(57)【要約】【課題】常温で長期間保存してもアフィニティ吸着性を有するリガンドを含む分離剤の性能の低下を抑制することができる分離剤の保存方法を提供する。【解決手段】アフィニティ吸着性を有するリガンドを含む分離剤を、１５℃〜４５℃の環境下で、１０日以上保存する分離剤の保存方法。前記分離剤を保存液中に保存することが好ましく、前記保存液としてアルコール類と水とを含む溶液又はアルコール類以外の有機溶媒と水とを含む溶液を用いることが好ましい。【選択図】図１
2019131478.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アフィニティ吸着性を有するリガンドを含む分離剤を、１５℃〜４５℃の環境下で、１０日以上保存する、分離剤の保存方法。
【請求項２】
前記分離剤を保存液中に保存する、請求項１に記載の分離剤の保存方法。
【請求項３】
前記保存液が、アルコール類を含む、請求項１又は２に記載の分離剤の保存方法。
【請求項４】
前記アルコール類の濃度が、保存液１００質量％中、１０質量％〜３０質量％である、請求項３に記載の分離剤の保存方法。
【請求項５】
前記保存液が、アルコール類以外の有機溶媒を含む、請求項１又は２に記載の分離剤の保存方法。
【請求項６】
前記アルコール類以外の有機溶媒の濃度が、保存液１００質量％中、１質量％〜３質量％である、請求項５に記載の分離剤の保存方法。
【請求項７】
前記分離剤を保存液中に浸漬させて保存する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の分離剤の保存方法。
【請求項８】
前記分離剤をカラムに充填して保存する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の分離剤の保存方法。
【請求項９】
前記分離剤が、多孔性粒子の表面にアフィニティ吸着性を有するリガンドが共有結合されたものである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の分離剤の保存方法。
【請求項１０】
前記多孔性粒子が、（メタ）アクリル系重合体で構成されたものである、請求項９に記載の分離剤の保存方法。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の保存方法により保存した分離剤を充填したカラムを接続した、生理活性物質の精製装置。
【請求項１２】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の保存方法により保存した分離剤を充填したカラムを接続し、生理活性物質を精製する、生理活性物質の精製方法。
【請求項１３】
カラム接続後、生理活性物質精製前に、カラムを水洗し、使用する緩衝液で洗浄する、請求項１２に記載の生理活性物質の精製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、分離剤の保存方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
生理活性物質、特に、タンパク質、ペプチド、核酸等の生体由来物質に基づく生物医薬品の製造には、実プロセススケールでこれらの分子を製造し、精製することが必要とされる。特に、生理活性物質の代表例であるモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の需要の高まりは、高い発現レベルを伴う細胞培養技術の開発を促進し、結果として、より効率的な精製プロセスについての需要が高まった。それに伴い、精密分離が可能な分離媒体をパッキングしたカラムを含む大型のクロマトグラフィーシステムを利用することが必須となっている。
【０００３】
生理活性物質のクロマトグラフィー分離プロセスは、滅菌条件下で行われる。そのためには、潜在的に有害なコンタミネーション物質が、使用前の分離剤に含まれていないことが極めて重要である。細菌及びその他の微生物によるコンタミネーションは、多数の生物工学的用途及び生物医学的用途において、しばしば直面する問題である。
【０００４】
