(57)【要約】      （修正有）【課題】３’末端キャップとして新規な化合物の提供。【解決手段】下式2019135236.tif 000237（ＸがＨ；ＯＨ；ＯＤＭＴ；カルボン酸；ＲＮＡｉ剤の鎖の３’末端；ＲＮＡｉ剤の鎖を含む分子の３’末端；ＹがＣＨ又はＮ；ｍが０又は１；ｐが１、２又は３；Ｒ３がＨ、２−（ヒドロキシ−メチル）−ベンジル、３−（ヒドロキシ−メチル）−ベンジル、スクシネート、又は固体担体；Ｒ４がＨ；Ｒ５がＨ；又はＲ４およびＲ５が、Ｒ４およびＲ５が結合されるフェニル環と一緒に、６Ｈ−ベンゾ［ｃ］クロメンを形成する）の化合物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉａ：
【化１】
2019135236.tif 000222
（式中：
Ｘが、Ｈ；ＯＨ（ここで、前記ヒドロキシル基が、任意選択的に、スクシネートとして
官能化されるかまたは固体担体に結合され得る）；ＯＤＭＴ；カルボン酸；ＲＮＡｉ剤の
鎖の３’末端；またはＲＮＡｉ剤の鎖を含む分子の３’末端であり、ここで、前記鎖の３
’末端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３
’の順に：スペーサ、および第２のホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカ
ーをさらに含み；
Ｙが、ＣＨまたはＮであり；
ｍが、０または１であり；
ｐが、１、２または３であり；
Ｒ３が、水素、２−（ヒドロキシ−メチル）−ベンジル、３−（ヒドロキシ−メチル）
−ベンジル、スクシネート、または固体担体であり；
ここで、（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｒ３部分が、３位または４位でフェニル環に結合され；
Ｒ４が水素であり；
Ｒ５が水素であり；または
Ｒ４およびＲ５が、Ｒ４およびＲ５が結合されるフェニル環と一緒に、６Ｈ−ベンゾ［
ｃ］クロメンを形成する）
の化合物。
【請求項２】
以下のもの：
【化２】
2019135236.tif 000223
【化３】
2019135236.tif 000224
から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式Ｉｂ：
【化４】
2019135236.tif 000225
（式中：
Ｘが、Ｈ；ＯＨ（ここで、前記ヒドロキシル基が、任意選択的に、スクシネートとして
官能化されるかまたは固体担体に結合され得る）；ＯＤＭＴ；カルボン酸；ＲＮＡｉ剤の
鎖の３’末端；またはＲＮＡｉ剤の鎖を含む分子の３’末端であり、ここで、前記鎖の３
’末端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３
’の順に：スペーサ、および第２のホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカ
ーをさらに含み；
ｑが、０、１または２であり；
Ｒ６が、非置換であるかまたはベンゾキシおよび３，４−ジヒドロキシブチルから選択
される基で置換されるフェニルであり；
Ｒ７が、水素またはヒドロキシ−エチルであり、ここで、Ｒ７がヒドロキシ−エチルで
ある場合、前記ヒドロキシルは、任意選択的に、スクシネートとして官能化されるかまた
は固体担体に結合され得；
Ｒ８が、水素またはメトキシであり；
Ｙ１が、ＣＨまたはＮであり；
Ｙ２が、ＮまたはＣＲ９であり；ここで、Ｒ９が、水素およびメチルから選択される）
の化合物。
【請求項４】
以下のもの：
【化５】
2019135236.tif 000226
【化６】
2019135236.tif 000227
【化７】
2019135236.tif 000228
【化８】
2019135236.tif 000229
から選択される、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
以下のもの：
【化９】
2019135236.tif 000230
（式中：
Ｘが、Ｈ；ＯＨ（ここで、前記ヒドロキシル基が、任意選択的に、スクシネートとして
官能化されるかまたは固体担体に結合され得る）；ＯＤＭＴ；カルボン酸；ＲＮＡｉ剤の
鎖の３’末端；またはＲＮＡｉ剤の鎖を含む分子の３’末端であり、ここで、前記鎖の３
’末端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３
’の順に：スペーサ、および第２のホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカ
ーをさらに含み、
ｑが、１および２から選択される）
から選択される化合物。
【請求項６】
ＲＮＡｉ剤の鎖の３’末端をキャッピングするための方法であって、
前記ＲＮＡｉ剤を、以下のもの：
【化１０】
2019135236.tif 000231
【化１１】
2019135236.tif 000232
【化１２】
2019135236.tif 000233
【化１３】
2019135236.tif 000234
【化１４】
2019135236.tif 000235
（式中：
Ｘが、Ｈ、ＯＨ、ＯＤＭＴおよびカルボキシレートから選択され、前記ヒドロキシル基
が、任意選択的に、スクシネートとして官能化されるかまたは固体担体に結合され得る）
から選択される化合物と反応させる工程と；
固相合成法を用いて、ＸをＲＮＡｉ剤の鎖で置換する工程；または
固体担体上にＲＮＡｉ剤鎖を構築する工程と；
前記鎖を前記化合物と反応させる工程と、
前記固体担体から前記ＲＮＡｉ剤鎖を切断する工程と
を含む方法。
【請求項７】
Ｘが、Ｈ、ＯＨ、ＯＤＭＴまたはカルボキシレートであり、前記ヒドロキシル基が、任
意選択的に、スクシネートとして官能化されるかまたは固体担体に結合され得；Ｒ３が、
水素、２−（ヒドロキシ−メチル）−ベンジル、３−（ヒドロキシ−メチル）−ベンジル
、スクシネート、または固体担体である、式Ｉａの化合物。
【請求項８】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、少なくとも１つの鎖
の３’末端が、３’末端キャップを含み、前記３’末端キャップが、請求項１〜６のいず
れか一項に記載の化合物であり、Ｘが、前記第１または第２の鎖である組成物。
【請求項９】
前記ＲＮＡｉ剤の第１および／または第２の鎖が、約４９ヌクレオチド長以下である、
請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ＲＮＡｉ剤の第１および／または第２の鎖が、約３０ヌクレオチド長以下である、
請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
前記第１および／または第２の鎖が、１８または１９ヌクレオチド長である、請求項８
に記載の組成物。
【請求項１２】
前記第１の鎖が、アンチセンス鎖であり、１８または１９ヌクレオチド長である、請求
項８に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ＲＮＡｉ剤が、１つまたは２つの平滑末端を有する、請求項８に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ＲＮＡｉ剤が、少なくとも１つの５’末端または３’末端にオーバーハングを含む
、請求項８に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ＲＮＡｉ剤が、少なくとも１つの５’末端または３’末端に１〜６つのヌクレオチ
ドオーバーハングを含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ＲＮＡｉ剤が、スペーサを含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１７】
前記スペーサがリビトールである、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記スペーサが、リビトール、２’−デオキシ−リビトール、ジリビトール、２’−メ
トキシエトキシ−リビトール（２’−ＭＯＥを有するリビトール）、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、
Ｃ６、または４−メトキシブタン−１，３−ジオールである、請求項１６に記載の組成物
。
【請求項１９】
前記ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つのヌクレオチドが修飾される、請求項８に記載の組成
物。
【請求項２０】
前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチドが、２’アルコキシリボヌクレオチド、２’ア
ルコキシアルコキシリボヌクレオチド、または２’−フルオロリボヌクレオチドの中から
選択される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチドが、２’−ＯＭｅ、２’−ＭＯＥおよび２’−
Ｈから選択される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２２】
１つまたは複数のヌクレオチドが、修飾され、またはＤＮＡであり、またはペプチド核
酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、モルホリノヌクレオチド、トレオース核酸（Ｔ
ＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、アラビノース核酸（ＡＮＡ）、２’−フルオロアラ
ビノース核酸（ＦＡＮＡ）、シクロヘキセン核酸（ＣｅＮＡ）、無水ヘキシトール核酸（
ＨＮＡ）、および／またはアンロックド核酸（ＵＮＡ）によって置換され；および／また
は少なくとも１つのヌクレオチドが、修飾されたヌクレオシド間リンカー（例えば、ここ
で、ヌクレオチドの少なくとも１つのホスフェートが、修飾されたヌクレオシド間リンカ
ーによって置換される）を含み、ここで、前記修飾されたヌクレオシド間リンカーが、ホ
スホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロアミデート、ボラノホスホノエート
、アミドリンカー、および式（Ｉ）
【化１５】
2019135236.tif 000236
（式中、Ｒ３が、Ｏ−、Ｓ−、ＮＨ２、ＢＨ３、ＣＨ３、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ６〜１０
アリール、Ｃ１〜６アルコキシおよびＣ６〜１０アリール−オキシから選択され、ここで
、Ｃ１〜６アルキルおよびＣ６〜１０アリールが、非置換であるか、または任意選択的に
、ハロ、ヒドロキシルおよびＮＨ２から独立して選択される１〜３つの基で独立して置換
され；Ｒ４が、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、またはＣＨ２から選択される）
の化合物から選択される、請求項８に記載の組成物。
【請求項２３】
前記第１および／または第２の鎖の３’末端における最初の２つの塩基対合ヌクレオチ
ドが修飾される、請求項８に記載の組成物。
【請求項２４】
前記第１および／または第２の鎖の３’末端における最初の２つの塩基対合ヌクレオチ
ドが２’−ＭＯＥである、請求項８に記載の組成物。
【請求項２５】
前記第１および／または第２の鎖の３’末端ホスフェートが、修飾されたヌクレオシド
間リンカーによって置換される、請求項８に記載の組成物。
【請求項２６】
第１および／または前記第２の鎖が、センス鎖によって仲介されるＲＮＡ干渉の量を減
少させる５’末端キャップを含むセンス鎖である、請求項８に記載の組成物。
【請求項２７】
様々な請求項において、前記センス鎖が、選択される５’末端キャップ：５’ホスフェ
ートまたは５’−ＯＨを含まないヌクレオチド；５’ホスフェートまたは５’−ＯＨを含
まず、また２−ＯＭｅまたは２’−ＭＯＥ修飾を含むヌクレオチド；５’−デオキシ−２
’−Ｏ−メチル修飾；５’−ＯＭＥ−ｄＴ；ｄｄＴ；および５’−ＯＴｒ−ｄＴを含む請
求項。
【請求項２８】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、少なくとも１つの鎖
の３’末端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、３’末
端キャップをさらに含み、前記３’末端キャップが、式ＩａまたはＩｂの化合物または本
明細書における任意の表からの化合物から選択され、Ｘが、前記第１または第２の鎖、ま
たは本明細書に開示される任意の３’末端キャップであり；ここで：（ａ）前記第１およ
び／または第２の鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり、約３０ヌクレオチド長以下であり、１
９ヌクレオチド長、または１５〜４９ヌクレオチド長であり；（ｂ）任意選択的に、前記
ＲＮＡｉ剤が、１つまたは２つの平滑末端を有し、または前記ＲＮＡｉ剤が、少なくとも
１つの５’末端または３’末端に、オーバーハング、任意選択的に、１〜６つのヌクレオ
チドオーバーハングを含み；（ｃ）任意選択的に、一方または両方の鎖がＲＮＡであり、
または任意選択的に、前記ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つのヌクレオチドが修飾され、任意
選択的に、前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチドが、２’アルコキシリボヌクレオチド
、２’アルコキシアルコキシリボヌクレオチド、または２’−フルオロリボヌクレオチド
の中から選択され、任意選択的に、前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチドが、２’−Ｏ
Ｍｅ、２’−ＭＯＥおよび２’−Ｈから選択され；任意選択的に、前記第１および／また
は第２の鎖の３’末端における最初の２つの塩基対合ヌクレオチドが修飾され、任意選択
的に、前記第１および／または第２の鎖の３’末端における最初の２つの塩基対合ヌクレ
オチドが２’−ＭＯＥであり；任意選択的に、１つまたは複数のヌクレオチドが、修飾さ
れ、またはＤＮＡであり、またはペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、モ
ルホリノヌクレオチド、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、アラビ
ノース核酸（ＡＮＡ）、２’−フルオロアラビノース核酸（ＦＡＮＡ）、シクロヘキセン
核酸（ＣｅＮＡ）、無水ヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、および／またはアンロックド核酸
（ＵＮＡ）によって置換され；（ｄ）少なくとも１つのヌクレオチドが、修飾されたヌク
レオシド間リンカーを含み、ここで、前記修飾されたヌクレオシド間リンカーが、ホスホ
ロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロアミデート、ボラノホスホノエート、ア
ミドリンカー、および式（Ｉ）の化合物から選択され；任意選択的に、前記第１および／
または第２の鎖の３’末端ホスフェートが、修飾されたヌクレオシド間リンカーによって
置換され；および／または（ｅ）任意選択的に、前記第１または第２の鎖が、センス鎖に
よって仲介されるＲＮＡ干渉の量を減少させる５’末端キャップを含むセンス鎖であり、
任意選択的に、前記５’末端キャップが、５’ホスフェートまたは５’−ＯＨを含まない
ヌクレオチドから選択され；５’ホスフェートまたは５’−ＯＨを含まず、また２−ＯＭ
ｅまたは２’−ＭＯＥ修飾を含むヌクレオチド；５’−デオキシ−２’−Ｏ−メチル修飾
；５’−ＯＭＥ−ｄＴ；ｄｄＴ；および５’−ＯＴｒ−ｄＴである組成物。
【請求項２９】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、少なくとも１つの鎖
の３’末端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’か
ら３’の順に：スペーサ、第２のホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー
、および３’末端キャップをさらに含み、前記３’末端キャップが、本明細書に開示され
る任意の３’末端キャップであり、または式ＩａまたはＩｂの化合物または本明細書にお
ける任意の表からの化合物から選択され、Ｘが、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオ
シド間リンカーで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、第２のホスフェートまたは修
飾されたヌクレオシド間リンカーをさらに含む前記第１または第２の鎖であり；ここで：
（ａ）前記第１および／または第２の鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり、約３０ヌクレオチ
ド長以下であり、１９ヌクレオチド長、または１５〜４９ヌクレオチド長であり；（ｂ）
任意選択的に、前記ＲＮＡｉ剤が、１つまたは２つの平滑末端を有し、または前記ＲＮＡ
ｉ剤が、少なくとも１つの５’末端または３’末端に、オーバーハング、任意選択的に、
１〜６つのヌクレオチドオーバーハングを含み；（ｃ）任意選択的に、一方または両方の
鎖がＲＮＡであり、または任意選択的に、前記ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つのヌクレオチ
ドが修飾され、任意選択的に、前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチドが、２’アルコキ
シリボヌクレオチド、２’アルコキシアルコキシリボヌクレオチド、または２’−フルオ
ロリボヌクレオチドの中から選択され、任意選択的に、前記少なくとも１つの修飾ヌクレ
オチドが、２’−ＯＭｅ、２’−ＭＯＥおよび２’−Ｈから選択され；任意選択的に、前
記第１および／または第２の鎖の３’末端における最初の２つの塩基対合ヌクレオチドが
修飾され、任意選択的に、前記第１および／または第２の鎖の３’末端における最初の２
つの塩基対合ヌクレオチドが２’−ＭＯＥであり；任意選択的に、１つまたは複数のヌク
レオチドが、修飾され、またはＤＮＡであり、またはペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド
核酸（ＬＮＡ）、モルホリノヌクレオチド、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸
（ＧＮＡ）、アラビノース核酸（ＡＮＡ）、２’−フルオロアラビノース核酸（ＦＡＮＡ
）、シクロヘキセン核酸（ＣｅＮＡ）、無水ヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、および／また
はアンロックド核酸（ＵＮＡ）によって置換され；（ｄ）前記スペーサが、リビトール、
２’−デオキシ−リビトール、ジリビトール、２’−メトキシエトキシ−リビトール（２
’−ＭＯＥを有するリビトール）、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、または４−メトキシブタン
−１，３−ジオールであり；（ｅ）少なくとも１つのヌクレオチドが、修飾されたヌクレ
オシド間リンカーを含み、ここで、前記修飾されたヌクレオシド間リンカーが、ホスホロ
チオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロアミデート、ボラノホスホノエート、アミ
ドリンカー、および式（Ｉ）の化合物から選択され；任意選択的に、前記第１および／ま
たは第２の鎖の３’末端ホスフェートが、修飾されたヌクレオシド間リンカーによって置
換され；および／または（ｆ）任意選択的に、前記第１または第２の鎖が、センス鎖によ
って仲介されるＲＮＡ干渉の量を減少させる５’末端キャップを含むセンス鎖であり、任
意選択的に、前記５’末端キャップが、５’ホスフェートまたは５’−ＯＨを含まないヌ
クレオチドから選択され；５’ホスフェートまたは５’−ＯＨを含まず、また２−ＯＭｅ
または２’−ＭＯＥ修飾を含むヌクレオチド；５’−デオキシ−２’−Ｏ−メチル修飾；
５’−ＯＭＥ−ｄＴ；ｄｄＴ；および５’−ＯＴｒ−ｄＴである組成物。
【請求項３０】
請求項２５に記載のＲＮＡｉ剤と、薬学的に許容できる担体とを含む組成物。
【請求項３１】
薬剤として使用するための、請求項２５に記載のＲＮＡｉ剤と、薬学的に許容できる担
体とを含む組成物。
【請求項３２】
細胞内の標的遺伝子のレベルおよび／または活性を阻害するかまたは低下させるための
方法であって、請求項２５に記載の１つまたは複数のＲＮＡｉ剤を前記細胞内に導入する
工程を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、新規な化合物および３’末端キャップとして新規な化合物を含むＲＮＡｉ剤
を含む組成物に関する。本開示は、このような組成物を作製するための方法、ならびにこ
のような組成物の、例えば、ＲＮＡ干渉を仲介するための、作製方法および使用にも関す
る。
【背景技術】
【０００２】
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、配列特異的な遺伝子サイレンシング機構である。このプロ
セスは、特定の配列を標的にするＲＮＡｉ剤を細胞内に導入することによって人工的に誘
発され得る。多くの構造が、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を含むがこれに限定されな
いＲＮＡｉ剤に好適である。ＲＮＡｉ剤は、修飾され得る二本鎖ＲＮＡを含む様々な構造
のいずれかを有し得る。
【０００３】
ＲＮＡｉ剤は、治療上の使用に望ましい。しかしながら、この使用は、血清中のこれら
の分子の分解によって媒介されることがある短い作用時間によって限られる。裸のＲＮＡ
ｉ剤は、数分間の半減期を有することが多い。Ｌａｙｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００４  Ｒ
ＮＡ  １０：７６６−７７１；Ｃｈｏｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．２００６  Ｂｉｏｃｈｅｍ．
Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．３４２：９１９−９２７；Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．
２００７  Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．１２２：２０９−２１６。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
したがって、ＲＮＡ干渉活性を妨げず、活性、血清中の生物学的半減期、および／また
は作用時間を増加させる、ＲＮＡｉ剤の新規な修飾が必要とされている。
【０００５】
これらの修飾を有するＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡ干渉機構を介した標的特異的なサイレンシ
ングの方法に有用であろう。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
一実施形態において、本開示は、式Ｉａ：
【化１】
2019135236.tif 000002
（式中：
Ｘが、Ｈ；ＯＨ（ここで、ヒドロキシル基が、任意選択的に、スクシネートとして官能
化されるかまたは固体担体に結合され得る）；ＯＤＭＴ；カルボン酸；ＲＮＡｉ剤の鎖の
３’末端；またはＲＮＡｉ剤の鎖を含む分子の３’末端であり、ここで、鎖の３’末端が
、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の順に
：スペーサ、および第２のホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーをさら
に含み；
Ｙが、ＣＨまたはＮであり；
ｍが、０または１であり；
ｐが、１、２または３であり；
Ｒ３が、水素、２−（ヒドロキシ−メチル）−ベンジル、３−（ヒドロキシ−メチル）
−ベンジル、スクシネート、または固体担体（例えば、ビーズまたは樹脂）であり；
ここで、（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｒ３部分が、３位または４位でフェニル環に結合され；
Ｒ４が水素であり；
Ｒ５が、水素であり；またはＲ４およびＲ５が、Ｒ４およびＲ５が結合されるフェニル
環と一緒に、６Ｈ−ベンゾ［ｃ］クロメンを形成する）
の化合物を包含する。ＯＤＭＴは、酸素原子を介して結合されるＤＭＴ（４，４’−ジメ
トキシトリチル）である。
【０００７】
本明細書に記載される様々な実施形態において、固体担体としては、限定はされないが
、ビーズ、樹脂、またはキャリアが挙げられる。いくつかの好適な固体担体は、化合物の
固定化に用いられ得る。好適な固体担体の例としては、アガロース、セルロース、デキス
トラン（例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅとして市販されている）カルボ
キシメチルセルロース、ポリスチレン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ろ紙、ニト
ロセルロース、イオン交換樹脂、プラスチックフィルム、ポリアミンメチルビニルエーテ
ルマレイン酸コポリマー、ガラスビーズ、アミノ酸コポリマー、エチレン−マレイン酸コ
ポリマー、ナイロン、絹などが挙げられる。
【０００８】
様々な実施形態において、式Ｉａの化合物は、表１Ａから選択される。
【０００９】
【表１】
2019135236.tif 000003
【００１０】
【表２】
2019135236.tif 000004
【００１１】
一実施形態において、本開示は、式Ｉｂ：
【化２】
2019135236.tif 000005
（式中：
Ｘが、Ｈ；ＯＨ（ここで、ヒドロキシル基が、任意選択的に、スクシネートとして官能
化されるかまたは固体担体に結合され得る）；ＯＤＭＴ；カルボン酸；ＲＮＡｉ剤の鎖の
３’末端；またはＲＮＡｉ剤の鎖を含む分子の３’末端であり、ここで、鎖の３’末端が
、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の順に
：スペーサ、および第２のホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーをさら
に含み；
ｑが、０、１または２であり；
Ｒ６が、非置換であるかまたはベンゾキシおよび３，４−ジヒドロキシブチルから選択
される基で置換されるフェニルであり；
Ｒ７が、水素またはヒドロキシ−エチルであり、ここで、Ｒ７がヒドロキシ−エチルで
ある場合、ヒドロキシルは、任意選択的に、スクシネートとして官能化されるかまたは固
体担体に結合され得；
Ｒ８が、水素またはメトキシであり；
Ｙ１が、ＣＨまたはＮであり；
Ｙ２が、ＮまたはＣＲ９であり；ここで、Ｒ９が、水素およびメチルから選択される）
の化合物を包含する。
【００１２】
様々な実施形態において、Ｉｂの化合物は、表１Ｂから選択される。
【００１３】
【表３】
2019135236.tif 000006
【００１４】
【表４】
2019135236.tif 000007
【００１５】
【表５】
2019135236.tif 000008
【００１６】
【表６】
2019135236.tif 000009
【００１７】
様々な実施形態において、本開示は、表１Ｃから選択される化合物に関する。
【００１８】
【表７】
2019135236.tif 000010
【００１９】
式中：
Ｘが、Ｈ；ＯＨ（ここで、ヒドロキシル基が、任意選択的に、スクシネートとして官能
化されるかまたは固体担体に結合され得る）；ＯＤＭＴ；カルボン酸；ＲＮＡｉ剤の鎖の
３’末端；またはＲＮＡｉ剤の鎖を含む分子の３’末端であり、ここで、鎖の３’末端が
、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の順に
：スペーサ、および第２のホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーをさら
に含み、
ｑが、１および２から選択される。
【００２０】
一実施形態において、本開示は、ＲＮＡｉ剤の鎖の３’末端をキャッピングするための
方法であって、ＲＮＡｉ剤を、表１Ｄから選択される化合物と反応させる工程を含む方法
を包含する。
【００２１】
【表８】
2019135236.tif 000011
【００２２】
【表９】
2019135236.tif 000012
【００２３】
【表１０】
2019135236.tif 000013
【００２４】
【表１１】
2019135236.tif 000014
【００２５】
【表１２】
2019135236.tif 000015
【００２６】
【表１３】
2019135236.tif 000016
【００２７】
【表１４】
2019135236.tif 000017
【００２８】
【表１５】
2019135236.tif 000018
【００２９】
【表１６】
2019135236.tif 000019
【００３０】
式中：
Ｘが、Ｈ；ＯＨ（ここで、ヒドロキシル基が、任意選択的に、スクシネートとして官能
化されるかまたは固体担体に結合され得る）；ＯＤＭＴ；カルボン酸；ＲＮＡｉ剤の鎖の
３’末端；またはＲＮＡｉ剤の鎖を含む分子の３’末端であり、ここで、鎖の３’末端が
、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の順に
：スペーサ、および第２のホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーをさら
に含み、
ｑが、１および２から選択される。
【００３１】
様々な実施形態において、本開示は、表４に列挙されるものなどの、ＤＭＴリガンド、
スクシネートリガンドおよび／またはカルボキシレートリガンドに関する。これらは、式
ＩａまたはＩｂの化合物、本明細書における任意の表からの化合物を含む３’末端キャッ
プ、または本明細書に開示される任意の３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤を製造するの
に有用である。
【００３２】
様々な実施形態において、本開示は、式Ｉａ（式中、Ｘが、Ｈ；ＯＨ（ここで、ヒドロ
キシル基が、任意選択的に、スクシネートとして官能化されるかまたは固体担体に結合さ
れ得る）；ＯＤＭＴ；カルボン酸；ＲＮＡｉ剤の鎖の３’末端；およびＲＮＡｉ剤の鎖を
含む分子の３’末端から選択され、ここで、鎖の３’末端が、ホスフェートまたは修飾さ
れたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、および第２のホ
スフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーをさらに含み；Ｒ３が、水素、２−
（ヒドロキシ−メチル）−ベンジル、３−（ヒドロキシ−メチル）−ベンジルおよびスク
シネートから選択されるか、または固体担体（例えば、ビーズまたは樹脂）に結合される
）の化合物に関する。
【００３３】
様々な実施形態において、本開示は、式Ｉａ（式中、Ｘが、ＲＮＡｉ剤の鎖を含む分子
の３’末端であり、ここで、鎖の３’末端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシ
ド間リンカーで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、および第２のホスフェートまた
は修飾されたヌクレオシド間リンカーをさらに含む）の化合物に関する。
【００３４】
一実施形態において、本開示は、第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、
少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップが、式Ｉ
ａまたはＩｂ（式中、Ｘが、ＲＮＡｉ剤の鎖の３’末端である）の化合物、本明細書にお
ける任意の表からの化合物、または本明細書に開示される任意の３’末端キャップから選
択されるＲＮＡｉ剤を包含する。
【００３５】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤の第１および／または第２の鎖は、約４９ヌクレオチ
ド長以下である。
【００３６】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤の第１および／または第２の鎖は、約３０ヌクレオチ
ド長以下である。
【００３７】
一実施形態において、第１および／または第２の鎖は、１９ヌクレオチド長である。
【００３８】
一実施形態において、第１の鎖は、アンチセンス鎖であり、１９ヌクレオチド長である
。
【００３９】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、１つまたは２つの平滑末端を有する。
【００４０】
別の実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、少なくとも１つの５’末端または３’末端にオ
ーバーハングを含む。
【００４１】
別の実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、少なくとも１つの５’末端または３’末端に１
〜６つのヌクレオチドオーバーハングを含む。
【００４２】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、スペーサを含む。
【００４３】
一実施形態において、スペーサは、リビトールまたは他のタイプの脱塩基ヌクレオチド
である。
【００４４】
一実施形態において、スペーサは、リビトールまたは他のタイプの脱塩基ヌクレオチド
、２’−デオキシ−リビトール、ジリビトール、２’−メトキシエトキシ−リビトール（
２’−ＭＯＥを有するリビトール）、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、または４−メトキシブタ
ン−１，３−ジオールである。
【００４５】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つのヌクレオチドが修飾される。
【００４６】
一実施形態において、前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチドは、２’アルコキシリボ
ヌクレオチド、２’アルコキシアルコキシリボヌクレオチド、または２’−フルオロリボ
ヌクレオチドの中から選択される。別の実施形態において、前記少なくとも１つの修飾ヌ
クレオチドは、２’−ＯＭｅ、２’−ＭＯＥおよび２’−Ｈから選択される。様々な態様
において、ヌクレオチドサブユニットは、糖の２’位で化学修飾される。一態様において
、２’化学修飾は、ハロ、Ｃ１〜１０アルキル、Ｃ１〜１０アルコキシ、ハロなどから選
択される。特定の態様において、２’化学修飾は、−ＯＣＨ３（すなわち、「ＯＭｅ」）
、−ＯＣＨ２ＣＨ３（すなわち、「ＯＥｔ」）または−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３（すなわち
、メトキシエチルまたは「ＭＯＥ」）から選択されるＣ１〜１０アルコキシであり；また
はＦから選択されるハロである。
【００４７】
様々な実施形態において、１つまたは複数のヌクレオチドは、修飾され、またはＤＮＡ
であり、またはペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、モルホリノヌクレオ
チド、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、アラビノース核酸（ＡＮ
Ａ）、２’−フルオロアラビノース核酸（ＦＡＮＡ）、シクロヘキセン核酸（ＣｅＮＡ）
、無水ヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、および／またはアンロックド核酸（ＵＮＡ）によっ
て置換され；および／または少なくとも１つのヌクレオチドは、修飾されたヌクレオシド
間リンカー（例えば、ここで、ヌクレオチドの少なくとも１つのホスフェートが、修飾さ
れたヌクレオシド間リンカーによって置換される）を含み、ここで、修飾されたヌクレオ
シド間リンカーは、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロアミデート、
ボラノホスホネート、アミドリンカー、および式（Ｉ）の化合物（本明細書の他の箇所で
記載されるような）から選択される。
【００４８】
一実施形態において、第１および／または第２の鎖の３’末端における最初の２つの塩
基対合ヌクレオチドが修飾される。
【００４９】
一実施形態において、第１および／または第２の鎖の３’末端における最初の２つの塩
基対合ヌクレオチドが２’−ＭＯＥである。
【００５０】
一実施形態において、第１および／または第２の鎖の３’末端ホスフェートが、修飾さ
れたヌクレオシド間リンカーによって置換される。
【００５１】
別の実施形態において、第１または第２の鎖は、センス鎖によって仲介されるＲＮＡ干
渉の量を減少させる５’末端キャップを含むセンス鎖である。
【００５２】
様々な実施形態において、センス鎖は、選択される５’末端キャップ：５’ホスフェー
トまたは５’−ＯＨを含まないヌクレオチド；５’ホスフェートまたは５’−ＯＨを含ま
ず、また２−ＯＭｅまたは２’−ＭＯＥ修飾を含むヌクレオチド；５’−デオキシ−２’
−Ｏ−メチル修飾；５’−ＯＭＥ−ｄＴ；ｄｄＴ；および５’−ＯＴｒ−ｄＴを含む。
【００５３】
様々な実施形態において、本開示は、第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であっ
て、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、ここで、３’末端キャ
ップが、式ＩａまたはＩｂの化合物、本明細書における任意の表からの化合物、または本
明細書に開示される任意の３’末端キャップから選択され；任意選択的に、各鎖が、４９
−ｍｅｒ以下であり、任意選択的に、第１および／または第２の鎖が、約３０ヌクレオチ
ド長以下であり、および／または任意選択的に、第１および／または第２の鎖が、１９ヌ
クレオチド長であり；任意選択的に、ＲＮＡｉ剤が、１つまたは２つの平滑末端を有し、
またはＲＮＡｉ剤が、少なくとも１つの５’末端または３’末端に、オーバーハング、任
意選択的に、１〜６つのヌクレオチドオーバーハングを含み；ＲＮＡｉ剤が、任意選択的
に、スペーサを含み、任意選択的に、スペーサが、リビトールまたは他のタイプの脱塩基
ヌクレオチド、２’−デオキシ−リビトール、ジリビトール、２’−メトキシエトキシ−
リビトール（２’−ＭＯＥを有するリビトール）、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、または４−
メトキシブタン−１，３−ジオールであり；任意選択的に、一方または両方の鎖がＲＮＡ
であり、または任意選択的に、ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つのヌクレオチドが修飾され、
任意選択的に、前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチドが、２’アルコキシリボヌクレオ
チド、２’アルコキシアルコキシリボヌクレオチド、または２’−フルオロリボヌクレオ
チドの中から選択され、任意選択的に、前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチドが、２’
−ＯＭｅ、２’−ＭＯＥおよび２’−Ｈから選択され；任意選択的に、１つまたは複数の
ヌクレオチドが、修飾され、またはＤＮＡであり、またはペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロッ
クド核酸（ＬＮＡ）、モルホリノヌクレオチド、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール
核酸（ＧＮＡ）、アラビノース核酸（ＡＮＡ）、２’−フルオロアラビノース核酸（ＦＡ
ＮＡ）、シクロヘキセン核酸（ＣｅＮＡ）、無水ヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、および／
またはアンロックド核酸（ＵＮＡ）（非ヌクレオチド、Ｃ２’〜Ｃ３’結合が存在しない
非環式類似体）によって置換され；および／または少なくとも１つのヌクレオチドが、修
飾されたヌクレオシド間リンカーを含み、ここで、修飾されたヌクレオシド間リンカーが
、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロアミデート、ボラノホスホノエ
ート、アミドリンカー、および式（Ｉ）の化合物から選択され；任意選択的に、第１およ
び／または第２の鎖の３’末端における最初の２つの塩基対合ヌクレオチドが修飾され、
任意選択的に、第１および／または第２の鎖の３’末端における最初の２つの塩基対合ヌ
クレオチドが２’−ＭＯＥであり；任意選択的に、第１および／または第２の鎖の３’末
端ホスフェートが、修飾されたヌクレオシド間リンカーによって置換され；任意選択的に
、第１または第２の鎖が、センス鎖によって仲介されるＲＮＡ干渉の量を減少させる５’
末端キャップを含むセンス鎖であり、任意選択的に、５’末端キャップが、５’ホスフェ
ートまたは５’−ＯＨを含まないヌクレオチドから選択され；５’ホスフェートまたは５
’−ＯＨを含まず、また２−ＯＭｅまたは２’−ＭＯＥ修飾を含むヌクレオチド；５’−
デオキシ−２’−Ｏ−メチル修飾；５’−ＯＭＥ−ｄＴ；ｄｄＴ；および５’−ＯＴｒ−
ｄＴであるＲＮＡｉ剤を包含する。
【００５４】
互いに矛盾しない、本明細書に開示される様々な実施形態の様々な要素［例えば、組成
物および方法；および３’末端キャップの選択、（ＤＮＡなどによる）ヌクレオチド修飾
または置換、修飾のパターン、鎖長、オーバーハング、および／または５’末端キャップ
の存在または非存在および送達ビヒクル］が、組み合わされ得る。
【００５５】
一実施形態において、本発明は、上記の特性のいずれか１つまたは複数を有するＲＮＡ
ｉ剤を含む医薬組成物を提供する。
【００５６】
別の実施形態において、本発明は、薬剤として使用するための上記の特性のいずれか１
つまたは複数を有するＲＮＡｉ剤を提供する。
【００５７】
別の実施形態において、本開示は、阻害のための方法または細胞内の標的遺伝子のレベ
ルおよび／または活性を阻害するかまたは低下させるための方法であって、上記のいずれ
かのＲＮＡｉ剤の１つまたは複数を細胞内に導入する工程を含む方法に関する。
【００５８】
複数のＲＮＡｉ剤（同じまたは異なるタイプのＲＮＡｉ剤、および／または３’末端キ
ャップ、配列、長さ、オーバーハング、５’末端キャップ、ヌクレオチドの置換および／
または修飾および／または修飾のパターンなどの組合せを含み得る）が、別々に投与され
るかまたは同時投与され得る。複数のＲＮＡｉ剤が、同じ送達ビヒクル、同じタイプの送
達ビヒクル、または異なる送達ビヒクル中で投与され得る。
【００５９】
様々なさらなる実施形態が後述される。
【００６０】
本開示の１つまたは複数の態様の詳細が、添付の図面および以下の説明に記載されてい
る。互いに矛盾しない、本明細書に開示されるかまたは当該技術分野において公知の様々
な態様の要素（例えば、配列、修飾、置換、スペーサ、修飾されたヌクレオシド間リンカ
ー、末端キャップ、ＲＮＡｉ剤の組合せ、送達ビヒクル、ＲＮＡｉ剤および別の薬剤を含
む併用療法など）が、互いに組み合わされ得、ただし、１つまたは複数の薬剤はまだＲＮ
Ａ干渉を仲介することができる。例えば、本明細書に開示される任意のＲＮＡｉ剤配列が
、本明細書に開示される任意の一連の修飾または末端キャップと組み合わされ得る。同様
に、修飾、５’末端キャップ、および／または３’末端キャップの任意の組合せが、本明
細書に開示される任意のＲＮＡｉ剤配列とともに使用され得る。本明細書に開示される任
意のＲＮＡｉ剤は（修飾または末端キャップとの任意の組合せで、または修飾または末端
キャップのいずれもなく）、本明細書に開示される任意の他のＲＮＡｉ剤または他の治療
組成物または方法と組み合わされ得る。
【００６１】
本開示の他の特徴、目的、および利点が、本明細書、図面、および特許請求の範囲から
明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００６２】
【図１】実施例１に使用される３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤の構造および配列を示す。図１中の配列が、上から下へ、配列番号１および２（一般的な配列（ｇｅｎｅｒｉｃ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ））；ならびに３および４（アンチセンスおよびセンスＦ７）によって表される。３’末端キャップ（「Ｘ」）の構造が、本明細書および／または米国特許第８，０８４，６００号明細書に提供されている。
【図２】ＲＮＡｉ剤がＲＮＡ干渉を仲介するのを可能にする際の、実施例１に記載される３’末端キャップ（Ｃ３、Ｃ６、Ｃ１２、グリコール、シクロヘキシル、フェニル、ビフェニル、リトコール、Ｃ７アミノまたはＣ３アミノ）を含むＲＮＡｉ剤の有効性を示す。３’末端キャップ（「Ｘ」）の構造が、本明細書および／または米国特許第８，０８４，６００号明細書に提供されている。
【図３】血清中のヌクレアーゼ分解を減少させおよび／または防止する際の、実施例１に記載される３’末端キャップの有効性を示す。
【図４】実施例１に使用される様々なＲＮＡｉ剤の品質管理を示す。
【図５−１】実施例３Ａに記載されるように、ガイド鎖上に３’末端キャップ：ＢＰ（ビフェニル）、Ｃ６、Ｘ０２７、Ｘ０３８、Ｘ０５０、Ｘ０５１、Ｘ０５２、Ｘ０５８、Ｘ０５９、Ｘ０６０、Ｘ０６１、Ｘ０６２、Ｘ０６３、Ｘ０６４、Ｘ０６５、Ｘ０６６、Ｘ０６７、Ｘ０６８、およびＸ０６９を含む様々なＲＮＡｉ剤によって仲介されるインビトロＲＮＡ干渉またはＫＤ（ノックダウン）を示す、残りの発現レベル（ｒｅｓｉｄｕａｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｌｅｖｅｌ）を示す。これらのＲＮＡｉ剤は、２’−ＭＯＥクランプを有さないか（−）または２’−ＭＯＥクランプを有し（ＭＯＥ）；またはリビトールスペーサを有さないか（−）またはリビトールスペーサを有する（ｒｉｂ）。図５Ａについての説明は、図５Ｂの下に提供されており、このデータは、実施例３Ａに関する。これらは、ヘプシジンに対するＲＮＡｉ剤である。
【図５−２】実施例３Ａに記載されるように、ガイド鎖上に３’末端キャップ：ＢＰ（ビフェニル）、Ｃ６、Ｘ０２７、Ｘ０３８、Ｘ０５０、Ｘ０５１、Ｘ０５２、Ｘ０５８、Ｘ０５９、Ｘ０６０、Ｘ０６１、Ｘ０６２、Ｘ０６３、Ｘ０６４、Ｘ０６５、Ｘ０６６、Ｘ０６７、Ｘ０６８、およびＸ０６９を含む様々なＲＮＡｉ剤によって仲介されるインビトロＲＮＡ干渉またはＫＤ（ノックダウン）を示す、残りの発現レベル（ｒｅｓｉｄｕａｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｌｅｖｅｌ）を示す。これらのＲＮＡｉ剤は、２’−ＭＯＥクランプを有さないか（−）または２’−ＭＯＥクランプを有し（ＭＯＥ）；またはリビトールスペーサを有さないか（−）またはリビトールスペーサを有する（ｒｉｂ）。図５Ａについての説明は、図５Ｂの下に提供されており、このデータは、実施例３Ａに関する。これらは、ヘプシジンに対するＲＮＡｉ剤である。
【図６−１】図５Ａおよび５Ｂおよび実施例３Ａなどに示されるデータにおいて使用されるＲＮＡｉ剤の一部を詳細に説明する。図６Ａ中の配列は、上から下へ、配列番号５〜１０（４００）、１１〜１６（４０２）および１７（４００  ２１−ｍｅｒ）によって表される。図６Ｂ中の配列は、上から下へ、配列番号１８〜２３（４００）；２４〜２９（４０２）および３０（４００  ２１−ｍｅｒ）によって表される。これらは、ヘプシジンに対するＲＮＡｉ剤である。
【図６−２】図５Ａおよび５Ｂおよび実施例３Ａなどに示されるデータにおいて使用されるＲＮＡｉ剤の一部を詳細に説明する。図６Ａ中の配列は、上から下へ、配列番号５〜１０（４００）、１１〜１６（４０２）および１７（４００  ２１−ｍｅｒ）によって表される。図６Ｂ中の配列は、上から下へ、配列番号１８〜２３（４００）；２４〜２９（４０２）および３０（４００  ２１−ｍｅｒ）によって表される。これらは、ヘプシジンに対するＲＮＡｉ剤である。
【図７】１．５７ｎＭ〜１５ｎＭの範囲の、３’末端キャップ（Ｃ６、ＢＰ、Ｘ０２７、Ｘ０５８、Ｘ０６７、Ｘ０３８、Ｘ０６９、またはＸ０５２）を含むＲＮＡｉ剤の残りの遺伝子活性（ｒｅｓｉｄｕａｌ  ｇｅｎｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）［ここで、残りの遺伝子活性＝１００％−ノックダウン（ＫＤ）］を示す。鎖のフォーマットが、実施例３Ａに記載されるように示される。これらは、マウスヘプシジンに対するＲＮＡｉ剤である。
【図８−１】ＡＢＩ  Ｈａｍｐ１  Ｔａｑｍａｎアッセイ（図８Ａ）およびＨａｍｐ１特異的Ｔａｑｍａｎアッセイ（図８Ｂ）の両方において、３’末端キャップを有するＲＮＡｉ剤の全てが、１×３ｍｇ／ｋｇの用量で、投与の４８時間後にインビボでノックダウンを仲介することができたことを示す。使用される３’末端キャップは、実施例３Ｂに記載されるように、対照としてのＣ６とともに、Ｘ０５２、Ｘ０５８、Ｘ０６７、Ｘ０３８、Ｘ０６９、およびＸ０２７であった。これらは、インビボで試験されるマウスヘプシジンに対するＲＮＡｉ剤である。
【図８−２】ＡＢＩ  Ｈａｍｐ１  Ｔａｑｍａｎアッセイ（図８Ａ）およびＨａｍｐ１特異的Ｔａｑｍａｎアッセイ（図８Ｂ）の両方において、３’末端キャップを有するＲＮＡｉ剤の全てが、１×３ｍｇ／ｋｇの用量で、投与の４８時間後にインビボでノックダウンを仲介することができたことを示す。使用される３’末端キャップは、実施例３Ｂに記載されるように、対照としてのＣ６とともに、Ｘ０５２、Ｘ０５８、Ｘ０６７、Ｘ０３８、Ｘ０６９、およびＸ０２７であった。これらは、インビボで試験されるマウスヘプシジンに対するＲＮＡｉ剤である。
【図９−１】Ｘ０５８  ３’末端キャップを含む二本鎖がまだ、実施例３Ｂに記載されるように、１×３ｍｇ／ｋｇの用量で、インビボで投与の１６８時間（７日）後の時点で（ヘプシジンノックダウンによって測定される）ＲＮＡ干渉を仲介することができたことを示す。
【図９−２】Ｃ６  ３’末端キャップを含む二本鎖の結合と比較して、Ａｇｏ２とのＸ０５８  ３’末端キャップを含む二本鎖の増加した結合を示す。これらは、インビボで試験されるマウスヘプシジンに対するＲＮＡｉ剤である。
【図１０】実施例３Ｂに示されるように、Ａ１６０およびＡ１６１フォーマットのＲＮＡｉ剤および様々な３’末端キャップ（Ｃ６またはＢＰ）またはリビトールスペーサおよび３’末端キャップ（ｒｉｂＣ６）のインビボでの比較を示す。これらは、ヒトヘプシジンＲＮＡｉ剤である。
【図１１】図１１（上部）は、１８−ｍｅｒ  ＲＮＡｉ剤フォーマットの非限定的な例を示す。「Ｌ」が、非ヌクレオチド「リガンド」を示し、例えば、様々な３’末端キャップのいずれかが使用され得る（例えば、ＰＡＺリガンド）。この一般的な配列は、配列番号３１および３２によって表される。図１１（真ん中）はまた、様々な鎖の３’末端において、５’から３’の順に、３’末端ホスフェートに結合された：リビトールスペーサ（ｒｉｂ）、ホスフェート（ｐ）および３’末端キャップ（Ｘ０５８またはＣ６）を含む１８−ｍｅｒ  ＲＮＡｉ剤の具体例を示す。これらの配列は、配列番号３３および３４（４００）および３５および３６（４０２）によって表される。様々な修飾も示される（下部）。
【図１２】スクシネート形態を用いた、３’末端キャップ（Ｘ０５８）を含むＲＮＡｉ剤の合成の非限定的な例を示す。
【図１３】Ｘ０５８、Ｘ１０９、Ｘ１１０、Ｘ１１１、Ｘ１１２およびＸ１１３  ３’末端キャップの構造を示す。ＴＦ−２６−ＢＣ５３は、ＲＮＡｉ剤を示し、これらの３’末端キャップは、任意の配列または標的の任意のＲＮＡｉ剤のいずれかまたは両方の鎖とともに使用され得る。
【図１４】３’末端キャップ（Ｃ６）；または、５’から３’の順に、スペーサ（Ｃ３）、ホスフェート（ｐ）および３’末端キャップ（Ｃ６）、またはＣ３ｐＣ６を含む様々なＲＮＡｉ剤のインビトロ有効性を示す。これらの配列は、上から下へ、配列番号３７〜４４によって表される。試験されるＲＮＡｉ剤は、マウスＶＩＩ因子に対するものである。
【図１５−１】図１５Ａおよび１５Ｂは、ＲＮＡｉ剤のためのいくつかの異なる修飾スキームを示す。これらのＲＮＡｉ剤は、３’末端キャップ（Ｃ３）を含む。図１５Ｂは、「ｗｔ」（野生型）および修飾されたＲＮＡｉ剤の文脈における修飾スキームを示し、ここで、ＲＮＡｉ剤は、３’末端キャップによって置換され得る、ヌクレオチドｄＴｄＴまたはｄＴｓｄＴオーバーハングを含む。図１５Ｃはまた、３’ジヌクレオチドオーバーハングまたは３’末端キャップ（Ｌ、または非ヌクレオチドリガンド）をさらに含み得る、１９ｂｐまたは１８ｂｐステム（二本鎖領域）の文脈における修飾スキームの例を示す。示される様々な修飾スキームが、本明細書に開示される３’末端キャップを含む様々なＲＮＡｉ剤とともに使用され得る。図１５Ａにおいて、一般的な配列は、上から下へ、配列番号４５〜４８によって表される。図１５Ｂにおいて、これらの配列は、上から下へ、配列番号４９〜５２によって表される。図１５Ｃにおいて、一般的な配列は、上から下へ、配列番号５３〜５６によって表される。図１５Ｃにおいて、一例において、二本鎖分子を保持するために、アンチセンス鎖における３’末端ヌクレオチドおよびセンス鎖における５’末端ヌクレオチドを取り除くことによって、１９−ｍｅｒの例が、１８−ｍｅｒに変更され得る。
【図１５−２】図１５Ａおよび１５Ｂは、ＲＮＡｉ剤のためのいくつかの異なる修飾スキームを示す。これらのＲＮＡｉ剤は、３’末端キャップ（Ｃ３）を含む。図１５Ｂは、「ｗｔ」（野生型）および修飾されたＲＮＡｉ剤の文脈における修飾スキームを示し、ここで、ＲＮＡｉ剤は、３’末端キャップによって置換され得る、ヌクレオチドｄＴｄＴまたはｄＴｓｄＴオーバーハングを含む。図１５Ｃはまた、３’ジヌクレオチドオーバーハングまたは３’末端キャップ（Ｌ、または非ヌクレオチドリガンド）をさらに含み得る、１９ｂｐまたは１８ｂｐステム（二本鎖領域）の文脈における修飾スキームの例を示す。示される様々な修飾スキームが、本明細書に開示される３’末端キャップを含む様々なＲＮＡｉ剤とともに使用され得る。図１５Ａにおいて、一般的な配列は、上から下へ、配列番号４５〜４８によって表される。図１５Ｂにおいて、これらの配列は、上から下へ、配列番号４９〜５２によって表される。図１５Ｃにおいて、一般的な配列は、上から下へ、配列番号５３〜５６によって表される。図１５Ｃにおいて、一例において、二本鎖分子を保持するために、アンチセンス鎖における３’末端ヌクレオチドおよびセンス鎖における５’末端ヌクレオチドを取り除くことによって、１９−ｍｅｒの例が、１８−ｍｅｒに変更され得る。
【図１５−３】図１５Ａおよび１５Ｂは、ＲＮＡｉ剤のためのいくつかの異なる修飾スキームを示す。これらのＲＮＡｉ剤は、３’末端キャップ（Ｃ３）を含む。図１５Ｂは、「ｗｔ」（野生型）および修飾されたＲＮＡｉ剤の文脈における修飾スキームを示し、ここで、ＲＮＡｉ剤は、３’末端キャップによって置換され得る、ヌクレオチドｄＴｄＴまたはｄＴｓｄＴオーバーハングを含む。図１５Ｃはまた、３’ジヌクレオチドオーバーハングまたは３’末端キャップ（Ｌ、または非ヌクレオチドリガンド）をさらに含み得る、１９ｂｐまたは１８ｂｐステム（二本鎖領域）の文脈における修飾スキームの例を示す。示される様々な修飾スキームが、本明細書に開示される３’末端キャップを含む様々なＲＮＡｉ剤とともに使用され得る。図１５Ａにおいて、一般的な配列は、上から下へ、配列番号４５〜４８によって表される。図１５Ｂにおいて、これらの配列は、上から下へ、配列番号４９〜５２によって表される。図１５Ｃにおいて、一般的な配列は、上から下へ、配列番号５３〜５６によって表される。図１５Ｃにおいて、一例において、二本鎖分子を保持するために、アンチセンス鎖における３’末端ヌクレオチドおよびセンス鎖における５’末端ヌクレオチドを取り除くことによって、１９−ｍｅｒの例が、１８−ｍｅｒに変更され得る。
【図１６−１】様々な３’末端キャップ：Ｘ０５８、Ｘ１０９、Ｘ１１０、Ｘ１１１、Ｘ１１２、Ｘ１１３、またはＣ６（陽性対照）のいずれかを含むＲＮＡｉ剤のインビトロ有効性を示す。
【図１６−２】この実験などに使用される分子の構造を示す。Ｘ１０９、Ｘ１１０、Ｘ１１１、Ｘ１１２、またはＸ１１３を含むＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖の５’末端にＤＮＡ修飾を含む。二本鎖は、２０〜２８の番号を付けられる。図１６Ｂ中の配列は、配列番号５７（第１の配列）および５８（第２の配列）によって表される。これらは、ＨｕＲ（ＥＬＡＶＬ１）に対するＲＮＡｉ剤である。配列は、ｈｓ（ヒト）１１８６と表記されるが、ヒト、マウスおよびラットの間で交差反応性である。
【図１７−１】ＲＮＡｉ剤の５’末端キャッピングに関連するデータを示す。図１７Ａは、２つの５’末端を示す。図１７Ｂは、ＨＡＭＰ  ＲＮＡｉ剤に対する５’末端キャッピングの影響を示す。図１７Ｃは、様々な５’末端キャップを示す。図１７Ｄは、様々な５’末端キャップおよび配列を示す。図１７Ａ中の配列は、上から下へおよび左から右へ、配列番号５９〜６６によって表される。図１７Ｃ中の配列は、上から下へ、配列番号６７〜７２によって表される。図１７Ｄおよび１７Ｆ中の二本鎖は、１０〜１５の番号を付けられる。
【図１７−２】ＲＮＡｉ剤の５’末端キャッピングに関連するデータを示す。図１７Ａは、２つの５’末端を示す。図１７Ｂは、ＨＡＭＰ  ＲＮＡｉ剤に対する５’末端キャッピングの影響を示す。図１７Ｃは、様々な５’末端キャップを示す。図１７Ｄは、様々な５’末端キャップおよび配列を示す。図１７Ａ中の配列は、上から下へおよび左から右へ、配列番号５９〜６６によって表される。図１７Ｃ中の配列は、上から下へ、配列番号６７〜７２によって表される。図１７Ｄおよび１７Ｆ中の二本鎖は、１０〜１５の番号を付けられる。
【図１７−３】ＲＮＡｉ剤の５’末端キャッピングに関連するデータを示す。図１７Ａは、２つの５’末端を示す。図１７Ｂは、ＨＡＭＰ  ＲＮＡｉ剤に対する５’末端キャッピングの影響を示す。図１７Ｃは、様々な５’末端キャップを示す。図１７Ｄは、様々な５’末端キャップおよび配列を示す。図１７Ａ中の配列は、上から下へおよび左から右へ、配列番号５９〜６６によって表される。図１７Ｃ中の配列は、上から下へ、配列番号６７〜７２によって表される。図１７Ｄおよび１７Ｆ中の二本鎖は、１０〜１５の番号を付けられる。
【図１７−４】ＲＮＡｉ剤の５’末端キャッピングに関連するデータを示す。図１７Ａは、２つの５’末端を示す。図１７Ｂは、ＨＡＭＰ  ＲＮＡｉ剤に対する５’末端キャッピングの影響を示す。図１７Ｃは、様々な５’末端キャップを示す。図１７Ｄは、様々な５’末端キャップおよび配列を示す。図１７Ａ中の配列は、上から下へおよび左から右へ、配列番号５９〜６６によって表される。図１７Ｃ中の配列は、上から下へ、配列番号６７〜７２によって表される。図１７Ｄおよび１７Ｆ中の二本鎖は、１０〜１５の番号を付けられる。
【図１７−５】ＲＮＡｉ剤の５’末端キャッピングに関連するデータを示す。図１７Ａは、２つの５’末端を示す。図１７Ｂは、ＨＡＭＰ  ＲＮＡｉ剤に対する５’末端キャッピングの影響を示す。図１７Ｃは、様々な５’末端キャップを示す。図１７Ｄは、様々な５’末端キャップおよび配列を示す。図１７Ａ中の配列は、上から下へおよび左から右へ、配列番号５９〜６６によって表される。図１７Ｃ中の配列は、上から下へ、配列番号６７〜７２によって表される。図１７Ｄおよび１７Ｆ中の二本鎖は、１０〜１５の番号を付けられる。
【図１７−６】ＲＮＡｉ剤の５’末端キャッピングに関連するデータを示す。図１７Ａは、２つの５’末端を示す。図１７Ｂは、ＨＡＭＰ  ＲＮＡｉ剤に対する５’末端キャッピングの影響を示す。図１７Ｃは、様々な５’末端キャップを示す。図１７Ｄは、様々な５’末端キャップおよび配列を示す。図１７Ａ中の配列は、上から下へおよび左から右へ、配列番号５９〜６６によって表される。図１７Ｃ中の配列は、上から下へ、配列番号６７〜７２によって表される。図１７Ｄおよび１７Ｆ中の二本鎖は、１０〜１５の番号を付けられる。
【図１７−７】ＲＮＡｉ剤の５’末端キャッピングに関連するデータを示す。図１７Ａは、２つの５’末端を示す。図１７Ｂは、ＨＡＭＰ  ＲＮＡｉ剤に対する５’末端キャッピングの影響を示す。図１７Ｃは、様々な５’末端キャップを示す。図１７Ｄは、様々な５’末端キャップおよび配列を示す。図１７Ａ中の配列は、上から下へおよび左から右へ、配列番号５９〜６６によって表される。図１７Ｃ中の配列は、上から下へ、配列番号６７〜７２によって表される。図１７Ｄおよび１７Ｆ中の二本鎖は、１０〜１５の番号を付けられる。
【図１７−８】ＲＮＡｉ剤の５’末端キャッピングに関連するデータを示す。図１７Ａは、２つの５’末端を示す。図１７Ｂは、ＨＡＭＰ  ＲＮＡｉ剤に対する５’末端キャッピングの影響を示す。図１７Ｃは、様々な５’末端キャップを示す。図１７Ｄは、様々な５’末端キャップおよび配列を示す。図１７Ａ中の配列は、上から下へおよび左から右へ、配列番号５９〜６６によって表される。図１７Ｃ中の配列は、上から下へ、配列番号６７〜７２によって表される。図１７Ｄおよび１７Ｆ中の二本鎖は、１０〜１５の番号を付けられる。
【図１８−１】実施例５に記載されるように、Ｃ６、Ｃ８またはＣ１０  ３’末端キャップを含む様々なＳＳＢ  ＲＮＡｉ剤の構造および有効性を示す。図１８Ｃは、ＲＮＡｉ剤鎖の３’末端の構造の例を示す。鎖は、ヌクレオチド（塩基を含む）およびジヌクレオチド（ｗｔまたは野生型）；または３’末端キャップ（Ｃ６、Ｃ８またはＣ１０）に結合された３’ホスフェートで終端する。これらの構造は、例えば、ＬＮＰ製剤化ＳＳＢ  ｓｉＲＮＡに使用されたが、任意の長さ、任意の配列または標的の任意のＲＮＡｉ剤に使用され得る。ＲＮＡｉ剤は、ＳＳＢ（シェーグレン症候群抗原Ｂ）に対するものであり、３’末端キャップ（Ｃ６、Ｃ８またはＣ１０）を有する１９−ｍｅｒを含む。ＳＳＢ−３０９  Ａ２２Ｓ２６と表記される化合物は、２１−ｍｅｒ対照である。実験は、マウスの生体内で行われた。図１８Ｂは、図１８Ａに示される棒グラフを作成するのに使用されるデータ点を示す。図１８Ｃはまた、３’末端ホスフェートが、示される化合物によって置換され得ることを示す。ＲＮＡｉ剤のいずれかまたは両方の鎖のホスフェートのいずれかが、示される化合物によって置換され得る。
【図１８−２】実施例５に記載されるように、Ｃ６、Ｃ８またはＣ１０  ３’末端キャップを含む様々なＳＳＢ  ＲＮＡｉ剤の構造および有効性を示す。図１８Ｃは、ＲＮＡｉ剤鎖の３’末端の構造の例を示す。鎖は、ヌクレオチド（塩基を含む）およびジヌクレオチド（ｗｔまたは野生型）；または３’末端キャップ（Ｃ６、Ｃ８またはＣ１０）に結合された３’ホスフェートで終端する。これらの構造は、例えば、ＬＮＰ製剤化ＳＳＢ  ｓｉＲＮＡに使用されたが、任意の長さ、任意の配列または標的の任意のＲＮＡｉ剤に使用され得る。ＲＮＡｉ剤は、ＳＳＢ（シェーグレン症候群抗原Ｂ）に対するものであり、３’末端キャップ（Ｃ６、Ｃ８またはＣ１０）を有する１９−ｍｅｒを含む。ＳＳＢ−３０９  Ａ２２Ｓ２６と表記される化合物は、２１−ｍｅｒ対照である。実験は、マウスの生体内で行われた。図１８Ｂは、図１８Ａに示される棒グラフを作成するのに使用されるデータ点を示す。図１８Ｃはまた、３’末端ホスフェートが、示される化合物によって置換され得ることを示す。ＲＮＡｉ剤のいずれかまたは両方の鎖のホスフェートのいずれかが、示される化合物によって置換され得る。
【図１８−３】実施例５に記載されるように、Ｃ６、Ｃ８またはＣ１０  ３’末端キャップを含む様々なＳＳＢ  ＲＮＡｉ剤の構造および有効性を示す。図１８Ｃは、ＲＮＡｉ剤鎖の３’末端の構造の例を示す。鎖は、ヌクレオチド（塩基を含む）およびジヌクレオチド（ｗｔまたは野生型）；または３’末端キャップ（Ｃ６、Ｃ８またはＣ１０）に結合された３’ホスフェートで終端する。これらの構造は、例えば、ＬＮＰ製剤化ＳＳＢ  ｓｉＲＮＡに使用されたが、任意の長さ、任意の配列または標的の任意のＲＮＡｉ剤に使用され得る。ＲＮＡｉ剤は、ＳＳＢ（シェーグレン症候群抗原Ｂ）に対するものであり、３’末端キャップ（Ｃ６、Ｃ８またはＣ１０）を有する１９−ｍｅｒを含む。ＳＳＢ−３０９  Ａ２２Ｓ２６と表記される化合物は、２１−ｍｅｒ対照である。実験は、マウスの生体内で行われた。図１８Ｂは、図１８Ａに示される棒グラフを作成するのに使用されるデータ点を示す。図１８Ｃはまた、３’末端ホスフェートが、示される化合物によって置換され得ることを示す。ＲＮＡｉ剤のいずれかまたは両方の鎖のホスフェートのいずれかが、示される化合物によって置換され得る。
【図１９】ジヌクレオチド（例えば、ＣＵオーバーハング）、またはジリビトール、リビトールおよびＸ０２７である３’末端キャップに結合されたＲＮＡｉ剤の３’末端ヌクレオチドの構造を示す。５’から３’の順に：スペーサ（リビトール）、第２のホスフェート、および３’末端キャップ（Ｃ６またはＸ０５８）に結合された３’末端ヌクレオチド（２’−ＭＯＥ）およびホスフェートの構造も示される。
【図２０−１】図２０ＡおよびＢは、様々な修飾を含む３’末端キャップおよび２’−ＭＯＥクランプの有効性を示す。様々なＲＮＡｉ剤において、両方の鎖の３’末端ホスフェート（ＰまたはＰＯ）は、ホスホロチオエート（ＰまたはＰＳ）によって置換され、３’末端キャップはＣ３である。対照ＲＮＡｉ剤は、３’末端キャップを含まず、３’末端ジヌクレオチド（ｄＴｐｄＴ、ここで、「ｐ」が、ホスフェートまたはホスホロチオエートである）を含む。図２０ＡおよびＢは、ホスホロチオエート−Ｃ３（ＰＳ−Ｃ３）の３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤の有効性を示す。図２０Ｃ、ＤおよびＥは、２’−ＭＯＥクランプを含むＲＮＡｉ剤の有効性を示し、ここで、５’から３’へと数えて最後の２つの塩基対合ｎｔが、ＲＮＡ、ＤＮＡ、２’−ＭＯＥ、２’−Ｆ、またはＬＮＡである。したがって、様々なＲＮＡｉ剤において、１つまたは複数のヌクレオチドが、ＬＮＡによって置換される。図２０Ｄおよび２０Ｅ中のＲＮＡｉ剤について、全ての試験されるＲＮＡｉ剤が有効であった。パーセンテージがノックダウンを表すのではなく、他のＲＮＡｉ剤に対するノックダウンを表すことが留意される。１００％は、例えば、これらの有効なＲＮＡｉ剤の全てのアンチセンス鎖の平均ノックダウンを表す。図２０Ａ中の配列は、上から下へ、配列番号７３〜８４によって表される。図２０Ｃ中の配列は、上から下へ、配列番号８５および８６によって表される。
【図２０−２】図２０ＡおよびＢは、様々な修飾を含む３’末端キャップおよび２’−ＭＯＥクランプの有効性を示す。様々なＲＮＡｉ剤において、両方の鎖の３’末端ホスフェート（ＰまたはＰＯ）は、ホスホロチオエート（ＰまたはＰＳ）によって置換され、３’末端キャップはＣ３である。対照ＲＮＡｉ剤は、３’末端キャップを含まず、３’末端ジヌクレオチド（ｄＴｐｄＴ、ここで、「ｐ」が、ホスフェートまたはホスホロチオエートである）を含む。図２０ＡおよびＢは、ホスホロチオエート−Ｃ３（ＰＳ−Ｃ３）の３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤の有効性を示す。図２０Ｃ、ＤおよびＥは、２’−ＭＯＥクランプを含むＲＮＡｉ剤の有効性を示し、ここで、５’から３’へと数えて最後の２つの塩基対合ｎｔが、ＲＮＡ、ＤＮＡ、２’−ＭＯＥ、２’−Ｆ、またはＬＮＡである。したがって、様々なＲＮＡｉ剤において、１つまたは複数のヌクレオチドが、ＬＮＡによって置換される。図２０Ｄおよび２０Ｅ中のＲＮＡｉ剤について、全ての試験されるＲＮＡｉ剤が有効であった。パーセンテージがノックダウンを表すのではなく、他のＲＮＡｉ剤に対するノックダウンを表すことが留意される。１００％は、例えば、これらの有効なＲＮＡｉ剤の全てのアンチセンス鎖の平均ノックダウンを表す。図２０Ａ中の配列は、上から下へ、配列番号７３〜８４によって表される。図２０Ｃ中の配列は、上から下へ、配列番号８５および８６によって表される。
【図２０−３】図２０ＡおよびＢは、様々な修飾を含む３’末端キャップおよび２’−ＭＯＥクランプの有効性を示す。様々なＲＮＡｉ剤において、両方の鎖の３’末端ホスフェート（ＰまたはＰＯ）は、ホスホロチオエート（ＰまたはＰＳ）によって置換され、３’末端キャップはＣ３である。対照ＲＮＡｉ剤は、３’末端キャップを含まず、３’末端ジヌクレオチド（ｄＴｐｄＴ、ここで、「ｐ」が、ホスフェートまたはホスホロチオエートである）を含む。図２０ＡおよびＢは、ホスホロチオエート−Ｃ３（ＰＳ−Ｃ３）の３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤の有効性を示す。図２０Ｃ、ＤおよびＥは、２’−ＭＯＥクランプを含むＲＮＡｉ剤の有効性を示し、ここで、５’から３’へと数えて最後の２つの塩基対合ｎｔが、ＲＮＡ、ＤＮＡ、２’−ＭＯＥ、２’−Ｆ、またはＬＮＡである。したがって、様々なＲＮＡｉ剤において、１つまたは複数のヌクレオチドが、ＬＮＡによって置換される。図２０Ｄおよび２０Ｅ中のＲＮＡｉ剤について、全ての試験されるＲＮＡｉ剤が有効であった。パーセンテージがノックダウンを表すのではなく、他のＲＮＡｉ剤に対するノックダウンを表すことが留意される。１００％は、例えば、これらの有効なＲＮＡｉ剤の全てのアンチセンス鎖の平均ノックダウンを表す。図２０Ａ中の配列は、上から下へ、配列番号７３〜８４によって表される。図２０Ｃ中の配列は、上から下へ、配列番号８５および８６によって表される。
【図２０−４】図２０ＡおよびＢは、様々な修飾を含む３’末端キャップおよび２’−ＭＯＥクランプの有効性を示す。様々なＲＮＡｉ剤において、両方の鎖の３’末端ホスフェート（ＰまたはＰＯ）は、ホスホロチオエート（ＰまたはＰＳ）によって置換され、３’末端キャップはＣ３である。対照ＲＮＡｉ剤は、３’末端キャップを含まず、３’末端ジヌクレオチド（ｄＴｐｄＴ、ここで、「ｐ」が、ホスフェートまたはホスホロチオエートである）を含む。図２０ＡおよびＢは、ホスホロチオエート−Ｃ３（ＰＳ−Ｃ３）の３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤の有効性を示す。図２０Ｃ、ＤおよびＥは、２’−ＭＯＥクランプを含むＲＮＡｉ剤の有効性を示し、ここで、５’から３’へと数えて最後の２つの塩基対合ｎｔが、ＲＮＡ、ＤＮＡ、２’−ＭＯＥ、２’−Ｆ、またはＬＮＡである。したがって、様々なＲＮＡｉ剤において、１つまたは複数のヌクレオチドが、ＬＮＡによって置換される。図２０Ｄおよび２０Ｅ中のＲＮＡｉ剤について、全ての試験されるＲＮＡｉ剤が有効であった。パーセンテージがノックダウンを表すのではなく、他のＲＮＡｉ剤に対するノックダウンを表すことが留意される。１００％は、例えば、これらの有効なＲＮＡｉ剤の全てのアンチセンス鎖の平均ノックダウンを表す。図２０Ａ中の配列は、上から下へ、配列番号７３〜８４によって表される。図２０Ｃ中の配列は、上から下へ、配列番号８５および８６によって表される。
【図２０−５】図２０ＡおよびＢは、様々な修飾を含む３’末端キャップおよび２’−ＭＯＥクランプの有効性を示す。様々なＲＮＡｉ剤において、両方の鎖の３’末端ホスフェート（ＰまたはＰＯ）は、ホスホロチオエート（ＰまたはＰＳ）によって置換され、３’末端キャップはＣ３である。対照ＲＮＡｉ剤は、３’末端キャップを含まず、３’末端ジヌクレオチド（ｄＴｐｄＴ、ここで、「ｐ」が、ホスフェートまたはホスホロチオエートである）を含む。図２０ＡおよびＢは、ホスホロチオエート−Ｃ３（ＰＳ−Ｃ３）の３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤の有効性を示す。図２０Ｃ、ＤおよびＥは、２’−ＭＯＥクランプを含むＲＮＡｉ剤の有効性を示し、ここで、５’から３’へと数えて最後の２つの塩基対合ｎｔが、ＲＮＡ、ＤＮＡ、２’−ＭＯＥ、２’−Ｆ、またはＬＮＡである。したがって、様々なＲＮＡｉ剤において、１つまたは複数のヌクレオチドが、ＬＮＡによって置換される。図２０Ｄおよび２０Ｅ中のＲＮＡｉ剤について、全ての試験されるＲＮＡｉ剤が有効であった。パーセンテージがノックダウンを表すのではなく、他のＲＮＡｉ剤に対するノックダウンを表すことが留意される。１００％は、例えば、これらの有効なＲＮＡｉ剤の全てのアンチセンス鎖の平均ノックダウンを表す。図２０Ａ中の配列は、上から下へ、配列番号７３〜８４によって表される。図２０Ｃ中の配列は、上から下へ、配列番号８５および８６によって表される。
