(57)【要約】  本発明は、細胞を免疫応答変更因子と接触させることにより、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の細胞表面分子の発現を増加する方法を提供する。本発明はまた、免疫応答変更因子化合物を、このような治療を必要としている対象に投与することにより、慢性リンパ球性白血病および小リンパ球性リンパ腫を含む、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫の治療方法も提供する。適当な免疫応答変更因子化合物は、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８の作用物質を包含する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の少なくとも１つの細胞表面分子の発現を増加する方法であって、前記ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、前記ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の少なくとも１つの細胞表面分子の発現を増加するのに有効な少なくとも１つのＩＲＭ化合物と接触させることを含む、前記方法。
【請求項２】
前記ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞が、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）細胞、小リンパ球性リンパ腫細胞（ＳＬＬ）、マントル細胞リンパ腫細胞、絨毛リンパ球を伴う脾リンパ腫、およびそれらの組合せからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＩＲＭが、ＴＬＲ７作用物質である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ＩＲＭが、ＴＬＲ８作用物質である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ＩＲＭが、テトラヒドロイミダゾキノリンアミンである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ＩＲＭが、スルホンアミド置換イミダゾキノリンアミンである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記細胞表面分子が、共刺激分子である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
少なくとも１つの共刺激分子が、ＣＤ２５、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ５４、ＣＤ８０、ＣＤ８３、またはＣＤ８６である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記細胞表面分子が、ＣＤ２０、ＣＤ２２、またはＣＤ２３である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞をＩＲＭと接触させることが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで起こる、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞をＩＲＭと接触させることが、器官内、組織内、または血中で起こる、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、ＩＲＭと接触させることが、対象内でｉｎ  ｖｉｖｏで起こる、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を刺激してサイトカインを産生する方法であって、前記ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、そのＩＲＭに接触させていない前記ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞により産生されるレベルより高く、少なくとも１つのサイトカインを産生するのに有効な上記ＩＲＭと接触させることを含み、前記少なくとも１つのサイトカインが、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−α、ＧＭ−ＣＳＦ、またはそれらの組合せである、前記方法。
【請求項１４】
前記ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を接触させることが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで起こる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を接触させることが、器官内、組織内、または血中で起こる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を接触させることが、対象内でｉｎ  ｖｉｖｏで起こる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
Ｔ細胞増殖を増進する方法であって、以下のステップ：
ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、前記ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の細胞表面上の少なくとも１つの共刺激分子の発現を増加するのに有効なＩＲＭと接触させること；および、
前記ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞をＴ細胞と接触させ、それによって前記Ｔ細胞を活性化すること；
を含み、ここで、前記活性化されたＴ細胞は、ＩＲＭと接触させていないＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞と接触させたＴ細胞と比較して増殖増進を示す、前記方法。
【請求項１８】
前記ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、少なくとも１つのさらなる免疫調節剤と接触させることをさらに含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記さらなる免疫調節剤が、ＩＬ−２を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記さらなる免疫調節剤が、プロテインキナーゼＣ作用物質を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記Ｔ細胞および前記ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞が、ｉｎ  ｖｉｖｏで接触させられる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞特異的細胞障害性Ｔ細胞によりＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の死滅を増進する方法であって、以下のステップ：
ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、前記ＣＤ５+リンパ腫細胞の表面上の少なくとも１つの共刺激分子の発現を増加するのに有効なＩＲＭと接触させること；および、
前記ＣＤ５+リンパ腫細胞を、ＣＤ８+Ｔ細胞と接触させ、それによって前記ＣＤ８+Ｔ細胞を活性化させること；
を含み、ここで、
前記活性化されたＣＤ８+Ｔ細胞が、ＩＲＭと接触させていないＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞と接触させたＣＤ８+Ｔ細胞と比較して、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の死滅増進を示すＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞特異的細胞障害性Ｔ細胞である、前記方法。
【請求項２３】
前記ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、少なくとも１つのさらなる免疫調節剤と接触させることをさらに含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記さらなる免疫調節剤が、ＩＬ−２を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記さらなる免疫調節剤が、プロテインキナーゼＣ作用物質を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞が、ＩＲＭとｉｎ  ｖｉｖｏで接触させられる、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫に罹患している対象において、自己Ｔ細胞によるＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の死滅を増進させる方法であって、前記対象に、ＴＬＲ７作用物質および／またはＴＬＲ８作用物質であるＩＲＭを投与することを含む、前記方法。
【請求項２８】
ＩＬ−２を投与することをさらに含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
プロテインキナーゼＣ作用物質を投与することをさらに含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
ＩＬ−２およびプロテインキナーゼＣ作用物質を投与することをさらに含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫に罹患している対象を治療する方法であって、前記対象に、前記ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の少なくとも１つの細胞表面分子の発現を増加するのに有効なＩＲＭを、前記ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の少なくとも１つの細胞表面分子の発現を増加するのに有効な量で投与することを含む、前記方法。
【請求項３２】
前記ＩＲＭが、ＴＬＲ７作用物質および／またはＴＬＲ８作用物質である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
ＩＬ−２を投与することをさらに含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
プロテインキナーゼＣ作用物質を投与することをさらに含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
ＩＬ−２およびプロテインキナーゼＣ作用物質を投与することをさらに含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
発現が増加している少なくとも１つの細胞表面分子が、治療薬の標的であって、前記対象に、前記治療薬の有効量を投与することをさらに含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３７】
前記細胞表面分子が、ＣＤ２０、ＣＤ２２、またはＣＤ２３である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３８】
前記細胞表面分子が、共刺激分子である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３９】
ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫を治療する方法であって、前記ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫に特有の少なくとも１つの症状または臨床徴候を寛解させるのに有効なＩＲＭを、このような治療を必要としている対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項４０】
前記ＩＲＭが、末梢血リンパ球、リンパ節腫脹、または脾腫の少なくとも５０％減少を、少なくとも２ヶ月間示すのに有効な量で投与される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記ＩＲＭが、進行性疾患の発生を防止するのに有効な量で投与され、前記進行性疾患は、循環リンパ球の少なくとも５０％増加またはより高悪性度の組織像への進行である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
前記ＩＲＭが、紅斑性病変を寛解させるのに有効な量で投与される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４３】
単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞またはその免疫学的に活性な部分を含み、前記単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞が、前記ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の細胞表面上の少なくとも１つの共刺激分子の発現を増加するのに有効なＩＲＭに接触させられている、ワクチン。
【請求項４４】
前記ＩＲＭが、ＴＬＲ７作用物質および／またはＴＬＲ８作用物質である、請求項４３に記載のワクチン。
【請求項４５】
前記単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞が、ＩＬ−２にさらに接触させられている、請求項４３に記載のワクチン。
【請求項４６】
前記単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞が、プロテインキナーゼＣ作用物質にさらに接触させられている、請求項４３に記載のワクチン。
