(57)【要約】【課題】霊芝を含有することを特徴とする、加齢に伴う免疫機能低下や、免疫機能の加齢変化が関与する様々な加齢関連疾患に対する改善剤を提供する。【解決手段】霊芝を含有する抗加齢剤を提供することにより、加齢に伴う免疫機能の低下、ＩＬ−２応答性の低下、ＮＫ活性の低下、サイトカイン産生の低下、ＩＬ−２受容体産生の低下、グランザイム産生の低下を改善することができる。また、加齢に伴う機能低下を改善する作用をもつ食品組成物を提供することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
霊芝を含有することを特徴とする抗加齢剤。
【請求項２】
加齢に伴う免疫機能低下を改善する請求項１記載の抗加齢剤。
【請求項３】
加齢に伴うＩＬ−２応答性低下を改善する請求項１記載の抗加齢剤。
【請求項４】
加齢に伴うＮＫ活性低下を改善する請求項１記載の抗加齢剤。
【請求項５】
加齢に伴うサイトカイン産生低下を改善する請求項１記載の抗加齢剤。
【請求項６】
加齢に伴うＩＬ−２受容体の産生低下を改善する請求項１記載の抗加齢剤。
【請求項７】
加齢に伴うグランザイム産生低下を改善する請求項１記載の抗加齢剤。
【請求項８】
請求項１記載の抗加齢剤を含有する免疫機能低下改善用、ＩＬ−２応答性低下改善用、ＮＫ活性低下改善用、サイトカイン産生低下改善用、ＩＬ−２受容体産生低下改善用、グランザイム産生低下改善用食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、霊芝を含有することを特徴とする抗加齢剤に関する。より詳しくは、加齢に伴う免疫機能の低下、ＩＬ−２応答性の低下、ＮＫ活性の低下、サイトカイン産生の低下、ＩＬ−２受容体産生の低下、グランザイム産生の低下に対する改善剤、及び加齢に伴う機能低下を改善する作用をもつ食品組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
加齢に伴い、ヒトに備わっている多くの機能は低下する。例えば、神経・内分泌系機能の低下、視力や聴力などの感覚機能の低下、筋力や関節の可動範囲など身体機能の低下、環境変化に対する適応能力の低下、病気に対する抵抗力の低下など、様々な変化が生じる。中でも、癌や感染症に対する防御機構の形成に重要な免疫機能は、加齢に伴い最も大きな変化を示すものと考えられる。近年、免疫機能の加齢変化が、様々な臓器における代謝性疾患や慢性炎症など、多くの加齢関連疾患の発症や病態に影響を与えることが明らかになってきている（非特許文献１）。
【０００３】
加齢に伴う免疫機能の低下は、癌の罹患や感染症の発症につながり、それらの疾病による死亡率の増大が、医学的及び社会的な問題となっている。癌は日本における死亡原因の第一位であり、平成２８年の死亡数は３７万人に達する。加齢と癌発症率との間には正の相関があるといわれており、その理由として、癌原物質の暴露期間の長期化、加齢に伴う遺伝子変化、癌細胞の排除に関わる宿主側の要因などが指摘されているが、最大の要因は宿主における免疫機能低下である。また高齢者は、感染抵抗性も低下することから、老人病院など、高齢者の多い施設においては、癌や脳梗塞を患っていても、その末期には肺炎で亡くなる方も少なくない。こうした事実は、生体防御機構の中核をなす免疫機能が、高齢者になると著明に低下することを示している（非特許文献２〜４）。
【０００４】
さらに、免疫機能は癌の罹患や感染症のみならず、心臓病、糖尿病、腎臓病、慢性疲労症候群、認知機能障害など、多くの疾患とも密接に関わっている。他にも、厚生労働省の指定する「難治性疾患（いわゆる難病指定）」１３５疾患のうちの４分の１が免疫に関わっており、「特定疾患」５６疾患についても、３分の１が免疫に関わっていると考えられている。すなわち、加齢に伴う免疫機能低下は、実に多様な疾病の発症や病態に結び付く可能性があるため、これを改善することは、癌の罹患や感染症を防ぐことに加え、幅広い抗加齢効果につながると考えられる。
【０００５】
加齢に伴う免疫機能の低下は、ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞の機能低下がひとつの例である。ＮＫ細胞は、自然免疫系の主要因子として働くリンパ球の一種であり、ＮＫ活性と呼ばれる癌細胞やウィルス感染細胞などに対する細胞傷害活性を有する。ＮＫ細胞による細胞傷害活性は、ＮＫ細胞が癌細胞やウィルス感染細胞などの標的細胞を認識・結合して、パーフォリンの重合によって形成されたチャネルを通してグランザイムと呼ばれるプロテアーゼを標的細胞に送り込み、そのグランザイムがプロテアーゼ活性により標的細胞にアポトーシスを誘導させるというメカニズムで働くことが知られている。
