(57)【要約】患者の関心部位で、マトリックスメタロプロテイナーゼ活性に関連する病理障害を検出、イメージングおよび／またはモニタリングするための診断薬の使用のための化合物を開示する。化合物を含む組成物およびキットも開示する。さらに、患者のマトリックスメタロプロテイナーゼ活性に関連するマトリックスメタロプロテイナーゼまたは病理障害の存在を検出、イメージングおよび／またはモニタリングする方法を開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）少なくとも１つのターゲティング部分、
ｂ）随意のキレーター、
ｃ）遮蔽されたトラッピング部分、および
ｄ）随意の連結基
を含む、化合物または医薬的に許容されるその誘導体であって、
該ターゲティング部分はマトリックスメタロプロテイナーゼ基質であり、
該キレーターは診断成分にコンジュゲートすることができ、
該遮蔽されたトラッピング部分は脱遮蔽されて、遮蔽されていないトラッピング部分を形成することができ、
該遮蔽されていないトラッピング部分は、患者内の関心部位で固定化されることができ、
使用に際して、該化合物の固定化は、該遮蔽されていないトラッピング部分と、該患者内の関心部位におけるマトリックスメタロプロテイナーゼ活性に関係する病理学的障害に関係する物質との相互作用によって達成され、
但し、該相互作用は受容体媒介性ではなく、かつ、
使用に際して、該物質がタンパク質である場合、該相互作用は共有結合であるものとする
化合物または医薬的に許容されるその誘導体。
【請求項２】
ａ）少なくとも１つのターゲティング部分、
ｂ）随意のキレーター、
ｃ）遮蔽されたトラッピング部分、および
ｄ）随意の連結基
を含む、化合物または医薬的に許容されるその誘導体であって、
該ターゲティング部分はマトリックスメタロプロテイナーゼ基質であり、
該キレーターは診断成分にコンジュゲートすることができ、
該遮蔽されたトラッピング部分は脱遮蔽されて、遮蔽されていないトラッピング部分を形成することができ、
該遮蔽されていないトラッピング部分は、患者内の関心部位で固定化されることができ、
使用に際して、該化合物の固定化は、該遮蔽されていないトラッピング部分と、該患者内の関心部位におけるマトリックスメタロプロテイナーゼ活性に関係する病理学的障害に関係する物質との相互作用によって達成され、
但し、該相互作用は受容体媒介性ではなく、かつ、
使用に際して、該診断成分からのシグナルは、該遮蔽されていないトラッピング部分が固定化される前と固定化された後で実質的に変化しないものとする
化合物または医薬的に許容されるその誘導体。
【請求項３】
該病理学的障害が冠状動脈プラークである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
該病理学的障害が癌性腫瘍である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
該ターゲティング部分がＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１４からなる群より選択される１またはそれ以上のマトリックスメタロプロテイナーゼ基質である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
該マトリックスメタロプロテイナーゼ基質がペプチド配列を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
該ペプチド配列が、コラーゲン、プロテオグリカン、ラミニン、フィブロネクチン、ゼラチン、ガレクチン−３、軟骨リンクタンパク質、ミエリン塩基性タンパク質、カリクレイン１４、ラジニン１、エンドグリン、エンドシリン受容体、ラミニンα２鎖、リン酸調節性中性エンドペプチダーゼ、ＡＤＡＭ２、デモグレイン３、インテグリンβ５、インテグリンβｖ、インテグリンβ６、インテグリンβｘ、インテグリンβ９、エラスチン、ペルラカン、エンタクチン、ビトロネクチン、テナシン、ニドゲン、デルマタン硫酸、ｐｒｏＴＮＦ−α、アグレカン、トランシン、デコリン、組織因子経路阻害因子、糖タンパク質、ＮＧ２プロテオグリカン、ニューロカン、ＰＡＩ−３、ビッグエンドセリン−１、ブレビカン／ＢＥＨＡＢ、デコリン、ＦＧＦＲ−１、ＩＧＦＢＰ−３、ＩＬ−１β、α2−マクログロブリン、ＭＣＰ−３、妊娠ゾーンタンパク質、ｐｒｏＭＭＰ−１、ｐｒｏＭＭＰ−２、ＳＰＡＲＣ、サブスタンスＰ、ベータグリカンまたはデンチンに由来する、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
該キレーターが、エコー源性物質で満たされた脂質球体または微小気泡を形成することができる界面活性剤である、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
該遮蔽されていないトラッピング部分が、病理学的障害に関係する物質と共有結合を形成することができる、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
該遮蔽されていないトラッピング部分が、該物質中の一部分と共に、マイケル付加体、ヒドラゾン、β-スルホン、シッフ塩基、ジスルフィド、シクロヘキセン、シクロヘキセン誘導体、またはオキシムを形成する、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
該遮蔽されていないトラッピング部分が、該物質内で内在性生体分子と反応する、請求項９に記載の化合物。
【請求項１２】
該遮蔽されていないトラッピング部分が、患者の関心部位に関係する可溶性酵素タンパク質または可溶性非酵素タンパク質のリガンドである、請求項２に記載の化合物。
【請求項１３】
該リガンドが薬物、親油性有機分子、両親媒性有機分子、ポルフィリン類、ステロイド、脂質、ホルモン、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、および抗体からなる群より選択される、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
ａ）請求項１の化合物をＭＭＰと反応させること、
ｂ）ステップａ）の生成物をＡＰＮと反応させて、α−アミノケトンを形成させること、および
ｃ）該α−アミノケトンを血清アミンオキシダーゼで酸化すること
を含む、１，２−ジカルボニル化合物を製造する方法。
【請求項１５】
ａ）請求項１に記載の化合物または医薬的に許容されるその誘導体、および
ｂ）診断成分
を含む診断剤。
【請求項１６】
ａ）請求項１に記載の化合物または医薬的に許容されるその誘導体、および
ｂ）診断成分
を含み、該診断成分は、該診断剤が固定化されても実質的に変化しないシグナルを持つ、診断剤。
【請求項１７】
該診断成分がエコー源性物質、非金属同位体、光学レポーター、ホウ素中性子吸収材、常磁性金属イオン、強磁性金属、ガンマ線放射性同位体、陽電子放射性同位体、またはＸ線吸収材である、請求項１５に記載の診断剤。
【請求項１８】
該診断成分が99mＴｃ、95Ｔｃ、111Ｉｎ、62Ｃｕ、64Ｃｕ、67Ｇａ、および68Ｇａからなる群から選択されるガンマ線放射性同位体または陽電子放射性同位体である、請求項１７に記載の診断剤。
【請求項１９】
該ガンマ線放射性同位体が99mＴｃである、請求項１８に記載の診断剤。
【請求項２０】
該ガンマ線放射性同位体が111Ｉｎである、請求項１８に記載の診断剤。
【請求項２１】
該非金属同位体が炭素−１１、窒素−１３、フッ素−１８、ヨウ素−１２３、またはヨウ素−１２５である、請求項１７に記載の診断剤。
【請求項２２】
該診断成分を安定化することができる第１補助配位子および第２補助配位子をさらに含む、請求項１５に記載の診断剤。
【請求項２３】
ａ）請求項１に記載の化合物、および
ｂ）医薬的に許容される担体
を含む組成物。
【請求項２４】
ａ）請求項１５に記載の診断剤、および
ｂ）医薬的に許容される担体
を含む組成物。
【請求項２５】
患者におけるマトリックスメタロプロテイナーゼの存在を検出、イメージングおよび/またはモニタリングするためのキットであって、
ａ）請求項１に記載の化合物、
ｂ）診断成分、
ｃ）医薬的に許容される担体、および
ｄ）患者におけるマトリックスメタロプロテイナーゼの存在を検出、イメージングおよび／またはモニタリングするための診断剤を含む組成物の製造に関する指示
を含むキット。
【請求項２６】
１またはそれ以上の補助配位子および還元剤をさらに含む、請求項２５に記載のキット。
【請求項２７】
該補助配位子がトリシンおよび３−［ビス（３−スルホフェニル）ホスフィン］ベンゼンスルホン酸である、請求項２６に記載のキット。
【請求項２８】
該還元剤がスズ（ＩＩ）である、請求項２６に記載のキット。
【請求項２９】
所定量の滅菌された請求項２４に記載の組成物、
二酸素キレート剤および官能基化アミノカルボキシレートから選択される所定量の滅菌された医薬的に許容される安定化共配位子、
所定量の滅菌された医薬的に許容される還元剤、および
適宜、緩衝剤、凍結乾燥助剤、安定化助剤、可溶化助剤および静菌剤から選択される、所定量の、滅菌された、１またはそれ以上の医薬的に許容される成分
を含む、診断剤を形成させるためのキット。
【請求項３０】
患者におけるマトリックスメタロプロテイナーゼの存在を検出、イメージング、および／またはモニタリングする方法であって、
ａ）該患者に請求項１５の診断剤を投与するステップ、および
ｂ）患者における該診断剤の濃縮部位の画像を画像診断技術によって取得するステップ
を含む方法。
【請求項３１】
患者におけるマトリックスメタロプロテイナーゼ活性に関係する病理学的障害を検出、イメージング、および／またはモニタリングする方法であって、
ａ）該患者に請求項１５の診断剤を投与するステップ、および
ｂ）患者における該診断剤の濃縮部位の画像を画像診断技術によって取得するステップ
を含む方法。
【請求項３２】
該病理学的障害が、癌、アテローム動脈硬化、慢性関節リウマチ、変形性関節症、歯周疾患、炎症、自己免疫疾患、臓器移植拒絶、潰瘍形成、強皮症、表皮水泡症、子宮内膜症、腎臓疾患、または骨疾患である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
一過性虚血発作または脳卒中のリスクが高い患者を同定する方法であって、
ａ）該患者に請求項１５に記載の診断剤を投与するステップ、および
ｂ）患者における該診断剤の濃縮部位の画像を画像診断技術によって取得するステップを含む、該患者における活動性アテローム動脈硬化度を決定するステップ
を含む方法。
【請求項３４】
急性心虚血、心筋梗塞または心臓死のリスクが高い患者を同定する方法であって、
ａ）該患者に請求項１５に記載の診断剤を投与するステップ、および
ｂ）患者における該診断剤の濃縮部位の画像を画像診断技術によって取得するステップを含む、該患者における活動性アテローム動脈硬化度を決定するステップ
を含む方法。
【請求項３５】
患者におけるうっ血性心不全を検出、イメージング、および／またはモニタリングする方法であって、
ａ）該患者に請求項１５に記載の診断剤を投与するステップ、および
ｂ）患者における該診断剤の濃縮部位の画像を画像診断技術によって取得するステップ
を含む方法。
【請求項３６】
患者において、心臓灌流および細胞外マトリックス分解の同時イメージングを行なう方法であって、
ａ）請求項１５に記載の診断剤（該診断成分がガンマ線放射性同位体または陽電子放射性同位体であるもの）を投与するステップ、
ｂ）ステップａ）でターゲティング部分にコンジュゲートされた診断成分のガンマ線放射エネルギーまたは陽電子放射エネルギーから分光的に分離可能なガンマ線放射エネルギーまたは陽電子放射エネルギーを示すガンマ線放射性同位体または陽電子放射性で放射標識されている心臓灌流化合物を投与するステップ、ならびに
ｃ）ステップａ）およびｂ）で投与された化合物の分光的に分離可能なガンマ線放射エネルギーまたは陽電子放射エネルギーの濃縮部位の同時画像を画像診断技術によって取得するステップ
を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本開示は診断剤に関する。より具体的には、本開示は、マトリックスメタロプロテイナーゼ活性に関係する病理学的障害を検出および／またはイメージングおよび／またはモニタリングするための化合物、診断剤、組成物、およびキットに関する。さらに本開示は、患者におけるマトリックスメタロプロテイナーゼの存在またはマトリックスメタロプロテイナーゼ活性に関係する病理学的障害を検出および／またはイメージングおよび／またはモニタリングするための方法に関する。
【０００２】
マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）類は、細胞外マトリックスに完全性をもたらす、構造的に関連する亜鉛含有酵素のファミリーである（Chem. Rev.，1999，99，2735-2776）。これらは、種々の結合組織および炎症促進細胞、例えば線維芽細胞、骨芽細胞、マクロファージ、好中球、リンパ球、および内皮細胞などによって排出される。細胞外マトリックスの再吸収につながる、プロテオグリカンおよびコラーゲンを含む結合組織の無制御な分解にマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）類が重要であることを示す一連の証拠が、現在では得られている。これはいくつかの心血管病理学的状態、例えばアテローム動脈硬化、心不全、再狭窄および再灌流傷害などの特徴である。通常、これらの異化酵素は、それらの合成のレベルで厳しく調節されると共に、それらの細胞外活性のレベルでも、ＭＭＰ類との不活性複合体を形成するα−２−マクログロブリン類およびＴＩＭＰ（メタロプロテイナーゼの組織阻害因子）などといった特異的阻害因子の作用によって厳しく調節される。したがって、細胞外マトリックスの分解およびリモデリングは、ＴＩＭＰ類およびＭＭＰ類の相対的発現量によって調節される。ＭＭＰ類は、それらのドメイン構造に基づいていくつかのファミリー、すなわちマトリライシン（最小ドメイン、ＭＭＰ−７）、コラゲナーゼ（ヘモペキシンドメイン、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−１３）、ゼラチナーゼ（フィブロネクチンドメイン、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−９）、ストロメライシン（ヘモペキシンドメイン、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１）、およびメタロエラスターゼ（ＭＭＰ−１２）に分類される。また最近、膜貫通ドメインファミリー（ＭＴ−ＭＭＰ類）も発見され、これにはＭＭＰ−１４〜ＭＭＰ−１７が含まれる。
【０００３】
心臓におけるＭＭＰレベルの上昇を検出することができれば、多くの心臓病で起こる組織分解の検出に大いに役立つだろう。最近、冠状動脈におけるアテロームプラークの組成および脆弱性は、不安定狭心症、心筋梗塞、および死亡などの血栓性急性冠状動脈事象における主要決定因子であると認識されるようになった（Circulation，1995，92：657-671）。炎症性アテロームプラークに関与する数多くの成分には、マトリックスメタロプロテイナーゼを分泌するマクロファージが含まれる（Circulation，1996，94：2013-2020）。ＭＭＰ類は、通常はプロテアーゼ耐性である心臓のフィブリル細胞外マトリックス成分（例えばコラーゲン）を切断する酵素ファミリーである。これらの細胞外マトリックスタンパク質は、アテロームの線維性皮膜に強度を付与する（Circulation，1995，91：2844-2850）。
【０００４】
アテローム動脈硬化プラークなどの炎症領域に蓄積するマクロファージは、結合組織マトリックスタンパク質を分解するこれらのＭＭＰ類を放出する（Falk，1995）。実際、メタロプロテイナーゼ類とそれらのｍＲＮＡはどちらもアテローム動脈硬化プラーク中（Am. J. Physiol.，1998，274：H1516-1523；Circ. Res. 1995，77：863-868；Proc. Natl. Acad. Sci., 1991，88：8154-8158）、特に、ヒトアテローム動脈硬化プラークの脆弱領域中（J. Clin. Invest.，1994，94：2493-2503）に存在することが、研究により、実証されている。ヒトアテローム部位に存在するマクロファージによって放出されうるメタロプロテイナーゼには、間質コラゲナーゼ（ＭＭＰ−１）、ゼラチナーゼＡおよびＢ（それぞれＭＭＰ−２およびＭＭＰ−９）ならびにストロメライシン（ＭＭＰ−３）（Circulation，1994，90：775-778）が含まれる。ヒトアテローム部位では全てのＭＭＰ類が増加しうるが、ゼラチナーゼＢは、事実上全ての活性化マクロファージによって発現されうるので、プラーク内で最も優勢なＭＭＰ類の一つになりうることが示唆されている（Circulation，1995，91：2125-2131）。ＭＭＰ−９も、不安定狭心症から得られるアテレクトミー材料中では、安定狭心症患者の場合よりも優勢であることが示されている（Circulation，1995，91：2125-2131）。
【０００５】
種々のコラーゲンおよびエラスチンを含有する左室細胞外マトリックスは、左室（ＬＶ）ジオメトリーの維持に関与するとも提唱されている。したがって、心筋のこれら細胞外成分の変質は、ＬＶ機能に影響を及ぼし、ＬＶ変性、そして最終的には心不全に関係する進行性変化のマーカーになりうる（Coker，Am. J. Physiol.，1998，274：H1516-1523）。
【０００６】
うっ血性心不全（ＣＨＦ）の場合、ＣＨＦ状態とＬＶ中のＭＭＰ活性との関係に、少なくとも臨床状況においては、まだ多少不明瞭な点がある。しかし、ＣＨＦの前臨床モデルでは、ＬＶの機能的変化と増加したＭＭＰ活性との相関関係が証明されている。例えば、ＣＨＦのブタモデルでは、ＬＶ機能の減少がＭＭＰ−１（約３００％）、ＭＭＰ−２（約２００％）、およびＭＭＰ−３（５００％）の著しい増加と同時に起こることが観察された（Am. J. Physiol.，1998，274：H1516-1523）。ブタモデルにおける中等度の虚血および再灌流は、ＭＭＰ−９を選択的に活性化することが実証されている（Circulation，1999，100 Suppl.1，I-12）。同様に、ＣＨＦのイヌモデルでは、ゼラチナーゼ（例えば、ＭＭＰ−２およびＭＭＰ−９）のレベルがいくつかの心不全で上昇することがわかった（Can. J. Cardiol.，1994，10：214-220）。拡張型心筋症を患っている患者から採取されたヒト筋細胞の生検試料では、ＭＭＰ−２およびＭＴ１−ＭＭＰ（膜型ＭＭＰ、ＭＭＰ−１４）のレベルが上昇していることがわかった（Circulation，1999，100 Suppl. 1，I-12）。
【０００７】
病理学的にＭＭＰ類は、いくつかの疾患状態に関係することが確認されている。例えば、肺癌患者では異常なＭＭＰ−２レベルが検出されており、この場合、ステージＩＶの疾患および遠隔転移を持つ患者では、血清ＭＭＰ−２レベルが正常血清値と比較して有意に上昇していることが観察された（Cancer Res.，1992，53：4548）。また、大腸癌および乳癌を持つ患者では、ＭＭＰ−９の血漿レベルが上昇することも観察されている（Cancer Res.，1993，53：140）。
【０００８】
慢性関節リウマチ患者から得られる滑液には、外傷後膝損傷と比較して、ストロメライシン（ＭＭＰ−３）レベルおよび間質コラゲナーゼ（ＭＭＰ−１）レベルの上昇が認められた（Arth. Rheum.，1992，35：35）。潰瘍性大腸炎では、コラゲナーゼＩ型（ＭＭＰ−１）およびコラゲナーゼＩＶ型（ＭＰＰ−２）の増加したｍＲＮＡ発現レベルが、クローン病および対照と比較して、増大していることが示されている（Gastroenterology，1992，Abstract 661）。さらに、慢性炎症性大腸炎のウサギモデルでは、ゼラチナーゼ抗原の免疫組織化学的発現の増加が実証されている（Gastroenterology，1992，Abstract 591）。
【０００９】
ゼラチナーゼＭＭＰ類は、腫瘍の成長および伝播と最も密接に関わることが示されている。悪性腫瘍ではゼラチナーゼの発現レベルが上昇すること、そしてゼラチナーゼは基底膜を分解し、それが腫瘍転移につながることがわかっている。固形腫瘍の成長に必要な血管新生が、その病理にゼラチナーゼ成分を持つことも、最近になって示されている。さらに、ゼラチナーゼがアテローム動脈硬化に伴うプラーク破裂に関与することを示唆する証拠もある。ＭＭＰ類によって媒介される他の状態には、再狭窄、ＭＭＰ媒介性骨減少症、中枢神経系の炎症性疾患、皮膚老化、腫瘍成長、変形性関節症、慢性関節リウマチ、敗血症性関節炎、角膜潰瘍形成、異常創傷治癒、骨疾患、タンパク尿、動脈瘤大動脈疾患、外傷性関節損傷後の変性軟骨減少、神経系の脱髄性疾患、肝硬変、腎糸球体疾患、早期破水、炎症性腸疾患、歯周疾患、加齢黄斑変性、糖尿病性網膜症、増殖性硝子体網膜症、未熟児網膜症、眼炎症、円錐角膜、シェーグレン症候群、近視、眼腫瘍、眼血管新生/新脈管形成、および角膜移植拒絶がある。最近の総説については、Research Focus，1996，Vol.1，16-26；Curr. Opin. Ther. Patents 1994，4(1)：7-16；Curr. Medicinal Chem.，1995，2：743-762；Exp. Opin. Ther. Patents，1995，5(2)：1087-110；およびExp. Opin. Ther. Patents，1995，5(12)：1287-1196 を参照されたい。
【００１０】
１またはそれ以上のＭＭＰ類を標的とする診断剤は、分解性疾患過程における細胞外マトリックス分解度の検出およびモニタリングに役立つだろう。１またはそれ以上のＭＭＰ類（例えば、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−９）に対するリガンドを含有する診断剤は、これらの疾患の非侵襲的イメージングのために、診断イメージングプローブを病理部位に局在させるだろう。
【００１１】
例えば、ＭＭＰレベルを検出し、モニタリングするために、イメージング剤にＭＭＰ阻害因子をコンジュゲートすることが知られている。例えば国際公開ＷＯ ０１／６０４１６を参照されたい。しかし、そのようなターゲティングには、通常、コンジュゲート化イメージング剤と、比較的低濃度で存在することが多いＭＭＰとの、１対１の相互作用が必要である。その結果、このアプローチによって特定組織に蓄積する標的化イメージングプローブ分子の数は限られ、それがこの方法の感度を制限する。
【００１２】
この感度の制限を避けるには、ＭＭＰレベルを検出およびモニタリングするためのイメージング剤に、ＭＭＰ基質をコンジュゲートすることができる。複数のコンジュゲート化イメージング剤がＭＭＰの各分子と相互作用しうるので、患者の関心領域におけるイメージング剤の濃度が増幅される。患者におけるマトリックスメタロプロテイナーゼの存在またはマトリックスメタロプロテイナーゼ活性に関係する病理学的障害の存在を検出および/またはイメージングおよび/またはモニタリングする方法に役立つであろう診断剤を開発すること、特に特異性および感度が高く、異なるトラッピング機序を用いるものを開発することは、有益であるだろう。ＭＭＰ活性の領域に局在化する化合物は、正常組織との比較で変化したＭＭＰレベルに関係するこれらの疾患の検出および局在を可能にするだろう。
【００１３】
ある態様として、本開示は、
ａ）少なくとも１つのターゲティング部分、
ｂ）随意のキレーター、および
ｃ）遮蔽されたトラッピング部分、および
ｄ）随意の連結基
を含む化合物または医薬的に許容されるその誘導体であって、
該ターゲティング部分は、マトリックスメタロプロテイナーゼ基質であり、
該キレーターは、診断成分にコンジュゲートすることができ、
該遮蔽されたトラッピング部分は脱遮蔽されて、遮蔽されていないトラッピング部分を形成することができ、
該遮蔽されていないトラッピング部分は、患者内の関心部位で固定化されることができ、
使用に際して、該化合物の固定化は、該遮蔽されていないトラッピング部分と、該患者内の関心部位におけるマトリックスメタロプロテイナーゼ活性に関係する病理学的障害に関係する物質との相互作用によって達成されるもの
（ただし、該相互作用は受容体媒介性ではなく、かつ、
使用に際して、該物質がタンパク質である場合、該相互作用は共有結合であるものとする）
に関する。
【００１４】
もう一つの態様として、本開示は、
ａ）少なくとも１つのターゲティング部分、
ｂ）随意のキレーター、および
ｃ）遮蔽されたトラッピング部分、および
ｄ）随意の連結基
を含む化合物または医薬的に許容されるその誘導体であって、
該ターゲティング部分は、マトリックスメタロプロテイナーゼ基質であり、
該キレーターは、診断成分にコンジュゲートすることができ、
該遮蔽されたトラッピング部分は、脱遮蔽されて、遮蔽されていないトラッピング部分を形成することができ、
該遮蔽されていないトラッピング部分は、患者内の関心部位で固定化されることができ、
使用に際して、該化合物の固定化は、該遮蔽されていないトラッピング部分と、該患者内の関心部位におけるマトリックスメタロプロテイナーゼ活性に関係する病理学的障害に関係する物質との相互作用によって達成されるもの
（ただし、該相互作用は受容体媒介性ではなく、かつ、
使用に際して、該診断成分からのシグナルは、該遮蔽されていないトラッピング部分が固定化される前と固定化された後で実質的に変化しないものとする）
に関する。
【００１５】
もう一つの態様として、本開示は、
ａ）上述の化合物をＭＭＰと反応させること、
ｂ）ステップａ）の生成物をＡＰＮと反応させて、α−アミノケトンを形成させること、および
ｃ）該α−アミノケトンを血清アミンオキシダーゼで酸化すること
を含む、１，２−ジカルボニル化合物を製造する方法を提供する。
【００１６】
もう一つの態様として、本開示は、
ａ）上述の化合物または医薬的に許容されるその誘導体、および
ｂ）診断成分
を含む診断剤に関する。
【００１７】
もう一つの態様として、本開示は、
ａ）上述の化合物または診断剤、および
ｂ）医薬的に許容される担体
を含む組成物に関する。
【００１８】
別の態様として、本開示は、患者におけるマトリックスメタロプロテイナーゼの存在を検出および/またはイメージングおよび/またはモニタリングするためのキットであって、
ａ）上述の診断剤、
ｂ）医薬的に許容される担体、および
ｃ）患者におけるマトリックスメタロプロテイナーゼの存在の検出および/またはイメージングおよび/またはモニタリングの準備に関する指示
を含むキットに関する。
【００１９】
別の態様として、本開示は、
ａ）該患者に上述の診断剤を投与するステップ、および
ｂ）患者における該診断剤の濃縮部位の画像を画像診断技術によって取得するステップ
を含む患者におけるマトリックスメタロプロテイナーゼの存在を検出、イメージング、および/またはモニタリングする方法に関する。
【００２０】
もう一つの態様として、本開示は、
ａ）該患者に上述の診断剤を投与するステップ、および
ｂ）患者における該診断剤の濃縮部位の画像を画像診断技術によって取得するステップ
を含む患者におけるマトリックスメタロプロテイナーゼ活性に関係する病理学的障害を検出、イメージング、および/またはモニタリングする方法に関する。
【００２１】
別の態様として、本開示は、
ａ）該患者に上述の診断剤を投与するステップ、
ｂ）患者における該診断剤の濃縮部位の画像を画像診断技術によって取得するステップ
を含む患者におけるアテローム動脈硬化（冠状動脈アテローム動脈硬化または脳血管アテローム動脈硬化を含む）を検出、イメージング、および/またはモニタリングする方法に関する。
【００２２】
別の態様として、本開示は、上述した方法の一つを実行することを含む患者における活動性アテローム動脈硬化度を決定することによって一過性虚血発作、脳卒中、急性心虚血、うっ血性心不全、心筋梗塞または心臓死のリスクが高い患者を同定する方法に関する。
【００２３】
別の態様として、本開示は、
ａ）上述の診断剤（該診断成分がガンマ線放射性同位体または陽電子放射性同位体であるもの）を投与するステップ、および
ｂ）ステップａ）でターゲティング部分にコンジュゲートされた診断成分のガンマ線放射エネルギーまたは陽電子放射エネルギーから分光的に分離可能なガンマ線放射エネルギーまたは陽電子放射エネルギーを示すガンマ線放射性同位体または陽電子放射性で放射標識されている心臓灌流化合物を投与するステップ、ならびに
ｃ）ステップａ）およびｂ）で投与された化合物の分光的に分離可能なガンマ線放射エネルギーまたは陽電子放射エネルギーの濃縮部位の同時画像を画像診断技術によって取得するステップ
を含む患者において心臓灌流および細胞外マトリックス分解の同時イメージングを行なう方法に関する。
【００２４】
もう一つの態様として、本開示は、
ａ）該患者に上述の診断剤を投与するステップ、および
ｂ）患者における該診断剤の濃縮部位の画像を画像診断技術によって取得するステップ
を含む患者における癌性腫瘍を検出および/またはイメージングおよび/またはモニタリングする方法に関する。
【００２５】
別の態様として、本開示は、少なくとも１つのＭＭＰ基質含有化合物および/または診断剤、および/または医薬的に許容される担体を含む組成物に関する。
【００２６】
任意の特定基中の炭素原子の数は、その基の記述の前に表示する。例えば、用語「Ｃ6-10アリール」とは６〜１０個の炭素原子を含有するアリール基を表し、用語「Ｃ6-10アリール−Ｃ1-10アルキル」とは、炭素原子数１〜１０のアルキル基を介して親分子部分に結合される炭素原子数６〜１０のアリール基を指す。
【００２７】
本明細書で使用する用語「アルケニル」とは、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含有する直鎖または分枝鎖炭化水素を指す。
【００２８】
本明細書で使用する用語「アルコキシ」とは、酸素原子を介して親分子部分に結合されるアルキル基を指す。
【００２９】
本明細書で使用する用語「アルコキシアルキル」とは、アルキル基を介して親分子部分に結合されるアルコキシ基を指す。
【００３０】
本明細書で使用する用語「アルキル」とは、直鎖または分枝鎖飽和炭化水素から誘導される基を指す。
【００３１】
本明細書で使用する用語「アルキルアリール」とは、アリール基を介して親分子部分に結合されるアルキル基を指す。
【００３２】
本明細書で使用する用語「アルキルアリーレン」とは、親分子部分への結合点の一方がアルキル部分上にあり、他方がアリール部分上にある、二価のアリールアルキル基を指す。
【００３３】
本明細書で使用する用語「アルキレン」とは、直鎖または分枝鎖飽和炭化水素から誘導される二価の基を指す。
【００３４】
本明細書で使用する語句「アミノ酸残基」とは、アミノ基（−ＮＨ2）、カルボン酸基（−ＣＯＯＨ）、および様々な側基のいずれかを含有する天然または合成有機化合物、特に基本式ＮＨ2ＣＨＲＣＯＯＨを持ち、ペプチド結合によって一つに連結されてタンパク質を形成するか、化学伝達物質としておよび代謝中間体として機能する２０化合物のいずれかから誘導される部分を意味する。
【００３５】
本明細書で使用する用語「アミノカルボキシレート」とは、−ＯＣ（Ｏ）ＮＨ2を指す。
【００３６】
本明細書で使用する用語「補助配位子」または「共配位子」とは、試薬のキレーターまたは放射性核種結合ユニットと共に放射性核種の配位圏を完成させるように働く配位子を指す。二元配位子系を含む放射性医薬品の場合、放射性核種配位圏は１またはそれ以上の試薬に由来する１またはそれ以上のキレーターまたは結合ユニットおよび１またはそれ以上の補助配位子または共配位子を含む（ただし、合計２タイプの配位子、キレーターまたは結合ユニットが存在するものとする）。例えば、１つの試薬に由来する１つのキレーターまたは結合ユニットと、２つの同じ補助配位子または共配位子とを含んでなる放射性医薬品、および１つまたは２つの試薬に由来する２つのキレーターまたは結合ユニットと、１つの補助配位子または共配位子とを含む放射性医薬品は、どちらも二元配位子系を含むとみなされる。三元配位子系を含む放射性医薬品の場合、放射性核種配位圏は、１またはそれ以上の試薬に由来する１またはそれ以上のキレーターまたは結合ユニットおよび２つの異なるタイプの補助配位子または共配位子の１またはそれ以上を含む（ただし合計３タイプの配位子、キレーターまたは結合ユニットが存在するものとする）。例えば、１つの試薬に由来する１つのキレーターまたは結合ユニットと、２つの異なる補助配位子または共配位子とを含んでなる放射性医薬品は、三元配位子系を含むとみなされる。
【００３７】
放射性医薬品の製造に有用な補助配位子または共配位子、および該放射性医薬品の製造に有用な診断キットに有用な補助配位子または共配位子は、１またはそれ以上の酸素、窒素、炭素、硫黄、リン、ヒ素、セレン、およびテルル供与原子を含む。配位子は、放射性医薬品の合成における移動配位子（transfer ligand）であることができ、別の放射性医薬品において補助配位子または共配位子として役立つこともできる。ある配位子が移動配位子と呼ばれるか、補助配位子または共配位子と呼ばれるかは、その配位子が放射性医薬品中の放射性核種配位圏内に留まるかどうかに依存し、それは放射性核種および試薬のキレーターまたは結合ユニットの配位化学によって決まる。
【００３８】
本明細書で使用する用語「アリール」とは、フェニル基を指すか、または環の１またはそれ以上がフェニルである二環式縮合環系を指す。二環式縮合環系は、単環式シクロアルケニル基、単環式シクロアルキル基、またはもう一つのフェニル基に縮合したフェニル基からなる。本発明のアリール基は、その基内の任意の置換可能な炭素原子を介して親分子部分に結合させることができる。アリール基の代表的な例として、アントラセニル、アズレニル、フルオレニル、インダニル、インデニル、ナフチル、フェニル、およびテトラヒドロナフチルが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【００３９】
本明細書で使用する用語「アリールアルキル」とは、アルキル基を介して親分子部分に結合されるアリール基を指す。
【００４０】
本明細書で使用する用語「アリールアルキルアリール」とは、アリール基を介して親分子部分に結合されるアリールアルキル基を指す。
【００４１】
本明細書で使用する用語「アリールアルキレン」とは、親分子部分への結合点の一方がアリール部分上にあり、他方がアルキル部分上にある、二価のアリールアルキル基を指す。
【００４２】
本明細書で使用する用語「アリーレン」とは、二価のアリール基を指す。
【００４３】
本明細書で使用する用語「静菌剤」とは、診断キットを使って診断剤を合成する前または合成した後の製剤の貯蔵時に、製剤中で起こる細菌の成長を阻害する成分を意味する。
【００４４】
本明細書で使用する用語「緩衝剤」とは、反応混合物のｐＨを約３〜約１０に維持するために用いられる物質を指す。
【００４５】
本明細書で使用する用語「糖質」とは、ポリヒドロキシアルデヒド、ケトン、アルコールもしくは酸、またはその誘導体（アセタール型のポリマー結合を持つそのポリマーを含む）を意味する。
【００４６】
本明細書で使用する用語「担体」とは、この開示の化合物および/または診断剤と一緒に患者に投与することができるアジュバントまたはベヒクルであって、有効量の診断剤および/または化合物を送達するのに十分な用量で投与された場合に、その活性を破壊せず、無毒性であるものを指す。
【００４７】
本明細書で使用する用語「キレーター」または「結合ユニット」とは、１またはそれ以上の供与原子を介して金属イオンに結合する試薬上の部分または基を指す。
【００４８】
本明細書で使用する用語「コンジュゲート化」とは、２つの部分間の化学結合の形成を指す。
【００４９】
本明細書で使用する用語「シアノ」とは、−ＣＮを指す。
【００５０】
本明細書で使用する用語「シクロアルケニル」とは、３〜１４個の炭素原子を持ち、ヘテロ原子を持たない、非芳香族、部分不飽和の単環式、二環式、または三環式環系を指す。シクロアルケニル基の代表的な例として、シクロヘキセニル、オクタヒドロナフタレニル、およびノルボルニレニルが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【００５１】
本明細書で使用する用語「シクロアルキル」とは、３〜１４個の炭素原子を持ち、ヘテロ原子を持たない、飽和単環式、二環式、または三環式炭化水素環系を指す。シクロアルキル基の代表的な例として、シクロプロピル、シクロペンチル、ビシクロ［３．１．１］ヘプチル、およびアダマンチルが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【００５２】
本明細書で使用する用語「シクロアルキレン」とは、二価のシクロアルキル基を指す。
【００５３】
本明細書で使用する用語「シクロデキストリン」とは、環状オリゴ糖を意味する。シクロデキストリンの例として、α−シクロデキストリン、ヒドロキシエチル−α−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、カルボキシメチル−β−シクロデキストリン、ジヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、ヒドロキシエチル−β−シクロデキストリン、２，６−ジ−Ｏ−メチル−β−シクロデキストリン、硫酸化−β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリン、ジヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリン、ヒドロキシエチル−γ−シクロデキストリン、および硫酸化γ−シクロデキストリンが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【００５４】
本明細書で使用する用語「診断剤」とは、ある状態、病理学的障害および/または疾患の存在および/または進行を検出し、イメージングし、そして/またはモニタリングするために使用することができる化合物を指す。
【００５５】
本明細書で使用する用語「診断成分」とは、ある状態、病理学的障害、および/または疾患の存在および/または進行の検出、イメージング、および/またはモニタリングを可能にする、ある分子の一部分または複数部分を指す。
【００５６】
本明細書で使用する用語「画像診断技術」とは、診断剤を検出するために用いられる手法を指す。
【００５７】
本明細書で使用する用語「診断キット」および「キット」とは、実施末端使用者が臨床状況下または薬学的状況下で診断剤を合成するために使用する１またはそれ以上のバイアルに入った製剤と呼ばれる成分の収集物を指す。キットは、診断剤を合成し使用するのに必要な全ての成分（実施末端使用者にとって一般に入手可能なもの、例えば注射用水または注射用食塩水などを除く）、例えば診断成分（例えば放射性核種）の溶液、診断剤の合成中に加熱するための機器、患者への診断剤の投与に必要な機器、例えば注射器および遮蔽材（必要な場合）、ならびにイメージング機器などを提供する。
【００５８】
本明細書で使用する語句「供与原子」とは、化学結合により金属に直接結合される原子を指す。
【００５９】
本明細書で使用する用語「内在性」とは、ある生物または細胞の内部で産生される物質を指す。
【００６０】
本明細書で使用する用語「ヘテロシクリル」とは、窒素、酸素、および硫黄からなる群より独立して選択される１個、２個、または３個のヘテロ原子を含有する５員、６員、または７員環を指す。５員環は、０〜２個の二重結合を持ち、６員環および７員環は０〜３個の二重結合を持つ。用語「ヘテロシクリル」は、ヘテロシクリル環がフェニル基、単環式シクロアルケニル基、単環式シクロアルキル基、またはもう一つの単環式ヘテロシクリル基に縮合している二環式基も包含する。本発明のヘテロシクリル基は、基内の炭素原子または窒素原子を介して親分子部分に結合させることができる。ヘテロシクリル基の例として、ベンゾチエニル、フリル、イミダゾリル、インドリニル、インドリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、モルホリニル、オキサゾリル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラゾリル、ピリジニル、ピロリジニル、ピロロピリジニル、ピロリル、チアゾリル、チエニル、およびチオモルホリニルが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【００６１】
本明細書で使用する用語「ヘテロシクリルアルキル」とは、アルキル基を介して親分子部分に結合されるヘテロシクリル基を指す。
【００６２】
本明細書で使用する用語「ヘテロシクリルアルキレン」とは、親分子部分への結合点の一方がヘテロシクリル部分上にあり、他方がアルキル部分上にある、二価のヘテロシクリルアルキル基を指す。
【００６３】
本明細書で使用する用語「ヘテロシクリレン」とは、二価のヘテロシクリル基を指す。
【００６４】
本明細書で使用する語句「疎水性アミノ酸残基」とは、生理的ｐＨでイオン化した基を含有せず、親油性の増加をもたらし、その残基を含有する化合物が標的（例えば脂質に富む冠状動脈プラーク）から拡散するのを阻害する、上に定義したアミノ酸残基を意味する。疎水性アミノ酸残基の例として、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、およびその誘導体が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【００６５】
本明細書で使用する用語「配位子」とは、中心原子の周りに錯体を形成する原子または分子またはラジカルまたはイオンを指す。
【００６６】
