(57)【要約】      （修正有）【課題】よりコスト効率の高い方法でより容易に調製できる、経口剤形、その調製の工程、およびその工程で得られるミクロゲル粒子を含有するカプセルの提供。【解決手段】非水性硬化浴で入手できるミクロゲル粒子の分散体を、ミクロゲル粒子の中間分離および乾燥を必要とせずにカプセルなどの経口剤形の調製において使用する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）医薬品有効成分を含有するミクロゲル粒子、および、（ｂ）パラフィン油を含まない非水性液体組成物、の分散体を含む多粒子薬物送達システムで充填された経口剤形であって、前記ミクロゲル粒子は、前記経口剤形に充填されるまで前記非水性液体組成物から分離されず乾燥しないものである経口剤形。
【請求項２】
前記ミクロゲル粒子が、キトサン、キトサン誘導体、ポリアクリル酸、アルギン酸塩、カラゲナン、アラビアゴム、ジェランガム、キサンタンガム、タンパク質、ゼラチン、寒天、ペクチン、ヒアルロン酸およびその塩から成る群より選択される少なくとも１つのゲル形成ポリマーを含有する、請求項１に記載の経口剤形。
【請求項３】
前記ミクロゲル粒子が、前記ゲル形成ポリマーを二価および／または三価金属イオンの存在下でゲル化することによって得られる、請求項２に記載の経口剤形。
【請求項４】
前記非水性組成物が脂質組成物である、請求項１から３のいずれかに記載の経口剤形。
【請求項５】
前記脂質組成物が少なくとも１つのグリセリドを含有する、請求項４に記載の経口剤形。
【請求項６】
前記グリセリドが、飽和および／または不飽和Ｃ２−２８カルボン酸のモノグリセリド、ジグリセリドおよびトリグリセリドから選択され、ここで前記モノグリセリドが１個または２個のポリエチレンオキシド残基を付加的に含有してもよく、および前記ジグリセリドが１個のポリエチレンオキシド残基を付加的に含有してもよい、請求項５に記載の経口剤形。
【請求項７】
前記グリセリドが、飽和Ｃ６−１２カルボン酸または不飽和Ｃ１６−２０カルボン酸のモノグリセリドおよびジグリセリドから選択され、ここで前記モノグリセリドが１個または２個のポリエチレンオキシド残基を付加的に含有してもよく、および前記ジグリセリドが１個のポリエチレンオキシド残基を付加的に含有してもよい、請求項５または６に記載の多粒子薬物送達システム。
【請求項８】
前記非水性組成物が、二価および／または三価金属イオン塩を前記非水性組成物に溶解するための共溶媒をさらに含有する、請求項１から７のいずれかに記載の経口剤形。
【請求項９】
前記共溶媒が、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、エタノール、２−ピロリドン、カプリル酸、プロピレングリコールおよびＮ−メチル−２−ピロリドンから選択される、請求項８に記載の経口剤形。
【請求項１０】
前記非水性組成物が、ポリエチレングリコール、炭酸プロピレンおよび天然油から選択される充填剤をさらに含有する、請求項１から９のいずれかに記載の経口剤形。
【請求項１１】
前記ミクロゲル粒子が１０００μｍ未満の粒度分布Ｄ９０を有する、請求項１から１０のいずれかに記載の経口剤形。
【請求項１２】
前記ミクロゲル粒子が１．２７〜２．６０の範囲内の長短比を有する、請求項１から１１のいずれかに記載の経口剤形。
【請求項１３】
ａ）ゲル形成ポリマーと医薬品有効成分の混合物を提供する段階、
ｂ）段階ａ）で得た混合物を微小液滴に形成する段階、
ｃ）段階ｂ）で得た微小液滴を、パラフィン油を含まない非水性液体組成物中でゲル化し、前記非水性液体組成物中に分散したミクロゲル粒子を形成する段階を含み、
さらに、段階ｃ）で得た前記分散体を、前記液体組成物から前記ミクロゲル粒子を単離せずにカプセルに充填する段階を含む、請求項１から１２のいずれかに記載の経口剤形を調製する工程。
【請求項１４】
段階ｂ）を、振動ノズル技術またはプリル化を用いることによって実施する、請求項１３に記載の工程。
【請求項１５】
段階ｃ）における前記ゲル化を液体脂質組成物中で実施する、請求項１３または１４に記載の工程。
【請求項１６】
請求項１３から１５のいずれかに記載の工程によって得られるミクロゲル粒子。
【請求項１７】
請求項１３から１５のいずれかに記載の工程によって得られる経口剤形。
【請求項１８】
請求項１６に記載のミクロゲル粒子を含有するカプセル。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、経口剤形、その調製の工程、およびその工程で得られるミクロゲル粒子を含有するカプセルに関する。
【背景技術】
【０００２】
医薬品有効成分（以下ＡＰＩと訳す）の経口送達は製薬技術における重要な研究分野である。局所作用性ＡＰＩの治療活性部位ならびに全身作用化合物の薬物吸収部位への途中で、ＡＰＩのバイオアベイラビリティはいくつかの障壁によって低下する。これは、胃腸管の過酷な条件下での、特に胃における多くのＡＰＩの内腔不安定性に始まる。したがって送達システムは、ＡＰＩを損なうことなく吸収部位または局所作用部位に届けるために酸および酵素障壁に対処しなければならない。もう１つの実質的な障害は腸壁の透過段階である。特に、大きな分子は、かさ高過ぎて腸壁を通して受動的には吸収されない。他の吸収の方法、例えば傍細胞輸送、トランスサイトーシスまたは腸管Ｍ細胞による取込みなどを用いなければならない。一部のＡＰＩは、特定の細胞受容体または上皮によって産生されたサイトカインのいずれかに結合して、胃腸内腔、粘膜において局所的に治療作用を及ぼす。これらの場合、胃腸粘膜を介しての全身作用に関連する障害は、局所作用性の大型分子にとっては有用である。どちらの場合も、すなわち全身作用性または局所作用性ＡＰＩのいずれも、共通の課題はそれらの生物学的活性を損なわずに作用部位まで送達されることである。
【０００３】
