(57)【要約】本発明は、親油基に連結した免疫刺激性核酸に、部分的に関連する。親油基に連結した特定の免疫刺激性核酸が、活性を向上させたのに対して、他の免疫刺激性核酸への親油基の結合は、その分子の免疫刺激能力について効果が最小限であった。本発明は、以下：（Ｎ１ＰＮ２）・Ｌを含有する組成物に関し、ここで、Ｎ１およびＮ２は独立して、０〜１００ヌクレオチド長の核酸であり、Ｐは、核酸を含み、かつ少なくとも１つのＹＲジヌクレオチドを含むパリンドロームであり、Ｙは、シトシンまたは修飾されたシトシンであり、そしてＲは、グアニンまたは修飾されたグアニンである。
2007506790.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組成物であって、以下：
（Ｎ１ＰＮ２）・Ｌ
を含有し、Ｎ１およびＮ２は独立して、０〜１００ヌクレオチド長の核酸であり、Ｐは、核酸を含み、かつ少なくとも１つのＹＲジヌクレオチドを含むパリンドロームであり、Ｙは、シトシンまたは修飾されたシトシンであり、そしてＲは、グアニンまたは修飾されたグアニンであり、Ｌは、親油基である、組成物。
【請求項２】
Ｎ１ＰＮ２が、３〜１４ヌクレオチド長である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
Ｌが、Ｎ１ＰＮ２の３’末端で前記ヌクレオチドに連結された、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
Ｌが、リンカーによって、Ｎ１ＰＮ２中のヌクレオチドの２’位か、Ｎ１ＰＮ２中のヌクレオチドの複素環式塩基か、またはＮ１ＰＮ２中のホスホジエステル結合に連結される、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記ヌクレオチドが、Ｎ１ＰＮ２の３’末端のヌクレオチド、および内部のヌクレオチドからなる群より選択される、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
Ｌが、コレステリル、修飾されたコレステリル、コレステロール誘導体、還元されたコレステロール、および置換されたコレステロールからなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記還元されたコレステロールが、コレスタンである、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
Ｌが、Ｃ１６アルキル鎖、胆汁酸類、コール酸、タウロコール酸、デオキシコレート、オレイルリトコール酸、オレオイルコレン酸、糖脂質類、リン脂質類、スフィンゴ脂質類、ステロイド類のようなイソプレノイド類、ビタミンＥのようなビタミン類、飽和脂肪酸類、不飽和脂肪酸類、トリグリセリド類のような脂肪酸エステル類、ピレン類、ポルフィリン類、テキサフィリン、アダマンタン、アクリジン類、ビオチン、クマリン、フルオレセイン、ローダミン、テキサスレッド、ジゴキシゲニン、ジメトキシトリチル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、シアニン色素（例えば、Ｃｙ３またはＣｙ５）、Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３２５８色素、ソラレン、およびイブプロフェンからなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記式が、Ｎ１ＰＮ２−Ｌ−Ｎ３ＰＮ４を包含し、Ｎ３およびＮ４は独立して、０〜１００ヌクレオチドの長さの核酸である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
Ｌが、−３’−Ｌ−３’−、−２’−Ｌ−２’−、−３’−Ｌ−２’−、および−２’−Ｌ−３’−からなる群より選択される結合を介して、Ｎ１ＰＮ２およびＮ３ＰＮ４に連結される、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
Ｎ１ＰＮ２およびＮ３ＰＮ４が、同一である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１２】
Ｎ１ＰＮ２およびＮ３ＰＮ４が、異なる、請求項９に記載の組成物。
【請求項１３】
請求項１に記載の組成物であって、さらに少なくとも２Ｌを含有する、組成物。
【請求項１４】
前記式が、以下：
（［Ｎ１ＰＮ２］ｎ−Ｘ３）ｍ）・（Ｌ）ｐ
を包含し、Ｘ３は、リンカーであり、ｍは、０〜２０（好ましくは１〜１０）の整数であり、ｎは、０〜２０（好ましくは１〜１０）の整数であり、ｐは、１〜１０（好ましくは１）の整数であり、そして該オリゴヌクレオチドＮ１ＰＮ２は、４〜４０ヌクレオチド長を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
Ｘ３が、無塩基残基（ｄスペーサー）、トリエチレングリコール（スペーサー９）またはヘキサエチレングリコール（スペーサー１８）のようなオリゴエチレングリコール、およびブタンジオールのようなアルカンジオールからなる群より選択される非ヌクレオチドリンカーである、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記リンカーが、ホスホジエステル結合、ホスホロチオエート結合、メチルホスホネート結合、およびアミド結合からなる群より選択される結合を介して、前記オリゴヌクレオチドに結合される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１７】
ｎが、１より大きく、そして前記複数の［Ｎ１ＰＮ２］が、３’末端を介して連結される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１８】
Ｎ１ＰＮ２が、分枝ＯＤＮであり、Ｎ１が、少なくとも１つのＣＧジヌクレオチドを含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１９】
Ｌが、前記オリゴヌクレオチド［Ｎ１ＰＮ２］の３’末端に結合される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２０】
Ｐが、Ｘ１−Ｙ−Ｒ−Ｘ２であり、Ｘ１およびＸ２は独立して、０〜４ヌクレオチドである、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２１】
Ｘ１が、１〜２ヌクレオチドである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
Ｘ１が、１ヌクレオチドである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２３】
Ｘ１が、ピリミジンである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２４】
前記ピリミジンが、チミジン、デオキシウリジン、および５−置換デオキシウリジンからなる群より選択される、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２５】
Ｘ２が、パリンドローム、または逆方向反復である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２６】
前記パリンドロームおよび前記逆方向反復が、少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧモチーフを含む、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記オリゴヌクレオチドＮ１ＰＮ２が、４〜２０ヌクレオチド長を有する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２８】
前記オリゴヌクレオチドＮ１ＰＮ２が、６〜１４ヌクレオチド長を有する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２９】
前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの、直鎖状の非ヌクレオシド結合または分枝状の非ヌクレオシド結合を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３０】
請求項１に記載の組成物であって、さらに該組成物に関連する免疫刺激分子を含有する、組成物。
【請求項３１】
前記免疫刺激分子が、ＴＬＲ９リガンドである、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記オリゴヌクレオチドのヌクレオチド間結合が、全てホスホジエステル結合である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの安定化したヌクレオチド間結合を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３４】
前記安定化したヌクレオチド間結合が、ＹとＲとの間の結合であり、そして該安定化したヌクレオチド間結合が、Ｒｐ立体配置におけるホスホロチオエート結合である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
Ｐが、Ｃ＿Ｇ＿Ａ＿Ｃ、Ｃ＿Ｇ＿Ｔ＿Ｃ、Ｔ＿Ｃ＿Ｇ＿Ａ＿Ｃ、Ｃ＿Ｇ＿Ａ＿Ｃ＿Ｇ＿Ｔ＿Ｃ、Ｃ＿Ｇ＿Ｇ＿Ｃ＿Ｇ＿Ｇ、およびＧ＿Ａ＿Ｃ＿Ｇ＿Ａからなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３６】
前記オリゴヌクレオチド中の少なくとも１つのヌクレオチドが、置換されたプリンもしくは置換されたピリミジン、または修飾されたプリンもしくは修飾されたピリミジンである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３７】
前記置換されたピリミジンが、Ｃ５置換である、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
前記置換されたプリンが、Ｃ８置換またはＣ７置換である、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３９】
前記置換されたピリミジン、または前記修飾されたピリミジンが、５−置換シトシンである、請求項３６に記載の組成物。
【請求項４０】
複合的なオリゴヌクレオチドが、複合的なダブラー部分、またはトレブラー部分によって連結され、デンドリマーを形成する、請求項１に記載の組成物。
【請求項４１】
前記組成物が、少なくとも１つの、アミド結合によって連結されたアミノ酸残基を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項４２】
前記オリゴヌクレオチドが、３’５’−結合、２’５’−結合、３’３’−結合、および５’５’−結合からなる群より選択される、少なくとも１つのヌクレオチド間結合を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項４３】
ＬとＮ１ＰＮ２−との間の結合が、代謝的に安定である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４４】
ＬとＮ１ＰＮ２−との間の結合が、代謝的に不安定である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４５】
Ｌが、キャリアに関連する、請求項１に記載の組成物。
【請求項４６】
前記キャリアが、リポソーム、ＩＳＣＯＭ、疎水性ビーズ、疎水性処方物、ポリマー、ペプチド、タンパク質、および核酸からなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項４７】
請求項４６に記載の組成物であって、さらに該組成物に関連した治療因子を含有する、組成物。
【請求項４８】
請求項１に記載の組成物であって、以下：
少なくとも１つの露出した５’末端を有する核酸であって、該核酸が、少なくとも１つのＹＲジヌクレオチドを含み、Ｙは、シトシンまたは修飾されたシトシンであり、そしてＲは、グアニンまたは修飾されたグアニン、少なくとも１つの１本鎖領域、少なくとも１つの２本鎖領域であって、そして該核酸は、少なくとも１つの親油基と連結される、核酸
をさらに含有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項４９】
前記核酸が、１本鎖核酸である、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５０】
前記核酸が、２本鎖領域を形成し、該２本鎖領域は、該２本鎖領域のそれぞれの側に少なくとも２つの核酸の塩基対形成を包含する、請求項４９に記載の組成物。
【請求項５１】
前記核酸が、２本鎖領域を形成し、該２本鎖領域は、該２本鎖領域のそれぞれの側に少なくとも３つの核酸の塩基対形成を包含する、請求項４９に記載の組成物。
【請求項５２】
前記核酸が、分枝状核酸である、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５３】
前記核酸が、互いに、少なくとも部分的にハイブリダイズした２つの１本鎖核酸である、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５４】
前記核酸が、少なくとも２つの親油基に連結される、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５５】
前記親油基が、前記核酸の３’末端でヌクレオチドに連結される、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５６】
免疫応答を調節するための方法であって、請求項１〜請求項５５のいずれか１項に記載の組成物を、免疫応答を調節するのに有効な量で被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項５７】
前記組成物が、前記被験体の喘息を処置するために、該被験体に送達される、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記組成物が、前記被験体のアレルギーを処置するために、該被験体に送達される、請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
前記組成物が、前記被験体の癌を処置するために、該被験体に送達される、請求項５６に記載の方法。
【請求項６０】
前記組成物が、前記被験体の感染症を処置するために、該被験体に送達される、請求項５６に記載の方法。
【請求項６１】
前記組成物が、前記被験体の自己免疫疾患を処置するために、該被験体に送達される、請求項５６に記載の方法。
【請求項６２】
前記組成物が、前記被験体の気道リモデリングを処置するために、該被験体に送達される、請求項５６に記載の方法。
【請求項６３】
請求項５６に記載の方法であって、前記被験体に抗原を投与する工程をさらに包含する、方法。
【請求項６４】
請求項５６に記載の方法であって、前記被験体に治療プロトコルをさらに施行する方法。
【請求項６５】
前記治療プロトコルが、手術である、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記治療プロトコルが、放射線である、請求項６４に記載の方法。
【請求項６７】
前記治療プロトコルが、薬剤である、請求項６４に記載の方法。
【請求項６８】
前記組成物が、処方される、請求項５６に記載の方法。
【請求項６９】
前記組成物が、標的分子に関連する、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記組成物が、口の経路、鼻の経路、舌下の経路、静脈内の経路、皮下の経路、粘膜の経路、呼吸器の経路、直接注入、および経皮的な経路からなる群より選択される経路によって送達される、請求項５６に記載の方法。
【請求項７１】
前記少なくとも１つの安定化したヌクレオチド間結合が、ホスホロチオエート結合である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項７２】
前記オリゴヌクレオチドが、該オリゴヌクレオチドの、５’末端および３’末端における、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む、請求項３３に記載の組成物。
【請求項７３】
（Ｎ１ＹＲＮ２）・Ｌ
を含有する組成物であって、Ｎ１およびＮ２は独立して、０〜１００ヌクレオチド長の核酸であり、Ｙは、シトシンまたは修飾されたシトシンであり、そしてＲは、グアニンまたは修飾されたグアニンであり、そしてＮ１ＹＲＮ２は、少なくとも１０ヌクレオチドの長さであり、Ｌは、親油基であり、そしてＬは、リンカーによって、Ｎ１ＹＲＮ２中のヌクレオチドの２’位に、またはＮ１ＹＲＮ２中のヌクレオチドの複素環式塩基に連結される、組成物。
【請求項７４】
Ｌが、コレステリル、修飾されたコレステリル、コレステロール誘導体、還元されたコレステロール、および置換されたコレステロールからなる群より選択される、請求項７３に記載の組成物。
【請求項７５】
前記還元されたコレステロールが、コレスタンである、請求項７４に記載の組成物。
【請求項７６】
Ｌが、Ｃ１６アルキル鎖、胆汁酸類、コール酸、タウロコール酸、デオキシコレート、オレイルリトコール酸、オレオイルコレン酸、糖脂質類、リン脂質類、スフィンゴ脂質類、ステロイド類のようなイソプレノイド類、ビタミンＥのようなビタミン類、飽和脂肪酸類、不飽和脂肪酸類、トリグリセリド類のような脂肪酸エステル類、ピレン類、ポルフィリン類、テキサフィリン、アダマンタン、アクリジン類、ビオチン、クマリン、フルオレセイン、ローダミン、テキサスレッド、ジゴキシゲニン、ジメトキシトリチル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、シアニン色素（例えば、Ｃｙ３またはＣｙ５）、Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３２５８色素、ソラレン、およびイブプロフェンからなる群より選択される、請求項７３に記載の組成物。
【請求項７７】
Ｎ１ＹＲＮ２が、５’ＴＣＣＧ３’、５’ＴＴＣＧ３’、および５’ＴＣＧＴＣＧ３’からなる群より選択される、請求項７３に記載の組成物。
【請求項７８】
（Ｎ１ＰＮ２）・Ｌ
を含有する組成物であって、Ｎ１およびＮ２は独立して、０〜１００ヌクレオチド長の核酸であり、Ｐは、核酸を含み、かつ少なくとも１つのＹＲジヌクレオチドを含むパリンドロームであり、Ｙは、シトシンまたは修飾されたシトシンであり、そしてＲは、グアニンまたは修飾されたグアニンであり、そしてＬは、コレステロールである、組成物。
【請求項７９】
Ｌが、Ｎ１ＰＮ２の３’末端で前記ヌクレオチドに連結される、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８０】
Ｎ１ＰＮ２が、５’ＴＣＧＡＣＧＴＣＧＴ３’（配列番号１１１）、および５’ＴＣＧＡＣＧＴＣＧＡ３’（配列番号１１２）からなる群より選択される、請求項７８に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は概して、核酸親油性接合体、これらの組成物、およびその接合体を使用する方法に関連する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
細菌ＤＮＡは、Ｂ細胞およびナチュラルキラー細胞を活性化する免疫刺激効果を有するが、脊椎動物ＤＮＡはその効果を有さない（非特許文献１、非特許文献２および非特許文献３）。細菌ＤＮＡのこれらの免疫刺激効果は、特定の塩基内容（ｂａｓｅ  ｃｏｎｔｅｘｔ）（ＣｐＧモチーフ）における非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドの存在の結果であり、その非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドは、細菌ＤＮＡにおいて一般的であるが、脊椎動物ＤＮＡにおいてはメチル化されかつ十分に示されない（非特許文献４）。上記細菌ＤＮＡの免疫刺激効果は、これらのＣｐＧモチーフを有する合成オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）を用いて模倣され得る。このようなＣｐＧ  ＯＤＮは、Ｂ細胞増殖、サイトカインの分泌および免疫グロブリンの分泌、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の細胞溶解活性およびＩＦＮ−γ分泌、および樹状細胞（ＤＣ）の活性化、ならびに共起刺激分子を発現させ、そしてサイトカイン（特に、Ｔｈ１様Ｔ細胞応答の発生の促進に重要なＴｈ１様サイトカイン）の分泌を与える他の抗原提示細胞の活性化を含む、ヒトの白血球およびマウスの白血球に対する高い刺激効果を有する。ネイティブなホスホジエステル骨格のＣｐＧ  ＯＤＮのこれらの免疫刺激効果は、そのＣｐＧモチーフが、メチル化されるか、ＧｐＣに変換されるか、または別の方法で除去されるか、もしくは変化する場合、上記効果を劇的に減少させる点で、高度にＣｐＧ特異的である（非特許文献５）。
【０００３】
初期の研究において、上記免疫刺激性ＣｐＧモチーフは、式：プリン−プリン−ＣｐＧ−ピリミジン−ピリミジンに従うと考えられた（非特許文献６、非特許文献７、非特許文献８、非特許文献９）。しかし、現在、マウスリンパ球が、この「式」に従わないホスホジエステルＣｐＧモチーフに、非常に良く応答し、（非特許文献１０）、同じことが、ヒトＢ細胞および樹状細胞にも当てはまる（非特許文献１１、非特許文献１２）ことが明らかである。それにも関らず、用語「ＣｐＧモチーフ」は概して、ＣｐＧジヌクレオチドが、その中心にある６量体モチーフを称するために使用される。
【非特許文献１】Ｔｏｋｕｎａｇａ，Ｔ．ら、１９８８．Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７９：６８２−６８６；Ｔｏｋｕｎａｇａ，Ｔ．ら、１９８４，ＪＮＣＩ  ７２：９５５−９６２；Ｍｅｓｓｉｎａ，Ｊ．Ｐ．ら、１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：１７５９−１７６４
【非特許文献２】Ａｐｐｌｉｅｄ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＣＡ．ＳｔｅｉｎおよびＡ．Ｍ．Ｋｒｉｅｇ，（編）中Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，４３１−４４８ページのＫｒｉｅｇによる概説
【非特許文献３】Ｋｒｉｅｇ．Ａ．Ｍ．ＣｐＧ  ｍｏｔｉｆｓ  ｉｎ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ＤＮＡ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｉｍｍｕｎｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ（２００２）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：７０９−７６０
【非特許文献４】Ｋｒｉｅｇら、１９９５  Ｎａｔｕｒｅ  ３７４：５４６−５４９；Ｋｒｉｅｇ，１９９９  Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  ９３３２１：１−１０
【非特許文献５】Ｋｒｉｅｇら、１９９５  Ｎａｔｕｒｅ  ３７４：５４６−５４９；Ｈａｒｔｍａｎｎら、１９９９  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９６：９３０５−１０
【非特許文献６】Ｋｒｉｅｇら、１９９５  Ｎａｔｕｒｅ  ３７４：５４６‐５４９
【非特許文献７】Ｐｉｓｅｔｓｋｙ，１９９６  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５６：４２１−４２３
【非特許文献８】Ｈａｃｋｅｒら、１９９８  ＥＭＢＯ  Ｊ．１７：６２３０−６２４０
【非特許文献９】Ｌｉｐｆｏｒｄら、１９９８  Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６：４９６‐５００
【非特許文献１０】Ｙｉら、１９９８  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：５８９８−５９０６
【非特許文献１１】Ｈａｒｔｍａｎｎら、１９９９  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９６：９３０５−１０
【非特許文献１２】Ｌｉａｎｇ，１９９６  Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９８：１１１９−１１２９
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
（発明の要旨）
本発明は部分的に、親油基に連結された免疫刺激性核酸に関連する。親油基に連結された特定の免疫刺激性核酸が、活性を上昇させたのに対して、他の免疫刺激性核酸への親油基の結合は、その分子の免疫刺激能力に対する効果が最小限であることが、見出されていた。
【０００５】
