(57)【要約】【課題】皮膚の光老化を抑制する効果を有するとともに、安価にかつ多量に製造できる皮膚の光老化抑制用食品を提供する。【解決手段】ゲルとゲル内に包含された気泡状態の水素ガスとを含み、気泡状態の水素ガスの含有率が０．１〜７０体積％［ｖ／ｗ］である、皮膚の光老化抑制用食品。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ゲルと前記ゲル内に包含された気泡状態の水素ガスとを含み、前記気泡状態の水素ガスの含有率が０．１〜７０体積％［ｖ／ｗ］である、皮膚の光老化抑制用食品。
【請求項２】
前記ゲルが、ゲル化剤から形成された網目構造と液状媒体とを含み、
前記ゲル化剤が、ゼラチン、寒天、カラギーナン、ペクチン、グァーガム、タマリンドガム、グルコマンナン、カロブビーンガム、キサンタンガム、プルラン、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸、アルギン酸塩およびアルギン酸誘導体からなる群から選ばれる少なくとも１種である、請求項１に記載の皮膚の光老化抑制用食品。
【請求項３】
前記食品が、ゼリーまたはグミである、請求項１または２に記載の皮膚の光老化抑制用食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚の光老化抑制用食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚の老化としては、加齢による自然老化と、紫外線による光老化とが知られている。光老化では、皮膚におけるシミやシワの発生、皮膚の保湿力の低下、皮膚の弾力の低下等が見られる。
【０００３】
皮膚の光老化を予防したり、皮膚の光老化を改善したりする食品としては、皮膚の光老化を抑制する効果を有する天然成分、天然由来成分等を含むものが提案されている（特許文献１〜４）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０１０−２２７０９８号公報
【特許文献２】特開２０１４−０２８８２３号公報
【特許文献３】特開２０１４−１６２７４８号公報
【特許文献４】特開２０１５−１８９７００号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかし、皮膚の光老化を抑制する効果を有する天然成分、天然由来成分等は、安価に入手できなかったり、多量に入手できなかったりするため、これら成分を含む食品を安価にかつ多量に製造できないという問題がある。
【０００６】
本発明は、皮膚の光老化を抑制する効果を有するとともに、安価にかつ多量に製造できる皮膚の光老化抑制用食品を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、下記の態様を有する。
＜１＞ゲルと前記ゲル内に包含された気泡状態の水素ガスとを含み、前記気泡状態の水素ガスの含有率が０．１〜７０体積％［ｖ／ｗ］である、皮膚の光老化抑制用食品。
＜２＞前記ゲルが、ゲル化剤から形成された網目構造と液状媒体とを含み、前記ゲル化剤が、ゼラチン、寒天、カラギーナン、ペクチン、グァーガム、タマリンドガム、グルコマンナン、カロブビーンガム、キサンタンガム、プルラン、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸、アルギン酸塩およびアルギン酸誘導体からなる群から選ばれる少なくとも１種である、前記＜１＞の皮膚の光老化抑制用食品。
＜３＞前記食品が、ゼリーまたはグミである、前記＜１＞または＜２＞の皮膚の光老化抑制用食品。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の皮膚の光老化抑制用食品は、皮膚の光老化を抑制する効果を有するとともに、安価にかつ多量に製造できる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】皮膚の光老化抑制用食品中の気泡状態の水素ガスの含有率の経時変化を示すグラフである。
【図２】実施例における各群の経表皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）を示すグラフである。
【図３】実施例において表皮厚の測定に用いた標本を示す写真である。
