(57)【要約】本願は、ＧＢＳポリペプチド抗原の組み合わせを含むＢ群のＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（「ＧＢＳ」）ワクチンに関し、そのポリペプチドは、レシピエントにおける免疫応答に寄与する。好ましくは、本発明の組み合わせは、２種以上のＧＢＳ抗原の組み合わせを含み、ここで、上記の組み合わせは、ＧＢＳ８０またはそのフラグメントを含む。１つの実施形態において、その組み合わせは、ＧＢＳ８０、ＧＢＳ９１、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ１８４、ＧＢＳ２７６、ＧＢＳ３０５、ＧＢＳ３２２、ＧＢＳ３３０、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ３６１、ＧＢＳ４０４、ＧＢＳ６９０およびＧＢＳ６９１からなる抗原の群から選択される２種〜１３種のＧＢＳ抗原からなり得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
２種以上のＧＢＳ抗原の組み合わせを含む組成物であって、ここで、該組み合わせが、ＧＢＳ８０またはそのフラグメントあるいはＧＢＳ８０と５０％以上の配列同一性を有するポリペプチド配列を含む、組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の組成物であって、前記ＧＢＳ抗原の組み合わせが、能動母子免疫アッセイによって測定される場合に改良された免疫原性を示し、ここで、該能動母子免疫アッセイは、免疫スケジュールの間に雌マウスの血清力価およびチャレンジ後の仔の生存率パーセントを測定する、組成物。
【請求項３】
請求項２に記載の組成物であって、前記チャレンジした仔の生存率パーセントが、単一の非ＧＢＳ８０抗原で免疫した雌マウス由来のチャレンジした仔の生存率パーセントより、少なくとも２パーセント高い、組成物。
【請求項４】
請求項１に記載の組成物であって、前記組み合わせが、２種のＧＢＳ抗原からなる、組成物。
【請求項５】
請求項１に記載の組成物であって、前記組み合わせが、３種のＧＢＳ抗原からなる、組成物。
【請求項６】
請求項１に記載の組成物であって、前記組み合わせが、４種のＧＢＳ抗原からなる、組成物。
【請求項７】
請求項１に記載の組成物であって、前記組み合わせが、５種のＧＢＳ抗原からなる、組成物。
【請求項８】
請求項１に記載の組成物であって、ＧＢＳ８０が、配列番号２またはその免疫原性フラグメントのアミノ酸配列を含む、組成物。
【請求項９】
請求項１に記載の組成物であって、前記ＧＢＳ８０のフラグメントが、配列番号３、４、５、６、７、８、および９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、組成物。
【請求項１０】
請求項１に記載の組成物であって、前記組み合わせが、ＧＢＳ８０、ＧＢＳ９１、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ１８４、ＧＢＳ２７６、ＧＢＳ３０５、ＧＢＳ３２２、ＧＢＳ３３０、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ３６１、ＧＢＳ４０４、ＧＢＳ６９０、およびＧＢＳ６９１からなる群より選択される、２〜１３種のＧＢＳ抗原からなる、組成物。
【請求項１１】
請求項１に記載の組成物であって、前記組み合わせが、ＧＢＳ８０、ＧＢＳ１０４およびＧＢＳ３２２を含む、組成物。
【請求項１２】
請求項１に記載の組成物であって、前記組み合わせが、ＧＢＳ８０、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ２７６およびＧＢＳ３２２を含む、組成物。
【請求項１３】
請求項１に記載の組成物であって、前記組み合わせが、ＧＢＳ９１、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ１８４、ＧＢＳ２７６、ＧＢＳ３０５、ＧＢＳ３２２、ＧＢＳ３３０、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ３６１、ＧＢＳ４０４、ＧＢＳ６９０またはＧＢＳ６９１のうちの少なくとも１種を含む、組成物。
【請求項１４】
ＧＢＳ８０抗原の一部分および少なくとも１種のＧＢＳ抗原の一部分を含む、融合タンパク質。
【請求項１５】
請求項１４に記載の融合タンパク質であって、前記少なくとも１種のＧＢＳ抗原が、ＧＢＳ９１、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ１８４、ＧＢＳ２７６、ＧＢＳ３０５、ＧＢＳ３２２、ＧＢＳ３３０、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ３６１、ＧＢＳ４０４、ＧＢＳ６９０またはＧＢＳ６９１からなる群より選択される、融合タンパク質。
【請求項１６】
請求項１５に記載の融合タンパク質であって、前記少なくとも１個種のＧＢＳ抗原が、ＧＢＳ３２２である、融合タンパク質。
【請求項１７】
請求項１６に記載の融合タンパク質であって、ＧＢＳ８０抗原およびＧＢＳ３２２抗原から本質的になる、融合タンパク質。
【請求項１８】
ＧＢＳ感染に感受性のある動物におけるＧＢＳ感染の治療的または予防的処置のための方法であって、該方法が、治療的または予防的な量の請求項１に記載の組成物を該動物に投与する工程を包含する、方法。
【請求項１９】
ＧＢＳに対する免疫応答を上昇させるための医薬の製造のための方法であって、該方法が、少なくとも１種のＧＢＳポリペプチド抗原とＧＢＳ８０抗原またはそのフラグメントとを混合する工程を包含する、方法。
【請求項２０】
請求項１９に記載の方法であって、前記少なくとも１種のＧＢＳポリペプチド抗原が、ＧＢＳ９１、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ１８４、ＧＢＳ２７６、ＧＢＳ３０５、ＧＢＳ３２２、ＧＢＳ３３０、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ３６１、ＧＢＳ４０４、ＧＢＳ６９０およびＧＢＳ６９１からなる抗原の群から選択されるポリペプチドまたはそのフラグメントを含む、組成物。
【請求項２１】
ＧＢＳ感染の処置のための医薬の調製における請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００４年２月２６日に出願された米国仮特許出願６０／５４８，７８９の利益を主張し、この米国仮特許出願６０／５４８，７８９の全体が参考として援用され、２００３年９月１５日に出願された国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ０３／２９１６７、代理人参照番号ＰＰ１９７６６．００２からの優先権を主張し、本明細書中にこのＰＣＴ／ＵＳ０３／２９１６７の全体が参考として援用される。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ（「ＧＢＳ」）由来の免疫原性抗原に関し、そして異なるＧＢＳ株の間でより広い適用範囲を提供するために他のＧＢＳ抗原と組み合わせてその免疫原性抗原を使用することに関連する。特に、本発明は、２種以上のＧＢＳ抗原の組み合わせを含む組成物に関連し、ここで、その組み合わせは、ＧＢＳ８０またはそのフラグメントを含む。その組み合わせは、ＧＢＳ８０および少なくとも１種の他のＧＢＳ抗原を含み得る。例えば、その組み合わせは、ＧＢＳ８０および１３種までのＧＢＳ抗原を含み得る。好ましい実施形態において、その組み合わせは、ＧＢＳ８０および１０種までのＧＢＳ抗原を含み得る。より好ましい実施形態において、その組み合わせは、ＧＢＳ８０および５種までのＧＢＳ抗原を含み得る。１つの実施形態において、その組み合わせは、ＧＢＳ８０、ＧＢＳ９１、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ１８４、ＧＢＳ２７６、ＧＢＳ３０５、ＧＢＳ３２２、ＧＢＳ３３０、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ３６１、ＧＢＳ４０４、ＧＢＳ６９０およびＧＢＳ６９１からなる抗原の群より選択される２種〜１３種のＧＢＳ抗原からなり得る。好ましくは、その組み合わせは、ＧＢＳ１０４およびＧＢＳ３２２の１種以上と組み合わせたＧＢＳ８０が挙げられる。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
ＧＢＳは、ここ２０年間で、１０００人の生産児あたり０．５〜３人に罹患する新生児敗血症および髄膜炎の主要な原因として、および人口１００，０００人あたり５〜８人に罹患する高齢者群の間の罹患率の重要な原因として、現れている。現在の疾患の管理戦略は、分娩時の抗生物質および新生児の監視に頼り、それは、新生児の症例の死亡率を、１９７０年代の５０％超から１９９０年代の１０％未満まで減少させている。それにもかかわらず、まだ相当な罹患率および死亡率があり、その管理は費用がかかる。１５〜３５％の妊婦は、無症候性キャリアであり、彼女らの乳児にこの疾患を伝染させる危険性が高い。新生児感染の危険性は、低い血清型特異的母子抗体に関連し、高力価が防御性である。さらに、侵襲性のＧＢＳ疾患は、疾患（例えば、糖尿病および癌）が内在する高齢者においてますます認識されている。
【０００４】
「ＧＢＳ」の「Ｂ」とは、Ｌａｎｃｅｆｉｅｌｄ分類をいい、それは、希酸中で可溶性でありかつＣ糖質と呼ばれる糖質の抗原性に基づいている。Ｌａｎｃｅｆｉｅｌｄは、１３種類のＣ糖質を同定して、血清学的区別され得るＡ〜Ｏと名付けた。最も一般にヒトに感染する生物は、Ａ群、Ｂ群、Ｄ群およびＧ群に見出されている。Ｂ群内で、菌株は、それらの多糖類莢膜の構造に基づいて少なくとも９個の血清型（Ｉａ、Ｉｂ、Ｉａ／ｃ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩおよびＶＩＩＩ）に分けられ得る。過去において、血清型Ｉａ、Ｉｂ、ＩＩおよびＩＩＩが、正常な膣の移動および新生児における早期発症性敗血症において一様に蔓延した。Ｖ型のＧＢＳは、米国のＧＢＳ感染の重要な原因として現れているが、しかし、ＶＩ型およびＶＩＩＩ型の菌株は、日本の女性の間に蔓延している。
【０００５】
血清型Ｖの菌株２６０３Ｖ／Ｒのゲノム配列は、公開されており（参考文献１）、そしてワクチン抗原として使用するための種々のポリペプチドが、同定されている（参考文献２）。しかし、現在、臨床試験中でワクチンは、多糖抗原に基づいている。これらは、血清型特異性および不十分な免疫原性に悩まされるので、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ感染に対する有効なワクチンの必要性がある。
【０００６】
本発明の目的は、ＧＢＳ疾患および／またはＧＢＳ感染に対する免疫を提供するためのさらなる改良された組成物を提供することである。その組成物は、２種以上（例えば、３種以上）のＧＢＳ抗原の組み合わせに基づいている。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（発明の要旨）
本出願人は、免疫原性のＧＢＳ抗原、特にＧＢＳ８０が、とりわけ他のＧＢＳ抗原と組み合わされて使用される場合、免疫処置の目的のために特に適切であることを発見している。その組み合わせは、ＧＢＳ８０と、少なくとも１種の他のＧＢＳ抗原または１３種までの他のＧＢＳ抗原とを含み得る。好ましい実施形態において、その組み合わせは、ＧＢＳ８０および１０種までのＧＢＳ抗原を含み得る。より好ましい実施形態において、その組み合わせは、ＧＢＳ８０および５種までのＧＢＳ抗原を含む。特に、本発明は、２種以上のＧＢＳ抗原の組み合わせを含む組成物に関連し、ここで、その組み合わせは、ＧＢＳ８０またはそのフラグメントを含む。１つの実施形態において、その組み合わせは、ＧＢＳ８０、ＧＢＳ９１、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ１８４、ＧＢＳ２７６、ＧＢＳ３０５、ＧＢＳ３２２、ＧＢＳ３３０、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ３６１、ＧＢＳ４０４、ＧＢＳ６９０およびＧＢＳ６９１からなる群より選択されるＧＢＳ抗原の２種〜１３種からなり得る。好ましくは、その組み合わせは、ＧＢＳ８０、ＧＢＳ１０４およびＧＢＳ３２２からなる。
【０００８】
完全長の抗原の代わりに、その組み合わせは、選択されたＧＢＳ抗原の免疫原性フラグメントおよび／または選択された抗原に対する配列同一性を有するポリペプチド配列を含み得る。
【０００９】
好ましくは、ＧＢＳ抗原の組み合わせは、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種または１０種のＧＢＳ抗原からなる。さらにより好ましくは、ＧＢＳ抗原の組み合わせは、３種、４種または５種のＧＢＳ抗原からなる。
【００１０】
（発明の詳細な説明）
本発明の実施は、他に記載されない限り、当業者の技術範囲内にある化学、生化学、分子生物学、免疫学および薬理学の従来の方法を使用する。そのような技術は、文献に十分に説明されている。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．、第１９版（１９９５）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．ＣｏｌｏｗｉｃｋおよびＮ．Ｋａｐｌａｎ、編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；およびＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｉ巻〜ＩＶ巻（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ、編、１９８６、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（第２版、１９８９）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｓｕｒｆａｃｅ  ａｎｄ  Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｂｉｒｄｉ，Ｋ．Ｓ．編、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、１９９７）；Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、第４版（Ａｕｓｕｂｅｌら、編、１９９９、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ）；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ：Ａｎ  Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｏｕｒｓｅ，（Ｒｅａｍら、編、１９９８、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）；ＰＣＲ（Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  Ｓｅｒｉｅｓ）、第２版（Ｎｅｗｔｏｎ  ＆  Ｇｒａｈａｍ編、１９９７、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ）；ＰｅｔｅｒｓおよびＤａｌｒｙｍｐｌｅ，Ｆｉｅｌｄｓ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（第２版）、Ｆｉｅｌｄｓら（編）、Ｂ．Ｎ．Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ．を参照のこと。
【００１１】
本明細書中に引用される全ての刊行物、特許および特許出願は、その全体が参考として本明細書中で援用される。
【００１２】
（ＧＢＳ抗原）
上記に議論したように、本発明は、２種以上のＧＢＳ抗原の組み合わせを含む免疫原性組成物を提供し、ここで、その組み合わせは、ＧＢＳ８０またはそのフラグメントを含む。
【００１３】
ＧＢＳ抗原の組み合わせは、同定したＧＢＳ抗原のポリペプチドフラグメントを含み得る。そのフラグメントの長さは、特定のＧＢＳ抗原のアミノ酸配列に依存して変化し得るが、そのフラグメントは、好ましくは、少なくとも７個連続するアミノ酸（例えば、８個、１０個、１２個、１４個、１６個、１８個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、５０個、６０個、７０個、８０個、９０個、１００個、１５０個、２００個またはそれ以上）である。好ましくは、そのフラグメントは、上記の配列由来の１種以上のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、（１）同定された各々のＧＢＳ抗原のＮ末端シグナルペプチド、（２）Ｎ末端シグナルペプチドを含まないその同定されたＧＢＳ抗原、および（３）同定された各々のＧＢＳ抗原（１０個までのアミノ酸残基（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれ以上）が、Ｎ末端および／またはＣ末端から欠失している（例えば、Ｎ末端アミノ酸残基が欠失され得る））を含む。他のフラグメントは、上記タンパク質の１種以上のドメインを取り除いている（例えば、シグナルペプチド、細胞質ドメイン、膜貫通ドメイン、または細胞外ドメインの除去）。
【００１４】