加えて、分離剤には高度な分離性能と安定性が求められる。一般に、生理活性物質は、多くの場合タンパク質であり、細胞培養によって製造されるが、これらは、細胞内に産生される又は周囲の媒体中に分泌される。使用する細胞系は生物であるから、糖質、アミノ酸、増殖因子等を含む複合増殖培地で育てなければならない。細胞に与えた化合物の混合物及び他の細胞成分から所望のタンパク質を十分な純度で分離することは、極めて高度な技術を要するが、通常、種々の分離剤が組み合わせて用いられ、そのうちの１種としてアフィニティ分離を行うアフィニティ分離剤が用いられる。
【０００５】
このようなアフィニティ分離剤として、例えば、特許文献１には、プロテインＡが固定化されたアフィニティ分離剤が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開２０１５／１９９１９６号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
生理活性物質のクロマトグラフィー分離プロセスに用いられる分離剤には、高度な衛生品質と分離性能が求められる。アフィニティ分離剤は、多糖、ポリマー、無機材料の基材に、目的の生理活性物質を特異的に認識するタンパク質リガンドを担持しているため、一般的な分離剤と比べて、生理活性物質のクロマトグラフィー用の分離剤は、非常に高価なものとなる。すべてのプロセス技術と同じく、生理活性物質の生産プロセス開発においても、生産コストを低く抑えることが重要な課題となっている。その課題を解決するためには、アフィニティ分離剤を衛生的かつ安定的に長期間保管する技術が求められている。
【０００８】
アフィニティ分離剤を衛生的かつ安定的に長期間保管する方法として、有機溶媒や水溶液等の液体中に、低温環境下（通常１℃〜８℃）で保存する方法が推奨されていて、微生物の混入と増殖を抑制する静菌効果とタンパク質リガンドの安定化効果は得られる。
【０００９】
しかしながら、アフィニティ分離剤を低温環境下で保管することで、エネルギー効率の低下や分離剤を用いて製造する生理活性物質の生産性低下という課題を有する。より具体的には、保冷庫等の低温環境下にするための設備や膨大な保冷剤・梱包材が必要となり、環境負荷が高まると共に作業効率が低下するという課題を有する。また、アフィニティ分離剤を低温環境下から使用温度に上昇させた際に気泡が発生し、使用前に発生した気泡の除去作業が必要となるという課題を有する。
【００１０】
特許文献１には、プロテインＡが固定化されたアフィニティ分離剤カラムを４０℃で７日間保存できることが記載されているが、分離剤を用いて製造する生理活性物質の生産性低下を改善するには期間が十分とは言えない。また、保存液として緩衝液を用いているが、微生物の増殖を抑制する等の面での対応が十分とは言えない。
【００１１】
本発明は、このような課題を鑑みてなされたものであり、本発明の目的は、常温で長期間保存してもアフィニティ吸着性を有するリガンドを含む分離剤の性能の低下を抑制することができる、分離剤の保存方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
従前、アフィニティ分離剤は、低温環境下（通常１℃〜８℃）で保存することが要求されていた。しかしながら、本発明者らは、鋭意検討を重ねた結果、常温で長期間保存してもアフィニティ吸着性を有するリガンドを含む分離剤の性能の低下を抑制することができる分離剤の保存方法を見出した。
【００１３】
即ち、本発明の要旨は、以下のとおりである。
［１］アフィニティ吸着性を有するリガンドを含む分離剤を、１５℃〜４５℃の環境下で、１０日以上保存する、分離剤の保存方法。
［２］前記分離剤を保存液中に保存する、［１］に記載の分離剤の保存方法。
［３］前記保存液が、アルコール類を含む、［１］又は［２］に記載の分離剤の保存方法。
［４］前記アルコール類の濃度が、保存液１００質量％中、１０質量％〜３０質量％である、［３］に記載の分離剤の保存方法。
［５］前記保存液が、アルコール類以外の有機溶媒を含む、［１］又は［２］に記載の分離剤の保存方法。