【図４】実施例における各群の表皮厚を示すグラフである。
【図５】実施例における各群のＳＯＤ様活性を示すグラフである。
【図６】実施例において角層剥離度の測定に用いた染色後の角層を示す写真である。
【図７】実施例における各群の角層剥離度を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下の用語の定義は、本明細書および特許請求の範囲にわたって適用される。
「ゲル化剤」とは、水素結合等による物理的凝集または共有結合等による架橋によって液状媒体を保持できる網目構造を形成し得る化合物をいう。
「皮膚の光老化抑制用食品中の気泡状態の水素ガスの含有率（体積％［ｖ／ｗ］）」とは、皮膚の光老化抑制用食品の所定質量（１００ｇ）に気泡状態で含まれる水素ガスの体積（ｃｍ３）の割合をいう。
「液状媒体に対する水素ガスの飽和溶解度」とは、液状媒体（水等）に対する水素ガスの大気圧下での飽和溶解度をいう。なお、飽和溶解度を規定する「ガスの溶解」は、ヘンリーの法則が成立し、ガスが圧力に応じて分子状で溶解している状態である。
【００１１】
皮膚の光老化抑制用食品中の気泡状態の水素ガスの含有率は、次のように求める。大気圧、２５℃の条件下で皮膚の光老化抑制用食品の０．５〜１ｇをガスクロマトグラフ（ＧＣ）分析で用いるヘッドスペースＧＣ分析用サンプル瓶（容量：２０ｍＬ）に精秤して入れ、水の１０ｍＬを加えて密閉する。サンプル瓶を手でよく振った後、超音波洗浄機で十分に混合する。サンプル瓶を７０℃に加熱し、皮膚の光老化抑制用食品から気泡が消えるまで７０℃で加熱を続ける。気泡が消えた後、サンプル瓶内の気相ガスを採取して、ＧＣ分析（ＴＣＤ検出器）によって水素ガスを定量し、皮膚の光老化抑制用食品中の気泡状態の水素ガスの含有率（体積％［ｖ／ｗ％］）を算出する。水に対する水素ガスの飽和溶解度は、２０℃で１．６ｐｐｍ（２体積％［ｖ／ｗ］）、７０℃で１．５ｐｐｍ（１．８体積％［ｖ／ｗ］）であってほとんど変わらない、すなわち皮膚の光老化抑制用食品のベースであるゲル（ほぼ水）中の溶存水素ガスの量は測定前後でほとんど変わらないから、前記方法によって求めた水素ガスの含有率は、ゲル内に包含された気泡状態の水素ガスの含有率と見なすことができる。
本明細書および特許請求の範囲において数値範囲を示す「〜」は、その前後に記載された数値を下限値および上限値として含むことを意味する。
【００１２】
＜＜皮膚の光老化抑制用食品＞＞
本発明の皮膚の光老化抑制用食品（以下、「本食品」とも記す。）は、ゲルと、ゲル内に包含された気泡状態の水素ガスとを含む。また、本食品は、通常、ゲルに溶存する水素ガスをさらに含む。すなわち、本食品は、ゲルに含まれる液状媒体に対する水素ガスの飽和溶解度（液状媒体が水の場合は２０℃で１．６ｐｐｍ（２体積％［ｖ／ｗ］））に相当する溶存水素ガスと、ゲルに含まれる液状媒体に溶解しきれなかった余剰の水素ガスである気泡状態の水素ガスを含んでいる。
本食品は、ゲルおよび水素ガス以外の固形分（果肉、繊維分、野菜片等）をさらに含んでいてもよい。
【００１３】
本食品の形態としては、経口摂取しやすい点から、ゼリーまたはグミが好ましい。ゼリーは、液状媒体（水分）の割合が比較的多い崩れやすいゲルをベースとしたものである。ゼリーには、飲める程度の硬さにゲル化されたゲルをベースとしたゼリー飲料も包含される。グミは、液状媒体（水分）の割合が比較的少ないゴム状のゲルをベースとしたものである。
【００１４】
＜気泡状態の水素ガス＞
本食品中の気泡状態の水素ガスの含有率は、０．１〜７０体積％［ｖ／ｗ］であり、２〜６０体積％［ｖ／ｗ］が好ましく、６〜５５体積％［ｖ／ｗ］がより好ましく、１０〜５０体積％［ｖ／ｗ］がさらに好ましく、１５〜４５体積％［ｖ／ｗ］が特に好ましい。本食品中の気泡状態の水素ガスの含有率が前記範囲の下限値以上であれば、ゲル中の溶存水素ガスの量と合計した本食品中の全水素ガスの含有率が、溶存水素ガスのみである従来の水素水等に比べ多くなり、水素ガスが有する様々な機能を十分に発現できる。本食品中の気泡状態の水素ガスの含有率が前記範囲の上限値までは、ゲル内への水素ガスの気泡分散が可能である。
【００１５】
本食品中の気泡状態の水素ガスの含有率は、後述する製造方法において、ゲル化剤の量、液状組成物に気泡状態の水素ガスを包含させる際の水素ガスの供給量ならびに液状組成物の撹拌条件（回転数、時間等）等を適宜選択することによって調整できる。