本明細書で使用する用語「連結基」とは、ある分子の他の２つの部分の間のスペーサーとして役立つ、当該分子の一部分を指す。連結基は本明細書で述べるように他の機能も果たしうる。
【００６７】
本明細書で使用する用語「凍結乾燥助剤」とは、凍結乾燥にとって有利な物理的性質（例えばガラス転移温度）を持ち、製剤の全成分の組合せが持つ物理的性質を凍結乾燥のために改善する目的で、製剤に加えられる成分を意味する。
【００６８】
本明細書で使用する用語「遮蔽されたトラッピング部分」とは、遮蔽基が存在するために特定の化学官能基に対して低下した結合親和性を示す分子またはその一部を指す。遮蔽基が除去されると、遮蔽されていないトラッピング部分が形成される。本明細書で使用する用語「遮蔽されていないトラッピング部分」は、遮蔽されたトラッピング部分との比較で、特定化学官能基に対して増加した結合親和性を示す分子またはその一部を指す。
【００６９】
本明細書で使用する用語「金属医薬品」とは、金属を含む医薬品を意味する。その金属は、診断用途においてはイメージング可能なシグナルの発生源であり、放射線治療用途においては細胞毒性放射線の線源である。
【００７０】
本明細書で使用する語句「医薬的に許容される」とは、健全な医学的判断の範囲内で、合理的な利益/リスク比に見合った、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答、または他の問題もしくは合併症を伴わない、ヒトおよび動物の組織と接触させて使用するのに適した化合物、材料、組成物、および/または剤形を指す。
【００７１】
本明細書で使用する用語「放射性医薬品」とは、金属が放射性同位体である金属医薬品を指す。
【００７２】
本明細書で使用する用語「試薬」とは、この開示の診断剤の製造に直接利用することができるこの開示の化合物を意味する。試薬は、この開示の診断剤の製造に直接利用すること、またはこの開示のキット内の一成分であることができる。
【００７３】
本明細書で使用する用語「還元剤」とは、放射性核種（典型的には比較的非反応性の高酸化状態化合物として入手されるもの）と反応して、放射性核種に電子を移動させてその酸化状態を低下させ、それによってその反応性を高くする化合物を指す。
【００７４】
本明細書で使用する語句「可溶化助剤」とは、製剤に必要な媒質における１またはそれ以上の他の成分の溶解度を改善する成分である。
【００７５】
本明細書で使用する語句「安定化助剤」とは、金属医薬品を安定化するために、またはキットを使用しなければならなくなるまでの貯蔵寿命を延ばすために、金属医薬品または診断キットに加えられる成分である。安定化助剤は酸化防止剤、還元剤またはラジカル捕捉剤であることができ、他の成分または金属医薬品を分解する分子種と優先的に反応することによって、改善された安定性をもたらすことができる。
【００７６】
本明細書で使用する用語「安定である」とは、製造可能であり、本明細書に詳述する目的にとって有用であるのに十分な期間にわたってその完全性を維持する化合物を指す。典型的には、本開示の化合物は、水分または他の化学的に反応性の高い条件の不在下に、４０℃以下の温度で、少なくとも１週間は安定である。
【００７７】
本明細書で使用する用語「滅菌」とは、病理学的微生物が存在しないこと、または病理学的微生物が存在しない状態を保つための方法を用いることを意味する。
【００７８】
本明細書で使用する用語「基質」とは、酵素による作用を受ける物質を指す。本開示において、基質は、酵素マトリックスメタロプロテイナーゼが作用する物質である。
【００７９】
本明細書で使用する用語「界面活性剤」とは、溶液における界面張力の低下をもたらす任意の両親媒性材料を指す。
【００８０】
本明細書で使用する用語「医薬的に許容される誘導体」とは、受容者に投与したときに、この開示の化合物またはその代謝産物もしくは残基を（直接的または間接的に）与えることができる、本開示の化合物の任意の医薬的に許容される塩、エステル、エステルの塩、または他の誘導体を指す。典型的には、誘導体は、そのような化合物を哺乳動物に投与した時に本開示の化合物の生物学的利用能を（例えば経口投与される化合物がより容易に血中に吸収されるようにすることなどによって）増加させるもの、または生物学的コンパートメント（例えば脳もしくはリンパ系）への親化合物の送達を親分子種よりも増大させるものである。
【００８１】
本明細書で使用する語句「ポリアルキレングリコール」とは、約５０００未満の分子量を持ち、末端がヒドロキシ部分またはアルキルエーテル部分で終わっている、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールまたはポリブチレングリコールを意味する。
【００８２】
本明細書で使用する語句「移動配位子」（transfer ligand）とは、望ましくない副反応を防ぐ程度に安定であるが、金属医薬品に変換されうる程度に不安定であるような、金属イオンとの中間錯体を形成する配位子を意味する。速度論的には中間錯体の形成が有利であるが、熱力学的には金属医薬品の形成が有利である。金属医薬品の製造に役立つ移動配位子および診断用放射性医薬品の製造に有用な診断キットに役立つ移動配位子として、グルコネート、グルコヘプトネート、マンニトール、グルカレート、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−エチレンジアミン四酢酸、ピロホスフェートおよびメチレンジホスホネートが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。一般に、移動配位子は、酸素または窒素供与原子を含んでなる。
【００８３】
本発明の化合物には不斉中心が存在する。これらの中心は、キラル炭素原子をめぐる置換基の立体配置に応じて、記号「Ｒ」または「Ｓ」で指定される。本発明は、本化合物のあらゆる立体化学異性体型、またはそれらの混合物を包含すると理解すべきである。化合物の個々の立体異性体は、キラル中心を含有する市販の出発物質から合成的に製造するか、エナンチオマー生成物の混合物を製造した後、分離することによって、例えばジアステレオマーの混合物に変換してから分離または再結晶、クロマトグラフィー法を行なうか、キラルクロマトグラフィーカラムでエナンチオマーを直接分離することなどによって、製造することができる。特定の立体化学を持つ出発化合物は市販されているか、または当技術分野で公知の技術によって製造し、分割することができる。
【００８４】
本開示の一定の化合物は、分離することが可能な異なる安定コンフォメーション型として存在することもできる。不斉単結合の周りの回転が、例えば立体障害または環ひずみなどのために制限されることによって生じるねじれ不斉は、異なるコンフォーマーの分離を可能にする。本開示は、これらの化合物の各コンフォメーション異性体およびそれらの混合物を包含する。
【００８５】
本化合物には二重結合が存在するので、本開示では、それら二重結合の周りの置換基の配置に起因する様々な幾何異性体およびそれらの混合物が考えられる。本開示は、両異性体型およびそれらの混合物を包含すると理解すべきである。炭素−炭素二重結合の場合、用語「Ｅ」とは、順位が高い方の置換基が炭素−炭素二重結合の反対側にあることを表し、用語「Ｚ」とは、順位が高い方の置換基が炭素−炭素二重結合の同じ側にあることを表す。
【００８６】
ある可変部がある置換基中またはある式中に２回以上出現する場合、各出現位置でのその定義は、他のどの出現位置でのその定義とも無関係である。したがって例えば、ある基が０〜２個のＲ23で置換されることが示されているとすると、その基は随意に２個までのＲ23で置換されていてよく、各出現位置のＲ23は、考えうるＲ23の限定的リストから独立して選択される。また、例えば基−Ｎ（Ｒ24）2の場合、窒素上の２つのＲ24置換基のそれぞれは、考えうるＲ24の限定的リストから独立して選択される。置換基および／または可変部の組合せは、そのような組合せが安定な化合物をもたらしさえすれば許容される。ある置換基への結合が環内の２つの原子を横切るように示されている場合、その置換基はその環上のどの原子に結合してもよい。
【００８７】
本開示の化合物には、少なくとも２つのドメインまたは成分要素、すなわちＭＭＰ基質である少なくとも１つのターゲティング部分（「Ｓ」）と、少なくとも１つの遮蔽されたトラッピング部分（「Ｍ−Ｔ」）とが必要である。本開示の化合物は、随意に、診断成分（「Ｄ」、本明細書では「レポーター」または「イメージング部分」という場合もある）および/または連結基（「Ｌ」）にコンジュゲートすることができるキレーター（「Ｃ」）を含んでもよい。
【００８８】
１分子のＭＭＰは、複数のＭＭＰ基質分子を加水分解することができるので、本開示の診断剤には、固有の増幅機能が内蔵されるという利点がある。本開示の診断剤は、典型的には、化学的安定性、高純度のラベリング、迅速な血液クリアランスおよび好都合な体内分布を含む、任意の診断剤の基準を満たす。また、本開示の診断剤は、典型的には、以下の特別な基準も満たす：
（１）本診断剤は、典型的には、冠状動脈プラークなどの標的物質の内外に自由に拡散する。
（２）本診断剤は、典型的には、血中および他の非標的組織に見いだされるプロテイナーゼに対して安定である。
（３）本診断剤は、典型的には、ＭＭＰ消化によって脱遮蔽される遮蔽されたトラッピング部分を含有する。
（４）本診断剤は、典型的には、冠状動脈プラークなどの標的物質内に固定化され、標的物質中に蓄積して、シグナルを経時的に増加させる。
【００８９】
本開示の診断剤の選択性は、体内の一定の組織、器官、またはコンパートメントでは、体内の正常な組織、器官、またはコンパートメントと比較して、例えば脆弱な冠状動脈プラークでは、安定な冠状動脈プラークと比較して、ＭＭＰ類の濃度が高いことに由来すると考えられる。トラッピング機序は組織特異的である必要はない。しかしトラッピング機序が組織特異的であれば有利だろう。なぜならそれは、二重の特異性レベルをもたらすことによって、標的対バックグラウンドシグナルを高くするからである。
【００９０】
本開示の一態様では、診断成分が患者内の標的に固定化されても、そのシグナルは実質的に変化しない。これは、その分子の結合時に、シグナルが実質的に強化されないことを意味する。この文脈で使用する場合、「実質的に」とは、シグナルに２０％を越える変化がないことを意味する。もう一つの態様では、シグナルに１０％を越える変化がない。もう一つの態様では、シグナルに５％を越える変化がない。もう一つの態様では、シグナルに１％を越える変化がなく、もう一つの態様では、シグナルに０％を越える変化がない。
【００９１】
診断成分は、エコー源性物質（液体または気体）、非金属同位体、光学レポーター、ホウ素中性子吸収材、常磁性金属イオン、強磁性金属、ガンマ線放射性同位体、陽電子放射性同位体、またはＸ線吸収材であることができる。
【００９２】
診断剤は、ガンマシンチグラフィーまたは陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）によるイメージングに役立つことが知られている放射性同位体に連結されたＭＭＰ基質であることができる。あるいは、１またはそれ以上の常磁性金属原子を結合するための単一または複数のキレーター部分に、ＭＭＰターゲティングリガンドを結合させてもよい。これにより、組織損傷部位で緩和度または磁化率などの磁気的性質の局所変化が起こり、それを磁気共鳴イメージングシステムでイメージングすることができる。あるいは、組織損傷部位での局在化後に超音波イメージングによって検出することができる気体を封入するため/その気体のミクロスフェアを安定化するために用いられるリン脂質またはポリマー材料に、ＭＭＰ基質を結合させてもよい。
【００９３】
好適なエコー源性気体として、六フッ化硫黄またはペルフルオロカーボンガス、例えばペルフルオロメタン、ペルフルオロエタン、ペルフルオロプロパン、ペルフルオロブタン、ペルフルオロシクロブタン、ペルフロオロペンタン、またはペルフルオロヘキサンなどが挙げられる。
【００９４】
好適な非金属同位体としては、炭素−１１、窒素−１３、フッ素−１８、ヨウ素−１２３、およびヨウ素−１２５が挙げられる。
【００９５】
好適な光学レポーターとして、蛍光レポーターおよび化学発光基が挙げられる。
【００９６】
好適な放射性同位体として、99mＴｃ、95Ｔｃ、111Ｉｎ、62Ｃｕ、64Ｃｕ、67Ｇａ、および68Ｇａが挙げられる。本開示の具体的な一態様では、放射性同位体として、９９ｍＴｃおよび111Ｉｎが挙げられる。
【００９７】
好適な常磁性金属イオンとして、Ｇｄ（ＩＩＩ）、Ｄｙ（ＩＩＩ）、Ｆｅ（ＩＩＩ）、およびＭｎ（ＩＩ）が挙げられる。
【００９８】
好適なＸ線吸収材として、Ｒｅ、Ｓｍ、Ｈｏ、Ｌｕ、Ｐｍ、Ｙ、Ｂｉ、Ｐｄ、Ｇｄ、Ｌａ、Ａｕ、Ａｕ、Ｙｂ、Ｄｙ、Ｃｕ、Ｒｈ、Ａｇ、およびＩｒが挙げられる。
【００９９】
診断成分が放射性同位体である場合、診断剤は、さらに、その放射性同位体を安定化することができる第１補助配位子および第２補助配位子を含みうる。数多くの配位子が、補助配位子または共配位子として役立ち、その選択は、例えば放射性医薬品の合成の容易さ、補助配位子の化学的および物理的性質、得られる放射性医薬品の形成速度、収率、異性体型の数、該補助配位子または共配位子を患者に投与してもその患者に有害な生理学的結果をもたらさないこと、ならびに凍結乾燥キット製剤における配位子の適合性などといった、種々の考慮すべき事項によって決定される。補助配位子の電荷および親油性は、放射性医薬品の電荷および親油性に影響を及ぼすだろう。例えば、４，５−ジヒドロキシ−１，３−ベンゼンジスルホネートの使用は、２つのアニオン基が追加された放射性医薬品をもたらすだろう。なぜならスルホネート基は生理条件下ではアニオン性であるだろうからである。Ｎ−アルキル置換３，４−ヒドロキシピリジノンの使用は、アルキル置換基のサイズに応じて様々な親油性度を持つ放射性医薬品をもたらすだろう。
【０１００】
遮蔽されたトラッピング部分Ｍ−Ｔは、脱遮蔽されて、遮蔽されていないトラッピング部分Ｔを形成することができ、また患者の関心部位で固定化されることができる。該化合物の固定化は、遮蔽されていないトラッピング部分と、関心対象である病理学的障害に関係する物質との、非受容体媒介的相互作用によって達成される。病理学的障害に関係する物質がタンパク質、コレステロール、または脂質以外である場合、その相互作用は、受容体媒介性でないという条件の下に、共有結合性または非共有結合性であることができる。
【０１０１】
遮蔽されたトラッピング部分（Ｍ−Ｔ）は、検出および/またはイメージングおよび/またはモニタリングしようとする組織内の病理学的状態に関係する物質への診断剤の結合を「遮蔽する」（または減少させる）。遮蔽されたトラッピング部分（Ｍ−Ｔ）の遮蔽物（Ｍ）が、酵素的切断によって除去されて、遮蔽されていないトラッピング部分（Ｔ）が形成されると、その薬剤の増加した結合親和性が顕わになる。これは少なくとも２つの分子断片の物理的分離をもたらす。すなわち、一方は遮蔽されていないトラッピング部分およびターゲティング部分を含有する分子断片であり、他方は遮蔽されたトラッピング部分の遮蔽物部分を含有する分子断片である。
【０１０２】
本開示の化合物の必須のドメインまたは要素および随意のドメインまたは要素は、互いに様々な位置に配置することができる。これらのドメインは、それらの間に特別な境界がなくても存在しうる（例えば遮蔽されたトラッピング部分はターゲティング部分の一部であることができる）が、それらを当該分子の独立したユニットとして概念化すると便利である。例えば以下の構造が考えられる：
【化１】
2007504242.tif 000002
式中、
Ｓは、ＭＭＰ基質を含むターゲティング部分であり、
Ｄは、診断成分であり、
Ｍは、トラッピング部分であり、
Ｔは、トラッピング部分の遮蔽物であり、
ｍ、ｎ、ｏ、ｐおよびｑのそれぞれは同じであるか異なって、１またはそれ以上である。一般に、ｍ、ｎ、ｏ、ｐおよびｑは５未満であり、典型的には１である。
【０１０３】
本化合物は、その化合物の機能ドメインを連結する生理適合性連結基を含みうると考えられる。ある態様では、遮蔽されたトラッピング部分が、随意に、遮蔽されたトラッピング部分を本開示の化合物の他の機能ドメインに連結する生理適合性連結基を含む。一般に、連結基は、診断剤の結合機能または画像向上機能に有意な寄与をしない。場合によっては、連結基の存在が、合成上の考慮すべき事項に基づいて好ましいこともありうる。また、遮蔽されたトラッピング部分における生物活性の操作を、連結基が容易にする場合もある。連結基の例として、直鎖、分枝鎖、または環状のアルキル、アリール、エーテル、ポリヒドロキシ、ポリエーテル、ポリアミン、複素環、芳香族、ヒドラジド、ペプチド、ペプトイド、もしくは他の生理適合性共有結合、またはそれらの組合せが挙げられる。
【０１０４】
一定の態様では、本開示の化合物が約１〜約１０個のターゲティング部分を持つ。もう一つの態様では、化合物が約１〜約５個のターゲティング部分を持ち、もう一つの態様では、化合物が約１個のターゲティング部分を持つ。
【０１０５】
本開示の化合物において、ターゲティング部分は１またはそれ以上のＭＭＰ類の基質であり、例えばそのＭＭＰ類は、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１４およびそれらの組合せからなる群より選択される。もう一つの態様では、ＭＭＰ類は、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１４およびそれらの組合せからなる群より選択される。
【０１０６】
ＭＭＰ基質はペプチドを配列を含む。ペプチド配列は、コラーゲン、プロテオグリカン、ラミニン、フィブロネクチン、ゼラチン、ガレクチン−３、軟骨リンクタンパク質、ミエリン塩基性タンパク質、カリクレイン１４、ラジニン（ladinin）１、エンドグリン、エンドシリン（endothilin）受容体、ラミニンα２鎖、リン酸調節性中性エンドペプチダーゼ、ＡＤＡＭ２、デモグレイン（demoglein）３、インテグリンβ５、インテグリンβｖ、インテグリンβ６、インテグリンβｘ、インテグリンβ９、エラスチン、ペルラカン、エンタクチン、ビトロネクチン、テナシン、ニドゲン、デルマタン硫酸、ｐｒｏＴＮＦ−α、アグレカン、トランシン、デコリン、組織因子経路阻害因子、糖タンパク質、ＮＧ２プロテオグリカン、ニューロカン、ＰＡＩ−３、ビッグエンドセリン−１、ブレビカン／ＢＥＨＡＢ、デコリン、ＦＧＦＲ−１、ＩＧＦＢＰ−３、ＩＬ−１β、α2−マクログロブリン、ＭＣＰ−３、妊娠ゾーンタンパク質（pregnancy zone protein）、ｐｒｏＭＭＰ−１、ｐｒｏＭＭＰ−２、ＳＰＡＲＣ、サブスタンスＰ、ベータグリカンまたはデンチンに由来しうる。
【０１０７】
一定の態様においてペプチド配列は、Ｐ3部位からＰ2'部位までがＰｒｏ−Ｘ−Ｘ−Ｈｙ−（Ｓｅｒ／Ｔｈｒ）（配列番号１）、Ｐ1部位からＰ2'部位までがＧｌｙ−Ｌｅｕ−（Ｌｙｓ／Ａｒｇ）、Ｐ1部位およびＰ2'部位にＡｒｇ残基、ＩＰＥＮ−ＦＦＧＶ（配列番号２）、ＢＰＹＧ−ＬＧＳＰ（配列番号３）、ＨＰＳＡ−ＦＳＥＡ（配列番号４）、ＧＰＱＧ−ＬＬＧＡ（配列番号５）、ＧＰＡＧ−ＬＳＶＬ（配列番号６）、ＧＰＡＧ−ＩＶＴＫ（配列番号７）、ＤＡＡＳ−ＬＬＧＬ（配列番号８）、ＲＰＡＶ−ＭＴＳＰ（配列番号９）、ＰＰＧＡ−ＹＨＧＡ（配列番号１０）、ＬＲＡＹ−ＬＬＰＡ（配列番号１１）、ＳＰＹＥ−ＬＫＡＬ（配列番号１２）、ＴＡＡＡ−ＬＴＳＣ（配列番号１３）、ＧＰＥＧ−ＬＲＶＧ（配列番号１４）、ＧＨＡＲ−ＬＶＨＶ（配列番号１５）、ＱＰＶＧ−ＩＮＴＳ（配列番号１６）、ＥＬＧＴ−ＹＮＶＩ（配列番号１７）、ＤＶＡＱ−ＦＶＬＹ（配列番号１８）、ＤＶＡＮ−ＹＮＦＦ（配列番号１９）、ＨＰＶＧ−ＬＬＡＲ（配列番号２０）、ＫＰＱＱ−ＦＦＧＬ（配列番号２１）、ＩＰＶＳ−ＬＲＳＧ（配列番号２２）、ＨＶＬＮ−ＬＲＳＴ（配列番号２３）、ＤＰＥＳ−ＩＲＳＥ（配列番号２４）、ＤＰＬＥ−ＦＫＳＨ（配列番号２５）、ＲＰＩＰ−ＩＴＡＳ（配列番号２６）、ＲＶＬＧ−ＬＫＡＨ（配列番号２７）、ＫＶＬＮ−ＬＴＤＮ（配列番号２８）、ＰＰＥＡ−ＬＲＧＩ（配列番号２９）、ＩＶＡＭ−ＬＲＡＰ（配列番号３０）、ＴＡＡＡ−ＩＴＧＡ（配列番号３１）、Ａｃ−ＰＬＧ−Ｈｐｈｅ−ＯＬ（配列番号３２）、Ｓｕｃ−ＰＬＧ−Ｈｐｈｅ−ＹＬ（配列番号３３）、またはＡｃ−ＰＯＧ−Ｈｐｈｅ−Ｌ（配列番号３４）である。ただし式中、
Ｘは、独立して、アミノ酸残基であり、
Ｈｙは、独立して、疎水性アミノ酸残基であり、そして
Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ，Ｉ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｂ、およびＯは、当業者に知られている特定アミノ酸の１文字表記である。
【０１０８】
本開示の化合物は、適宜キレーター（「Ｃ」）を含有しうる。本開示の化合物の一定の態様では、キレーターが、エコー源性物質で満たされた脂質球体または微小気泡を形成することのできる界面活性剤である。他の一定の態様では、キレーターが、以下から選択される式：
【化２】
2007504242.tif 000003
［式中、
各Ａ1は、−ＮＲ19Ｒ20、−ＮＨＲ26、−ＳＨ、−Ｓ（Ｐｇ）、−ＯＨ、−ＰＲ19Ｒ20、−Ｐ（Ｏ）Ｒ21Ｒ22、該ターゲティング部分への結合、および該連結基への結合から独立して選択され、
各Ａ2は、Ｎ（Ｒ26）、Ｎ（Ｒ19）、Ｓ、Ｏ、Ｐ（Ｒ19）、および−ＯＰ（Ｏ）（Ｒ21）Ｏ−から独立して選択され、
Ａ3は、Ｎであり、
Ａ4は、ＯＨおよびＯＣ（＝Ｏ）Ｃ1-20アルキルから選択され、
Ａ5は、ＯＣ（＝Ｏ）Ｃ1-20アルキルであり、
各Ｅは、０〜３個のＲ23で置換されたＣ1-16アルキレン、０〜３個のＲ23で置換されたＣ6-10アリーレン、０〜３個のＲ23で置換されたＣ3-10シクロアルキレン、０〜３個のＲ23で置換されたヘテロシクリル−Ｃ1-10アルキレン、０〜３個のＲ23で置換されたＣ6-10アリール−Ｃ1-10アルキレン、０〜３個のＲ23で置換されたＣ1-10アルキル−Ｃ6-10アリーレン、および０〜３個のＲ23で置換されたヘテロシクリレンから独立して選択され、
Ｅ1は、結合およびＥから選択され、
各Ｅ2は、０〜３個のＲ23で置換されたＣ1-16アルキル、０〜３個のＲ23で置換されたＣ6-10アリール、０〜３個のＲ23で置換されたＣ3-10シクロアルキル、０〜３個のＲ23で置換されたヘテロシクリル−Ｃ1-10アルキル、０〜３個のＲ23で置換されたＣ6-10アリール−Ｃ1-10アルキル、０〜３個のＲ23で置換されたＣ1-10アルキル−Ｃ6-10アリール、および０〜３個のＲ23で置換されたヘテロシクリルから、独立して選択され、
Ｅ3は、１〜３個のＲ32で置換されたＣ1-10アルキレンであり、
Ｐｇは、チオール保護基であり、
Ｒ19およびＲ20は、連結基への結合、ターゲティング部分への結合、水素、０〜３個のＲ23で置換されたＣ1-10アルキル、０〜３個のＲ23で置換されたアリール、０〜３個のＲ23で置換されたＣ3-10シクロアルキル、０〜３個のＲ23で置換されたヘテロシクリル−Ｃ1-10アルキル、０〜３個のＲ23で置換されたＣ6-10アリール−Ｃ1-10アルキル、および０〜３個のＲ23で置換されたヘテロシクリルから、それぞれ独立して選択され、
Ｒ21およびＲ22は、連結基への結合、ターゲティング部分への結合、−ＯＨ、０〜３個のＲ23で置換されたＣ1-10アルキル、０〜３個のＲ23で置換されたアリール、０〜３個のＲ23で置換されたＣ3-10シクロアルキル、０〜３個のＲ23で置換されたヘテロシクリル−Ｃ1-10アルキル、０〜３個のＲ23で置換されたＣ6-10アリール−Ｃ1-10アルキル、および０〜３個のＲ23で置換されたヘテロシクリルから、それぞれ独立して選択され、
各Ｒ23は、連結基への結合、ターゲティング部分への結合、＝Ｏ、ハロ、トリフルオロメチル、シアノ、−ＣＯ2Ｒ24、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ24、−Ｃ（＝Ｏ）n（Ｒ24）2、−ＣＨＯ、−ＣＨ2ＯＲ24、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ24、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＲ24、−ＯＲ24、−ＯＣ（＝Ｏ）n（Ｒ24）2、−ＮＲ24Ｃ（＝Ｏ）Ｒ24、−ＮＲ24Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ24、−ＮＲ24Ｃ（＝Ｏ）n（Ｒ24）2、−ＮＲ24ＳＯ2Ｎ（Ｒ24）2、−ＮＲ24ＳＯ2Ｒ24、−ＳＯ3Ｈ、−ＳＯ2Ｒ24、−ＳＲ24、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ24、−ＳＯ2Ｎ（Ｒ24）2、−Ｎ（Ｒ24）2、−ＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨＲ24、＝ＮＯＲ24、ＮＯ2、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＯＲ24、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＮＲ24Ｒ24、−ＯＣＨ2ＣＯ2Ｈ、２−（１−モルホリノ）エトキシ、Ｃ1-5アルキル、Ｃ2-4アルケニル、Ｃ3-6シクロアルキル、Ｃ3-6シクロアルキルメチル、Ｃ2-6アルコキシアルキル、０〜２個のＲ24で置換されたアリール、およびヘテロシクリルから独立して選択され、
各Ｒ24は、連結基への結合、該ターゲティング部分への結合、水素、Ｃ1-6アルキル、フェニル、ベンジル、およびＣ1-6アルコキシから、独立して選択され、
Ｒ26は、金属への配位結合またはヒドラジン保護基であり、
各Ｒ32は、Ｒ34、＝Ｏ、−ＣＯ2Ｒ33、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ33、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ33）2、−ＣＨ2ＯＲ33、−ＯＲ33、−Ｎ（Ｒ33）2、およびＣ2−Ｃ4アルケニルから選択され、
各Ｒ33は、Ｒ34、水素、Ｃ1−Ｃ6アルキル、フェニル、ベンジル、およびトリフルオロメチルから独立して選択され、そして
Ｒ34は、該連結基への結合であって、
Ａ1、Ｒ19、Ｒ20、Ｒ21、Ｒ22、Ｒ23、Ｒ24、およびＲ34の少なくとも１つは、該連結基または該ターゲティング部分への結合である］
を持つ結合ユニットである。
【０１０９】
本開示の一態様では、キーラント（chelant）が次式：
【化３】
2007504242.tif 000004
［式中、
Ａ1aは、該連結基への結合であり、
Ａ1b、Ａ1c、Ａ1dおよびＡ1eは、それぞれＯＨであり、
Ａ3a、Ａ3b、およびＡ3cは、それぞれＮであり、
Ｅa、Ｅb、およびＥcは、Ｃ2アルキレンであり、
Ｅd、Ｅe、Ｅf、およびＥgは、０〜１個のＲ23で置換されたＣ2アルキレンであり、そして
Ｒ23は、＝Ｏである］
で表される。
【０１１０】
本開示のもう一つの態様では、キーラントが次式：
【化４】
2007504242.tif 000005
［式中、
Ａ1a、Ａ1b、Ａ1dおよびＡ1eは、それぞれＯＨであり、
Ａ1cは、該連結基への結合であり、
Ａ3a、Ａ3bおよびＡ3cは、それぞれＮであり、
Ｅa、Ｅd、Ｅe、Ｅf、およびＥgは、０〜１個のＲ23で置換されたＣ2アルキレンであり、
ＥbおよびＥcは、Ｃ2アルキレンであり、そして
Ｒ23は、＝Ｏである］
で表される。
【０１１１】
本開示のもう一つの態様では、キーラントが次式：
【化５】
2007504242.tif 000006
［式中、
Ａ3a、Ａ3b、Ａ3cおよびＡ3dは、それぞれＮであり、
Ａ1aは、該連結基への結合であり、
Ａ1b、Ａ1cおよびＡ1dは、それぞれ−ＯＨであり、
Ｅa、Ｅc、ＥgおよびＥeは、それぞれ０〜１個のＲ23で置換されたＣ2アルキレンであり、
Ｅb、Ｅd、ＥfおよびＥhは、それぞれＣ2アルキレンであり、そして
Ｒ23は、＝Ｏである］
で表される。
【０１１２】
本開示のもう一つの態様では、キーラントが次式：
【化６】
2007504242.tif 000007
［式中、
Ａ1aは、−ＮＨＲ26であり、
Ａ1bは、ＮＨＲ19であり、
Ｅは、結合であり、
Ｒ19は、Ｒ23で置換されたヘテロシクリルであって、そのヘテロシクリルはピリジンおよびピリミジンから選択され、
Ｒ26は、金属への配位結合またはヒドラジン保護基であり、
Ｒ23は、該連結基への結合、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ24およびＣ（＝Ｏ）Ｒ24から選択され、そして
Ｒ24は、該連結基への結合である］
で表される。
【０１１３】
本開示のもう一つの態様では、キーラントが次式：
【化７】
2007504242.tif 000008
［式中、
Ａ1aおよびＡ1cは、それぞれ−Ｓ（Ｐｇ）であり、
Ａ1bは、該連結基への結合であり、
Ａ2aおよびＡ2bは、それぞれ−ＮＨであり、
ＥaおよびＥdは、０〜１個のＲ23で置換されたＣ2アルキレンであり、
Ｅbは、０〜１個のＲ23で置換されたＣ1-3アルキレンであり、
Ｅcは、ＣＨ2であり、そして
Ｒ23は、＝Ｏである］
で表される。
【０１１４】
本開示のもう一つの態様では、キーラントが次式：
【化８】
2007504242.tif 000009
［式中、
Ａ1aは、該連結基への結合であり、
Ａ2aは、ＮＨであり、
Ａ2bは、−ＯＰ（Ｏ）（Ｒ21）Ｏ−であり、
Ａ2cおよびＡ2dは、それぞれＯであり、
Ｅaは、Ｒ23で置換されたＣ1アルキレンであり、
Ｅbは、０〜１個のＲ23で置換されたＣ2アルキレンであり、
ＥcおよびＥdは、Ｃ1アルキレンであり、
Ｅ2aおよびＥ2bは、それぞれ０〜１個のＲ23で置換されたＣ1-16アルキルであり、
Ｒ21は、−ＯＨであり、そして
Ｒ23は、＝Ｏである］
で表される。
【０１１５】
本開示の診断剤の重要な特徴の一つは、ひとたびＭＭＰ基質ドメインが、関心対象である病理学的障害に関係するＭＭＰ活性が存在する患者内の標的器官、標的コンパートメントまたは標的領域の近傍に、診断剤をターゲティングすれば、診断成分を含有する診断剤は、イメージングに適した期間はトラップされた状態になる（すなわちその場に留まる）が、典型的には、危害を及ぼさない期間内に、身体から除去されることである。診断剤のトラッピングは、遮蔽されたトラッピング部分を使って達成することができる。遮蔽されたトラッピング部分が「脱遮蔽」されると、患者内の関心部位で、診断剤の、診断成分を含有する部分の固定化が可能になる。
【０１１６】
遮蔽されていないトラッピング部分が関心物質中にトラップされる機序は、いくつかある。好適なトラッピング機序として、
（１）遮蔽されていないトラッピング部分を含有する診断剤の親油性が、遮蔽されたトラッピング部分を含有する診断剤と比較して、増加することによるトラッピング、
（２）遮蔽されていないトラッピング部分を含有する診断剤の脂質二重層挿入によるトラッピング、
（３）遮蔽されていないトラッピング部分を含有する診断剤と、関心対象である病理学的障害に関係する物質との間に共有結合が形成されることによるトラッピング、
（４）細胞トランスポーター基によるトラッピング、
が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【０１１７】
遮蔽されていないトラッピング部分を含有する診断剤の親油性が、遮蔽されたトラッピング部分を含有する診断剤と比較して、増加することによるトラッピングは、例えば診断剤の一定のドメインに親油性官能基または親水性官能基を組み込むことなど、いくつかの異なる方法で達成することができる。
【０１１８】
本開示のある態様では、化合物が、診断剤の、診断成分または診断ドメインを含有する部分に、親油性官能基を含む。ＭＭＰがＭＭＰ基質を切断すると、診断成分または診断ドメインを含有する断片が高い有効親油性を持つようになり、その結果、関心対象である親油性物質、例えば脂質に富む柔らかい芯の中に高レベルの酸化リポタンパク質を含有する冠状動脈プラークなどと、非共有結合的会合によって相互作用する。別の態様では、遮蔽されていないトラッピング部分自体が親油性官能基を含む。親油性官能基は、長鎖アルキル基、長鎖アルケニル基、長鎖アルキニル基、シクロアルキル基、またはアミノ酸の親油性残基に由来することができる。ある例では親油性官能基が少なくとも６個の炭素原子を含有する。もう一つの例では親油性官能基が１２個の炭素原子を含有し、もう一つの例では１８個の炭素原子を含有する。長鎖アルキル基、長鎖アルケニル基、長鎖アルキニル基およびシクロアルキル基は、随意に、芳香環で置換されていてもよい。長鎖アルケニル基および長鎖アルキニル基は、随意に、さらなる不飽和部位（二重結合もしくは三重結合またはそれらの組合せを含む）を持っていてもよい。また、長鎖アルキル基、長鎖アルケニル基、長鎖アルキニル基、およびシクロアルキル基は、随意に、例えばエーテル、チオエーテル、アルコール、アルデヒド、ケトンなどの非イオン化官能基、および生理的ｐＨで非塩基性であると考えられるアミン、例えばピリジンおよびアニリンなどを含有してもよい。親油性官能基は、バリン、ノルバリン、ロイシン、ノルロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、プロリン、ホモフェニルアラニン、テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸、メチオニン、Ｏ−メチルセリン、およびピリジルアラニンなど（ただしこれらに限定されるわけではない）のアミノ酸に由来してもよい。
【０１１９】
別の態様では、マトリックスメタロプロテイナーゼ基質が、親水性官能基をさらに含む。親水性官能基は、例えばアスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、アルギニン、システイン酸およびオルニチンなどの極性アミノ酸、糖類、および極性ポリマー、例えばポリアルキレングリコール、線状ポリアミンおよびデンドリマーなどに由来しうる。あるいは、ＭＭＰ基質の親油性を低下させる目的で官能基を付加することもできる。好適な官能基として、アミン、アルコール、カルボン酸、スルホン酸、ホスホン酸およびホスホネートが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。ＭＭＰがＭＭＰ基質を切断すると、診断成分または診断ドメインを含有する断片は有効親油性が高くなり、その結果、関心対象である親油性物質と、非共有結合的会合によって相互作用する。
【０１２０】
実施例１〜４０および５８は、親油性の増加によるトラッピングを実証するものである。文献報告では、親油性の高い化合物は、親油性の低い化合物よりも遅い速度で組織内を拡散することが示唆されている。例えば、Circ. Res.，2000，879-884 を参照されたい。実施例１〜４０および５８では、ＭＭＰ基質分子の親油性が高い方の末端に診断成分が結合される。ＭＭＰによる消化を受けると、極性アミノ酸が除去され、その結果、全体としての親油性の増加が起こる。
【０１２１】
もう一つのトラッピングアプローチは、診断剤の遮蔽されていないトラッピング部分の脂質二重層挿入である。このトラッピング機序では、親油性基がそれ自身を脂質二重層中に挿入するのを、ＭＭＰ基質ペプチドへの結合によって妨げることができる。ＭＭＰおよびアミノペプチダーゼＮ（ＡＰＮ）によるペプチドの除去は、トラッピング部分を脱遮蔽し、その結果、診断剤の、ターゲティング部分を含有する部分が、関心対象である脂質二重層材料中に保持されることになる。アミノペプチダーゼは例えば冠状動脈プラーク中に、正常な大動脈壁よりも高い濃度で存在すると報告されており（Atheroschlerosis，1971，14，169-180）、マクロファージを含むほとんどの細胞タイプ中に見いだされる（Adv. Exp. Med. Biol.，2000，477，1-24）。典型的には、脂質二重層挿入基上に残留する官能基（Ｘ、下記）は、可能な限り小さく、可能な限り無極性である。好適な例として、ヒドロキシアルカン酸、ヒドロキシフェニルアルカン酸、ピリジニウム塩、アミノフェニルアルカン酸、エナミドおよび４−アミノピリジニウム塩が挙げられる。残留官能基Ｘがアルコール、フェノール、および弱塩基性アミンなどの基である脂質二重層挿入基を遮蔽するには、いくつかの異なる化学薬品を使用することができる。例えば、J. Pharm. Sci.，1997，86，765-767、Advanced Drug Delivery Reviews，1989，3，39-65を参照されたい。
【化９】
2007504242.tif 000010
【０１２２】
Ａ．ヒドロキシアルカン酸
実施例１９〜２３は、脂質二重層へのヒドロキシアルカン酸の挿入を実証するものである。生細胞懸濁液を使った実験では、細胞会合が観察される（実施例４７）。ｐ−アミノベンジルアルコールは、これらの化合物の多くにとって、自己犠牲的な遮蔽部分である。ＭＭＰ基質ペプチドの除去により、カーボネート酸素との結合を不安定化する電子供与アミンが生じる。その結果、ｐ−アミノベンジルアルコール、二酸化炭素、およびヒドロキシアルカン酸の迅速な脱離が起こる。実施例２４は、アミノペプチダーゼが最後のＭＭＰ基質アミノ酸を遮蔽部分から除去することを確認するためのモデル化合物である。この実施例で脱遮蔽される基はヒドラジドである。実施例２５では同じスペーサーを用いるが、ヒドロキシアルカン酸を脱遮蔽する。遮蔽物（下記の文献ではプロドラッグと呼ばれている）としてのｐ−アミノベンジルアルコールの例については、Bioorg. Med. Chem. Lett.，2002，12，217-219 を参照されたい。
【化１０】
2007504242.tif 000011
【０１２３】
Ｂ．ヒドロキシフェニルアルカン酸
実施例２６は、ヒドロキシフェニルアルカン酸が細胞と会合することを示している。机上の実施例５１および５２は、以下に示す環化反応によってフェノール類を放出する２つの自己犠牲的遮蔽部分の使用を例示している。ＭＭＰ基質ペプチドの除去により、非求核性アミドが求核性アミンに変換され、環化反応が促進される。
【化１１】
2007504242.tif 000012
【０１２４】
Ｃ．ピリジニウム塩（実施例５３）
ピリジン類、アニリン類、および他のアミン類から製造される４級アンモニウム塩は、以下に示すｐ−アミノベンジル基などのプロドラッグリンカーと共に、脱離基として使用することができる。その概念はｐ−アミノベンジルアルコールについて上述したものと同じある。遮蔽されていないアミン類による電子供与はベンジル−窒素結合を不安定化し、その結果、３級アミンの迅速な脱離が起こる（例えば、J. Pharm. Sci.，1982，71，729-735）。
【化１２】
2007504242.tif 000013
【０１２５】
Ｄ．アミノフェニルアルカン酸（実施例５５）
上記のピリジン例と同様に、アニリン類も生理的ｐＨでは非プロトン化された状態を保ち、したがって脂質二重層によって許容されるだろう。標的組織中のアミノペプチダーゼは、この分子を基質として認識し、最後のアミノ酸を除去して、アニリン類を脱遮蔽するだろう。
【０１２６】
Ｅ．エナミド（実施例５４）
ＭＭＰ基質ペプチドの除去によって１級アミンのエナミンが生成し、次にそれがイミンに互変異性し、次にそれがケトンに加水分解することになる。ケトンは脂質二重層挿入が可能なほど十分に無極性である。
【化１３】
2007504242.tif 000014
【０１２７】
Ｆ．４−アミノピリジニウム塩（実施例５６）
ＭＭＰ基質がＭＭＰおよびＡＰＮによって除去され、その結果、環への電子供与が起こって、置換１Ｈ−ピリジン−４−イミンが形成されることになる。次にこれが加水分解を起こして、１Ｈ−ピリジン−４−オンを形成することになる。
【化１４】
2007504242.tif 000015
【０１２８】
一定の態様では、遮蔽されていないトラッピング部分が、病理学的障害に関係する物質との共有結合を形成する能力を持つ。好適な遮蔽されていないトラッピング部分は、該物質中の一部分と共に、マイケル付加物、ヒドラゾン、β−スルホン、シッフ塩基、ジスルフィド、シクロヘキセン類、シクロヘキセン誘導体、またはオキシムを形成しうる。マイケル付加物は、マレイミドとアミンまたはチオールの間に形成させることができる。ヒドラゾンは、ヒドラジンまたはヒドラジドとアルデヒドまたはケトンの間に形成させることができる。β−スルホンは、ビニルスルホンへの求核剤の１，４−付加によって形成させることができる。シッフ塩基は、アミン（アリールアミンまたは脂肪族アミン）のアルデヒドまたはケトンとの縮合によって形成させることができる。ジスルフィドは２つのチオール基の反応によって形成させることができる。シクロヘキセン類（またはその誘導体生成物）は、ジエンとジエノフィルのディールス−アルダー縮合によって形成させることができる。オキシムは、Ｏ−アルコキシヒドロキシルアミンと反応するケトンまたはアルデヒドから形成させることができる。別の態様として、本開示の化合物上の官能基を標的タンパク質中のアルギニン残基と反応させて、その残基との共有結合を形成させることもできる。
【０１２９】
診断剤は、安定なヒドラゾン類の形成によってトラップすることができる（実施例６〜１８）。プラーク中のＬＤＬの酸化は、アルデヒドの形成をもたらす。以下に示すように、アルデヒドがヒドラジン類およびヒドラジド類と反応して安定なヒドラゾン類を形成することは、よく知られている。これらの例では、ＭＭＰ類およびアミノペプチダーゼ（例えばＡＰＮ）は遮蔽ペプチドを除去してヒドラジンまたはヒドラジドを生成させ、次にそれがアルデヒドとの反応を経て安定なヒドラゾンを形成することにより、プラーク内にレポーター基をトラップすることになる。
【化１５】
2007504242.tif 000016
【０１３０】
ＡＰＮがＭＭＰ基質配列の最後のアミノ酸を除去して反応性官能基を脱遮蔽することを立証するために設計されたモデル化合物を、実施例６〜９に記載する。実施例１０〜１８は完全なペプチド−ヒドラジドを表す。これらをＭＭＰ類の基質として試験した。
