(57)【要約】      （修正有）【課題】関節炎を処置する方法の提供。【解決手段】関節炎を処置するための方法であって、該方法は、徐放性組成物を関節炎の処置が必要な被験体の関節に関節内注射する工程であって、該組成物は、１種以上のリン脂質、コレステロール；および１種以上の治療剤を含むリポソームを含み、ここで該リポソームは、水性懸濁物中にある、方法。該徐放性組成物は、１種以上のリン脂質、およびコレステロールを含む凍結乾燥した脂質ケーキを、１種以上の治療剤を含む水性溶液で再構成して、水性懸濁物を形成することによって調製され得る。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
関節炎を処置する方法であって、該方法は、
徐放性組成物を関節炎の処置が必要な被験体の関節に関節内注射する工程であって、該組成物は、
１種以上のリン脂質、コレステロール；および１種以上の治療剤を含むリポソームを含み、ここで該リポソームは、水性懸濁物中にある、
方法。
【請求項２】
前記徐放性組成物は、前記１種以上のリン脂質および前記コレステロールを含む凍結乾燥した脂質ケーキを、前記１種以上の治療剤を含む水性溶液で再構成して、前記水性懸濁物を形成することによって調製される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記徐放性組成物は、前記１種以上の治療剤と前記１種以上のリン脂質および前記コレステロールを含む脂質ケーキとの凍結乾燥した組み合わせ物を、水性溶液で再構成して、前記水性懸濁物を形成することによって調製される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記１種以上のリン脂質は、ＤＯＰＣ、ＰＯＰＣ、ＳＰＣ、ＥＰＣ、ＰＥＧ−ＤＳＰＥおよびＤＯＰＧからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ＤＯＰＣ：ＤＯＰＧ：コレステロールのモル％比は、約６７．５：７．５：２５である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記治療剤は、有効量の水溶性ステロイドもしくはその薬学的に受容可能な塩を含む水溶性ステロイド溶液を構成する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記水溶性ステロイドは、リン酸デキサメタゾンナトリウムである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記水溶性ステロイド溶液は、バッファーをさらに含む、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記水溶性ステロイド溶液は、キレート化剤をさらに含む、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
前記水溶性ステロイド溶液は、約２ｍｇ用量〜約８ｍｇ用量のデキサメタゾンに等しい有効性を有する、請求項６に記載の方法。
【請求項１１】
前記治療剤は、非ステロイド系抗炎症薬を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記非ステロイド系抗炎症薬は、水溶性非ステロイド系抗炎症薬である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記水溶性非ステロイド系抗炎症薬は、インドメタシンもしくはその薬学的に受容可能な塩である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記インドメタシンの薬学的に受容可能な塩は、インドメタシンナトリウムである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記水溶性非ステロイド系抗炎症薬もしくはその薬学的に受容可能な塩の用量は、４．６５〜５ｍｇ／ｍｌである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
前記治療剤は、疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＤＭＡＲＤは、ＴＮＦ−αアンタゴニストを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＴＮＦ−αアンタゴニストは、エタネルセプトである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
エタネルセプトの用量は、４２．８ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＴＮＦ−αアンタゴニストは、ヒュミラである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＤＭＡＲＤは、メトトレキサートもしくはその薬学的に受容可能な塩を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項２２】
前記メトトレキサートの薬学的に受容可能な塩は、メトトレキサートナトリウムである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
メトトレキサートもしくはその薬学的に受容可能な塩の用量は、２．３〜２．５ｍｇ／ｍｌである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記治療剤は、前記リポソームの水性媒体中に被包される、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記関節炎は、関節リウマチである、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の引用）
本願は、２０１２年７月５日に出願した米国出願第６１／６６８，４４６号および２０１３年３月１５日に出願した米国出願第６１／７９１，６５０号の利益を主張する。これらの開示全体は、本明細書に参考として援用される。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
変形性関節症（ＯＡ）は、関節炎のうちで最も一般的なタイプであり、障害の主要な原因である。これは、関節軟骨の進行性の喪失、軟骨下骨硬化、骨棘形成、滑膜の変化、ならびに粘度が低下し、従って潤滑特性が変化した、増大した体積の滑液によって特徴付けられる、非炎症性の変性関節疾患である。
【０００３】
関節リウマチ（ＲＡ）は、原因不明の慢性全身性炎症性疾患である。遺伝的要因、環境要因、ホルモン要因、免疫学的要因、および感染性の要因が、顕著な役割を果たし得る。この状態の顕著な特徴は、手足に影響を及ぼす持続性の対称性多発性関節炎であるが、滑膜によって裏打ちされているいかなる関節も関与する可能性がある。これは、滑膜炎として公知の、滑膜裏打ちにおける炎症性細胞の蓄積および増殖に起因する。関節外器官の巻き添え（例えば、皮膚、心臓、肺および眼）は、顕著であり得る。
【０００４】
関節内（ＩＡ）薬物注射は、関節炎（ＯＡおよびＲＡを含む）の処置の魅力的な処置アプローチである。市場に出ている種々のステロイドおよびヒアルロン酸製剤が、有効であると考えられるが、頻繁なＩＡ注射を要し、短期間の症状緩和を提供するに過ぎない。他の結晶懸濁物（ｃｒｙｓｔａｌ  ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ）製剤は、ＩＡ注射のための大口径ニードルを要し、小さな関節を処置するには適しておらず、結晶誘発性滑膜炎を生じ得る。利用可能な全身的処置はまた欠点を有し、最も顕著なことには、副作用がある。
【０００５】
上記で概説した欠点に鑑みて、関節炎を処置するための方法であって、よりＩＡ注射の頻度が低く、および／もしくはより長期間の疼痛緩和を伴う方法が必要である。本明細書で開示される方法は、この必要性および他の重要な必要性に対処する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の簡単な要旨）
本明細書で使用される用語「本発明」（「ｉｎｖｅｎｔｉｏｎ」、「ｔｈｅ  ｉｎｖｅｎｔｉｏｎ」、「ｔｈｉｓ  ｉｎｖｅｎｔｉｏｎ」および「ｔｈｅ  ｐｒｅｓｅｎｔ  ｉｎｖｅｎｔｉｏｎ」）は、本特許出願の主題および以下の特許請求の範囲の全てを広くいうことが意図される。これら用語を含む記載は、本明細書に記載される主題も限定せず、以下の特許請求の範囲の意味もしくは範囲も限定しないと理解されるべきである。この要旨は、本発明の種々の局面の高レベルの全体像であり、以下の詳細な説明の節にさらに記載される概念のうちのいくつかを前置きする。この要旨は、特許請求される主題の重要なもしくは本質的な特徴を同定する意図もなく、特許請求される主題の範囲を決定するために別個に使用する意図もない。その主題は、明細書全体、いずれかのもしくは全ての図面および各請求項の適切な部分を参照することによって理解されるべきである。