【００１６】
＜ゲル＞
ゲルは、本食品において水素ガスを溶存するとともに気泡状態の水素ガスを包含するためのベースとなるものである。ゲルとしては、ゲル化剤から形成された網目構造と液状媒体とを含むものが好ましい。
ゲルは、必要に応じて、ゲル化剤から形成された網目構造および液状媒体以外の他の成分をさらに含んでいてもよい。
【００１７】
（ゲル化剤）
ゲル化剤としては、天然物由来の蛋白類または多糖類等が挙げられる。
天然物由来の蛋白類または多糖類としては、例えば、ゼラチン、寒天、カラギーナン、ペクチン、グルコマンナン、プルラン、アルギン酸、アルギン酸塩（アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カリウム、アルギン酸カルシウム、アルギン酸アンモニウム等）、アルギン酸誘導体（アルギン酸プロピレングリコールエステル等）、アウレオバシジウム培養液、スクシノグリカン、アマシードガム、アラビアガム、アラビノガラクタン、ウェランガム、カシアガム、ガティガム、カードラン、カラヤガム、カロブビーンガム、キサンタンガム、キトサン、グァーガム、グァーガム酵素分解物、酵母細胞壁、サイリウムシードガム、サバクヨモギシードガム、ジェランガム、タマリンドシードガム、タラガム、デキストラン、トラガントガム、トロロアオイ、微小繊維状セルロース、ファーセレラン、フクロノリ抽出物、マクロホモプシスガム、ラムザンガム、レバン、オクラ抽出物、海藻セルロース、褐藻抽出物、コンニャクイモ抽出物、サツマイモセルロース、ダイズ多糖類、ナタデココ、カルボキシメチルセルロース、アガロース等が挙げられる。
ゲル化剤は、１種を単独で用いてもよく、２種以上を併用してもよい。
【００１８】
ゲル化剤としては、ゼラチン、寒天、カラギーナン、ペクチン、グルコマンナン、プルラン、アルギン酸、アルギン酸塩、アルギン酸誘導体、アウレオバシジウム培養液、スクシノグリカン、アマシードガム、アラビアガム、アラビノガラクタン、ウェランガム、カシアガム、ガティガム、カードラン、カラヤガム、カロブビーンガム、キサンタンガム、キトサン、グァーガム、グァーガム酵素分解物、酵母細胞壁、サイリウムシードガム、サバクヨモギシードガム、ジェランガム、タマリンドシードガム、タラガム、デキストラン、トラガントガム、トロロアオイ、微小繊維状セルロース、ファーセレラン、フクロノリ抽出物、マクロホモプシスガム、ラムザンガム、レバン、オクラ抽出物、海藻セルロース、褐藻抽出物、コンニャクイモ抽出物、サツマイモセルロース、ダイズ多糖類、ナタデココ、カルボキシメチルセルロースおよびアガロースからなる群から選ばれる少なくとも１種がより好ましく、ゼラチン、寒天、カラギーナン、ペクチン、グァーガム、タマリンドガム、グルコマンナン、カロブビーンガム、キサンタンガム、プルラン、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸、アルギン酸塩およびアルギン酸誘導体からなる群から選ばれる少なくとも１種がより好ましく、ゼラチンがさらに好ましい。
【００１９】
（液状媒体）
液状媒体は、液状媒体以外の成分を溶解または分散させるための媒体となるものである。液状媒体としては、食品として用いる点から、水を含む水性媒体が好ましく、水が特に好ましい。
【００２０】
（他の成分）
他の成分としては、甘味料（砂糖、果糖、ブドウ糖、果糖ブドウ糖液糖、糖アルコール（パラチニット、ソルビトール等）、高甘味度甘味料（アステルパーム、ステビア等）、マルトデキストリン等）、起泡剤（カゼイン、卵アルブミン等）、酸味料（クエン酸、リンゴ酸、酒石酸等）、賦形剤（デキストリン、デンプン等）、セルロース系添加剤（セルロース、セルロース誘導体等）、グリセリン、果汁、乳製品、鶏卵、ビタミン、ミネラル、アミノ酸、香料、着色料、油脂、乳化剤等が挙げられる。
【００２１】
（ゲル中の各成分の割合）
本食品がゼリーの場合、液状媒体の割合は、ゲル（１００質量％）のうち、５０〜９９質量％が好ましく、６０〜９９質量％がより好ましく、７０〜９９質量％がさらに好ましい。ゼリーにおける液状媒体の割合が前記範囲の下限値以上であれば、ゼリーが硬くなりすぎず、のど越しがよい。ゼリーにおける液状媒体の割合が前記範囲の上限値以下であれば、ゼリーとしての弾力があり、食感がよい。