ＧＢＳ抗原の組み合わせは、同定されたＧＢＳ抗原に対する配列同一性を有するポリペプチド配列を含み得る。その配列同一性の程度は、問題のアミノ酸配列（ａ）に依存して変化し得るが、しかし、好ましくは、５０％より大きい（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％。９９．５％またはそれ以上）。配列同一性を有するポリペプチドは、上記同定されたＧＢＳ抗原のホモログ、オルトログ、対立遺伝子改変体および機能性変異体を含む。代表的に、２種のタンパク質間の５０％以上の同一性は、機能的に等価であることの指標であるとみなされる。タンパク質間の同一性は、好ましくは、ギャップ開始ペナルティー＝１２およびギャップ伸長ペナルティ＝１といったパラメーターを用いる類似性のギャップ検索を使用して、ＭＰＳＲＣＨプログラム（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ）で実行されるようなＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎホモロジーサーチアルゴリズムによって決定される。
【００１５】
上記ポリペプチドは、もちろん、種々の手段によって（例えば、組換え発現、ＧＢＳからの精製、化学合成など）種々の形態（例えば、ネイティブ形態、融合物、グリコシル化形態、非グリコシル化形態など）で調製され得る。それらは、好ましくは、実質的に純粋な形態（すなわち、他の連鎖球菌タンパク質または宿主細胞タンパク質を実質的には含まない）または実質的に単離された形態で調製される。
【００１６】
（ＧＢＳ８０）
上記に議論したように、本発明は、他のＧＢＳ抗原との相乗的な組み合わせにおけるＧＢＳ８０の使用に関連する。ＧＢＳ８０とは、推定細胞壁表面アンカーファミリータンパク質をいう。血清型Ｖの単離菌株２６０３Ｖ／Ｒから配列決定されたＧＢＳ８０のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が、配列番号８７７９および配列番号８７８０として参考文献２に示されている。これらの配列をまた、配列番号１および配列番号２
【００１７】
【表１】
2007527866.tif 000002
【００１８】
【表２】
2007527866.tif 000003
として上に示す。
【００１９】
上記のように、本発明の組み合わせは、ＧＢＳ抗原のフラグメントを含み得る。いくつかの場合において、１種以上のドメイン（例えば、リーダー配列領域またはシグナル配列領域、膜貫通領域、細胞質領域あるいは細胞壁アンカーモチーフ）の除去は、上記のＧＢＳタンパク質の抗原および／または組換え発現をコードする遺伝子のクローニングを容易にし得る。さらに、上記の列挙したＧＢＳ抗原の免疫原性エピトープを含むフラグメントは、本発明の組成物において使用され得る。
【００２０】
ＧＢＳ８０は、上記の配列番号２の初めにおける下線を引いた配列によって示されるＮ末端リーダー配列領域またはＮ末端シグナル配列領域を含有する。１つの実施形態において、ＧＢＳ８０のリーダー配列領域またはシグナル配列領域由来の１個以上のアミノ酸が、除去される。そのようなＧＢＳ８０フラグメントの例を、配列番号３
【００２１】
【表３】
2007527866.tif 000004
として上に示す。
【００２２】
ＧＢＳ８０は、上記の配列番号２の終わり近くにおける下線を引いた配列によって示されるＣ末端膜貫通領域を含有する。１つの実施形態において、その膜貫通領域および／または細胞質領域由来の１個以上のアミノ酸が、除去される。そのようなＧＢＳ８０フラグメントの例を、配列番号４
【００２３】
【表４】
2007527866.tif 000005
として上に示す。
【００２４】
ＧＢＳ８０は、細胞壁アンカーを示すアミノ酸モチーフ：配列番号５  Ｉ.ＰＮＴＧ（上記の配列番号２においてイタリック体で示される）を含有する。いくつかの組換え宿主細胞系において、その宿主細胞由来の組換えＧＢＳ８０タンパク質の分泌を促進するために、このモチーフを除去することが好まれ得る。従って、本発明における使用のためのＧＢＳ８０の１つの好ましいフラグメントにおいて、上記の膜貫通領域および／または細胞質領域ならびに上記の細胞壁アンカーモチーフが、ＧＢＳ８０から除去される。そのようなＧＢＳ８０フラグメントの例を、配列番号６
【００２５】
【表５】
2007527866.tif 000006
として上に示す。
【００２６】
あるいは、いくつかの組換え宿主細胞系において、上記の組換え発現されたタンパク質をその細胞壁に固着させるために、上記の細胞壁アンカーモチーフを使用することが好まれ得る。その発現されたタンパク質の細胞外ドメインは、精製の間に切断され得るか、あるいはその組換えタンパク質は、その最終組成物中の不活性化された宿主細胞または細胞膜のいずれかに付着したままであり得る。
【００２７】
１つの実施形態において、上記のリーダー配列領域またはシグナル配列領域、上記の膜貫通領域および細胞質領域ならびに上記の細胞壁アンカーモチーフが、上記のＧＢＳ８０の配列から除去される。そのようなＧＢＳ８０フラグメントの例を、配列番号７
【００２８】
【表６】
2007527866.tif 000007
として上に示す。
【００２９】
本出願人は、上記のＧＢＳ８０タンパク質の特に免疫原性であるフラグメントを同定した。この免疫原性フラグメントは、そのタンパク質のＮ末端に向かって位置し、それには、以下のように上記のＧＢＳ８０の配列番号２の配列において下線を引かれている。その下線を引いたフラグメントを、配列番号８
【００３０】
【表７】
2007527866.tif 000008
として上に示す。
【００３１】
配列番号７によってコードされるタンパク質の免疫原性を、ＰＢＳ、ＧＢＳの細胞全体、ＧＢＳ８０（全長）およびＧＢＳ８０のペプチドのＣ末端に対してもっと近くに位置するＧＢＳ８０の別のフラグメント（以下の配列番号９）
【００３２】
【表８】
2007527866.tif 000009
に対して比較した。
【００３３】
能動母子免疫アッセイ（Ａｃｔｉｖｅ  Ｍａｔｅｒｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ）および受動母子免疫アッセイ（Ｐａｓｓｉｖｅ  Ｍａｔｅｒｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ）の両方を、このタンパク質集合に対して行った。
【００３４】
本明細書中で使用される場合、能動母子免疫アッセイとは、雌マウスが上記の試験抗原組成物で免疫されるインビボでの防御アッセイをいう。次いでその雌マウスに、仔を産ませ、それらの仔を致死量のＧＢＳでチャレンジする。上記の免疫スケジュールの間の雌マウスの血清力価ならびにチャレンジ後の仔の生存期間を測定する。
【００３５】
具体的には、本明細書中で言及される能動母子免疫アッセイは、４匹のＣＤ−１雌マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｃａｌｃｏ  Ｉｔａｌｙ）の群を使用した。これらのマウスを、仔を産む前の１日目、２１日目および３５日目に、フロイントのアジュバント中にある選択されたタンパク質を用いて腹腔内免疫した。６〜８週齢のマウスに、単一の抗原を用いて免疫した場合には一投与量あたり２０μｇのタンパク質を与え、抗原の組み合わせを用いて免疫した場合には一投与量あたり３０〜４５μｇのタンパク質（各々１５μｇの抗原）を与えた。その母親の免疫応答を、０日目および４９日目に得た血清サンプルを使用することによってモニターした。その雌マウスは、最後の免疫処置の２〜７日間後に（およそｔ＝３６〜３７にて）仔を産み、代表的に２１日間の妊娠期間を有した。誕生の４８時間以内に、免疫処置していない仔の７０〜９０％を殺すのに十分である量（ＰＢＳコントロール群から集めた実験に基づいた経験的データによって決定した場合）とほとんど等しい用量のＧＢＳを用いてその仔を腹腔内チャレンジした。そのＧＢＳチャレンジの用量を、好ましくは、５０μｌのＴＨＢ培地中で投与する。好ましくは、その仔のチャレンジを、最初の免疫処置の５６〜６１日後に行う。そのチャレンジ接種物を、使用する前にＴＨＢで適切な濃度に希釈した凍結培養物から始めて調製した。仔の生存を、チャレンジ後の５日間モニターした。
【００３６】
本明細書中で使用される場合、受動母子免疫アッセイとは、妊娠中のマウスが、出産のおよそ２日間前に、ウサギ免疫血清（またはコントロール血清）を注射することによって受動免疫される、インビボでの防御アッセイをいう。その仔を、次いで、致死量のＧＢＳでチャレンジする。
【００３７】
具体的には、本明細書中で言及される受動母子免疫アッセイには、出産の２日間前に、１ｍｌのウサギ免疫血清またはコントロール血清を腹腔内注射することによって受動免疫された、妊娠中のＣＤ１マウスの群を使用した。新生仔マウス（誕生後２４時間〜４８時間）に、７０％〜９０％の致死量のＧＢＳ血清型ＩＩＩ  ＣＯＨ１を用いて腹腔内チャレンジする。凍結した対数中期の培養物を希釈することによって得たチャレンジ用量を、５０μｌのＴＨＢ培地中で投与した。
【００３８】
両方のアッセイについて、生存しているＧＢＳ感染の仔の数を、１２時間ごとに４日間評価した。統計的有意性をフィッシャーの正確確率検定によって評価した。
【００３９】
配列番号７、配列番号８、ＰＢＳおよびＧＢＳの細胞全体を用いる免疫処置についての各アッセイの結果を、以下の表１および表２に示す。
【００４０】
【表９】
2007527866.tif 000010
表１および表２に示すように、上記の配列番号７のＧＢＳ８０フラグメントを用いる免疫処置は、上記のチャレンジした仔について、比較対象である配列番号８のＧＢＳ８０フラグメントより実質的に改良された生存率を提供した。これらの結果は、上記の配列番号７のＧＢＳ８０フラグメントが、ＧＢＳ８０の重要な免疫原性エピトープを含み得ることを示す。
【００４１】
（ＧＢＳ８０を含む組み合わせ）
本発明は、２種以上のＧＢＳ抗原の組み合わせを含み、ここで、その組み合わせは、ＧＢＳ８０またはそのフラグメントを含む。本出願人は、ＧＢＳ８０が、他のＧＢＳ抗原と組み合わせた免疫処置のために特に適切であり、これらの抗原の組み合わせが、種々のＧＢＳ株の間で、より広い適用範囲を提供することを発見した。
【００４２】
好ましくは、そのＧＢＳ抗原の組み合わせは、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種または１０種のＧＢＳ抗原からなる。さらにより好ましくは、そのＧＢＳ抗原の組み合わせは、３種、４種または５種のＧＢＳ抗原からなる。
【００４３】
好ましくは、本発明の組み合わせは、単独で投与される場合の上記の抗原の免疫原性よりも改良された免疫原性を提供する。改良された免疫原性は、例えば、能動母子免疫アッセイによって測定され得る。上記に議論したように、このアッセイは、上記の免疫処置スケジュールの間の雌マウスの血清力価、ならびにチャレンジ後の仔の生存期間を測定するために、使用され得る。好ましくは、本発明の免疫原性組成物を用いる免疫処置は、単独で投与される場合の上記の組成物の単一の抗原を用いる母子免疫からの生存パーセントと比較すると、上記のチャレンジした仔の生存パーセントにおいて少なくとも２パーセント（好ましくは、少なくとも３パーセント、４パーセントまたは５パーセント）の増加を生じる。好ましくは、その増加は、少なくとも６パーセント、７パーセント、８パーセント、９パーセント、１０パーセント、１１パーセント、１２パーセント、１３パーセント、１４パーセント、１５パーセント、１６パーセント、１７パーセント、１８パーセント、１９パーセント、２０パーセント、２１パーセント、２２パーセント、２３パーセント、２４パーセント、２５パーセント、２６パーセント、２７パーセント、２８パーセント、２９パーセントまたは３０パーセントである。好ましくは、ＧＢＳ８０を含む本発明のＧＢＳの組み合わせは、ＧＢＳ８０でない抗原単独での免疫処置からの生存パーセントと比較すると、生存パーセントの増加を示す。
【００４４】
本発明の１つの実施形態に従って、上記の抗原の一部もしくはいくつかの部分を含む抗原または融合タンパク質の組み合わせは、１種〜１０種の抗原、好ましくは１種から１０種以下の抗原と組み合わせた、ＧＢＳ８０またはその一部を含む。そのような他の抗原は、非限定的な例として、ＧＢＳ６７、ＧＢＳ９１、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ１８４、ＧＢＳ２７６、ＧＢＳ３０５、ＧＢＳ３２２、ＧＢＳ３３０、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ３６１、ＧＢＳ４０４、ＧＢＳ６９０およびＧＢＳ６９１が挙げられる。さらに他の抗原は、２００３年４月２８日に出願された米国出願番号１０／４１５，１８２（本明細書中でその全体が援用される）において同定されている。
【００４５】
例えば、組み合わせとしては、ＧＢＳ８０、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ３２２およびＧＢＳ２７６；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ３３０；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ３３０、ＧＢＳ１０４；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ４０４；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ１０４；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ４０４；ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ３３０、ＧＢＳ１０４；ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ４０４；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ３３０、ＧＢＳ４０４；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ３２２、ＧＢＳ１０４；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ３２２、ＧＢＳ２７６；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ３２２、ＧＢＳ９１；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ２７６；ＧＢＳ８０、ＧＳＢ１０４、ＧＢＳ９１；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ２７６、ＧＢＳ９１；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ３２２、ＧＢＳ１０４；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ３２２、ＧＢＳ２７６；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ３２２、ＧＢＳ９１；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ２７６；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ９１；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ２７６、ＧＢＳ９１；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ６９０、ＧＢＳ６９１；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ６９０、ＧＢＳ３３８；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ６９０、ＧＢＳ３０５；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ６９１、ＧＢＳ３０５；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ３０５；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ３６１；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ３０５、ＧＢＳ３６１；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ１８４、ＧＢＳ６９１；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ６９１、ＧＢＳ３３８；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ２７６、ＧＢＳ３２２；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ６７およびＧＢＳ３２２が挙げられ得る。改良された免疫原性を示す本発明の組み合わせの例を、以下に示す。これらの実験において言及される上記のＧＢＳ抗原のより詳細な説明を、以下の実施例に示す。
【実施例】
【００４６】
（実施例１：ＧＢＳ８０単独に対するＧＢＳ８０組み合わせの能動母子免疫アッセイ）
この実施例において、上記の能動母子免疫アッセイを、ｔ＝５６日にて、ＧＢＳのＩＩＩ型血清型（ＣＯＨ１単離体）でチャレンジした仔の生存パーセントを測定するために使用した。その母マウスを、以下の表３に示すように、ＧＢＳ８０単独、ＧＢＳ抗原の組み合わせ（ＧＢＳ８０を含むＧＢＳ抗原、およびＧＢＳ８０を含まないＧＢＳ抗原）、プラシーボ（ＰＢＳ）または不活性化したＧＢＳ単離体の細胞全体を用いて、上記に議論した能動母子免疫アッセイ計画に従って、免疫した。これらの実験において、免疫処置していない仔の７０〜９０％を殺すのに十分なＩＩＩ型ＧＢＳであるＣＯＨ１単離体についてのチャレンジ用量は、１０×ＬＤ５０％とほぼ等しい（ここで、ＬＤ５０％は、統計的に導かれた半数致死量である）。