【０００７】
本発明は、関節炎を処置する方法に関し、前記方法は、上記被験体の関節炎症状を低減するために、関節炎の処置が必要な被験体に、徐放性組成物を関節内注射することを含む。本発明は、関節リウマチを処置するために特に有用である。
【０００８】
本発明の徐放性組成物は、リポソームを含み、上記リポソームは、（ａ）リン脂質もしくはリン脂質の混合物、およびコレステロール；ならびに（ｂ）治療剤もしくはその薬学的に受容可能な塩を含み、ここで上記リポソームは、水性懸濁物中にある。上記徐放性組成物は、脂質ケーキと治療剤とを混合することによって調製され得る。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は、４群のラットにおける、各群をそれぞれ生理食塩水、遊離リン酸デキサメタゾンナトリウム（ＤＳＰ）もしくは上記徐放性組成物の単回のＩＡ注射に供した後の体重変化を示す線グラフである。
【００１０】
【図２】図２は、４群のラットにおける、各群をそれぞれ生理食塩水、遊離ＤＳＰもしくは上記徐放性組成物の単回のＩＡ注射に供した後の臨床的視覚的関節炎スコアの変化を示す線グラフである。
【００１１】
【図３】図３は、４群のラットにおける、各群をそれぞれ生理食塩水、遊離ＤＳＰもしくは上記徐放性組成物の単回のＩＡ注射に供した後の右足関節体積の変化を示す線グラフである。
【００１２】
【図４】図４は、４群のラットにおける、各群をそれぞれ生理食塩水、遊離ＤＳＰもしくは上記徐放性組成物の単回のＩＡ注射に供した後の左足関節体積の変化を示す線グラフである。
【００１３】
【図５】図５は、３群のラットにおける、遊離ＤＳＰもしくは上記徐放性組成物の４回の毎日のＩＡ注射後の体重変化を示す線グラフである。
【００１４】
【図６】図６は、３群のラットにおける、各群をそれぞれ遊離ＤＳＰもしくは上記徐放性組成物の４回の毎日のＩＡ注射に供した後の臨床的視覚的関節炎スコアの変化を示す線グラフである。
【００１５】
【図７】図７は、３群のラットにおける、各群をそれぞれ遊離ＤＳＰもしくは上記徐放性組成物の４回の毎日のＩＡ注射に供した後の右足関節体積の変化を示す線グラフである。
【００１６】
【図８】図８は、３群のラットにおける、各群をそれぞれ遊離ＤＳＰもしくは上記徐放性組成物の４回の毎日のＩＡ注射に供した後の左足関節体積の変化を示す線グラフである。
【００１７】
【図９】図９は、３群のラットの、遊離インドメタシンもしくはインドメタシン徐放性組成物の５回の毎日のＩＡ注射に供した後の体重変化（パネルａ）および臨床的関節炎スコア（パネルｂ）を示す線グラフである。１９日目の第１の矢印は、インドメタシンの最初の毎日のＩＡ投与を示し、２３日目の第２の矢印は、インドメタシンの最後の毎日のＩＡ投与を示す。
【００１８】
【図１０】図１０は、３群のラットの、遊離エタネルセプトもしくはエタネルセプト徐放性組成物の２回のＩＡ注射後の体重変化（パネルａ）および臨床的関節炎スコア（パネルｂ）を示す線グラフである。２３日目の第１の矢印は、エタネルセプトの最初のＩＡ投与を示し、２６日目の第２の矢印は、エタネルセプトの２回目のＩＡ投与を示す。
【００１９】
【図１１】図１１は、３群のラットの、遊離メトトレキサートもしくはメトトレキサート徐放性組成物の２回のＩＡ注射の後の体重変化（パネルａ）および臨床的関節炎スコア（パネルｂ）を示す線グラフである。２３日目の第１の矢印は、メトトレキサートの第１のＩＡ投与を示し、２６日目の第２の矢印は、メトトレキサートの第２のＩＡ投与を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
（発明の詳細な説明）
本明細書で開示されるように、有効量の本明細書で記載される徐放性組成物の被験体へのＩＡ投与は、有利なことには、上記被験体における関節炎の徴候および／もしくは症状を低減し得ることが発見された。本明細書で開示される関節炎処置は、以前の公知の処置より頻度が少ないＩＡ注射を要し得ることもまた発見された。本明細書で開示される関節炎処置が以前に公知の処置より長期の疼痛緩和をもたらすこともまた、発見された。これら発見は、本明細書で記載される関節炎を処置するための方法、組成物および医薬、ならびに関節炎を処置するための組成物の使用において具現化される。
【００２１】
（定義）
上記でおよび本開示全体を通して使用されるように、以下の用語は、別段示されなければ、以下の意味を有することが理解されるものとする。
【００２２】
本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上別の意味が明確に示されなければ、複数形への参照を含む。
【００２３】
用語「リポソーム」および関連する用語は、本明細書で使用される場合、多胞性リポソーム（ｍｕｌｔｉｖｅｓｉｃｕｌａｒ  ｌｉｐｏｓｏｍｅ）（ＭＶＬ）、マルチラメラ小胞（ＭＬＶ）または小さなもしくは大きなユニラメラ小胞（ＵＬＶ）を含む。上記リポソームは、ナノサイズであり、粒子形成成分および薬剤保持成分を含む。上記粒子形成成分は、中性脂質（例えば、トリグリセリド）を実質的に含まない囲われた脂質バリアを形成する。特定の実施形態において、上記粒子形成成分の中には、約０．１％未満の中性脂質がある。他の実施形態において、上記粒子形成成分の中には、中性脂質はない。上記薬剤保持成分は、実質的に水性の媒体を含み、中性脂質（例えば、トリグリセリド）、非水性相（油相）、水−油エマルジョンもしくは非水性相を含む他の混合物のいずれをも実質的に含まない。
【００２４】
用語「有効量」とは、本明細書で使用される場合、関節炎の症状および／もしくは徴候（例えば、疼痛および関節硬直）を低減するために十分である徐放性組成物の用量をいう。
【００２５】
用語「処置する」、「処置される」、もしくは「処置」（「ｔｒｅａｔｉｎｇ」、「ｔｒｅａｔｅｄ」もしくは「ｔｒｅａｔｍｅｎｔ」）とは、本明細書で使用される場合、防止的（例えば、予防的）、緩和的、および治癒的な方法、使用もしくは結果を含む。用語「処置」はまた、組成物（例えば、薬学的組成物）もしくは医薬を言及し得る。
【００２６】
本願全体を通じて、処置は、関節炎の１以上の影響もしくは症状を低減するかもしくは遅らせるための方法を意味する。処置はまた、上記症状のみだけでなく、根底にある病状を低減する方法を言及し得る。処置は、任意の低減であり得、そして関節炎、関節炎の徴候もしくは症状の完全な除去（ａｂｌａｔｉｏｎ）であり得るが、これらに限定されない。処置は、当該分野で公知の技術によって検出されるとおりの関節炎の完全な改善を含み得る。当該分野で認識される方法は、関節炎およびその症状を検出するために利用可能である。これらとしては、いくつか挙げると、放射線検査、関節吸引（ｊｏｉｎｔ  ａｓｐ
ｉｒａｔｉｏｎ）、血液検査（例えば、リウマチ因子の検出もしくは抗ＣＣＰ試験）またはＭＲＩが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、開示される方法は、処置前の被験体もしくはコントロール被験体と比較した場合に、被験体における関節炎の１以上の症状において約１０％の低減がある場合、処置であると考えられる。従って、上記低減は、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、またはその間の任意の量の低減であり得る。
【００２７】
本明細書で使用される場合、防止（ｐｒｅｖｅｎｔ、ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ、もしくはｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）は、関節炎の発症、発生、重篤度、もしくは再発を起こらないようにする（ｐｒｅｃｌｕｄｉｎｇ）、遅らせる（ｄｅｌａｙｉｎｇ）、避ける（ａｖｅｒｔｉｎｇ）、未然に防ぐ（ｏｂｖｉａｔｉｎｇ）、妨げる（ｆｏｒｅｓｔａｌｌｉｎｇ）、止める（ｓｔｏｐｐｉｎｇ）、または邪魔する（ｈｉｎｄｅｒｉｎｇ）方法を意味する。例えば、開示される方法は、本明細書で開示される処置を受けなかった関節炎に罹りやすいコントロール被験体と比較して、関節炎に罹りやすい被験体における関節炎の発症、発生、重篤度もしくは再発または関節炎の１以上の症状（例えば、疼痛、硬直、発熱、関節炎症もしくは関節圧痛）における低減もしくは遅れがある場合に、防止であると考えられる。開示される方法はまた、本明細書で開示される処置を受ける前の被験体の進行と比較して、本明細書で開示される処置を受けた後の関節炎に罹りやすい被験体における関節炎の発症、発生、重篤度、もしくは再発、または関節炎の１以上の症状における低減もしくは遅れがある場合に、防止であると考えられる。従って、関節炎の発症、発生、重篤度、もしくは再発における低減もしくは遅れは、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、またはその間の任意の量の低減であり得る。
