(57)【要約】本発明は、多数の病理、特に、新血管、癌関連、および炎症性の病理の診断に有用な新規化合物、および本化合物を含んだ薬学的組成物に関する。これらの化合物は、診断的に有効な検出成分に結合された病理学的領域を標的化する成分を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一般式（Ｅ）の化合物、および薬学的に許容可能な有機または無機の酸または塩基を有する式（Ｅ）の化合物の塩：
Ｂｘ‐Ｌｚ‐（ＨＲ  Ｃｈ）ｙ（Ｅ）
上式中、
Ｂはバイオベクター
Ｌはリンカー
ＨＲ  Ｃｈは式（Ｉ）：
［（Ｄ）q‐（Ｉa、b、c、d、e、f、ｇ）r］
のキレートを表し、ここで、
ａ）Ｉａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇはＩａ、Ｉｂ、Ｉｃ、Ｉｄ、Ｉｅ、Ｉｆ、Ｉｇから選択され、
Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃは
2007527857.tif 000174
を意味するものであり、
式中、
Ｘは同一または異なってよく、ＣＯ２Ｒ’ａ、ＣＯＮＲ’ｂＲ’ｃまたはＰ（Ｒ’ｄ）Ｏ２Ｈから選択され、
Ｒ’ａ、Ｒ’ｂおよびＲ’は同一または異なってよく、任意でヒドロキシル化されてもよいＨまたは（Ｃ１‐Ｃ８）アルキルを表し、
Ｐはリン原子であり、Ｒ’ｄはＯＨ、（Ｃ１‐Ｃ８）アルキルまたは（Ｃ１‐Ｃ８）アルコキシ、（Ｃ１‐Ｃ８）アリルアルキルまたは（Ｃ１‐Ｃ８）アルコキシアルキルから選択され、
Ｒ１は分子量（モル質量ｇ／モル）が２００を超える親水基を表し、以下の基から選択され、
好適には分子量が１０００〜２０００の、ポリオキシ（Ｃ２‐Ｃ３）アルキレン、特にポリエチレングリコールおよびそのＣ１‐Ｃ３モノエーテルおよびモノエステル、
ポリヒドロキシアルキル、
ポリオール、
（Ｒ２ｇ）e［（Ｒ２ｇ）ｉＲ３］ｈ、ここで、
ｈ＝１または２；ｉ＝０、１または２；ｅ＝１〜５であり、
Ｒ２（Ｒ２は同一または異なる）は
無、アルキレン、アルコキシアルキレン、ポリアルコキシアルキレン、
任意でＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、（Ｃ１‐Ｃ８）アルキル基、（Ｃ１‐Ｃ８）アルキルオキシ、ＮＯ２、ＮＲＸＲＹ、ＮＲXＣＯＲＹ、ＣＯＮＲＸＲＹまたはＣＯＯＲＸ、Ｈまたは（Ｃ１‐Ｃ８）アルキルであるＲＸおよびＲＹ、およびヒドロキシル化されてよい直鎖、分枝、または環状のＣ１‐Ｃ１４アルキル、アルキレンおよびアルコキシ基で任意に置換されてもよい、フェニレン、または飽和または不飽和であってよい複素環式残基
を表し、
ｇ（ｇは同一または異なる）は、無または官能基Ｏ、ＣＯ、ＯＣＯ、ＣＯＯ、ＳＯ３、ＯＳＯ２、ＣＯＮＲ’、ＮＲ’ＣＯ、ＮＲ’ＣＯＯ、ＯＣＯＮＲ’、ＮＲ’、ＮＲ’ＣＳ、ＣＳＮＲ’、ＳＯ２ＮＲ’、ＮＲ’ＳＯ２、ＮＲ’ＣＳＯ、ＯＣＳＮＲ’、ＮＲ’ＣＳＮＲ’、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）ＮＲ’、ＮＲ’Ｐ（Ｏ）‐（ＯＨ）を表し、Ｒ’はＨ、（Ｃ１‐Ｃ８）アルキルまたはＲ３であり、
Ｒ３はアルキル、フェニル、１つまたは複数のフェニルで置換または遮断したアルキル、アルキレンオキシ基；任意で上記基の１つで置換または遮断されてもよいアルキルで未置換または置換されたアミノまたはアミド；ＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、（Ｃ１‐Ｃ８）アルキル、（Ｃ１‐Ｃ８）アルキルオキシ、ＮＯ２、ＮＲＸＲＹ、ＮＲXＣＯＲＹ、ＣＯＮＲＸＲＹまたはＣＯＯＲＸ、Ｈまたは（Ｃ１‐Ｃ８）アルキルであるＲＸおよびＲＹ、およびヒドロキシル化されてよい直鎖、分枝、または環状のＣ１‐Ｃ１４アルキル、アルキレンおよびアルコキシ基で置換されてよい、フェニル基、フェニレン基、および複素環基を表し、
Ｒａ〜Ｒｉは独立してＨ基、アルキル基、ヒドロキシアルキル基、アルキルフェニル基またはシクロアルキル基を表し、
Ｕは基‐ＣＸＲ４‐リンカー１、ＣＨＲ４ＣＯＮ‐リンカー１、ＣＨＲ４‐ＣＨＲ５ＯＨ‐リンカー１であり、
Ｒ４およびＲ５は独立してＨ、アルキルまたはヒドロキシアルキルを表し、
Ｘは上記意味を有し、
リンカー１はｑ＝０のときにはキレートＩａ、ｂ、ｃとリンカーＬとの間で結合を提供し、ｑ＝１のときにはキレートＩａ、ｂ、ｃとＤとの間で結合を提供するリンカーであり、
Ｉｄ、Ｉｅ、Ｉｆは
2007527857.tif 000175
を意味しており、
Ｘ、Ｒ１、Ｒａ〜Ｒｉは上記と同じ意味を有し、
Ｕ’はリンカー１であり、ｑ＝０のときには、キレートｌｄ、ｅ、ｆとリンカーＬとの間で結合を提供し、ｑ＝１のときにはｌｄ、ｅ、ｆとＤとの間で結合を提供し、
Ｉｇは
2007527857.tif 000176
を表し、
Ｕ、Ｘ、Ｒ１は上記と同じ意味を有し、リンカー１はｑ＝０のときはキレートｌｇとリンカーＬとの間で結合を提供し、ｑ＝１のときにはｌｇとＤとの間に結合を提供し、
ｂ）
ｑ＝０またはｑ＝１であり、
ｑ＝０のときｒ＝１、またはｑ＝１のときｒは２〜５であり、
ｃ）ＤはリンカーＬを少なくとも２個のキレートＩa、b、c、d、e、f、ｇに結合することのできる多官能分子であり、Ｄはリンカー２を介してＬと、リンカー１を介して少なくとも２個の金属キレートと結合することができ、
ｄ）ｘ、ｙおよびｚが１〜８であり、ｙ＝ｚの場合、ｘ＝１〜３、ｙ＝１〜６、ｚ＝１〜３であることが好ましい。
【請求項２】
Ｒ１が（ＣＨ２）ｘＣＯＮＨＲ（ｘ＝１、２または３）であり、かつＲが以下から選択される２００を超える分子量の親水基であることを特徴とする、請求項１に記載の化合物：
１）基
2007527857.tif 000177
Ｚは結合、ＣＨ２、ＣＨ２ＣＯＮＨまたは（ＣＨ２）２ＮＨＣＯであり、
Ｚ’基は結合、Ｏ、Ｓ、ＮＱ、ＣＨ２、ＣＯ、ＣＯＮＱ、ＮＱＣＯ、ＮＱ‐ＣＯＮＱまたはＣＯＮＱＣＨ２ＣＯＮＱであり、
Ｚ’’基は結合であり、ＣＯＮＱ、ＮＱＣＯまたはＣＯＮＱＣＨ２ＣＯＮＱであり、
ｐおよびｑは整数であり、その合計は０〜３である、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５は
互いに独立して、同一または異なってよいＨ、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｉ、Ｑ１およびＱ２を有するＣＯＮＱ１Ｑ２またはＮＱ１ＣＯＱ２、モノヒドロキシル化またはポリヒドロキシル化されたか、あるいは任意で１つまたは複数の酸素原子で遮断されてもよいＨまたは（Ｃ１‐Ｃ８）アルキル基を表し、Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つおよび僅か２個はＣＯＮＱ１Ｑ２またはＮＱ１ＣＯＱ２であり
または、Ｒ２およびＲ４は
2007527857.tif 000178
を表し、かつ同一または異なってもよいＲ１、Ｒ’１、Ｒ３、Ｒ’３、Ｒ５およびＲ’５はＨ、Ｂｒ、ＣｌまたはＩ、Ｑ１およびＱ２を表し、上記と同じ意味を有し、Ｚ’’’はＣＯＮＱ、ＣＯＮＱＣＨ２ＣＯＮＱ、ＣＯＮＱＣＨ２、ＮＱＣＯＮＱおよびＣＯＮＱ（ＣＨ２）２ＮＱＣＯから選択された基であり、Ｑは任意でヒドロキシル化されてもよいＨまたは（Ｃ１‐Ｃ４）アルキル基であり、アルキル基は直鎖または分枝でもよい、
２）以下の「フラッシュ」分枝
2007527857.tif 000179
（Ｚ’’’’はＮＱ（ＣＨ２）j（ＣＨ２ＯＣＨ２）i（ＣＨ２）jＮＨ２（ｉ＝２〜６およびｊ＝１〜６））、
好適には、
2007527857.tif 000180
（ｔ＝１、２、３または４およびｎ＝２〜６）
である。
【請求項３】
ｑ＝１であることを特徴とする、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
ＨＲ  Ｃｈが以下の基を表すことを特徴とする、請求項１または２に記載の化合物：
2007527857.tif 000181
式中、
‐Ｓ１‐Ｔ‐Ｓ２‐が以下である：
１）
2007527857.tif 000182
（Ｓ１＝Ｓ２＝（ＣＨ２）２）
Ｂ１、Ｂ２およびＢ３の３つはすべて（ＣＨ２）ｘＣＯＮＨＲを表す（ｘ＝１、２または３）；
２）または、
2007527857.tif 000183
（ｋ＝０およびＳ１＝Ｓ２＝ＣＨ２）
Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３の１つはＧ−ＮＨを表し、その他は（ＣＨ２）xＣＯＮＨＲを表す；
３）あるいは、
2007527857.tif 000184
（ｋ＝１）
Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３の３つはすべて（ＣＨ２）xＣＯＮＨＲ（ｘ＝１、２または３）を表し、
ＧＮＨが
基‐（ＣＨ２）n‐ＮＨ‐（ｎ＝１〜４）、
または
2007527857.tif 000185
（ｐ＝０〜３）
から選択される。
【請求項５】
ＨＲ  Ｃｈが以下から選択される基を表し、
１）基
2007527857.tif 000186
式中、‐Ｓ１‐Ｔ‐Ｓ２‐は
2007527857.tif 000187
であり、ここでＳ１＝Ｓ２＝（ＣＨ２）２であり、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３の３つはすべて（ＣＨ２）xＣＯＮＨＲ（ｘ＝１、２または３）を表す；
２）基
2007527857.tif 000188
ＩＩａ２（Ｎ‐官能化ＰＣＴＡと呼ばれる化合物）
またはＩＩｂ２（Ｎ‐官能化ＰＣＴＡと呼ばれる化合物であり、ＩＩｂ２の位置異性体）
2007527857.tif 000189
式中、‐Ｓ１‐Ｔ‐Ｓ２‐は
2007527857.tif 000190
（ｋ＝０およびＳ１＝Ｓ２＝ＣＨ２）
であり、
Ｂ３はＧ‐ＮＨを表し、Ｂ１およびＢ２はＩＩａ２に対して（ＣＨ２）xＣＯＮＨＲを表し、
Ｂ２はＧ‐ＮＨを表し、Ｂ１およびＢ３はＩＩｂ２に対して（ＣＨ２）xＣＯＮＨＲを表す；
３）基
2007527857.tif 000191
ＩＩ２（Ｃ‐官能化ＰＣＴＡと呼ばれる化合物）
式中、‐Ｓ１‐Ｔ‐Ｓ２‐は
2007527857.tif 000192
（ｋ＝１およびＳ１＝Ｓ２＝ＣＨ２）
であり、
ＩＩｃ２に対してＢ１、Ｂ２、Ｂ３の３つはすべて（ＣＨ２）xＣＯＮＨＲ（ｘ＝１、２または３）を表し、
ＩＩ２、ＩＩａ２、ＩＩｂ２およびＩＩｃ２の場合、
ＧＮＨが‐（ＣＨ２）ｎ‐ＮＨ‐基（ｎ＝１〜４）、または
2007527857.tif 000193
（ｐ＝０〜３）
から選択される
ことを特徴とする、請求項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｄがカルボキシレート基および／またはアミノ基で多官能化された芳香性骨格鎖であり、好適にはＤが式
2007527857.tif 000194
の１、３、５‐トリアジン型であり、リンカー２は以下のａ）およびｂ）、好適にはａ）から選択され、
ａ）（ＣＨ２）２‐φ‐ＮＨ、（ＣＨ２）３‐ＮＨ、ＮＨ‐（ＣＨ２）２‐ＮＨ、ＮＨ‐（ＣＨ２）３‐ＮＨ、
ｂ）同一または異なってよく、Ｐ１およびＰ２はＯＨ、ＳＨ、ＮＨ２、無、ＣＯ２Ｈ、ＮＣＳ、ＮＣＯ、ＳＯ３Ｈ（Ｉ＝アルキレン、アルコキシアルキレン、ポリアルコキシアルキレン、フェニレンで遮断したアルキレン、アルキリデン、アルキリデン）から選択される、Ｐ１‐Ｉ‐Ｐ２、
かつＤがさらに好適には、
2007527857.tif 000195
であることを特徴とする、請求項１から５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｌがポリオキシアルキレン基、スクアリン酸、スクアレート‐ＰＥＧラジカル、アルキレン基、アルコキシアルキレン基、ポリアルコキシアルキレン基、フェニレン基で遮断したアルキレン基、アルキリデン、アルキリデン）から選択されるリンカーであることを特徴とする、請求項１から６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
（ＣＨ２）ｘＣＯＮＨＲのｘが２である、請求項３から７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
‐Ｓ１‐Ｔ‐Ｓ２‐が
2007527857.tif 000196
（Ｓ１＝Ｓ２＝ＣＨ２）
を表す、請求項４から８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
ｋが１、およびＧが‐（ＣＨ２）３‐である、式ＩＩ１の請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
ｋが０、およびＢ２またはＢ３が‐（‐ＣＨ２）３ＮＨ‐または
2007527857.tif 000197
を表す、式ＩＩ１の請求項９に記載の化合物。
【請求項１２】
‐Ｓ１‐Ｔ‐Ｓ２‐が
2007527857.tif 000198
（Ｓ１＝Ｓ２＝（ＣＨ２）２）
を表す、請求項４から９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｂ１、Ｂ２およびＢ３が、‐Ｇ‐ＮＨを表さない場合、‐（ＣＨ２）２ＣＯＮＨＲを表し、Ｒではｐ＝ｑ＝０、およびＺが‐ＣＨ２ＣＯＮＨである、請求項１から１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒが
2007527857.tif 000199
を表し、Ｘが同一でありかつＢｒまたはＩを表し、同一または異なってもよいＱ１およびＱ２が、各ＣＯＮＱ１Ｑ２が合計で４〜１０個のヒドロキシル基を含むようにモノヒドロキシル化またはポリヒドロキシル化された（Ｃ１‐Ｃ８）アルキル基である、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒが
2007527857.tif 000200
を表し、同一であるＸがＢｒまたはＩであり、同一または異なってもよいＱ１およびＱ２が、各ＣＯＮＱ１Ｑ２が合計で４〜１０個のヒドロキシル基を含むようにモノヒドロキシル化またはポリヒドロキシル化された（Ｃ１‐Ｃ８）アルキル基である、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒが
2007527857.tif 000201
を表し、ＺがＣＨ２またはＣＨ２ＣＯＮＨであり、Ｚ’がＣＯＮＨまたはＣＯＮＨＣＨ２ＣＯＮＨであり、同一であるＲ１、Ｒ３、Ｒ５がＢｒまたはＩであり、かつ同一または異なってもよいＱ１およびＱ２が、各ＣＯＮＱ１Ｑ２が合計で４〜１０個のヒドロキシル基を含むようにモノヒドロキシル化またはポリヒドロキシル化された（Ｃ１‐Ｃ８）アルキル基である、請求項１から１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒが
2007527857.tif 000202
を表し、ＺがＣＨ２ＣＯＮＨであり、Ｚ’がＣＯＮＨであり、Ｚ’’がＣＯＮＨＣＨ２ＣＯＮＨであり、同一であるＲ１、Ｒ３、Ｒ５がＢｒまたはＩであり、かつ同一または異なってもよいＱ１およびＱ２が、各ＣＯＮＱ１Ｑ２が合計で４〜１０個のヒドロキシル基を含むようにモノヒドロキシル化またはポリヒドロキシル化された（Ｃ１‐Ｃ８）アルキル基である、請求項１から１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒが
2007527857.tif 000203
（Ｚ’’’がＮＱ（ＣＨ２）ｊ（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｉ（ＣＨ２）ｊＮＨ２（ｉ＝２〜６、ｊ＝１〜６））
を表し、
好適には、Ｒが
2007527857.tif 000204
（ｔ＝１、２、３または４、およびｎ＝２〜６）
を表す、請求項１から１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１９】
バイオベクターが、特に、心筋細胞、内皮細胞、上皮細胞、腫瘍細胞、または免疫系細胞の受容体から選択される細胞受容体または組織成分を標的化することのできる薬剤であることを特徴とする、請求項１から１８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２０】
バイオベクターが葉酸受容体を標的化することができる薬剤であり、（Ｅ）が
2007527857.tif 000205
であり、上式中、
ａ）Ｇ１はハロ、Ｒｆ２、ＯＲｆ２、ＳＲｆ３、ＮＲｆ４Ｒｆ５から成る基から独立して選択され；
ｂ）Ｇ２はハロ、Ｒｆ２、ＯＲｆ２、ＳＲｆ３、およびＮＲｆ４Ｒｆ５から成る群から独立して選択される；
ｃ）Ｇ３およびＧ４は−（Ｒｆ６’）Ｃ＝、−Ｎ＝、−（Ｒｆ６’）Ｃ（Ｒｆ７’）−、‐Ｎ（Ｒｆ４’）−から成る群から独立して選択される二価基を表し；
ｄ）Ｇ５は存在しないか、または−（Ｒｆ６’）Ｃ＝、−Ｎ＝、−（Ｒｆ６’）Ｃ（Ｒｆ７’）−、−Ｎ（Ｒｆ４’）−から選択され；
ｅ）環Ｊは、おそらくヘテロ環式芳香族５または６員環であり、環の原子はＣ、Ｎ、Ｏ、Ｓでもよく；
ｆ）Ｇ６は、ＮまたはＣであり；
ｇ）Ｋ１およびＫ２は、−Ｃ（Ｚｆ）−、−Ｃ（Ｚｆ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｚｆ）−、−Ｎ（Ｒｆ４’’）−、−Ｃ（Ｚｆ）−Ｎ（Ｒｆ４’’）、−Ｎ（Ｒｆ４’’）−Ｃ（Ｚｆ）、−Ｏ−Ｃ（Ｚ）−Ｎ（Ｒｆ４’’）−、−Ｎ（Ｒｆ４’’）−Ｃ（Ｚｆ）−Ｏ−、Ｎ（Ｒｆ４’’）−Ｃ（Ｚｆ）−Ｎ（Ｒｆ５’’）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒｆ４’’）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｒｆ６’’）（Ｒｆ７’’）−、−Ｎ（Ｃ≡ＣＨ）−、−Ｎ（ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ）−、Ｃ１−Ｃ１２アルキルおよびＣ１−Ｃ１２アルコキシよりなる群から独立して選択され；式中、ＺｆはＯまたはＳであり；好ましくは、Ｋ１は−Ｎ（Ｒｆ４’’）−または−Ｃ（Ｒｆ６’’）（Ｒｆ７’’）−であって、Ｒｆ４’’、Ｒｆ６’’、Ｒｆ７’’はＨであり；Ｋ２は、アミノ酸に共有結合していることもあり；
ｈ）Ｒｆ１は、Ｈ、ハロ、Ｃ１−Ｃ１２アルキルおよびＣ１−Ｃ１２アルコキシよりなる群から選択され；Ｒｆ２、Ｒｆ３、Ｒｆ４、Ｒｆ４’、Ｒｆ４’’、Ｒｆ５、Ｒｆ５’’’、Ｒｆ６’’およびＲｆ７’’は、Ｈ、ハロ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ、Ｃ，−Ｃ、２アルカノイル、Ｃ，−Ｃ、２アルケニル、Ｃ１−Ｃ１２アルキニル、（Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ）カルボニルおよび（Ｃ，−Ｃ、２アルキルアミノ）カルボニルよりなる群から独立して選択され；
ｉ）Ｒｆ６およびＲｆ７は、Ｈ、ハロ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ１−Ｃ１２アルコキシよりなる群から独立して選択されるか；またはＲｆ６およびＲｆ７は共にＯ＝を形成し；
ｊ）Ｒｆ６’およびＲｆ７’は、Ｈ、ハロ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ１−Ｃ１２アルコキシよりなる群から独立して選択されるか、またはＲｆ６’およびＲｆ７’は共にＯ＝を形成する；
ｋ）Ｌｆは、適切である場合、アミド結合を介するαアミノ基を介してＫ２またはＫ１に結合した天然のアミノ酸または天然のポリ（アミノ酸）を含む２価の連結であり；
ｌ）ｎ、ｐ、ｒおよびｓは、独立して０または１である
ことを特徴とする、請求項１から１９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｇ１がＮＨ２またはＯＨであることを特徴とする、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｇ３が、Ｇ３を含む環が芳香族のときには‐Ｎ＝または‐ＣＨ‐であり、Ｇ３を含む環が非芳香族のときには‐ＮＨ‐または‐ＣＨ２‐であり；好適には、Ｇ３が‐ＣＨ‐、Ｇ１がＯＨ、Ｇ６がＮＨ、およびＫ１が‐Ｎ（Ｒｆ４’’）−であることを特徴とする、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｇ４が、Ｇ３を含む環が芳香族のときには‐ＣＨ‐または‐Ｃ（ＣＨ３）‐であり、Ｇ３を含む環が非芳香族のときには‐ＣＨ２‐または−ＣＨ（ＣＨ３）−であることを特徴とする、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２４】
Ｇ５が存在せず、好適には、Ｇ１がＯＨ、Ｇ２がＮＨ２、Ｇ６がＮであることを特徴とする、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｇ６がＮまたはＣであることを特徴とする、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２６】
（Ｅ）が、
2007527857.tif 000206
または
2007527857.tif 000207
であることを特徴とする、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２７】
バイオベクターが血管新生阻害剤であることを特徴とする、１から１９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２８】
バイオベクターがＭＭＰの活性を阻害することのできる薬剤であることを特徴とする、請求項１から１９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２９】
バイオベクターがイロマスタット（ｉｌｏｍａｓｔａｔ）由来のＭＭＰ阻害剤であることを特徴とする、請求項２８に記載の化合物。
【請求項３０】
バイオベクターがインテグリンを標的化することのできる薬剤であることを特徴とする、請求項１から１９の１ずれか１項に記載の化合物。
【請求項３１】
バイオベクターが、インテグリンαｖβ３、特に、ＲＧＤペプチド、ＲＧＤペプチドのペプチド擬態を標的化することのできる薬剤、またはＲＧＤペプチドの作用を模倣することのできる非ペプチド薬剤であることを特徴とする、請求項３０に記載の化合物。
【請求項３２】
バイオベクターが以下の構造：
2007527857.tif 000208
を有するＲＧＤｆＶペプチドであることを特徴とする、請求項３１に記載の化合物。
【請求項３３】
バイオベクターがインテグリンＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａを標的化することのできる薬剤であることを特徴とする、請求項３０に記載の化合物。
【請求項３４】
バイオベクターがビトロネクチンを標的化することのできる薬剤であることを特徴とする、請求項３０に記載の化合物。
【請求項３５】
バイオベクターが内皮細胞の血管由来の受容体、特に、ＶＥＧＦＲ受容体、好適にはペプチドＡＴＷＬＰＰＲまたはＨＴＭＹＹＨＨＹＱＨＨＬを標的化することのできる薬剤であることを特徴とする、請求項１から１９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３６】
バイオベクターがマクロファージに存在する受容体、特にＳＲＡ受容体を標的化することのできる薬剤であることを特徴とする、請求項１から１９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３７】
バイオベクターがフォスファチジルセリンの誘導体であることを特徴とする、請求項３６に記載の化合物。
【請求項３８】
バイオベクターがビスホスホネート誘導体であることを特徴とする、請求項１から１９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３９】
バイオベクターがタフトシンを標的化するペプチドであることを特徴とする、請求項１から１９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項４０】
バイオベクターがアネキシン５であることを特徴とする、請求項１から１９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項４１】
請求項１に記載の化合物を調製するのに用いられる、式
Ｌ‐［（Ｄ）q‐（Ｉa、b、c、d、e、f、ｇ）r］
の中間化合物であって、
Ｌが好適にはスクアレート型、ｑ＝１であり、［（Ｄ）q‐（Ｉa、b、c、d、e、f、ｇ）r］が、好適には以下から選択される中間化合物：
2007527857.tif 000209
（‐Ｇ‐ＮＨは‐（ＣＨ２）３‐ＮＨ‐であるか、または
2007527857.tif 000210
である）
２）
2007527857.tif 000211
３）
2007527857.tif 000212
（‐Ｇ‐ＮＨは‐（ＣＨ２）３‐ＮＨ‐であるか、または
2007527857.tif 000213
である）
４）
2007527857.tif 000214
（Ｇ‐ＮＨは‐（‐ＣＨ２）３‐ＮＨ-である）。
【請求項４２】
Ｍが原子番号２１〜２９、４２〜４４、または５８〜７０を有する常磁性金属イオンか、典型的には９９Ｔｃ、１１７Ｓｎ、１１１Ｉｎ、９７Ｒｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、８９Ｚｒ、１７７Ｌｕ、４７Ｓｃ、１０５Ｒｈ；１８８Ｒｅ、６０Ｃｕ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、１５９Ｇｄ、１４９Ｐｒおよび１６６Ｈｏから選択された放射性核種か、あるいは原子番号２１〜３１、３９〜４９、５０、５６〜８０、８２、８３または９０を有する重金属イオンの場合、ある要素Ｍと結合した形態では、（Ｅ）はＢｘ‐Ｌ‐（ＨＲ  Ｃｈ）ｙ‐Ｍと表される、請求項１から４０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項４３】
任意で薬学的に許容可能な担体と結合されてもよい、請求項１から４０のいずれか１項に記載の化合物を含むことを特徴とする、磁気共鳴画像用造影剤。
【請求項４４】
注入可能な滅菌溶液の形態で提供される、請求項４３に記載の造影剤。
【請求項４５】
その用途が心血管、癌関連、または炎症性病理の診断である、請求項４３および４４に記載の造影剤。
【請求項４６】
任意で薬学的に許容可能な担体と結合されてもよい、請求項１から３８のいずれか１項に記載の化合物を含むことを特徴とする、核医学用薬剤。
【請求項４７】
２５〜２００ｍＭ−１Ｇｄ−１の緩和度を有する、請求項１から２２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項４８】
請求項１から１８のいずれか一項に記載された少なくとも１つのバイオベクターおよび少なくとも１つの高緩和度キレートの結合を含むことを特徴とする、請求項１から４０のいずれか１項に記載の化合物の調製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は多数の病理、特に、心血管病理、腫瘍に関連する病理、および炎症性病理の診断に有用な新規化合物および前記化合物を含有する医薬組成物に関する。これらの化合物は診断的観点で有効性のある検出成分に結合される、病理学的領域を標的化する成分を含む。該検出成分は典型的には、ＭＲＩ造影剤、Ｘ線造影剤、または放射性同位元素を含有するか、または超音波または光学的画像化によって検出できる実体である。
【背景技術】
【０００２】
患者に造影剤を投与することは、得られる画像の分解能および診断の精度を改善するのに役立つ。したがって、当業者はＭＲＩ（磁気共鳴画像）に関し、ガドリニウムキレートに基づいた多数の「非特異的」造影剤を認識しており、これらは直鎖状または大環状であり、特に、欧州特許第７１５６４号、欧州特許第４４８１９１号、国際公開特許第０２／４８１１９号、米国特許第６３９９０４３号、国際公開特許第０１／５１０９５号、欧州特許第２０３９６２号、欧州特許第２９２６８９号、欧州特許第４２５５７１号、欧州特許第２３０８９３号、欧州特許第４０５７０４号、欧州特許第２９００４７号、米国特許第６１２３９２０号、欧州特許第２９２６８９号、欧州特許第２３０８９３号、米国特許第２００２／００９０３４２号、米国特許第６４０３０５５号、国際公開特許第０２／４００６０号、米国特許第６４５８３３７号、米国特許第６２６４９１４号、米国特許第６２２１３３４号、国際公開特許第９５／３１４４４号、米国特許第５５７３７５２号、米国特許第５３５８７０４号、および米国特許第２００２／０１２７１８１号に記載されており、例えば化合物ＤＴＰＡ、ＤＴＰＡ  ＢＭＡ、ＤＴＰＡ  ＢＯＰＴＡ、ＤＯ３Ａ、ＴＥＴＡ、ＴＲＩＴＡ、ＨＥＴＡ、ＤＯＴＡ−ＮＨＳ、ＴＥＴＡ−ＮＨＳ、ＤＯＴＡ（Ｇｌｙ）３−Ｌ−（ｐ−イソチオシアノート（ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎｏｔｏ））−Ｐｈｅ−アミド、ＤＯＴＡ、Ｍ４ＤＯＴＡ、Ｍ４ＤＯ３Ａ、Ｍ４ＤＯＴＭＡ、ＭＰＤＯ３Ａ、ＨＢＥＤ、ＥＨＰＧ、およびＢＦＣ（米国特許第６５１７８１４）、ｐｏｌｙｐｏｄａｌ型の化合物である。そのようなキレートは放射性薬剤の形態で治療薬としても使用される。
【０００３】
しかしながら、「特異的」画像化および治療を開発する必要性があることが明らかとなっており、診断用造影剤または治療薬は所与の病理により正確に関連付けられる生物学的マーカーを標的化することが意図されている。いくつかの治療分野は特に、心血管疾患、癌関連疾患、および炎症性疾患に及ぶ。したがって、本明細書では、「特異的薬剤（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｐｒｏｄｕｃｔ）」という用語は、生物学的マーカーを標的化しない「非特異的薬剤」とは対照的に、１つまたは複数の病理に関与する生物学的マーカーを特異的に標的化することのできる薬剤を意味することを意図しており、非特異的薬剤はある場合には、病理学的領域において信号を提供できるが、非病理学的領域においてもこの信号を提供し、故に（例えば、腫瘍の場合は最適な切除のために）病理学的領域の範囲を正確に定めることを不可能にする。
【０００４】
心血管分野および高リスクのアテローム性プラークに関し、公衆衛生の観点では、血管壁病理およびその予後は人口における発症率が高くなっている。まずリスクのある領域の早期診断および検査を可能にし、次に治療および治療モニタリングの有効性の評価を可能にすることが特に重要であると思われる。現在、心筋梗塞の１／３以上が無症候性患者に発生しており、アテローム患者において脳卒中および心筋発作のリスクを予測する能力が大いに期待されている。現在、狭窄を調査すること（解剖学的画像化）はこのリスクを予測するのには有用ではなく、診断および予後の関係はアテローマ性プラークの機能状態を評価することを伴うことが認められている。したがって、血管壁を特徴付け、その成分を識別し、かつ破断のリスクを評価するためのアテローマ性プラークを予測する評価方法を可能にする薬剤を利用できれば、リスクのある患者において予防の標的化が可能となる。
【０００５】
腫瘍学に関連し、癌率は高く、１９９８年には全世界で新たに１０００万人が新たな症例として診断されており、母集団の加齢という事実のためにその率は増大し続ける。世界レベルでは、２０２０年には８０億人のうちの新たに２０００万人の症例が加わる。癌は心血管疾患および感染性疾患後の３番目（先進国では２番目）の死亡原因である。今日、癌分野で利用可能な画像化試験は主として疑わしい腫瘤の検出を可能にするが、これらの腫瘤の癌性または非癌性の性質に関する情報は提供しない。
【０００６】
病理学的領域の「特異的」画像化は、ＭＲＩ、Ｘ線、ガンマ線シンチグラフィ、ＣＴスキャン、超音波、ＰＥＴまたは光学的画像化によって実行することができる。ＭＲＩの場合、造影は水からのプロトンの緩和度に作用する常磁性または超常磁性金属を含んだ造影剤を投与することによって得られる。シンチグラフィの場合、造影はγ線またはβ線を放出する放射性薬剤を特異的に局所化することによって得られる。
【０００７】
造影剤または放射性薬剤が生物学的マーカーに結合することによって、病理学的領域を特異的に標的化することが可能となる。これらの生体分子は上記病理に関与するマーカーを標的化できる造影剤または放射性薬剤のバイオベクターを構成するので、特異的画像化という表現されている。適したバイオベクターは、病理のタイプおよび状態に従って、抗体などの巨大分子またはオリゴヌクレオチド、ペプチド、糖または有機分子等の小分子であり得る。
【０００８】
したがって、バイオベクターと造影剤（ＭＲＩ造影剤、シンチグラフィ造影剤、Ｘ線画像化造影剤、超音波造影剤、光学的画像化造影剤）または放射線治療に有効である放射性同位元素（毒性のある放射塩を放出する放射性同位元素）との関連が知られている。
【０００９】
