(57)【要約】      （修正有）【課題】膵炎を治療するための方法の提供。【解決手段】約５から約５０のアミノ酸からなるリンカーを介して結合するＩＬ−２２ドメインと二量体ドメインを含む２つの単量体サブユニットからなる、ＩＬ−２２二量体の有効用量を個体に投与することを含む、個体における膵炎を治療する方法。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効量のＩＬ−２２二量体を個体に投与することを含む、個体における膵炎を治療する方法。
【請求項２】
ＩＬ−２２二量体は、２つの単量体サブユニットを含み、各単量体サブユニットはＩＬ−２２ドメイン及び二量体ドメインを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
単量体サブユニットは、任意選択的なリンカー配列を介して二量体ドメインに結合したＩＬ−２２ドメインを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
リンカー配列は約５から約５０のアミノ酸である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
リンカー配列は配列番号１又は配列番号１０の配列を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
リンカー配列は配列番号１又は配列番号１０の配列を有する、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
二量体ドメインは分子間ジスルフィド結合を形成可能な少なくとも２つのシステインを含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
二量体ドメインはＦｃ断片の少なくとも一部を含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
Ｆｃ断片はＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
Ｆｃ断片は配列番号２又は配列番号９の配列を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
Ｆｃ断片は配列番号２又は配列番号９の配列を有する、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
単量体サブユニットの各々のＩＬ−２２ドメインは配列番号３の配列を有する、請求項２から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
単量体サブユニットの各々は配列番号４及び配列番号６から８から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
ＩＬ−２２二量体は静脈内投与される、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
ＩＬ−２２二量体は約２μｇ／ｋｇから約２００μｇ／ｋｇの量で投与される、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
ＩＬ−２２二量体は約５μｇ／ｋｇから約８０μｇ／ｋｇの量で投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
ＩＬ−２２二量体は約１０μｇ／ｋｇから約４５μｇ／ｋｇの量で投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
膵炎は急性膵炎である、請求項１から１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
膵炎は慢性膵炎である、請求項１から１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
膵炎はアルコール誘発性膵炎である、請求項１から１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
膵炎は再発性膵炎である、請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
個体は、血清アミラーゼの上昇、血清リパーゼの上昇、尿中アミラーゼの上昇、又はＣ反応性タンパク質の上昇を示す、請求項１から２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
ＩＬ−２２二量体は１週間に約１回以下で投与される、請求項１から２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
ＩＬ−２２二量体は１月に約１回以下で投与される、請求項１から２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
ＩＬ−２２二量体は３か月ごとに１回以下で投与される、請求項１から２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
有効量のＩＬ−２２二量体は個体における血清アミロイドＡタンパク質又はＣ反応性タンパク質のレベルの上昇をもたらす、請求項１から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
有効量のＩＬ−２２二量体は、個体におけるトリグリセリドの抑制をもたらす、請求項１から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
有効量のＩＬ−２２二量体は、炎症性サイトカインレベルの上昇をもたらさない、請求項１から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
炎症性サイトカインはＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−１β、及びＩＬ−８からなる群から選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
二量体ドメインはＩＬ−２２二量体サブユニットのＮ末端にある、請求項２から２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
二量体ドメインはＩＬ−２２二量体サブユニットのＣ末端にある、請求項２から２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
ＩＬ−２２二量体を含む、膵炎を治療するためのキット。
【請求項３３】
膵炎の治療及び／又は予防のための薬剤の製造におけるインターロイキン−２２（ＩＬ−２２）二量体の使用。
【請求項３４】
前記膵炎は、急性膵炎、慢性膵炎、アルコール性膵炎、再発性膵炎、胆汁逆流膵炎、間質性膵炎、壊死性膵炎及びＥＲＣＰ後膵炎からなる群から選択される、請求項３３に記載の使用。
【請求項３５】
前記ＩＬ−２２二量体は、式Ｉ： 
Ｍ１−Ｌ−Ｍ２      式Ｉ
［式中、
Ｍ１はＩＬ−２２の第１の単量体であり、
Ｍ２はＩＬ−２２の第２の単量体であり、
Ｌは前記第１の単量体と前記第２の単量体を接続しその間に配置されるリンカーである］
によって表される構造を有する、請求項３３に記載の使用。
【請求項３６】
リンカーＬは
（ｉ）３から５０のアミノ酸を含む短ペプチド、及び 
（ｉｉ）式ＩＩのポリペプチド：
−Ｚ−Ｙ−Ｚ      式ＩＩ
［式中、
Ｙは担体タンパク質であり、
Ｚは存在しないか、又は１から３０のアミノ酸を含む短ペプチドであり、
「−」は化学結合又は共有結合である］
からなる群から選択される、請求項３５に記載の使用。
【請求項３７】
担体タンパク質はアルブミン又はヒトＩｇＧのＦｃ断片である、請求項３６に記載の使用。
【請求項３８】
ＩＬ−２２二量体は２つの単量体サブユニットによって形成され、各単量体サブユニットは、ＩＬ−２２ドメイン、二量体ドメイン、及び、ＩＬ−２２ドメインと二量体ドメインとを接続する任意選択的なリンカーを含む、請求項３３に記載の使用。
【請求項３９】
前記単量体サブユニットは配列番号４及び配列番号６から８から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３８に記載の使用。
【請求項４０】
ＩＬ−２２二量体は、
（ａ）インビボにおけるアミラーゼ及び／又はリパーゼレベルの低減、
（ｂ）インビボにおける膵臓の浮腫の改善、
（ｃ）インビボにおける膵臓の腺房細胞及び／又は脂肪細胞の壊死の抑制、
（ｄ）インビボにおける膵臓の炎症細胞の浸潤の改善、
を含む１つ以上の生物活性から選択される生物活性を有する、請求項３３から３９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４１】
膵炎を治療又は予防するための医薬組成物であって、薬学的に許容される担体及び式ＩのＩＬ−２２二量体：
Ｍ１−Ｌ−Ｍ２      式Ｉ
［式中、
Ｍ１はＩＬ−２２の第１の単量体であり、
Ｍ２はＩＬ−２２の第２の単量体であり、
Ｌは前記第１の単量体と前記第２の単量体を接続しその間に配置されるリンカーである］
を含む、医薬組成物。
【請求項４２】
インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）二量体の使用であって、
（ａ）アミロイドＡタンパク質の血清レベルの上昇、
（ｂ）Ｃ反応性タンパク質の血清レベルの上昇、及び／又は
（ｃ）トリグリセリドの血清レベルの低下
のための薬剤の製造における、使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、全体を参照することによりその内容が本明細書に組み込まれる、中国特許出願第２０１３１０５４９６４８．Ｘ号の優先権の利益を主張する。
【０００２】
本発明は生物学的及び医療的技術の分野に関し、特に、本発明は、膵炎を治療するための薬剤の製造におけるＩＬ−２２二量体の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
膵炎は、トリプシノーゲンからトリプシンへの変換と、それに続く膵腺房細胞の自己消化によって生じると一般的に考えられている。疾患の経過によって、膵炎は、急性膵炎（ＡＰ）と慢性膵炎（ＣＰ）の２つの形態に分けられる。
【０００４】
急性膵炎の主な病因は、胆石（胆汁微小石灰化を含む）、高トリグリセリド血及びアルコール等である。他の原因としては、過食症、衝撃、妊娠、寄生生物感染、高脂血症、高カルシウム血、耳下腺炎等が挙げられる。さらには、ＡＰはまた、開腹手術、内視鏡的逆行性胆道膵管造影（ＥＲＣＰ）、内視鏡的超音波検査（ＥＵＳ）、電気けいれん療法、ならびに、ヒドロクロロチアジド、エタクリン酸、インドメタシン、経口避妊薬などの医薬といった医原性因子にも関連性がある。加えて、原因不明の、すなわち特発性の膵炎を患う患者が多数存在する。
【０００５】
急性膵炎は臨床的に一般的な疾患であり、急性膵炎の基礎病変には、浮腫、出血、及び壊死が含まれる。報告によれば、全患者の８５％が間質性膵炎を有し、１５％（範囲４〜４７％）が壊死性膵炎を有している。間質性膵炎を患う患者のおよそ１０％は臓器不全を経験するが、その大多数においては一過性であり、死亡率は非常に低い。壊死性膵炎を患う患者の中でも、３３％（範囲１６〜４７％）は感染性の壊死を有しており、壊死性膵炎での臓器不全の有病率中央値は５４％（範囲２９〜７８％）である。臓器不全の有病率は、感染性の壊死（３４〜８９％）では無菌性の壊死（４５〜７３％）の場合と同じであるか幾分高い。急性膵炎の全死亡率はおよそ５％であり、間質性膵炎では３％、壊死性膵炎では１７％（感染性の壊死では３０％、無菌性の壊死では１２％）である。臓器不全を有しない場合の死亡率は０であり、単一の臓器不全では３％（範囲０〜８％）、多臓器不全では４７％（範囲２８〜６９％）である（Peter A. Banks et al, Am J Gastroenterol, 101: 2379-2400, 2006）。現在、急性膵炎の治療は対症的であり、流体及び塩の置換ならびに疼痛管理で構成される。特に有効な薬物はまだない。
【０００６】
慢性膵炎は、さまざまな病因因子によって生じる、限局性又は広範性の膵臓の炎症である。再発性の重篤な急性膵炎は慢性膵炎へと進行しうる（Kloppel G, Maillet B. Hepatogastroenterology, 38(5):408-12, 1991）。慢性膵炎の発症の原因となるメカニズムは完全には理解されていない。現在の治療は主に、トリプシンの供給による代替療法、及び疼痛管理などの合併症の治療を含む。
【０００７】
Ｆｅｎｇらは、インターロイキン−２２がマウスのセルレイン誘発性膵炎を改善することを報告している（Int. J. Biol.Sci, 8(2), 249-257,2012）。
【０００８】
本明細書で参照されるすべての出版物、特許、特許出願及び特許出願公開公報の開示は、参照することによりそれらの全体が本明細書に取り込まれる。
【発明の概要】
【０００９】
膵炎の予防及び／又は治療のための薬剤の製造におけるＩＬ−２２二量体の使用を提供することが本発明の目的である。
【００１０】
本発明の１つの態様では、膵炎の治療及び／又は予防のための薬剤の製造におけるインターロイキン−２２（ＩＬ−２２）二量体の使用が提供される。
【００１１】
幾つかの実施態様では、膵炎は、急性膵炎、慢性膵炎、アルコール性膵炎、再発性膵炎, 胆汁逆流膵炎、間質性膵炎、壊死性膵炎、及びＥＲＣＰ後膵炎からなる群から選択される。
