(57)【要約】      （修正有）【課題】皮膚充填剤組成物に関し、より具体的には、皮膚における細線の治療に有効である注入可能な皮膚充填剤組成物の提供。【解決手段】皮膚充填剤組成物であって、架橋成分と架橋結合されたヒアルロン酸成分と、前記架橋成分以外の添加剤と、を含み、前記組成物は、実質的に光透過性であり、前記組成物は、患者の皮膚領域中に投与されるとき、前記添加剤を含まないことを除いて実質的に同一である組成物と比べて、低減されたチンダル現象を示す、組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚充填剤組成物であって、
架橋成分と架橋結合されたヒアルロン酸成分と、
前記架橋成分以外の添加剤と、を含み、
前記組成物は、実質的に光透過性であり、
前記組成物は、患者の皮膚領域中に投与されるとき、前記添加剤を含まないことを除いて実質的に同一である組成物と比べて、低減されたチンダル現象を示す、組成物。
【請求項２】
前記添加剤は、ビタミンＣ誘導体である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記添加剤は、ＡＡ２Ｇである、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記添加剤は、Ｖｉｔａｇｅｎである、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記ヒアルロン酸成分は、前記添加剤に化学的に結合される、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記ヒアルロン酸成分は、約３モル％〜約４０モル％である結合度で、前記添加剤に化学的に結合される、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記ヒアルロン酸成分は、約３モル％〜約１０モル％である結合度で、前記添加剤に化学的に結合される、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記架橋成分は、ＢＤＤＥである、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
麻酔剤をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
リドカインをさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
約４０Ｐａ〜約１００ＰａのＧ’値を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
約１００Ｐａ以下のＧ’値を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
約４０Ｐａ以上のＧ’値を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
患者の皮膚における細線を治療する方法であって、前記方法は、
患者の皮膚中に、ヒアルロン酸成分と、前記ヒアルロン酸を架橋結合する架橋成分と、前記架橋成分以外の添加剤との混合物を含む、組成物を導入することを含み、
前記組成物は、実質的に光透過性であり、
前記皮膚充填剤組成物は、前記添加剤を含まないことを除いて実質的に同一である組成物と比べて、低減されたチンダル現象を示す、方法。
【請求項１５】
前記添加剤は、ビタミンＣ誘導体である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記添加剤は、ＡＡ２Ｇである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記添加剤は、Ｖｉｔａｇｅｎである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
前記ヒアルロン酸成分は、前記添加剤に化学的に結合される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
前記ヒアルロン酸成分は、約３モル％〜約１０モル％である結合度で、前記添加剤に化学的に結合される、請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
前記ヒアルロン酸成分は、約３モル％〜約４０モル％である結合度で、前記添加剤に化学的に結合される、請求項１４に記載の方法。
【請求項２１】
顔面の審美的外観を改善する方法であって、前記方法は、
患者の皮膚領域に、チンダル現象を何ら示さないか、または有意でないチンダル現象を示す、実質的に光透過性の皮膚充填剤皮膚充填剤組成物を投与するステップを含み、前記組成物は、
ヒアルロン酸を提供するステップと、
架橋剤をビタミンＣ誘導体と反応させるステップと、
前記反応させられた架橋剤およびビタミンＣ誘導体を、前記ヒアルロン酸に添加して、共有結合されたビタミンＣを含む架橋結合されたヒアルロン酸組成物を形成するステップと、
前記架橋結合されたヒアルロン酸組成物を均一化および中和して、注入可能な皮膚充填剤組成物を得るステップと、によって作製される、方法。
【請求項２２】
前記添加剤は、ビタミンＣ誘導体である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記添加剤は、ＡＡ２Ｇである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記添加剤は、Ｖｉｔａｇｅｎである、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２５】
前記ヒアルロン酸成分は、前記添加剤に化学的に結合される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
前記ヒアルロン酸成分は、約３モル％〜約４０モル％である結合度で、前記添加剤に化学的に結合される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２７】
前記ヒアルロン酸成分は、約３モル％〜約１０モル％である結合度で、前記添加剤に化学的に結合される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２８】
患者の薄い皮膚領域における細線の出現を低減する方法であって、前記方法は、
前記患者に、約１ｍｍを超えない深さで、皮膚充填剤組成物であって、ビタミンＣまたはビタミンＣ誘導体を含む、実質的に光透過性のヒアルロン酸ベースの皮膚充填剤組成物を投与することを含む、方法。
【請求項２９】
前記組成物は、約０．８ｍｍを超えない深さで注入される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記組成物は、約０．６ｍｍを超えない深さで注入される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記組成物は、約０．４ｍｍを超えない深さで注入される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
皮膚充填剤組成物であって、
架橋成分と架橋結合されたヒアルロン酸成分と、
少なくとも約３モル％の結合度で、前記ヒアルロン酸成分に共有結合されたビタミンＣまたはビタミンＣ誘導体と、を含み、
前記組成物が、実質的に光透過性であり、約４０Ｐａ〜約１００ＰａのＧ’値を有する、組成物。
【請求項３３】
約１８ｍｇ／ｇ〜約３０ｍｇ／ｇのヒアルロン酸濃度を有する、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
約１２ｍｇ／ｇ〜約３０ｍｇ／ｇのヒアルロン酸濃度を有する、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３５】
前記結合度は、約１０モル％である、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３６】
前記ヒアルロン酸は、少なくとも９０％が低分子量ＨＡである、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３７】
前記ヒアルロン酸成分は、実質的に完全に低分子量ＨＡである、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３８】
顔面における細線の出現を低減するための注入可能な組成物であって、前記組成物は、
１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）架橋結合低分子量ヒアルロン酸（ＨＡ）であって、約３００Ｋダルトン〜約９００Ｋダルトンの平均分子量を有する、ＨＡと、
前記ヒアルロン酸に共有結合されたビタミンＣ誘導体であって、結合度が、約１０モル％である、ビタミンＣ誘導体と、を含み、
前記組成物は、約６０Ｐａ〜約８０ＰａのＧ’値を有する、組成物。
【請求項３９】
前記ＨＡは、約３００Ｋダルトン〜約５００Ｋダルトンの平均分子量を有する、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
前記組成物は、約８０ＰａのＧ’値を有する、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４１】
光透過性である、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４２】
約２５ｍｇ／ｇのＨＡ濃度を有する、請求項３８に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１１年９月１４日に出願された米国仮特許出願第６１／５３４，７８０号に対する優先権およびその便益を主張し、また２０１１年６月３日に出願された米国仮特許出願第６１／４９３，３０９号に対する優先権およびその便益を主張する２０１２年６月１日に出願された米国特許出願第１３／４８６，７５４号の一部継続である、２０１２年８月２３日に出願された米国特許出願第１３／５９３，３１３号の一部継続であり、これらの出願の各々の開示全体は、この具体的な参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、一般に、皮膚充填剤組成物に関し、より具体的には、皮膚における細線の治療に有効である注入可能な皮膚充填剤組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
皮膚の老化は進行性の現象であり、経時的に生じ、アルコール消費、喫煙、および日光露出等の生活要因の影響を受け得る。顔面皮膚の老化は、萎縮、たるみ、および肥厚を特徴とし得る。萎縮は、皮膚組織の厚みの激減に相当する。皮下組織のたるみは、余分な皮膚および眼瞼下垂につながり、頬および瞼の垂れ下がった外観につながる。肥厚は、顔面下部および首の膨張による過剰な重量の増加を指す。これらの変化は、典型的には、乾燥、弾力性の喪失、およびザラザラした質感に関連する。
【０００４】
ヒアルロナンとしても知られるヒアルロン酸（ＨＡ）は、結合組織、上皮組織、および神経組織においてヒトの体全体に広く分布される非硫酸化グリコサミノグリカンである。ヒアルロン酸（Ｈｙａｌｕｒｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）は、皮膚の様々な層に豊富であり、そこで、それは、例えば、良好な水和作用を確保し、細胞外マトリックスの組織化を支援し、充填剤物質として働き、かつ組織修復機構に関与するといった複数の機能を有する。しかしながら、年齢と共に、皮膚内に存在するヒアルロン酸、コラーゲン、エラスチン、および他のマトリックス重合体の量は減少する。例として、紫外線（たとえば太陽からの）への繰り返しの露出は、皮膚細胞のヒアルロナン産生の減少、ならびにその分解速度の増加の両方を引き起こす。この物質の喪失は、例えば、しわ、くぼみ、水分の喪失、および老化の出現に寄与する他の望ましくない状態等の様々な皮膚状態をもたらす。
【０００５】
注入可能な皮膚充填剤は、老化する皮膚を治療することにおいて成功裏に使用されてきた。充填剤は、これらの皮膚状態を治療するために、失われた内因性マトリックス重合体を置換し得るか、または既存のマトリックス重合体の機能を強化／促進し得る。ヒアルロン酸は、ヒトの体全体で天然に見出される物質であるので、ヒアルロン酸ベースの皮膚充填剤は、次第に評判となってきている。これらの充填剤は、一般に、忍容性に優れ、非永続的で、多種多様の皮膚状態に対するかなりリスクの低い治療である。
【０００６】
チンダル現象は、ヒアルロン酸（ＨＡ）ベースの皮膚充填剤を投与された一部の患者において生じる有害事象である。チンダル現象は、皮膚充填剤が注入された皮膚部位における青色の変色の出現によって特徴付けられ、それは半透明な表皮から透けて見える可視的なヒアルロン酸を表す。臨床報告は、充填剤投与技法および皮膚特性がこの有害事象の徴候に影響を及ぼし得ることを示唆している。高い剛性および弾力性を有する充填剤は、その物質が中層および深層真皮領域に注入されるため、顔面変色の恐れなしに、鼻唇溝、頬、および顎等の顔面上の領域を修正するために成功裏に使用される。しかしながら、これらの充填物質を使用して、表層の、細線じわ、例えば、涙の通り道、眉間の線、目尻の線、笑い線、または額を修正するとき、または誤って真皮の上層領域において過度に表層に適用するとき、皮膚の青みがかった変色がしばしば観察される。チンダル現象の結果と考えられている、この現象は、適用部位の半永続的な変色を残し、時には、充填物質を分解するためのヒアルロニダーゼの投与後のみに消失する。結果的に、チンダル現象は、表層の細線じわに対して治療された患者においてより一般的である。ゲルが皮膚内に残る限り、典型的には数ヶ月間にわたる、チンダル現象の長期的な徴候は、患者の間での主要な懸念の原因である。
【０００７】
ＨＡベースの皮膚充填剤ゲルは、涙の通り道、額、目尻、眉間の線等の周辺の「細線」のしわを治療するために特異的に製剤化されてきた。市販されているＨＡ「細線」ゲルにはＪｕｖｅｄｅｒｍ  Ｒｅｆｉｎｅ（Ｇ’約６７Ｐａ；Ｇ”／Ｇ’約０．５９、ＨＡ濃度１８ｍｇ／ｍＬ）、Ｂｅｌｏｔｅｒｏ  Ｓｏｆｔ（Ｇ’約２８Ｐａ；Ｇ”／Ｇ’約１．１、ＨＡ濃度２０ｍｇ／ｍＬ）、Ｅｍｅｒｖｅｌ  Ｔｏｕｃｈ（Ｇ’約５６Ｐａ；Ｇ”／Ｇ’約０．６４、ＨＡ濃度２０ｍｇ／ｍＬ）、Ｓｔｙｌａｇｅ  Ｓ（Ｇ’約１９２  Ｐａ；Ｇ”／Ｇ’約０．２０、ＨＡ濃度１６ｍｇ／ｍＬ）、Ｔｅｏｓｙａｌ  Ｆｉｒｓｔ  Ｌｉｎｅｓ（Ｇ’  ５９Ｐａ；Ｇ”／Ｇ’約０．５３、ＨＡ濃度２０ｍｇ／ｍＬ）、Ｒｅｓｔｙｌａｎｅ  Ｔｏｕｃｈ（Ｇ’約４８９Ｐａ；Ｇ”／Ｇ’約０．２４、ＨＡ濃度１８ｍｇ／ｍＬ）が含まれる。これらのゲルは、例えば、少量の架橋剤によりＨＡ直鎖を軽く架橋結合することによって、および／またはこれらのゲルの最終ＨＡ濃度を低減することによって、低い弾性係数を有するように製剤化されるが、市販されている「細線」ゲルのほとんどは、一部の患者において、特に表層に、例えば、約１ｍｍ未満の深さで注入されるときとき、依然としてチンダル現象を示す。
【０００８】
コラーゲンベースのゲルは、表層のしわの治療において用いることができ、チンダル現象を引き起こさないように思われる。コラーゲンベースのゲルは、それらが皮膚内で比較的不十分な持続期間を有し、また個人において事前検査を必要とするため、あまり好まれない。Ｒａｄｉｅｓｓｅ（登録商標）（カルシウムヒドロキシアパタイト）は、主要な成分がヒアルロン酸でなく合成カルシウムヒドロキシアパタイトである、皮下の注入可能な埋没物である。ヒアルロン酸ベースの皮膚充填剤とは異なり、カルシウムヒドロキシアパタイトは、透明でなく、故にチンダル現象の合併症を回避する。しかしながら、過度に表層に配置されると、この充填剤は、皮膚の直下で白色の物質として見られ得る。さらに、ヒアルロン酸ベースの充填剤と比較して、Ｒａｄｉｅｓｓｅ（登録商標）は、注入のためにより大きい針を必要とし、典型的に、目の領域における使用には推奨されない。
【０００９】
表層に注入されるときであってもチンダル現象に起因する青みがかった変色を示さない、注入可能なヒアルロン酸ベースの皮膚充填を提供することが望ましいであろう。
【発明の概要】
【００１０】
本発明は、いかなる青みがかった皮膚の変色も生み出すことのない、または少なくとも有意なもしくは顕著な青みがかった変色のない、真皮上層内に投与され得る、ＨＡベースの皮膚充填剤を調製するための組成物および製剤方法を記載する。さらに、本発明の本明細書に記載される充填剤ゲルの多くは、現在市販されるゲルよりも体内で有意により長く持続することが見出されている。本発明のいくつかの態様において、「チンダル形成」することなく、ボリュームおよびふくよかさを追加し、細線じわの出現を低減する、皮膚の外観を向上させるのに有用な光透過性の皮膚充填剤が提供される。本組成物は、多くの従来の光透過性の皮膚充填剤に関連する否定的な青色の変色を引き起こすことなく、皮膚の細線に、薄い皮膚の領域で、かつかなり表層であっても、導入することができる。
【００１１】
より具体的には、本発明の一態様において、生体適合性重合体、例えば、架橋結合されたヒアルロン酸成分およびヒアルロン酸成分と組み合わされた添加剤を一般に含む、長期持続性の治療的皮膚充填剤組成物が提供される。
【００１２】
一実施形態において、重合体は、多糖類、例えば、ヒアルロン酸である。ヒアルロン酸は、架橋成分を含み、また非架橋成分をさらに含んでもよい。添加剤は、ビタミン、例えば、ビタミンＣ、例えば、ビタミンＣの安定化型、またはビタミンＣ誘導体、例えば、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド（ＡＡ２Ｇ）、リン酸アスコルビル３‐アミノプロピル（ａｓｃｏｂｙｌ  ３−ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）（Ｖｉｔａｇｅｎ）、またはリン酸アスコルビルナトリウム（ＡＡ２Ｐ）を含んでもよい。
【００１３】
本発明の一態様において、添加剤は、好適な反応プロセス、例えば、エーテル化、アミド化、またはエステル化によって重合体に共有結合されるビタミン誘導体である。
【００１４】
本発明の幅広い態様において、皮膚充填剤組成物が提供され、その組成物は、架橋成分と架橋結合されたヒアルロン酸成分、および架橋成分以外の添加剤を含む。ヒアルロン酸成分は、添加剤に化学的に結合されてもよい。さらに、組成物は、患者の皮膚領域中に投与されるとき、添加剤を含まないことを除いて実質的に同一である組成物と比べて、低減されたチンダル現象を示す。組成物は、他の添加剤、例えば、リドカイン等の麻酔剤をさらに含んでもよい。一実施形態において、添加剤は、ビタミンＣ誘導体、例えば、ＡＡ２Ｇである。別の実施形態において、添加剤は、Ｖｉｔａｇｅｎである。
【００１５】
一実施形態において、ヒアルロン酸成分は、約３モル％〜約４０モル、例えば、約３モル％〜約１０モル％である結合度で、添加剤に化学的に結合される。
【００１６】
組成物は、実質的に光透過性であってもよい。組成物は、一般に、約４０Ｐａ〜約１００Ｐａ、例えば、約１００Ｐａ以下〜例えば、約４０Ｐａ以上のＧ’値を有する。
【００１７】
本発明の別の態様において、患者の皮膚における細線を治療する方法が提供される。一実施形態において、本方法は、患者の皮膚中に、ヒアルロン酸成分と、ヒアルロン酸を架橋結合する架橋成分と、架橋成分以外の添加剤との混合物を含む、組成物を導入するステップを含み、その組成物は、実質的に光透過性であり、またその組成物は、添加剤を含まないことを除いて実質的に同一である組成物と比べて、低減されたチンダル現象を示す。
【００１８】
本発明の別の態様において、顔面の審美的外観を改善する方法が提供され、本方法は、一般に、患者の皮膚領域に、チンダル現象を何ら示さないか、または有意でないチンダル現象を示す、実質的に光透過性の皮膚充填剤組成物を投与するステップを含む。組成物は、ヒアルロン酸を提供するステップと、架橋剤をビタミンＣ誘導体と反応させるステップと、反応させられた架橋剤およびビタミンＣ誘導体をヒアルロン酸に添加して、共有結合されたビタミンＣを含む架橋結合されたヒアルロン酸組成物を形成するステップと、架橋結合されたヒアルロン酸組成物を均一化および中和して、注入可能な皮膚充填剤組成物を得るステップによって作製されてもよい。いくつかの実施形態において、ビタミンＣ誘導体は、ＡＡ２Ｇである。他の実施形態において、ビタミンＣ誘導体は、Ｖｉｔａｇｅｎである。
【００１９】
本発明のなおも別の態様において、患者の薄い皮膚領域における細線の出現を低減する方法が提供され、本方法は、一般に、患者に、約１ｍｍを超えない深さで、皮膚充填剤組成物であって、ビタミンＣまたはビタミンＣ誘導体を含む、実質的に光透過性のヒアルロン酸ベースの皮膚充填剤組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態において、組成物は、約０．８ｍｍ以下、約０．６ｍｍ以下、または約０．４ｍｍ以下の深さの深さで注入される。
【００２０】
本発明のなおも別の態様において、実質的に光透過性であり、一般に、架橋成分と架橋結合されたヒアルロン酸成分、およびヒアルロン酸成分に共有結合されたビタミンＣ誘導体を含む、皮膚充填剤組成物が提供される。例となる実施形態において、組成物および約４０Ｐａ〜約１００ＰａのＧ’値を有する。さらに、組成物は、約１８ｍｇ／ｇ〜約３０ｍｇ／ｇのヒアルロン酸濃度を有してもよい。これらの組成物は、皮膚における、例えば、非常に薄い皮膚、例えば、約１ｍｍ以下の厚さを有する皮膚においてさえも細線または表層の溝を治療する際に特に有用かつ有効であり得る。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、皮膚中に導入された後、少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月、または最大１年持続する。
【００２１】
本発明のこれらのおよび他の態様および利点は、次の図面および詳細な説明を参照してより容易に理解され、評価され得る。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】Ｌ‐アスコルビン酸２‐グルコシド（ＡＡ２Ｇ）の構造の表示である。
【図２】リン酸アスコルビル３‐アミノプロピル（Ｖｉｔａｇｅｎ）の構造の表示である。
【図３】リン酸アスコルビルナトリウム（ＡＡ２Ｐ）の構造の表示である。