経口投与後にＡＰＩを保護し、胃腸管内の作用部位まで送達するための様々な選択肢の中で、脂質ベースの薬物送達が想定できる。しかし、標準的な脂質ベースのシステムでは腸の特定領域を標的とすることができない。さらに、技術的な課題の１つは、多くのＡＰＩが水性環境を必要とすることである。親水性微小環境は逆マイクロエマルションまたはリポソームによって得られ得る。リポソームまたは油中水型マイクロエマルションを使用することの基本的な問題は、胃腸管での希釈後、コロイド不安定性をもたらす相転移が起こることである。さらに、これらの脂質ベースの製剤は、リポソームおよび他のリン脂質ベースのシステムを分解する、ホスホリパーゼＡ２を含む親油性酵素によって消化される。そのため、薬物封入のためにはより安定した親水性区画が望ましい。
【０００４】
ＡＰＩを親水性区画に封入するための１つの選択肢はマイクロカプセル化である。ミクロスフェアおよびマイクロカプセルの生成のための多くの異なる技術が記述されている。これらの技術の概説は、Ｍ．Ｗｈｅｌｅｈａｎ，ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ，２０１１；２８（８）：６６９−６８８に記載されている。振動ノズル技術はミクロスフェアおよびマイクロカプセルの生成のために広く使用されている方法である。この技術は、例えば国際公開第２００９／１３０２２５号ならびにＭ．Ｈｏｍａｒ，ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２００７；２４（１）：７２−８１、Ｃ．−Ｙ．Ｙｕ，ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ，２０１０；２７（２）：１７１−１７７、Ｈ．Ｂｒａｎｄｅｎｂｅｒｇｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６３（１９９８）７３−８０およびＧ．Ａｕｒｉｅｍｍａ，ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ９２（２０１３）３６７−３７３に開示されている。
【０００５】
公知のアプローチの難点は、得られたポリマー粒子を、粒子を凝固させるためにゲル化する必要があることである。このゲル化は一般に、溶解した二価または三価金属イオン、例えばＣａ２＋の存在下でのイオン性ゲル化によって行われる。例えば、アルギン酸ナトリウム溶液の液滴を、ＣａＣｌ２の溶液を含有する硬化浴中に注いで液滴をゲル化し、迅速な向イオン性反応でアルギン酸カルシウムを形成させる。しかし、これまでは、二価および三価塩の水溶液を硬化浴として使用していた。これにより、水相に存在する水分がカプセル殻を軟化させる、またはさらには溶解するため、得られた水性硬化浴中の微粒子の分散体を、例えばゼラチンカプセルに直接充填するのには適さない。その結果、単位用量へとさらに加工する前に、ゲル化した微粒子を収集し、乾燥しなければならない。さらに、特に水性硬化浴中では、微粒子の保存安定性が低い。このため、微粒子の沈殿後直ちに微粒子を収集し、乾燥することを必要とする。最後に、水浴中で微粒子を硬化することによる封入効率は低い。
【０００６】
国際公開第２００７／１２９９２６号は、乳化／内部ゲル化手順によって生物学的活性高分子をポリマー粒子に封入する方法を開示しており、前記方法は、油中水型エマルションを形成し、次いで分散した不溶性カルシウム錯体を可溶化して、内相に分散した前記ポリマーのゲル化を生じさせることを含む。油相に分散している生じたゲル化粒子を、高速遠心分離サイクルと組み合わせた分配相によって回収する。油中水型エマルションを機械的撹拌によって調製する。外部油相としてパラフィン油とモノオレイン酸ソルビタンの混合物を使用する。得られたポリマー粒子は直径１０μｍ未満のサイズを有する。
【０００７】
欧州特許出願公開第１４７５０７０号明細書は、ミクロゲルを含有する油中水型エマルション組成物を開示しており、前記ミクロゲルは、ゲル化能力を有する親水性化合物を水または水性成分に溶解し、これを静置冷却して凝固させ、ゲルを形成し、前記ゲルを微粉化することによって得られる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
それゆえ、上記問題を克服し、よりコスト効率の高い方法でより容易に調製できる、さらなる多粒子薬物送達システムが依然として必要である。特に、中間分離および乾燥段階を必要とせずに、例えばゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）または他の種類のカプセルに直接充填するのに適した多粒子薬物送達システムが求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
今や驚くべきことに、ミクロゲル粒子が非水性硬化浴、特に脂質硬化浴中で入手できることが見出された。これにより、得られる硬化浴中のミクロゲル粒子の分散体を、ミクロゲル粒子の中間分離および乾燥を必要とせずにカプセルなどの経口剤形の調製において使用することが可能となる。さらに、驚くべきことに、非水性硬化浴を使用することにより、封入効率が有意に上昇し、それによって得られるミクロゲル粒子が、硬化浴中での長期間の保存の間でさえもより高い安定性を有することが見出された。
【００１０】
したがって、本発明は、医薬品有効成分を含有するミクロゲル粒子を含み、前記ミクロゲル粒子が非水性液体組成物中に分散している多粒子薬物送達システムに関する。
【００１１】
本発明に関連して「ミクロゲル粒子」は、ゲル（ミクロゲル）から形成された微粒子を意味する。ミクロゲル粒子は、好ましくは振動ノズル技術（「プリル化」とも呼ばれる）によって入手できるものである。特に、ミクロゲル粒子は、乳化工程によっては得ることができないものである。ミクロゲルは非水性液体組成物中に分散している。この薬物送達システムは、それゆえ、ミクロゲルの分散体、好ましくは脂質ベースの分散体とも称することができる。