【０１３１】
診断剤は、アルギニン（実施例５７）または任意の内在性生体分子との反応によって、トラップすることができる。１，２−ジカルボニル化合物はタンパク質中のアルギニンのグアニジノ側鎖と容易に反応し、この反応はペプチドおよびタンパク質を誘導体化する方法の基礎になっている。実施例５７ではビニルエステルを使ってジカルボニル基を遮蔽する。連結基はトリメチルロックカテゴリーに属する（J. Org. Chem.，1997，62，1363-1367 を参照）。
【化１６】
2007504242.tif 000017
【０１３２】
もう一つのトラッピング機序は、実施例５９に記載するように、細胞トランスポーター基によるトラッピングを伴う。いくつかの小ペプチドは、細胞膜を横切る能力を持つことが示されており、これらペプチドにコンジュゲートすれば、通常は細胞膜を透過できない分子を、細胞内に輸送することができる（Bioconj. Chem.，2001，12，825-841 を参照）。実施例６０では、レポーターがトランスポーターペプチドのＣ末端にコンジュゲートされると共に、ＭＭＰ基質ペプチドがリジン側鎖にコンジュゲートされ、ＭＭＰ類およびＡＰＮによって除去されるまでは、それが細胞への進入を妨げる。
【０１３３】
さらにもう一つのトラッピング機序は、ＭＭＰ類、カテプシン類、アミノペプチダーゼ類、ネプロライシン（neprolysin）などの可溶性酵素タンパク質またはアルブミンなどの非酵素タンパク質のリガンドの結合によるトラッピングである。好適なリガンドとして、薬物、親油性もしくは両親媒性有機分子、ポルフィリン類、ステロイド、脂質、ホルモン、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド（ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはそれらの化学修飾体）、抗体（モノクローナル抗体および遺伝子操作型ならびにそれらの断片を含む）、またはイメージングしようとする生物活性を含有する組織中の少なくとも１つの可溶性酵素タンパク質もしくは非酵素タンパク質に結合することが知られている他の生体分子が挙げられる。ある態様では、イメージング後の患者からの排泄を促進するために、リガンドの結合が不可逆的である。可溶性酵素タンパク質および可溶性非酵素タンパク質の好適な例として、ＵＳ２００２／０６４４７６に開示されているものが挙げられ、その開示は、参照により全体を本明細書に引用する。
【０１３４】
この開示の化合物は、選択された生物学的性質を強化するために、適当な化学基の付加によって修飾することができると理解すべきである。そのような修飾は、当該技術分野では知られており、与えられた生物学的コンパートメント（例えば、血液、リンパ系、中枢神経系）への生物学的浸透を増加させるもの、経口利用率を増加させるもの、注射による投与が可能になるように溶解度を増加させるもの、代謝を変化させるもの、および排泄速度を変化させるものなどが挙げられる。
【０１３５】
この開示の化合物が溶液中、医薬組成物中および生体内で様々なコンフォメーション型およびイオン型をとりうることも理解すべきである。この開示の具体的化合物を本明細書で叙述する場合、それは特定のコンフォメーションおよびイオン型の叙述であるが、それらの叙述により、それらの化合物の他のコンフォメーションおよびイオン型も想定され、包含される。
【０１３６】
この開示の医薬組成物中に使用することができる医薬的に許容される担体、アジュバントおよびベヒクルとしては、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、緩衝剤、例えばリン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、トリス（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）など、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩類または電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドケイ酸、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ロウ、ポリエチレン−ポリオキシプロピレンブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【０１３７】
この開示によれば、医薬組成物は、滅菌注射可能調製物の形態、例えば滅菌された注射可能な水性または油性懸濁液の形態をとりうる。この懸濁液は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使って、当該技術分野で知られる技術に従って製剤化することができる。滅菌注射可能調製物は、非経口的に許容できる無毒性の希釈剤または溶剤中の滅菌注射可能溶液または懸濁液、例えば１，３−ブタンジオール溶液などであってもよい。使用することができる許容できるベヒクルおよび溶剤には、水、リンゲル液および等張塩化ナトリウム溶液がある。また、滅菌固定油も、溶剤または懸濁媒として通常使用される。この目的には、合成モノまたはジグリセリドを含む任意の無刺激性固定油を使用することができる。オレイン酸などの脂肪酸およびそのグリセリド誘導体は、天然の医薬的に許容される油、例えばオリーブ油またはヒマシ油、特にそれらのポリオキシエチル化体と同様、注射可能剤の製造に有用である。これらの油溶液または油懸濁液は、長鎖アルコール希釈剤または長鎖アルコール分散剤も含有しうる。
【０１３８】
場合によっては、注射量および注射速度に応じて、血漿タンパク質上の結合部位は、プロドラッグおよび活性型薬剤で飽和された状態になりうる。これはタンパク質結合型薬剤の割合を低下させ、その半減期および認容性ならびにその薬剤の有効性を損ないうる。そのような場合は、プロドラッグ剤を滅菌アルブミンまたは血漿置換溶液と共に注射することが望ましい。もう一つの選択肢として、造影剤を含有し、その造影剤を注射器内に吸い込んだ血液と混合する器具/注射器を使用することもでき、次にこれを患者に再注射する。
【０１３９】
本開示の化合物、診断剤および医薬組成物は、通常の医薬的に許容される無毒性の担体、アジュバントおよびベヒクルを含有する投与製剤として、経口投与、非経口投与、吸入スプレーによる投与、局所外用、直腸投与、鼻腔投与、口腔内投与、経膣投与、または植込み型レザバーを介して投与することができる。本明細書で使用する用語「非経口」とは、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液内、胸骨内、髄腔内、肝内、病巣内および頭蓋内注射または注入技術を包含する。
【０１４０】
経口投与する場合、この開示の医薬組成物は、例えばカプセル剤、錠剤、水性の懸濁剤および溶液剤など（ただしこれらに限定されるわけではない）の経口的に許容できる任意の剤形で投与することができる。経口投与用の錠剤の場合、よく使用される担体として、乳糖およびトウモロコシデンプンが挙げられる。通例、ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤も加えられる。カプセル剤形で経口投与する場合、有用な希釈剤としては、乳糖および乾燥トウモロコシデンプンが挙げられる。経口投与用の水性懸濁剤が必要な場合は、活性成分を乳化および懸濁化剤と混合する。所望であれば、一定の甘味剤、着香剤または着色剤も加えてよい。
【０１４１】
もう一つの選択肢として、直腸投与用坐剤の形態で投与する場合、この開示の医薬組成物は、薬剤を、室温では固体であるが直腸温度では液体になり、したがって直腸内で融解して薬物を放出するような適当な非刺激性賦形剤と混合することによって、製造することができる。そのような材料として、カカオ脂、ミツロウおよびポリエチレングリコールが挙げられる。
【０１４２】
上述のように、この開示の医薬組成物は、特に、処置標的が局所外用適用によって容易に到達することのできる領域または器官、例えば眼、皮膚、もしくは下部腸管などを含む場合には、局所外用することもできる。これらの領域または器官のそれぞれに適した局所外用製剤は容易に製造される。
【０１４３】
下部腸管への局所外用適用は直腸用坐剤（上記参照）または適当な浣腸剤で達成することができる。局所外用経皮貼付剤も使用することができる。
【０１４４】
局所外用適用のために、医薬組成物は、１またはそれ以上の担体に懸濁または溶解された活性成分を含有する適切な軟膏として製剤化することができる。この開示の化合物を局所外用投与するための担体として、鉱油、液体ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックスおよび水が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。もう一つの選択肢として、１またはそれ以上の医薬的に許容される担体に懸濁または溶解された活性成分を含有する適切なローション剤またはクリーム剤として、医薬組成物を製剤化することもできる。好適な担体として、鉱油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリソルベート６０、セチルエステルロウ、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【０１４５】
眼科用には、塩化ベンジルアルコニウムなどの保存剤を含むまたは含まない、ｐＨを調節した等張性滅菌食塩水中の微細化懸濁剤として、または典型的には、ｐＨ調節した等張性滅菌食塩水中の溶液剤として、医薬組成物を製剤化することができる。もう一つの選択肢として、眼科用途には、ワセリンなどの軟膏に医薬組成物を製剤化してもよい。
【０１４６】
鼻腔エアロゾルまたは鼻腔吸入による投与の場合、この開示の医薬組成物は、医薬製剤分野で周知の技術に従って製造され、ベンジルアルコールまたは他の適切な保存剤、生物学的利用能を高めるための吸収促進剤、フルオロカーボン、および/または他の通常の可溶化剤または分散剤を使って、食塩水溶液などとして製造することができる。
【０１４７】
１回量剤形を製造するために担体材料と混合することができる活性成分の量は、処置されるホストと特定の投与様式とに依存して変動するだろう。典型的な調製物は、約５％〜約９５％の活性化合物（ｗ／ｗ）を含有するだろう。典型的には、そのような調製物は約２０％〜約８０％の活性化合物を含有する。
【０１４８】
静脈内投与および他のタイプの投与の場合、許容される用量範囲は約０．００１〜約１．０ｍｍｏｌ／ｋｇ体重であり、活性成分化合物の典型的な投与量は約０．００１〜約０．５ｍｍｏｌ／ｋｇ体重である。より一層典型的には０．０１〜約０．１ｍｍｏｌ／ｋｇであり、活性成分化合物の最も典型的な投与量は約０．０２〜約０．０５ｍｍｏｌ／ｋｇである。
【０１４９】
当業者には理解されるだろうが、上記の投与量よりも少ない投与量または多い投与量が必要な場合もある。特定の患者に対する具体的な用法用量は、使用する具体的な化合物の活性、年齢、体重、全般的健康状態、性別、食餌、投与時間、排泄速度、併用薬および処置する医師の判断を含む様々な因子に依存するだろう。
【０１５０】
好ましい医薬組成物は、この開示の好ましい化合物および診断剤を含むものであることは、理解されるだろう。
【０１５１】
本開示のもう一つの側面は、マトリックスメタロプロテイナーゼ活性に関係する病理学的障害を検出、イメージング、および／またはモニタリングするための診断剤を製造するための診断キットである。本発明の診断キットは、所定量の本開示の試薬と、随意に他の成分、例えば１つまたは２つの補助配位子、例えばトリシンおよび３−［ビス（３−スルホフェニル）ホスフィン］ベンゼンスルホン酸（ＴＰＰＴＳ）、還元剤、移動配位子、緩衝剤、凍結乾燥助剤、安定化助剤、可溶化助剤ならびに静菌剤などを含む、滅菌非発熱性製剤を含有する１またはそれ以上のバイアルを含む。本キットは例えばスズ(ＩＩ)などの還元剤も含みうる。
【０１５２】
製剤に１またはそれ以上の随意成分を含めることにより、実施末端使用者による診断剤の合成の容易さ、キットの製造の容易さ、キットの貯蔵寿命、または放射性医薬品の安定性および貯蔵寿命が、しばしば改善されるだろう。ヒドラジンまたはヒドラゾン結合部分を含む試薬を含む診断キットの場合は、１またはそれ以上の補助配位子を含める必要がある。製剤の全部または一部を含有する１またはそれ以上のバイアルは、独立して、滅菌溶液または凍結乾燥固体の形態をとることができる。
【０１５３】
本開示のもう一つの側面は、心血管障害、感染性疾患、炎症性疾患および癌を診断するための診断剤を製造するための診断キットである。本開示の診断キットは、所定量のこの開示に記載するキーラント、安定化共配位子、還元剤、および随意の他の成分、例えば緩衝剤、凍結乾燥助剤、安定化助剤、可溶化助剤および静菌剤を含む、滅菌非発熱性製剤を含有する１またはそれ以上のバイアルを含有する。
【０１５４】
製剤に１またはそれ以上の随意成分を含めることにより、実施末端使用者による診断剤の合成の容易さ、キットの製造の容易さ、キットの貯蔵寿命、または放射性医薬品の安定性および貯蔵寿命が、しばしば改善されるだろう。製剤に随意成分を含めることによって達成される改善は、付加される製剤の複雑さおよび付加されるキット製造コストと比較検討しなければならない。製剤の全部または一部を含有する１またはそれ以上のバイアルは、独立して、滅菌溶液または凍結乾燥固体の形態をとることができる。
【０１５５】
診断剤およびそのキットの製造に有用な緩衝剤としては、リン酸塩、クエン酸塩、スルホサリチル酸塩、および酢酸塩が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。より完全なリストは米国薬局方に見いだすことができる。
【０１５６】
診断剤およびそのキットの製造に有用な凍結乾燥助剤としては、マンニトール、ラクトース、ソルビトール、デキストラン、フィコール、およびポリビニルピロリジン（ＰＶＰ）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【０１５７】
診断剤およびそのキットの製造に有用な安定化助剤としては、アスコルビン酸、システイン、モノチオグリセロール、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、ゲンチジン酸、およびイノシトールが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【０１５８】
診断剤およびそのキットの製造に有用な可溶化助剤としては、エタノール、グリセリン、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン、モノオレイン酸ソルビタン、ポリソルベート、ポリ(オキシエチレン)−ポリ(オキシプロピレン)ポリ(オキシエチレン)ブロック共重合体（プルロニック）およびレシチンが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。典型的な可溶化助剤はポリエチレングリコールおよびプルロニック共重合体である。
【０１５９】
診断剤およびそのキットの製造に有用な静菌剤としては、ベンジルアルコール、塩化ベンザルコニウム、クロルブタノール、およびメチル、プロピルまたはブチルパラベンが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【０１６０】
診断キット中の成分は２以上の機能を果たすこともできる。例えば、還元剤は安定化助剤としても働くことができ、緩衝剤は移動配位子としても働くことができ、凍結乾燥助剤は移動、補助または共配位子としても働くことができる。
【０１６１】
製剤中の各成分の所定量は、様々な考慮すべき事項によって決まり、それらの事項はある場合にはその成分に特有の事項であり、またある場合には別の成分の量もしくは随意成分の存在および量に依存する。一般に、製剤の望ましい効果を与えるであろう各成分の最少量を使用する。製剤の望ましい効果とは、実施末端使用者が診断剤を合成できること、そしてその診断剤を患者に安全に注射することができ、その患者の疾患状態に関する診断情報を与えるであろうという高度な確信を実施末端使用者が持ちうることである。
【０１６２】
本開示の診断キットは、実施末端使用者が診断剤を合成するために従うことができる指示書も含有することができる。これらの指示は、バイアルの１またはそれ以上に貼付けるか、１つまたは複数のバイアルが輸送のために梱包されている容器に貼付けるか、または添付文書と呼ばれる独立した挿入物であってもよい。
【０１６３】
Ｘ線造影剤、超音波造影剤および磁気共鳴イメージング造影剤用の金属医薬品は、典型的には１つのバイアルに凍結乾燥固体としてまたは水溶液として含有される製剤に入ったそれらの最終形態で、末端使用者に提供される。末端使用者は、凍結乾燥固体を水または食塩水で復元し、患者用量を引き抜くか、または単に提供された水溶液製剤から用量を引き抜く。
【０１６４】
これらの診断剤は、ガンマシンチグラフィー、陽電子放射断層撮影、ＭＲＩ、超音波またはＸ線のいずれの画像向上用であれ、心血管疾患の経時的変化の検出およびモニタリングに、とりわけ有用である。ＭＭＰ類の過剰発現の度合いは心臓組織また血管組織の劣化に関係するので（JACC，1999，33：835-842）、関心疾患部位におけるこれらのイメージング剤の局在の度合いを定量することによって、心血管疾患病巣（すなわちプラーク）の重症度および現在の活動性を評価することができる。さらに、これらの診断剤を使って、血管系におけるアテローム動脈硬化による変化の進行を遅くする医薬的治療、または血管系におけるアテローム動脈硬化による変化を逆転もしくはうっ血性心不全に関係する心筋劣化の逆転を引き起こす医薬的治療の開始に関係するＭＭＰ活性の変化をモニタリングすることもできる。したがって、心臓中のＭＭＰ類のイメージングが、心組織のＭＭＰ含量の変化に関係する様々な心臓疾患の進行／後退を検出し、局在し、モニタリングするのに一般に有用であるだろうことは、理解することができる。
【０１６５】
本開示の方法がその検出、イメージングおよび／またはモニタリングに有用である病理学的障害としては、癌（特に転移に先立つ細胞外マトリックスの分解時）、アテローム動脈硬化（特に、破裂、血栓形成、および心筋梗塞または不安定狭心症につながる、アテローム動脈硬化プラークの線維性皮膜の分解時）、慢性関節リウマチおよび変形性関節症（軟骨アグリカンおよびコラーゲンの破壊）、歯周疾患、炎症、自己免疫疾患、臓器移植拒絶、潰瘍形成（角膜、表皮、および胃）、強皮症、表皮水泡症、子宮内膜症、腎臓疾患、および骨疾患が挙げられる。本開示の化合物、診断剤、組成物、キットおよび方法は、冠状動脈アテローム動脈硬化および脳血管アテローム動脈硬化を含むアテローム動脈硬化、ならびに癌性腫瘍の診断に、特に有用である。本開示の化合物、診断剤、組成物、キットおよび方法は、一過性虚血発作もしくは脳卒中のリスクが高い患者の診断、または急性心虚血、心筋梗塞もしくは心臓死のリスクが高い患者の診断に、特に有用である。
【０１６６】
本開示の超音波造影剤は、生体適合性気体の微小気泡に取付けられた、または組み込まれた複数のマトリックスメタロプロテイナーゼ基質部分、液体担体、および界面活性剤ミクロスフェアを含み、さらにターゲティング部分と微小気泡の間に随意の連結部分を含む。この文脈において「液体担体」という語句は水溶液を意味し、用語「界面活性剤」とは、溶液中で界面張力の低下をもたらす両親媒性材料を意味する。界面活性剤ミクロスフェアを形成させるのに適した界面活性剤のリストは、参照によりその全文が本明細書に引用されるＥＰ−Ａ−０７２７２２５に開示されている。「界面活性剤ミクロスフェア」という語句は、ナノスフェア、リポソーム、小胞などを包含する。生体適合性気体は空気であるか、エコー源性の相違をもたらし、したがって超音波イメージングにおいてコントラストをもたらす、Ｃ3-5ペルフルオロアルカンなどのフルオロカーボンであることができる。気体はミクロスフェアに封入または含有させることができ、そのミクロスフェアには生体配向基を、随意に連結基を介して、結合することができる。その結合は、共有結合、イオン結合またはファンデルワールス力による結合であることができる。そのような造影剤の具体例として、複数のＭＭＰ阻害化合物を持つ脂質封入ペルフルオロカーボンが挙げられる。
【０１６７】
本開示のＸ線造影剤は、１またはそれ以上の、原子番号２０以上のＸ線吸収原子または「重」原子に取付けられた１またはそれ以上のマトリックスメタロプロテイナーゼ基質ターゲティング部分を含み、ターゲティング部分とＸ線吸収原子との間に随意の連結部分をさらに含む。Ｘ線造影剤によく使用される重原子はヨウ素である。最近、金属キレート（ＵＳ−Ａ−５４１７９５９）および複数の金属イオンを含むポリキレート（ＵＳ−Ａ−５６７９８１０）を含むＸ線造影剤が開示された。さらに最近になって、多核クラスター錯体が、Ｘ線造影剤として開示されている（ＵＳ−Ａ−５８０４１６１、ＵＳ−Ａ−５４５８８６９、ＵＳ−Ａ−５６１４１６８、ＵＳ−Ａ−５４８２６９９およびＵＳ−Ａ−５９３２１９０）。
【０１６８】
本開示のＭＲＩ診断剤は、１またはそれ以上の常磁性金属イオンに取付けられた１またはそれ以上のマトリックスメタロプロテイナーゼ基質ターゲティング部分を含み、さらにターゲティング部分と常磁性金属イオンの間に随意の連結基を含む。常磁性金属イオンは金属錯体または金属酸化物粒子の形態で存在する。ＵＳ−Ａ−５４１２１４８およびＵＳ−Ａ−５７６０１９１には、ＭＲＩ造影剤に用いられる常磁性金属イオン用のキレーターの例が記載されている。ＵＳ−Ａ−５８０１２２８、ＵＳ−Ａ−５５６７４１１およびＵＳ−Ａ−５２８１７０４は、ＭＲＩ造影剤に用いられる２以上の常磁性金属イオンを錯化するのに有用なポリキーラントの例が記載されている。ＵＳ−Ａ−５５２０９０４には、ＭＲＩ造影剤として使用される常磁性金属イオンを含む粒子状組成物が記載されている。
【０１６９】
本開示の診断剤はいくつかのアプローチによって合成することができる。
（１）あるアプローチでは、ターゲティングＭＭＰ基質部分を合成し、１またはそれ以上の基質部分を、１またはそれ以上のキレーターまたは結合部分に直接取付けるか、常磁性金属イオンまたは重原子含有固形粒子に直接とりつけるか、エコー源性気体微小気泡に直接取付ける。
（２）もう一つのアプローチでは、ＭＭＰ基質部分を連結基に取付けた後、それを１またはそれ以上の金属キレーターまたは結合部分に取付けるか、常磁性金属イオンまたは重原子含有固体粒子に取付けるか、エコー源性気体微小気泡に取付ける。
（３）もう一つのアプローチでは、連結基を持つ残基をＭＭＰ基質の合成に組み込むことによって、ＭＭＰ基質が連結基に取付けられている部分を合成する。次に、得られた部分を１またはそれ以上の金属キレーターまたは結合部分に取付けるか、常磁性金属イオンまたは重原子含有固体粒子に取付けるか、エコー源性気体微小気泡に取付ける。
（４）もう一つのアプローチでは、連結基の断片を持つＭＭＰ基質を合成し、次にその１つ以上を連結基の残りに取付けた後、１またはそれ以上の金属キレーターまたは結合部分に取付けるか、常磁性金属イオンまたは重原子含有固体粒子に取付けるか、エコー源性気体微小機能に取付ける。
【０１７０】
随意に連結基Ｌｎまたは連結基の断片を持つＭＭＰ基質部分は、当業者に知られる標準的な合成方法を使って製造することができる。
【０１７１】
一般に、ペプチド、ポリペプチドおよびペプチドミメティックは、記載の方法により、Ｃ末端残基のα−アミンを脱保護し、次に適切に保護されたアミノ酸をペプチド結合でカップリングすることによって伸長される。この脱保護およびカップリング手順は、所望の配列が得られるまで繰り返される。このカップリングは構成アミノ酸を使って段階的に行なうか、断片（２〜数個のアミノ酸）の縮合によって行なうか、両方の過程の組合せによって行なうか、または J. Am. Chem. Soc.，1963，85，2149-2154 に初めて記載された方法による固相ペプチド合成で行なうことができる。
【０１７２】
ペプチド、ポリペプチドおよびペプチドミメティックは自動合成機器を使って合成することもできる。ペプチド、ポリペプチドおよびペプチドミメティック合成の手順は、上記に加えて、StewartおよびYoung「Solid Phase Peptide Synthesis」第2版，Pierce Chemical Co.，イリノイ州ロックフォード（1984）、Gross，Meienhofer，Udenfriend編「The Peptides：Analysis, Synthesis, Biology」第1、2、3、5、および9巻，Academic Press，ニューヨーク（1980〜1987）、Bodanszky「Peptide Chemistry：A Practical Textbook」Springer-Verlag，ニューヨーク（1988）、ならびにBodanszkyら「The Practice of Peptide Synthesis」Springer-Verlag，ニューヨーク（1984）に記載されている。
【０１７３】
２つのアミノ酸誘導体、アミノ酸とペプチド、ポリペプチドもしくはペプチドミメティック、２つのペプチド、ポリペプチドもしくはペプチドミメティック断片間のカップリング、またはペプチド、ポリペプチドまたはペプチドミメティックの環化は、標準的なカップリング手順、例えばアジド法、混合炭酸無水物（クロロギ酸イソブチル）法、カルボジイミド（ジシクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミド、または水溶性カルボジイミド）法、活性エステル（ｐ−ニトロフェニルエステル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）法、ウッドワード試薬Ｋ法、カルボニルジイミダゾール法、ＢＯＰ−Ｃｌなどのリン試薬、または酸化還元法などを使って行なうことができる。これらの方法の一部（特にカルボジイミド）は、１−ヒドロキシベンゾトリアゾールの添加によって強化することができる。これらのカップリング反応は溶液（液相）または固相で行なうことができる。
【０１７４】
構成アミノ酸またはアミノ酸ミメティックの官能基は、望ましくない結合が形成されるのを避けるために、通例、カップリング反応中は保護される。使用することができる保護基は、Greene「Protective Groups in Organic Synthesis」John Wiley & Sons，ニューヨーク（1981）および「The Peptides：Analysis, Synthesis, Biology」第3巻，Academic Press，ニューヨーク（1981）に列挙されている。
【０１７５】
Ｃ末端残基のα−カルボキシル基は、切断するとカルボン酸を与えることができるエステルで保護しうる。これらの保護基には、
（１）アルキルエステル、例えばメチルおよびｔ−ブチル、
（２）アリールエステル、例えばベンジルおよび置換ベンジル、または
（３）穏和な塩基処理または穏和な還元手段によって切断することができるエステル、例えばトリクロロエチルおよびフェナシルエステル
が含まれる。
【０１７６】
固相法の場合、Ｃ末端アミノ酸は不溶性担体（通常はポリスチレン）に取付けられる。これらの不溶性担体は、伸長条件に対して安定であるが後に容易に切断される結合をカルボキシル基との反応によって形成するような基を含有する。例として、オキシムレジン（DeGradoおよびKaiser（1980）J. Org. Chem. 45，1295-1300）、クロロまたはブロモメチルレジン、ヒドロキシメチルレジン、およびアミノメチルレジンが挙げられる。これらのレジンの多くは、所望のＣ末端アミノ酸が既に組み込まれた状態で市販されている。
【０１７７】
通例、各アミノ酸のα-アミノ基は保護される。当該技術分野で既知の任意の保護基を使用することができる。それらの例は、
（１）アシル型、例えばホルミル、トリフルオロアセチル、フタリル、およびｐ−トルエンスルホニル；
（２）芳香族カルバメート型、例えばベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）および置換ベンジルオキシカルボニル、１−（ｐ−ビフェニル）−１−メチルエトキシカルボニル、ならびに９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）；
（３）脂肪族カルバメート型、例えばｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、エトキシカルボニル、ジイソプロピルメトキシカルボニル、およびアリルオキシカルボニル；
（４）環状アルキルカルバメート型、例えばシクロペンチルオキシカルボニルおよびアダマンチルオキシカルボニル；
（５）アルキル型、例えばトリフェニルメチルおよびベンジル；
（６）トリアルキルシラン、例えばトリメチルシラン、ならびに
（７）チオール含有型、例えばフェニルチオカルボニルおよびジチアスクシノイル
である。
【０１７８】
典型的なα−アミノ保護基は、ＢｏｃまたはＦｍｏｃである。ペプチド合成用に適切に保護された多くのアミノ酸またはアミノ酸ミメティック誘導体が市販されている。
【０１７９】
α−アミノ保護基は次のアミノ酸のカップリングに先立って切断される。Ｂｏｃ基を使用する場合、選り抜きの方法は、ニートのもしくはジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸、またはジオキサン中のＨＣｌである。次に、カップリングに先だって、または系内で、塩基性溶液、例えば水性緩衝液、またはジクロロメタンもしくはジメチルホルムアミド中の３級アミンにより、得られたアンモニウム塩を中和する。Ｆｍｏｃ基を使用する場合、選り抜きの試薬はジメチルホルムアミド中のピペリジンまたは置換ピペリジンであるが、任意の２級アミンまたは水性塩基性溶液を使用することができる。脱保護は０℃〜室温の温度で行なわれる。
【０１８０】
側鎖官能基を持つアミノ酸またはアミノ酸ミメティックはいずれも、通例、ペプチドの製造中は、上述した基のいずれかを使って保護される。これらの側鎖官能基にとって適切な保護基の選択および使用は、そのアミノ酸またはアミノ酸ミメティックおよびそのペプチド、ポリペプチドまたはペプチドミメティック中の他の保護基の存在に依存するであろうことは、当業者には理解されるだろう。α−アミノ基の脱保護およびカップリング中に除去されてはならないので、そのような保護基の選択は重要である。
【０１８１】
例えば、α−アミン保護用にＢｏｃを選択する場合、以下の保護基を許容することができる：アルギニンにはｐ−トルエンスルホニル（トシル）部分およびニトロ；リジンにはベンジルオキシカルボニル、置換ベンジルオキシカルボニル、トシルまたはトリフルオロアセチル；グルタミン酸およびアスパラギン酸にはベンジルまたはアルキルエステル、例えばシクロペンチル；セリンおよびスレオニンにはベンジルエーテル；チロシンにはベンジルエーテル、置換ベンジルエーテルまたは２−ブロモベンジルオキシカルボニル；システインにはｐ−メチルベンジル、ｐ−メトキシベンジル、アセトアミドメチル、ベンジル、またはｔ−ブチルスルホニル；そしてトリプトファンのインドールは、保護せずに放置するか、ホルミル基で保護することができる。
【０１８２】
α−アミノ保護用にＦｍｏｃを選択する場合、通常はｔｅｒｔ−ブチル系保護基を許容することができる。例えば、リジンにはＢｏｃ、セリン、スレオニンおよびチロシンにはｔｅｒｔ−ブチルエーテル、そしてグルタミン酸およびアスパラギン酸にはｔｅｒｔ−ブチルエステルを使用することができる。
【０１８３】
ペプチド、ポリペプチドもしくはペプチドミメティックの伸長、または環状ペプチドもしくはペプチドミメティックの伸長および環化が完了したら、全ての保護基を除去する。液相合成の場合、保護基は保護基の選択によって決まる何らかの方法で除去される。これらの手順は当業者にはよく知られている。
【０１８４】
固相合成を使って環状ペプチドまたはペプチドミメティックを合成する場合は、環化過程を妨害するかもしれない官能基から保護基を同時に除去することなく、ペプチドまたはペプチドミメティックをレジンから除去すべきである。したがって、ペプチドまたはペプチドミメティックを溶液中で環化させようとするなら、他の保護基を同時に除去することなく遊離のα−カルボキシレートおよび遊離のα−アミノ基が生成するような切断条件を選択する必要がある。あるいは、ペプチドまたはペプチドミメティックをヒドラジン分解によってレジンから除去し、次にアジド法によってカップリングすることもできる。もう一つの極めて便利な方法では、オキシムレジン上でペプチドまたはペプチドミメティックを合成した後、レジンからの分子内求核置換を行なって、環状ペプチドまたはペプチドミメティックを生成する（Tetrahedron Letters，1990，43，6121-6124）。オキシムレジンを使用する場合は、Ｂｏｃ保護スキームが一般に選択される。その場合、側鎖保護基を除去するための好ましい方法では、一般に、ジメチルスルフィド、アニソール、チオアニソール、またはｐ−クレゾールなどの添加剤を含有する無水ＨＦによる０℃での処理が行なわれる。ペプチドまたはペプチドミメティックの切断は、他の酸試薬、例えばトリフルオロメタンスルホン酸／トリフルオロ酢酸混合物などによって達成することもできる。
【０１８５】
この開示で使用される異常アミノ酸は、当業者によく知られている標準的な方法によって合成することができる（「The Peptides：Analysis, Synthesis, Biology」第5巻，342-449頁，Academic Press，ニューヨーク（1981））。N-アルキルアミノ酸は、既報の手順を使って製造することができる（Cheungら，Can. J. Chem.，1977，55，906、Freidingeら，J. Org. Chem.，1982，48，77）。
【０１８６】
ＭＭＰ基質への連結基の取付け、基質または連結基へのキレーターまたは結合ユニットの取付け、および連結基の断片を含有する基質の、連結基残部への取付けにより、全体としてＭＭＰ基質−連結基部分を形成させてから行なわれる、キレーターへの取付けは、いずれも標準的技術によって行なうことができる。これにはアミド化、エステル化、アルキル化、および尿素類またはチオ尿素類の形成などがあるが、これらに限定されるわけではない。これらの取付けを行なうための手順は、Brinkley,M.「Bioconjugate Chemistry」1992，3，1 に見いだすことができる。
【０１８７】
固体粒子表面修飾分野の当業者は、ＭＭＰ基質を常磁性金属イオンまたは重原子含有固体粒子に取付けるために、いくつかの方法を使用することができる。一般的には、ターゲティング部分またはターゲティング部分と連結基の組合せが、固体粒子表面の構成物と反応するカップリング基に取付けられる。カップリング基は、ＵＳ−Ａ−６２５４８５２に記載されているように、固体粒子表面上の表面ヒドロキシ基と反応するいくつかのシランのいずれでもよく、ＵＳ−Ａ−５５２０９０４に記載されているように固体粒子の表面とカップリングするポリホスホネート、ポリカルボキシレート、ポリホスフェートまたはそれらの混合物も含むことができる。
【０１８８】
ＭＭＰ基質Ｓを界面活性剤ミクロスフェアＸ３に取付けるには、いくつかの反応スキームを使用することができる。それらを以下の反応スキームで図解する。式中、Ｆは界面活性剤ミクロスフェアを形成する界面活性剤部分を表す。
【化１７】
2007504242.tif 000018
これらの反応スキームでは、置換基ＦおよびＳを逆にすることもできる。
【０１８９】
連結基Ｌｎは、いくつかの役割を果たすことができる。第一に、これは、金属キレーターまたは金属結合部分Ｃｈ、常磁性金属イオンまたは重原子含有固体粒子Ｘ２、および界面活性剤ミクロスフェアＸ３と、ＭＭＰ基質Ｓの１またはそれ以上との間のスペーシング基になって、Ｓの認識配列と心血管病に関係するＭＭＰ類との相互作用がＣｈ−Ｘ、Ｃｈ−Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３部分によって妨害される可能性が最小限になるようにする。試薬中に連結基を組み込む必要性は、Ｓ、Ｃｈ−Ｘ、Ｃｈ−Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３の素性に依存する。Ｃｈ−Ｘ、Ｃｈ−Ｘ１、Ｘ２およびＸ３を、ＭＭＰ類を阻害するというＳの能力を実質的に減少させずにＳに取付けることができない場合は、連結基を使用する。連結基は、Ｃｈ−Ｘ、Ｃｈ−Ｘ１、Ｘ２、またはＸ３に取付けられた１つの基に複数の基質を独立して取付ける手段にもなる。
【０１９０】
連結基は、本開示の診断剤に薬物動態調節剤を組み込む手段にもなる。薬物動態調節剤は、ターゲティング部分と心血管病で発現されるＭＭＰ類との相互作用以外の方法で、注射された医薬品の体内分布を指示する働きをする。例えば糖質、ポリアルキレングリコール、ペプチドまたは他のポリアミノ酸、およびシクロデキストリン類など（ただしこれらに限定されるわけではない）多種多様な官能基が、薬物動態調節剤として働きうる。調節剤は、親水性を増加または減少させるため、そして血液クリアランス速度を増加または減少させるために使用することができる。調節剤は、医薬品の排除経路を指示するためにも用いることができる。好ましい薬物動態調節剤は、中等度〜速い血液クリアランスおよび増大した腎排泄をもたらすものである。
【０１９１】
金属キレーターおよび結合部分は、その特定用途のために選択された金属イオンと安定な錯体を形成するように選択される。診断用放射性医薬品のためのキレーターまたは結合部分は、イメージング可能なガンマ線放射または陽電子放射を持つ放射性同位体、例えば99mＴｃ、95Ｔｃ、111Ｉｎ、62Ｃｕ、60Ｃｕ、64Ｃｕ、67Ｇａ、68Ｇａ、86Ｙなどと安定な錯体を形成するように選択される。
【０１９２】
テクネチウム、銅およびガリウム同位体用のキレーターは、ジアミンジチオール、モノアミン−モノアミドジチオール、トリアミド−モノチオール、モノアミン−ジアミドモノチオール、ジアミンジオキシム、およびヒドラジンから選択される。これらのキレーターは一般に、窒素、酸素および硫黄から選択される供与原子を持つ四座型である。典型的な試薬は、アミン窒素およびチオール硫黄供与原子ならびにヒドラジン結合ユニットを持つキレーターを含んでなる。チオール硫黄原子およびヒドラジンは、試薬を放射性医薬品の合成に使用する前に、あるいはより多くの場合、放射性医薬品の合成中に系内で、置換することができる保護基を持ちうる。
【０１９３】
例示的なチオール保護基として、GreeneおよびWuts「Protective Groups in Organic Synthesis」John Wiley & Sons，ニューヨーク（1991）に列挙されるものが挙げられる。当該技術分野で知られる任意のチオール保護基を使用することができる。チオール保護基の具体例として、これらに限らないが、以下の基：アセトアミドメチル、ベンズアミドメチル、１−エトキシエチル、ベンゾイル、およびトリフェニルメチルを含む。
【０１９４】
ヒドラジン結合ユニット用の例示的保護基はヒドラゾンであり、これは水素、アルキル、アリールおよび複素環から選択される置換基を持つアルデヒドヒドラゾンまたはケトンヒドラゾンであることができる。
【０１９５】
金属放射性核種に結合している場合、ヒドラジン結合ユニットはヒドラジド基またはジアゼニド基と呼ばれ、放射性医薬品の残りの部分への放射性核種の結合点として役立つ。ジアゼニド基は末端型（当該基の１原子だけが放射性核種に結合している）またはキレート型であることができる。キレート型ジアゼニド基であるには、当該基の少なくとも１つの他の原子も放射性核種に結合していなければならない。金属に結合する原子を供与原子という。
【０１９６】
111Ｉｎおよび86Ｙ用のキレーターは、環状または非環状ポリアミノカルボキシレート、例えばＤＴＰＡ、ＤＯＴＡ、ＤＯ３Ａ、２−ベンジル−ＤＯＴＡ、α−（２−フェネチル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１−酢酸−４，７，１０−トリス（メチル酢酸）、２−ベンジルシクロヘキシルジエチレントリアミン五酢酸、２−ベンジル−６−メチル−ＤＴＰＡ、および６，６”−ビス［Ｎ，Ｎ，Ｎ”，Ｎ”−テトラ（カルボキシメチル）アミノメチル）−４’−（３−アミノ−４−メトキシフェニル）−２，２”：６’，２”−テルピリジンなどから選択される。市販されていないこれらのキレーターを合成する手順は、J. Chem. Soc. Perkin Trans.，1992，1，1175、Bioconjugate Chem.，1991，2，187、J. Nucl. Med.，1990，31，473、US-A-5,064,956、およびUS-A-4,859,777に見いだすことができる。
【０１９７】
金属イオンの配位圏は、その金属に結合している全ての配位子または基を包含する。遷移金属放射性核種は、安定になるために、通例、４以上８以下の整数からなる配位数（供与原子の数）を持つ。すなわち、金属には４〜８個の原子が結合しており、完成した配位圏を持つという。安定な放射性核種錯体に要求される配位数は、放射性核種の素性、その酸化状態、および供与原子のタイプによって決まる。キレーターまたは結合ユニットがその配位圏を完成させることによって金属放射性核種を安定化するのに必要な原子の全てを提供しない場合、配位圏は、補助配位子または共配位子と呼ばれる他の配位子（これもまた、末端配位子またはキレート配位子であることができる）に由来する供与原子によって完成される。
【０１９８】