【図４】１，４‐ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）の構造の表示である。
【図５】ペンタエリスリトールグリシダールエーテル（Ｓｔａｒ‐ＰＥＧエポキシド）の構造の表示である。
【図６】ペンタエリスリトール（３‐アミノプロピル）エーテル（Ｓｔａｒ‐ＰＥＧアミン）の構造の表示である。
【図７】本発明に従う様々な皮膚充填剤組成物についての結合度およびＧ’値を示す表である。
【図８】本発明に従うＨＡ‐ＡＡ２Ｇ（ＢＤＤＥ）皮膚充填剤組成物についての結合度、ＨＡ濃度、およびＧ’値を示す表である。
【図９】４つの異なるα−グルコシダーゼ濃度についての、分単位の時間の単位での、ＡＡ２ＧのＰＢＳ溶液からのＡｓＡの観察された放出パーセントのグラフ表示である。
【図１０】本発明に従う結合された皮膚充填剤からの遊離ＡｓＡの放出プロファイル（持続放出）（モル％でのＡＡ２Ｇ変換対反応時間）の表示を示す。
【図１１Ａ】本発明に従う様々な皮膚充填剤についての追加の放出データを示す。
【図１１Ｂ】本発明に従う様々な皮膚充填剤についての追加の放出データを示す。
【図１２】本発明のＨＡベースの皮膚充填剤ゲルおよび細線適用のためのいくつかの市販されているゲルの表層注入後の皮膚の画像を示す。
【図１３】本発明のＨＡベースの皮膚充填剤ゲルおよび細線適用のためのいくつかの市販されているゲルの可視的なチンダルスコアを示す。
【図１４】本発明のＨＡベースの皮膚充填剤ゲルおよび細線適用のためのいくつかの市販されているゲルの、皮膚から送達される青色光の％を示す。
【図１５】本発明のＨＡベースの皮膚充填剤ゲルおよび細線適用のためのいくつかの市販されているゲルの１週間の埋没後に残っているゲルの全体的な％を示す。
【図１６】埋没された本発明のＨＡベースの皮膚充填剤ゲルおよび細線適用のためのいくつかの市販されているゲルの０週目、１２週目、２４週目、および４０週目に残っているゲルの全体的な％を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明の一態様において、皮膚充填剤組成物が提供され、それらの組成物は、一般に、生体適合性重合体、例えば、架橋結合されたヒアルロン酸等の多糖類、およびその重合体に共有結合されたビタミンＣ誘導体を含む。組成物は、皮膚の新規コラーゲン新生ならびに他の治療的または美容的便益のためのビタミンＣの持続放出を提供する。例えば、皮内で、皮膚中に導入されたときに、組成物は、体内の内因性酵素と反応し、経時的に、生理活性ビタミンＣが酵素切断を介して生体内で生成される。ビタミンＣが数週間または数ヶ月の期間にわたり組成物から放出されるにつれて、その付帯する便益が体にとって利用可能になる。
【００２４】
重合体は、タンパク質、ペプチドおよびポリペプチド、ポリリジン、コラーゲン、プロコラーゲン、エラスチン、ならびにラミニンからなる重合体の群から選択され得る。
【００２５】
重合体は、ヒドロキシル、アミン、およびカルボキシル官能基を有する合成重合体、ポリ（ビニルアルコール）、ポリエチレングリコール、ポリビニルアミン、ポリアリルアミン、デアセチル化ポリアクリルアミド、ポリアクリル酸、およびポリメタクリル酸からなる重合体の群から選択され得る。重合体は、        樹状（ｄｅｎｔｒｉｃ）ポリオールおよび樹状ポリアミンを含む、樹状または分枝状重合体重合体からなる重合体の群から選択され得る。重合体は、ヒドロキシル、アミン、およびカルボキシル官能基を有する固体表面からなる重合体の群から選択され得る。
【００２６】
重合体は、例えば、デンプンならびにその誘導体、デキストランならびにその誘導体、セルロースならびにその誘導体、キチンおよびキトサンおよびアルギン酸塩ならびにその誘導体を含む多糖類の群から選択される多糖類であってもよい。
【００２７】
本発明の１つの例となる実施形態において、重合体はグリコサミノグリカンである。本明細書に開示されるヒドロゲル組成物は、２つ以上の異なるグリコサミノグリカン重合体をさらに含み得る。本明細書中で使用されるとき、用語「グリコサミノグリカン」は、「ＧＡＧ」および「ムコ多糖」と同義であり、反復二糖単位からなる長い非分岐多糖類を指す。復単位は、ヘキソサミン（窒素含有六炭糖）に結合されたヘキソース（六炭糖）またはヘキスロン酸およびその薬学的に許容される塩からなる。ＧＡＧファミリーのメンバーは、例えば、グルクロン酸、イズロン酸、ガラクトース、ガラクトサミン、グルコサミン等、それらが含有するヘキソサミン、ヘキソース、もしくはヘキスロン酸単位の型において異なり、グリコシド結合の幾何においてもまた異なり得る。いずれのグリコサミノグリカン重合体も、そのグリコサミノグリカン重合体が皮膚の状態を改善するという条件で、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物において有用である。グリコサミノグリカンの非限定的な例として、コンドロイチン硫酸塩、デルマタン硫酸塩、ケラタン硫酸塩、ヒアルロナンが挙げられる。グリコサミノグリカンの許容される塩の非限定的な例として、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、およびそれらの組み合わせが挙げられる。本明細書に開示されるヒドロゲル組成物および方法において有用なグリコサミノグリカンおよびそれらの結果として生じる重合体は、例えば、Ｐｉｒｏｎ  ａｎｄ  Ｔｈｏｌｉｎ，Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  Ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ，Ｈｙｄｒｏｇｅｌ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ，Ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ  Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ（ｓ）ａｎｄ  Ｈｙｄｒｏｇｅｌ（ｓ），ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ、米国特許公開第２００３／０１４８９９５号、Ｌｅｂｒｅｔｏｎ，Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｉｎｇ  ｏｆ  Ｌｏｗ  ａｎｄ  Ｈｉｇｈ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｗｅｉｇｈｔ  Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ  Ｍｏｎｏｐｈａｓｅ  Ｈｙｄｒｏｇｅｌｓ、Ｌｅｂｒｅｔｏｎ，Ｖｉｓｃｏｅｌａｓｔｉｃ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｓｏｄｉｕｍ  Ｈｙａｌｕｒｏｎａｔｅ  ａｎｄ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｍｅｔｈｙｌ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ，Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ、米国特許公開第２００８／００８９９１８号、Ｌｅｂｒｅｔｏｎ，Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  Ａｃｉｄ−Ｂａｓｅｄ  Ｇｅｌｓ  Ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  Ｌｉｄｏｃａｉｎｅ、米国特許公開第２０１０／００２８４３８号、およびＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｈｙｄｒｏｇｅｌｓ  ｔｈｕｓ  Ｏｂｔａｉｎｅｄ、米国特許公開第２００６／０１９４７５８号、およびＤｉ  Ｎａｐｏｌｉ，Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｉｎｔｒａｄｅｒｍａｌ  Ｓｏｆｔ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ａｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ、国際特許公開第２００４／０７３７５９号に記載され、それらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本明細書に開示されるヒドロゲル組成物および方法において有用なＧＡＧは、例えば、ヒアルロナンベースの皮膚充填剤、ＪＵＶＥＤＥＲＭ（登録商標）、ＪＵＶＥＤＥＲＭ（登録商標）３０、ＪＵＶＥＤＥＲＭ（登録商標）Ｕｌｔｒａ、ＪＵＶＥＤＥＲＭ（登録商標）Ｕｌｔｒａ  Ｐｌｕｓ、ＪＵＶＥＤＥＲＭ（登録商標）Ｕｌｔｒａ  ＸＣ、およびＪＵＶＥＤＥＲＭ（登録商標）Ｕｌｔｒａ  Ｐｌｕｓ  ＸＣ（Ａｌｌｅｒｇａｎ  Ｉｎｃ，Ｉｒｖｉｎｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）等、商業的に入手可能である。表１は代表的なＧＡＧを列挙する。
【００２８】
【表１】
2019058692.tif 000002
【００２９】
本発明の態様は、一部において、コンドロイチン硫酸塩重合体を含むヒドロゲル組成物を提供する。本明細書中で使用されるとき、用語「コンドロイチン硫酸塩重合体」は、Ｄ‐グルクロン酸（ＧｌｃＡ）およびＮ‐アセチル‐Ｄ‐ガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）の２つの交互に現れる単糖類の二糖類を含む様々な長さの非分岐鎖硫酸化重合体およびその薬学的に許容される塩を指す。コンドロイチン硫酸塩重合体は、エピマー化されてＬ‐イズロン酸（ＩｄｏＡ）になるＤ‐グルクロン酸残基をもまた含み得、その場合、結果として生じる二糖は、デルマタン硫酸塩と称される。コンドロイチン硫酸塩重合体は、１００個超の個々の糖の鎖を有することができ、それらの各々は、様々な位置および量で硫酸化され得る。コンドロイチン硫酸塩重合体は、軟骨の重要な構造成分であり、圧縮に対するその抵抗性の大部分を提供する。いずれのコンドロイチン硫酸塩重合体も、そのコンドロイチン硫酸塩重合体が皮膚の状態を改善するという条件で、本明細書に開示される組成物において有用である。コンドロイチン硫酸塩の薬学的に許容される塩の非限定的な例として、コンドロイチン硫酸ナトリウム、コンドロイチン硫酸カリウム、コンドロイチン硫酸マグネシウム、コンドロイチン硫酸カルシウム、およびそれらの組み合わせが挙げられる。
【００３０】
本明細書の態様は、一部において、ケラタン硫酸塩重合体を含むヒドロゲル組成物を提供する。本明細書中で使用されるとき、用語「ケラタン硫酸塩重合体」は、二糖単位であって、β‐Ｄ‐ガラクトースおよびＮ‐アセチル‐Ｄ‐ガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）をそれ自体含む、二糖単位を含む様々な長さの重合体およびその薬学的に許容される塩を指す。ケラタン硫酸塩の反復領域内の二糖類は、フコシル化することができ、Ｎ‐アセチルノイラミン酸は、その鎖の末端をキャップする。いずれのケラタン硫酸塩重合体も、そのケラタン硫酸塩重合体が皮膚状態を改善するという条件で、本明細書に開示される組成物中で有用である。ケラタン硫酸塩の薬学的に許容される塩の非限定的な例として、ケラタン硫酸塩ナトリウム、ケラタン硫酸塩カリウム、ケラタン硫酸塩マグネシウム、ケラタン硫酸塩カルシウム、およびそれらの組み合わせが挙げられる。
【００３１】
本明細書の態様は、一部において、ヒアルロナン重合体を含むヒドロゲル組成物を提供する。本明細書中で使用されるとき、用語「ヒアルロン酸重合体」は、「ＨＡ重合体」、「ヒアルロン酸重合体」、および「ヒアルロン酸塩重合体」と同義であり、二糖単位であって、交互に現れるβ‐１，４およびβ‐１，３グリコシド結合により共に結合されるＤ‐グルクロン酸およびＤ‐Ｎ‐アセチルグルコサミン単量体をそれ自体含む、二糖単位を含む陰イオン性非硫酸化グリコサミノグリカン重合体およびその薬学的に許容される塩を指す。ヒアルロナン重合体は、動物および非動物源から精製され得る。ヒアルロナンの重合体は、約５，０００ダルトン〜約２０，０００，０００ダルトンの範囲のサイズであり得る。いずれのヒアルロナン重合体も、そのヒアルロナンが皮膚状態を改善するという条件で、本明細書に開示される組成物中で有用である。ヒアルロナンの薬学的に許容される塩の非限定的な例として、ヒアルロナンナトリウム、ヒアルロナンカリウム、ヒアルロナンマグネシウム、ヒアルロナンカルシウム、およびそれらの組み合わせが挙げられる。
【００３２】
本明細書の態様は、一部において、架橋結合されたグリコサミノグリカン重合体を含むヒドロゲル組成物を提供する。本明細書中で使用されるとき、用語「架橋結合された」は、個々の重合体分子または単量体鎖を結合して、ゲル等の、より安定な構造にする分子間結合を指す。よって、架橋結合されたグリコサミノグリカン重合体は、少なくとも１つの個々の重合体分子を別の重合体分子に結合する少なくとも１つの分子間結合を有する。グリコサミノグリカン重合体の架橋結合は、ヒドロゲルの形成を典型的にもたらす。かかるヒドロゲルは高い粘性を有し、細い針に通して押し出すために有意な力を要する。本明細書に開示されるグリコサミノグリカン重合体は、非限定的に、多機能なＰＥＧベースの架橋剤、ジビニルスルホン、ジグリシジルエーテル、およびビス‐エポキシド、ビスカルボジイミドを含むジアルデヒドおよびジスルフィド架橋剤を用いて架橋結合され得る。たヒアルロナン架橋剤の非限定的な例として、ペンタエリスリトールテトラグリシジルエーテル（ＰＥＴＧＥ）等の多機能ＰＥＧベースの架橋剤、ジビニルスルホン（ＤＶＳ）、１，４‐ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、１，２‐ビス（２，３‐エポキシプロポキシ）エチレン（ＥＧＤＧＥ）、１，２，７，８‐ジエポキシオクタン（ＤＥＯ）、（フェニレンビス‐（エチル）‐カルボジイミドおよび１，６ヘキサメチレンビス（エチルカルボジイミド）、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベリン酸塩（ＢＳ）、ヘキサメチレンジアミン（ＨＭＤＡ）、１‐（２，３‐エポキシプロピル）‐２，３‐エポキシシクロヘキサン、リジン、リジンメチルエステル、またはそれらの組み合わせが挙げられる。他の有用な架橋剤は、２０１０年１０月２２日に出願されたＳｔｒｏｕｍｐｏｕｌｉｓ  ａｎｄ  Ｔｅｚｅｌ，Ｔｕｎａｂｌｙ  Ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｅｄ  Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ、米国特許出願第１２／９１０，４６６号に開示され、それは参照によりその全体が組み込まれる。グリコサミノグリカン重合体を架橋結合する方法の非限定的な例は、例えば、に記載され、本明細書に開示の組成物および方法において有用なグリコサミノグリカン重合体の非限定的な例は、例えば、Ｐｉｒｏｎ  ａｎｄ  Ｔｈｏｌｉｎ，Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  Ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ，Ｈｙｄｒｏｇｅｌ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ，Ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ  Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ（ｓ）ａｎｄ  Ｈｙｄｒｏｇｅｌ（ｓ），ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ，米国特許公開第２００３／０１４８９９５号、Ｌｅｂｒｅｔｏｎ，Ｃｒｏｓｓ‐Ｌｉｎｋｉｎｇ  ｏｆ  Ｌｏｗ  ａｎｄ  Ｈｉｇｈ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｗｅｉｇｈｔ  Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ  Ｍｏｎｏｐｈａｓｅ  Ｈｙｄｒｏｇｅｌｓ、Ｌｅｂｒｅｔｏｎ，Ｖｉｓｃｏｅｌａｓｔｉｃ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｓｏｄｉｕｍ  Ｈｙａｌｕｒｏｎａｔｅ  ａｎｄ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｍｅｔｈｙｌ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ，Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ，米国特許公開第２００８／００８９９１８号、Ｌｅｂｒ���ｔｏｎ，Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  Ａｃｉｄ‐Ｂａｓｅｄ  Ｇｅｌｓ  Ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  Ｌｉｄｏｃａｉｎｅ，米国特許公開第２０１０／００２８４３８号、およびＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｈｙｄｒｏｇｅｌｓ  ｔｈｕｓ  Ｏｂｔａｉｎｅｄ，米国特許公開第２００６／０１９４７５８号、およびＤｉ  Ｎａｐｏｌｉ，Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｉｎｔｒａｄｅｒｍａｌ  Ｓｏｆｔ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ａｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ，国際公開第２００４／０７３７５９号に記載され、それらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００３３】
本明細書の態様は、一部において、ある程度の架橋結合を有する架橋結合されたグリコサミノグリカン重合体を含むヒドロゲル組成物を提供する。本明細書中で使用されるとき、用語「架橋結合程度」は、架橋剤に結合された、例えば、ヒアルロナンの二糖単量体単位等のグリコサミノグリカン重合体単量体単位の割合を指す。架橋結合程度は、架橋剤対グリコサミノグリカンの重量パーセント比として表される。本発明のある特定の有利な実施形態における架橋結合程度は、約３％〜約１２％、例えば、約５％〜約１０％である。
【００３４】
ある実施形態において、ヒドロゲル組成物は、架橋結合されたグリコサミノグリカン重合体、例えば、架橋結合されたヒアルロン酸を含み、その架橋結合されたグリコサミノグリカン重合体は、例えば、約１８ｍｇ／ｇ〜約３０ｍｇ／ｇの濃度で組成物中に存在する。いくつかの実施形態において、組成物は、約２４ｍｇ／ｇまたは約２５ｍｇ／ｇの総ヒアルロン酸濃度を有する。
【００３５】
本明細書の態様は、一部において、低分子量のヒアルロナン重合体、高分子量のヒアルロナン重合体、または低および高分子量両方のヒアルロナン重合体を含むヒドロゲル組成物を提供する。本明細書中で使用されるとき、「ヒアルロナン」について言及するとき、用語「高分子量」は、１，０００，０００ダルトン以上の平均分子量を有するヒアルロナン重合体を指す。高分子量ヒアルロナン重合体の非限定的な例として、ヒアルロナン重合体約１，５００，０００ダルトン、約２，０００，０００ダルトン、約２，５００，０００ダルトン、約３，０００，０００ダルトン、約３，５００，０００ダルトン、約４，０００，０００ダルトン、約４，５００，０００ダルトン、および約５，０００，０００ダルトンが挙げられる。本明細書中で使用されるとき、「ヒアルロナン」について言及するとき、用語「低分子量」は、１，０００，０００ダルトン未満の平均分子量を有するヒアルロナン重合体を指す。低分子量ヒアルロナン重合体の非限定的な例として、約２００，０００ダルトン、約３００，０００ダルトン、約４００，０００ダルトン、約５００，０００ダルトン、約６００，０００ダルトン、約７００，０００ダルトン、約８００，０００ダルトンの、および約９００，０００ダルトンのヒアルロナン重合体が挙げられる。
【００３６】
ある実施形態において、組成物は、低分子量の架橋結合されたヒアルロナン重合体を含む。この実施形態の態様において、組成物は、例えば、約１００，０００ダルトン、約２００，０００ダルトン、約３００，０００ダルトン、約４００，０００ダルトン、約５００，０００ダルトン、約６００，０００ダルトン、約７００，０００ダルトン、約８００，０００ダルトン、または約９００，０００ダルトンの平均分子量を有する架橋結合されたヒアルロナン重合体を含む。この実施形態のなおも他の態様において、組成物は、例えば、最大１００，０００ダルトン、最大２００，０００ダルトン、最大３００，０００ダルトン、最大４００，０００ダルトン、最大５００，０００ダルトン、最大６００，０００ダルトン、最大７００，０００ダルトン、最大８００，０００ダルトン、最大９００，０００ダルトン、または最大９５０，０００ダルトンの平均分子量を有する架橋結合されたヒアルロナン重合体を含む。この実施形態のさらに他の態様において、組成物は、例えば、約１００，０００ダルトン〜約５００，０００ダルトン、約２００，０００ダルトン〜約５００，０００ダルトン、約３００，０００ダルトン〜約５００，０００ダルトン、約４００，０００ダルトン〜約５００，０００ダルトン、約５００，０００ダルトン〜約９５０，０００ダルトン、約６００，０００ダルトン〜約９５０，０００ダルトン、約７００，０００ダルトン〜約９５０，０００ダルトン、約８００，０００ダルトン〜約９５０，０００ダルトン、約３００，０００ダルトン〜約６００，０００ダルトン、約３００，０００ダルトン〜約７００，０００ダルトン、約３００，０００ダルトン〜約８００，０００ダルトン、または約４００，０００ダルトン〜約７００，０００ダルトンの平均分子量を有する架橋結合されたヒアルロナン重合体を含む。