ＭＲＩ造影剤および放射性薬剤に関し、該薬剤の毒性を回避するためにキレート−金属錯体の十分な安定性を達成することが重要である。
【００１０】
したがって、先行技術は上記キレートと多数の病理、特に、心血管疾患、癌関連疾患、炎症性疾患、または変性疾患を標的化するバイオベクターとの関連を言及している。
【００１１】
例えば、国際公開特許第９９／５９６４０号および国際公開特許第０２／０８５９０８号は葉酸受容体を標的化する誘導体とＤＯＴＡまたはＤＴＰＡ型のキレートとの関連を言及している。国際公開特許第０２／０５５１１１号はαｖβ３およびαｖβ５を含むビトロネクチンを標的化するバイオベクターとＤＴＰＡ型のキレートとの関連を記載している。国際公開特許第 ９８／４７５４１号はＭＭＰを標的化するＲＧＤペプチド型バイオベクターとＤＴＰＡ型のキレートとの関連を記載している。ホスホナートまたはホスフィナートバイオベクターとＧｄＤＴＰＡまたは放射性核種（国際公開特許第０２／０６２３９８号）との関連、およびＧｄ２（ＤＴＰＡ）４−ＴＰＰなどのポルフィリン骨格鎖を有する化合物も知られている。
【００１２】
先行技術は多数のバイオベクターと１０ｍＭｏｌ−１Ｇｄ−１ｓ−１未満の比較的低い緩和度を有するキレートとの関連を非常に優勢的に記載しており、これは得られる画像化の結果がこのタイプのキレートに満足のいくものであることを示している。
【００１３】
これは、例えば、国際公開特許第０１／９７８５０号、第６０９３６１５７号、米国特許第６３７２１９４、国際公開特許第２００１／９１８８号、国際公開特許第０１／７７１４５号、国際公開特許第０２２６７７６号、国際公開特許第９９／４０９４７号、国際公開特許第０２０６２８１０号、国際公開特許第０２／４００６０号、国際公開特許第９２／０９７０１号、米国特許第６５３７５２０号号、米国特許第６５２４５５４号、米国特許第６４８９３３３号、米国特許第６  ５１１６４８号、米国特許第Ａ２００２／０１０６３２５号、国際公開特許第０１／９７８６１、国際公開特許第  ０１／９８２９４、国際公開特許第０１／６０４１６号、国際公開特許第０１／６０２８０号、国際公開特許第０１／９７８６１号、国際公開特許第０２／０８１４９７、国際公開特許第０１／１０４５０号、米国特許第６２６１５３５号、米国特許第５７０７６０５号、国際公開特許第０２／２８４４１号、国際公開特許第０２／０５６６７０号、米国特許第６４１０６９５号、米国特許第６３９１２８０号、米国特許第６４９１８９３号、米国特許第Ａ２００２／０１２８５５３号、国際公開特許第０２／０５４０８８号、国際公開特許第０２／３２２９２号、および国際公開特許第０２／３８５４６号の例である。
【００１４】
信号成分がある程度補助的なものであり、バイオベクター成分が診断に十分に有効ではなかったために、当業者は信号成分（キレート）に変性を見付けようとするには至らなかった。
【００１５】
縦緩和度ｒ１の常磁性造影剤はその磁気的有効性の尺度を提供し、記録された信号に対する該造影剤の影響を評価することを可能にすることが想起される。ＭＲＩ医用画像では、造影剤がプロトン緩和時間を修正し、得られる緩和度が増大することによって、より高い信号を得ることが可能となる。Ｍａｇｎｅｖｉｓｔ（登録商標）、Ｄｏｔａｒｅｍ（登録商標）またはＯｍｎｉｓｃａｎ（登録商標）等のヒト病院で使用されるガドリニウムキレートは分子量が低く、モル緩和度はｒ１／Ｇｄ当たり５ｍＭ―１ｓ―１未満である。
【００１６】
実際、いくつかの問題は先行技術に記載されたこのタイプの特異的化合物によっては解決されない。信号の欠如および／または特異性の欠如および／または毒性の問題があるために、生理学的条件（インビボ）下または生理学的条件に類似する条件下（生体外）で所望の結果を得るには、これらの化合物は十分ではないか、または十分満足するものではない。そのようなキレートはＴ１画像と呼ばれる画像化において十分な緩和度を得ることができない。現在、このＴ１画像は最も一般的であり、医師によって最も調査されている画像であることは明らかである；Ｔ１画像は正常領域と病理学的領域との間の陽性造影の差を用いた読み取りに相当する：可視信号は病理学的領域では白色であるが、正常領域はグレーで現れる。
【００１７】
より正確に言えば：
（１）診断薬の特異性は、病理学的領域の、例えば、腫瘍の正確な限界決定に関する結論を導くのに十分に有意な、正常領域と病理学的領域との差を引き出すことは不可能である。バイオベクターを介したその標的に対する該薬剤の親和性は、得られる診断的観点において関連する画像には不十分である。
（２）該薬剤の感度は不十分である：該製剤によって提供される信号は良好な画像化には不十分である。実施例に詳細に記載するように、本発明者らは、例えば、葉酸およびＤＯＴＡ型のキレートを結び付ける薬剤を対照として試験した。インビトロにけるＫＢ細胞へのある結果は癌細胞の標的化を示しているが、国際公開第９９／５９６４０号に示されるように、インビボで得られるＭＲＩ画像は信号が不十分であるために医師が利用できない。有効であるためには、このような薬剤は投与量を非常に高くすることが必要となり、毒性、受容体の飽和、および薬理学的効果（および故に副作用）の著しいリスクになる。
（３）該薬剤は先験的に特異性のある信号を提供するが、この信号は非常に急速に削除されるので診断が難しくなりるか、非常に遅いために毒性をもたらすことになる。
（４）該特異的造影剤は以降の治療のために十分に早期の段階で、病理学的領域または病理学的になるリスクのある領域（高リスクのアテローマ性プラーク、成長腫瘍、等）を検出することは不可能である。これは、特に、インビボの画像信号が５ｍｍ未満の小さな領域を検出するには不十分であるという事実によるものである。
（５）医師が取り扱う画像パラメータはインビボ診断中は複雑になる。例えば、情報の分析は投与される造影剤の小さな変化に対して、または薬剤の投与に対して信号が読み取られる瞬間に応じて著しく変動する恐れがあり、これは診断および／または治療の組織化および信頼性の問題を呈することになる。
（６）該造影剤は病理学的領域の標的化および選択的検出を可能にしない。これは、例えば、米国特許第２００２／０１２７１８１号に想起されるように、血栓症またはアテローム性動脈硬化症の原因である脆弱な高リスクのプラークの場合である。したがって、該病理の予後をモニタリングするために、冠動脈造影法、血管内視鏡、血管内ＭＲＩを含む多数の侵襲的または非侵襲的技術が開発されてきた。例えば、血管造影法は狭窄の程度を過小評価し得る；侵襲的な血管内視鏡または現行の造影剤を用いたＭＲＩはプラークの視覚化を可能にするが、安定したプラークと高リスクのプラークとを識別することは不可能である。
【００１８】
数は非常に少ないが、米国特許第６２２１３３４号などのいくつかの文献は、比較的高い緩和度およびバイオベクターを有する化合物を記載している。しかし、実際に例証されている化合物は、特に製造に関して複雑な問題を呈している。それらはデンドリマー型の化合物であり、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｒａｄｉｏｌ、３５号、５０〜５７頁、２０００に記載されており、その緩和度はｒ１＝９．３ｍＭ−１ｓ−１Ｇｄ−１である。そのようなバイオベクターが変えられたデンドリマーの化学合成も困難である。
【００１９】
これらすべての問題は、完全に有効性のあるものにするために造影剤の構造をさらに改良することが必要であり、当業者には全く明らかになっていない。バイオベクターおよび常磁性キレートを結び付ける原理が数年前に提唱され、多くの試験を行ったが、臨床試験において特異的ＭＲＩ剤が存在しないことが、さらにこのことを裏付けている。
【発明の開示】
【００２０】
本発明は少なくとも部分的に先行技術の不利を克服することに向けられている。発明者らはまず、デンドリマーとは非常に異なる構造を有する適した高緩和度（ＨＲ）誘導体を用いて信号成分（ｃｏｎｔｒａｓｔｏｐｈｏｒｅ）を最適化して、製造の複雑さおよび不純物の問題、特異性およびバイオベクターの高投与量に起因する問題、および信号の不十分さの問題を抑え、次に、標的リガンドに対する親和性が病理学的領域を区別することのできる選択的体内分布を得るには不十分なバイオベクターを用いるバイオベクター成分を最適化することによって新規化合物を得ることに成功した。
【００２１】
特に、得られた薬剤は一般に使用される磁界においては非常に良好なモル緩和度ｒ１を有するが、特異的薬剤については今のところ得られていない。先行技術の大半の誘導体の約５〜９ｍＭ−１ｓ−１値に比して、モル有効度（ｒ１／Ｇｄ）は以下に記載の単金属誘導体（特に、ＨＲ  ＤＯＴＡおよびＨＲ  ＰＣＴＡ）については少なくとも２５〜４０ｍＭ−１ｓ−１であり、以下に記載の多金属誘導体については１２０〜１６０ｍＭ−１ｓ−１または約２００〜３００ｍＭ−１ｓ−１もの値に達し得る。高緩和度のおかげで相当な信号を得ることにより、よりよい空間分解能を得ることが可能になることが想起される。
【００２２】
すなわち、同じ信号を得るのに必要なバイオベクターの投与量は相応して低減されるので、使用されるバイオベクターの量を著しく抑えることが可能となり、故に、あるバイオベクターによって引き起こされる毒性および副作用、製造コストも抑えることが可能となるとともに、非常に複雑なバイオベクターを使用しなくて済む。患者に注入される同量のＧｄに関し、本発明者らによって得られた化合物が必要とするバイオベクター投与量は約１０〜１００倍低い。
【００２３】
約３０個のＧｄ原子がグラフとされるデンドリマーを有する特異的薬剤（ｒ１＝９ｍＭ−１ｓ−１Ｇｄ−１）に比して、同じ緩和度（故に同じ信号）を得るために、本発明者らによって得られた化合物（ｒ１＝２５〜４０ｍＭ−１ｓ−１Ｇｄ−１）によって３〜４倍低いＧｄ投与量の使用が可能になり、これはｉｍａｇｉｎｇ  ｆｉｅｌｄにおいては非常に有利である。
【００２４】
本薬剤は非常に多様なバイオベクターを受け入れることのできる化学的「プラットフォーム」を用いて得られるために、これらの結果は一層有利である。
【００２５】
他の技術的利点を本明細書において以下で言及し、その利点はバイオベクターを幅広く選択できることおよび得られる薬剤の毒性が低いことの結果である。
【００２６】
これに関し、本出願人は（十分な信号を得るために）満足できる緩和度を得るために、欧州特許第Ｂ６６１２７９号、欧州特許第Ｂ９２２７００号、および欧州特許第Ｂ１１８３２５５号に一部が記載されたＨＲと呼ぶ高緩和度のキレートを用いた。これらのＨＲ化合物は、キレートであり、ＭＲＩの場合に常磁性ガドリウム錯体を形成することのできる、その存在によって特徴付けられる酢酸基を窒素原子の上に有し、カルボキシル基に対してα位の炭素原子を親水基の上に有する窒素性巨大環を含む。
【００２７】
少なくとも１つのリンカーＬを介した少なくとも１つのバイオベクターと少なくとも１つのＨＲキレート化合物との関係は、上記の診断および生体適合性に関連する技術的問題だけでなく、薬剤の化学構造に関連し、かつ開発されている種々のクラスのバイオベクターについて以降に記載する技術的問題を克服すること必要とした。
【００２８】
また、本発明者らは特異的医用造影剤には小分子の使用が好ましいということに基づく技術的偏向と逆行した。実際、本発明者らは使用されるＨＲキレートの立体障害はその標的に対する特異的薬剤の親和性を損なわないことに気づいた。約８〜２０ＫＤの分子量に関わらず、本剤はその特異的標的部位に効果的に到達する。
【００２９】
わかり易いように、本明細書を通してこれら化合物は、区別せずに（バイオベクター）ｘ‐Ｌｚ‐（ＨＲキレート）ｙまたはＨＲバイオベクターと呼ぶ。「ＨＲキレート」という用語はＨＲ  Ｃｈという略語に置き換えることができる。
【００３０】
したがって、第１の態様によれば、本発明は以下の一般式（Ｅ）の化合物に関する：
（１）
Ｂｘ‐Ｌｚ‐（Ｈ  Ｃｈ）ｙ（Ｅ）
上式で
−  Ｂはバイオベクター
−  Ｌはリンカー
−  ＨＲ  Ｃｈは式（Ｉ）：
［（Ｄ）ｑ‐（Ｉａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ）ｒ］
のキレートを表し、ここで
ａ）Ｉａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇからＩａ、Ｉｂ、Ｉｃ、Ｉｄ、Ｉｅ、Ｉｆ、Ｉｇから選択され、
Ｉａ〜Ｉｂ、Ｉｃは
2007527857.tif 000002
を意味し、
式中、
−  基Ｘは同一または異なってよく、ＣＯ２Ｒ’ａ、ＣＯＮＲ’ｂＲ’ｃまたはＰ（Ｒ’ｄ）Ｏ２Ｈから選択され、
Ｒ’ａ、Ｒ’ｂおよびＲ’は同一または異なってよく、任意でヒドロキシル化されてもよいＨまたは（Ｃ１‐Ｃ８）アルキルを表し；
Ｐはリン原子であり、Ｒ’ｄはＯＨ、（Ｃ１‐Ｃ８）アルキルまたは（Ｃ１‐Ｃ８）アルコキシ、（Ｃ１‐Ｃ８）アリルアルキルまたは（Ｃ１‐Ｃ８）アルコキシアルキルから選択され、
−  Ｒ１は親水基を表し、典型的には分子量（モル質量ｇ／モル）が２００を超える、好適には分子量３００を超える、さらに好適には５００超える、一層好適には８００を超える、さらに一層好適には１０００を超え、以下から選択される少なくとも３個の酸素原子を含み：
好適には分子量が１０００〜２０００の、ポリオキシ（Ｃ２‐Ｃ３）アルキレン（すなわち、ポリオキシエチレンおよびポリオキシプロピレン）、特にポリエチレングリコールおよびそのＣ１‐Ｃ３モノエーテルおよびモノエステル、
ポリヒドロキシアルキル、
ポリオール（官能化オリゴ糖を含む［このタイプの官能化は特にＪ．Ｐｏｌｙｍｅｒ．Ｓｃ．Ｐａｒｔ  Ａ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２３号、１３９５〜１４０５貢（１９８５）および２９号、１２７１〜１２７９（１９９１）およびＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｃｈｅｍ．３号、１５４〜１５９頁（１９９２）に記載されている］）
（Ｒ２ｇ）ｅ［（Ｒ２ｇ）ｉＲ３］ｈ、ここで
ｈ＝１または２；ｉ＝０、１または２；ｅ＝１〜５、
Ｒ２（Ｒ２は同一または異なる）は
無、アルキレン、アルコキシアルキレン、ポリアルコキシアルキレン、
ＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、（Ｃ１‐Ｃ８）アルキル基、（Ｃ１‐Ｃ８）アルキルオキシ、Ｎ０２、ＮＲＸＲＹ、ＮＲＸＣＯＲＹ、ＣＯＮＲＸＲＹまたはＣＯＯＲＸ、Ｈまたは（Ｃ１‐Ｃ８）アルキルであるＲＸおよびＲＹ、およびヒドロキシル化されてよい直鎖、分枝、または環状のＣ１‐Ｃ１４アルキル、アルキレンおよびアルコキシで任意で置換されてもよい、フェニレン、または飽和または不飽和であってよい複素環式残基
を表し、
ｇ（ｇは同一または異なる）は、無または官能基Ｏ、ＣＯ、ＯＣＯ、ＣＯＯ、ＳＯ３、ＯＳＯ２、ＣＯＮＲ’、ＮＲ‘ＣＯ、ＮＲ’ＣＯＯ、ＯＣＯＮＲ’、ＮＲ’、ＮＲ’ＣＳ、ＣＳＮＲ’、ＳＯ２ＮＲ’、ＮＲ’ＳＯ２、ＮＲ’ＣＳＯ、ＯＣＳＮＲ’、ＮＲ’ＣＳＮＲ’、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）ＮＲ’、ＮＲ’Ｐ（Ｏ）‐（ＯＨ）を表し、Ｒ’はＨ、（Ｃ１‐Ｃ８）アルキルまたはＲ３であり、
Ｒ３はアルキル、フェニル、１つまたは複数のフェニルで置換または遮断したアルキル、アルキレンオキシ；任意で上記基の１つで置換または遮断されてもよいアルキルで未置換または置換されたアミノまたはアミド；ＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、（Ｃ１‐Ｃ８）アルキル、（Ｃ１‐Ｃ８）アルキルオキシ、ＮＯ２、ＮＲＸＲＹ、ＮＲＸＣＯＲＹ、ＣＯＮＲＸＲＹまたはＣＯＯＲＸ、Ｈまたは（Ｃ１‐Ｃ８）アルキルであるＲＸおよびＲＹ、およびヒドロキシル化されてよい直鎖、分枝、または環状のＣ１‐Ｃ１４アルキル、アルキレンおよびアルコキシで置換されてよい、フェニル基、フェニレン基、および複素環基を表し、
−  Ｒａ〜Ｒｉ（すなわち、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、Ｒｆ、Ｒｇ、Ｒｈ、Ｒｉ）は独立してＨ基、アルキル基、ヒドロキシアルキル基、アルキルフェニル基またはシクロアルキル基を表し、
−  Ｕは‐ＣＸＲ４‐リンカー１、ＣＨＲ４ＣＯＮ‐リンカー１、ＣＨＲ４‐ＣＨＲ５ＯＨ‐リンカー１であり、
−  Ｒ４およびＲ５は独立してＨ、アルキルまたはヒドロキシアルキルを表し、
−  Ｘは上記意味を有し、
−  リンカー１はｑ＝０のときにはＨＲ  ＣｈキレートとリンカーＬとの間で結合を提供し、ｑ＝１のときにはＨＲ  ＣｈキレートとＤとの間で結合を提供するリンカーである。
Ｉｄ、Ｉｅ、Ｉｆは
2007527857.tif 000003
を表し、
Ｘ、Ｒ１、Ｒａ〜Ｒｉは上記と同じ意味を有し、
Ｕ’はリンカー１である。
Ｉｇは
2007527857.tif 000004
を表し、Ｕ、Ｘ、Ｒ１は上記と同じ意味を有する。
ｂ）
ｑ＝０またはｑ＝１であり、
ｑ＝０のときｒ＝１、またはｑ＝１のときｒは２〜５である。
ｃ）ＤはリンカーＬを少なくとも２個のＨＲキレートに結合することのできる多官能分子であり、Ｄはリンカー２を介してＬと、リンカー１を介して少なくとも２個の金属キレートと結合することができる。
ｄ）ｘ、ｙおよびｚが１〜６であり、ｙ＝ｚの場合、ｘ＝１〜３、ｙ＝１〜８、ｚ＝１〜３であることが好ましい。
【００３１】
ＨＲ  Ｃｈのように、リンカーＬは互いに同一かまたは異なる。
【００３２】
Ｍが典型的には９９Ｔｃ、１１７Ｓｎ、１１１Ｉｎ、９７Ｒｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、８９Ｚｒ、１７７Ｌｕ、４７Ｓｃ、１０５Ｒｈ；１８８Ｒｅ、６０Ｃｕ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、１５９Ｇｄ、１４９Ｐｒおよび１６６Ｈｏから選択された放射性核種か、原子番号２１〜２９、４２〜４４、または５８〜７０を有する常磁性金属イオンか、あるいは原子番号２１〜３１、３９〜４９、５０、５６〜８０、８２、８３または９０を有する重金属イオンの場合、（Ｅ）はある要素Ｍと結合した形態では、Ｂｘ‐Ｌｚ‐（ＨＲ  Ｃｈ‐Ｍ）ｙと書かれる。
【００３３】
本発明は鉱酸基または有機酸基あるいは塩基を有する式（Ｅ）の化合物の塩、特にアミノ基の塩酸塩およびナトリウム、キレートに存在するカルボン酸基のカリウム塩およびＮ‐メチルグルカミン塩にも関する。
【００３４】
‐ＣＲ１Ｘ‐基はＧｄコアにグラフトされる親水性分枝を構成する。有利には、これら分枝は
以降に記載するＡＡＧ１  ＡＡ２８Ｂｒ、ＡＡＧ１  ＡＡ２９Ｂｒと表される分枝；
欧州特許第６６１２７９号、欧州特許第９２２７００号、欧州特許第１１８３２５５号に記載された分枝；
以降に記載する「フラッシュ（ｆｌａｓｈ）」分枝；
以降に記載するＰ７９２と呼ばれるＣＯ‐ＮＨ‐Φ‐ＣＯ‐ＮＨの「強固なリンカー」分枝
から選択した。
【００３５】
酸基上に側枝を形成するこのような親水性分枝は実質的に異なっていてよく、常磁性錯体およびそこに付着した常磁性イオンの運動の自由性を抑えることが意図されており、したがって、磁界におけるその回転（ｒ１の逆関数）が、故に複雑な固定化の現象が抑えられる。
【００３６】
さらに、まったく驚くべきことであるが、これらの親水性分枝はバイオベクターの本来の親和性を保持することを可能にする。これは水の網目の形成および電荷のマスキングの効果によるものと思われ、当業者がバイオベクターに結合させるのを断念させるであろうＨＲキレートの大きさにも関わらず、バイオベクターとその標的部位との間の特異的相互作用は失われない。また、この親水性のおかげで、先行技術のバイオベクターにみられた溶解性がないという相当な問題を解決することが可能となる。この親水性分枝に関し、少なくとも２００の分子量が示されている；高緩和度の責任を負う分枝を固定化することの効果が達成されると仮定すると、この値を多少変えてよいことは当業者には明白である。製造が非常に複雑になる鎖を有すること回避し、かつＧｄに対して優れた重量効率を有するためには、典型的には、分枝の分子量は３０００未満である。
【００３７】
さらに、本出願人は次のように述べている：
Ｕ＝ＣＸＲ４‐ＣＨＲ５ＯＨ‐リンカー１またはＵ＝ＣＨＲ４ＣＯＮ‐リンカーの場合、合成は促進される。
ＸはＣＯ２Ｒ’ａを表すことが好ましい；しかし、ＣＯＮＲ’ｂＲ’ｃ を使用すれば本剤のモル浸透圧濃度を低減させるのに有利な非イオン性化合物を得ることが可能となり、Ｐ（Ｒ’ｄ）Ｏ２Ｈを使用すればより高い緩和度を有する薬剤を得ることができる。
Ｒａ、Ｒｂ、およびＲｃはＨ基を表すことが好ましいが、本剤の所望の特性に干渉しない場合、構造を安定させかつ緩和度を向上させるために、アルキル基またはシクロアルキル基を用いることも可能である（アルキル基をグラフトすることによる強固化は当業者には知られている。Ｉｎｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、４１巻、２５号、６８４６〜６８５５頁、２００２）。Ｉｎｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｃｔａ  ３１７、２００１、２１８〜２２９頁およびＣｏｏｒｄｉｎａｔｉｏｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、１８５〜１８６、１９９９、４５１〜４７０頁に記載されているように、当業者はヒドロキシアルキル基が構造の毒性を低減させることが知られていることを認識している。
【００３８】
非限定的実施形態によれば、以下の化合物（２）〜（１８）が得られる。
【００３９】
（２）Ｒ１が（ＣＨ２）ｘＣＯＮＨＲ（ｘ＝１、２または３）であり、およびＲが２００を超える分子量の親水基である、以下から選択される上記化合物（Ｅ）：
１）基：
2007527857.tif 000005
Ｚ基は結合、ＣＨ２、ＣＨ２ＣＯＮＨまたは（ＣＨ２）２ＮＨＣＯであり、
Ｚ’基は結合、Ｏ、Ｓ、ＮＱ、ＣＨ２、ＣＯ、ＣＯＮＱ、ＮＱＣＯ、ＮＱ‐ＣＯＮＱまたはＣＯＮＱＣＨ２ＣＯＮＱであり、
Ｚ’’基は結合であり、ＣＯＮＱ、ＮＱＣＯまたはＣＯＮＱＣＨ２ＣＯＮＱｐおよびｑは整数であり、その合計は０〜３である；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５は
互いに独立して、同一または異なってよいＨ、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｉ、Ｑ１およびＱ２を有するＣＯＮＱ１Ｑ２またはＮＱ１ＣＯＱ２、モノヒドロキシル化またはポリヒドロキシル化されたか、あるいは任意で１つまたは複数の酸素原子で遮断されてもよいＨまたは（Ｃ１‐Ｃ８）アルキル基を表し、Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つおよび僅か２個はＣＯＮＱ１Ｑ２またはＮＱ１ＣＯＱ２である；
または、Ｒ２およびＲ４は
2007527857.tif 000006
を表し、かつＲ１、Ｒ’１、Ｒ３、Ｒ’３、Ｒ５およびＲ’５は同一または異なってよく、Ｈ、Ｂｒ、ＣｌまたはＩ、Ｑ１およびＱ２を表し、上記と同じ意味を有し、Ｚ’’’はＣＯＮＱ、ＣＯＮＱＣＨ２ＣＯＮＱ、ＣＯＮＱＣＨ２、ＮＱＣＯＮＱおよびＣＯＮＱ（ＣＨ２）２ＮＱＣＯから選択された基であり、Ｑは任意でヒドロキシル化されてもよいＨまたは（Ｃ１‐Ｃ４）アルキル基であり、アルキル基は直鎖または分枝であもよい；
２）「フラッシュ」分枝
2007527857.tif 000007
（Ｚ’’’’はＮＱ（ＣＨ２）ｊ（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｉ（ＣＨ２）ｊＮＨ２（ｉ＝２〜６およびｊ＝１〜６））
好適には、
2007527857.tif 000008
（ｔ＝１、２、３または４およびｎ＝２〜６）
である。
【００４０】
（３）ｑ＝１の化合物。
したがって、化合物（Ｅ）の１つまたは複数のＨＲキレートはディバイダー（ｄｉｖｉｄｅｒ）Ｄを提供する。まず少なくとも２個のキレートの間に、次にリンカーＬＺの間に結合を提供できる限り、種々のディバイダーが可能である。Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、２００１、１０１（１２）、３８１９〜３８６およびＴｏｐｉｃｓ  ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２１７、２１２、２１０、１９７巻に記載された種々の多官能性骨格鎖がディバイダーとして当業者によって使用され得る。好適なディバイダーはカルボキレート基および／またはアミノ基で多官能化された芳香性骨格鎖である。
Ｄは（Ｄｉｖ‐リンカー２）の形式で書くことができ、Ｄｉｖは少なくともｒに等しい自由原子価を有する基である。Ｄは上記のリンカー１を介してまず少なくとも２個の金属キレートに結合され、次に、リンカー２を介してリンカーＬに結合されている。例えば、ｒ＝２の場合、
（リンカー）‐Ｄｉｖ‐（リンカー１）２；
（Ｅ）は
（バイオベクター）ｘ‐Ｌｚ‐［（リンカー‐Ｄｉｖ）ｑ‐（Ｉａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ）ｒ］ｙと書かれる。
２個のリンカー１はＩａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｈに含まれる。
デンドリマーの場合とは異なり、化合物（Ｅ）、特にＤｉｖＤを有する化合物（Ｅ）は以下を得ることを可能にする。
【００４１】
信号成分およびバイオベクター成分のステアリン酸分離。
プリストレスされていないので、その親和性を保持するバイオベクターの配座が自由であること。
限られた数のＧｄを有する効果的な信号。
純度および多分散性の制御。デンドリマー型製剤の純度は５％未満と非常に低い。
投与されるＧｄの数の完全な制御。
成分を不活化し、これによりバイオベクターのその特異的結合部位に対する認識が向上する、コントラストフォア（ｃｏｎｔｒａｓｔｏｐｈｏｒｅ）成分の親水性。
【００４２】
また、
ディバイダーの有無に関係なく得られる薬剤を構成するスキームはモジュラーであり、構造の各モジュール（Ｂ、Ｌ、ＨＲ  Ｃｈ）の生理化学的性質、例えば、親水性、粘性、電荷を制御することが可能であり、これにより、特に、薬剤の溶解性を制御し、かつ投与される薬剤量を抑えることができる；
デンドリマーとは異なり、分子（コレステロール、イオン、内在性金属、等）を結合するという好ましくない効果が避けられる。
【００４３】
さらに、得られる薬剤は生体において先行技術の非ＨＲ  ＤＯＴＡ型の化合物よりも高い保磁性を呈するという利点があると考えられる：得られる薬剤の大きさは、特に腎においてその脱離を低減させるので、その生体における接触時間が長くなる。
【００４４】
ディバイダーを有するこの構造（いくつかのＨＲキレートを有することから、この化合物はまた多金属と呼ばれる）、患者に投与される同投与量のＧｄに対して、モル緩和度の、故に薬剤の有効性をさらに増大させることが可能であるので特に有利である。ＨＲ  ＤＯＴＡでは２５  ｍＭ−１ｓ−１〜ＨＲ  ＰＣＴＡでは４０ｍＭ−１ｓ−１という緩和度／キレートは、構造中のキレート数によって乗算される。すなわち、４個のキレートを有するＨＲ‐バイオベクターでは、例えば、緩和度は約１２０〜１６０となる。この構造によって、非ＨＲ誘導体が画像化において十分に有効ではないバイオベクターの場合であっても非常に良好な結果を得ることが可能となる。多金属バイオベクターは典型的には２〜８個またはそれ以上のガドリウムキレートを有する。好適な実施形態に従って以下の構造を有する化合物が得られる：
ｘ＝ｙ＝ｚ＝１およびｑ＝１：リンカーＬを介してディバイダーに結合されたバイオベクターであり、それ自身が２個のキレートに結合されている。
ｘ＝１、ｙ＝ｚ＝２、およびｑ＝１：２個のリンカーＬを介して２個のディバイダーに結合されたバイオベクターであり、各ディバイダーは２個のキレート（したがって、合計４個のキレート）に結合されている。
ｘ＝１、ｙ＝ｚ＝３、およびｑ＝１：３個のリンカーＬを介して３個のディバイダーに結合されたバイオベクターであり、各ディバイダーは２個のキレート（したがって、合計６個のキレート）に結合されている。
【００４５】
ディバイダーＤは実際それ自身が少なくとも２個のサブディバイダーを樹枝状の形態で含み得ることもわかる。例えば、リンカーＬを介して２個のディバイダーに結合されたバイオベクターの場合、各ディバイダーは２個のサブディバイダーを含み、したがって４個のキレートを有し、多金属バイオベクターは計８個のキレートを含む。
【００４６】
（４）ＨＲ  Ｃｈを有する式（Ｅ）の化合物は以下から選択された基を表す。
2007527857.tif 000009
式中、
‐Ｓ１‐Ｔ‐Ｓ２‐は以下である：
１）
2007527857.tif 000010
ここでＳ１＝Ｓ２＝（ＣＨ２）２であり、
Ｂ１、Ｂ２およびＢ３の３つはすべて（ＣＨ２）ｘＣＯＮＨＲを表す（ｘ＝１、２または３）；
２）または、
2007527857.tif 000011
（ｋ＝０およびＳ１＝Ｓ２＝ＣＨ２）
Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３の１つはＧ−ＮＨを表し、その他は（ＣＨ２）ｘＣＯＮＨＲを表す；
３）あるいは、
2007527857.tif 000012
（ｋ＝１）
Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３の３つはすべて（ＣＨ２）ｘＣＯＮＨＲ（ｘ＝１、２または３）を表し、
ＧＮＨは
基‐（ＣＨ２）ｎ‐ＮＨ‐（ｎ＝１〜４）、
または
2007527857.tif 000013
（ｐ＝０〜３）
から選択される。
Ｇ‐ＮＨはこれら化合物において上記に記載したリンカー１を表す。
【００４７】
（５）ＨＲ  Ｃｈを有する式（Ｅ）の化合物は以下から選択される基を表す：
１）基
2007527857.tif 000014
式中、
‐Ｓ１‐Ｔ‐Ｓ２‐は、
2007527857.tif 000015
であり、この式でＳ１＝Ｓ２＝（ＣＨ２）２であり、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３の３つはすべて（ＣＨ２）ｘＣＯＮＨＲ（ｘ＝１、２または３）である。
２）基
2007527857.tif 000016
ＩＩａ２（Ｎ‐官能化ＰＣＴＡと呼ばれる化合物）
またはＩＩｂ２（Ｎ‐官能化ＰＣＴＡと呼ばれる化合物であり、ＩＩｂ２の位置異性体）
2007527857.tif 000017
式中、‐Ｓ１‐Ｔ‐Ｓ２‐は、
2007527857.tif 000018
（ｋ＝０およびＳ１＝Ｓ２＝ＣＨ２）
であり、
Ｂ３はＧ‐ＮＨを表し、Ｂ１およびＢ２はＩＩａ２に対して（ＣＨ２）ｘＣＯＮＨＲを表し、
Ｂ２はＧ‐ＮＨを表し、Ｂ１およびＢ３はＩＩｂ２に対して（ＣＨ２）ｘＣＯＮＨＲを表す。
３）基
2007527857.tif 000019
ＩＩ２（Ｃ‐官能化ＰＣＴＡと呼ばれる化合物）
‐Ｓ１‐Ｔ‐Ｓ２‐が
2007527857.tif 000020
（ｋ＝１およびＳ１＝Ｓ２＝ＣＨ２）
である場合、
ＩＩｃ２に対してＢ１、Ｂ２、Ｂ３の３つはすべて（ＣＨ２）ｘＣＯＮＨＲ（ｘ＝１、２または３）を表し、
ＩＩ２、ＩＩａ２、ＩＩｂ２およびＩＩｃ２の場合、
ＧＮＨは‐（ＣＨ２）ｎ‐ＮＨ‐基（ｎ＝１〜４）から選択される。
式中、
2007527857.tif 000021
（ｐ＝０〜３）
【００４８】
（６）Ｄがカルボキレート基および／またはアミノ基で多官能化された芳香性骨格鎖である式（Ｅ）の化合物、好適にはＤｉｖが１、３、５‐トリアジン型の式：
2007527857.tif 000022
であり、（リンカー１）２‐Ｄｉｖ‐（リンカー）は次のように書かれる：
2007527857.tif 000023
リンカー１およびリンカー２は次のａ）およびｂ）、好適にはａ）から選択される：
ａ）（ＣＨ２）２‐φ‐ＮＨ、（ＣＨ２）３‐ＮＨ、ＮＨ‐（ＣＨ２）２‐ＮＨ、ＮＨ‐（ＣＨ２）３‐ＮＨ、無または単結合、
ｂ）同一または異なってよく、Ｐ１およびＰ２はＯ、Ｓ、ＮＨ、無、ＣＯ２、ＮＣＳ、ＮＣＯ、ＳＯ３Ｈ、ＮＨＣＯ、ＣＯＮＨ、ＮＨＣＯＮＨ、ＮＨＣＳＮＨ、ＳＯ２ＮＨ‐、ＮＨＳＯ２‐、スクアリン酸から選択される、Ｐ１‐Ｉ‐Ｐ２。
Ｉ＝アルキレン、アルコキシアルキレン、ポリアルコキシアルキレン、フェニレンで遮断したアルキレン、アルキリデン、ａｌｋｉｌｉｄｅｎｅ、アルキニレンである。
一実施形態によれば、Ｄは、例えば
2007527857.tif 000024
である。
【００４９】
（７）Ｌがポリオキシアルキレン基、スクアレート、ＰＥＧ‐スクアレート集合体、ラジカル：アルキレン基、アルコキシアルキレン基、ポリアルコキシアルキレン基、フェニレン基で遮断したアルキレン基、アルキリデン、ａｌｋｉｌｉｄｅｎｅから選択されるリンカーである、式（Ｅ）の化合物。
【００５０】
少なくとも１つのバイオベクター官能基および少なくとも１つのＨＲキレート官能基と相互作用できる限り、多数のリンカーＬを使用することができる。特に以下に言及する：
