(57)【要約】【課題】本発明の課題は、接着分子の一種であるＶＣＡＭ−１の発現を抑制するためのＶＣＡＭ−１発現抑制剤、又は、ケモカインの一種であるＭＣＰ−１の発現を抑制するためのＭＣＰ−１発現抑制剤を提供することである。【解決手段】上記課題を解決するために、３−アミノ−２−メチルプロパン酸を含有することを特徴とする、ＶＣＡＭ−１発現抑制剤又はＭＣＰ−１発現抑制剤を提供する。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
３−アミノ−２−メチルプロパン酸を含有することを特徴とする、ＶＣＡＭ−１発現抑制剤。
【請求項２】
３−アミノ−２−メチルプロパン酸を含有することを特徴とする、ＭＣＰ−１発現抑制剤。
【請求項３】
請求項１に記載のＶＣＡＭ−１発現抑制剤又は請求項２に記載のＭＣＰ−１発現抑制剤を含有することを特徴とする、炎症性疾患改善用組成物。
【請求項４】
前記炎症性疾患改善用組成物が、関節リウマチ、動脈硬化又はアトピー性皮膚炎を改善することを特徴とする、請求項３に記載の炎症性疾患改善用組成物。
【請求項５】
３−アミノ−２−メチルプロパン酸を含有することを特徴とする、加工食品又は飲料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＶＣＡＭ−１の発現を抑制するためのＶＣＡＭ−１発現抑制剤、又は、ＭＣＰ−１の発現を抑制するためのＭＣＰ−１発現抑制剤に関する。さらに、本発明は、ＶＣＡＭ−１又はＭＣＰ−１の発現を抑制することにより関節リウマチや動脈硬化等の炎症性疾患を改善するための炎症性疾患改善用組成物に関する。
また、本発明は、ＶＣＡＭ−１又はＭＣＰ−１の発現を抑制し、関節リウマチや動脈硬化等の炎症性疾患を改善する機能を有する加工食品又は飲料に関する。
【背景技術】
【０００２】
脂肪細胞や血管内皮細胞等の細胞より産生される炎症性サイトカインとしてＴＮＦ−α（Tumor Necrosis Factor-α）が知られている。ＴＮＦ−αは、細胞接着分子の発現やアポトーシスの誘導、炎症メディエーター（ＩＬ−１、ＩＬ−６、プロスタグランジンＥ２など）や形質細胞による抗体産生の亢進を行うことにより感染防御や抗腫瘍作用に関与する。一方で、ＴＮＦ−αが過剰に産生されると、炎症反応が過剰となり、関節リウマチ、動脈硬化などの炎症性疾患の発症を招くことが知られている（例えば、非特許文献１、２参照。）。
【０００３】
これらの炎症性疾患の原因は、Ｔ細胞や単球等の白血球が内皮細胞上に接着することによって組織内へ遊走する機構により説明される。ＴＮＦ−αなどの炎症性サイトカインが大量に産生されると、内皮細胞上にＶＣＡＭ−１（vascular cell adhesion molecule-1）、ＩＣＡＭ−１（intercellular adhesion molecule-1）などの免疫グロブリンスーパーファミリー（Immunoglobulin superfamily：ＩｇＳＦ）に属する接着分子の発現が誘導される。そして、これらの接着分子がＴ細胞や単球等の白血球と付着して、Ｔ細胞や単球等を組織内へ大量に遊走する。その結果、自己免疫疾患となり、関節リウマチ、動脈硬化などの炎症性疾患を引き起こす。
【０００４】
また、炎症の形成に関与する分子として、ＭＣＰ−１（monocyte chemotactic protein-1）等のケモカインが知られている。ケモカインは、Ｔ細胞や単球等の白血球の遊走を引き起こすためのサイトカインである。