【００３７】
別の実施形態において、組成物は、高分子量の架橋結合されたヒアルロナン重合体を含む。この実施形態の態様において、組成物は、例えば、約１，０００，０００ダルトン、約１，５００，０００ダルトン、約２，０００，０００ダルトン、約２，５００，０００ダルトン、約３，０００，０００ダルトン、約３，５００，０００ダルトン、約４，０００，０００ダルトン、約４，５００，０００ダルトン、または約５，０００，０００ダルトンの平均分子量を有する架橋結合されたヒアルロナン重合体を含む。この実施形態のさらに他の態様において、組成物は、例えば、少なくとも１，０００，０００ダルトン、少なくとも１，５００，０００ダルトン、少なくとも２，０００，０００ダルトン、少なくとも２，５００，０００ダルトン、少なくとも３，０００，０００ダルトン、少なくとも３，５００，０００ダルトン、少なくとも４，０００，０００ダルトン、少なくとも４，５００，０００ダルトン、または少なくとも５，０００，０００ダルトンの平均分子量を有する架橋結合されたヒアルロナン重合体を含む。この実施形態の依然として他の態様において、組成物は、例えば、約１，０００，０００ダルトン〜約５，０００，０００ダルトン、約１，５００，０００ダルトン〜約５，０００，０００ダルトン、約２，０００，０００ダルトン〜約５，０００，０００ダルトン、約２，５００，０００ダルトン〜約５，０００，０００ダルトン、約２，０００，０００ダルトン〜約３，０００，０００ダルトン、約２，５００，０００ダルトン〜約３，０００，０００ダルトンの平均分子量を有する架橋結合されたヒアルロナン重合体を含む。
【００３８】
なおも別の実施形態において、組成物は、架橋結合されたヒアルロナン重合体を含み、その架橋結合されたヒアルロナン重合体は、様々な比率の高分子量ヒアルロナン重合体および低分子量ヒアルロナン重合体の両方の組み合わせを含む。この実施形態の態様において、組成物は、架橋結合されたヒアルロナン重合体を含み、その架橋結合されたヒアルロナン重合体は、約２０：１、約１５：１、約１０：１、約５：１、約１：１、約１：５、約１：１０、約１：１５、または約１：２０の比率の高分子量ヒアルロナン重合体および低分子量ヒアルロナン重合体の両方の組み合わせを含む。
【００３９】
本明細書の態様は、一部において、架橋結合されていないグリコサミノグリカン重合体を含むヒドロゲル組成物を提供する。本明細書中で使用されるとき、用語「架橋結合されていない（非架橋結合）」は、個々のグリコサミノグリカン重合体分子または単量体鎖を結合する分子間結合の欠如を指す。よって、非架橋結合グリコサミノグリカン重合体は、分子間結合によりいかなる他のグリコサミノグリカン重合体にも結合されていない。この実施形態の態様において、組成物は、非架橋結合コンドロイチン硫酸塩重合体、非架橋結合デルマタン硫酸塩重合体、非架橋結合ケラタン硫酸塩重合体、非架橋結合ヘパラン重合体、非架橋結合ヘパラン硫酸塩重合体、または非架橋結合ヒアルロナン重合体を含む。非架橋結合グリコサミノグリカン重合体は、水溶性であり、概して、天然では流体のままである。よって、非架橋結合グリコサミノグリカン重合体は、多くの場合、細い針に通した組成物の押し出しプロセスを促進するための潤滑剤としてグリコサミノグリカン重合体ベースのヒドロゲル組成物と混合される。
【００４０】
ある実施形態において、組成物は、非架橋結合グリコサミノグリカンを含み、その非架橋結合グリコサミノグリカンは、例えば、約２ｍｇ／ｇ、約３ｍｇ／ｇ、約４ｍｇ／ｇ、約５ｍｇ／ｇ、約６ｍｇ／ｇ、約７ｍｇ／ｇ、約８ｍｇ／ｇ、約９ｍｇ／ｇ、約１０ｍｇ／ｇ、約１１ｍｇ／ｇ、約１２ｍｇ／ｇ、約１３ｍｇ／ｇ、約１３．５ｍｇ／ｇ、約１４ｍｇ／ｇ、約１５ｍｇ／ｇ、約１６ｍｇ／ｇ、約１７ｍｇ／ｇ、約１８ｍｇ／ｇ、約１９ｍｇ／ｇ、約２０ｍｇ／ｇ、約４０ｍｇ／ｇ、または約６０ｍｇ／ｇの濃度で存在する。この実施形態の他の態様において、組成物は、非架橋結合グリコサミノグリカンを含み、その非架橋結合グリコサミノグリカンは、例えば、少なくとも１ｍｇ／ｇ、少なくとも２ｍｇ／ｇ、少なくとも３ｍｇ／ｇ、少なくとも４ｍｇ／ｇ、少なくとも５ｍｇ／ｇ、少なくとも１０ｍｇ／ｇ、少なくとも１５ｍｇ／ｇ、少なくとも２０ｍｇ／ｇ、少なくとも２５ｍｇ／ｇ、少なくとも３５ｍｇ／ｇ、または少なくとも４０ｍｇ／ｇの濃度で存在する。この実施形態のなおも他の態様において、組成物は、非架橋結合グリコサミノグリカンを含み、その非架橋結合グリコサミノグリカンは、例えば、最大１ｍｇ／ｇ、最大２ｍｇ／ｇ、最大３ｍｇ／ｇ、最大４ｍｇ／ｇ、最大５ｍｇ／ｇ、最大１０ｍｇ／ｇ、最大１５ｍｇ／ｇ、最大２０ｍｇ／ｇ、または最大２５ｍｇ／ｇの濃度で存在する。この実施形態の依然として他の態様において、組成物は、非架橋結合グリコサミノグリカンを含み、その非架橋結合グリコサミノグリカンは、例えば、約１ｍｇ／ｇ〜約６０ｍｇ／ｇ、約１０ｍｇ／ｇ〜約４０ｍｇ／ｇ、約７．５ｍｇ／ｇ〜約１９．５ｍｇ／ｇ、約８．５ｍｇ／ｇ〜約１８．５ｍｇ／ｇ、約９．５ｍｇ／ｇ〜約１７．５ｍｇ／ｇ、約１０．５ｍｇ／ｇ〜約１６．５ｍｇ／ｇ、約１１．５ｍｇ／ｇ〜約１５．５ｍｇ／ｇ、または約１２．５ｍｇ／ｇ〜約１４．５ｍｇ／ｇの濃度で存在する。
【００４１】
本明細書の態様は、一部において、架橋結合グリコサミノグリカン重合体を本質的に含まないヒドロゲル組成物を提供する。本明細書中で使用されるとき、用語「本質的に含まない」（または「本質的に〜からなる」）は、微量な架橋結合マトリックス重合体しか検出され得ない組成物を指す。この実施形態の一態様において、組成物は、架橋結合コンドロイチン硫酸塩重合体を本質的に含まないコンドロイチン硫酸塩、架橋結合デルマタン硫酸塩重合体を本質的に含まないデルマタン硫酸塩、架橋結合ケラタン硫酸塩重合体を本質的に含まないケラタン硫酸塩、架橋結合ヘパラン重合体を本質的に含まないヘパラン、架橋結合ヘパラン硫酸塩重合体を本質的に含まないヘパラン硫酸塩、または架橋結合ヒアルロナン重合体を本質的に含まないヒアルロナン硫酸塩を含む。
【００４２】
本明細書の態様は、一部において、架橋結合グリコサミノグリカン重合体を完全に含まないヒドロゲル組成物を提供する。本明細書中で使用されるとき、用語「完全に含まない」は、使用されている装置またはプロセスの検出範囲内で架橋結合グリコサミノグリカン重合体が検出され得ない、またはその存在が確認され得ない組成物を指す。この実施形態の一態様において、組成物は、架橋結合コンドロイチン硫酸塩重合体を完全に含まないコンドロイチン硫酸塩、架橋結合デルマタン硫酸塩重合体を完全に含まないデルマタン硫酸塩、架橋結合ケラタン硫酸塩重合体を完全に含まないケラタン硫酸塩、架橋結合ヘパラン重合体を完全に含まないヘパラン、架橋結合ヘパラン硫酸塩重合体を完全に含まないヘパラン硫酸塩、または架橋結合ヒアルロナン重合体を完全に含まないヒアルロナン硫酸塩を含む。
【００４３】
本明細書の態様は、一部において、ある比率の架橋結合グリコサミノグリカン重合体および非架橋結合グリコサミノグリカン重合体を含むヒドロゲル組成物を提供する。架橋結合および非架橋結合グリコサミノグリカン重合体のこの比率は、ゲル：流体比としてもまた知られる。いずれのゲル：流体比も、かかる割合が本明細書に開示されるように皮膚状態を改善する本明細書に開示される組成物を作製するという条件で、本明細書に開示される組成物の作製において有用である。本発明の組成物中のゲル：流体比の非限定的な例として、１００：０、９８：２、９０：１０、７５：２５、７０：３０、６０：４０、５０：５０、４０：６０、３０：７０、２５：７５、１０：９０、２：９８、および０：１００が挙げられる。
【００４４】
この実施形態の態様において、組成物は、架橋結合グリコサミノグリカン重合体および非架橋結合グリコサミノグリカン重合体を含み、そのゲル：流体比は、例えば、約０：１００、約１：９９、約２：９８、約３：９７、約４：９６、約５：９５、約６：９４、約７：９３、約８：９２、約９：９１、または約１０：９０である。この実施形態の他の態様において、組成物は、架橋結合グリコサミノグリカン重合体および非架橋結合グリコサミノグリカン重合体を含み、そのゲル：流体比は、例えば、最大１：９９、最大２：９８、最大３：９７、最大４：９６、最大５：９５、最大６：９４、最大７：９３、最大８：９２、最大９：９１、または最大１０：９０である。この実施形態のさらに他の態様において、組成物は、架橋結合グリコサミノグリカン重合体および非架橋結合グリコサミノグリカン重合体を含み、そのゲル：流体比は、例えば、約０：１００〜約３：９７、約０：１００〜約５：９５、または約０：１００〜約１０：９０である。
【００４５】
この実施形態の他の態様において、組成物は、架橋結合グリコサミノグリカン重合体および非架橋結合グリコサミノグリカン重合体を含み、そのゲル：流体比は、例えば、約１５：８５、約２０：８０、約２５：７５、約３０：７０、約３５：６５、約４０：６０、約４５：５５、約５０：５０、約５５：４５、約６０：４０、約６５：３５、約７０：３０、約７５：２５、約８０：２０、約８５：１５、約９０：１０、約９５：５、約９８：２、または約１００：０である。この実施形態のさらに他の態様において、組成物は、架橋結合グリコサミノグリカン重合体および非架橋結合グリコサミノグリカン重合体を含み、そのゲル：流体比は、例えば、最大１５：８５、最大２０：８０、最大２５：７５、最大３０：７０、最大３５：６５、最大４０：６０、最大４５：５５、最大５０：５０、最大５５：４５、最大６０：４０、最大６５：３５、最大７０：３０、最大７５：２５、最大８０：２０、最大８５：１５、最大９０：１０、最大９５：５、最大９８：２、または最大１００：０である。この実施形態のさらに他の態様において、組成物は、架橋結合グリコサミノグリカン重合体および非架橋結合グリコサミノグリカン重合体を含み、そのゲル：流体比は、例えば、約１０：９０〜約７０：３０、約１５：８５〜約７０：３０、約１０：９０〜約５５：４５、約８０：２０〜約９５：５、約９０：１０〜約１００：０、約７５：２５〜約１００：０、または約６０：４０〜約１００：０である。
【００４６】
本明細書に開示されるヒドロゲル組成物は、その組成物が個人に投与されるとき有益な効果を提供する別の薬剤または薬剤の組み合わせをさらに含み得る。かかる有益な薬剤は、非限定的に、酸化防止剤、かゆみ止め、抗セルライト剤、抗傷跡剤、抗炎症剤、麻酔剤、抗刺激物剤、血管収縮薬、血管拡張薬、止血剤もしくは抗線溶剤のような抗出血剤、角質溶解剤、テンション剤、抗ざそう剤、色素沈着剤、抗色素沈着剤、または保湿剤を含む。
【００４７】
本明細書の目的のために、別途定めのない限り、製剤中の「％」は重量対重量（すなわち、重量／重量）割合として定義される。
【００４８】
本明細書の態様は、一部において、麻酔剤を任意に含み得る、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物を提供する。麻酔剤は、好ましくは局所麻酔剤、すなわち、例えば、アミノアミド局所麻酔薬およびアミノエステル局所麻酔薬等の、可逆的な局所麻酔および痛覚の喪失を引き起こす麻酔剤である。本明細書に開示される組成物中に含まれる麻酔剤の量は、その組成物の投与に際して個人が経験する痛みをやわらげるのに有効な量である。よって、本明細書に開示される組成物中に含まれる麻酔剤の量は、その組成物総量のうちの約０．１重量％〜約５重量％である。麻酔剤の非限定的な例として、リドカイン、アムブカイン（ａｍｂｕｃａｉｎｅ）、アモラノン、アミロカイン（ａｍｙｌｏｃａｉｎｅ）、ベノキシネート、ベンゾカイン、ベトキシカイン（ｂｅｔｏｘｙｃａｉｎｅ）、ビフェナミン、ブピバカイン、ブタカイン、ブタンベン、ブタニリカイン、ブテタミン、ブトキシカイン（ｂｕｔｏｘｙｃａｉｎｅ）、カルチカイン、クロロプロカイン、コカエチレン、コカイン、シクロメチカイン、ジブカイン、ジメチソキン（ｄｉｍｅｔｈｙｓｏｑｕｉｎ）、ジメトカイン（ｄｉｍｅｔｈｏｃａｉｎｅ）、ジペロドン、ジシクロニン（ｄｙｃｙｃｌｏｎｉｎｅ）、エクゴニジン（ｅｃｇｏｎｉｄｉｎｅ）、エクゴニン、塩化エチル、エチドカイン、ベータ‐ユーカイン、ユープロシン（ｅｕｐｒｏｃｉｎ）、フェナルコミン（ｆｅｎａｌｃｏｍｉｎｅ）、フォルモカイン（ｆｏｒｍｏｃａｉｎｅ）、ヘキシルカイン、ヒドロキシテトラカイン、イソブチルｐ‐アミノ安息香酸、ロイシノカイン（ｌｅｕｃｉｎｏｃａｉｎｅ）メシレート、レボキサドロール（ｌｅｖｏｘａｄｒｏｌ）、リドカイン、メピバカイン、メプリルカイン、メタブトキシカイン、塩化メチル、ミルテカイン（ｍｙｒｔｅｃａｉｎｅ）、ネパイン、オクタカイン（ｏｃｔａｃａｉｎｅ）、オルトカイン、オキセサゼイン、パレトキシカイン（ｐａｒｅｔｈｏｘｙｃａｉｎｅ）、フェナカイン、フェノール、ピペロカイン、ピリドカイン（ｐｉｒｉｄｏｃａｉｎｅ）、ポリドカノール、プラモキシン、プリロカイン、プロカイン、プロパノカイン（ｐｒｏｐａｎｏｃａｉｎｅ）、プロパラカイン、プロピポカイン（ｐｒｏｐｉｐｏｃａｉｎｅ）、プロポキシカイン、スードコカイン（ｐｓｕｅｄｏｃｏｃａｉｎｅ）、ピロカイン（ｐｙｒｒｏｃａｉｎｅ）、ロピバカイン、サリチルアルコール、テトラカイン、トリカイン、トリメカイン、ゾラミン、それらの組み合わせ、およびそれらの塩が挙げられる。アミノエステル局所麻酔薬の非限定的な例として、プロカイン、クロロプロカイン、コカイン、シクロメチカイン、シメトカイン（ｃｉｍｅｔｈｏｃａｉｎｅ）（ラロカイン（ｌａｒｏｃａｉｎｅ））、プロポキシカイン、プロカイン（ノボカイン）、プロパラカイン、テトラカイン（アメソカイン）を含む。アミノアミド局所麻酔薬の非限定的な例として、アルチカイン、ブピバカイン、シンコカイン（ジブカイン）、エチドカイン、レボブピバカイン、リドカイン（リグノカイン）、メピバカイン、ピペロカイン、プリロカイン、ロピバカイン、およびトリメカインが挙げられる。本明細書に開示される組成物は、単一の麻酔剤または複数の麻酔剤を含み得る。組み合わせ局所麻酔薬の非限定的な例には、リドカイン／プリロカイン（ＥＭＬＡ）がある。
【００４９】
したがって、ある実施形態において、本明細書に開示される組成物は、麻酔剤およびその塩を含む。この実施形態の態様において、本明細書に開示される組成物は、アミノアミド局所麻酔薬およびその塩またはアミノエステル局所麻酔薬およびその塩を含む。この実施形態の他の態様において、本明細書に開示される組成物は、プロカイン、クロロプロカイン、コカイン、シクロメチカイン、シメトカイン、プロポキシカイン、プロカイン、プロパラカイン、テトラカイン、もしくはそれらの塩、またはそれらの組み合わせを含む。この実施形態のさらに他の態様において、本明細書に開示される組成物は、アルチカイン、ブピバカイン、シンコカイン、エチドカイン、レボブピバカイン、リドカイン、メピバカイン、ピペロカイン、プリロカイン、ロピバカイン、トリメカイン、もしくはそれらの塩、またはそれらの組み合わせを含む。この実施形態のさらに他の態様において、本明細書に開示される組成物は、リドカイン／プリロカインの組み合わせを含む。
【００５０】
この実施形態の他の態様において、本明細書に開示される組成物は、例えば、その全組成物の約０．１重量％、約０．２重量％、約０．３重量％、約０．４重量％、約０．５重量％、約０．６重量％、約０．７重量％、約０．８重量％、約０．９重量％、約１．０重量％、約２．０重量％、約３．０重量％、約４．０重量％、約５．０重量％、約６．０重量％、約７．０重量％、約８．０重量％、約９．０重量％、または約１０重量％の量の麻酔剤を含む。さらに他の態様において、本明細書に開示される組成物は、例えば、その全組成物の少なくとも０．１重量％、少なくとも０．２重量％、少なくとも０．３重量％、少なくとも０．４重量％、少なくとも０．５重量％、少なくとも０．６重量％、少なくとも０．７重量％、少なくとも０．８重量％、少なくとも０．９重量％、少なくとも１．０重量％、少なくとも２．０重量％、少なくとも３．０重量％、少なくとも４．０重量％、少なくとも５．０重量％、少なくとも６．０重量％、少なくとも７．０重量％、少なくとも８．０重量％、少なくとも９．０重量％、または少なくとも１０重量％の量の麻酔剤を含む。さらに他の態様において、本明細書に開示される組成物は、例えば、その全組成物の最大０．１重量％、最大０．２重量％、最大０．３重量％、最大０．４重量％、最大０．５重量％、最大０．６重量％、最大０．７重量％、最大０．８重量％、最大０．９重量％、最大１．０重量％、最大２．０重量％、最大３．０重量％、最大４．０重量％、最大５．０重量％、最大６．０重量％、最大７．０重量％、最大８．０重量％、最大９．０重量％、または最大１０重量％の量の麻酔剤を含む。さらなる態様において、本明細書に開示される組成物は、例えば、その全組成物の約０．１重量％〜約０．５重量％、約０．１重量％〜約１．０重量％、約０．１重量％〜約２．０重量％、約０．１重量％〜約３．０重量％、約０．１重量％〜約４．０重量％、約０．１重量％〜約５．０重量％、約０．２重量％〜約０．９重量％、約０．２重量％〜約１．０重量％、約０．２重量％〜約２．０重量％、約０．５重量％〜約１．０重量％、または約０．５重量％〜約２．０重量％の量の麻酔剤を含む。
【００５１】
別の実施形態において、本明細書に開示される組成物は、麻酔剤を含まない。
【００５２】
本発明の一態様において、重合体、例えば、グリコサミノグリカン重合体、例えば、ヒアルロン酸重合体、例えば、少なくとも一部分が架橋結合されるヒアルロン酸と、その重合体と組み合わされた添加剤または有益な薬剤とを含む、注入可能な皮膚充填剤が提供される。
【００５３】
重合体と組み合わされた有益な薬剤は、ビタミン、例えば、ビタミンＣを含み得る。ビタミンＣの好適な型の非限定的な例として、アスコルビン酸、ならびにアスコルビン酸のナトリウム、カリウム、およびカルシウム塩、長鎖脂肪酸を有するアスコルビン酸の脂肪溶解性エステル（パルミチン酸アスコルビルまたはステアリン酸アスコルビル）、リン酸アスコルビルマグネシウム（ＭＡＰ）、リン酸アスコルビルナトリウム（ＳＡＰ）、およびアスコルビン酸２‐グルコシド（ＡＡ２Ｇ（登録商標））、リン酸アスコルビルナトリウム（ＡＡ２Ｐ）、硫酸アスコルビル二ナトリウム、およびリン酸アスコルビル３‐アミノプロピル（ａｓｃｏｂｙｌ  ３−ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）（Ｖｉｔａｇｅｎ）が挙げられる。
【００５４】
ある特に有利な実施形態において、有益な薬剤は、重合体に共有結合される。例えば、有益な薬剤は、重合体に共有結合され、組成物中に、その組成物総量のうちの約０．０４重量％〜約５．０重量％、例えば、その組成物総量のうちの約０．１重量％〜約４．０重量％、例えば、その組成物総量のうちの約０．２重量％〜約２．０重量％の量で存在する、ビタミンＣ、またはビタミンＣ誘導体であってもよい。一実施形態において、本明細書に開示される組成物中に含まれるビタミンＣの量は、その組成物総量のうちの約０．３重量％〜約１．２重量％である。
【００５５】
好ましくは、重合体に共有結合されるビタミンＣは、アスコルビン酸、Ｌ‐アスコルビン酸、Ｌ‐アスコルビン酸２‐硫酸塩（ＡＡ‐２Ｓ）およびＬ‐アスコルビン酸２‐リン酸塩（ＡＡ‐２Ｐ）、アスコルビン酸２‐Ｏ‐グルコシド（ＡＡ‐２Ｇ）、６‐Ｏ‐アシル‐２‐Ｏ‐アルファ‐Ｄ‐グルコピラノシル‐Ｌ‐アスコルビン酸（６‐Ａｃｙｌ‐ＡＡ‐２Ｇ）、（リン酸アスコルビル３‐アミノプロピル（ａｓｃｏｂｙｌ  ３−ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、パルミチン酸アスコルビル）、それらの誘導体および組み合わせのうちの少なくとも１つを含む。本明細書に開示される組成物は、単一のビタミンＣ剤または複数のビタミンＣ剤を含み得る。
【００５６】
本発明の別の実施形態において、ヒアルロン酸がＢＤＤＥと架橋結合された、皮膚充填剤が提供される。この実施形態において、結合度は、約３モル％〜約１０モル％、約３モル％〜約１５モル％、約３モル％〜約４０モル％であり得る。
【００５７】
いくつかの実施形態において、皮膚充填剤は、持続的な生物学的利用能を有する。例えば、ヒトの皮膚に導入されたときに、少なくとも約１ヶ月〜最大約２０ヶ月、またはそれを超える間にわたって、アスコルビン酸または他のビタミンをヒトに放出するために有効である、皮膚充填剤が提供される。
【００５８】
本明細書の態様は、一部において、複素弾性係数、弾性係数、粘性係数、および／またはタンジェントδを示す、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物を提供する。本明細書に開示される組成物は、その組成物が、力（ストレス、変形）を適用されたときに、弾性成分（例えば、架橋結合されたグリコサミノグリカン重合体等の、固体様）および粘性成分（例えば、架橋結合されていないグリコサミノグリカン重合体、または担体相等の液体様）を有するという点で粘弾性である。この特性を説明した流体力学的属性は、変形に対する組成物全体の抵抗性を定義する、複素弾性係数（Ｇ＊）である。複素弾性係数は、実数および虚数部分を有する複素数である、Ｇ＊＝Ｇ’＋ｉＧ’’である。Ｇ＊の絶対値は、Ａｂｓ（Ｇ＊）＝Ｓｑｒｔ（Ｇ’２＋Ｇ’’２）である。複素弾性係数は、弾性係数（Ｇ’）および粘性係数（Ｇ’’）の合計として定義され得る。Ｆａｌｃｏｎｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｍｐｏｒａｒｙ  Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  Ｄｅｒｍａｌ  Ｆｉｌｌｅｒｓ：Ａ  Ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ  Ｂａｓｅｄ  ｏｎ  Ｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｓｕｒｇ．３５（８）：  １２３８−１２４３（２００９）、Ｔｅｚｅｌ，上記，２００８、Ｋａｂｌｉｋ，上記，２００９、Ｂｅａｓｌｅｙ，上記，２００９、それらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００５９】