【請求項４７】
前記単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞が、ＩＬ−２およびプロテインキナーゼＣ作用物質にさらに接触させられている、請求項４３に記載のワクチン。
【請求項４８】
単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、前記ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の表面上の少なくとも１つの分子の発現を増加するのに有効なＩＲＭと接触させることを含む、ワクチンを調製する方法。
【請求項４９】
前記単離された細胞を、ＩＬ−２と接触させることを含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記単離された細胞を、プロテインキナーゼＣ作用物質と接触させることをさらに含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
前記単離された細胞を、ＩＬ−２およびプロテインキナーゼＣ作用物質と接触させることをさらに含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５２】
ＣＤ５+リンパ腫に罹患している対象を治療する方法であって、前記対象に、単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の免疫学的に活性な部分を投与することを含み、前記単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞は、前記ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の細胞表面上の少なくとも１つの共刺激分子の発現を増加するのに有効なＩＲＭに接触させられている、前記方法。
【請求項５３】
前記単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞が、ＩＬ−２にも接触させられている、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞が、プロテインキナーゼＣ作用物質にも接触させられている、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
前記単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞が、ＩＬ−２およびプロテインキナーゼＣ作用物質にも接触させられている、請求項５２に記載の方法。
【請求項５６】
前記単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞が、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫に罹患している対象に由来する、請求項５２に記載の方法。
【請求項５７】
前記単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の免疫学的に活性な部分が、細胞全体を含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５８】
前記単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の免疫学的に活性な部分が、前記単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞からの細胞膜調製物またはタンパク質調製物を含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５９】
発現が増加している少なくとも１つの細胞表面分子が、治療薬の標的であって、前記対象に前記治療薬の有効量を投与することをさらに含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項６０】
ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫であると診断された対象において、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫反応性Ｔ細胞応答を開始する方法であって、前記対象に、前記ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の前記細胞表面上の少なくとも１つの共刺激分子の発現を増加するのに有効なＩＲＭに接触させられている単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の免疫学的に活性な部分を含む組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項６１】
前記単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞が、ＩＬ−２にも接触させられている、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞が、プロテインキナーゼＣ作用物質にも接触させられている、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
前記単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞が、ＩＬ−２およびプロテインキナーゼＣ作用物質にも接触させられている、請求項６０に記載の方法。
【請求項６４】
前記単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞が、前記ＣＤ５+リンパ腫に罹患している対象に由来する、請求項６０に記載の方法。
【請求項６５】
前記単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞が、ＣＬＬまたはＳＬＬに罹患している対象に由来する、請求項６０に記載の方法。
【請求項６６】
前記単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の免疫学的に活性な部分が、細胞全体を含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６７】
前記単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の免疫学的に活性な部分が、前記単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞からの細胞膜調製物またはタンパク質調製物を含む、請求項６０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
末梢Ｂ細胞新生物慢性リンパ性白血病／小リンパ球性リンパ腫は、最も一般的なリンパ性白血病の代表である。名前が示すように、提示は、白血病またはリンパ腫のいずれもあり得る。しかし、この新生物の２つの提示である、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）および小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）は、形態学的に、表現型的に、また遺伝子型的に区別がつかず、末梢血リンパ球増加症の程度が異なるに過ぎない。
【０００２】
ＣＬＬは、西洋世界における成人の最も一般的な白血病である。ＣＬＬの場合、末梢血は、細胞質の乏しい、小さい円形のリンパ球を含む。ＣＬＬの全例およびＳＬＬのほとんどの症例で、骨髄の関与が認められ、間質性浸潤または小リンパ球凝集の形をとる。ＣＬＬおよびＳＬＬにおける腫瘍細胞は、ｐａｎ  Ｂ細胞マーカーＣＤ２９およびＣＤ２０を発現する。加えて、ＣＤ５（正常なＢ細胞の小さいサブセット上のみに発現されるＴ細胞マーカー）は、腫瘍細胞上に存在する。ＣＬＬ細胞の免疫表現型は独特である。ＣＬＬ細胞は、Ｂリンパ球系マーカーＣＤ１９およびＴリンパ球マーカーＣＤ５を共発現する。ＣＬＬ細胞はまた、特徴的なレベルの免疫グロブリン受容体発現も示す。腫瘍細胞は一般的に、κ軽鎖またはλ軽鎖のいずれかが付いた、Ｉｇ重鎖の低レベルの表面発現も有する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
ＣＬＬは、Ｂリンパ球のクローン性悪性病変である。該疾患は、通常は無痛性であり、免疫不全で抗原刺激に十分に反応しない長寿小リンパ球の緩徐進行性蓄積を伴う。ＣＬＬは、従来の細胞障害性化学療法では治癒しない（チェソン（Ｃｈｅｓｏｎ）ら、Ｂｌｏｏｄ  １９９６年；８７：４９９０〜４９９７；およびキーティング（Ｋｅａｔｉｎｇ）ら、Ｂｌｏｏｄ  １９９３年；８１：２８７８〜２８８４）。ＣＬＬの特徴は、孤立性リンパ球増加症である。白血球数は、通常は２０，０００／μＬより多く、数十万まで著しく上昇していることもある。ＣＬＬの診断要件は、４０００／ｍｍ3より多い絶対リンパ球数である。ＣＬＬは、免疫抑制、骨髄不全、およびリンパ球の器官浸潤を臨床的に呈する。免疫不全は、異常Ｂ細胞による抗体産生不足にも関連がある。進行疾患を有する場合、ＣＬＬは、直接組織浸潤による損傷を引き起こす可能性がある。
【０００４】
場合により、患者は、皮膚リンパ腫沈着（皮膚上の紅斑性病変）を示すことがある。該病変は、小さい、円形Ｂ細胞の、非定型リンパ性皮膚浸潤を含むことがある。
【０００５】
ある種の小分子免疫応答変更因子（ＩＲＭ）は、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の表面上の分子の発現を増加するのに有用なこともあることが分かっている。したがって、ある種のＩＲＭを使用して、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫、たとえば、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、マントル細胞リンパ腫、または絨毛リンパ球を伴う脾リンパ腫等を治療することができる。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
したがって、本発明は、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫を治療する方法を提供する。概して、本方法は、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫の少なくとも１つの症状または臨床徴候を寛解させるのに有効な量でＩＲＭ化合物を対象に投与することを含む。幾つかの実施形態において、該ＩＲＭ化合物を投与することにより、末梢血リンパ球、リンパ節腫脹、または脾腫を少なくとも２ヶ月間、少なくとも５０％減少させることが可能である。他の実施形態では、ＩＲＭ化合物を投与することにより、進行性疾患の発生を阻害するかまたは防止することさえでき、ここで進行性疾患は、循環リンパ球の少なくとも５０％の増加、またはより活動的な組織像への進行である。さらに他の実施形態では、ＩＲＭ化合物を投与することにより、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫に随伴する結節性の、紅斑性病変を消散することができる。
【０００７】
別の態様において、本発明は、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の少なくとも１つの細胞表面分子の発現を増加する方法を提供する。概して、本方法は、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、該ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の少なくとも１つの細胞表面分子の発現を増加するのに有効な少なくとも１つのＩＲＭと接触させることを含む。幾つかの実施形態では、該細胞表面分子は、共刺激分子であってもよい。
【０００８】
別の態様において、本発明はまた、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、ＩＲＭに接触させていないＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞により産生されるレベルより高いサイトカインの産生を誘導するのに有効なＩＲＭと接触させることによってサイトカインを産生するために、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を刺激する方法も提供する。幾つかの実施形態では、該サイトカインは、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−α、ＧＭ−ＣＳＦ、またはそれらの組合せであってもよい。
【０００９】
別の態様において、本発明は、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫特異的細胞障害性Ｔ細胞の増殖を増進する方法を提供する。概して、本方法は、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の表面上の少なくとも１つの共刺激分子の発現を増加するのに有効なＩＲＭと接触させ、次いでＣＤ８+Ｔ細胞を該ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞と接触させ、それによってＣＤ８+Ｔ細胞を活性化することを含み；ここで、該活性化されるＴ細胞は、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫特異的細胞障害性Ｔ細胞であり、また、ＩＲＭに接触させていなかったＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞と接触させたＴ細胞と比較して高い増殖を示す。
【００１０】
幾つかの実施形態では、該ＣＤ８+Ｔ細胞は、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞特異的である。他の実施形態では、該ＣＤ８+Ｔ細胞は、未処理である。
【００１１】