多数の配位子が補助配位子または共配位子として役立ち、その選択は、例えば放射性医薬品の合成の容易さ、補助配位子の化学的および物理的性質、得られる放射性医薬品の形成速度、収率、異性体型の数、該補助配位子または共配位子を患者に投与してもその患者に有害な生理学的結果をもたらさないこと、ならびに凍結乾燥キット製剤における配位子の適合性などといった、種々の考慮すべき事項によって決定される。補助配位子の電荷および親油性は、放射性医薬品の電荷および親油性に影響を及ぼすだろう。例えば、４，５−ジヒドロキシ−１，３−ベンゼンジスルホネートの使用は、２つのアニオン基が追加された放射性医薬品をもたらすだろう。なぜならスルホネート基は生理条件下ではアニオン性であるだろうからである。Ｎ−アルキル置換３，４−ヒドロキシピリジノンの使用は、アルキル置換基のサイズに応じて様々な親油性度を持つ放射性医薬品をもたらすだろう。
【０１９９】
本開示の好ましいテクネチウム放射性医薬品は、ヒドラジドまたはジアゼニド結合ユニットと補助配位子ＡL1、または結合ユニットと２タイプの補助配位子ＡL1およびＡL2、または２つの窒素原子および２つの硫黄原子を含んでなる四座キレーターを含んでなる。補助配位子ＡL1は２個以上の硬い供与原子、例えば酸素およびアミン窒素（ｓｐ3混成）を含んでなる。それらの供与原子は放射性核種金属の配位圏中の部位の少なくとも２つを占有し、補助配位子ＡL1は三元配位子系中の３つの配位子の１つとして役立つ。補助配位子ＡL1の例としては、二酸素配位子および官能化アミノカルボキシレートが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。そのような配位子は数多く市販されている。
【０２００】
補助二酸素配位子には、少なくとも２つの酸素供与原子を介して金属イオンに配位する配位子が包含される。例として、グルコヘプトネート、グルコネート、２−ヒドロキシイソブチレート、ラクテート、タートレート、マンニトール、グルカレート、マルトール、コウジ酸、２，２−ビス(ヒドロキシメチル)プロピオン酸、４，５−ジヒドロキシ−１，３−ベンゼンジスルホネート、または置換もしくは無置換１，２−もしくは３，４−ヒドロキシピリジノンが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。（これらの例における配位子の名称は、その配位子のプロトン化型または非プロトン化型を指す。）
【０２０１】
官能化アミノカルボキシレートには、アミン窒素および酸素供与原子の組合せを持つ配位子が包含される。例としては、イミノ二酢酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、ニトリロ三酢酸、Ｎ，Ｎ’−エチレンジアミン二酢酸、Ｎ，Ｎ，Ｎ’−エチレンジアミン三酢酸、ヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸、およびＮ，Ｎ’−エチレンジアミンビスヒドロキシフェニルグリシンが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。（これらの例における配位子の名称は、その配位子のプロトン化型または非プロトン化型を指す。）
【０２０２】
テクニチウム標識ヒドラジノ修飾タンパク質の形成速度の改善をもたらす一連の官能化アミノカルボキシレートがＵＳ−Ａ−５３５０８３７に開示されている。本発明者らは、これらのアミノカルボキシレートの一部が、本開示の放射性医薬品の収率を改善させることを確認した。好ましい補助配位子ＡL1としてグリシンの誘導体である官能化アミノカルボキシレートが挙げられ、最も好ましいのはトリシン（トリス(ヒドロキシメチル)メチルグリシン）である。
【０２０３】
本開示の最も好ましいテクニチウム診断剤は、ヒドラジドまたはジアゼニド結合ユニットと、ＡL1およびＡL2と呼ばれる２タイプの補助配位子、またはジアミノジチオールキレーターを含んだ。第２のタイプの補助配位子ＡL2は、ホスフィンリン、アルシンヒ素、イミン窒素（ｓｐ2混成）、硫黄（ｓｐ2混成）および炭素（ｓｐ混成）から選択される１またはそれ以上の柔らかい供与原子、ｐ酸特徴を持つ原子を含む。配位子ＡL2は単座、二座または三座配位子であることができる。配座数は配位子中の供与原子の数によって定義される。二座配位子中の２つの供与原子のうちの１つ、および三座配位子中の３つの供与原子のうちの１つは、柔らかい供与原子でなければならない。ＵＳ−Ａ−５７４４１２０およびＵＳ−Ａ−５７３９７８９には、１またはそれ以上の補助配位子ＡL2を含まない放射性医薬品よりも安定な、１またはそれ以上の補助配位子または共配位子ＡL2を含む放射性医薬品が開示されている。すなわち、それらの異性体型の数は最小であり、それらの相対的比率は経時的に有意に変化せず、希釈しても実質的に元のままである。
【０２０４】
ホスフィンまたはアルシン供与原子を含む配位子ＡL2は、三置換ホスフィン、三置換アルシン、四置換ジホスフィンおよび四置換ジアルシンである。イミン窒素を含む配位子ＡL2は不飽和または芳香族窒素含有５員または６員複素環である。硫黄（ｓｐ2混成）供与原子を含む配位子はチオカルボニルであり、Ｃ＝Ｓ部分を含む。炭素（ｓｐ混成）供与原子を含む配位子は、ＣＮＲ部分（式中、Ｒは有機基である）を含むイソニトリルである。そのような配位子は数多く市販されている。イソニトリルは、ＵＳ−Ａ−４４５２７７４およびＵＳ−Ａ−４９８８８２７に記載されているように合成することができる。
【０２０５】
好ましい補助配位子ＡL2は、三置換ホスフィンおよび不飽和または芳香族５員または６員複素環である。最も好ましい補助配位子ＡL2は、三置換ホスフィンおよび不飽和５員複素環である。
【０２０６】
補助配位子ＡL2は、アルキル、アリール、アルコキシ、ヘテロシクリル、アリールアルキル、アルキルアリールおよびアリールアルキルアリール基で置換されていてよく、酸素、窒素、リンまたは硫黄などのヘテロ原子を含む官能基を持っても持たなくてもよい。そのような官能基の例として、ヒドロキシル、カルボキシル、カルボキサミド、ニトロ、エーテル、ケトン、アミノ、アンモニウム、スルホネート、スルホンアミド、ホスホネート、およびホスホンアミドが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。官能基は、放射性医薬品の生物学的性質に影響を及ぼしうる（例えば非標的組織、細胞または体液への分布ならびに身体からの除去機構および除去速度を変化させる）配位子の親油性および水溶性を変化させるために選択することができる。
【０２０７】
磁気共鳴イメージング造影剤用のキレーターは、Ｇｄ（ＩＩＩ）、Ｄｙ（ＩＩＩ）、Ｆｅ（ＩＩＩ）、およびＭｎ（ＩＩ）などの常磁性金属イオンと安定な錯体を形成するように選択され、ＤＴＰＡ、ＤＯＴＡ、ＤＯ３Ａ、２−ベンジル−ＤＯＴＡ、アルファ−（２−フェネチル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１−酢酸−４，７，１０−トリス（メチル酢酸）、２−ベンジルシクロヘキシルジエチレントリアミン五酢酸、２−ベンジル−６−メチルＤＴＰＡ、および６，６”−ビス［Ｎ，Ｎ，Ｎ”，Ｎ”−テトラ（カルボキシメチル）アミノメチル）−４’−（３−アミノ−４−メトキシフェニル）−２，２’:６’，２”−テルピリジンなどの環状および非環状ポリアミノカルボキシレートから選択される。
【０２０８】
本開示の診断剤にはそれらの効力を決定する２つの重要な特徴がある。すなわちＭＭＰ選択性と、血液からのクリアランス速度である。本開示の好ましい診断剤は、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−９、またはＭＭＰ−１４のみに、またはそれらの組合せに、他のＭＭＰ類との比較で選択性を示すターゲティング部分を含む。最も好ましいのは、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−９、またはＭＭＰ−１４のみに、またはそれらの組合せに、他のＭＭＰ類との比較で選択性を示すＭＭＰ基質である。
【０２０９】
血液からのクリアランス速度は、心臓イメージング法にとって特に重要である。というのも、心血液プールは、イメ―ジングしようとする病巣と比較して大きいからである。有効な心臓イメージング剤の場合、標的対バックグラウンド比（病巣対血液および病巣対筋）は典型的には約１．５以上、典型的には約２．０以上、さらに典型的にはそれ以上である。本開示の好ましい医薬品は、マウスモデルでの測定で注射後２時間にて約１０％ｉ．ｄ．／ｇ未満をもたらし、イヌモデルでの測定で注射後２時間にて約０．５％ｉ．ｄ．／ｇ未満をもたらすような血液クリアランス速度を持つ。本開示の最も好ましい診断剤は、マウスモデルでの測定で注射後２時間にて約３％ｉ．ｄ．／ｇ未満をもたらし、イヌモデルでの測定で注射後２時間にて約０．０５％ｉ．ｄ．／ｇ未満をもたらすような血液クリアランス速度を持つ。
【０２１０】
テクネチウムを含有すると共にヒドラジドまたはジアゼニド結合ユニットを含む本開示の診断剤は、約０℃〜約１００℃の温度で、放射性核種の塩、本開示の試薬、補助配位子ＡL1、補助配位子ＡL2、および還元剤を、水溶液中で混合することによって、容易に製造することができる。テクネチウムを含有し、２つの窒素原子および２つの硫黄原子を持つ四座キレーターを含む、本開示の診断剤は、約０℃〜約１００℃の温度で、放射性核種の塩、本開示の試薬、および還元剤を、水溶液中で混合することによって、容易に製造することができる。
【０２１１】
本開示の試薬中の結合ユニットがヒドラゾン基として存在する場合は、典型的には、まずそれを、プロトン化されていてもプロトン化されていなくてもよいヒドラジンに変換してから、金属放射性核種と錯化させる。ヒドラゾン基からヒドラジンへの変換は、放射性核種との反応前に行なうか（この場合は、放射性核種および1つまたは複数の補助配位子または共配位子を試薬と混合するのではなく、キレーターまたは結合ユニットを持つ試薬の加水分解型と混合する）、放射性核種の存在下で行なう（この場合は、試薬そのものを放射性核種および１つまたは複数の補助配位子または共配位子と混合する）ことができる。後者の場合、反応混合物のｐＨは通常、中性または酸性である。
【０２１２】
もう一つの選択肢として、ヒドラジドまたはジアゼニド結合ユニットを含む本開示の診断剤は、まず、約０℃〜約１００℃の温度で、放射性核種の塩、補助配位子ＡL1、および還元剤を水溶液中で混合することによって補助配位子ＡL1との中間放射性核種錯体を形成させた後、本開示の試薬および補助配位子ＡL2を加え、約０℃〜約１００℃の温度でさらに反応させることにより、製造することができる。
【０２１３】
もう一つの選択肢として、ヒドラジドまたはジアゼニド結合ユニットを含む本開示の診断剤は、まず、約０℃〜約１００℃の温度で、放射性核種の塩、補助配位子ＡL1、本開示の試薬、および還元剤を、水溶液中で混合することによって中間放射性核種錯体を形成させた後、補助配位子ＡL2を加え、さらに約０℃〜約１００℃の温度でさらに反応させることにより、製造することができる。
【０２１４】
テクネチウム放射性核種は通例、過テクネチウム酸イオンまたは過レニウム酸イオンおよび医薬的に許容されるカチオンの化学形態をとっている。過テクネチウム酸塩型は、通例、市販の99mＴｃジェネレータから得られるような過テクネチウム酸ナトリウムである。本開示の放射性医薬品を製造するために用いられる過テクネチウム酸塩の量は、約０．１ｍＣｉ〜約１Ｃｉ、より典型的には約１〜約２００ｍＣｉでありうる。
【０２１５】
本開示のテクネチウム診断剤を製造するために用いられる本開示の試薬の量は、約０．０１μg〜約１０ｍｇ、より典型的には約０．５μg〜約２００μgでありうる。使用量は、他の反応物の量および製造すべき本開示の放射性医薬品の素性によって決まるだろう。
【０２１６】
補助配位子ＡL1の使用量は、約０．１ｍｇ〜約１ｇ、より典型的には約１ｍｇ〜約１００ｍｇでありうる。特定の放射性医薬品に関する正確な量は、製造すべき本開示の放射性医薬品の素性、使用する手法ならびに他の反応物の量および素性の関数である。ＡL1の量が多すぎると、生物活性分子を含まないテクネチウム標識ＡL1から構成される副生成物、またはテクネチウム標識生物活性分子と補助配位子ＡL1とから構成されるが補助配位子ＡL2を含まない副生成物の形成が起こるだろう。ＡL1の量が少なすぎると、補助配位子ＡL2を含むが補助配位子ＡL1を含まないテクネチウム標識生物活性分子、または還元加水分解型テクネチウム、またはテクネチウムコロイドなどの他の副生成物が生じるだろう。
【０２１７】
補助配位子ＡL2の使用量は、約０．００１ｍｇ〜約１ｇ、より典型的には約０．０１ｍｇ〜約１０ｍｇでありうる。特定の放射性医薬品に関する正確な量は、製造すべき本開示の放射性医薬品の素性、使用する手法ならびに他の反応物の量および素性の関数である。ＡL2の量が多すぎると、生物活性分子を含まないテクネチウム標識ＡL2から構成される副生成物、またはテクネチウム標識生物活性分子と補助配位子ＡL2とから構成されるが補助配位子ＡL1を含まない副生成物の形成が起こるだろう。
【０２１８】
本開示のもう一つの態様では、放射標識ＭＭＰ基質含有診断剤のシンチグラフィー像が、放射標識心臓灌流イメージング剤のシンチグラフィー像と同時に取得されるだろう。この同時二重同位体イメージングは、分光的に分離可能なガンマ線放射エネルギーを持つＭＭＰ基質イメージング剤および灌流イメージング剤の放射性同位体を利用することによって行なわれるだろう。例えば、99mＴｃ心臓灌流イメージング剤（99mＴｃ−セスタミビなど）またはＴｌ２０１（塩化第一タリウムとして）と、111Ｉｎ標識ＭＭ基質化合物とが、標準的ガンマカメラで同時にイメージングされるだろう。約１４０ＫｅＶの99mＴｃガンマ線エネルギーまたは約８０ＫｅＶのＴｌ２０１ガンマ線エネルギーは、約１６０ＫｅＶおよび２５０ＫｅＶの111Ｉｎガンマ線エネルギーから容易に分離することができるので、これが可能になる。この心臓灌流と細胞外マトリックス分解（ＭＭＰ基質を含有する診断剤の局在化によって証明されるもの）との同時イメージングは、99mＴｃ−セスタミビまたはＴｌ２０１像に見られる灌流分布との比較に基づく心臓中の診断剤分布位置の改善された解剖学的評価にとって、極めて有用である。また、灌流および細胞外マトリックス分解の同時イメージングは、ある患者に対する１回のイメージングセッションにおいて、基礎にある心臓疾患を、血流変化および生化学的変化の両面から、より完全に評価することを可能にする。
【０２１９】
心臓灌流および細胞外マトリックス分解の同時二重同位体イメージングは、１回のイメージングセッション中に、脆弱なプラークの部位の局在を可能にし、心臓灌流を可視化することを可能にする。また、うっ血性心不全（ＭＭＰ基質を含有する診断剤から）および冠状動脈疾患（灌流イメージング剤から）に関係する組織変化の同時イメージングは、うっ血性心不全の基礎にある原因を特徴づけるのに極めて有用である。
【０２２０】
患者における異なる放射性同位体標識放射性医薬品の同時イメージングは既に報告されている。例えば、Antunesら，Am J. Cardiol.，1992，70，426-431 は、Ｔｌ２０１による心臓灌流のイメージングと共に、111Ｉｎアンチミオシン抗体で心筋梗塞をイメージングすることが可能であることを実証している。しかし、本開示の二重同位体イメージングは新しい。なぜなら、これは、ＭＭＰ基質および心臓灌流イメージング化合物を含有する放射標識診断剤の同時二重同位体イメージングに対して初めて報告されたアプローチだからである。ＭＭＰ基質シンチグラフィーイメージングと灌流イメージングとを含有する診断剤を使ったシンチグラフィーイメージングの組合せは、１回のイメージングセッションで、虚血性冠状動脈疾患またはうっ血性心不全に関する並外れた量の臨床情報を、画像診断医に提供する。
【０２２１】
本開示の診断剤の合成に適した還元剤として、第一スズ塩、亜ジチオン酸塩または亜硫酸水素塩、水素化ホウ素塩、アスコルビン酸、システイン、ホスフィン、および第一銅または第一鉄塩、ならびにホルムアミジンスルフィン酸が挙げられ、それらの塩類は任意の医薬的に許容される形態をとりうる。具体的な還元剤は第一スズ塩である。他の還元剤はＵＳ−Ａ−５６６２８８２に記載されている。使用する還元剤の量は、約０．００１ｍｇ〜約１０ｍｇ、より典型的には約０．００５ｍｇ〜約１ｍｇでありうる。
【０２２２】
本開示のインジウム、銅、ガリウム、およびイットリウム診断剤は、約０℃〜約１００℃の温度で放射性核種の塩および本開示の試薬を水溶液中で混合することによって容易に製造することができる。これらの放射性核種は通例、塩酸、硝酸または硫酸などの鉱酸中の希水溶液として得られる。放射性核種は、水性溶液に溶解された１〜約１０００等量の本開示の試薬と混合される。反応混合物のｐＨを約３〜約１０に維持するために、通例、緩衝剤が使用される。
【０２２３】
本開示のガドリニウム、ジスプロシウム、鉄およびマンガン診断剤は、約０℃〜約１００℃の温度で常磁性金属イオンの塩および本開示の試薬を水溶液中で混合することによって容易に製造することができる。これらの常磁性金属イオンは通例、塩酸、硝酸または硫酸などの鉱酸中の希水溶液として得られる。常磁性金属イオンは、水性溶液に溶解された１〜約１０００等量の本開示の試薬と混合される。反応混合物のｐＨを約３〜約１０に維持するために、通例、緩衝剤が使用される。
【０２２４】
製造時間の合計は、金属イオンの素性、反応物の素性および量ならびに製造に使用する手法に依存して変動するだろう。製造は約１分で完了して収率約８０％以上の放射性医薬品をもたらす場合もあるし、さらに時間がかかる場合もある。より高純度の金属医薬品が必要であるか望まれる場合は、液体クロマトグラフィー、固相抽出、溶媒抽出、透析または限外濾過など、当業者に周知のいくつかの技術のいずれかによって、生成物を精製することができる。
【０２２５】
診断用放射性医薬品は、静脈内注射により、通常は食塩溶液として、体重７０ｋｇにつき約１〜約１００ｍＣｉの用量で、または典型的には約５〜約５０ｍＣｉの用量で投与される。イメージングは既知の手法を使って行なわれる。
【０２２６】
磁気共鳴イメージング造影成分を含有する本開示の診断剤は、ＵＳ−Ａ−５１５５２１５、ＵＳ−Ａ−５０８７４４０、Magn. Reson. Med.，1986，3，808、Radiology，1988，166，835、およびRadiology，1988，166，693 に記載されている他のＭＲＩ剤と同様の方法で使用することができる。一般に、造影剤の滅菌水溶液は、体重１ｋｇにつき約０．０１〜約１．０ｍｍｏｌの投与量で患者に静脈内投与される。
【０２２７】
Ｘ線造影剤として使用する場合、本開示の診断剤は、一般に約１ｍＭ〜約５Ｍ、典型的には約０．１Ｍ〜約２Ｍの重原子濃度を持つべきである。静脈内注射によって投与される投与量は、通例、約０．５ｍｍｏｌ／ｋｇ〜約１５ｍｍｏｌ／ｋｇ、典型的には約０．８ｍｍｏｌ／ｋｇ〜約１．２ｍｍｏｌ／ｋｇであるだろう。イメージングは既知の技術、典型的にはＸ線コンピュータ断層撮影を使って行なわれる。
【０２２８】
超音波造影成分を含有する本開示の診断剤は、静脈内注射により、体重１ｋｇにつきエコー源性気体約１０〜約３０μＬの量で、または速度約３μＬ／ｋｇ／分の注入によって投与される。イメージングは既知の超音波検査技術を使って行なわれる。
【０２２９】
本開示の他の特徴は例示的態様を以下に説明する過程で明白になるだろう。以下の説明は、本開示を例証するために記載するものであって、その限定を意図するものではない。以下、下記の具体的かつ限定でない実施例を参照することによって、本開示を例証する。有機合成分野の当業者は、開示化合物への合成系路を他にも知っているかもしれない。本明細書で使用する試薬および中間体は、別段の記載がない限り、市販されているか、標準的な文献法に従って製造される。
【０２３０】
実施例１
（１Ｓ）−１−［（２Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−｛６−［（６−ヒドラジノ（３−ピリジル））カルボニルアミノ］ヘキサノイル｝ピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−５−アミノペンタノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）−４−カルボキシブタノイルアミノ］プロパン−１，３−ジカルボン酸トリフルオロ酢酸塩の合成
【化１８】
2007504242.tif 000019
パートＡ−Ｆｍｏｃ−Ａｈｘ−ＰＬＧ−Ｈｐｈｅ−ＯＬＥＥ−ワンレジンの製造
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ワンレジン（２．０００ｇ，置換レベル＝０．９ｍｍｏｌ／ｇ）を５０ｍｌのアドバンスドケムテック反応槽に入れた。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ×２）で洗浄することによってレジンを膨潤させ、以下のステップを実行した。（ステップ１）Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（２０ｍＬ）を使って、Ｆｍｏｃ基を３０分間、除去した。（ステップ２）レジンを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で、十分に洗浄した（各２０ｍＬ）。（ステップ３）Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）およびジイソプロピルエチルアミン（３ｍＬ）中のＦｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ（３．０６４ｇ，７．２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１．１０２ｇ，７．２ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（２．７３１ｇ，７．２ｍｍｏｌ）をレジンに加え、反応を４時間進行させた。（ステップ４）レジンを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で、十分に洗浄した（各２０ｍｌ）。（ステップ５）半定量的ニンヒドリンアッセイおよび定量的ピクリン酸アッセイまたはフルベン−ピペリジンアッセイで評価したところ、カップリング反応は９５％以上完了していることがわかった。Ｇ−Ｈｐｈｅ−ＯＬＥＥという配列に達するまでステップ１〜５を繰り返した。残りのアミノ酸のカップリングでは、高いカップリング収率を達成するために、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の４０％ＤＭＳＯにおける二重カップリングが必要だった。
【０２３１】
パートＢ−Ｈｙｎｉｃ−Ａｈｘ−ＰＬＧ−Ｈｐｈｅ−ＯＬＥＥ−ＯＨの製造
上記パートＡで製造したペプチド−レジンの半分を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（２０ｍＬ）で、３０分間処理した。レジンを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で、十分に洗浄した（各２０ｍＬ）。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）およびジイソプロピルエチルアミン（３ｍＬ）中のＢｏｃ−Ｈｙｎｉｃ−ＯＨ（０．９１２ｇ，３．６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．５５１ｇ，３．６ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（１．３６６ｇ，３．６ｍｍｏｌ）を加え、反応を４時間進行させた。レジンを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で、十分に洗浄した（各２０ｍＬ）。半定量的ニンヒドリンアッセイおよび定量的ピクリン酸アッセイまたはフルベン−ピペリジンアッセイで評価したところ、カップリング反応は完了していることがわかった。
【０２３２】
上記のレジンの半分をトリフルオロ酢酸（９．００ｍＬ）、Ｈ2Ｏ（０．２３６ｍＬ）およびＴＩＳ（０．２３６ｍＬ）と共に２時間撹拌した。焼結ガラス漏斗で濾過することによってレジンを除去し、レジンをトリフルオロ酢酸（２ｍＬ×２）で十分に洗浄した。濾液を２ｍＬまで濃縮し、エーテル（１０ｍＬ）で希釈した。得られた沈殿物を濾過によって集め、エーテル（５ｍＬ×３）で洗浄し、乾燥することにより、標記化合物を無色の固体（０．６７３ｇ）として得た。フェノメネックスルナ（Phenomenex Luna）Ｃ１８（２）カラム（４１．２×２５０ｍｍ）および０．１％トリフルオロ酢酸を含有する１８→３６％アセトニトリルの０．５０％／分グラジエント（流量８０ｍＬ／分）による逆相ＨＰＬＣで精製した後、フェノメネックスジュピター（Phenomenex Jupiter）Ｃ１８カラム（２１．２×２５０ｍｍ）で、０．１Ｍ ＮＨ4ＯＡｃ（ｐＨ７）を含有する１８→３６％アセトニトリルの０．６７％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を使って精製した。生成物画分の凍結乾燥により、標記化合物を無色の固体（０．０４０ｇ，総収率７．５％，ＨＰＬＣ純度１００％）として得た。ＭＳ：m/e 591.0［2M+H］（100％），1180.9［M+H］（20％）；ＦＴ−ＭＳ：計算値（C56H85N13O15［M+2H］として）：590.8217、実測値：590.8214。Ｌ−ロイシンのキラル分析：９９．８％。
【０２３３】
実施例２
１−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（｛１−［６−（２−｛２−［（６−｛［（１Ｅ）−１−アザ−２−（２−スルホフェニル）ビニル］アミノ｝（３−ピリジル））カルボニルアミノ］（２Ｒ）−３−フェニルプロパノイルアミノ｝−（２Ｒ）−３−フェニルプロパノイルアミノ）ヘキサノイル］（２Ｓ）ピロリジン−２−イル｝カルボニルアミノ）（２Ｓ）−４−メチルペンタノイルアミノ］アセチルアミノ｝（２Ｓ）−４−フェニルブタノイルアミノ）（２Ｓ）−５−アミノペンタノイルアミノ］（２Ｓ）−４−メチルペンタノイルアミノ｝（２Ｓ）−４−カルボキシブタノイルアミノ）（１Ｓ）プロパン−１，３−ジカルボン酸トリフルオロ酢酸塩の合成
【化１９】
2007504242.tif 000020
実施例１・パートＡで得たペプチド−レジン（０．５００ｇ，置換レベル＝０．４５ｍｍｏｌ／ｇ）を５０ｍＬ反応槽に入れた。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ×２）で洗浄することによってレジンを膨潤させ、以下のステップを実行した。（ステップ1）Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（２０ｍＬ）を使って、Ｆｍｏｃ基を３０分間、除去した。（ステップ２）レジンを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で、十分に洗浄した（各２０ｍＬ）。（ステップ３）ＤＭＳＯ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４０：６０，１０ｍＬ）およびジイソプロピルエチルアミン（３ｍＬ）中のＦｍｏｃ−ｆ−ＯＨ（０．３４９ｇ，０．９ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．１３８ｇ，０．９ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（０．３４１ｇ，０．９ｍｍｏｌ）をレジンに加え、反応を１０時間進行させた。（ステップ４）レジンを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で、十分に洗浄した（各２０ｍｌ）。（ステップ５）Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の４０％ＤＭＳＯ（１０ｍｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（３ｍｌ）中のＦｍｏｃ−ｆ−ＯＨ（０．３４９ｇ，０．９ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．１３８ｇ，０．９ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（０．３４１ｇ，０．９ｍｍｏｌ）をレジンに加え、反応を４時間進行させた。（ステップ６）レジンを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で、十分に洗浄した（各２０ｍｌ）。（ステップ７）半定量的ニンヒドリンアッセイおよび定量的ピクリン酸アッセイまたはフルベン−ピペリジンアッセイで評価したところ、カップリング反応は完了していることがわかった。二回目のＤ−フェニルアラニンを付加するために、ステップ１〜７を繰り返した。
【０２３４】
レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（２０ｍＬ）で３０分間処理し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で十分に洗浄した（各２０ｍＬ）。ＤＭＳＯ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４０：６０，１０ｍｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（３ｍｌ）中の２−［（１Ｅ）−２−アザ−２−（｛５−［（２，５−ジオキソピロリジニル）オキシカルボニル］（２−ピリジル）｝アミノ）ビニル］ベンゼンスルホン酸ナトリウム（０．３９６ｇ，０．９ｍｍｏｌ）およびＨＯＡｔ（０．１２２ｇ，０．９ｍｍｏｌ）をレジンに加え、反応を１８時間進行させた。レジンを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で十分に洗浄した（各２０ｍＬ）。切断した少量のペプチドをＬＣ／ＭＳにかけて評価することで、反応が完了したと決定されるまで、上記のカップリング手順をさらに３回繰り返した。最後のカップリング時に、カオトロピック塩ＫＳＣＮ（０．７７６ｇ，２０ｍｌ溶液中０．４Ｍ）を触媒としてカップリング溶液に加えた。
【０２３５】
上記のレジンの半分を９５％トリフルオロ酢酸、２．５％Ｈ2Ｏおよび２．５％ＴＩＳ（２ｍＬ）と共に２時間撹拌した。焼結ガラス漏斗で濾過することによってレジンを除去し、トリフルオロ酢酸（２ｍＬ×２）でレジンを十分に洗浄した。濾液を２ｍＬまで濃縮し、エーテル（１０ｍＬ）で希釈した。得られた沈殿物を濾過によって集め、エーテル（５ｍＬ×３）で洗浄し、乾燥することにより、標記化合物を無色の固体（０．１２６ｇ）として得た。フェノメネックスジュピターＣ１８カラム（４１．２×２５０ｍｍ）および０．１Ｍ ＮＨ4ＯＡｃ（ｐＨ７）を含有する２２．５→４５％アセトニトリルの０．８３％／分グラジエント（流量８０ｍＬ／分）を用いる逆相ＨＰＬＣを使って精製を行なった後、フェノメネックスジュピターＣ１８カラム（２１．２×２５０ｍｍ）および０．１Ｍトリフルオロ酢酸を含有する３１．５→３６％アセトニトリルの０．１７％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）での精製を行なった。生成物画分の凍結乾燥により、標記化合物を無色の固体（８．０ｍｇ，総収率４．４％，ＨＰＬＣ純度１００％）として得た。ＭＳ：m/e 822.0［2M+H］（100％），1643.6［M+H］（70％）；ＦＴ−ＭＳ：計算値（C81H107N15O20S［M+2H］として）：821.8842，実測値：821.8831。
【０２３６】
実施例３
１−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（｛１−［６−（２−［２−｛２−［（６−｛［（１Ｅ）−１−アザ−２−（２−スルホフェニル）ビニル］アミノ｝（３−ピリジル））カルボニルアミノ］（２Ｒ）−３−フェニルプロパノイルアミノ｝（２Ｒ）−３−フェニルプロパノイルアミノ］（２Ｒ）−３−フェニルプロパノイルアミノ）ヘキサノイル］（２Ｓ）ピロリジン−２−イル｝カルボニルアミノ）（２Ｓ）−４−メチルペンタノイルアミノ］アセチルアミノ｝（２Ｓ）−４−フェニルブタノイルアミノ）（２Ｓ）−５−アミノペンタノイルアミノ］（２Ｓ）−４−メチルペンタノイルアミノ｝（２Ｓ）−４−カルボキシブタノイルアミノ）（１Ｓ）プロパン−１，３−ジカルボン酸トリフルオロ酢酸塩の合成
【化２０】
2007504242.tif 000021
上記実施例２のＨＰＬＣ精製により、トリ−Ｄ−フェニルアラニンペプチドも得られた。生成物画分の凍結乾燥により、標記化合物を無色の固体（３．０ｍｇ，総収率１．４％，ＨＰＬＣ純度１００％）として得た。ＭＳ：m/e 895.7［2M+H］（100％），1790.7［M+H］（30％）；ＦＴ−ＭＳ：計算値（C90H116N16O21S［M+2H］として）：895.4184，実測値：895.4172。
【０２３７】
実施例４
（１Ｓ）−１−［（２Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−｛６−［（７−メトキシ−２−オキソ（２Ｈ−クロメン−３−イル））カルボニルアミノ］ヘキサノイル｝ピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−５−アミノペンタノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）−４−カルボキシブタノイルアミノ］プロパン−１，３−ジカルボン酸の合成
【化２１】
2007504242.tif 000022
実施例１・パートＡのペプチド−レジン（０．２ｇ，置換レベル＝０．４５ｍｍｏｌ／ｇ）を５０ｍＬ反応槽に入れた。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ×２）で洗浄することによってレジンを膨潤させ、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（２０ｍＬ）を使って、Ｆｍｏｃ基を３０分間、除去した。レジンを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で、十分に洗浄した（各２０ｍＬ）。ＤＭＳＯ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４０：６０，１０ｍＬ）中の７−メトキシクマリン−３−カルボン酸（０．０４ｇ，０．１８ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．０２８ｇ，０．１８ｍｍｏｌ）、およびＨＢＴＵ（０．０６９ｇ，０．１８ｍｍｏｌ）、ならびにジイソプロピルエチルアミン（３ｍＬ）をレジンに加え、反応を３時間進行させた。レジンを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で、十分に洗浄した（各２０ｍｌ）。半定量的ニンヒドリンアッセイおよび定量的ピクリン酸アッセイまたはフルベン−ピペリジンアッセイによる評価で反応が完了したと決定されるまで、上記のカップリング手順をさらに２回繰り返した。
【０２３８】
上記のレジンを９５％トリフルオロ酢酸、２．５％Ｈ2Ｏおよび２．５％ＴＩＳ（２ｍＬ）と共に１．５時間撹拌した。焼結ガラス漏斗で濾過することによってレジンを除去し、トリフルオロ酢酸（２ｍＬ×２）でレジンを十分に洗浄した。濾液を２ｍＬまで濃縮し、エーテル（１０ｍＬ）で希釈した。得られた沈殿物を濾過によって集め、エーテル（５ｍＬ×３）で洗浄し、乾燥することにより、標記化合物を油状物（０．１４５ｇ）として得た。フェノメネックスジュピターＣ１８カラム（２１．２×２５０ｍｍ）および０．１Ｍ ＮＨ4ＯＡｃ（ｐＨ７）を含有する１８→４５％アセトニトリルの１％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を用いる逆相ＨＰＬＣによって精製を行なった。生成物画分の凍結乾燥により、標記化合物を無色の固体（０．０１１ｍｇ，総収率１０％，ＨＰＬＣ純度１００％）として得た。ＭＳ：m/e 624.5［2M+H］（60％），1247.6［M+H］（100％）；ＦＴ−ＭＳ：計算値（C61H86N10O18［M+2H］として）：624.3134，実測値：624.3127。
【０２３９】
実施例５
４−（Ｎ−｛６−［（６−｛［（１Ｅ）−１−アザ−２−（２−スルホフェニル）ビニル］アミノ｝（３−ピリジル））カルボニルアミノ］ヘキシル｝カルバモイル）（４Ｓ）−４−［（２Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−５−アミノペンタノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）−４−カルボキシブタノイルアミノ]ブタン酸ビスアンモニウム塩の合成
【化２２】
2007504242.tif 000023
パートＡ−Ａｃ−ＰＬＧ−Ｈｐｈｅ−ＯＬＥＥ−ヘキサメチレン−ＮＨ−トリチルレジンの製造
１，６−ジアミノヘキサントリチルレジン（２．０００ｇ，置換レベル＝０．８１ｍｍｏｌ／ｇ）を５０ｍＬのアドバンスドケムテック反応槽に入れた。以下のステップを実行した。（ステップ１）ジクロロメタン（３回）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）でレジンを十分に洗浄した（各２０ｍＬ）。（ステップ２）Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）およびジイソプロピルエチルアミン（３ｍＬ）中のＦｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ（２．７６ｇ，６．５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．９９ｇ，６．５ｍｍｏｌ）、およびＨＢＴＵ（２．４６ｇ，６．５ｍｍｏｌ）をレジンに加え、反応を４時間進行させた。（ステップ３）Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）でレジンを十分に洗浄した（各２０ｍＬ）。（ステップ４）Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（２０ｍＬ）をレジンに加え、３０分間反応させた。（ステップ５）Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）でレジンを十分に洗浄した（各２０ｍＬ）。（ステップ６）フルベン−ピペリジンアッセイでレジンを分析したところ、負荷率（loading factor）は０．３３ｍｍｏｌ／ｇであることがわかった。所望のアミノ酸配列に達するまで、ステップ２〜６を繰り返した。カップリングステップは全て定量的収率で進行した。Ｆｍｏｃ−Ｏｒｎ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨでは二重カップリングが必要だった。レジンを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）に溶解した酢酸無水物（０．６６６ｍＬ，６．６ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（１．４ｍＬ，７．９２ｍｍｏｌ）で２．０時間処理し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、およびジクロロメタン（３回）で十分に洗浄し（各２０ｍＬ）、減圧下で乾燥した。
【０２４０】
パートＢ−Ａｃ−ＰＬＧ−Ｈｐｈｅ−ＯＬＥＥ−ヘキサメチレン−ＮＨ2の製造
パートＡで得たペプチド−レジン（１．０ｇ）を３０ｍＬのフリットガラス漏斗に入れ、ジクロロメタン（２５ｍＬ×２）で洗浄した。ペプチド−レジンを酢酸：Ｅｔ3ＳｉＨ：ジクロロメタン溶液（５：１：９４，１０ｍＬ）で２分間処理した。その溶液を、１０％ピリジン−メタノール溶液（２ｍＬ）中に直接、加圧濾過した。この切断ステップを５回繰り返した。合わせた濾液を濃縮してクロロメタンおよびメタノールを除去したところ、無色の油性固形物を得た。水（４０ｍＬ）でトリチュレートすることにより、無色の乾燥固体になり、それを濾過によって集めた。この粗生成物を、フェノメネックスジュピターＣ１８カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、１００ｍＭの酢酸アンモニウムを含有する３１．５→６７．５％アセトニトリルの０．９％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を使って精製した。２８．５分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、標記化合物を無色の固体（６１．３ｍｇ，１９．６％；ＨＰＬＣ純度，１００％）として得た。ＭＳ：m/e 537.0［(M-Boc-2(t-Bu)+2H］（100％），565.2［(M-Boc-(t-Bu))+2H］（45％），593.2［(M-Boc)+2H］（30％），654.2［(M+Na)+2H］(65％），1285.2［M+H］（95％），1307.1［M+Na］（25％）。
【０２４１】
パートＣ−4−（Ｎ−｛６−［（６−｛［（１Ｅ）−１−アザ−２−（２−スルホフェニル）ビニル］アミノ｝（３−ピリジル））カルボニルアミノ］ヘキシル｝カルバモイル）（４Ｓ）−４−［（２Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝−アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−５−アミノペンタノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）−４−カルボキシブタノイルアミノ］ブタン酸ビスアンモニウム塩の製造