本食品がグミの場合、液状媒体の割合は、ゲル（１００質量％）のうち、５〜４０質量％が好ましく、６〜３０質量％がより好ましく、１０〜２０質量％がさらに好ましい。グミにおける液状媒体の割合が前記範囲の下限値以上であれば、グミが硬くなりすぎず、咀嚼しやすい。グミにおける液状媒体の割合が前記範囲の上限値以下であれば、グミの弾力性が高く、噛み口が硬く、歯切れがよくないため、咀嚼回数が強制的に増え、グミに含まれる水素ガスが十分に放出される。
【００２２】
本食品がゼリーの場合、ゲル化剤の割合は、ゲル（１００質量％）のうち、１〜５０質量％が好ましく、１〜４０質量％がより好ましく、１〜３０質量％がさらに好ましい。ゼリーにおけるゲル化剤の割合が前記範囲の下限値以上であれば、ゲル中に気泡状態の水素ガスを多量にかつ長時間にわたり保持しやすく、また、ゼリーとしての弾力があり、食感がよい。ゼリーにおけるゲル化剤の割合が前記範囲の上限値以下であれば、ゼリーが硬くなりすぎず、のど越しがよい。
本食品がグミの場合、ゲル化剤の割合は、ゲル（１００質量％）のうち、２〜２５質量％が好ましく、３〜２０質量％がより好ましく、５〜１５質量％がさらに好ましい。グミにおけるゲル化剤の割合が前記範囲の下限値以上であれば、ゲル中に気泡状態の水素ガスを多量にかつ長時間にわたり保持しやすく、また、グミの弾力性が高くなりやすい。グミにおけるゲル化剤の割合が前記範囲の上限値以下であれば、グミが硬くなりすぎず、咀嚼しやすい。
【００２３】
他の成分の割合は、本食品に要求される特性、機能等に応じて公知の配合割合の範囲内で適宜選択すればよい。
【００２４】
＜皮膚の光老化抑制用食品の製造方法＞
本食品は、例えば、下記の工程（Ｉ）〜工程（ＩＩＩ）を有する方法によって製造できる。
工程（Ｉ）：ゲル化剤と液状媒体とを含む液状組成物を調製する工程。
工程（ＩＩ）：工程（Ｉ）の後、液状組成物に気泡状態の水素ガスを包含させる工程。
工程（ＩＩＩ）：工程（ＩＩ）の後、気泡状態の水素ガスを包含する液状組成物をゲル化させて本食品を得る工程。
【００２５】
（工程（Ｉ））
液状組成物は、例えば、溶解槽にゲル化剤と液状媒体とを仕込み、撹拌によってゲル化剤を液状媒体に溶解させることによって調製できる。液状組成物には、ゲル化剤および液状媒体以外の他の成分をさらに添加してもよい。
【００２６】
液状組成物の調製に用いられる装置としては、撹拌機付きの槽または釜が挙げられる。装置の材料は、本発明の効果を損なわない範囲内で、ゲル化剤、液状媒体、水素ガス等に対する耐食性、使用温度における耐熱性、液状組成物への溶出等を考慮して選択できる。装置の材料としては、ステンレス鋼材、ガラスライニング、フッ素樹脂ライニング、プラスチック等が挙げられる。また、引火性の水素ガスを使用するため、引火または爆発を防止できる安全対策を講じた装置対応も考慮する必要がある。
【００２７】
（工程（ＩＩ））
液状組成物に水素ガスを供給することによって、気泡状態の水素ガスを包含した液状組成物を得る。気泡状態の水素ガスを包含した液状組成物にはゲル化剤および液状媒体以外の他の成分をさらに添加してもよい。
【００２８】
水素ガス供給時の液状組成物の粘度は、１〜３０，０００ｍＰａ・ｓが好ましく、１０〜２０，０００ｍＰａ・ｓがより好ましく、１００〜１０，０００ｍＰａ・ｓがさらに好ましい。液状組成物の粘度が前記範囲の下限値未満では、液状組成物中に水素ガスを気泡として分散しやすいが、水素ガスが浮上しやすく液状組成物中に留まりにくい。液状組成物の粘度が前記範囲の上限値を超えると、液状組成物中に水素ガスを気泡として分散しにくく、水素ガスの均一分散が困難となる。
水素ガス供給時の液状組成物の温度については、前記した液状組成物の粘度範囲が達成できる温度であればよく、適宜設定すればよい。
【００２９】
水素ガスの供給量は、液状組成物中に溶解した水素ガスと気泡状態の水素ガスとの合計量が、液状媒体（水等）に対する水素ガスの飽和溶解度を超える量となる量であり、最終的に得られる本食品中の気泡状態の水素ガスの含有率が、０．１〜７０体積％［ｖ／ｗ］となる量である。
【００３０】
ゲル化剤および液状媒体の仕込量、水素ガスの供給量は、所望する本食品中の気泡状態の水素ガスの含有率に応じて適宜設定すればよい。また、液状組成物の温度および粘度についても、ゲル化剤および液状媒体の種類、所望する本食品中の気泡状態の水素ガスの含有率に応じて適宜設定すればよい。