【００１２】
「多粒子」という用語は、以下でより詳細に説明するように、同じかまたは異なる種類であってよい複数の個別粒子を意味すると理解されるべきである。
【００１３】
「非水性」という用語は、それぞれ液体組成物の総重量に基づき、２０重量％未満の水、好ましくは１０重量％未満、より好ましくは５重量％未満、さらにより好ましくは３重量％未満、なお一層好ましくは２重量％未満、例えば１重量％未満の水を含有する液体組成物を定義する。最も好ましくは、液体組成物は水を実質的に含有せず、特に水を全く含有しない。
【００１４】
好ましい実施形態では、非水性組成物は医薬的に許容される成分だけを含有する。したがって、組成物は、ｎ−ヘキサンまたはｎ−ブタノールなどのいかなる毒性有機溶媒も含有しない。非水性組成物中の適切な溶媒は、例えばエタノールなどの医薬的に許容されるアルコール、ジエチレングリコールモノエチルエーテルおよび脂質である。適切な脂質組成物は以下でより詳細に説明する。１つの実施形態では、非水性組成物はいかなるパラフィン油も含有しない。
【００１５】
本発明の多粒子薬物送達システムは、経口投与後にＡＰＩをその薬理作用部位または吸収部位に送達するのに適する。それによりミクロゲル粒子は、例えば酵素分解に対してＡＰＩを保護し、ミクロゲル粒子中のポリマーは、例えば、ＡＰＩの局所作用または全身吸収をさらに促進するために粘膜付着を提供するように選択することができる。本発明の多粒子薬物送達システムのさらなる利点は、このシステムが、例えば経口投与用のゼラチンカプセルに含有され得るように、ミクロゲル粒子が非水性液体組成物、特に脂質組成物中に分散していることである。
【００１６】
ミクロゲル粒子中に含まれるＡＰＩは特定の物理化学特性に限定されない。ＡＰＩは親水性または疎水性であり得る。しかし、ミクロゲル粒子をポリマーの水溶液を用いて調製する場合は、親水性ＡＰＩが好ましい。ミクロゲル粒子は、１つ以上のＡＰＩを純粋な形態でまたは例えばＡＰＩを含有する小胞の形態で含むことができる。本発明の多粒子薬物送達システムは、さもなければ経口投与後に薬理作用部位に輸送されることが困難なかさ高いＡＰＩ分子に特に適する。
【００１７】
特にかさ高いＡＰＩ分子に関しては、それらの生物学的活性を保存するために胃腸管を介した輸送の間好ましい環境を維持することが難しい。この問題は本発明によって成功裏に解決される。
【００１８】
さらに、医薬用タンパク質およびペプチドは治療薬の重要な部類になりつつある。しかし、それらの大きな分子量とサイズのために、様々な粘膜表面および生体膜に関して低い透過性を示す。さらに、それらの固有の化学的および物理的不安定性も、経口送達に関連する低いバイオアベイラビリティをもたらす因子である。本発明の多粒子薬物送達システムのさらなる利点は、ミクロゲル粒子が通常親水性環境を提供するので、通常は同じく親水性であるタンパク質およびペプチドをミクロゲル粒子に溶解することができ、したがって標的部位で容易に利用可能であることである。さらに、ミクロゲル粒子はペプチドおよびタンパク質を胃腸管環境から有効に保護することができる。それゆえ、タンパク質およびペプチドは本発明の多粒子薬物送達システムの好ましいＡＰＩである。
【００１９】
ミクロゲル粒子は、ＡＰＩのためのマトリックスを形成する粒子全体にわたってゲル化ポリマーを含有するビーズの形態またはＡＰＩを含有するコアとゲル化ポリマーで形成される殻を含むマイクロカプセルの形態であり得る。
【００２０】
ミクロゲル粒子は任意の適切なサイズを有し得る。粒子のサイズは、例えば１〜２，０００μｍ、好ましくは１０〜２，０００μｍまたは２０〜２，０００μｍの範囲、より好ましくは５０〜１，０００μｍの範囲、さらにより好ましくは８０〜５００μｍの範囲内であり得る。１つの実施形態では、９０パーセンタイルによって表される粒度分布Ｄ９０は、１０００μｍ未満、例えば７００μｍ未満、好ましくは５００μｍ未満であり得る。好ましくは、粒度分布Ｄ９０は１０μｍを上回り、より好ましくは２０μｍを上回る。粒度分布Ｄ９０は、１０〜１０００μｍの範囲、好ましくは１００〜７００μｍの範囲、より好ましくは２５０〜５００μｍの範囲内であり得る。別の実施形態では、メジアン径Ｄ５０によって表される粒度分布は、１，０００μｍ未満、例えば７００μｍ未満、好ましくは５００μｍ未満であり得る。好ましくは、メジアン径Ｄ５０は１０μｍを上回り得、より好ましくは２０μｍを上回り得る。メジアン径Ｄ５０は、１０〜１，０００μｍの範囲、好ましくは１００〜７００μｍの範囲、より好ましくは２５０〜５００μｍの範囲内であり得る。好ましい実施形態では、粒度分布は両方の基準を満たし、Ｄ９０値を上回り、およびＤ５０値を上回る。
【００２１】
さらに、ミクロゲル粒子は任意の適切な形態を有し得る。例えば、粒子は球状または楕円のような非球状であり得る。さらに、粒子は、赤血球のものに類似したドーナツ型を示し得る。粒子形状は長短比によって表すことができ、これは、最大フェレ径（最も遠く離れた２つの外周点を結ぶ線形セグメント）をフェレ等価長方形の短辺（粒子と同じ面積を有する長方形の最短辺であり、その長辺は最大フェレ径と長さが等しい）で除したものである。好ましくは、粒子の長短比は、１．２７〜２．６０の範囲、より好ましくは１．２７〜２．３０の範囲、さらにより好ましくは１．６０〜２．２０の範囲内である。
【００２２】
これに関して、驚くべきことに、水性硬化浴を用いて先行技術に従ってミクロゲル粒子を調製した場合、得られる粒子の長短比は２．８を上回り、特に約２．９である。非水性硬化浴を使用することにより、より低い長短比を有するミクロゲル粒子を得ることができる。したがって、本発明はまた、１０００μｍ未満、好ましくは７００μｍ未満、より好ましくは５００μｍ未満の粒度分布Ｄ９０を有し、および１．２７〜２．６０の範囲、好ましくは１．２７〜２．３０の範囲、さらにより好ましくは１．６０〜２．２０の範囲内の長短比を有する少なくとも１つのゲル形成ポリマーを含有するミクロゲル粒子に関する。さらなる実施形態では、ミクロゲル粒子は、１，０００μｍ未満、好ましくは７００μｍ未満、より好ましくは５００μｍ未満のメジアン径Ｄ５０を有することができる。これらのミクロゲル粒子は、本発明の多粒子薬物送達システム中のミクロゲル粒子と同じゲル形成ポリマーを含有し得る。