【化２３】
2007504242.tif 000024
パートＢの生成物（２０．２ｍｇ，０．０１５７ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（２０μＬ，０．０７８５ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（７ｍＬ）溶液を、ＨＯＡｔ（２．１５ｍｇ，０．０１５７ｍｍｏｌ）および２−［（１Ｅ）−２−アザ−２−（｛５−［（２，５−ジオキソピロリジニル）オキシカルボニル］（２−ピリジル）｝アミノ）ビニル］ベンゼンスルホン酸ナトリウム（６．９ｍｇ，０．０１５７ｍｍｏｌ）で処理した。得られた溶液を窒素下に周囲温度で撹拌した。５時間時点で、ＨＯＡｔ（２．１５ｍｇ，０．０１５７ｍｍｏｌ）および２−［（１Ｅ）−２−アザ−２−（｛５−［（２，５−ジオキソピロリジニル）オキシカルボニル］（２−ピリジル）｝アミノ）ビニル］ベンゼンスルホン酸ナトリウム（６．９ｍｇ，０．０１５７ｍｍｏｌ）を反応槽に追加した。合計３０時間撹拌した後、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを減圧下で除去したところ、緑色油状物が生じ、それをエーテル（２ｍＬ×４）でトリチュレートすることにより、粉末状の緑色固体を得た。この固体をトリフルオロ酢酸／Ｅｔ3ＳｉＨ（９７：３）に溶解し、窒素下に４０℃で３０分間撹拌した。溶液を濃縮し、得られた油状物を、フェノメネックスジュピターＣ１８カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、１００ｍＭの酢酸アンモニウムを含有する５．８５→５０．８５％アセトニトリルの１．１２％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を使って精製した。２９．０分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、所望の化合物（１２．１ｍｇ，５６．０％）をＨＰＬＣ純度９９．２％の無色の固体として得た。ＭＳ：m/e 688.8［M+2H］（100％），1375.8［M+H］（30％）；高分解能ＭＳ：計算値（C65H95N14O17S［M+H］として）：1375.6715，実測値：1375.6704。
【０２４２】
実施例６
２−｛（１Ｅ）−２−［（５−｛Ｎ−［２−（｛４−［（（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルペンタノイルアミノ）アミノ］フェニル｝カルボニルアミノ）エチル］カルバモイル｝（２−ピリジル））アミノ］−２−アザビニル｝ベンゼンスルホン酸の合成
【化２４】
2007504242.tif 000025
パートＡ−（４−｛［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］アミノ｝フェニル）−Ｎ−｛２−［（フェニルメトキシ）カルボニルアミノ］エチル｝カルボキサミドの製造
【化２５】
2007504242.tif 000026
４−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ヒドラジノ］安息香酸（Schwartz,D.A.ら；Bioconj. Chem.，1991，2，333-336）（１．８ｇ，７．２９ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（２．０ｍＬ，１１．５ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（８ｍＬ）に溶解し、窒素下に室温で撹拌した。その溶液をＰｙＢｒｏＰ（３．４ｇ，７．２９ｍｍｏｌ）およびＮ−（２−アミノエチル）−カルバミン酸ベンジル塩酸塩（１．６８ｇ，７．２９ｍｍｏｌ）で処理した。２時間時点で、ＰｙＢｒｏＰ（０．３４ｇ，０．７２９ｍｍｏｌ）およびＮ−（２−アミノエチル）カルバミン酸ベンジル塩酸塩（０．１７ｇ，０．７２９ｍｍｏｌ）を反応溶液に追加した。６時間時点で、ＰｙＢｒｏＰ（０．６８ｇ，１．４６ｍｍｏｌ）およびＮ−（２−アミノエチル）カルバミン酸ベンジル塩酸塩（０．３４ｇ，１．４６ｍｍｏｌ）を追加した。その溶液を合計８時間撹拌し、減圧下で濃縮することにより、暗琥珀色油状物を得た。粗生成物を結晶化（エーテル）することにより、標記化合物２．０８ｇ（６６．８％）を、ＬＣ／ＭＳで純度１００％の無色の固体として得た。ＭＳ：m/e 429.3［M+H］（100％）。
【０２４３】
パートＢ−２−［（１Ｅ）−２−（｛５−［Ｎ−（２−｛［４−（｛（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アミノ）フェニル］カルボニルアミノ｝エチル）カルバモイル］（２−ピリジル）｝アミノ）−２−アザビニル］ベンゼンスルホン酸の製造
【化２６】
2007504242.tif 000027
パートＡの生成物（４０５．９ｍｇ，０．９５ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸／ジクロロメタン（１：１，１０ｍＬ）に溶解し、窒素下に周囲温度で１０分間反応させた。その溶液を濃縮して金色油状物にし、それをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）中に取り出した。この溶液をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中のＢｏｃ−ロイシン水和物（５５０ｍｇ，２．１９ｍｍｏｌ，ノババイオケム社）、ＨＢＴＵ（６６４ｍｇ，１．７５ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（１．７８ｍＬ，１０．２２ｍｍｏｌ）に加え、周囲温度で３０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを減圧下で除去し、得られた琥珀色油状物を、フェノメネックスジュピターカラム（４１．４×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、０．１％トリフルオロ酢酸を含有する２９．７→４９．５％アセトニトリルの０．６６％／分グラジエント（流量８０ｍＬ／分）を使って精製した。２３．０分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、標記化合物（３３４．２ｍｇ，６２．１％）を、ＨＰＬＣ純度１００％の無色の固体として得た。ＭＳ：m/e 442.5［M+H-Boc］（15％）；486.6［M+H-(t-Bu)］（60％）；542.5［M+H］（23％）；1084.1［2M+H］（100％）；1106.1［2M+Na｝（25％）。
【０２４４】
パートＣ−（２Ｓ）−Ｎ−（｛４−［Ｎ−（２−アミノエチル）カルバモイル］フェニル｝アミノ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタンアミドの製造
【化２７】
2007504242.tif 000028
パートＢの生成物（２９１．２ｍｇ，０．５３８ｍｍｏｌ）をエタノール（２５ｍＬ）中、２０％Ｐｄ／Ｃ（６０ｍｇ）、６０ｐｓｉで２０時間、水素化分解した。セライト（登録商標）濾過によって触媒を除去し、濾液を濃縮したところ、油性固形物を得た。この油状物をアセトニトリル：水（１：１，３０ｍＬ）に取り出し、凍結乾燥することにより、標記化合物を、ＨＰＬＣ純度８７．９％の無色の薄片状固体（２３１．６ｍｇ，収率１０５．７％）として得た。ＭＳ：m/e 352.5［M+H-(t-Bu)］（42％）；408.6［M+H］（100％）；815.8［2M+H］（25％）。
【０２４５】
パートＤ−２−｛（１Ｅ）−２−［（５−｛Ｎ−［２−（｛４−［（（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルペンタノイルアミノ）アミノ］フェニル｝カルボニルアミノ）エチル］カルバモイル｝（２−ピリジル））アミノ］−２−アザビニル｝ベンゼンスルホン酸の製造
【化２８】
2007504242.tif 000029
パートＣの生成物（５０．０ｍｇ，０．１２３ｍｍｏｌ）、２−［（１Ｅ）−２−アザ−２−（｛５−［（２，５−ジオキソピロリジニル）オキシカルボニル］（２−ピリジル）｝アミノ）ビニル］ベンゼンスルホン酸ナトリウム（５４．２ｍｇ，０．１２３ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（１６．９ｍｇ，０．１２３ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（１２０μＬ，０．６１５ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）溶液を窒素下に周囲温度で３時間撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを減圧下で除去したところ、琥珀色の油状物を得た。それを０．１Ｍ ＨＣｌ（５ｍＬ×２）でトリチュレートし、水（５ｍＬ×３）で洗浄することにより、黄褐色固体を得た。この固体をトリフルオロ酢酸／ジクロロメタン（１：１，７ｍＬ）に溶解し、窒素下に周囲温度で１０分間反応させた。溶液を減圧下で濃縮し、得られた琥珀色油状物を、フェノメネックスジュピターＣ１８カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、０．１％トリフルオロ酢酸を含有する０→２７％アセトニトリルの０．６７５％／分グラジエント（２０ｍＬ／分）を使って精製した。２８．５分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、標記化合物５７．４ｍｇ（７２．０％）をＨＰＬＣ純度１００％の無色の固体として得た。1H NMR（DMSO d-6）：δ 10.33（s，1H）、9.17（ブロードs，1H）、8.72-8.02（m，7H）、7.83-7.69（m，3H）、7.43-7.31（m，2H）、7.22（d，J＝9.0Hz，1H）、6.76（d，J＝8.8Hz，2H）、3.82（s，1H）、3.42（s，4H）、1.74-1.50（m，3H）、1.01-0.73（m，6H）；ＭＳ：m/e 611.6［M+H］（100％）；1222.1［2M+H］（20％）；高分解能ＭＳ：計算値（C31H45N4O10S［M+H］として）：611.2395，実測値：611.2386。
【０２４６】
実施例７
２−［２−（｛５−［Ｎ−（（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルペンタノイルアミノ）カルバモイル］（２−ピリジル）｝アミノ）（１Ｚ）−２−アザビニル］ベンゼンスルホン酸の合成
【化２９】
2007504242.tif 000030
パートＡ−２−｛（１Ｚ）−２−アザ−２−［（５−｛Ｎ−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］カルバモイル｝（２−ピリジル））アミノ］ビニル｝ベンゼンスルホン酸の製造
【化３０】
2007504242.tif 000031
カルバジン酸ｔ−ブチル（０．３０ｇ，２．２７ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（１．９ｍＬ，１１．３５ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）溶液をＨＯＡｔ（０．３１ｇ，２．２７ｍｍｏｌ）および２−［（１Ｅ）−２−アザ−２−（｛５−［（２，５−ジオキソピロリジニル）オキシカルボニル］（２−ピリジル）｝アミノ）ビニル］ベンゼンスルホン酸ナトリウム（１．００ｇ，２．２７ｍｍｏｌ）で処理し、窒素下に周囲温度で撹拌した。カルバジン酸ｔ−ブチル（０．４５４ｍｍｏｌ）を２７時間時点で追加し、４５時間時点で再び追加した。７０時間時点で、減圧によってＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを除去したところ、琥珀色油状物を得た。それをアセトニトリル／水（１：１）に溶解し、凍結乾燥することにより、粘着性の黄色固体を得た。この固体を０．１Ｍ ＨＣｌ（２５ｍＬ×２）でトリチュレートし、水（１５ｍＬ×３）で洗浄し、減圧下に硫酸カルシウム上で乾燥することにより、ＨＰＬＣ純度８７．８％の所期生成物０．９６１ｇ（９７％）を得た。ＭＳ：m/e 436.5［M+H］（100％），871.7［2M+H］（100％），1307.0［3M+H］（30％）。
【０２４７】
パートＢ−２−（２−｛［５−（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝カルバモイル）（２−ピリジル）］アミノ｝（１Ｚ）−２−アザビニル）ベンゼンスルホン酸の製造
【化３１】
2007504242.tif 000032
上記パートＡの生成物（９００ｍｇ，２．０７ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸／ジクロロメタン（１：１，１５ｍＬ）に溶解し、周囲温度で１０分間反応させた。その溶液を減圧下で濃縮したところ金色の油状物が生じ、それをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（７ｍＬ）に取り出した。この溶液をＢｏｃ−ロイシン水和物（７７０ｍｇ，３．１ｍｍｏｌ，ノババイオケム社）、ＨＢＴＵ（９４０ｍｇ，２．４７ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（４．３ｍＬ，２５ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液に加え、周囲温度で３０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを減圧下で除去し、得られた琥珀色油状物を０．１Ｍ ＨＣｌ（２０ｍＬ×２）でトリチュレートし、水（２０ｍＬ×３）で洗浄し、減圧下に硫酸カルシウム上で乾燥することにより、ＨＰＬＣ純度７６．４３％の所望生成物１．２５ｇ（１１１％）を得た。ＭＳ：m/e 449.5［M+H-Boc］（100％），493.5［M+H-(t-Bu)］（35％），1097.9［2M+H］（45％）。
【０２４８】
パートＣ−２−［２−（｛５−［Ｎ−（（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルペンタノイルアミノ）カルバモイル］（２−ピリジル）｝アミノ）（１Ｚ）−２−アザビニル］ベンゼンスルホン酸の製造
【化３２】
2007504242.tif 000033
上記パートＢで得た生成物（１００ｍｇ，０．１８２ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸／ジクロロメタン（１：１，６ｍＬ）に溶解し、１０分間反応させた。溶媒を減圧下で除去し、得られた琥珀色油状物を、フェノメネックスジュピターカラム（２１．４×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、０．１％トリフルオロ酢酸を含有する４．５→１８％アセトニトリルの０．４５％／分グラジエント（流量８０ｍＬ／分）を使って精製した。２３．０分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、標記化合物（３０．４ｍｇ，３７．５％）をＨＰＬＣ純度１００％の無色の固体として得た。1H NMR（DMSO d-6）：δ 10.53（s，1H）、9.14（s，1H）、8.62（s，1H）、8.34-8.00（m，4H）、7.79（d，J＝7.62Hz，1H）、7.46-7.30（m，2H）、7.27（d，J＝8.94Hz，1H）、3.86（s，1H）、1.89-1.54（m，3H）、1.02-0.82（m，6H）；MS：m/e 336.3［M+H-Leu］（20％）；449.4［M+H］（100％）；高分解能ＭＳ：計算値（C19H24N6O5S［M+H］として）：449.1602，実測値：449.1586。
【０２４９】
実施例８
２−［（１Ｅ）−２−（｛５−［Ｎ−（｛４−［Ｎ−（（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルペンタノイルアミノ）カルバモイル］フェニル｝メチル）カルバモイル］（２−ピリジル）｝アミノ）−２−アザビニル］ベンゼンスルホン酸の合成
【化３３】
2007504242.tif 000034
パートＡ−Ｎ−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］（４−｛［（フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニルアミノ］メチル｝フェニル）カルボキサミドの製造
【化３４】
2007504242.tif 000035
Ｆｍｏｃ−Ａｍｂ−ＯＨ（２．５０ｇ，６．７ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１．１１ｇ，７．３ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（２．７７ｇ，７．３ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（３ｍＬ，１７．２ｍｍｏｌ）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）溶液を窒素下に周囲温度で２０分間撹拌し、カルバジン酸ｔ−ブチル（０．７４ｇ，５．６ｍｍｏｌ）で処理した。さらに２時間経ってから、反応系を酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈し、０．１Ｎ ＨＣｌ（３０ｍＬ×３）、０．１Ｎ ＮａＯＨ（３０ｍＬ）、水（３０ｍＬ）で順次洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、蒸発乾固した。得られた黄色固体を酢酸エチル／ヘキサン類から再結晶することにより、標記化合物を無色の固体（２．３７ｇ，８７％）として得た。1H NMR（CDCl3）：δ 8.15（bs，1H）、7.79-7.51（m，6H）、7.45-7.20（m，6H）、6.85（bs，1H）、5.18（s，1H）、4.57-4.45（m，2H）、4.45-4.12（m，2H）、1.49（s，9H）；13C NMR（CDCl3）：δ 166.8，156.6，155.8，143.8，143.2，141.4，130.6，127.8，127.7，127.5，127.0，124.9，120.0，82.5，66.8，47.3，44.6，28.1；ＭＳ：m/e 388.5［M-Boc+H]；高分解能ＭＳ：計算値（C23H21N3O3［M-Boc+H］として）：388.1656，実測値：388.1643。
【０２５０】
パートＢ−［４−（アミノメチル）フェニル］−Ｎ−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］カルボキサミドの製造
【化３５】
2007504242.tif 000036
パートＡの生成物（０．８０ｇ，１．６ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（２ｍＬ）で、窒素下に室温で２０分間処理した。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを減圧下で除去し、残渣をシリカゲルでのクロマトグラフィーにかけて、ＣＨＣｌ3／メタノール（９：１）、ＣＨＣｌ3／メタノール（８：１）、ＣＨＣｌ3／メタノール（４：１）、および１００％メタノールで溶出させることにより、標記化合物を無色の粘性油状物（０．３２ｇ，７４％）として得た。ＭＳ：m/e 166.3［M-Boc+H］。
【０２５１】
パートＣ−２−｛（１Ｅ）−２−アザ−２−［（５−｛Ｎ−［（４−｛Ｎ−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］カルバモイル｝フェニル）メチル］カルバモイル｝（２−ピリジル））アミノ］ビニル｝ベンゼンスルホン酸の製造
【化３６】
2007504242.tif 000037
パートＢの生成物（０．３０９ｇ，１．２ｍｍｏｌ）、２−［（１Ｅ）−２−アザ−２−（｛５−［（２，５−ジオキソピロリジニル）オキシカルボニル］（２−ピリジル）｝アミノ）ビニル］ベンゼンスルホン酸ナトリウム（０．５１３ｇ，１．２ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（０．１５９ｇ，１．２ｍｍｏｌ）、およびジイソプロピルエチルアミン（０．３ｍＬ，１．７ｍｍｏｌ）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）溶液を、窒素下に室温で１８時間撹拌した。反応系を１０ｍＬの０．１Ｎ ＨＣｌで希釈した。得られた固体を濾過によって集め、０．１Ｎ ＨＣｌで洗浄した後、水（１０ｍＬ×３）で洗浄し、乾燥することにより、標記化合物を無色の固体（０．６２５ｇ，９５％，ＨＰＬＣ純度＞９５％）として得た。ＭＳ：m/e 469.1［M+H］。
【０２５２】
パートＤ−２−（（１Ｅ）−２−｛［５−（Ｎ−｛［４−（Ｎ−アミノカルバモイル）フェニル］メチル｝カルバモイル）（２−ピリジル）］アミノ｝−２−アザビニル）ベンゼンスルホン酸ナトリウムの製造
【化３７】
2007504242.tif 000038
パートＣの生成物（０．２２ｇ，０．４ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン中の５０％トリフルオロ酢酸（６ｍＬ）で、窒素下に周囲温度で１０分間処理した。溶媒を減圧下で除去することにより、無色の固体を得た。得られた固体を、フェノメネックスルナＣ１８（２）カラム（４１．４×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、０．１Ｍ ＮａＯＡｃ（ｐＨ７）を含有する９→３６％アセトニトリルの１％／分グラジエント（流量８０ｍＬ／分）を使って精製した。１５分に溶出する主生成物ピークを、フェノメネックスルナＣ１８（２）カラム（４１．４×２５０ｍｍ）で、アセトニトリル濃度が５．４％になるように水で希釈し、ポンプでカラム上に送出することにより、脱塩した。そのカラムを、流量８０ｍL/分の５．４％アセトニトリルで１０分間、定組成的に溶出した後、５．４→４５％アセトニトリルの２．２％／分グラジエント（流量８０ｍＬ／分）で溶出した。１５分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、標記化合物を無色の固体（０．１４ｇ，７８％）として得た。MS：m/e 469.1［M+H］。
【０２５３】
パートＥ−２−（（１Ｅ）−２−｛［５−（Ｎ−｛［４−（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝カルバモイル）フェニル］メチル｝カルバモイル）（２−ピリジル）］アミノ｝−２−アザビニル）ベンゼンスルホン酸の製造
【化３８】
2007504242.tif 000039
Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（０．１３０ｇ，０．５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．０７８ｇ，０．５ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（０．１９０ｇ，０．５ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（０．１４９ｍＬ，０．５ｍｍｏｌ）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）溶液を窒素下に周囲温度で２０分間撹拌し、パートＤの生成物（０．２００ｇ，０．４ｍｍｏｌ）で処理した。その溶液を周囲温度で４時間撹拌し、０．１Ｎ ＨＣｌ（１５ｍＬ）で希釈した。得られた沈殿物を濾過によって集め、０．１Ｎ ＨＣｌ（１０ｍＬ×２）および水（１５ｍＬ×３）で順次洗浄し、乾燥することにより、標記化合物を無色の固体（０．１１ｇ，３８％）として得た。1H NMR（CD3CN：DMSO-d6，2：1）：δ 13.04（bs，1H）、10.12（s，1H）、9.71（s，1H）、9.41（s，1H）、9.09（s，1H）、8.52（s，1H）、8.36（d，J＝9.0Hz，1H）、8.28（d，J＝6.9Hz，1H）、7.89-7.87（m，1H）、7.84（d，J＝8.13Hz，2H）、7.49-7.44（m，2H）、7.42（d，J＝8.13Hz，2H）、7.20（d，J＝8.90Hz，1H）、6.45（d，J＝8.90Hz，1H）、4.56（d，J＝5.8Hz，2H）、4.14（q，J＝7.9Hz，1H）、1.68-1.73（m，1H）、1.52（t，J＝7.3Hz，2H）、1.39（s，9H）、0.97-0.86（m，6H）；13C NMR（CD3CN：DMSO-d6，2：1）：δ 173.3，166.6，156.5，148.6，144.2，132.5，130.9，129.9，128.7，128.3，127.9，127.4，122.1，79.4，52.7，43.7，42.2，28.8，25.3，23.5，22.2；MS：m/e 582.2［M-Boc+H］。
【０２５４】
パートＦ−２−［（１Ｅ）−２−（｛５−［Ｎ−（｛４−［Ｎ−（（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルペンタノイルアミノ）カルバモイル］フェニル｝メチル）カルバモイル］（２−ピリジル）｝アミノ）−２−アザビニル］ベンゼンスルホン酸の製造
【化３９】
2007504242.tif 000040
パートＥの生成物（０．１１ｇ，０．２ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン中の５０％トリフルオロ酢酸（８ｍＬ）で、窒素下に周囲温度で１０分間処理した。その溶液を濃縮し、得られた無色の粘性油状物を、フェノメネックスジュピターＣ１８カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、０．１％トリフルオロ酢酸を含有する９→４５％アセトニトリルの１．２％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を使って精製した。１２．９分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、標記化合物を無色の固体（５１ｍｇ，収率５７％，ＨＰＬＣ純度１００％）として得た。1H NMR（DMSO-d6）：δ 10.56（s，1H）、10.53（s，1H）、9.20（bs，2H）、8.61（s，1H）、8.40-8.06（m，5H）、7.86（d，J＝8.2Hz，2H）、7.80（d，J＝6.7Hz，1H）、7.46（d，J＝8.2Hz，2H）、7.44-7.34（m，2H）、7.25（d，J＝9.1Hz，1H）、4.55（d，J＝8.6Hz，2H）、1.85-1.77（m，1H）、1.72-1.63（m，1H）、1.63-1.52（m，1H）、0.94（q，J＝6.0Hz，6H)；ＭＳ：m/e 582.6［M+H］；高分解能ＭＳ：計算値（C27H31N7O6S［M+H］として）：582.2129，実測値：582.2146。
【０２５５】
実施例９
Ｎ−（（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルペンタノイルアミノ）−６−［（７−メトキシ−２−オキソ（２Ｈ−クロメン−３−イル））カルボニルアミノ］ヘキサンアミドの合成
【化４０】
2007504242.tif 000041
パートＡ−（２Ｓ）−Ｎ−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］−２−［（フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタンアミド
【化４１】
2007504242.tif 000042
Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（０．５０ｇ，１．４ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（０．６２ｍＬ，３．５ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液を、クロロギ酸イソブチル（０．１８ｍＬ，１．５ｍｍｏｌ）で処理し、窒素下に０℃で１５分間撹拌した。カルバジン酸ｔ−ブチル（０．１９ｇ，１．４ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（５ｍＬ）溶液を加え、反応系を窒素下に周囲温度で１６時間撹拌した。反応系を酢酸エチル（２５ｍＬ）で希釈し、０．１Ｎ ＨＣｌ（２５ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ3（２５ｍＬ）、０．１Ｎ ＮａＯＨ（２５ｍＬ×２）、水（２５ｍＬ）、および食塩水（２５ｍＬ）で順次洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濃縮することにより、標記化合物を無色の粘性油状物（０．４４ｇ，６６％，ＨＰＬＣ純度１００％）として得た。1H NMR（CD3CN）：δ 8.17（s，1H）、7.85（d，J＝7.51Hz，2H）、7.72-7.65（m，2H）、7.43（t，J＝7.51Hz，2H）、7.39-7.32（m，2H）、6.93（s，1H）、5.90（d，J＝7.8Hz，1H）、4.41-4.21（m，3H）、4.17-4.06（m，1H）、1.74-1.63（m，1H）、1.59-1.50（m，2H）、1.42（s，9H）、1.00-0.81（m，6H)；13C NMR（CD3CN）：δ 173.3，157.2，156.3，145.3，145.2，142.3，129.0，128.2，81.4，67.4，53.2，48.2，41.9，28.5，25.5，23.4，21.9；ＭＳ：m/e 468.1［M+H］。
【０２５６】
パートＢ−（２Ｓ）−Ｎ−アミノ−２−［（フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタンアミドトリフルオロ酢酸塩の製造
【化４２】
2007504242.tif 000043
パートＡの生成物（０．４４ｇ，０．９ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン中の５０％トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）で、窒素下に室温で１０分間処理した。その溶液を濃縮することにより、標記化合物を淡黄色の粘性油状物（０．４７ｇ，収率１３８％，ＨＰＬＣ純度１００％）として得た。1H NMR（CD3CN)：δ 7.84（d，J＝7.51Hz，2H）、7.68（t，J＝6.93Hz，2H）、7.43（t，J＝7.51Hz，2H）、7.38-7.31（m，2H）、5.96（s，1H）、5.78（bs，2H）、1.76-1.49（m，3H）、1.02-0.79（m，6H）；ＭＳ：m/e 368.3［M+H］。
【０２５７】
パートＣ−Ｎ−｛（２Ｓ）−２−［（フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝−６−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］ヘキサンアミドの製造
【化４３】
2007504242.tif 000044
Ｂｏｃ−Ａｈｘ−ＯＨ（０．１５ｇ，０．６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．１１ｇ，０．７ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（０．２７ｇ，０．７ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（３ｍＬ，１７．２ｍｍｏｌ）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）溶液を窒素下に周囲温度で１０分間撹拌し、パートＢの生成物（０．２ｇ，０．５ｍｍｏｌ）で処理した。反応系を１時間撹拌し、酢酸エチル（１５ｍＬ）で希釈し、０．１Ｎ ＨＣｌ（１５ｍＬ）、０．１Ｎ ＮａＯＨ（１５ｍＬ×２）、水（１５ｍＬ）、および食塩水（１５ｍＬ）で順次洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮することにより、標記化合物を無色の固体（０．２８ｇ，８７％）として得た。ＭＳ：m/e 481.4［M-Boc+H］。
【０２５８】
パートＤ−Ｎ−｛（２Ｓ）−２−［（フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝−６−アミノヘキサンアミドトリフルオロ酢酸塩の製造
【化４４】
2007504242.tif 000045
パートＣの生成物（０．２８ｇ，０．５ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン中の５０％トリフルオロ酢酸（１２ｍＬ）で、窒素下に周囲温度で１０分間処理した。その溶液を減圧下で濃縮し、残渣をエーテル（３ｍＬ）でトリチュレートすることにより、無色の固体（０．２６ｇ，１１３％）を得た。1H NMR（CD3CN)：δ 8.76-8.49（m，1H）、7.85（d，J＝7.5Hz，2H）、7.73-7.64（m，2H）、7.43（t，J＝7.5Hz，2H）、7.38-7.33（m，2H）、7.05（bs，2H）、4.41-4.12（m，4H）、2.96（t，J＝7.0Hz，2H）、2.22（t，J＝6.8Hz，2H）、1.76-1.35（m，11H）、1.00-0.81（m，6H）；MS：m/e 481.4［M+H］。
【０２５９】
パートＥ−Ｎ−｛（２Ｓ）−２−［（フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝−６−［（７−メトキシ−２−オキソ（２Ｈ−クロメン−３−イル））カルボニルアミノ］ヘキサンアミドの製造
【化４５】
2007504242.tif 000046
７−メトキシクマリン−３−カルボン酸（０．０２２ｇ，０．１ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．０１５ｇ，０．１ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（０．０３８ｇ，０．１ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（０．０３ｍＬ，０．２ｍｍｏｌ）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）溶液を窒素下に室温で１０分間撹拌し、パートＤの生成物（０．０４０ｇ，０．０８ｍｍｏｌ）で処理した。その溶液を周囲温度で４時間撹拌し、減圧下で濃縮した。得られた残渣をＣＨ2Ｃｌ2（３ｍＬ）およびＴＨＦ（３ｍＬ）で洗浄し、乾燥することにより、標記化合物を帯黄色固体（０．０３１ｇ，５５％）として得た。ＭＳ：m/e 683.7［M+H］。
【０２６０】
パートＦ−Ｎ−（（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルペンタノイルアミノ）−６−［（７−メトキシ−２−オキソ（２Ｈ−クロメン−３−イル））カルボニルアミノ］ヘキサンアミドトリフルオロ酢酸塩の製造
【化４６】
2007504242.tif 000047
パートＥの生成物（０．０２０ｇ，０．０３ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（１ｍＬ）で、窒素下に室温で２０分間処理した。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを減圧下で除去し、残渣をフェノメネックスジュピターＣ１８カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、０．１％トリフルオロ酢酸を含有する４．５→４５％アセトニトリルの１．３５％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を使って精製した。２３．４分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、標記化合物を無色の固体（０．０１２ｇ，８９％）として得た。1H NMR（CDCl3)：δ 10.32-9.55（m，1H）、8.95（s，1H）、8.83（s，1H）、8.25（bs，1H）、7.65-7.58（m，1H）、6.97-6.81（m，2H）、4.34（s，1H）、3.89（s，3H）、3.86-3.30（m，5H）、2.34（s，1H）、1.88-1.53（m，7H）、1.45-1.35（m，2H）、1.00-0.78（m，6H）；ＭＳ：m/e 461.5［M+H］；高分解能ＭＳ：計算値（C23H32N4O6［M+H］として）：461.2395，実測値：461.2391。
【０２６１】
実施例１０
２−［（１Ｅ）−２−（｛５−［Ｎ−（｛４−［Ｎ−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロパノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）カルバモイル］フェニル｝メチル）カルバモイル］（２−ピリジル）｝アミノ）−２−アザビニル］ベンゼンスルホン酸アンモニウムの合成
【化４７】
2007504242.tif 000048
パートＡ−Ｆｍｏｃ−ＰＬＧ−Ｈｐｈｅ−Ｙ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌ−ＨＭＰＢ−ＢＨＡレジンの製造
ＨＭＰＢ−ＢＨＡレジン（５．００ｇ，置換レベル＝０．６１ｍｍｏｌ／ｇ）を１００ｍＬのアドバンスドケムテック反応槽に入れ、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４０ｍＬ×２）で洗浄することによって膨潤させた。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３５ｍＬ）中のＦｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（３．２３ｇ，９．１５ｍｍｏｌ）を加え、レジンを室温で１５分間混合した。ピリジン（１．０９ｇ，１３．７３ｍｍｏｌ）および塩化２，６−ジクロロベンゾイル（１．９２ｇ，９．１５ｍｍｏｌ）を加え、その混合物を２０時間穏やかに振とうした。レジンを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で、十分に洗浄した（各４０ｍＬ）。ジクロロメタン（４０ｍＬ）中で塩化ベンゾイル（１．５ｍＬ）およびピリジン（１．５ｍＬ）と２時間反応させることにより、レジンの残存ヒドロキシル基をキャッピングした。定量的フルベン−ピペリジンアッセイにより、置換レベルは０．４ｍｍｏｌ／ｇと決定された。
【０２６２】
以下のステップを実行した。（ステップ１）Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジンを使って、Ｆｍｏｃ基を３０分間、除去した。（ステップ２）レジンを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で、十分に洗浄した（各４０ｍＬ）。（ステップ３）Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）およびジイソプロピルエチルアミン（３ｍＬ）中のＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ（３．６８ｇ，８ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１．２２ｇ，８ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（３．０３ｇ，８ｍｍｏｌ）をレジンに加え、反応を８時間進行させた。（ステップ４）レジンを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で、十分に洗浄した（各４０ｍｌ）。（ステップ５）Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）およびジイソプロピルエチルアミン（３ｍＬ）中のＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ（３．６８ｇ，８ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１．２２ｇ，８ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（３．０３ｇ，８ｍｍｏｌ）をレジンに加え、反応を４時間進行させた。（ステップ６）レジンを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で、十分に洗浄した（各４０ｍｌ）。（ステップ７）半定量的ニンヒドリンアッセイおよび定量的ピクリン酸アッセイまたはフルベン−ピペリジンアッセイで評価したところ、カップリング反応は完了していることがわかった。Ｆｍｏｃ−ＰＬＧ−Ｈｐｈｅ−Ｙ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌという配列に達するまで、ステップ１〜７を繰り返した。