【０００６】
標的細胞に対する細胞傷害活性は、ＮＫ細胞によってもたらされるものであるが、他のリンパ球であるＴ細胞も、ＩＦＮγ（インターフェロンガンマ）やＴＮＦα（腫瘍壊死因子アルファ）などのサイトカインを介して、ＮＫ細胞を活性化することで細胞傷害活性に関係している。
【０００７】
ＮＫ細胞やＴ細胞などのリンパ球を活性化する因子としてＩＬ−２（インターロイキン−２）が知られているが、加齢に伴う免疫機能の低下は、リンパ球のＩＬ−２に対する応答性の低下が要因であると考えられている。リンパ球のＩＬ−２に対する応答性の低下とは、リンパ球におけるＩＬ−２受容体の減少や、受容体の下流にあるシグナル伝達の異常により、リンパ球の細胞分裂、ＩＦＮγやＴＮＦαなどのサイトカイン産生、グランザイム産生など、ＩＬ−２刺激によって惹起される細胞の反応が低下あるいは全く起こらないことを指す。
【０００８】
しかしながら、加齢によるＩＬ−２受容体の減少や、その遺伝子発現の低下、ＩＬ−２との親和性の低下については、詳しく判っていない。以上のことから、加齢に伴う免疫機能の低下を改善するためには、リンパ球のＩＬ−２応答性やＩＬ−２受容体の産生を改善することで、サイトカインやグランザイムの産生を高めるという方法が、非常に有効であると考えられる。
【０００９】
ここで、霊芝の薬理作用については、種々の報告がある。免疫機能に関するものでは、ＴＮＦαの産生促進を介して免疫機能を向上する食品（特許文献１）、鹿角霊芝の免疫増強作用による医薬品及び食品（特許文献２）、マクロファージ貪食活性とＮＫ細胞活性の増強による免疫系活性物質とその製造方法（特許文献３）、担子菌類の菌糸体の抽出物を含有する免疫活性調節剤（特許文献４）などが開示されている。しかしながら、加齢に伴う免疫機能の低下に対する働きについては全く知られていない。加齢に伴う免疫機能低下においては、リンパ球のＩＬ−２の応答性低下、ＩＬ−２受容体の減少が要因となって起こる特徴的なメカニズムにより生じるため、従来の免疫機能の向上作用のみでもって解決することはできない。加齢に伴う免疫機能低下の改善には、従来、開示されている霊芝の薬理作用とは全く異なるアプローチが必要であると考えられる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開２００３−１３５０２８号公報
【特許文献２】特開２００１−１３１０８３号公報
【特許文献３】特許第３１２８１４７号公報
【特許文献４】特開２００２−３７１００４号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】実験医学５、２０１７、３５（８）、１３０９−１３１５
【非特許文献２】磯部健一、日本老年医学会雑誌、２０１１、４８（３）、２０５−２１０
【非特許文献３】廣川勝いく、日本老年医学会雑誌、２００３、４０（６）、５４３−５５２
【非特許文献４】新井冨生、日本老年医学会雑誌、２０１０、４７（５）、４０９−４１１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、霊芝を含有することを特徴とする抗加齢剤に関する。より詳しくは、加齢に伴う免疫機能の低下、ＩＬ−２応答性の低下、ＮＫ活性の低下、サイトカイン産生の低下、ＩＬ−２受容体産生の低下、グランザイム産生の低下に対する改善剤、及び加齢に伴う機能低下を改善する作用をもつ食品組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、上記課題の解決に向けて鋭意検討を行った結果、霊芝が加齢に伴うリンパ球のＩＬ−２の応答性低下を改善し、ＩＬ−２受容体の産生低下を改善することで、ＩＬ−２の作用を著しく増強させることを見出し、本発明を完成させるに至った。リンパ球のＩＬ−２の応答性低下の改善、ＩＬ−２受容体の産生低下の改善は、従来、開示されている免疫機能の改善とは全く異なるアプローチであり、加齢に伴う免疫機能低下の改善や、免疫機能の加齢変化が関与する様々な疾病に対する改善作用など、幅広い抗加齢効果につながると考えられる。
【００１４】