【図２１】スペーサ［リビトール（ｒｉｂ）、Ｃ３または４−メトキシブタン−１，３−ジオール（Ａ５３００）である］；ホスフェート；およびＸ０５８である３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤の例の構造を示す。この図は、１８−ｍｅｒ  ＲＮＡｉ剤および特定の３’末端キャップの文脈におけるスペーサを示すが、このスペーサは、任意の長さ、配列または標的の任意のＲＮＡｉ剤鎖とともに、および任意の３’末端キャップとともに使用され得る。
【図２２】鎖を含むＲＮＡｉ剤の例のＲＮＡｉ剤活性の有効性および持続時間を示し、ここで、鎖の３’末端が、ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：リビトール（ｒｉｂ）、Ｃ３または４−メトキシブタン−１，３−ジオール（Ａ５３００）であるスペーサ；ホスフェート；およびＸ０５８またはＣ６である３’末端キャップをさらに含む。二本鎖は、１〜６の番号を付けられる。これらは、ＨｕＲ（ＥＬＡＶＬ１）に対するＲＮＡｉ剤である。ＵＮＴ：非処理（陰性対照）。ＮＴＣ：非標的対照（異なる標的を標的にする非関連ＲＮＡｉを用いた陰性対照）。
【図２３−１】Ｘ１０９、Ｘ１１０、Ｘ１１１、Ｘ１１２、Ｘ１１３、Ｘ１００９、Ｘ１０１０、Ｘ１０２４またはＸ１０２５（図２３Ａ）；Ｘ１０１１、Ｘ１０１２、Ｘ１０１３、Ｘ０５８、Ｘ１０１５、Ｘ１０１６、Ｘ１０１７、Ｘ１０２６、Ｘ１０２７（図２３Ｂ）：またはＸ１０１８；Ｘ１０１９、Ｘ１０２０、Ｘ１０２１、Ｘ１０２２またはＸ１０２８（図２３Ｃ）である３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤の有効性を示す。Ｃ３リンカー、Ｃ４リンカー、およびＣ５リンカーという用語は、３’末端キャップの部分を示す。
【図２３−２】Ｘ１０９、Ｘ１１０、Ｘ１１１、Ｘ１１２、Ｘ１１３、Ｘ１００９、Ｘ１０１０、Ｘ１０２４またはＸ１０２５（図２３Ａ）；Ｘ１０１１、Ｘ１０１２、Ｘ１０１３、Ｘ０５８、Ｘ１０１５、Ｘ１０１６、Ｘ１０１７、Ｘ１０２６、Ｘ１０２７（図２３Ｂ）：またはＸ１０１８；Ｘ１０１９、Ｘ１０２０、Ｘ１０２１、Ｘ１０２２またはＸ１０２８（図２３Ｃ）である３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤の有効性を示す。Ｃ３リンカー、Ｃ４リンカー、およびＣ５リンカーという用語は、３’末端キャップの部分を示す。
【図２３−３】Ｘ１０９、Ｘ１１０、Ｘ１１１、Ｘ１１２、Ｘ１１３、Ｘ１００９、Ｘ１０１０、Ｘ１０２４またはＸ１０２５（図２３Ａ）；Ｘ１０１１、Ｘ１０１２、Ｘ１０１３、Ｘ０５８、Ｘ１０１５、Ｘ１０１６、Ｘ１０１７、Ｘ１０２６、Ｘ１０２７（図２３Ｂ）：またはＸ１０１８；Ｘ１０１９、Ｘ１０２０、Ｘ１０２１、Ｘ１０２２またはＸ１０２８（図２３Ｃ）である３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤の有効性を示す。Ｃ３リンカー、Ｃ４リンカー、およびＣ５リンカーという用語は、３’末端キャップの部分を示す。
【図２４−１】Ｘ１１０、Ｘ１０１２、Ｘ１０１８、Ｘ１１１、Ｘ１０１３、Ｘ１１２、Ｘ０５８、Ｘ１０１９、Ｘ１０２５、Ｘ１０２７、またはＸ１０２８である３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤の有効性および持続時間を示す。
【図２４−２】Ｘ１１０、Ｘ１０１２、Ｘ１０１８、Ｘ１１１、Ｘ１０１３、Ｘ１１２、Ｘ０５８、Ｘ１０１９、Ｘ１０２５、Ｘ１０２７、またはＸ１０２８である３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤の有効性および持続時間を示す。
【発明を実施するための形態】
【００６３】
本開示は、式ＩａまたはＩｂの化合物、本明細書における任意の表からの化合物、また
は本明細書に開示される任意の３’末端キャップを含む新規な化合物に関する。
【００６４】
様々な実施形態において、本開示は、式ＩａまたはＩｂ（例えば、式中、Ｘが、Ｈまた
はＯＨである）の化合物、本明細書における任意の表からの化合物を含む３’末端キャッ
プ、または本明細書に開示される任意の３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤を製造するの
に有用である、表４に列挙されるものなどの、ＤＭＴリガンド、スクシネートリガンドお
よび／またはカルボキシレートリガンドに関する。
【００６５】
様々な実施形態において、本開示は、式Ｉａ（式中、Ｘが、Ｈ、ＯＨ、ＯＤＭＴ、カル
ボン酸、およびＲＮＡｉ剤の鎖の３’末端から選択され；；Ｒ３が、水素、２−（ヒドロ
キシ−メチル）−ベンジル、３−（ヒドロキシ−メチル）−ベンジルおよびスクシネート
から選択されるか、または固体担体（例えば、ビーズまたは樹脂）に結合される）の化合
物に関する。
【００６６】
様々な実施形態において、本開示は、本明細書においてＸ０５８（式中、Ｘが、Ｈ、Ｏ
Ｈ、ＯＤＭＴ、カルボン酸、およびＲＮＡｉ剤の鎖の３’末端から選択され；；Ｒ３が、
水素、２−（ヒドロキシ−メチル）−ベンジル、３−（ヒドロキシ−メチル）−ベンジル
およびスクシネートから選択されるか、または固体担体（例えば、ビーズまたは樹脂）に
結合される）と表記される化合物に関する。
【００６７】
様々な実施形態において、本開示は、第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であっ
て、第１および／または第２の鎖の３’末端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオ
シド間リンカーで終端し、Ｘ０５８である３’末端キャップをさらに含むＲＮＡｉ剤に関
する。この場合、Ｘが、第１または第２の鎖を表す。
【００６８】
一実施形態において、式ＩａおよびＩｂの化合物および表１Ａ、１Ｂまたは１Ｃの化合
物が、ＲＮＡｉ剤における３’末端キャップとして使用され得；これらの実施形態におい
て、Ｘが、ＲＮＡｉ剤鎖の３’末端である。
【００６９】
一実施形態において、本開示は、第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、
各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップ
（例えば、３’末端における修飾）を含み、３’末端キャップが、表１または２に列挙さ
れる３’末端キャップまたは他の形で本明細書に開示されるものから選択されるＲＮＡｉ
剤を包含する。
【００７０】
様々な実施形態において、本開示は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤
であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり、アンチセンス鎖の３’末端が、３’末端キ
ャップ（例えば、３’末端における修飾）を含み、３’末端キャップが、表１または２に
列挙される３’末端キャップまたは他の形で本明細書に開示されるものから選択されるＲ
ＮＡｉ剤を包含する。
【００７１】
様々な実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、二本鎖ＲＮＡであり得る。様々な実施形態に
おいて、１つまたは複数のＲＮＡヌクレオチドが、ＤＮＡ、ＰＮＡ、ＬＮＡ、モルホリノ
、ＴＮＡ、ＧＮＡ、ＡＮＡ、ＨＮＡ、ＣｅＮＡ、ＦＡＮＡ、および／またはＵＮＡによっ
て置換され得る。ある実施形態において、ＤＮＡ、または異なる骨格のヌクレオチド、ま
たはＰＮＡ、ＬＮＡ、モルホリノ、ＴＮＡ、ＧＮＡ、ＡＮＡ、ＨＮＡ、ＣｅＮＡ、ＦＡＮ
ＡによるＲＮＡの置換（ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔまたはｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）が、
「修飾」とみなされ得る。様々な実施形態において、１つまたは複数のホスフェートが、
ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロアミデート、ボラノホスホノエー
ト、アミドリンカーまたは式（Ｉ）の化合物（本明細書の他の箇所に記載されるような）
によって置換され得る。
【００７２】
様々な実施形態において、本開示は、第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であっ
て、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり、少なくとも１つの鎖の３’末端が、ホスフェート
（本明細書において「ｐ」または「ＰＯ」と表記される）または修飾されたヌクレオシド
間リンカーで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、第２のホスフェートまたは修飾さ
れたヌクレオシド間リンカー、および３’末端キャップをさらに含み、スペーサが、リビ
トール、２’−デオキシ−リビトール、ジリビトール、２’−メトキシエトキシ−リビト
ール（２’−ＭＯＥを有するリビトール）、またはＣ３、Ｃ４、Ｃ５またはＣ６または４
−メトキシブタン−１，３−ジオールであり；３’末端キャップが、表１または２に列挙
されるかまたは他の形で本明細書に開示される３’末端キャップから選択され；任意選択
的に、１つまたは複数のヌクレオチドが、修飾され、またはＤＮＡであり、またはペプチ
ド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、モルホリノヌクレオチド、トレオース核酸
（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、および／またはアンロックド核酸（ＵＮＡ）に
よって置換され；任意選択的に、１つまたは複数のヌクレオチドが、修飾されたヌクレオ
シド間リンカー（例えば、ここで、ヌクレオチドの少なくとも１つのホスフェートが、修
飾されたヌクレオシド間リンカーによって置換される）を含むＲＮＡｉ剤に関する。
【００７３】
本明細書に開示される３’末端キャップおよびスペーサは、長さ、配列または標的にか
かわらず、任意のＲＮＡｉ剤の一方または両方の鎖とともに使用され得る。
【００７４】
裸のｓｉＲＮＡ（例えば、開示されるように３’末端キャップを含まないもの）が、腸
液中の血清中で非常に短い生物学的半減期（多くの場合わずか数分間）を有することが知
られている。この短い半減期は、例えば、ヌクレアーゼによる分解に起因し得る。多くの
３’末端キャップが、ＲＮＡｉ剤に使用するために試験されてきたが、ほとんどは、（１
）ＲＮＡ干渉活性を可能にせず、（２）作用時間を増加させない（例えば、分解を減少さ
せない）。対照的に、本発明の３’末端キャップは、ＲＮＡ干渉を可能にし、ＲＮＡｉ剤
の持続時間を増加させる（例えば、分解を減少させる）ことができる。好ましい３’末端
キャップは、向上したノックダウン（ＲＮＡ干渉活性）、および／またはさらなる向上し
た作用時間を有する。何らかの特定の科学理論によって制約されるのを望むものではない
が、本開示は、これらの効果の一方または両方が、ダイサーのＰＡＺドメインとの特異的
相互作用からおよび／またはエキソヌクレアーゼ活性の低下による安定性の向上によって
得られ得ることを示唆している。
【００７５】
さらに、ＲＮＡｉ剤が二本鎖であるため、いずれかの鎖が、ＲＩＳＣ中に充填され得る
（ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体）。したがって、問題は、センス鎖が充填され得るが
、アンチセンス鎖のみが適切な配列を標的にすることである。「ＰＡＺリガンド」と表記
されるものを含む、本明細書に開示される新規な３’末端キャップが、アンチセンス鎖の
充填を補助し、それにより、効率、安定性および効果持続期間が向上される。したがって
、ある実施形態において、アンチセンス鎖の３’末端が、本明細書に開示される３’末端
キャップを含む。
【００７６】
本開示は、標的遺伝子の発現を低下させ、またはその遺伝子産物のレベルおよび／また
は活性を阻害するかまたは低下させる方法、またはインビトロでの、またはヒトなどの哺
乳動物などの生物における標的遺伝子の過剰発現に関連する疾病を治療する方法であって
、第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、各鎖が、４９−ｍｅ
ｒ以下であり、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップ（例えば、３’炭素
における修飾）を含み、３’末端キャップが、表１または２に列挙されるかまたは他の形
で本明細書に開示される３’末端キャップから選択される組成物を生理学的に活性な量で
ヒトに投与する工程を含む方法も包含する。
【００７７】
様々な３’末端キャップ（「ＰＡＺリガンド」と表記されるものを含む）の構造が、以
下の表１において、以下に示される。いくつかの３’末端キャップが「ＰＡＺリガンド」
と表記されているが、本開示が、何らかの特定の理論に制約されないことが留意される。
【００７８】
【表１７】
2019135236.tif 000020
【００７９】
【表１８】
2019135236.tif 000021
【００８０】
【表１９】
2019135236.tif 000022
【００８１】
【表２０】
2019135236.tif 000023
【００８２】
【表２１】
2019135236.tif 000024
【００８３】
【表２２】
2019135236.tif 000025
【００８４】
【表２３】
2019135236.tif 000026
【００８５】
【表２４】
2019135236.tif 000027
【００８６】
【表２５】
2019135236.tif 000028
【００８７】
【表２６】
2019135236.tif 000029
【００８８】
【表２７】
2019135236.tif 000030
【００８９】
【表２８】
2019135236.tif 000031
【００９０】
【表２９】
2019135236.tif 000032
【００９１】
表１の構造は、ＲＮＡｉ剤の一方または両方の鎖の３’末端にあり得る３’末端キャッ
プ（Ｘによって表される）を表す。ある実施形態において、３’末端キャップは、アンチ
センス鎖の３’末端にある。
【００９２】
表１の構造の特定の実施形態が、表２中で示される。
【００９３】
表１および２の構造において：
ある実施形態において、ヒドロキシル基が存在し、Ｘが、ＲＮＡｉ剤の鎖の３’末端を
表す。例えば、ＲＮＡｉの鎖の３’末端が、リン酸基で終端してもよく、リン酸基に３’
末端キャップが結合される。このような構造の非限定的な例が、例えば、図１５Ａ（Ｃ３
）、図１８Ｃ（Ｃ６、Ｃ８、およびＣ１０）；および図１９（Ｘ０２７、Ｃ６およびＸ０
５８）に示される。中でも特に、Ｘ０２７およびＸ０５８は、インビトロで１９−ｍｅｒ
において活性である。表２は、ＲＮＡｉ剤の鎖の３’末端でホスフェートに結合された様
々な３’末端キャップの構造を示す。非限定的な例として：Ｘ０５８は、インビトロおよ
びインビボの両方で、異なる長さ、配列および標的の様々な異なるＲＮＡｉ剤における機
能的な３’末端キャップであることが示されている（本明細書に示されるデータおよび示
されないデータ）。Ｘ０５８は、例えば、２１−ｍｅｒ平滑末端ＨｕＲ  ＲＮＡｉ剤にお
ける有効な３’末端キャップであり、ここで、各鎖が２１−ｍｅｒであり、２つの鎖が一
緒に、平滑末端二本鎖を形成し、各鎖の３’末端が、ホスフェートで終端し、Ｘ０５８で
ある３’末端キャップをさらに含む。Ｘ０５８は、１８−ｍｅｒフォーマットにおいてい
くつかの異なる標的および配列でも有効であった。例えば、第１および第２の鎖を含むい
くつかの有効なＲＮＡｉ剤が構築され、ここで、第１および第２の鎖は両方とも１８−ｍ
ｅｒであり、２つの鎖が一緒に平滑末端二本鎖を形成し、ガイド鎖の３’末端が、ホスフ
ェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の順に：スペー
サ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、およびＸ０５８である３’
末端キャップをさらに含む。第１および第２の鎖を含むいくつかの有効なＲＮＡｉ剤が構
築され、ここで、第１および第２の鎖は両方とも１８−ｍｅｒであり、２つの鎖が一緒に
平滑末端二本鎖を形成し、ガイド鎖の３’末端が、ホスフェートで終端し、５’から３’
の順に：スペーサ、ホスフェート、およびＸ０５８である３’末端キャップをさらに含む
。第１および第２の鎖を含むいくつかの有効なＲＮＡｉ剤が構築され、ここで、第１およ
び第２の鎖は両方とも１８−ｍｅｒであり、２つの鎖が一緒に平滑末端二本鎖を形成し、
ガイド鎖の３’末端が、ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：リビトールである
スペーサ、ホスフェート、およびＸ０５８である３’末端キャップをさらに含む。Ｘ０５
８は、他のＲＮＡｉ剤においても有効であった。したがって、Ｘ０５８は、インビボおよ
びインビトロの両方で、異なる長さ、標的、および配列の様々なＲＮＡｉ剤における有効
な３’末端キャップである。
【００９４】
ヒドロキシル基が存在するある実施形態において、ヒドロキシルは、保護された形態で
存在し得る。ＯＨのための好適な保護基が当該技術分野において公知である。ＯＨの保護
された形態としては、以下に限定はされないが、エーテル、リン酸エステル、メチルテト
ラアセチルグルクロネート、パーアセチルグリコシドおよびアミノ酸ポリペプチドエステ
ルが挙げられる。
【００９５】
スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末端キャ
ップを含む実施形態
ある実施形態において、ＲＮＡｉ剤の一方または両方の鎖が、３’末端でおよび５’か
ら３’の順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、およ
び３’末端キャップ（例えば、本明細書に開示される３’末端キャップ）をさらに含む。
【００９６】
したがって：
一実施形態において、Ｘが、ＲＮＡｉ剤の鎖を含む分子の３’末端であり、ここで、鎖
の３’末端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’か
ら３’の順に：スペーサ、および第２のホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リ
ンカーをさらに含む。様々な実施形態において、スペーサは、リビトール、２’−デオキ
シリビトール、または２’−メトキシエトキシリビトール（２’−ＭＯＥを有するリビト
ール）、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５またはＣ６、または４−メトキシブタン−１，３−ジオールで
ある。様々な実施形態が、以下により詳細に記載される。
【００９７】
スペーサ：リビトール、ジリビトール、２’−デオキシリビトール、２’−メトキシエト
キシリビトール、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、または４−メトキシブタン−１，３−ジオー
ル（５３００）
ある実施形態において、ＲＮＡｉ剤の一方または両方の鎖の３’末端が、ホスフェート
または修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホ
スフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末端キャップ（例えば
、本明細書に開示される３’末端キャップ）をさらに含む。スペーサは、２つの他の化学
部分の間；例えば、２つのホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーの間の
空間（例えば、適切または機能的な間隔）を生成または維持することが意図され、または
それに使用される化学部分である。スペーサは、例えば、リビトール、ジリビトール、２
’−デオキシリビトール、または２’−メトキシエトキシリビトール（２’−ＭＯＥを有
するリビトール）または当業者に公知の同等の脱塩基ヌクレオチド、または後述されるよ
うに、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５またはＣ６、または４−メトキシブタン−１，３−ジオールなど
の低級アルキルまたはアルコキシ基から選択され得る。
【００９８】
リビトールスペーサ
ある実施形態において、スペーサは、リビトールまたは他のタイプの脱塩基ヌクレオチ
ドである。
【００９９】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、鎖を含み、鎖の３’末端が、ホスフェートまたは
修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の順に：リビトールであるス
ペーサ、第２のホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末端
（例えば、本明細書に記載されるかまたは当該技術分野において公知の任意の３’末端キ
ャップ）をさらに含む。言い換えると：一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、５’から３
’の順に：３’末端ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーを含む鎖；リ
ビトールであるスペーサ；ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー；およ
び３’末端キャップ（例えば、本明細書に記載されるかまたは当該技術分野において公知
の任意の３’末端キャップ）を含む。したがって：一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、
５’から３’の順に：３’末端ホスフェートを含む鎖；リビトールであるスペーサ；ホス
フェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー；および３’末端キャップを含む。
【０１００】
３’末端ホスフェートおよびリビトールスペーサの構造が、本明細書に示される：
【化３】
2019135236.tif 000033
【０１０１】
ある文献において、リビトールスペーサは、Ｎ０２７（Ｃ０２７など）と表記される。
【０１０２】
一実施形態が、図１８に示され、ここで、ＲＮＡｉ剤が、５’から３’の順に：１８−
ｍｅｒ鎖を含み、１８−ｍｅｒ鎖の３’末端が、ホスフェートで終端し、５’から３’の
順に：リビトールであるスペーサ、ホスフェート、およびＸ０５８である３’末端キャッ
プをさらに含む。この構造は、任意の配列または標的の任意のＲＮＡｉ鎖上にあり得る。
さらに、本明細書に開示される任意の３’末端キャップが、Ｘ０５８の代わりに使用され
得る。
【０１０３】
関連する構造が、図１９に示され（「Ｘ０５８を有するリビトール」）、ここで、１８
−ｍｅｒ鎖の最後のヌクレオチドが示され（２’−ＭＯＥであり）、１８−ｍｅｒ鎖の３
’末端が、ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：リビトールであるスペーサ、第
２のホスフェート、およびＸ０５８である３’末端キャップをさらに含む。
【０１０４】
別の実施形態が、図１９に示され（「Ｃ６キャップを有するリビトール」）、ここで、
１８−ｍｅｒ鎖の最後のヌクレオチドが示され（２’−ＭＯＥであり）、１８−ｍｅｒ鎖
の３’末端が、ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：リビトールであるスペーサ
、ホスフェート、およびＣ６である３’末端キャップをさらに含む。
【０１０５】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、５’から３’の順に：３’ホスフェートで終端す
る１８−ｍｅｒ鎖、リビトールスペーサ、ホスフェート、およびＣ６  ３’末端キャップ
を含む。これは、表２中でｒｉｂｐＣ６（またはｒｉｂＣ６）として示される。
【０１０６】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、５’から３’の順に：３’ホスフェートで終端す
る１８−ｍｅｒ鎖、リビトールスペーサ、ホスフェート、およびＢＰ  ３’末端キャップ
を含む。これは、表２中でｒｉｂｐＢＰ（またはｒｉｂＢＰ）として示される。
【０１０７】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、５’から３’の順に：３’ホスフェートで終端す
る１８−ｍｅｒ鎖、リビトールスペーサ、ホスフェート、およびＣ１０  ３’末端キャッ
プを含む。これは、表２中でｒｉｂｐＣ１０（またはｒｉｂＣ１０）として示される。
【０１０８】
一実施形態が、図２１に示され、ここで、ＲＮＡｉ剤は、鎖を含み、鎖の３’末端が、
ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：リビトールであるスペーサ、ホスフェート
、およびＸ０５８である３’末端キャップをさらに含む。図２１に示される構造が、１８
−ｍｅｒ  ＲＮＡｉ剤である一方、この構造は、任意の長さ、配列または標的の任意のＲ
ＮＡｉ鎖上にあり得る。さらに、本明細書に開示される任意の３’末端キャップが、Ｘ０
５８の代わりに使用され得る。
【０１０９】
ある実施形態において、３’末端キャップはリビトールである。したがって、ＲＮＡｉ
剤は、１８−ｍｅｒ鎖を含み、１８−ｍｅｒ鎖の３’末端が、ホスフェートまたは修飾さ
れたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の順に：リビトールであるスペーサ
、第２のホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および第２のリビトー
ルである３’末端キャップをさらに含む。一実施形態において、１８−ｍｅｒ鎖の３’末
端が、ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：リビトールであるスペーサ、第２の
ホスフェート、および第２のリビトールである３’末端キャップをさらに含む。このよう
な構造は、図１９（３’末端ヌクレオチドおよびホスフェートを含む）に示され、「ジリ
ビトール」と表記される。
【０１１０】
様々な実施形態において、３’末端キャップは、トリエチレングリコール、シクロヘキ
シル、フェニル、ＢＰ（ビフェニル）、リトコール（リトコール酸）、アダマンタン、Ｃ
３アミノ、Ｃ７アミノ、Ｃ３、Ｃ６、Ｃ８、Ｃ１０、Ｃ１２、Ｘ０２７、Ｘ０３８、Ｘ０
５０、Ｘ０５１、Ｘ０５２、Ｘ０５８、Ｘ０５９、Ｘ０６０、Ｘ０６１、Ｘ０６２、Ｘ０
６３、Ｘ０６４、Ｘ０６５、Ｘ０６６、Ｘ０６７、Ｘ０６８、Ｘ０６９、Ｘ０９７、Ｘ０
９８、Ｘ１０９、Ｘ１１０、Ｘ１１１、Ｘ１１２、Ｘ１１３、Ｘ１００９、Ｘ１０１０、
Ｘ１０１１、Ｘ１０１２、Ｘ１０１３、Ｘ１０１５、Ｘ１０１６、Ｘ１０１７、Ｘ１０１
８、Ｘ１０１９、Ｘ１０２０、Ｘ１０２１、Ｘ１０２２、Ｘ１０２４、Ｘ１０２５、Ｘ１
０２６、Ｘ１０２７、Ｘ１０２８、Ｘ１０４７、Ｘ１０４８、Ｘ１０４９、Ｘ１０６２、
Ｘ１０６３、Ｘ１０６４、またはリビトール、または本明細書に開示されるかまたは当該
技術分野において公知の任意の３’末端キャップである。５’から３’の順に、３’末端
ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端する鎖、リビトールスペー
サ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末端キャップ（
例えば、前の文に列挙されるものを含むがこれらに限定されない本明細書に開示される任
意の３’末端キャップ）を含むＲＮＡｉ剤を含む構造は、二本鎖ＲＮＡを含むがこれに限
定されない、任意の長さ、配列または標的の任意のＲＮＡｉ剤上で使用され得、ここで、
任意選択的に、１つまたは複数のホスフェートが、修飾されたヌクレオシド間リンカーに
よって置換され、任意選択的に、１つまたは複数のヌクレオチドが修飾され、任意選択的
に、１つまたは複数のＲＮＡヌクレオチドが、ＤＮＡ、ＰＮＡ、ＬＮＡ、モルホリノ、Ｔ
ＮＡ、ＧＮＡ、ＡＮＡ、ＨＮＡ、ＣｅＮＡ、ＦＡＮＡ、および／またはＵＮＡによって置
換される。
【０１１１】
ジリビトールスペーサ
ある実施形態において、スペーサはジリビトールである。
【０１１２】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、鎖を含み、鎖の３’末端が、ホスフェートまたは
修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の順に：スペーサ（ここで、
スペーサは、５’から３’の順に：第１のリビトール；ホスフェートまたは修飾されたヌ
クレオシド間リンカー；第２のリビトール；ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド
間リンカーを含む）；および３’末端キャップをさらに含む。
【０１１３】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、５’から３’の順に：３’末端ホスフェートを含
む鎖；第１のリビトールスペーサ；ホスフェート；第２のリビトールスペーサ；ホスフェ
ートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー；および３’末端キャップを含む。３’末
端ホスフェート、第１のリビトール、ホスフェート、および第２のリビトールのこの構造
が、本明細書に示される：
【化４】
2019135236.tif 000034
【０１１４】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、５’から３’の順に：３’末端ホスフェートまた
は修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端する鎖、第１のリビトールスペーサ、ホスフ
ェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、第２のリビトールスペーサ、ホスフェ
ートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、およびリビトールである３’末端キャッ
プを含み；この構造は、トリリビトールと表記される。
【０１１５】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、５’から３’の順に：３’ホスフェートで終端す
る鎖、リビトールスペーサ、ホスフェート、およびＣ６  ３’末端キャップを含む。これ
は、表２中でｒｉｂｐＣ６（またはｒｉｂＣ６）として示される。
【０１１６】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、５’から３’の順に：３’ホスフェートで終端す
る鎖、リビトールスペーサ、ホスフェート、およびＢＰ  ３’末端キャップを含む。これ
は、表２中でｒｉｂｐＢＰ（またはｒｉｂＢＰ）として示される。
【０１１７】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、５’から３’の順に：３’ホスフェートで終端す
る鎖、リビトールスペーサ、ホスフェート、およびＣ１０  ３’末端キャップを含む。こ
れは、表２中でｒｉｂｐＣ１０（またはｒｉｂＣ１０）として示される。様々な実施形態
において、３’末端キャップは、トリエチレングリコール、シクロヘキシル、フェニル、
ＢＰ（ビフェニル）、リトコール（リトコール酸）、アダマンタン、Ｃ３アミノ、Ｃ７ア
ミノ、Ｃ３、Ｃ６、Ｃ８、Ｃ１０、Ｃ１２、Ｘ０２７、Ｘ０３８、Ｘ０５０、Ｘ０５１、
Ｘ０５２、Ｘ０５８、Ｘ０５９、Ｘ０６０、Ｘ０６１、Ｘ０６２、Ｘ０６３、Ｘ０６４、
Ｘ０６５、Ｘ０６６、Ｘ０６７、Ｘ０６８、Ｘ０６９、Ｘ０９７、Ｘ０９８、Ｘ１０９、
Ｘ１１０、Ｘ１１１、Ｘ１１２、Ｘ１１３、Ｘ１００９、Ｘ１０１０、Ｘ１０１１、Ｘ１
０１２、Ｘ１０１３、Ｘ１０１５、Ｘ１０１６、Ｘ１０１７、Ｘ１０１８、Ｘ１０１９、
Ｘ１０２０、Ｘ１０２１、Ｘ１０２２、Ｘ１０２４、Ｘ１０２５、Ｘ１０２６、Ｘ１０２
７、Ｘ１０２８、Ｘ１０４７、Ｘ１０４８、Ｘ１０４９、Ｘ１０６２、Ｘ１０６３、Ｘ１
０６４、または本明細書に開示されるかまたは当該技術分野において公知の任意の３’末
端キャップである。
【０１１８】
５’から３’の順に、３’末端ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー
で終端する鎖、第１のリビトールスペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド
間リンカー、第２のリビトールスペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間
リンカー、および３’末端キャップ（例えば、本明細書に開示される任意の３’末端キャ
ップ）を含むＲＮＡｉ剤を含む構造は、二本鎖ＲＮＡを含むがこれに限定されない、任意
の長さ、配列または標的の任意のＲＮＡｉ剤上で使用され得、ここで、任意選択的に、１
つまたは複数のホスフェートが、修飾されたヌクレオシド間リンカーによって置換され、
任意選択的に、１つまたは複数のヌクレオチドが修飾され、任意選択的に、１つまたは複
数のＲＮＡヌクレオチドが、ＤＮＡ、ＰＮＡ、ＬＮＡ、モルホリノ、ＴＮＡ、ＧＮＡ、Ａ
ＮＡ、ＨＮＡ、ＣｅＮＡ、ＦＡＮＡ、および／またはＵＮＡによって置換される。
【０１１９】
２’−メトキシエトキシリビトールスペーサ
ある実施形態において、スペーサは、２’−メトキシエトキシリビトールまたは他のタ
イプの脱塩基ヌクレオチドである。
【０１２０】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、鎖を含み、鎖の３’末端が、ホスフェートまたは
修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の順に：２’−メトキシエト
キシリビトールであるスペーサ、第２のホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リ
ンカー、および３’末端（例えば、本明細書に記載されるかまたは当該技術分野において
公知の任意の３’末端キャップ）をさらに含む。言い換えると：一実施形態において、Ｒ
ＮＡｉ剤は、５’から３’の順に：３’末端ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド
間リンカーを含む鎖；２’−メトキシエトキシリビトールであるスペーサ；ホスフェート
または修飾されたヌクレオシド間リンカー；および３’末端キャップ（例えば、本明細書
に記載されるかまたは当該技術分野において公知の任意の３’末端キャップ）を含む。し
たがって：一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、５’から３’の順に：３’末端ホスフェ
ートを含む鎖；２’−メトキシエトキシリビトールであるスペーサ；ホスフェートまたは
修飾されたヌクレオシド間リンカー；および３’末端キャップを含む。
【０１２１】
３’末端ホスフェートおよび２’−メトキシエトキシリビトールスペーサの構造が、本
明細書に示される：
【化５】
2019135236.tif 000035
【０１２２】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、５’から３’の順に：１８−ｍｅｒ鎖を含み、１
８−ｍｅｒ鎖の３’末端が、ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：２’−メトキ
シエトキシリビトールであるスペーサ、ホスフェート、およびＸ０５８である３’末端キ
ャップをさらに含む。この構造は、任意の配列または標的の任意のＲＮＡｉ鎖上にあり得
る。さらに、本明細書に開示される任意の３’末端キャップが、Ｘ０５８の代わりに使用
され得る。
【０１２３】
関連する構造は、Ｘ０５８を有する２’−メトキシエトキシリビトールであり、１８−
ｍｅｒ鎖の最後のヌクレオチドが２’−ＭＯＥであり、１８−ｍｅｒ鎖の３’末端が、ホ
スフェートで終端し、５’から３’の順に：２’−メトキシエトキシリビトールであるス
ペーサ、第２のホスフェート、およびＸ０５８である３’末端キャップをさらに含む。
【０１２４】
別の実施形態は、Ｃ６キャップを有する２’−メトキシエトキシリビトールであり、１
８−ｍｅｒ鎖の最後のヌクレオチドが２’−ＭＯＥであり、１８−ｍｅｒ鎖の３’末端が
、ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：２’−メトキシエトキシリビトールであ
るスペーサ、ホスフェート、およびＣ６である３’末端キャップをさらに含む。
【０１２５】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、５’から３’の順に：３’ホスフェートで終端す
る１８−ｍｅｒ鎖、２’−メトキシエトキシリビトールスペーサ、ホスフェート、および
Ｃ６  ３’末端キャップを含む。
【０１２６】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、５’から３’の順に：３’ホスフェートで終端す
る１８−ｍｅｒ鎖、２’−メトキシエトキシリビトールスペーサ、ホスフェート、および
ＢＰ  ３’末端キャップを含む。
【０１２７】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、５’から３’の順に：３’ホスフェートで終端す
る１８−ｍｅｒ鎖、２’−メトキシエトキシリビトールスペーサ、ホスフェート、および
Ｃ１０  ３’末端キャップを含む。
【０１２８】
別の実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、鎖を含み、鎖の３’末端が、ホスフェートで終
端し、５’から３’の順に：２’−メトキシエトキシリビトールであるスペーサ、ホスフ
ェート、およびＸ０５８である３’末端キャップをさらに含む。
【０１２９】
ある実施形態において、３’末端キャップは、２’−メトキシエトキシリビトールであ
る。したがって、ＲＮＡｉ剤は、１８−ｍｅｒ鎖を含み、１８−ｍｅｒ鎖の３’末端が、
ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の順に：
２’−メトキシエトキシリビトールであるスペーサ、第２のホスフェートまたは修飾され
たヌクレオシド間リンカー、および第２の２’−メトキシエトキシリビトールである３’
末端キャップをさらに含む。一実施形態において、１８−ｍｅｒ鎖の３’末端が、ホスフ
ェートで終端し、５’から３’の順に：２’−メトキシエトキシリビトールであるスペー
サ、第２のホスフェート、および第２の２’−メトキシエトキシリビトールである３’末
端キャップをさらに含む。
【０１３０】
様々な実施形態において、３’末端キャップは、トリエチレングリコール、シクロヘキ
シル、フェニル、ＢＰ（ビフェニル）、リトコール（リトコール酸）、アダマンタン、Ｃ
３アミノ、Ｃ７アミノ、Ｃ３、Ｃ６、Ｃ８、Ｃ１０、Ｃ１２、Ｘ０２７、Ｘ０３８、Ｘ０
５０、Ｘ０５１、Ｘ０５２、Ｘ０５８、Ｘ０５９、Ｘ０６０、Ｘ０６１、Ｘ０６２、Ｘ０
６３、Ｘ０６４、Ｘ０６５、Ｘ０６６、Ｘ０６７、Ｘ０６８、Ｘ０６９、Ｘ０９７、Ｘ０
９８、Ｘ１０９、Ｘ１１０、Ｘ１１１、Ｘ１１２、Ｘ１１３、Ｘ１００９、Ｘ１０１０、
Ｘ１０１１、Ｘ１０１２、Ｘ１０１３、Ｘ１０１５、Ｘ１０１６、Ｘ１０１７、Ｘ１０１
８、Ｘ１０１９、Ｘ１０２０、Ｘ１０２１、Ｘ１０２２、Ｘ１０２４、Ｘ１０２５、Ｘ１
０２６、Ｘ１０２７、Ｘ１０２８、Ｘ１０４７、Ｘ１０４８、Ｘ１０４９、Ｘ１０６２、
Ｘ１０６３、Ｘ１０６４、または２’−メトキシエトキシリビトール、または本明細書に
開示されるかまたは当該技術分野において公知の任意の３’末端キャップである。５’か
ら３’の順に、３’末端ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端す
る鎖、２’−メトキシエトキシリビトールスペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌク
レオシド間リンカー、および３’末端キャップ（例えば、前の文に列挙されるものを含む
がこれらに限定されない本明細書に開示される任意の３’末端キャップ）を含むＲＮＡｉ
剤を含む構造は、二本鎖ＲＮＡを含むがこれに限定されない、任意の長さ、配列または標
的の任意のＲＮＡｉ剤上で使用され得、ここで、任意選択的に、１つまたは複数のホスフ
ェートが、修飾されたヌクレオシド間リンカーによって置換され、任意選択的に、１つま
たは複数のヌクレオチドが修飾され、任意選択的に、１つまたは複数のＲＮＡヌクレオチ
ドが、ＤＮＡ、ＰＮＡ、ＬＮＡ、モルホリノ、ＴＮＡ、ＧＮＡ、ＡＮＡ、ＨＮＡ、ＣｅＮ
Ａ、ＦＡＮＡ、および／またはＵＮＡによって置換される。
【０１３１】
２’−デオキシリビトールスペーサ
ある実施形態において、スペーサは２’−デオキシリビトールである。
【０１３２】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、５’から３’の順に：３’ホスフェートまたは修
飾されたヌクレオシド間リンカー終端する鎖、２’−デオキシリビトール（２’−デオキ
シｒｉｂ）であるスペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、お
よび３’末端キャップを含む。
【０１３３】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、５’から３’の順に：３’ホスフェートで終端す
る鎖、２’−デオキシリビトール（２’−デオキシｒｉｂ）であるスペーサ、ホスフェー
トまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末端キャップを含む。３’末端
ホスフェートおよび２’−デオキシリビトールの構造が、本明細書に示される：
【化６】
2019135236.tif 000036
【０１３４】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、５’から３’の順に：３’末端ホスフェートを含
む鎖；第１のリビトールスペーサ；ホスフェート；第２のリビトールスペーサ；ホスフェ
ートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー；および３’末端キャップを含む。
【０１３５】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、５’から３’の順に：３’ホスフェートで終端す
る鎖、２’−デオキシリビトールスペーサ、ホスフェート、およびＣ１２  ３’末端キャ
ップを含む。これは、表２中でｒｉｂｐＣ１２（またはｒｉｂＣ１２）として示される。
この実施形態は、「２’デオキシｒｉｂＣ１２」と表記され、表２に示される。
【０１３６】
様々な実施形態において、３’末端キャップは、トリエチレングリコール、シクロヘキ
シル、フェニル、ＢＰ（ビフェニル）、リトコール（リトコール酸）、アダマンタン、Ｃ
３アミノ、Ｃ７アミノ、Ｃ３、Ｃ６、Ｃ８、Ｃ１０、Ｃ１２、Ｘ０２７、Ｘ０３８、Ｘ０
５０、Ｘ０５１、Ｘ０５２、Ｘ０５８、Ｘ０５９、Ｘ０６０、Ｘ０６１、Ｘ０６２、Ｘ０
６３、Ｘ０６４、Ｘ０６５、Ｘ０６６、Ｘ０６７、Ｘ０６８、Ｘ０６９、Ｘ０９７、Ｘ０
９８、Ｘ１０９、Ｘ１１０、Ｘ１１１、Ｘ１１２、Ｘ１１３、Ｘ１００９、Ｘ１０１０、
Ｘ１０１１、Ｘ１０１２、Ｘ１０１３、Ｘ１０１５、Ｘ１０１６、Ｘ１０１７、Ｘ１０１
８、Ｘ１０１９、Ｘ１０２０、Ｘ１０２１、Ｘ１０２２、Ｘ１０２４、Ｘ１０２５、Ｘ１
０２６、Ｘ１０２７、Ｘ１０２８、Ｘ１０４７、Ｘ１０４８、Ｘ１０４９、Ｘ１０６２、
Ｘ１０６３、Ｘ１０６４、または本明細書に開示されるかまたは当該技術分野において公
知の任意の３’末端キャップである。
【０１３７】
５’から３’の順に、３’末端ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー
で終端する鎖、２’−デオキシリビトールスペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌク
レオシド間リンカー、および３’末端キャップ（例えば、本明細書に開示される任意の３
’末端キャップ）を含むＲＮＡｉ剤を含む構造は、二本鎖ＲＮＡを含むがこれに限定され
ない、任意の長さ、配列または標的の任意のＲＮＡｉ剤上で使用され得、ここで、任意選
択的に、１つまたは複数のホスフェートが、修飾されたヌクレオシド間リンカーによって
置換され、任意選択的に、１つまたは複数のヌクレオチドが修飾され、任意選択的に、１
つまたは複数のＲＮＡヌクレオチドが、ＤＮＡ、ＰＮＡ、ＬＮＡ、モルホリノ、ＴＮＡ、
ＧＮＡ、ＡＮＡ、ＨＮＡ、ＣｅＮＡ、ＦＡＮＡ、および／またはＵＮＡによって置換され
る。
【０１３８】
Ｃ３スペーサ
ある実施形態において、スペーサはＣ３である。
【０１３９】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、５’から３’の順に：３’ホスフェートまたは修
飾されたヌクレオシド間リンカー終端する鎖、Ｃ３であるスペーサ、ホスフェートまたは
修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末端キャップを含む。
【０１４０】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、５’から３’の順に：３’ホスフェートで終端す
る鎖、Ｃ３であるスペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、お
よび３’末端キャップを含む。
【０１４１】
Ｃ３スペーサは、化学式−（ＣＨ２）３−で表される。３’末端ホスフェートおよびＣ
３スペーサの構造が、本明細書に示される：
【化７】
2019135236.tif 000037
【０１４２】
一実施形態が、図２１に示され、ここで、ＲＮＡｉ剤は、５’から３’の順に：３’ホ
スフェートで終端する鎖、Ｃ３スペーサ、ホスフェート、およびＸ０５８である３’末端
キャップを含む。図２１に示される構造が、１８−ｍｅｒ  ＲＮＡｉ剤である一方、この
構造は、任意の長さ、配列または標的の任意のＲＮＡｉ鎖上にあり得る。さらに、本明細
書に開示される任意の３’末端キャップが、Ｘ０５８の代わりに使用され得る。
【０１４３】
別の実施形態が、鎖を含むＶＩＩ因子に対するＲＮＡｉ剤の一部を示す図１４に示され
、ここで鎖が、ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：Ｃ３スペーサ、ホスフェー
トおよびＣ６である３’末端キャップをさらに含む。これは、「Ｃ３ｐＣ６オーバーハン
グ」と表記される。この構造は、任意の配列または標的の任意のＲＮＡｉ鎖上にあり得る
。さらに、本明細書に開示されるかまたは当該技術分野において公知の任意の３’末端キ
ャップが、Ｃ６の代わりに使用され得、任意の修飾されたヌクレオシド間リンカーが、ホ
スフェートの代わりに使用され得る。
【０１４４】
Ｃ３スペーサを含むＲＮＡｉ剤の有効性が、図２２に示される。鎖を含む２つの異なる
ＨｕＲ構築物を調製し、鎖の３’末端が、ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：
Ｃ３スペーサ、ホスフェートおよび３’末端キャップ（Ｃ６またはＸ０５８である）をさ
らに含む。これらの両方が、ＲＮＡ干渉を仲介することができた。
【０１４５】
様々な実施形態において、３’末端キャップは、トリエチレングリコール、シクロヘキ
シル、フェニル、ＢＰ（ビフェニル）、リトコール（リトコール酸）、アダマンタン、Ｃ
３アミノ、Ｃ７アミノ、Ｃ３、Ｃ６、Ｃ８、Ｃ１０、Ｃ１２、Ｘ０２７、Ｘ０３８、Ｘ０
５０、Ｘ０５１、Ｘ０５２、Ｘ０５８、Ｘ０５９、Ｘ０６０、Ｘ０６１、Ｘ０６２、Ｘ０
６３、Ｘ０６４、Ｘ０６５、Ｘ０６６、Ｘ０６７、Ｘ０６８、Ｘ０６９、Ｘ０９７、Ｘ０
９８、Ｘ１０９、Ｘ１１０、Ｘ１１１、Ｘ１１２、Ｘ１１３、Ｘ１００９、Ｘ１０１０、
Ｘ１０１１、Ｘ１０１２、Ｘ１０１３、Ｘ１０１５、Ｘ１０１６、Ｘ１０１７、Ｘ１０１
８、Ｘ１０１９、Ｘ１０２０、Ｘ１０２１、Ｘ１０２２、Ｘ１０２４、Ｘ１０２５、Ｘ１
０２６、Ｘ１０２７、Ｘ１０２８、Ｘ１０４７、Ｘ１０４８、Ｘ１０４９、Ｘ１０６２、
Ｘ１０６３、Ｘ１０６４、または本明細書に開示されるかまたは当該技術分野において公
知の任意の３’末端キャップである。
【０１４６】
５’から３’の順に、３’末端ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー
で終端する鎖、Ｃ３スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、
および３’末端キャップ（例えば、本明細書に開示される任意の３’末端キャップ）を含
むＲＮＡｉ剤を含む構造は、二本鎖ＲＮＡを含むがこれに限定されない、任意の長さ、配
列または標的の任意のＲＮＡｉ剤上で使用され得、ここで、任意選択的に、１つまたは複
数のホスフェートが、修飾されたヌクレオシド間リンカーによって置換され、任意選択的
に、１つまたは複数のヌクレオチドが修飾され、任意選択的に、１つまたは複数のＲＮＡ
ヌクレオチドが、ＤＮＡ、ＰＮＡ、ＬＮＡ、モルホリノ、ＴＮＡ、ＧＮＡ、ＡＮＡ、ＨＮ
Ａ、ＣｅＮＡ、ＦＡＮＡ、および／またはＵＮＡによって置換される。
【０１４７】
Ｃ４スペーサ、Ｃ５スペーサおよびＣ６スペーサ
様々な実施形態において、スペーサは、Ｃ４またはＣ５またはＣ６である。
【０１４８】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、鎖を含み、鎖の３’末端が、３’ホスフェートま
たは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、Ｃ４またはＣ５またはＣ６であるスペ
ーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末端キャップ
をさらに含む。
【０１４９】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、２つの鎖を含み、各鎖の３’末端が、３’ホスフ
ェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、スペーサ、第２のホスフェー
トまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末端キャップをさらに含み、一
方または両方の鎖中のスペーサが、Ｃ４またはＣ５またはＣ６である。
【０１５０】
Ｃ３〜Ｃ６スペーサは、以下のように定義され得る：
Ｃ３＝１，３−プロパン−ジオール
Ｃ４＝１，４−ブタン−ジオール
Ｃ５＝１，５−ペンタン−ジオール
Ｃ６＝１，６−ヘキサン−ジオール
【０１５１】
ある文脈において：
Ｃ４スペーサは、化学式−（ＣＨ２）４−で表される。
【０１５２】
Ｃ５スペーサは、化学式−（ＣＨ２）５−で表される。
【０１５３】
Ｃ６スペーサは、化学式−（ＣＨ２）６−で表される。
【０１５４】
様々な実施形態において、３’末端キャップは、トリエチレングリコール、シクロヘキ
シル、フェニル、ＢＰ（ビフェニル）、リトコール（リトコール酸）、アダマンタン、Ｃ
３アミノ、Ｃ７アミノ、Ｃ３、Ｃ６、Ｃ８、Ｃ１０、Ｃ１２、Ｘ０２７、Ｘ０３８、Ｘ０
５０、Ｘ０５１、Ｘ０５２、Ｘ０５８、Ｘ０５９、Ｘ０６０、Ｘ０６１、Ｘ０６２、Ｘ０
６３、Ｘ０６４、Ｘ０６５、Ｘ０６６、Ｘ０６７、Ｘ０６８、Ｘ０６９、Ｘ０９７、Ｘ０
９８、Ｘ１０９、Ｘ１１０、Ｘ１１１、Ｘ１１２、Ｘ１１３、Ｘ１００９、Ｘ１０１０、
Ｘ１０１１、Ｘ１０１２、Ｘ１０１３、Ｘ１０１５、Ｘ１０１６、Ｘ１０１７、Ｘ１０１
８、Ｘ１０１９、Ｘ１０２０、Ｘ１０２１、Ｘ１０２２、Ｘ１０２４、Ｘ１０２５、Ｘ１
０２６、Ｘ１０２７、Ｘ１０２８、Ｘ１０４７、Ｘ１０４８、Ｘ１０４９、Ｘ１０６２、
Ｘ１０６３、Ｘ１０６４、または本明細書に開示されるかまたは当該技術分野において公
知の任意の３’末端キャップである。
【０１５５】
５’から３’の順に、３’末端ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー
で終端する鎖、Ｃ４またはＣ５またはＣ６スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌク
レオシド間リンカー、および３’末端キャップ（例えば、本明細書に開示される任意の３
’末端キャップ）を含むＲＮＡｉ剤を含む構造は、二本鎖ＲＮＡを含むがこれに限定され
ない、任意の配列または標的の任意のＲＮＡｉ剤上で使用され得、ここで、任意選択的に
、１つまたは複数のホスフェートが、修飾されたヌクレオシド間リンカーによって置換さ
れ、任意選択的に、１つまたは複数のヌクレオチドが修飾され、任意選択的に、１つまた
は複数のＲＮＡヌクレオチドが、ＤＮＡ、ＰＮＡ、ＬＮＡ、モルホリノ、ＴＮＡ、ＧＮＡ
および／またはＵＮＡによって置換される。
【０１５６】
明確化の注記として、本開示は、「Ｃ３」［−（ＣＨ２）３−］、「Ｃ４」［−（ＣＨ
２）４−］、および「Ｃ５」［−（ＣＨ２）５−］という用語が、一般に、本明細書にお
いてスペーサを示すのに使用され、同様の用語（Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５「リンカー」）も、３
’末端キャップの一部を示すのに使用されることを注記する。これらの図において、異な
るリンカーが、様々な３’末端キャップの部分を区別するのに使用される。「Ｃ３」とい
う用語が、Ｃ３  ３’末端キャップ（例えば、図１５Ａ）、Ｃ３スペーサ（図２１）、お
よびＣ３リンカー（図１３）を示すのに使用されることも留意される。Ｃ６スペーサはま
た、Ｃ６末端キャップと区別されるべきである。
【０１５７】
４−メトキシブタン−１，３−ジオール（５３００）スペーサ
様々な実施形態において、スペーサは４−メトキシブタン−１，３−ジオールである。
４−メトキシブタン−１，３−ジオールは、５３００、Ａ５３００、Ｃ５３００、Ｇ５３
００、およびＵＧ５３００とも表記される。
【０１５８】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、５’から３’の順に：３’ホスフェート（３’末
端ホスフェート）または修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端する鎖、４−メトキシ
ブタン−１，３−ジオールであるスペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド
間リンカー、および３’末端キャップを含む。
【０１５９】
３’末端ホスフェートおよび４−メトキシブタン−１，３−ジオールスペーサの構造が
、本明細書に示される：
【化８】
2019135236.tif 000038
【０１６０】
４−メトキシブタン−１，３−ジオールは、５３００、Ａ５３００、Ｃ５３００、Ｇ５
３００、およびＵＧ５３００とも表記される。一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、５’
から３’の順に：３’ホスフェートで終端する鎖、４−メトキシブタン−１，３−ジオー
ルであるスペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’
末端キャップを含む。
【０１６１】
一実施形態が、図２１に示され、ここで、ＲＮＡｉ剤は、５’から３’の順に：３’ホ
スフェートで終端する鎖、４−メトキシブタン−１，３−ジオールスペーサ、ホスフェー
ト、およびＸ０５８である３’末端キャップを含む。図２１に示される構造が、１８−ｍ
ｅｒ  ＲＮＡｉ剤である一方、この構造は、任意の長さ、配列または標的の任意のＲＮＡ
ｉ鎖上にあり得る。さらに、本明細書に開示される任意の３’末端キャップが、Ｘ０５８
の代わりに使用され得る。
【０１６２】
Ｃ５３００スペーサを含むＲＮＡｉ剤の有効性が、図２２に示される。１８−ｍｅｒを
含む２つの異なるＨｕＲ構築物を調製し、１８−ｍｅｒの３’末端が、ホスフェートで終
端し、Ｃ５３００スペーサ、ホスフェートおよび３’末端キャップ（Ｃ６またはＸ０５８
である）をさらに含む。これらの両方が、ＲＮＡ干渉を仲介することができた。
【０１６３】
様々な実施形態において、３’末端キャップは、トリエチレングリコール、シクロヘキ
シル、フェニル、ＢＰ（ビフェニル）、リトコール（リトコール酸）、アダマンタン、Ｃ
３アミノ、Ｃ７アミノ、Ｃ３、Ｃ６、Ｃ８、Ｃ１０、Ｃ１２、Ｘ０２７、Ｘ０３８、Ｘ０
５０、Ｘ０５１、Ｘ０５２、Ｘ０５８、Ｘ０５９、Ｘ０６０、Ｘ０６１、Ｘ０６２、Ｘ０
６３、Ｘ０６４、Ｘ０６５、Ｘ０６６、Ｘ０６７、Ｘ０６８、Ｘ０６９、Ｘ０９７、Ｘ０
９８、Ｘ１０９、Ｘ１１０、Ｘ１１１、Ｘ１１２、Ｘ１１３、Ｘ１００９、Ｘ１０１０、
Ｘ１０１１、Ｘ１０１２、Ｘ１０１３、Ｘ１０１５、Ｘ１０１６、Ｘ１０１７、Ｘ１０１
８、Ｘ１０１９、Ｘ１０２０、Ｘ１０２１、Ｘ１０２２、Ｘ１０２４、Ｘ１０２５、Ｘ１
０２６、Ｘ１０２７、Ｘ１０２８、Ｘ１０４７、Ｘ１０４８、Ｘ１０４９、Ｘ１０６２、
Ｘ１０６３、Ｘ１０６４、または本明細書に開示されるかまたは当該技術分野において公
知の任意の３’末端キャップである。
【０１６４】
５’から３’の順に、３’末端ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー
で終端する鎖、４−メトキシブタン−１，３−ジオールスペーサ、ホスフェートまたは修
飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末端キャップ（例えば、本明細書に開示さ
れる任意の３’末端キャップ）を含むＲＮＡｉ剤を含む構造は、二本鎖ＲＮＡを含むがこ
れに限定されない、任意の長さ、配列または標的の任意のＲＮＡｉ剤上で使用され得、こ
こで、任意選択的に、１つまたは複数のホスフェートが、修飾されたヌクレオシド間リン
カーによって置換され、任意選択的に、１つまたは複数のヌクレオチドが修飾され、任意
選択的に、１つまたは複数のＲＮＡヌクレオチドが、ＤＮＡ、ＰＮＡ、ＬＮＡ、モルホリ
ノ、ＴＮＡ、ＧＮＡ、ＡＮＡ、ＨＮＡ、ＣｅＮＡ、ＦＡＮＡ、および／またはＵＮＡによ
って置換される。
【０１６５】
ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー
様々な実施形態において、修飾されたヌクレオシド間リンカーは、以下に詳述されるよ
うに、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロアミデート、ボラノホスホ
ノエート、アミドリンカー、または式（Ｉ）の化合物である。
【０１６６】
ある実施形態において、ＲＮＡｉ剤の一方または両方の鎖が、３’末端において、スペ
ーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末端キャップ
（例えば、本明細書に開示される３’末端キャップ）を含む。
【０１６７】
様々な実施形態において、ＲＮＡｉ剤の一方または両方の鎖のホスフェートの１つまた
は複数が置換される。したがって：様々な実施形態において、一方または両方の鎖の１つ
または複数のヌクレオチドが、修飾されたヌクレオシド間リンカーを有する。ある実施形
態において、３’末端ホスフェートが置換される。ある実施形態において、一方または両
方の鎖の１つまたは複数のヌクレオチドが、修飾されたヌクレオシド間リンカーを有し、
および／または修飾されたヌクレオシド間リンカーが、スペーサと３’末端キャップとの
間に介挿される。
【０１６８】
一実施形態において、本開示は、第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、
各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップ
を含み、３’末端キャップが、表１または２に列挙されるかまたは他の形で本明細書に開
示される３’末端キャップから選択され、少なくとも１つのヌクレオチドが、修飾された
ヌクレオシド間リンカー（例えば、ここで、ヌクレオチドの少なくとも１つのホスフェー
トが、修飾されたヌクレオシド間リンカーによって置換される）を有し、修飾されたヌク
レオシド間リンカーが、
【化９】
2019135236.tif 000039
ホスホロチオエート（ＰＳ）、
【化１０】
2019135236.tif 000040
ホスホロジチオエート、ホスホロアミデート、ボラノホスホノエート、アミドリンカー、
または式（Ｉ）：
【化１１】
2019135236.tif 000041
（式中、Ｒ３が、Ｏ−、Ｓ−、ＮＨ２、ＢＨ３、ＣＨ３、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ６〜１０
アリール、Ｃ１〜６アルコキシおよびＣ６〜１０アリール−オキシから選択され、ここで
、Ｃ１〜６アルキルおよびＣ６〜１０アリールが、非置換であるか、または任意選択的に
、ハロ、ヒドロキシルおよびＮＨ２から独立して選択される１〜３つの基で独立して置換
され；Ｒ４が、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、またはＣＨ２から選択される）の化合物であるＲＮＡｉ剤
を包含する。
【０１６９】
図２０ＤおよびＥは、様々なＲＮＡｉ剤の有効性を示し、ここで、センス（Ｓ）または
アンチセンス（ＡＳ）鎖の２  ３’末端ＮＴ（ヌクレオチド）が、２’ＭＯＥホスフェー
ト（ＭＯＥ＿ＰＯ）、２’ＯＭｅホスフェート（ＯＭｅ−ＰＯ）、ＲＮＡ（ＲＮＡ＿ＰＯ
）、ＤＮＡ（ＤＮＡ＿ＰＯ）、２’Ｆ  ＰＳ（Ｆ＿ＰＳ）、ＲＮＡ  ＰＳ（ＲＮＡ＿ＰＳ
）、ＬＮＡホスフェート（ＬＮＡ＿ＰＯ）、２’Ｆホスフェート（Ｆ＿ＰＯ）、２’ＯＭ
ｅ  ＰＳ（ＯＭｅ＿ＰＳ）、２’ＭＯＥ  ＰＳ（ＭＯＥ＿ＰＳ）、ＤＮＡ  ＰＳ（ＤＮＡ
＿ＰＳ）、またはＬＮＡ  ＰＳ（ＬＮＡ＿ＰＳ）である。図２０Ｄおよび２０Ｅ中のＲＮ
Ａｉ剤について、全ての試験されるＲＮＡｉ剤が有効であった。パーセンテージがノック
ダウンを表すのではなく、他のＲＮＡｉ剤に対するノックダウンを表すことが留意される
。１００％は、例えば、これらの有効なＲＮＡｉ剤の全てのアンチセンス鎖の平均ノック
ダウンを表す。
【０１７０】
一実施形態において、本開示は、第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、
各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップ
を含み、３’末端キャップが、表１または２に列挙されるかまたは他の形で本明細書に開
示される３’末端キャップから選択され、一方または両方の鎖における少なくとも３’末
端ヌクレオチドが、修飾されたヌクレオシド間リンカー（例えば、ここで、一方または両
方の鎖における３’ヌクレオチドのホスフェートが、修飾されたヌクレオシド間リンカー
によって置換される）を有し、修飾されたヌクレオシド間リンカーが、ホスホロチオエー
ト、ホスホロジチオエート、ホスホロアミデート、ボラノホスホノエート、アミドリンカ
ー、または式（Ｉ）の化合物であるＲＮＡｉ剤を包含する。
【０１７１】
一実施形態において、表１の化合物が、末端リン酸基を介して連結され、末端リン酸基
は、少なくとも１つのＲＮＡｉ剤鎖の３’末端で３’炭素に結合される。このような化合
物は、例えば、表２に示される。
【０１７２】
一実施形態において、表２の化合物が、少なくとも１つのＲＮＡｉ剤鎖の３’末端で３
’炭素に結合された末端ホスホロチオエート基を有する。したがって、様々な実施形態に
おいて、表２に列挙される３’末端キャップにおいて、リン酸基は、ホスホロチオエート
によって置換される。さらなる実施形態において、Ｃ３、Ｃ６、Ｃ１２、トリエチレング
リコール、シクロヘキシル、フェニル、ビフェニル、アダマンタン、リトコール酸として
本明細書に列挙される様々な３’末端キャップのリン酸基は、ホスホロチオエートによっ
て置換され得る。特定の一実施形態において、Ｃ３  ３’末端キャップ中のリン酸基は、
ホスホロチオエートによって置換される（表２に示され、実施例６および図２０Ａ〜Ｅに
記載されるように、「ＰＳ−Ｃ３」と表記される）。特定の一実施形態において、Ｃ６  
３’末端キャップ中のリン酸基は、ホスホロチオエートによって置換される（表２に示さ
れるように、「ＰＳ−Ｃ６」と表記される）。特定の一実施形態において、Ｃ１０  ３’
末端キャップ中のリン酸基は、ホスホロチオエートによって置換される（表２に示される
ように、「ＰＳ−Ｃ１０」と表記される）。特定の一実施形態において、ビフェニル（Ｂ
Ｐ）３’末端キャップ中のリン酸基は、ホスホロチオエートによって置換される（表２に
示されるように、「ＰＳ−ＢＰ」と表記される）。
【０１７３】
様々な実施形態において、Ｒ１＝ＯＨ；およびＲ２＝式（Ｉ）の化合物である。この構
造は、図１８Ｃにも示される。
【０１７４】
３’末端キャップ
ある実施形態において、ＲＮＡｉ剤の一方または両方の鎖が、３’末端において、スペ
ーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末端キャップ
（例えば、本明細書に開示される３’末端キャップ）を含む。
【０１７５】
３’末端キャップが、ＲＮＡｉ剤を含む分子の３’末端、例えば、（ａ）鎖を含む分子
であって、鎖の３’末端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終
端する分子；または（ｂ）５’から３’の順に：鎖（ここで、鎖の３’末端が、ホスフェ
ートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端する）、スペーサ、および第２のホ
スフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーを含む分子の３’末端（３’ｔｅｒ
ｍｉｎｕｓ）（または３’末端（３’ｅｎｄ））に結合された非ヌクレオチド化学部分で
ある。３’末端キャップは、以下の機能のうちの少なくとも１つを果たす：分子によって
仲介されるＲＮＡ干渉を可能にする、分解から分子を保護するかまたは（例えば、ヌクレ
アーゼによる）分子の分解の量または速度を低下させる、センス鎖のオフターゲット効果
を減少させる、または分子によって仲介されるＲＮＡ干渉の活性、持続時間または有効性
を増加させる。３’末端キャップを「非ヌクレオチド」として表すことによって、ヌクレ
オチドが、３つの成分、すなわち、ホスフェート、ペントース（例えば、リボースまたは
デオキシリボース）および核酸塩基を含み、３’末端キャップが、成分のうちの３つ全て
を含むわけではないことを意味する。
【０１７６】
以下の表２は、表１に示されるもののいくつかを含む、様々な３’末端キャップのいく
つかの構造を表す。構造のいくつかにおいて、ＲＮＡｉ剤鎖の末端３’ホスフェートも、
内容上示されるが、このホスフェートは、３’末端キャップの一部ではない。
【０１７７】
さらなる情報が、米国仮特許出願第６１／８８６，７５３号明細書；同第６１／９３０
，６８１号明細書；同第６１／８８６，７４８号明細書；同第６１／８８６，７３９号明
細書；および同第６１／８８６，７６０号明細書に見られ、これらは全て、全体が参照に
より援用される。
【０１７８】
表２．ＲＮＡ干渉に使用するためのＲＮＡｉ剤用の３’末端キャップ
２．Ａ．ＲＮＡｉ剤に使用するための３’末端キャップ
ある実施形態において、ＲＮＡｉ剤の鎖の３’末端が、ホスフェートまたは修飾された
ヌクレオシド間リンカーで終端し、任意選択的に、５’から３’の順に、スペーサおよび
ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーをさらに含む。非限定的な例とし
て、ホスフェートは、３’末端キャップに結合されて、本明細書に示される。
【０１７９】
【表３０】
2019135236.tif 000042
【０１８０】
【表３１】
2019135236.tif 000043
【０１８１】
【表３２】
2019135236.tif 000044
【０１８２】
【表３３】
2019135236.tif 000045
【０１８３】
【表３４】
2019135236.tif 000046
【０１８４】
【表３５】
2019135236.tif 000047
【０１８５】
【表３６】
2019135236.tif 000048
【０１８６】
【表３７】
2019135236.tif 000049
【０１８７】
【表３８】
2019135236.tif 000050
【０１８８】
【表３９】
2019135236.tif 000051
【０１８９】
【表４０】
2019135236.tif 000052
【０１９０】
２．Ｂ．鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、鎖の３’末端が、ホスフェートまたは修飾された
ヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の順に、スペーサ、ホスフェートまたは
修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末端キャップをさらに含むＲＮＡｉ剤
【０１９１】
以下の非限定的な例は、例えば、スペーサが、Ｃ３、リビトールまたは２’−デオキシ
リビトールであるＲＮＡｉ剤を示す。特定の３’末端キャップ（Ｃ３、Ｃ６、Ｃ８、Ｃ１
０、Ｃ１２、ＢＰ、Ｃ０５８など）が示されるが、任意の３’末端キャップが、任意のス
ペーサまたはホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーと組み合わせて使用
され得る。
【０１９２】
【表４１】
2019135236.tif 000053
【０１９３】
【表４２】
2019135236.tif 000054
【０１９４】
【表４３】
2019135236.tif 000055
【０１９５】
【表４４】
2019135236.tif 000056
【０１９６】
【表４５】
2019135236.tif 000057
【０１９７】
さらなる構造としては、特に：ｒｉｂｐトリエチレングリコール、ｒｉｂｐシクロヘキ
シル、ｒｉｂｐフェニル、ｒｉｂｐＢＰ（ビフェニル）、ｒｉｂｐリトコール（リトコー
ル酸）、ｒｉｂｐアダマンタン、ｒｉｂｐＣ３アミノ、ｒｉｂｐＣ７アミノ、ｒｉｂｐＣ
３、ｒｉｂｐＣ６、ｒｉｂｐＣ８、ｒｉｂｐＣ１０、ｒｉｂｐＣ１２、ｒｉｂｐＸ０２７
、ｒｉｂｐＸ０２７、ｒｉｂｐＸ０３８、ｒｉｂｐＸ０５０、ｒｉｂｐＸ０５１、ｒｉｂ
ｐＸ０５２、ｒｉｂｐＸ０５９、ｒｉｂｐＸ０６０、ｒｉｂｐＸ０６１、ｒｉｂｐＸ０６
２、ｒｉｂｐＸ０６３、ｒｉｂｐＸ０６４、ｒｉｂｐＸ０６５、ｒｉｂｐＸ０６６、ｒｉ
ｂｐＸ０６７、ｒｉｂｐＸ０６８、ｒｉｂｐＸ０６９、ｒｉｂｐＸ０９７、ｒｉｂｐＸ０
９８、ｒｉｂｐＸ１０９、ｒｉｂｐＸ１１０、ｒｉｂｐＸ１１１、ｒｉｂｐＸ１１２、ｒ
ｉｂｐＸ１１３、ｒｉｂｐＸ１００９、ｒｉｂｐＸ１０１１、ｒｉｂｐＸ１０１２、ｒｉ
ｂｐＸ１０１３、ｒｉｂｐＸ１０１５、ｒｉｂｐＸ１０１６、ｒｉｂｐＸ１０１７、ｒｉ
ｂｐＸ１０１８、ｒｉｂｐＸ１０１９、ｒｉｂｐＸ１０２０、ｒｉｂｐＸ１０２１、ｒｉ
