(57)【要約】      （修正有）【課題】ＲＰＬ５５４を含む、吸入のための最適な組成物の提供。【解決手段】希釈剤、及び９，１０‐ジメトキシ‐２‐（２，４，６‐トリメチルフェニルイミノ）‐３‐（Ｎ‐カルバモイル‐２‐アミノエチル）‐３，４，６，７‐テトラヒドロ‐２Ｈ‐ピリミド［６，１‐ａ］イソキノリン‐４−オン（ＲＰＬ５５４）、又はその医薬的に許容される塩の粒子の懸濁液を含む、吸入による投与に適した液体医薬組成物であって、ＲＰＬ５５４の粒子が、約０．２μｍ〜約５μｍのＤｖ５０値の粒子径分布を有し、組成物が、５ｍｇ／ｍＬ未満の濃度でリン酸緩衝液を含む。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
希釈剤、及び９，１０‐ジメトキシ‐２‐（２，４，６‐トリメチルフェニルイミノ）‐３‐（Ｎ‐カルバモイル‐２‐アミノエチル）‐３，４，６，７‐テトラヒドロ‐２Ｈ‐ピリミド［６，１‐ａ］イソキノリン‐４−オン（ＲＰＬ５５４）、又はその医薬的に許容される塩の粒子の懸濁液を含む、吸入による投与に適した液体医薬組成物。
【請求項２】
前記ＲＰＬ５５４の粒子が、約０．２μｍ〜約５μｍのＤｖ５０（体積によるメジアン粒子径）値の粒子径分布を有する、請求項１に記載の液体医薬組成物。
【請求項３】
前記ＲＰＬ５５４の粒子が、約０．７μｍ〜約２．５μｍのＤｖ５０値の粒子径分布を有する、請求項１又は２に記載の液体医薬組成物。
【請求項４】
前記液体医薬組成物中の前記ＲＰＬ５５４の粒子の濃度が、約０．０１ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の液体医薬組成物。
【請求項５】
前記組成物が、約６〜約８のｐＨを有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の液体医薬組成物。
【請求項６】
さらに１つ以上の界面活性剤を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の液体医薬組成物。
【請求項７】
前記１つ以上の界面活性剤が、1つ以上の非イオン性界面活性剤から選択される、請求
項６に記載の液体医薬組成物。
【請求項８】
前記１つ以上の界面活性剤が、ポリオキシエチレングリコールソルビタンアルキルエステル、及びソルビタンアルキルエステルから選択される、請求項６又は７に記載の液体医薬組成物。
【請求項９】
さらに１つ以上の緩衝液を含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の液体医薬組成物。
【請求項１０】
前記１つ以上緩衝液が、クエン酸、及びリン酸緩衝液から選択される、請求項９に記載の液体医薬組成物。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の液体医薬組成物であって、前記組成物が、以下：
（ａ）約０．０１ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬの濃度のＲＰＬ５５４の粒子；
（ｂ）約０．０１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬの濃度の1つ以上の界面活性剤；及び
（ｃ）約５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの濃度の緩衝液
を含む、液体医薬組成物。
【請求項１２】
前記組成物が、さらに等張化剤を含み、ここで任意により、前記等張化剤が塩化ナトリウムである、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の液体医薬組成物。
【請求項１３】
前記希釈剤が水である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の液体医薬組成物。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の液体医薬組成物であって、前記組成物が、以下：
（ａ）０．０１ｍｇ／ｍＬ〜３０ｍｇ／ｍＬの濃度のＲＰＬ５５４の粒子；
（ｂ）０．１ｍｇ／ｍＬ〜２ｍｇ／ｍＬの濃度のポリオキシエチレングリコールソルビタンアルキル；
（ｃ）０．０１ｍｇ／ｍＬ〜０．１ｍｇ／ｍＬの濃度のソルビタンアルキルエステル；
（ｄ）５ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬの濃度の第一のリン酸緩衝液成分；
（ｅ）５ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬの濃度の第二のリン酸緩衝液成分；及び
（ｆ）２ｍｇ／ｍＬ〜８ｍｇ／ｍＬの濃度の等張化剤
を含む、液体医薬組成物。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載の液体医薬組成物であって、前記組成物が、以下：
（ａ）０．０５ｍｇ／ｍＬ〜２５ｍｇ／ｍＬの濃度のＲＰＬ５５４の粒子；
（ｂ）０．１ｍｇ／ｍＬ〜２ｍｇ／ｍＬの濃度のポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート（ポリソルベート２０、Ｔｗｅｅｎ２０）；
（ｃ）０．０１ｍｇ／ｍＬ〜０．１ｍｇ／ｍＬの濃度のソルビタンモノラウレート（Ｓｐａｎ２０）；
（ｄ）５ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬの濃度のリン酸一ナトリウム一水和物；
（ｅ）５ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬの濃度の無水リン酸水素二ナトリウム；及び
（ｆ）２ｍｇ／ｍＬ〜８ｍｇ／ｍＬの濃度の塩化ナトリウム
を含む、液体医薬組成物。
【請求項１６】
ネブライザーでの投与に適した、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の液体医薬組成物。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか１項に記載の液体医薬組成物を含む、ネブライザー。
【請求項１８】
ヒト又は動物の治療に使用するための、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の液体医薬組成物。
【請求項１９】
喘息、アレルギー性喘息、枯草熱、アレルギー性鼻炎、気管支炎、気腫、気管支拡張症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、ステロイド耐性喘息、重度の喘息、小児喘息、嚢胞性線維症、肺線維症、肺線維症（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ 
ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、間質性肺疾患、皮膚疾患、アトピー性皮膚炎、乾癬、眼球炎症、脳虚血、炎症性疾患、及び自己免疫疾患から選択される疾患、又は症状の治療、又は予防において使用するための、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の液体医薬組成物。
【請求項２０】
前記疾患、又は症状が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である、請求項１９に記載の液体医薬組成物。
【請求項２１】
対象において請求項１９又は２０に記載の疾患、又は症状を治療し、又は予防するための方法であって、前記方法が、前記対象に治療有効量の請求項１〜１６のいずれか１項に記載の液体医薬組成物を投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、吸入剤を含む、液体医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
液体医薬組成物の毒物動態学的特性は、予測不可能である。組成物が患者に送達されたときに、安全で、効果的かつ制御された投与量が提供されるように、活性医薬成分（ＡＰＩ）が正しく処方されることが重要である。これは特に、吸入組成物の場合に当てはまる。さらに、液体医薬組成物は、組成物の投与量プロファイルが、保存後に維持されることを確実にするために、信頼性の高い長期安定性を有していなければならない。これにより、間違った投与量の投与が回避される。医薬組成物はまた、例えば、味、及び酸味に関して、投与が患者にとって不快でないような方法で、製剤化しなければならない。