幾つかの実施形態では、該活性化ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫特異的細胞障害性Ｔ細胞が、自己ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫特異的細胞障害性Ｔ細胞であるように、該ＩＲＭ化合物を、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫であると診断された対象に投与することも可能である。
【００１２】
幾つかの実施形態では、該ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、１つ以上のさらなる免疫調節剤、たとえば、ＩＬ−２および／またはプロテインキナーゼＣ作用物質等と、さらに接触させてもよい。
【００１３】
別の態様において、本発明はまた、細胞障害性Ｔ細胞によるＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の死滅を増進する方法も提供する。概して、本方法は、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、ＣＤ５+リンパ腫細胞の細胞表面上の少なくとも１つの共刺激分子の発現を増加するのに有効なＩＲＭと接触させ、次いでＣＤ８+Ｔ細胞を該ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞と接触させ、それによって該ＣＤ８+Ｔ細胞を活性化することを含み；ここで、該活性化されるＣＤ８+Ｔ細胞は、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫特異的細胞障害性Ｔ細胞であり、またＩＲＭと接触させていないＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞と接触させたＴ細胞と比較して、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の高い死滅を示す。
【００１４】
幾つかの実施形態では、該ＣＤ８+Ｔ細胞は、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞特異的である。他の実施形態では、該ＣＤ８+Ｔ細胞は未処理である。
【００１５】
幾つかの実施形態では、該活性化ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫特異的細胞障害性Ｔ細胞が、自己ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫特異的細胞障害性Ｔ細胞であるように、該ＩＲＭ化合物を、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫であると診断された対象に投与することも可能である。
【００１６】
幾つかの実施形態では、該ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、１つ以上のさらなる免疫調節剤、たとえば、ＩＬ−２および／またはプロテインキナーゼＣ作用物質等と、さらに接触させてもよい。
【００１７】
別の態様において、本発明はまた、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の少なくとも１つの細胞表面分子の発現を増加するのに有効なＩＲＭを対象に投与することを含む、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫に罹患している対象を治療する方法も提供する。
【００１８】
別の態様において、本発明はまた、単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞またはその免疫学的に活性な部分を含むワクチンも提供し、該単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞は、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の少なくとも１つの細胞表面分子の発現を増加するのに有効なＩＲＭに接触されている。ある実施形態では、該ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、１つ以上のさらなる免疫調節剤、たとえば、ＩＬ−２および／またはプロテインキナーゼＣ作用物質等と、さらに接触させてもよい。
【００１９】
別の態様において、本発明はまた、単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の表面上の少なくとも１つの分子の発現を増加するのに有効なＩＲＭと接触させることを含む、ワクチンを調製する方法も提供する。一部の実施形態では、単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、１つ以上のさらなる免疫調節剤、たとえば、ＩＬ−２またはプロテインキナーゼＣ作用物質等と接触させることをさらに含んでもよい。他の実施形態では、該単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞は、ＣＬＬまたはＳＬＬであると診断された対象に由来してもよい。
【００２０】
幾つかの実施形態では、該ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞は、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）細胞、小リンパ球性リンパ腫細胞（ＳＬＬ）、マントル細胞リンパ腫細胞、絨毛リンパ球を伴う脾リンパ腫、またはそれらの組合せであってもよい。
【００２１】
幾つかの実施形態では、該ＩＲＭは、ＴＬＲ７作用物質である。幾つかの実施形態では、該ＩＲＭは、ＴＬＲ８作用物質である。さらに他の実施形態では、該ＩＲＭ化合物は、ＴＬＲ７およびＴＬＲ８の両作用物質である。
【００２２】
幾つかの実施形態では、該ＩＲＭは、イミダゾキノリンアミン、テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、イミダゾピリジンアミン、１，２架橋イミダゾキノリンアミン、６，７縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン、イミダゾナフチリジンアミン、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン、オキサゾロキノリンアミン、チアゾロキノリンアミン、オキサゾロピリジンアミン、チアゾロピリジンアミン、オキサゾロナフチリジンアミン、またはチアゾロナフチリジンアミンであってもよい。ある特定の実施形態では、該ＩＲＭは、イミダゾキノリンアミン、たとえば、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン等である。代替実施形態では、該ＩＲＭは、テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、たとえば、４−アミノ−２−（エトキシメチル）−α，α−ジメチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール水和物等である。さらに他の実施形態では、該ＩＲＭは、スルホンアミド置換イミダゾキノリンアミン、たとえば、Ｎ−［４−（４−アミノ−２−エチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）ブチル］メタンスルホンアミド等である。
【００２３】
幾つかの実施形態では、発現が増加している少なくとも１つの細胞表面分子は、ＣＤ２０、ＣＤ２２、またはＣＤ２３であってもよく、また本方法は、高い発現を示す細胞表面分子を、標的として、有する治療薬を、対象に投与することをさらに含む。幾つかの実施形態では、２つ以上の細胞表面分子の発現が増加していてもよい。
【００２４】
幾つかの実施形態では、発現が増加している少なくとも１つの共刺激分子は、ＣＤ４０、ＣＤ５４、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８６、ＣＤ２５、またはＣＤ３８であってもよい。幾つかの実施形態では、２つ以上の共刺激分子の発現が増加していてもよい。
【００２５】
幾つかの実施形態では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、該ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞をＩＲＭと接触させてもよい。他の実施形態では、ｉｎ  ｖｉｖｏで、たとえば、対象の器官内、組織内、または血中等で、該ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞をＩＲＭと接触させてもよい。
【００２６】
本発明の様々な他の特徴および利点は、以下の詳細な説明、実施例、特許請求の範囲および添付図面を参照して、容易に明白になるはずである。明細書を通して方々に、例のリストを介して指針が提供されている。いずれの場合にも、列挙されているリストは、代表グループの役割を果たすに過ぎず、排他的リストと解釈すべきではない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
本発明は、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫、たとえば、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）等を治療する方法を提供する。多数の臨床観察から、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞は、Ｔ細胞介在性免疫認識の対象である可能性があることが示唆される（たとえば、リベラ（Ｒｉｂｅｒａ）ら、Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｌｌｓ  １９８７年；１２：４７１〜４８３；ジーグラー（Ｚｉｅｇｌｅｒ）−ハイトブロック（Ｈｅｉｔｂｒｏｃｋ）ら、Ｂｌｏｏｄ  １９８９年；７３：１４２６〜１４３０；ウィールダ（Ｗｉｅｒｄａ）ら、Ｂｌｏｏｄ  ２０００年；９６：２９１７〜２９２４；ジテルソン（Ｇｉｔｅｌｓｏｎ）ら、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００３年；９９：１６５６〜１６６５；およびパブレティック（Ｐａｖｌｅｔｉｃ）ら、Ｂｏｎｅ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ２０００年；２５：７１７〜７２２参照）が、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の免疫原性は弱いため、免疫学に基づいた治療方法の開発が制限され、したがって、疾患の進行の一因となる。
【００２８】
本発明は、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を免疫応答変更因子（ＩＲＭ）化合物と接触させることが、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫の治療に有用な可能性があることを、初めて実証する。ＩＲＭ化合物は、トール様受容体（ＴＬＲ）として知られる基本的免疫系機構を介して、ある種のサイトカイン類、ケモカイン類および共刺激分子の選択された生合成を誘導するように作用するようである。したがって、ある種のＩＲＭ化合物は、該免疫系のある特定の態様を選択的に誘導することができ、かつ／または該免疫系の他の態様を阻害することができる。特に、ＩＲＭ化合物は、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の細胞表面分子の発現を増加し、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の免疫原性を高め、またＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫を治療するための新たな免疫療法的手法を提供することが可能である。場合により、発現が増加している細胞表面分子は、共刺激分子であってもよい。共刺激分子の細胞表面発現の増加により、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞は、腫瘍反応性Ｔ細胞活性を開始および／または維持することができるコンピテントな抗原提示細胞（ＡＰＣ）になることが可能になる。
【００２９】
本書で使用されるとき、以下の用語は以下の意味を有するものとする：
【００３０】
「寛解させる」は、ある特定の病気に特有の症状または臨床徴候の、程度、重症度、頻度、および／または可能性のいずれかの低減を指す。
【００３１】
「ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞」は、ＣＤ１９およびＣＤ５の共発現を含む独特の免疫表現型を有する新生物細胞を指す。Ｂリンパ球系マーカーＣＤ１９を発現する他にも、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞はまた、一般的に正常Ｂ細胞の小さいサブセットのみに発現されるＴリンパ球マーカーＣＤ５も発現する。ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞は、たとえば、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）細胞、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）細胞、マントル細胞リンパ腫細胞、および絨毛リンパ球を伴う脾リンパ腫を包含する。幾つかの実施形態では、該ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞は、ＣＬＬ細胞またはＳＬＬ細胞である。ある具体的な実施形態において、該ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞は、ＣＬＬ細胞である。
【００３２】