［６］前記アルコール類以外の有機溶媒の濃度が、保存液１００質量％中、１質量％〜３質量％である、［５］に記載の分離剤の保存方法。
［７］前記分離剤を保存液中に浸漬させて保存する、［１］〜［６］のいずれかに記載の分離剤の保存方法。
［８］前記分離剤をカラムに充填して保存する、［１］〜［６］のいずれかに記載の分離剤の保存方法。
［９］前記分離剤が、多孔性粒子の表面にアフィニティ吸着性を有するリガンドが共有結合されたものである、［１］〜［８］のいずれかに記載の分離剤の保存方法。
［１０］前記多孔性粒子が、（メタ）アクリル系重合体で構成されたものである、［９］に記載の分離剤の保存方法。
［１１］［１］〜［１０］のいずれかに記載の保存方法により保存した分離剤を充填したカラムを接続した、生理活性物質の精製装置。
［１２］［１］〜［１０］のいずれかに記載の保存方法により保存した分離剤を充填したカラムを接続し、生理活性物質を精製する、生理活性物質の精製方法。
［１３］カラム接続後、生理活性物質精製前に、カラムを水洗し、使用する緩衝液で洗浄する、［１２］に記載の生理活性物質の精製方法。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の分離剤の保存方法は、常温で長期間保存しても分離剤の性能の低下を抑制することができ、その結果、環境負荷が低減されると共に分離剤を用いて製造する生理活性物質の生産性に優れる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】実施例、比較例及び参考例の保存方法により保存した分離剤の保存期間中の動的吸着容量の変動を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下に本発明について詳述するが、本発明は、以下の実施の形態に限定されるものではなく、その要旨の範囲内で種々に変更して実施することができる。尚、本明細書において「〜」という表現を用いる場合、その前後の数値又は物性値を含む表現として用いるものとする。また、本明細書において、「（メタ）アクリル」とは、「アクリル」、「メタクリル」又はその両者をいい、「（メタ）アクリレート」とは、「アクリレート」、「メタクリレート」又はその両者をいう。
【００１７】
（分離剤）
本発明の分離剤の保存方法における分離剤は、アフィニティ吸着性を有するリガンドを含む。
【００１８】
分離剤は、アフィニティ吸着性を有するリガンドを含むものであれば、特に限定されないが、吸着容量に優れることから、多孔性粒子の表面にアフィニティ吸着性を有するリガンドが共有結合された分離剤が好ましい。
【００１９】
アフィニティ吸着性を有するリガンドとしては、目的の生理活性物質を特異的に認識するものであれば特に限定されないが、例えば、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＬ、Ｆｃ結合タンパク、アビジン等のタンパク質；インシュリン等のペプチド；モノクローナル抗体等の抗体；酵素；ホルモン；ＤＮＡ；ＲＮＡ；ヘパリン、ルイスＸ、ガングリオシド等の糖質等が挙げられる。これらのアフィニティ吸着性を有するリガンドの中でも、分子認識選択性に優れることから、タンパク質、ペプチドが好ましく、タンパク質がより好ましく、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＬが更に好ましく、プロテインＡが特に好ましい。
【００２０】
多孔性粒子を構成する材料としては、例えば、ポリビニルアルコール系重合体、スチレン−ジビニルベンゼン系重合体や（メタ）アクリル系重合体等の架橋性合成高分子；セルロース、セファロース、アガロース、キトサン等の天然有機高分子；シリカ、ガラス、セラミック等の無機高分子等が挙げられる。これらの多孔性粒子を構成する材料の中でも、本発明の効果が顕著に表れることから、架橋性合成高分子が好ましく、（メタ）アクリル系重合体がより好ましい。
尚、本明細書において、スチレン−ジビニルベンゼン系重合体は、重合体を構成する全単量体単位１００質量％中、スチレン及びジビニルベンゼン由来の構成単位が５０質量％以上であることをいい、８０質量％以上が好ましい。また、本明細書において、（メタ）アクリル系重合体は、重合体を構成する全単量体単位１００質量％中、（メタ）アクリレート由来の構成単位が５０質量％以上であることをいい、８０質量％以上が好ましい。
