(57)【要約】液体試料を準備位置で準備し、例えばＨＰＬＣカラム内で処理する。試料を準備し、装置内を通る流速より実質的に小さい流速で装置へと輸送する。好ましくは、準備位置から、及び装置内において試料を駆動する、可変流速で作動する流体供給源によって、異なる流速を提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
液体試料の処理方法であって、
（Ａ）充填速度で、試料準備位置内に、及び試料準備位置から処理装置へと、試料を流すステップ、及び
（Ｂ）処理速度で、処理装置内に試料を流すステップ
を含み、充填速度が、試料準備位置内の試料の流れ及び試料準備位置から装置への試料の流れの少なくとも一部において、処理装置を通る試料の流れの少なくとも一部における処理速度よりも実質的に小さい、方法。
【請求項２】
充填速度が処理速度の０．７５倍未満である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
充填速度が処理速度の０．１から０．５倍である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
ステップ（Ａ）中の充填速度が実質的に一定であり、ステップ（Ｂ）中の処理速度が実質的に一定であり、充填速度から処理速度へと試料が流れる速度が上昇する速度変化期間があり、その長さが５秒未満、好ましくは１秒未満である、請求項１ないし３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
処理速度が１００マイクロリットル／分である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項６】
処理装置が、内径が２ｍｍ以下のμＬＣカラムを有している、請求項１ないし５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
試料の容積が、５００ｎＬ未満、好ましくは１００ｎＬ未満である、請求項１ないし６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
ステップ（Ａ）及び（Ｂ）において、試料は、可変流速作動流体供給部からの作動流体の圧力によって流れる、請求項１ないし７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
請求項８に記載の方法によって液体試料を処理する設備であって、
（１）液体試料準備位置、
（２）液体試料の処理装置、
（３）準備位置から装置への試料充填路、及び
（４）試料充填路に接続された可変流速作動流体供給部
を備えることにより、試料が充填速度で試料準備位置内を通過して試料準備位置から処理装置へと流れるように、且つ充填速度よりも実質的に大きな処理速度で処理装置内を流れるように、作動流体供給部を作動させることができる設備。
【請求項１０】
請求項１ないし８のいずれか１項に記載の方法によって処理できる液体試料の準備方法であって、
（ａ）作動流体入口及び試料出口を有する試料リザーバ内に試料組成物を配置するステップ、及び
（ｂ）制御された充填速度で作動流体を作動流体入口に供給することにより、制御された時間で、出口を通して試料組成物からなる試料を試料吐出するステップ
を含み、
（１）制御された充填速度が、５００ｎＬ／分未満、例えば１００ｎＬ／分未満であること、
（２）試料の容積が、１００ｎＬ未満、例えば５０ｎＬ未満であること、
（３）制御された時間が、１〜３０秒、特に２〜１０秒、例えば２〜５秒であること、及び
（４）試料リザーバが、作動時間が６０〜５００、例えば８０〜２００、例えば約１００ミリ秒であるバルブ内の、又はバルブに接続する試料ループであること
のうち少なくとも１つを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２００３年５月２０日出願の米国特許出願第１０／４４１６４０号明細書（整理番号１４３７７）の一部継続出願である。また、本出願は、同一出願人による同時係属出願である２００２年９月１７日出願の米国出願第１０／２４６２８４号、同一出願人による同時係属出願である２００２年５月２４日出願の米国出願第１０／１５５４７４号の一部継続出願の米国公開第２００３／００５２００７号明細書（整理番号１４０１７−３）、同一出願人による同時係属中である、２００１年８月２９日出願の米国出願第０９／９４２８８４号の一部継続出願である、米国公開第２００２／０１９５３４４４号明細書（整理番号１４０１７−２）明細書、２００１年６月１３日出願の米国仮出願第６０／２９８１４７号明細書(整理番号１４０１７)の優先権を主張する米国公開第２００２／０１８９９４７号明細書（整理番号１４０１７−１）にも関連している。上記の各出願の全開示内容を、参照により本出願に包含する。