弾性係数、または弾性の係数は、力をかけられたときに、ヒドロゲル物質が変形に抵抗する能力、または逆に言えば、非恒久的に変形される物体の性質を指す。弾性係数は、組成物の硬度を特徴付け、それはその組成物の運動からのエネルギーの貯蔵を示すので、貯蔵弾性係数としても知られる。弾性係数は、弾性と強度との間の相互作用を説明し（Ｇ’＝圧力／歪み）、よって、組成物の硬さまたは軟らかさの定量的測定を提供する。物体の弾性係数は、弾性変形領域における物体の圧力対歪み曲線の傾き：λ＝圧力／歪みとして定義され、ここでλは、弾性係数（単位：パスカル）であり、圧力は、（変形を引き起こす力）／（力がかけられた領域）であり、歪みは、その物体の元の状態に対してその圧力により引き起こされた変化率である。その力がかけられる速さに依存するが、より硬い組成物は、より高い弾性係数を有し、かつ、より硬い組成物は、例えば、注入等の、ある一定の距離、その物質を変形するためにより大きな力を要するであろう。圧力を（方向も含めて）どのように測定するか規定すれば、多くの型の弾性係数が定義される。３つの主要な弾性係数は、引張弾性係数、せん断弾性係数、および体積弾性係数である。
【００６０】
粘性係数は、粘性損失として失われるエネルギーを示すので、損失弾性係数としてもまた知られる。タンジェントδは、粘性係数と弾性係数との比率である。タンジェントδ＝Ｇ’’／Ｇ’。Ｆａｌｃｏｎｅ，上記，２００９。本明細書に開示されるタンジェントδ値については、タンジェントδは、周波数１Ｈｚでの動的弾性係数から得られる。より低いタンジェントδは、より硬い、より固い、またはより弾性の組成物に相当する。
【００６１】
別の実施形態において、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物は、ある弾性係数を示す。この実施形態の態様において、ヒドロゲル組成物は、例えば、約２５Ｐａ、約５０Ｐａ、約７５Ｐａ、約１００Ｐａ、約１２５Ｐａ、約１５０Ｐａ、約１７５Ｐａ、約２００Ｐａ、約２５０Ｐａ、約３００Ｐａ、約３５０Ｐａ、約４００Ｐａ、約４５０Ｐａ、約５００Ｐａ、約５５０Ｐａ、約６００Ｐａ、約６５０Ｐａ、約７００Ｐａ、約７５０Ｐａ、約８００Ｐａ、約８５０Ｐａ、約９００Ｐａ、約９５０Ｐａ、約１，０００Ｐａ、約１，２００Ｐａ、約１，３００Ｐａ、約１，４００Ｐａ、約１，５００Ｐａ、約１，６００Ｐａ、約１，７００Ｐａ、約１，８００Ｐａ、約１，９００Ｐａ、約２，０００Ｐａ、約２，１００Ｐａ、約２，２００Ｐａ、約２，３００Ｐａ、約２，４００Ｐａ、または約２，５００Ｐａの弾性係数を示す。この実施形態の他の態様において、ヒドロゲル組成物は、例えば、少なくとも２５Ｐａ、少なくとも５０Ｐａ、少なくとも７５Ｐａ、少なくとも１００Ｐａ、少なくとも１２５Ｐａ、少なくとも１５０Ｐａ、少なくとも１７５Ｐａ、少なくとも２００Ｐａ、少なくとも２５０Ｐａ、少なくとも３００Ｐａ、少なくとも３５０Ｐａ、少なくとも４００Ｐａ、少なくとも４５０Ｐａ、少なくとも５００Ｐａ、少なくとも５５０Ｐａ、少なくとも６００Ｐａ、少なくとも６５０Ｐａ、少なくとも７００Ｐａ、少なくとも７５０Ｐａ、少なくとも８００Ｐａ、少なくとも８５０Ｐａ、少なくとも９００Ｐａ、少なくとも９５０Ｐａ、少なくとも１，０００Ｐａ、少なくとも１，２００Ｐａ、少なくとも１，３００Ｐａ、少なくとも１，４００Ｐａ、少なくとも１，５００Ｐａ、少なくとも１，６００Ｐａ、少なくとも１，７００Ｐａ、少なくとも１，８００Ｐａ、少なくとも１，９００Ｐａ、少なくとも２，０００Ｐａ、少なくとも２，１００Ｐａ、少なくとも２，２００Ｐａ、少なくとも２，３００Ｐａ、少なくとも２，４００Ｐａ、または少なくとも２，５００Ｐａの弾性係数を示す。この実施形態のさらに他の態様において、ヒドロゲル組成物は、例えば、最大２５Ｐａ、最大５０Ｐａ、最大７５Ｐａ、最大１００Ｐａ、最大１２５Ｐａ、最大１５０Ｐａ、最大１７５Ｐａ、最大２００Ｐａ、最大２５０Ｐａ、最大３００Ｐａ、最大３５０Ｐａ、最大４００Ｐａ、最大４５０Ｐａ、最大５００Ｐａ、最大５５０Ｐａ、最大６００Ｐａ、最大６５０Ｐａ、最大７００Ｐａ、最大７５０Ｐａ、最大８００Ｐａ、最大８５０Ｐａ、最大９００Ｐａ、最大９５０Ｐａ、最大１，０００Ｐａ、最大１，２００Ｐａ、最大１，３００Ｐａ、最大１，４００Ｐａ、最大１，５００Ｐａ、または最大１，６００Ｐａの弾性係数を示す。この実施形態のさらに他の態様において、ヒドロゲル組成物は、例えば、約２５Ｐａ〜約１５０Ｐａ、約２５Ｐａ〜約３００Ｐａ、約２５Ｐａ〜約５００Ｐａ、約２５Ｐａ〜約８００Ｐａ、約１２５Ｐａ〜約３００Ｐａ、約１２５Ｐａ〜約５００Ｐａ、約１２５Ｐａ〜約８００Ｐａ、約５００Ｐａ〜約１，６００Ｐａ、約６００Ｐａ〜約１，６００Ｐａ、約７００Ｐａ〜約１，６００Ｐａ、約８００Ｐａ〜約１，６００Ｐａ、約９００Ｐａ〜約１，６００Ｐａ、約１，０００Ｐａ〜約１，６００Ｐａ、約１，１００Ｐａ〜約１，６００Ｐａ、約１，２００Ｐａ〜約１，６００Ｐａ、約５００Ｐａ〜約２，５００Ｐａ、約１，０００Ｐａ〜約２，５００Ｐａ、約１，５００Ｐａ〜約２，５００Ｐａ、約２，０００Ｐａ〜約２，５００Ｐａ、約１，３００Ｐａ〜約１，６００Ｐａ、約１，４００Ｐａ〜約１，７００Ｐａ、約１，５００Ｐａ〜約１，８００Ｐａ、約１，６００Ｐａ〜約１，９００Ｐａ、約１，７００Ｐａ〜約２，０００Ｐａ、約１，８００Ｐａ〜約２，１００Ｐａ、約１，９００Ｐａ〜約２，２００Ｐａ、約２，０００Ｐａ〜約２，３００Ｐａ、約２，１００Ｐａ〜約２，４００Ｐａ、または約２，２００Ｐａ〜約２，５００Ｐａの弾性係数を示す。
【００６２】
別の実施形態において、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物は、ある粘性係数を示す。この実施形態の態様において、ヒドロゲル組成物は、例えば、約１０Ｐａ、約２０Ｐａ、約３０Ｐａ、約４０Ｐａ、約５０Ｐａ、約６０Ｐａ、約７０Ｐａ、約８０Ｐａ、約９０Ｐａ、約１００Ｐａ、約１５０Ｐａ、約２００Ｐａ、約２５０Ｐａ、約３００Ｐａ、約３５０Ｐａ、約４００Ｐａ、約４５０Ｐａ、約５００Ｐａ、約５５０Ｐａ、約６００Ｐａ、約６５０Ｐａ、または約７００Ｐａの粘性係数を示す。この実施形態の他の態様において、ヒドロゲル組成物は、例えば、最大１０Ｐａ、最大２０Ｐａ、最大３０Ｐａ、最大４０Ｐａ、最大５０Ｐａ、最大６０Ｐａ、最大７０Ｐａ、最大８０Ｐａ、最大９０Ｐａ、最大１００Ｐａ、最大１５０Ｐａ、最大２００Ｐａ、最大２５０Ｐａ、最大３００Ｐａ、最大３５０Ｐａ、最大４００Ｐａ、最大４５０Ｐａ、最大５００Ｐａ、最大５５０Ｐａ、最大６００Ｐａ、最大６５０Ｐａ、または最大７００Ｐａの粘性係数を示す。この実施形態のさらに他の態様において、ヒドロゲル組成物は、例えば、約１０Ｐａ〜約３０Ｐａ、約１０Ｐａ〜約５０Ｐａ、約１０Ｐａ〜約１００Ｐａ、約１０Ｐａ〜約１５０Ｐａ、約７０Ｐａ〜約１００Ｐａ、約５０Ｐａ〜約３５０Ｐａ、約１５０Ｐａ〜約４５０Ｐａ、約２５０Ｐａ〜約５５０Ｐａ、約３５０Ｐａ〜約７００Ｐａ、約５０Ｐａ〜約１５０Ｐａ、約１００Ｐａ〜約２００Ｐａ、約１５０Ｐａ〜約２５０Ｐａ、約２００Ｐａ〜約３００Ｐａ、約２５０Ｐａ〜約３５０Ｐａ、約３００Ｐａ〜約４００Ｐａ、約３５０Ｐａ〜約４５０Ｐａ、約４００Ｐａ〜約５００Ｐａ、約４５０Ｐａ〜約５５０Ｐａ、約５００Ｐａ〜約６００Ｐａ、約５５０Ｐａ〜約６５０Ｐａ、または約６００Ｐａ〜約７００Ｐａの粘性係数を示す。
【００６３】
別の実施形態において、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物は、あるタンジェントδを示す。この実施形態の態様において、ヒドロゲル組成物は、例えば、約０．１、約０．２、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、または約２．５のタンジェントδを示す。この実施形態の他の態様において、ヒドロゲル組成物は、例えば、最大０．１、最大０．２、最大０．３、最大０．４、最大０．５、最大０．６、最大０．７、最大０．８、最大０．９、最大１．０、最大１．１、最大１．２、最大１．３、最大１．４、最大１．５、最大１．６、最大１．７、最大１．８、最大１．９、最大２．０、最大２．１、最大２．２、最大２．３、最大２．４、または最大２．５のタンジェントδを示す。この実施形態のさらに他の態様において、ヒドロゲル組成物は、例えば、約０．１〜約０．３、約０．３〜約０．５、約０．５〜約０．８、約１．１〜約１．４、約１．４〜約１．７、約０．３〜約０．６、約０．１〜約０．５、約０．５〜約０．９、約０．１〜約０．６、約０．１〜約１．０、約０．５〜約１．５、約１．０〜約２．０または約１．５〜約２．５のタンジェントδを示す。
【００６４】
本明細書の態様は、一部において、透明性および／または半透明性を有する本明細書に開示されるヒドロゲル組成物を提供する。光透過性は、可視光が物質を通り抜けることを可能にする物理的特性であり、一方、半透明性（半透明または半透明度とも呼ばれる）は、光が拡散して通り抜けることを可能にするのみである。反対の特性は、不透明性である。透明な物質は、澄んでいるが、一方、半透明な物質は、はっきりとは透けて見え得ない。本明細書に開示されるヒドロゲルは、好ましくは光透過性であるか、または少なくとも半透明である。
【００６５】
ある実施形態において、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物は、光学的に半透明である。この実施形態の態様において、ヒドロゲル組成物は、例えば、光の約７５％、光の約８０％、光の約８５％、光の約９０％、光の約９５％、または光の約１００％を拡散して伝導する。この実施形態の他の態様において、ヒドロゲル組成物は、例えば、光の少なくとも７５％、光の少なくとも８０％、光の少なくとも８５％、光の少なくとも９０％、または光の少なくとも９５％を拡散して伝導する。この実施形態のなおも他の態様において、ヒドロゲル組成物は、例えば、光の約７５％〜約１００％、光の約８０％〜約１００％、光の約８５％〜約１００％、光の約９０％〜約１００％、または光の約９５％〜約１００％を拡散して伝導する。ある実施形態において、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物は、光透過性であり、可視光の１００％を伝導する。
【００６６】
本明細書に開示されるヒドロゲル組成物は、そのヒドロゲルを粉砕して粒子にすることによりさらにプロセスされ、任意に、例えば、水または食塩水等の、担体相と混合し、溶液、油、ローション、ゲル、軟膏、クリーム、スラリー、膏薬、またはペーストのような注入可能なまたは局所的物質を形成し得る。よって、開示されるヒドロゲル組成物は、単相性または多相性組成物であり得る。ヒドロゲルは、直径約１５μｍ〜約３０μｍ、約５０μｍ〜約７５μｍ、約１００μｍ〜約１５０μｍ、約２００μｍ〜約３００μｍ、約４５０μｍ〜約５５０μｍ、約６００μｍ〜約７００μｍ、約７５０μｍ〜約８５０μｍ、または約９００μｍ〜約１，０００μｍ等の、約１０μｍ〜約１０００μｍの粒子サイズに製粉され得る。
【００６７】
本明細書の態様は、一部において、注入可能である本明細書に開示される組成物を提供する。本明細書中で使用されるとき、用語「注入可能な」は、細い針を備える注入装置を用いて個人の皮膚領域にその組成物を投与するために必要な特性を有する物質を指す。本明細書中で使用されるとき、用語「細い針」は、２７ゲージ以下の針を指す。本明細書に開示される組成物の注入可能性は、上記に議論されるようにヒドロゲル粒子をサイズ調整することにより達成され得る。
【００６８】
この実施形態の態様において、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物は、細い針に通して注入可能である。この実施形態の他の態様において、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物は、例えば、約２７ゲージ、約３０ゲージ、または約３２ゲージの針に通して注入可能である。この実施形態のなおも他の態様において、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物は、例えば、２２ゲージ以下、２７ゲージ以下、３０ゲージ以下、または３２ゲージ以下の針に通して注入可能である。この実施形態のなおも他の態様において、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物は、例えば、約２２ゲージ〜約３５ゲージ、２２ゲージ〜約３４ゲージ、２２ゲージ〜約３３ゲージ、２２ゲージ〜約３２ゲージ、約２２ゲージ〜約２７ゲージ、または約２７ゲージ〜約３２ゲージの針に通して注入可能である。
【００６９】
この実施形態の態様において、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物は、１００ｍｍ／分の速度で約６０Ｎ、約５５Ｎ、約５０Ｎ、約４５Ｎ、約４０Ｎ、約３５Ｎ、約３０Ｎ、約２５Ｎ、約２０Ｎ、または約１５Ｎの押出力で注入され得る。この実施形態の他の態様において、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物は、約６０Ｎ以下、約５５Ｎ以下、約５０Ｎ以下、約４５Ｎ以下、約４０Ｎ以下、約３５Ｎ以下、約３０Ｎ以下、約２５Ｎ以下、約２０Ｎ以下、約１５Ｎ以下、約１０Ｎ以下、または約５Ｎ以下の押出力で２７ゲージの針に通して注入され得る。この実施形態のなおも他の態様において、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物は、約６０Ｎ以下、約５５Ｎ以下、約５０Ｎ以下、約４５Ｎ以下、約４０Ｎ以下、約３５Ｎ以下、約３０Ｎ以下、約２５Ｎ以下、約２０Ｎ以下、約１５Ｎ以下、約１０Ｎ以下、または約５Ｎ以下の押出力で３０ゲージの針に通して注入され得る。この実施形態の依然として他の態様において、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物は、約６０Ｎ以下、約５５Ｎ以下、約５０Ｎ以下、約４５Ｎ以下、約４０Ｎ以下、約３５Ｎ以下、約３０Ｎ以下、約２５Ｎ以下、約２０Ｎ以下、約１５Ｎ以下、約１０Ｎ以下、または約５Ｎ以下の押出力で３２ゲージの針に通して注入され得る。
【００７０】
本明細書の態様は、一部において、粘着性を示す、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物を提供する。粘着性は、粘着、粘着性吸引力、粘着力、または圧縮力とも称され、分子を合体させるよう働く、物質内の類似分子間の分子間引力により引き起こされる物質の物理的特性である。粘着性は、グラム重量（ｇｍｆ）単位で表される。粘着性は、他の要因の中でも、最初の遊離グリコサミノグリカン重合体の分子量比、グリコサミノグリカン重合体の架橋結合度、架橋結合後の残留遊離グリコサミノグリカン重合体の量、およびそのヒドロゲル組成物のｐＨにより影響を受ける。組成物は、投与部位に局在したまま残るように十分に粘着性であるべきである。さらに、ある特定の用途において、十分な粘着性は、組成物が機械的な負荷循環の場合において、その形、ひいては機能性を保持するために重要である。よって、一実施形態において、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物は、水と同等の粘着性を示す。なおも別の実施形態において、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物は、投与部位に局在したまま残るのに十分な粘着性を示す。依然として別の実施形態において、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物は、その形を保持するのに十分な粘着性を示す。１つのさらなる実施形態において、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物は、その形および機能性を保持するのに十分な粘着性を示す。
【００７１】
本明細書の態様は、一部において、生理学的に許容される容量オスモル濃度を示す、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物を提供する。本明細書中で使用されるとき、用語「容量オスモル濃度」は、溶液中で浸透圧的に活性な溶質の濃度を指す。本明細書中で使用されるとき、用語「生理学的に許容される容量オスモル濃度」は、生体の正常な機能に従う、またはそれに特徴的な容量オスモル濃度を指す。よって、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物の投与は、哺乳類に投与されたとき、長期のまたは恒久的な有害な効果を実質的に有しない容量オスモル濃度を示す。容量オスモル濃度は、溶媒リットル当たりの浸透圧的に活性な溶質のオスモルを用いて表される（Ｏｓｍｏｌ／ＬまたはＯｓｍ／Ｌ）。容量オスモル濃度は、溶質のモルではなく、浸透圧的に活性な溶質粒子のモルを測定するので、モル濃度とは区別される。いくつかの化合物は、溶液中で解離し得るが、一方で、他の化合物は、解離し得ないので、その区別が生じる。溶液の容量オスモル濃度は、以下の式から計算され得る：Ｏｓｍｏｌ／Ｌ＝Σψｉηｉ  Ｃｉ、式中、ψは、その溶液の非理想特性の程度を表す浸透係数であり、ηは、分子が解離した、粒子（例えば、イオン）の数であり、Ｃは、その溶質のモル濃度であり、ｉは、特定の溶質の同一性を表す標識である。本明細書に開示されるヒドロゲル組成物の容量オスモル濃度は、溶液を測定する従来の方法を用いて測定され得る。
【００７２】
１つの実施形態において、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物は、生理学的に許容される容量オスモル濃度を示す。本明細書中で使用されるとき、用語「重量オスモル濃度」は、体内の溶媒キロ当たりの浸透圧的に活性な溶質の濃度を指す。本明細書中で使用されるとき、用語「生理学的に許容される重量オスモル濃度」は、生体の正常な機能に従う、またはそれに特徴的な重量オスモル濃度を指す。よって、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物の投与は、哺乳類に投与されたとき、長期のまたは恒久的な有害な効果を実質的に有しない重量オスモル濃度を示す。重量オスモル濃度は、溶媒キログラム当たりの浸透圧的に活性な溶質のオスモルを用いて表され（ｏｓｍｏｌ／ｋｇまたはＯｓｍ／ｋｇ）、その溶液中に存在する全ての溶質のモル濃度の合計に等しい。溶液の重量オスモル濃度は、浸透圧計を用いて測定され得る。最新の研究室で最も一般的に使用される器具は、氷点降下浸透圧計である。この器具は、重量オスモル濃度が増加している溶液中で起こる氷点変化（氷点降下浸透圧計）、または重量オスモル濃度が増加している溶液中で起こる蒸気圧変化（蒸気圧降下浸透圧計）を測定する。
【００７３】
この実施形態の態様において、ヒドロゲル組成物は、例えば、約１００ｍＯｓｍ／Ｌ、約１５０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２００ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ、約３００ｍＯｓｍ／Ｌ、約３５０ｍＯｓｍ／Ｌ、約４００ｍＯｓｍ／Ｌ、約４５０ｍＯｓｍ／Ｌ、または約５００ｍＯｓｍ／Ｌの容量オスモル濃度を示す。この実施形態の他の態様において、ヒドロゲル組成物は、例えば、少なくとも１００ｍＯｓｍ／Ｌ、少なくとも１５０ｍＯｓｍ／Ｌ、少なくとも２００ｍＯｓｍ／Ｌ、少なくとも２５０ｍＯｓｍ／Ｌ、少なくとも３００ｍＯｓｍ／Ｌ、少なくとも３５０ｍＯｓｍ／Ｌ、少なくとも４００ｍＯｓｍ／Ｌ、少なくとも４５０ｍＯｓｍ／Ｌ、または少なくとも５００ｍＯｓｍ／Ｌの容量オスモル濃度を示す。この実施形態のなおも他の態様において、ヒドロゲル組成物は、例えば、最大１００ｍＯｓｍ／Ｌ、最大１５０ｍＯｓｍ／Ｌ、最大２００ｍＯｓｍ／Ｌ、最大２５０ｍＯｓｍ／Ｌ、最大３００ｍＯｓｍ／Ｌ、最大３５０ｍＯｓｍ／Ｌ、最大４００ｍＯｓｍ／Ｌ、最大４５０ｍＯｓｍ／Ｌ、または最大５００ｍＯｓｍ／Ｌの容量オスモル濃度を示す。この実施形態の依然として他の態様において、ヒドロゲル組成物は、例えば、約１００ｍＯｓｍ／Ｌ〜約５００ｍＯｓｍ／Ｌ、約２００ｍＯｓｍ／Ｌ〜約５００ｍＯｓｍ／Ｌ、約２００ｍＯｓｍ／Ｌ〜約４００ｍＯｓｍ／Ｌ、約３００ｍＯｓｍ／Ｌ〜約４００ｍＯｓｍ／Ｌ、約２７０ｍＯｓｍ／Ｌ〜約３９０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２２５ｍＯｓｍ／Ｌ〜約３５０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ〜約３２５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２７５ｍＯｓｍ／Ｌ〜約３００ｍＯｓｍ／Ｌ、または約２８５ｍＯｓｍ／Ｌ〜約２９０ｍＯｓｍ／Ｌの容量オスモル濃度を示す。
【００７４】
本明細書の態様は、一部において、実質的な安定性を示す、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物を提供する。本明細書中で使用されるとき、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物について言及するとき、用語「安定性」または「安定な」は、個人への投与前の貯蔵中にいかなる実質的なまたは顕著な程度まで低下し、分解し、または壊れる傾向もない組成物を指す。本明細書中で使用されるとき、用語「実質的な熱安定性」、「実質的に熱安定な」、「オートクレーブ安定な」、または「蒸気滅菌安定な」は、本明細書に開示される熱処理にかけられたときに実質的に安定である、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物を指す。
【００７５】
本明細書に開示されるヒドロゲル組成物の安定性は、例えば、常圧でのまたは圧力下での（例えば、オートクレーブ）蒸気滅菌等の、熱処理に、ヒドロゲル組成物をかけることにより決定され得る。好ましくは、その熱処理は、約１分〜約１０分間にわたって少なくとも約１００℃の温度で行われる。本明細書に開示されるヒドロゲル組成物の実質的な安定性は、１）滅菌後の本明細書に開示されるヒドロゲル組成物の押出力の変化（ΔＦ）を決定することにより評価することができ、ここで（特定の添加剤を伴うヒドロゲル組成物の押出力）−（添加剤の添加を伴わないヒドロゲル組成物の押出力）により計算されるとき、２Ｎ未満の押出力の変化は、実質的に安定なヒドロゲル組成物の表示であり、および／または２）滅菌後の本明細書に開示されるヒドロゲル組成物の流体力学的特性の変化を決定することにより評価することができ、ここで（添加剤を伴うゲル製剤のタンジェントδ  １Ｈｚ）−（添加剤を伴わないゲル製剤のタンジェントδ  １Ｈｚ）により計算されるとき、０．１未満のタンジェントδ  １Ｈｚの変化は実質的に安定なヒドロゲル組成物の表示である。よって、本明細書に開示される実質的に安定なヒドロゲル組成物は、以下の特徴：均一性、押出力、粘着性、ヒアルロナン濃度、薬剤（単数または複数）濃度、容量オスモル濃度、ｐＨ、または熱処理前のヒドロゲルに所望される他の流体力学的特徴のうちの１つ以上を滅菌後に保持する。