「細胞表面分子」は、細胞の表面上に発現される分子を指し、また細胞系譜を決定するために使用したり、あるいは、ある細胞または細胞型を他の細胞または細胞型と区別するために使用したりすることが可能である。
【００３３】
「患者」または「対象」は、たとえば，ヒト、非ヒト霊長類、齧歯類、イヌ、ネコ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、またはウシ等の動物を含むが、その限りではない。
【００３４】
「徴候」または「臨床徴候」は、患者以外の者により確認されることができる、ある特定の状態に関する客観的身体所見を指す。
【００３５】
「症状」は、疾患または患者の状態の主観的証拠を指す。
【００３６】
特に明記されていない限り、不定冠詞（「ａ」、「ａｎ」）、定冠詞（「ｔｈｅ」）、および「少なくとも１つ」は、互換的に使用され、１つまたは２つ以上を意味する。
【００３７】
ある種のＩＲＭ化合物、たとえば、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８の作動物質等は、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の多数の細胞表面分子（たとえば、共刺激分子を含む）の発現を増加することができ、その結果、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞に対する、より強力な免疫応答を招く。したがって、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の細胞表面分子の発現を増加することを利用して、該疾患の進行を遅くしたり止めたりすることができる治療法を提供できる可能性がある。ある実施形態において、該治療方法は、場合によっては、該疾患を完全に回復、すなわち治癒するところまで、該疾患の経過を逆進させることが可能である。
【００３８】
治療的有用性に加えて、１つ以上の共刺激分子および／または他の細胞表面分子の発現が増加したＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞は、診断的または精査的有用性も有する。
【００３９】
未処理Ｔ細胞における細胞増殖およびサイトカイン産生の誘導には、２つのシグナルが必要である。第１のシグナルは外来抗原であり、これは抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面上の自己主要組織適合複合体（ＭＨＣ）により提供される。該抗原性ペプチド−ＭＨＣ複合体は、未処理Ｔ細胞表面上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）と相互に作用し、それによって免疫応答に抗原特異性を与える。第２のシグナルは、「共刺激」シグナルである。共刺激シグナルは、抗原非依存的であり、たとえば、Ｔ細胞生存、クローン増殖、サイトカイン分泌、およびエフェクター機能を促進する特異的受容体−リガンド相互作用を介して、ＡＰＣにより未処理Ｔ細胞に提供される。
【００４０】
両シグナルの存在下で、増殖性適応免疫応答が生じる可能性がある。しかし、該共刺激シグナルが存在しなければ、リンパ球は、抗原刺激に効果的に応答できない。適応免疫系のこのような不反応性は、免疫寛容を招く結果となる。
【００４１】
したがって、本書で使用されるとき、「共刺激分子」は、増殖性免疫応答を引き起こすために、ＭＨＣ  Ｉ分子の提示に加えて、発現を必要とするが、その発現は単独では増殖性免疫応答を引き起こすのに十分ではない、細胞表面分子のサブセットのメンバーを指す。共刺激分子の例は、Ｂ７ファミリーのメンバー（たとえば、Ｂ７−１（ＣＤ８０）、Ｂ７−２（ＣＤ８６）、ＩＣＯＳ−Ｌ（Ｂ７ＲＰ１）、およびＰＤＬ−１を含む）、Ｉｇスーパーファミリーの他の分子（たとえば、ＣＤ２およびＯＸ２を含む）、デスドメインを欠くＴＮＦ：ＴＮＦＲサブファミリーの分子（たとえば、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＣＤ２７、４−１ＢＢ、およびＣＤ３０）、および幾つかのインテグリン類（たとえば、ＶＬＡ−４、ＩＣＡＭ−１、およびＩＣＡＭ−３を含む）を含むが、その限りではない。
【００４２】
１つ以上の細胞表面分子の発現増加は、本書に記載の方法のいずれかを含む、多くの既知の方法を使用して決定することができる。たとえば、このような方法は、フローサイトメトリー、免疫組織化学、定量的ＲＴ−ＰＣＲ、およびノーザンブロット分析を含む逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を含むが、その限りではない．
【００４３】
幾つかの実施形態では、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を刺激して、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ５４、ＣＤ８０、ＣＤ８３、またはＣＤ８６の１つ以上の発現を増加することが可能である。
【００４４】
ある実施形態では、たとえば、該細胞表面分子に特異的に結合するモノクローナル抗体等の、治療薬の標的である細胞表面分子の発現を増加するために、該ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を刺激することが可能である。このような方法で、細胞表面分子発現の増加を、細胞表面分子を標的とする治療で利用することが可能である。たとえば、リツキシマブは、ＣＤ２０を標的とし、また非ホジキンリンパ腫の効果的な治療法であることが示されている、モノクローナル抗体である。リツキシマブは、ＣＤ２０を発現するＢ細胞に結合し、その結果、リツキシマブ標識細胞は、免疫系による除去に関する指標となる。このように、たとえば、（ａ）ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞上のＣＤ２０の発現を増加し、次いで（ｂ）リツキシマブの投与を含む治療方法により、リツキシマブがＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞に結合することを可能にし、その結果、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞は、免疫系による除去に関する指標となり、その結果、リツキシマブを、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫のための効果的な治療方法にする。ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞で、発現を増加させることが可能であり、また治療薬の標的の役割を果たすことが可能な、さらなる細胞表面分子としては、たとえば、ＣＤ２２およびＣＤ２３などが挙げられる。
【００４５】
幾つかの実施形態では、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、サイトカインを産生するために有効なＩＲＭと接触させることにより、ＩＲＭに接触されていないＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞により産生されるより多い量でサイトカインを産生するために、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を刺激することが可能である。幾つかの実施形態では、該ＩＲＭ化合物は、１つ以上のＴＬＲの作用物質、たとえば、ＴＬＲ７作用物質、ＴＬＲ８作用物質であってもよく、またはＴＬＲ７およびＴＬＲ８の両者の作用物質であってもよい。産生されるサイトカインは、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−α、ＧＭ−ＣＳＦ、およびそれらの組合せを包含することができるが、その限りではない。
【００４６】
幾つかの実施形態では、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、たとえば、細胞培養中で、ＩＲＭ化合物と接触させてもよい。代替実施形態では、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、ｉｎ  ｖｉｖｏでＩＲＭ化合物と接触させてもよい、すなわち、該ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞とＩＲＭ化合物は、器官内、組織内、または血中で、接触させてもよい。このような場合、たとえば、ＩＲＭ化合物を、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫であると診断された対象に投与することにより、該ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、対象内でＩＲＭ化合物と接触させることが可能である。該ＩＲＭを該対象に直接投与することにより、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、ＩＲＭと接触させた後、自己Ｔ細胞−すなわち、該対象自身のＴ細胞−を活性化させ、その結果、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞に対してＴ細胞依存性免疫応答を引き起こすことを可能にする。該対象自身のＴ細胞集団を利用してＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞に対する免疫応答を引き起こすことにより、異種生体材料を投与することを含む治療法に随伴するある種の危険性（たとえば、炎症、拒絶、等々）を低減する、または排除することさえできる可能性がある。
【００４７】
該ＩＲＭ化合物は、たとえば、非経口的、経皮的、鼻腔内、および経口的を含む、適当な方法で投与することが可能である。ＩＲＭ化合物の送達に適当な製剤は、詳細に後述する。
【００４８】
幾つかの実施形態では、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の細胞表面上の少なくとも１つの共刺激分子の発現を増加するのに有効なＩＲＭを、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫に罹患している対象に、臨床的に有効な量で投与することができる。本書で使用されるとき「臨床的に有効な量」は、臨床改善の１つ以上の徴候を示すのに有効な量である。臨床改善のこのような徴候は、医療行為または研究所での研究に適用される測定値を含むことができる。たとえば、チェソン（Ｃｈｅｓｏｎ）ら、国立癌研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）−慢性リンパ球性白血病のためのスポンサー付作業部会ガイドライン（ｓｐｏｎｓｏｒｅｄ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）：診断および治療のための改訂ガイドライン（ｒｅｖｉｓｅｄ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）。Ｂｌｏｏｄ．１９９６年；８７：４９９０〜４９９７を参照されたい。たとえば、臨床的に有効な量は、部分寛解（ＰＲ）を得るのに有効な量であってもよい。本書で使用されるとき、「部分寛解」は、少なくとも２ヶ月間、末梢血リンパ球、リンパ節腫脹、および／または脾腫の少なくとも約５０％減少である。臨床的に有効な量は、完全寛解（ＣＲ）を得るのに有効な量であってもよい。本書で使用されるとき、「完全寛解」は、検出可能な白血病またはリンパ腫細胞の欠如である。臨床的に有効な量は、進行性疾患（ＰＤ）を防止するのに有効な量であってもよい。本書で使用されるとき、「進行性疾患」は、既知の病理学的基準で測定されるとき、循環リンパ球の少なくとも約５０％増加、またはより高悪性度の組織像への進行である。臨床的に有効な量は、長期生存の可能性または程度を増大するのに有効な量であってもよい。あるいは、臨床的に有効な量は、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫に随伴する少なくとも１つの症状または臨床徴候を低減または寛解させる量であってもよい。たとえば、臨床的に有効な量は、皮膚リンパ腫沈着の重症度、程度、または数を低減するために十分な量であってもよい。
【００４９】
幾つかの実施形態では、１つ以上のＩＲＭを、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞と接触させる効果は、該ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、１つ以上のさらなる免疫調節剤とさらに接触させることによって高めることが可能である。このような実施形態では、該ＩＲＭおよび１つ以上のさらなる免疫調節剤をたとえば、治療組合せ等の、組合せと考えることが可能である。ある成分を、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞と接触させる生物学的効果を、少なくとも、別の成分を該ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞と接触させるまで持続させることができる方法で該成分が提供されるのであれば、このような組合せの成分は、互いに「組み合せて」送達されると言うことができる。したがって、成分は、別々の製剤で提供されても、異なる投与経路で送達されても、かつ／または異なる時に投与されても、互いに組み合わせて送達することが可能である。
【００５０】
適当な免疫調節剤は、たとえば、インターロイキン−２（「ＩＬ−２」）を含んでもよい。ＩＬ−２は、抗原刺激性Ｔリンパ球の増殖因子であり、抗原認識後のＴ細胞クローン増殖に関与する。ＩＬ−２は、多くの周知のソースのいずれからも得ることができる。たとえば、臨床品質のＩＬ−２は、たとえば、カリフォルニア州サンフランシスコのカイロン・コーポレーション（Ｃｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ．）から商業的に購入することができる。
【００５１】