【０００２】
背景技術
本発明は、システムを通って流れる液体試料の流速の制御に関する。
多くの工程では、液体試料を準備し、充填路により処理装置へ試料を流し、装置内に試料を流す。特に重要なこの種の装置は、液体クロマトグラフィ（ＬＣ）カラムであり、これは、混合物の成分の分離、同定、精製及び定量に広く用いられている。この種のさらに別の装置には、検出器及び反応チャンバが含まれる。前記工程においては、液体試料の容積を減少させることによって、重要な潜在的利益が得られる。例えば、高速ＬＣ（ＨＰＬＣ）では、通常、直径２．０から１０ｍｍ、例えば約４．６ｍｍのカラムが用いられ、一方、マイクロカラムＬＣ（μＬＣ）では、通常、直径２．０ｍｍ以下のカラム及び容積５００ｎＬ未満の試料が用いられる。しかし、試料容積を減少させると、試料の容積を正確に制御し、試料の望ましい正方形パルス形状を得ることがますます難しくなる。したがって、試料を準備して、従来のＨＰＬＣカラムへと輸送するためのシステムは、μＬＣシステムでの使用には十分でない。これまで、μＬＣシステムのための注入バルブ及び方法を開発する試みが行われてきた。例えば、Vissersら、J. of Chrom A、746、1頁（1996）、Bakalyarら、J. Chrom. A、762、167頁、（1997）及びFosterら、J. Chrom. A、869、231頁（2000）、並びに、VICI Valco Instruments、Rheodyne及びUpchurch Scientificにより市販されているバルブを参照されたい。このバルブの設計は、外部試料ループと内部試料ループの両方を含む。ロータに設けられた溝がループとして機能する内部試料ループを有するバルブを用いることによって、一般に１００ｎＬ未満の注入容積が達成される。さらに大きな容積は、内部ループ又はバルブポートと接続された外部ループによって達成できる。
【０００３】
発明の概要
液体試料を処理するための装置を、満足のいく時間で満足のいく結果が得られるように選択された流速で作動させ、液体試料を従来のように準備して、同じ又はより大きな流速で試料準備位置から装置へと輸送する。本発明によれば、試料を準備し、試料が装置を通って流れる流速よりも実質的に小さな流速で装置へと運ぶと、改善された結果が得られることが分かった。このような結果の改善は、特に、試料を試料準備位置で準備し、そこから吐出する際の試料の分散を減少させたことによるものと考えられる。流速が小さいことにより、同じように準備された複数の試料の均一性も向上させることができる。
【０００４】
第１の好ましい態様では、本発明は液体試料の処理方法を提供し、本方法は、
（Ａ）充填速度で、試料を試料準備位置から処理装置へと流し、好ましくは、試料を試料準備位置内でも流すこと、及び
（Ｂ）処理速度で、処理装置内に試料を流すこと
を含み、試料準備位置内での流れ及び／又は試料準備位置から装置への試料の流れの少なくとも一部における前記充填速度は、処理装置内の試料の流れの少なくとも一部における処理速度より実質的に小さく、好ましくは処理速度の０．７５倍、例えば０．０１から０．７５倍、特に０．１から０．７５倍より小さい。
【０００５】
第２の好ましい態様では、本発明は液体試料を処理するための設備を提供し、本装置は、
（１）液体試料準備位置、
（２）液体試料処理装置、
（３）準備位置から装置への試料充填路、及び
（４）試料準備位置に接続された流速が可変の作動流体供給部
を有し、作動流体供給部は、試料準備位置内、及び試料準備位置から処理装置においては充填速度で、且つ充填速度よりも実質的に大きな処理速度で処理装置内を試料が流れるように作動させることができる。
【０００６】
第３の好ましい態様では、本発明は液体試料の準備方法を提供し、本方法は、
（Ａ）作動流体入口及び試料出口を有する試料リザーバ内に試料組成物を配置すること、及び
（Ｂ）制御された充填速度で作動流体入口に作動流体を供給することにより、試料組成物からなる試料を、制御された時間で試料出口から吐出すること
を含み、
（１）制御された充填速度が５００ｎＬ／分未満、例えば１００ｎＬ／分未満であること、
（２）試料の容積が１００ｎＬ未満、例えば５０ｎＬ未満であること、