ｂｐＸ１０２２、ｒｉｂｐＸ１０２４、ｒｉｂｐＸ１０２５、ｒｉｂｐＸ１０２６、ｒｉ
ｂｐＸ１０２７、ｒｉｂｐＸ１０２８、ｒｉｂｐＸ１０４７、ｒｉｂｐＸ１０４８、ｒｉ
ｂｐＸ１０４９、ｒｉｂｐＸ１０６２、ｒｉｂｐＸ１０６３、ｒｉｂｐＸ１０６４、ｒｉ
ｂｐリビトールなどが挙げられる。これらは、リビトールであるスペーサ、ホスフェート
、および３’末端キャップを表し、３’末端キャップは、トリエチレングリコール、シク
ロヘキシル、フェニル、ＢＰ（ビフェニル）、リトコール（リトコール酸）、アダマンタ
ン、Ｃ３アミノ、Ｃ７アミノ、Ｃ３、Ｃ６、Ｃ８、Ｃ１０、Ｃ１２、Ｘ０２７、Ｘ０３８
、Ｘ０５０などである。
【０１９８】
さらなる構造としては、特に：ｄｉｒｉｂｐトリエチレングリコール、ｄｉｒｉｂｐシ
クロヘキシル、ｄｉｒｉｂｐフェニル、ｄｉｒｉｂｐＢＰ（ビフェニル）、ｄｉｒｉｂｐ
リトコール（リトコール酸）、ｄｉｒｉｂｐアダマンタン、ｄｉｒｉｂｐＣ３アミノ、ｄ
ｉｒｉｂｐＣ７アミノ、ｄｉｒｉｂｐＣ３、ｄｉｒｉｂｐＣ６、ｄｉｒｉｂｐＣ８、ｄｉ
ｒｉｂｐＣ１０、ｄｉｒｉｂｐＣ１２、ｄｉｒｉｂｐＸ０２７、ｄｉｒｉｂｐＸ０２７、
ｄｉｒｉｂｐＸ０３８、ｄｉｒｉｂｐＸ０５０、ｄｉｒｉｂｐＸ０５１、ｄｉｒｉｂｐＸ
０５２、ｄｉｒｉｂｐＸ０５９、ｄｉｒｉｂｐＸ０６０、ｄｉｒｉｂｐＸ０６１、ｄｉｒ
ｉｂｐＸ０６２、ｄｉｒｉｂｐＸ０６３、ｄｉｒｉｂｐＸ０６４、ｄｉｒｉｂｐＸ０６５
、ｄｉｒｉｂｐＸ０６６、ｄｉｒｉｂｐＸ０６７、ｄｉｒｉｂｐＸ０６８、ｄｉｒｉｂｐ
Ｘ０６９、ｄｉｒｉｂｐＸ０９７、ｄｉｒｉｂｐＸ０９８、ｄｉｒｉｂｐＸ１０９、ｄｉ
ｒｉｂｐＸ１１０、ｄｉｒｉｂｐＸ１１１、ｄｉｒｉｂｐＸ１１２、ｄｉｒｉｂｐＸ１１
３、ｄｉｒｉｂｐＸ１００９、ｄｉｒｉｂｐＸ１０１１、ｄｉｒｉｂｐＸ１０１２、ｄｉ
ｒｉｂｐＸ１０１３、ｄｉｒｉｂｐＸ１０１５、ｄｉｒｉｂｐＸ１０１６、ｄｉｒｉｂｐ
Ｘ１０１７、ｄｉｒｉｂｐＸ１０１８、ｄｉｒｉｂｐＸ１０１９、ｄｉｒｉｂｐＸ１０２
０、ｄｉｒｉｂｐＸ１０２１、ｄｉｒｉｂｐＸ１０２２、ｄｉｒｉｂｐＸ１０２４、ｄｉ
ｒｉｂｐＸ１０２５、ｄｉｒｉｂｐＸ１０２６、ｄｉｒｉｂｐＸ１０２７、ｄｉｒｉｂｐ
Ｘ１０２８、ｄｉｒｉｂｐＸ１０４７、ｄｉｒｉｂｐＸ１０４８、ｄｉｒｉｂｐＸ１０４
９、ｄｉｒｉｂｐ１０６２、ｄｉｒｉｂｐ１０６３、ｄｉｒｉｂｐ１０６４、ｄｉｒｉｂ
ｐリビトールなどが挙げられる。これらは、ジリビトールであるスペーサ、ホスフェート
、および３’末端キャップを表し、３’末端キャップは、トリエチレングリコール、シク
ロヘキシル、フェニル、ＢＰ（ビフェニル）、リトコール（リトコール酸）、アダマンタ
ン、Ｃ３アミノ、Ｃ７アミノ、Ｃ３、Ｃ６、Ｃ８、Ｃ１０、Ｃ１２、Ｘ０２７、Ｘ０３８
、Ｘ０５０などである。
【０１９９】
さらなる構造としては、特に：２’−デオキシｒｉｂｐトリエチレングリコール、２’
−デオキシｒｉｂｐシクロヘキシル、２’−デオキシｒｉｂｐフェニル、２’−デオキシ
ｒｉｂｐＢＰ（ビフェニル）、２’−デオキシｒｉｂｐリトコール（リトコール酸）、２
’−デオキシｒｉｂｐアダマンタン、２’−デオキシｒｉｂｐＣ３アミノ、２’−デオキ
シｒｉｂｐＣ７アミノ、２’−デオキシｒｉｂｐＣ３、２’−デオキシｒｉｂｐＣ６、２
’−デオキシｒｉｂｐＣ８、２’−デオキシｒｉｂｐＣ１０、２’−デオキシｒｉｂｐＣ
１２、２’−デオキシｒｉｂｐＸ０２７、２’−デオキシｒｉｂｐＸ０２７、２’−デオ
キシｒｉｂｐＸ０３８、２’−デオキシｒｉｂｐＸ０５０、２’−デオキシｒｉｂｐＸ０
５１、２’−デオキシｒｉｂｐＸ０５２、２’−デオキシｒｉｂｐＸ０５９、２’−デオ
キシｒｉｂｐＸ０６０、２’−デオキシｒｉｂｐＸ０６１、２’−デオキシｒｉｂｐＸ０
６２、２’−デオキシｒｉｂｐＸ０６３、２’−デオキシｒｉｂｐＸ０６４、２’−デオ
キシｒｉｂｐＸ０６５、２’−デオキシｒｉｂｐＸ０６６、２’−デオキシｒｉｂｐＸ０
６７、２’−デオキシｒｉｂｐＸ０６８、２’−デオキシｒｉｂｐＸ０６９、２’−デオ
キシｒｉｂｐＸ０９７、２’−デオキシｒｉｂｐＸ０９８、２’−デオキシｒｉｂｐＸ１
０９、２’−デオキシｒｉｂｐＸ１１０、２’−デオキシｒｉｂｐＸ１１１、２’−デオ
キシｒｉｂｐＸ１１２、２’−デオキシｒｉｂｐＸ１１３、２’−デオキシｒｉｂｐＸ１
００９、２’−デオキシｒｉｂｐＸ１０１１、２’−デオキシｒｉｂｐＸ１０１２、２’
−デオキシｒｉｂｐＸ１０１３、２’−デオキシｒｉｂｐＸ１０１５、２’−デオキシｒ
ｉｂｐＸ１０１６、２’−デオキシｒｉｂｐＸ１０１７、２’−デオキシｒｉｂｐＸ１０
１８、２’−デオキシｒｉｂｐＸ１０１９、２’−デオキシｒｉｂｐＸ１０２０、２’−
デオキシｒｉｂｐＸ１０２１、２’−デオキシｒｉｂｐＸ１０２２、２’−デオキシｒｉ
ｂｐＸ１０２４、２’−デオキシｒｉｂｐＸ１０２５、２’−デオキシｒｉｂｐＸ１０２
６、２’−デオキシｒｉｂｐＸ１０２７、２’−デオキシｒｉｂｐＸ１０２８、２’−デ
オキシｒｉｂｐＸ１０４７、２’−デオキシｒｉｂｐＸ１０４８、２’−デオキシｒｉｂ
ｐＸ１０４９、２’−デオキシｒｉｂｐ  １０６２、２’−デオキシｒｉｂｐ  １０６３
、２’−デオキシｒｉｂｐ  １０６４、２’−デオキシｒｉｂｐリビトールなどが挙げら
れる。これらは、２’−デオキシリビトールであるスペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップを表し、３’末端キャップは、トリエチレングリコール、シクロヘキシル、
フェニル、ＢＰ（ビフェニル）、リトコール（リトコール酸）、アダマンタン、Ｃ３アミ
ノ、Ｃ７アミノ、Ｃ３、Ｃ６、Ｃ８、Ｃ１０、Ｃ１２、Ｘ０２７、Ｘ０３８、Ｘ０５０な
どである。
【０２００】
さらなる構造としては、特に：Ｃ３ｐトリエチレングリコール、Ｃ３ｐシクロヘキシル
、Ｃ３ｐフェニル、Ｃ３ｐＢＰ（ビフェニル）、Ｃ３ｐリトコール（リトコール酸）、Ｃ
３ｐアダマンタン、Ｃ３ｐＣ３アミノ、Ｃ３ｐＣ７アミノ、Ｃ３ｐＣ３、Ｃ３ｐＣ６、Ｃ
３ｐＣ８、Ｃ３ｐＣ１０、Ｃ３ｐＣ１２、Ｃ３ｐＸ０２７、Ｃ３ｐＸ０２７、Ｃ３ｐＸ０
３８、Ｃ３ｐＸ０５０、Ｃ３ｐＸ０５１、Ｃ３ｐＸ０５２、Ｃ３ｐＸ０５９、Ｃ３ｐＸ０
６０、Ｃ３ｐＸ０６１、Ｃ３ｐＸ０６２、Ｃ３ｐＸ０６３、Ｃ３ｐＸ０６４、Ｃ３ｐＸ０
６５、Ｃ３ｐＸ０６６、Ｃ３ｐＸ０６７、Ｃ３ｐＸ０６８、Ｃ３ｐＸ０６９、Ｃ３ｐＸ０
９７、Ｃ３ｐＸ０９８、Ｃ３ｐＸ１０９、Ｃ３ｐＸ１１０、Ｃ３ｐＸ１１１、Ｃ３ｐＸ１
１２、Ｃ３ｐＸ１１３、Ｃ３ｐＸ１００９、Ｃ３ｐＸ１０１１、Ｃ３ｐＸ１０１２、Ｃ３
ｐＸ１０１３、Ｃ３ｐＸ１０１５、Ｃ３ｐＸ１０１６、Ｃ３ｐＸ１０１７、Ｃ３ｐＸ１０
１８、Ｃ３ｐＸ１０１９、Ｃ３ｐＸ１０２０、Ｃ３ｐＸ１０２１、Ｃ３ｐＸ１０２２、Ｃ
３ｐＸ１０２４、Ｃ３ｐＸ１０２５、Ｃ３ｐＸ１０２６、Ｃ３ｐＸ１０２７、Ｃ３ｐＸ１
０２８、Ｃ３ｐＸ１０４７、Ｃ３ｐＸ１０４８、Ｃ３ｐＸ１０４９、Ｃ３ｐＸ１０６２、
Ｃ３ｐＸ１０６３、Ｃ３ｐＸ１０６４、Ｃ３ｐリビトールなどが挙げられる。これらは、
Ｃ３であるスペーサ、ホスフェート、および３’末端キャップを表し、３’末端キャップ
は、トリエチレングリコール、シクロヘキシル、フェニル、ＢＰ（ビフェニル）、リトコ
ール（リトコール酸）、アダマンタン、Ｃ３アミノ、Ｃ７アミノ、Ｃ３、Ｃ６、Ｃ８、Ｃ
１０、Ｃ１２、Ｘ０２７、Ｘ０３８、Ｘ０５０などである。
【０２０１】
さらなる構造としては、特に：Ｃ４ｐトリエチレングリコール、Ｃ４ｐシクロヘキシル
、Ｃ４ｐフェニル、Ｃ４ｐＢＰ（ビフェニル）、Ｃ４ｐリトコール（リトコール酸）、Ｃ
４ｐアダマンタン、Ｃ４ｐＣ４アミノ、Ｃ４ｐＣ７アミノ、Ｃ４ｐＣ４、Ｃ４ｐＣ６、Ｃ
４ｐＣ８、Ｃ４ｐＣ１０、Ｃ４ｐＣ１２、Ｃ４ｐＸ０２７、Ｃ４ｐＸ０２７、Ｃ４ｐＸ０
３８、Ｃ４ｐＸ０５０、Ｃ４ｐＸ０５１、Ｃ４ｐＸ０５２、Ｃ４ｐＸ０５９、Ｃ４ｐＸ０
６０、Ｃ４ｐＸ０６１、Ｃ４ｐＸ０６２、Ｃ４ｐＸ０６３、Ｃ４ｐＸ０６４、Ｃ４ｐＸ０
６５、Ｃ４ｐＸ０６６、Ｃ４ｐＸ０６７、Ｃ４ｐＸ０６８、Ｃ４ｐＸ０６９、Ｃ４ｐＸ０
９７、Ｃ４ｐＸ０９８、Ｃ４ｐＸ１０９、Ｃ４ｐＸ１１０、Ｃ４ｐＸ１１１、Ｃ４ｐＸ１
１２、Ｃ４ｐＸ１１３、Ｃ４ｐＸ１００９、Ｃ４ｐＸ１０１１、Ｃ４ｐＸ１０１２、Ｃ４
ｐＸ１０１３、Ｃ４ｐＸ１０１５、Ｃ４ｐＸ１０１６、Ｃ４ｐＸ１０１７、Ｃ４ｐＸ１０
１８、Ｃ４ｐＸ１０１９、Ｃ４ｐＸ１０２０、Ｃ４ｐＸ１０２１、Ｃ４ｐＸ１０２２、Ｃ
４ｐＸ１０２４、Ｃ４ｐＸ１０２５、Ｃ４ｐＸ１０２６、Ｃ４ｐＸ１０２７、Ｃ４ｐＸ１
０２８、Ｃ４ｐＸ１０４７、Ｃ４ｐＸ１０４８、Ｃ４ｐＸ１０４９、Ｃ４ｐＸ１０６２、
Ｃ４ｐ１０６３、Ｃ４ｐ１０６４、Ｃ４ｐリビトールなどが挙げられる。これらは、Ｃ４
であるスペーサ、ホスフェート、および３’末端キャップを表し、３’末端キャップは、
トリエチレングリコール、シクロヘキシル、フェニル、ＢＰ（ビフェニル）、リトコール
（リトコール酸）、アダマンタン、Ｃ４アミノ、Ｃ７アミノ、Ｃ４、Ｃ６、Ｃ８、Ｃ１０
、Ｃ１２、Ｘ０２７、Ｘ０３８、Ｘ０５０などである。
【０２０２】
さらなる構造としては、特に：Ｃ５ｐトリエチレングリコール、Ｃ５ｐシクロヘキシル
、Ｃ５ｐフェニル、Ｃ５ｐＢＰ（ビフェニル）、Ｃ５ｐリトコール（リトコール酸）、Ｃ
５ｐアダマンタン、Ｃ５ｐＣ５アミノ、Ｃ５ｐＣ７アミノ、Ｃ５ｐＣ５、Ｃ５ｐＣ６、Ｃ
５ｐＣ８、Ｃ５ｐＣ１０、Ｃ５ｐＣ１２、Ｃ５ｐＸ０２７、Ｃ５ｐＸ０２７、Ｃ５ｐＸ０
３８、Ｃ５ｐＸ０５０、Ｃ５ｐＸ０５１、Ｃ５ｐＸ０５２、Ｃ５ｐＸ０５９、Ｃ５ｐＸ０
６０、Ｃ５ｐＸ０６１、Ｃ５ｐＸ０６２、Ｃ５ｐＸ０６３、Ｃ５ｐＸ０６４、Ｃ５ｐＸ０
６５、Ｃ５ｐＸ０６６、Ｃ５ｐＸ０６７、Ｃ５ｐＸ０６８、Ｃ５ｐＸ０６９、Ｃ５ｐＸ０
９７、Ｃ５ｐＸ０９８、Ｃ５ｐＸ１０９、Ｃ５ｐＸ１１０、Ｃ５ｐＸ１１１、Ｃ５ｐＸ１
１２、Ｃ５ｐＸ１１３、Ｃ５ｐＸ１００９、Ｃ５ｐＸ１０１１、Ｃ５ｐＸ１０１２、Ｃ５
ｐＸ１０１３、Ｃ５ｐＸ１０１５、Ｃ５ｐＸ１０１６、Ｃ５ｐＸ１０１７、Ｃ５ｐＸ１０
１８、Ｃ５ｐＸ１０１９、Ｃ５ｐＸ１０２０、Ｃ５ｐＸ１０２１、Ｃ５ｐＸ１０２２、Ｃ
５ｐＸ１０２４、Ｃ５ｐＸ１０２５、Ｃ５ｐＸ１０２６、Ｃ５ｐＸ１０２７、Ｃ５ｐＸ１
０２８、Ｃ５ｐＸ１０４７、Ｃ５ｐＸ１０４８、Ｃ５ｐＸ１０４９、Ｃ５ｐＸ１０６２、
Ｃ５ｐＸ１０６３、Ｃ５ｐＸ１０６４、Ｃ５ｐリビトールなどが挙げられる。これらは、
Ｃ５であるスペーサ、ホスフェート、および３’末端キャップを表し、３’末端キャップ
は、トリエチレングリコール、シクロヘキシル、フェニル、ＢＰ（ビフェニル）、リトコ
ール（リトコール酸）、アダマンタン、Ｃ５アミノ、Ｃ７アミノ、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ８、Ｃ
１０、Ｃ１２、Ｘ０２７、Ｘ０３８、Ｘ０５０などである。
【０２０３】
２．Ｃ．鎖が、３’末端ホスホロチオエート、および３’末端キャップで終端するＲＮＡ
ｉ剤
本開示のいくつかのＲＮＡｉ剤において、鎖の３’末端が、修飾されたヌクレオシド間
リンカー（例えば、ＰＳ）で終端し、３’末端キャップ（Ｃ３、Ｃ６など）をさらに含む
。３’末端キャップ、末端の修飾されたヌクレオシド間リンカー、および、最初の例では
、糖および塩基を含む、このような構造の非限定的な例が、本明細書に示される。言い換
えると、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’炭素における修飾を含み、修飾は、ＰＳ
−Ｃ３、ＰＳ−Ｃ６、ＰＳ−Ｃ８、ＰＳ−Ｃ１０、ＰＳ−Ｃ１２、ＰＳ−ＢＰ、ＰＳ−Ｘ
０５８など、または本明細書に記載される任意の修飾されたヌクレオシド間リンカー、お
よび本明細書に記載される任意の３’末端キャップから選択される。
【０２０４】
【表４６】
2019135236.tif 000058
【０２０５】
【表４７】
2019135236.tif 000059
【０２０６】
【表４８】
2019135236.tif 000060
【０２０７】
さらなる構造としては、特に：ＰＳ−トリエチレングリコール、ＰＳ−シクロヘキシル
、ＰＳ−フェニル、ＰＳ−ＢＰ（ビフェニル）、ＰＳ−リトコール（リトコール酸）、Ｐ
Ｓ−アダマンタン、ＰＳ−Ｃ３アミノ、ＰＳ−Ｃ７アミノ、ＰＳ−Ｃ３、ＰＳ−Ｃ６、Ｐ
Ｓ−Ｃ８、ＰＳ−Ｃ１０、ＰＳ−Ｃ１２、ＰＳ−Ｘ０２７、ＰＳ−Ｘ０２７、ＰＳ−Ｘ０
３８、ＰＳ−Ｘ０５０、ＰＳ−Ｘ０５１、ＰＳ−Ｘ０５２、ＰＳ−Ｘ０５９、ＰＳ−Ｘ０
６０、ＰＳ−Ｘ０６１、ＰＳ−Ｘ０６２、ＰＳ−Ｘ０６３、ＰＳ−Ｘ０６４、ＰＳ−Ｘ０
６５、ＰＳ−Ｘ０６６、ＰＳ−Ｘ０６７、ＰＳ−Ｘ０６８、ＰＳ−Ｘ０６９、ＰＳ−Ｘ０
９７、ＰＳ−Ｘ０９８、ＰＳ−Ｘ１０９、ＰＳ−Ｘ１１０、ＰＳ−Ｘ１１１、ＰＳ−Ｘ１
１２、ＰＳ−Ｘ１１３、ＰＳ−Ｘ１００９、ＰＳ−Ｘ１０１１、ＰＳ−Ｘ１０１２、ＰＳ
−Ｘ１０１３、ＰＳ−Ｘ１０１５、ＰＳ−Ｘ１０１６、ＰＳ−Ｘ１０１７、ＰＳ−Ｘ１０
１８、ＰＳ−Ｘ１０１９、ＰＳ−Ｘ１０２０、ＰＳ−Ｘ１０２１、ＰＳ−Ｘ１０２２、Ｐ
Ｓ−Ｘ１０２４、ＰＳ−Ｘ１０２５、ＰＳ−Ｘ１０２６、ＰＳ−Ｘ１０２７、ＰＳ−Ｘ１
０２８、ＰＳ−Ｘ１０４７、ＰＳ−Ｘ１０４８、ＰＳ−Ｘ１０４９、ＰＳ−Ｘ１０６２、
ＰＳ−Ｘ１０６３、ＰＳ−Ｘ１０６４、ＰＳ−リビトールなどが挙げられる。これらは、
ホスホロチオエート（ＰＳ）および３’末端キャップを表し、３’末端キャップは、トリ
エチレングリコール、シクロヘキシル、フェニル、ＢＰ（ビフェニル）、リトコール（リ
トコール酸）、アダマンタン、Ｃ３アミノ、Ｃ７アミノ、Ｃ３、Ｃ６、Ｃ８、Ｃ１０、Ｃ
１２、Ｘ０２７、Ｘ０３８、Ｘ０５０などである。
【０２０８】
表２（２．Ａ、２．Ｂおよび２．Ｃを含む）に関して：
Ｃ７アミノおよびＣ３アミノ（それぞれ、アミノＣ７またはアミノＣ３とも表記される
）についての合成スキームは、これらの分子がＧｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｓｔｅｒｌ
ｉｎｇ，ＶＡ）から市販されており、合成スキームがＧｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｓｔ
ｅｒｌｉｎｇ，ＶＡ）によって以前に公開されているため、提供されない。
【０２０９】
Ｃ７アミノ：カタログ番号：２０−２９５７−ｘｘ；説明：３’−アミノ−修飾因子Ｃ
７  ＣＰＧ  ５００；２−ジメトキシトリチルオキシメチル−６−フルオレニルメトキシ
カルボニルアミノ−ヘキサン−１−スクシノイル−長鎖アルキルアミノ−ＣＰＧ；技術資
料：Ｐｒｅ−Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  ｏｆ  Ａｍｉｎｏｍｏｄｉｆｉｅ
ｒ  Ｃ３  ｏｒ  Ｃ７  ＣＰＧ，Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｓｔｅｒｌｉｎｇ，ＶＡ
）。
【０２１０】
Ｃ３アミノ：カタログ番号：２０−２９１３−ｘｘ；説明：３’−スペーサＣ３  ＣＰ
Ｇ；（１−ジメトキシトリチルオキシ−プロパンジオール−３−スクシノイル）−長鎖ア
ルキルアミノ−ＣＰＧ、Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｓｔｅｒｌｉｎｇ，ＶＡ）。Ｇｌ
ｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈは、プロピルＣＰＧがエキソヌクレアーゼ消化からオリゴを保護
し、ポリメラーゼ伸長を可能にしないという主張を裏付けるためのプロピルＣＰＧについ
ての決定的なデータをＧｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈが有さないことも述べている。Ｇｌｅ
ｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈの結論は、プロピルアミノ−修飾因子ＣＰＧとの類似性に基づいて
いる［Ｚｅｎｄｅｇｕｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ
，１９９２，２０，３０７−３１４］（Ｃａｔ．Ｎｏ．２０−２９５０−４１）。この修
飾は、エキソヌクレアーゼ消化からオリゴを保護するが、修飾因子が３’末端から約１０
％のレベルまで除去されて、利用可能な３’−ヒドロキシル基を残すため、わずかにポリ
メラーゼ伸長を可能にする。ＨＰＬＣ実験は、スペーサＣ３−ＣＰＧから作製されたオリ
ゴからのプロピル基の検出可能な除去がなかったことを示した。
【０２１１】
また、ＲＮＡｉ剤鎖の文脈において、例の３’末端キャップＣ８およびＣ１０が、図１
８Ｃに示され、リビトールおよびジリビトールが図１９に示される。
【０２１２】
表２が、スペーサ（例えば、Ｃ３ｐ、リビトール、または２’−デオキシリビトール）
および３’末端キャップの両方を含む様々な３’末端キャップを列挙していることが留意
される。したがって、例えば、「Ｃ３ｐＣ６」は、文脈に応じて、「３’末端キャップ」
として、または「スペーサおよびホスフェートおよび３’末端キャップ」（Ｃ３＋ｐ＋Ｃ
６）またはスペーサ、ホスフェートおよび３’末端キャップとしてみなされ得る。スペー
サおよび３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤の有効性が、例えば、図５Ａ、５Ｂ、１０お
よび１４に示される。
【０２１３】
本開示は、表１または２に示されるかまたは他の形で本明細書に開示される３’末端キ
ャップを含む任意のＲＮＡｉ剤を包含する。
【０２１４】
異なる配列および標的のための３’末端キャップの使用
様々な実験は、本明細書に開示される３’末端キャップが、ヘプシジン、ＨｕＲ（ＥＬ
ＡＶＬ１）、ＰＬＫ１、ＳＳＢおよびＦＶＩＩ（因子７またはＦ７）を含む様々な異なる
ｍＲＮＡ標的に対するＲＮＡ干渉を仲介することができる有効なＲＮＡｉ剤の様々な鎖の
３’末端で使用され得ることを示した。異なる３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤がマウ
スおよびヒト細胞の両方において有効であったため、３’末端キャップはまた、様々な哺
乳動物種を含む様々な種のためにＲＮＡｉ剤において使用され得る。また、本明細書に開
示される様々な３’末端キャップを含む良好なＲＮＡｉ剤を、いくつかのさらなる遺伝子
標的（本明細書に記載されていない）のために構築した。本明細書に記載される３’末端
キャップは、インビボおよびインビトロでＲＮＡｉ剤に有用であることが分かった。さら
に、様々な良好なＲＮＡｉ剤を構築し、試験し、ここで、一方または両方の鎖が、３’末
端において、５’から３’の順に、本明細書に開示されるスペーサ、本明細書に開示され
るホスフェートまたはヌクレオシド間リンカー、および本明細書に開示される３’末端キ
ャップを含んでいた。
【０２１５】
明らかに、当業者に公知であろうように、試験される配列の全てが、良好なＲＮＡｉ剤
を生じるわけでなく、任意の３’末端キャップ、または任意のスペーサ、ホスフェートま
たはヌクレオシド間リンカー、および３’末端キャップと組み合わせると、確かに生じな
い。しかしながら、本明細書に記載される３’末端キャップは、様々なＲＮＡｉ剤を考案
し、試験するのに使用され得、様々なＲＮＡｉ剤のうち、他のフォーマット（例えば、標
準的な構造（ｃａｎｏｎｉｃａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ））とほぼ等しい活性を有するも
のもあれば；向上した品質（例えば、向上した活性、活性の持続時間、減少したオフター
ゲット効果など）を生じるものもある。
【０２１６】
したがって、本明細書に開示される新規な３’末端キャップは、様々な異なる配列およ
び遺伝子標的とともに使用され得る。
【０２１７】
３’末端キャップを含むヘプシジンＲＮＡｉ剤
本明細書において、例えば、図５Ａ〜９に詳述されるように、ヘプシジンを標的にする
、本明細書に開示される様々な３’末端キャップを含む有効なＲＮＡｉ剤を構築した。
【０２１８】
これらの構築物は、図および図の説明文において詳述される。これらの構築物は、マウ
スおよびヒトヘプシジンの両方を標的にするのに成功した。
【０２１９】
これらのＲＮＡｉ剤に使用される良好な３’末端キャップとしては、ＢＰ、Ｃ６、Ｘ０
２７、Ｘ０３８、Ｘ０５０、Ｘ０５１、Ｘ０５２、Ｘ０５８、Ｘ０５９、Ｘ０６０、Ｘ０
６１、Ｘ０６２、Ｘ０６３、Ｘ０６４、Ｘ０６５、Ｘ０６６、Ｘ０６７、Ｘ０６８、Ｘ０
６９などが挙げられる。これらのＲＮＡｉ剤のいくつかは、鎖の３’末端が、ホスフェー
トで終端し、３’末端キャップをさらに含む鎖を含む。他のＲＮＡｉ剤は、鎖の３’末端
が、ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ（例えば、リビトール）、ホ
スフェート、および３’末端キャップをさらに含む鎖を含む。
【０２２０】
３’末端キャップを含むＨｕＲ（ＥＬＡＶ１）ＲＮＡｉ剤
様々な３’末端キャップを含むＨｕＲに対する有効なＲＮＡｉ剤を構築した。図１６Ａ
およびＢ、および２２〜２４、図の説明文などを参照されたい。
【０２２１】
例えば：別の標的、ＨｕＲに対する有効な１８−ｍｅｒ  ＲＮＡｉ剤が以下に示される
：
ＡＳ：ｕ  Ｕ  ａ  Ａ  ｕ  Ｕ  ａ  Ｕ  ｃ  Ｕ  ａ  Ｕ  ｕ  Ｃ  ｃ  Ｇ  ｕ  Ａ  ｒ
ｉｂ  Ｃ６
Ｓ：Ｃ６  ｒｉｂ  Ａ  ａ  Ｕ  ｕ  Ａ  ａ  Ｕ  ａ  Ｇ  ａ  Ｕ  ａ  Ａ  ｇ  Ｇ  ｃ
Ａ  ｕ
ｎ（ａ、ｕ、ｃ、ｇ）：２’Ｏｍｅ−ｎ（ａ、ｕ、ｃ、ｇ）
上に示される５’から３’のＡＳ（アンチセンス）鎖の配列は、配列番号８７であり；上
に示される３’から５’のＳ（センス）鎖の配列は、配列番号８８である。このＲＮＡｉ
剤は、５’から３’の順に、ＲＮＡｉ剤鎖、スペーサ（リビトールまたはｒｉｂ）、ホス
フェート（示されていない）、および３’末端キャップ（Ｃ６）をそれぞれが含む２つの
鎖を含む。他のスペーサおよび３’末端キャップが使用され得、このホスフェートおよび
他のホスフェートは、修飾されたヌクレオシド間リンカーによって置換され得る。
【０２２２】
他の有効なＨｕＲ  ＲＮＡｉ剤を製造し、使用される配列が以下のとおりであった：
Ｕ００２ｐＵｐＡｐＡｐＵ００４ｐＵ００４ｐＡｐＵ００４ｐＣｐＵ００４ｐＡｐＵ００
４ｐＵ００４ｐＣｐＣｐＧｐＵ００５ｐＡ００５ｐＣ０２７ｐＸｎｎｎｎ（配列番号８９
）
ここで、Ｃ０２７は、リビトール（または必要に応じてＣ３またはＣ５３００などの他の
スペーサ）である。
００２＝ＤＮＡ
００４＝２’Ｏｍｅ
００５＝２’ＭＯＥ
全ての他の位置はＲＮＡである。
０２７＝リビトール
ｐ＝ホスフェート
Ｘｎｎｎ＝３’末端キャップ（Ｘ０５８、Ｘ１０９など）
【０２２３】
本明細書に開示されるこの配列および様々な他の配列において、Ｕ００４は、２’Ｏｍ
ｅ修飾を有するＵ塩基を有するヌクレオチドを示し；Ｕ００２は、ＤＮＡであるＵ塩基を
有するヌクレオチドを示し；Ｕ００５は、２’ＭＯＥ修飾を有するＵ塩基を有するｎｔを
示す。同様に、他のヌクレオチドが修飾され、例えば、Ｕ００４は、Ｕ塩基および２’Ｏ
ｍｅ修飾を有するヌクレオチドを示す。
【０２２４】
このＨｕＲ配列では、３’末端において、５’から３’の順に：スペーサ（リビトール
）、ホスフェートおよび３’末端キャップ（Ｘ０５８、Ｘ１０９、Ｘ１１０、Ｘ１１１、
Ｘ１１２、Ｘ１１３、Ｘ１００９、Ｘ１０１０、Ｘ１０１１、Ｘ１０１２、Ｘ１０１３、
Ｘ１０１５、Ｘ１０１６、Ｘ１０１７、Ｘ１０１８、Ｘ１０１９、Ｘ１０２０、Ｘ１０２
１、Ｘ１０２２、Ｘ１０２４、Ｘ１０２５、Ｘ１０２６、Ｘ１０２７、またはＸ１０２８
）をさらに含む、ＲＮＡｉ剤鎖を含む有効なＲＮＡｉ剤を製造した。これらをＨｕｈ−７
細胞内で、インビトロで試験し、全てが、３０ｐＭで少なくとも約６０％〜８０％の遺伝
子ノックダウンを実証した。
【０２２５】
３’末端において、５’から３’の順に：スペーサ（リビトール）、ホスフェートおよ
び３’末端キャップ（Ｘ０５８、Ｘ１１０、Ｘ１１１、Ｘ１１２、Ｘ１０１２、Ｘ１０１
３、Ｘ１０１８、Ｘ１０１９、Ｘ１０２５、Ｘ１０２７、Ｘ１０２８）をさらに含む、Ｒ
ＮＡｉ剤鎖を含むものを含む、これらのＨｕＲ構築物のいくつかをさらに試験した。これ
らをＨｕｈ−７細胞内で、インビトロで試験し、全てが、１ｎＭで３日目に少なくとも約
８０％〜９０％の遺伝子ノックダウンを実証した。
【０２２６】
３’末端において、５’から３’の順に：（ａ）リビトールスペーサ、ホスフェートお
よびＸ０５８  ３’末端キャップ；（ｂ）リビトールスペーサ、ホスフェートおよびＣ６
３’末端キャップ；（ｃ）Ｃ３スペーサ、ホスフェートおよびＸ０５８  ３’末端キャ
ップ；（ｄ）Ｃ３スペーサ、ホスフェートおよびＣ６  ３’末端キャップ；（ｅ）Ｃ５３
００スペーサ、ホスフェートおよびＸ０５８  ３’末端キャップ；および（ｆ）Ｃ５３０
０スペーサ、ホスフェートおよびＣ６  ３’末端キャップをさらに含む、上記の１８−ｍ
ｅｒ配列を有する鎖を含む３’末端キャップを含むさらなるＨｕＲ構築物を構築した。こ
れらの構築物のそれぞれをＨｕｈ−７細胞内で、インビトロで試験し、全てが、１ｎＭで
３日目に約９０％の遺伝子ノックダウンを実証した。
【０２２７】
それぞれが１８−ｍｅｒである２つの鎖を含む、ＨｕＲに対するさらなるＲＮＡｉ剤を
構築し、２つの鎖は一緒に平滑末端二本鎖を形成し、少なくとも１つの鎖が３’ホスホロ
チオエート（ＰＳ）で終端し、鎖は、３’末端において、５’から３’の順に、スペーサ
（リビトール）、修飾されたヌクレオシド間リンカー（別のホスホロチオエート）、およ
び３’末端キャップ（Ｃ６）をさらに含む。
【０２２８】
３’末端キャップを含むＳＳＢ  ＲＮＡｉ剤
ＳＳＢを標的にし、本明細書に開示される、３’末端キャップ、またはスペーサ、ホス
フェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーおよび３’末端キャップを含む有効な
ＲＮＡｉ剤も構築した。例えば、これらの標的に対するいくつかのＲＮＡｉ剤において、
一方または両方の鎖が、３’末端において、５’から３’の順に、スペーサ（例えば、Ｃ
３）、ホスフェートおよび３’末端キャップ（Ｃ６）をさらに含む。
【０２２９】
例えば、ｈｓ＿ＳＳＢ＿３０９＿ＡＳ＿１８ｍｅｒ−Ｃ３−Ｃ６と表記されるヒトＳＳ
Ｂ  ＲＮＡｉ剤は、インビトロでＲＮＡ干渉を仲介するのに有効であり、以下に示される
：
ＡＳ：ＵｕＡｃＡＵｕＡＡＡＧＵＣＵＧＵ８７−Ｃ３ｐＣ６  ８＝２’メトキシエチルＴ
；７＝２’メトキシエチルＧ
Ｓ：ｃＡＡｃＡＧＡｃｕｕｕＡＡｕＧｕ５５−Ｃ３ｐＣ６  ５＝２’メトキシエチルＡ
ｎ：２’Ｏｍｅ−ｎ
上に示される５’から３’のＡＳ（アンチセンス）鎖の配列は、配列番号９０である。上
に示される５’から３’のＳ（センス）鎖の配列は、配列番号９１である。上記のように
規定されるように、８、７、５および５は、２’−ＭＯＥヌクレオシドである。
【０２３０】
ＳＳＢを標的にし、本明細書に開示される、３’末端キャップまたはスペーサ、ホスフ
ェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーおよび３’末端キャップを含む様々なＲ
ＮＡｉ剤を構築した。これらは、様々な標的配列を有する。例えば、構築された様々なＳ
ＳＢ  ＲＮＡｉ剤において、一方または両方の１８−ｍｅｒ鎖が、３’末端において、５
’から３’の順に：スペーサ（Ｃ３またはリビトール）、ホスフェート、および３’末端
キャップ（Ｃ６、ＢＰ、第２のリビトール、またはジリビトール）をさらに含む。ＳＳＢ
を標的にする他のＲＮＡｉ剤が構築され得る。
【０２３１】
３’末端キャップを含むＶＩＩ因子ＲＮＡｉ剤
ＶＩＩ因子（Ｆ７）を標的にし、３’末端キャップ（Ｃ３、Ｃ６、Ｃ１２、グリコール
、シクロヘキシル（ｃｙｃｌｏｈｅｘ）、フェニル、ビフェニル、リトコール、Ｃ７アミ
ノおよびＣ３アミノ）を含む様々なＲＮＡｉ剤を構築し；これらの構築物の有効性が、図
１〜３に示される。
【０２３２】
ＶＩＩ因子（Ｆ７）を標的にし、本明細書に開示される、３’末端キャップまたはスペ
ーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーおよび３’末端キャップを
含む様々なＲＮＡｉ剤も構築した。これは、非限定的な例として、３’末端において、５
’から３’の順に、スペーサ（Ｃ３）、ホスフェート、および３’末端キャップ（Ｃ６）
をさらに含む鎖を含むＲＮＡｉを含む。Ｆ７を標的にする他のＲＮＡｉ剤が構築され得る
。
【０２３３】
３’末端キャップを含むＰＬＫ１  ＲＮＡｉ剤
３’末端キャップを含む様々なＰＬＫ１  ＲＮＡｉ剤を構築し、試験した。
【０２３４】
例えば、３’末端において、５’から３’の順に、スペーサ（Ｃ３）、ホスフェート、
および３’末端キャップ（Ｃ６）をさらに含む鎖を含む、本明細書に開示される、３’末
端キャップまたはスペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーおよ
び３’末端キャップを含む、標的ＰＬＫ１に対するＲＮＡｉ剤を構築した。
【０２３５】
３’末端キャップの向上した活性
上述されるように、いくつかの例では、本明細書に開示される、３’末端キャップまた
はスペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーおよび３’末端キャ
ップを含むＲＮＡｉ剤は、このような３’末端キャップを含まない対応するｓｉＲＮＡと
比べて向上した活性を有することが示されている。本明細書に開示される、３’末端キャ
ップまたはスペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーおよび３’
末端キャップを含む様々なｓｉＲＮＡは、インビトロおよびインビボで、異なる実験にお
いて、向上したＲＮＡ干渉活性、増加した作用時間、ヌクレアーゼ分解に対する向上した
抵抗性、および／または向上した特異性を有することが示されている。例えば、図１〜３
を参照されたい。
【０２３６】
例えば、Ｃ３ｐＣ６を含む、（２つのジヌクレオチドオーバーハングを有する、標準的
な構造の）２１−ｍｅｒおよび平滑末端１８−ｍｅｒを含む、標的Ｆ７に対するいくつか
の試験ｓｉＲＮＡを構築した。Ｃ３ｐＣ６分子において、アンチセンス鎖の３’末端が、
５’から３’の順に：Ｃ３であるスペーサ、ホスフェート、およびＣ６である３’末端キ
ャップをさらに含む。２１−ｍｅｒおよび１８−ｍｅｒは両方とも、同じ配列を標的にし
；両方とも同じ５’開始点を有する。しかしながら、Ｃ３ｐＣ６を含むＲＮＡｉ剤は、２
１−ｍｅｒ（０．６１（±０．０１７）ｍｇ／ｋｇ）より低いＥＤ５０（０．４４（±０
．０２２）ｍｇ／ｋｇ）を示した。
【０２３７】
さらに、ヘプシジンＲＮＡｉ剤（Ｘ０５８  ３’末端キャップを有する）をインビボで
試験する場合、２日後、対応する２１−ｍｅｒ  ＲＮＡｉ剤（ジヌクレオチドオーバーハ
ングを有する）より効果が高いことが分かった。ヘプシジンに対して、対応する２１−ｍ
ｅｒ（ジヌクレオチドオーバーハングを有する）より効果が高い本明細書に開示される３
’末端キャップを有するいくつかのＲＮＡｉ剤が開発されている。
【０２３８】
ヘプシジン２１−ｍｅｒ  ｓｉＲＮＡが、スペーサ、ホスフェートまたはヌクレオシド
間リンカーおよび３’末端キャップを含む３’末端を有する対応する１８−ｍｅｒよりＲ
ＩＳＣへのセンス鎖組み込みを起こしやすかったことも分かった。したがって、この場合
、２１−ｍｅｒは、より非特異的である。
【０２３９】
したがって、様々な実験において、スペーサ、ホスフェートまたはヌクレオシド間リン
カーおよび３’末端キャップを含む３’末端を含むＲＮＡｉ剤は、対応する２１−ｍｅｒ
ｓｉＲＮＡと比較して向上した活性を実証することができる。
【０２４０】
本開示は、標的遺伝子の発現を低下させ、またはその遺伝子産物のレベルおよび／また
は活性を阻害するかまたは低下させる方法、またはインビトロでの、またはヒトなどの哺
乳動物などの生物における標的遺伝子の過剰発現に関連する疾病を治療する方法であって
、本明細書に開示される、スペーサ、ホスフェートまたはヌクレオシド間リンカーおよび
３’末端キャップを含む３’末端を有するＲＮＡｉ剤を生理学的に活性な量でヒトに投与
する工程を含む方法も包含する。
【０２４１】
３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤
様々な実施形態において、本開示は、以下のものを包含する：
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＣ７
アミノであるＲＮＡｉ剤。
【０２４２】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＣ３
アミノであるＲＮＡｉ剤。
【０２４３】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が１８のヌクレオチドであり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＣ６
であるＲＮＡｉ剤。Ｃ６は、１８−ｍｅｒフォーマットで、インビトロおよびインビボで
活性であることが実証されている。
【０２４４】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＣ８
であるＲＮＡｉ剤。
【０２４５】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＣ１
０であるＲＮＡｉ剤。Ｃ１０は、１８−ｍｅｒおよび１９−ｍｅｒフォーマットを有する
ｓｉＲＮＡの有益な持続時間を実証した。
【０２４６】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＣ１
２であるＲＮＡｉ剤。Ｃ１２は、インビトロでｓｉＲＮＡにおいて活性であることを示し
た。
【０２４７】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ０
２７であるＲＮＡｉ剤。
【０２４８】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ０
３８であるＲＮＡｉ剤。
【０２４９】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ０
５０であるＲＮＡｉ剤。
【０２５０】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ０
５１であるＲＮＡｉ剤。
【０２５１】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ０
５２であるＲＮＡｉ剤。
【０２５２】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ０
５８であるＲＮＡｉ剤。
【０２５３】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ０
５９であるＲＮＡｉ剤。
【０２５４】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ０
６０であるＲＮＡｉ剤。
【０２５５】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ０
６１であるＲＮＡｉ剤。
【０２５６】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ０
６２であるＲＮＡｉ剤。
【０２５７】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ０
６３であるＲＮＡｉ剤。
【０２５８】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ０
６４であるＲＮＡｉ剤。
【０２５９】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ０
６５であるＲＮＡｉ剤。
【０２６０】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ０
６６であるＲＮＡｉ剤。
【０２６１】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ０
６７であるＲＮＡｉ剤。
【０２６２】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ０
６８であるＲＮＡｉ剤。
【０２６３】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ０
６９であるＲＮＡｉ剤。
【０２６４】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ０
９７であるＲＮＡｉ剤。
【０２６５】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ０
９８であるＲＮＡｉ剤。
【０２６６】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
０９であるＲＮＡｉ剤。
【０２６７】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
１０であるＲＮＡｉ剤。
【０２６８】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
１１であるＲＮＡｉ剤。
【０２６９】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
１２であるＲＮＡｉ剤。
【０２７０】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
１３であるＲＮＡｉ剤。
【０２７１】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
００９であるＲＮＡｉ剤。
【０２７２】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
０１０であるＲＮＡｉ剤。
【０２７３】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
０１１であるＲＮＡｉ剤。
【０２７４】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
０１２であるＲＮＡｉ剤。
【０２７５】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
０１３であるＲＮＡｉ剤。
【０２７６】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
０１５であるＲＮＡｉ剤。
【０２７７】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
０１６であるＲＮＡｉ剤。
【０２７８】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
０１７であるＲＮＡｉ剤。
【０２７９】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
０１８であるＲＮＡｉ剤。
【０２８０】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
０１９であるＲＮＡｉ剤。
【０２８１】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
０２０であるＲＮＡｉ剤。
【０２８２】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
０２１であるＲＮＡｉ剤。
【０２８３】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
０２２であるＲＮＡｉ剤。
【０２８４】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
０２４であるＲＮＡｉ剤。
【０２８５】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
０２５であるＲＮＡｉ剤。
【０２８６】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
０２６であるＲＮＡｉ剤。
【０２８７】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
０２７であるＲＮＡｉ剤。
【０２８８】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
０２８であるＲＮＡｉ剤。
【０２８９】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
０４７であるＲＮＡｉ剤。
【０２９０】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
０４８であるＲＮＡｉ剤。
【０２９１】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
０４９であるＲＮＡｉ剤。
【０２９２】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
０６２であるＲＮＡｉ剤。
【０２９３】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
０６３であるＲＮＡｉ剤。
【０２９４】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがＸ１
０６４であるＲＮＡｉ剤。
【０２９５】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップがリビ
トールであるＲＮＡｉ剤。
【０２９６】
この項に列挙されるあらゆるＲＮＡｉ剤について、ＲＮＡｉ剤は、任意の長さ、配列ま
たは標的のものであり得、非限定的な例として、二本鎖ＲＮＡであり得、ここで、任意選
択的に、１つまたは複数のホスフェートが、修飾されたヌクレオシド間リンカーによって
置換され、任意選択的に、１つまたは複数のヌクレオチドが修飾され、任意選択的に、１
つまたは複数のＲＮＡヌクレオチドが、ＤＮＡ、ＰＮＡ、ＬＮＡ、モルホリノ、ＴＮＡ、
ＧＮＡ、ＡＮＡ、ＨＮＡ、ＣｅＮＡ、ＦＡＮＡ、および／またはＵＮＡによって置換され
る。
【０２９７】
ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の順に：
スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末端キャ
ップをさらに含むＲＮＡｉ剤
様々な実施形態において、本開示は、５’から３’の順に、３’末端ホスフェートまた
は修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端する鎖、スペーサ、ホスフェートまたは修飾
されたヌクレオシド間リンカー、および３’末端キャップ（例えば、表１または２に列挙
されるかまたは他の形で本明細書に開示される任意の３’末端キャップ）を含むＲＮＡｉ
剤に関する。
【０２９８】
様々な実施形態において、本開示は、以下のものを包含する：
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含むＲＮＡｉ剤。
【０２９９】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであるＲＮＡｉ剤。
【０３００】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、スペーサが２’−デオキシ−リビトールであるＲＮＡｉ剤。
【０３０１】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、スペーサがジリビトールであるＲＮＡｉ剤。
【０３０２】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、スペーサが２’−メトキシエトキシ−リビトールであるＲＮＡ
ｉ剤。
【０３０３】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、スペーサがＣ３であるＲＮＡｉ剤。
【０３０４】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、スペーサがＣ４であるＲＮＡｉ剤。
【０３０５】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、スペーサがＣ５であるＲＮＡｉ剤。
【０３０６】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、スペーサがＣ６であるＲＮＡｉ剤。
【０３０７】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、スペーサが４−メトキシブタン−１，３−ジオールであるＲＮ
Ａｉ剤。
【０３０８】
この第２の鎖中のあらゆるＲＮＡｉ剤において、３’末端キャップは、トリエチレング
リコール、シクロヘキシル、フェニル、ＢＰ（ビフェニル）、リトコール（リトコール酸
）、アダマンタン、Ｃ３アミノ、Ｃ７アミノ、Ｃ３、Ｃ６、Ｃ８、Ｃ１０、Ｃ１２、Ｘ０
２７、Ｘ０３８、Ｘ０５０、Ｘ０５１、Ｘ０５２、Ｘ０５８、Ｘ０５９、Ｘ０６０、Ｘ０
６１、Ｘ０６２、Ｘ０６３、Ｘ０６４、Ｘ０６５、Ｘ０６６、Ｘ０６７、Ｘ０６８、Ｘ０
６９、Ｘ０９７、Ｘ０９８、Ｘ１０９、Ｘ１１０、Ｘ１１１、Ｘ１１２、Ｘ１１３、Ｘ１
００９、Ｘ１０１０、Ｘ１０１１、Ｘ１０１２、Ｘ１０１３、Ｘ１０１５、Ｘ１０１６、
Ｘ１０１７、Ｘ１０１８、Ｘ１０１９、Ｘ１０２０、Ｘ１０２１、Ｘ１０２２、Ｘ１０２
４、Ｘ１０２５、Ｘ１０２６、Ｘ１０２７、Ｘ１０２８、Ｘ１０４７、Ｘ１０４８、Ｘ１
０４９、Ｘ１０６２、Ｘ１０６３、Ｘ１０６４、またはリビトールから選択される。さら
に、この項に列挙されるあらゆるＲＮＡｉ剤について、ＲＮＡｉ剤は、任意の長さ、配列
または標的のものであり得、非限定的な例として、二本鎖ＲＮＡであり得、ここで、任意
選択的に、１つまたは複数のホスフェートが、修飾されたヌクレオシド間リンカーによっ
て置換され、任意選択的に、１つまたは複数のヌクレオチドが修飾され、任意選択的に、
１つまたは複数のＲＮＡヌクレオチドが、ＤＮＡ、ＰＮＡ、ＬＮＡ、モルホリノ、ＴＮＡ
、ＧＮＡ、ＡＮＡ、ＨＮＡ、ＣｅＮＡ、ＦＡＮＡ、および／またはＵＮＡによって置換さ
れる。
【０３０９】
スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末端キャ
ップを含むさらなる実施形態
本開示は、特に、以下のものを包含する：
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがＣ３であり、３’末端キャップがＣ６であるＲＮ
Ａｉ剤。この構造は、Ｃ３ｐＣ６と表記される。
【０３１０】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＣ３であ
るＲＮＡｉ剤。この構造は、ｒｉｂＣ３またはｒｉｂｐＣ３と表記される。
【０３１１】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＣ６であ
るＲＮＡｉ剤。この構造は、ｒｉｂｐＣ６と表記される。ｒｉｂｐＣ６を含むＲＮＡｉ剤
の有効性が、図５Ａに示される。この３’末端キャップを含む有効なＲＮＡｉ剤が、図１
１に示される。ＲｉｂｐＣ６も、１８−ｍｅｒフォーマットで、インビボで活性である。
【０３１２】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＣ６であ
るＲＮＡｉ剤。この構造は、ｒｉｂＣ６またはｒｉｂｐＣ６と表記される。
【０３１３】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＣ８であ
るＲＮＡｉ剤。この構造は、ｒｉｂＣ８またはｒｉｂｐＣ８と表記される。
【０３１４】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＣ１０で
あるＲＮＡｉ剤。この構造は、ｒｉｂＣ１０またはｒｉｂｐＣ１０と表記される。
【０３１５】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＣ１２で
あるＲＮＡｉ剤。この構造は、ｒｉｂＣ１２またはｒｉｂｐＣ１２と表記される。
【０３１６】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＢＰであ
るＲＮＡｉ剤。この構造は、ｒｉｂｐＢＰと表記される。この３’末端キャップを含むＲ
ＮＡｉ剤の有効性が、図５Ａに示される。この３’末端キャップは、１８−ｍｅｒフォー
マットで、インビトロで活性である。
【０３１７】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ０２７
であるＲＮＡｉ剤。この構造は、ｒｉｂＸ０２７と表記される。この３’末端キャップを
含むＲＮＡｉ剤の有効性が、図５Ａに示される。
【０３１８】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ０３８
であるＲＮＡｉ剤。この構造は、ｒｉｂＸ０３８と表記される。この３’末端キャップを
含むＲＮＡｉ剤の有効性が、図５Ａに示される。
【０３１９】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ０５０
であるＲＮＡｉ剤。この構造は、ｒｉｂＸ０５０と表記される。この３’末端キャップを
含むＲＮＡｉ剤の有効性が、図５Ａに示される。
【０３２０】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ０５１
であるＲＮＡｉ剤。この構造は、ｒｉｂＸ０５１と表記される。この３’末端キャップを
含むＲＮＡｉ剤の有効性が、図５Ａに示される。
【０３２１】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ０５２
であるＲＮＡｉ剤。この構造は、ｒｉｂＸ０５２と表記される。この３’末端キャップを
含むＲＮＡｉ剤の有効性が、図５Ａに示される。
【０３２２】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ０５８
であるＲＮＡｉ剤。この構造は、ｒｉｂＸ０５８と表記される。この３’末端キャップを
含むＲＮＡｉ剤の有効性が、図５Ａに示される。この３’末端キャップを含む有効なＲＮ
Ａｉ剤が、図１１に示される。
【０３２３】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ０５９
であるＲＮＡｉ剤。この構造は、ｒｉｂＸ０５９と表記される。この３’末端キャップを
含むＲＮＡｉ剤の有効性が、図５Ａに示される。
【０３２４】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ０６０
であるＲＮＡｉ剤。この構造は、ｒｉｂＸ０６０と表記される。この３’末端キャップを
含むＲＮＡｉ剤の有効性が、図５Ａに示される。
【０３２５】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ０６１
であるＲＮＡｉ剤。この構造は、ｒｉｂＸ０６１と表記される。この３’末端キャップを
含むＲＮＡｉ剤の有効性が、図５Ｂに示される。
【０３２６】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ０６２
であるＲＮＡｉ剤。これは、ｒｉｂＸ０６２と表記される。この３’末端キャップを含む
ＲＮＡｉ剤の有効性が、図５Ｂに示される。
【０３２７】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ０６３
であるＲＮＡｉ剤。この構造は、ｒｉｂＸ０６３と表記される。この３’末端キャップを
含むＲＮＡｉ剤の有効性が、図５Ｂに示される。
【０３２８】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ０６４
であるＲＮＡｉ剤。ｒｉｂＸ０６４。この３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤の有効性が
、図５Ｂに示される。
【０３２９】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ０６５
であるＲＮＡｉ剤。この構造は、ｒｉｂＸ０６５と表記される。この３’末端キャップを
含むＲＮＡｉ剤の有効性が、図５Ｂに示される。
【０３３０】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ０６６
であるＲＮＡｉ剤。この構造は、ｒｉｂＸ０６６と表記される。この３’末端キャップを
含むＲＮＡｉ剤の有効性が、図５Ｂに示される。
【０３３１】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ０６７
であるＲＮＡｉ剤。この構造は、ｒｉｂＸ０６７と表記される。この３’末端キャップを
含むＲＮＡｉ剤の有効性が、図５Ｂに示される。
【０３３２】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ０６８
であるＲＮＡｉ剤。この構造は、ｒｉｂＸ０６８と表記される。この３’末端キャップを
含むＲＮＡｉ剤の有効性が、図５Ｂに示される。
【０３３３】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ０６９
であるＲＮＡｉ剤。この構造は、ｒｉｂＸ０６９と表記される。この３’末端キャップを
含むＲＮＡｉ剤の有効性が、図５Ｂに示される。
【０３３４】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ０９７
であるＲＮＡｉ剤。
【０３３５】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ０９８
であるＲＮＡｉ剤。
【０３３６】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１０９
であるＲＮＡｉ剤。
【０３３７】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１１０
であるＲＮＡｉ剤。
【０３３８】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１１１
であるＲＮＡｉ剤。
【０３３９】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１１２
であるＲＮＡｉ剤。
【０３４０】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１１３
であるＲＮＡｉ剤。
【０３４１】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１００
９であるＲＮＡｉ剤。
【０３４２】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１０１
０であるＲＮＡｉ剤。
【０３４３】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１０１
１であるＲＮＡｉ剤。
【０３４４】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１０１
２であるＲＮＡｉ剤。
【０３４５】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１０１
３であるＲＮＡｉ剤。
【０３４６】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１０１
５であるＲＮＡｉ剤。
【０３４７】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１０１
６であるＲＮＡｉ剤。
【０３４８】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１０１
７であるＲＮＡｉ剤。
【０３４９】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１０１
８であるＲＮＡｉ剤。
【０３５０】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１０１
９であるＲＮＡｉ剤。
【０３５１】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１０２
０であるＲＮＡｉ剤。
【０３５２】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１０２
１であるＲＮＡｉ剤。
【０３５３】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１０２
２であるＲＮＡｉ剤。
【０３５４】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１０２
４であるＲＮＡｉ剤。
【０３５５】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１０２
５であるＲＮＡｉ剤。
【０３５６】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１０２
６であるＲＮＡｉ剤。
【０３５７】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１０２
７であるＲＮＡｉ剤。
【０３５８】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１０２
８であるＲＮＡｉ剤。
【０３５９】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１０４
７であるＲＮＡｉ剤。
【０３６０】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１０４
８であるＲＮＡｉ剤。
【０３６１】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１０４
９であるＲＮＡｉ剤。
【０３６２】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１０６
２であるＲＮＡｉ剤。
【０３６３】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１０６
３であるＲＮＡｉ剤。
【０３６４】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがＸ１０６
４であるＲＮＡｉ剤。
【０３６５】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖が、３’
末端ホスフェートで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、ホスフェート、および３’
末端キャップをさらに含み、スペーサがリビトールであり、３’末端キャップがリビトー
ルであるＲＮＡｉ剤。
【０３６６】
この項に列挙されるあらゆる構造について、ＲＮＡｉ剤は、任意の長さ、配列または標
的のものであり得、非限定的な例として、二本鎖ＲＮＡであり得、ここで、任意選択的に
、１つまたは複数のホスフェートが、修飾されたヌクレオシド間リンカーによって置換さ
れ、任意選択的に、１つまたは複数のヌクレオチドが修飾され、任意選択的に、１つまた
は複数のＲＮＡヌクレオチドが、ＤＮＡ、ＰＮＡ、ＬＮＡ、モルホリノ、ＴＮＡ、ＧＮＡ
、ＡＮＡ、ＨＮＡ、ＣｅＮＡ、ＦＡＮＡ、および／またはＵＮＡによって置換される。
【０３６７】
スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末端キャ
ップを含むさらなる実施形態
本開示は、特に、以下のものを包含する：
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＣ３であるＲＮＡｉ剤。
【０３６８】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＣ６であるＲＮＡｉ剤。
【０３６９】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＣ８であるＲＮＡｉ剤。
【０３７０】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＣ１０であるＲＮＡｉ剤。
【０３７１】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＣ１２であるＲＮＡｉ剤。
【０３７２】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＢＰであるＲＮＡｉ剤。
【０３７３】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ０２７であるＲＮＡｉ剤。
【０３７４】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ０３８であるＲＮＡｉ剤。
【０３７５】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ０５０であるＲＮＡｉ剤。
【０３７６】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ０５１であるＲＮＡｉ剤。
【０３７７】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ０５２であるＲＮＡｉ剤。
【０３７８】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ０５８であるＲＮＡｉ剤。
【０３７９】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ０５９であるＲＮＡｉ剤。
【０３８０】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ０６０であるＲＮＡｉ剤。
【０３８１】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ０６１であるＲＮＡｉ剤。
【０３８２】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ０６２であるＲＮＡｉ剤。これは、ｒｉ
ｂＸ０６２と表記される。この３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤の有効性が、図５Ｂに
示される。
【０３８３】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ０６３であるＲＮＡｉ剤。
【０３８４】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ０６４であるＲＮＡｉ剤。ｒｉｂＸ０６
４。この３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤の有効性が、図５Ｂに示される。
【０３８５】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ０６５であるＲＮＡｉ剤。
【０３８６】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ０６６であるＲＮＡｉ剤。
【０３８７】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ０６７であるＲＮＡｉ剤。
【０３８８】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ０６８であるＲＮＡｉ剤。
【０３８９】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ０６９であるＲＮＡｉ剤。
【０３９０】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ０９７であるＲＮＡｉ剤。
【０３９１】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ０９８であるＲＮＡｉ剤。
【０３９２】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１０９であるＲＮＡｉ剤。
【０３９３】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１１０であるＲＮＡｉ剤。
【０３９４】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１１１であるＲＮＡｉ剤。
【０３９５】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１１２であるＲＮＡｉ剤。
【０３９６】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１１３であるＲＮＡｉ剤。
【０３９７】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１００９であるＲＮＡｉ剤。
【０３９８】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１０１０であるＲＮＡｉ剤。
【０３９９】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１０１１であるＲＮＡｉ剤。
【０４００】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１０１２であるＲＮＡｉ剤。
【０４０１】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１０１３であるＲＮＡｉ剤。
【０４０２】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１０１５であるＲＮＡｉ剤。
【０４０３】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１０１６であるＲＮＡｉ剤。
【０４０４】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１０１７であるＲＮＡｉ剤。
【０４０５】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１０１８であるＲＮＡｉ剤。
【０４０６】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１０１９であるＲＮＡｉ剤。
【０４０７】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１０２０であるＲＮＡｉ剤。
【０４０８】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１０２１であるＲＮＡｉ剤。
【０４０９】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１０２２であるＲＮＡｉ剤。
【０４１０】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１０２４であるＲＮＡｉ剤。
【０４１１】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１０２５であるＲＮＡｉ剤。
【０４１２】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１０２６であるＲＮＡｉ剤。
【０４１３】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１０２７であるＲＮＡｉ剤。
【０４１４】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１０２８であるＲＮＡｉ剤。
【０４１５】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１０４７であるＲＮＡｉ剤。
【０４１６】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１０４８であるＲＮＡｉ剤。
【０４１７】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１０４９であるＲＮＡｉ剤。
【０４１８】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１０６２であるＲＮＡｉ剤。
【０４１９】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１０６３であるＲＮＡｉ剤。
【０４２０】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがＸ１０６４であるＲＮＡｉ剤。
【０４２１】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップがリビトールであるＲＮＡｉ剤。
【０４２２】
第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第２の鎖の３’末
端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の
順に：スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末
端キャップをさらに含み、３’末端キャップは、トリエチレングリコール、シクロヘキシ
ル、フェニル、ＢＰ（ビフェニル）、リトコール（リトコール酸）、アダマンタン、Ｃ３
アミノ、Ｃ７アミノ、Ｃ３、Ｃ６、Ｃ８、Ｃ１０、Ｃ１２、Ｘ０２７、Ｘ０３８、Ｘ０５
０、Ｘ０５１、Ｘ０５２、Ｘ０５８、Ｘ０５９、Ｘ０６０、Ｘ０６１、Ｘ０６２、Ｘ０６
３、Ｘ０６４、Ｘ０６５、Ｘ０６６、Ｘ０６７、Ｘ０６８、Ｘ０６９、Ｘ０９７、Ｘ０９
８、Ｘ１０９、Ｘ１１０、Ｘ１１１、Ｘ１１２、Ｘ１１３、Ｘ１００９、Ｘ１０１０、Ｘ
１０１１、Ｘ１０１２、Ｘ１０１３、Ｘ１０１５、Ｘ１０１６、Ｘ１０１７、Ｘ１０１８
、Ｘ１０１９、Ｘ１０２０、Ｘ１０２１、Ｘ１０２２、Ｘ１０２４、Ｘ１０２５、Ｘ１０
２６、Ｘ１０２７、Ｘ１０２８、Ｘ１０４７、Ｘ１０４８、Ｘ１０４９、Ｘ１０６２、Ｘ
１０６３、Ｘ１０６４、またはリビトールである。
【０４２３】
この項に列挙されるあらゆる構造について、ＲＮＡｉ剤は、任意の長さ、配列または標
的のものであり得、非限定的な例として、二本鎖ＲＮＡであり得、任意選択的に、１つま
たは複数のホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーが、修飾されたヌクレ
オシド間リンカーによって置換され、任意選択的に、１つまたは複数のヌクレオチドが修
飾され、任意選択的に、１つまたは複数のＲＮＡヌクレオチドが、ＤＮＡ、ＰＮＡ、ＬＮ
Ａ、モルホリノ、ＴＮＡ、ＧＮＡ、ＡＮＡ、ＨＮＡ、ＣｅＮＡ、ＦＡＮＡ、および／また
はＵＮＡによって置換される。
【０４２４】
本開示は、第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１および／または第
２の鎖が、ＰＳ（ホスホロチオエート）で終端し、３’末端キャップをさらに含むＲＮＡ
ｉ剤も包含する。本開示は、第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１お
よび／または第２の鎖が、ＰＳ（ホスホロチオエート）で終端し、５’から３’の順に：
スペーサ、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末端キャ
ップをさらに含むＲＮＡｉ剤も包含する。
【０４２５】
したがって、本開示は、以下のものを包含する：
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、第１および／または第２の鎖が、ＰＳで終端し、３’末端キャップをさらに含み、３’
末端キャップがＣ３であるＲＮＡｉ剤。この構造は、ＰＳ−Ｃ３と表記される。この３’
末端キャップを含むＲＮＡｉ剤のこの有効性が、実施例６および図２０Ａ〜Ｅ）に記載さ
れている。