その他にも、ケモカインは、Ｔ細胞や単球等のインテグリンを活性化することによって炎症の形成に関与する。Ｔ細胞や単球等のインテグリンは、ＶＣＡＭ−１やＩＣＡＭ−１などの内皮細胞上のＩｇＳＦ分子に対する主要レセプターであり、Ｔ細胞や単球等の白血球と内皮細胞の接着には、Ｔ細胞や単球等のインテグリンの活性化が必要である。インテグリンの活性化に関与する分子群として、様々なケモカインが知られており、例えば、ＭＣＰ−１は、単球におけるインテグリンを活性化し、内皮細胞との接着を誘導する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】田中良哉、「慢性関節リウマチ滑膜病態形成におけるケモカインと接着分子のクロストーク」、炎症、２０００年３月、VOL.20、No.2、１０７〜１１７頁
【非特許文献２】高山昭三ら、「炎症と動脈硬化症発生の関連−その発症抑制と治療法の開発−」、モダンメディア、２００５年、５１巻、２号、３７〜３９頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
過剰な炎症反応による炎症性疾患を改善するために、血管内皮細胞における接着分子やケモカインの発現を抑制することが求められる。そこで、本発明の課題は、接着分子の一種であるＶＣＡＭ−１の発現を抑制するためのＶＣＡＭ−１発現抑制剤、又は、ケモカインの一種であるＭＣＰ−１の発現を抑制するためのＭＣＰ−１発現抑制剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、３−アミノ−２−メチルプロパン酸が血管内皮細胞におけるＶＣＡＭ−１やＭＣＰ−１の過剰な発現を抑制することを見出して、本発明を完成した。
すなわち本発明は、以下のＶＣＡＭ−１発現抑制剤、ＭＣＰ−１発現抑制剤、炎症性疾患改善用組成物、加工食品である。
【０００８】
上記課題を解決するための本発明のＶＣＡＭ−１発現抑制剤は、３−アミノ−２−メチルプロパン酸を含有することを特徴とする。
このＶＣＡＭ−１発現抑制剤によれば、血管内皮細胞におけるＶＣＡＭ−１の発現が抑制されるため、過剰な炎症反応により引き起こされる炎症性疾患を改善することができる。
【０００９】
上記課題を解決するための本発明のＭＣＰ−１発現抑制剤は、３−アミノ−２−メチルプロパン酸を含有することを特徴とする。
このＭＣＰ−１発現抑制剤によれば、血管内皮細胞におけるＭＣＰ−１の発現が抑制されるため、過剰な炎症反応により引き起こされる炎症性疾患を改善することができる。
【００１０】
上記課題を解決するための本発明の炎症性疾患改善用組成物は、本発明のＶＣＡＭ−１発現抑制剤又はＭＣＰ−１発現抑制剤を含有することを特徴とする。
この特徴によれば、炎症性疾患を改善することを目的とする医薬品、医薬部外品、化粧品、食品、飲料等を提供することができる。
【００１１】
更に、本発明の炎症性疾患改善用組成物の一実施態様によれば、前記炎症性疾患改善用組成物が、関節リウマチ、動脈硬化又はアトピー性皮膚炎を改善することを特徴とする。
この特徴によれば、関節リウマチ、動脈硬化、アトピー性皮膚炎を改善することを目的とする医薬品、医薬部外品、化粧品、食品、飲料等を提供することができる。
【００１２】
上記課題を解決するための本発明の加工食品又は飲料は、３−アミノ−２−メチルプロパン酸を含有することを特徴とする。