１つの局面において、本発明は、（Ｎ１ＰＮ２）Ｌの組成物に関連し、Ｎ１およびＮ２は独立して、０〜１００ヌクレオチド長の核酸であり、Ｐは、核酸を含み、かつ少なくとも１つのＹＲジヌクレオチドを含むパリンドロームであり、ここでＹは、シトシンまたは修飾されたシトシンであり、そしてＲは、グアニンまたは修飾されたグアニンであり、Ｌは、親油基である。１つの実施形態において、Ｎ１ＰＮ２は、３〜１４ヌクレオチド長である。別の実施形態において、Ｌは、Ｎ１ＰＮ２の３’末端で上記ヌクレオチドに連結される。必要に応じて、上記ヌクレオチドは、Ｎ１ＰＮ２の３’末端におけるヌクレオチド、および内部のヌクレオチドからなる群より選択される。１つの実施形態において、Ｐは、２〜１００ヌクレオチド長である。別の実施形態において、Ｐは、４〜１４ヌクレオチド長である。
【０００６】
他の実施形態において、Ｌは、リンカーによって、Ｎ１ＰＮ２中のヌクレオチドの２’位か、Ｎ１ＰＮ２中のヌクレオチドの複素環式塩基か、またはＮ１ＰＮ２中のホスホジエステル結合に連結される。
【０００７】
Ｌは、親油基であり、それは、コレステロール、修飾されたコレステロール、コレステロール誘導体、還元されたコレステロール、置換されたコレステロール、コレスタン、Ｃ１６アルキル鎖、胆汁酸類、コール酸、タウロコール酸、デオキシコレート（ｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ）、オレイルリトコール酸、オレオイルコレン酸（ｏｌｅｏｙｌ  ｃｈｏｌｅｎｉｃ  ａｃｉｄ）、糖脂質類、リン脂質類、スフィンゴ脂質類、ステロイド類のようなイソプレノイド類、ビタミンＥのようなビタミン類、飽和脂肪酸類、不飽和脂肪酸類、トリグリセリド類のような脂肪酸エステル類、ピレン類、ポルフィリン類、テキサフィリン（Ｔｅｘａｐｈｙｒｉｎｅ）、アダマンタン、アクリジン、ビオチン、クマリン、フルオレセイン、ローダミン、テキサスレッド、ジゴキシゲニン、ジメトキシトリチル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、シアニン色素（例えば、Ｃｙ３またはＣｙ５）、Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３２５８色素、ソラレン、またはイブプロフェンである。上記組成物は、少なくとも２Ｌを含み得る。
【０００８】
いくつかの実施形態において、上記式は、Ｎ１ＰＮ２−Ｌ−Ｎ３ＰＮ４を包含し、Ｎ３およびＮ４は独立して、０〜１００ヌクレオチド長の核酸である。Ｌは、−３’−Ｌ−３’−、−２’−Ｌ−２’−、−３’−Ｌ−２’−、および−２’−Ｌ−３’−からなる群より選択される結合を介して、Ｎ１ＰＮ２およびＮ３ＰＮ４に連結され得る。いくつかの実施形態において、Ｎ１ＰＮ２およびＮ３ＰＮ４は、同一である。他の実施形態において、Ｎ１ＰＮ２およびＮ３ＰＮ４は、異なる。
【０００９】
本発明の他の局面における組成物は、以下の式：（［Ｎ１ＰＮ２］ｎ−Ｘ３）ｍ）・（Ｌ）ｐである。Ｘ３は、リンカーであり、ｍは、０〜２０（好ましくは１〜１０）の整数であり、ｎは、０〜２０（好ましくは１〜１０）の整数であり、ｐは、１〜１０（好ましくは１）の整数である。上記オリゴヌクレオチドＮ１ＰＮ２は、４〜４０ヌクレオチド長を有する。ｎは、１より大きく、そして上記複数の［Ｎ１ＰＮ２］は、３’末端を介して連結される。
【００１０】
いくつかの実施形態において、Ｘ３は、無塩基残基（ｄスペーサー（ｄＳｐａｃｅｒ））、トリエチレングリコール（スペーサー（ｓｐａｃｅｒ）９）またはヘキサエチレングリコール（スペーサー１８）のようなオリゴエチレングリコール、およびブタンジオールのようなアルカンジオールからなる群より選択される非ヌクレオチド性リンカーである。
【００１１】
他の実施形態において、上記リンカーは、ホスホジエステル結合、ホスホロチオエート結合、メチルホスホネート結合、およびアミド結合からなる群より選択される結合を介して、オリゴヌクレオチドに結合される。
【００１２】
必要に応じて、Ｎ１ＰＮ２は、分枝ＯＤＮであり、Ｎ１は、少なくとも１つのＣＧジヌクレオチドを含む。
【００１３】
Ｌは、上記オリゴヌクレオチド［Ｎ１ＰＮ２］の３’末端に結合され得る。ＬとＮ１ＰＮ２−との間の結合は、代謝的に安定であり得るか、または代謝的に不安定であり得る。
【００１４】
Ｐは、式：Ｘ１−Ｙ−Ｒ−Ｘ２を有し得、Ｘ１およびＸ２は独立して、０〜４ヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、Ｘ１は１〜２ヌクレオチドである。他の実施形態において、Ｘ１は、ピリミジンである。必要に応じて、上記ピリミジンは、チミジン、デオキシウリジンおよび５−置換デオキシウリジンからなる群より選択される。他の実施形態において、Ｘ２は、パリンドロームまたは逆方向反復（部分的にパリンドローム）である。上記パリンドロームまたは逆方向反復（部分的にパリンドローム）は、少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧモチーフを含み得る。Ｐは、Ｃ＿Ｇ＿Ａ＿Ｃ、Ｃ＿Ｇ＿Ｔ＿Ｃ、Ｔ＿Ｃ＿Ｇ＿Ａ＿Ｃ、Ｃ＿Ｇ＿Ａ＿Ｃ＿Ｇ＿Ｔ＿Ｃ、Ｃ＿Ｇ＿Ｇ＿Ｃ＿Ｇ＿Ｇ、およびＧ＿Ａ＿Ｃ＿Ｇ＿Ａからなる群より選択され得る。
【００１５】
いくつかの実施形態において、上記オリゴヌクレオチドＮ１ＰＮ２は、４〜２０ヌクレオチド長、または６〜１４ヌクレオチドの長さを有する。
【００１６】
必要に応じて、上記オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの、直鎖状の非ヌクレオシド結合、または分枝状の非ヌクレオシド結合を含む。
【００１７】
免疫刺激分子は、上記組成物に関連し得る。免疫刺激分子の例は、ＴＬＲ９リガンドである。
【００１８】
上記オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの安定化したヌクレオチド間結合を含み得る。好ましくは、上記安定化したヌクレオチド間結合は、ＹとＲとの間の結合であり、そしてその安定化したヌクレオチド間結合は、Ｒｐ立体配置（ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ）におけるホスホロチオエート結合である。好ましくは、上記オリゴヌクレオチドのヌクレオチド間結合は、全てホスホジエステル結合である。
【００１９】
上記オリゴヌクレオチド中の少なくとも１つのヌクレオチドは、置換されたプリンもしくは置換されたピリミジン、または修飾されたプリンもしくは修飾されたピリミジンである。１つの実施形態において、上記置換されたピリミジンは、Ｃ５置換であるか、または上記置換されたプリンは、Ｃ８置換もしくはＣ７置換である。別の実施形態において、上記置換されたプリンもしくは置換されたピリミジン、または修飾されたプリンもしくは修飾されたピリミジンは、５−置換シトシン類（例えば、５−メチル−シトシン、５−フルオロ−シトシン、５−クロロ−シトシン、５−ブロモ−シトシン、５−ヨード−シトシン、５−ヒドロキシ−シトシン、５−ヒドロキシメチル−シトシン、５−ジフルオロメチル−シトシン、および非置換５−アルキニル−シトシンまたは置換５−アルキニル−シトシン）、６−置換シトシン類、Ｎ４−置換シトシン類（例えば、Ｎ４−エチル−−シトシン）、５−アザ−シトシン、２−メルカプト−シトシン、イソシトシン、プソイド（ｐｓｅｕｄｏ）−イソシトシン、縮合環系を有するシトシン類似物類（例えば、Ｎ，Ｎ’−プロピレンシトシンまたはフェノキサジン）、ならびにウラシルおよびその誘導体類（例えば、５−フルオロ−ウラシル、５−ブロモ−ウラシル、５−ブロモビニル−ウラシル、４−チオ−ウラシル、５−ヒドロキシ−ウラシル、５−プロピニル−ウラシル）、チミン誘導体類（例えば、２−チオチミン、４−チオチミン、６−置換チミン）、７−デアザグアニン、７−デアザ−７−置換グアニン（例えば、７−デアザ−７−（Ｃ２−Ｃ６）アルキニルグアニン）、７−デアザ−８−置換グアニン、７−デアザ−８−アザグアニン、ヒポキサンチン、Ｎ２−置換グアニン類（例えば、Ｎ２−メチル−グアニン）、５−アミノ−３−メチル−３Ｈ，６Ｈ−チアゾール［４，５−ｄ］ピリミジン−２，７−ジオン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、プリン、インドール、アデニン、置換アデニン類（例えば、Ｎ６−メチル−アデニン、８−オキソ−アデニン）、８−置換グアニン（例えば、８−ヒドロキシグアニン、および８−ブロモグアニン）、および６−チオグアニンからなる群より選択される。本発明の別の実施形態において、上記塩基は、一般的な塩基（例えば、４−メチル−インドール、５−ニトロ−インドール、３−ニトロピロール、Ｐ塩基（Ｐ−ｂａｓｅ）、およびＫ塩基（Ｋ−ｂａｓｅ））、芳香環系（例えば、ベンズイミダゾールまたはジクロロベンズイミダゾール、１−メチル−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド）、芳香環系（例えば、フルオロベンゼンまたはジフルオロベンゼン）、および水素原子（ｄスペーサー）によって置換される。
【００２０】
複数のオリゴヌクレオチド類は、複数のダブラー（ｄｏｕｂｌｅｒ）部分または複数のトレブラー（ｔｒｅｂｌｅｒ）部分によって連結され得、デンドリマーを形成し得る。
【００２１】
上記組成物は、アミド結合によって連結された、少なくとも１つのアミノ酸残基を含みうる。
【００２２】
必要に応じて、上記オリゴヌクレオチドは、３’５’−結合、２’５’−結合、３’３’−結合、および５’５’−結合からなる群より選択される、少なくとも１つのヌクレオチド間結合を含む。
【００２３】
１つの実施形態において、Ｌは、キャリアに関連する。必要に応じて、上記キャリアは、リポソーム、ＩＳＣＯＭ、疎水性ビーズ、疎水性処方物、ポリマー、ペプチド、タンパク質、および核酸からなる群より選択される。上記組成物はまた、治療因子を含み得る。
【００２４】
他の局面における本発明は、少なくとも１つの露出した５’末端を有する核酸をさらに含有する組成物であって、その核酸は、少なくとも１つのＹＲジヌクレオチドを含み、ここでＹは、シトシンまたは修飾されたシトシンであり、そしてＲは、グアニンまたは修飾されたグアニン、少なくとも１つの１本鎖領域、少なくとも１つの２本鎖領域であって、そして、上記核酸は、少なくとも１つの親油基と連結される。
【００２５】
上記核酸は、１本鎖核酸であり得るか、またはその２本鎖領域のそれぞれの側に少なくとも２つの核酸の塩基対形成を含む２本鎖領域を有し得る。１つの実施形態において、上記核酸は、その２本鎖領域のそれぞれの側に少なくとも３つの核酸の塩基対形成を含む２本鎖領域を形成する。
【００２６】
いくつかの実施形態において、上記核酸は、分枝状核酸である。
【００２７】
他の実施形態において、上記核酸は、互いに、少なくとも部分的にハイブリダイズした２つの１本鎖核酸である。
【００２８】
上記核酸は、少なくとも２つの親油基に連結され得る。必要に応じて、上記親油基は、上記核酸の３’末端で上記ヌクレオチドに連結される。
【００２９】
別の局面において、本発明は、（Ｎ１ＹＲＮ２）・Ｌの親油性組成物であり、Ｎ１およびＮ２は独立して、０〜１００ヌクレオチド長の核酸であり、Ｙは、シトシンまたは修飾されたシトシンであり、そしてＲは、グアニンまたは修飾されたグアニンであり、そしてＮ１ＹＲＮ２は、少なくとも１０ヌクレオチド長である。Ｌは、Ｎ１ＹＲＮ２中のヌクレオチドの２’位か、またはＮ１ＹＲＮ２中のヌクレオチドの複素環式塩基に連結された親油基である。１つの実施形態において、Ｎ１ＹＲＮ２は、５’ＴＣＣＧ３’、５’ＴＴＣＧ３’、または５’ＴＣＧＴＣＧ３’である。
【００３０】
なお別の局面において、本発明は、（Ｎ１ＰＮ２）・Ｌの組成物であり、Ｎ１およびＮ２は独立して、０〜１００ヌクレオチド長の核酸であり、Ｐは、核酸を含み、かつ少なくとも１つのＹＲジヌクレオチドを含有するパリンドロームであり、ここでＹは、シトシンまたは修飾されたシトシンであり、そしてＲは、グアニンまたは修飾されたグアニンであり、そしてＬは、コレステロールである。特定の実施形態において、Ｌは、Ｎ１ＰＮ２の３’末端で上記ヌクレオチドに連結される。特定の実施形態において、Ｎ１ＰＮ２は、５’ＴＣＧＡＣＧＴＣＧＴ３’（配列番号１１１）、および５’ＴＣＧＡＣＧＴＣＧＡ３’（配列番号１１２）からなる群より選択される。
【００３１】
別の局面において、本発明は、アレルギーまたは喘息を処置するための方法に関連する。本方法は、アレルギーもしくは喘息を有するか、またはそれらを有する危険がある被験体に、本明細書中に記載される免疫刺激性ＣｐＧオリゴヌクレオチドを、アレルギーまたは喘息を処置するのに有効な量で投与することによって実施される。１つの実施形態において、そのオリゴヌクレオチドは、粘膜の表面（例えば、呼吸器の組織）に投与される。他の実施形態において、上記オリゴヌクレオチドは、エアロゾル処方物で投与される。必要に応じて、上記オリゴヌクレオチドは、鼻腔内に投与される。他の実施形態において、上記被験体は、アレルギー性喘息を有するか、またはそれを発症する危険を有する。
【００３２】
サイトカイン産生を誘導するための方法は、本発明の別の局面によって提供される。本方法は、本明細書中に記載される免疫賦活性ＣｐＧオリゴヌクレオチドを、ＩＰ１０、ＩＬ６、ＩＬ８、ＩＬ１２、ＩＬ１８、ＴＮＦ、ＩＦＮ−α、ケモカイン、およびＩＦＮ−γからなる群より選択されるサイトカインを誘導するために有効な量で、被験体に投与することによって実施される。
【００３３】
別の局面において、本発明は、抗原または他の治療的化合物（例えば、抗微生物薬または抗癌剤）との組み合わせた、本明細書中に記載される親油性接合体の組成物である。上記抗微生物薬は、例えば、抗ウイルス薬、抗寄生虫薬、抗菌薬または抗真菌薬であり得る。
【００３４】
上記組成物は必要に応じて、薬学的キャリアを含み得、そして／または送達デバイス中に処方され得る。いくつかの実施形態において、上記送達デバイスは、カチオン性脂質、細胞浸透性タンパク質、および徐放性デバイスからなる群より選択される。１つの実施形態において、上記徐放性デバイスは、生分解性ポリマーであるか、マイクロ粒子である。
【００３５】
本発明の別の局面によって、免疫応答を刺激する方法が、提供される。その方法は、親油性接合体を、被験体における免疫応答を誘導するのに有効な量でその被験体に投与する工程を包含する。好ましくは、上記親油性接合体は、経口的にか、局所的にか、徐放性デバイスによってか、経粘膜的にか、全身的にか、非経口的にか、または筋肉内に投与される。上記親油性接合体が、粘膜表面に投与される場合、それは、粘膜の免疫応答または全身性の免疫応答を誘発するのに有効な量で送達され得る。好ましい実施形態において、上記粘膜表面は、口腔の表面、鼻腔の表面、直腸の表面、膣の表面、または眼の表面である。
【００３６】
いくつかの実施形態において、本方法は、上記被験体を抗原に曝す工程を包含し、その免疫応答は、抗原特異的な免疫応答である。いくつかの実施形態において、上記抗原は、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、寄生虫抗原およびペプチド抗原からなる群より選択される。
【００３７】
ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、広範囲の免疫応答を引き起こすことが可能である。例えば、これらの親油性接合体は、Ｔｈ２をＴｈ１免疫応答に変えるために使用され得る。親油性接合体はまた、リンパ球（例えば、Ｂ細胞およびＴ細胞）、樹状細胞、およびＮＫ細胞のような免疫細胞を活性化するために使用され得る。上記活性化は、インビボ、インビトロ、エキソビボ、すなわち、上記被験体から免疫細胞を単離し、その免疫細胞と、その免疫細胞を活性化するのに有効な量の親油性接合体とを接触し、そしてその活性化された免疫細胞をその被験体に再投与することによって行われ得る。いくつかの実施形態において、上記樹状細胞は、癌抗原を示す。上記樹状細胞は、エキソビボにて上記癌抗原に曝され得る。
【００３８】
親油性接合体によって産生される上記免疫応答はまた、サイトカイン産生（例えば、ＩＰ１０、ＩＬ６、ＩＬ８、ＩＬ１２、ＩＬ１８、ＴＮＦ、ＩＦＮ−α、ケモカイン、およびＩＦＮ−γの産生）の誘導を生じ得る。
【００３９】
さらに別の実施形態において、上記親油性接合体は、癌を有するか、または癌を発症する危険を有する被験体において、癌を処置するのに有用である。上記癌は、胆道癌、乳癌、子宮頚癌、絨毛癌、結腸癌、子宮内膜癌、胃癌、上皮内新生物、リンパ腫、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞癌および非小細胞癌）、黒色腫、神経芽細胞種、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、直腸癌、肉腫、甲状腺癌、および腎臓癌、ならびに他の癌腫および肉腫からなる群より選択され得る。いくつかの重要な実施形態において、上記癌は、骨癌、脳癌および中枢神経系の癌、結合組織の癌、食道癌、眼の癌、ホジキンリンパ腫、喉頭癌、口腔癌、皮膚癌、および精巣癌からなる群より選択される。
【００４０】
必要に応じて、親油性接合体が、抗癌療法との組み合わせで投与される場合、親油性接合体はまた、癌治療（すなわち、抗癌療法）に対する癌細胞の反応性を向上させるために使用され得る。上記抗癌療法は、例えば、化学療法、ワクチン（例えば、インビトロにてプライミングした樹状細胞のワクチンもしくは癌抗原のワクチン）または免疫療法物質（例えば、抗体ベースの治療薬）であり得る。この後者の治療法はまた、例えば癌細胞の細胞表面抗原に対して特異的な抗体を投与する工程を包含し、その免疫応答は、抗体依存性細胞媒介性細胞障害（ＡＤＣＣ）を生じる。１つの実施形態において、上記抗体は、リブタキシン（Ｒｉｂｕｔａｘｉｎ）、ハーセプチン、クアドラメット（Ｑｕａｄｒａｍｅｔ）、パノレックス（Ｐａｎｏｒｅｘ）、ＩＤＥＣ−Ｙ２Ｂ８、ＢＥＣ２、Ｃ２２５、オンコリム（Ｏｎｃｏｌｙｍ）、ＳＭＡＲＴ  Ｍ１９５、ＡＴＲＡＧＥＮ、オバレックス（Ｏｖａｒｅｘ）、ベキサール（Ｂｅｘｘａｒ）、ＬＤＰ−０３、ｉｏｒ  ｔ６、ＭＤＸ−２１０、ＭＤＸ−１１、ＭＤＸ−２２、ＯＶ１０３、３６２２Ｗ９４、抗ＶＥＧＦ、ゼナパックス（Ｚｅｎａｐａｘ）、ＭＤＸ−２２０、ＭＤＸ−４４７、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−２、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−１、ＣＥＡＣＩＤＥ、プレターゲット（Ｐｒｅｔａｒｇｅｔ）、ＮｏｖｏＭＡｂ−Ｇ２、ＴＮＴ、Ｇｌｉｏｍａｂ−Ｈ、ＧＮＩ−２５０、ＥＭＤ−７２０００、ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ、ＣＭＡ  ６７６、Ｍｏｎｏｐｈａｒｍ−Ｃ、４Ｂ５、ｉｏｒ  ｅｇｆ．ｒ３、ｉｏｒ  ｃ５、ＢＡＢＳ、抗ＦＬＫ−２、ＭＤＸ−２６０、ＡＮＡ  Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  １Ｄ１０  Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  ＡＢＬ  ３６４  ＡｂおよびＩｍｍｕＲＡＩＴ−ＣＥＡからなる群より選択され得る。
【００４１】
従って、本発明のいくつかの局面によって、癌を有するか、または癌を有する危険のある被験体は、親油性接合体および抗癌療法を施される。いくつかの実施形態において、上記抗癌療法は、化学療法剤、免疫治療因子および癌ワクチンからなる群より選択される。
【００４２】
本方法のさらに別の実施形態は、癌を処置することに関し、その被験体はさらに、インターフェロン−αを投与され得る。
【００４３】
他の局面において、本発明は、上記被験体に親油性接合体を、生得的な免疫応答を活性化するのに有効な量で投与することによって、生得的な免疫応答を誘導するための方法である。従って、上記ＯＤＮは、病原体（例えば、リュシュマニア属、リステリア属、および炭疽菌）を処置するのに有用である。
【００４４】
本発明の別の局面によって、ウイルス感染またはレトロウイルス感染を処置するための方法が、提供される。その方法は、ウイルス感染またはレトロウイルス感染を有するか、またはそれらを有する危険がある被験体に、ウイルス感染またはレトロウイルス感染を処置するのに有効な量の、本発明の組成物のいずれかを投与する工程を包含する。いくつかの実施形態において、ウイルス性疾患は、肝炎ウイルス（例えば、Ｂ型肝炎もしくはＣ型肝炎）、ＨＩＶ、ヘルペスウイルス、またはパピローマウイルスによって引き起こされる。
【００４５】
細菌感染を処置するための方法が、本発明の別の局面によって提供される。その方法は、細菌感染を有するか、または細菌感染を有する危険がある被験体に、細菌感染を処置するのに有効な量の、本発明の組成物のいずれかを投与する工程を包含する。１つの実施形態において、その細菌感染は、細胞内の細菌に起因する。
【００４６】
別の局面において、本発明は、寄生虫感染を有するか、または寄生虫感染を有する危険がある被験体に、寄生虫感染を処置するのに有効な量の、本発明の組成物のいずれかを投与することによって、寄生虫感染を処置するための方法である。１つの実施形態において、その寄生虫感染は、細胞内の寄生虫に起因する。別の実施形態において、その寄生虫感染は、非駆虫性の寄生虫に起因する。
【００４７】
いくつかの実施形態において、上記被験体は、ヒトであり、そして他の実施形態において、その被験体は、非ヒト脊椎動物（例えば、犬、猫、馬、牛、豚、七面鳥、山羊、魚、猿、鶏、ラット、マウス、または羊）である。
【００４８】
別の局面において、本発明は、被験体に本発明の組成物のいずれかを、ＴＨＩ免疫応答を引き起こすのに有効な量で投与することによって、ＴＨ１型免疫応答を誘導するための方法に関連する。
本発明のそれぞれの限界は、本発明の種々の実施形態を包含し得る。これにより、本発明のそれぞれの限界は、いずれか１つの要素、または要素の組み合わせを含み、その限界は、本発明のそれぞれの局面に含まれ得る。
【００４９】
本発明は、添付の図と組み合わせた場合、より容易かつ完全に理解され得る。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５０】
（詳細な説明）
１つの局面における本発明は、親油基に連結した免疫刺激性オリゴヌクレオチドの特定のサブクラスが、免疫刺激効果を媒介する工程において非常に効果的であるという発見を含む。これらの接合体は、癌、感染症、アレルギー、喘息および他の疾患を処置するために免疫系を刺激する工程に対して、治療的および予防的に有用である。
【００５１】
Ａクラス免疫刺激性ＣｐＧオリゴヌクレオチド（例えば、配列番号４０のオリゴヌクレオチド）は、それらの非常に効果的なＩＦＮ−α分泌の誘導と、低いＢ細胞刺激によって特徴付けされる。配列番号４０は、ホスホロチオエート（Ｇ）ｎストレッチによって固定された、パリンドロームのホスホジエステルＣｐＧ配列（配列番号１１０）で構成されている。ＯＤＮ配列は、以下の表１に示される。Ａクラス免疫刺激ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、その３’末端および５’末端が、ホスホロチオエート修飾されており、そしてその中心部分はホスホジエステルであり、そのオリゴヌクレオチドの両端に、少なくとも４つの一連のＧ残基を有する。高分子量凝集物を生じる、分子間の４分子形成の結果としての、Ｇリッチオリゴヌクレオチドの開発は困難であった。このクラスの化合物の生物物理学的特性に関連する問題点としては、凝集の傾向、乏しい安定性、品質管理の困難性およびＰＫ研究で使用される固相抽出（ＳＰＥ）が挙げられる。
【００５２】
オリゴヌクレオチドの（Ｇ）ｎストレッチ（ｎ≧４）は、非同質的な高分子量凝集物を生じる分子間の４分子形成を導くことが知られる。（Ｇ）ｎストレッチを伴うオリゴヌクレオチドの取り込みは、非凝集オリゴヌクレオチドの取り込みより、約２０倍〜４０倍高く、そしてその細胞内局在性もまた、異なるようである。これらの知見が、生物学的活性とどのように関連するのかは、理解されていない。
【００５３】
Ａクラスオリゴヌクレオチド（例えば、配列番号４０であるが、Ｇリッチオリゴヌクレオチドより、より好ましい生物物理学的特性）と同様の能力を有する新規の免疫刺激性オリゴヌクレオチドを見出すための試みにおいて、（Ｇ）ｎストレッチを有さないが、共有結合した親油性残基を有する一連のオリゴヌクレオチドが、本発明によって開発されてきた。意外なことに、オリゴヌクレオチドが、Ａクラス活性に重大な意味を有すると考えられているＧｎ配列を有さなくとも、パリンドロームの中心領域を有し、好ましくはホスホジエステル結合、および結合した少なくとも１つの親油基を伴う場合、高いインターフェロン−α（ＩＦＮ−α）誘導が、検出された。最も高いＩＦＮ−α誘導に関して、ホスホロチオエート残基の数が、最小限に保たれることが好ましい。ＩＦＮ−α分泌の予想外に高い誘導は、５’−ＴＣＧを伴い、そしてただいくつかのホスホロチオエート結合を有するか、またはホスホロチオエート結合を有さないオリゴヌクレオチドの３’末端に結合したＬ（親油基）で構成される組成物に観察された。
【００５４】
ＢクラスＣｐＧオリゴヌクレオチドが、３’末端でコレステロールによって修飾された場合（配列番号３８）、そのＢクラスＣｐＧオリゴヌクレオチドが、ＩＦＮ−α誘導およびＴＬＲ９アッセイの両方で、対応する３’−非修飾オリゴヌクレオチド（配列番号３６）より、低い免疫刺激性であることもまた興味深い。同様に、５’−コレステロール修飾ＯＤＮ（配列番号３７）の活性は、５’−非修飾配列番号３６の活性より、非常に低い。ＢクラスＯＤＮは、非パリンドローム配列からなり、そしてそれは通常、完全に修飾されたホスホロチオエートである。コレステロール修飾から生じるＢクラスＣｐＧ  ＯＤＮの減少した活性は、本明細書中に記載されるパリンドロームのホスホジエステルＣｐＧ  ＯＤＮとは対照的である。３’末端における後者のコレステロール修飾（配列番号４）は、増加した免疫刺激活性を生じるが、同じ配列の５’−コレステロール修飾（配列番号６）は、活性を完全に消失させる。