【００２１】
（メタ）アクリル系重合体は、架橋構造を形成するため、架橋性（メタ）アクリレート由来の構成単位を含むことが好ましい。
架橋性（メタ）アクリレートとしては、例えば、エチレングリコールジ（メタ）アクリレート、ポリエチレングリコールジ（メタ）アクリレート、グリセリンジ（メタ）アクリレート、アリル（メタ）アクリレート、トリメチロールプロパントリ（メタ）アクリレート、テトラヒドロキシブタンジ（メタ）アクリレート、ペンタエリスリトールジ（メタ）アクリレート等が挙げられる。これらの架橋性（メタ）アクリレートは、１種を単独で用いてもよく、２種以上を併用してもよい。これらの架橋性（メタ）アクリレートの中でも、架橋反応性に優れることから、エチレングリコールジ（メタ）アクリレート、グリセリンジ（メタ）アクリレート、トリメチロールプロパントリ（メタ）アクリレートが好ましく、エチレングリコールジ（メタ）アクリレートがより好ましい。
【００２２】
（メタ）アクリル系重合体は、アフィニティ吸着性を有するリガンドと共有結合させるため、官能基を有する（メタ）アクリレート由来の構成単位を含むことが好ましい。
官能基を有する（メタ）アクリレートとしては、例えば、ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート、ヒドロキシプロピル（メタ）アクリレート、グリセリンモノ（メタ）アクリレート等のヒドロキシル基含有（メタ）アクリレート；グリシジル（メタ）アクリレート、４，５−エポキシブチル（メタ）アクリレート、９，１０−エポキシステアリル（メタ）アクリレート等のエポキシ基含有（メタ）アクリレート等が挙げられる。これらの官能基を有する（メタ）アクリレートは、１種を単独で用いてもよく、２種以上を併用してもよい。これらの官能基を有する（メタ）アクリレートの中でも、タンパク質リガンドとの反応性に優れることから、エポキシ基含有（メタ）アクリレートが好ましく、グリシジル（メタ）アクリレートがより好ましい。
【００２３】
（メタ）アクリル系重合体は、その性能を損なわない範囲において、必要に応じて、架橋性（メタ）アクリレート、官能基を有する（メタ）アクリレート以外の（メタ）アクリレート由来の構成単位を含んでもよい。
架橋性（メタ）アクリレート、官能基を有する（メタ）アクリレート以外の（メタ）アクリレートとしては、例えば、メチル（メタ）アクリレート、エチル（メタ）アクリレート、ブチル（メタ）アクリレート、ステアリル（メタ）アクリレート、２−エチルヘキシル（メタ）アクリレート、シクロヘキシル（メタ）アクリレート等のアルキル（メタ）アクリレート等が挙げられる。これらの（メタ）アクリレートは、１種を単独で用いてもよく、２種以上を併用してもよい。
【００２４】
粒子を多孔質にする方法は、例えば、粒子を形成する際の重合時に、多孔化剤を添加する方法が挙げられる。
【００２５】
多孔性粒子の表面にアフィニティ吸着性を有するリガンドを共有結合させる方法は、例えば、多孔性粒子の表面の特定の官能基とリガンドの特定の官能基との双方を選択的に反応させる方法が挙げられる。
【００２６】
アフィニティ吸着性を有するリガンドは、多孔性粒子の表面に直接結合させてもよく、スペーサーを介して結合してもよい。
【００２７】
分離剤は、多孔性粒子が有する反応性基を親水化処理することが好ましい。具体的には、エポキシ基を開環、親水性高分子鎖を共有結合で結合等の処理である。親水化処理を施されている分離剤は、非特異吸着を抑制することができ、分離処理の際の目的物質の回収率を向上させることができる。また、本発明の保存方法を適用した場合に、分離剤使用前の保存液成分の洗浄性に優れる。
【００２８】
分離剤の細孔容積は、０．４ｍＬ／ｇ〜１．５ｍＬ／ｇが好ましく、０．７ｍＬ／ｇ〜１．２ｍＬ／ｇがより好ましい。分離剤の細孔容積０．４ｍＬ／ｇ以上であると、吸着対象物質の拡散性に優れ、吸着容量に優れる。また、分離剤の細孔容積が１．５ｍＬ／ｇ以下であると、分離剤の強度に優れる。