この加工食品又は飲料によれば、３−アミノ−２−メチルプロパン酸を摂取しやすいという効果を奏する。また、この加工食品又は飲料によれば、３−アミノ−２−メチルプロパン酸を含有するため、血管内皮細胞におけるＶＣＡＭ−１やＭＣＰ−１の発現を抑制し、関節リウマチや動脈硬化やアトピー性皮膚炎等の過剰な炎症反応により引き起こされる炎症性疾患を改善することができる。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、接着分子の一種であるＶＣＡＭ−１の発現を抑制するためのＶＣＡＭ−１発現抑制剤、又は、ケモカインの一種であるＭＣＰ−１の発現を抑制するためのＭＣＰ−１発現抑制剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】炎症反応におけるＶＣＡＭ−１及びＭＣＰ−１の作用を示す概略説明図である。
【図２】本発明の実施例のＶＣＡＭ−１の発現量に関する試験結果を示すグラフである。
【図３】本発明の実施例のＭＣＰ−１の発現量に関する試験結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
［ＶＣＡＭ−１発現抑制剤、ＭＣＰ−１発現抑制剤］
本発明のＶＣＡＭ−１発現抑制剤及びＭＣＰ−１発現抑制剤は、３−アミノ−２−メチルプロパン酸を含有することを特徴とする。
３−アミノ−２−メチルプロパン酸（CAS No.１４４−９０−１）は、以下の式（１）に示す化合物である。なお、本発明における３−アミノ−２−メチルプロパン酸は、異性体、塩、誘導体、プロドラッグを包含するものである。
【化１】
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【００１６】
（ＶＣＡＭ−１発現抑制剤）
図１に示すように、ＶＣＡＭ−１は、血管内皮細胞における接着分子の一種であり、Ｔ細胞や単球等の白血球を血管内皮細胞に接着する作用を有する。白血球が接着分子を介して血管内皮細胞に接着すると、白血球の組織内への遊走が促進される。本発明のＶＣＡＭ−１発現抑制剤によれば、血管内皮細胞における接着分子の発現量が低下するため、白血球の血管内皮細胞への接着及び組織への遊走を抑制して、過剰な炎症反応を防止することができる。
【００１７】
なお、本発明のＶＣＡＭ−１発現抑制剤は、ＶＣＡＭ−１の発現を抑制するだけでなく、血管内皮細胞と白血球の接着する接着分子の発現を抑制してもよい。血管内皮細胞と白血球の接着する接着分子としては、例えば、ＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１などのＩｇＳＦに属する接着分子や、セレクチンなどが挙げられる。セレクチンには、白血球に発現するＬ−セレクチン、血管内皮細胞に発現するＥ−セレクチンやＰ−セレクチン等がある。
【００１８】
（ＭＣＰ−１発現抑制剤）
図１に示すように、ＭＣＰ−１は、Ｔ細胞や単球等の白血球の遊走を引き起こすためのケモカインの一種である。本発明のＭＣＰ−１発現抑制剤によれば、Ｔ細胞や単球等の白血球の遊走を引き起こすためのＭＣＰ−１の発現量が低下するため、白血球の組織への遊走を抑制して、過剰な炎症反応を防止することができる。
【００１９】
また、ＭＣＰ−１は、血管内皮細胞と白血球の接着に関与するインテグリンを活性化する。本発明のＭＣＰ−１発現抑制剤よれば、インテグリンを活性化するためのＭＣＰ−１の発現量が低下するため、白血球の血管内皮細胞への接着及び組織への遊走を抑制して、過剰な炎症反応を防止することができる。
【００２０】
なお、本発明のＭＣＰ−１発現抑制剤は、ＭＣＰ−１の発現を抑制するだけでなく、その他のケモカインの発現を抑制してもよい。その他のケモカインとしては、例えば、ＭＣＰ−１〜４、ＭＩＰ−１α,β、ＭＩＰ−３α,β、ＲＡＮＴＥＳ、ＨＣＣ１〜４、eotaxin１〜３、ＴＡＲＣ、ＭＤＣ、ＬＡＲＣ、ＥＬＣ、ＴＣＡ−４、Ｉ３０９、ＴＥＣＫ、ＩＬ−８、ＧＣＰ−２、ＧＲＯ、ＮＡＰ−２、ＥＮＡ−７８、ＩＰ−１０、Ｍｉｇ、ＩＴＡＣ、ＳＤＦ−１α,β、ＢＣＡ−１、lymphotactin、ＳＣＭ−１α,β、ＦＫＮなどが挙げられる。
