(57)【要約】【課題】細胞を受け入れて試験等を行う施設で細胞培養フラスコ内の接着細胞を細胞懸濁液とするプロセスを簡便に行う細胞培養フラスコを提供すること。【解決手段】接着細胞を輸送するための細胞培養フラスコ１０であって、一方の端部に液体流入用の開閉コック（Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３）を有するチューブ（Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３）が設けられ、他方の端部に液体排出用の開閉コック（Ｆ４、Ｆ５）を有するチューブ（Ｔ４、Ｔ５）が設けられてなる細胞培養フラスコ。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
接着細胞を輸送するための細胞培養フラスコであって、一方の端部に液体流入用の開閉コックを有するチューブが設けられ、他方の端部に液体排出用の開閉コックを有するチューブが設けられてなる細胞培養フラスコ。
【請求項２】
前記液体流入用の開閉コックを有するチューブが、細胞洗浄液流入用のチューブ、細胞剥離液流入用のチューブ及び培地流入用のチューブであり、前記液体排出用の開閉コックを有するチューブが、洗浄廃液排出用のチューブ及び剥離した細胞と培地とからなる細胞懸濁液排出用のチューブである、請求項１に記載の細胞培養フラスコ。
【請求項３】
前記細胞洗浄液流入用のチューブ、前記細胞剥離液流入用のチューブ及び前記培地流入用チューブがそれぞれ独立して前記細胞培養フラスコの一方の端部に設けられている、請求項２に記載の細胞培養フラスコ。
【請求項４】
前記細胞洗浄液流入用のチューブ、前記細胞剥離液流入用のチューブ及び前記培地流入用チューブが一本のチューブから分岐した構造であり、前記一本のチューブが前記細胞培養フラスコの一方の端部に設けられている、請求項２に記載の細胞培養フラスコ。
【請求項５】
請求項１〜４の何れかに記載の細胞培養フラスコを収納するための収納容器であって、
容器内部の空間は、
洗浄液の収容容器を収納する区画、剥離液の収容容器を収納する区画及び培地の収容容器を収納する区画に分かれた上部空間と、
前記細胞培養フラスコを収納するための区画からなる中央部空間と、
洗浄廃液を回収する回収容器及び細胞及び培地を含む細胞懸濁液を回収する回収容器を収納するための下方部空間と
に仕切られている、収納容器。
【請求項６】
請求項５に記載の収納容器からなる細胞輸送容器。
【請求項７】
請求項５に記載の収納容器と、
請求項１〜４の何れかに記載の細胞培養フラスコと、
洗浄液を収容し、洗浄液流出用の開閉コックを有するチューブを備えた洗浄液収容容器と、
剥離液を収容し、剥離液流出用の開閉コックを有するチューブを備えた剥離液収容容器と、
培地を収容し、培地流出用の開閉コックを有するチューブを備えた培地収容容器と、
洗浄廃液が流入するための開閉コックを有するチューブを備えた洗浄廃液を回収する洗浄廃液回収容器と、
細胞及び培地を含む細胞懸濁液が流入するための開閉コックを有するチューブを備えた細胞懸濁液を回収する細胞懸濁液回収容器と
からなる、細胞培養フラスコ内の接着細胞から、細胞及び培地を含む細胞懸濁液を製造するためのキット。
【請求項８】
請求項７に記載のキットを用いて細胞培養フラスコ内の接着細胞から、細胞及び培地を含む細胞懸濁液を製造する方法であって、
接着細胞を有する細胞培養フラスコ、洗浄液収容容器、剥離液収容容器、培地収容容器、洗浄廃液回収容器、及び、細胞懸濁液回収容器を前記収納容器内の所定の位置に収納し、前記細胞培養フラスコのチューブと前記各収容容器のチューブ及び各回収容器のチューブとを接続し、次いで少なくとも以下に記載する（１）〜（３）の工程を実施することによって細胞懸濁液を製造する細胞懸濁液製造方法。
