(57)【要約】      （修正有）【課題】単離された完全ヒトモノクローナルＣＤ３抗体またはそのフラグメントの提供。【解決手段】ａ．ＣＤ３陽性（ＣＤ３＋）細胞に結合するが、ＣＤ３陰性（ＣＤ３−）細胞には結合しない、ｂ．ＣＤ３の細胞表面発現レベルまたは活性を調節する、およびｃ．Ｔ細胞レセプターの細胞表面発現レベルまたは活性を低下させる、の特性を有する抗体またはそのフラグメント。一局面において、上記抗体が、マウスの抗ヒトＯＫＴ３モノクローナル抗体のＴリンパ球への結合を阻害する。別の局面において、上記抗体が、アミノ酸配列ＥＭＧＧＩＴＱＴＰＹＫＶＳＩＳＧＴを完全に含むかまたは一部分含むエピトープに結合する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
図面に記載された発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、一般に、完全ヒト抗ＣＤ３抗体、並びにこれらの抗体の使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
身体の免疫系は、例えば、負傷、感染および新生組織形成を含む種々の状態に対する防御として作用し、別々ではあるが相互に関連した２つのシステムである細胞性免疫系および体液性免疫系により媒介される。一般的に言えば、体液性の系は抗体または免疫グロブリンと呼ばれる可溶性産物により媒介される。これらの抗体または免疫グロブリンは、この系により身体にとって外来性であると認識された産物と結合し、これらを中和する能力を有する。対照的に、細胞性免疫系は、種々の治療上の役割を果たすＴ細胞と呼ばれる特定の細胞の動員を含む。
【０００３】
ヒトおよび動物の両方の免疫系には、２つの主要なクラスのリンパ球、即ち胸腺由来細胞（Ｔ細胞）および骨髄由来細胞（Ｂ細胞）が含まれる。成熟Ｔ細胞は、胸腺から出て、組織とリンパ管と血流との間で循環する。Ｔ細胞は、免疫学的特異性を示し、細胞媒介免疫反応（例えば、移植片拒絶）に直接関与する。Ｔ細胞は、種々の外来性の構造体（抗原）に対して、すなわちこれらに反応して作用する。多くの例において、これらの外来性の抗原は、感染の結果として宿主細胞上に発現される。しかし、外来性の抗原は、新生組織形成または感染により改変されている宿主からも生じ得る。Ｔ細胞は自身では抗体を分泌しないが、Ｔ細胞は通常、第２のクラスのリンパ球であるＢ細胞による抗体分泌のために必要とされる。
【０００４】
Ｔ細胞は、それらの細胞表面上に存在する抗原決定基によって、並びに機能的活性および外来性抗原認識によって、一般に規定される種々のサブセットを含む。ＣＤ８＋細胞などのＴ細胞のいくつかのサブセットは、免疫系における機能調節を果たすキラー細胞／サプレッサー細胞であり、一方、ＣＤ４＋細胞などの他の細胞は、炎症反応および体液性反応を促進するのに役立つ。
【０００５】
ヒトの末梢Ｔリンパ球は、外来性抗原、モノクローナル抗体、ならびにフィトヘマトグルチニン（ｐｈｙｔｏｈｅｍａｙｇｌｕｔｉｎｉｎ）およびコンカナバリンＡなどのレクチンを含む種々の薬物により刺激されて、有糸分裂をすることができる。活性化は、おそらく細胞膜上の特定の部位へのマイトジェンの結合により起こるが、これらのレセプターの性質およびその活性化のメカニズムは、完全には解明されていない。増殖の誘導が、Ｔ細胞活性化の唯一の指標である。この細胞の基本状態または休止状態における改変として規定される、活性化の他の指標としては、リンホカイン産生および細胞傷害性細胞活性の増加が挙げられる。
【０００６】
Ｔ細胞の活性化は、反応しているＴ細胞集団上に発現された種々の細胞表面分子の関与に依存する複合的な現象である。例えば、抗原特異性Ｔ細胞レセプター（ＴｃＲ）は、２つのクローンのような配置をとる（ｃｌｏｎａｌｌｙ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ）内在性膜糖タンパク質鎖である、アルファ（α）およびベータ（β）、またはガンマ（γ）およびデルタ（δ）を含む、ジスルフィド結合したヘテロダイマーから構成され、低分子量の不変のタンパク質の複合体（一般に、ＣＤ３（以前はＴ３と呼ばれた）と名付けられる）と非共有結合している。
【０００７】
ＴｃＲアルファ鎖およびＴｃＲベータ鎖により、抗原特異性が決まる。ＣＤ３構造体は、ＴｃＲアルファベータ（ＴｃＲαβ）がそのリガンドに結合したときに開始される活性化信号の伝達要素であるアクセサリ分子を表している。ＴｃＲの糖タンパク質鎖の定常領域および可変領域（多型性）の両方が存在する。多型性ＴｃＲ可変領域が、異なる特異性を有するＴ細胞のサブセットを規定する。外来性のタンパク質の全体またはより小さなフラグメントを抗原として認識している抗体とは異なり、ＴｃＲ複合体は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子に関連して必ず提示される、抗原の小さなペプチドとのみ、相互作用する。これらのＭＨＣタンパク質は、種を通じて無作為に分散する、高度に多型性である別の分子の組を表す。従って、活性化は通常、ＴｃＲと主要なＭＨＣタンパク質に結合した外来性のペプチド抗原との３粒子（ｔｒｉｐａｒｔｉｃｌｅ）相互作用を必要とする。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（発明の概要）
本発明は、ＣＤ３を特異的に指向する、完全ヒトモノクローナル抗体を提供する。代表的なモノクローナル抗体としては、本明細書に記載された２８Ｆ１１、２７Ｈ５、２３Ｆ１０および１５Ｃ３が挙げられる。あるいは、このモノクローナル抗体は、２８Ｆ１１、２７Ｈ５、２３Ｆ１０または１５Ｃ３と同じエピトープに結合する抗体である。本明細書でそれぞれ言及されているこれらの抗体は、ｈｕＣＤ３抗体である。このｈｕＣＤ３抗体は、以下の特性の１つ以上を有する：抗体はＣＤ３陽性（ＣＤ３＋）細胞には結合するがＣＤ３陰性（ＣＤ３−）細胞には結合しないこと、ｈｕＣＤ３抗体はＣＤ３またはＴ細胞レセプター（ＴｃＲ）の細胞表面発現レベルまたは活性の変化（例えば、低下）を含む抗原性調節を誘導すること、ｈｕＣＤ３抗体はマウスの抗ヒトＯＫＴ３モノクローナル抗体のＴリンパ球への結合を阻害すること、またはｈｕＣＤ３抗体はアミノ酸配列ＥＭＧＧＩＴＯＴＰＹＫＶＳＩＳＧＴ（配列番号２１）を完全に含むかもしくは一部分含むＣＤ３のエピトープに結合することである。本発明のｈｕＣＤ３抗体は、ＣＤ３に対する結合について、マウスの抗ＣＤ３抗体ＯＫＴ３と競合し、そしてｈｕＣＤ３抗体への曝露は、ＣＤ２、ＣＤ４またはＣＤ８の細胞表面発現に影響することなくＣＤ３および／またはＴｃＲを除去するかもしくはマスキングする。ＣＤ３および／またはＴｃＲのマスキングは、制御されていないＴ細胞の活性化が起きる自己免疫疾患において望ましいＴ細胞の活性化の、喪失または低減をもたらす。ＣＤ３のダウン・レギュレーションは、従来の免疫抑制剤、例えば、シクロスポリンを用いる場合に観察される一過性の抑制と比べて、長期にわたる（例えば、少なくとも数ヶ月間）Ｔ細胞活性化の低減をもたらす。
【０００９】
抗原性調節は、細胞、例えば、リンパ球の表面上のＣＤ３−Ｔ細胞レセプター複合体の再分配および排除を意味している。細胞表面発現のレベルまたは細胞上のＴｃＲの活性のレベルの低下は、ＴｃＲの量が減少するかまたは機能が低下することを意味している。細胞表面発現のレベルまたはＣＤ３の活性のレベルの調節は、細胞表面上のＣＤ３の量またはＣＤ３の機能が変わること、例えば、低下することを意味している。ＣＤ３の量または細胞の原形質膜において発現されたＴｃＲの量は、例えば、ｈｕＣＤ３抗体と細胞が接触した際のＣＤ３またはＴｃＲの内在化により減少する。あるいは、細胞とｈｕＣＤ３抗体との接触の際、ＣＤ３またはＴｃＲがマスキングされる。
【００１０】
マウスの抗ヒトＯＫＴ３モノクローナル抗体のＴリンパ球への結合の阻害は、マウスのＯＫＴ３抗体がＴリンパ球の細胞表面におけるＣＤ３と複合体を形成する能力の低下として規定されている。
【００１１】
ｈｕＣＤ３抗体は、配列番号２、配列番号６、配列番号１０または配列番号２２のアミノ酸配列を有する重鎖可変部分、および配列番号４、配列番号８、配列番号１６〜２０または配列番号２５〜２６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変部分を含む。３つの重鎖ＣＤＲには、ＧＹＧＭＨ（配列番号２７）、ＶＩＷＹＤＧＳＫＫＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号２８）、ＱＭＧＹＷＨＦＤＬ（配列番号２９）、ＳＹＧＭＨ（配列番号３３）、ＩＩＷＹＤＧＳＫＫＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３４）、ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号３５）、およびＡＩＷＹＮＧＲＫＱＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４４）からなる群から選択される配列と少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％９８％、９９％より多く同一なアミノ酸配列が含まれることが好ましく、そして、３つのＣＤＲを有する軽鎖には、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号３０）、ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号３１）、ＱＱＲＳＮＷＰＰＬＴ（配列番号３２）、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号３６）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号３７）、ＱＱＹＧＳＳＰＩＴ（配列番号３８）、ＲＡＳＱＧＩＳＳＡＬＡ（配列番号３９）、ＹＡＳＳＬＱＳ（配列番号４０）、ＱＱＹＹＳＴＬＴ（配列番号４１）、ＤＡＳＳＬＧＳ（配列番号４２）、ＷＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡ（配列番号４３）、ＱＱＲＳＮＷＰＷＴ（配列番号４５）、ＤＡＳＳＬＥＳ（配列番号４６）、およびＱＱＦＮＳＹＰＩＴ（配列番号４７）のアミノ酸配列からなる群から選択される配列と少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％９８％、９９％またはそれより多く同一であるアミノ酸配列が含まれることが好ましい。この抗体はＣＤ３に結合する。
【００１２】
本発明のｈｕＣＤ３抗体は、以下の特性の少なくとも２個以上（即ち、２個以上、３個以上、４個以上、５個以上、６個以上、７個以上、８個以上、９個以上、１０個以上、１１個以上）を示す：該抗体がヒトＤＰ５０ＶＨ生殖細胞系列遺伝子配列によりコードされるかまたはヒトＤＰ５０ＶＨ生殖細胞系列遺伝子配列と相同である核酸配列によりコードされる重鎖可変領域（ＶＨ）を含むこと、該抗体がヒトＬ６ＶＬ生殖細胞系列遺伝子配列によりコードされるかまたはヒトＬ６ＶＬ生殖細胞系列遺伝子配列と相同である核酸配列によりコードされる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含むこと、該抗体がヒトＬ４／１８ａＶＬ生殖細胞系列遺伝子配列またはヒトＬ４／１８ａＶＬ生殖細胞系列遺伝子配列と相同である核酸配列によりコードされたＶＬを含むこと、該抗体がアミノ酸配列ＹＧＭＨ（配列番号５８）を含むＶＨＣＤＲ１領域を含むこと、該抗体がアミノ酸配列ＤＳＶＫＧ（配列番号５９）を含むＶＨＣＤＲ２領域を含むこと、該抗体がアミノ酸配列ＩＷＹＸ１ＧＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＹＸ６ＤＳＶＫＧ（配列番号６０）を含むＶＨＣＤＲ２領域を含むこと、該抗体がアミノ酸配列ＸＡＸＢＧＹＸＣＸＤＦＤＸＥ（配列番号６１）を含むＶＨＣＤＲ３領域を含むこと、該抗体がアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号６２）またはアミノ酸配列ＱＭＧＹＷＨＦＤＬ（配列番号６３）を含むＶＨＣＤＲ３領域を含むこと、該抗体がＣＤＲ３領域に対してＣ末端側である位置（この位置はＣＤＲ３領域に対してＣ末端側にある可変領域内にある）においてアミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（配列番号６４）を含むこと、該抗体がＣＤＲ３領域に対してＣ末端側である位置（この位置はＣＤＲ３領域に対してＣ末端側にある可変領域内にある）においてアミノ酸配列ＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６５）を含むこと、該抗体がＣＤＲ３領域に対してＣ末端側である位置（この位置はＣＤＲ３領域に対してＣ末端側にある可変領域内にある）においてアミノ酸配列ＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６６）を含むこと、該抗体がアミノ酸配列ＥＭＧＧＩＴＱＴＰＹＫＶＳＩＳＧＴ（配列番号６７）を完全に含むかまたは一部分含むエピトープに結合すること、ならびに、該抗体が２３４位、２３５位、２６５位、または２９７位におけるアミノ酸残基またはこれらの組み合わせにおいて重鎖内に変異を含み、該抗体の存在下におけるＴ細胞からのサイトカインの放出が、２３４位、２３５位、２６５位、または２９７位またはこれらの組み合わせにおいて重鎖内に変異を含まない抗体の存在下におけるＴ細胞からのサイトカインの放出に比べて低下すること。本明細書に記載された重鎖残基の番号の付け方は、例えば、米国特許第５，６２４，８２１号および５，６４８，２６０号に示されるＥＵインデックスの付け方（Ｋａｂａｔら，「Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」，ＵＳ  Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ＆  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９８３）を参照のこと）である。これらの特許の内容は、その全体が本明細書中に参考として援用される。
【００１３】
いくつかの局面では、ｈｕＣＤ３抗体はアミノ酸変異を含む。この変異は、定常領域内に存在する。この変異は、改変されたエフェクタ機能を有する抗体をもたらす。抗体のエフェクタ機能は、Ｆｃレセプターまたは補体成分などのエフェクタ分子に対する抗体の親和性を変える（即ち、増強するかまたは低減する）ことにより改変される。抗体のエフェクタ機能を変える（例えば、免疫系の種々の反応を増強するか抑制する）ことにより、免疫反応の種々の局面を制御することができる。例えば、この変異は、Ｔ細胞からのサイトカインの放出を減少することができる抗体をもたらす。例えば、変異は、アミノ酸残基２３４、２３５、２６５、または２９７またはこれらの組み合わせにおいて重鎖内に存在する。この変異は、２３４位、２３５位、２６５位、または２９７位のいずれかにおいてアラニン残基をもたらすか、または２３５位にグルタミン酸残基をもたらすか、あるいはこれらの組み合わせをもたらすことが、好ましい。用語「サイトカイン」は、当該分野で公知の全てのヒトサイトカインを意味し、細胞表面上に発現される細胞外レセプターに結合し、それにより、ＩＬ−２、ＩＦＮ−ガンマ、ＴＮＦ−ａ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３を含むが、これらに限定されない細胞機能を調節する。
【００１４】
サイトカインの放出は、例えば、ＡＴＧ（抗胸腺細胞グロブリン）およびＯＫＴ３（マウスの抗Ｔ細胞抗体）のような抗Ｔ細胞抗体を使用することによって起こる一般的な臨床合併症である、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）として公知の中毒症状に導くことができる。この症候群は、ＴＮＦ、ＩＦＮガンマおよびＩＬ−２のようなサイトカインを循環中に過剰に放出することによって特徴づけられる。ＣＲＳは、この抗体のＣＤ３への結合（この抗体の可変領域を介する）およびこの抗体の他の細胞上のＦｃレセプターおよび／または補体レセプターへの結合（この抗体の定常領域を介する）が同時に起きることに起因し、それにより、Ｔ細胞を活性化し、低血圧、発熱および悪寒によって特徴付けられる全身性炎症反応を生じるサイトカインを放出する。ＣＲＳの症状としては、発熱、悪寒、悪心、嘔吐、低血圧および呼吸困難がある。したがって、本発明のｈｕＣＤ３抗体は、重鎖定常領域によって媒介される、インビボの１種以上のサイトカインの放出を予防する、１つ以上の変異を含む。
【００１５】
本発明の完全ヒトＣＤ３抗体は、例えば、Ｆｃ領域におけるＬ２３４Ｌ２３５からＡ２３４Ｅ２３５への変異を含み、それにより、このｈｕＣＤ３抗体にさらされたサイトカイン放出は、顕著に低減するか、または消失する（例えば、図１１Ａ、１１Ｂを参照のこと）。下で実施例４において記載されるように、本発明のｈｕＣＤ３抗体のＦｃ領域におけるＬ２３４Ｌ２３５からＡ２３４Ｅ２３５への変異は、このｈｕＣＤ３抗体がヒトの白血球にさらされた場合にサイトカインの放出を低減するかもしくは消失させるが、以下に記載される変異は、かなりのサイトカイン放出能力を維持する。例えば、サイトカイン放出の有意な低減は、Ｆｃ領域においてＬ２３４Ｌ２３５からＡ２３４Ｅ２３５への変異を有するｈｕＣＤ３抗体への曝露の際のサイトカインの放出を、下に記載される１つ以上の変異を有する別の抗ＣＤ３抗体への曝露の際のサイトカイン放出のレベルと比較することにより規定される。Ｆｃ領域における他の変異としては、例えば、Ｌ２３４Ｌ２３５からＡ２３４Ａ２３５へ、Ｌ２３５からＥ２３５へ、Ｎ２９７からＡ２９７へ、およびＤ２６５からＡ２６５へ、が挙げられる。
【００１６】
あるいは、ｈｕＣＤ３抗体は、生殖細胞系列核酸残基により核酸残基を置換する、１つ以上の変異を含む核酸によりコードされる。「生殖細胞系列核酸残基」は、定常領域または可変領域をコードする生殖細胞系列遺伝子に自然に存在する核酸残基を意味する。「生殖細胞系列遺伝子」は、生殖細胞（即ち、卵子または精子になるように運命づけられた細胞）において見出されるＤＮＡである。「生殖細胞系列変異」は、生殖細胞または１細胞ステージの受精卵で起きた特定のＤＮＡにおける遺伝性の変化を意味し、子孫に伝えられた場合、このような変異は身体のあらゆる細胞に組み込まれる。生殖細胞系列変異は、１つの身体の細胞ににおいて獲得される体細胞変異とは対照的である。いくつかの場合には、可変領域をコードしている生殖細胞系列ＤＮＡ配列内のヌクレオチドは、変異形成（即ち、体細胞変異）され、異なるヌクレオチドにより置換される。したがって、本発明の抗体は、生殖細胞系列核酸残基により核酸を置換する１つ以上の変異を含む。生殖細胞系列抗体遺伝子としては、例えば、ＤＰ５０（登録番号：ＩＭＧＴ／ＥＭＢＬ／ＧｅｎＢａｎｋ／ＤＤＢＪ：Ｌ０６６１８）、Ｌ６（登録番号：ＩＭＧＴ／ＥＭＢＬ／ＧｅｎＢａｎｋ／ＤＤＢＪ：Ｘ０１６６８）およびＬ４／１８ａ（登録番号：ＥＭＢＬ／ＧｅｎＢａｎｋ／ＤＤＢＪ：Ｚ００００６）が挙げられる。
【００１７】
ｈｕＣＤ３抗体の重鎖は、例えば、ＤＰ５０生殖細胞系列遺伝子などの生殖細胞系列Ｖ（可変）遺伝子に由来する。ＤＰ５０生殖細胞系列遺伝子の核酸およびアミノ酸配列としては、例えば、以下に示す核酸およびアミノ酸配列が挙げられる。
【００１８】
【化１】
2019131607.tif 000002
（配列番号６８）
【００１９】
【化２】
2019131607.tif 000003
（配列番号６９）
本発明のｈｕＣＤ３抗体は、ヒトのＤＰ５０ＶＨ生殖細胞系列遺伝子配列によりコードされた重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。ＤＰ５０ＶＨ生殖細胞系列遺伝子配列は、例えば、図５の配列番号４８に示されている。本発明のｈｕＣＤ３抗体は、ＤＰ５０ＶＨ生殖細胞系列遺伝子配列に対して少なくとも８０％相同である核酸配列によりコードされているＶＨ領域を含む。好ましくは、該核酸配列は、ＤＰ５０ＶＨ生殖細胞系列遺伝子配列に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％相同であり、より好ましくは、ＤＰ５０ＶＨ生殖細胞系列遺伝子配列に対して少なくとも９８％、９９％相同である。ｈｕＣＤ３抗体のＶＨ領域は、ＤＰ５０ＶＨ生殖細胞系列遺伝子配列によりコードされたＶＨ領域のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％相同である。好ましくは、ｈｕＣＤ３抗体のＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＤＰ５０ＶＨ生殖細胞系列遺伝子配列によりコードされたアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％相同であり、より好ましくは、ＤＰ５０ＶＨ生殖細胞系列遺伝子配列によりコードされた配列に対して少なくとも９８％、９９％相同である。
【００２０】
また、本発明のｈｕＣＤ３抗体は、ヒトＬ６ＶＬ生殖細胞系列遺伝子配列またはＬ４／１８ａＶＬ生殖細胞系列遺伝子配列によりコードされた軽鎖可変（ＶＬ）領域をも含む。ヒトＬ６ＶＬ生殖細胞系列遺伝子配列は、例えば、図６の配列番号７４に示され、ヒトＬ４／１８ａＶＬ生殖細胞系列遺伝子配列は、図７の配列番号５３に示されている。あるいは、ｈｕＣＤ３抗体は、Ｌ６ＶＬ生殖細胞系列遺伝子配列またはＬ４／１８ａＶＬ生殖細胞系列遺伝子配列のいずれかに少なくとも８０％相同である核酸配列によりコードされているＶＬ領域を含む。好ましくは、該核酸配列は、Ｌ６ＶＬ生殖細胞系列遺伝子配列またはＬ４／１８ａＶＬ生殖細胞系列遺伝子配列のいずれかに対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％相同であり、より好ましくは、Ｌ６ＶＬ生殖細胞系列遺伝子配列またはＬ４／１８ａＶＬ生殖細胞系列遺伝子配列のいずれかに対して少なくとも９８％、９９％相同である。ｈｕＣＤ３抗体のＶＬ領域は、Ｌ６ＶＬ生殖細胞系列遺伝子配列またはＬ４／１８ａＶＬ生殖細胞系列遺伝子配列のいずれかによりコードされるＶＬ領域のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％相同である。好ましくは、ｈｕＣＤ３抗体のＶＬ領域のアミノ酸配列は、Ｌ６ＶＬ生殖細胞系列遺伝子配列またはＬ４／１８ａＶＬ生殖細胞系列遺伝子配列のいずれかによりコードされたアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％相同であり、より好ましくは、Ｌ６ＶＬ生殖細胞系列遺伝子配列またはＬ４／１８ａＶＬ生殖細胞系列遺伝子配列のいずれかによりコードされた配列に対して少なくとも９８％、９９％相同である。
【００２１】
本発明のｈｕＣＤ３抗体は、例えば、ＤＰ５０生殖細胞系列に由来する、部分的に保存されたアミノ酸配列を有する。例えば、本発明のｈｕＣＤ３抗体のＣＤＲ１領域は、少なくとも、連続するアミノ酸配列ＹＧＭＨ（配列番号５８）を有する。
【００２２】
このｈｕＣＤ３抗体のＣＤＲ２は、例えば、少なくとも、連続するアミノ酸配列ＤＳＶＫＧ（配列番号５９）を含む。例えば、ＣＤＲ２領域は、連続するアミノ酸配列ＩＷＹＸ１ＧＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＹＸ６ＤＳＶＫＧ（配列番号６０）を含み、ここで、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５およびＸ６は、任意のアミノ酸を表す。例えば、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４は、親水性アミノ酸である。本発明のいくつかのｈｕＣＤ３抗体において、Ｘ１はアスパラギンまたはアスパラギン酸塩であり、Ｘ２はアルギニンまたはセリンであり、Ｘ３はリジンまたはアスパラギンであり、Ｘ４はリジンまたはグルタミンであり、Ｘ５はアスパラギン酸塩、アスパラギンまたはチロシンであり、そして／またはＸ６はバリンまたはアラニンである。例えば、ＶＨＣＤＲ２領域は、ＡＩＷＹＮＧＲＫＱＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６９）、ＩＩＷＹＤＧＳＫＫＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７０）、ＶＩＷＹＤＧＳＫＫＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号７１）およびＶＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７２）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００２３】