【００４７】
【表１０】
2007527866.tif 000011
表３に示すように、ＧＢＳ８０を含むＧＢＳ抗原の組み合わせは、上記の抗原単独の使用よりも改良された免疫原性を示した。例えば、ＧＢＳ８０単独での免疫処置によって、上記のチャレンジした仔の間で７０％の生存率を得た。ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ３３０、ＧＢＳ１０４、およびＧＢＳ４０４と、ＧＢＳ８０との組み合わせを用いる免疫処置によって、上記のチャレンジした仔の間で９５〜１００％の生存率を得た。これは、２５〜３０パーセントの増加である。
【００４８】
比較すると、ＧＢＳ８０を含まなかったこれらの抗原の組み合わせは、ＧＢＳ８０単独の生存％を達成できなかった。例えば、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ１０４およびＧＢＳ４０４を用いる免疫処置によって、６５％の生存率を得た。これらの抗原のいずれか１つをＧＢＳ８０で置換することによって、９７％と１００％との間にまで生存率パーセントが、劇的に増加した。これは、３２〜３５パーセントの増加である。（ＧＢＳ８０、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ１０１の生存率パーセント（９７％）；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ４０４の生存率パーセント（１００％）およびＧＢＳ８０、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ４０４の生存率パーセント（１００％）を参照のこと。）同様に、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ３３０およびＧＢＳ１０４を用いる免疫処置によって、７３％の生存率を得た。これらの抗原のいずれか１つをＧＢＳ８０で置換することよって、９５％と９７％との間にまで生存率パーセントが増加した。
【００４９】
これらの所見は、ＣＯＨ１単離体からの防御が、他のＧＢＳ抗原と組み合わせたＧＢＳ８０の使用によって増加することを示す。
【００５０】
（実施例２：ＧＢＳ８０、ＧＢＳ３２２、ＧＢＳ２７６、ＧＢＳ１０４単独対組み合わせの能動母子免疫アッセイ）
この実施例において、上記の能動母子免疫アッセイを、ｔ＝５６日にて、ＩＩＩ型血清型のＧＢＳ（ＣＯＨ１単離体）でチャレンジした仔の生存パーセントを測定するために使用した。その母マウスを、以下の表４に示すように、単一のＧＢＳ抗原、ＧＢＳ８０とＧＢＳ抗原との組み合わせ、およびプラシーボ（ＰＢＳ）を用いて、上記に議論した能動母子免疫アッセイ計画に従って、免疫処置した。
【００５１】
【表１１】
2007527866.tif 000012
表４に示すように、ＧＢＳ８０と上記の抗原の組み合わせによって、その抗原単独の使用よりも改良された免疫原性を得た。例えば、ＧＢＳ３２２単独での免疫処置によって、上記のチャレンジした仔の間で１７％の生存率を得た。ＧＢＳ３２２と、ＧＢＳ８０および別のＧＢＳ抗原との組み合わせを用いる免疫処置によって、９２〜１００％の生存率を得た。別の例において、ＧＢＳ１０４単独での免疫処置によって、７４％の生存率を得た。ＧＢＳ１０４と、ＧＢＳ８０および別のＧＢＳ抗原との組み合わせを用いる免疫処置によって、９０〜１００％の生存率を得た。別の例として、ＧＢＳ２７６単独での免疫処置によって、３５％の生存率を得た。ＧＢＳ２７６と、ＧＢＳ８０および別のＧＢＳ抗原との組み合わせを用いる免疫処置によって、８２〜９７％の生存率を得た。
【００５２】
上記の組み合わせの免疫原性が示されたので、上記のマウスモデルにおける免疫応答期間をさらに分析した。上記の能動母子免疫アッセイにおいて使用した母マウスを再び、交配させて、ｔ＝９１日にて、劇的に高い用量（３００×ＬＤ５０％）で、異なるＧＢＳ血清型（Ｖ型、ＣＪＢ１１１単離体）を生じた仔を用いてチャレンジした。この２度目のより強いチャレンジのパラメーターは、上記の標準的な能動母子免疫アッセイのパラメーターの外側にあった。このことは、上記のマウスモデルにおける元の母親の免疫処置から生じる免疫記憶の限界を調べるようになっていた。これらの条件下でのこのモデルにおける免疫記憶の徴候は、有意であると考えられる。表５に示すように、これらの極端な条件下でさえ、特にＧＢＳ８０を、ＧＢＳ３２２とＧＢＳ１０４とを含む組み合わせについて、概ね、生存率の増加が達成された。ＧＢＳ８０と、ＧＢＳ２３３とＧＢＳ１０４との組み合わせについての生存率パーセントが、上記の１度目および２度目のチャレンジの両方について１００％であることに気付いたのは、驚くべきことであった。
【００５３】
【表１２】
2007527866.tif 000013
（実施例３：ＧＢＳ８０と、ＧＢＳ６９０、ＧＢＳ６９１、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ３０５、ＧＢＳ３６１およびＧＢＳ１８４との組み合わせの能動母子免疫アッセイ）
この実施例において、ＧＢＳ抗原のさらなる組み合わせを、再びＧＢＳＩＩＩ型  ＣＯＨ１単離体のチャレンジを用いて上記の能動母子免疫アッセイにおいて使用した。上記の母マウスを、以下の表６に示すＧＢＳ抗原の組み合わせを用いて、上記の能動母子免疫アッセイ計画に従って免疫した。
【００５４】
【表１３】
2007527866.tif 000014
このモデルにおける母マウスをまた、再び交配させて、ｔ＝８４日にて、劇的に高い用量（１００×ＬＤ５０％）で、同じＧＢＳ単離体を生じた仔を用いてチャレンジした。上記の実施例のように、この２度目のより強いチャレンジのパラメーターは、上記の標準的な能動母子免疫アッセイのパラメーターの外側にあった。これは、上記のマウスモデルにおける元の母親の免疫から生じる免疫記憶の限界を調べるようになっていた。表７に示すように、これらの極端な条件下でさえ、生存率のいくつかは、７０％のままであるか、または７０％以上のままであった。驚いたことに、ＧＢＳ８０と、ＧＢＳ１８４とＧＢＳ６９１との組み合わせについての生存率パーセントは、実際に増加した。
【００５５】
【表１４】
2007527866.tif 000015
（実施例４：ＧＢＳ８０と、ＧＢＳ６９０、ＧＢＳ６９１、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ３０５およびＧＢＳ３６１との組み合わせを使用する能動母子免疫アッセイ）
この実施例において、ＧＢＳ抗原のさらなる組み合わせを、今回は、ＧＢＳＶ型のＣＪＢ１１１単離体のチャレンジを用いて、上記の能動母子免疫アッセイにおいて使用した。これらの実験において、免疫処置していない仔の７０〜９０％を殺すのに十分なＧＢＳ  Ｖ型のＣＪＢ１１１単離体についてのチャレンジ用量は、６０×ＬＤ５０％とほぼ等しい（ここで、ＬＤ５０％は、統計的に導かれた半数致死量である）。上記の母マウスを、以下の表８に示すＧＢＳ抗原の組み合わせを用いて、上記の能動母子免疫アッセイ計画に従って免疫した。表８に示すように、この特定のＶ型単離体を用いるこの特定のチャレンジ研究において、上記の組み合わせすべてについての生存率は、少なくとも７０％に達した。
【００５６】
【表１５】
2007527866.tif 000016
このモデルにおける母マウスをまた、２度目に交配させ、生じた仔を、ｔ＝８４日にて、劇的に高い用量（６００×ＬＤ５０％）で、上記の同じＧＢＳ単離体を用いてチャレンジした。上記の実施例のように、この２度目のより強いチャレンジのパラメーターは、上記の標準的な能動母子免疫アッセイのものの外側にあった。これは、上記のマウスモデルにおける元の母親の免疫処置から生じる免疫記憶の限界を調べるようになっていた。表９に示すように、これらの極端な条件下でさえ、生存率のいくつかは、７０％より高いままであった。驚いたことに、上記抗原群のうちの２つ（ＧＢＳ８０、ＧＢＳ６９０およびＧＢＳ３３８）ならびに（ＧＢＳ８０、ＧＢＳ６９１およびＧＢＳ３３８）についての生存パーセントは、実際に増加した。
【００５７】
【表１６】
2007527866.tif 000017
（実施例５：ＧＢＳ８０と、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ２７６およびＧＢＳ３２２との組み合わせを使用する能動母子免疫アッセイ）
この実施例において、ＧＢＳ抗原のさらなる組み合わせを、今回は異なるＧＢＳ菌株の単離体のチャレンジを用いて、上記の能動母子免疫アッセイにおいて使用した。これらの実験において、異なるＧＢＳ菌株についてのチャレンジ用量は、免疫処置していない仔の６０〜９０％を殺すのに十分であり、１０×ＬＤ５０％に等しい（ここで、ＬＤ５０％は、統計的に導かれた半数致死量である）。上記の母マウスを、以下の表１０に示すＧＢＳ菌株における、８０抗原とＧＢＳ１０４抗原、ＧＢＳ２７６抗原およびＧＢＳ３２２抗原とＧＢＳの組み合わせを用いて、上記の能動母子免疫アッセイ計画に従って免疫した。生存％を、２個の異なるアジュバント（ミョウバンおよびフロイント）とともに上記のＧＢＳの組み合わせを用いて測定した。表１０および表１１に示すように、この特定のチャレンジ研究において、上記のＧＢＳ菌株の全てにおける組み合わせについての生存率が、９６％にまで達した。
【００５８】
【表１７】
2007527866.tif 000018
従って、その結果、本発明は、２種以上のＧＢＳ抗原の組み合わせを含む組成物を包含し、ここで、その組み合わせは、ＧＢＳ８０またはそのフラグメントあるいはそれらに対する配列同一性を有するポリペプチド配列を含む。
【００５９】
１つの実施形態において、その組み合わせは、ＧＢＳ８０を含む、２種〜１３種のＧＢＳ抗原からなり得る。例として、その組み合わせは、ＧＢＳ８０と、ＧＢＳ８０、ＧＢＳ９１、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ１８４、ＧＢＳ２７６、ＧＢＳ３０５、ＧＢＳ３２２、ＧＢＳ３３０、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ３６１、ＧＢＳ４０４、ＧＢＳ６９０およびＧＢＳ６９１からなる群から選択される他のＧＢＳ抗原とを含み得る。好ましくは、その組み合わせは、ＧＢＳ８０をＧＢＳ１０４およびＧＢＳ３２２の１種以上と組み合わせて含む。例えば、その組み合わせは、ＧＢＳ８０、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ３２２およびＧＢＳ６７を含み得る。
【００６０】
完全長の抗原の代わりに、その組み合わせは、選択されたＧＢＳ抗原の免疫原性フラグメント、および／または選択された抗原に対する配列同一性を有するポリペプチド配列を含み得る。
【００６１】
好ましくは、ＧＢＳ抗原の組み合わせは、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種または１０種のＧＢＳ抗原からなる。さらにより好ましくは、ＧＢＳ抗原の組み合わせは、３種、４種または５種のＧＢＳ抗原からなる。
【００６２】
ＧＢＳ８０と組み合わせて使用するためのＧＢＳ抗原の例の詳細を以下に示す。
【００６３】
（ＧＢＳ９１）
ＧＢＳ９１とは、ＧＢＳ  Ｃ３結合ポリペプチドをいう。血清型Ｖの単離菌株２６０３Ｖ／Ｒから配列決定されたＧＢＳ９１のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は、配列番号８９３７および配列番号８９３８として参考文献２に示されている。これらの配列を、配列番号１０および配列番号１１
【００６４】
【表１８】
2007527866.tif 000019
として上に示す。
【００６５】
ＧＢＳ９１は、上記の配列番号１１の初めにおける下線を引いた配列によって示されるＮ末端リーダー配列領域またはＮ末端シグナル配列領域を含有する。１つの実施形態において、ＧＢＳ９１のリーダー配列領域またはシグナル配列領域からの１個以上のアミノ酸が、除去される。そのようなＧＢＳ９１フラグメントの例を、配列番号１２
【００６６】
【表１９】
2007527866.tif 000020
として上に示す。
【００６７】
ＧＢＳ９１は、上記の配列番号１１の終わり近くにおける下線を引いた領域内に位置し得るＣ末端膜貫通領域を含有する。１つの実施形態において、その膜貫通領域および細胞質領域からの１個以上のアミノ酸が、除去される。そのようなＧＢＳ９１フラグメントの例を、配列番号１３
【００６８】
【表２０】
2007527866.tif 000021
として上に示す。
【００６９】
ＧＢＳ９１は、細胞壁アンカーを示すアミノ酸モチーフ：配列番号１４  ＬＴＫＴＧ（上記の配列番号１１にイタリック体で示される）を含有する。１つの実施形態において、上記の膜貫通領域および上記の細胞壁アンカーモチーフの両方が、ＧＢＳ９１から除去される。そのようなＧＢＳ９１フラグメントの例を、配列番号１５
【００７０】
【表２１】
2007527866.tif 000022
として上に示す。
【００７１】
１つの実施形態において、上記のリーダー配列領域またはシグナル配列領域からの１個以上のアミノ酸ならびに上記の膜貫通領域および細胞質領域からの１個以上のアミノ酸が、上記のＧＢＳ９１の配列から除去される。そのようなＧＢＳ９１フラグメントの例を、配列番号１６
【００７２】
【表２２】
2007527866.tif 000023
として上に示す。
【００７３】
別の実施形態において、上記のリーダー配列領域またはシグナル配列領域、上記の膜貫通領域および細胞質領域、ならびに上記の細胞壁アンカーモチーフが、上記のＧＢＳ９１の配列から全て除去される。そのようなＧＢＳ９１フラグメントの例を、配列番号１７
【００７４】
【表２３】
2007527866.tif 000024
として上に示す。
【００７５】
ＧＢＳ９１に関するさらなる情報は、ＷＯ０１／２５４４０（Ｃ３結合ポリペプチド）、ＷＯ０１／３２８８２（ＩＤ−６５）、ＷＯ０２／３１１５６（ＢＶＨ）およびＲｅｉｎｓｃｈｅｉｄら、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ（２００２）１４８：３２４５−３２５４（ｂｓｐ遺伝子）において見出され得、それらの各々は、その全体が参考として本明細書中に援用される。
【００７６】
（ＧＢＳ１０４）
ＧＢＳ１０４とは、推定細胞壁表面アンカーファミリータンパク質をいう。それは、ｅｍａＡタンパク質と呼ばれている。血清型Ｖの単離菌株２６０３Ｖ／Ｒから配列決定されたＧＢＳ１０４のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が、配列番号８７７７および配列番号８７７８として参考文献２に示されている。これらの配列を、配列番号１８および１９
【００７７】
【表２４】
2007527866.tif 000025
として上に示す。
【００７８】
ＧＢＳ１０４は、上記の配列番号１９の初めにおける下線を引いた配列によって示されるＮ末端リーダー配列領域またはＮ末端シグナル配列領域を含有する。１つの実施形態において、ＧＢＳ１０４のリーダー配列領域またはシグナル配列領域からの１個以上のアミノ酸配列が、除去される。そのようなＧＢＳ１０４フラグメントの例を、配列番号２０
【００７９】
【表２５】
2007527866.tif 000026
として上に示す。
【００８０】
ＧＢＳ１０４は、上記の配列番号１９の終わり近くにおける下線を引いた領域によって示されるＣ末端膜貫通領域および／または細胞質領域を含有する。１つの実施形態において、その膜貫通領域または細胞質領域からの１個以上のアミノ酸が、除去される。そのようなＧＢＳ１０４フラグメントの例を、配列番号２１
【００８１】
【表２６】
2007527866.tif 000027
として上に示す。
【００８２】
１つの実施形態において、上記のリーダー配列領域またはシグナル配列領域からの１個以上のアミノ酸ならびに上記の膜貫通領域または細胞質領域からの１個以上のアミノ酸が、除去される。そのようなＧＢＳ１０４フラグメントの例を、配列番号２２
【００８３】
【表２７】
2007527866.tif 000028
として上に示す。
【００８４】
他の実施形態において、ＧＢＳ１０４のさらなるフラグメントは、ＧＢＳ１０４のアミノ酸２８〜８５８の８３０アミノ酸フラグメント、ＧＢＳ１０４のアミノ酸２８〜３８７の３５９アミノ酸フラグメント、ＧＢＳ１０４のアミノ酸２８〜６０９の５８１アミノ酸フラグメント、またはＧＢＳ１０４のアミノ酸２８〜７６８の７４０アミノ酸フラグメントを含むことを提供される。
【００８５】
（ＧＢＳ１８４）
ＧＢＳ１８４とは、推定リポタンパク質をいう。血清型Ｖの単離菌株２６０３Ｖ／Ｒから配列決定されたＧＢＳ１８４のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が、配列番号１９７７および配列番号１９７８として参考文献２に示されている。これらの配列をまた、配列番号２３および２４
【００８６】
【表２８】
2007527866.tif 000029
として上に示す。
【００８７】
ＧＢＳ１８４は、上記の配列番号２４の初めにおける下線を引いた配列によって示されるＮ末端リーダー配列領域またはＮ末端シグナル配列領域を含有する。１つの実施形態において、上記のリーダー配列またはシグナル配列からの１個以上のアミノ酸が、ＧＢＳ１８４から除去される。そのようなＧＢＳ１８４フラグメントの例を、配列番号２５
【００８８】
【表２９】
2007527866.tif 000030
として上に示す。
【００８９】
（ＧＢＳ２７６）
ＧＢＳ２７６とは、Ｃ５ａペプチダーゼをいう。血清型Ｖの単離菌株２６０３Ｖ／Ｒから配列決定されたＧＢＳ２７６のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が、配列番号８９４１および配列番号８９４２として参考文献２に示されている。これらの配列を、配列番号２６および２７