【０００３】
ＲＰＬ５５４（９，１０‐ジメトキシ‐２‐（２，４，６‐トリメチルフェニルイミノ）‐３‐（Ｎ‐カルバモイル‐２‐アミノエチル）‐３，４，６，７‐テトラヒドロ‐２Ｈ‐ピリミド［６，１‐ａ］イソキノリン‐４−オン）は、ＰＤＥ３／ＰＤＥ４二重阻害剤であり、国際公開第００／５８３０８号に記載されている（またＲＰＬ５５４と呼ばれることもある）。組み合わせたＰＤＥ３／ＰＤＥ４阻害剤として、ＲＰＬ５５４は、抗炎症性、及び気管支拡張作用の両方を有し、喘息、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの呼吸器疾患の治療に有用である。ＲＰＬ５５４の構造を以下に示す。
【０００４】
【化１】
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【０００５】
ＲＰＬ５５４は、呼吸器系疾患の治療に効果があるため、多くの場合、吸入で投与することが望ましい。有効な投与方法は噴霧である。Ｆｒａｎｃｉｏｓｉらは、クエン酸塩‐リン酸塩緩衝液中のＲＰＬ溶液を開示している（Ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｎｄ ｓａｆｅｔｙｏｆ ＲＰＬ５５４，ａ ｄｕａｌ ＰＤＥ３ ａｎｄ ＰＤＥ４ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ｉｎ ｈｅａｌｔｈｙ ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ ａｎｄ ｉｎｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｓｔ
ｈｍａ ｏｒ ｃｈｒｏｎｉｃ ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｄｉｓｅａ
ｓｅ：ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｆｒｏｍｆｏｕｒ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌｓ，Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ：Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １１／２０１３；１（９）：７１４‐２７．ＤＯＩ：１０．１０１６／Ｓ２２１３‐２６００（１３）７０１８７‐５）。
【発明の概要】
【０００６】
本発明の驚くべき知見は、ＲＰＬ５５４を含む吸入のための最適な組成物が、ＲＰＬ５５４の粒子の懸濁液を含む液体医薬組成物であることである。ＲＰＬ５５４の懸濁液は、臨床背景に非常に望ましい特性を有することが見出されている。多くの利点が、ＲＰＬ５５４、又はその薬学的に許容される塩の粒子の希釈液、及び懸濁液を含む液体医薬組成物と関連することが見出されている。
【０００７】
本発明の液体医薬組成物は、例えば、ＲＰＬ５５４の溶液製剤と比較した場合、以前の製剤よりも大幅に改善された特性を有する。毒物動態学的特性に関して、懸濁製剤は、溶液の放出特性と比較して、遅延放出特性を有することが判明している。これは、患者に投与されるべき治療対策の数を減らすことができる。この懸濁液はまた、血漿Ｃｍａｘ、及びＡＵＣ値から見ることができるように、はるかに多量のＲＰＬ５５４を投与することを可能にすることも分かっている。これはまた、必要な投与の頻度を減らすことができる。
【０００８】
本発明の液体医薬組成物はまた、周囲条件下（２５℃）で、１２か月後、及び加速条件下（４０℃）で、６か月後にも分解を示さない組成物で、優れた安定性を示す。同じ条件下で、同等の溶液組成物で分解が観察される。この組成物は、周囲条件（２５℃／６０％ＲＨ）で１２か月経過しても、加速条件（４０℃／７５％ＲＨ）で６か月経過しても、劣化を示さないことがある。
【０００９】
従って、本発明は、９，１０‐ジメトキシ‐２‐（２，４，６‐トリメチルフェニルイミノ）‐３‐（Ｎ‐カルバモイル‐２‐アミノエチル）‐３，４，６，７‐テトラヒドロ‐２Ｈ‐ピリミド［６，１‐ａ］イソキノリン‐４−オン（ＲＰＬ５５４）、又はその医薬的に許容される塩の粒子の希釈物、及び懸濁物を含む、液体医薬組成物を提供する。
【００１０】
本発明はまた、ヒト、又は動物の体の治療に使用するための本発明の液体医薬組成物を提供する。本発明の液体医薬組成物は、喘息、アレルギー性喘息、枯草熱、アレルギー性鼻炎、気管支炎、気腫、気管支拡張症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、ステロイド耐性喘息、重度の喘息、小児喘息、嚢胞性線維症、肺線維症、肺線維症（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、間質性肺疾患、皮膚疾患、ア
トピー性皮膚炎、乾癬、眼球炎症、脳虚血、炎症性疾患、及び自己免疫疾患から選択される疾患、又は症状の治療、又は予防において使用されてもよい。
【００１１】
典型的には、前記疾患、又は症状は、喘息、又はＣＯＰＤであり、より典型的には、ＣＯＰＤである。
【００１２】
本発明はまた、本発明中で定義されたような疾患、又は症状を治療、又は予防する方法を提供し、前記方法は、本発明の液体医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、生理食塩水、又はＲＰＬ５５４溶液製剤で処置した動物における全気道抵抗（アセチルコリンＲＬ ＰＣ５０）の５０％増加を累積的に生じたアセチルコリンの誘発濃度（ＰＣ）（２、及び５時間時）を示し、アセチルコリンＲＬ ＰＣ５０を、統計的分析の目的で、対数変換した。非変換データのポストホック（ｐｏｓｔ ｈｏｃ）ｔ‐検定は、食塩水対群の間の差を示した。*ノンパラメトリック解析では、２時間（１ｍｇ／ｍＬ ＲＰＬ５５４溶液、Ｐ＝０．０１９０未補正）と５時間（２．５ｍｇ／ｍＬ溶液、Ｐ＝０．００９５未補正）対生理食塩水群との間に有意差が認められた。Ｎ値＝６、４、４；４、４左から右へ（注記５時間の対照はプロットされていない）。
【図２】図２は、ビヒクル、又はＲＰＬ５５４の懸濁液製剤で処置した動物におけるアセチルコリンＲＬ ＰＣ５０（２、及び５時間時）を示し、アセチルコリンＲＬ ＰＣ５０を、統計的分析の目的で、対数変換した（上部パネル）。ノンパラメトリック解析では、２時間（１０ｍｇ／ｍＬ ＲＰＬ５５４溶液、Ｐ＝０．０２６８未補正）対ビヒクル対照群との間に有意差が認められた。ビヒクルデータ（２＋５時間）を組み合わせることによるデータの再分析は、ビヒクルに対して、２．５ｍｇ／ｍＬ ＲＰＬ５５４懸濁液での有意な程度の気管支保護（２．５２倍（１‐５．７２）、Ｐ＜０．０５）、及び１０ｍｇ／ｍＬ ＲＰＬ５５４懸濁液での有意な程度の気管支保護（４．６７倍（２‐１１）、＊Ｐ＜０．０５）によって反映された全体的な有意な気管支保護（Ｐ＝０．００１６）を示した。５時間の時点で、ＲＰＬ５５４ １０ｍｇ／ｍＬ懸濁液は、有意な程度の気管支保護（２．７７倍（１．３‐６．０）、＊Ｐ＜０．０５）を引き起こした。（Ｎ＝８、４、４、３、６、左から右）（下部パネル）。
【図３】図３は、（ｉ）懸濁液製剤、又は（ｉｉ）約１．５ｍｇの公称用量レベルでの、ネブライザーによる溶液製剤のいずれかの投与後の健康なヒトボランティア由来の血漿中のＲＰＬ５５４の平均濃度を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
ＲＰＬ５５４の粒子は、吸入に適した液体医薬組成物での使用に適した任意の大きさであってもよい。典型的には、ＲＰＬ５５４の粒子は、微粉化された粒子である。例えば、ＲＰＬ５５４の粒子は、１０μｍ以下、又は約０．１μｍ〜約８μｍのＤｖ５０（体積によるメジアン粒子径）値を有してもよい。
【００１５】