幾つかの実施形態では、該ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、たとえば、細胞培養内で、ＩＬ−２と接触させることが可能である。代替実施形態では、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、ｉｎ  ｖｉｖｏでＩＬ−２と接触させることが可能である−すなわち、該ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞とＩＬ−２を、器官内、組織内、または血中で接触させることが可能である。このような場合、たとえば、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫に罹患している対象にＩＬ−２を投与することにより、該ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を対象内でＩＬ−２と接触させることが可能である。該ＩＬ−２は、たとえば、非経口的、経皮的、鼻腔内、および経口的を含む、任意の適当な方法で投与することが可能である。ＩＬ−２の送達に適当な製剤は、後述する。
【００５２】
いずれか１つの実施形態で使用されるＩＬ−２の正確な量は、ＩＬ−２の物理的性質および化学的性質、該ＩＬ−２と組み合せて提供されるＩＲＭまたはＩＲＭ類の物理的性質および化学的性質、所期の投与計画、対象の免疫系の状態（たとえば、抑制されている、低下している、刺激されている）、ＩＬ−２の投与方法、該ＩＬ−２と組み合せて、さらなる免疫調節剤が投与されるかどうか、および該製剤が投与される種を含むがその限りではない、当該技術分野で既知の因子によって変化するであろう。したがって、可能性のある全ての適用に有効なＩＬ−２の量となる量を全般的に述べることは実用的ではない。しかし、当業者は、このような因子を十分に考慮して適切な量を容易に決定することができる。たとえば、ＩＬ−２は、黒色腫および腎細胞癌の治療のためのＩＬ−２投与について、ローゼンバーグ（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ）らにより略述されているものと類似した手順に従って、対象に投与することが可能である。ローゼンバーグ（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ）ら、ＪＡＭＡ，１９９４年；２７１：９０７〜９１３。
【００５３】
もう１つの適当な免疫調節剤は、たとえば、プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）作用物質を包含することが可能である。ＰＫＣ作用物質の例は、ホルボールエステル類（トターマン（Ｔｏｔｔｅｒｍａｎ）ら、Ｎａｔｕｒｅ，１９８０年；２８８：１７６〜１７８）およびブリオスタチン−１（ドレクスラー（Ｄｒｅｘｌｅｒ）ら、Ｂｌｏｏｄ，１９８９年；７４：１７４７〜１７５７）を包含することが可能であるが、その限りではない。リンパ腫細胞表面上の分子の生理学的リガンドはまた、該細胞表面分子を介してシグナル形質導入を誘導することによってＰＫＣ作用物質の役割を果たし、ＰＫＣファミリーのメンバーのタンパク質の活性化をもたらすこともできる。たとえば、リンパ腫細胞表面上のある種の分子に対する抗体はまた、ＰＫＣ作用物質の役割を果たすこともできる。このような抗体は、たとえば、ＭＨＣクラスＩ分子に対する抗体および表面Ｉｇに対する抗体を含む。
【００５４】
幾つかの実施形態では、該ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、たとえば、細胞培養内で、ＰＫＣ作用物質と接触させることが可能である。代替実施形態では、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、ｉｎ  ｖｉｖｏでＰＫＣ作用物質と接触させることが可能である−すなわち、該ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞とＰＫＣ作用物質を、器官内、組織内、または血中で、接触させることが可能である。このような場合、たとえば、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫に罹患している対象にＰＫＣ作用物質を投与することにより、対象内で、該ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞をＰＫＣ作用物質と接触させることが可能である。該ＰＫＣ作用物質は、たとえば、非経口的、経皮的、鼻腔内、および経口的を含む、任意の適当な方法で投与することが可能である。ＰＫＣ作用物質の送達に適当な製剤は、後述する。
【００５５】
いずれか１つの実施形態で使用されるＰＫＣ作用物質の正確な量は、ＰＫＣ作用物質の物理的性質および化学的性質、該ＰＫＣ作用物質と組み合せて提供されるＩＲＭまたはＩＲＭ類の物理的性質および化学的性質、所期の投与計画、対象の免疫系の状態（たとえば、抑制されている、低下している、刺激されている）、ＰＫＣ作用物質の投与方法、該ＰＫＣ作用物質と組み合せて、さらなる免疫調節剤が投与されるかどうか、および該製剤が投与される種を含むがその限りではない、当該技術分野で既知の因子によって変化するであろう。したがって、可能性のある全ての適用に有効なＰＫＣ作用物質の量となる量を全般的に述べることは実用的ではない。しかし、当業者は、このような因子を十分に考慮して適切な量を容易に決定することができる。
【００５６】
ある実施形態では、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞、（ａ）少なくとも１つの共刺激分子の発現を増加するのに有効な１つ以上のＩＲＭ、（ｂ）ＩＬ−２、および（ｃ）ＰＫＣ作用物質と接触させることが可能である。ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、このようなＩＲＭ、ＩＬ−２、およびＰＫＣ作用物質の組合せと接触させるとき、該組合せの各成分は、該成分の全てを含む１つの製剤で提供することが可能である。あるいは、該組合せは、それぞれが、該組合せの成分を単独で、または他成分の一方または両方と一緒に、含んでもよい２つ以上の製剤で提供することも可能である。該組合せが複数の製剤で提供される場合、該様々な製剤は、類似した組成であっても異なる組成であってもよい。さらに、各製剤は、類似した剤形であっても異なる剤形であってもよく（たとえば、エアロゾル剤、ゲル剤、クリーム剤、液剤、等々）、また類似した送達経路で投与することも異なる送達経路で投与することも可能である（たとえば、注射、経皮的、静脈内、等々）。また、該組み合わせの該成分が、複数の製剤で提供されるのであれば、様々な成分を、任意の順序で、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞と接触させてもよい。
【００５７】
幾つかの実施形態では、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の細胞表面上の少なくとも１つの共刺激分子の発現を増加した結果は、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞特異的（以下、「リンパ腫細胞特異的」）細胞障害性Ｔ細胞（「ＣＴＬ」）の増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ−すなわち、ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）の増進を含む可能性がある。リンパ腫細胞特異的ＣＴＬの増殖は、リンパ腫細胞特異的ＣＤ８+Ｔ細胞を、共刺激分子の表面発現が増加したＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞と接触させたことに起因する可能性がある。ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の表面上の共刺激分子の発現は、たとえば、上述の方法の１つ以上を含む、適当な方法で増加することが可能である。
【００５８】
幾つかの実施形態では、該ＣＤ８+Ｔ細胞は、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞特異的である−すなわち、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞特異的抗原が予め提示されている−ＣＤ８+Ｔ細胞またはＣＤ８+Ｔ細胞の子孫である。他の実施形態では、該ＣＤ８+Ｔ細胞は未処理である−すなわち、抗原（ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫特異的またはそうでないもの）が予め提示されなかった−ＣＤ８+Ｔ細胞、またはＣＤ８+Ｔ細胞の子孫である。
【００５９】
少なくとも１つの共刺激分子の発現が増加したＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞との接触によって活性化されたリンパ腫細胞特異的ＣＴＬは、たとえば、１つ以上の共刺激分子の発現増加を示さないＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞との接触によって活性化されたリンパ腫細胞特異的ＣＴＬによって示されるものより高い増殖を示す可能性がある。
【００６０】
他の態様において、本発明はまた、ワクチン、ワクチンを製造する方法、およびワクチンを投与することにより対象を治療する方法も提供する。このようなワクチンは、単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞、またはその免疫学的に活性な部分を含み、該単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞は、該細胞表面上の少なくとも１つの共刺激分子の発現を増加するのに有効なＩＲＭに接触されている。また単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞を、ＩＬ−２、ＰＫＣ作用物質、またはＩＬ−２およびＰＫＣ作用物質の両者の組合せと接触させることも可能である。ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞の免疫学的に活性な部分は、単離されたＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞に由来する細胞膜調製物および／またはタンパク質調製物を包含することができるが、その限りではない。したがって、たとえば、膜調製物は、ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫細胞由来の細胞膜の一部、および、たとえば、その中に埋め込まれたタンパク質を含んでもよい。ワクチンは、細胞に基づく予防注射を調製するための様々な手順のいずれかに従って製造することができる。たとえば、黒色腫（たとえば、ウー（Ｗｕ）ら、Ｊ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ．２００１年１２月；２１（１２）：１１１７〜２７参照）、腎臓癌細胞（たとえば、フィーベグ（Ｖｉｅｗｅｇ）ら、Ｕｒｏｌ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．２００３年８月；３０（３）：６３３〜４３参照）または脳腫瘍（たとえば、フェチ（Ｆｅｃｃｉ）ら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｏｎｃｏｌ．２００３年８月〜９月；６４（１−２）：１６１〜７６参照）に対する細胞性ワクチンの調製に使用されるものと類似した方法を使用することが可能である。
【００６１】
ＩＲＭは、抗ウイルス活性および抗腫瘍活性を含むがその限りではない、強力な免疫調節活性を有する化合物を含む。あるＩＲＭは、サイトカイン類の産生および分泌を調節する。たとえば、あるＩＲＭ化合物は、たとえば、Ｉ型インターフェロン、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＭＩＰ−１、および／またはＭＣＰ−１等のサイトカイン類の産生および分泌を誘導する。別の例として、あるＩＲＭ化合物は、ある種のＴH２サイトカイン類、たとえばＩＬ−４およびＩＬ−５の、産生および分泌を阻害することができる。さらに、幾つかのＩＲＭ化合物は、ＩＬ−１およびＴＮＦを抑制すると言われる（米国特許第６，５１８，２６５号明細書）。
【００６２】
あるＩＲＭは、たとえば、米国特許第４，６８９，３３８号明細書；米国特許第４，９２９，６２４号明細書；米国特許第４，９８８，８１５号明細書；米国特許第５，０３７，９８６号明細書；米国特許第５，１７５，２９６号明細書；米国特許第５，２３８，９４４号明細書；米国特許第５，２６６，５７５号明細書；米国特許第５，２６８，３７６号明細書；米国特許第５，３４６，９０５号明細書；米国特許第５，３５２，７８４号明細書；米国特許第５，３６７，０７６号明細書；米国特許第５，３８９，６４０号明細書；米国特許第５，３９５，９３７号明細書；米国特許第５，４４６，１５３号明細書；米国特許第５，４８２，９３６号明細書；米国特許第５，６９３，８１１号明細書；米国特許第５，７４１，９０８号明細書；米国特許第５，７５６，７４７号明細書；米国特許第５，９３９，０９０号明細書；米国特許第６，０３９，９６９号明細書；米国特許第６，０８３，５０５号明細書；米国特許第６，１１０，９２９号明細書；米国特許第６，１９４，４２５号明細書；米国特許第６，２４５，７７６号明細書；米国特許第６，３３１，５３９号明細書；米国特許第６，３７６，６６９号明細書；米国特許第６，４５１，８１０号明細書；米国特許第６，５２５，０６４号明細書；米国特許第６，５４１，４８５号明細書；米国特許第６，５４５，０１６号明細書；米国特許第６，５４５，０１７号明細書；米国特許第６，５５８，９５１号明細書；米国特許第６，５７３，２７３号明細書；米国特許第６，６５６，９３８号明細書；米国特許第６，６６０，７３５号明細書；米国特許第６，６６０，７４７号明細書；米国特許第６，６６４，２６０号明細書；米国特許第６，６６４，２６４号明細書；米国特許第６，６６４，２６５号明細書；米国特許第６，６６７，３１２号明細書；米国特許第６，６７０，３７２号明細書；米国特許第６，６７７，３４７号明細書；米国特許第６，６７７，３４８号明細書；米国特許第６，６７７，３４９号明細書；米国特許第６，６８３，０８８号明細書；米国特許第６，７５６，３８２号明細書；欧州特許０  ３９４  ０２６；米国特許出願公開第２００２／００１６３３２号明細書；米国特許出願公開第２００２／００５５５１７号明細書；米国特許出願公開第２００２／０１１０８４０号明細書；米国特許出願公開第２００３／０１３３９１３号明細書；米国特許出願公開第２００３／０１９９５３８号明細書；および米国特許出願公開第２００４／００１４７７９号明細書；ならびに国際公開第ＷＯ  ０１／７４３４３号パンフレット；国際公開第ＷＯ  ０２／４６７４９号パンフレット／国際公開第ＷＯ  ０２／１０２３７７号パンフレット；国際公開第ＷＯ  ０３／０２０８８９号パンフレット；国際公開第ＷＯ  ０３／０４３５７２号パンフレット；国際公開第ＷＯ  ０３／０４５３９１号パンフレット；国際公開第ＷＯ  ０３／１０３５８４号パンフレット；および国際公開第ＷＯ  ０４／０５８７５９号パンフレットに開示されているもの等の、小さい有機分子（タンパク質、ペプチド、等々の大きい生体分子とは対照的に、たとえば、約１０００ダルトン未満、好ましくは約５００ダルトン未満の分子量）である。