【０２６３】
パートＢ−Ａｃ−ＰＬＧ−Ｈｐｈｅ−Ｙ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌ−ＯＨの製造
パートＡの生成物（１ｇ，置換レベル＝０．４ｍｍｏｌ／ｇ）を５０ｍＬのアドバンスドケムテック反応槽に入れ、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ×２）で洗浄することによって膨潤させた。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジンを使って、Ｆｍｏｃ基を３０分間除去した。レジンを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で、十分に洗浄した（各２０ｍＬ）。酢酸無水物（０．３８ｍＬ，４ｍｍｏｌ）、およびジイソプロピルエチルアミン（０．８４ｍＬ，４ｍｍｏｌ）を加え、レジンを１８時間混合した。切断した少量のペプチドをＬＣ／ＭＳにかけて評価することにより、反応は完了したことがわかった。
【０２６４】
ペプチド−レジンを焼結ガラス漏斗に入れ、ジクロロメタン中の１％トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）で処理した。２分後に、その溶液を、１０％ピリジン−メタノール溶液（２ｍＬ）中に直接、加圧濾過した。この切断ステップを９回繰り返した。合わせた濾液を体積が元の５％になるまで濃縮し、水（１５ｍＬ）で希釈し、氷水浴で冷却した。得られた沈殿物を濾過によって焼結ガラス漏斗中に集め、水で洗浄し、減圧下で乾燥した。フェノメネックスジュピターＣ１８カラム（４１．２×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、０．１％トリフルオロ酢酸を含有する４５→８１％アセトニトリルの１．２％／分グラジエントを使って、精製を行なったところ、標記化合物を無色の固体（０．１０３ｇ，総収率３１％，ＨＰＬＣ純度１００％）として得た。ＭＳ：m/e 821.8［M+H］（100％）；ＦＴ−ＭＳ：計算値（C44H64N6O9［M+H］として）：821.4808，実測値：821.4792。
【０２６５】
パートＣ−２−［（１Ｅ）−２−（｛５−［Ｎ−（｛４−［Ｎ−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−３−［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）フェニル］プロパノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）カルバモイル］フェニル｝メチル）カルバモイル］（２−ピリジル）｝アミノ）−２−アザビニル］ベンゼンスルホン酸アンモニウムの製造
【化４８】
2007504242.tif 000049
上記パートＢの生成物（５．０ｍｇ，０．００６ｍｍｏｌ）、および実施例８・パートＤの生成物（２．９ｍｇ，０．００６ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６０μＬ）に溶解し、コリジン（０．８μＬ，０．００６ｍｍｏｌ）で塩基性にした。その溶液をＨＯＡｔ（１．７ｍｇ，０．０１２ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（２．０μＬ，０．０１２ｍｍｏｌ）で処理し、窒素下に室温で１８時間撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを減圧下で除去し、残渣を、フェノメネックスルナＣ１８（２）カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、０．１Ｍ ＮＨ4ＯＡｃ（ｐＨ７）を含有する３６→５８．５％アセトニトリルの１．１２％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を使って精製した。１２．３分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、標記化合物を無色の固体（３．９ｍｇ，５１％，ＨＰＬＣ純度１００％）として得た。ＭＳ：m/e 1272.4［M+H］。Ｌ−ロイシンのキラル分析：９９．６％。
【０２６６】
パートＤ−２−［（１Ｅ）−２−（｛５−［Ｎ−（｛４−［Ｎ−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロパノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）カルバモイル］フェニル｝メチル）カルバモイル］（２−ピリジル）｝アミノ）−２−アザビニル］ベンゼンスルホン酸アンモニウムの製造
【化４９】
2007504242.tif 000050
パートＣの生成物（６．９ｍｇ，０．００５ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸：アニソール：水（９５：２．５：２．５，２ｍＬ）に溶解し、窒素下に室温で１０分間撹拌した。その溶液を減圧下で濃縮し、得られた残渣を、フェノメネックスルナＣ１８（２）カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、０．０５Ｍ ＮＨ4ＯＡｃ（ｐＨ７）を含有する２２．５→４５％アセトニトリルの０．９％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を使って精製した。２１．９分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、標記化合物を無色の固体（１ｍｇ，１５％，ＨＰＬＣ純度１００％）として得た。ＭＳ：m/e 1215.3［M+H］；高分解能ＭＳ：計算値（C61H74N12O13S［M+H］として）：1215.5292，実測値：1215.5285。Ｌ−ロイシンのキラル分析：９９．８％。
【０２６７】
実施例１１
２−（（１Ｅ）−２−｛［５−（Ｎ−｛［４−（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−５−アミノペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝カルバモイル）フェニル］メチル｝カルバモイル）（２−ピリジル）］アミノ｝−２−アザビニル）ベンゼンスルホン酸アンモニウムの合成
【化５０】
2007504242.tif 000051
パートＡ−２−（（１Ｅ）−２−｛［５−（Ｎ−｛［４−（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−５−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］ペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝カルバモイル）フェニル］メチル｝カルバモイル）（２−ピリジル）］アミノ｝−２−アザビニル）ベンゼンスルホン酸の製造
【化５１】
2007504242.tif 000052
実施例１４・パートＢの生成物（２０．０ｍｇ，０．０２８ｍｍｏｌ）、実施例８・パートＤの生成物（１３．３ｍｇ，０．０２８ｍｍｏｌ）、およびＨＯＡｔ（７．７ｍｇ，０．０５７ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（１５０μＬ）溶液を、コリジン（３．４μＬ，０．０２８ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（８．９μＬ，０．０５７ｍｍｏｌ）で処理し、窒素下に室温で撹拌した。２時間後に、実施例８・パートＤの生成物（２ｍｇ，０．００４ｍｍｏｌ）およびコリジン（７．６μＬ，０．０６３ｍｍｏｌ）を追加した。反応系をさらに１８時間撹拌し、フェノメネックスルナＣ１８（２）カラム（２１．２×２５０mm）でのＨＰＬＣにより、０．１％トリフルオロ酢酸を含有する３１．５→４５％アセトニトリルの０．４５％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を使って精製した。１８．２分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、標記化合物を無色の固体（９ｍｇ，２７％，ＨＰＬＣ純度１００％）として得た。ＭＳ：m/e 1153.4［M+H］。
【０２６８】
パートＢ−２−（（１Ｅ）−２−｛［５−（Ｎ−｛［４−（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−５−アミノペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝カルバモイル）フェニル］メチル｝カルバモイル）（２−ピリジル）］アミノ｝−２−アザビニル）ベンゼンスルホン酸アンモニウムの製造
【化５２】
2007504242.tif 000053
パートＡの生成物（９ｍｇ，０．００８ｍｍｏｌ）のトリフルオロ酢酸：アニソール：水（９５：２．５：２．５，６．０ｍＬ）溶液を窒素下に室温で１０分間撹拌した。その溶液を濃縮し、得られた残渣を、フェノメネックスジュピターＣ１８カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、０．１Ｍ ＮＨ4ＯＡｃ（ｐＨ７）を含有する９→３６％アセトニトリルの０．９％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を使って精製した。２９．５分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、標記化合物を無色の固体（５．８ｍｇ，７１％，ＨＰＬＣ純度１００％）として得た。ＭＳ：m/e 1052.4［M+H］；高分解能ＭＳ：計算値（C51H64N12O11S［M+H］として）：1053.4611，実測値：1053.4592；Ｌ−ロイシンのキラル分析：９９．８％。
【０２６９】
実施例１２
３−（Ｎ−｛２−［２−（Ｎ−｛１−［Ｎ−（｛Ｎ−［１−（Ｎ−｛１−［Ｎ−（１−｛Ｎ−［（４−｛［（６−｛［（１Ｅ）−１−アザ−２−（２−スルホフェニル）ビニル］アミノ｝（３−ピリジル））カルボニルアミノ］メチル｝フェニル）カルボニルアミノ］カルバモイル｝（１Ｓ）−３−メチルブチル）カルバモイル］（１Ｓ）−２−（４−ヒドロキシフェニル）エチル｝カルバモイル）（１Ｓ）−３−フェニルプロピル］カルバモイル｝メチル）カルバモイル］（１Ｓ）−３−メチルブチル｝カルバモイル）（２Ｓ）ピロリジニル］−２−オキソエチル｝アセチルアミノ）プロパン酸の合成
【化５３】
2007504242.tif 000054
パートＡ−Ｆｍｏｃ−ＮＧｌｕ（Ｂｏｃ）−ＰＬＧ−Ｈｐｈｅ−Ｙ（Ｏｔ−Ｂｕ）−Ｌ−ＨＭＰＢ−ＢＨＡレジンの製造
実施例１０・パートＡのペプチド−レジン（１ｇ，置換レベル＝０．４ｍｍｏｌ／ｇ）を５０ｍＬのアドバンスドケムテック反応槽に入れ、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ×２）で洗浄することによって膨潤させた。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（２０ｍＬ）を使ってＦｍｏｃ基を３０分間除去した。レジンを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で、十分に洗浄した（各２０ｍＬ）。レジンを、Ｆｍｏｃ−ＮＧｌｕ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（Simon，R.J.ら，Proc. Nat. Acad. Sci.：USA 1992，89，9367-9371）（０．５１ｇ，１．２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．１８ｇ，１．２ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（０．４６ｇ，１．２ｍｍｏｌ）、およびジイソプロピルエチルアミン（０．６８ｍＬ，４ｍｍｏｌ）で処理し、１０時間混合した。切断した少量のペプチドをＬＣ／ＭＳにかけて評価することにより、カップリング反応は完了したことがわかった。
【０２７０】
パートＢ−Ａｃ−ＮＧｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＰＬＧ−Ｈｐｈｅ−Ｙ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌ−ＯＮＨ4の製造
パートＡのペプチド-レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２０％ピリジン（２０ｍＬ）で３０分間処理した。レジンを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で、十分に洗浄した（各２０ｍＬ）。酢酸無水物（０．３８ｍＬ，４ｍｍｏｌ）、およびジイソプロピルエチルアミン（０．８４ｍＬ，４ｍｍｏｌ）を加え、レジンを１８時間混合した。切断した少量のペプチドをＬＣ／ＭＳにかけて評価することにより、カップリング反応は完了したことがわかった。
【０２７１】
そのペプチド−レジンを焼結ガラス漏斗に入れ、ジクロロメタン中の１％トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）で処理した。２分後に、その溶液を、１０％ピリジン−メタノール溶液（２ｍＬ）中に直接、加圧濾過した。この切断ステップを３回繰り返した。合わせた濾液を濃縮し、得られた残渣を、フェノメネックスルナＣ１８（２）カラム（４１．４×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、０．１Ｍ ＮＨ4ＯＡｃ（ｐＨ７）を含有する３６→６３％アセトニトリルの０．９％／分グラジエントを使って、精製を行なったところ、標記化合物を無色の固体（０．１２ｇ，総収率３０％，ＨＰＬＣ純度１００％）として得た。ＭＳ：m/e 1006.5［M+H］（100％）。
【０２７２】
パートＣ−２−（（１Ｅ）−２−｛［５−（Ｎ−｛［４−（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛２−［（２Ｓ）−２−（｛（２Ｓ）−１−［２−（Ｎ−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブチル）オキシカルボニル］エチル｝アセチルアミノ）アセチル］ピロリジン−２−イル｝カルボニルアミノ）−４−メチルペンタノイルアミノ］アセチルアミノ｝−４−フェニルブタノイルアミノ）−３−［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）フェニル］プロパノイルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝カルバモイル）フェニル］メチル｝カルバモイル）（２−ピリジル）］アミノ｝−２−アザビニル）ベンゼンスルホン酸の製造
【化５４】
2007504242.tif 000055
上記パートＢの生成物（２０．０ｍｇ，０．０２ｍｍｏｌ）、および実施例８・パートＤの生成物（９．３ｍｇ，０．０２ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（１００μＬ）溶液を、ＨＯＡｔ（５．４ｍｇ，０．０４ｍｍｏｌ）、コリジン（２．６μＬ，０．０２ｍｍｏｌ）、およびＤＩＣ（６．２μＬ，０．０４ｍｍｏｌ）で処理し、窒素下に室温で３時間撹拌した。実施例８・パートＤで得た生成物（２ｍｇ，０．００４ｍｍｏｌ）およびコリジン（２．６μＬ，０．０２ｍｍｏｌ）を追加し、反応系をさらに２時間撹拌した。その溶液をフェノメネックスジュピターＣ１８カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、０．１％トリフルオロ酢酸を含有する４０．５→６３％アセトニトリルの１％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を使って精製した。２２．４分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、標記化合物を無色の固体（０．１６ｇ，５７％，ＨＰＬＣ純度１００％）として得た。ＭＳ：m/e 1456.5［M+H］。
【０２７３】
パートＤ−３−（Ｎ−｛２−［２−（Ｎ−｛１−［Ｎ−（｛Ｎ−［１−（Ｎ−｛１−［Ｎ−（１−｛Ｎ−［（４−｛［（６−｛［（１Ｅ）−１−アザ−２−（２−スルホフェニル）ビニル］アミノ｝（３−ピリジル））カルボニルアミノ］メチル｝フェニル）カルボニルアミノ］カルバモイル｝（１Ｓ）−３−メチルブチル）カルバモイル］（１Ｓ）−２−（４−ヒドロキシフェニル）エチル｝カルバモイル）（１Ｓ）−３−フェニルプロピル］カルバモイル｝メチル）カルバモイル］（１Ｓ）−３−メチルブチル｝カルバモイル）（２Ｓ）ピロリジニル］−２−オキソエチル｝アセチルアミノ）プロパン酸の製造
【化５５】
2007504242.tif 000056
パートＡの生成物をトリフルオロ酢酸：アニソール：水（９５：２．５：２．５，３ｍＬ）に溶解し、窒素下に室温で１０分間撹拌した。その溶液を減圧下で濃縮し、得られた残渣を、フェノメネックスジュピターＣ１８カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、０．１％トリフルオロ酢酸を含有する９→３６％アセトニトリルの１％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を使って精製した。２８．２分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、標記化合物を無色の固体（２．６ｍｇ，５７％，ＨＰＬＣ純度１００％）として得た。ＭＳ：m/e 1344.4［M+H］；高分解能ＭＳ：計算値（C66H81N13O16S［M+H］として）：1344.5718，実測値：1344.5706；Ｌ−ロイシンのキラル分析：９９．２％。
【０２７４】
実施例１３
２−（（１Ｅ）−２−｛［５−（Ｎ−｛５−［Ｎ−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロパノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）カルバモイル］ペンチル｝カルバモイル）（２−ピリジル）］アミノ｝−２−アザビニル）ベンゼンスルホン酸の合成
【化５６】
2007504242.tif 000057
パートＡ−Ｎ−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］−６−［（フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニルアミノ］ヘキサンアミドの製造
【化５７】
2007504242.tif 000058
Ｆｍｏｃ−６−Ａｈｘ−ＯＨ（３．００ｇ，８．５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１．４１ｇ，９．２ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（３．４９ｇ，９．２ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（３．４５ｍＬ，１９．９ｍｍｏｌ）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）溶液を窒素下に周囲温度で２０分間撹拌し、カルバジン酸ｔ−ブチル（０．９３ｇ，７．０ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（１ｍＬ，５．８ｍｍｏｌ）で処理した。その溶液を５時間撹拌し、酢酸エチル（１５ｍＬ）で希釈し、０．１Ｎ ＨＣｌ（１５ｍＬ×３）、水（２５ｍＬ）、および食塩水（３０ｍＬ）で順次洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮することにより、黄色油状物を得た。その油状物を、ＣＨ2Ｃｌ2：メタノール（９５：５）を溶離液とするシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーで精製することにより、標記化合物を無色の固体（２．５１ｇ，７１％，ＨＰＬＣ純度１００％）として得た。1H NMR（CDCl3)：δ 7,75（d，J＝7.5Hz，2H）、7.58（d，J＝7.5Hz，2H）、7.39（t，J＝7.5Hz，2H）、7.37-7.28（m，3H）、6.48（s，1H）、4.95（s，1H）、4.39（d，J＝6.7Hz，2H）、4.21（t，J＝6.7Hz，1H）、3.17（s，2H）、2.21（t，J＝7.2Hz，2H）、1.82-1.59（m，4H）、1.45（s，9H）、1.40-1.32（m，2H）；13C NMR（CDCl3)：δ 172.4，156.5，155.5，144.0，141.3，127.6，127.0，125.0，119.9，81.9，66.5，47.3，40.7，33.8，29.5，28.1，25.9，24.6；ＭＳ：m/e 368.3［M-Boc+H］；高分解能ＭＳ：計算値（C26H33N3O5［M+H］として）：468.2493，実測値：468.2485。
【０２７５】
パートＢ−６−アミノ−Ｎ−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］ヘキサンアミドの製造
【化５８】
2007504242.tif 000059
パートＡの生成物（１．４４ｇ，３．１ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（４．０ｍＬ）で、窒素下に室温で２０分間処理した。その溶液を減圧下で濃縮し、得られた固体を、メタノール、メタノール：ＴＥＡ（１００：３）、およびメタノール：ＴＥＡ（１００：６）を順次溶離液とするシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーで精製することにより、標記化合物を無色の固体（０．７９ｇ，１０４％）として得た。1H NMR（CDCl3)：δ 4.12（bs，2H）、2.80-2.68（m，2H）、2.24（t，J＝7.3Hz，2H）、1.72-1.60（m，2H）、1.58-1.46（m，2H）、1.45（s，9H）、1.43-1.33（m 2H）；ＭＳ：m/e 246.3［M+H］。
【０２７６】
パートＣ−２−［（１Ｅ）−２−アザ−２−（｛５−［Ｎ−（５−｛Ｎ−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］カルバモイル｝ペンチル）カルバモイル］（２−ピリジル）｝アミノ）ビニル］ベンゼンスルホン酸ナトリウムの製造
【化５９】
2007504242.tif 000060
パートＢの生成物（０．７２ｇ，２．９ｍｍｏｌ）、２−［（１Ｅ）−２−アザ−２−（｛５−［（２，５−ジオキソピロリジニル）オキシカルボニル］（２−ピリジル）｝アミノ）ビニル］ベンゼンスルホン酸ナトリウム（１．２９ｇ，２．９ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（０．４０ｇ，２．９ｍｍｏｌ）、およびジイソプロピルエチルアミン（１．０２ｍＬ，５．９ｍｍｏｌ）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）溶液を窒素下に室温で撹拌した。２時間後に、２−［（１Ｅ）−２−アザ−２−（｛５−［（２，５−ジオキソピロリジニル）オキシカルボニル］（２−ピリジル）｝アミノ）ビニルベンゼンスルホン酸ナトリウム（０．２７ｇ，０．６ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（０．１ｍＬ，０．６ｍｍｏｌ）を追加し、反応系を終夜撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を濃縮した。得られた残渣を、ＣＨ2Ｃｌ2／メタノール（８５：１５）を溶離液とするシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーで精製することにより、標記化合物を無色の固体（０．８１ｇ，収率５０％，ＨＰＬＣ純度＞９５％）として得た。1H NMR（DMSO-d6)：δ 11.32（s，1H）、9.45（s，1H）、9.01（s，1H）、8.63（s，1H）、8.59（d，J＝2.1Hz，1H）、8.34-8.23（m，1H）、8.08-7.97（m，2H）、7.78（dd，J＝1.4，7.5Hz，1H）、7.40-7.18（m，3H）、3.28-3.17（m，2H）、2.07（t，J＝7.2Hz，2H）、1.60-1.45（m，4H）、1.45-1.21（m，11H）；ＭＳ：m/e 449.2［M-Boc+H］。
【０２７７】
パートＤ−２−｛（１Ｅ）−２−［（５−｛Ｎ−［５−（Ｎ−アミノカルバモイル）ペンチル］カルバモイル｝（２−ピリジル））アミノ］−２−アザビニル｝ベンゼンスルホン酸の製造
【化６０】
2007504242.tif 000061
パートＣの生成物（０．３７ｇ，０．７ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン中の５０％トリフルオロ酢酸（５ｍＬ）で、窒素下に室温で１０分間処理した。その溶液を減圧下で濃縮し、残渣を、フェノメネックスジュピターＣ１８カラム（４１．４×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、０．１％トリフルオロ酢酸を含有する０→２７％アセトニトリルの０．９％／分グラジエント（流量８０ｍＬ／分）を使って精製した。１８．９分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、標記化合物を無色の固体（０．２４ｇ，８０％）として得た。1H NMR（DMSO-d6)：δ 10.75（s，1H）、9.22（s，1H）、8.64-8.54（m，1H）、8.53（d，J＝1.8Hz，1H）、8.29-8.11（m，2H）、7.80（dd，J＝1.9，7.0Hz，1H）、7.47-7.32（m，2H）、7.23（d，J＝9.1Hz，1H）、4.50（bs，3H）、3.26（q，J＝6.4Hz，2H）、2.23（t，J＝7.3Hz，2H）、1.66-1.45（m，4H）、1.40-1.22（m，2H）；ＭＳ：m/e 449.1［M+H］。
【０２７８】
パートＥ−２−（（１Ｅ）−２−｛［５−（Ｎ−｛５−［Ｎ−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−３−［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）フェニル］プロパノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）カルバモイル］ペンチル｝カルバモイル）（２−ピリジル）］アミノ｝−２−アザビニル）ベンゼンスルホン酸の製造
【化６１】
2007504242.tif 000062
実施例１０・パートＢの生成物（２０．０ｍｇ，０．０２４ｍｍｏｌ）、実施例１３・パートＤの生成物（１０．９ｍｇ，０．０２４ｍｍｏｌ）、およびＨＯＡｔ（６．６ｍｇ，０．０４８ｍｍｏｌ）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００μＬ）溶液をコリジン（１１．２μＬ，０．０８４ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（７．６μＬ，０．０４８ｍｍｏｌ）で処理し、窒素下に室温で撹拌した。実施例１３・パートＤの生成物を、２時間時点（３ｍｇ，０．００７ｍｍｏｌ）および５時間の時点（８ｍｇ，０．０１８ｍｍｏｌ）で追加した。反応系をさらに１８時間撹拌し、減圧下で濃縮した。得られた残渣を、フェノメネックスルナカラム（２１．２×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、０．１％トリフルオロ酢酸を含有する３６→５４％アセトニトリルの０．６７％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を使って精製した。２１．７分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、標記化合物を無色の固体（１１ｍｇ，３６％，ＨＰＬＣ純度１００％）として得た。ＭＳ：m/e 1251.6［M+H］。
【０２７９】
パートＦ−２−（（１Ｅ）−２−｛［５−（Ｎ−｛５−［Ｎ−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロパノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）カルバモイル］ペンチル｝カルバモイル）（２−ピリジル）］アミノ｝−２−アザビニル）ベンゼンスルホン酸の製造
【化６２】
2007504242.tif 000063
パートＥの生成物（１１ｍｇ，０．００９ｍｍｏｌ）のトリフルオロ酢酸：アニソール：水（９５：２．５：２．５、２ｍＬ）溶液を窒素下に室温で１０分間撹拌した。その溶液を減圧下で濃縮し、得られた残渣を、フェノメネックスルナＣ１８（２）カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、０．１％トリフルオロ酢酸を含有する３１．５→４５％アセトニトリルの０．５％／分グラジエントを使って精製した。１５．４分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、標記化合物を無色の固体（３ｍｇ，２９％，ＨＰＬＣ純度１００％）として得た。ＭＳ：m/e 1195.5［M+H］；高分解能ＭＳ：計算値（C59H78N12O13S［M+H］として）：1195.5605，実測値：1195.5579。Ｌ−ロイシンのキラル分析：９９．８％。
【０２８０】
実施例１４
２−（（１Ｅ）−２−｛［５−（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−５−アミノペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝カルバモイル）（２−ピリジル）］アミノ｝−２−アザビニル）ベンゼンスルホン酸アンモニウムの合成
【化６３】
2007504242.tif 000064
パートＡ−Ｆｍｏｃ−ＰＯ（Ｂｏｃ）Ｇ−Ｈｐｈｅ−Ｌ−ＨＭＰＢ−ＢＨＡレジンの製造
ＨＭＰＢ−ＢＨＡレジン（２．０００ｇ，置換レベル＝０．６８ｍｍｏｌ／ｇ）を２００ｍＬのアドバンスドケムテック反応槽に入れ、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ×２）で洗浄することによって膨潤させた。Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（３．６０ｇ，１０．２ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４０ｍＬ）溶液を槽に加え、その混合物を１５分間穏やかに撹拌した。塩化２，６−ジクロロベンゾイル（１．５ｍＬ，１０．９ｍｍｏｌ）およびピリジン（１．２３ｍＬ，１５．３ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）溶液を加え、その混合物を窒素下に周囲温度で１５時間振とうした。レジンを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（１回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で、洗浄した（各５０ｍＬ）。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）中の塩化ベンゾイル（２．５ｍＬ，２１．０ｍｍｏｌ）およびピリジン（２．５ｍＬ，３０．６当量）をレジンに加え、槽を窒素下で１０時間振とうし、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（１回）、およびジクロロメタン（３回）で洗浄した（各５０ｍＬ）。レジンの乾燥試料に対してフルベン−ピペリジンアッセイを行なったところ、負荷量は０．４５０ｍｍｏｌ／ｇであることがわかった。
【０２８１】
以下のステップを実行した。（ステップ１）Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（５０ｍＬ）を使って、Ｆｍｏｃ基を３０分間、除去した。（ステップ２）レジンを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で、洗浄した（各５０ｍＬ）。（ステップ３）Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）およびジイソプロピルエチルアミン（２ｍＬ）中のＦｍｏｃ−Ｈｐｈｅ−ＯＨ（３．０１ｇ，７．５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１．１５ｇ，７．５ｍｍｏｌ）、およびＨＢＴＵ（２．８４ｇ，７．５ｍｍｏｌ）をレジンに加え、反応を５時間進行させた。（ステップ４）レジンをステップ２と同様に洗浄した。（ステップ５）ステップ３およびステップ４を繰り返す。（ステップ６）定性的カイザー（Kaiser）テストにより、反応の完了を監視した。所望の配列が得られるまで、ステップ１〜６を繰り返した。
【０２８２】
パートＢ−Ａｃ−ＰＯ（Ｂｏｃ）Ｇ−Ｈｐｈｅ−Ｌ−ＯＨの製造
パートＡで得た生成物（１．５ｇ）を１００ｍＬのアドバンスドケムテック反応槽に入れ、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ×２）で洗浄することによって膨潤させた。そのペプチド−レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）中の２０％ピペリジンで３０分間処理した後、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で洗浄した（各３０ｍＬ）。レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）中の酢酸無水物（０．６３ｍＬ，６．７５ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（１．４ｍＬ，８．１ｍｍｏｌ）で処理した後、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、およびジクロロメタン（３回）で洗浄し（各３０ｍＬ）、減圧下で乾燥した。そのペプチド−レジンを焼結ガラス漏斗に入れ、１％トリフルオロ酢酸−ジクロロメタン溶液（１２ｍＬ）で処理した。２分後に、その溶液を、窒素圧を加えることによって、ピリジン／メタノール（１：９，２ｍＬ）を含有するフラスコ中に直接、濾過した。この切断手順を１０回繰り返した。合わせた濾液を濃縮して油性固形物を得た。この粗生成物を、フェノメネックスジュピターＣ１８カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、０．１％トリフルオロ酢酸を含有する１８→４５％アセトニトリルの０．９％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を使って精製した。２８．５分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、標記化合物３１３．１ｍｇ（６６．０％）をＨＰＬＣ純度１００％の無色の固体として得た。ＭＳ：m/e 603.7［M+H-Boc］（100％）、703.8［M+H］(95％）、1428.4［2M+Na］。
【０２８３】
パートＣ−２−（（１Ｚ）−２−｛［５−（Ｎ−アミノカルバモイル）（２−ピリジル）］アミノ｝−２−アザビニル）ベンゼンスルホン酸ナトリウムの製造
【化６４】
2007504242.tif 000065
実施例７・パートＡの生成物（１５０ｍｇ，０．３４４ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸：ジクロロメタン（１：１，８ｍＬ）に溶解し、窒素ガス下に周囲温度で１０分間撹拌した。その溶液を減圧下で濃縮することによって得た金色の油状物を、フェノメネックスルナＣ１８（２）カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、５０ｍＭ酢酸アンモニウムを含有する４．５→３１．５％アセトニトリルの１．０８％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を使って精製した。生成物画分を凍結乾燥することによって得た無色の固体を、フェノメネックスルナＣ１８（２）カラム（２１．２×２５０）でのＨＰＬＣにより、１００ｍＭ酢酸ナトリウムを含有する０→３０％アセトニトリルの１％／分グラジエントを使って精製した。主生成物ピークを、フェノメネックスルナＣ１８（２）カラム（２１．２×２５０ｍｍ）で、アセトニトリル濃度が４％になるように水で希釈し、ポンプでカラム上に送出することにより、脱塩した。そのカラムを、流量２０ｍＬ／分の４％アセトニトリルで１５分間、定組成的に溶出した後、４→５０％アセトニトリルの２．３％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）で溶出した。主生成物画分を凍結乾燥することにより、標記化合物をＨＰＬＣ純度９８．６％の無色の固体（８６．３ｇ，５９．０％）として得た。ＭＳ：m/e 336.1［M+H］(100％）、671.1［2M+H］(75％）、1006.3［3M+H］(15％）。
【０２８４】
パートＤ−２−（（１Ｅ）−２−｛［５−（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−５−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］−ペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝カルバモイル）（２−ピリジル）］アミノ｝−２−アザビニル）ベンゼンスルホン酸の製造
【化６５】
2007504242.tif 000066
パートＢの生成物（２０．０ｍｇ，０．０２８５ｍｍｏｌ）、パートＣの生成物（９．５ｍｇ，０．０２８５ｍｍｏｌ）、およびＨＯＡｔ（３．９ｍｇ，０．０２８５ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（１５０μＬ）溶液を、コリジン（１６μＬ，０．１１４ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（４．５μＬ，０．０２８５ｍｍｏｌ）で処理し、窒素下に室温で撹拌した。２４時間後に、反応溶液を、パートＣの生成物（４．８ｍｇ，０．０１４３ｍｍｏｌ）、ＤＩＣ（２．３μＬ，０．０１４３ｍｍｏｌ）およびコリジン（１２μＬ，０．０８５５ｍｍｏｌ）で追加処理した。４４時間時点で、反応系を、フェノメネックスジュピターＣ１８カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、０．１％トリフルオロ酢酸を含有する１３．５→５２．２％アセトニトリルの１．２９％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を使って精製した。２３〜２６．５分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、標記化合物（１９．６ｍｇ，６８．０％）をＨＰＬＣ純度１００％の無色の固体として得た。ＭＳ：m/e 460.9［M-Boc+2H］(30％）、920.4［M+H-Boc］（10％）、1020.4［M+H］(100％）。
【０２８５】
パートＥ−２−（（１Ｅ）−２−｛［５−（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−５−アミノペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝カルバモイル）（２−ピリジル）］アミノ｝−２−アザビニル）ベンゼンスルホン酸アンモニウムの製造
【化６６】
2007504242.tif 000067
パートＤの生成物（１９．０ｍｇ，０．０１８６ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸：ジクロロメタン（１：１、５ｍＬ）に溶解し、窒素下に周囲温度で１０分間撹拌した。その溶液を減圧下で濃縮し、得られた固体を、フェノメネックスジュピターＣ１８カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、１００ｍＭ酢酸アンモニウムを含有する１８→３６％アセトニトリルの０．４５％／分グラジエント（流量２０ｍＬ）を使って精製した。２７分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、標記化合物１０．９ｍｇ（６０．０％）をＨＰＬＣ純度１００％の無色の固体として得た。ＭＳ：m/e 460.7［M+2H］（100％）；920.3［M+H］（90％）；高分解能ＭＳ：計算値（C43H58N11O10S［M+H］として）：920.4083，実測値：920.4063；Ｌ−ロイシンのキラル分析：９９．９％。