【００５５】
いくつかの例において、ホスホジエステル骨格を有するオリゴヌクレオチドを含む非パリンドロームＹＲはまた、親油基が、そのオリゴヌクレオチドの３’末端に接合される場合、増加した免疫刺激活性を有する。ホスホジエステルであるＹＲモチーフを少なくとも１つ有するが、オリゴヌクレオチドの５’末端および３’末端において、少なくとも１つのホスホロチオエート結合または他の修飾された結合を有する、キメラオリゴヌクレオチドもまた、親油基が、その分子の３’末端に結合される場合、増加した免疫刺激活性を有する。このようなキメラオリゴヌクレオチド中のＹＲモチーフは、パリンドロームまたは非パリンドロームであり得る。
【００５６】
従って、１つの局面において、本発明は、親油基に連結された免疫刺激性オリゴヌクレオチドの部分集合が、改良された免疫刺激特性を有するという発見を含む。いくつかの局面において、本発明は、以下の式：（Ｎ１ＰＮ２）・Ｌを有する接合体である。Ｌは、親油基である。
【００５７】
上記親油基Ｌは、好ましくは、コレステロールであるか、コレステリルであるか、または修飾されたコレステリル残基である。そのコレステロール部分は、還元され得るか（例えば、コレスタンの場合のように）、または置換され得る（例えば、ハロゲンによって）。１分子中の異なる親油基の組み合わせもまた、可能である。他の親油基としては、胆汁酸類、コール酸またはタウロコール酸、デオキシコレート、オレイルリトコール酸、オレオイルコレン酸、糖脂質類、リン脂質類、スフィンゴ脂質類、ステロイド類のようなイソプレノイド類、ビタミンＥのようなビタミン類、飽和または不飽和のいずれかの脂肪酸類、トリグリセリド類のような脂肪酸エステル類、ピレン類、ポルフィリン類、テキサフィリン、アダマンタン、アクリジン類、ビオチン、クマリン、フルオレセイン、ローダミン、テキサスレッド、ジゴキシゲニン、ジメトキシトリチル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、シアニン色素（例えば、Ｃｙ３またはＣｙ５）、Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３２５８色素、ソラレン、またはイブプロフェンが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、Ｌは、コレステロールではない。
【００５８】
最も高い免疫刺激活性は、他の末端修飾（例えば、ヘキセデシル、ビタミンＥまたはトリエチレングリコール）に比べ、コレステロール修飾によってもたらされた。しかし、これらの物質は、２つ以上の因子がオリゴヌクレオチドに結合される場合、より大きい活性を生じることが、推測される。従って、いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、複数のＬ基を有する。
【００５９】
Ｌは、好ましくは、上記オリゴヌクレオチドが、分枝オリゴヌクレオチドであり、少なくとも１つの遮られない５’ＣｐＧモチーフが存在する場合を除いて、オリゴヌクレオチドの３’末端にあるか、またはその近傍にある。試験されたオリゴヌクレオチドの唯一利用可能な５’末端におけるコレステロール置換（配列番号５および配列番号６）は、その免疫刺激効果にとって有害であった。
【００６０】
Ｌは、リンカー部分によって上記オリゴヌクレオチドに接続され得る。必要に応じて、そのリンカー部分は、非ヌクレオチドリンカー部分である。非ヌクレオチドリンカーは、例えば、無塩基残基（ｄスペーサー）、トリエチレングリコール（スペーサー９）またはヘキサエチレングリコール（スペーサー１８）のようなオリゴエチレングリコール、またはブタンジオールのようなアルカンジオールである。そのスペーサーユニットは、好ましくはホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合によって連結される。そのリンカーユニットは、その分子中にただ一度だけ現れ得るか、または、例えば、ホスホジエステル結合、ホスホロチオエート結合、メチルホスホネート結合、もしくはアミド結合を介して数回取り込まれ得る。
【００６１】
上記親油基Ｌは、上記オリゴヌクレオチドの種々の位置に結合され得る。上述のように、その親油基Ｌは、オリゴヌクレオチドの３’末端に連結され、それはまた、３’−エキソヌクレアーゼに対するオリゴマーの安定性を向上させる目的を果たす。あるいは、それは、内部のヌクレオチド、または分枝上のヌクレオチドに連結され得る。その親油基Ｌは、そのヌクレオチドの２’位に結合され得る。その親油基Ｌはまた、ヌクレオチドの複素環式塩基に結合され得る。
【００６２】
上記オリゴヌクレオチドは、１つまたは２つ以上の接近可能な５’末端を有し得る。このことは、例えば、３’−３’結合、もしくは他の結合を介して２つのオリゴヌクレオチドを結合することによってか、または１つもしくは２つの接近可能な５’末端を有するオリゴヌクレオチドを生成するＬ基を通じて、２つの３’末端を接続して達成され得る。このような構造は、５’ＴＣＧＮ１−Ｌ−Ｎ１ＧＣＴ５’のような式を有し得た。その３’３’−結合は、例えば、ホスホジエステル架橋、ホスホロチオエート架橋または任意の他の修飾されたヌクレオシド間架橋であり得る。このような結合を達成するための方法は、当該分野で公知である。例えば、このような結合は、以下：Ｓｅｌｉｇｅｒ，Ｈ．ら、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ａｎａｌｏｇｓ  ｗｉｔｈ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ３’−３’−  ａｎｄ  ５’−５’−  ｉｎｔｅｒｎｕｃｌｅｏｔｉｄｉｃ  ｌｉｎｋａｇｅｓ  ａｓ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｖｉｒａｌ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ（１９９１），１０（１−３），４６９−７７、およびＪｉａｎｇら、Ｐｓｅｕｄｏ−ｃｙｃｌｉｃ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ：ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９９），７（１２），２７２７−２７３５に開示されてきた。
【００６３】
さらに、３’末端のヌクレオチドの間の結合が、ホスホジエステル架橋、ホスホロチオエート架橋、または他の修飾された架橋ではない、３’３’−結合型ＯＤＮは、トリ−エチレングリコールホスフェート部分、またはテトラ−エチレングリコールホスフェート部分のような、さらなるスペーサーを使用して調製され得る（Ｄｕｒａｎｄ，  Ｍ．ら、Ｔｒｉｐｌｅ−ｈｅｌｉｘ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｂｙ  ａｎ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｏｎｅ  （ｄＡ）１２  ａｎｄ  ｔｗｏ  （ｄＴ）１２  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｂｒｉｄｇｅｄ  ｂｙ  ｔｗｏ  ｈｅｘａｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｃｈａｉｎｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  （１９９２），３１（３８），９１９７−２０４，米国特許第５６５８７３８号、および米国特許第５６６８２６５号）。あるいは、上記非ヌクレオチドリンカーは、エタンジオール、プロパンジオールに由来し得るか、または標準的なホスホラミダイト化学的性質を使用する無塩基のデオキシリボース（ｄスペーサー）ユニット（Ｆｏｎｔａｎｅｌ，Ｍａｒｉｅ  Ｌａｕｒｅｎｃｅら、Ｓｔｅｒｉｃａｌ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｔ４  ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｏｆ  ｎｏｎ−ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｉｃ  ｍｏｉｅｔｉｅｓ  ５’−ａｔｔａｃｈｅｄ  ｔｏ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ；Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９４），２２（１１），２０２２−７）に由来し得る。その非ヌクレオチドリンカーは、１回または複数回取り込まれ得るか、または相互に組み合わされて、連結されるべき２つのＯＤＮの３’末端の間の、任意の望ましい距離を可能にし得る。
【００６４】
親油性修飾が、２つの隣接したヌクレオチドを接続する上記ヌクレオチド間結合の一部である式のオリゴヌクレオチドが、さらに好ましい。上記親油性残基が、その配列内にある場合、異なる配列部分を一緒に連結し、次いで、その配列部分は、それらの５’末端を介して優先的には、接続されない。この場合において、２つ以上の３’３’−連結型配列は、好ましい。また好ましくは、それぞれ、２’２’−連結型配列、３’２’−連結型、配列または２’３’−連結型配列である。必要に応じて、その結合は５’３’結合であり得た。２つ以上の配列が連結された場合、これらは、同一であり得るか、または異なり得る。好ましい結合は、ホスホジエステル結合、ホスホロチオエート結合、アミド結合、エーテル結合、チオエーテル結合、尿素結合、チオ尿素結合、スルホンアミド結合、シッフ塩基結合、およびジスルフィド結合である。別の可能性は、Ｓｏｌｕｌｉｎｋ  ＢｉｏＣｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍの使用である。
【００６５】
上記親油性基は、さらなるスペーサーを伴わないオリゴヌクレオチド（ｍ＝０）に連結され得るか、または１つ以上のリンカーユニット（ｍ＞１）を介して連結され得る。上記オリゴヌクレオチドと親油性残基との間の結合は、代謝的に安定な結合であり得るか、代謝的に不安定な結合であり得る。
【００６６】
従って、いくつかの実施形態において、上記接合体は、以下の式：
（［Ｎ１ＰＮ２］ｎ−Ｘ３）ｍ）・（Ｌ）ｐ
を有し得る。
【００６７】
Ｎ１およびＮ２は独立して、０〜１００ヌクレオチド長の核酸であり、Ｐは、核酸を含み、かつ少なくとも１つのＹＲジヌクレオチドを含むパリンドロームであり、Ｙは、シトシンまたは修飾されたシトシンであり、そしてＲは、グアニンまたは修飾されたグアニンである。
【００６８】
Ｎは必要に応じて、散在型の、直鎖状の非ヌクレオシド結合もしくは分枝状の非ヌクレオシド結合、または他の免疫刺激接合体（例えば、ＴＬＲ分子に対するリガンド）を有する。５’ＴＣＧまたは５’ＵＣＧを有するオリゴヌクレオチドは、特に強い免疫刺激能力を有することが見出されている。
【００６９】
上記式のオリゴヌクレオチド（ヌクレオチドをＬに接続するリンカーとは別である）はまた、非ヌクレオチドリンカー（特に、無塩基性リンカー（ｄスペーサー）、トリエチレングリコールユニット、またはヘキサエチレングリコールユニット）を含み得る。さらに好ましいリンカーは、アルキルアミノリンカー（例えば、Ｃ３アミノリンカー、Ｃ６アミノリンカー、Ｃ１２アミノリンカー）であり、そしてまた、アルキルチオールリンカー（例えば、Ｃ３チオールリンカーまたはＣ６チオールリンカー）である。３’３’−結合を有するオリゴヌクレオチドはまた、ダブラーユニットまたはトレブラーユニットを含み得る。複数のダブラー部分または複数のトレブラー部分によるオリゴヌクレオチドの枝分かれは、本発明のさらなる実施形態であるデンドリマーを導く。式Ｉのオリゴヌクレオチドはまた、ペプチド修飾試薬またはオリゴヌクレオチド修飾試薬から生じるリンカーユニットを含む。さらに、それは、１つ以上の、天然のアミノ酸残基または非天然のアミノ酸残基を含み得、そのアミノ酸残基は、ペプチド（アミド）結合によって接続される。上記式中のヌクレオチドは、３’５’−結合、および／または２’５’−結合を通じて連結され得る。それはさらに、互いに独立して、１つ以上の３’３’−結合、および／または５’５’−結合を含み得る。
【００７０】
Ｐは、パリンドローム、または逆方向反復（すなわち、部分的なパリンドローム）である。好ましくは、パリンドローム、または逆方向反復（部分的なパリンドローム）は、少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧモチーフを含む。いくつかの実施形態において、それは、少なくとも２つまたは３つのＣｐＧモチーフを含む。配列番号４において、上記配列（ＴＣＧＡＣＧＴＣＧＴ、配列番号１１１）は、部分的にパリンドローム（ＣＧＡＣＧＴＣＧ）（すなわち、逆方向反復）であるだけであり、これに対して、配列番号１３の配列は、完全なパリンドロームを形成する。好ましくは、パリンドローム中または逆方向反復（部分的なパリンドローム）中の、少なくとも１つのＣｐＧモチーフは、ＴＣＧＡ、ＡＣＧＴ、またはＣＧＧＣＣＧである。いくつかの好ましいパリンドローム配列としては、以下：
Ｃ＿Ｇ＿Ａ＿Ｃ＿Ｇ＿Ｔ＿Ｃ＿Ｇ
Ｃ＿Ｇ＿Ｔ＿Ｃ＿Ｇ＿Ａ＿Ｃ＿Ｇ
Ｔ＿Ｃ＿Ｇ＿Ａ＿Ｃ＿Ｇ＿Ｔ＿Ｃ＿Ｇ＿Ａ                  配列番号１１２
Ｃ＿Ｇ＿Ａ＿Ｃ＿Ｇ＿Ｔ＿Ｃ＿Ｇ＿Ａ＿Ｃ＿Ｇ＿Ｔ＿Ｃ＿Ｇ  配列番号１１３
Ｃ＿Ｇ＿Ｇ＿Ｃ＿Ｇ＿Ｇ＿Ｃ＿Ｃ＿Ｇ＿Ｃ＿Ｃ＿Ｇ          配列番号１１４
Ｇ＿Ａ＿Ｃ＿Ｇ＿Ａ＿Ｔ＿Ｃ＿Ｇ＿Ｔ＿Ｃ                  配列番号１１５
が挙げられる。
【００７１】
上記免疫刺激性オリゴヌクレオチドは概して、４ヌクレオチドと１００ヌクレオチドとの間の範囲の長さを有する。いくつかの実施形態において、その長さは、４ヌクレオチド〜４０ヌクレオチド、１３ヌクレオチド〜１００ヌクレオチド、１３ヌクレオチド〜４０ヌクレオチド、１３ヌクレオチド〜３０ヌクレオチド、１５ヌクレオチド〜５０ヌクレオチド、もしくは１５ヌクレオチド〜３０ヌクレオチドの範囲、またはこれらの間の範囲の任意の整数の範囲内である。
【００７２】
用語「核酸」および用語「オリゴヌクレオチド」は、交換可能に使用されて複数のヌクレオチド（すなわち、リン酸基および交換可能な有機塩基に連結された糖（例えば、リボースまたはデオキシリボース）を含有する分子であり、その有機塩基は、置換されたピリミジン（例えば、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）もしくはウラシル（Ｕ））、または置換されたプリン（例えば、アデニン（Ａ）もしくはグアニン（Ｇ））のいずれかである）を意味する。本明細書中で使用される場合、用語「核酸」および用語「オリゴヌクレオチド」は、オリゴリボヌクレオチド、ならびにオリゴデオキシリボヌクレオチドを称する。用語「核酸」および用語「オリゴヌクレオチド」はまた、ポリヌクレオシド（すなわち、リン酸のないポリヌクレオチド）、およびポリマーを含む他の有機塩基を含む。核酸分子は、既存の核酸供給源（例えば、ゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡ）から入手され得るが、好ましくは合成的（例えば、核酸合成によって生成される）である。用語「オリゴヌクレオチド」は概して、より短い分子（すなわち、１００ヌクレオチド以下）を称する。
【００７３】
用語「核酸」および用語「オリゴヌクレオチド」はまた、置換または修飾（例えば、塩基および／もしくは糖における）を伴う、核酸またはオリゴヌクレオチドを包含する。例えば、それらとしては、骨格糖を有する核酸があげられ、その骨格糖は、２’位におけるヒドロキシル基以外、および５’位における、リン酸基またはヒドロキシル基以外の低分子量の有機基に共有結合される。従って、修飾された核酸は、２’−Ｏ−アルキル化リボース基を含み得る。さらに、修飾された核酸は、リボースの代わりに、アラビノースまたは２’−フルオロアラビノースのような糖を含み得る。従って、その核酸は、骨格組成物において不均一であり得、それによって、その骨格組成物は、一緒に連結されたポリマーユニットの任意の可能な組み合わせ（例えば、ペプチド−核酸（核酸塩基を伴うアミノ酸骨格を有する））を含む。他の例は、以下により詳細に記載される。
【００７４】
本発明の免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、天然のＲＮＡおよび天然のＤＮＡと比較して、ホスホジエステルヌクレオシド間架橋、β−Ｄ−リボースユニット、および／または天然のヌクレオシド塩基（アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル）を含む、種々の化学的修飾および化学的置換を含み得る。化学的修飾の例は、当業者にとって公知であり、そしてその化学的修飾は、例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ  Ｅ．ら、（１９９０）Ｃｈｅｍ  Ｒｅｖ  ９０：５４３；Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ＆  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｓ．Ａｇｒａｗａｌ，編、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＵＳＡ  １９９３）中の「Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｓ」；Ｃｒｏｏｋｅ  ＳＴら、（１９９６）Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  ３６  ：  １０７−１２９；およびＨｕｎｚｉｋｅｒ  Ｊ．ら、（１９９５）Ｍｏｄ  Ｓｙｎｔｈ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ７：３３１−４１７に記載される。本発明のオリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾を有し得、それぞれの修飾は、天然のＤＮＡまたは天然のＲＮＡで構成される、同じ配列のオリゴヌクレオチドと比較して、特定のホスホジエステルヌクレオシド間架橋の位置、および／または特定のβ−Ｄ−リボースユニットの位置、および／または特定の天然のヌクレオシド塩基の位置にある。
【００７５】
例えば、上記オリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾を含み得、そしてそれぞれの修飾は独立して、以下：
ａ）ヌクレオシドの、３’末端および／または５’末端に位置するホスホジエステルヌクレオシド間架橋の、修飾されたヌクレオチド間架橋による置換；
ｂ）ヌクレオシドの、３’末端および／または５’末端に位置するホスホジエステル架橋の、デホスホ（ｄｅｐｈｏｓｐｈｏ）架橋による置換；
ｃ）糖リン酸骨格由来の糖リン酸ユニットの、別のユニットによる置換；
ｄ）β−Ｄ−リボースユニットの、修飾された糖ユニットによる置換；ならびに
ｅ）天然のヌクレオシド塩基の、修飾されたヌクレオシド塩基による置換より選択される。
【００７６】
オリゴヌクレオチドの化学的修飾についてのより詳細な例は、以下の通りである。
【００７７】
上記オリゴヌクレオチドは、修飾されたヌクレオチド間結合（例えば、上のａまたはｂに記載した置換）を含み得る。これらの修飾された結合は、分解に対して部分的に耐性であり得る（例えば、安定化される）。「安定化されたオリゴヌクレオチド分子」は、このような修飾の形成を生じるインビボ分解（例えば、エキソヌクレアーゼまたはエンドヌクレアーゼによって）に対して比較的耐性であるオリゴヌクレオチドを意味する。いくつかの実施形態において、ホスホロチオエート結合を有するオリゴヌクレオチドは、最大の活性を提供し得、ならびにそのオリゴヌクレオチドを、細胞内の、エキソヌクレアーゼおよびエンドヌクレアーゼによる分解から保護し得る。
【００７８】
ヌクレオシドの３’末端および５’末端に位置するホスホジエステルヌクレオシド間架橋は、修飾されたヌクレオシド間架橋によって置換され得、その修飾されたヌクレオシド間架橋は、例えば、ホスホロチオエート架橋、ホスホロジチオエート架橋、ＮＲ１Ｒ２−ホスホラミデート架橋、ボラノホスフェート架橋、α−ヒドロキシベンジルホスホネート架橋、ホスフェート−（Ｃ１−Ｃ２１）−Ｏ−アルキルエステル架橋、ホスフェート−［（Ｃ６−Ｃ１２）アリール−（Ｃ１−Ｃ２１）−Ｏ−アルキル］エステル架橋、（Ｃ１−Ｃ８）アルキルホスホネート架橋、および／または（Ｃ６−Ｃ１２）アリールホスホネート架橋、（Ｃ７−Ｃ１２）−  −ヒドロキシメチル−アリール（例えば、ＷＯ  ９５／０１３６３に開示される）より選択され、（Ｃ６−Ｃ１２）アリール、（Ｃ６−Ｃ２０）アリールおよび（Ｃ６−Ｃ１４）アリールは必要に応じて、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ニトロ、シアノによって置換され、そしてＲ１およびＲ２は、それぞれ独立して、水素、（Ｃ１−Ｃ１８）−アルキル、（Ｃ６−Ｃ２０）−アリール、（Ｃ６−Ｃ１４）−アリール−（Ｃ１−Ｃ８）−アルキルであり、好ましくは、水素、（Ｃ１−Ｃ８）−アルキルであり、好ましくは、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルおよび／またはメトキシエチルであるか、またはＲ１およびＲ２は、それらを保有する窒素原子と一緒になって、群Ｏ、ＳおよびＮに由来するさらなるヘテロ原子を、さらに含み得る５員環〜６員環の複素環を形成する。
【００７９】
ホスホジエステル架橋の置換は、デホスホ架橋（デホスホ架橋は、例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ  ＥおよびＰｅｙｍａｎ  Ａの「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」，２０巻，「Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｓ」，Ｓ．Ａｇｒａｗａｌ編，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ  １９９３，Ｃｈａｐｔｅｒ  １６，ｐｐ．３５５  ｆｆに記載される）によって、ヌクレオシドの３’末端および５’末端に位置し、デホスホ架橋は、例えば、デホスホ架橋ホルムアセタール基、３’−チオホルムアセタール基、メチルヒドロキシルアミン基、オキシム基、メチレンジメチルヒドラゾ基、ジメチレンスルフォン基、および／またはシリル基から選択される。
【００８０】
糖リン酸骨格（すなわち、糖リン酸骨格は、糖リン酸ユニットで構成される）由来の糖リン酸ユニット（すなわち、糖リン酸ユニットを一緒に形成する、β−Ｄ−リボースおよびホスホジエステルヌクレオシド間架橋）は、別のユニットによって置き換えられ、他のユニットは、例えば、「モルホリノ誘導体」オリゴマー（例えば、Ｓｔｉｒｃｈａｋ  ＥＰら、（１９８９）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  １７：６１２９−４１に記載される）を構築する（すなわち、例えば、モルホリノ誘導体ユニットによる置換である）か、ポリアミド核酸（「ＰＮＡ」；例えば、Ｎｉｅｌｓｅｎ  ＰＥら、（１９９４）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ  ５：３−７に記載される）を構築する（すなわち、例えば、ＰＮＡ骨格ユニット（例えば、２−アミノエチルグリシンによる）による置換である）のに適している。そのオリゴヌクレオチドは、他の炭化水素骨格修飾および他の炭化水素骨格置換（例えば、リン酸基を有するペプチド核酸（ＰＨＯＮＡ）、ロックされた（ｌｏｃｋｅｄ）核酸（ＬＮＡ）、およびアルキルリンカーまたはアミノリンカーを伴う骨格部分を有するオリゴヌクレオチド）を有し得る。アルキルリンカーは、分枝状または非分枝状、置換または非置換、および掌性的に純粋であるか、またはラセミ体の混合物であり得る。
【００８１】
β−リボースユニットまたはβ−Ｄ−２’−デオキシリボースユニットは、修飾された糖ユニットによって置き換えられ得、その修飾された糖ユニットは、例えば、β−Ｄ−リボース、α−Ｄ−２’−デオキシリボース、Ｌ−２’−デオキシリボース、２’−Ｆ−２’−デオキシリボース、２’−Ｆ−アラビノース、２’−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−リボースから選択され、好ましくは２’−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６）リボースは、２’−Ｏ−メチルリボース、２’−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ６）アルケニルリボース、２’−［Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル］−リボース、２’−ＮＨ２−２’−デオキシリボース、β−Ｄ−キシロフラノース、α−アラビノフラノース、２，４−デオキシ−β−Ｄ−エリスロ−ヘキソ−ピラノース、および炭素環式糖類似物（例えば、Ｆｒｏｅｈｌｅｒ  Ｊ（１９９２）Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １１４：８３２０に記載される）、および／または開鎖の糖類似物（例えば、Ｖａｎｄｅｎｄｒｉｅｓｓｃｈｅら、（１９９３）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ４９：７２２３に記載される）、および／またはビシクロ糖類似物（例えば、Ｔａｒｋｏｖ  Ｍら、（１９９３）Ｈｅｌｖ  Ｃｈｉｍ  Ａｃｔａ  ７６：４８１に記載される）である。