尚、本明細書において、分離剤の細孔容積は、水銀圧入法により測定したものとする。具体的には、分離剤に圧力をかけて水銀を開孔部に侵入させ、圧力値と対応する侵入水銀体積とを用いて、細孔の形状を円柱状と仮定し、Ｗａｓｈｂｕｒｎの式から算出する方法であり、セラミックス成形体について規定されたＪＩＳ  Ｒ１６５５を準用する。
【００２９】
分離剤の比表面積は、３０ｍ２／ｇ〜２００ｍ２／ｇが好ましく、７０ｍ２／ｇ以上１００ｍ２／ｇがより好ましい。分離剤の比表面積が３０ｍ２／ｇ以上であると、リガンドの固定に必要な細孔内の表面積が十分存在し、リガンドが十分固定化でき、吸着量に優れる。また、分離剤の比表面積が２００ｍ２／ｇ以下であると、細孔の内部へ吸着対象物質が行き渡るまでに時間がかからず、動的吸着容量に優れる。
尚、本明細書において、分離剤の比表面積は、水銀圧入法により測定したものとする。具体的には、分離剤に圧力をかけて水銀を開孔部に侵入させ、圧力値と対応する侵入水銀体積とを用いて、細孔の形状を円柱状と仮定し、Ｗａｓｈｂｕｒｎの式から算出する方法であり、セラミックス成形体について規定されたＪＩＳ  Ｒ１６５５を準用する。
【００３０】
分離剤の体積平均粒子径は、１μｍ〜１０００μｍが好ましく、５μｍ〜７００μｍがより好ましく、１０μｍ〜５００μｍが更に好ましい。分離剤の体積平均粒子径が１μｍ以上であると、分離剤をカラムに充填して通液したときの圧力損失を抑制し、通液速度を高めることができ、分離処理の生産性に優れる。また、分離剤の体積平均粒子径が１０００μｍ以下であると、カラム効率に優れ、吸着量や分離性能に優れる。
尚、本明細書において、分離剤の体積平均粒子径は、光学顕微鏡を用いて任意の１００個の分離剤の粒子径を測定し、その分布から体積メジアン径を算出するものとする。
【００３１】
（保存温度）
本発明の分離剤の保存方法における保存温度は、１５℃〜４５℃であり、２０℃〜４０℃が好ましい。保存温度が１５℃以上であると、環境負荷を低減でき、作業効率が向上し、分離剤使用時の気泡の発生を抑制することができる。また、保存温度が４５℃以下であると、分離剤の性能の低下を抑制することができる。
本発明の分離剤の保存方法における保存温度は、１５℃〜４５℃、好ましくは２０℃〜４０℃と、比較的幅を持たせることができるので、分離剤輸送時の保存条件や分離剤保管時の保存条件等、異なる保存条件でも分離剤を保存することができ、分離剤の取り扱い性に優れる。
【００３２】
（保存期間）
本発明の分離剤の保存方法における保存期間は、１０日以上であり、２０日〜２年が好ましく、３０日〜１年がより好ましい。保存期間が１０日以上であると、分離剤を用いて製造する生理活性物質の生産性に優れる。また、保存期間が２年以下であると、分離剤の性能の低下を抑制することができる。保存期間の開始日は、製造した分離剤を容器又はカラムに入れ、１５℃〜４５℃の環境下に置いた日とする。保存期間の終了日は、分離剤を１５℃未満若しくは４５℃を超える環境下に置いた日、又は、生理活性物質の精製に使用するために分離剤を水若しくは緩衝液で洗浄した日とする。
【００３３】
（保存液）
本発明の分離剤の保存方法は、細菌や微生物の混入を抑制することができることから、分離剤を保存液中に保存することが好ましい。
【００３４】
保存液としては、細菌や微生物の増殖を抑制し、分離剤使用前の洗浄性に優れることから、アルコール類と水とを含む溶液、アルコール類以外の有機溶媒と水とを含む溶液が好ましく、有機溶媒の濃度をより低くすることができ、引火点をより低くすることができ、保管環境における安全性が高いことから、アルコール類以外の有機溶媒と水とを含む溶液がより好ましい。
【００３５】
アルコール類としては、メタノール、エタノール、イソプロパノール等が挙げられる。これらのアルコール類は、１種を単独で用いてもよく、２種以上を併用してもよい。これらのアルコール類の中でも、分離剤使用前の洗浄性、安全性に優れることから、エタノールが好ましい。
【００３６】
