６】
「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、望ましくない状態（例えば、再狭窄または線維増殖性障害）を有する被験体または系に組成物を投与することを意味する。状態には疾患が含まれ得る。「防止（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」または「防止すること（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」は、状態にリスクがある被験体または系に組成物を投与することを意味する。状態は、疾患素因であり得る。被験体への組成物の投与（処置および／または防止のいずれか）の影響は、状態の特定の症状の停止、状態の症状の軽減または防止、状態の重症度の軽減、状態の完全な除去、特定の事象または特徴の発症または進行の安定化または遅延、または特定の事象または特徴が起こる機会の最小化であり得るが、これらに限定されない。
【００３７】
本明細書中で使用する場合、用語「抗体」を、他で明確に示さない限り、最も広い意味で使用する。したがって、「抗体」は、天然に存在するか人工物（従来のハイブリドーマテクノロジーによって産生されたモノクローナル抗体など）であり得る。抗体には、モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体ならびにこれらの抗体の抗原結合ドメインおよび／または１つまたはそれを超える相補性決定領域を含むフラグメントが含まれる。「抗体」は、抗体またはその抗原結合フラグメントの任意の形態をいい、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体が含まれる）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および抗体フラグメントが含まれる。
ＩＩ．組成物
【００３８】
組織修復過程をＬＹＳＴ遺伝子の発現および機能の操作によって媒介することができることを明らかにした。具体的には、ＬＹＳＴ遺伝子産物の機能喪失によって一定の免疫細胞で機能が異常になり、それにより、免疫機能障害が生じ、関連する増殖性障害が軽減する。ＬＹＳＴ遺伝子またはＬＹＳＴタンパク質の調整に影響を受け得る免疫細胞には、自然免疫細胞、マクロファージ、および血小板が含まれる。
自然免疫細胞
【００３９】
自然免疫過程（炎症、損傷細胞およびデブリの除去、ならびに新組織の発達および他の創傷修復機構が含まれる）は、傷害に対する生理学的応答の重要な要素である。組織修復は、４つの異なる段階を有し、これらの段階には、以下が含まれる：ａ）凝固／凝血；ｂ）炎症；ｃ）線維芽細胞の遊走／増殖；およびｄ）正常な組織構造が回復される最終的なリモデリング期。組織損傷後の最初期段階では、上皮細胞および／または内皮細胞は、炎症メディエーターを放出して抗線維素溶解性凝血カスケードを開始し、それにより、凝固および仮の細胞外基質（ＥＣＭ）の発達を引き起こす。血小板の凝集およびその後の脱顆粒により、血管の拡張が促進されて透過性が増大し、それにより、炎症細胞（好中球、マクロファージ、リンパ球、および好酸球など）が損傷組織に効率的に動員される。好中球は、創傷治癒の最初期段階における最も豊富な炎症細胞であるが、好中球の脱顆粒後にマクロファージに速やかに置き換えられる。活性化されたマクロファージおよび好中球は、創傷を清拭し、任意の侵入生物を排除し、種々のサイトカインおよびケモカインを産生して炎症応答を増幅し、ならびに線維芽細胞の増殖および動員も引き起こす。活性化の際、線維芽細胞は、筋線維芽細胞に変換されてα−平滑筋アクチンおよびＥＣＭ構成要素を分泌する。最後に、リモデリング期において、上皮／内皮細胞が分裂し、一時性マトリックス（temporary  matrix）に遊走し、損傷組織を再生する。したがって、治癒および新組織の生成は、過剰な肥厚および狭窄または線維症を伴わずに組織の再生および血管壁の肥厚の要求の釣り合いを取る精密に制御された過程である。
マクロファージ
【００４０】
循環単球および浸潤マクロファージの存在が創傷治癒および新組織の発達に重要であることが示されている（Ａｒｒａｓら，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ，１０１（１）：４０−５０（１９９８））。しかし、組織損傷部位におけるマクロファージ浸潤の程度は、増殖性の調節不全および新生内膜形成とも相関している（Ｈｉｂｉｎｏら，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．２５（１２）：４２５３−６３（２０１１））。さらに、多くの研究により、マクロファージおよび線維芽細胞が線維症の病理発生に関与する主なエフェクター細胞であることが示されている（Ｗｙｎｎ，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．４（８）：５８３−９４（２００４）に概説）。
【００４１】
血管損傷後、炎症性単球細胞（ヒトにおけるＣＤ１６−ｈｉ、ＣＤ６４−ｈｉ、およびＣＤ１４−ｈｉ；マウスにおけるＣＤ１１５＋、ＣＤ１１ｂ＋、およびＬｙ６ｃ−ｈｉ）は、損傷組織に動員され、局所成長因子、炎症促進性サイトカイン、および微生物化合物（microbial  compound）へ曝露されると活性化マクロファージ（ヒトにおけるＥｍｒ１−ｈｉ；マウスにおけるＦ４／８０−ｈｉ）に分化する（Ｇｅｉｓｓｍａｎｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２７：６５６−６６１（２０１０））。過剰なマクロファージ浸潤によって狭窄に至り、一方で、マクロファージ浸潤の完全な阻害により新組織形成が防止される（Ｈｉｂｉｎｏら、ＦＡＳＥＢ  Ｊ．２５（１２）：４２５３−６３（２０１１）。
【００４２】
マクロファージの分極活性化の以下の２つの異なる状況が定義されている：古典的に活性化された（Ｍ１）マクロファージ表現型および別経路で活性化された（Ｍ２）マクロファージ表現型（Ｇｏｒｄｏｎ  ａｎｄ  Ｔａｙｌｏｒ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：９５３−９６４（２００５）；Ｍａｎｔｏｖａｎｉら，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：５４９−５５５（２００２））。古典的に活性化された（Ｍ１）マクロファージの役割は、ＴＨ１細胞性免疫応答におけるエフェクター細胞であるのに対して、別経路で活性化された（Ｍ２）マクロファージは、免疫抑制および創傷治癒／組織修復に関与するようである。Ｍ１およびＭ２マクロファージは、異なるケモカインおよびケモカイン受容体のプロフィールを有し、ここで、Ｍ１はＴＨ１細胞誘引ケモカインＣＸＣＬ９およびＣＸＣＬ１０を分泌し、Ｍ２マクロファージはケモカインＣＣＬ１７、ＣＣＬ２２、およびＣＣＬ２４を発現する。
【００４３】
Ｍ２マクロファージの存在は、新生内膜の発達および狭窄に関連している（Ｈｉｂｉｎｏら，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．２５（１２）：４２５３−６３（２０１１））。組織グラフト植込後の一定の時点においてマクロファージ浸潤の程度、新組織形成、および狭窄の間に相関があり、この相関がマクロファージ活性の調整を通じて狭窄を防止する手段を提供する。
【００４４】
さらに、マクロファージは、典型的には、コラーゲン産生筋線維芽細胞の近傍に局在し、単球由来マクロファージは線維症の必要条件として傷害後の炎症反応を持続させるのに不可欠であることが示されている（Ｗｙｎｎ  ａｎｄ  Ｂａｒｒｏｎ，Ｓｅｍｉｎ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓ．，３０（３）：２４５−２５７（２０１０））。マクロファージは、線維芽細胞を活性化する線維症促進メディエーター（血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、強力な走化性作用因子、およびトランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦ−Ｂ）が含まれる）を産生する。具体的には、マクロファージの非古典的Ｍ２（ＣＤ１４＋、ＣＤ１６＋）サブセットの顕著な増加は、慢性肝臓疾患に罹患している患者における炎症促進性サイトカインおよび臨床的進行に相関している。線維症が進行中、単球由来マクロファージは、慢性炎症を持続させるサイトカインを放出し、ならびに肝星細胞（ＨＳＣ）を直接活性化し、その結果、該星細胞の増殖をもたらし、コラーゲン産生筋線維芽細胞に分化転換する（Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎら，ＰＬＯＳ  Ｏｎｅ，５（６）：ｅ１１０４９（２０１０））。
血小板
【００４５】
凝集血小板は、周囲の結合組織から創傷領域内に線維芽細胞を誘引する化学物質を分泌して、創傷を治癒するか、調節不全の炎症応答の場合、瘢痕組織を形成することによって血管の修復を補助する。組織傷害に応答して、血小板が活性化されるようになり、細胞外基質の沈着を刺激する多数の成長因子（血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）（強力な走化性作用因子）、ならびにトランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦ−β）など）を放出する。これらの成長因子の両方は、結合組織の修復および再生で重要な役割を果たすことが示されている。ＰＤＧＦは、線維芽細胞および炎症細胞の流入を有意に増大させ、ならびに、細胞増殖および遺伝子発現を刺激する主要なマイトジェンおよび化学誘引物質として機能する。ＰＤＧＦは、白血球を、血管壁に強固に付着させ、最終的に、内皮下組織内に遊出させることができる。しかし、血小板由来ケモカインはまた、平滑筋細胞（ＳＭＣ）増殖を誘導し、新生内膜増殖および器官線維症で役割を果たすことが公知である（Ｃｈａｎｄｒａｓｅｋａｒら，Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ  ３５，Ｎｏ．３，ｐｐ．５５５−５６２（２０００））。ＰＤＧＦおよびその受容体の発現の増加は、強皮症の肺組織および皮膚組織に関連する。具体的には、強皮症の肺線維芽細胞および皮膚線維芽細胞における自己分泌型ＰＤＧＦ−受容体媒介性のシグナル伝達ループの証拠が有り、ＴＧＦ−β経路およびＰＤＧＦ経路の両方が強皮症における慢性線維症に関与する（Ｔｒｏｊａｎｏｗｓｋａ，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ；４７：ｖ２−ｖ４（２００８））。さらに、ＰＤＧＦシグナル伝達の制御解除は、心血管の指標（肺高血圧症およびアテローム性動脈硬化症など）に関連する。
【００４６】
傷害誘導性ＰＤＧＦに応答した中膜層平滑筋細胞（ＳＭＣ）の増殖および遊走は、最終的に血管の狭小化および狭窄に至る新生内膜肥厚に寄与する不可欠な事象である（Ｆｉｎｇｅｒｌｅら，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．，８６：８４１２（１９８９）；Ｃｌｏｗｅｓら，Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．，５６：１３９−１４５（１９８５））。
【００４７】
血小板によって放出される他の治癒関連成長因子には、塩基性線維芽細胞成長因子、インスリン様成長因子１、血小板由来上皮成長因子、および血管内皮成長因子が含まれる。
【００４８】
したがって、ＬＹＳＴ遺伝子およびＬＹＳＴタンパク質のインヒビターは、再生促進性免疫環境を生じ、それにより、創傷治癒を強化し、内膜過形成などの増殖性障害、過剰な瘢痕組織の発達、および線維症性疾患を防止することができる。ＬＹＳＴの調整はまた、血小板の活性および機能を調整することができる。したがって、ＬＹＳＴ遺伝子および／またはＬＹＳＴタンパク質のインヒビターを使用して、血小板の生物学的機能（血小板凝集および血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）の産生／発現など）を軽減または防止することができる。
【００４９】
組織再生の促進ならびにＬＹＳＴタンパク質の発現および／または機能の遮断による過剰な瘢痕組織の形成を特徴とする疾患の防止または軽減のための組成物を開示する。
Ａ．ＬＹＳＴ
【００５０】
リソソーム輸送制御因子（ＬＹＳＴ）遺伝子産物は、リソソームへの細胞内物質の輸送に関連する偏在性タンパク質である。ＬＹＳＴタンパク質の機能を減少または阻害する変異がマクロファージの正常な機能に干渉し、また、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞および血小板の生物学的活性に影響を及ぼすことを明らかにした。ＬＹＳＴタンパク質を調整することにより血管の増殖性障害、新生内膜形成、線維症、および過剰な瘢痕化を生じる免疫過程を調整する手段が得られると考えられる。
１．ＬＹＳＴ遺伝子
【００５１】
ヒトＬＹＳＴ遺伝子は、１番染色体（セグメント１ｑ４２．１−ｑ４２．２；塩基対２３５，６６１，０３０〜２３５，８８３，７０７）に局在する（Ｂａｒｒａｔら，Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ，５９：６２５−６３２（１９９６））。ＬＹＳＴ遺伝子産物の核酸配列は、当該分野で公知である。例えば、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００００８１．３、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓリソソーム輸送制御因子（ＬＹＳＴ）、転写物バリアント１、ｍＲＮＡ（以下の核酸配列を提供する）を参照のこと：
【化１】
2019135267.tif 000002
【化２】
2019135267.tif 000003
【化３】
2019135267.tif 000004
【化４】
2019135267.tif 000005
【化５】
2019135267.tif 000006
【化６】
2019135267.tif 000007
【化７】
2019135267.tif 000008
【化８】
2019135267.tif 000009
【化９】
2019135267.tif 000010
【化１０】
2019135267.tif 000011
【化１１】
2019135267.tif 000012
（配列番号１）。配列番号１と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％のアミノ酸配列が同一のヌクレオチド配列も開示する。
２．ＬＹＳＴタンパク質
【００５２】
ＬＹＳＴポリペプチドは、分子量がおよそ４２９ｋＤａの３，８０１アミノ酸の細胞質タンパク質（リソソーム輸送制御因子、ＣＨＳタンパク質、ＣＨＳ１またはＬＹＳＴタンパク質としても公知）である（Ｂａｒｂｏｓａら，Ｎａｔｕｒｅ，３８２（６５８８）：２６２−２６５（１９９６））。
【００５３】
ＬＹＳＴタンパク質は、３つのイソ型のうちの１つとして存在し、らせん構造を取ると予想される（Ｂａｒｂｏｓａら，Ｎａｔｕｒｅ，３８２（６５８８）：２６２−２６５（１９９６））。
【００５４】
ＬＹＳＴタンパク質は、哺乳動物種間で高度に保存され、全細胞型において低レベルで発現されるが、成人および胎児の胸腺、末梢血白血球、骨髄、ならびに成人脳のいくつかの領域で豊富に発現される（Ｄｏｔｔａら，Ｏｒｐｈａｎｅｔ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒａｒｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，８：１６８（２０１３）の概説およびその中の文献を参照のこと）。
【００５５】
ヒトＬＹＳＴタンパク質のアミノ酸配列は、当該分野で公知である。例えば、以下のＧｅｎｂａｎｋ受入番号Ｕ６７６１５を参照のこと：
【化１２】
2019135267.tif 000013
【化１３】
2019135267.tif 000014
【化１４】
2019135267.tif 000015
【化１５】
2019135267.tif 000016
（配列番号２）
【００５６】
配列番号２に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％のアミノ酸配列が同一のＬＹＳＴポリペプチドを開示する。
【００５７】
ＬＹＳＴタンパク質は、特に、エンドソームおよびリソソームでの細胞内タンパク質輸送における多くの多様な細胞活動に関連しているが、ＬＹＳＴタンパク質の生物学的機能の大部分が依然として未知である。
【００５８】
ＬＹＳＴ遺伝子産物の異常な発現および機能は、多くの病理学的障害（自己免疫疾患、過剰増殖性障害、および血小板機能障害が含まれる）に関与している。具体的には、ＬＹＳＴ遺伝子の変異は、ヒト疾患であるチェディアック・東症候群（ＣＨＳ）に関連する（Ｂａｒｒａｔら，Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ，５９：６２５−６３２（１９９６））。ＣＨＳ患者では、ＬＹＳＴ遺伝子は、コードドメインのヌクレオチド１１７〜１１８にフレームシフト変異を含む。
【００５９】