【００８２】
いくつかの実施形態において、その糖は、特に、ホスホジエステルヌクレオシド間結合またはホスホジエステル様のヌクレオシド間結合によって結合される、１つまたは両方のヌクレオチドのための２’−Ｏ−メチルリボースである。
【００８３】
核酸はまた、置換されたプリン、および置換されたピリミジン（例えば、Ｃ−５プロリンピリミジン修飾塩基、および７−デアザ−７−置換プリン修飾塩基（Ｗａｇｎｅｒ  ＲＷら、（１９９６）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １４：８４０−４））を含む。プリンおよびピリミジンとしては、アデニン、シトシン、グアニン、およびチミン、ならびに他の天然の核酸塩基および非天然の核酸塩基、置換された芳香族部分および置換されない芳香族成分が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８４】
修飾された塩基は、代表的にＤＮＡ中およびＲＮＡ中に見出されるＴ、Ｃ、Ｇ、Ａ、およびＵのような天然の塩基と、化学的に区別される任意の塩基であるが、修飾された塩基は、これらの天然の塩基と、基本的化学構造を共にする。例えば、その修飾されたヌクレオシド塩基は、ヒポキサンチン、ウラシル、ジヒドロウラシル、プソイドウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−アミノウラシル、５−（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルウラシル、５−（Ｃ２−Ｃ６）−アルケニルウラシル、５−（Ｃ２−Ｃ６）−アルキニルウラシル、５−（ヒドロキシメチル）ウラシル、５−クロロウラシル、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−ヒドロキシシトシン、５−（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルシトシン、５−（Ｃ２−Ｃ６）−アルケニルシトシン、５−（Ｃ２−Ｃ６）−アルキニルシトシン、５−クロロシトシン、５−フルオロシトシン、５−ブロモシトシン、Ｎ２−ジメチルグアニン、２，４−ジアミノ−プリン、８−アザプリン、置換された７−デアザプリン（好ましくは、７−デアザ−７−置換プリンおよび／または７−デアザ−８−置換プリン）、５−ヒドロキシメチルシトシン、Ｎ４−アルキルシトシン（例えば、Ｎ４−エチルシトシン）、５−ヒドロキシデオキシシチジン、５−ヒドロキシメチルデオキシシチジン、Ｎ４−アルキルデオキシシチジン（例えば、Ｎ４−エチルデオキシシチジン）、６−チオデオキシグアノシン、およびニトロピロールのデオキシリボヌクレオシド、Ｃ５−プロピニルピリミジン、およびジアミノプリン（例えば、２，６−ジアミノプリン）、イノシン、５−メチルシトシン、２−アミノプリン、２−アミノ−６−クロロプリン、ヒポキサンチンまたは天然のヌクレオシド塩基の他の修飾より選択され得る。この一覧は、例示的な意図であり、限定であると解釈されるべきではない。
【００８５】
本明細書中に記載された特定の式において、１組の修飾された塩基が、定義される。例えば、文字Ｙは、シトシンまたは修飾されたシトシンを含むヌクレオチドを称するために使用される。本明細書中で使用される場合、修飾されたシトシンは、天然または非天然の、シトシンのピリミジン塩基類似物であり、この類似物は、上記オリゴヌクレオチドの免疫刺激活性を損なわずにこの塩基を置換し得る。修飾されたシトシンとしては、５−置換シトシン（例えば、５−メチル−シトシン、５−フルオロ−シトシン、５−クロロ−シトシン、５−ブロモ−シトシン、５−ヨード−シトシン、５−ヒドロキシ−シトシン、５−ヒドロキシメチル−シトシン、５−ジフルオロメチル−シトシン、および置換されていない５−アルキニル−シトシンまたは置換された５−アルキニル−シトシン）、６−置換シトシン、Ｎ４−置換シトシン（例えば、Ｎ４−エチル−シトシン）５−アザ−シトシン、２−メルカプト−シトシン、イソシトシン、プソイド−イソシトシン、縮合環系を有するシトシン類似物（例えば、Ｎ，Ｎ’−プロピレンシトシンまたはフェノキサジン）、ならびにウラシルおよびその誘導体（例えば、５−フルオロ−ウラシル、５−ブロモ−ウラシル、５−ブロモビニル−ウラシル、４−チオ−ウラシル、５−ヒドロキシ−ウラシル、５−プロピニル−ウラシル）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの好ましいシトシンとしては、５−メチル−シトシン、５−フルオロ−シトシン、５−ヒドロキシ−シトシン、５−ヒドロキシメチル−シトシン、およびＮ４−エチル−シトシンが挙げられる。本発明の別の実施形態において、そのシトシン塩基は、ユニバーサル塩基（ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ｂａｓｅ）（例えば、３−ニトロピロール、Ｐ塩基）、芳香環系（例えば、フルオロベンゼンまたはジフルオロベンゼン）、または水素原子（ｄスペーサー）によって置換される。
【００８６】
文字Ｒは、グアニンまたは修飾されたグアニン塩基を称するために使用される。本明細書中で使用される場合、修飾されたグアニンは、天然のまたは非天然の、グアニンのプリン塩基類似物であり、この類似物は、上記オリゴヌクレオチドの免疫刺激活性を損なわずにこの塩基を置換し得る。修飾されたグアニンとしては、７−デアザグアニン、７−デアザ−７−置換グアニン（例えば、７−デアザ−７−（Ｃ２−Ｃ６）アルキニルグアニン）、７−デアザ−８−置換グアニン、ヒポキサンチン、Ｎ２−置換グアニン（例えば、Ｎ２−メチル−グアニン）、５−アミノ−３−メチル−３Ｈ，６Ｈ−チアゾール［４，５−ｄ］ピリミジン−２，７−ジオン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、プリン、インドール、アデニン、置換されたアデニン（例えば、Ｎ６−メチル−アデニン、８−オキソ−アデニン）、８−置換グアニン（例えば、８−ヒドロキシグアニンおよび８−ブロモグアニン）、および６−チオグアニンが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の別の実施形態において、そのグアニン塩基は、ユニバーサル塩基（例えば、４−メチル−インドール、５−ニトロ−インドール、およびＫ塩基）、芳香環系（例えば、ベンズイミダゾールまたはジクロロベンズイミダゾール、１−メチル−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド）、または水素原子（ｄスペーサー）によって置換される。
【００８７】
特定の塩基修飾がまた、許容された。末端どちらかのＴ残基が、デオキシウリジン（Ｕ）によって置換された配列番号２９は、ＩＦＮ−αの強力な誘導因子であることが分かった。対照的に、全てのＣｐＧモチーフ中のデオキシイノシン（Ｉ）によるＧの置換（配列番号３０における場合）は、ＩＦＮ−α誘導を完全に消滅させた。意外にも、７−デアザデオキシグアノシン（配列番号３１）のようなＧ残基の修飾は、高ＩＦＮ−α誘導を生じた。これにより、Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎ塩基対形成を介する４分子形成についての必要性（これまでに記載されたＧリッチのＡクラスオリゴヌクレオチドの高い活性についての必要条件）は、新規のコレステロール修飾Ａクラス免疫刺激オリゴヌクレオチドのために排除され得る。
【００８８】
本発明における使用に関して、本発明のオリゴヌクレオチドは、当該分野で周知である多くの手段のいずれかを使用して、デノボに合成され得る。例えば、その手段は、β−シアノエチルホスホラミダイト法（Ｂｅａｕｃａｇｅ，Ｓ．Ｌ．，およびＣａｒｕｔｈｅｒｓ，Ｍ．Ｈ．，Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２２：１８５９，１９８１）；ヌクレオチドＨ−ホスホネート法（Ｇａｒｅｇｇら、Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２７：４０５１−４０５４，１９８６；Ｆｒｏｅｈｌｅｒら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１４：５３９９−５４０７，１９８６，；Ｇａｒｅｇｇら、Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２７：４０５５−４０５８，１９８６，Ｇａｆｆｎｅｙら、Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２９：２６１９−２６２２，１９８８）である。これらの化学反応は、市販の種々の自動核酸合成機によって、実施され得る。これらのオリゴヌクレオチドは、合成オリゴヌクレオチドと称される。単離されたオリゴヌクレオチドは概して、それが天然では通常結合した構成成分から分離されたオリゴヌクレオチドを称する。例として、単離されたオリゴヌクレオチドは、細胞からか、核からか、ミトコンドリアからか、またはクロマチンから分離されるものであり得る。
【００８９】
上記オリゴヌクレオチド中のヌクレオチド間結合は、（ヌクレアーゼに対して）非安定化された結合か、または安定化された結合であり得、好ましくは、ホスホジエステル（非安定化された）骨格か、ホスホロチオエート（安定化された）骨格か、または別の荷電した骨格であり得、最も好ましくは、ホスホジエステル結合であり得る。Ｙ−Ｒにおけるヌクレオチド間結合が、ホスホロチオエートである場合、この結合の掌性は、無作為であり得るか、または好ましくはＲｐ立体配置のホスホロチオエート結合である。特に５’末端における、ホスホロチオエート結合の数の増加（配列番号３、配列番号１５、配列番号２５）は、減少されたＩＦＮ−α誘導を生じるか、またはＩＦＮ−α誘導を生じない。
【００９０】
ホスホロチオエートのような修飾された骨格は、ホスホラミデート化学反応またはＨ−ホスホネート化学反応のいずれかを利用する、自動化された技術を使用して合成され得る。アリール−ホスホネートおよびアルキル−ホスホネートは、例えば、米国特許第４，４６９，８６３号に記載されるように作製され得、そしてアルキルホスホトリエステル（荷電した酸素部分が、米国特許第５，０２３，２４３号および欧州特許第０９２，５７４号に記載されるようにアルキル化される）は、市販の試薬を使用する自動固相合成によって調製され得る。他のＤＮＡ骨格修飾および他のＤＮＡ骨格置換をなすための方法が、記載されてきた（例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ，Ｅ．およびＰｅｙｍａｎ，Ａ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９０：５４４，１９９０；Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ，Ｊ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１：１６５，１９９０）。
【００９１】
【表１−１】
2007506790.tif 000003
【００９２】
【表１−２】
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【００９３】
【表１−３】
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【００９４】
【表１−４】
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【００９５】
【表１−５】
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【００９６】
【表１−６】
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本発明はまた、２本鎖を形成する１組のオリゴヌクレオチドである組成物に関連する。以下の例に示すように、そのオリゴヌクレオチドは、単独で使用される場合、最小限の活性を有するか、または活性を有さない。しかし、それらは、２本鎖として調製される場合、その２本鎖の活性は、大きく向上する。
【００９７】
上記２つのオリゴヌクレオチドの間に形成する２本鎖は、部分的相補性を有する。部分的相補性は少なくとも、互いに塩基対形成するヌクレオチドを含む２本鎖の一部を称する。従って、第１のオリゴヌクレオチドの１つの領域は、第２のオリゴヌクレオチドの領域中の相補的ヌクレオチドとの塩基対を形成する、少なくともいくつかのヌクレオチドを含み得る。その部分的相補性は、外因性安定剤の、存在下または非存在下において、２本鎖を安定化するのに十分な量である。一般的に、部分的相補性の領域は、それぞれのオリゴヌクレオチド上に、少なくとも２つのヌクレオチドを含むべきであり、そのオリゴヌクレオチドは、他のオリゴヌクレオチドと塩基対形成が可能であり、その塩基対形成は、そのオリゴヌクレオチド対の長さに依存する。いくつかの実施形態において、部分的相補性の領域は、２ヌクレオチドより大きいことが、好ましい。例えば、その領域は、それぞれのオリゴヌクレオチド上に少なくとも、３ヌクレオチド、４ヌクレオチド、５ヌクレオチド、６ヌクレオチド、７ヌクレオチド、８ヌクレオチド、９ヌクレオチド、または１０ヌクレオチドを含み得る。従って、その部分的相補性を有するヌクレオチドの領域は、１つ以上のヌクレオチドミスマッチ（ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｍｉｓ−ｍａｔｃｈ）を含み得る。
【００９８】
あるいは、上記２本鎖に関与するヌクレオチドの全領域は、完全に相補的であり得る。完全に相補的である領域は、その他のオリゴヌクレオチド上で相補的ヌクレオチドと塩基対形成するヌクレオチドのみを含む領域である。
【００９９】
上記２本鎖は、塩基対形成するヌクレオチドの間の相互作用によって安定化され得る。いくつかの事例において、その２本鎖は、外因性安定剤の使用によって安定化され得るか、さらに安定化され得る。外因性安定剤は、任意の分子（例えば、その２本鎖の解離のレベルを減少するリンカー、または言い換えればその２本鎖の安定性を向上させるリンカー）である。
【０１００】
上記オリゴヌクレオチドの少なくとも１つは、ＹＲモチーフを含み、そして好ましくはＣＧモチーフを含む。片方または両方のオリゴヌクレオチドは、必要ではないが、パリンドロームを含み得る。いくつかの実施形態において、いずれのヌクレオチドも、パリンドロームを含まない。
【０１０１】
オリゴヌクレオチドの機能的活性２本鎖の例は、配列番号１０８および配列番号１０９である。
配列番号１０８  ５’−Ｔ＿Ｃ＿Ｇ＿Ｔ＿Ｃ＿Ｇ＿Ｔ＿Ｃ＿Ｇ＿Ａ＿Ｃｈｏｌ
配列番号１０９  Ｃｈｏｌ−Ａ＿Ｇ＿Ｃ＿Ａ＿Ｇ＿Ｃ＿Ａ＿Ｇ＿Ｃ＿Ｔ−５’
本発明によって、上記１組の親油性接合体が、ヒト細胞に対して劇的な免疫刺激効果を有することが発見され、このことは、これらの接合体が、放射線または化学療法、および他の免疫調節適用に続く、ヒトのワクチン接種、癌の免疫療法、喘息の免疫療法、一般的な免疫機能の向上、造血回復の向上についての効果的な治療薬であることを示唆。
【０１０２】
本明細書中で使用される場合、用語「処置（ｔｒｅａｔ）」，用語「処置された（ｔｒｅａｔｅｄ）」、用語「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、疾患（例えば、感染症、癌、アレルギー、または喘息）に関して使用される場合、予防的な処置を称し、その処置は、疾患の発症に対する（例えば、病原体による感染に対する）被験体の抵抗性を増加し、または言い換えれば、その被験体が疾患を発症する（例えば、病原体により感染する）可能性を減少すし、そして疾患と闘う（例えば、感染を軽減しまたは排除する）ため、または疾患の悪化を防ぐための、被験体が疾患を発症した後の処置である。
【０１０３】
従って、本発明のいくつかの局面において、上記親油性接合体は、アレルギーもしくは喘息、感染性の生物による感染もしくは特定の癌抗原が確認された癌を、有するか、または発症する危険のある被験体の処置のためのワクチンとして有用である。親油性接合体はまた、感染、アレルギーまたは癌に対する防御のための抗原またはアレルゲンを伴わずに単独で投与され得るか、他の治療薬と一緒に投与され得る。反復投与は、より長い期間の防御を可能にし得る。本明細書中で使用されるような危険にある被験体は、感染を引き起こす病原体、または癌、またはアレルゲンに対する曝露の危険のいずれか、または癌を発症する危険を有する被験体である。例えば、危険にある被験体は、特定の型の感染因子が見出される地域への旅行を計画している被験体であり得るか、またはその危険にある被験体は、ライフスタイルまたは医療手順を通じて、感染性の生物を含み得る体液に曝されるか、もしくは直接的にその生物に曝され得るか、または感染性の生物もしくはアレルゲンが確認されている地域に生きる任意の被験体でさえある。感染を発症する危険のある被験体はまた、医療機関が、特定の感染性の生物の抗原を用いるワクチン接種を推奨する、一般的な集団を含む。その抗原が、アレルゲンであり、そしてその被験体が、その特定の抗原に対してアレルギー反応を発症し、そしてその被験体が、その抗原に曝露され得る（すなわち、花粉の季節の間）場合、その被験体は、上記抗原への曝露の危険がある。アレルギーから喘息を発症する危険のある被験体としては、アレルギーまたは喘息を有することが確認されてきた被験体が挙げられるが、その被験体は、上記親油性接合体による処置の間に、活動性の疾患を有さず、そして遺伝的要因または環境的要因がもとで、これらの疾患を発症する危険にあると考えられる被験体である。
【０１０４】
癌を発症する危険のある被験体は、癌を発症する高い確率を有する被験体である。例えば、これらの被験体としては、その存在が癌を発症する、より高い可能性に対して、相関関係を有することが実証されてきた遺伝的異常を有する被験体、および癌を引き起こす因子（例えば、タバコ、アスベスト、もしくは他の化学的毒素）に曝露される被験体、またはこれまでに癌について処置され、そして表面上は回復状態にある被験体が挙げられる。癌を発症する危険のある被験体が、親油性接合体、および必要に応じて、被験体が発症する危険のある癌の型に特異的な抗原を用いて処置される場合、その被験体は、癌が発症する場合、その癌細胞を殺傷することが可能であり得る。上記被験体中で腫瘍の形成が始まる場合、その被験体は、生得的な免疫応答、またはその腫瘍抗原に対する特異的な免疫応答を発生する。
【０１０５】
予防的処置についての上記親油性接合体の使用に加えて、本発明はまた、感染、アレルギー、喘息、または癌を有する被験体の処置についての親油性接合体の使用を包含する。
【０１０６】
感染を有する被験体は、感染性病原体に曝された被験体であり、そしてその被験体は、身体の中に、急性的または慢性的な、その病原体の検出可能なレベルを有する。上記親油性接合体は、抗原もしくは他の治療因子を伴うか、または伴わずに使用され得、その治療因子は、生得的もしくは抗原特異的な全身性免疫応答、または生得的もしくは抗原特異的な粘膜の免疫応答を起こし、その免疫応答は、その感染性病原体のレベルの減少すること、またはその感染性病原体を根絶することができる。本明細書中で使用される場合、感染症は、身体の中の外来性の微生物の存在に起因する疾患である。効果的なワクチンによる方法、および病原体侵入の主要な部位である身体の粘膜表面を保護するための処置を開発することは、特に重要である。
【０１０７】
アレルギーを有する被験体は、アレルゲンに対する応答におけるアレルギー反応を発症する可能性のある被験体である。アレルギーは、物質（アレルゲン）に対する後天性の過敏症を称する。アレルギー性状態としては、湿疹、アレルギー性鼻炎またはアレルギー性コリーザ、枯草熱、結膜炎、気管支喘息、アレルギー性喘息、じんま疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）（じんま疹（ｈｉｖｅｓ））および食物アレルギー、および他のアトピー性の状態が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０８】
アレルギーは概して、無害なアレルゲンに対するＩｇＥ抗体産生によって引き起こされる。親油性接合体の、全身的投与または粘膜的投与によって誘導されるサイトカインは、主に、Ｔｈ１と呼ばれるクラスのサイトカイン（例は、ＩＬ−１２、ＩＰ−１０、ＩＦＮ−α、およびＩＦＮ−γである）であり、そしてこれらは、体液性免疫応答および細胞性免疫応答の両方を誘導する。他の主な型の免疫応答は、ＩＬ−４サイトカインおよびＩＬ−５サイトカインの産生に関連し、その免疫応答は、Ｔｈ２免疫応答と称される。一般的に、アレルギー性疾患は、Ｔｈ２型免疫応答によって媒介されるようである。優勢なＴｈ２応答（ＩｇＥ抗体およびアレルギーの産生に関連する応答である）から、バランスのとれたＴｈ２／Ｔｈ１応答（アレルギー性反応に対して防御的である応答）に、被験体中の免疫応答を移行する本明細書中に記載される親油性接合体の能力に基づいて、親油性接合体の免疫応答を誘導するのに効果的な用量が、喘息およびアレルギーを処置するために、被験体に投与され得る。
【０１０９】
従って、上記親油性接合体は、アレルギー性状態およびアレルギー性喘息の処置における実質的な治療有用性を有する。Ｔｈ２サイトカイン、特に、ＩＬ−４およびＩＬ−５は、喘息被験体の気道中で上昇する。これらのサイトカインは、喘息性炎症応答の重要な局面を促し、その局面は、ＩｇＥ同位体切り替え、好酸球走化作用および好酸球活性化、ならびに肥満細胞増殖を含む。Ｔｈ１サイトカイン、特に、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−１２は、Ｔｈ２クローンの形成およびＴｈ２サイトカインの産生を抑制し得る。喘息は、炎症、気道の縮小、および吸入因子に対する気道の増強した反応によって特徴付けされた呼吸器系の疾患を称する。喘息は、独占的にアトピー性症状またはアレルギー性症状に、頻繁に関連するが、独占的に関連しない。従って、喘息としては、アレルギー性喘息および非アレルギー性喘息が挙げられる。
【０１１０】
癌を有する被験体は、検出可能な癌性細胞を有する被験体である。その癌は、悪性の癌または非悪性の癌であり得る。癌または腫瘍としては、胆道癌、脳癌、乳癌、子宮頚癌、絨毛癌、結腸癌、子宮内膜癌、、食道癌、胃癌、上皮内新生物、リンパ腫、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞癌および非小細胞癌）、黒色腫、神経芽細胞種、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、直腸癌、肉腫、皮膚癌、精巣癌、甲状腺癌、および腎臓癌、ならびに他の癌腫および肉腫が挙げられるが、これらに限定されない。１つの実施形態において、その癌は、ヘアリーセル白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚のＴ細胞白血病、多発骨髄腫、濾胞性リンパ腫、悪性黒色腫、扁平上皮癌、腎細胞癌、前立腺癌、膀胱細胞癌または大腸癌である。
【０１１１】
被験体は、ヒト、または、脊椎動物もしくは哺乳動物を意味し、脊椎動物もしくは哺乳動物としては、犬、猫、馬、牛、豚、羊、山羊、七面鳥、鶏、霊長類（例えば、猿）、および魚（水産養殖の生物種）（例えば、鮭）が挙げられるが、これらに限定されない。従って、上記化合物は、癌および腫瘍、感染、ならびにヒト被検体および非ヒト被験体における、アレルギー／喘息を処置するために使用され得る。癌は、コンパニオンアニマル（ｃｏｍｐａｎｉｏｎ  ａｎｉｍａｌ）（例えば、猫および犬）の死の原因を導く要因の１つである。
【０１１２】
上記ＣｐＧオリゴヌクレオチドが、抗原と共に投与される事例において、、その被験体は、その抗原に曝され得る。本明細書中で使用される場合、用語「に曝される（ｅｘｐｏｓｅｄ  ｔｏ）」は、上記被験体と抗原とを接触する能動的な工程、またはインビボでの、その抗原に対するその被験体の受動的な曝露のいずれかを称する。抗原に対する被験体の能動的な曝露のための方法は、当該分野で周知である。一般的に、抗原は、任意の手段（例えば、静脈内投与、筋肉内投与、口への投与、経皮的投与、粘膜への投与、鼻腔内への投与、気管内への投与、皮下投与）によって、その被験体に直接的に投与される。その抗原は、全身的または局所的に投与され得る。その抗原およびその親油基接合体を投与するための方法は、以下に、より詳細に記載される。抗原がその身体において、免疫細胞に対する曝露に利用可能になる場合、被験体は、抗原に受動的に曝される。被験体は、例えば、その身体の中への、外来性の病原体の侵入によってか、またはその表面上で外来性の抗原を発現する腫瘍細胞の発生によって、抗原に受動的に曝露され得る。
【０１１３】
