(57)【要約】      （修正有）【課題】基材の一面に接触または保持させた細胞を、損傷させること無く基材から離脱させることができる医療器具の提供。【解決手段】基材を備え、かつ前記基材の一面に細胞を接触または保持させる医療器具であって、前記基材の少なくとも細胞を保持する前記一面は、下記一般式（１）で表される繰返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーにより構成される。2019004884.tif 000012（式（１）中、Ｒ１〜Ｒ４のうち、少なくとも１つは、フッ素、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルキル、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルコキシ、またはフッ素を含有する炭素数２〜１０のアルコキシアルキルである。）【選択図】図１
2019004884.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
基材を備え、かつ前記基材の一面に細胞を接触または保持させる医療器具であって、
前記基材の少なくとも細胞を保持する前記一面は、下記一般式（１）で表される繰返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーにより構成される医療器具。
【化１】
2019004884.tif 000009
（式（１）中、Ｒ１〜Ｒ４のうち、少なくとも１つは、フッ素、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルキル、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルコキシ、またはフッ素を含有する炭素数２〜１０のアルコキシアルキルである。Ｒ１〜Ｒ４がフッ素を含有しない基である場合、Ｒ１〜Ｒ４は、水素、炭素数１〜１０のアルキル、炭素数１〜１０のアルコキシ、または炭素数２〜１０のアルコキシアルキルから選ばれる。Ｒ１〜Ｒ４は互いに同一であっても異なっていてもよい。Ｒ１〜Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよい。）
【請求項２】
細胞を接触または保持する前記一面の水接触角が７０°以上１６０°以下である請求項１に記載の医療器具。
【請求項３】
細胞を接触または保持する前記一面の水接触角が７０°以上１２０°以下である請求項１または２に記載の医療器具。
【請求項４】
前記基材の少なくとも細胞と接触する前記一面が、凹凸構造を備える請求項１に記載の医療器具。
【請求項５】
細胞と接触する前記一面の水接触角が１２１°以上１６０°以下である請求項４に記載の医療器具。
【請求項６】
前記基材の少なくとも細胞を接触または保持する前記一面は、前記フッ素含有環状オレフィンポリマーと、光硬化性化合物と、光硬化開始剤と、を含むフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物により構成される請求項１〜５のいずれか一項に記載の医療器具。
【請求項７】
前記フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物中における前記フッ素含有環状オレフィンポリマーと前記光硬化性化合物の質量比（フッ素含有環状オレフィンポリマー／光硬化性化合物）が、９９．９／０．１〜５０／５０である請求項６に記載の医療器具。
【請求項８】
前記一面に接触または保持させた細胞を培養するために用いられる請求項１〜７のいずれか一項に記載の医療器具。
【請求項９】
細胞培養において、細胞が群体を形成しながら増殖する請求項８に記載の医療器具。
【請求項１０】
培養した細胞を緩衝液により浮遊して前記一面から離脱させる請求項８または９に記載の医療器具。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の医療器具の前記基材の前記一面上に、前記一面に接触または保持するよう細胞を播種する工程と、
前記細胞を培養して培養細胞を得る工程と、
前記一面上に緩衝液を添加して、前記一面から前記培養細胞を浮遊させる工程と、
を備える細胞培養方法。
【請求項１２】
基材を備え、かつ前記基材の一面に細胞を接触または保持させる医療器具の、前記基材の少なくとも細胞を保持させる前記一面を構成するフッ素含有環状オレフィンポリマーであって、下記一般式（１）で表される繰返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマー。
【化２】
2019004884.tif 000010
（式（１）中、Ｒ１〜Ｒ４のうち、少なくとも１つは、フッ素、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルキル、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルコキシ、またはフッ素を含有する炭素数２〜１０のアルコキシアルキルである。Ｒ１〜Ｒ４がフッ素を含有しない基である場合、Ｒ１〜Ｒ４は、水素、炭素数１〜１０のアルキル、炭素数１〜１０のアルコキシ、または炭素数２〜１０のアルコキシアルキルから選ばれる。Ｒ１〜Ｒ４は互いに同一であっても異なっていてもよい。Ｒ１〜Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよい。）
【請求項１３】
基材を備え、かつ前記基材の一面に細胞を接触または保持させる医療器具の、前記基材の少なくとも細胞を保持させる前記一面を構成するフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物であって、
下記一般式（１）で表される繰返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーと、
光硬化性化合物と、
光硬化開始剤と、
を含むフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物。
【化３】
2019004884.tif 000011
（式（１）中、Ｒ１〜Ｒ４のうち、少なくとも１つは、フッ素、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルキル、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルコキシ、またはフッ素を含有する炭素数２〜１０のアルコキシアルキルである。Ｒ１〜Ｒ４がフッ素を含有しない基である場合、Ｒ１〜Ｒ４は、水素、炭素数１〜１０のアルキル、炭素数１〜１０のアルコキシ、または炭素数２〜１０のアルコキシアルキルから選ばれる。Ｒ１〜Ｒ４は互いに同一であっても異なっていてもよい。Ｒ１〜Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよい。）
【請求項１４】
薬物代謝系酵素活性を少なくとも７日間維持した培養細胞。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医療器具、細胞培養方法、フッ素含有環状オレフィンポリマー、フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物、および培養細胞に関する。
【背景技術】
【０００２】
動植物の細胞は、従来から多くのものが培養されており、培養技術も様々な形態のものが検討されている。細胞培養技術は、特に、生命科学の分野において、医薬品の開発や病態メカニズムの解明などに欠くことのできない技術となっており、研究目的の細胞培養技術のみならず、生物学、医学、薬学、免疫学などの分野での利用を目的とした工業生産的培養方法も種々検討されている。また、近年では医療などの分野において、組織細胞を培養し、これを人工臓器、人工歯骨、人工皮膚などの代替組織として利用する研究も盛んに行われている。
【０００３】
このような細胞培養は、通常一定の容器の中で培養液とともに培養が行われる。細胞培養は、特に動物細胞の多くは、物質に付着して育成される接着依存性を有しており、このような接着依存性を有する細胞の培養には、細胞が付着するための基材（器具）が必要とされる。細胞培養用基材としては、その材料で主としてポリスチレン成形品が一般的であり、基材の表面に低温プラズマ処理、コロナ放電処理などを施し、親水性を付与したものがシャーレ、フラスコ、マルチプレートなどの培養器具として市販されている。
【０００４】
しかしながら、付着性細胞種の重要な性質として、培養器具を用いて細胞培養をした場合に培養容器の培養面を細胞が覆いつくしてしまうと細胞増殖が停止してしまう接触阻害が知られている。また、播種される細胞濃度が低すぎると、栄養分や酸素等が細胞に十分供給されている環境であっても細胞の接着や増殖に影響が生じるという密度効果も知られている。さらには、細胞は培養容器の培養面に付着しながら平面的に増殖する態様を示すため、特に組織培養に応用される細胞増殖が群体を形成した状態の細胞シートを作製する方法として、播種を繰り返して培養する操作（以下、継代操作と略す）が用いられているが、操作が煩雑で、細胞を損傷なく再現良く培養することが困難である。
【０００５】
このような問題を解決するために、ゲル、スポンジ状に架橋したコラーゲンを培養基材の上に配置して線維芽細胞や角化細胞などを播種、培養することで培養粘膜・皮膚を製造する方法が開示されているが（特許文献１）、利用されるコラーゲン種の多くは、ウシあるいはブタの結合組織から可溶化し、抽出されたコラーゲンであり、近年ＢＳＥ（牛海綿状脳症）や口蹄疫などの問題により、医療応用などを考慮する場合にその使用が困難になってきている。
【０００６】
継代操作について従来の技術では、分裂を繰り返す付着性細胞を培養するために培養容器で細胞を適当な時間培養して目的の細胞濃度まで増殖する度に、細胞を培養面から剥離し、その一部を新たな培養容器に移し替える操作を継続的に行なう方法が一般的である（例えば、特許文献２、３）。特許文献２では、面積が異なる複数の培養面を有する培養容器を用い、最小面積を有する培養面から細胞培養を開始し、増殖が進行するにつれて細胞をスクレーパーで剥離して徐々に面積の大きな培養面へと細胞を移動しながら培養を閉鎖系で行なう方法が開示されている。また、ガス透過性の樹脂で作製された細胞バッグ同士を接続し、バッグ内の培養液を混合させることで、細胞濃度を調整する継代操作が開示されている（特許文献３）。しかしながら、何れの方法であっても、この継代操作は、頻繁な液交換などの非常に煩雑な作業を伴うものであり、また、基材に付着した細胞を剥がして新たな培養容器に移し替える操作を行うため、細胞を損傷させ、増殖した形態を崩壊させてしまうなど潜在的に多くの問題がある。
【０００７】
なお、細胞を培養する基材表面の性状と増殖性については、Ｌ細胞（胃腸内分泌細胞）を培養した例で、細胞の増殖形態と基材の水接触角との関係を評価した結果が開示されている（非特許文献１）。この中では、水接触角が４３°〜１１６°の範囲の基材について、培養開始１時間経過後の細胞密度を計測すると、基材の種類に寄らず６０°〜７０°の範囲にある基材を用いた細胞の密度が高く、細胞の接着性が良好であると記載されている。
【０００８】
また、最近では細胞が接触する基材の表面に、凹凸構造を形成した基材を用いた培養技術が提案されている（例えば、特許文献４、５）。凹凸構造を付形した基材を用いる培養は、多くの場合、スフェロイド培養であり細胞は塊状の形態で増殖する態様を示す。しかしながら、凹凸構造を付形する基材の材料は、シクロオレフィンポリマー（特許文献４）、ポリジメチルシロキサン（特許文献５）などの従来から知られた細胞接着性の材料であり、基材の凹凸構造によるスフェロイド培養において、細胞が基材と接触する面積が小さくなっていても本質的に接着性の態様は変わらず細胞は足場を形成する。これにより、培養した細胞を基材から離脱させる際に、細胞を損傷させ、増殖した形態を崩壊させてしまうなど潜在的な問題がある。さらには、凹凸構造を付形した基材を用いる細胞培養では、細胞が足場を形成する上での効果的な凹凸構造の形状、サイズについて報告されているものの、基材表面の水接触角と接着性或いは、増殖性の関係についての記載は無い。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開２００４−１４７５８５号公報
【特許文献２】特開２００４−１２９５５８号公報
【特許文献３】特開平７−０４７１０５号公報
【特許文献４】国際公開第２００７／０９７１２１号パンフレット
【特許文献５】特開２０１０−８８３４７号公報
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｙ．Ｔａｍａｄａ，Ｙ．Ｉｋａｄａ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｌｌｏｉｄ  ａｎｄ  Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １５５，３３４−３３９（１９９３）．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、基材の一面に接触または保持させた細胞を、損傷させること無く基材から離脱させることができる医療器具を提供することを課題とする。
また本発明は、薬物代謝系酵素活性を長期間維持可能な培養細胞を提供することを課題とする。薬物代謝系酵素活性維持出来る培養細胞は、再生医療などに好適に展開出来ると考えられるので、本発明の意義は極めて大きい。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、以下に示される。
（１）  基材を備え、かつ前記基材の一面に細胞を接触または保持させる医療器具であって、前記基材の少なくとも細胞を保持する前記一面は、下記一般式（１）で表される繰返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーにより構成される医療器具。
【化１】
2019004884.tif 000003
（式（１）中、Ｒ１〜Ｒ４のうち、少なくとも１つは、フッ素、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルキル、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルコキシ、またはフッ素を含有する炭素数２〜１０のアルコキシアルキルである。Ｒ１〜Ｒ４がフッ素を含有しない基である場合、Ｒ１〜Ｒ４は、水素、炭素数１〜１０のアルキル、炭素数１〜１０のアルコキシ、または炭素数２〜１０のアルコキシアルキルから選ばれる。Ｒ１〜Ｒ４は互いに同一であっても異なっていてもよい。Ｒ１〜Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよい。）
（２）細胞を接触または保持する前記一面の水接触角が７０°以上１６０°以下である（１）に記載の医療器具。
（３）細胞を接触または保持する前記一面の水接触角が７０°以上１２０°以下である（１）または（２）に記載の医療器具。
（４）  前記基材の少なくとも細胞と接触する前記一面が、凹凸構造を備える（１）に記載の医療器具。
（５）  細胞と接触する前記一面の水接触角が１２１°以上１６０°以下である（４）に記載の医療器具。
（６）  前記基材の少なくとも細胞を接触または保持する前記一面は、前記フッ素含有環状オレフィンポリマーと、光硬化性化合物と、光硬化開始剤と、を含むフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物により構成される（１）〜（５）のいずれか一項に記載の医療器具。
（７）  前記フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物中における前記フッ素含有環状オレフィンポリマーと前記光硬化性化合物の質量比（フッ素含有環状オレフィンポリマー／光硬化性化合物）が、９９．９／０．１〜５０／５０である（６）に記載の医療器具。
（８）  前記一面に接触または保持させた細胞を培養するために用いられる（１）〜（７）のいずれか一項に記載の医療器具。
（９）  細胞培養において、細胞が群体を形成しながら増殖する（８）に記載の医療器具。
（１０）  培養した細胞を緩衝液により浮遊して前記一面から離脱させる（８）または（９）に記載の医療器具。
（１１）  （１）〜（１０）のいずれか一項に記載の医療器具の前記基材の前記一面上に、前記一面に接触または保持するよう細胞を播種する工程と、
前記細胞を培養して培養細胞を得る工程と、
前記一面上に緩衝液を添加して、前記一面から前記培養細胞を浮遊させる工程と、
を備える細胞培養方法。
（１２）  基材を備え、かつ前記基材の一面に細胞を接触または保持させる医療器具の、前記基材の少なくとも細胞を保持させる前記一面を構成するフッ素含有環状オレフィンポリマーであって、下記一般式（１）で表される繰返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマー。
【化２】
2019004884.tif 000004
（式（１）中、Ｒ１〜Ｒ４のうち、少なくとも１つは、フッ素、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルキル、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルコキシ、またはフッ素を含有する炭素数２〜１０のアルコキシアルキルである。Ｒ１〜Ｒ４がフッ素を含有しない基である場合、Ｒ１〜Ｒ４は、水素、炭素数１〜１０のアルキル、炭素数１〜１０のアルコキシ、または炭素数２〜１０のアルコキシアルキルから選ばれる。Ｒ１〜Ｒ４は互いに同一であっても異なっていてもよい。Ｒ１〜Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよい。）
（１３）  基材を備え、かつ前記基材の一面に細胞を接触または保持させる医療器具の、前記基材の少なくとも細胞を保持させる前記一面を構成するフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物であって、
下記一般式（１）で表される繰返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーと、
光硬化性化合物と、
光硬化開始剤と、
を含むフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物。
【化３】
2019004884.tif 000005
（式（１）中、Ｒ１〜Ｒ４のうち、少なくとも１つは、フッ素、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルキル、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルコキシ、またはフッ素を含有する炭素数２〜１０のアルコキシアルキルである。Ｒ１〜Ｒ４がフッ素を含有しない基である場合、Ｒ１〜Ｒ４は、水素、炭素数１〜１０のアルキル、炭素数１〜１０のアルコキシ、または炭素数２〜１０のアルコキシアルキルから選ばれる。Ｒ１〜Ｒ４は互いに同一であっても異なっていてもよい。Ｒ１〜Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよい。）
（１４）  薬物代謝系酵素活性を少なくとも７日間維持した培養細胞。
【発明の効果】
【００１３】
基材の一面に接触または保持させた細胞を、損傷させること無く基材から離脱させることができる医療器具を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
上述した目的、およびその他の目的、特徴および利点は、以下に述べる好適な実施の形態、およびそれに付随する以下の図面によってさらに明らかになる。
【００１５】
【図１】リン酸緩衝生理食塩水に浸漬してシート状に浮遊したマウス胚繊維芽細胞である。
【図２】実施例２３に記載の細胞培養容器で７日間培養したヒト皮膚繊維芽細胞の細胞核、および細胞骨格タンパクの蛍光顕微鏡写真である。
【図３】比較例６に記載のＴＣＰＳマルチウェルプレートで７日間培養したヒト皮膚繊維芽細胞の細胞核、および細胞骨格タンパクの蛍光顕微鏡写真である。
【図４】実施例２３に記載の細胞培養容器で７日間培養したヒト培養細胞の死滅自家蛍光発光を観察した蛍光顕微鏡写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、実施の形態について、図面を用いて説明する。尚、すべての図面において、同様な構成要素には同様の符号を付し、適宜説明を省略する。
【００１７】
本実施形態に係る医療器具は、基材を備え、かつ当該基材の一面に細胞を接触または保持させる医療器具である。また、上記基材の細胞を保持させる少なくとも一面は、下記一般式（１）で表される繰返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーにより構成される。
【００１８】
【化４】
2019004884.tif 000006
（式（１）中、Ｒ１〜Ｒ４のうち、少なくとも１つは、フッ素、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルキル、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルコキシ、またはフッ素を含有する炭素数２〜１０のアルコキシアルキルである。Ｒ１〜Ｒ４がフッ素を含有しない基である場合、Ｒ１〜Ｒ４は、水素、炭素数１〜１０のアルキル、炭素数１〜１０のアルコキシ、または炭素数２〜１０のアルコキシアルキルから選ばれる。Ｒ１〜Ｒ４は互いに同一であっても異なっていてもよい。また、Ｒ１〜Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよい。）
尚、前記のアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル等の置換基は、本明細書においてはそれぞれアルキル基、アルコキシ基、アルコキシアルキル基と記載することがある。
また、本明細書中の「繰り返し構造単位」について、単に「構造単位」と表現することもできる。
【００１９】
本発明者は、医療器具を構成する基材の細胞を接触または保持させる一面を、上記一般式（１）により表される繰り返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマー、または当該フッ素含有環状オレフィンポリマーを含む組成物を用いて形成した場合に、当該一面に保持させた細胞を、例えば、リン酸緩衝生理食塩水のような緩衝液によって容易に浮遊させることができることを新たに知見した。したがって、本実施形態に係る上記医療器具によれば、基材の一面に接触または保持させた細胞を、緩衝液を用いて浮遊させることによって、損傷させること無く基材から離脱させることが可能となる。
【００２０】
以下、本実施形態に係る医療器具について詳細に説明する。
【００２１】
本実施形態に係る医療器具は、基材を備え、基材の一面に細胞および／または培養液が接触または保持される形態で使用される医療器具を示す。このような医療器具は、たとえば基材の一面に接触または保持させた細胞を培養する、または基材の一面に接触または保持させた細胞を利用した検査を行うために用いられるものである。本実施形態においては、たとえば培養バッグ、培養プレート、培養シャーレ、培養ディッシュ、培養フラスコ、培養チューブなどを上記医療器具の例として挙げることができる。細胞を培養するための医療器具においては、上記一面を、細胞を培養するための培養面とすることができる。
【００２２】
本実施形態に係る医療器具において、基材の細胞を接触または保持させる少なくとも一面は、上記一般式（１）で表される繰返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーにより構成される。これにより、上述のとおり、基材の一面に保持させた細胞や、一面上において培養した細胞を、緩衝液を用いることによって基材から浮遊させることができる医療器具が得られる。このため、基材の一面に接触または保持させた細胞を損傷させること無く基材から離脱させることが可能となる。ここでは、基材の一面上にある種の緩衝液、例えば、リン酸緩衝生理食塩水を添加する場合や、基材をリン酸緩衝生理食塩水内へ浸漬させる場合等により細胞を基材から浮遊させることができる。
【００２３】
また、上記一般式（１）で表される繰返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーにより基材の細胞を接触または保持させる少なくとも一面を構成することによって、一面に保持させた細胞が基材に対して適度な足場を形成しながら、一方で、当該一面に強固に接着および付着しない基材を実現することができる。これにより、細胞培養において、細胞を厚み方向へ群体を形成しながら増殖させることができる。
【００２４】
ここでの厚み方向に群体を形成しながら増殖した細胞の形態は、培養した細胞を、例えば、明暗視野顕微鏡、位相差顕微鏡、蛍光顕微鏡などにより観察することができる。特に、細胞の細胞核や細胞骨格タンパクなどを部位別に蛍光発光試薬で染色した蛍光色で観察できる蛍光顕微鏡観察は細胞の形態観察法として好適である。
【００２５】