ＣＨＳは、低色素沈着、重症免疫欠損、出血傾向、神経異常、リソソームへのおよびリソソームからの細胞内輸送の異常、種々の細胞型における巨大封入体を特徴とする稀なリソソーム蓄積障害である。チェディアック・東症候群を有する人々においてＬＹＳＴ遺伝子中に少なくとも３０の変異が同定されている。これらの変異は、正常なリソソーム輸送制御因子タンパク質機能を損ない、リソソームおよび細胞内の関連構造体のサイズ、構造、および機能を破壊する。ＬＹＳＴ変異を有する人々は、体内の至る所の細胞内に異常に巨大なリソソームおよび関連する構造体を有する。これらの巨大化された構造体は、正常細胞の機能に干渉する。免疫系細胞（マクロファージなど）中の巨大化リソソームは、これらの細胞が細菌および他の外来侵入者に対して適切に応答するのを防止し；巨大な核周囲のリソソームは、ＣＨＳを有する人のマクロファージ細胞内に管状に配置される。罹患した好中球および単球は、走化能および遊走能が正常細胞の約４０％である。罹患患者はまた、血小板機能障害に起因した出血の傾向がある。走化性刺激に対する応答性が減少する結果として、機能不全に陥った免疫系が、重篤な再発性感染から身体を防御することができない。患者が免疫無防備状態であり、感染に有効な免疫応答を開始することができないので、ＣＨＳはしばしば致命的である。
【００６０】
ベージュ（Ｂｇ）マウス系統では、ＬＹＳＴのマウスホモログ（「Ｌｙｓｔ」）は、機能的Ｌｙｓｔタンパク質の発現を不可能にする欠失によって破壊される。Ｂｇマウスは、野生型マウスと比較して増殖性疾患の低下を示すこと（血管組織グラフト植込後の狭窄率がより低いことが含まれる）が見出された。骨髄移植実験（実施例を参照のこと）によって決定したところ、Ｂｇマウスにおける機能障害性Ｌｙｓｔタンパク質の影響は、高度にマクロファージ特異的である。
Ｃ．ＬＹＳＴのインヒビター
【００６１】
ＬＹＳＴタンパク質の遮断により傷害後に血管の増殖性障害、線維増殖性疾患、および過剰な瘢痕組織を生じる免疫過程を軽減または防止することができることを明らかにした。ＬＹＳＴタンパク質の転写、翻訳、または機能を阻害または軽減する免疫調節剤を開示する。
【００６２】
ＬＹＳＴのインヒビターは、ＬＹＳＴ遺伝子またはＬＹＳＴタンパク質に結合し、ＬＹＳＴタンパク質の生物学的機能を直接または間接的に遮断することができる。インヒビターはまた、ＬＹＳＴの下流の生物学的機能を構成する１つまたはそれを超えるシグナル伝達経路の生物学的機能を遮断することもできる。いくつかの実施形態では、ＬＹＳＴのインヒビターは、ＬＹＳＴタンパク質の内因性リガンドがＬＹＳＴタンパク質と相互作用することまたはＬＹＳＴタンパク質へ直接結合することを防止することによって作用する。インヒビターは、ＬＹＳＴタンパク質が関与するタンパク質間相互作用を遮断することができるか、ＬＹＳＴタンパク質とリガンドとの複合体の機能的活性を防止または軽減することができる。ＬＹＳＴタンパク質に直接結合するインヒビターは、ＬＹＳＴタンパク質の活性部位の直接的な閉塞またはＬＹＳＴ相互作用の立体的（ｓｔｅａｒｉｃ）遮断によるなどの間接的な閉塞を介して作用し得る。例えば、いくつかの実施形態では、インヒビターは、タンパク質相互作用ドメイン（ＷＤ４０反復モチーフのタンデムコピーによって形成されたソレノイドタンパク質ドメインなど）の機能を遮るか閉鎖する。他の実施形態では、インヒビターは、活性部位から空間的に離れた位置に結合する。
【００６３】
ＬＹＳＴタンパク質に結合するインヒビターは、機構（二量体化の誘導、オリゴマー化の誘導、高次構造の変化の誘導、触媒機能の防止、分解の誘導、免疫細胞による取り込みの誘導、標的細胞による取り込みの防止、リガンド結合の防止、リン酸化の防止、変性の誘導、１つまたはそれを超える翻訳後修飾の防止、または他の点ではＬＹＳＴタンパク質の天然の三次構造の変更が含まれるが、これらに限定されない）によってＬＹＳＴ機能を防止することができる。
【００６４】
ＬＹＳＴによる細胞シグナル伝達経路の開始または伝達にはＬＹＳＴタンパク質へのリガンドの結合が必要であり得ると理解されている。したがって、ＬＹＳＴが関与するシグナル伝達経路を遮断し、任意選択的に、ＬＹＳＴおよびその受容体の共ライゲーション（ｃｏ−ｌｉｇａｔｉｏｎ）を防止するタンパク質、抗体、または小分子は、有用な免疫調整剤である。以下で考察するＬＹＳＴインヒビターのクラスには、抗体および機能的核酸が含まれる。
１．抗体
【００６５】
ＬＹＳＴタンパク質、そのリガンド、またはそのアクセサリー分子への直接的結合によってＬＹＳＴの機能を阻害する抗体を開示する。任意の特異的抗体を、本明細書中に提供した方法および組成物で使用することができる。抗体は、ＬＹＳＴタンパク質上のエピトープに結合する抗原結合部位を含み得る。ＬＹＳＴへの抗体の結合により、１つまたはそれを超える異なる機構を介してＬＹＳＴタンパク質の機能を阻害または軽減することができる。
【００６６】
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号２のアミノ酸配列によってコードされるタンパク質内のエピトープに特異的に結合する。エピトープは、線状エピトープであり得、配列番号２の一次配列の１つまたはそれを超える連続アミノ酸を含み得る。他の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＬＹＳＴタンパク質の三次元表面フィーチャ（3-D  surface  feature）、形状、または三次構造を含む高次構造エピトープに結合することができる。いくつかの実施形態では、三次元表面フィーチャは、任意の数の配列番号２由来のアミノ酸、またはそのホモログ、オルソログ、パラログ、もしくはバリアント中の対応する残基を含み得る。
【００６７】
いくつかの実施形態では、配列番号２のアミノ酸配列によってコードされるタンパク質内のエピトープに特異的に結合する抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号２のアミノ酸配列によってコードされるタンパク質がリガンドまたは小分子によって結合されない場合に限り結合することができる。
【００６８】
種々のタイプの抗体および抗体フラグメントを、開示の組成物および方法で使用することができ、この抗体および抗体フラグメントには、任意のクラスの全免疫グロブリン、そのフラグメント、および少なくとも抗体の抗原結合可変ドメインを含む合成タンパク質が含まれる。抗体は、ＩｇＧ抗体（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４など）であり得る。抗体は、抗原結合フラグメントの形態であり得、このフラグメントには、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、および単鎖可変領域などが含まれる。抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体（ｍＡｂ）であり得る。モノクローナル抗体には、重鎖および／または軽鎖の一部が特定の種に由来するか特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるか相同である一方で、鎖（複数可）の残部が別の種に由来するか別の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるか相同である「キメラ」抗体、ならびに、標的抗原に特異的に結合し、そして／または所望の生物学的活性を示す限り、かかる抗体のフラグメントが含まれる（米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））。開示の抗体を、組換え手段（例えば、アミノ酸の欠失、付加、または置換によって）によって改変して、所望の機能を媒介することにおける抗体の有効性を増大させることもできる。置換は保存的置換であり得る。例えば、抗体の定常領域中の少なくとも１つのアミノ酸を、異なる残基で置き換えることができる（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号；米国特許第６，１９４，５５１号；ＷＯ９９５８５７２号；およびＡｎｇａｌら，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：１０５−０８（１９９３）を参照のこと）。いくつかの場合、望ましくない活性（例えば、補体依存性細胞傷害性）を軽減するように変化させる。抗体は、少なくとも２つの異なる抗原性エピトープに対する結合特異性を有する二重特異性抗体であり得る。１つの実施形態では、エピトープは同一の抗原に由来する。別の実施形態では、エピトープは、２つの異なる抗原に由来する。二重特異性抗体には、二重特異性抗体フラグメントが含まれ得る（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，９０：６４４４−４８（１９９３）；Ｇｒｕｂｅｒら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照のこと）。
【００６９】
ヒトＬＹＳＴタンパク質に結合する種々の抗体は、複数の供給元（例えば、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＣＡ，ＵＳＡ，カタログ番号ｓｃ−１３６７４６）から市販されている。抗体を、当該分野で公知の任意の手段によって生成することができる。抗体の生成および産生手段の記載例には、Ｄｅｌｖｅｓ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ：Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｗｉｌｅｙ，１９９７）；Ｓｈｅｐｈａｒｄら，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，２０００）；Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  Ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９９３）；およびＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，最新版）が含まれる。インタクトなＩｇ分子のフラグメントを、当該分野で周知の方法（酵素消化および組換え手段が含まれる）を使用して生成することができる。
２．機能的核酸
【００７０】
ＬＹＳＴ遺伝子産物の転写、翻訳、または機能を阻害する機能的核酸を開示する。機能的核酸は、特異的機能（標的分子への結合または特異的反応の触媒など）を有する核酸分子である。以下により詳細に考察するように、機能的核酸分子を、以下の非限定的なカテゴリーに分類することができる：アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アプタマー、リボザイム、三重鎖形成分子、ＲＮＡｉ、および外部ガイド配列。機能的核酸分子は、標的分子が有する特異的活性のエフェクター、インヒビター、調整因子、刺激因子として作用することができるか、機能的核酸分子は、任意の他の分子から独立したｄｅ  ｎｏｖｏ活性を有し得る。
【００７１】
機能的核酸分子は、任意の高分子（ＤＮＡ、ＲＮＡ、ポリペプチド、または炭水化物鎖など）と相互作用することができる。したがって、機能的核酸は、ＬＹＳＴポリペプチドのｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡと相互作用することができるか、ＬＹＳＴポリペプチド自体と相互作用することができる。機能的核酸は、しばしば、標的分子と機能的核酸分子との間の配列相同性に基づいて他の核酸と相互作用するようにデザインされる。他の状況では、機能的核酸分子と標的分子との間の特異的認識は、機能的核酸分子と標的分子との間の配列相同性に基づかないが、むしろ、特異的認識が起こることを可能にする三次構造の形成に基づく。したがって、開示の組成物は、ＬＹＳＴタンパク質の発現または機能を軽減するようにデザインされた１つまたはそれを超える機能的核酸を含むことができる。
【００７２】
いくつかの実施形態では、組成物は、ＬＹＳＴｍＲＮＡを標的としてその発現または翻訳を軽減または阻害するか、ＬＹＳＴタンパク質の発現を軽減または阻害するか、その活性を軽減するか、その分解を増加させるようにデザインされた機能的核酸またはポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、機能的核酸のｉｎ  ｖｉｖｏ発現に適切なベクターを含む。
【００７３】
いくつかの実施形態では、機能的核酸またはポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列をコードする核酸のセグメントもしくはその相補物、または配列番号２のアミノ酸配列をコードする核酸と６５％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一の核酸配列を有するそのバリアントを標的とするようにデザインされている。
【００７４】
他の実施形態では、機能的核酸またはポリペプチドは、配列番号１の核酸配列のセグメントもしくはその相補物、または配列番号１と少なくとも６５％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一の核酸配列を有するそのバリアントを標的とするようにデザインされている。
【００７５】
いくつかの実施形態では、機能的核酸は、配列番号１の核酸またはその相補物と、例えば、ストリンジェントな条件下でハイブリッド形成する。いくつかの実施形態では、機能的核酸は、配列番号２をコードする核酸配列またはその相補物と、例えば、ストリンジェントな条件下でハイブリッド形成する。
【００７６】
開示の機能的核酸（アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ＥＧＳ、リボザイム、およびアプタマーなど）のｉｎ  ｖｉｖｏ発現のためのベクターの作製方法および使用方法は、当該分野で公知である。
ｉ．アンチセンス分子
【００７７】
機能的核酸は、アンチセンス分子であり得る。アンチセンス分子は、標準的なまたは非標準的な塩基対合のいずれかを通じて標的核酸分子と相互作用するようにデザインされている。アンチセンス分子と標的分子との相互作用は、例えば、ＲＮＡｓｅＨ媒介性のＲＮＡ−ＤＮＡハイブリッド分解を通じて標的分子の破壊を促進するようにデザインされている。あるいは、アンチセンス分子は、標的分子上で通常起こることになるプロセシング機能（転写または複製など）を中断するようにデザインされている。アンチセンス分子を、標的分子の配列に基づいてデザインすることができる。標的分子の最もアクセス可能な領域を見出すことによってアンチセンス効率を最適にするための方法が多数存在する。例示的な方法には、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ選択実験ならびにＤＭＳおよびＤＥＰＣを使用したＤＮＡ改変研究が含まれる。アンチセンス分子がＬＹＳＴ標的分子と１０−６、１０−８、１０−１０、もしくは１０−１２未満または１０−６、１０−８、１０−１０、もしくは１０−１２の解離定数（Ｋｄ）で結合することが好ましい。
ｉｉ．アプタマー
【００７８】
機能的核酸はアプタマーであり得る。アプタマーは、好ましくは、特異的方法で、標的分子と相互作用する分子である。典型的には、アプタマーは、定義された二次構造および三次構造（ステム−ループまたはＧ−カルテットなど）に折り畳まれる１５〜５０塩基長の範囲の小さな核酸である。アプタマーは、小分子（ＡＴＰおよびテオフィリンなど）ならびに大分子（逆転写酵素およびトロンビンなど）に結合することができる。アプタマーは、１０−１２Ｍ未満のＫｄで標的分子と非常に強固に結合することができる。アプタマーが１０−６、１０−８、１０−１０、または１０−１２未満のＫｄでＬＹＳＴ標的分子と結合することが好ましい。アプタマーは、非常に高い特異度で標的分子に結合することができる。例えば、標的分子とこの分子上の単一の位置のみが異なる別の分子との間の結合親和性が１０，０００倍を超えて異なるアプタマーが単離されている。アプタマーのＬＹＳＴ標的分子とのＫｄが、バックグラウンド結合分子とのＫｄの少なくとも１／１０、１／１００、１／１０００、１／１０，０００、または１／１００，０００であることが好ましい。ポリペプチドなどの分子について比較する場合、バックグラウンド分子が異なるポリペプチドであることが好ましい。
ｉｉｉ．リボザイム
【００７９】
機能的核酸はリボザイムであり得る。リボザイムは、分子内または分子間のいずれかで化学反応を触媒することができる核酸分子である。リボザイムが分子間反応を触媒することが好ましい。天然の系で見出されるリボザイム（ハンマーヘッド型リボザイムなど）に基づいたヌクレアーゼまたは核酸ポリメラーゼ型反応を触媒する異なるリボザイム型を開示する。天然の系で見出されないが、ｄｅ  ｎｏｖｏで特異的反応を触媒するように操作されたリボザイムも開示する。好ましいリボザイムは、ＲＮＡ基質またはＤＮＡ基質を切断し、より好ましくは、ＲＮＡ基質を切断する。リボザイムは、典型的には、標的基質の認識および結合を通じて核酸基質を切断し、その後に切断される。この認識は、しばしば、主に標準的（canonical）または非標準的な塩基対相互作用に基づく。標的基質の認識が標的基質配列に基づいているので、この塩基対相互作用に基づくという性質によりリボザイムは核酸の特異的切断のターゲティングのための特に良好な候補である。
ｉｖ．三重鎖形成オリゴヌクレオチド
【００８０】
機能的核酸は、三重鎖形成オリゴヌクレオチド分子であり得る。三重鎖形成機能的核酸分子は、二本鎖または一本鎖の核酸のいずれかと相互作用することができる分子である。三重鎖分子が標的領域と相互作用する場合、ワトソン・クリック型塩基対合およびフーグスティーン塩基対合の両方に依存して複合体を形成する３つのＤＮＡ鎖が存在する三重鎖と呼ばれる構造が形成される。三重鎖分子は高い親和性および特異性で標的領域と結合することができるので、三重鎖分子が好ましい。三重鎖形成分子が１０−６、１０−８、１０−１０、または１０−１２未満のＫｄで標的分子に結合することが好ましい。