被験体が、抗原に対して受動的に曝露される方法は、特に、上記親油性接合体の投与の時期に依存する。例えば、癌、または感染症、またはアレルギー性反応もしくは喘息の反応を発症する危険のある被験体において、その危険が、最も高い（すなわち、アレルギーの季節の間、または癌を引き起こす因子に対する曝露の後）場合、その被験体は、通常の基準でその親油性接合体を投与され得る。さらに、その親油性接合体は、旅行者が、感染性因子への曝露の危険がある外国の土地へ旅行する前に、その旅行者に投与され得る。同様に、その親油性接合体は、抗原に対する、全身性免疫応答または粘膜の免疫疫応を誘導する生物戦争への曝露の危険がある、軍人または一般人に投与され得、そして被験体が、それに曝された場合、投与され得る。
【０１１４】
本明細書中で使用される抗原は、免疫応答を引き起こすことができる分子である。抗原としては、細胞、細胞抽出物、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、多糖類、多糖類の接合体、多糖類および他の分子の、ペプチド性模倣物（ｍｉｍｉｃ）および非ペプチド性模倣物、低分子、脂質、糖脂質、炭水化物、ウイルスおよびウイルス抽出物、ならびに多細胞生物（例えば、寄生虫およびアレルゲン）が挙げられるが、これらに限定されない。用語「抗原」は、外来性である場合、宿主免疫系によって認識される任意の分子の型を広く含む。抗原としては、癌抗原、微生物抗原、およびアレルゲンが、挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１５】
本明細書中で使用される癌抗原は、腫瘍細胞表面または癌細胞表面と関係がある化合物（例えば、ペプチドまたはタンパク質）であり、そしてその化合物は、ＭＨＣ分子の状況において細胞を提示する抗原の表面上に発現されるときに、免疫応答を引き起こすことができる。癌抗原は、癌細胞の粗製抽出物を調製すること（例えば、Ｃｏｈｅｎら、１９９４，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５４：１０５５に記載される）によってか、特にその抗原を精製することによってか、組換え技術によってか、または公知の抗原のデノボ合成によってかのいずれかで、癌細胞から調製され得る。癌抗原としては、組換え的（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｌｙ）に発現された抗原、それらの免疫原性部分、または腫瘍細胞の全体もしくは癌細胞の全体が挙げられるが、これらに限定されない。このような抗原は、単離され得るか、または組換え的に調製され得るか、または当該分野で公知の任意の他の手段によって調製され得る。
【０１１６】
本明細書中で使用される場合、用語「癌抗原」および用語「腫瘍抗原」は、癌細胞によって差次的に発現された抗原を称するために、交換可能に使用されるそれによって癌細胞を標的化するために利用され得る。がん抗原は、腫瘍特異的免疫応答を潜在的に、明白に刺激し得る抗原である。これらの抗原のいくつかは、正常な細胞によって、コードされるが、必ずしも発現されない。これらの抗原は、正常な細胞において、普通は無症候性（すなわち、発現されない）である抗原、分化の特定の段階においてのみ発現される抗原および一時的に発現される抗原（例えば、胚性の抗原および胎性の抗原）として特徴付けされ得る。他の癌抗原は、癌遺伝子（例えば、活性化されたｒａｓ癌遺伝子）、サプレッサー遺伝子（例えば、変異ｐ５３）、内部欠失または染色体転座から生じる融合タンパク質のような変異細胞内遺伝子によってコードされる。さらに他の癌抗原は、ウイルス遺伝子（例えば、ＲＮＡ腫瘍ウイルスおよびＤＮＡ腫瘍ウイルスに保持される遺伝子）によってコードされ得る。
【０１１７】
本明細書中で使用される微生物抗原は、微生物の抗原であり、そしてその微生物としてはウイルス、細菌、寄生虫および真菌が挙げられるが、これらに限定されない。このような抗原としては、インタクトな微生物、ならびに天然の単離物および天然のフラグメントまたはそれらの誘導体、ならびに合成化合物も挙げられ、その合成化合物は、天然の微生物の抗原と同一であるか、または類似であり、その微生物に対して特異的な免疫応答を誘導する。化合物が、天然の微生物抗原に対する免疫応答（体液性免疫応答および／または細胞性免疫応答）を誘導する場合、その化合物は、天然の微生物の抗原に類似する。このような抗原は、当該分野で日常的に使用され、その抗原は、当業者にとって周知である。
【０１１８】
ヒトにおいて見出されて来たウイルスの例としては、レトロウイルス科（例えば、ＨＩＶ−１（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、ＬＡＶもしくはＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ、またはＨＩＶ−ＩＩＩとも称される）のようなヒト免疫不全ウイルス、およびＨＩＶ−ＬＰのような他の単離体）、ピコルナウイルス科（例えば、ポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、エンテロウイルス、ヒトコクサッキーウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス）、カルシウイルス科（Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、胃腸炎を引き起こす株）、トガウイルス科（例えば、馬脳炎ウイルス、風疹ウイルス）、フラビウイルス科（例えば、デング熱ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス）、コロノウイルス科（Ｃｏｒｏｎｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、コロナウイルス）、ラブドウイルス科（Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）、コロナウイルス科（Ｃｏｒｏｎｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、コロナウイルス）、ラブドウイルス科（例えば、水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）、フィロウイルス科（例えば、エボラウイルス）、パラミクソウイルス科（例えば、パラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、麻疹ウイルス、呼吸器多核体ウイルス）、オルトミクソウイルス科（例えば、インフルエンザウイルス）、ブンヤウイルス科（Ｂｕｎｇａｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、ハンターンウイルス、ブンヤウイルス、フレボウイルス、およびナイロウイルス）、アレナウイルス科（出血熱ウイルス）、レオウイルス科（例えば、レオウイルス、オルビウイルス、およびロタウイルス）、ビルナウイルス科、ヘパドナウイルス科（Ｂ型肝炎ウイルス）、パルボウイルス科（パルボウイルス）、パポバウイルス科（パピローマウイルス、ポリオーマウイルス）、アデノウイルス科（ほとんどのアデノウイルス）、ヘルペスウイルス科（単純疱疹１型ウイルスおよび単純疱疹２型ウイルス（ＨＳＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス科（天然痘ウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス）、およびイリドウイルス科（例えば、アフリカ豚コレラウイルス）、ならびに分類されていないウイルス（例えば、デルタ型肝炎の外的病原因子（Ｂ型肝炎ウイルスの不完全な付随体と考えられる）、Ｃ型肝炎ウイルス、ノーウォークウイルスおよびそれに関連したウイルス、ならびにアストロウイルス）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１９】
グラム陰性菌およびグラム陽性菌の両方は、脊椎動物において抗原として作用する。このようなグラム陽性菌としては、パスツレラ種、ブドウ球菌種、および連鎖球菌種が挙げられるが、これらに限定されない。グラム陰性菌としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、シュードモナス種およびサルモネラ種が挙げられるが、これらに限定されない。感染性細菌の特定の例としては、以下：
【０１２０】
【化１】
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が挙げられるが、これらには限定されない。
【０１２１】
真菌の例としては、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓが挙げられる。
【０１２２】
他の感染性の生物（すなわち、原生生物）としては、プラスモディウム種（例えば、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｍａｌａｒｉａｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｏｖａｌｅ、およびＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ）、ならびにＴｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉが挙げられる。血液に運ばれる寄生虫および／または組織の寄生虫としては、プラスモディウム種、Ｂａｂｅｓｉａ  ｍｉｃｒｏｔｉ、Ｂａｂｅｓｉａ  ｄｉｖｅｒｇｅｎｓ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｔｒｏｐｉｃａ、リーシュマニア種、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｉｓ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｇａｍｂｉｅｎｓｅおよびＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｒｈｏｄｅｓｉｅｎｓｅ（アフリカ睡眠病）、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ（シャーガス病）、ならびにＴｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉが挙げられる。
【０１２３】
他の医学的に関連する微生物は、文献（例えば、Ｃ．Ｇ．Ａ  Ｔｈｏｍａｓ，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｂａｉｌｌｉｅｒｅ  Ｔｉｎｄａｌｌ，Ｇｒｅａｔ  Ｂｒｉｔａｉｎ  １９８３を参照のこと）に広く記載され、その内容の全体は、参考によって本明細書中に参考として援用される。
【０１２４】
アレルゲンは、感受性の被験体において、アレルギー反応または喘息の反応を誘導し得る物質（抗原）を称する。アレルゲンの一覧は、莫大な数であり、そしてアレルゲンとしては、花粉、昆虫の毒液、動物の鱗屑の塵（ｄａｎｄｅｒ  ｄｕｓｔ）、真菌の胞子、および薬物（例えば、ペニシリン）が挙げられ得る。天然の、動物性アレルゲンおよび植物性アレルゲンの例としては、以下の属：
【０１２５】
【化２】
2007506790.tif 000010
に特異的なタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２６】
上記抗原は、実質的に精製され得る。本明細書中で使用される用語「実質的に精製され（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ  ｐｕｒｉｆｉｄｅ）」は、抗原（すなわち、それが天然で結合している他のタンパク質、脂質、炭水化物、または他の物質が実質的にないポリペプチド）を称する。当業者は、タンパク質精製のための標準的な技術を使用して、ポリペプチド抗原を精製し得る。実質的に純粋なポリペプチドは、多くの場合、非還元のポリアクリルアミドゲル上に、単一の主要なバンドを生じる。部分的にグリコシル化されたポリペプチドの場合、またはいくつかの開始コドンを有するポリペプチドの場合、非還元のポリアクリルアミドゲル上に、いくつかのバンドが存在し得るが、それらのバンドは、そのポリペプチドに対する特有のパターンを形成する。そのポリペプチド抗原の精製はまた、アミノ末端のアミノ酸配列の分析によって決定され得る。他の型の抗原（例えば、多糖類、低分子、模倣物など）は、本発明内に含まれ、そしてその抗原は、必要に応じて実質的に純粋であり得る。
【０１２７】
本発明の接合体は、抗微生物因子と共に、被験体に投与され得る。本明細書中で使用される場合、抗微生物因子は、天然に存在する化合物または合成化合物を称し、それらは、感染性の微生物を、殺傷することができるか、または抑制することができる。本発明に従った有用な抗微生物剤の型は、被験体が、感染されるか、または感染される危険のある微生物の型に依存する。抗微生物剤としては、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、および抗寄生虫剤が挙げられるが、これらに限定されない。「抗感染剤」、「抗菌剤」、「抗ウイルス剤」、「抗真菌剤」、「抗寄生虫剤」および「駆虫薬」のような表現は、当業者に定着した意味を有し、そしてその表現は、標準的な医学の教科書に定義される。簡潔に言えば、抗菌薬は、細菌を殺傷または抑制し、そして抗生物質ならびに類似の機能を有するその他の合成または天然化合物を含む。抗生物質は、微生物のような細胞によって二次代謝物として産生される低分子量分子である。一般的に、抗生物質は、１つ以上の細菌の機能または構造を妨害し、それは、微生物に特異的であり、そして宿主細胞に存在しない。抗ウイルス薬は、天然供給源から単離され得るか、または合成され得、そしてウイルスを殺傷または抑制するために有用である。抗真菌剤は、表在性の真菌感染、ならびに日和見性および原発性の、全身性真菌感染を処置するために使用される。抗寄生虫剤は、寄生虫を殺傷または抑制する。
【０１２８】
抗寄生虫薬の例はまた、ヒト投与のための有用な駆虫薬と称され、抗寄生虫薬としては、アルベンダゾール、アムホテリシンＢ、ベンズニダゾールビチオノール、塩酸クロロキン、リン酸クロロキン、クリンダマイシン、デヒドロエメチン、ジエチルカルバマジン、ジロキサニドフロエート、エフロルニチン、フラゾリダオン（ｆｕｒａｚｏｌｉｄａｏｎｅ）、糖質コルチコイド、ハロファントリン、ヨードキノール、アイバメクチン、メベンダゾール、メフロキン、メグルミンアンチモニエート、メラルソプロール、メトリホネート、メトロニダゾール、ニクロサミド、ニフルチモックス、オキサムニキン、パロモマイシン、ペンタミジンイセチオネート、ピペラジン、プラジカンテル、リン酸プリマキン、プログアニル、ピランテルパモエート、ピリメタミンスルホンアミド（ｐｙｒｉｍｅｔｈａｎｍｉｎ−ｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｅ）、ピリメタミンスルファドキシン、塩酸キナクリン、硫酸キニーネ、グルコン酸キニジン、スピラマイシン、スチボグルコン酸ナトリウム（グルコン酸アンチモンナトリウム）、スラミン、テトラサイクリン、ドキシサイクリン、チアベンダゾール、チニダゾール、トリメトプリム−スルファメトキサゾール（ｔｒｉｍｅｔｈｒｏｐｒｉｍ−ｓｕｌｆａｍｅｔｈｏｘａｚｏｌｅ）、およびトリパルサミド（これらのいくつかは、単独で使用されるか、もしくは他と組み合わせて使用される）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２９】
抗菌薬は、細菌を殺傷するか、または細菌の増殖または機能を抑制する。抗菌薬の大きな分類は抗生物質である。広い範囲の細菌を殺傷または抑制するために有効である抗生物質は、広域スペクトル抗生物質と称される。他の型の抗生物質は、グラム陽性またはグラム陰性の分類の細菌に対して優先的に有効である。これらの型の抗生物質は、狭域スペクトル抗生物質と称される。単一の生物または疾患に対して有効であり、そしてその他のタイプの細菌に対しては有効でないその他の抗生物質は、限定スペクトル抗生物質と称される。抗菌薬は、それらの主な作用の様式に基づいて分類されることもある。一般的に、抗菌薬は、細胞壁合成インヒビター、細胞膜インヒビター、タンパク質合成インヒビター、核酸合成インヒビターまたは機能的インヒビター、および競争的インヒビターである。
【０１３０】
抗ウイルス薬は、ウイルスによる細胞の感染、または細胞内のウイルスの複製を防ぐ化合物である。抗ウイルス性薬物は、抗菌剤よりはかなり少ない。なぜならば、ウイルス複製のプロセスは、宿主細胞内のＤＮＡ複製に密接に関係しており、非特異的な抗ウイルス剤は、多くの場合、宿主に毒性であるからである。抗ウイルス薬によって遮断され得るか、または阻害され得るウイルス感染のプロセス内のいくつかの段階が存在する。これらの段階としては、ウイルスの宿主細胞への付着（免疫グロブリンまたは結合性ペプチド）、ウイルスの脱殻（例えば、アマンタジン）、ウイルスｍＲＮＡの、合成または翻訳（例えば、インターフェロン）、ウイルスＲＮＡまたはウイルスＤＮＡの複製（例えば、ヌクレオシド類似物）、新しいウイルスタンパク質の成熟（例えば、プロテアーゼインヒビター）、およびウイルスの出芽およびウイルスの放出が挙げられる。
【０１３１】
ヌクレオチド類似物は、ヌクレオチドに類似している合成化合物であるが、不完全または異常な、デオキシリボース基またはリボース基を有している。一旦、ヌクレオチド類似物が細胞内に存在すると、それらは、リン酸化され、ウイルスＤＮＡ中またはウイルスＲＮＡ中への取り込みに関して正常ヌクレオチドと競合する、トリホスフェート形態を生成する。一旦、ヌクレオチド類似物のトリホスフェート形態が、伸長する核酸鎖中に取り込まれると、それは、ウイルスポリメラーゼと不可逆的な結合を引き起こし、そしてそれ故、鎖終結（ｃｈａｉｎ  ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ）を引き起こす。ヌクレオチド類似物としては、アシクロビル（単純ヘルペスウイルスおよび水痘帯状疱疹ウイルスの処置に用いられる）、ガンシクロビル（サイトメガロウイルスの処置に有用である）、イドクスウリジン、リバビリン（呼吸器合胞体ウイルスの処置に有用である）、ジデオキシイノシン、ジデオキシシチジン、ジドブジン（アジドチミジン）、イミキモッドおよびレスイミキモッド（ｒｅｓｉｍｉｐｕｉｍｏｄ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３２】
上記インターフェロンは、ウイルス感染細胞ならびに免疫細胞によって分泌されるサイトカインである。インターフェロンは、感染細胞に隣接する細胞上の特異的レセプターに結合することによって機能し、細胞においてそれをウイルス感染から保護する変化を引き起こす。α−インターフェロンおよびβ−インターフェロンはまた、感染細胞の表面上のクラスＩ  ＭＨＣ分子およびクラスＩＩ  ＭＨＣ分子の発現を誘導し、宿主免疫細胞認識のための増加した抗原提示を生じる。α−インターフェロンおよびβ−インターフェロンは、組換え形態として入手可能であり、そして慢性の、Ｂ型肝炎感染およびＣ型肝炎感染の処置のために使用されてきた。抗ウイルス治療のために有効であ投薬量で、インターフェロンは、発熱、倦怠感および体重減少のような重篤な副作用を有している。
【０１３３】
本発明で有用な抗ウイルス薬としては、免疫グロブリン類、アマンタジン、インターフェロン類、ヌクレオシド類似物、およびプロテアーゼインヒビター類が挙げられるが、これらに限定されない。抗ウイルス薬の特定の例としては、アセマンナン、アシクロビル、アシクロビルナトリウム、アデフォビル、アロブジン（Ａｌｏｖｕｄｉｎｅ）、アルビルセプトスドトックス（Ａｌｖｉｒｃｅｐｔ  Ｓｕｄｏｔｏｘ）、塩酸アマンタジン、アラノチン（Ａｒａｎｏｔｉｎ）、アリルドン、アテビルジンメシレート（Ａｔｅｃｉｒｄｉｎｅ  Ｍｅｓｙｌａｔｅ）、アブリジン、シドフォビル、シパムフィリン（Ｃｉｐａｍｆｙｌｌｉｎｅ）、塩酸シタラビン、デラビルジンメシレート、デスシクロビル（Ｄｅｓｃｉｃｌｏｖｉｒ）、ジダノシン、ジソキサリル、エドクスジン、エンビラデン、エンビロキシム、ファムシクロビル（Ｆａｍｃｉｃｌｏｖｉｒ）、塩酸ファモチン（Ｆａｍｏｔｉｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、フィアシタビン、フィアルリジン、フォサリレート、フォスカーネットナトリウム、フォスフォネットナトリウム、ガンシクロビル、ガンシクロビルナトリウム、イドクスウリジン、ケトキサール（Ｋｅｔｈｏｘａｌ）、ラミブジン、ロブカビル、塩酸メモチン、メチサゾン、ネビラピン、ペンシクロビル、ピロダビル、リバビリン、塩酸リマンタジン、サキナビルメシレート、塩酸ソマンタジン、ソリブジン、スタトロン（Ｓｔａｔｏｌｏｎ）、スタブジン、塩酸チロロン、トリフルリジン、塩酸バラシクロビル、ビダラビン、リン酸ビダラビン、ビダラビンリン酸ナトリウム、ビロキシム（Ｖｉｒｏｘｉｍｅ）、ザルシタビン、ジドブジン、およびジンビロキシムが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３４】
抗真菌薬は、感染性真菌の、処置および予防に有用である。抗真菌薬は、それらの作用機構によって分類されることもある。いくつかの抗真菌薬は、グルコース合成を阻害することによって、細胞壁インヒビターとして機能する。これらとしては、バシウンギン（ｂａｓｉｕｎｇｉｎ／ＥＣＢが挙げられるが、これに限定されない。他の抗真菌薬は、膜の統合性を不安定化させることによって機能する。これらとしては、クロトリマゾール、セルタコンゾール（ｓｅｒｔａｃｏｎｚｏｌｅ）、フルコナゾール、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ミコナゾール、およびボリコナコール（ｖｏｒｉｃｏｎａｃｏｌｅ）のようなイミダゾール類、ならびにＦＫ  ４６３、アンホテリシンＢ，ＢＡＹ  ３８−９５０２、ＭＫ  ９９１、プラディマイシン、ＵＫ  ２９２，ブテナフィン、およびテルビナフィンが挙げられるが、これらに限定されない。他の抗真菌薬は、キチンを分解することによって（例えば、キチナーゼ）、または免疫抑制によって（５０１クリーム）、機能する。
【０１３５】
親油性接合体は、アジュバントのような他の治療的因子と組み合わされて、免疫応答を向上させ得る。その親油性接合体および他の治療的因子は、同時にまたは連続して投与され得る。他の治療的因子が、同時に投与される場合、それらは、同一の処方物、または別の処方物中で同時に投与され得る。上記他の治療的因子および上記親油性接合体の投与が、一時的に分離される場合、上記他の治療的因子は、連続して、および親油性接合体と連続して投与される。これらの化合物の投与の間の時間の隔たりは、数分か、またはそれより長いものであり得る。他の治療的因子としては、アジュバント、サイトカイン、抗体、抗原などが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３６】
本発明の組成物はまた、非核酸性アジュバントと共に投与され得る。非核酸性アジュバントは、本明細書中に記載される親油性接合体を除く、任意の分子または任意の化合物であり、その親油性接合体は、体液性免疫応答および／または細胞性免疫応答を刺激し得る。非核酸性アジュバントとしては、例えば、デポ（ｄｅｐｏ）効果を引き起こすアジュバント、免疫刺激アジュバント、およびデポ効果を引き起こし、そして免疫系を刺激するアジュバントが挙げられる。
【０１３７】
上記親油性接合体はまた、粘膜アジュバントとして有用である。これまでに、全身性免疫および粘膜免疫の両方が、ＣｐＧ核酸の粘膜送達によって誘導されることが見出されてきた。従って、そのオリゴヌクレオチドは、他の粘膜アジュバントとの組み合わせで投与され得る。
【０１３８】
免疫応答はまた、サイトカイン（ＢｕｅｌｅｒおよびＭｕｌｌｉｇａｎ，１９９６；Ｃｈｏｗら、１９９７；Ｇｅｉｓｓｌｅｒら、１９９７；Ｉｗａｓａｋｉら、１９９７；Ｋｉｍら、１９９７）、またはＢ７のような共起刺激性分子（Ｉｗａｓａｋｉら；１９９７；Ｔｓｕｊｉら、１９９７）と親油性接合体との同時投与または共直線性（ｃｏ−ｌｉｎｅａｒ）発現によって、誘導または増強され得る。用語サイトカインは、ナノモル濃度からピコモル濃度で体液性調節因子として作用し、そして正常な条件下または病理学的条件下のいずれかにおいて、個々の細胞および組織の機能的活性を調節する可溶性タンパク質および可溶性ペプチドの種々の群についての一般的な名称として使用される。これらのタンパク質はまた、直接的に細胞間の相互作用を媒介し、そして細胞外環境で行われるプロセスを調節する。サイトカインの例としては、ＩＰ−１０、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、ＩＦＮ−α、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ＴＧＦ−β、ＦＬＴ−３リガンド、およびＣＤ４０リガンドが挙げられるが、これらに限定されない。サイトカインに加えて、そのＣｐＧオリゴヌクレオチドは、特定のサイトカインに対する抗体（例えば、抗ＩＬ−１０および抗ＴＧＦ−β、ならびにＣｏｘインヒビター（すなわち、ＣＯＸ−１インヒビターおよびＣＯＸ−２インヒビター））との組み合わせで使用され得る。
【０１３９】
