(57)【要約】【課題】  ターゲット遺伝子の発現を促進するための新たな手法の提供を目的とする。【解決手段】  本発明のターゲット遺伝子の発現促進方法は、細胞に、ＲＮＡ干渉用核酸分子を導入する工程を含み、前記ＲＮＡ干渉用核酸分子が、ノンコーディングＲＮＡに結合する分子であり、前記ノンコーディングＲＮＡが、前記ターゲット遺伝子のプロモータ領域に対して、前記ターゲット遺伝子の翻訳領域とは逆方向に転写されるＲＮＡであり、前記ＲＮＡ干渉用核酸分子による、前記ノンコーディングＲＮＡに対するＲＮＡ干渉によって、前記ターゲット遺伝子の発現が促進されることを特徴とする。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞に、ＲＮＡ干渉用核酸分子を導入する工程を含み、
前記ＲＮＡ干渉用核酸分子が、ノンコーディングＲＮＡに結合する分子であり、
前記ノンコーディングＲＮＡが、前記ターゲット遺伝子のプロモータ領域に対して、前記ターゲット遺伝子の翻訳領域とは逆方向に転写されるＲＮＡであり、
前記ＲＮＡ干渉用核酸分子による、前記ノンコーディングＲＮＡに対するＲＮＡ干渉によって、前記ターゲット遺伝子の発現が促進されることを特徴とするターゲット遺伝子の発現促進方法。
【請求項２】
前記ＲＮＡ干渉用核酸分子が、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡおよびｓｈＲＮＡからなる群から選択された少なくとも一つである請求項１記載の発現促進方法。
【請求項３】
前記ターゲット遺伝子が、がん抑制遺伝子である、請求項１または２記載の発現促進方法。
【請求項４】
前記ターゲット遺伝子が、ＢＬＵ遺伝子またはＰＴＥＮ遺伝子である、請求項３記載の発現促進方法。
【請求項５】
前記細胞が、がん細胞である、請求項１から４のいずれか一項に記載の発現促進方法。
【請求項６】
ノンコーディングＲＮＡに結合するＲＮＡ干渉用核酸分子を含み、
前記ノンコーディングＲＮＡが、ターゲット遺伝子のプロモータ領域に対して、前記ターゲット遺伝子の翻訳領域とは逆方向に転写されるＲＮＡであり、
前記ＲＮＡ干渉用核酸分子による、前記ノンコーディングＲＮＡに対するＲＮＡ干渉によって、前記ターゲット遺伝子の発現が促進されることを特徴とするターゲット遺伝子の発現促進剤。
【請求項７】
前記ＲＮＡ干渉用核酸分子が、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡおよびｓｈＲＮＡからなる群から選択された少なくとも一つである請求項６記載の発現促進剤。
【請求項８】
前記ターゲット遺伝子が、がん抑制遺伝子である、請求項６または７記載の発現促進剤。
【請求項９】
前記ターゲット遺伝子が、ＢＬＵ遺伝子またはＰＴＥＮ遺伝子である、請求項８記載の発現促進剤。
【請求項１０】
ノンコーディングＲＮＡに結合するＲＮＡ干渉用核酸分子を選択する工程と、
前記選択したＲＮＡ干渉用核酸分子を導入した細胞について、ターゲット遺伝子の発現を検出する工程と、
前記選択したＲＮＡ干渉用核酸分子が未導入である前記細胞について、前記ターゲット遺伝子の発現を検出する工程と、
前記未導入の細胞における前記ターゲット遺伝子の発現よりも、前記導入の細胞における前記ターゲット遺伝子の発現が、有意に高い場合に、前記選択したＲＮＡ干渉用核酸分子を、前記ターゲット遺伝子の発現促進剤として決定する工程とを含み、
前記ノンコーディングＲＮＡが、前記ターゲット遺伝子のプロモータ領域に対して、前記ターゲット遺伝子の翻訳領域とは逆方向に転写されるＲＮＡであることを特徴とするターゲット遺伝子の発現促進剤の製造方法。
【請求項１１】
前記ＲＮＡ干渉用核酸分子が、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡおよびｓｈＲＮＡからなる群から選択された少なくとも一つである請求項１０記載の発現促進剤の製造方法。
【請求項１２】
前記ターゲット遺伝子が、がん抑制遺伝子である、請求項１０または１１記載の製造方法。
【請求項１３】