【００２８】
用語「被験体」とは、関節炎を有する脊椎動物または関節炎処置の必要があるとみなされる脊椎動物をいい得る。被験体としては、温血動物（例えば、霊長類、およびより好ましくは、ヒトのような哺乳動物）を含む。非ヒト霊長類は、同様に被験体である。用語被験体は、飼い慣らされた動物（例えば、ネコ、イヌなど）、家畜（例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギなど）および実験動物（例えば、マウス、ウサギ、ラット、アレチネズミ、モルモットなど）を含む。従って、獣医の使用および医学的製剤は、本明細書で企図される。用語「関節炎」とは、１以上の関節の炎症を含む関節の障害もしくは状態をいう。用語「関節炎」とは、本明細書で使用される場合、種々の病因および原因（公知もしくは未知のいずれであろうと）の関節炎の種々のタイプおよびサブタイプ（関節リウマチ、変形性関節症、感染性関節炎、乾癬性関節炎、痛風性関節炎、およびループス関連関節炎（ｌｕｐｕｓ−ｒｅｌａｔｅｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）が挙げられるが、これらに限定されない）を包含する。
【００２９】
（脂質ケーキ）
本明細書で記載される関節炎処置で使用される脂質ケーキは、ケーキ、フィルムもしくは粉末の状態にある固体脂質混合物を含む。
【００３０】
特定の実施形態において、上記リン脂質およびコレステロール、またはリン脂質とコレステロールとの混合物は、脂質ケーキへとさらに加工処理される前に、リポソームへと予め形成される。
【００３１】
特定の実施形態において、上記リン脂質およびコレステロール、またはリン脂質とコレステロールとの混合物は、脂質ケーキへとさらに加工処理される前に、リポソームへと予め形成されない。
【００３２】
上記脂質ケーキは、単層構造もしくは二層構造を形成するかまたは組み込まれるかのい
ずれかであり得る種々の脂質から調製され得る。本明細書に提供される脂質ケーキは、トリグリセリドなどの中性脂質を実質的に含まない、１種以上のリン脂質およびコレステロールを含む。リン脂質の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、卵由来ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、卵由来ホスファチジルグリセロール（ＥＰＧ）、卵由来ホスファチジルエタノールアミン（ＥＰＥ）、卵由来ホスファチジルセリン（ＥＰＳ）、卵由来ホスファチジン酸（ＥＰＡ）、卵由来ホスファチジルイノシトール（ＥＰＩ）、ダイズ由来ホスファチジルコリン（ＳＰＣ）、ダイズ由来ホスファチジルグリセロール（ＳＰＧ）、ダイズ由来ホスファチジルエタノールアミン（ＳＰＥ）、ダイズ由来ホスファチジルセリン（ＳＰＳ）、ダイズ由来ホスファチジン酸（ＳＰＡ）、ダイズ由来ホスファチジルイノシトール（ＳＰＩ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ヘキサデシルホスホコリン（ＨＥＰＣ）、水素添加ダイズ由来ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルステアロイルホスファチジルコリン（ＰＳＰＣ）、パルミトイルステアロイルホスファチジルグリセロール（ＰＳＰＧ）、モノオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＭＯＰＥ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、ポリエチレングリコールジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＤＳＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジルセリン（ＤＯＰＳ）、ジミリストイルホスファチジルセリン（ＤＭＰＳ）、ジステアロイルホスファチジルセリン（ＤＳＰＳ）、ジパルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸（ＤＯＰＡ）、ジミリストイルホスファチジン酸（ＤＭＰＡ）、ジステアロイルホスファチジン酸（ＤＳＰＡ）、ジパルミトイルホスファチジルイノシトール（ＤＰＰＩ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジルイノシトール（ＤＯＰＩ）、ジミリストイルホスファチジルイノシトール（ＤＭＰＩ）、ジステアロイルホスファチジルイノシトール（ＤＳＰＩ）。脂質は、上記脂質のうちの１種以上の混合物、または上記脂質のうちの１種以上と上記に列挙していない他の１種以上の脂質との混合物であり得る。
【００３３】
例示的実施形態において、脂質ケーキは、２種のリン脂質（例えば、ＤＯＰＣもしくはＤＯＰＧ）の混合物を含む。別の実施形態において、上記脂質ケーキは、ＤＯＰＣ、ＰＯＰＣ、ＳＰＣ、ＥＰＣ、ＰＥＧ−ＤＳＰＥおよびＤＯＰＧからなる群より選択されるリン脂質とコレステロールとの混合物を含む。別の実施形態において、上記脂質ケーキは、第１のリン脂質と第２のリン脂質との混合物を含み、上記第１のリン脂質は、ＤＯＰＣ、ＰＯＰＣ、ＳＰＣ、もしくはＥＰＣであり、上記第２のリン脂質は、ＰＥＧ−ＤＳＰＥもしくはＤＯＰＧである。上記脂質ケーキの種々の例示的組成は、米国出願第１２／５３８，４３５号（その教示は、全体において本明細書に参考として援用される）に開示される。
【００３４】
例示的実施形態において、上記脂質ケーキ混合物は、約２９．５％〜９０％：３％〜３７．５％：１０％〜３３％のモル比でＤＯＰＣ、ＤＯＰＧおよびコレステロールを含む。別の実施形態において、ＤＯＰＣ：ＤＯＰＧ：コレステロールの比は、約５６．２５〜７２．５モル％：７．５〜１８．７５モル％：２０〜２５モル％である。例示であって限定ではなく、ＤＯＰＣ：ＤＯＰＧ：コレステロールの比は、約６７．５：７．５：２５であり得る。別の実施形態において、上記脂質ケーキ混合物は、上記脂質ケーキに対して約１
２モル％〜約３０モル％未満のコレステロールを含む。別の実施形態において、上記脂質ケーキ混合物は、上記脂質ケーキに対して約１５モル％から約２９モル％のコレステロールを含む。さらに別の実施形態において、上記脂質ケーキ混合物は、上記脂質ケーキに対して約１７．５モル％〜約２８モル％のコレステロールを含む。
【００３５】
別の実施形態において、上記粒子形成成分は、脂肪酸もカチオン性脂質（すなわち、生理学的ｐＨにおいて正味の正電荷を有する脂質）も含まない。
【００３６】
別の実施形態において、上記粒子形成成分は、リン脂質分子に結合された、非常に水和した可撓性の中性ポリマーの長い鎖を有する親水性ポリマーを含む。いかなる理論にも拘束されないが、上記親水性ポリマーは、上記リポソームを安定化し、インビボでより長い循環時間を生じると考えられる。上記親水性ポリマーの例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：約２，０００〜約５，０００ダルトンの分子量を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、メトキシＰＥＧ（ｍＰＥＧ）、ガングリオシドＧＭ１、ポリシアル酸、ポリ乳酸（ポリラクチドともいわれる）、ポリグリコール酸（ポリグリコリドともいわれる）、ポリ乳酸ポリグリコール酸（ａｐｏｌｙｌａｃｔｉｃｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリメトキサゾリン（ｐｏｌｙｍｅｔｈｏｘａｚｏｌｉｎｅ）、ポリエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルオキサゾリン、ポリアスパルタミド（ｐｏｌｙａｓｐａｒｔａｍｉｄｅ）、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、ポリビニルメチルエーテル、ポリヒドロキシエチルアクリレート、誘導体化セルロース（例えば、ヒドロキシメチルセルロースもしくはヒドロキシエチルセルロース）、および合成ポリマー。