ａ．１  （ＣＨ２）２‐φ‐ＮＨ、（ＣＨ２）３‐ＮＨ、ＮＨ‐（ＣＨ２）２‐ＮＨ、ＮＨ‐（ＣＨ２）３‐ＮＨ、無または単結合、
ａ．２  同一または異なってよく、Ｐ１およびＰ２はＯ、Ｓ、ＮＨ、無、ＣＯ２、ＮＣＳ、ＮＣＯ、ＳＯ３Ｈ、ＮＨＣＯ、ＣＯＮＨ、ＮＨＣＯＮＨ、ＮＨＣＳＮＨ、ＳＯ２ＮＨ‐、ＮＨＳＯ２‐、スクアレートから選択される、Ｐ１‐Ｉ‐Ｐ２。
Ｉ＝アルキレン基、アルコキシアルキレン基、ポリアルコキシアルキレン基、フェニレン基で遮断したアルキレン基、アルキリデン基、ａｌｋｉｌｉｄｅｎｅ基、アルキニレン基である。
【００５１】
ｂ）反応することができる米国特許第６２６４９１４号に記載のリンカー
（バイオベクターおよびキレートの）アミノ基、ヒドロキシル基、スルフヒドリル基、カルボキシル基、カルボニル基、炭水化物基、チオエーテル基、２‐アミノアルコール基、２‐アミノチオール基、グアニジニル基、イミダゾリル基またはフェノール官能基。
【００５２】
スルフヒドリル基と反応することができる基には、Ｘ‐ＣＨ２ＣＯ‐型のα‐ハロアセチル化合物（Ｘ＝Ｂｒ、ＣｌまたはＩ）があり、これを用いて、イミダゾリル基、チオエーテル基、フェノール基またはアミノ基と反応させることができる。
【００５３】
特にアミノ基と反応することができる基には、
−  アルキル化化合物：α‐ハロアセチル化合物、Ｎ‐マレイイミド誘導体、アリル化合物（例えば、ニトロハロ芳香族化合物）、シッフ塩基を形成することのできるアルデヒドおよびケトン、エピクロロヒドリンなどのエポキシド誘導体、求核体と非常に反応しやすい、塩素を含んだトリアジンの誘導体、アジリジン、スクアレートエステル、α‐ハロアルキルエーテル；
−  アルキル化化合物：イソシアネートおよびイソチオシアネート、塩化スルホニル、ニトロフェニルエステルまたはＮ‐ヒドロキシスクシンイミジルエステルなどのエステル、無水酸、アシルアジ化物、アズラクトン、イミドエステル
がある。
【００５４】
カルボキシル基と反応することのできる基には、ジアゾ化合物（ジアゾアセテートエステル、ジアゾアセトアミド）、カルボン酸を修正する化合物（例えば、カルボジイミド）、イソキサゾリウム誘導体（ニトロフェニルクロロホルメート；カルボニルジイミダゾール、等）、キノリン誘導体がある。
【００５５】
グアニジニル基と反応することのできる基には、フェニレンジグリオキサル、ジアゾニウムなどのジオン化合物がある。
【００５６】
ｃ）下記式の、米国特許第６５３７５２０号に記載の特定のリンカー。
（Ｃｒ６ｒ７）ｇ‐（Ｗ）ｈ‐（Ｃｒ６ａｒ７ａ）ｇ’‐（Ｚ）ｋ‐（Ｗ）ｈ’‐（Ｃｒ８ｒ９）ｇｇ’’‐（Ｗ）ｈ’’‐（Ｃｒ８ａｒ９ａ）ｇ’’’
ｇ＋ｈ＋ｇ’＋ｋ＋ｈ’＋ｇ’’＋ｈ’’＋ｇ’’’は０以外であり；
ＷはＯ、Ｓ、ＮＨ、ＮＨＣ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＯＣ（＝Ｏ）、ＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨ、ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ、ＳＯ２、（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ’、（ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）ｓ’’、（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｔから選択され；
Ｚは０〜３ｒ１０で置換したアリル基、０〜３ｒ１０で置換したＣ３‐Ｃ１０シクロアルキル基、Ｎ、Ｓ、Ｏから独立して選択された１〜４個のヘテロ原子を含み、かつ０〜３ｒ１０で置換した５〜１０員のヘテロ環の系から選択され；
ｒ６、ｒ６ａ、ｒ７、ｒ７ａ、ｒ８、ｒ８ａ、ｒ９およびｒ９ａはＨ、＝Ｏ基、ＣＯＯＨ基、ＳＯ３Ｈ基、ＰＯ３Ｈ基、０〜３ｒ１０で置換したＣ１‐Ｃ５アルキル基、０〜３ｒ１０で置換したアリル基、０〜３ｒ１０で置換したベンジル基、０〜３ｒ１０で置換したＣ１‐Ｃ５アルコキシ基、ＮＨＣ（＝Ｏ）ｒ１１基、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ  ｒ１１基、ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ  ｒ１１、ＮＨ  ｒ１１、ｒ１１、およびＨＲ  Ｃｈを有するリンカーから独立して選択され；
ｒ１０はＣＨＲＲへのリンカー、ＣＯＯｒ１１、ＯＨ、ＮＨ  ｒ１１、ＳＯ３Ｈ、ＰＯ３Ｈ、０〜３ｒ１１で置換したアリル基、０〜１ｒ１２で置換したＣ１‐Ｃ５アルキル基、０〜１ｒ１２で置換したＣ１‐Ｃ５アルコキシ基、およびＮ、Ｓ、Ｏから独立して選択され、かつ０〜３ｒ１１で置換した１〜４個のヘテロ原子を含み１〜４個のヘテロ原子を含む５〜１０員のヘテロ環から独立して選択され；
ｒ１１は：Ｈ、０〜１ｒ１２で置換したアリル基、Ｎ、Ｓ、Ｏから独立して選択され、かつ０〜１ｒ１２で置換した１〜４個のヘテロ原子を備えた５〜１０員を含むヘテロ環、０〜１ｒ１２で置換したＣ３‐Ｃ１０シクロアルキル基、０〜１ｒ１２で置換したポリアルキレングリコール基、０〜１ｒ１２で置換した炭水化物基から独立して選択され；
ｒ１２はＨＲ  Ｃｈを有するリンカーであり；
ｋは０、１、２から選択され；ｈは０、１、２から選択され；ｈ’は０、１、２、３、４、５選択され；ｈ’’０、１、２、３、４、５から選択され；ｇは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０から選択され；ｇ’は０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０から選択され；ｇ’’は０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０から選択され；ｇ’’’は０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０から選択され；ｓは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０から選択され；ｓ’は０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０から選択され；ｓ’’は０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０から選択され；ｔは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０から選択される。
【００５７】
ｄ）国際公開特許第０２／０８５９０８号に記載の特定のリンカーであって、例えば以下から選択される、直鎖または分枝状のリンカー：
ＣＲ６’’’Ｒ７’’’‐基、‐（Ｒ６’’’）Ｃ＝Ｃ（Ｒ７’’’）＝基、‐ＣＣ‐基、‐Ｃ（Ｏ）‐基、‐Ｏ‐基、‐Ｓ‐基、‐ＳＯ２‐基、‐Ｎ（Ｒ３’’’）‐基、‐（Ｒ６’’’）Ｃ＝Ｎ‐基、‐Ｃ（Ｓ）‐基、‐Ｐ（Ｏ０（ＯＲ３’’’）‐基、‐Ｐ（Ｏ）‐（ＯＲ３’’’）Ｏ‐基、
（Ｒ’’’３は窒素または酸素と反応することのできる基である）
環状領域（二価のシクロアルキル基、二価のヘテロシクリル基）、
ポリアルキル基、ポリアルキレングリコール基。
【００５８】
ｅ）国際公開特許第０２／０９４８７３号に記載のリンカー。
【００５９】
リンカー１およびリンカー２について、化学結合またはリンカーは典型的には、ａ）から選択されよう。
【００６０】
（８）（ＣＨ２）ｘＣＯＮＨＲのｘがｘ＝２である、（３）から（７）に記載の化合物。
【００６１】
（９）‐Ｓ１‐Ｔ‐Ｓ２‐が
2007527857.tif 000025
（Ｓ１＝Ｓ２＝ＣＨ２）
を表す、（４）から（８）に記載の化合物。
【００６２】
（１０）ｋが１およびＧが‐（ＣＨ２）３‐である、式ＩＩ．１の（９）に記載の化合物。
【００６３】
（１１）ｋが０、およびＢ２またはＢ３が‐（‐ＣＨ２）３ＮＨ‐または
2007527857.tif 000026
を表す、ＩＩ．１の（９）に記載の化合物。
【００６４】
（１２）‐Ｓ１‐Ｔ‐Ｓ２‐が
2007527857.tif 000027
（Ｓ１＝Ｓ２＝（ＣＨ２）２）
を表す、（４）から（９）に記載の化合物。
【００６５】
（１３）Ｂ１、Ｂ２およびＢ３が、‐Ｇ‐ＮＨを表さない場合、‐（ＣＨ２）２ＣＯＮＨＲを表し、Ｒにおいて、ｐ＝ｑ＝０およびＺが‐ＣＨ２ＣＯＮＨである、（４）から（９）に記載の化合物。
【００６６】
（１４）Ｒが
2007527857.tif 000028
を表し、Ｘは同一であり、かつＢｒまたはＩを表し、Ｑ１およびＱ２は同一または異なってよく、各ＣＯＮＱ１Ｑ２が合計で４〜１０個のヒドロキシル基を含むようにモノヒドロキシル化またはポリヒドロキシル化（Ｃ１‐Ｃ８）されたアルキル基である、（１３）に記載の化合物。
【００６７】
（１５）Ｒが
2007527857.tif 000029
を表し、Ｘが同一であり、ＢｒまたはＩであり、Ｑ１およびＱ２は同一または異なってよく、各ＣＯＮＱ１Ｑ２が合計で４〜１０個のヒドロキシル基を含むようにモノヒドロキシル化またはポリヒドロキシル化（Ｃ１‐Ｃ８）されたアルキル基である、（１３）に記載の化合物。
【００６８】
（１６）Ｒが
2007527857.tif 000030
を表し、ＺがＣＨ２またはＣＨ２ＣＯＮＨであり、Ｚ’がＣＯＮＨまたはＣＯＮＨＣＨ２ＣＯＮＨであり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５が同一であり、ＢｒまたはＩであり、かつＱ１およびＱ２が同一または異なってよく、各ＣＯＮＱ１Ｑ２が合計で４〜１０個のヒドロキシル基を含むようにモノヒドロキシル化またはポリヒドロキシル化（Ｃ１‐Ｃ８）されたアルキル基である、（１）〜（１２）に記載の化合物。
【００６９】
（１７）Ｒが
2007527857.tif 000031
を表し、ＺがＣＨ２ＣＯＮＨであり、Ｚ’がＣＯＮＨであり、Ｚ’’がＣＯＮＨＣＨ２ＣＯＮＨであり、同一であるＲ１、Ｒ３、Ｒ５がＢｒまたはＩであり、かつＱ１およびＱ２が同一または異なってよく、各ＣＯＮＱ１Ｑ２が合計で４〜１０個のヒドロキシル基を含むようにモノヒドロキシル化またはポリヒドロキシル化（Ｃ１‐Ｃ８）されたアルキル基である、（１）〜（１２）に記載の化合物。
【００７０】
（１８）Ｒが
2007527857.tif 000032
（Ｚ’’’はＮＱ（ＣＨ２）ｊ（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｉ（ＣＨ２）ｊＮＨ２（ｉ＝２〜６、ｊ＝１〜６））、
好適には、
2007527857.tif 000033
（ｔ＝１、２、３または４、およびｎ＝２〜６）
を表す、（１）〜（１２）に記載の化合物。
【００７１】
ｘおよびＲが上記と同じ意味を有する以下の化合物Ａ１を特に合成した：
・巨大環がシクリンであり、式ＩＩ  １において、‐Ｓ１‐Ｔ‐Ｓ２‐が
2007527857.tif 000034
を表し、
上式が
2007527857.tif 000035
を有し、
‐Ｇ‐ＮＨが‐（ＣＨ２）３‐ＮＨ‐または
2007527857.tif 000036
である化合物。
・巨大環が脂肪族窒素原子の１つの上で官能化された３、６、９、１５‐テトラアザビシクロ［９．３．１］ペンタデカ‐１（１５）、１１、１３‐トリエンであり、‐Ｓ１‐Ｔ‐Ｓ２‐が
式
2007527857.tif 000037
の
2007527857.tif 000038
（ｋ＝０）
を表し、
‐Ｇ‐ＮＨ＝‐（ＣＨ２）３‐ＮＨ‐または
2007527857.tif 000039
である化合物。
・および、式ＩＩのピリジル環上で官能化された化合物であり、‐Ｓ１‐Ｔ‐Ｓ２‐が
式
2007527857.tif 000040
の
2007527857.tif 000041
（ｋ＝１およびＧ＝（ＣＨ２）３）
を表し、
および特にｘ＝２であるＡ１残基の化合物。
【００７２】
同じく、ＧｄモノマーをＧｄダイマーＩＩ’２、ＩＩ’’ａ２、ＩＩ’’ｂ２、ＩＩ’’’２各々と置換することによって、上記化合物ＩＩ’１、ＩＩ’’ａ１、ＩＩ’’ｂ１およびＩＩ’’’１と同様の化合物Ａ２を合成した。
１）
2007527857.tif 000042
‐Ｇ‐ＮＨは‐（ＣＨ２）３‐ＮＨ‐、または
2007527857.tif 000043
である化合物。
２）
2007527857.tif 000044
またはＩＩ’’ｂ２（ＩＩ’’ａ２の位置異性体）
2007527857.tif 000045
‐Ｇ‐ＮＨは‐（ＣＨ２）３‐ＮＨ‐、または
2007527857.tif 000046
である化合物。
３）
2007527857.tif 000047
Ｇ‐ＮＨは‐（‐ＣＨ２）３‐ＮＨ、
および特にｘ＝２であるＡ２残基である化合物。
【００７３】
式ＩＩ’２、ＩＩ’’ａ２、ＩＩ’’ｂ２の化合物は、ｐＨおよび温度を管理しながら水性媒質中の２、４、６‐トリクロロ‐１、３、５‐トリアジンまたは水および水混和性の極性溶媒から成る混合物におけるにより二重置換反応本願に定めた構造Ｖ１の化合物の２つの同等物で開始することによって得られる。
式Ｒ‐の残基は、当業者に公知の方法に従って、対応する式Ｒ‐ＮＨ２のアミンのペプチド結合によって導入され、上記に定めた構造は、例えば、ＥＤＣＩ適合性のあるカップリング剤および、任意で触媒の存在下では水性媒体でもよい。
第３の塩素原子は最終的には、例えば、式Ｈ２Ｎ‐（ＣＨ２）ａ‐ＮＨ２またはＨ２Ｎ‐ＣＨ２‐（ＣＨ２‐Ｏ‐ＣＨ２）ｂＣＨ２‐ＮＨ２（ａ＝２〜５およびｂ＝１〜４）の過剰なジアミンを用いて置換される。
式ＩＩ’’’２の化合物は、同様のプロトコルに従って、トリアジン環の二重置換および上記に定めた過剰なジアミンを用いた残った塩素原子の置換によって、式ＩＩ’’’１および構造：
2007527857.tif 000048
の残基に由来するアミノ化された前駆物質で開始して調製される。
【００７４】
化合物Ａ１を合成するために、式
2007527857.tif 000049
のＡ’１ＮＨの前駆物質を用いた。
上式でｘ＝１、２または３であり、‐Ｓ１‐Ｔ’‐Ｓ２‐は
１）
2007527857.tif 000050
（Ｓ１＝Ｓ２＝（ＣＨ２）２）、
または
２）
2007527857.tif 000051
（Ｓ１＝Ｓ２＝ＣＨ２）
であり、
基Ｚ１またはＺ２の１つは基‐（‐ＣＨ２）３ＮＨ２、または
2007527857.tif 000052
から選択され、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｉｎｔｈｅｓｉｓ、第３版、Ｅｄ．Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐｉｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ（Ｊ．Ｗｉｌｅｙ）ｐ．４９４〜６５３頁に一般に記載されているように、ＮＨ２基は任意で従来の方法で、カーバメート、フルタイミドまたはベンジルアミンの形態で保護されてよく、
およびＺ１またはＺ２の他の基は（ＣＨ２）ｘＣＯＯＨである。
【００７５】
１）の化合物Ｖ１はＨＲ  ＤＯＴＡ型と呼ばれ、２）の化合物はＮ‐官能化ＨＲ  ＰＣＴＡ型と呼ばれる。
【００７６】
式
2007527857.tif 000053
（ｘ＝１、２、３）
の前駆物質Ａ’１ＮＨも使用し、ＮＨ２基は任意で保護または塩化されてもよく、特にはｘ＝２の化合物Ｖ１およびＶＩ１である。
【００７７】
このような化合物ＶＩ１はＣ‐官能化型のＨＲ  ＰＣＴＡであり、アミン官能基は外環上に位置する。
【００７８】
１、３、５‐トリアジノ残基をディバイダーＤＩＶとして使用する場合、前駆物質Ｖ１、ＶＩ１またはＶＩ’１は、特にＣｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｄ．Ｂｏｓｔｏｗ、Ｗ．Ｏｌｌｉｓ、第４巻、１５０〜１５２貢（Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ）またはＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、４１（１１）、２０００、１８３７〜１８４０貢に記載されたように、任意には水との混合物として塩基が非プロトン性極性溶媒中に存在した状態で求核置換するための一般的条件下で、２、４、６‐トリクロロ‐１、３、５‐トリアジンで反応されるのが好ましい。この反応は、例えば、体積で１、６‐ジオキサン、テトラヒドロフラン、またはジメチルフォルアミドの５〜６０％の存在下の水中で、ＮａＯＨまたはＮａ２ＣＯ３などの無機塩基の存在下またはトリエチルアミンなどの第三アミンの存在下で実行されてよい。
【００７９】
Ｚ１またはＺ２が（ＣＨ２）３ＮＨ２を表す式Ｖ１の中間化合物を調製するには、第１の段階で、前記Ｚ１またはＺ２を有する窒素原子が遊離し、かつ他の窒素原子が任意で事前に保護されてもよい対応する大環状化合物に、周知の方法で反応させることが可能であり、式
2007527857.tif 000054
の合物Ｙ’１‐ＢｒはＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ３８（４７）、１９９７、８２５３‐８２５６  およびＪ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、５０、１９８５、５６０〜５６５貢に従って調製するが、Ｚ１またはＺ２は
2007527857.tif 000055
を表し、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５８、１９９３、３８６９〜３８７６貢に記載された式
2007527857.tif 000056
の化合物Ｙ’’１‐Ｂｒを反応させる。
【００８０】
次に、他方の大環状窒素原子では、それを任意に脱保護した後、エステルＹ’’’１Ｂｒ
2007527857.tif 000057
の形で保護された臭素化した二酸を反応させる。
これは、例えば、
ｘ＝１、Ｂ＝ジフェニルメチルの場合、Ｊ．Ｂ．Ｉ．Ｃ．４、１９９９、３４１−３４７  に従って；
ｘ＝２、Ｂ（Ｃ１‐Ｃ３）アルキルまたはベンジルの場合、国際公開特許第００／７５２４１号に従って；
ｘ＝３、Ｂ＝ＣＨ３の場合、欧州特許第Ａ６１４  ８９９号に従って、
フタルイミド基のアミン官能基を遊離させる前、または予め導入されたニトロ基を還元する前に調製することができる。酸官能基は水性媒体または水性アルコール性媒体中の塩基または酸の作用によって、アミノ基の形成の前または後に脱離される。
【００８１】
カルボン酸官能基を遊離後、次いで、特に、米国特許第５５５４７４８号またはＨｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ、６９、１９８６、２０６７〜２０７４貢からの知られた方法の１つに従って、ｐＨが５〜７の７の水性媒体中のＧｄ２Ｏ３またはＧｄＣｌ３の作用によってガドリニウム錯体を調製する。
【００８２】
Ｔ’がピリジルを表す式Ｖの生成物を調製中、第１段階において、Ｙ’ＢｒまたはＹ’’Ｂｒを窒素原子のいずれもが保護されていない巨大環で反応させるとき、Ｙ’’’Ｂｒと反応後またはアミノ基の形成後に、以下の型の非対称の誘導体が得られる。
2007527857.tif 000058
【００８３】
これらの化合物ＶＩＩ’１はＮ‐官能化型のＨＲ  ＰＣＴＡと呼ばれ、アミン官能基は側枝上に位置する。
【００８４】
対称的に置換された誘導体を得るために、以下の表１の反応スキームに従った工程を用いてもよく、表中、ｘおよびＢは上記の意味を有し、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、４１（３９）、２０００、７４４３〜７４４６貢に記載された保護されたトリアミン（ａ）を用い、次いで、非対称性の化合物に記載したものと同様の段階を用いる。
【００８５】
表１
化合物Ｖ（１）〜Ｖ（４）の化合物はＶ．１の中間化合物である。
2007527857.tif 000059
【００８６】
式ＶＩの化合物を調製するには、Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍ．２７、１９９０、１６７〜１６９貢に記載の式
2007527857.tif 000060
の、ピリジル環上で臭素化された二環式巨大環でＨｅｃｋ反応を行い、次いで還元する。Ｈｅｃｋ反応はＭｅｔａｌ  Ｃａｔａｌｙｚｅｄ  ｃｒｏｓｓ‐ｃｏｕｐｌｉｎｇ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ、Ｅｄ．Ｆ．Ｄｉｅｄｅｒｉｃｈ、Ｐ．Ｊ．Ｓｔａｎｇ、Ｗｉｌｅｙ、ＶＣＨ、ｃｈａｐ．３、９９〜１６６貢に記載された条件で行うことができる。ＶＩを調製する第１段階のための反応スキームを表２に示す。次いで、トリフルオロ酢酸によってアミノ基を脱保護する前または後に、エステル基を加水分解し、ガドリニウムを錯体化する。
【００８７】
化合物ＶＩとアミンＲＮＨ２の反応から得られるアミドを調製するには、脂肪族アミンを脱保護する前にアミド化を行うことが好ましい。
【００８８】
表２
化合物ＶＩ（１）〜ＶＩ（４）はＶＩ １の中間化合物である。
2007527857.tif 000061
【００８９】
同じく、化合物Ａ２が前駆物質Ａ’２ＮＨから得られ、これは下記式の二量体である。
１）
2007527857.tif 000062
（式中、ｘ＝１、２または３であり、好ましくはｘ＝２である）
２）
2007527857.tif 000063
１）および２）に関して、
‐Ｇ‐ＮＨは基‐（‐ＣＨ２）３ＮＨ、または
2007527857.tif 000064
から選択され、
２）に関して、
Ｚ１およびＺ２は（ＣＨ２）ｘＣＯＯＨであり、式中、ｘ＝１、２または３であり、好ましくはｘ＝２である。
３）
2007527857.tif 000065
（式中、ｘ＝１、２または３であり、好ましくはｘ＝２である）
【００９０】
一態様によれば、本発明は式（Ｅ）の化合物を調製するための中間化合物に関し、前記中間化合物は、式
Ｌ‐［（Ｄ）ｑ‐（Ｉａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ）ｒ］
を有し、特に化合物ＩＩ’２、ＩＩ’’ａ２、ＩＩ’’ｂ２、ＩＩ’’’２はスクアレート型のリンカーＬに結合されている。実際、これらの新規の化合物および本発明の構造によって、高緩和度および優れた選択性を有する多金属化合物（Ｅ）を生成することが可能となる。
【００９１】
ＨＲキレート成分を記載してきたが、ここでバイオベクター成分を記載する。
【００９２】
好適な実施形態によれば、バイオベクターは心筋細胞、内皮細胞、上皮細胞、腫瘍細胞、または免疫系細胞の受容体から選択された細胞受容体または組織成分（細胞外マトリクス、プロテアーゼ、等）および正常組織または病理学的組織の構造の成分を標的化することのできる薬剤である。
【００９３】
使用されるＨＲキレートのおかげで、その緩和度は高く（少なくとも２０〜３０ｍＭｏｌ−１Ｇｄ−１）、小さなバイオベクター分子に関するものも含め、得られるＨＲバイオベクター化合物の緩和度も高い。このことは、緩和度を上げるために信号成分に結合されたタンパク質をバイオベクターとして用いる先行技術の薬剤に比して、さらなる利点を構成する。
【００９４】
溶解性の点で、この特性は非常に有利である。使用されるバイオベクターは、例えば、葉酸および多数のペプチドにみられるように、可溶性の問題を呈することが多い。他方、本発明者らのＨＲバイオベクター化合物は親水性Ｒ基のおかげで、優れた溶解性を有する。
【００９５】
ここで、種々の病理学的領域に関連するいくつかの実施形態を記載する。
【００９６】
心新血管系分野および高リスクのアテローム性プラークに関し、心血管系疾患、特にアテローム性プラークに関連する疾患に存在する多様な生物学的系／機構は、本発明に従う造影剤または治療薬剤のための好適な標的であり、特に、メタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）に関与する系、血栓系、アネキシンＶ系がある。
【００９７】
マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはマトリキシンは、細胞外マトリクスのタンパク質成分を分解する特性を有する酵素である。細胞および組織を囲むこの細胞外マトリクスはコラーゲンなどのタンパク質より成る。ＭＭＰは、３つのグループに分類される：ゲラチナーゼ（ＩＶ型コラゲナーゼ）、ストロメリシンおよび間質コラゲナーゼ。
【００９８】
ＭＭＰは、アテローム性プラークにおいて過剰発現する。心血管系分野では、多くの研究により、ＭＭＰがプラークにおける細胞外マトリクスのリモデリングに関与することが示されている。アテローム性プラークに関しては、非網羅的様式ではあるが、本明細書において少なくとも８つのＭＭＰが過剰発現されている。
【００９９】
2007527857.tif 000066
【０１００】
ＭＭＰ１およびＭＭＰ３は、ジョンソン  Ｊ（Ｊｏｈｎｓｏｎ  Ｊ）ら、Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍａｔｒｉｘ−ｄｅｇｒａｄｉｎｇ  Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ  ｂｙ  Ｍａｓｔ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｔｅａｓｅｓ  ｉｎ  Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ  Ｐｌａｑｕｅｓ，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．１９９８；１８：１７０７−１７１５に詳しく記載される。
【０１０１】
したがって、本発明は、バイオベクターが、少なくとも１つのＭＭＰを阻害することが可能な薬剤、特に、心血管系分野におけるアプリケーションのためのＭＭＰ阻害剤である式（ＩＩＩ）のベクトル化されたナノ粒子に関する。好適な実施形態によれば、阻害剤は、アイロマスタット（Ｉｌｏｍａｓｔａｔ）の誘導体または後に例示するペプチドである。
Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００１，８，４２５−４７４；Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ，１９９９，９９，２７３５−２７７６に記載の阻害剤から選択されるＭＭＰ阻害剤Ｉｘと共に、式Ｉｘ−Ｌｎ−（ＣｈＦＲ）ｙの化合物も好適である。特に、ＴＩＭＰと称されるＭＭＰ阻害剤を使用することができ、ＤＤＴ  １巻、Ｎｏ１，Ｊａｎｕａｒｙ  １９９６，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，１６−１７；Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ，２００１，１２，９６４−９７１において想起される。
【０１０２】
血栓については、
・ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体が活性型血小板上で発現される（それは、抗血小板剤の標的としての療法において既に使用されている）；
・フィブリンは血栓症に関連する、
ことが知られている。
【０１０３】
より正確には、血栓に関して、活性型血小板上のＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ糖タンパク質の改善が実証されている。血小板は、アテローム性動脈硬化症および血栓症の方法において中軸的役割を果たす骨髄巨核球の無核フラグメントである。最も一般的に使用される従来の抗血小板医薬製品は、アスピリン、チクロピジンおよびクロピドグレルである。血小板凝集を生じる分子機構に関する知識から、血小板受容体フィブリノゲン、インテグリンＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａに対して指向された新規のファミリーの分子を開発することが可能である。上記のアンタゴニストと比較した主要な利点は、血小板の活性化の経路には依存せずに、血小板活性化の最終工程が遮断されることである。血小板−血小板相互作用は血小板の形成に極めて重要であるため、（血小板の間で架橋を形成する）フィブリノゲンのＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ複合体への結合は止血および血栓症において重要な事象である。血小板が活性化される場合、血小板膜の表面にあるＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ糖タンパク質受容体は、それらの空間的コンホメーションの修飾を経験し、次いで、血漿に可溶なフィブリノゲンの分子、およびカルシウムに結合することができる。フィブリノゲンは、血球が捕らえられるネットワークを形成するＣａ２＋−フィブリノゲン結合を介して、血小板の間で連結される。トロンビンは、フィブリノゲンをフィブリンに変換することによって、この網のを締め付ける。この凝集は、損傷を受けた領域の血栓の形成をもたらす。従って、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体上のリガンド相互作用部位を同定するために、多くの研究が行われている。ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ複合体は、血小板における重要な膜結合へテロ二量体糖タンパク質複合体（血小板あたり約５００００コピー）である。
【０１０４】
ヒトフィブリノゲンに天然に存在するアミノ酸配列に対応する少なくとも２つの系列のペプチドは、付着巨大分子のＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体への結合を阻害することが公知である：配列Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ＲＧＤ）およびＬｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｖａｌγ鎖。
【０１０５】
配列Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ＲＧＤ）は、当初、血小板によるその放出後、フィブロネクチンの付着配列、血小板−血小板および血小板−管相互作用において重要な役割を果たすインテグリンとして同定された。この配列はフィブリノゲン、フォン・ヴィレブランド因子およびビトロネクチン（線溶および管への結合に役割を果たす）にも存在する。
【０１０６】
ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ複合体は、血小板へのフィブロネクチン、フィブリノゲン、フォン・ヴィレブランド因子およびビトロネクチンの結合を阻害するこの配列を認識する。これらのすべてのリガンドは少なくとも１つのＲＧＤ配列を含有する一方；フィブリノゲンは半分子当たりそれらの２つを含有する。血漿におけるその高濃度のため、インビボで、フィブリノゲンは主要なリガンドである。
【０１０７】
したがって、本発明は、
・バイオベクターが、ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体を標的にすることが可能である；
・バイオベクターが、特に、フィブリンを可溶性フィブリノゲン分子から区別するために、フィブリン単量体に対して選択的なペプチドを介して、フィブリンを標的化することが可能である、
ベクトル化された粒子（ＩＩＩ）に関する。
【０１０８】
本発明は、特に、心血管系用途のために、バイオベクターがＲＧＤモチーフを含むＨＲ−ＢＩＯＶＥＣＴＯＲに関する。
【０１０９】
例えば、国際公開第２００１／９１８８号パンフレット、米国特許第６５２１２１１号明細書、米国特許第６４０３０５６号明細書、Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１９９０，５２−６７，Ｎｕｃｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ，２８，２００１，５１５−５２６に記載のペプチド、ダイアチド（Ｄｉａｔｉｄｅ）社製アプシタイド、アキュテクト（Ａｃｕｔｅｃｔ）を使用することができる。
【０１１０】
腫瘍学の分野に関し、本発明によって得られる特異的画像化は、１つの実施形態に従えば、既知の技術では得られない新血管形成、腫瘍細胞の特異的標的化または細胞外マトリクスの変更を入手、標識することを目的とする。腫瘍の発達に関連する多様な生物学的系（または機構）は、本発明に従う造影または治療薬剤の好適な標的である：葉酸受容体に結合することが可能な化合物に関与する系、ＭＭＰに関与する系、血管形成に関与する成長因子に関与する系が該当する。
【０１１１】