【００１２】
幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は、式Ｉ：
Ｍ１−Ｌ−Ｍ２      Ｉ
として示され、式中、
Ｍ１はＩＬ−２２の第１の単量体であり、
Ｍ２はＩＬ−２２の第２の単量体であり、
Ｌは前記第１の単量体と前記第２の単量体とを接続し、その間に配置されるリンカーである。
【００１３】
幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体はＩＬ−２２の生物活性を保持し、第１の単量体又は第２の単量体の血清半減期の２倍より長い血清半減期を有する。
【００１４】
幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体の血清半減期は、第１の単量体及び／又は第２の単量体の血清半減期の３倍、５倍、又は１０倍よりも長い。
【００１５】
好ましい実施態様では、リンカーＬは、
（Ｉ）３から５０のアミノ酸を含む短ペプチド；及び
（ｉｉ）式ＩＩのポリペプチド：
−Ｚ−Ｙ−Ｚ−      ＩＩ
からなる群から選択され、式中、
Ｙは担体タンパク質であり、
Ｚは存在しないか、又は１から３０のアミノ酸を含む短ペプチドであり、
「−」は化学結合又は共有結合である。
【００１６】
幾つかの実施態様では、「−」はペプチド結合である。
【００１７】
幾つかの実施態様では、Ｚは５から５０長のアミノ酸残基である。
【００１８】
幾つかの実施態様では、Ｚは配列番号１又は配列番号１０の配列を含む。
【００１９】
幾つかの実施態様では、Ｚは配列番号１又は配列番号１０の配列を有する。
【００２０】
幾つかの実施態様では、担体タンパク質は分子間ジスルフィド結合を形成可能な少なくとも２つのシステインを含む。
【００２１】
幾つかの実施態様では、担体タンパク質はＩＬ−２２単量体のＮ末端に配置される。
【００２２】
幾つかの実施態様では、担体タンパク質はＩＬ−２２単量体のＣ末端に配置される。
【００２３】
幾つかの実施態様では、担体タンパク質はアルブミン又はヒトＩｇＧのＦｃ断片である。
【００２４】
幾つかの実施態様では、Ｆｃ断片はＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。
【００２５】
幾つかの実施態様では、Ｆｃ断片は配列番号２又は配列番号９の配列を含む。
【００２６】
幾つかの実施態様では、Ｆｃ断片は配列番号２又は配列番号９の配列を有する。
【００２７】
幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は２つの単量体サブユニットによって形成され、各単量体サブユニットは、ＩＬ−２２ドメイン、二量体ドメイン及び、任意選択的にＩＬ−２２ドメインと二量体ドメインとを接続するリンカーを含む。
【００２８】
幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２ドメインはＩＬ−２２単量体であり、二量体ドメインはヒト免疫グロブリン（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４など）のＦｃ断片を含み、任意選択的なリンカーはＩＬ−２２単量体とＦｃ断片とを接続するペプチドであり、二量体は１つ以上のジスルフィド結合を介した２つの二量体ドメイン（Ｆｃ断片など）の接続によって形成される。
【００２９】
幾つかの実施態様では、前記ジスルフィド結合の数は２〜４である。
【００３０】
幾つかの実施態様では、各ＩＬ−２２二量体の単量体サブユニットは、配列番号４及び配列番号６〜８から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００３１】
幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体の第１の単量体と第２の単量体とは同一である。
【００３２】
幾つかの実施態様では、第１の単量体と第２の単量体とは異なる。
【００３３】
幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体の生物活性は、
（ａ）インビボにおけるアミラーゼ及び／又はリパーゼレベルの低減、
（ｂ）インビボにおける膵臓の浮腫の改善、
（ｃ）インビボにおける膵臓の腺房細胞及び／又は脂肪細胞の壊死の抑制、
（ｄ）インビボにおける膵臓の炎症細胞の浸潤の改善、
からなる群の中の１つ以上の生物活性から選択される。
【００３４】
本発明の別の態様では、薬学的に許容される担体と式ＩのＩＬ−２２二量体を含む、膵炎の予防及び／又は治療のための医薬組成物が提供される：
Ｍ１−Ｌ−Ｍ２      Ｉ
式中、
Ｍ１はＩＬ−２２の第１の単量体であり、
Ｍ２はＩＬ−２２の第２の単量体であり、
Ｌは前記第１の単量体と前記第２の単量体とを接続し、その間に配置されるリンカーである。
【００３５】
幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体はＩＬ−２２の生物活性を保持し、第１の単量体又は第２の単量体の血清半減期の２倍よりも長い血清半減期を有する。
【００３６】
本発明の別の態様では、アミロイドＡタンパク質（ＳＡＡ）及び／又はＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の血清レベルを上昇させるため、及び／又はトリグリセリド（ＴＧ）の血清レベルを低下させるための薬剤の製造におけるＩＬ−２２二量体の使用が提供される。
【００３７】
本発明の別の態様では、有効量のＩＬ−２２二量体を個体に投与（静脈内投与など）を含む、個体における膵炎の治療方法が提供される。
【００３８】
幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は２つの単量体サブユニットを含み、各単量体サブユニットはＩＬ−２２ドメイン及び二量体ドメインを含む。
【００３９】
幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体の各単量体サブユニットは、任意選択的なリンカー配列を介して二量体ドメインに結合したＩＬ−２２ドメインを含む。
【００４０】
幾つかの実施態様では、リンカー配列は約５から約５０のアミノ酸である。
【００４１】
幾つかの実施態様では、リンカー配列は配列番号１又は配列番号１０の配列を含む。
【００４２】
幾つかの実施態様では、リンカー配列は配列番号１又は配列番号１０の配列を有する。
【００４３】
幾つかの実施態様では、二量体ドメインは分子間ジスルフィド結合を形成可能な少なくとも２つのシステインを含む。
【００４４】
幾つかの実施態様では、二量体ドメインはＦｃ断片の少なくとも一部を含む。
【００４５】
幾つかの実施態様では、Ｆｃ断片はＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。
【００４６】
幾つかの実施態様では、Ｆｃ断片は配列番号２又は配列番号９の配列を含む。
【００４７】
幾つかの実施態様では、Ｆｃ断片は配列番号２又は配列番号９の配列を有する。
【００４８】
幾つかの実施態様では、各単量体サブユニットのＩＬ−２２ドメインは配列番号３の配列を有する。
【００４９】
幾つかの実施態様では、各単量体サブユニットは配列番号４及び配列番号６〜８から選択される配列を有する。
【００５０】
幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は静脈内投与される。
【００５１】
幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は約２μｇ／ｋｇから約２００μｇ／ｋｇの量で投与される。
【００５２】
幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は約５μｇ／ｋｇから約８０μｇ／ｋｇの量で投与される。
【００５３】
幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は約１０μｇ／ｋｇから約４５μｇ／ｋｇの量で投与される。
【００５４】
幾つかの実施態様では、膵炎は急性膵炎である。
【００５５】
幾つかの実施態様では、膵炎は慢性膵炎である。
【００５６】
幾つかの実施態様では、膵炎は間質性膵炎である。
【００５７】
幾つかの実施態様では、膵炎は壊死性膵炎である。
【００５８】
幾つかの実施態様では、膵炎はアルコール誘発性膵炎である。
【００５９】
幾つかの実施態様では、膵炎は再発性膵炎である。
【００６０】
幾つかの実施態様では、膵炎は胆汁逆流性膵炎である。
【００６１】
幾つかの実施態様では、膵炎はＥＲＣＰ誘発性膵炎である。
【００６２】
幾つかの実施態様では、個体は、血清アミラーゼの上昇、血清リパーゼの上昇、 尿中アミラーゼの上昇、又はＣ反応性タンパク質の上昇を示す。
【００６３】
幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は毎週約１回以下で投与される。
【００６４】
幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は毎月約１回以下で投与される。
【００６５】
幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は３か月毎に約１回以下で投与される。
【００６６】
幾つかの実施態様では、有効量のＩＬ−２２二量体は個体における血清アミロイドＡタンパク質又はＣ反応性タンパク質レベルの上昇をもたらす。
【００６７】
幾つかの実施態様では、有効量のＩＬ−２２二量体は個体におけるトリグリセリドの抑制をもたらす。
【００６８】
幾つかの実施態様では、有効量のＩＬ−２２二量体は炎症性サイトカインレベルの上昇をもたらさない。
【００６９】
幾つかの実施態様では、炎症性サイトカインはＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−１β、及びＩＬ−８から選択される。
【００７０】
幾つかの実施態様では、有効量のＩＬ−２２二量体はインビボにおけるアミラーゼ及び／又はリパーゼレベルの低下をもたらす。
【００７１】
幾つかの実施態様では、有効量のＩＬ−２２二量体はインビボにおける膵臓の浮腫を改善する。
【００７２】
幾つかの実施態様では、有効量のＩＬ−２２二量体は、インビボにおける膵臓の腺房細胞及び／又は脂肪細胞の壊死を抑制する。
【００７３】
幾つかの実施態様では、有効量のＩＬ−２２二量体は、インビボにおける膵臓の炎症性細胞浸潤を改善する。
【００７４】
幾つかの実施態様では、二量体ドメインはＩＬ−２２二量体サブユニットのＮ末端にある。
【００７５】
幾つかの実施態様では、二量体ドメインはＩＬ−２２二量体サブユニットのＣ末端にある。
【００７６】
新規の又はより良好な技術的解決法を結果的にもたらすために、上述しかつ以下の実施例で論じられる本発明の技術的特徴を互いに組み合わせうることは、当業者にとって明白である。よって、本発明は本明細書に記載される実施態様に限定されると解釈されるべきではない。
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１】本発明に従った典型的なＩＬ−２２二量体の例示。図において、「−」はリンカーを表し、「ＩＬ−２２」と記された卵型の物体はＩＬ−２２単量体を表す。
【図２】本発明に従った典型的なＩＬ−２２二量体の例示。図において、「−」はアミノ酸リンカーを表し、「ＩＬ−２２」と記された卵型の物体はＩＬ−２２単量体を表す。図２Ａに例示されるように、「Ｃ」と記された卵型の物体は担体タンパク質を表し、ＩＬ−２２は担体タンパク質のＮ末端に配置される。図２Ｂに例示されるように、「Ｆｃ」と記された半卵型の物体は二量体ドメインであるＦｃ断片を表し、二量体がジスルフィド結合を介した２つのＦｃ断片の結合によって形成されることを示している。
【図３】本発明に従った典型的なＩＬ−２２二量体の例示。図において、「−」はアミノ酸リンカーを表し、「ＩＬ−２２」と記された卵型の物体はＩＬ−２２単量体を表す。図３Ａに例示されるように、「Ｃ」と記された卵型の物体は担体タンパク質を表し、ＩＬ−２２は担体タンパク質のＣ末端に配置される。図３Ｂに例示されるように、「Ｆｃ」と記された半卵型の物体は二量体ドメインであるＦｃ断片を表し、二量体がジスルフィド結合を介した２つのＦｃ断片の結合によって形成されることを示している。
【図４】インビトロ活性実験におけるＣｏｌｏ２０５細胞のＩＬ−２２及びＩＬ−２２二量体の増殖促進効果を示す。
【図５】インビトロ活性実験におけるＣｏｌｏ２０５細胞のＩＬ−２２及びＩＬ−２２二量体のＳＴＡＴ３刺激効果を示す。
【図６】投与後のラットにおける膵臓組織のＩＬ−２２二量体の分布を示す。ＳＤラットは尾静脈を介した３０μｇ／ｋｇの１２５Ｉ標識化ＩＬ−２２二量体の単回静脈注射を受けた。注射後それぞれ２、２４、及び４８時間の時点での臓器組織の放射能計数を測定した。
【図７】投与後のカニクイザルの膵臓組織のＩＬ−２２二量体の分布を示す。カニクイザルは１００μｇ／ｋｇのＩＬ−２２二量体の単回静脈注射を受けた。注射後２時間の時点で臓器組織における薬物濃度を測定した。
【図８Ａ】ＩＬ−２２二量体の静脈内投与後の経時によるヒトのアミロイドタンパク質（ＳＡＡ）の血清レベルの変化を示す。
【図８Ｂ】ＩＬ−２２二量体の静脈内投与後の経時によるヒトのＣ反応性タンパク質の血清レベルの変化を示す。
【図８Ｃ】ＩＬ−２２二量体の静脈内投与後の経時によるヒトのトリグリセリドの血清レベルの変化を示す。