（１）接着細胞を有する細胞培養フラスコに洗浄液収容容器から洗浄液を供給し、細胞を洗浄した後、洗浄廃液を洗浄廃液回収容器に回収する工程。
（２）洗浄後の細胞培養フラスコに剥離液収容容器から剥離液を供給して細胞を剥離する工程。
（３）剥離された細胞を有する細胞培養フラスコに培地を供給して、剥離した細胞と培地とからなる細胞懸濁液を細胞懸濁液回収容器に回収する工程。
【請求項９】
請求項７に記載のキットを用いて接着細胞を有する細胞培養フラスコを輸送する細胞輸送方法であって、
クリーンな環境内で、細胞培養フラスコに接着細胞を播種し、前記接着細胞を有する細胞培養フラスコ、洗浄液収容容器、剥離液収容容器、培地収容容器、洗浄廃液回収容器、及び、細胞懸濁液回収容器を前記収納容器内の所定の位置に収納し、前記細胞培養フラスコのチューブと前記各収容容器のチューブ及び各回収容器のチューブとを接続した状態で収納容器を輸送する、細胞輸送方法。
【請求項１０】
請求項７に記載のキットを用いて接着細胞を有する細胞培養フラスコを輸送する細胞輸送方法であって、
クリーンな環境内で、細胞培養フラスコに接着細胞を播種し、前記接着細胞を有する細胞培養フラスコ、洗浄液収容容器、洗浄廃液回収容器、及び、細胞懸濁液回収容器を前記収納容器内の所定の位置に収納し、前記細胞培養フラスコのチューブと前記洗浄液収容容器のチューブ及び前記各回収容器のチューブとを接続した状態で収納容器を輸送する、細胞輸送方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞培養フラスコ、収納容器、キット、細胞懸濁液製造方法及び細胞輸送方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
培養細胞は、細胞培養における細胞の存在形態により接着細胞と浮遊細胞とに分類することができる。接着細胞は培養容器に付着して増殖する培養細胞であり、浮遊細胞は培地内において浮遊状態で増殖する培養細胞である。
【０００３】
細胞を受け入れて試験等を行う施設（以下、「受領施設」という。）が細胞を用いた試験や培養を行うには、まず、細胞バンクから細胞を入手し、これを受領施設まで輸送する必要がある。
【０００４】
細胞バンクでは種細胞は通常はアンプル内で細胞と培地とが混ざった状態で凍結保存されている。
また、接着細胞を輸送するときは細胞培養フラスコに細胞が接着した状態で輸送する必要があり、受領施設では、受け入れた細胞の利用にあたって、受け入れた細胞培養フラスコに接着した状態にある細胞を細胞と培地とからなる懸濁液の状態とする必要がある。
以下では、アンプル内で凍結保存された種細胞を受領施設が入手し試験するまでの一般的な手順を図７に基づいて説明する。
【０００５】
（細胞の搬出までの工程）
（ａ）凍結保存された細胞を収容したアンプルを取り出して解凍する。
（ｂ）解凍した種細胞に培地を加えて細胞懸濁液を作製する。
（ｃ）細胞懸濁液を、細胞を培養する細胞培養フラスコに移し替えて播種し、細胞培養フラスコに細胞を接着させる。
上記の（ａ）〜（ｃ）の各工程は全てクリーンルーム内で行う。
（輸送工程）
（ｄ）細胞を接着させた細胞培養フラスコを収納した収納容器を受領施設まで搬送する。
（受領施設に搬入した後の工程）
（ｅ）クリーンルーム内で細胞培養フラスコ内の培地を交換した後、培養を継続する。
（ｆ）培養容器から培地を吸引して除去した後、各種薬剤を用いて接着細胞の洗浄、剥離を行い、新しい培地を加えて細胞を新しい容器に移し替え、細胞懸濁液を得る。