例えば、ｈｕＣＤ３抗体のＣＤＲ３領域は、少なくとも連続アミノ酸配列ＸＡＸＢＧＹＸＣＸＤＦＤＸＥ（配列番号６１）を含み、ここで、ＸＡ、ＸＢ、ＸＣ、ＸＤおよびＸＥは任意のアミノ酸を表す。本発明のいくつかのｈｕＣＤ３抗体において、ＸＡおよびＸＢは中性アミノ酸であり、ＸＤは芳香族アミノ酸であり、ＸＥは疎水性アミノ酸である。例えば、ＸＡはグリシンまたはグルタミンであり、ＸＢはスレオニンまたはメチオニンであり、ＸＣはアスパラギンまたはトリプトファンであり、ＸＤはトリプトファンまたはヒスチジンであり、および／またはＸＥはプロリンまたはロイシンである。例えば、ＣＤＲ３領域は、連続するアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号６２）または連続するアミノ酸配列ＱＭＧＹＷＨＦＤＬ（配列番号６３）のいずれかを含む。
【００２４】
ｈｕＣＤ３抗体は、アミノ酸配列ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶ（配列番号７３）を含むフレームワーク２領域（ＦＲＷ２）を含む。本発明のｈｕＣＤ３抗体は、アミノ酸配列ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡ（配列番号７４）を含むフレームワーク３領域（ＦＲＷ３）を含む。
【００２５】
いくつかのｈｕＣＤ３抗体は、ＣＤＲ３領域に対してＣ末端側にある位置において、連続するアミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（配列番号６４）を含む。例えば、該抗体は、ＣＤＲ３領域に対してＣ末端側にある位置において、連続するアミノ酸配列ＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６５）を含む。他のｈｕＣＤ３抗体は、ＣＤＲ３領域に対してＣ末端である位置において、連続するアミノ酸配列ＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６６）を含む。配列番号６６のアルギニン残基は、例えば、２８Ｆ１１  ｈｕＣＤ３抗体（配列番号２）および２３Ｆ１０  ｈｕＣＤ３抗体（配列番号６）のＶＨ配列に示されている。
【００２６】
別の局面では、本発明は、被験体にｈｕＣＤ３抗体を投与することにより免疫関連疾患の症状を処置、予防または緩和する方法を提供する。必要に応じて、該被験体は、第２の薬剤（抗炎症性化合物または免疫抑制性化合物が挙げられるがこれらに限定されない）をさらに投与される。例えば、Ｉ型糖尿病または成人性潜在型自己免疫性糖尿病（Ｌａｔｅｎｔ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ａｄｕｌｔ：ＬＡＤＡ）を有する被験体はまた、例えば、ＧＬＰ−１またはベータ細胞休止性（ｒｅｓｔｉｎｇ）化合物（即ち、カリウム・チャンネル開口薬のような、インスリン放出を低減するかまたは阻害する薬剤）のような、第２の薬剤を投与される。
【００２７】
適切な化合物としては、メトトレキサート、シクロスポリンＡ（例えば、シクロスポリン・ミクロエマルジョンを含む）、タクロリマス、コルチコステロイド類、スタチン類、インターフェロン・ベータ、Ｒｅｍｉｃａｄｅ（Ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）、Ｅｎｂｒｅｌ（Ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）およびＨｕｍｉｒａ（Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２８】
該被験体は、例えば、自己免疫性疾患または炎症性障害のような免疫関連疾患を罹患しているか、または、該疾患を発症しやすい。
【００２９】
別の局面において、本発明は、器官もしくは組織の移植の前、移植の間および／または移植の後に本発明のｈｕＣＤ３抗体を被験体に投与する方法を、提供する。例えば、本発明のｈｕＣＤ３抗体は、器官または組織の移植後の拒絶反応を治療するか、または予防するために使用される。
例えば、本発明は、以下の項目を提供する：
（項目１）
単離された完全ヒトモノクローナルＣＤ３抗体またはそのフラグメントであって、該抗体が、以下：
ａ．ＣＤ３陽性（ＣＤ３＋）細胞に結合するが、ＣＤ３陰性（ＣＤ３−）細胞には結合しない、
ｂ．ＣＤ３の細胞表面発現レベルまたは活性を調節する、および
ｃ．Ｔ細胞レセプターの細胞表面発現レベルまたは活性を低下させる、
の特性を有する、抗体またはそのフラグメント。
（項目２）
上記抗体が、マウスの抗ヒトＯＫＴ３モノクローナル抗体のＴリンパ球への結合を阻害する、項目１に記載の抗体。
（項目３）
上記抗体が、アミノ酸配列ＥＭＧＧＩＴＱＴＰＹＫＶＳＩＳＧＴ（配列番号６７）を完全に含むかまたは一部分含むエピトープに結合する、項目１に記載の抗体。
（項目４）
上記抗体が、２３４位、２３５位、２６５位、または２９７位におけるアミノ酸残基またはこれらの組み合わせにおいて重鎖内に変異を含み、Ｔ細胞からサイトカインの放出を低下させる、項目１に記載の抗体。
（項目５）
上記変異が、上記位置においてアラニン残基またはグルタミン酸残基をもたらす、項目４に記載の抗体。
（項目６）
上記抗体がＩｇＧ１イソ型であり、少なくとも２３４位における第１の変異および２３５位における第２の変異を含み、該第１の変異は２３４位にアラニン残基をもたらし、該第２の変異は２３５位にグルタミン酸残基をもたらす、項目１に記載の抗体。
（項目７）
単離された完全ヒトモノクローナル抗体であって、該抗体が、ＧＹＧＭＨ（配列番号２７）、ＶＩＷＹＤＧＳＫＫＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号２８）、ＱＭＧＹＷＨＦＤＬ（配列番号２９）、ＳＹＧＭＨ（配列番号３３）、ＩＩＷＹＤＧＳＫＫＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３４）、ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号３５）、およびＡＩＷＹＮＧＲＫＱＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４４）のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを備えた重鎖を有し、そしてＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号３０）、ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号３１）、ＱＱＲＳＮＷＰＰＬＴ（配列番号３２）、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号３６）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号３７）、ＱＱＹＧＳＳＰＩＴ（配列番号３８）、ＲＡＳＱＧＩＳＳＡＬＡ（配列番号３９）、ＹＡＳＳＬＱＳ（配列番号４０）、ＱＱＹＹＳＴＬＴ（配列番号４１）、ＤＡＳＳＬＧＳ（配列番号４２）、ＷＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡ（配列番号４３）、ＱＱＲＳＮＷＰＷＴ（配列番号４５）、ＤＡＳＳＬＥＳ（配列番号４６）、およびＱＱＦＮＳＹＰＩＴ（配列番号４７）のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを備えた軽鎖を有し、該抗体は、ＣＤ３に結合する、抗体。
（項目８）
単離された完全ヒトモノクローナル抗体であって、該抗体が、ＧＹＧＭＨ（配列番号２７）、ＶＩＷＹＤＧＳＫＫＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号２８）、ＱＭＧＹＷＨＦＤＬ（配列番号２９）、ＳＹＧＭＨ（配列番号３３）、ＩＩＷＹＤＧＳＫＫＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３４）、ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号３５）、およびＡＩＷＹＮＧＲＫＱＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４４）のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを備えた重鎖を有し、該抗体は、ＣＤ３に結合する、抗体。
（項目９）
単離された完全ヒトモノクローナル抗体であって、該抗体が、配列番号２、配列番号６、配列番号１０および配列番号２２からなる群から選択される重鎖可変アミノ酸配列を含み、該抗体は、ＣＤ３に結合する、抗体。
（項目１０）
単離された完全ヒトモノクローナル抗体であって、該抗体が、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号３０）、ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号３１）、ＱＱＲＳＮＷＰＰＬＴ（配列番号３２）、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号３６）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号３７）、ＱＱＹＧＳＳＰＩＴ（配列番号３８）、ＲＡＳＱＧＩＳＳＡＬＡ（配列番号３９）、ＹＡＳＳＬＱＳ（配列番号４０）、ＱＱＹＹＳＴＬＴ（配列番号４１）、ＤＡＳＳＬＧＳ（配列番号４２）、ＷＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡ（配列番号４３）、ＱＱＲＳＮＷＰＷＴ（配列番号４５）、ＤＡＳＳＬＥＳ（配列番号４６）、およびＱＱＦＮＳＹＰＩＴ（配列番号４７）のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを備えた軽鎖を有し、該抗体は、ＣＤ３に結合する、抗体。
（項目１１）
単離された完全ヒトモノクローナル抗体であって、該抗体が、配列番号４、配列番号８、配列番号１６〜配列番号２０、配列番号２５および配列番号２６からなる群から選択される軽鎖可変アミノ酸配列を含み、該抗体は、ＣＤ３に結合する、抗体。
（項目１２）
単離された完全ヒトモノクローナル抗ＣＤ３抗体またはそのフラグメントであって、該抗体は、ＣＤＲ１およびＣＤＲ２を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含み、該領域が、ヒトＤＰ５０ＶＨ生殖細胞系遺伝子配列によってコードされているか、またはＤＰ５０ＶＨ生殖細胞系遺伝子配列に対して相同である核酸配列によってコードされている、抗体またはそのフラグメント。
（項目１３）
ＤＰ５０ＶＨ生殖細胞系遺伝子配列に対して相同である上記核酸配列が、ＤＰ５０ＶＨ生殖細胞系遺伝子配列に対して少なくとも９０％相同である、項目１２に記載の抗体。
（項目１４）
ヒトＬ６ＶＬ生殖細胞系遺伝子配列によってコードされているか、またはＬ６ＶＬ生殖細胞系遺伝子配列に対して相同である核酸配列によってコードされている軽鎖可変（ＶＬ）領域をさらに含む、項目１２に記載の抗体。
（項目１５）
Ｌ６ＶＬ生殖細胞系遺伝子配列に対して相同である上記核酸配列が、Ｌ６ＶＬ生殖細胞系遺伝子配列に対して少なくとも９０％相同である、項目１４に記載の抗体。
（項目１６）
ヒトＬ４／１８ａＶＬ生殖細胞系遺伝子配列によってコードされているか、またはＬ４／１８ａＶＬ生殖細胞系遺伝子配列に対して相同である核酸配列によってコードされているＶＬ領域をさらに含む、項目１２に記載の抗体。
（項目１７）
Ｌ４／１８ａＶＬ生殖細胞系遺伝子配列に対して相同である上記核酸配列が、Ｌ４／１８ａＶＬ生殖細胞系遺伝子配列に対して少なくとも９０％相同である、項目１６に記載の抗体。
（項目１８）
単離された完全ヒトモノクローナル抗ＣＤ３抗体またはそのフラグメントであって、該抗体は、アミノ酸配列ＹＧＭＨ（配列番号５８）を含むＶＨＣＤＲ１領域を含む、抗体またはそのフラグメント。
（項目１９）
単離された完全ヒトモノクローナル抗ＣＤ３抗体またはそのフラグメントであって、該抗体は、アミノ酸配列ＤＳＶＫＧ（配列番号５９）を含むＶＨＣＤＲ２領域を含む、抗体またはそのフラグメント。
（項目２０）
上記ＶＨＣＤＲ２領域は、アミノ酸配列ＩＷＹＸ１ＧＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＹＸ６ＤＳＶＫＧ（配列番号６０）を含む、項目１９に記載の抗体。
（項目２１）
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５およびＸ６は、任意のアミノ酸を表す、項目２０に記載の抗体。
（項目２２）
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４は、親水性アミノ酸である、項目２０に記載の抗体。
（項目２３）
Ｘ１は、アスパラギンまたはアスパラギン酸塩である、項目２０に記載の抗体。
（項目２４）
Ｘ２は、アルギニンまたはセリンである、項目２０に記載の抗体。
（項目２５）
Ｘ３は、リジンまたはアスパラギンである、項目２０に記載の抗体。
（項目２６）
Ｘ４は、リジンまたはグルタミンである、項目２０に記載の抗体。
（項目２７）
Ｘ５は、アスパラギン酸塩、アスパラギンまたはチロシンである、項目２０に記載の抗体。
（項目２８）
Ｘ６は、バリンまたはアラニンである、項目２０に記載の抗体。
（項目２９）
上記ＶＨＣＤＲ２領域は、ＡＩＷＹＮＧＲＫＱＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６９）、ＩＩＷＹＤＧＳＫＫＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７０）、ＶＩＷＹＤＧＳＫＫＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号７１）およびＶＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７２）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、項目２０に記載の抗体。
（項目３０）
単離された完全ヒト抗モノクローナルＣＤ３抗体またはそのフラグメントであって、該抗体は、アミノ酸配列ＸＡＸＢＧＹＸＣＸＤＦＤＸＥ（配列番号６１）を含むＶＨＣＤＲ３領域を含む、抗体またはそのフラグメント。
（項目３１）
ＸＡ、ＸＢ、ＸＣ、ＸＤ、およびＸＥは、任意のアミノ酸を表す、項目３０に記載の抗体。
（項目３２）
ＸＡおよびＸＢは、中性のアミノ酸である、項目３０に記載の抗体。
（項目３３）
ＸＤは、芳香族アミノ酸である、項目３０に記載の抗体。
（項目３４）
ＸＥは、疎水性のアミノ酸である、項目３０に記載の抗体。
（項目３５）
ＸＡは、グリシンまたはグルタミンである、項目３０に記載の抗体。
（項目３６）
ＸＢは、スレオニンまたはメチオニンである、項目３０に記載の抗体。
（項目３７）
ＸＣは、アスパラギンまたはトリプトファンである、項目３０に記載の抗体。
（項目３８）
ＸＤは、トリプトファンまたはヒスチジンである、項目３０に記載の抗体。
（項目３９）
ＸＥは、プロリンまたはロイシンである、項目３０に記載の抗体。
（項目４０）
上記ＶＨＣＤＲ３領域は、アミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号６２）またはアミノ酸配列ＱＭＧＹＷＨＦＤＬ（配列番号６３）を含む、項目３０に記載の抗体。
（項目４１）
単離された完全ヒトモノクローナル抗ＣＤ３抗体またはそのフラグメントであって、該抗体がアミノ酸配列ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶ（配列番号７３）を含むフレームワーク２領域（ＦＲＷ２）を含む、抗体またはそのフラグメント。
（項目４２）
単離された完全ヒトモノクローナル抗ＣＤ３抗体またはそのフラグメントであって、該抗体は、アミノ酸配列ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡ（配列番号７４）を含むフレームワーク３領域（ＦＲＷ３）を含む、抗体またはそのフラグメント。
（項目４３）
単離された完全ヒトモノクローナル抗ＣＤ３抗体またはそのフラグメントであって、該抗体は、ＣＤＲ３領域に対してＣ末端側に配置された可変領域を含み、該可変領域は、該ＣＤＲ３領域に対してＣ末端側の位置においてアミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（配列番号６４）を含む、抗体またはそのフラグメント。
（項目４４）
上記抗体は、上記ＣＤＲ３領域に対してＣ末端側に配置された可変領域を含み、該可変領域は、該ＣＤＲ３領域に対してＣ末端側の位置においてアミノ酸配列ＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６５）を含む、項目４３に記載の抗体。
（項目４５）
上記抗体は、上記ＣＤＲ３領域に対してＣ末端側に配置された可変領域を含み、該可変領域は、該ＣＤＲ３領域に対してＣ末端側の位置においてアミノ酸配列ＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６６）を含む、項目４３に記載の抗体。
（項目４６）
単離された完全ヒトモノクローナル抗ＣＤ３抗体またはそのフラグメントであって、該抗体は、アミノ酸配列ＥＭＧＧＩＴＱＴＰＹＫＶＳＩＳＧＴ（配列番号６７）を完全に含むかまたは一部分含むエピトープに結合する、抗体またはそのフラグメント。
（項目４７）
上記抗体は、２３４位、２３５位、２６５位、または２９７位におけるアミノ酸残基またはこれらの組み合わせにおいて重鎖内に変異を含み、該抗体の存在下におけるＴ細胞からのサイトカインの放出が、２３４位、２３５位、２６５位、または２９７位またはこれらの組み合わせにおいて重鎖内に変異を含まない抗体の存在下におけるＴ細胞からのサイトカインの放出に比べて低下する、項目１〜項目４６のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目４８）
上記変異は、上記位置において、アラニン残基またはグルタミン酸残基をもたらす、項目４７に記載の抗体。
（項目４９）
上記抗体は、少なくとも２３４位における第１の変異および２３５位における第２の変異を含み、該第１の変異は２３４位においてアラニン残基をもたらし、該第２の変異は２３５位においてグルタミン酸残基をもたらす、項目４７に記載の抗体。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】図１は、ｈｕＣＤ３抗体２８Ｆ１１の軽鎖可変領域および重鎖可変領域のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列の一連の表示である。図１Ａは、該重鎖の可変領域をコードしているヌクレオチド配列を示し、図１Ｂは、図１Ａで示されたヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を示し、これらのＣＤＲはボックスにより強調されている。図１Ｃは、該軽鎖の可変領域をコードしているヌクレオチド配列を示し、図１Ｄは、図１Ｃで示されたヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を示し、これらのＣＤＲはボックスにより示されている。
【図２】図２は、ｈｕＣＤ３抗体２３Ｆ１０の軽鎖可変領域および重鎖可変領域のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列の一連の表示である。図２Ａは、該重鎖の可変領域をコードしているヌクレオチド配列を示し、図２Ｂは、図２Ａで示されたヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を示し、図２Ｃは、該軽鎖の可変領域をコードしているヌクレオチド配列を示し、図２Ｄは、図２Ｃで示されたヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を示している。
【図３−１】図３は、ｈｕＣＤ３抗体２７Ｆ５の軽鎖可変領域および重鎖可変領域のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列の一連の表示である。図３Ａは、該重鎖の可変領域をコードしているヌクレオチド配列を示し、図３Ｂは、図３Ａで示されたヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を示し、図３Ｃは、２７Ｈ５クローンの該軽鎖の可変領域をコードしている５つのヌクレオチド配列を示し、図３Ｄは、図３Ｃで示されたヌクレオチド配列によりコードされる５つのアミノ酸配列を示し、図３Ｅは、クローン２７Ｈ５由来の５つの軽鎖のアラインメントであり、最後の行の星印（＊）（標識を付けたキー（ＫＥＹ））はその列の保存されたアミノ酸を表し、キー行のコロン（：）は保存的変異を表し、キー行のピリオド（．）は半保存的変異を表している。
【図３−２】図３は、ｈｕＣＤ３抗体２７Ｆ５の軽鎖可変領域および重鎖可変領域のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列の一連の表示である。図３Ａは、該重鎖の可変領域をコードしているヌクレオチド配列を示し、図３Ｂは、図３Ａで示されたヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を示し、図３Ｃは、２７Ｈ５クローンの該軽鎖の可変領域をコードしている５つのヌクレオチド配列を示し、図３Ｄは、図３Ｃで示されたヌクレオチド配列によりコードされる５つのアミノ酸配列を示し、図３Ｅは、クローン２７Ｈ５由来の５つの軽鎖のアラインメントであり、最後の行の星印（＊）（標識を付けたキー（ＫＥＹ））はその列の保存されたアミノ酸を表し、キー行のコロン（：）は保存的変異を表し、キー行のピリオド（．）は半保存的変異を表している。
【図３−３】図３は、ｈｕＣＤ３抗体２７Ｆ５の軽鎖可変領域および重鎖可変領域のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列の一連の表示である。図３Ａは、該重鎖の可変領域をコードしているヌクレオチド配列を示し、図３Ｂは、図３Ａで示されたヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を示し、図３Ｃは、２７Ｈ５クローンの該軽鎖の可変領域をコードしている５つのヌクレオチド配列を示し、図３Ｄは、図３Ｃで示されたヌクレオチド配列によりコードされる５つのアミノ酸配列を示し、図３Ｅは、クローン２７Ｈ５由来の５つの軽鎖のアラインメントであり、最後の行の星印（＊）（標識を付けたキー（ＫＥＹ））はその列の保存されたアミノ酸を表し、キー行のコロン（：）は保存的変異を表し、キー行のピリオド（．）は半保存的変異を表している。
【図４】図４は、ｈｕＣＤ３抗体１５Ｃ３の軽鎖可変領域および重鎖可変領域のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列の一連の表示であり、図４Ａは、該重鎖の可変領域をコードしているヌクレオチド配列を示し、図４Ｂは、図４Ａで示されたヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を示し、図４Ｃは、１５Ｃ３クローンの該軽鎖の可変領域をコードしている２つのヌクレオチド配列を示し、図４Ｄは、図４Ｃで示されたヌクレオチド配列によりコードされた２つのアミノ酸配列を示している。
【図５】図５は、１５Ｃ３  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ｈｕＣＤ３抗体および２８Ｆ１１  ｈｕＣＤ３抗体、並びにＤＰ−５０生殖細胞系列配列、ヒト重鎖結合５−０２配列、およびヒト重鎖結合２配列の重鎖可変領域を示すアラインメントである。ＣＤＲ領域は、各配列について示される。
【図６】図６は、１５Ｃ３  ｈｕＣＤ３抗体（可変軽鎖１、即ち「ＶＬ１」）および２８Ｆ１１  ｈｕＣＤ３抗体、並びにＬ６生殖細胞系列配列、ヒトカッパ結合４配列およびヒトカッパ結合１配列のＶκＩＩＩ可変領域を示すアラインメントである。ＣＤＲ領域は、各配列について示される。
【図７】図７は、１５Ｃ３  ｈｕＣＤ３抗体（可変軽鎖２、即ち「ＶＬ２」）および２７Ｈ５  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体、並びにＬ４／１８ａ生殖細胞系列配列、ヒトカッパ結合４配列およびヒトカッパ接合５配列のＶκＩ可変領域を示すアラインメントである。ＣＤＲ領域は、各配列について示される。
【図８】図８は、２７Ｈ５  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体およびＤＰＫ２２、並びにヒトカッパ結合５配列のＶκＩＩ可変領域を示すアラインメントである。ＣＤＲ領域は、各配列について示される。