通常の細胞を培養するために用いられる医療器具においては、増殖した細胞が培養面に接着または付着しながら増殖するため、厚み方向に対して均一な平面状態で細胞が増殖する。この場合、細胞が培養面を覆いつくしてしまうと細胞が接着または付着する足場が無くなるため、接触阻害等の影響により増殖が妨げられることとなる。一方で、効率的な細胞培養を行うために播種を繰り返して培養する継代操作を用いることが考えられるが、細胞を剥がして新たな培養容器に移し替える作業により細胞を損傷させるおそれがある。また、継代操作は頻繁な液交換などの非常に煩雑な作業を伴うものである。
これに対し、本実施形態によれば、上記一般式（１）のフッ素含有環状オレフィンポリマーによって細胞を保持させる基材の一面を構成することにより、増殖した細胞が基材の一面に接着および付着することを抑制することができる。このため、継代操作によらずとも、厚み方向に対して群体を形成するように細胞を増殖させることが可能となる。したがって、細胞の損傷の発生や操作の煩雑化を抑えつつ、より効率的な細胞培養を行うことが可能となる。
また、本実施形態の医療器具を用いて作製した培養細胞は、薬物代謝系酵素活性を少なくとも７日間維持した培養細胞である。すなわち、生体内での細胞増殖とほぼ同じ機能を維持したまま成長させた培養細胞であり、細胞の種類を限定的に選ばない。もしくは、遺伝子変異を起こす確率の高いウイルスまたは細菌などごく限られた細胞の種類を除いて正常に生細胞を培養することができる。その細胞の薬物代謝系酵素活性は、低温下で保存するまたは特別な培養保存操作（例えば、酸素過多で保存するなど）をすることなく、少なくとも７日間維持され、好ましくは、１０日間維持した培養細胞である。特に好ましくは１４日間維持された培養細胞である。一方、細胞の形状は、特に限定する必要は無いが、例示するならば、例えば、シート状細胞、群生状（含むスフェロイド）細胞、神経系形態細胞などである。特に、再生医療の分野では、短期間で、かつ、生体細胞と同様な薬物代謝系酵素活性を維持していることが望まれており、本実施形態の培養細胞のように好適に生産できることが、重要な訴求点になる。
また、本実施形態の培養細胞は、創薬やバイオ薬品、美容においても同様の機能を長期間維持することが期待でき、世界的な潮流となりうる発明である。
【００２６】
また、上記フッ素含有環状オレフィンポリマーにより基材を構成することによって、基材の成形性を向上させることができ、工業的に価値のあるあらたな医療器具が実現される。
【００２７】
基材の細胞を接触または保持させる少なくとも一面が上記フッ素含有環状オレフィンポリマーにより構成されるとは、たとえば他の材料により形成される支持体の一面上に上記フッ素含有環状オレフィンポリマーにより構成されるフィルム（培養細胞シートとも称す。）が貼り付けられて基材が構成される場合や、他の材料により形成される支持体の一面上に上記フッ素含有環状オレフィンポリマーにより構成されるコート膜が塗布乾燥により形成されて基材が構成される場合、基材全体が上記フッ素含有環状オレフィンポリマーにより構成される成形物により形成される場合を含む。
【００２８】
また、本実施形態の医療器具上で作製された培養細胞を綿、布、不織布などで覆い積層された積層体も提供してもよい。または、この積層体は、グリセリンなどの保湿剤を含侵させてもよい。すなわち、本実施形態の医療器具で作製された培養細胞としては、積層体として設けられた覆いを外し、再生医療の用途として直接患部に貼り合わせ、その後フィルムを離脱させるような医療行為に用いることもできる。
【００２９】
基材の細胞を接触または保持する一面における水接触角は、たとえば７０°以上１６０°以下とすることができる。これにより、培養液の細胞外マトリックス中に存在するビトロネクチンやフィブロネクチン等のタンパク質のファミリー（付着分子やタンパク質）を介して引き起こされる基材への細胞の付着または接着を抑制することができる。これにより、細胞と細胞外マトリックスを含む主成分が水である培養液との親和性が適度に小さな基材を細胞の培養基材として用いることで、一面に接着および付着が抑制されつつ増殖した細胞を、例えば、リン酸緩衝生理食塩水のような緩衝液を用いてより容易に浮遊させることができる。このため、細胞を基材から離脱させる際に、細胞に損傷が発生することをより確実に抑えることが可能となる。また、細胞の増殖過程においては、厚み方向に対して群体を形成するように細胞を増殖させることがより容易となり、さらに効率的な細胞培養が可能となる。すなわち、上述の範囲で水接触角を調整した基材を備える医療器具により細胞を培養することで、基材表面、細胞、および培養液それぞれの界面の相互作用を保ちながら、細胞の培養器具への付着、または密着が抑制されつつ群体を形成しながら増殖することができる。細胞の損傷を抑える観点や、効率的な細胞培養を行う観点からは、上記水接触角が７５°以上１５５°以下であることがより好ましく、８０°以上１５０°以下とすることがとくに好ましい。
【００３０】
基材の一面における水接触角は、一態様においては、基材表面の水接触角が７０°以上１２０°以下で好ましく用いられ、基材の一面を構成する材料や、基材の作製方法における種々の条件を適切に選択することにより制御することが可能である。細胞の損傷を抑える観点や、効率的な細胞培養を行う観点からは、上記の水接触角が７５°以上１１５°以下であることがより好ましく、８０°以上１１０°以下とすることが特に好ましい。
また、他の態様においては、より高い水接触角とすることもでき、たとえば、基材の一面における水接触角を１２１°〜１６０°の範囲に設定することもできる。このように１２１°〜１６０°の水接触角を実現するためには、基材の一面に凹凸構造を形成させて制御する方法が好ましく用いられる。細胞の損傷を抑える観点や、効率的な細胞培養を行う観点からは、上記の水接触角が１２３°以上１５５°以下であることがより好ましく、１２５°以上１５０°以下とすることが特に好ましい。本実施形態においては、上記一般式（１）で表される繰返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーを用いて上記基材の一面を形成することが、水接触角を所望の範囲とするために重要な要素の一つである。
【００３１】
水接触角の測定は、日本工業規格ＪＩＳ−Ｒ３２５７（基板ガラス表面のぬれ性試験方法）に準じて、２５±５℃、５０±１０％の恒温恒湿条件下で水滴の形状を球形とみなせる４μｌ以下の容量の水滴を基材表面に滴下し、静滴法により、基材表面に水滴が接触した直後から１分以内の基材と水滴の接触界面の角度を計測する方法で行うことができる。本実施形態においては、たとえば種々のプラスチック材料の物性値に利用される数値と同様に、上記方法により水滴が接触した直後から１分以内の数値を物性値として取り扱うことができる。
【００３２】
本実施形態に係る医療器具で取扱うことができる細胞の種類としては、動物細胞の場合で浮遊系細胞、接着系細胞に関わらず、例えば、線維芽細胞、間葉系幹細胞、造血幹細胞、神経幹細胞、神経細胞、角膜上皮細胞、口腔粘膜上細胞、網膜色素上細胞、歯根膜幹細胞、筋繊維芽細胞、心筋細胞、肝細胞、脾内分泌細胞、皮膚角化細胞、皮膚繊維芽細胞、皮下脂肪由来前駆細胞、腎臓細胞、底部毛根鞘細胞、鼻粘膜上皮細胞、間葉系幹細胞、血管内皮前駆細胞、血管内皮細胞、血管平滑筋細胞、骨芽細胞、軟骨細胞、骨格筋細胞、不死化細胞、がん細胞、角化細胞、胚性幹細胞（ＥＳ細胞）、ＥＢＶ形質転換Ｂ細胞、人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）などが例示され、より具体的にはＨｅＬａ細胞、ＣＨＯ細胞、Ｃｏｓ細胞、ＨＬ−６０細胞、Ｈｓ−６８細胞、ＭＣＦ７細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｖｅｒｏ細胞、ＰＣ−１２細胞、Ｋ５６２細胞、Ｌ細胞、２９３細胞、ＨｅｐＧ２細胞、Ｕ−９３７細胞、Ｃａｃｏ−２細胞、ＨＴ−２９細胞、Ａ５４９細胞、Ｂ１６細胞、ＭＤＣＫ細胞、ＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞、Ｖ７９細胞、３Ｔ３−Ｌ１細胞、ＮＩＨ／３Ｔ３細胞、Ｒａｊｉ細胞、ＮＳＣＬＣ細胞、Ａ４３１細胞、Ｓｆ９細胞、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞、ＢＨＫ−２１細胞、Ｊ７７４細胞、Ｃ２Ｃ１２細胞、３Ｔ３−Ｓｗｉｓｓ  ａｌｂｉｎｏ細胞、ＭＯＬＴ−４細胞、ＣＶ−１細胞、Ｆ９細胞、ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞、ＨａＣａＴ細胞、Ｌ５１７８Ｙ細胞、ＨｕＨ−７細胞、Ｒａｔ１細胞、Ｓａｏｓ−２細胞、ＴＩＧ細胞、ＣＨＬ細胞、ＷＩ−３８細胞、ＭＲＣ−５細胞、Ｈｅｐ３Ｂ細胞、ＳＫ−Ｎ−ＳＨ細胞、ＭＩＮ６細胞、ＫＡＴＯ細胞、Ｃ３Ｈ／１０Ｔ１／２細胞、ＤＴ４０細胞、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞、ＩＭＲ−９０細胞、ＦＭ３Ａ細胞、などが例示される。また、初代細胞あるいは継代された細胞のいずれであっても良い。
これらの細胞の由来としては各種生物、例えば、ヒト、イヌ、ラット、マウス、トリ、ブタ、ウシ、昆虫等の細胞、または、これらが集合して形成された組織、器官、微生物、ウイルスなどが挙げられ、より具体的には、ヒト子宮頚部癌由来、Ｃｈｉｎｅｓｅ  ｈａｍｓｔｅｒ卵巣由来、ＣＶ−１細胞由来、ヒト骨髄性白血病由来、ヒト乳癌由来、ヒトＴ細胞白血病由来、Ａｆｒｉｃａ  ｇｒｅｅｎ  ｍｏｎｋｅｙ腎由来、ヒト副腎髄褐色細胞種由来、ヒト骨髄性白血病由来、Ｃ３Ｈマウス皮下組織由来、ヒト胎児腎由来、ヒト肝癌由来、ヒト組織球性白血病由来、ヒト大腸癌由来、ヒト肺癌由来、マウスメラノーマ由来、イヌ腎臓由来、Ｂａｌｂ／ｃマウス胎仔由来、Ｃｈｉｎｅｓｅ  ｈａｍｓｔｅｒ肺由来、Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３由来、ＮＩＨ  Ｓｗｉｓｓマウス胎仔由来、ヒトバーキットリンパ腫由来、ヒト肺非小細胞癌由来、ヒト皮膚Ｅｐｉｄｅｒｍｏｉｄ  Ｃａｒｃｉｎｏｉｄ由来、蛾の幼虫卵巣由来、ヒト神経芽細胞腫由来、Ｓｉｒｉａｎ  ｇｏｌｄｅｎ  ｈａｍｓｔｅｒ腎由来、マウスマクロファージ由来、マウス筋組織由来、雑系Ｓｗｉｓｓマウス胎仔由来、ヒト急性Ｔ細胞白血病由来、マウスＥＣ細胞ＯＴＴ６０５０由来、マウスｃａｌｖａｒｉａ由来、ヒト表皮角化細胞由来、ＤＢＡ／２マウス胸腺腫瘍由来、ヒト幹細胞癌由来、ラット結合織由来、ヒト骨肉腫由来、ヒト胎児肺由来、ヒト胎児肺由来、ヒト神経芽細胞腫由来、マウスインスリノーマ由来、ヒト胃癌由来、Ｃ３Ｈマウス胎仔由来、ニワトリＢ細胞白血病由来、マウス自然発生乳癌由来、などが例示される。
【００３３】
次に、フッ素含有環状オレフィンポリマーについて詳細に説明する。
【００３４】
（フッ素含有環状オレフィンポリマー）
フッ素含有環状オレフィンポリマーは、上述したとおり、下記一般式（１）で表される繰返し構造単位を含有するものである。本実施形態においては、このフッ素含有環状オレフィンポリマーを用いて、基材の一面に細胞を接触または保持させる医療器具の当該基材の少なくとも一面を形成することができる。
【００３５】
【化５】
2019004884.tif 000007
（式（１）中、Ｒ１〜Ｒ４のうち、少なくとも１つは、フッ素、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルキル、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルコキシ、またはフッ素を含有する炭素数２〜１０のアルコキシアルキルである。Ｒ１〜Ｒ４がフッ素を含有しない基である場合、Ｒ１〜Ｒ４は、水素、炭素数１〜１０のアルキル、炭素数１〜１０のアルコキシ、または炭素数２〜１０のアルコキシアルキルから選ばれる。Ｒ１〜Ｒ４は互いに同一であっても異なっていてもよい。また、Ｒ１〜Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよい。）
【００３６】
一般式（１）においてＲ１〜Ｒ４は、フッ素；フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、トリフルオロエチル、ペンタフルオロエチル、ヘプタフルオロプロピル、ヘキサフルオロイソプロピル、ヘプタフルオロイソプロピル、ヘキサフルオロ−２−メチルイソプロピル、ペルフルオロ−２−メチルイソプロピル、ｎ−ペルフルオロブチル、ｎ−ペルフルオロペンチル、ペルフルオロシクロペンチル等のアルキル基の水素の一部または全てがフッ素で置換されたアルキル等のフッ素を含有する炭素数１〜１０のアルキル；フルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシ、トリフルオロエトキシ、ペンタフルオロエトキシ、ヘプタフルオロプロポキシ、ヘキサフルオロイソプロポキシ、ヘプタフルオロイソプロポキシ、ヘキサフルオロ−２−メチルイソプロポキシ、ペルフルオロ−２−メチルイソプロポキシ、ｎ−ペルフルオロブトキシ、ｎ−ペルフルオロペントキシ、ペルフルオロシクロペントキシ等のアルコキシの水素の一部または全てがフッ素で置換されたアルコキシ等のフッ素を含有する炭素数１〜１０のアルコキシ；またはフルオロメトキシメチル、ジフルオロメトキシメチル、トリフルオロメトキシメチル、トリフルオロエトキシメチル、ペンタフルオロエトキシメチル、ヘプタフルオロプロポキシメチル、ヘキサフルオロイソプロポキシメチル、ヘプタフルオロイソプロポキシメチル、ヘキサフルオロ−２−メチルイソプロポキシメチル、ペルフルオロ−２−メチルイソプロポキシメチル、ｎ−ペルフルオロブトキシメチル、ｎ−ペルフルオロペントキシメチル、ペルフルオロシクロペントキシメチル等のアルコキシアルキルの水素の一部または全てがフッ素で置換されたアルコキシアルキル等のフッ素を含有する炭素数２〜１０のアルコキシアルキルが例示される。
また、Ｒ１〜Ｒ４が互いに結合して環構造を形成していてもよく、ペルフルオロシクロアルキル、酸素を介したペルフルオロシクロエーテル等の環を形成してもよい。
さらに、フッ素を含有しないその他のＲ１〜Ｒ４は、水素；メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、２−メチルイソプロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、シクロペンチル等の炭素数１〜１０のアルキル；メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペントキシ等の炭素数１〜１０のアルコキシ；またはメトキシメチル、エトキシメチル、プロポキシメチル、ブトキシメチル、ペントキシメチル等の炭素数２〜１０のアルコキシアルキルが例示される。
【００３７】
フッ素含有環状オレフィンポリマーは、一般式（１）で表される構造単位のみを有するものであってもよく、一般式（１）で表される構造単位とともに他の構造単位を有するものであってもよい。また、フッ素含有環状オレフィンポリマーは、一般式（１）で表される構造単位であって、Ｒ１〜Ｒ４の少なくとも１つが互いに異なる二種類以上の構造単位を含んでいてもよい。
【００３８】
一般式（１）で表される繰り返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーの具体的な例として、ポリ（１−フルオロ−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−フルオロ−１−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−１−フルオロ−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１−ジフルオロ−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロエチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１−ビス（トリフルオロメチル）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２−トリフルオロ−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ビス（トリフルオロメチル）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロプロピル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−２−ペルフルオロプロピル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ブチル−２−ペルフルオロプロピル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロ−ｉｓｏ−プロピル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−２−ペルフルオロ−ｉｓｏ−プロピル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１，２−ビス（トリフルオロメチル）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２，２，３，３，３a, ６a−オクタフルオロシクロペンチル−４，６−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２，２，３，３，４，４，３a, ７a−デカフルオロシクロヘキシル−５，７−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロブチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロ−ｉｓｏ−ブチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロ−ｔｅｒｔ−ブチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−２−ペルフルオロ−ｉｓｏ−ブチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ブチル−２−ペルフルオロ−ｉｓｏ−ブチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−トリフルオロメチル−２−ペルフルオロエチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−(１−トリフルオロメチル−２，２，３，３，４，４，５，５−オクタフルオロ−シクロペンチル）−３，５−シクロペンチレンエチレン)）、ポリ（（１，１，２−トリフルオロ−２−ペルフルオロブチル）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−トリフルオロメチル−２−ペルフルオロブチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−フルオロ−１−ペルフルオロエチル−２，２−ビス（トリフルオロメチル）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−ペルフルオロプロパニル−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロヘキシル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−２−ペルフルオロ��キシル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ブチル−２−ペルフルオロヘキシル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ヘキシル−２−ペルフルオロヘキシル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−オクチル−２−ペルフルオロヘキシル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロヘプチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロオクチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロデカニル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２−トリフルオロ−ペルフルオロペンチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−トリフルオロメチル−２−ペルフルオロブチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２−トリフルオロ−ペルフルオロヘキシル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−トリフルオロメチル−２−ペルフルオロペンチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ビス（ペルフルオロブチル）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ビス（ペルフルオロヘキシル）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メトキシ−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ｔｅｒｔ−ブトキシメチル−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，３，３，３a, ６a−ヘキサフルオロフラニル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−フルオロ−２−トリフルオロメトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−フルオロ−１−トリフルオロメトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−１−フルオロ−２−トリフルオロメトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１−ジフルオロ−２−トリフルオロメトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−２−トリフルオロメトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロエトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、