葉酸はあらゆる生物において、プリン塩基およびピリミジン塩基の生合成において重要な役割をしていることが知られている。したがって、葉酸は補因子または基質として葉酸を用いる種々の酵素を伴う細胞増殖のプロセスに関与する。その代謝は、まず、プテリジン環の合成、次に、既に形成されたプテリジン環を機能的に修飾、酸化、または還元するための反応に及ぶ。抗葉酸と同様、内在性葉酸の細胞摂取は次の２つの輸送タンパク質によって調節される：
−  葉酸結合タンパク質（ＦＢＰ）、葉酸受容体とも言う。
−  還元葉酸輸送体（ＲＦＣ）
【０１１２】
米国特許第６２２１３３４号はこの分野への葉酸の関与を想起させるとともに、葉酸またはメトトレキサートをキレートと結び付ける化合物を記載している。
【０１１３】
国際特許出願第０２／０８７４２４号は、葉酸を低緩和度のキレートと結び付ける化合物を記載しており、このような葉酸は必然的に天然アミノ酸を持っていないが、本発明の葉酸バイオベクターはそうとも限らない。
2007527857.tif 000067
【０１１４】
一実施形態によれば、本発明は、バイオベクターが葉酸受容体を標的化することが可能な誘導体であるＨＲ−ＢＩＯＶＥＣＴＯＲに関し、このバイオベクターは、腫瘍細胞の特異的認識を提供することが可能であり、固定化されたキレートＨＲ  Ｃｈに結合されている。
【０１１５】
本発明は、特に以下に記載される化合物（Ｅ）に関する。
2007527857.tif 000068
式中、
ａ）Ｇ１はハロ、Ｒｆ２、ＯＲｆ２、ＳＲｆ３、ＮＲｆ４Ｒｆ５から成る基から独立して選択される；Ｇ１はＮＨ２またはＯＨであるのが好ましい；
ｂ）Ｇ２はハロ、Ｒｆ２、ＯＲｆ２、ＳＲｆ３、およびＮＲｆ４Ｒｆ５から成る群から独立して選択される；
ｃ）Ｇ３、Ｇ４は−（Ｒｆ６’）Ｃ＝、−Ｎ＝、−（Ｒｆ６’）Ｃ（Ｒｆ７’）−、‐Ｎ（Ｒｆ４’）−から成る群から独立して選択される二価基を表す；
好ましくは、Ｇ３を含む環が芳香族である場合、Ｇ３は−Ｎ＝（葉酸）または−ＣＨ−（後に記載の化合物：ＣＢ３７１７、ラルチトレキセド、ＭＡＩ）であり、Ｇ３を含む環が非芳香族である場合、Ｇ３は−ＮＨ−または−ＣＨ２−（後に記載の化合物：ＡＧ−２０３４、ロメトレキソール（ｌｏｍｅｔｒｅｘｏｌ））である；
好ましくは、Ｇ３を含む環が芳香族である場合、Ｇ４は−ＣＨ−または−Ｃ（ＣＨ３）−であり、Ｇ３を含む環が非芳香族である場合、−ＣＨ２−または−ＣＨ（ＣＨ３）−である；
ｆ）Ｇ５は存在しない（化合物ペメトレキセド）か、または−（Ｒｆ６’）Ｃ＝、−Ｎ＝、−（Ｒｆ６’）Ｃ（Ｒｆ７’）−、−Ｎ（Ｒｆ４’）−から選択される；
ｇ）環Ｊは、おそらくヘテロ環式芳香族５または６員環であり、環の原子はＣ、Ｎ、Ｏ、Ｓであるかもしれない；
ｈ）Ｇ６は、ＮまたはＣ（後に記載の化合物：３−デアザ−ＩＣＩ−１９８，５８３）である；
ｉ）Ｋ１およびＫ２は、−Ｃ（Ｚｆ）−、−Ｃ（Ｚｆ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｚｆ）−、−Ｎ（Ｒｆ４’’）−、−Ｃ（Ｚｆ）−Ｎ（Ｒｆ４）、−Ｎ（Ｒｆ４’’）−Ｃ（Ｚｆ）、−Ｏ−Ｃ（Ｚ）−Ｎ（Ｒｆ４’’）−、−Ｎ（Ｒｆ４’’）−Ｃ（Ｚｆ）−Ｏ−、Ｎ（Ｒｆ４’’）−Ｃ（Ｚｆ）−Ｎ（Ｒｆ５’’）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒｆ４’’）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｒｆ６’’）（Ｒｆ７’’）−、−Ｎ（Ｃ≡ＣＨ）−、−Ｎ（ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ）−、Ｃ１−Ｃ１２アルキルおよびＣ１−Ｃ１２アルコキシよりなる群から独立して選択され；式中、ＺｆはＯまたはＳである；好ましくは、Ｋ１は−Ｎ（Ｒｆ４’’）−または−Ｃ（Ｒｆ６’’）（Ｒｆ７’’）−であって、Ｒｆ４’’、Ｒｆ６’’、Ｒｆ７’’はＨである；Ａ２は、おそらくアミノ酸に共有結合している；
ｊ）Ｒｆ１は、Ｈ、ハロ、Ｃ１−Ｃ１２アルキルおよびＣ１−Ｃ１２アルコキシよりなる群から選択される；Ｒｆ２、Ｒｆ３、Ｒｆ４、Ｒｆ４’、Ｒｆ４’’、Ｒｆ５、Ｒｆ５’’’、Ｒｆ６’’およびＲｆ７’’は、Ｈ、ハロ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ、Ｃ，−Ｃ、２アルカノイル、Ｃ，−Ｃ、２アルケニル、Ｃ１−Ｃ１２アルキニル、（Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ）カルボニルおよび（Ｃ，−Ｃ、２アルキルアミノ）カルボニルよりなる群から独立して選択される；
ｈ）Ｒｆ６およびＲｆ７は、Ｈ、ハロ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ１−Ｃ１２アルコキシよりなる群から独立して選択されるか；またはＲｆ６およびＲｆ７は共にＯ＝を形成する；
ｉ）Ｒｆ６’およびＲｆ７’は、Ｈ、ハロ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ１−Ｃ１２アルコキシよりなる群から独立して選択されるか、またはＲｆ６’およびＲｆ７’は共にＯ＝を形成する；
ｊ）Ｌｆは、適切である場合、アミド結合を介するαアミノ基を介してＫ１またはＫ２に結合した天然のアミノ酸または天然のポリ（アミノ酸）を含む２価の連結である；
ｋ）ｎ、ｐ、ｒおよびｓは、独立して０または１である。
【０１１６】
式（Ｅ）は、互変異性型、例えば、Ｇ１がＯＨ、ＳＨまたはＮＨである化合物を含む。
【０１１７】
本発明の化合物では、基Ｋ１、Ｋ２、Ｒｆ１、Ｒｆ２、Ｒｆ３、Ｒｆ４、Ｒｆ４’、Ｒｆ４’’、Ｒｆ５、Ｒｆ５’’、Ｒｆ６、Ｒｆ７’’、Ｒｆ６、Ｒｆ７、Ｒｆ６’およびＲｆ７’の少なくとも１つは、水素原子またはアルキル、アルコキシ、アルキルアミノ、アルカノイル、アルケニル、アルキニル、アルコキシカルボニルもしくはアルキルアミノカルボニル基を含み、基は、好適には、１〜６個の炭素原子（Ｃ１−Ｃ６）、より好適には、１〜４個の炭素原子（Ｃ１−Ｃ４）を含む。
【０１１８】
上記化合物のうち、本発明者らは次の誘導体に注目した。
ａ）
2007527857.tif 000069
2007527857.tif 000070
【０１１９】
ｂ）
2007527857.tif 000071
2007527857.tif 000072
【０１２０】
2007527857.tif 000073
【０１２１】
本発明は好適には以下のバイオベクターＢを用いた化合物（Ｅ）に関する。
2007527857.tif 000074
【０１２２】
ＭＴＸのＮ１０をエチル基を有する炭素と置換することによって、ＲＦＣを介した細胞摂取およびポリグルタメイテイション（ｐｏｌｙｇｌｕｔａｍａｔａｔｉｏｎ）も腫瘍細胞／正常細胞に対してより大きくなる。
2007527857.tif 000075
【０１２３】
５位の硫黄によって、メチレンよりもＧＡＲＦＴの疎水性ポケットをよりよく充填することが可能となる（ｋｄ／ＦＢＰ＝３．２ｐＭ）。
2007527857.tif 000076
【０１２４】
この構造は、１０位の窒素に対して置換された本発明者らが試験したすべての化合物と同様、葉酸とは非常に異なるものである。
2007527857.tif 000077
2007527857.tif 000078
2007527857.tif 000079
【０１２５】
これらの構造は、プテロイル骨格鎖を含まず、構造の点で葉酸とはおおきく異なる。
2007527857.tif 000080
【０１２６】
活性化された構造解析のおかげで、本発明者らは、ＲＦＣとの相互作用に好ましいいくつかの構造（２位のアミンをメチルと置換するときに、親和性は大きくなる；５位および１０位の窒素は炭素と置換され得る；ピラジン環は四水酸化され得るか、またはピロール基（ペメトレキセド）と置換され得る）に気付き、ＦＢＰ（チミジル酸合成酵素（ＴＳ）の４つのインヒビター）との相互作用に好ましいいくつかの構造は、葉酸よりも大きい親和性を有する：ペメトレキセド＞ＣＢ３７１７＞ＩＡＨＱ＞２‐ＮＨ２‐ＺＤ１６９４；親和性は５、８‐ジデアザイソホリック（ｄｉｄｅａｚａｉｓｏｆｏｌｉｃ）誘導体に対して保持される；ピラジン環は四水酸化され得るか、ベンゼン基（ＣＢ３７１７）と置換され得るか、またはピロール基（ペメトレキセド）と置換され得る；グルタミン酸の置換が可能である）。
【０１２７】
葉酸または誘導体の場合に、Ｌｆがアミノ酸を含んでいると、化合物（Ｅ１）はカルボン酸官能基をα位に、カルボン酸官能基をγ位に有する。
【０１２８】
ａ）したがって、式（Ｅ１）の化合物を用いれば、グラフトするものを選択することが可能となる。例えば、
ｚ＝１、ｘ＝１、ｙ＝１の化合物ＢＩＯ‐ＦＯＬＡＴＥの場合のように、単一のＨＲ  Ｃｈでは、基ＣＨＲＲはディバイダーを介して結合された２つのキレートを含む二量体の形態であり、基［Ｌ‐ＨＲ  Ｃｈ］はγ位にグラフトされる；
またはｚ＝２、ｘ＝１、ｙ＝２の化合物ＢＩＯ‐ＦＯＬＡＴＥ．ＩＩの場合のように２つの基ＨＲ  Ｃｈでは、基ＨＲ  Ｃｈは二量体の形態であり、基［Ｌ‐ＨＲ  Ｃｈ］の１つはγ位にグラフトされ、他方はα位にグラフトされ、したがって、化合物  ＢＩＯ‐ＦＯＬＡＴＥ．ＩＩは四量体である。
【０１２９】
ｂ）したがって、式（Ｅ２）の化合物を用いれば、Ｌｆがアミノ酸を含んでいる場合、１０位のＫ１上にグラフトすることも可能であり、これは任意で（ａ）の（Ｅ１）についても当てはまる。
【０１３０】
腫瘍学分野におけるＭＭＰに関して、ＭＭＰは、２つの異なる機能を有することが知られている：
ａ）ＭＭＰは、細胞外マトリクスを破壊することによって、腫瘍播種に寄与する；
ｂ）ＭＭＰは、原発性および転移した腫瘍の増殖および血管形成を促進する環境を作製する。
【０１３１】
主なヒト腫瘍において発現されるＭＭＰは、特に、以下の通りである：
乳癌：ＭＭＰ−１、２、３、７、９、１１、１３、１４；
直腸結腸癌：ＭＭＰ−１、２、３、７、９、１１；
肺癌：ＭＭＰ−２、３、７、９、１１、１４；
前立腺癌：ＭＭＰ−１、２、３、７、９。
【０１３２】
腫瘍の進行の状態とＭＭＰの発現のレベルとの間には、緊密な相関関係が存在する。一般に、悪性腫瘍は良性腫瘍よりも多量のＭＭＰを発現する。
【０１３３】
したがって、本発明は、バイオベクターが、腫瘍学分野における用途のためのＭＭＰ阻害剤であるＨＲバイオベクターに関する。好適な実施形態によれば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００１，８，４２５−４７４；Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ，１９９９，９９，２７３５−２７７６に記載の阻害剤から選択されるＭＭＰ阻害剤が使用される。特に、ＴＩＭＰと称されるＭＭＰ阻害剤を使用することができ、ＤＤＴ  １巻、Ｎｏ１，Ｊａｎｕａｒｙ  １９９６，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，１６−１７；Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ，２００１，１２，９６４−９７１において想起される。
【０１３４】
血管形成に関して、研究により、血管形成は異なった腫瘍、特に、乳癌、腎臓癌、前立腺癌、結腸癌および脳癌、ならびにまた黒色腫における予後因子であることが示されている。
【０１３５】
従って、本発明は、バイオベクターが血管形成マーカーを標的にすることが可能であるＨＲバイオベクターに関する。
【０１３６】
所定の内皮増殖因子は腫瘍特異的であることが示されている。管内壁を構成する内皮細胞は、正常な成体において増殖する天然の傾向を示さない。一方、病理学的状況では、例えば、腫瘍の発達または転移の形成中に、酸素および栄養供給の必要性が、局所への誘引によって、増加するように変化する。したがって、腫瘍はそれらの利益のために、新たな管ネットワーク、すなわち血管形成として知られたプロセスを誘導する。
【０１３７】
血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）は、強力かつ選択的な血管形成増殖因子である。該因子は、大きなＲＴＫ（チロシン−キナーゼ受容体）ファミリーに属する細胞外膜上の少なくとも３つの受容体：ＶＥＧＦＲ−１（Ｆｌｔ−１）、ＶＥＧＦＲ−２（Ｆｌｋ−１／ＫＤＲ）およびＮＰ−１．ＶＥＧＦ受容体を刺激することによって作用する。インテグリンファミリーのこれらのタンパク質は、リガンド、膜貫通ドメインおよびチロシンキナーゼ活性を担持する細胞質領域を有する。ＶＥＧＦＲの場合、キナーゼドメインは、それぞれの受容体に特異的な短い配列によって中断される。
【０１３８】
したがって、本発明はバイオベクターが、内皮細胞の表面に存在する血管形成受容体に結合することが可能な因子であるＨＲバイオベクターに関する。
【０１３９】
特に、文献国際公開第０１／０１２８０９号パンフレット、国際公開第０１／８３６９３号パンフレット、国際公開第０２／０５７２９９号パンフレット（ＶＥＧＦＲ３を標的化する８アミノ酸のペプチド）；Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ（１９９９），２０，Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ，１７９，２０６，２０００；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０００，２７５，１３５８８−１３５９６；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，２７７，４５，４３１３７−４３１４２；Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２００１，３１６，７６９−７８７；Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９８，３７，１７７５４−１７７７２；Ｃｈｅｍ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２０００，１６，８０３−８０６に記載のバイオベクター（特に、ファージディスプレイによって得られるペプチド）を使用することができる。特に、（ｉ）キナゾリン、アミノチアゾールまたはアントラニルアミド化合物などのＶＥＧＦ関連酵素活性の阻害剤、（ｉｉ）ＶＥＧＦアンタゴニスト、特に、ジベンゾチオフェンなどの小さな分子および文献特願２００１−３５３０７５号公報、特願２０００−３９５４１３号公報の分子、抗体である化合物を使用することができる。血管形成の場合において過剰発現される受容体を標的化するための多くの薬剤について記載している文献、米国特許第６６１０２６９号明細書のバイオベクターを使用することもできる。
【０１４０】
インテグリンαｖβ３が管系においては発現し難いが、腫瘍細胞（最終段階の膠芽腫、卵巣癌、黒色腫）では過剰発現する。αｖβ３は、多様な段階で血管形成に参加する：αｖβ３は、マトリクスへの内皮細胞付着を調節し、それはシグナルを細胞の核へ伝達し、かつ内皮細胞増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ−２、ｆｌｋ）と協同することによってプロ−血管原性である、受容体である。αｖβ３は、膜型メタロプロテイナーゼ−１（ＭＴ１−ＭＭＰ）と共に作用し、細胞表面のメタロプロテイナーゼ−２の活性化を担う。ＲＧＤペプチドまたは抗体によるこの受容体だけでなく、αｖβ５の遮断は、細胞のアポトーシスを誘導する。αｖβ５は、αｖβ５と同様に、血管形成の増殖段階に特に関与する。多くのマトリクスタンパク質は、所定のインテグリンとの相互作用の部位として同定されている共通配列：Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ＲＧＤと称される）を有する。従って、このＲＧＤ配列を含む多数の血管形成阻害剤が開発されている。
【０１４１】
したがって、本発明は、バイオベクターが、腫瘍学における用途に適切なＲＧＤペプチドであるＨＲバイオベクターに関する。
【０１４２】
αｖβ３を標的化するＲＧＤペプチドについては、本発明者らは、αｖβ３に対して高い親和性を示す（マトリクスタンパク質の結合を防止するため）が、αＩＩｂβ３に対しては低い親和性を示す血管形成を阻害するためのバイオベクターを選好する。事実、αＩＩｂβ３アンタゴニストは有害な出血の問題を生じ得ることが示されている。本発明者らは、特に、酵素分解に対してより安定であり、より良好な親和性および選択性を伴う環状ＲＧＤペプチド配列（ペプチドのコンホメーションは、回転に対する制限により有利な位置で維持される）を有するアンタゴニストを選好する。
【０１４３】
より正確には、ＲＧＤペプチドの構造−活性解析後、本発明者らは、最も特定すれば、αｖβ３に対する親和性を維持するのに有利な条件下に置くため、酵素（エキソペプチダーゼおよびエンドペプチダーゼ）による分解を防止するために、より堅牢にするために十分に短い環（６アミノ酸環より５アミノ酸環）を伴い、Ｄ型アミノ酸を伴う環状ＲＧＤペプチドを選好する。特に、アスパラギン酸およびアルギニンのβ−炭素間の距離は、αＩＩｂβ３（αＩＩｂβ３のその部位はαｖβ３の当該部位よりも大きい）よりもαｖβ３に対して高い選択性を有するために、６．６Å未満である。アスパラギン酸付近の疎水性アミノ酸もまた、より良好な選択性を促進する。そのような構造は、受容体部位における疎水性および親水性基の正確な露出に最適である。本発明者らは、特に、ペプチドのシクロ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄｐｈｅ−Ｖａｌ）を選好し、これはシクロ（ＲＧＤｆＶ）とも呼ばれ、小文字は対応するアミノ酸がＤ型であることを示す。該ペプチドは、ナノモルのＩＣ５０（２〜２．５ｎＭ）を示す。このペプチドは、ＦＲ誘導体と反応することができるリジン側鎖のアミン基に特に有利である。その合成については、Ｘ．ダイ（Ｘ．Ｄａｉ）、Ｚ．シュ（Ｚ．Ｓｕ）、Ｊ．Ｏ．リュウ（Ｊ．Ｏ．Ｌｉｕ）；Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ（２０００），４１、６２９５〜６２９８頁に記載されている。
2007527857.tif 000081
【０１４４】
ＲＧＤｆＫペプチド
それは、特に、ＣＯＯＨ、スクアレート、またはイソチオシアネートで官能化される官能化されたＨＲ  Ｇｄへの結合を可能にする。本発明者らは、アミノ酸の保護基の選択、および結合媒体（Ｇｄリガンドの溶解性の問題のある固体、または溶液中）の選択に関する技術的困難を克服しなければならなかった。
【０１４５】
制限された可撓性を伴うコンホメーションを有する化合物を使用することもでき、これらのペプチドは、αｖβ３に良好な親和性および選択性を有する：
２つのシステインの間にＲＧＤモチーフが配置され、例えば、αｖβ３に対する活性が増加しているペプチド（シクロ（ＣＲＧＤＣ））；
ＲＧＤ基は環状ではないが、２つの環が接しており、そのうち少なくとも１つは２つのシステイン間のジスルフィド架橋によって形成されたペプチド（国際公開第０２／２６７７６号パンフレット）。
【０１４６】
以下を使用することもできる：
国際公開特許第０１／５２９０６号に記載されているような、インビボで少なくとも１つの酵素、特に、ＭＭＰと相互作用するように選択され、この相互作用によって、標的タンパク質とのより強力な結合が得られ、かつ緩和度が向上するポリペプチドバイオベクター；
酵素切断部位を含み、該切断はコンホメーションの改変を生じ、ＨＲキレートレベルで水分子が交換される（非ＨＲキレートを用いた米国特許第５７０７６０５号に記載の原理）バイオベクター；
ＬＭ６０９などの抗体から誘導されるバイオベクター（Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｖｏｌ  ４，５，Ｍａｙ  １９９８，６２３）。
【０１４７】
本発明はまた、バイオベクターが腫瘍学分野における用途に適切なＲＧＤペプチドのペプチド模倣物であるＨＲバイオベクターに関する。以下を使用することがきる：
チオアミド結合（ＣＳＮＨ）またはケトメチレン基（ＣＯＣＨ２）による１つまたは２つのペプチドの置換を伴い、但し、置換は重要なコンホメーションの変化を含まない、ペプチド；
環状ペプチド（ＲＧＤｆＶ）のそれぞれのアミノ酸のＮ−メチル化を示すペプチド（ＥＭＤ１２１９７４、チレンジタイド（Ｃｉｌｅｎｇｉｔｉｄｅ）とも呼ばれる：シクロ（ＲＧＤｆ−Ｎ（Ｍｅ）Ｖ））であって、極めて高い親和性（ＩＣ５０＝０．５８ｎＭ）および極めて高い選択性（αＩＩｂβ３の１５００倍）を示すペプチド；
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次の配列、シクロ（Ｘａａ−Ｙａａ−ＧＤ−マンブ（Ｍａｍｂ））を有するペプチド。Ｍａｍｂ基はＮ−アミノメチルベンゼン酸である。ＤＸａａ−Ｎ−ＭｅＡｒｇペプチドは、αＩＩｂβの極めて活性なアンタゴニストである一方、ＬＸａａ−Ａｒｇアンタゴニストはαｖβ３に対して選択的である；
2007527857.tif 000083
アスパラギン酸に隣接するアミノ酸の疎水性の性質および水溶液においてペプチドの可撓性を低下させるＭａｍｂ基により、αｖβ３に対して極めて高い親和性（ＩＣ５０＝０．６ｎＭ、これに対し、αｖβ３に対しては１４μｍ）を示す環状ペプチド（ＲＧＤＤ（ｔＢｕＧ）Ｍａｍｂ）；
基：シクロ（ＡＲＧＤ−Ｍａｍｂ）を有するペプチドＸＪ７３５（デュポン（ＤＵＰＯＮＴ））。これは、フィブリノゲンのαｖβ３受容体への結合を阻害する（ＩＣ５０＝７０ｎＭ）ことを可能にするが、他のインテグリン（αｖβ５、α５β１）を遮断しない；
Ｄｐｈｅ−Ｖａｌ（またはｆＶ）の代わりに多様な基を対照ペプチドＲＧＤｆＶに導入することによって得られるペプチド。
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【０１４８】
βＩＩ’ホールディングを模倣するためだけでなく、γ−回転領域における可撓性も減少するためにこれらの基を合成した。最も活性な因子はシクロ（ＲＧＤ−（Ｒ）−ＡＮＣ）（ＩＣ５０＝０．８ｎＭ）である。配列シクロ（ＲＧＤＸ）のこれらの２つのアミノ酸（ｆＶ）の代わりに、ここで糖Ｘを導入することも可能である（ローホフＥ．（Ｌｏｈｏｆ  Ｅ．）ら；Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．（２０００），３９（１５）、２７６１〜２７６４頁）；
環に二重結合が導入されたペプチド（カワグチ（Ｋａｗａｇｕｃｈｉ）ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ（２００１），２８８（３）、７１１〜７１７頁）；
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Ｃｈｅｍｌｉｂｒａｒｙ．ｂｒｉ．ｎｒｃ．ｃａに記載のペプチド。
【０１４９】
本発明はまた、バイオベクターが、腫瘍学における用途に適切なインテグリンαｖβ３を標的化する非ペプチド分子であるＨＲバイオベクターに関する。以下の表における化合物（そのナノモルでの親和性が実証されている）を使用することができ、そのＨＲ成分は、実際に増強される信号を可能にする（診断的有効性はＲＧＤｆＶペプチドなどのに用いられるものなどのスクリーニングテストによって検証されており、その詳細を以降で述べる）。
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【０１５０】
また、文献米国特許第６５３７５２０号明細書（血管形成中に過剰発現されたαｖβ３を標的化するバイオベクター）および国際公開第０１／１９８２９４号パンフレット（インダゾールコア）に記載のバイオベクターを使用することもできる。
【０１５１】
場合によっては、同じ標的に到達する機会を増加するために、同じ化合物において異なるいくらかのバイオベクター、例えば、αｖβ３にＲＧＤペプチドおよびベンゾジアゼピンを使用することができる。
【０１５２】
ＨＲキレートバイオベクターをＭＭＰ阻害剤と合成する原理は、非ＨＲキレートバイオベクター（バイオベクターをＱで、リンカーをＬｎで表す）を用いる国際公開０１／６０４１６号（９１〜９７貢）で使用されるものであってよい。
【０１５３】
上記のＲＧＤ型のバイオベクターまたは機能的等価物に加えて、詳細な説明に、インビトロまたはインビボスクリーニングを完結させることを可能にする実験プロトコルが記載されていることを知った上で、以下のＭＭＰ阻害化合物を使用することができる：
特に、ビーチャム（Ｂａｃｈｅｍ）、アマシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ）の２００２年カタログにおける市販の阻害剤から選択される診断または治療に関して有効であるペプチド、ペプチド模倣物、機能的に等価な非ペプチド；
文献国際公開第０１／６０４１６号パンフレット、国際公開第０１／６０８２０号パンフレット、国際公開第２００１／９２２４４号パンフレット、ＥＰ５５８６３５、ＥＰ６６３８２３に記載の阻害剤；
文献ＥＰ７９３６４１、ＥＰ７６６６６５、ＥＰ７４０６５５、ＥＰ６８９５３８、ＥＰ５７５８４４、ＥＰ６３４９９８、国際公開第９９／２９６６７号パンフレット、ＥＰ９６５５９２、ＥＰ９２２７０２、国際公開第９９／５２８８９号パンフレット、国際公開第９９／４２４４３号パンフレット、国際公開第０１／６０４１６号パンフレットに記載のヒドロキサメート、ヒドロキサメートピロリジン、二環式ヒドロキサメート、シクロブチルヒドロキサメート、スクシニルヒドロキサメート、スルホンアミドヒドロキサメート、アラニンヒドロキサメートなどのタイプの阻害剤（デュポン（Ｄｕｐｏｎｔ）；特に、式ＩａおよびＩｂ）；
文献ＥＰ７２５０７５、米国特許第５６７９７００号明細書、国際公開第９８／０３５１６号パンフレット、ＥＰ７１６０８６、国際公開第２０００  ７４６８１号パンフレット、国際公開第２０００  ０４０３０号パンフレットに記載のホスフィン酸に基づく阻害剤；
環式イミドに基づく阻害剤（米国特許第５８５４２７５号明細書）；
三環系ホスホンアミドに基づく阻害剤（国際公開第２０００  ０６５６１号パンフレット）；
オキソ酪酸に基づく阻害剤；
ＴＩＭＰＳの誘導体（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ、２００１，１２，９６４−９７１）。
【０１５４】
腫瘍学においてなお、バイオベクターがホスホネートまたはビスホスホネートに基づくＨＲバイオベクターは、骨組織の癌に極めて有用である。これらの化合物もまた、免疫の問題（慢性関節リウマチなどの自己免疫疾患）、代謝疾患（骨粗鬆症など）および感染性疾患による骨問題に関連する疾患に有用である。
【０１５５】
これらの化合物において、バイオベクターは、例えば、文献国際公開第０２／０６２３９８号パンフレットに記載のバイオベクターである。米国特許第６５３４４８８号明細書または米国特許第６５０９３２４号明細書に記載のビスホスホネート、エチドロネート、クロドロネート、パミドロネート、アレンドロネート、イバンドロネート、ＹＨ５９２またはＥＢ−１０５３などの市販のビスホスホネートを使用することもできる
【０１５６】
本発明は特に、式
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の調製された生成物に関する。
【０１５７】
炎症性および変性疾患に関し、ＳＲＡ受容体（スカベンジャー受容体）またはＦｃ受容体（米国特許第２００２／５８２８４号明細書）などのマクロファージに位置する受容体を標的化するＨＲバイオベクターに向けられたものである。
【０１５８】
アテローム性動脈硬化症の進行は、ＬＤＬの捕捉および次いで、プラークにおけるその酸化に関与する。マクロファージによるこれらの酸化型ＬＤＬの食作用は、スカベンジャー受容体（ＳＲ）と称される受容体の組によって仲介される。従って、膜結合型タンパク質のファミリーはマクロファージの泡沫細胞への逐次変換において重要な役割を果たす。ＳＲは、老化細胞に結合可能な膜結合型表面タンパク質であり、また、化学的または生物学的に修飾されたリポタンパク質である。主なＳＲのグループは、多様なクラスに分類される：
１／クラスＡ  ＳＲ：Ｉ型、ＩＩ型およびＭＡＲＣＯ
２／クラスＢ  ＳＲ：Ｉ型、ＩＩ型およびＣＤ３６
３／クラスＤ  ＳＲ：ＣＤ６８
４／クラスＥおよびＦ  ＳＲ、「レクチン様」：ＬＯＸ−１
５／最近の未分類のＳＲ：ＳＲ−ＰＳＯＸ。
【０１５９】
文献米国特許第Ａ２００２／０１２７１８１号明細書およびデ・ウィンサー（Ｄｅ  Ｗｉｎｔｈｅｒ）ら、ＡＴＶＢ  ２０００；２０：２９０−２９７；クンジャツーア（Ｋｕｎｊａｔｈｏｏｒ）ら、Ｊ  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００２；２７７：４９９８２−４９９８８において想起されるように、ＳＲＡ受容体は、心血管系疾患（アテローム性動脈硬化症、アテローム性プラーク、冠動脈疾患、血栓症、虚血、心筋梗塞など）において、マクロファージにより過剰発現される。これらの病理に関連するＳＲＡを標的化するための本発明に従う生成物の使用は、本発明の一部分である。例えば、ＳＲＡ拮抗剤はシンチグラフィまたはポジトロン放射断層撮影（ＰＥＴおよび派生の技術）において使用できるＭＲＩ試験用の超常磁性金属または放射性同意元素と共に、バイオベクターとして用いられよう。
【０１６０】
ＳＲＡ標的化に有用なバイオベクターのうち、ＳＲ−ＡＩに特異的な短鎖ぺプチドリガンドは式
Ｘ１‐Ｘ２‐Ａｒｇ‐Ｐｈｅ‐Ｌｅｕ‐Ａｒｇ‐Ｃｙｓ‐Ｔｒｐ‐Ｓｅｒ‐Ａｓｐ‐Ｘ３‐Ｐｒｏ‐Ｘ４
であり、以降、
Ｘ１−Ｘ２−ＲｆＬＲＣＷＳＤ−Ｘ３−Ｐ−Ｘ４
とも呼ぶ。
式中、
Ｘ１は任意で存在してもよく、カルボン酸；または１つまたは複数のＤ‐またはＬ‐アミノ酸またはその類似対あるいは擬態物；または抗炎症薬；またはアテローム性動脈硬化症治療用の薬剤；または検出可能な標識であってよい。カルボン酸はクエン酸、グリコール酸、酒石酸、または乳酸などのＣ‐１０〜Ｃ‐１８脂肪酸などの、合成または天然のカルボン酸であってもよく；カプロン酸またはオレイン酸などの不飽和酸；分子量２００〜５００のナフテン酸などの分枝状カルボン酸；安息香酸またはサリチル酸などの芳香族カルボン酸あるいは他の任意のカルボン酸であってよい。
Ｘ２はＤ‐または‐Ｌ‐アミノ酸またはペプチドであり、Ｘ２はペプチド（ＬｅｕまたはＡｌａまたはＩｌｅ）‐Ｓｅｒ‐（ＬｅｕまたはＡｌａまたはＩｌｅ）‐（ＧｌｕまたはＡｓｐ）、ペプチドＳｅｒ‐（ＬｅｕまたはＡｌａまたはＩｌｅ）‐（ＧＬｕまたはＡｓｐ）、ペプチド（ＬｅｕまたはＡｌａまたはＩｌｅ）‐（ＧＬｕまたはＡｓｐ）、アミノ酸ＧｌｕおよびＡｓｐからなる基から選択されるのが好ましく、この記号はアミノ酸がアミノ酸およびペプチドに関するＩＵＰＡＣ命名法およびシンボリズムと一致していることを示している；
Ｘ３はＤ‐または‐Ｌ‐アミノ酸であり、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｃｙｓ、およびＴｈｒから選択されるのが好ましく、ＡｌａおよびＳｅｒから選択されるのがさらに好ましい；
任意でＸ４が存在してもよく、好ましくはＡｌａ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ＣｙｓおよびＴｈｒから選択され、さらに好ましくはＡｌａおよびＳｅｒ、またはその類似体あるいは擬態から選択されるＤ‐または‐Ｌ‐アミノ酸であってよく；または抗炎症薬；またはアテローム性動脈硬化症を治療する薬剤；または検出可能な標識でもよい；かつ
Ｒ、Ｆ、Ｌ、Ｃ、Ｗ、Ｓ、ＤおよびＰは、アミノ酸に関するＩＵＰＡＣ命名法およびシンボリズム煮準拠してアミノ酸Ａｒｇ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ｃｙｓ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、ＡｓｐおよびＰｒｏをそれぞれ示す記号である。
【０１６１】
Ｘ２および／またはＸ３のＤ‐または‐Ｌ‐アミノ酸はそれに対応するアミノ酸の類似体または擬態の形態をとってよいことを理解されたい。
【０１６２】
ある実施形態では、ペプチドはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１（ＬＳＬＥＲＦＬＲＣＷＳＤＡＰＡ）のアミノ酸配列を含み、Ｅはアミノ酸グルタミン酸を表し、Ａはアミノ酸アラニンを表す。したがって、この好適な実施形態では式ＩのＸ２はペプチドＬＳＬＥ（Ｌｅｕ‐Ｓｅｒ‐Ｌｅｕ‐Ｇｌｕ）で表され、Ｘ３およびＸ４は共にアミノ酸アラニンで表される。
【０１６３】
ある実施形態では、ペプチドはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２（ＬＳＬＥＲＦＬＲＣＷＳＤＳＰＲ）のアミノ酸配列を含む。
【０１６４】