ｖ．外部ガイド配列
【００８１】
機能的核酸は外部ガイド配列であり得る。外部ガイド配列（ＥＧＳ）は、標的核酸分子に結合して複合体を形成する分子であり、この複合体はＲＮａｓｅＰによって認識され、その後にＲＮａｓｅＰが標的分子を切断する。ＥＧＳを、最適なＲＮＡ分子を特異的に標的とするようにデザインすることができる。ＲＮＡｓｅＰは、細胞内の転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）のプロセシングを補助する。細菌ＲＮＡｓｅＰを補充し、ＥＧＳを使用して標的ＲＮＡ：ＥＧＳ複合体に天然のｔＲＮＡ基質を模倣するようにさせることによって、実質的に任意のＲＮＡ配列を切断することができる。同様に、真核生物ＥＧＳ／ＲＮＡｓｅＰに指示されたＲＮＡ切断を利用して、真核細胞内の所望の標的を切断することができる。ＥＧＳ分子を作製および使用して種々の異なる標的分子の切断を容易にするための方法の代表例は、当該分野で公知である。
ｖｉ．ＲＮＡ干渉
【００８２】
いくつかの実施形態では、機能的核酸は、ＲＮＡ干渉（ｓｉＲＮＡ）を通じてサイレンシングする遺伝子を誘導する。ＬＹＳＴ遺伝子の発現を、ＲＮＡ干渉を通じて高度に特異的な様式で有効にサイレンシングすることができる。
【００８３】
遺伝子サイレンシングは、最初に、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）の添加で観察された（Ｆｉｒｅら（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ，３９１：８０６−１１；Ｎａｐｏｌｉら（１９９０）Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  ２：２７９−８９；Ｈａｎｎｏｎ，（２００２）Ｎａｔｕｒｅ，４１８：２４４−５１）。一旦ｄｓＲＮＡが細胞に入ると、ｄｓＲＮＡは、ダイサーと呼ばれるＲＮａｓｅＩＩＩ様酵素によって、３’末端に２つのヌクレオチドオーバーハングを含む２１〜２３ヌクレオチド長の二本鎖低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）に切断される（Ｅｌｂａｓｈｉｒら，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．，１５：１８８−２００（２００１）；Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎら，Ｎａｔｕｒｅ，４０９：３６３−６（２００１）；Ｈａｍｍｏｎｄら，Ｎａｔｕｒｅ，４０４：２９３−６（２０００）；Ｎｙｋａｎｅｎら，Ｃｅｌｌ，１０７：３０９−２１（２００１）；Ｍａｒｔｉｎｅｚら，Ｃｅｌｌ，１１０：５６３−７４（２００２））。ｉＲＮＡもしくはｓｉＲＮＡの影響またはその使用は、いかなるタイプの機構にも制限されない。
【００８４】
１つの実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ｓｉＲＮＡと標的ＬＹＳＴ  ＲＮＡの両方の間で配列が同一な領域内の相同ＬＹＳＴ  ＲＮＡ分子（ＬＹＳＴ  ｍＲＮＡなど）の特異的分解を引き起こす。
【００８５】
配列特異的遺伝子サイレンシングを、哺乳動物細胞において酵素ダイサーによって産生されたｓｉＲＮＡを模倣する合成された短い二本鎖ＲＮＡを使用して達成することができる（Ｅｌｂａｓｈｉｒら，Ｎａｔｕｒｅ，４１１：４９４−４９８（２００１））（Ｕｉ−Ｔｅｉら，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ，４７９：７９−８２（２０００））。
【００８６】
ｓｉＲＮＡは、化学合成またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ合成することができるか、細胞内でのｓｉＲＮＡにプロセシングされる短い二本鎖ヘアピン様ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）の結果であり得る。例えば、ＷＯ０２／４４３２１号は、３’オーバーハング末端と塩基対合した場合に標的ｍＲＮＡを配列特異的に分解することが可能なｓｉＲＮＡを開示しており、この文献は、これらのｓｉＲＮＡの作製方法の参考として本明細書中に組み込まれる。合成ｓｉＲＮＡを、一般に、アルゴリズムおよび従来のＤＮＡ／ＲＮＡ合成機を使用してデザインする。供給業者には、Ａｍｂｉｏｎ（Ａｕｓｔｉｎ，Ｔｅｘａｓ）、ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ（Ａｓｈｌａｎｄ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）、Ｄｈａｒｍａｃｏｎ（Ｌａｆａｙｅｔｔｅ，Ｃｏｌｏｒａｄｏ）、Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｓｔｅｒｌｉｎｇ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ）、ＭＷＢ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｅｓｂｅｒｓｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｐｒｏｌｉｇｏ（Ｂｏｕｌｄｅｒ，Ｃｏｌｏｒａｄｏ）、およびＱｉａｇｅｎ（Ｖｅｎｔｏ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）が含まれる。ｓｉＲＮＡを、ＡｍｂｉｏｎのＳＩＬＥＮＣＥＲ（登録商標）ｓｉＲＮＡ構築キットなどのキットを使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏで合成することもできる。いくつかの実施形態では、組成物は、機能的核酸を発現するベクターを含む。ベクターからのｓｉＲＮＡの産生は、より一般的には、低分子ヘアピン型ＲＮＡｓｅ（ｓｈＲＮＡ）の転写を通じて行われる。ｓｈＲＮＡを含むベクターの産生のためのキット（例えば、ＩｍｇｅｎｅｘのＧＥＮＥＳＵＰＰＲＥＳＳＯＲ（商標）構築キットおよびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのＢＬＯＣＫ−ＩＴ（商標）誘導性ＲＮＡｉプラスミドおよびレンチウイルスベクターなど）が利用可能である。いくつかの実施形態では、機能的核酸は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、またはｍｉＲＮＡである。
Ｂ．賦形剤、送達ビヒクル、およびデバイス
【００８７】
ＬＹＳＴインヒビターを投与し、送達ビヒクルの補助ありまたは無しで被験体の細胞内に取り込ませることができる。開示のインヒビターに適切な送達ビヒクルは、当該分野で公知であり、このビヒクルを特定のインヒビターに適するように選択することができる。１つの好ましい実施形態では、インヒビターを、静脈内、皮下、腹腔内、または局所への注射によって送達する。典型的なキャリアは、食塩水、リン酸緩衝食塩水、および他の注射用キャリアである。
【００８８】
送達ビヒクルを含むか含まずに１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを含む製剤を開示する。開示のＬＹＳＴインヒビターを、１つまたはそれを超える薬学的に許容され得るキャリアを含む薬学的組成物に製剤化することができる。薬学的組成物を、インヒビターおよび使用目的に応じて異なる投与機構のために製剤化することができる。非経口（筋肉内、腹腔内、静脈内（ＩＶ）、または皮下注射）、局部、または経皮（受動的かイオン導入法もしくはエレクトロポレーションを使用するかのいずれか）への投与経路または生体浸食性インサートの使用による投与のために製剤化された薬学的組成物を開示する。
１．非経口投与
【００８９】
いくつかの実施形態では、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターおよび任意選択的に送達ビヒクルを、非経口注射による水溶液での投与のために製剤化する。製剤はまた、懸濁液またはエマルジョンの形態であり得る。一般に、有効量の活性薬剤、ターゲティング部分、および任意選択的な送達ビヒクルを含む薬学的組成物を提供し、この薬学的組成物は、任意選択的に、薬学的に許容され得る希釈剤、防腐剤、可溶化剤（solubilizer）、乳化剤、アジュバント、および／またはキャリアを含む。かかる組成物は、希釈剤
、滅菌水、種々のバッファの内容（例えば、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、アセテート、ホスフェート）、ｐＨ、およびイオン強度の緩衝食塩水、ならびに、任意選択的に、添加物（界面活性剤および可溶化剤（solubilizing  agent）（例えば、ポリソルベート２０または８０とも呼ばれるＴＷＥＥＮ（登録商標）２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム）、および防腐剤（例えば、チメロサール（Ｔｈｉｍｅｒｓｏｌ）、ベンジルアルコール）、ならびに増量物質（例えば、ラクトース、マンニトール）など）を含む。非水性の溶媒またはビヒクルの例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油（オリーブ油およびトウモロコシ油など）、ゼラチン、および注射用有機エステル（オレイン酸エチルなど）である。製剤を凍結乾燥させ、使用直前に再溶解／再懸濁することができる。製剤を、例えば、細菌保持フィルター（bacteria  retaining  filter）による濾過、組成物への滅菌剤の組み込み、組成物の照射、または組成物の加熱によって滅菌することができる。
２．肺または粘膜への投与
【００９０】
さらなる実施形態では、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターおよび任意選択的に送達ビヒクルを、粘膜（口腔、眼、肺、鼻、経口（舌下、頬側）、膣、または直腸の粘膜など）への投与のために製剤化する。
【００９１】
粘膜への投与のための製剤は、典型的には、錠剤、ゲル、カプセル、懸濁液、またはエマルジョンに組み込むことができる噴霧乾燥した薬物粒子である。標準的な薬学的賦形剤を、任意の製剤従事者から入手可能である。
【００９２】
１つの実施形態では、化合物を、肺送達（鼻腔内投与または経口吸入など）のために製剤化する。気道は、大気と血流との間のガス交換に関与する構造物である。上気道および下気道を、誘導気道と呼ぶ。終末細気管支は呼吸細気管支に分岐し、次いで、最終的な呼吸領域である肺胞、すなわち肺深部に至る。肺深部、すなわち肺胞は、全身薬物送達のための吸入治療エアロゾルの主な標的である。肺内で活性な治療剤を全身投与し、経肺吸収を介してターゲティングすることができる。本明細書中で使用されるエアロゾルという用語は、噴射剤を使用して生成されるかどうかと関係なく、溶液または懸濁液であり得る微粒子状の微細ミストの任意の調製物をいう。エアロゾルを、標準的な技法（超音波処理または高圧処理など）を使用して生成することができる。
【００９３】
肺製剤のためのキャリアを、乾燥粉末製剤用および溶液としての投与用のキャリアに分類することができる。気道への治療剤の送達のためのエアロゾルは、当該分野で公知である。上気道を介した投与のために、製剤を、溶液（例えば、水または等張食塩水、緩衝化または非緩衝化）に、または懸濁液として（鼻腔内投与のための液滴または噴霧剤として）製剤化することができる。好ましくは、かかる溶液または懸濁液は、鼻腔内の分泌物と比較して等張であり、且つほぼ同じｐＨ（例えば、約ｐＨ４．０〜約ｐＨ７．４またはｐＨ６．０〜ｐＨ７．０の範囲）のものである。緩衝液は生理学的に適合するべきであり、簡潔には、例として、リン酸緩衝液が含まれる。当業者は、鼻腔および／または上気道への投与に無害な水溶液に適切な食塩水の含量およびｐＨを容易に決定することができる。
【００９４】
空気力学的直径が約５ミクロン未満のエアロゾルまたは噴霧乾燥粒子のいずれかとして送達した場合、組成物を吸入しながら肺に送達し、肺上皮内層を通過して血流に到達させることができる。
【００９５】
大きな粒径の乾燥粉末製剤（「ＤＰＦ」）は、流動性が改善されており（低凝集など）、エアロゾル化がより容易であり、潜在的に食作用が低い特徴を有する。一般に、平均直径が主に５ミクロン未満の範囲の吸入治療用乾燥粉末エアロゾルを生成するが、空気力学的直径の好ましい範囲は１ミクロンと１０ミクロンの間である。大きな「キャリア」粒子（薬物を含まない）を治療エアロゾルと共送達することで、他のあり得る利点のうちの効率的なエアロゾル化の達成を補助している。肺送達用製剤には、単層リン脂質小胞、リポソーム、またはリポタンパク質粒子が含まれる。核酸を含む製剤およびかかる製剤の作製方法は、当業者に周知である。治療用生成物の肺送達のためにデザインされた広範な機械的デバイスを使用することができ、この機械的デバイスには、ネブライザー、定量吸入器、および粉末吸入器（その全てについて当業者は精通している）が含まれるが、これらに限定されない。
３．局部投与および経皮投与
【００９６】
活性薬剤および任意選択的な送達ビヒクルを、局部に適用することができる。局部投与には、例えば、手術中の血管系または組織もしくはプロテーゼへの直接適用、または皮膚への直接投与が含まれ得る。
【００９７】
経皮製剤も調製することができる。これらは、典型的には、軟膏、ローション、噴霧剤、またはパッチであり、これらの全てを、標準的なテクノロジーを使用して調製することができる。経皮製剤は、浸透促進剤を含むことができる。局部投与または経皮投与のための標準的な薬学的賦形剤を、任意の製剤従事者から入手可能である。
４．制御送達マトリックス
【００９８】
ポリマーデバイス（ロッド、シリンダー、フィルム、ディスク）の植込または注射（微粒子）後の長期間の全身放出のための制御放出ポリマーデバイスを作製することができる。マトリックスは、ミクロスフィアなどの微粒子の形態であり得、ここで、ＬＹＳＴインヒビターはコアがポリマーシェルと異なる材料のものである固体のポリマーマトリックスまたはマイクロカプセル内に分散され、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターがコア中に分散または懸濁し、インヒビターは本質的に液体または固体であり得る。本明細書中で特に定義しない限り、微粒子、ミクロスフィア、およびマイクロカプセルを、互換的に使用する。あるいは、ポリマーは、ナノメートルから４センチメートルの範囲の薄スラブまたは薄膜としての成型品、磨砕もしくは他の標準的な技術によって生成された粉末、またはさらにゲル（ヒドロゲルなど）であり得る。
【００９９】
非生分解性または生分解性のマトリックスのいずれかを、開示のＬＹＳＴのインヒビターの送達のために使用することができるが、生分解性マトリックスが好ましい。これらは、天然ポリマーまたは合成ポリマーであり得るが、分解および放出のプロフィールの特徴付けがより良好であるので、合成ポリマーが好ましい。ポリマーを、望ましい放出期間に基づいて選択する。いくつかの場合、直線的な放出が最も有用であり得るが、他の場合、パルス放出または「大量放出」でより有効な結果を得ることができる。ポリマーは、ヒドロゲル（典型的には、約９０重量％までの水を吸収する）の形態であり得、任意選択的に、多価イオンまたはポリマーと架橋することができる。
【０１００】
マトリックスを、溶媒蒸発、噴霧乾燥、溶媒抽出、および当業者に公知の他の方法によって形成することができる。生体浸食性ミクロスフィアを、例えば、Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ  ａｎｄ  Ｌａｎｇｅｒ，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ５：１３−２２（１９８７）；Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚら，Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ６：２７５−２８３（１９８７）；およびＭａｔｈｉｏｗｉｔｚら，Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｃｉ．３５：７５５−７７４（１９８８）に記載のように薬物送達用のミクロスフィアの作製のために開発された任意の方法を使用して調製することができる。デバイスを、典型的には、全身処置用の投薬量よりも遥かに少ない投薬量を送達する、植込または注射の領域を処置するための局所放出のために製剤化することができる。デバイスを、局所送達または全身送達のために製剤化することもできる。
【０１０１】
薬物および抗体などのカーゴを血管系、血管平滑筋の細胞もしくは部位、血餅、または血栓症に送達するようにデザインされた微粒子およびナノ粒子は当該分野で公知である。例えば、Ｗｉｃｋｌｉｎｅら，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ，ａｎｄ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、２６：４３５−４４１（２００６），オンライン公開（Ｄｅｃ．２００５）、ならびに米国特許出願公開第２００２／０１６８３２０号、同第２００３／００８６８６７号、同第２００３／０１２９１３６号、同第２００４／００５８９５１号、同第２００４／０１１５１９２号、同第２００６／０１４７３８０号、同第２００６／０２３９９１９号、同第２００７／０１４０９６５号、同第２００７／０２０２０４０号、同第２００７／０２５８９０８号、同第２００８／０１７５７９２号、同第２００８／０２４７９４３号、および同第２０１３／００６４７６５号を参照のこと。