（３）制御された時間が、１〜３０秒、特に２〜１０秒、例えば２〜５秒であること、及び
（４）試料リザーバが、作動時間が６０〜５００、例えば８０〜２００、例えば約１００ミリ秒であるバルブ内に設けられているか、又はそのバルブに接続された試料ループであること
のうち少なくとも１つを特徴とする。
【０００７】
本発明を添付図面において説明する。これらの図面は概略的なものであり、その縮尺比は正確なものではない。
【０００８】
発明の詳細な説明
上記の発明の概要、発明の詳細な説明、実施例及び特許請求の範囲、ならびに添付図面において、本発明の特定の特徴について説明する。このような特徴は、例えば、構成要素、要素、装置、設備、システム、ステップ及び実施形態を含む。本明細書における発明の開示は、このような特定の特徴の全ての可能な組合せを含むと理解されたい。例えば、１つの特定の特徴が、特定の実施形態、特定の図面又は特定の請求項と関連して開示されている場合、その特徴は、可能な範囲内で、別の特定の実施形態、図面及び請求項に関連して、並びに本発明で一般的に、使用することもできる。本出願に係る発明は、ここで具体的に記述されないが、ここに具体的に記述された特徴と同一、同等又は類似の機能を提供する特徴を使用することを含む。
【０００９】
本明細書において使用する、「有する」、「備える」、及び「含む」という表現、並びにこれと文法的に同等の表現は、別の特徴が任意に存在するということを意味する。例えば、構成要素Ａ、Ｂ及びＣを「有する」設備は、構成要素Ａ、Ｂ及びＣのみを含んでいるか、又は構成要素Ａ、Ｂ及びＣ以外に１つ以上の別の要素を含んでいる。２つ以上の規定されたステップを含む方法を説明する際、文脈上別の意味に解釈すべき場合を除き、それらの規定されたステップは任意の順序で又は同時に行うことができ、さらにこの方法は、規定された任意のステップの前、規定された２つのステップの間、又は規定された全てのステップの後に行われる１つ以上の別のステップを含むことが可能である。また、本明細書において数の前に「少なくとも」という語を使用する場合、その数字で始まる範囲（規定される変数に応じて、上限を有する場合と有さない場合がある）の始点を意味する。例えば、「少なくとも１」は、１又は１より大きいことを意味し、「少なくとも８０％」は、８０％又は８０％より大きいことを意味する。本明細書で、範囲が、「（第１の数）から（第２の数）」又は「（第１の数）〜（第２の数）」で示されている場合、これは、この範囲の下限が第１の数であり、上限が第２の数であることを意味する。例えば、「８から２０個の炭素原子」又は「８〜２０個の炭素原子」は、下限が炭素原子８個であり、上限が炭素原子２０個である範囲を意味する。本明細書中に示される数字は、その内容及び表現に適する許容範囲で解釈されるべきである。「複数の」及び「複数」という語は、２つ以上を意味するために使用される。
【００１０】
本明細書で「１つの」又は「その」特徴と記述する場合、或いは特に数を示さずに記述する場合、文脈上別の意味に解釈すべき場合を除いて、そのような特徴が１又は複数あり得ると理解されたい。本明細書で第１の特徴及び／又は第２の特徴と記述する場合、文脈上別の意味に解釈すべき場合を除いて、このような表現は、これらの特徴を規定するために便宜上使用されるものであり、これらの特徴のいずれか又は両方が存在しうること、及び両方の特徴が存在する場合には、それらの特徴が同じでも異なってもよいことを意味する。
【００１１】
２つ以上の構成要素（又は部品又は部分等）について記述する場合、文脈上別の意味に解釈すべき場合を除き、その構成要素は、互いに分離していてもよいし、単一構造の統合された部品であってもよいし、２つ以上の特定の構成要素として機能する単一の構成要素であってもよい。
【００１２】
試料
本発明では、あらゆる液体試料を使用することができる。しかし、試料が、以下の特徴の少なくとも１つを有している場合、本発明の利点が最も明らかとなる。
（１）試料が、処理装置中で分離され、及び／又は分析され、及び／又は反応する１つ以上の要素（既知又は未知）を含む。
（２）試料の容積が、５００ｎＬ未満、例えば１００ｎＬ未満、５０ｎＬ未満又は１０ｎＬ未満、例えば１．２〜４３ｎＬ、例えば２０ｎＬである。
（３）試料は、ほぼ理想的な正方形パルスを示す試料である。
（４）試料に対し、ゲルろ過クロマトグラフィ及び別の定組成分離を含め、わずかしか保持されない成分によるＨＰＬＣ分離を行う。
【００１３】