【００２３】
ミクロゲル粒子の上述したサイズおよび形態は、Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＳＣ３０フレーム取込み器を備えるＯｌｙｍｐｕｓ  ＣＫＸ４１ＳＦ顕微鏡を用いて観察することができる。粒子の形状を目視検査するために異なる倍率で写真を撮影する。ミクロゲルの粒径および形状は、ＸＰＴ−Ｃ（ＰＳ−Ｐｒｏｚｅｓｓｔｅｃｈｎｉｋ  ＧｍｂＨ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を用いた動的画像解析によって評価する。ミクロゲルを硬化浴中の懸濁液に保持し、次に近赤外光源の前で流す（ｎ＝１０００）。粒径は、検出される粒子と同じ面積を有するディスクの直径である、ワドルディスク径（Ｗａｄｄｌｅ  ｄｉｓｋ  ｄｉａｍｅｔｅｒ）によって表される。
【００２４】
ＡＰＩ以外に、ミクロゲル粒子はポリマーおよび好ましくはゲル化剤を含有する。ポリマーは、胃腸管内の環境に対してＡＰＩを有効に保護するためにゲル化していなければならない。適切なゲル形成ポリマーは、例えばキトサン、キトサン誘導体、ポリアクリル酸、アルギン酸塩、カラゲナン、アラビアゴム、ジェランガム、タンパク質、キサンタンガム、ゼラチン、寒天、ペクチン、ヒアルロン酸およびその塩である。これらのポリマーは、単独でまたはこれらのポリマーの２つ以上の組合せとして使用することができる。
【００２５】
適切なキトサン誘導体は、ヒドロキシル基および／またはアミノ基、好ましくはアミノ基が部分的または完全にアルキル化および／またはカルボキシアルキル化されていてもよい、アルキル化キトサンおよび／またはカルボキシアルキル化キトサンおよび／またはＰＥＧ化キトサンである。アルキル化キトサンおよび／またはカルボキシアルキル化キトサン中の適切な炭化水素基は、飽和、不飽和または芳香族炭化水素基、例えばアルキル基またはアルケニル基、特に１〜２４個、好ましくは１〜１０個、より好ましくは１〜６個の炭素原子を有するものである。芳香族炭化水素基としてはフェニルが適切である。炭化水素基は、１個以上の置換基、例えばヒドロキシル、アミノおよびカルボキシで置換されていてもよい。好ましいアルキル基はメチルであり、好ましいカルボキシアルキル基はカルボキシメチルである。他の適切な残基は、例えばフタル酸エステル、コハク酸エステルおよび脂肪酸エステル、例えばリノール酸エステルおよびオレイン酸エステルである。キトサン誘導体として、Ｎ−トリメチルキトサンおよびカルボキシメチルキトサン（モノ−Ｎ−カルボキシメチル化キトサン）を例に挙げることができる。タンパク質としてはアルブミンおよび乳清タンパク質を例に挙げることができる。好ましいゲル形成ポリマーはカルボキシメチルキトサンである。
【００２６】
ポリマーのゲル化は、好ましくはゲル化剤として二価および／または三価金属イオンの存在下で得られる。例えばアルギン酸ナトリウムは、Ｃａ２＋などの二価または三価金属イオンの存在下で、アルギン酸カルシウムの形成により、ゲル化する。
【００２７】
適切な二価金属イオンは、例えばＣａ２＋、Ｍｇ２＋、Ｚｎ２＋、Ｂａ２＋およびＣｕ２＋である。適切な三価金属イオンは、例えばＡｌ３＋である。Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋およびＺｎ２＋が好ましく、Ｃａ２＋が最も好ましい。他の適切なゲル化剤は、例えばトリポリリン酸塩、クエン酸、フィチン酸およびグルタルアルデヒドである。これらのイオンまたは物質の２つ以上の混合物も使用し得る。イオンは、適切な塩（または例えばそれらの水和物）、例えばＣａＣｌ２またはその水和物の１つ、例えばＣａＣｌ２二水和物を組成物に溶解することによって非水性液体組成物、特に脂質組成物中で提供される。
【００２８】
一部のポリマーは、例えば温度またはｐＨの違いによってゲル化することができる。これらの場合は、ミクロゲル粒子がゲル化剤を含有する必要はない。
【００２９】
ミクロゲル粒子は、さらなる成分、例えば水、グリセロール、緩衝剤等を含有し得る。
【００３０】
多粒子薬物送達システムは、非水性液体組成物、特に脂質組成物中に分散している１種類または２つ以上の異なる種類のミクロゲル粒子を含有し得る。２つ以上の異なる種類のミクロゲル粒子が存在する場合、これらの種類は、例えばそれらのサイズ、形態、ＡＰＩ、ポリマーおよび／または他の成分が異なり得る。異なる種類のミクロゲル粒子はまた、それらの機能が異なっていてもよく、例えば持続放出、遅延放出または即時放出ミクロゲル粒子であり得る。
【００３１】
ミクロゲル粒子を分散させるために使用される非水性液体組成物は特に限定されない。しかし、前記非水性液体組成物は医薬的に許容されるべきであり、通常のカプセル材料、例えばゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはデンプンに干渉すべきではない。組成物は、５０℃以下、好ましくは４０℃以下、より好ましくは３０℃以下、最も好ましくは２５℃以下、例えば室温（２３℃）で液体であるべきである。好ましくは、液体組成物は少なくとも１つのグリセリド（すなわちグリセロールと有機酸から形成されるエステル、本明細書では「グリセリド誘導体」とも称する）またはアルコール、例えばエタノールを含有する。
【００３２】