【０１０２】
例えば、以前に人工血液代用物質と見なされたペルフルオロカーボンナノ粒子は、分子イメージングおよび標的化薬物送達のためのプラットフォームテクノロジー（すなわち、いわゆる「セラノスティック」テクノロジー）に発展している。通常の直径が２５０ｎｍであるこれらの脂質被包粒子を、静脈内に投与することができ、この粒子は、典型的には、サイズによってインタクトな血管系に制限される。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルはリポソームである。ＬＹＳＴインヒビターが抗体、タンパク質、または小分子である場合、好ましい送達ビヒクルはリポソームであり得る。一定の細胞型（例えば、マクロファージ細胞）への開示のＬＹＳＴインヒビターの直接送達のためのリポソームを開示する。マクロファージ細胞は、リポソームを内在化し、それにより、１つまたはそれを超えるインヒビターをマクロファージの細胞内区画に送達することができる。リポソーム作製に適切な方法、材料、および脂質は、当該分野で公知である。リポソーム送達ビヒクルは、複数の供給元から市販されている。リポソームを、単一の脂質二重層（すなわち、リポソームは単層であり得る）またはいくつかの同心円状の脂質二重層（すなわち、リポソームは多重層であり得る）から形成することができる。リポソームを、単一の脂質から形成することができるが、いくつかの実施形態では、リポソームを、１つを超える脂質の組み合わせから形成する。脂質は、生理学的ｐＨで中性、陰イオン性、または陽イオン性であり得る。
【０１０４】
適切な中性および陰イオン性の脂質には、ステロールおよび脂質（コレステロール、リン脂質、リゾ脂質、リゾリン脂質、およびスフィンゴ脂質など）が含まれる。中性および陰イオン性の脂質には、ホスファチジルコリン（ＰＣ）（卵ＰＣ、ダイズＰＣなど）（１，２−ジアシル−グリセロ−３−ホスホコリンが含まれる）；ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）；糖脂質；スフィンゴリン脂質（スフィンゴミエリンなど）、スフィンゴ糖脂質（１−セラミジルグルコシドとしても公知）（セラミドガラクトピラノシド、ガングリオシド、およびセレブロシドなど）；脂肪酸、カルボン酸基を含むステロール（コレステロールまたはその誘導体など）；ならびに１，２−ジアシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンが含まれる）、または１，２−ジオレオリルグリセリルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２−ジヘキサデシルホスホエタノールアミン（ＤＨＰＥ）、１，２−ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、１，２−ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、および１，２−ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１０５】
ＴＡＰ脂質とも呼ばれるトリメチルアンモニウム塩（例えば、メチル硫酸塩）。適切なＴＡＰ脂質には、ＤＯＴＡＰ（ジオレオイル−）、ＤＭＴＡＰ（ジミリストイル−）、ＤＰＴＡＰ（ジパルミトイル−）、およびＤＳＴＡＰ（ジステアロイル−）が含まれるが、これらに限定されない。他の適切な陽イオン性脂質には、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、１，２−ジアシルオキシ−３−トリメチルアンモニウムプロパン、Ｎ−［１−（２，３−ジオロイルオキシ）プロピル］−Ν，Ν−ジメチルアミン（ＤＯＤＡＰ）が含まれる。他の適切な脂質には、上記の中性、陰イオン性、および陽イオン性の脂質のＰＥＧ化誘導体が含まれる。１つまたはそれを超えるＰＥＧ化脂質誘導体の組み込みにより、その表面上にポリエチレングリコール鎖を示すリポソームを得ることができる。得られたリポソームは、その表面上にＰＥＧ鎖を欠くリポソームと比較して、ｉｎ  ｖｉｖｏでの安定性および循環時間が増加し得る。
【０１０６】
ＬＹＳＴインヒビターが核酸またはベクターである場合、送達ビヒクルは、ウイルスベクター、例えば、アデノウイルスベクターなどの市販の調製物であり得る（Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｌａｖａｌ，Ｑｕｅｂｅｃ，Ｃａｎａｄａ）。ウイルスベクター送達は、ウイルス系（組換えレトロウイルスゲノムをパッケージングすることができるレトロウイルスベクター系など）を介し得る（例えば、Ｐａｓｔａｎら，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：４４８６；Ｍｉｌｌｅｒら，（１９８６）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．６：２８９５を参照のこと）。次いで、組換えレトロウイルスを使用して感染させ、それにより、ＬＹＳＴインヒビターをコードする核酸を感染細胞に送達することができる。変化させた核酸を哺乳動物細胞に正確に組み込む方法は、勿論、レトロウイルスベクターの使用に制限されない。この手順のために他の技術を広く利用可能であり、他の技術には、アデノウイルスベクター（Ｍｉｔａｎｉら，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．５：９４１−９４８（１９９４））、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター（Ｇｏｏｄｍａｎら，Ｂｌｏｏｄ  ８４：１４９２−１５００（１９９４））、レンチウイルスベクター（Ｎａｉｄｉｎｉら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７２：２６３−２６７（１９９６））、偽型レトロウイルスベクター（Ａｇｒａｗａｌら，Ｅｘｐｅｒ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２４：７３８−７４７（１９９６））の使用が含まれる。
【０１０７】
リポソーム送達ならびに受容体媒介機構および他のエンドサイトーシス機構などの物理的形質導入技術も使用することができる（例えば、Ｓｃｈｗａｒｔｚｅｎｂｅｒｇｅｒら，Ｂｌｏｏｄ  ８７：４７２−４７８（１９９６）を参照のこと）。市販のリポソーム調製物（リポフェクチン、リポフェクタミン（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ，Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，Ｍｄ．）、スーパーフェクト（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎｃ．Ｈｉｌｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、およびトランスフェクタム（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｂｉｏｔｅｃ，Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）、ならびに当該分野で標準的な手順にしたがって開発された他のリポソームなど）が周知である。さらに、開示の核酸またはベクターを、エレクトロポレーション（Ｇｅｎｅｔｒｏｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）から利用可能なテクノロジー）ならびにソノポレーションまたは超音波処理器（ＩｍａＲｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ．，Ｔｕｃｓｏｎ，Ａｒｉｚ．）の手段によってｉｎ  ｖｉｖｏで送達することができる。開示の組成物および方法を、任意のこれらまたは他の一般的に使用されている遺伝子移入法と併せて使用することができる。
５．グラフトおよび医療デバイス
【０１０８】
ＬＹＳＴの阻害による免疫調節のための開示の組成物を、医療デバイス上にコーティングするか医療デバイス内に組み込むことができるか、ｅｘ  ｖｉｖｏでの植込み型血管グラフトを前処理するために使用することができる。
グラフト
【０１０９】
ＬＹＳＴインヒビターを使用して、被験体への植込前にｅｘ  ｖｉｖｏで血管グラフトを前処理することができる。１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターおよび任意選択的に送達ビヒクルを含む組成物を、組成物が接着し、薬物処置に最適な位置で組織またはグラフトにくまなく分布することが保障される方法によって組織に適用することができる。いくつかの実施形態では、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを、目的の領域に接着させるか、長期間の局所処置を提供するために十分な薬物負荷を保持するか、所望の速度またはスケジュールでＬＹＳＴインヒビターを放出するか、組織またはグラフト内の最適な範囲に浸透するか、その組み合わせが行えるようにデザインされたナノ粒子、微粒子、リポソーム、ミセル、エマルジョン、ゲル、またはコーティングを使用して送達する。
【０１１０】
手術で用いるグラフトを、生分解性足場上にｅｘ−ｖｉｖｏで細胞を播種することによって形成することもできる。グラフトは、自己グラフト、例えば、伏在静脈または橈骨動脈；保存自己グラフト（例えば、凍結保存静脈）；同種異系グラフト；異種グラフト；または合成品（例えば、織状ポリエステル、ポリウレタン（ＬＹＣＲＡ（登録商標））、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、ＧＯＲＥ−ＴＥＸ（登録商標）、またはポリエチレン（ｐｏｌｙｅｔｈｅｌｅｎｅ）テレフタラート（ＤＡＣＲＯＮ（登録商標）））であり得る。内胸動脈、橈骨動脈、または内腸骨動脈を使用した人工同種グラフトは、有用且つ耐久性の有る血液導管の例である。例示的なグラフトを以下で考察する。
組織工学血管グラフト
【０１１１】
１つまたはそれを超えるＬＹＳＴのインヒビターを含む組織工学血管グラフト（tissue  engineering  vascular  graft）（ＴＥＶＧ）を開示する。組織工学による血管グラフト（tissue-engineered  vascular  graft）（ＴＥＶＧ）は、その成長能力を最大限に活用することができれば、先天性心疾患の手術分野の進歩にかなり有望である。例えば、ＴＥＶＧを、修正フォンタン手術を受けた患者において下大静脈を肺動脈に接続する血液導管として使用するためにデザインすることができる。２５人の単心室心奇形患者におけるＴＥＶＧの使用を評価する長期間（１０年超）のパイロット研究では、グラフトに関連する死亡またはグラフトの不全のないことが実証された。この研究では、ＴＥＶＧの成長能力により成長能力を有する最初の人工グラフトが実現されることも確認された。主なグラフト関連合併症は狭窄であり、およそ３０％の患者が罹患し、１６％（４／２５）が重篤な狭窄を処置するために血管形成術を必要とした。
【０１１２】
１つの実施形態では、ＴＥＶＧを、ポリグリコール酸繊維の管から製作された生分解性管状足場から形成する。管を、ポリ乳酸（ＰＬＡ）とポリ−カプロラクトンの比が５０：５０などのコポリマーでコーティングすることができる。被験体内への植込前に、足場に細胞を播種することができる。いくつかの実施形態では、細胞は、意図するレシピエント由来の自己細胞である。
【０１１３】
組織工学による血管グラフト（ＴＥＶＧ）へのマクロファージの過剰な浸潤により瘢痕化が促進され、それにより、血管の肥厚、閉塞、および狭窄に至ることを明らかにした。したがって、本明細書中に記載の組成物および方法を使用して、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを局所的に且つ制御された様式でＴＥＶＧに送達し、それによりマクロファージによる浸潤を防止または阻害することができる。
バイパスグラフト
【０１１４】
１つまたはそれを超えるＬＹＳＴのインヒビターを含むバイパスグラフトを開示する。バイパス手術の一般的形態は、冠状動脈への自家移植のために脚部から伏在静脈を切除することを含む。相当数の症例において、これらのグラフトは、主に新生内膜過形成に原因する再狭窄のために失敗に終わる。本明細書中に記載の組成物および方法を使用して、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを局所的に且つ制御された様式で自己グラフトに送達することができる。インヒビターを、手術前、手術のとき、および／または手術の直後に投与することができる。伏在静脈の切除後、組織を、胸部開口およびグラフト植込のための調製中に食塩水に数時間（且つ頻繁に）懸濁することができる。１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターおよび任意選択的なターゲティングシグナル、送達ビヒクル、またはその組み合わせを含む組成物を、この期間中に伏在静脈とインキュベートすることができる。
動静脈グラフト
【０１１５】
１つまたはそれを超えるＬＹＳＴのインヒビターを含む動静脈グラフトを開示する。米国において末期腎疾患が増加している。血液透析アクセスによる病的状態は依然として患者の生活の質に関する大きな問題であり；社会にとって相当な負担でもある。ネイティブ動静脈フィステル（ＡＶＦ）は依然として血液透析用のアクセスを得るための最適な導管であり、補綴具ＡＶＧなどの他の選択肢と比較して、優れた結果が得られる。不運なことに、各個体は、適切な部位および血管の数が限定されているために、作製することができるネイティブＡＶＦ数が制限される。末期腎疾患患者は、通常、重篤な共存症を有し、診断および治療のために広範な静脈穿刺が一生涯にわたって必要であるので、アクセス部位は制限される。最初のＡＶＦの全ての選択肢を使い果たした患者では、新規のアクセス部位はＡＶグラフトを使用しなければならない。これらのグラフトは新生内膜過形成による再狭窄の影響を受けやすく、その有効性が制限される。１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを含み、任意選択的にターゲティングシグナル、送達ビヒクル、またはその組み合わせを含む組成物のグラフト上でのインキュベーションを、手術のときに行うことができる。
医療デバイス
【０１１６】
いくつかの実施形態では、患者の新生内膜形成などの血管増殖障害を軽減または阻害するために、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを含む組成物で、医療デバイスまたはその構成要素上にコーティングするか、医療デバイスまたはその構成要素内（血管ステント中のポリマーリザーバ内など）に組み込む。デバイスは、被験体内に一過性に挿入されるデバイスまたは恒久的に植込まれるデバイスであり得る。いくつかの実施形態では、デバイスは外科的デバイスである。
【０１１７】
医療デバイスの例には、針、カニューレ、カテーテル、シャント、バルーン、および植込物（ステントおよび弁など）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、ＬＹＳＴインヒビターまたは薬学的組成物を、医療デバイスへのその組み込みが可能なように製剤化することができ、それにより、再狭窄または他の血管増殖障害などの状態を防止または処置するためにインヒビターを部位に直接適用することができる。ＬＹＳＴインヒビターまたはその薬学的組成物を、医療デバイス上のコーティング内に含めることによって製剤化することができる。処方期間にわたってインヒビターを放出することができる利用可能な種々のコーティング（例えば、ポリマーコーティングなど）が存在する。インヒビターまたはその薬学的組成物を、医療デバイス内に直接包埋することができる。いくつかの実施形態では、ＬＹＳＴインヒビターの放出および送達を容易にする微粒子またはリポソームなどの送達ビヒクル中に含まれるＬＹＳＴインヒビターを、該デバイス上または該デバイス内にコーティングする。
ステント
【０１１９】
いくつかの実施形態では、医療デバイスは、ステントなどの血管植込物である。医学分野では、ステントを、血管の制限を防止または排除するために利用する。ステントを、制限された血管が広げられるように該制限された血管内に挿入することができる。かかる血管植込物を使用した経験から、隣接する細胞の過剰な成長により特に植込物の末端で血管が再度制限され、植込物の有効性が低下することが示されている。動脈硬化性狭窄の排除のためにステントをヒト動脈に挿入する場合、１年以内に血管植込物の末端に内膜過形成が起こり得、結果として狭窄が再発する。
【０１２０】
したがって、いくつかの実施形態では、ステントを、ＬＹＳＴインヒビターおよび任意選択的に送達ビヒクルを含む組成物でコーティングまたは負荷する。
【０１２１】
多数のステントが市販されているか、別段当該分野で公知である。ステントを、適切な材料の薄肉管から形成（すなわち、エッチングまたは切断）するか、適切な材料の薄板から形成し、チューブへと巻くことができる。
【０１２２】