【００２１】
本発明のＶＣＡＭ−１発現抑制剤及びＭＣＰ−１発現抑制剤は、ＴＮＦ−αの産生により誘導されたＶＣＡＭ−１及びＭＣＰ−１の過剰な発現を抑制する。ＶＣＡＭ−１発現抑制剤及びＭＣＰ−１発現抑制剤が、炎症反応を強制的に低下するような場合には、健常者が摂取した際に、免疫力の低下などを引き起こす恐れがある。また、過剰に摂取した場合にも同様に、免疫力を過剰に低下する恐れがある。本発明のＶＣＡＭ−１発現抑制剤及びＭＣＰ−１発現抑制剤によれば、過剰な炎症反応を低下させる作用を有するものであるため、必要以上に免疫力を低下するなどの恐れがない。そのため、安全性に優れるＶＣＡＭ−１発現抑制剤及びＭＣＰ−１発現抑制剤を提供することができる。また、安全性に優れるという観点から、加工食品や飲料などに利用することができるという効果もある。
【００２２】
なお、本発明のＶＣＡＭ−１発現抑制剤及びＭＣＰ−１発現抑制剤は、ＴＮＦ−αの産生により誘導されたＶＣＡＭ−１及びＭＣＰ−１の過剰な発現を抑制するだけでなく、その他の要因により誘導されたＶＣＡＭ−１及びＭＣＰ−１の過剰な発現を抑制してもよい。その他の要因としては、例えば、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＦＮγ、Ｇ−ＣＳＦなどの炎症性サイトカインによる発現の誘導等が挙げられる。
【００２３】
［炎症性疾患改善組成物］
本発明の炎症性疾患改善組成物は、ＶＣＡＭ−１発現抑制剤又はＭＣＰ−１発現抑制剤を含有することを特徴とする。炎症性疾患とは、過剰な炎症反応により発症する疾患であり、例えば、関節リウマチ、動脈硬化、アトピー性皮膚炎、乾癬、遅延型アレルギー、肺疾患、移植拒絶反応、サルコイドーシス、炎症性腸疾患、がん、糸球体腎炎などが挙げられる。
【００２４】
炎症性疾患改善剤組成物を投与する形態としては、特に制限されず、例えば、内用剤、外用剤、注射剤等が挙げられる。また、投与経路としては、例えば、内用剤は口から投与する経路が挙げられ、外用剤は皮膚、鼻、目、耳、肺、肛門等から投与する経路が挙げられ、注射剤は皮膚、血管、筋肉等から投与する経路が挙げられる。
【００２５】
なお、本発明における内用剤には、医薬品や医薬部外品の他、食品や飲料としての形態も含まれる。また、本発明の外用剤には、医薬品や医薬部外品の他、化粧品としての形態も含まれる。継続的に摂取しやすいという観点から、食品や飲料としての形態が好ましい。食品や飲料としては、特定保健用食品、機能性表示食品、健康食品、加工食品等が含まれる。その他にも、ペット用の医薬品やペットフード等の形態としてもよい。
【００２６】
炎症性疾患改善剤組成物の剤型としては、特に制限されず、例えば、液状、クリーム状、粉末状、顆粒状、タブレット状、カプセル状などが挙げられる。また、日常的に摂取する飲料や加工食品としてもよい。
【００２７】
炎症性疾患改善剤組成物の投与量は、安全性等を考慮して適宜設定される。投与量としては、例えば、３−アミノ−２−メチルプロパン酸の有効量として０．００１〜１００００ｍｇ／日である。下限としては、好ましくは０．０１ｍｇ／日以上であり、より好ましくは０．１ｍｇ／日以上であり、更に好ましくは１ｍｇ／日以上である。上限としては、好ましくは５０００ｍｇ／日以下であり、より好ましくは１０００ｍｇ／日以下であり、更に好ましくは５００ｍｇ／日以下である。
【００２８】
［加工食品又は飲料］
本発明の加工食品又は飲料は、３−アミノ−２−メチルプロパン酸を含有することを特徴とする。