上記の（ｅ）及び（ｆ）の工程は全てクリーンルーム内で行う。
また、細胞懸濁液を得た後は、通常はスケールアップ培養を行い、細胞を増やし、受領者が各自の目的に応じて、試験にかける。
【０００６】
上記の（ｅ）の工程以降の操作を受領施設が行うためには受領施設がクリーンルームやクリーンベンチといったクリーンな環境を整備することが必須となる。
しかしながら、各受領施設がクリーンな環境を整備することは負担が大きく困難である。
【０００７】
特許文献１には、細胞輸送容器としては、細胞を長期にわたり恒温で輸送可能にするために、球体状容器と、該球体状容器内部の中心部に輸送対象品を保持する空間を残して前記空間と前記球体状容器との間に蓄熱材を有する輸送容器が記載されている。
この輸送容器は輸送には適したものであるが、接着細胞は培養容器に接着した形で搬送する必要があるため、上記の輸送容器を用いて接着細胞を搬送した後は、受領施設のクリーンルーム内で接着細胞を細胞懸濁液の形態にする必要がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００７−２８４１３７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、受領施設内で細胞培養フラスコ内の接着細胞を細胞懸濁液とするプロセスを簡便に行う細胞培養フラスコを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記課題を解決するための本発明は、以下のとおりである。
（１）接着細胞を輸送するための細胞培養フラスコであって、一方の端部に液体流入用の開閉コックを有するチューブが設けられ、他方の端部に液体排出用の開閉コックを有するチューブが設けられてなる細胞培養フラスコ。
（２）前記液体流入用の開閉コックを有するチューブが、細胞洗浄液流入用のチューブ、細胞剥離液流入用のチューブ及び培地流入用のチューブであり、前記液体排出用の開閉コックを有するチューブが、洗浄廃液排出用のチューブ及び剥離した細胞と培地とからなる細胞懸濁液排出用のチューブである、上記（１）に記載の細胞培養フラスコ。
（３）前記細胞洗浄液流入用のチューブ、前記細胞剥離液流入用のチューブ及び前記培地流入用チューブがそれぞれ独立して前記細胞培養フラスコの一方の端部に設けられている、上記（２）に記載の細胞培養フラスコ。
（４）前記細胞洗浄液流入用のチューブ、前記細胞剥離液流入用のチューブ及び前記培地流入用チューブが一本のチューブから分岐した構造であり、前記一本のチューブが前記細胞培養フラスコの一方の端部に設けられている、上記（２）に記載の細胞培養フラスコ。
（５）上記（１）〜（４）の何れかに記載の細胞培養フラスコを収納するための収納容器であって、
容器内部の空間は、
洗浄液の収容容器を収納する区画、剥離液の収容容器を収納する区画及び培地の収容容器を収納する区画に分かれた上部空間と、
前記細胞培養フラスコを収納するための区画からなる中央部空間と、
洗浄廃液を回収する回収容器及び細胞及び培地を含む細胞懸濁液を回収する回収容器を収納するための下方部空間と
に仕切られている、収納容器。
（６）上記（５）に記載の収納容器からなる細胞輸送容器。
（７）上記（５）に記載の収納容器と、
上記（１）〜（４）の何れかに記載の細胞培養フラスコと、
洗浄液を収容し、洗浄液流出用の開閉コックを有するチューブを備えた洗浄液収容容器と、
剥離液を収容し、剥離液流出用の開閉コックを有するチューブを備えた剥離液収容容器と、
培地を収容し、培地流出用の開閉コックを有するチューブを備えた培地収容容器と、
洗浄廃液が流入するための開閉コックを有するチューブを備えた洗浄廃液を回収する洗浄廃液回収容器と、