さらに別の実施形態では、ペプチドはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２の配列を表すアミノ酸を含み、そのコンセンサスはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３（ＬＳＬＥＲＦＬＲＣＷＳＤ）のアミノ酸配列またはその切頭ペプチドによって表される。特に好適なＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３の切頭ペプチドはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４（ＬＳＬＥＲＦＬ）のアミノ酸配列に相当するペプチドである。合成ＳＲ‐ＡＩ受容体に結合する最小のモチーフはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５（ＬＥＲＦＬ）になると考えられ、これはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３の切頭ペプチドのさらに別の好適な実施形態である。
【０１６５】
ＳＲＡを標的化するこのようなペプチドは、標準的なＦｍｏｃ固相ペプチド合成を用いて自動ペプチド合成器（９０５０  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＭＡ）で合成された。粗タンパクはＪＡＳＣＯ  ＰＵ−９８０（日本国東京）を用いて調製用Ｃ８  ＲＰ−ＨＰＬＣカラム（Ａｌｔｅｃｈ，Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ、ＩＬ）で精製された。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析およびＲＰ−ＨＰＬＣで検査されるように、ペプチドの純度は少なくとも７０％であった。凍結乾燥したペプチドは後で使用されるまで窒素下で−２０℃で保管された。合成ビオチン化ウシＳＲ−ＡＩが合成、精製され、Ｓｕｚｕｋｉらが記載したように（Ｓｕｚｕｋｉら、１９９９）特徴付けられた。
【０１６６】
したがって、本発明はまた、炎症性疾患の診断および／または処置のための、以下に関連するＨＲキレートを含む：
１）ＳＲ標的化バイオベクター、特に：
１ａ）文献米国特許第６２５５２９８号明細書、米国特許第６４５８８４５号明細書、国際公開第００／０６１４７号パンフレット、国際公開第００／０３７０４号パンフレットに記載のバイオベクター；
１ｂ）修飾されたリポタンパク質、特に、アセチル化ＬＤＬ（ａｃＬＤＬ；グルダッタ（Ｇｕｒｕｄｕｔｔａ）ら、Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２００１  ２８：２３５−２４）および酸化型ＬＤＬ（ｏｘＬＤＬ）；
１ｃ）エスバッハ（Ｅｓｂａｃｈ）ら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１９９３１８：５３７；デ・リケ（Ｄｅ  Ｒｉｊｋｅ）ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，１９９４，２６９：８２４；ファン・オーステン（Ｖａｎ  Ｏｏｓｔｅｎ）ら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．１９９８，６６：５１０７；ビジャスターボッシュ（Ｂｉｊｓｔｅｒｂｏｓｃｈ）ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９９７  ２５：３２９０；ビーセン（Ｂｉｅｓｓｅｎ）ら、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５３：２６２，１９９８；に記載のＡｃＬＤＬ、ＯｘＬＤＬおよびＬＰＳリガンド；  １ｄ）ＳＲ−ＡＩ受容体に結合可能な、ファージディスプレイによってスクリーニングされたペプチド；
２）マクロファージ活性化に関与する病理における使用のための葉酸受容体標的化バイオベクター（これらの葉酸受容体は、活性型マクロファージにおいて過剰発現される）；
３）特に、アルツハイマー病をもたらすアミロイドプラークを標的化するためのペプチド（例えば、国際公開第０１／７４３７４号パンフレット、米国特許第６３２９５３１号明細書に記載されている）；
４）例えば、米国特許第６４９１８９３号明細書に記載のＣＳＦ型のバイオベクター（ＧＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦなど）；
５）マクロファージ上に過剰発現される受容体（ＣＤ６８、ＭＲＰ８−１４など）を標的化する抗体または抗体フラグメント。
【０１６７】
炎症性疾患の分野において、本発明者らは、特に、マクロファージ関連疾患の診断における使用のためのバイオベクターがホスファチジルセリンまたはホスファチジルセリンの誘導体であるＨＲバイオベクターも得た。
【０１６８】
ホスファチジルセリン（ＰＳ）は、主に、細胞質側の細胞の内面に位置する膜リン脂質である。その全体的な負の電荷は、その極性を安定化し、細胞質膜を横切ってそれが拡散することを防止する。ＰＳは、マクロファージのための認識シグナルとしての役割を果たす。このシグナルの性質については、未だ不明である（直接認識、電荷密度、複数の受容体、誘導性シグナル受容体）。公開された最新の研究に従えば、それは、ホメオスタシスの破壊を経験する領域に存在する所定のマクロファージの表面のこの受容体の認識後のＰＳとＰＳ受容体（ＰＳＲ）との間の直接的相互作用であると考えられる。いくつかのマクロファージ細胞では、ＰＳもまた、アニオン性リン脂質のためのそれらの付着部位を介して、スカベンジャー受容体を相互作用する。ＰＳは、すべての精細胞の膜の内面上で発現される。細胞が患っている場合、またはアポトーシス方法の始めに、膜結合型トランスロカーゼは、ＰＳを細胞の細胞外面上に移動させる。この細胞外発現は、マクロファージのための認識シグナルを構成し、これは、患っている細胞を認識し、細胞内に取り込み、したがって、局所の炎症を回避する。
【０１６９】
本発明者らは、これらの多様な病理を画像化するために、マクロファージに能動的に取り込まれることを目的とした、ＰＳまたは誘導体に結合した造影剤を調製した。以下のＰＳバイオベクター（遊離のＮＨ２基に結合したキレート）を調製するために、いくつかの化学的技術的困難を克服した。
2007527857.tif 000091
【０１７０】
最終生成物の構造を完全に制御するためには、正確に官能化されたＰＳ誘導体を調製する必要があった。ＰＳの極性部分のアミノ酸の存在は、さらなる困難の供給源であり、化学を実施して、遊離のアミンおよび酸性基を保護／脱保護することによって、制御しなければならない。アミノ酸残基を保護する基は、アミノ酸化学において使用される従来の基である（Ｂｏｃ、ｔＢｕ、Ｚ、Ｂｎなど）。ＰＳと超常磁性粒子との間の結合を提供するのに好適な基は、ＮＨ２、ＣＯＯＨおよびＳＨである。
【０１７１】
本発明者らはまた、ホスファチジルセリンが少なくとも１つの脂肪鎖を欠き、妨害的様式で親和性が変更されているベクトル化された生成物を調製した。
【０１７２】
上記例のすべてに加え、本発明は一般に、診断および治療的観点で有効性がありかつ病理学的プロセスに直接または間接的に関与するかつ／または過剰発現する）関与するリガンドを標的にすることができるＨＲバイオベクター化合物を包含する。「診断的観点で有効性がある（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ  ｉｎ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ｔｅｒｍｓ）」という表現は、ＨＲ化合物が対応する非ＨＲ化合物その選択性を干渉的に失っているという事実、および既知の化合物に比してその緩和度が診断の著しい改善を可能にするほどに高いものであり、本剤は典型的にはＧｄ当たり少なくとも２０、好適には少なくとも３０、３５または４０ｍＭｏｌ−１Ｇｄ−１の緩和度ｒ１を有するという事実を意味することを意図している。本願により、当業者はこの診断的有効性を試験する適した技術にそれらを利用できるようにする。
【０１７３】
バイオベクターのうち本明細書において上記に既に言及したものに加え、特に以下を言及する：
１）以下に記載のバイオベクター：文献国際公開第０１／９７８５０号パンフレット（ＶＥＧＦ受容体およびアンギオポエチンを標的化する）、米国特許第６，３７２，１９４号明細書（ポリヒスチジンなどのポリマー）、国際公開第２００１／９１８８号パンフレット（フィブリン標的化ポリペプチド）、国際公開第０１／７７１４５号パンフレット（インテグリン標的化ペプチド）、国際公開第０２／２６７７６号パンフレット（αｖβ３インテグリン標的化ペプチド）、国際公開第０３／０６２１９８号パンフレット（ＭＭＰメタロプロテイナーゼ標的化ペプチド）、国際公開第９９／４０９４７号パンフレット（例えば、Ｒ−Ｘ−Ｋ−Ｘ−ＨおよびＲ−Ｘ−Ｋ−Ｘ−Ｈ、またはＴｉｅ−１および２受容体を含むＫＤＲ／Ｆｌｋ−ｌ受容体を標的化するペプチド）、国際公開第０２／０６２８１０号パンフレットおよびミュラー（Ｍｕｅｌｌｅｒ）ら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ，２００２，３９６６−３９７３（シアリル・ルイス・グリコシド）、国際公開第０２／４００６０号パンフレット（アスコルビン酸などの抗酸化剤）、米国特許第６，５２４，５５４号明細書（タフトシンの標的化）、国際公開第０２／０９４８７３号パンフレット（Ｇタンパク質受容体ＧＰＣＲ、特に、コレシストキニンの標的化）、米国特許第６，４８９，３３３号明細書（インテグリンアンタゴニストおよびグアニジン模倣物の組み合わせ）、米国特許第６，５１１，６４８号明細書（キノロン標的化αｖβ３またはαｖβ５）、米国特許第Ａ２００２／０１０６３２５号明細書、国際公開第０１／９７８６１号パンフレット（ベンゾジアゼピンおよび類似体標的化インテグリン）、α５β１を含むインテグリンを標的化するためのバイオベクター、国際公開第０１／９８２９４号パンフレット（イミダゾールおよび類似体）、国際公開第０１／６０４１６号パンフレット（ＭＭＰ阻害剤、特に、ヒドロキサメート）、国際公開第０２／０８１４９７号パンフレット（ＲＧＤＷＸＥなどのαｖβ３標的化ペプチド）、国際公開第０１／１０４５０号パンフレット（ＲＧＤペプチド）、米国特許第６，２６１，５３５号明細書（抗体または抗体フラグメント（ＴＮＦまたはＩＬによって誘導可能なＦＧＦ、ＴＧＦｂ、ＧＶ３９、ＧＶ９７、ＥＬＡＭ、ＶＣＡＭ））、米国特許第５７０７６０５号明細書（その標的との相互作用によって修飾された分子を標的化する）、国際公開第０２／２８４４１号パンフレット（アミロイド沈着標的化薬剤）、国際公開第０２／０５６６７０号パンフレット（カテプシン切断ペプチド）、米国特許第６，４１０，６９５号明細書（ミトキサントロンまたはキノン）、米国特許第６，３９１，２８０号明細書（上皮標的化ポリペプチド）、米国特許第６，４９１，８９３号明細書（ＧＣＳＦ）、米国特許第２００２／０１２８５５３号明細書、国際公開第０２／０５４０８８号パンフレット、国際公開第０２／３２２９２号パンフレット、国際公開第０２／３８５４６号パンフレット、国際公開第２００３／６０５９号パンフレット、米国特許第６，５３４，０３８号明細書、国際公開第９９／５４３１７号パンフレット（システインプロテアーゼ阻害剤）、国際公開第０１７７１０２号パンフレット、ＥＰ１１���１３７７、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ（５２，ｎ°２，１７９；増殖因子ＰＤＧＦ、ＥＧＦ、ＦＧＦなど）、Ｔｏｐｉｃｓ  ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２２２，Ｗ．クラウス・スプリンガー（Ｗ．Ｋｒａｕｓｅ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ），Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１１，２００３，１３１９−１３４１；αｖβ３標的化テトラヒドロベンズアゼピノン誘導体）。
２）血管形成阻害剤、特に臨床治験または既に市販されている阻害剤、具体的には
・ＳＵ１０１、ＳＵ５４１６、ＳＵ６６６８、ＺＤ４１９０、ＰＴＫ７８７、ＺＫ２２５８４６、アザ環式化合物などのＦＧＦＲまたはＶＥＧＦＲ受容体に関与する血管形成阻害剤（国際公開第００／２４４１５６号パンフレット、国際公開第０２／０５９１１０号パンフレット）；
・ＢＢ２５−１６（マリマスタット）、ＡＧ３３４０（プリノマスタット）、ソリマスタット、ＢＡＹ１２−９５６６、ＢＭＳ２７５２９１、メタスタット、ネオバスタットなどのＭＭＰに関与する血管形成阻害剤；
・ＳＭ２５６、ＳＧ５４５、ＥＣ−ＥＣＭ遮断付着分子などのインテグリンに関与する血管形成阻害剤（ＥＭＤ  １２１−９７４、またはバイタクシン）；
・カルボキシアミドトリアゾール、ＴＮＰ４７０、スクアラミン、ＺＤ０１０１などの抗血管形成作用のより間接的な機構を伴う医薬製品；
・文献国際公開第９９／４０９４７号パンフレットに記載の阻害剤、ＫＤＲ受容体に対する結合に極めて選択的なモノクローナル抗体、粗的スタチン類似体（国際公開第９４／００４８９号パンフレット）、セレクチン結合ペプチド（国際公開第９４／０５２６９号パンフレット）、増殖因子（ＶＥＧＦ、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＮＦ、ＭＣＳＦ、インターロイキン）；Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，１９９９，２０に記載のＶＥＧＦ標的化バイオベクター；
・文献国際公開第０２／０６６５１２号パンフレットの阻害ペプチド。
３）次の受容体を標的化することが可能なバイオベクター：ＣＤ３６、ＥＰＡＳ−１、ＡＲＮＴ、ＮＨＥ３、Ｔｉｅ−１、１／ＫＤＲ、Ｆｌｔ−１、Ｔｅｋ、ニューロピリン−１、エンドグリン、プレイオトロフィン、エンドシアリン、Ａｘｌ．、ａｌＰｉ、ａ２ｓｓｌ、ａ４Ｐ１、ａ５ｐｌ、ｅｐｈＢ４（エフリン）、ラミニンＡ受容体、ニュートロフィリン（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｉｎ）６５受容体、ＯＢ−ＲＰレプチン受容体、ＣＸＣＲ−４ケモカイン受容体（および文献国際公開第９９／４０９４７号パンフレットに記載の他の受容体）、ＬＨＲＨ、ボムベシン／ＧＲＰ、ガストリン受容体、ＶＩＰ、ＣＣＫ、Ｔｌｒ４。
４）チロシンキナーゼ阻害剤型のバイオベクター。
５）（１）ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体に対するモノクローナル抗体のｆａｂフラグメント（アブシキシマブ（Ａｂｃｉｘｉｍａｂ））（レオプロ（ＲｅｏＰｒｏ）ＴＭ）（２）エプチフィバチド（ｅｐｔｉｆｉｂａｔｉｄｅ）（インテグリン（Ｉｎｔｅｇｒｉｌｉｎ）ＴＭ）およびチロフィバン（ｔｉｒｏｆｉｂａｎ）（アグラスタット（Ａｇｇｒａｓｔａｔ）ＴＭ）などの静脈注射される小さなペプチドおよびペプチド模倣分子、から選択されるＩＩｂ／ＩＩＩａの阻害剤の既知の阻害剤。
６）フィブリノゲン受容体アンタゴニストであるペプチド（ＥＰ４２５２１２）、ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体リガンド、フィブリノゲンリガンド、トロンビンリガンドであるペプチド、アテローム性プラーク、血小板、フィブリンを標的化することが可能なペプチド、ヒルディンに基づくペプチド、ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体を標的化するグアニンに基づく誘導体。
７）抗トロンビン作用、抗血小板凝集作用、アテローム性動脈硬化症に対する作用、再狭窄に対する作用、および／または抗凝結作用を伴う他のバイオベクターまたは医薬製品として当業者に既知のバイオベクターの生物学的に活性なフラグメント。
８）αｖβ３を標的化し、米国特許第６，５３７，５２０号明細書において非ＨＲ  ＤＯＴＡとの併用が記載され、以下から選択される他のバイオベクターまたはバイオベクターの生物学的に活性なフラグメント：マイトマイシン、トレチノイン、リボムスチン（ｒｉｂｏｍｓｔｉｎ）、ゲムシタビン、ビンクリスチン、エトポシド、クラドリビン、ミトブロニトール、メトトレキサート、ドキソルビシン、カルボコン、ペントスタチン、ニトラクリン（ｎｉｔｒａｃｒｉｎｅ）、ジノスタチン、セトロレリクス、レトロゾール、ラルチトレキセド、ダウノルビシン、ファドロゾール、フォテムスチン、チマルファシン、ソブゾキサン、ネダプラチン、シタラビン、ビカルタミド、ビノレルビン、ベスナリノン、アミノグルテチミド、アムサクリン、プログルミド、エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ）酢酸塩、ケタンセリン、ドキシフルリジン、エトレチナート、イソトレチノイン、ストレプトゾシン、ミヌスチン（ｍｉｎｕｓｔｉｎｅ）、ビンデシン、フルタミド、ドロゲニル（ｄｒｏｇｅｎｉｌ）、ブトシン（ｂｕｔｏｃｉｎ）、カルモフール、ラゾキサン（ｒａｚｏｘａｎｅ）、シゾフィラン、カルボプラチン、ミトラクトール、テガフール、イホスファミド、プレドニムスチン（ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、ピシバニル、レバミソール、テニポシド、インプロスルファン、エノシタビン、リスリド、オキシメトロン、タモキシフェン、プロゲステロン、メピチオスタン、エピチオスタノール、ホルメスタン、α−インターフェロン、α２−インターフェロン、β−インターフェロン、γ−インターフェロン、コロニー刺激因子−１、コロニー刺激因子−２、デニロイキンジフチトクス、インターロイキン−２、黄体形成ホルモン放出因子。
９）特定のタイプの癌を標的化するいくつかのバイオベクター、例えば、直腸結腸癌に関連するＳＴ受容体、またはタキキニン受容体に関連するＳＴ受容体を標的化するペプチド。
１０）ホスフィン型化合物を使用するバイオベクター。
１１）Ｐ−セレクチン、Ｅ−セレクチンを標的化するためのバイオベクター（例えば、モリカワ（Ｍｏｒｉｋａｗａ）ら、１９９６、９５１に記載の８アミノ酸ペプチド）
１２）アネキシンＶおよび任意のその誘導体またはアポトーシス方法を標的化するバイオベクター。
１３）ファージディスプレイなどの標的化技術によって得られた、場合により、非天然のアミノ酸で修飾された任意のペプチド（ｈｔｔｐ／／ｃｈｅｍｌｉｂｒａｒｙ．ｂｒｉ．ｎｒｃ．ｃａ）、例えば、ファージディスプレイライブラリー：ＲＧＤ、ＮＧＲ、ＣＲＲＥＴＡＷＡＣ、ＫＧＤ、ＲＧＤ−４Ｃ、ＸＸＸＹ＊ＸＸＸ、ＲＰＬＰＰ、ＡＰＰＬＰＰＲから誘導されるペプチド。
１４）特に、文献国際公開第２００３／０１４１４５号パンフレットに記載のアテローム性プラークを標的化するための他の既知のペプチドバイオベクター。
１５）ビタミン。
１６）ホルモンおよびステロイドを含むホルモン受容体のためのリガンド。
１７）オピオイド受容体標的化バイオベクター。
１８）ＴＫＩ受容体標的化バイオベクター。
１９）ＬＢ４およびＶｎＲアンタゴニスト。
２０）ニトロイミダゾールおよびベンジルグアニジン化合物
２１）Ｔｏｐｉｃｓ  ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第２２２巻、２６０〜２７４頁、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ  ｏｆ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｂａｓｅｄ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｍｅｔａｌｌｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓにおいて想起されるバイオベクター、特に
・腫瘍において過剰発現されるペプチド受容体（例えば、ＬＨＲＨ受容体、ボンベシン／ＧＲＰ、ＶＩＰ受容体、ＣＣＫ受容体、タキキニン受容体）を標的化するためのバイオベクター、特に、ソマトスタチン類似体またはボンベシン類似体、場合によりグリコシル化オクトレオチド由来ペプチド、ＶＩＰペプチド、α−ＭＳＨ、ＣＣＫ−Ｂペプチド；
・環状ＲＧＤペプチド、フィブリン−α鎖、ＣＳＶＴＣＲ、タフトシン、ｆＭＬＦ、ＹＩＧＳＲ（受容体：ラミニン）から選択されるペプチド。
２２）多糖およびオセ誘導体（ｏｓｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ）、Ｇｌｕ標的化誘導体。
２３）スマート（ｓｍａｒｔ）型の製品に使用されるバイオベクター、例えば、生化学的局所反応の場合にｃｌｉｖａｂｌｅなバイオベクター、すなわち酵素。
２４）心筋生存性のマーカー（テトロホスミンおよびヘキサキス−２−メトキシ−２−メチルプロピルイソニトリル）。
２５）糖および脂肪代謝のトレーサー。
２６）神経伝達物質受容体のためのリガンド（Ｄ、５ＨＴ、Ａｃｈ、ＧＡＢＡ、ＮＡ受容体）。
２７）オリゴヌクレオチド。
２８）チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、Ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ、Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ、ｌｍａｔｉｎｉｂ。
２９）腫瘍を標的化することが知られている抗体。
【０１７４】
好適には、使用されるバイオベクターは膜標的を有するであろうが、細胞内の標的、例えば、プラーク変性による血栓のリスクを抑えることが知られており、さらにそのうちのいくつかにはＭＭＰ産生を抑えることが知られているＰＰＡＲ受容体（ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体）活性化因子を有するバイオベクターが使用されてもよい。表面または正常組織あるいは病理学的組織に存在するプロテアーゼおよび細胞外成分を標的化することもできる。
【０１７５】
当業者は、本願（提示した活性試験）および先行技術の知られたスクリーニング技術（例えば、国際公開特許第０２／０８７６３２に記載された方法、ＣＥＲＥＰ８０テスト）に基づいて、ＨＲバイオベクター化合物の診断的または治療的有効性（特に上記バイオベクターに相当する特許に記載のバイオベクターを用いて）をスクリーニングすることができる。
【０１７６】
したがって、本発明のＨＲバイオベクター剤は以下に関連しているか、または関連するかもしれない薬剤とは異なっている：
ａ）第１に、キレート
低緩和度（ＤＴＰＡ、ＤＯＴＡ、ＤＯ３Ａ、ＢＯＰＴＡ骨格鎖、等）を有するキレートか、または、少なくとも２０、３０、３５、４０、５０、６０、７０、１００、１５０ｍＭｏｌ‐Ｇｄ−１の緩和度ｒ１および／またはｒ２（例えば、シクロデキストリン等を有する、高分子、第２〜第５世代のデンドリマー、網内のキレート、）のキレートであり、特に、本明細書の初めに言及した記載の非ＨＲ誘導体（および、例えば、ペプチドへの結合、重合化、架橋化、グラフト化によって緩和度を増大させるための、これら非ＨＲ誘導体由来の化合物、またはタンパク質分子、リポソーム、ミセル、ポリマー）、
ｂ）第２に、本願で言及した病理学的プロセスに関連する任意のバイオベクター。
【０１７７】
別の態様によれば、本発明は上記のＨＲバイオベクター化合物を含んだＭＲＩ造影剤に関し、常磁性金属イオンが原子番号２１〜２９、４２〜４４、５８または７０を有し、好適にはガドリニウムである。
【０１７８】
別の態様によれば、本発明は上記のバイオベクター化合物を含んだＸ線画像またはＣＴ画像用造影剤に関し、重金属イオンが原子番号２１〜３１、３９〜５０、５６〜８０、８２、８３または９０を有する。
【０１７９】
別の態様によれば、本発明は上記のＨＲバイオベクター化合物を含んだ放射性薬剤に関し、ＨＲキレートは当業者には知られた放射性核種または放射性ハロゲン、典型的にはガドリニウム、テクネシウム、クロム、ガリウム、インジウム、イットリビウム、レニウム、ランタニウム、イットリウム、ジスプロシウム、銅、等でキレート化される。放射性薬剤は、１８Ｆ（Ｖａｉｄｙａｎａｔｈａｎ、Ｇ．およびＺａｌｕｔｓｋｙ、Ｍ．Ｒ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１９９０、１、２６９〜２７３頁；Ｖａｉｄｙａｎａｔｈａｎ、Ｇ．およびＺａｌｕｔｓｋｙ、Ｍ．Ｒ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．１９９２、１９、２７５−２８１；Ｖａｉｄｙａｎａｔｈａｎ、Ｇ．およびＺａｌｕｔｓｋｙ、Ｍ．Ｒ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１９９４、５、３５２−３６４；Ｖａｉｄｙａｎａｔｈａｎ、Ｇ．およびＺａｌｕｔｓｋｙ、Ｍ．Ｒ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．１９９５、２２、７５９−７６４；Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅ−Ｇｏｕｌｄｅｎｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍｌｅｔｔ．２０００、１０、１５０１−１５０３）とＰＥＴ型の技術を用いて調製してもよい。
【０１８０】
別の態様によれば、本発明は上記薬剤を用いた、放射性薬剤による診断の方法および放射性薬剤による治療の方法に関する。
【０１８１】
別の態様によれば、本発明は診断または放射性薬剤の組成物を調製するための上記のような薬剤の使用に関する。本発明の診断薬および放射性薬剤組成物は抗癌指示薬として、米国特許出願第２００２／００９０３４２号、米国特許出願第２００２／００９８１４９号および国際特許出願第０２／０５５１１１号に記載されているように使用することができる。
【０１８２】
ＭＲＩによる診断のためには、通常は食塩水を用いた注入による静脈内投与が典型的には１〜５００μｍｏｌＧｄ／の投与量で実行される。
【０１８３】
放射性薬剤による診断のためには、通常は食塩水を用いた注入による静脈内投与が典型的には体重７０ｋｇ当たり１〜１００ｍＣｉ、好適には５〜５０ｍＣｉの投与量で行われる。
【０１８４】
Ｘ線造影剤として使用する場合、重原子の濃度は典型的には０．１Ｍ〜５Ｍであり、静脈内投与当たりの濃度は約０．５〜１．５ｍｍｏｌ／ｋｇである。
【０１８５】
別の態様によれば、本発明は光学画像用の組成物を調製するための上記のＨＲキレートの使用にも関する。
【０１８６】
本発明は病理学的領域を標的することができる本発明の常磁性金属を含んだ化合物の合成、その患者への投与、およびＭＲＩによる画像化を含んだ、画像化の方法にも関する。本発明は病理学的領域を標的することができる本発明の放射性薬剤の合成、その患者への投与、およびＳＰＥＣＴまたはプレーナガンマ線シンチグラフィ、またはポジトロン放射断層撮影による画像化を含む画像化の方法にも関する。
【０１８７】
定義
「塩」という用語は、例えば、ＣＲＣ  ＨＡＮＤＢＯＯＫ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ、６５版、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、Ｆｌａ．、１９８４に定められている。「薬学的に受容可能な塩」とは、酸性塩または塩基性塩、例えば、無機塩または有機塩、アミンなどの塩基性残基の酸性塩、カルボン酸（塩の例：塩化水素、臭化水素、硫黄、スルファミン酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸ステアリン酸乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、グルタミン酸）などの酸残基のアルカリ、メグルミンの塩または特にリジンの塩を形成することによって修飾される本発明の化合物の誘導体をいう。
【０１８８】
薬学的に受容可能な投与量とは治療的診断的使用に適した投与量をいう。
【０１８９】
「アルキル」という用語は飽和または不飽和脂肪族炭化水素基を含む。「Ｃ１‐Ｃｎアルキル」にはＣ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、…Ｃｎアルキル基、例えば、：メチル、エチル、ｎ‐プロピル、ｉ‐プロピル、ｎ‐ブチル、ｓ‐ブチル、ｔｅｒｔ‐ブチル、ｎ‐ペンチルを含む。ハロアルキルの例にはトリフロロメチル、トリクロロメチルおよびペンタフルオロエチルを含む。
【０１９０】
「アルカノイル」という用語は、特に、ホルミル、カルボニル基で末端位を置換した上記に定めたようなアルキル、例えば、アセチル、プロパノイ、ブタノイル、ペンタノイル、等を含む。
【０１９１】
「アルケニル」という用語は少なくとも１つの炭素‐炭素二重結合を有する直鎖または分枝炭素鎖を意味する。
【０１９２】
「アリルアルキル」という用語は
【０１９３】
「アルキニル」という用語は炭素‐炭素三重結合を有する直鎖または分枝炭素鎖を意味する。
【０１９４】
「アルキルアミノ」という用語は、モノアルキルアミノ（メチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、ｔｅｒｔ‐ブチルアミノ、等）およびジアルキルアミノ（ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、メチルプロピルアミノ、等）を含むＮ‐置換アルキルをいう。
【０１９５】
「ハロ」という用語は基１７族の元素、特にフルオロ、クロロ、ブロモ、イオドをいう。
【０１９６】
「アルキルエニル」という用語はメチレン、エチレンまたは２‐メチルプロピレンなどの直鎖または分枝状の炭素鎖をいう。「ポリオキシアルキレン」という用語はポリオキシエチレンまたはポリオキシプロピレンなどの化合物をいう。
【０１９７】
「天然アミノ酸」という用語はグリシン、アラニン、またはメチオニンなどのタンパク質合成に関与する２０個のアミノ酸をいう。
【０１９８】
「アルコキシ」は特に、メトキシ、エトキシ、ｉ‐プロキシ‐プロキシ、ｎ‐ブトキシ、ｓ‐ブトキシ、ｔｅｒｔ‐ブトキシ、ｎ‐ペントキシ、ｎ‐ペントキシ、ｓ‐ペントキシを含む。シクロアルキルは特に、シクロプロキシ、シクロブチル、シクロペンチルを含む。「炭素環式化合物」は単環、二環、三環を含み、各環は不飽和または芳香族であり、特に、シクロプロピルシクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、アダマンチル、シクロオクチル、［３．３．０］ビシクロオクタン、［４．３．０］ビシクロノナン、［４．４．０］ビシクロデカン、［２．２．２］ビシクロオクタン、フルオレニル、フェニル、ナフチル、インダニル、アダマンチルがある。アルカリルには、特に、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の炭素原子を含んだアルキル基を有するアリル基がある。
【０１９９】
ヘテロシクロアルキルには、特に、ヘテロ環を有する１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の炭素原子を含んだアルキル基がある。５‐、６‐または７‐員の安定した単環系のヘテロ環は飽和、部分的に不飽和、または不飽和であり得、炭素原子およびＮ、ＮＨ、ＯおよびＳから選択される１、２、３または４個のヘテロ原子を含む。ヘテロ環は、特に、米国特許第６５３７５２０号に言及されたものを含み、特に、ピリジニル、フラニル、チェニル、ピロリル、ピラゾリル、ピロリジニル、イミダゾリル、インドイル、ベンゾイミダゾリル、１Ｈ‐インダゾリル、オキサゾリジニル、ベンゾトリアゾリル、ベンズイソオキサゾリル（ｂｅｎｚｉｓｏｘａｚｏｌｙｌ）、オキシンドリル、ベンゾキサゾリニル、ベンズオキサゾリニル（ｂｅｎｚｏｘａｚｏｌｉｎｙｌ）、およびイサチノイル（ｉｓａｔｉｎｏｙｌ）がある。
【０２００】
本発明は、特に定めのない限り、ジアステレオマー、ラセミ、特にシス‐トランス、および記載の化合物のＬ‐Ｄ形態をすべて包含する。
【０２０１】
ここで、本発明者らによって得られた化合物の実施例を記載する。以下の式を有する多金属化合物を特に記載する：
2007527857.tif 000092
【０２０２】
多金属化合物に使用されるものと類似するかまたは同一の「ブリック（ｂｒｉｃｋ）」を用いて、本発明者らによって単金属化合物も得られたことは明白である。
【０２０３】
実施例１〜１０は必要に応じてリンカーＬと結合されたＨＲ  Ｃｈ信号  成分を記載している。以下を指定する：
Ｄ’＝Ｄ‐Ｈであり、Ｄは式（Ｅ）の一部を形成するラジカルであり、Ｄ’は遊離アミン官能基を有する同式の中間物である。
分枝ＡＡＧ１ＡＡ２８ＢＲおよびＡＡＧ１ＡＡ２９  Ｂｒの意味。
【０２０４】
分枝ＡＡＧ１ＡＡ２８ＢＲは式
2007527857.tif 000093
（Ｑ１＝Ｑ２＝ＣＨ２（ＣＨＯＨ）４ＣＨ２ＯＨおよびＸ＝Ｂｒ）
を有する。
【０２０５】
したがって、Ｒ１は
2007527857.tif 000094