【図８Ｄ】ＩＬ−２２二量体の静脈内投与後の経時によるヒトのさまざまなサイトカインの血清レベルにおける効果を示す。
【図９Ａ】膵炎モデルラットにおける血清アミラーゼレベルに対するＩＬ−２２二量体及びＩＬ−２２二量体の効果を示す。
【図９Ｂ】膵炎モデルラットにおける血清リパーゼレベルに対するＩＬ−２２二量体及びＩＬ−２２二量体の効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００７８】
本明細書は、有効量のＩＬ−２２二量体を投与（静脈内投与など）することにより膵炎を予防及び／又は治療する方法を提供する。膵炎のしっかりと確立された動物モデルを使用して、発明者らはＩＬ−２２二量体が膵炎の治療に非常に効果的であり、膵炎の個体における血清アミラーゼ及び／又はリパーゼレベルを顕著に低減することができ、インビボにおける膵臓浮腫を改善し、膵臓の腺房細胞及び／又は脂肪細胞の壊死を抑制し、インビボにおける膵臓の炎症性細胞浸潤を改善することを実証した。驚くべきことに、ＩＬ−２２二量体は、インビトロアッセイでは活性の低下を示すが、等モルの投与量で、ＩＬ−２２二量体のインビボ生物活性はＩＬ−２２単量体のものよりも顕著に強いことが見出された。驚くべきことに、ＩＬ−２２二量体の皮下注射は注射部位における有害事象の遅延をもたらすが、ＩＬ−２２二量体の静脈注射は優れた忍容性及び安全性を示すことも見出された。さらには、ＩＬ−２２二量体の投与はヒトにおける炎症性サイトカインの血清レベルの上昇はもたらさない。
【００７９】
よって、幾つかの実施態様では、有効量のＩＬ−２２二量体を個体に投与（静脈内投与など）することを含む、膵炎を予防及び／又は治療する方法が提供される。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は静脈内プッシュ（ＩＶＰ）によって投与される。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は静脈内注入によって投与される。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は持続静脈内注入によって投与される。
【００８０】
幾つかの実施態様では、有効量のＩＬ−２２二量体を個体に投与（静脈内投与など）することを含む、膵炎を患う個体における炎症を抑制する方法が提供される。
【００８１】
幾つかの実施態様では、有効量のＩＬ−２２二量体を個体に投与（静脈内投与など）することを含む、個体における膵炎の１つ以上の症状を軽減する方法が提供される。
【００８２】
幾つかの実施態様では、有効量のＩＬ−２２二量体を個体に投与（静脈内投与など）することを含む、膵炎を患う個体における生活の質を向上させる方法が提供される。
【００８３】
幾つかの実施態様では、有効量のＩＬ−２２二量体は、膵炎を患う個体における血清アミラーゼレベルの低下をもたらす。幾つかの実施態様では、有効量のＩＬ−２２二量体を個体に投与（静脈内投与など）することを含む、膵炎を患う個体における血清アミラーゼレベルを低下させる方法が提供される。幾つかの実施態様では、血清アミラーゼレベルは、治療前のレベルと比較して、少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍低減される。幾つかの実施態様では、有効量のＩＬ−２２二量体は、膵炎を患う個体における血清リパーゼレベルの低下をもたらす。幾つかの実施態様では、有効量のＩＬ−２２二量体を個体に投与（静脈内投与など）することを含む、膵炎を患う個体における血清リパーゼレベルを低減する方法が提供される。幾つかの実施態様では、血清リパーゼレベルは、治療前のレベルと比較して、少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍低下する。幾つかの実施態様では、有効量の ＩＬ−２２二量体は、膵臓の腺房細胞及び／又は脂肪細胞の壊死を抑制し、膵炎を患う個体における膵臓の浮腫及び炎症性細胞浸潤を改善する。幾つかの実施態様では、有効量のＩＬ−２２二量体を個体に投与（静脈内投与など）することを含む、膵炎を患う個体における膵臓腺房細胞及び／又は脂肪細胞の壊死を抑制する方法が提供される。幾つかの実施態様では、有効量のＩＬ−２２二量体を個体に投与（静脈内投与など）することを含む、膵炎を患う個体の膵臓における浮腫及び炎症細胞浸潤を改善する方法が提供される。
【００８４】
幾つかの実施態様では、個体の血清アミロイドＡタンパク質レベルの上昇をもたらす有効量のＩＬ−２２二量体を個体に投与（静脈内投与など）することを含む、膵炎を予防及び／又は治療する方法が提供される。幾つかの実施態様では、有効量のＩＬ−２２二量体を個体に投与（静脈内投与など）することを含む、膵炎を患う個体における血清アミロイドＡタンパク質レベルを上昇させる方法が提供される。幾つかの実施態様では、血清アミロイドＡタンパク質レベルは、治療前のレベルと比較して少なくとも約５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、５０倍、１００倍、１５０倍、２００倍、５００倍、１０００倍、２０００倍、又は２５００倍上昇する。幾つかの実施態様では、個体におけるＣ反応性タンパク質レベルの上昇をもたらす有効量のＩＬ−２２二量体を個体に投与（静脈内投与など）することを含む、膵炎を予防及び／又は治療する方法が提供される。幾つかの実施態様では、有効量のＩＬ−２２二量体を個体に投与（静脈内投与など）することを含む、膵炎を患う個体におけるＣ反応性タンパク質レベルを上昇させる方法が提供される。幾つかの実施態様では、Ｃ反応性タンパク質レベルは、治療前のレベルと比較して、少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、５０倍、又は１００倍上昇する。幾つかの実施態様では、個体におけるトリグリセリドレベルの低下をもたらす有効量のＩＬ−２２二量体を個体に投与（静脈内投与など）することを含む、膵炎を予防及び／又は治療する方法が提供される。幾つかの実施態様では、有効量のＩＬ−２２二量体を個体に投与（静脈内投与など）することを含む、膵炎を患う個体におけるトリグリセリドレベルを低減する方法が提供される。幾つかの実施態様では、トリグリセリドレベルは、治療前のレベルと比較して、少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、又は３０倍低下する。
【００８５】
幾つかの実施態様では、炎症性サイトカイン（ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−１β、及びＩＬ−８からなる群から選択される１つ以上の炎症性サイトカインなど）のレベルの上昇をもたらさない、有効量のＩＬ−２２二量体を個体に投与（静脈内投与など）することを含む膵炎の治療方法が提供される。幾つかの実施態様では、血清アミラーゼレベルの低下、血清リパーゼレベルの低下、膵臓における腺房細胞及び／又は脂肪細胞の壊死の抑制、膵臓における浮腫及び炎症性細胞浸潤の改善、血清アミロイドＡタンパク質レベルの上昇、Ｃ反応性タンパク質レベルの上昇、及びトリグリセリドレベルの低下を含むがこれらに限られない、前述の治療のエンドポイントのうち２つ以上をもたらす、有効量のＩＬ−２２二量体を個体に投与（静脈内投与など）することを含む膵炎を治療する方法が提供される。
【００８６】
本発明において用いられる用語「治療／療法」とは、対象の疾患、症状、又は素因を治癒、改善、好転、低減、遅延、及び／又は作用するために、必要とする対象にＩＬ−２２二量体を投与することを指す。
【００８７】
用語「有効（投与）量」とは、それを必要とする対象に治療目標を達成することができるＩＬ−２２二量体の投与量のことを指す。「治療的有効（投与）量」が投与経路、用いられる賦形剤の種類及び他の医薬との組み合わせに応じて変化しうることは、当業者によって理解されるべきである。用語「治療されるべき個体」又は「個体」とはヒトなどの哺乳動物のことを指す。個体は、ヒト、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、齧歯動物、又は霊長類を含むがこれらに限られない。幾つかの実施態様では、個体はヒトである。幾つかの実施態様では、治療されるべき個体は１６歳以下、１８歳以下、２５歳以下、３５歳以下、４５歳以下、５５歳以下、６５歳以下、又は７５歳以下である。幾つかの実施態様では、治療されるべき個体は１６歳以上、１８歳以上、２５歳以上、３５歳以上、４５歳以上、５５歳以上、６５歳以上、又は７５歳以上である。
【００８８】
幾つかの実施態様では、治療されるべき個体は、１以上、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、８以上、９以上、１０以上、又は１１以上のＲａｎｓｏｎ基準スコアを有する。幾つかの実施態様では、治療されるべき個体は、１以上、２以上、３以上、又は４のＣＴ重症度指数スコアを有する。幾つかの実施態様では、個体は、１以上、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、７以上、８以上、９以上、又は１０の修正ＣＴ重症度指数スコアを有する。幾つかの実施態様では、個体は、１以上、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、７以上、８以上、９以上、１０以上、１１以上、１５以上、２０以上、２５以上、３０以上、３５以上、又は４０以上のＡＰＡＣＨＥ  ＩＩスコアを有する。幾つかの実施態様では、個体は、１以上、２以上、３以上、４以上、５以上、１０以上、１５以上、２０以上、２５以上、３０以上、３５以上、４０以上、４５以上、又は５０以上のＡＰＡＣＨＥ ＩＩスコアを有する。幾つかの実施態様では、治療されるべき個体は、１以上、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、７以上、又は８以上の修正グラスゴースコアを有する。幾つかの実施態様では、個体は上述の特徴の２つ以上を有する。幾つかの実施態様では、治療されるべき個体は急性膵炎の典型的な画像の変化によって特徴づけられる。幾つかの実施態様では、治療されるべき個体は、悪心、腹痛又は圧痛、嘔吐、消化不良、体重減少、脂肪便、病的変化、急性炎症、空胞変性（腺房の空胞変性など）、好中球浸潤、浮腫、膵石、胆石、胆管結石、膵嚢胞、高体温又は低体温、高心拍数、高呼吸数、内出血、黄疸、糖尿病、壊死（腺房壊死など）、膵臓がん、及び臓器不全を含むがこれらに限られない、１つ以上の膵炎の症状を示す。
【００８９】
幾つかの実施態様では、治療されるべき個体は血清アミラーゼレベルの上昇（約１２０Ｕ／Ｌ超、約１５０Ｕ／Ｌ超、約２００Ｕ／Ｌ超、３００Ｕ／Ｌ超、又は約４００Ｕ／Ｌ超など）、尿中アミラーゼの上昇（約４０Ｕ／ｈ超、約８０Ｕ／ｈ超、約１２０Ｕ／ｈ超、又は約１６０Ｕ／ｈ超など）を示す。幾つかの実施態様では、治療されるべき個体は、血清リパーゼレベルの上昇（約１５０Ｕ／Ｌ超、約２００Ｕ／Ｌ超、約３００Ｕ／Ｌ超、又は約４００Ｕ／Ｌ超、又は約５００Ｕ／Ｌ超など）を示す。幾つかの実施態様では、治療されるべき個体は、正常値の上限レベルの少なくとも３倍の血清アミラーゼレベル及び／又は血清リパーゼレベルを示す。幾つかの実施態様では、治療されるべき個体は、血清Ｃ反応性タンパク質の上昇（約２５ｍｇ／Ｌ超、約５０ｍｇ／Ｌ超、約１００ｍｇ／Ｌ超、約１５０ｍｇ／Ｌ超、約２００ｍｇ／Ｌ超、約２５０ｍｇ／Ｌ超、約３００ｍｇ／Ｌ超、又は約４００ｍｇ／Ｌ超など）を示す。
【００９０】
幾つかの実施態様では、治療されるべき個体は、血清アラニントランスアミナーゼの上昇（約４０Ｕ／Ｌ超、約５０Ｕ／Ｌ超、約６０Ｕ／Ｌ超、約７５Ｕ／Ｌ超、又は約１５０Ｕ／Ｌ超など）を示す。幾つかの実施態様では、治療されるべき個体は、血清ＩＬ−６又はＩＬ−８レベルの上昇又は血中ホスホリパーゼＡ２の上昇（約３Ｕ／Ｌ超、約７Ｕ／Ｌ超、約１５Ｕ／Ｌ超、約３０Ｕ／Ｌ超、約６０Ｕ／Ｌ超、又は約１００Ｕ／Ｌ超など）を示す。幾つかの実施態様では、治療されるべき個体は、血清プロカルシトニンレベルの上昇（約３ｎｇ／ｍＬ超、約４ｎｇ／ｍＬ超、約５ｎｇ／ｍＬ超、又は約７．５ｎｇ／ｍＬ超など）を示す。幾つかの実施態様では、治療されるべき個体は、尿中トリプシノーゲン活性化ペプチドの上昇（約３ｎｇ／ｍＬ超、約６ｎｇ／ｍＬ超、約１０ｎｇ／ｍＬ超、約２０ｎｇ／ｍＬ超、又は約３０ｎｇ／ｍＬ超など）を示す。幾つかの実施態様では、治療されるべき個体は、血清トリプシノーゲン活性化ペプチドの上昇を示す。幾つかの実施態様では、治療されるべき個体は、便中膵エラスターゼレベルの低下（約２００μｇ／ｇ未満、約１５０μｇ／ｇ未満、約１００μｇ／ｇ未満、又は約５０μｇ／ｇ未満など）を示す。幾つかの実施態様では、治療されるべき個体は、白血球数の上昇（約１２０００細胞／ｍｍ３超、約１４０００細胞／ｍｍ３超、約１６０００細胞／ｍｍ３超、約１８０００細胞／ｍｍ３超、又は約２００００細胞／ｍｍ３超など）を示す。幾つかの実施態様では、治療されるべき個体は、血清カルシウムレベルの低下（約１０ｍｇ／ｍＬ未満、約８ｍｇ／ｍＬ未満、約６ｍｇ／ｍＬ未満、約４ｍｇ／ｍＬ未満、又は約２ｍｇ／ｍＬ未満など）を示す。幾つかの実施態様では、治療されるべき個体は、血清アスパラギン酸トランスアミナーゼの上昇（約３０Ｕ／Ｌ超、約４０Ｕ／Ｌ超、約５０Ｕ／Ｌ超、約６０Ｕ／Ｌ超、又は約７５Ｕ／Ｌ超など）を示す。幾つかの実施態様では、治療されるべき個体は、血清乳酸デヒドロゲナーゼ（約２５０ＩＵ／Ｌ超、約３００ＩＵ／Ｌ超、約３５０ＩＵ／Ｌ超、約４００ＩＵ／Ｌ超、又は約４５０ＩＵ／Ｌ超など）を示す。幾つかの実施態様では、治療されるべき個体は、血糖の上昇（約１８０ｍｇ／ｄＬ超、約２００ｍｇ／ｄＬ超、約２２０ｍｇ／ｄＬ超、約２６０ｍｇ／ｄＬ超、又は約３００ｍｇ／ｄＬ超など）を示す。幾つかの実施態様では、治療されるべき個体は、塩基欠乏（約３ｍＥｑ／Ｌ超、約４ｍＥｑ／Ｌ超、約５ｍＥｑ／Ｌ超、又は約６ｍＥｑ／Ｌ超など）を示す。