典型的には、粒子は、約０．２μｍ〜約５μｍのＤｖ５０値を有する粒子径分布を有する。より典型的には、ＲＰＬ５５４の粒子は、約０．７μｍ〜約３．０μｍのＤｖ５０値を有する粒子径分布を有する。例えば、ＲＰＬ５５４の粒子は、０．９μｍ〜１．７μｍ、あるいは１．７μｍ〜２．７μｍのＤｖ５０値を有する粒子径分布を有してもよい。多くの場合、ＲＰＬ５５４の粒子は、Ｄｖ５０値が、約１．１μｍ〜約２．６μｍである。
【００１６】
Ｄｖ５０値は、体積分布のメジアン粒子径である。従って、粒子の体積の半分は、Ｄｖ５０値未満の直径を有する粒子に含まれ、そして粒子の体積の半分は、Ｄｖ５０値より大きい直径を有する粒子に含まれる。これは、粒子径分布を記述する周知の方法である。
【００１７】
粒子は、典型的には、約０．４μｍ〜約１．０μｍのＤｖ１０値を有する粒子径分布を有する。粒子は、典型的には、約２．０μｍ〜約４．０μｍのＤｖ９０値を有する粒子径分布を有する。Ｄｖ１０値は、試料の体積の１０％がＤｖ１０値未満の粒子径を有する粒子中にある場合の粒子径を反映する。Ｄｖ９０値は、試料の体積の９０％がＤｖ９０値未満の粒子径を有する粒子内にある場合の粒子径を反映する。
【００１８】
Ｄｖ５０値を測定するために使用される技法は、典型的にはレーザー回折である。例えば、ＲＰＬ５５４粒子は、典型的には、レーザー回折によって測定した場合、約０．２μｍ〜約５μｍのＤｖ５０値を有する粒子径分布を有する。粒子径分布分析は、湿式分散セルと共にマルバーン スプレーテック（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｓｐｒａｙｔｅｃ）を使用するレーザー回折によって行うことができる。典型的には、マルバーン スプレーテック（Ｍａ
ｌｖｅｒｎ Ｓｐｒａｙｔｅｃ）の機器パラメーターは、以下：
・粒子‐標準の不透明粒子；
・屈折率粒子‐１．５０；
・屈折率（虚数）‐０．５０；
・粒子の密度‐１．００；
・分散剤の屈折率‐１．３３；
・制御ユニット‐１０００ＲＰＭ；
・測定タイプ‐時間指定；
・初期サンプリング時間‐３０秒；
・減衰率‐２０％〜３０％；及び
・分散剤‐脱イオン水中の1％ポリソルベート２０
の通りである。
【００１９】
ＲＰＬ５５４の粒子は、医薬的に許容されるサイズ減少方法、又は粒子径制御生産方法によって製造することができる。例えば、粒子は、ＲＰＬ５５４の溶液を噴霧乾燥することによって、又は制御された結晶化によって、又はＲＰＬ５５４の固体形態の粉砕、例えば、エアジェット粉砕、機械的微粉化、若しくは媒体粉砕によって製造されてもよい。
【００２０】
液体医薬組成物中のＲＰＬ５５４の粒子の濃度は、典型的には、約０．０１ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬである。より典型的には、液体医薬組成物中のＲＰＬ５５４の粒子の濃度は、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬである。例えば、液体医薬組成物中のＲＰＬ５５４の粒子の濃度は、約０．０１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬ、又は０．１ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬであってもよい。液体医薬組成物中のＲＰＬ５５４の粒子の濃度は、例えば、０．１ｍｇ／ｍＬ〜６ｍｇ／ｍＬであってもよい。
【００２１】
好ましくは、懸濁液のｐＨは、約６〜約８、より好ましくは、約６．５〜約７である。
【００２２】
液体医薬組成物は、１つ以上の界面活性剤をさらに含んでもよい。界面活性剤は、医薬的に許容される界面活性剤である。界面活性剤は、非イオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤又は両性イオン性界面活性剤であってもよい。好ましくは、１つ以上の界面活性剤は、1つ以上の非イオン性界面活性剤から選択される。
【００２３】
１つ以上の界面活性剤は、典型的には、ポリオキシエチレングリコールアルキルエーテル、ポリオキシプロピレングリコールアルキルエーテル、グルコシドアルキルエーテル、ポリオキシエチレングリコールオクチルフェノールエーテル、ポリオキシエチレングリコールアルキルフェノールエーテル、グリセロールアルキルエステル、ポリオキシエチレングリコールソルビタンアルキルエステル（ポリソルベート）、ソルビタンアルキルエステル、コカミドＭＥＡ、コカミドＤＥＡ、ドデシルジメチルアミンオキシド、ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコール（ポロキサマー）のブロックコポリマー、及びポリエトキシル化獣脂アミン（ＰＯＥＡ）から選択される。
【００２４】
好ましくは、1つ以上の界面活性剤は、ポリオキシエチレングリコールソルビタンアル
キルエステル、例えば、ポリソルベート２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）、ポリソルベート４０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート）、ポリソルベート６０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート）、及びポリソルベート８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレアート）、並びにソルビタンアルキルエステル、例えば、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタントリステアレート、及びソルビタンモノオレエートから選択される。
【００２５】
1つ以上の界面活性剤の全濃度は、典型的には、約０．０１ｍｇ／ｍＬ〜約２ｍｇ／ｍ
Ｌである。組成物は、多くの場合、２つ以上の界面活性剤、例えば、ポリソルベート、及びスパン界面活性剤を含む。
【００２６】
典型的には、液体医薬組成物は、１つ以上の緩衝液をさらに含む。緩衝液は、医薬的に許容される緩衝液である。緩衝液は、吸入に適した液体医薬組成物における使用に適した任意の緩衝液であってもよい。１つ以上の緩衝液は、典型的には、クエン酸緩衝液、又はリン酸緩衝液から選択される。クエン酸緩衝液には、クエン酸、クエン酸ナトリウム、及びそれらの混合物が含まれる。リン酸緩衝液には、リン酸、リン酸一ナトリウム、リン酸
水素二ナトリウム、及びそれらの混合物が含まれる。
【００２７】
1つ以上の緩衝液の全濃度は、典型的には、約５ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬである
。組成物は、多くの場合、２つ以上の緩衝成分、例えば、２つのリン酸塩、例えば、リン酸ナトリウム塩を含む。
【００２８】
本発明による液体医薬組成物は、（ａ）約０．０１ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬの濃度のＲＬＰ５５４の粒子；（ｂ）約０．０１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬの濃度の１つ以上の界面活性剤；及び（ｃ）約５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬの濃度の緩衝液を含む。
【００２９】
液体医薬組成物は、典型的には、等張化剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙ ａｄｊｕｓｔｅｒ）を
さらに含む。等張化剤は、任意の医薬的に許容される等張化剤であってもよい等張化剤の例として、単純な非毒性塩、例えば、アルカリ金属ハロゲン化物、例えば、塩化ナトリウム、及びヨウ化カリウムが挙げられる。典型的には、等張化剤は、塩化ナトリウムである。
【００３０】
等張化剤の濃度は、所望の張度に達するのに必要な量、例えば、体、又は肺との等張性に依存する。等張化剤の濃度は、典型的には、約２ｍｇ／ｍＬ〜約８ｍｇ／ｍＬ、より典型的には、約３．５ｍｇ／ｍＬ〜６ｍｇ／ｍＬである。
【００３１】
液体医薬組成物は、他の成分を含んでもよい。あるいは、他の構成要素を除外することができる。ある場合には、液体医薬組成物は、β２‐アドレナリン受容体アゴニスト、又はムスカリン性受容体アンタゴニストを含まない（又はβ２-アドレナリン受容体アゴニ