【００９０】
【表３０】
2007527866.tif 000031
【００９１】
【表３１】
2007527866.tif 000032
として上に示す。
【００９２】
ＧＢＳ２７６は、上記の配列番号２７の初めにおける下線を引いた配列によって示されるＮ末端リーダー配列領域またはＮ末端シグナル配列領域を含有する。１つの実施形態において、ＧＢＳ２７６のリーダー配列領域またはシグナル配列領域からの１個以上のアミノ酸が、除去される。そのようなＧＢＳ２７６フラグメントの例を、配列番号２８
【００９３】
【表３２】
2007527866.tif 000033
として上に示す。
【００９４】
ＧＢＳ２７６は、上記の配列番号２７の終わり近くにおける下線を引いた配列によって示されるＣ末端膜貫通領域および／またはＣ末端細胞質領域を含有する。１つの実施形態において、ＧＢＳ２７６の膜貫通領域または細胞質領域からの１個以上のアミノ酸が、除去される。そのようなＧＢＳ２７６フラグメントの例を、配列番号２９
【００９５】
【表３３】
2007527866.tif 000034
として上に示す。
【００９６】
１つの実施形態において、ＧＢＳ２７６のリーダー配列領域またはシグナル配列領域からの１個以上のアミノ酸、およびその膜貫通領域または細胞質領域からの１個以上のアミノ酸が、除去される。そのようなＧＢＳ２７６フラグメントの例を、配列番号３０
【００９７】
【表３４】
2007527866.tif 000035
として上に示す。
【００９８】
ＧＢＳ２７６のさらなる詳細は、以下の参考文献：Ｑｉ  Ｃｈｅｎら、「Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｃ５ａ  Ｐｅｐｔｉｄａｓｅ  ｏｒ  Ｐｅｐｔｉｄａｓｅ−Ｔｙｐｅ  ＩＩＩ  Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  Ｅｎｈａｎｃｅｓ  Ｃｌｅａｒａｎｃｅ  ｏｆ  Ｇｒｏｕｐ  Ｂ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ  ｆｒｏｍ  Ｌｕｎｇｓ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｅｄ  Ｍｉｃｅ」，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００２）７０（１１）：６４０９〜６４１５；Ｂｅｃｋｍａｎｎら、「Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｏｖｅｌ  Ａｄｈｅｓｉｏｎｓ  ｆｒｏｍ  Ｇｒｏｕｐ  Ｂ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ  ｂｙ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ  Ｒｅｖｅａｌｓ  ｔｈａｔ  Ｃ５ａ  Ｐｅｐｔｉｄａｓｅ  Ｍｅｄｉａｔｅｓ  Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ  Ｂｉｎｄｉｎｇ」  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００２）７０（６）：２８６９〜２８７６；Ｃｈｅｎｇら、「Ｔｈｅ  Ｇｒｏｕｐ  Ｂ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ  Ｃ５ａ  Ｐｅｐｔｉｄａｓｅ  Ｉｓ  Ｂｏｔｈ  ａ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｐｒｏｔｅａｓｅ  ａｎｄ  ａｎ  Ｉｎｖａｓｉｎ」  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００２）７０（５）２４０８〜２４１３；およびＣｈｅｎｇら、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ａｇａｉｎｓｔ  Ｓｕｒｆａｃｅ−Ｂｏｕｎｄ  Ｃ５ａ  Ｐｅｐｔｉｄａｓｅ  Ｉｓ  Ｏｐｓｏｎｉｃ  ａｎｄ  Ｉｎｉｔｉａｔｅｓ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｋｉｌｌｉｎｇ  ｏｆ  Ｇｒｏｕｐ  Ｂ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ」  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００１）６９（４）：２３０２〜２３０８に見出され得る。
【００９９】
（ＧＢＳ３０５）
ＧＢＳ３０５とは、ＵＤＰ−Ｎ−アセチルムラモイルアラニン−Ｄ−グルタミン酸リガーゼをいい、これはまた、Ｍｕｒ  Ｄとも呼ばれる。血清型Ｖの単離菌株２６０３Ｖ／Ｒから配列決定されたＧＢＳ３０５のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は、配列番号２０７および配列番号２０８として参考文献２に示されている。これらの配列を、配列番号３１および配列番号３２
【０１００】
【表３５】
2007527866.tif 000036
として上に示す。
【０１０１】
ＧＢＳ３０５は、上記の配列番号３２の初めにおける下線を引いた配列によって示されるＮ末端リーダー配列領域またはＮ末端シグナル配列領域を含有する。１つの実施形態において、そのリーダー配列領域またはシグナル配列領域からの１個以上のアミノ酸が、ＧＢＳ３０５から除去される。そのようなＧＢＳ３０５フラグメントの例を、配列番号３３
【０１０２】
【表３６】
2007527866.tif 000037
として上に示す。
【０１０３】
ＧＢＳ３０５は、上記の配列番号３２の終わり近くにおける下線を引いた配列によって示されるＣ末端膜貫通領域または細胞質領域を含有する。１つの実施形態において、その膜貫通領域または細胞質領域からの１個以上のアミノ酸が、ＧＢＳ３０５から除去される。そのようなＧＢＳ３０５フラグメントの例を、配列番号３４
【０１０４】
【表３７】
2007527866.tif 000038
として上に示す。
【０１０５】
１つの実施形態において、上記のリーダー配列領域またはシグナル配列領域からの１個以上のアミノ酸、および上記の膜貫通領域または細胞質領域からの１個以上のアミノ酸が、ＧＢＳ３０５から除去される。そのようなＧＢＳ３０５フラグメントの例を、配列番号３５
【０１０６】
【表３８】
2007527866.tif 000039
として上に示す。
【０１０７】
（ＧＢＳ３２２）
ＧＢＳ３２２とは、表面免疫原性タンパク質をいい、また、「ｓｉｐ」とも呼ばれる。血清型Ｖの単離菌株２６０３Ｖ／Ｒから配列決定されたＧＢＳ３２２のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が、配列番号８５３９および配列番号８５４０として参考文献２に示されている。これらの配列を、配列番号３６および配列番号３７
【０１０８】
【表３９】
2007527866.tif 000040
として上に示す。
【０１０９】
ＧＢＳ３２２は、配列番号３７の初め近くにおける下線を引いた配列によって示されるＮ末端リーダー配列領域またはシグナル配列領域を含有する。１つの実施形態において、ＧＢＳ３２２のリーダー配列領域またはシグナル配列領域からの１個以上のアミノ酸が、除去される。そのようなＧＢＳ３２２フラグメントの例を、配列番号３８
【０１１０】
【表４０】
2007527866.tif 000041
として上に示す。
【０１１１】
（ＧＢＳ３３０）
ＧＢＳ３３０とは、ピルビン酸キナーゼをいい、また、「ｐｙｋ」とも呼ばれる。血清型Ｖの単離菌株２６０３Ｖ／Ｒから配列決定されたＧＢＳ３３０のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が、配列番号８７９１および配列番号８７９２として参考文献２に示されている。これらの配列を、配列番号３９および配列番号４０
【０１１２】
【表４１】
2007527866.tif 000042
【０１１３】
【表４２】
2007527866.tif 000043
として上に示す。
【０１１４】
（ＧＢＳ３３８）
ＧＢＳ３３８とは、Ｓａｔ  Ｄタンパク質をいう。血清型Ｖの単離菌株２６０３Ｖ／Ｒから配列決定されたＧＢＳ３３８のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が、配列番号８６３７および配列番号８６３８として参考文献２に示されている。これらの配列を、配列番号４１および４２
【０１１５】
【表４３】
2007527866.tif 000044
として上に示す。
【０１１６】
ＧＳＢ３３８は、上記の配列番号４２の初めにおける下線を引いた配列によって示されるＮ末端リーダー配列領域またはＮ末端シグナル配列領域を含有し得る。１つの実施形態において、そのリーダー配列領域またはシグナル配列領域からの１個以上のアミノ酸が、ＧＢＳ３３８から除去される。そのようなＧＢＳ３３８フラグメントの例を、配列番号４３
【０１１７】
【表４４】
2007527866.tif 000045
として上に示す。
【０１１８】
（ＧＢＳ３６１）
ＧＢＳ３６１とは、ｃｙｌＩタンパク質をいう。血清型Ｖの単離菌株２６０３Ｖ／Ｒ由来の配列決定されたＧＢＳ３６１のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が、配列番号８７６９および配列番号８７７０として参考文献２に示されている。これらの配列を、配列番号４４および４５
【０１１９】
【表４５】
2007527866.tif 000046
として上に示す。
【０１２０】
ＧＢＳ３６１は、上記の配列番号４５の初めにおける下線を引いた配列によって示されるＮ末端リーダー配列領域またはＮ末端シグナル配列領域を含有し得る。１つの実施形態において、そのリーダー配列領域またはシグナル配列領域からの１個以上のアミノ酸が、ＧＢＳ３６１から除去される。そのようなＧＢＳ３６１フラグメントの例を、配列番号４６
【０１２１】
【表４６】
2007527866.tif 000047
として上に示す。
【０１２２】
（ＧＢＳ４０４）
血清型Ｖの単離菌株２６０３Ｖ／Ｒから配列決定されたＧＢＳ４０４のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が、配列番号８７９９および配列番号８８００として参考文献２に示されている。これらの配列を、配列番号４７および４８
【０１２３】
【表４７】
2007527866.tif 000048
として上に示す。
【０１２４】
（ＧＢＳ６９０）
血清型Ｖの単離菌株２６０３Ｖ／Ｒから配列決定されたＧＢＳ６９０のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が、配列番号９９６５および配列番号９９６６として参考文献２に示されている。これらの配列を、配列番号４９および５０
【０１２５】
【表４８】
2007527866.tif 000049
として上に示す。
【０１２６】
ＧＢＳ６９０は、上記の配列番号５０の初めにおける下線を引いた配列によって示されるＮ末端リーダー配列領域またはＮ末端シグナル配列領域を含有する。１つの実施形態において、ＧＢＳ６９０のリーダー配列領域またはシグナル配列領域からの１個以上のアミノ酸が、除去される。そのようなＧＢＳ６９０フラグメントの例を、配列番号５１
【０１２７】
【表４９】
2007527866.tif 000050
として上に示す。
【０１２８】
（ＧＢＳ６９１）
ＧＢＳ６９１とは、鉄化合物ＡＢＣトランスポーター、または基質結合タンパク質をいう。血清型Ｖの単離菌株２６０３Ｖ／Ｒから配列決定されたＧＢＳ６９１のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が、配列番号３６９１および配列番号３６９２として参考文献２に示されている。これらの配列を、配列番号５２および５３
【０１２９】
【表５０】
2007527866.tif 000051
として上に示す。
【０１３０】
ＧＢＳ６９１は、上記の配列番号５３の初めにおける下線を引いた配列によって示されるＮ末端リーダー配列領域またはＮ末端シグナル配列領域を含有する。１つの実施形態において、１個以上のアミノ酸が、ＧＢＳ６９１のリーダー配列領域またはシグナル配列領域から除去される。そのようなＧＢＳ６９１フラグメントの例を、配列番号５４
【０１３１】
【表５１】
2007527866.tif 000052
として上に示す。
【０１３２】
ＧＢＳ６９１は、上記の配列番号５３の終わりにおける下線を引いた配列によって示されるＣ末端膜貫通領域または細胞質領域を含有する。１つの実施形態において、１個以上のアミノ酸が、ＧＢＳ６９１の膜貫通領域または細胞質領域から除去される。そのようなＧＢＳ６９１フラグメントの例を、配列番号５５
【０１３３】
【表５２】
2007527866.tif 000053
として上に示す。
【０１３４】
１つの実施形態において、上記のリーダー配列領域またはシグナル配列領域からの１個以上のアミノ酸、および上記の膜貫通領域または細胞質領域からの１個以上のアミノ酸が、ＧＢＳ６９１から除去される。そのようなＧＢＳ６９１フラグメントの１つの例を、配列番号５６
【０１３５】
【表５３】
2007527866.tif 000054
として上に示す。
【０１３６】
ＧＢＳ８０と組み合わせて使用され得るＧＢＳ抗原のさらなる例を、以下に示す。
【０１３７】
（ＧＢＳ４）
ＧＢＳ４とは、別の推定細胞壁表面アンカーファミリータンパク質をいう。血清型Ｖの単離菌株２６０３Ｖ／Ｒから配列決定されたＧＢＳ４のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が、配列番号１および配列番号２として参考文献２に示されている。これらの配列をまた、配列番号５７および５８
【０１３８】
【表５４】
2007527866.tif 000055
として上に示す。
【０１３９】
ＧＢＳ４は、上記の配列番号５８の初めにおける下線を引いたＮ末端リーダー配列またはＮ末端シグナル配列を含有する。１つの実施形態において、ＧＢＳ４のＮ末端リーダードメインまたはシグナルペプチドドメインからの１個以上のアミノ酸が、除去される。そのようなＧＢＳ４フラグメントの例を、配列番号５９
【０１４０】
【表５５】
2007527866.tif 000056
として上に示す。
【０１４１】
ＧＢＳ４のさらなるＮ末端部分が、組換え発現を容易にするために除去され得る。そのようなＧＢＳ４フラグメントの例を、配列番号６０
【０１４２】
【表５６】
2007527866.tif 000057
として上に示す。
【０１４３】
ＧＢＳ４は、上記の配列番号５８の終わりにおける下線を引いたＣ末端膜貫通領域を含有する。１つの実施形態において、そのＣ末端膜貫通領域からの１個以上のアミノ酸が、除去される。そのようなＧＢＳ４フラグメントの例を、配列番号６１
【０１４４】
【表５７】
2007527866.tif 000058
として上に示す。
【０１４５】
１つの実施形態において、上記のＮ末端リーダードメインまたはＮ末端シグナルドメインおよび上記のＣ末端膜貫通領域ドメインの両方が、上記のＧＢＳ４の配列から除去される。そのようなＧＢＳ４フラグメントの例を、配列番号６２
【０１４６】
【表５８】
2007527866.tif 000059
として上に示す。
【０１４７】
さらに別の実施形態において、上記のＮ末端リーダードメインまたはＮ末端シグナルドメイン、さらに上記のＮ末端領域およびＣ末端膜貫通ドメインが、ＧＢＳ４の配列から除去される。そのようなＧＢＳ４フラグメントの例を、配列番号６３
【０１４８】
【表５９】
2007527866.tif 000060
として上に示す。
【０１４９】
（ＧＢＳ２２）
ＧＢＳ２２とは、推定接着リポタンパク質をいう。血清型Ｖの単離菌株２６０３Ｖ／Ｒから配列決定されたＧＢＳ２２のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が、配列番号８５８３および配列番号８５８４として参考文献２に示されている。これらの配列を、配列番号６４および６５
【０１５０】
【表６０】
2007527866.tif 000061
として上に示す。
【０１５１】
（ＧＢＳ８５）
ＧＢＳ８５とは、推定細胞分裂タンパク質（ＤｉｖＩＢ）をいう。血清型Ｖの単離菌株２６０３Ｖ／Ｒから配列決定されたＧＢＳ８５のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が、配列番号２１５および配列番号２１６として参考文献２に示されている。これらの配列を、配列番号６６および６７
【０１５２】
【表６１】
2007527866.tif 000062
として上に示す。
【０１５３】
（ＧＢＳ１４７）
ＧＢＳ１４７とは、推定プロテアーゼをいう。血清型Ｖの単離菌株２６０３Ｖ／Ｒから配列決定されたＧＢＳ１４７のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が、配列番号８５２５および配列番号８５２６として参考文献２に示されている。これらの配列を、配列番号６８および６９
【０１５４】
【表６２】
2007527866.tif 000063
【０１５５】
【表６３】
2007527866.tif 000064
として上に示す。
【０１５６】
ＧＢＳ１４７は、上記の配列番号６９の初めにおける下線を引いた配列によって示されるＮ末端リーダー配列領域またはＮ末端シグナル配列領域を含有する。１つの実施形態において、ＧＢＳ１４７のリーダー配列領域またはシグナル配列領域からの１個以上のアミノ酸が、除去される。そのようなＧＢＳ１４７フラグメントの例を、配列番号７０
【０１５７】
【表６４】
2007527866.tif 000065