【００７６】
１つの実施形態において、グリコサミノグリカン重合体および本明細書に開示される少なくとも１つの薬剤を含むヒドロゲル組成物は、本明細書に開示される所望のヒドロゲル特性を維持する熱処理を用いてプロセスされる。この実施形態の態様において、グリコサミノグリカン重合体および本明細書に開示される少なくとも１つの薬剤を含むヒドロゲル組成物は、例えば、約１００℃、約１０５℃、約１１０℃、約１１５℃、約１２０℃、約１２５℃、または約１３０℃の熱処理を用いてプロセスされる。この実施形態の他の態様において、グリコサミノグリカン重合体および本明細書に開示される少なくとも１つの薬剤を含むヒドロゲル組成物は、例えば、少なくとも１００℃、少なくとも１０５℃、少なくとも１１０℃、少なくとも１１５℃、少なくとも１２０℃、少なくとも１２５℃、または少なくとも１３０℃の熱処理を用いてプロセスされる。この実施形態のさらに他の態様において、グリコサミノグリカン重合体および本明細書に開示される少なくとも１つの薬剤を含むヒドロゲル組成物は、例えば、約１００℃〜約１２０℃、約１００℃〜約１２５℃、約１００℃〜約１３０℃、約１００℃〜約１３５℃、約１１０℃〜約１２０℃、約１１０℃〜約１２５℃、約１１０℃〜約１３０℃、約１１０℃〜約１３５℃、約１２０℃〜約１２５℃、約１２０℃〜約１３０℃、約１２０℃〜約１３５℃、約１２５℃〜約１３０℃、または約１２５℃〜約１３５℃の熱処理を用いてプロセスされる。
【００７７】
本明細書に開示されるヒドロゲル組成物の長期安定性は、ヒドロゲル組成物を、例えば、約４５℃環境での約６０日間の保存等の熱処理に供することにより決定され得る。本明細書に開示されるヒドロゲル組成物の長期安定性は、１）４５℃熱処理後のヒドロゲル組成物の透明度および色を評価することにより評価することができ、ここで、透明なおよび無色のヒドロゲル組成物は、実質的に安定なヒドロゲル組成物の表示であり、２）４５℃熱処理後の本明細書に開示されるヒドロゲル組成物の押出力の変化（ΔＦ）を決定することにより評価することができ、ここで、（４５℃熱処理前の特定の添加剤を伴うヒドロゲル組成物の押出力）−（４５℃熱処理後の特定の添加剤を伴うヒドロゲル組成物の押出力）により計算されるとき、２Ｎ未満の押出力の変化は、実質的に安定なヒドロゲル組成物の表示であり、および／または３）滅菌後の本明細書に開示されるヒドロゲル組成物の流体力学的特性の変化を決定することにより評価することができ、ここで、（４５℃熱処理前の特定の添加剤を伴うゲル形成のタンジェントδ  １Ｈｚ）−（４５℃熱処理後の特定の添加剤を伴うゲル形成のタンジェントδ  １Ｈｚ）により計算されるとき、０．１未満のタンジェントδ  １Ｈｚの変化は、実質的に安定なヒドロゲル組成物の表示である。よって、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物の長期安定性は、４５℃熱処理後の以下の特徴：透明度（透明性および半透明性）、均一性、および粘着性のうちの１つ以上の保持により評価される。
【００７８】
この実施形態の態様において、ヒドロゲル組成物は、例えば、約３ヶ月、約６ヶ月、約９ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２１ヶ月、約２４ヶ月、約２７ヶ月、約３０ヶ月、約３３ヶ月、または約３６ヶ月間、室温で実質的に安定である。この実施形態の他の態様において、ヒドロゲル組成物は、例えば、少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１５ヶ月、少なくとも１８ヶ月、少なくとも２１ヶ月、少なくとも２４ヶ月、少なくとも２７ヶ月、少なくとも３０ヶ月、少なくとも３３ヶ月、または少なくとも３６ヶ月間、室温で実質的に安定である。この実施形態の他の態様において、ヒドロゲル組成物は、例えば、約３ヶ月〜約１２ヶ月、約３ヶ月〜約１８ヶ月、約３ヶ月〜約２４ヶ月、約３ヶ月〜約３０ヶ月、約３ヶ月〜約３６ヶ月、約６ヶ月〜約１２ヶ月、約６ヶ月〜約１８ヶ月、約６ヶ月〜約２４ヶ月、約６ヶ月〜約３０ヶ月、約６ヶ月〜約３６ヶ月、約９ヶ月〜約１２ヶ月、約９ヶ月〜約１８ヶ月、約９ヶ月〜約２４ヶ月、約９ヶ月〜約３０ヶ月、約９ヶ月〜約３６ヶ月、約１２ヶ月〜約１８ヶ月、約１２ヶ月〜約２４ヶ月、約１２ヶ月〜約３０ヶ月、約１２ヶ月〜約３６ヶ月、約１８ヶ月〜約２４ヶ月、約１８ヶ月〜約３０ヶ月、または約１８ヶ月〜約３６ヶ月間、室温で実質的に安定である。
【００７９】
本組成物は、非限定的に、緩衝液、防腐剤、等張化剤、塩、抗酸化物質、重量オスモル濃度調整剤、乳化剤、湿潤剤等を含む、非限定的に、他の薬学的に許容される成分を任意に含み得る。
【００８０】
薬学的に許容される緩衝液は、結果として生じる調製物が薬学的に許容されるものであることを条件として、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物を調製するために使用され得る緩衝液である。薬学的に許容される緩衝液の非限定的な例として、酢酸塩緩衝液、ホウ酸塩緩衝液、クエン酸塩緩衝液、中性緩衝食塩水、リン酸塩緩衝液、およびリン酸塩緩衝食塩水が挙げられる。薬学的に許容される緩衝液のいずれの濃度も、治療上有効量の活性成分がこの有効な濃度の緩衝液を用いて回収されるという条件で、本明細書に開示される薬学的組成物の製剤化において有用であり得る。生理学的に許容される緩衝液の濃度の非限定的な例は、約０．１ｍＭ〜約９００ｍＭの範囲内で生じる。薬学的に許容される緩衝液のｐＨは、結果として生じる調製物が薬学的に許容されるという条件で、調整され得る。必要に応じ、酸または塩基が薬学的組成物のｐＨを調整するために使用され得ることが理解される。いずれの緩衝されたｐＨレベルも、治療上有効量のマトリックス重合体活性成分がこの有効なｐＨレベルを用いて回収されるという条件で、薬学的組成物の製剤化において有用であり得る。生理学的に許容されるｐＨの非限定的な例は、約ｐＨ５．０〜約ｐＨ８．５の範囲内で生じる。例えば、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物のｐＨは、約５．０〜約８．０、または約６．５〜約７．５、約７．０〜約７．４、もしくは約７．１〜約７．３であり得る。
【００８１】
薬学的に許容される防腐剤は、非限定的に、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、アセチルシステイン、ブチル化ヒドロキシアニソール、およびブチル化ヒドロキシトルエンを含む。薬学的に許容される防腐剤は、非限定的に、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、チメロサール、酢酸フェニル水銀、硝酸フェニル水銀、例えば、ＰＵＲＩＴＥ（登録商標）（Ａｌｌｅｒｇａｎ，Ｉｎｃ．Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ）等の安定化オキシクロロ組成物、ならびに例えば、ＤＴＰＡまたはＤＴＰＡ‐ビスアミド、ＤＴＰＡカルシウム、およびＣａＮａＤＴＰＡ‐ビスアミド等のキレート剤を含む。
【００８２】
本明細書に開示されるヒドロゲル組成物において有用な薬学的に許容される等張化剤は、非限定的に、例えば、塩化ナトリウムおよび塩化カリウム等の塩、ならびにグリセリンを含む。組成物は、塩として提供されてもよく、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸等を含むが、これらに限定されない、多くの酸と共に形成され得る。塩は、その対応する遊離塩基形よりも水性または他のプロトン溶媒中で可溶性である傾向がある。これらのおよび薬理学分野において既知の他の物質が本明細書に開示される薬学的成物中に含まれ得ることが理解される。薬理学的に許容される成分の他の非限定的な例は、Ａｎｓｅｌ，上記，（１９９９）、Ｇｅｎｎａｒｏ，上記，（２０００）、Ｈａｒｄｍａｎ，上記，（２００１）、およびＲｏｗｅ，上記，（２００３）に見出すことができ、それらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００８３】
本明細書の態様は、一部において、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物を投与することによって個人の軟組織状態を治療する方法を提供する。本明細書中で使用されるとき、用語「治療する」は、軟組織の欠点、欠損、疾患、および／または障害を特徴とする軟組織状態の美容的または臨床的症状を個人において低下させることもしくは消去すること、または軟組織の欠点、欠損、疾患、および／もしくは障害を特徴とする状態の美容的もしくは臨床的症状の開始を個人において遅らせることもしくは妨げることを指す。例えば、用語「治療する」は、軟組織の欠損、疾患、および／または障害を特徴とする状態の症状を例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも１００％低減することを意味し得る。軟組織の欠損、疾患、および／または障害を特徴とする状態の治療における本明細書に開示されるヒドロゲル組成物の有効性は、その状態に関連する１つ以上の美容的、臨床的症状、および／または生理学的指標を観察することにより決定され得る。軟組織の欠損、疾患、および／または障害における改善は、同時療法の必要性が低減されたことによってもまた示され得る。当業者であれば、特定の軟組織の欠損、疾患、および／または障害に関連する適切な症状または指標を認識し、また、ある個人が本明細書に開示される化合物または組成物での治療の候補であるかどうかを決定する方法を認識するであろう。
【００８４】
本発明に従うヒドロゲル組成物は、個人に投与される。個人は、典型的に、いずれの年齢、性別、または人種のヒトでもある。典型的に、軟組織状態を治療するための従来の処置の候補であるいずれの個人も本明細書に開示される方法の候補である。老化皮膚の徴候を有する対象は成人であるが、早期老化または治療に好適な他の皮膚状態（例えば、傷跡）を有する対象もまた、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物で治療され得る。さらに、本開示のヒドロゲル組成物および方法は、現在の軟組織移植技術では技術的に不可能であり得る、または審美的に許容され得ない、体の部分または領域の少しの／中程度の拡張、形の変化、または輪郭の変化を求める個人に適用し得る。手術前評価は、その処置に関連する全ての危険性および利点を開示する徹底的なインフォームドコンセントに加えて、ルーチンの履歴および身体検査を典型的に含む。
【００８５】
本明細書に開示されるヒドロゲル組成物および方法は、軟組織状態の治療において有用である。軟組織状態は、非限定的に、軟組織の欠点、欠損、疾患、および／または障害を含む。軟組織状態の非限定的な例は、例えば、胸の増大、胸の再構築、乳房固定、小乳房症、胸部発育不全、ポーランド症候群、カプセルの収縮および／または破裂等の移植合併症に起因する欠陥等の、胸の欠点、欠損、疾患、および／または障害、例えば、顔面の増大、顔面の再構築、メソセラピー、パリー‐ロンバーグ症候群、深在性エリテマトーデス、皮膚の穴、傷跡、こけた頬、薄い唇、鼻の欠点もしくは欠損、後眼窩の欠点もしくは欠損、眉間の線、鼻唇の線、口周囲の線、および／もしくはほうれい線等の顔のひだ、線、および／もしくはしわ、および／または顔面の他の輪郭の欠陥もしくは欠点等の、顔の欠点、欠損、疾患、または障害、首の欠点、欠損、疾患、または障害、皮膚の欠点、欠損、疾患、および／または障害、例えば、上腕、前腕、手、肩、背中、腹部を含む胴、臀部、腿、ふくらはぎを含む下腿、足底皮下脂肪を含む足、眼、生殖器、または他の体の部分、領域、もしくは範囲の増大または再構築等の、他の軟組織の欠点、欠損、疾患、および／または障害、またはこれらの体の部分、領域、もしくは範囲に影響する疾患または障害、失禁、大便失禁、他の形態の失調、および胃食道逆流疾患（ＧＥＲＤ）を含む。本明細書中で使用されるとき、用語「メソセラピー」は、上皮、真皮上皮の接合部、および／または真皮に小さな多数の液滴として投与される薬剤の上皮内、皮内、および／または皮下注入を含む、皮膚の非外科的美容処置技術を指す。
【００８６】
本明細書に開示される方法のいずれかで使用されるヒドロゲル組成物の量は、所望される変化および／または改善、所望される軟組織状態の症状の低下および／または消去、個人および／または医師により所望される臨床的および／または美容的効果、ならびに治療される体の部分または領域に基づいて典型的に決定されるであろう。組成物投与の有効性は、以下の臨床的および／または美容的測定：軟組織の形の変化および／または改善、軟組織の大きさの変化および／または改善、軟組織の輪郭の変化および／または改善、組織機能の変化および／または改善、組織内殖の支持および／または新規コラーゲン沈着、組成物の移植維持、患者の満足および／または生活の質の改善、ならびに埋没可能な外来物質の使用の減少のうちの１つ以上により表され得る。
【００８７】
顔面の軟組織の治療におけるその組成物および方法の有効性は、以下の臨床的および／または美容的測定：唇、頬、もしくは眼領域の大きさ、形、および／または輪郭の増大のような顔面の造作の大きさ、形、および／または輪郭の増大、唇、頬、もしくは眼領域の形の大きさ、形、および／または輪郭の変化のような顔面の造作の大きさ、形、および／または輪郭の変化、皮膚のしわ、ひだ、もしくは線の減少または消去、皮膚のしわ、ひだ、または線に対する抵抗性、皮膚の水分補給、皮膚の弾力性の増加、皮膚の粗さの低下または消去、皮膚緊縮性の増加および／または改善、ストレッチマークの減少または消去、皮膚の色調、つや、明るさ、および／もしくは輝きの増加ならびに／または改善、皮膚の色の増加および／または改善、皮膚の青白さの低下または消去、組成物の移植維持、副作用の減少、患者の満足および／または生活の質の改善のうちの１つ以上により表され得る。
【００８８】
なおも別の例として、尿失禁処置について、括約筋支持のための組成物および方法の有効性は、以下の臨床的測定：失禁頻度の減少、移植維持、患者の満足および／または生活の質の改善、ならびに埋没可能な外来性充填剤の使用の減少のうちの１つ以上により表され得る。
【００８９】
この実施形態の態様において、投与されるヒドロゲル組成物の量は、例えば、約０．０１ｇ、約０．０５ｇ、約０．１ｇ、約０．５ｇ、約１ｇ、約５ｇ、約１０ｇ、約２０ｇ、約３０ｇ、約４０ｇ、約５０ｇ、約６０ｇ、約７０ｇ、約８０ｇ、約９０ｇ、約１００ｇ、約１５０ｇ、または約２００ｇである。この実施形態の他の態様において、投与されるヒドロゲル組成物の量は、例えば、約０．０１ｇ〜約０．１ｇ、約０．１ｇ〜約１ｇ、約１ｇ〜約１０ｇ、約１０ｇ〜約１００ｇ、または約５０ｇ〜約２００ｇである。この実施形態のなおも他の態様において、投与されるヒドロゲル組成物の量は、例えば、約０．０１ｍＬ、約０．０５ｍＬ、約０．１ｍＬ、約０．５ｍＬ、約１ｍＬ、約５ｍＬ、約１０ｍＬ、約２０ｍＬ、約３０ｍＬ、約４０ｍＬ、約５０ｍＬ、約６０ｍＬ、約７０ｍＬ、約８０ｍＬ、約９０ｍＬ、約１００ｍＬ、約１５０ｍＬ、または約２００ｍＬである。この実施形態の他の態様において、投与されるヒドロゲル組成物の量は、例えば、約０．０１ｍＬ〜約０．１ｍＬ、約０．１ｍＬ〜約１ｍＬ、約１ｍＬ〜約１０ｍＬ、約１０ｍＬ〜約１００ｍＬ、または約５０ｍＬ〜約２００ｍＬである。
【００９０】
治療期間は、個人および／または医師により所望される美容的および／または臨床的効果、ならびに治療される体の部分または領域に基づいて典型的に決定されるであろう。この実施形態の態様において、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物の投与は、例えば、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１３ヶ月、約１４ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、または約２４ヶ月間、軟組織状態を治療し得る。この実施形態の他の態様において、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物の投与は、例えば、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月、少なくとも１１ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１３ヶ月、少なくとも１４ヶ月、少なくとも１５ヶ月、少なくとも１８ヶ月、または少なくとも２４ヶ月間、軟組織状態を治療し得る。この実施形態のさらなる態様において、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物の投与は、例えば、約６ヶ月〜約１２ヶ月、約６ヶ月〜約１５ヶ月、約６ヶ月〜約１８ヶ月、約６ヶ月〜約２１ヶ月、約６ヶ月〜約２４ヶ月、約９ヶ月〜約１２ヶ月、約９ヶ月〜約１５ヶ月、約９ヶ月〜約１８ヶ月、約９ヶ月〜約２１ヶ月、約６ヶ月〜約２４ヶ月、約１２ヶ月〜約１５ヶ月、約１２ヶ月〜約１８ヶ月、約１２ヶ月〜約２１ヶ月、約１２ヶ月〜約２４ヶ月、約１５ヶ月〜約１８ヶ月、約１５ヶ月〜約２１ヶ月、約１５ヶ月〜約２４ヶ月、約１８ヶ月〜約２１ヶ月、約１８ヶ月〜約２４ヶ月、または約２１ヶ月〜約２４ヶ月間、軟組織状態を治療し得る。
【００９１】
本明細書の態様は、一部分において、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物の投与を提供する。本明細書中で使用されるとき、用語「投与」は、臨床的に、治療的に、または実験的に有益な結果をもたらす可能性のある、本明細書に開示される組成物を個人に提供するいずれの送達機構をも意味する。個人に組成物を投与するために使用される実際の送達機構は、非限定的に、皮膚状態の型、皮膚状態の位置、皮膚状態の原因、皮膚状態の重篤さ、所望される軽減の程度、所望される軽減の期間、使用される特定の組成物、使用される特定の組成物の排泄速度、使用される特定の組成物の薬力学、使用される特定の組成物中に含まれる他の化合物の性質、特定の投与経路、例えば、年齢、体重、一般的な健康等の、個人の特定の特徴、履歴、および危険因子、またはそれらの組み合わせを含む要因を考慮に入れることにより当業者に決定され得る。この実施形態の一態様において、本明細書に開示される組成物は、注入により個人の皮膚領域に投与される。
【００９２】
個々の患者へのヒドロゲル組成物の投与経路は、個人および／または医師により所望される美容的および／または臨床的効果、ならびに治療される体の部分または領域に基づいて典型的に決定されるであろう。本明細書に開示される組成物は、非限定的に、針を伴うシリンジ、ピストル（例えば、油空圧ピストル）、カテーテル、局所的なもの、または直接的な外科的埋没によるものを含む当業者に既知のいずれの手段によっても投与され得る。本明細書に開示されるヒドロゲル組成物は、例えば、皮膚領域もしくは皮下組織領域等の、皮膚領域に投与され得る。例えば、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物は、約０．２６ｍｍ〜約０．４ｍｍの直径および約４ｍｍ〜約１４ｍｍに及ぶ長さの針を利用して注入され得る。代替的に、その針は２１〜３２Ｇであり、かつ約４ｍｍ〜約７０ｍｍの長さを有し得る。好ましくは、針は、使い捨ての針である。針は、シリンジ、カテーテル、および／またはピストルと結合され得る。
【００９３】
加えて、本明細書に開示される組成物は、一回または複数回にわたり、投与され得る。最終的に、使用されるタイミングは、良質医療の基準に従うであろう。例えば、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物は、１回、または数日間もしくは数週間空けたセッションでいくつかのセッションにわたり投与され得る。例えば、個人は、１、２、３、４、５、６、もしくは７日毎、または１、２、３、もしくは４週間毎に本明細書に開示されるヒドロゲル組成物を投与され得る。個人への本明細書に開示されるヒドロゲル組成物の投与は、毎月または隔月の頻度であるか、または３、６、９、または１２ヶ月毎に投与され得る。
【００９４】
本明細書の態様は、一部分において、皮膚領域を提供する。本明細書中で使用されるとき、用語「皮膚領域」は、上皮皮膚接合部、ならびに表層真皮（乳頭状領域）および深層真皮（網状領域）を含む真皮を含む、皮膚の領域を指す。皮膚は、３つの主要な層である、防水性を提供し、かつ感染に対するバリアとして働く上皮、皮膚の付属物のための場所として働く真皮、および皮下組織（皮下脂肪層）から成る。上皮は、血管を含有せず、真皮からの拡散により養われる。上皮を作り上げる細胞の主な型は、ケラチノサイト、メラノサイト、ランゲルハンス細胞、およびメルケル細胞である。
【００９５】
真皮は、結合組織からなる上皮の下の皮膚層であり、圧力および歪みから体を保護する。真皮は、基部膜により上皮にしっかりと結合される。それはまた、触覚および温覚を与える、多くの機械受容器／神経末端を抱えもする。それは、毛包、汗腺、皮脂腺、アポクリン汗腺、リンパ管、および血管を含有する。真皮中の血管は、栄養を提供し、かつその細胞自体からのおよび上皮の基底細胞層からの除去物を廃棄する。真皮は、構造的に２つの領域：乳頭状領域と呼ばれる上皮に近い表面領域、および網状領域として知られる深くより厚い領域に分けられる。
【００９６】
乳頭状領域は、ゆるい乳輪状結合組織からなる。それは、上皮に向かって伸びる乳頭突起と呼ばれるその指のような突起部にちなんで名付けられる。乳頭突起は、上皮と互いに組み合わさる「でこぼこの」表面を真皮に提供し、その２つの皮膚層間結合を増強する。網状領域は、乳頭状領域中に深く存在し、かつ通常はるかにより厚い。それは、密集した不規則な結合組織からなり、それ全体を織りなすコラーゲン性の、弾力性の、および網状の繊維の密集からその名前が付けられている。これらのタンパク質繊維は、真皮の強度、拡張性、および弾力性の特性を提供する。髪の毛の根元、皮脂腺、汗腺、受容体、爪、および血管もまた、網状領域内に位置する。入れ墨のインクは、真皮中に保持される。妊娠による妊娠線もまた、真皮中に位置する。