スト、及びムスカリン性受容体アンタゴニストの合計が０．１重量％以下である）。
【００３２】
希釈剤は、任意の医薬的に許容される希釈剤であってもよい。希釈剤は、吸入による投与に適している。適切な希釈剤の例としては、水、エタノール、及びグリセロールが挙げられる。希釈剤は、好ましくは、水である。希釈剤は、好ましくは、滅菌されている。
【００３３】
本発明による液体医薬組成物は、典型的には、以下：
（ａ）０．０１ｍｇ／ｍＬ〜４０ｍｇ／ｍＬの濃度のＲＬＰ５５４の粒子;
（ｂ）０．１ｍｇ／ｍＬ〜２ｍｇ／ｍＬの濃度のポリオキシエチレングリコールソルビタンアルキルエステル；
（ｃ）０．０１ｍｇ／ｍＬ〜０．１ｍｇ／ｍＬの濃度のソルビタンアルキルエステル；
（ｄ）５ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬの濃度の第一のリン酸緩衝液成分；
（ｅ）５ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬの濃度の第二のリン酸緩衝液成分；及び
（f）２ｍｇ／ｍＬ〜８ｍｇ／ｍＬの濃度の等張化剤
を含む。
【００３４】
例えば、液体医薬組成物は、以下：
（ａ）０．０５ｍｇ／ｍＬ〜２５ｍｇ／ｍＬの濃度のＲＬＰ５５４の粒子；
（ｂ）０．１ｍｇ／ｍＬ〜２ｍｇ／ｍＬの濃度のポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート（ポリソルベート２０、Ｔｗｅｅｎ ２０）；
（ｃ）０．０１ｍｇ／ｍＬ〜０．１ｍｇ／ｍＬの濃度のソルビタンモノラウレート（Ｓｐａｎ ２０）；
（ｄ）５ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬの濃度のリン酸一ナトリウム一水和物；
（ｅ）５ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬの濃度の無水リン酸水素二ナトリウム；及び
（ｆ）２ｍｇ／ｍＬ〜８ｍｇ／ｍＬの濃度の塩化ナトリウム
を含んでもよい。
【００３５】
典型的には、液体医薬組成物は、ネブライザーによる投与に適している。
【００３６】
本発明はまた、本発明による液体医薬組成物を含むネブライザーを提供する。ネブライザーは、典型的には、液体医薬組成物を充填される。ネブライザーは、典型的には、約１ｍＬ〜約２００ｍＬ、より典型的には、１ｍＬ〜２０ｍＬの液体医薬組成物を含む。
【００３７】
ネブライザーは、圧縮空気を使用して、液体医薬組成物をエアロゾル化して、対象の気道に吸入されるエアロゾルにする。ネブライザーの例として、ソフトミストネブライザー、振動ふるい式ネブライザー、ジェットネブライザー、及び超音波ネブライザーが挙げられる。適切なネブライザー装置は、Ｐｈｉｌｉｐｓ Ｉ‐ｎｅｂ（商標）（Ｐｈｉｌｉｐ
ｓ）、Ｐａｒｉ ＬＣ Ｓｐｒｉｎｔ（Ｐａｒｉ ＧｍｂＨ）、ＡＥＲｘ（登録商標）Ｐｕ
ｌｍｏｎａｒｙ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ （Ａｒａｄｉｇｍ Ｃｏｒｐ．）、及びＰａｒｉ ＬＣ ＰｌｕｓＲｅｕｓａｂｌｅ Ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ（Ｐａｒｉ ＧｍｂＨ）が挙げられる。
【００３８】
本発明はまた、ヒト、又は動物の体の治療に使用するための液体医薬組成物を提供する。本組成物は、本明細書中で定義される通りである。液体医薬組成物は、典型的には、ヒト、又は動物の体の治療に使用され、治療は吸入による投与を含む。
【００３９】
本発明の組成物は、ＲＰＬ５５４の血流への遅延放出を可能にする。従って、特定の時間後のＲＰＬ５５４の血漿濃度は、ＲＰＬ５５４の既知の組成物の使用と比較して増加する。典型的には、ＲＰＬ５５４の血漿濃度は、組成物の噴霧用量が投与されてから４時間以上の時間で、１ｎｇ／ｍＬ以上である。噴霧される用量は、典型的には、０．０２ｍｇ／ｋｇ〜０．６ｍｇ／ｋｇである。例えば、噴霧される用量は、０．２ｍｇ／ｋｇ〜０．６ｍｇ／ｋｇであってもよい。例えば、本発明は、ヒト、又は動物の体の治療に使用するための本明細書中で定義されたような液体医薬組成物を提供し、ここでＲＰＬ５５４の血漿濃度は、０．２ｍｇ／ｋｇ〜０．６ｍｇ／ｋｇの噴霧用量が、本発明の噴霧組成物の吸入を介して投与された後、４時間以上の時間で、１ｎｇ／ｍＬ以上である。ＲＰＬ５５４の血漿濃度は、典型的には、本組成物の噴霧用量が投与された後、３時間、４時間、又は５時間以上の時間で、１ｎｇ／ｍＬである。
【００４０】
本発明はまた、対象において、本明細書中で定義されるような疾患、又は症状を治療、又は予防する方法を提供し、本方法は、前記対象に、本明細書中で定義するような液体医薬組成物の有効量を投与することを含む。典型的には、本方法は、疾患、又は症状を治療するためのものである。典型的には、疾患、又は症状は、喘息、アレルギー性喘息、枯草熱、アレルギー性鼻炎、気管支炎、気腫、気管支拡張症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、ステロイド耐性喘息、重度の喘息、小児喘息、嚢胞性線維症、肺線維症、肺線維症（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、間質性肺疾
患、皮膚疾患、アトピー性皮膚炎、乾癬、眼球炎症、脳虚血、炎症性疾患、及び自己免疫疾患から選択される。好ましくは、本方法は、喘息、又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、より好ましくは、ＣＯＰＤを治療することを含む。
【００４１】
ＲＰＬ５５４の有効量は、典型的には、単回投与について、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇである。ＲＰＬ５５４の有効量は、多くの場合、単回投与について、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇである。例えば、有効量は、約０．１ｍｇ〜約５００ｍｇ、又は約０．１ｍｇ〜１００ｍｇ、好ましくは、約０．１ｍｇ〜約６ｍｇの用量であってもよい。有効量は、０．１ｍｇ〜１２ｍｇであってもよい。ＲＰＬ５５４の単回用量は、０．５ｍｇ〜３ｍｇ、例えば、約１．５ｍｇであってもよい。用量は、毎日投与されてもよい。例えば、ＲＰＬ５５４の用量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜５０ｍｇ／ｋｇ／日、典型的には、０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日、又は０．０１ｍｇ／ｋｇ／
日〜１ｍｇ／ｋｇ／日であってもよい。これらの用量は、典型的には、吸入器から放出される公称用量である。液体医薬組成物は、１日に１回、２回、又は３回投与されてもよく、週に２回、３回、４回、又は５回投与されてもよい。本組成物は、患者が必要とする頻度で投与されてもよい。
【００４２】
有効量は、約０．１ｍｇ〜約５００ｍｇ、又は約０．１ｍｇ〜１００ｍｇ、好ましくは、約０．５ｍｇ〜約６ｍｇの用量であってもよい。有効量は、０．１ｍｇ〜１２ｍｇであってもよい。ＲＰＬ５５４の単回用量は、０．５ｍｇ〜２４ｍｇであってもよく、ネブライザーによって投与されてもよい。ＲＰＬ５５４の単回投与量は、０．５ｍｇ〜６ｍｇ、例えば、約１．５ｍｇであってもよい。用量は１日１回、２回、又は３回投与であってもよい。例えば、ＲＰＬ５５４の用量は、０．１ｍｇ／日〜５０ｍｇ／日、典型的には、１．５ｍｇ／日〜１８ｍｇ／日であってもよい。これらの用量は、典型的には、吸入器から放出される公称用量である。液体医薬組成物は、１日に１回、２回、又は３回投与されてもよく、週２回、３回、４、回、又は５回投与されてもよい。本組成物は、患者が必要とする頻度で投与されてもよい。
【００４３】
本発明の驚くべき知見は、ＲＰＬ５５４の懸濁液製剤が、心血管系の負担の増加を伴わずに、患者に高用量のＲＰＬ５５４を投与することを可能にすることである。従って、液体医薬組成物は、心血管疾患を罹患している患者、又は心血管疾患を罹患するリスクのある患者の治療に使用するのに適している。
【００４４】