本発明に用いる霊芝は、担子菌類のマンネンタケ科（Ｇａｎｏｄｅｒｍａｔａｃｅａｅ）マンネンタケ属（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ）に属するキノコで、中国の薬学古書である「本草綱目」や「神農本草経」によると、霊芝（赤芝）、黒霊芝（黒芝）、紫霊芝（紫芝）、青霊芝（青芝）、黄霊芝（黄芝）及び白霊芝（白芝）が知られている。本発明では、マンネンタケ科に属する全てのキノコを用いることができるが、好ましくは霊芝、黒霊芝、紫霊芝、青霊芝、黄霊芝、白霊芝であり、更に好ましくは霊芝（赤芝、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ）又は黒霊芝（黒芝、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｕｍ）を用いることが望ましい。
【００１５】
本発明に用いる霊芝は、子実体、胞子、菌糸体、天産物、栽培物、培養物等を問わず使用することができ、広く中国や日本市場等で流通しているものを用いることができる。また、必要に応じてそのままの状態、破砕物、乾燥物等を適宜選択して抽出操作に付することができる。又、破壁胞子を得る方法として、微粒化処理、ロールプレス処理、摩砕処理、超高圧マイクロスチーム処理、通常工業的に用いられるその他機械的方法等が挙げられる。
【００１６】
本発明に用いる霊芝には、抽出溶媒として、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール類（１、３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン、石油エーテル等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）等を用いることができる。これらの溶媒は一種でも二種以上を混合して用いても良い。好ましくは、水、エタノール、あるいはこれらの混合物を用いると良い。
【００１７】
本発明に用いる霊芝の摂取量は、投与形態、使用目的、年齢、体重等によって異なるが、乾燥物に換算して１〜２００００ｍｇ／日、好ましくは１０〜１００００ｍｇ／日、より好ましくは５０〜５０００ｍｇ／日の範囲で１日１回から数回経口投与できる。上記投与範囲より少ない量で十分な場合もあるし、また、範囲を超えて投与する必要がある場合もある。また、製剤化における薬効成分の添加法については、予め加えておいても、製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。
【００１８】
本発明の抗加齢剤は、食品、医薬部外品又は医薬品のいずれにも用いることができる。その剤形は、経口用として散剤、顆粒剤、錠剤、糖衣錠剤、カプセル剤、シロップ剤、丸剤、懸濁剤、液剤、乳剤等がある。また、非経口用として注射剤、座剤等にすることもできる。
【００１９】
本発明の抗加齢剤は、霊芝をそのまま使用しても良く、効果を損なわない範囲内で、必要に応じて通常の医薬品、医薬部外品又は食品に用いられる賦形剤、安定剤、保存剤、結合剤、崩壊剤、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料等の成分を含有することもできる。
【発明の効果】
【００２０】
本発明の抗加齢剤は、加齢に伴うリンパ球のＩＬ−２応答性の低下、ＩＬ−２受容体産生の低下を改善することで、ＩＬ−２の作用を著しく増強させることができる。それにより、加齢に伴うＮＫ活性の低下、サイトカイン産生の低下、グランザイム産生の低下を改善することで、免疫機能低下の改善を達成することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
以下に、本発明を詳細に説明するため実施例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。
【実施例１】
【００２２】
製造例１  霊芝熱水抽出物
霊芝（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ）の乾燥物２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して霊芝熱水抽出物を１．４ｇ得た。
【００２３】
製造例２  霊芝エタノール抽出物