【０４２６】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、第１および／または第２の鎖が、ＰＳで終端し、３’末端キャップをさらに含み、３’
末端キャップがＣ６であるＲＮＡｉ剤。この構造は、ＰＳ−Ｃ６と表記される。
【０４２７】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、第１および／または第２の鎖が、ＰＳで終端し、３’末端キャップをさらに含み、３’
末端キャップがＣ８であるＲＮＡｉ剤。この構造は、ＰＳ−Ｃ８と表記される。
【０４２８】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、第１および／または第２の鎖が、ＰＳで終端し、３’末端キャップをさらに含み、３’
末端キャップがＣ１０であるＲＮＡｉ剤。この構造は、ＰＳ−Ｃ１０と表記される。
【０４２９】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、第１および／または第２の鎖が、ＰＳで終端し、３’末端キャップをさらに含み、３’
末端キャップがＣ１２であるＲＮＡｉ剤。この構造は、ＰＳ−Ｃ１２と表記される。
【０４３０】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり
、第１および／または第２の鎖が、ＰＳで終端し、３’末端キャップをさらに含み、３’
末端キャップがＢＰであるＲＮＡｉ剤。この構造は、ＰＳ−ＢＰと表記される。
【０４３１】
代替名および３’末端キャップのＤＭＴ、スクシネートおよびカルボキシレート形態
様々な実施形態において、本開示は、３’末端キャップ（またはスペーサおよび３’末
端キャップ）を含むＲＮＡｉ剤を構築するのに使用され得る、様々な３’末端キャップの
ＤＭＴ、スクシネートおよびカルボキシレート形態を包含する。表１に示される化合物に
おいて、例えば、独立して、Ｒ１＝ＯＨ、ＯＨのスクシネートまたは保護された形態であ
り；Ｒ２＝ＯＤＭＴ（ここで、ＯＤＭＴが、酸素原子を介して結合されるＤＭＴ（４，４
’−ジメトキシトリチル）である）、またはカルボキシレートである。ＯＨの保護された
形態としては、以下に限定はされないが、エーテル、リン酸エステル、メチルテトラアセ
チルグルクロネート、パーアセチルグリコシドおよびアミノ酸ポリペプチドエステルが挙
げられる。
【０４３２】
代替名が、様々な３’末端キャップの様々なＤＭＴ、スクシネートおよびカルボキシレ
ート形態（「リガンド」とも呼ばれる）について考案されている。
【０４３３】
スクシネート形態は、任意選択的に、ＲＮＡｉ剤合成のための固体担体上にこれらの分
子を充填するのに使用され得る。１つのこのような合成が、図１２に示されるが、他の経
路も可能である。
【０４３４】
固相ＣＰＧ充填およびオリゴヌクレオチド合成に使用されるスクシニル（ＣＯ２Ｈ−（
ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｈ；ｎ＝２）リンカーに加えて、様々な長さの他の二酸［ＣＯ２Ｈ−
（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｈ］、ならびにヒドロキノン−Ｏ，Ｏ’−ジアシル（Ｐｏｎ  ｅｔ
ａｌ．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９９７，１８，３６２９−３６３５）、Ｎ−
メチル−スクシンイミド［３，４−ｂ］−７−オキサビシクロ［２．２．１］ヘプタン−
６−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）−５−スクシノイル（Ｇｕｚａｅｖ  ｅｔ
ａｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００３，１２５，２３８０−２３８１；Ｋｕｍ
ａｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ２００６，６２，４５２８−４５３４）、
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−４−（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキ
シ）−２，５−ジメトキシテトラヒドロフラン−３−スクシノイル（Ｓｃｏｔｔ  ｅｔ  
ａｌ．“Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ｉｎ  Ｓｏｌｉ
ｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｙｍｐ
ｏｓｉｕｍ，”１９９４，Ｅｄ．Ｒｏｇｅｒ  Ｅｐｔｏｎ，Ｍａｙｆｌｏｗｅｒ  Ｗｏｒ
ｌｄｗｉｄｅ，１１５−１２４）、および１−ジメトキシトリチルオキシ−２−Ｏ−ジク
ロロアセチル−プロピル−３−Ｎ−スクシニル（Ａｚｈａｙｅｖ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏ
ｎ，１９９９，５５，７８７−８００；Ａｚｈａｙｅｖ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｅｔｒａｈｅｄ
ｒｏｎ  ２００１，５７，４９７７−４９８６）を含む、当該技術分野において公知の他
の「一般的な担体（ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ｓｕｐｐｏｒｔ）」の手法（例えば、Ｇｌｅｎ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｓｔｅｒｌｉｎｇ，ＶＡ）製のＧｌｅｎ  ＵｎｙＳｕｐｐｏｒｔ（
商標））が使用され得る。
【０４３５】
スクシネートは、ｓｉＲＮＡの最終的な形態中に存在しない合成手段に過ぎないため、
痕跡が残らない。
【０４３６】
カルボキシレート形態を用いたＰＡＺ結合アッセイは、以下に開示されるＰＡＺリガン
ドのいくつかが、このアッセイにおいてＰＡＺリガンドに結合しなかったため、有効性を
予測しなかったが、ＰＡＺリガンドは、ｓｉＲＮＡにコンジュゲートされる際に３’キャ
ップとして有効であることが後に分かったことが留意される。
【０４３７】
３’末端キャップのＤＭＴ−リガンド、スクシネート−リガンドおよびカルボキシレー
ト形態の構造が、以下の表４に示される。
【０４３８】
【表４９】
2019135236.tif 000061
【０４３９】
【表５０】
2019135236.tif 000062
【０４４０】
【表５１】
2019135236.tif 000063
【０４４１】
【表５２】
2019135236.tif 000064
【０４４２】
【表５３】
2019135236.tif 000065
【０４４３】
【表５４】
2019135236.tif 000066
【０４４４】
【表５５】
2019135236.tif 000067
【０４４５】
【表５６】
2019135236.tif 000068
【０４４６】
【表５７】
2019135236.tif 000069
【０４４７】
【表５８】
2019135236.tif 000070
【０４４８】
３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤
したがって、本開示は、第１および第２の鎖を含む二本鎖ＲＮＡｉ剤（ｓｉＲＮＡを含
むがこれに限定されない、ＲＮＡ干渉を仲介することが可能な二本鎖分子）であって、第
１および／または第２の鎖が、標的遺伝子の少なくとも１５から少なくとも１９以上の連
続ヌクレオチドを含み、ＲＮＡｉ剤が、一方または両方の鎖上に３’末端キャップを含む
ＲＮＡｉ剤を提供する。第１および第２の鎖は、文脈に応じて、アンチセンス鎖およびセ
ンス鎖、またはセンス鎖およびアンチセンス鎖であり得る。センス鎖およびアンチセンス
鎖は、不連続であるか、連続であるか、または、例えば、ループまたはリンカーを介して
、共有結合され得る。特に、３’末端キャップは、表１または２に列挙されるかまたは他
の形で本明細書に開示されるものから選択される。両方の鎖が、３’末端キャップを含む
場合、各鎖における３’末端キャップは、同じかまたは異なり得る。ＲＮＡｉ剤は、特に
、一実施形態において、例えば、１７〜２３のヌクレオチド、１５〜１９、１８〜２２の
ヌクレオチド、および／または１９〜２１のヌクレオチドなどの鎖当たり３０未満のヌク
レオチドを含むことができ、１つまたは複数のヌクレオチドにおいて（例えば、２’炭素
において）修飾および非修飾であり得る。
【０４４９】
二本鎖ＲＮＡｉ剤は、０、１または２つの平滑末端、および／または一方または両方の
３’および／または５’末端から［例えば、１、２、３または４つのヌクレオチド（すな
わち、１〜４つのｎｔ）の］オーバーハングを有し得る。
【０４５０】
ＲＮＡｉ剤は、リボヌクレオチドサブユニットまたはデオキシリボヌクレオチドサブユ
ニットを含むかまたは他の関連する修飾された形態を含むかにかかわらず、天然のヌクレ
オチドサブユニット（例えば、リボヌクレオチド）のみ、または置換ヌクレオチドサブユ
ニットの１つまたは複数の糖、ホスフェートまたは塩基に対する１つまたは複数の修飾の
いずれかを含有し得る。したがって、ＲＮＡｉ剤は、代替的な骨格ヌクレオチド（例えば
、ＰＮＡ、モルホリノ、ＬＮＡ、ＴＮＡ、ＧＮＡ、ＡＮＡ、ＨＮＡ、ＣｅＮＡ、ＦＡＮＡ
、および／またはＵＮＡなど）および／または修飾ヌクレオチドによる、天然のヌクレオ
チドの置換を含むものを含む。
【０４５１】
一実施形態において、開示されるＲＮＡｉ剤の修飾された形態は、ウリジンを置換する
チミジン（ＲＮＡ、または、好ましくは、ＤＮＡとして）を有するか、またはイノシン塩
基を有する。ある実施形態において、開示されるＲＮＡｉ剤の修飾された形態は、「パッ
センジャー」（別名「センス」）鎖の切れ目、ガイド鎖とパッセンジャー鎖とのミスマッ
チ、ガイド鎖およびパッセンジャー鎖の両方の一部（例えば、シード領域）のＲＮＡを置
換するＤＮＡ、および／または短縮されたパッセンジャー鎖（例えば、１５、１６、１７
または１８ｎｔ）を有し得る。ガイド鎖とともに使用するのに好適な機能的３’末端キャ
ップが同定されると、ＲＮＡｉ剤の修飾および変形が、容易に行われ得る。開示される３
’末端キャップは、互いに矛盾しない実施形態または特徴の任意の組合せ（例えば、短縮
されたパッセンジャー鎖との塩基修飾の組合せ；または切れ目のあるパッセンジャー鎖お
よび塩基修飾；またはシード領域の部分または全てを置換するＤＮＡおよび残りのＲＮＡ
における塩基修飾；または任意の送達ビヒクルとの修飾の組合せなど）を含む任意のＲＮ
Ａｉ剤に使用され得る。
【０４５２】
一実施形態において、修飾は、ＲＮＡｉ剤の有効性、安定性（例として、例えば、血清
または腸液中のヌクレアーゼに対する）を向上させ、および／またはＲＮＡｉ剤の免疫原
性を低下させる。本開示の一実施形態は、少なくとも１つの非天然の核酸塩基を含む二本
鎖オリゴヌクレオチドに関する。特定の実施形態において、非天然の核酸塩基は、ジフル
オロトリル、ニトロインドリル、ニトロピロリル、またはニトロイミダゾリルである。特
定の実施形態において、非天然の核酸塩基は、ジフルオロトリルである。特定の実施形態
において、２つのオリゴヌクレオチド鎖の一方のみが、非天然の核酸塩基を含有する。特
定の実施形態において、オリゴヌクレオチド鎖の両方が、非天然の核酸塩基を含有する。
【０４５３】
ＲＮＡｉ剤は、例えば、この薬剤の安定性、分配および／または細胞取り込みなどの１
つまたは複数の特性を向上させるように選択されるリガンド、例えば、コレステロールま
たはその誘導体に任意選択的に結合され得る。ＲＮＡｉ剤は、単離されてもよく、または
本明細書に記載される方法に使用される医薬組成物の一部であり得る。特に、医薬組成物
は、特定の組織（例えば、標的遺伝子関連疾患に罹患した組織）への送達のために製剤化
され得るか、または非経口投与のために製剤化され得る。医薬組成物は、任意選択的に、
ＲＮＡｉ剤の２つ以上のタイプまたは配列を含むことができ、それぞれが、標的遺伝子ｍ
ＲＮＡの同じかまたは異なるセグメントに向けられる。任意選択的に、医薬組成物は、任
意の標的遺伝子関連疾患のための任意の公知の治療をさらに含み得るか、またはそのよう
な治療と併用され得る。医薬組成物は、本明細書に開示されるかまたは当該技術分野にお
いて公知の３’末端キャップおよび任意の好適な送達ビヒクルを含むＲＮＡｉ剤を含み得
る。
【０４５４】
本開示は、特に、標的遺伝子の過剰発現または活動亢進を特徴とする疾病の場合、細胞
内の標的遺伝子ｍＲＮＡのレベルおよび／または活性を阻害するかまたは低下させるため
の方法をさらに提供する。標的遺伝子の突然変異、過剰発現および／または活動亢進など
の変化を含む細胞は、「標的遺伝子欠陥」細胞と呼ばれる。このような方法は、さらに後
述されるように、本開示のＲＮＡｉ剤の１つまたは複数を細胞に投与する工程を含む。本
発明の方法は、ＲＮＡ干渉に関与する細胞機構を用いて、細胞内の標的ＲＮＡを選択的に
分解し、細胞を、本開示のＲＮＡｉ剤の１つまたは複数と接触させる工程を含む。
【０４５５】
本開示は、標的遺伝子の発現によって少なくとも部分的に仲介される病理的状態を有す
るヒト被験体を治療する方法であって、治療的に有効な量の、標的遺伝子を標的にするＲ
ＮＡｉ剤を被験体に投与する工程を含む方法も包含する。
【０４５６】
本開示の方法および組成物、例えば、本方法および標的遺伝子ＲＮＡｉ剤組成物は、本
明細書に記載されるかまたは当該技術分野において公知の任意の適切な投与量および／ま
たは配合において、ならびに本明細書に記載されるかまたは当該技術分野において公知の
任意の好適な投与経路で使用され得る。
【０４５７】
本方法はまた、任意選択的に、第２の薬剤を投与する工程をさらに含む。ある実施形態
において、この第２の薬剤は、標的遺伝子に対する別のＲＮＡｉ剤である。他の実施形態
において、第２の薬剤は、別の標的に向けられるものなどの別の治療であり、別の標的は
また、病理的状態において活動亢進、突然変異および／または過剰発現される。
【０４５８】
本開示の１つまたは複数の実施形態の詳細が、添付の図面および以下の説明に記載され
る。互いに矛盾しない様々な実施形態の要素（例えば、３’末端キャップ、配列、修飾、
修飾のパターン、５’末端キャップ、ＲＮＡｉ剤の組合せ、標的遺伝子ＲＮＡｉ剤および
別の薬剤を含む併用療法など）が、本明細書に記載され、当該技術分野において公知であ
るかまたは開発されているように、互いに組み合わされ得る。例えば、本明細書に開示さ
れる任意の３’末端キャップは、本明細書に開示される任意の一連の修飾または配列と組
み合わされ得る。修飾、５’末端キャップ、および／または配列の任意の組合せが、本明
細書に開示される任意の３’末端キャップとともに使用され得る。本明細書に開示される
任意のＲＮＡｉ剤は（修飾または末端キャップの任意の組合せで、または修飾または末端
キャップのいずれもなく）、本明細書に開示される任意の他のＲＮＡｉ剤または他の治療
組成物または方法と組み合わされ得る。
【０４５９】
したがって、本開示は、本明細書に開示される任意のＲＮＡｉ剤、または本明細書に開
示される任意のＲＮＡｉ剤を含む任意の方法を包含し、ここで、ＲＮＡｉ剤は、本明細書
に開示される少なくとも１つの３’末端キャップを含む。
【０４６０】
定義
便宜上、本明細書、実施例、および添付の特許請求の範囲に使用される特定の用語およ
び語句の意味が、以下に示される。本明細書の他の部分における用語の使用法と、この項
に示される用語の定義との間に明らかな矛盾がある場合、この項における定義が優先され
るものとする。
【０４６１】
「アルキル」は、規定の数の炭素原子を有する一価の飽和炭化水素鎖である。例えば、
Ｃ１〜６アルキルは、１〜６つの炭素原子を有するアルキル基を指す。アルキル基は、直
鎖状または分枝鎖状であり得る。代表的な分枝鎖状アルキル基は、１つ、２つ、または３
つの分枝を有する。アルキル基の例としては、以下に限定はされないが、メチル、エチル
、プロピル（ｎ−プロピルおよびイソプロピル）、ブチル（ｎ−ブチル、イソブチル、ｓ
ｅｃ−ブチル、およびｔ−ブチル）、ペンチル（ｎ−ペンチル、イソペンチル、およびネ
オペンチル）、およびヘキシルが挙げられる。
【０４６２】
「アリール」は、芳香環を有する炭化水素環系である。アリール基は、単環式環系また
は二環式環系である。単環式アリール環は、フェニルを指す。本明細書において定義され
るように、二環式アリール環は、ナフチルおよびフェニルがＣ５〜７シクロアルキルまた
はＣ５〜７シクロアルケニル環に縮合された環を指す。
【０４６３】
ＲＮＡ干渉
本明細書において使用される際、「ＲＮＡ干渉」（ＲＮＡｉ）は、ＲＮＡｉ剤を用いて
、ＲＮＡｉ剤と同じかまたは非常に類似した配列を含有するメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲ
ＮＡ）を分解する転写後の標的化遺伝子サイレンシング技術である。Ｚａｍｏｒｅ  ａｎ
ｄ  Ｈａｌｅｙ，２００５，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０９，１５１９−１５２４；Ｚａｍｏｒ
ｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｃｅｌｌ，１０１，２５−３３；Ｅｌｂａｓｈｉｒ  ｅｔ
ａｌ．，２００１，Ｎａｔｕｒｅ，４１１，４９４−４９８；およびＫｒｅｕｔｚｅｒ
らのＰＣＴ公報の国際公開第００／４４８９５号パンフレット；ＦｉｒｅのＰＣＴ公報の
国際公開第９９／３２６１９号パンフレット；ＭｅｌｌｏおよびＦｉｒｅのＰＣＴ公報の
国際公開第０１／２９０５８号パンフレットなどを参照されたい。ＲＮＡｉのプロセスは
、長いｄｓＲＮＡが細胞内に導入され、リボヌクレアーゼＩＩＩ（ダイサー）によってｓ
ｉＲＮＡと呼ばれるより短い断片へと切断されるときに、自然に発生する。自然に産生さ
れるｓｉＲＮＡは、典型的に、約２１ヌクレオチド長であり、２つの２−ｎｔオーバーハ
ング（「標準的な」構造）を有する約１９塩基対二本鎖を含む。ｓｉＲＮＡの１つの鎖は
、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）に組み込まれる。この鎖（アンチセンス
鎖またはガイド鎖として知られている）は、ＲＩＳＣを相補的ｍＲＮＡへとガイドする。
次に、ＲＩＳＣ中の１つまたは複数のヌクレアーゼは、サイレンシングを誘導するように
標的ｍＲＮＡの切断を仲介する。標的ＲＮＡの切断は、アンチセンス鎖に対して相補的な
領域の中央部で起こる。Ｎｙｋａｎｅｎ，ｅｔ  ａｌ．２００１  Ｃｅｌｌ  １０７：３
０９；Ｓｈａｒｐ  ｅｔ  ａｌ．２００１  Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１５：４８５；Ｂｅｒ
ｎｓｔｅｉｎ，ｅｔ  ａｌ．２００１  Ｎａｔｕｒｅ  ４０９：３６３；Ｅｌｂａｓｈｉ
ｒ，ｅｔ  ａｌ．２００１  Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１５：１８８を参照されたい。
【０４６４】
本明細書において使用される際、「ＲＮＡｉ剤」という用語は、ＲＮＡ干渉を仲介する
ことが可能な様々な天然および人工構造に加えて、ｓｉＲＮＡ（「標準的な」構造のもの
を含むがこれに限定されない）を包含する。以下に詳述されるように、これらの構造は、
標準的な構造より長くてもまたは短くてもよく、および／または平滑末端であってもよく
、および／または１つまたは複数の修飾、ミスマッチ、ギャップ、および／またはヌクレ
オチド置換を含み得る。本開示の３’末端キャップは、任意のＲＮＡｉ剤とともに使用さ
れ得、（１）ＲＮＡ干渉を可能にし；（２）作用時間および／または生物学的半減期を増
加させるという２つの機能を可能にすることができ、これらの機能は、例えば、ダイサー
のＰＡＺドメインへの結合を増加させることによって、および／または（例えば、血清ま
たは腸液中のものなどのヌクレアーゼによる）ＲＮＡｉ剤の分解を減少させるかまたは防
止することによって実現され得る。
【０４６５】
本開示のＲＮＡｉ剤は、標的ｍＲＮＡを標的にする（例えば、それに結合し、それにア
ニールするなど）。標的へのＲＮＡｉ剤の使用は、標的活性、レベルおよび／または発現
の低下、例えば、標的遺伝子または標的配列の「ノックダウン」または「ノックアウト」
をもたらす。特に、一実施形態において、標的遺伝子の過剰発現または活動亢進を特徴と
する病態の場合、標的遺伝子へのＲＮＡｉ剤の投与は、標的遺伝子活性の正常なレベルを
回復させるのに十分に、標的遺伝子標的をノックダウンする。
【０４６６】
好適なＲＮＡｉ剤は、当該技術分野において公知のまたは当業者によって考えられる任
意の方法によって選択され得る。例えば、選択基準は、以下の工程のうちの１つまたは複
数を含み得る：標的遺伝子配列およびＲＮＡｉ剤の設計の初期分析（この設計は、生物種
（ヒト、カニクイザル、マウスなど）間の配列類似性および他の遺伝子（非標的遺伝子）
との相違を考慮に入れ得る）；インビトロでのＲＮＡｉ剤のスクリーニング（例えば、細
胞内で、１０ｎＭで）；細胞内でのＥＣ５０の測定；生存のために標的遺伝子を必要とし
ない非感受性細胞、または生存のために標的遺伝子を必要とする感受性細胞を含む、ＲＮ
Ａｉ剤で処理された細胞の生存率の測定；例えば、免疫原性を推定するためにＴＮＦ−α
のレベルを試験するための、ヒトＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）を用いた試験（ここで、免
疫刺激性配列は望ましくない）；ヒト全血アッセイでの試験（ここで、新鮮なヒト血液が
、ＲＮＡｉ剤で処理され、サイトカイン／ケモカインレベルが測定され［例えば、ＴＮＦ
−α（腫瘍壊死因子−α）および／またはＭＣＰ１（単球走化性タンパク質１）］、ここ
で、免疫刺激性配列は望ましくない）；試験動物における皮下腫瘍を用いたインビボでの
遺伝子ノックダウンの測定；例えば、薬力学的（ＰＤ）マーカー、例えば、発現が標的遺
伝子によって影響される他の因子を用いた標的遺伝子修飾分析（ここで、標的遺伝子ノッ
クダウンが、それらの成分の量の用量依存的な減少をもたらす）；およびＲＮＡｉ剤の特
異的修飾の最適化。
【０４６７】
したがって、本明細書に記載される３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤が、標的遺伝子
のＲＮＡ干渉に有用である。
【０４６８】
裸のｓｉＲＮＡ（本明細書に開示されるものなどの好適な３’末端キャップを含まない
）が、インビボで短い作用時間を有し；それは、多くの場合数分間の半減期で、血清中の
ヌクレアーゼによって急速に分解されることが当該技術分野において公知である。Ｌａｙ
ｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００４  ＲＮＡ  １０：７６６−７７１；Ｃｈｏｕｎｇ  ｅｔ  
ａｌ．２００６  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．３４２：９１９
−９２７；およびＳａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．２００７  Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．１２
２：２０９−２１６。上述された多くの３’末端キャップは、ＲＮＡ干渉を可能にせず、
ヌクレアーゼから分子を保護もせずまたは持続時間を延長もしない。
【０４６９】
本明細書に開示される３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤は、これらの活性を仲介する
。
【０４７０】
開示される３’末端キャップとともに使用するのに好適なＲＮＡｉ剤構造の非限定的な
例が後述される。
【０４７１】
ＲＮＡｉ剤の構造：様々な長さ、（任意選択的な）オーバーハング、（任意選択的な）５
’末端キャップ、（任意選択的な）修飾；（任意選択的な）修飾のパターンのアンチセン
ス鎖およびセンス鎖
ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡ干渉を仲介し、第１の鎖および第２の鎖、例えば、センス鎖およ
びアンチセンス鎖（またはアンチセンス鎖およびセンス鎖）を含み、ここで、鎖は、（任
意選択的に）１つまたは２つのオーバーハング、および（任意選択的に）１つまたは２つ
の５’末端キャップをさらに含む、任意選択的に主にＲＮＡ（任意選択的に、１つまたは
複数のヌクレオチドが、置換および／または修飾される）であり、任意選択的な修飾は、
任意選択的に、様々なパターンの修飾であり得、鎖は、任意選択的に、様々な長さのもの
であり得る。本開示のＲＮＡｉ剤は、センス鎖および／またはアンチセンス鎖のいずれか
における３’末端キャップを含む。
【０４７２】
アンチセンス鎖およびセンス鎖
本明細書において使用される際の「アンチセンス鎖」（ＡＳ）という用語は、標的配列
に対して完全にまたは実質的に相補的な領域を含むＲＮＡｉ剤の鎖を指す。「アンチセン
ス鎖」は、「ガイド」鎖と呼ばれることもある。本明細書において使用される際、「相補
性の領域」という用語は、標的ｍＲＮＡ配列に対して完全にまたは実質的に相補的なアン
チセンス鎖の領域を指す。相補性の領域が、標的配列に対して完全に相補的でない場合、
ミスマッチが、分子の内部または末端領域にあり得る。一般に、最も許容されるミスマッ
チは、末端領域、例えば、５’および／または３’末端の５、４、３、または２ヌクレオ
チド以内にある。ミスマッチに対して最も感受性のアンチセンス鎖の部分は、「シード領
域」と呼ばれる。正確に１９ｎｔの鎖を含むＲＮＡｉ剤において、（５’から３’へと数
えて）１９番目の位置は、いくらかのミスマッチを許容することができる。
【０４７３】
本明細書において使用される際の「センス鎖」（Ｓ）という用語は、その用語が本明細
書において定義されるように、アンチセンス鎖の領域に対して実質的に相補的な領域を含
むＲＮＡｉ剤の鎖を指す。「センス」鎖は、「パッセンジャー」または「アンチガイド」
鎖と呼ばれることもある。それらの配列によって、アンチセンス鎖が、所望のｍＲＮＡを
標的にする一方、センス鎖は、異なる標的を標的にする。したがって、アンチセンス鎖が
、ＲＩＳＣに組み込まれる場合、適切な標的が標的化される。センス鎖の組み込みは、オ
フターゲット効果をもたらし得る。後述されるように、これらのオフターゲット効果は、
修飾の使用、またはセンス鎖における５’末端キャップの使用によって制限され得る。
【０４７４】
遺伝子の配列は、特に、コードセグメント内の不安定位置において、または非翻訳領域
中において、個体によって異なり得；個体はまた、コード配列において互いに異なってい
てもよく、ｍＲＮＡのさらなる相違をもたらす。したがって、必要な場合および必要に応
じて、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖の配列は、個々の患者のものに対応す
るように調整され得る。ＲＮＡｉ剤はまた、免疫原性、望ましくないｍＲＮＡへの結合（
例えば、「オフターゲット効果」）を減少させるために、または血液中での安定性を高め
るために、配列中で修飾され得る。これらの配列の変形は、ＲＮＡｉ剤の塩基または５’
または３’または他の末端キャップの化学修飾から独立している。
【０４７５】
アンチセンス鎖およびセンス鎖の長さ
ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖およびセンス鎖は、本明細書に記載され、当該技術分野に
おいて公知であるように、様々な長さのものであり得る。
【０４７６】
一実施形態において、各鎖が、４９−ｍｅｒ以下である。
【０４７７】
ｓｉＲＮＡの長さが短くなるほど、有効なｓｉＲＮＡを得られることが分かっている。
例えば、２つのＲＮＡ鎖のそれぞれは、１４〜２４塩基対（ｂｐ）の二本鎖領域、および
１〜５ｎｔの少なくとも１つの３’末端オーバーハングを有する１９〜２５ヌクレオチド
（ｎｔ）であり得る。例えば：米国特許第７，０５６，７０４号明細書および同第７，０
７８，１９６号明細書；特願２００２／５４６６７０号公報；および欧州特許第１４０７
０４４号明細書を参照されたい。あるいは、鎖はそれぞれ、２１ｎｔ長であり得、２つの
２ｎｔオーバーハングを有する１９ｂｐ領域を形成する。このような構造が、本明細書に
おいて「標準的な」構造として定義される。
【０４７８】
あるいは、鎖はそれぞれ、１９−ｍｅｒであり得、２つの鎖は一緒に平滑末端二本鎖を
形成し得る。
【０４７９】
あるいは、鎖はそれぞれ、１８−ｍｅｒであり得、２つの鎖は一緒に平滑末端二本鎖を
形成し得る。
【０４８０】
あるいは、センス鎖は、アンチセンス鎖より著しく短くてもよい。ある実施形態におい
て、アンチセンス鎖は、約２１ｎｔ長である一方、センス鎖は、１５または１６ｎｔ長に
過ぎない。センス鎖を短くすると、ＲＩＳＣに組み込まれるセンス鎖によって仲介される
オフターゲット効果が減少される。Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．２００８  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉ
ｏｔｅｃｈ．２６：１３７９−１３８２；Ｃｈｕ  ａｎｄ  Ｒａｎａ．２００８  ＲＮＡ
１４：１７１４−１７１９。センス鎖は、そのＲＮＡｉ活性を低下させるために、様々
な組合せで、短縮され、修飾され、および／または５’末端でキャップされ得る。
【０４８１】
任意の長さのアンチセンスまたはセンス鎖のいずれかは、組合せが相互に矛盾しない限
り（例えば、オーバーハングの存在または非存在は、アンチセンス鎖およびセンス鎖の特
定の長さによって左右され得る）、本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤の任意の他の実施形
態（例えば、任意の３’末端キャップ、修飾、ヌクレオチド置換、５’末端キャップ、オ
ーバーハング、送達ビヒクルなど）と組み合わされ得る。
【０４８２】
したがって、本明細書に記載される３’末端キャップは、任意の長さの鎖を有する任意
の機能的ＲＮＡｉ剤とともに使用され得る。
【０４８３】
（任意選択的な）オーバーハング
ＲＮＡｉ剤はまた、０、１、または２つのオーバーハングのオーバーハングを有するこ
とができ；０ｎｔオーバーハングの場合、ＲＮＡｉ剤は平滑末端である。したがって、Ｒ
ＮＡｉ剤は、０、１または２つの平滑末端を有し得る。「平滑末端ＲＮＡｉ剤」において
、両方の鎖が、塩基対で終端し；ここで、平滑末端分子は、３’または５’の一本鎖ヌク
レオチドオーバーハングのいずれかを含まない。
【０４８４】
本開示の３’末端キャップは、オーバーハングの官能基を置換することができ、または
一方または両方の鎖においてオーバーハングに加えて使用され得る。
【０４８５】
本明細書において使用される際、「オーバーハング」または「ヌクレオチドオーバーハ
ング」という用語は、ＲＮＡｉ剤の二本鎖構造の２つの鎖の少なくとも一方の末端から突
出する少なくとも１つの不対ヌクレオチドを指す。オーバーハングは、センス鎖および／
またはアンチセンス鎖の５’および／または３’末端にあり得る。
【０４８６】
ｓｉＲＮＡの両方の鎖が、一般に、（ヌクレオチドの１つまたは複数が置換および／ま
たは修飾され得るが）ＲＮＡである一方、オーバーハングは、ＲＮＡまたはその変形であ
り得る。好適なオーバーハングは、任意の配列または長さ（例えば、１〜５ｎｔ）のＲＮ
Ａ、ＴＴ（ジチミジンジヌクレオチド）またはＵＵあるいは二本鎖中の標的遺伝子特異的
配列と反対／逆の配向または同じ５’から３’の配向のいずれかにあり得るｄＴｄＴ、ｓ
ｄＴ、ｄＴｓｄＴ、ｓｄＴｓｄＴ、またはｓｄＴｄＴなどのその変形を含む。
【０４８７】
ＴＴまたはＵＵなどのヌクレオチドオーバーハングは、標的ｍＲＮＡを認識せず、標的
配列の一部とみなされない。それにもかかわらず、多くの標準的なｓｉＲＮＡが同様に、
オーバーハングを含まずに機能しないため、オーバーハングは機能的であり得る。さらに
、オーバーハングは、血清または腸液中のものなどの、ヌクレアーゼによる分解からのＲ
ＮＡｉ剤のいくらかの保護を提供する。Ｅｌｂａｓｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．２００１  ＥＭ
ＢＯ  Ｊ．２３：６８７７−６８８８、特に、図１Ｆ；Ｅｌｂａｓｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．
２００１  Ｎａｔｕｒｅ  ４１１：４９４−４９８；およびＫｒａｙｎａｃｋ  ｅｔ  ａ
ｌ．２００６  ＲＮＡ  １２：１６３−１７６を参照されたい。
【０４８８】
本明細書に示され、当該技術分野において公知であるように、オーバーハングを３’末
端キャップで置換して、より優れたＲＮＡｉ剤を得るために多くの試みがなされてきた。
しかしながら、これらの試みにより、以下に詳述されるように、（１）ＲＮＡ干渉を仲介
できず、（２）ヌクレアーゼに対する向上した抵抗性および／または血清中での長い持続
時間を有することができないＲＮＡｉ剤が得られることが多かった。対照的に、本明細書
に開示される３’末端キャップは、ＲＮＡ干渉および血清中でのＲＮＡ干渉活性の持続時
間の増加を可能にする。
【０４８９】
それらは、場合により、ジヌクレオチドオーバーハングを代替するため、３’末端キャ
ップ（特に、ＰＡＺリガンド）は、ある文献において「ジヌクレオチド代替物（ｓｕｒｒ
ｏｇａｔｅ）」と呼ばれる。しかしながら、本明細書に開示される３’末端キャップがま
た、オーバーハングに加えて使用され得ることも留意される。
【０４９０】
したがって、本明細書は、ＲＮＡｉ剤に使用するための、例えば、表１および２に示さ
れるかおよび／または他の形で本明細書に記載されるように、３’末端キャップを包含す
る。
【０４９１】
（任意選択的な）５’末端キャップ
「５’キャップ」は、任意選択的に、センス鎖またはアンチセンス鎖の５’末端におい
て結合され得る。アンチセンス鎖およびセンス鎖の機能は、これらの鎖の５’末端の構造
要件と同様に異なる。アンチセンス鎖における５’末端キャップは、この鎖によって仲介
されるＲＮＡｉ活性を妨げるべきではないが；ある実施形態において、センス鎖における
５’末端キャップは、センス鎖によって仲介されるＲＮＡｉ活性を妨げ得る。いずれかの
鎖が、ＲＩＳＣ中に充填され得るが、アンチセンス鎖のみが、所望の標的を標的にする。
センス鎖の充填は、オフターゲット効果、例えば、望ましくない標的のＲＮＡ干渉をもた
らし得る。Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．２００３  Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２１：６
３５−６３７
【０４９２】
アンチセンス鎖の場合：５’末端キャップは、この鎖のＲＮＡｉ活性を妨げるべきでは
ないが、（例えば、血清または腸液中のものなどのヌクレアーゼからの）少なくともいく
らかの保護を提供することができる。ガイド鎖における５’−ホスフェートが、一般に、
任意選択的なＲＮＡｉ活性に必要とされる。５’ｄＴ修飾が、アンチセンス鎖安定性を提
供し、有効性を向上させる。リン酸化の阻止により、活性が低下される。対照的に、５’
末端に加えられる１〜３つのリボヌクレオチドにより、阻害が改善された。Ｍｏｒｒｉｓ
ｓｅｙ  ｅｔ  ａｌ．２００５  Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１００２−１００７。
ＲＩＳＣのアルゴノート（Ａｒｇｏｎａｕｔｅ）−２（Ａｇｏ２）成分とのアンチセンス
鎖５’末端の分子間相互作用の一部が解明されている。Ｐａｒｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２０
０５．Ｎａｔｕｒｅ  ４３４：６６３−６６６；およびＦｒａｎｋ  ｅｔ  ａｌ．２０１
０  Ｎａｔｕｒｅ  ４６５：８１８−８２２。
【０４９３】
対照的に、センス鎖の場合：ＲＮＡ干渉を阻害する５’末端キャップが、この鎖におい
て有用であり得る。上述されるように、５’−ホスフェートが、一般に、最適なＲＮＡｉ
活性に必要とされる。５’−ＯＨ基の除去は、センス鎖のリン酸化を防ぐための最も簡単
な手法である。
【０４９４】
５’末端キャップに加えて、他の修飾または修飾の組合せが、センス鎖の活性を低下さ
せるのに使用され得る。
【０４９５】
本開示の３’末端キャップは、センス鎖における５’末端キャップおよび／またはセン
ス鎖の活性を低下させる任意の修飾または修飾の組合せを含む任意のＲＮＡｉ剤とともに
使用され得る。
【０４９６】
（任意選択的な）さらなるヌクレオチド置換および／または修飾
ｓｉＲＮＡの鎖は、一般に、自然界で発現されるかまたは自然界に見られる（すなわち
、天然である）ＲＮＡ分子だけでなく、本明細書に記載されるかまたは当該技術分野にお
いて公知の１つまたは複数のリボヌクレオチド／リボヌクレオシド類似体または誘導体を
含むヌクレオチドの非天然の類似体および誘導体も含み得る。
【０４９７】
位置のいくつかにおいて、ＲＮＡヌクレオチドは、ＤＮＡ、または異なる骨格のヌクレ
オチド、またはＰＮＡ、ＬＮＡ、モルホリノ、ＴＮＡ、ＧＮＡ、ＡＮＡ、ＨＮＡ、ＣｅＮ
Ａ、ＦＡＮＡ、および／またはＵＮＡによって置換され得；および／または修飾され得る
（２’−ＭＯＥ、２’−ＯＭｅ、２’−Ｆ、および２’−Ｈを含むがこれらに限定されな
い）。様々な実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、５’末端および／または３’末端（例え
ば、１９−ｍｅｒにおける１８および１９位または１８−ｍｅｒにおける１７および１８
位）、および／または鎖の中央部にある１つまたは複数のＬＮＡを含み得る。
【０４９８】
ある実施形態において、ヌクレオチド置換は、クランプを形成する、（５’から３’へ
と数えて）最後の２つの塩基対合ｎｔ中にある。クランプは、限定はされないが、２’−
ＭＯＥクランプを含む［ここで、（５’から３’へと数えて）最後の２つの塩基対合ｎｔ
がそれぞれ、２’−ＭＯＥ修飾を有する］。クランプの他の形態が可能であり、例えば、
（５’から３’へと数えて）最後の２つの塩基対合ｎｔがそれぞれ、図２０Ｃ〜Ｅに示さ
れるように、ＤＮＡ、２’−ＯＭｅ、２’−ＦまたはＬＮＡである。（５’から３’へと
数えて）最後の２つのｎｔはまた、（３’から５’へと数えて）各鎖の３’末端における
最初の２つの塩基対合ヌクレオチドであるとみなされ得ることが留意される。本明細書お
よび米国特許第８，０８４，６００号明細書に示されるように、クランプは、アンチセン
スおよび／またはセンス鎖にあり得る。
【０４９９】
したがって、各鎖中のヌクレオチドが、一般に、ＲＮＡである（これは、ヌクレオチド
のほとんどがＲＮＡであることを意味する）一方、一部は、ＤＮＡまたはペプチド核酸（
ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、モルホリノ、トレオース核酸（ＴＮＡ）、および／
またはグリコール核酸（ＧＮＡ）などの代替的な骨格のヌクレオチドによって置換され得
る。ある実施形態において、一方または両方の鎖中の１または２または３つのｎｔのみが
置換される。ある実施形態において、一方または両方の鎖中の約１〜３つのｎｔのみが、
ＤＮＡによって置換される。この非限定的な例が、図１５Ｂおよび１７Ａに示される。
【０５００】
したがって、いずれかの鎖におけるＲＮＡヌクレオチドは、置換および／または修飾さ
れ得る。
【０５０１】
ＲＮＡは、核酸塩基構造またはリボース−ホスフェート骨格構造において修飾され得る
。しかしながら、ほとんどの実施形態において、リボヌクレオシド類似体または誘導体を
含む分子は、二本鎖を形成する能力を保持する。非限定的な例として、ＲＮＡ分子は、２
’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチド、５’ホスホロチオエート基を含むヌクレオシド、コレ
ステリル誘導体またはドデカン酸ビスデシルアミド基に連結された末端ヌクレオシド、ロ
ックドヌクレオシド、脱塩基ヌクレオシド、２’−デオキシ−２’−フルオロ修飾ヌクレ
オシド、２’−アミノ−修飾ヌクレオシド、２’−アルキル−修飾ヌクレオシド、モルホ
リノヌクレオシド、アンロックドリボヌクレオチド（例えば、国際公開第２００８／１４
７８２４号パンフレットに記載されるように、非環式ヌクレオチドモノマー）、ホスホロ
アミデートまたはヌクレオシドを含む非天然の塩基、またはそれらの任意の組合せを含む
がこれらに限定されない少なくとも１つの修飾リボヌクレオシドも含み得る。あるいは、
ＲＮＡ分子は、少なくとも２つの修飾リボヌクレオシド、少なくとも３、少なくとも４、
少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも
１０、少なくとも１５、少なくとも２０個またはそれ以上、最大でｄｓＲＮＡ分子の全長
になるまでの修飾リボヌクレオシドを含み得る。修飾は、ＲＮＡ分子中のこのような複数
の修飾リボヌクレオシドのそれぞれについて同じである必要はない。一実施形態において
、本明細書に記載される方法および組成物に使用されることを想定される修飾されたＲＮ
Ａは、本明細書に開示される３’末端キャップを含み、所要の二本鎖構造を形成する能力
を有し、ＲＩＳＣ経路を介して標的ＲＮＡの特異的な分解を可能にするかまたは仲介する
。
【０５０２】
ＲＮＡｉ剤を生成するのに使用され得る修飾ヌクレオチドの例としては、５−フルオロ
ウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、ヒポキサン
チン、キサンチン、４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシ
ル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミ
ノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、β−Ｄ−ガラクトシルクエオシン、イノシン、Ｎ
６−イソペンテニルアデニン、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメ
チルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メ
チルシトシン、Ｎ６−アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル
、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルクエオシン、５’
−メトキシカルボキシメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−
イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、ワイブトキソシン（ｗｙｂ
ｕｔｏｘｏｓｉｎｅ）、プソイドウラシル、クエオシン、２−チオシトシン、５−メチル
−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、ウラ
シル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、５−メチル−
２−チオウラシル、３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボキシプロピル）ウラシル、（
ａｃｐ３）ｗ、および２，６−ジアミノプリンが挙げられる。
【０５０３】
本明細書に開示される配列の「修飾された形態」は、（例えば、Ａの代わりにＧ、また
はＣの代わりにＵといった塩基置換ではないが）、塩基、糖、ホスフェートまたは骨格中
に修飾を有する以外は同じ配列を含む任意の形態を含む。したがって、修飾された形態は
、上述される任意の修飾ヌクレオチド（例えば、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラ
シル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４−ア
セチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシルなど）を含み得る。塩基
が、対応する修飾された塩基によって置換される場合（例えば、Ａの代わりに修飾された
Ａ）、これらの修飾ヌクレオチドは、ミスマッチまたは塩基の相違を構成しない。したが
って、特定の位置にＵを有する所与の配列および同じ配列における５−フルオロウラシル
、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、または５−ヨードウラシルを含む修飾され
た形態は、０ｎｔだけ異なるが（すなわち、ミスマッチを有さない）；特定の位置にＣを
有する所与の配列および５−フルオロウラシルを有する異なる配列（ここで、２つの配列
は、それ以外は同一である）は、１ｎｔだけ異なる（１つのミスマッチ）。
【０５０４】
ある実施形態において、本発明に係るＲＮＡｉ剤は、鎖の少なくとも一方に３’末端キ
ャップおよび少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含むことによって、高いインビボ安定
性を与える。したがって、本発明に係るＲＮＡｉ剤は、好ましくは、少なくとも１つの修
飾されたまたは非天然のリボヌクレオチドを含有する。多くの公知の化学修飾の長い説明
が、公開されたＰＣＴ特許出願である国際公開第２００３７０９１８号パンフレットに記
載されており、本明細書においては繰り返さない。経口送達に好適な修飾は、本明細書の
実施例および説明により詳細に記載されている。好適な修飾としては、以下に限定はされ
ないが、糖部分（すなわち、例えば２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）または２’−ＭＯ
Ｅなどの糖部分の２’位）（Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔ
ａ，１９９５，７８，４８６−５０４）すなわち、アルコキシアルコキシ基）への修飾ま
たは塩基部分（すなわち、別のヌクレオチド鎖における別の特定の塩基と対合する能力を
維持する非天然または修飾された塩基）への修飾が挙げられる。
【０５０５】
他の修飾としては、リン酸エステル基を置換すること（隣接するリボヌクレオチドを、
例えば、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエートまたはホスホロジチオエートと
結合すること）を含むがこれに限定されないいわゆる「骨格」修飾が挙げられる。様々な
実施形態において、１つまたは複数のリン酸基は、
【化１２】
2019135236.tif 000071
で置換される。様々なさらなる実施形態において、１つまたは複数のリン酸基は、
【化１３】
2019135236.tif 000072
（式中、Ｒ３が、Ｏ−、Ｓ−、ＮＨ２、ＢＨ３、ＣＨ３、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ６〜１０
アリール、Ｃ１〜６アルコキシおよびＣ６〜１０アリール−オキシから選択され、ここで
、Ｃ１〜６アルキルおよびＣ６〜１０アリールが、非置換であるか、または任意選択的に
、ハロ、ヒドロキシルおよびＮＨ２から独立して選択される１〜３つの基で独立して置換
され；Ｒ４が、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、またはＣＨ２から選択される）によって置換される。これ
らの置換リン酸基のいくつかは、図１８Ｃにも示される。
【０５０６】
様々な実施形態において、リン酸基のホスフェートは、ヒ素（Ａｓ）、セレン（Ｓｅ）
、またはアンチモン（Ｓｂ）によって置換される。一実施形態において、スペーサは、リ
ビトールであり、リン酸基は置換されない。様々な実施形態において、リン酸基は、スル
ホンアミド基またはシアノ基またはカルボキサミドによって置換される。様々な実施形態
において、３’末端キャップのリン酸基は、ヒ素、セレン、アンチモンまたはスルホンア
ミド基またはシアノ基またはカルボキサミドによって置換される。様々な実施形態におい
て、リンカーのリン酸基（例えば、Ｃ３、Ｃ４、またはＣ６またはリビトール、ジリビト
ール、２’−デオキシリビトール、または２’−メトキシエトキシリビトール）は、ヒ素
、セレン、アンチモンまたはスルホンアミド基またはシアノ基またはカルボキサミドによ
って置換される。
【化１４】
2019135236.tif 000073
【０５０７】
したがって、本明細書に開示される３’末端キャップとともに有用なＲＮＡｉ剤のいず
れかまたは両方の鎖のヌクレオチドは、置換および／または修飾され得る。
【０５０８】
修飾の（任意選択的な）パターン
ＲＮＡｉ剤のヌクレオチドを修飾するいくつかの場合、修飾は、ランダムではなく、パ
ターンで配置される。これらのパターン（またはスキーム）は、有効性（ＲＮＡｉ活性）
を向上させ、センス鎖の活性を低下させ、あるいはオフターゲット効果を減少させ、ＲＮ
Ａｉ剤の分解または免疫原性を低下させ、および／または生物学的半減期（例えば、作用
の持続時間）を増加させる。
【０５０９】
修飾の１つのパターンにおいて、センス鎖の複数の位置が、２’−ＭＯＥである。非限
定的な例として、ピリミジンのほとんどまたは全てが、センス鎖中の２’ＭＯＥである。
２’−ＭＯＥを用いて、センス鎖における位置の半分以上を修飾することにより、活性が
低下され得る。センス鎖の全ての位置が２’−ＭＯＥである場合、活性がなくなることが
多い。
【０５１０】
修飾の様々なパターンが、図７、１１、１４、１５Ａ、１５Ｂ、および１７Ａに示され
る。
【０５１１】
図１５Ａ（上部）は、１９−ｍｅｒ平滑末端ＲＮＡｉ剤における２’−ＯＭｅおよび２
’−ＭＯＥ修飾のパターンの配置の非限定的な例を示す。例において、示される３’末端
キャップは、Ｃ３であるが、他の３’末端キャップが、この修飾パターン（例えば、本明
細書に開示されるもの）で使用され得る。この修飾パターンは、ＭＯＥクランプも含む（
ここで、５’から３’へと数えて最後の２つの塩基対合ヌクレオチドは、２’−ＭＯＥ修
飾を有する）。５’から３’へと数えて最後の２つのｎｔはまた、（３’から５’へと数
えて）各鎖の３’末端における最初の２つの塩基対合ヌクレオチドであるとみなされ得る
。
【０５１２】
図１５Ａ（下部）は、２’Ｆ修飾を用いた修飾パターンの非限定的な例を示す。同様に
、この例において、示される３’末端キャップは、Ｃ３であるが、他の３’末端キャップ
が、この修飾スキーム（例えば、本明細書に開示されるもの）で使用され得る。
【０５１３】
図１５Ｂ（上部）は、「ｗｔ」（「野生型」）ｓｉＲＮＡおよびこのｓｉＲＮＡの修飾
スキームの対応する非限定的な例を示す。修飾ｓｉＲＮＡの例は、２’−ＯＭｅおよびホ
スホロチオエートを有する。
【０５１４】
図１５Ｂ（下部）は、標準的な２１−ｍｅｒ  ｓｉＲＮＡについての、および１８−ま
たは１９−ｍｅｒフォーマットについての修飾スキームの非限定的な例を示す。これらの
スキームにおいて、「Ｌ」は、３’末端キャップ（例えば、ＰＡＺリガンド）を示す。
【０５１５】
様々な他の修飾パターンにおいて、ＲＮＡｉ剤は、少なくとも１つの５’−ウリジン−
アデニン−３’（５’−ｕａ−３’）ジヌクレオチド（ここで、ウリジンが２’−修飾ヌ
クレオチドである）；少なくとも１つの５’−ウリジン−グアニン−３’（５’−ｕｇ−
３’）ジヌクレオチド（ここで、５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである）；少
なくとも１つの５’−シチジン−アデニン−３’（５’−ｃａ−３’）ジヌクレオチド（
ここで、５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである）；および／または少なくとも
１つの５’−ウリジン−ウリジン−３’（５’−ｕｕ−３’）ジヌクレオチド（ここで、
５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである）を含む。
【０５１６】
修飾の他のパターンが、本明細書に開示される３’末端キャップを含む任意のＲＮＡｉ
剤とともに使用され得る。
【０５１７】
特に好ましい修飾パターンとしては、限定はされないが、以下のものが挙げられる。
２’−ＯＭｅ−Ｕ  ２’−ＯＭｅ−Ｕとしての全ての３’オーバーハング
Ａ８５：１、２および１４位を除く、２’−ＯＭｅ−Ｕとしての全てのＵ
Ｓ２６：２’−ＯＭｅ−Ｕとしての全てのＵおよび２’−ＯＭｅ−Ｃとしての全てのＣ
Ａ５１：１、２および１４位を除く、２’−ＯＭｅ−Ｕとしての全てのＵおよび２’−Ｏ
Ｍｅ−Ｃとしての全てのＣ
Ｓ２６：２’−ＯＭｅ−Ｕとしての全てのＵおよび２’−ＯＭｅ−Ｃとしての全てのＣ
Ａ４８：２’−ＯＭｅ−Ｕ  ＡとしてのＵＡおよび２’−ＯＭｅ−Ｃ  Ａとしての全ての
ＣＡ、第１の５’−ＮがＤＮＡ
Ｓ２６：２’−ＯＭｅ−Ｕとしての全てのＵおよび２’−ＯＭｅ−Ｃとしての全てのＣ
【０５１８】
ここで、本明細書に開示される３’末端キャップは、任意のＲＮＡｉ剤とともに使用さ
れ得、ここで、ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つの鎖の少なくとも１つのヌクレオチドが、置
換および／または修飾されており、ヌクレオチドの修飾が、修飾のパターンで配置され得
る。
【０５１９】
修飾の様々なパターンにおいて、パターンは、２’−ＭＯＥクランプを含む［ここで、
（５’から３’へと数えて）最後の２つの塩基対合ｎｔがそれぞれ、２’−ＭＯＥ修飾を
有する］。クランプの他の形態が可能であり、例えば、（５’から３’へと数えて）最後
の２つの塩基対合ｎｔがそれぞれ、図２０Ｃ〜Ｅに示されるように、ＤＮＡ、２’−ＯＭ
ｅ、２’−ＦまたはＬＮＡである。（５’から３’へと数えて）最後の２つのｎｔはまた
、（３’から５’へと数えて）各鎖の３’末端における最初の２つの塩基対合ヌクレオチ
ドであるとみなされ得ることが留意される。本明細書および米国特許第８，０８４，６０
０号明細書に示されるように、クランプは、アンチセンスおよび／またはセンス鎖にあり
得る。
【０５２０】
本明細書に記載される任意のＲＮＡｉ剤の任意の実施形態が、任意の他の実施形態と組
み合わされ得るが、ただし、実施形態は、相互に矛盾しない（例えば、単一のＲＮＡｉ剤
は、正確に０個および正確に２つのオーバーハングを同時に有することができない）。
【０５２１】
したがって、本明細書に開示される３’末端キャップは、本明細書に記載されるかまた
は当該技術分野において公知の任意のＲＮＡｉ剤とともに使用され得、ここで、ＲＮＡｉ
剤の鎖は、任意の長さのものであり、ＲＮＡｉ剤は、０、１、または２つのオーバーハン
グまたは０、１または２つの平滑末端を含むことができ、一方または両方の鎖の１つまた
は複数のヌクレオチドが、置換または修飾され得、修飾は、修飾のパターンまたはスキー
ムで配置され得、アンチセンスおよび／またはセンス鎖は、５’末端キャップを含み、こ
こで、センス鎖（存在する場合）の５’末端キャップが、センス鎖によって仲介されるＲ
ＮＡ干渉活性を低下させる。
【０５２２】
本明細書に開示される３’末端キャップはまた、本明細書に開示されるかまたは当該技
術分野において公知の任意のさらなるＲＮＡｉ剤のフォーマットまたは構造とともに使用
され得る。
【０５２３】
さらなるＲＮＡｉ剤
上に列挙される構造に加えて、同様にＲＮＡ干渉を仲介することが可能なさらなるタイ
プの分子が考案されている。これらの構造において、鎖は、必ずしもＲＮＡであるわけで
はなく、鎖は、標準的な構造より長くてもまたは短くてもよく、および／または平滑末端
であってもよく、および／または１つまたは複数の修飾、ミスマッチ、ギャップ、および
／またはヌクレオチド置換を含み得る。
【０５２４】
「ＲＮＡｉ剤」という用語は、限定はされないが、ｓｉＲＮＡ（標準的な構造であるか
または他の構造であるかにかかわらず）を含む、ＲＮＡ干渉を仲介することが可能な、本
明細書に記載されるかまたは当該技術分野において公知の任意の分子、またはＲＮＡ干渉
を仲介することが可能な任意の他の分子を包含することが意図される。本明細書に記載さ
れる３’末端キャップは、任意のＲＮＡｉ剤とともに使用され得る。
【０５２５】
したがって、本明細書に開示される３’末端キャップは、任意のＲＮＡｉ剤（ｓｉＲＮ
Ａを含む）において、または特に、限定はされないが、以下のものを含む任意の他のＲＮ
Ａｉ剤において使用され得る：
急なヘアピンカーブ（ｔｉｇｈｔ  ｈａｉｒｐｉｎ  ｔｕｒｎ）を形成し、ｓｉＲＮＡ
のように、ＲＩＳＣを介して標的をサイレンシングするＲＮＡの配列を含むｓｈＲＮＡ（
小ヘアピンＲＮＡまたは短ヘアピンＲＮＡ）。ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖は
、ヘアピンによって接続される。ｓｈＲＮＡは、例えば、プラスミドの送達を介してまた
はウイルスまたは細菌ベクターを介して発現され得る。様々な種類のｓｈＲＮＡが、当該
技術分野において公知である。例えば：Ｘｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．２００６．Ｎａｔｕｒ
ｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：６９７−７０２；Ｍａｃｒａｅ  ｅｔ  ａｌ．２００６  Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ  ３１１：１９５−８．Ｌｏｍｂａｒｄｏ  ｅｔ  ａｌ．２００７．Ｎａｔ
ｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２５：１２９８−１３０６；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．２０１１
．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．２８：２９８３−２９９５；Ｓｅｎｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２０１
１．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２０：６７９−６８６を参照されたい。
【０５２６】
ｓｉＲＮＡのように、同様にＲＩＳＣを介して標的をサイレンシングする小さいＲＮＡ
分子（約２２ｎｔ）であるｍｉＲＮＡ（マイクロＲＮＡ）。天然のｍｉＲＮＡは、真核性
ＤＮＡによってコードされ；ｍｉＲＮＡは、転写後ＲＮＡプロセシングによって生成され
、通常、翻訳抑制または標的分解および遺伝子サイレンシングをもたらす、ｍＲＮＡ分子
内の相補的配列との塩基対合を介して機能する。ヒトゲノムは、哺乳動物遺伝子の約６０
％を標的にし得、かつ多くのヒト細胞型において豊富にある１０００を超えるｍｉＲＮＡ
をコードすることができる。ｍｉＲＮＡの様々な種類の天然および人工誘導体が、当該技
術分野において公知である。例えば：Ｌｅｗｉｓ  ｅｔ  ａｌ．２００３．Ｃｅｌｌ  １
１５：７８７−７９８；Ｌｉｍ  ｅｔ  ａｌ．２００３．Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１７：９
９１−１００８；Ｈｅ  ｅｔ  ａｌ．２００４．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．５：５２
２−３１；Ｂｅｎｔｗｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．２００５．Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．３７：７６
６−７０；Ｌｅｗｉｓ  ｅｔ  ａｌ．２００５．Ｃｅｌｌ  １２０：１５−２０；Ｋｕｓ
ｅｎｄａ  ｅｔ  ａｌ．２００６．Ｂｉｏｍｅｄ  Ｐａｐ  Ｍｅｄ  Ｆａｃ  Ｕｎｉｖ  
Ｐａｌａｃｋｙ  Ｏｌｏｍｏｕｃ  Ｃｚｅｃｈ  Ｒｅｐｕｂ  １５０：２０５−１５；Ｚ
ｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．２００６．Ｊ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎ．３６：１−６；Ｂｒｏｄｅｒｓ
ｅｎ  ｅｔ  ａｌ．２００８．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２０：１１８５−９０；Ｆｒｉｅｄｍ
ａｎ  ｅｔ  ａｌ．２００９．Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１９（１）：９２−１０５；Ｂａ
ｒｔｅｌ  ２００９．Ｃｅｌｌ  １３６（２）：２１５−３３を参照されたい。
【０５２７】
センス鎖が少なくとも１つの一本鎖切れ目を含むｓｉｓｉＲＮＡ（低分子内部セグメン
ト化干渉ＲＮＡ）。この切れ目は、ＲＩＳＣ複合体へのセンス鎖の組み込みを減少させ、
ひいてはオフターゲット効果を低下させる。国際公開第２００７／１０７１６２号パンフ
レットを参照されたい。
【０５２８】
各鎖のシード部分がＤＮＡである一方、各鎖の残りがＲＮＡであるＤＮＡ−ＲＮＡキメ
ラ。Ｙａｍａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．２０１１．Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１８：
５８７−５９７を参照されたい。
【０５２９】
分子が３つの短い二本鎖領域を含む、２つのミスマッチを含むｓｉＲＮＡ。このＲＮＡ
ｉ剤の一実施形態において、ガイド（アンチセンス）鎖が２２−ｍｅｒである一方、セン
ス鎖は２０−ｍｅｒであり（アンチセンス鎖の３’末端に単一の２−ｎｔオーバーハング
を生成し）；２つのミスマッチが、６、８および４ｂｐの二本鎖領域を生成する。米国特
許出願公開第２００９／０２０９６２６号明細書を参照されたい。
【０５３０】
アンチセンス鎖が優先的にＲＩＳＣ中に充填されるように、センス鎖が１９−ｎｔ長よ
り短く、ひいてはオフターゲット効果が低下されるａｉＲＮＡ（非対称干渉ＲＮＡ）。こ
のＲＮＡｉ剤の様々な実施形態において、アンチセンス鎖は２１−ｎｔ長であるが、セン
ス鎖は、１５または１６ｎｔ長に過ぎない。Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．２００８  Ｎａｔｕｒ
ｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２６：１３７９−１３８２；およびＣｈｕおよびＲａｎａ．２００
８  ＲＮＡ  １４：１７１４−１７１９を参照されたい。
【０５３１】
したがって、本明細書に開示される任意の３’末端キャップは、ｓｉＲＮＡ（標準的な
構造のものを含むがこれに限定されない）、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉｓｉＲＮＡ、
ＤＮＡ−ＲＮＡキメラ、２つのミスマッチ（またはそれ以上のミスマッチ）を含むｓｉＲ
ＮＡ、またはａｉＲＮＡを含む、上述されるかあるいは当該技術分野において公知のＲＮ
Ａｉ剤の様々なフォーマットのいずれかとともに使用され得る。
【０５３２】
３’末端キャップ
本開示のＲＮＡｉ剤は、３’末端キャップを含む。「３’末端キャップ」、「３’末端
キャップ修飾」、「末端キャップ」、「キャップ」、「３’末端修飾」などの用語は、二
本鎖ヌクレオチド二本鎖の末端に結合された化学部分を含むが、ヌクレオチドまたはヌク
レオシドである化学部分を除外するように本明細書において使用される。「３’末端キャ
ップ」は、ヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドの３’末端において結合され（例えば
、少なくとも１つの鎖の３’末端における３’ヌクレオチドの３’炭素における修飾であ
る）、分解から、例えば、血清または腸液中のものなどのヌクレアーゼから分子を保護す
る。「３’末端キャップ」は、以下に限定はされないが、「ＰＡＺリガンド」を含み、こ
の用語は、酵素ダイサーのＰＡＺドメインと相互作用する３’末端キャップを含む。３’
末端キャップは、「非ヌクレオチドオーバーハング模倣体」または「ジヌクレオチドオー
バーハングのＬＭＷ模倣体」などと呼ばれることもある。
【０５３３】
本開示は、いくつかの文献が、本明細書に記載される３’末端キャップ（例えば、Ｘ１
０９またはＸ１１０またはＸ１１１など）を「オーバーハング」または「３’オーバーハ
ング」として示すが；本明細書は、３’末端キャップを「オーバーハング」と区別し、「
オーバーハング」という用語を、ヌクレオチドオーバーハング（例えば、ＵＵまたはＴＴ
などの、Ａ、Ｃ、Ｇ、ＵまたはＴなどのヌクレオチドのみを含むもの）のみを示すのに使
用することを注記する。したがって、本明細書において定義されるように、「３’末端キ
ャップ」は、オーバーハングではない。
【０５３４】
本明細書において定義されるように、３’末端キャップは、オーバーハング（すなわち
、ヌクレオチドオーバーハング）の代わりにまたはそれに加えて使用され得る。標準的な
ｓｉＲＮＡ構造を用いた以前の研究は、２−ｎｔオーバーハングが、ＲＮＡ干渉活性に有
用であった一方、平滑末端ｄｓＲＮＡ（オーバーハングを含まない）が一般に有効でなか
ったことを示唆した。例えば、Ｅｌｂａｓｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．２００１  ＥＭＢＯ  Ｊ
．２３：６８７７−６８８８、特に、図１Ｆを参照されたい。しかしながら、ｄｓＲＮＡ
は、オーバーハングを有していても、酵素分解されなかった。本出願人によって他の箇所
に示されるように、「非修飾ｓｉＲＮＡは、主にヌクレアーゼによって、酵素消化される
」（国際公開第２００７／１２８４７７号パンフレット、１頁）。したがって、３’末端
キャップを、（１）分子がＲＮＡ干渉活性を仲介するのを可能にすること、および（２）
分解から分子を保護することを含む、いくつかの機能を行うように設計した。
【０５３５】
本明細書に開示される３’末端キャップが、３’オーバーハングに加えてならびにその
代わりに使用され得ることが留意される。
【０５３６】
３’末端キャップが、ＵＵまたはＴＴなどのオーバーハングの代わりに使用され得るた
め、本明細書に記載される３’末端キャップは、「３’−ジヌクレオチド代替物」と呼ば
れることもある。
【０５３７】
いくつかの３’末端キャップが、ｓｉＲＮＡとともに使用するために開示されている。
化学的に記載されている３’末端キャップのうち、これらの多くは、機能的でないことが
示されていることが留意される。機能的な３’末端キャップは、これらの機能を行うこと
が可能であり得る：（１）二本鎖ＲＮＡをＲＮＡ干渉において機能させ；（２）例えば、
血清または腸液中に見られるものなどのヌクレアーゼから分子を保護することによって、
分子の安定性を高める。
【０５３８】
機能的でない３’末端キャップ
文献に記載される多くの３’末端キャップは、これらの機能の両方を行うことができな
い。場合によっては、末端キャップの配置が重要であり；いくつかの末端キャップは、１
つのみの鎖に配置されるときに機能的であり得るが、両方の鎖および／または両方の鎖の
両方の５’および３’末端に配置される場合、機能的でない。
【０５３９】
実験なしでどの３’末端キャップが両方の機能を行うか予測することはできない。実際
に、多くの末端キャップが、ＲＮＡ干渉に好適であると予測された一方（例えば、米国特
許出願公開第２００３／０１４３７３２号明細書中）、後に多くは、両方の機能を行わな
いことが発見された。
【０５４０】
他の科学者が、予測にもかかわらず、いくつかの末端キャップまたはオーバーハングが
、（１）ｓｉＲＮＡを安定させたが、（２）ＲＮＡｉ活性を可能にしなかったことを実験
により見出した。例えば、全ての位置において２’−ＯＭｅ修飾と組み合わされたＴＴ（
ジチミジン）、Ｃｚａｕｄｅｒｎａ  ｅｔ  ａｌ．２００３  Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒ
ｅｓ．３１：２７０５−２７１６、図４Ｂ。また、Ｈａｄｗｉｇｅｒらは、完全な２’−
Ｏ−メチル化がｓｉＲＮＡ血清にヌクレアーゼ抵抗性を与えたが、遺伝子サイレンシング
活性はほぼ完全に失われたことを指摘している。Ｈａｄｗｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００
５，ｐａｇｅｓ  １９４−２０６，ｉｎ  ＲＮＡ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  Ｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｙ，ｅｄ．Ｋ．Ａｐｐａｓａｎｉ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ
ｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ。
【０５４１】
他の末端キャップまたはオーバーハングは、（１）ｓｉＲＮＡを安定させなかったが、
（２）それらはＲＮＡｉ活性を可能にした。例えば、ｓｉＲＮＡの両方の３’末端または
両方の５’末端におけるＴＴ。Ｃｚａｕｄｅｒｎａ  ｅｔ  ａｌ．２００３、図４Ｂ。
【０５４２】
さらに他の末端キャップは、（１）ｓｉＲＮＡを安定させず、（２）ＲＮＡｉ活性を可
能にしなかった。このような例としては、アミノ−Ｃ６リンカーまたは逆脱塩基ヌクレオ
チドが挙げられる。Ｃｚａｕｄｅｒｎａ  ｅｔ  ａｌ．２００３、図４Ｂ。
【０５４３】
少なくともいくつかの条件下で機能的でない３’末端キャップのさらなる例としては、
以下のものが挙げられる：
両方の５’および両方の３’末端に存在する場合、ｓｉＲＮＡを安定させず、ｓｉＲＮ
Ａ活性を可能にもしなかった逆（デオキシ）脱塩基。Ｃｚａｕｄｅｒｎａ  ｅｔ  ａｌ．
２００３  Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３１：２７０５−２７１６、図４Ｂを参照さ
れたい。
【０５４４】
ｓｉＲＮＡを安定させず、ＲＮＡｉ活性を可能にしない、５−プロピニル−Ｕなどの修
飾された塩基ヌクレオチド。Ｄｅｌｅａｖｅｙ  ｅｔ  ａｌ．２００９  Ｃｕｒｒ．Ｐｒ
ｏｔ．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ  Ｃｈｅｍ．１６．３．１−１６．３．２２；Ｔｅｒｒａｚａ
ｓ  ｅｔ  ａｌ．２００９  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３７：３４６−３５
３。
【０５４５】
ｓｉＲＮＡを安定させることができなかった、アミノヘキシルホスフェートを含む少な
くともいくつかのアミノ置換された低級アルキル。両方の５’末端および両方の３’末端
に存在する場合、それはＲＮＡｉ活性を防止した。Ｃｚａｕｄｅｒｎａ  ｅｔ  ａｌ．２
００３、図４Ｂを参照されたい。
【０５４６】
アンチセンス鎖の３’末端にコンジュゲートされるとき、ＲＮＡ干渉活性を阻害するこ
とが分かったフルオレセイン（例えば、蛍光性発色団）。センス鎖は、例えば、３’末端
におけるフルオレセインのコンジュゲートを許容することができるが、アンチセンス鎖は
できない。Ｈａｒｂｏｔｈ  ｅｔ  ａｌ．２００３  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃｌ．Ａ
ｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ．１３：８３−１０５。Ｈａｒｂｏｔｈ  ｅｔ  ａｌ．２００
３  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ  １３：８３−１０５
を参照されたい。
【０５４７】
機能的でないシアニン（例えば、Ｃｙ５）。Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．２００３  Ｎａｔ
ｕｒｅ  Ｍｅｄ．９：３４７−３５１を参照されたい。３４７頁、第２欄（ｓｅｃｏｎｄ
ｃｏｌ．）を参照されたい。
【０５４８】
米国特許第５，９９８，２０３号明細書（段落［０１７］）によって提案されたが、よ
り最近、ｓｉＲＮＡの３’末端を安定させず、ＲＮＡｉ活性を可能にしないことが示され