前記ターゲット遺伝子が、ＢＬＵ遺伝子またはＰＴＥＮ遺伝子である、請求項１２記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ターゲット遺伝子の発現促進方法、発現促進剤、および発現促進剤の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
がんの発症については、例えば、ＢＬＵ遺伝子等のがん抑制遺伝子の発現減少が影響していることが知られている。このように、遺伝子の発現減少が疾患の原因である場合、その治療方法として、前記遺伝子の発現量を増加させることが考えられる。しかしながら、前記遺伝子の発現量を増加させる手段としては、前記遺伝子を体内に投与して、投与された前記遺伝子を発現させるという投与療法にとどまっている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
そこで、本発明は、ターゲット遺伝子の発現を促進するための新たな手法の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
前記目的を達成するために、本発明のターゲット遺伝子の発現促進方法は、
細胞に、ＲＮＡ干渉用核酸分子を導入する工程を含み、
前記ＲＮＡ干渉用核酸分子が、ノンコーディングＲＮＡに結合する分子であり、
前記ノンコーディングＲＮＡが、前記ターゲット遺伝子のプロモータ領域に対して、前記ターゲット遺伝子の翻訳領域とは逆方向に転写されるＲＮＡであり、
前記ＲＮＡ干渉用核酸分子による、前記ノンコーディングＲＮＡに対するＲＮＡ干渉によって、前記ターゲット遺伝子の発現が促進されることを特徴とする。
【０００５】
本発明のターゲット遺伝子の発現促進剤は、
ノンコーディングＲＮＡに結合するＲＮＡ干渉用核酸分子を含み、
前記ノンコーディングＲＮＡが、ターゲット遺伝子のプロモータ領域に対して、前記ターゲット遺伝子の翻訳領域とは逆方向に転写されるＲＮＡであり、
前記ＲＮＡ干渉用核酸分子による、前記ノンコーディングＲＮＡに対するＲＮＡ干渉によって、前記ターゲット遺伝子の発現が促進されることを特徴とする。
【０００６】
本発明のターゲット遺伝子の発現促進剤の製造方法は、
ノンコーディングＲＮＡに結合するＲＮＡ干渉用核酸分子を選択する工程と、
前記選択したＲＮＡ干渉用核酸分子を導入した細胞について、ターゲット遺伝子の発現を検出する工程と、
前記選択したＲＮＡ干渉用核酸分子が未導入である前記細胞について、前記ターゲット遺伝子の発現を検出する工程と、
前記未導入の細胞における前記ターゲット遺伝子の発現よりも、前記導入の細胞における前記ターゲット遺伝子の発現が、有意に高い場合に、前記選択したＲＮＡ干渉用核酸分子を、前記ターゲット遺伝子の発現促進剤として決定する工程とを含み、
前記ノンコーディングＲＮＡが、前記ターゲット遺伝子のプロモータ領域に対して、前記ターゲット遺伝子の翻訳領域とは逆方向に転写されるＲＮＡであることを特徴とする。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、例えば、ターゲット遺伝子の発現を促進させるために、前記ターゲット遺伝子を補充するのではなく、ＲＮＡ干渉用核酸分子を使用することによって、前記ターゲット遺伝子の発現を促進することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】図１は、ＢＬＵ遺伝子について、翻訳領域（ｅｘｏｎ領域）と上流のプロモータ領域の概略を示す図である。
【図２】図２は、実施例１におけるＢＬＵの発現量の相対値を示すグラフである。
【図３】図３は、実施例２におけるＢＬＵの発現量の相対値を示すグラフである。
【図４】図４は、ＰＴＥＮ遺伝子について、翻訳領域（ｅｘｏｎ領域）と上流のプロモータ領域の概略を示す図である。
【図５】図５は、実施例３におけるＰＴＥＮ遺伝子の発現量の相対値を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
＜発現促進方法＞
本発明の発現促進方法は、前述のように、ターゲット遺伝子の発現促進方法であり、
細胞に、ＲＮＡ干渉用核酸分子を導入する工程を含み、
前記ＲＮＡ干渉用核酸分子が、ノンコーディングＲＮＡに結合する分子であり、