【００９１】
本明細書ではさまざまな種類の膵炎が予防又は治療可能である。
【００９２】
幾つかの実施態様では、膵炎は、アルコール性膵炎（例えば、慢性的なアルコール飲用）、遺伝性膵炎、嚢胞性線維型膵炎（cystic fibrosis pancreatitis）、外傷誘発性膵炎、熱帯性膵炎、栄養不良誘発性膵炎、高カルシウム血性膵炎、石灰化膵炎（例えば、膵石、胆石、又は胆管結石などの結石によって生じる）、自己免疫性膵炎、又は特発性膵炎を含むがこれらに限られない、慢性膵炎である。
【００９３】
幾つかの実施態様では、膵炎は急性膵炎である。幾つかの実施態様では、急性膵炎は単発の事象である。幾つかの実施態様では、急性膵炎は再発性である。急性膵炎は、アルコール誘発性膵炎（例えば、急性アルコール摂取）、胆石性膵炎、胆管膵炎、内視鏡的逆行性膵胆管造影後膵炎、又は特発性膵炎を含むがこれらに限られない。幾つかの実施態様では、急性膵炎は、コクサッキー（coxackie）ウイルス、サイトメガロウイルス、Ｂ型肝炎、単純ヘルペスウイルス、おたふく風邪、及び水痘帯状疱疹ウイルスなどのウイルス感染によって生じる。幾つかの実施態様では、急性膵炎は、レジオネラ、レプトスピラ、マイコプラズマ、又はサルモネラによって引き起こされる感染などの細菌感染によって生じる。幾つかの実施態様では、急性膵炎は、アスペルギルス菌感染に起因して生じる。幾つかの実施態様では、急性膵炎は、回虫、クリプトスポリジウム、及びトキソプラズマなどの寄生生物感染によって生じる。
【００９４】
幾つかの実施態様では、膵炎は、さまざまな病状の治療に使用されるもの又は違法使用のものなど、薬物使用の結果として生じる。例えば、幾つかの実施態様では、膵炎は、ジダノシン、アスパラギナーゼ、メサラミン、ホルモン、アヘン剤、テトラサイクリン、シタラビン、ＡＣＥ阻害剤、バルプロ酸、アザチオプリン、スルファサラジン、フロセミド、スリンダク、ステロイド、又はＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤の投与と関連づけられたときに治療することができる。
【００９５】
幾つかの実施態様では、遺伝性膵炎又は家族性膵炎が治療されうる。例えば、幾つかの実施態様では、トリプシン−１（カチオン性トリプシノーゲン又はＰＲＳＳ１とも呼ばれる）、セリンプロテアーゼ阻害剤Ｋａｚａｌ１型（ＳＰＩＮＫ１）、又は嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）の変異を伴う個体における膵炎を治療することができる。幾つかの実施態様では、変異は原因遺伝子又はコードタンパク質の切断によって生じる。
【００９６】
幾つかの実施態様では、膵炎は、高カルシウム血、高脂血症、高アミラーゼ血症、腹部外傷、胃潰瘍、さそり刺症、低体温症、膵管癒合不全、妊娠、糖尿病、外科手術、膵臓がん、及び血管炎を含むがこれらに限られない他の因子に関連する。幾つかの実施態様では、自己免疫性疾患によって生じる膵炎を治療することができる。幾つかの実施態様では、特発性膵炎を治療することができる。
【００９７】
幾つかの実施態様では、膵炎は胆管の胆石又は他の閉塞によって生じる。胆嚢と膵臓は、器官を消化管に接続する単一のドレナージ管を共有していることから、管内に詰まる胆石は膵臓から出る消化酵素の流れを遮断し、結果として急性の胆石性膵炎を生じる。胆管膵炎の他の形態は、胆泥の通過又は胆膵灌流を生じる胆管内の解剖学的異常によって生じうる。
【００９８】
幾つかの実施態様では、膵炎は内視鏡的逆行性胆道膵管造影（ＥＲＣＰ）によって生じる。ＥＲＣＰはしばしば、例えば、胆石、黄疸、又は腫瘍などの胆管系又は膵管系内の問題又は異常を診断又は治療するために用いられる。しかしながら、この手法は、時折、膵炎を生じさせる。
【００９９】
膵炎は診断することができ、治療は、超音波（超音波内視鏡など）、 コンピューター断層撮影（ＣＴ）、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）、又は他の内部視覚化技術を含むがこれらに限られないさまざまな方法で評価することができる。内視鏡的逆行性胆道膵管造影（ＥＲＣＰ）又は磁気共鳴胆道膵管造影（ＭＲＣＰ）もまた、膵炎の治療のエンドポイントを診断又は評価するために、膵臓、胆嚢、及び胆管の視覚化に用いられうる。
【０１００】
超音波内視鏡を使用する診断及び治療の評価では、評価基準は、膵実質（pancreatic panenchyma）、膵嚢胞、不規則な膵管輪郭、又は拡張した膵管の高エコー病巣、高エコーストランド、又は高エコー小葉のうち１つ以上を含みうる。ＢａｌｔｈａｚａｒらのRadiology 156:767-772 (1985)、ＢａｌｔｈａｚａｒのRadiology 174:331-336 (1990)、又はＭｏｒｔｅｌｅらのAm. J. Roentgenology, 183: 1261-1265 (2004)などに記載されるＣＴ重症度指数もまた使用されうる。幾つかの実施態様では、腹壁浮腫、又はYang, et al., Eur.J. Radiology, 81:3041-3047 (2012)に記載されるＭＲＩ重症度指数（ＭＲＳＩ）でのスコアの上昇の所見もまた、評価基準として用いられうる。幾つかの実施態様では、胆管又は胆嚢結石の視覚化もまた評価基準として用いられうる。
【０１０１】
ＩＬ−２２
本明細書では、用語「インターロイキン−２２」又は「ＩＬ−２２」とは、（ａ）Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒらの米国特許第６，３５９，１１７号に記載されるヒト／マウスＩＬ−２２と同一のアミノ酸配列、及び（ｂ）天然のＩＬ−２２と同一の生物活性を本質的に有するタンパク質のことを指す。本発明のＩＬ−２２は、ヒトＩＬ−２２、組み換えヒトＩＬ−２２、マウスＩＬ−２２及び／又は組み換えマウスＩＬ−２２を含むがこれらに限定されない。
【０１０２】
具体的には、ＩＬ−１０関連Ｔ細胞由来誘導性因子（ＩＬ−ＴＩＦ）としても知られるインターロイキン−２２（ＩＬ−２２）は、活性化Ｔ細胞及びナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）において発現しそこから分泌される糖タンパク質である。活性化Ｔ細胞は、主にＣＤ４＋細胞、数ある中でもとりわけ、ＣＤ２８経路活性化Ｔｈ１細胞、Ｔｈ１７細胞及びＴｈ２２細胞である。ＩＬ−２２ ｍＲＮＡの発現は、マウスのＩＬ−９模倣Ｔ細胞及び肥満細胞ならびにコンカナバリンＡ（Ｃｏｎ Ａ）刺激脾臓細胞において最初に同定された（Dumoutier, et al., J. Immunology, 164:1814- 1819, 2000）。ヒトＩＬ−２２ ｍＲＮＡは、抗ＣＤ３又はＣｏｎ Ａによって刺激されると、主に末梢Ｔ細胞で発現される。
【０１０３】
天然のＩＬ−２２前駆体ペプチドは１７９アミノ酸残基からなり、一方、成熟ペプチドは１４６アミノ酸残基からなる。Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒは、マウス及びヒトのＩＬ−２２クローン化ＤＮＡ配列を最初に報告した（Dumoutier, et al., 2000; 米国特許第６，３５９，１１７号及び米国特許第６，２７４，７１０号）。ＩＬ−２２は、ＬＰＳで刺激すると、活性化Ｔ細胞（とりわけＴｈ１７細胞）、レクチン刺激脾臓細胞（Duroutier JI 2002）、ＩＬ−２／ＩＬ−１２刺激ＮＫ細胞（Wolk, K et al, J.Immunology, 168:5379-5402, 2002）、及び、消化管、肝臓、胃、腎臓、肺、心臓、胸腺、脾臓を含む複数の器官及び組織で主に発現され、これらの器官及び組織における ＩＬ−２２の発現の増加を測定することができる。ＩＬ−２２ は、ＩＬ−２２Ｒ１受容体とＩＬ−１０Ｒ２受容体の組み合わせを通じて生物学的機能を発現する。ＩＬ−２２Ｒ１はＩＬ−２２に特異的な受容体であり、皮膚、腎臓、消化器系（膵臓、小腸、肝臓、大腸、結腸）及び呼吸器系（肺、気管支）で発現される。発表された研究により ＩＬ−２２が免疫修飾物質であることが実証された。
【０１０４】
ＩＬ−２２二量体
本発明のＩＬ−２２二量体の構造は式Ｉに例示される。図１から３は本発明のＩＬ−２２二量体の代表的な構造を例証しており、担体タンパク質はヒトＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４など）のＦｃ断片、又はヒトアルブミンを含むがこれらに限られない。
【０１０５】
幾つかの実施態様では、本発明のＩＬ−２２二量体は、各単量体サブユニットがＩＬ−２２ドメイン及び二量体ドメインを含む、２つの単量体サブユニットを含む。各単量体サブユニットは、任意選択的なリンカー配列を介して二量体ドメインに結合したＩＬ−２２ドメインを含む。ＩＬ−２２ドメインは、二量体ドメインのＣ末端又はＮ末端に存在しうる。ＩＬ−２２二量体の担体タンパク質は二量体化を介した２つの二量体ドメインによって形成されている。典型的なＩＬ−２２二量体のアミノ酸配列は 配列番号５に示されており、ここでアミノ酸残基１−１４６はＩＬ−２２を表し、アミノ酸残基１４７−１６２はリンカーを表し、残基１６３−３０８は別のＩＬ−２２を表している。
【０１０６】
この実施態様のＩＬ−２２二量体の形成に用いられる、Ｆｃ断片を伴う典型的なＩＬ−２２単量体のアミノ酸配列は配列番号４に示されており、ここでアミノ酸残基１−１４６はＩＬ−２２を表し、アミノ酸残基１４７−１６２はリンカーを表し、残基１６３−３８５はヒトＩｇＧ２のＦｃ断片を表している。二量体は、Ｆｃ断片のカップリングを介して、Ｆｃ断片を伴う２つのＩＬ−２２単量体によって形成されている。
【０１０７】
この実施態様のＩＬ−２２二量体の形成に用いられる、Ｆｃ断片を伴う典型的なＩＬ−２２単量体のアミノ酸配列は配列番号６に示されており、ここでアミノ酸残基１−１４６はＩＬ−２２を表し、アミノ酸残基１４７−１５２はリンカーを表し、残基１５３−３７５はヒトＩｇＧ２のＦｃ断片を表している。二量体は、Ｆｃ断片のカップリングを介して、Ｆｃ断片を伴う２つのＩＬ−２２単量体で形成されている。この実施態様のＩＬ−２２二量体の形成に用いられる、Ｆｃ断片を伴うＩＬ−２２単量体のアミノ酸配列は配列番号７に示されており、ここでアミノ酸残基１−２２３はヒトＩｇＧ２のＦｃ断片を表し、アミノ酸残基２２４−２３９はリンカーを表し、残基２４０−３８５はＩＬ−２２を表している。二量体は、Ｆｃ断片のカップリングを介して、Ｆｃ断片を伴う２つのＩＬ−２２単量体で形成されている。この実施態様のＩＬ−２２二量体の形成に用いられる、Ｆｃ断片を伴う２つのＩＬ−２２単量体のアミノ酸配列は配列番号８に示されており、ここでアミノ酸残基１−２２３はヒトＩｇＧ２のＦｃ断片を表し、アミノ酸残基２２４−２２９はリンカーを表し、残基２３０−３７５はＩＬ−２２を表している。二量体は、Ｆｃ断片のカップリングを介して、Ｆｃ断片を伴う２つのＩＬ−２２単量体で形成されている。
【０１０８】
本明細書及び特許請求の範囲において、用語「リンカーペプチド」又は「リンカー」は、１つのＩＬ−２２単量体と担体タンパク質の間、又は１つのＩＬ−２２単量体（又はＩＬ−２２ドメイン）と二量体ドメインとの間に配置され、かつ、２つのドメインを互いに接続するオリゴペプチドのことを指す。リンカーの長さに特別な制限は存在しない。リンカーは、通常、５から５０長のアミノ酸残基である。一般に、リンカーは、２つのＩＬ−２２単量体の立体配置によって形成される適切な折り畳みと配座に影響を与えないか、又は顕著に影響を与える。リンカーの幾つかの例は、含む（が限定されない）。
【０１０９】
好ましくは、リンカーは、下記から選択されるアミノ酸配列を含む：
（ａ）３−１６の疎水性アミノ酸残基Ｇｌｙ又はＰｒｏを有するアミノ酸配列、例えばＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏなど；
（ｂ）マルチクローニングサイトによってコードされるアミノ酸配列。このような配列は通常、５−２０のアミノ酸残基、好ましくは１０−２０のアミノ酸残基を含む；
（ｃ）ＩＬ−２２単量体以外のタンパク質のアミノ酸配列、例えばＩｇＧ又はアルブミンのアミノ酸配列；及び
（ｄ）上記（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）のいずれかの組み合わせを含むアミノ酸配列。
【０１１０】
１つの好ましい実施態様では、リンカーは、ＧＳＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（すなわち、配列番号１のアミノ酸残基）及びＡＳＴＫＧＰ（すなわち、配列番号１０のアミノ酸残基）の配列を有する。
【０１１１】
加えて、ＩＬ−２２単量体の生物活性に影響を与えないアミノ酸配列を融合タンパク質のＮ末端又はＣ末端に加えることもできる。好ましい実施態様では、このような追加されたアミノ酸配列は、発現（例えばシグナル・ペプチド）、精製（例えば６×Ｈｉｓ配列、サッカロミセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）α−因子シグナル・ペプチド（Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ）の切断部位）、又は融合タンパク質の生物活性の強化にとって有益である。