霊芝（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ）の乾燥物１００ｇに９００ｍＬのエタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、霊芝エタノール抽出物を１．６ｇ得た。
【００２４】
製造例３  黒霊芝熱水抽出物  
黒霊芝（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）の乾燥物２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して黒霊芝熱水抽出物を１．１ｇ得た。
【００２５】
製造例４  黒霊芝エタノール抽出物  
黒霊芝（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）の乾燥物１００ｇに９００ｍＬのエタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、黒霊芝エタノール抽出物を１．４ｇ得た。
【００２６】
製造例５  霊芝胞子熱水抽出物
霊芝（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ）の胞子乾燥物２０ｇを微粒化処理し、４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して霊芝胞子熱水抽出物を１．２ｇ得た。
【００２７】
製造例６  霊芝胞子エタノール抽出物
霊芝（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ）の胞子乾燥物１００ｇを微粒化処理し、９００ｍＬのエタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、霊芝胞子エタノール抽出物を１．５ｇ得た。
【００２８】
以下の処方例の％は重量％を示す。
【実施例２】
【００２９】
処方例１  軟カプセル剤
＜処方＞
成分                                                      含有量（％）
１．霊芝熱水抽出物（製造例１）                                ３０．０
２．米胚芽油                                                  ６０．０
３．ミツロウ                                                    ７．０
４．ビタミンＥ                                                  ３．０
＜製造方法＞
成分１〜４を混合し、ゼラチン、グリセリン、カラメル色素で構成される被膜に、２５０ｍｇ充填し、乾燥後、軟カプセル剤を得る。
＜用法＞
１日当り４粒摂取する。
【００３０】
処方例２  硬カプセル剤
＜処方＞
成分                                                      含有量（％）
１．霊芝熱水抽出物（製造例１）                                ２０．０
２．コーンスターチ                                            ７２．０
３．ショ糖脂肪酸エステル                                        ８．０
＜製造方法＞
成分１〜３を混合し、２号硬カプセルに２５０ｍｇ充填してカプセル剤を得る。
＜用法＞
１日当り４粒摂取する。
【００３１】
処方例３  飲料
＜処方＞
成分                                                      含有量（％）
１．黒霊芝熱水抽出物（製造例３）                                １．０
２．クエン酸                                                    ６．０
３．ショ糖                                                    １０．０
４．香料                                                        １．０
５．水                                                        ８２．０