ポリ（１，１−ビス（トリフルオロメトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２−トリフルオロ−２−トリフルオロメトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ビス（トリフルオロメトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロプロポキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−２−ペルフルオロプロポキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ブチル−２−ペルフルオロプロポキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロ−ｉｓｏ−プロポキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−２−ペルフルオロ−ｉｓｏ−プロポキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１，２−ビス（トリフルオロメトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロブトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロ−ｔｅｒｔ−ブトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−２−ペルフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ブチル−２−ペルフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−トリフルオロメトキシ−２−ペルフルオロエトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２−トリフルオロ−２−ペルフルオロブトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−トリフルオロメトキシ−２−ペルフルオロブトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−フルオロ−１−ペルフルオロエトキシ−２，２−ビス（トリフルオロメトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−ペルフルオロプロポキシ−２−トリフルオロメトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロヘトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−２−ペルフルオロヘトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ブチル−２−ペルフルオロヘトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ヘキシル−２−ペルフルオロヘトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−オクチル−２−ペルフルオロヘトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロヘプトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロオクトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロデトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２−トリフルオロ−ペルフルオロペントキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−トリフルオロメトキシ−２−ペルフルオロブトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２−トリフルオロ−２−ペルフルオロヘトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−トリフルオロメトキシ−２−ペルフルオロペンチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ビス（ペルフルオロブトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ビス（ペルフルオロへトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メトキシ−２−トリフルオロメトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ｔｅｒｔ−ブトキシメチル−２−トリフルオロメトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−（２´, ２´, ２´−トリフルオロエトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−(２´, ２´, ３´, ３´ , ３´-ペンタフルオロプロポキシ)−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−２−(２´, ２´, ３´, ３´ , ３´−ペンタフルオロプロポキシ)−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ブチル−２−(２´, ２´, ３´, ３´ , ３´−ペンタフルオロプロポキシ)−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−（１´,１´,１´−トリフルオロ−ｉｓｏ−プロポキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−（１´,１´,１´−トリフルオロ−ｉｓｏ−プロポキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−(２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，４´−ヘプタフルオロブトキシ)−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−(１´,１´,１´-トリフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ)−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−(１´,１´,１´−トリフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ)−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−２−(１´,１´,１´-トリフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ)−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ブチル−２−(１´,１´,１´−トリフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ)−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−トリフルオロメトキシ−２−（２´,２´,２´−トリフルオロエトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２−トリフルオロ−２−（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，４´−ヘプタフルオロブトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−トリフルオロメトキシ−２−（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，４´−ヘプタフルオロブトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−フルオロ−１−（２´, ２´, ２´−トリフルオロエトキシ）−２，２−ビス（トリフルオロメトキシ））−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−(２´, ２´, ３´, ３´ , ３´-ペンタフルオロプロポキシ)−２−トリフルオロメトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，５´，５´，６´，６´，６´−ウンデカフルオロヘトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−２−（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，５´，５´，６´，６´，６´−ウンデカフルオロヘトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ブチル−２−（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，５´，５´，６´，６´，６´−ウンデカフルオロヘトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ヘキシル−２−（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，５´，５´，６´，６´，６´−ウンデカフルオロヘトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポ��（１−オクチル−２−（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，５´，５´，６´，６´，６´−ウンデカフルオロヘトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，５´，５´，６´，６´，７´，７´，７´−トリデカフルオロヘプトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，５´，５´，６´，６´，７´，７´，８´，８´，８´−ペンタデカフルオロオクトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，５´，５´，６´，６´，７´，７´，８´，８´，９´，９´，９´−ヘプタデカフルオロデトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２−トリフルオロ−２−（１´,１´,１´−トリフルオロ−ｉｓｏ−プロポキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−トリフルオロメトキシ−２−（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，４´−ヘプタフルオロブトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２−トリフルオロ−（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，５´，５´，６´，６´，６´−ウンデカフルオロヘトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ビス（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，４´−ヘプタフルオロブトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ビス（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，５´，５´，６´，６´，６´−ウンデカフルオロヘトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−ペルフルオロエチル−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−ペルフルオロ−ｉｓｏ−プロピル−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）等が挙げられる。
【００３９】
フッ素含有環状オレフィンポリマーの分子量は、たとえば試料濃度３．０〜９．０ｍｇ／ｍｌでゲルパーミュエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）によって測定したポリスチレン換算の重量平均分子量（Ｍｗ）において、５,０００〜１,０００,０００であることが好ましく、１０,０００〜３００,０００であることがより好ましい。この重量平均分子量（Ｍｗ）を上記下限値以上とすることにより、溶液キャスト法により成形した成形物、あるいは基材にコートした成形物において曲げなどの外部応力に起因したヒビなどの発生しない、良好な状態の成形物をより確実に得る事が可能になる。また、重量平均分子量（Ｍｗ）を上記上限値以下とすることにより、溶融成形が容易な流動性を持つことが可能になる。
なお、本明細書中において、「〜」で示した数値範囲は、その上限値および下限値を含むものとする。
【００４０】
また、重量平均分子量（Ｍｗ）と数平均分子量（Ｍｎ）との比である分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は、１．３〜５．０とすることが好ましく、１．５〜４．５とすることがより好ましく、１．７〜４．０とすることがとくに好ましい。この分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）を上記下限値以上とすることにより、溶液キャスト法や溶融成形法などの各種成形法で作製したフィルムまたは成形物の靱性を向上させ、外部応力に起因したクラックや割れの発生をより効果的に抑制することが可能になる。一方で、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）を上記上限値以下とすることにより、オリゴマーなどの特に低分子量成分が溶出することを抑え、基材表面の水接触角が変化して本実施形態の細胞増殖の形態が妨げられることをより確実に抑制することが可能となる。重量平均分子量（Ｍｗ）、および分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）を上記した範囲とすることにより、細胞培養および細胞を利用した検査に用いられるものとしてとくに好適な医療器具を得ることが可能になる。
【００４１】
示差走査熱量分析によるフッ素含有環状オレフィンポリマーのガラス転移温度は、５０〜３００℃とすることが好ましく、８０〜２８０℃とすることがより好ましく、１００〜２５０℃とすることがさらに好ましい。ガラス転移温度が上記範囲であると、加熱滅菌処理が行え、また使用環境下で形状を維持することができ、さらに溶融成形において加熱温度に対して優れた流動性を有し製造安定性良く、色相にも優れた細胞培養および細胞を利用した検査のための基材としての医療器具を好適に得ることが可能になる。
【００４２】
本実施形態の一般式（１）の部分化フッ素化ポリマーは、全フッ素化ポリマーとは異なり、主鎖が炭化水素で側鎖にフッ素原子を有する部分的なフッ素化ポリマーである構造に起因して極性が大きく、これにより、ポリマー合成時の溶剤である通常市販されているエーテル、ケトンなどの極性溶剤に対して良く溶解し、光硬化性化合物などの極性化合物にも優れた溶解性を示しながら、その成形物は、ＰＥＴ、アクリル樹脂などの汎用樹脂からなる成形物に対して優れた密着性を示し、かつ、フッ素系ポリマーとしての特徴である疎水な表面性状を有する。
【００４３】
次に、フッ素含有環状オレフィンポリマーの製造方法について説明する。
以下に記載の製造方法によって得られるフッ素含有環状オレフィンポリマーからなるフィルム、または成形物を、細胞培養および細胞を利用した検査のための基材として用いる事により、本実施形態の細胞が接着および付着しづらいことを特徴とする医療器具を好適に得ることができる。
【００４４】
（フッ素含有環状オレフィンポリマーの製造方法）
本実施形態において、実質的に一般式（１）で表される繰返し構造単位からなるフッ素含有環状オレフィンポリマーは、後述する方法で製造することができる。これにより、本実施形態の細胞の接着または付着が抑制されることを特徴とする細胞培養および細胞を利用した検査のための基材の原料となる、フッ素含有環状オレフィンポリマーを好適に得ることができる。
具体的には、下記一般式（２）で表わされる環状オレフィンモノマーを開環メタセシス重合触媒によって重合し、得られる重合体の主鎖のオレフィン部を水素添加することによって、フッ素含有環状オレフィンポリマーを合成することができる。
【００４５】
【化６】
2019004884.tif 000008
（式（２）中、Ｒ１〜Ｒ４は、上記式（１）と同義である。）
【００４６】
なお、本実施形態の効果を損なわない範囲であれば、一般式（２）で表される環状オレフィンモノマー以外のモノマーを含んでいてもよい。
【００４７】
本実施形態の一般式（１）で表される構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーは、一般式（２）で表されるモノマーを開環メタセシス重合した後に、主鎖二重結合を水素添加したフッ素含有ポリマーである。開環メタセシス重合は、Ｓｃｈｒｏｃｋ触媒が好ましく用いられ、Ｇｒｕｂｂｓ触媒を用いても良く、これにより極性モノマーに対する重合触媒活性を高め、工業的に優れた製造方法を実現することが可能となる。なお、これらの開環メタセシス重合触媒は、単独で用いてもよく、二種以上を組み合わせて用いてもよい。また、古典的な有機遷移金属錯体、遷移金属ハロゲン化物または遷移金属酸化物と、助触媒としてのルイス酸との組み合せからなる開環メタセシス重合触媒を用いることもできる。
環状オレフィンモノマーの開環メタセシス重合において、環状オレフィンモノマーと開環メタセシス重合触媒とのモル比は、タングステン、モリブデン、またはルテニウム等の遷移金属アルキリデン触媒の場合は、遷移金属アルキリデン触媒１モルに対して、該モノマーを１００〜３０,０００モルとすることが好ましく、１,０００〜２０,０００モルとすることがより好ましい。
【００４８】
また、上記した範囲に分子量、およびその分布を制御するために、連鎖移動剤としてオレフィンまたはジエンを使用することができる。オレフィンとしては、例えば、エチレン、プロピレン、１−ブテン、１−ペンテン、１−ヘキセン、１−オクテン等のα−オレフィンまたはこれらのフッ素含有オレフィンがあげられ、さらに、ビニルトリメチルシラン、アリルトリメチルシラン、アリルトリエチルシラン、アリルトリイソプロピルシラン等のケイ素含有オレフィンまたはこれらのフッ素およびケイ素含有オレフィンがあげられる。また、ジエンとしては、１，４−ペンタジエン、１，５−ヘキサジエン、１，６−ヘプタジエン等の非共役系ジエンまたはこれらのフッ素含有非共役系ジエンがあげられる。これらオレフィン、フッ素含有オレフィンまたはジエンはそれぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用しても良い。
【００４９】
上記連鎖移動剤の使用量は、連鎖移動剤が環状オレフィンモノマー１モルに対して０．００１〜１,０００モルであることが好ましく、０．０１〜１００モルであることがより好ましい。また、連鎖移動剤は、遷移金属アルキリデン触媒１モルに対して０．１〜１,０００モルであることが好ましく、１〜５００モルであることがより好ましい。
【００５０】
また、環状オレフィンモノマーの開環メタセシス重合は、無溶媒でも溶媒を使用しても良いが、特に使用する溶媒としては、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ジブチルエーテル、ジメトキシエタンもしくはジオキサン等のエーテル類、酢酸エチル、酢酸プロピルもしくは酢酸ブチル等のエステル類、ベンゼン、トルエン、キシレンもしくはエチルベンゼン等の芳香族炭化水素、ペンタン、ヘキサンもしくはヘプタン等の脂肪族炭化水素、シクロペンタン、シクロヘキサン、メチルシクロヘキサン、ジメチルシクロヘキサンもしくはデカリン等の脂肪族環状炭化水素、メチレンジクロライド、ジクロロエタン、ジクロロエチレン、テトラクロロエタン、クロロベンゼンもしくはトリクロロベンゼン等のハロゲン化炭化水素、フルオロベンゼン、ジフルオロベンゼン、ヘキサフルオロベンゼン、トリフルオロメチルベンゼン、メタキシレンヘキサフルオライド等のフッ素含有芳香族炭化水素、ペルフルオロヘキサン等のフッ素含有脂肪族炭化水素、ペルフルオロシクロデカリン等のフッ素含有脂肪族環状炭化水素、またはペルフルオロ−２−ブチルテトラヒドロフラン等のフッ素含有エーテル類が挙げられる。これらは、単独で用いてもよく、２種類以上を組み合わせて使用しても良い。
【００５１】
環状オレフィンモノマーの開環メタセシス重合では、該モノマーの反応性および重合溶媒ヘの溶解性によっても異なるが、モノマー溶液に対する環状オレフィンモノマーの濃度は５〜１００質量％であることが好ましく、１０〜６０質量％であることがより好ましい。また、反応温度は、−３０〜１５０℃であることが好ましく、３０〜１００℃であることがより好ましい。また、反応時間は、１０分〜１２０時間であることが好ましく、３０分〜４８時間であることがより好ましい。さらに、ブチルアルデヒド等のアルデヒド類、アセトン等のケトン類、メタノール等のアルコール類、水等の失活剤で反応を停止し、重合体の溶液を得ることができる。
【００５２】
本実施形態の環状オレフィンポリマーは、環状オレフィンモノマーを開環メタセシス重合して得られたポリマーの主鎖のオレフィン部を、触媒によって水素添加反応することによって得られる。また、その水素添加触媒は使用する溶媒の水素添加反応を起こさずに、該ポリマーの主鎖のオレフィン部を水素添加できる触媒であれば、均一系金属錯体触媒でも不均一系の金属担持触媒のいずれであってもよく、均一系金属錯体触媒として、例えば、クロロトリス（トリフェニルホスフィン）ロジウム、ジクロロトリス（トリフェニルホスフィン）オスミウム、ジクロロヒドリドビス（トリフェニルホスフィン）イリジウム、ジクロロトリス（トリフェニルホスフィン）ルテニウム、ジクロロテトラキス（トリフェニルホスフィン）ルテニウム、クロロヒドリドカルボニルトリス（トリフェニルホスフィン）ルテニウム、ジクロロトリス（トリメチルホスフィン）ルテニウム等が挙げられ、また、不均一系金属担持触媒として、例えば、活性炭担持パラジウム、アルミナ担持パラジウム、活性炭担持ロジウム、アルミナ担持ロジウム、活性炭担持ルテニウム、アルミナ担持ルテニウム等が挙げられる。これら水素添加触媒は、単独で用いてもよく、または二種類以上を組合せて使用することもできる。特に、細胞培養の観点からは、ろ過で簡単に除去できる活性炭担持パラジウム、またはアルミナ担持パラジウムが好適に用いられる。
【００５３】
上記の主鎖のオレフィン部の水素添加処理をするに際して、不均一系または均一系水素添加触媒を使用する場合には、水素添加触媒の使用量は、水素添加触媒中の金属成分が、水素添加処理前のポリマー１００質量部に対して５×１０−４質量部〜１００質量部であることが好ましく、１×１０−２質量部〜３０質量部であることがより好ましい。
【００５４】
水素添加に用いられる溶媒としては、環状オレフィンポリマーを溶解し、かつ、溶媒自身が水素添加されないものであれば特に制限はなく、例えば、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ジブチルエーテル、ジメトキシエタンなどのエーテル類、酢酸エチル、酢酸プロピルまたは酢酸ブチル等のエステル類、ベンゼン、トルエン、キシレン、エチルベンゼンなどの芳香族炭化水素、ペンタン、ヘキサン、ヘプタンなどの脂肪族炭化水素、シクロペンタン、シクロヘキサン、メチルシクロヘキサン、ジメチルシクロヘキサン、デカリンなどの脂肪族環状炭化水素、メチレンジクロリド、クロロホルム、ジクロロエタン、ジクロロエチレン、テトラクロロエタン、クロロベンゼン、トリクロロベンゼンなどのハロゲン化炭化水素、フルオロベンゼン、ジフルオロベンゼン、ヘキサフルオロベンゼン、トリフルオロメチルベンゼン、メタキシレンヘキサフルオライド等のフッ素含有芳香族炭化水素、ペルフルオロヘキサン等のフッ素含有脂肪族炭化水素、ペルフルオロシクロデカリン等のフッ素含有脂肪族環状炭化水素、ペルフルオロ−２−ブチルテトラヒドロフラン等のフッ素含有エーテル類等が挙げられる。これらは単独で用いてもよく、２種以上を組合せて使用してもよい。
【００５５】
上記の主鎖のオレフィン部の水素添加反応は、水素圧力が常圧〜３０ＭＰａであることが好ましく、０．５〜２０ＭＰａであることがより好ましく、２〜１５ＭＰａであることがとくに好ましい。また、反応温度は、０〜３００℃の温度であることが好ましく、室温〜２５０℃であることがより好ましく、５０〜２００℃であることがとくに好ましい。水素添加反応の実施様式は、特に制限はないが、例えば、触媒を溶媒中に分散または溶解して行う方法、触媒をカラムなどに充填し、固定相としてポリマー溶液を流通させて行う方法などが挙げられる。
【００５６】
さらに、主鎖のオレフィン部の水素添加処理は、水素添加処理前の環状オレフィンポリマーの重合溶液を貧溶媒に析出させポリマーを単離した後に、再度溶媒に溶解して水素添加処理を行なっても、重合溶液からポリマーを単離することなく、上記の水素添加触媒で水素添加処理を行なってもよく、特に制限はない。
【００５７】
また、環状オレフィンポリマーのオレフィン部の水素添加率は５０％以上であることが好ましく、７０〜１００％であることがより好ましく、９０〜１００％であることがとくに好ましい。水素添加率を上記下限値以上とすることにより、オレフィン部において、光吸収に起因した劣化や成形時の加熱に起因した酸化が生じることを抑制し、水接触角などの基材表面の性状を良好なものとすることを容易にすることができる。
【００５８】
本実施形態において水素添加後の、特に、活性炭担持パラジウム、アルミナ担持パラジウムなどの固体触媒を好ましく用いる場合のポリマー溶液から環状オレフィンポリマーを取得する方法は、特に制限はないが、例えば、ろ過、遠心分離、デカンテーション等の方法でポリマーを取得し、撹拌下の貧溶媒に反応溶液を排出する方法、反応溶液中にスチームを吹き込むスチームストリッピング等の方法によってポリマーを析出させる方法、または、反応溶液から溶媒を加熱等によって蒸発除去する方法等が挙げられる。
【００５９】
また、不均一系金属担持触媒を利用して水素添加反応を実施した場合は、合成液をろ過して金属担持触媒をろ別した後に、上記した方法で環状オレフィンポリマーを取得する事ができる。なお、粒径の大きな触媒成分を予めデカンテーション、延伸分離などの方法でポリマー溶液中に沈降させ、上澄みを採取し、触媒成分を粗取りした溶液をろ過し、上記した方法で環状オレフィンポリマーを取得しても良い。特に、触媒成分を精密ろ過することが、好適であり、ろ過フィルターの目開きは、好ましくは、１０μｍ〜０．０５μｍ、特に好ましくは、１０μｍ〜０．１μｍ、さらに好ましくは、５μｍ〜０．１μｍである。
【００６０】
次に、医療器具の作製方法について説明する。
【００６１】
（フッ素含有環状オレフィンポリマーを用いた医療器具の作製方法）
本実施形態において上述のように製造したフッ素含有環状オレフィンポリマーから、細胞の培養、または細胞の検査のために用いる医療器具を作製する方法について記載する。たとえば、以下に示す方法により、本実施形態の基材表面の水接触角が７０°以上１２０°以下である医療器具を作製することが可能になる。本実施形態に係る医療器具は、たとえばフィルムやシート状の単層膜からなる基材や、他の材料の上にコート膜を形成して得られる基材を備える。このような基材を作製する方法としては、たとえば上記において例示した一般式（１）で表されるフッ素含有環状オレフィンポリマーを有機溶剤に溶解させて得られるワニスを用いた溶液キャスト法を挙げることができる。