【００３７】
上記粒子形成成分は、上記リポソームを標的分子を有する標的細胞に特異的に結合させるために、標的化部分として作用する、抗体もしくはペプチドの脂質結合体をさらに含み得る。上記標的分子の例としては、上皮増殖因子レセプター（ＥＧＦＲ）、血管内皮増殖因子レセプター（ＶＥＧＦ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、およびｅｒｂＢ−２／ｎｅｕ（ＨＥＲ２）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３８】
本明細書に記載の関節炎処置において使用されるリポソームは、小胞を調製するために使用される従来技術によって精製され得る。これら技術としては、以下が挙げられる：エーテル注射法（Ｄｅａｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  （１９７８）  ３０８：  ２５０）、界面活性剤法（Ｂｒｕｎｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ａｃｔａ  （１９７６）  ４５５：  ３２２）、凍結融解法（Ｐｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ，  Ａｒｃｈ．  Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  （１９８１）  ２１２：  １８６）、逆相エバポレーション法（Ｓｚｏｋａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ａｃｔａ．  （１９８０）  ６０１  ：  ５５９  ７１）、超音波処理法（Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  （１９６９）  ８：  ３４４）、エタノール注射法（Ｋｒｅｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  （１９７７）  １６：  ３９３２）、押し出し法（Ｈｏｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ａｃｔａ  （１９８５）  ８１２：５５
６５）、フレンチプレス法（Ｂａｒｅｎｈｏｌｚ  ｅｔ  ａｌ．，  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  （１９７９）  ９９：  ２１０）およびＳｚｏｋａ，  Ｆ．，  Ｊｒ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｂｉｏｅｎｇ．  ９：４６７  （１９８０）に詳述される方法。上記に示した文献のすべては、リポソーム小胞の形成のためのプロセスおよび従来技術を記載しており、これらプロセスの説明は、本明細書に参考として援用される。
【００３９】
例示的実施形態において、上記治療剤は、上記リポソームの薬剤保持成分中に被包され
、ここで上記薬剤保持成分は、実質的に水性媒体を含み、中性脂質（例えば、トリグリセリド）、非水性相（油相）、水−油エマルジョンまたは非水性相を含む他の混合物を実質的に含まない。実質的に水性媒体を含む薬剤保持成分は、関節における上記治療剤のより長期の治療効力および長期放出プロフィールを提供する。対照的に、実質的に非水性の媒体（例えば、ダイズ油媒体）を含む薬剤保持成分に被包される治療剤は、より迅速な放出プロフィールおよびより短期間の治療効力を有する（Ｂｉａｓ  ｅｔ  ａｌ，  Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  Ｐａｌｍｉｔａｔｅ  −  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｋｎｅｅ．  Ｃｌｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２００１；
２１（６）：４２９−４３６）。
【００４０】
特定の実施形態では、脂質ケーキは、リポソームへと予備形成されない１種以上の脂質を含む。上記脂質ケーキは、適切な有機溶媒（エタノール、メタノール、ｔ−ブチルアルコール、エーテルおよびクロロホルムが挙げられるが、これらに限定されない）中に上記脂質を溶解し、そして加熱、真空エバポレーション、窒素エバポレーション、凍結乾燥、もしくは溶媒除去の他の従来の手段によって乾燥することによって調製され得る。
【００４１】
滅菌後、上記脂質溶液は、上記治療剤と混合され、凍結乾燥されて、粉末もしくはケーキを形成する。一般に、少なくとも１種の凍結防止剤および少なくとも１種のバッファーが、上記ステロイド−脂質混合物を有効に凍結乾燥するために添加される。
【００４２】
上記凍結防止剤としては、マンニトール、グリセロール、デキストロース、スクロース、および／もしくはトレハロースが挙げられるが、これらに限定されない。１つの例示的な凍結防止剤は、マンニトールである。
【００４３】
上記バッファーとしては、リン酸二水素ナトリウム二水和物およびリン酸水素二ナトリウム無水物が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４４】
脂質ケーキ調製のいくつかの例は、本発明に関連するので、脂質ケーキ調製のプロセスを例示するために以下に記載される。
【００４５】
（治療剤）
治療剤は、ステロイド溶液、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）（例えば、インドメタシン、疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）または前述のうちの２以上の組み合わせ）、ならびに前述のうちの１種以上と本明細書で具体的に列挙されていない他の成分もしくは化合物との組み合わせであり得る。ＤＭＡＲＤとしては、低分子薬剤（例えば、メトトレキサート、レフルノミド、スルファサラジン、シクロホスファミド、アザチオプリン、シクロスポリンＡ、ｄ−ペニシラミン、抗マラリア薬（例えば、ヒドロキシクロロキン）が挙げられる。ＤＭＡＲＤはまた、生物学的物質、例えば、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）アンタゴニスト（例えば、エタネルセプト、商品名エンブレル（Ｗｙｅｔｈ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｃｏｌｌｅｇｅｖｉｌｌｅ，  ＵＳＡから市販））、アダリムマブ、商品名ヒュミラ（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，
Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ，  Ｉｌｌｉｎｏｉｓ，  ＵＳＡから市販）、インターロイキン−１レセプターアンタゴニスト、インターロイキン−６レセプターアンタゴニスト、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ、ＲＧＤペプチドなどを含む。
【００４６】
例示的実施形態において、上記治療剤は、実質的に水溶性のステロイド溶液（例えば、ＤＳＰ）である。別の例示的実施形態において、上記治療剤は、実質的に水溶性のＮＳＡＩＤ（例えば、インドメタシンの薬学的に受容可能な塩）である。さらに別の例示的実施
形態において、上記治療剤は、実質的に水溶性のＤＭＡＲＤ（例えば、メトトレキサートの薬学的に受容可能な塩、またはＴＮＦ−αアンタゴニスト）である。さらに別の例示的実施形態において、上記治療剤は、リン脂質にも脂肪酸（例えば、パルミテート）にも共有結合されていない。
【００４７】
治療剤は、薬学的に受容可能な賦形剤および薬学的製剤（これは、ヒトおよび動物での使用のための製剤、ならびに研究、実験および関連の用途のための製剤を含む）に適した別の成分と合わされ得る。いくつかの実施形態において、クエン酸バッファー、好ましくは、クエン酸ナトリウムが使用される。他の実施形態において、キレート化剤が使用され、好ましくは、ＥＤＴＡが使用される。
【００４８】