【００６３】
小分子ＩＲＭのさらなる例は、ある種のプリン誘導体（米国特許第６，３７６，５０１号明細書、および米国特許第６，０２８，０７６号明細書に記載のもの等）、ある種のイミダゾキノリンアミド誘導体（米国特許第６，０６９，１４９号明細書に記載のもの等）、ある種のイミダゾピリジン誘導体（米国特許第６，５１８，２６５号明細書に記載のもの等）、ある種のベンズイミダゾール誘導体（米国特許第６，３８７，９３８号明細書に記載のもの等）、窒素含有複素５員環に縮合した４−アミノピリミジンのある誘導体（米国特許第６，３７６，５０１号明細書；米国特許第６，０２８，０７６号明細書およ米国特許第６，３２９，３８１号明細書；ならびに国際公開第ＷＯ  ０２／０８９０５号パンフレットに記載のアデニン誘導体等）、およびある種の３−β−Ｄ−リボフラノシルチアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン誘導体（米国特許出願公開第２００３／０１９９４６１号明細書に記載のもの等）を包含する。
【００６４】
他のＩＲＭは、オリゴヌクレオチド配列等の大きい生体分子を含む。幾つかのＩＲＭオリゴヌクレオチド配列は、シトシン−グアニンジヌクレオチド（ＣｐＧ）を含み、たとえば、米国特許第６，１９４，３８８号明細書；米国特許第６，２０７，６４６号明細書；米国特許第６，２３９，１１６号明細書；米国特許第６，３３９，０６８号明細書；および米国特許第６，４０６，７０５号に記載されている。一部のＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドは、たとえば、米国特許第６，４２６，３３４号明細書および米国特許第６，４７６，０００号明細書に記載のもの等の、合成の免疫調節性構造モチーフを含むことができる。他のＩＲＭヌクレオチド配列は、ＣｐＧ配列を欠き、たとえば、国際公開第ＷＯ  ００／７５３０４号パンフレットに記載されている。
【００６５】
他のＩＲＭは、リン酸アミノアルキルグルコサミニド（ＡＧＰ）等の生体分子を含み、また、たとえば、米国特許第６，１１３，９１８号明細書；米国特許第６，３０３，３４７号明細書；米国特許第６，５２５，０２８号明細書；および米国特許第６，６４９，１７２号明細書に記載されている。
【００６６】
本発明を実行するために、いずれの適当なＩＲＭ化合物を使用してもよい。特に指示がない限り、化合物への言及は、異性体（たとえば、ジアステレオマーまたは鏡像異性体）、塩、溶媒和物、多形体等々を含む、あらゆる薬学的に許容し得る形態の化合物を包含することができる。特に、化合物が光学活性である場合、該化合物への言及は、該化合物の鏡像異性体のそれぞれならびに該鏡像異性体のラセミ混合物を包含することができる。
【００６７】
幾つかの実施形態では、適当なＩＲＭ化合物は、たとえば、上述のものの１つ等の小分子ＩＲＭ化合物であってもよい。適当な小分子ＩＲＭ化合物は、窒素含有複素５員環に縮合した２−アミノピリジンを有するもの、たとえば、アミド置換イミダゾキノリンアミン類、スルホンアミド置換イミダゾキノリンアミン類、尿素置換イミダゾキノリンアミン類、アリールエーテル置換イミダゾキノリンアミン類、複素環式エーテル置換イミダゾキノリンアミン類、アミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン類、スルホンアミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン類、尿素置換イミダゾキノリンエーテル類、チオエーテル置換イミダゾキノリンアミン類、および６−、７−、８−、または９−アリールまたはヘテロアリール置換イミダゾキノリンアミン類を含むがその限りではないイミダゾキノリンアミン類；アミド置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン類、スルホンアミド置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン類、尿素置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン類、アリールエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン類、複素環式エーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン類、アミドエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン類、スルホンアミドエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン類、尿素置換テトラヒドロイミダゾキノリンエーテル類、およびチオエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミンを含むがその限りではないテトラヒドロイミダゾキノリンアミン類；アミド置換イミダゾピリジンアミン類、スルホンアミド置換イミダゾピリジンアミン類、尿素置換イミダゾピリジンアミン類、アリールエーテル置換イミダゾピリジンアミン類、複素環式エーテル置換イミダゾピリジンアミン類、アミドエーテル置換イミダゾピリジンアミン類、スルホンアミドエーテル置換イミダゾピリジンアミン類、尿素置換イミダゾピリジンエーテル類、およびチオエーテル置換イミダゾピリジンアミン類を含むがその限りではないイミダゾピリジンアミン類；１，２架橋イミダゾキノリンアミン類；６，７縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン類；イミダゾナフチリジンアミン類；テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン類；オキサゾロキノリンアミン類；チアゾロキノリンアミン類；オキサゾロピリジンアミン類；チアゾロピリジンアミン類；オキサゾロナフチリジンアミン類；チアゾロナフチリジンアミン類；およびピリジンアミン類、キノリンアミン類、テトラヒドロキノリンアミン類、ナフチリジンアミン類、またはテトラヒドロナフチリジンアミン類に縮合した１Ｈ−イミダゾダイマー等を包含する。
【００６８】
ある実施形態では、該ＩＲＭ化合物は、たとえば、４−アミノ−２−（エトキシメチル）−α，α−ジメチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール等の、テトラヒドロイミダゾキノリンアミンであってもよい。代替実施形態では、該ＩＲＭ化合物は、イミダゾキノリンアミンであってもよい。ある具体的な実施形態では、該ＩＲＭは、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミンであってもよい。他の実施形態では、該ＩＲＭ化合物は、たとえば、Ｎ−［４−（４−アミノ−２−エチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）ブチル］メタンスルホンアミド等の、スルホンアミド置換イミダゾキノリンアミンであってもよい。必要に応じて、ＩＲＭの様々な組合せを使用することができる。
【００６９】
該ＩＲＭ化合物−または、たとえば、ＩＲＭおよびＩＬ−２および／またはＰＫＣ作用物質等の組合せの各成分−は、対象への投与に適当な任意の製剤で提供することが可能である。製剤の適当なタイプは、たとえば、米国特許第５，７３６，５５３号明細書；米国特許第５，２３８，９４４号明細書；米国特許第５，９３９，０９０号明細書；米国特許第６，３６５，１６６号明細書；米国特許第６，２４５，７７６号明細書；米国特許第６，４８６，１８６号明細書；欧州特許ＥＰ  ０  ３９４  ０２６；および米国特許出願公開第２００３／０１９９５３８号に記載されている。該化合物は−ＩＲＭ化合物、ＩＬ−２、またはＰＫＣ作用物質にかかわらず−溶液、懸濁液、エマルジョン、または任意の形態の混合物を含むがその限りではない、適当な形態で提供することができる。該化合物は、任意の薬学的に許容し得る賦形剤、担体、または媒体を含む製剤で送達することが可能である。たとえば、該化合物は、局所投与に適当な製剤で提供することが可能である。たとえば、ある種のＩＲＭ化合物の、局所送達に適当なタイプの製剤は、たとえば、国際公開第ＷＯ  ０３／０４５３９１号パンフレットに記載されている。該製剤は、クリーム剤、軟膏剤、エアロゾル製剤、非エアロゾルスプレー剤、ゲル剤、ローション剤、錠剤、トローチ剤、エリキシル剤等々を含むがその限りではない任意の従来の剤形で送達することが可能である。該製剤は、アジュバント、皮膚浸透促進剤、着色料、香料、湿潤剤、増粘剤等々を含むがその限りではない、１つ以上の添加物をさらに含んでもよい。
【００７０】
本発明を実行するのに適当な製剤の組成は、ＩＲＭ化合物の物理的性質および化学的性質、担体の性質、所期の投与計画、対象の免疫系の状態（たとえば、抑制されている、低下している、刺激されている）、該ＩＲＭ化合物の投与方法、該ＩＲＭは１つ以上のさらなる薬剤と組み合せて投与されるかどうか、および該製剤が投与される種を含むがその限りではない、当該技術分野で既知の因子によって変化するであろう。したがって、可能性のある全ての適用および本発明の可能性のある全ての実施形態に有効な製剤の組成を全般的に述べることは実用的ではない。しかし、当業者は、このような因子を十分に考慮して適切な製剤を容易に決定することができる。
【００７１】
幾つかの実施形態では、本発明の方法は、たとえば、約０.０００１〜約１０％（特に指示がない限り、本書に提供される全てのパーセンテージは、製剤総量を基準にして、重量／重量である）の製剤で、ＩＲＭを対象に投与することを含むが、幾つかの実施形態では、該ＩＲＭ化合物は、この範囲外の濃度でＩＲＭ化合物を提供する製剤を使用して投与されることもある。ある実施形態では、本方法は、約０．０１〜約５％のＩＲＭ化合物を含む製剤、たとえば、約５％のＩＲＭ化合物を含む製剤を対象に投与することを含む。
【００７２】
本発明を実行するのに有効なＩＲＭ化合物の量は、ＩＲＭ化合物の物理的性質および化学的性質、担体の性質、所期の投与計画、対象の免疫系の状態（たとえば、抑制されている、低下している、刺激されている）、該ＩＲＭ化合物の投与方法、該ＩＲＭは１つ以上のさらなる薬剤と組み合せて投与されるかどうか、および該製剤が投与される種を含むがその限りではない、当該技術分野で既知の因子によって変化するであろう。したがって、可能性のある全ての適用および本発明の可能性のある全ての実施形態に有効なＩＲＭ化合物の量となる量を全般的に述べることは実用的ではない。しかし、当業者は、このような因子を十分に考慮して適切な量を容易に決定することができる。
【００７３】
幾つかの実施形態では、本発明の方法は、約１００ｎｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの用量を提供するのに十分なＩＲＭ化合物を、該対象に投与することを含むが、幾つかの実施形態では、本方法は、この範囲外の用量でＩＲＭ化合物を投与することにより実施することが可能である。これらの実施形態の幾つかでは、本方法は、約１０μｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの用量、たとえば、１００μｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇの用量を、提供するのに十分なＩＲＭ化合物を該対象に投与することを含む。
【００７４】
投与計画は、該ＩＲＭ化合物の物理的性質および化学的性質、担体の性質、投与されるＩＲＭの量、対象の免疫系の状態（たとえば、抑制されている、低下している、刺激されている）、ＩＲＭ化合物の投与方法、該ＩＲＭは１つ以上のさらなる薬剤と組み合せて投与されるかどうか、および該製剤が投与される種を含むがその限りではない、当該技術分野で既知の多くの因子に少なくともある程度左右される可能性がある。したがって、可能性のある全ての適用および本発明の可能性のある全ての実施形態に有効な投与計画を全般的に述べることは実用的ではない。しかし、当業者は、このような因子を十分に考慮して、適切な投与計画を容易に決定することができる。
【００７５】
本発明の幾つかの実施形態では、該ＩＲＭ化合物は、たとえば、１日に１回投与ないし多回投与で投与することが可能である。ある実施形態では、該ＩＲＭ化合物は、１週間に約３回ないし１日に約１回、投与することが可能である。ある特定の実施形態では、該ＩＲＭ化合物は１日１回投与される。
【実施例】
【００７６】
以下の実施例は、本発明の特徴、利点、および他の詳細をさらに説明するために選択されたに過ぎない。しかし、実施例はこの目的に役立つが、使用される個々の材料および量ならびに他の条件および詳細は、本発明の範囲を不当に限定するような状況で解釈すべきでないことは、明確に理解されよう。
【００７７】
実施例で使用した化合物を、表１に示す。
【００７８】
【表１】
2007504269.tif 000002
【００７９】
材料および方法