細胞及び培地を含む細胞懸濁液が流入するための開閉コックを有するチューブを備えた細胞懸濁液を回収する細胞懸濁液回収容器と
からなる、細胞培養フラスコ内の接着細胞から、細胞及び培地を含む細胞懸濁液を製造するためのキット。
（８）上記（７）に記載のキットを用いて細胞培養フラスコ内の接着細胞から、細胞及び培地を含む細胞懸濁液を製造する方法であって、
接着細胞を有する細胞培養フラスコ、洗浄液収容容器、剥離液収容容器、培地収容容器、洗浄廃液回収容器、及び、細胞懸濁液回収容器を前記収納容器内の所定の位置に収納し、前記細胞培養フラスコのチューブと前記各収容容器のチューブ及び各回収容器のチューブとを接続し、次いで少なくとも以下に記載する（１）〜（３）の工程を実施することによって細胞懸濁液を製造する細胞懸濁液製造方法。
（１）接着細胞を有する細胞培養フラスコに洗浄液収容容器から洗浄液を供給し、細胞を洗浄した後、洗浄廃液を洗浄廃液回収容器に回収する工程。
（２）洗浄後の細胞培養フラスコに剥離液収容容器から剥離液を供給して細胞を剥離する工程。
（３）剥離された細胞を有する細胞培養フラスコに培地を供給して、剥離した細胞と培地とからなる細胞懸濁液を細胞懸濁液回収容器に回収する工程。
（９）上記（７）に記載のキットを用いて接着細胞を有する細胞培養フラスコを輸送する細胞輸送方法であって、
クリーンな環境内で、細胞培養フラスコに接着細胞を播種し、前記接着細胞を有する細胞培養フラスコ、洗浄液収容容器、剥離液収容容器、培地収容容器、洗浄廃液回収容器、及び、細胞懸濁液回収容器を前記収納容器内の所定の位置に収納し、前記細胞培養フラスコのチューブと前記各収容容器のチューブ及び各回収容器のチューブとを接続した状態で収納容器を輸送する、細胞輸送方法。
（１０）上記（７）に記載のキットを用いて接着細胞を有する細胞培養フラスコを輸送する細胞輸送方法であって、
クリーンな環境内で、細胞培養フラスコに接着細胞を播種し、前記接着細胞を有する細胞培養フラスコ、洗浄液収容容器、洗浄廃液回収容器、及び、細胞懸濁液回収容器を前記収納容器内の所定の位置に収納し、前記細胞培養フラスコのチューブと前記洗浄液収容容器のチューブ及び前記各回収容器のチューブとを接続した状態で収納容器を輸送する、細胞輸送方法。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の細胞培養フラスコにより以下の効果が奏される。
・細胞の懸濁操作を簡便化することができる。
・よりクローズドな条件下で細胞懸濁液を作製できるので、汚染リスクを低減することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は本発明の細胞培養フラスコの実施形態の一つを示す図である。
【図２】図２は本発明の細胞培養フラスコの実施形態の一つを示す図である。
【図３】図３は本発明の細胞培養フラスコを収納するための収納容器の一例を示す図である。
【図４】図４は本発明の細胞培養フラスコを含むキットを組み立てた状態の一例を示す図である。
【図５】図５は細胞培養フラスコに接続されるチューブに設ける開閉コックの一例を示す図である。
【図６】図６は本発明の細胞培養フラスコを含むキットを組み立てた状態の一例を示す図である。