液体試料は、試料源から任意の方法で準備することができる。このための多くの方法が知られている。これら多くの公知の方法では、試料ループ又は別の試料リザーバを試料源で充填し、所望の量（リザーバの容量の一部でも全部でもよい）の試料をリザーバから吐出する。例えば、シリンジを用いて試料をリザーバ内に注入することによって、又はリザーバ内へと試料を吸引する（例えば真空にするためのシリンジを用いる）ことによって、又は試料を（例えばオンラインのモニタリングシステムの一部として）リザーバ内にポンピングすることによって、試料をリザーバ内に導入することができる。
【００１４】
リザーバは、完全に充填することもできるし、試料源の既知の容積で部分的に充填することもできる。リザーバを完全に充填する場合、好ましくは、試料源の一部が無駄になるまで充填を行い、これによりリザーバを確実に一杯にする。リザーバを部分的に充填する場合、試料がリザーバの縁まで到達しないように試料源から既知の容積の試料で充填するのが好ましい。特定の方法は、内部試料ループ及び外部試料ループを有するバルブの使用を含む。ロータに設けられた溝がループとして機能するバルブは、１００ｎＬ未満の容積の試料を準備するために特に有用である。このようなバルブとしては、例えば、Rheodyne、Valco Instruments及びUpchurch Scientificより入手可能なバルブ、及び米国特許第６２９０９０９号明細書及び米国特許公開第２００２／０１９４９０９号明細書に記載のバルブが挙げられる。これらの明細書の開示内容は参照により本出願に組み込まれる。
【００１５】
試料は、好ましくは作動流体の圧力によって試料リザーバから駆動され、この作動流体は、所望の容積の試料を吐出するのに所定の時間に亘ってリザーバを通して導かれる。このような規定の時間に亘る吐出（移動注入、一時的注入又はタイムスライス注入とも呼ばれる）は、例えば空圧式又は電子式に作動するバルブを用いて行うことができる。リザーバが、試料源からの既知容積の試料で部分的に充填された場合、通常、全試料が吐出される（試料の両端部ではいくらかの作動流体が共に吐出される）。リザーバが完全に充填されている場合、通常、吐出される試料の容積はリザーバの容積より小さい。
【００１６】
作動流体
試料は、好ましくは、試料後方の作動流体の圧力によって、試料準備位置内、試料準備位置から処理装置へ、さらに処理装置内で駆動される。したがって、作動流体は、この作動流体が通過する設備の様々な部品に不都合な影響を与えない流体である。よって、処理装置がＬＣカラムである場合、作動流体はＬＣシステム内において移動相である。
【００１７】
作動流体は、単一の化合物又は複数の化合物の混合物であってよく、同じ又は異なる作動流体を供給する単一又は複数の供給源から供給することができる。複数の供給源がある場合、試料と接触する前にその出力の全てを混合することができる。別の態様では、１つ以上の供給源からの作動流体を使用して、充填速度で試料を吐出することができ、さらに、１つ以上の別の供給源からの作動流体を使用して、処理速度で試料を駆動することができる。異なる供給源からの作動流体の混合は、拡散により、或いは受動的又は能動的な装置によって行うことができる。
【００１８】
作動流体を供給するために、１つ以上の可変流速源を使用することが好ましい。好ましくは、流速の供給は連続的に可変であり、１から１０００００ｎＬ／分の流速を５０００ｐｓｉ（ｃｍ２当たり３５０ｋｇ）まで、又はそれより高い背圧に提供することができ、その応答時間は秒のオーダーである。このような供給源には多くのものが知られており、それらは例えば、直接動電式ポンプ、動電式流速制御装置、液圧式増幅器付きを備えるか又は備えない電空式ポンプ、ならびに機械式に作動可能なポンプである。例えば米国特許第５９４２０９３号明細書を参照することができ、この文献を参照により本出願に組み込む。特に、低い流速では、能動的な流速フィードバック制御がない場合、送りねじポンプ及びそれに類似の容積形ポンプでは十分ではないだろう。供給源が１以上存在する場合、それら供給源は同一でも異なっていてもよい。
【００１９】