前記ノンコーディングＲＮＡが、前記ターゲット遺伝子のプロモータ領域に対して、前記ターゲット遺伝子の翻訳領域とは逆方向に転写されるＲＮＡであり、
前記ＲＮＡ干渉用核酸分子による、前記ノンコーディングＲＮＡに対するＲＮＡ干渉によって、前記ターゲット遺伝子の発現が促進されることを特徴とする。
【００１０】
本発明者らは、以下の点を見出して、本発明を完成させるに至った。すなわち、翻訳される遺伝子は、通常、翻訳領域を有し、その上流側に、プロモータ領域を有している。そして、遺伝子の中には、前記翻訳領域についてコーディングＲＮＡが転写される際、前記プロモータ領域について、前記コーディングＲＮＡとは逆方向に、ノンコーディングＲＮＡが転写されるものがあることが知られている。逆方向に転写される前記ノンコーディングＲＮＡは、長鎖ノンコーディングＲＮＡ（long non-coding RNA）ともよばれる（以下、ｌｎｃＲＮＡともいう）。本発明者らは、鋭意研究を行った結果、ターゲット遺伝子のコーディング領域の発現の促進を行うにあたって、前記コーディング領域のｍＲＮＡではなく、逆方向に転写されたｌｎｃＲＮＡに結合するＲＮＡ干渉用核酸分子を、細胞に導入することで、間接的に、前記ターゲット遺伝子のコーディング領域の発現を促進できることを見出した。ｓｉＲＮＡ等のＲＮＡ干渉用核酸分子は、通常、コーディング領域から転写されたｍＲＮＡに結合して、前記ｍＲＮＡからの翻訳を阻害するものとして知られている。このため、前記ＲＮＡ干渉用核酸分子は、ターゲット遺伝子におけるコーディング領域に結合するように設計され、前記コーディング領域の発現を阻害する場合に用いられる。しかし、本発明者らは、あえて、逆方向に転写されたｌｎｃＲＮＡに結合するＲＮＡ干渉用核酸分子を使用することで、前記ターゲット遺伝子の発現を阻害するのではなく、発現を促進できるとの知見を得たのである。このため、前記ターゲット遺伝子について、前記プロモータ領域に対して逆方向に転写されるノンコーディングＲＮＡが存在する場合、前記ノンコーディングＲＮＡに結合するＲＮＡ干渉用核酸分子を使用することで、容易に前記ターゲット遺伝子の発現を促進できるといえる。
【００１１】
前記ＲＮＡ干渉用核酸分子として、逆方向の前記ｌｎｃＲＮＡに結合する分子を使用することで、前記ターゲット遺伝子の発現を促進できるのは、前記ｌｎｃＲＮＡに前記ＲＮＡ干渉用核酸分子が結合することによって、ＡＧＯ２等のタンパク質複合体を引き寄せることによると推測される。なお、本発明は、これらの推測には制限されない。
【００１２】
各種遺伝子について、前記プロモータ領域に対して、翻訳領域とは逆方向に転写されるＲＮＡが存在するか否かは、例えば、既存のデータベースにより確認することができる。前記データベースは、例えば、ＦＡＮＴＯＭ  ｗｅｂ  ｒｅｓｏｕｒｃｅ（理化学研究所）等があげられる。
【００１３】
本発明は、前記ｌｎｃＲＮＡ（すなわち、前記ターゲット遺伝子のプロモータ領域に対して、前記ターゲット遺伝子の翻訳領域とは逆方向に転写されるＲＮＡ）に結合するＲＮＡ干渉用核酸分子を使用することが特徴であって、その他の構成および条件は、特に制限されない。ＲＮＡ干渉用核酸分子は、例えば、結合させる対象の配列によって、適宜設定できる。前記結合させる対象（すなわち、前記ｌｎｃＲＮＡ）は、例えば、前記ターゲット遺伝子を決定すれば、前述のような前記データベースに基づいて、設定できる。
【００１４】
前記ＲＮＡ干渉用核酸分子の種類は、特に制限されず、ＲＮＡ干渉を起こす核酸分子であればよい。前記ＲＮＡ干渉用核酸分子は、例えば、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｇｈＲＮＡ等があげられる。また、前記ＲＮＡ干渉用核酸分子としては、例えば、ｇｈＲＮＡ（Development of Novel Small Hairpin RNAs That do not Require Processing by Dicer or AGO2; The American Society of Gene & Cell Therapy, Ohno et al., vol. 24 no. 7, 1278-1289 jul. 2016）等もあげられる。なお、本発明の特徴は、前記ターゲット遺伝子の発現促進に、前記ターゲット遺伝子そのものへのアプローチではなく、前記ｌｎｃＲＮＡへのアプローチを行うという点であるため、前記ＲＮＡ干渉用核酸分子は、前記ｌｎｃＲＮＡに結合できればよい。このため、前記ＲＮＡ干渉核酸分子は、例えば、ｓｉＲＮＡ等の例には何ら限定されない。