例えば、本組成物は、心血管脆弱性を罹患している患者において、上記で定義したような疾患、又は症状を治療するために使用されてもよい。心血管脆弱性を罹患している患者は、典型的には、頻脈、又は高血圧症から生じる有害事象のリスクが高い患者である。より典型的には、心血管脆弱性を罹患している患者は、既存の心臓病、又は頻脈、若しくは高血圧によって悪化する症状を罹患している患者である。そのような患者には、冠状動脈疾患、心筋症、高血圧、高血圧性心疾患、心不全、不整脈、心臓不整脈（ｃａｒｄｉａｃ
ｄｙｓｒｈｙｔｈｍｉａｓ）、心内膜炎、心筋炎、心臓弁膜症、及び脳卒中に罹患して
いる患者が含まれる。また、心臓発作に罹患した患者も含まれる。
【００４５】
本発明は、以下の実施例により、より詳細に記載される。
【実施例】
【００４６】
実施例１‐ＲＰＬ５５４懸濁液製剤の処方及び安定性
本発明による液体医薬組成物を、以下の表１、及び表２に示す処方で製造した。
【００４７】
【表１】
2019069978.tif 000004
【００４８】
【表２】
2019069978.tif 000005
【００４９】
アッセイを二連で行った。重要な方法パラメーターは、以下：
・移動相：アセトニトリル：水：ＴＦＡ（４５：５５：０．１）；
・カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘ‐Ｂｒｉｄｇｅ ｐｈｅｎｙｌ，３．５μｍ，１５０ｘ４．６ｍｍ；
・流速：１．５ｍＬ／分
・注入量：１０μＬ；
・検出：UV（２５４ｎｍ）；
・ランタイム：６分；並びに
・サンプル、及び標準濃度：０．１ｍｇ／ｍＬ
である。
【００５０】
変形１ａを、（ｉ）温度２５℃、及び相対湿度（ＲＨ）６０％、又は（ｉｉ）温度４０℃、及びＲＨ７５％のいずれかの条件下で保存した。外観、ｐＨ、アッセイ、不純物、及び粒子径分布（ＰＳＤ）を、最初に、１か月、２か月、及び６か月（２５℃、及び６０％ＲＨの条件でのみ6か月）で測定した。不純物の量は、示された不純物の相対保持時間（
ＲＲＴ）を使用して、ＨＰＬＣで測定した。結果を、以下の表３、及び表４に示す。
【００５１】
【表３】
2019069978.tif 000006
【００５２】
【表４】
2019069978.tif 000007
【００５３】
変形１ｂを、（ｉ）温度25℃、及び相対湿度（ＲＨ）６０％、又は（ｉｉ）温度４０℃、及びＲＨ７５％のいずれかの条件下で保存した。外観、ｐＨ、不純物、及び粒子径分布（ＰＳＤ）を、最初に、１か月、及び２か月で測定した。不純物の量は、示された不純物の相対保持時間（ＲＲＴ）を用いて、ＨＰＬＣによって測定した。結果を、表５、及び表６に示す。
【００５４】
【表５】
2019069978.tif 000008
【００５５】
【表６】
2019069978.tif 000009
【００５６】
表３〜６から分かるように、本発明による液体医薬組成物は、ｐＨ、又は不純物の量に有意な変動がなく、優れた長期安定性を示す。この安定性は、４０℃で２か月後でも観察される。
【００５７】
比較例１‐ＲＰＬ５５４溶液製剤の処方及び安定性
ＲＰＬ５５４の溶液製剤について、同様の安定性試験を行った。ｐＨ約３．２のクエン酸塩／リン酸塩緩衝液中のＲＰＬ５５４の１．０ｍｇ／ｍｌ溶液を、温度２５℃、及び相対湿度（ＲＨ）６０％の条件下で、６か月間保持した。存在する外観、ｐＨ、アッセイ、及び不純物を、最初に、及び６か月で測定した。結果を以下の表７に示す。
【００５８】
【表７】
2019069978.tif 000010
【００５９】
溶液の外観に変化はないが、ＲＲＴ値が０．８７である不純物の量が著しく増加する。この不純物を、ＲＰＬ５５４の加水分解生成物として同定した。ＲＰＬ５５４の溶液は、本発明による懸濁液製剤よりも安定性が低い。
【００６０】
実施例２‐粒子径分布
噴霧される製剤における使用に適した微粉化ＲＰＬ５５４の試料の粒子径分布を、レーザー回折を用いて評価した。粒子径分布分析を、湿式分散セルと共にＭａｌｖｅｒｎ Ｓ
ｐｒａｙｔｅｃを用いたレーザー回折によって行った。結果は以下の通りである：Ｄｖ１０＝０．６９μｍ；Ｄｖ５０＝１．３５μｍ；Ｄｖ９０＝２．５μｍ。
【００６１】
実施例３‐製剤
ＲＰＬ５５４懸濁液、及び溶液製剤を、以下のように調製した。これらの製剤を実施例４〜６に使用した。
【００６２】
【表８】
2019069978.tif 000011
【００６３】
【表９】
2019069978.tif 000012
【００６４】
実施例４‐ラットでの毒物動態学的プロファイル
概要
本発明によるＲＰＬ５５４懸濁液を、２．４、８．４、又は２１．６ｍｇ／ｋｇ／日の標的用量で１日１回、鼻のみの吸入によって、Ｗｉｓｔａｒ Ｈａｎラット（５／性別／
群）に、７日間連続投与した（群２、３、及び４）。追加の５匹／性別／群にビヒクル懸濁液を与え、そして対照として用いた（群１）。用量投与の期間は、毎日２４０分であった。処置期間の終わりに、生存している全ての動物を安楽死させ、剖検した。サテライト動物（３／性別／群）にも同様に投与し、そして毒性動態解析のために７日目に採血した。ＲＰＬ５５４懸濁液との比較のために、サテライト動物の追加群（３／性別）に、ＲＰＬ５５４溶液を、２．４ｍｇ／ｋｇ／日の標的用量で１日１回、鼻のみの吸入によって投与し、そして毒性動態解析のために７日目に採血した。平均エアロゾル濃度、及び達成された用量を以下の表８に示す。
【００６５】
【表１０】
2019069978.tif 000013
【００６６】
毒物動態結果
ＲＰＬ５５４懸濁液の毒物動態プロファイルを、異なる用量（第２、３、及び４群）で測定した。これを既知のＲＰＬ５５４溶液（第５群）の毒物動態プロファイルと比較した。群２、及び群５に投与される用量は、同様である。群１は、対照群である。
【００６７】
懸濁液（本発明）、又は溶液（比較）形態のＲＰＬ５５４の毒物動態パラメーターを、ＲＰＬ５５４組成物のラットへの１週間毎日の吸入暴露の７日目に評価した。結果を、以下の表１０、及び表１１に示す。測定されたパラメーターは、ラットの血漿中のＲＰＬ５５４の最大濃度（Ｃｍａｘ）、Ｃｍａｘ（Ｔｍａｘ）に達するまでの時間、及び８時間後の用量曲線下面積（ＡＵＣ８ｈ）である。
【００６８】
【表１１】
2019069978.tif 000014
【００６９】
【表１２】
2019069978.tif 000015
【００７０】
これらの結果は、溶液組成物（群５）と比較して、本発明の液体医薬組成物（例えば、群３、及び４）を用いて、実質的により高いＣｍａｘ値に達することが可能であることを実証する。ＲＰＬ５５４溶液からの実現可能な溶解限度量は、そのようなＣｍａｘ値が溶液組成物で達成されることを妨げる。懸濁液組成物はまた、遅延放出を有することが示され、群２〜４について、より大きなＴｍａｘ値が観察された。
【００７１】
実施例５‐イヌにおける薬物動態プロファイル
本発明のＲＰＬ５５４懸濁液の毒物動態プロファイルを、ビーグル犬について評価した。試験設計は、以下の表１２に示す通りであった。
【００７２】
【表１３】
2019069978.tif 000016
＊１２０分の暴露時間、及び１２ｋｇの体重を仮定して計算されたエアロゾル濃度
【００７３】
動物に、可変用量相（ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｓｅ ｐｈａｓｅ）（第一相）の各用量で３日間、吸入投与により試験物質ＲＰＬ５５４を、少なくとも２日間のウオッシュアウト期間で投与した。定用量相（ｃｏｎｓｔａｎｔ ｄｏｓｅ ｐｈａｓｅ）（第二相）において、動物に試験物質を、７日間連続して投与した。クロスオーバーフェーズ（第三相）では、動物に、懸濁液製剤への一回暴露として試験物質を投与し、次に２日間投与を中止し、続いて比較溶液製剤への一回暴露を与えた。
【００７４】
毒物動態結果
ＲＰＬ５５４懸濁液（群２）を用いて、９．８２ｍｇ／ｋｇ／日で７日間投与した後、雄、及び雌のＣｍａｘ値は、それぞれ、１１６ｎｇ／ｍＬ、及び９５．９ｎｇ／ｍＬであり、雄、及び雌のＡＵＣ６ｈ値は、それぞれ３８９ｎｇ．時間／ｍＬ、及び２８９ｎｇ．時間／ｍＬであった。
【００７５】
０．３９５ｍｇ／ｋｇのＲＰＬ５５４懸濁液を1回暴露した後、雄、及び雌のＣｍａｘ
値は、それぞれ１３．４ｎｇ／ｍＬ、及び１２．７ｎｇ／ｍＬであり、雄、及び雌のＡＵＣ６ｈ値は、それぞれ、３３．９ｎｇ．時間／ｍＬ、及び３１．５ｎｇ．時間／ｍＬであった。