た、３’末端キャップとしての３’ホスフェート、Ｓｃｈｗａｒｚ  ｅｔ  ａｌ．２００
２  Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  １０：５３７−５４８；およびＬｉｐａｒｄｉ  ｅｔ  ａｌ．２
００１  Ｃｅｌｌ  １０７：２９９−３０７。
【０５４９】
ＲＮＡ干渉活性を低下させた３’−アミノプロピルリン酸エステル。Ｓｃｈｗａｒｚ  
ｅｔ  ａｌ．２００２  Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  １０：５３７−５４８、図２を参照されたい
。
【０５５０】
したがって、３’末端キャップとして試験される全ての部分が、ＲＮＡ干渉を可能にし
、分解から分子を保護することができるわけではない。
【０５５１】
機能的な３’末端キャップ
上述される非機能的な３’末端キャップおよびオーバーハングと対照的に、機能的な３
’末端キャップが、例えば、米国特許第８，０９７，７１６号明細書；同第８，０８４，
６００号明細書；同第８，３４４，１２８号明細書；同第８，４０４，８３１号明細書；
および同第８，４０４，８３２号明細書に記載されている。これらは、ホスフェートを含
み、Ｃ３、Ｃ６、Ｃ１２、トリエチレングリコール、シクロヘキシル（またはシクロヘキ
シル（Ｃｙｃｌｏｈｅｘ））、フェニル、ビフェニル、アダマンタンおよびリトコール酸
（またはリトコール（Ｌｉｔｈｏｃｈｏｌ））と称される機能的な３’末端キャップを開
示している。
【０５５２】
これらの機能的な３’末端キャップが、以下に示され、ここで、機能的な３’末端キャ
ップは、ホスフェートに結合されて示される。
【化１５】
2019135236.tif 000074
【０５５３】
本開示に使用される専門用語が、米国特許第８，０９７，７１６号明細書；同第８，０
８４，６００号明細書；同第８，３４４，１２８号明細書；同第８，４０４，８３１号明
細書；および同第８，４０４，８３２号明細書に使用されるものとわずかに異なることが
留意される。様々な実施形態において、本開示は、第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡ
ｉ剤に関し、ここで、ある実施形態において、第１および／または第２の鎖の３’末端が
、ホスフェート（または修飾されたヌクレオシド間リンカー）で終端し、３’末端キャッ
プをさらに含む。直ぐ上の略図には、ホスフェートおよび３’末端キャップが示される。
【０５５４】
米国特許第８，０９７，７１６号明細書；同第８，０８４，６００号明細書；同第８，
３４４，１２８号明細書；同第８，４０４，８３１号明細書；および同第８，４０４，８
３２号明細書に開示される３’末端キャップは、それら以前に考案されたものより優れて
いた。例えば、他の考えられる末端キャップと異なり、これらは、分解から（例えば、血
液または腸液中などのヌクレアーゼから）ｓｉＲＮＡを保護し、また、ＲＮＡ干渉を可能
にすることもできた。
【０５５５】
しかしながら、本開示の新規な３’末端キャップの多く（例えば、表１および２に列挙
されるもの）は、さらに改良されている。例えば、Ｘ０５８を有するｓｉＲＮＡ（本明細
書に開示されるような）は、Ｃ６を有するｓｉＲＮＡより長い作用時間を示す（図２２）
。Ｘ０５８を有するＨｕＲ  ｓｉＲＮＡは、Ｈｕｈ−７細胞内で７日目および１０日目に
より高い有効性を示した。
【０５５６】
本明細書に開示される様々な新規な３’末端キャップは、ダイサーのＰＡＺドメインと
相互作用するため、ＰＡＺリガンドと表記されるものを含む。
【０５５７】
ＰＡＺリガンド
上述されるように、長いｄｓＲＮＡ分子が細胞内に導入されるとき、ダイサーがｄｓＲ
ＮＡを、ｓｉＲＮＡと呼ばれるより短いセグメントに切断する。ダイサーの同族体は、ｄ
ｓＲＮＡに仲介される遺伝子サイレンシングが観察された全ての生物に共通している。Ｍ
ｙｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．２００５．Ｉｎ  ＲＮＡ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  Ｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｙ，ｅｄ．Ａｐｐａｓａｎｉ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  
Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  ＵＫ，ｐ．２９−５４；Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ  ｅｔ  
ａｌ．２００１  Ｎａｔｕｒｅ  ４０９：３６３−３６６；およびＳｃｈａｕｅｒ  ｅｔ
ａｌ．２００２  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｌａｎｔ  Ｓｃｉ．７：４８７−４９１。ダイサー
は、ＲＮａｓｅ  ＩＩＩ酵素であり、６つの認識できるドメインから構成される。Ｎ末端
にまたはＮ末端の近傍に、約５５０のａａ  ＤＥｘＨ−ｂｏｘ  ＲＮＡヘリカーゼドメイ
ンがあり、その直後に、ＤＵＦ２８３と呼ばれる保存された約１００のａａドメインがあ
る。ＤＵＦ２８３ドメインに対する唯一のＣ末端は、ＰＡＺ（Ｐｉｗｉ／Ａｒｇｏｎａｕ
ｔｅ／Ｚｗｉｌｌｅを示す）ドメインである。このドメインは、一本鎖ジヌクレオチドオ
ーバーハングを認識する。Ｌｉｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．２００３  Ｎａｔｕｒｅ  ４２６
：４６５−４６９；Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．２００３  Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂ
ｉｏｌ．１０：１０２６−１０３２；Ｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．２００３  Ｎａｔｕｒｅ  ４
２６：４６８−４７４；Ｌｉｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．２００４  Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕ
ｃｔ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１１：５７６−５７７；Ｍａ  ｅｔ  ａｌ．２００４  Ｎａｔ
ｕｒｅ  ４２９：３１８−３２２。おそらく、ダイサーにおけるＰＡＺドメインはまた、
触媒ドメインを切断のために位置決めするようにＲＮＡを結合し得る。Ｚｈａｎｇ  ｅｔ
ａｌ．２００４  Ｃｅｌｌ  １１８：５７−６８。ダイサータンパク質のＣ末端は、２
つのＲＮＡｓｅ  ＩＩＩ触媒ドメインおよび推定ｄｓＲＮＡ結合ドメインから構成される
。
【０５５８】
表２は、多くのＰＡＺリガンドを含む様々な３’末端キャップを列挙している。
【０５５９】
３’末端キャップの配置および異なる性質
アンチセンス鎖およびセンス鎖は、生化学的に異なる。上述されるように、アンチセン
ス鎖は、この鎖が所望の標的を標的にする際、好ましくは、ＲＩＳＣ中に充填される。セ
ンス鎖の組み込みは、オフターゲット効果をもたらし得る。
【０５６０】
いくつかの３’末端キャップが、一方の鎖上で他方の鎖上より有用であり得ることが知
られている。例えば、上述されるように、センス鎖は、例えば、３’末端におけるフルオ
レセインのコンジュゲーションを許容することができるが、アンチセンス鎖はできない。
Ｈａｒｂｏｔｈ  ｅｔ  ａｌ．２００３  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ  Ｄ
ｒｕｇ  Ｄｅｖ．１３：８３−１０５。
【０５６１】
本明細書に記載される３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤
具体的な特定の一実施形態において、本開示は、第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡ
ｉ剤を含む組成物であって、第１または第２の鎖が、表２に列挙される３’末端キャップ
から選択される３’末端キャップを含む組成物に関する。一実施形態において、組成物は
、第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、第１および第２の鎖は、表２に列挙
される３’末端キャップから選択される３’末端キャップを含む。したがって、簡潔に述
べると：一実施形態において、組成物は、第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤を含
み、第１および／または第２の鎖は、表２に列挙される３’末端キャップから選択される
３’末端キャップを含む。ある実施形態において、第１および第２の鎖はそれぞれ、アン
チセンス鎖およびセンス鎖である。ある実施形態において、第１および第２の鎖はそれぞ
れ、センス鎖およびアンチセンス鎖である。
【０５６２】
ＲＮＡｉ剤は、ｓｉＲＮＡを含むがこれに限定されない、ＲＮＡ干渉を仲介することが
可能な二本鎖分子である。
【０５６３】
この実施形態の様々な特定の実施形態が後述される。
【０５６４】
一実施形態において、組成物は、第２のＲＮＡｉ剤をさらに含む。様々な実施形態にお
いて、第２のＲＮＡｉ剤は、第１のＲＮＡｉ剤と物理的に分かれており；または２つのＲ
ＮＡｉ剤は、物理的に結合されるか（例えば、共有結合され、あるいはコンジュゲートさ
れる）または同じ医薬組成物中で組み合わされ、または両方とも同じ治療計画における要
素である。
【０５６５】
一実施形態において、アンチセンス鎖は、約３０ｎｔ長以下である。
【０５６６】
一実施形態において、センス鎖およびアンチセンス鎖は、約１５〜約３０ヌクレオチド
対の長さの二本鎖領域を形成する。
【０５６７】
一実施形態において、アンチセンス鎖は、約１８〜約３０ｎｔ長を含み、約１９〜約２
１ｎｔ長および約１９〜約２３ｎｔ長をさらに含む、約１５〜約３６ｎｔ長である。一実
施形態において、アンチセンス鎖は、少なくとも、約１５ｎｔ、約１６ｎｔ、約１７ｎｔ
、約１８ｎｔ、約１９ｎｔ、約２０ｎｔ、約２１ｎｔ、約２２ｎｔ、約２３ｎｔ、約２４
ｎｔ、約２５ｎｔ、約２６ｎｔ、約２７ｎｔ、約２８ｎｔ、約２９ｎｔおよび約３０ｎｔ
から選択される長さを有する。
【０５６８】
一実施形態において、３’末端キャップにより、ＲＮＡｉ剤が、生体試料または環境、
例えば、細胞質、間質液、血清、肺洗浄液または洗腸液中における向上した安定性を有す
る。
【０５６９】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、少なくとも１つの糖骨格修飾（例えば、ホスホロ
チオエートリンカー）および／または少なくとも１つの２’−修飾ヌクレオチドをさらに
含む。一実施形態において、全てのピリミジンが、２’Ｏ−メチル−修飾ヌクレオチドで
ある。
【０５７０】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、少なくとも１つの５’−ウリジン−アデニン−３
’（５’−ｕａ−３’）ジヌクレオチド（ここで、ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドで
ある）；および／または少なくとも１つの５’−ウリジン−グアニン−３’（５’−ｕｇ
−３’）ジヌクレオチド（ここで、５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである）；
および／または少なくとも１つの５’−シチジン−アデニン−３’（５’−ｃａ−３’）
ジヌクレオチド（ここで、５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである）；および／
または少なくとも１つの５’−ウリジン−ウリジン−３’（５’−ｕｕ−３’）ジヌクレ
オチド（ここで、５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである）を含む。
【０５７１】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、２’−デオキシ、２’−デオキシ−２’−フルオ
ロ、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−ア
ミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡ
ＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチ
ルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、および２’−Ｏ−Ｎ−メチル
アセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）からなる群から選択される２’−修飾を含む。一実施
形態において、全てのピリミジンが、２’Ｏ−メチル−修飾ヌクレオチドである。
【０５７２】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、平滑末端を含む。
【０５７３】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、１〜４つの不対ヌクレオチドを有するオーバーハ
ングを含む。
【０５７４】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖の３’末端にオーバ
ーハングを含む。
【０５７５】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、１つまたは複数の診断用化合物、レポーター基、
架橋剤、ヌクレアーゼ抵抗性を付与する部分、天然または特殊な核酸塩基、親油性分子、
コレステロール、脂質、レクチン、ステロイド、ウバオール、ヘシゲニン（ｈｅｃｉｇｅ
ｎｉｎ）、ジオスゲニン、テルペン、トリテルペン、サルササポゲニン、フリーデリン、
エピフリーデラトール（ｅｐｉｆｒｉｅｄｅｌａｎｏｌ）誘導体化リトコール酸、ビタミ
ン、炭水化物、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、合成炭水化物、オリゴラク
テート１５−ｍｅｒ、天然ポリマー、低分子量または中間分子量ポリマー、イヌリン、シ
クロデキストリン、ヒアルロン酸、タンパク質、タンパク質結合剤、インテグリン標的分
子、ポリカチオン、ペプチド、ポリアミン、ペプチド模倣体、および／またはトランスフ
ェリンに結合される。
【０５７６】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロの細胞内で１０ｎＭの濃度で少なくと
も約６０％だけ標的遺伝子の発現を阻害することができる。
【０５７７】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロの細胞内で１０ｎＭの濃度で少なくと
も約７０％だけ標的遺伝子の発現を阻害することができる。
【０５７８】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロの細胞内で１０ｎＭの濃度で少なくと
も約８０％だけ標的遺伝子の発現を阻害することができる。
【０５７９】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロの細胞内で１０ｎＭの濃度で少なくと
も約９０％だけ標的遺伝子の発現を阻害することができる。
【０５８０】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロの細胞内で約０．１ｎＭ以下のＥＣ５
０を有する。
【０５８１】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロの細胞内で約０．０１ｎＭ以下のＥＣ
５０を有する。
【０５８２】
一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロの細胞内で約０．００１ｎＭ以下のＥ
Ｃ５０を有する。
【０５８３】
標的遺伝子に対するＲＮＡｉ剤の医薬組成物
具体的な特定の一実施形態において、本開示は、第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡ
ｉ剤を含む組成物であって、第１および／または第２の鎖が、表２に列挙される３’末端
キャップから選択される３’末端キャップを含む組成物に関し、組成物は、薬学的に有効
な製剤中にある。
【０５８４】
一実施形態において、本開示は、標的遺伝子関連疾患の治療用の薬剤の製造におけるＲ
ＮＡｉ剤の使用であって、ＲＮＡｉ剤が、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチ
センス鎖が、本明細書に提供され、例えば、表２に列挙されるそれらの特定の二本鎖から
選択される標的遺伝子に対するＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２、または３つの
ヌクレオチドだけ異なる少なくとも１５連続ヌクレオチドを含む使用に関する。
【０５８５】
一実施形態において、医薬組成物は、送達ビヒクルと、３’末端キャップを含むＲＮＡ
ｉ剤とを含む。
【０５８６】
当業者に公知の他の修飾が、本発明の範囲内に包含されるものと考えられる。例示的な
修飾は、以下に限定はされないが、センス鎖およびアンチセンス鎖における塩基対の間の
ギャップまたはミスマッチの存在、センス鎖におけるヌクレオシド間結合の切れ目または
裂け目の存在などを含む。
【０５８７】
医薬組成物
経口用の組成物が、医薬組成物の製造のための当該技術分野に公知の任意の方法にした
がって調製され得、このような組成物は、薬学的に優れ、かつ口当たりの良い製剤を提供
するために、１つまたは複数のこのような甘味料、着香剤、着色剤または防腐剤を含有し
得る。錠剤は、錠剤の製造に好適な非毒性の薬学的に許容できる賦形剤との混合物中に活
性成分を含有する。これらの賦形剤は、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラク
トース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウムなどの不活性希釈剤；造粒剤および崩
壊剤、例えば、コーンスターチ、またはアルギン酸；結合剤、例えば、でんぷん、ゼラチ
ンまたはアカシア；および潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸また
はタルクであり得る。錠剤は、被覆されていなくてもよく、または公知の技術によって被
覆され得る。経口用の製剤はまた、活性成分が、不活性固体希釈剤、例えば、炭酸カルシ
ウム、リン酸カルシウムまたはカオリンと混合される硬ゼラチンカプセルとして、または
活性成分が、水または油媒体、例えば、ピーナッツ油、流動パラフィンまたはオリーブ油
と混合される軟ゼラチンカプセルとして示され得る。水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に
好適な賦形剤との混合物中に活性物質を含有する。
【０５８８】
本発明の組成物の経口投与は、最も重要なことには、剤形の自己調節嚥下（ｐａｔｉｅ
ｎｔ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｓｗａｌｌｏｗｉｎｇ）による、また、このような送達の
他の機械的な補助手段による、胃または腸に直接物質を投与するための全ての標準的な技
術を含む。
【０５８９】
１日に体重１キログラム当たり約０．１ｍｇ〜約１４０ｍｇ程度の投与量レベルが、上
に示される条件の治療（１日に被験体当たり約０．５ｍｇ〜約７ｇ）に有用である。単一
剤形を生成するためにキャリア材料と組み合わされ得る活性成分の量は、治療されるホス
トおよび具体的な投与方法に応じて変化する。単位剤形は、一般に、約１ｍｇ〜約５００
ｍｇの活性成分を含有する。任意の特定の被験体の特定の用量レベルが、用いられる特定
の化合物の活性、年齢、体重、全体的な健康、性別、食生活、投与時期、投与経路、およ
び排せつ速度、複合薬および治療を受けている具体的な疾病の重症度を含む様々な要因に
応じて決まることが理解される。
【０５９０】
本発明の治療剤の治療効果は、他の薬剤との組合せによって向上され得る。典型的に、
このような他の薬剤は、血管新生性疾患などの同様の疾病を治療するのに使用することが
知られている薬剤を含む。
【０５９１】
本発明のＲＮＡｉ剤およびその製剤は、経口で、局所的に、非経口的に、吸入もしくは
噴霧によって、または従来の非毒性の薬学的に許容できる担体、助剤および／またはビヒ
クルを含有する投与単位製剤中で経直腸的に投与され得る。本明細書において使用される
際の非経口という用語は、経皮、皮下、血管内（例えば、静脈内）、筋肉内、腹腔内、ま
たは髄膜注射、または注入技術などを含む。２つ以上の異なるＲＮＡｉ剤が投与される場
合、それぞれが別々に投与されてもまたは同時投与されてもよい。それぞれが別々に投与
される場合、投与の方法および／または部位が、同じであってもまたは異なっていてもよ
く、例えば、両方のＲＮＡｉ剤が、静脈内または皮下に投与されてもよく、または第１の
ＲＮＡｉ剤が静脈内に投与され、第２のＲＮＡｉ剤が皮下に投与されてもよいなどである
。
【０５９２】
様々な実施形態において、本開示は、ＲＮＡｉ剤を含む組成物または医薬組成物であっ
て、一方または両方の鎖が３’末端キャップを含む組成物を包含し、組成物は、ヘルパー
脂質（ｈｅｌｐｅｒ  ｌｉｐｉｄ）、中性脂質、および／またはステルス脂質（ｓｔｅａ
ｌｔｈ  ｌｉｐｉｄ）をさらに含む。
【０５９３】
様々な実施形態において、組成物は、ヘルパー脂質をさらに含む。
【０５９４】
様々な実施形態において、組成物は、中性脂質をさらに含む。
【０５９５】
様々な実施形態において、組成物は、ステルス脂質をさらに含む。
【０５９６】
様々な実施形態において、ヘルパー脂質、中性脂質およびステルス脂質は、米国特許出
願公開第２０１１−０２００５８２号明細書に開示されるものから選択される。様々なＲ
ＮＡｉ剤の送達に使用され得るさらなる組成物が、当該技術分野において公知であり、例
えば、米国仮特許出願第６１／７７４７５９号明細書；１２／１９／１３に出願された同
第６１／９１８，１７５号明細書；同第６１／９１８，９２７号明細書；同第６１／９１
８，１８２号明細書；同第６１／９１８９４１号明細書；同第６２／０２５２２４号明細
書；同第６２／０４６４８７号明細書；および国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ０４／０４２９
１１号明細書；ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０７０４１２号明細書；ＰＣＴ／ＩＢ２０１４／
０５９５０３号明細書において提供される。
【０５９７】
様々な実施形態において、組成物は、さらなる生物学的活性剤をさらに含む。
【０５９８】
様々な実施形態において、ヘルパー脂質はコレステロールであり、生物学的活性剤はｓ
ｉＲＮＡである。
【０５９９】
様々な実施形態において、組成物は、脂質ナノ粒子の形態である。
【０６００】
本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤を用いた治療の方法
具体的な特定の一実施形態において、本開示は、個体における標的遺伝子関連疾患を治
療する方法であって、治療的に有効な量の、第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤を
含む組成物であって、第１および／または第２の鎖が、表２に列挙される３’末端キャッ
プから選択される３’末端キャップを含む組成物を個体に投与する工程を含む方法に関す
る。具体的な特定の一実施形態において、本開示は、個体における標的遺伝子の発現を阻
害する方法であって、治療的に有効な量の、本開示のＲＮＡｉ剤を含む組成物を個体に投
与する工程を含む方法に関する。
【０６０１】
方法の一実施形態において、組成物は、薬学的に有効な製剤をさらに含む。
【０６０２】
これらの実施形態の様々な具体的な特定の実施形態が後述される。
【０６０３】
一実施形態において、本方法は、さらなる治療の投与をさらに含む。一実施形態におい
て、さらなる治療は、治療的に有効な量の組成物である。
【０６０４】
一実施形態において、さらなる治療は、方法（または手順）である。
【０６０５】
一実施形態において、さらなる治療およびＲＮＡｉ剤は、任意の順序で投与され得、ま
たは同時に投与され得る。
【０６０６】
一実施形態において、本方法は、疾病のためのさらなる治療を投与する工程をさらに含
む。
【０６０７】
一実施形態において、本方法は、標的遺伝子関連疾患に対するさらなるアンタゴニスト
のリストから選択されるさらなる治療または治療を投与する工程をさらに含む。
【０６０８】
一実施形態において、組成物は、標的遺伝子に対する第２のＲＮＡｉ剤を含む。様々な
実施形態において、第２のＲＮＡｉ剤は、第１のＲＮＡｉ剤と物理的に分かれており、ま
たは２つのＲＮＡｉ剤は、物理的に結合される（例えば、共有結合され、あるいはコンジ
ュゲートされる）。
【０６０９】
他の実施形態
本開示の様々な具体的な特定の実施形態が後述される。
【０６１０】
一実施形態において、本開示は、個体における標的遺伝子関連疾患を治療する方法に使
用するための、本明細書に記載される実施形態のいずれかに係る組成物に関し、本方法は
、治療的に有効な量の、請求項のいずれかに記載の組成物を個体に投与する工程を含む。
【０６１１】
本開示の一実施形態は、標的遺伝子関連疾患の治療用の薬剤の製造における、これらの
実施形態のいずれかに記載の組成物の使用である。
【０６１２】
一実施形態において、本開示は、標的遺伝子関連疾患の治療に使用するための、上記の
実施形態のいずれかの組成物に関する。
【０６１３】
さらなる定義
特に定義されない限り、本明細書において使用される技術用語および科学用語は、本開
示が属する技術分野に精通している専門家によって通常理解されるのと同じ意味を有する
。
【０６１４】
特に示されない限り、具体的に詳細に記載されていない全ての方法、工程、技術および
操作は、当業者に明らかであるため、それ自体公知の方法で行うことができ、そのように
行われた。例えば、標準的なハンドブックおよび本明細書において言及される一般的な背
景技術およびその中に引用されるさらなる参照文献も参照される。
【０６１５】
本開示に対する特許請求の範囲は非限定的であり、以下に提供される。
【０６１６】
特定の実施形態および特許請求の範囲が、本明細書に詳細に開示されているが、これは
、あくまでも説明の目的のために例としてなされており、添付の特許請求の範囲、または
任意の対応する将来の出願の特許請求の範囲の主題の範囲に対して限定されることは意図
されていない。特に、様々な置換、改変、および変更が、特許請求の範囲によって規定さ
れる本開示の趣旨および範囲から逸脱せずに本開示に対してなされ得ることが、本発明者
らによって考えられる。核酸出発材料、対象のクローン、またはライブラリー型の選択は
、本明細書に記載される実施形態の知識を有する当業者にとって日常的なことと考えられ
る。他の態様、利点、および変更は、以下の特許請求の範囲内であると考えられる。後に
出願された対応する出願の特許請求の範囲の補正は、様々な国の特許法による制限による
ことがあり、特許請求の範囲の主題を放棄するものと解釈されるものではない。
【０６１７】
記載される３’末端キャップの様々なさらなる製剤および明らかな変形が、当業者によ
って考案され得る。一方または両方の鎖が３’末端キャップを含む非限定的なＲＮＡｉ剤
の例が、以下の実施例に記載され、これらの実施例は、特許請求の範囲に記載される本開
示の範囲を限定しない。
【実施例】
【０６１８】
実施例１．３’末端キャップを有するｓｉＲＮＡの血清安定性
様々な異なる３’末端キャップ（３’末端オーバーハング）の有効性を試験した。同一
の配列を有する１０個のｓｉＲＮＡを調製した（ｍＦ７−ＩＩＩ標的遺伝子、平滑末端１
９−ｍｅｒ、Ａ１２Ｓ１７修飾スキーム）。１０個の異なる非ヌクレオチド３’末端キャ
ップを使用した。これらを、４つの時点でマウスおよびヒト血清中で試験した。Ａ６Ｓ１
１フォーマットにおける親ｍＦ７−ＩＩＩおよびｗｔ（野生型）ｌｕｃ（ルシフェラーゼ
）ｓｉＲＮＡを対照として使用した。使用される分子が、図１に示される。以下の表５は
、これらの分子の配列を提供する。
【０６１９】
【表５９】
2019135236.tif 000075
【０６２０】
【化１６】
2019135236.tif 000076
材料および方法：
ＲＮＡ試料を、３７℃で、１００％のマウス血清およびヒト血清中でインキュベートし
、０、５’、６時間および２４時間の時点で取り出し、急速凍結した。オリゴを、予め成
形されたヒドロゲル（Ｅｌｃｈｒｏｍ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって分離し、ＳＹＢ
Ｒ  ｇｏｌｄ（Ｂｉｏｒａｄ，Ｃｈｅｍｉｄｏｃ  ＸＲＳ）を用いて可視化した。
【０６２１】
図２は、ＲＮＡｉ剤がＲＮＡ干渉を仲介するのを可能にする際の、実施例１に記載され
る様々な３’末端キャップの有効性を示す。３’末端キャップ−Ｃ３、Ｃ６、Ｃ１２、ト
リエチレングリコール、シクロヘキシル、フェニル、ビフェニル、アダマンタンおよびリ
トコール酸−の全てが、ＲＮＡｉ剤がＲＮＡ干渉を行うことを可能にする。
【０６２２】
図３は、血清中のヌクレアーゼ分解を減少させおよび／または防止する際の、実施例１
に記載される様々な３’末端キャップの有効性を示す。
【０６２３】
マウス血清中、全ての３‘キャップＡ１２Ｓ１７  ｓｉＲＮＡが、最大で２４時間まで
高い抵抗性を示す。
【０６２４】
ヒト血清中、Ｃ３、Ｃ１２およびリトコールは、他の誘導体と比較して安定性が低いよ
うである。しかしながら、両方の実験において、Ｃ３、ビフェニルおよびリトコールは、
他の誘導体と比較して著しく弱いバンド（ｂａｎｄ）を示す。しかしながら、これがより
低い合成／ｄｓＲＮＡ品質によるか（ゲルに基づくＱＣによって示されるように）または
技術的なゲルに基づくアーチファクト（リトコール酸は、ヒト血清に付着し、それによっ
てＳＹＢＲ  ＧＯＬＤインターカレーションから保護された状態になり得る）によるかを
明らかにする必要がある。
【０６２５】
一本鎖アンチセンスＡ１２が、ヒト血清中で急速に分解される一方、親センスＳ１７鎖
（より多い化学修飾を有する）は、少し長く抵抗するが、ｄｓＲＮＡほど長くはない。酵
素安定性は、熱ｄｓＲＮＡ安定性と相関する。
【０６２６】
したがって、この実施例は、これらの様々な３’末端キャップを有するｓｉＲＮＡが、
ＦＶＩＩ（ＶＩＩ因子）に対してＲＮＡ干渉を仲介することができたことを示す。Ｃ３、
Ｃ６、Ｃ１２、グリコール、シクロヘキシル、フェニル、ビフェニル、リトコール、Ｃ７
アミノおよびＣ３アミノと表記される３’末端キャップ修飾は、ルシフェラーゼおよびｄ
ＴｓｄＴ対照と比較して１’、３０’、６時間および２４時間の時点でマウス血清中の向
上した安定性を示した。Ｃ３、Ｃ６、グリコール、シクロヘキシル、フェニルおよびビフ
ェニル、Ｃ７アミノおよびＣ３アミノと表記されるそれらの３’末端修飾は、対照と比較
してヒト血清中の向上した安定性も示した。
【０６２７】
実施例２．様々な３’末端キャップコハク酸エステルおよびアルコールの合成が、以下に
示される。
【０６２８】
【表６０】
2019135236.tif 000077
【０６２９】
実施例２．様々な３’末端キャップコハク酸エステルおよびアルコールの合成が、以下に
示される。
【０６３０】
【表６１】
2019135236.tif 000078
【０６３１】
２．Ａ．Ｘ０２７コハク酸エステルの合成
【化１７】
2019135236.tif 000079
ＤＭＦ（２００ｍＬ）中の化合物１（１０．０ｇ、７０．０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭ
Ｔ−Ｃｌ  ２（２８．４ｇ、８４．０ｍｍｏｌ）および２，６−ルチジン（１５．０ｇ、
１４０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を氷水に注ぎ
、ＥｔＯＡｃ（３×５００ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を硫酸ナトリウム上で乾燥させ
、減圧下で濃縮したところ、粗生成物が得られ、それを、シリカゲルクロマトグラフィー
（ヘプタン／酢酸エチル／ＮＥｔ３）によって精製したところ、所望の生成物が白色の固
体（１６ｇ、３６％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）
：３．７３（ｓ，６Ｈ）、４．１７（ｓ，２Ｈ）、６．９１（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ、４Ｈ
）、７．３５−７．２２（ｍ，７Ｈ）、７．４２（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．４
８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．８３−７．８０（ｍ，１Ｈ）、８．３３（ｄ，Ｊ
＝１．６Ｈｚ、１Ｈ）．
【０６３２】
【化１８】
2019135236.tif 000080
ジオキサン（１６０ｍＬ）／Ｈ２Ｏ（４０ｍＬ）中の化合物２（８．０ｇ、１８ｍｍｏ
ｌ）の溶液に、３−ヒドロキシフェニルボロン酸４（３．５ｇ、２５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（
ＰＰｈ３）４（１．１ｇ、１．０ｍｍｏｌ）、およびＮａ２ＣＯ３（４．０ｇ、３８ｍｍ
ｏｌ）を加えた。反応混合物を窒素ガスでバブリングし、９０℃で一晩撹拌した。次に、
反応混合物を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×８００ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を硫酸ナ
トリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（ヘプタン／酢
酸エチル／ＮＥｔ３）によって精製したところ、４が不純な淡黄色の油（６ｇ）として得
られた。
【０６３３】
【化１９】
2019135236.tif 000081
アセトン（６００ｍＬ）中の化合物４（１０ｇの粗材料、２０ｍｍｏｌ）の溶液に、化
合物５（４．０ｇ、１７．６ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（４．０ｇ、２８ｍｍｏｌ）、およ
びＫＩ（３１６ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を一晩還流状態で撹拌した
。反応混合物を冷却した後、溶媒を減圧下で濃縮した。残渣を水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（
３×８００ｍＬ）で抽出した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した
ところ、粗生成物が得られ、それを、シリカゲルクロマトグラフィー（ヘプタン／酢酸エ
チル／ＮＥｔ３）によって精製したところ、６が淡黄色の油（９ｇ、６９％）として得ら
れた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）：３．７４（ｓ，６Ｈ）、３．８
４（ｓ，３Ｈ）、４．１９（ｓ，２Ｈ）、６．９３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ、４Ｈ）、７．
１１−７．０８（ｍ，１Ｈ）、７．２７−７．２３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．
４６−７．３１（ｍ，９Ｈ）、７．５９−７．５５（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．
６８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．７９−７．７５（ｍ，２Ｈ）、７．８４−７．
８０（ｍ，１Ｈ）、７．９７−７．９２（ｍ，２Ｈ）、８．１０（ｓ，１Ｈ）、８．６１
（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ、１Ｈ）．
【０６３４】
【化２０】
2019135236.tif 000082
水素化アルミニウムリチウム（３０．７ｍＬの、ＴＨＦ中１．０Ｍの懸濁液、３０．７
ｍｍｏｌ）を、０℃でＴＨＦ（１５０ｍＬ）中の化合物６（８．０ｇ、１２ｍｍｏｌ）の
溶液に加えた。０℃で２時間後、反応混合物を水（２００ｍＬ）でクエンチし、次に、反
応混合物をジクロロメタン（３×２００ｍＬ）で抽出し、組み合わされた有機相を硫酸ナ
トリウム上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮したところ、所望の生成物７が白色の固体
（６．１ｇ、８０％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）
：３．７４（ｓ，６Ｈ）、４．１９（ｓ，２Ｈ）、５．５４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ、２Ｈ
）、５．１８（ｓ，２Ｈ）、５．２７−５．２４（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．９
３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ、４Ｈ）、７．１０−７．０７（ｍ，１Ｈ）、７．４７−７．２
３（ｍ，１４Ｈ）、７．６７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．７５（ｓ，１Ｈ）、７
．８３−７．８１（ｍ，１Ｈ）、７．９５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．６１（ｄ
，Ｊ＝１．２Ｈｚ、１Ｈ）．
【０６３５】
【化２１】
2019135236.tif 000083
アルゴン下で１０ｍＬの乾燥ピリジン中の２．００ｇ（３．２１ｍｍｏｌ）の７および
３９０ｍｇ（３．２１ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の溶液
に、６４０ｍｇ（６．４１ｍｍｏｌ）の無水コハク酸（８）を加えた。反応混合物を室温
で１７時間撹拌し、次に、０．５ｍＬの水を加えた。撹拌を３０分間にわたって続けた。
反応混合物を１００ｍＬのジクロロメタンで希釈し、５０ｍＬの氷冷した１０％のクエン
酸水溶液および水（２×５０ｍＬ）で洗浄した。水層を５０ｍＬのジクロロメタンで再抽
出した。組み合わされた有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させた。残りの油を、
２回トルエンと同時蒸発させ、粗生成物を、シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメ
タン／メタノール／トリエチルアミン９７：２：１）によって精製したところ、１．３５
ｇ（１．６４ｍｍｏｌ、５１％）の９がオフホワイトの発泡体として得られた。１Ｈ  Ｎ
ＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：１．１２（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ、９Ｈ）、２．５１
−２．５５（ｍ，２Ｈ）、２．５９−２．６２（ｍ，２Ｈ）、２．８９（ｑ，Ｊ＝７．３
Ｈｚ、６Ｈ）、３．７２（ｓ，６Ｈ）、４．１７（ｓ，２Ｈ）、５．０８（ｓ，４Ｈ）、
５．６８（ｓ  ｂｒ．，１Ｈ）、６．７６−６．８０（ｍ，４Ｈ）、６．９３（ｄｄ，Ｊ
＝８．１、２．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．１４−７．１８（ｍ，１Ｈ）、７．２１−７．３４
（ｍ，１０Ｈ）、７．４１−７．４６（ｍ，４Ｈ）、７．６２（ｄｄ，Ｊ＝５．１、２．
５Ｈｚ、２Ｈ）、７．７１（ｄｄ，Ｊ＝８．２、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、８．５９（ｄ，Ｊ
＝１．５Ｈｚ、１Ｈ）．
【０６３６】
２．Ｂ  Ｘ０３８コハク酸エステルの合成
【化２２】
2019135236.tif 000084
【化２３】
2019135236.tif 000085
２０００ｍＬの３つ口丸底フラスコ中に、メタノール（１０００ｍＬ）中の６−ブロモ
−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸１（１００ｇ、４１７ｍｍｏｌ）の溶液を入れた。
この後、塩化チオニル（１００ｇ、８４０ｍｍｏｌ）を、撹拌しながら滴下して加えた。
得られた溶液を２時間にわたって加熱還流させた。反応混合物を室温に冷ましたところ、
沈殿物が形成された。メタノールで洗浄しながら、ろ過によって固体を回収し、減圧下で
、オーブン中で乾燥させたところ、２（９５ｇ、９０％）が白色の固体として得られた。
【０６３７】
【化２４】
2019135236.tif 000086
窒素の不活性雰囲気でパージされ、維持された２０００ｍＬの３つ口丸底フラスコ中に
、エチレングリコールジメチルエーテル（５００ｍＬ）、水（５００ｍＬ）、（ピリジン
−３−イル）ボロン酸３（４３．６ｇ、３５５ｍｍｏｌ）、ＮＥｔ３（１０７ｇ、１．０
６ｍｏｌ）、およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（９ｇ、７．７９ｍｍｏｌ）中の２（９０ｇ、３
５４ｍｍｏｌ）の溶液を入れた。得られた溶液を、一晩加熱還流させた。反応混合物を室
温に冷まし、８００ｍＬの水の添加によってクエンチしたところ、沈殿物が形成された。
水で洗浄しながら、ろ過によって固体を回収し、減圧下で、オーブン中で乾燥させたとこ
ろ、４（７８ｇ、８７％）が褐色の固体として得られた。
【０６３８】
【化２５】
2019135236.tif 000087
２０００ｍＬの丸底フラスコ中に、ＤＭＦ（５００ｍＬ）中の４（７５ｇ、２９７ｍｍ
ｏｌ）の溶液を入れた。この後、ＮＢＳ（５３．５ｇ、３０１ｍｍｏｌ）を少しずつ加え
た。得られた溶液を室温で２時間撹拌した。次に、反応物を、１０００ｍＬの水の添加に
よってクエンチしたところ、沈殿物が形成された。水で洗浄しながら、ろ過によって固体
を回収し、減圧下で、オーブン中で乾燥させたところ、５（７０ｇ、７１％）が褐色の固
体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：３．９４（ｓ，３Ｈ）
、７．５１−７．５８（ｍ，２Ｈ）、７．６７−７．７６（ｍ，２Ｈ）、８．１１（ｄ，
Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、８．６０（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．９１（ｓ，１Ｈ
）、１２．４８（ｓ，１Ｈ）．
【０６３９】
【化２６】
2019135236.tif 000088
２０００ｍＬの丸底フラスコ中に、メタノール（５００ｍＬ）、水（１００ｍＬ）、お
よび水酸化ナトリウム（２５ｇ、６２５ｍｍｏｌ）中の５（６８ｇ、２０５）の溶液を入
れた。得られた溶液を２時間にわたって加熱還流させた。得られた溶液を室温に冷まし、
５００ｍＬの水で希釈した。溶液のｐＨ値を、２ＮのＨＣｌ（水溶液）を用いて５〜６に
調整したところ、沈殿物が形成された。水で洗浄しながら、ろ過によって固体を回収し、
減圧下で、オーブン中で乾燥させたところ、６（５０ｇ、７７％）が淡黄色の固体として
得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：７．５０−７．５３（ｍ，２Ｈ
）、７．６５−７．７１（ｍ，２Ｈ）、８．０９（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、８．５
９（ｄ，Ｊ＝  ４Ｈｚ、１Ｈ）、８．９１（ｓ，１Ｈ）、１２．３０（ｓ，１Ｈ）、１３
．５５（ｓ，１Ｈ）．
【０６４０】
【化２７】
2019135236.tif 000089
２０００ｍＬの丸底フラスコ中に、ＴＨＦ（６００ｍＬ）、Ｆｍｏｃ−ＯＳｕ（１６６
ｇ、４９１ｍｍｏｌ）、およびＮＥｔ３（１９９ｇ、１．９７ｍｏｌ）中の２−アミノエ
タン−１−オール７ａ（３０ｇ、４９１ｍｍｏｌ）の溶液を入れた。得られた溶液を室温
で一晩撹拌した。混合物を減圧下で濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル
／石油エーテル）によって精製したところ、７ｂ（１３０ｇ、９３％）が白色の固体とし
て得られた。
【０６４１】
【化２８】
2019135236.tif 000090
２０００ｍＬの丸底フラスコ中に、ピリジン（５００ｍＬ）、１−［クロロ（４−メト
キシフェニル）ベンジル］−４−メトキシベンゼン（ＤＭＴ−Ｃｌ）（２３３ｇ、６８８
ｍｍｏｌ）、および４−ジメチルアミノピリジン（２．８ｇ、２２．９ｍｍｏｌ）中の７
ｂ（１３０ｇ、４５９ｍｍｏｌ）の溶液を入れた。得られた溶液を室温で一晩撹拌した。
次に、反応物を水の添加によってクエンチし、得られた溶液を酢酸エチル（３×５００ｍ
Ｌ）で抽出した。組み合わされた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮し
た。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル）によって精製
したところ、７ｃ（２１０ｇ、７８％）が褐色の固体として得られた。
【０６４２】
【化２９】
2019135236.tif 000091
２０００ｍＬの丸底フラスコ中に、ジクロロメタン（５００ｍＬ）およびＮＥｔ３（５
００ｍＬ）中の７ｃ（２１０ｇ、３５９ｍｍｏｌ）の溶液を入れた。得られた溶液を室温
で一晩撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルクロマトグラ
フィー（酢酸エチル／石油エーテル）によって精製したところ、７（９５ｇ、７３％）の
褐色の固体が得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）２．４２（ｂｒ．ｓ
、２Ｈ）、３．７０−３．８２（ｍ，２Ｈ）、３．８０（ｓ，６Ｈ）、６．７９−６．８
７（ｍ，４Ｈ）、７．１９−７．２５（ｍ，２Ｈ）、７．２９（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ、２
Ｈ）、７．３３−７．４０（ｍ，３Ｈ）、７．４９（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）．
【０６４３】
【化３０】
2019135236.tif 000092
２０００ｍＬの丸底フラスコ中に、ＤＭＦ（８００ｍＬ）、７（６９ｇ、１９０ｍｍｏ
ｌ）、ＨＡＴＵ（９６ｇ、２５２ｍｍｏｌ）、およびｉ−Ｐｒ２ＥｔＮ（６５ｇ、５０３
ｍｍｏｌ）中の６（４０ｇ、１２６ｍｍｏｌ）の溶液を入れた。得られた溶液を室温で４
時間撹拌し、次に、１０００ｍＬの水の添加によってクエンチした。得られた溶液を酢酸
エチル（３×８００ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥
させ、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エ
ーテル）によって精製したところ、８（３０ｇ、３６％）が淡黄色の固体として得られた
。
【０６４４】
【化３１】
2019135236.tif 000093
２０００ｍＬの丸底フラスコ中に、ＴＨＦ（２００ｍＬ）中の４−（クロロメチル）安
息香酸９ａ（５０ｇ、２９３ｍｍｏｌ）の溶液を入れた。この後、１ＭのＢＨ３／ＴＨＦ
（５８６ｍＬ、５８６ｍｍｏｌ）を、１時間にわたって０℃で撹拌しながら滴下して加え
た。得られた溶液を室温で４時間撹拌した。次に、反応物を、６００ｍＬの１ＮのＨＣｌ
の添加によってクエンチした。溶液を５００ｍｌの酢酸エチルで抽出した。有機層を、３
００ｍｌの炭酸ナトリウム（水溶液）、および３００ｍｌの塩水で洗浄した。有機層を硫
酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮したところ、９ｂ（３５ｇ、７６％）が白色の
固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）４．５０（ｄ，Ｊ＝４
．８Ｈｚ、２Ｈ）、４．７５（ｓ，２Ｈ）、５．２１（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ、１Ｈ）、７
．３２（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．３９（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）．
【０６４５】
【化３２】
2019135236.tif 000094
１０００ｍＬの３つ口丸底フラスコ中に、ＴＨＦ（３００ｍＬ）およびＴＥＡ（６８ｇ
、６７２ｍｍｏｌ）中の９ｂの溶液（３５ｇ、２２３ｍｍｏｌ）を入れた。この後、ＴＭ
Ｓ−Ｃｌ（３６．４ｇ、３３５ｍｍｏｌ）を撹拌しながら滴下して加えた。得られた溶液
を室温で一晩撹拌した。次に、反応物を、５００ｍＬの水の添加によってクエンチし、５
００ｍｌの酢酸エチルで抽出した。有機層を、５００ｍｌのＮａＨＣＯ３（水溶液）、５
００ｍｌの塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。残渣を減圧下で濃縮したとこ
ろ、９（３５ｇ、６８％）が無色油として得られた。
【０６４６】
【化３３】
2019135236.tif 000095
１０００ｍＬの３つ口丸底フラスコ中に、ＤＭＦ（３００ｍＬ）、および水素化ナトリ
ウム（１．１ｇ、４５．８ｍｍｏｌ）中の８（３０ｇ、４５．３ｍｍｏｌ）の溶液を入れ
た。混合物を室温で０．５時間撹拌した。次に、ＴＨＦ（１００ｍｌ）中の９（１５．５
ｇ、６７．８ｍｍｏｌ）の溶液を加え、得られた溶液を６０℃で一晩撹拌した。反応混合
物を室温に冷まし、５００ｍＬの水の添加によってクエンチした。得られた溶液をジクロ
ロメタン（３×５００ｍＬ）で抽出し、組み合わされた有機層を減圧下で濃縮した。残渣
を、シリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル）によって精製したとこ
ろ、１０（１５ｇ、３９％）が白色の固体として得られた。
【０６４７】
【化３４】
2019135236.tif 000096
５００ｍＬの丸底フラスコ中に、ＴＨＦ（１５０ｍＬ）およびＴＢＡＦ（７ｇ、２６．
８ｍｍｏｌ）中の１０（１５ｇ、１７．６ｍｍｏｌ）の溶液を入れた。得られた溶液を室
温で３０分間撹拌した。得られた溶液を、３００ｍＬの水で希釈し、５００ｍＬの酢酸エ
チルで抽出した。有機層を、水（２×３００ｍＬ）および３００ｍＬの塩水で洗浄し、硫
酸ナトリウム上で乾燥させた。得られた混合物を減圧下で濃縮し、粗生成物を、ヘキサン
から再結晶化させたところ、１１（５．５ｇ、４０％）が黄色の固体として得られた。１
Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：３．３０（ｍ，２Ｈ）、３．６６−３．６５
（ｍ，２Ｈ）、３．７８（ｓ，６Ｈ）、４．５１（ｓ，２Ｈ）、５．６８（ｓ，２Ｈ）、
６．８４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ、４Ｈ）、７．０９（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、７．１９
−７．３５（ｍ，９Ｈ）、７．４７−７．５４（ｍ，４Ｈ）、７．７０（ｄ，Ｊ＝９．２
Ｈｚ、２Ｈ）、８．１０（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、８．５１（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ、１
Ｈ）、８．７９（ｓ，１Ｈ）．
【０６４８】
【化３５】
2019135236.tif 000097
アルゴン下で、８ｍＬの乾燥ピリジン中の１．５７ｇ（２．００ｍｍｏｌ）の１１およ
び２４４ｍｇ（２．００ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の溶
液に、４００ｍｇ（４．００ｍｍｏｌ）の無水コハク酸（１２）を加えた。反応混合物を
室温で２２時間撹拌し、次に、０．５ｍＬの水を加えた。撹拌を３０分間にわたって続け
た。反応混合物を１００ｍＬのジクロロメタンに取り込み、５０ｍＬの氷冷した１０％の
クエン酸水溶液および水（２×５０ｍＬ）で洗浄した。水層を５０ｍＬのジクロロメタン
で再抽出した。組み合わされた有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させた。残りの
油を、２回トルエンと同時蒸発させ、粗生成物を、シリカゲルクロマトグラフィー（ジク
ロロメタン／メタノール／トリエチルアミン９４：５：１）によって精製したところ、２
．０５ｇ（２．００ｍｍｏｌ、定量的（ｑｕａｎｔ．）の１３がオフホワイトの発泡体と
して得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：１．０５（ｔ，Ｊ＝７．２
Ｈｚ、９Ｈ）、２．４５（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．５４（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ
、２Ｈ）、２．６６（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ、６Ｈ）、３．２９（ｔ，Ｊ＝４．９Ｈｚ、２
Ｈ）、３．６０（ｑ，Ｊ＝５．１Ｈｚ、２Ｈ）、３．７０（ｓ，６Ｈ）、４．９７（ｓ，
２Ｈ）、５．７５（ｓ，２Ｈ）、６．７２−６．７６（ｍ，４Ｈ）、７．０１（ｄ，Ｊ＝
８．１Ｈｚ、２Ｈ）、７．１２−７．２３（ｍ，６Ｈ）、７．２６−７．３１（ｍ，５Ｈ
）、７．３５−７．４１（ｍ，４Ｈ）、７．６３（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．７
９（ｄｔ，Ｊ＝８．１、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、８．４９（ｄｄ，Ｊ＝４．８、１．５Ｈｚ
、１Ｈ）、８．７３（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ、１Ｈ）．
【０６４９】
２．Ｃ．Ｘ０５２コハク酸エステルの合成
【化３６】
2019135236.tif 000098
乾燥した２つ口丸底フラスコ中に、３．３３ｇ（１７．８ｍｍｏｌ）の４−ブロモベン
ジルアルコール、２．３５ｇ（１７．８ｍｍｏｌ）の４−エチニルベンジルアルコール、
７５０ｍｇ（１．０７ｍｍｏｌ）のビス−（トリフェニルホスフィン）−パラジウムジク
ロリド、および３４０ｍｇ（１．７８ｍｍｏｌ）のヨウ化銅（Ｉ）を、アルゴン下で、４
５ｍＬの乾燥ＴＨＦに溶解させた。次に、１２．４ｍＬ（９．２１ｇ、７１．３ｍｍｏｌ
）のヒューニッヒ塩基を加え、混合物を、４時間にわたって加熱還流させた。反応混合物
を室温に冷まし、Ｈｙｆｌｏのパッドに通し、ろ過ケークをＴＨＦで洗浄し、ろ液を蒸発
乾固させた。粗生成物を、シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール
９９：１〜４９：１）によって精製したところ、３（１．０３ｇ、２４％）が、黄色がか
った固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：４．５４（
ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ、４Ｈ）、５．２９（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、７．３７（ｄ，
Ｊ＝８．３Ｈｚ、４Ｈ）、７．５１（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ、４Ｈ）．
【０６５０】
【化３７】
2019135236.tif 000099
ジオール３（９６０ｍｇ、４．０３ｍｍｏｌ）を、アルゴン下で１７ｍＬのピリジンに
溶解させ、０℃に冷却した。次に、４，４’−ジメトキシトリフェニルクロロメタン（Ｄ
ＭＴ−Ｃｌ、１．３７ｍｇ、４．０３ｍｍｏｌ）を、１５分間にわたって少しずつ加えた
。溶液を周囲温度で一晩撹拌した。反応混合物を、１００ｍＬのジクロロメタンに溶解さ
せ、それぞれ５０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で２回抽出した。水層を１００ｍＬのジ
クロロメタンで再抽出した。組み合わされた有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、蒸発乾
固させた。粗生成物を、２回トルエンと同時蒸発させ、シリカゲルクロマトグラフィー（
０．１％のＥｔ３Ｎを含むヘプタン／酢酸エチル３：１〜２：１）によって精製したとこ
ろ、４が６１％の収率で発泡体（１．３２ｇ、２．４４ｍｍｏｌ）として得られた。１Ｈ
ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：１．６７（ｔ  ｂｒ．，１Ｈ）、３．７２（ｓ
，６Ｈ）、４．１１（ｓ，２Ｈ）、４．６４（ｓ  ｂｒ．，２Ｈ）６．７６−６．７９（
ｍ，４Ｈ）、７．１３−７．１７（ｍ，１Ｈ）、７．２１−７．３４（ｍ，１０Ｈ）、７
．４１−７．４７（ｍ，６Ｈ）．
【０６５１】
【化３８】
2019135236.tif 000100
アルゴン下で１２ｍＬの乾燥ピリジン中の１．３０ｇ（２．４０ｍｍｏｌ）の４および
２９０ｍｇ（２．４０ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の溶液
に、４８０ｍｇ（４．８１ｍｍｏｌ）の無水コハク酸（５）を加えた。反応混合物を室温
で１９時間撹拌し、次に、１．５ｍＬの水の添加によってクエンチした。撹拌を６０分間
にわたって続けてから、反応混合物を、１５０ｍＬのジクロロメタンで希釈し、７５ｍＬ
の氷冷した１０％のクエン酸水溶液および水（２×７５ｍＬ）で洗浄した。水層を１５０
ｍＬのジクロロメタンで再抽出した。組み合わされた有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ
、蒸発させた。残りの油を、２回トルエンと同時蒸発させ、粗生成物を、シリカゲルクロ
マトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール／トリエチルアミン９７：２：１）によっ
て精製したところ、１．３６ｇ（１．８３ｍｍｏｌ、７６％）の６がオフホワイトの粘着
性の発泡体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：１．１６（ｔ
，Ｊ＝７．３Ｈｚ、９Ｈ）、２．５０（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．６０（ｔ，Ｊ
＝  ６．７Ｈｚ、２Ｈ）、２．８７（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ、６Ｈ）、３．７２（ｓ，６Ｈ
）、４．１１（ｓ，２Ｈ）、５．０５（ｓ，２Ｈ）、５．６５（ｓ  ｂｒ．，１Ｈ）、６
．７５−６．７９（ｍ，４Ｈ）、７．１３−７．１６（ｍ，１Ｈ）、７．２１−７．３４
（ｍ，１０Ｈ）、７．４１−７．４４（ｍ，６Ｈ）．
【０６５２】
２．Ｄ．Ｘ０５８コハク酸エステルの合成
【化３９】
2019135236.tif 000101
【化４０】
2019135236.tif 000102
アルゴン下でトルエン（４．９４Ｌ、４．９４ｍｏｌ）中の三塩化ホウ素の１Ｍの溶液
を、５Ｌのトルエンで希釈してから、４００ｍＬのトルエン中の８５０ｇ（４．９４ｍｏ
ｌ）の２−ブロモアニリン（１）の溶液を、４０分間の期間にわたって加えたところ、わ
ずかに発熱性の反応において透明の淡褐色の溶液が得られた。温度を、冷却しながら２４
℃未満に保持した。次に、１．５３Ｌのトルエン中の１５２９ｇ（１４．８ｍｏｌ）のベ
ンゾニトリル（２）の溶液を加えた後、７２５ｇ（５．４４ｍｏｌ）のＡｌＣｌ３を加え
たところ、微細懸濁液が得られ、それが淡緑色に変化した。この混合物を、２０℃〜２４
℃で１時間撹拌し、次に、６時間にわたって加熱還流させた。還流状態で１時間後、透明
の淡褐色の溶液が得られ、それが４時間後に淡黄色に変化し、最終的に濁った。合計で７
時間後、反応混合物を、一晩２０℃に冷ましたところ、エマルジョンが得られ、次に、そ
れを、１５Ｌの氷冷した１ＭのＨＣｌの添加によってクエンチした（注意：添加の開始時
に強いガス発生を伴う発熱反応）。温度を、冷却によって２２℃〜３５℃に保持した。こ
の二相混合物を、６０分間にわたって８０℃に温めた。水相を分離し、５Ｌのトルエンで
再抽出した。両方の有機相を、５Ｌの１ＭのＨＣｌ、１０Ｌの２ＭのＮａＯＨ溶液および
５Ｌの塩水で洗浄した。組み合わされたトルエン層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、褐色の油
になるまで蒸発させ（５５℃、５ミリバール）、それを８０℃および０．５ミリバールで
さらに乾燥させた。粗生成物が室温で１時間後に固化し、次に、それを、シリカゲルクロ
マトグラフィー（ヘプタン／酢酸エチル）によって精製したところ、８１２ｇ（２．９４
ｍｏｌ、５８％）の３が得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、アセトニトリル−ｄ３
）：６．５２−６．６８（ｍ，３Ｈ）、７．４２（ｄｄ，Ｊ＝７．８、１．３Ｈｚ、１Ｈ
）、７．４７−７．５４（ｍ，２Ｈ）、７．５７−７．６４（ｍ，３Ｈ）、７．６６（ｄ
ｄ，Ｊ＝７．８、１．３Ｈｚ、１Ｈ）．
【０６５３】
【化４１】
2019135236.tif 000103
アルゴン下で、激しく撹拌しながら、１２０ｇ（１０３３ｍｍｏｌ）のメチル−４−オ
キソブタノエート（４）を、３．５Ｌの氷酢酸中のベンゾフェノン３（２３３ｇ、８０８
ｍｍｏｌ）の溶液に一度に加えたところ、透明の黄色の溶液が得られた。２．５ｍＬ（４
．６０ｇ、４６．９ｍｍｏｌ）の濃硫酸の添加の後、色が淡赤色に変化した。溶液を、一
晩加熱還流させた。次に、黄色の溶液を室温に冷まし、１０Ｌの水中の３ｋｇの塩化アン
モニウムの氷冷した溶液にゆっくりと注いだ。混合物を、それぞれ５Ｌのジクロロメタン
で２回抽出した。組み合わされた有機層を、６Ｌの飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で２回抽出し
た（注意：ガス発生）。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、蒸発乾固させたところ、３３
８ｇの粗生成物が淡黄色の固体として得られた。この物質を、６Ｌのヘプタン／酢酸エチ
ル４：１から結晶化させたところ、１３６ｇ（３８２ｍｍｏｌ、４７％）の５が無色の結
晶として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、アセトニトリル−ｄ３）：３．５８（
ｓ，３Ｈ）、３．６５（ｓ，２Ｈ）、７．２５−７．３１（ｍ，２Ｈ）、７．３２−７．
３８（ｍ，１Ｈ）、７．４０−７．４５（ｍ，１Ｈ）、７．５３−７．６１（ｍ，３Ｈ）
、８．０７（ｄｄ，Ｊ＝７．６、１．５Ｈｚ、１Ｈ）、８．９７（ｓ，１Ｈ）．
【０６５４】
【化４２】
2019135236.tif 000104
フェニルキノリン５（３３８ｇ、９４９ｍｍｏｌ）、ボロン酸ビニル６（１７５ｇ、１
１３９ｍｍｏｌ）、および炭酸カリウム（２６６ｇ、１９２６ｍｍｏｌ）を、アルゴン下
で４．６Ｌの１，４−ジオキサン／水１：１に溶解させた。混合物を５分間撹拌してから
、３１．９ｇ（７８ｍｍｏｌ）のＳ−ＰＨＯＳおよび１０．０ｇ（４４．６ｍｍｏｌ）の
酢酸パラジウム（ＩＩ）を加えた。混合物を７０℃に温め、５時間にわたってアルゴン下
で撹拌した。次に、黄色の混合物を室温に冷まし、３Ｌのｔｅｒｔ．−ブチルメチルエー
テルで希釈し、２．５Ｌの水、続いて２Ｌの塩水で２回抽出した。水相を２Ｌのｔｅｒｔ
．−ブチルメチルエーテルで再抽出した。組み合わされた有機層を、ＭｇＳＯ４で乾燥さ
せ、蒸発乾固させたところ、３４８ｇの黄色の油が得られた。粗生成物を、シリカゲルク
ロマトグラフィー（ヘプタン／酢酸エチル４：１）によって精製したところ、１９６ｇ（
６４５ｍｍｏｌ、６８％）の７が得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、アセトニトリ
ル−ｄ３）：３．５８（ｓ，３Ｈ）、３．６３（ｓ，２Ｈ）、５．５０（ｄｄ，Ｊ＝１１
．１、１．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．０４（ｄｄ，Ｊ＝１７．９、１．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．
２４−７．３０（ｍ，２Ｈ）、７．３５（ｄｄ，Ｊ＝８．３、１．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．
４３−７．５０（ｍ，１Ｈ）、７．５１−７．５９（ｍ，３Ｈ）、７．９７（ｄｄ，Ｊ＝
７．１、１．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．０６（ｄｄ，Ｊ＝１７．９、１１．４Ｈｚ、１Ｈ）、
８．９１（ｓ，１Ｈ）
【０６５５】
【化４３】
2019135236.tif 000105
ビニル−キノリン７（１９４ｇ、６４０ｍｍｏｌ）を、アルゴン下で３ＬのＴＨＦに溶
解させた。黄色の溶液を１５℃に冷却し、１０分間撹拌した。次に、１．８Ｌの、ＴＨＦ
（９００ｍｍｏｌ）中の９−ボラビシクロ［３．３．１］ノナンの０．５Ｍの溶液を、１
５〜１８℃で３０分間の期間の間、滴下して加えた。撹拌を室温で一晩続けた。−５０℃
（ドライアイス／アセトン）に冷却した後、３００ｍＬの、水（２９３７ｍｍｏｌ）中３
０％の過酸化水素溶液を、５分間にわたって滴下して加えた後（発熱反応）、５２０ｍＬ
の３ＭのＮａＯＨ水溶液（１５６０ｍｍｏｌ）を加えたところ、黄色の懸濁液が得られた
。反応混合物を、０〜２℃に温め、次に、この温度で３時間撹拌した。黄色の懸濁液を、
３Ｌの水で希釈し、次に、３Ｌの酢酸エチルで２回抽出した。両方の有機層を、２Ｌの水
、続いて２Ｌの塩水で洗浄した。組み合わされた有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、蒸発
させたところ、淡褐色の油が得られ、それを、シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロ
メタン中２〜３％のメタノール）によって精製したところ、１６３ｇ（５０７ｍｍｏｌ、
７９％）の８が得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：３．４２（
ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．５３（ｓ，３Ｈ）、３．６５（ｓ，２Ｈ）、３．７６
−３．８４（ｍ，２Ｈ）、４．５４（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．１９（ｄｄ，Ｊ
＝８．６、１．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．２１−７．２５（ｍ，２Ｈ）、７．４０（ｄｄ，Ｊ
＝８．１、７．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．４９−７．５９（ｍ，３Ｈ）、７．６２（ｄ，Ｊ＝
７．１Ｈｚ、１Ｈ）、８．９１（ｓ，１Ｈ）．
【０６５６】
【化４４】
2019135236.tif 000106
メチルエステル８（６４．５ｇ、２０１ｍｍｏｌ）を、６００ｍｌのメタノールに溶解
させた。この溶液に、４５０ｍＬの０．５ＭのＮａＯＨ水溶液（２２５ｍｍｏｌ）を加え
た。濁った溶液を５０℃で１時間撹拌した。次に、反応混合物を、約６００ｍＬになるま
で蒸発させ、残渣を、それぞれ８００ｍＬのｔｅｒｔ．−ブチルメチルエーテルで２回抽
出した。エーテル層を３００ｍＬの水で洗浄した。組み合わされた水相を蒸発乾固させ、
残渣を、２回トルエンと同時蒸発させたところ、６７ｇのベージュ色の固体が得られた。
この物質を、１Ｌの水に溶解させ、次に、２５０ｍＬの１Ｍのクエン酸水溶液を注意深く
加えた。得られた懸濁液を１５分間撹拌し、次に、それぞれ１Ｌの酢酸エチルで２回抽出
した。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、蒸発乾固させたところ、５４．１ｇ（１７６ｍ
ｍｏｌ、８８％）の酸９がベージュ色の固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨ
ｚ、Ｄ２Ｏ）：３．８０（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．８２（ｓ，２Ｈ）、４．３
２（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、７．５８−７．６４（ｍ，２Ｈ）、７．６７−７．７
３（ｍ，１Ｈ）、７．７３−７．７９（ｍ，１Ｈ）、７．８７−７．９５（ｍ，３Ｈ）、
７．９７（ｄｄ，Ｊ＝７．１、１．５Ｈｚ、１Ｈ）、９．１４（ｓ，１Ｈ）．
【０６５７】
【化４５】
2019135236.tif 000107
無水フタル酸（１０Ｂ、１４０ｇ、９４５ｍｍｏｌ）を、４−アミノ−１−ブタノール
（１０Ａ）と混合し、３時間にわたって１４０℃に加熱した。反応の間に、無色の懸濁液
が、透明の淡黄色の液体に変化した。混合物を８０℃に冷まし、３ｋｇの砕いた氷上に注
いだ。氷混合物を、それぞれ２Ｌのジクロロメタンで３回抽出した。組み合わされた有機
相を、２Ｌの飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で、２Ｌの水で２回、次に、２Ｌの塩水で洗浄した
。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濃縮したところ、１９５ｇの１０Ｃ（８８９ｍｍｏ
ｌ、９５％）がベージュ色の固体として得られた。この物質を、さらに精製せずに次の工
程に使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、アセトニトリル−ｄ３）：１．４８−１．
５８（ｍ，２Ｈ）、１．６７−１．７８（ｍ，２Ｈ）、２．３７（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ、
１Ｈ）、３．５０−３．５７（ｍ，２Ｈ）、３．６６（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ、２Ｈ）、７
．７５−７．８５（ｍ，４Ｈ）．
【０６５８】
【化４６】
2019135236.tif 000108
フタルイミド１０Ｃ（１９３ｇ、８８０ｍｍｏｌ）を、アルゴン下で２．５Ｌのピリジ
ンに溶解させた。次に、４，４’−ジメトキシトリフェニルクロロメタン（ＤＭＴ−Ｃｌ
、３２８ｇ、９６８ｍｍｏｌ）を、１０分間にわたって４回に分けて加えた。反応混合物
の温度が、２３℃から２６℃に上昇し、黄色の溶液が赤色に変化し、次に、再度黄色に戻
った。溶液を周囲温度で一晩撹拌した。反応をクエンチするために、２００ｍＬのメタノ
ールを加え、続いて、反応混合物を蒸発させた。残渣を、５Ｌの酢酸エチルに溶解させ、
５Ｌの５％のクエン酸水溶液で２回、５％のＮａＨＣＯ３水溶液で１回、最後に５Ｌの塩
水で抽出した。水層を、２Ｌの酢酸エチルで再抽出した。組み合わされた有機層をＭｇＳ