として上に示す。
【０１５８】
ＧＢＳ１４７はまた、上記の配列番号６９の終わり近くにおける下線を引いた配列内に位置し得るＣ末端膜貫通領域および／または細胞質領域を含有する。１つの実施形態において、その膜貫通領域および／または細胞質領域からの１個以上のアミノ酸が、除去される。そのようなＧＢＳ１４７フラグメントの例を、配列番号７１
【０１５９】
【表６５】
2007527866.tif 000066
として上に示す。
【０１６０】
１つの実施形態において、上記のリーダー配列領域またはシグナル配列領域からの１個以上のアミノ酸、および上記の膜貫通領域または細胞質領域からの１個以上のアミノ酸が、上記のＧＢＳ１４７の配列から除去される。そのようなＧＢＳ１４７フラグメントの例を、配列番号７２
【０１６１】
【表６６】
2007527866.tif 000067
として上に示す。
【０１６２】
（ＧＢＳ１７３）
ＧＢＳ１７３とは、アミダーゼファミリータンパク質をいう。血清型Ｖの単離菌株２６０３Ｖ／Ｒから配列決定されたＧＢＳ１７３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は、配列番号８７８７および配列番号８７８８として参考文献２に示されている。これらの配列を、配列番号７３および７４
【０１６３】
【表６７】
2007527866.tif 000068
【０１６４】
【表６８】
2007527866.tif 000069
として上に示す。
【０１６５】
ＧＢＳ１７３は、上記の配列番号７４の初めにおける下線を引いた配列によって示されるＮ末端リーダー配列領域またはＮ末端シグナル配列領域を含有する。１つの実施形態において、ＧＢＳ１７３のリーダー配列またはシグナル配列からの１個以上のアミノ酸が、除去される。そのようなＧＢＳ１７３フラグメントの例を、配列番号７５
【０１６６】
【表６９】
2007527866.tif 000070
として上に示す。
【０１６７】
ＧＢＳ１７３はまた、上記の配列番号７４の終わり近くにおける下線を引いた配列内に位置し得るＣ末端膜貫通領域および／または細胞質領域を含有し得る。１つの実施形態において、ＧＢＳ１７３の膜貫通領域または細胞質領域からの１個以上のアミノ酸が、除去される。そのようなＧＢＳ１７３フラグメントの例を、配列番号７６
【０１６８】
【表７０】
2007527866.tif 000071
として上に示す。
【０１６９】
１つの実施形態において、上記のリーダー配列領域またはシグナル配列領域からの１個以上のアミノ酸、および膜貫通領域または細胞質領域からの１個以上のアミノ酸が、除去される。そのようなＧＢＳ１７３フラグメントの例を、配列番号７７
【０１７０】
【表７１】
2007527866.tif 000072
として上に示す。
【０１７１】
（ＧＢＳ３１３）
血清型Ｖの単離菌株２６０３Ｖ／Ｒから配列決定されたＧＢＳ３１３のヌクレオチドおよびアミノ酸配列が、配列番号４０８９および配列番号４０９０として参考文献２に示されている。これらの配列を、配列番号７８および７９
【０１７２】
【表７２】
2007527866.tif 000073
として上に示す。
【０１７３】
（ＧＢＳ３２８）
ＧＢＳ３２８は、５’−ヌクレオチダーゼファミリーに属する。血清型Ｖの単離菌株２６０３Ｖ／Ｒから配列決定されたＧＢＳ３２８のヌクレオチドおよびアミノ酸配列が、配列番号６０１５および配列番号６０１６として参考文献２に示されている。これらの配列を、配列番号８０および８１
【０１７４】
【表７３】
2007527866.tif 000074
として上に示す。
【０１７５】
ＧＢＳ３２８は、上記の配列番号８１の初めにおける下線を引いた配列によって示されるＮ末端リーダー配列領域またはＮ末端シグナル配列領域を含有し得る。１つの実施形態において、ＧＢＳ３２８のリーダー配列領域またはシグナル配列領域からの１個以上のアミノ酸が、除去される。そのようなＧＢＳ３２８フラグメントの例を、配列番号８２
【０１７６】
【表７４】
2007527866.tif 000075
として上に示す。
【０１７７】
ＧＢＳ３２８はまた、膜貫通領域および／または細胞質領域を含有し得る。１つの実施形態において、ＧＢＳ３２８の膜貫通領域および／または細胞質領域からの１個以上のアミノ酸が、除去される。そのようなＧＢＳ３２８フラグメントの例を、配列番号８３
【０１７８】
【表７５】
2007527866.tif 000076
として上に示す。
【０１７９】
１つの実施形態において、上記のリーダー配列領域またはシグナル配列領域からの１個以上のアミノ酸、ならびにＧＢＳ３２８の膜貫通領域または細胞質領域からの１個以上のアミノ酸が、除去される。そのようなＧＢＳ３２８フラグメントの例を、配列番号８４
【０１８０】
【表７６】
2007527866.tif 000077
として上に示す。
【０１８１】
（ＧＢＳ６５６）
ＧＢＳ６５６とは、推定ＤＮＡエントリー（ｅｎｔｒｙ）ヌクレアーゼをいう。血清型Ｖの単離菌株２６０３Ｖ／Ｒから配列決定されたＧＢＳ６５６のヌクレオチドおよびアミノ酸配列が、配列番号９３２３および配列番号９３２４として参考文献２に示されている。これらの配列を、配列番号８５および８５
【０１８２】
【表７７】
2007527866.tif 000078
として上に示す。
【０１８３】
（ＧＢＳ６７）
以下に、好ましいＧＢＳ６７フラグメントの例を提示する。血清型Ｖの単離菌株２６０３由来のＧＢＳ６７の配列のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を、配列番号８７および８８
【０１８４】
【表７８】
2007527866.tif 000079
【０１８５】
【表７９】
2007527866.tif 000080
として上に示す。
【０１８６】
ＧＢＳ６７は、上記の配列番号８８のＣ末端近くにおける下線を引いた領域によって示されるＣ末端膜貫通領域を含有する。１つの実施形態において、膜貫通領域からの１個以上のアミノ酸が、除去されるか、および／または、そのアミノ酸は、膜貫通領域の前で切断される。そのようなＧＢＳ６７フラグメントの例を、配列番号８９として以下に示す。
【０１８７】
【表８０】
2007527866.tif 000081
ＧＢＳ６７は、細胞壁アンカーを示すアミノ酸モチーフ（ＬＰＸＴＧモチーフ）：配列番号９０  ＩＰＭＴＧを含む（上記の配列番号８８にイタリック体で示した）。いくつかの組換え宿主細胞系において、宿主細胞由来の組換えＧＢＳ６７タンパク質の分泌を促進するためにこのモチーフを除去することが好まれ得る。従って、本発明の使用のためのＧＢＳ６７の１つの好ましいフラグメントにおいて、上記の膜貫通および細胞壁アンカーモチーフが、ＧＢＳ６７から除去される。そのようなＧＢＳ６７フラグメントの例を、配列番号９１
【０１８８】
【表８１】
2007527866.tif 000082
として上に示す。
【０１８９】
本発明の組成物はまた、ＧＢＳ８０と組み合わせる１種以上の公知のＧＢＳ抗原を含む、組み合わせを含み得る。
【０１９０】
本発明の組成物において存在するＧＢＳ抗原の数には上限がある。好ましくは、本発明の組成物中のＧＢＳ抗原の数は、２０種未満、１９種未満、１８種未満、１７種未満、１６種未満、１５種未満、１４種未満、１３種未満、１２種未満、１１種未満、１０種未満、９種未満、８種未満、７種未満、６種未満、５種未満、４種未満または３種未満である。さらにより好ましくは、本発明の組成物におけるＧＢＳ抗原の数は、６種未満、５種未満または４種未満である。さらにより好ましくは、本発明の組成物におけるＧＢＳ抗原の数は、３種である。
【０１９１】
本発明に使用されるＧＢＳ抗原は、好ましくは、生物体全体から単離（すなわち、分離（ｓｅｐａｒａｔｅ）および分離（ｄｉｓｃｒｅｔｅ））され、その生物体全体は、天然に見出される分子を有するか、あるいは上記のポリヌクレオチドまたはポリペプチドが天然に見出されない場合、そのポリヌクレオチドまたはポリペプチドが、上記の意図される目的のために使用され得るように他の生物学的高分子を実質的には含まない。
【０１９２】
（融合タンパク質）
本発明に使用されるＧＢＳ抗原は、個々の別々のポリペプチドとして組成物中に存在し得るが、少なくとも２種（すなわち、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１１種、１２種、１３種、１４種、１５種、１６種、１７種または１８種）の抗原が、単一のポリペプチド鎖（「ハイブリッド」または「融合」ポリペプチド）として発現されることが好ましい。そのような融合ポリペプチドは、２つの主要な利点：第１は、単独で不安定または不完全に発現され得るポリペプチドが、その問題を克服する適切な融合相手を加えることによって補助され得る点；第２は、１つのみの発現および必要な精製が、両方の抗原性に有用である２種のポリペプチドを生成するために使用されるので、商業的な製造が、単純化される点を提供する。
【０１９３】
融合ポリペプチドは、ＧＢＳ８０、ＧＢＳ９１、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ１８４、ＧＢＳ２７６、ＧＢＳ３０５、ＧＢＳ３２２、ＧＢＳ３３０、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ３６１、ＧＢＳ４０４、ＧＢＳ６９０およびＧＢＳ６９１からなる群由来の２種以上のポリペプチド配列を含み得る。好ましくは、そのポリペプチド配列は、ＧＢＳ８０、ＧＢＳ１０４およびＧＢＳ３２２からなる群より選択される。最も好ましくは、その融合ペプチドは、ＧＢＳ８０由来のポリペプチド配列を含む。従って、本発明は、第１のアミノ酸配列および第２のアミノ酸配列を含む融合ペプチドを含み、ここで、その第１のアミノ酸配列および第２のアミノ酸配列は、上記の抗原の群のＧＢＳ抗原またはそのフラグメントから選択される。好ましくは、融合ポリペプチドにおける第１のアミノ酸配列および第２のアミノ酸配列は、異なるエピトープを含む。
【０１９４】
（実施例７：ＧＢＳ１０４およびＧＢＳ３２２と、ＧＢＳ８０由来の融合タンパク質についてのフラグメントの例実施）
融合タンパク質についてのＧＢＳフラグメントの実施例を、ＧＢＳ３２２、ＧＢＳ１０４およびＧＢＳ８０から提供する。融合タンパク質におけるＧＢＳ３２２のフラグメントの１つの例は、上記のシグナルペプチドが除去された４０７個のアミノ酸フラグメントである。ＧＢＳ１０４のフラグメントもまた、融合タンパク質に組み込まれ得る。ＧＢＳ１０４フラグメントの例としては、８３０個のアミノ酸フラグメント、Ｎ末端近くから由来の３５９個のアミノ酸フラグメント、Ｎ末端近く由来の５８１個のアミノ酸フラグメント、およびＮ末端近く由来の７４０個のアミノ酸フラグメントが挙げられる。ＧＢＳ８０フラグメントの例としては、４４６個のアミノ酸フラグメントおよび２３５個のアミノ酸フラグメントが挙げられる。以下の表１３に、全長のＧＢＳタンパク質に相当する範囲内の融合タンパク質およびそれらの位置についてのフラグメントの例をまとめる。
【０１９５】
【表８２】
2007527866.tif 000083
２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種または１０種のＧＢＳ抗原由来のアミノ酸配列からなるハイブリッド（または融合物）が、好ましい。特に、２種、３種、４種または５種のＧＢＳ抗原に由来するアミノ酸配列からなるハイブリッドが、好ましい。
【０１９６】
異なるハイブリッドポリペプチドは、単一の処方物において一緒に混合され得る。そのような組み合わせ内で、ＧＢＳ抗原は、１種より多いハイブリッドポリペプチドにおいて、および／またはハイブリッドでないポリペプチドとして存在し得る。しかし、抗原は、ハイブリッドまたはハイブリッドでない、のいずれかとして存在することが好ましく、両方として存在することは好ましくない。
【０１９７】
ハイブリッドポリペプチドは、式ＮＨ２−Ａ−｛−Ｘ−Ｌ−｝ｎ−Ｂ−ＣＯＯＨによって表され得、ここで：Ｘは、上記に示される抗原の群に由来するＧＢＳ抗原またはそのフラグメントのアミノ酸配列であり；Ｌは、任意のリンカーアミノ酸配列であり；Ａは、任意のＮ末端アミノ酸配列であり；Ｂは、任意のＣ末端アミノ酸配列であり；そしてｎは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５である。
【０１９８】
−Ｘ−の部分が、その野生型の形態においてリーダーペプチド配列を有する場合、それは、ハイブリッドタンパク質に含まれ得るか、または除去され得る。いくつかの実施形態において、上記リーダーペプチドは、上記ハイブリッドタンパク質のＮ末端に位置する−Ｘ−部分のものを除いて除去される（すなわち、Ｘ１のリーダーペプチドは、保持されるが、Ｘ２．．．Ｘｎのリーダーペプチドは除去される）。これは、全てのリーダーペプチドを削除することおよび部分−Ａ−としてＸ１のリーダーペプチドを使用することに等しい。
【０１９９】
｛−Ｘ−Ｌ−｝の各ｎの場合について、リンカーアミノ酸配列−Ｌ−は、存在し得るかまたは存在し得ない。例えば、ｎ＝２の場合、上記のハイブリッドは、ＮＨ２−Ｘ１−Ｌ１−Ｘ２−Ｌ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｘ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｌ１−Ｘ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｘ２−Ｌ２−ＣＯＯＨ、などであり得る。リンカーアミノ酸配列−Ｌ−は、代表的に短い（例えば、２０個以下のアミノ酸、すなわち、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、１個）。実施例は、クローニングを容易にする短いペプチド配列、ポリ−グリシンリンカー（すなわち、Ｇｌｙｎを含み、ここで、ｎ＝２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上）、およびヒスチヂンタグ（すなわち、Ｈｉｓｎ、ここで、ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上）を含む。他の適切なリンカーアミノ酸配列は、当業者に明らかである。有用なリンカーは、ＧＳＧＧＧＧであり、ＢａｍＨＩ制限酵素認識部位から形成されるＧｌｙ−Ｓｅｒジペプチドを有し、それによって、クローニングおよび操作を助け、そしてその（Ｇｌｙ）４テトラペプチドは、代表的なポリ−グリシンリンカーである。
【０２００】
−Ａ−は、任意のＮ末端アミノ酸配列である。これは、代表的に短い（例えば、４０個またはそれ以下のアミノ酸、すなわち、３９個、３８個、３７個、３６個、３５個、３４個、３３個、３２個、３１個、３０個、２９個、２８個、２７個、２６個、２５個、２４個、２３個、２２個、２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、１個）。例としては、タンパク質を輸送するように方向づけるリーダー配列、またはクローニングもしくは精製を容易にする短いペプチド配列（例えば、ヒスチジンタグ、すなわち、Ｈｉｓｎ、ここで、ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上）が挙げられる。他の適切なＮ末端アミノ酸配列は、当業者に明白である。Ｘ１が、それ自体のＮ末端メチオニンを欠く場合、−Ａ−は、好ましくは、Ｎ末端メチオニンを提供するオリゴペプチド（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個または８個のアミノ酸を有する）である。
【０２０１】
−Ｂ−は、任意のＣ末端アミノ酸配列である。これは、代表的に短い（例えば、４０個またはそれ以下のアミノ酸、すなわち、３９個、３８個、３７個、３６個、３５個、３４個、３３個、３２個、３１個、３０個、２９個、２８個、２７個、２６個、２５個、２４個、２３個、２２個、２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、１個）。例としては、タンパク質を輸送するように方向づける配列、クローニングまたは精製を容易にする短いペプチド配列（例えば、ヒスチジンタグ、すなわち、Ｈｉｓｎを含む、ここで、ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上である）、またはタンパク質の安定性を増強させる配列が挙げられる。他の適切なＣ末端アミノ酸配列は、当業者に明白である。最も好ましくは、ｎは、２または３である。
【０２０２】
（実施例８：ＧＢＳ８０、ＧＢＳ６７、およびＧＢＳ３２２のフラグメントの融合タンパク質を使用する能動母子免疫アッセイ）
この実施例において、ＧＢＳ抗原の融合タンパク質を、異なるＧＢＳ株の単離体チャレンジを用いて能動母子免疫アッセイにおいて使用した。これらの実験において、その異なるＧＢＳ株についての免疫チャレンジ用量は、約７０〜９０％の免疫処置していない仔を殺すのに十分であり、１０×ＬＤ５０％と等しい（ここで、ＬＤ５０％は、統計的に導かれた半数致死量である）。母マウスを、以下の表１４に示すＧＢＳ株におけるＧＢＳ３２２抗原とＧＢＳ８０抗原との融合タンパク質を用いる上記の能動母子免疫アッセイ計画に従って、免疫処置した。生存％を、ＧＢＳ融合タンパク質を用いて測定した。表１４に示すように、この特定のチャレンジ研究において、上記のＧＢＳ株の全てにおける融合タンパク質について生存率は、７９％までに達した。
【０２０３】
【表８３】
2007527866.tif 000084
（核酸）
本発明はまた、本発明のＧＢＳ抗原および／またはハイブリッド融合ポリペプチドをコードする核酸を提供する。さらに、本発明は、好ましくは、「高ストリンジェンシー」の条件下（例えば、０．１×ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳ溶液中で６５℃）で、これらの核酸にハイブリダイズし得る核酸を提供する。
【０２０４】