【０１１２】
幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は２つの単量体サブユニットを含み、各単量体サブユニットはＩＬ−２２ドメイン及び二量体ドメインを含む。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２ドメインは二量体ドメインのＮ末端と融合する。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２ドメインは二量体ドメインのＣ末端と融合する。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２ドメイン及び二量体ドメインは、任意選択的なペプチドリンカー（例えば約５から約５０のアミノ酸長のペプチドリンカー、例えば配列番号１０の配列を有するリンカー）を介して結合する。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体の二量体ドメインはロイシンジッパーを含む。
【０１１３】
幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は２つのＩＬ−２２単量体サブユニットを含み、各単量体サブユニットは、ＩＬ−２２単量体及び、免疫グロブリンＦｃ断片の少なくとも一部分（「Ｆｃ断片」、又はいわゆるＦｃ領域）を含む。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２ドメインはＦｃ断片のＮ末端と融合する。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２ドメインはＦｃ断片のＣ末端と融合する。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２ドメイン及びＦｃ断片は、任意選択的なペプチドリンカー（例えば約５から約５０のアミノ酸長のペプチドリンカー、例えば配列番号１又は配列番号１０の配列を有するリンカー）を介して結合する。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２ドメインは配列番号３の配列を有する。幾つかの実施態様では、Ｆｃ断片は分子間ジスルフィド結合を形成可能な少なくとも２つのシステインを含む。幾つかの実施態様では、Ｆｃ断片はＮ末端で切断されており、例えば、完全免疫グロブリンＦｃドメインの最初の１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０アミノ酸を欠失している。幾つかの実施態様では、Ｆｃ断片はＩｇＧ２型のものである。幾つかの実施態様では、Ｆｃ断片はＩｇＧ４型のものである。幾つかの実施態様では、Ｆｃ断片は配列番号２又は配列番号９の配列を有する。
【０１１４】
幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は２つのＩＬ−２２単量体サブユニットを含み、各単量体サブユニットは、配列番号４又は配列番号６〜８のいずれかの配列を含む（例えば、有する）。
【０１１５】
本発明は、それらの特性及び、強化又は低減した活性を有する変異に顕著に影響を与えない、機能的に等価なタンパク質を含む、本明細書に記載のポリペプチドに対する修飾も包含している。ポリペプチドの修飾は当技術分野における常套手法であり、本明細書で詳細に説明する必要はない。修飾ポリペプチドの例は、アミノ酸残基の同類置換、機能活性を顕著に悪化させないアミノ酸の１つ以上の欠失又は付加、機能活性を顕著に悪化させない非保存的突然変異、又は化学的類似体の使用を伴ったポリペプチドを含む。
【０１１６】
アミノ酸配列挿入は、１残基から１００以上の残基を含むポリペプチドまでの長さにわたるアミノ及び／又はカルボキシ末端融合、並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例としてＮ末端メチオニル残基又はエピトープタグが挙げられる。ＩＬ−２２単量体サブユニットの他の挿入変異体は、ポリペプチドのＮ末端又はC末端、もしくはＩＬ−２２二量体の血清半減期を延長させるポリペプチドに対する融合を含む。
【０１１７】
２０アミノ酸がタンパク質によく見られる。それらのアミノ酸は、側鎖の化学的特性に基づいて、９つのクラス又はグループに分類することができる。１つのアミノ酸残基で同一のクラス又はグループ内にある別のアミノ酸を置換することは、本明細書では「保存的」置換と称される。保存的アミノ酸置換は、タンパク質の立体配置又は機能を顕著に変化させることなく、タンパク質に頻繁に行われうる。対照的に、非保存的アミノ酸置換は、タンパク質の立体配置又は機能を破壊する傾向にある。似た側鎖を有するアミノ酸残基ファミリは当技術分野において定義されている。これらのファミリは、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β−分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン)を有するアミノ酸を含む。（下記表１参照。）
【０１１８】
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【０１１９】
幾つかの実施態様では、保存的アミノ酸置換は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、及びロイシン（Ｌ）のいずれかでこれらの脂肪族アミノ酸の他のいずれかを置換；セリン（Ｓ）でスレオニン（Ｔ）を置換及びその逆；アスパラギン酸（ｄ）でグルタミン酸（Ｅ）を置換及びその逆；グルタミン（Ｑ）でアスパラギン（Ｎ）を置換及びその逆；リシン（Ｋ）でアルギニン（Ｒ）を置換及びその逆；フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）及びトリプトファン（Ｗ）でこれらの芳香族アミノ酸の他のいずれかを置換；ならびにメチオニン（Ｍ）でシステイン（ｃ）を置換及びその逆を含む。特定のアミノ酸の環境及びタンパク質の３次元構造におけるその役割に応じて、他の置換もまた保存的とみなされうる。例えば、グリシン（Ｇ）及びアラニン（Ａ）は、アラニン（Ａ）とバリン（Ｖ）が可能であるように、しばしば置き換え可能である。比較的疎水性であるメチオニン（Ｍ）は、しばしばロイシン及びイソロイシンと置換することができ、時にはバリンとも置換可能である。リシン（Ｋ）とアルギニン（Ｒ）は、アミノ酸残基の顕著な特徴がその変更であり、これら２つのアミノ酸残基の異なるｐＫが顕著ではない位置において、しばしば置換可能である。さらに他の変更もまた特定の環境においては「保存的」であるとみなされうる（例えば、Biochemistry, pp. 13-15, 2nd ed. Lubert Stryer ed. (Stanford University); Henikoff et al., Proc.Nat’l Acad.Sci.USA (1992) 89:10915-10919; Lei et al., J. Biol.Chem.(1995) 270(20):11882-11886参照）。
【０１２０】
驚くべきことに、ある特定のＩＬ−２２二量体は、インビトロアッセイにおいてＩＬ−２２よりも低い活性を有するが、それらは膵炎の治療におけるインビボ環境では顕著にＩＬ−２２より活性が高いことが見出された。例えば、幾つかの実施態様では、本明細書に記載のＩＬ−２２二量体は、インビトロでの細胞増殖アッセイにおいて、約２０ｎｇ／ｍＬ以上（例えば約１００ｎｇ／ｍＬ以上、約２００ｎｇ／ｍＬ以上、約３００ｎｇ／ｍＬ以上、約４００ｎｇ／ｍＬ又はそれ以上のいずれかを含む）のＥＣ５０を有する。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は、インビトロでの細胞増殖アッセイにおいて、野生型の単量体のＩＬ−２２（例えば配列番号３の配列を有する単量体のＩＬ−２２）の少なくとも約５倍（例えば、少なくとも約１０倍、３０倍、５０倍、１００倍、１５０倍、３００倍、４００倍、５００倍、６００倍、１０００倍又はそれ以上のいずれかを含む）のＥＣ５０を有する。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は、インビトロでのＳＴＡＴ３刺激アッセイにおいて、約１０ｎｇ／ｍＬ以上（例えば約５０ｎｇ／ｍＬ以上、約１００ｎｇ／ｍＬ以上、約２００ｎｇ／ｍＬ以上、約３００ｎｇ／ｍＬ以上、約４００ｎｇ／ｍＬ又はそれ以上のいずれかを含む）のＥＣ５０を有する。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は、インビトロでのＳＴＡＴ３刺激アッセイにおいて、野生型の単量体のＩＬ−２２（例えば配列番号３の配列を有する単量体のＩＬ−２２）の少なくとも約１０倍（例えば少なくとも約５０倍、１００倍、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、６００倍、７００倍、８００倍、９００倍、１０００倍、１５００倍又はそれ以上のいずれかを含む）のＥＣ５０を有する。
【０１２１】
幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は、ＩＬ−２２単量体よりも顕著に長い血清半減期を有する。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は、少なくとも約１５、３０、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、又は３５０時間のいずれかの血清半減期を有する。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体の投与量は２μｇ／ｋｇであり、血清半減期は少なくとも約１５、３０、５０、１００、１５０、又は２００時間のいずれかである。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体の投与量は１０μｇ／ｋｇであり、血清半減期は少なくとも約５０、１００、１５０、又は２００時間のいずれかである。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体の投与量は３０μｇ／ｋｇであり、血清半減期は少なくとも約１００、１５０、２００、又は２５０時間のいずれかである。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体の投与量は４５μｇ／ｋｇであり、血清半減期は少なくとも約１００、１５０、２００、２５０、３００、又は３５０時間のいずれかである。
【０１２２】
ＩＬ−２２二量体の調製
ＩＬ−２２二量体のＩＬ−２２単量体サブユニットは、組み換えＤＮＡ技術を用いて発現されうる。ＩＬ−２２単量体サブユニットをコードするヌクレオチド配列は、既知の技術を使用して、複製可能なクローニング又はタンパク質発現ベクターに制限部位において挿入することができる。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２単量体サブユニットをコードする単一のヌクレオチド配列がクローニング又は発現ベクターに挿入される。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２領域をコードするヌクレオチド配列及び延長ペプチド領域をコードするヌクレオチド配列は、ヌクレオチド配列がタンパク質として発現される場合に、連続するポリペプチドが形成されるように、クローニング又は発現ベクター内に別々に挿入されうる。幾つかの実施態様では、リンカーをコードするヌクレオチド配列、二量体ドメインをコードするヌクレオチド配列、及びＩＬ−２２領域をコードするヌクレオチド配列は、ヌクレオチド配列がタンパク質として発現される場合に、連続するポリペプチドが形成されるように、クローニング又は発現ベクター内に別々に挿入されうる。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２単量体サブユニットをコードするヌクレオチド配列は、限定はしないが、Ｈｉｓ−タグ、ＦＬＡＧ−タグ、ＳＵＭＯ−タグ、ＧＳＴ−タグ、抗体タグ、又はＭＢＰ−タグなどのアフィニティータグ又は識別タグをコードするヌクレオチド配列に融合されうる。幾つかの実施態様では、クローニング又は発現ベクターは、その後、既知の技術を使用して真核細胞又は原核細胞にトランスフェクト又は転換されうる。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２又はＩＬ−２２単量体サブユニットはインビトロで発現されうる。
【０１２３】