【００７６】
０．５４３ｍｇ／ｋｇのＲＰＬ５５４懸濁液を1回暴露した後、雄、及び雌のＣｍａｘ
値は、それぞれ４０．９ｎｇ／ｍＬ、及び３４．２ｎｇ／ｍＬであり、雄、及び雌のＡＵＣ６ｈ値は、それぞれ、７４．６ｎｇ．時間／ｍＬ、及び６２．８ｎｇ．時間／ｍＬであった。
【００７７】
ここでは、本発明によるＲＰＬ５５４懸濁液（例えば、１１６ｎｇ／ｍＬ、及び９５．９ｎｇ／ｍＬ）を用いて、高いＣｍａｘ、及びＡＵＣ値を達成することが可能であることを観察する。
【００７８】
毒物動態結果はまた、懸濁製剤が、溶液製剤と比較して遅延放出を与えることを確認する。これは、第３相実験のデータ（懸濁液製剤の別々の単回投与）から見出すことができる。これらのデータを、以下の溶液製剤（標的用量０．５ｍｇ／ｋｇ／日、実際０．５４３ｍｇ／ｋｇ／日）を、懸濁液製剤（標的用量０．５ｍｇ／ｋｇ／日、実際０．３９５ｍｇ／ｋｇ／日）と比較した表１３に示す。表１３は、懸濁液の単回投与、又は溶液の単回投与による処置後の経時的な血漿中濃度（ｎｇ／ｍＬ）を示す。２つの治療を、２日間隔で行った。１匹の雄イヌ（６１）と２匹の雌イヌ（６２及び６４）の３匹すべてのデータ
が示されている。ＢＬＱは、１．００ｎｇ／ｍＬ未満の血漿濃度を指す。
【００７９】
【表１４】
2019069978.tif 000017
【００８０】
表１３のデータは、ＲＰＬ５５４の懸濁液製剤が、ＲＰＬ５５４の溶液製剤よりも遅延放出プロファイルをもたらすことを示している。例えば、ＲＰＬ５５４の血漿濃度は、全てのイヌについて、溶液製剤の吸入から４時間後に検出限界以下であるが、一方、懸濁液の吸入後の全てのイヌについて、少なくとも１．４ｎｇ／ｍＬのＲＰＬ５５４が、４時間後に、血漿中に存在する。
【００８１】
実施例６‐モルモットにおける肺機能
序論
ＲＰＬ５５４は、乾燥粉末として投与される場合、又は酸性化（ｐＨ２．５）生理食塩水中の溶液として調製される場合、静脈内投与される攣縮剤に対する気管支保護を引き起こす。メタコリンに対するこの機能的拮抗作用（１．５倍希釈、即ち２．８倍）は、ヒト喘息対象においても確認されている（Ｆｒａｎｃｉｏｓｉら，２０１３）。この実施例では、噴霧のための新規懸濁液製剤として提示した場合の、ＲＰＬ５５４によって与えられる気管支保護を評価した。
【００８２】
方法
薬物曝露
オス ダンキンハートレー（Ｄｕｎｋｉｎ Ｈａｒｔｌｅｙ）モルモット（３００〜４００ｇ）を、特注のエアロゾルチャンバーに入れ、ビヒクル（０．９％生理食塩水 ｐＨ２
．５）、ＲＰＬ５５４（２．５ｍｇ／ｍＬ溶液）、又はＲＰＬ５５４（１ｍｇ／ｍＬ溶液）のいずれかに、１５分間曝露した。超音波ネブライザー（Ｕｌｔｒａｎｅｂ ９９）を
使用してエアロゾルを生成し、１Ｌ／分の流速を用いて噴霧された溶液を、動物をその上気道（即ち、鼻）で拘束することができ、エアロゾルチャンバー内に突出している、４つのアームを含むエアロゾルチャンバーに導いた。
【００８３】
この１５分間の曝露期間の後、動物を回復させ、薬物曝露の２時間前、及び５時間前に、動物をウレタン（１．５ｇ／ｋｇ）で麻酔し、正中切開を行って気管を露出させた。気管開口術を行い、気管カニューレを適所に結び付け、そして気流検出のために、Ｖａｌｉｄｙｎｅ圧力トランスデューサ―（＋２ｃｍＨ２Ｏ）に接続された呼吸気流計に接続した。Ｌｕｎｇ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ Ｒｅｃｏｒｄｉｎｇシステム（ＬＦＲ，Ｖｅｒｓｉｏｎ 
９，Ｍｕｍｅｄ ＵＫ）を用いて，気流の呼吸変化による呼吸を測定し、リアルタイムで
ＰＣに表示した。流量信号を、一回呼吸量の尺度を与えるために積分した。
【００８４】
カニューレを、第３、及び第５肋間腔の間の胸腔に挿入し、Ｖａｌｉｄｙｎｅ圧力トランスデューサ―（＋２ｃｍＨ２Ｏ）の負極側に接続した。肺圧差（ＴＰＰ：口と胸の圧力の差）を測定するために、圧力トランスデューサの正極側を動物の近位の呼吸気流計側に接続した。肺機能パラメーター、全気道抵抗（ＲＬ； ｃｍＨ２Ｏ．ｓ／Ｌ）、及び動肺
コンプライアンス（ｍＬ／ｃｍＨ２Ｏ）を、積分法による流量、１回呼吸量、及びＴＰＰの各測定値から導いた。頸動脈にカニューレを挿入して、血圧をそれぞれ測定した。累積濃度効果曲線を確立し、そしてＲＬの５０％増加を累積的に生じた（ＰＣ５０）アセチルコリンの誘発濃度（ＰＣ）を確立した。
【００８５】
アセチルコリン暴露
ＲＰＬ５５４（１、及び２．５ｍｇ／ｍＬ）、又はビヒクル（酸性化生理食塩水ｐＨ３．５又はｐＨ２．５）の溶液の投与の２時間後、及び５時間後に、アセチルコリンに対する気管支収縮（０．２５〜１６ｍｇ／ｍＬ、４秒間曝露）を観察した。Ａｅｒｏｎｅｂ（登録商標）Ｌａｂ Ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ（Ａｅｒｏｇｅｎ Ｉｎｃ）を用いて、アセチルコリンのエアロゾルを生成した。流入を、呼吸肺機能の測定のために呼吸気流計を介して導くか、又は薬物を肺に直接送達するためにネブライザーを介して分路した（呼吸機能は４秒の曝露期間中に測定されなかった）。
【００８６】
別の一連の実験では、ＲＰＬ５５４（２．５ｍｇ／ｍＬ、及び１０ｍｇ／ｍＬ）、並びにビヒクルの新規懸濁液製剤の吸入の２、及び５時間後に肺機能を行った。
【００８７】
結果
ベースラインパラメーター
先にビヒクル対照（生理食塩水ｐＨ２．５）、ＲＰＬ５５４の溶液製剤（１ｍｇ／ｍＬ、又は２．５ｍｇ／ｍＬ、図１）、及びＲＰＬ５５４の新規懸濁液製剤（２．５ｍｇ／ｍＬ、及び１０ｍｇ／ｍＬ、図２）に曝露した動物について、ベースライン総肺抵抗（ＲＬ）、動肺コンプライアンス（Ｃｄｙｎ）、平均動脈血圧（ＢＰ）、及びネブライザー出力を測定した。アセチルコリン曝露前に、ベースラインの呼吸、及び心臓血管パラメーターを作成し、そして麻酔したモルモットでの生理食塩水、又はＲＰＬ５５４曝露の２、及び５時間後に観察した。
【００８８】
肺機能パラメーター
一般に、ＲＬは、肺のこの領域における気道平滑筋上のムスカリン受容体の活性化後の中枢気道における気道径の変化を表す。アセチルコリンを、その短い作用時間のために選択した。
【００８９】
１．ＲＰＬ５５４溶液製剤
吸入経路で麻酔したモルモットに投与したアセチルコリンは、生理食塩水、及びＲＰＬ５５４（１ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ溶液）曝露の２時間、及び５時間後に測定したＲＬの変化により決定されたように、用量依存性の気管支収縮反応を引き起こした。
【００９０】
１．１‐アセチルコリンＲＬ ＰＣ５０の分析
算術平均の事後分析は、ＲＰＬ５５４ １ｍｇ／ｍＬ溶液で２時間（平均ｄｉｆｆ＝３
．５（０．１１−８．８３）ｍｇ／ｍＬ、Ｐ＝０．０４４５）、２．５ｍｇ／ｍＬで２時間（４．７（０．４−９）ｍｇ／ｍＬ、Ｐ＝０．０３５７）、及び５時間（３．４（０．９−６）ｍｇ／ｍＬ、Ｐ＝０．０１３３）での有意な気管支保護を示した。気管支保護の程度は、ＲＰＬ５５４ １ｍｇ／ｍＬ溶液の５時間では、明白ではなかった（２．５（−
０．１７−５．２）ｍｇ／ｍＬ、Ｐ＝０．０６２８）。
【００９１】
ＲＰＬ５５４溶液と生理食塩水群の２時間（１ｍｇ／ｍＬ ＲＰＬ５５４、Ｐ＝０．０
１９０未補正）と５時間（２．５ｍｇ／ｍＬ、Ｐ＝０．００９５未補正）の有意差を観察した（図１）。
【００９２】
２．ＲＰＬ５５４の新規懸濁液製剤
吸入経路で麻酔したモルモットに投与したアセチルコリンは、生理食塩水、及びＲＰＬ５５４懸濁液（２．５ｍｇ／ｍＬ、及び１０ｍｇ／ｍＬ）曝露の２時間、及び５時間後に測定したＲＬの変化により決定されたように、用量依存性の気管支収縮反応を引き起こした。ベースライン肺コンプライアンス（Ｃｄｙｎ）の用量依存的減少をまた、生理食塩水、又はＲＰＬ５５４懸濁液（２．５ｍｇ／ｍＬ、及び１０ｍｇ／ｍＬ）曝露の２時間、及び５時間後のアセチルコリンの濃度の増加に伴って、記録した。
【００９３】
２．１‐アセチルコリンＲＬ ＰＣ５０の分析
アセチルコリンＲＬ ＰＣ５０のｌｏｇ２変換データの分散の分析は、２時間で全体的
な薬物効果を示した（Ｐ＝０．０２３８）。２時間の群では、１０ｍｇ／ｍＬ ＲＰＬ５