【図７】図７は種細胞を細胞培養フラスコに播種し、接着培養し、接着培養した細胞から細胞懸濁液を製造するまでの一般的なプロセスを説明するフロー図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の細胞培養フラスコ（以下単に「フラスコ」ともいう。）を収納する収納容器は、容器内部の空間は、洗浄液の収容容器を収納する区画、剥離液の収容容器を収納する区画及び培地の収容容器を収納する区画に分かれた上部空間と、前記細胞培養フラスコを収納するための区画からなる中央部空間と、洗浄廃液を回収する回収容器及び細胞及び培地を含む細胞懸濁液を回収する回収容器を収納するための下方部空間とに仕切られ、フラスコ、洗浄液を収容した洗浄液収容容器、接着細胞を容器から剥離する剥離液を収容した剥離液収容容器、培地を収容した培地収容容器、洗浄廃液を回収する洗浄廃液回収容器、及び、剥離した接着細胞を懸濁させた懸濁液を回収する細胞懸濁液回収容器を収納することができ、フラスコと、その他の収容容器及び回収容器とを開閉手段を設けたチューブによって接続できるようにした構造を有する。
このようにすると、チューブの開閉手段の開閉操作だけで培養容器内の培地の排出、培養容器の洗浄、洗浄廃液の洗浄廃液回収容器への回収、接着細胞の剥離、フラスコへの培地の充填、懸濁液回収容器への細胞懸濁液の回収を行うことができる。
すなわち、この収納容器を用いて、上記（ｃ）迄の工程をクリーンルーム内で行い、細胞を接着したフラスコを収納した収納容器を受領施設に輸送すると、上記（ｄ）〜（ｆ）の工程を収納容器内で行うことができる。
従って、本発明の細胞培養フラスコを用いることにより、細胞の懸濁操作を簡便化することができ、また、よりクローズドな条件下で細胞懸濁液を作製できるので、汚染リスクを低減することができる。
【００１４】
本発明を第１の実施形態に基づいて説明する。
（第１の実施形態）
本実施形態はフラスコの構造に関するものである。
本実施形態のフラスコの構造を図１（ａ）、（ｂ）に基づいて以下説明する。
図１（ａ）はフラスコ１０の下方部に側面から中央に向かう下向きの傾斜を設けたものであり、図１（ｂ）はフラスコ１０の下方部に側面から中央に向かう下向きの傾斜を設け、上方部に側面から中央に向かう上向きの傾斜を設けたものである。
液体をスムーズに流すために傾斜は直線的であることが好ましい。
フラスコ１０はフラスコの容器だけを用いてもよいが、大量培養を行うために繊維状担体をフラスコ内に充填したものを用いてもよい。
図示したフラスコ１０はプラスチック製で全体形状はＴフラスコと同じ形状である。
フラスコ１０は３本の液体流入用のチューブと、２本の液体排出用のチューブとを有している。
フラスコ１０の一方の端面には下記の３本の液体流入用のチューブＴ１、Ｔ２、Ｔ３が設けられ、他方の端面には下記の２本の液体排出用のチューブＴ４、Ｔ５が設けられている。
Ｔ１：洗浄液であるリン酸緩衝液（ＰＢＳ）をフラスコ１０に供給するためのチューブ
Ｔ２：接着細胞の剥離液であるトリプシンやＥＤＴＡをフラスコ１０に供給するためのチューブ
Ｔ３：培地をフラスコ１０に供給するためのチューブ
Ｔ４：洗浄廃液をフラスコ１０から排出するためのチューブ
培地をフラスコ１０から排出する際にも用いることができる。
Ｔ５：細胞及び培地を含む細胞懸濁液をフラスコ１０から排出するためのチューブ
上記のチューブＴ１〜Ｔ５はいずれも端部にコネクタＣ１〜Ｃ５と流路開閉用の開閉コックＦ１〜Ｆ５を有している。
チューブＴ１〜Ｔ３の端部は、フラスコに流入する液体がフラスコ内に行き渡るように、フラスコの端部中央付近に接続されることが好ましい。
フラスコ１０は図１に示すように、フラスコの下方部が外側から中央に向かって下がる傾斜を有していることが好ましい。そして、チューブＴ４、Ｔ５の端部はフラスコから流出する液体が完全に排出されるように、フラスコの下端中央部に接続することが好ましい。
【００１５】
（第２の実施形態）
図２にフラスコの他の構成例を示す。
本実施形態では、チューブＴ１、チューブＴ２及びチューブＴ３がそれぞれ一本のチューブＴ０から分岐した構造を有する。この構造にすると、フラスコ１０とチューブとの取り付け構造が簡易なものとなる。