【００６２】
以下に、溶液キャスト法を用いた基材の作製方法について説明する。
まず、上述したとおり、上記において例示した一般式（１）で表されるフッ素含有環状オレフィンポリマーを有機溶剤に溶解させてワニスを得る。
【００６３】
有機溶媒としては、特に制限はないが、例えば、メタキシレンヘキサフロライド、ベンゾトリフロライド、フルオロベンゼン、ジフルオロベンゼン、ヘキサフルオロベンゼン、トリフルオロメチルベンゼン、ビス（トリフルオロメチル）ベンゼン等のフッ素含有芳香族炭化水素、ペルフルオロヘキサン、ペルフルオロオクタン等のフッ素含有脂肪族炭化水素、ペルフルオロシクロデカリン等のフッ素含有脂肪族環状炭化水素、ペルフルオロ−２−ブチルテトラヒドロフラン等のフッ素含有エーテル類、クロロホルム、クロルベンゼン、トリクロルベンゼンなどのハロゲン化炭化水素、テトラヒドロフラン、ジブチルエーテル、１,２−ジメトキシエタン、ジオキサン等のエーテル類、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル等のエステル類、または、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、シクロヘキサノン等のケトン類等を挙げることができる。これらのうちから、溶解性、製膜性を考慮して選択することができる。また、これらは単独で用いてもよく、二種類以上を組み合わせて用いてもよい。特に、製膜性の観点からは、大気圧下で７０℃以上の沸点をもつ溶媒が好ましい。これにより、蒸発速度が速くなりすぎることを確実に抑えることができる。このため、塗布する際に部分的に溶媒が乾き始めてしまう等に起因して膜厚精度の悪化や膜表面におけるムラが生じてしまうことを、確実に抑制することができる。
【００６４】
フッ素含有環状オレフィンポリマーを溶解させる濃度は、１.０〜９９.０質量％であることが好ましく、５.０〜９０.０質量％であることがより好ましく、１０.０〜８０.０質量％であることがとくに好ましい。濃度は、ポリマーの溶解性、ろ過プロセスへの適応性、製膜性、フィルムの膜厚を考慮して選択してもよい。
【００６５】
さらに、本実施形態においてフィルム特性を損なわない範囲であれば、必要に応じて他の公知の成分を加えてよい。他の成分としては、老化防止剤、レベリング剤、濡れ性改良剤、界面活性剤、可塑剤等の改質剤、紫外線吸収剤、防腐剤、抗菌剤などの安定剤、光増感剤、シランカップリング剤等が挙げられる。
【００６６】
次いで、上記した方法で調製したワニスを、フィルターを通過させてろ過する。これによって、ワニスからポリマー不溶分、ゲル、異物等を大きく低減することができ、細胞を培養する培養器具や、細胞を利用した検査を行う検査器具としての基材表面を平滑に、そして疎水な表面性状を全面にわたって均一に形成できる。
【００６７】
ろ過フィルターの目開きは、好ましくは、１０μｍ〜０．０５μｍ、特に好ましくは、１０μｍ〜０．１μｍ、さらに好ましくは、５μｍ〜０．１μｍである。ろ過のプロセスは、孔径の大きなフィルターから小さなフィルターへポリマー溶液を送る多段プロセスでも、直接、孔径の小さなフィルターへワニスを送る単一プロセスでも良い。フィルターの材質は、テフロン（登録商標）、ＰＰ、ＰＥＳ、セルロースなどの有機材料からなるものでも、ガラス繊維、金属などの無機材料からなるものでも良く、細胞培養に悪影響を与えなければワニス特性、プロセス適応性から選ぶことができる。
【００６８】
また、ワニスをフィルターへ送る方法としては、圧力差を利用する方法でも、スクリューなどを介して機械的な駆動によってワニスをフィルターへ送液する方法でも良い。さらに、ろ過の温度は、フィルター性能、溶液粘度、ポリマーの溶解性を考慮した範囲で選ばれ、−１０〜２００℃であることが好ましく、０℃〜１５０℃であることがより好ましく、室温〜１００℃であることがとくに好ましい。
【００６９】
前記のようにワニスをろ過した後、ワニスからフィルムを製膜する。溶液キャスト法で製造する場合は、まず、支持体の上に、テーブルコート、スピンコート、ディップコート、ダイコート、スプレーコート、バーコート、ロールコート、カーテンフローコートなどの方法でポリマー溶液（ワニス）を塗布し、製膜する。支持体としては、ステンレス鋼、シリコン等の金属材料、ガラス、石英等の無機材料、ポリイミド、ポリアミド、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリフェニレンエーテル、ポリフェニレンスルフィド、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリレート、エポキシ樹脂、シリコーン樹脂等の樹脂材料等からなるものから選ぶことができる。
【００７０】
塗膜の乾燥は、加熱板の上に、溶液がキャストされた支持体を置いて加熱乾燥させても良く、加熱した乾燥炉に溶液をキャストした基材を入れて加熱乾燥させても良く、空気、窒素などの気体を加熱した温風を塗布膜にあてて乾燥させても良く、これらを組み合わせたプロセスを利用して乾燥させても良い。乾燥時の温度は１０〜２５０℃であることが好ましく、２０〜２２０℃であることがより好ましく、３０〜２００℃であることがとくに好ましく、ワニスの特性、フィルムの膜厚、基材の耐熱性を考慮して選ばれる。また、温度設定が２種類以上である多段の乾燥温度を設定して塗膜を乾燥させても良い。塗膜を乾燥する時間は、ワニス溶剤の沸点、フィルムの膜厚、プロセス要件を考慮した条件から選択する事ができる。これらによって、支持体上にフィルムが形成される。
【００７１】
フィルムやシート状の単層膜からなる基材を得る場合には、たとえば支持体からフィルムを剥離させることにより基材を製造することができる。支持体からのフィルムの剥離は、フィルムの端部に市販のテープを貼り付け、これに応力を加えて剥離することにより行ってもよく、水、溶剤などの液体をフィルムと支持体の接触界面に接触させて支持体表面とフィルムの接触面の表面張力の差を利用してフィルムを剥離することにより行っても良い。
【００７２】
他の材料の上にコート膜を形成して基材を得る場合には、たとえば前記工程のうち塗膜の乾燥工程までを実施することにより、支持体と、本実施形態のフッ素含有環状オレフィンポリマーからなるコート膜により構成される基材を製造することができる。この場合、支持体は、ＰＥＴ、アクリル樹脂などの有機材料、もしくはガラス、シリコンなどの無機材料から選択されることがとくに好ましい。
【００７３】
また、他の医療器具を構成する基材を作製する方法としては、溶融成形法により基材となるフィルムを作製する方法が挙げられる。溶融成形法でフィルム製造する方法としては、上記に例示したフッ素含有環状オレフィンポリマーを溶融混練機を用いてＴダイを経てフィルム化する方法や、インフレーション法等が挙げられる。Ｔダイによる溶融押出しフィルム製造においては、例えば、必要に応じて添加剤を配合した環状オレフィンポリマーを押出機に投入し、ガラス転移温度よりも好ましくは５０℃〜２００℃高い温度、より好ましくは８０℃〜１５０℃高い温度で溶融混練し、Ｔダイから押出し、冷却ロールなどで溶融ポリマーを冷却することでフィルムに加工することができる。また、本発明の効果を損なわない範囲で、紫外線吸収剤、酸化防止剤、難燃剤、帯電防止剤、着色剤等の添加剤を添加してもよい。
【００７４】
フッ素含有環状オレフィンポリマーを用いて作製されるフィルムの膜厚は、１〜１０００μｍであることが好ましく、５〜５００μｍであることがより好ましく、１０〜２００μｍであることがとくに好ましい。これらは、例えば、培養バッグ、培養プレート、培養シャーレなどの細胞培養に用いられる医療器具を作製する観点から好適な範囲となる。また、フィルムの膜厚は、それら器具を作製するプロセスに合わせて設定することができる。
【００７５】
溶液キャスト法、もしくは溶融成形法で製造したフィルムからは、ヒートシール法や、接着剤を利用したシール法などにより、例えば、袋、チューブなどの形態の医療器具を製造でき、また、溶融プレスなどの方法で、例えば、シャーレなどの形態の医療器具を製造することもできる。
【００７６】
さらには、上記に例示したフッ素含有環状オレフィンポリマーを用いて、例えば、射出成形、プレス成形、圧縮成形、射出圧縮成形、押出成形、ブロー成形などの方法により、細胞培養用のシャーレ、マルチウェルプレート、フラスコなどの培養器具を製造することもできる。この際の溶融成形温度は、３３０℃以下であることが好ましく、３００℃以下であることがより好ましく、２８０℃以下であることがとくに好ましい。この範囲の温度でポリマーを溶融し、成形することでポリマーの熱分解に伴う黄変や、分解ガスの発生などをより確実に抑制できる。さらに、本発明の効果を損なわない範囲で、紫外線吸収剤、酸化防止剤、難燃剤、帯電防止剤、着色剤等の添加剤を添加してもよい。
【００７７】
また、本実施形態に係るフッ素含有環状オレフィンポリマーを用いた医療器具は、たとえば、細胞を保持または接触させる一面に凹凸構造を形成したフィルムやシート状の単層膜からなる基材や、他の材料の上に凹凸構造を形成したフィルムやシート状の単層膜を接着剤または粘着剤などで貼り付けて形成して得られる基材を備えてもよく、特に１２１°〜１６０°の水接触角を実現するために好ましく用いられる。
【００７８】
この凹凸構造のサイズは、凸凸間距離が４０ｎｍ〜９０μｍのパターンを賦型したものであり、好ましくは６０ｎｍ〜８０μｍ、特に好ましくは８０ｎｍ〜７０μｍとすることで水接触角を所望の範囲とすることができ、形状は特に限定されない。
【００７９】
ここで、凹凸構造は、スクリーン印刷、エンボス加工、サブミクロンインプリント、ナノインプリントなど様々な方法で凹凸構造を形成してもよい。
【００８０】
特に、凹凸構造をインプリント方法で形成するときは、石英、シリコン、ニッケル、レジストなどからなるモールドの様々なパターンに、たとえば上記において例示した一般式（１）で表される構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーを有機溶剤に溶解させて得られるワニスを塗布する溶液キャスト法を挙げることができる。
【００８１】
以下に、溶液キャスト法によるワニスからの凹凸構造を形成した基材の作製方法について説明する。
【００８２】
まず、上述した溶液キャスト法を用いた基材の作製方法と同様な方法で、一般式（１）で表される構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーを有機溶剤に溶解させてワニスを調製し、フィルターを通過させてろ過を行う。
【００８３】
次に、上記ワニスと凹凸構造を形成したモールドのパターン面を接触させ、溶剤を蒸発させることによってモールドのパターンを転写することにより凹凸構造を形成した基材を得ることができる。
【００８４】
本実施形態の凹凸構造を形成した基材の作製に用いられる表面に微細パターンを形成させたモールドの基材材質としては、ニッケル、鉄、ステンレス鋼、ゲルマニウム、チタン、シリコン等の金属材料、ガラス、石英、アルミナ等の無機材料、ポリイミド、ポリアミド、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリフェニレンエーテル、ポリフェニレンスルフィド、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアリレート、エポキシ樹脂、シリコーン樹脂等の樹脂材料、ダイヤモンド、黒鉛等の炭素材料等が挙げられる。
【００８５】
本実施形態の一般式（１）で表される構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーを有機溶剤に溶解したワニスと、モールドとを接触させる方法としては特に制限はなく、例えば、テーブルコート、スピンコート、ダイコート、スプレーコート、バーコート、ロールコートなどの方法でモールドの微細なパターン面の上にポリマー溶液（ワニス）を塗布する方法、または、ステンレス鋼、シリコン等の金属材料、ガラス、石英等の無機材料、ポリイミド、ポリアミド、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリフェニレンエーテル、ポリフェニレンスルフィド、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアリレート、エポキシ樹脂、シリコーン樹脂等の樹脂材料等の基材の上にテーブルコート、スピンコート、 ダイコート、スプレーコート、バーコート、ロールコートなどの方法でポリマー溶液を塗布し、モールドの微細なパターン面をそれに被せて接触させる方法のいずれであってもよい。
【００８６】
具体的には、（１）微細パターンを有するモールド表面に、フッ素含有環状オレフィンポリマーと有機溶剤からなる溶液(ワニス)を塗布する工程と、前記溶液から溶剤を蒸発させる工程と、を含む方法、（２）支持体（基材）にフッ素含有環状オレフィンポリマーと有機溶剤からなる溶液（ワニス）を塗布する工程と、塗布層の上面を微細パターンが形成されたモールド表面で押圧する工程と、前記塗布層から溶剤を蒸発させる工程と、を含む方法、等を挙げることができる。尚、（２）の方法においては、塗布層から溶剤を蒸発させた後、モールドで押圧することもできる。
【００８７】
転写体から溶剤を蒸発させ、乾燥する温度は通常１０〜３００℃であり、好ましくは５０〜２００℃の範囲であり、圧力は通常１３３Ｐａから大気圧の範囲であり、さらに、乾燥時間は通常１０分〜１２０時間であり、好ましくは３０分〜４８時間の範囲で実施することができる。また、乾燥温度、圧力および時間はそれぞれの設定で段階的に変化させても良い。
【００８８】
本実施形態においては、溶媒を蒸発させてモールド上に転写体を形成させた後、この転写体を剥離する工程を備える。転写体の剥離は、ガラス転移温度以下の温度で行なうことが好ましく、さらに、（ガラス転移温度−２０℃）以下の温度で剥離することがより好ましく、これによって転写体に形成されたパターン形状を精度よく保持し、容易に剥離することができる。剥離の方法は、モールドから剥離によって離型しても、または、モールドと転写体を例えば水などの媒体と浸漬、スプレーなどの方法で接触させた後に表面張力を利用して剥離することができる。また、転写体背面に樹脂材、或いは、ガラス等の無機材を貼り付け該基板を支持体に剥離しても良い。
【００８９】
また、本実施形態の凹凸構造を形成した細胞を保持または接触させる前記一面の基材は、一般式（１）で表される構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーからなるフィルムを、モールドのパターン面と接触させて押圧することによってモールドのパターンを転写させることにより得ることもできる。
【００９０】
例えば、フィルムにガラス転移温度以上に加熱したモールドを圧着する方法、または、フィルムをガラス転移温度以上に加熱しモールドを圧着させる方法、または、フィルム及びモールドをガラス転移温度以上に加熱し、モールドを圧着する方法が好ましく、加熱温度は、ガラス転移温度〜（ガラス転移温度＋１００℃）の範囲であり、好ましくは、（ガラス転移温度＋５℃）〜（ガラス転移温度＋５０℃）であり、また、圧着圧力は、通常１ＭＰａ〜１００ＭＰａであり、好ましくは、１ＭＰａ〜６０ＭＰａの範囲である。これにより、転写体に形成されたパターン形状を精度よく形成することができる。
【００９１】
圧着によってモールド上に形成させた転写体の剥離は、ガラス転移温度以下の温度で行なうことが好ましく、さらに、（ガラス転移温度−２０℃）以下の温度で剥離することがより好ましい。これによって転写体に形成されたパターン形状を精度よく保持し、容易に離脱することができる。剥離の方法は、モールドから剥離によって剥離しても、または、モールドと転写体を例えば水などの媒体と浸漬、スプレーなどの方法で接触させた後に表面張力を利用して剥離することができる。また、転写体背面に樹脂材、或いは、ガラス等の無機材を貼り付け該基板を支持体に剥離しても良い。
【００９２】
さらに、溶融成形法により凹凸構造を形成した基材となるフィルムを作製する方法が挙げられる。溶融成形法でフィルム製造する方法としては、上記に例示したフッ素含有環状オレフィンポリマーを溶融混練機を用いてＴダイを経てフィルム化する方法が挙げられる。Ｔダイによる溶融押出しフィルム製造においては、例えば、必要に応じて添加剤を配合した環状オレフィンポリマーを押出機に投入し、ガラス転移温度よりも好ましくは５０℃〜２００℃高い温度、より好ましくは８０℃〜１５０℃高い温度で溶融混練し、Ｔダイから押出し、冷却ロールで送りながらポリマーのガラス転移温度以上に加熱した表面に微細なパターンを有するロール形状のモールドをフィルムに押し当てることで凹凸構造を形成したフィルムに加工する。この際の、表面に微細なパターンを有するロールの加熱温度は、上述のフィルムとモールドを加熱圧着することにより凹凸構造を形成する際の加熱温度と同じ範囲で用いられる。また、本発明の効果を損なわない範囲で、紫外線吸収剤、酸化防止剤、難燃剤、帯電防止剤、着色剤等の添加剤を添加してもよい。
【００９３】
フッ素含有環状オレフィンポリマーを用いて作製される凹凸構造を形成した細胞を保持または接触させる前記一面の基材のフィルムの膜厚は、１〜１０００μｍであることが好ましく、５〜５００μｍであることがより好ましく、１０〜２００μｍであることがとくに好ましい。これらは、例えば、培養バッグ、培養プレート、培養シャーレなどの細胞培養に用いられる医療器具を作製する観点から好適な範囲となる。また、フィルムの膜厚は、それら器具を作製するプロセスに合わせて設定することができる。
【００９４】
溶液キャスト法、加熱圧着法もしくは溶融成形法で製造した凹凸構造を形成したフィルムまたはシートからは、ヒートシール法や、接着剤を利用したシール法などにより、例えば、袋、チューブなどの形態の医療器具を製造できる。また、ポリスチレン、ポリエチレン、金属などの他の材料で作製された、例えばシャーレ、マルチウェルプレート、フラスコなどの医療器具の細胞を保持または接触させる基材の表面に、本実施形態の凹凸構造を形成したフィルム、またはシートを貼り付けた形態の医療器具を製造することもできる。
【００９５】
（フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物を用いた医療器具の作製方法）
次に、本実施形態においてはフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物から、細胞の培養、または細胞の検査のために用いる医療器具を作製する方法について記載する。たとえば、以下に示す方法により、本実施形態の基材表面の水接触角が７０°以上１２０°以下である医療器具を作製することが可能になる。
【００９６】
フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物は、上記において例示した一般式（１）で表されるフッ素含有環状オレフィンポリマー（以下、フッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）とも呼ぶ）と、光硬化性化合物（Ｂ）と、光硬化開始剤（Ｃ）とを含む。本実施形態によれば、このようなフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物を用いて、基材の一面に細胞を接触または保持させる医療器具の当該基材の少なくとも一面を形成することができる。
これにより、各種部材との強固な密着性を発現しつつ、細胞培養バッグ、またはプレートなどの各種培養器具の細胞を接触または保持する基材表面の性状を改質することができ、細胞の接着および付着を抑制しつつ増殖させることが可能な医療器具を提供することができる。
【００９７】
本実施形態に係る医療器具は、たとえばフィルムやシート状の単層膜からなる基材や、他の材料の上にコート膜を形成して得られる基材を備える。このような基材を作製する方法としては、たとえばフッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）を含むフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物を有機溶剤に溶解させて得られるワニスを用いた溶液キャスト法を挙げることができる。
【００９８】
以下に、溶液キャスト法を用いた基材の作製方法について説明する。
まず、上述したとおり、フッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）を含むフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物を有機溶剤に溶解させてワニスを得る。
【００９９】
本実施形態に係るフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物のワニスは、たとえばフッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）を予め任意の濃度で溶液に調製し、それにフッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）と後述する光硬化性化合物（Ｂ）の質量比（Ａ）／（Ｂ）が、好ましくは９９.９／０.１〜５０／５０、より好ましくは９９.９／０.１〜５５／４５、とくに好ましくは９９.９／０.１〜６０／４０となるように光硬化性化合物（Ｂ）を加え、混合することで得られる。
【０１００】
フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物を調製する際に用いる有機溶剤は、特に制限はないが、たとえばメタキシレンヘキサフロライド、ベンゾトリフロライド、フルオロベンゼン、ジフルオロベンゼン、ヘキサフルオロベンゼン、トリフルオロメチルベンゼン、ビス（トリフルオロメチル）ベンゼン、メタキシレンヘキサフルオリド等のフッ素含有芳香族炭化水素、ペルフルオロヘキサン、ペルフルオロオクタン等のフッ素含有脂肪族炭化水素、ペルフルオロシクロデカリン等のフッ素含有脂肪族環状炭化水素、ペルフルオロ−２−ブチルテトラヒドロフラン等のフッ素含有エーテル類、クロロホルム、クロルベンゼン、トリクロルベンゼンなどのハロゲン化炭化水素、テトラヒドロフラン、ジブチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、ジオキサン、プロピレングリコールモノメチルエーテル、ジプロピレングリコールモノメチルエーテル、プロピレングリコールモノメチルエーテルアセテート等のエーテル類、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル等のエステル類、または、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、シクロヘキサノン等のケトン類、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、２−メトキシエタノール、３−メトキシプロパノール等のアルコール類などが挙げられる。これらのうちから、溶解性、製膜性を考慮して選択することができる。また、これらは単独で用いてもよく、二種類以上を組み合わせて用いてもよい。特に、製膜性の観点からは、大気圧下で７０℃以上の沸点をもつ溶媒が好ましい。これにより、蒸発速度が速くなりすぎることを確実に抑えることができる。このため、塗布する際に部分的に溶媒が乾き始めてしまう等に起因して膜厚精度の悪化や膜表面におけるムラが生じてしまうことを、確実に抑制することができる。
【０１０１】
なお、フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物には、必要に応じて、フッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）、光硬化性化合物（Ｂ）、および光硬化開始剤（Ｃ）以外の他の公知の成分を添加することもできる。このような成分としては、例えば、老化防止剤、レベリング剤、濡れ性改良剤、界面活性剤、可塑剤等の改質剤、紫外線吸収剤、防腐剤、抗菌剤などの安定剤、光増感剤、シランカップリング剤等が挙げられる。
【０１０２】
（光硬化性化合物（Ｂ））
フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物において、フッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）と光硬化性化合物（Ｂ）の質量比（Ａ）／（Ｂ）は、９９.９／０.１〜５０／５０であることが好ましく、９９.９／０.１〜５５／４５であることがより好ましく、９９.９／０.１〜６０／４０であることがさらに好ましい。光硬化性化合物（Ｂ）としては、反応性二重結合基を有する化合物、カチオン重合可能な開環重合性化合物等が挙げられる。好ましくは、コートして用いる際の硬化後の体積収縮にともなう基材の変形の抑制や、フッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）との相溶性の観点からカチオン重合可能な開環重合性化合物が選ばれる。
【０１０３】
反応性二重結合基を有する化合物およびカチオン重合可能な開環重合性化合物は、１分子中に反応性基を１個有していてもよく、複数個有していてもよい。また、光硬化性化合物（Ｂ）中には、異なる反応性基数の化合物を任意の割合で混合して用いても良い。さらに、光硬化性化合物（Ｂ）として、反応性二重結合基を有する化合物とカチオン重合可能な開環重合性化合物を任意の割合で混合したものを用いても良い。これらにより、本実施形態のフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物を、他の材料からなる部材と寸法精度良く、かつ強固に密着させる事が可能になる。また、本実施形態の効果を発現可能な細胞培養、もしくは細胞を検査するための基材としての医療器具を好適に得る事ができる。