ステントに適切な材料には、ステンレス鋼、イリジウム、白金、金、タングステン、タンタル、パラジウム、銀、ニオビウム、ジルコニウム、アルミニウム、銅、インジウム、ルテニウム、モリブデン、ニオビウム、スズ、コバルト、ニッケル、亜鉛、鉄、ガリウム、マンガン、クロム、チタン、アルミニウム、バナジウム、およびカーボン、ならびにその組み合わせ、合金、および／または積層物が含まれるが、これらに限定されない。例えば、ステントを、コバルト合金（Ｌ６０５またはＭＰ３５Ｎ（登録商標）など）、ニチノール（ニッケル−チタン形状記憶合金）、ＡＢＩ（パラジウム−銀合金）、Ｅｌｇｉｌｏｙ（登録商標）（コバルト−クロム−ニッケル合金）などから形成することができる。ＭＰ３５Ｎ（登録商標）と積層するタンタルなどの相互に積層される２つまたはそれを超える材料からステントを形成することができることも企図される。ステントを、異なる金属、合金、または他の材料の同心円層を有するワイヤから形成することもできる。ステントの実施形態を、中空管、または他の材料で充填された管から形成することもできる。上記の材料および積層物は、例であることを意図し、制限することを決して意図しない。
【０１２３】
ステントは、薬剤溶出性ステントであり得る。壁組織に人工の放射状支持物を提供する一方で、同時に処置部位に治療物質を送達する種々の薬剤溶出性ステントが当該分野で公知である。ステントが含まれる管腔内デバイスを、その外面を薬物放出剤、成長因子、または抗体などの物質でコーティングすることができる。管腔の中心部から薬物を溶出させるために側壁を横断する孔またはポートを有する中空の管状構造を有するステントも開発されている。ステントの中空性により管腔の中心部に薬液が負荷され、ステントの側壁中のポートまたは孔を介して薬液が送達されるが、中空の環状構造は、血管内に適切な足場を提供するための適切な機械的強度がない場合がある。
【０１２４】
ＬＹＳＴインヒビターを溶出するステントを開示する。いくつかの実施形態では、デバイスを、ＬＹＳＴインヒビターおよび１つまたはそれを超えるさらなる治療剤（抗血小板剤、抗凝固剤、抗菌剤、および代謝拮抗剤が含まれるが、これらに限定されない）でコーティングするか、これらを浸透させることも行う。
【０１２５】
本明細書中に開示の組成物および方法と共に使用することができる例示的なステントには、米国特許第５，８９１，１０８号、同第６，９１８，９２９号、同第６，９２３，８２８号、同第６，９４５，９９２号、同第６，９８６，７８５号、同第７，０６０，０９０号、同第７，１４４，４１９号、同第７，１６３，５５５号、同第７，３２３，００８号、同第７，６５１，５２７号、同第７，６５５，０３４号、同第７，６７８，１４１号、同第７，７４４，６４５号、同第７，９４２，９１７号、同第８，００１，９２５号、同第８，００１，９２５号、同第８，０３４，０９９号、同第８，０４８，１４９号、同第８，０６６，７６０号、同第８，１００，９６０号、同第８，１５７，８５５号、同第８，１７２，８９３号、同第８，１８２，５２４号、同第８，１８７，２８４号、同第８，１８７，３２２号、同第８，１９７，５２８号、同第８，２０６，４３２号、同第８，２２１，４９０号、同第８，２３１，６６９号、同第８，２３６，０４４号、同第８，２５２，０４８号、同第８，２５２，０６５号、同第８，２５７，４２５号、同第８，２５７，４３１号、同第８，２９２，９４５号、同第８，２９８，２７８号、同第８，２９８，２８０号、同第８，３４８，９９１号、同第８，３４８，９９２号、同第８，３４８，９９３号、同第８，３５３，９５２号、同第８，３５９，９９８号、同第８，３６１，１４０号、同第８，３７２，１３４号、同第８，３７２，１３８号、同第８，３７７，１１２号、同第８，３８８，６７６号、同第８，３９８，６９５号、同第８，４１４，６３７号、同第８，４１４，６３９号、および同第８，４１４，６５６号に記載のステントが含まれるが、これらに限定されない。
バイオプロテーゼ
【０１２６】
複数の他の補綴具は、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴのインヒビターを含むことができ、この補綴具には、心臓弁、人工関節、ペースメーカー、留置カテーテル、および美容的植込物が含まれるが、これらに限定されない。
【０１２７】
開示のＬＹＳＴインヒビターは、バイオプロテーゼの存在に関連する炎症応答および線維増殖性障害を軽減または防止することができると考えられる。したがって、いくつかの実施形態では、バイオプロテーゼを、ＬＹＳＴインヒビターおよび任意選択的に送達ビヒクルを含む組成物を用いてコーティングするか負荷する。
ＩＶ．使用方法
【０１２８】
開示のＬＹＳＴインヒビターの使用方法を提供する。本方法は、被験体におけるＬＹＳＴの発現または機能を防止、軽減、または阻害するのに有効な量の１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを含む組成物を該被験体に投与すること；該被験体内へのデバイスまたはグラフトの挿入または植込後の新生内膜形成を防止、軽減、または阻害するのに有効な量のＬＹＳＴインヒビターを含む組成物で医療デバイスまたは血管グラフトを前処理すること；またはその組み合わせを含むことができる。
Ａ．処置すべき障害および疾患
【０１２９】
ＬＹＳＴインヒビターを使用して、免疫機能（マクロファージ、血小板、およびナチュラルキラー細胞の機能が含まれるが、これらに限定されない）を変化させ、再生促進性免疫環境を引き起こすことができる。ＬＹＳＴインヒビターの使用方法（ＬＹＳＴタンパク質の転写、翻訳、または機能を阻害または遮断するようにデザインされた方法が含まれるが、これらに限定されない）を使用して、免疫応答を調整することができる。いくつかの実施形態では、本方法は、例えば、血管手術後の血管新組織の形成を促進し、新生内膜の形成を阻害し、血管開存性を改善する。生物学的および合成の血液導管の両方において内膜および新生内膜の過形成を防止するためのＬＹＳＴインヒビターの使用方法を提供する。本方法は、ＴＥＶＧ狭窄を軽減または防止し、ＴＥＶＧ機能を改善することができる。
【０１３０】
さらに、ＬＹＳＴインヒビターは、組織再生の促進、創傷治癒の改善、および異物応答の調整により広く関与し得る。したがって、再生医学に適用するための補助手段としてのＬＹＳＴインヒビターの使用方法も記載する。いくつかの実施形態では、ＬＹＳＴインヒビターの使用方法により、瘢痕形成の治癒および防止を促進（例えば、腹部手術後の癒着の治癒および防止を促進）することができる。
【０１３１】
本方法は、組織傷害の結果としての血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）の産生量を調整することができる。したがって、本方法は、過剰なまたは望ましくないＰＤＧＦ発現に関連する疾患を処置することができる。
【０１３２】
本方法はまた、過剰な線維症に起因する疾患（例えば、肝臓、肺、または心臓の線維症性疾患）を防止または処置することができる。最後に、抗ＬＹＳＴ治療方法により、異物反応を変化させて組み込みを促進するがバイオプロテーゼの被包を遮断するように免疫が調整され、それにより、ペースメーカーもしくは神経刺激器などのデバイスの機能および寿命または置換心臓弁もしくは人工関節の組み込みを改善することができる。
【０１３３】
好ましい実施形態では、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターは、被験体における疾患、障害、または状態の１つまたはそれを超える症状を軽減、阻害、または遅延させるのに有効である。開示のＬＹＳＴインヒビターは、広範な種々の治療および予防で使用され、例えば、開示のＬＹＳＴインヒビターを使用して、傷害または種々の外科的手順後の血管増殖性障害、瘢痕化、および線維症性疾患を処置または防止することができる。過剰な瘢痕または線維症性組織の存在を特徴とする疾患の処置のための１つまたはそれを超えるＬＹＳＴのインヒビターの使用方法を記載する。抗血小板治療（例えば、異常な、過剰な、または、そうでなければ望ましくない血小板活性またはＰＤＧＦシグナル伝達に起因する疾患の処置）のための１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターの使用方法も提供する。
血管増殖性障害
【０１３４】
いくつかの実施形態では、開示のＬＹＳＴインヒビターを使用して、血管増殖性障害を処置または防止することができる。かかる障害の例には、アテローム性動脈硬化症に関与する血管増殖、血管内デバイス植込後の血管増殖、一般に血管再建術またはＡ−Ｖシャント術後に生じる血管吻合（ａｎａｓｔａｍｏｓｉｓ）部位での血管増殖、頸動脈内膜切除後の血管増殖、および移植血管症が含まれるが、これらに限定されない。
【０１３５】
１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターの投与による血管増殖性障害を処置または防止する方法を提供する。本方法は、典型的には、コントロールと比較して、マクロファージ細胞の浸潤、マクロファージ細胞のＭ１表現型からＭ２表現型への変換、またはその両方を軽減または阻害する。いくつかの実施形態では、本方法は、血管新組織の発達を減少させたり阻害したりすることなくマクロファージ細胞の増殖を軽減または阻害する。被験体は、狭窄、再狭窄、または他の血管増殖障害を有し得るか、再狭窄または他の血管増殖障害のリスクが有ると同定され得る（例えば、血管外傷、血管形成術、手術、または移植動脈症などを経験していたか、経験しているか、経験する被験体）。開示の組成物を使用して処置することができる疾患、障害、および状態を、以下でより詳細に考察する。血管傷害
【０１３６】
いくつかの実施形態では、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを、血管外傷前、血管外傷のとき、または血管外傷後に適用することができる。
【０１３７】
血管傷害は、内皮の裸出または機能障害、炎症、ならびに血管平滑筋細胞（ＶＳＭＣ）の活性化および増殖を含む連続的に起こる事象を引き起こす。複数の成長因子およびサイトカインは、機能障害性内皮細胞、炎症細胞、血小板、およびＶＳＭＣによって放出される。これらの成長因子およびサイトカインは、化学誘引、細胞遊走、増殖、アポトーシス、およびマトリックス調整を媒介し、多くの血管増殖性障害に関与する。
【０１３８】
血管増殖性の疾患および障害は、血管壁の機械的傷害、生化学的傷害、または免疫学的傷害によって開始され得る。典型的な血管外傷には、鈍的傷害および穿通性傷害の両方（裂傷、刺創、挫傷、銃創、ナイフ創、職業外傷、転落、および自動車事故、ならびに医学的介入（手術または血管形成術など）が含まれるが、これらに限定されない）に関連する血管外傷が含まれる。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、被験体は、手術を経験していたか、経験しているか、経験する。手術には、侵襲手術、低侵襲手術、または経皮手術が含まれ得る。例えば、いくつかの実施形態では、被験体は、腹部大動脈瘤、頸動脈狭窄、静脈瘤の静脈、末梢動脈閉塞性疾患、急性肢虚血、または大動脈解離を処置または修復するための手術を受けている。一般的な血管手術には、開腹腹部大動脈瘤修復、血管内動脈瘤修復（ＥＶＡＲ）、頸動脈内膜切除、頸動脈ステント留置、静脈抜去、硬化療法およびフォーム硬化療法、静脈内レーザー処置、高周波静脈焼灼、外来静脈切除、ステント留置使用／不使用の血管形成術、バイパス手術  動脈内膜切除  粥腫切除、バルーン塞栓摘出、血栓摘出、バイパス手術、開放修復（open  repair）、胸部血管内動脈瘤修復（ＴＥＶＡＲ）が含まれるが、これらに限定されない。外科医は、手術のとき、手術前、手術後に、創傷治癒の過程を強化するか、血管増殖性障害（狭窄または再狭窄を引き起こす血管増殖性障害など）の発症を防止するために１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを手術部位に適用することができる。
内膜過形成
【０１４０】
内膜過形成は、血管内皮の傷害に対する生理学的治癒応答である。内皮層の傷害によって一連の急性および慢性の炎症応答が誘発され、それにより、血小板の凝集、フィブリンの沈着を引き起こし、傷害領域に白血球が誘引される（Ｍｕｒａｋａｍｉら，Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２７２：Ｌ１９７−Ｌ２０２（１９９７）；Ｃｏｔｒａｎら，Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ．，１：２２５−２３５（１９９０））。したがって、新血管形成および内膜過形成を生じる再生過程は、ヒトの他の血管生物学的過程（静脈グラフト適応など）における単球−マクロファージの提案された役割に類似する免疫媒介性の現象のようである（Ｒａｔｌｉｆｆ  ａｎｄ  Ｍｙｌｅｓ，Ａｒｃｈ．Ｐａｔｈｏｌ．Ｌａｂ．Ｍｅｄ．１１３：７７２−７７６（１９８９）；Ｍｏｔｗａｎｉ  ａｎｄ  Ｔｏｐｏｌ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ９７：９１６−９３１（１９９８））。
狭窄
【０１４１】
内膜過形成により血管内膜が肥厚し、血管狭窄の合併症に至り得る。炎症機構および凝血促進機構の活性化は、狭窄の惹起および発達に有意に寄与すると考えられる。数週間から数ヶ月までの範囲の期間にわたり、傷害を受けた血管の内側領域由来の平滑筋細胞は、内膜領域に再配置される。これらの細胞は、瘢痕形成に類似の過程で、外傷部位で増殖し、細胞外基質を沈着して新生内膜を形成する（Ｆｉｎｇｅｒｌｅら，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．，８６：８４１２（１９８９）；Ｃｌｏｗｅｓら，Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．，５６：１３９−１４５（１９８５））。したがって、頑強な治癒反応により血管壁の内部肥厚が起こり（内膜過形成）、最終的に血管腔が減少し、狭窄を生じる。内膜過形成の形成は、血管内のプロテーゼなどの異物の存在によって加速され得、これは、血管内介入（血管形成術、バイパス、および移植動脈症などが含まれる）に起因し得る（Ｇｌａｇｏｖ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，８９：２８８８−２８９１（１９９４））。
【０１４２】
したがって、内膜過形成および狭窄を防止する開示のＬＹＳＴインヒビターの使用方法を提供する。
再狭窄
【０１４３】
冠状血管系または末梢循環系の再狭窄を防止または軽減する方法を提供する。血管の再狭窄は、典型的には、内膜過形成に起因する。ステントなどの外科デバイスを、狭窄した血管を開けるために挿入することができるが、ステント自体がさらなる内膜過形成を刺激し得るので、これは問題でもある。さらに、過形成性内膜組織は、ベアステントの間隙を通して成長し、血管が再狭窄に至り得る。被覆ステントはこの現象が起こるのを防止できる一方で、血管壁を最も刺激するステントの末端に依然として内膜過形成が生じ得る。ステント内再狭窄患者は、内膜過形成由来の狭窄がしばしば処置が困難であるので、重篤な合併症のリスクが有る。柔らかいアテローム斑と異なり、これらの狭窄は硬く、バルーンで拡張させるために高い膨張圧を長期間印加する必要がある。狭窄はしばしば再発し、血管拡張の反復により、内膜傷害が繰り返され、内膜治癒応答が持続する。
【０１４４】
したがって、開示の組成物、デバイス、またはグラフトを、平滑筋細胞の増殖、遊走、およびその組み合わせを軽減または阻害するために、新生内膜形成を軽減または阻害し、それにより、被験体における再狭窄および他の血管増殖障害を処置または防止するのに有効な量で被験体に投与することができる。いくつかの実施形態では、グラフトおよびデバイスの開存性を、ＬＹＳＴインヒビターを含む組成物を使用して増加させることができる。したがって、ＬＹＳＴインヒビターを含む組成物をデバイスおよびグラフトまたは被験体に、植込前または植込後に投与するための方法を提供する。
アテローム性動脈硬化症
【０１４５】
アテローム性動脈硬化症は、炎症、血管増殖、およびマトリックスの変化を含む複数の過程を含む（Ｄｚａｕら，Ｎａｔ  Ｍｅｄ，．８（１１）（２００２）に概説）。アテローム性動脈硬化症では、ＶＳＭＣは、炎症を生じ、血液由来のリポタンパク質を保持し、ならびに斑を構成する線維状沈着物を発達させる。炎症は、アテローム性動脈硬化症の以下の全段階を媒介することが示されている：アテローム斑の発達において、ＶＳＭＣは、単球化学誘引タンパク質などの炎症促進性メディエーターを産生し、血液由来のリポタンパク質を保持するマトリックス分子を合成する；斑の発達後、局所炎症環境がコラゲナーゼ発現を誘導してタンパク質分解インヒビターの発現を阻害することができ、それにより、線維性キャップを脆弱にして破裂しやすくする。したがって、いくつかの実施形態では、開示のＬＹＳＴインヒビターを、被験体における血管増殖障害を処置、軽減、阻害、または防止するために使用する。
血管形成術
【０１４６】