＜製造方法＞
成分１〜４を成分５の一部の水に撹拌溶解する。次いで、成分５の残りの水を加えて混合し、殺菌したものを飲料とする。
＜用法＞
１日当り５０ｍＬ摂取する。
【００３２】
処方例４  顆粒剤
＜処方＞
成分                                                      含有量（％）
１．霊芝エタノール抽出物（製造例２）                            ８．０
２．乳糖                                                      ８０．０
３．セルロース                                                １２．０
＜製造方法＞
成分１〜３を乾式法により造粒し、顆粒剤を得る。
＜用法＞
１日当り１ｇ摂取する。
【００３３】
処方例５  錠剤
＜処方＞
成分                                                      含有量（％）
１．霊芝胞子熱水抽出物（製造例５）                            １１．０
２．乳糖                                                      ６０．０
３．還元麦芽糖水飴                                            ２５．０
４．ショ糖脂肪酸エステル                                        ４．０
＜製造方法＞
成分１〜４を混合して打錠成型し、０．５ｇの錠剤を得る。
＜用法＞
１日当り２粒摂取する。
【００３４】
処方例６  ゼリー
＜処方＞
成分                                                      含有量（％）
１．黒霊芝エタノール抽出物（製造例４）                          ０．００１
２．カラギーナン                                                ２．０
３．ゼラチン                                                    １．０
４．砂糖                                                      ２８．５
５．精製水                                                    ６８．４９９
＜製造方法＞
成分１〜５を混合し、加熱しながら煮詰め、ゼリーの型に流し込み、冷却する。
＜用法＞
１日当り１個（１００ｇ）を摂取する。
【実施例３】
【００３５】
次に、実施例１で示した霊芝を用い、リンパ球のＩＬ−２応答性の改善に関する実験例とその結果を示す。
【００３６】
実験例１  マウスのリンパ球を用いたＮＫ活性試験とサイトカイン産生試験
若齢マウス（ＩＣＲマウス１２週齢）と加齢マウス（ＩＣＲマウス６４週齢）より脾臓を摘出し、それぞれのマウスにおいて、ＮＫ細胞やＴ細胞などを含むリンパ球を調製した。細胞を２４ウェルプレートに播種し、ＩＬ−２を添加（最終濃度２０Ｕ／ｍＬ）する場合と、ＩＬ−２を添加しない場合に分け、製造例１または製造例５の霊芝を添加（最終濃度２μｇ／ｍＬ）し、培養を行った。培養後、細胞と培養上清を回収し、細胞は標的癌細胞ＹＡＣ−１と２４時間共培養を行うことにより、ＮＫ活性の測定を行った。培養上清は、ＥＬＩＳＡを用いてＩＦＮγ産生量とＴＮＦα産生量を測定した。さらに、ＮＫ活性測定後の細胞を回収し、グランザイムＡ及びＢの遺伝子発現解析を行った。遺伝子発現解析に用いたプライマーは次の通りである。
【００３７】
グランザイムＡ用プライマーセット
ＣＡＣＴＧＴＡＡＣＧＴＧＧＧＡＡＡＧＡＧ（配列番号１）
ＧＴＧＡＡＧＧＡＴＡＧＣＣＡＣＡＴＴＴＣＴＧ（配列番号２）
グランザイムＢ用プライマーセット
ＣＴＧＣＴＡＡＡＧＣＴＧＡＡＧＡＧＴＡＡＧＧ（配列番号３）
ＴＴＴＡＡＡＧＴＡＧＧＡＣＴＣＡＣＡＣＴＣＣＣ（配列番号４）
【００３８】
試験結果を表１−１、表１−２に示した。数値は、ＩＬ−２を添加した場合の、若齢マウスにおける試料未添加群の値を１００％とし、他はそれに対する相対値を示した。
【００３９】