【００１５】
前記ターゲット遺伝子は、特に制限されず、前述のように、前記プロモータ領域に対して、前記翻訳領域とは逆方向に転写される前記ｌｎｃＲＮＡが存在するものであればよい。前記ターゲット遺伝子は、例えば、発現の促進が望まれる遺伝子があげられ、具体例としては、発現の抑制が発症に関与するような遺伝子、例えば、がん抑制遺伝子が例示できる。前記がん抑制遺伝子は、例えば、ＢＬＵ遺伝子、ＰＴＥＮ遺伝子、ｐ５３遺伝子等があげられる。
【００１６】
前記細胞は、特に制限されず、前記ターゲット遺伝子が存在する細胞があげられる。前記ターゲット遺伝子が前記がん抑制遺伝子の場合、例えば、がん細胞があげられる。本発明の発現促進方法は、例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで行ってもよいし、ｉｎ  ｖｉｖｏで行ってもよい。本発明の発現促進方法をｉｎ  ｖｉｖｏで行う場合、対象となる生体は、例えば、ヒト、非ヒト動物であり、前記非ヒト動物は、例えば、サル、イヌ、ウサギ、ウシ、ウマ等の哺乳類があげられる。
【００１７】
前記細胞に対する前記ＲＮＡ干渉用核酸分子の導入方法は、特に制限されず、公知の方法が採用できる。
【００１８】
＜発現促進剤＞
本発明の発現促進剤は、前述のように、ターゲット遺伝子の発現促進剤であり、
ノンコーディングＲＮＡに結合するＲＮＡ干渉用核酸分子を含み、
前記ノンコーディングＲＮＡが、ターゲット遺伝子のプロモータ領域に対して、前記ターゲット遺伝子の翻訳領域とは逆方向に転写されるＲＮＡであり、
前記ＲＮＡ干渉用核酸分子による、前記ノンコーディングＲＮＡに対するＲＮＡ干渉によって、前記ターゲット遺伝子の発現が促進されることを特徴とする。
【００１９】
本発明の発現促進剤は、前記ＲＮＡ干渉用核酸分子を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、制限されない。前記ＲＮＡ干渉用核酸分子は、前記本発明の発現促進方法における説明を援用できる。
【００２０】
本発明の発現促進剤は、前記ＲＮＡ干渉用核酸分子の他に、さらに、添加剤を含んでもよい。前記添加剤は、例えば、前記細胞への導入を補助する補助剤等があげられる。前記補助剤は、例えば、リポフェクタミン、カチオニックリポソーム等のリポソーム、アテロコラーゲン等があげられる。
【００２１】
＜発現促進剤の製造方法＞
本発明の製造方法は、前述のように、ターゲット遺伝子の発現促進剤の製造方法であり、
ノンコーディングＲＮＡに結合するＲＮＡ干渉用核酸分子を選択する工程と、
前記選択したＲＮＡ干渉用核酸分子を導入した細胞について、ターゲット遺伝子の発現を検出する工程と、
前記選択したＲＮＡ干渉用核酸分子が未導入である前記細胞について、前記ターゲット遺伝子の発現を検出する工程と、
前記未導入の細胞における前記ターゲット遺伝子の発現よりも、前記導入の細胞における前記ターゲット遺伝子の発現が、有意に高い場合に、前記選択したＲＮＡ干渉用核酸分子を、前記ターゲット遺伝子の発現促進剤として決定する工程とを含み、
前記ノンコーディングＲＮＡが、前記ターゲット遺伝子のプロモータ領域に対して、前記ターゲット遺伝子の翻訳領域とは逆方向に転写されるＲＮＡであることを特徴とする。
【００２２】
本発明の発現促進剤の製造方法は、一例であって、本発明の発現促進剤の製造は、本発明の製造方法には制限されない。本発明は、前述のように、前記ターゲット遺伝子について、前記プロモータ領域に対して逆方向に転写されるノンコーディングＲＮＡが存在する場合、前記ノンコーディングＲＮＡに結合するＲＮＡ干渉用核酸分子を使用することで、前記ターゲット遺伝子の発現を促進できることを見出したことがポイントである。したがって、本発明の製造方法のように、前記ターゲット遺伝子の発現の検出等を行わなくても、例えば、前記ターゲット遺伝子に対応するノンコーディングＲＮＡの配列を、前記データベース等により選択し、それに結合するＲＮＡ干渉用核酸分子を設計することで、前記本発明の発現促進剤は、製造することが可能である。