また、フラスコ１０から液体を流出させるチューブＴ４、Ｔ５を分岐構造としてもよい。
【００１６】
（第３の実施形態）
本実施形態は、第１の実施形態のフラスコを収納する収納容器に関する。
フラスコを収納する収納容器の構造を図３、図４に基づいて以下、説明する。
収納容器２０の内部空間は下記に記載するＢＦ及びＢ１〜Ｂ５の区画に分かれている。
ＢＦ：フラスコ１０を収納する区画
Ｂ１：洗浄液であるリン酸緩衝液（ＰＢＳ）の収容容器１を収納する区画
Ｂ２：接着細胞の剥離液であるトリプシンやＥＤＴＡを収容した収容容器２を収納する区画
Ｂ３：培地を収容した収容容器３を収納する区画
Ｂ４：フラスコから流出する廃液を回収するための回収容器４を収納する区画
Ｂ５：細胞及び培地を含む細胞懸濁液を回収するための回収容器５を収納する区画
なお、区画Ｂ４及び区画Ｂ５は、収納される収容容器が常温に保持されるので、特に両者を壁で区画する必要はない。
また、収納容器の外部壁２１及び区画壁２２はいずれも断熱材を用いた断熱構造となっている。当該区画に収納される収容容器が保冷又は保温を必要とする場合には当該区画には保冷手段又は保温手段を設ける。
保冷手段としては保冷剤を用いることができ、保温手段としては蓄熱材を用いることができる。
収納容器２０は使用時には図４に示したように収容容器１〜３が上方に位置し、回収容器４、５が下方に位置するように配置され、収容容器１〜３内の液体が重力によってフラスコ１０に流入し、次いで、フラスコ１０から回収容器に流入するようにする。
また、図３、４には示していないが、収納容器２０は蓋を有しており、収納容器２０内にフラスコ１０、収容容器１〜３、回収容器４、５を収納した後、内部のフラスコ１０及び収容容器１〜３、回収容器４、５を保護するために収納容器２０の前面は蓋で覆われる。蓋材としては緩衝性、断熱性のある材料を用いることが好ましい。
【００１７】
各区画はそれぞれの区画に収容されるフラスコ１０及び収容容器１〜５に適した温度に保持される。
フラスコ１０を収納する区画ＢＦは細胞培養に適した温度である３７℃程度に保持される。
洗浄液の収容容器１、回収容器４、回収容器５を収納する区画Ｂ１、Ｂ４、Ｂ５は常温に保持される。
剥離液を収納する収容容器２を収納する区画Ｂ２は−５℃程度に保持される。
培地を収容する収容容器３を収納する区画Ｂ３は２℃程度に保持される。
【００１８】
各区画を独立して温度制御するため、各区画は断熱材によって区画されている。
そして、区画Ｂ２及び区画Ｂ３は所定の低温に保持するため保冷手段を備えている。
また、区画ＢＦは培養温度に適した温度とするために保温手段を備えている。
【００１９】
（第４の実施形態）
本実施形態は図３に示した収納容器２０と、フラスコ１０、収容容器１〜３及び回収容器４、５とを備えたキットにかかるものである。
図４はキットを組み立てた状態を示す。
なお、図４においては、図１、２で示したコネクタＣ１〜Ｃ５については図示を省略した。
まず、図４に基づいて、収容容器１〜３、回収容器４、５について説明する。
収容容器１〜３には、収容容器内部に収容された液体を流出するためのチューブｔ１〜ｔ３が設けられており、回収容器４、５にはフラスコ１０から排出される液体を回収するためのチューブｔ４、ｔ５が設けられている。
これらのチューブｔ１〜ｔ５はそれぞれフラスコ１０に設けられたチューブＴ１〜Ｔ５と接続される。
また、ｔ１とＴ１とを接続して形成される液体の流路Ｐ１の収容容器側には流路を開閉するための開閉コックｆ１が設けられており、ｔ２とＴ２、ｔ３とＴ３、ｔ４とＴ４、ｔ５とＴ５のそれぞれによって形成される流路Ｐ２〜Ｐ５の収容容器側及び回収容器側にも同様に開閉コックｆ２〜ｆ５が設けられる。