【０２８６】
実施例１５
３−［Ｎ−（２−｛２−［Ｎ−（１−｛Ｎ−［（Ｎ−｛１−［Ｎ−（１−｛Ｎ−［（６−｛［（１Ｅ）−１−アザ−２−（２−スルホフェニル）ビニル］アミノ｝（３−ピリジル））カルボニルアミノ］カルバモイル｝（１Ｓ）−３−メチルブチル）カルバモイル］（１Ｓ）−３−フェニルプロピル｝カルバモイル）メチル］カルバモイル｝（１Ｓ）−４−アミノブチル）カルバモイル］（２Ｓ）ピロリジニル｝−２−オキソエチル）アセチルアミノ］プロパン酸アンモニウム塩の合成
【化６７】
2007504242.tif 000068
パートＡ−Ａｃ−ＮＧｌｕ（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）−ＰＯ（Ｂｏｃ）Ｇ−Ｈｐｈｅ−Ｌ−ＯＨの製造
実施例１４・パートＡの生成物（１．００ｇ，置換レベル＝０．５ｍｍｏｌ／ｇ）を２００ｍｌのアドバンスドケムテック反応槽に入れ、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ×２）で洗浄することによって膨潤させた。以下のステップを実行した。（ステップ１）Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（５０ｍＬ）を使って、Ｆｍｏｃ基を３０分間、除去した。（ステップ２）レジンを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で、洗浄した（各５０ｍＬ）。（ステップ３）Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６０ｍＬ）およびジイソプロピルエチルアミン（１ｍＬ）中のＦｍｏｃ−ＮＧｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ（０．６４ｇ，１．５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．２３ｇ，１．５ｍｍｏｌ）、およびＨＢＴＵ（０．５７ｇ，１．５ｍｍｏｌ）をレジンに加え、反応を１０時間進行させた後、ステップ２と同様に洗浄した。（ステップ４）Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（５０ｍＬ）を使って、Ｆｍｏｃ基を３０分間、除去した後、ステップ２と同様に洗浄した。（ステップ５）レジンを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６０ｍＬ）中の酢酸無水物（０．３ｍＬ，５ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（０．８１ｍＬ，６ｍｍｏｌ）で処理し、その混合物を窒素下で１８時間振とうした。レジンを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（１回）、およびジクロロメタン（３回）で洗浄し（各５０ｍＬ）、減圧下で乾燥した。
【０２８７】
そのペプチド−レジンを焼結ガラス漏斗に入れ、ジクロロメタン中の１％トリフルオロ酢酸（１２ｍＬ）で２分間処理した。その溶液を、窒素圧を加えることによって、ピリジン：メタノール溶液（１：９、２ｍＬ）を含有するフラスコ中に直接、濾過した。この切断手順を１０回繰り返した。合わせた濾液を濃縮して油性固形物を得た。この粗生成物を、フェノメネックスジュピターＣ１８カラム（４１．４×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、０．１％トリフルオロ酢酸を含有する３１．５→５８．５％アセトニトリルの０．９％／分グラジエント（流量８０ｍＬ／分）を使って精製した。２０．３分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、標記化合物（１６５．３ｍｇ，３７．１％）をＨＰＬＣ純度９３．７％の無色の固体として得た。ＭＳ：m/e 788.4［M+H-Boc］（85％）、888.5［M+H］(100％）。
【０２８８】
パートＢ−２−｛（１Ｅ）−２−［（５−｛Ｎ−［（２Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛２−［（２Ｓ）−２−（｛（２Ｓ）−１−［２−（Ｎ−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブチル）オキシカルボニル］エチル｝アセチルアミノ）アセチル］ピロリジン−２−イル｝カルボニルアミノ）−５−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］ペンタノイルアミノ］アセチルアミノ｝−４−フェニルブタノイルアミノ）−４−メチルペンタノイルアミノ］カルバモイル｝（２−ピリジル））アミノ］−２−アザビニル｝ベンゼンスルホン酸アンモニウムの製造
【化６８】
2007504242.tif 000069
パートＡの生成物（１５．０ｍｇ，０．０１６９ｍｍｏｌ）、実施例１４・パートＣの生成物（５．６７ｍｇ，０．０１６９ｍｍｏｌ）、およびＨＯＡｔ（２．３２ｍｇ，０．０１６９ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（１５０μＬ）溶液をコリジン（９μＬ，０．０６７６ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（２．６５μＬ，０．０１６９ｍｍｏｌ）で処理し、窒素下に室温で撹拌した。４時間後に、実施例１４・パートＣ（２．８５ｍｇ，０．００８４ｍｍｏｌ）、ＤＩＣ（１．３３μＬ，０．００８４ｍｍｏｌ）およびコリジン（４．５μＬ，０．０３３８ｍｍｏｌ）を追加した。反応系をさらに１６時間撹拌し、フェノメネックスジュピターＣ１８カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、１００ｍＭ酢酸アンモニウムを含有する３３．８→４９．５％アセトニトリルの０．５２％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を使って精製した。１７〜２２．５分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、標記化合物（１０．６ｍｇ，５２．０％）をＨＰＬＣ純度１００％の無色の固体として得た。ＭＳ：m/e 525.4［(M-Boc-(t-Bu))+2H］（90％）、1205.4［M+H］（100％）。Ｌ−ロイシンのキラル分析：９５．４％。
【０２８９】
パートＣ−３−［Ｎ−（２−｛２−［Ｎ−（１−｛Ｎ−［（Ｎ−｛１−［Ｎ−（１−｛Ｎ−［（６−｛［（１Ｅ）−１−アザ−２−（２−スルホフェニル）ビニル］アミノ｝（３−ピリジル））カルボニルアミノ］カルバモイル｝（１Ｓ）−３−メチルブチル）カルバモイル］（１Ｓ）−３−フェニルプロピル｝カルバモイル）メチル］カルバモイル｝（１Ｓ）−４−アミノブチル）カルバモイル］（２Ｓ）ピロリジニル｝−２−オキソエチル）アセチルアミノ］プロパン酸アンモニウム塩の製造
【化６９】
2007504242.tif 000070
パートＢの生成物（９．６ｍｇ，０．００８ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸／アニソール／水（３８：１：１、４ｍＬ）に溶解し、窒素下に周囲温度で１０分間撹拌した。その溶液を濃縮し、得られた固体を、フェノメネックスジュピターＣ１８カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、１００ｍＭ酢酸アンモニウムを含有する１８→３６％アセトニトリルの０．４５％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を使って精製した。２０分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、標記化合物５．６ｍｇ（６６．７％）をＨＰＬＣ純度１００％の無色の固体として得た。ＭＳ：m/e 525.3［M+2H］（40％）；1049.4［M+H］（100％）；高分解能ＭＳ：計算値（C43H58N11O10S［M+H］として）：1049.4509，実測値：1049.4512；Ｌ−ロイシンのキラル分析：９９．５％。
【０２９０】
実施例１６
２−［（１Ｅ）−２−（｛５−［Ｎ−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロパノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）カルバモイル］（２−ピリジル）｝アミノ）−２−アザビニル］ベンゼンスルホン酸アミノの合成
【化７０】
2007504242.tif 000071
パートＡ−２−［（１Ｅ）−２−（｛５−［Ｎ−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−３−［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）フェニル］プロパノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）カルバモイル］（２−ピリジル）｝アミノ）−２−アザビニル］ベンゼンスルホン酸の製造
【化７１】
2007504242.tif 000072
実施例１０・パートＢの生成物（１５．０ｍｇ，０．０１８３ｍｍｏｌ）、実施例１４・パートＣの生成物（６．１２ｍｇ，０．０１８３ｍｍｏｌ）、およびＨＯＡｔ（２．５１ｍｇ，０．０１８３ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（１５０μＬ）溶液をコリジン（９．７μＬ，０．０７３２ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（２．８７μＬ，０．０１８３ｍｍｏｌ）で処理し、窒素下に室温で撹拌した。１．５時間後に、反応混合物を実施例１４・パートＣの生成物（３．０ｍｇ，０．００９２ｍｍｏｌ）、ＤＩＣ（１．４５μＬ，０．００９２ｍｍｏｌ）、およびコリジン（４．９μＬ，０．０３６６ｍｍｏｌ）で追加処理した。反応系を合計２２時間撹拌し、フェノメネックスルナＣ１８（２）カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、０．１％トリフルオロ酢酸を含有する３６→６３％アセトニトリルの０．９％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を使って精製した。２３．７分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、標記化合物（１１．３ｍｇ，５４．３％）をＨＰＬＣ純度１００％の無色の固体として得た。ＭＳ：m/e 1138.5［M+H］(100％）；Ｌ−ロイシンのキラル分析：９８．７％。
【０２９１】
パートＢ−脱保護
パートＡの生成物（９．６ｍｇ，０．００８４ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸：アニソール：水（３８：１：１、４ｍＬ）に溶解し、窒素下に室温で１５分間撹拌した。その溶液を減圧下で濃縮し、得られた固体を、フェノメネックスジュピターＣ１８カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、１００ｍＭ酢酸アンモニウムを含有する２２．５→４９．５％アセトニトリルの０．０．９％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を使って精製した。２１．５分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、標記化合物３．１ｍｇ（３４．２％）をＨＰＬＣ純度１００％の無色の固体として得た。ＭＳ：m/e 541.7［M+2H］（25％）；1082.5［M+H］（100％）；高分解能ＭＳ：計算値（C53H68N11O12S［M+H］として）：1082.4764，実測値：1082.4762。
【０２９２】
実施例１７
２−［（１Ｅ）−２−（｛５−［Ｎ−（｛４−［Ｎ−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−５−アミノペンタノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）カルバモイル］フェニル｝メチル）カルバモイル］（２−ピリジル）｝アミノ）−２−アザビニル］ベンゼンスルホン酸アンモニウムの合成
【化７２】
2007504242.tif 000073
パートＡ−Ｆｍｏｃ−ＰＬＧ−Ｈｐｈｅ−Ｏ（Ｂｏｃ）Ｌ−ＨＭＰＢ−ＢＨＡレジンの製造
ＨＭＰＢ−ＢＨＡレジン（８．０００ｇ，置換レベル＝０．６８ｍｍｏｌ／ｇ）を２００ｍＬのアドバンスドケムテック反応槽に入れ、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４５ｍＬ×２）で洗浄することによって膨潤させた。Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（５．７７ｇ，１６．３２ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４５ｍＬ）溶液を槽に加え、その混合物を１５分間振とうした。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４５ｍＬ）中の塩化２，６−ジクロロベンゾイル（２．５ｍＬ，１６．３２ｍｍｏｌ）およびピリジン（２．０ｍＬ，２４．５ｍｍｏｌ）を加え、その混合物を窒素下に周囲温度で１８時間振とうした。レジンを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（１回）、ジクロロメタン（３回）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で洗浄した（各９０ｍＬ）。塩化ベンゾイル（３．０ｍＬ，２６ｍｍｏｌ）およびピリジン（３．０ｍＬ，３６．７ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（９０ｍＬ）溶液をレジンに加え、槽を窒素下で３時間振とうし、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（１回）およびジクロロメタン（３回）で洗浄した（各９０ｍＬ）。レジンの乾燥試料に対してフルベン−ピペリジンアッセイを行なったところ、負荷量は０．３４０ｍｍｏｌ／ｇであることがわかった。
【０２９３】
以下のステップを実行した。（ステップ１）Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（９０ｍＬ）を使って、Ｆｍｏｃ基を３０分間、除去した。（ステップ２）レジンを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で、洗浄した（各９０ｍＬ）。（ステップ３）Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（９０ｍＬ）およびジイソプロピルエチルアミン（２ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｏｒｎ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（３．７１ｇ，８．１６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１．２５ｇ，８．１６ｍｍｏｌ）、およびＨＢＴＵ（３．１０ｇ，８．１６ｍｍｏｌ）をレジンに加え、反応を５時間進行させた。（ステップ４）レジンをステップ２と同様に洗浄した。（ステップ５）Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（９０ｍＬ）およびジイソプロピルエチルアミン（２ｍＬ）中のＦｍｏｃ−Ｏｒｎ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（３．７１ｇ，８．１６ｍｍｏｌ）およびＰｙＢｒｏＰ（３．８ｇ，８．１６ｍｍｏｌ）をレジンに加え、反応を５時間進行させた。（ステップ７）レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、およびジクロロメタン（３回）で洗浄した。（ステップ６）反応の完了をフルベン−ピペリジンアッセイで監視した。所望の配列が得られるまでステップ１〜７を繰り返した。カップリング収率は＞９５％だった。
【０２９４】
パートＢ−Ａｃ−ＰＬＧ−Ｈｐｈｅ−Ｏ（Ｂｏｃ）Ｌ−ＯＨの製造
パートＡのペプチド−レジン（２．５ｇ）を１００ｍＬのアドバンスドケムテック反応槽に入れ、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ×２）で洗浄することによって膨潤させた。Ｆｍｏｃ基を除去するためにレジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（３０ｍＬ）で３０分間処理した後、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で洗浄した（各３０ｍＬ）。酢酸無水物（０．７８ｍＬ，４．２ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（０．８８ｍＬ，５．０ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）を加え、その混合物を穏やかに２時間撹拌した。ペプチド−レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、およびジクロロメタン（３回）で洗浄し（各３０ｍＬ）、減圧下で乾燥した。ペプチド−レジンを焼結ガラス漏斗に入れ、ジクロロメタン中の１％トリフルオロ酢酸（１２ｍＬ）で２分間処理した。その溶液を、窒素圧を加えることによって、ピリジン：メタノール溶液（１：９、２ｍＬ）を含有するフラスコ中に直接、濾過した。この切断手順を１０回繰り返した。合わせた濾液を濃縮して無色の油性固形物を得た。この粗生成物を水（２５ｍＬ×２）でトリチュレートし、減圧下で乾燥することにより、乾燥した固体を得た。この固体を、フェノメネックスルナＣ１８（２）カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、０．１％トリフルオロ酢酸を含有する２２．５→５８．５％アセトニトリルの０．９％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を使って精製した。２８．５分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、標記化合物（６８．４ｍｇ，９．３％）をＨＰＬＣ純度１００％の無色の固体として得た。ＭＳ：m/e 716.6［M+H-Boc］（90％），816.7［M+H］（100％）。
【０２９５】
パートＣ−２−［（１Ｅ）−２−（｛５−［Ｎ−（｛４−［Ｎ−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−５−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］ペンタノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）カルバモイル］フェニル｝メチル）カルバモイル］（２−ピリジル）｝アミノ）−２−アザビニル］ベンゼンスルホン酸の製造
【化７３】
2007504242.tif 000074
パートＢの生成物（１５．０ｍｇ，０．０１８４ｍｍｏｌ）、実施例８・パートＤの生成物（８．６２ｍｇ，０．０１８４ｍｍｏｌ）、およびＨＯＡｔ（２．５２ｍｇ，０．０１８４ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（１５０μＬ）溶液をコリジン（９．７μＬ，０．０７３６ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（２．８８μＬ，０．０１８４ｍｍｏｌ）で処理し、窒素下に室温で撹拌した。５時間後に、反応溶液を、実施例８・パートＤの生成物（２．１６ｍｇ，０．００４６ｍｍｏｌ）、ＤＩＣ（０．７２μＬ，０．００４６ｍｍｏｌ）、およびコリジン（２．５μＬ，０．０１８４ｍｍｏｌ）で、追加処理し、さらに１５時間撹拌した。その反応系を、フェノメネックスルナＣ１８カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、０．１％トリフルオロ酢酸を含有する２７→５４％アセトニトリルの０．９％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を使って精製した。２４．９分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、所望の化合物（１４．１ｍｇ，６０．０％）をＨＰＬＣ純度１００％の無色の固体として得た。ＭＳ：m/e 583.9［M-Boc+2H］（100％），1166.5［M+H-Boc］（20％），1266.5［M+H］（100％）；Ｌ−ロイシンのキラル分析：９８．９％。
【０２９６】
パートＤ−２−［（１Ｅ）−２−（｛５−［Ｎ−（｛４−［Ｎ−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−５−アミノペンタノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）カルバモイル］フェニル｝メチル）カルバモイル］（２−ピリジル）｝アミノ）−２−アザビニル］ベンゼンスルホン酸アンモニウムの製造
【化７４】
2007504242.tif 000075
パートＣの生成物（１３．０ｍｇ，０．０１０３ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸：ジクロロメタン（１：１、３ｍＬ）に溶解し、窒素下に周囲温度で１０分間撹拌した。その溶液を減圧下で濃縮し、得られた固体を、フェノメネックスジュピターＣ１８カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣにより、１００ｍＭ酢酸アンモニウムを含有する２２．５→３６％アセトニトリルの０．４５％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を使って精製した。２８．０分に溶出する主生成物ピークを凍結乾燥することにより、標記化合物１０．９ｍｇ（６０．０％）をＨＰＬＣ純度１００％の無色の固体として得た。ＭＳ：m/e 584.0［M+2H］（55％）；1166.5［M+H］（100％）；高分解能ＭＳ：計算値（C57H76N13O12S［M+H］として）：1166.5451，実測値：1166.5456；Ｌ−ロイシンのキラル分析：９９．９％。
【０２９７】
実施例１８
アンモニウム ２−（（１Ｅ）−２−｛［５−（Ｎ−｛［４−（Ｎ−｛２−［２−（２−｛２−［２−（｛１−［（２Ｒ）−２−（アセチルアミノ）−３−（アミノオキシスルホニル）プロパノイル］（２Ｓ）ピロリジン−２−イル｝カルボニルアミノ）（２Ｓ）−４−メチルペンタノイルアミノ］アセチルアミノ｝（２Ｓ）−４−フェニルブタノイルアミノ）（２Ｓ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロパノイルアミノ］（２Ｓ）−４−メチルペンタノイルアミノ｝カルバモイル）フェニル］メチル｝カルバモイル）（２−ピリジル）］アミノ｝−２−アザビニル）ベンゼンスルホネートの合成
【化７５】
2007504242.tif 000076
パートＡ−Ａｃ−Ｃｓａ−ＰＬＧ−Ｈｐｈｅ−Ｙ（ｔ−Ｂｕ）Ｌ−ＯＨの製造
実施例１０・パートＡ（５００ｍｇ、置換レベル＝０．４ｍｍｏｌ／ｇ）からのペプチド−レジンを５０ｍＬのアドバンストケムテック反応槽に付して、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２×２０ｍＬ）で洗浄することによって膨張させた。以下の工程を実施した：（ステップ１）Ｆｍｏｃ基をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）中、３０分間、２０％のピペリジンを用いて除去した（ステップ２）。該レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で洗浄した（各２０ｍＬ）（ステップ３）。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）およびジイソプロピルエチルアミン(１ｍＬ）中、Ｆｍｏｃ−Ｃｓａ−ＯＨ（Hubbuch, A.; Danho, W.; Zahn, H. Liebigs Ann. Chem. 1979, 776-783）（２４０ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（９０ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）、およびＨＢＴＵ（２３０ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）をレジンおよび混合物に加え、該混合物を５時間穏やかに攪拌し、続いてステップ２のとおり洗浄した（ステップ４）。ステップ３を繰り返した（ステップ５）。Ｆｍｏｃ基をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）中、３０分間、２０％のピペリジンを用いて除去し、続いて、ステップ２のとおり洗浄した（ステップ５）。該ペプチド−レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）中、無水酢酸（０．３５ｍＬ、４ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（０．８７ｍＬ、５ｍｍｏｌ）で処理し、該混合液を窒素雰囲気下で１８時間振とうした。該レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（１回）、およびジクロロメタン（３回）で洗浄し（各２０ｍＬ）、真空乾燥した。
【０２９８】
ペプチド−レジンをガラス濾過器に付して、ジクロロメタン（１０ｍＬ）中で、２分間、１％トリフルオロ酢酸で処理した。該溶液は、窒素圧を使用して、ピリジン：メタノール（１：９、２ｍＬ）を含んだフラスコに直接濾過した。解離手順を１０分間繰り返した。濾液を併せて、無色の油状固体を得るために濃縮した。この残渣生成物を、０．１％トリフルオロ酢酸を含む、２６．１→４５．９％アセトニトリルの０．６６％／分グラジエント（流量８０ｍＬ／分）を用いて、フェノメネックスジュピターＣ１８カラム（４１．４×２５０ｍｍ）で、ＨＰＬＣによって精製した。２４〜２８分で溶離する主生成物のピークを凍結乾燥し、チロシンからｔ−ブチル基を除去した標記化合物およびペプチド（５１：４９）の混合物（６７．３ｍｇ）を得た。これらの二つの生成物の全収率は、１７．０％であった。ＭＳ（保護体）：m/e 972．5 ［M+H］(100%)；ＭＳ（脱保護体）：m/e 916．3 [M+H](100%)。
【０２９９】
パートＢ−結合形成反応
パートＡ（１５．０ｍｇ、０．０１５４ｍｍｏｌ）の生成物、実施例８の生成物、パートＤ（７．３ｍｇ、０．０１５４ｍｍｏｌ）、およびＨＯＡｔ（２．１５ｍｇ、０．０１５４ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（１５０μＬ）溶液をコリジン（７．２μＬ、０．０５４３ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（２．５０μＬ、０．０１５４ｍｍｏｌ）で処理し、窒素雰囲気下、室温で攪拌した。３時間後、該反応溶液を実施例８の付加生成物、パートＤ（１．８３ｍｇ、０．００３９ｍｍｏｌ）、ＤＩＣ（０．５４μＬ、０．００３９ｍｍｏｌ）、およびコリジン（１．８μＬ、０．０１５４ｍｍｏｌ）で処理し、加えて１７時間攪拌した。該反応液を、０．１％トリフルオロ酢酸を含む、１８→５４％のアセトニトリルの０．９％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を用いて、フェノメネックスルナＣ１８（２）カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でＨＰＬＣによって精製した。保護生成物の結合形成体は、２９．５分で溶離し、凍結乾燥して無色の個体（５．０ｍｇ）を得た。標記化合物は、１９．０分に溶離し、凍結乾燥し、無色の個体を得て、さらに１００ｍＭ酢酸アンモニウムを含む、１８→５４％のアセトニトリルの０．９％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を用いて、フェノメックスジュピターＣ１８カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でＨＰＬＣによって精製した。２１．０分に溶離した主生成物のピークを凍結乾燥し、ＨＰＬＣで１００％純度の無色の固体として、標記化合物（７．１ｍｇ）（保護した結合形成体を補正し、６４．５％）を得た。ＭＳ:m/e 1367.4 [M+H](100%)；高分解能ＭＳ：計算値(C64H80N13O17S2)[M+H]：1366.5215、実験値：1366.5208；Ｌ−ロイシンのキラル分析：９９．９％。
【０３００】
実施例１９
２−（（１Ｅ）−２−｛［５−（Ｎ−｛５−［Ｎ−（アセチルアミノ）カルバモイル］ペンチル｝カルバモイル）（２−ピリジル）］アミノ｝−２−アザビニル）ベンゼンスルホン酸の合成
【化７６】
2007504242.tif 000077
無水酢酸（１０．９μＬ、０．１２ｍｍｏｌ）、実験１３・パートＤの生成物（５２ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、およびＨＯＡｔ（３０．８ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．２ｍＬ）溶液をジイソプロピルエチルアミン（１００μＬ、０．５７ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（３５．５μＬ、０．２４ｍｍｏｌ）で処理し、窒素雰囲気下、室温で３時間攪拌した。該溶液を濃縮し、生じた残渣を、０．１％トリフルオロ酢酸を含む、０→２７％アセトニトリルの０．９％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を用いて、フェノメネックスルナＣ１８（２）カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でＨＰＬＣにより精製した。２３分で溶離する主生成物のピークを凍結乾燥し、無色の固体として、標記化合物（３６ｍｇ、６３％、ＨＰＬＣ純度１００％）を得た。1H NMR (DMSO-d6):δ9.72-9.60 (m, 2H), 9.32 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.50-8.43 (m, 1H), 8.42-8.19 (m, 2H), 7.85-7.73 (m, 1H), 7.53-7.36 (m, 2H), 7.20 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 3.13-3.32 (m, 2H), 2.12 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.83 (s, 1H), 1.63-1.42 (m, 4H), 1.41-1.22 (m, 2H); ＭＳ: m/e 491.2 [M+H]; 高分解能ＭＳ：計算値（C21H26N6O6S）[M+H]：491.1707、実験値：491.1702。
【０３０１】
実施例２０
２−（（１Ｅ）−２−アザ−２−｛［５−（Ｎ−｛５−［Ｎ−（１２−ヒドロキシドデカノイルアミノ）カルバモイル］ペンチル｝カルバモイル）（２−ピリジル）］アミノ｝ビニル）ベンゼンスルホン酸の合成
【化７７】
2007504242.tif 000078
１２−ヒドロキシドデカノイン酸（２５ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、実験１３・パートＤの生成物、（５２ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、およびＨＯＡｔ（３０．８ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．２ｍＬ）溶液をジイソプロピルエチルアミン（１００μＬ、０．５７ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（３５．５μＬ、０．２４ｍｍｏｌ）で処理し、窒素雰囲気下、室温で３時間攪拌した。実験１３・パートＤの付加生成物（８ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）を加え、該反応液をさらに３時間攪拌した。該反応液を、０．１％トリフルオロ酢酸を含む、１８→４５％アセトニトリルの０．９％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を用いて、フェノメネックスルナＣ１８（２）カラム（２１．２×２５０ｍｍ）で、ＨＰＬＣにより精製した。２１分に溶離した主生成物のピークを凍結乾燥し、無色の固体として、標記化合物（２９ｍｇ、３９％、ＨＰＬＣ純度１００％）を得た。1H NMR(DMSO-d6):δ9.63 (s, 2H), 9.30 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.50-8.44 (m, 1H), 8.40-8.18 (m, 2H), 7.88-7.75 (m, 1H), 7.52-7.46 (m, 2H), 7.20 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 3.36 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.31-3.18 (m, 2H), 2.17-2.00 (m, 4H), 1.62-1.18 (m, 24 H); ＭＳ: m/e 647.4 [M+H]; 高分解能ＭＳ：計算値（C31H46N6O7S）[M+H]：647.3221、実験値：647.3217。
【０３０２】
実施例２１
２−（（１Ｅ）−２−アザ−２−｛［５−（Ｎ−｛５−［Ｎ−（ドデカノイルアミノ）カルバモイル］ペンチル｝カルバモイル）（２−ピリジル）］アミノ｝ビニル）ベンゼンスルホン酸の合成
【化７８】
2007504242.tif 000079
ラウリル酸（２３．２ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、実験１３・パートＤの生成物（５２ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、およびＨＯＡｔ（３０．８ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．２ｍＬ）溶液をジイソプロピルエチルアミン（１００μＬ、０．５７ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（３５．５μＬ、０．２４ｍｍｏｌ）で処理し、窒素雰囲気下、室温で２時間攪拌した。該溶液を減圧下で濃縮し、０．１％トリフルオロ酢酸を含む、３１．５→４９．５％アセトニトリルの０．６％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）条件を用いて、フェノメネックスルナＣ１８（２）カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でＨＰＬＣにより精製した。３１．１分で溶離した主生成物ピークを凍結乾燥し、無色固体として、標記化合物（３４ｍｇ、４７％、ＨＰＬＣ純度１００％）を得た。1H NMR (DMSO-d6):δ9.63 (s, 2H), 9.30 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.50-8.43 (m, 1H), 8.40-8.18 (m, 2H), 7.85-7.75 (m, 1H), 7.50-7.36 (m, 2H), 7.20 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 3.31-3.18 (m, 2H), 2.18-2.00 (m, 4H), 1.62-1.39 (m, 6H), 1.39-1.11 (m, 18H), 0.90-0.78 (m, 3H); ＭＳ: m/e 631.3 [M+H]. 高分解能ＭＳ：計算値（C31H46N6O6S）[M+H]：631.3272、実験値：631.3272。
【０３０３】
実施例２２
２−［（１Ｅ）−２−アザ−２−（｛５−［Ｎ−（５−ヒドロキシドデカノイルアミノ）カルバモイル］（２−ピリジル）｝アミノ）ビニル］ベンゼンスルホン酸の合成
【化７９】
2007504242.tif 000080
δ−ドデカノラクトン（７．９ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）および実施例１４・パートＣの生成物（２０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．２ｍＬ）溶液をナトリウム ２−エチルヘキサノエート（１６．５ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）で処理し、窒素雰囲気下、室温で１８時間攪拌し、続いて、５０℃で４８時間加熱した。該溶液を濃縮し、残渣を、０．１％トリフルオロ酢酸を含む、１８→４５％アセトニトリルの１．３５％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を用いて、フェノメネックスルナＣ１８（２）カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でＨＰＬＣにより精製した。１９．２分に溶離した主生成物のピークを凍結乾燥し、無色固体として、標記化合物（１．２ｍｇ、７．０％、ＨＰＬＣ純度１００％）を得た。ＭＳ：m/e 534.3 [M+H]；高分解能ＭＳ：計算値(C25H35N5O6S)[M+H]：534.2381、実験値：534.2375。
【０３０４】
実施例２３
２−｛（１Ｅ）−２−アザ−２−［（５−｛Ｎ−［２−（８−ヒドロキシドデカノイルアミノ）エチル］カルバモイル｝（２−ピリジル））アミノ］ビニル｝ベンゼンスルホン酸の合成
【化８０】
2007504242.tif 000081
パートＡ−エチル ７−（クロロカルボニル）ヘプタノエートの製造
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５滴）を含む、エチル水素セブレート（５．０ｇ、２４．７ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（１５ｍＬ）溶液を塩化オキサリル（２．１６ｍＬ、２４．７ｍｍｏｌ）で処理し、窒素雰囲気下、室温で３時間攪拌した。該溶媒を減圧下で除去し、無色油状物（５．４９ｇ、１０１％）を得た。ＩＲ（ＮａＣｌ板にＣＨ2Ｃｌ2溶液で沈着した、cm-1）：1797.4 (C=O), 1730.9 (C=O); 1H NMR (CDCl3):δ4.11 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.87 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.28 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.73-1.67 (m, 2H), 1.67-1.57 (m, 2H), 1.38-1.30 (m, 4H), 1.24 (t, J = 7.1 Hz, 3H); 13C NMR (CDCl3):δ173.7, 173.6, 60.2, 47.0, 34.2, 28.5, 28.0, 24.7, 24.5, 14.2。
【０３０５】
パートＢ−エチル ８−オキソドデカノエートの製造
無水塩化亜鉛（０．６９ｇ、５．１ｍｍｏｌ）の無水エーテル（１０ｍＬ）溶液を２．０Ｍ塩化ブチルマグネシウムのエーテル溶液（２．５３ｍＬ、５．１ｍｍｏｌ）を−７８℃で、滴下し処理した。温度を０℃に上昇し、該反応混合液をパートＡ（１．２３ｇ、５．６ｍｍｏｌ）の生成物の無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液、続いて、Ｐｄ（ＰＰｈ3）4（０．０５７ｇ、０．０５ｍｍｏｌ）で処理した。生じた混合液を０℃で３０分間、次いで、室温で１．５時間攪拌した。該反応液を１Ｎ ＨＣｌ（２ｍＬ）の付加によって、クエンチし、ヘキサン（２×２０ｍＬ）で抽出した。併せた有機層を飽和ＮａＨＣＯ3（３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮した。生じた残渣をシリカゲルでクロマトグラフし、酢酸エチル／ヘキサン（１：３）で溶離して、淡黄色油状物（１．０６ｇ、９６％）として、標記化合物を得た。ＩＲ（ＮａＣｌ板にＣＨ2Ｃｌ2溶液で沈着した、cm-1）：1737.5 (C=O), 1704.3 (C=O); 1H NMR (CDCl3):δ4.10 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.37 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 2.26 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.63-1.50 (m, 6H), 1.31-1.26 (m, 6H), 1.24 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.89 (t, J = 7.5 Hz, 3H); 13C NMR (CDCl3):δ211.4, 173.7, 60.2, 42.6, 42.5, 34.3, 28.9, 28.8, 26.0, 24.8, 23.6, 22.4, 14.2, 13.8; MS: m/e 279.1 [M+Na]。