いくつかの実施形態では、被験体は、血管形成術を経験していたか、経験しているか、経験する。血管形成術は、狭小化したか閉塞した動脈（アテローム性動脈硬化症の結果として閉塞した動脈など）を機械的に拡張する技術である。一般に、血管形成術は、ガイドワイヤ上の空でしぼんだバルーン（バルーンカテーテルとして公知）を被験体の血管系に挿入し、狭小化した位置に通し、次いで、固定サイズに膨張させることを含む。バルーンは、内部の白血球／クロットプラークの沈着物および周囲の筋肉壁を強制的に拡大して血管を広げて血流を改善し、次いで、バルーンを収縮させて引き抜く。確実に血管が開いたままになるようにバルーン膨張のときにステントを挿入してもしなくても良い。血管形成術には、末梢血管形成術（すなわち、腹部または脚部などの冠状動脈の外側の血管）、冠動脈血管形成術、腎動脈血管形成術、頸動脈血管形成術、および大脳動脈血管形成術が含まれる。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、被験体は、経皮的経管的冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）を経験していたか、経験しているか、経験する。ＰＴＣＡの使用により、心筋梗塞に罹患の患者の致死数が非常に減少した（Ｆｉｓｃｈｍａｎら，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．，３３１：４９６−５０１（１９９４）；Ｅｌｅｚｉら，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ９８：１８７５−１８８０（１９９８）；Ｂｅｎｎｅｔｔ  ａｎｄ  Ｏ’Ｓｕｌｌｉｖａｎ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ．，９１：１４９−１６６（２００１））。ＰＴＣＡ中、動脈壁は、管腔の直径を増加させて血流を改善するために元の直径の数倍に拡大される。不運なことに、この技術では、血管の再狭小化または再狭窄の発生率が高いことに悩まされており、３０〜４０％患者においてこの手順の６ヶ月以内におこる（Ａｎｄｅｒｓｏｎら，Ｊ  Ｉｎｔｅｒｖ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，６：１８７−２０２（１９９３）；Ｆｉｓｃｈｍａｎら，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ，３３１：４９６−５０１（１９９４）；Ｅｌｅｚｉら，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ９８：１８７５−１８８０（１９９８）；Ｂｅｎｎｅｔｔ  ａｎｄ  Ｏ’Ｓｕｌｌｉｖａｎ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ，９１：１４９−１６６（２００１）；Ｈｅｃｋｅｎｋａｍｐら，Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｓｕｒｇ．（Ｔｏｒｉｎｏ），４３：３４９−３５７（２００２））。
【０１４８】
首尾の良いＰＴＣＡ後の再狭窄の防止は、閉塞性冠状動脈疾患の処置において依然として最も困難な課題の１つである。この増殖応答を向上させる試みには冠動脈ステントの使用が含まれ、このステントの使用により、冠状動脈血管再建術による介入後の短期間および長期間の両方の結果が有意に改善されている。ステント配置による再狭窄率の軽減にもかかわらず、再狭窄は、依然として１５〜３０％の患者において６ヶ月以内に生じる（Ｆｉｓｃｈｍａｎら，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ，３３１：４９６−５０１（１９９４）；Ｅｌｅｚｉら，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，９８：１８７５−１８８０（１９９８））。このステント内再狭窄の発生率は、冠動脈ステント留置がより頻繁になり、あまり理想的でない病変で用いられるにつれて増加すると予想される。開示のＬＹＳＴインヒビターを使用して、血管形成術後の再狭窄、腹部癒着、および瘢痕化を処置または防止することができる。
移植片動脈症
【０１４９】
いくつかの実施形態では、被験体は、移植を経験していたか、経験しているか、経験する。慢性移植片動脈症（ＣＴＡ）は、心臓または腎臓の移植後の後期同種異系移植片喪失の主因である（Ｔａｙｌｏｒら，Ｊ．Ｈｅａｒｔ  Ｌｕｎｇ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．，２４：９４５−９５５（２００５），Ｂｕｒｋｅら，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，６０：１４１３−１４１７（１９９５）；Ｃｏｒｎｅｌｌ  ａｎｄ  Ｃｏｌｖｉｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｎｅｐｈｒｏｌ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．，１４：２２９−２３４（２００５））。したがって、いくつかの実施形態では、開示のＬＹＳＴインヒビターを使用して、移植レシピエントにおける移植片動脈症を軽減、阻害、または防止する。
過剰な瘢痕化
【０１５０】
開示のＬＹＳＴインヒビターを使用して、例えば、傷害、疾患、または外科的手順後の瘢痕化（ケロイドの形成および腹部癒着が含まれる）を処置、遅滞、または防止することができる。
【０１５１】
傷害の部位または手術の部位の血管成長量を減少させるための１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターの使用方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法により、瘢痕化、ケロイド、または癒着を生じる高密度の細胞および結合組織の形成を防止または減少させる。好ましくは、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターの量は、創傷治癒を防止しない。
肥厚性瘢痕化
【０１５２】
いくつかの実施形態では、開示のＬＹＳＴインヒビターを使用して、肥厚性瘢痕の発達を処置、軽減、阻害、または防止する。過剰な瘢痕化は、組織応答が正常な修復および治癒に必要な瘢痕組織の量との釣り合いを失った場合に起こり得る。深い創傷により相当な真皮の喪失を伴う場合、創傷部位に肥厚性瘢痕組織が沈着し得る。瘢痕組織は、高密度の細胞を含み、結合組織の体積が増加し、血管数の増加に起因して血管供給が増加する。肥厚性瘢痕は、組織修復のリモデリング期の欠陥の結果として生じ得る（Ｅｈｒｌｉｃｈ  ａｎｄ  Ｋｅｌｌｅｙ，Ｐｌａｓｔ  Ｒｅｃｏｎｓｔｒ  Ｓｕｒｇ．，９０：９９３−９９８（１９９２））。
【０１５３】
開示のＬＹＳＴインヒビターを使用して、創傷領域中の血管の発達を減少または防止し、それにより、肥厚性瘢痕化の発達を軽減、遅滞、または防止することができる。
ケロイド
【０１５４】
いくつかの実施形態では、開示のＬＹＳＴインヒビターを使用して、ケロイド瘢痕の発達を処置、軽減、阻害、または防止する。ケロイド瘢痕は、傷害の境界を超えた隆起または肥厚した瘢痕であり、長期間にわたって発達および拡大し続け得る。ケロイド成長の発達中、創傷修復で使用されるコラーゲンが過剰に成長して、元の瘢痕の塊よりも大きな塊を何度も産生する。
【０１５５】
ＬＹＳＴインヒビターを使用して、皮膚傷害（例えば、耳のピアシング、裂傷、熱傷、ワクチン接種、または炎症過程）に関連するケロイド発達を防止することができる。ＬＹＳＴインヒビターを、必要に応じて、局所または局部に適用することができる。
癒着
【０１５６】
癒着は、しばしば手術中の傷害の結果としての組織と器官との間に形成される線維帯である。癒着は、通常は結合しない組織を、大抵は腹膜腔などの実質的な空間を横切って結合する内部瘢痕組織と考えることができる。腹部手術または外傷後、傷害により線維素溶解酵素の産生または活性が損なわれて線維素性癒着が発達し得る。これが起こる場合、組織修復細胞（マクロファージ、線維芽細胞、および他の血管細胞など）が線維素性癒着を浸透してコラーゲンおよび他のマトリックス物質が沈着し、それにより永続的な線維状癒着が形成される。
【０１５７】
開示のＬＹＳＴインヒビターによって処置、軽減、または防止することができる例示的な癒着には、腹部癒着、骨盤内癒着（子宮内膜症に起因する骨盤内癒着が含まれる）、心膜癒着、硬膜外癒着、および腱周囲の癒着が含まれる。癒着の症状には、腹痛、遮断、慢性骨盤痛、痙攣、嘔気、柔軟性の制限、および癒着部位の炎症または腫脹が含まれ得る。他の線維増殖性疾患
【０１５８】
いくつかの実施形態では、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを、線維増殖性疾患を処置するために適用することができる。
【０１５９】
線維症は、炎症および／または損傷に応答した器官または組織中の過剰な線維状結合組織の沈着である（Ｗｙｎｎ，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４（８）：５８３−５９４（２００４））。損傷組織の修復は、組織傷害部位での細胞外基質成分の産生を含む。マクロファージおよび損傷組織は、結合組織（コラーゲンおよびグリコサミノグリカンが含まれる）を蓄えるように細胞を刺激するサイトカインおよびＴＧＦβを放出する。しかし、この過程の調節不全によりこの結合組織が過剰に沈着し、その下にある器官の構造および機能が破壊され、線維症性疾患の病状をもたらし得る。線維症は、体内の多くの組織（肝臓、肺、心臓、および腎臓が含まれる）で生じ得る。主要器官の線維症および線維増殖性障害の処置方法を提供する。
肝硬変
【０１６０】
肝臓の線維症は、肝硬変として公知の過程において肝細胞が非機能性瘢痕組織によって置き換えられるとおりの肝臓損傷をもたらす（Ｍａｓｕｏｋａら  Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１２８１：１０６−１２２（２０１３））。肝線維症および結果として生じる肝硬変は、実質的に全ての慢性肝臓疾患の最終共通経路をあらわし、肝不全、肝臓がん、および肝臓関連死に至り得る。肝硬変は、正常な実質が瘢痕組織に置き換わる場合におこる。急性肝傷害（例えば、ウイルス性肝炎）後、炎症応答に関連する過程においては、実質細胞が再生し、壊死細胞またはアポトーシス細胞にとってかわる。肝傷害が持続する場合、肝臓の再生過程が最終的に崩壊し、肝細胞が豊富な細胞外基質（線維性コラーゲンが含まれる）に置き換えられる。進行性線維症は、線維性コラーゲン（主に、コラーゲンＩおよびコラーゲンＩＩＩ）が豊富な細胞外基質タンパク質の蓄積を特徴とする（Ｉｒｅｄａｌｅ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．，１１７（３）：５２９−５４８（２００７）；Ｂａｔａｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｂｒｅｎｎｅｒ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ，１１５（２）：２０９−２１８（２００５）に概説されている）。コラーゲンを分泌するように肝星細胞（ＨＳＣ）を活性化する炎症細胞は、線維症性肝臓疾患における重要な因子である。単球数の増加は、疾患の進行、特に、非肝硬変性疾患から肝硬変性疾患への進行に関連している。
【０１６１】
非処置コントロール被験体と比較して肝臓疾患の１つまたはそれを超える症状を軽減、減少、制限、または防止するのに有効な量の１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを被験体に投与することを含む、被験体における肝線維症を処置する方法を提供する。肝臓疾患の典型的な症状には、腹部腫瘤（abdominal  mass）の増大、疲労、腹痛、悪液質、黄疸、閉塞症候群（リンパ遮断および腹水の蓄積が含まれる）、貧血、および背部痛が含まれるが、これらに限定されない（Ｓｕｎら，Ｃｌｉｎ  Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．Ｎｕｒｓ．，１２：７５９−７６６（２００８））。いくつかの実施形態では、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターは、非処置コントロール被験体と比較して肝臓疾患を有する被験体において肝機能を改善するか、炎症を軽減するか、線維症を軽減するか、これらの組み合わせである。
肺線維症
【０１６２】
肺線維症は、顕著な構造上の歪みおよび肺胞腔の喪失を生じ、臓器不全、最終的には呼吸不全に起因する死に至る肺内の過剰な線維状組織の沈着を特徴とする。肺線維症は、酸素拡散能の不可逆的な減少を引き起こす、正常な肺実質の線維症性組織での段階的交換を含む。
【０１６３】
肺線維症（特発性線維化肺胞炎としても公知）は、間質性肺疾患（ＩＬＤ）（結合組織病など）または慢性炎症性疾患（例えば、関節リウマチ）、感染症、特発性肺疾患、および悪性疾患に関連する。吸入された毒素への環境曝露、薬物適用、および放射線療法も肺線維症に関連している。
【０１６４】
非処置コントロール被験体と比較して肺線維症の１つまたはそれを超える症状を軽減、減少、制限、または防止するのに有効な量の１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを被験体に投与することを含む、被験体における肺線維症を処置または防止する方法を提供する。典型的な症状には、慢性乾性咳嗽、息切れ、疲労および脱力感、胸部不快感、食欲不振、ならびに体重減少が含まれる。いくつかの実施形態では、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターは、非処置コントロール被験体と比較して肺線維症を有する被験体において呼吸機能を改善するか、炎症を軽減するか、線維症を軽減するか、これらの組み合わせである。
他の線維症性疾患
【０１６５】
非処置コントロール被験体と比較して過剰な線維症の１つまたはそれを超える症状を軽減、減少、制限、または防止するのに有効な量の１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを被験体に投与することを含む、被験体における過剰な線維症を特徴とする疾患を処置または防止する方法を提供する。開示の方法によって処置することができる例示的な疾患および障害には、腎硬化症、強皮症、シャープ症候群、神経線維腫症、骨髄線維症、全身性硬化症、デュピュイトラン拘縮、および黄斑変性が含まれる。さらに、外科合併症、化学療法、または他の薬物誘発性線維症、放射線誘発性線維症、傷害および熱傷に起因する線維症に関連する瘢痕化および線維症の処置方法を提供する。
血小板機能に関連する疾患
【０１６６】
過剰なもしくは有害な血小板活性化および／または血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）媒介性シグナル伝達を特徴とする疾患を処置または防止する方法を提供する。血小板が血液凝固過程において重要な役割を果たすので、血小板を対象とした治療は、心臓および脳の血管疾患との戦いにおいて最も重要な治療のうちのいくらかを占める。不適切なまたは過剰な血小板の活性化により、インタクトな血管内にクロット形成が生じ得る（血栓症）。遊離し、体内を駆け巡り始めるクロット（血栓塞栓症）は、血管の閉鎖または閉塞、鬱血、虚血、卒中、および／または死を引き起こし得る。
【０１６７】
ＬＹＳＴの軽減により、血小板活性化の軽減およびＰＤＧＦ発現の軽減もたらすことを明らかにした（実施例７を参照のこと）。したがって、ＬＹＳＴ−インヒビターを、抗血小板薬として使用して、有害な血小板凝集および血栓形成を軽減または防止することができる。非処置コントロール被験体と比較して有害なまたは過剰な血小板凝集の１つまたはそれを超える症状を軽減、減少、制限、または防止するのに有効な量の１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを被験体に投与することを含む、被験体における有害なまたは過剰な血小板活性化を特徴とする疾患を処置または防止する方法を提供する。したがって、ＬＹＳＴインヒビターを使用して、望ましくないか有害な血小板機能に関連する疾患または障害を処置または防止することができる。血小板の不適切な／有害な活性化に起因する障害の例には、血小板の高凝集または平均血小板容積（ＭＰＶ）の増加および血小板増加性（ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｓｉｓｌ）動脈血栓症；静脈血栓症（バッド・キアリ症候群；海綿静脈洞血栓症；脳静脈洞血栓症；深部静脈血栓症；パジェット・シュレッター病；門脈血栓症；頸静脈血栓症；腎静脈血栓症）；および微小循環性血栓症が含まれる。動脈血栓症は、血流を部分的または完全に閉塞して、下流の虚血、卒中、または心筋梗塞を生じ得る。
【０１６８】
血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）の増加または無制御の過剰発現および無制御のＰＤＧＦシグナル伝達は、がん細胞の成長、血管新生、および転移、ならびに腫瘍の発達、生存、および転移などに関連する疾患に関与している（Ａｎｄｒａｅら，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．，２２：ｐｐ１２７６−１３１２（２００８）に概説）。ＰＤＧＦを阻害すると神経膠腫細胞の成長を低下させることが示されている。ＰＤＧＦＲ媒介性シグナル伝達のいくつかのインヒビター（イマチニブなど）は、種々の悪性疾患の処置のための臨床試験段階に入っている。したがって、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを使用して、ＰＤＧＦ発現の増加もしくは上方制御および／または無制御のＰＤＧＦシグナル伝達に関連する任意の疾患を処置または防止することができる。例示的な疾患には、膠芽細胞腫（例えば、未分化乏突起膠腫）および肉腫（例えば、皮膚肉腫；食道扁平細胞肉腫）などのがんならびに網膜血管疾患（例えば、虚血性網膜症）が含まれる。