血液サンプル：ヘパリン処理血液（３０〜４０ｍＬ）を、同意するＣＬＬ患者（ＣＤ１９+ＣＤ５+ＩｇＭloリンパ球の持続的上昇により診断された（ローズマン（Ｒｏｚｍａｎ）およびモントセラト（Ｍｏｎｔｓｅｒｒａｔ）、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．１９９５年；３３３：１０５２〜１０５７））から採取した。全ての患者は、分析時に未処置であった。プロトコールは、適切な施設内審査委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄ）により承認された。
【００８０】
【表２】
2007504269.tif 000003
【００８１】
抗体：フィコエリトリン標識またはＦＩＴＣ標識したＣＤ８０（Ｂ７−１）、ＣＤ８６（Ｂ７−２）、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ−１）、ＣＤ８３、４−１ＢＢリガンド（４−１ＢＢＬ）、ＣＤ５、およびＣＤ１９抗体は、ＢＤファーミンゲン（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）（カリフォルニア州サンフランシスコ（Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ））から購入した。フィコエリトリン標識したＩＣＯＳ−ＬおよびＰＤＬ−１（Ｂ７−Ｈ１）抗体は、ｅバイオサイエンス（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）（カリフォルニア州サンディエゴ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ））から入手した。
【００８２】
材料準備および方法：ＰＤＢの原液（５ｍｇ／ｍＬ）は、ＤＭＳＯで作った。選択的ストレス活性化タンパク質キナーゼ（ＳＡＰＫ）のインヒビター（ｐ３８）（リー（Ｌｅｅ）ら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ．１９９９年；８２：３８９〜３９７）である、ＳＢ２０３５８０の原液（２５ｍｇ／ｍＬ）は、ＤＭＳＯで作った。ＩＲＭ１および陰性コントロール（Ｎｅｇ．）化合物は、３Ｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（ミネソタ州セントポール（Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ））により提供された。化合物は、ＡＩＭ−Ｖ媒体（ニューヨーク州グランドアイランドのギブコＢＲＬ（ＧｉｂｃｏＢＲＬ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓａｌａｎｄ，ＮＹ））（３３％ＤＭＳＯを含む）に１．３ｍｇ／ｍＬで溶解し、４℃で暗所に保存した。アルダラ（ＡＬＤＡＲＡ）として販売されている、ＩＲＭ２の５％クリームもまた、スリーエム・ファーマシューティカルズ（３Ｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）により提供された。
【００８３】
細胞精製：ＣＬＬ細胞およびＴ細胞は、ジテルソン（Ｇｉｔｅｌｓｏｎ）らによる記述（ジテルソン（Ｇｉｔｅｌｓｏｎ）ら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００３年；９９：１６５６〜１６６５）通りに、ネガティブ選択（ブリティッシュコロンビア州バンクーバーにあるステムセル・テクノロジーズのロゼットセップ（ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ，ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ））により鮮血から単離した。
【００８４】
ＣＬＬ細胞の活性化：精製ＣＬＬ細胞（１．５×１０6細胞／ｍＬ）は、６ウェルプレートまたは２４ウェルプレート（ニュージャージー州フランクリン・レイクにあるベクトン・ディッキンソン・ラブウェア（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｌａｂｗａｒｅ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅ，ＮＪ））内の無血清ＡＩＭ−Ｖ媒体に２−メルカプトエタノール（２−ＭＥ、５×１０-5Ｍ）（シグマ・ケミカル社（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．））を加えた中で、５％ＣＯ2中、３７℃で３〜４日間、培養した。ＣＬＬ細胞は、必要に応じて、陰性コントロール化合物（１μｇ／ｍＬ）、ＩＲＭ１（１μｇ／ｍＬ）、ＩＬ−２（５０００Ｕ／ｍＬ）、ＰＤＢ（１００ｎｇ／ｍＬ）、またはブリオスタチン（２０ｎｍｏｌ）を加えることにより活性化させた。該陰性コントロール化合物は、ＣＬＬ細胞に対して測定可能な影響を示さず、結果的に、ＡＩＭ−Ｖ媒体のみを実験の大半のコントロールとして使用した。
【００８５】
混合リンパ球応答（ＭＬＲ）：Ｔ細胞は、ＣＬＬ患者から単離し、ＡＩＭ−Ｖ媒体で５×１０5細胞／ｍＬに調整した。活性化ＣＬＬ細胞は、残存免疫調節剤を除去するために少なくとも４回洗浄し、放射線照射し（２５００ｃＧｙ）、５×１０5細胞／ｍＬ（または、より低濃度）でＡＩＭ−Ｖ中に懸濁した。次いで、レスポンダーと刺激物質を１：１（容量：容量）比で混合し、サイトカイン類または血清を追加せずに、９６ウェル丸底プレート（ニュージャージー州フランクリン・レイクにあるベクトン・ディッキンソン・ラブウェア（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｌａｂｗａｒｅ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅ，ＮＪ））内で培養した。増殖は、４〜６日後に比色分析法を使用して測定した（ジテルソン（Ｇｉｔｅｌｓｏｎ）ら、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００３年；９９：１６５６〜１６６５；およびアーメド（Ａｈｍｅｄ）ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９９４年；１７０：２１１〜２２４）。
【００８６】
フローサイトメトリー：細胞染色は、ジテルソン（Ｇｉｔｅｌｓｏｎ）らによる記述通りに実施した（ジテルソン（Ｇｉｔｅｌｓｏｎ）ら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００３年；９９：１６５６〜１６６５）。
【００８７】
サイトカイン測定：培養上清（４８時間後の活性化ＣＬＬ細胞に由来）中のサイトカインレベルは、ルミネックス１００システム（ＬＵＭＩＮＥＸ−１００  ＳＹＴＥＭ）という商品名で、テキサス州オースチンにあるルミネックス社（Ｌｕｍｉｎｅｘ  Ｃｏｒｐ．，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）から入手できる多重分析蛍光ビーズ分析システムで測定した。製造会社（ミネソタ州ミネアポリスにあるＲ＆Ｄシステムズ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ））の説明書に従って、５部分からなる、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−１０およびＴＮＦ−α測定用ヒト・サイトカインキットを使用した。個々のサイトカイン濃度は、バイオ・プレックス（ＢＩＯ−ＰＬＥＸ）２．０という商品名で、オンタリオ州ミシソーガにあるバイオラド（ＢｉｏＲａｄ，Ｍｉｓｓｉｓｓａｕｇａ，Ｏｎｔａｒｉｏ）から入手可能なソフトウェアを使用して、標準曲線から決定した。該アッセイは、各サイトカインについて、３０ｐｇ／ｍＬから１０００ｐｇ／ｍＬまでの間で直線状であった。
【００８８】
統計解析：スチューデントｔ解析（Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ−ｔｅｓｔ）を使用して、サンプル平均値間の差に関するｐ値を決定した。最良適合線は、最小二乗回帰で決定した。
【００８９】
実施例１：ＣＬＬ細胞による共刺激分子発現に対するＩＲＭ１の作用
表示された数の患者由来のＣＬＬ細胞を、ＩＲＭ１（１μｇ／ｍＬ）中で３〜４日間、培養し、次いで、図１Ａのｘ−軸上に表示されている（蛍光対数値の最初の１０より大きい強度の）共刺激分子の発現を分析した。各共刺激分子を発現した細胞のパーセンテージ、および発現の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を、フローサイトメトリーで測定した。次いで、これらの測定値と、活性化剤なしで培養したコントロール細胞のパーセンテージおよびＭＦＩとの比率から、「増加倍数」を算出した。これらの、共刺激分子発現の相対的増加の平均誤差および標準誤差を、図１Ａに示す。
【００９０】
ＩＲＭ１は、ＣＤ８０、ＣＤ８６、およびＣＤ５４発現に対して殊に強い作用を示し、ＩＲＭ１は、試験した全ての患者（ｎ=３１）に由来するＣＬＬ細胞上のＣＤ５４、ＣＤ８０、およびＣＤ８６の発現を増加した。ＣＤ８０に対する作用は、ＣＤ８６に対するよりも大きかった（図１、２を比較）。ＩＲＭ１はまた、ＣＤ８３、４−１ＢＢＬ、およびＰＤＬ−１の発現も増加したが、ＩＣＯＳ−Ｌ発現に対する作用は少なかった（図１Ａ）。
【００９１】
表示された数の患者由来のＣＬＬ細胞を、ＩＲＭ１、ＬＰＳ（１００μｇ／ｍＬ）、ポリ（Ｉ：Ｃ）（１００μｇ／ｍＬ）およびＩＦＮ−γ  ２Ｂ（５００Ｕ／ｍＬ）中で、４８時間培養した。図１Ａに関する記述の通りにＣＤ８０およびＣＤ８６の発現の相対的増加を算出し、図１Ｂに示す。
【００９２】
ＣＬＬ細胞は、同じ方法で、他のＴＬＲ作用物質による影響を受けなかった。ＴＬＲ２およびＴＬＲ４は、細菌のＬＰＳにより活性化されるが、ＴＬＲ３は、ウイルスの二本鎖ＲＮＡおよびｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）により活性化される（ゴードン（Ｇｏｒｄｏｎ）、Ｃｅｌｌ．２００２；１１１：９２７−９３０）。しかし、ＬＰＳまたはｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）は、ＣＬＬ細胞による共刺激分子発現にほとんど影響を及ぼさなかった（図１Ｂ）。ＩＲＭ１は、ＤＣまたは単球からのＩＦＮ−α放出を刺激することが分かっているＩＲＭ群の１つである（ギブソン（Ｇｉｂｓｏｎ）ら、Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００２年；２１８：７４〜８６）が、ＣＬＬ細胞による共刺激分子発現は、ＩＦＮ−γ  ２Ｂで直接刺激した後、有意に変化しなかったため、ＩＲＭ１の作用は、このサイトカインに直接媒介される可能性は低かった（図１Ｂ）。
【００９３】
実施例２：ＣＬＬ細胞による共刺激分子発現に対するＩＬ−２およびＩＲＭ１の作用
ＣＬＬ細胞を単離し、単独で、またはＩＬ−２（５０００Ｕ／ｍＬ）、ＩＲＭ１（１μｇ／ｍＬ）、またはＩＬ−２およびＩＲＭ１の両者と一緒に、３〜４日間培養した。次いで、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ５４、およびＣＤ８３の発現をフローサイトメトリーで測定した。図２Ａは、典型的な例を示す。上列および下列のドットプロット内の数値は、それぞれ、ＣＤ８０+ＣＬＬ細胞およびＣＤ８６+ＣＬＬ細胞のパーセンテージである。図２Ｂは、グラフ凡例に表示されている患者数に由来する、異なる共刺激分子を発現するＣＬＬ細胞のパーセンテージ（蛍光対数値の最初の１０より高い染色強度を有する細胞のパーセンテージで決定）のグラフ表示である。これらの各測定値の平均誤差および標準誤差をグラフに示す。ダブルヘッドの矢印の上方の数値は、サンプル平均値間の差のｐ値を表す。図２Ｃはグラフ凡例に表示されている患者数に由来する、ＣＬＬ細胞について決定された異なる共刺激分子発現の平均蛍光指数のグラフ表示である。これらの各測定値の平均誤差および標準誤差をグラフに示す。（１０で割った）ＣＤ５４発現のＭＦＩのみを示すが、本質的に全てのＣＬＬ細胞がこの分子を発現するためである。ダブルヘッドの矢印の上方の数値は、サンプル平均値間の差に関するｐ値を表す。
【００９４】
ＩＬ−２およびＩＲＭ１は共に、ＣＤ８０およびＣＤ８６を発現したＣＬＬ細胞のパーセンテージ、ならびにこれらの分子の発現の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を上昇させた（図２）。単剤として、ＩＲＭ１は、この点に関してＩＬ−２より強力であると思われた。共刺激分子発現に対するＩＬ−２およびＩＲＭ１の作用は、相加的であり（図２Ａ、右のドットプロットおよび図２Ｂ、Ｃ）、両者には、異なる機構が介在することが示唆される。図２Ｃに示す共刺激分子ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ５４、およびＣＤ８３のＭＦＩから、ＩＲＭ１は、ＣＬＬ細胞上の、これらの４つの共刺激分子全ての発現を増加したことが分かる。ＣＤ８０発現の強さは、ＩＬ−２と組み合せたＩＲＭ１により殊に上昇した。
【００９５】
４−１ＢＢＬおよびＰＤＬ−１の発現は、ＩＬ−２およびＩＲＭ１により幾らか増加したが、ＣＤ８０、ＣＤ８６、およびＣＤ５４ほど多くはなかった（図１Ａ）。ＩＣＯＳ−Ｌは、多くのＣＬＬ細胞上で見られたが、その発現は、ＩＬ−２およびＩＲＭ１介在性シグナルとは比較的無関係のようであった。
【００９６】
実施例３：共刺激表現型およびＴ細胞刺激能に対する、共刺激表現型ならびにＴ細胞ＩＬ−２活性化ＣＬＬ細胞およびＩＲＭ１活性化ＣＬＬ細胞のＰＫＣ活性化の作用