【図９Ａ】図９Ａは、本発明の２８Ｆ１１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体、１５Ｃ３  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体および１５Ｃ３  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体を含む種々の抗ＣＤ３抗体を用いた、Ｊａｒｋａｔ細胞の表面におけるＣＤ３分子への抗体結合を示すグラフである。図９Ｂは、本発明の２８Ｆ１１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体、１５Ｃ３  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体および１５Ｃ３  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体を含む種々の抗ＣＤ３抗体が、ＣＤ３陽性細胞へのマウスの抗ＣＤ３抗体ＯＫＴ３の結合を阻害する能力を示すグラフである。図９Ｃは、本発明の２８Ｆ１１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体、１５Ｃ３  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体および１５Ｃ３  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体を含む種々の抗ＣＤ３抗体による、ヒト末梢血Ｔ細胞の表面由来のＣＤ３およびＴＣＲの抗原性調節を示すグラフである。図９Ｄは、本発明の２８Ｆ１１、２７Ｈ５  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体、１５Ｃ３  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体および１５Ｃ３  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体を含む種々の抗ＣＤ３抗体の、Ｔ細胞の増殖に対する作用を示すグラフである。
【図９Ｂ】図９Ａは、本発明の２８Ｆ１１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体、１５Ｃ３  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体および１５Ｃ３  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体を含む種々の抗ＣＤ３抗体を用いた、Ｊａｒｋａｔ細胞の表面におけるＣＤ３分子への抗体結合を示すグラフである。図９Ｂは、本発明の２８Ｆ１１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体、１５Ｃ３  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体および１５Ｃ３  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体を含む種々の抗ＣＤ３抗体が、ＣＤ３陽性細胞へのマウスの抗ＣＤ３抗体ＯＫＴ３の結合を阻害する能力を示すグラフである。図９Ｃは、本発明の２８Ｆ１１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体、１５Ｃ３  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体および１５Ｃ３  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体を含む種々の抗ＣＤ３抗体による、ヒト末梢血Ｔ細胞の表面由来のＣＤ３およびＴＣＲの抗原性調節を示すグラフである。図９Ｄは、本発明の２８Ｆ１１、２７Ｈ５  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体、１５Ｃ３  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体および１５Ｃ３  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体を含む種々の抗ＣＤ３抗体の、Ｔ細胞の増殖に対する作用を示すグラフである。
【図９Ｃ】図９Ａは、本発明の２８Ｆ１１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体、１５Ｃ３  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体および１５Ｃ３  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体を含む種々の抗ＣＤ３抗体を用いた、Ｊａｒｋａｔ細胞の表面におけるＣＤ３分子への抗体結合を示すグラフである。図９Ｂは、本発明の２８Ｆ１１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体、１５Ｃ３  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体および１５Ｃ３  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体を含む種々の抗ＣＤ３抗体が、ＣＤ３陽性細胞へのマウスの抗ＣＤ３抗体ＯＫＴ３の結合を阻害する能力を示すグラフである。図９Ｃは、本発明の２８Ｆ１１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体、１５Ｃ３  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体および１５Ｃ３  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体を含む種々の抗ＣＤ３抗体による、ヒト末梢血Ｔ細胞の表面由来のＣＤ３およびＴＣＲの抗原性調節を示すグラフである。図９Ｄは、本発明の２８Ｆ１１、２７Ｈ５  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体、１５Ｃ３  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体および１５Ｃ３  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体を含む種々の抗ＣＤ３抗体の、Ｔ細胞の増殖に対する作用を示すグラフである。
【図９Ｄ】図９Ａは、本発明の２８Ｆ１１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体、１５Ｃ３  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体および１５Ｃ３  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体を含む種々の抗ＣＤ３抗体を用いた、Ｊａｒｋａｔ細胞の表面におけるＣＤ３分子への抗体結合を示すグラフである。図９Ｂは、本発明の２８Ｆ１１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体、１５Ｃ３  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体および１５Ｃ３  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体を含む種々の抗ＣＤ３抗体が、ＣＤ３陽性細胞へのマウスの抗ＣＤ３抗体ＯＫＴ３の結合を阻害する能力を示すグラフである。図９Ｃは、本発明の２８Ｆ１１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体、１５Ｃ３  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体および１５Ｃ３  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体を含む種々の抗ＣＤ３抗体による、ヒト末梢血Ｔ細胞の表面由来のＣＤ３およびＴＣＲの抗原性調節を示すグラフである。図９Ｄは、本発明の２８Ｆ１１、２７Ｈ５  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体、２７Ｈ５  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体、１５Ｃ３  ＶＬ１  ｈｕＣＤ３抗体および１５Ｃ３  ＶＬ２  ｈｕＣＤ３抗体を含む種々の抗ＣＤ３抗体の、Ｔ細胞の増殖に対する作用を示すグラフである。
【図１０】図１０は、ＣＤ３イプシロン鎖のアミノ酸配列に由来するペプチドアレイ上の完全ヒトモノクローナル抗体２８Ｆ１１の結合パターンを示す図である。
【図１１】図１１は、野生型の２８Ｆ１１  ｈｕＣＤ３抗体（２８Ｆ１１ＷＴ）、Ｌ２３４Ｌ２３５からＡ２３４Ａ２３５への変異を有する変異２８Ｆ１１  ｈｕＣＤ３抗体（２８Ｆ１１ＡＡ）、およびＬ２３４Ｌ２３５からＡ２３４Ｅ２３５への変異を有する変異２８Ｆ１１  ｈｕＣＤ３抗体（２８Ｆ１１ＡＥ）に曝露された際の、サイトカイン放出のレベルを示す一連のグラフである。図１１Ａは、これらの抗体に曝露された際のＴＮＦ−アルファ放出のレベルを示し、図１１Ｂは、インターフェロン・ガンマ放出のレベルを示している。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
（詳細な説明）
本発明は、ＣＤ３イプシロン鎖（ＣＤ３ε）に対して特異的な完全ヒト抗体モノクローナルを提供する。これらの抗体は、それぞれ、本明細書中でｈｕＣＤ３抗体と呼ばれる。
【００３２】
ＣＤ３は、成熟Ｔリンパ球内の少なくとも５個の膜結合ポリペプチドの複合体であり、これらのポリペプチドは、互いに非共有結合し、そしてＴ細胞レセプターと非共有結合している。ＣＤ３複合体としては、ガンマ鎖、デルタ鎖、イプシロン鎖、ゼータ鎖およびイータ鎖（サブユニットとも呼ばれる）が挙げられる。マウスの抗体であるＯＫＴ３、ＳＰ３４、ＵＣＨＴ１または６４．１により例示されるように、これらの鎖の幾つかに対する非ヒトモノクローナル抗体が、開発されている。（例えば、Ｊｕｎｅら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３６：３９４５〜３９５２（１９８６）；Ｙａｎｇら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：１０９７〜１１００（１９８６）；およびＨａｙｗａｒｄら，Ｉｍｍｕｎｏｌ．６４：８７〜９２（１９８８）を参照のこと）。
【００３３】
本発明のｈｕＣＤ３抗体は、２系統のトランスジェニックマウス（ＨｕＭａｂＴＭマウスおよびＫＭＴＭマウス（Ｍｅｄａｒｅｘ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ  ＮＪ））を免疫化することにより産生された。
【００３４】
本発明のｈｕＣＤ３抗体は、以下の特性の１つ以上を有する：ｈｕＣＤ３抗体はＣＤ３陽性（ＣＤ３＋）細胞には結合するが、ＣＤ３陰性（ＣＤ３−）細胞には結合しないこと、ｈｕＣＤ３抗体はＣＤ３およびＴ細胞レセプター（ＴｃＲ）の細胞表面発現レベルの変化を含む抗原性調節を誘導すること、またはｈｕＣＤ３抗体はマウスの抗ヒトＯＫＴ３モノクローナル抗体のＴリンパ球への結合を阻害すること。本発明のｈｕＣＤ３抗体は、ＣＤ３への結合についてマウスの抗ＣＤ３抗体ＯＫＴ３と競合し、ｈｕＣＤ３抗体への曝露の際ＣＤ２、ＣＤ４またはＣＤ８の細胞表面発現に影響することなくＣＤ３および／またはＴｃＲを除去するか、マスキングする。ＣＤ３および／またはＴｃＲのマスキングは、Ｔ細胞活性化の喪失または低減をもたらす。
【００３５】
本発明のｈｕＣＤ３抗体は、プロセシングされた（即ち、リーダー配列なしの）ヒトＣＤ３イプシロン・サブユニットの２７位から４３位までのアミノ酸残基を完全に含むかまたは一部分含む、ＣＤ３に結合する。ヒトＣＤ３イプシロン・サブユニットのアミノ酸配列は、例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＰ＿０００７２４、ＡＡＡ５２２９５、Ｐ０７７６６、Ａ３２０６９、ＣＡＡ２７５１６およびＡＡＨ４９８４７に示されている。例えば、ｈｕＣＤ３抗体は、アミノ酸配列ＥＭＧＧＩＴＱＴＰＹＫＶＳＩＳＧＴ（配列番号６７）を完全に含むかまたは一部分含む、ＣＤ３エピトープに結合する。このエピトープに結合する例示的なｈｕＣＤ３モノクローナル抗体は、本明細書に記載される２８Ｆ１１抗体である。２８Ｆ１１抗体は、以下の配列番号１に示された核酸配列によりコードされる重鎖可変領域（配列番号２）および配列番号３に示された核酸配列によりコードされる軽鎖可変領域（配列番号４）を含む（図１Ａ〜１Ｄ）。
【００３６】
Ｃｈｏｔｈｉａら，１９８９、Ｅ．Ａ．Ｋａｂａｔら，１９９１により規定された相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むアミノ酸は、下でボックスにより強調されている（図１Ｂ、１Ｄおよび図５、６も参照のこと）。（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃら，Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７〜８８３（１９８９）、Ｋａｂａｔ，ＥＡら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照のこと）。２８Ｆ１１抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＧＭＨ（配列番号２７）、ＶＩＷＹＤＧＳＫＫＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号２８）およびＱＭＧＹＷＨＦＤＬ（配列番号２９）。２８Ｆ１１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号３０）、ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号３１）およびＱＱＲＳＮＷＰＰＬＴ（配列番号３２）。
＞２８Ｆ１１  ＶＨ  ヌクレオチド配列：（配列番号１）
【００３７】
【化３】
2019131607.tif 000004
＞２８Ｆ１１  ＶＨ  アミノ酸配列：（配列番号２）
【００３８】
【化４】
2019131607.tif 000005
＞２８Ｆ１１  ＶＬ  ヌクレオチド配列：（配列番号３）
【００３９】
【化５】
2019131607.tif 000006
＞２８Ｆ１１  ＶＬ  アミノ酸配列：（配列番号４）
【００４０】
【化６】
2019131607.tif 000007
該２３Ｆ１０抗体は、下の配列番号５に示された核酸配列によりコードされる重鎖可変領域（配列番号６）、および配列番号７に示された核酸配列によりコードされる軽鎖可変領域（配列番号８）を含む。
【００４１】
Ｃｈｏｔｈｉａら，１９８９、Ｅ．Ａ．Ｋａｂａｔら，１９９１により規定されたＣＤＲを含むアミノ酸は、下でボックスにより強調されている。（図２Ｂ、２Ｄも参照のこと）。２３Ｆ１０抗体の重鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：ＧＹＧＭＨ（配列番号２７）、ＶＩＷＹＤＧＳＫＫＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号２８）およびＱＭＧＹＷＨＦＤＬ（配列番号２９）。２３Ｆ１０抗体の軽鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号３０）、ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号３１）およびＱＱＲＳＮＷＰＰＬＴ（配列番号３２）。
＞２３Ｆ１０  ＶＨ  ヌクレオチド配列：（配列番号５）
【００４２】
【化７】
2019131607.tif 000008
＞２３Ｆ１０  ＶＨ  アミノ酸配列：（配列番号６）
【００４３】
【化８】
2019131607.tif 000009
＞２３Ｆ１０  ＶＬ  ヌクレオチド配列：（配列番号７）
【００４４】
【化９】
2019131607.tif 000010
＞２３Ｆ１０  ＶＬ  アミノ酸配列：（配列番号８）
【００４５】
【化１０】
2019131607.tif 000011
２７Ｈ５抗体は、下の配列番号９に示された核酸配列によりコードされる重鎖可変領域（配列番号１０）、ならびに、配列番号１１〜１５に示された核酸配列によりコードされる配列番号１６〜２０に示されたアミノ酸配列から選択される軽鎖可変領域を含む。本明細書の実施例２に記載されるように、ＨｕＮａｂ（登録商標）トランスジェニックマウスに由来する単一クローン・ハイブリドーマは、単一の重鎖について複数の軽鎖を産生することができる。産生された重鎖と軽鎖との各組み合わせは、本明細書の実施例２に記載されるように、最適機能についてテストされる。
【００４６】
Ｃｈｏｔｈｉａら，１９８９、Ｅ．Ａ．Ｋａｂａｔら，１９９１により規定されたＣＤＲを含むアミノ酸は、下でボックスにより強調されている。（図３Ｂ、３Ｄ、５および７〜８も参照のこと）。２７Ｈ５抗体の重鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：ＳＹＧＭＨ（配列番号３３）、ＩＩＷＹＤＧＳＫＫＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３４）、ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号３５）。２７Ｈ５抗体の軽鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号３６）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号３７）、ＱＱＹＧＳＳＰＩＴ（配列番号３８）、ＲＡＳＱＧＩＳＳＡＬＡ（配列番号３９）、ＹＡＳＳＬＱＳ（配列番号４０）、ＱＱＹＹＳＴＬＴ（配列番号４１）、ＤＡＳＳＬＧＳ（配列番号４２）、ＷＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡ（配列番号４３）。
＞２７Ｈ５  ＶＨ  ヌクレオチド配列：（配列番号９）
【００４７】
【化１１】
2019131607.tif 000012
＞２７Ｈ５  ＶＨ  アミノ酸配列：（配列番号１０）
【００４８】
【化１２】
2019131607.tif 000013
＞２７Ｈ５  ＶＬ１  ヌクレオチド配列：（配列番号１１）
【００４９】
【化１３】
2019131607.tif 000014
＞２７Ｈ５  ＶＬ２  ヌクレオチド配列：（配列番号１２）
【００５０】
【化１４】
2019131607.tif 000015
＞２７Ｈ５  ＶＬ３  ヌクレオチド配列：（配列番号１３）
【００５１】
【化１５】
2019131607.tif 000016
＞２７Ｈ５  ＶＬ４  ヌクレオチド配列：（配列番号１４）
【００５２】
【化１６】
2019131607.tif 000017
＞２７Ｈ５  ＶＬ５  ヌクレオチド配列：（配列番号１５）
【００５３】
【化１７】
2019131607.tif 000018
＞２７Ｈ５  ＶＬ１  アミノ酸配列：（配列番号１６）
【００５４】
【化１８】
2019131607.tif 000019
＞２７Ｈ５  ＶＬ２  アミノ酸配列：（配列番号１７）
【００５５】
【化１９】
2019131607.tif 000020
＞２７Ｈ５  ＶＬ３  アミノ酸配列：（配列番号１８）
【００５６】
【化２０】
2019131607.tif 000021
＞２７Ｈ５  ＶＬ４  アミノ酸配列：（配列番号１９）
【００５７】
【化２１】
2019131607.tif 000022
＞２７Ｈ５  ＶＬ５  アミノ酸配列：（配列番号２０）
【００５８】
【化２２】
2019131607.tif 000023
１５Ｃ３抗体は、下の配列番号２１に示された核酸配列によりコードされる重鎖可変領域（配列番号２２）、ならびに、配列番号２３〜２４に示された核酸配列によりコードされる配列番号２５〜２６に示されたアミノ酸配列から選択される軽鎖可変領域を含む。本明細書の実施例２に記載されたように、ＨｕＮａｂ（登録商標）トランスジェニックマウスに由来する単一クローン・ハイブリドーマは、単一の重鎖について複数の軽鎖を産生することができる。産生された重鎖と軽鎖との各組み合わせは、本明細書の実施例２に記載されたように、最適機能についてテストされる。
【００５９】
Ｃｈｏｔｈｉａら，１９８９、Ｅ．Ａ．Ｋａｂａｔら，１９９１により規定されたＣＤＲを含むアミノ酸は、下でボックスにより強調されている（図４Ｂ、４Ｄ、および５〜７も参照のこと）。１５Ｃ３抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＳＹＧＭＨ（配列番号３３）、ＡＩＷＹＮＧＲＫＱＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４４）およびＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号３５）。１５Ｃ３抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号３０）、ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号３１）、ＱＱＲＳＮＷＰＷＴ（配列番号４５）、ＲＡＳＱＧＩＳＳＡＬＡ（配列番号３９）、ＤＡＳＳＬＥＳ（配列番号４６）、ＱＱＦＮＳＹＰＩＴ（配列番号４７）。
＞１５Ｃ３  ＶＨ  ヌクレオチド配列：（配列番号２１）
【００６０】
【化２３】
2019131607.tif 000024
＞１５Ｃ３  ＶＨ  アミノ酸配列：（配列番号２２）
【００６１】
【化２４】
2019131607.tif 000025
＞１５Ｃ３  ＶＬ１  ヌクレオチド配列：（配列番号２３）
【００６２】
【化２５】
2019131607.tif 000026
＞１５Ｃ３  ＶＬ２  ヌクレオチド配列：（配列番号２４）
【００６３】
【化２６】
2019131607.tif 000027
＞１５Ｃ３  ＶＬ１  アミノ酸配列：（配列番号２５）
【００６４】
【化２７】
2019131607.tif 000028
＞１５Ｃ３  ＶＬ２  アミノ酸配列：（配列番号２６）
【００６５】
【化２８】
2019131607.tif 000029
本発明のｈｕＣＤ３抗体としてはまた、配列番号２、配列番号６、配列番号１０または配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％９８％、９９％またはそれより多く同一である重鎖可変アミノ酸配列および／または配列番号４、配列番号８、配列番号１６〜２０または配列番号２５〜２６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％９８％、９９％またはそれより多く同一である軽鎖可変アミノ酸配列を含む抗体が挙げられる。
【００６６】
あるいは、該モノクローナル抗体は、２８Ｆ１１、２７Ｈ５、２３Ｆ１０または１５Ｃ３と同じエピトープに結合する抗体である。
【００６７】
特に規定されていない限り、本発明に関連して使われる科学技術用語は、当業者に普通に理解される意味を有する。さらに、文脈により特に必要としない限り、単数形は複数を含み、複数形は単数を含む。一般に、本明細書に記載された細胞および組織培養、分子生物学、ならびに、タンパク質およびオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの化学およびハイブリダイゼーションに関連して、これらの技術において用いられる術語は、当該分野で周知であり、普通に使われている。標準的技術は、組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、組織培養および形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）について使われる。酵素反応および精製技術は、製造業者の仕様明細書に従って実施されるか、または当該分野で普通に達成されているように実施されるか、もしくは本明細書に記載されたように実施される。前述の技術および手順は、当該分野で周知であり、かつ本明細書を通して引用され、考察されている種々の一般的かつより詳細な参考文献に記載されている、従来的方法により実施される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（第２版，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照のこと。本明細書に記載された分析化学、合成有機化学、薬化学（ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）および薬化学（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）に関連して使われた学術用語およびこれらの化学の実験手順および技術は、周知のものであり、当該分野で普通に使われている。標準的技術は、化学合成、化学分析、薬学的調製、処方、送達および患者の処置に使用されている。