水溶性ステロイドとしては、任意の天然に存在するステロイドホルモン、合成ステロイドおよびそれらの誘導体が挙げられる。水溶性ステロイドとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：コルチゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム（ＤＳＰ）、ヒドロコルチゾン−１７−バレレート、フルオロコルチゾン、フルドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、パラメタゾンおよびエプレレノン。１つの例であって、非限定的なものではないが、水溶性ステロイドは、ＤＳＰである。例えば、約２〜約１００ｍｇ／ｍＬのＤＳＰ溶液を用いて、上記脂質ケーキを再構成し得る。
【００４９】
水溶性ステロイドの薬学的に受容可能な塩としては、非毒性の無機塩基もしくは有機塩基から形成された非毒性の塩が挙げられる。例えば、非毒性の塩は、無機塩基（例えば、アルカリ金属水酸化物もしくはアルカリ土類金属水酸化物、例えば、カリウム、ナトリウム、リチウム、カルシウム、もしくはマグネシウム）；またはアミンなどのような有機塩基を用いて形成され得る。
【００５０】
水溶性ステロイドの薬学的に受容可能な塩はまた、非毒性の無機酸もしくは有機酸から形成された非毒性の塩を含む。有機酸および無機酸の例は、塩酸、硫酸、リン酸、酢酸、コハク酸、クエン酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、パルミチン酸、コール酸、パモ酸、粘液酸、Ｄ−グルタミン酸、グルタル酸、グリコール酸、フタル酸、酒石酸、ラウリン酸、ステアリン酸、サリチル酸、ソルビン酸、安息香酸などである。
【００５１】
（徐放性組成物）
本明細書で記載される関節炎処置において使用される徐放性組成物は、結晶懸濁物を実質的に含まない。例示的実施形態において、上記徐放性組成物中の結晶懸濁物は約０．１％未満である。別の実施形態において、上記徐放性組成物中に結晶懸濁物はない。本明細書で示される徐放性組成物は、リポソームを含み、ここで上記リポソームは、リン脂質もしくはリン脂質の混合物、コレステロール、および１種以上の治療剤を含み、そして上記リポソームは、水性懸濁物中にある。上記徐放性組成物は、１種以上のリン脂質およびコレステロールを含む凍結乾燥した脂質ケーキを、１種以上の治療剤を含む水性溶液で再構成して、水性懸濁物を形成することによって調製され得る。上記徐放性組成物はまた、１種以上の治療剤と、１種以上のリン脂質およびコレステロールを含む脂質ケーキとの凍結乾燥した組み合わせ物を、水性溶液で再構成して、水性懸濁物を形成することによって調製され得る。いくつかの例示的実施形態において、上記脂質ケーキは、脂質成分としての１種以上のリン脂質およびコレステロールから本質的になる。再構成するために適切な水性溶液もしくは媒体としては、バッファー、蒸留水、食塩水、糖溶液、例えば、デキストロース溶液などが挙げられるが、これらに限定されない。他の例示的実施形態において、上記脂質ケーキは、ホスファチジルコリン脂質、ホスファチジルグリセロール脂質およびコレステロールから本質的になる。さらに他の例示的実施形態において、上記脂質ケーキは、（上記ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、およびコレステロール
脂質に加えて）保存剤、凍結防止剤もしくはこれらの組み合わせを含み得る。リポソームを含む徐放性組成物が本明細書でさらに提供され、ここで上記リポソームは、リン脂質もしくはリン脂質の混合物、コレステロール、およびＴＮＦ−αアンタゴニスト、例えば、エタネルセプトもしくはアダリムマブを含み、そして上記リポソームは、水性懸濁物中にある。この組成物の凍結乾燥した形態もまた、本明細書で企図される。
【００５２】
一部の実施形態において、上記徐放性組成物は、上記活性成分のための少なくとも１種の薬学的に受容可能な賦形剤、希釈剤、ビヒクル、キャリア、媒体、保存剤、凍結防止剤もしくはこれらの組み合わせをさらに含む。
【００５３】
例示的実施形態において、本発明の徐放性組成物は、上記脂質ケーキを作製し、それを上記治療剤で再構成して、水性懸濁物を形成することによって調製される。
【００５４】
別の実施形態において、本発明の徐放性組成物は、上記脂質ケーキを調製する間に、上記治療剤を上記脂質混合物に添加し、続いて、上記脂質混合物と上記治療剤との組み合わせを、１種以上の凍結保護剤とともに凍結乾燥して、粉末を形成することによって調製される。
【００５５】
例示的実施形態において、上記徐放性組成物は、約２ｍｇ用量〜約８ｍｇ用量のデキサメタゾンに等しい有効性を有する水溶性ステロイドを含む。例えば、上記徐放性組成物中の４ｍｇ  ＤＳＰの有効性は、３ｍｇ  デキサメタゾンの有効性に等しい。上記徐放性組成物中の１０ｍｇ  ＤＳＰの有効性は、７．６ｍｇ  デキサメタゾンの有効性に等しい。同様に、４０ｍｇ  酢酸メチルプレドニゾロンの有効性は、７．５ｍｇ  デキサメタゾンの有効性に等しい。
【００５６】
本明細書で記載される徐放性組成物は、関節炎（例えば、関節リウマチ）に罹患している患者を処置するために使用され得る。
【００５７】
例示的実施形態において、上記徐放性組成物中の治療剤のうちの約５０％〜約９５％は、非会合形態にある（すなわち、上記治療剤のうちの約５％〜約５０％が、会合形態にある）。別の実施形態において、上記徐放性組成物中の治療剤のうちの約６０〜９０％が、非会合形態にある。用語「非会合形態にある治療剤」とは、上記徐放性組成物のリン脂質／コレステロール画分からのゲル濾過によって分離可能な治療剤分子をいう。
【００５８】
別の実施形態において、上記リン脂質とコレステロールとの組み合わせの、上記治療剤に対する重量比は、約５〜８０  対  約１である。さらに別の実施形態において、上記リン脂質とコレステロールとの組み合わせの、上記治療剤に対する重量比は、５〜４０  対
１である。例えば、上記リン脂質とコレステロールとの組合せの、上記治療剤に対する重量比は、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５もしくは８０  対  約１であり得る。
【００５９】
（関節炎の処置方法）
本発明は、被験体における関節炎を処置する方法であって、有効量の本明細書で記載されるとおりの徐放性組成物を処置の必要な被験体に投与し、それによって、上記被験体における関節炎の症状および徴候が低減されることを包含する方法に関する。
【００６０】
上記徐放性組成物は、ＩＡ投与、筋肉内投与、もしくは皮下投与に適しているように製剤化される。関節内注射は、以下の工程を含む：１）処置される予定の関節の適切な注射部位を同定し、印を付ける工程；２）上記注射部位を無菌操作を使用して滅菌し、必要に応じて、局所麻酔剤を提供する工程。３）上記注射部位において関節腔へと針を刺入する
工程。上記針の刺入は、必要に応じて、超音波ガイドの下で行われ得る。少量の滑液を吸引して、上記針の先端が関節腔内にあることを確認する。４）上記医薬を上記関節腔へと注入する工程。
【００６１】
本発明の徐放性組成物の投与量は、上記実施形態に従って、当業者によって決定され得る。単位用量もしくは複数用量の形態が企図され、各々、特定の臨床状況において利点を提供する。本発明によれば、投与される上記徐放性組成物の実際の量は、処置される予定の被験体の年齢、体重、状態、ならびに関節のタイプに従って変動し得、医療専門家の裁量に依存する。
【００６２】
ＩＡ注射のためのＤＳＰの用量は、患者の状態および関節の大きさに依存する。例示的実施形態において、ＤＰＳの用量は、約０．２ｍｇ〜約６ｍｇ／ＩＡ注射である。別の例示的実施形態において、ＤＰＳの用量は、大関節（例えば、膝関節）に関しては、約２〜約４ｍｇ／ＩＡ注射である。さらに別の例示的実施形態において、ＤＳＰの用量は、小関節（例えば、指節間関節）に関しては、約０．８〜約１ｍｇ／ＩＡ注射である。
【００６３】
例示的実施形態において、ＩＡ注射１回あたりのインドメタシンの用量は、約５ｍｇ〜約３０ｍｇである。別の例示的実施形態において、ＩＡ注射１回あたりのインドメタシンの用量は、約１０〜約２５ｍｇである。さらに別の例示的実施形態において、ＩＡ注射１回あたりのインドメタシンの用量は、約１５〜約２０ｍｇである。
【００６４】
例示的実施形態において、ＩＡ注射１回あたりのメトトレキサートの用量は、約１ｍｇ〜約１５ｍｇである。別の例示的実施形態において、ＩＡ注射１回あたりのメトトレキサートの用量は、約５ｍｇ〜約１２．５ｍｇである。さらに別の例示的実施形態において、ＩＡ注射１回あたりのメトトレキサートの用量は、約７．５ｍｇ〜約１０ｍｇである。
【００６５】