５４懸濁液とビヒクル群との間に有意差があった（平均倍率差＝２．６７（１．１２−６．３６）、Ｐ＜０．０５）。５時間でのＲＰＬ５５４（１０ｍｇ／ｍＬ懸濁液）とビヒクルの間の１４倍のシフト（０．５−４００）というより大きな平均差にもかかわらず、広い信頼区間のために、統計学的差異が達成されなかった（図２の上部パネル）。
【００９４】
２、及び５時間の時点のビヒクルデータを合わせて再分析した（図２の下部パネル）。２．５ｍｇ／ｍＬ ＲＰＬ５５４懸濁液（２．５２倍（１−５．７２）、Ｐ＜０．０５）
、及び１０ｍｇ／ｍＬ ＲＰＬ５５４（４．６７倍（２−１１）、Ｐ＜０．０５）で、気
管支保護の有意な程度に反映された、全体的な有意な治療効果があった（Ｐ＝０．００１６）。５時間の時点で、１０ｍｇ／ｍＬ ＲＰＬ５５４懸濁液は、有意な程度の気管支保
護をもたらした（２．７７倍（１．３−６．０））（図２の上部パネル）。
【００９５】
概要
ＲＰＬ５５４は、薬物暴露の２時間後、及び５時間後に測定した場合、エアロゾル化アセチルコリン投与によって誘発された気管支収縮を阻害した。ＲＰＬ５５４溶液製剤（１ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ）、及び新規ＲＰＬ５５４懸濁液製剤（２．５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ）は、統計的に有意な気管支保護をもたらした。
【００９６】
実施例７‐ヒトにおける薬物動態研究
第１相、ランダム化、二重盲検、プラセボ対照試験を行い、１８歳〜５０歳の健康な男性対象にネブライザーで投与した、本発明のＲＰＬ５５４懸濁液の単回吸入用量の安全性、耐容性、及び薬物動態を評価した。
【００９７】
懸濁液製剤の公称用量は、約１．５ｍｇであり、これは、溶液製剤での臨床試験において既に十分耐容性が示されている０．０１８ｍｇ／ｋｇ用量と本質的に同等であった。
【００９８】
使用された懸濁製剤は、界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ２０、及びＳｐａｎ２０）を有する、ｐＨ７のリン酸緩衝化生理食塩水５ｍＬ中の１．５ｍｇ 微粉化ＲＰＬ５５４を含む噴霧
のための滅菌懸濁液であった（上記実施例１に記載の通りであるが、異なる濃度のＲＰＬ５５４を有する）。懸濁液の投与を、標準的なジェットネブライザー（ＰＡＲＩ ＬＣ Ｓｐｒｉｎｔ）を用いて行った。
【００９９】
血液サンプル（各時点で４ｍＬ）を、投与後適切な時間間隔で採取した。サンプルを、前腕の静脈穿刺、又は留置カニューレを介して、リチウムヘパリンチューブに採取し、直ちに冷却（氷浴）した。採取後１５分以内に、血液を遠心分離した。血漿を、冷凍遠心分離機（約４℃）で、１１００ｇで１５分間分離し、そしてポリプロピレンチューブに移し
た。次いで、活性物質の濃度を測定した。
【０１００】
平均の結果を図3に示し、そしてそれは、溶液、又は懸濁液製剤の投与後の対象の平均
濃度曲線を示す。溶液製剤の結果は、ｐＨ３．２で、クエン酸−リン酸緩衝化生理食塩水に溶解したＲＰＬ５５４を含む噴霧のための滅菌溶液を使用した以前の臨床研究（Ｔｈｅ
ＬａｎｃｅｔＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｖｏｌｕｍｅ １，Ｎｏ．９，ｐ．７１４−７２７，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１３）に由来する。ネブライザーを介して
投与される量は、公称ＲＰＬ５５４用量が０．０１８ｍｇ／ｋｇであるような量であった（７０ｋｇのヒトの場合、〜１．２６ｍｇ）。
【０１０１】
試験中に測定された平均薬物動態パラメーターを以下の表１４に示す。
【０１０２】
【表１５】
2019069978.tif 000018
【０１０３】
表１４の値は、本発明の懸濁製剤が、比較の溶液製剤と比べて、実質的に改善された薬物動態プロフィールを有することを実証する。特に、曲線下面積（ＡＵＣ）、及び半減期は、いずれも有意に増加する。これは、懸濁製剤が、ＲＰＬ５５４が吸入によって投与され得る、予期せぬ改善された方法を提供することを実証する。
【０１０４】
実施例８‐１２か月の安定性試験
本発明の懸濁製剤の３つのバッチを、以下の表１５に示す組成で製造した。
【０１０５】
【表１６】
2019069978.tif 000019
【０１０６】
分析試験
分析試験を、２５.℃、６０％ＲＨで、製剤の１、３、６、及び１２か月保存後に行っ
た。１２か月の結果を以下に示す。
【０１０７】
外観
外観検査を、単一のサンプル上で視覚的に行った。プラセボ試料は透明で無色の溶液であることが判明した。０．５ｍｇ／ｍＬの濃度の試料は、目視できる凝集物のない淡黄色の懸濁液であったが、２．５ｍｇ／ｍＬ、及び１０ｍｇ／ｍＬの濃度の試料は目視できる凝集物のない黄色の懸濁液であるように見えた。
【０１０８】
ｐＨ
pＨの決定を、単一のサンプルで行った。結果を表１６に示す。
【０１０９】
【表１７】
2019069978.tif 000020
【０１１０】
３つの活性製剤、及びプラセボはすべて、１２か月の時点で、ｐＨ６．７を有することが判明した。最初の時点からの変化を観察しなかった。
【０１１１】
アッセイ
アッセイ試験を、二連にて行った。重要な方法パラメーターを、以下のように要約する。
【０１１２】
【表１８】
2019069978.tif 000021
【０１１３】
アッセイの結果を表１７に示す。
【０１１４】
【表１９】
2019069978.tif 000022
【０１１５】
１２か月の時点での各濃度の活性懸濁液のアッセイ結果は、初期時点から何ら変化を示
さなかった。
【０１１６】
関連物質
関連物質の決定を、二連で行った。重要な方法パラメーターを、以下のように要約する。
【０１１７】
【表２０】
2019069978.tif 000023
【０１１８】
懸濁液の関連物質決定の結果を表１８に示す。
【０１１９】
【表２１】
2019069978.tif 000024
【０１２０】
【表２２】
2019069978.tif 000025
【０１２１】
【表２３】
2019069978.tif 000026
【０１２２】
１２か月の時点での各濃度の活性懸濁液の関連物質の結果は、初期時点と同様であった。
【０１２３】
粒子径分布（ＰＳＤ）
粒子径分布方法を、以下に詳細に示す設定で、Ｓｐｒａｙｔｅｃを使用して行った。
光学特性：粒子：ＲＩ（実数）：１．５０（標準不透明粒子）；ＲＩ（虚数）：０．５０；密度：１．００；分散剤（水）；分散剤ＲＩ：１．３３
サンプル分析用分散剤：脱イオン水中の１％ポリソルベート２０
コントローラーユニット設定：撹拌速度１０００ｒｐｍ
測定時間：サンプリング時間：３０秒；バックグラウンド時間：１０秒
【０１２４】
結果を表１９に示す。
【０１２５】
【表２４】
2019069978.tif 000027
【０１２６】
粒子径分布プロファイルは、１２か月の時点で３つの濃度すべてについて同様であり、そして初期時点と比較して何ら変化を示さなかった。
【０１２７】
顕微鏡による評価
顕微鏡評価を、Ｇ３顕微鏡を用いて製剤を視覚的に評価することによって行った。いくつかの脆い塊を、２．５ｍｇ／ｍＬ、及び１０ｍｇ／ｍＬ懸濁液について、時々見つけたが、試験したバッチのいずれにおいても、凝集物を確認しなかった。評価は、最初の時点と比較して変化がないことを決定した。
【０１２８】
送達速度及び総送達用量
送達速度、及び総送達用量を、バッチあたり３つのバイアルで行った。懸濁液を調剤し、そしてＰＡＲＩ ＬＣ ＰＬＵＳ（商標）ネブライザー／ＰＡＲＩＴｕｒｂｏＢＯＹ Ｓ
（商標）コンプレッサーの組み合わせを使用して送達した。送達速度、及び総送達用量の結果を表２０に示す。
【０１２９】
【表２５】
2019069978.tif 000028
【０１３０】
【表２６】
2019069978.tif 000029
【０１３１】
【表２７】
2019069978.tif 000030
【０１３２】
＊アッセイは、送達された合計である。
％効率は、送達された実際の総用量／送達された理論用量（アッセイ由来の送達された重量、及び製剤濃度を用いて計算）である。
【０１３３】
すべての濃度における総送達用量、及び送達速度は、最初の時点と同様であった。すべての懸濁液の送達効率は、以前の時点と一致していた。
【０１３４】
空気動力学的粒子径分布（ＡＰＳＤ）