【００３１】
工程（ＩＩ）に用いられる装置としては、液状組成物に水素ガスを所望する気泡として均一に分散できる装置であれば、公知の気液分散操作に用いられる装置、設備を用いることができる。装置の材料は、本発明の効果を損なわない範囲内で、ゲル化剤、液状媒体、水素ガス等に対する耐食性、使用温度における耐熱性、液状組成物への溶出等を考慮して選択できる。
【００３２】
工程（ＩＩ）においては、液状組成物を撹拌した状態で、液状組成物に水素ガスを供給する、または、液状組成物を撹拌せずに、液状組成物に水素ガスを供給した後、振とうすることが好ましい。
撹拌方法としては、撹拌機を用いる方法、ホモミキサーを用いる方法、ラインミキサーを用いる方法等が挙げられる。
振とう方法としては、振とう機を用いる方法等が挙げられる。
【００３３】
（工程（ＩＩＩ））
気泡状態の水素ガスを包含する液状組成物をゲル化させて本食品を得る。
液状組成物に包含された気泡状態の水素ガスの揮散ロスを極力低減するために、液状組成物のゲル化はできる限り速やかに行うことが好ましい。
【００３４】
ゲル化方法は、ゲル化剤の種類に応じた方法を適宜選択すればよい。
ゲル化方法としては、ゲル化剤がゲル化温度を有する場合は、ゲル化剤のゲル化温度以下に液状組成物を冷却することによって液状組成物をゲル化する方法が挙げられる。
ゲル化方法としては、ゲル化剤が架橋性基を有する場合は、中和剤や架橋剤によるゲル化剤の架橋反応によって液状組成物をゲル化する方法が挙げられる。
【００３５】
＜作用機序＞
以上説明した本食品にあっては、ゲル内に包含された気泡状態の水素ガスを含むため、ゲル中には、ゲルに含まれる液状媒体（水等）に対する水素ガスの飽和溶解度と等しい量の水素ガスが溶解していることになる。すなわち、ゲル中に溶解した水素ガスとゲル内に包含された気泡状態の水素ガスとの合計量は、液状媒体に対する水素ガスの飽和溶解度を超える量となる。このように水素ガスを多く含む本食品は、水素ガスを多く供給でき、水素ガスが有する様々な機能（活性酸素を除去する機能、生物活性を高める機能等）を十分に発現できる。その結果、皮膚の光老化を予防したり、皮膚の光老化を改善したりできる。
また、本食品にあっては、皮膚の光老化を抑制する効果を有する成分として、安価にかつ多量に入手できる水素ガスを用いているため、安価にかつ多量に製造できる。
【実施例】
【００３６】
以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００３７】
＜実施例１＞
撹拌機付きの槽にゼラチンおよび水を入れ、撹拌しながら６０℃に加熱してゼラチン濃度２５質量％の液状組成物を調製した。３５℃にて液状組成物を撹拌しながら、液状組成物に水素ガスを通気し、気泡状態の水素ガスを包含する液状組成物を得た。液状組成物を蓋付きのガラス製容器の複数個に分けて入れ、密閉状態で室温まで冷却し、ゲル化させて本食品を得た。本食品は、ゲル中に溶解した水素ガスおよびゲル内に包含された気泡状態の水素ガスを含んでいた。
【００３８】
蓋付きのガラス製容器に密閉された状態の本食品を５℃の冷蔵庫中で保管した。複数の本食品からサンプリングしたサンプル中の気泡状態の水素ガスの含有率の経時変化を図１に示す。マウスに投与される本食品は、製造後２〜１１日のものであるため、投与時の本食品中の気泡状態の水素ガスの含有率は、１７〜４０体積％［ｖ／ｗ］であると想定された。
【００３９】
＜比較例１＞
市販の水素水（株式会社伊藤園製、水素水Ｈ２、水素ガス濃度：０．３〜０．８ｐｐｍ）を用意した。
【００４０】
＜比較例２＞
撹拌機付きの槽にゼラチンおよび水を入れ、撹拌しながら６０℃に加熱してゼラチン濃度２５質量％の液状組成物を調製した。液状組成物を室温まで冷却し、ゲル化させて水素ガスを含まないゼラチンゲルを得た。
【００４１】
＜動物試験＞
ヘアレスマウス（Ｈｏｓ・ＨＲ−１、６週齢、雄）の３５匹を入手し、７日間予備飼育した。予備飼育は、１２時間明暗周期、温度２４±２℃、湿度５０±１０％の動物飼育室で行った。飼料としては、一般飼育用固形飼料を用い、自由摂取、自由飲水させた。予備飼育の後、体重、皮膚水分量および皮膚蒸散量が等しくなるように、１群７匹として下記の５群に分けた。