本発明のポリペプチドは、種々の手段によって（例えば、組換え発現、細胞培養液からの精製、化学合成など）種々の形態（例えば、ネイティブ形態、融合物、非グリコシル化形態、脂質化形態など）に調製され得る。それらは、好ましくは、実質的に純粋な形態（すなわち、他のＧＡＳタンパク質または宿主細胞タンパク質を実質的には含まない）で調製される。
【０２０５】
本発明に従う核酸は、多くの手段（例えば、化学合成によって、ゲノムライブラリーからまたはｃＤＮＡライブラリーから、その生物自体から、など）で調製され得、種々の形態（例えば、一本鎖、二本鎖、ベクター、プローブ、など）をとり得る。それらは、好ましくは、実質的に純粋な形態（すなわち、他のＧＢＳ核酸または宿主細胞核酸を実質的には含まない）で調製される。
【０２０６】
用語「核酸」は、ＤＮＡおよびＲＮＡを含み、そしてまた、これらのアナログ（例えば、改変骨格（例えば、ホスホロチオエート、など）を含むＤＮＡおよびＲＮＡ）、およびまたペプチド核酸（ＰＮＡ）なども含む。本発明は、上記の配列に対して相補的な配列（例えば、アンチセンスまたはプローブの目的物）を含む核酸を含む。
【０２０７】
本発明はまた、本発明のポリペプチドを生成するためのプロセスを提供し、そのプロセスは、ポリペプチド発現を誘導する条件下で本発明の核酸で形質転換された宿主細胞を培養する工程を包含する。
【０２０８】
本発明は、本発明のポリペプチドを生成するためのプロセスを提供し、そのプロセスは、化学的手段によってポリペプチドの少なくとも一部分を合成する工程を包含する。
【０２０９】
本発明は、本発明の核酸を生成するためのプロセスを提供し、そのプロセスは、プライマーベースの増幅方法（例えば、ＰＣＲ）を使用して、核酸を増幅させる工程を包含する。
【０２１０】
本発明は、本発明の核酸を生成するためのプロセスを提供し、そのプロセスは、化学的手段によって核酸の少なくとも一部分を合成する工程を包含する。
【０２１１】
（精製および組換え発現）
本発明のＧＢＳ抗原は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅから単離され得るか、あるいは、それらは、（例えば、異種の宿主において）組換え産生され得る。好ましくは、上記のＧＢＳ抗原は、異種の宿主を使用して調製される。異種の宿主は、原核生物（例えば、細菌）または真核生物であり得る。好ましくは、Ｅ．ｃｏｌｉであるが、しかし、他の適切な宿主としては、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｌａｃｔａｍｉｃａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｃｉｎｅｒｅａ、マイコバクテリウム属（例えば、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、酵母、などが挙げられる。
【０２１２】
ポリペプチドの組換え産生は、上記のＧＢＳ抗原にタグタンパク質を加えることによって容易にされ、そのタグタンパク質およびそのＧＢＳ抗原を含む融合タンパク質として発現される。そのようなタグタンパク質は、上記の発現されたタンパク質の精製、検出および安定を容易にし得る。本発明における使用のために適切なタグタンパク質としては、ポリアルギニンタグ（Ａｒｇ−ｔａｇ）、ポリヒスチジンタグ（Ｈｉｓ−ｔａｇ）、ＦＬＡＧ−ｔａｇ、Ｓｔｒｅｐ−ｔａｇ、ｃ−ｍｙｃ−ｔａｇ、Ｓ−ｔａｇ、カルモジュリン結合ペプチド、セルロース結合ドメイン、ＳＢＰ−タグ、キチン結合ドメイン、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼタグ（ＧＳＴ）、マルトース結合タンパク質、転写終結アンチターミネーション因子（ＮｕｓＡ）、Ｅ．ｃｏｌｉチオレドキシン（ＴｒｘＡ）およびタンパク質ジスルフィドイソメラーゼＩ（ＤｓｂＡ）が挙げられる。好ましいタグタンパク質としては、Ｈｉｓ−ｔａｇおよびＧＳＴが挙げられる。タグタンパク質の使用に関する十分な議論は、参考文献３に見出され得る。
【０２１３】
精製後、上記タグタンパク質は、上記の発現された融合タンパク質から必要に応じて（すなわち、詳細には、当業者に公知の調整した酵素処理によって）除去され得る。一般に使用されるプロテアーゼとしては、エンテロキナーゼ、タバコエッチウイルス（ＴＥＶ）、トロンビン、および因子Ｘａが挙げられる。
【０２１４】
（ＧＢＳ多糖類）
本発明の組成物は、ＧＢＳ多糖類を含むことによって、さらに改良され得る。好ましくは、上記のＧＢＳ抗原および上記の糖類の各々は、レシピエントの免疫応答に寄与する。その組み合わせは特に、上記の糖類およびポリペプチドが、異なるＧＢＳ血清型から防御性を提供する利点がある。
【０２１５】
その組み合わせた抗原は、別々の糖類抗原およびポリペプチド抗原が、一緒に投与される単一の組み合わせとして存在し得るか、またはそれらは、その糖類抗原およびポリペプチド抗原が、互いに共有結合されて、結合された組み合わせとして存在し得る。
【０２１６】
このように、本発明は、（ｉ）１種以上のＧＢＳポリペプチド抗原および（ｉｉ）１種以上のＧＢＳ糖類抗原を含む免疫原性組成物を提供する。上記のポリペプチドおよび上記の糖類は、有利に、互いに共有結合され得、結合体を形成し得る。
【０２１７】
それらの間に、上記の組み合わせたポリペプチドおよび糖類抗原は、好ましくは、２種以上のＧＢＳ血清型（例えば、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種またはそれ以上の血清型）をカバーする（または２種以上のＧＢＳ血清型から防御性を提供する）。上記のポリペプチド抗原および糖類抗原の血清型は、重なり合ってもよく、重なり合わなくてもよい。例えば、上記のポリペプチドは、血清型ＩＩまたは血清型Ｖに対して防御し得るが、一方、上記の糖類は、血清型Ｉａ、血清型Ｉｂまたは血清型ＩＩＩのいずれかに対して防御し得る。好ましい組み合わせは、以下の群の血清型：（１）血清型Ｉａおよび血清型Ｉｂ、（２）血清型Ｉａおよび血清型ＩＩ、（３）血清型Ｉａおよび血清型ＩＩＩ、（４）血清型Ｉａおよび血清型ＩＶ、（５）血清型Ｉａおよび血清型Ｖ、（６）血清型Ｉａおよび血清型ＶＩ、（７）血清型Ｉａおよび血清型ＶＩＩ、（８）血清型Ｉａおよび血清型ＶＩＩＩ、（９）血清型Ｉｂおよび血清型ＩＩ、（１０）血清型Ｉｂおよび血清型ＩＩＩ、（１１）血清型Ｉｂおよび血清型ＩＶ、（１２）血清型Ｉｂおよび血清型Ｖ、（１３）血清型Ｉｂおよび血清型ＶＩ、（１４）血清型Ｉｂおよび血清型ＶＩＩ、（１５）血清型Ｉｂおよび血清型ＶＩＩＩ、（１６）血清型ＩＩおよび血清型ＩＩＩ、（１７）血清型ＩＩおよび血清型ＩＶ、（１８）血清型ＩＩおよび血清型Ｖ、（１９）血清型ＩＩおよび血清型ＶＩ、（２０）血清型ＩＩおよび血清型ＶＩＩ、（２１）血清型ＩＩおよび血清型ＶＩＩ、（２２）血清型ＩＩＩおよび血清型ＩＶ、（２３）血清型ＩＩＩおよび血清型Ｖ、（２４）血清型ＩＩＩおよび血清型ＶＩ、（２５）血清型ＩＩＩおよび血清型ＶＩＩ、（２６）血清型ＩＩＩおよび血清型ＶＩＩＩ、（２７）血清型ＩＶおよび血清型Ｖ、（２８）血清型ＩＶおよび血清型ＶＩ、（２９）血清型ＩＶおよび血清型ＶＩＩ、（３０）血清型ＩＶおよび血清型ＶＩＩＩ、（３１）血清型Ｖおよび血清型ＶＩ、（３２）血清型Ｖおよび血清型ＶＩＩ、（３３）血清型Ｖおよび血清型ＶＩＩＩ、（３４）血清型ＶＩおよび血清型ＶＩＩ、（３５）血清型ＶＩおよび血清型ＶＩＩＩ、ならびに（３６）血清型ＶＩＩおよび血清型ＶＩＩＩに対して防御する。
【０２１８】
さらにより好ましくは、上記の組み合わせは、以下の血清型の群：（１）血清型Ｉａおよび血清型ＩＩ、（２）血清型Ｉａおよび血清型Ｖ、（３）血清型Ｉｂおよび血清型ＩＩ、（４）血清型Ｉｂおよび血清型Ｖ、（５）血清型ＩＩＩおよび血清型ＩＩ、ならびに（６）血清型ＩＩＩおよび血清型Ｖに対して防御する。最も好ましくは、上記の組み合わせは、血清型ＩＩＩおよび血清型Ｖに対して防御する。
【０２１９】
血清型ＩＩおよび血清型Ｖに対する防御性は、好ましくは、ポリペプチド抗原によって提供される。血清型Ｉａ、血清型Ｉｂおよび／または血清型ＩＩＩに対する防御性は、ポリペプチド抗原であり得るか、または糖類抗原であり得る。
【０２２０】
１つの実施形態において、上記の免疫原性組成物は、ＧＢＳ糖類抗原および少なくとも２種のＧＢＳポリペプチド抗原またはそのフラグメントを含有し、ここで、上記のＧＢＳ糖類抗原は、ＧＢＳ血清型Ｉａ、ＧＢＳ血清型ＩｂおよびＧＢＳ血清型ＩＩＩから選択される糖類を含み、ここで、上記のＧＢＳポリペプチド抗原は、ＧＢＳ８０、ＧＢＳ９１、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ１８４、ＧＢＳ２７６、ＧＢＳ３０５、ＧＢＳ３２２、ＧＢＳ３３０、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ３６１、ＧＢＳ４０４、ＧＢＳ６９０およびＧＢＳ６９１からなる抗原の群から選択される少なくとも２種のポリペプチドまたはそのフラグメントの組み合わせを含む。好ましくは、その組み合わせは、１種以上のＧＢＳ８０、ＧＢＳ１０４およびＧＢＳ３２２を含む。さらにより好ましくは、その組み合わせは、ＧＢＳ８０またはそのフラグメントを含む。
【０２２１】
特定の実施形態において、本発明の組み合わせは、ＧＢＳ多糖類を含まない。特定の実施形態において、その組み合わせは、ＧＢＳ４、ＧＢＳ２２、ＧＢＳ８５、ＧＢＳ３３８およびＧＢＳ３６１からなる群より選択される１種以上のＧＢＳ抗原を含まない。
【０２２２】
（免疫原性組成物および医薬）
本発明の組成物は、好ましくは、免疫原性組成物であり、より好ましくは、ワクチン組成物である。上記の組成物のｐＨは、好ましくは、６と８との間であり、好ましくは、約７である。そのｐＨは、緩衝液の使用によって維持され得る。上記の組成物は、滅菌され得、そして／または発熱物質を含まない。この組成物は、ヒトに関して等張性であり得る。
【０２２３】
本発明に従うワクチンは、予防薬（すなわち、感染を予防するため）または治療薬（すなわち、感染を処置するため）のいずれかであり得るが、しかし、代表的に予防薬である。従って、本発明は、連鎖球菌感染に感受性の動物におけるＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ感染の治療的処置または予防的処置のための方法を包含し、その方法は、本発明の治療的または予防的な量の免疫原性組成物を、上記の動物に投与する工程を包含する。
【０２２４】
本発明はまた、医薬としての使用のための本発明の組成物を提供する。その医薬は、好ましくは、哺乳動物における免疫応答を上昇させ得（すなわち、それは免疫原性組成物である）、より好ましくはワクチンである。
【０２２５】
本発明はまた、哺乳動物における免疫応答を上昇させるための医薬の製造における本発明の組成物の使用を提供する。その医薬は好ましくは、ワクチンである。
【０２２６】
本発明はまた、ＧＢＳ抗原の組み合わせを含む第１の成分を含むキットを提供する。
【０２２７】
本発明はまた、本発明の免疫原性組成物をあらかじめ充填した送達デバイスを提供する。
【０２２８】
本発明はまた、哺乳動物における免疫応答を上昇させるための方法を提供し、その方法は、本発明の有効な量の組成物を投与する工程を包含する。その免疫応答は、好ましくは、防御性であり、そして好ましくは、抗体および／または細胞媒介免疫に関連する。その方法は、ブースター反応を惹起し得る。
【０２２９】
上記哺乳動物は、好ましくはヒトである。上記ワクチンが、予防的な使用のためである場合、そのヒトは、好ましくは、女性（妊婦可能年齢または１０代のいずれか）である。あるいは、そのヒトは、高齢者（例えば、５０歳、５５歳、６０歳、６５歳、７０歳または７５歳以上）であり得、内在する疾患（例えば、糖尿病または癌）を有し得る。上記のワクチンが治療的な使用のためである場合、そのヒトは、好ましくは、妊婦または高齢者である。
【０２３０】
これらの使用および方法は、好ましくは、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅによって引き起こされる疾患の予防および／または処置のためである。上記の組成物はまた、他の連鎖球菌に対して有効であり得る。
【０２３１】
治療的処置の有効性を調べる１つの方法は、本発明の組成物の投与後に、ＧＢＳ感染をモニタリングする工程を包含する。予防的処置の有効性を調べる１つの方法は、上記の組成物の投与後に、本発明の組成物における上記のＧＢＳ抗原に対する免疫応答をモニタリングする工程を包含する。
【０２３２】
本発明の組成物は、一般に、患者に直接的に投与される。直接送達は、非経口注射（例えば、皮下、腹腔内、皮内、静脈内、筋肉内、または組織の間隙空間へ）によって、または直腸、経口（例えば、錠剤、噴霧）、膣、局所、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）｛例えば、参考文献４を参照のこと｝もしくは経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）｛例えば、参考文献５および６を参照のこと｝、鼻腔内｛例えば、参考文献７を参照のこと｝、眼内、耳、肺または他の粘膜への投与によって、達成され得る。
【０２３３】
本発明は、全身性免疫および／または粘膜免疫を誘発するために使用され得る。
【０２３４】
投薬処置は、単回用量スケジュールまたは複数回用量スケジュールであり得る。複数回用量は、初期の免疫スケジュールおよび／またはブースター免疫スケジュールに使用され得る。複数回用量スケジュールにおいて、種々の用量は、同じまたは異なる経路（例えば、初期の非経口および追加の粘膜、初期の粘膜および追加の非経口、など）によって与えられ得る。
【０２３５】
本発明の組成物は、種々の形態で調製され得る。例えば、その組成物は、液体の溶液または懸濁液のいずれかとしての注射可能物として調製され得る。注射前に液体ビヒクル中の溶解または懸濁液に適した固体形態（例えば、凍結乾燥した組成物）もまた、調製され得る。その組成物は、局所投与のために（例えば、軟膏、クリーム剤、または散剤として）調製され得る。その組成物は、経口投与のために（例えば、錠剤もしくはカプセル剤、噴霧剤、またはシロップ剤（必要に応じて香味を付けられている）として）調製され得る。その組成物は、肺投与のために（例えば、微細な散剤または噴霧剤を用いる吸入器として）調製され得る。その組成物は、坐剤またはペッサリーとして調製され得る。その組成物は、鼻、耳または眼への投与のために（例えば、滴として）調製され得る。その組成物は、組み合わせた組成物が、患者への投与の直前に再形成されるように設計されたキットの形態であり得る。そのようなキットは、液体の形態で１種以上の抗原および１種以上の凍結乾燥された抗原を含み得る。
【０２３６】
ワクチンとして使用される免疫原性組成物は、免疫学的に有効な量の抗原、ならびに必要とされる場合、任意の他の成分を含有する。「免疫学的に有効な量」によっては、単回投与でか、または一連の一部としてのいずれかでの個体に対するその量の投与が、処置または予防のために有効であることを意味する。この量は、処置される個体の健康状態および身体的状態、年齢、処置される個体の分類群（例えば、非ヒト霊長類、霊長類など）、抗体を合成するための個体の免疫系の能力、所望の防御性の程度、ワクチンの処方、処置する医師の医療状況の評価、および他の関連する要因に依存して変動する。その量は、日常的な試行によって決定され得る比較的広い範囲にわたると予測される。
【０２３７】
（さらなる組成物の成分）
本発明の組成物は、代表的に、上に述べた組成物に加えて、１種以上の「薬学的に受容可能なキャリア」を含有し、それは、それ自体、上記組成物を受容する個体に対して有害な抗体の産生を誘導しない任意のキャリアを含有する。適切なキャリアは、代表的に、大きく、徐々に代謝される高分子（例えば、タンパク質、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマーアミノ酸、アミノ酸コポリマー、および脂質凝集体（例えば、油滴またはリポソーム））である。そのようなキャリアは、当業者に周知である。上記のワクチンはまた、希釈剤（例えば、水、生理食塩水、グリセロールなど）を含み得る。さらに、補助的物質（例えば、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝物質など）が、存在し得る。薬学的に受容可能な賦形剤の徹底的な議論は、参考文献８において利用可能である。
【０２３８】
本発明のワクチンは、他の免疫調節性因子と併せて投与され得る。特に、組成物は通常、アジュバントを含有する。
【０２３９】
好ましいさらなるアジュバントとしては、以下に示す次の１つ以上が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２４０】
（Ａ．無機質含有組成物）
本発明のアジュバントとしての使用のために適切な無機質含有組成物としては、無機塩（例えば、アルミニウム塩およびカルシウム塩）が挙げられる。本発明は、無機塩（例えば、水酸化物（例えば、酸水酸化物）、リン酸塩（例えば、ヒドロキシリン酸塩（ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｏｓｈｐａｔｅ）、オルトリン酸塩）、スルフェート、など｛例えば、参考文献９の第８章および第９章を参照のこと｝）、または異なる無機化合物の混合物を含み、その化合物は任意の適切な形態（例えば、ゲル、結晶、非晶質など）をとり、そして吸着性であることが好ましい。上記の無機物含有組成物はまた、金属塩の粒子として処方され得る。参考文献１０を参照のこと。
【０２４１】
（Ｂ．油乳濁液）