上記オリゴヌクレオチドはまた、細胞のＴｏｌｌ様レセプター（ＴＬＲ）を介して免疫応答を媒介するのに有用である。ＴＬＲは、一連のシグナル伝達パターン認識レセプターであり、それは、炎症反応および免疫の誘導において主要な役割を果たすことが知られる。異なるＴＬＲは、直接的または間接的に、異なる微生物分子に結合する。例えば、ＴＬＲ−２は、ペプチドグリカンおよびリポタンパク質を認識し、ＴＬＲ−４は、リポ多糖類およびリポテイコ酸を認識し、ＴＬＲ−５は、細菌のフラゲリンを認識し、そしてＴＬＲ−９は、細菌ＤＮＡを認識する。ＴＬＲの刺激は、細胞核にシグナルを伝達し、細胞内調節分子（例えば、サイトカイン）の合成をコードする遺伝子の発現を誘導する。そのサイトカインは、順に、他の防御細胞上のサイトカインレセプターに結合する。これらのサイトカインは、生得的な免疫防御（例えば、炎症、発熱および食作用）を誘発し、そして侵入する微生物に対する即時的な反応を与える。ＴＬＲはまた、体液性免疫（抗体の産生）および細胞媒介性免疫（細胞障害性Ｔリンパ球およびさらなるサイトカインの産生）に必要とされる、種々の２次的シグナルを誘発することによって、養子免疫に関与する。本発明のオリゴヌクレオチドは、ＴＬＲの免疫応答を媒介するのに有用であり、そして本発明のオリゴヌクレオチドは、ＴＬＲ依存様式における特定のサイトカインの産生を刺激し得る。
【０１４０】
上記オリゴヌクレオチドはまた、免疫応答をＴｈ２型免疫応答からＴｈ１型免疫応答へ移行するために有用である。このことは、比較的にバランスのとれたＴｈ１／Ｔｈ２環境の産生を生じる。Ｔｈ２型免疫応答からＴｈ１型免疫応答への免疫応答の移行は、その核酸に対する反応において産生されたサイトカインのレベルを測定することによって（例えば、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−γおよびＧＭ−ＣＳＦを含む、単核細胞およびＴｈ１サイトカインを産生する他の細胞を誘導することによって）評価され得る。Ｔｈ２応答からＴｈ１応答への免疫応答の、移行またはリバランス（ｒｅｂａｌａｎｃｅ）は、喘息の処置に、特に有用である。例えば、喘息を処置するのに有効な量は、喘息に関連するＴｈ２型の免疫応答を、Ｔｈ１型の免疫応答またはバランスのとれたＴｈ１／Ｔｈ２環境に移行するために有用な量であり得る。Ｔｈ２サイトカイン、特にＩＬ−４およびＩＬ−５は、喘息の被検体の気道において上昇する。本明細書中に記載される親油性接合体は、免疫系のリバランスを補助するＴｈ１サイトカインの増加を引き起こし、それは優勢なＴｈ２型免疫応答に関連する悪影響を防ぐか、または減少する。
【０１４１】
上記親油性接合体は、細胞の生存、細胞の分化、細胞の活性化および樹状細胞の成熟を促進する固有の能力を有し、そして樹状細胞を含む、インビトロ、インビボ、およびエキソビボにおける方法について有用である。
【０１４２】
親油性接合体はまた、ナチュラルキラー細胞の細胞溶解活性および抗体依存性細胞媒介性細胞障害（ＡＤＣＣ）を増強する。ＡＤＣＣは、細胞標的（例えば、癌細胞）に対して特異的な抗体との組み合わせで、親油性接合体を使用して行われ得る。その親油性接合体が、その抗体との組み合わせで被検体に投与される場合、その被検体の免疫系は誘導され、その腫瘍細胞を殺傷する。そのＡＤＣＣの手順に有用な抗体は、身体の中の細胞と相互作用する抗体を含む。細胞標的に対して特異的である多くのこのような抗体は、当該分野において記載されてきて、その多くは市販されている。
【０１４３】
上記親油性接合体はまた、抗癌療法と組み合わせて投与され得る。抗癌療法としては、癌治療薬（ｃａｎｃｅｒ  ｍｅｄｉｃａｍｅｎｔ）、放射線および外科的手順が挙げられる。本明細書中で使用される場合、「癌治療薬」とは、癌を処置する目的で被験体に投与される薬剤を指す。本明細書中で使用される場合、「癌の処置」とは、癌の発症を防ぐこと、癌の症状を軽減させること、および／もしくは確立した癌の成長を阻害することを含む。他の局面において、その癌治療薬は、癌を発症する危険を有する被験体に、その癌を発症する危険を減少させる目的で投与される。癌の処置のための種々の型の医薬が、本明細書中に記載される。本明細書の目的のため、癌治療薬は、化学療法剤、免疫治療因子、癌ワクチン、ホルモン治療、および生物学的反応修飾因子として分類される。
【０１４４】
さらに、本発明の方法は、上記親油性接合体とともに１種より多くの癌治療薬の使用を含むことが意図される。例として、適切な場合、その親油性接合体は、化学療法剤および免疫治療因子の両方とともに投与され得る。あるいは、その癌治療薬は、癌を有するか、もしくは癌を発症する危険性のある被験体を処置する目的で１個体の被験体に全て投与される、免疫治療因子および癌ワクチン、または化学療法剤および癌ワクチン、または化学療法剤、免疫治療因子、および癌ワクチンを含み得る。
【０１４５】
上記化学療法剤は、例えば、メトトレキサート、ビンクリスチン、アドリアマイシン、シスプラチン、クロロエチルニトロソ尿素を含む非糖成分、５−フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ドキソルビシン、タキソール、ダカルバジン、フラジリン（ｆｒａｇｙｌｉｎｅ）、Ｍｅｇｌａｍｉｎｅ  ＧＬＡ、バルルビシン（ｖａｌｒｕｂｉｃｉｎ）、カームスタイン（ｃａｒｍｕｓｔａｉｎｅ）およびポリフェルポサン（ｐｏｌｉｆｅｒｐｏｓａｎ）、ＭＭＩ２７０、ＢＡＹ  １２−９５６６、ＲＡＳファメシル（ｆａｍｅｓｙｌ）トランスフェラーゼインヒビター、ファメシルトランスフェラーゼインヒビター、ＭＭＰ、ＭＴＡ／ＬＹ２３１５１４、ＬＹ２６４６１８／ロメテキソール（Ｌｏｍｅｔｅｘｏｌ）、グラモレック（Ｇｌａｍｏｌｅｃ）、ＣＩ−９９４、ＴＮＰ−４７０、ハイカムチン／トポテカン、ＰＫＣ４１２、バルスポダール／ＰＳＣ８３３、ノバントロン／ミトキサントロン、メタレット（Ｍｅｔａｒｅｔ）／スラミン、バスチマスタット（Ｂａｔｉｍａｓｔａｔ）、Ｅ７０７０、ＢＣＨ−４５５６、ＣＳ−６８２、９−ＡＣ、ＡＧ３３４０、ＡＧ３４３３、インセル（Ｉｎｃｅｌ）／ＶＸ−７１０、ＶＸ−８５３、ＺＤ０１０１、ＩＳＩ６４１、ＯＤＮ  ６９８、ＴＡ  ２５１６／マーミスタット（Ｍａｒｍｉｓｔａｔ）、ＢＢ２５１６／マーミスタット、ＣＤＰ  ８４５、Ｄ２１６３、ＰＤ１８３８０５、ＤＸ８９５１ｆ、レモナール（Ｌｅｍｏｎａｌ）  ＤＰ  ２２０２、ＦＫ  ３１７、ピシバニール／ＯＫ−４３２、ＡＤ  ３２／バルルビシン、メタストロン（Ｍｅｔａｓｔｒｏｎ）／ストロンチウム誘導体、テモダール／テモゾロマイド、エバセット（Ｅｖａｃｅｔ）／リポソーム化ドキソルビシン、ユーロタキサン（Ｙｅｗｔａｘａｎ）／パクリタキセル、タキソール／パクリタキセル、キセロード（Ｘｅｌｏａｄ）／カペシタビン、フルツロン／ドキシフルリジン、シクロパックス（Ｃｙｃｌｏｐａｘ）／経口パクリタキセル、経口タキソイド、ＳＰＵ−０７７／シスプラチン、ＨＭＲ  １２７５／フラボピリドール、ＣＰ−３５８（７７４）／ＥＧＦＲ、ＣＰ−６０９（７５４）／ＲＡＳ癌遺伝子インヒビター、ＢＭＳ−１８２７５１／経口白金錯体製剤、ＵＦＴ（テガフール／ウラシル）、エルガミゾール／レバミゾール、エニルウラシル／７７６Ｃ８５／５ＦＵエンハンサー、カンプト／レバミゾール、カンプトサール／イリノテカン、ツモデックス（Ｔｕｍｏｄｅｘ）／ラリトレキセド（Ｒａｌｉｔｒｅｘｅｄ）、リウスタチン／クラドリビン、パクセックス（Ｐａｘｅｘ）／パクリタキセル、ドキシル／リポソーム化ドキソルビシン、シーリクス（Ｃａｅｌｙｘ）／リポソーム化ドキソルビシン、フルダラ／フルダラビン、ファーマルビシン（Ｐｈａｒｍａｒｕｂｉｃｉｎ）／エピルビシン、ＤｅｐｏＣｙｔ、ＺＤ１８３９、ＬＵ  ７９５５３／ビス−ナフタルイミド（Ｂｉｓ−Ｎａｐｈｔａｌｉｍｉｄｅ）、ＬＵ  １０３７９３／Ｄｏｌａｓｔａｉｎ、シーティクス（Ｃａｅｔｙｘ）／リポソーム化ドキソルビシン、ジェムザール／ゲムシタビン、ＺＤ  ０４７３／アノルメッド（Ａｎｏｒｍｅｄ）、ＹＭ  １１６、ヨウ素種（ｌｏｄｉｎｅ  ｓｅｅｄ）、ＣＤＫ４インヒビターおよびＣＤＫ２インヒビター、ＰＡＲＰインヒビター、Ｄ４８０９／デキシフォスアミド（Ｄｅｘｉｆｏｓａｍｉｄｅ）、イフェス（Ｉｆｅｓ）／Ｍｅｓｎｅｘ／イフォスファミド（Ｉｆｏｓａｍｉｄｅ）、ビューモン／テニポシド、パラプラチン／カルボプラチン、プランチノール（Ｐｌａｎｔｉｎｏｌ）／シスプラチン、ベプシド（Ｖｅｐｅｓｉｄｅ）／エトポシド、ＺＤ  ９３３１、タキソテール／ドセタキセル、グアニンアラビノシドのプロドラッグ、タキサン類似物、ニトロソ尿素、メルフェラン（ｍｅｌｐｈｅｌａｎ）およびシクロフォスファミドのようなアルキル化剤、アミノグルテチミド、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、クロロムブシル（Ｃｈｌｏｒｏｍｂｕｃｉｌ）、塩酸シタラビン、ダクチノマイシン、塩酸ダウノルビシン、リン酸エストラムスチンナトリウム、エトポシド（ＶＰ１６−２１３）、フロクスウリジン、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フルタミド、ヒドロキシ尿素（ヒドロキシカルバミド）、イホスファミド、インターフェロンα−２ａ、インターフェロンα−２ｂ、酢酸ロイプロリド（ＬＨＲＨ−放出因子類似物）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、塩酸メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、メルカプトプリン、メスナ、ミトタン（ｏ．ｐ’−ＤＤＤ）、塩酸ミトキサントロン、オクトレオチド、プリカマイシン、塩酸プロカルバジン、ストレプトゾシン、クエン酸タモキシフェン、チオグアニン、チオテパ、硫酸ビンブラスチン、アムサクリン（ｍ−ＡＭＳＡ）、アザシチジン、エリスロポエチン、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、インターロイキン２、ミトグアゾン（メチル−ＧＡＧ；メチルグリオキサールビス−グアニルヒドラゾン；ＭＧＢＧ）、ペントスタチン（２’デオキシコホルマイシン）、セムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）、テニポシド（ＶＭ−２６）、または硫酸ビンデシンであり得るが、これらに限定されない。
【０１４６】
上記免疫治療因子は、例えば、リブタキシン（Ｒｉｂｕｔａｘｉｎ）、ハーセプチン、クアドラメット、パノレックス（Ｐａｎｏｒｅｘ）、ＩＤＥＣ−Ｙ２Ｂ８、ＢＥＣ２、Ｃ２２５、オンコリム（Ｏｎｃｏｌｙｍ）、ＳＭＡＲＴ  Ｍ１９５、ＡＴＲＡＧＥＮ、オバレックス（Ｏｖａｒｅｘ）、ベキサール（Ｂｅｘｘａｒ）、ＬＤＰ−０３、ｉｏｒ  ｔ６、ＭＤＸ−２１０、ＭＤＸ−１１、ＭＤＸ−２２、ＯＶ１０３、３６２２Ｗ９４、抗ＶＥＧＦ、ゼナパックス（Ｚｅｎａｐａｘ）、ＭＤＸ−２２０、ＭＤＸ−４４７、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−２、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−１、ＣＥＡＣＩＤＥ、プレターゲット、ＮｏｖｏＭＡｂ−Ｇ２、ＴＮＴ、Ｇｌｉｏｍａｂ−Ｈ、ＧＮＩ−２５０、ＥＭＤ−７２０００、ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ、ＣＭＡ  ６７６、Ｍｏｎｏｐｈａｒｍ−Ｃ、４Ｂ５、ｉｏｒ  ｅｇｆ．ｒ３、ｉｏｒ  ｃ５、ＢＡＢＳ、抗ＦＬＫ−２、ＭＤＸ−２６０、ＡＮＡ  Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  １Ｄ１０  Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  ＡＢＬ  ３６４  Ａｂ、またはＩｍｍｕＲＡＩＴ−ＣＥＡであり得るが、これらに限定されない。
【０１４７】
上記癌ワクチンは、例えば、ＥＧＦ、抗イディオタイプの癌ワクチン、Ｇｐ７５抗原、ＧＭＫメラノーマワクチン、ＭＧＶガングリオシド結合ワクチン、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、オバレックス（Ｏｖａｒｅｘ）、Ｍ−Ｖａｘ、Ｏ−Ｖａｘ、Ｌ−Ｖａｘ、ＳＴｎ−ＫＨＬ  セラトープ（ｔｈｅｒａｔｏｐｅ）、ＢＬＰ２５（ＭＵＣ−１）、リポソーム化したイディオタイプのワクチン、メラシン、ペプチド抗原のワクチン、毒素／抗原型ワクチン、ＭＶＡベースのワクチン、ＰＡＣＩＳ、ＢＣＧワクチン、ＴＡ−ＨＰＶ、ＴＡ−ＣＩＮ、ＤＩＳＣ−ウイルス、またはＩｍｍｕＣｙｓｔ／ＴｈｅｒａＣｙｓであり得るが、これらに限定されない。
【０１４８】
免疫治療因子（例えば、モノクローナル抗体）に組み合わせられた上記親油性接合体の使用は、ＡＤＣＣの有意な増強を含む多くの機構（上記で議論される）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の活性化、およびＩＦＮ−αレベルの増加を通じて、長期生存を延長し得る。モノクローナル抗体と組み合わせて使用される場合、核酸は、生物学的結果を達成するのに必要とされる抗体の用量を減少させるように作用する。
【０１４９】
本発明はまた、抗原に非特異的な生得的免疫の活性化、および感染性の攻撃に対する広いスペクトルの抵抗性を誘導するための方法を包含し、それは、上記親油性接合体を使用する。本明細書中で使用される場合、用語「生得的免疫の活性化」は、記憶Ｂ細胞以外の免疫細胞の活性化を称し、そして例えばそれは、ＮＫ細胞、Ｔ細胞および／または抗原非依存的な様式で応答し得る他の免疫細胞の活性化を包含し得る。感染性の攻撃に対する広いスペクトルの抵抗性は、誘導される。なぜなら、その免疫細胞が活性型であり、そしてプライムされて、任意の侵入化合物および任意の侵入微生物に応答するので誘導される。その細胞は、特定の抗原に対して特異的にプライムされなくてもよい。このことは、生物兵器を用いた戦争、および上述のような他の状況（例えば、旅行者）において、特に有用である。
【０１５０】
本発明の接合体は、他のオリゴヌクレオチドのように処方され得るか、または親油基に起因する変化物（例えば、表面のＬ基の、結合または埋め込みによる、マルチマーの処方物（例えば、リポソーム、ＩＳＣＯＭ、または他の適切な疎水性ビーズもしくは処方物））と一緒に処方され得る。その接合体は、好ましいキャリア構造を有する複合体（例えば、ポリマー、ペプチド、タンパク質、または対象となる核酸）中に処方され得る。その接合体は、本明細書中に記載されるような親油性化合物を主に含むか、その親油性化合物がほとんどであるベシクル中に処方され得る。本発明はまた、処方試薬に対する親和性を増加するために、免疫刺激性オリゴヌクレオチドの親油性を増加するための方法を提供する。従って、本明細書中に記載されるオリゴヌクレオチドは、脂質組成物中に封入される場合、好ましい特性を有する。従来型のリポソームにおいて、多くの場合、高濃度の薬物を内包するのは困難である。免疫刺激性オリゴヌクレオチドを親油性にする誘導体化、およびリポソームへの取り込みによって、そのオリゴヌクレオチドは、長期の保存に、より適切になり得、それは、そのリポソームからの薬物の漏出が、より少なくなるからである。上記親油性リガンドはまたは、バイオアベイラビリティーおよび特定の器官（例えば、肝臓）への好ましい生体内分布の改善を導き得、そしてまた、有毒性の副作用を減少し得る。作用の特定の機構に縛られることはない。このようなマルチマーの高分子から突き出している、ＯＤＮの遊離５’末端は、レセプターの架橋を導く方法で、ＴＬＲ９レセプターと相互作用するために利用可能であり、それは、なおさらに増加されたＩＦＮ−αの産生を誘導し得る。
【０１５１】
親油性接合体および／または抗原および／または他の治療剤は、単独で（例えば、生理食塩水中でまたは緩衝液中で）、あるいは当該分野で公知の任意の送達ビヒクルを使用して投与され得る。例えば、以下の送達ビヒクルが記載されている：コキレート（Ｃｏｃｈｌｅａｔｅｓ）（Ｇｏｕｌｄ−Ｆｏｇｅｒｉｔｅら，１９９４，１９９６）；エマルソーム（Ｅｍｕｌｓｏｍｅｓ）（Ｖａｎｃｏｔｔら，１９９８，Ｌｏｗｅｌｌら，１９９７）；ＩＳＣＯＭｓ（Ｍｏｗａｔら，１９９３，Ｃａｒｌｓｓｏｎら，１９９１，Ｈｕら，１９９８，Ｍｏｒｅｉｎら，１９９９）；リポソーム（Ｃｈｉｌｄｅｒｓら，１９９９，Ｍｉｃｈａｌｅｋら，１９８９，１９９２，ｄｅ  Ｈａａｎ  １９９５ａ，１９９５ｂ）；生きた細菌ベクター（例えば、サルモネラ属，Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ，Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｌｍａｔｔｅ−ｇｕｅｒｉｎ，シゲラ属，ラクトバシラス属）（Ｈｏｎｅら，１９９６，Ｐｏｕｗｅｌｓら，１９９８，Ｃｈａｔｆｉｅｌｄら，１９９３，Ｓｔｏｖｅｒら，１９９１，Ｎｕｇｅｎｔら，１９９８）；生きたウイルスベクター（例えば、ワクシニア、アデノウイルス、単純ヘルペス）（Ｇａｌｌｉｃｈａｎら，１９９３，１９９５，Ｍｏｓｓら，１９９６，Ｎｕｇｅｎｔら，１９９８，Ｆｌｅｘｎｅｒら，１９８８，Ｍｏｒｒｏｗら，１９９９）；ミクロスフェア（Ｇｕｐｔａら，１９９８，Ｊｏｎｅｓら，１９９６，Ｍａｌｏｙら，１９９４，Ｍｏｏｒｅら，１９９５，Ｏ’Ｈａｇａｎら，１９９４，Ｅｌｄｒｉｄｇｅら，１９８９）；核酸ワクチン（Ｆｙｎａｎら，１９９３，Ｋｕｋｌｉｎら，１９９７，Ｓａｓａｋｉら，１９９８，Ｏｋａｄａら，１９９７，Ｉｓｈｉｉら，１９９７）；ポリマー（例えば、カルボキシメチルセルロース、キトサン）（Ｈａｍａｊｉｍａら，１９９８，Ｊａｂｂａｌ−Ｇｉｌｌら，１９９８）；ポリマー環（Ｗｙａｔｔら，１９９８）；プロテオソーム（Ｖａｎｃｏｔｔら，１９９８，Ｌｏｗｅｌｌら、１９８８，１９９６，１９９７）；フッ化ナトリウム（Ｈａｓｈｉら，１９９８）；トランスジェニック植物（Ｔａｃｋｅｔら，１９９８，Ｍａｓｏｎら，１９９８，Ｈａｑら，１９９５）；ビロソーム（Ｇｌｕｃｋら，１９９２，Ｍｅｎｇｉａｒｄｉら，１９９５，Ｃｒｙｚら，１９９８）；ウイルス様粒子（Ｊｉａｎｇら，１９９９，Ｌｅｉｂｌら，１９９８）。他の送達ビヒクルは、当該分野で公知であり、いくつかのさらなる例が、ベクターについての考察において以下に提供される。
【０１５２】
用語、「親油性接合体の有効量」とは、望ましい生物学的効果を実現するのに必要なまたは十分な量を称する。例えば、粘液の免疫を誘導するための親油性接合体の有効量は、抗原に曝露した際に、抗原に応答してＩｇＡの発生を引き起こすのに必要な量であるのに対して、全身性免疫を誘導するために必要とされる量は、抗原に曝露した際に、抗原に応答してＩｇＧの発生を引き起こすのに必要な量である。本明細書中に提供される教示と組み合わせて、種々の活性化合物を選択し、そして因子（例えば、効力、相対的バイオアベイラビリティー、患者体重、有害な副作用の重篤度および投与の好ましい様式）を比較検討することによって、有効な予防処置レジメンまたは治療処置レジメン（実質的な毒性を引き起こさず、なお特定の被験体を処置するのに完全に有効である）が計画され得る。任意の特定の適用についての有効量は、処置される疾患または状態、投与される特定の親油性接合体、被験体の大きさ、または疾患もしくは状態の重篤度のような因子に依存して変動し得る。当業者は、過度な実験を必要とすることなく、特定の親油性接合体および／または抗原および／または他の治療剤の有効量を経験的に決定し得る。
【０１５３】
粘膜送達または局所送達のために本明細書中に記載される化合物の被験体用量は、代表的に、投与当たり約１０μｇ〜１０００ｍｇの範囲であり、これは、毎日、毎週、または毎月およびそれらの間の任意の他の時間の量で与えられ得る適用または他に必要とされる場合に依存する。より代表的には、粘膜用量または局所用量は、投与当たり１００μｇ〜５０ｍｇ、最も代表的には、約５００μｇ〜５ｍｇの範囲であり、２〜４回の投与が、日または週の間隔をあけてなされる。より代表的には、免疫刺激用量は、毎日または毎週の投与で投与当たり１００μｇ〜１０００ｍｇ、最も代表的には、５００μｇ〜５０ｍｇの範囲である。親油性接合体が他の治療因子と組み合わせてまたは特定の送達ビヒクル中で投与される場合、先天性免疫応答を誘導するため、またはＡＤＣＣを増加させるため、または抗原特異的免疫応答を誘導するために、非経口的送達のための本明細書中に記載される化合物の用量は、代表的に、投与当たり約１０μｇ〜１０００ｍｇの範囲であり、これは、毎日、毎週、または毎月およびそれらの間の任意の他の時間の量で与えられ得る適用または他に必要とされる場合に依存する。より代表的には、これらの目的のための非経口用量は、投与当たり約１００μｇ〜５０ｍｇ、最も代表的には、約１０００μｇ〜１０ｍｇの範囲であり、２〜４回の投与が、日または週の間隔をおかれてなされる。しかし、ある実施形態において、これらの目的のための非経口用量は、上記の代表的な用量よりも５〜１０，０００倍高い範囲で使用され得る。
【０１５４】
本明細書中に記載される任意の化合物について、治療有効量は、動物モデルから最初に決定され得る。治療有効用量はまた、ヒトにおいて試験されている他のＣｐＧオリゴヌクレオチド（ヒト臨床試験が開始されている）について、および類似の薬理学的活性を示すことが公知である化合物（例えば、他のアジュバント（例えば、ＬＴおよびワクチン接種目的の他の抗原）についてのヒトデータから最初に決定され得る。より多い用量は、非経口投与のために必要とされ得る。適用される用量は、投与される化合物の相対的なバイオアベイラビリティーおよび効力に基づいて調節され得る。上記の方法および当該分野において周知の他の方法に基づいて、最大の効力を達成するための用量を調節することは、十分に当業者の能力の範囲内である。
【０１５５】
本発明の処方物は、薬学的に受容可能な溶液で投与され、これは、日常的には、薬学的に受容可能な濃度の塩、緩衝剤、保存剤、適合性キャリア、アジュバント、および必要に応じて他の治療成分を含有し得る。
【０１５６】
治療において使用するために、有効量の親油性接合体および／または他の治療剤が、化合物を所望の表面（例えば、局所粘膜、全身）に送達する任意の様式によって、被験体に投与され得る。本発明の薬学的組成物を投与することは、当業者に公知の任意の手段によって達成され得る。好ましい投与経路としては、経口、非経口、筋肉内、鼻内、舌下、期間内、吸入、眼、膣および直腸が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５７】
経口投与のために、上記化合物（すなわち、親油性接合体、抗原および／または他の治療剤）は、活性化合物と当該分野で周知の薬学的に受容可能なキャリアとを組み合わせることによって容易に処方され得る。このようなキャリアによって、本発明の化合物が、錠剤、丸剤、糖剤、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして、処置される被験体による経口摂取のために、処方され得る。経口使用のための薬学的調製物は、必要に応じて、得られた混合物を粉砕し、そして錠剤または糖剤コア（ｄｒａｇｅｅ  ｃｏｒｅ）を得るために、所望の場合、適切な補助剤を添加した後に、顆粒の混合物を処理して、固体賦形剤として得られ得る。適切な賦形剤は、特に、充填剤（例えば、糖（ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含む）；セルロース調製物（例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム）、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）である。所望の場合、崩壊剤（例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸またはその塩（例えば、アルギン酸ナトリウム）が添加され得る。必要に応じて、経口処方物はまた、内部酸条件を中和するために生理食塩水または緩衝液中に処方され得るか、あるいは、いかなるキャリアもなしで投与され得る。
【０１５８】
糖剤コアは、適切なコーティングを伴って提供される。この目的のために、濃縮糖溶液が使用され得、これは、必要に応じて、アラビアゴム、滑石、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、および適切な有機溶媒または溶媒混合物を含有し得る。色素または顔料は、活性化合物用量の異なる組合せを同定または特徴付けするために、錠剤または糖剤コーティングに添加され得る。
【０１５９】
経口的に使用され得る薬学的調製物としては、ゼラチンから作製された押し込み型（ｐｕｓｈ−ｆｉｔ）カプセル、ならびにゼラチンおよび可塑剤（例えば、グリセロールまたはソルビトール）から作製された軟質密封カプセルが挙げられる。押し込み型カプセルは、充填剤（例えば、ラクトース）、結合剤（例えば、デンプン）、および／または滑沢剤（例えば、滑石またはステアリン酸マグネシウム）および必要に応じて安定化剤と混合されて、活性成分を含み得る。軟質カプセルにおいて、活性化合物は、適切な液体（例えば、脂肪油、流動パラフィン、または液体ポリエチレングリコール）中に溶解または懸濁され得る。さらに、安定化剤が添加され得る。経口投与のために処方されるミクロスフェアもまた使用され得る。このようなミクロスフェアは、当該分野において十分に規定されている。経口投与のための全ての処方物は、このような投与のために適切な投薬量であるべきである。
【０１６０】
口腔（ｂｕｃｃａｌ）投与のために、この組成物は、従来の様式で処方される錠剤またはロゼンジの形態を採り得る。
【０１６１】