【００６８】
本開示に従って使用されている以下の用語は、特に明示しない限り、以下の意味を有すると理解される。
【００６９】
本明細書で使われている用語「抗体」は、免疫グロブリン（Ｉｇ）分子（即ち、抗原に特異的に結合する（抗原と免疫反応する）抗原結合部位を含む分子）および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分を意味している。このような抗体としては、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、単鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’  フラグメントおよびＦ（ａｂ’）２フラグメントおよびＦａｂ発現ライブラリが挙げられるが、これらに限定されない。「特異的に結合する」または「免疫反応する」は、該抗体が所望の抗原の１つ以上の抗原決定基と反応し、そして他のポリペプチドとは反応（即ち、結合）しないか、またははるかに低い親和性（Ｋｄ＞１０−６）にて結合することを意味する。
【００７０】
基本的な抗体構造ユニットは、テトラマーを含むことが公知である。各テトラマーは、の同一なポリペプチド鎖の２つの対から構成され、各対は、１つの「軽い」鎖（２５ｋＤａ）および１つの「重い」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識を司る約１００〜１１０個以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能を司る定常領域を規定する。ヒトの軽鎖は、カッパ軽鎖およびラムダ軽鎖として分類される。重鎖は、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファおよびイプシロンとして分類され、抗体のイソ型をそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥとして規定する。軽鎖内および重鎖内で、可変領域および定常領域は、約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域により結合され、重鎖はまた、約１０個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域をも含む。一般に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第７章（Ｐａｕｌ，Ｗ．ら，第２版，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照のこと。各軽鎖／重鎖対の可変領域は、抗体結合部位を形成する。
【００７１】
本明細書で使われている、用語「モノクローナル抗体」（ＭＡｂ）または「モノクローナル抗体組成物」は、独特の軽鎖遺伝子産物および独特の重鎖遺伝子産物からなる抗体分子の１つの分子種のみを含む、抗体分子の集団を意味する。特に、モノクローナル抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、集団のすべての分子において同一である。ＭＡｂは、ＭＡｂに対する独特の結合親和性により特徴づけられる抗原の特定のエピトープと免疫反応し得る抗原結合部位を含む。
【００７２】
一般に、ヒトから得られた抗体分子は、分子内に存在する重鎖の性質により互いに異なる、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥおよびＩｇＤのいずれかのクラスに関連している。特定のクラスは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２などのようなサブクラスを有する。さらに、ヒトにおいて、軽鎖は、カッパ鎖であってもラムダ鎖であってもよい。
【００７３】
用語「抗原結合部位」または「結合部分」は、抗原結合に関与する免疫グロブリン分子の部分を意味している。抗原結合部位は、重（Ｈ）鎖および軽（Ｌ）鎖のＮ末端可変（Ｖ）領域のアミノ酸残基により形成される。重鎖および軽鎖のＶ領域内の３つの非常多様性のある部分（ｓｔｒｅｔｃｈ）は、「超可変領域」と呼ばれ、「フレームワーク領域」すなわち「ＦＲ」として公知であるより保存的な隣接する部分（ｓｔｒｅｔｃｈ）の間に介在する。したがって、用語「ＦＲ」は、天然において、免疫グロブリンにおける超可変領域の間または該領域に隣接して見出される、アミノ酸配列をいう。１つの抗体分子において、軽鎖の３つの超可変領域および重鎖の３つの超可変領域は、３次元空間において互いに関連して配置され、抗原結合表面を形成する。抗原結合表面は、結合した抗原の３次元表面に対して相補的であり、重鎖および軽鎖各々の３つの超可変領域は、「相補性決定領域」もしくは「ＣＤＲ」と呼ばれる。アミノ酸の各ドメインへの割り当ては、Ｋａｂａｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７および１９９１）），またはＣｈｏｔｉａ  ＆  Ｌｅｓｋ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６；９０１〜９１７（１９８７），Ｃｈｏｔｈｉａら，Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８〜８８３（１９８９）の定義に従っている。
【００７４】
本明細書で使われている、用語「エピトープ」は、免疫グロブリン、ｓｃＦｖまたはＴ細胞レセプターに特異的に結合することができる任意のタンパク質決定基を含む。用語「エピトープ」は、免疫グロブリンまたはＴ細胞レセプターに特異的に結合することができる任意のタンパク質決定基を含む。エピトープの決定基は、通常、アミノ酸または糖側鎖のような分子を分類する化学的に活性な表面からなり、通常、特異的な３次元構造特性、並びに特異的な電荷特性を有する。抗体は、解離定数が≦１μＭ、好ましくは≦１００ｎＭおよび最も好ましくは≦１０ｎＭである場合に、抗原に特異的に結合すると言われている。
【００７５】
本明細書で使われている、用語「免疫学的結合」および「免疫学的結合特性」は、免疫グロブリン分子と、免疫グロブリンが特異的であるところの抗原との間で起きる型の非共有結合的相互作用を意味している。免疫学的結合相互作用の強度、または親和性は、該相互作用の解離定数（Ｋｄ）により表され得、Ｋｄが小さいほど大きな親和性を表す。選択されたポリペプチドの免疫学的結合特性は、当該分野で周知の方法を用いて定量される。このような方法の１つは、抗原結合部位／抗原複合体形成および解離の速度を測定する方法であり、これらの速度は該複合体のパートナーの濃度、相互作用の親和性および両方向の速度に等しく影響を及ぼす幾何学的パラメーターに依存する。したがって、「結合速度定数（ｏｎ  ｒａｔｅ  ｃｏｎｓｔａｎｔ）」（Ｋｏｎ）および「解離速度定数（ｏｆｆ  ｒａｔｅ  ｃｏｎｓｔａｎｔ）」（Ｋｏｆｆ）の両方は、濃度ならびに結合および解離の実際の速度により決定され得る。（Ｎａｔｕｒｅ  ３６１：１８６〜８７（１９９３））。Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎの比により、親和性に関係のないすべてのパラメータを削除することができ、該比は解離定数Ｋｄに等しい。（一般的に、Ｄａｖｉｅｓら（１９９０）Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ５９：４３９〜４７３を参照のこと）。本発明の抗体は、放射性リガンド結合試験または当業者に公知の類似の試験のようなアッセイによって測定された場合、平衡結合定数（Ｋｄ）が≦１μＭ、好ましくは≦１００ｎＭおよび最も好ましくは≦１００ｐＭ〜１ｐＭである場合に、ＣＤ３エピトープに特異的に結合すると言われている。
【００７６】
ヒトモノクローナル抗体が本発明のヒトモノクローナル抗体（例えば、モノクローナル抗体２８Ｆ１１、２７Ｈ５、２３Ｆ１０または１５Ｃ３）と同じ特異性を有する場合、前者のヒトモノクローナル抗体は、後者である本発明のヒトのモノクローナル抗体がＣＤ３抗原ポリペプチドに結合することを妨げるか否かを確認することにより、前者が後者と同じ特異性を有することを過度の実験なしに決定し得ることを、当業者は理解するであろう。テストされているヒトモノクローナル抗体が本発明のヒトのモノクローナルと競合している場合（本発明のヒトのモノクローナル抗体による結合の低下によって示される）、これら２つのモノクローナル抗体は、同じエピトープに結合するか、または密接に関連しているエピトープに結合する。ヒトモノクローナル抗体が本発明のヒトモノクローナル抗体の特異性を有するかどうかを決定するための別の方法は、本発明のヒトのモノクローナル抗体を、通常は反応性であるＣＤ３抗原ポリペプチドと共に予め培養し、次いで、テストされるヒトモノクローナル抗体を添加して、テストされるヒトのモノクローナル抗体がＣＤ３抗原ポリペプチドに結合する能力を阻害されるかどうかを決定する方法である。テストされるヒトのモノクローナル抗体が阻害されるならば、おそらく、該抗体は、本発明のモノクローナル抗体と同じであるか、または機能的に同等である、エピトープ特異性を有する。
【００７７】
当該分野内で公知の種々の手順が、ＣＤ３タンパク質のようなタンパク質に対して指向されるモノクローナル抗体、またはこれらのタンパク質の誘導体、フラグメント、アナログ、ホモログ、またはオルソログに対して指向されるモノクローナル抗体の産生のために使われる。（例えば、参考として本明細書中に援用される、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ，およびＬａｎｅ  Ｄ，１９８８，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．を参照のこと）。完全ヒト抗体は、ＣＤＲを含む軽鎖および重鎖両方の配列全体がヒトの遺伝子由来である、抗体分子である。このような抗体は、本明細書中で「ヒト抗体」または「完全ヒト抗体」と呼ばれる。ヒトモノクローナル抗体は、例えば、下の実施例１に記載された手順を用いて調製される。ヒトのモノクローナル抗体はまた、トリオーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒら，１９８３  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  ４：７２を参照のこと）、およびヒトのモノクローナル抗体を産生するためのＥＢＶハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら，１９８５  Ｉｎ：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＡＮＤ  ＣＡＮＣＥＲ  ＴＨＥＲＡＰＹ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７〜９６を参照のこと）を用いることによっても調製され得る。ヒトのモノクローナル抗体は、ヒトのハイブリドーマ（Ｃｏｔｅら，１９８３．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８０：２０２６〜２０３０）を用いるか、またはインビトロでエプスタイン−バーウイルスを用いてヒトＢ細胞を形質転換すること（Ｃｏｌｅら，１９８５  Ｉｎ：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＡＮＤ  ＣＡＮＣＥＲ  ＴＨＥＲＡＰＹ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７〜９６を参照のこと）により、利用され得、そして産生され得る。
【００７８】
抗体は、主に免疫血清のＩｇＧ画分を提供する、タンパク質Ａまたはタンパク質Ｇを用いた親和性クロマトグラフィーのような周知の技術により精製される。その後、または代替的に、所望の免疫グロブリンの標的である特定の抗原またはこれらのエピトープは、免疫親和性クロマトグラフィーにより免疫特異性抗体を精製するためにカラムに固定化され得る。免疫グロブリンの精製は、例えば、Ｄ．Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ（Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ｂｙ  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ，Ｉｎｃ．，Ｐｈｉｌａｄｌｐｈｉａ  ＰＡ，Ｖｏｌ．１４，Ｎｏ．８（２０００年４月１７日），ｐｐ．２５〜２８）により考察されている。
【００７９】
例えば、抗体の免疫関連疾患の処置における有効性を高めるために、エフェクター機能に関して本発明の抗体を改変することが望ましい。例えば、システィン残基をＦｃ領域に導入して、それにより、この領域に鎖間ジスルフィド結合を形成することができる。このようにして作り出されたホモ二量体抗体は、改善された内在化能力を有し得、そして／またはより高い補体媒介性細胞殺傷性および抗体依存性細胞性傷害活性（ＡＤＣＣ）を有し得る。（Ｃａｒｏｎら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７６：１１９１〜１１９５（１９９２）およびＳｈｏｐｅｓ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８：２９１８〜２９２２（１９９２）を参照のこと）。あるいは、２つのＦｃ領域を有し、それにより、補体溶解能力およびＡＤＣＣ能力が増強され得るような、抗体を設計することができる。（Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，３：２１９〜２３０（１９８９）を参照のこと）。
【００８０】
本発明はまた、Ｆｖ２ｈｕＣＤ３フラグメント、Ｆａｂ２ｈｕＣＤ３フラグメント、Ｆａｂ’ｈｕＣＤ３フラグメントおよびＦ（ａｂ’）２ｈｕＣＤ３フラグメント、単鎖ｈｕＣＤ３抗体、二重特異性ｈｕＣＤ３抗体およびヘテロ結合体ｈｕＣＤ３抗体をも包含する。
【００８１】
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対して結合特異性を有する抗体である。今回の場合、結合特異性のうちの１つは、ＣＤ３に対するものである。第２の結合標的は、任意の他の抗原であり、有利なのは、細胞表面タンパク質またはレセプター、あるいはレセプターサブユニットである。
【００８２】
二重特異性抗体を作製する方法は、当該分野公知である。従来、二重特異性抗体の組換え体産生は、２つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖対の共発現に基づいており、２つの重鎖は異なる特異性を有する（ＭｉｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ，３０５，５３７〜５３９（１９８３））。免疫グロブリンの重鎖および軽鎖の無作為な組み合わせに起因して、これらのハイブリドーマ（クオドロマ）は、１０種の異なる抗体分子の潜在的な混合物を産生し、そのうちの１つだけが、的確な二重特異性構造を有する。この的確な分子の精製は、通常、親和性クロマトグラフィ工程によって達成される。類似の手順は、１９９３年５月１３日公開の国際公開第９３／０８８２９号、およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１０：３６５５〜３６５９（１９９１）において開示されている。
【００８３】
所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン（抗体ー抗原結合部位）は、融合されて免疫グロブリン定常ドメイン配列になることができる。融合は、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインを用いて行われるのが好ましい。軽鎖結合に必要な部位を含む第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが好ましく、これらの融合体のうちの少なくとも１つに存在する。免疫グロブリン重鎖融合体をコードするＤＮＡ、および、所望される場合、免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡが、別々の発現ベクター内に挿入され、適切な宿主生物に共トランスフェクションされる。二重特異性抗体を作製する方法のさらなる詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈら，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：２１０（１９８６）を参照のこと。
【００８４】
国際公開第９６／２７０１１号に記載されている別のアプローチによると、一対の抗体分子の間の界面は、組み換え細胞培養物から回収されるヘテロ二量体の百分率を最大にするように設計することができる。好ましい界面は、抗体定常ドメインのＣＨ３領域の少なくとも一部を含む。この方法において、第１抗体分子の界面から１つ以上の小さなアミノ酸側鎖が、より大きな側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置換される。大きなアミノ酸側鎖を比較的小さな側鎖（アラニンまたはスレオニン）で置換することにより、大きな側鎖と同一または類似のサイズの補償（ｃｏｍｐｅｎｓａｔｏｌｙ）「空洞（ｃａｖｉｔｙ）」が、第２抗体分子の界面上に作られる。これにより、ホモ二量体のような望ましくない他の最終産物を上回って、ヘテロ二量体の収量を増加させるメカニズムが提供される。
【００８５】
二重特異性抗体は、完全抗体または抗体フラグメント（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）として調製され得る。抗体フラグメントから二重特異性抗体を産生する技術は、文献に記載されている。例えば、二重特異性抗体は、化学結合を用いて調製され得る。Ｂｒｅｎｎａｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１（１９８５）には、インタクトな抗体がタンパク質分解により開裂されて、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを作り出す手順が記載されている。これらのフラグメントは、ジチオール錯化剤である亜ヒ酸ナトリウムの存在下で還元され、近接するジチオールを安定化させることにより、分子間ジスルフィドの形成を防止する。作り出されたＦａｂ’フラグメントは、次いで、チオニトロベンゾエート（ＴＮＢ）誘導体に転換される。Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体の１つは、次いで、メルカプトエチルアミンを用いた還元によりＦａｂ’−チオールに再転換され、等モル量の他のＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体と混合され、二重特異性抗体を形成する。産生された二重特異性抗体は、酵素を選択的に固定化する薬剤として使用され得る。
【００８６】
さらに、Ｆａｂ’フラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収され、化学的に結合されて、二重特異性抗体を形成することができる。Ｓｈａｌａｂｙら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：２１７−２２５（１９９２）には、完全にヒト化された二重特異性抗体Ｆ（ａｂ’）２分子の産生が記載されている。各Ｆａｂ’フラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから別々に分泌され、インビトロで指向される化学結合に供されて、二重特異性抗体を形成する。このようにして形成された二重特異性抗体は、ＥｒｂＢ２レセプターを過剰発現する細胞および正常なヒトＴ細胞に結合することができ、並びにヒトの乳癌標的に対してヒト細胞傷害性のリンパ球の溶解活性を引き起こすことができた。
【００８７】
組換え細胞培養物から二重特異性抗体フラグメントを直接作り、そして単離する、種々の技術もまた、記載されている。例えば、二重特異性抗体は、ロイシン・ジッパーを用いて産生されている。Ｋｏｓｔｅｌｎｙら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５４７〜１５５３（１９９２）。Ｆｏｓタンパク質およびＪｕｎタンパク質からのロイシン・ジッパー・ペプチドは、遺伝子融合により２種の異なる抗体のＦａｂ’部分に連結された。抗体ホモ二量体は、ヒンジ領域において還元されてモノマーを形成し、次いで、再度酸化されて抗体ヘテロ二量体を形成した。この方法はまた、抗体ホモ二量体の産生にも利用される。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４〜６４４８（１９９３）により記載された「ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）」技術により、二重特異性フラグメントを作製するための代替メカニズムが提供された。該フラグメントは、同じ鎖の２つのドメインの間で対形成するには短すぎるリンカーにより、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。したがって、１つのフラグメントのＶＨおよびＶＬドメインは、別のフラグメントの相補性ＶＨおよびＶＬドメインと対形成し、それにより、２つの抗原結合部位を形成せざるを得ない。単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用により二重特異性抗体フラグメントを作る別の方法も報告されている。Ｇｒｕｂｅｒら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８（１９９４）を参照のこと。
【００８８】
２よりも多い原子価を有する抗体が、企図される。例えば、三重特異性抗体が、調製され得る。Ｔｕｔｔら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）。
【００８９】
例示的な二重特異性抗体は、２種の異なるエピトープに結合することができ、そのうちの少なくとも１つは、本発明のタンパク質抗原に由来している。あるいは、免疫グロブリン分子の抗抗原性アームは、白血球（例えば、Ｔ細胞レセプター分子（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ２８またはＢ７））上またはＩｇＧ（ＦｃγＲ）のＦｃレセプター（ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６））上の誘発（ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ）分子に結合するアームと結合させることができ、それによって、細胞防御メカニズムを特定の抗原が発現する細胞に集中させる。二重特異性抗体はまた、特定の抗原を発現する細胞に細胞傷害性薬剤を方向付けるためにも使うことができる。これらの抗体は、抗原結合性アームおよび細胞傷害性薬剤またはＥＯＴＵＢＥ、ＤＰＴＡ、ＤＯＴＡまたはＴＥＴＡのような放射性核種キレート化剤を結合するアームを有する。目的の別の二重特異性抗体は、本明細書に記載されたタンパク質抗原に結合し、さらに、組織因子（ＴＦ）に結合する。
【００９０】
ヘテロ結合体化抗体もまた、本発明の範囲内にある。ヘテロ結合体化抗体は、２つの共有結合した抗体から構成されている。このような抗体は、例えば、望ましくない細胞に対して免疫系細胞を標的化すること（米国特許第４，６７６，９８０号）、ＨＩＶ感染の処置に使うこと（国際公開第９１／００３６０号；国際公開第９２／２００３７３号；欧州特許第０３０８９号）が提案されている。これらの抗体は、架橋剤を含む方法を含む合成タンパク質化学において公知の方法を用いて、インビトロで調製され得ることが検討されている。例えば、免疫毒素は、ジスルフィド交換反応を用いるか、またはチオエーテル結合を形成することにより、構築することができる。この目的のための適切な試薬の例としては、イミノチオレート、メチル−４−メルカプトブチルイミデートおよび、例えば、米国特許第４，６７６，９８０号で開示されたものが挙げられる。
【００９１】
本発明は、また、細胞傷害性薬剤に結合体化された抗体を含む免疫結合体にも関連し、細胞傷害性薬剤は、例えば、毒素（例えば、細菌、真菌、植物または動物に由来する酵素的に活性な毒素、またはこれらのフラグメント）、または放射線同位体（即ち、放射性結合体）である。
【００９２】