グリセリドは、例えば、飽和および／または不飽和Ｃ２−２８カルボン酸、好ましくは飽和および／または不飽和Ｃ２−２２カルボン酸、より好ましくは飽和および／または不飽和Ｃ２−２０カルボン酸のモノグリセリド、ジグリセリドおよびトリグリセリド（すなわちグリセロールエステルがそれぞれ１個、２個または３個の有機酸で形成される）から選択することができる。さらなる好ましい実施形態では、グリセリドは、飽和Ｃ６−１２カルボン酸、好ましくは飽和Ｃ８−１０カルボン酸、または不飽和Ｃ１６−２０カルボン酸、好ましくは不飽和Ｃ１８カルボン酸のモノグリセリドおよびジグリセリドから選択される。前記カルボン酸のモノグリセリドが特に好ましい。ジグリセリドおよびトリグリセリドは、２個または３個の異なるカルボン酸残基を含有し得る。グリセリドは他の残基、例えばポリエチレンオキシド残基、特に１個のポリエチレンオキシド残基、例えばマクロゴール３〜２０、好ましくはマクロゴール３〜１５、より好ましくはマクロゴール４〜１０、例えばマクロゴール−４、５、６、７、８または９、特にマクロゴール−６およびマクロゴール−８をさらに含有し得る。
【００３３】
適切なグリセリドは、例えば、酢酸、カプリル酸、カプリルカプリン酸、カプリン酸、ステアリン酸、オレイン酸、ラウリン酸、リノレン酸および／またはリノール酸残基を含有するモノグリセリド、ジグリセリドおよびトリグリセリドである。適切なグリセリドの例は、Ｍａｉｓｉｎｅ（登録商標）３５−１のようなモノリノール酸グリセリル、Ｉｍｗｉｔｏｒ（登録商標）７４２のようなデカノイルオクタノイルグリセリド、Ｃａｐｍｕｌ（登録商標）ＭＣＭ  Ｃ１０  ＥＰのようなモノカプリン酸グリセリル、Ｃａｐｍｕｌ（登録商標）ＭＣＭ  ＥＰのようなモノカプリルカプリン酸グリセリル、Ｃａｐｍｕｌ（登録商標）ＭＣＭ  Ｃ８  ＥＰのようなモノカプリル酸グリセリル、Ｃａｐｔｅｘ（登録商標）８０００のようなトリカプリル酸グリセリル、Ｃａｐｔｅｘ（登録商標）１０００のようなトリカプリン酸グリセリル、Ｍｉｇｌｙｏｌ（登録商標）８１２のようなトリカプリルカプリン酸グリセリル、Ａｃｃｏｎｏｎ（登録商標）ＣＣ−６のようなカプリルカプリン酸マクロゴール−６グリセリド、Ａｃｃｏｎｏｎ（登録商標）ＭＣ−８  ＥＰ／ＮＦのようなカプリルカプリン酸マクロゴール−８グリセリド、Ｌａｂｒａｆｉｌ（登録商標）Ｍ２１２５ＣＳのようなリノレオイルマクロゴール−６グリセリド、およびＬａｂｒａｆｉｌ（登録商標）Ｍ１９４４ＣＳのようなオレオイルマクロゴール−６グリセリドである。
【００３４】
さらなる実施形態では、グリセリドは、ポリグリセリル（すなわちグリセロールが他のグリセロール基に結合しており、および最も遠いグリセロールが有機酸とエステルを形成するかまたは他の残基、例えばポリエチレンオキシド残基によって置換されていてもよいポリマー）から選択することができる。エステルを形成する有機酸およびポリエチレンオキシド残基としては、モノグリセリド、ジグリセリドおよびトリグリセリドに関して上述したものが好ましい。
【００３５】
適切なポリグリセリルは、例えばＰｌｕｒｏｌ  Ｏｌｅｉｑｕｅ  ＣＣ  ４９７のようなジオレイン酸ポリグリセリル−３、オレイン酸ポリグリセリル−６、ジステアリン酸ポリグリセリル−１０、イソステアリン酸ポリグリセリル−１０およびラウリン酸ポリグリセリル−１０である。
【００３６】
非水性液体組成物中のＰＥＧ化グリセリド誘導体の存在、特にマクロゴール−６グリセリドの存在は、ポリエチレンオキシド残基なしでグリセリドを含有する非水性液体組成物を使用して調製したミクロゲル粒子と比較して、ミクロゲル粒子の調製の間の封入効率ならびに保存条件下でのミクロゲル粒子に含有されるタンパク質の安定化に関してミクロゲル粒子の安定性を顕著に増大させることが見出された。
【００３７】
驚くべきことに、ミクロゲル粒子の製造においてゲル形成ポリマーをゲル化するために使用される硬化浴が、ミクロゲル粒子を分散させるための非水性液体組成物、特に脂質組成物として使用できることが発明人によって見出された。この発見は、硬化浴からのミクロゲル粒子の中間分離およびこのようにして得られたミクロゲル粒子の乾燥を必要とせずに経口剤形の調製においてミクロゲル粒子を使用することを初めて可能にする。しかし、非水性液体組成物、特に脂質組成物、および特にそのような組成物中で使用されるグリセリドによっては、ゲル形成ポリマーをゲル化するために使用される二価または三価金属イオンの塩は、組成物にほとんど溶解しないかまたはさらには不溶性であり得る。発明人は、そのような場合、二価および／または三価金属イオン塩を組成物に溶解するための共溶媒を添加することによって非水性液体組成物、特に脂質組成物中の塩の溶解度を十分に高めることができることを見出した。共溶媒として、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、エタノール、２−ピロリドン、カプリル酸、プロピレングリコールおよびＮ−メチル−２−ピロリドンを例に挙げることができる。ジエチレングリコールモノエチルエーテル（Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ（登録商標）ＨＰ）およびエタノールが好ましく、ジエチレングリコールモノエチルエーテルが最も好ましい。
【００３８】
共溶媒としてのジエチレングリコールモノエチルエーテルの存在は、共溶媒としてのエタノールの存在と比較して、封入効率ならびに保存の間のミクロゲル粒子に含有されるタンパク質の安定性を増大させることが見出された。
【００３９】
非水性組成物、特に脂質組成物は充填剤をさらに含有し得る。適切な充填剤は、例えばＰＥＧ６００などのポリエチレングリコール、炭酸プロピレンおよびハッカ油などの天然油である。
【００４０】
ＰＥＧ６００などのポリエチレングリコールおよび炭酸プロピレンの存在は、非水性組成物中の充填剤としての天然油の存在と比較して、ミクロゲル粒子の調製の間の封入効率を有意に高めることが見出された。
【００４１】