ＵＶ（−）ｃｏｎｔｒｏｌ群：蒸留水を投与し、かつ紫外線を照射しないコントロール群。
ＵＶ（＋）ｃｏｎｔｒｏｌ群：蒸留水を投与し、かつ紫外線を照射するコントロール群。
ＵＶ（＋）水素水群：水素水を投与し、かつ紫外線を照射する群。
ＵＶ（＋）ゼラチンゲル群：ゼラチンゲルを投与し、かつ紫外線を照射する群。
ＵＶ（＋）本食品群：本食品を投与し、かつ紫外線を照射する群。
【００４２】
本飼育においては、群毎に１つのケージで群飼いした。本飼育は、予備飼育条件に加えて、胃ゾンデによる下記の強制投与も行った。
ＵＶ（−）ｃｏｎｔｒｏｌ群には、投与量が１０ｍＬ／ｋｇＢＷ・ｄａｙとなるように、蒸留水を胃ゾンデにて群分けから７日間投与した。
ＵＶ（＋）ｃｏｎｔｒｏｌ群には、投与量が１０ｍＬ／ｋｇＢＷ・ｄａｙとなるように、蒸留水を胃ゾンデにて群分けから７日間投与した。
ＵＶ（＋）水素水群には、投与量が１０ｍＬ／ｋｇＢＷ・ｄａｙとなるように、水素水を胃ゾンデおよび自由飲水にて群分けから７日間投与した。水素ガス投与量は、０．０００６ｍｇ／ｋｇＢＷ・ｄａｙとなる。
ＵＶ（＋）ゼラチンゲル群には、ＵＶ（＋）本食品群と投与するゼラチン量を合わせるために、投与量が７．７ｍＬ／ｋｇＢＷ・ｄａｙとなるように、ゼラチンゲルを群分けから７日間経口投与した。なお、ゼラチンゲルとしては、経口投与前に３０℃で５分間湯浴にした後、ゲルを再スラリー化させたものを用いた。
ＵＶ（＋）本食品群には、投与量が１０ｍＬ／ｋｇＢＷ・ｄａｙとなるように、本食品を群分けから７日間経口投与した。水素ガス投与量は、０．１９６ｍｇ／ｋｇＢＷ・ｄａｙとなる。なお、本食品としては、経口投与前に、蓋付きのガラス製容器に密閉された状態にて３０℃で５分間湯浴した後、１分間強振とうすることによって、水素ガスをゲル中に再分散させたスラリーを用いた。
【００４３】
紫外線を照射する各群については、群分けから７日後に０．１２Ｊ／ｃｍ２の紫外線（ＵＶＢ）を照射した。
各群のマウスについて、下記に示す経表皮水分蒸散量、表皮厚、ＳＯＤ様活性、角層剥離度の測定を行った。
【００４４】
（統計処理法）
各測定結果について、エクセル（マイクロソフト社製）のアドインソフトである統計ソフトのＳｔａｔｃｅｌ３（オーエムエス出版、４Ｓｔｅｐｓエクセル統計（第３版）、付録）によって統計処理を行った。すべてのパラメーターについて正規性の有無を確認した。独立２群間の検定において正規分布に従いかつ等分散である場合、つまりＵＶ（−）ｃｏｎｔｒｏｌ群とＵＶ（＋）ｃｏｎｔｒｏｌ群との比較については、Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ−ｔｅｓｔ（危険率５％）を行った。正規性を有する多群間の検定、つまり紫外線を照射する各群間の比較においては一元分散分析を行った。水準間に差がある群間には、Ｔｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒ’ｓ  ｔｅｓｔ（危険率１％または５％）による統計処理を行った。
【００４５】
（経表皮水分蒸散量）
紫外線の照射を実施してから２４時間後、各群のマウスについて、Ｔｅｗａｍｅｔｅｒ  ＴＭ３００（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  ＧｍｂＨ製）を用いて腰部の経表皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）を測定した。Ｔｅｗａｍｅｔｅｒ  ＴＭ３００は、皮膚等の表面から蒸発する水分がＦｉｃｋの法則に従って拡散すると仮定した測定方法を採用している。Ｔｅｗａｍｅｔｅｒ  ＴＭ３００においては、プローブ先端の円筒の内部に２組の高感度温湿度センサーが一定の距離で配置されており、プローブを皮膚に当て、センサーを通過する水分の温湿度を測定し、温湿度の値から蒸散量（ｇ／ｈｍ２）を算出している。
測定補助者がマウスを両手で保定し、測定者がマウスの腰部にプローブを軽く押し当ててＴＥＷＬを測定した。１秒おきに経時的にＴＥＷＬを測定し、連続した５回の測定値の標準偏差が０．１以下になったときの最後の５回の測定値の平均値をその個体の測定値とした。各群のＴＥＷＬ（個体数７の平均値±標準誤差）を図２に示す。