を表す。
【０２０６】
ＡＡＧ１ＡＡ２９Ｂｒという分枝は
2007527857.tif 000095
（Ｑ１＝ＣＨ２ＣＨＯＨＣＨ２ＯＨおよびＱ２＝ＣＨ２（ＣＨＯＨ）４ＣＨ２ＯＨおよびｘ＝Ｂｒ）
を有する。
【０２０７】
実施例１２〜１６は次のバイオベクター成分を記載する：葉酸誘導体（実施例１１）、ＰＳ誘導体（実施例１２および１３）、ペプチド（実施例２３）。
ＨＰＬＣカラムは以下の特性を有する：
Ｓｕｐｅｒｓｐｈｅｒｅ  ６０Ａ  ＲＰ‐ＳＥＬＥＣＴ  Ｂ（登録商標）４μｍ、（１２５×４．６ｍｍ）（メルク（登録商標））
シンメトリー（登録商標）Ｃ１８  １００Å；５μｍ；（２５０
×４．６ｍｍ）（Ｗａｔｅｒｓ（登録商標））
シンメトリー（登録商標）Ｃ１８  ５μ、１００Å（１００×４．６ｍｍ）（Ｗａｔｅｒｓ（登録商標））
Ｈｙｐｅｒｃａｒｂ（登録商標）５μｍ  ２５０Å；（２５０×４．６ｍｍ）（ｈｙｐｅｒｓｉｌ（登録商標））
Ｘ‐ＴＥＲＲＡ  ＭＳ（登録商標）Ｃ１８  ５μ  （２５０×４．６ｍｍ）（Ｗａｔｅｒｓ（登録商標））
Ｌｉｃｒｏｓｐｈｅｒ（登録商標）ＲＰ１８  １００Å、５μｍ、（２５０×４．６）（メルク（登録商標））
ＳＥＣ（立体排除（ｓｔｅｒｉｃ  ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ）クロマトグラフィ）：参照ＯＨ  Ｐａｃｋ  ＳＢ‐ＨＱに基づき、ポリヒドロキシメタクリラート・ゲルを含んでいるＳｈｏｄｅｘ（登録商標）（日本）によって販売されている連続４カラム（ｄ＝８ｍｍｌ＝３０ｃｍ）を用いて実行される。Ｐｕｌｌｕｌａｎ（登録商標）を用いて決定されるこのカラムの排除限界は連続して：１０６ＫＤ（ＳＢ‐８０４）；１０５ＫＤ（ＳＢ‐８０３）；１０４ＫＤ（ＳＢ‐８０２．５）；１０４  ＫＤ（ＳＢ８０２．５）；溶離剤：７０／３０ｖ／ｖＮａＣｌ水溶液（０．１６Ｍ）／ＣＨ３ＣＮ、流速０．８ｍｌ／分。Ｔ＝３０°Ｃ：である。
【０２０８】
実施例１
式Ｖ（ｘ＝２）の化合物であって、‐Ｓ１‐Ｔ’‐Ｓ２‐（Ｓ１＝Ｓ２＝（ＣＨ２）２）は
2007527857.tif 000096
であり、Ｚ１は
2007527857.tif 000097
であり、およびＺ２は‐（‐ＣＨ２）２‐ＣＯＯＨである。
【０２０９】
ａ）
ＣＨ３ＣＮ５０ｍにメチル２‐ブロモ‐４‐（４‐ニトロフェニル）ブチラートｌ４０．４ｇを入れた溶液を、懸濁液ＣＨ３ＣＮ １４０ｍｌに１、４、７、１０‐テトラアザシクロドデカン２０ｇを入れた懸濁液に段階的に添加する。２５°Ｃで２４時間攪拌後、溶液を濾過し、ＣＨ３ＣＮで洗浄し、次いでおよびジエチルエーテル２００ｍｌで洗浄する。濾過後、水素酸塩形態の生成物をＣＨ３ＣＮ ２００ｍｌから結晶化する。ｍ＝４２ｇ；Ｍｐ＝１７０°Ｃ。
ＨＰＬＣ：
Ｌｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒ  Ｃ１８（登録商標）カラム
水‐ＫＨ２ＰＯ４、０．０１Ｍ／ＣＨ３ＣＮ
ｔｒ：２．５分
【０２１０】
ｂ）Ｙ’’’Ｂｒとの反応＝
2007527857.tif 000098
【０２１１】
段階ａ）で得られた化合物２０ｇおよびＮａ２ＣＯ３ ２０ｇを含むＣＨ３ＣＮ ４００ｍｌの懸濁液を１５分間、還流温度にした後、メチル２‐ブロモグルタラート４０ｇを段階的に添加する。還流しながら２４時間撹拌し、次いで２５℃で一晩撹拌し、該媒体を濾過し、次いでこの溶媒をエバポレートし、残渣をＣＨ２Ｃｌ２ １００ｍｌに希釈する。この有機相を水で洗浄し、次いで硫酸ナトリウムで洗浄してから、減圧下でエバポレーションして溶媒を脱離する。残渣を最小容量１Ｍの塩酸水溶液に希釈する。この溶液を同量のジエチルエーテルで洗浄し、次いでＮａＨＣＯ３でｐＨ４にした後、ジエチルエーテルで抽出する。有機相のエバポレーション後、残渣をシリカを用いて（メルク（登録商標）Ｓｉ６０）クロマトグラフィによって精製し、ヘプタン／ＣＨ３ＣＯＯＣ２Ｈ５混合物（４０／６０ｖ／ｖ、次いで３０／７０ｖ／ｖ）で希釈する；ｍ＝８ｇ。
ＨＰＬＣ：
シンメトリー（登録商標）Ｃ１８  カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ：２２〜２９分
【０２１２】
ｃ）メチルエステル基の加水分解
段階ｂ）により得られた化合物１０ｇを１２Ｎの塩酸水溶液２０ｍｌに希釈し、混合物を２４時間還流する。冷却後、溶液をエバポレーションし、残渣を水に希釈する。真空下で濃縮後、７．７ｇの粗生成物が得られる。
【０２１３】
ｄ）ガドリニウムと上記化合物との錯体形成
上記粗生成物５ｇを３０ｍｌのＨ２Ｏに入れた溶液を、５ＭのＮａＯＨを添加した後Ｇｄ２Ｏ３ １．２ｇ添加することによってｐＨ５．２にする。この媒体を８０℃で２時間半加熱し、その間、６Ｍの塩酸水溶液を添加してｐＨを５．２〜５．５に維持する。２５℃まで冷却後、この媒体を１０°ＣのＣ２Ｈ５ＯＨ ２５０ｍｌに入れる。Ｃ２Ｈ５ＯＨで洗浄後に得られる沈澱物を乾燥させる；ｍ＝５ｇ。
ＨＰＬＣ：
シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ２．８／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ：３１〜３４分
【０２１４】
ｅ）ニトロ基の還元
ナトリウム塩の形態のガドリニウム錯体５ｇを水７０ｍｌに希釈し、加圧下で水素化する（ｐａｌｌａｄｉｕｍ−ｏｎ−ｃｈａｒｃｏａｌ、１０％、２５°Ｃ、水素圧３´１０５Ｐａで６時間）。５ｇの生成物がナトリウム塩の形態で得られる。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８  カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ２．８／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ：１７〜２１分
【０２１５】
実施例２
式、ＩＩ’２（ｘ＝２）の化合物。
‐ＧＮＨ‐は
2007527857.tif 000099
であり、
Ｒは
2007527857.tif 000100
（Ｑ１＝Ｑ２＝ＣＨ２（ＣＨＯＨ）４ＣＨ２ＯＨおよびＸ＝Ｂｒ）
であり、
Ｄ’は
2007527857.tif 000101
（ｎ＝２）
である。
【０２１６】
ａ）トリアジン環の縮合
２、４、６‐トリクロロ‐１、３、５−トリアジン０．６６ｇをジオキサン９ｍｌに入れた溶液を、撹拌しながら、ｐＨ＝７．７のＮａＨＣＯ３の存在下で水７５ｍｌに溶解した実施例１の段階ｅ）の化合物７．６ｇの溶液に添加する。周囲温度で６時間攪拌後、反応媒体を一晩４°Ｃで保管する。
質量スペクトル：Ｍｏｄｅ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝９５０（ｚ＝２）
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８  カラム；水‐ＴＦＡ
ｐＨ３／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ：４１分
【０２１７】
ｂ）アミンＲ‐ＮＨ２の結合
ｐＨ＝６．６５アミンＲ‐ＮＨ２ ３０．０６ｇを、周囲温度で強力に攪拌しながら段階ａ）の溶液に添加する。ｐＨ＝６．２になるように０．２ｍｌの６ＮのＨＣｌを添加する。ＮＨＳ ０．４７ｇ、次いでＥＤＣＩ ５．８ｇを反応媒体に添加する。周囲温度で３時間攪拌後、１体積の水を反応媒体に添加し、次いで混合物を１ＫＤのカットオフ閾値でポリエーテルスルホン膜（Ｐａｌｌ（登録商標））で限外濾過し、その濃縮水を体積１００ｍｌまでエバポレーションし、次いで低音条件下でＥｔＯＨ １０００ｍｌに入れる。得られる質量＝２９ｇ。
質量スペクトル：Ｍｏｄｅ  Ｅｓ−ｍ／ｚ＝２１４１．６（ｚ＝４）
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８  カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ２．８／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ：２２分
【０２１８】
ｃ）ジアミンの導入
２‐２’−（エチレンジオキシ）ビスエチルアミン４５ｍｌをＤＭＳＯ １７３ｍｌに６５°Ｃで希釈する。事前に調製した中間物を添加する。６５°Ｃで１時間、周囲温度で１時間攪拌後、反応媒体をエタノール１７３０ｍｌに入れる。得られた沈澱物を濾過し、エタノールで洗浄する。カットオフ閾値１ＫＤの膜を用いた限外濾過によって精製されるように、得られた生成物を水７５０ｍｌに希釈する。
質量スペクトル：Ｍｏｄｅ  ＥＳ‐ｍ／ｚ＝１７３５．２（ｚ＝５）
ＨＰＬＣ：Ｌｉｃｒｏｓｐｈｅｒ（登録商標）ＲＰ１８カラム；水／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ：２１分
【０２１９】
実施例３
下記式である化合物：
2007527857.tif 000102
（ｘ、‐ＧＮＨ‐、Ｒ、Ｑ１、Ｑ２、Ｘ、Ｄ’およびｎは実施例２で定めたものであり、Ｄ‐Ｈ＝Ｄ’）
【０２２０】
実施例２の段階ｃ）の化合物１．３８ｇ（１．５９×１０−４ｍｏｌ）を７０°Ｃでジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ） ３．５ｍｌに希釈する。反応媒体を周囲温度にする。３、４‐ジエトキシ‐３‐シクロブテン‐１、２‐ジオン０．１３５ｇをエタノール０．４ｍｌと混合し、得られた溶液を１回で反応媒体に導入する。トリエチルアミン３４μｌを添加し、反応媒体を周囲温度で５時間撹拌する。エタノール２００ｍｌを用いて混合物を沈澱させ、周囲温度で一晩撹拌を続ける。沈澱物を濾過して、真空下で乾燥させる。１．２９ｇの生成物が分離される。
ＨＰＬＣ：Ｓｕｐｅｒｓｐｈｅｒ  ＲＰ‐ＳＥＬＥＣＴ  Ｂカラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ３／ＣＨ３ＣＮ；Ｔｒ：７．６０分
質量スペクトル：Ｍｏｄｅ  ＥＳ‐ｍｍ／ｚ＝２１９９．８（ｚ＝４）
【０２２１】
実施例４
式ＶＩＩ１（ｘ＝２）の化合物。
【０２２２】
ａ）
エステルメチル２‐ブロモ‐４‐ニトロフェニルブチラート１０２ｇをＣＨ３ＣＮ １００ｍｌに入れた溶液を、強塩基形態のアニオン交換樹脂（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ（登録商標）ＩＲＡ４５８） ９１０ｍｌ存在下で３、６、９、１５‐テトラアザビシクロ［９．３．１．］ペンタデカ‐１（１５）、１１、１３‐トリエン７０ｇをＣＨ３ＣＮ ８００ｍｌ入れた懸濁液に添加する。２５℃で３日間攪拌後、樹脂を濾過およびエバポレーションし、得られたオイルを５ｋｇのシリカ（メルク（登録商標）、４０〜６０μｍ）のカラムを用いたクロマトグラフィによって精製し、ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ混合物（７０／３０ｖ／ｖ）で希釈する。３８ｇの生成物が得られる。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ  ３／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ：１５分
１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ｄ６‐ＤＭＳＯ、３０°Ｃ）：
δ（ｐｐｍ）：１６０．１（Ｃ１）；５３．８（Ｃ２、４）；４５‐４５．４‐４５．７（Ｃ５、７、８）；５１．３（Ｃ１０）；１６１．６（Ｃ１１）；１１９．３（Ｃ１２）；１１９．６（Ｃ１４）；１３７．６（Ｃ１３）；５１．７（Ｏ‐ＣＨ３）；１７２．８（Ｃ＝Ｏ）；６５．８（Ｃ‐Ｎ）；３１．０６‐３１．４５（ＣＨ２‐ＣＨ２）；１４９．６‐１２９．６‐１２２（Ａｒ）；１４５．６（Ａｒ‐ＮＯ２）。
【０２２３】
ｂ）Ｙ’’’Ｂｒとの反応＝
2007527857.tif 000103
Ｋ２ＣＯ３ ６．８ｇおよびエチル２‐ブロモグルタラート１３ｇを、ＣＨ３ＣＮ ７０ｍｌおよびジイソプロピルエーテル３５ｍｌに溶解した段階ａ）で得られた化合物７ｇの溶液に添加し、次いで、混合物を還流しながら２４時間撹拌する。濾過により塩を脱離し、溶液を濃縮後、得られたオイルをシリカ（メルク（登録商標）４０〜６３μｍ）を用いたクロマトグラフィによって精製し、ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン混合物（７０／３０ｖ／ｖ）で希釈する。６ｇの固体生成物が得られる。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８  カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ２．８／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ：３３分
【０２２４】
ｃ）エチルエステル基の加水分解
段階ｂ）で得られた化合物６ｇを１２ＮのＨＣｌ溶液１０ｍｌに添加し、次いで混合物をその還流温度で４８時間撹拌する。濾過および濃縮後、残渣をシラン化したシリカゲル（メルク（登録商標）０．０６３〜０．２０μｍ）を用いたクロマトグラフィによって精製し、Ｈ２Ｏ／ＣＨ３ＯＨ混合物で希釈すると２．８ｇの生成物が得られる。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８  カラム；水‐ＴＦＡｐＨ２．８／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ：１７〜１９分
【０２２５】
ｄ）上記化合物のガドリニウムキレート
２ｇのＧｄＣｌ３・６Ｈ２Ｏを段階ｃ）で得られた化合物３．９ｇのｐＨ５の溶液３５ｍｌに導入し、混合物を５０°Ｃで５時間保ち、必要に応じて（２Ｎ）ＮａＯＨ水溶液を添加してその間にｐＨを調製する。続いて、この媒体を濾過し、エバポレーションする。；弱酸性カチオン交換樹脂Ｃｈｅｌｅｘ（登録商標）１００（Ｂｉｏ‐Ｒａｄ）４ｇを得られたオイルに添加し、水４０ｍｌに溶解させる。２５°Ｃで２時間撹拌後、濾過により樹脂を除去し、溶液をエバポレーションすると４．５ｇの生成物が得られる。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８  カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ２．８／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ：１５．６−１８．７分
【０２２６】
ｅ）ニトロ基の還元
実施例１の段階ｅと同じ手順を適用することによって、段階ｄ）で得られる化合物４．５ｇから１、４ｇの生成物を得る。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８  カラム；水‐ＴＦ  ｐＨ２．８／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ：８．６〜９．５分
【０２２７】
実施例５
式Ｉ’’ａ２（ｘ＝２）の化合物。
‐ＧＮＨ‐は
2007527857.tif 000104
であり、
Ｒは
2007527857.tif 000105
（Ｑ１＝Ｑ２＝ＣＨ２（ＣＨＯＨ）４ＣＨ２ＯＨおよびＸ＝Ｂｒ）
であり、
Ｄ’は
2007527857.tif 000106
（ｎ＝２）
である。
【０２２８】
ａ）トリアジン環との縮合
実施例４の段階ｅ）で得られた化合物５を実施例２の段階ａ）のプロトコルに従って２、４、６‐トリクロロ‐１、３、５‐トリアジンと縮合させる。３時間反応させた後、炭酸水素ナトリウム溶液を用いてｐＨを７まで下げる。得られた溶液を冷蔵庫で一晩保管する。
質量スペクトル：Ｍｏｄｅ  ＥｓＳ−ｍ／ｚ＝８５２．７（ｚ＝２）；
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ２．９５／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝２０〜２５分
【０２２９】
ｂ）アミンＲ‐ＮＨ２の結合
式ＲＮＨ２のアミン１４ｇ、１‐（３‐ジメチルアミノプロピル）‐３‐エチルカルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣＩ） ２．６８ｇ、および（Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミジル）‐３‐スルホン酸の（ＮＨＳ）ナトリウム塩０．３２６ｇを、段階ａ）で得られた化合物４．２ｇを含む水‐ジオキサン溶液に添加する。実施例２の段階ｂ）に記載のプロトコルに従って結合させると、１８ｇの生成物が得られる
質量スペクトル：Ｍｏｄｅ  ＥＳ−ｍ／ｚ＝１０２４．９（ｚ＝６）
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ２．７／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝１３分
【０２３０】
ｃ）ジアミンの導入
２‐［２‐（２‐アミノエトキシ）エトキシ］エチルアミン２０ｍｌを、段階ｂ）で得られた化合物１８ｇを含んだジメチルスルホキシド７０ｍｌの溶液に導入する。混合物を５０℃で１時間撹拌する。２５℃まで冷却後、溶液をエタノール１０００ｍｌに入れ、形成された沈澱物を水４００ｍｌで希釈し、カットオフ閾値１ＫＤの膜で限外濾過する。濃縮水をエバポレーション後、得られた生成物を調製用のＨＰＬＣによって精製する。このようにして１．５ｇの固体が得られる。
質量スペクトル：Ｍｏｄｅ  ＥＳ−ｍ／ｚ＝２０８７．２（ｚ＝３）
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ２．７／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝１１分
【０２３１】
実施例６
式
2007527857.tif 000107
（ｘ、‐ＧＮＨ‐、Ｒ、Ｑ１、Ｑ２、Ｘ、Ｄ’およびｎは実施例５に定めたようなものであり、Ｄ‐Ｈ＝Ｄ’である）
の化合物。
【０２３２】
実施例５ｃで得られた化合物０．５ｇをＤＭＳＯ ２ｍｌに８０℃で溶解し、反応媒体を周囲温度にし、次いで、トリエチルアミン１７μｌおよび３、４‐ジエトキシ‐３‐シクロブテン‐１、２‐ジオン５９μｌを添加し、反応媒体を周囲温度で５時間撹拌する。反応媒体をエタノール２０ｍｌから沈澱させる。沈澱物を濾別し、エタノールで洗浄し、次いで減圧下で乾燥する。５００ｇの生成物が得られる。
質量スペクトル：
Ｍｏｄｅ  ＥＳ−ｍ／ｚ＝６３９０．５（ｚ＝１）
ＨＰＬＣ：Ｓｕｐｅｒｐｈｅｒｅ  ＲＰ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｂ（登録商標）カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ２．８／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝１５．９分
【０２３３】
実施例７
表２の方法による式ＶＩ（ｘ＝２）の化合物化合物。
ａ）式ＶＩ（１）の化合物（Ｂ＝エチル）
１３‐ブロモ‐３、６、９、１５‐テトラアザビシクロ［９．３．１．］ペンタデカ‐１（１５）、１１、１３‐トリエン２２ｇを焼いて石灰化したＫ２ＣＯ３ ４８ｇの存在下でＣＨ３ＣＮ ４４０ｍｌに導入し、混合物を８０℃で１時間維持した後、エチル２‐ブロモグルタレート９３ｇをＣＨ３ＣＮ １００ｍｌに入れた溶液を添加する。次いで、反応媒体を８０℃で２０時間撹拌し、周囲温度まで冷却、濾過し、その溶媒をエバポレーションする。残渣を１体積のジエチルエーテル存在下で１ＮのＨＣｌ水溶液５００ｍｌに希釈させる。有機相を分離後、水相をＮａＨＣＯ３で中和し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出する。水で洗浄後、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、有機相を濃縮し、残渣をシリカを用いたカラム（メルク（登録商標）５００ｇ、ｄ＝１０ｃｍ）で生成し、ＣＨ３ＣＯＯＣ２Ｈ５を用いて溶出する。ｍ＝３７ｇ。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ３／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝２６分
【０２３４】
ｂ）式ＶＩ（２）の化合物
３‐（ｔｅｒｔ‐ブチルオキシカルボニルアミノ）プロペン２３．５ｇ、トリエチルアミン２５．３ｍｌ、次いでトリフェニルホスフィン３．４ｇ、最後に酢酸パラジウム１．８ｇを、トルエ４００ｍｌに溶解させた段階ａ）で得られた化合物２８ｇに添加する。不活性雰囲気下で、一晩８０℃で加熱後、媒体をエバポレーションし、残渣を塩酸水溶液（ｐＨ＝１）で溶解する。水相を１体積のジエチルエーテル、次いでトルエンで洗浄してから、ＮａＯＨ（１Ｎ）を添加することによりｐＨ６にする。ＣＨ２Ｃｌ２を用いて水溶液を抽出後、硫酸マグネシウム上で乾燥させた有機相をエバポレーションする。茶色のオイルが得られる。ｍ＝１７ｇ。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ３／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝１４〜１９分。
【０２３５】
ｃ）式ＶＩ（３）の化合物
１０％の触媒ｐａｌｌａｄｉｕｍ−ｏｎ−ｃｈａｒｃｏａｌ ３ｇをＣＨ３ＯＨ ３５０ｍｌに溶解した段階ｂ）で得られた化合物１７ｇに添加し、次いで、４×１０５Ｐａの水素下で反応媒体を２０℃で２時間３０分撹拌する。Ｃｌａｒｃｅｌ（登録商標）で濾過後、溶媒をエバポレーションし、１６．８ｇの粗オイルが得られる。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ３／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝１５−１６−２１分
【０２３６】
ｄ）エチルエステル基の加水分解
５ＮのＮａＯＨ水溶液５０ｍｌおよびＣＨ３ＯＨ ８０ｍｌに溶解した段階ｃ）で得られた化合物２０ｇを、７０°Ｃで１８時間加熱する。反応媒体を濃縮後、残渣を水で溶解し、その溶液を、酢酸を数滴用いてｐＨ５．５〜６にし、シラン化したシリカ（メルク（登録商標）０．０６３〜０．２００μｍ）１ｋｇを含むカラム（ｄ＝１５ｃｍ）を用いたクロマトグラフィによって精製し、水で希釈する。乾燥するまで濃縮後、９．３ｇの白色結晶が得られる。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム；水に入れたＨ２ＳＯ４（０．０３７  Ｎ）／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝１６．７‐１７．５‐１７．９分
【０２３７】
ｅ）ガドリニウム錯体形成
段階ｄ）で得られた化合物８．７ｇを水７０ｍｌに溶解し、次いで、Ｇｄ２Ｏ３ ２．１ｇを１回で添加し、１ＮのＮａＯＨ水溶液を添加することによってｐＨを５．５〜６に保ちながら混合物全体を６０°Ｃで３時間４５分加熱する。濾過後、反応媒体をエバポレーション氏、残渣をエタノールから結晶化させる。９．６ｇの白色結晶が得られる。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム；水に溶解したＨ２ＳＯ４（０．０３７Ｎ）／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝３１‐３１．７‐３２．２‐３３分
【０２３８】
ｆ）アミンの遊離化
段階ｅ）で得られた錯体９ｇをＣＦ３ＣＯＯＨ １８０ｍｌに入れた溶液を、２５°Ｃで３時間撹拌し続け、その後減圧下で液体を除去する。残渣をジエチルエーテルで溶解し、この懸濁液を濾過する。溶媒の脱離後、水５０ｍｌに溶解した弱アニオン性樹脂（ＯＨ−）の少なくとも５ｍｌの懸濁液に残渣を段階的に導入する；添加の最後には、ｐＨは安定し、８〜８．５になっているはずである。次いで、この樹脂を濾過によって分離し、溶媒を除去し、エチルエーテルを添加することによって残渣を沈殿させる。
【０２３９】
実施例８
ＶＩＩＩの中間キレートの調製。
2007527857.tif 000108
Ｒは
2007527857.tif 000109
（Ｘ＝Ｂｒ）
を表す。
【０２４０】
ａ）Ｒ‐ＮＨ２の結合
実施例７の段階ｅ）で得られ化合物６ｇおよびアミンＲＮＨ２２６．５ｇを水２００ｍｌに希釈し、ＥＤＣＩ７．６およびＮＨＳ ０．４ｇを添加する。必要に応じて１ＮのＮａＯＨまたはＨＣｌ水溶液を加えながら、混合物を約ｐＨ６で２４時間撹拌し続ける。溶媒をエバポレーション後、エタノールを添加することによって残渣を結晶化させる。得られた黄色の結晶３５ｇを水２００ｍｌに希釈し、溶液カットオフ閾値が１ｋＤのポリエーテルスルホン膜（Ｐａｌｌ（登録商標））で限外濾過する。
【０２４１】
シラン処理したシリカ（メルク（登録商標））のカラム（直径：７ｃｍ、高さ：３３ｃｍ）を用いたクロマトグラフィによって濃縮水を濃縮、精製し、水、次に水／メタノール混合物（９０／１０Ｖ／Ｖ〜８０／２０）を用いて希釈する。溶媒が脱離するまで、所望の生成物を含んだ分画物を濃縮する。水５０ｍｌに希釈させた残渣、ＯＨ−形態アニオン樹脂（ＲｏｈｍおよびＨａａｓのＨＰ６６１）２０で処理し、次いで、カーボンブブラックで４５℃で処理する。溶媒を濾過および脱離後、１０ｇの白色結晶を分離する。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム；Ｈ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝１５分
ＳＥＣ：条件Ｎｏ．１ｔｒ＝４０分
【０２４２】
ｂ）アミンの脱保護
上記の得られた固体をトリフルオロ酢酸２００ｍｌに希釈する。周囲温度で３時間攪拌後、減圧下で液体を脱離し、ジエチルエーテル添加することによって残渣を結晶化させる。このようにして、８．８ｇの白色結晶、すなわち、式ＩＩＩのアミンのトリフルオロアセタートが得られる。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム；Ｈ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝４‐５．３‐５．９分
【０２４３】
実施例９
式ＩＩ’’’２（ｘ＝２）の化合物。
‐ＧＮＨ‐は‐（‐ＣＨ２）３‐ＮＨ_であり
Ｒは
2007527857.tif 000110
（Ｑ１＝Ｑ２＝ＣＨ２（ＣＨＯＨ）４ＣＨ２ＯＨおよびＸ＝Ｂｒ）
であり、
Ｄ’は
2007527857.tif 000111
（ｎ＝２）
である。
【０２４４】
ａ）トリアジン環の縮合
炭酸カリウム０．１３２ｇを、蒸留水２５ｍｍとともに実施例８の段階ｂ）で得られた化合物）４ｇを含む溶液に添加した。ジオキサン５．５ｍｌに２、４、６‐トリクロロ‐１、３、５‐トリアジン０．０８０ｇを入れた溶液を添加し、Ｋ２ＣＯ３を添加することによってｐＨを８．４にした。Ｈ＋状態のカチオン樹脂で中和後、溶媒をエバポレーションし、残渣を無水エタノールに溶解する。沈澱物を分離する。３．７ｇの生成物が分離される。
質量スペクトル：Ｍｏｄｅ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝２０９９（ｚ＝４）
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム；水／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝１０．８分
【０２４５】
ｂ）ジアミンの導入
まず、段階５ｃ）に記載のプロトコルに従って、段階ａ）で得られた化合物３．７ｇを含む溶液を、炭酸カリウム０．２２０ｇおよびジアミン２‐［２‐（２‐アミノエトキシ）エトキシ］エチルアミン１．３ｇと共にジメチルスルホキシド３０ｍｌに入れ、調製用ＨＰＬＣによって精製すると、１ｇの生成物が得られる。
質量スペクトル：
Ｍｏｄｅ  ＥＳ−ｍ／ｚ＝１７００．３（ｚ＝５）
ＨＰＬＣ：  Ｌｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒｅ  Ｃ１８（登録商標）カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ３．３／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝１３．８分
【０２４６】
実施例１０
式
2007527857.tif 000112
（ｘ、‐ＧＮＨ‐、Ｒ、Ｑ１、Ｑ２、Ｘ、Ｄ’およびｎは実施例９に定められたものであり、Ｄ‐Ｈ＝Ｄ’）
の化合物。
【０２４７】
実施例９の段階ｂ）で得られた化合物０．８ｇおよび３、４‐ジエトキシ‐３‐シクロブテン‐１、２‐ジオン７３μｌを、ジメチルスルホキシド３ｍｌに溶解する。トリエチルアミン２０μを添加後、媒体を周囲温度で４時間放置する。エタノール２０ｍｌで沈殿させて得られた生成物を濾過、乾燥し、次いで、エタノールおよびエーテル１０ｍｌで２回洗浄する。６５０ｍｇの白色結晶が得られる。
ＨＰＬＣ：Ｓｕｐｅｒｐｈｅｒ  ＲＰ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｂ（登録商標）カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ２．８／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝１２分
【０２４８】
実施例１１
Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ、１９９７、１１９、１０００４〜１００１３頁。
ａ）式
2007527857.tif 000113
の化合物。
【０２４９】
葉酸５０ｇ（０．１１３ｍｏｌ）を冷媒、マグネティックスターラー、温度計および滴下漏斗を備えた１Ｌの三つ口フラスコ中でＴＨＦ ５００ｍｌに懸濁させ、次いで、混合物全体を０℃まで冷却する。温度が５℃を越えないようにしながら、無水トリフルオロ酢酸（１２８ｍｌ、０．９０６ｍｏｌ、８ｅｑ）を段階的に添加する。混合物を５°Ｃで６時間撹拌する。三つ口フラスコをアルミ箔で包み、冷蔵庫に一晩置く。オイルが得られるまで、ロータリーエバポレータで４０°Ｃでエバポレーションする。エーテル３Ｌから沈澱させ、周囲温度で２時間撹拌する。焼結ガラスで濾過し、真空下で３０℃で乾燥させる。得られる質量：５４．４ｇ。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ３／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝３３分
【０２５０】
ｂ）式
2007527857.tif 000114
の化合物。
【０２５１】
上記で得られた生成物５４．４ｇ（０．０８８ｍｏｌ）を、小片にして、マグネティックスターラーを備えた１Ｌの丸底フラスコ内でヒドラジン水化物５４０ｃｃ（１１ｍｏｌ、１２５ｅｑ）に添加する。反応媒体を周囲温度で２４時間撹拌する。メタノール４Ｌから沈澱させ、周囲温度で４時間撹拌する。焼結ガラスで濾過し、沈澱物をメタノールで洗浄し、次いでエーテルで洗浄する。換気したオーブンで沈澱物を４０℃で一晩乾燥する。得られる質量：３０ｇ。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ３／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝１０．５０分
【０２５２】
ｃ）式
2007527857.tif 000115
の化合物。
【０２５３】
上記で得られた生成物１０ｇ（０．０３０６ｍｏｌ）およびＫＳＣＮ ０．１５ｇ（１．５３．１０−３ｍｏｌ、０．０５ｅｑ）を冷媒、マグネティックスターラー、温度計、および滴下漏斗を備えた２５０ｃｃの三つ口フラスコに導入する。反応媒体を撹拌せずに−１０°Ｃまで冷却する。トリフルオロ酢酸１３４ｍｌを導入し、完全に希釈するまで混合物を−１０°Ｃで撹拌する。温度が−５℃を超えないようにしながら、ｎ‐ブチルナイトライト（３．１５ｇ、０．０３０６ｍｏｌ、１ｅｑ）を段階的に添加する。混合物−１０°Ｃで６時間撹拌する。混合物を周囲温度に戻し、ＮａＮ３ １ｇ（０．０１５ｍｏｌ、０．５ｅｑを添加する。混合物を周囲温度で一晩撹拌する。反応媒体を滴下漏斗に導入し、事前に０°Ｃに冷却したイソプロパノール３５０ｍｌに段階的に入れる。温度が１０°Ｃを超えないようにしながら、混合物を２時間撹拌する。沈澱物を焼結ガラスで濾過する。沈澱物をＣＨ３ＣＮ ４００ｍｌで洗浄し、周囲温度で一晩撹拌する。焼結ガラスで濾過する。沈澱物を周囲温度で１時間、水２００ｍｌで洗浄する。焼結ガラスで濾過し、エーテルで洗浄する。真空下、周囲温度で一晩乾燥する。得られる質量：１３．５ｇ。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ３／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝３５．４０分