所望の流速を確実に維持するために、作動流体、例えば組成物、温度、圧力及び混合比についての情報を、流速計、熱電対等によって得ることができ、可変速度作動流体供給源を調節する制御装置に伝達することができる。このようにして、逆止弁の漏れ、ポンプシール部の漏れ、機械的シールの変形、構成要素の熱膨張及び作動流体の圧縮のような変数を考慮に入れることができる。適切な制御装置、流速計、熱電対等は周知である。制御装置は、例えば、ＰＩＤサーボループ制御装置とすることができ、別個のアナログ及び／又はデジタル回路、専用のマイクロプロセッサ又はプログラム制御されたコンピュータを含むことができる。流速計は、例えば、Enokssonら、J. MEMS、6、119〜125（1997）、米国特許第６３８６０５０号明細書、又はCarvalhoら、Appl. Opt.、33、6073〜7（1994）に開示されているものが挙げられ、これらの文献の開示内容を参照により本出願に組み込む。流速計は、好ましくは、全ての望ましい流速（例えば１０から１０００００ｎＬ／分）において連続的な信号を提供し、その信号バンド幅は１Ｈｚより大きく、好ましくは１０Ｈｚより大きい。好ましい流速計は毛細管を有し、それを横切る圧力降下が、望ましい流速での入力圧力の少なくとも５％であり、さらに、毛細管を横切る圧力降下を測定する少なくとも１つの圧力センサ（好ましくは、容積１００００ｎＬ未満の圧力変換器）を有している。
【００２０】
処理装置
試料は、任意の装置で処理することができる。しかし、装置が、内径２ｍｍ未満の導管、例えばμＬＣカラムを有している場合、本発明の利点が最も明らかとなる。
【００２１】
流速
ここでは、試料が、試料準備位置内を通って流れる速度、及びこの試料準備位置から処理装置へと流れる速度を充填速度と呼ぶ。また、試料が処理装置を通って流れる速度を処理速度と呼ぶ。
【００２２】
試料が試料準備位置内を移動し、（例えば試料ループ及びそれに接続するバルブを通って）試料準備位置から出て行く際の充填速度が、それに続いて試料が装置へ輸送される間の充填速度が与えるよりも大きな影響を試料の分散に与える場合が多いことが分かっている。このことは、準備位置における試料の流路が比較的複雑であることに起因しうる。したがって、充填速度は、少なくとも試料が試料準備位置を出発するまでは、比較的小さいことが望ましい。その時間は、例えば０．５から３０秒の時間とすることができる。最適な結果を得るために、試料が処理装置に流入する直前まで、比較的小さな充填速度が維持されることが望ましい。その時間は、例えばさらに０．５から３０秒とすることができる。
【００２３】
したがって、試料が試料準備位置内を通過して試料準備位置から装置へと流れる時間の少なくとも第１の部分（例えば少なくとも始めの５０％）では、充填速度は、試料が処理装置内を通って流れる時間の少なくとも一部（例えば少なくとも５０％）における処理速度の、０．７５倍以下、例えば０．００５から０．７５倍であり、好ましくは０．０１から０．７５倍、例えば０．１から０．７５倍である。多くの場合、充填速度は、処理速度の０．０５から０．７５倍、好ましくは０．１から０．５倍である。充填速度及び処理速度の少なくとも一方が実質的に一定であることが好ましいが、必須ではない。
【００２４】
比較的小さい速度から処理速度にほぼ等しい（５％以内）速度へと充填速度を上昇させるのにかかる時間は、好ましくは５秒未満、特に１秒未満である。流速の変化は、漸次的に又は段階的に行うことができる。充填速度から処理速度への変化は、時限式に、又は例えば光学的、電子的もしくは電気化学的センサによって引き起こすことができる。
【００２５】
処理装置、例えば内径２ｍｍ未満の導管を有する装置内では、処理速度は通常１０００００ｎＬ／分未満である。例えば、ＨＰＬＣシステムでは、充填速度は通常５０〜５００ｎＬ／分、例えば１００ｎＬ／分であり、処理速度は通常１０００から３００００ｎＬ／分、例えば１０００から１５０００又は３０００から４０００ｎＬ／分である。例として、内径２００〜４００ミクロンの導管を有する処理装置では、充填速度は５００〜４０００ｎＬ／分であり、処理速度は４０００〜３００００ｎＬ／分である。内径５０〜２００ミクロンの導管を有する処理装置では、充填速度は２５〜５００ｎＬ／分であり、処理速度は１００〜４０００ｎＬ／分である。
【００２６】
図１〜３に、本発明の一実施態様を示す。第１及び第２の可変流速作動流体供給源２０Ａ及び２０Ｂはそれぞれ、流速計２４Ａ及び２４Ｂによって測定される流速で作動流体を供給する。回転弁１２は、６つの外部ポート１２Ａ〜１２Ｆを有している。作動流体供給源の出力は結合してポート１２Ａに供給する。ポート１２Ｂは、充填導管１８１を介してμＬＣカラム１８に接続されており、カラム１８の出力は検出器２６へ流入する。ポート１２Ｃ及び１２Ｆは試料ループ３０に接続されており、その試料ループ３０は、図２及び図３に示すようにバルブの内部又はバルブの外部にある。ポート１２Ｄは、廃液ラインに接続されている。ポート１２Ｅは、試料源２８に接続されている。制御装置２２は、流速計からの入力を用いて、バルブ１２、及び供給源２０Ａ及び２０Ｂの運転を制御し、これにより、後述するように、設備は所望のプログラムを操作する。