ＴＥＷＬの上昇は、紫外線の照射による皮膚のバリア機能の崩壊を示す。本食品の投与によって、ＴＥＷＬの上昇が抑えられており、紫外線の照射による皮膚のバリア機能の崩壊が穏やかになっていることが分かる。また、本食品を投与したＵＶ（＋）本食品群は、水素水またはゼラチンをそれぞれ単独で投与したＵＶ（＋）水素水群、ＵＶ（＋）ゼラチンゲル群と比べて、ＴＥＷＬの上昇が顕著に低下しており、水素とゼラチンとの組み合わせによる相乗効果によって、優れた効果が発揮されることが確認できる。
【００４６】
（皮膚組織採取法）
紫外線の照射を実施してから４８時間後、各群のマウスについて、劇セボフレン（登録商標）吸入麻酔液（丸石製薬株式会社製）による麻酔下、大静脈採血後、皮膚組織の採取を行った。
８ｍｍ径生検パンチ（カイ  インダストリーズ株式会社製）を用いてマウスの背部正中線上部の１箇所に穴を開け、病理解析用皮膚を採取した。皮膚を傷つけないようにろ紙（有限会社桐山製作所製、桐山ロート用ろ紙、Ｎｏ．４、φ２１ｍｍ）で挟み平らにした。平らにした皮膚を３５ｍｍ径ディッシュに入れ、直ちに固定液（和光純薬工業株式会社製、マイルドホルム（登録商標）１０Ｎ）を皮膚に数滴滴下し、皮膚を固定液に浸すことによって皮膚の固定を行った。
続いて、マウスの背部皮膚全域の皮膚を採取し、カッター板の上に角層側を下にして置いた。メス（アズワン株式会社製、ディスポメスＮｏ．１２）の刃のついていない面を用いて背部皮膚から皮下組織を除去した。８ｍｍ径生検パンチを用いて背部皮膚の８箇所に穴を開け、皮膚組織をエッペンに採取した。エッペンおよび残りの皮膚組織を直ちに液体窒素に浸して瞬間凍結し、解析まで−８０℃にて保管した。
【００４７】
（表皮厚）
固定液で固定された皮膚について、常法に従ってパラフィン包埋、切り出し、薄切を行い、ヘマトキシリン＆エオジン（ＨＥ）染色を施し、病理組織標本を作製した。標本作製については、株式会社札幌病理総合研究所に依頼した。染色方法を以下に示す。
薄切された切片について、脱パラフィンを行い、水洗した後、カラッチのヘマトキシリン液で５分間染色した。必要に応じて７０％塩酸アルコール液で軽く分別した。切片を水道水の流水で洗浄した後、温水に１０分間浸漬した。切片をエオジン染色液に５分間浸漬した。染色後の切片について、複数槽の１００％アルコールに順次浸漬して脱水し、キシレンで透徹、封入した。
標本の全視野を観察し、代表的な部位の写真撮影をデジタルカメラ（オリンパス株式会社製、ＣＡＭＥＤＩＡ  Ｃ−３０４０ＺＯＯＭ）で実施した。標本の写真について、基底層から顆粒層の最上部までの距離を、画像処理ソフトウエア（ＩｍａｇｅＪ、作者：Ｗａｙｎｅ Ｒａｓｂａｎｄ（ＮＩＨ））で測定した。マウス１匹あたり３視野の写真撮影を行い、１枚の写真あたり１０箇所について基底層から顆粒層の最上部までの距離を測定し、３０箇所の平均値（写真上の表皮厚の値）を算出した。同様にミクロメーターの写真撮影を行い、ミクロメーターの写真を用いて写真上の表皮厚の値から実際の表皮厚の値を換算で求め、その個体の表皮厚とした。各群ごとに代表の１個体の標本の写真を図３に示す。各群の表皮厚（個体数７の平均値±標準誤差）を図４に示す。
表皮厚の上昇は、紫外線の照射によって皮膚がダメージを受けて表皮が肥厚化していることを示す。本食品の投与によって、表皮の肥厚化が改善されており、紫外線の照射による皮膚のダメージが改善されていることが分かる。
【００４８】
（ＳＯＤ様活性）
ＳＯＤ様活性の測定は、キサンチンとキサンチンオキシダーゼから発生したスーパーオキシド（Ｏ２−）がどれくらい消去されたかを２−（４−ヨードフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−（２，４−ジスルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム，モノナトリウム塩（同仁化学研究所製、ＷＳＴ−１）の発色によって調べ、消去能をスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）様活性とする測定である。