【０２５４】
ｄ）式
2007527857.tif 000116
の化合物。
【０２５５】
前工程で調製した化合物５．１８ｇ（０．０１５３ｍｏｌ）およびＬ‐グルタミン酸５メチルエステル２．７２ｇ（０．０１６８ｍｏｌ、１．１ｅｑ）を、マグネティックスターラーおよび滴下漏斗を備えた１００ｍｌの三つ口フラスコのＤＭＳＯ ６０ｍｌに懸濁させる。反応媒体を５°Ｃで冷却し、温度が１５°Ｃを超えないようにしながら、１、１、３、３‐テトラメチルグアニジン（３．８４ｍｌ、０．０３０６ｍｏｌ、２ｅｑ）をゆっくりと導入する。均質な媒体が得られるまで、混合物を１０°Ｃで約１５分撹拌し、次いで、周囲温度で４時間撹拌する。少量の不溶性物質を濾別する。アセトン８００ｍｌから沈澱させ、周囲温度で一晩撹拌する。沈澱物を焼結ガラスで濾別し、エーテルで洗浄する。真空下、周囲温度で乾燥させる。得られる質量：６．４ｇ。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ３／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝２２．６０分
【０２５６】
ｅ）式
2007527857.tif 000117
の化合物。
【０２５７】
上記調製した生成物９．７４ｇ（０．０２１４ｍｏｌ）を、マグネティックスターラーを備えた５００ｍｌの一首フラスコのＤＭＳＯ ６０ｍｌに周囲温度で溶解する。４、７、１０‐トリオキサ‐１、１３‐トリデカンジアミン２３５ｍｌ（１．０７ｍｏｌ、５０ｅｑ）を１回で添加し、混合物を周囲温度で４８時間撹拌する。少量の不溶性物質を濾別する。ＣＨ３ＣＮ １５００ｍｌおよびエーテル１５００ｍｌから成る混合物から上清を沈澱させる。周囲温度で３時間撹拌する。沈澱物を焼結ガラスで濾別する。真空下、周囲温度で乾燥する。得られる質量：９．５ｇ。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ３／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝１６分
【０２５８】
実施例１２
ａ）２個の脂肪鎖の縮合
2007527857.tif 000118
【０２５９】
ＣＨ２ＣＬ２の５０ｍｌにＤＭＡＰ（ジメチルアミノピリジン） ０．６１ｇおよびＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド４１．５ｇ）を入れた溶液を、３‐アルコキシ‐１、２（Ｒ）‐プロパンジオール２８ｇおよびＮ‐ＣＢＺ‐６‐アミノヘキサン酸１２．５ｇをＣＨ２Ｃｌ２ ５００ｍｌに入れた溶液に段階的に０°Ｃで添加する。０°Ｃで１時間、次いで周囲温度で１時間撹拌後、混合物を焼結ガラスで濾過し、次いで、濃縮し、ヘキサン酸２５ｍｌ存在下でＣＨ２Ｃｌ２ ５００ｍｌに再溶解させる。ＣＨ２Ｃｌ２ ５０ｍｌにＤＣＣ ４１ｇおよびＤＭＡＰ １．２２ｇを入れた溶液を、段階的に周囲温度でこの混合物に添加する。この媒体を周囲温度で１時間撹拌し、次いで、再度、濾過およびエバポレーションする。２５ｇの黄色のオイルが得られる。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８（４．６×１００）カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ３．２／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝１６．５分
【０２６０】
ｂ）アルキルの脱保護
2007527857.tif 000119
【０２６１】
Ｐｄ（ＯＡＣ）２ ０．５ｇおよびトリフェニルホスフィン２．３３ｇを酢酸３００ｍｌに溶解した段階ａ）で得られた化合物２５ｇの溶液に添加する。８０°Ｃで５日間加熱後、媒体をガラス繊維で濾過し、次いでエバポレーションする。残渣を調製用のＨＰＬＣによって精製する。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８（４．６×１００）カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ３．２／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝１４、１４．５、１７．７分．
ＮＭＲ：
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：７．４５（５芳香族Ｈ）、５．２５（Ｏ‐ＣＨ２‐Ａｒ）、４．６５‐４．２０および３．９０（グリセロールからの２ＣＨ２Ｏ‐およびＣＨＯ）、３．３７（ＯＣＯ‐ＮＨ‐ＣＨ２‐）、２．５３（ｍ、２ＯＣＯ‐ＣＨ２‐）
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１７３．９（２  ＯＣＯ‐ＣＨ２）、１５６．９（ＯＣＯ‐ＮＨ）、１３７（芳香族ＣＩＶ）、１２８．９／１２８．５（５芳香族ＣＨ）、６８．５（グリセロールからのＣＨ）、６７．０／６５．４（グリセロールからの２  ＣＨ２）、４１．２（ＯＣＯ‐ＮＨ‐ＣＨ２‐）
【０２６２】
ｃ）リン酸化
2007527857.tif 000120
【０２６３】
トルエン４６ｍｌに溶解した段階ｂ）で得られた化合物６ｇの溶液を、ヘプタン１８ｍｌに溶解したＰＯＣｌ３ １．９２ｍｌおよびトリエチルアミン２．８５ｍｌの溶液に段階的に添加する。０°Ｃで１時間、次いで周囲温度で一晩撹拌後、この媒体を周囲温度で２時間、水３０ｍｌで加水分解し、次いで、沈澱させることにより分離する。有機相を濃縮し、次いで、酸／塩基で洗浄することによって精製する。黄色のオイルが得られる。ｍ＝５．４ｇ。
ＨＰＬＣ：Ｘ‐ＴＥＲＲＡ（登録商標）ＭＳ  Ｃ１８カラム；（ＮＨ４）２ＣＯ３‐Ｈ２Ｏ  ｐＨ９／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝１３．３〜１４分
ＮＭＲ：
３１Ｐ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：−３．５ｐｐｍ
【０２６４】
ｄ）セリンの結合
2007527857.tif 000121
【０２６５】
ピリジン６０ｍｌに溶解したトリイソプロピルベンゼンスルホニルクロリド９．３ｇから成る溶液を、段階ｃ）で得られた化合物５．３ｇおよびＮ‐（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）‐Ｌ‐セリン‐ｔ‐ブチルエステル（Ｂｏｃ‐Ｌ‐Ｓｅｒ‐ＯｔＢｕ） ５．３５ｇをピリジン８０ｍｌに入れた溶液に段階的に周囲温度で添加する。この混合物を周囲温度で１８時間撹拌し、次いで、水１２０ｍｌで加水分解する。濃縮後、残渣を調製用のＨＰＬＣによって精製する。
ＨＰＬＣ：Ｌｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒ  Ｃ１８（登録商標）カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ３．３／ＣＨ３ＣＮ；ｒ＝１１．７分
ＮＭＲ：
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：４．５０〜４．１０（グリセロールからのＣＨ２Ｏ‐Ｐ、セリンからのＣＨ２Ｏ‐Ｐ、セリンからのＣＨ‐ＮＨ）、１．４０（ｔＢｕからの６ＣＨ３）
１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：８２．９／８０．５（２Ｃ（ＣＨ３）３）、６４．９（グリセロールからのＣＨ２Ｏ‐Ｐ）、６４．３（セリンからのＣＨ２Ｏ‐Ｐ）、５６．７（セリンからのＣＨ‐ＮＨ）、２８．７／２８．４（ｔＢｕからの６ＣＨ３）
３１ＰＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：−２．５ｐｐｍ
【０２６６】
ｅ）ＣＢＺの脱保護
2007527857.tif 000122
【０２６７】
１０％の  ｐａｌｌａｄｉｕｍ−ｏｎ−ｃｈａｒｃｏａｌ触媒０．５ｇを段階ｄ）で得られた化合物３．８ｇに添加し、２‐メチル‐２‐プロパノール２００ｍｌに溶解させ、次いで、２０×１０５  Ｐａの水素下で反応媒体を３０°Ｃで６時間撹拌する。ガラス繊維で濾過後、溶媒をエバポレーションし、残渣を調製用のＨＰＬＣによって精製する。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８（４．６×１００カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ  ３．２／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝７．６分
2007527857.tif 000123
【０２６８】
実施例１３
ａ）リン酸化
2007527857.tif 000124
【０２６９】
ＰＯＣｌ３ １．２３ｍｌおよびトリエチルアミン１．６３ｍｌをヘプタン９ｍｌに０°Ｃで溶解する。アルコール（Ｎ（Ｆｍｏｃ）‐６‐アミノヘキサノール、３ｇ）をＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、０°Ｃを超えないように段階的に上記溶液に添加する。次いで、反応媒体０°Ｃで１時間、次いで周囲温度で１８時間撹拌する。水３０ｍｌを添加し、媒体を周囲温度で２時間撹拌する。この２つの相を分離する；有機相を濃縮する。得られた固体を水で洗浄し、濾過し、減圧下で乾燥する。３ｇの生成物が得られる。
ＨＰＬＣ：Ｘ‐ＴＥＲＲＡ（登録商標）ＭＳ  Ｃ１８カラム；（ＮＨ４）２ＣＯ３‐Ｈ２ＯｐＨ９／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝１４．１分
【０２７０】
ｂ）セリンの結合
2007527857.tif 000125
【０２７１】
上記で得られた化合物３ｇおよびＢｏｃ‐Ｓｅｒ‐ＯｔＢｕ ３．７３ｇを周囲温度でピリジン５４ｍｌに溶解する。ピリジン４２ｍｌにＴＩＳ（トリイソプロピルベンゼンスルホニルクロリド）６．４９ｇを入れた溶液を段階的に添加し、この媒体を周囲温度で４８時間撹拌する。次いで、反応媒体を水３０ｍｌで加水分解し、周囲温度で４時間撹拌し、次いで乾燥するまで濃縮する。得られた粗生成物をＥｔ２Ｏ １００ｍｌに溶解し、形成された沈澱物を焼結ガラスで濾別する。上清を濃縮し、次いでシリカを用いたクロマトグラフィによって精製する。９５％ＣＨ２Ｃｌ２−５％ＭｅＯＨで希釈する。３．９ｇの生成物が得られる。
ＨＰＬＣ：Ｘ‐ＴＥＲＲＡ（登録商標）ＭＳ  Ｃ１８カラム；（ＮＨ４）２ＣＯ３−Ｈ２Ｏ  ｐＨ９／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝２０分
【０２７２】
ｃ）Ｆｍｏｃの開裂
2007527857.tif 000126
【０２７３】
アセトニトリルに入れた、先の段階で得られた化合物３ｇおよびピペリジン０．６２ｍｌを周囲温度で１２時間撹拌する。白色の沈殿物が形成される。反応媒体を濾過し、結晶をＣＨ３ＣＮ ５０ｍｌで２回洗浄し、次いで、ＣＨ３ＣＮ １００ｍｌから再結晶化させる。０．９ｇの生成物が得られる。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム；水／ＭｅＯＨ；ｔｒ＝１３．６分
【０２７４】
実施例１４
ａ）ベンジル５‐｛［（２Ｓ）‐２‐｛［（９Ｈ‐フロレン‐９‐イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝‐３‐（１Ｈ‐インドール‐３‐イル）プロパノイル］アミノ｝ペンチルカルバメート
2007527857.tif 000127
【０２７５】
（（２Ｒ）‐２‐｛［（９Ｈ‐フロレン‐９‐イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝‐３‐（１Ｈ‐インドール‐３‐イル）プロパン酸）１５．６３ｇを、周囲温度でテトラヒドロフラン３００ｍｌに溶解する。ベンジル５‐アミノペンチルカルバメート１０ｇ、および次いでトリエチルアミン５．１ｍｌを添加する。混合物全体を周囲温度で５分間撹拌する。１‐ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物５．９４ｇ、および次いで１‐（３‐ジメチルアミノプロピル）‐３‐エチルカルボジイミドヒドロクロリド８．４３ｇを、続いて反応媒体に添加し、混合物全体を周囲温度で２４時間撹拌する。不溶物質を濾過によって除去する。上清を減圧下で濃縮する。得られたオイルを水１５０ｍｌに入れ、混合物全体を周囲温度で１時間強力に撹拌する。得られた沈澱物を水１００ｍｌで強力に撹拌しながら洗浄し、濾過し、次いで、エチルエーテル２００ｍｌで洗浄する。沈澱物を濾別し、乾燥する。２２．７８ｇが分離される。
ＴＬＣ：ＳＩＯ２メルク（登録商標）；ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ−８０／２０；ｒｆ＝０．９４分
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ２．９５／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝４０分
質量スペクトル：Ｍｏｄｅ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝６４５（ｚ＝１）
【０２７６】
ｂ）ベンジル５‐｛［（２Ｓ）‐２‐アミノ‐３‐（１Ｈ‐インドール‐３‐イル）プロパノイル］アミノ｝ペンチルカーバメート
2007527857.tif 000128
【０２７７】
上記で得られた化合物２０ｇを周囲温度でテトラヒドロフラン２８０ｍｌに溶解する。次いで、ピペリジン４１．４ｍｌおよび水２０ｍｌを添加する。混合物全体を周囲温度で３時間撹拌する。反応媒体を減圧下で濃縮する。得られたオイルをシリカで精製する。［ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ］（９．５／０．５）で希釈する。減圧下でエバポレーションおよび乾燥後、１２．７７ｇの生成物が得られる。
ＴＬＣ：ＳＩＯ２メルク（登録商標）；ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ‐９５／５；ｒｆ＝０．６４分
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ２．９５／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝１９．５分
質量スペクトル：Ｍｏｄｅ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝４２３（ｚ＝１）
【０２７８】
ｃ）ｔｅｒｔ‐ブチル（１２Ｓ）‐１２‐（１Ｈ‐インドール‐３‐イルメチル）‐（１５Ｒ）‐１５‐イソブチル‐３、１１、１４‐トリオキソ‐１‐フェニル‐２‐オキサ‐４、１０、１３‐トリアザヘプタデカン‐１７‐カルボン酸メチルエステル
2007527857.tif 000129
【０２７９】
（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９８、Ｖｏｌ４１、Ｎｏ．２、ｐ２０９）に記載の手順に従って合成した（２（Ｒ）‐（２‐ｔｅｒｔ‐ブトキシ‐２‐オキソエチル）‐４‐メチルペンタン酸）を９．１６ｇ周囲温度でテトラヒドロフラン１６０ｍｌに溶解する。前段階で調製した化合物１６．８１ｇから成る均質なテトラヒドロフラン溶液１６５ｍｌを１回で添加し、次いで、トリエチルアミン８．３ｍｌ、ヒドロキシ‐１ベンゾトリアゾール水和物６．４５ｇ、および‐（３‐ジメチルアミノプロピル）‐３‐エチルカルボジイミド塩酸塩９．１５ｇを連続して添加した。混合物全体を周囲温度で１２時間撹拌する。不溶物質を濾過で除去する。上清を減圧下で濃縮する。得られたオイルをシリカを用いて精製する。正確な生成物を［ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ］で希釈する（９８／２）。減圧下でエバポレーションおよび乾燥後、２４ｇの生成物が分離される。
ＴＬＣ：ＳｉＯ２メルク（登録商標）；ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ‐９５／５；ｒｆ＝０．４２分
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ２．９５／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝２５．７分
質量スペクトル：Ｍｏｄｅ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝６３５（ｚ＝１）
【０２８０】
ｄ）（１２Ｓ）−１２−（１Ｈ‐インドール‐３‐イルメチル‐）‐１５イソブチル‐３、１１、１４‐トリオキソ‐１‐フェニル‐２‐オキサ‐４、１０、１３‐トリアザヘプタデカン‐１７‐オイック酸
2007527857.tif 000130
【０２８１】
ジチオエリスリトール１．４ｇをＣＨ２Ｃｌ２ １００ｍｌトリフルオロ酢酸１００ｍｌから成る混合物に添加する。完全に溶解するまでアルゴン下で混合物を撹拌する。次いで、上記で調製した化合物１０を添加する。混合物全体を周囲温度で３０分撹拌し、次いで、減圧下で濃縮する。得られたオイルをシリカ［ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ］（９８／２）を用いて精製する。エバポレーションおよびエーテルで溶解後、生成物を濾過および乾燥する。６．１９ｇが分離される。
ＴＬＣ：ＳｉＯ２メルク（登録商標）；ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ−８０／２０；ｒｆ＝０．５７分
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８  カラム；水−ＴＦＡ  ｐＨ２．９０／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝２０．８分
質量スペクトル：
Ｍｏｄｅ  Ｅｓ＋ｍ／ｚ＝５７９（ｚ＝１）
【０２８２】
ｅ）ベンジル（８Ｓ）−８−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−（１１Ｒ）−１１−イソブチル−７、１０、１３−トリオキソ−１６−フェニル−１５−オキサ−６、９、１４−トリアザヘキサデカン−１−イルカーバメート
2007527857.tif 000131
【０２８３】
上記の得られた生成物６．１１ｇを周囲温度でテトラヒドロフラン１６０ｍｌに溶解する。反応媒体を０°Ｃまで冷却する。Ｏ‐ベンジルヒドロキシルアミンヒドロクロリド１．６９ｇ、トリエチルアミン３ｍｌ、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物１．８６ｇ、および次いで１‐（３‐ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド２．６３ｇを連続して反応媒体に添加し、混合物全体を周囲温度で２４時間撹拌する。不溶物質を濾過により除去する。上清を減圧下で濃縮する。得られたオイルを水２００ｍｌに入れ、混合物全体を周囲温度で１時間撹拌する。得られた沈澱物を濾別し、乳鉢で細かく磨り潰し、次いで３０分間、周囲温度で水１００ｍｌで強力に撹拌しながら再度洗浄する。得られた沈澱物を濾別し、減圧下で乾燥する。５．７ｇの生成物が分離される。
ＴＬＣ：ＳｉＯ２メルク（登録商標）；ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ‐５０／５０；ｒｆ＝０．２９分
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８  カラム；  水−ＴＦＡ  ｐＨ２．８０／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝２２．８分
質量スペクトル：
Ｍｏｄｅ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝６８４（ｚ＝１）
【０２８４】
ｆ）Ｎ１‐［（１Ｓ）‐２‐［（５−アミノペンチル）アミノ］‐１‐（１Ｈ‐インドール‐３‐イルメチル）‐２‐オキソエチル］‐Ｎ４‐ヒドロキシ‐（２Ｒ）‐２‐イソブチルスクシンアミド
2007527857.tif 000132
【０２８５】
上記で調製した生成物０．５ｇを、マグネティックスターラーを備えた１００ｍｌの反応器に入れてエタノール７５ｍｌおよび濃縮したＨＣｌ５０μｌから成る溶液に溶解する。水酸化Ｐｄ／Ｃ１ｇをこの溶液に添加する。混合物全体を水素１気圧下、周囲温度で２時間強力に撹拌する。触媒をｃｌａｒｃｅｌで濾過して除去する。得られた溶液を濾過し（０．４５μ）、濾液を減圧下で濃縮する。０．３２ｇの生成物が分離される。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ２．８０／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝９．９０分
質量スペクトル：Ｍｏｄｅ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝４６０（ｚ＝１）
【０２８６】
実施例１５
ａ）ジアミンの保護
2007527857.tif 000133
【０２８７】
４、７、１０‐トリオキサル‐１、１３‐トリデカンジアミン０．１１３ｍｏｌをＣＨ２Ｃｌ２ ２００ｍｌに溶解する。ＣＨ２Ｃｌ２ ５０ｍｌに入れたジメチルジカーボネート（Ｂｏｃ２Ｏ）０．０３８ｍｏｌの溶液を、滴下漏斗を用いて添加する。反応媒体を周囲温度で１８時間撹拌する。反応媒体を１５０ｍｌまで濃縮後、有機相を水１５０ｍｌで２回洗浄する。クロロメチレン相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過、洗浄し、次いで、濃縮する。得られたオイルをシリカ（ＡｃＯＥｔ／ＭｅＯＨ）で精製する。５．７ｇの生成物が得られる。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ２．８０／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝９．５分
質量スペクトル：Ｍｏｄｅ  Ｅｓ−ｍ／ｚ＝３２０．９（ｚ＝１）
【０２８８】
ｂ）保護されたアミノ酸の結合
2007527857.tif 000134
【０２８９】
Ｎ‐α‐Ｆｍｏｃ‐Ｌ‐グルタミン酸（Ｆｍｏｃ‐Ｇｌｕ‐ＯＨ）５．４ｍｍｏｌをアルゴン下でＣＨ２Ｃｌ２ ５０ｍｌ中で懸濁させる。２ｅｑのＮ‐ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）をそれに添加し、次いで２ｅｑのジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を添加する。反応媒体を４５分撹拌し、濾過する。沈澱物をＣＨ２Ｃｌ２で洗浄する。ＣＨ２Ｃｌ２ ５０ｍｌに入れた上記（段階１５ａ）で得られた化合物１１ｍｍｏｌの溶液を、滴下漏斗を用いて添加する。反応媒を周囲温度で２時間撹拌する。水３０ｍｌを添加する。混合物を沈澱させて分離し、有機相を回収し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過、洗浄し、次いで、２／３まで濃縮する。得られた溶液をＳｉＯ２（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）を用いてクロマトグラフによって精製する。留分をエバポレーション後、オイルが得られる。ｍ＝３．８ｇ。
ＴＬＣ：ＳｉＯ２メルク（登録商標）；ＡｃＯＥｔ／ＭｅＯＨ‐９０／１０；ｒｆ＝０．４分
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ２．８０／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝４１分
質量スペクトル：Ｍｏｄｅ  Ｅｓ−ｍ／ｚ＝９７４．６（ｚ＝１）
【０２９０】
ｃ）Ｆｍｏｃの脱保護
2007527857.tif 000135
【０２９１】
前段階で得られた１．０２ｍｍｏｌの化合物をＣＨ３ＣＮ ６ｍｌに溶解する。ペリジン２０％を含むＣＨ３ＣＮ １０ｍｌを添加する。反応媒体を周囲温度でアルゴン下で３時間撹拌する。この溶媒をエバポレーション後、得られた残渣をＳｉＯ２（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）を用いたクロマトグラフィによって精製する。溶媒をエバポレーション後、０．６６ｇのオイルが得られる。
ＴＬＣ：ＳｉＯ２メルク（登録商標）；ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ‐８０／２０；ｒｆ＝０．３５
質量スペクトル：
Ｍｏｄｅ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝７５１．５（ｚ＝１）
【０２９２】
ｄ）プテロイン酸の結合
2007527857.tif 000136
【０２９３】
上記で得られた化合物０．８ｍｍｏｌの存在下で、プテロイン酸０．８ｍｍｏｌをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ） ２５ｍｌに懸濁させる。ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）７５ｍｇおよびジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）２００ｍｇを周囲温度で撹拌しながら添加する。反応媒体を暗所で７２時間４０°Ｃで撹拌する。反応媒体をＥｔ２Ｏ ２５０ｍｌに入れる。ガムが得られ、これを濾過し水１０ｍｌに懸濁させる水で濾過および洗浄し、アンバークリスタルのＰ２Ｏ５ ３２０ｍｇの存在下で減圧下で乾燥する。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ２．８０／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝３４分
質量スペクトル：
Ｍｏｄｅ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝１０４６．５（ｚ＝１）
【０２９４】
ｅ）脱保護
2007527857.tif 000137
【０２９５】
上記で調製された０．２８ｍｍｏｌの化合物をトリフルオロアセテート酸（ＴＦＡ）５ｍｌに溶解する。周囲温度で１５分間マグネティックスターラーで撹拌後、反応媒体をＥｔ２Ｏ ２５ｍｌに入れる。得られた沈澱物を濾別し、Ｅｔ２Ｏで洗浄し、次いで、Ｐ２Ｏ５の存在下、減圧下のデシケータで乾燥する。得られるオレンジ色の結晶を調製用のＨＰＬＣによって精製する。１１０ｍｇの生成物が得られる。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム；水‐ＴＦＡ  ｐＨ２．８０／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝１１．３分
質量スペクトル：Ｍｏｄｅ  ＥＳ＋-ｍ／ｚ＝８４６．５（ｚ＝１）
【０２９６】
実施例１６
ａ）結合
2007527857.tif 000138
【０２９７】
2007527857.tif 000139
【０２９８】
実施例１６‐４の合成手順
ＮＨＳ ２５３ｍｇ、次いでＤＣＣ ４５４ｍｇをＦｍｏｃ‐Ａｌａ‐ＯＨ ６８５ｍｇを入れたジクロロメタン（ＤＣＭ） ２０ｍｌに添加する。混合物を周囲温度で３０分撹拌する。実施例１５ａ）で得られた化合物７００ｍｇをジクロロメタン１０ｍｌで希釈し、添加する。混合物を周囲温度で１時間撹拌する。濾過し、水１０ｍｌで２回洗浄する。ＤＣＭでエバポレーション後、得られた生成物をシリカ（ＤＣＭ／メタノール（９５／５））を用いたクロマトグラフィによって精製する。
【０２９９】
ｂ）Ｆｍｏｃの脱保護
2007527857.tif 000140
【０３００】
2007527857.tif 000141
【０３０１】
実施例１６‐４の合成手順
段階ａ）で得られた化合物５００ｍｇをアセトニトリル（ＡＣＮ） ５ｍｌに導入する。ピペリジン２０％溶液を添加し、次いで反応媒体を周囲温度で３時間撹拌する。得られた生成物を濾過し、ＡＣＮで洗浄し、シリカを用いたクロマトグラフィで精製する。
【０３０２】
ｃ）プテロイン酸の結合
2007527857.tif 000142
【０３０３】
2007527857.tif 000143
【０３０４】
実施例１６‐４の合成手順
プテロイン酸１３２ｍｇ、次いで、ＨＯＢＴ ５７ｍｇおよび１‐（３‐ジメチルアミノプロピル）‐３‐エチルカルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣＩ） １２１．５ｍｇを、ＤＭＳＯ ５ｍｌに溶解した前段階で得られた化合物１６５．５ｍｇに添加する。反応混合物を４０℃で一晩撹拌しながら放置する。濾過し、ジエチルエーテル５０ｍｌで２回および水２０ｍｌで２回洗浄し、遠心分離を行い、形成された黄色の沈殿物を回収する
【０３０５】
ｄ）ｔＢｏの脱保護
2007527857.tif 000144
【０３０６】
2007527857.tif 000145
【０３０７】
実施例１６‐４Ｐの合成手順
得られた化合物をＴＦＡで脱保護する。３０分後、上記生成物をエチルエーテルから沈澱させ、エチルエーテルで３回洗浄する。
【０３０８】
実施例１７  平行合成
2007527857.tif 000146
であるような、式Ｅの化合物。
ＨＲ  Ｃｈは、ｒが２でありかつＩaが以下であるような式ＩＩ’’を有するようなものである：
ｘ＝２
‐ＧＮＨ‐が、
2007527857.tif 000147
であり、
Ｒが、
2007527857.tif 000148
（Ｑ１＝Ｑ２＝ＣＨ２（ＣＨＯＨ）４ＣＨ２ＯＨおよびＸ＝Ｂｒ）
であり、
Ｄが、
2007527857.tif 000149
（ｑ＝１、およびｘ、ｙ、ｚ＝１）
である。
【０３０９】
2007527857.tif 000150
【０３１０】
実施例１６‐４の合成手順
実施例３の化合物１ｇを水１２ｍｌに溶解し、ｐＨを炭酸ナトリウム溶液を用いて９．２に調製する。事前に水に溶解した段階１６ｄ）で得られた化合物を添加する。混合物を撹拌しながら周囲温度で４８時間放置する。この反応の最後で、媒体を中和し、および生成物を調製用クロマトグラフィによって精製する。
【０３１１】
実施例１８
式Ｅの化合物。
Ｂ＝
2007527857.tif 000151
Ｌ＝実施例１７で定めたようなものであり、
ＨＲ  Ｃｈ＝実施例１７で定めたようなものであり、
ｘ＝１、およびｙ、ｚ＝２である。
【０３１２】
実施例３で調製した化合物６７３ｍｇを水７ｍｌに溶解し、次いで、Ｎａ２ＣＯ３溶液を用いてｐＨを９に調製する。アセトニトリル１ｍに溶解した実施例１５ｅ）で得られた化合物４０ｍｇを添加する。反応媒体を周囲温度で２４時間撹拌し、次いで、１ＮのＨＣｌ水溶液を用いてｐＨを６．５に調製する。減圧下で反応媒体をエバポレーションして乾燥する。得られた生成物を調製用のＨＰＬＣによって精製する。
ＨＰＬＣ：Ｓｕｐｅｒｓｐｈｅｒｅ  ＲＰ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｂ（登録商標）カラム；水‐ＴＦＡ、ｐＨ  ２．８０／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝１２．８分
質量スペクトル：Ｍｏｄｅ  ＥＳ−ｍ／ｚ＝１８３６１（ｚ＝１）
【０３１３】
実施例１９
式Ｅの化合物。
2007527857.tif 000152
ＨＲ  Ｃｈ＝実施例１７で定めたようなものである（ｘ、ｙ、ｚ＝１）。
【０３１４】
ａ）縮合
実施例３で得られた中間物３．３ｇを水３３ｍｌに溶解し、Ｎａ２ＣＯ３溶液を用いてｐＨを９に調製する。アセトニトリル３．３ｍｌに溶解した実施例１２ｅ）で得られた中間物２７１ｍｇを添加する。反応媒体を周囲温度で２４時間撹拌し、１ＮのＨＣｌ水溶液を用いてｐＨを５．７に調製する。減圧下で反応媒体をエバポレーションして乾燥する。得られ生成物をＨＰＬＣによって精製する。２ｇの生成物が得られる。
ＨＰＬＣ：Ｓｕｐｅｒｓｐｈｅｒｅ  ＲＰ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｂ（登録商標）カラム；水‐ＴＦＡ、ｐＨ２．８０／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝２２．８分