【００２７】
バルブ１２は、試料注入位置（図２）又は試料充填位置（図３）をとることができる。注入位置では、充填導管１８１内に予め充填された試料がカラム１８内に注入される。よって、図２に示すように、
（ｉ）ポート１２Ａ及び１２Ｂが接続され、混合された作動流体が、充填導管１８１内に既に存在する試料を駆動してカラム１８及び検出器２６を通過させ、試料が処理速度で流れ、
（ｉｉ）ポート１２Ｅと１２Ｆ、及びポート１２Ｃと１２Ｄが接続することにより、試料ループ３０が試料源２８からの試料で少なくとも部分的に充填される。
充填位置では、図３に示すように、ポート１２Ａと１２Ｆとが接続され、ポート１２Ｃと１２Ｂとが接続され、ポート１２Ｄ及び１２Ｅが隔離されているので、混合された作動流体が、充填速度で、試料ループからの試料を充填導管１８１内に充填する。
【実施例】
【００２８】
実施例１
本実施例では３種類で一組の実験を行い、同一の試料を、２０ｎＬの内部試料ループを有するバルブから、それぞれ一定の流速３０００、１３００及び５４０ｎＬ／分で吐出した。試料の組成は、チオ尿素をメタノール及び水５０／５０の混合物に混ぜた２ｍＭの溶液であり、作動流体は、メタノール及び水５０／５０の混合物であった。バルブを出た直後に試料が毛細管を通る際に、吐出された各試料の吸収度を測定した。測定された吸収度を図４に示す。この図４では、吸収度（任意の単位）を縦軸に表し、容積（ｎＬ）を横軸に表している。３０００、１３００及び５４０ｎＬ／分の流速に対する計算された分散は、それぞれ１０８０、５３０及び２８０ｎＬ２であった。これらの結果は、試料を試料準備位置から吐出するのに小さな流速を用いることの利点を示している。
【００２９】
実施例２
本実施例では６種類で一組の実験を行い、実施例１と同一の試料材料及び作動流体を使用して、２５０ｎＬの内部試料ループを有するバルブから、５４０ｎＬ／分の一定の速度で、それぞれ２、４、６、８、１２及び４０秒の時間にわたり試料を吐出した。バルブを出た直後に試料が毛細管を通過する際に、各吐出試料の吸収度を測定した。相対吸収度を図５に示す。図５では、相対吸収度を縦軸に、容積（ｎＬ）を横軸に表している。始めの５つの試料の半値全幅は、それぞれ２９、４１、５８、１１２及び２７０ｎＬであった。４０秒の注入でループの全容積分が吐出され、その結果により完全なループ注入からの分散テールが示されている。
【００３０】
実施例３
この実施例では、図１〜３に示す装置を使用した。バルブは、２５０ｎＬの外部試料ループを有するＶａｌｃｏ  ＣＮ２バルブであり、コンピュータ制御下で空圧式に作動させた。分離カラムは、長さ１５０ｍｍ、内径０．３ｍｍであり、直径３ミクロンの固定相（Ｐｈｅｎｏｍｅｎａｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８）を充填した。検出器は、容積約４５ｎＬ、通路長約４ｍｍであった。試料は、ウラシル、アセトフェノン、プロピオフェノン及びブチロフェノンと、メタノール５５％及び水４５％のバッファとの混合物であった。各流体供給源中の作動流体は、メタノール及び水の５５／４５パーセント混合物であった。
容積２５ｎＬの試料を、流速５００ｎＬ／分で３秒の時間に亘って吐出し、試料がカラム内に注入される前に４０００ｎＬ／分に流速を上昇させた。９つの分離についてのクロマトグラフの結果を重ね合わせたものを図６に示す。図６では、吸収度（ｍＡＵ）を縦軸に、時間（秒）を横軸に表している。ピーク高さの相対標準偏差は、１％未満であった。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】本発明の実施形態を示す図である。
【図２】本発明の実施形態を示す別の図である。
【図３】本発明の実施形態を示すさらに別の図である。
【図４】実施例１に示す実験の結果を示す図である。
【図５】実施例２に示す実験の結果を示す図である。
【図６】実施例３に示す実験の結果を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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2007504479.tif 000010
2007504479.tif 000011