８ｍｍ径生検パンチを用いてマウスの背部皮膚の８箇所から採取された皮膚組織を、滅菌丸底スピッツ（栄研化学株式会社製）に入れ、１ｍＬのショ糖バッファー（０．２５Ｍ  ショ糖／１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／１ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ  ７．４）を加え、ホモジナイザー（ＫＩＮＥＭＡＴＩＣＡ社製、ポリトロンホモジナイザーＰＴ１０−３５ＧＴ）を用いて粉砕した。粉砕液を１．５ｍＬチューブに移し、１０，０００×ｇ、４℃、６０分で遠心後、上清を測定用サンプルとした。操作は、すべて氷上で行った。
サンプルの調製後、直ちにＳＯＤ様活性の測定を行った。ＳＯＤ様活性の測定には、ＳＯＤ  Ａｓｓｅｙ  ＫＩＴ−ＷＳＴ（株式会社同仁化学研究所製）を用いた。ＳＯＤ様活性の測定は、９６ｗｅｌｌプレートを用いて、２連で行った。各ｗｅｌｌにサンプルまたはブランク（ミリＱ水）を２μＬずつ分注した。各ｗｅｌｌにＷＳＴ  ｗｏｒｋｉｎｇ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＷＳＴ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ：Ｂｕｆｆｅｒ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ＝１：１９（体積比））を２００μＬずつ加え、プレートミキサーでよく混合した。各ｗｅｌｌにＥｎｚｙｍｅ  ｗｏｒｋｉｎｇ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｅｎｚｙｍｅ  ｓｏｌｕｔｉｏｎの１５μＬをＤｉｌｕｔｉｏｎ  ｂｕｆｆｅｒの２．５ｍＬで希釈）を２０μＬずつ加え、直ちに３７℃のインキュベーター内に静置した。２０分後、マイクロプレートリーダー（ＴＥＣＡＮ社製、Ｉｎｆｉｎｉｔｅ  Ｍ２００）を用いて各ｗｅｌｌの４５０ｎｍの吸光度を測定した。ブランクは阻害なしの全発色とし、ブランクの吸光度Ａｂｌａｎｋ、サンプルの吸光度Ａｓａｍｐｌｅから下記式によって各個体のＳＯＤ様活性を求めた。
ＳＯＤ様活性＝（Ａｂｌａｎｋ−Ａｓａｍｐｌｅ）／Ａｂｌａｎｋ×１００
各群のＳＯＤ様活性（個体数７の平均値±標準誤差）を表１および図５に示す。
ＳＯＤ様活性の上昇は、紫外線の照射によって皮膚中に活性酸素が発生し、酸化ストレスが増加していることを示す。本食品の投与によって、ＳＯＤ様活性の上昇が抑えられており、本食品によって皮膚中の活性酸素が除去され、酸化ストレスが軽減していることが分かる。また、本食品を投与したＵＶ（＋）本食品群は、水素水またはゼラチンをそれぞれ単独で投与したＵＶ（＋）水素水群、ＵＶ（＋）ゼラチンゲル群と比べて、ＳＯＤ様活性の上昇が顕著に抑制されており、水素とゼラチンとの組み合わせによる相乗効果によって、優れた効果が発揮されることが確認できる。
【００４９】
【表１】
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【００５０】
（角層剥離度）
マウスの背部皮膚から採取された残りの皮膚組織から、セロハンテープ（ニチバン社製）を用いて角層を剥離した。セロハンテープをスライドガラスに押し付けた状態でキシレン浴に一晩浸漬して、セロハンテープからスライドガラスに角層を移した。スライドガラスをキシレン浴に１時間で２回浸漬し、スライドガラスから過剰の接着剤を除いた。スライドガラスを乾燥した後、スライドガラスに付着した角層を、０．５％ブリリアントグリーン溶液および１％ゲンチアナバイオレット溶液で染色した。角層を光学顕微鏡で観察し、コルネオサイトメーター（ＣＩＥＬ社）のピクセル数で角層の大きさを換算した。各個体の角層剥離度は、角層の総ピクセル数に対する角層の重層面積のピクセル数の割合として示した。各群の染色後の角層の写真を図６に示す。各群の角層剥離度（個体数７の平均値±標準誤差）を図７に示す。
角層剥離度の上昇は、紫外線の照射によって皮膚から剥離する角層が増加していることを示す。本食品の投与によって、角層の剥離が抑えられている。
【産業上の利用可能性】
【００５１】
本発明の皮膚の光老化抑制用食品は、水素ガスを多く供給することによって皮膚の光老化を予防したり、皮膚の光老化を改善したりする食品として有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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