【００９７】
皮下組織は、真皮の下に存在する。その目的は、下にある骨および筋肉に皮膚の皮膚領域を結合すること、および皮膚領域に血管および神経を供給することである。それは、ゆるい結合組織およびエラスチンからなる。主な細胞型は、線維芽細胞、マクロファージ、および脂肪細胞である（皮下組織は、体脂肪のうちの５０％を含有する）。脂肪は、体の詰め物および断熱材として働く。
【００９８】
この実施形態の一態様において、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物は、皮膚領域または皮下組織領域への注入により個人の皮膚領域に投与される。この実施形態の態様において、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物は、例えば、上皮皮膚接合領域、乳頭状領域、網状領域、またはそれらの組み合わせへの注入により個人の皮膚領域に投与される。
【００９９】
有利なことに、本組成物のうちのいくつかは、例えば、患者の薄い皮膚領域における、細線の出現を低減することにおいて特に有用かつ有効である。例えば、患者に、約１ｍｍを超えない深さで、本明細書の他の箇所に記載される皮膚充填剤組成物を投与するステップを含む、細線治療のための方法が提供される。
【０１００】
本明細書の他の態様は、一部において、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物を、皮膚状態を患う個人に投与するステップを含む、皮膚状態を治療する方法を開示し、ここでその組成物の投与は、皮膚状態を改善し、それにより皮膚状態を治療する。この実施形態の一態様において、皮膚の脱水を治療する方法は、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物を、皮膚の脱水を患う個人に投与するステップを含み、その組成物の投与は、皮膚に水分を補給し、それにより皮膚の脱水を治療する。この実施形態の別の態様において、皮膚の弾力性の不足を治療する方法は、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物を、皮膚の弾力性の不足を患う個人に投与するステップを含み、その組成物の投与は皮膚の弾力性を増大させ、それにより皮膚の弾力性の不足を治療する。この実施形態のなおも別の態様において、皮膚の粗さを治療する方法は、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物を、皮膚の粗さを患う個人に投与するステップを含み、その組成物の投与は、皮膚の粗さを低下させ、それにより皮膚の粗さを治療する。この実施形態のさらに別の態様において、皮膚の緊縮性の不足を治療する方法は、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物を、皮膚の緊縮性の不足を患う個人に投与するステップを含み、その組成物の投与は、皮膚をよりぴんと張らせ、それにより皮膚の緊縮性の不足を治療する。
【０１０１】
この実施形態の１つのさらなる態様において、皮膚のストレッチマークを治療する方法は、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物を、皮膚のストレッチマークを患う個人に投与するステップを含み、その組成物の投与は、皮膚のストレッチマークを減少させまたは消去し、それにより皮膚のストレッチマークを治療する。この実施形態の別の態様において、皮膚の青白さを治療する方法は、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物を、皮膚の青白さを患う個人に投与するステップを含み、その組成物の投与は、皮膚の色調または輝きを増大させ、それにより皮膚の青白さを治療する。この実施形態の別の態様において、皮膚のしわを治療する方法は、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物を、皮膚のしわを患う個人に投与するステップを含み、その組成物の投与は、皮膚のしわを減少させまたは消去し、それにより皮膚のしわを治療する。この実施形態のさらに別の態様において、皮膚のしわを治療する方法は、本明細書に開示されるヒドロゲル組成物を個人に投与するステップを含み、その組成物の投与は、皮膚のしわに対して皮膚を抵抗性にさせ、それにより皮膚のしわを治療する。
【０１０２】
いくつかの実施形態において、皮膚充填剤は、持続的な生物学的利用能を有する。例えば、（例えば、顔面のくぼみの軟組織の欠損の修正のためにヒトに皮内でまたは皮下で）ヒトの皮膚に導入されたときに、ヒトにアスコルビン酸（または他のビタミン）を少なくとも約１ヶ月〜最大約２０ヶ月間、またはそれを超えて放出する、皮膚充填剤が提供される。
【０１０３】
例えば、充填剤の期間と調和したビタミンＣ有効性の維持を予測するために、結合度についての見積もりがなされる。この見積もりは、エーテル化によるＨＡへのＡＡ２Ｇ結合の形成に基づいた。その製剤は生理学的条件下で安定であるが、細胞膜に結合されたα‐グルコシダーゼによりアスコルビン酸（ＡｓＡ）の放出を開始する。α‐グルコシダーゼが細胞膜に結合しているという事実のために、ＡｓＡの放出は、充填剤／細胞境界面で起こる。ＨＡ‐ＡＡ２ＧからのＡｓＡのさらなる放出にＨＡ分解が付随し、ＡＡ２Ｇが線維芽細胞に使用可能になるであろう。ＡｓＡの放出はしたがって、ＡＡ２Ｇ結合度およびＨＡの期間による。およそ５モル％の結合度を有するゲルは、少なくとも最大１ヶ月間、例えば、３〜５ヶ月間、活性ビタミンＣを放出し得る。１０モル％の結合度を有するゲルは、最大６〜８ヶ月間、活性ビタミンＣを放出し得る。１５モル％の結合度を有するゲルは、最大約１０ヶ月間、活性ビタミンＣを放出し得る。３０モル％では、最大１年半である。
【０１０４】
【表２】
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＊ゲルのパラメータ：体積  ０．１ｃｃ、濃度  ２４ｍｇ／ｍＬに基づく。（０．１×２４×３％×１０００）／（３３８＊０．１）＝２．１３（ｍＭ）
＊＊仮定：
ＡｓＡは一定の速度で放出される。
ＡｓＡの有効な濃度は０．０５ｍＭであり、２日間超、有効性を維持する。２．１３＊２／（０．０５＊３０）＝２．８（ヶ月）
【０１０５】
本発明の１つの実施形態において、Ｓｔａｒ‐ＰＥＧエポキシドと架橋結合されたヒアルロン酸を含み、かつ約３モル％〜約４０モル％の結合度でそのヒアルロン酸に結合されたビタミンＣ誘導体（例えば、ＡＡ２Ｇ（アスコルビン酸２‐グルコシド）、Ｖｉｔａｇｅｎ（リン酸Ｌ‐アスコルビル３‐アミノプロピル）、およびＳＡＰ（リン酸アスコルビルナトリウム）のうちの１つ）を有する、皮膚充填剤が提供される。
【０１０６】
この皮膚充填剤の作製方法は、４‐アームエポキシドによってキャップされたＡＡ２Ｇ（ＡＡ２Ｇ‐４アームエポキシド）、未反応の４‐アームエポキシド、および遊離ＡＡ２Ｇを含有する組成物を得るために好適な割合、反応温度、および反応時間で、ペンタエリスリトールグリシダールエーテル（Ｓｔａｒ‐ＰＥＧエポキシド）をアスコルビン酸２‐グルコシド（ＡＡ２Ｇ）と反応させることを含む。４アームエポキシドでキャップされたＡＡ２Ｇ（ＡＡ２Ｇ‐４アームエポキシド）は、エポキシル基によりヒアルロン酸に結合される。未反応の４アームエポキシドは、ヒアルロン酸を架橋結合するための架橋剤として、およびＡＡ２Ｇをさらに結合するための結合剤として働く。
【０１０７】
本発明の別の実施形態において、ＢＤＤＥと架橋結合されたヒアルロン酸を含み、かつ約３モル％〜約１０モル％の結合度でそのヒアルロン酸に結合されたビタミンＣ誘導体（例えば、ＡＡ２Ｇ（アスコルビン酸２‐グルコシド）、Ｖｉｔａｇｅｎ（リン酸Ｌ‐アスコルビル３‐アミノプロピル）、およびＳＡＰ（リン酸アスコルビルナトリウム）のうちの１つ）を有する皮膚充填剤が提供される。
【０１０８】
この皮膚充填剤の作製方法は、ＢＤＤＥによってキャップされたＡＡ２Ｇ（ＡＡ２Ｇ‐ＢＤＤＥ）、未反応のＢＤＤＥ、および遊離ＡＡ２Ｇを含有する組成物を得るために好適な割合、反応温度、および反応時間で、ＢＤＤＥをアスコルビン酸２‐グルコシド（ＡＡ２Ｇ）と反応させることを含む。ＢＤＤＥでキャップされたＡＡ２Ｇ（ＡＡ２Ｇ‐ＢＤＤＥ）は、エポキシル基によりヒアルロン酸に結合される。未反応のＢＤＤＥは、ヒアルロン酸を架橋結合するための架橋剤として、およびＡＡ２Ｇをさらに結合するための結合剤として働く。
【０１０９】
図９は、ＡＡ２Ｇ‐ＰＢＳ溶液からのＡｓＡ放出に対するα‐グルコシダーゼ濃度の効果を示す表である。ＡＡ２ＧのＡｓＡへの変換は、α‐グリコシダーゼの濃度による。α‐グリコシダーゼ濃度がゲル１ｇ当たり６．３ユニットであるとき、ＡＡ２Ｇは１５分間でほとんど完全にＡｓＡに変換した。α‐グリコシダーゼ濃度がゲル１ｇ当たり４．７ユニットであるとき、ＡＡ２ＧをＡｓＡに完全に変換するのに３０分かかった。さらなるα‐グリコシダーゼ濃度喪失は、ＡＡ２ＧのＡｓＡへの変換を遅くした。
【０１１０】
図１０は、本発明に従う結合された皮膚充填剤からの遊離ＡｓＡの放出プロファイルの表示（持続性放出）（モル％でのＡＡ２Ｇ変換対反応時間）を示す。ＡＡ２Ｇは、ＡＡ２Ｇ／ＨＡ混合物中で、４０分でＡｓＡに完全に変換した。ＡＡ２Ｈ/ＨＡ結合物は、ＡｓＡへのＡＡ２Ｇ変換の時間依存性を示した。
【０１１１】
図１１Ａおよび１１Ｂは、本発明に従う様々な皮膚充填剤についての追加の放出データを示す。より具体的には、ＨＡ‐ＡＡ２Ｇゲル中のＡＡ２ＧのＡｓＡへの変換は、α‐グリコシダーゼ濃度に依存する。高いα‐グリコシダーゼ濃度は、ＡＡ２ＧのＡｓＡへの変換を速くした。所与のα‐グリコシダーゼ濃度について、様々な製剤が、ＡＡ２ＧのＡｓＡへのそれぞれ異なるプロファイルを示した。
【０１１２】
本発明の一態様において、細線、例えば、皮膚における比較的表層の溝、例えば、限定されないが、眼の周辺の細線、涙の通り道の領域、額、目尻、眉間の線等の出現を治療することおよび消去することにおいて特に有効である、皮膚充填剤が提供される。
【０１１３】
皮膚充填が注入された皮膚部位における青色の変色の出現（チンダル現象）は、一部の皮膚充填剤の患者によって経験される有意な有害事象である。チンダル現象は、表層の細線じわに対して治療された患者においてより一般的である。チンダル現象からもたらされるいずれの青色の変色もなく、比較的薄い皮膚の領域においてでさえ、細線およびしわを治療するために表層に注入され得る、長期持続性の半透明の充填剤を提供する、本発明の実施形態が開発されてきた。細線または表層のしわは、一般に、皮膚が最も薄い、つまり、皮膚が１ｍｍ未満の真皮厚さを有する、顔面の領域（額、外眼角、唇紅境界／口周囲の線）に典型的に見出される、皮膚におけるしわまたは溝であることが理解される。額上で、平均皮膚厚さは、正常な皮膚について約０．９５ｍｍおよびしわになった皮膚について約０．８１ｍｍである。外眼角周囲の真皮は、さらにより薄い（例えば、正常な皮膚について約０．６１ｍｍおよびしわになった皮膚について約０．４１ｍｍ）。３０または３２ゲージ針の平均外径（細線ゲル適用に典型的に使用される針）は、約０．３０および約０．２４ｍｍである。
【０１１４】
本発明は、チンダル現象をもたらさない、本明細書の他の箇所に記載される皮膚充填剤組成物を提供する。例えば、本発明の組成物は、架橋成分と架橋結合されたヒアルロン酸成分と、架橋成分以外の添加剤とを含み、その組成物は、患者の皮膚領域中に投与されるとき、添加剤を含まないことを除いて実質的に同一である組成物と比べて、低減されたチンダル現象を示す。組成物は、実質的に光透過性であってもよい。
【０１１５】
一実施形態において、添加剤は、ビタミンＣ誘導体、例えば、本明細書の他の箇所に記載される、ヒアルロン酸に化学的に結合され得るＡＡ２Ｇである。
【０１１６】
いくつかの実施形態において、架橋成分は、ＢＤＤＥであり、その結合度は、約３モル％〜約１０モル％、または最大１５モル％もしくはそれよりも大きい。いくつかの実施形態において、組成物は、注入されると患者に安楽を提供するのに好適な量の麻酔剤、例えば、リドカインをさらに含む。
【０１１７】
患者の皮膚における細線を治療する方法もまた提供される。本方法は、一般に、患者の皮膚に、本明細書に記載されるような組成物を導入するステップを含む。例えば、組成物は、ヒアルロン酸成分と、ヒアルロン酸を架橋結合する架橋成分と、架橋成分以外の添加剤との混合物を含み、その組成物は、実質的に光透過性であり、またその皮膚充填剤組成物は、添加剤を含まないことを除いて実質的に同一である組成物と比べて、低減されたチンダル現象を示す。
【０１１８】
本発明のいくつかの実施形態において、組成物は、ＥＤＣ化学反応を用いてジアミンまたはマルチアミン架橋剤と架橋結合されたヒアルロン酸成分を含む。例えば、架橋剤は、ＨＭＤＡであってもよい。
【０１１９】
架橋剤がＨＭＤＡである、本発明のある特定の実施形態において、組成物は、最大約７０ＰａのＧ’、約０．６５〜約０．７５でのＧ”／Ｇ’、約２４Ｎ以下の押出力、および約２４ｍｇ／ｇ〜約２５ｍｇ／ｇの最終ＨＡ濃度を有する。
【０１２０】
添加剤がＨＡ−ＡＡ２Ｇ結合物またはＨＡ−Ｖｉｔａｇｅｎ結合物である、本発明のある特定の実施形態において、結合度は、約３モル％〜約１０モル％、または最大約１５モル％、または最大約４０モル％である。これらの組成物は、少なくとも約３０Ｐａ、より好ましくは少なくとも約４０Ｐａ〜約１００ＰａのＧ’、約０．３０〜約０．５０のＧ”／Ｇ’、約２７Ｎ以下の押出力、および約２４ｍｇ／ｇ〜約２５ｍｇ／ｇの最終ＨＡ濃度を有してもよい。
【０１２１】
本開示の目的のために、本明細書で使用される「結合度」は、結合物、例えば、ヒアルロン酸の反復単位（例えば、ＨＡ二量体）に対するＡＡ２Ｇの、モル割合として定義される。故に、１０モル％の結合度は、１００個のＨＡ反復単位につき１０個の結合したＡＡ２Ｇを意味する。結合度は、下の実施例２に例示される方法、または当業者に既知の他の方法を用いて計算することができる。
【実施例】
【０１２２】
実施例１：架橋剤としてＢＤＤＥを用いた、架橋結合されたＨＡゲルへのＡＡ２Ｐ結合
４００．６ｍｇの低分子量ヒアルロン酸（ＬＭＷ  ＨＡ）を、シリンジ中の１８０２ｍｇの１重量％ＮａＯＨ中で約３０分間水和した。８００．７ｍｇのＡＡ２Ｇ、続いて７１３．７ｍｇのＢＤＤＥ、および１４１６．８ｍｇの１０％ＮａＯＨをバイアル中に入れた。上記溶液（ｐＨ１２超）を５０℃の水浴中で約２０分間反応させ、その後水和ＨＡに添加した。その添加後、その混合物を、２つのシリンジ間を往復させることにより約２０回混合した。その混合ペーストをバイアル中に入れ、５０℃の水浴中に約２．５時間入れた。２２３．５ｍｇの１２Ｍ  ＨＣｌを９．０５ｇのＰＢＳ（ｐＨ７．４）に添加した。約２．５時間後、ＨＡ‐ＡＡ２Ｇゲルが形成された。そのゲルを切断して断片にし、ＨＣｌ‐ＰＢＳ溶液をそれに添加した。そのゲルを中和させ、環状振騰器上で一晩膨潤させた。そのゲルを、約６０μｍスクリーンを通してサイズ調整し、２つのシリンジ間を往復させることにより約２０回混合した。そのゲルを１５，０００ＭＷＣＯ  ＲＣ透析バッグ中に入れ、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）中で透析した。透析を、ＰＢＳ緩衝液を頻繁に交換しながら約１８５時間続けた。透析後、そのゲルをシリンジ中に入れ、４℃の冷蔵庫内で貯蔵した。
【０１２３】
実施例２：ＡＡ２Ｇ結合の決定
実施例１に記載されるゲルの重量を透析直前、および透析後に書き留めた。そのゲルが透析後に約１ｇ／ｍＬであったと想定した。透析を、１ＬのＰＢＳ中で８時間超につき、顕著なＡＡ２Ｇが出てこなくなった点で止めた。そのＡＡ２Ｇを、ＵＶ／Ｖｉｓ分光光度計（Ｎａｎｏｄｒｏｐ  ２０００Ｃ、ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて２６０ｎｍで測定した。ＡＡ２Ｇの較正曲線を、２％ＨＡ中の異なる濃度のＡＡ２Ｇを用いて計算した（２６０ｎｍでの吸収＝１．４８３８［ＡＡ２Ｇ（ｍＭ）］）。
【０１２４】
透析後のＨＡの重量：ＨＡの出発重量×（透析前の実際の重量／理論的重量）
【０１２５】
透析後のＡＡ２Ｇのｍｍｏｌ：式（２６０ｎｍでの吸収＝１．４８３８［ＡＡ２Ｇ（ｍＭ）］）中に透析後の２６０ｎｍでの吸収を入れた。
【０１２６】
ＡＡ２Ｇでの結合：（ＡＡ２Ｇ（ｍｍｏｌ）／ＨＡ（ｍｍｏｌ））×１００％
実施例１に記載されるゲル中のＡＡ２Ｇ結合度は、１４．７モル％である。
【０１２７】
実施例３：ゲルの流体力学的特性の決定
振動平行プレートレオメータ（Ａｎｔｏｎ  Ｐａａｒ，Ｐｈｙｓｉｃａ  ＭＣＲ  ３０１）を、実施例１で得られたゲルの特性を測定するために使用した。使用されたプレートの直径は２５ｍｍであった。そのプレート間のギャップを１ｍｍに設定した。各測定について、一定の歪みでの周波数掃引を最初に、その後、固定周波数での歪み掃引を行った。Ｇ’（貯蔵弾性係数）を１％の歪みでの歪み掃引曲線から得た。そのゲルについてのその値は、１４５０Ｐａである。
【０１２８】
実施例４：可変性の結合度およびゲル流体力学的特性を有する、架橋剤としてＢＤＤＥを用いた、架橋結合されたＨＡゲルへのＡＡ２Ｇ結合
本手順は、実施例１に記載されるものと類似した。結合度は、架橋剤対ＨＡおよびＡＡ２Ｇモル比を調整することにより修正される。ゲル特性を、実施例３に記載されるように測定した。詳細は、以下の通りである：
【０１２９】
４００．８ｍｇのＬＭＷ  ＨＡを、シリンジ中の１７５２．１ｍｇの１％ＮａＯＨ中で約３０分間水和した。８００．３ｍｇのＡＡ２Ｇ、続いて３５４．１ｍｇのＢＤＤＥ、および１４０２．０ｍｇの１０％ＮａＯＨをバイアル中に入れた。上記溶液（ｐＨ１２超）を５０℃の水浴中で約２０分間反応させ、その後水和ＨＡに添加した。その添加後、その混合物を、２つのシリンジ間を往復させることにより約２０回混合した。その混合ペーストをバイアル中に入れ、５０℃の水浴中に約２．５時間入れた。１４０．９ｍｇの１２Ｍ  ＨＣｌを９．００５３ｇのＰＢＳ（ｐＨ７．４）に添加した。約２．５時間後、ＨＡ‐ＡＡ２Ｇゲルが形成された。そのゲルを切断して断片にし、ＨＣｌ‐ＰＢＳ溶液をそれに添加した。そのゲルを中和させ、環状振騰器上で一晩膨潤させた。そのゲルを、約６０μｍスクリーンを通してサイズ調整し、２つのシリンジ間を往復させることにより約２０回混合した。そのゲルを１５，０００ＭＷＣＯ  ＲＣ透析バッグ中に入れ、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）中で透析した。透析を、ＰＢＳ緩衝液を頻繁に交換しながら約１６４．５時間続けた。透析後、そのゲルをシリンジ中に入れ、４℃の冷蔵庫内で貯蔵した。結合度は１３％である。ゲル貯蔵弾性係数（Ｇ’）は、８０３Ｐａである。
【０１３０】
実施例５：架橋剤としてＢＤＤＥを用いた、架橋結合されたＨＡゲルへのＡＡ２Ｇ結合。結合度は５．３％であり、Ｇ’は約３００Ｐａである。
４００．３ｍｇのＬＭＷ  ＨＡを、シリンジ中の３００２．０ｍｇの１％ＮａＯＨ中で約３０分間水和した。８００．５ｍｇのＡＡ２Ｇ、続いて２６４．３ｍｇのＢＤＤＥ、および１１００．０ｍｇの１０％ＮａＯＨをバイアル中に入れた。上記溶液（ｐＨ１２超）を５０℃の水浴中で約２０分間反応させ、その後水和ＨＡに添加した。その添加後、その混合物を、２つのシリンジ間を往復させることにより約２０回混合した。その混合ペーストをバイアル中に入れ、５０℃の水浴中に約２．５時間入れた。１０４．２ｍｇの１２Ｍ  ＨＣｌを８．５１２８ｇのＰＢＳ（ｐＨ７．４）に添加した。約２．５時間後、ＨＡ‐ＡＡ２Ｇゲルが形成され、ＨＣｌ‐ＰＢＳ溶液をそれに添加した。そのゲルを中和させ、環状振騰器上で週末にかけて（約５５時間）膨潤させた。そのゲルを、約６０μｍスクリーンを通してサイズ調整し、２つのシリンジ間を往復させることにより約２０回混合した。そのゲルを１５，０００ＭＷＣＯ  ＲＣ透析バッグ中に入れ、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）中で透析した。透析を、ＰＢＳ緩衝液を頻繁に交換しながら約１１４時間続けた。透析後、そのゲルをシリンジ中に入れ、４℃の冷蔵庫内で貯蔵した。結合度およびゲル流体力学的特性を、実施例２および３に記載される手順で測定する。結合度は５．３％である。ゲル貯蔵弾性係数は約３００Ｐａである。
【０１３１】
実施例６：架橋剤としてｓｔａｒ‐ＰＥＧエポキシドを用いた、架橋結合されたＨＡゲルへのＡＡ２Ｇ結合。結合度は２９．４％であり、Ｇ’は約２３５Ｐａである。
２００．４ｍｇのＬＭＷ  ＨＡを、シリンジ中の２０００ｍｇの１％ＮａＯＨ中で約３０分間水和した。４００ｍｇのＡＡ２Ｇ、続いて３１２．７ｍｇのｓｔａｒ‐ＰＥＧエポキシド、および１０２６．５ｍｇの１０％ＮａＯＨをバイアル中に入れた。上記溶液を５０℃の水浴中で約２０分間反応させ、その後水和ＨＡに添加した。その添加後、その混合物を、２つのシリンジ間を往復させることにより約２０回混合した。その混合ペーストをバイアル中に入れ、５０℃の水浴中に約２．５時間入れた。１８７．４ｍｇの１２Ｍ  ＨＣｌを３．０３４ｇのＰＢＳ（ｐＨ７．４）に添加した。約２．５時間後、ＨＡ‐ＡＡ２Ｇゲルが形成され、ＨＣｌ‐ＰＢＳ溶液をそれに添加した。そのゲルを中和させ、環状振騰器上で週末にかけて（約６８時間）膨潤させた。そのゲルを、約６０μｍスクリーンを通してサイズ調整し、２つのシリンジ間を往復させることにより約２０回混合した。そのゲルを１５，０００ＭＷＣＯ  ＲＣ透析バッグ中に入れ、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）中で透析した。透析を、ＰＢＳ緩衝液を頻繁に交換しながら約９５時間続けた。透析後、そのゲルをシリンジ中に入れ、４℃の冷蔵庫内で貯蔵した。結合度およびゲル流体力学的特性を、実施例２および３に記載される手順で測定する。結合度は２９．４％である。ゲル貯蔵弾性係数は約２３５Ｐａである。
【０１３２】
実施例７：架橋剤としてｓｔａｒ‐ＰＥＧエポキシドを用いた、架橋結合されたＨＡゲルへのＡＡ２Ｇ結合。結合度は２７．８％であり、Ｇ’は約３６３Ｐａである。