質量スペクトル：Ｍｏｄｅ  ＥＳ-ｍ／ｚ＝９３８４．８（ｚ＝１）
【０３１５】
ｂ）脱保護
前段階で得られた化合物１．７ｇをＴＦＡ ３０ｍｌに溶解する。得られた混合物を４０℃で３時間撹拌する。この溶液エチルエーテル３００ｍｌから沈澱させる。沈殿物を濾別し、エチルエーテルで洗浄し、次いで、乾燥する。生成物を水１００ｍｌに溶解し、ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液溶液を用いてｐＨを６．２にする。カットオフ閾値１ＫＤの膜で限外濾過した後、濃縮水をエバポレーションして乾燥し、その後真空下で乾燥させた。１．４ｇの生成物が得られる。
ＨＰＬＣ：Ｓｕｐｅｒｓｐｈｅｒｅ  ＲＰ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｂ（登録商標）カラム；水‐ＴＦＡ、ｐＨ２．８０／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝１５．２分
質量スペクトル：Ｍｏｄｅ  ＥＳ-ｍｚ＝９２２３．６（ｚ＝１）
【０３１６】
実施例２０
式Ｅの化合物。
Ｂ＝
2007527857.tif 000153
Ｌ＝実施例１７で定めたようなものであり、
ＨＲ  Ｃｈは、ｒが２でありかつＩｃが以下であるような式ＩＩ’’’ａ１を有するようなものである：
ｘ＝２
‐ＧＮＨ‐が
2007527857.tif 000154
であり、
Ｒが
2007527857.tif 000155
（Ｑ１＝Ｑ２＝ＣＨ２（ＣＨＯＨ）４ＣＨ２ＯＨおよびＸ＝Ｂｒ）
であり、
Ｄが
2007527857.tif 000156
（ｑ＝１、ｘ、ｙ、ｚ＝１）
である。
【０３１７】
実施例６で得られた中間物０．９２ｇを水９ｍｌに溶解し、次いで、ｐＨを９にするためにＮａ２ＣＯ３飽和溶液を添加する。エタノール５滴とともに実施例１１ｅ）で得られた中間物９３ｍｇを添加する。反応媒体を周囲温度で２４時間撹拌し、次いで１ＮのＨＣｌ水溶液を用いてｐＨを６．５に調製する。減圧下で反応媒体をエバポレーションして観想する。得られた生成物を調製用のＨＰＬＣによって精製する。４００ｍｇの生成物が得られる。
ＨＰＬＣ：Ｓｕｐｅｒｓｐｈｅｒｅ  ＲＰ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｂ（登録商標）カラム；水‐ＴＦＡ、ｐＨ２．８０／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝１６．６分
質量スペクトル：Ｍｏｄｅ  ＥＳ−ｍｚ＝６９８７（ｚ＝１）
【０３１８】
実施例２１
式Ｅの化合物。
Ｂ＝
2007527857.tif 000157
Ｌは実施例１９で定めたようなものであり、
ＨＲ  Ｃｈは実施例１７に定めたようなものである（ｘ、ｙ、ｚ＝１）。
【０３１９】
実施例３で得られた化合物１．１７ｇを周囲温度で水１５ｍｌに溶解する。Ｎａ２ＣＯ３溶液を用いて溶液のｐＨを９にする。段階１４ｆ）で得られた生成物６７．１８ｍｇを添加し、続いてエタノー１７０μｌを添加し、ｐＨを９に保ちながらＮａ２ＣＯ３飽和溶液を用いて反応媒体を周囲温度で４８時間撹拌する。ＨＣｌ溶液を用いてｐＨを７に戻し、溶液をエタノール１５０ｍｌから沈澱させる。沈澱物を濾別し、エチルエーテル１００ｍｌで洗浄、乾燥する。１．０５ｇの生成物が得られ、調製用のＨＰＬＣによって精製する。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）カラム；水‐ＴＦＡ、ｐＨ２．８０／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝１３．７分
質量スペクトル：Ｍｏｄｅ  Ｅｓ−ｍ／ｚ＝２３０３．３（ｚ＝４）
【０３２０】
実施例２２
式Ｅの化合物。
Ｂ＝実施例２０で定めたようなものであり、
Ｌは実施例１７で定めたようなものであり、
ＨＲ  Ｃｈは実施例１７で定めたようなものである（ｘ、ｙ、ｚ＝１）。
【０３２１】
実施例３で得られた化合物１．２５ｇを周囲温度で炭酸ナトリウム（０．１Ｎ） ５０ｍｌに溶解する（ｐＨ＝１０）。実施例１１ｅ）で得られた生成物を添加し、反応媒体を周囲温度で２４時間撹拌する。この混合物をエタノール５００ｍｌに入れ、得られた沈殿物を濾別し、減圧下で乾燥する。生成物を調製用のＨＰＬＣによって精製する。０．２６ｇが分離される。
ＨＰＬＣ：Ｓｕｐｅｒｓｐｈｅｒｅ  ＲＰ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｂ（登録商標）カラム；水‐ＴＦＡ、ｐＨ３／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝１２．３０分
質量スペクトル：Ｍｏｄｅ  Ｅｓ−ｍ／ｚ＝１８７９．３（ｚ＝５）
【０３２２】
実施例２３−ペプチドの結合
Ｂは以下の表に提示したようなぺプチドの１つである、式Ｅの化合物。
【０３２３】
2007527857.tif 000158
【０３２４】
Ｌは実施例１９で定めたようなものであり、
ＨＲ  Ｃｈは実施例１７で定めたようなものである（ｘ、ｙ，ｚ＝１）。
【０３２５】
文献からの従来の方法に従って、ＢｏｃまたはＦｍｏｃ化学を用いて、手作業または自動合成器により液相または固体担体を用いてペプチドを調製した。使用されるペプチドを以下に示す。
【０３２６】
2007527857.tif 000159
【０３２７】
ペプチド１と実施例３の化合物との結合
Ｂ＝‐ＮＨ‐Ｐｒｏ-Ｌｅｕ-Ｇｌｙ‐ＮＨＯＨであるような、式Ｅ化合物。
Ｌは実施例１９で定めたようなものであり、
ＨＲ  Ｃｈは実施例１７で定めたようなものである（ｘ、ｙ、ｚ＝１）。
【０３２８】
ａ）脱ベンジル化
ペプチドＺ‐Ｐｒｏ‐Ｌｅｕ‐Ｇｌｙ‐ＮＨＯＨ（ＢＡＣＨＥＭ（登録商標）） １ｇをメタノール１００ｍｌに溶解する。Ｐａｌｌａｄｉｕｍ−ｏｎ−Ｃｈａｒｃｏａｌ １００ｍｇを添加する。混合物全体を水素圧下（４０Ｐｓｉ）に周囲温度で８時間置く（ＰＡＲＲ（登録商標）システム）。次いで、反応媒体をｃｌａｒｃｅｌで濾過し、減圧下でエバポレーションにより濃縮し、次いで、エーテルから沈澱させる。５７０ｍｇの白色結晶が得られる。
ＨＰＬＣ：シンメトリー（登録商標）Ｃ１８カラム：水‐ＴＦＡ、ｐＨ３．２０／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝５分
質量スペクトル：Ｍｏｄｅ  ＥＳ＋−ｍ／ｚ＝３０１．３（ｚ＝１）
【０３２９】
ｂ）結合
実施例３で得られた化合物５０ｍｇを水１ｍｌに溶解する。Ｎａ２ＣＯ３を添加することによってｐＨを９．５にする。前段階に従って得られたペプチド５ｍｇを添加する。反応媒体を周囲温度で４８時間撹拌し、次いでエタノールから沈澱させる。次いで、濾過により得られた生成物を調製用のＨＰＬＣによって精製する。
ＨＰＬＣ：Ｓｕｐｅｒｓｐｈｅｒｅ  ＲＰ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｂ（登録商標）カラム；水‐ＴＦＡ、ｐＨ３／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝１４分
質量スペクトル：Ｍｏｄｅ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝２２６５（ｚ＝４）
【０３３０】
ペプチド２と実施例３の化合物との結合
Ｂ＝シクロ（Ａｒｇ‐Ｇｌｙ‐Ａｓｐ‐Ｄ‐Ｐｈｅ‐Ｌｙｓ）であるような、式Ｅの化合物。
Ｌは実施例１９で定めたようなものであり、
ＨＲ  Ｃｈは実施例１７で定めたようなものである（ｘ、ｙ、ｘ＝１）。
【０３３１】
ｃ）結合
実施例３で得られた化合物３００ｍｇを水２ｍｌに溶解する。Ｎａ２ＣＯ３を添加することによってｐＨを９．５にする。ペプチド２（Ｃｙｃｌｏ（Ａｒｇ（Ｐｂｆ）‐Ｇｌｙ‐Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）‐Ｄ‐Ｐｈｅ‐Ｌｙｓ）） ５６．３ｍｇを添加する。反応媒体を周囲温度で３日間撹拌し、次いでエタノールから沈澱させる。
ＨＰＬＣ：Ｓｕｐｅｒｓｐｈｅｒｅ  ＲＰ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｂ（登録商標）カラム；水‐ＴＦＡ、ｐＨ２．８／Ｈ３ＣＮ；ｔｒ＝７．３および１９．７
質量スペクトル：Ｍｏｄｅ  ＥＳ−ｍ／ｚ＝２４１６．７（ｚ＝４）＝４
【０３３２】
ｄ）脱保護
段階ｃ）によりで得られた化合物をトリフルオロ酢酸／水／トリイソプロピルシラン（９０／５／５） １０ｍｌに溶解する。周囲温度で４時間撹拌後、減圧下でエバポレーションによりＴＦＡを除去する。反応媒体をエーテルから沈澱させる。次いで、濾過により得られた生成物を精製調製用のＨＰＬＣによって精製する。
ＨＰＬＣ：Ｓｕｐｅｒｓｐｈｅｒｅ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｂ（登録商標）カラム；水‐ＴＦＡ、ｐＨ３／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝１３．８分
質量スペクトル：Ｍｏｄｅ  ＥＳ-ｍ／ｚ＝２３３９．３（ｚ＝４）
【０３３３】
他の化合物は同様の様式で得られる。
【０３３４】
ペプチド３と実施例３の化合物との結合
ペプチド３（ＮＨ２‐Ｖａｌ‐Ｃｙｃｌｏ（Ｃｙｓ‐Ａｒｇ（Ｐｐｆ）‐Ｇｌｙ‐Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）‐Ｃｙｓ）‐ＮＨ２）および実施例２３の段階ｃ）の手順による化合物で開始する。
実施例２３の段階ｄ）の手順による脱保護。
【０３３５】
ペプチド４と実施例３の化合物との結合
ペプチド４（ＮＨ２‐Ａｄｏ‐Ａｌａ‐ＴＨＲ（ｔＢｕ）‐Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）‐Ｌｅｕ‐Ｐｒｏ‐Ｐｒｏ‐Ａｒｇ（Ｐｂｆ）‐ＮＨ２）および実施例２３の段階ｃ）の手順による実施例３の化合物で開始する。実施例２３の段階ｄ）の手順による脱保護。
【０３３６】
ペプチド１と実施例１０の化合物との結合
実施例２３の段階ａ）の化合物および実施例２３の段階ｂ）の手順による実施例１０の化合物で開始する。
【０３３７】
ペプチド２と実施例１０の化合物との結合
ペプチド２（Ｃｙｃｌｏ（Ａｒｇ（Ｐｂｆ）‐Ｇｌｙ‐Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）‐Ｄ‐Ｐｈｅ‐Ｌｙｓ））および実施例２３の段階ｃ）の手順による実施例１０の化合物で開始する。
実施例２３の段階ｄ）の手順による脱保護。
【０３３８】
ペプチド３と実施例１０の化合物との結合
ペプチド３（ＮＨ２‐Ｖａｌ‐Ｃｙｃｌｏ（Ｃｙｓ‐Ａｒｇ（Ｐｐｆ）‐Ｇｌｙ‐Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）‐Ｃｙｓ）‐ＮＨ２）および実施例２３の段階ｃ）の手順による実施例１０の化合物で開始する。
実施例２３の段階ｄ）の手順による脱保護。
【０３３９】
ペプチド４と実施例１０の化合物との結合
ペプチド４（ＮＨ２‐Ａｄｏ‐Ａｌａ‐Ｔｈｒ（ｔＢｕ）‐Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）‐Ｌｅｕ‐Ｐｒｏ‐Ｐｒｏ‐Ａｒｇ（Ｐｂｆ）‐ＮＨ２）および実施例２３の段階ｃ）の手順による実施例１０の化合物で開始する。
実施例２３の段階ｄ）の手順による脱保護。
【０３４０】
ペプチド５と実施例３の化合物との結合
ペプチド５（ＮＨ２‐Ｇｌｙ‐Ｔｈｒ（ｔＢｕ）‐Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）‐Ｐｒｏ‐Ｐｒｏ‐Ａｒｇ（Ｐｂｆ）‐ＣＯＯＨ）および実施例２３の段階ｃ）の手順による実施例３の化合物で開始する。
実施例２３の段階ｄ）の手順による脱保護。
【０３４１】
ペプチド１と実施例６の化合物との結合
実施例２３の段階ａ）の化合物および実施例２３の段階ｂ）の手順による実施例６の化合物で開始する。
【０３４２】
ペプチド２と実施例６の化合物との結合
ペプチド２（Ｃｙｃｌｏ（Ａｒｇ（Ｐｂｆ）‐Ｇｌｙ‐Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）‐Ｄ‐Ｐｈｅ‐Ｌｙｓ））および実施例２３の段階ｃ）の手順による実施例６の化合物で開始する。
実施例２３の段階ｄ）の手順による脱保護。
【０３４３】
ペプチド３と実施例６の化合物との結合
ペプチド３（ＮＨ２‐Ｖａｌ‐Ｃｙｃｌｏ（Ｃｙｓ‐Ａｒｇ（Ｐｐｆ）‐Ｇｌｙ‐Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）‐Ｃｙｓ）‐ＮＨ２）および実施例２３の段階ｃ）の手順による実施例６の化合物で開始する。
実施例２３の段階ｄ）の手順による脱保護。
【０３４４】
ペプチド４と実施例６の化合物との結合
ペプチド４（ＮＨ２‐Ａｄｏ‐Ａｌａ‐Ｔｈｒ（ｔＢｕ）‐Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）‐Ｌｅｕ‐Ｐｒｏ‐Ｐｒｏ‐Ａｒｇ（Ｐｂｆ）‐ＮＨ２）および実施例２３の段階ｃ）の手順による実施例６の化合物で開始する。
実施例２３の段階ｄ）の手順による脱保護。
【０３４５】
実施例２４
式Ｅの化合物。
Ｂ＝
2007527857.tif 000160
Ｌは実施例１９に定めたようなものであり、
ＨＲ  Ｃｈ＝実施例１７に定めたようなものである（ｘ、ｙ、ｚ＝１）。
【０３４６】
ａ）縮合
実施例３の化合物および実施例３および実施例１９ａ）の手順による実施例１３ｃ）で得られた中間物で縮合を開始する。
【０３４７】
ｂ）脱保護
前段階で得られた化合物をＴＦＡに溶解し、段階１９ｂ）に記載の手順に従って処理する。
【０３４８】
実施例２５
式Ｅの化合物。
Ｂ＝実施例２０に定めたようなものであり、
Ｌは実施例１７に定めたようなものであり、
ＨＲ  Ｃｈはｒが２でありかつＩｅが以下であるような式ＩＩ’’’１を有するようなものである。
ｘ＝２
‐ＧＮＨ‐が‐（‐ＣＨ２）３‐ＮＨ‐であり、
Ｒが
2007527857.tif 000161
（Ｑ１＝Ｑ２＝ＣＨ２（ＣＨＯＨ４ＣＨ２ＯＨおよびＸ＝Ｂｒ）
であり、
Ｄが
2007527857.tif 000162
（ｑ＝１、ｘ、ｙ、ｚ＝１）
である。
【０３４９】
実施例１０で得られた化合物０．６５０ｇを水９ｍｌに溶解する；Ｎａ２ＣＯ３を用いてｐＨを９．２にし、次いで、実施例１１ｅ）で調製した化合物０．０６５ｇをエタノール０．３ｍｌと共に添加する。この溶液を周囲温度で２日間放置し、次いで、エタノール９０ｍｌに入れる。得られた生成物を濾過し、次いで、乾燥する。調製用のＨＰＬＣによって精製し、カットオフ閾値１ＫＤの膜で限外濾過後、濃縮水を濃縮する。２００ｍｇの黄色のフレークが得られる。
ＨＰＬＣ：Ｓｕｐｅｒｓｐｈｅｒｅ  ＲＰ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｂ（登録商標）カラム；水‐ＴＦＡ、ｐＨ２．８／ＣＨ３ＣＮ；ｔｒ＝１２分
質量スペクトル：Ｍｏｄｅ  ＥＳ‐−ｍ／ｚ＝２３０５．６（ｚ＝４）
【０３５０】
本発明者らが合成した化合物の生物学的効果をここで記載する。
【０３５１】
実施例Ｉ）：葉酸受容体標的剤をバイオベクターとして用いたＨＲ化合物
本発明者らは特に、以下の非ＨＲバイオベクターを対照として試験した。
【０３５２】
ａ．
葉酸および非ＨＲ  ＤＯＴＡを結びつける、市販の化合物Ｐ８５３およびＰ８７１
2007527857.tif 000163
下記式の化合物Ｐ８６０
2007527857.tif 000164
Ｐ８６０は非特異的葉酸受容体標的化バイオベクターおよび非ＨＲ  ＤＯＴＡをＰＥＧ型リンカーに結び付ける。
【０３５３】
本発明者らは特にＨＲバイオベクターを試験した。
下記式の化合物ＢＩＯ‐ＦＯＬＡＴＥ．Ｉ
2007527857.tif 000165
【０３５４】
ＢＩＯ‐ＦＯＬＡＴＥ．Ｉは、特異的葉酸受容体標的化バイオベクターおよびＨＲ  ＤＯＴＡをスクアレート型リンカーに結び付ける。ＢＩＯ‐ＦＯＬＡＴＥ．Ｉは薬剤のモル当たり２Ｇｄを有するので、モル緩和度の値を以下の表にまとめた（不確実度＋／−５％）。
【０３５５】
2007527857.tif 000166
【０３５６】
ｂ．
下記式の化合物ＢＩＯ‐ＦＯＬＡＴＥ．ＩＩ
2007527857.tif 000167
【０３５７】
本発明者らは対照の化合物がその受容体に対する高い親和性を有することをインビトロで試験した。３Ｈ葉酸、ＫＢ細胞膜に結合するインビトロモデルを対象に結合を試験した。
【０３５８】
他方、このインビトロ試験では、ＢＩＯ‐ＦＯＬＡＴＥ．ＩおよびＢＩＯ‐ＦＯＬＡＴＥ．ＩＩと異なり、Ｐ８６０がインビボでは不活性であることが明らかとなった。
【０３５９】
ｃ．ＫＢ腫瘍ヌードマウスを用いた生体内分布試験
この生体内分布試験はＰ８６０と遊離葉酸との間の競合を含む。ある群の動物には通常の飼料を与え、葉酸を被試験薬剤と同時注入し、別の群には葉酸を含まない飼料を被被試験薬剤と共に１回で注入した。この試験ではＰＢ８６０がＦＢＰへ結合していないことを示す。
【０３６０】
ｄ．ＫＢ腫瘍ヌードマウスを用いたＭＲＩ（ＫＢ腫瘍ヌードラットを用いたＰ８６０およびＤｏｔａｒｅｍの比較試験）
腫瘍に関し、目視では薬剤間の差を認めなかった。
【０３６１】
他方、薬剤ＢＩＯ‐ＦＯＬＡＴＥ．Ｉを用いた以下の試験では良好な成績が得られた：
−  ＦＢＰに結合する薬剤のインビトロ試験（葉酸結合タンパク質）：この試験はＢＩＯ‐ＦＯＬＡＴＥ．ＩがＦＢＰに特異的に結合することを示すことが可能にした。
−  ＫＢ細胞における結合／インターナリゼーションのインビトロ試験：この試験は、ＸＣＰ−ＭＳアッセイを用いて、過剰な遊離葉酸がある状態／無い状態で３７℃で行い、ＫＢ細胞内に特異的に結合および内在化した薬剤の量を試験することを可能にした。この薬剤は３７℃で正しく取り込まれることが記録され、このことは先の試験と矛盾しないものであり、阻害実験を通して特異性のあること明らかにしている。
−  ＫＢ腫瘍ヌードマウスを用いた生体内分布試験。
【０３６２】
ＢＩＯ‐ＦＯＬＡＴＥ．Ｉについて選択した濃度は１５μｍｏｌ／ｋｇであり、ヒトにおいて有効な投与量の範囲内にある。
結果：ＢＩＯ‐ＦＯＬＡＴＥ．Ｉにおける腫瘍の蓄積は優れていることが観察された。遊離葉酸２５μｍｏｌ／ｋｇを予め注入すれば、腫瘍中に分析されるＧｄ濃度を下げることが可能であり、これは本薬剤の特異性を示すものである。
【０３６３】
水におけるＢＩＯ‐ＦＯＬＡＴＥ．Ｉのモル緩和度は、特に６０ＭＨｚで非常に良好である：ｒ１＝５３ｍＭ−１ｓ−１。葉酸に関与するデンドリマー型などの先行技術の特異的薬剤を用いて得られる緩和度はｒ１＝９．３２ｍＭ−１ｓ−１／Ｇｄであることが想起される（Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ、Ｊａｎ  ２０００、３５巻、５６貢）。
【０３６４】
−  ３０分〜２４時間のＭＲＩ画像化試験：腫瘍レベルの造影は、特に注入１〜２時間後で非常に鮮明である。さらに、アッセイの終わりに脱像素子を用いて、ＩＣＰ−ＭＳによるＧｄアッセイを参照器官に対して行った。このような実験は、例えば、ＢＩＯ‐ＦＯＬＡＴＥ．Ｉが腫瘍の鮮明化（ｈｅｉｇｈｔｅｎｉｎｇ）を誘導し、かつこの鮮明化が選考技術の薬剤よりも長く続くことを示している。腫瘍／筋の比はこれまで使用された造影剤に関し観察されたものの約４〜１０倍である。
【０３６５】
Ｐ８６０およびＢＩＯ‐ＦＯＬＡＴＥ．Ｉを用いたＢＩＡＣＯＲＥ３０００用の実験条件（ＢＩＡｃｏｒｅ３０００を用いたＰ８６０、ＢＩＯ‐ＦＯＬＡＴＥ．Ｉ、および葉酸結合タンパク質間の親和性試験）
【０３６６】
2007527857.tif 000168
【０３６７】
ＨＢＳ緩衝液：ｐＨ ７．４のＨＥＰＥＳ １０ｍＭ、ＮａＣｌ ０．１５Ｍ、ＥＤＴＡ ４．３ｍＭ、および０．００５％ＮＰ２０
ＰＧＭ緩衝液：ｐＨ７のＫＨ２ＰＯ４ １００ｍＭ、１０％グリセロール、およびβ−メルカプトエタノール４ｍＭ
【０３６８】
アミンを結合させるＢＩＡｃｏｒｅ推奨のプロトコルに準拠して、ＰＧＭ緩衝液中でＦＢＰを１ｍｇ／ｍｌで固定化した。次に、残りの活性のカルボキシル化された基を１ＭのエタノールアミンでｐＨ＝８に飽和させた。
【０３６９】
次に、異なる４種の濃度（１２５、２５０、５００、および１０００μＭ）で葉酸を結合させた。結合相は５分であり、解離相は３分である。
【０３７０】
2007527857.tif 000169
【０３７１】
ヌードマウスを用いた生体内分布試験条件
パート１：
雌ヌードマウスに腫瘍を導入し、ヒトＫＢ細胞を静脈内投与する。
マウスを葉酸摂取群と葉酸無摂取群の２群に分ける（１０日間）。
葉酸摂取群には造影剤（ＣＰ）注入の５分前にさらに葉酸（２５μｍｏｌ／ｋｇ  静脈内投与）を注入する。
ＣＰの静脈内投与した後、組織標本（筋、腫瘍、肝、腎）および血漿標本を採取する。
【０３７２】
パート２：ＩＣＰ−ＡＥＳによるアッセイ
Ｇｄアッセイ（Ｐ８６０、ＢＩＯ‐ＦＯＬＡＴＥ．Ｉ、Ｄｏｔａｒｅｍ）：肝、腎
【０３７３】
パート３：生体分析：ＣＰ−ＭＳによるアッセイ
Ｇｄアッセイ（Ｐ８６０、ＢＩＯ‐ＦＯＬＡＴＥ．Ｉ、Ｄｏｔａｒｅｍ）：腫瘍、筋、血漿
【０３７４】
葉酸の補給
５．５ｍＭ葉酸をＰＢＳで希釈し、２５μｍｏｌ／ｋｇ（４．５４ｍｌ／ｋｇ）の投与量で注入する。
【０３７５】
2007527857.tif 000170
【０３７６】
投与方法
葉酸およびＣＰ：静脈内投与（尾静脈）
葉酸はＣＰ注入の５分前に投与する。
【０３７７】
2007527857.tif 000171
ＫＢ細胞はＲＰＭＩ１６４０で培養＋ＳＶＦの１０％
【０３７８】
皮下腫瘍の導入
Ｄ０：ＲＰＭＩ ２００μｌで希釈した１０７個の細胞を皮下接種する：マウスの右側腹部にイソフルランでガス麻酔する。
Ｄ１８：マウスの１００％が皮下腫瘍を発現した。
【０３７９】
結果：ＰＣ−Ｇｄの腫瘍分布
【０３８０】
−  葉酸を含まない飼料
注入したＢＩＯ‐ＦＯＬＡＴＥ．Ｉの理論的投与量の１４％（４時間）〜７％（７２時間）が腫瘍に認められた。
【０３８１】
Ｐ８６０の場合、注入した理論的投与量の１〜２％しか腫瘍に認められなかった。
【０３８２】
これらの比率は腫瘍標本の質量によって重み付けするときに保たれる：それぞれ、ＢＩＯ‐ＦＯＬＡＴＥでの０．３〜０．４％ 対 Ｐ８６０での０．０５〜０．１０％。
【０３８３】
２種類のＣＰについて、４時間後と７時間後の時間‐効果を観察したところ、腫瘍において測定されるＣＰの量が緩徐に鉄火するという特徴がみられた。
【０３８４】
−  遊離葉酸との競合
葉酸はＢＩＯ‐ＦＯＬＡＴＥ．Ｉの腫瘍における蓄積を部分的に阻止する（４回、２４時間）：腫瘍には２倍少ない薬剤が認められる（注入量の５〜８（％）。
他方、Ｐ８６０の腫瘍における分布は遊離葉酸の存在によって影響を受けない。
【０３８５】
−  参照ＣＰ（ＤＯＴＡＲＥＭ）の腫瘍分布
葉酸を含まない飼料を用いた場合、注入されたＤｏｔａｒｅｍの理論的投与量の１〜２％が腫瘍に認められた。
Ｐ８６０およびＢＩＯ‐ＦＯＬＡＴＥ．Ｉに関し、４時間〜７２時間の間に時間効果が認められた（観察された量は減少している）。
組織に対する ｇで補正すると、Ｄｏｔａｒｅｍの腫瘍内量は４時間を超えるとごく僅かなものになることに留意されたい。
【０３８６】
実施例ＩＩ）ＭＭＰ阻害剤をバイオベクターとして用いたＨＲ化合物
ＤＯＴＡＲＥＭ（Ｇｄ  ＤＯＴＡ塩）はバイオベクターを含まない「非特異的」対象薬剤である。ＭＭＰ阻害バイオベクターでベクター化した以下の２つのガドリニウムを含んだ化合物を試験した：
下記式を有する、特異的ＭＭＰ阻害バイオベクターおよび非ＨＲ  ＤＯＴＡを結び付けるＰ９４７（非ＨＲバイオベクター化合物）：
2007527857.tif 000172
Ｐ９４７とは異なってＨＲ  ＤＯＴＡを含み、特異的ＭＭＰ阻害偽ペプチドバイオベクターおよびＨＲ  ＤＯＴＡを結び付ける、Ｐ９６７（ＨＲバイオベクター化合物）。
【０３８７】
インビトロアッセイ
本発明者らはヒトＭＭＰ−１およびＭＭＰ−３を対象にマトリクスメタロプロテアーゼ阻害剤（ＭＭＰ）で官能化したＰ９４７およびＰ９６７のガドリニウムキレート造影剤のインビトロ活性を試験した。受容体に対するバイオベクター成分の親和性に関し、２種類のペプチドを対照とした：
市販のトリペプチド：Ｚ‐Ｐｒｏ‐Ｌｅｕ‐Ｇｌｙ−ＮＨＯＨ（Ｂａｃｈｅｍ）、本試験ではペプチドＡと呼ぶ（ＭＭＰ‐１ンヒビター）。
市販のテトラペプチド：４‐Ａｂｚ‐Ｇｌｙ‐Ｐｒｏ‐Ｄｌｅｕ‐Ｄａｌａ‐ＮＨＯＨ（Ｂａｃｈｅｍ）、本試験ではペプチドＢと呼ぶ（ＭＭＰ‐１、ＭＭＰ‐２、およびＭＭＰ‐３のインヒビター）。
本発明者らは上記ペプチドについて得られた値は文献に記載の値と類似するものであることを検証し、ＧＤプローブにペプチドをグラフしてもペプチドの阻害活性は損なわれないことを実証した。
【０３８８】
さらに正確に言うと、インビトロのＭＭＰ阻害活性を次のように評価した：
１．試験薬をＭＭＰ酵素存在下で３７℃で所定時間インキュベートし、次いで、この媒体の蛍光を測定する（ｔ＝０）。
２．（酵素によって切断されるときに蛍光剤になる）基質を添加することによって酵素反応を誘導し、次いで、３７°Ｃで４０分インキュベートする。２回目の蛍光性測定を行う（ｔ＝４０）。
３．信号蛍光定量法により測定された信号を差し引くことによりＭＭＰ酵素の活性を決定する：（ｔ＝４０）−（ｔ＝０）。
４．結果を対照酵素の活性の阻害の割合として表す。
５．標準的阻害剤はＴＩＭＰ−１である。
ペプチドに対して、試験薬剤を１０-５、１０-７および１０-９Ｍで２回試験した。ペプチドを含まない薬剤を対応する官能化された造影剤と類似する様式で処理した。
【０３８９】
2007527857.tif 000173
【０３９０】
発明者らはＭＭＰ−２、すなわちゼラチナーゼに対するＰ９４７およびテトラペプチドの阻害活性を評価するために、インビトロ活性も試験した。血管壁においては恒常的に発現し、炎症がある場合には過剰発現する。
対照：市販のテトラペプチド（本試験ではペプチドＢと呼ぶ）：４‐Ａｂｚ‐Ｇｌｙ‐Ｐｒｏ‐Ｄｌｅｕ‐Ｄａｌａ‐ＮＨＯＨ（Ｂａｃｈｅｍ）；ＭＭＰ‐１、ＭＭＰ‐２、およびＭＭＰ‐３のインヒビター。実験的には、テトラペプチドはＭＭＰ−２に対して１０-５Ｍからの著しい阻害活性を有する；この結果は文献からのデータと一致する（市販のテトラペプチドのＭＭＰ‐２に対するＩＣ５０＝３×１０-５Ｍ）。また、Ｐ９４７を用いて同様の結果が得られるので、ガドリニウムを含んだキレートへテトラペプチドをグラフトしても、ＭＭＰ‐２に対する効果は変わらない。
【０３９１】
本インビトロアッセイに関する結論として、先行技術の既知の化合物（非ＨＲキレートに関連するバイオベクター）および本発明者らにより得られたＨＲ化合物は、特異性が保持されることを示している。
【０３９２】
ＭＭＰ２の詳細なプロトコルを以下に示す：１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＮａＣｌ２、０．０２％ＮａＮ３、０．０５％Ｂｒｉｊ（登録商標）３５、および６．６７ｍＭのＡＰＭＡを用いて３７°Ｃで１２０分間インキュベートすることにより活性化した０．３５μＭのＭＭＰ‐２を含んだ５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．５）に被試験薬剤を添加する。３７℃で３０分間プリインキュベーションした後に、蛍光強度をｌａｍｂｄａ  ｅｘ＝３４０ｎｍおよびｌａｍｂｄａ  ｅｍ＝４０５ｎｍにて測定する。６μＭのＮＦＦ−２を添加し、３７℃で９０分間インキュベートすることにより酵素反応を開始させる。
【０３９３】
ＩＩＩ）ホスファチジルセリンをバイオベクターとして用いたＨＲ化合物
ＩＩＩ．１  インビトロ試験
活性化されたマクロファージによる取込み速度を非活性化マクロファージと比較することによって、インビトロのバリデーションを行った（活性化ＴＨＰ−１細胞はＰＳ受容体に対して陽性である）。本試験によって蛍光性のフォスファチジルセリン‐ＮＢＤ（ＰＳ−ＮＢＤ）のＴＨＰ−１系との相互作用を明らかにすることが可能となった。ＰＳ‐ＮＢＤは脂肪鎖をただ１つ含むフォスファチジルセリンであり、その他方の腕は蛍光マーカーＮＢＤを支持するセリンの頭に結合されている。
【０３９４】
ＴＨＰ−１細胞系はヒト単球系であり、活性化されると、マクロファージに分化し、フォスファチジルセリン受容体を発現する。これらの細胞をフォスファチジルセリン‐ＮＢＤ存在下で培養した。
【０３９５】
ＰＳ−ＮＢＤ：８１０１９２  Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ−Ｌｉｐｉｄｓ（ＣＯＧＥＲ）
【０３９６】
フローサイトメトリーを用いたプロトコル
−  １０６Ｃ／ｍｌのＴＨＰ‐１懸濁液２ｍｌを６−ウェルプレートに播種する。
−  ＴＨＰ‐１を５０ｎｍｏｌ／ｌのＰＭＡによって２４時間活性化させる。
−  （６．２５ｍｍｏｌ／ｌの溶液からの）７００ｍｌの各希釈液を２４時間インキュベートする。
−  過剰な生成物を吸引除去する。
−  細胞層をフェノールレッド無しのＲＰＭＩ １ｍｌで洗浄する。
−  過剰なものを吸引除去する。
−  細胞をＰＢＳ １ｍｌに再度懸濁させる（層の上に媒質の流れを用いて細胞を離断し、離断しなかった細胞はスクレーパを用いて掻き取る）。
−  読取りを待っている間、細胞を４℃で暗所に置く。
−  フローサイトメトリーを用いて、ＦＬ１において５２５ｎｍで蛍光を読み取る。
ＰＳ−ＮＢＤ範囲を試験：１３、３２および６４μＭ
対照：ＴＨＰ−１
試験群：ＴＨＰ−１／ＰＭＡ、ＴＨＰ‐１／ＰＳ‐ＮＢＤ（５μＭ）
結果：陰性対照と最大濃度との比は５０倍を上回る。
【０３９７】
ＩＩＩ２  生体外試験
生体外試験の結果は、ＷＨＨＬウサギからの一次のマクロファージとフォスファチジルセリン‐ＮＢＤ（ＰＳ−ＮＢＤ）との間に相互作用があることを示す。実際、マクロファージは大動脈弓および腸管膜リンパ節から分離し、ＰＳ−ＮＢＤの存在下で生体外で１８時間インキュベートした。蛍光顕微鏡によりこれら細胞を分析したところ、ＰＳ‐ＮＢが細胞内に大きく蓄積されていることがわかった。さらに正確に言えば、ウサギを放血させてヘパリン化ウシ新生児血清で潅流した後、殺処分した。大動脈弧、胸部大動脈、および腹部大動脈を除去した。除去した組織を、ＰＳ‐ＮＢＤが添加された細胞培養培地で１８時間インキュベートし、次いで、組織片を切断するために凍結ブロック内に設置した。蛍光顕微鏡により特定の部分を観察し、他の部分を抗ウサギマクロファージ抗体（ＲＡＭ１１）を用いて免疫標識した。
ＰＳ−ＮＢＤを用いた、組織のインキュベーション
−  ３５μＭのＰＳ−ＮＢＤの存在下で、２４−ウェルプレートを用いて標本を３７℃で１８時間インキュベートする。
−  ＰＢＳで動脈を２回洗い流す。
−  動脈の各片を凍結ゲルに埋め込む。
−  凍結固定（Ｃｒｙｏｆｉｘａｔｉｏｎ）を行う。
−  成分を−８０℃の冷凍庫に保管する。
免疫組織化学
−  マウス一次抗体Ｒａｍ１１を１／１００で希釈して用いる。
−  二次抗体（ヤギ抗マウス）をアルカリホスファターゼに結合する。
−  使用するクロモゲンは（ＡｂＣｙｓによって供給される）ＡＤＣである。
−  再度、迅速に対比染色を行う。
【０３９８】
免疫組織化学によれば、標本片のすべての部分にマクロファージがあることが示された。
【０３９９】
本発明者らは生体外試験ではＡｐｏＥ−ＫＯマウスのアテローム性プラークにおいてＰＳ‐ＮＢＤが分布していることも明らかにした。この目的で、弁および大動脈弧のほか腸骨分岐部も含む標本をＰＳ‐ＮＢＤ存在下でインキュベートする。この試験によって、フォスファチジルセリンがプラークに存在するマクロファージと特異的に相互作用することを示すことが可能となった。
【０４００】
本発明者らは（陰性ＫＢ細胞と陽性ＴＨＰ細胞との比較試験により）、活性化マクロファージの表面に発現したフォスファチジルセリン受容体によるＰＳ‐ＮＢＤの認識がセリンリン酸（極性基）には効果的に及ぶが、脂肪鎖には及ばないことも明らかにした。この目的のため、まずＰＳ−ＮＢＤを用い、次にＮＢＤ‐ＰＳ（蛍光マーカーはセリンの頭部に結合されているが、脂肪鎖には結合されていない）を用いて生体外およびインビトロ両方で同じアッセイを（活性化ＴＨＰ１細胞を対象に）行った。
【０４０１】
（活性化と非活性化）ＴＨＰ１細胞を対象にしたインビトロ試験では、本発明者らはＢがＰＳ誘導体であり、ＨＲキレートがＢＩＯ‐ＦＯＬＡＴＥ．Ｉに用いられるものと同一である、式（Ｅ）の化合物を試験し、陽性の活性化ＴＨＰ１基において著しく大きい結合および／または蓄積がみられることを示した。
【手続補正書】
【提出日】平成19年2月26日(2007.2.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2007527857000001.app
【国際調査報告】
2007527857.tif 000215
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