ＩＡ注射の頻度は、毎日から３〜５日ごとに１回、毎週もしくは２〜３週間ごとに１回の範囲に及ぶ。
【００６６】
以下の実施例は、本発明をさらに例示するために供されるが、同時にそのいかなる限定をも構成しない。対照的に、種々の実施形態、改変およびその等価物に対して、本明細書中の説明を読んだ後に、本発明の趣旨から逸脱することなく当業者にそれら自体を示唆し得る策がなされ得ることは、明らかに理解されるべきである。以下の実施例に記載される研究の間、別段示されなければ、従来の手順に従った。上記手順のうちのいくつかは、例示目的で以下に記載される。本明細書で引用される刊行物およびそれらが引用されるものは、それら全体において本明細書に具体的に参考として援用される。多くの実施形態が記載された。それにも関わらず、種々の改変が行われ得ることは理解される。よって、他の実施形態は、以下の特許請求の範囲の範囲内にある。
【実施例】
【００６７】
（実施例１：脂質ケーキの調製）
脂質ケーキを、溶媒注射法によって調製した。上記脂質（ＤＯＰＣ、ＤＯＰＧおよびコレステロールを含む）を、モル比  ６７．５：７．５：２５において合わせ、フラスコの中で９９．９％  エタノール中、約４０℃において溶解させた。卓上型超音波処理バスを脂質溶解に使用した。
【００６８】
上記溶解した脂質溶液を、蠕動ポンプによって１００ｍＬ／分で１．０ｍＭリン酸ナトリウム溶液に添加し、上記２種の溶液を混合した。次いで、上記脂質混合物を、孔サイズ
０．２μｍを有するポリカーボネート膜に６〜１０回通過させた。リポソーム（もしくは大きな単ラメラ小胞）（ＭＬＶ）を形成したところ、平均小胞直径は、約１２０〜１４
０ｎｍであった（Ｍａｌｖｅｒｎ  ＺｅｔａＳｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳ−９０、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ，  Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ，  ＵＫで測定した）。
【００６９】
上記リポソーム混合物を透析し、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｐｅｌｌｉｃｏｎ  ２  Ｍｉｎｉ  Ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ  Ｍｏｄｕｌｅ  Ｂｉｏｍａｘ−１００Ｃ（０．１ｍ２）（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，  Ｂｉｌｌ  ｅｒｉｃａ，  ＭＡ，  ＵＳＡ）を備えた接線流濾過システムによって濃縮し、次いで０．２μｍ滅菌フィルタを使用して滅菌した。
【００７０】
上記濾過したリポソーム混合物の脂質濃度を、リンアッセイ（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｕｓ
ａｓｓａｙ）によって定量し、上記リポソーム混合物を、凍結防止剤、２％  マンニトールとともに製剤化し、次いで、０．２μｍ滅菌フィルタを使用して再び滅菌した。次いで、上記滅菌したリポソーム混合物を、凍結乾燥用バイアルへと無菌充填した。
【００７１】
（実施例２：ＤＳＰ徐放性組成物の調製）
徐放性組成物を、実施例１で記載されるリポソーム混合物と、ＤＳＰ（１３．２ｍｇ／ｍｌ）およびクエン酸ナトリウム（４ｍｇ／ｍｌ）を含むＤＳＰ溶液とを混合することによって調製し、続いて、凍結乾燥した。
【００７２】
上記凍結乾燥したＤＳＰ−リポソームケーキを、３００μｌの食塩水で再構成した。ここでＤＳＰの濃度は、６．６ｍｇ／ｍｌであった。上記凍結乾燥したＤＳＰ−リポソームケーキを、通常生理食塩水でさらに希釈して、表１に示されるように上記徐放性組成物を形成した。ここでＤＳＰの濃度は、徐放性組成物１では１ｍｇ／ｍｌであり、徐放性組成物２では１．４ｍｇ／ｍｌであった。
【表１】
2019069962.tif 000002
【００７３】
（実施例３．関節炎を処置するための徐放性組成物の単回注射）
関節炎に対する上記徐放性組成物の効果のインビボ評価を、Ｌｅｗｉｓラットを使用して行った。１６匹の雌性ラット（８週齢）を、この研究に使用した。上記ラットの平均体重は、約１８０〜約２００グラムであった。
【００７４】
関節炎を誘発するために、各ラットを、フロイント不完全アジュバント（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，  ＵＳＡから市販されている）中に乳化した２００μｇのウシタイプＩＩコラーゲン（１０ｍＭ  酢酸中に４ｍｇ／ｍｌでストック、Ｅｌａｓｔｉｎ
Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，  Ｏｗｅｎｓｖｉｌｌｅ，  ＵＳＡから市販されている）で０日目に免疫し、その後、７日目に再度免疫した。１６日目が、関節炎症状が認められた初日であり、誘発された関節炎の発症であると規定した。
【００７５】
上記実験研究での全てのラットには、この研究の間いつでも、飲料水および飼料に自由に摂取させた。
【００７６】
上記ラットを、以下の４つの研究群に無作為化した：
群１：１つの足につき１００μｌの食塩水を各々受容した４匹のラット（図１〜８において「食塩水コントロール」と表示）。
群２：１つの足につき１００μｌの遊離ＤＳＰを各々受容した４匹のラット（ここでＤＳＰの濃度は、１ｍｇ／ｍｌである（図１〜８において「遊離ＤＳＰ＿１ｍｇ／ｍｌ」と表示））。
群３：１つの足につき１００μｌの上記徐放性組成物１を各々受容した４匹のラット（ここでＤＳＰの濃度は、１ｍｇ／ｍｌである（図１〜４において「ＴＬＣ３９９＿１ｍｇ／ｍｇ」および図５〜８において「ＴＬＣ３９９＿Ｉ  ４ｍｇ／ｍｌ」と表示））。
群４：１つの足につき１００μｌの上記徐放性組成物２を各々受容した４匹のラット（ここでＤＳＰの濃度は、１．４ｍｇ／ｍｌである（図１〜４において「ＴＬＣ３９９＿１．４ｍｇ／ｍｇ」、および図５〜８において「ＴＬＣ３９９＿ＩＩ  １．４ｍｇ／ｍｌ」と表示）。
【００７７】
上記コントロールもしくは上記ＤＳＰ製剤を、１９日目に１回のみのＩＡ注射として、上記ラットの両後ろ足に投与した。各足に投与したＤＳＰ用量を、表２にまとめる。
【表２】
2019069962.tif 000003
【００７８】
１４日間の研究期間の間に、上記ラットを、以下の結果について１週間に３回検査した：
・体重減少（これは、関節炎の重篤度を評価するためのパラメーターのうちの１つである）。
・臨床的視覚的関節炎スコア（これは、関節炎の重篤度と相関する視覚的スコアである）。各足の関節指数（０〜４の範囲）を使用して等級付けした（０＝足底に浮腫も紅斑もなし；１＝足底に僅かな浮腫および紅斑；２＝足底に軽度の浮腫および紅斑；３＝足底全体および足関節に中程度の浮腫および紅斑；４＝足関節、足および足趾の重篤な浮腫およ
び関節強直）。各ラットの臨床的視覚的関節炎スコアは、両後ろ足の関節指数の合計であった（最大スコアは８）。
・後ろ足体積および腫脹。後ろ足体積を、ＵＧＯ  Ｐｌｅｔｈｙｓｍｏｍｅｔｅｒ  ７１４９測定系によって測定した。最終体積データを平均体重で正規化し（ｍｌ／ｋｇ）、浮腫を、０日目に対する測定日の足体積の増大として定義した。
（結果：）
【００７９】
図１は、上記４群のラットにおける体重変化を示す。全４群のラットにおいて、１６日目に体重減少が認められ、これは、関節炎の発症と同時に起こった。体重減少は、１６日目から１９日目まで続いた。
【００８０】
１９日目にＩＡ注射した後、食塩水群および遊離ＤＳＰ群と比較してより顕著な体重減少が、上記徐放性組成物１群および徐放性組成物２群において認められた。体重減少は、ステロイドの公知の副作用である食欲不振によって引き起こされ得る。上記ＤＳＰは、上記徐放性組成物からよりゆっくりとした速度で放出されたので、ステロイドの副作用（食欲不振）がより長く続いた。よって、より顕著な体重減少が、徐放性組成物を受けた群で認められた。
【００８１】
図２は、４群のラットにおける臨床的視覚的関節炎スコアの変化を示す。ＩＡ注射の前に、平均スコアは、食塩水群については３．７５であり、遊離ＤＳＰ群および上記徐放性組成物２群については４．０であり、ならびに上記徐放性組成物１群については４．２５であった。
【００８２】
上記ＩＡ注射の２４時間後、上記スコアは、上記群のうちの食塩水群を除く全ての群について１未満に低下した。
【００８３】
上記遊離ＤＳＰ群については、上記スコアは、上記ＩＡ注射の４８時間後にゆっくりと増大した。関節炎症状はより重篤になり、上記スコアは２６日目に４．５に達した。