上記化合物は、吸入によって肺の経路へ、特に気管支へ、そしてより特定的に、肺の深部の肺胞中へ投与され得、投与には、標準的な吸入デバイスを使用する。その化合物は、適切な噴霧剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、または他の適切な気体）を使用して、加圧型のパックまたはネブライザーから、エアロゾルスプレー状の形態で送達され得る。加圧されたエアロゾルの場合、その投与単位は、測定した量を送達するためのバルブを提供することによって、決定され得る。吸入器具は、その化合物を被験体に送達するために使用され得る。本明細書中で使用する場合、吸入器具は、エアロゾル（例えば、その化合物の乾燥粉末形態）を投与するための任意のデバイスである。この型の装置は、当該分野において周知であり、そしてそれは、詳細に記載されてきた（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，第１９版、１９９５，Ｍａｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，１６７６−１６９２ページに見出される記述）。多くの米国特許もまた吸入デバイスを記載する（例えば、米国特許第６，１１６，２３７号）。
【０１６２】
本明細書中で使用される場合、「粉末」は、細かく分散した固体粒子からなる組成物を称する。好ましくは、上記化合物は、比較的に自由に流れ、そして吸入デバイス中に分散可能であり、次いで、被験体に吸入され、その化合物は、肺に到達して肺胞中に浸透される。「ドライパウダー」は、水分を含む成分を有する粉末組成物を称し、従って、その粒子は、吸入デバイス中に、容易に分散可能であり、エアロゾルを形成する。その水分含有量は概して、約１０重量％以下の水であり、そしていくつかの実施形態において、約５重量％以下であり、そして好ましくは、約３重量％未満である。その粉末は、ポリマーと共に処方され得るか、または必要に応じて、他の物質（例えば、リポソーム、アルブミンおよび／または他のキャリア）と共に処方され得る。
【０１６３】
エアロゾルの投与量および送達システムは、当業者によって、例えば、Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，６：２７３−３１３  （１９９０）中のＧｏｎｄａ，Ｉ．「Ａｅｒｏｓｏｌｓ  ｆｏｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｎｄ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｇｅｎｔｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｔｒａｃｔ，」およびＡｅｒｏｓｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｍｏｒｅｎら、編、Ｅｓｅｖｉｅｒ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９８５中のＭｏｒｅｎ，「Ａｅｒｏｓｏｌ  ｄｏｓａｇｅ  ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ，」に記載されるような、特定の治療適用のために選択され得る。
【０１６４】
化合物を全身的に送達することが望ましい場合、その化合物は、注射による（例えば、ボーラス注射または連続注入による）、非経口的な投与のために処方され得る。注射のための処方物は、単位投与形態（例えば、アンプル中）または多回投与用の容器中で、添加された保存剤と共に存在し得る。上記組成物は、油性ビヒクルもしくは水性ビヒクル中の、懸濁物、溶液またはエマルジョンのような形態を取り得、そして上記組成物は、処方剤（例えば、懸濁剤、安定化剤、および／または分散剤）を含有し得る。
【０１６５】
非経口投与のための薬学的処方物は、水溶性形態での活性化合物の水溶液を含有する。さらに、活性化合物の懸濁物が、適切な油状注射懸濁物として、調製され得る。適切な親油性溶媒または親油性ビヒクルとしては、脂肪油（例えば、ゴマ油）、または合成脂肪酸エステル類（例えば、オレイン酸エチルもしくはトリグリセリド類）、またはリポソームが挙げられる。水性注射懸濁物は、その懸濁物の粘性を増加する物質（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストラン）を含有し得る。必要に応じて、その懸濁物はまた、適切な安定化剤、または上記化合物の溶解度を増加して高濃縮溶液の調製を可能にする薬剤も含有し得る。
【０１６６】
あるいは、その活性化合物は、適切なビヒクル（例えば、発熱性物質を含まない滅菌水）を用いて使用前に構成するための粉末形態であり得る。
【０１６７】
上記化合物はまた、直腸に適用される組成物または膣に適用される組成物（例えば、坐剤または保持浣腸）の状態で、例えば、従来の坐剤基剤（例えば、カカオ脂または他のグリセリド）を含んで、処方され得る。
【０１６８】
上記の処方物に加えて、上記化合物はまた、持続性（ｄｅｐｏｔ）製剤として処方され得る。このような長期作用性処方物は、適切なポリマー物質もしくは疎水性物質（例えば、受容可能な油中のエマルジョンとして）またはイオン交換樹脂を用いて、またはやや溶解しにくい誘導体（例えば、やや溶解しにくい塩）として、処方され得る。
【０１６９】
上記薬学的組成物はまた、適切な固体もしくはゲル相の、キャリアまたは賦形剤を含有し得る。このようなキャリアまたは賦形剤の例としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖類、デンプン類、セルロース誘導体類、ゼラチン、およびポリマー類（例えば、ポリエチレングリコール）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７０】
適切な液体もしくは固体の薬学的調製物形態は、例えば、吸入用の水溶液もしくは生理食塩水溶液であるか、マイクロカプセル化されているか、渦巻き状（ｅｎｃｏｃｈｌｅａｔｅｄ）になっているか、顕微的な金粒子上にコーティングされているか、リポソーム中に含まれるか、噴霧されるか、エアロゾルであるか、皮膚移植用のペレットであるか、または皮膚中に掻き入れるべき鋭利な物体上に乾燥されている。上記薬学的組成物はまた、顆粒、散剤、錠剤、コーティングされた錠剤、（マイクロ）カプセル、坐剤、シロップ、エマルジョン、顕濁物、クリーム、活性化合物を長期放出する液滴もしくは調製物を包含し、その調製賦形剤および添加剤および／または補助剤（例えば、崩壊剤、結合剤、コーティング剤、膨張剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、甘味剤または溶解剤）は、上記のように慣習的に使用される。上記薬学的組成物は、種々の薬物送達系において使用するために適切である。薬物送達のための方法の簡略な概説について、Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７〜１５３３、１９９０（これは、本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。
【０１７１】
上記親油性接合体と、必要に応じて、他の治療剤および／または薬剤とが、それ自体で（そのままで）投与され得るか、または薬学的に受容可能な塩の形態で投与され得る。医薬において使用される場合、それらの塩は、薬学的に受容可能であるべきであるが、薬学的に受容可能でない塩が、その薬学的に受容可能な塩を調製するために好都合に使用され得る。そのような塩としては、以下の酸から調製した塩が挙げられるが、これらに限定されない：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸、ナフタレン−２−スルホン酸、およびベンゼンスルホン酸。また、そのような塩は、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩（例えば、カルボン酸基のナトリウム塩、カリウム塩、もしくはカルシウム塩）として、調製され得る。
【０１７２】
適切な緩衝剤としては、酢酸と塩（１〜２％ｗ／ｖ）；クエン酸と塩（１〜３％ｗ／ｖ）；ホウ酸と塩（０．５〜２．５％ｗ／ｖ）；およびリン酸と塩（０．８〜２％ｗ／ｖ）が挙げられる。適切な保存剤としては、塩化ベンザルコニウム（０．００３〜０．０３％ｗ／ｖ）；クロロブタノール（０．３〜０．９％ｗ／ｖ）；パラベン（０．０１〜０．２５％ｗ／ｖ）およびチメロサール（０．００４〜０．０２％ｗ／ｖ）が挙げられる。
【０１７３】
本発明の薬学的組成物は、有効量の親油性接合体と、必要に応じて抗原および／または他の治療剤とを含有し、必要に応じてそれらを、薬学的に受容可能なキャリア中に含有する。用語「薬学的に受容可能なキャリア」とは、ヒトまたは他の脊椎動物に投与するために適切な、１種以上の適合性の固体もしくは液体の、充填剤、希釈剤、または封入された物質を意味する。用語「キャリア」とは、適用を容易にするために活性成分が混合される、有機成分または無機成分（天然でも、または合成でもよい）を意味する。上記薬学的組成物の成分はまた、所望の薬学的有効性を実質的に損なう相互作用が存在しない様式で、本発明の化合物と混合可能であり、そして互いに混合可能である。
【０１７４】
本発明は、以下の実施例によってさらに例証される。以下の実施例は、さらなる限定としては決して解釈されるべきではない。本出願全体を通して引用された参考文献（文献参照物、発行された特許、公開された特許出願、および同時係属中の特許出願を含む）のすべての内容全体が、本明細書中に参考として明示的に援用される。
【実施例】
【０１７５】
（実施例１〜５の材料および方法）
オリゴヌクレオチド。すべてのＯＤＮは、Ｃｏｌｅｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｇｒｏｕｐ（Ｌａｎｇｅｎｆｅｌｄ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から提供され、Ｌｉｍｕｌｕｓアッセイ（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｖｅｒｖｉｅｒｓ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）によって測定したエンドトキシンレベルは、検出不可能（＜０．１ＥＵ／ｍｌ）であった。ＯＤＮを、エンドトキシンを含まない、滅菌したＴｒｉｓ−ＥＤＴＡ（Ｓｉｇｍａ，Ｄｅｉｓｅｎｈｏｆｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に懸濁し、そして保存し、そして無菌条件下で操作して微生物汚染およびエンドトキシン汚染の両方を防いだ。すべての希釈を、発熱物質を含まないリン酸緩衝化生理食塩水（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｅｇｇｅｎｓｔｅｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して行った。
【０１７６】
ＴＬＲ９アッセイ。ＨＥＫ２９３細胞を、ヒトＴＬＲ９を発現するベクターおよび６×ＮＦκＢ−ルシフェラーゼレポータープラスミドを用いて、エレクトロポレーションによってトランスフェクトした。安定なトランスフェクト産物（３×１０４細胞／ウェル）を、加湿したインキュベーターにおいて、３７℃で１６時間、ＯＤＮとインキュベートした。各データ点は、３連で行った。細胞を溶解し、そしてルシフェラーゼ遺伝子活性についてアッセイした（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ，Ｕｅｂｅｒｌｉｎｇｅｎ，ＧｅｒｍａｎｙのＢｒｉｔｌｉｔｅキットを使用して）。刺激指数を、ＯＤＮを添加しない培地のレポーター遺伝子活性を参照して計算した。
【０１７７】
細胞純化。健常ヒト供与体由来の末梢血軟膜調製物を、Ｂｌｏｏｄ  Ｂａｎｋ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｄｕｓｓｅｌｄｏｒｆ（Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手し、そしてＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ（Ｓｉｇｍａ）に対する遠心分離によって、ＰＢＭＣを精製した。細胞を、５％（ｖ／ｖ）熱不活性化ヒトＡＢ血清（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ）、または１０％（ｖ／ｖ）の、加熱して不活性化したＦＣＳ、１．５ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン（全てＳｉｇｍａ由来）を補充したＲＰＭＩ  １６４０培地中で、加湿したインキュベーターにおいて３７℃にて培養した。
【０１７８】
サイトカイン検出。ＰＢＭＣを５×１０６細胞／ｍｌの濃度で再懸濁し、４８ウェル平底プレート（１ｍｌ／ウェル）または９６ウェル円底プレート（２００μｌ／ウェル）に添加し、このプレートにはその前に、何も添加していないか、または異なる濃度のＯＤＮを添加しておいた。培養上清（ＳＮ）を、指定した時点の後に収集した。すぐに使用しない場合、上清を、必要になるまで−２０℃で凍結した。上清中のサイトカインの量を、市販のＥＬＩＳＡキット（ＩＬ−６，ＩＬ−１０；Ｄｉａｃｌｏｎｅ，Ｂｅｓａｎｃｏｎ，Ｆｒａｎｃｅから入手）または市販の抗体（複数のＩＦＮ−α種の検出のためにＰＢＬ，Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，ＮＪ，ＵＳＡから入手）を使用して開発した組織内のＥＬＩＳＡを使用して評価した。
【０１７９】
（実施例６〜９の材料および方法）
ＣｐＧ  ＯＤＮ。使用したＣｐＧ  ＯＤＮの配列はＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ（配列番号１１６）およびＴ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ａ−コレステロール（配列番号１３）であった。配列番号１１６のＧｐＣ類似物を、非ＣｐＧコントロールとして使用した。全てのＯＤＮは、Ｃｏｌｅｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｇｒｏｕｐ（Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ，ＭＡ）によって供給された。全てのＯＤＮを、エンドトキシンを含まない滅菌したＴＥ（ｐＨ  ８．０）（ＯｍｎｉＰｅｒ（登録商標）；ＥＭ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ，ＮＪ）中に再懸濁し、そして保存し、そして無菌条件下で操作して微生物汚染およびエンドトキシン汚染の両方を防いだ。アッセイのためのＯＤＮの希釈を、エンドトキシンを含まない滅菌したＰＢＳ（ｐＨ  ７．２）（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｌｏｉｓ，ＭＯ）で行った。
【０１８０】
動物。雌性ＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｃａｎａｄａ；Ｍｏｎｔｒｅａｌ，Ｑｕｅｂｅｃ，Ｃａｎａｄａから購入した）、ＴＬＲ９ノックアウトまたはそれらの野生型対照体（Ｏｓａｋａ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＪａｐａｎのＤｒ．Ｓ．Ａｋｉｒａより入手し、ｔｈｅ  Ｃｏｌｅｙ  Ｃａｎａｄａ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  Ｆａｃｉｌｉｔｙで飼育した）（６〜８週齢）を、実験のために使用した。全ての動物を、ｔｈｅ  Ｃｏｌｅｙ  Ｃａｎａｄａ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  Ｆａｃｉｌｉｔｙにおいて、微小アイソレーター（ｍｉｃｒｏ−ｉｓｏｌａｔｏｒ）中に収容し、そして実験を、ｔｈｅ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅの承認された状態で、ｔｈｅ  Ｃａｎａｄｉａｎ  Ｃｏｕｎｃｉｌ  ｏｎ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅの指針の下で行った。
【０１８１】
インビトロアッセイ。未処置のＢＡＬＢ／ｃ脾細胞（１ｍｌあたり５×１０６細胞）を、０．３μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、３μｇ／ｍｌ、もしくは１０μｇ／ｍｌの、配列番号１１６のＣｐＧ、配列番号１３のＣｐＧまたは非ＣｐＧコントロールのいずれかによって刺激した。コンカナバリンＡ（１０μｇ／ｍｌ，Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ）をポジティブコントロールとして使用し、そして培地のみで培養した細胞をネガティブコントロールとして使用した。培養上清を、６時間（ＴＮＦ−αについて）にて、または２４時間（ＩＬ−６およびＩＬ−１２について）にて収集し、そして市販のＥＬＩＳＡキット（マウスＯｐｔＥＩＡキット；ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，Ｍｉｓｓｉｓｓａｕｇａ，ＯＮ）を使用してサイトカインについて試験した。
【０１８２】
インビボアッセイ。雌性ＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝３または５／群）に５００μｇのＯＤＮ、または５００μｌのＰＢＳ（ネガティブコントロール）を、皮下または静脈内のいずれかで注射し、そしてＯＤＮ投与後、３時間または８時間で採血した。血漿を、ＥＬＩＳＡによって、ＩＰ−１０、ＩＬ−６またはＩＬ−１２について試験した。
【０１８３】
（実施例１：親油性接合体は、向上したＩＦＮ−α産生を実証する）
ヒトＰＢＭＣを、配列番号３６（ＣｐＧ  Ｂクラス）、配列番号３９（ＣｐＧ  Ｃクラス）、非ＣｐＧコントロール、配列番号４０（ＣｐＧ  Ａクラス）、非ＣｐＧコントロールＡクラス、または配列番号４（親油性接合体を有するＣｐＧ  ＯＤＮ）の濃度を増加して、４８時間インキュベートした。上清を回収して、ＥＬＩＳＡによってＩＦＮ−αを測定した。３つの血液供与体の平均±標準誤差を示す。結果を、図１に示す。親油性接合体を有するＣｐＧ  ＯＤＮ、ＣｐＧ  Ｃクラスオリゴヌクレオチド、およびＣｐＧ  Ａクラスオリゴヌクレオチドの全てが、ＩＦＮ−α産生を誘導した。０．５μｇ／ｍｌおよび２μｇ／ｍｌの濃度の、親油性接合体を有するＣｐＧ  ＯＤＮを測定し、約１０００ｐｇ／ｍｌおよび約３２５０ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ−α産生を、それぞれ誘導した。ＣｐＧ  Ｂクラスオリゴヌクレオチド、非ＣｐＧコントロールオリゴヌクレオチド、および非ＣｐＧコントロールＡクラスオリゴヌクレオチドは、測定可能なＩＦＮ−α応答を全く誘導しなかった。
【０１８４】
（実施例２：親油基接合体は、ＩＬ−６産生における有効性を実証する）
ヒトＰＢＭＣを、配列番号３６（ＣｐＧ  Ｂクラス）、配列番号３９（ＣｐＧ  Ｃクラス）、非ＣｐＧコントロール、配列番号４０（ＣｐＧ  Ａクラス）、非ＣｐＧコントロールＡクラス、または配列番号４（親油性接合体を有するＣｐＧ  ＯＤＮ）の濃度を増加して、２４時間インキュベートした。上清を回収して、ＥＬＩＳＡによってＩＬ−６を測定した。３つの血液供与体の平均±標準誤差を示す。結果を、図２に示す。このアッセイにおいて、２μｇ／ｍｌの濃度の、親油性接合体を有するＣｐＧ  ＯＤＮは、使用した他のＯＤＮと比較して、測定された最も高いＩＬ−６の誘導（約７５０ｐｇ／ｍｌ）を示した。より低い濃度（０．０３１、０．１２５および０．５）において、親油性接合体を有するＣｐＧ  ＯＤＮは、減少した有効性でＩＬ−６を誘導した。ＣｐＧ  ＢクラスＯＤＮ、ＣｐＧ  ＣクラスＯＤＮ、および特定の伸長したＣｐＧ  ＡクラスＯＤＮは全て、ＩＬ−６誘導における有効性を実証した。非ＣｐＧコントロールおよび非ＣｐＧコントロールＡクラスオリゴヌクレオチドは、ＩＬ−６の誘導を示さないか、またはＩＬ−６の誘導についての低い能力を示した。
【０１８５】
（実施例３：親油性接合体は、ＩＬ−１０産生において減少した有効性を実証する）
ヒトＰＢＭＣを、配列番号３６（ＣｐＧ  Ｂクラス）、配列番号３９（ＣｐＧ  Ｃクラス）、非ＣｐＧコントロール、配列番号４０（ＣｐＧ  Ａクラス）、非ＣｐＧコントロールＡクラス、または配列番号４（親油性接合体を有するＣｐＧ  ＯＤＮ）の濃度を増加して、２４時間インキュベートした。上清を回収して、ＥＬＩＳＡによってＩＬ−６を測定した。３つの血液供与体の平均±標準誤差を示す。結果を、図３に示す。親油性接合体を有するＣｐＧ  ＯＤＮは、ＩＬ−１０産生に対する刺激において、顕著に減少した有効性を示した。使用した最も高い濃度である２μｇ／ｍｌにおいてさえ、親油性接合体を有するＣｐＧ  ＯＤＮは、ＩＬ−１０刺激を顕著に誘導しなかった。同様の結果が、ＡクラスＯＤＮで得られたが、対照的に、ＢクラスＯＤＮおよびＣクラスＯＤＮは、ＩＬ−１０産生の誘導について、高い能力を示した。非ＣｐＧコントロールおよび非ＣｐＧコントロールＡクラスオリゴヌクレオチドは、ＩＬ−１０の誘導を示さないか、またはＩＬ−１０の誘導についての低い能力を示した。
【０１８６】
（実施例４：親油性接合体は、ＴＬＲ９依存性ＮＦκＢシグナル伝達を誘導する）
ヒトＴＬＲ９を発現するＨＥＫ２９３細胞を、示されたＯＤＮ濃度でインキュベートした。ＮＦκＢ刺激を、ルシフェラーゼ活性を通じて測定した。刺激指数を、ＣｐＧ  ＯＤＮを添加しない培地のルシフェラーゼ活性を参照して計算した（ルシフェラーゼ活性の誘導倍数）。結果を、図４に示す。１０μｇ／ｍｌの使用した最も高い用量における、親油性接合体を有するＣｐＧ  ＯＤＮは、約２０の刺激指数を誘導した。相対的に、ＢクラスＯＤＮは、ずっと低い濃度である０．６２５μｇ／ｍｌにおいて、２０の刺激指数を誘導した。ＡクラスＯＤＮは、最も低いＮＦκＢ刺激を示し、そして測定された最も高い刺激指数は、１０μｇ／ｍｌのＯＤＮ濃度に対して５であった。
【０１８７】
（実施例５：ＩＦＮ−α産生に対する接合体の配列および親油基の効果）
３つの供与体のヒトＰＢＭＣを、示したＯＤＮと一緒に４８時間インキュベートした。上清を回収して、ＥＬＩＳＡによってＩＦＮ−αを測定した。それぞれのＯＤＮの活性化のレベルを、−：無し；＋：低い；＋／＋＋：中間；＋＋＋／＋＋＋＋：強いによって示し、ならびにそれぞれのＯＤＮによって誘導された最大のＩＦＮ−αの量を示す。結果を、表２に示す。
【０１８８】
【表２−１】
2007506790.tif 000011
【０１８９】
【表２−２】
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【０１９０】
【表２−３】
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【０１９１】
【表２−４】
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【０１９２】
【表２−５】
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少なくとも１つのＣｐＧモチーフを有する、パリンドローム配列または部分的にパリンドロームな配列が必要とされたが、高いＩＦＮ−α誘導には十分ではなかった。パリンドロームＣＧＧＣＧＧＣＣＧＣＣＧ（配列番号１１４）および５’末端におけるさらなるＴを有する配列番号２７は、ＩＦＮ−αの強力な誘導を生じた。５’末端へのＧ残基の付加または３’末端へのＴ残基の付加（例えば、配列番号９、配列番号１０、および配列番号８にある）は同様の生物学的活性を生じた。しかし、そのパリンドロームの顕著な伸長（配列番号１９）は、ＩＦＮ−α誘導の僅かな減少を生じた。これらの結果は、この長さのオリゴヌクレオチドを有すること、そしてＯＤＮの配列を設計することは、少なくとも部分的にパリンドロームでなければならず、そして５’末端または５’末端近傍における、ＴＣＧ（例えば、配列番号４、配列番号１３）モチーフ、ＧＴＣＧ（配列番号９）モチーフ、ＧＡＣＧ（配列番号１４）モチーフ、またはＵＣＧ（配列番号２９にあるような）モチーフは、高いＩＦＮ−α誘導を得るのに、特に有利であることを示唆する。
【０１９３】
３’−コレステロール修飾した配列番号４は、ＩＦＮ−αの高い分泌を示すが、低いＩＬ−１０分泌の誘導（ＡクラスＣｐＧオリゴヌクレオチドの特有の特性）を示す。
【０１９４】
（実施例６：インビトロマウス脾細胞刺激）
ＢＡＬＢ／ｃマウス脾細胞を、示された濃度の配列番号１３またはコントロールの配列番号１１７と一緒に２４時間（図５ａ〜ｂ）、または６時間（図５ｃ）インキュベートした。ＳＮを回収し、そしてサイトカインをＥＬＩＳＡによって測定した。図５ａに示すように、親油性接合体を有するＣｐＧ  ＯＤＮは、用量依存的様式で、ＩＬ−６産生を誘導した。試験した最も高いＯＤＮ濃度（１０μｇ／ｍｌ）において測定されたＩＬ−６応答は、約９００ｐｇ／ｍｌであった。コントロールの非ＣｐＧ  ＯＤＮは、全くＩＬ−６誘導を刺激しなかった。図５ｂは親油性接合体を有するＣｐＧ  ＯＤＮによるＩＬ−１２の誘導を示す。その親油性接合体を有するＣｐＧ  ＯＤＮは、用量依存的様式で、ＩＬ−１２産生を誘導し、使用した最も高いＯＤＮ濃度（１０μｇ／ｍｌ）において測定されたＩＬ−１２応答は、約３７５０ｐｇ／ｍｌであった。対照的に、コントロールの非ＣｐＧ  ＯＤＮは、任意のＩＬ−１２産生を刺激しなかった。図５ｃは、コントロールの非ＣｐＧ  ＯＤＮと比較して、親油性接合体を有するＣｐＧ  ＯＤＮは、約１４０ｐｇ／ｍｌのＴＮＦ−αを誘導したが、対照的に、コントロールの非ＣｐＧ  ＯＤＮは、任意のＴＮＦ−α産生をほとんど誘導しなかった。