【０１０４】
光硬化性化合物（Ｂ）のうち、カチオン重合可能な開環重合性化合物としては、例えば、シクロヘキセンエポキシド、ジシクロペンタジエンオキサイド、リモネンジオキサイド、４−ビニルシクロヘキセンジオキサイド、３，４−エポキシシクロヘキシルメチル−３'，４'−エポキシシクロヘキサンカルボキシレート、ジ（３，４−エポキシシクロヘキシル）アジペート、（３，４−エポキシシクロヘキシル）メチルアルコール、（３，４−エポキシ−６−メチルシクロヘキシル）メチル−３，４−エポキシ−６−メチルシクロヘキサンカルボキシレート、エチレン−１，２−ジ（３，４−エポキシシクロヘキサンカルボン酸）エステル、（３，４−エポキシシクロヘキシル）エチルトリメトキシシラン、フェニルグリシジルエーテル、ジシクロヘキシル−３，３´−ジエポキシド、１，７−オクタジエンジエポキシド、ビスフェノールＡ型エポキシ樹脂、ハロゲン化ビスフェノールＡ型エポキシ樹脂、ビスフェノールＦ型エポキシ樹脂、ｏ−、ｍ−、ｐ−クレゾールノボラック型エポキシ樹脂、フェノールノボラック型エポキシ樹脂、多価アルコールのポリグリシジルエーテル、３，４−エポキシシクロヘキセニルメチル−３´，４´−エポキシシクロヘキセンカルボキシレートといった脂環式エポキシ樹脂あるいは水素添加ビスフェノールＡのグリシジルエーテル等のエポキシ化合物等の、エポキシ化合物類；さらに、３−メチル−３−（ブトキシメチル）オキセタン、３−メチル−３−（ペンチロキシメチル）オキセタン、３−メチル−３−（ヘキシロキシメチル）オキセタン、３−メチル−３−（２−エチルヘキシロキシメチル）オキセタン、３−メチル−３−（オクチロキシメチル）オキセタン、３−メチル−３−（デカニロキシメチル）オキセタン、３−メチル−３−（ドデカニロキシメチル）オキセタン、３−メチル−３−（フェノキシメチル）オキセタン、３−エチル−３−（ブトキシメチル）オキセタン、３−エチル−３−（ペンチロキシメチル）オキセタン、３−エチル−３−（ヘキシロキシメチル）オキセタン、３−エチル−３−（２−エチルヘキシロキシメチル）オキセタン、３−エチル−３−（オクチロキシメチル）オキセタン、３−エチル−３−（デカニロキシメチル）オキセタン、３−エチル−３−（ドデカニロキシメチル）オキセタン、３−（シクロヘキシロキシメチル）オキセタン、３−メチル−３−（シクロヘキシロキシメチル）オキセタン、３−エチル−３−（シクロヘキシロキシメチル）オキセタン、３−エチル−３−（フェノキシメチル）オキセタン、３，３−ジメチルオキセタン、３−ヒドロキシメチルオキセタン、３−メチル−３−ヒドロキシメチルオキセタン、３−エチル−３−ヒドロキシメチルオキセタン、３−エチル−３−フェノキシメチルオキセタン、３−ｎ−プロピル−３−ヒドロキシメチルオキセタン、３−イソプロピル−３−ヒドロキシメチルオキセタン、３−ｎ−ブチル−３−ヒドロキシメチルオキセタン、３−イソブチル−３−ヒドロキシメチルオキセタン、３−ｓｅｃ−ブチル−３−ヒドロキシメチルオキセタン、３−ｔｅｒｔ−ブチル−３−ヒドロキシメチルオキセタン、３−エチル−３−（２−エチルヘキシル）オキセタン等があり、オキセタニル基を２個以���有する化合物としてビス（３−エチル−３−オキセタニルメチル）エーテル、１，２−ビス［（３−エチル−３−オキセタニルメトキシ）］エタン、１，３−ビス［（３−エチル−３−オキセタニルメトキシ）］プロパン、１，３−ビス［（３−エチル−３−オキセタニルメトキシ）］−２，２−ジメチル−プロパン、１，４−ビス（３−エチル−３−オキセタニルメトキシ）ブタン、１，６−ビス（３−エチル−３−オキセタニルメトキシ）ヘキサン、１，４−ビス［（３−メチル−３−オキセタニル）メトキシ］ベンゼン、１，３−ビス［（３−メチル−３−オキセタニル）メトキシ］ベンゼン、１，４−ビス｛［（３−メチル−３−オキセタニル）メトキシ］メチル｝ベンゼン、１，４−ビス｛［（３−メチル−３−オキセタニル）メトキシ］メチル｝シクロヘキサン、４，４´−ビス｛［（３−メチル−３−オキセタニル）メトキシ］メチル｝ビフェニル、４，４´−ビス｛［（３−メチル−３−オキセタニル）メトキシ］メチル｝ビシクロヘキサン、２，３−ビス［（３−メチル−３−オキセタニル）メトキシ］ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、２，５−ビス［（３−メチル−３−オキセタニル）メトキシ］ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、２，６−ビス［（３−メチル−３−オキセタニル）メトキシ］ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、１，４−ビス［（３−エチル−３−オキセタニル）メトキシ］ベンゼン、１，３−ビス［（３−エチル−３−オキセタニル）メトキシ］ベンゼン、１，４−ビス｛［（３−エチル−３−オキセタニル）メトキシ］メチル｝ベンゼン、１，４−ビス｛［（３−エチル−３−オキセタニル）メトキシ］メチル｝シクロヘキサン、４，４´−ビス｛［（３−エチル−３−オキセタニル）メトキシ］メチル｝ビフェニル、４，４'−ビス｛［（３−エチル−３−オキセタニル）メトキシ］メチル｝ビシクロヘキサン、２，３−ビス［（３−エチル−３−オキセタニル）メトキシ］ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、２，５−ビス［（３−エチル−３−オキセタニル）メトキシ］ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、２，６−ビス［（３−エチル−３−オキセタニル）メトキシ］ビシクロ［２．２．１］ヘプタン等のオキセタン化合物類が挙げられる。これらは、単独で用いても、２種以上組み合わせで用いてもよい。
【０１０５】
また、光硬化性化合物（Ｂ）のうち、反応性二重結合基を有する化合物としては、例えば、フルオロジエン（ＣＦ２＝ＣＦＯＣＦ２ＣＦ２ＣＦ＝ＣＦ２、ＣＦ２＝ＣＦＯＣＦ２ＣＦ（ＣＦ３）ＣＦ＝ＣＦ２、ＣＦ２＝ＣＦＣＦ２Ｃ（ＯＨ）（ＣＦ３）ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、ＣＦ２＝ＣＦＣＦ２Ｃ（ＯＨ）（ＣＦ３）ＣＨ＝ＣＨ２、ＣＦ２＝ＣＦＣＦ２Ｃ（ＣＦ３）（ＯＣＨ２ＯＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、ＣＦ２＝ＣＦＣＨ２Ｃ（Ｃ（ＣＦ３）２ＯＨ）（ＣＦ３）ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２等）などのオレフィン類；ノルボルネン、ノルボルナジエンなどの環状オレフィン類；シクロヘキシルメチルビニルエーテル、イソブチルビニルエーテル、シクロヘキシルビニルエーテル、エチルビニルエーテルなどのアルキルビニルエーテル類；酢酸ビニルなどのビニルエステル類；（メタ）アクリル酸、フェノキシエチルアクリレート、ベンジルアクリレート、ステアリルアクリレート、ラウリルアクリレート、２−エチルヘキシルアクリレート、アリルアクリレート、１，３−ブタンジオールジアクリレート、１，４−ブタンジオールジアクリレート、１，６−ヘキサンジオールジアクリレート、トリメチロールプロパントリアクリレート、ペンタアエリスリトールトリアクリレート、ジペンタエリスリトールヘキサアクリレート、エトキシエチルアクリレート、メトキシエチルアクリレート、グリシジルアクリレート、テトラヒドロフルフリールアクリレート、ジエチレングリコールジアクリレート、ネオペンチルグリコールジアクリレート、ポリオキシエチレングリコールジアクリレート、トリプロピレングリコールジアクリレート、２−ヒドロキシエチルアクリレート、２−ヒドロキシプロピルアクリレート、４ − ヒドロキシブチルビニルエーテル、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエチルアクリレート、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルアクリレート、Ｎ−ビニルピロリドン、ジメチルアミノエチルメタクリレートなどの（メタ）アクリル酸及びその誘導体またはそれらのフッ素含有アクリレート類などが挙げられる。これらは、単独で用いても、２種以上組み合わせで用いてもよい。
【０１０６】
（光硬化開始剤（Ｃ））
光硬化開始剤（光重合開始剤）（Ｃ）としては、光の照射によってカチオンを生成する光カチオン開始剤、光の照射によってラジカルを生成する光ラジカル開始剤、などが挙げられる。光硬化開始剤（Ｃ）の使用量は、光硬化性化合物（Ｂ）１００質量部に対して０.０５質量部以上であることが好ましく、０.１〜１０質量部であることがより好ましい。
【０１０７】
光硬化開始剤（Ｃ）のうち、光の照射によってカチオンを生成する光カチオン開始剤としては、光照射により、前記カチオン重合可能な開環重合性化合物類のカチオン重合を開始させる化合物であれば特に限定はないが、例えば、オニウム陽イオンと対を成す陰イオンとのオニウム塩のように光反応しルイス酸を放出する化合物が好ましい。
オニウム陽イオンの具体例としては、ジフェニルヨードニウム、４−メトキシジフェニルヨードニウム、ビス（４−メチルフェニル）ヨードニウム、ビス（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）ヨードニウム、ビス（ドデシルフェニル）ヨードニウム、トリフェニルスルホニウム、ジフェニル−４−チオフェノキシフェニルスルホニウム、ビス〔４−（ジフェニルスルフォニオ）−フェニル〕スルフィド、ビス〔４−（ジ（４−（２−ヒドロキシエチル）フェニル）スルホニオ）−フェニル〕スルフィド、η５−２，４−（シクロペンタジェニル）〔１，２，３，４，５，６−η−（メチルエチル）ベンゼン〕−鉄（１＋）等が挙げられる。また、オニウム陽イオン以外に、過塩素酸イオン、トリフルオロメタンスルホン酸イオン、トルエンスルホン酸イオン、トリニトロトルエンスルホン酸イオン等が挙げられる。また、これらの光カチオン開始剤は、単独で用いても、２種以上組み合わせて用いてもよい。
一方、陰イオンの具体例としては、テトラフルオロボレート、ヘキサフルオロホスフェート、ヘキサフルオロアンチモネート、ヘキサフルオロアルセネート、ヘキサクロロアンチモネート、テトラ（フルオロフェニル）ボレート、テトラ（ジフルオロフェニル）ボレート、テトラ（トリフルオロフェニル）ボレート、テトラ（テトラフルオロフェニル）ボレート、テトラ（ペンタフルオロフェニル）ボレート、テトラ（ペルフルオロフェニル）ボレート、テトラ（トリフルオロメチルフェニル）ボレート、テトラ〔ジ（トリフルオロメチル）フェニル〕ボレート等が挙げられる。また、これらの光カチオン開始剤は、単独で用いても、２種以上組み合わせて用いてもよい。
【０１０８】
さらに好ましく用いられる光カチオン開始剤の具体例としては、例えば、イルガキュアー２５０（ＢＡＳＦ社製）、イルガキュアー７８４（ＢＡＳＦ社製）、エサキュアー１０６４（ランベルティー社製）、ＷＰＩ−１２４（和光純薬工業社製）、ＣＹＲＡＵＲＥ ＵＶＩ６９９０（ユニオンカーバイト日本社製）、ＣＰＩ−１００Ｐ（サンアプロ社製）、アデカオプトマーＳＰ−１７２（ＡＤＥＫＡ社製）、アデカオプトマーＳＰ−１７０（ＡＤＥＫＡ社製）、アデカオプトマーＳＰ−１５２（ＡＤＥＫＡ社製）、アデカオプトマーＳＰ−１５０（ＡＤＥＫＡ社製）が挙げられる。また、これらの光カチオン開始剤は、単独で用いても、２種以上組み合わせて用いてもよい。
【０１０９】
また、光硬化開始剤（Ｃ）のうち、光の照射によってラジカルを生成する光ラジカル開始剤としては、例えば、アセトフェノン、ｐ−ｔｅｒｔ−ブチルトリクロロアセトフェノン、クロロアセトフェノン、２，２−ジエトキシアセトフェノン、ヒドロキシアセトフェノン、２，２−ジメトキシ−２'−フェニルアセトフェノン、２−アミノアセトフェノン、ジアルキルアミノアセトフェノンなどのアセトフェノン類；ベンゾイン、ベンゾインメチルエーテル、ベンゾインエチルエーテル、ベンゾインイソプロピルエーテル、ベンゾインイソブチルエーテル、１−ヒドロキシシクロヘキシルフェニルケトン、２−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニル−２−メチルプロパン−１−オン、１−（４−イソプロピルフェニル）−２−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−１−オンなどのベンゾイン類；ベンゾフェノン、ベンゾイル安息香酸、ベンゾイル安息香酸メチル、メチル−ｏ−ベンゾイルベンゾエート、４−フェニルベンゾフェノン、ヒドロキシベンゾフェノン、ヒドロキシプロピルベンゾフェノン、アクリルベンゾフェノン、４，４´−ビス（ジメチルアミノ）ベンゾフェノンなどのベンゾフェノン類；チオキサントン、２−クロロチオキサントン、２−メチルチオキサントン、ジエチルチオキサントン、ジメチルチオキサントンなどのチオキサントン類；ペルフルオロ（ｔｅｒｔ−ブチルペルオキシド）、ペルフルオロベンゾイルペルオキシドなどのフッ素系ペルオキド類；α−アシルオキシムエステル、ベンジル−（ｏ−エトキシカルボニル）−α−モノオキシム、アシルホスフィンオキサイド、グリオキシエステル、３−ケトクマリン、２−エチルアンスラキノン、カンファーキノン、テトラメチルチウラムスルフィド、アゾビスイソブチロニトリル、ベンゾイルペルオキシド、ジアルキルペルオキシド、ｔｅｒｔ−ブチルペルオキシピバレート等が挙げられる。
さらに好ましく用いられる光ラジカル開始剤の具体例としては、例えば、イルガキュアー６５１（ＢＡＳＦ社製）、イルガキュアー１８４（ＢＡＳＦ社製）、ダロキュアー１１７３（ＢＡＳＦ社製）、ベンゾフェノン、４−フェニルベンゾフェノン、イルガキュアー５００（ＢＡＳＦ社製）、イルガキュアー２９５９（ＢＡＳＦ社製）、イルガキュアー１２７（ＢＡＳＦ社製）、イルガキュアー９０７（ＢＡＳＦ社製）、イルガキュアー３６９（ＢＡＳＦ社製）、イルガキュアー１３００（ＢＡＳＦ社製）、イルガキュアー８１９（ＢＡＳＦ社製）、イルガキュアー１８００（ＢＡＳＦ社製）、ダロキュアーＴＰＯ（ＢＡＳＦ社製）、ダロキュアー４２６５（ＢＡＳＦ社製）、イルガキュアーＯＸＥ０１（ＢＡＳＦ社製）、イルガキュアーＯＸＥ０２（ＢＡＳＦ社製）、エサキュアーＫＴ５５（ランベルティー社製）、エサキュアーＫＩＰ１５０（ランベルティー社製）、エサキュアーＫＩＰ１００Ｆ（ランベルティー社製）、エサキュアーＫＴ３７（ランベルティー社製）、エサキュアーＫＴＯ４６（ランベルティー社製）、エサキュアー１００１Ｍ（ランベルティー社製）、エサキュアーＫＩＰ／ＥＭ（ランベルティー社製）、エサキュアーＤＰ２５０（ランベルティー社製）、エサキュアーＫＢ１（ランベルティー社製）、２，４−ジエチルチオキサントンが挙げられる。これらの中で、さらに好ましく用いられる光ラジカル重合開始剤としては、イルガキュアー１８４（ＢＡＳＦ社製）、ダロキュアー１１７３（ＢＡＳＦ社製）、イルガキュアー５００（ＢＡＳＦ社製）、イルガキュアー８１９（ＢＡＳＦ社製）、ダロキュアーＴＰＯ（ＢＡＳＦ社製）、エサキュアーＫＩＰ１００Ｆ（ランベルティー社製）、エサキュアーＫＴ３７（ランベルティー社製）およびエサキュアーＫＴＯ４６（ランベルティー社製）が挙げられる。また、これらの光ラジカル開始剤は、単独で用いても、２種以上組み合わせて用いてもよい。
【０１１０】
光硬化性化合物（Ｂ）および光硬化開始剤（Ｃ）は、これらを含有する光硬化性組成物として用いることができる。光硬化性組成物は、光硬化開始剤（Ｃ）を前記の光硬化性化合物（Ｂ）に溶解して得ることができ、光硬化性化合物（Ｂ）と光硬化開始剤（Ｃ）を共に有機溶剤に溶解して得ることもできる。さらに、必要に応じて第３成分として他の公知の成分、例えば、老化防止剤、レベリング剤、濡れ性改良剤、界面活性剤、可塑剤等の改質剤、紫外線吸収剤、防腐剤、抗菌剤などの安定剤、光増感剤、シランカップリング剤等を加えてもよい。
【０１１１】
光硬化性組成物を調製するために使用する有機溶媒としては、特に制限はないが、例えば、メタキシレンヘキサフロライド、ベンゾトリフロライド、フルオロベンゼン、ジフルオロベンゼン、ヘキサフルオロベンゼン、トリフルオロメチルベンゼン、ビス（トリフルオロメチル）ベンゼン、メタキシレンヘキサフルオリド等のフッ素含有芳香族炭化水素、ペルフルオロヘキサン、ペルフルオロオクタン等のフッ素含有脂肪族炭化水素、ペルフルオロシクロデカリン等のフッ素含有脂肪族環状炭化水素、ペルフルオロ−２−ブチルテトラヒドロフラン等のフッ素含有エーテル類、クロロホルム、クロルベンゼン、トリクロルベンゼンなどのハロゲン化炭化水素、テトラヒドロフラン、ジブチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、ジオキサン、プロピレングリコールモノメチルエーテル、ジプロピレングリコールモノメチルエーテル、プロピレングリコールモノメチルエーテルアセテート等のエーテル類、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル等のエステル類、または、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、シクロヘキサノン等のケトン類、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、２−メトキシエタノール、３−メトキシプロパノール等のアルコール類などが挙げられる。これらのうちから溶解性、製膜性を考慮して選択でき、フッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）を溶解する有機溶剤と同一でも異なってもよく、二種類以上を組み合わせて用いてもよい。特に、製膜性の観点から大気圧下で７０℃以上の沸点をもつ溶媒が好ましい。これにより、蒸発速度が速くなりすぎることを確実に抑えることができる。このため、塗布する際に部分的に溶媒が乾き始めてしまう等に起因して膜厚精度の悪化や膜表面におけるムラが生じてしまうことを、確実に抑制することができる。
【０１１２】
本実施形態におけるフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物は、主鎖に炭化水素構造、側鎖にフッ素含有脂肪族環構造を有する特定のフッ素含有環状オレフィンポリマーを用いているので、極性が大きく光硬化性化合物および光硬化開始剤との相溶性良く、硬化後の形態で透明形状の基材を作製することもできる。また、フッ素含有環状オレフィンポリマーを基盤とする材料であることで、基材表面の水接触角を７０°〜１６０°に保つことができる。これにより、各種細胞の培養または各種細胞の検査のための細胞が、フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物からなる基材に接着または付着が抑制されつつ増殖することができる。
また、フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物は硬化後の形態で、光硬化性化合物が３次元の網目構造を形成することで、表面硬度を硬く改質することができる。このため、医療器具等に実装した場合の傷付き性を改善でき、細胞培養や細胞の検査のための基材として用いる際に、利便性良く使用することができる。
【０１１３】
次いで、上記した方法で調製したワニスを、フィルターを通過させてろ過する。これによって、ワニスからポリマー不溶分、ゲル、異物等を大きく低減することができ、細胞を培養する培養器具としての基材表面を平滑に、そして疎水な表面性状を全面にわたって均一に形成できる。
【０１１４】
ろ過フィルターの目開きは、好ましくは、１０μｍ〜０．０５μｍ、特に好ましくは、１０μｍ〜０．１μｍ、さらに好ましくは、５μｍ〜０．１μｍである。ろ過のプロセスは、孔径の大きなフィルターから小さなフィルターへポリマー溶液を送る多段プロセスでも、直接、孔径の小さなフィルターへワニスを送る単一プロセスでも良い。フィルターの材質は、テフロン（登録商標）、ＰＰ、ＰＥＳ、セルロースなどの有機材料からなるものでも、ガラス繊維、金属などの無機材料からなるものでも良く、細胞培養に悪影響を与えなければワニス特性、プロセス適応性から選ぶことができる。
【０１１５】
また、ワニスをフィルターへ送る方法としては、圧力差を利用する方法でも、スクリューなどを介して機械的な駆動によってワニスをフィルターへ送液する方法でも良い。さらに、ろ過の温度は、フィルター性能、溶液粘度、光硬化性化合物の熱安定性、ポリマーの溶解性を考慮した範囲で選ばれ、−１０〜２００℃であることが好ましく、０℃〜１５０℃であることがより好ましく、室温〜１００℃の範囲であることがとくに好ましい。
【０１１６】
前記のようにワニスをろ過した後、ワニスからフィルムを製膜する。溶液キャスト法で製造する場合は、まず、支持体の上に、テーブルコート、スピンコート、ディップコート、ダイコート、スプレーコート、バーコート、ロールコート、カーテンフローコートなどの方法でポリマー溶液（ワニス）を塗布し、製膜する。支持体としては、ステンレス鋼、シリコン等の金属材料、ガラス、石英等の無機材料、ポリイミド、ポリアミド、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリフェニレンエーテル、ポリフェニレンスルフィド、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリレート、エポキシ樹脂、シリコーン樹脂等の樹脂材料等、からなるものを挙げることができる。
【０１１７】
塗膜の乾燥は、加熱板の上に、溶液がキャストされた基材を置いて加熱乾燥させても良く、加熱した乾燥炉に溶液をキャストした支持体を入れて加熱乾燥させても良く、空気、窒素などの気体を加熱した温風を塗布膜にあてて乾燥させても良く、これらを組み合わせたプロセスを利用して乾燥させても良い。乾燥時の温度は１０〜２５０℃であることが好ましく、２０〜２２０℃であることがより好ましく、３０〜２００℃であることがとくに好ましく、ワニスの特性、フィルムの膜厚、基材の耐熱性を考慮して選ばれる。また、温度設定が２種類以上である多段の乾燥温度を設定して塗膜を乾燥させても良い。塗膜を乾燥する時間は、ワニス溶剤の沸点、フィルムの膜厚、プロセス要件を考慮した条件から選択する事ができる。これにより、支持体上にフィルムが形成される。
【０１１８】
次いで、得られたフィルムに対してＵＶ照射工程を行い、光硬化性化合物（Ｂ）を硬化させる。また、ＵＶ照射工程は滅菌を兼ねても良い。照射光としては、光硬化開始剤（Ｃ）に光を照射することによってラジカル反応またはイオン反応を引起すエネルギーを与えることができれば特に限定されるものではない。この光源としては、波長４００ｎｍ以下の光線、例えば、低圧水銀灯、中圧水銀灯、高圧水銀灯、超高圧水銀灯、ケミカルランプ、ブラックライトランプ、マイクロウェーブ励起水銀灯およびメタルハライドランプ、ｉ線、Ｇ線、ＫｒＦエキシマレーザ光、ＡｒＦエキシマレーザ光を用いることができる。
【０１１９】
フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物からなる上記フィルムへの照射強度は、目的とする製品毎に制御されるものであって特に限定されるものではない。例えば、後述の光硬化開始剤（Ｃ）の活性化に有効な光波長領域（光硬化開始剤（Ｃ）によって異なるが、たとえば３００〜４２０ｎｍの光が用いられる）の光照射強度が０．１〜１００ｍＷ／ｃｍ２であることが好ましい。照射強度を０．１ｍＷ／ｃｍ２以上とすることにより、反応時間が長くなり過ぎることを確実に抑制できる。一方で、照射強度を１００ｍＷ／ｃｍ２以下とすることにより、ランプから輻射される熱および組成物の重合時の発熱に起因して得られる硬化物の凝集力の低下や黄変あるいは支持体の劣化が生じることを、より確実に抑制することが可能となる。
【０１２０】
この光の照射時間は、目的とする製品毎に制御されるものであって特に限定されるものではないが、光波長領域での光照射強度と光照射時間の積として表される積算光量を、たとえば３〜１０００ｍＪ／ｃｍ２に設定することが出来る。更に好ましくは５〜５００ｍＪ／ｃｍ２であり、特に好ましくは１０〜３００ｍＪ／ｃｍ２である。積算光量を上記下限値以上とすることにより、光重合開始剤（Ｃ）からの活性種の発生を十分なものとし、得られる硬化物の特性の向上を図ることができる。一方で、積算光量を上記上限値以下とすることにより、生産性向上に寄与することができる。また、重合反応を促進するために加熱を併用することも場合によっては好ましい。また、光を照射して硬化性樹脂を硬化させる場合の温度は、通常０〜１５０℃が好ましく、０〜６０℃がより好ましい。
【０１２１】
フィルムやシート状の単層膜からなる基材を得る場合には、たとえば支持体からフィルムを剥離させることにより基材を製造することができる。支持体からのフィルムの剥離は、フィルムの端部に市販のテープを貼り付け、これに応力を加えて剥離することにより行ってもよく、水、溶剤などの液体をフィルムと支持体の接触界面に接触させて支持体表面とフィルムの接触面の表面張力の差を利用してフィルムを剥離することにより行っても良い。
【０１２２】
他の材料の上にコート膜を形成して基材を得る場合には、たとえば前記工程のうち塗膜の乾燥工程までを実施することにより、支持体と、本実施形態のフッ素含有環状オレフィンポリマーからなるコート膜と、により構成される基材を製造することができる。この場合、支持体は、ＰＥＴ、アクリル樹脂などの有機材料、もしくはガラス、シリコンなどの無機材料から選択されることがとくに好ましい。
【０１２３】
フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物を支持体に製膜し、加熱し、次いで光を照射して硬化させて得られる硬化膜の膜厚は、特に制限はないが、好ましくは１μｍ〜１０ｍｍであり、より好ましくは５μｍ〜１ｍｍであり、さらに好ましくは１０μｍ〜０．５ｍｍである。これらの範囲であると、自立した単層フィルムや、コート膜を得ることができる。また、光硬化の際の体積収縮が小さく基材の変形を確実に抑制することもできる。また、例えば、培養バッグ、培養プレート、培養シャーレなどの細胞培養に用いられる医療器具を作製する観点から好適な範囲となる。また、フィルムの膜厚は、それら器具を作製するプロセスに合わせて設定することができる。
【０１２４】
さらに、本実施形態に係るフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物を用いた医療器具は、たとえば、細胞を保持または接触させる一面に、本実施形態のフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物からなる凹凸構造を形成したフィルムやシート状の単層膜からなる基材や、他の材料の上に凹凸構造を形成したフィルムやシート状の単層膜を接着剤または粘着剤などで貼り付けて形成して得られる基材を備えてもよく、特に１２１°〜１６０°の水接触角を実現するために好ましく用いられる。
【０１２５】
この凹凸構造のサイズは、凸凸間距離が４０ｎｍ〜９０μｍのパターンを賦型したものであり、好ましくは６０ｎｍ〜８０μｍ、特に好ましくは８０ｎｍ〜７０μｍとすることで水接触角を所望の範囲とすることができ、形状は特に限定されない。
【０１２６】
ここで、凹凸構造は、スクリーン印刷、エンボス加工、サブミクロンインプリント、ナノインプリントなど様々な方法で凹凸構造を形成してもよい。
【０１２７】
特に、凹凸構造をインプリント方法で形成するときは、石英、シリコン、ニッケル、レジストなどからなるモールドの様々なパターンに、たとえば、上記において例示したフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物である一般式（１）で表されるフッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）と、光硬化性化合物（Ｂ）と、光硬化開始剤（Ｃ）を有機溶剤に溶解させて得られるワニスを塗布する溶液キャスト法を挙げることができる。
【０１２８】
まず、上記において例示した方法と同様に一般式（１）で表されるフッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）と、光硬化性化合物（Ｂ）と、光硬化開始剤（Ｃ）を有機溶剤に溶解させて得られる溶液を、フィルターを通過させてろ過を行いワニスを調製する。
【０１２９】
次に、上記フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物からなる溶液（ワニス）と凹凸構造を形成したモールドのパターン面を接触させ、溶剤を蒸発させてＵＶ照射し剥離することによって、モールドのパターンを転写した凹凸構造を形成した基材を得ることができる。
【０１３０】
具体的には、（１）微細パターンを有するモールド表面に、フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物と有機溶剤からなる溶液(ワニス)を塗布する工程と、前記溶液から溶剤を蒸発させる工程と、を含む方法、（２）支持体（基材）にフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物と有機溶剤からなる溶液（ワニス）を塗布する工程と、塗布層の上面を微細パターンが形成されたモールド表面で押圧する工程と、前記塗布層から溶剤を蒸発させる工程と、を含む方法、等を挙げることができ、何れの方法であってもモールドとフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物を接触させた後にＵＶ照射工程を経て、剥離することで凹凸構造を形成した基材を得る。尚、（２）の方法においては、塗布層から溶剤を蒸発させた後、モールドで押圧することもできる。
【０１３１】
本実施形態の凹凸構造を形成した基材の作製に用いられる表面に微細パターンを形成させたモールドの基材の材質、モールドとフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物からなるワニスを接触させる方法、および、塗膜の乾燥方法は特に制限無く、上述のフッ素含有環状オレフィンポリマーを有機溶剤に溶解したワニスからの凹凸構造を形成した基材の作製方法と同様に行うことができる。
【０１３２】
次いで、モールドの上に形成したフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物に対してＵＶ照射工程を行い、光硬化性化合物（Ｂ）を硬化させる。また、ＵＶ照射工程は滅菌を兼ねても良い。ＵＶ照射工程における、光源、照射強度、照射時間、照射時の温度の各条件は特に制限無く、上述のフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物からの基材の作製方法と同様な方法で行うことができる。
【０１３３】
フィルムやシート状の単層膜からなる基材を得る場合には、ＵＶ照射後にモールドからフィルムを剥離させることにより基材を製造することができる。支持体からのフィルムの剥離は、フィルムの端部に市販のテープを貼り付け、これに応力を加えて剥離することにより行ってもよく、水、溶剤などの液体をフィルムと支持体の接触界面に接触させて支持体表面とフィルムの接触面の表面張力の差を利用してフィルムを剥離することにより行っても良い。
【０１３４】
他の支持体（基材）の上に凹凸構造を形成したコート膜を形成した基材を得る場合には、たとえば前記工程のうち支持体の上にコートした塗膜の乾燥工程までを実施して、支持体の上にフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物をコートする。次いで、モールドのパターン面とフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物のコート面を接触させ、必要に応じ圧着し、ＵＶ照射、剥離することによって支持体の上に本実施形態のフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物からなる凹凸構造を形成したコート膜を形成した基材を製造することができる。この場合、支持体は、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、アクリル樹脂などの有機材料、もしくはガラス、シリコン、アルミなどの無機材料から選択されることがとくに好ましい。
【０１３５】
モールドのパターン面とフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物のコート面を接触させる際の圧力は、０．０１〜５ＭＰａ、好ましくは０．０５〜４ＭＰａ、より好ましくは０．１〜３ＭＰａの範囲で用いられ、圧着しながらＵＶ照射しても、ラミネーターなどの圧着装置を利用して圧着した後にＵＶ照射してもよい。これにより、パターンの形状、サイズに寄らず、モールドのパターンを高い精度で転写した細胞を保持または接触させるための凹凸構造を有する基材を作製することができる。
【０１３６】
フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物を支持体に製膜し、加熱して、必要に応じ圧着した後に、光を照射して硬化させて得られる硬化膜の膜厚は、特に制限はないが、好ましくは１μｍ〜１０ｍｍであり、より好ましくは５μｍ〜１ｍｍであり、さらに好ましくは１０μｍ〜０．５ｍｍである。これらの範囲であると、自立した単層フィルムや、支持体上のコート膜を得ることができる。また、光硬化の際の体積収縮が小さく、精度良くパターンを転写しながら基材の変形を確実に抑制することもできる。また、例えば、培養バッグ、培養プレート、培養シャーレなどの細胞培養に用いられる医療器具を作製する観点から好適な範囲となる。さらに、フィルムの膜厚は、それら器具を作製するプロセスに合わせて設定することができる。
【０１３７】
フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物から製造したフィルムまたはシートからは、ヒートシール法や、接着剤を利用したシール法などにより、例えば、袋、チューブなどの形態の医療器具を製造できる。また、ポリスチレン、ポリエチレン、金属などの他材料で作製された、例えばシャーレ、マルチウェルプレート、フラスコなどの医療器具の細胞を保持または接触させる基材の表面に、本実施形態のフィルム、またはシートを貼り付けた形態の医療器具を製造することもできる。
【０１３８】
次に、本実施形態に係る医療器具を用いた細胞培養方法を説明する。
【０１３９】
（細胞培養方法）
本実施形態に係る細胞培養方法は、本実施形態に係る医療器具を構成する基材の一面上に、当該一面に接触または保持されるよう細胞を播種する工程と、当該細胞を培養して培養細胞を得る工程と、上記一面上に緩衝液を添加して、前記一面から前記培養細胞を浮遊させる工程と、を備える。これにより、培養細胞を損傷なく基材から離脱させることができ、かつ効率的な増殖が可能な細胞培養を実現することができる。
【０１４０】
本実施形態においては、細胞培養の形態として、医療器具内に細胞を播種した後、静置した状態で浮遊細胞を培養することができる。これは、基材の細胞を接触または保持する一面が本実施形態に係るフッ素含有環状オレフィンポリマー、またはフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物により構成されていることにより実現され、とくに当該一面の水接触角が７０°〜１６０°である場合により好適に実現され得る。また、細胞の形態や増殖性を考慮して振動を与えて培養しても良く、培養液を流動させながら培養しても良く、撹拌しながら培養しても良く、特に制限はない。これらの中から、細胞の特性、装置の形態、生産性を考慮して好適に選ばれる。何れの形態であっても、本実施形態に係る医療器具で細胞を培養することにより、細胞の培養器具への付着、または密着を抑制しつつ群体を形成しながら増殖することができる。
【０１４１】
培養方法としては、本実施形態に係る基材を各種培養方法に応じた容器に加工した医療器具を用いて、例えば、静置培養、回転培養、マイクロキャリア培養、旋回培養、スフェロイド培養、ゲル内培養、三次元担体培養、加圧循環培養などの方法で細胞培養を実施する事ができる。これらのうち、細胞の特性、培養形態、または生産性を考慮して好適に選ばれ、単独で用いても２種類以上を併用しても良い。
【０１４２】
これらの各種培養方法における温度は、３５〜４０℃であることが好ましく、３６〜３８℃であることがより好ましく、３６．５〜３７．５℃であることがとくに好ましい。また、圧力は、０．０２〜０．５ＭＰａであることが好ましく、０．０５〜０．３ＭＰａであることがより好ましく、０．０８〜０．２ＭＰａであることがとくに好ましい。さらに、水素イオン指数（ｐＨ）は、８〜６であることが好ましく、７．５〜６．５であることがより好ましい。
【０１４３】
本実施形態に係る医療器具を培養器具として用いる際の滅菌方法としては、例えば、アルコールなどに浸漬する湿式滅菌、エチレンオキシドによるガス滅菌、紫外線滅菌、放射線滅菌、高温、高圧の水蒸気によるオートクレーブ滅菌、直接蒸気に触れてはいけないものに用いる乾熱滅菌、熱に不安定な成分を含む基材に適したろ過滅菌などを上げることができる。これらの中から、本発明の効果を損なわない範囲でプロセス適合性を考慮して、好適に選ばれ、２種類以上の滅菌方法を組み合わせて用いても良い。
【０１４４】
また、培養に用いる培地の種類としては、液状、ゲル状、固形（粉末）などの形態に寄らず、細胞の特性、培養形態に応じて選択でき、例えば、ＢＭＥ培地、ＭＥＭ培地、ＤＭＥＭ培地、１９９培地、ＲＰＭＩ培地、ハムＦ１０培地、ハムＦ１２培地、ＭＣＤＢ１０４、１０７、１３１、１５１、１７０、２０２培地、ＲＩＴＣ８０−７培地、ＭＣＤＢ１５３培地などが挙げられる。これらは、単独で用いても２種類以上を混合して用いても良く、さらにはヒト、イヌ、ラット、マウス、トリ、ブタ、ウシなどの生物由来の血清と混合して用いても良い。
【０１４５】
さらに、細胞培養の目的に応じて本発明の効果を損なわない範囲で、例えば、ラミニン−５、ラミニン−５１１、ラミニン−５２１などのコラーゲン、本実施形態のフッ素含有環状オレフィンポリマー、またはフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物などを、本実施形態の前記基材の内壁や、細胞を接触または保持する一面の一部、もしくは全面に塗工して用いてもよい。これらは単独、あるいは２種類以上を混合して用いても良い。また、本実施形態において、細胞の種類、培養細胞の応用に応じて、細胞の培養液や緩衝液を選択することができ、蛍光色素や細胞の固定化試薬も自由に選択しても良い。
【０１４６】
さらには、培養、もしくは培養した細胞を浮遊させて基材から離脱させる際に用いる緩衝液としては、細胞が増殖する過程において、系内の水素イオン指数(ｐＨ)を変化させないものであれば良く、通常は、例えば、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水、塩酸緩衝液、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、酒石酸緩衝液、トリス緩衝液、トリス塩酸緩衝液、エチレンジアミン四酢酸緩衝液、トリスＥＤＴＡ緩衝液、トリス酢酸ＥＤＴＡ緩衝液、トリスホウ酸ＥＤＴＡ緩衝液、濃縮ＳＳＣ緩衝液、濃縮ＳＳＰＥ緩衝液、クエン酸ナトリウム緩衝液、炭酸重炭酸緩衝液、ホウ酸ナトリウム緩衝液、マレイン酸緩衝液、ＣＡＢＳ緩衝液、ピペリジン緩衝液、グリシン緩衝液、リンゴ酸緩衝液、ギ酸緩衝液、コハク酸緩衝液、酢酸緩衝液、プロピオン酸緩衝液、ピペラジン緩衝液、ピリジン緩衝液、カコジル酸緩衝液、ＭＥＳ緩衝液、ヒスチジン緩衝液、エタノールアミン緩衝液、ＡＤＡ緩衝液、炭酸緩衝液、ＡＣＥＳ緩衝液、ＰＩＰＥＳ緩衝液、イミダゾール緩衝液、ビス−トリスプロパン緩衝液、ＢＥＳ緩衝液、ＭＯＰＳ緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液、ＴＥＳ緩衝液、ＭＯＰＳＯ緩衝液、ＭＯＢＳ緩衝液、ＤＩＰＳＯ緩衝液、ＴＡＰＳＯ緩衝液、ＴＥＡ緩衝液、ピロリン酸緩衝液、ＨＥＰＰＳＯ緩衝液、ＰＯＰＳＯ緩衝液、トリシン緩衝液、ヒドラジン緩衝液、グリシルグリシン緩衝液、ＥＰＰＳ緩衝液、ビシン緩衝液、ＨＥＰＢＳ緩衝液、ＴＡＰＳ緩衝液、ＡＭＰＤ緩衝液、ＴＡＢＳ緩衝液、ＡＭＰＳＯ緩衝液、タウリン緩衝液、ＣＨＥＳ緩衝液、グリシン緩衝液、水酸化アンモニウム緩衝液、ＣＡＰＳＯ緩衝液、メチルアミン緩衝液、ＣＡＰＳ緩衝液などが単独もしくはトリプシン、ペプシン、レンネット、キモトリプシン、エラスターゼ、ＮＡＤＰＨデハイドロゲナアゼまたはＮＡＤＨデハイドロゲナアゼなどの酵素を含有させて用いてもよく、
好ましくは、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水、塩酸緩衝液、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、酒石酸緩衝液、トリス緩衝液、トリス塩酸緩衝液、エチレンジアミン四酢酸緩衝液、トリスＥＤＴＡ緩衝液、トリス酢酸ＥＤＴＡ緩衝液、トリスホウ酸ＥＤＴＡ緩衝液、濃縮ＳＳＣ緩衝液、濃縮ＳＳＰＥ緩衝液、クエン酸ナトリウム緩衝液、炭酸重炭酸緩衝液、ホウ酸ナトリウム緩衝液、マレイン酸緩衝液などが単独もしくはトリプシン、ペプシン、レンネット、キモトリプシン、エラスターゼ、ＮＡＤＰＨデハイドロゲナアゼまたはＮＡＤＨデハイドロゲナアゼなどの酵素を含有させて用いてもよい。
さらに好ましくは、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水、トリス塩酸緩衝液、エチレンジアミン四酢酸緩衝液、トリスＥＤＴＡ緩衝液、トリス酢酸ＥＤＴＡ緩衝液、トリスホウ酸ＥＤＴＡ緩衝液、濃縮ＳＳＣ緩衝液、濃縮ＳＳＰＥ緩衝液、クエン酸ナトリウム緩衝液、炭酸重炭酸緩衝液、ホウ酸ナトリウム緩衝液などを単独もしくはトリプシン、ペプシン、レンネット、キモトリプシン、エラスターゼ、ＮＡＤＰＨデハイドロゲナアゼまたはＮＡＤＨデハイドロゲナアゼなどの酵素を含有させて用いてもよい。
【０１４７】
鋭意検討の結果、本発明者は、本実施形態の培養器具を用いて、例えば、マウス胚繊維芽細胞を培養し、検査のために細胞を採取する過程において、例えば、リン酸緩衝生理食塩水のような緩衝液を添加すると、細胞が自然に浮遊した状態で基材から離脱する現象を発見した。つまり、本実施形態によれば、特定のフッ素含有環状オレフィンポリマー、またはフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物からなる培養器具を用いて細胞培養することにより、細胞は浮遊して群体を形成しながら増殖し、増殖した細胞は浮遊させて細胞を損傷させること無く基材から離脱できるという優れた細胞培養方法を実現することが可能となる。
【０１４８】
なお、本発明は前述の実施形態に限定されるものではなく、本発明の目的を達成できる範囲での変形、改良等は本発明に含まれるものである。
【実施例】
【０１４９】
以下、実施例において、本発明を説明するが、本発明はこれらの例によって何ら限定されるものではない。なお、実施例におけるポリマー分析値測定方法、細胞の取り扱い方法、培養器具の滅菌方法および培養評価方法を以下に記載した。
【０１５０】
［重量平均分子量（Ｍｗ）、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）］
下記の条件下でゲルパーミュエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）を使用して、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）または、トリフルオロメチルベンゼン（ＴＦＴ）に溶解したポリマーの重量平均分子量（Ｍｗ）および数平均分子量（Ｍｎ）を、ポリスチレンスタンダードによって分子量を較正して測定した。
検出器：日本分光社製ＲＩ−２０３１および８７５−ＵＶまたはＶｉｓｃｏｔｅｃ社製Ｍｏｄｅｌ２７０、直列連結カラム：Ｓｈｏｄｅｘ  Ｋ−８０６Ｍ、８０４、８０３、８０２．５、カラム温度：４０℃、流量：１.０ｍｌ／分、試料濃度：３.０〜９.０  ｍｇ/ｍｌ
【０１５１】
［ガラス転移温度］
島津製作所社製ＤＳＣ−５０を用い、測定試料を窒素雰囲下で１０℃／分の昇温速度で加熱し測定した。
【０１５２】
［水接触角測定］
協和界面科学社製固体表面エナジー解析装置ＣＡ−ＸＥ型を使用してＪＩＳ  Ｒ３２５７（基板ガラス表面のぬれ性試験方法）に準拠し、２μｌの水滴を基材表面に滴下し、静滴法により、基材表面に水滴が接触してから１分以内に接触角を測定した。
【０１５３】
［ＵＶ硬化］
塗布膜の硬化には光源として、シーシーエス社製ＵＶ照射装置を用いて波長３６５ｎｍのＬＥＤ光、またはエンジニアリングシステム社製ＵＶ式インプリント装置を用いて３７５ｎｍのＬＥＤ光を照射して硬化した。
【０１５４】
［細胞種および培養液について］
マウス胚繊維芽細胞（以下、ＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞と略す）を用い、１０％仔ウシ血清（Ｃａｌｆ  Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ、ＣＢＳ）と、高グルコースと、Ｄ−ＭＥＭ培地（Ｌ-グルタミン、フェノールレッド、ピルビン酸ナトリウム含有）と、を含む溶液（以下、ＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液とも呼ぶ）中で、すべての継代培養および細胞増殖性試験を行った。
【０１５５】
［細胞の解凍］
凍結した細胞懸濁液を３７℃ウォーターバスに浸けて解凍し、解凍した細胞懸濁液に氷上冷却した１０％仔ウシ血清Ｄ−ＭＥＭ培地を添加して遠心分離した。遠心後、上澄み液を除去して細胞塊をタッピングによりほぐした後、３７℃ウォーターバスで保温した１０％仔ウシ血清Ｄ−ＭＥＭ培地を添加した。血球計算盤で細胞数を計数し、ウォーターバスで保温した１０％仔ウシ血清Ｄ−ＭＥＭ培地を用いて細胞懸濁液を調製し培養フラスコに細胞を播種した後、加湿インキュベーターで培養した。
【０１５６】
［細胞の継代］
加湿インキュベーターから培養フラスコを取り出して培地をアスピレーターで除去し、３７℃ウォーターバス中で保温したダルベッコＰＢＳ（−）を加え、上澄みをアスピレーターで除去した。再度、同様な操作行った後、３７℃ウォーターバス中で保温した０．０２５ｗ／ｖ％トリプシン-ＥＤＴＡ溶液を加えて加湿インキュベーター内で静置した後、１０％仔ウシ血清Ｄ−ＭＥＭ培地を加えて剥がれた細胞を回収して遠沈管に移し遠心分離して上澄み液を除去し、タッピングにより細胞塊をほぐした後、１０％仔ウシ血清Ｄ−ＭＥＭ培地を加えた。血球計算盤で細胞数を計数した後、１０％仔ウシ血清Ｄ−ＭＥＭ培地で細胞懸濁液を調製し、培養フラスコに細胞を播種して、加湿インキュベーターで培養した。実施例に記載の細胞胞増殖性評価では、継代数３〜２０代のものを用いた。
【０１５７】
［細胞培養器具の滅菌方法］
直径１５ｍｍに切り出した円形の培養フィルムをＴＣＰＳマルチウェルプレート（コーニング社製）穴部に置き、７０％エタノール水溶液を加えて４０分〜1時間浸漬した後、７０％エタノール水溶液を除去してダルベッコＰＢＳ（−）に１５分〜４０分間浸漬した。次に、ＰＢＳ（−）を除去して、培養器具をひっくり返し、同様な操作を行い、培養器具の表裏面を滅菌処理した。滅菌処理終了後、クリーンベンチ内で一晩乾燥させた。
【０１５８】
［細胞懸濁液の調製］
２５ｃｍ２培養フラスコで約６０％コンフレント状態になったＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞を、上記、細胞の継代操作と同様な方法で０．０２５ｗ／ｖ％トリプシン-ＥＤＴＡで処理して剥がした。血球計算盤で細胞数を計数して、１０％仔ウシ血清Ｄ−ＭＥＭ培地で７５００ ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞懸濁液を調製した。
【０１５９】
［細胞増殖性の評価］
培養開始後１、３、および７日経過後のＴＣＰＳマルチウェルプレートを加湿インキュベーターから取り出して培地を除去し、１０％ＷＳＴ−８（Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８）／１０％仔ウシ血清Ｄ−ＭＥＭ培地の混合溶液を添加して、加湿インキュベーターで３時間インキュベートした。その後、培地２００μｌを９６ウェルプレートに移し、プレートリーダー（ＳＰＥＣＴＲＡ  ｍａｘ  ＰＬＵＳ３８４、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社製）で波長４５０ｎｍの吸光度を測定した。各培養器具の細胞増殖性は、吸光度の経時変化により確認した。
【０１６０】
［有意差検定］
各種培養器具について、細胞を播種したサンプルを９検体準備して培養し、吸光度の測定結果をＰｒｉｓｍ  ６  ｆｏｒ  Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）  ６．０１（エムデーエフ社製）により数値解析して、結果の平均値を吸光度として算出し、標準偏差に±の符号を付しバラツキの範囲とした。
【０１６１】
［蛍光顕微鏡観察］
７日間細胞培養した容器から培地を除去して、４％グルタルアルデヒド／リン酸緩衝液を添加し１時間静置した後、４％グルタルアルデヒド／リン酸緩衝液を除去した。その後、滅菌水で洗浄し、Ｉｍａｇｅ−ｉＴ  Ｆｉｘａｔｉｏｎ／Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎキット（ライフサイエンス社製）を使用し細胞核、および細胞骨格タンパクを染色して蛍光顕微鏡観察に用いる試料を調製した。蛍光顕微鏡観察は、オールインワン蛍光顕微鏡ＢＺ−Ｘ７００（キーエンス社製）を使用した。
【０１６２】
［製造例１］ポリマー１
５，５，６−トリフルオロ−６−（トリフルオロメチル）ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−エン（１００ｇ）と１−ヘキセン（０．２６８ｇ）のテトラヒドロフラン溶液に、Ｍｏ（Ｎ−２，６−Ｐｒｉ２Ｃ６Ｈ３）（ＣＨＣＭｅ２Ｐｈ）（ＯＢｕt）２（５０ｍｇ）のテトラヒドロフラン溶液を添加し、７０℃で開環メタセシス重合を行った。得られたポリマーのオレフィン部を、パラジウムアルミナ（５ｇ）によって１６０℃で水素添加反応を行い、ポリ（１，１，２−トリフルオロ−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）のテトラヒドロフラン溶液を得た。その溶液を孔径５μｍのフィルターで加圧ろ過しパラジウムアルミナを除去した溶液をメタノールに加え、白色のポリマーをろ別、乾燥し９９ｇのポリマー１を得た。得られたポリマー１は、上記一般式（１）により表される繰り返し構造単位を含有していた。また、水素添加率は１００％、重量平均分子量（Ｍｗ）は８３０００、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１.７３、ガラス転移温度は１０９℃であった。