発現宿主細胞は、ＩＬ−２２二量体を発現可能ないずれかの細胞でありうる。適切な原核性の発現宿主細胞は、大腸菌（Escherichia coli）、エルウィニア（Erwinia）、クレブシエラ（Klesbsiella）、プロテウス（Proteus）、サルモネラ（Salmonella）、セラチア（Serratia）、赤痢菌（Shigella）、枯草菌（Bacillus subtilis）、バチルス・リケニフォルミス（Bacillus licheniformis）、シュードモナス（Pseudomonas）、及びストレプトミセス（Streptomyces）を含みうるがこれらに限られない。菌類又は酵母などの真核細胞もまたＩＬ−２２単量体サブユニットの発現に適切でありえ、例えば、サッカロミセス（Saccharomyces）、分裂酵母（Schizosaccharomyces pombe）、クルイベロミセス・ラクチス（Kluyveromyces lactis）、クルイベロミセス・フラジリス（Kluyveromyces fragilis）、クルイベロミセス・ウォルティ（Kluyveromyces waltii）、クルイベロミセス・ドロソフィラルム（Kluyveromyces drosophilarum）、クルイベロミセス・サーモトレランス（Kluyveromyces thermotolerans）、クルイベロミセス・マルキアヌス（Kluyveromyces marxianus）、ピキア・パストリス（Pichia pastoris）、アカパンカビ（Neurospora crassa）、シュワニオミセス（Schwanniomyces）、アオカビ（Penicillium）、トリポクラジウム（Tolypocladium）、シネココッカス（Synechococcus）及びアスペルギルス（Aspergillus）が挙げられるがこれらに限られない。クラミドモナス（Chlamydomonas）などの植物又は藻の細胞もまた、ＩＬ−２２単量体サブユニットの発現にとって適切でありうる。多細胞生物に由来する真核細胞もＩＬ−２２単量体サブユニットの発現に適切でありえ、例えば、ショウジョウバエ（Drosophila）Ｓ２及びスポドプテラ（Spodoptera）Ｓｆ９などの無脊椎動物細胞、又はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＣＯＳ細胞、ヒト胎児由来腎臓細胞（ＨＥＫ２９３細胞など）、マウス精巣栄養膜細胞、ヒト肺細胞、及びマウス乳がん細胞などの哺乳動物細胞が挙げられるが、これらに限られない。ＩＬ−２２単量体サブユニット・クローニングプラスミドが宿主細胞内に転換又はトランスフェクトされた後、宿主細胞は通常の栄養培地上で成長させることができ、必要に応じてタンパク質発現が誘発される。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２単量体サブユニットの発現は誘発を必要としない。 
【０１２４】
幾つかの実施態様では、発現されたＩＬ−２２単量体サブユニットはＩＬ−２２二量体の形態をしている。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２単量体サブユニットは、酸化化合物（過酸化水素又は触媒金属など）、紫外線、又は化学架橋剤（ホルムアルデヒド、１，６−ビスマレイミドヘキサン、１，３−ジブロモ−２−プロパノール、ビス（２−クロロエチル）スルフィド、又はグルタルアルデヒドなど）を供給することによるなど、さらに誘発を必要とする。
【０１２５】
幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体の形成は誘発を必要としない。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体の発現に用いられる宿主細胞はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は任意の数のタンパク質精製法を使用して精製されうる。例えば、ＩＬ−２２二量体は、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、逆相ＨＰＬＣ、サイズ排除クロマトグラフィー、沈殿、又は遠心分離を使用して精製されうる。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２単量体サブユニットポリペプチドに融合されたアフィニティータグが除去されうる。
【０１２６】
ＩＬ−２２二量体の調製方法は、参照することによって本明細書中に取り込まれる２０１１年８月３０日にGeneron (Shanghai) Corporation, LTDが出願した国際出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０１１／０７９１２４号を参照されたい。
【０１２７】
ＩＬ−２２二量体の投与
本明細書に記載されるＩＬ−２２二量体は、さまざまな経路で個体に投与することができる。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は、非経口、静脈内、経口、筋肉内、又は皮下に投与することができる。
【０１２８】
幾つかの実施態様では、個体は哺乳動物であり、好ましくはヒト、齧歯動物、又は霊長類のいずれかを含む。
【０１２９】
個体（ヒトなど）に投与されるＩＬ−２２二量体の本発明にかかる組成物の投与量は、特定の組成物、投与方法、及び治療される膵炎の特定の種類に伴って変化する。投与量は、特定の疾患に対する治療又は予防応答など、所望の応答に影響を与えるのに十分であるべきである。幾つかの実施態様では、有効量は疾患の進行を遅延させるのに十分な量である。幾つかの実施態様では、有効量は発生及び／又は再発を予防するのに十分な量である。有効量は、１回以上の投与で投与することができる。ＩＬ−２２二量体の適切な用量としては、例えば、約１．５μｇ／ｋｇから約５００μｇ／ｋｇ、約２μｇ／ｋｇから約２００μｇ／ｋｇを含み、例えば約５μｇ／ｋｇから約８０μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇから約４５μｇ／ｋｇ、又は約３０μｇ／ｋｇから約４０μｇ／ｋｇが挙げられる。
【０１３０】
幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は毎週１回投与される。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、又は２４週間ごとに１回投与される。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、又は１２か月ごとに１回投与される。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は１回のみ投与される。
【０１３１】
幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は、少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、２０μｇ／ｋｇ、３０μｇ／ｋｇ、４０μｇ／ｋｇ、又は５０μｇ／ｋｇのいずれかの投与量で静脈内投与される。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体は、毎週１回、毎月１回、２か月ごとに１回、又は６か月ごとに１回以下の頻度で投与される。
【０１３２】
キット及び医薬
本明細書に記載される方法のいずれか１つに適切なキット、医薬、単位用量、又は製品が提供される。例えば、幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２二量体及び膵炎の治療のためのＩＬ−２２二量体の使用についての指示書を含むキットが提供される。
【０１３３】
本明細書に記載されるＩＬ−２２二量体は、膵炎の治療に使用するための薬学的に許容される賦形剤又は担体と共に製剤化することができる。
【０１３４】
本発明の医薬組成物は、安全かつ有効な量の前記ＩＬ−２２二量体、又は薬学的に許容される塩、もしくは薬学的に許容される賦形剤又は担体を含む。「安全かつ有効な量」とは、重大な副作用を生じさせずにそれを必要とする患者の病状を実質的に改善するのに十分な化合物の量のことを指す。安全かつ有効な量は、治療の対象に関連する年齢、状態、及び投与計画などの具体的な状況に基づいて決定される。
【０１３５】
「薬学的に許容される賦形剤又は担体」とは、十分な純度及び十分に低い毒性を伴う、ヒトに用いるのに適した、１つ以上の混和性のある固体又は液体の充填剤又はゼラチン材料のことをいう。「混和性」とは、化合物の臨床的有効性を実質的低下させることなく、本発明の化合物と緊密に混合するための組成物の各成分の能力及び成分間の緊密混合能力のことをいう。薬学的に許容される賦形剤又は担体の例の幾つかとして、セルロース及びその誘導体（例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースナトリウム、アセチルセルロ-ス等）、ゼラチン、スペックストーン, 固形潤滑剤（例えばステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム）、硫酸カルシウム、植物油（例えば豆油（pea oil）、ゴマ油、ピーナツ油、オリーブ油等）、ポリオール（例えばプロピレングリコール、グリセロール、マンニトール、ソルビトール等）、乳化剤（例えばＴｗｅｅｎ（商標登録））、湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウム）、着色剤、香味剤、安定剤、抗酸化剤、 防腐剤、発熱性物質除去蒸留水等が挙げられる。
【０１３６】
本発明のＩＬ−２２二量体の投与経路は、経口投与、直腸投与、非経口投与（静脈内、筋肉内、又は皮下）、及び局所投与を含む。
【０１３７】
経口投与のための固形の形状は、カプセル、錠剤、丸薬、粉末及び顆粒を含む。これらの固形形状では、活性化合物は、クエン酸ナトリウム、リン酸二カルシウム又は次の成分のいずれかなど、通常の不活性な賦形剤（又は担体）のうちの少なくとも１つと混合される：（ａ）充填剤又は増量剤、例えばデンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及びケイ酸；（ｂ）付着剤、例えばカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン, ポリビニルピロリドン、スクロース、及びアカシア；（ｃ）保湿剤、例えばグリセロール、（ｄ）崩壊剤、例えば寒天、炭酸カルシウム, ジャガイモデンプン又はキャッサバデンプン、アルギン酸、複合ケイ酸塩（compounded silicate）、及び炭酸ナトリウム；（ｅ）緩衝剤、例えばパラフィンワックス；（ｆ）吸収促進剤、例えば第４級アミン化合物；（ｇ）湿潤剤、例えばセタノール及びモノステアリン酸グリセリン；（ｈ）吸収剤、例えばカオリン；及び（ｉ）潤滑剤、例えばスペックストーン、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、又はそれらのいずれかの混合物。カプセル、錠剤、及び丸薬もまた緩衝剤を含みうる。
【０１３８】
錠剤、糖衣錠（sugar pill）、カプセル、丸薬、及び顆粒などの固形の形状は、ケーシング及び当技術分野で既知の他の材料など、コーティング及びコアシェル材料と共に調製することができる。これらの材料は、乳白剤及び活性化合物又は、放出が消化管の一部でなされるような遅延された方式でこれらの組成物が放出されうる化合物を含みうる。ポリマー材料及びワックス材料などの埋め込み成分を使用することができる。必要に応じて、活性化合物は上述の賦形剤の１つ以上と混合し、マイクロカプセルの形態に製剤化することができる。
【０１３９】
経口投与の液状の形態は、薬学的に許容される エマルション、溶液、懸濁液、シロップ、又はチンキ剤を含む。活性化合物の他に、液体形態には、水又は他の溶媒などの当技術分野で通常用いられる不活性希釈剤、可溶化剤（solublilizing agent）及び乳化剤、例えばエタノール、イソプロパノール、カーボネートアセテート（carbonate acetate）、酢酸エチル、プロパン−２−オール、１，３−ブタン−２−オール、ジメチルホルムアミド（dimethylfomamide）、及び油、特に綿実油、ピーナツ油、トウモロコシ胚油、オリーブ油、ヒマシ油、及びゴマ油又はそれらのいずれかの混合物なども含めることができる。
【０１４０】
これらの不活性希釈剤の他に、組成物に、湿潤剤、乳化剤、懸濁剤、甘味剤、中和剤、及び香辛料などの添加剤も含めることができる。
【０１４１】
活性化合物の他に、懸濁液には、エトキシルイソステアリン酸アルコール（ethoxyl isostearic alcohol）、ポリオキシエチレンソルビトール、ソルビタン、微結晶セルロース、アルミニウムメトキシド、寒天、又はそれらのいずれかの混合物などの懸濁剤をも含めることができる。
【０１４２】
非経口投与に用いられる組成物には、滅菌水又は無水溶液、分散液、懸濁液、又はエマルション等の生理学的に許容可能な液体の組み合わせも含めることができる。 適切な水和担体又は無水担体、希釈剤、溶剤、又は賦形剤は、水、エタノール、ポリオール（例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセリン（glycerinum）等）、及びそれらの適切な混合物を含み、それらは中国薬局方又は他国の薬局方に記載されている。好ましくは、液体組成物は、ＩＬ−２２二量体の機能を抑制しないことを条件として、通常使用される薬学的に許容される添加剤を含めることができる。代表的な添加剤としては、緩衝剤、ＰＨ調節剤、及び同様のものが挙げられる（がこれらに限られない）。
【０１４３】