【実施例】
【００２３】
以下、実施例により、本発明を詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２４】
［実施例１］
ｓｉＲＮＡタイプの発現促進剤を作製し、がん細胞におけるがん抑制遺伝子の発現の促進を確認した。
【００２５】
がん抑制遺伝子として、ＢＬＵ遺伝子を選択した。ＢＬＵ遺伝子は、翻訳領域の上流にプロモータ領域を有し、前記翻訳領域の転写の際、前記プロモータ領域において、逆方向に向かってｌｎｃＲＮＡが転写されることは、公知のデータベースにより確認済みである。
【００２６】
ＲＮＡ干渉用核酸分子として、標的配列に対して１００％相補的な、複数のｓｉＲＮＡを設計した。図１に、ＢＬＵ遺伝子について、翻訳領域（ｅｘｏｎ領域）と上流のプロモータ領域の概略を示す。図１に示すように、前記プロモータ領域から逆方向に転写されるｌｎｃＲＮＡに結合するｓｉＲＮＡを作製した。なお、ｌｎｃＲＮＡに結合するｓｉＲＮＡは、前記翻訳領域に対するノックダウンを示す核酸分子ではないため、以下、small  activating  RNA（ｓａＲＮＡ）という。また、前記翻訳領域に結合するｓｉＲＮＡを作製した。これらの配列を、下記表１に示す。
【００２７】
【表１】
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【００２８】
がん細胞として、肺がん細胞株ＮＣＩ−Ｈ１２９９を使用した。培地は、ＲＰＭＩ１６４０（１０%  ＦＢＳ）を使用し、培養条件は、３７℃、５％ＣＯ２とした。
【００２９】
まず、前記肺がん細胞株を、１×１０４  ｃｅｌｌｓ／５００μＬ／ｗｅｌｌの条件で、２４ｗｅｌｌプレートに播種した（０日目）。そして、２４時間後、前記プレートに、トランスフェクション試薬（商品名Lipofectamine  RNAiMAX  transfection  reagent；Life  technologies社）を用いて、各種核酸分子（ｓａＲＮＡおよびｓｉＲＮＡ）をトランスフェクションした（１日目）。前記核酸分子の最終濃度は、２５ｎｍｏｌ／Ｌとした。
【００３０】
そして、トランスフェクションから４８時間後、前記肺がん細胞株から、試薬（商品名RNAzol  RT；Molecular  Research社）を用いて、トータルＲＮＡを抽出した（３日目）。前記トータルＲＮＡから、試薬（商品名M-MLV  reverse  transcriptase；Life  technologies社）を用いて、リアルタイムＰＣＲにより、ｃＤＮＡを合成した。リアルタイムＰＣＲは、FastStart  Essential  DNA  Green  Master（商品名；Roche  Diagnostics社）を使用し、サーマルサイクラーは、LightCycler  96（商品名； Roche  Diagnostics社）を用いた。
【００３１】
前記核酸分子をトランスフェクションしていない前記肺がん細胞株（Non-treated）、前記トランスフェクション試薬のみ添加した前記肺がん細胞株（Mock）、データベース上のどの転写産物にも結合しないと予測されるネガティブコントロール核酸をトランスフェクションした前記肺がん細胞株（Control）についても、同様に、培養とｃＤＮＡの合成を行った。そして、トランスフェクションしていない前記肺がん細胞株（Non-treated）におけるｃＤＮＡ量を基準として、それぞれの前記肺がん細胞株のｃＤＮＡ量の相対値を求めた。
【００３２】
これらの結果を、図２に示す。図２は、各核酸分子をトランスフェクションした前記肺がん細胞株に関するｃＤＮＡ量の相対関係を示すグラフである。図２において、縦軸は、ｃＤＮＡ量の相対値を示す。図２に示すように、前記翻訳領域に対するｓｉＲＮＡを導入した場合、ＢＬＵ遺伝子の発現は著しく低下したが、前記ｌｎｃＲＮＡに対するｓａＲＮＡを導入した結果、ＢＬＵ遺伝子の発現は、有意に増加した。