【００８４】
上記徐放性組成物１群および徐放性組成物２群におけるラットは、引き続く４日間にわたって関節炎症状を示さず、スコアは、２３日目および２４日目に０であった。２６日目に、上記徐放性組成物１における３匹のラットが、軽度の関節炎症状を発生させ、平均スコア１．５であったのに対して、上記徐放性組成物２群におけるラットは、いかなる再発症状をも有さず、そのスコアは０のままであった。２６日目の上記遊離ＤＳＰ群におけるラットは、重篤な関節炎症状およびスコア４．５を有した。３０日目に、上記徐放性組成物１群におけるラットは、重篤な関節炎を発生させ、スコアは、４より高かったのに対して、上記徐放性組成物２群におけるラットは、軽度の関節炎を有し、スコア１．５であった。
【００８５】
図３および図４を参照すると、１９日目のＩＡ注射後に、足の腫脹体積が２０日目に４群全てで減少した。食塩水群における足腫脹体積の一時的な減少は、関節において食塩水によって炎症因子が希釈されたことに起因した可能性がある。
【００８６】
上記遊離ＤＳＰ群については、上記ＩＡ注射の効果が３日間続いた。２３日目に、両足が再び腫脹し、厚さは、約７．５ｍｌ／ｋｇであった。
【００８７】
上記徐放性組成物１群については、足の腫脹は、次の４日間にわたって有意に減少した。両足が２５日目に再び腫脹し、概算される厚さは、約７．５ｍｌ／ｋｇであった。
【００８８】
上記徐放性組成物２群については、足の腫脹は、次の１０日間にわたって有意に減少し
た。両足は、３４日目あたりで再び腫脹し、厚さは、右足関節について８ｍｌ／ｋｇを超え、左足関節について７．５ｍｌ／ｋｇであった。
【００８９】
上記の研究は、上記徐放性組成物の単回ＩＡ注射が、遊離ＤＳＰと比較して、実験動物の関節炎を処置するにあたってより有効であるという結論を裏付けた。
【００９０】
（実施例４．関節炎を処置するための徐放性組成物の多数回注射）
この研究の設計は、（ａ）食塩水コントロール群がなかったこと；および（ｂ）研究薬が１日に１回４日間（２６日目〜２９日目）にわたってＩＡ注射によって投与されたことを除いて、実施例３に記載される研究のものに実質的に類似である。
【００９１】
（結果：）
図５は、３群のラット（遊離ＤＳＰ群、徐放性組成物１群および徐放性組成物２群）における体重変化を示す。全３群のラットにおいて、２４日目に体重減少が認められた。これは、関節炎の発症と同時に起こった。
【００９２】
２６日目〜２９日目までのＩＡ注射の後、上記３群においてより顕著な体重減少が認められた。実施例３で考察されたように、体重減少は、ステロイドの公知の副作用である食欲不振によって引き起こされ得る。
【００９３】
図６は、上記３群のラットにおける臨床的視覚的関節炎スコアの変化を示す。ＩＡ注射の前に、その平均スコアは、約４．５〜４．７であった。
【００９４】
上記遊離ＤＳＰ群については、スコアは３０日目に３へと低下し、この研究において最低のスコアが記録された。関節炎の徴候は直ぐに再発し、３３日目に重篤になった。
【００９５】
上記徐放性組成物１群および徐放性組成物２群については、関節炎スコアは、２９日目に処置が終了した後も低下し続け、３７日目までゼロ（０）のままであった。上記徐放性組成物１群では、ラットは、４０日目に再発の徴候を初めて示したのに対して、上記徐放性組成物２群では、ラットは、４２日目に再発の徴候を初めて示した。
【００９６】
図７および図８を参照すると、足の腫脹体積は、４回の毎日のＩＡ注射後に、上記３群にわたって両足で減少した。上記遊離ＤＳＰ群については、ＩＡ注射の効果は、１〜２日間続いた。３１日目に、両足は再び腫脹し、４０日目にピークに達した。
【００９７】
上記徐放性組成物群については、足の腫脹は、次の１４日間にわたって有意に減少した。上記徐放性組成物１群では、足の腫脹の最初の徴候は、４０日目に示されたのに対して、上記徐放性組成物２群では、足の腫脹の最初の徴候は、４２日目に示された。
【００９８】
上記の研究は、４回の毎日のＩＡ徐放性ＤＰＳ注射が、実験動物において関節炎を処置するために有効であるという結論を裏付けた。
【００９９】
（実施例５．インドメタシン徐放性組成物）
インドメタシンナトリウム（Ｈｕｂｅｉ  Ｈｅｎｇ  Ｌｕ  Ｙｕａｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，  Ｌｔｄ，  Ｈｕｂｅｉ，  Ｃｈｉｎａ）を、食塩水で終濃度５ｍｇ／ｍｌへと溶解した。実施例１に記載される凍結乾燥したリポソーム混合物を０．３ｍｌのインドメタシン溶液で再構成したところ、終濃度５ｍｇ／ｍｌ  ＩＮＮ、７１ｍｇ／ｍｌ
ＤＯＰＣ、８ｍｇ／ｍｌ  ＤＯＰＧ、１３ｍｇ／ｍｌ  コレステロールおよび５０ｍｇ／ｍｌ  マンニトールを有する０．３ｍｌ／バイアルの再構成体積のインドメタシン徐放性組成物を生じた。
【０１００】
（実施例６．インドメタシン徐放性組成物の実験研究において使用されるコラーゲン誘発性関節炎動物モデル）
関節炎に対する上記インドメタシン徐放性組成物の効果のインビボ評価を、１８匹の雌性Ｌｅｗｉｓラット（ＢｉｏＬＡＳＣＯ  Ｔａｉｗａｎ  Ｃｏ，  Ｌｔｄ．，  Ｔａｉｗａｎ）を使用して行った。研究設計およびラットにおける関節炎の誘発は、実施例３の研究のものに実質的に類似であった。
【０１０１】
関節炎処置を、臨床的視覚的関節炎スコアのピーク時（これは、１９日目に起きた）に開始した。１８匹のラットを、無作為に３群に分けた（各群で６匹のラット）：（１）コントロール群（いかなる処置もなし；図９において「コントロール」と表示）；（２）遊離インドメタシン群（１用量あたり２ｍｇ／ｋｇ  インドメタシン；図９において「インドメタシン（２ｍｇ／ｋｇ）」と表示）；および（３）インドメタシン徐放性組成物群（１用量あたり２ｍｇ／ｋｇ  インドメタシン；図９において「インドメタシン−ＢｉｏＳｅｉｚｅｒ（２ｍｇ／ｋｇ）」と表示）。各群のラットに、１９日目から２３日目まで、処置なし（コントロール群）、遊離インドメタシンもしくはインドメタシン徐放性組成物の関節炎の関節周りに毎日の皮下注射を与えた。投与された組成物中のインドメタシンの用量を、表４に列挙する。
【０１０２】
表４．遊離インドメタシン溶液およびインドメタシン徐放性組成物の用量。
【表４】
2019069962.tif 000004
【０１０３】
この研究におけるラットは、研究の初めから体重が増加し、１２日目にピークに達した。関節炎の徴候が発達するにつれて、３つのラット群全てで体重は減少した。関節炎スコアは、１８日目にその最大に達し、その平均関節炎スコアは、図９ｂに図示されるように、７．２〜７．４の間であった。
【０１０４】
１９日目から２３日目まで、群２および群３において、関節炎症状は低減した。群２（遊離インドメタシン群）では、その平均関節炎スコアが、７．４から５へと低下し、２０日目に運動機能が改善し、膝関節柔軟性が増した。インドメタシン処置の終了の２日後である２５日目に、関節炎の徴候（例えば、硬直、腫脹および紅斑のある関節）が再発し、関節炎スコアは８に達した。
【０１０５】
群３（インドメタシン徐放性組成物群）では、その平均関節炎スコアは、２０日目に７．６から５．８へと減少した。上記関節炎スコアは、２９日目まで７より下のままであり、処置の終了後も長期の処置効力が保持された。群３の関節炎症状は、３０日目に重篤になった。
【０１０６】
まとめると、遊離インドメタシン（群２）もしくはインドメタシン徐放性組成物（群３）の５日間処置の間に、関節炎症状は、両方の群において有意に改善した。関節炎徴候は、群２では遊離インドメタシンを中止して２日後に戻ったのに対して、群３では、関節炎徴候の改善は、処置を終了しても６日間継続した。上記をまとめた研究の結果は、インド
メタシン徐放性組成物が、遊離インドメタシンより長期間にわたって関節中でインドメタシンの効力を維持するという結論を裏付ける。
【０１０７】
（実施例７．エタネルセプト徐放性組成物）
実施例１に記載される凍結乾燥したリポソーム混合物を、０．３ｍｌのエンブレル（５０ｍｇ／ｍｌのエタネルセプト；Ｗｙｅｔｈ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｃｏｌｌｅｇｅｖｉｌｌｅ，  ＵＳＡから市販されている）で再構成したところ、０．３ｍｌ／バイアルの再構成体積を有するエタネルセプト徐放性組成物を生じた。上記エタネルセプト徐放性組成物中の脂質およびエタネルセプトの終濃度は、以下である：４２．８ｍｇ／ｍｌ  エタネルセプト、７０．７ｍｇ／ｍｌ  ＤＯＰＣ、８ｍｇ／ｍｌ  ＤＯＰＧ、１３ｍｇ／ｍｌ  コレステロールおよび５０ｍｇ／ｍｌ  マンニトール。
【０１０８】