保存液としてアルコール類と水とを含む溶液を用いる場合の水の濃度は、保存液１００質量％中、７０質量％〜９０質量％が好ましく、７５質量％〜８５質量％がより好ましい。水の濃度が７０質量％以上であると、引火点が低く安全性に優れる。また、水の濃度が９０質量％以下であると、細菌や微生物の増殖を抑制し、分離剤の性能の低下を抑制することができる。
【００３７】
保存液としてアルコール類と水とを含む溶液を用いる場合のアルコール類の濃度は、保存液１００質量％中、１０質量％〜３０質量％が好ましく、１５質量％〜２５質量％がより好ましい。アルコール類の濃度が１０質量％以上であると、細菌や微生物の増殖を抑制し、分離剤の性能の低下を抑制することができる。また、アルコール類の濃度が３０質量％以下であると、引火点が低く安全性に優れる。
【００３８】
アルコール類以外の有機溶媒としては、ベンジルアルコール、フェノキシイソプロパノール、ドデカン、シクロヘキサン等が挙げられる。これらのアルコール類以外の有機溶媒は、１種を単独で用いてもよく、２種以上を併用してもよい。これらのアルコール類以外の有機溶媒の中でも、水溶性、分離剤使用前の洗浄性に優れることから、ベンジルアルコール、フェノキシイソプロパノールが好ましく、ベンジルアルコールがより好ましい。
【００３９】
保存液としてアルコール類以外の有機溶媒と水とを含む溶液を用いる場合の水の濃度は、保存液１００質量％中、９７質量％〜９９質量％が好ましく、９７．５質量％〜９８．５質量％がより好ましい。水の濃度が９７質量％以上であると、分離剤使用前の洗浄性に優れる。また、水の濃度が９９質量％以下であると、細菌や微生物の増殖を抑制し、分離剤の性能の低下を抑制することができる。
【００４０】
保存液としてアルコール類以外の有機溶媒と水とを含む溶液を用いる場合のアルコール類以外の有機溶媒の濃度は、保存液１００質量％中、１質量％〜３質量％が好ましく、１．５質量％〜２．５質量％がより好ましい。アルコール類以外の有機溶媒の濃度が１質量％以上であると、細菌や微生物の増殖を抑制し、分離剤の性能の低下を抑制することができる。また、アルコール類以外の有機溶媒の濃度が３質量％以下であると、分離剤使用前の洗浄性に優れる。
【００４１】
（保存方法具体例）
本発明の分離剤の保存方法は、湿潤環境下により分離剤の性能の安定性に優れることから、分離剤を保存液中に浸漬させて保存することが好ましい。
【００４２】
分離剤を保存液中に浸漬させる方法は、例えば、水切り状態の分離剤の質量を計量し、分離剤と保存液と混濁する方法が挙げられる。
【００４３】
本発明の分離剤の保存方法は、輸送効率に優れ、分離剤使用時にカラム筐体に充填する作業が不要になり作業効率に優れることから、分離剤をカラムに充填して保存することが好ましい。
【００４４】
分離剤をカラムに充填する方法は、例えば、スラリー状に分散させた分離剤をカラム中に導入し、通液して分離剤層を安定させる方法が挙げられる。
【００４５】
（用途）
本発明の分離剤の保存方法は、例えば、実験設備や製造設備での分離剤の保管、長距離輸送時の分離剤の保管等に好適に用いることができ、長距離輸送時の分離剤の保管に特に好適に用いることができる。
【００４６】
本発明の保存方法により保存した分離剤を充填したカラムを接続することで、生理活性物質の精製装置や生理活性物質の精製方法に好適である。
分離剤をカラムに充填して保存する場合、生理活性物質の精製時に保存したカラムをそのまま接続することができる。その場合、カラムを使用する前、即ち、生理活性物質の精製前に、水洗し、使用する緩衝液で洗浄すればよい。
【実施例】
【００４７】
以下、実施例を用いて本発明を更に具体的に説明するが、本発明は、その要旨を逸脱しない限り、以下の実施例の記載に限定されるものではない。
【００４８】
（カラム作成）
以下の（１）〜（８）の手順にて、カラムを作成した。
（１）実施例・比較例・参考例における保存中のスラリー（分離剤と保存液）を振盪後、分離剤量が約１０ｍＬになるよう採取し水洗する。
（２）水洗後５ｍＬメスシリンダーに移し、分離剤量が約２．７ｍＬになるようタップさせる。３時間静置させて体積を計量する。
（３）計量した分離剤の上清を除去し、２００ｍｍｏｌ／Ｌの食塩水に懸濁させ、分離剤が６０〜７０体積％の範囲となるよう、スラリーを調製する。