非水性組成物、特に脂質組成物は、さらなる成分、例えばグリセロールまたは公知の透過促進剤をさらに含有し得る。
【００４２】
非水性組成物、特に脂質組成物の成分の量は広い範囲で異なり得る。例えば、組成物は、１．５：８．５：０〜１．５：０．１：８．４の範囲内の共溶媒：グリセリド：充填剤の重量比を含有し得る。好ましくは、共溶媒の量は、組成物の総重量に基づき１〜１０重量％、好ましくは２〜７重量％の塩をこの組成物に溶解できる程度まで、組成物への二価または三価金属イオン塩、例えばＣａＣｌ２の溶解度を高めるのに十分である。非水性組成物、特に脂質組成物は、適切には、非水性組成物、特に脂質組成物の総重量に基づき、少なくとも１５重量％、好ましくは少なくとも２０重量％の共溶媒を含有することができる。
【００４３】
本発明はさらに、上述した多粒子薬物送達システムを調製する工程に関する。この工程は、
ａ）ゲル形成ポリマーと医薬品有効成分の混合物を提供する段階、
ｂ）段階ａ）で得た混合物を微小液滴に形成する段階、
ｃ）段階ｂ）で得た微小液滴を非水性液体組成物中でゲル化し、非水性液体組成物中に分散したミクロゲル粒子を形成する段階を含む。
【００４４】
上記工程の段階ａ）では、ゲル形成ポリマーと医薬品有効成分を混合する。一般に、この混合は、ゲル形成ポリマーの溶液を形成するために水の存在下で実施する。ゲル形成ポリマーの量は特に限定されず、得られる溶液の粘度に依存する。粘度が高くなる場合、混合物を微小液滴に形成することが困難である。それゆえ、低い粘度の溶液が好ましい。例えば、カルボキシメチルキトサンをゲル形成ポリマーとして使用する場合、溶液は、好適には、得られる混合物の総重量に基づき１〜８重量％、好ましくは２〜６重量％、最も好ましくは約５重量％のゲル形成ポリマーを含有し得る。溶液はまた、２つ以上のゲル形成ポリマーの混合物を含有することができる。
【００４５】
混合物は、さらなる成分、例えばグリセロールをさらに含有することができる。グリセロールの量は、例えば混合物の総重量に基づき１〜７０重量％の範囲、好ましくは２０〜７０重量％の範囲、より好ましくは３０〜６０重量％の範囲、最も好ましくは４０〜５５重量％の範囲内であり得る。
【００４６】
さらなる好ましい実施形態では、混合物は、１つ以上の緩衝剤、例えばトリス（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）またはＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）を付加的に含有する。
【００４７】
上記工程の段階ｂ）では、段階ａ）で得た混合物を微小液滴に形成する。微小液滴の形成は、当業者に公知の任意の方法によって実施することができる。様々な方法が、例えばＭ．Ｗｈｅｌｅｈａｎ，ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ，２０１１；２８（８）：６６９−６８８に記載されている。機械技術は、医療適用のための微粒子を生成するのに使用される最も一般的な種類の機構である。これらは、ノズルを通して押し出されたポリマーから液滴を生成する原理に基づいており、機械的手段（すなわち切断または振動力）を用いて働き、開口部での通常の滴下工程を増大させるか、またはノズルを通過するときにポリマーによって生成される押出液体流を破砕する。流体分散体を液滴に形成するためおよびその後のゲル粒子への変換のための主要な機械技術の一部は：同軸空気流、静電押出、回転円板、ジェット切断、噴霧乾燥、振動ノズルおよびプリル化である。これらの方法はすべて当業者に公知であり、適切な装置は市販されている。本発明の工程では、段階ｂ）は振動ノズル技術またはプリル化を用いることによって実施する。
【００４８】
上記工程の段階ｃ）では、段階ｂ）で得た微小液滴をゲル化し、ミクロゲル粒子を形成する。一般に、生成後、ゲル化剤を使用した化学的手段、例えば化学的架橋（例えばグルタルアルデヒドとキトサン）、コアセルベーション／沈殿（例えば転移温度もしくはｐＨのような物理化学特性を用いたキトサン、ジェラン、カラゲナンの混合物）またはイオン性ゲル化（例えばキトサンもしくはアルギン酸塩と二価もしくは三価金属イオン）によって液滴を直ちにミクロゲル粒子（スフェアまたはカプセル）に凝固させる。イオン性ゲル化が本発明の工程では好ましい。
【００４９】
段階ｃ）におけるゲル化は、非水性液体組成物、好ましくは脂質組成物中で実施する。硬化浴からミクロゲル粒子を単離することを必要とせずに、最終的な水性、好ましくは脂質組成物中または最終的な水性、好ましくは脂質組成物に変換することができる組成物中で直接微粒子のイオン性ゲル化を実施するために、十分な量の二価および三価金属イオンを非水性液体組成物に溶解することが可能であることが発明人によって見出された。例えば、硬化浴は、共溶媒だけまたは共溶媒とグリセリドで構成され得、ミクロゲル粒子の形成後にグリセリドと充填剤または充填剤だけを添加する。好ましくは液体脂質組成物を硬化浴として使用する。
【００５０】
「非水性」という用語は、それぞれ液体組成物の総重量に基づき、２０重量％未満の水、好ましくは１０重量％未満、より好ましくは５重量％未満、さらにより好ましくは３重量％未満、なお一層好ましくは２重量％未満、例えば１重量％未満の水を含有する液体組成物を定義する。最も好ましくは、液体組成物は水を実質的に含有せず、特に水を全く含有しない。
【００５１】
これは、常に塩の水溶液中で実施されてきた先行技術のゲル化段階を省くことができ、それにより時間とコストを節約するという利点を有する。結果として、得られるミクロゲル粒子の混合物および液体組成物は、いかなる精製または乾燥段階も必要とせずにさらなる処理のために直ちに使用することができる。
【００５２】
例えば、形成された微小液滴を非水性液体組成物から成るゲル化または硬化浴に注ぐ。微小液滴が液体組成物に浸漬するとすぐに、ゲル形成ポリマーは二価または三価金属イオンの存在下でゲル化し、それによりミクロゲル粒子を形成して、これらは同時に液体組成物中に分散する。