酵素的に活性な毒素および使用可能なこれらのフラグメントとしては、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合性活性フラグメント、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシンＡ鎖、アルファサルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質類、ｄｉａｎｔｈｉｎタンパク質類、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質類（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ−Ｓ）、Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａインヒビター、クルシン、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、Ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓインヒビター、ゲロニン、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）およびトリコセセンズ（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅｓ）が挙げられる。種々の放射性核種が放射結合体化抗体の産生に利用できる。例としては２１２Ｂｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、９０Ｙおよび１８６Ｒｅが挙げられる。
【００９３】
抗体と細胞傷害性薬剤との結合体は、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、イミノチオレート（ＩＴ）、イミドエステル類の二官能性誘導体（ジメチルアジピミデートＨＣＬなど）、活性エステル類（ジスクシンイミジル・スベラート）、アルデヒド類（グルタルアルデヒドなど）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン）、ジイソシアネート（トリエン−２，６−ジイソシアネートなどの）、およびビス−活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）などの種々の二官能性タンパク質結合剤を用いて作られる。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３８：１０９８（１９８７）に記載されているように作ることができる。炭素１４標識化１−イソチオシアネートベンジル−３−メチルジエチレン・トリアミンペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性核種を抗体に結合体化するための例示的なキレート化剤である。（国際公開第９４／１１０２６号を参照のこと）。
【００９４】
当業者は、広範な種々の使用され得る部分が、本発明の得られた抗体または他の分子に結合され得ることを理解するであろう。（例えば、「Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ」，Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ  ｔｏ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｍ．Ｃｒｕｓｅ  ａｎｄ  Ｒ．Ｅ．Ｌｅｗｉｓ，Ｊｒ（編），Ｃａｒｇｅｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，（１９８９）を参照のこと）。なお、この文献の全内容は本明細書中で参考として援用される。
【００９５】
抗体およびその他の部分がそれぞれの活性を保持する限り、これら２つの分子を結合する任意の化学反応により、結合が達成される。この連結には、多くの化学メカニズム、例えば、共有結合、親和性結合、インターカレーション、配位結合および錯体形成が含まれ得る。しかし、好ましい結合は共有結合である。共有結合は、既存の側鎖の直接的縮合または外部架橋分子の組み込みのいずれかにより達成される。多くの二価または多価の連結剤が、本発明の抗体のようなタンパク質分子を他の分子に結合させる場合に有用である。例えば、代表的な結合剤としては、チオエステル類、カルボジイミド類、スクシンイミド・エステル類、ジイソシアネート類、グルタルアルデヒド、ジアゾベンゼン類およびヘキサメチレンジアミン類のような有機化合物が挙げられる。この列挙は、当該分野で公知の種々の種類の結合剤を網羅したものではなく、より一般的な結合剤の例示である。（ＫｉｌｌｅｎおよびＬｉｎｄｓｔｒｏｍ，Ｊｏｕｒ．Ｉｍｍｕｎ．１３３：１３３５〜２５４９（１９８４）；Ｊａｎｓｅｎら，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ６２：１８５〜２１６（１９８２）；Ｖｉｔｅｔｔａら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３８：１０９８（１９８７）を参照のこと）。好ましいリンカーは、文献に記載されている。（例えば、ＭＢＳ（Ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド・エステル）の使用について記述されているＲａｍａｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｓら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４４：２０１〜２０８（１９８４）を参照のこと）。オリゴペプチドリンカーにより抗体に結合されたハロゲン化アセチル・ヒドラジン誘導体の使用について記述されている米国特許第５，０３０，７１９号も参照のこと。特に好ましいリンカーとしては、（ｉ）ＥＤＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド・ヒドロクロリド、（ｉｉ）ＳＭＰＴ（４−スクシンイミジルオキシカルボニル−アルファ−メチル−アルファ−（２−ピリジル（ｐｒｉｄｙｌ）−ジチオ）−トルエン（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｃａｔ．（２１５５８Ｇ）；（ｉｉｉ）ＳＰＤＰ（スクシンイミジル−６［３−（２−ピリジル−ジチオ）プロピオンアミド］ヘキサノエート（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｃａｔ＃２１６５１Ｇ）；（ｉｖ）Ｓｕｌｆｏ−ＬＣ−ＳＰＤＰ（スルホスクシンイミジル−６［３−（２−ピリジルジチオ）プロピオンアミド］ヘキサノエート（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｃａｔ＃２１６５−Ｇ）；および（ｖ）ＥＤＣに接合したスルホ−ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスルホ−スクシンイミド：Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｃａｔ．＃２４５１０）がある。
【００９６】
上に記載されたリンカーには、異なる特性を有する成分が含まれ、したがって、物理化学的特性が異なる結合体がもたらされる。例えば、アルキル・カルボキシレート類のスルホ−ＮＨＳエステル類は、芳香族カルボキシレート類のスルホ−ＮＨＳエステル類よりも安定性がよい。ＮＨＳエステル含有リンカーは、スルホ−ＮＨＳエステル類よりも安定性が劣る。さらに、リンカーＳＭＰＴには、立体障害のあるジスルフィド結合が含まれ、安定性の向上した複合体を形成することができる。ジスルフィド結合は、インビトロで開裂され、利用できる結合体が少ししか得られないので、一般に、安定性が低い。特に、スルホ−ＮＨＳは、カルボジイミド結合の安定性を高めることができる。カルボジイミド結合（ＥＤＣなど）は、スルホ−ＮＨＳと併用して使用した場合、カルボジイミド結合反応単独よりも加水分解に対して耐性であるエステル類を形成する。
【００９７】
本明細書で使われている用語「単離されたポリヌクレオチド」は、ゲノム起源、ｃＤＮＡ起源、合成起源またはこれらの組み合わせを起源とするポリヌクレオチドであって、この「単離されたポリヌクレオチド」は、その起源により、（１）「単離されたポリヌクレオチド」が天然において見出されるポリヌクレオチドのすべてまたは一部を伴わないか、（２）天然において連結されていないポリヌクレオチドに作動可能に連結されるか、または（３）より大きな配列の一部として天然に存在することはない、ポリヌクレオチドを意味する。
【００９８】
本明細書で「単離タンパク質」と呼ばれている用語は、ｃＤＮＡ起源、組換えＲＮＡ起源、合成起源またはこれらの組み合わせの起源のタンパク質を意味し、該タンパク質は、その起源または由来の源により、「単離タンパク質」は、（１）天然において見出されるタンパク質を伴わないか、（２）同じ源からの他のタンパク質、例えば、海洋性タンパク質を含まないか、（３）異なる種由来の細胞により発現されるか、または（４）天然に存在しない。
【００９９】
本明細書で一般用語として用いられている用語「ポリペプチド」は、ポリペプチド配列の天然タンパク質、フラグメントまたはアナログを意味している。したがって、天然タンパク質フラグメントおよびアナログは、ポリペプチド属の種である。本発明により好ましいポリペプチドとしては、図１Ｂ、２Ｂ、３Ｂおよび４Ｂにより表されるヒト重鎖免疫グロブリン分子、および図１Ｄ、２Ｄ、３Ｄおよび４Ｄにより表されるヒト重鎖免疫グロブリン分子、重鎖免疫グロブリン分子を軽鎖免疫グロブリン分子（例えば、カッパ軽鎖免疫グロブリン分子）とを含む組み合わせによって形成される抗体分子、およびその逆により形成される抗体分子、並びにこれらのフラグメントおよびアナログが挙げられる。
【０１００】
本明細書で使われ、対象に適用された用語「天然に存在する」は、対象が天然匂いて見出され得る事実を意味している。例えば、天然の供給源から単離され得る生物（ウイルスを含む）中に存在するが、研究室他においてヒトにより意図的に改変されていない、ポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列は、天然に存在する。
【０１０１】
本明細書で使われている用語「作動可能に連結された」は、そのように記載された成分の位置を意味し、これらの成分の位置は、これらの成分を意図した方法で機能させることを可能にする関係にある。コード配列に「作動可能に連結された」制御配列は、コード配列の発現が制御配列に適応できる条件下で達成されるように連結される。
【０１０２】
本明細書で使われている用語「制御配列」は、制御配列が連結されるコード配列の発現およびプロセシングを生じるのに必要である、ポリヌクレオチド配列を意味している。このような制御配列の性質は、原核生物の宿主生物によって異なり、このような制御配列には、一般に、真核生物中のプロモーター、リボソーム結合部位および転写終止配列が含まれ、一般に、このような制御配列には、プロモーターおよび転写終止配列が含まれる。用語「制御配列」は、最小限、その存在が発現およびプロセシングに必須であるすべての成分を含むことを意図しており、その存在が有利であるさらなる成分（例えば、リーダー配列および融合パートナー配列）を含むことができる。本明細書で「ポリヌクレオチド」と呼ばれている用語は、長さが少なくとも１０塩基のヌクレオチド（リボヌクレオチドかデオシヌクレオチドのいずれか、またはいずれかの型のヌクレオチドの変形態）のポリマー性ホウ素を意味している。この用語には、ＤＮＡの一本鎖および二本鎖の形態が含まれている。
【０１０３】
本明細書でオリゴヌクレオチドと呼ばれている用語は、天然に存在するオリゴヌクレオチド連結、および存在しないオリゴヌクレオチド連結により一緒に連結された、天然に存在するヌクレオチド、および改変ヌクレオチドを含む。オリゴヌクレオチドは、一般に、長さ２００塩基以下を含むポリヌクレオチド・サブセットである。オリゴヌクレオチドは、長さが１０〜６０塩基であることが好ましく、長さが１２塩基、１３塩基、１４塩基、１５塩基、１６塩基、１７塩基、１８塩基、１９塩基または２０〜４０塩基であることが最も好ましい。オリゴヌクレオチドは、通常、例えば、プローブの場合、一本鎖である。しかし、オリゴヌクレオチドは、例えば、遺伝子変異体の構築に使用する場合二本鎖であり得る。本発明のオリゴヌクレオチドは、センスかアンチセンスのいずれかのオリゴヌクレオチドである。
【０１０４】
本明細書で「天然に存在するヌクレオチド」と呼ばれた用語としては、デオキシリボヌクレオチドとリボヌクレオチドが挙げられる。本明細書で「改変ヌクレオチド」と呼ばれた用語としては、改変されたかまたは置換された糖類などを有するヌクレオチドが挙げられる。本明細書で「ヌクレオチド連結」と呼ばれた用語としては、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレルエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホルアニラデート、ホスホロンミデートなどのオリゴヌクレオチド連結が挙げられる。例えば、ＬａＰｌａｎｃｈｅら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４：９０８１（１９８６）；Ｓｔｅｃら，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０６：６０７７（１９８４）；Ｓｔｅｉｎら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１６：３２０９（１９８８）；Ｚｏｎら，Ａｎｔｉ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ６：５３９（１９９１）；Ｚｏｎら，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｐｐ．８７〜１０８（Ｆ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｅｎｇｌａｎｄ（１９９１））；Ｓｔｅｃら，米国特許第５，１５１，５１０号；Ｕｈｌｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｐｅｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ９０：５４３（１９９０）を参照のこと。オリゴヌクレオチドは、所望される場合、検出のための標識を含むことができる。
【０１０５】
本明細書で「選択的にハイブリダイズする」と呼ばれた用語は、検出可能かつ特異的に結合することを意味する。本発明に従うポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチドおよびこれらのフラグメントは、非特異的な核酸に対する感知可能な量の検出可能な結合を最小限にするハイブリダイゼーション条件および洗浄条件下において、核酸鎖に対して選択的にハイブリダイズする。当該分野で公知であり、本明細書で論じられた選択的なハイブリダイゼーション条件を達成するためには、高ストリンジェンシー条件が使われる。一般に、本発明のポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチドおよびフラグメントと目的の核酸配列との間の核酸配列相同性は、少なくとも８０％、より代表的には相同性が少なくとも８５％、９０％、９５％、９９％および１００％に増加するのが好ましい。２つのアミノ酸配列は、これらの配列の間に部分的または完全な同一性があるならば相同である。例えば、８５％の相同は、これら２つの配列が、マッチングが最大になるように並べられている場合、アミノ酸の８５％が同一であることを意味している。（マッチングされている２つの配列のいずれかにおける）ギャップが、５以下の最大マッチングギャップ長が許容されるのが好ましく、２以下が許容されればより好ましい。あるいは、好ましくは、２つのタンパク質配列（または少なくとも長さ３０アミノ酸のタンパク質配列に由来するポリペプチド配列）は、これらが、変異データマトリックスおよび６以上のギャップペナルティを有するプログラムＡＬＩＧＮを用いて、（標準偏差ユニットにおいて）５を超えた配列スコアを有するならば、本明細書で用語「相同」が使用される場合、相同である。Ｄａｙｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．，ｉｎ  Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｐｐ．１０１−１１０（Ｖｏｌｕｍｅ５，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ（１９７２））およびこの巻に対する補遺２，ｐｐ．１〜１０を参照のこと。２つの配列およびその一部は、これらのアミノ酸がＡＬＩＧＮプログラムを用いて最適に整列された場合、５０％以上同一であればより好ましい相同である。用語「〜に相当する」は、ポリヌクレオチド配列が基準ポリヌクレオチド配列のすべてまたは一部に対して相同（即ち、同一ではあるが、厳密には進化的には関係していない）であること、およびポリペプチド配列が基準ポリペプチド配列と同一であることを意味するために本明細書で使われる。対照的に、用語「相補的である」は、相補性配列が、基準ポリヌクレオチド配列のすべてまたは一部と相同であることを意味するために本明細書で使われる。例として、ヌクレオチド配列「ＴＡＴＡＣ」は基準配列「ＴＡＴＡＣ」に相当し、基準配列「ＧＴＡＴＡ」に対して相補的である。
【０１０６】
以下の用語は、２個以上のポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列の間の配列関係を説明するために使われる：「基準配列」、「比較ウインドウ」、「配列同一性」、「配列同一性の百分率」および「実質的に同一」。「基準配列」は、配列を比較するための基礎として使われる規定された配列であり、基準配列は、例えば、配列の列挙において与えられる全長ｃＤＮＡまたは遺伝子配列のセグメントとしての比較的大きな配列のサブセットであるか、または完全なｃＤＮＡまたは遺伝子配列を含んでもよい。一般に、基準配列は、長さが少なくとも１８ヌクレオチドまたは６アミノ酸であり、またはしばしば２４ヌクレオチドまたは８アミノ酸であり、または多くの場合４８ヌクレオチドまたは１６アミノ酸である。２つのポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列は、各々が（１）２つの分子の間で類似している配列（即ち、完全なポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列の一部）を含み、（２）さらに、２つのポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列の間で異なっている（ｄｉｖｅｒｇｅｎｔ）配列を含むことができるので、２つ（またはそれ以上）の分子間の配列比較は、代表的に、配列類似性の局部領域を同定し、比較するための「比較ウインドウ」上で２つの分子の配列を比較することによりなされる。本明細書で使われる「比較ウインドウ」は、少なくとも１８の連続するヌクレオチド位置または６のアミノ酸の概念的セグメントを意味し、このウインドウでは、ポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列は、少なくとも１８の連続するヌクレオチドまたは６のアミノ酸配列の基準配列と比較され、比較ウインドウ内のポリヌクレオチド配列の部分には、２つの配列の最適アラインメントの基準配列（これは付加または欠失を含まない）と比較された２０パーセント以下の付加、欠失、置換など（即ち、ギャップ）が含まれる。比較ウインドウを整列させるための配列の最適アラインメントは、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ  Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）による局部相同アルゴリズムにより、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同整列アルゴリズムにより、Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８５：２４４４（１９８８）の類似性に関する検査方法により、これらのアルゴリズム（ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＷｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ７．０におけるＴＦＡＳＴＡ、（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）、Ｇｅｎｅｗｏｒｋｓ、またはＭａｃ  Ｖｅｃｔｏｒ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｐａｃｋａｇｅｓ）のコンピュータ制御された実施により、または試験により行われ、種々の方法により作り出された最良のアラインメント（即ち、比較ウインドウの上で相同の最高の百分率を生じる）が選択される。
【０１０７】
用語「配列同一性」は、２つのポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列が（即ち、ヌクレオチド毎または残基毎のベースで）比較ウインドウの上で同一であることを意味している。用語「配列同一性の百分率」は、比較ウインドウの上で２つの最適整列された配列を比較し、同一核酸塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、ＵまたはＩ）または残基が両配列内で生じる位置の数を決定し、マッチングした位置の数を得て、マッチングした位置の数を比較ウインドウにおける位置の総数（即ち、ウインドウ・サイズ）で割り算し、この結果を１００倍して配列同一性の百分率を得る。本明細書で使われている用語「実質的に同一」は、ポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列の特徴を示し、ポリヌクレオチドまたはアミノ酸は、少なくとも１８ヌクレオチド（６アミノ酸）の位置の比較ウインドウの上で、しばしば少なくとも２４〜４８ヌクレオチド（８〜１６アミノ酸）の位置のウインドウの上で基準配列と比較した時に、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０〜９５％、より普通には９９％の配列同一性を含む。配列同一性の百分率は、比較ウインドウの上で基準配列の合計２０％以下の欠失または付加を含み得る配列に対して基準配列を比較することにより計算される。基準配列はより大きな配列のサブセットでもよい。
【０１０８】
本明細書で使われている、２０種の従来のアミノ酸およびこれらの略語は、従来の用法に従う。Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ−Ａ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅ．Ｓ．Ｇｏｌｕｂ  ａｎｄ  Ｄ．Ｒ．Ｇｒｅｎ，Ｅｄｓ．，Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ７  Ｍａｓｓ．（１９９１））。２０種の従来のアミノ酸の立体異性体（例えば、Ｄ−アミノ酸類）、α−，α−ジ置換アミノ酸類、Ｎ−アルキルアミノ酸類、乳酸、および他の従来のものでないアミノ酸のような非天然アミノ酸も、本発明のポリペプチドの適切な成分である。従来のものでないアミノ酸の例としては、４−ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタメート、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリジン、ε−Ｎ−アセチルリジン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリジン、σ−Ｎ−メチルアルギニン、および他の類似のアミノ酸およびイミノ酸（例えば、４−ヒドロキシプロリン）が挙げられる。本明細書で使われるポリペプチド表記法では、標準用法および慣例によると、左手方向はアミノ末端方向であり、右手方向はカルボキシ末端方向である。
【０１０９】
同様に、特に明示しない限り、一本鎖ポリヌクレオチド配列の左手端部は５’端部であり、二本鎖ポリヌクレオチド配列の左手方向は５’方向と呼ばれる。新生ＲＮＡ転写物の５’から３’への付加の方向は、ＲＮＡと同じ配列を有するＤＮＡ鎖上の転写方向配列領域と呼ばれ、そしてＲＮＡ転写物の５’端部に対して５’側である配列は「上流配列」と呼ばれ、ＲＮＡと同じ配列を有するＤＮＡ鎖上の配列領域であってＲＮＡ転写物の３’端部に対して３’側である配列領域は、「下流配列」と呼ばれる。
【０１１０】
ポリペプチドに適用されたように、用語「実質的に同一」は、２つのペプチド配列が、デフォルト・ギャップ重量を用いたプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴなどにより最適に整列された場合、少なくとも８０パーセント、好ましくは少なくとも９０パーセント、より好ましくは少なくとも９５パーセント、最も好ましくは少なくとも９９パーセントの配列同一性を共有することを意味する。
【０１１１】
同一でない残基位置は、保存的アミノ酸置換基により異なるのが好ましい。