非経口投与に用いられる組成物には、注入可能な溶液又は分散液に再構成することができる滅菌粉末（例えば、凍結乾燥粉末）をも含めることができる。好ましくは、凍結乾燥粉末には、ＩＬ−２２二量体の機能を抑制しないことを条件として、通常使用される薬学的に許容される添加剤も含めることができる。代表的な添加剤としては、緩衝剤、ＰＨ調節剤が挙げられる（がこれらに限られない）。好ましくは、凍結乾燥粉末を溶解するのに用いられる溶媒として、グルコース溶液、塩化ナトリウム溶液が挙げられる（がこれらに限られない）。
【０１４４】
幾つかの実施態様では、本明細書に記載のＩＬ−２２二量体は、例えば、静脈内プッシュ又は静脈内注入など、静脈内投与することができる。
【０１４５】
部分的投与に用いられる本発明のＩＬ−２２二量体の形態は、軟膏、粉末、パッチ、噴霧器、及び吸入剤を含む。滅菌条件下では、活性成分は、生理学的に許容可能な担体、及び必要に応じて、いずれかの防腐剤、緩衝剤、又は推進剤と混合することができる。
【０１４６】
本発明のＩＬ−２２二量体は、単独で投与、又はいずれかの他の薬学的に許容される化合物と組み合わせて投与することができる。
【０１４７】
本発明のＩＬ−２２二量体を含むマイクロカプセルを徐放性システムとして使用することができる。組み換えタンパク質の徐放性のマイクロカプセルシステムは、組み換えヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）、組み換えヒトインターフェロン（ｒｈＩＦＮ）、ＩＬ−２及びＭＮｒｇｐ１２０に首尾よく適用されている（Johnson et al., Nat. Med., 2:795-799 (1996); Yasuda, Biomed.Ther 27:1221-1223 (1993); WO 97/03692, WO 96/40072, WO 96/07399; US 5,654,010）。
【０１４８】
本発明のＩＬ−２２二量体の徐放性システムは、良好な生物学的混和性及び幅広い生物学的分解性を有する乳酸−グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）を用いて調製することができる。ＰＬＧＡの分解生成物である乳酸及びグリコール酸は、人体から急速に除去することができる。さらには、該ポリマーの分解性は、その分子量及び組成に応じて数か月から数年まで変化しうる（Lewis, "Controlled release of bioactive agents form lactide/glycolide polymer," in: M. Chasin and R. Langer (Eds.), Biodegradable Polymers as Drug Delivery Systems (Marcel Dekker: New York, 1990), pp. 1-41）。
【０１４９】
本発明の医薬組成物の用量及び濃度は実際の使用状況により調整することができる。実用的ニーズに従って適切な用量及び投与経路を選択する方法については、当業者は知っているはずである。マウスとヒトなど、異種間の調整の原理については、Mordenti, J. and Chappell, W. "The use of interspecies scaling in toxicokinetics" In Toxicokinetics and New Drug Development, Yacobi et al.; Pergamon Press, New York 1989, pp. 42-96に記載されている。
【０１５０】
本明細書に記載の組成物を適切な包装内に含む製造物品もまた提供される。本明細書に記載の組成物にとって適切な包装は当技術分野で知られており、例えば、バイアル（密封バイアルなど）、容器（密封容器など）、アンプル、ボトル、広口瓶、フレキシブル包装（例えば、密封マイラー又はプラスチックバッグ）、及び同様のものが挙げられる。これらの製造物品はさらに滅菌及び／又は封止されてもよい。本明細書に記載の組成物を含む単位用量形態もまた提供される。これらの単位用量形態は単一又は複数の単位用量で適切な包装内に保存することができ、それらをさらに滅菌及び封止してもよい。
【０１５１】
本発明はまた、本明細書に記載の組成物（又は単位用量形態及び／又は製造物品）を含むキットも提供し、本明細書に記載の使用など、組成物の使用方法についての指示書をさらに含みうる。幾つかの実施態様では、本発明のキットは上述の包装を含む。他の実施態様では、本発明のキットは上述の包装を含む。本明細書に記載のキットは、商業的及び使用者の観点から望ましい他の材料を含んでいてもよく、他の緩衝剤、希釈剤、フィルタ、針、シリンジ、及び本明細書に記載のいずれかの方法を実施するための指示が書かれた添付文書が挙げられる。
【０１５２】
本発明の主な利点としては、限定はしないが、次の点が挙げられる：
【０１５３】
１．ＩＬ−２２単量体と比較して、ＩＬ−２２二量体の生物活性は、インビボにおいて、ＩＬ−２２単量体の活性よりも顕著に高い。
【０１５４】
２．ＩＬ−２２二量体は、動物モデルにおける膵炎の予防及び／又は治療に効果的であることが証明されている。ＩＬ−２２二量体は、膵炎を患う個体における血清アミラーゼ及び／又はリパーゼのレベルを顕著に低減し、インビボでの膵臓の浮腫を改善し、腺房細胞及び／又は脂肪細胞の壊死を抑制し、かつインビボでの膵臓の炎症性細胞浸潤を改善することができる。等モルのＩＬ−２２投与量において、ＩＬ−２２二量体は、ＩＬ−２２単量体と比較して、膵炎の動物モデルにおいて、より良好な治療効果を示す。
【０１５５】
３．驚くべきことに、ＩＬ−２２二量体の皮下注射が注射部位における有害事象の遅延を生じさせるのに対して、ＩＬ−２２二量体の静脈注射は優れた忍容性及び安全性を示すことが初めて見出された。
【０１５６】
４．ＩＬ−２２二量体は、ヒトにおける顕著な生物活性、ＣＲＰ、ＳＡＡ血清レベルの上昇及び血清ＴＧレベルの低減をもたらす。
【０１５７】
５．ＩＬ−２２二量体の投与は、ヒトにおける炎症性サイトカインの血清レベルの上昇をもたらさない。本明細書に記載の発明の態様及び実施態様は、態様及び実施態様「からなる」及び／又は「から本質的になる」ことを含むことが理解される。
【０１５８】
「約」に関しては、本明細書における値又はパラメータは、その値又はパラメータ自体を対象とするバリエーションを含む（及び説明する）。例えば、「約Ｘ」という記述は、「Ｘ」の記述を含む。
【０１５９】
本明細書及び添付の特許請求の範囲において、単数形「a」、「or」、及び「the」は、文脈から明らかにそうでないと示唆されない限り、複数の指示対象を含む。本明細書に記載される発明の態様及びバリエーションは、その態様及びバリエーション「からなる」及び／又は「から本質的になる」ことを含むことが理解される。
【０１６０】
次の典型的な実施態様は本発明をさらに説明する。この説明は特定の実施態様について言及しているが、これらの具体的詳細のバリエーションを伴って実施されうることは、当業者にとって明白であろう。よって、本発明は本明細書に記載される実施態様に限定されると解釈されるべきではない。さらには、 実験方法の詳細が記載されていない実施態様については、このような方法は、Sambrook et al.Molecular Cloning: A Laboratory Manual (New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)に記載されるものなど、通常の条件に従って、又は製造業者が示唆するように行われる。
【実施例】
【０１６１】
実施例１  Ｃｏｌｏ２０５細胞におけるＩＬ−２２又はＩＬ−２２二量体の増殖効果
Ｃｏｌｏ２０５細胞をＲＰＭＩ１６４０ １０％ ＦＢＳ培地で培養し、細胞を対数期まで成長させた。上清を廃棄し、ＰＢＳを添加して残留培地を洗い流し、その後、消化用に２−５ｍＬの０．２５％トリプシン−ＥＤＴＡを添加した。次いで培地を加え、ピペット操作によって均質になるまで混合した。混合物を１５００ｒｐｍで５分間遠心分離にかけ、細胞を回収し、基本培地を用いて５．０＊１０５細胞／ｍｌの細胞懸濁液へと調製した。９６ウェルプレート（１００μＬ／ウェル）のウェル内に懸濁液を加え、３７℃、５％ ＣＯ２のインキュベータ内に一晩置いた。翌日、９６ウェルプレートをＣＯ２インキュベータから取り出し、４℃、８００ｒｐｍで５分間、遠心分離にかけた。次いで、各ウェルから９０μＬの細胞上清を取り出し、９０μＬの０．１％ ＢＳＡ／ＲＰＭＩ １６４０を各ウェルに加え、その後、ＩＬ−２２二量体（それぞれ配列番号４を含む２つの単量体サブユニットからなる）を１．４、４．１、１２．３、３７．０、１１１．１、３３３．３、１０００、３０００ｎｇ／ｍＬの最終濃度まで、ＩＬ−２２（ｒｈＩＬ−２２、いわゆる組み換えヒトＩＬ−２２）を０．０１、０．０４、０．１２、０．３７、１．１、３．３、１０、３０ｎｇ／ｍＬの最終濃度まで加えた。混合物を、５％ ＣＯ２のインキュベータ内で、３７℃で２０時間、インキュベートし、細胞上清を回収し、そのＯＤ値をＩＬ−２２ ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ社、カタログ番号：Ｓ１０００Ｂ）を使用して試験した。
【０１６２】
図４に示すように、ＩＬ−２２二量体の半数効果濃度（ＥＣ５０）値は２２９ｎｇ／ｍＬ（２，６７５ｐＭ）であり、ＩＬ−２２の値は０．５４ｎｇ／ｍＬ（３２．４ｐＭ）である。これは、インビトロでの活性実験において、ＩＬ−２２二量体の生物活性がＩＬ−２２単量体の活性よりもはるかに低いことを示している。
【０１６３】
実施例２  Ｃｏｌｏ２０５細胞のＳＴＡＴ３活性化におけるＩＬ−２２又はＩＬ−２２二量体の効果
Ｃｏｌｏ２０５細胞をＲＰＭＩ１６４０ １０％ ＦＢＳ培地で培養し、細胞を対数期まで成長させた。上清を廃棄し、ＰＢＳを添加して残留培地を洗い流し、その後、消化用に２〜５ｍＬの０．２５％トリプシン−ＥＤＴＡを添加した。次いで培地を加え、ピペット操作によって均質になるまで混合した。混合物を１５００ｒｐｍで５分間の遠心分離にかけ、細胞を回収し、基本培地ＲＰＭＩ１６４０を用いて２．０＊１０５細胞／ｍｌの細胞懸濁液へと調製した。懸濁液を９６ウェルプレート（１００μＬ／ウェル）のウェルに加え、３７℃で６時間、５％ ＣＯ２のインキュベータ内に置いた。懸濁液を、それぞれ、さまざまな濃度のｒｈＩＬ−２２又はＩＬ−２２二量体（各々配列番号４に示す配列を含む２つの単量体サブユニットからなる）で１時間処理した。上清を廃棄後、４０μＬの細胞溶解バッファ（カタログ番号：９８０３Ｓ、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ社）を各ウェルに加えた。遠心分離によって上清を回収した。ブラッドフォード法を用いてタンパク質濃度を決定した。加えて、ＥＬＩＳＡ法（ＳＴＡＴ３ ［ｐＹ７０５］ｐｈｏｓｐｈｏｒ ＥＬＩＳＡキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カタログ番号：ＫＨ００４８１）を使用してＳＴＡＴ３リン酸化レベルを測定した。ｐＳＴＡＴ３含量は、ｐＳＴＡＴ３の検出濃度をタンパク質濃度で割ることによって計算される。
【０１６４】
図５に示すように、ＳＴＡＴ３を活性化するＩＬ−２２二量体の半数効果濃度（ＥＣ５０）値は１１９．５ｎｇ／ｍＬ（１３９４ｐＭ、ＩＬ−２２二量体の理論分子量である８５．７ＫＤを使用して計算）であり、ＩＬ−２２の値は０．１４ｎｇ／ｍＬ（６．９ｐＭ、ＩＬ−２２の分子量である１６．７ＫＤを使用して計算）である。
【０１６５】
実施例３  ＳＤラットの臓器組織におけるＩＬ−２２二量体の分布
１８匹のＳＤラットを、無作為に、一群あたり６匹ずつの３つの群に分けた（半数はオス、半数はメス）。動物に、ヨードゲン法で標識化した１２５Ｉ−ＩＬ−２２二量体（各々配列番号４に示す配列を含む２つの単量体サブユニットからなる）を３０μｇ／ｋｇの投与量で尾静脈注射した。動物をそれぞれ注射後２、２４及び４８時間の時点で殺処分した。臓器組織を採取し、重さを量り、放射能計数を直接測定した。次いで、組織のグラム当たりの放射能計数を計算した。
【０１６６】
結果は、ＩＬ−２２二量体が、注射後４８時間にわたり、膵臓において安定であったことを示した。図６に示すように、注射後２４及び４８時間の時点での膵臓におけるＩＬ−２２二量体の濃度は５６％に、２時間の時点でのＩＬ−２２二量体の濃度は２１％に、それぞれ低下した。注射後２４時間及び４８時間の時点での肝臓におけるＩＬ−２２二量体の濃度は２８％に、２時間の時点でのＩＬ−２２二量体の濃度は９％に、それぞれ低下した。注射後２時間の時点の膵臓におけるＩＬ−２２二量体の濃度は、肝臓におけるＩＬ−２２二量体の濃度の約１／５であった。
【０１６７】
実施例４  カニクイザルの臓器組織におけるＩＬ−２２二量体の分布
体重４．３から４．６ｋｇの３匹のオスのカニクイザルに、ＩＬ−２２二量体（各々配列番号４に示す配列を含む２つの単量体サブユニットからなる）を１００μｇ／ｋｇの投与量で静脈注射した。注射後２時間の時点で動物を殺処分した。臓器組織を採取し、液体窒素中で保管した。組織の重さを量り、溶解バッファを加えて溶解させて組織のホモジネートを得た。遠心分離の後、上清を分離し、タンパク質濃度決定に供した。組織中のＩＬ−２２二量体濃度は、ＥＬＩＳＡ法（ヒトＩＬ−２２ ＥＬＩＳＡキット、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社、カタログ番号：４３４５０６）を使用して測定した。
【０１６８】
結果は、膵臓におけるＩＬ−２２二量体の濃度がかなり低い（約０．７６ｎｇ／ｍｇタンパク質）ことを示した。図７に示すように、この濃度は、肝臓におけるＩＬ−２２二量体の濃度よりはるかに低い（肝臓における濃度の約１／５）。