【００５３】
微小液滴を非水性液体組成物中でゲル化させる場合は、液体組成物からミクロゲル粒子を単離せずに、得られた分散体を医薬剤形に加工することができる。例えば、分散体を、その調製後直ちにまたはさらなる成分を添加した後にカプセルに充填することができ、または分散体をしばらくの間保存することができ、その後さらにカプセルに充填するなど、加工することができる。いずれの場合も、費用と時間がかかる単離、洗浄および乾燥段階を回避することができる。
【００５４】
さらに、驚くべきことに、本発明の工程のさらなる利点として、特に微小液滴のゲル形成ポリマーを非水性液体組成物中でゲル化することによってミクロゲル粒子を形成する場合、ミクロゲル粒子は、水性硬化浴中でゲル化することによって調製されたミクロゲル粒子と比較してより高い機械的安定性、より高い封入効率および増大した保存安定性を示す。したがって、本発明の工程によって得られるミクロゲル粒子および多粒子薬物送達システムは、ミクロゲル粒子が先行技術の工程に従って調製され、さらに処理される前に単離され、洗浄され、乾燥された同等の薬物送達システムとは、その物理的特性においても異なる。
【００５５】
本発明の多粒子薬物送達システムは、さらなる加工を行わずに経口投与用の医薬組成物として、例えばシロップの形態で使用することができる。好ましくは、多粒子薬物送達システムは、しかし、適切な単位剤形、例えばカプセルを得るためにさらに加工する。適切な医薬カプセルは、例えばハードシェルまたはソフトシェルカプセルである。適切なカプセル材料は、例えばゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびデンプンである。
【図面の簡単な説明】
【００５６】
【図１】本発明に従って得られたミクロゲル粒子を示す。
【図２】種々の硬化浴を用いた封入効率を示す。
【図３】種々の硬化浴を用いて得られたミクロゲル粒子からの漏出を示す。
【図４】種々の硬化浴を用いて得られたミクロゲル粒子からのＢＳＡの放出を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５７】
ここで本発明を実施例によってさらに説明するが、これらの実施例は限定と解釈されることを意図しない。
【実施例１】
【００５８】
以下の成分を含有する２つのポリマー溶液を調製した：
【表１】
2019112413.tif 000003
【表２】
2019112413.tif 000004
【００５９】
どちらの場合も、カルボキシメチルキトサンおよびウシ血清アルブミンの重さを量り、３００ｒｐｍ〜７００ｒｐｍで撹拌しながら一緒に混合した。次にこの混合物を真空下に目開き１μｍ〜５μｍのガラスマイクロファイバーフィルタでろ過した。製剤中の気泡を除去するために最終組成物を一晩（少なくとも８時間）休ませた。その後溶液を振動ノズルユニットと共に使用した。
【００６０】
これらのポリマー溶液から、ＥｎｃａｐＢｉｏＳｙｓｔｅｍｓからのＥｎｃａｐｓｕｌａｔｏｒ  ＢＩＯＴＥＣＨを以下の設定で使用して微小液滴を調製した：
【表３】
2019112413.tif 000005
【００６１】
微小液滴のゲル化のために以下の硬化浴を使用した：
【表４】
2019112413.tif 000006
【００６２】
Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ  ＨＰ、Ｃａｐｍｕｌ  ＭＣＭ−Ｃ８  ＥＰおよび炭酸プロピレンの重さを量り、５００ｒｐｍ〜９００ｒｐｍで撹拌しながら一緒に混合した。塩化カルシウム二水和物の重さを量り、粉末が完全に溶解するまで８００ｒｐｍ〜１１００ｒｐｍで撹拌しながら前記混合物に添加した。その後混合物を硬化浴として使用した。
【表５】
2019112413.tif 000007
【００６３】
硬化浴２は、Ｃａｐｍｕｌ  ＭＣＭ  ＥＰを４０℃に加熱した後で使用したことを除き、基本的に硬化浴１と同じ方法で調製した。
【００６４】
ポリマー溶液１を使用して、以下のパラメータを有するミクロゲル粒子を得た：
【表６】
2019112413.tif 000008
【実施例２】
【００６５】
カルボキシメチルキトサンの４．７６％（乾燥物質ｗ／ｖ）溶液を脱塩水に溶解することによってポリマー溶液を調製した。適切な量のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を添加して２．５％（ｗ／ｖ）溶液を得た。次にこの溶液を褐色ガラスビン中で＋４℃にて保存し、それぞれの使用の前に室温にもどした。
【００６６】
それぞれ４．７６％（ｗ／ｗ）の塩化カルシウムを含有する７つの硬化浴を調製した。それらの組成物を以下の表に列挙する：
【表７】
2019112413.tif 000009
【００６７】
硬化浴ＨＢＷを比較物として使用した。
【００６８】
Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（ＥｎｃａｐＢｉｏＳｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．，Ｇｒｅｉｆｅｎｓｅｅ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ；この製品は現在Ｂｕｅｃｈｉ  Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ  ＡＧ，Ｆｌａｗｉｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ（Ｂｕｅｃｈｉのｕｅはｕにウムラウト付）によって市販されている）で振動ノズル技術を用いてミクロゲルを調製した。ポリマー溶液を２０ｍＬ  Ｏｍｎｉｆｉｘ（登録商標）プラスチック注射器（Ｂ．Ｂｒａｕｎ  Ｍｅｌｓｕｎｇｅｎ  ＡＧ，Ｍｅｌｓｕｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に充填した。次にポリマー溶液を、１２４０Ｈｚの周波数を適用し、電極リングを１５００Ｖに設定することにより３．１０ｍＬ／分（ポリマー溶液３．７９ｇ／分）の公称流量で、１５０μｍのステンレススチールノズルを介して注入した。落下距離は硬化浴１００ｍＬ中まで〜１３ｃｍであり、硬化浴を４００ｒｐｍで撹拌した。その後ミクロゲルを硬化浴中でさらなる分析まで２０分間静置した。