（４）下部栓を装着し、パッカーと連結したガラスカラム（直径５ｍｍ、高さ１５０ｍｍ、体積２．７ｍＬ）に調製したスラリーを入れ、パッカーの上端まで２００ｍｍｏｌ／Ｌの食塩水を加える。
（５）通液装置にパッカーと連結したガラスカラム内に、２００ｍｍｏｌ／Ｌの食塩水を２０００ｍＬ／時間で１分間通液する。
（６）２００ｍｍｏｌ／Ｌの食塩水を４０００ｍＬ／時間で４分間通液する。
（７）通液装置から取り外し、パッカーを取り外す。
（８）充填した内容物の高さが約１２．７ｃｍとなるように、ガラスカラムに上部栓を取り付ける。
【００４９】
（動的吸着容量（ＤＢＣ）測定）
以下の（１）〜（５）の手順にて、動的吸着容量（ＤＢＣ）測定を行った。
（１）ＨＰＬＣ装置（機種名「ＡＫＴＡ  ＡＶＡＮＴ１５０」、ＧＥヘルスケア製）に、前述で作成したカラムを接続する。
（２）１ｍＬ／分でリン酸緩衝液（１５０ｍｍｏｌ／Ｌの塩化ナトリウムを添加した２０ｍｍｏｌ／Ｌのリン酸ナトリウム緩衝液）を２５分間通液し、平衡化する。
（３）平衡化したものと同組成の緩衝液で１．０ｍｇ／ｍＬに調製したヒトグロブリン水溶液を１．２７ｍＬ／分で４０分間通液する。
（４）ヒトグロブリンの吸着工程において、測定吸光度が最大吸光度の１０％に達した点を１０％破過点とし、通液開始から１０％破過点までの通液時間を測定する。
（５）以下の計算式を用いて、ＤＢＣ値を算出する。
ＤＢＣ（ｍｇ／ｍＬ）＝１．０（ｍｇ／ｍＬ、ヒトグロブリン濃度）×１．２７（ｍＬ／分、流速）×１０％破過点までの通液時間（分）÷２．５（ｍＬ、カラム体積）
【００５０】
［実施例１］
アフィニティ吸着性を有するリガンドを含む分離剤（商品名：ＭａｂＳｐｅｅｄ  ｒＰ２０２、三菱ケミカル（株）製、カタログ番号  ５−１０５−０１）７０体積％を、水８０質量％及びエタノール２０質量％の保存液３０体積％中に、保存温度２５℃で６０日間保存した。
保存期間中の動的吸着容量を、表１及び図１に示す。
【００５１】
［実施例２］
保存温度を４０℃にした以外は、実施例１と同様に保存した。
保存期間中の動的吸着容量を、表１及び図１に示す。
【００５２】
［参考例１］
保存温度を４℃にした以外は、実施例１と同様に保存した。
保存期間中の動的吸着容量を、表１及び図１に示す。
【００５３】
［実施例３］
アフィニティ吸着性を有するリガンドを含む分離剤（商品名：ＭａｂＳｐｅｅｄ  ｒＰ２０２、三菱ケミカル（株）製、カタログ番号  ５−１０５−０１）７０体積％を、水９８質量％及びベンジルアルコール２質量％の保存液３０体積％中に、保存温度２５℃で６０日間保存した。
保存期間中の動的吸着容量を、表１及び図１に示す。
【００５４】
［実施例４］
保存温度を４０℃にした以外は、実施例１と同様に保存した。
保存期間中の動的吸着容量を、表１及び図１に示す。
【００５５】
［参考例２］
保存温度を４℃にした以外は、実施例１と同様に保存した。
保存期間中の動的吸着容量を、表１及び図１に示す。
【００５６】
［比較例１］
保存温度を６０℃にした以外は、実施例１と同様に保存した。
保存期間中の動的吸着容量を、表１及び図１に示す。
【００５７】
【表１】
2019131478.tif 000003
【００５８】
図１は、実施例、比較例及び参考例の保存方法により保存した分離剤の保存期間中の動的吸着容量の変動を示す図である。
表１、図１からも分かるように、実施例及び参考例の保存方法により保存した分離剤は、保存期間中の動的吸着容量の変動がほとんどなく、長期間保存しても分離剤の性能の低下が抑制されたことを確認することができた。一方、比較例の保存方法により保存した分離剤は、保存期間中の動的吸着容量の変動が大きく、分離剤を長期間保存することができなかった。
また、実施例及び参考例の結果から、冷蔵なしで長期間保存しても分離剤の性能の低下が抑制されることを確認することができた。
【産業上の利用可能性】
【００５９】
本発明の分離剤の保存方法は、例えば、実験設備や製造設備での分離剤の保管、長距離輸送時の分離剤の保管等に好適に用いることができ、長距離輸送時の分離剤の保管に特に好適に用いることができる。
【図１】
2019131478.tif 000004