Ｏ４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。粗生成物、４９５ｇの褐色の油を、シリカゲルクロ
マトグラフィー（ヘプタン／酢酸エチル４：１〜３：１）によって精製した。ＤＭＴ保護
されたリンカー１０Ｄが８１％の収率（３８１ｇ、７３０ｍｍｏｌ）で得られた。１Ｈ  
ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：１．４８−１．６０（ｍ，２Ｈ）、１．６２
−１．７４（ｍ，２Ｈ）、３．０１（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ、２Ｈ）、３．５６（ｔ，Ｊ＝
７．１Ｈｚ、２Ｈ）、３．７３（ｓ，６Ｈ）、６．８２−６．８８（ｍ，４Ｈ）、７．１
６−７．２５（ｍ，５Ｈ）、７．２５−７．３１（ｍ，２Ｈ）、７．３２−７．３７（ｍ
，２Ｈ）、７．７８−７．８７（ｍ，４Ｈ）．
【０６５９】
【化４７】
2019135236.tif 000109
フタルイミド１０Ｄ（３０２ｇ、５７９ｍｍｏｌ）を、５０℃で７Ｌのエタノールに溶
解させ、３２０ｍＬ（３２７ｇ、３．５７ｍｏｌ）のヒドラジン水和物を加えた。反応混
合物を、５時間にわたって５０℃に加熱した。無色の懸濁液を室温に冷まし、１５Ｌの水
で希釈した。得られたエマルジョンを、それぞれ６Ｌのｔｅｒｔ．−ブチルメチルエーテ
ルで２回抽出した。有機相を、４Ｌの５％のＮａＨＣＯ３水溶液で２回、次に、４Ｌの塩
水で洗浄した。組み合わされたエーテル層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させたところ
、２２６ｇ（５７８ｍｍｏｌ）の１０が淡黄色の油として得られ、それを、さらに精製せ
ずに次の工程に使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、アセトニトリル−ｄ３）：１．
４２−１．５４（ｍ，２Ｈ）、１．５６−１．６６（ｍ，２Ｈ）、２．６１（ｔ，Ｊ＝７
．１Ｈｚ、２Ｈ）、３．０６（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ、２Ｈ）、３．７８（ｓ，６Ｈ）、６
．８４−６．９０（ｍ，４Ｈ）、７．１９−７．２６（ｍ，１Ｈ）、７．２８−７．３５
（ｍ，６Ｈ）、７．４１−７．４７（ｍ，２Ｈ）．
【０６６０】
【化４８】
2019135236.tif 000110
キノリン酢酸９（９２ｇ、２７９ｍｍｏｌ）を、アルゴン下で１．５ＬのＤＭＦに溶解
させ、１ＬのＤＭＦ中の１２８ｇ（３２７ｍｍｏｌ）のＤＭＴ保護されたアミノブタノー
ル１０の溶液、続いて、１４６ｍＬ（１０８ｇ、８３８ｍｍｏｌ）のエチルジイソプロピ
ルアミンを加えた。最後に、１３８ｇ（３６３ｍｍｏｌ）のＨＡＴＵを、淡黄色の濁った
溶液に加えたところ、発熱反応が得られた。温度を、氷浴による冷却によって２５℃未満
に保持した。反応混合物を室温で６時間撹拌し、次に、３ＬのＮａＨＣＯ３水溶液で希釈
した。この混合物を、それぞれ３Ｌのｔｅｒｔ．−ブチルメチルエーテルで２回抽出した
。有機層を塩水で洗浄し、組み合わせて、乾燥させ、蒸発させた。粗生成物（１８０ｇの
淡褐色の油）を、シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール／トリエ
チルアミン９８：２：０．２５）によって精製したところ、１３４ｇ（１９７ｍｍｏｌ、
７０％）の１１が無色の発泡体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ
−ｄ６）：１．３５−１．５７（ｍ，４Ｈ）、２．９７（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ、４Ｈ）、
３．３４−３．４８（ｍ，４Ｈ）、３．７３（ｓ，６Ｈ）、３．７６−３．８３（ｍ，２
Ｈ）、４．５４（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．８４−６．９０（ｍ，４Ｈ）、７．
１５−７．３２（ｍ，１０Ｈ）、７．３４−７．４１（ｍ，３Ｈ）、７．４２−７．５３
（ｍ，３Ｈ）、７．５８（ｄｄ，Ｊ＝６．８、１．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．６２（ｔ，Ｊ＝
４．８Ｈｚ、１Ｈ）、８．８３（ｓ，１Ｈ）．
【０６６１】
【化４９】
2019135236.tif 000111
アルコール１１（４３．８ｇ、６４．４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリ
ジン（ＤＭＡＰ、７．８７ｇ、６４．４ｍｍｏｌ）を、アルゴン下で６００ｍＬのピリジ
ンに溶解させた。次に、１２．９ｇ（１２８ｍｍｏｌ）の無水コハク酸（１２）を加え、
反応混合物を室温で２０時間撹拌した。反応物を、１０ｍＬの水の添加によってクエンチ
し、撹拌を３０分間にわたって続けた。反応混合物を、１２００ｍＬのジクロロメタンで
希釈し、６００ｍＬの氷冷した１０％のクエン酸水溶液でおよび６００ｍＬの水で２回洗
浄した。水層を６００ｍＬのジクロロメタンで再抽出した。組み合わされた有機層をＮａ
２ＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させた。粗生成物を、１００ｍＬのトルエンと２回同時蒸発
させ、次に、シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール／トリエチル
アミン９７：２：１〜９４：５：１）によって精製したところ、５７．５ｇ（定量的）の
１３がオフホワイトの発泡体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３
）：１．１７（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ、９Ｈ）、１．４６−１．６０（ｍ，４Ｈ）、２．５
２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．６１（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ、２Ｈ）、２．８２（
ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ、６Ｈ）、３．０６（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．１６（ｑ，
Ｊ＝６．３Ｈｚ、２Ｈ）、３．４９（ｓ，２Ｈ）、３．６４（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ
）、３．８０（ｓ，６Ｈ）、４．５３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、５．３８（ｔ  ｂ
ｒ．，１Ｈ）、６．０８（ｓ  ｂｒ．，１Ｈ）、６．８０−６．８４（ｍ，４Ｈ）、７．
２０（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．２６−７．３８（ｍ，１０Ｈ）、７．４１−７
．５２（ｍ，５Ｈ）、７．５９（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ、１Ｈ）、８．９２（ｓ，１Ｈ）．
【０６６２】
２．Ｅ．Ｘ０６７コハク酸エステルの合成
【化５０】
2019135236.tif 000112
２５０ｍＬの丸底フラスコに、２−（４−ブロモフェニル）エタノール１（１．００ｇ
、４．９７ｍｍｏｌ）、ピリジン（２５ｍＬ）および４，４’−（クロロ（フェニル）メ
チレン）ビス（メトキシベンゼン）（ＤＭＴ−Ｃｌ）（１．６９ｇ、４．９７ｍｍｏｌ）
を加えた。溶液を室温で２時間撹拌した。１ｍＬのＭｅＯＨを加え、溶液を室温で１０分
間撹拌した。次に、溶液を減圧下で濃縮し、２５０ｍＬのＥｔＯＡｃに溶解させ、１００
ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、１００ｍＬの水、および１００ｍＬの塩水で洗浄した。
有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（
ヘプタン／酢酸エチル／ＮＥｔ３）によって精製したところ、２（２．３５ｇ、９４％）
が発泡体状の固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：２
．８０（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ、２Ｈ）、３．１２（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ、２Ｈ）、３．７
２（ｓ，６Ｈ）、６．８１−６．８７（ｍ，４Ｈ）、７．１２−７．２２（ｍ，７Ｈ）、
７．２６（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ、４Ｈ）、７．４４−７．５０（ｍ，２Ｈ）．
【０６６３】
【化５１】
2019135236.tif 000113
ゴム隔膜を備えた４０ｍＬのガラスバイアルに、２（０．７０ｇ、１．３９ｍｍｏｌ）
、４−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸３（０．２５ｇ、１．６７ｍｍｏｌ）、Ｐ
ｄ（ＰＰｈ３）４（８０ｍｇ、０．０７０ｍｍｏｌ）、２Ｍ（水溶液）Ｎａ２ＣＯ３（２
．１ｍＬ、４．１７ｍｍｏｌ）、および１，４−ジオキサン（７ｍＬ）を加えた。内容物
を短時間減圧下に置き、次に、窒素雰囲気下に置いた。バイアルを密閉し、９０℃で１６
時間加熱した。室温に冷ました後、ＥｔＯＡｃを加え、混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶
液および塩水で洗浄した。有機部分を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮し、シリ
カゲルクロマトグラフィー（ヘプタン／酢酸エチル／ＮＥｔ３）によって精製したところ
、３（０．６４ｇ、８７％）が発泡体状の固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００Ｍ
Ｈｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：２．８６（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ、２Ｈ）、３．１６（ｔ，Ｊ＝
６．６Ｈｚ、２Ｈ）、３．７２（ｓ，６Ｈ）、４．５２（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ、２Ｈ）、
５．１９（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ、１Ｈ）、６．８１−６．８７（ｍ，４Ｈ）、７．１８（
ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ、４Ｈ）、７．２０−７．２２（ｍ，１Ｈ）、７．２４−７．３３（
ｍ，６Ｈ）、７．３８（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．５７（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ、
２Ｈ）、７．６０（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ、２Ｈ）．
【０６６４】
【化５２】
2019135236.tif 000114
アルゴン下で３５ｍＬの乾燥ピリジン中の３．６８ｇ（６．９３ｍｍｏｌ）の４および
８４７ｍｇ（６．９３ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の溶液
に、１．３９ｇ（１３．９ｍｍｏｌ）の無水コハク酸（５）を加えた。反応混合物を室温
で１６時間撹拌し、次に、２．５ｍＬの水を加えた。撹拌を３０分間にわたって続けた。
反応混合物を、３００ｍＬのジクロロメタンに取り込み、１５０ｍＬの氷冷した１０％の
クエン酸水溶液および水（２×１５０ｍＬ）で洗浄した。水層を１５０ｍＬのジクロロメ
タンで再抽出した。組み合わされた有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させた。残
りの油を、２回トルエンと同時蒸発させ、粗生成物を、シリカゲルクロマトグラフィー（
ジクロロメタン／メタノール／トリエチルアミン９７：２：１）によって精製したところ
、４．６８ｇ（６．３９ｍｍｏｌ、９２％）の６がオフホワイトの発泡体として得られた
。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：１．１４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ、９Ｈ）
、２．５１（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．６０（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ、２Ｈ）、２
．８２−２．９０（ｍ，８Ｈ）、３．２４（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．７０（ｓ
，６Ｈ）、５．０８（ｓ，２Ｈ）、６．６９−６．７３（ｍ，４Ｈ）、７．０８−７．２
１（ｍ，９Ｈ）、７．２８−７．３５（ｍ，４Ｈ）、７．４２（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ、２
Ｈ）、７．４８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、８．０４（ｓ  ｂｒ．，１Ｈ）．
【０６６５】
２．Ｆ．Ｘ０６９コハク酸エステルの合成
【化５３】
2019135236.tif 000115
Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ，２００２，１９，３３２６−３３３５にしたがって、
化合物２を調製した。２５０ｍＬの丸底フラスコ中に、３−ブロモベンズアルデヒド１（
１０．０ｇ、５４．０ｍｍｏｌ）およびＥｔＯＨ（２５ｍＬ）を加えた。溶液を氷水浴中
で０℃に冷却し、水素化ホウ素ナトリウム（１．１１ｇ、２９．５ｍｍｏｌ）を加え、混
合物を０℃で１時間撹拌した。硫酸ナトリウム十水和物を加え、反応物を室温で１時間撹
拌して、ホウ化水素をクエンチした。ジエチルエーテルを加え、混合物を水で洗浄した。
有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮したところ、２（９．５０ｇ、９４％
）が透明の油として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：２．３４（
ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、４．６１（ｂｒ．ｓ，２Ｈ）、７．１３−７．３３（ｍ，２Ｈ）、７
．４０（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．４９（ｓ，１Ｈ）．
【０６６６】
【化５４】
2019135236.tif 000116
５００ｍＬの丸底フラスコに、２（９．５０ｇ、５０．８ｍｍｏｌ）、４，４’−（ク
ロロ（フェニル）メチレン）ビス（メトキシベンゼン）（ＤＭＴ−Ｃｌ）（１７．２ｇ、
５０．８ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０．３１０ｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）、およびピリジン
（２００ｍＬ）を加えた。溶液を窒素の雰囲気下に置き、室温で一晩撹拌した。ＥｔＯＡ
ｃを加え、溶液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄した。有機層を減圧下で濃縮し、シリカ
ゲルクロマトグラフィー（ヘプタン／酢酸エチル／ＮＥｔ３）によって精製したところ、
３（２３．３ｇ、９４％）が発泡体状の固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨ
ｚ、ＣＤＣｌ３）：３．７４（ｓ，６Ｈ）、４．１２（ｓ，２Ｈ）、６．９２（ｄｄ，Ｊ
＝８．０Ｈｚ、４Ｈ）、７．２１−７．４８（ｍ，１３Ｈ）．
【０６６７】
【化５５】
2019135236.tif 000117
ゴム隔膜を備えた４０ｍＬのガラスバイアルに、３（１．００ｇ、２．０４ｍｍｏｌ）
、４−エチニルベンジルアルコール４（０．４０５ｇ、３．０６ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ２
（ＰＰｈ３）２（８６ｍｇ、０．１２３ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（３９ｍｇ、０．２０４ｍｍ
ｏｌ）、ｉＰｒ２ＥｔＮ（１．０６ｇ、８．１７ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（７ｍＬ）を加
えた。内容物を短時間減圧下に置き、次に、窒素雰囲気下に置いた。バイアルを密閉し、
７０℃で１６時間加熱した。室温に冷ました後、混合物を、ＥｔＯＡｃで洗浄しながらセ
ライトに通してろ過し、ろ液を減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィ
ー（ヘプタン／酢酸エチル／ＮＥｔ３）によって精製したところ、５（０．６８０ｇ、６
２％）が発泡体状の固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：
３．７４（ｓ，６Ｈ）、４．１２（ｓ，２Ｈ）、４．５３（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ、２Ｈ）
、５．２９（ｔ，Ｊ＝４．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．９３（ｄｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ、４Ｈ）、
７．１９−７．５８（ｍ，１７Ｈ）．
【０６６８】
【化５６】
2019135236.tif 000118
アルゴン下で４２ｍＬの乾燥ピリジン中の４．５５ｇ（８．４２ｍｍｏｌ）の５および
１．０３ｇ（８．４２ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の溶液
に、１．６８ｇ（１６．８ｍｍｏｌ）の無水コハク酸（６）を加えた。反応混合物を室温
で１６時間撹拌し、次に、２．５ｍＬの水を加えた。撹拌を３０分間にわたって続けた。
反応混合物を、３００ｍＬのジクロロメタンに取り込み、１５０ｍＬの氷冷した１０％の
クエン酸水溶液および水（２×１５０ｍＬ）で洗浄した。水層を１５０ｍＬのジクロロメ
タンで再抽出した。組み合わされた有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させた。残
りの油を、２回トルエンと同時蒸発させ、粗生成物を、シリカゲルクロマトグラフィー（
ジクロロメタン／メタノール／トリエチルアミン９７：２：１）によって精製したところ
、５．８１ｇ（７．８３ｍｍｏｌ、９３％）の７がオフホワイトの粘着性の発泡体として
得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：１．１４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ
、９Ｈ）、２．５０（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．６０（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ、２
Ｈ）、２．８６（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ、６Ｈ）、３．７２（ｓ，６Ｈ）、４．０９（ｓ，
２Ｈ）、５．０５（ｓ，２Ｈ）、５．９５（ｓ  ｂｒ．，１Ｈ）、６．７５−６．７９（
ｍ，４Ｈ）、７．１５（ｔｔ、Ｊ＝７．３、１．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．２１−７．３６（
ｍ，１１Ｈ）、７．４２−７．４５（ｍ，５Ｈ）．
【０６６９】
２．Ｇ．ＰＡＺリガンドスクシネートと制御細孔ガラス担体の高密度充填の基本手順
【化５７】
2019135236.tif 000119
エルレンマイヤーフラスコ中に、１．００ｍｍｏｌのＰＡＺリガンドコハク酸塩１を、
アルゴン下で５０ｍＬの乾燥アセトニトリルに溶解させた。この溶液に、３５３ｍｇ（１
．１０ｍｍｏｌ）のＯ−（１Ｈ−ベンゾ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−Ｎ，
Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）を加え
、溶液を１０分間振とうした。次に、１０ｇの長鎖アルキルアミン制御細孔ガラス（ＬＣ
ＡＡ／ＣＮＡ−６００−ＣＰＧ、ＰｒｉｍｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ、２）を加え、反応混合
物を５分間にわたって穏やかに撹拌した。最後に、０．６８５ｍＬ（５１７ｍｇ、４．０
０ｍｍｏｌ）のヒューニッヒ塩基を加え、フラスコを、オービタルシェーカー上で２４時
間にわたって穏やかに振とうした。ＣＰＧのアリコート（アセトニトリルで洗浄され、減
圧下で乾燥され、２５ｍＬの、ジクロロメタン（ｖ／ｖ）中３％のジクロロ酢酸に加えら
れた３〜５ｍｇのＣＰＧ、５０４ｎｍにおける吸光度が測定される）を脱トリチル化する
ことによって、充填密度を評価した。充填密度が所望の範囲内（６０〜９０マイクロモル
／ｇ）である場合、ＣＰＧをろ過して取り除き、アセトニトリルで十分に洗浄した。ＣＰ
Ｇを、それぞれ×ｍＬの、無水酢酸／２，６−ルチジン／ＴＨＦの混合物（１：１：８（
ｖ／ｖ／ｖ））およびＴＨＦ中の１−メチルイミダゾールの溶液（１６：８４（ｖ／ｖ）
）で処理することによって、非誘導体化アミノ基をキャッピングした。混合物を、室温で
１５分間にわたって穏やかに振とうした。次に、ＣＰＧをろ過して取り除き、アセトニト
リルで洗浄し、一晩減圧下で乾燥させた。充填密度を上記のように再度測定した。実施例
１〜６におけるスクシネートの充填収量は、６４〜７５マイクロモル／ｇの範囲であった
。
【０６７０】
２．Ｈ．Ｘ０５０、Ｘ０５９、Ｘ０６１、Ｘ０６２、Ｘ０６５、Ｘ０６８アルコールおよ
びコハク酸エステルの合成
Ｘ０２７と同様の方法で調製される。
【化５８】
2019135236.tif 000120
Ｘ０５０アルコール：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ３．
７３（ｓ，６Ｈ）４．１９（ｓ，２Ｈ）４．５１（ｄ，Ｊ＝５．５６Ｈｚ、２Ｈ）５．１
７（ｓ，２Ｈ）５．２１（ｔ，Ｊ＝５．８１Ｈｚ、１Ｈ）６．８９−６．９５（ｍ，４Ｈ
）７．０１（ｄｄ，Ｊ＝８．０８、２．０２Ｈｚ、１Ｈ）７．１９−７．３０（ｍ，４Ｈ
）７．３０−７．４０（ｍ，９Ｈ）７．４０−７．４９（ｍ，５Ｈ）７．５３（ｓ，１Ｈ
）７．５７（ｄ，Ｊ＝７．５８Ｈｚ、１Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｚ：Ｃ４２Ｈ３８Ｏ
５についての計算値６２２．３；実測値６６７．９［ＭＨ−＋ギ酸］。
Ｘ０５９アルコール：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ３．
７４（ｓ，６Ｈ）４．１０（ｓ，２Ｈ）４．５２（ｓ，２Ｈ）５．１５（ｓ，２Ｈ）５．
２２（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）６．９０−６．９６（ｍ，４Ｈ）７．０７−７．１３（ｍ，２
Ｈ）７．２２−７．３０（ｍ，２Ｈ）７．３０−７．３８（ｍ，８Ｈ）７．３９−７．４
８（ｍ，５Ｈ）７．６０（ｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ、４Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｚ：Ｃ
４２Ｈ３８Ｏ５についての計算値６２２．３；実測値６２１．１［ＭＨ−］。
Ｘ０６１アルコール：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ３．
７４（ｓ，６Ｈ）４．１７（ｓ，２Ｈ）４．６３（ｄ，Ｊ＝５．０５Ｈｚ、２Ｈ）５．１
７−５．２２（ｍ，３Ｈ）６．９３（ｄ，Ｊ＝８．５９Ｈｚ、４Ｈ）７．１１（ｄ，Ｊ＝
８．５９Ｈｚ、２Ｈ）７．２２−７．３７（ｍ，１０Ｈ）７．４０−７．５２（ｍ，７Ｈ
）７．５８（ｄ，Ｊ＝８．５９Ｈｚ、２Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｚ：Ｃ４２Ｈ３８Ｏ
５についての計算値６２２．３；実測値６６７．６［ＭＨ−＋ギ酸］。
Ｘ０６２アルコール：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ３．
７４（ｓ，６Ｈ）４．１６（ｓ，２Ｈ）４．５２（ｄ，Ｊ＝６．０６Ｈｚ、２Ｈ）５．１
４（ｓ，２Ｈ）５．１９−５．２３（ｍ，１Ｈ）６．９０−６．９５（ｍ，４Ｈ）７．０
７−７．１２（ｍ，２Ｈ）７．２１−７．２９（ｍ，２Ｈ）７．３０−７．３８（ｍ，９
Ｈ）７．３９−７．４８（ｍ，５Ｈ）７．４９−７．５３（ｍ，１Ｈ）７．５５−７．６
０（ｍ，２Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｚ：Ｃ４２Ｈ３８Ｏ５についての計算値６２２．
３；実測値６６７．７［ＭＨ−＋ギ酸］。
Ｘ０６５アルコール：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ３．
７５（ｓ，６Ｈ）４．１６（ｓ，２Ｈ）４．５２（ｄ，Ｊ＝６．０６Ｈｚ、２Ｈ）５．１
７（ｓ，２Ｈ）５．２１（ｔ，Ｊ＝５．８１Ｈｚ、１Ｈ）６．９３（ｄ，Ｊ＝８．５９Ｈ
ｚ、４Ｈ）７．１２（ｄ，Ｊ＝９．０９Ｈｚ、２Ｈ）７．２２−７．３９（ｍ，１０Ｈ）
７．４１−７．４７（ｍ，３Ｈ）７．７８（ｄｄ，Ｊ＝８．３４、２．２７Ｈｚ、１Ｈ）
７．８５−７．９０（ｍ，１Ｈ）８．０３（ｄ，Ｊ＝９．０９Ｈｚ、２Ｈ）８．５５（ｄ
，Ｊ＝１．５２Ｈｚ、１Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ：Ｃ４１Ｈ３７ＮＯ５についての
計算値６２３．３；実測値６２４．７［ＭＨ＋］。
Ｘ０６８アルコール：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ２．
８７（ｔ，Ｊ＝６．５７Ｈｚ、２Ｈ）３．１６（ｔ，Ｊ＝６．５７Ｈｚ、２Ｈ）３．７２
（ｓ，６Ｈ）４．５１（ｄ，Ｊ＝５．５６Ｈｚ、２Ｈ）５．１７（ｓ，２Ｈ）５．２１（
ｔ，Ｊ＝５．８１Ｈｚ、１Ｈ）６．８５（ｄ，Ｊ＝８．５９Ｈｚ、４Ｈ）６．９９（ｄｄ
，Ｊ＝８．０８、１．５２Ｈｚ、１Ｈ）７．１８（ｄ，Ｊ＝９．０９Ｈｚ、４Ｈ）７．２
０−７．３８（ｍ，１３Ｈ）７．４３（ｓ，１Ｈ）７．５９（ｄ，Ｊ＝８．５９Ｈｚ、２
Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ：Ｃ４３Ｈ４０Ｏ５についての計算値６３６．３；実測値
６５９．７［Ｍ＋Ｎａ］。
【０６７１】
２．Ｉ．Ｘ０６０およびＸ０６４アルコールおよびコハク酸エステルの合成
Ｘ０６７と同様の方法で調製される。
【化５９】
2019135236.tif 000121
Ｘ０６０アルコール：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １Ｈ
ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ３．７５（ｓ，６Ｈ）４．１２
（ｓ，２Ｈ）４．５７（ｄ，Ｊ＝５．５６Ｈｚ、２Ｈ）５．２０−５．２６（ｍ，１Ｈ）
６．９０−６．９６（ｍ，４Ｈ）７．２２−７．２８（ｍ，１Ｈ）７．２９−７．３８（
ｍ，７Ｈ）７．３９−７．４８（ｍ，５Ｈ）７．５３（ｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ、１Ｈ）７
．６０（ｓ，１Ｈ）７．６４（ｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ、２Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ
：Ｃ３５Ｈ３２Ｏ４についての計算値５１６．２；実測値３０３．４［ＤＭＴ＋］。
Ｘ０６４アルコール：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ３．
７５（ｓ，６Ｈ）４．１８（ｓ，２Ｈ）４．５６（ｄ，Ｊ＝５．５６Ｈｚ、２Ｈ）５．２
４（ｔ，Ｊ＝５．８１Ｈｚ、１Ｈ）６．９３（ｄ，Ｊ＝９．０９Ｈｚ、４Ｈ）７．２５（
ｔ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ、１Ｈ）７．３２（ｄ，Ｊ＝９．０９Ｈｚ、４Ｈ）７．３４−７．
３９（ｍ，２Ｈ）７．４４（ｔ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ、４Ｈ）７．８２（ｄｄ，Ｊ＝８．３
４、２．２７Ｈｚ、１Ｈ）７．９３（ｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ、１Ｈ）８．０４（ｄ，Ｊ＝
８．０８Ｈｚ、２Ｈ）８．５９（ｄ，Ｊ＝２．０２Ｈｚ、１Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／
ｚ：Ｃ３４Ｈ３１ＮＯ４についての計算値５１７．２；実測値５１８．８［ＭＨ＋］。
【０６７２】
２．Ｊ．Ｘ０６３コハク酸エステルの合成
【化６０】
2019135236.tif 000122
３−（ヒドロキシメチル）フェノール（１、６．２１ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）を、ピリ
ジン（１００ｍＬ）に溶解させ、０℃に冷却した。ＤＭＴ−Ｃｌ（１６．９ｇ、５０ｍｍ
ｏｌ）を加え、溶液を室温で２時間撹拌した。５００ｍＬのＥｔＯＡｃを加え、溶液を、
４００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、水、および塩水でそれぞれ１回洗浄した。有機部
分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。混合物を、アセトン／トルエ
ンに再溶解させ、濃縮し、このプロセスを４回繰り返した。次に、残渣を減圧下で一晩濃
縮したところ、２（２０．９ｇ、９８％）が発泡体状の固体として得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ３．７４（ｓ，６Ｈ）３．
９７（ｓ，２Ｈ）６．６６（ｄｄ，Ｊ＝８．０８、１．５２Ｈｚ、１Ｈ）６．７２（ｄ，
Ｊ＝７．５８Ｈｚ、１Ｈ）６．８３（ｄ，Ｊ＝１．５２Ｈｚ、１Ｈ）６．８９−６．９５
（ｍ，４Ｈ）７．１２（ｔ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ、１Ｈ）７．１７（ｄ，Ｊ＝７．５８Ｈｚ
、１Ｈ）７．２７−７．３２（ｍ，４Ｈ）７．３４（ｔ，Ｊ＝７．５８Ｈｚ、２Ｈ）７．
４０−７．４６（ｍ，２Ｈ）９．３７（ｓ，１Ｈ）．
【０６７３】
【化６１】
2019135236.tif 000123
アセトン（１４５ｍＬ）中の化合物２（１７．２ｇ、３６．３ｍｍｏｌ）に、メチル４
−ブロモ−３−（ブロモメチル）ベンゾエート（３、１１．７ｇ、３８．１ｍｍｏｌ）お
よびＫ２ＣＯ３（３０．１ｇ、２１８ｍｍｏｌ）を加えた。フラスコの中身を排出し／Ｎ
２でバックフィルし（２回）、Ｎ２の雰囲気下で、一晩還流状態で加熱した。室温に冷ま
した後、混合物を、ＣＨ２Ｃｌ２で洗浄しながらろ過し、濃縮した。次に、残渣を、ＣＨ
２Ｃｌ２に再溶解させ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、濃縮したところ、４（２４．
８ｇ、９９％）が発泡体状の固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳ
Ｏ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ３．７４（ｓ，６Ｈ）３．８４（ｓ，３Ｈ）４．０７（ｓ，２Ｈ
）５．２０（ｓ，２Ｈ）６．８８−６．９２（ｍ，４Ｈ）６．９４−６．９８（ｍ，２Ｈ
）６．９９（ｄ，Ｊ＝１．５２Ｈｚ、１Ｈ）７．２１−７．２６（ｍ，１Ｈ）７．２６−
７．３０（ｍ，５Ｈ）７．３０−７．３５（ｍ，２Ｈ）７．３８−７．４３（ｍ，２Ｈ）
７．８５（ｓ，２Ｈ）８．１１（ｓ，１Ｈ）
【０６７４】
【化６２】
2019135236.tif 000124
ジメトキシエタン（３５０ｍＬ）中の化合物４（２４．８ｇ、３５．８ｍｍｏｌ）に、
Ｂｕ４ＮＢｒ（１７．３ｇ、５３．７ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（１７．５ｇ、５３．７
ｍｍｏｌ）、およびＰｄ（ＯＡｃ）２（２．０１ｇ、８．９６ｍｍｏｌ）を加えた。フラ
スコを２回の真空／Ｎ２バックフィルで脱気し、Ｎ２の雰囲気下で、一晩加熱還流させた
。室温に冷ました後、混合物を、ＴＨＦで溶離しながらセライトに通してろ過し、濃縮し
た。残渣を、５００ｍＬのＥｔＯＡｃに溶解させ、４００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３水溶液
、２×４００ｍＬの水、および４００ｍＬの塩水で洗浄した。有機画分をＮａ２ＳＯ４で
乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨ２
Ｃｌ２／トリエチルアミン）によって精製したところ、５（１５．１ｇ、６８％）が発泡
体状の固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ
３．７４（ｓ，６Ｈ）３．８７（ｓ，３Ｈ）４．１１（ｓ，２Ｈ）５．２３（ｓ，２Ｈ
）６．８９−６．９６（ｍ，４Ｈ）７．０１（ｄ，Ｊ＝１．５２Ｈｚ、１Ｈ）７．０８（
ｄｄ，Ｊ＝８．０８、１．５２Ｈｚ、１Ｈ）７．２２−７．２７（ｍ，１Ｈ）７．２９−
７．３３（ｍ，４Ｈ）７．３３−７．３８（ｍ，２Ｈ）７．４１−７．４６（ｍ，２Ｈ）
７．８８−７．９３（ｍ，２Ｈ）７．９３−７．９９（ｍ，２Ｈ）
【０６７５】
【化６３】
2019135236.tif 000125
水素化アルミニウムリチウム（４３．４ｍＬの、ＴＨＦ中１．０Ｍの懸濁液、４３．４
ｍｍｏｌ）を、０℃でＴＨＦ（１５０ｍＬ）中の化合物５（１２．０ｇ、１９．３ｍｍｏ
ｌ）の溶液に加えた。０℃で２時間後、反応混合物を、０℃で１０分間撹拌しながら、２
０ｍＬのＥｔＯＡｃの滴下添加によってクエンチした。１．６５ｍＬのＨ２Ｏ、１．６５
ｍＬの２０％のＮａＯＨ水溶液、および４．９５ｍＬのＨ２Ｏを連続して加えた。次に、
混合物を室温で１時間撹拌し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、セライトに通してろ過し、減圧
下で濃縮した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘプタン／トリエ
チルアミン）によって精製したところ、６（８．４７ｇ、８１％）が発泡体状の固体とし
て得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ３．７５（ｓ
，６Ｈ）４．０７（ｓ，２Ｈ）４．５２（ｄ，Ｊ＝５．５６Ｈｚ、２Ｈ）５．１３（ｓ，
２Ｈ）５．２１−５．２５（ｍ，１Ｈ）６．８９−６．９５（ｍ，４Ｈ）６．９６（ｄ，
Ｊ＝１．５２Ｈｚ、１Ｈ）７．０３（ｄｄ，Ｊ＝８．０８、１．５２Ｈｚ、１Ｈ）７．２
２（ｓ，１Ｈ）７．２３−７．２８（ｍ，１Ｈ）７．２９−７．３３（ｍ，４Ｈ）７．３
３−７．３８（ｍ，３Ｈ）７．４１−７．４６（ｍ，２Ｈ）７．７６（ｄ，Ｊ＝７．５８
Ｈｚ、１Ｈ）７．８１（ｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ、１Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ：Ｃ３
６Ｈ３２Ｏ５についての計算値５４４．２；実測値５４５．２［ＭＨ＋］。
【０６７６】
【化６４】
2019135236.tif 000126
ジメチルアミノピリジン（０．１２４ｇ、１．０２ｍｍｏｌ）を、アルゴン下で、室温
でピリジン（５ｍＬ）中の化合物６（０．５５４ｇ、１．０２ｍｍｏｌ）の溶液に加えた
。無水コハク酸７（０．２０４ｇ、２．０３ｍｍｏｌ）を加え、溶液を室温で６時間撹拌
した。０．５ｍＬのＨ２Ｏを加え、溶液を３０分間撹拌した。１００ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２
を加え、溶液を、５０ｍＬの低温の１０％のクエン酸水溶液で１回およびそれぞれ５０ｍ
Ｌの水で２回洗浄した。水性画分を１×５０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で再抽出した。組み合わ
された有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮し、次に、トルエンで
２回、希釈／濃縮した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタ
ノール／トリエチルアミン）（４９：１／１％）によって精製したところ、８（０．７８
ｇ、１０３％）が発泡体状の固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣ
ｌ３）δ  ｐｐｍ  １．４５（ｔ，Ｊ＝７．２０Ｈｚ、２．５Ｈ）２．５２−２．６０（
ｍ，２Ｈ）２．６５−２．７１（ｍ，２Ｈ）３．６０（ｑ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ、１．７Ｈ
）３．７９（ｓ，６Ｈ）４．１６（ｓ，２Ｈ）５．１２（ｓ，２Ｈ）５．１３（ｓ，２Ｈ
）６．８２−６．８７（ｍ，４Ｈ）７．０３（ｄｄ，Ｊ＝８．０８、１．２６Ｈｚ、１Ｈ
）７．０８（ｓ，１Ｈ）７．１７（ｓ，１Ｈ）７．１９−７．２５（ｍ，１Ｈ）７．２８
−７．３３（ｍ，２Ｈ）７．３３−７．３７（ｍ，１Ｈ）７．３８−７．４４（ｍ，４Ｈ
）７．４９−７．５４（ｍ，２Ｈ）７．６６（ｔ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ、２Ｈ）
【０６７７】
２．Ｋ．Ｘ０６６コハク酸エステルの合成
【化６５】
2019135236.tif 000127
隔膜を備えた４０ｍＬのバイアルに、４−ブロモ−３−（ブロモメチル）フェノール（
１、０．３６０ｇ、１．２５ｍｍｏｌ）、メチル３−（ブロモメチル）ベンゾエート（２
、０．８５６ｇ、３．７４ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（０．５１６ｇ、３．７４ｍｍｏｌ）
、およびアセトン（６ｍＬ）を加えた。バイアルの中身を排出し／Ｎ２でバックフィルし
（２回）、５０℃で２０時間加熱した。室温に冷ました後、混合物を、ＣＨ２Ｃｌ２で洗
浄しながらろ過し、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エ
チル／ヘプタン）によって精製したところ、３（０．３９１ｇ、６２％）が白色の固体と
して得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ３．８８（
ｓ，３Ｈ）４．６７（ｓ，２Ｈ）５．２１（ｓ，２Ｈ）６．９８（ｄｄ，Ｊ＝８．５９、
３．０３Ｈｚ、１Ｈ）７．３５（ｄ，Ｊ＝３．０３Ｈｚ、１Ｈ）７．５２−７．５８（ｍ
，２Ｈ）７．７２（ｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ、１Ｈ）７．９１−７．９５（ｍ，１Ｈ）８．
０５（ｓ，１Ｈ）
【０６７８】
【化６６】
2019135236.tif 000128
化合物４の合成が、Ｘ０６３の合成において記載されている。隔膜を備えた４０ｍＬの
バイアルに、化合物３（０．３９０ｇ、０．７６３ｍｍｏｌ）、４（０．３９０ｇ、０．
９１５ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（０．３１６ｇ、２．２９ｍｍｏｌ）およびアセトン（４
ｍＬ）を加えた。バイアルを密閉し、中身を排出し／Ｎ２でバックフィルした（２回）。
次に、バイアルを６０℃で１７時間加熱した。室温に冷ました後、混合物を、ＣＨ２Ｃｌ
２で洗浄しながらろ過し、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（
酢酸エチル／ヘプタン／トリエチルアミン）によって精製したところ、５（０．４４８ｇ
、７７％）が発泡体状の固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−
ｄ６）δ  ｐｐｍ  ３．７４（ｓ，６Ｈ）３．８５（ｓ，３Ｈ）４．１０（ｓ，２Ｈ）５
．０８（ｓ，２Ｈ）５．２０（ｓ，２Ｈ）６．８７−６．９２（ｍ，４Ｈ）６．９２−７
．０２（ｍ，４Ｈ）７．１９−７．２６（ｍ，３Ｈ）７．２６−７．３５（ｍ，７Ｈ）７
．３９−７．４５（ｍ，２Ｈ）７．５０（ｔ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ、１Ｈ）７．５６（ｄ，
Ｊ＝８．５９Ｈｚ、１Ｈ）７．６８（ｄ，Ｊ＝７．５８Ｈｚ、１Ｈ）７．９０（ｄ，Ｊ＝
７．５８Ｈｚ、２Ｈ）８．０２（ｓ，１Ｈ）
【０６７９】
【化６７】
2019135236.tif 000129
隔膜を備えたバイアル中の化合物５（０．５４０ｇ、０．５６９ｍｍｏｌ）に、ジメト
キシエタン（５．７ｍＬ）、Ｂｕ４ＮＢｒ（０．２７５ｇ、０．８５３ｍｍｏｌ）、Ｃｓ
２ＣＯ３（０．２７８ｇ、０．８５３ｍｍｏｌ）、およびＰｄ（ＯＡｃ）２（０．０２６
ｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を加えた。バイアルを密閉し、２回の真空／Ｎ２バックフィルで
脱気し、９０℃で一晩加熱した。約３３％の転化率が、ＬＣＭＳによって１７時間後に観
察された。さらなる０．１００ｇのＰｄ（ＯＡｃ）２（０．４４ｍｍｏｌ）を加え、反応
を、さらに２４時間にわたって続けた。室温に冷ました後、混合物を、ＥｔＯＡｃで溶離
しながらセライトに通してろ過した。次に、溶液を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、水および
塩水でそれぞれ１回ずつ洗浄した。有機部分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、減圧下
で濃縮した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘプタン／トリエチ
ルアミン）によって精製したところ、６（０．１０５ｇ、２７％）が発泡体状の固体とし
て得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ３．７５（ｓ
，６Ｈ）３．８７（ｓ，３Ｈ）４．０８（ｓ，２Ｈ）５．０９（ｓ，２Ｈ）５．２４（ｓ
，２Ｈ）６．８８−  ６．９５（ｍ，５Ｈ）６．９５−７．００（ｍ，２Ｈ）７．０５（
ｄｄ，Ｊ＝８．３４、２．７８Ｈｚ、２Ｈ）７．２１−７．２６（ｍ，２Ｈ）７．２９−
７．３６（ｍ，６Ｈ）７．３９−７．４６（ｍ，２Ｈ）７．５５（ｔ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ
、１Ｈ）７．６９−７．７７（ｍ，３Ｈ）７．９２（ｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ、１Ｈ）８．
０５（ｓ，１Ｈ）
【０６８０】
【化６８】
2019135236.tif 000130
ＴＨＦ（２ｍＬ）中の化合物６（０．１３５ｇ、０．１９９ｍｍｏｌ）を、Ｎ２の雰囲
気下で０℃に冷却した。ＴＨＦ（０．４７７ｍＬ、０．４７７ｍｍｏｌ）中のＬＡＨの１
Ｍの懸濁液を、滴下して加え、溶液を０℃で３時間撹拌した。１ｍＬのＥｔＯＡｃを滴下
して加え、溶液を０℃で２０分間撹拌した。０．０１８ｍＬのＨ２Ｏ、０．０１８ｍＬの
２０％のＮａＯＨ水溶液、および０．０５４ｍＬのＨ２Ｏを連続して加え、混合物を室温
で１時間撹拌した。混合物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ＥｔＯＡｃで洗浄しながらセライ
トに通してろ過し、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エ
チル／ヘプタン／トリエチルアミン）によって精製したところ、７（０．１１０ｇ、８５
％）が発泡体状の固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）
δ  ｐｐｍ  ３．７５（ｓ，６Ｈ）４．０８（ｓ，２Ｈ）４．５２（ｄ，Ｊ＝５．５６Ｈ
ｚ、２Ｈ）５．０４（ｔ，Ｊ＝５．８１Ｈｚ、１Ｈ）５．０８（ｓ，２Ｈ）５．１４（ｓ
，２Ｈ）６．８９−６．９４（ｍ，５Ｈ）６．９５（ｄ，Ｊ＝２．５３Ｈｚ、１Ｈ）６．
９８（ｄｄ，Ｊ＝８．０８、１．５２Ｈｚ、１Ｈ）７．０３（ｄｄ，Ｊ＝８．５９、２．
５３Ｈｚ、１Ｈ）７．２４（ｔ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ、１Ｈ）７．２６−７．３７（ｍ，９
Ｈ）７．４０−７．４６（ｍ，３Ｈ）７．７２（ｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ、２Ｈ）．ＭＳ（
ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ：Ｃ４３Ｈ３８Ｏ６についての計算値６５０．３；実測値３０３．４［
ＤＭＴ＋］。
【０６８１】
【化６９】
2019135236.tif 000131
ジメチルアミノピリジン（０．０１９ｇ、０．１５７ｍｍｏｌ）を、アルゴン下で、室
温でピリジン（３ｍＬ）中の化合物７（０．１０２ｇ、０．１５７ｍｍｏｌ）の溶液に加
えた。無水コハク酸８（０．０３１ｇ、０．３１３ｍｍｏｌ）を加え、溶液を室温で１６
時間撹拌した。０．５ｍＬのＨ２Ｏを加え、溶液を３０分間撹拌した。５０ｍＬのＣＨ２
Ｃｌ２を加え、溶液を、２５ｍＬの低温の１０％のクエン酸水溶液で１回およびそれぞれ
２５ｍＬの水で２回洗浄した。水性画分を１×２５ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で再抽出した。有
機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮し、トルエンで２回希釈／濃縮
した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール／トリエチ
ルアミン）（４９：１／１％）によって精製したところ、９（０．１０ｇ、７６％）が油
として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  １．４６（ｔ
，Ｊ＝７．３３Ｈｚ、２．１Ｈ）２．５７（ｔ，Ｊ＝６．８２Ｈｚ、２Ｈ）２．６８（ｔ
，Ｊ＝６．８２Ｈｚ、２Ｈ）３．６１（ｑ，Ｊ＝７．１６Ｈｚ，１．４Ｈ）３．８０（ｓ
，６Ｈ）４．１５（ｓ，２Ｈ）５．０９（ｓ，２Ｈ）５．０９（ｓ，２Ｈ）５．１５（ｓ
，２Ｈ）６．７８（ｄ，Ｊ＝２．５３Ｈｚ、１Ｈ）６．８２−６．８８（ｍ，４Ｈ）６．
９５−７．０４（ｍ，２Ｈ）７．０６（ｓ，１Ｈ）７．１８−７．２５（ｍ，１Ｈ）７．
２８−７．３６（ｍ，３Ｈ）７．３６−７．４６（ｍ，７Ｈ）７．５０−７．５５（ｍ，
２Ｈ）７．６１（ｄｄ，Ｊ＝８．３４、２．２７Ｈｚ、２Ｈ）
【０６８２】
２．Ｌ．Ｘ０５１コハク酸エステルの合成
【化７０】
2019135236.tif 000132
【化７１】
2019135236.tif 000133
化合物１の合成が、Ｘ０６３の合成において記載されている。化合物１（６．７０ｇ、
１２．３ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１２３ｍＬ）に溶解させ、２回排出／Ｎ２パージし、０
℃に冷却した。鉱油中のＮａＨの６０％の分散体を加え（０．８８６ｇ、３６．９ｍｍｏ
ｌ）、混合物を０℃で２０分間撹拌した。次に、メチル３−（ブロモメチル）ベンゾエー
ト（２、３．３８ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２０時間撹拌した。次
に、反応混合物を、４００ｍＬのＥｔＯＡｃで希釈し、４００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３水
溶液で１回洗浄した。水層を、２００ｍＬのＥｔＯＡｃで逆抽出し、組み合わされた有機
層を、４００ｍＬの水および塩水でそれぞれ１回洗浄した。有機部分をＮａ２ＳＯ４で乾
燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチ
ル／ヘプタン／トリエチルアミン）によって精製したところ、３（６．５５ｇ、７７％）
が発泡体状の固体として得られた。生成物は、約１３％の対応するエチルエステルを含有
し、それを、当量の前駆体として次の工程に持ち越した。メチルエステル：１Ｈ  ＮＭＲ
（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．３２（ｔ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ、０．
３８Ｈ）３．７４（ｓ，６Ｈ）３．８６（ｓ，２．５２Ｈ）４．０８（ｓ，２Ｈ）４．３
２（ｑ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ、０．２５Ｈ）４．５８（ｓ，２Ｈ）４．６４（ｓ，２Ｈ）５
．１４（ｓ，２Ｈ）６．９３（ｄ，Ｊ＝８．５９Ｈｚ、４Ｈ）６．９７（ｄ，Ｊ＝１．５
２Ｈｚ、１Ｈ）７．０４（ｄｄ，Ｊ＝８．０８、１．５２Ｈｚ、１Ｈ）７．２５（ｔ，Ｊ
＝７．３３Ｈｚ、１Ｈ）７．２８（ｓ，１Ｈ）７．３１（ｄ，Ｊ＝９．０９Ｈｚ、４Ｈ）
７．３３−７．４１（ｍ，３Ｈ）７．４４（ｄ，Ｊ＝７．５８Ｈｚ、２Ｈ）７．５３（ｔ
，Ｊ＝７．８３Ｈｚ、１Ｈ）７．６６（ｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ、１Ｈ）７．８０（ｄ，Ｊ
＝８．０８Ｈｚ、１Ｈ）７．８３（ｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ、１Ｈ）７．９０（ｄ，Ｊ＝７
．５８Ｈｚ、１Ｈ）７．９７（ｓ，１Ｈ）
【０６８３】
【化７２】
2019135236.tif 000134
ＴＨＦ中の化合物３を０℃に冷却し、Ｎ２の雰囲気下に置いた。ＴＨＦ（２２．５ｍＬ
、２２．５ｍｍｏｌ）中のＬＡＨの１Ｍの懸濁液を滴下して加え、溶液を０℃で２時間撹
拌した。１ｍＬのＥｔＯＡｃを滴下して加え、溶液を０℃で２０分間撹拌した。次に、０
．８６ｍＬのＨ２Ｏ、０．８６ｍＬの２０％のＮａＯＨ水溶液、および２．５８ｍＬのＨ
２Ｏを連続して加えた。混合物を室温で１時間撹拌し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ＥｔＯ
Ａｃで洗浄しながらセライトに通してろ過し、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルク
ロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘプタン／トリエチルアミン）によって精製したところ
、４（５．９８ｇ、９６％）が発泡体状の固体として得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ３．７４（ｓ，６Ｈ）４．
０８（ｓ，２Ｈ）４．５０（ｄ，Ｊ＝６．０６Ｈｚ、２Ｈ）４．５５（ｓ，２Ｈ）４．５
５（ｓ，２Ｈ）５．１４（ｓ，２Ｈ）５．１８（ｔ，Ｊ＝５．８１Ｈｚ、１Ｈ）６．９３
（ｄ，Ｊ＝８．５９Ｈｚ、４Ｈ）６．９７（ｄ，Ｊ＝１．０１Ｈｚ、１Ｈ）７．０１−７
．０６（ｍ，１Ｈ）７．２１−７．２８（ｍ，４Ｈ）７．２８−７．３３（ｍ，５Ｈ）７
．３３−７．４０（ｍ，４Ｈ）７．４１−７．４６（ｍ，２Ｈ）７．８０（ｄ，Ｊ＝８．
０８Ｈｚ、１Ｈ）７．８３（ｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ、１Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ：
Ｃ４４Ｈ４０Ｏ６についての計算値６６４．３；実測値６６５．３［ＭＨ＋］。
【０６８４】
【化７３】
2019135236.tif 000135
ジメチルアミノピリジン（０．３７ｇ、３．０１ｍｍｏｌ）を、アルゴン下で、室温で
ピリジン（１５ｍＬ）中の化合物４（２．００ｇ、３．０１ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。
無水コハク酸７（０．６０ｇ、６．０２ｍｍｏｌ）を加え、溶液を室温で１７時間撹拌し
た。１ｍＬのＨ２Ｏを加え、溶液を１時間撹拌した。１００ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２を加え、
溶液を、５０ｍＬの低温の１０％のクエン酸水溶液で１回およびそれぞれ５０ｍＬの水で
２回洗浄した。水性画分を１×５０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で再抽出した。組み合わされた有
機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮し、トルエンで２回希釈／濃縮
した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール／トリエチ
ルアミン）（３９：１／１％）によって精製したところ、６（２．４８ｇ、９５％）が油
として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  １．１７（ｔ
，Ｊ＝７．３３Ｈｚ、１４．２Ｈ）２．５６（ｔ，Ｊ＝６．６９Ｈｚ、２Ｈ）２．６８（
ｔ，Ｊ＝７．４５Ｈｚ、２Ｈ）２．８４（ｑ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ、９．５Ｈ）３．８０（
ｓ，６Ｈ）４．１６（ｓ，２Ｈ）４．５７（ｓ，２Ｈ）４．５８（ｓ，２Ｈ）５．１４（
ｓ，２Ｈ）５．１４（ｓ，２Ｈ）６．８２−６．８８（ｍ，４Ｈ）７．０１−７．０５（
ｍ，１Ｈ）７．０９（ｓ，１Ｈ）７．１８（ｓ，１Ｈ）７．１９−７．２５（ｍ，１Ｈ）
７．２８−７．３４（ｍ，５Ｈ）７．３４−７．３８（ｍ，２Ｈ）７．３９−７．４４（
ｍ，４Ｈ）７．４９−７．５５（ｍ，２Ｈ）７．６８（ｄｄ，Ｊ＝７．９６、４．４２Ｈ
ｚ、２Ｈ）
【０６８５】
２．Ｍ．Ｘ０９７コハク酸エステルの合成
【化７４】
2019135236.tif 000136
（３−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−５−ブロモ
フェニル）メタノール（２）：
ピリジン（６０ｍＬ）中の５−ブロモ−１，３−ジヒドロキシメチルベンゼン１（３．
００ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）、４，４’−ジメトキシトリチルクロリド（４．６８ｇ、１
３．８ｍｍｏｌ）の溶液を、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を、ＥｔＯＡｃと水と
に分液した。ＥｔＯＡｃ層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させた。粗生成物を、
５〜３０％のＥｔＯＡｃ／ヘプタン中の１％のＥｔ３Ｎで溶離しながら、フラッシュクロ
マトグラフィーによって精製したところ、２．５７ｇ（３６％）の２が得られた。ＭＳ（
ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ：Ｃ２９Ｈ２７ＢｒＯ４についての計算値５１８．１；実測値３０３．
５［ＤＭＴ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ  ７．５４−７．４８（
ｍ，２Ｈ）、７．４７−７．３７（ｍ，６Ｈ）、７．３６−７．２９（ｍ，２Ｈ）、７．
２７−７．２１（ｍ，２Ｈ）、６．８７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ、４Ｈ）、４．６７（ｄ，
Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）、４．２２（ｓ，２Ｈ）、３．８２（ｓ，６Ｈ）、１．６７（ｔ
，Ｊ＝６．０Ｈｚ、１Ｈ）．
【０６８６】
【化７５】
2019135236.tif 000137
（３’−（ベンジルオキシ）−５−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メト
キシ）メチル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メタノール（４）：
窒素雰囲気下で１，４−ジオキサン（６ｍＬ）中の、臭化物２（０．５０ｇ、０．９６
３ｍｍｏｌ）と、３−ベンジルオキシベンゼンボロン酸３（０．２６３ｇ、１．１５５ｍ
ｍｏｌ）と、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．１１１ｇ、０．０９６ｍｍｏｌ）との混合物に、
２ＭのＮａ２ＣＯ３水溶液（１．４４ｍＬ）を加えた。混合物を一晩還流状態で加熱した
。次に、反応物を室温に冷まし、ＥｔＯＡｃと飽和ＮａＨＣＯ３水溶液とに分液した。有
機層を蒸発させ、粗生成物を、５〜３０％のＥｔＯＡｃ／ヘプタン中の１％のＥｔ３Ｎで
溶離しながら、フラッシュクロマトグラフィーによって精製したところ、０．４５４ｇ（
７０％）の４が得られた。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ：Ｃ４２Ｈ３８Ｏ５についての計算値
６２２．３；実測値３０３．５［ＤＭＴ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）
δ  ７．５２−７．４３（ｍ，５Ｈ）、７．４１−７．２９（ｍ，１２Ｈ）、７．２７−
７．１６（ｍ，３Ｈ）、７．０１（ｍ，１Ｈ）、６．９５−６．８６（ｍ，４Ｈ）、５．
１８（ｓ，２Ｈ）、５．０７（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．５７（ｄ，Ｊ＝５．８
Ｈｚ、２Ｈ）、４．１８（ｓ，２Ｈ）、３．７４（ｓ，６Ｈ）．
【０６８７】
【化７６】
2019135236.tif 000138
アルゴン下で５ｍＬの乾燥ピリジン中の４５２ｍｇ（０．７２６ｍｍｏｌ）の４および
８９ｍｇ（０．７２６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の溶液
に、１４５ｍｇ（１．４５ｍｍｏｌ）の無水コハク酸（５）を加えた。反応混合物を室温
で１８時間撹拌し、次に、０．５ｍＬの水を加えた。撹拌を３０分間にわたって続けた。
反応混合物を１００ｍＬのジクロロメタンで希釈し、５０ｍＬの氷冷した１０％のクエン
酸水溶液および水（２×５０ｍＬ）で洗浄した。水層を５０ｍＬのジクロロメタンで再抽
出した。組み合わされた有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させた。残りの油を、
２回トルエンと同時蒸発させ、粗生成物を、シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメ
タン／メタノール／トリエチルアミン９４：５：１）によって精製したところ、５１０ｍ
ｇ（０．６１９ｍｍｏｌ、８５％）の６が無色の発泡体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（
４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：１．２２（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ、９Ｈ）、２．５７−２．
５９（ｍ，２Ｈ）、２．６７−２．６９（ｍ，２Ｈ）、２．９７（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ、
６Ｈ）、３．７９（ｓ，６Ｈ）、４．２４（ｓ，２Ｈ）、５．１４（ｓ，２Ｈ）、５．１
８（ｓ，２Ｈ）、５．７２（ｓ  ｂｒ．，１Ｈ）、６．８４−６．８８（ｍ，４Ｈ）、６
．９８（ｄｄｄ，Ｊ＝０．７、２．２、８．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１９−７．５４（ｍ，
２０Ｈ）．
【０６８８】
２．Ｎ．Ｘ０９８コハク酸エステルの合成
【化７７】
2019135236.tif 000139
（３−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−５−ブロモ
フェニル）メタノール（２）：
上記と同じ
ピリジン（６０ｍＬ）中の５−ブロモ−１，３−ジヒドロキシメチルベンゼン１（３．
００ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）、４，４’−ジメトキシトリチルクロリド（４．６８ｇ、１
３．８ｍｍｏｌ）の溶液を、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を、ＥｔＯＡｃと水と
に分液した。ＥｔＯＡｃ層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させた。粗生成物を、
５〜３０％のＥｔＯＡｃ／ヘプタン中の１％のＥｔ３Ｎで溶離しながら、フラッシュクロ
マトグラフィーによって精製したところ、２．５７ｇ（３６％）の２が得られた。ＭＳ（
ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ：Ｃ２９Ｈ２７ＢｒＯ４についての計算値５１８．１；実測値３０３．
５［ＤＭＴ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ  ７．５４−７．４８（
ｍ，２Ｈ）、７．４７−７．３７（ｍ，６Ｈ）、７．３６−７．２９（ｍ，２Ｈ）、７．
２７−７．２１（ｍ，２Ｈ）、６．８７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ、４Ｈ）、４．６７（ｄ，
Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）、４．２２（ｓ，２Ｈ）、３．８２（ｓ，６Ｈ）、１．６７（ｔ
，Ｊ＝６．０Ｈｚ、１Ｈ）．
【０６８９】
【化７８】
2019135236.tif 000140
（５−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−［１，１’
−ビフェニル］−３−イル）メタノール（４）：
窒素雰囲気下で１，４−ジオキサン（６ｍＬ）中の、臭化物２（０．５００ｇ、０．９
６０ｍｍｏｌ）と、ベンゼンボロン酸３（０．１４１ｇ、１．１６ｍｍｏｌ）と、Ｐｄ（
ＰＰｈ３）４（０．１１１ｇ、０．０９６ｍｍｏｌ）との混合物に、２ＭのＮａ２ＣＯ３
水溶液（１．４４ｍＬ）を加えた。混合物を一晩還流状態で加熱した。次に、反応物を室
温に冷まし、ＥｔＯＡｃと飽和ＮａＨＣＯ３水溶液とに分液した。有機層を蒸発させ、粗
生成物を、５〜３０％のＥｔＯＡｃ／ヘプタン中の１％のＥｔ３Ｎで溶離しながら、フラ
ッシュクロマトグラフィーによって精製したところ、０．３８０ｇ（７６％）の４が得ら
れた。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ：Ｃ３５Ｈ３２Ｏ４についての計算値５１６．２；実測値
３０３．５［ＤＭＴ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ  ７．６１（ｄｄ
，Ｊ＝８．３、１．３Ｈｚ、２Ｈ）、７．５１−７．４２（ｍ，５Ｈ）、７．３９−７．
２８（ｍ，９Ｈ）、７．２７−７．２０（ｍ，１Ｈ）、６．９５−６．８６（ｍ，４Ｈ）
、５．０８（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．５７（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、４
．１９（ｓ，２Ｈ）、３．７４（ｓ，６Ｈ）．
【０６９０】
【化７９】
2019135236.tif 000141
アルゴン下で５ｍＬの乾燥ピリジン中の３８０ｍｇ（０．７３６ｍｍｏｌ）の４および
９０ｍｇ（０．７３６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の溶液
に、１４７ｍｇ（１．４７ｍｍｏｌ）の無水コハク酸（５）を加えた。反応混合物を室温
で１８時間撹拌し、次に、０．５ｍＬの水を加えた。撹拌を３０分間にわたって続けた。
反応混合物を１００ｍＬのジクロロメタンで希釈し、５０ｍＬの氷冷した１０％のクエン
酸水溶液および水（２×５０ｍＬ）で洗浄した。水層を５０ｍＬのジクロロメタンで再抽
出した。組み合わされた有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させた。残りの油を、
２回トルエンと同時蒸発させ、粗生成物を、シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメ
タン／メタノール／トリエチルアミン９４：５：１）によって精製したところ、４６０ｍ
ｇ（０．６４１ｍｍｏｌ、８７％）の６がオフホワイトの発泡体として得られた。１Ｈ  
ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：１．２２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ、９Ｈ）、２．５
９（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ、２Ｈ）、２．７１（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ、２Ｈ）、２．９４（
ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ、６Ｈ）、３．８１（ｓ，６Ｈ）、４．２６（ｓ，２Ｈ）、５．２０
（ｓ，２Ｈ）、６．０４（ｓ  ｂｒ．，１Ｈ）、６．８５−６．８９（ｍ，４Ｈ）、７．
２２−７．５５（ｍ，１５Ｈ）、７．６２（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ、２Ｈ）．
【０６９１】
２．Ｏ．Ｘ１０９とコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの合成
ｓｓ−ｓｉＲＮＡ＝コンジュゲーションに使用されるアンチセンス一本鎖配列＝Ｕ００
２ｐＵｐＡｐＡｐＵ００４ｐＵ００４ｐＡｐＵ００４ｐＣｐＵ００４ｐＡｐＵ００４ｐＵ
００４ｐＣｐＣｐＧｐＵ００５ｐＡ００５ｐＣ０２７
ここで、Ｃ０２７がリビトールである。
【化８０】
2019135236.tif 000142
ＤＣＥ（４ｍＬ）中の、１（１００ｍｇ、０．３６１ｍｍｏｌ）と、Ｎ−ヒドロキシス
クシンイミド（８３ｍｇ、０．７２１ｍｍｏｌ）と、ＤＣＣ（１４９ｍｇ、０．７２１ｍ
ｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌した。反応混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶
液（４ｍＬ）でクエンチした。有機層を水層から分離し、水（１ｍＬ）および塩水（１ｍ
Ｌ）で洗浄した。有機溶媒を減圧下で除去した。粗生成物を、メタノールからの再結晶化
によって精製したところ、２１％の収率で２（２７．７ｍｇ、０．０７４ｍｍｏｌ）が得
られた。ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ、ＭＨ＋）：３７５．４；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、
クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  ２．８５（ｄ，Ｊ＝５．５２Ｈｚ、４Ｈ）２．８９（ｓ
，３Ｈ）３．９４（ｓ，２Ｈ）７．３１−７．４８（ｍ，４Ｈ）７．４９−７．６４（ｍ
，３Ｈ）７．７１（ｔ，Ｊ＝６．７８Ｈｚ、１Ｈ）８．１２（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．
【０６９２】
【化８１】
2019135236.tif 000143
ＤＭＳＯ（７３．２μＬ）中の２（２．２３ｍｇ、５．９６μｍｏｌ）に、新たに調製
したｓｓ−ｓｉＲＮＡ−（ＣＨ２）３−ＮＨ２溶液（３．６６ｍｇ、７３．２μＬのＰＢ
Ｓ  ８．５緩衝液中０．５９６μｍｏｌ）を加えた。反応混合物をボルテックスし、室温
で３０分間静置した。粗生成物を、アセトニトリル／水中５〜６０％の１００ｍＭの酢酸
トリエチルアンモニウムによって精製したところ、２７．５％の収率で３（１．０９ｍｇ
、０．１６４μｍｏｌ）が得られた。ＴＯＦ  ＭＳ（ＥＳ−）：６４０３。
【０６９３】
２．Ｐ．Ｘ１１０とコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの合成
【化８２】
2019135236.tif 000144
メタノール（１５ｍＬ）中の、１（５００ｍｇ、１．４０ｍｍｏｌ）と、Ｐｄ（炭素上
３０％、２４．９ｍｇ、０．０７０ｍｍｏｌ）と、酢酸（８０μｌ、１．４０ｍｍｏｌ）
との混合物を、１２時間にわたってＨ２（１気圧）下で、室温で撹拌した。反応混合物を
ろ過して、Ｐｄ／Ｃを除去した。溶液に、１ＭのＮａＯＨ水溶液（３ｍＬ）を加え、得ら
れた混合物を６０℃で１２時間加熱した。混合物を室温に冷まし、１ＭのＨＣｌ水溶液で
中和したところ、沈殿物が得られた。沈殿物を真空ろ過によって回収し、オーブン中で乾
燥させたところ、４５％の収率で２（１６６ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）が得られた。ＥＳ
Ｉ  ＭＳ（ｍ／ｚ、ＭＨ＋）：２６４．４。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ
６）δ  ｐｐｍ  ３．５８（ｓ，２Ｈ）７．１８−７．３９（ｍ，３Ｈ）７．４４−７．
６５（ｍ，４Ｈ）７．７５（ｄｄｄ，Ｊ＝８．２８、６．７８、１．５１Ｈｚ、１Ｈ）８
．０１−８．２０（ｍ，１Ｈ）８．９１（ｓ，１Ｈ）１２．４７（ｓ，１Ｈ）．
【０６９４】
【化８３】
2019135236.tif 000145
ＤＣＭ（４ｍＬ）中の、２（８７．６ｍｇ、０．３３３ｍｍｏｌ）と、Ｎ−ヒドロキシ
スクシンイミド（７７．０ｍｇ、０．６６５ｍｍｏｌ）と、ＤＣＣ（１３７ｍｇ、０．６
６５ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌した。反応混合物を、飽和ＮａＨＣＯ
３水溶液（４ｍＬ）でクエンチした。有機層を水層から分離し、水（１ｍＬ）および塩水
（１ｍＬ）で洗浄した。有機溶媒を減圧下で除去した。粗生成物を、メタノールからの再
結晶化によって精製したところ、４９％の収率で３（２７．７ｍｇ、０．０７４ｍｍｏｌ
）が得られた。ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ、ＭＨ＋）：３６１．２。１Ｈ  ＮＭＲ（４００Ｍ
Ｈｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ２．７９（ｂｒ．ｓ．，４Ｈ）４．０５（ｓ，２Ｈ
）７．２９−７．３７（ｍ，２Ｈ）７．４０（ｓ，１Ｈ）７．５０−７．６４（ｍ，４Ｈ
）７．８０（ｓ，１Ｈ）８．１０（ｓ，１Ｈ）９．０２（ｓ，１Ｈ）．
【０６９５】
【化８４】
2019135236.tif 000146