【０１６３】
［製造例２］培養フィルム１
製造例１で合成したポリマー１をメチルイソブチルケトンに３０質量％濃度で溶解し、その溶液を孔径１μｍのフィルターで加圧ろ過し、次いで０．１μｍのフィルターでろ過してポリマー１のメチルイソブチルケトン溶液を調製した。次いで、ポリマー１のメチルイソブチルケトン溶液をガラス基板に塗布し、アプリケーターを用いて均一にコートした後、１４０℃で６０分乾燥して剥離する事で厚み６０μｍのフィルムを作製した。フィルムの水接触角は１５秒で９３．６°であった。さらに、１０分経過後で８８．１°であり水滴が消失するまでの時間において変化は見られなかった。
【０１６４】
［製造例３］培養フィルム２
製造例２で調製したポリマー１のメチルイソブチルケトン溶液を、コート基材であるＰＥＴフィルム（ルミラー、東レ）にバーコーターを用いて均一に塗布し、１００℃で２０分乾燥して室温まで放冷し、コート膜の厚みが５μｍの培養フィルム２を作製した。フィルムの水接触角は１５秒で９３．７°であった。さらに、１０分経過後で８７．７°であり水滴が消失するまでの時間において変化は見られなかった。
【０１６５】
［製造例４］培養フィルム３
コート基材をアクリルフィルム（アクリプレン、三菱レイヨン）に、コート後の乾燥条件を９０℃、４０分に変更したこと以外は製造例３と同じ方法で、コート膜の厚みが５μｍの培養フィルム３を作製した。フィルムの水接触角は１５秒で９４．１°であった。さらに、１０分経過後で８８．０°であり水滴が消失するまでの時間において変化は見られなかった。
【０１６６】
［製造例５］培養フィルム４
製造例１で合成したフッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）であるポリマー１を３０質量％濃度で溶解したメチルイソブチルケトン溶液１００ｇに、光硬化性化合物（Ｂ）として３−エチル−３{[(３−エチルオキセタン−３−イル)メトキシ]メチル}オキセタンと１，７−オクタジエンジエポキシドの質量比９／１の混合物を７．５ｇ[（Ａ）／（Ｂ）＝８０／２０]、および光重合開始剤（Ｃ）として光カチオン開始剤（アデカオプトマーＳＰ−１７２、旭電化社製）を０．４ｇ加えた溶液を調製し、孔径１μｍのフィルターで加圧ろ過し、次いで０．１μｍのフィルターでろ過してポリマー１と光硬化性化合物および光硬化開始剤のメチルイソブチルケトン溶液を調製した。次いで、コート基材であるＰＥＴフィルム（ルミラー、東レ）に塗布して、バーコーターを用いて均一にコートし、１００℃で１０分乾燥して室温まで放冷した後、２００ｍＪ/ｃｍ２の光量でＵＶ照射して硬化樹脂を硬化させコート厚み５μｍの培養フィルム４を作製した。コート面の水接触角は１５秒で８８．１°であった。さらに、１０分経過後で８４．９°であり水滴が消失するまでの時間において変化は見られなかった。
【０１６７】
［製造例６］培養フィルム５
フッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）であるポリマー１と、光硬化性化合物（Ｂ）である３−エチル−３{[(３−エチルオキセタン−３−イル)メトキシ]メチル}オキセタンと１、７−オクタジエンジエポキシドの質量比９／１の混合物と、の質量比を［（Ａ）／（Ｂ）＝６０／４０］に変更した以外は製造例５と同様な方法でコート厚み５μｍの培養フィルム５を作製した。コート面の水接触角は１５秒で８４．２°であった。さらに、１０分経過後で８１．３°であり水滴が消失するまでの時間において変化は見られなかった。
【０１６８】
［製造例７］培養フィルム６
コート基材をアクリルフィルム（アクリプレン、三菱レイヨン）に、コート後の乾燥条件を９０℃、４０分に変更したこと以外は製造例６と同じ方法で、コート膜の厚みが５μｍの培養フィルム６を作製した。フィルムの水接触角は１５秒で８４．３°であった。さらに、１０分経過後で８１．０°であり水滴が消失するまでの時間において変化は見られなかった。
【０１６９】
［製造例８］培養フィルム７
製造例１で合成したポリマー１に耐熱酸化防止剤としてスミライザーＧＰ（住友化学社製）を０．５質量％添加して、ペレタイザーによりペレット化した後、メイホー製小型射出成型機Ｍｉｃｒｏ−１を用いて、加熱混練部の温度を２６０℃、金型の温度を９０℃に設定し、射出速度２０ｍｍ／ｓｅｃ、射出圧力４０ＭＰａの条件で直径２０ｍｍ×厚み３ｍｍの培養フィルム７を作製した。基材表面の水接触角は１５秒で９４．０°であった。さらに、１０分経過後で８８．４°であり水滴が消失するまでの時間において変化は見られなかった。
【０１７０】
［実施例１］
製造例２で作製した滅菌済みの培養フィルム１を２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレートの穴部底面に置き、滅菌グリース（東レ・ダウコーニング社製）でＳＵＳ製Ｏ−リング（内径１１ｍｍ）と密着させて固定した後、ＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を培養フィルム１の上に播種した。同操作を９回実施して、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をして加湿インキュベーターに移動し、庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
【０１７１】
ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．１０±０．０２であり、３日経過後で０．３５±０．０８であり、７日経過後で０．７３±０．２４であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
【０１７２】
［実施例２］
製造例３で作製した滅菌済みの培養フィルム２を実施例１と同様な方法で２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレートに固定し、解凍済みのＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
【０１７３】
ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．１１±０．０２であり、３日経過後で０．３６±０．０５であり、７日経過後で０．７８±０．１３であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
【０１７４】
［実施例３］
製造例４で作製した滅菌済みの培養フィルム３を実施例１と同様な方法で２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレートに固定し、解凍済みのＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
【０１７５】
ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．１１±０．０４であり、３日経過後で０．３８±０．０４であり、７日経過後で０．８３±０．１１であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
【０１７６】
［実施例４］
製造例５で作製した滅菌済みの培養フィルム４を実施例１と同様な方法で２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレートに固定し、解凍済みのＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
【０１７７】
ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．１１±０．０３であり、３日経過後で０．２３±０．０４であり、７日経過後で０．５１±０．１１であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
【０１７８】
［実施例５］
製造例６で作製した滅菌済みの培養フィルム５を実施例１と同様な方法で２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレートに固定し、解凍済みのＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
【０１７９】
ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．１１±０．０２であり、３日経過後で０．２７±０．０４であり、７日経過後で０．５５±０．１８であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
【０１８０】
［実施例６］
製造例７で作製した滅菌済みの培養フィルム６を実施例１と同様な方法で２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレートに固定し、解凍済みのＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
【０１８１】
ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．１１±０．０４であり、３日経過後で０．２３±０．０２であり、７日経過後で０．５３±０．１３であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
【０１８２】
［実施例７］
製造例８で作製した滅菌済みの培養フィルム７を２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレートの穴部底面に置き、滅菌グリース（東レ・ダウコーニング製）でＳＵＳ製Ｏ−リング（内径１６ｍｍ）と密着させて固定した後、解凍済みのＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を培養フィルム７の上に播種した。同操作を９回実施して、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
【０１８３】
ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．１１±０．０５であり、３日経過後で０．４２±０．１５であり、７日経過後で０．９６±０．０６であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
【０１８４】
［実施例８］
フッ素含有環状オレフィンモノマーの種類を５，６−ジフルオロ−５−ペンタフルオロエチル−６−トリフルオロメチルビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−エンに変更したこと以外は、製造例１と同様な方法により９７ｇのポリマー２を得た。得られたポリマー２は、上記一般式（１）により表される繰り返し構造単位を含有していた。また、水素添加率は１００％、重量平均分子量（Ｍｗ）は９１０００、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１.９３、ガラス転移温度は１０４℃であった。
【０１８５】
次に、製造例２と同様な方法により厚み５５μｍの培養フィルム８を作製した。フィルムの水接触角は１５秒で１０１．６°であった。さらに、１０分経過後で９９．７°であり水滴が消失するまでの時間において変化は見られなかった。
【０１８６】
培養フィルム８による実施例１と同様な方法で実施したＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞の培養は、ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価で1日経過後の吸光度が０．１０±０．０１であり、３日経過後で０．３３±０．０５であり、７日経過後で０．７４±０．１７であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
【０１８７】
［実施例９］
フッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）である実施例８で製造したポリマー２と、光硬化性化合物（Ｂ）として３−エチル−３{[(３−エチルオキセタン−３−イル)メトキシ]メチル}オキセタンと１、７−オクタジエンジエポキシドの質量比９／１の混合物と、を製造例５と同じ方法で混合し、［質量比（Ａ）／（Ｂ）＝８０／２０］の組成物を調製した。次に、ＰＥＴフィルム（ルミラー、東レ）にコートして、培養フィルム９を作製した。フィルムの水接触角は１５秒で９５．３°であった。さらに、１０分経過後で９４．９°であり水滴が消失するまでの時間において変化は見られなかった。
【０１８８】
培養フィルム９による実施例１と同様な方法で実施したＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞の培養は、ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価で1日経過後の吸光度が０．１０±０．０１であり、３日経過後で０．２５±０．０７であり、７日経過後で０．６０±０．１３であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
【０１８９】
［実施例１０］
フッ素含有環状オレフィンモノマーの種類を５，６−ジフルオロ−５−へプタフルオロ−ｉｓｏ−プロピル−６−トリフルオロメチルビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−エンに変更したこと以外は、製造例１と同様な方法により９８ｇのポリマー３を得た。得られたポリマー３は、上記一般式（１）により表される繰り返し構造単位を含有していた。また、水素添加率は１００％、重量平均分子量（Ｍｗ）は１４２０００、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１.４０、ガラス転移温度は１３７℃であった。
【０１９０】
次に、製造例２と同様な方法により厚み５８μｍの培養フィルム１０を作製した。フィルムの水接触角は１５秒で１０３．９°であった。さらに、１０分経過後で１０２．２°であり水滴が消失するまでの時間において変化は見られなかった。
【０１９１】
培養フィルム１０による実施例１と同様な方法で実施したＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞の培養は、ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価で1日経過後の吸光度が０．１１±０．０３であり、３日経過後で０．３２±０．０３であり、７日経過後で０．７９±０．２１であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
【０１９２】
［製造例９］培養フィルム１３
製造例１で合成したポリマー１をメチルイソブチルケトンに３０質量％濃度で溶解し、その溶液を孔径１μｍのフィルターで加圧ろ過し、次いで０．１μｍのフィルターでろ過してポリマー１のメチルイソブチルケトン溶液を調製した。次いで、直径１５０ｎｍ、ピッチ２５０ｎｍのホール形状を有するサイズが４ｃｍ×４ｃｍのニッケルモールドにポリマー１のメチルイソブチルケトン溶液を塗布し、アプリケーターを用いて均一にコートした後、１４０℃で６０分乾燥して剥離する事で、厚み５０μｍのピラー形状の培養フィルム１３を作製した。培養フィルム１３の水接触角（１５秒経過時）は１４７．０°であった。
【０１９３】
［製造例１０］培養フィルム１４
製造例９で使用したポリマー１のメチルイソブチルケトン溶液を、ライン幅２００ｎｍ、ピッチ４００ｎｍでラインとスペースが２μｍ周期で縦横最密充填配列したサイズが５ｃｍ×５ｃｍのシリコンモールドに塗布し、アプリケーターを用いて均一にコートした後、１４０℃で６０分乾燥して剥離する事で、厚み５０μｍのホール形状の培養フィルム１４を作製した。培養フィルム１４の水接触角（１５秒経過時）は１３６．０°であった。
【０１９４】
［製造例１１］培養フィルム１５
製造例９で使用したポリマー１のメチルイソブチルケトン溶液を、直径１５０ｎｍ、ピッチ２５０ｎｍのピラー形状を有するサイズが４ｃｍ×４ｃｍのニッケルモールドに塗布し、アプリケーターを用いて均一にコートした後、１４０℃で６０分乾燥して剥離する事で、厚み５０μｍのホール形状の培養フィルム１５を作製した。培養フィルム１５の水接触角（１５秒経過時）は１２４．３°であった。
【０１９５】
［製造例１２］培養フィルム１６
製造例９で使用したポリマー１のメチルイソブチルケトン溶液を、直径が２５μｍのドーム形状の反転パターンを有するサイズが４ｃｍ×４ｃｍの石英モールドにポリマー１のメチルイソブチルケトン溶液を塗布し、アプリケーターを用いて均一にコートした後、１４０℃で６０分乾燥して剥離する事で、厚み６０μｍのドーム形状の培養フィルム１６を作製した。培養フィルム１６の水接触角（１５秒経過時）は１２７．３°であった。
【０１９６】
［製造例１３］培養フィルム１７
製造例１で合成したポリマー１を３０質量％濃度で溶解したメチルイソブチルケトン溶液１００ｇに、光硬化性化合物（Ｂ）として３−エチル−３{[(３−エチルオキセタン−３−イル)メトキシ]メチル}オキセタンと１，７−オクタジエンジエポキシドの質量比９／１の混合物を２０ｇ［（Ａ）／（Ｂ）＝６０／４０］、および光硬化開始剤（Ｃ）として（アデカオプトマーＳＰ−１７２、ＡＤＥＫＡ社製）を０．８ｇ加えた溶液を調製し、孔径１μｍのフィルターで加圧ろ過し、次いで０．１μｍのフィルターでろ過して光硬化性組成物１を調製した。次いで、製造例１２で使用した石英モールドに光硬化性組成物１をアプリケーターを用いて均一にコートした後、１４０℃で３０分乾燥し、コート面の背面から波長３６５ｎｍのＵＶ光を２００ｍＪ／ｃｍ２の積算光量で照射し、その後モールドから剥離する事で、厚み６０μｍのドーム形状の培養フィルム１７を作製した。培養フィルム１７の水接触角（１５秒経過時）は１２９．５°であった。
【０１９７】
［実施例１１］
製造例９で作製した培養フィルム１３を滅菌し、パターン面を上方に２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレートの穴部底面に置き、滅菌グリース（東レ・ダウコーニング社製）でＳＵＳ製Ｏ−リング（内径１１ｍｍ）と密着させて固定した後、ＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を培養フィルム１３のパターン面に播種した。同操作を９回実施して、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をして加湿インキュベーターに移動し、庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．１０±０．０３であり、３日経過後で０．３３±０．０６であり、７日経過後で０．６８±０．０９であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞は厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加すると群体形成の形態を保った状態で浮遊した。
【０１９８】
［実施例１２］
製造例１０で作製した培養フィルム１４を滅菌し、実施例１と同様な方法で２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレートに固定し、解凍済みのＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を培養フィルム１４のパターン面に播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．１０±０．０１であり、３日経過後で０．３２±０．０６であり、７日経過後で０．６７±０．１０であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞は厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加すると群体形成の形態を保った状態で浮遊した。
【０１９９】
［実施例１３］
製造例１１で作製した培養フィルム１５を滅菌し、実施例１と同様な方法で２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレートに固定し、解凍済みのＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を培養フィルム１５のパターン面に播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．１０±０．０２であり、３日経過後で０．３４±０．０３であり、７日経過後で０．７０±０．０９であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞は厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加すると群体形成の形態を保った状態で浮遊した。
【０２００】
［実施例１４］
製造例１２で作製した培養フィルム１６を滅菌し、実施例１と同様な方法で２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレートに固定し、解凍済みのＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を培養フィルム１６のパターン面に播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．０９±０．０２であり、３日経過後で０．３２±０．０３であり、７日経過後で０．６６±０．０８であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞は厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加すると群体形成の形態を保った状態で浮遊した。
【０２０１】
［実施例１５］
製造例１３で作製した培養フィルム１７を滅菌し、実施例１と同様な方法で２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレートに固定し、解凍済みのＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を培養フィルム１７のパターン面に播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．１０±０．０４であり、３日経過後で０．２６±０．０２であり、７日経過後で０．５２±０．１２であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、７日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞は厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加すると群体形成の形態を保った状態で浮遊した。
【０２０２】
［実施例１６］
実施例８で製造したポリマー２を用いて、製造例９と同様な方法により厚み５５μｍのピラー形状の培養フィルム１８を作製した。培養フィルム１８の水接触角（１５秒経過時）は１５０．５°であった。
培養フィルム１８を用い、実施例１と同様な方法で実施したＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞の培養は、ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価で1日経過後の吸光度が０．１０±０．０３であり、３日経過後で０．３２±０．０３であり、７日経過後で０．７２±０．１０であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、７日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞は厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加すると群体形成の形態を保った状態で浮遊した。
【０２０３】
［実施例１７］
実施例１０で製造したポリマー３を用いてモールドを製造例１１で使用したピラー形状のニッケルモールドに変更したこと以外は、製造例９と同様な方法により厚み５８μｍのホール形状の培養フィルム１９を作製した。培養フィルム１９の水接触角（１５秒経過時）は１３０．３°であった。
培養フィルム１９による実施例１と同様な方法で実施したＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞の培養は、ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価で1日経過後の吸光度が０．０９±０．０２であり、３日経過後で０．３２±０．０４であり、７日経過後で０．７８±０．１９であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、７日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞は厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加すると群体形成の形態を保った状態で浮遊した。
【０２０４】