２００．３ｍｇのＬＭＷ  ＨＡを、シリンジ中の２０００ｍｇの１％ＮａＯＨ中で約３０分間水和した。４００．２ｍｇのＡＡ２Ｇ、続いて３１３．４ｍｇのｓｔａｒ‐ＰＥＧエポキシド、および１０２２．６ｍｇの１０％ＮａＯＨをバイアル中に入れた。上記溶液を水和ＨＡに添加した。その添加後、その混合物を、２つのシリンジ間を往復させることにより約２０回混合した。その混合ペーストをバイアル中に入れ、５０℃の水浴中に約２．５時間入れた。１９６．５ｍｇの１２Ｍ  ＨＣｌを３．０１６ｇのＰＢＳ（ｐＨ７．４）に添加した。約２．５時間後、ＨＡ‐ＡＡ２Ｇゲルが形成され、ＨＣｌ‐ＰＢＳ溶液をそれに添加した。そのゲルを中和させ、環状振騰器上で一晩（約２４時間）膨潤させた。そのゲルを、約６０μｍスクリーンを通してサイズ調整し、２つのシリンジ間を往復させることにより約２０回混合した。そのゲルを１５，０００ＭＷＣＯ  ＲＣ透析バッグ中に入れ、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）中で透析した。透析を、ＰＢＳ緩衝液を頻繁に交換しながら約９８．５時間続けた。透析後、そのゲルをシリンジ中に入れ、４℃の冷蔵庫内で貯蔵した。結合度およびゲル流体力学的特性を、実施例２および３に記載される手順で測定する。結合度は２７．８％である。ゲル貯蔵弾性係数は約３６３Ｐａである。
【０１３３】
実施例８：架橋剤としてＢＤＤＥを用いた、架橋結合されたＨＭＷ  ＨＡゲルへのＡＡ２Ｇ結合。結合度は１０モル％であり、Ｇ’は約２４０Ｐａである。
４００．３ｍｇのＨＭＷ  ＨＡを、シリンジ中の２５０１．３ｍｇの４重量％ＮａＯＨ中で約３０分間水和した。１２００ｍｇのＡＡ２Ｇ、続いて３０４．７ｍｇのＢＤＤＥ、および１１７８．６ｍｇの１６重量％ＮａＯＨをバイアル中に入れた。上記溶液（ｐＨ１２超）を５０℃の水浴中で約２０分間反応させ、２０ｃｃのシリンジに移し、その後水和ＨＡに添加した。その添加後、その混合物を２つのシリンジ間を往復させることにより約２０回混合した。その混合ペーストを２０ｃｃバイアル中に入れ、５０℃の水浴中に約２．５時間入れた。約２．５時間後、ＨＡ‐ＡＡ２Ｇゲルが形成された。その後、２２６．６ｍｇの１２Ｍ  ＨＣｌを８４９２．２ｍｇの１０倍ＰＢＳ（ｐＨ７．４）に添加して、ＨＣｌ‐ＰＢＳ溶液を得、そのＨＣｌ‐ＰＢＳ溶液を添加して、ゲルを中和させ、膨潤させた。そのゲルを環状振騰器上で４８時間にわたり中和させ、膨潤させた。そのゲルを、約６０μｍスクリーンを通してサイズ調整し、２つのシリンジ間を往復させることにより約２０回混合した。そのゲルを２０，０００ＭＷＣＯ  ＣＥ透析バッグ中に入れ、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）中で透析した。透析を、ＰＢＳ緩衝液を頻繁に交換しながら約１１４時間続けた。透析後、そのゲルをシリンジ中に入れ、４℃の冷蔵庫内で貯蔵した。結合度およびゲル流体力学的特性を、実施例２および３に記載される手順で測定する。結合度は約１０モル％である。ゲル貯蔵弾性係数は約２４０Ｐａである。
【０１３４】
実施例９：架橋剤としてＢＤＤＥを用いた、架橋結合されたＬＭＷ  ＨＡゲルへのＶｉｔａｇｅｎ結合。結合度は１５モル％であり、Ｇ’は約３６５Ｐａである。
３９８．２ｍｇのＬＭＷ  ＨＡを、シリンジ中の１７５３．２４ｍｇの１重量％ＮａＯＨ中で約４０分間水和した。ＢＤＤＥ（３１１．７ｍｇ）を膨潤したＨＡに添加し、ＨＡをさらなる８０分間、膨潤させ続けた。膨潤したＨＡ／ＢＤＤＥ混合物を５０℃で２０分間予め反応させた。
【０１３５】
８０１．９ｍｇのＶｉｔａｇｅｎを１４５９．７ｍｇの１０重量％ＮａＯＨ中で別に溶解させ、ＢＤＤＥと予め反応させたＨＡと混合した。その混合物を５０℃でさらなる２．５時間、反応させ続けた。約２．５時間後、ＨＡ‐Ｖｉｔａｇｅｎゲルが形成された。次いで、１９５ｍｇの１２Ｍ  ＨＣｌを９００４．０ｍｇの１０倍ＰＢＳ（ｐＨ７．４）に添加して、ＨＣｌ‐ＰＢＳ溶液を得、そのＨＣｌ‐ＰＢＳ溶液を添加して、ゲルを中和させ、膨潤させた。そのゲルを環状振騰器上で４８時間にわたり中和させ、膨潤させた。そのゲルを、約６０μｍスクリーンを通してサイズ調整し、２つのシリンジ間を往復させることにより約２０回混合した。そのゲルを２０，０００ＭＷＣＯ  ＣＥ透析バッグ中に入れ、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）中で透析した。透析を、ＰＢＳ緩衝液を頻繁に交換しながら約１２０時間続けた。透析後、そのゲルをシリンジ中に入れ、４℃の冷蔵庫内で貯蔵した。ゲル流体力学的特性を、実施例３に記載される手順で測定した。結合度を、実施例２に記載されるＡＡ２Ｇ決定と類似の方法を用いて、約１５モル％と決定した。ゲル貯蔵弾性係数は約３６５Ｐａである。
【０１３６】
実施例１０：アミド化化学反応による直鎖状ＨＡへのＶｉｔａｇｅｎ結合
２００．３ｍｇのＨＭＷ  ＨＡを６０ｃｃのシリンジ中の１０ｍＬの水中で水和した。５００ｍｇのＶｉｔａｇｅｎを０．５ｍＬの水中に溶解させ、溶液をｐＨ４．８まで中和した。１９７．７ｍｇのＥＤＣおよび１４９ｍｇのＮＨＳを６ｍＬの水中で別に溶解させた。上記溶液（溶液およびＥＤＣ／ＮＨＳ溶液）を、２３．５ｍＬの水を含有する別の６０ｃｃシリンジに添加する。その２つのシリンジを、２つのシリンジ間を往復させることにより２０回混合する。その混合物を１つのシリンジ中で貯蔵し、３７℃の浴中に４時間浸した。最後に、その溶液を、顕著なＶｉｔａｇｅｎが観察されなくなるまで、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）に対して透析した。結合度を、実施例３に記載される方法と類似の方法により決定した。結合度は約１０モル％である。
【０１３７】
実施例１１：架橋結合されたＨＡゲルへのＡＡ２Ｐ結合
２００．４ｍｇのＬＭＷ  ＨＡを、シリンジ中の１０００ｍｇのＭＥＳ  ５．２緩衝液中で約３０分間水和する。２９２ｍｇのＡＡ２Ｐをバイアル中に入れ、続いて３００ｍｇのｓｔａｒ‐ＰＥＧアミンを添加する。上記溶液を室温で一晩反応させる。そのゲルをＰＢＳ緩衝液で水和し、ＰＢＳ緩衝液に対して透析して、未反応のＡＡ２Ｐを除去した。最終的なゲルを実施例２および３に記載されるように特徴付けて、結合度およびゲル流体力学的特性を決定した。結合度は約２０モル％である。貯蔵弾性係数（Ｇ’）は約５００Ｐａである。
【０１３８】
実施例１２
細線の出現を低減するための、ＡＡ２Ｇを有するＨＡ／ＢＤＤＥ皮膚充填剤製品の製剤化
上記実施例に記載されるゲルのいずれかに対して、透析後、好適な量の遊離ＨＡゲルをそのゲルに添加して、ゲルの粘着性および／または注入可能性の修正を改善し得る。例えば、均一な粘弾性ゲル（「遊離」ＨＡゲル）を得るために、遊離ＨＡ繊維をリン酸緩衝液中で膨潤させる。（例えば、約１ｗ／ｗ％〜約５ｗ／ｗ％の遊離ＨＡを有する組成物を得るために）この非架橋結合ゲルを、透析ステップ前に、実施例１で得られたＨＡ／ＢＤＤＥ架橋結合ゲルに添加する。結果として生じるゲルを次いで、処理済み滅菌シリンジ中に満たし、滅菌のために十分な温度および圧で少なくとも約１分間オートクレーブにかける。オートクレーブ後、最終的なＨＡ／ＡＡ２Ｇ製品を包装し、目尻または他の顔面領域における細線の出現を改善する表層注入のための皮膚充填剤として使用するために医師に配布する。
【０１３９】
実施例１３
リドカインを含むＨＡ‐ＡＡ２Ｇ皮膚充填剤の製剤化
実施例１２の手順に従うが、透析ステップ後、かつ遊離ＨＡゲル添加前に、リドカインクロル水和物（リドカインＨＣｌ）をその混合物に添加する。粉末形態の（リドカインＨＣｌ）を最初にＷＦＩ中で可溶化し、０．２μｍフィルターを通してろ過し得る。希釈ＮａＯＨ溶液を、わずかに塩基性のｐＨ（例えば、約７．５〜約８のｐＨ）に到達させるために、その粘着性ＨＡ／ＡＡ２Ｇゲルに添加する。そのリドカインＨＣｌ溶液を次いで、そのわずかに塩基性のゲルに添加して、最終的に所望される濃度、例えば、約０．３ｗ／ｗ％の濃度に到達させる。すると、ＨＡ／ＡＡ２Ｇ／リドカイン混合物の結果として生じるｐＨは、約７であり、ＨＡ濃度は、約２４ｍｇ／ｇである。適切なブレンダー機構を備えた標準の反応器中で、適切な均一性を得るために機械的混合を行う。
【０１４０】
実施例１４
ＨＡヒドロゲルへのカルボキシル官能基を含有する添加剤の結合
レチノイン酸（トレチノインとしても知られる）、アダパレンス（ａｄａｐａｌｅｎｃｅ）、およびアルファ‐リポ酸等の添加剤は、カルボキシル官能基（‐ＣＯＯＨ）を含有する。これらの添加剤は、ＥＤＣ化学反応を用いたエステル化によりＨＡヒドロゲルに結合される。本発明のある実施形態に従う結合についての実施例は、以下のように説明される：
【０１４１】
２００ｍｇのＨＭＷ  ＨＡを６０ｃｃシリンジ中の１０ｍＬのＭＥＳ緩衝液（ｐＨ４．８）中で水和する。別のシリンジ中で、２００ｍｇのレチノイン酸を５ｍＬの水‐アセトン混合物（水／アセトン体積比１：３）中に溶解させる。上記２つのシリンジをシリンジ接続器により約２０回混合する。次いで、１９７．７ｍｇのＥＤＣおよび１４９ｍｇのＮＨＳを別のシリンジ中の６ｍＬの水中で別に溶解させる。ＥＤＣおよびＮＨＳを含有するシリンジを、ＨＡおよびレチノイン酸を含有するシリンジと接続し、２つのシリンジ間を往復させることにより反応物を少なくとも２０回混合する。その混合物を１つのシリンジ中で貯蔵し、３７℃の浴中に４時間浸す。そのゲルをイソプロパノールに対して透析して、未結合のレチノイン酸を除去し、次いで、無菌条件下でＰＢＳ緩衝液に対して透析する。そのゲルを滅菌シリンジ中に包装し、４℃で貯蔵する。
【０１４２】
実施例１５
ＨＡヒドロゲルへのヒドロキシル官能基を含有する添加剤の結合
レチノール（トレチノインとしても知られる）、カタラーゼ、ジメチルアミノエタノール、およびｇ‐トコフェロール等の添加剤は、ヒドロキシル官能基（‐ＯＨ）を含有する。これらの添加剤は、ＥＤＣ化学反応を用いたエステル化によりＨＡヒドロゲルに結合される。結合についての典型的な実施例は、以下のように説明される：
【０１４３】
２００ｍｇのＨＭＷ  ＨＡを６０ｃｃのシリンジ中の１０ｍＬの２‐（Ｎ‐モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）緩衝液（ｐＨ４．８）中で水和する。別のシリンジ中で、２００ｍｇのレチノール酸を５ｍＬの水‐アセトン混合物（水／アセトン体積比１：３）中に溶解させる。上記２つのシリンジをシリンジ接続器により約２０回混合する。次いで、１９７．７ｍｇのＥＤＣおよび１４９ｍｇのＮＨＳを別のシリンジ中の６ｍＬの水中で別に溶解させる。ＥＤＣおよびＮＨＳを含有するシリンジをＨＡおよびレチノールを含有するシリンジに接続し、２つのシリンジ間を往復させることにより反応物を少なくとも２０回混合する。その混合物を１つのシリンジ中で貯蔵し、３７℃の浴中に４時間浸す。そのゲルをイソプロパノールに対して透析して、未結合のレチノールを除去し、次いで、無菌条件下でＰＢＳ緩衝液に対して透析する。そのゲルを滅菌シリンジ中に包装し、４℃で貯蔵する。
【０１４４】
実施例１６
修飾後のＨＡヒドロゲルへのヒドロキシル官能基を含有する添加剤の結合
これは、２ステップのプロセスである。
【０１４５】
ステップ１：架橋結合されたＨＡゲル、例えば、市販のＨＡベースの皮膚充填剤、例えば、ＪＵＶＥＤＥＲＭ（登録商標）、Ａｌｌｅｒｇａｎ、Ｉｒｖｉｎｅ  ＣＡ、またはＲｅｓｔｙｌａｎｅ（登録商標）Ｍｅｄｉｃｉｓ  ＡｅｓｔｈｅｔｉｃｓをＥＤＣ／ＮＨＳで処理して、ＨＡのカルボキシル基を活性化する。
【０１４６】
ステップ２：活性化されたＨＡヒドロゲルを、ヒドロキシル基を含有する添加剤で処理する。ヒドロキシル基を含有する添加剤は、レチノール、カタラーゼ、ジメチルアミノエタノール、およびｇ‐トコフェロールヒドロキシル官能基（‐ＯＨ）である。
【０１４７】
架橋結合されたＨＡゲルへの添加剤の結合についての典型的な実施例は、以下の通りである：
【０１４８】
２ｍｇのＪｕｖｅｄｅｒｍゲルを２００ｍｇのＥＤＣおよび１５０ｍｇのＮＨＳと室温で混合する。次いで、３ｍＬのアセトン‐水混合物中の２００ｍｇのレチノールを添加する。上記混合物を３７℃で４時間反応させる。そのゲルをイソプロパノールに対して透析して、未結合のレチノールを除去し、次いで、無菌条件下でＰＢＳ緩衝液に対して透析する。そのゲルを滅菌シリンジ中に包装し、４℃で貯蔵する。
【０１４９】
実施例１７
ＨＡヒドロゲルへの成長因子、ペプチド、またはエラスチンの結合
官能アミン基を含有する、上皮成長因子（ＥＧＦ）、形質転換成長因子（ＴＧＦ）、およびペプチド等の添加剤をＨＡに結合させて、有益な皮膚充填剤を形成し得る。これらの添加物は、アミド化化学反応によりＨＡに結合される。結合についての典型的な実施例は、以下のように説明される：
【０１５０】
２００．３ｍｇのＨＭＷ  ＨＡを１０ｍＬのＭＥＳ緩衝水（ｐＨ５．４）中で水和する。１００ｍｇのＭＥＳ溶液中の２０ｍｇのＥＧＦを添加する。上記混合物に、１９７．７ｍｇのＥＤＣおよび１４９ｍｇを添加する。結果として生じる反応混合物を３７℃で４時間反応させる。反応完了後、そのゲルをイソプロパノールに対してさらに透析し、次いで、無菌条件下でＰＢＳ緩衝液に対して透析する。そのゲルを滅菌シリンジ中に包装し、４℃で貯蔵する。
【０１５１】
本発明は、移植された脂肪組織の生存率を向上させる方法をさらに提供する。この方法は、一般に、組成物を、移植された脂肪組織に隣接する患者の皮膚中に導入するステップを含み得、その組成物は、本明細書の他の箇所に記載される組成物である。例えば、組成物は、ヒアルロン酸およびヒアルロン酸に共有結合されたビタミンＣ誘導体を含み得、その結合度は、約３モル％〜約４０モル％である。本発明の他の態様において、皮膚を治療するための方法は、皮膚中に、脂肪組織と、ヒアルロン酸と、ヒアルロン酸に結合されたビタミンＣとを含む組成物を導入することを含む。
【０１５２】
実施例１８
ＨＡヒドロゲルへの成長因子、ペプチド、またはエラスチンの結合
ヒト脂肪組織由来幹細胞（ｈＡＳＣ）に対するビタミンＣおよびその誘導体の分裂促進効果を評価するために、ｈＡＳＣを、組織培養プラスチック上で、遊離型のビタミンＣ（アスコルビン酸）またはその誘導体（ＶｉｔａｇｅｎまたはＡＡ２Ｇ）を補充したまたは補充しない完全ＭｅｓｅｎＰｒｏ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中で４日間培養した。増殖を、ＭＴＴアッセイによって、製造業者（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）によって記載されるように評価した。４日後、アスコルビン酸の０．２５、０．５、および１ｍＭの濃度が、それぞれ、アスコルビン酸を欠いた対照を６０％、８０％、および９６％上回って、増殖を向上させることが見出された（デヒドロゲナーゼ酵素による、黄色のテトラゾリウムＭＴＴの、紫色のホルマザンへの変換の量によって測定（紫色のホルマザンは、洗剤によって可溶化する）。ＡＡ２Ｇの同じ濃度の使用は、それぞれ、対照を７０％、６０％、および５０％を上回る増殖向上をもたらした。同様の結果がＶｉｔａｇｅｎにより得られ、それぞれ、対照を７０％、６０％、および３０％上回る増加を示した。要約すると、ビタミンＣならびにその誘導体ＡＡ２ＧおよびＶｉｔａｇｅｎは、成長因子含有培地の存在下で、細胞培養物中のｈＡＳＣ増殖を向上させる。
【０１５３】
架橋結合されたビタミンＣを有する架橋結合されたＨＡゲル
低減されたチンダル現象および他の利点を示す本発明のある特定の実施形態に従う、架橋結合されたビタミンＣを有し、架橋剤として１，４−ブタンジオール（ｂｕｔａｅｄｉｏｌ）ジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）を用いる、架橋結合されたＨＡベースのゲルの調製が、下の実施例１９および２０に記載される。実施例１９において、ビタミンＣ誘導体は、アスコルビン酸２−グルコシド（ＡＡ２Ｇ）であり、実施例２０において、ビタミンＣ誘導体は、リン酸アスコルビル３‐アミノプロピル（Ｖｉｔａｇｅｎ）である。これらのゲルは、最適な流体力学的特性、優れた注入可能性、および高いＨＡ濃度（２５ｍｇ／ｇ）を有する。いかなる特定の操作理論にも拘束されることを望むものではないが、本発明者らによって、ＡＡ２ＧまたはＶｉｔａｇｅｎのいずれかの存在下で、ＨＡをＢＤＤＥと架橋結合することにより、ゲルの特性が大幅に変化し、そのゲルが、ＢＤＤＥと架橋結合された市販のＨＡゲルと比べて、高い架橋結合密度、高いＨＡ濃度、低い粘度、および低い押出力を有することが発見されている。ＡＡ２ＧまたはＶｉｔａｇｅｎが架橋結合の間に存在するので、形成されたこのゲルは、ペンダント（ｐｅｎｄｅｎｔ）基として、かつＨＡ鎖を単独でまたはＢＤＤＥを介してのいずれかで橋渡しする架橋剤の両方として、ＨＡ鎖に連結されたこれらのアスコルビン酸誘導体を有する。ゲルの顕微鏡的構造は大幅に変化し、針が３０ゲージもの細さであっても、非常に低い押出力を有するゲルをもたらす。さらに、そのゲルは、約３モル％〜約１０モル％、または最大約１５モル％のＨＡに結合されたビタミンＣを有する。ゲルが注入されるとき、それらは、線維芽細胞またはホスホターゼ（ｐｈｏｓｐｈｏｔａｓｅ）から、α−グルコシダーゼ等の内因性酵素によって、活性ビタミンＣを放出する。活性ビタミンＣは、皮膚コラーゲン新生を誘発し得、ゲル分解を阻害するラジカルスカベンジャーとして作用し得る。
【０１５４】
実施例１９
低減されたチンダル現象を伴うＨＡ／ＡＡ２Ｇゲルの製剤化
シリンジ中の４００．１ｍｇのＬＭＷ  ＨＡおよび４０２．３ｍｇのＡＡ２Ｇの混合物を、１７６４．０ｍｇの５重量％ＮａＯＨ溶液を添加した後に約６０分間水和した。別個のバイアル中に、８００．８ｍｇのＡＡ２Ｇ、続いて１４０１．１ｍｇの９．１重量％ＮａＯＨ溶液、および２５２．６ｍｇのＢＤＤＥを添加した。結果として生じた溶液（ｐＨ１２超）を５０℃の水浴中で約２０分間反応させ、その後それを水和ＨＡに移した。その添加後、その混合物を、２つのシリンジ間を往復させることにより約２０回混合した。そのペーストを次いでバイアル中に移し、その後それを５０℃の水浴中に約２．５時間配置した。架橋結合させた後、１９７．０ｍｇの１２Ｍ  ＨＣｌおよび９．１８ｇの１０倍ＰＢＳ（ｐＨ７．４）を含有する溶液を添加して塩基を中和し、ゲルを環状振騰器上で７２時間膨潤させた。ゲルを、約６０μｍ細孔サイズのメッシュに押し通すことによってサイズ調整した。サイズ調整したゲルを、２つのシリンジ間を往復させることにより約２０回混合し、その後それを、ＭＷＣＯ約２０ｋＤａのセルロースエステル透析バッグ中に移し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）に対して、緩衝液を毎日２回交換しながら５日間透析した。透析後、そのゲルを、１ｍＬ  ＣＯＣシリンジ中に分注し、５０００ＲＰＭで５分間遠心分離して気泡を除去し、湿り蒸気で滅菌した。ゲルは、２５ｍｇ／ｇの最終ＨＡ濃度を有し、ＡＡ２Ｇモル％が実施例２に記載されるように計算して約１０モル％、Ｇ’が約８０Ｐａであった。他のゲルを同様の様態で作製し、このうちＧ’値が約６０Ｐａ〜約８０Ｐａであった。
【０１５５】
実施例１９Ａ
低減されたチンダル現象を伴う、リドカインを有するＨＡ／ＡＡ２Ｇの製剤化
実施例１９のゲルに、ある量のリドカインを添加して、０．３ｗｗ％リドカインを有するリドカインゲルを含むＨＡ／ＡＡ２Ｇを得た。リドカインの溶液を、リドカインＨＣｌをＰＢＳ緩衝液（ｐＨ約７．４）中に溶解させることによって調製した。リドカイン溶液のアリコートを、透析後であるが滅菌前に、実施例１９のゲルに添加した。ゲルを次いで完全に混合して、０．３ｗ／ｗ％リドカイン濃度を有する均一化された混合物を得た。
【０１５６】
実施例２０
低減されたチンダル現象を伴うＨＡ／Ｖｉｔａｇｅｎゲルの製剤化
４０１．０ｍｇのＬＭＷ  ＨＡを、シリンジ中の２３５５．０ｍｇの１重量％ＮａＯＨ溶液中で約４５分間水和した。３０３．８ｍｇ  ＢＤＤＥを、水和されたＨＡに添加して、シリンジからシリンジにわたる混合によって１０回混合した。混合物を５０℃の水浴中で１５分間予め反応させた。８００．１ｍｇのＶｉｔａｇｅｎを、９５０．６ｍｇの１５重量％ＮａＯＨ中に別に溶解させ、続いて５１０．１  Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水を添加した。Ｖｉｔａｇｅｎ溶液を、シリンジからシリンジにわたる混合を使用して３０回往復させて、予め加熱された水和ＨＡ／ＢＤＤＥ混合物と混合した。混合物を再び５０℃の水浴中に配置し、反応がさらに２時間進行し、その後、１４８．１ｍｇの１２Ｍ  ＨＣｌおよび８５２３．１ｍｇの１０倍ＰＢＳ（ｐＨ７．４）を含有する溶液を、クロスに添加した。ＨＣｌ−ＰＢＳ溶液を添加して、ゲルを中和し、膨潤させた。そのゲルを環状振騰器上で４８時間にわたり、中和させ、膨潤させた。そのゲルを、約６０μｍスクリーンを通してサイズ調整し、２つのシリンジ間を往復させることにより約２０回混合した。そのゲルを２０，０００ＭＷＣＯ  ＣＥ透析バッグ中に入れ、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）中で透析した。透析を、ＰＢＳ緩衝液を頻繁に交換しながら約１９７時間続けた。透析後、そのゲルを１ｍＬ  ＣＯＣシリンジ中に移し、５０００ＲＰＭで５分間遠心分離し、湿り蒸気で滅菌した。ゲルの最終ＨＡ濃度は、２４ｍｇ／ｇであった。
【０１５７】
１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）化学反応を介して架橋結合されたＨＡゲル
低減されたチンダル現象および他の利点を示す本発明のある特定の実施形態に従う、架橋結合されたＨＡベースのゲルの調製が、下の実施例２１および２２に記載される。実施例２１において、そのゲルは、ＥＤＣ化学反応を介して作製され  架橋剤は、ヘキサメチレンジアミン（ＨＭＤＡ）を用い、実施例２０においては、３−［３−（３−アミノプロポキシ）−２，２−ビス（３−アミノ−プロポキシメチル）−プロポキシ］−プロピルアミン（４アームのアミン−４  ＡＡ）である。架橋結合を、緩やかな条件下、例えば、室温で、および例えば、ｐＨ５．４で行う。反応条件を調節して、最適なゲル特性、優れた注入可能性、および高いＨＡ濃度（約２４ｍｇ／ｇ）を有する、高度に網状のゲルを調製することができる。本発明者らによって、カップリング剤である、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）およびＮ−ヒドロキシコハク酸イミド（ＮＨＳ）またはスルホニル−ＮＨＳ（スルホ−ＮＨＳ）と組み合わせて、中程度の量のＨＭＤＡまたは４  ＡＡのいずれかを用いて、ＨＡを非常に低い水和または反応濃度で架橋結合することが有利であり得ることが発見されている。ゲルは、相互に離れた架橋結合点を有することになり、よって、高い減衰力を有する高度に架橋結合された物質となる。対照的に、かかる低い水和または反応濃度でのＨＡのＢＤＤＥとの架橋結合は、架橋剤が比較的非効率的であるので実行不可能であり得る。