Ｂ．処置方法
【０１６９】
ＬＹＳＴの阻害を、局所送達または全身送達のいずれかを通じた治療機構として使用することができる。いくつかの実施形態では、組成物を全身投与する。送達ビヒクルを選択し、インヒビターが特定の位置または細胞型を標的とするように使用することができる。他の実施形態では、インヒビターを、デバイスまたはグラフト（上記で考察のものなど）を使用して血管系に直接投与する。さらなる実施形態では、投与経路により、インヒビターが特定の器官または傷害の局所部位を直接標的とする。
【０１７０】
血管の増殖および炎症の過程が関連していることを明らかにした。ＬＹＳＴが増殖性障害に寄与する免疫過程（再狭窄過程など）を緩和すると考えられる。早期薬理学的介入により、慢性治療および慢性治療に関連する任意の潜在的に有害な副作用を排除することができる。例えば、本明細書中に開示の組成物は、新生内膜形成を軽減または防止することができるが、新規組織の成長をおこさせる。任意選択的に送達ビヒクルを含む開示のＬＹＳＴインヒビターを使用した疾患および障害の処置および防止方法を、以下により詳細に考察する。
コントロール
【０１７１】
ＬＹＳＴインヒビターの影響を、コントロールと比較することができる。適切なコントロールは、当該分野で公知であり、例えば、非処置細胞または非処置被験体が含まれる。いくつかの実施形態では、コントロールは、処置される被験体由来または非処置被験由来の非処置組織である。好ましくは、コントロールの細胞または組織は、処置された細胞または組織と同一の組織に由来する。いくつかの実施形態では、非処置コントロール被験体は、処置された被験体と同一の疾患または状態に罹患している。例えば、いくつかの実施形態では、抗ＬＹＳＴ処置に影響を受ける１つまたはそれを超える薬理学的なまたは生理学的なマーカーまたは経路を、非処置コントロール細胞または非処置コントロール被験体における同一の薬理学的なまたは生理学的なマーカーまたは経路と比較する。例えば、抗ＬＹＳＴ処置被験体を、他の新生内膜形成インヒビター（ラパマイシンなど）で処置した被験体と比較することができる。他の新生内膜形成インヒビターで処置した被験体は、ＬＹＳＴインヒビターで処置した被験体よりも術後狭窄の発生率が高いか、新血管組織の形成が軽減し得る。
【０１７２】
１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを含む薬学的組成物を、局所処置または全身処置のいずれが望ましいかに応じて、および処置すべき領域に応じて種々の様式で投与することができる。例えば、開示の組成物を、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、腔内、または経皮に投与することができる。組成物を、非経口で（例えば、静脈内）、筋肉内注射によって、腹腔内注射によって、経皮で、体外に、または局部になど（局部鼻腔内投与または吸入による投与が含まれる）で投与することができる。
【０１７３】
使用する場合、組成物の非経口投与は、一般に、注射を特徴とする。注射用製剤を、液体（溶液または懸濁液）、注射前に液体である溶液または懸濁液（solution  of  suspension）のための適切な固体、またはエマルジョンのいずれかとしての慣習的な形態で調製することができる。一定の投薬量が維持されるような緩徐放出系または徐放系の使用を含む投与も考察する。
【０１７４】
一定の実施形態では、組成物を、局所的に、例えば、注射によって処置すべき部位内に直接投与する。薬物の局所送達により、全身送達に関連する副作用または毒性を軽減することができ、局所用量の増加によって処置結果の強化をもたらし得る。
【０１７５】
開示のＬＹＳＴインヒビターの局所投与方法（すなわち、局所薬物送達、ＬＤＤを介した）を提供する。一定の実施形態では、ＬＹＳＴインヒビターを、全身性の有害作用を生じること無く処置組織（動脈または静脈など）に直接投与することができる。さらなる実施形態では、組成物を、注射するか、別の方法で、１つまたはそれを超える手術部位に直接投与する。典型的には、局所注射により、全身投与によって達成できる濃度よりも高い組成物の局所濃度が得られる。好ましい実施形態では、組成物を、局所注射または局部投与によって組織、プロテーゼ、グラフト、または医療デバイスに直接送達する。いくつかの実施形態では、ＬＹＳＴインヒビターの局所送達は、同一化合物の全身投与で達成された濃度の２倍、１０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、または１０００倍を超える濃度がもたらされる。いくつかの実施形態では、局所投与されたＬＹＳＴインヒビターは、長期間にわたって一定速度で送達部位に着実に放出される。好ましくは、一定の放出により、送達部位で所望のＬＹＳＴインヒビター濃度が維持される。
【０１７６】
開示のＬＹＳＴインヒビターを、疾患症状の発症前、発症中、または発症後の一定期間中、または１つまたはそれを超える疾患症状の発症前、発症中、または発症後の任意の組み合わせの期間中投与することができる。例えば、被験体に、疾患症状発症前の１、２、３、４、５、６  ７、１４、２１、２８、３５、または４８日毎に１つまたはそれを超える用量の組成物を投与することができる。被験体に、疾患症状発症後の１、２、３、４、５、６、７、１４、２１、２８、３５、または４８日毎に１つまたはそれを超える用量の組成物を投与することができる。いくつかの実施形態では、複数の用量の組成物を、病状の改善が明らかになる前に投与する。例えば、いくつかの実施形態では、被験体に、疾患または状態の改善が明らかになる前に１、２、３、４、５、６  ７、１４、２１、２８、３５、または４８日間または１、２、３、４、５、６、７、１４、２１、２８、３５、または４８週間にわたって、１、２、３、４、５、６、７、１４、２１、２８、３５、または４８を投与する。
【０１７７】
したがって、開示の１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを含む組成物を、処置すべき疾患または障害に応じて、診断、予後、手術、または傷害に関して異なる時間に投与することができる。抗ＬＹＳＴ治療開始のタイミングは、被験体の要求に基づいて決定されるべきであり、手術または傷害のときから手術または傷害後１日以上、１週間以上、または１ヶ月以上まで変動し得る。ＬＹＳＴインヒビターの遅延放出のための製剤の使用方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＬＹＳＴインヒビターを使用した治療を、一旦血管新組織の成長が生じると、中断することができる。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、単回用量の１つまたはそれを超えるＬＹＳＴのインヒビターを、１つまたはそれを超えるインヒビターの血中濃度が所望のレベルに上昇するように１つまたはそれを超えるボーラス用量として被験体に送達する。ボーラスを、注射によるなどの任意の手段によって投与することができる。ボーラス用量の配置は、所望の効果および処置すべき標的器官または標的組織に応じて変動し得る。特定の実施形態では、ボーラスを、拍動放出投薬形態などの他の投薬形態の投与前に投与する。したがって、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターの所望の血中濃度を、即時放出、遅延放出、または拍動放出のための製剤の組み合わせを使用して、所望の期間維持することができる。
【０１７９】
癒着の場合、正常な解剖学的構造の間の結合組織の沈着は不必要であり、したがって、血管組織の発達を防止することは有害ではない。したがって、癒着の防止および軽減のために、ＬＹＳＴインヒビターを、典型的には、手術のときまたは手術から短期間で（例えば、１週間以内）適用することになる。新生内膜形成（例えば、狭窄）、または組織グラフトもしくはステントの再狭窄のリスクのある外科的手順の場合、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを、手術のときに投与することができる。皮膚を冒す傷害または手術の場合、ＬＹＳＴインヒビターを、皮膚表面の再上皮形成後に適用することができる。
グラフトおよびデバイス上のコーティング
【０１８０】
１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを、医療デバイス（ステントなど）または他のプロテーゼ内への１つまたはそれを超えるインヒビターの組み込みによって、デバイスの構造材料またはシーリング材料内またはこれらの材料上へのインヒビター（複数可）の負荷によって局所に送達することができる。インヒビター（複数可）の放出速度を、多数の方法（薬剤に対する吸収性材料の比、吸収性材料の分子量、インヒビター（複数可）の組成、吸収性ポリマーの組成、コーティングの厚さ、コーティング層数およびその関連する厚さ、インヒビター濃度、および／またはデバイスもしくはシーリング材料へのインヒビター（複数可）の物理的もしくは化学的な結合もしくは連結のうちの１つまたはそれを超える変更が含まれる）によって制御することができる。ポリマーおよび他の材料（吸収性ポリマーが含まれる）のトップコートを、１つまたはそれを超えるインヒビターの放出速度を制御するために適用することもできる。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、デバイスまたはグラフト組織上のＬＹＳＴインヒビターの存在量を、送達ビヒクルの変更によって調整することができる。組織の至る所へのインヒビターの浸透も調整することができる。このような方法で、植込部位での薬物の局所放出量を、慎重に制御することができる。典型的には、ＬＹＳＴインヒビターまたはこのインヒビターを保有する送達ビヒクルを、ｅｘ  ｖｉｖｏでデバイスまたはグラフト材料と接触させる。穏やかな撹拌を使用しないか使用して、またはインヒビターがデバイスまたはグラフト組織に付着するか浸透することを保証する当該分野で公知の他の方法で接触を行うことができる。例えば、オービタルシェイカー上でのインキュベーションまたは縦回転（ハイブリダイゼーションオーブンの縦型回転棚（vertical  carousel）中でのインキュベーションなど）によって撹拌することができる。インキュベーションプロトコールを、デバイスまたはグラフト上の粒子の位置決めに影響を及ぼすように変動することができる。デバイスまたはグラフトへの粒子などの送達ビヒクルの付着の量およびの局在性を、ビヒクル上に存在する付着物およびターゲティングリガンド（記載のリガンドなど）の型および密度の変動によって変動することもできる。ｅｘ  ｖｉｖｏで血管グラフトへの薬物を送達するための例示的な組成物および方法は、米国特許出願公開第２００６／０００２９７１号、同第２０１０／０１５１４３６号、および米国特許第７，５３４，４４８号で考察されている。
【０１８２】
本組成物および本方法を使用して、血管グラフトまたはステントの配置などのさらなる侵襲性の手順を必要とするか必要としないでＬＹＳＴインヒビターをグラフトに局所的に送達することができる。
Ｃ．投薬量および有効量
【０１８３】
いくつかのｉｎ  ｖｉｖｏアプローチでは、ＬＹＳＴインヒビターの組成物を、治療有効量で被験体に投与する。本明細書中で使用する場合、用語「有効量」または「治療有効量」は、処置される障害の１つまたはそれを超える症状を処置するか、阻害するか、緩和するか、別の方法で、所望の薬理学的および／または生理学的効果を得るのに十分な投薬量を意味する。正確な投薬量は、被験体に依存する変数（例えば、年齢、免疫系、健康など）、疾患または障害、および施される処置などの種々の要因に応じて変動する。
【０１８４】
開示の全ての化合物について、さらなる研究が行われるにつれて、種々の患者における種々の状態の処置に適切な投薬レベルに関する情報が得られ、当業者は、レシピエントの治療状況、年齢、および全体的な健康状態を考慮して、適切な投薬を確認することができる。選択した投薬量は、所望の治療効果、投与経路、および所望の処置の持続時間に依存する。一般に、０．００１ｍｇ／ｋｇ体重と１００ｍｇ／ｋｇ体重との間の投薬レベルを、毎日、哺乳動物、もっと好ましくはヒトに投与する。一般に、静脈内注射または注入のために、投薬量はより低くて良い。好ましくは、組成物を、処置することが望ましい部位でのＬＹＳＴインヒビター血清レベルが約１μＭと約１０００μＭとの間になるように製剤化する。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、ＬＹＳＴインヒビターは、免疫細胞（マクロファージ、血小板、およびＮＫ細胞など）の通常の生物学的活性を防止するのに有効である。例えば、１つまたはそれを超えるインヒビターは、マクロファージの遊走性または走化活性を軽減または防止するのに有効な量で存在し得る。
【０１８６】
１つの実施形態では、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターは、被験体における新生内膜形成を防止または軽減するのに有効な量で存在する。好ましい実施形態では、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターの量は、非処置コントロールと比較して被験体における創傷治癒または新組織の形成を防止しない。好ましくは、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターの量は、非処置コントロールと比較して被験体における新生内膜形成を防止または軽減し、創傷治癒を強化するのに有効である。
【０１８７】
別の実施形態では、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターは、傷害または手術の部位での血管成長量を減少させるか、線維症、瘢痕化、ケロイド、または癒着を生じる高密度の細胞および結合組織の形成を防止または減少させるのに有効な量で存在する。好ましくは、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターの量は、創傷治癒を防止しない。
【０１８８】
別の実施形態では、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターは、血小板活性化を減少または阻害するのに有効な量で存在する。例えば、ＬＹＳＴインヒビターは、傷害または手術の部位での不適切な血小板凝集およびケモカインの分泌を防止または阻害するのに有効な量で存在し得る。１つのさらなる実施形態では、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターは、傷害または手術の部位でのトロンビンによる活性化に応答して細胞によって産生または分泌された血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）および／またはトランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦβ）の量を減少するのに有効な量で存在する。１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターは、ＰＤＧＦ−Ａ、ＰＤＧＦ−Ｂ、ＰＤＧＦ−Ｃ、またはＰＤＧＦ−Ｄの産生または分泌の軽減に有効であり得る。したがって、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターは、血清中の生物学的に活性なＰＤＧＦの量を軽減するのに有効であり得る。例えば、ＰＤＧＦ−ＡＡ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＰＤＧＦ−ＣＣ、ＰＤＧＦ−ＤＤ、またはＰＧＤＦ−ＡＢの量を、非処置コントロール中の量と比較して軽減することができる。したがって、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターは、ＰＤＧＦの結果としてか、ＰＤＧＦによって制御される下流シグナル伝達事象の結果として生じる１つまたはそれを超える生物学的活性を軽減または防止するのに有効であり得る。例えば、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターは、１つまたはそれを超えるチロシンキナーゼ受容体（ＰＤＧＦ受容体α（ＰＤＧＦＲα）；ＰＤＧＦ受容体β（ＰＤＧＦＲβ）；および／またはＰＤＧＦ受容体αβ（ＰＤＧＦαβ）など）の活性化を軽減または防止するのに有効であり得る。１つまたはそれを超えるＰＤＧＦの活性の軽減または防止により、ＬＹＳＴインヒビターは、細胞活動（細胞増殖、走化性、およびアクチン再構成が含まれる）を制御するいくつかのシグナル伝達経路のＰＤＧＦ媒介性の誘導を軽減または防止することができる。
【０１８９】
別の実施形態では、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターは、線維症、瘢痕化、ケロイド、または癒着を生じる高密度の細胞および結合組織の形成を防止または減少させるのに有効な量で存在する。好ましくは、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターの量は、創傷治癒を防止しない。
Ｄ．併用療法
【０１９０】
ＬＹＳＴインヒビターを含む開示の組成物、デバイス、およびグラフトを、治療的処置または予防的処置のレジメン（ｒｅｇｉｍｅ）の一部として、単独、または１つまたはそれを超えるさらなる活性薬剤と組み合わせて投与することができる。例えば、組成物を、１日目、２日目、３日目、または４日目に、またはその組み合わせで投与することができる。組成物を、第２の活性薬剤と同日または異なる日に投与することができる。