【００２０】
なお、図４においては開閉コックとして図５に示すような二重コックを用いている。
二重コックについて、フラスコ１０と収容容器１とを結ぶ流路Ｐ１を例にとって説明する。チューブＴ１側の開閉コックを開閉コックＦ１とし、チューブｔ１側の開閉コックを開閉コックｆ１とする。開閉コックＦ１と開閉コックｆ１との間には清浄な高圧空気３０が充填されている。このような構造とすることにより、開閉コックの誤作動があった場合でも、流路Ｐ１内の液体は高圧空気３０により収容容器側へ押し戻されるので液の漏出、交差汚染を防止することができる。
【００２１】
（第５の実施形態）
本実施形態は本発明のキットを用いて細胞を輸送し、受領した細胞から細胞懸濁液を製造する方法に係るものである。
図４に基づいて本実施形態を説明する。
本実施形態では、前記一般的な手順の、細胞の搬出までの工程の前記（ａ）の工程、前記（ｂ）の工程は、一般的な方法と同様に行うことができ、前記（ｃ）の工程及び搬送工程の前記（ｄ）の工程を図３に示した収納容器（細胞輸送容器）２０を用いて行う。
まず、洗浄液収容容器１、剥離液収容容器２、培地収容容器３、洗浄廃液回収容器４、細胞懸濁液回収容器５が収納された収納容器２０を準備する。
次いで、クリーンルームやクリーンベンチ等のクリーンな環境内で、収納容器２０の区画ＢＦに接着細胞１３を有するフラスコ１０を収納する。
次いで、クリーンな環境内で収容容器１〜３、回収容器４、５のチューブｔ１〜ｔ５のそれぞれをフラスコ１０のチューブＴ１〜Ｔ５のそれぞれに接続する。
【００２２】
前記接着細胞１３を有するフラスコ１０を収納した収納容器２０を受領施設まで輸送する。この時、収納容器２０を密閉状態とすることによりクリーンな環境を保つ。
受領施設では、収納容器２０について次の操作を行う。
（１）収容容器４とフラスコ１０とを結ぶ流路Ｐ４の開閉コックＦ４及び開閉コックｆ４を開放して、フラスコ１０内の古い培地を流路Ｐ４を介して回収容器４に回収する。
（２）収容容器３とフラスコ１０とを結ぶ流路Ｐ３の開閉コックＦ３及び開閉コックｆ３を開放して、（１）で回収した古い培地と同量の培地をフラスコ１０に供給する。このあと例えば半日〜１日培養を継続して細胞を安定化させる。
（３）収容容器１とフラスコ１０とを結ぶ流路Ｐ１の開閉コックＦ１及び開閉コックｆ１を開放して、洗浄液をフラスコ１０に供給し、洗浄処理を行う。
ついで、開閉コックＦ１及び開閉コックｆ１を閉じて、フラスコ１０と回収容器４とを結ぶ流路Ｐ４の開閉コックＦ４及び開閉コックｆ４を開放して、洗浄廃液を回収容器４に回収する。
この操作を必要な回数行って開閉コックＦ１、開閉コックｆ１、開閉コックＦ４、開閉コックｆ４を閉じる。洗浄操作の際にはフラスコ１０を揺することにより洗浄効果を高めることができる。
（４）収容容器２とフラスコ１０とを結ぶ流路Ｐ２の開閉コックＦ２及び開閉コックｆ２を開放して、剥離液をフラスコ１０に供給し、接着細胞の剥離処理を行い、開閉コックＦ２及び開閉コックｆ２を閉じる。剥離操作の際にはフラスコ１０を揺すったりタップしたりすることにより洗浄効果を高めることが出来る。
（５）収容容器３とフラスコ１０とを結ぶ流路Ｐ３の開閉コックＦ３及び開閉コックｆ３を開放して、培地をフラスコ１０に供給し、次いで、流路Ｐ５の開閉コックＦ５及び開閉コックｆ５を開放して、剥離した細胞と培地とをフラスコ１０から流出させて回収容器５に細胞懸濁液を回収する。
上記（１）〜（５）の操作は、クリーンベンチを必要とせずに行うことができる。
【００２３】
（第６の実施形態）
本実施形態は本発明のキットを用いて細胞を輸送し、受領した細胞から細胞懸濁液を製造する方法に係るものである。