【０１９５】
（実施例７：インビトロＴＬＲ９＋／＋脾細胞刺激およびインビトロＴＬＲ９−／−脾細胞刺激）
ＴＬＲ９＋／＋マウス由来のＢａｌｂ／ｃ脾細胞（図６ａ）またはＴＬＲ９−／−マウス由来のＢａｌｂ／ｃ脾細胞（図６ｂ）を、示した濃度の配列番号１３、またはコントロールの配列番号１１７と一緒に２４時間インキュベートした。ＳＮを回収し、そしてＩＬ−１２ｐ４０をＥＬＩＳＡによって測定した。図６ａは、親油性接合体を有するＣｐＧ  ＯＤＮが、ＩＬ−１２用量反応を誘導し、それは、ＴＬＲ依存性であったことを示す。使用した。親油性接合体を有する最も高いＣｐＧ  ＯＤＮの濃度（１０μｇ／ｍｌ）は、１２００ｐｇ／ｍｌのＩＬ−１２濃度を誘導した。対照的に、コントロールの非ＣｐＧ  ＯＤＮは、使用したいずれの濃度においても、任意のＩＬ−１２産生をほとんど誘導しなかった。図６ｂは、親油性接合体を有するＣｐＧ  ＯＤＮおよびコントロールの非ＣｐＧ  ＯＤＮの両方が、１０μｇ／ｍｌの濃度においてでさえ、ＴＬＲ欠乏性細胞中で任意のＩＬ−１２産生をほとんど誘導しなかったことを示す。
【０１９６】
（実施例８：インビボでの時間依存的な血漿ＩＰ−１０刺激）
Ｂａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝５）に、５００μｇの配列番号１３を皮下注射し、そしてそのマウスをＯＤＮ投与の、１時間後、２時間後、３時間後、６時間後、８時間後、１２時間後、および２４時間後に採血した。血漿を、ＥＬＩＳＡによって、ＩＰ−１０について試験した（図７）。図７に示すように、親油性接合体を有するＣｐＧ  ＯＤＮは、時間依存的様式でＩＰ−１０の産生を刺激した。注射後の最初の３時間の間は、検出可能なＩＰ−１０誘導はなかった。注射後６時間において、ＩＰ−１０濃度を、５００ｐｇ／ｍｌまで増加した。注射後８時間において、ＩＰ−１０刺激は、約２０００ｐｇ／ｍｌで頂点に達した。注射後１２時間において、ＩＰ−１０濃度は、約５００ｐｇ／ｍｌまで減少し、注射後６時間において測定された刺激と等しくなった。注射後２４時間において、検出可能なＩＰ−１０産生の刺激はなかった。コントロールのＰＢＳ処置は、試験したいずれの時点においてもＩＰ−１０産生の誘導を示さなかった。
【０１９７】
（実施例９：インビボの、血漿サイトカイン刺激および血漿ケモカイン刺激）
Ｂａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝３）に、５００μｇの配列番号１３、または５００μｌのＰＢＳ（ネガティブコントロール）を静脈内注射し、そしてＯＤＮ投与の、３時間後および８時間後に採血した。血漿は、ＥＬＩＳＡによって、サイトカインまたはケモカインについて試験した（図８）。塗りつぶした棒＝３時間；斜線の棒＝８時間である。図８ａは、親油性接合体を有するＣｐＧ  ＯＤＮが、ＩＰ−１０の産生を時間依存的様式で刺激し、それぞれ、３時間および８時間において、約９０００ｐｇ／ｍｌおよび４０００ｐｇ／ｍｌの、ＩＰ−１０が刺激されたことを示す。対照的に、コントロールの非ＣｐＧ  ＯＤＮ（配列番号１１７）は、同じ時点において、任意のＩＰ−１０産生を刺激しなかった。図８ｂは、親油性接合体を有するＣｐＧ  ＯＤＮによるＩＬ−１２産生の刺激が、３時間（約２０，０００ｐｇ／ｍｌのＩＬ−１２を産生した）では、８時間（約２５，０００ｐｇ／ｍｌのＩＬ−１２を産生した）より、より低かったことを示す。コントロールの非ＣｐＧ  ＯＤＮは、試験したいずれの時点においても、任意のＩＬ−１２産生を誘導しなかった。図８ｃは、親油性接合体を有するＣｐＧ  ＯＤＮが、時間依存的様式でＩＬ−６の産生を刺激したことを示す。注射後３時間において、ＩＬ−６産生は、２５０ｐｇ／ｍｌ〜５００ｐｇ／ｍｌの範囲であったが、注射後８時間においては、そのＩＬ−６産生は、約４００ｐｇ／ｍｌであった。コントロールの非ＣｐＧ  ＯＤＮは、ＰＢＳコントロールと比較して、ＩＬ−６産生の有意な誘導を示さなかった。
【０１９８】
上に記載される明細書は、当業者が本発明を実施することを可能にするために十分であると考えられる。本明細書中に示されかつ記載されるものに加えて、本発明の種々の改変は、上の記載から当業者にとって明らかになり、そして添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれる。本発明の利点および目的は、必ずしも本発明の各実施形態に含まれない。
【図面の簡単な説明】
【０１９９】
【図１】図１は、免疫刺激性核酸に対する親油基の結合の効果を、ＩＦＮ−αの誘導によって示すグラフである。
【図２】図２は、免疫刺激性核酸に対する親油基の結合の効果を、ＩＬ−６の誘導によって示す棒グラフである。
【図３】図３は、免疫刺激性核酸に対する親油基の結合の効果を、ＩＬ−１０の誘導によって示す棒グラフである。
【図４】図４は、免疫刺激性核酸に接合した親油基が、ＴＬＲ９依存性ＮＦκＢシグナル伝達の誘導を向上させることを実証する棒グラフである。
【図５】図５は、免疫刺激性核酸に対する親油基の結合のインビトロマウス脾細胞刺激効果を、ＩＬ−６、ＩＬ−１２およびＴＮＦ−αの誘導によって示す棒グラフである。
【図６】図６は、免疫刺激性核酸に対する親油基の結合の、インビトロＴＬＲ９＋／＋マウス脾細胞刺激効果およびインビトロＴＬＲ９−／−マウス脾細胞刺激効果を、ＩＬ−１２の誘導によって示す棒グラフである。
【図７】図７は、免疫刺激性核酸に対する親油基の結合の、インビボ時間依存的効果を、ＩＰ−１０の誘導によって示すグラフである。
【図８】図８は、免疫刺激性核酸に対する親油基の結合の、インビボ刺激効果を、ＩＰ−１０、ＩＬ−１２およびＩＬ−６の誘導によって示す棒グラフである。
【図１】
2007506790.tif 000016
【図２】
2007506790.tif 000017
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2007506790.tif 000022
【図８】
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【配列表】
2007506790000001.xml
【手続補正書】
【提出日】平成18年3月27日(2006.3.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組成物であって、以下：
（Ｎ１ＰＮ２）・Ｌ
を含有し、Ｎ１およびＮ２は独立して、０〜１００ヌクレオチド長の核酸であり、Ｐは、核酸を含み、かつ少なくとも１つのＹＲジヌクレオチドを含むパリンドロームであり、Ｙは、シトシンまたは修飾されたシトシンであり、そしてＲは、グアニンまたは修飾されたグアニンであり、Ｌは、親油基である、組成物。
【請求項２】
Ｎ１ＰＮ２が、３〜１４ヌクレオチド長である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
Ｌが、Ｎ１ＰＮ２の３’末端で前記ヌクレオチドに連結された、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
Ｌが、リンカーによって、Ｎ１ＰＮ２中のヌクレオチドの２’位か、Ｎ１ＰＮ２中のヌクレオチドの複素環式塩基か、またはＮ１ＰＮ２中のホスホジエステル結合に連結される、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記ヌクレオチドが、Ｎ１ＰＮ２の３’末端のヌクレオチド、および内部のヌクレオチドからなる群より選択される、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
Ｌが、コレステリル、修飾されたコレステリル、コレステロール誘導体、還元されたコレステロール、および置換されたコレステロールからなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記還元されたコレステロールが、コレスタンである、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
Ｌが、Ｃ１６アルキル鎖、胆汁酸類、コール酸、タウロコール酸、デオキシコレート、オレイルリトコール酸、オレオイルコレン酸、糖脂質類、リン脂質類、スフィンゴ脂質類、ステロイド類のようなイソプレノイド類、ビタミンＥのようなビタミン類、飽和脂肪酸類、不飽和脂肪酸類、トリグリセリド類のような脂肪酸エステル類、ピレン類、ポルフィリン類、テキサフィリン、アダマンタン、アクリジン類、ビオチン、クマリン、フルオレセイン、ローダミン、テキサスレッド、ジゴキシゲニン、ジメトキシトリチル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、シアニン色素（例えば、Ｃｙ３またはＣｙ５）、Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３２５８色素、ソラレン、およびイブプロフェンからなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記式が、Ｎ１ＰＮ２−Ｌ−Ｎ３ＰＮ４を包含し、Ｎ３およびＮ４は独立して、０〜１００ヌクレオチド長の核酸である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
Ｌが、−３’−Ｌ−３’−、−２’−Ｌ−２’−、−３’−Ｌ−２’−、および−２’−Ｌ−３’−からなる群より選択される結合を介して、Ｎ１ＰＮ２およびＮ３ＰＮ４に連結される、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
Ｎ１ＰＮ２およびＮ３ＰＮ４が、同一である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１２】
Ｎ１ＰＮ２およびＮ３ＰＮ４が、異なる、請求項９に記載の組成物。
【請求項１３】
請求項１に記載の組成物であって、さらに少なくとも２Ｌを含有する、組成物。
【請求項１４】
前記式が、以下：
（［Ｎ１ＰＮ２］ｎ−Ｘ３）ｍ）・（Ｌ）ｐ
を包含し、Ｘ３は、リンカーであり、ｍは、０〜２０（好ましくは１〜１０）の整数であり、ｎは、０〜２０（好ましくは１〜１０）の整数であり、ｐは、１〜１０（好ましくは１）の整数であり、そして該オリゴヌクレオチドＮ１ＰＮ２は、４〜４０ヌクレオチド長を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
Ｘ３が、無塩基残基（ｄスペーサー）、トリエチレングリコール（スペーサー９）またはヘキサエチレングリコール（スペーサー１８）のようなオリゴエチレングリコール、およびブタンジオールのようなアルカンジオールからなる群より選択される非ヌクレオチドリンカーである、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記リンカーが、ホスホジエステル結合、ホスホロチオエート結合、メチルホスホネート結合、およびアミド結合からなる群より選択される結合を介して、前記オリゴヌクレオチドに結合される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１７】
ｎが、１より大きく、そして前記複数の［Ｎ１ＰＮ２］が、３’末端を介して連結される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１８】
Ｎ１ＰＮ２が、分枝ＯＤＮであり、Ｎ１が、少なくとも１つのＣＧジヌクレオチドを含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１９】
Ｌが、前記オリゴヌクレオチド［Ｎ１ＰＮ２］の３’末端に結合される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２０】
Ｐが、Ｘ１−Ｙ−Ｒ−Ｘ２であり、Ｘ１およびＸ２は独立して、０〜４ヌクレオチドである、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２１】
Ｘ１が、１〜２ヌクレオチドである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
Ｘ１が、１ヌクレオチドである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２３】
Ｘ１が、ピリミジンである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２４】
前記ピリミジンが、チミジン、デオキシウリジン、および５−置換デオキシウリジンからなる群より選択される、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２５】
Ｘ２が、パリンドローム、または逆方向反復である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２６】
前記パリンドロームまたは前記逆方向反復が、少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧモチーフを含む、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記オリゴヌクレオチドＮ１ＰＮ２が、４〜２０ヌクレオチド長を有する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２８】
前記オリゴヌクレオチドＮ１ＰＮ２が、６〜１４ヌクレオチド長を有する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２９】
前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの、直鎖状の非ヌクレオシド結合または分枝状の非ヌクレオシド結合を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３０】
請求項１に記載の組成物であって、さらに該組成物に関連する免疫刺激分子を含有する、組成物。
【請求項３１】
前記免疫刺激分子が、ＴＬＲ９リガンドである、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記オリゴヌクレオチドのヌクレオチド間結合が、全てホスホジエステル結合である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの安定化したヌクレオチド間結合を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３４】
前記安定化したヌクレオチド間結合が、ＹとＲとの間の結合であり、そして該安定化したヌクレオチド間結合が、Ｒｐ立体配置におけるホスホロチオエート結合である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
Ｐが、Ｃ＿Ｇ＿Ａ＿Ｃ、Ｃ＿Ｇ＿Ｔ＿Ｃ、Ｔ＿Ｃ＿Ｇ＿Ａ＿Ｃ、Ｃ＿Ｇ＿Ａ＿Ｃ＿Ｇ＿Ｔ＿Ｃ、Ｃ＿Ｇ＿Ｇ＿Ｃ＿Ｇ＿Ｇ、およびＧ＿Ａ＿Ｃ＿Ｇ＿Ａからなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３６】
前記オリゴヌクレオチド中の少なくとも１つのヌクレオチドが、置換されたプリンもしくは置換されたピリミジン、または修飾されたプリンもしくは修飾されたピリミジンである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３７】
前記置換されたピリミジンが、Ｃ５置換である、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
前記置換されたプリンが、Ｃ８置換またはＣ７置換である、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３９】
前記置換されたピリミジン、または前記修飾されたピリミジンが、５−置換シトシンである、請求項３６に記載の組成物。
【請求項４０】
複合的なオリゴヌクレオチドが、複合的なダブラー部分、またはトレブラー部分によって連結され、デンドリマーを形成する、請求項１に記載の組成物。
【請求項４１】
前記組成物が、少なくとも１つの、アミド結合によって連結されたアミノ酸残基を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項４２】
前記オリゴヌクレオチドが、３’５’−結合、２’５’−結合、３’３’−結合、および５’５’−結合からなる群より選択される、少なくとも１つのヌクレオチド間結合を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項４３】
ＬとＮ１ＰＮ２−との間の結合が、代謝的に安定である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４４】
ＬとＮ１ＰＮ２−との間の結合が、代謝的に不安定である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４５】
Ｌが、キャリアに関連する、請求項１に記載の組成物。
【請求項４６】
前記キャリアが、リポソーム、ＩＳＣＯＭ、疎水性ビーズ、疎水性処方物、ポリマー、ペプチド、タンパク質、および核酸からなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項４７】
請求項４６に記載の組成物であって、さらに該組成物に関連した治療因子を含有する、組成物。
【請求項４８】
請求項１に記載の組成物であって、以下：
少なくとも１つの露出した５’末端を有する核酸であって、該核酸が、少なくとも１つのＹＲジヌクレオチドを含み、Ｙは、シトシンまたは修飾されたシトシンであり、そしてＲは、グアニンまたは修飾されたグアニン、少なくとも１つの１本鎖領域、少なくとも１つの２本鎖領域であって、そして該核酸は、少なくとも１つの親油基と連結される、核酸をさらに含有する、組成物。
【請求項４９】
前記核酸が、１本鎖核酸である、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５０】
前記核酸が、２本鎖領域を形成し、該２本鎖領域は、該２本鎖領域のそれぞれの側に少なくとも２つの核酸の塩基対形成を包含する、請求項４９に記載の組成物。
【請求項５１】
前記核酸が、２本鎖領域を形成し、該２本鎖領域は、該２本鎖領域のそれぞれの側に少なくとも３つの核酸の塩基対形成を包含する、請求項４９に記載の組成物。
【請求項５２】
前記核酸が、分枝状核酸である、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５３】
前記核酸が、互いに、少なくとも部分的にハイブリダイズした２つの１本鎖核酸である、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５４】
前記核酸が、少なくとも２つの親油基に連結される、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５５】
前記親油基が、前記核酸の３’末端でヌクレオチドに連結される、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５６】
免疫応答を調節するための薬学的組成物であって、請求項１〜請求項５５のいずれか１項に記載の組成物を、免疫応答を調節するのに有効な量で含有する、薬学的組成物。
【請求項５７】
前記組成物が、被験体の喘息を処置するための、該被験体への送達に適している、請求項５６に記載の薬学的組成物。
【請求項５８】
前記組成物が、被験体のアレルギーを処置するための、該被験体への送達に適している、請求項５６に記載の薬学的組成物。
【請求項５９】
前記組成物が、被験体の癌を処置するための、該被験体への送達に適している、請求項５６に記載の薬学的組成物。
【請求項６０】
前記組成物が、被験体の感染症を処置するための、該被験体への送達に適している、請求項５６に記載の薬学的組成物。
【請求項６１】
前記組成物が、被験体の自己免疫疾患を処置するための、該被験体への送達に適している、請求項５６に記載の薬学的組成物。
【請求項６２】
前記組成物が、被験体の気道リモデリングを処置するための、該被験体への送達に適している、請求項５６に記載の薬学的組成物。
【請求項６３】
請求項５６に記載の薬学的組成物であって、抗原ををさらに含有する、薬学的組成物。
【請求項６４】
請求項５６に記載の薬学的組成物であって、該組成物が、治療プロトコルを伴なった投与に適している、薬学的組成物。
【請求項６５】
前記治療プロトコルが、手術である、請求項６４に記載の薬学的組成物。
【請求項６６】
前記治療プロトコルが、放射線である、請求項６４に記載の薬学的組成物。
【請求項６７】
前記治療プロトコルが、薬剤である、請求項６４に記載の薬学的組成物。
【請求項６８】
前記組成物が、処方されている、請求項５６に記載の薬学的組成物。
【請求項６９】
前記組成物が、標的分子に関連する、請求項６８に記載の薬学的組成物。
【請求項７０】
前記組成物が、口の経路、鼻の経路、舌下の経路、静脈内の経路、皮下の経路、粘膜の経路、呼吸器の経路、直接注入、および経皮的な経路からなる群より選択される経路による送達に適している、請求項５６に記載の薬学的組成物。
【請求項７１】
前記少なくとも１つの安定化したヌクレオチド間結合が、ホスホロチオエート結合である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項７２】
前記オリゴヌクレオチドが、該オリゴヌクレオチドの、５’末端および３’末端における、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む、請求項３３に記載の組成物。
【請求項７３】
（Ｎ１ＹＲＮ２）・Ｌ
を含有する組成物であって、Ｎ１およびＮ２は独立して、０〜１００ヌクレオチド長の核酸であり、Ｙは、シトシンまたは修飾されたシトシンであり、そしてＲは、グアニンまたは修飾されたグアニンであり、そしてＮ１ＹＲＮ２は、少なくとも１０ヌクレオチド長であり、Ｌは、親油基であり、そしてＬは、リンカーによって、Ｎ１ＹＲＮ２中のヌクレオチドの２’位に、またはＮ１ＹＲＮ２中のヌクレオチドの複素環式塩基に連結される、組成物。
【請求項７４】
Ｌが、コレステリル、修飾されたコレステリル、コレステロール誘導体、還元されたコレステロール、および置換されたコレステロールからなる群より選択される、請求項７３に記載の組成物。
【請求項７５】
前記還元されたコレステロールが、コレスタンである、請求項７４に記載の組成物。
【請求項７６】
Ｌが、Ｃ１６アルキル鎖、胆汁酸類、コール酸、タウロコール酸、デオキシコレート、オレイルリトコール酸、オレオイルコレン酸、糖脂質類、リン脂質類、スフィンゴ脂質類、ステロイド類のようなイソプレノイド類、ビタミンＥのようなビタミン類、飽和脂肪酸類、不飽和脂肪酸類、トリグリセリド類のような脂肪酸エステル類、ピレン類、ポルフィリン類、テキサフィリン、アダマンタン、アクリジン類、ビオチン、クマリン、フルオレセイン、ローダミン、テキサスレッド、ジゴキシゲニン、ジメトキシトリチル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、シアニン色素（例えば、Ｃｙ３またはＣｙ５）、Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３２５８色素、ソラレン、およびイブプロフェンからなる群より選択される、請求項７３に記載の組成物。
【請求項７７】
Ｎ１ＹＲＮ２が、５’ＴＣＣＧ３’、５’ＴＴＣＧ３’、および５’ＴＣＧＴＣＧ３’からなる群より選択される、請求項７３に記載の組成物。
【請求項７８】
（Ｎ１ＰＮ２）・Ｌ
を含有する組成物であって、Ｎ１およびＮ２は独立して、０〜１００ヌクレオチド長の核酸であり、Ｐは、核酸を含み、かつ少なくとも１つのＹＲジヌクレオチドを含むパリンドロームであり、Ｙは、シトシンまたは修飾されたシトシンであり、そしてＲは、グアニンまたは修飾されたグアニンであり、そしてＬは、コレステロールである、組成物。
【請求項７９】
Ｌが、Ｎ１ＰＮ２の３’末端で前記ヌクレオチドに連結される、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８０】
Ｎ１ＰＮ２が、５’ＴＣＧＡＣＧＴＣＧＴ３’（配列番号１１１）、および５’ＴＣＧＡＣＧＴＣＧＡ３’（配列番号１１２）からなる群より選択される、請求項７８に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2007506790000001.app
【国際調査報告】
2007506790.tif 000064
2007506790.tif 000065
2007506790.tif 000066
2007506790.tif 000067
2007506790.tif 000068
2007506790.tif 000069
2007506790.tif 000070
2007506790.tif 000071
2007506790.tif 000072
2007506790.tif 000073