表１−１に示す様に、ＩＬ−２を添加した場合は、ＮＫ活性、ＩＦＮγ産生量、ＴＮＦα産生量はいずれも、加齢により明らかに低下したが、霊芝の添加により、極めて著しい改善が認められた。一方、ＩＬ−２未添加の場合は、これら免疫指標の加齢による変化や、霊芝の添加による改善は極めて限定的であった。以上の結果から、霊芝は、ＮＫ細胞やＴ細胞などのリンパ球を直接活性化することよりも、ＩＬ−２作用の増強に強く働くものと考えられた。
【００４０】
2019019056.tif 000002
【００４１】
次に、グランザイムＡ及びＢの遺伝子発現解析の結果を表１−２に示した。ＩＬ−２を添加した場合は、グランザイムＡ及びＢの遺伝子発現は加齢により明らかに低下したが、霊芝の添加により、極めて著しい改善が認められた。一方、ＩＬ−２未添加の場合は、グランザイムＡ及びＢの遺伝子発現の加齢による変化や、霊芝の添加による改善は極めて限定的であった。
【００４２】
2019019056.tif 000003
【００４３】
また、製造例３の黒霊芝においても、ＮＫ活性、ＩＦＮγ産生量、ＴＮＦα産生量、グランザイムＡ及びＢの遺伝子発現について、同様の改善効果が認められた。
【００４４】
実験例２  自然加齢マウスを用いた有効性試験
１２週齢のＨＲ−１ヘアレスマウスを用い、製造例１の霊芝を２％添加した飼料による飼育を１２ヶ月間行った。比較として、普通飼料による飼育を１２ヶ月間行う群と、若齢マウス群（１２週齢）を設定した。脾臓を摘出してリンパ球を調製し、ＩＬ−２を添加（最終濃度２０Ｕ／ｍＬ）して、標的癌細胞ＹＡＣ−１と２４時間共培養を行うことによりＮＫ活性の測定を行った。培養上清は、ＥＬＩＳＡを用いてサイトカイン（ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−２、ＩＬ−１２）産生量を測定した。さらに、ＮＫ活性測定後の細胞を回収し、種々の遺伝子発現解析を行った。
【００４５】
ＮＫ活性とサイトカイン産生量の測定結果を表２に示した。数値は、普通飼料の若齢マウス群の値を１００％とし、他はそれに対する相対値を示した。若齢マウスと加齢マウスを比較すると、ＮＫ活性、ＩＦＮγ産生量、ＴＮＦα産生量のいずれも加齢マウスにおいて明らかに低下し、加齢による免疫機能低下、すなわちＩＬ−２応答性の低下が認められた。
【００４６】
霊芝を添加した飼料により飼育を行うと、ＮＫ活性、ＩＦＮγ産生量、ＴＮＦα産生量に顕著な改善がみられ、霊芝は、加齢に伴うＩＬ−２応答性の低下による、ＮＫ活性低下の改善、ＩＦＮγ産生量及びＴＮＦα産生量の低下の改善に優れた効果を発揮した。ＮＫ細胞の活性化に関与するサイトカインとしてＩＬ−２とＩＬ−１２についても測定を行ったが、これらは、いずれもＥＬＩＳＡの検出限界以下であった。この結果は、単に、ＩＬ−２の産生量を増大させるだけでは、加齢による免疫機能低下を改善できないことを示している。
【００４７】
2019019056.tif 000004
【００４８】
次に、ＩＬ−２応答性関連因子の遺伝子発現解析を行った。遺伝子発現解析に用いたプライマーは次の通りである。
【００４９】
ＩＬ−２受容体α用プライマーセット
ＴＣＣＴＡＡＡＣＴＧＴＧＡＡＴＧＣＡＡＧＡＧ（配列番号５）
ＡＴＴＴＧＴＣＡＴＧＧＧＡＧＴＴＧＣＴＧ（配列番号６）
ＩＬ−２受容体β用プライマーセット
ＣＣＴＴＴＧＡＣＡＡＣＣＴＴＣＧＣＣＴＧ（配列番号７）
ＡＧＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＡＡＧＡＧＣＣＡ（配列番号８）
ＩＬ−２受容体γ用プライマーセット
ＧＣＴＧＡＡＡＣＧＡＧＡＡＴＣＣＴＴＣＣ（配列番号９）
ＣＧＴＴＣＣＡＡＣＣＡＡＣＡＧＴＡＣＡＣ（配列番号１０）
Ｍｙｃ用プライマーセット
ＡＴＣＡＧＣＡＡＣＡＡＣＣＧＣＡＡＧＴＧ（配列番号１１）
ＧＴＧＴＣＣＧＣＣＴＣＴＴＧＴＣＧＴＴＴ（配列番号１２）
Ｂｃｌ−２用プライマーセット
ＣＣＧＧＧＡＧＡＴＣＧＴＧＡＴＧＡＡＧＴ（配列番号１３）
ＡＴＣＴＣＣＡＧＣＡＴＣＣＣＡＣＴＣＧＴＡ（配列番号１４）
Ｊｕｎ用プライマーセット
ＡＡＡＣＡＧＡＧＣＡＴＧＡＣＣＴＴＧＡＡＣＣ（配列番号１５）
ＧＴＣＧＧＴＧＴＡＧＴＧＧＴＧＡＴＧＴＧ（配列番号１６）
Ｆｏｓ用プライマーセット
ＣＡＡＡＧＴＡＧＡＧＣＡＧＣＴＡＴＣＴＣＣＴ（配列番号１７）
ＣＡＧＡＣＣＴＣＣＡＧＴＣＡＡＡＴＣＣＡ（配列番号１８）
ｐ１６用プライマーセット
ＴＧＡＴＧＡＴＧＡＴＧＧＧＣＡＡＣＧＴＴ（配列番号１９）