次世代インパクタ（ＮＧＩ）を使用して、1条件につき1バッチあたり３つのバイアルに対して、空気動力学的粒子径分布（ＡＰＳＤ）を行った。懸濁液を調剤し、そしてＰＡＲＩ ＬＣ ＰＬＵＳ（商標）ネブライザー／ＰＡＲＩ ＴｕｒｂｏＢＯＹ Ｓ（商標）コンプレッサーの組み合わせを使用して送達した。ＡＰＳＤ決定の結果を、表２１に示す。結果をＣＩＴＤＡＳプログラム（バージョン３．１０）に入力し、５μｍのカットオフ値を用いて微粒子用量を計算し、その計算結果を表２１に示す。
【０１３５】
【表２８】
2019069978.tif 000031
【０１３６】
【表２９】
2019069978.tif 000032
【０１３７】
【表３０】
2019069978.tif 000033
【０１３８】
＊丸められていないデータに対してＣＩＴＤＡＳを用いて計算した。ＦＰＤ：微粒子用量；ＦＰＦ：微粒子画分；ＧＳＤ：幾何学径分布；ＭＭＡＤ：空気動力学的中央粒子径；ＭＯＣ：マイクロオリフィスコレクターである。
【０１３９】
１２か月安定性
以下の表２２（０．５ｍｇ／ｍＬに関して）、表２３（２．５ｍｇ／ｍＬに関して）、及び表２４（１０ｍｇ／ｍＬに関して）は、本発明のＲＰＬ５５４懸濁液製剤の１２か月のデータと、対応する１、３、及び６か月の時点のデータとの組み合わせである。
【０１４０】
（注：表２２、２３、及び２４中の＊で印が付けられている不純物ピークを、ダブレットとして観察したが、最初の時点で、単一のピークとして観察している。これは、おそら
く、使用したより良い分離をもたらす新しいカラムのためであり、そして分解の兆候とは考えられない。）
【０１４１】
概要
０．５ｍｇ／ｍＬ（ＢＮ０１１／１４）、２．５ｍｇ／ｍＬ（ＢＮ０１０／１４）、及び１０ｍｇ／ｍＬ（ＢＮ００９／１４）噴霧用のＲＰＬ５５４懸濁液、並びに関連するプラセボ（ＢＮ００８／１４）を製造し、そして２５℃／６０％ＲＨで安定に置き、そして１２か月の時点で試験した。
【０１４２】
結果は、１２か月の時点で試験したバッチのいずれにも本質的に変化はなかったことを示し、噴霧用ＲＰＬ５５４懸濁液が、２５℃／６０％ＲＨで、１２か月間安定であることを確認した。
【０１４３】
【表３１】
2019069978.tif 000034
【０１４４】
【表３２】
2019069978.tif 000035
【０１４５】
【表３３】
2019069978.tif 000036
【０１４６】
実施例９‐加速条件（４０℃／７５％ＲＨ）での６か月の分析
４０℃／７５％ＲＨでの加速安定性試験をまた、６か月まで継続した。これらの結果を、表２５（０．５ｍｇ／ｍＬ）、表２６（２．５ｍｇ／ｍＬ）、及び表２７（１０ｍｇ／ｍＬ）に示す。
【０１４７】
（実施例８に記載されているように、＊で印が付けられている不純物ピークをダブレットとして観察したが、最初の時点で、単一のピークとして観察している。これは、おそらく、使用したより良い分離をもたらす新しいカラムのためであり、そして分解の兆候とは考えられない。）
【０１４８】
結果は、６か月の時点で試験したバッチのいずれにも本質的に変化はなかったことを示し、噴霧用ＲＰＬ５５４懸濁液が、４０℃／７５％ＲＨで、６か月間安定であるという、優れた安定性を有することを確認した。
【０１４９】
【表３４】
2019069978.tif 000037
【０１５０】
【表３５】
2019069978.tif 000038
【０１５１】
【表３６】
2019069978.tif 000039
【図１】
2019069978.tif 000040
【図２】
2019069978.tif 000041
【図３】
2019069978.tif 000042
【手続補正書】
【提出日】平成31年1月21日(2019.1.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
希釈剤、及び９，１０‐ジメトキシ‐２‐（２，４，６‐トリメチルフェニルイミノ）‐３‐（Ｎ‐カルバモイル‐２‐アミノエチル）‐３，４，６，７‐テトラヒドロ‐２Ｈ‐ピリミド［６，１‐ａ］イソキノリン‐４−オン（ＲＰＬ５５４）、又はその医薬的に許容される塩の粒子の懸濁液を含む、吸入による投与に適した液体医薬組成物であって、前記ＲＰＬ５５４の粒子が、約０．２μｍ〜約５μｍのＤｖ５０（体積によるメジアン粒子径）値の粒子径分布を有し、及び前記組成物が、５ｍｇ／ｍＬ未満の濃度でリン酸緩衝液を含む、液体医薬組成物。
【請求項２】
前記組成物がリン酸緩衝液を含まない、請求項１に記載の液体医薬組成物。
【請求項３】
前記組成物が緩衝液を含まない、請求項１又は２に記載の液体医薬組成物。
【請求項４】
前記ＲＰＬ５５４の粒子が、約０．７μｍ〜約２．５μｍのＤｖ５０値の粒子径分布を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の液体医薬組成物
【請求項５】
前記液体医薬組成物中の前記ＲＰＬ５５４の粒子の濃度が、約０．０１ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の液体医薬組成物。
【請求項６】
さらに１つ以上の界面活性剤を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の液体医薬組成物。
【請求項７】
前記１つ以上の界面活性剤が、1つ以上の非イオン性界面活性剤から選択される、請求項６に記載の液体医薬組成物。
【請求項８】
前記１つ以上の界面活性剤が、ポリオキシエチレングリコールソルビタンアルキルエステル、及びソルビタンアルキルエステルから選択される、請求項６又は７に記載の液体医薬組成物。
【請求項９】
前記組成物が、さらに等張化剤を含み、ここで任意により、前記等張化剤が塩化ナトリウムである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の液体医薬組成物。
【請求項１０】
前記希釈剤が水である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の液体医薬組成物。
【請求項１１】
ネブライザーでの投与に適した、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の液体医薬組成物。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の液体医薬組成物を含む、ネブライザー。
【請求項１３】
９，１０‐ジメトキシ‐２‐（２，４，６‐トリメチルフェニルイミノ）‐３‐（Ｎ‐カルバモイル‐２‐アミノエチル）‐３，４，６，７‐テトラヒドロ‐２Ｈ‐ピリミド［６，１‐ａ］イソキノリン‐４−オン、又はその医薬的に許容される塩を活性剤として含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の液体医薬組成物。
【請求項１４】
９，１０‐ジメトキシ‐２‐（２，４，６‐トリメチルフェニルイミノ）‐３‐（Ｎ‐カルバモイル‐２‐アミノエチル）‐３，４，６，７‐テトラヒドロ‐２Ｈ‐ピリミド［６，１‐ａ］イソキノリン‐４−オン、又はその医薬的に許容される塩を活性剤として含む、喘息、アレルギー性喘息、枯草熱、アレルギー性鼻炎、気管支炎、気腫、気管支拡張症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、ステロイド耐性喘息、重度の喘息、小児喘息、嚢胞性線維症、肺線維症、肺線維症（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、間質性肺疾患、皮膚疾患、アトピー性皮膚炎、乾癬、眼球炎症、脳虚血、炎症性疾患、及び自己免疫疾患から選択される疾患、又は症状の治療、又は予防のための、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の液体医薬組成物。
【請求項１５】
前記疾患、又は症状が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である、請求項１４に記載の液体医薬組成物。
【外国語明細書】
2019069978000001.pdf
2019069978000002.pdf
2019069978000003.pdf
2019069978000004.pdf