ＤＭＳＯ（２４０μＬ）中の３（１．７６ｍｇ、４．８８μｍｏｌ）に、新たにｓｓ−
ｓｉＲＮＡ−（ＣＨ２）３−ＮＨ２溶液（２ｍｇ、４０μＬのＰＢＳ  ８．５緩衝液中の
０．３２５μｍｏｌ）を加えた。反応混合物をボルテックスし、室温で３０分間静置した
。粗生成物を、アセトニトリル／水中５〜６０％の１００ｍＭの酢酸トリエチルアンモニ
ウムによって精製したところ、２５％の収率で４（０．５２６ｍｇ、０．０８２μｍｏｌ
）が得られた。ＴＯＦ  ＭＳ（ＥＳ−）：６３８８。
【０６９６】
２．Ｑ．Ｘ１１１とコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの合成
１は、市販されているが、合成は、文献において公知ではない。
【化８５】
2019135236.tif 000147
ＤＣＭ（４ｍＬ）中の、１（８１ｍｇ、０．３０８ｍｍｏｌ）と、Ｎ−ヒドロキシスク
シンイミド（７０．８ｍｇ、０．６１５ｍｍｏｌ）と、ＤＣＣ（１２７ｍｇ、０．６１５
ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌した。反応混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３水
溶液（４ｍＬ）でクエンチした。有機層を水層から分離し、水（１ｍＬ）および塩水（１
ｍＬ）で洗浄した。有機溶媒を減圧下で除去した。粗生成物を、メタノールからの再結晶
化によって精製したところ、３９％の収率で２（４３．７ｍｇ、０．１２１ｍｍｏｌ）が
得られた。ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ、ＭＨ＋）：３６１．４。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ
、メタノール−ｄ４）δ  ｐｐｍ  ２．８２（ｓ，４Ｈ）４．０７（ｓ，２Ｈ）７．３６
−７．４２（ｍ，２Ｈ）７．４６−７．５１（ｍ，１Ｈ）７．５５−７．６４（ｍ，３Ｈ
）７．７０−７．７７（ｍ，２Ｈ）８．２０（ｄｔ，Ｊ＝４．５２、２．２６Ｈｚ、１Ｈ
）９．２９（ｓ，１Ｈ）．
【０６９７】
【化８６】
2019135236.tif 000148
ＤＭＳＯ（２４０μＬ）中の２（２．３５ｍｇ、６．５１μｍｏｌ）に、新たにｓｓ−
ｓｉＲＮＡ−（ＣＨ２）３−ＮＨ２溶液（２ｍｇ、８０μＬのＰＢＳ  ８．５緩衝液中の
０．３２５μｍｏｌ）を加えた。反応混合物をボルテックスし、室温で３０分間静置した
。粗生成物を、アセトニトリル／水中５〜６０％の１００ｍＭの酢酸トリエチルアンモニ
ウムによって精製したところ、３３％の収率で３（０．６８ｍｇ、０．０８２μｍｏｌ）
が得られた。ＴＯＦ  ＭＳ（ＥＳ−）：６３９０。
【０６９８】
２．Ｒ．Ｘ１１２とコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの合成
【化８７】
2019135236.tif 000149
ＤＭＦ（４ｍＬ）中の、１（１００ｍｇ、０．３２５ｍｍｏｌ）と、ｔｅｒｔ−ブチル
クロロジメチルシラン（１０８ｍｇ、０．７１６ｍｍｏｌ）と、イミダゾール（９１ｍｇ
、１．３３ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で４８時間撹拌した。反応混合物を、水（４ｍ
Ｌ）でクエンチし、酢酸エチル（３×５ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機層を、水
および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。次に、有機溶媒を減圧下で除去し
た。粗生成物を、０〜５０％の酢酸エチル／ヘプタンを用いたシリカクロマトグラフィー
によって精製したところ、４０％の収率で２（５５ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）が得られた
。ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ、ＭＨ＋）：４２２．２。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロ
ホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  ０．０４（ｍ，６Ｈ）０．８８−０．９３（ｍ，９Ｈ）３．５
９（ｔ，Ｊ＝６．７８Ｈｚ、２Ｈ）３．７１（ｓ，２Ｈ）４．０９（ｔ，Ｊ＝６．７８Ｈ
ｚ、２Ｈ）７．２８−７．４５（ｍ，４Ｈ）７．５１−７．６１（ｍ，３Ｈ）７．６３−
７．６８（ｍ，１Ｈ）９．００（ｓ，１Ｈ）．
【０６９９】
【化８８】
2019135236.tif 000150
ＤＭＳＯ（２００μＬ）中の、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．７３ｍｇ、０．０
２４ｍｍｏｌ）と、２（５．０ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）と、ＤＩＣ（２ｍｇ、０．３
２５μｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌した。１０μＬの反応混合物を、１９
０μＬのＤＭＳＯで希釈した。得られた溶液に、新たにｓｓ−ｓｉＲＮＡ−（ＣＨ２）３
−ＮＨ２溶液（２．１９ｍｇ、８０μｌのＰＢＳ  ８．５緩衝液中の０．３５６μｍｏｌ
）を加えた。反応混合物をボルテックスし、室温で２時間静置した。粗生成物を、アセト
ニトリル／水中１０〜４０％の１００ｍＭの酢酸トリエチルアンモニウムを用いたＨＰＬ
Ｃによって精製したところ、３５％の収率で３（０．７９ｍｇ、０．１２３μｍｏｌ）が
得られた。ＴＯＦ  ＭＳ（ＥＳ−）：６４３５。
【０７００】
２．Ｓ．Ｘ１１３とコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの合成
１が、市販されており、合成が、文献において公知である。Ｚｈａｎｇ，ＹａｎらのＰ
ＣＴ国際出願の国際公開第２０１００８３３８４号パンフレット（２２  Ｊｕｌ  ２０１
０）から。
【化８９】
2019135236.tif 000151
ＤＭＳＯ（２００μＬ）中の、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（６．１８ｍｇ、０．０
５４ｍｍｏｌ）と、１（５．０ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）と、ＤＩＣ（６．７７ｍｇ、
０．０５４ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌した。１０μＬの反応混合物を
、１９０μＬのＤＭＳＯで希釈した。得られた溶液に、新たにｓｓ−ｓｉＲＮＡ−（ＣＨ
２）３−ＮＨ２溶液（２．４６ｍｇ、８０μＬのＰＢＳ  ８．５緩衝液中の０．４０１μ
ｍｏｌ）を加えた。反応混合物をボルテックスし、室温で２時間静置した。粗生成物を、
アセトニトリル／水中１０〜４０％の１００ｍＭの酢酸トリエチルアンモニウムを用いた
ＨＰＬＣによって精製したところ、１０％の収率で２（０．２４ｍｇ、０．０３８μｍｏ
ｌ）が得られた。ＴＯＦ  ＭＳ（ＥＳ−）：６３１５。
【０７０１】
２．Ｓ．１．ＰＡＺリガンドスクシネートと制御細孔ガラス担体の高密度充填の基本手順
【化９０】
2019135236.tif 000152
エルレンマイヤーフラスコ中に、１．００ｍｍｏｌのＰＡＺリガンドコハク酸塩１を、
アルゴン下で５０ｍＬの乾燥アセトニトリルに溶解させた。この溶液に、３５３ｍｇ（１
．１０ｍｍｏｌ）のＯ−（１Ｈ−ベンゾ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−Ｎ，
Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）を加え
、溶液を１０分間振とうした。次に、１０ｇの長鎖アルキルアミン制御細孔ガラス（ＬＣ
ＡＡ／ＣＮＡ−６００−ＣＰＧ、ＰｒｉｍｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ、２）を加え、反応混合
物を５分間にわたって穏やかに撹拌した。最後に、０．６８５ｍＬ（５１７ｍｇ、４．０
０ｍｍｏｌ）のヒューニッヒ塩基を加え、フラスコを、オービタルシェーカー上で２４時
間にわたって穏やかに振とうした。ＣＰＧのアリコート（アセトニトリルで洗浄され、減
圧下で乾燥され、２５ｍＬの、ジクロロメタン（ｖ／ｖ）中３％のジクロロ酢酸に加えら
れた３〜５ｍｇのＣＰＧ、５０４ｎｍにおける吸光度が測定される）を脱トリチル化する
ことによって、充填密度を評価した。充填密度が所望の範囲内（６０〜９０マイクロモル
／ｇ）である場合、ＣＰＧをろ過して取り除き、アセトニトリルで十分に洗浄した。ＣＰ
Ｇを、それぞれ×ｍＬの、無水酢酸／２，６−ルチジン／ＴＨＦの混合物（１：１：８（
ｖ／ｖ／ｖ））およびＴＨＦ中の１−メチルイミダゾールの溶液（１６：８４（ｖ／ｖ）
）で処理することによって、非誘導体化アミノ基をキャッピングした。混合物を、室温で
１５分間にわたって穏やかに振とうした。次に、ＣＰＧをろ過して取り除き、アセトニト
リルで洗浄し、一晩減圧下で乾燥させた。充填密度を上記のように再度測定した。実施例
１〜６におけるスクシネートの充填収量は、６４〜７５マイクロモル／ｇの範囲であった
。
【０７０２】
２．Ｔ．Ｘ１０１１とコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの合成
【化９１】
2019135236.tif 000153
ＤＭＳＯ（２００μＬ）中の、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．４８９ｍｇ、０．
０２２ｍｍｏｌ）と、１（３．０ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）と、ＤＩＣ（２．７３ｍｇ
、０．０２２ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌した。１０μＬの反応混合物
を、１９０μＬのＤＭＳＯで希釈した。得られた溶液に、新たにｓｓ−ｓｉＲＮＡ−（Ｃ
Ｈ２）４−ＮＨ２溶液（２．００ｍｇ、８０μＬのＰＢＳ  ８．５緩衝液中の０．３２５
μｍｏｌ）を加えた。反応混合物をボルテックスし、室温で２時間静置した。粗生成物を
、アセトニトリル／水中１０〜４０％の１００ｍＭの酢酸トリエチルアンモニウムを用い
たＨＰＬＣによって精製したところ、２が得られた。ＴＯＦ  ＭＳ（ＥＳ−）：６４１８
。
【０７０３】
２．Ｕ．Ｘ１０１２およびＸ１０１８とコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの合成
【化９２】
2019135236.tif 000154
メタノール（１５ｍＬ）中の、１（５００ｍｇ、１．４０ｍｍｏｌ）と、Ｐｄ（炭素上
３０％、２４．９ｍｇ、０．０７０ｍｍｏｌ）と、酢酸（８０μｌ、１．４０ｍｍｏｌ）
との混合物を、１２時間にわたってＨ２（１気圧）下で、室温で撹拌した。反応混合物を
ろ過して、Ｐｄ／Ｃを除去した。溶液に、１ＭのＮａＯＨ水溶液（３ｍＬ）を加え、得ら
れた混合物を６０℃で１２時間加熱した。混合物を室温に冷まし、１ＭのＨＣｌ水溶液で
中和したところ、沈殿物が得られた。沈殿物を真空ろ過によって回収し、オーブン中で乾
燥させたところ、４５％の収率で２（１６６ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）が得られた。ＥＳ
Ｉ  ＭＳ（ｍ／ｚ、ＭＨ＋）：２６４．４。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ
６）δ  ｐｐｍ  ３．５８（ｓ，２Ｈ）７．１８−７．３９（ｍ，３Ｈ）７．４４−７．
６５（ｍ，４Ｈ）７．７５（ｄｄｄ，Ｊ＝８．２８、６．７８、１．５１Ｈｚ、１Ｈ）８
．０１−８．２０（ｍ，１Ｈ）８．９１（ｓ，１Ｈ）１２．４７（ｓ，１Ｈ）．
【０７０４】
【化９３】
2019135236.tif 000155
ＤＭＳＯ（２００μＬ）中の、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．４８９ｍｇ、０．
０２２ｍｍｏｌ）と、２（２．８５ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）と、ＤＩＣ（２．７３ｍ
ｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌した。１０μＬの反応混合
物を、１９０μＬのＤＭＳＯで希釈した。得られた溶液に、新たにｓｓ−ｓｉＲＮＡ−（
ＣＨ２）４−ＮＨ２溶液（２．００ｍｇ、８０μＬのＰＢＳ  ８．５緩衝液中の０．３２
５μｍｏｌ）を加えた。反応混合物をボルテックスし、室温で２時間静置した。粗生成物
を、アセトニトリル／水中１０〜４０％の１００ｍＭの酢酸トリエチルアンモニウムを用
いたＨＰＬＣによって精製したところ、３が得られた。ＥＳＩ  ＭＳ（ＥＳ＋）：６４０
５。
【０７０５】
２．Ｕ．Ｘ１０１８とコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの合成
【化９４】
2019135236.tif 000156
ＤＭＳＯ（２００μＬ）中の、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．４８３ｍｇ、０．
０２２ｍｍｏｌ）と、２（２．８４ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）と、ＤＩＣ（２．７２ｍ
ｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌した。１０μＬの反応混合
物を、１９０μＬのＤＭＳＯで希釈した。得られた溶液に、新たにｓｓ−ｓｉＲＮＡ−（
ＣＨ２）５−ＮＨ２溶液（２．００ｍｇ、８０μＬのＰＢＳ  ８．５緩衝液中の０．３２
５μｍｏｌ）を加えた。反応混合物をボルテックスし、室温で２時間静置した。粗生成物
を、アセトニトリル／水中１０〜４０％の１００ｍＭの酢酸トリエチルアンモニウムを用
いたＨＰＬＣによって精製したところ、４が得られた。
【０７０６】
２．Ｖ．Ｘ１０１３とコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの合成
【化９５】
2019135236.tif 000157
ＤＭＳＯ（２００μＬ）中の、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．４８９ｍｇ、０．
０２２ｍｍｏｌ）と、２（２．８５ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）と、ＤＩＣ（２．７３ｍ
ｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌した。１０μＬの反応混合
物を、１９０μＬのＤＭＳＯで希釈した。得られた溶液に、新たにｓｓ−ｓｉＲＮＡ−（
ＣＨ２）４−ＮＨ２溶液（２．００ｍｇ、８０μＬのＰＢＳ  ８．５緩衝液中の０．３２
５μｍｏｌ）を加えた。反応混合物をボルテックスし、室温で２時間静置した。粗生成物
を、アセトニトリル／水中１０〜４０％の１００ｍＭの酢酸トリエチルアンモニウムを用
いたＨＰＬＣによって精製したところ、２が得られた。ＴＯＦ  ＭＳ（ＥＳ−）：６４０
４。
【０７０７】
２．Ｗ．Ｘ１０１９とコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの合成
【化９６】
2019135236.tif 000158
ＤＭＦ（４ｍＬ）中の、１（１００ｍｇ、０．３２５ｍｍｏｌ）と、ｔｅｒｔ−ブチル
クロロジメチルシラン（１０８ｍｇ、０．７１６ｍｍｏｌ）と、イミダゾール（９１ｍｇ
、１．３３ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で４８時間撹拌した。反応混合物を、水（４ｍ
Ｌ）でクエンチし、酢酸エチル（３×５ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機層を、水
および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。次に、有機溶媒を減圧下で除去し
た。粗生成物を、０〜５０％の酢酸エチル／ヘプタンを用いたシリカクロマトグラフィー
によって精製したところ、４０％の収率で２（５５ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）が得られた
。ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ、ＭＨ＋）：４２２．２。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロ
ホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  ０．０４（ｍ，６Ｈ）０．８８−０．９３（ｍ，９Ｈ）３．５
９（ｔ，Ｊ＝６．７８Ｈｚ、２Ｈ）３．７１（ｓ，２Ｈ）４．０９（ｔ，Ｊ＝６．７８Ｈ
ｚ、２Ｈ）７．２８−７．４５（ｍ，４Ｈ）７．５１−７．６１（ｍ，３Ｈ）７．６３−
７．６８（ｍ，１Ｈ）９．００（ｓ，１Ｈ）．
【０７０８】
【化９７】
2019135236.tif 000159
ＤＭＳＯ（２００μＬ）中の、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．４８ｍｇ、０．０
２２ｍｍｏｌ）と、２（４．５５ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）と、ＤＩＣ（２．７２ｍｇ
、０．０２２ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌した。１０μＬの反応混合物
を、１９０μＬのＤＭＳＯで希釈した。得られた溶液に、新たにｓｓ−ｓｉＲＮＡ−（Ｃ
Ｈ２）３−ＮＨ２溶液（２ｍｇ、８０μｌのＰＢＳ  ８．５緩衝液中の０．３２４μｍｏ
ｌ）を加えた。反応混合物をボルテックスし、室温で２時間静置した。粗生成物を、アセ
トニトリル／水中１０〜４０％の１００ｍＭの酢酸トリエチルアンモニウムを用いたＨＰ
ＬＣによって精製したところ、３が得られた。ＴＯＦ  ＭＳ（ＥＳ−）：６４６２。
【０７０９】
２．Ｘ．Ｘ１０１５とコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの合成
【化９８】
2019135236.tif 000160
ＤＭＳＯ（２００μＬ）中の、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．４９ｍｇ、０．０
２２ｍｍｏｌ）と、１（２．０２ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）と、ＤＩＣ（２．７３ｍｇ
、０．０２２ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌した。１０μＬの反応混合物
を、１９０μＬのＤＭＳＯで希釈した。得られた溶液に、新たにｓｓ−ｓｉＲＮＡ−（Ｃ
Ｈ２）４−ＮＨ２溶液（２ｍｇ、８０μＬのＰＢＳ  ８．５緩衝液中の０．３２５μｍｏ
ｌ）を加えた。反応混合物をボルテックスし、室温で２時間静置した。粗生成物を、アセ
トニトリル／水中１０〜４０％の１００ｍＭの酢酸トリエチルアンモニウムを用いたＨＰ
ＬＣによって精製したところ、２が得られた。ＴＯＦ  ＭＳ（ＥＳ−）：６３２７。
【０７１０】
２．Ｙ．Ｘ１０２０とコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの合成
【化９９】
2019135236.tif 000161
ＤＭＳＯ（２００μＬ）中の、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．４８ｍｇ、０．０
２２ｍｍｏｌ）と、１（２．０２ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）と、ＤＩＣ（２．７２ｍｇ
、０．０２２ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌した。１０μＬの反応混合物
を、１９０μＬのＤＭＳＯで希釈した。得られた溶液に、新たにｓｓ−ｓｉＲＮＡ−（Ｃ
Ｈ２）５−ＮＨ２溶液（２ｍｇ、８０μＬのＰＢＳ  ８．５緩衝液中の０．３２４μｍｏ
ｌ）を加えた。反応混合物をボルテックスし、室温で２時間静置した。粗生成物を、アセ
トニトリル／水中１０〜４０％の１００ｍＭの酢酸トリエチルアンモニウムを用いたＨＰ
ＬＣによって精製したところ、２が得られた。ＴＯＦ  ＭＳ（ＥＳ−）：６３４１。
【０７１１】
２．Ｚ．Ｘ１００９とコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの合成
【化１００】
2019135236.tif 000162
Ｎ２下でＡｌＣｌ３（１．１９ｇ、８．９３ｍｍｏｌ、４０ｍｌのトルエン溶液）に、
４−メトキシアニリン（１ｇ、８．１２ｍｍｏｌ、１０ｍｌのトルエン溶液）を滴下して
加えた。ＢＣｌ３（８．１２ｍｌ、８．１２ｍｍｏｌ、ＣＨ２Ｃｌ２中１Ｍの溶液）およ
びベンゾニトリル（２．５１ｇ、２４．３６ｍｍｏｌ）を、上記の混合物に続いて加えた
。得られた混合物を室温で１時間撹拌し、次に、１１０℃で６時間加熱した。反応混合物
を室温に冷まし、それにＨＣｌ水溶液（１Ｍ、１３ｍｌ）を加えた。次に、溶液を８０℃
で１時間加熱した。溶液を室温に冷まし、有機層および水層を分離した。水層を酢酸エチ
ル（３×５０ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機層を、水および塩水で洗浄し、硫酸
ナトリウム上で乾燥させた。次に、有機溶媒を減圧下で除去した。粗生成物を、０〜４０
％の酢酸エチル／ヘプタンを用いたシリカクロマトグラフィーによって精製したところ、
１５％の収率で１（２７３ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）が得られた。ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ、
ＭＨ＋）：２２７．３。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  
３．６６（ｓ，３Ｈ）６．８０（ｄ，Ｊ＝８．８４Ｈｚ、１Ｈ）６．９３−７．０５（ｍ
，２Ｈ）７．４０−７．４９（ｍ，２Ｈ）７．４９−７．５８（ｍ，１Ｈ）７．６３−７
．７２（ｍ，２Ｈ）．
【０７１２】
【化１０１】
2019135236.tif 000163
ＤＣＭ（１０ｍｌ）中の、１（２６９ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）と、エチル４−クロロ
−４−オキソブタノエート（２１４ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）との混合物を、６０℃で１時
間加熱した。反応混合物を冷却し、１ＭのＮａＯＨ水溶液（５ｍｌ）でクエンチした。有
機層および水層を分離した。水層をジクロロメタン（３×５ｍｌ）で抽出した。組み合わ
された有機層を、水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。次に、有機溶
媒を減圧下で除去した。粗生成物を、０〜６０％の酢酸エチル／ヘプタンを用いたシリカ
クロマトグラフィーによって精製したところ、７３％の収率で２（３０５ｍｇ、０．８６
ｍｍｏｌ）が得られた。ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ、ＭＨ＋）：３５５．５。１Ｈ  ＮＭＲ（
４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  １．２６（ｔ，Ｊ＝７．２８Ｈｚ、３Ｈ
）２．７４（ｓ，４Ｈ）３．７７（ｓ，３Ｈ）４．１６（ｑ，Ｊ＝７．０３Ｈｚ、２Ｈ）
７．０６（ｄ，Ｊ＝３．０１Ｈｚ、１Ｈ）７．１４（ｄｄ，Ｊ＝９．０３、３．０１Ｈｚ
、１Ｈ）７．４８−７．５５（ｍ，２Ｈ）７．６０−７．６６（ｍ，１Ｈ）７．７３−７
．７９（ｍ，２Ｈ）８．５０（ｄ，Ｊ＝９．０３Ｈｚ、１Ｈ）１０．４５（ｂｒ．ｓ．，
１Ｈ）．
【０７１３】
【化１０２】
2019135236.tif 000164
エタノール（１０ｍｌ）中の、２（３０５ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）と、水素化ナトリ
ウム（３４３ｍｇ、８．５８ｍｍｏｌ）との混合物を、８０℃で２時間加熱した。反応混
合物を室温に冷まし、水（５ｍｌ）でクエンチし、次に、１ＭのＨＣｌ水溶液（２ｍｌ）
で中和した。得られた溶液を酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有
機層を、水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。次に、有機溶媒を減圧
下で除去したところ、９４％の収率で３（２５０ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）が得られた。
ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ、ＭＨ＋）：３０９．３。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノー
ル−ｄ４）δ  ｐｐｍ  ３．３８（ｓ，２Ｈ）３．６３（ｓ，３Ｈ）６．５１（ｄ，Ｊ＝
２．５１Ｈｚ、１Ｈ）７．２０（ｄｄ，Ｊ＝９．０３、３．０１Ｈｚ、１Ｈ）７．２８−
７．４７（ｍ，３Ｈ）７．５２−７．６３（ｍ，３Ｈ）．
【０７１４】
【化１０３】
2019135236.tif 000165
ＰＯＣｌ３（１０ｍｌ）中の３（２５０ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）の溶液を、室温で２
時間撹拌した。ＰＯＣｌ３を減圧下で除去し、得られた残渣を、エタノール（２０ｍｌ）
でクエンチした。溶液を室温で１時間撹拌し、次に、エタノールを減圧下で除去した。残
渣に、ジクロロメタン（３０ｍｌ）および１ＭのＮａＯＨ水溶液（２０ｍｌ）を加えた。
有機層および水層を分離した。水層をジクロロメタン（２×２０ｍｌ）で抽出した。組み
合わされた有機層を、水、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。有機溶媒を減
圧下で除去したところ、９９％の収率で４（２７０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）が得られた。
ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ、ＭＨ＋）：３３８．２。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホ
ルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  １．２３−１．２７（ｍ，３Ｈ）３．４８（ｓ，２Ｈ）３．６６
（ｓ，３Ｈ）４．０４−４．２２（ｍ，２Ｈ）６．５５（ｄ，Ｊ＝２．５１Ｈｚ、１Ｈ）
７．０９−７．１５（ｍ，１Ｈ）７．２４（ｄ，Ｊ＝９．０３Ｈｚ、１Ｈ）７．２９−７
．３４（ｍ，２Ｈ）７．４４−７．６４（ｍ，３Ｈ）１０．４９（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．
【０７１５】
【化１０４】
2019135236.tif 000166
ＰＯＣｌ３（１０ｍｌ）中の４（２７０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）の溶液を、１１０℃で
１２時間加熱した。ＰＯＣｌ３を減圧下で除去した。残渣に、ジクロロメタン（２０ｍｌ
）および１ＭのＮａＯＨ水溶液（２０ｍｌ）を加えた。有機層および水層を分離した。水
層をジクロロメタン（２×２０ｍｌ）で抽出した。組み合わされた有機層を、水、塩水で
洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。有機溶媒を減圧下で除去したところ、９２％の
収率で５（２６５ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）が得られた。ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ、ＭＨ＋
）：３５６．１。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  １．２
２−１．２７（ｍ，３Ｈ）３．７０（ｓ，５Ｈ）４．１７（ｑ，Ｊ＝７．０３Ｈｚ、２Ｈ
）６．６２（ｄ，Ｊ＝３．０１Ｈｚ、１Ｈ）７．２０−７．３４（ｍ，２Ｈ）７．３８（
ｄｄ，Ｊ＝９．０３、２．５１Ｈｚ、１Ｈ）７．４６−７．６３（ｍ，３Ｈ）８．０１（
ｄ，Ｊ＝９．０３Ｈｚ、１Ｈ）．
【０７１６】
【化１０５】
2019135236.tif 000167
エタノール（２０ｍｌ）中の、５（２６５ｍｇ、０．７４５ｍｍｏｌ）と、トリエチル
アミン（１．２８ｇ、１２．６６ｍｍｏｌ）と、Ｐｄ／Ｃ（１０％、７９ｍｇ、０．７４
５ｍｍｏｌ）との混合物を、１２時間にわたって室温で、Ｈ２（１気圧）下で撹拌した。
反応混合物をろ過して、Ｐｄ／Ｃを除去した。有機溶媒を減圧下で除去したところ、７６
％の収率で６（１８２ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）が得られた。ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ、Ｍ
Ｈ＋）：３２２．１。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  １
．１２（ｔ，Ｊ＝７．１５Ｈｚ、３Ｈ）３．５１（ｓ，２Ｈ）３．６２（ｓ，３Ｈ）４．
０１（ｑ，Ｊ＝７．１９Ｈｚ、２Ｈ）６．６１（ｄ，Ｊ＝２．７６Ｈｚ、１Ｈ）７．１８
−７．３１（ｍ，３Ｈ）７．３９−７．５０（ｍ，３Ｈ）７．９７（ｄ，Ｊ＝９．２９Ｈ
ｚ、１Ｈ）８．６８（ｓ，１Ｈ）．
【０７１７】
【化１０６】
2019135236.tif 000168
ジオキサン（１ｍｌ）中の、６（５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）と、１ＭのＬｉＯＨ水
溶液（０．１７ｍｌ、０．１７ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で４８時間撹拌した。反応
混合物からの沈殿物をろ過し、乾燥させたところ、６９％の収率で７（３２ｍｇ、０．１
０７ｍｍｏｌ）がリチウム塩として得られた。ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ、ＭＨ＋）：２９４
．２。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ  ｐｐｍ  ３．４８（ｓ，２
Ｈ）３．６３−３．７３（ｍ，３Ｈ）６．７５（ｄ，Ｊ＝２．５１Ｈｚ、１Ｈ）７．２８
−７．４３（ｍ，３Ｈ）７．４８−７．６４（ｍ，３Ｈ）７．９４（ｄ，Ｊ＝９．０３Ｈ
ｚ、１Ｈ）８．７３（ｓ，１Ｈ）．
【０７１８】
【化１０７】
2019135236.tif 000169
ＤＭＳＯ（２００μＬ）中の、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．４９ｍｇ、０．０
２２ｍｍｏｌ）と、７（３．１８ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）と、ＤＩＣ（２．７４ｍｇ
、０．０２２ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌した。１０μＬの反応混合物
を、１９０μＬのＤＭＳＯで希釈した。得られた溶液に、新たにｓｓ−ｓｉＲＮＡ−（Ｃ
Ｈ２）３−ＮＨ２溶液（２ｍｇ、８０μＬのＰＢＳ  ８．５緩衝液中の０．３２５μｍｏ
ｌ）を加えた。反応混合物をボルテックスし、室温で２時間静置した。粗生成物を、アセ
トニトリル／水中１０〜４０％の１００ｍＭの酢酸トリエチルアンモニウムを用いたＨＰ
ＬＣによって精製したところ、８が得られた。ＴＯＦ  ＭＳ（ＥＳ−）：６４２２。
【０７１９】
２．ＡＡ．Ｘ１０１６とコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの合成
【化１０８】
2019135236.tif 000170
ＤＭＳＯ（２００μＬ）中の、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．４９ｍｇ、０．０
２２ｍｍｏｌ）と、７（３．１８ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）と、ＤＩＣ（２．７４ｍｇ
、０．０２２ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌した。１０μＬの反応混合物
を、１９０μＬのＤＭＳＯで希釈した。得られた溶液に、新たにｓｓ−ｓｉＲＮＡ−（Ｃ
Ｈ２）４−ＮＨ２溶液（２ｍｇ、８０μＬのＰＢＳ  ８．５緩衝液中の０．３２５μｍｏ
ｌ））を加えた。反応混合物をボルテックスし、室温で２時間静置した。粗生成物を、ア
セトニトリル／水中１０〜４０％の１００ｍＭの酢酸トリエチルアンモニウムを用いたＨ
ＰＬＣによって精製したところ、９が得られた。ＴＯＦ  ＭＳ（ＥＳ−）：６４３４。
【０７２０】
２．ＢＢ．Ｘ１０２１とコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの合成
【化１０９】
2019135236.tif 000171
ＤＭＳＯ（２００μＬ）中の、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．４８ｍｇ、０．０
２２ｍｍｏｌ）と、７（３．１６ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）と、ＤＩＣ（２．７２ｍｇ
、０．０２２ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌した。１０μＬの反応混合物
を、１９０μＬのＤＭＳＯで希釈した。得られた溶液に、新たにｓｓ−ｓｉＲＮＡ−（Ｃ
Ｈ２）５−ＮＨ２溶液（２ｍｇ、８０μＬのＰＢＳ  ８．５緩衝液中の０．３２５μｍｏ
ｌ）を加えた。反応混合物をボルテックスし、室温で２時間静置した。粗生成物を、アセ
トニトリル／水中１０〜４０％の１００ｍＭの酢酸トリエチルアンモニウムを用いたＨＰ
ＬＣによって精製したところ、１０が得られた。ＴＯＦ  ＭＳ（ＥＳ−）：６４４８。
【０７２１】
２．ＣＣ．Ｘ１０１０とコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの合成
【化１１０】
2019135236.tif 000172
【化１１１】
2019135236.tif 000173
Ｎ２下でＢＣｌ３（１０．７４ｍｌ、１０．７４ｍｍｏｌ、ＣＨ２Ｃｌ２中１Ｍの溶液
）に、アニリン（１ｇ、１０．７４ｍｍｏｌ、１０ｍｌのトルエン溶液）を滴下して加え
た。３−メトキシベンゾニトリル（４．２９ｇ、３２．２ｍｍｏｌ）およびＡｌＣｌ３（
１．５７５ｇ、１１．８１ｍｍｏｌ、４０ｍｌのトルエン溶液）を、上記の混合物に続い
て加えた。得られた混合物を室温で１時間撹拌し、次に、１１０℃で６時間加熱した。反
応混合物を室温に冷まし、それにＨＣｌ水溶液（１Ｍ、１３ｍｌ）を加えた。次に、溶液
を８０℃で１時間加熱した。溶液を室温に冷まし、有機層および水層を分離した。水層を
酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機層を、水および塩水で洗浄
し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。次に、有機溶媒を減圧下で除去した。粗生成物を、
０〜４０％の酢酸エチル／ヘプタンを用いたシリカクロマトグラフィーによって精製した
ところ、３６％の収率で１（８７５ｍｇ、３．８５ｍｍｏｌ）が得られた。ＥＳＩ  ＭＳ
（ｍ／ｚ、ＭＨ＋）：２２７．９。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ
ｐｐｍ  ３．７４（ｓ，３Ｈ）６．００（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ）６．４４−６．５６（ｍ
，１Ｈ）６．６３（ｄｄ，Ｊ＝８．５３、１．００Ｈｚ、１Ｈ）６．９３−７．００（ｍ
，１Ｈ）７．０４−７．１１（ｍ，２Ｈ）７．１４−７．３１（ｍ，２Ｈ）７．３７（ｄ
ｄ，Ｊ＝８．０３、１．５１Ｈｚ、１Ｈ）．
【０７２２】
【化１１２】
2019135236.tif 000174
ＤＣＭ（２０ｍｌ）中の、１（５７０ｍｇ、２．５１ｍｍｏｌ）と、エチル４−クロロ
−４−オキソブタノエート（４５４ｍｇ、２．７６ｍｍｏｌ）との混合物を、６０℃で１
時間加熱した。反応混合物を冷却し、１ＭのＮａＯＨ水溶液（５ｍｌ）でクエンチした。
有機層および水層を分離した。水層をジクロロメタン（３×１５ｍｌ）で抽出した。組み
合わされた有機層を、水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。次に、有
機溶媒を減圧下で除去したところ、９２％の収率で２（８２４ｍｇ、２．３２ｍｍｏｌ）
が得られた。ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ、ＭＨ＋）：３５５．４。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨ
ｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  １．２５−１．４８（ｍ，３Ｈ）２．７３−３．０
１（ｍ，４Ｈ）３．８８（ｓ，３Ｈ）４．１８（ｑ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ、２Ｈ）７．０５
−７．２０（ｍ，２Ｈ）７．２２−７．３０（ｍ，２Ｈ）７．３７−７．４５（ｍ，１Ｈ
）７．５３−７．６４（ｍ，２Ｈ）８．６４（ｄ，Ｊ＝８．５９Ｈｚ、１Ｈ）１０．９０
（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．
【０７２３】
【化１１３】
2019135236.tif 000175
エタノール（２０ｍｌ）中の、２（８２４ｍｇ、２．３２ｍｍｏｌ）と、水素化ナトリ
ウム（９２７ｍｇ、２３．１９ｍｍｏｌ）との混合物を、８０℃で２時間加熱した。反応
混合物を室温に冷まし、水（５ｍｌ）でクエンチし、次に、１ＭのＨＣｌ水溶液（２ｍｌ
）で中和した。得られた溶液を酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出した。組み合わされた
有機層を、水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。次に、有機溶媒を減
圧下で除去したところ、８１％の収率で３（５８３ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）が得られた
。ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ、ＭＨ＋）：３１０．１。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロ
ホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  ３．４９−３．６４（ｍ，２Ｈ）３．８３−３．８９（ｍ，３
Ｈ）６．８３−６．９６（ｍ，２Ｈ）７．００−７．２８（ｍ，４Ｈ）７．３７−７．５
６（ｍ，４Ｈ）１２．０２−１２．３２（ｍ，２Ｈ）．
【０７２４】
【化１１４】
2019135236.tif 000176
ＰＯＣｌ３（１０ｍｌ）中の３（５８３ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ）の溶液を、室温で２
時間撹拌した。ＰＯＣｌ３を減圧下で除去し、得られた残渣を、エタノール（２０ｍｌ）
でクエンチした。溶液を室温で１時間撹拌し、次に、エタノールを減圧下で除去した。残
渣に、ジクロロメタン（３０ｍｌ）および１ＭのＮａＯＨ水溶液（２０ｍｌ）を加えた。
有機層および水層を分離した。水層をジクロロメタン（２×２０ｍｌ）で抽出した。組み
合わされた有機層を、水、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。有機溶媒を減
圧下で除去したところ、１２０％の収率で４（７６０ｍｇ、２．２５ｍｍｏｌ）が得られ
た。ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ、ＭＨ＋）：３３８．１。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロ
ロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  １．２６（ｔ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ、３Ｈ）３．４４−３．６
４（ｍ，２Ｈ）３．８５（ｓ，３Ｈ）４．１７（ｑ，Ｊ＝７．１６Ｈｚ、２Ｈ）６．８５
−６．９３（ｍ，２Ｈ）７．０３（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４６、２．６５、１．０１Ｈｚ、１
Ｈ）７．１１（ｄｄｄ，Ｊ＝８．２１、６．９５、１．０１Ｈｚ、１Ｈ）７．１７（ｄｄ
，Ｊ＝８．２１、１．３９Ｈｚ、１Ｈ）７．３２−７．３９（ｍ，１Ｈ）７．４０−７．
５２（ｍ，２Ｈ）１１．４３（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）
【０７２５】
【化１１５】
2019135236.tif 000177
ＰＯＣｌ３（１０ｍｌ）中の４（７６０ｍｇ、２．２５ｍｍｏｌ）の溶液を、１１０℃
で１２時間加熱した。ＰＯＣｌ３を減圧下で除去した。残渣に、ジクロロメタン（２０ｍ
ｌ）および１ＭのＮａＯＨ水溶液（２０ｍｌ）を加えた。有機層および水層を分離した。
水層をジクロロメタン（２×２０ｍｌ）で抽出した。組み合わされた有機層を、水、塩水
で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。有機溶媒を減圧下で除去したところ、９７％
の収率で５（６５０ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）が得られた。ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ、ＭＨ
＋）：３５５．４。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  １．
２５（ｔ，Ｊ＝７．２８Ｈｚ、３Ｈ）３．７５（ｄ，Ｊ＝１．００Ｈｚ、２Ｈ）３．８５
（ｓ，３Ｈ）４．１８（ｑ，Ｊ＝７．０３Ｈｚ、２Ｈ）６．７８−６．９２（ｍ，２Ｈ）
６．９７−７．１３（ｍ，１Ｈ）７．３９−７．６０（ｍ，３Ｈ）７．７６（ｄ，Ｊ＝２
．０１Ｈｚ、１Ｈ）８．１５（ｄ，Ｊ＝８．５３Ｈｚ、１Ｈ）．
【０７２６】
【化１１６】
2019135236.tif 000178
エタノール（２０ｍｌ）中の、５（６５０ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）と、トリエチルア
ミン（３．１４ｇ、３１．１ｍｍｏｌ）と、Ｐｄ／Ｃ（１０％、１９４ｍｇ、１．８２７
ｍｍｏｌ）との混合物を、１２時間にわたって室温で、Ｈ２（１気圧）下で撹拌した。反
応混合物をろ過して、Ｐｄ／Ｃを除去した。有機溶媒を減圧下で除去したところ、７８％
の収率で６（４６０ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ）が得られた。ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ、ＭＨ
＋）：３２１．５。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  １．
２０−１．２６（ｍ，３Ｈ）１．４４（ｔ，Ｊ＝７．５３Ｈｚ、９Ｈ）３．１２（ｑｄ，
Ｊ＝７．２８、４．７７Ｈｚ、６Ｈ）３．６５（ｓ，２Ｈ）３．７９−３．９３（ｍ，３
Ｈ）４．１２（ｑ，Ｊ＝７．１９Ｈｚ、２Ｈ）６．８２−６．９２（ｍ，２Ｈ）７．０６
（ｄｄｄ，Ｊ＝８．５３、２．５１、１．００Ｈｚ、１Ｈ）７．３９−７．５８（ｍ，３
Ｈ）７．７２（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４１、６．６５、１．５１Ｈｚ、１Ｈ）８．１９（ｄ，
Ｊ＝８．５３Ｈｚ、１Ｈ）８．９３（ｓ，１Ｈ）１２．２０（ｂｒ．ｓ．，３Ｈ）．
【０７２７】
【化１１７】
2019135236.tif 000179
ＤＣＭ（１５ｍｌ）中の６（４００ｍｇ、１．２４５ｍｍｏｌ）の溶液に、−７８℃で
ＢＢｒ３（ＤＣＭ中１Ｍ、３．７３ｍｌ、３．７３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２
時間で室温に温めた。混合物を−７８℃に冷却し、エタノールでクエンチした。有機溶媒
を減圧下で除去した。得られた残渣に、酢酸エチル（１５ｍｌ）および水（１５ｍｌ）を
加えた。有機層および水層を分離した。水層を酢酸エチル（３×１５ｍｌ）で抽出した。
組み合わされた有機層を、水、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。有機溶媒
を減圧下で除去した。粗材料を、ジクロロメタンからの再結晶化によって精製したところ
、７４％の収率で７（２８２ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）が得られた。ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／
ｚ、ＭＨ＋）：３０８．２。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ
１．１１（ｔ，Ｊ＝７．０３Ｈｚ、３Ｈ）３．６８（ｓ，２Ｈ）３．９１−４．１１（
ｍ，２Ｈ）６．５０−６．７０（ｍ，２Ｈ）６．８１−６．９７（ｍ，１Ｈ）７．３０−
７．４８（ｍ，２Ｈ）７．５１−７．６３（ｍ，１Ｈ）７．７８（ｄｄｄ，Ｊ＝８．５３
、７．０３、１．５１Ｈｚ、１Ｈ）８．０８（ｄ，Ｊ＝８．０３Ｈｚ、１Ｈ）８．９３（
ｓ，１Ｈ）９．７５（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．
【０７２８】
【化１１８】
2019135236.tif 000180
ＤＭＦ（５００μｌ）中の、７（２０ｍｇ、０．０６５ｍｍｏｌ）と、臭化ベンジル（
１６．６９ｍｇ、０．０９８ｍｍｏｌ）と、炭酸セシウム（４２．４ｍｇ、０．１３ｍｍ
ｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌した。反応混合物をろ過して、不溶性物質を除
去した。粗生成物を、５〜９５％のアセトニトリル／水中５％のＮＨ４ＯＨを用いたＨＰ
ＬＣによって精製したところ、２６．７％の収率で８（６．９ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ
）が得られた。ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ、ＭＨ＋）：３９８．３。１Ｈ  ＮＭＲ（４００Ｍ
Ｈｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  １．２２（ｔ，Ｊ＝７．０３Ｈｚ、３Ｈ）３．６
４（ｓ，２Ｈ）４．１２（ｑ，Ｊ＝７．０３Ｈｚ、２Ｈ）５．１１（ｓ，２Ｈ）６．７６
−７．０２（ｍ，２Ｈ）７．１３（ｄｄｄ，Ｊ＝８．５３、２．５１、１．００Ｈｚ、１
Ｈ）７．３１−７．５６（ｍ，８Ｈ）７．７１（ｄｄｄ，Ｊ＝８．２８、６．７８、２．
０１Ｈｚ、１Ｈ）８．１７（ｄ，Ｊ＝８．５３Ｈｚ、１Ｈ）８．９２（ｓ，１Ｈ）．
【０７２９】
【化１１９】
2019135236.tif 000181
ジオキサン（０．５ｍｌ）中の、８（６．９ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）と、１ＭのＬ
ｉＯＨ水溶液（０．０１９ｍｌ、０．０１９ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹
拌した。有機溶媒を減圧下で除去したところ、９２％の収率で９（６ｍｇ、０．０１６ｍ
ｍｏｌ）がリチウム塩として得られた。ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ、ＭＨ＋）：３７０．２。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ  ｐｐｍ  ３．４２−３．６０（ｍ
，２Ｈ）５．０７−５．１９（ｍ，２Ｈ）６．９４（ｄｔ，Ｊ＝７．５３、１．２５Ｈｚ
、１Ｈ）７．０６（ｄｄ，Ｊ＝２．５１、１．５１Ｈｚ、１Ｈ）７．１４（ｄｄｄ，Ｊ＝
８．５３、２．５１、１．００Ｈｚ、１Ｈ）７．２５−７．４２（ｍ，３Ｈ）７．４２−
７．５３（ｍ，２Ｈ）７．７０（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４１、４．６４、３．５１Ｈｚ、２Ｈ
）８．０４（ｄ，Ｊ＝８．０３Ｈｚ、１Ｈ）８．５６（ｓ，２Ｈ）８．８８（ｓ，１Ｈ）
．
【０７３０】
【化１２０】
2019135236.tif 000182
ＤＭＳＯ（２００μＬ）中の、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．４９ｍｇ、０．０
２２ｍｍｏｌ）と、９（４．０８ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）と、ＤＩＣ（２．７４ｍｇ
、０．０２２ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌した。１０μＬの反応混合物
を、１９０μＬのＤＭＳＯで希釈した。得られた溶液に、新たにｓｓ−ｓｉＲＮＡ−（Ｃ
Ｈ２）３−ＮＨ２溶液（２ｍｇ、８０μＬのＰＢＳ  ８．５緩衝液中の０．３２５μｍｏ
ｌ）を加えた。反応混合物をボルテックスし、室温で２時間静置した。粗生成物を、アセ
トニトリル／水中１０〜４０％の１００ｍＭの酢酸トリエチルアンモニウムを用いたＨＰ
ＬＣによって精製したところ、１０が得られた。ＴＯＦ  ＭＳ（ＥＳ−）：６４９５。
【０７３１】
２．ＤＤ．Ｘ１０１７とコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの合成
【化１２１】
2019135236.tif 000183
ＤＭＳＯ（２００μＬ）中の、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．４９ｍｇ、０．０
２２ｍｍｏｌ）と、９（４．０７ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）と、ＤＩＣ（２．７３ｍｇ
、０．０２２ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌した。１０μＬの反応混合物
を、１９０μＬのＤＭＳＯで希釈した。得られた溶液に、新たにｓｓ−ｓｉＲＮＡ−（Ｃ
Ｈ２）４−ＮＨ２溶液（２ｍｇ、８０μＬのＰＢＳ  ８．５緩衝液中の０．３２５μｍｏ
ｌ）を加えた。反応混合物をボルテックスし、室温で２時間静置した。粗生成物を、アセ
トニトリル／水中１０〜４０％の１００ｍＭの酢酸トリエチルアンモニウムを用いたＨＰ
ＬＣによって精製したところ、１１が得られた。ＴＯＦ  ＭＳ（ＥＳ−）：６５１０。
【０７３２】
２．ＥＥ．Ｘ１０２２とコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの合成
【化１２２】
2019135236.tif 000184
ＤＭＳＯ（２００μＬ）中の、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．４８ｍｇ、０．０
２２ｍｍｏｌ）と、９（４．０６ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）と、ＤＩＣ（２．７２ｍｇ
、０．０２２ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌した。１０μＬの反応混合物
を、１９０μＬのＤＭＳＯで希釈した。得られた溶液に、新たにｓｓ−ｓｉＲＮＡ−（Ｃ
Ｈ２）５−ＮＨ２溶液（２ｍｇ、８０μＬのＰＢＳ  ８．５緩衝液中の０．３２５μｍｏ
ｌ）を加えた。反応混合物をボルテックスし、室温で２時間静置した。粗生成物を、アセ
トニトリル／水中１０〜４０％の１００ｍＭの酢酸トリエチルアンモニウムを用いたＨＰ
ＬＣによって精製したところ、１２が得られた。ＴＯＦ  ＭＳ（ＥＳ−）：６５２４。
【０７３３】
２．ＦＦ．Ｘ１０２４とコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの合成
【化１２３】
2019135236.tif 000185
ＤＭＳＯ（２００μＬ）中の、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．５ｍｇ、０．０５
２２ｍｍｏｌ）と、１（２．５ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）と、ＤＩＣ（２．７４ｍｇ、
０．０２２ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌した。１０μＬの反応混合物を
、１９０μＬのＤＭＳＯで希釈した。得られた溶液に、新たにｓｓ−ｓｉＲＮＡ−（ＣＨ
２）３−ＮＨ２溶液（２．０ｍｇ、８０μＬのＰＢＳ  ８．５緩衝液中の０．３２５μｍ
ｏｌ）を加えた。反応混合物をボルテックスし、室温で２時間静置した。粗生成物を、ア
セトニトリル／水中１０〜４０％の１００ｍＭの酢酸トリエチルアンモニウムを用いたＨ
ＰＬＣによって精製したところ、２が得られた。ＴＯＦ  ＭＳ（ＥＳ−）：６３１５。
【０７３４】
２．ＧＧ．Ｘ１０２６とコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの合成
【化１２４】
2019135236.tif 000186
ＤＭＳＯ（２００μＬ）中の、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．４９ｍｇ、０．０
２２ｍｍｏｌ）と、１（２．０２ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）と、ＤＩＣ（２．７３ｍｇ
、０．０２２ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌した。１０μＬの反応混合物
を、１９０μＬのＤＭＳＯで希釈した。得られた溶液に、新たにｓｓ−ｓｉＲＮＡ−（Ｃ
Ｈ２）４−ＮＨ２溶液（２ｍｇ、８０μＬのＰＢＳ  ８．５緩衝液中の０．３２５μｍｏ
ｌ）を加えた。反応混合物をボルテックスし、室温で２時間静置した。粗生成物を、アセ
トニトリル／水中１０〜４０％の１００ｍＭの酢酸トリエチルアンモニウムを用いたＨＰ
ＬＣによって精製したところ、２が得られた。ＴＯＦ  ＭＳ（ＥＳ−）：６３２７。
【０７３５】
２．ＨＨ．Ｘ１０２５とコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの合成
【化１２５】
2019135236.tif 000187
ＤＭＳＯ（２００μＬ）中の、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．４９ｍｇ、０．０
２２ｍｍｏｌ）と、１（２．８４ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）と、ＤＩＣ（２．７４ｍｇ、
０．０２２ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌した。１０μＬの反応混合物を
、１９０μＬのＤＭＳＯで希釈した。得られた溶液に、新たにｓｓ−ｓｉＲＮＡ−（ＣＨ
２）３−ＮＨ２溶液（２．０ｍｇ、８０μＬのＰＢＳ  ８．５緩衝液中の０．３２５μｍ
ｏｌ）を加えた。反応混合物をボルテックスし、室温で２時間静置した。粗生成物を、ア
セトニトリル／水中１０〜４０％の１００ｍＭの酢酸トリエチルアンモニウムを用いたＨ
ＰＬＣによって精製したところ、２が得られた。ＴＯＦ  ＭＳ（ＥＳ−）：６３９０。
【０７３６】
２．ＩＩ．Ｘ１０２７とコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの合成
【化１２６】
2019135236.tif 000188
ＤＭＳＯ（２００μＬ）中の、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．４９ｍｇ、０．０
２２ｍｍｏｌ）と、１（２．８４ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）と、ＤＩＣ（２．７３ｍｇ
、０．０２２ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌した。１０μＬの反応混合物
を、１９０μＬのＤＭＳＯで希釈した。得られた溶液に、新たにｓｓ−ｓｉＲＮＡ−（Ｃ
Ｈ２）４−ＮＨ２溶液（２ｍｇ、８０μＬのＰＢＳ  ８．５緩衝液中の０．３２５μｍｏ
ｌ）を加えた。反応混合物をボルテックスし、室温で２時間静置した。粗生成物を、アセ
トニトリル／水中１０〜４０％の１００ｍＭの酢酸トリエチルアンモニウムを用いたＨＰ
ＬＣによって精製したところ、２が得られた。ＴＯＦ  ＭＳ（ＥＳ−）：６４０４。
【０７３７】
２．ＪＪ．Ｘ１０２８とコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの合成
【化１２７】
2019135236.tif 000189
ＤＭＳＯ（２００μＬ）中の、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．４８ｍｇ、０．０
２２ｍｍｏｌ）と、１（２．９０ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）と、ＤＩＣ（２．７２ｍｇ
、０．０２２ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌した。１０μＬの反応混合物
を、１９０μＬのＤＭＳＯで希釈した。得られた溶液に、新たにｓｓ−ｓｉＲＮＡ−（Ｃ
Ｈ２）５−ＮＨ２溶液（２ｍｇ、８０μＬのＰＢＳ  ８．５緩衝液中の０．３２４μｍｏ
ｌ）を加えた。反応混合物をボルテックスし、室温で２時間静置した。粗生成物を、アセ
トニトリル／水中１０〜４０％の１００ｍＭの酢酸トリエチルアンモニウムを用いたＨＰ
ＬＣによって精製したところ、２が得られた。ＴＯＦ  ＭＳ（ＥＳ−）：６４１７。
【０７３８】
２．ＫＫ．Ｘ１０６２とコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの合成
【化１２８】
2019135236.tif 000190
【化１２９】
2019135236.tif 000191
トルエン（２００ｍｌ）中のＡｌＣｌ３（７．８８ｇ、５９．１ｍｍｏｌ）に、Ｎ２下
でアニリン（５ｇ、５３．７ｍｍｏｌ、４．５９ｍｌ、５０ｍｌのトルエン中）を滴下し
て加えた。３−ブロモベンゾニトリル（２９．３ｇ、１６１ｍｍｏｌ）を、上記の混合物
に続いて加えた。得られた混合物を室温で１時間撹拌し、次に、１１０℃で６時間加熱し
た。反応混合物を室温に冷まし、それにＨＣｌ水溶液（１Ｍ、３ｍｌ）を加えた。次に、
溶液を８０℃で１時間加熱した。溶液を室温に冷まし、有機層および水層を分離した。水
層を酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機層を、水および塩水
で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。次に、有機溶媒を減圧下で除去した。粗生成
物を、０〜４０％の酢酸エチル／ヘプタンを用いたシリカクロマトグラフィーによって精
製したところ、２９％の収率で１（４．３１ｇ、１５．６ｍｍｏｌ）が得られた。ＥＳＩ
ＭＳ（ｍ／ｚ、ＭＨ＋）：２７８．１  １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−
ｄ）δ  ｐｐｍ  ６．１６（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ）６．６４（ｔ，Ｊ＝７．５３Ｈｚ、１Ｈ
）６．７６（ｄ，Ｊ＝８．５３Ｈｚ、１Ｈ）７．２９−７．４９（ｍ，３Ｈ）７．５６（
ｄ，Ｊ＝７．５３Ｈｚ、１Ｈ）７．６７（ｄ，Ｊ＝８．０３Ｈｚ、１Ｈ）７．７４−７．
８４（ｍ，１Ｈ）
【０７３９】
【化１３０】
2019135236.tif 000192
ＤＣＭ（６０ｍｌ）中の、１（１．０２ｇ、３．６９ｍｍｏｌ）と、エチル４−クロロ
−４−オキソブタノエート（０．６６９ｇ、４．０６ｍｍｏｌ）との混合物を、６０℃で
１時間加熱した。反応混合物を冷却し、１ＭのＮａＯＨ水溶液（１５ｍｌ）でクエンチし
た。有機層および水層を分離した。水層をジクロロメタン（３×５０ｍｌ）で抽出した。
組み合わされた有機層を、水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。次に
、有機溶媒を減圧下で除去したところ、９６％の収率で２（１．４４ｇ、３．５６ｍｍｏ
ｌ）が得られた。ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ、ＭＨ＋）：４０６．２。１Ｈ  ＮＭＲ（４００
ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  １０．８８（ｓ，１Ｈ）、８．６５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈ
ｚ、１Ｈ）、７．８６（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．７４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ、
１Ｈ）、７．６５−７．５１（ｍ，３Ｈ）、７．３９（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、７
．１２（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．１７（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ、２Ｈ）、２．７
７（ｄｔ，Ｊ＝１０．３、５．２Ｈｚ、４Ｈ）、１．２７（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ、４Ｈ）
．
【０７４０】
【化１３１】
2019135236.tif 000193
エタノール（２０ｍｌ）中の、２（１．４４ｇ、３．５６ｍｍｏｌ）と、水素化ナトリ
ウム（１．４２５ｇ、３５．６ｍｍｏｌ）との混合物を、８０℃で２時間加熱した。反応
混合物を室温に冷まし、水（５ｍｌ）でクエンチし、次に、１ＭのＨＣｌ水溶液（２ｍｌ
）で中和した。得られた溶液を酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出した。組み合わされた
有機層を、水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。次に、有機溶媒を減
圧下で除去したところ、９４％の収率で３（１．２ｇ、３．６３ｍｍｏｌ）が得られた。
ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ、ＭＨ＋）：３６０．２。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホ
ルム−ｄ）δ  １１．７１−１１．６３（ｍ，１Ｈ）、１１．５５−１１．４２（ｍ，３
Ｈ）、１１．３７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ、１Ｈ）、１１．３０−１１．２２（ｍ，１Ｈ）
、１１．１２（ｔｄ、Ｊ＝７．６、７．０、１．２Ｈｚ、１Ｈ）、１１．００（ｄｄ，Ｊ
＝８．２、１．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．３３（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ、２Ｈ）、４．８７−４
．８２（ｍ，２Ｈ）．
【０７４１】
【化１３２】
2019135236.tif 000194
ＰＯＣｌ３（１５ｍｌ）中の３（１．２ｇ、１．８９ｍｍｏｌ）の溶液を、室温で２時
間撹拌した。ＰＯＣｌ３を減圧下で除去し、得られた残渣を、エタノール（５０ｍｌ）で
クエンチした。溶液を室温で２時間撹拌し、次に、エタノールを減圧下で除去した。残渣
に、ジクロロメタン（５０ｍｌ）および１ＭのＮａＯＨ水溶液（２０ｍｌ）を加えた。有
機層および水層を分離した。水層をジクロロメタン（２×５０ｍｌ）で抽出した。組み合
わされた有機層を、水、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。有機溶媒を減圧
下で除去したところ、１３６％の収率で４（１．７６ｍｇ、４．５６ｍｍｏｌ）が得られ
た。ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ、ＭＨ＋）：３８８．２。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロ
ロホルム−ｄ）δ  ７．６５（ｄｔ，Ｊ＝８．２、１．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．５４−７．
４６（ｍ，２Ｈ）、７．４５−７．３７（ｍ，２Ｈ）、７．２７（ｄｔ，Ｊ＝７．８、１
．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．１７−７．０４（ｍ，２Ｈ）、４．１８−４．１６（ｍ，２Ｈ）
、３．５０（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ、２Ｈ）、１．２７（ｈ，Ｊ＝３．７Ｈｚ、３Ｈ）．
【０７４２】
【化１３３】
2019135236.tif 000195
ＰＯＣｌ３（１０ｍｌ）中の４（１．７６ｇ、４．５６ｍｍｏｌ）の溶液を、１１０℃
で１２時間加熱した。ＰＯＣｌ３を減圧下で除去した。残渣に、ジクロロメタン（５０ｍ
ｌ）および１ＭのＮａＯＨ水溶液（２０ｍｌ）を加えた。有機層および水層を分離した。
水層をジクロロメタン（２×５０ｍｌ）で抽出した。組み合わされた有機層を、水、塩水
で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。有機溶媒を減圧下で除去したところ、３２．
５％の収率で５（４４０ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）が得られた。ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ、
ＭＨ＋）：４０６．０。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ８．１４
−８．０５（ｍ，１Ｈ）、７．７６（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４、６．９、１．４Ｈｚ、１Ｈ）
、７．６９（ｄｄｄ，Ｊ＝８．０、１．９、１．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．５３−７．４１（
ｍ，３Ｈ）、７．３６（ｄｄ，Ｊ＝８．３、１．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．２６（ｄｔ，Ｊ＝
７．７、１．３Ｈｚ、１Ｈ）、４．１９（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ、２Ｈ）、３．７２（ｓ，
２Ｈ）、１．２７（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ、３Ｈ）．
【０７４３】
【化１３４】
2019135236.tif 000196
ＴＦＡ（１ｍｌ）中の、５（５０ｍｇ、０．１２４ｍｍｏｌ）、亜鉛粉末（４０．４ｍ
ｇ、０．６１８ｍｍｏｌ）との混合物を、４０℃で１２時間加熱した。反応混合物を、Ｎ
ａＯＨ（１Ｍ、１ｍｌ）でクエンチした。有機層をジクロロメタン（２×１０ｍｌ）で抽
出した。組み合わされた有機層を、水、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。
有機溶媒を減圧下で除去した。粗生成物を、０〜５０％のＥｔＯＡｃ／ヘプタンの溶離を
用いたシリカフラッシュクロマトグラフによって精製したところ、８５％の収率で６（３
９ｍｇ、０．１０５ｍｍｏｌ）が得られた。ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ、ＭＨ＋）：３７２．
１。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  １．２４（ｔ，Ｊ＝
７．１５Ｈｚ、３Ｈ）３．６３（ｓ，２Ｈ）４．０２−４．２７（ｍ，２Ｈ）７．１２−
７．３３（ｍ，１Ｈ）７．３７−７．６１（ｍ，４Ｈ）７．６１−７．７１（ｍ，１Ｈ）
７．７５（ｔ，Ｊ＝１．５１Ｈｚ、１Ｈ）８．２１（ｄ，Ｊ＝８．５３Ｈｚ、１Ｈ）８．
９４（ｓ，１Ｈ）．
【０７４４】
【化１３５】
2019135236.tif 000197
２−Ｍｅ  ＴＨＦ（５００μＬ）およびＤＭＦ（５００μＬ）中の、４−（２−（４，
４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）エチル）−１，
３−ジオキソラン−２−オン）（２５５ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）と、６（３９ｍｇ、０
．１０５ｍｍｏｌ）と、（Ｂｒｅｔｔｐｈｏｓ）パラジウム（ＩＩ）フェネチルアミンク
ロリド（４．２１ｍｇ、５．２７μｍｏｌ）と、１ＭのＫ３ＰＯ４水溶液（４２１μＬ、
０．４２１ｍｍｏｌ）との混合物を、８０℃で１２時間加熱した。反応混合物をろ過して
、不溶性物質を除去した。有機溶媒を減圧下で除去した。粗材料を、５〜９５％のアセト
ニトリル／水中５％のＴＦＡを用いたＨＰＬＣによって精製したところ、３７．５％の収
率で７（１５ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）が得られた。ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ、ＭＨ＋）：
３８０．４。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  １．２２（
ｔｄ、Ｊ＝７．１５、２．２６Ｈｚ、３Ｈ）１．７３−１．９２（ｍ，２Ｈ）２．７２−
２．９８（ｍ，２Ｈ）３．４９（ｄｄ，Ｊ＝１１．０４、７．５３Ｈｚ、１Ｈ）３．５６
−３．８４（ｍ，４Ｈ）４．０４−４．２０（ｍ，２Ｈ）７．１５（ｄ，Ｊ＝７．５３Ｈ
ｚ、１Ｈ）７．１３（ｄ，Ｊ＝８．７８Ｈｚ、１Ｈ）７．３７（ｄ，Ｊ＝７．５３Ｈｚ、
１Ｈ）７．４３−７．５６（ｍ，３Ｈ）７．７４（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）８．２２（ｂｒ．
ｓ．，１Ｈ）８．９４（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．
【０７４５】
【化１３６】
2019135236.tif 000198