ＴＣＧＡＡＴＣＴＧＣＡＣＣＧＴＡＧＴＴＧＡＧ（配列番号２０）
ｐ２１用プライマーセット
ＣＣＧＡＧＡＡＣＧＧＴＧＧＡＡＣＴＴＴＧ（配列番号２１）
ＡＡＣＧＣＧＣＴＣＣＣＡＧＡＣＧＡＡ（配列番号２２）
ｐ５３用プライマーセット
ＣＧＡＣＣＴＡＴＣＣＴＴＡＣＣＡＴＣＡＴＣＡＣＡ（配列番号２３）
ＧＧＣＡＣＡＡＡＣＡＣＧＡＡＣＣＴＣＡＡ（配列番号２４）
【００５０】
ＩＬ−２受容体の遺伝子発現解析の結果を表３−１に示した。ＩＬ−２受容体はα、β、γの３種類より構成される。試験の結果、ＩＬ−２受容体αとＩＬ−２受容体γは、加齢により遺伝子発現が低下し、霊芝の投与により改善した。ＩＬ−２受容体βは、加齢による低下は見られないものの、霊芝の投与により２倍以上の遺伝子発現促進を示した。
【００５１】
2019019056.tif 000005
【００５２】
ＩＬ−２受容体からのシグナルは、その下流因子を介して、グランザイムの産生につながるため、ＩＬ−２受容体シグナルの下流因子Ｍｙｃ、Ｂｃｌ２、Ｊｕｎ、Ｆｏｓの遺伝子発現解析を行った。表３−２に示した結果より、Ｆｏｓについては加齢による遺伝子発現低下や霊芝の投与による影響は見られなかったが、Ｆｏｓ以外のＩＬ−２受容体シグナルの下流因子は、加齢による発現低下と霊芝の投与による顕著な改善が見られた。
【００５３】
2019019056.tif 000006
【００５４】
グランザイムＡ及びＢの遺伝子発現解析の結果を表３−３に示した。グランザイムＡ及びＢの遺伝子発現は、加齢により明らかに低下し、霊芝の投与による顕著な改善が認められた。表３−１、表３−２、表３−３の結果から、霊芝は、加齢に伴うＩＬ−２の応答性低下を改善することが明らかとなった。
【００５５】
2019019056.tif 000007
【００５６】
一般的な細胞老化マーカーの遺伝子発現解析の結果を表３−４に示した。その結果、ｐ１６、ｐ２１、ｐ５３のいずれの遺伝子においても、加齢による発現上昇と霊芝の投与による発現抑制が観察された。
【００５７】
2019019056.tif 000008
【００５８】
また、製造例３の黒霊芝においても、ＮＫ活性、ＩＦＮγ産生量、ＴＮＦα産生量、グランザイムＡ及びＢの遺伝子発現、ＩＬ−２受容体α、β及びγの遺伝子発現、細胞老化マーカーｐ１６、ｐ２１、ｐ５３遺伝子発現について、同様の改善効果が認められた。
【００５９】
霊芝によるＮＫ活性改善効果の発揮に対し、より重要な働きをする因子を探索するため、実験例２における霊芝投与群のマウスについて、個体毎のＮＫ活性と、表３−１、表３−２、表３−３、表３−４に示した遺伝子発現との相関解析を行った。尚、ＩＦＮγとＴＮＦαについては、表２に示したＥＬＩＳＡ測定値との相関解析を行った。
【００６０】
ＮＫ活性と、遺伝子発現またはＥＬＩＳＡ測定値との相関係数を表４に示した。相関係数は、−１から１までの値を取り、絶対値が大きいほど、２種のデータ（この場合、ＮＫ活性と、遺伝子発現またはＥＬＩＳＡ測定値）の相関が強いことを示す。数値がプラスの場合、正の相関（一方の値が増加すると、もう一方の値も増加する傾向にあること）と判断される。解析の結果、ＮＫ活性は、グランザイムＡ及びＢの遺伝子発現と、非常に強い相関があることが明らかとなった。すなわち、加齢に伴うＮＫ活性低下の改善には、グランザイムの遺伝子発現を改善することが大変重要であり、霊芝は加齢に伴うグランザイムの遺伝子発現の改善に優れた効果を発揮することが明らかとなった。
【００６１】
2019019056.tif 000009
【００６２】
以上の結果から、霊芝は、加齢に伴う免疫機能低下を改善する効果が認められた。霊芝は、ＩＬ−２応答性の改善、ＩＬ−２受容体産生の改善、グランザイムの産生の改善によって免疫機能の低下全体を改善することが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【００６３】
本発明の霊芝を含有することを特徴とする抗加齢剤は、加齢に伴う免疫機能低下、ＮＫ活性低下、リンパ球のＩＬ−２応答性低下、サイトカイン産生低下及びグランザイム産生低下に対して優れた改善効果を示した。加齢に伴う免疫機能低下の根本的な改善は、代謝性疾患や慢性炎症など免疫機能が関与する様々な加齢関連疾患の改善にもつながり、医薬品、医薬部外品、食品として幅広く利用できる。
【配列表】
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