【０１１２】
保存的アミノ酸置換基は、類似の側鎖を有する残基の互換性を意味している。例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸のグループは、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシンであり、脂肪族ヒドロキシ側鎖を有するアミノ酸のグループは、セリンおよびスレオニンであり、アミド含有側鎖を有するアミノ酸のグループは、アスパラギンおよびグルタミンであり、芳香族側鎖を有するアミノ酸のグループは、フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファンであり、塩基性側鎖を有するアミノ酸のグループは、リジン、アルギニンおよびヒスチジンであり、そして硫黄含有側鎖を有するアミノ酸のグループは、システィンおよびメチオニンである。好ましい保存アミノ酸置換グループは、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン  バリン、グルタミン酸−アスパラギン酸、およびアスパラギン−グルタミンである。
【０１１３】
本明細書で論議されたように、抗体または免疫グロブリン分子のアミノ酸配列の小さな変化は、アミノ酸配列の変化を少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、９０％、９５％、および最も好ましくは９９％に維持している場合、本発明により包含されることが企図される。特に、保存的アミノ酸置換が企図されている。保存的置換は、アミノ酸の側鎖に関連しているアミノ酸のファミリー内で起きる置換である。遺伝子にコードされたアミノ酸は、一般に、次のようなファミリーに分類される：（１）酸性アミノ酸はアスパラギン酸塩、グルタミン酸塩であり、（２）塩基性アミノ酸はリジン、アルギニン、ヒスチジンであり、（３）非極性アミノ酸はアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファンであり、（４）非荷電極性アミノ酸はグリシン、アスパラギン、グルタミン、システィン、セリン、スレオニン、チロシンである。親水性アミノ酸としては、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸塩、グルタミン、グルタミン酸塩、ヒスチジン、リジン、セリンおよびスレオニンがある。疎水性アミノ酸には、アラニン、システィン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、チロシンおよびバリンが挙げられる。アミノ酸の他のファミリーとしては、（ｉ）脂肪族ヒドロキシ・ファミリーであるセリンおよびスレオニン、（ｉｉ）アミド含有ファミリーであるアスパラギンおよびグルタミン、（ｉｉｉ）脂肪族ファミリーであるアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、（ｉｖ）芳香族ファミリーであるフェニルアラニン、トリプトファン、チロシンが挙げられる。例えば、イソロイシンまたはバリンとロイシンとの、グルタミン酸塩とアスパラギン酸塩との、セリンとスレオニンとの単独の置換、または構造的に関連のあるアミノ酸とアミノ酸との類似の置換は、特に該交換がフレームワーク部位内のアミノ酸を含まないならば、得られる分子の結合または特性に対して大きな効果を持たないことを予測することは、合理的である。アミノ酸置換が機能性ペプチドを生じるかどうかは、ポリペプチド誘導体の特定の活性を試験することにより容易に決めることができる。アッセイは本明細書に詳細に記載されている。抗体または免疫グロブリン分子のフラグメントまたはアナログは、当業者により容易に調製され得る。フラグメントまたはアナログの好ましいアミノ末端およびカルボキシ末端は、機能的ドメインの境界の近くに存在する。構造的ドメインおよび機能的ドメインは、ヌクレオチドおよび／またはアミノ酸配列データを公開配列データベースまたは独自の配列データベースと比較することにより識別することができる。好ましくは、構造および／または機能が既知の他のタンパク質中に存在する、配列モチーフまたは予測されたタンパク質の立体構造のドメインを同定するために、コンピュータによる比較方法が使われる。既知の３次元構造に折りたたまれるタンパク質配列を同定する方法が、公知である。Ｂｏｗｉｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５３：１６４（１９９１）。したがって、前述の例は、本発明による構造的ドメインおよび機能的ドメインを規定するために使われ��配列モチーフおよび構造的立体構造を、当業者が理解し得ることを実証している。
【０１１４】
好ましいアミノ酸置換基は、（１）タンパク質分解に対する感受性を低減し、（２）酸化に対する感受性を低減し、（３）タンパク質複合体を形成する結合親和性を変え、（４）結合親和性を変え、および（４）このようなアナログの他の物理化学的または機能的特性を与えるか、または改変するものである。アナログは、天然に存在するペプチド配列以外の配列の種々のムテインを含むことができる。例えば、単一または複数のアミノ酸置換（保存的アミノ酸置換が好ましい）は、天然に存在する配列において（好ましくは、分子間接触を形成するドメイン外のポリペプチドの部分において）作製され得る。保存的アミノ酸置換は、親配列の構造的特性をほとんど変えない（例えば、置換アミノ酸は親配列中に存在する螺旋を壊す傾向はなく、親配列を特徴づける他の型の二次構造を混乱させる傾向もない）。当該分野で認められたポリペプチドの二次構造および三次構造の複数の例は、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４））；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｃ．Ｂｒａｎｄｅｎ  ａｎｄ  Ｊ．Ｔｏｏｚｅ，ｅｄｓ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９１））；ａｎｄ  Ｔｈｏｒｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：１０５（１９９１）に記載されている。
【０１１５】
本明細書で使われる用語「ポリペプチド・フラグメント」は、アミノ末端および／またはカルボキシ末端が欠失しているポリペプチドを意味するが、残りのアミノ酸配列は、例えば、全長ｃＤＮＡ配列から推定された天然に存在する配列における対応する位置と同一である。フラグメントの長さは、代表的に、少なくとも５、６、８または１０アミノ酸、好ましくは少なくとも１４アミノ酸、より好ましくは少なくとも２０アミノ酸、通常少なくとも５０アミノ酸、より一層好ましくは少なくとも７０アミノ酸である。本明細書で用いられる用語「アナログ」は、推定されたアミノ酸配列の一部と実質的に同一である少なくとも２５個のアミノ酸のセグメントを含み、以下の特性の少なくとも１つを有するポリペプチドを意味している：（１）適切な条件下におけるＣＤ３への特異的な結合、（２）適切なＣＤ３結合を遮断する能力、または（３）インビトロまたはインビボでＣＤ３発現細胞の増殖を阻害する能力。代表的に、ポリペプチドアナログには、天然に存在する配列について保存的アミノ酸置換（または付加または欠失）が含まれている。アナログの長さは、代表的に、少なくとも２０アミノ酸長、好ましくは少なくとも５０アミノ酸長以上であり、天然に存在するポリペプチドの全長と同じ程度であってもよい。
【０１１６】
ペプチドアナログは、鋳型ペプチドの特性に類似した特性を有する非ペプチド薬物として製薬産業で普通に使われる。これらの型の非ペプチド化合物は、「ペプチド模倣物」と呼ばれる。Ｆａｕｃｈｅｒｅ，Ｊ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓ．１５：２９（１９８６）；Ｖｅｂｅｒ  ａｎｄ  Ｆｒｅｉｄｉｎｇｅｒ  ＴＩＮＳ  ｐ．３９２（１９８５）；およびＥｖａｎｃｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３０：１２２９（１９８７）。このような化合物は、コンピュータによる分子モデリングの助けをかりて開発されることも多い。治療上有用なペプチドに構造上似ているペプチド模倣物は、同等の治療効果または予防効果を生み出すために使われる。一般に、ペプチド模倣物は、ヒトの抗体などのパラダイムポリペプチド（即ち、生化学特性または薬理活性を有するポリペプチド）と構造上似ているが、当該分野で周知の方法により、−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−（シスおよびトランス）、−ＣＯＣＨ２−、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−、および−ＣＨ２ＳＯ−からなる群から選択される結合により任意に置換された１つ以上のペプチド結合を有する。同じ型のＤ−アミノ酸（例えば、Ｌ−リジンの代わりにＤ−リジン）を有する共通配列の１つ以上のアミノ酸の系統的置換が、より安定なペプチドを作り出すために使われる。さらに、共通配列または実質的に同一な共通配列変形態様を含む制約されたペプチドは、例えば、分子内ジスルフィド架橋（これが該ペプチドを環化する）を形成しうる内部システィン残基を添加することにより、当該分野で公知の方法（Ｒｉｚｏ  ａｎｄ  Ｇｉｅｒａｓｃｈ  Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６１：３８７（１９９２））により作り出され得る。
【０１１７】
用語「薬剤」は、本明細書では、化合物、化合物の混合物、生物学的高分子または生物学的材料から作られた抽出物を示すために使われる。
【０１１８】
本明細書で使われている、用語「標識」または「標識化」は、放射性標識されたアミノ酸の組み込みまたは印を付けられたアビジン（例えば、光学的な方法または熱量測定方法により検出することができる蛍光マーカーまたは酵素活性を含むストレプトアビジン）により検出されうるビオチニル部分をポリペプチドに取り付けることによる、検出可能なマーカーの組み込みを意味する。特定の状況では、標識またはマーカーも治療薬となり得る。ポリペプチドおよび糖タンパク質を標識化する種々の方法が、当該分野で公知であり、使用され得る。ポリペプチドの標識の例としては、放射性同位体または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニドリン光体）、酵素標識（例えば、セイヨウワサビ・ペルオキシダーゼ、ｐ−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリ性ホスファターゼ）、化学発光、ビオチニル・グループ、二次レポータ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープ・タグ）により認識された所定のポリペプチド・エピトープがあるが、これらに限定されない。いくつかの実施例では、標識は、潜在的な立体障害を低減するために種々の長さのスペーサーアームにより取り付けられる。本明細書で使われている用語「薬剤もしくは薬物」は、患者に適切に投与された場合、所望の治療効果を誘導しうる化合物または組成物を意味している。
【０１１９】
本明細書の他の化学用語は、Ｔｈｅ  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｒｍｓ（Ｐａｒｋｅｒ，Ｓ．，Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ（１９８５））により例示されている当該分野の従来の用法に従って使われている。
【０１２０】
用語「抗新生物剤」は、ヒトの新生物、特に、癌腫、肉腫、リンパ腫または白血病のような特に悪性（癌性）の病変の発症または進行を阻害する機能的特性を有する薬剤を意味するために、本明細書中で使われる。転移の阻害は、多くの場合、抗新生物剤の特性である。
【０１２１】
本明細書で使われている場合、「実質的に純粋」は、対象種が存在する優勢な種であることを意味し（即ち、モルベースで、その種が組成物中の他のいかなる種よりも豊富に存在する）、好ましくは、実質的に精製された画分は、対象種が、存在するすべての高分子の少なくとも約５０％（モルベースで）を含む組成物である。
【０１２２】
一般に、実質的に純粋な組成物は、組成物中に存在するすべての高分子種の約８０％を超えて、より好ましくは、約８５％、９０％、９５％および９９％を超えて対象種を含む。最も好ましくは、該対象種は、該組成物が本質的には単一の高分子種からなる必須の均一性（汚染種は、従来の検出方法では組成物内において検出することができない）まで精製される。
【０１２３】
患者という用語には、ヒトおよび獣医の被験動物が含まれる。
【０１２４】
（ヒト抗体および抗体のヒト化）
ｈｕＣＤ３抗体は、例えば、全体ヒト抗体を発現できる異種マウスを免疫化することにより作り出される（実施例１を参照のこと）。ＩｇＧ  ｈｕＣＤ３抗体は、例えば、トランスジェニックマウスにより産生されたＩｇＭ抗ＣＤ３抗体を変換することにより作り出される（実施例２を参照のこと）。あるいは、このようなｈｕＣＤ３抗体は、例えば、ヒト配列のみを含む抗体を用いたファージディスプレイ（ｐｈａｓｅ-ｄｉｓｐｌａｙ）方法を用いて開発される。このようなアプローチは、例えば、国際公開第９２／０１０４７号および米国特許第６，５２１，４０４号において当該分野では周知の方法である。なお、これらの特許は本明細書に参考として援用される。このアプローチにおいて、軽鎖および重鎖の無作為な対を保有するファージのコンビナトリアルライブラリは、ＣＤ３またはこれらのフラグメントの天然の源または組換え源を用いて選別される。
【０１２５】
本発明には、少なくとも１つの工程に、トランスジェニック非ヒト動物を、ヒトＣＤ３で免疫化する工程が包含されているプロセスにより、ｈｕＣＤ３抗体を産生する方法が含まれている。この異種移植（ｘｅｎｏｇｅｎｉｃ）非ヒト動物の内因性重鎖および／またはカッパ軽鎖遺伝子座の一部は、無効にされ、抗原に反応して免疫グロブリンをコードする遺伝子を作り出すのに必要な再配列をすることができない。さらに、少なくとも１つのヒト重鎖遺伝子座および少なくとも１つのヒト軽鎖遺伝子座が、動物に安定的にトランスフェクトされている。したがって、投与された抗原に反応して、ヒト遺伝子座は再配列して、抗原に対して免疫特異的なヒトの可変領域をコードする遺伝子を与える。したがって、免疫化の際、ｘｅｎｏｍｏｕｓｅは、完全ヒト免疫グロブリンを分泌するＢ細胞を産生する。
【０１２６】
異種移植非ヒト動物を産生する種々の技術が、当該分野において周知である。例えば、米国特許第６，０７５，１８１および６，１５０，５８４号を参照のこと。１つの戦略では、異種（ヒト）の重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子が、宿主の生殖細胞系（例えば、精子または卵細胞）に導入され、別の工程では、対応する宿主遺伝子が相同組換えを用いた不活性化により非機能性にされる。ヒトの重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子は、適切な真核微生物または原核微生物において再構築され、得られるＤＮＡフラグメントが適切な宿主、例えば、受精したマウスの卵細胞または胚幹細胞の前核に導入される。内因性宿主免疫グロブリン遺伝子座の不活性化は、宿主細胞、特に胚幹細胞または受精したマウスの卵細胞の前核において、相同組換えによって適切な遺伝子座の標的化された破壊により達成される。標的化された破壊は、標的遺伝子座における傷（ｌｅｓｉｏｎ）もしくは欠失または遺伝子座内への挿入（例えば、選択可能なマーカーの挿入）に付随する標的遺伝子座内の欠失の導入を含むことができる。胚幹細胞の場合、一部は改変胚幹細胞に由来するキメラ動物が作製され、このキメラ動物は、生殖細胞系に遺伝子改変を伝えることができる。導入されたヒトの免疫グロブリン遺伝子座を有する宿主と、不活性化内因性遺伝子座を有する系統との交配により、抗体の産生が純粋に異種、例えば、ヒトである動物を生じる。
【０１２７】
代わりの戦略では、ヒトの重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子座の少なくとも一部が、胚幹細胞における相同組換えにより対応する内因性免疫グロブリン遺伝子座を直接置換するために使われる。これは、内因性免疫グロブリンの不活性化および置換を同時にもたらす。これに次いで、胚幹細胞由来細胞が生殖細胞系に寄与することができるキメラ動物を生成する。
【０１２８】
例えば、ヒトの抗ＣＤ３抗体を発現するＢ細胞クローンが、異種非ヒト動物から取り出され、当該分野内で公知の種々の方法により不死化される。このようなＢ細胞は、動物の血液に直接得られ得るか、または脾臓、扁桃腺、リンパ節および骨髄を含むがこれらに限定されないリンパ系組織から得られ得る。得られた不死化Ｂ細胞は、インビトロで播種されて培養され、臨床的に適用できる大量のｈｕＣＤ３抗体を産生することができる。あるいは、１つ以上のヒト可変領域を有する免疫グロブリンをコードする遺伝子が回収され得、該遺伝子は、抗体を直接得るかまたはこの抗体の単鎖Ｆｖ分子から構成される個別の鎖を得るために、異なる細胞型（哺乳類細胞培養系を含むがこれらに限定されない）において発現され得る。
【０１２９】
さらに、異種非ヒト動物により作り出された完全ヒトＣＤ３抗体の組全体は、最適特性を有する１つのクローンを同定するために選別される。このような特性としては、例えば、ヒトＣＤ３タンパク質への結合親和性、相互作用の安定性、並びに完全ヒト抗ＣＤ３抗体のイソ型が挙げられる。次いで、所望の特性を有する組全体に由来するクローンは、代替の細胞系において、従来の組換え技術またはトランスジェニック技術を用いて、これらの特性を有する抗体を作り出すためのさらなる操作のために、所望の可変領域をコードするヌクレオチド配列の源として使われる。
【０１３０】
この一般的な戦略は、１９９４年に刊行されたように、第１のＸｅｎｏＭｏｕｓｅＴＭ系統の生成に関連して実証された。Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ７：１３〜２１（１９９４）を参照のこと。この方法は、１９９０年１月１２日に出願された米国特許出願第０７／４６６，００８、１９９０年１１月８日に出願された０７／６１０，５１５、１９９２年７月２４日に出願された０７／９１９，２９７、１９９２年７月３０日に出願された０７／９２２，６４９、１９９３年３月１５日に出願された０８／０３１，８０１、１９９３年８月２７日に出願された０８／１１２，８４８、１９９４年４月２８日に出願された０８／２３４，１４５、１９９５年１月２０日に出願された０８／３７６，２７９、１９９５年４月２７日に出願された０８／４３０，９３８、１９９５年６月５日に出願された０８／４６４，５８４、１９９５年６月５日に出願された０８／４６４，５８２、１９９５年６月５日に出願された０８／４６３，１９１、１９９５年６月５日に出願された０８／４６２，８３７、１９９５年６月５日に出願された０８／４８６，８５３、１９９５年６月５日に出願された０８／４８６，８５７、１９９５年６月５日に出願された０８／４８６，８５９、１９９５年６月５日に出願された０８／４６２，５１３、１９９６年１０月２日に出願された０８／７２４，７５２、および１９９６年１２月３日に出願された０８／７５９，６２０号および米国特許第６，１６２，９６３、６，１５０，５８４、６，１１４，５９８、６，０７５，１８１および５，９３９，５９８号および特許第３  ０６８  １８０、３  ０６８  ５０６、および３  ０６８  ５０７号においてさらに考察され、説明されている。Ｍｅｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６〜１５６（１９９７）およびＧｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．：１８８：４８３〜４９５（１９９８）も参照のこと。１９９６年６月１２日に許可発行された欧州特許第０  ４６３  １５１号、１９９４年２月３日に発行された国際特許出願公開第９４／０２６０２号、１９９６年１０月３１日に発行された国際特許出願第９６／３４０９６、１９９８年６月１１日に発行された９８／２４８９３、２０００年１２月２１日に発行された００／７６３１０号も参照のこと。
【０１３１】
代替のアプローチにおいて、他は、「ミニ遺伝子座」アプローチを利用した。ミニ遺伝子座アプローチでは、外因性Ｉｇ遺伝子座は、Ｉｇ遺伝子座からの部分（個々の遺伝子）の包含により模倣される。したがって、１つ以上のＶＨ遺伝子、１つ以上のＤＨ遺伝子、１つ以上のＪＨ遺伝子、ミュー定常領域、および第２定常領域（好ましくは、ガンマ定常領域）が、動物に挿入するための構築物内に形成される。この方法は、Ｓｕｒａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．の米国特許第５，５４５，８０７号、およびＬｏｎｂｅｒｇおよびＫａｙの米国特許第５，５４５，８０６、５，６２５，８２５、５，６２５，１２６、５，６３３，４２５、５，６６１，０１６、５，７７０，４２９、５，７８９，６５０、５，８１４，３１８、５，８７７，３９７、５，８７４，２９９、および６，２５５，４５８号、ＫｒｉｍｐｅｎｆｏｒｔおよびＢｅｒｍｓの米国特許第５，５９１，６６９および６，０２３，０１０号、Ｂｅｒｎｓ  ｅｔ  ａｌ．の米国特許第５，６１２，２０５、５，７２１，３６７および５，７８９，２１５号、ＣｈｏｉおよびＤｕｎｎの米国特許第５，６４３，７６３号、およびＧｅｎＰｈａｒｍ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌの１９９０年８月２９日に出願された米国特許出願第０７／５７４，７４８、１９９０年８月３１日に出願された０７／５７５，９６２、１９９１年１２月１７日に出願された０７／８１０，２７９、１９９２年３月１８日に出願された０７／８５３，４０８、１９９２年６月２３日に出願された０７／９０４，０６８、１９９２年１２月１６日に出願された０７／９９０，８６０、１９９３年４月２６日に出願された０８／０５３，１３１、１９９３年７月２２日に出願された０８／０９６，７６２、１９９３年１１月１８日に出願された０８／１５５，３０１、１９９３年１２月３日に出願された０８１１６１，７３９、１９９３年１２月１０日に出願された０８／１６５，６９９、１９９４年３月９日に出願された０８／２０９，７４１号に記載されている。欧州特許第０  ５４６  ０７３号、国際特許出願公開第９２／０３９１８、９２／２２６４５、９２／２２６４７、９２／２２６７０、９３／１２２２７、９４／００５６９、９４／２５５８５、９６／１４４３６、９７／１３８５２、および９８／２４８８４号および米国特許第５，９８１，１７５号も参照のこと。さらに、Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｔｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｃｈｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４），Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４），およびＴｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５），Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）も参照のこと。
【０１３２】
ミニ遺伝子座アプローチの利点は、Ｉｇ遺伝子座の部分を含む構築物が作り出され得、動物に導入することができる迅速性にある。しかし、ミニ遺伝子座アプローチの大きな欠点は、理論上、少数のＶ、ＤおよびＪの各遺伝子の包含により多様性が十分導入されないことである。実際に、発表された研究はこの懸念を支持しているようである。Ｂ細胞の発生およびミニ遺伝子座アプローチの使用により産生された動物の抗体産生は、妨げられるようである。したがって、本発明を取り巻く研究は、一貫して、より大きな多様性を達成し、動物の免疫レパートリを再構成するためにＩｇ遺伝子座の大きな部分の導入に向けられている。
【０１３３】
Ｋｉｒｉｎは、微小細胞融合により、染色体の大きな断片または染色体全体が導入されている、マウスからのヒト抗体の生成も実証した。欧州特許出願公開第７７３，２８８および８４３，９６１号を参照のこと。
【０１３４】
ヒトの抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）反応は、この産業をキメラ抗体またはさもないとヒト化抗体の調製に導いた。キメラ抗体はヒト定常領域および免疫可変領域を有するが、特定のヒト抗キメラ抗体（ＨＡＣＡ）反応は、特に抗体の慢性用量または多回用量の利用において観察されるであろうことが予測される。したがって、ＨＡＭＡまたはＨＡＣＡ反応の懸念および／または効果を下げるためにＣＤ３に対する完全ヒト抗体を提供することが望ましい。
【０１３５】