【００３３】
［実施例２］
ｍｉＲＮＡタイプの発現促進剤を作製し、がん細胞におけるがん抑制遺伝子の発現の促進を確認した。
【００３４】
前記実施例１におけるｓａＲＮＡの配列に基づいて、センス鎖の３’側から８−１１塩基目の４塩基をミスマッチとしたｍｉＲＮＡタイプの発現促進剤を作製した。これらの配列を、下記表２に示す。
【００３５】
【表２】
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【００３６】
そして、前記実施例１と同様にして、前記肺がん細胞へのトランスフェクションを行い、ｃＤＮＡを合成した。これらの結果を図３に示す。図３は、各核酸分子をトランスフェクションした前記肺がん細胞株に関するｃＤＮＡ量の相対関係を示すグラフである。図３において、縦軸は、ｃＤＮＡ量の相対値を示す。図３に示すように、前記ｌｎｃＲＮＡに対するｓｉＲＮＡタイプとｍｉＲＮＡタイプのｓａＲＮＡを導入した結果、ＢＬＵ遺伝子の発現は、有意に増加した。
【００３７】
ｓｉＲＮＡタイプとｍｉＲＮＡタイプのいずれによっても、前記ターゲット遺伝子の発現を促進できることから、以下のように推測される。すなわち、ｓｉＲＮＡは、対象配列に結合すると、前記対象配列を切断するが、ｍｉＲＮＡは、前記対象配列を切断しない。本実施例によると、ｓｉＲＮＡタイプとｍｉＲＮＡタイプのいずれによっても、前記ターゲット遺伝子の発現を促進できることから、本発明において、前記ＲＮＡ干渉用核酸分子は、前記ｌｎｃＲＮＡの切断ではなく、前記ｌｎｃＲＮＡに結合し、ＡＧＯ２等のタンパク質複合体を引き寄せることで、間接的に、前記ターゲット遺伝子の発現を促進していると考えられる。なお、本発明は、この推測には制限されない。
【００３８】
［実施例３］
ｓｉＲＮＡタイプの発現促進剤を作製し、がん細胞におけるがん抑制遺伝子の発現の促進を確認した。
【００３９】
がん抑制遺伝子として、ＰＴＥＮ遺伝子を選択した。ＰＴＥＮ遺伝子は、翻訳領域の上流にプロモータ領域を有し、前記翻訳領域の転写の際、前記プロモータ領域において、逆方向に向かってｌｎｃＲＮＡが転写されることは、公知のデータベースにより確認済みである。
【００４０】
ＲＮＡ干渉用核酸分子として、ｓｉＲＮＡタイプおよびｍｉＲＮＡタイプのｓａＲＮＡを設計した。図４に、ＰＴＥＮ遺伝子について、翻訳領域（ｅｘｏｎ領域）と上流のプロモータ領域の概略を示す。図４に示すように、前記プロモータ領域から逆方向に転写されるｌｎｃＲＮＡに結合するｓａＲＮＡを作製した。これらの配列を、下記表３に示す。
【００４１】
【表３】
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【００４２】
がん細胞として、肝がん細胞株ＨｅｐＧ２を使用し、培地は、ＤＭＥＭ（１０%  ＦＢＳ）を使用し、培養条件は、３７℃、５％ＣＯ２とした以外は、前記実施例１と同様にして、トランスフェクションを行い、ＰＴＥＮ遺伝子のｃＤＮＡの合成を行った。これらの結果を、図５に示す。図５は、各核酸分子をトランスフェクションした前記肝がん細胞株に関するｃＤＮＡ量の相対関係を示すグラフである。図５において、縦軸は、ｃＤＮＡ量の相対値を示す。図５に示すように、前記ｌｎｃＲＮＡに対するｓａＲＮＡを導入した結果、ＰＴＥＮ遺伝子の発現は、有意に増加した。
【００４３】
以上、実施形態を参照して本願発明を説明したが、本願発明は、上記実施形態に限定されるものではない。本願発明の構成や詳細には、本願発明のスコープ内で当業者が理解しうる様々な変更をすることができる。
【産業上の利用可能性】
【００４４】
以上のように、本発明によれば、本発明によれば、例えば、ターゲット遺伝子の発現を促進させるために、前記ターゲット遺伝子を補充するのではなく、ＲＮＡ干渉用核酸分子を使用することによって、前記ターゲット遺伝子の発現を促進することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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