３−アミノ−２−メチルプロパン酸を加工食品又は飲料に含有することにより、３−アミノ−２−メチルプロパン酸を摂取しやすくなる。
また、３−アミノ−２−メチルプロパン酸は、従来、食品や飲料として利用されていないため、汎用性が低い。しかし、この加工食品又は飲料によれば、３−アミノ−２−メチルプロパン酸が血管内皮細胞におけるＶＣＡＭ−１やＭＣＰ−１の発現を抑制することができるため、３−アミノ−２−メチルプロパン酸の新たな用途として、関節リウマチや動脈硬化やアトピー性皮膚炎等の過剰な炎症反応により引き起こされる炎症性疾患を改善するための食品又は飲料を提供することができる。
【００２９】
本発明の加工食品とは、３−アミノ−２−メチルプロパン酸を添加した食品、又は、鮮魚や精肉等の生鮮食品に含まれる３−アミノ−２−メチルプロパン酸を加工することにより濃度を高めた食品である。また、本発明の飲料とは、３−アミノ−２−メチルプロパン酸を添加した飲料である。
【００３０】
加工食品の形態は特に限定されないが、例えば、パン類、麺類等主菜となりうるもの、チーズ、ウインナー、ハム、魚介加工品等副菜となりうるもの、ケーキ、クッキー、ゼリー、キャンディー、プリン、ヨーグルト等の嗜好品等とすることができる。また、サプリメントとしての形態も特に限定されるものではなく、錠剤、カプセル、ソフトカプセル、栄養ドリンク状の形態をとることもできる。
【００３１】
飲料の形態は特に限定されないが、例えば、炭酸飲料、果実飲料、スポーツ飲料、乳性飲料、トマトジュース、野菜ジュースなどの野菜飲料、栄養ドリンクなどの栄養飲料、コーヒーなどのコーヒー飲料、紅茶、ウーロン茶、麦茶、緑茶、ブレンド茶などの茶系飲料、豆乳、大豆たん白飲料などの豆乳類等の清涼飲料、牛乳、加工乳、乳飲料などの乳、日本酒、ビール、ウイスキー、ワインなどのアルコール飲料等とすることができる。
【００３２】
加工食品又は飲料に含まれる３−アミノ−２−メチルプロパン酸の含有量は、特に制限されないが、０．００１〜１００質量％である。下限としては、好ましくは０．０１質量％以上であり、より好ましくは０．０５質量％以上であり、更に好ましくは０．１質量％以上であり、特に好ましくは０．５質量％以上である。上限としては、好ましくは３０質量％以下であり、より好ましくは２０質量％以下であり、更に好ましくは１０質量％以下であり、特に好ましくは５質量％以下である。０．００１質量％以上の場合には、ＶＣＡＭ−１やＭＣＰ−１の発現を抑制することができる。
【実施例】
【００３３】
以下、実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
＜実施例＞
血管内皮細胞としてヒト臍帯静脈内皮細胞（Human umbilical vein endothelial cells。以下、「HUVECs」という。)をロンザジャパン（株）より購入した。培地は「EGMTM-2 Endothelial Cell Growth Medium-2 BulletKitTM (CC-3162,ロンザジャパン（株）)」を使用し、ウシ胎児血清濃度は5％で使用した。継代には「ReagentPackTM Subculture Reagents (CC-5034,ロンザジャパン社)」を使用した。実験には継代数2〜6の細胞を使用した。
HUVECsを24-ウェルプレートに5×104/wellの濃度で播種し、24時間インキュベーションした。その後、ＴＮＦ−α(最終濃度0ng/ml（無添加群）,10ng/ml（添加群）)(和光純薬工業（株）)と３−アミノ−２−メチルプロパン酸(最終濃度0μM（無添加群）,10μM（添加群）)(A0324,東京化成工業（株）)を加え、24時間インキュベーション後、RNA抽出を行った。