低減した免疫原性を有する抗体の産生もまた、適切なライブラリを用いるヒト化技術および表示技術を介して達成される。マウスの抗体または他の種からの抗体が、当該分野で周知の技術を用いてヒト化または霊長類化（ｐｒｉｍａｔｉｚｅ）され得ることが理解される。例えば、Ｗｉｎｔｅｒ  ａｎｄ  Ｈａｒｒｉｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  １４：４３  ４６（１９９３）およびＷｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２１２５〜１６８（１９９２）を参照のこと。目的の抗体は、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ヒンジドメインおよび／またはフレームワークドメインを、対応するヒト配列により置換するように、組換えＤＮＡ技術によって設計され得る（国際公開第９２１０２１９０号および米国特許第５，５３０，１０１、５，５９５，０８９、５，６９３，７９２、５，６９３，７９２、５，７１４，３５０および５，７７７，０８５号を参照のこと）。キメラ免疫グロブリン遺伝子を構築する場合にＩｇ  ｃＤＮＡを使用することもまた、当該分野で公知である（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．８４：３４３９（１９８７）およびＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１（１９８７））。ｍＲＮＡは、抗体を産生するハイブリドーマまたは他の細胞から単離され、ｃＤＮＡの産生に使われる。目的のｃＤＮＡは、特異的なプライマーを用いたポリメラーゼ連鎖反応により増幅される（米国特許第４，６８３，１９５および４，６８３，２０２号）。あるいは、目的の配列を単離するためにライブラリが作られ、選別される。該抗体の可変領域をコードするＤＮＡ配列は、次いで、ヒト定常領域配列に融合される。ヒト定常領域遺伝子の配列は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎ．Ｉ．Ｈ．ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９１−３２４２において見出され得る。ヒトＣ領域遺伝子は、公知のクローンから容易に利用できる。イソ型の選択は、補体固定または抗体依存性細胞性傷害活性における活性のような所望のエフェクター機能によって導かれる。好ましいイソ型は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４である。ヒト軽鎖定常領域のカッパまたはラムダのいずれかが使われ得る。キメラヒト化抗体は、次いで、従来の方法により発現される。
【０１３６】
Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）２およびＦａｂのような抗体フラグメントは、インタクトなタンパク質の切断（例えば、プロテアーゼによる）または化学的切断によって調製され得る。あるいは、短縮型（ｔｒａｎｃａｔｅｄ）遺伝子が設計される。例えば、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントの一部をコードするキメラ遺伝子は、ＣＨ１ドメインおよびＨ鎖のヒンジ領域をコードするＤＮＡ配列を含み、その後、翻訳停止コドンにより短縮型分子を生じる。
【０１３７】
Ｈ領域およびＬＪ領域の共通配列は、Ｊ領域内に有用な制限部位を導入し、その後、ヒトＣ領域セグメントにＶ領域セグメントを連結するためのプライマー（ｐｒｉｅｒ）として使用するためのオリゴヌクレオチドを設計するために使われ得る。Ｃ領域ｃＤＮＡは、ヒト配列における類似の位置に制限部位を置くために部位特異的変異誘発によって改変され得る。
【０１３８】
発現ベクターとしては、プラスミド、レトロウイルス、ＹＡＣ、ＥＰＶ由来エピソームなどが挙げられる。便利なベクターは、任意のＶＨまたはＶＬ−３１配列が容易に挿入され得るか、または発現され得るように、設計された適切な制限部位を有する、機能的に完全なヒトＣＨまたはＣＬ免疫グロブリン配列をコードするベクターである。このようなベクターにおいて、スプライシングは、通常、挿入されたＪ領域のスプライスドナー部位とヒトＣ領域に先行するスプライス受容部位との間で起こり、そしてまた、ヒトＣＨエキソン内で起きるスプライス領域においても起きる。ポリアデニル化および転写終結は、コード領域の下流の天然染色体部位で起きる。得られるキメラ抗体は、レトロウイルスＬＴＲ、例えば、ＳＶ−４０初期プロモータ（Ｏｋａｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏ．３：２８０（１９８３））、ラウス肉腫ウイルスＬＴＲ（Ｇｏｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．７９：６７７７（１９８２））、およびモロニーマウス白血病ウイルスＬＴＲ（Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  ４１：８８５（１９８５））を含む任意の強力なプロモータに結合され得る。また、天然のＩｇプロモータなどが使われることが、理解される。
【０１３９】
さらに、ヒト抗体または他の種からの抗体は、非限定で、ファージ・ディスプレイ、レトロウイルス・ディスプレイ、リボソーム・ディスプレイ、および当該分野で周知の技術を用いる他の技術を含む、ディスプレイ型の技術により作り出され、得られる分子は、親和性成熟のようなさらなる成熟（このような技術は当該分野で周知である）を受けることができる。Ｗｒｉｇｈｔ  ａｎｄ  Ｈａｒｒｉｓ（上記を参照のこと）、Ｈａｎｅｓ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｔｈａｕ  ＰＥＡＳ  ＵＳＡ  ９４：４９３７〜４９４２（１９９７）（リボソーム・ディスプレイ）、Ｐａｒｍｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ  Ｇｅｎｅ  ７３：３０５〜３１８（１９８８）（ファージ・ディスプレイ）、Ｓｃｏｔｔ  ＴＩＢ５  １７：２４１〜２４５（１９９２）、Ｃｗｉｒｌａ  ｅｔ  ａｌ．ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８７：６３７８〜６３８２（１９９０）、Ｒｕｓｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２１：１０８１〜１０８５（１９９３）、Ｈｏｇａｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｉｅｗｓ  １３０：４３〜６８（１９９２）、Ｃｈｉｓｗｅｌｌ  ａｎｄ  ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ＴＩＢＴＥＣＨ；１０：８０〜８Ａ（１９９２）、および米国特許第５，７３３，７４３号。ディスプレイ技術がヒトではない抗体を産生するために利用される場合、このような抗体は、上で記述されたように、ヒト化され得る。
【０１４０】
これらの技術を用いると、抗体は、ＣＤ３発現細胞、ＣＤ３自身、ＣＤ３の形態、これらのエピトープまたはペプチド、およびその発現ライブラリを作り出すことができ（例えば、米国特許第５，７０３，０５７号を参照のこと）、次いで、これらの抗体は上で記述された活性に関して上で記述されたように選別される。
【０１４１】
（他の治療薬の設計および作製）
本発明従い、ならびにＣＤ３について本明細書中で産生されて特徴づけられる抗体の活性に基づいて、抗体部分より優れた他の治療様式の設計は容易になる。このような治療様式としては、非限定で、二重特異性抗体、免疫毒素、放射性標識化治療薬、ペプチド治療薬、遺伝子治療（特に体内）、アンチセンス治療薬、および低分子のような進歩した抗体治療薬の作製が挙げられる。
【０１４２】
例えば、二重特異性抗体に関連して、（ｉ）１つはＣＤ３に対して特異性をもち、別の抗体は第２の分子に対して特異的である、一緒に結合体化される２つの抗体、（ｉｉ）ＣＤ３に対して特異的な１つの鎖および第２の分子に対して特異的な第２の鎖を有する単一の抗体、または（ｉｉｉ）ＣＤ３および他の分子に対して特異性を有する一本鎖抗体を含む、二重特異性抗体が作り出され得る。このような二重特異性抗体は、例えば、（ｉ）および（ｉｉ）に関連する周知の技術（例えば、Ｆａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ４：７２〜８１（１９９４）およびＷｒｉｇｈｔ  ａｎｄ  Ｈａｒｒｉｓ（前出）を参照のこと）を用いて、そして（ｉｉｉ）に関連する周知の技術（例えば、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ（Ｓｕｐｐｌ．）７：５１〜５２（１９９２）を参照のこと）を用いて、作り出され得る。各々の場合において、第２の特異性は、非限定で、ＣＤ１６またはＣＤ６４（例えば、Ｄｅｏ  ｅｔ  ａｌ．１８：１２７（１９９７）を参照のこと）またはＣＤ８９（例えば、Ｖａｌｅｒｉｕｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  ９０：４４８５〜４４９２（１９９７）を参照のこと）を含む重鎖活性化レセプターに対して作られ得る。前述の方法に従って調製された二重特異性抗体は、ＣＤ３を発現する細胞、特に本発明のＣＤ３抗体が有効である細胞を、殺傷する傾向がある。
【０１４３】
免疫毒素に関連して、抗体は、当該分野で周知の技術を利用して、免疫毒素として作用するように改変され得る。例えば、Ｖｉｅｔｔａ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  １４：２５２（１９９３）を参照のこと。米国特許第５，１９４，５９４号も参照のこと。放射性標識化抗体の調製に関連して、このような改変抗体もまた、当該分野で周知の技術を利用して容易に調製され得る。例えば、Ｊｕｎｇｈａｕｓ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ６５５〜６８６（２ｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｈａｆｎｅｒ  ａｎｄ  Ｌｏｎｇ，ｅｄｓ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｒａｖｅｎ（１９９６））を参照のこと。米国特許第４，６８１，５８１、４，７３５，２１０、５，１０１，８２７、５，１０２，９９０（再発行特許第３５，５００号）、５，６４８，４７１、および５，６９７，９０２号も参照のこと。免疫毒素および放射性標識化分子の各々は、ＣＤ３を発現する細胞、特に本発明の抗体が有効である細胞を、殺傷する傾向がある。
【０１４４】
治療用ペプチドの作製に関連して、ＣＤ３、および本発明の抗体のようなＣＤ３に対する抗体、またはペプチドライブラリーの選別に関連した構造情報を利用することにより、ＣＤ３に対して指向される治療用ペプチドが作製され得る。ペプチド治療薬の設計および選別は、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １３：４１２〜４２１（１９９２）、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ  ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８２：５１３１〜５１３５（１９８５）、Ｐｉｎａｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １３：９０１〜９０５（１９９２）、Ｂｌａｋｅ  ａｎｄ  Ｌｉｔｚｉ−Ｄａｖｉｓ  ＢｉｏＣｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．３：５１０〜５１３（１９９２）に関連して論じられている。免疫毒素および放射性標識化分子もまた、抗体に関連して上で論じられたペプチド部分に関連した類似の様式で、調製され得る。ＣＤ３分子（またはスプライシング変形態様もしくは代替形態など）が疾患プロセスにおいて機能的に活性であると仮定すると、従来技術により、ＣＤ３分子に対する遺伝子治療薬またはアンチセンス治療薬を設計することもまた可能である。このような様式は、ＣＤ３の機能を調節する場合に利用されうる。ＣＤ３に関連して、本発明の抗体は、該抗体に関連した機能的アッセイの設計および使用を容易にする。アンチセンス治療薬についての設計および戦略は、国際特許出願公開第９４／２９４４４号で詳細に論じられている。遺伝子治療薬のデザインおよび方法は周知である。しかし、特に、身体内を含む遺伝子治療薬技術の使用は、特に有効であることが判明している。例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ５：５９５〜６０１（１９９４）およびＭａｒａｓｃｏ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ４：１１〜１５（１９９７）を参照のこと。遺伝子治療薬に関連した一般的設計および検討は、国際特許出願公開第９７／３８１３７号でも論じられている。
【０１４５】
ＣＤ３分子の構造から収集された知識および本発明の抗体のような本発明に従う他の分子とのＣＤ３分子の相互作用などは、さらなる治療様式を合理的に設計するために利用することができる。これに関連して、Ｘ線結晶学、コンピュータによる分子モデリング（ＣＡＭＭ）、定量的または定性的な構造−活性との関係（ＱＳＡＲ）、および類似の技術のような合理的薬剤設計技術は、薬剤発見の努力を集中させるために利用することができる。合理的な設計により、ＣＤ３の活性を改変または調節するために使用され得る、分子または分子の特異な形態と相互作用することができるタンパク質または合成構造体の予測が可能になる。このような構造体は、化学的に合成されても、生物システムにおいて発現されてもよい。このアプローチは、Ｃａｐｓｅｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｄｒｕｇｓ（Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９８８））において概説されている。さらに、組み合わせライブラリを、設計し得、合成し得、そして高い選別処理能力のような選別プログラムにおいて使用することができる。
【０１４６】
（治療薬の投与および処方）
本発明による治療薬の投与は、適切なキャリア、賦形剤、および輸送、送達、耐性などを改善するために処方物中に組み込まれる他の薬剤と共に投与されることが、理解される。多数の適切な処方物が、すべての薬剤師に公知である処方として見出され得る：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１５ｔｈ  ｅｄ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９７５）），特にその中のＢｌａｕｇ，ＳｅｙｍｏｕｒによるＣｈａｐｔｅｒ  ８７。これらの処方物としては、例えば、散在、ペースト、軟膏、ジェリー剤、ワックス、油、脂質、脂質（カチオン性またはアニオン性）含有小包（ＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎＴＭなど）、ＤＮＡ結合体、無水吸収ペースト、油中水型および水中油型エマルジョン、エマルジョン・カーボワックス（種々の分子量のポリエチレングリコール類）、半固体ゲル類およびカーボワックス含有半固体混合物が挙げられる。前述の混合物のいずれかが、処方物中の活性成分が処方物により不活性化されておらず、処方物が投与経路に生理学的に適合性であり、耐性である場合、本発明による処置および治療において適切である。Ｂａｌｄｒｉｃｋ  Ｐ．”Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：ｔｈｅ  ｎｅｅｄ  ｆｏｒ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｇｕｉｄａｎｃｅ．”Ｒｅｇｕｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３２（２）：２１０〜８（２０００），Ｗａｎｇ  Ｗ．”Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｏｌｉｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ．”Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．２０３（１−２）：１〜６０（２０００），Ｃｈａｒｍａｎ  ＷＮ”Ｌｉｐｉｄｓ，ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ  ｄｒｕｇｓ，ａｎｄ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ−ｓｏｍｅ  ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｃｏｎｃｅｐｔｓ．”Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．８９（８）：９６７〜７８（２０００），Ｐｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．”Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ”ＰＤＡ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．５２：２３８〜３１１（１９９８）および薬剤師に周知の処方物、賦形剤およびキャリアに関連したさらなる情報について、これらの中の引用文献も参照のこと。
【０１４７】
本発明のｈｕＣＤ３抗体を含む本発明の治療処方物は、例えば、自己免疫疾患または炎症性障害のような免疫関連疾患に関連した症状を処置または緩和するために使われる。
【０１４８】
自己免疫疾患としては、例えば、後天性免疫不全症候群（エイズ、これは自己免疫成分を有するウイルス性疾患である）、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫アジソン病、自己免疫溶血性貧血、自己免疫肝炎、自己免疫内耳炎（ＡＩＥＤ）、自己免疫リンパ球増殖性症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫血小板減少紫斑病（ＡＴＰ）、ベーチェット病、心筋症、セアリックスプルー疱疹状皮膚炎、慢性疲労免疫機能不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症脱髄性多発神経障害（ＣＩＰＤ）、瘢痕性類天疱瘡、寒冷凝集素症、クレスト症候群、クローン病、デゴス病、若年性皮膚筋炎、円板状ループス、特発性混合型クリオグロブリン血症、腺維筋肉病−腺維筋炎、グレーブス病、ギラン−バレー症候群、橋本甲状腺炎、特発性肺腺維症、特発性血小板減少紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、インスリン依存性糖尿病、若年性慢性関節炎（スチル病）、若年性関節リウマチ、メニエール病、混合型結合組織疾患、多発性硬化症、重症筋無力症、悪性貧血、結筋性多発性動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発性筋痛、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、慢性関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症（進行性全身性硬化症（ＰＳＳ）、全身性硬化症（ＳＳ）としても知られる）、シェーグレン症候群、スティフマン症候群、全身性紅斑性狼瘡、タカヤス動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、白斑およびウエグナー肉芽腫症が挙げられる。
【０１４９】
炎症疾患としては、例えば、慢性および急性炎症疾患が挙げられる。炎症疾患の例としては、アルツハイマー病、ぜんそく、アトピー性アレルギー、アレルギー、アテローム性動脈硬化症、気管支ぜんそく、湿疹、糸球体腎炎、移植片対宿主病、溶血性貧血、変形性関節症、敗血症、脳卒中、組織および器官の移植、脈管炎、糖尿病性網膜症および換気装置に誘発された肺の損傷が挙げられる。
【０１５０】
１つの実施例では、本発明のｈｕＣＤ３抗体組成物は、例えば、ＧＬＰ−１またはベータ細胞休止化合物（即ち、カリウム・チャンネル開口薬などのインスリンの放出を低減するか、さもなければ阻害する化合物）などの第２の薬剤と併用して投与される。適切なＧＬＰ−１化合物の例は、例えば、発行された米国特許出願公開第２００４００３７８２６号に記載されており、適切なベータ細胞休止化合物は発行された米国特許出願公開第２００３０２３５５８３号に記載されており、これらの特許の各々は、その全体が本明細書中で参考として援用される。
【０１５１】
別の実施例では、免疫関連疾患の処置に使われたｈｕＣＤ３抗体組成物は、既知の種々の抗炎症性化合物および／または免疫抑制化合物のいずれかと併用して投与される。適切な既知の化合物としては、メトトレキサート、シクロスポリンＡ（例えば、シクロスポリンのミクロエマルジョンを含む）、タクロリムス、コルチコステロイド類、スタチン類、インターフェロン・ベータ、Ｒｅｍｉｃａｄｅ（Ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）、Ｅｎｂｒｅｌ（Ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）およびＨｕｍｉｒａ（Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５２】
例えば、慢性関節リウマチの治療では、本発明のｈｕＣＤ３抗体組成物が、コルチコステロイド類、メトトレキサート、シクロスポリンＡ、スタチン類、Ｒｅｍｉｃａｄｅ（Ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）、Ｅｎｂｒｅｌ（Ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）および／またはＨｕｍｉｒａ（Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ）と共に投与され得る。
【０１５３】
ブドウ膜炎の治療では、ｈｕＣＤ３抗体組成物は、例えば、コルチコステロイド類、メトトレキサート、シクロスポリンＡ、シクロホスファミドおよび／またはスタチン類と併用して投与することができる。同様に、クローン病または乾癬のような疾患に苦しむ患者は、本発明のｈｕＣＤ３抗体組成物およびＲｅｍｉｃａｉｄｅ（Ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）、および／またはＨｕｍｉｒａ（Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ）を併用して処置を受けることができる。
【０１５４】
多発性硬化症の患者は、本発明のｈｕＣＤ３抗体組成物を、例えば、グラチラマー・アセテート（Ｃｏｐａｘｏｎｅ）、インターフェロン・ベータ−１ａ（Ａｖｏｎｅｘ）、インターフェロン・ベータ−１ａ（Ｒｅｂｉｆ）、インターフェロン・ベータ−１ｂ（ＢｅｔａｓｅｒｏｎまたはＢｅｔａｆｅｒｏｎ）、ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）、デキサメタゾン（Ｄｅｃａｄｒｏｎ）、メチルプレドニゾロン（Ｄｅｐｏ−Ｍｅｄｒｏｌ）および／またはプレドニゾン（Ｄｅｌｔａｓｏｎｅ）および／またはスタチン類と併用して受けることができる。
【０１５５】
本発明は、免疫関連疾患に付随する症状または器官移植後の拒絶反応に付随する症状を治療または緩和する方法も提供する。例えば、本発明の組成物は、本明細書に記載された自己免疫疾患および炎症疾患のいずれかの症状を処置または緩和するために使うことができる。
【０１５６】
本発明の治療用組成物は、器官または組織移植における免疫抑制剤としても使われる。本明細書で使われている「免疫抑制剤」は、免疫系に対するその作用が、免疫反応（この反応が自然に起きるか、それとも人工的に引き起こされるか、この反応は先天性免疫系、適応免疫系、または両方の系の一部として起きるかどうかにかかわらない）に含まれる少なくとも１つの経路の活性の即時低下または遅延低下に導く薬剤を意味している。これらの免疫抑制ｈｕＣＤ３抗体組成物は、器官または組織の移植の前、移植の間、および／または移植の後に、被験体に投与される。例えば、本発明のｈｕＣＤ３抗体は、器官または組織移植後の拒絶反応を、治療または予防するために使われる。
【０１５７】
１つの実施例では、本発明の免疫抑制ｈｕＣＤ３抗体組成物は、例えば、上に記載されたＧＬＰ−１またはベータ細胞休止化合物などの第２の薬剤と併用して投与される。
【０１５８】