本発明のアジュバントとしての使用のために適切な油乳濁液組成物としては、スクアレン−水乳濁液（例えば、ＭＦ５９（マイクロフルイダイザーを用いてサブミクロン粒子へと処方される、５％  スクアレン、０．５％  Ｔｗｅｅｎ８０、および０．５％  Ｓｐａｎ  ８５））が挙げられる。ＷＯ９０／１４８３７を参照のこと。Ｆｒｅｙら、「Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓａｆｅｔｙ，ｔｏｌｅｒａｂｉｌｉｔｙ，ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａ  ＭＦ５９−ａｄｊｕｖａｎｔｅｄ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｖａｃｃｉｎｅ  ａｎｄ  ａ  ｎｏｎ−ａｄｊｕｖａｎｔｅｄ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｉｎ  ｎｏｎ−ｅｌｄｅｒｌｙ  ａｄｕｌｔｓ」、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００３）２１：４２３４〜４２３７もまた参照のこと。
【０２４２】
特に、上記の組成物における使用のための好ましいアジュバントは、サブミクロン水中油乳濁液である。本明細書中の使用のための好ましいサブミクロン水中油乳濁液は、必要に応じて、変動する量のＭＴＰ−ＰＥを含むスクアレン／水乳濁液（例えば、４〜５％ｗ／ｖ  スクアレン、０．２５〜１．０％ｗ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ８０ＴＭ（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）、および／または０．２５〜１．０％  Ｓｐａｎ８５ＴＭ（ソルビタントリオレアート）、ならびに必要に応じて、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ））を含むサブミクロン水中油乳濁液である（例えば、「ＭＦ５９」（国際公開番号ＷＯ９０／１４８３７；米国特許第６，２９９，８８４号および同第６，４５１，３２５号これらは本明細書中にその全体が参考として援用される；ならびにＶａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｆ．および  Ｎｅｗｍａｎ，Ｍ．Ｊ．編）Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９５，２７７〜２９６頁中のＯｔｔら、「ＭＦ５９−Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｓａｆｅ  ａｎｄ  Ｐｏｔｅｎｔ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  ｆｏｒ  Ｈｕｍａｎ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ」として公知であるサブミクロン水中油乳濁液）である。ＭＦ５９は、４〜５％ｗ／ｖ  スクアレン（例えば、４．３％）、０．２５〜０．５％ｗ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ８０ＴＭ、および０．５％ｗ／ｖ  Ｓｐａｎ８５ＴＭを含み、そして必要に応じて、マイクロフルイダイザー（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）（例えば、Ｍｏｄｅｌ  １１０Ｙ  マイクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ，Ｎｅｗｔｏｎ，ＭＡ））を用いてサブミクロン粒子へと処方される種々の量のＭＴＰ−ＰＥを含む。例えば、ＭＴＰ−ＰＥは、一投与量あたり約０〜５００μｇ、より好ましくは一投与量あたり０〜２５０μｇ、および最も好ましくは一投与量あたり０〜１００μｇの量で存在し得る。本明細書中で使用される場合、用語「ＭＦ５９−０」とは、ＭＴＰ−ＰＥを欠く上記のサブミクロン水中油乳濁液をいうが、一方で、用語ＭＦ５９−ＭＴＰとは、ＭＴＰ−ＰＥを含有する処方物を意味する。例えば、「ＭＦ５９−１００」は、一投与量あたり１００μｇのＭＴＰ−ＰＥを含む、などである。本明細書中での使用のための別のサブミクロン水中油乳濁液であるＭＦ６９は、４．３％ｗ／ｖ  スクアレン、０．２５％ｗ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ８０ＴＭ、および０．７５％ｗ／ｖ  Ｓｐａｎ８５ＴＭ、ならびに必要に応じてＭＴＰ−ＰＥを含む。さらに別のサブミクロン水中油乳濁液は、１０％スクアレン、０．４％  Ｔｗｅｅｎ８０ＴＭ、５％プルロニック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ）ブロックポリマーＬ１２１、およびｔｈｒ−ＭＤＰ（それもまたサブミクロン乳濁液にマイクロフルイダイズされる）を含む、ＳＡＦとしてもまた公知であるＭＦ７５である。ＭＦ７５−ＭＴＰは、ＭＴＰ（例えば、一投与量あたり１００〜４００μｇのＭＴＰ−ＰＥ）を含むＭＦ７５処方物を意味する。
【０２４３】
上記の組成物における使用のためのサブミクロン水中油乳濁液、そのサブミクロン水中油乳濁液を作製する方法および免疫刺激因子（例えば、ムラミルペプチド）は、国際公開番号ＷＯ９０１１４８３７ならびに米国特許第６，２９９，８８４号および同第６，４５１，３２５号に、詳細に記載され、それらの全体が参考として本明細書中に援用される。
【０２４４】
完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）および不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）もまた、本発明のアジュバントとして使用され得る。
【０２４５】
（Ｃ．サポニン処方物）
サポニン処方物もまた、本発明のアジュバントとして使用され得る。サポニンは、広範囲の植物種の樹皮、葉、茎、根および花においてでさえ見出されるステロールグリコシドおよびトリテルペノイドグリコシドの異種の群である。Ｑｕｉｌｌａｉａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａの木の樹皮由来のサポニンは、アジュバントとして広範に研究されている。サポニンはまた、Ｓｍｉｌａｘ  ｏｒｎａｔａ（サルサパリラ（ｓａｒｓａｐｒｉｌｌａ））、Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌｌａ  ｐａｎｉｃｕｌａｔａ（ｂｒｉｄｅｓ  ｖｅｉｌ）、およびＳａｐｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉａｎａｌｉｓ（ｓｏａｐ  ｒｏｏｔ）から商業的に得られ得る。サポニンアジュバント処方物としては、精製した処方物（例えば、ＱＳ２１）、ならびに脂質処方物（例えば、ＩＳＣＯＭ）が挙げられる。
【０２４６】
サポニン組成物は、高速薄層クロマトグラフィー（ＨＰ−ＬＣ）および逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）を用いて精製されている。これらの技術を用いて精製された特定の画分は同定されており、それらは、ＱＳ７、ＱＳ１７、ＱＳ１８、ＱＳ２１、ＱＨ−Ａ、ＱＨ−ＢおよびＱＨ−Ｃを含む。好ましくは、上記のサポニンは、ＱＳ２１である。ＱＳ２１を生成する方法は、米国特許第５，０５７，５４０号に開示されている。サポニン処方物はまた、ステロール（例えば、コレステロール）を含有し得る（ＷＯ９６／３３７３９を参照のこと）。
【０２４７】
サポニンおよびコレステロールの組み合わせは、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）と呼ばれる特有の粒子を形成するために使用され得る。代表的にＩＳＣＯＭもまた、リン脂質（例えば、ホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリン）を含む。任意の公知のサポニンは、ＩＳＣＯＭに使用され得る。好ましくは、そのＩＳＣＯＭは、１種以上のＱｕｉｌ  Ａ、ＱＨＡおよびＱＨＣを含む。ＩＳＣＯＭはさらに、ＥＰ０１０９９４２、ＷＯ９６／１１７１１およびＷＯ９６／３３７３９に記載されている。必要に応じて、そのＩＳＣＯＭは、さらなる界面活性剤（ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ）を欠き得る。参考文献１１を参照のこと。
【０２４８】
サポニンに基づいたアジュバントの開発の総評は、参考文献１２に見出され得る。
【０２４９】
（Ｃ．ビロゾームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ））
ビロゾームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）もまた、本発明のアジュバントとして使用され得る。これらの構造は、一般に、必要に応じて組み合わされるか、またはリン脂質とともに処方されるウイルス由来の１種以上のタンパク質を含む。それらは、概して、非病原性で複製せず、そして概して、天然のウイルスゲノムを全く含まない。そのウイルスタンパク質は、組み換えて産生され得るか、またはウイルス全体から単離され得る。ビロゾームまたはＶＬＰの使用のために適切なこれらのウイルスタンパク質としては、インフルエンザウイルス（例えば、ＨＡまたはＮＡ）、Ｂ型肝炎ウイルス（例えば、コアタンパク質またはカプシドタンパク質）、Ｅ型肝炎ウイルス、麻疹ウイルス、シンドビスウイルス、ロタウイルス、口蹄疫ウイルス、レトロウイルス、ノーウォークウイルス、ヒト乳頭腫ウイルス、ＨＩＶ、ＲＮＡ−ファージ、Ｑβ−ファージ（例えば、コートタンパク質）、ＧＡ−ファージ、ｆｒ−ファージ、ＡＰ２０５ファージ、およびＴｙ（例えば、レトロトランスポゾンＴｙタンパク質ｐ１）由来のタンパク質が挙げられる。ＶＬＰはさらに、ＷＯ０３／０２４４８０、ＷＯ０３／０２４４８１、ならびに参考文献１３、参考文献１４、参考文献１５および参考文献１６に議論されている。ビロゾームはさらに、例えば、参考文献１７に議論されている。
【０２５０】
（Ｄ．細菌誘導体または微生物誘導体）
本発明における使用のために適切なアジュバントとしては、以下のような細菌誘導体または微生物誘導体が挙げられる。
【０２５１】
（１）腸内細菌性リポ多糖類（ＬＰＳ）の非毒性誘導体
このような誘導体としては、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）および３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）が挙げられる。３ｄＭＰＬは、４本、５本または６本のアシル化された鎖を有する３  脱−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａの混合物である。３  脱−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａの好ましい「小さな粒子」形態は、ＥＰ０６８９４５４に開示されている。このような３ｄＭＰＬの「小さな粒子」は、０．２２ミクロンの膜を通って濾過滅菌されるのに十分小さい（ＥＰ０６８９４５４を参照のこと）。他の非毒性のＬＰＳ誘導体としては、モノホスホリル脂質Ａ模倣物（例えば、アミノアルキルグリコサミニドホスフェート誘導体（例えば、ＲＣ−５２９））が挙げられる。例えば、参考文献１８を参照のこと。
【０２５２】
（２）脂質Ａ誘導体
脂質Ａ誘導体としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ（例えば、ＯＭ−１７４）由来の脂質Ａの誘導体が挙げられる。ＯＭ−１７４は、例えば、参考文献１９および参考文献２０に記載されている。
【０２５３】
（３）免疫刺激性オリゴヌクレオチド
本発明のアジュバントとしての使用のために適切な免疫刺激性オリゴヌクレオチドとしては、ＣｐＧモチーフ（後にグアノシンが続き、リン酸結合によって結合されたメチル化されていないシトシンを含む配列）を含むヌクレオチド配列が挙げられる。パリンドローム配列またはポリ（ｄＧ）配列を含む細菌の二本鎖ＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドもまた、免疫刺激性であると示されている。
【０２５４】
上記のＣｐＧとしては、ヌクレオチド改変物／アナログ（例えば、ホスホロチオエート改変物）が挙げられ得、それは、二本鎖または一本鎖であり得る。必要に応じて、上記のグアノシンは、アナログ（例えば、２’−デオキシ−７−デアザグアノシン）で置換され得る。可能なアナログ置換の例については、参考文献２１、ＷＯ０２／２６７５７およびＷＯ９９／６２９２３を参照のこと。ＣｐＧオリゴヌクレオチドのアジュバント効果は、参考文献２２、参考文献２３、ＷＯ９８／４０１００、米国特許第６，２０７，６４６号、同第６，２３９，１１６号および同第６，４２９，１９９号に、さらに議論されている。
【０２５５】
上記のＣｐＧ配列は、ＴＬＲ９（例えば、モチーフＧＴＣＧＴＴまたはＴＴＣＧＴＴ）に関連し得る。参考文献２４を参照のこと。そのＣｐＧ配列は、Ｔｈ１免疫応答（例えば、ＣｐＧ−Ａ  ＯＤＮ）を誘導するために特異的であり得るか、またはそれは、Ｂ細胞応答（例えば、ＣｐＧ−Ｂ  ＯＤＮ）を誘導するために、より特異的であり得る。ＣｐＧ−Ａ  ＯＤＮおよびＣｐＧ−Ｂ  ＯＤＮは、参考文献２５および参考文献２６ならびにＷＯ０１／９５９３５に議論されている。好ましくは、上記のＣｐＧは、ＣｐＧ−Ａ  ＯＤＮである。
【０２５６】
好ましくは、上記のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、５’末端が、レセプター認識のために接近できるように構築される。必要に応じて、２つのＣｐＧオリゴヌクレオチド配列は、「イムノマー（ｉｍｍｕｎｏｍｅｒ）」を形成するために、それらの３’末端で接合され得る。例えば、参考文献２７、参考文献２８、参考文献２９およびＷＯ０３／０３５８３６を参照のこと。
【０２５７】
（４）ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその無毒化された誘導体
細菌のＡＤＰ−リボシル化毒素およびその無毒化された誘導体は、本発明のアジュバントとして使用され得る。好ましくは、そのタンパク質は、Ｅ．ｃｏｌｉ（すなわち、Ｅ．ｃｏｌｉ熱不安定性腸毒素「ＬＴ」）、コレラ（「ＣＴ」）、または百日咳（「ＰＴ」）由来である。粘膜のアジュバントとしての無毒化されたＡＤＰ−リボシル化毒素の使用は、ＷＯ９５／１７２１１に記載され、そしてＷＯ９８／４２３７５に非経口のアジュバントとして記載されている。
【０２５８】
好ましくは、そのアジュバントは、無毒化されたＬＴ変異体（例えば、ＬＴ−Ｋ６３）である。
【０２５９】
（Ｅ．ヒト免疫調節剤）
本発明のアジュバントとしての使用のために適切なヒト免疫調節剤としては、サイトカイン（例えば、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２など）、インターフェロン（例えば、インターフェロン−γ））、マクロファージコロニー刺激因子、および腫瘍壊死因子が挙げられる。
【０２６０】
（Ｆ．生物接着剤および粘膜接着剤）
生物接着剤および粘膜接着剤もまた、本発明のアジュバントとして使用され得る。適切な生物接着剤としては、エステル化ヒアルロン酸ミクロスフェア（参考文献３０）または粘膜接着剤（例えば、ポリ（アクリル酸）、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、多糖類およびカルボキシメチルセルロースの架橋誘導体）が挙げられる。キトサンおよびその誘導体もまた、本発明のアジュバントとして使用され得る。例えば、参考文献３１。
【０２６１】
（Ｇ．微粒子）
微粒子もまた、本発明のアジュバントとして使用され得る。微粒子（すなわち、直径が約１００ｎｍ〜約１５０μｍ、より好ましくは、直径が約２００ｎｍ〜約３０μｍ、および最も好ましくは直径が約５００ｎｍ〜約１０μｍの粒子）、生分解性かつ非毒性である物質（例えば、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリカプロラクトン、などと、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）から形成された）であり、それは、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）が好ましく、必要に応じて、負電荷表面（例えば、ＳＤＳを有する）または正電荷表面（例えば、カチオン性界面活性剤（例えば、ＣＴＡＢ））を有するように処置される。
【０２６２】
（Ｈ．リポソーム）
アジュバントとしての使用のために適切なリポソーム処方物の例は、米国特許第６，０９０，４０６号、同第５，９１６，５８８号、およびＥＰ０６２６１６９に記載されている。
【０２６３】
（Ｉ．ポリオキシエチレンエーテル処方物およびポリオキシエチレンエステル処方物）
本発明における使用のために適切なアジュバントとしては、ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステルが挙げられる（参考文献３２）。このような処方物としては、オクトキシノール（参考文献３３）と組み合わせるポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤ならびに少なくとも１種のさらなる非イオン性界面活性剤（例えば、オクトキシノール（参考文献３４））と組み合わせるポリオキシエチレンアルキルエーテルまたはエステル界面活性剤、がさらに挙げられる。
【０２６４】
好ましいポリオキシエチレンエステルは、以下の群：ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル（ラウレス９）、ポリオキシエチレン−９−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−８−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−４−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−３５−ラウリルエーテル、およびポリオキシエチレン−２３−ラウリルエーテルから選択される。