［実施例１８］
製造例１で合成したポリマー１から作製した厚み５０μｍのフィルムを製造例９で使用したホール形状のニッケルモールドのパターン面に被せ、１５０℃に加熱し１０ＭＰａで熱圧着しそのまま５秒間保持した。５０℃に冷却後、モールドを離脱させピラー形状の培養フィルム２０を作製した。培養フィルム２０の水接触角（１５秒経過時）は１４８．１°であった。
培養フィルム２０を用い、実施例１と同様な方法で実施したＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞の培養は、ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価で1日経過後の吸光度が０．１１±０．０３であり、３日経過後で０．３９±０．０４であり、７日経過後で０．８１±０．１１であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、７日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞は厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加すると群体形成の形態を保った状態で浮遊した。
【０２０５】
［実施例１９］
製造例１３で調製した光硬化性組成物１［（Ａ）／（Ｂ）＝６０／４０］をＰＥＴフィルムにスピンコートして、１００℃で１分間加熱した後に、製造例９で使用したホール形状のニッケルモールドのパターン面と光硬化性組成物１のコート面が接触するようにＰＥＴフィルムを被せ、０．３ＭＰａの圧力で圧着しながら波長３７５ｎｍのＵＶ光を２００ｍＪ／ｃｍ２の積算光量で照射した。次いで、ニッケルモールドからＰＥＴフィルムを剥離して、ＰＥＴフィルムの表面にピラー形状を形成した培養フィルム２１を作製した。培養フィルム２１の水接触角（１５秒経過時）は１４６．９°であった。
培養フィルム２１による実施例１と同様な方法で実施したＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞の培養は、ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価で1日経過後の吸光度が０．１１±０．０２であり、３日経過後で０．２６±０．０３であり、７日経過後で０．５３±０．１０であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、７日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞は厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加すると群体形成の形態を保った状態で浮遊した。
【０２０６】
［実施例２０］
細胞種をヒト皮膚繊維芽細胞（以下、Ｈｓ−６８細胞と略す）に変更し、マウス胚繊維芽細胞と同様な方法により細胞の解凍、継代、懸濁液を調製し、１０％仔ウシ血清Ｄ−ＭＥＭ培地で７５００ ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞懸濁液を調製した。
次に、製造例２で作製した滅菌済みの培養フィルム１を使用して、実施例１と同様な方法により、解凍済みのＨｓ−６８細胞液（１ｍＬ）を播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．３４±０．０７であり、３日経過後で１．５５±０．１０であり、７日経過後で４．２７±０．１６であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、７日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、トリプシン含有リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
この培養細胞のＮＡＤＰＨデハイドロゲナーゼで薬物代謝系酵素活性評価を行うとほぼ１００％が、生態系と同様の薬物代謝系酵素活性があることが分かった。さらに、自家蛍光を観察すると同様に１００％の培養細胞が生細胞であることを確認した。
【０２０７】
［実施例２１］
製造例６で作製した滅菌済みの培養フィルム５を使用して、実施例２０と同様な方法により、解凍済みのＨｓ−６８細胞液（１ｍＬ）を播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．３１±０．０３であり、３日経過後で１．４９±０．０９であり、７日経過後で３．７７±０．１９であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、７日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、トリプシン含有リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
この培養細胞のＮＡＤＰＨデハイドロゲナーゼで薬物代謝系酵素活性評価を行うとほぼ１００％が、生態系と同様の薬物代謝系酵素活性があることが分かった。さらに、自家蛍光を観察すると同様に１００％の培養細胞が生細胞であることを確認した。
【０２０８】
［実施例２２］
実施例１０で記載した滅菌済みの培養フィルム１０を使用して、実施例２０と同様な方法により、解凍済みのＨｓ−６８細胞液（１ｍＬ）を播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．３３±０．０４であり、３日経過後で１．５３±０．０５であり、７日経過後で４．１７±０．１１であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、７日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、トリプシン含有リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
この培養細胞のＮＡＤＰＨデハイドロゲナーゼで薬物代謝系酵素活性評価を行うとほぼ１００％が、生態系と同様の薬物代謝系酵素活性があることが分かった。さらに、自家蛍光を観察すると同様に１００％の培養細胞が生細胞であることを確認した。
【０２０９】
［実施例２３］
６穴ＴＣＰＳマルチウェルプレート（コーニング社製）の凹部底面を切り抜き、製造例２で作製したフィルム１を６穴全ての凹部底面に貼り付け細胞培養容器を作製し、エタノールにより滅菌処理した。
次いで、細胞液の量を１０ｍＬに変更したこと以外は、実施例２０と同様な方法により、解凍済みのＨｓ−６８細胞液を播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．５２±０．０３であり、３日経過後で１．７０±０．０３であり、７日経過後で４．３５±０．０９であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、トリプシン含有リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
さらに、７日間培養した細胞を蛍光発光試薬で染色して細胞核、および細胞骨格タンパクの形態を蛍光顕微鏡観察すると、青色蛍光発光（図２の白色部）した細胞核、および緑色蛍光発光（図２の灰色部）した細胞骨格タンパクは、二次元的に密度斑を伴いながら、三次元的には厚み方向に細胞が重なった状態の群体を形成した形態で観察された（図２参照）。
この培養細胞のＮＡＤＰＨデハイドロゲナーゼで薬物代謝系酵素活性評価を行うとほぼ１００％が、生態系と同様の薬物代謝系酵素活性があることが分かった。さらに、自家蛍光を観察しても、殆ど蛍光が観察されないことから、同様に９９．９８％の培養細胞が生細胞であることを確認した（図４参照）。
【０２１０】
［実施例２４］
実施例１３で記載した滅菌済みの培養フィルム１５を使用して、実施例２０と同様な方法により、解凍済みのＨｓ−６８細胞液（１ｍＬ）を播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価では、１日経過後の吸光度が０．２５±０．０２であり、３日経過後で０．７８±０．０４であり、７日経過後で１．８０±０．０９であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞は厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、トリプシン含有リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
この培養細胞のＮＡＤＰＨデハイドロゲナーゼで薬物代謝系酵素活性評価を行うとほぼ１００％が、生態系と同様の薬物代謝系酵素活性があることが分かった。さらに、自家蛍光を観察すると同様に１００％の培養細胞が生細胞であることを確認した。
【０２１１】
［比較例１］
γ線滅菌済み２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレート（コーニング製、水接触角は１５秒後で４６．１°。さらに、１０分後で１１．２°）の穴部底面に解凍済みのＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を播種した。同操作を９回繰り返し、検体数９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
【０２１２】
ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．２７±０．０３であり、３日経過後で１．０８±０．１１であり、７日経過後で１．５１±０．２３であった。経過日数に対して吸光度は徐々に減衰する傾向を示し、経過日数に応じて細胞増殖の程度は小さくなった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して均一な平面状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加しても形態に変化なく浮遊しなかった。
【０２１３】
［比較例２］
低密度ポリエチレンフィルム（三井化学製、水接触角は１５秒後で９６．８°。さらに１０分後で５９．５°）を実施例の培養フィルムの取扱法と同様に切出して滅菌処理した。次に、実施例１と同様な方法によりＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞を培養した。
【０２１４】
ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．２２±０．０２であり、３日経過後で０．７１±０．０９であり、７日経過後で１．１１±０．１８であった。経過日数に対して吸光度は徐々に減衰する傾向を示し、経過日数に応じて細胞増殖の程度は小さくなった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して均一な平面状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加しても形態に変化なく浮遊しなかった。
【０２１５】
［比較例３］
製造例１に記載のモノマーを５−メチル−ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−エン（２０.０ｇ）と８−メチル−テトラシクロ[４．４．０．１２,５．１７,１０]−３−ドデセン（３２.２ｇ）に、溶媒をシクロヘキサンに変更した以外は製造例１と同様な方法によって、ポリ（１−メチル−シクロペンチレンエチレン）とポリ（３−メチル−トリシクロ[４.３.０.１２,５]デカニレンエチレン）のシクロヘキサン溶液を得た。その溶液を孔径５μｍのフィルターで加圧ろ過し、溶液をメタノールに加え、白色のポリマーをろ別、乾燥し５１ｇのポリマー４を得た。水素添加率は１００％、重量平均分子量（Ｍｗ）は８２０００、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は２.２６、ガラス転移温度は１０４℃であった。
【０２１６】
次に、溶剤をシクロヘキサンに変更した以外は、製造例２と同様な方法により、厚み５５μｍの培養フィルム１１を作製した。フィルムの水接触角は１５秒で９２．１°であった。さらに、１０分経過後で５５．４°であり、水接触角は変化した。さらに、実施例１と同様な方法によりＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞を培養した。
【０２１７】
ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．２０±０．０４であり、３日経過後で０．５１±０．１０であり、７日経過後で０．８５±０．１３であった。経過日数に対して吸光度は徐々に減衰する傾向を示し、経過日数に応じて細胞増殖の程度は小さくなった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して均一な平面状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加しても形態に変化なく浮遊しなかった。
【０２１８】
［比較例４］
テフロン（登録商標）ＡＦ１６００（アルドリッチ製）の粉末を２００℃の加熱条件で熱プレスして厚み２００μｍの培養フィルム１２を作製し、実施例の培養フィルムの取扱法と同様に切出して滅菌処理した。基材作製時の水接触角は１５秒後で１１１．６°であった。さらに、１０分後で１１０．３°であった。次に、実施例１と同様な方法によりＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞を培養した。
【０２１９】
ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．０６±０．０２であり、３日経過後で０．１４±０．１１であり、７日経過後で０．１８±０．０９であった。経過日数に対して吸光度は徐々に減衰する傾向を示し、経過日数に応じて細胞増殖の程度は小さくなった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞は点在して増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加しても形態に変化なく浮遊しなかった。
【０２２０】
［比較例５］
滅菌済み２４穴ナノカルチャープレート（Ｓ社製、水接触角（１５秒経過時）は１２５°）の穴部底面のパターン面に解凍済みのＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を播種した。同操作を９回繰り返し、検体数９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．０７±０．０３であり、３日経過後で０．０９±０．０２であり、７日経過後で０．１０±０．０９であった。経過日数に対して吸光度は徐々に減衰する傾向を示し、経過日数に応じて細胞増殖の程度は小さくなった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞は厚み方向に対して群体を形成して増殖し、リン酸緩衝生理食塩水を添加しても形態に変化なく浮遊しなかった。
【０２２１】
［比較例６］
細胞懸濁液をＨｓ−６８細胞液（１０ｍＬ）に変更したこと以外は、比較例１と同様にインキュベーターの庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
ＷＳＴ−８法による細胞増殖性の評価では、１日経過後の吸光度が０．３３±０．０６であり、３日経過後で１．４９±０．１１であり、７日経過後で３．１０±０．１３であった。経過日数に対して吸光度は徐々に減衰する傾向を示し、経過日数に応じて細胞増殖の程度は小さくなった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、シート状に細胞は増殖しており、トリプシン含有リン酸緩衝生理食塩水を添加しても形態に変化なく浮遊しなかった。
さらに、７日間培養した細胞を蛍光発光試薬で染色して細胞核、および細胞骨格タンパクの形態を蛍光顕微鏡観察すると、青色蛍光発光（図３の白色部）した細胞核、および緑色蛍光発光（図３の灰色部）した細胞骨格タンパクは、二次元的に広がったシート形状の蛍光発光分布が観察された（図３参照）。実施例２３に記載の細胞培養容器で培養したＨｓ−６８細胞に見られる厚み方向に細胞が重なった群体形成は確認できなかった。
この培養細胞のＮＡＤＰＨデハイドロゲナーゼで薬物代謝系酵素活性評価を行うとほぼ０％が、生態系と同様の薬物代謝系酵素活性があることが分かった。さらに、自家蛍光観察は、γ線滅菌済み２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレートの蛍光吸収で測定することができず、酵素活性評価のみで実証した。
【０２２２】
この出願は、２０１４年８月１３日に出願された日本出願特願２０１４−１６４９１２号及び２０１５年２月４日に出願された日本出願特願２０１５−０１９９９６号を基礎とする優先権を主張し、その開示の全てをここに取り込む。
【図１】
2019004884.tif 000013
【図２】
2019004884.tif 000014
【図３】
2019004884.tif 000015
【図４】
2019004884.tif 000016
【手続補正書】
【提出日】平成30年8月23日(2018.8.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
基材を備え、かつ前記基材の一面に細胞を接触または保持させる医療器具であって、
前記基材の少なくとも細胞を保持する前記一面は、下記一般式（１）で表される繰返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーにより構成され、
前記フッ素含有環状オレフィンポリマーの、ゲルパーミュエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）によって測定したポリスチレン換算の重量平均分子量（Ｍｗ）と数平均分子量（Ｍｎ）との比である分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）が１．３以上５．０以下である医療器具。
【化１】
2019004884.tif 000017
（式（１）中、Ｒ１〜Ｒ４のうち、少なくとも１つは、フッ素、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルキル、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルコキシ、またはフッ素を含有する炭素数２〜１０のアルコキシアルキルである。Ｒ１〜Ｒ４がフッ素を含有しない基である場合、Ｒ１〜Ｒ４は、水素、炭素数１〜１０のアルキル、炭素数１〜１０のアルコキシ、または炭素数２〜１０のアルコキシアルキルから選ばれる。Ｒ１〜Ｒ４は互いに同一であっても異なっていてもよい。Ｒ１〜Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよい。）
【請求項２】
細胞を接触または保持する前記一面の水接触角が７０°以上１６０°以下である請求項１に記載の医療器具。
【請求項３】
細胞を接触または保持する前記一面の水接触角が７０°以上１２０°以下である請求項１または２に記載の医療器具。
【請求項４】
前記基材の少なくとも細胞と接触する前記一面が、凹凸構造を備える請求項１に記載の医療器具。
【請求項５】
細胞と接触する前記一面の水接触角が１２１°以上１６０°以下である請求項４に記載の医療器具。
【請求項６】
前記基材の少なくとも細胞を接触または保持する前記一面は、前記フッ素含有環状オレフィンポリマーと、光硬化性化合物と、光硬化開始剤と、を含むフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物により構成される請求項１〜５のいずれか一項に記載の医療器具。
【請求項７】
前記フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物中における前記フッ素含有環状オレフィンポリマーと前記光硬化性化合物の質量比（フッ素含有環状オレフィンポリマー／光硬化性化合物）が、９９．９／０．１〜５０／５０である請求項６に記載の医療器具。
【請求項８】
前記一面に接触または保持させた細胞を培養するために用いられる請求項１〜７のいずれか一項に記載の医療器具。
【請求項９】
細胞培養において、細胞が群体を形成しながら増殖する請求項８に記載の医療器具。
【請求項１０】
培養した細胞を緩衝液により浮遊して前記一面から離脱させる請求項８または９に記載の医療器具。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の医療器具の前記基材の前記一面上に、前記一面に接触または保持するよう細胞を播種する工程と、
前記細胞を培養して培養細胞を得る工程と、
前記一面上に緩衝液を添加して、前記一面から前記培養細胞を浮遊させる工程と、
を備える細胞培養方法。
【請求項１２】
基材を備え、かつ前記基材の一面に細胞を接触または保持させる医療器具の、前記基材の少なくとも細胞を保持させる前記一面を構成するフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物であって、下記一般式（１）で表される繰返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーを含むフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物。
【化２】
2019004884.tif 000018
（式（１）中、Ｒ１〜Ｒ４のうち、少なくとも１つは、フッ素、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルキル、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルコキシ、またはフッ素を含有する炭素数２〜１０のアルコキシアルキルである。Ｒ１〜Ｒ４がフッ素を含有しない基である場合、Ｒ１〜Ｒ４は、水素、炭素数１〜１０のアルキル、炭素数１〜１０のアルコキシ、または炭素数２〜１０のアルコキシアルキルから選ばれる。Ｒ１〜Ｒ４は互いに同一であっても異なっていてもよい。Ｒ１〜Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよい。）
【請求項１３】
請求項１２に記載のフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物において、
前記フッ素含有環状オレフィンポリマーの、ゲルパーミュエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）によって測定したポリスチレン換算の重量平均分子量（Ｍｗ）と数平均分子量（Ｍｎ）との比である分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）が１．３以上５．０以下であるフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物。
【請求項１４】
基材を備え、かつ前記基材の一面に細胞を接触または保持させる医療器具の、前記基材の少なくとも細胞を保持させる前記一面を構成するフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物であって、
下記一般式（１）で表される繰返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーと、
光硬化性化合物と、
光硬化開始剤と、
を含み、
前記フッ素含有環状オレフィンポリマーの、ゲルパーミュエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）によって測定したポリスチレン換算の重量平均分子量（Ｍｗ）と数平均分子量（Ｍｎ）との比である分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）が１．３以上５．０以下であるフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物。
【化３】
2019004884.tif 000019
（式（１）中、Ｒ１〜Ｒ４のうち、少なくとも１つは、フッ素、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルキル、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルコキシ、またはフッ素を含有する炭素数２〜１０のアルコキシアルキルである。Ｒ１〜Ｒ４がフッ素を含有しない基である場合、Ｒ１〜Ｒ４は、水素、炭素数１〜１０のアルキル、炭素数１〜１０のアルコキシ、または炭素数２〜１０のアルコキシアルキルから選ばれる。Ｒ１〜Ｒ４は互いに同一であっても異なっていてもよい。Ｒ１〜Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよい。）
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
本発明は、医療器具、細胞培養方法およびフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物に関する。