ＣＬＬ細胞は、個々の患者から精製し、単独で、あるいはＩＬ−２と、ＩＲＭ１と、ＩＬ−２およびＩＲＭ１と、ＰＤＢ、ＰＤＢおよびＩＬ−２と、ＰＤＢおよびＩＲＭ１と、またはＰＤＢ、ＩＬ−２およびＩＲＭ１と一緒に、培養した。３〜４日後、これらの細胞を収穫し、徹底的に洗浄し、放射線照射して（２５００ｃＧｙ）、５〜６日間培養した後、ＣＬＬ患者由来の同種Ｔ細胞または自己Ｔ細胞（ＣＬＬ細胞と同時に得て、混合リンパ球応答（Ｍｉｘｅｄ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ）（ＭＬＲ）アッセイ）に加えるまで培養中で休止させた）を刺激するために使用し、アラマーブルーを加えて、光学密度比色用マイクロプレート読取機で、５４０（還元状態）および５９５（酸化状態）の波長で増殖を測定した。これらの測定値間の差を、培養中の生存細胞数の測定値として使用した。結果を図３Ａに示す。各個の実験で最大の刺激を示したＴ細胞源の結果（非活性化ＣＬＬ細胞刺激因子により誘導された増殖の減算後）を使用して、ｘ−軸上に表示されている患者数から平均増殖および標準誤差を生成した。
【００９７】
図３Ｂは、ＣＤ８３発現とＴ細胞刺激能力との相関関係のグラフ表示である。ＣＬＬ細胞は、ＩＬ−２およびＩＲＭ１で４〜５日間処理した。次いで、ＣＤ８３を発現する細胞のパーセンテージ、およびＣＤ８３発現のＭＦＩをフローサイトメトリーで決定した。次いで活性化ＣＬＬ細胞を放射線照射し、ＭＬＲで自己Ｔ細胞または同種Ｔ細胞を刺激するために使用した。次いで、異なる患者１９例由来の、ＣＤ８３+ＣＬＬ細胞の初期パーセンテージ（左パネル）およびＣＤ８３発現のＭＦＩ（右パネル）を、ＭＬＲで測定された増殖と関連させた。最良直線は、切片１０．６９２および勾配０．０５９８を有し；付随するＰ値は０．０１５３である。
【００９８】
図４Ａは、単独で（左パネル）、またはＩＲＭ１、ＩＬ−２、およびＰＤＢと一緒に（右パネル）、３日間培養した代表的な患者由来のＣＬＬ細胞を表す。次いで、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ５４、およびＣＤ８６発現をフローサイトメトリーで決定した。ドットプロット内のパーセンテージは、ＣＤ８０（右上および左上の合計）（上段パネル）およびＣＤ８６（右上および左上の合計）（下段パネル）に関する。図４Ｂは、単独で、あるいは表の凡例に表示された患者数に由来する、ＰＤＢと、ＰＤＢおよびＩＬ−２と、ＰＤＢおよびＩＲＭ１と、またはＰＤＢ、ＩＬ−２およびＩＲＭ１と一緒に、培養した後、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ５４、およびＣＤ８６を発現するＣＬＬ細胞のパーセンテージ（および発現のＭＦＩ）の、フローサイトメトリー評価の結果の要約である。平均誤差および標準誤差を示す。本質的に全てのＣＬＬ細胞がこの分子を示すため、ＣＤ５４発現のＭＦＩのみを示す。図４Ｃは、ＩＣＯＳ−Ｌ、４−１ＢＢＬ、およびＰＤＬ−１発現の、同様のフローサイトメトリー評価の要約である。ダブルヘッドの矢印の上方の数値は、サンプル平均値間の差に関するｐ値である。
【００９９】
ホルボールジブチレート（ＰＤＢ）治療は、単独で、ＣＬＬ細胞の約９０％にＣＤ８３を発現させた（図４Ｂ、透明の棒）。ＰＤＢはまた、ＣＤ８０+ＣＬＬ細胞およびＣＤ８６+ＣＬＬ細胞の数（後者は前者よりも多く）、ならびに、４−１ＢＢＬおよびＰＤＬ−１の発現（図４Ｃ、透明の棒）も増加した。ＣＤ５４発現およびＩＣＯＳ−Ｌ発現は、ＰＤＢにより大きく影響を受けなかった（図４Ｂおよび図４Ｃ）。
【０１００】
ＰＤＢでＣＬＬ細胞を活性化している間にＩＬ−２を加えることにより、ＣＤ８０+細胞数およびＣＤ８０発現およびＣＤ５４発現のＭＦＩが主に増加した（図４Ｂ；水平線の棒）。ＣＬＬ細胞をＰＤＢおよびＩＲＭ１の両者で活性化したとき、僅かに高いパーセンテージのＣＤ８０+細胞が得られた（図４Ｂ；垂直線の棒）。ＩＬ−２をＩＲＭ１およびＰＤＢに加えることにより、ＣＤ８０の発現（殊にＣＤ８６と比較して（図４Ｂ））、ならびにＣＤ５４の発現が強く増加し、本質的に全てのＣＬＬ細胞に、ＣＤ８３hiＣＤ８０hiＣＤ８６hiＣＤ５４hi細胞表面表現型を獲得させた（図４Ａおよび図４Ｂ；斜線の棒）。
【０１０１】
図４に示す結果から、ＰＤＢおよびＩＲＭ１の組合せは、ＣＬＬ細胞のほぼ１００％にＣＤ８０、ＣＤ８６、およびＣＤ８３発現を獲得させることが分かった。ＩＬ−２を加えることにより、主としてＣＤ８０発現およびＣＤ５４発現の大きさに影響を及ぼした。ＩＬ−２の有無にかかわらず、ＰＤＢ、および／またはＩＲＭ１は、４−１ＢＢＬおよびＰＤＬ−１の発現を増加したが、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ５４、およびＣＤ８３と同程度までではなかった。
【０１０２】
ＰＤＢ、ＩＬ−２、およびＩＲＭ１で活性化されたＣＬＬ細胞による、この、共刺激分子の強い発現は、これらの細胞の、Ｔ細胞増殖を刺激する能力に反映された（図３Ａ）。ＰＤＢ（ＩＬ−２なし）で刺激されたＣＬＬ細胞は、Ｔ細胞増殖の弱い刺激因子であった（図３Ａ）。
【０１０３】
実施例４：ＩＲＭ１の存在下における、自己Ｔ細胞によるＣＬＬ細胞の除去
ＣＬＬ細胞およびＴ細胞は、ＣＬＬ患者から単離し、１０6細胞／ｍＬの濃度で懸濁し、１：１の比率で混合した。該細胞混合物を、単独で、あるいはＩＬ−２、ＩＬ−２およびＩＲＭ１、ブリオスタチン、ブリオスタチンおよびＩＬ−２、ブリオスタチンおよびＩＲＭ１、またはブリオスタチン、ＩＬ−２、およびＩＲＭ１の存在下で、培養した。図５Ａでは、５日後に、ＣＤ５+ＣＤ１９+腫瘍細胞（ドットプロットの右上方の数値で表示）およびＣＤ５+ＣＤ１９-Ｔ細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーで決定した。図５Ｂでは、これらのパーセンテージおよび生存細胞総数（血球計算器で、手動計算により決定した）を使用して、培養中に残存するＣＬＬ細胞の絶対数を算出した。
【０１０４】
ＩＲＭ１は、単独であれＩＬ−２および／またはブリオスタチンとの組合せであれ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、自己Ｔ細胞にＣＬＬ細胞を死滅させる。ＩＲＭ１、ＩＬ−２、およびブリオスタチンの組合せは、自己Ｔ細胞が５日でＣＬＬ細胞の１００％クリアランスを達成することを可能にした。
【０１０５】
実施例５：ＩＲＭ化合物を慢性リンパ性白血病に随伴するリンパ腫様皮膚沈着に投与することの臨床効果
７１才の男性コーカサス人は、フローサイトメトリーで決定された循環モノクローナルＣＤ１９+ＣＤ５+ＩｇＭloリンパ球数の持続的増加に基づいて、ライ病期分類ステージ０（Ｒａｉ  Ｓｔａｇｅ  ０）ＣＬＬであると診断された。ＣＤ３８は、循環ＣＬＬ細胞の４５％により発現された。ＩＲＭ２治療の開始時および終了時における白血球数は、それぞれ、３６×１０6細胞／ｍＬおよび４５×１０6細胞／ｍＬであった。その他の全身性化学療法、ステロイド類、または放射線は、それまでに投与されていなかった。
【０１０６】
さらに、該患者は、手および腕に再発性の結節性紅斑性病変がおよそ８年間あると報告した。該病変は通常、液体窒素治療で除去される。彼がＣＬＬであると診断された時、このような病変が数個、彼の上背部（図８Ａ）および両腕にあった。一病変を生検して、表皮向性のない、多くの小さい円形リンパ球からなる、び慢性非定型リンパ性皮膚浸潤物を含むことが判明した。パラフィン免疫ペルオキシダーゼ染色で、リンパ様濾液は、優性ＣＤ２０+表現型を有していた。パラフィン包埋組織の分子分析は、Ｂ細胞リンパ腫と一致する、モノクローナルＢ細胞群を示した。
【０１０７】
ＩＲＭ２の５％クリームを、１週間に３回、患部に塗布した。８週後、治療した病変のサイズは著明に変化していなかったが、退行性黒色腫沈着の周りに、暈状母斑を連想させる色素脱失領域が形成されていた。
【０１０８】
５％ＩＲＭ２クリームの投与を１日１回に増やした。６週間の治療後に該病変は消失し（図６Ｂ）、治療停止後３ヶ月までに再発していなかった。未処置のリンパ腫様病変も循環白血球数も、治療の間に著明に変化しなかった。
【０１０９】
ＣＬＬ細胞は、ジテルソン（Ｇｉｔｅｌｓｏｎ）ら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎ．Ｒｅｓ．９：１６５６−１６６５（２００３年）に記載されている通りに、ネガティブ選択（ブリティッシュコロンビア州バンクーバーにあるステムセル・テクノロジーズ社のロゼットセップ（ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ，ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ））により鮮血から単離した。精製ＣＬＬ細胞（１．５×１０6細胞／ｍＬ）は、無血清ＡＩＭ−Ｖ媒体（ギブコＢＲＬ（ＧｉｂｃｏＢＲＬ））中で３日間、培養した。ＩＲＭ１および陰性コントロール化合物は、１μｇ／ｍＬの最終濃度で使用した。
【０１１０】
細胞を、予め最適化した体積の、ＣＤ８０−ＰＥおよびＣＤ８３−ＦＩＴＣ抗体かまたはＣＤ５４−ＰＥおよびＣＤ８６−ＦＩＴＣ抗体と共に２０分間インキュベートし、洗浄し、次いでフローサイトメトリー分析に付した。陰性コントロールは、アイソタイプ適合イレレバント抗体（ｉｒｒｅｌｅｖａｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）であった。有核細胞の染色は、前方散乱特性および側方散乱特性に関するゲーティングによって決定した。ファクスキャン（ＦＡＣＳｃａｎ）フローサイトメーターでセルクエスト（ＣＥＬＬＱＵＥＳＴ）ソフトウェア（カリフォルニア州サンノゼにあるＢＤイムノサイトメトリー・システムズ（ＢＤ  Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ））を使用して、１万個の生存細胞を分析した。該フローサイトメーターは、スフェロパーティクルズ（ＳｐｈｅｒｏＰａｒｔｉｃｌｅｓ）（イリノイ州シカゴにあるスフェロテック社（Ｓｐｈｅｒｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ））を用いて標準化した。ＣＤ８０+、ＣＤ８６+、およびＣＤ８３+細胞のパーセンテージは、アイソタイプコントロール標識細胞との比較によって算出した。結果を図７に示す。
【０１１１】
実施例６：ＣＬＬ細胞による共刺激マーカー発現に対する、ＩＲＭ３作用の用量応答
異なる患者８例に由来するＣＬＬ細胞は、精製して、０．００１μｇ／ｍＬ、０．０１μｇ／ｍＬ、０．１μｇ／ｍＬ、または１．０μｇ／ｍＬのいずれかのＩＲＭ３と一緒に３日間、培養した。ＣＤ８０発現およびＣＤ８３発現は、上述の通り、フローサイトメトリーで決定した。ＣＤ８０発現およびＣＤ８３発現の増加は、ＩＲＭ３を加えなかったコントロールＣＬＬ培養から、それぞれ、ＣＤ８０発現およびＣＤ８３発現を減算することによって計算した。結果を図８に示す。
【０１１２】
実施例７：ＣＬＬ細胞表面分子のＩＲＭ３介在性変化
ＣＬＬ細胞は、患者から採取し、ＩＲＭ３（１μｇ／ｍＬ）と一緒に、およびＩＲＭ３なしで（コントロール）、２〜３日間培養した。ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８６、およびＣＤ３８を発現した細胞のパーセンテージは、フローサイトメトリーで決定した。ＣＤ５４発現およびＣＤ２５発現のＭＦＩは、実質的に全てのＣＬＬ細胞がこれらの分子を発現するため、決定した。発現のＭＦＩの変化、または特定の細胞表面分子を発現する細胞のパーセンテージは、コントロール培養から得られた値を、ＩＲＭ３と一緒に培養した細胞から得られた値から減算することによって決定した。結果を、図９に示す。
【０１１３】
実施例８：ＣＬＬ細胞によるＣＤ２０発現のＩＲＭ３介在性増加
ＣＬＬ細胞を精製して、ＩＲＭ３なし（コントロール）か、またはＩＲＭ３（１μｇ／ｍＬ）およびＩＬ−２（５０００Ｕ／ｍＬ）と一緒のいずれかで、培養した。４８時間後、ＣＤ２０発現のＭＦＩをフローサイトメトリーで決定した。結果を図１０に示す。
【０１１４】
本書に引用した、特許の全開示内容、特許書類および出版物は、それぞれが個々に組み込まれたかのように、その全体を参照により本書に援用する。闘争の場合には、定義を含む本明細書が、調整するであろう。本発明に対する様々な修飾および変更は、本発明の範囲および精神から逸脱することなく、当業者に明白になるであろう。説明に役立つ実施形態および実施例は、例として提供されているに過ぎず、本発明の限定を意図するものではない。本発明の範囲は、以下の通りに記載されている特許請求の範囲によってのみ限定される。
【図面の簡単な説明】
【０１１５】
【図１Ａ】ＩＲＭ化合物による、ＣＬＬ細胞上の共刺激分子発現の増強。
【図１Ｂ】ＩＲＭ化合物による、ＣＬＬ細胞上の共刺激分子発現の増強。
【図２Ａ】ＣＬＬ細胞による共刺激分子発現に対する、ＩＲＭ化合物（ＩＬ−２を含む、または含まない）の作用。
【図２Ｂ】ＣＬＬ細胞による共刺激分子発現に対する、ＩＲＭ化合物（ＩＬ−２を含む、または含まない）の作用。
【図２Ｃ】ＣＬＬ細胞による共刺激分子発現に対する、ＩＲＭ化合物（ＩＬ−２を含む、または含まない）の作用。
【図３Ａ】ＣＬＬ細胞が細胞障害性Ｔ細胞増殖を刺激する能力に対する、ＩＲＭ化合物の作用。
【図３Ｂ】ＣＬＬ細胞が細胞障害性Ｔ細胞増殖を刺激する能力に対する、ＩＲＭ化合物の作用。
【図４Ａ】ＣＬＬ細胞による共刺激分子発現に対する、ＩＲＭ化合物、ＩＬ−２、およびＰＫＣ作用物質の作用。
【図４Ｂ】ＣＬＬ細胞による共刺激分子発現に対する、ＩＲＭ化合物、ＩＬ−２、およびＰＫＣ作用物質の作用。
【図４Ｃ】ＣＬＬ細胞による共刺激分子発現に対する、ＩＲＭ化合物、ＩＬ−２、およびＰＫＣ作用物質の作用。
【図５Ａ】ＰＫＣ作用物質、ＩＬ−２、およびＩＲＭによる、自己ＣＬＬ細胞に対するＴ細胞細胞障害性の誘導。
【図５Ｂ】ＰＫＣ作用物質、ＩＬ−２、およびＩＲＭによる、自己ＣＬＬ細胞に対するＴ細胞細胞障害性の誘導。
【図６Ａ】ＩＲＭによる治療前（図６ａ）の、リンパ腫様皮膚沈着の写真。
【図６Ｂ】ＩＲＭによる治療後（図６ｂ）の、リンパ腫様皮膚沈着の写真。
【図７】ＣＬＬ細胞による共刺激分子発現に対する、ＩＲＭ１の作用。
【図８Ａ】ＣＬＬ細胞によるＣＤ８０およびＣＤ８３の発現に対する、ＩＲＭ３の作用。
【図８Ｂ】ＣＬＬ細胞によるＣＤ８０およびＣＤ８３の発現に対する、ＩＲＭ３の作用。
【図９】ＣＬＬ細胞における、細胞表面分子発現のＩＲＭ３介在性変化。
【図１０】ＩＲＭ３＋ＩＬ−２は、ＣＬＬ細胞上のＣＤ２０発現を増加する。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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