（実施例８．エタネルセプト徐放性組成物の実験研究において使用されるコラーゲン誘発性関節炎動物モデル）
関節炎に対する上記エタネルセプト徐放性組成物の効果のインビボ評価を、１８匹の雌性Ｌｅｗｉｓラット（ＢｉｏＬＡＳＣＯ  Ｔａｉｗａｎ  Ｃｏ，  Ｌｔｄ．，  Ｔａｉｗａｎ）を使用して行った。研究設計およびラットにおける関節炎の誘発は、ウシタイプＩＩコラーゲンを０日目、７日目および１７日目に投与したことを除いて、実施例３の研究のものと実質的に類似であった。
【０１０９】
関節炎処置を、臨床的視覚的関節炎スコアのピーク時（これは、２３日目に起きた）に開始した。１８匹のラットを３群に無作為に分けた（各群で６匹のラット）：（１）コントロール群（いかなる処置もなし；図１０において「コントロール」と表示）；（２）遊離エタネルセプト群（１用量あたり５０ｍｇ／ｋｇ  エタネルセプト；図１０において「エンブレル（５０ｍｇ／ｋｇ）」と表示）；および（３）エタネルセプト徐放性組成物群（１用量あたり５０ｍｇ／ｋｇ  エタネルセプト；図１０において「エンブレル−ＢｉｏＳｅｉｚｅｒ（５０ｍｇ／ｋｇ）」と表示）。各群のラットに、２３日目および２６日目に、処置なし、または遊離エタネルセプトもしくはエタネルセプト徐放性組成物の関節炎の関節周りに2回の皮下注射を与えた。上記投与した組成物中のエタネルセプトの用量を
、表５に列挙する。
【０１１０】
表５．遊離エタネルセプト溶液およびエタネルセプト徐放性組成物の用量。
【表５】
2019069962.tif 000005
【０１１１】
この研究のラットは、タイプＩＩコラーゲン免疫後直ぐに関節炎の徴候を発達させ、２３日目にピークに達した。その平均関節炎スコアは、図１０に図示されるように、３．６〜３．８の間であった。
【０１１２】
処置期間（２３日目〜２６日目）の間に、関節炎の徴候は、処置群（群２および群３）で低減した。群２（遊離エタネルセプト群）では、平均関節炎スコアは、２６日目に２．４へと低下したが、関節炎は、上記遊離エタネルセプトを終了して３日後に再発した。３０日目に、その関節炎スコアは４に達し、ラットは、関節腫脹および硬直に起因して動かなくなった。
【０１１３】
群３（エタネルセプト徐放性組成物群）では、平均関節炎スコアは、２６日目に２．２へと減少し、３２日目まで２．５より下のままであった。群３の関節炎症状は、３３日目に再び重篤になった。
【０１１４】
まとめると、遊離エタネルセプト（群２）もしくはエタネルセプト徐放性組成物（群３）の４日間の処置の間に、関節炎症状は、両方の群において有意に改善した。関節炎徴候は、群２において遊離エタネルセプトを中止して３日後に戻ったのに対して、群３では、関節炎徴候の改善は、上記処置を終了しても５日間続いた。上記でまとめた実験研究の結果は、上記エタネルセプト徐放性組成物が、遊離エタネルセプトより長期間にわたって、関節におけるエタネルセプトの効力を維持するという結論を裏付ける。
【０１１５】
（実施例９．メトトレキサート徐放性組成物）
実施例１に記載される凍結乾燥したリポソーム混合物を、０．３ｍｌのメトトレキサートナトリウム（Ｐｈａｒｍａｃｈｅｍｉｅ  ＢＶ，  Ｉｎｃ．）で再構成したところ、０．３ｍｌ／バイアルの再構成体積を有するメトトレキサート徐放性組成物を生じた。上記メトトレキサート徐放性組成物中の脂質およびメトトレキサートの終濃度は、以下である：２．５ｍｇ／ｍｌ  メトトレキサート、７０．７ｍｇ／ｍｌ  ＤＯＰＣ、８ｍｇ／ｍｌ
ＤＯＰＧ、１３ｍｇ／ｍｌ  コレステロールおよび５０ｍｇ／ｍｌ  マンニトール。
【０１１６】
（実施例１０．メトトレキサート徐放性組成物の実験研究において使用されるコラーゲン誘発性関節炎動物モデル）
関節炎に対する上記メトトレキサート徐放性組成物の効果のインビボ評価を、１８匹の雌性Ｌｅｗｉｓラット（ＢｉｏＬＡＳＣＯ  Ｔａｉｗａｎ  Ｃｏ，  Ｌｔｄ．，  Ｔａｉｗａｎ）を使用して行った。研究設計およびラットにおける関節炎の誘発は、ウシタイプＩＩコラーゲンを０日目、７日目および１７日目に投与したことを除いて、実施例３における研究のものに実質的に類似であった。
【０１１７】
関節炎処置を、臨床的視覚的関節炎スコアのピーク時（これは、２３日目に起きた）に開始した。１８匹のラットを３群に無作為に分けた（各群で６匹のラット）：（１）コントロール群（いかなる処置もなし。図１１ａにおいて「コントロール」と表示）；（２）遊離メトトレキサート群（１用量あたり１ｍｇ／ｋｇ  メトトレキサート。図１１ａにおいて「メトトレキサート（１ｍｇ／ｋｇ）」と表示）；および（３）メトトレキサート徐放性組成物群（１用量あたり１ｍｇ／ｋｇ  メトトレキサート；図１１ａにおいて「メトトレキサート−ＢｉｏＳｅｉｚｅｒ（１ｍｇ／ｋｇ）」と表示）。各群のラットに、処置なし（コントロール群）または２３日目および２６日目に、遊離メトトレキサートもしくはメトトレキサート徐放性組成物のいずれかの関節炎の関節周りに２回の皮下注射を与えた。投与した組成物中のメトトレキサートの用量を、表６に列挙する。
【０１１８】
表６．遊離メトトレキサート溶液およびメトトレキサート徐放性組成物の用量。
【表６】
2019069962.tif 000006
【０１１９】
この研究におけるラットは、タイプＩＩコラーゲン免疫のすぐ後に関節炎の徴候を発達させ、２３日目にピークに達し、その平均関節炎スコアは、図１１ｂに示されるように、３．４〜３．８の間であった。
【０１２０】
２３日目から２６日目まで、関節炎症状は、群２および群３において減少した。群２（遊離メトトレキサート群）では、その平均関節炎スコアは、２６日目に３．７から１．４へと低下した。メトトレキサート処置の終了の４日後である３０日目に、上記ラットは機能低下状態になり、その関節炎スコアは、３．５に達した。
【０１２１】
群３（メトトレキサート徐放性組成物群）では、その平均関節炎スコアは、２６日目に３．４から１．６へと減少した。その関節炎スコアは、３５日目まで約２のままであり、その後に増大した。
【０１２２】
まとめると、メトトレキサート処置は、群２および群３において関節炎症状を改善した。関節炎徴候は、群２において遊離メトトレキサートを中止して４日後に戻ったのに対して、群３では、関節炎徴候の改善は、処置を終了しても９日間続いた。上記でまとめた実験研究の結果は、上記メトトレキサート徐放性組成物が、遊離メトトレキサートより長期間にわたって関節におけるメトトレキサートの効力を維持するという結論を裏付ける。
【０１２３】
本明細書で記載される要素および特徴の種々の取り合わせおよび組み合わせが可能である。同様に、いくつかの特徴および部分的な組み合わせ(ｓｕｂｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ
）は有用であり、他の特徴および部分的な組み合わせに言及せずに使用され得る。例えば、ある方法が開示され、考察され、上記方法に含まれる組成物に対して行われ得る多くの改変が考察される場合、上記方法の各々のおよびあらゆる組み合わせおよび入れ替え（ｐｅｒｍｕｔａｔｉｏｎ）、ならびに可能な改変は、そうでないと具体的に示されなければ、具体的に企図される。同様に、これらの任意の部分セットもしくは組み合わせもまた、具体的に企図され、開示される。本発明の種々の実施形態が、本発明の種々の目的を達成するにあたって記載されてきた。これら実施形態は、本発明の原理を例示するに過ぎないことは、認識されるべきである。その多くの改変および適合は、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、当業者に容易に明らかである。
【図１】
2019069962.tif 000007
【図２】
2019069962.tif 000008
【図３】
2019069962.tif 000009
【図４】
2019069962.tif 000010
【図５】
2019069962.tif 000011
【図６】
2019069962.tif 000012
【図７】
2019069962.tif 000013
【図８】
2019069962.tif 000014
【図９】
2019069962.tif 000015
【図１０】
2019069962.tif 000016
【図１１】
2019069962.tif 000017
【手続補正書】
【提出日】平成31年1月7日(2019.1.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【外国語明細書】
2019069962000001.pdf
2019069962000002.pdf
2019069962000003.pdf
2019069962000004.pdf