【０１９１】
用語「組み合わせ」または「組み合わせた」を、２つまたはそれを超える薬剤の共同投与、同時投与、または逐次投与のいずれかをいうために使用する。したがって、組成物を、共同して（例えば、混合物として）、個別であるが同時に（例えば、同一被験体内への個別の静脈内ラインを介して）、または逐次的に（例えば、化合物または薬剤のうちの１つを最初に投与後、第２の化合物または薬剤を投与する）のいずれかで投与することができる。
【０１９２】
さらなる治療剤は、他の抗新生内膜剤、化学療法剤、抗体、抗生物質、抗ウイルス剤、ステロイド性および非ステロイド性の抗炎症薬、従来の免疫治療剤、免疫抑制剤、サイトカイン、ケモカインおよび／または成長因子、新生内膜形成または再狭窄を処置または防止するようにデザインした抗増殖剤または抗遊走剤、遊走および細胞外基質産生に影響を及ぼす薬剤、血小板の沈着または血栓の形成に影響を及ぼす薬剤、ならびに血管の治癒および再内皮化を促進する薬剤であり得る。これらの治療剤は、Ｔａｎｇｕａｙら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｓｔａｔｕｓ  ｏｆ  Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｓｔｅｎｔｓ，Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ  Ｃｌｉｎｉｃｓ，１２：６９９−７１３（１９９４），Ｊ．Ｅ．Ｓｏｕｓａ，Ｐ．Ｗ．Ｓｅｒｒｕｙｓ  ａｎｄ  Ｍ．Ａ．Ｃｏｓｔａ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １０７（２００３）２２７４（Ｐａｒｔ  Ｉ），２２８３（Ｐａｒｔ  ＩＩ），Ｋ．Ｊ．Ｓａｌｕ，Ｊ．Ｍ．Ｂｏｓｍａｎｓ，Ｈ．Ｂｕｌｔ  ａｎｄ  Ｃ．Ｊ．Ｖｒｉｎｔｓ，Ａｃｔａ  Ｃａｒｄｉｏｌ  ５９（２００４）５１に記載されている。
【０１９３】
例示的な抗トロンビン剤には、ヘパリン（低分子量ヘパリンが含まれる）、Ｒ−ヒルジン、ヒルログ、アルガトロバン、エフェガトラン、マダニ抗凝固ペプチド、およびＰｐａｃｋが含まれるが、これらに限定されない。
【０１９４】
例示的な抗増殖剤には、パクリタキセル（タキソール）、ＱＰ−２ビンクリスチン（Ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎ）、メトトレキサート（Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔ）、アンギオペプチン、マイトマイシン、ＢＣＰ  ６７８、アンチセンスｃ−ｍｙｃ、ＡＢＴ５７８、アクチノマイシン−Ｄ、ＲｅｓｔｅｎＡＳＥ、１−Ｃｈｌｏｒ−デオキシアデノシン（ｄｅｏｘｙａｄｅｎｏｓｉｎ）、ＰＣＮＡリボザイム、およびセレコキシブが含まれるが、これらに限定されない。
【０１９５】
細胞の複製／増殖を調整する例示的な薬剤には、ラパマイシンの標的（ＴＯＲ）インヒビター（シロリムス、エベロリムス、およびＡＢＴ−５７８が含まれる）、パクリタキセルおよび抗新生物剤（アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、メクロレタミン、クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン、ロムスチン、イフォスファミド、プロカルバジン、ダカルバジン、テモゾロミド、アルトレタミン、シスプラチン、カルボプラチン、およびオキサリプラチン）が含まれる）、抗腫瘍抗生物質（例えば、ブレオマイシン、アクチノマイシンＤ、ミトラマイシン、マイトマイシンＣ、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、およびミトキサントロン）、代謝拮抗物質（例えば、デオキシコフォルマイシン、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、アザチオプリン、２−クロロデオキシアデノシン、ヒドロキシ尿素、メトトレキサート、５−フルオロウラシル、カペシタビン、シトシンアラビノシド、アザシチジン、ゲムシタビン、リン酸フルダラビン、およびアスパラギナーゼ（aspariginase））、有糸分裂阻害剤（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ドセタキセル、エストラムスチン）、および分子標的剤（例えば、イマチニブ、トレチノイン、ベキサロテン、ベバシズマブ、ゲムツズマブ  オゴミシン（ogomicin）、およびデニロイキンジフチトクス）が含まれる。
【０１９６】
例示的な抗再狭窄剤には、免疫調節剤（シロリムス（ラパマイシン）、タクロリムス、ビオレスト、ミゾリビン、シクロスポリン、インターフェロンγ１ｂ、レフルノミド、トラニラスト、コルチコステロイド（ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄｅ）、ミコフェノール酸、およびビホスホナートなど）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１９７】
例示的な抗遊走剤および細胞外基質調整因子には、ハロフギノン、プロピル−ヒドロキシラーゼ−インヒビター、Ｃ−プロテイナーゼ−インヒビター、ＭＭＰ−インヒビター、バチマスタット、プロブコールが含まれるが、これらに限定されない。
【０１９８】
抗血小板剤の例には、ヘパリンが含まれるが、これらに限定されない。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、さらなる治療剤は、米国特許第８，０２９，８１５号に記載のＮ−３，４−トリヒドロキシベンズアミドまたはその薬学的に許容され得る塩もしくはエステル、ジドックス、イミダート、またはヒドロキシ尿素である。
【０２００】
さらなる治療剤を、被験体に局所または全身投与するか、デバイスまたはグラフト上にコーティングするか、デバイスまたはグラフト内に組み込むことができる。さらなる治療試薬を、同一または異なる経路および異なる手段によって投与することができる。例えば、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを、全身などの異なる手段で送達される１つまたはそれを超えるパクリタキセル、タキソテールおよび他のタキソイド化合物、メトトレキサート、アントラサイクリン（ドキソルビシンなど）、エベロリムス、セロリムス、ラパマイシンまたはラパマイシン誘導体と組み合わせて局所送達することができる。
【０２０１】
さらなる実施形態では、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを使用して、１つまたはそれを超えるさらなる治療剤の使用に関連する望ましくない副作用を軽減または防止することができる。例えば、１つまたはそれを超えるＬＹＳＴインヒビターを、ブレオマイシンに関連する肺線維症を防止するために抗新生物剤ブレオマイシンと共に使用することができる。
【０２０２】
本発明は、以下の非限定的な実施例を参照することによりさらに理解される。
【実施例】
【０２０３】
実施例
実施例１：ベージュ変異は組織グラフトにおける狭窄を軽減する
方法及び材料
組織工学血管グラフト（ＴＥＶＧ）を、ポリ乳酸とポリカプロラクトンとの５０：５０コポリマーでコーティングしたポリグリコール酸繊維の管から製作された生分解性管状足場上に自己骨髄由来単核球を播種することによって開発した。
【０２０４】
ＴＥＶＧ機能を評価するためのマウスモデルを、ＴＥＶＧ形成の基礎をなす細胞および分子の機構を解明する目的で開発した。下大静脈（ＩＶＣ）間置グラフトモデルは、フォンタン循環に類似する低圧高流量の循環系における血管グラフトの使用を調査するためのバリデートされたモデルである。このモデルを、ＴＥＶＧにおける新組織形成を研究するために広範囲にわたって使用した。
【０２０５】
ＰＧＡ−ＰＣＬ／ＬＡから構成される生分解性導管グラフトを、細胞播種無しで野生型マウスおよびベージュ変異体マウスの下大静脈内にそれぞれ植込んだ。グラフトを、手術から２週間後に外植し、切片にし、血管の直径を測定し、開存性について評価した。
結果
【０２０６】
ＴＥＶＧをＩＶＣ間置グラフトとして植込んだ場合、マウスの系統に応じて狭窄率の有意な変動が認められた。具体的には、ベージュ変異を有するマウスに植込んだＴＥＶＧの狭窄率が例外的に低いことが示された。ＩＶＣ間置グラフトとして植込んだＴＥＶＧの開存性および管腔直径を、Ｃ５７Ｂ６（野生型マウス）（Ｎ＝２５）とベージュ変異体（Ｎ＝１０）の両者で比較した（表１）。野生型マウスの狭窄率は８０％を示し、管腔直径の測定値は０．３３ｍｍであったのに対して、ベージュマウスの狭窄率は１０％を示し、管腔直径の測定値は０．７１ｍｍであった（Ｔ検定＜０．００１およびカイ二乗０．０００２）（図１）。
【０２０７】
【表１】
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【０２０８】
実施例２：ベージュ変異は組織グラフト内へのマクロファージ浸潤を軽減する
方法及び材料
【０２０９】
血管新組織の形成が宿主由来の細胞から生じること、および、血管新組織の形成過程が免疫系、特に、宿主由来マクロファージによって調整されることがマウスモデルを使用して以前に証明されている。過剰なマクロファージ浸潤によって狭窄に至り、一方、マクロファージ浸潤の阻害により新組織形成が防止される。
【０２１０】
上の実施例１に記載の外植グラフト中のマクロファージ数を、ベージュマウスおよび野生型マウスの両者について測定した。各群における内皮細胞の数および形態を特徴付けるために、ＣＤ３１細胞マーカーに特異的な抗体を使用して各グラフトの組織切片に対して免疫組織化学的検査を行った。
結果
【０２１１】
ベージュマウスに植込んだＴＥＶＧは、術後２週間で野生型マウスに植込んだＴＥＶＧよりマクロファージ浸潤が有意に低いことを示した。図２を参照のこと。とりわけ、内皮細胞の免疫組織化学的検査（ＣＤ３１に特異的な抗体を使用）は、野生型由来のグラフト切片とベージュマウス由来のグラフト切片との間にいかなる相違も示さず、新組織形成が両群で類似することを示していた。
実施例３：ベージュ表現型はＬＹＳＴ遺伝子の変異から生じる
方法及び材料
【０２１２】
ベージュ変異は、ＬＹＳＴ遺伝子の自発的変異から生じる（図３）。タンパク質発現の分析のために、それぞれＬＹＳＴ１、ＬＹＳＴ３、ＬＹＳＴ４、ＬＹＳＴ５、およびＬＹＳＴ６と命名した６つの異なるプライマーを、完全なＬＹＳＴ遺伝子領域を対象範囲とするようにデザインした。ＬＹＳＴ−５プライマーは、ベージュマウス遺伝子型で同定されたアミノ酸変異を含むエクソン５２領域を対象範囲とした。相対ｍＲＮＡレベルを計算するための標準としてＲａｗ細胞を使用した。
結果
【０２１３】
ベージュマウスにおけるベージュ表現型を担う特異的変異を同定した。全長ＬＹＳＴ遺伝子は、３８０１アミノ酸ポリペプチドをコードする。ＬＹＳＴの変異は、エクソン５２上で生じ、それにより、アミノ酸イソロイシンが欠失していた（ｉｌｅ３７４１ｄｅｌ）（図３）。
【０２１４】
分子分析により、両群の間でｍＲＮＡ発現に有意差がないことが証明された。野生型タンパク質および変異体タンパク質の転写レベルが同等であるにもかかわらず、変異体タンパク質は翻訳されなかった。
【０２１５】
さらに、免疫組織化学的検査およびウェスタンブロッティングにより、ＬＹＳＴタンパク質発現は、ベージュ変異体マウスで枯渇していた（図４）。これらの結果は、ベージュマウスにおけるＬＹＳＴ遺伝子変異が遺伝子からの翻訳後のタンパク質改変レベルに影響を及ぼすことを示していた。
実施例４：ＬＹＳＴ遺伝子のベージュ変異は免疫過程を変化させる
方法及び材料
【０２１６】
ベージュ変異が免疫系の調整によってＴＥＶＧ狭窄の形成を阻害するという仮説を試験した。骨髄をＣ５７Ｂ６（野生型）マウスからベージュ変異体マウスに移植し、その逆も行った。ＦＡＣＳ分析を実施して、ベージュマウスおよび野生型マウスにおけるＬＹＳＴ単球の百分率を決定した。さらに、フィブリンでの刺激の際の血小板活性化の能力は、野生型マウスと比較してベージュ変異体マウスで低下した。
結果
【０２１７】
ベージュマウス由来の骨髄を移植した野生型マウスでＴＥＶＧ狭窄の有意な阻害が証明された。同様に、野生型マウス由来の骨髄を移植したベージュマウスにＴＥＶＧを植込んだ場合、ベージュマウスのＴＥＶＧ狭窄率は高かった。これらの所見は、ベージュ変異が免疫系におけるその影響を介してＴＥＶＧ狭窄を阻害することを示していた。それぞれＷｔマウスおよびベージュマウス由来の単球およびマクロファージのＦＡＣＳ分析により、表現型集団の相違が証明された。フローサイトメトリー分析の代表的な結果を示す一連のドット散布図は、それぞれＷＴ３マウス、ＷＴ４マウス、ｂｇ３マウス、およびｂｇ４マウス由来のＣＤ１１５（Ｙ軸）および  ＣＤ１１ｂ（Ｘ軸）について染色した単球細胞の集団を示す。それぞれＷＴ３マウス、ＷＴ４マウス、ｂｇ３マウス、およびｂｇ４マウス由来のＬＹＣ６およびＦ４／８０について染色した細胞の分布も決定した。ＬＹＣ６「Ｈｉ」およびＬＹＣ６「ｌｏ」と命名した細胞の百分率を計算した。結果は、死細胞およびデブリを排除するためにゲーティングした、チオグリコーラートでの刺激から３日後の代表的な腹腔マクロファージである。
【０２１８】
ドット散布図は、それぞれＷＴマウスおよびベージュマウス由来のＦＩＴＣ−Ａ蛍光（Ｘ軸）に対してＰＥ−Ａ（Ｙ軸）について染色した細胞をプロットしたフローサイトメトリー分析の代表的な結果を示していた。フィブリンでの刺激後の血小板活性化後に、細胞をゲーティングして死細胞およびデブリを排除した。チオグリコーラートでの刺激から３日後の腹腔マクロファージにおいて、ＬＹ６Ｃ「ｈｉ」単球数は野生型群（ＷＴ３、ＷＴ４）でより高かったのに対して、Ｌｙ６Ｃ「ｌｏｗ」単球数はベージュ群（ｂｇ３、ｂｇ）でより高かった。
【０２１９】
ＦＡＣＳ分析はまた、フィブリンで細胞を刺激した際の血小板活性化能が野生型マウスと比較してベージュ変異体マウスで低下したことも明らかに示した。
実施例５：ＬＹＳＴタンパク質に対する抗体を使用してＬＹＳＴ媒介性免疫調節を行うことができる
方法及び材料
【０２２０】
ＬＹＳＴタンパク質の遮断効果を、抗ＬＹＳＴ抗体を使用して調査した。Ｃ５７Ｂ６マウスを抗ＬＹＳＴ抗体で処置し、次いで、ＴＥＶＧを植込んだ。抗ＬＹＳＴ抗体を、３つの異なる各処置群（０ｍｇ／ｋｇ（コントロール）、１０ｍｇ／ｋｇ、または５０ｍｇ／ｋｇ）の各々において、野生型マウスの腹膜内に、手術１日前ならびに手術１週間後に注射した。手術から２週間後にマウスを屠殺し、グラフトおよび脾臓を外植した。組織学的検査を、グラフトのヘマトキシリンおよびエオシン染色（ＨＥ染色）を使用して行った。脾臓組織を、ＬＹＳＴタンパク質に特異的な抗体を使用したウェスタンブロッティングによって分析して、各処置群におけるＬＹＳＴタンパク質の相対的有効量を決定した。
結果
【０２２１】
抗ＬＹＳＴ抗体の全身注射により、用量依存的様式でグラフト開存性が改善された。マクロファージ浸潤の顕著な阻害およびＴＥＶＧ狭窄の減少が認められた。免疫組織化学的検査によって決定したところ、この用量依存性の開存性の増加は、脾臓組織内のＬＹＳＴタンパク質の存在下での用量依存性の軽減を伴っていた。したがって、新組織形成の改善およびＴＥＶＧ狭窄形成の阻害が得られる免疫調節方法を確立した。
実施例６：機能的Ｌｙｓｔ遺伝子を欠くトランスジェニックマウスは、ＴＥＶＧの狭窄を示さない
方法及び材料
【０２２２】
機能的ＬＹＳＴタンパク質を欠くＣ５７ＢＬ／６トランスジェニックマウスを作製した。これらのマウスを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｌｙｓｔｔｍ１ｂと命名した。このノックアウト系統を作製するために使用したテクノロジーは、ＬａｃＺレポーターを使用する。ＬａｃＺのＰＣＲにより、ノックアウトモデルを確認した。
【０２２３】
Ｃ５７ＢＬ／６Ｌｙｓｔｔｍ１ｂノックアウトマウスがＴＥＶＧ植込後に狭窄を発達させるかどうかを決定するために、５匹のＣ５７ＢＬ／６Ｌｙｓｔｔｍ１ｂマウスおよび５匹のＣ５７ＢＬ／６野生型マウスに、非播種ＴＥＶＧを植込んだ。ＴＥＶＧを外植し、植込２週間後に試験した。
結果
【０２２４】
Ｌｙｓｔｔｍ１ｂノックアウトマウス（ｎ＝５）に植込んだ１００％の非播種の組織工学血管グラフト（ＴＥＶＧ）が、植込２週間後に開存した（図５；表１を参照のこと）。対照的に、Ｃ５７ＢＬ／６野生型マウスは、狭窄の発生率がおよそ９０％であった。
実施例７：Ｌｙｓｔは、活性化に応答して血小板機能を調整する
方法及び材料
【０２２５】
Ｌｙｓｔタンパク質は血小板機能に関与すると理解され、チェディアック・東症候群（ヒト関連）は、「血小板貯蔵プール欠乏症」と特徴付けられる。多血小板血漿（ＰＲＰ）を、ベージュ（Ｂｇ）マウスおよび野生型（ＷＴ）マウスから得た。サンプルをトロンビンによって活性化し、各群（ｎ＝７）からのＰＤＧＦ（血小板由来成長因子）の総分泌濃度を、静止非活性化コントロール（ｎ＝５）と比較した。
結果
【０２２６】
活性化群および静止群の両者において、トロンビン活性化により、ＰＤＧＦ濃度が有意に高くなった。しかし、活性化血小板からのＰＤＧＦ分泌は、野生型と比較してベージュ群で有意に減少した（図６を参照のこと）。したがって、Ｌｙｓｔ活性を低下させるとＰＤＧＦも低下し、Ｌｙｓｔ活性を低下させる薬剤は抗血小板剤としても機能することができることが示された。
【図１】
2019135267.tif 000018
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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