【００６９】
ミクロゲル粒子のサイズと形態を上述したように測定した。結果を以下の表に要約する：
【表８】
2019112413.tif 000010
【００７０】
ＢＳＡの定量化および分析のため、ミクロゲルの５ｇアリコートを目開き１２５μｍのステンレススチールふるいに通し、その後水、エタノールで洗浄し、再び水で洗浄した。ミクロゲルを、メスフラスコ（公称ＢＳＡ濃度２．５ｍｇ／ｍＬ）中、リン酸緩衝生理食塩水ｐＨ６．８で５０ｍＬに希釈し、一定撹拌しながら室温で７２時間にわたってそれらの全内容物を放出させた。その後試料を＋４℃で保存した。それぞれの使用前に、必要な量の溶液を５４１５Ｃ遠心機（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  ＧｍｂＨ，Ｌｅｉｐｚｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）において１０，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、次にＴｉｔａｎ３ナイロンフィルタ０．４５μｍ（ＳＭＩ−ＬａｂＨｕｔ  Ｌｔｄ，Ｍａｉｓｅｍｏｒｅ，ＵＫ）でろ過した。
ミクロゲルへのＢＳＡの封入効率（ＥＥ）
【００７１】
ＢＳＡ溶液のアリコートをさらなる緩衝液で１．５ｍｇ／ｍＬの最終公称ＢＳＡ濃度に希釈した。タンパク質含量を、ローリータンパク質アッセイ（Ｌｏｗｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９５１；Ｐｅｔｅｒｓｏｎ，１９７９）に基づくＤＣ（商標）タンパク質アッセイを用いて、供給会社によって提供されるプロトコルに従って測定した。タンパク質含量は、１ｃｍ光路のＰｌａｓｔｉｂｒａｎｄ（登録商標）使い捨てセミマイクロＰＭＭＡキュベット（Ｂｒａｎｄ  ＧｍｂＨ＋ＣＯ  ＫＧ，Ｗｅｒｔｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）中でＪａｓｃｏ  Ｖ−６３０  ＵＶ−Ｖｉｓ分光光度計（Ｊａｓｃｏ  Ｉｎｃ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＵＳ）で７５０ｎｍにて測定した。封入効率は、封入されたＢＳＡとポリマー溶液中に存在するＢＳＡの量との比率としてパーセントで表す。結果を図２に示す。
【００７２】
硬化浴中にある間のポリマーマトリックスからのＢＳＡ漏出を、ＥＥを経時的に測定することによっても試験した。懸濁したミクロゲルを遮光ビン中で１か月間にわたって２５℃に保持した。ＥＥを１、２、３および４週目に測定した。漏出は、ゼロ時点のＥＥと比較した所与の時点でのＥＥとしてパーセントで表す。結果を図３に示す。
ミクロゲルからのＢＳＡのインビトロ放出
【００７３】
ミクロゲルのインビトロ放出を、欧州薬局方（２００７）に記載されているように、パドルを備えるＥｒｗｅｋａ  ＤＴ  ６００（Ｅｒｗｅｋａ  ＧｍｂＨ，Ｈａｕｓｅｎｓｔａｍｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で試験した。それぞれの溶解容器（ｎ＝３）にリン酸緩衝生理食塩水ｐＨ６．８  ５００ｍＬを満たし、これを３７±０．５℃で加熱して、５０ｒｐｍで撹拌した。次に、洗浄したＢＳＡ充填ミクロゲルを、各容器につきＢＳＡ  １５ｍｇの公称総含量になるように添加した。種々の時点で（５、１０、１５、２０、３０、４５、６０、９０および１２０分）、１ｍＬ試料を放出媒質から取り出し、ナイロンフィルタ０．４５μｍでろ過した。取り出した放出媒質の対応容積を新鮮緩衝液で補填した。最終的なアリコートを１００ｒｐｍで１２時間後に採取し、平衡状態のミクロゲルからのＢＳＡ放出を得た。これらの試料のタンパク質含量を、ビシンコニン酸タンパク質アッセイ（Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９；Ｋｅｓｓｌｅｒ  ａｎｄ  Ｆａｎｅｓｔｉｌ  １９８６；Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５；Ｗｉｅｃｈｅｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８）に基づくＭｉｃｒｏ  ＢＣＡ（商標）タンパク質アッセイキット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＵＳ）を用いて、供給会社によって提供されるプロトコルに従って測定した。調製した試料を９６ウェル透明ＢＲＡＮＤｐｌａｔｅｓ（登録商標）ｐｕｒｅＧｒａｄｅ（商標）（Ｂｒａｎｄ  ＧｍｂＨ＋ＣＯ  ＫＧ，Ｗｅｒｔｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に充填し、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ２ｅにおいてλ＝５６２ｎｍで測定した。得られた値を平衡状態の放出値のパーセントとして表す。結果を図４に示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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