【０１５８】
実施例２１
低減されたチンダル現象を伴うＨＡ／ＨＭＤＡゲルの製剤化
２０．０ｇの１００ｍＭ  ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ５．２）を、１０００．０ｍｇのＬＭＷ  ＨＡを含有するシリンジに添加した。ＨＭＤＡ溶液を、２６０．９ｍｇ  ＨＭＤＡ．ＨＣｌを２０１０．５ｍｇの１００ｍＭ  ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ５．２）中に溶解させ、２μＬの１Ｍ  ＮａＯＨを添加してｐＨを５．２にすることによって調製した。ＥＤＣ溶液を、２５４．２ｍｇのＥＤＣを１１８８．４ｍｇ  １００ｍＭ  ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ５．２）中に溶解させることによって調製し、別個のバイアル中で、４４．３ｍｇのＮＨＳを、１３４１．８ｍｇの１００ｍＭ  ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ５．２）中に溶解させた。約１時間で、ＨＡが完全に水和すると、７９０μＬのＨＭＤＡ溶液を、水和したＨＡに添加した。混合物を、１０回のシリンジからシリンジにわたる混合によって均一化した。４９０μＬのＥＤＣおよび４９０μＬのＮＨＳ溶液を次いで、均一化されたペーストに添加し、シリンジからシリンジにわたる混合によって再び１０回混合した。混合物を次いでバイアルに移し、室温で５時間架橋結合させ、その後、１７．９ｍＬの１倍ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）を添加した。ゲルをローラー上で３日間膨潤させ、その後、それを６０μｍ細孔サイズのメッシュに押し通した。サイズ調整したゲルを、ＭＷＣＯ  ２０ｋＤａのセルロースエステル膜透析管類中に配置し、１倍ＰＢＳに対して、緩衝液を１日２回交換しながら４日間透析した。ゲルを、１ｍＬＣＯＣシリンジ中に分注し、５０００ＲＰＭで５分間遠心分離し、湿り蒸気で滅菌した。ゲルの最終ＨＡ濃度は、２５ｍｇ／ｇであった。
【０１５９】
実施例２２
低減されたチンダル現象を伴うＨＡ／４  ＡＡゲルの製剤化
３２．５５ｇの１００ｍＭ  ＭＥＳ緩衝液ｐＨ５．２を、１０００．４ｍｇのＬＭＷ  ＨＡを含有するシリンジに添加した。４  ＡＡ溶液を、２５６．３ｍｇの４  ＡＡを１０３９．８ｍｇの１００ｍＭ  ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ５．２）中に溶解させ、３８０μＬの６Ｍ  ＨＣｌを添加してｐＨを５．２にすることによって調製した。ＥＤＣ溶液を、２５１．２ｍｇのＥＤＣを１０１３．８ｍｇの１００ｍＭ  ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ５．２）中に溶解させることによって調製し、別個のバイアル中で、７４．７ｍｇのＮＨＳを、２０２０．０ｍｇの１００ｍＭ  ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ５．２）中に溶解させた。約１時間で、ＨＡが完全に水和すると、２６０μＬの４  ＡＡ溶液を、水和したＨＡに添加した。混合物を、１０回のシリンジからシリンジにわたる混合によって均一化した。２７７μＬのＥＤＣおよび２７３μＬのＮＨＳ溶液を次いで、均一化されたペーストに添加し、シリンジからシリンジにわたる混合によって再び１０回混合した。混合物を次いでバイアルに移し、室温で５時間架橋結合させ、その後、６．４ｍＬの１０倍ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）を添加した。ゲルをローラー上で３日間膨潤させ、その後、それを６０μｍ細孔サイズのメッシュに押し通した。サイズ調整したゲルを、ＭＷＣＯ  ２０ｋＤａのセルロースエステル膜透析管類中に配置し、１倍ＰＢＳに対して、緩衝液を１日２回交換しながら４日間透析した。ゲルを、１ｍＬ  ＣＯＣシリンジ中に分注し、５０００ＲＰＭで５分間遠心分離し、湿り蒸気で滅菌した。ゲルは、２３ｍｇ／ｇの最終ＨＡ濃度を有した。
【０１６０】
実施例２３
実施例１９〜２２のゲルの流体力学的特性の決定。
振動平行プレートレオメータである、Ａｎｔｏｎ  Ｐａａｒ  Ｐｈｙｓｉｃａ  ＭＣＲ  ３０１を使用して、ゲルの流体力学的特性を測定した。２５ｍｍのプレート直径を１ｍｍのギャップ高さで使用した。測定を２５℃の一定の温度で行った。各測定は、２％の一定の歪みでの１〜１０Ｈｚの周波数掃引および周波数の対数的な増加、続いて５Ｈｚの一定の周波数での１〜３００％の歪み掃引と共に歪みの対数的な増加からなっていた。貯蔵弾性係数（Ｇ’）および粘性係数（Ｇ”）は、１％歪みでの歪み掃引から得た。
【表３】
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【０１６１】
実施例２４
実施例１９〜２２のゲルの押出力測定値
ゲルを３０ゲージ針に通して押し出すために必要とされる力を、Ｉｎｓｔｒｏｎ  ５５６４およびＢｌｕｅｈｉｌｌ  ２ソフトウェアを使用して測定した。ゲルを１ｍＬ  ＣＯＣシリンジから、３０Ｇ1/2  ＴＳＫ針に通して押し出した。プランジャを１００ｍｍ／分の速度で１１．３５ｍｍにわたって押し、押出力を記録した。
【表４】
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【０１６２】
実施例２５
実施例１９〜２２のゲルの生体適合性試験
ゲルの５０μＬボーラス注入を、Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットの背面の皮内に埋め込んだ。埋没物を、１週目に除去し、ヘマトキシリン・エオシン（Ｈ＆Ｅ）染色、および単核性炎症細胞に対するマーカーであるＣＤ６８染色を用いる組織学によって分析した。ＣＤ６８の３つの２０倍画像を、染色の程度に基づいて０〜４でスコア化した。これらの値を次いで平均化して、試料スコアを得た。各ゲルから４つの試料を分析した。
【表５】
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【０１６３】
実施例２６
実施例１９〜２２のゲル、ＩＳＯ  １０９９３−５の細胞傷害性試験。
ゲルの体外細胞傷害性試験を、ＮＡＭＳＡによって、Ａｇａｒｏｓｅ  Ｏｖｅｒｌａｙ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  ＩＳＯ  １０９９３−５：ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｅｖｉｃｅｓ−Ｐａｒｔ  ５：Ｔｅｓｔｓ  ｆｏｒ  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙに従って行った。三重のウェルに、フィルターディスク上に配置した０．１ｍＬの試験物品、ならびに０．９％  ＮａＣｌ溶液、陰性対照として１ｃｍ長の高密度ポリエチレン、および陽性対照としてラテックスの１×１ｃｍ２  部分を投薬した。各々を、Ｌ９２９マウス線維芽細胞の単層を直接覆っているアガロース表面上に配置した。５％ＣＯ２中、３７℃で２４時間インキュベートした後、培養物を、いずれの異常な細胞形態および細胞溶解について巨視的におよび微視的に検査した。試験物品を、試料の近接における溶解域に基づいて０〜４でスコア化した。試験物品は、いかなる細胞溶解または傷害性も引き起こす証拠を示さなかったため、試料１、３、および４からの試験物質を０としてスコア化した。
【０１６４】
チンダル現象の定量分析
目視観察をさらに支持し、ＨＡ充填剤の比較性能分析を行うために、チンダル現象の定量分析を行うことが必要であるとされた。そのようなものとして、皮膚充填剤に特異的なチンダル現象に対する定量的技法は、文献において何ら存在しない。しかしながら、光散乱および光と皮膚との相互作用についての既存の科学的理解に基づいて、（ａ）比色分析、および（ｂ）分光法に基づく２つの別々のアプローチを用いて、皮膚におけるチンダル現象を定量化した。これらの技法に基づいて、３つの別々の定量的パラメータ（下に概説される）を定義して、体内のチンダル現象を測定した。
【０１６５】
ａ）チンダル現象可視的スコア：スケールは、０．５の増分で、１〜５の範囲を有した。正常な皮膚色調を有し、かつ青色の変色のない注入部位に対して１のスコアを与えた。顕著な青色の変色（典型的にＲｅｓｔｙｌａｎｅまたはＪｕｖｅｄｅｒｍ  Ｕｌｔｒａ  Ｐｌｕｓに関連する）に対して５の最大スコアを与えた。スコア試験試料に対して盲検化される前に、３人の独立した観察者をスケールに対して訓練した。
【０１６６】
ｂ）皮膚色の青色成分−「ｂ」：色彩色差計（ＣＭ２６００Ｄ、Ｋｏｎｉｃａ  Ｍｉｎｏｌｔａ，ＮＪ）を使用して、様々な充填剤を注入された皮膚部位から送達される光の青色成分を定量化した。これは、Ｌ−ａ−ｂ色スケールの「ｂ」成分を使用することによって達成した。
【０１６７】
ｃ）皮膚から送達される「青色光％」：携帯用分光光度計（ＣＭ２６００Ｄ、Ｋｏｎｉｃａ  Ｍｉｎｏｌｔａ，ＮＪ）を使用して、可視光総領域で皮膚から送達される青色光％を定量化した。これは、４００〜４９０ｎｍの可視光スペクトル下面積を積分し、それをスペクトル下総面積（４００〜７００ｎｍ）によって正規化することによって達成した。
【０１６８】
実施例２７
ゲルのチンダル評価
ゲルを、リニアスレッディング技法を使用して、２月齢の無毛ラットの大腿部中に、２７Ｇ1/2  ＴＳＫ針に通して皮内注入した。ゲルを、臨床的な細線手技を模倣するために表層に埋め込んだ。チンダルについての試験を、ゲル埋没の４８時間後に行った。チンダル試験を行う前に、ヘモグロビンの欠如に起因するチンダル現象の対比を改善するために、動物を安楽死させた。
【０１６９】
埋没の２日後の、実施例１９および２１からのゲルの画が、図１２に示される。市販のＪｕｖｅｄｅｒｍ  ＲｅｆｉｎｅおよびＲｅｓｔｙｌａｎｅ  Ｔｏｕｃｈについての画像もまた、比較のために示される。青みがかった線（チンダル現象）は、市販のゲルＪｕｖｅｄｅｒｍ  ＲｅｆｉｎｅおよびＲｅｓｔｙｌａｎｅ  Ｔｏｕｃｈの画像において明確に可視的である。実施例１９、１９Ａ（図示せず）、および２１からのゲルは、チンダル現象を何ら示さなかった。
【０１７０】
０．５の増分での１〜５の可視的スコアを使用して、注入部位をスコア化した。１のスコアを有した注入部位は、皮膚変色を何ら示さなかった一方で、５のスコアを有した注入部位は、重度の青色の皮膚変色を示した。分光分析もまた、比色計（ＣＭ２６００Ｄ、Ｋｏｎｉｃａ  Ｍｉｎｏｌｔａ，ＮＪ）の補助により、注入部位に対して行った。皮膚色の青色成分「ｂ」、および皮膚から送達される青色光の％（４００〜７００ｎｍ）を、独立して測定した。図１３および１４は、可視的チンダルスコアおよび送達される青色光の％を示す。実施例１９および２１からのゲルは、チンダル現象を何ら示さず、より低い可視的チンダルスコアおよび青色光送達値の％を有した。チンダルスコアおよび送達された青色光値の％は、Ｊｕｖｅｄｅｒｍ  ＲｅｆｉｎｅおよびＲｅｓｔｙｌａｎｅ  Ｔｏｕｃｈについて、より高かった。Ｂｅｌｏｔｅｒｏ  Ｓｏｆｔは、いかなるチンダルも示さず、値は、実施例１９および２１のそれらと同等であった。図１３および１４を参照されたい。
【０１７１】
実施例２８
組織学によるゲルの体内持続期間評価
本発明のゲルおよび市販のゲルの５０μＬボーラス注入を、Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットの背面の皮内に埋め込んだ。埋没物を、１週目に除去し、ヘマトキシリン・エオシン（Ｈ＆Ｅ）染色を用いる組織学によって分析した。切片を厳密に注入部位において採取した。２つの切片を、各組織試料から切り取り、Ｈ＆Ｅ染色切片を、縫合スコープを用いて縫合した。試料を次いでグループ化し、次のようにスコア化した；残っている物質の量に応じて、なし（０％）、低（２５％）、中（５０％）、および高（１００％）。図１５を参照されたい。
【０１７２】
実施例２８Ａ
ＭＲＩによるゲルの体内持続期間評価
磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）研究を使用して、メスＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおける皮内注入後４０週間の期間にわたる、本発明のゲルおよび市販のゲルの経時的な体積および表面積変化を評価した。ゲルを、１つの埋没当たり1５０μＬの目標体積で注入した。埋没物は、肩の若干後方の２つの対側部位、膝から若干吻側の２つの対側部位、ならびに頭部および尾の中間点の２つの対側部位に位置した。ＭＲＩ走査を、７  Ｔｅｓｌａ  ７０／３０  Ｂｒｕｋｅｒ  Ｂｉｏｓｐｅｃ  ＭＲＩ走査器上で行った。画像を、埋没の当日（０週目）、および埋没の１２、２４、４０週後に収集した。ゲルの絶対体積対時間のプロットが、下の図１６に示される。高持続性のゲルは、４０週の埋没時点で高い絶対体積を有する。
【０１７３】
実施例２９
目尻の線の治療において使用される本発明の組成物
４０歳の痩せた女性が、目尻の領域に小じわを呈し、皮膚充填剤治療を要求する。３０ゲージ針を使用して、医師は、本発明に従う０．６ｍＬのＨＡベースのゲル（実施例１９に記載されるもの等）を、リニアスレッディング技法を使用して彼女の眼の各々の下の細線中および涙の通り道領域において表層に導入する。ゲルは表層に導入されるが、青色の変色は何ら観察されず、患者は結果に満足する。
【０１７４】
示されるように、本発明の組成物、例えば、実施例１９および２１の組成物は、ある特定のＨＡベースの市販のゲル、例えば、Ｊｕｖｅｄｅｒｍ  Ｒｅｆｉｎｅ／Ｓｕｒｇｉｄｅｒｍ  １８およびＢｅｌｏｔｅｒｏ  Ｓｏｆｔと比べて、低減されたまたは有意でないチンダル現象、および体内で実質的により長い持続期間を有する。例えば、市販の「細線」製剤のＢｅｌｏｔｅｒｏ  Ｓｏｆｔと比べて、本発明の実施例１９は、少なくともこの市販のゲルと同程度に好ましいチンダルスコア有しただけでなく、実質的により高い体内持続期間を有利に示した。
【０１７５】
実施例３０
細線の出現の改善のための本発明の注入可能な組成物
ビタミンＡ、ビタミンＢ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、およびその誘導体等の添加剤を、単独でおよび組み合わせて、多様な実質的に光透過性であり、注入可能なＨＡベースのゲルを作製するような様態で、架橋結合されたヒアルロン酸ゲルに結合させる。ＨＡ成分は、本明細書の他の箇所で定義されるように、例えば、少なくとも９０重量％であり、実質的に完全に低分子量のＨＡ、または約１００％低分子量のＨＡである。これらの添加剤は、任意の好適な手段を使用してＨＡヒドロゲルに結合される。結合されたゲルは、少なくとも約２０ｍｇ／ｇ、例えば、約２３、約２４ｍｇ／ｇ、約２５ｍｇ／ｇ、最大約３０ｍｇ／ｇのＨＡ濃度を有し、細いゲージ針に通す注入に好適な、注入可能なｐＨ中性の粘着性組成物を作製するように、サイズ調整され、プロセスされる。ゲルは、少なくとも約５０ＰＡ、約６０Ｐａ、約７０Ｐａ、約８０Ｐａ、最大約１００Ｐａかつ約１００Ｐａ以下のＧ’値を有する。ゲルは、包装され、オートクレーブ、ＵＶ光、または他の好適な手段を使用して滅菌される。
【０１７６】
ゲルの各々は、患者のしわ、例えば、目尻の領域、鼻唇溝領域、涙の通り道領域、首領域、または皮膚充填から便益を受けるであろう任意の他の顔面領域における、表層注入、例えば、約１．０ｍｍを超えない深さでの皮膚中への注入に有用である。ゲルの表層導入にもかかわらず、チンダル現象に起因する変色は何ら観察されず、患者は結果に満足する。
【０１７７】
最後に、本明細書の態様が様々な実施形態について示されているが、当業者は開示される特定の実施例が本明細書に開示される発明の原理の単に例示であることを容易に理解するであろうことが理解されるべきである。それゆえ、開示される発明は本明細書中に示される特定の方法、プロトコル、および／または試薬等に決して限定されないことが理解されるべきである。よって、本明細書の精神から離れることなく、当業者は多くのおよび様々な改変または変化を作出し得る、あるいは、開示される発明の代替の構成は本明細書中の教示に従ってなされ得る。詳細における変化は付属の請求項中に定義されるような本発明の精神から離れることなく、なされ得る。最後に、本明細書中で使用される用語は特定の実施形態を説明する目的のためのみであり、そして請求項によってのみ定義される本発明の範囲を限定するとは意図されない。さらに、上記説明中に含有される、または付属の図面中に示される全ての事柄は単に例示として、および限定ではないと解釈されるべきであることが意図される。したがって、本発明は示されるおよび説明されるとおりの正確なものに限定されない。
【０１７８】
本発明を実施するために本発明者に知られる最も良い様式を含む、本発明のある特定の実施形態が本明細書中に示される。当然ながら、これらの示される実施形態についての変形は上記説明を読めば当業者に明らかになるであろう。本発明者は、当業者がそのような変形を使用することを適切であると予想し、そして本発明者は本発明が本明細書中に具体的に示されるものとは異なって実施されることを意図する。したがって、本発明は適用可能な法により許可されるように、本明細書中に付属の請求項中に列挙される発明の全ての改変および均等物を含む。さらに、上記に示される要素の、それらの全ての可能な変形の、どんな組み合わせも、本明細書中に別段の定めなき限り、または別段のように文脈により明らかに矛盾しない限り、本発明に含まれる。
【０１７９】
本明細書に開示される本発明の代替の要素または実施形態のグループ化は限定として解釈されるべきでない。各グループ構成要素は個々に、またはそのグループの他の構成要素もしくは本明細書中に見られる他の要素とのどんな組み合わせでも言及され、そして請求され得る。１グループの１つ以上の構成要素は利便性および／または特許性の理由のためにグループ中に含められ、またはグループから消去され得る。そのような包含または消去が起こるとき、本明細書は改変されたグループを含有し、したがって付属の請求項中で使用される全てのマーカッシュ形式のグループの記述を実現するとみなされる。
【０１８０】
別段の定めなき限り、本明細書および請求項で使用される成分の量、分子量等の特性、反応条件等を表す全ての数字は用語「約」により全ての場合において修飾されると理解されるべきである。本明細書で使用されるとき、用語「約」は、そのように指定された項目、パラメータ、または用語が、示された項目、パラメータ、または用語の値の１０パーセント超および未満の範囲を包含することを意味する。したがって、逆の定めなき限り、本明細書および付属の請求項中に設定される数字パラメータは本発明により得られると考えられる所望の特性により変化し得る近似値である。何はともあれ、かつ請求項の範囲に対する均等物の原則の適用を限定する試みではなく、各数字パラメータは少なくとも報告される有意な桁の数字に照らして、かつ通常の端数処理技術を適用することにより解釈されるべきである。本発明の広い範囲を示す数字範囲およびパラメータは近似値であるにもかかわらず、特定の実施例中に示される数値は可能な限り正確に報告される。どの数値も、しかしながら、それらの各試験計測中に見られる標準偏差から必然的に生じるある特定の誤差を本質的に含有する。
【０１８１】
本発明を示す文脈中で（特に以下の請求項の文脈中で）使用される用語「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」、および同様の指示物は、本明細書中に別段の定めなき限りまたは文脈により明らかに矛盾しない限り、単数および複数の両方を含むと解釈されるべきである。本明細書中の値の範囲の列挙はその範囲に入る各別々の値を個々に言及する省略法として働くと単に意図される。本明細書中に別段の定めなき限り、各個々の値は、それが本明細書中に個々に列挙されているかのように本明細書中に組み込まれる。本明細書中に示される全ての方法は、本明細書中に別段の定めなき限り、または文脈により明らかに矛盾しない限り、いかなる好適な順序でも行われ得る。本明細書中に提供されるいかなるおよび全ての実施例または例示的な言語（例えば、「等の」）の使用は単に本発明をよりよく例示することが意図され、そして別段のように請求される本発明の範囲についての限定を提示しない。本明細書中のどの言語も本発明の実施に本質的な非請求要素を示すと解釈されるべきでない。
【０１８２】
本明細書に開示される特定の実施形態は言語からなるまたは本質的に言語からなることを用いて請求項中でさらに限定され得る。請求項中で使用されるとき、出願時の請求項であろうと補正で追加されたものであろうと、接続用語「からなる」は請求項中で特定されない要素、ステップ、または成分を除外する。接続用語「本質的に〜からなる」は特定の物質またはステップ、ならびに基本的なおよび新規の特性（単数または複数）に実質的に影響しないものに請求項の範囲を限定する。そのように請求される本発明の実施形態は本明細書中に本質的にまたは明示的に示され、および可能にされる。
【０１８３】
本明細書中に引用されるおよび特定される全ての特許、特許公報、および他の出版物は、例えば、本発明に関連して使用され得るそのような出版物中に示される組成物および方法を示すおよび開示する目的のために、それらの全体が引用により本明細書中に個々におよび明示的に組み込まれる。これらの出版物は本出願の出願日前のそれらの開示についてのみ提供される。この点におけるいずれも、本発明者が先発明によってまたは他の理由のためにそのような開示に先行する権利を与えられないことの承認として解釈されるべきでない。その日付についての全ての記述またはこれらの文書の内容についての表示は本出願人に入手可能な情報に基づき、そしてこれらの文書の日付または内容の正確さについての承認を構成しない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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