RNA抽出は200μlの「RNA iso plus (9108,タカラバイオ（株）)」を使用し、メーカー推奨のプロトコルにて行った。逆転写は、「PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser (RR047A,タカラバイオ（株）)」を使用して行い、RNA持ち込み量は1μgとした。
リアルタイムPCRは、「SYBR Premix Taq II (RR820S,タカラバイオ（株）)」を使用して行い、プライマーはユーロフィンジェノミクス（株）より購入した。プライマー配列は表１に示す通りである。なお、遺伝子発現量は、β-actin発現量で補正した。
【００３４】
【表１】
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【００３５】
結果を図２、図３に示す。図２中及び図３中において、３−アミノ−２−メチルプロパン酸を添加した群を「ＢＡＩＢＡ」（別名「β-アミノイソ酪酸」の略）と表記した。なお、対照試験として、イリシンを添加した群を試験した（図２中及び図３中において、「Ｉｒｉｓｉｎ」と表記する。）。イリシンは、運動によって生じるホルモンの一種であり、ＶＣＡＭ−１及びＭＣＰ−１の発現を抑制する機能を有するものである。
また、図２中及び図３中において、ＴＮＦ−α、ＢＡＩＢＡ又はＩｒｉｓｉｎの添加群を（＋）、無添加群を（−）として表記した。
【００３６】
図２、図３に示すように、ＢＡＩＢＡを添加すると、ＴＮＦ−αの添加によって過剰に発現したＶＣＡＭ−１及びＭＣＰ−１の発現量を低下するという効果が認められた。
また、ＴＮＦ−α無添加群において、ＢＡＩＢＡの添加群と無添加群を比較すると、ＢＡＩＢＡ添加群の方がＶＣＡＭ−１及びＭＣＰ−１の発現量がやや増加した。すなわち、ＢＡＩＢＡは、ＶＣＡＭ−１及びＭＣＰ−１の発現量を強制的に低下するのではなく、過剰に発現した場合にのみ低下する作用を有することがわかる。この作用によれば、ＢＡＩＢＡを過剰に摂取したり、ＶＣＡＭ−１やＭＣＰ−１の発現量が正常な場合にＢＡＩＢＡを摂取したりしても、ＶＣＡＭ−１及びＭＣＰ−１の発現量を強制的に低下させて、免疫力が低下するという問題を生じない。よって、安全性に優れた炎症性疾患改善用組成物を提供することができる。また、安全性に優れるため、ＢＡＩＢＡを加工食品や飲料等に利用することができる。
【産業上の利用可能性】
【００３７】
本発明のＶＣＡＭ−１発現抑制剤又はＭＣＰ−１発現抑制剤は、ＶＣＡＭ−１又はＭＣＰ−１の発現量を低下させる目的で利用することができる。特に、ＴＮＦ−αなどＶＣＡＭ−１やＭＣＰ−１の発現を誘発する炎症性サイトカインによる過剰な発現を抑制するために好適に利用することができる。
【００３８】
また、本発明のＶＣＡＭ−１発現抑制剤又はＭＣＰ−１発現抑制剤は、炎症性疾患を改善するための炎症性疾患改善剤組成物に使用することができる。炎症性疾患とは、過剰な炎症反応により発症する疾患であり、例えば、関節リウマチ、動脈硬化、アトピー性皮膚炎、乾癬、遅延型アレルギー、肺疾患、移植拒絶反応、サルコイドーシス、炎症性腸疾患、がん、糸球体腎炎などが挙げられる。
【００３９】
炎症性疾患改善用組成物は、医薬品、医薬部外品、化粧品、特定保健用食品、機能性表示食品、健康食品、加工食品、飲料、ペット用医薬品、ペットフード、ペット用飲料等に利用することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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