【０１６９】
実施例５  健康なヒト対象におけるＩＬ−２２二量体の臨床的安全性
方法：
健康な男性のボランティアを登録し、６つの用量群に無作為化された：
プラセボ群（ｎ＝８）：静脈内注入による等体積の５％グルコース／生理食塩水の単回投与を受けた。
【０１７０】
ＩＬ−２２二量体 ２．０μｇ／ｋｇ ＳＣ用量群（ｎ＝６）（ＳＣ群）：２．０μｇ／ｋｇのＩＬ−２２二量体の単回皮下投与を受けた。
【０１７１】
ＩＬ−２２二量体 ２．０μｇ／ｋｇ ＩＶ用量群（ｎ＝６）（ＩＶ群）：ＩＬ−２２二量体を１００ｍＬの５％グルコース／生理食塩水の溶液に溶解し、静脈内注入により２μｇ／ｋｇの単回用量で投与された。
【０１７２】
ＩＬ−２２二量体 １０μｇ／ｋｇ ＩＶ用量群（ｎ＝６）（ＩＶ群）：ＩＬ−２２二量体を１００ｍＬの５％グルコース／生理食塩水の溶液に溶解し、静脈内注入により１０μｇ／ｋｇの単回用量で投与された。
【０１７３】
ＩＬ−２２二量体 ３０μｇ／ｋｇ ＩＶ用量群（ｎ＝６）（ＩＶ群）：ＩＬ−２２二量体を１００ｍＬの５％グルコース／生理食塩水の溶液に溶解し、静脈内注入により３０μｇ／ｋｇの単回用量で投与された。
【０１７４】
ＩＬ−２２二量体 ４５μｇ／ｋｇ ＩＶ用量群（ｎ＝６）（ＩＶ群）：ＩＬ−２２二量体を１００ｍＬの５％グルコース／生理食塩水の溶液に溶解し、静脈内注入により４５μｇ／ｋｇの単回用量で投与された。
【０１７５】
ここで、ＩＬ−２２二量体は、各々配列番号４に示される配列を含む２つの単量体サブユニットからなる。
【０１７６】
理学的検査、臨床検査、体重、生存兆候、心電図，及び腹部超音波等を通じて、安全性を評価した。さらに、血清レベルの薬物濃度、ＳＡＡ−１、ＣＲＰ、ＴＧ及びサイトカインを分析した。
【０１７７】
結果：
Ａ．有害事象
ＩＬ−２２二量体 ２．０μｇ／ｋｇ Ｓｃ用量群：研究薬物に関して、注入部位のドライスキン（×３）、紅斑（×２）、及び貨幣状湿疹（×１）を含む、合計６つが有害事象とみなされた。
【０１７８】
ＩＬ−２２二量体 ２．０μｇ／ｋｇ ＩＶ用量群：有害事象は観察されなかった。
【０１７９】
ＩＬ−２２二量体 １０μｇ／ｋｇ Ｉｖ用量群：悪寒（点滴関連反応）（×１）及び頭痛（×１）を含む、２つの有害事象が観察された。
【０１８０】
ＩＬ−２２二量体 ３０μｇ／ｋｇ ＩＶ用量群：局所的なドライスキン（×４）、アレルギー性皮膚炎（×１）、及び点滴関連反応（×１）を含む、６つの有害事象が観察された。
【０１８１】
ＩＬ−２２二量体 ４５μｇ／ｋｇ ＩＶ用量群：局所的なドライスキン（６）、眼の掻痒（×３）、紅斑性発疹（×２）、及び傾眠（×１）を含む、１２の有害事象が観察された。
【０１８２】
プラセボ群：上気道感染症（×１）、けん怠感（×１）及び多汗症（×１）を含む有害事象が観察された。
【０１８３】
有害事象、理学的検査、臨床検査、体重、生存兆候、心電図、及び腹部超音波データ等の結果は、４５μｇ／ｋｇの用量のＩＬ−２２二量体の単回の静脈内投与が、重篤な有害事象又は生命を脅かすような有害事象を観察されることなく、良好な安全性プロファイルを実証した。２．０μｇ／ｋｇ用量レベルでは、ＳＣと比較して、ＩＶでのＩＬ−２２二量体の投与後は、研究対象がはるかに良く耐えられたことを示唆する、より少ない有害事象が報告された（表２）。結果は、ＩＬ−２２二量体の静脈内投与が皮下投与と比較して、より良好な安全性及び忍容性を有することを実証した。
【０１８４】
2019206548.tif 000004
【０１８５】
Ｂ．ヒトにおけるＩＬ−２２二量体の薬物動態
投与前及び投与後のさまざまな時点で静脈血試料を採取した。遠心分離後、血清を分離し、７０℃未満で保管した。ＥＬＩＳＡ法（ヒトＩＬ−２２ ＥＬＩＳＡキット、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社、カタログ番号：４３４５０６）を使用して血清中の薬物濃度を測定した。検出結果についてノンコンパートメントモデルを使用して、薬物動態パラメータを解析した（解析ソフトウェア：ＰｈｏｅｎｉｘTM ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（商標登録）（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ６．２．１）。結果は、ＩＬ−２２二量体がヒトにおいて非常に優れた半減期を有することを示し、とりわけ、４５μｇ／ｋｇの単回用量の群はＩＬ−２２単量体よりも顕著に良好な２０６時間の半減期を有していた。
【０１８６】
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【０１８７】
Ｃ．ＩＬ−２２二量体は、ＳＡＡ、ＣＲＰの血清レベルを顕著に上昇させ、ＴＧの血清レベルを低下させることができる。
ａ．血清アミロイドタンパク質（ＳＡＡ）
ＥＬＩＳＡ法（ヒトＳＡＡ ＥＬＩＳＡキット、カタログ番号：ＫＨＡ００１１Ｃ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を使用して血清ＳＡＡ−１の濃度を測定した。
【０１８８】
結果は、ＩＬ−２２二量体のＩＶの投与がヒトＳＡＡ血清濃度を顕著に上昇させることができることを示し、非常に顕著な生物活性を示唆している。図８Ａに示されるように、プラセボ群と比較して、ＳＡＡ−１の濃度はＩＬ−２２二量体の投与後１２時間の時点において顕著に上昇した。ＳＡＡの高い血清濃度は、投与後１２日目の４５μｇ／ｋｇ用量群においても依然としてかなり高い。
【０１８９】
2019206548.tif 000006
【０１９０】
ｂ．Ｃ反応性タンパク質
免疫透過濁度法を使用してＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）のレベルを測定した。
【０１９１】
図８Ｂに示されるように、ＩＬ−２２二量体のＩＶ投与は、プラセボ群と比較してＣ反応性タンパク質の血清濃度を顕著に増大させた。
【０１９２】
ｃ．トリグリセリド
自動血液生化学分析器を使用して、投与前後の血清トリグリセリドの変化を検出した。
【０１９３】
図８Ｃに示すように、ＩＬ−２２二量体のＩＶ投与は、トリグリセリドの血清レベルを顕著に低下させ、プラセボ群と比較して明らかな用量反応関係を示した。
【０１９４】
Ｄ．サイトカインアッセイ法
プラセボ群及びＩＬ−２２二量体 ４５μｇ／ｋｇ ＩＶ群の血清試料を、投与前及び投与後２４時間、４８時間に採取し、プロテオームプロファイラーアレイ−ヒト・サイトカインアレイパネルＡ（カタログ番号ＡＲＹ００５，Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ社）を使用して測定し、さまざまなサイトカインのレベルを得た。ＰＢＭＣ（ヒト末梢血単核細胞）を５０ｎｇ／ｍＬのＰＭＡ（ホルボールミリスタートアセタート）で２４時間処理し、上清を陽性対照として使用した。２００μＬの各血清試料をロードし、キットの指示書に従って測定した。
【０１９５】
図８Ｄに示すように、ＴＮＦα、ＩＬ−６、ＩＬ−１β、ＩＬ−８等の炎症性サイトカインのレベルは陽性対照（ＰＢＭＣｓ＋ＰＭＡ）において著しく上昇した。プラセボ群と同様のプロファイルを示す、ＣＤ５４、ＭＩＦ、セルピンＥ１及びＣＣＬ５のレベルは、ＩＬ−２２二量体 ４５μｇ／ｋｇ ＩＶ群において投与後２４時間及び４８時間に採取した血清試料では比較的高く、ＴＮＦα、ＩＬ−６、ＩＬ−１β、ＩＬ−８などの炎症性サイトカインのレベルは投与前に採取した血清試料と比較して著しい変化はなかった。これらは、ＩＬ−２２二量体の投与が血清の炎症性サイトカインレベルの上昇をもたらさないことを実証した。
【０１９６】
実施例６  胆膵管内へのタウロコール酸ナトリウムの逆行性注入による急性膵炎誘発性のラットモデルにおけるＩＬ−２２又はＩＬ−２２二量体の予防及び治療効果
胆膵管内へのタウロコール酸ナトリウムの逆行性注入によって誘発された急性膵炎モデルは、胆汁逆流膵炎の発症及び医薬の有効性を評価するために幅広く用いられている。この実験では、急性膵炎のラットモデルは、胆膵管内への０．１ｍＬ／１００ｇの３．５％ タウロコール酸ナトリウムの逆行性注入によってもたらされる。
【０１９７】
ＳＤラットを無作為に３つの群に分けた：
モデル対照群（ｎ＝６）は、手術前２時間の時点で等体積の溶媒の単回静脈注射を受けた。
ＩＬ−２２単量体 ４０μｇ／ｋｇ群（ｎ＝７）、手術前２時間の時点で４０μｇ／ｋｇの組み換えヒトＩＬ−２２（ｒｈＩＬ−２２）の単回静脈注射を受けた。
ＩＬ−２２二量体 １００μｇ／ｋｇ群（ｎ＝７）、手術前２時間の時点で１００μｇ／ｋｇのＩＬ−２２二量体（ＩＬ−２２単量体 ４０μｇ／ｋｇ群と比較してＩＬ−２２分子の等モル用量を含む）の単回静脈注射を受けた。
【０１９８】
ＩＬ−２２二量体は、各々配列番号４に示される配列を含む、２つの単量体サブユニットからなる。
【０１９９】
動物は水への自由なアクセスが与えられ、手術前の１２時間は絶食させた。
【０２００】
外科的処置：
モデル群のラットをジエチルエーテルで麻酔した。腹部を正中切開によって開腹し、十二指腸及び総胆管を確認した後、微小血管のクランプを使用して、総胆管を肝門肝管の合流点で一時的に閉塞させた。十二指腸の側壁で腸間膜の無血管野を探し、０．４サイズの針を使用して穿刺し、腸間膜の無血管野において胆管−膵管内に横方向に挿入した。次にポリエチレン（ＰＥ）１０チューブを、穴を介して８から１０ｍｍ、十二指腸乳頭に沿って胆管−膵管内に挿入し、脱落を防ぐために固定した。３．５％ タウロコール酸ナトリウム（０．１ｍＬ／１００ｇ）を逆行法でゆっくりと注入し、注入後８分間、針芯をそのままの状態に留めておいた。ポリエチレンチューブ及び微小血管のクランプを除去し、腹部を閉じた。ラットは手術後、食餌及び水への自由なアクセスが与えられた。手術後１２時間の時点で、ラットの眼窩静脈叢から血液試料を採取し、次に遠心分離にかけて血清を分離した。アミラーゼ及びリパーゼの血清レベルを測定した。
【０２０１】
手術後４８時間の時点で、動物を殺処分した。ラットの膵臓組織を採取し、１０％ホルマリン溶液で固定した。膵臓の頭部、体部、及び尾部の組織をスライスし、それぞれ３μｍのパラフィン切片を作製した。切片をＨＥで染色し、病的変化を光学顕微鏡下で観察した。浮腫、壊死、出血、炎症性細胞浸潤等のスコアを、シュミットのスケールに従い、二重盲検方式で評価した（Schmidt et al.Ann Surg, 1992, 215(1):44-56）。各ラットについて膵臓の頭部、体部、及び尾部を含む３つの切片の採点を行った。
【０２０２】
結果：
アミラーゼ及びリパーゼの血清レベルの顕著な上昇からも明らかなように、膵炎動物モデルを成功裏に確立した。図９Ａ及び９Ｂに示されるように、モデル群と比較して、ＩＬ−２２単量体はアミラーゼの血清レベルを低下させる傾向にあるが、顕著な差異はない。アミラーゼの血清レベルは、ＩＬ−２２二量体の治療後に顕著に低下した（Ｐ＝０．０３）。モデル群と比較して、リパーゼの血清レベルはＩＬ−２２単量体の治療後に顕著に低下した（Ｐ＝０．０３）のに対し、リパーゼの血清レベルはＩＬ−２２二量体の治療後に顕著に上昇した（Ｐ＝０．００８）。等モルのＩＬ−２２用量では、ＩＬ−２２二量体は膵炎ラットモデルにおいて治療的に有効であり、その有効性はＩＬ−２２よりも良好であったことは、注目に値する。顕微鏡下では、明らかな浮腫、大量の炎症性細胞浸潤、部分的な腺房細胞及び脂肪細胞の壊死、及び少量の出血が、モデル群の膵臓組織において観察された。ＩＬ−２２二量体は膵炎の動物における病理学的スコアを顕著に改善することができ、膵臓における保護的役割を示す。等モルのＩＬ−２２用量では、膵臓におけるＩＬ−２２単量体の顕著な保護的効果は観察されない。
【０２０３】
2019206548.tif 000007
【０２０４】
本発明で述べられたすべての参照は、これら参照のそれぞれが個別に参照によって取り込まれるように、参照することにより本明細書に取り込まれる。記述は特定の実施態様についてなされているが、本発明がこれらの具体的詳細のバリエーションを用いて実施されうることは当業者にとって明白であろう。よって、本発明は本明細書に記載される実施態様に限定されると解釈されるべきではない。
【図１】
2019206548.tif 000008
【図２】
2019206548.tif 000009
【図３】
2019206548.tif 000010
【図４】
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【図５】
2019206548.tif 000012
【図６】
2019206548.tif 000013
【図７】
2019206548.tif 000014
【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
2019206548.tif 000016
【図８Ｃ】
2019206548.tif 000017
【図８Ｄ】
2019206548.tif 000018
【図９Ａ】
2019206548.tif 000019
【図９Ｂ】
2019206548.tif 000020
【配列表】
2019206548000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和1年8月1日(2019.8.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【外国語明細書】
2019206548000001.pdf