ジオキサン（２００μｌ）中の、７（１５ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）と、１ＭのＬｉＯ
Ｈ水溶液（８７μＬ／ｍｌ、０．０８７ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌し
た。有機溶媒を減圧下で除去したところ、１００％の収率で８（１４．１７ｍｇ、０．０
４ｍｍｏｌ）がリチウム塩として得られた。ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ、ＭＨ＋）：３５２．
４。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ  ｐｐｍ  １．６２−１．８０
（ｍ，１Ｈ）１．８０−１．９８（ｍ，１Ｈ）２．７８（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．３３、６．
７６、３．１６Ｈｚ、１Ｈ）２．８４−２．９９（ｍ，１Ｈ）３．４６−３．５５（ｍ，
３Ｈ）３．５５−３．６８（ｍ，３Ｈ）６．９８−７．２５（ｍ，２Ｈ）７．３１−７．
５９（ｍ，４Ｈ）７．７４（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４０、６．３８、１．８９Ｈｚ、１Ｈ）８
．０６（ｄ，Ｊ＝８．３４Ｈｚ、１Ｈ）８．８６（ｓ，１Ｈ）．
【０７４６】
【化１３７】
2019135236.tif 000199
ＤＭＦ（４ｍｌ）中の、８（１４ｍｇ、０．０３９ｍｍｏｌ）と、ＴＢＤＭＳＣｌと、
イミダゾール（４３．６ｍｇ、０．６４１ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で２４時間撹拌
した。反応混合物を、水（１ｍｌ）でクエンチした。有機層を酢酸エチル（３×５ｍｌ）
で抽出した。組み合わされた有機層を、水、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ
た。有機溶媒を減圧下で除去した。粗生成物を、０〜５０％のＥｔＯＡｃ／ヘプタンの溶
離を用いたシリカフラッシュクロマトグラフによって精製したところ、６３．２％の収率
で９（１５．９ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）が得られた。ＥＳＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ、ＭＨ＋
）：５８０．６。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ  ｐｐｍ  −０．
１２−０．１３（ｍ，８Ｈ）０．６９−０．９８（ｍ，１２Ｈ）１．１７−１．３６（ｍ
，５Ｈ）２．６０−２．９０（ｍ，２Ｈ）３．３８−３．６２（ｍ，６Ｈ）３．７３（ｄ
，Ｊ＝４．５５Ｈｚ、１Ｈ）７．０２−７．１５（ｍ，２Ｈ）７．２４−７．３８（ｍ，
１Ｈ）７．３９−７．４７（ｍ，３Ｈ）７．６４−７．７４（ｍ，１Ｈ）７．９８−８．
０６（ｍ，１Ｈ）８．６８−８．８９（ｍ，１Ｈ）．
【０７４７】
【化１３８】
2019135236.tif 000200
ＤＭＳＯ（２００μＬ）中の、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．４９ｍｇ、０．０
２２ｍｍｏｌ）と、９（６．２６ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）と、ＤＩＣ（２．７４ｍｇ
、０．０２２ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌した。１０μＬの反応混合物
を、１９０μＬのＤＭＳＯで希釈した。得られた溶液に、新たにｓｓ−ｓｉＲＮＡ−（Ｃ
Ｈ２）３−ＮＨ２溶液（２ｍｇ、８０μＬのＰＢＳ  ８．５緩衝液中の０．３２５μｍｏ
ｌ）を加えた。反応混合物をボルテックスし、室温で２時間静置した。粗生成物を、アセ
トニトリル／水中１０〜４０％の１００ｍＭの酢酸トリエチルアンモニウムを用いたＨＰ
ＬＣによって精製したところ、１０が得られた。ＴＯＦ  ＭＳ（ＥＳ−）：６４７８。
【０７４８】
２．ＬＬ．Ｘ１０６３とコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの合成
【化１３９】
2019135236.tif 000201
ＤＭＳＯ（２００μＬ）中の、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．４９ｍｇ、０．０
２２ｍｍｏｌ）と、９（６．２６ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）と、ＤＩＣ（２．７３ｍｇ
、０．０２２ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌した。１０μＬの反応混合物
を、１９０μＬのＤＭＳＯで希釈した。得られた溶液に、新たにｓｓ−ｓｉＲＮＡ−（Ｃ
Ｈ２）４−ＮＨ２溶液（２ｍｇ、８０μＬのＰＢＳ  ８．５緩衝液中の０．３２５μｍｏ
ｌ）を加えた。反応混合物をボルテックスし、室温で２時間静置した。粗生成物を、アセ
トニトリル／水中１０〜４０％の１００ｍＭの酢酸トリエチルアンモニウムを用いたＨＰ
ＬＣによって精製したところ、１１が得られた。ＴＯＦ  ＭＳ（ＥＳ−）：６４９２。
【０７４９】
２．ＭＭ．Ｘ１０６４とコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの合成
【化１４０】
2019135236.tif 000202
ＤＭＳＯ（２００μＬ）中の、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．４８ｍｇ、０．０
２２ｍｍｏｌ）と、９（６．２６ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）と、ＤＩＣ（２．７２ｍｇ
、０．０２２ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で１２時間撹拌した。１０μＬの反応混合物
を、１９０μＬのＤＭＳＯで希釈した。得られた溶液に、新たにｓｓ−ｓｉＲＮＡ−（Ｃ
Ｈ２）５−ＮＨ２溶液（２ｍｇ、８０μＬのＰＢＳ  ８．５緩衝液中の０．３２５μｍｏ
ｌ）を加えた。反応混合物をボルテックスし、室温で２時間静置した。粗生成物を、アセ
トニトリル／水中１０〜４０％の１００ｍＭの酢酸トリエチルアンモニウムを用いたＨＰ
ＬＣによって精製したところ、１２が得られた。ＴＯＦ  ＭＳ（ＥＳ−）：６５０６。
【０７５０】
実施例３．ＰＡＺリガンドコンジュゲートの３’末端キャップのインビトロおよびインビ
ボ活性および構造
ＰＡＺリガンドコンジュゲートを、Ｘ線結晶およびＮＭＲ構造研究（データは示されて
いない）において７−ｍｅｒ  ＲＮＡコンジュゲート構造の一部として調べた。
【０７５１】
様々な３’末端キャップを含む二本鎖のＲＮＡ干渉活性も分析し；インビトロおよびイ
ンビボの有効性を、実施例３Ａ（インビトロでのデータ）および３Ｂ（インビボでのデー
タ）に示されるように調べた。
【０７５２】
実施例３Ａ．３’末端キャップ（ＰＡＺリガンド）を含むＲＮＡｉ剤のインビトロ有効性
ＨＡＭＰ  ｓｉＲＮＡ−ＰＡＺリガンドコンジュゲートの有効性を調べる。ＨｕＨ−７
細胞内のヘプシジンｍＲＮＡの下方制御を、３つの用量で調べる。
【０７５３】
２つの試験配列：ｈｓ＿ＨＡＭＰ＿４００および４０２
親ステムフォーマット：Ａ１０６Ｓ４２（２’−ＯＭｅ化学）
ガイド（アンチセンス）鎖における１９  ＰＡＺリガンド±リビトールスペーサ、±Ｍ
ＯＥクランプ（ここで、ＭＯＥクランプは、５’から３’へと数えて各鎖における２つの
最後の塩基対合ヌクレオチドのそれぞれにおける２’−ＭＯＥ修飾である）。
【０７５４】
Ｈｕｈ−７細胞内のインビトロ用量反応を測定する。
【０７５５】
結果が、図５Ａおよび５Ｂおよび７および以下の表５に示される。
【０７５６】
図５Ａおよび５Ｂは、ガイド（アンチセンス）鎖上に３’末端キャップ：ＢＰ（ビフェ
ニル）、Ｃ６、Ｘ０２７、Ｘ０３８、Ｘ０５０、Ｘ０５１、Ｘ０５２、Ｘ０５８、Ｘ０５
９、Ｘ０６０、Ｘ０６１、Ｘ０６２、Ｘ０６３、Ｘ０６４、Ｘ０６５、Ｘ０６６、Ｘ０６
７、Ｘ０６８、およびＸ０６９を含む様々なＲＮＡｉ剤によって仲介されるインビトロＲ
ＮＡ干渉またはＫＤ（ノックダウン）を示す。２つの配列を試験し（ｈｓ＿ＨＡＭＰ＿４
００および＿４０２）、ここで、４００は、ヒトＨＡＭＰ（ヘプシジン）遺伝子の４００
位から開始する配列であり、４０２は、４０２位から開始する重複配列である。
【０７５７】
これらを、リビトールスペーサを用いて（Ｒｉｂ）および用いずに（−）；および２’
−ＭＯＥクランプを用いて（ＭＯＥ）および用いずに（−）試験した（図６Ａおよび６Ｂ
に示されるように）。様々なｈｓ＿ＨＡＭＰ４００および４０２が、図６Ａ（ガイドまた
はアンチセンス鎖）および６Ｂ（対応するセンス鎖）に示される。
【０７５８】
データは、図５Ａおよび５Ｂに提供される。図４Ａおよび４Ｂ中の丸で囲まれたデータ
点は、ｈｓ＿ＨＡＭＰ＿４００のための最も効果が高いフォーマットおよびｈｓ＿ＨＡＭ
Ｐ＿４０２のための最も効果が高いフォーマットを表す。
【０７５９】
さらなるデータが、以下の表５に提供される。この表は、３’末端キャップ、およびＤ
ＭＴ、そのスクシネートおよびカルボキシレート形態の名称（「オリゴ識別子（Ｏｌｉｇ
ｏ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ）」）；カルボキシレートＫｄ；インビトロで５ｎＭの３’末
端キャップを含むヘプシジンＲＮＡｉ剤（フォーマット：Ｓ４０２＋リビトール＋ＭＯＥ
クランプ）によって仲介されるＫＤ（ノックダウン）；およびおよその（ａｐｐｒｏｘ．
）ＩＣ５０を示す。
【０７６０】
【表６２】
2019135236.tif 000203
【０７６１】
図７は、１．５７ｎＭ〜１５ｎＭの範囲の、３’末端キャップを含む様々な用量のＲＮ
Ａｉ剤の後の、ＣＯＳ１細胞内の７２時間の時点におけるヘプシジンｍｍ−レポーターレ
ベルの残りの遺伝子活性（ここで、残りの遺伝子活性＝１００％−ＫＤである）を示す。
鎖のフォーマットが示される。センス鎖の３’末端は、２’ＭＯＥ−クランプ−ｒｉｂｐ
（リビトールスペーサ）−Ｃ６で終端する。アンチセンス鎖の３’末端は、２’ＭＯＥ−
クランプ−ｒｉｂｐ（リビトールスペーサ）−リガンドで終端し、ここで、使用されるリ
ガンドは、３’末端キャップ（Ｘ０２７、Ｘ０５８、Ｘ０６７など）であった。
【０７６２】
これらのデータは、ＢＰ（ビフェニル）、Ｃ６、Ｘ０２７、Ｘ０３８、Ｘ０５０、Ｘ０
５１、Ｘ０５２、Ｘ０５８、Ｘ０５９、Ｘ０６０、Ｘ０６１、Ｘ０６２、Ｘ０６３、Ｘ０
６４、Ｘ０６５、Ｘ０６６、Ｘ０６７、Ｘ０６８、またはＸ０６９である３’末端キャッ
プを含むＲＮＡｉ剤の有効性を示す。
【０７６３】
実施例３Ｂ．３’末端キャップ（ＰＡＺリガンド）を含むＲＮＡｉ剤のインビボ有効性
実施例３Ａは、３’末端キャップを含む様々なＲＮＡｉ剤のインビトロ有効性を示した
。実施例３Ｂは、３’末端キャップを含む様々なＲＮＡｉ剤のインビボ有効性を示す。
【０７６４】
これらのインビボ実験では、これらのパラメータを使用した：
マウス（ｎ＝５／群）に静脈内ボーラス（ＩＶ  ｂｏｌｕｓ）（尾静脈）を介して注入さ
れる：ＬＮＰ５６９
・ＰＢＳ
・ＬＮＰ５６９−Ｈａｍｐ２５４−Ｘ０５２（ＳＬ５２−４９ＣＥ）−３ｍｇ／ｋｇ
・ＬＮＰ５６９−Ｈａｍｐ２５４−Ｘ０５８（ＩＬ５４−４３−ＸＥ）−３ｍｇ／ｋｇ
・ＬＮＰ５６９−Ｈａｍｐ２５４−Ｘ０６７（ＹＬ５５−４８ＲＥ）−３ｍｇ／ｋｇ
・ＬＮＰ５６９−Ｈａｍｐ２５４−Ｘ０３８（ＣＬ５１−５５ＩＥ）−３ｍｇ／ｋｇ
・ＬＮＰ５６９−Ｈａｍｐ２５４−Ｘ０６９（ＧＡ３５−２４ＯＦ）−３ｍｇ／ｋｇ
・ＬＮＰ５６９−Ｈａｍｐ２５４−Ｘ０２７（ＭＬ５９−３９ＮＥ）−３ｍｇ／ｋｇ
・ＬＮＰ５６９−Ｈａｍｐ２５４−Ｃ６対照−３ｍｇ／ｋｇ
ＬＮＰ５６９は、ＲＮＡｉ剤の脂質ナノ粒子調製物である。
【０７６５】
２つの時点−注入の４８および１６８時間後（両方とも３ｍｇ／ｋｇ）。
【０７６６】
肝臓中のヘプシジンノックダウンを評価する（ｍＲＮＡ−ｑＰＣＲ）
以下のキークエスチョン（ｋｅｙ  ｑｕｅｓｔｉｏｎ）を尋ねる：
ＰＡＺドメインリガンドはインビボで活性か？（４８時間の時点）。
ＰＡＺドメインリガンドはノックダウンの持続時間に利益を与えるか？（１６８時間の時
点）。
【０７６７】
結果が、図８Ａおよび８Ｂに示される。
【０７６８】
図８Ａおよび８Ｂは、ＡＢＩ  Ｈａｍｐ１  Ｔａｑｍａｎアッセイ（図８Ａ）およびＨ
ａｍｐ１特異的Ｔａｑｍａｎアッセイ（図８Ｂ）の両方において、ＲＮＡｉ剤の全てが、
１×３ｍｇ／ｋｇの用量での投与の４８時間後の時点で、インビボでヘプシジンノックダ
ウンを仲介することができたことを示す。使用される３’末端キャップは、対照としての
Ｃ６とともに、Ｘ０５２、Ｘ０５８、Ｘ０６７、Ｘ０３８、Ｘ０６９、およびＸ０２７で
あった。
【０７６９】
Ｘ０５２、Ｘ０５８、Ｘ０６７、Ｘ０３８、Ｘ０６９、Ｘ０２７、またはＣ６の３’末
端キャップを有するＲＮＡｉ剤が、４８時間の時点でＲＮＡ干渉をまだ仲介することがで
きたという発見は、３’末端キャップが、（例えば、血清中のヌクレアーゼによる）分解
または消化からＲＮＡｉ剤を保護することを示す。
【０７７０】
図９Ａは、Ｈａｍｐ１特異的Ｔａｑｍａｎアッセイにおいて、Ｘ０５８  ３’末端キャ
ップを含む二本鎖が、インビボで投与の１６８時間後の時点でＲＮＡ干渉（ヘプシジンノ
ックダウンによって測定される）をまだ仲介することができたことを示す。したがって、
５０％を超えるノックダウンが、単回投与で７日後にマウスにおいて観察された。
【０７７１】
何らかの特定の理論によって制約されるものではないが、本開示は、Ｘ０５８  ３’末
端キャップを有するＲＮＡｉ剤によって仲介されるノックダウンの増加した有効性および
持続時間が、Ａｇｏ２とＸ０５８との増加した結合に起因し得ることを指摘している。図
９Ｂは、ヘプシジン１８−ｍｅｒオリゴヌクレオチドを用いたＸ０５８およびＣ６  Ａｇ
ｏ２プルダウン（Ｐｕｌｌｄｏｗｎ）実験を示す。
【０７７２】
簡潔には、Ａｇｏ２に対する抗体を用いて、Ｘ０５８またはＣ６  ３’末端キャップ、
または非標的（ＮＴ）対照ＲＮＡｉ剤のいずれかを含むＲＮＡｉ剤の投与の７２時間後に
細胞からＡｇｏ２をプルダウンした。次に、示されるように、ＲＮＡｉ剤のレベルを測定
するために分析を行った。図９Ｂは、７２時間後、Ｘ０５８を有するはるかに多くのＲＮ
Ａｉ剤が、Ｃ６を有するＲＮＡｉ剤よりＡｇｏ２と結合していたことを示す。
【０７７３】
したがって、これらのデータは、以下のことを示す：
ガイド鎖上にＸ０３８、Ｘ０５２、Ｘ０５８、Ｘ０６７、またはＸ０６９  ＰＡＺリガン
ドを有するＨＡＭＰ  １８−ｍｅｒ（２５４）ｓｉＲＮＡがインビボで活性である。
【０７７４】
Ｘ０５８は、ノックダウンの確実に増加した有効性および持続時間を示す。
【０７７５】
さらなるインビボ試験
さらなるインビボ試験を、異なる化学的フォーマット：（Ａ１６０＿Ｓ３８、Ｓ４２、
Ｓ４５およびＡ１６１＿Ｓ３８、Ｓ４２、Ｓ４５）で行った。
【０７７６】
アンチセンス鎖において：
Ａ１６０＿→２位のＦおよびｒｉｂＣ６オーバーハング
Ａ１６１＿→２、５、６、７位のＦおよびｒｉｂＣ６オーバーハング
センス鎖において：
＿Ｓ３８→Ｃ６オーバーハング
＿Ｓ４２→ｒｉｂＣ６オーバーハング
＿Ｓ４５→ＢＰオーバーハング
この実験に使用されるパラメータは以下のとおりであった：
マウス（ｎ＝５／群）に静脈内ボーラス（ＩＶ  ｂｏｌｕｓ）（尾静脈）を介して注入さ
れる：ＬＮＰ５６９
・ＰＢＳ
・ＬＮＰ５６９−Ｈａｍｐ２５４  Ａ１６０＿Ｓ３８−３ｍｇ／ｋｇ
・ＬＮＰ５６９−Ｈａｍｐ２５４  Ａ１６０＿Ｓ４２−３ｍｇ／ｋｇ
・ＬＮＰ５６９−Ｈａｍｐ２５４  Ａ１６０＿Ｓ４５−３ｍｇ／ｋｇ
・ＬＮＰ５６９−Ｈａｍｐ２５４  Ａ１６１＿Ｓ３８−３ｍｇ／ｋｇ
・ＬＮＰ５６９−Ｈａｍｐ２５４  Ａ１６１＿Ｓ４２−３ｍｇ／ｋｇ
・ＬＮＰ５６９−Ｈａｍｐ２５４  Ａ１６１＿Ｓ４５−３ｍｇ／ｋｇ
４８時間の時点。
【０７７７】
肝臓中のヘプシジンノックダウンを評価する（ｍＲＮＡ−ｑＰＣＲ）
結果が、図１０に示される。図１０は、Ａ１６０およびＡ１６１フォーマット［様々な
パッセンジャー（センス）鎖オーバーハング］のインビボでの比較を示す。この実験を、
１×３ｍｇ／ｋｇの用量での投与の４８時間後に行った。
【０７７８】
これらのデータは、いくつかの３’末端キャップ：ＢＰ、Ｃ６、Ｘ０５２、Ｘ０５８、
Ｘ０６７、Ｘ０３８、Ｘ０６９、Ｘ０２７のうちのいずれかを含むＲＮＡｉ剤のインビボ
有効性を示す。
【０７７９】
実施例４．３’末端キャップの有効性を示すさらなる試験
さらなる試験を、３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤を用いて行う。
【０７８０】
図１６Ａは、３’末端キャップがＸ１０９、Ｘ１１０、Ｘ１１１、Ｘ１１２、Ｘ１１３
、Ｘ０５８またはＣ６であるＲＮＡｉ剤の有効性を示す。ＨｕＲが標的である。使用され
る用量は、１ｎＭ、０．２５ｎＭ、０．６２ｎＭ、および０．１６ｎＭである。３’末端
キャップのいずれかを含むＲＮＡｉ剤は、特に、使用される最も高い用量で、ＲＮＡ干渉
を仲介することができた。
【０７８１】
特に、ＨｕＲ−ＰＡＺリガンドＸ１１０、Ｘ１１１およびＸ１１２は、有効性がＸ０５
８と同様であるようである。
【０７８２】
以下の表６は、様々な３’末端キャップ：Ｘ０５９、Ｘ０５０、Ｘ０６１、Ｘ０５１、
Ｘ０２７、Ｘ０６２、Ｘ０６０、Ｃ６（Ｘ００３）、Ｘ０６８、Ｘ０６５、Ｘ０６９、Ｘ
０９７、Ｘ０６６、Ｘ０９８、Ｘ０５２、Ｘ０６３、ＢＰ（Ｘ０１４）、Ｘ０３８、Ｘ０
６７、Ｘ０５８、Ｘ０６４、およびｒｉｂｐｒｉｂ（Ｘ０２５）を有する１８−ｍｅｒフ
ォーマットＲＮＡｉ剤の有効性を示すさらなるデータを提供する。
【０７８３】
【表６３】
2019135236.tif 000204
【０７８４】
【表６４】
2019135236.tif 000205
【０７８５】
実施例５．Ｃ８またはＣ１０  ３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤の有効性
Ｃ８またはＣ１０  ３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤を試験する。
【０７８６】
Ｃ８またはＣ１０オーバーハングを有する１９−ｍｅｒ  ＳＳＢ  ｓｉＲＮＡを試験す
る。
【０７８７】
図１８Ａおよび１８Ｂは、結果を示す一方、図１７Ｃは、使用される様々な３’末端キ
ャップを示す。
【０７８８】
Ｃ８またはＣ１０  ３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤が、ＲＮＡ干渉を仲介すること
ができた。
【０７８９】
Ｃ１０オーバーハングを有する１９−ｍｅｒ  ＳＳＢ  ｓｉＲＮＡが、３日目に２１−
ｍｅｒ陽性対照より弱いｍＲＮＡの下方制御を示すが、より良好な効果持続期間を示す。
【０７９０】
したがって、Ｃ１０修飾１９ｍｅｒ  ｓｉＲＮＡは、早い時点（３日）で同じ最大標的
ノックダウンを示さないが、より長く持続する（１０日目により強力なノックダウン）。
したがって、Ｃ１０  ３’末端キャップは、より優れた作用時間を提供する。
【０７９１】
実験データは、Ｃ６、Ｃ８またはＣ１０である３’末端キャップを含む有効なＲＮＡｉ
剤が構築され得ることを示す。さらに、Ｃ１０  ３’末端キャップは、インビボでの増加
した作用時間の利点を有する。
【０７９２】
実施例６．ホスホロチオエートおよび／またはＲＮＡ、ＤＮＡ、２’−ＭＯＥ、２’−Ｆ
、またはＬＮＡクランプを含むＲＮＡｉ剤
Ｆ７（ＶＩＩ因子）に対する変形ＲＮＡｉ剤を調製する。
【０７９３】
これらの変形は、例として、ホスホロチオエート−Ｃ３（ＰＳ−Ｃ３）、および／また
はクランプである３’末端キャップを含む。クランプにおいて、５’から３’へと数えて
最後の２つの塩基対合ｎｔが修飾される。
【０７９４】
結果が、図２０Ａ〜Ｅに示される。
【０７９５】
図２０は、様々な修飾を含む３’末端キャップおよびクランプの有効性を示す。図２０
ＡおよびＢは、ホスホロチオエート−Ｃ３（ＰＳ−Ｃ３）の３’末端キャップを含むＲＮ
Ａｉ剤の有効性を示す。図２０Ｃ、ＤおよびＥは、２’クランプを含むＲＮＡｉ剤の有効
性を示し、ここで、５’から３’へと数えて最後の２つの塩基対合ｎｔは、ＲＮＡ、ＤＮ
Ａ、２’−ＭＯＥ、２’−Ｆ、またはＬＮＡである。
【０７９６】
図２０Ｄおよび２０Ｅ中のＲＮＡｉ剤について、全ての試験されるＲＮＡｉ剤が有効で
あった。パーセンテージがノックダウンを表すのではなく、他のＲＮＡｉ剤に対するノッ
クダウンを表すことが留意される。１００％は、例えば、これらの有効なＲＮＡｉ剤の全
てのアンチセンス鎖の平均ノックダウンを表す。
【０７９７】
したがって、これらのデータは、ＲＮＡ、ＤＮＡ、２’−ＭＯＥ、２’−Ｆ、またはＬ
ＮＡを含む有効なＲＮＡｉ剤が構築され得ることを示し、ここで、修飾されたヌクレオシ
ド間リンカーは、ホスホロチオエートである。
【０７９８】
実施例７．３’末端キャップ中にＣ３、Ｃ４、またはＣ５リンカーを含むＲＮＡｉ剤
この実施例は、Ｘ１０９、Ｘ１１０、Ｘ１１１、Ｘ１１２、Ｘ１１３、Ｘ１００９、Ｘ
１０１０、Ｘ１０２４またはＸ１０２５（図２３Ａ）；Ｘ１０１１、Ｘ１０１２、Ｘ１０
１３、Ｘ０５８、Ｘ１０１５、Ｘ１０１６、Ｘ１０１７、Ｘ１０２６、Ｘ１０２７（図２
３Ｂ）：またはＸ１０１８；Ｘ１０１９、Ｘ１０２０、Ｘ１０２１、Ｘ１０２２またはＸ
１０２８（図２３Ｃ）である３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤の有効性を示す。図２０
Ａに示される３’末端キャップは、Ｃ３を含み；図２０Ｂ中の３’末端キャップは、Ｃ４
を含み；図２０Ｃ中の３’末端キャップは、Ｃ５を含む。これらのデータは、これらの３
’末端キャップのいずれかを含むＲＮＡｉ剤が有効であることを示す。
【０７９９】
ＨｕＲ  ＲＮＡｉ剤が使用される。
【０８００】
これらの実験において、Ｈｕｈ−７細胞を、９６ウェルプレートフォーマットにおいて
ＲＮＡｉＭａｘを用いてトランスフェクトする。ＲＮＡを、トランスフェクションの４８
時間後に単離する。ＨｕＲ  ｍＲＮＡをＰＰＩＡ内在性コントロールに対して正規化する
。３、１０および３０ｐＭのＲＮＡｉ剤濃度が、以前に分析されたＰＡＺリガンド（３’
末端キャップ）のＩＣ５０データに基づいて選択される。Ｘ１０９〜Ｘ１１３データにつ
いて、２つの以前のデータセットの平均が提供される。
【０８０１】
一般に、３’末端キャップ内のリンカーの長さは、３’末端キャップのいずれかの有効
性にそれほど影響を与えない。
【０８０２】
別個であるが、関連した実験において、ＩＣ５０データを、Ｈｕｈ−７細胞内でＨｕＲ
ＲＮＡｉ剤を用いて、いくつかの３’末端キャップについて測定した。２つの別個の試
験のデータ点が以下に示される。
【０８０３】
【表６５】
2019135236.tif 000206
【０８０４】
これらのデータは、Ｘ０５８、Ｘ１０９、Ｘ１１０、Ｘ１１１、Ｘ１１２またはＸ１１
３である３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤がそれぞれ有効であることを示す。
【０８０５】
実施例８．３’末端キャップ中にＣ３、Ｃ４、またはＣ５リンカーを含むさらなるＲＮＡ
ｉ剤
この実施例は、Ｘ１１０、Ｘ１０１２、Ｘ１０１８、Ｘ１１１、Ｘ１０１３、Ｘ１１２
、Ｘ０５８、Ｘ１０１９、Ｘ１０２５、Ｘ１０２７、またはＸ１０２８である３’末端キ
ャップを含む様々なＲＮＡｉ剤の有効性を示す。
【０８０６】
この様々な３’末端キャップ（表１に示される）は、Ｒ２と頭部基との間のリンカー（
Ｃ３、Ｃ４またはＣ５）の長さが変化する。
【０８０７】
明確化の注記として、本開示は、「Ｃ３」［−（ＣＨ２）３−］、「Ｃ４」［−（ＣＨ
２）４−］、および「Ｃ５」［−（ＣＨ２）５−］という用語が、一般に、本明細書にお
いてスペーサを示すのに使用され、同様の用語（Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５「リンカー」）も、３
’末端キャップの一部を示すのに使用されることを注記する。図１３において、異なるリ
ンカーが、様々な３’末端キャップの部分を区別するのに使用される。「Ｃ３」という用
語が、Ｃ３  ３’末端キャップ（例えば、図１５Ａ）、Ｃ３スペーサ（図２１）、および
Ｃ３リンカー（図１３）を示すのに使用されることも留意される。
【０８０８】
この実施例のための標的遺伝子はＨｕＲである。Ｈｕｈ−７細胞を、ＲＮＡｉＭａｘト
ランスフェクション試薬を用いてトランスフェクトする。２４ウェルプレートに、ウェル
当たり４０，０００個の細胞を播種する。１ｎＭのＲＮＡｉ剤／ウェルによる「リバース
トランスフェクション」を行った後、約１８時間にわたってインキュベーションを行う。
２連のプレート（ｄｕｐｌｉｃａｔｅ  ｐｌａｔｅ）を、ＲＮＡ抽出のために一方をおよ
び持続のために他方を用いて準備する。トランスフェクション培地を、新しい増殖培地（
ＲＮＡｉ剤なし）と交換し、細胞を、ＲＮＡ単離の前にさらに２日間にわたってインキュ
ベートし、または持続時間実験のために分割する。
【０８０９】
細胞を、トランスフェクションの３および７日後に分割する。ＲＮＡを、ＨｕＲ  ｍＲ
ＮＡ分析のためにトランスフェクションの３、７および１０日後の時点で単離する。
【０８１０】
結果が、図２４Ａおよび２４Ｂに示される。対照（ＮＴＣ）は、ｍＦＶＩＩ  ２１−ｍ
ｅｒ  ＲＮＡｉ剤である。
【０８１１】
図２４Ａにおいて、リガンドＬＭＥ８４４（Ｘ１１０、Ｘ１０１２およびＸ１０１８）
について、リンカーの長さは、作用時間を変化させるようではない。リガンドＰＫＦ０２
７−８９５（Ｘ１１１およびＸ１０１３）について、より短いリンカー（Ｃ３）およびＣ
４リンカーはそれほど異なっていない。
【０８１２】
図２４Ｂにおいて、リガンドＬＰＩ２３０（Ｘ１０２５、Ｘ１０２７およびＸ１０２８
）について、Ｃ３リンカーの持続時間は、より長いリンカーより良好である。トランスフ
ェクションの７日後程度でこの兆候がある。
【０８１３】
リガンドＬＫＳ８７１（Ｘ１１２、Ｘ０５８およびＸ１０１９）について、より長いリ
ンカーは、後の時点でわずかにより良好な活性を有するようであり、この「傾向」は７日
目にもあるが、エラーバーが重複し、それはおそらく有意ではない。１０日目のＸ０５８
の活性は、以前の持続試験で示されたより約１５％低いが、これらのタイプの分析では試
験によってばらつきがある。
【０８１４】
これらのデータは、Ｘ１１２、Ｘ０５８、Ｘ１０１９、Ｘ１０２５、Ｘ１０２７、また
はＸ１０２８である３’末端キャップを含むＲＮＡｉ剤がそれぞれ有効であることを示す
。
【０８１５】
実施例９．さらなる３’末端キャップの有効性
３’末端キャップＸ１０６２、Ｘ１０６３およびＸ１０６４はそれぞれ、ＲＮＡｉ剤に
おいて使用されるときに有効であることが分かった。例えば、これらは、ＨｕＲ  ｓｉＲ
ＮＡにおいて有効であり、ここで、ＨｕＲ  ｓｉＲＮＡは、本明細書に記載される１８−
ｍｅｒであり、各鎖の３’末端が、ホスフェートで終端し、５’から３’方向に、リビト
ールであるスペーサ、第２のホスフェート、およびＸ１０６２、Ｘ１０６３またはＸ１０
６４である３’末端キャップをさらに含む。Ｈｕｈ７細胞を、ＲＮＡｉ  Ｍａｘトランス
フェクション試薬を用いてｓｉＲＮＡでトランスフェクトし；２４ウェルプレートに、ウ
ェル当たり４０，０００個の細胞を播種し；リバーストランスフェクションを、ウェル当
たり１ｎＭのｓｉＲＮＡを用いて行い、細胞を約１８時間にわたってインキュベートした
。トランスフェクション培地を交換し（ｓｉＲＮＡなしで）、細胞を、ＲＮＡ単離の前に
さらに２日間にわたってインキュベートし、または播種のために分割した。細胞を、持続
時間の時点のためにトランスフェクションの３および７日後に分割した。ＲＮＡを、Ｈｕ
Ｒ  ｍＲＮＡ分析のためにトランスフェクションの３、７および１０日後に単離した。Ｘ
１０６２である３’末端キャップを有するＨｕＲ  ｓｉＲＮＡが、３、７または１０日後
に８９．０、７７．９および３２．７％の有効性（ノックダウン）を実証した。Ｘ１０６
３およびＸ１０６４である３’末端キャップを有するＨｕＲ  ｓｉＲＮＡは、３、７およ
び１０日後にそれぞれ、８９．６、８１．５、および４３．７％；および６７．０、３０
．９および０．０％を示した。
【０８１６】
実施形態
１．式Ｉａ：
【化１４１】
2019135236.tif 000207
（式中：
Ｘが、Ｈ；ＯＨ（ここで、ヒドロキシル基が、任意選択的に、スクシネートとして官能
化されるかまたは固体担体に結合され得る）；ＯＤＭＴ；カルボン酸；ＲＮＡｉ剤の鎖の
３’末端；またはＲＮＡｉ剤の鎖を含む分子の３’末端であり、ここで、鎖の３’末端が
、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の順に
：スペーサ、および第２のホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーをさら
に含み；
Ｙが、ＣＨまたはＮであり；
ｍが、０または１であり；
ｐが、１、２または３であり；
Ｒ３が、水素、２−（ヒドロキシ−メチル）−ベンジル、３−（ヒドロキシ−メチル）
−ベンジル、スクシネート、または固体担体であり；
ここで、（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｒ３部分が、３位または４位でフェニル環に結合され；
Ｒ４が水素であり；
Ｒ５が水素であり；または
Ｒ４およびＲ５が、Ｒ４およびＲ５が結合されるフェニル環と一緒に、６Ｈ−ベンゾ［
ｃ］クロメンを形成する）
の化合物。
【０８１７】
２．以下のものから選択される、実施形態１に記載の化合物。
【化１４２】
2019135236.tif 000208
【化１４３】
2019135236.tif 000209
【０８１８】
３．式Ｉｂ：
【化１４４】
2019135236.tif 000210
（式中：
Ｘが、Ｈ；ＯＨ（ここで、ヒドロキシル基が、任意選択的に、スクシネートとして官能
化されるかまたは固体担体に結合され得る）；ＯＤＭＴ；カルボン酸；ＲＮＡｉ剤の鎖の
３’末端；またはＲＮＡｉ剤の鎖を含む分子の３’末端であり、ここで、鎖の３’末端が
、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の順に
：スペーサ、および第２のホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーをさら
に含み；
ｑが、０、１または２であり；
Ｒ６が、非置換であるかまたはベンゾキシおよび３，４−ジヒドロキシブチルから選択
される基で置換されるフェニルであり；
Ｒ７が、水素またはヒドロキシ−エチルであり、ここで、Ｒ７がヒドロキシ−エチルで
ある場合、ヒドロキシルは、任意選択的に、スクシネートとして官能化されるかまたは固
体担体に結合され得；
Ｒ８が、水素またはメトキシであり；
Ｙ１が、ＣＨまたはＮであり；
Ｙ２が、ＮまたはＣＲ９であり；ここで、Ｒ９が、水素およびメチルから選択される）
の化合物。
【０８１９】
４．以下のものから選択される、実施形態３に記載の化合物。
【化１４５】
2019135236.tif 000211
【化１４６】
2019135236.tif 000212
【化１４７】
2019135236.tif 000213
【化１４８】
2019135236.tif 000214
【０８２０】
５．以下のもの：
【化１４９】
2019135236.tif 000215
（式中：
Ｘが、Ｈ；ＯＨ（ここで、ヒドロキシル基が、任意選択的に、スクシネートとして官能
化されるかまたは固体担体に結合され得る）；ＯＤＭＴ；カルボン酸；ＲＮＡｉ剤の鎖の
３’末端；またはＲＮＡｉ剤の鎖を含む分子の３’末端であり、ここで、鎖の３’末端が
、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の順に
：スペーサ、および第２のホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーをさら
に含み、
ｑが、１および２から選択される）
から選択される化合物。
【０８２１】
６．ＲＮＡｉ剤の鎖の３’末端をキャッピングするための方法であって、
ＲＮＡｉ剤を、以下のもの：
【化１５０】
2019135236.tif 000216
【化１５１】
2019135236.tif 000217
【化１５２】
2019135236.tif 000218
【化１５３】
2019135236.tif 000219
【化１５４】
2019135236.tif 000220
（式中：
Ｘが、Ｈ、ＯＨ、ＯＤＭＴおよびカルボキシレートから選択され、前記ヒドロキシル基
が、任意選択的に、スクシネートとして官能化されるかまたは固体担体に結合され得る）
から選択される化合物と反応させる工程と；
固相合成法を用いて、ＸをＲＮＡｉ剤の鎖で置換する工程；または
固体担体上にＲＮＡｉ剤鎖を構築する工程と；
鎖を化合物と反応させる工程と、
固体担体からＲＮＡｉ剤鎖を切断する工程と
を含む方法。
【０８２２】
７．Ｘが、Ｈ、ＯＨ、ＯＤＭＴまたはカルボキシレートであり、ヒドロキシル基が、任
意選択的に、スクシネートとして官能化されるかまたは固体担体に結合され得；Ｒ３が、
水素、２−（ヒドロキシ−メチル）−ベンジル、３−（ヒドロキシ−メチル）−ベンジル
、スクシネート、または固体担体である、式Ｉａの化合物。
【０８２３】
８．第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、少なくとも１つ
の鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、３’末端キャップが、実施形態１〜６のい
ずれかに記載の化合物であり、Ｘが、第１または第２の鎖である組成物。
【０８２４】
９．ＲＮＡｉ剤の第１および／または第２の鎖が、約４９ヌクレオチド長以下である、
実施形態８に記載の組成物。
【０８２５】
１０．ＲＮＡｉ剤の第１および／または第２の鎖が、約３０ヌクレオチド長以下である
、実施形態８に記載の組成物。
【０８２６】
１１．第１および／または第２の鎖が、１８または１９ヌクレオチド長である、実施形
態８に記載の組成物。
【０８２７】
１２．第１の鎖が、アンチセンス鎖であり、１８または１９ヌクレオチド長である、実
施形態８に記載の組成物。
【０８２８】
１３．ＲＮＡｉ剤が、１つまたは２つの平滑末端を有する、実施形態８に記載の組成物
。
【０８２９】
１４．ＲＮＡｉ剤が、少なくとも１つの５’末端または３’末端にオーバーハングを含
む、実施形態８に記載の組成物。
【０８３０】
１５．ＲＮＡｉ剤が、少なくとも１つの５’末端または３’末端に１〜６つのヌクレオ
チドオーバーハングを含む、実施形態８に記載の組成物。
【０８３１】
１６．ＲＮＡｉ剤が、スペーサを含む、実施形態８に記載の組成物。
【０８３２】
１７．スペーサがリビトールである、実施形態１６に記載の組成物。
【０８３３】
１８．スペーサが、リビトール、２’−デオキシ−リビトール、ジリビトール、２’−
メトキシエトキシ−リビトール（２’−ＭＯＥを有するリビトール）、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５
、Ｃ６、または４−メトキシブタン−１，３−ジオールである、実施形態１６に記載の組
成物。
【０８３４】
１９．ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つのヌクレオチドが修飾される、実施形態８に記載の
組成物。
【０８３５】
２０．前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチドが、２’アルコキシリボヌクレオチド、
２’アルコキシアルコキシリボヌクレオチド、または２’−フルオロリボヌクレオチドの
中から選択される、実施形態１９に記載の組成物。
【０８３６】
２１．前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチドが、２’−ＯＭｅ、２’−ＭＯＥおよび
２’−Ｈから選択される、実施形態１９に記載の組成物。
【０８３７】
２２．１つまたは複数のヌクレオチドが、修飾され、またはＤＮＡであり、またはペプ
チド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、モルホリノヌクレオチド、トレオース核
酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、アラビノース核酸（ＡＮＡ）、２’−フルオ
ロアラビノース核酸（ＦＡＮＡ）、シクロヘキセン核酸（ＣｅＮＡ）、無水ヘキシトール
核酸（ＨＮＡ）、および／またはアンロックド核酸（ＵＮＡ）によって置換され；および
／または少なくとも１つのヌクレオチドが、修飾されたヌクレオシド間リンカー（例えば
、ここで、ヌクレオチドの少なくとも１つのホスフェートが、修飾されたヌクレオシド間
リンカーによって置換される）を含み、ここで、修飾されたヌクレオシド間リンカーが、
ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロアミデート、ボラノホスホノエー
ト、アミドリンカー、および式（Ｉ）
【化１５５】
2019135236.tif 000221
（式中、Ｒ３が、Ｏ−、Ｓ−、ＮＨ２、ＢＨ３、ＣＨ３、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ６〜１０
アリール、Ｃ１〜６アルコキシおよびＣ６〜１０アリール−オキシから選択され、ここで
、Ｃ１〜６アルキルおよびＣ６〜１０アリールが、非置換であるか、または任意選択的に
、ハロ、ヒドロキシルおよびＮＨ２から独立して選択される１〜３つの基で独立して置換
され；Ｒ４が、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、またはＣＨ２から選択される）
の化合物から選択される、実施形態８に記載の組成物。
【０８３８】
２３．第１および／または第２の鎖の３’末端における最初の２つの塩基対合ヌクレオ
チドが修飾される、実施形態８に記載の組成物。
【０８３９】
２４．第１および／または第２の鎖の３’末端における最初の２つの塩基対合ヌクレオ
チドが２’−ＭＯＥである、実施形態８に記載の組成物。
【０８４０】
２５．第１および／または第２の鎖の３’末端ホスフェートが、修飾されたヌクレオシ
ド間リンカーによって置換される、実施形態８に記載の組成物。
【０８４１】
２６．第１および／または第２の鎖が、センス鎖によって仲介されるＲＮＡ干渉の量を
減少させる５’末端キャップを含むセンス鎖である、実施形態８に記載の組成物。
【０８４２】
２７．様々な実施形態において、センス鎖が、選択される５’末端キャップ：５’ホス
フェートまたは５’−ＯＨを含まないヌクレオチド；５’ホスフェートまたは５’−ＯＨ
を含まず、また２−ＯＭｅまたは２’−ＭＯＥ修飾を含むヌクレオチド；５’−デオキシ
−２’−Ｏ−メチル修飾；５’−ＯＭＥ−ｄＴ；ｄｄＴ；および５’−ＯＴｒ−ｄＴを含
む。
【０８４３】
２８．第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、少なくとも１
つの鎖の３’末端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、
３’末端キャップをさらに含み、３’末端キャップが、式ＩａまたはＩｂの化合物または
本明細書における任意の表からの化合物から選択され、Ｘが、第１または第２の鎖、また
は本明細書に開示される任意の３’末端キャップであり；ここで：（ａ）第１および／ま
たは第２の鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり、約３０ヌクレオチド長以下であり、１９ヌク
レオチド長、または１５〜４９ヌクレオチド長であり；（ｂ）任意選択的に、ＲＮＡｉ剤
が、１つまたは２つの平滑末端を有し、またはＲＮＡｉ剤が、少なくとも１つの５’末端
または３’末端に、オーバーハング、任意選択的に、１〜６つのヌクレオチドオーバーハ
ングを含み；（ｃ）任意選択的に、一方または両方の鎖がＲＮＡであり、または任意選択
的に、ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つのヌクレオチドが修飾され、任意選択的に、前記少な
くとも１つの修飾ヌクレオチドが、２’アルコキシリボヌクレオチド、２’アルコキシア
ルコキシリボヌクレオチド、または２’−フルオロリボヌクレオチドの中から選択され、
任意選択的に、前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチドが、２’−ＯＭｅ、２’−ＭＯＥ
および２’−Ｈから選択され；任意選択的に、第１および／または第２の鎖の３’末端に
おける最初の２つの塩基対合ヌクレオチドが修飾され、任意選択的に、第１および／また
は第２の鎖の３’末端における最初の２つの塩基対合ヌクレオチドが２’−ＭＯＥであり
；任意選択的に、１つまたは複数のヌクレオチドが、修飾され、またはＤＮＡであり、ま
たはペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、モルホリノヌクレオチド、トレ
オース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、アラビノース核酸（ＡＮＡ）、２’
−フルオロアラビノース核酸（ＦＡＮＡ）、シクロヘキセン核酸（ＣｅＮＡ）、無水ヘキ
シトール核酸（ＨＮＡ）、および／またはアンロックド核酸（ＵＮＡ）によって置換され
；（ｄ）少なくとも１つのヌクレオチドが、修飾されたヌクレオシド間リンカーを含み、
ここで、修飾されたヌクレオシド間リンカーが、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエ
ート、ホスホロアミデート、ボラノホスホノエート、アミドリンカー、および式（Ｉ）の
化合物から選択され；任意選択的に、第１および／または第２の鎖の３’末端ホスフェー
トが、修飾されたヌクレオシド間リンカーによって置換され；および／または（ｅ）任意
選択的に、第１または第２の鎖が、センス鎖によって仲介されるＲＮＡ干渉の量を減少さ
せる５’末端キャップを含むセンス鎖であり、任意選択的に、５’末端キャップが、５’
ホスフェートまたは５’−ＯＨを含まないヌクレオチドから選択され；５’ホスフェート
または５’−ＯＨを含まず、また２−ＯＭｅまたは２’−ＭＯＥ修飾を含むヌクレオチド
；５’−デオキシ−２’−Ｏ−メチル修飾；５’−ＯＭＥ−ｄＴ；ｄｄＴ；および５’−
ＯＴｒ−ｄＴである組成物。
【０８４４】
２９．第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、少なくとも１
つの鎖の３’末端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、
５’から３’の順に：スペーサ、第２のホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リ
ンカー、および３’末端キャップをさらに含み、３’末端キャップが、本明細書に開示さ
れる任意の３’末端キャップであり、または式ＩａまたはＩｂの化合物または本明細書に
おける任意の表からの化合物から選択され、Ｘが、ホスフェートまたは修飾されたヌクレ
オシド間リンカーで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、第２のホスフェートまたは
修飾されたヌクレオシド間リンカーをさらに含む第１または第２の鎖であり；ここで：（
ａ）前記第１および／または第２の鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり、約３０ヌクレオチド
長以下であり、１９ヌクレオチド長、または１５〜４９ヌクレオチド長であり；（ｂ）任
意選択的に、ＲＮＡｉ剤が、１つまたは２つの平滑末端を有し、またはＲＮＡｉ剤が、少
なくとも１つの５’末端または３’末端に、オーバーハング、任意選択的に、１〜６つの
ヌクレオチドオーバーハングを含み；（ｃ）任意選択的に、一方または両方の鎖がＲＮＡ
であり、または任意選択的に、ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つのヌクレオチドが修飾され、
任意選択的に、前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチドが、２’アルコキシリボヌクレオ
チド、２’アルコキシアルコキシリボヌクレオチド、または２’−フルオロリボヌクレオ
チドの中から選択され、任意選択的に、前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチドが、２’
−ＯＭｅ、２’−ＭＯＥおよび２’−Ｈから選択され；任意選択的に、第１および／また
は第２の鎖の３’末端における最初の２つの塩基対合ヌクレオチドが修飾され、任意選択
的に、第１および／または第２の鎖の３’末端における最初の２つの塩基対合ヌクレオチ
ドが２’−ＭＯＥであり；任意選択的に、１つまたは複数のヌクレオチドが、修飾され、
またはＤＮＡであり、またはペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、モルホ
リノヌクレオチド、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、アラビノー
ス核酸（ＡＮＡ）、２’−フルオロアラビノース核酸（ＦＡＮＡ）、シクロヘキセン核酸
（ＣｅＮＡ）、無水ヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、および／またはアンロックド核酸（Ｕ
ＮＡ）によって置換され；（ｄ）スペーサが、リビトール、２’−デオキシ−リビトール
、ジリビトール、２’−メトキシエトキシ−リビトール（２’−ＭＯＥを有するリビトー
ル）、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、または４−メトキシブタン−１，３−ジオールであり；
（ｅ）少なくとも１つのヌクレオチドが、修飾されたヌクレオシド間リンカーを含み、こ
こで、修飾されたヌクレオシド間リンカーが、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエー
ト、ホスホロアミデート、ボラノホスホノエート、アミドリンカー、および式（Ｉ）の化
合物から選択され；任意選択的に、第１および／または第２の鎖の３’末端ホスフェート
が、修飾されたヌクレオシド間リンカーによって置換され；および／または（ｆ）任意選
択的に、第１または第２の鎖が、センス鎖によって仲介されるＲＮＡ干渉の量を減少させ
る５’末端キャップを含むセンス鎖であり、任意選択的に、５’末端キャップが、５’ホ
スフェートまたは５’−ＯＨを含まないヌクレオチドから選択され；５’ホスフェートま
たは５’−ＯＨを含まず、また２−ＯＭｅまたは２’−ＭＯＥ修飾を含むヌクレオチド；
５’−デオキシ−２’−Ｏ−メチル修飾；５’−ＯＭＥ−ｄＴ；ｄｄＴ；および５’−Ｏ
Ｔｒ−ｄＴである組成物。
【０８４５】
３０．実施形態２５に記載のＲＮＡｉ剤と、薬学的に許容できる担体とを含む組成物。
【０８４６】
３１．薬剤として使用するための、実施形態２５に記載のＲＮＡｉ剤と、薬学的に許容
できる担体とを含む組成物。
【０８４７】
３２．細胞内の標的遺伝子のレベルおよび／または活性を阻害するかまたは低下させる
ための方法であって、実施形態２５に記載の１つまたは複数のＲＮＡｉ剤を細胞内に導入
する工程を含む方法。
【０８４８】
特に定義されない限り、本明細書において使用される技術用語および科学用語は、本開
示が属する技術分野に精通している専門家によって通常理解されるのと同じ意味を有する
。
【０８４９】
特に示されない限り、具体的に詳細に記載されていない全ての方法、工程、技術および
操作は、当業者に明らかであるため、それ自体公知の方法で行うことができ、そのように
行われた。例えば、標準的なハンドブックおよび本明細書において言及される一般的な背
景技術およびその中に引用されるさらなる参照文献も参照される。特に示されない限り、
本明細書に引用される参照文献のそれぞれは、全体が参照により援用される。
【０８５０】
特許請求の範囲は非限定的であり、以下に提供される。
【０８５１】
特定の実施形態および特許請求の範囲が、本明細書に詳細に開示されているが、これは
、あくまでも説明の目的のために例としてなされており、または添付の特許請求の範囲、
または任意の対応する将来の出願の特許請求の範囲の主題の範囲に対して限定されること
は意図されていない。特に、様々な置換、改変、および変更が、特許請求の範囲によって
規定される本開示の趣旨および範囲から逸脱せずに本開示に対してなされ得ることが、本
発明者らによって考えられる。核酸出発材料、対象のクローン、またはライブラリー型の
選択は、本明細書に記載される実施形態の知識を有する当業者にとって日常的なことと考
えられる。他の実施形態、利点、および変更は、以下の特許請求の範囲内であると考えら
れる。当業者は、単なる日常的な実験を用いて、本明細書に記載される本開示の特定の実
施形態の多くの均等物を認識し、またはそれを確認することができる。このような均等物
は、以下の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。後に出願された対応す
る出願の特許請求の範囲の補正は、様々な国の特許法による制限によることがあり、特許
請求の範囲の主題を放棄するものと解釈されるものではない。
【図１】
2019135236.tif 000238
【図２】
2019135236.tif 000239
【図３】
2019135236.tif 000240
【図４】
2019135236.tif 000241
【図５−１】
2019135236.tif 000242
【図５−２】
2019135236.tif 000243
【図６−１】
2019135236.tif 000244
【図６−２】
2019135236.tif 000245
【図７】
2019135236.tif 000246
【図８−１】
2019135236.tif 000247
【図８−２】
2019135236.tif 000248
【図９−１】
2019135236.tif 000249
【図９−２】
2019135236.tif 000250
【図１０】
2019135236.tif 000251
【図１１】
2019135236.tif 000252
【図１２】
2019135236.tif 000253
【図１３】
2019135236.tif 000254
【図１４】
2019135236.tif 000255
【図１５−１】
2019135236.tif 000256
【図１５−２】
2019135236.tif 000257
【図１５−３】
2019135236.tif 000258
【図１６−１】
2019135236.tif 000259
【図１６−２】
2019135236.tif 000260
【図１７−１】
2019135236.tif 000261
【図１７−２】
2019135236.tif 000262
【図１７−３】
2019135236.tif 000263
【図１７−４】
2019135236.tif 000264
【図１７−５】
2019135236.tif 000265
【図１７−６】
2019135236.tif 000266
【図１７−７】
2019135236.tif 000267
【図１７−８】
2019135236.tif 000268
【図１８−１】
2019135236.tif 000269
【図１８−２】
2019135236.tif 000270
【図１８−３】
2019135236.tif 000271
【図１９】
2019135236.tif 000272
【図２０−１】
2019135236.tif 000273
【図２０−２】
2019135236.tif 000274
【図２０−３】
2019135236.tif 000275
【図２０−４】
2019135236.tif 000276
【図２０−５】
2019135236.tif 000277
【図２１】
2019135236.tif 000278
【図２２】
2019135236.tif 000279
【図２３−１】
2019135236.tif 000280
【図２３−２】
2019135236.tif 000281
【図２３−３】
2019135236.tif 000282
【図２４−１】
2019135236.tif 000283
【図２４−２】
2019135236.tif 000284
【配列表】
2019135236000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成31年4月19日(2019.4.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉａ：
【化１】
2019135236.tif 000285
（式中：
Ｘが、Ｈ；ＯＨ（ここで、前記ヒドロキシル基が、任意選択的に、スクシネートとして
官能化されるかまたは固体担体に結合され得る）；ＯＤＭＴ；カルボン酸；ＲＮＡｉ剤の
鎖の３’末端；またはＲＮＡｉ剤の鎖を含む分子の３’末端であり、ここで、前記鎖の３
’末端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３
’の順に：スペーサ、および第２のホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカ
ーをさらに含み；
Ｙが、ＣＨまたはＮであり；
ｍが、０または１であり；
ｐが、１、２または３であり；
Ｒ３が、水素、２−（ヒドロキシ−メチル）−ベンジル、３−（ヒドロキシ−メチル）
−ベンジル、スクシネート、または固体担体であり；
ここで、（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｒ３部分が、３位または４位でフェニル環に結合され；
Ｒ４が水素であり；
Ｒ５が水素であり；または
Ｒ４およびＲ５が、Ｒ４およびＲ５が結合されるフェニル環と一緒に、６Ｈ−ベンゾ［
ｃ］クロメンを形成する）
の化合物。
【請求項２】
以下のもの：
【化２】
2019135236.tif 000286
【化３】
2019135236.tif 000287
から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
以下のもの：
【化９】
2019135236.tif 000288
（式中：
Ｘが、Ｈ；ＯＨ（ここで、前記ヒドロキシル基が、任意選択的に、スクシネートとして
官能化されるかまたは固体担体に結合され得る）；ＯＤＭＴ；カルボン酸；ＲＮＡｉ剤の
鎖の３’末端；またはＲＮＡｉ剤の鎖を含む分子の３’末端であり、ここで、前記鎖の３
’末端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３
’の順に：スペーサ、および第２のホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカ
ーをさらに含む）
から選択される化合物。
【請求項４】
ＲＮＡｉ剤の鎖の３’末端をキャッピングするための方法であって、
前記ＲＮＡｉ剤を、以下のもの：
【化１０】
2019135236.tif 000289
【化１６】
2019135236.tif 000290
（式中：
Ｘが、Ｈ、ＯＨ、ＯＤＭＴおよびカルボキシレートから選択され、前記ヒドロキシル基
が、任意選択的に、スクシネートとして官能化されるかまたは固体担体に結合され得る）
から選択される化合物と反応させる工程と；
固相合成法を用いて、ＸをＲＮＡｉ剤の鎖で置換する工程；または
固体担体上にＲＮＡｉ剤鎖を構築する工程と；
前記鎖を前記化合物と反応させる工程と、
前記固体担体から前記ＲＮＡｉ剤鎖を切断する工程と
を含む方法。
【請求項５】
Ｘが、Ｈ、ＯＨ、ＯＤＭＴまたはカルボキシレートであり、前記ヒドロキシル基が、任
意選択的に、スクシネートとして官能化されるかまたは固体担体に結合され得；Ｒ３が、
水素、２−（ヒドロキシ−メチル）−ベンジル、３−（ヒドロキシ−メチル）−ベンジル
、スクシネート、または固体担体である、式Ｉａの化合物。
【化１】
2019135236.tif 000291
【請求項６】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、少なくとも１つの鎖の３’末端が、３’末端キャップを含み、前記３’末端キャップが、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物であり、Ｘが、前記第１または第２の鎖である、組成物。
【請求項７】
前記ＲＮＡｉ剤の第１および／または第２の鎖が、約４９ヌクレオチド長以下である、
請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記ＲＮＡｉ剤の第１および／または第２の鎖が、約３０ヌクレオチド長以下である、
請求項６に記載の組成物。
【請求項９】
前記第１および／または第２の鎖が、１８または１９ヌクレオチド長である、請求項６
に記載の組成物。
【請求項１０】
前記第１の鎖が、アンチセンス鎖であり、１８または１９ヌクレオチド長である、請求
項６に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ＲＮＡｉ剤が、１つまたは２つの平滑末端を有する、請求項６に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ＲＮＡｉ剤が、少なくとも１つの５’末端または３’末端にオーバーハングを含む
、請求項６に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ＲＮＡｉ剤が、少なくとも１つの５’末端または３’末端に１〜６つのヌクレオチ
ドオーバーハングを含む、請求項６に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ＲＮＡｉ剤が、スペーサを含む、請求項６に記載の組成物。
【請求項１５】
前記スペーサがリビトールである、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記スペーサが、リビトール、２’−デオキシ−リビトール、ジリビトール、２’−メ
トキシエトキシ−リビトール（２’−ＭＯＥを有するリビトール）、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、
Ｃ６、または４−メトキシブタン−１，３−ジオールである、請求項１４に記載の組成物
。
【請求項１７】
前記ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つのヌクレオチドが修飾される、請求項６に記載の組成
物。
【請求項１８】
前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチドが、２’アルコキシリボヌクレオチド、２’ア
ルコキシアルコキシリボヌクレオチド、または２’−フルオロリボヌクレオチドの中から
選択される、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチドが、２’−ＯＭｅ、２’−ＭＯＥおよび２’−
Ｈから選択される、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２０】
１つまたは複数のヌクレオチドが、修飾され、またはＤＮＡであり、またはペプチド核
酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、モルホリノヌクレオチド、トレオース核酸（Ｔ
ＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、アラビノース核酸（ＡＮＡ）、２’−フルオロアラ
ビノース核酸（ＦＡＮＡ）、シクロヘキセン核酸（ＣｅＮＡ）、無水ヘキシトール核酸（
ＨＮＡ）、および／またはアンロックド核酸（ＵＮＡ）によって置換され；および／また
は少なくとも１つのヌクレオチドが、修飾されたヌクレオシド間リンカー（例えば、ここ
で、ヌクレオチドの少なくとも１つのホスフェートが、修飾されたヌクレオシド間リンカ
ーによって置換される）を含み、ここで、前記修飾されたヌクレオシド間リンカーが、ホ
スホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロアミデート、ボラノホスホノエート
、アミドリンカー、および式（Ｉ）
【化１５】
2019135236.tif 000292
（式中、Ｒ３が、Ｏ−、Ｓ−、ＮＨ２、ＢＨ３、ＣＨ３、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ６〜１０
アリール、Ｃ１〜６アルコキシおよびＣ６〜１０アリール−オキシから選択され、ここで
、Ｃ１〜６アルキルおよびＣ６〜１０アリールが、非置換であるか、または任意選択的に
、ハロ、ヒドロキシルおよびＮＨ２から独立して選択される１〜３つの基で独立して置換
され；Ｒ４が、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、またはＣＨ２から選択される）
の化合物から選択される、請求項６に記載の組成物。
【請求項２１】
前記第１および／または第２の鎖の３’末端における最初の２つの塩基対合ヌクレオチ
ドが修飾される、請求項６に記載の組成物。
【請求項２２】
前記第１および／または第２の鎖の３’末端における最初の２つの塩基対合ヌクレオチ
ドが２’−ＭＯＥである、請求項６に記載の組成物。
【請求項２３】
前記第１および／または第２の鎖の３’末端ホスフェートが、修飾されたヌクレオシド
間リンカーによって置換される、請求項６に記載の組成物。
【請求項２４】
第１および／または前記第２の鎖が、センス鎖によって仲介されるＲＮＡ干渉の量を減
少させる５’末端キャップを含むセンス鎖である、請求項６に記載の組成物。
【請求項２５】
前記５’末端キャップが、５’ホスフェートまたは５’−ＯＨを含まないヌクレオチド；５’ホスフェートまたは５’−ＯＨを含まず、また２−ＯＭｅまたは２’−ＭＯＥ修飾を含むヌクレオチド；５’−デオキシ−２’−Ｏ−メチル修飾；５’−ＯＭＥ−ｄＴ；ｄｄＴ；および５’−ＯＴｒ−ｄＴからなる群より選択される、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、少なくとも１つの鎖の３’末端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、３’末端キャップをさらに含み、前記３’末端キャップが、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物から選択され、Ｘが、前記第１または第２の鎖であり；ここで：
（ａ）前記第１および／または第２の鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり、約３０ヌクレオチド長以下であり、１９ヌクレオチド長、または１５〜４９ヌクレオチド長であり；
（ｂ）任意選択的に、前記ＲＮＡｉ剤が、１つまたは２つの平滑末端を有し、または前記ＲＮＡｉ剤が、少なくとも１つの５’末端または３’末端に、オーバーハング、任意選択的に、１〜６つのヌクレオチドオーバーハングを含み；
（ｃ）任意選択的に、一方または両方の鎖がＲＮＡであり、または任意選択的に、前記ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つのヌクレオチドが修飾され、任意選択的に、前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチドが、２’アルコキシリボヌクレオチド、２’アルコキシアルコキシリボヌクレオチド、または２’−フルオロリボヌクレオチドの中から選択され、任意選択的に、前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチドが、２’−ＯＭｅ、２’−ＭＯＥおよび２’−Ｈから選択され；任意選択的に、前記第１および／または第２の鎖の３’末端における最初の２つの塩基対合ヌクレオチドが修飾され、任意選択的に、前記第１および／または第２の鎖の３’末端における最初の２つの塩基対合ヌクレオチドが２’−ＭＯＥであり；任意選択的に、１つまたは複数のヌクレオチドが、修飾され、またはＤＮＡであり、またはペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、モルホリノヌクレオチド、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、アラビノース核酸（ＡＮＡ）、２’−フルオロアラビノース核酸（ＦＡＮＡ）、シクロヘキセン核酸（ＣｅＮＡ）、無水ヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、および／またはアンロックド核酸（ＵＮＡ）によって置換され；
（ｄ）少なくとも１つのヌクレオチドが、修飾されたヌクレオシド間リンカーを含み、ここで、前記修飾されたヌクレオシド間リンカーが、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロアミデート、ボラノホスホノエート、アミドリンカー、および式（Ｉ）
【化１５】
2019135236.tif 000293
（式中、Ｒ３が、Ｏ−、Ｓ−、ＮＨ２、ＢＨ３、ＣＨ３、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ６〜１０
アリール、Ｃ１〜６アルコキシおよびＣ６〜１０アリール−オキシから選択され、ここで
、Ｃ１〜６アルキルおよびＣ６〜１０アリールが、非置換であるか、または任意選択的に
、ハロ、ヒドロキシルおよびＮＨ２から独立して選択される１〜３つの基で独立して置換
され；Ｒ４が、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、またはＣＨ２から選択される）
の化合物から選択され；任意選択的に、前記第１および／または第２の鎖の３’末端ホスフェートが、修飾されたヌクレオシド間リンカーによって置換され；および／または
（ｅ）任意選択的に、前記第１または第２の鎖が、センス鎖によって仲介されるＲＮＡ干渉の量を減少させる５’末端キャップを含むセンス鎖であり、任意選択的に、前記５’末端キャップが、５’ホスフェートまたは５’−ＯＨを含まないヌクレオチド；５’ホスフェートまたは５’−ＯＨを含まず、また２−ＯＭｅまたは２’−ＭＯＥ修飾を含むヌクレオチド；５’−デオキシ−２’−Ｏ−メチル修飾；５’−ＯＭＥ−ｄＴ；ｄｄＴ；および５’−ＯＴｒ−ｄＴから選択される、組成物。
【請求項２７】
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、少なくとも１つの鎖の３’末端が、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、第２のホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカー、および３’末端キャップをさらに含み、前記３’末端キャップが、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物から選択され、Ｘが、ホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーで終端し、５’から３’の順に：スペーサ、第２のホスフェートまたは修飾されたヌクレオシド間リンカーをさらに含む前記第１または第２の鎖であり；ここで：
（ａ）前記第１および／または第２の鎖が、４９−ｍｅｒ以下であり、約３０ヌクレオチド長以下であり、１９ヌクレオチド長、または１５〜４９ヌクレオチド長であり；
（ｂ）任意選択的に、前記ＲＮＡｉ剤が、１つまたは２つの平滑末端を有し、または前記ＲＮＡｉ剤が、少なくとも１つの５’末端または３’末端に、オーバーハング、任意選択的に、１〜６つのヌクレオチドオーバーハングを含み；
（ｃ）任意選択的に、一方または両方の鎖がＲＮＡであり、または任意選択的に、前記ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つのヌクレオチドが修飾され、任意選択的に、前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチドが、２’アルコキシリボヌクレオチド、２’アルコキシアルコキシリボヌクレオチド、または２’−フルオロリボヌクレオチドの中から選択され、任意選択的に、前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチドが、２’−ＯＭｅ、２’−ＭＯＥおよび２’−Ｈから選択され；任意選択的に、前記第１および／または第２の鎖の３’末端における最初の２つの塩基対合ヌクレオチドが修飾され、任意選択的に、前記第１および／または第２の鎖の３’末端における最初の２つの塩基対合ヌクレオチドが２’−ＭＯＥであり；任意選択的に、１つまたは複数のヌクレオチドが、修飾され、またはＤＮＡであり、またはペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、モルホリノヌクレオチド、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、アラビノース核酸（ＡＮＡ）、２’−フルオロアラビノース核酸（ＦＡＮＡ）、シクロヘキセン核酸（ＣｅＮＡ）、無水ヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、および／またはアンロックド核酸（ＵＮＡ）によって置換され；
（ｄ）前記スペーサが、リビトール、２’−デオキシ−リビトール、ジリビトール、２’−メトキシエトキシ−リビトール（２’−ＭＯＥを有するリビトール）、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、または４−メトキシブタン−１，３−ジオールであり；
（ｅ）少なくとも１つのヌクレオチドが、修飾されたヌクレオシド間リンカーを含み、ここで、前記修飾されたヌクレオシド間リンカーが、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロアミデート、ボラノホスホノエート、アミドリンカー、および式（Ｉ）
【化１５】
2019135236.tif 000294
（式中、Ｒ３が、Ｏ−、Ｓ−、ＮＨ２、ＢＨ３、ＣＨ３、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ６〜１０
アリール、Ｃ１〜６アルコキシおよびＣ６〜１０アリール−オキシから選択され、ここで
、Ｃ１〜６アルキルおよびＣ６〜１０アリールが、非置換であるか、または任意選択的に
、ハロ、ヒドロキシルおよびＮＨ２から独立して選択される１〜３つの基で独立して置換
され；Ｒ４が、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、またはＣＨ２から選択される）
の化合物から選択され；任意選択的に、前記第１および／または第２の鎖の３’末端ホスフェートが、修飾されたヌクレオシド間リンカーによって置換され；および／または
（ｆ）任意選択的に、前記第１または第２の鎖が、センス鎖によって仲介されるＲＮＡ干渉の量を減少させる５’末端キャップを含むセンス鎖であり、任意選択的に、前記５’末端キャップが、５’ホスフェートまたは５’−ＯＨを含まないヌクレオチド；５’ホスフェートまたは５’−ＯＨを含まず、また２−ＯＭｅまたは２’−ＭＯＥ修飾を含むヌクレオチド；５’−デオキシ−２’−Ｏ−メチル修飾；５’−ＯＭＥ−ｄＴ；ｄｄＴ；および５’−ＯＴｒ−ｄＴから選択される、組成物。
【請求項２８】
請求項６に記載のＲＮＡｉ剤と、薬学的に許容できる担体とを含む組成物。
【請求項２９】
薬剤として使用するための、請求項６に記載のＲＮＡｉ剤と、薬学的に許容できる担体とを含む組成物。
【請求項３０】
細胞内の標的遺伝子のレベルおよび／または活性を阻害するかまたは低下させるための方法であって、請求項６に記載の１つまたは複数のＲＮＡｉ剤を前記細胞内に導入する工程を含む方法。
【外国語明細書】
2019135236000001.pdf