図６に基づいて本実施形態を説明する。
本実施形態では、第５の実施形態において、収容容器２及び収容容器３を収納容器２０に収納しないで上記（ｃ）の工程を行う。
収容容器２及び収容容器３は所定の温度に保冷するために保冷手段が必要である。そこで、本実施形態では収容容器２及び収容容器３を受領施設内で保冷保管しておき、収納容器２０を受領施設に受け入れてから収容容器２及び収容容器３を収納容器２０に収納するようにする。このため、収容容器２のチューブｔ２の端部及び収容容器３のチューブｔ３の端部には無菌コネクタ４０を設ける。
一方、チューブｔ２とチューブｔ３に接続するフラスコ１０のチューブＴ２の端部及びチューブＴ３の端部にも無菌コネクタ４０を設ける。
そして、受領施設内でｔ２とＴ２及びｔ３とＴ３を接続することにより、クリーンベンチを必要とせず無菌接続が可能となる。
その後の工程は第５の実施形態で説明したのと同様である。
【００２４】
（第７の実施形態）
第６の実施形態では前記工程（ｃ）を行う際に、収容容器２及び収容容器３を収納容器２０に収納しない例を示したが、前記工程（ｃ）を行う際に、収容容器１〜３、回収容器４、５を収納容器２０に収納しないようにすることも可能である。
この場合は、フラスコ１０のチューブＴ１〜Ｔ５の末端に無菌コネクタ４０を設ける必要があり、コスト高になる。
収容容器１、回収容器４及び回収容器５はいずれも常温環境で保管してよいため、実施形態６で示したような前記工程（ｃ）を行う際に収容容器２及び収容容器３を収納容器２０に収納しないようにすることが得策である。
【００２５】
（第８の実施形態）
本実施形態では、フラスコ１０に接続されているチューブＴ１〜Ｔ５の端部のコネクタＣ１〜Ｃ５を無菌コネクタ４０とする。
上記（ｃ）の工程を、クリーンルーム内で無菌コネクタ４０を備えたフラスコを用いて行う。この場合、フラスコの輸送には収納容器２０を用いても用いなくてもよい。
フラスコの輸送に収納容器２０を用いた場合には、受領施設で、無菌コネクタを有する収容容器１〜３、回収容器４、５を収納容器に収納して、収容容器側及び回収容器側のチューブとフラスコ側のチューブとの無菌的接続を行い所定の処理操作を行う。
また、フラスコの輸送に収納容器２０を用いない場合には、受領施設で、フラスコ１０及び無菌コネクタを有する収容容器１〜５をそれぞれ収納容器２０に収納して収容容器側及び回収容器側のチューブとフラスコ側のチューブとの無菌的接続を行い所定の処理操作を行う。
【符号の説明】
【００２６】
１、２、３  収容容器
４、５  回収容器
１０  細胞培養フラスコ
１１  繊維状担体
１２  培地
１３  接着細胞
２０  収納容器
２１  外部壁
２２  区画壁
３０  高圧空気
４０  無菌コネクタ
Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５  コネクタ
Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、Ｔ４、Ｔ５  チューブ
ｔ１、ｔ２、ｔ３、ｔ４、ｔ５  チューブ
Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５  流路
Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４、Ｆ５  開閉コック
ｆ１、ｆ２、ｆ３、ｆ４、ｆ５  開閉コック
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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