別の実施例では、これらの免疫抑制ｈｕＣＤ３抗体組成物は、種々の公知の抗炎症性化合物および／または免疫抑制化合物と共に投与される。本発明の免疫抑制ｈｕＣＤ３抗体と共に使用するのに適した抗炎症性化合物および／または免疫抑制化合物としては、メトトレキサート、シクロスポリンＡ（例えば、シクロスポリンのミクロエマルジョンを含む）、タクロリムス、コルチコステロイド類およびスタチン類が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５９】
本発明のさらに別の実施例では、ｈｕＣＤ３抗体は自己反応性抗体の存在を検出されたヒト個人に投与される。このような自己反応性抗体は、ヒト個人において内因的に発現された１つ以上のタンパク質に対して結合親和性を有する抗体として当該分野内で公知である。本発明の１つの態様では、ヒト個人は、具体的には、当該分野内で周知である１つ以上の自己免疫疾患に関与する自己反応性抗体の存在についてテストされる。１つの特定の実施形態では、ヒト患者は、インスリン、グルタミン酸デカルボキシラーゼおよび／またはＩＡ−２タンパク質に対する抗体の存在についてテストされ、次いで、１つ以上のこのような自己反応性抗体が陽性と検出されると、ｈｕＣＤ３抗体を投与される。
【０１６０】
本発明の別の実施形態では、ヒトの組織への免疫細胞の補充を予防、低減または減少するためにヒトである被験体にｈｕＣＤ３抗体が投与される。本発明のｈｕＣＤ３抗体は、ヒトの疾患の組織部位への異常または無秩序な免疫細胞の補充に付随する状態を予防および処置するために、ｈｕＣＤ３抗体を必要とする被験体に投与される。
【０１６１】
本発明の別の実施形態では、ヒト組織への免疫細胞の溢出および漏出を予防、軽減および／または減少するために、ヒト被験体にｈｕＣＤ３抗体が投与される。したがって、本発明のｈｕＣＤ３抗体は、ヒトの疾患の組織部位への異常または無秩序な免疫細胞の浸潤に付随する状態を予防および／または処置するために投与される。
【０１６２】
本発明の別の実施形態では、ｈｕＣＤ３抗体は、ヒト身体内のサイトカインの放出により媒介された効果を予防、軽減または減少するために、ヒト被験体に投与される。用語「サイトカイン」は、細胞表面上で細胞外レセプターに結合し、それにより細胞機能を調節する当該分野内で公知のすべてのヒトサイトカインを意味し、ＩＬ−２、ＩＦＮ−ｇ、ＴＮＦ−ａ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３を含むがこれらに限定されない。
【０１６３】
サイトカインの放出は、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）として公知の中毒状態をもたらし得、ＣＲＳは、例えば、ＡＴＧ（抗胸腺細胞グロブリン）およびＯＫＴ３（マウスの抗ヒトＣＤ３抗体）などの抗Т細胞抗体を使用した場合に起きる一般的な臨床的合併症である。この症候群は、血流中へのＴＮＦ、ＩＦＮ−ガンマおよびＩＬ−２などのサイトカインの過剰な放出によって特徴づけられる。ＣＲＳは、ＣＤ３への抗体の（抗体の可変領域を介した）結合、および他の細胞上におけるＦｃレセプターおよび／または補体レセプターへの抗体の（抗体の定常領域を介した）結合が同時に起こることの結果として生じ、それによりТ細胞の活性化によってサイトカインを放出し、低血圧、発熱および悪寒により特徴づけられる全身性炎症反応を生じる。ＣＲＳの症状としては、熱、悪寒、悪心、吐き気、低血圧および呼吸困難が挙げられる。したがって、本発明のｈｕＣＤ３抗体は、インビボの１種以上のサイトカインの異常な放出および産生を防止するために設計された１つ以上の変異を含む。
【０１６４】
本発明の別の実施形態では、ｈｕＣＤ３抗体は、ヒト身体内のサイトカインレセプターの放出により媒介された効果を予防、低減または減少するためにヒト被験体に投与される。用語「サイトカインレセプター」は、１つ以上のサイトカインに結合する、本明細書で規定される当該分野内のすべてのヒトサイトカインレセプターを意味し、前述のサイトカインを含むがこれらに限定されない。したがって、本発明のｈｕＣＤ３抗体は、ヒト身体内の１つ以上のサイトカインレセプターの異常な活性化、結合または連結反応により媒介された状態を処置および／または予防するために投与される。さらに、インビボのｈｕＣＤ３抗体の投与は、このようなヒト被験体内のサイトカインレセプターにより媒介される細胞内シグナル伝達を枯渇させるであろう。
【０１６５】
本発明の１つの態様では、ｈｕＣＤ３抗体は、膵臓のベータ細胞の機能の低下の際に、ヒト個人へ投与される。１つの実施形態では、該個人は、当該分野において公知であるベータ細胞機能、インスリン分泌またはｃ−ペプチドレベルについてテストされる。次いで、いずれかの指標が十分低下していることが分かると、ヒト個人は、ベータ細胞機能の自己免疫破壊のさらなる進行を防止するために十分な用量のｈｕＣＤ３抗体を投与される。
【０１６６】
（診断薬および予防薬の処方）
本発明の完全ヒト抗ＣＤ３ＭＡｂは、診断用処方物および予防要処方物において使われる。１つの実施形態では、本発明のｈｕＣＤ３  ＭＡｂは、前述の自己免疫疾患の１つを発症するリスクがある患者に投与される。１つ以上の前述の自己免疫疾患に対する患者の素因は、遺伝子型、血清学的マーカーまたは生化学的マーカーを用いて決めることができる。例えば、特定のＨＬＡサブタイプおよび血清学的抗体（インスリン、ＧＡＤ６５およびＩＡ−２に対して）の存在は、Ｉ型糖尿病を示している。
【０１６７】
本発明の別の実施形態では、ｈｕＣＤ３抗体は、前述の自己免疫疾患を１つ以上有すると診断されたヒト個人に投与される。診断されると、ｈｕＣＤ３抗体は、自己免疫の作用を和らげるか、または逆転するために投与される。このような１つの実施例においては、Ｉ型糖尿病と診断されたヒト個人は、膵臓の機能を回復し、膵臓内への自己免疫性浸潤の損傷を最小限に押さえるために十分な用量のｈｕＣＤ３抗体を投与される。別の実施形態において、慢性関節リウマチと診断されたヒト個人は、肢関節への免疫細胞の浸潤および肢関節の破壊を軽減するためにｈｕＣＤ３抗体を投与される。
【０１６８】
本発明の抗体は、患者試料中のＣＤ３の検出にも有用であり、したがって、診断薬としても有用である。例えば、本発明のｈｕＣＤ３抗体は、患者試料中のＣＤ３レベルを検出するために、生体外試験、例えば、ＥＬＩＳＡにおいて使われる。
【０１６９】
１つの実施形態では、本発明のｈｕＣＤ３抗体は、固体支持体（例えば、マイクロタイター・プレートのウェル）上に固定される。固定された抗体は、テスト試料中に存在し得る任意のＣＤ３の捕捉抗体として役立つ。固定された抗体を患者試料に接触させる前に、固体支持体は、分析物の非特異的吸着を防ぐためにミンクタンパク質またはアルブミンなどの遮断薬によりすすがれ、処理される。
【０１７０】
次いで、ウェルを、抗原を含む疑いのあるテスト試料または標準量の抗原を含む溶液で処理した。このような試料は、例えば、病理診断薬と考えられる抗原の循環レベルを有する疑いのある被験体からの血清試料である。テスト試料または標準試料をすすいだ後、固体支持体は、検出できるように標識化した二次抗体で処理される。標識化二次抗体は、検出抗体として役立つ。検出可能な標識のレベルは測定され、テスト試料中のＣＤ３抗原の濃度は、標準試料から作られた標準曲線と比較して決められる。
【０１７１】
インビトロ診断アッセイにおいて本発明のｈｕＣＤ３抗体を用いて得られた結果に基づいて、ＣＤ３抗原の発現レベルに基づいて、被験体の疾患（例えば、自己免疫疾患または炎症性疾患）の段階を決めることができることが、理解される。任意の疾患について、血液試料は、該疾患の種々の段階にあると診断された被験体、および／または該疾患の治療上の処置における種々の時点にある被験体から採取される。進行または治療の各段階について統計学的に有意な結果が得られる試料集団を用いて、各段階の特徴と考えられる抗原の濃度範囲が指定される。
【０１７２】
本明細書で引用されたすべての刊行物および特許文書は、あたかもこのような各刊行物または文書が、具体的且つ個別に、本明細書に参考として援用されることを示されたかのように、本明細書に参考として援用される。刊行物および特許文書の引用は、任意の刊行物および特許文書が適切な先行技術であることを承認する意図はなく、刊行物および特許文書の内容または日付を承認するものでもない。明細書により記述されている本発明は、本発明が種々の実施態様において実行することができ、前述の説明および以下に述べる実施例は例示のためのものであり、後に続く請求の範囲を制限するものではないことを、当業者は認めるであろう。
【実施例】
【０１７３】
行われた実験および得られた結果を含む以下の実施例は、例示するためだけのものであり、本発明を制限するものと解釈すべきではない。
【０１７４】
（実施例１：ｈｕＣＤ３抗体の作製）
免疫化戦略：完全ヒトｈｕＣＤ３抗体を作り出すために、２系列のトランスジェニックマウス（ＨｕＭａｂ（登録商標）マウスおよびＫＭＴＭマウス（Ｍｅｄａｒｅｘ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ  ＮＪ）を利用した。最初の免疫化戦略は、マウス抗体を作り出す文献から十分に立証されたプロトコルに従った。（例えば、Ｋｕｎｇ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ；２０６（４４１６）：３４７〜９（１９７９）；Ｋｕｎｇ  ＰＣ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｐｒｏｃ．（３  Ｓｕｐｐｌ  １）：１４１〜６（１９８０）；Ｋｕｎｇ  ＰＣ，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．３（３）：１７５〜８１（１９８１）を参照のこと）。当該分野で公知の標準プロトコルでは、ＨｕＭＡｂ（登録商標）マウスまたはＫＭＴＭマウスにおいて完全ヒトｈｕＣＤ３抗体を産生することはできなかった。例えば、以下の免疫化戦略は成功せず、ＨｕＭＡｂ（登録商標）マウスまたはＫＭＴＭマウスのいずれにも機能性抗体を産生しなかった。
【０１７５】
−胸腺細胞のみまたはＴ細胞のみを用いた免疫化
−組換えヒトＣＤ３物質のみを用いた免疫化
−Ｆｒｅｕｎｄのアジュバント中の組換えＣＤ３物質を用いた免疫化
−Ｆｒｅｕｎｄのアジュバント中の細胞を用いた免疫化
−胸腺細胞またはＴ細胞を可溶性ＣＤ３と共に投与した免疫化
−胸腺細胞またはＴ細胞を組換えＣＤ３発現細胞と共に投与した免疫化
これらの先行技術免疫化戦略が、ＨｕＭＡｂ（登録商標）マウスまたはＫＭＴＭマウスではなくＢＡＬＢ／ｃマウスで使われる場合、これらの方法は、ヒト抗ＣＤ３抗体ではなくマウスの抗ＣＤ３抗体を産生する。
【０１７６】
したがって、以下のパラメータを変えることにより新規な免疫付与方法を開発した。
【０１７７】
−用いた免疫原の種類
−注入の頻度
−用いたアジュバントの種類
−用いた同時刺激技術の種類
−用いた免疫化の経路
−融合に用いた二次リンパ組織の種類
例えば、（ｉ）ＣＤ３のみを発現するウイルス粒子を用いた免疫化、および（ｉｉ）Ｔ細胞、胸腺細胞と共に、または組換えＣＤ３を発現するためにトランスフェクトされた細胞と共に投与された同時刺激シグナル（例えば、ＣＤ４０、ＣＤ２７またはこれらの組み合わせ）を用いた免疫化、を含む一連の新規な免疫化戦略を開発した。
【０１７８】
本明細書では「過剰追加投与プロトコル」と呼ばれる第１の新規な免疫化戦略によって、ＨｕＭＡｂ（登録商標）マウス（Ｍｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）またはＫＭＴＭマウス（Ｍｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．，Ｋｉｒｉｎ）に、ヒト細胞、例えば、胸腺細胞またはＴ細胞を最初に注入することにより免疫化した。胸腺細胞および／またはＴ細胞の注入後、１〜８週間の範囲の時点で、１回またはそれ以上の「過剰追加投与」注射をマウスにした。過剰追加投与注射には、例えば、可溶性ＣＤ３タンパク質（例えば、組換え可溶性ＣＤ３タンパク質）、胸腺細胞またはＴ細胞の追加注射、ＣＤ３によりトランスフェクトされた細胞、高レベルのＣＤ３を発現するウイルス粒子、およびこれらの組み合わせが含まれるものとした。例えば、過剰追加投与注射には、可溶性ＣＤ３タンパク質とＣＤ３によりトランスフェクトされた細胞の組み合わせが含まれる。
【０１７９】
好ましくは、過剰追加投与免疫化プロトコルでは、免疫化されたマウスに、リンパ節および／または脾臓の融合の６日前と３日前の２回、最後の過剰追加投与注射をした。例えば、ＫＭマウスＴＭでは、融合組織は脾臓に由来し、ＨｕＭＡｂ（登録商標）マウスでは、融合組織は、リンパ節および／または脾臓組織に由来する。
【０１８０】
過剰追加投与免疫化プロトコルの１つの実施例では、１つのＨｕＭＡｂＴＭマウスを、０日、７日および２８日の３回、ヒト胸腺細胞（約１０６個の細胞）を用いて免疫化した。ヒトＣＤ３δ鎖およびε鎖（ＣＨＯ／ＣＤ３，約１０６個の細胞）をコードするｃＤＮＡを用いてトランスフェクトされたチャイニーズ卵巣細胞株（ＣＨＯ）を、次いで、４７日と６５日とに注入した。高いレベルのＣＤ３δεをその表面で発現するウイルス粒子を用いた別の追加免疫を、７９日にした。最後に、１２１日と１２４日とに可溶性組換えヒトＣＤ３δεを該マウスに注射し、１２７日にリンパ節の融合をした。
【０１８１】
すべての免疫化では、アジュバントとしてＲｉｂｉ（Ｃｏｒｉｘａ  Ｃｏｒｐ．，Ｓｅａｔｔｌｅ  ＷＡ）を皮下に与えた。全部で８．５×１０６個の細胞を融合した。４７０個のハイブリドーマから選別された７個だけが、完全ヒト抗ＣＤ３抗体を産生し、完全ヒト抗ＣＤ３抗体のすべては、ＩｇＭ分子であった。これらの抗ＣＤ３抗体のうち２つが、臨床治療候補薬として選択された（図１〜３）。
【０１８２】
過剰追加投与免疫化プロトコルの第２の実施例では、１匹のＫＭＴＭマウスに、０日および２５日に可溶性組換えヒトＣＤ３δεを用いて２度免疫付与した。次いで、４０日、４９日および５６日に追加免疫のためにヒト胸腺細胞（約１０６個の細胞）を使った。可溶性組換えＣＤ３δεを、７０日、７７日、８４日および９１日に２度注射した。ヒトＣＤ３δ鎖およびヒトＣＤ３ε鎖（ＥＬ４／ＣＤ３，約１０６個の細胞）をコードするｃＤＮＡを用いてトランスフェクトしたマウスＴ細胞株を、次いで、９８日に注射した。最後に、１０１日に可溶性組み換えヒトＣＤ３δεを該マウスに注射し、１０４日に脾臓の融合をした。免疫化を、Ｒｉｂｉアジュバントを使用した７０日目を除いて、アジュバントとしてＡｌｕｍを腹腔内に投与した。０日、２５日、８４日および９１日にＣｐＧを同時刺激剤として使用した。全部で１．２７×１０８個の細胞を融合した。７４３個のハイブリドーマから選別された５個だけが、完全ヒト抗ＣＤ３抗体を産生し、産生された抗体のすべては、ＩｇＧ分子であった。これらの完全ヒト抗ＣＤ３抗体の１つは、臨床治療候補薬として選択された（図４）。
【０１８３】
選択基準：臨床治療候補薬は、次のような基準を用いて選択された。まず、ＣＤ３陽性細胞への抗体結合  対  ＣＤ３陰性細胞への抗体結合を分析した。この分析のために、Ｊｕｒｋａｔ  ＣＤ３陽性細胞（Ｊ＋）およびＪｕｒｋａｔ  ＣＤ３陰性細胞（Ｊ−）を種々の抗体を用いて培養し、結合をフローサイトメトリーにより評価した（図９Ａ）。第２に、競合試験において、ＣＤ３陽性細胞へのマウスの抗ヒトＯＫＴ３モノクローナル抗体の結合を阻害する候補抗体の能力をＪ＋細胞を用いて評価し、競合をフローサイトメトリーにより評価した（図９Ｂ）。次に、ＣＤ３の抗原性調節およびヒト末梢血Ｔ細胞の表面からのＴＣＲをフローサイトメトリーにより評価した（図９Ｃ）。最後に、Ｔ細胞増殖アッセイを、ＣＦＳＥを用いて着色したヒト末梢血Ｔ細胞を用いて行い、細胞分裂を、フローサイトメトリーにより評価した（図９Ｄ）。
【０１８４】
（実施例２：ヒト抗ＣＤ３抗体のイソ型切り替え）
実施例１に記載された新規なプロトコルを用いて産生されたいくつかのｈｕＣＤ３抗体は、ＩｇＭ抗体であった。これらのＩｇＭ抗体を、ＩｇＧ抗体、好ましくはＩｇＧ１抗体に「変換」した。例えば、ＩｇＭ抗体を、クローニング方法により変換し、該方法では、ＩｇＭ抗体をコードする遺伝子のＶＤＪ領域を、アロ型Ｆガンマ１をコードする遺伝子を含むベクターから得られたＩｇＧ１重鎖遺伝子にクローニングした。軽鎖の変換については、ＩｇＭ配列を、カッパ領域を含むベクター内にクローニングした。Ｍｅｄａｒｅｘマウス、例えば、ＨｕＭａｂ（登録商標）マウスでは、対立遺伝子排除の欠如により、多数の軽鎖を産生した。
【０１８５】
重鎖と軽鎖との各組み合わせを、製造者のガイドラインに従ってＦｕＧＥＮＥ６（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を用いて２９３Ｔ細胞にトランスフェクトした。分泌されたモノクローナル抗体を、最適化機能について（例えば、実施例１に記載された選択基準を用いて、標的抗原結合について）テストした。
【０１８６】
（実施例３：ｈｕＣＤ３抗体を用いた抗原性調節）
本発明のｈｕＣＤ３抗体は、抗原性調節をすることができ、該調節は、抗体結合により誘導されたＣＤ３−ＴＣＲ複合体の再分布および削除として規定されている。例えば、ＣＤ４を含むＴ細胞上の他の分子の細胞表面発現は、本発明の抗ＣＤ３抗体に曝露することにより改変されない（図９Ｃ）。
【０１８７】
（実施例４：ｈｕＣＤ３抗体により作製した傷害性サイトカイン放出症候群の低減）
好ましくは、本発明のｈｕＣＤ３抗体には、サイトカイン放出症候群を変えるような変異が、Ｆｃ領域において含まれる。上に記載されたように、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）は、一般的な急性合併症であり、ＡＴＧ（抗胸腺細胞グロブリン）およびＯＫＴ３（マウスのＣＤ３抗体）などの抗Ｔ細胞抗体を使用した場合に起きる。この症候群は、ＴＮＦ、ＩＦＮ−ガンマおよびＩＬ−２などのサイトカインの循環への過度の放出により特徴づけられる。活性化されたＴ細胞により放出されたサイトカインは、低血圧、発熱および悪寒により特徴づけられる、重篤な感染において見られるものに類似した型の全身性炎症反応を発症する。ＣＲＳの症状には、例えば、熱、悪寒、悪心、吐き気、低血圧および呼吸困難がある。
【０１８８】
本発明のｈｕＣＤ３抗体には、１つ以上の変異が含まれ、該変異は、インビボで、１つ以上のサイトカインの重鎖定常領域を媒介した生体内放出を防ぐ。１つの実施形態では、本発明のｈｕＣＤ３抗体は改変ＩｇＧγ１骨格に１つ以上の以下の変異を有するＩｇＧ分子である：”γ１Ｎ２９７Ａ”（２９７位のアスパラギン残基がアラニン残基で置換されている）、”γ１Ｌ２３４／Ａ，Ｌ２３５／Ａ”（２３４位および２３５位のロイシン残基がアラニン残基で置換されている）、”γ１Ｌ２３４／Ａ；Ｌ２３５／Ｅ”（２３４位のロイシン残基がロイシンで置換され、２３５位のロイシン残基がグルタミン酸残基で置換されている）、”γ１Ｌ２３５／Ｅ”（２３５位のロイシン残基がグルタミン酸残基で置換されている）、”γ１Ｄ２６５／Ａ”（２６５位のアスパラギン酸残基がアラニン残基で置換されている）。本明細書に記載された重鎖残基の番号は、例えば、米国特許第５，６２４，８２１および５，６４８，２６０号に示されているＥＵインデックス番号（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，”Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”，ＵＳ  Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ＆  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９８３）を参照のこと）である。なお、これらの特許の内容は、その全体が本明細書参考として援用される。
【０１８９】
本発明のｈｕＣＤ３抗体において使用されうる、他のＩｇＧγ１骨格の改変としては、例えば、３３０位のアラニン残基がセリン残基で置換されている”Ａ３３０／Ｓ”、および／または３３１位のプロリン残基がセリン残基で置換されている”Ｐ３３１／Ｓ”が挙げられる。
【０１９０】
Ｆｃ領域にＬ２３４Ｌ２３５からＡ２３４Ｅ２３５への変異を有する本発明の完全ヒトＣＤ３抗体は、独特の機能、即ち、ｈｕＣＤ３抗体の存在下でのサイトカイン放出の除去を有する。先行研究は、実際に、ＬからＥへの変異の使用から教示されている（例えば、Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００，ｐｐ．１６〜２６（２０００），ａｔ  ｐ．２３を参照のこと）。しかし、位置２３４および２３５におけるこれら２つの変異（即ち、Ｌ２３４Ｌ２３５からＡ２３４Ｅ２３５へ）は、末梢ヒト血液単球核インビトロ試験システムで評価されたように、サイトカイン放出症候群を除去した（図１１Ａ，１１Ｂ）。この試験では、末梢ヒト血液単球核は、フィコール勾配を用いて単離され、ＣＦＳＥで標識化される。ＣＦＳＥ標識化細胞を、次いで、９６ウェルプレートに入れた。種々の濃度に希釈されたモノクローナル抗体を添加し、３７℃で７２時間培養した。６時間後、５０μｌの上澄みを除去し、ＥＬＩＳＡによるＴＮＦ放出を評価した。４８時間後、５０μｌの上澄みを除去し、ＥＬＩＳＡによりＩＦＮ−γ放出を評価した。７２時間後、細胞を回収し、ＣＦＳＥ標識強度を用いてＦＡＣＳにより評価した。
【０１９１】
したがって、野生型重鎖とは対照的に、および他（例えば、ＴｏｌｅｒＸ（無グリコシル化変異），Ｂｌｕｅｓｔｏｎｅ（Ｌ２３４Ｌ２３５からＡ２３４Ａ２３５への変異）（例えば、米国特許第５，８８５，５７３号）を参照のこと）により記述された一連の他の変異体とは対照的に、これらはすべて有意なレベルのサイトカイン放出作用を保持し、本発明のｈｕＣＤ３抗体のＬ２３４Ｌ２３５からＡ２３４Ｅ２３５への変異はサイトカイン放出現象を示さない。残りのサイトカイン放出作用のレベルは、野生型Ｆｃについては１００％、Ｂｌｕｅｓｔｏｎｅ（Ｌ２３４Ｌ２３５からＡ２３４Ａ２３５への）変異については約５０〜６０％であり、および本明細書に記載されたＡｌａ／Ｇｌｕ  Ｆｃ変異体については検出できなかった（図１１Ａ，１１Ｂ）。
【０１９２】
（実施例５：ｈｕＣＤ３抗体−結合エピトープのペプチドアレイによる同定）
種々のモノクローナル抗体のエピトープに含まれるアミノ酸残基を決定するために、多数のペプチドの合成およびＥＬＩＳＡ選別を用いた。（例えば、Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，ｖｏｌ．１０２（２）：２５９〜７４（１９８７）を参照のこと）。本明細書に記載された実験では、ＣＤ３イプシロン鎖のアミノ酸配列に由来する重複ペプチドのアレイは、Ｊｅｒｉｎｉ（Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から購入し、次いで、本発明の完全ヒト抗ＣＤ３ｍＡｂによる結合パターンについてテストした。
【０１９３】
アレイ内のペプチドは、膜支持体上で直接化学合成する「スポット合成」技術を用いて作製した（Ｆｒａｎｋ  ａｎｄ  Ｏｖｅｒｗｉｎ，Ｍｅｔｈ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．ｖｏｌ．６６：１４９〜１６９（１９９６）；Ｋｒａｍｅｒ  ａｎｄ  Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ−Ｍｅｒｇｅｎｅｒ，Ｍｅｔｈ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．ｖｏｌ．８７：２５〜３９（１９９８）を参照のこと）。直鎖状１４量体ペプチドは、Ｎ末端を自由（即ち、非結合）なままにし、Ｃ末端によりＷｈａｔｍａｎ５０セルロース支持体に共有結合していた。標準ウエスタン・ブロッティング技術を用いて、これらの固体相結合ペプチドは、２８Ｆ１１モノクローナル抗体が、Ｎ末端に近接してアミノ酸の重複する組を認識していることを明らかにした（図１０）。
【０１９４】
（他の実施形態）
本発明は、本発明の詳細な説明と併せて記述されてきたが、前述の説明は例示することを意図しており、本発明の範囲を限定するものではなく、本発明の範囲は添付された特許請求の範囲により規定される。他の態様、利点、および変形態様は次の特許請求の範囲内にある。
【図１】
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【図２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図３−３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図９Ｄ】
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【図１０】
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【図１１】
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【配列表】
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【外国語明細書】
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