【０２６５】
（Ｊ．ポリフォスファゼン（ＰＣＰＰ））
ＰＣＰＰ処方物は、例えば、参考文献３５および参考文献３６に記載されている。
【０２６６】
（Ｋ．ムラミルペプチド）
本発明のアジュバントとしての使用のために適切なムラミルペプチドの例としては、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、およびＮ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミンＭＴＰ−ＰＥ）が挙げられる。
【０２６７】
（Ｌ．イミダゾキノロン化合物）
本発明のアジュバントとしての使用のために適切なイミダゾキノロン化合物の例としては、イミクアモド（ｉｍｉｑｕａｍｏｄ）およびそのホモログが挙げられ、それは、参考文献３７および参考文献３８に、さらに記載されている。
【０２６８】
本発明はまた、上記の同定した１種以上のアジュバントの組み合わせの局面を含み得る。例えば、以下のアジュバント組成物が、本発明に使用され得る。
【０２６９】
（１）サポニンおよび水中油型乳濁液（参考文献３９）；
（２）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）（ＷＯ９４／００１５３を参照のこと）；
（３）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）＋コレステロール；
（４）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ−１２（必要に応じて＋ステロール）（参考文献４０）；
（５）例えば、ＱＳ２１および／または水中油型エマルジョンと３ｄＭＰＬとの組み合わせ（参考文献４１）；
（６）１０％  スクアレン、０．４％  Ｔｗｅｅｎ８０、５％  プルロニックブロックポリマーＬ１２１、およびサブミクロン乳濁液にマイクロフルイダイズされるか、またはより大きな粒子サイズの乳濁液を作製するようにボルテックスされるかのいずれかのｔｈｒ−ＭＤＰを含む、ＳＡＦ。
【０２７０】
（７）２％  Ｓｑｕａｌｅｎｅ、０．２％  Ｔｗｅｅｎ  ８０、および以下：モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）（好ましくはＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤｅｔｏｘＴＭ））からなる群、からの１種以上の細菌細胞壁成分を含有する、ＲｉｂｉＴＭアジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ）；および
（８）１種以上の無機塩（例えば、アルミニウム塩）＋ＬＰＳの非毒素誘導体（例えば、３ｄＰＭＬ）。
【０２７１】
アルミニウム塩およびＭＦ５９は、非経口免疫処置のための好ましいアジュバントである。変異細菌毒素は、好ましい粘膜のアジュバントである。
【０２７２】
上記組成物は、抗生物質を含有し得る。
【０２７３】
（さらなる抗原）
本発明の組成物は、さらなる細菌性抗原、ウイルス性抗原または寄生性抗原を含む１種以上のさらなる非ＧＢＳ抗原を、さらに含有し得る。
【０２７４】
別の実施形態において、本発明のＧＢＳ抗原の組み合わせは、高齢者または免疫力のない個体を防御するように設計されたワクチンにおける使用のために適切な１種以上のさらなる非ＧＢＳ抗原と組み合わせられる。例えば、そのＧＢＳ抗原の組み合わせは、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ、インフルエンザウイルス、およびパラインフルエンザウイルス（「ＰＩＶ」）からなる群由来の抗原と組み合わせられ得る。
【０２７５】
糖類抗原または炭水化物抗原が使用される場合、好ましくは、免疫原性を増強するためにキャリアタンパク質に結合される｛例えば、参考文献４２〜５１｝。好ましいキャリアタンパク質は、細菌毒素または細菌トキソイド（例えば、ジフテリアトキソイドまたは破傷風トキソイド）である。ＣＲＭ１９７ジフテリアトキソイドが、特に好ましい｛５２｝。他のキャリアポリペプチドとしては、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ外膜タンパク質｛５３｝、合成ペプチド｛５４、５５｝、熱ショックタンパク質｛５６，５７｝、百日咳タンパク質｛５８、５９｝、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来のタンパク質Ｄ｛６０｝、サイトカイン｛６１｝、リンホカイン、ホルモン、増殖因子、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来の毒素Ａまたは毒素Ｂ｛６２｝、鉄取り込みタンパク質｛６３｝、などが挙げられる。混合物が、血清型Ａおよび血清型Ｃの両方由来の莢膜糖類を含む場合、ＭｅｎＡ糖類：ＭｅｎＣ糖類の比（ｗ／ｗ）は、１より大きい（例えば、２：１、３：１、４：１、５：１、１０：１またはそれ以上）ことが好ましい。異なる糖類は、同じまたは異なるタイプのキャリアタンパク質に結合され得る。任意の適切な結合反応が使用され得、それは必要な場合、任意の適切なリンカーを有する。
【０２７６】
毒性タンパク質抗原は、必要な場合（例えば、百日咳毒の無毒化の場合）、化学的手段および／または遺伝的手段によって無毒化され得る。
【０２７７】
ジフテリア抗原が上記の組成物に含まれる場合、破傷風抗原および百日咳抗原を含むこともまた好ましい。同様に、破傷風抗原が含まれる場合、ジフテリア抗原および百日咳抗原を含むこともまた好ましい。同様に、百日咳抗原が含まれる場合、ジフテリア抗原および破傷風抗原を含むこともまた好ましい。
【０２７８】
上記の組成物中の抗原は、代表的に、それぞれ少なくとも１μｇ／ｍｌの濃度で存在する。一般に、任意の所定の抗原の濃度は、その抗原に対する免疫応答を誘発するのに十分である。
【０２７９】
本発明の組成物中で、タンパク質抗原を使用する代わりとして、その抗原をコードする核酸が、使用され得る｛例えば、参考文献６４〜７２｝。従って、本発明の組成物のタンパク質成分は、そのタンパク質をコードする核酸（好ましくは、ＤＮＡ（例えば、プラスミドの形態で））によって置換され得る。
【０２８０】
（定義）
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」ならびに「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を意味する（例えば、Ｘを「含む」組成物は、単にＸからなり得るか、または追加されたものを含み得る（例えば、Ｘ＋Ｙ））。
【０２８１】
数値ｘに関する用語「約」とは、例えば、ｘ±１０％を意味する。
【０２８２】
２つのアミノ酸配列間の配列同一性のパーセンテージに対する基準は、並べた場合、アミノ酸のパーセンテージが、２つの配列を比較して同じであることを意味する。このアラインメントおよびホモロジーまたは配列同一性のパーセントは、当該分野において公知であるソフトウェアプログラム（例えば、参考文献７３の節７．７．１８に記載されているもの）を使用して決定され得る。好ましいアラインメントは、１２のギャップ開始ペナルティおよび２のギャップ伸長ペナルティ、６２のＢＬＯＳＵＭマトリックスを用いて、類似性のギャップ検索を使用するＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎホモロジーサーチアルゴリズムによって決定される。このＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎホモロジーサーチアルゴリズムは、参考文献７４に開示されている。
【表８４】
2007527866.tif 000085
【表８５】
2007527866.tif 000086
【表８６】
2007527866.tif 000087
【誤訳訂正書】
【提出日】平成19年8月8日(2007.8.8)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
２種以上のＧＢＳ抗原の組み合わせを含む組成物であって、ここで、該組み合わせが、ＧＢＳ８０またはそのフラグメントあるいはＧＢＳ８０と５０％以上の配列同一性を有するポリペプチド配列を含む、組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の組成物であって、前記ＧＢＳ抗原の組み合わせが、能動母子免疫アッセイによって測定される場合に改良された免疫原性を示し、ここで、該能動母子免疫アッセイは、免疫スケジュールの間の雌マウスの血清力価およびチャレンジ後の仔の生存率パーセントを測定する、組成物。
【請求項３】
請求項２に記載の組成物であって、前記チャレンジした仔の生存率パーセントが、単一の非ＧＢＳ８０抗原で免疫した雌マウス由来のチャレンジした仔の生存率パーセントより、少なくとも２パーセントポイント高い、組成物。
【請求項４】
請求項１に記載の組成物であって、前記組み合わせが、２種のＧＢＳ抗原からなる、組成物。
【請求項５】
請求項１に記載の組成物であって、前記組み合わせが、３種のＧＢＳ抗原からなる、組成物。
【請求項６】
請求項１に記載の組成物であって、前記組み合わせが、４種のＧＢＳ抗原からなる、組成物。
【請求項７】
請求項１に記載の組成物であって、前記組み合わせが、５種のＧＢＳ抗原からなる、組成物。
【請求項８】
請求項１に記載の組成物であって、ＧＢＳ８０が、配列番号２またはその免疫原性フラグメントのアミノ酸配列を含む、組成物。
【請求項９】
請求項１に記載の組成物であって、前記ＧＢＳ８０のフラグメントが、配列番号３、４、５、６、７、８、および９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、組成物。
【請求項１０】
請求項１に記載の組成物であって、前記組み合わせが、ＧＢＳ８０、ＧＢＳ９１、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ１８４、ＧＢＳ２７６、ＧＢＳ３０５、ＧＢＳ３２２、ＧＢＳ３３０、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ３６１、ＧＢＳ４０４、ＧＢＳ６９０、およびＧＢＳ６９１からなる群より選択される、２〜１３種のＧＢＳ抗原からなる、組成物。
【請求項１１】
請求項１に記載の組成物であって、前記組み合わせが、ＧＢＳ８０、ＧＢＳ１０４およびＧＢＳ３２２を含む、組成物。
【請求項１２】
請求項１に記載の組成物であって、前記組み合わせが、ＧＢＳ８０、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ２７６およびＧＢＳ３２２を含む、組成物。
【請求項１３】
請求項１に記載の組成物であって、前記組み合わせが、ＧＢＳ９１、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ１８４、ＧＢＳ２７６、ＧＢＳ３０５、ＧＢＳ３２２、ＧＢＳ３３０、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ３６１、ＧＢＳ４０４、ＧＢＳ６９０またはＧＢＳ６９１のうちの少なくとも１種を含む、組成物。
【請求項１４】
ＧＢＳ８０抗原の一部分および少なくとも１種のＧＢＳ抗原の一部分を含む、融合タンパク質。
【請求項１５】
請求項１４に記載の融合タンパク質であって、前記少なくとも１種のＧＢＳ抗原が、ＧＢＳ９１、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ１８４、ＧＢＳ２７６、ＧＢＳ３０５、ＧＢＳ３２２、ＧＢＳ３３０、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ３６１、ＧＢＳ４０４、ＧＢＳ６９０またはＧＢＳ６９１からなる群より選択される、融合タンパク質。
【請求項１６】
請求項１５に記載の融合タンパク質であって、前記少なくとも１種のＧＢＳ抗原が、ＧＢＳ３２２である、融合タンパク質。
【請求項１７】
請求項１６に記載の融合タンパク質であって、ＧＢＳ８０抗原およびＧＢＳ３２２抗原から本質的になる、融合タンパク質。
【請求項１８】
ＧＢＳ感染に感受性のある動物におけるＧＢＳ感染の治療的処置または予防的処置のための、請求項１に記載の組成物。
【請求項１９】
ＧＢＳに対する免疫応答を上昇させるための医薬の製造のための方法であって、該方法が、少なくとも１種のＧＢＳポリペプチド抗原とＧＢＳ８０抗原またはそのフラグメントとを混合する工程を包含する、方法。
【請求項２０】
請求項１９に記載の方法であって、前記少なくとも１種のＧＢＳポリペプチド抗原が、ＧＢＳ９１、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ１８４、ＧＢＳ２７６、ＧＢＳ３０５、ＧＢＳ３２２、ＧＢＳ３３０、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ３６１、ＧＢＳ４０４、ＧＢＳ６９０およびＧＢＳ６９１からなる抗原の群から選択されるポリペプチドまたはそのフラグメントを含む、方法。
【請求項２１】
ＧＢＳ感染の処置のための医薬の調製における請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４３】
好ましくは、本発明の組み合わせは、単独で投与される場合の上記の抗原の免疫原性よりも改良された免疫原性を提供する。改良された免疫原性は、例えば、能動母子免疫アッセイによって測定され得る。上記に議論したように、このアッセイは、上記の免疫処置スケジュールの間の雌マウスの血清力価、ならびにチャレンジ後の仔の生存期間を測定するために、使用され得る。好ましくは、本発明の免疫原性組成物を用いる免疫処置は、単独で投与される場合の上記の組成物の単一の抗原を用いる母子免疫からの生存パーセントと比較すると、上記のチャレンジした仔の生存パーセントにおいて少なくとも２パーセントポイント（好ましくは、少なくとも３パーセントポイント、４パーセントポイントまたは５パーセントポイント）の増加を生じる。好ましくは、その増加は、少なくとも６パーセントポイント、７パーセントポイント、８パーセントポイント、９パーセントポイント、１０パーセントポイント、１１パーセントポイント、１２パーセントポイント、１３パーセントポイント、１４パーセントポイント、１５パーセントポイント、１６パーセントポイント、１７パーセントポイント、１８パーセントポイント、１９パーセントポイント、２０パーセントポイント、２１パーセントポイント、２２パーセントポイント、２３パーセントポイント、２４パーセントポイント、２５パーセントポイント、２６パーセントポイント、２７パーセントポイント、２８パーセントポイント、２９パーセントポイントまたは３０パーセントポイントである。好ましくは、ＧＢＳ８０を含む本発明のＧＢＳの組み合わせは、ＧＢＳ８０でない抗原単独での免疫処置からの生存パーセントと比較すると、生存パーセントの増加を示す。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４７】
【表１０】
2007527866.tif 000088
表３に示すように、ＧＢＳ８０を含むＧＢＳ抗原の組み合わせは、上記の抗原単独の使用よりも改良された免疫原性を示した。例えば、ＧＢＳ８０単独での免疫処置によって、上記のチャレンジした仔の間で７０％の生存率を得た。ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ３３０、ＧＢＳ１０４、およびＧＢＳ４０４と、ＧＢＳ８０との組み合わせを用いる免疫処置によって、上記のチャレンジした仔の間で９５〜１００％の生存率を得た。これは、２５〜３０パーセントポイントの増加である。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４８】
比較すると、ＧＢＳ８０を含まなかったこれらの抗原の組み合わせは、ＧＢＳ８０単独の生存％を達成できなかった。例えば、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ１０４およびＧＢＳ４０４を用いる免疫処置によって、６５％の生存率を得た。これらの抗原のいずれか１つをＧＢＳ８０で置換することによって、９７％と１００％との間にまで生存率パーセントが、劇的に増加した。これは、３２〜３５パーセントポイントの増加である。（ＧＢＳ８０、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ１０１の生存率パーセント（９７％）；ＧＢＳ８０、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ４０４の生存率パーセント（１００％）およびＧＢＳ８０、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ４０４の生存率パーセント（１００％）を参照のこと。）同様に、ＧＢＳ３３８、ＧＢＳ３３０およびＧＢＳ１０４を用いる免疫処置によって、７３％の生存率を得た。これらの抗原のいずれか１つをＧＢＳ８０で置換することよって、９５％と９７％との間にまで生存率パーセントが増加した。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】配列表
【訂正方法】追加
【訂正の内容】
【配列表】
2007527866000001.app
【国際調査報告】
2007527866.tif 000089
2007527866.tif 000090
2007527866.tif 000091
2007527866.tif 000092