【０３０６】
パートＣ−８−オキソデカノイン酸の製造
パートＢ（０．５０ｇ、２．１ｍｍｏｌ）の生成物のＴＨＦ（７ｍＬ）および水（２ｍＬ）溶液を３Ｎ ＬｉＯＨ（７．０６ｍＬ、２０．１ｍｍｏｌ）で処理し、窒素雰囲気下、室温で１８時間、急速で攪拌した。ＴＨＦを除去し、生じた混合液を３７％ＨＣｌ（２．５ｍＬ）で、ｐＨ４まで酸性とし、ＣＨ2Ｃｌ2（２０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ3（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮し、無色の油状物として、標記化合物（０．３２ｇ、７２％）を得た。1H NMR (DMSO-d6):δ2.42-2.33 (m, 4H), 2.08-2.03 (m, 2H), 1.47-1.39 (m, 6H), 1.28-1.14 (m, 6H), 0.85 (t, J = 7.4 Hz, 3H); 13C NMR (DMSO-d6):δ210.5, 174.7, 41.7, 41.5, 34.2, 28.4, 28.3, 25.4, 24.6, 23.1, 21.7, 13.7; MS: m/e 197.3 [M-H2O+H]。
【０３０７】
パートＤ−８−ヒドロキシドデカノイン酸の製造
パートＣ（０．１５ｇ、０．７ｍｍｏｌ）の生成物のエタノール（３ｍＬ）溶液を窒素雰囲気下、０℃で１０分間、ＮａＢＨ4（０．０１３ｇ、０．３ｍｍｏｌ）で処理した。さらに、ＮａＢＨ4（０．０５２ｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加え、該反応液を１．５時間攪拌した。該反応液を１Ｎ ＨＣｌ（１０ｍＬ）でクエンチした。エタノールを減圧下で除去し、生じた溶液をＣＨ2Ｃｌ2（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を併せて、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮し、無色の固体として、標記化合物（０．１１８ｇ、７８％）を得た。1H NMR (DMSO-d6):δ11.95 (s, 1H), 4.19 (s, 1H), 2.18 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.52-1.47 (m, 2H), 1.35-1.20 (m, 14H), 0.86 (t, J = 7.0 Hz, 3H); 13C NMR (DMSO-d6):δ174.4, 69.4, 37.1, 36.9, 33.6, 28.9, 28.6, 27.5, 25.1, 24.4, 22.3, 14.0; MS: m/e 181.4 [M-H2O+H]。
【０３０８】
パートＥ−２−（（１Ｅ）−２−アザ−２−｛［５−（Ｎ−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］エチル｝カルバモイル）（２−ピリジル）］アミノ｝ビニル）ベンゼンスルホン酸の製造
【化８１】
2007504242.tif 000082
ナトリウム ２−［（１Ｅ）−２−アザ−２−（｛５−［（２，５−ジオキソピロリジニル）オキシカルボニル］（２−ピリジル）｝アミノ）ビニル］ベンゼンスルホネート（５．５０ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）およびＨＯＡｔ（１．７０ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（８ｍＬ）溶液をＮ−Ｂｏｃ−エチレンジアミン（２．００ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（４．３８ｍＬ、２５．０ｍｍｏｌ）で処理し、生じた溶液を窒素雰囲気下、室温４時間攪拌した。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを減圧下で除去し、生じた残渣をシリカゲルでクロマトグラフし、メタノールで溶離し、淡黄色固体として、標記化合物（３．４８ｇ、１２０％）を得た。ＭＳ: m/e 464.1 [M+H]。
【０３０９】
パートＦ−２−［（１Ｅ）−２−（｛５−［Ｎ−（２−アミノエチル）カルバモイル］（２−ピリジル）｝アミノ）−２−アザビニル］ベンゼンスルホン酸の製造
【化８２】
2007504242.tif 000083
パートＥの生成物（２．８ｇ、６．０ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸：ジクロロメタン（５０：５０、１０ｍＬ）で溶解し、窒素雰囲気下、室温で１０分間攪拌した。該溶液を濃縮し、生じた残渣を、０．１％トリフルオロ酢酸を含む、０→１８％アセトニトリルの０．９％／分グラジエント（流量８０ｍＬ／分）を用いて、フェノメネックスルナＣ１８（２）カラム（４１．４×２５０ｍｍ）でＨＰＬＣにより精製した。約１７．０分に溶離する主生成物のピークを併せて、凍結乾燥し、無色の固体として、標記化合物（１．３９ｇ、収率６４％、ＨＰＬＣ純度：１００％）を得た。1H NMR (DMSO-d6):δ9.18 (s, 1H), 8.68-8.52 (m, 2H), 8.28-8.05 (m, 2H), 7.91-7.65 (m, 4H), 7.50-7.32 (m, 2H), 7.27 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 3.62-3.45 (m, 2H), 3.15-2.94 (m, 2H); ＭＳ: m/e 364.1 [M+H]. 高分解能ＭＳ：計算値（C15H17N5O4S）[M+H]:364.1074, 実験値：364.1078。
【０３１０】
パートＧ−２−｛（１Ｅ）−２−アザ−２−［（５−｛Ｎ−［２−（８−ヒドロキシドデカノイルアミノ）エチル］カルバモイル｝（２−ピリジル））アミノ］ビニル｝ベンゼンスルホン酸の製造
【化８３】
2007504242.tif 000084
パートＦの生成物（０．０２５ｇ、０．０７ｍｍｏｌ）、パートＤの生成物（０．０１５ｇ、０．０７ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（２３μＬ、０．１４ｍｍｏｌ）、およびＨＯＡｔ（１９ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．５ｍＬ）溶液をＤＩＣ（２１μＬ、０．１４ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（２１μＬ、０．１３ｍｍｏｌ）で処理し、該反応液を窒素雰囲気下、室温で１８時間攪拌した。溶液を減圧下で濃縮し、生じた残渣を、０．１％トリフルオロ酢酸を含む、１８→４１．４％アセトニトリルの０．９％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を用いて、フェノメネックスルナＣ１８（２）カラム（２１．２×２５０ｍｍ）で、ＨＰＬＣにより精製した。２１分で溶離する主生成物のピークを凍結乾燥し、無色の固体として、標記化合物（２２．７ｍｇ、収率５８％、ＨＰＬＣ純度１００％）を得た。ＭＳ: m/e 562.3 [M+H]; 高分解能ＭＳ：計算値(C27H39N6O6S)[M+H]:562.2694、実験値：562.2681。
【０３１１】
実施例２４
２−（（１Ｅ）−２−｛［５−（Ｎ−｛５−［Ｎ−（｛［４−（（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルペンタノイルアミノ）フェニル］メトキシ｝カルボニルアミノ）カルバモイル］ペンチル｝カルバモイル）（２−ピリジル）］アミノ｝−２−アザビニル）ベンゼンスルホン酸の合成
【化８４】
2007504242.tif 000085
パートＡ−（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］−Ｎ−［４−（ヒドロキシメチル）フェニル］−４−メチルペンタンアミドの製造
【化８５】
2007504242.tif 000086
Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（２．０２ｇ、８．１ｍｍｏｌ）、ＰＡＢＡ（１．００ｇ、８．１ｍｍｏｌ）、およびＥＥＤＱ（２．２１ｇ、８．９ｍｍｏｌ）のトルエン：エタノール（１：１、２０ｍＬ）溶液を窒素雰囲気下、室温で４時間攪拌した。該溶液を減圧下で濃縮し、生じた残渣をシリカゲルでクロマトグラフし、酢酸エチル：ヘキサン（１：４）、酢酸エチル：ヘキサン（１：２）、および酢酸エチル：ヘキサン（１：１）で連続的に溶離し、無色の固体として、標記化合物（２．６２ｇ、９６％）を得た。1H NMR (CDCl3):δ8.46 (s, 1H), 7.49 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.28 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 4.98 (s, 1H), 4.64 (s, 2H), 4.27 (s, 1H), 1.83-1.73 (m, 2H), 1.70 (s, 1H), 1.62-1.55 (m, 1H), 1.47 (s, 9H), 1.03-0.93 (m, 6H); ＭＳ: m/e 237.3 [M-Boc+H]; 高分解能ＭＳ：計算値(C18H28N2O4)[M+H]:337.2122、実験値：337.2118。
【０３１２】
パートＢ−（４−｛（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝フェニル）メチル（４−ニトロフェノキシ）ホルメートの製造
【化８６】
2007504242.tif 000087
パートＡの生成物（１．００ｇ、３．０ｍｍｏｌ）および４−ニトロフェニルクロロホルメート（０．６ｇ、３．０ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液を０℃まで冷却し、ピリジン（０．４ｍＬ、４．９ｍｍｏｌ）で処理し、窒素雰囲気下、室温で２時間攪拌した。該溶液をＣＨ2Ｃｌ2（３０ｍＬ）で希釈し、水（５０ｍＬ）および飽和食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、減圧濃縮した。生じた残渣を酢酸エチル／ヘキサン（３：１）で溶離し、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）で精製し、無色の結晶固体として、標記化合物（１．０２ｇ、６８％）を得た。1H NMR (CDCl3):δ8.48 (s, 1H), 8.30-8.26 (m, 2H), 7.57 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.42-7.36 (m, 4H), 5.25 (s, 2H), 4.92 (s, 1H), 4.24 (s, 1H), 1.85-1.70 (m, 2H), 1.62-1.53 (m, 1H), 1.48 (s, 9H), 1.02-0.95 (m, 6H); 13C NMR (CDCl3):δ170.9, 155.5, 152.4, 145.4, 138.6, 129.8, 129.7, 125.3, 121.8, 119.9, 80.8, 70.7, 53.8, 40.2, 28.3, 24.8, 22.9, 21.9; ＭＳ: m/e 524.3 [M+Na]; 高分解能ＭＳ：計算値（C18H28N2O4）[M+H]:502.2184、実験値:502.2183。
【０３１３】
パートＣ−２−（（１Ｅ）−２−｛［５−（Ｎ−｛５−［Ｎ−（｛［４−（（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルペンタノイルアミノ）フェニル］メトキシ｝カルボニルアミノ）カルバモイル］ペンチル｝カルバモイル）（２−ピリジル）］アミノ｝−２−アザビニル）ベンゼンスルホン酸の製造
【化８７】
2007504242.tif 000088
パートＢの生成物（１０５ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）および実施例１３・パートＤの生成物（５０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）溶液をＴＥＡ（１７μＬ、０．１２ｍｍｏｌ）で処理し、窒素雰囲気下、室温で２日間攪拌した。該溶液を減圧濃縮し、生じた黄色の粘性油状物をトリフルオロ酢酸：ジクロロメタン（５０：５０、４ｍＬ）で溶解し、窒素雰囲気下、室温で１０分間攪拌した。該溶液を濃縮し、生じた残渣を、０．１Ｍ ＮＨ4ＯＡｃ（ｐＨ７）を含む、１５〜３５％アセトニトリルの０．６７％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を用いて、フェノメネックスルナＣ１８（２）カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でＨＰＬＣにより精製した。２３．２分に溶離する主生成物ピークを凍結乾燥し、無色の固体として、標記化合物（１４ｍｇ、収率１８％、ＨＰＬＣ純度１００％）を得た。1H NMR(DMSO-d6):δ11.30 (s, 1H), 10.43 (s, 1H), 9.60 (s, 1H), 9.05-9.00 (m, 2H), 8.59 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.30-8.25 (m, 1H), 8.05-7.98 (m, 2H), 7.78 (dd, J1 = 7.7 Hz, J2 = 1.3 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.37-7.25 (m, 4H), 7.22 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.0 (s, 2H), 3.83 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 3.26-15 (m, 2H), 2.06-2.01 (m, 2H), 1.72-1.48 (m, 7H), 1.43-1.23 (m, 2H), 0.95-0.83 (m, 6H); 13C NMR(DMSO-d6):δ171.9, 171.8, 164.8, 158.5, 156.1, 147.8, 145.9, 137.8, 136.7, 132.2, 132.0, 128.7, 128.6, 127.5, 126.7, 125.1, 121.0, 119.3, 105.2, 65.5, 52.1, 40.7, 33.0, 28.9, 25.9, 24.7, 23.7, 22.7, 21.8, 21.0; ＭＳ: m/e 711.3 [M+H]。
【０３１４】
実施例２５
［４−（（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルペンタノイルアミノ）フェニル］メチル［１１−（Ｎ−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］エチル｝カルバモイル）ウンデシルオキシ］ホルメートの合成
【化８８】
2007504242.tif 000089
パートＡ−（２Ｓ）−２−［（フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニルアミノ］−Ｎ−［４−（ヒドロキシメチル）フェニル］−４−メチルペンタンアミドの製造
【化８９】
2007504242.tif 000090
Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（２．０ｇ、５．７ｍｍｏｌ）、ＰＡＢＡ（０．７ｇ、５．７ｍｍｏｌ）、およびＥＥＤＱ（１．４ｇ、６．３ｍｍｏｌ）のトルエン：エタノール（１：１、３０ｍＬ）溶液を窒素雰囲気下、室温で３日間攪拌した。さらに、ＰＡＢＡ（０．１４ｇ、１．１ｍｍｏｌ）を加え、該反応液をさらに１８時間攪拌した。さらに、ＥＥＤＱ（０．４ｇ、１．９ｍｍｏｌ）を加え、該反応液をさらに２時間攪拌し、濃縮した。生じた残渣をジクロロメタン（２０ｍＬ）で溶解し、１Ｎ ＨＣｌ（３×２０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ3（３×２０ｍＬ）、および飽和食塩水（２０ｍＬ）で連続的に洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮した。生じた固体をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）で精製し、ジクロロメタン：メタノール（５０：１）で溶離し、無色の固体として、標記化合物（２．０３ｇ、７８％）を得た。1H NMR(DMSO-d6):δ9.96 (s, 1H), 7.89 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.74 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 7.63 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.44-7.38 (m, 2H), 7.34-7.29 (m, 2H), 7.23 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.08 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 4.43 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 4.30-4.19 (m, 4H), 1.73-1.64 (m, 1H), 1.63-1.56 (m, 1H), 1.49-1.44 (m, 1H), 0.96-0.73 (m, 6H); 13C NMR(DMSO-d6):δ171.3, 156.0, 143.9, 143.7, 140.7, 137.5, 137.4, 127.6, 127.0, 126.8, 125.3, 120.1, 119.0, 65.5, 62.5, 53.8, 46.7, 40.6, 24.3, 23.0, 21.4; ＭＳ: m/e 459.2 [M+H] (100%), 481.2 [M+Na] (60%)。
【０３１５】
パートＢ−（４−｛（２Ｓ）−２−［（フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝フェニル）メチル（４−ニトロフェノキシ）ホルメートの製造
【化９０】
2007504242.tif 000091
パートＡの生成物（０．５０ｇ、１．１ｍｍｏｌ）および４−ニトロフェニルクロロホルメート（０．６６ｇ、３．３ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（１５ｍＬ）溶液をピリジン（０．７３ｍＬ、８．９ｍｍｏｌ）で処理し、窒素雰囲気下、室温で１．５時間攪拌した。該反応混合液を濾過し、濾液を濃縮した。生じた残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）で精製し、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（１：３）で溶離し、無色の結晶性の固体として、標記化合物（０．１３ｇ、１９％）を得た。1H NMR(DMSO-d6):δ10.13 (s, 1H), 8.31 (d, J = 9.1 Hz, 2H), 7.88 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 7.74 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 7.69-7.62 (m, 3H), 7.59-7.53 (m, 2H), 7.44-7.35 (m, 4H), 7.36-7.29 (m, 2H), 5.25 (s, 2H), 4.33-4.20 (m, 4H), 1.74-1.65 (m, 1H), 1.64-1.56 (m, 1H), 1.51-1.43 (m, 1H), 0.95-0.83 (m, 6H); 13C NMR(DMSO-d6):δ171.7, 156.0, 155.3, 151.9, 145.1, 143.8, 143.7, 140.7, 139.4, 129.4, 129.3, 127.6, 127.0, 126.2, 125.4, 125.3, 123.9, 122.6, 120.1, 119.2, 115.9, 70.2, 65.6, 53.8, 46.6, 40.5, 24.3, 23.0, 21.4; ＭＳ: m/e 624.2 [M+H]。
【０３１６】
パートＣ−Ｎ−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］エチル｝−１２−ヒドロキシドデカンアミドの製造
【化９１】
2007504242.tif 000092
１２−ヒドロキシドデカノイン酸（０．１３５ｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｎ−Ｂｏｃ−エチレンジアミン（０．１００ｇ、０．６ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（０．１７０ｇ、１．２ｍｍｏｌ）、およびジイソプロピルエチルアミン（０．２２ｍＬ、１．２ｍｍｏｌ）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）溶液をＤＩＣ（０．１９ｍＬ、１．２ｍｍｏｌ）で処理し、該反応液を窒素下、室温で１８時間攪拌した。該反応液を酢酸エチル（２５ｍＬ）で希釈し、１Ｎ ＨＣｌ（２５ｍＬ）、０．５Ｎ ＮａＯＨ（２５ｍＬ）、および飽和食塩水（２５ｍＬ）で連続的に洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮した。生じた残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）で精製し、酢酸エチルで溶離し、無色の固体として、標記化合物（０．２３７ｇ、ＬＣ／ＭＳ［１］により、不純物として１，３−ジイソプロピルウレアを含む）を得た。MS: m/e 259.4 [M-Boc+H]。
【０３１７】
パートＤ−（４−｛（２Ｓ）−２−［（フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝フェニル）メチル［１１−（Ｎ−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］エチル｝カルバモイル）ウンデシルオキシ］ホルメートの製造
【化９２】
2007504242.tif 000093
パートＢの生成物（５０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）、パートＣの生成物（４２ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）、およびＤＭＡＰ（１１ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（３ｍＬ）溶液を窒素下、室温で２８時間攪拌した。該溶液を減圧濃縮し、生じた黄色がかった粘性油状物を５０％アセトニトリル：水（４ｍＬ）で、窒素下、室温で１０分間処理した。該溶媒を除去し、生じた残渣をの流速で、０．１％ギ酸を含む、５１．３〜９０％アセトニトリルの１．７６％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を用いて、フェノメネックスルナＣ１８（２）カラム（２１．２×２５０ｍｍ）で、ＨＰＬＣにより精製した。２３．２分に溶離する主生成物ピークを凍結乾燥し、無色の固体として、標記化合物（２２ｍｇ、収率３３％、ＨＰＬＣ純度１００％）を得た。1H NMR(CDCl3):δ8.32 (bs, 1H), 7.75 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.58-7.53 (m, 2H), 7.53-7.47 (m, 2H), 7.37 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 7.33 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.28-7.25 (m, 2H), 6.15 (bs, 1H), 5.31 (bs, 1H), 5.10 (s, 2H), 4.95 (bs, 1H), 4.49-4.42 (m, 2H), 4.30 (bs, 1H), 4.20 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 4.13 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.39-3.27 (m, 2H), 3.26-3.21 (m, 2H), 2.14 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.81-1.53 (m, 7H), 1.42 (s, 9H), 1.36-1.30 (m, 2H), 1.30-1.19 (m, 12H), 1.00-0.90 (m, 6H); ＭＳ: m/e 843.5 [M+H]; 高分解能ＭＳ:計算値（C48H66N4O9）[M+H]:843.4903、実験値:843.4897。
【０３１８】
パートＥ−［４−（（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルペンタノイルアミノ）フェニル］メチル［１１−（Ｎ−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］エチル｝カルバモイル）ウンデシルオキシ］ホルメートの製造
【化９３】
2007504242.tif 000094
パートＤの生成物（７．０ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ）を２０％ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）溶液と窒素下、室温で５分間処理した。該溶液を減圧濃縮し、淡黄色の固体として、標記化合物を得た。ＭＳ: m/e 621.5 [M+H](100%)。
【０３１９】
実施例２６
２−（（１Ｅ）−２−アザ−２−｛［５−（Ｎ−｛２−［８−（４−ヒドロキシフェニル）オクタノイルアミノ］エチル｝カルバモイル）（２−ピリジル）］アミノ｝ビニル）ベンゼンスルホン酸の合成
【化９４】
2007504242.tif 000095
８−（４−ヒドロキシフェニル）オクタン酸（１５．０ｍｇ、０．０６３５ｍｍｏｌ）、実施例２３・パートＦの生成物（２３．１ｍｇ、０．０６３５ｍｍｏｌ）、およびＨＯＡｔ（８．７ｍｇ、０．０６３５ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（２００μＬ）溶液をコリジン（３５μＬ、０．２５４ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（９．９μＬ、０．０６３５ｍｍｏｌ）で処理し、窒素下、室温で攪拌させた。２１時間後、反応混合液を追加の実施例２３・パートＦの生成物（１１．６ｍｇ、０．０３１８ｍｍｏｌ）、ＤＩＣ（５．０μＬ、０．０３１８ｍｍｏｌ）、およびコリジン（１７．５μＬ、０．１２７ｍｍｏｌ）で処理した。４８時間後、該反応混合液を追加の実施例２３・パートＦの生成物（５．８ｍｇ、０．０１５９ｍｍｏｌ）、ＤＩＣ（２．５μＬ、０．０１５９ｍｍｏｌ）、およびコリジン（９μＬ、０．０６３５ｍｍｏｌ）で処理した。５８時間後、該反応混合液を実施例２３・パートＦの生成物（５．８ｍｇ、０．０１５９ｍｍｏｌ）、ＤＩＣ（２．５μＬ、０．０１５９ｍｍｏｌ）、およびコリジン（９μＬ、０．０６３５ｍｍｏｌ）で再び処理した。６３時間の全反応時間で、該反応溶液を、０．１％トリフルオロ酢酸を含む、０→５６．２％アセトニトリルの１．１２％／分グラジエント（流量２０ｍＬ／分）を用いて、フェノメネックスルナカラム（２１．２×２５０ｍｍ）で、ＨＰＬＣにより精製した。３６．２分に溶離する主生成物ピークを凍結乾燥し、ＨＰＬＣで１００％純度の無色の固体として、所望の化合物（１６．３ｍｇ、５１．７％）を得た。ＭＳ: m/e 582.2 [M+H](100%), 1163.3 [2M+H](35%)。
【０３２０】
実施例２７〜４４
複合体［９９ｍＴｃ（ＨＹＮＩＣ−ＭＭＰｓｕｂ）（トリシン）（ＴＰＰＴＳ）］の合成
ＴＰＰＴＳ（４．８４ｍｇ）、トリシン（６．３ｍｇ）、マンニトール（４０ｍｇ）、コハク酸緩衝液、ｐＨ４．８、および０．１％プルロニック（Pluronic）F-64界面活性剤を含む、鉛遮蔽した凍結乾燥バイアルに注射用滅菌水（１．１ｍＬ）、適当なＨＹＮＩＣ（０．２ｍＬ）とコンジュゲートしたマトリックスメタロプロテイナーゼ基質（ＭＭＰｓｕｂ）（２０μｇ）の脱イオン水または５０％エタノール水溶液、および０．２ｍＬの９９ｍＴｃＯ４−（５０±５ｍＣｉ）の生理食塩水溶液を加えた。再構成したキットを９５℃の水浴で１０分間加熱し、室温で５分間冷却させた。該反応混合液のサンプルをＨＰＬＣで分析した。ＲＣＰの結果は、表１にまとめる。
ＨＰＬＣの方法
検出器：ＩＮＵＳ β−Ｒａｍ、ＵＶ：２２０ｎｍ
カラム：ゾルバックス Ｒｘ Ｃ１８、２５ｃｍ×４．６ｍｍ
遮蔽：ゾルバックス Ｃ１８
温度：室温
流速：１．０ｍＬ／分
溶媒Ａ：２５ｍＭの酢酸アンモニウム（ｐＨの調整無し）
溶媒Ｂ：１００％アセトニトリル
グラジエントＡ
2007504242.tif 000096
グラジエントＢ
2007504242.tif 000097
グラジエントＣ
2007504242.tif 000098
グラジエントＤ
2007504242.tif 000099
表１．複合体［９９ｍＴｃ（ＨＹＮＩＣ−ＭＭＰ基質）（トリシン）（ＴＰＰＴＳ）］についての分析および収率データ
【表１】
2007504242.tif 000100
【０３２１】
実施例４５
ＭＭＰ基質の加水分解の反応速度測定
パートＡ−ＭＭＰ−２およびＭＭＰ−９の活性化および活性部位の滴定
精製したＭＭＰ−２（１０μｇ）またはＭＭＰ−９（１０μｇ）をＴＣＮ緩衝液（１００μＬ）で再構成した。精製したヒトＭＭＰ−９をアミノフェニル酢酸水銀（ＡＰＭＡ）（２ｎＭ）と一緒に３７℃で５．５時間、インキュベーションすることによって活性化した。Ｐｒｏ−ＭＭＰ−２を３７℃で２時間、ＡＰＭＡ（２ｎＭ）と一緒にインキュベーションすることによって活性化した。インキュベーションの終点で、１００％グリセロール（１００μＬ）を活性化ＭＭＰ−２および活性化ＭＭＰ−９（最終濃度：５０％グリセロール）に加えた。活性化ＭＭＰ−２および活性化ＭＭＰ−９を等分し、−２０℃で保存した。
【０３２２】
パートＢ−ＭＭＰ−２／ＭＭＰ−９の活性化部滴定
活性化プロテアーゼのレベルは、反応速度研究の前に、活性部滴定研究によって、常に定量した。ＭＭＰ−９およびＭＭＰ−２の活性化部は、２．５ｍＭの保存濃度で、１００％ＤＭＳＯで溶解したｇｍ６００１を用いて、滴定した。ｇｍ６００１の希釈液（１：２）をＴＣＮ緩衝液中で調製し、活性部滴定アッセイで、５ｎＭ〜０．０４ｎＭのｇｍ６００１の最終濃度を与えた。活性化したＭＭＰ−２または活性化したＭＭＰ−９（２ｎＭ）を９６ウェルの黒色マイクロタイタープレートで、３７℃にて１５分間、ｇｍ６００１の上昇する濃度で前培養した。アッセイ緩衝液（５００ｍＭ トリシン／ｐＨ７．５、１００ｍＭ ＣａＣｌ2、０．２％ＮａＮ3）中、蛍光基質Ｉ（Ｍｃａ−Ｐ−Ｌ−Ｇ−Ｌ−Ｄｐａ−Ａ−Ｒ−ＮＨ2）（１５０μＬ）を各ウェルに加えた。該プレートを室温で１分間激しく振とうし、２７℃で１時間インキュベートした。該反応液を２０μＬの０．５Ｍ ＥＤＴＡで停止した。プレートを３２０ｎｍの励起波長および３９５ｎｍの発光波長で、蛍光分光光度計で読み取った。活性酵素の濃度は、モリソン式およびカレイダグラフ（Kaleidagraph）ソフトウェア（読み取り、ＰＡ）を用いて、決定した。
【０３２３】
パートＣ−基質加水分解の反応速度測定
基質加水分解の反応速度パラメーターは、ラジオＨＰＬＣアッセイを用いて、決定した。活性化ＭＭＰ−２および活性化ＭＭＰ−９による異なった基質の代謝回転は、このアッセイを用いて、決定した。異なった試験基質（１０ｍＭ）のストック溶液を１００％ＤＭＳＯで調製した。試験基質のストック溶液を緩衝液（５０ｍＭ ヘペス／ｐＨ７．５、１０ｍＭ ＣａＣｌ2、０．１％のＢｒｉｊ）で１０００倍（１０ｎＭ）に希釈して、作業用のストック溶液を得た。試験基質（１５μＬ）の作業用ストック溶液を試験管の緩衝液（１２０μＬ）に加え、３７℃で２分間温めた。この溶液に、活性なＭＭＰ−２（最終濃度１０ｎＭ）または活性なＭＭＰ−９の作業するストック溶液の１５μＬを加えた（最終濃度２ｎＭ）。最終的に、４μＣｉの放射性ラベルした試験基質を加え、該溶液を混合し、すぐに混合液（６７．５μＬ）を０．５Ｍ ＥＤＴＡ（７．５μＬ）を含む、ＨＰＬＣバイアルに移し、ｔ＝０分を測定した。試験管内で、該混合液の残りを３７℃、６０分間でインキュベートした。６０分の時点で、該混合液の６７．５μＬを０．５Ｍ ＥＤＴＡ（７．５μＬ）を含む、ＨＰＬＣバイアルに移し、ｔ＝６０分を測定した。放射性ラベルした基質および生成物を１ｍＬ／分の流量および６０μＬのサンプルサイズで、カラム温度（２５℃）を維持して、ゾルバックスＲｘ−Ｃ１８カラム（４．６×２５０ｍｍ）の逆相ＨＰＬＣで分離した。移動相Ａ（ＭＰＡ）は、２５ｍＭの酢酸アンモニウム、移動相Ｂ（ＭＰＢ）は、１００％アセトニトリルであった。３分で２％ＭＰＢのステップグラジエント、１３分で４０％ＭＰＢ、１８分で８０％ＭＰＢを生成物および基質の分離のために使用した。放射性ラベルをＩＮ／ＵＳベータラム検出器によって検出した。該ピークエリアを統合し、基質のピークエリアを以下の式で速度定数ｋを決定するために使用した：
ｋ＝（−ｌｎ（Ｓｔ／Ｓｏ））／ｔ
式中、
Ｓｔ＝６０分での基質ピーク
Ｓｏ＝０分での基質ピーク
Ｔ＝３６００秒。
この反応基質濃度は、Ｋｍよりはるかに低い、
Ｋｃａｔ／Ｋｍ＝ｋ／［Ｅｔ］（Ｍ-1Ｓ-1）
種々の試験基質のＫｃａｔ／Ｋｍ値は、表２に示す。
表２．基質の加水分解アッセイの結果
【表２】
2007504242.tif 000101
【０３２４】
実施例４６
試験基質のアミノペプチダーゼＮ解裂
蛋白質およびペプチドのＮ末端で、アミノペプチダーゼＮを解裂したアミノ酸は、他のアミノ酸を結合した。試験基質の最後の付属品は、ヒドラジドに結合したアミノ酸からなる。アミノペプチダーゼによる、このアミノ酸の解裂は、反応性のあるヒドラジド種を与える。我々の最終目標は、アミノペプチダーゼＮによるアミノ酸およびヒドラジドのアミド結合の解裂を研究することである。試験基質のストック溶液を２５ｍＭの濃度で、１００％ＤＭＳＯで調製した。ストック溶液（６μＬ）を反応液中、試験基質の最終濃度（１ｍＭ）の緩衝液（５０ｍＭヘペス／ｐＨ７．５、１０ｍＭ ＣａＣｌ2、０．１％Ｂｒｉｊ）に加えた。酵素（ＡＰＮ）の０．０２Ｕの反応混合液に加え、該溶液を混合し、すぐに、６７．５μＬの混合液を、酢酸（３３．２μＬ）を含むＨＰＬＣバイアルに移し、ｔ＝０分で測定した。試験管の混合液の残りを３７℃、２５分でインキュベートした。２５分の時点で、６７．５μＬの混合液は、酢酸（３３．２μＬ）を含むＨＰＬＣバイアルに移し、ｔ＝２５分で測定した。試験基質および生成物をＵＶ検出器で０．１％トリフルオロ酢酸／アセトニトリルのグラジエント方法を用いて、ゾルバックスＳＢ−Ｃ１８カラム（４．６×１５０ｍｍ、５ミクロン）で逆相ＨＰＬＣにより分離した。該ピークエリアを統合し、該基質ピークエリアを以下の式で、速度定数ｋを決定するために使用した：
Ｋ＝｛（加水分解率（％）／１００）*［Ｓ］｝／［Ｅ］*［時間］
式中、
Ｓ＝μモルでの試験基質濃度
Ｅ＝ユニット／ｍＬでのアミノペプチダーゼＮ濃度
Ｋ＝μモルの加水分解した基質／分／ユニット酵素
試験基質の加水分解速度を表３に示す。
表３：試験基質のＡＰＮ加水分解からの結果
2007504242.tif 000102
【０３２５】
実施例４７
脂質二重層の挿入
このアッセイは、細胞の脂質二重層での試験基質の局在化を研究するために計画した。ＴＨＰ−１細胞株のヒト単球細胞株を本アッセイに使用した。ＴＨＰ−１細胞をリン酸で緩衝した生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、２×１０6個の細胞を１５０μＬの反応量で、各反応に使用した。試験基質をこれらの細胞懸濁液に加え、反応液中、０．１５ｍＭの最終濃度を与えた。該反応液を３７℃で１時間インキュベートした。上清の試験化合物をＨＰＬＣで分析し、定量した。細胞の存在および非存在での上清の化合物のレベルを決定し、以下の比が生じた：
Ｒ＝細胞の非存在下での化合物のレベル／細胞の存在下での化合物のレベル
比は、細胞への結合が増加すれば上昇する。比が１とは、細胞に結合しないことを意味する。種々の試験化合物の細胞に結合するためのデータは、表４に示す。
表４：試験基質の細胞結合からの結果
2007504242.tif 000103
【０３２６】
実施例４８
２−｛（１Ｅ）−２−［（５−｛Ｎ−［２−（１２−｛［４−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロパノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）フェニル］メトキシカルボニルオキシ｝ドデカノイルアミノ）エチル］カルバモイル｝（２−ピリジル））アミノ］−２−アザビニル｝ベンゼンスルホン酸の合成
【化９５】
2007504242.tif 000104
パートＡ−Ａｃ−ＰＬＧ−Ｈｐｈｅ−Ｙ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨの製造
ＨＭＰＢ−ＢＨＡレジンをペプチド合成反応槽に付し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２回）で洗浄することによって膨張させた。Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を加え、該レジンを室温で１５分間混合した。ピリジンおよび２，６−ジクロロベンゾイルクロリドを加え、該混合液を穏やかに２０時間振とうした。次いで、該レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）によって洗浄した。該レジンの残存ヒドロキシル基をベンゾイルクロリドおよびピリジンのジクロロメタン溶液と２時間反応することによって、キャッピングした。置換レベルは、定量的フルベン−ピペリジンアッセイによって決定した。次いで、以下のステップを実施した：（ステップ１）Ｆｍｏｃ基をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中、３０分間、２０％のピペリジンを用いて、除去した。（ステップ２）該レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で洗浄した。（ステップ３）Ｆｍｏｃ−Ｈｐｈｅ−ＯＨ、ＨＯＢｔ、およびＨＢＴＵのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液ならびにジイソプロピルエチルアミンをレジンに加え、該反応液を８時間反応させた。（ステップ４）該レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で洗浄した。（ステップ５）定量的フルベン−ピペリジンアッセイで、最初のカップリングが不完全であると示すなら、二回目のカップリングを実施する。（ステップ６）該レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）により洗浄した。ステップ１〜６を配列がＦｍｏｃ−ＰＬＧ−Ｈｐｈｅ−Ｙ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨに達するまで、繰り返した。
【０３２７】
ペプチド−レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中、３０分間、２０％ピペリジンで処理し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で充分に洗浄した。無水酢酸、およびジイソプロピルエチルアミンを加え、該レジンは、キャッピング反応が解裂したペプチドの小部分のＬＣ／ＭＳによって評価して、完了していることが確認されるまで混合した。ペプチド−レジンをガラス濾過器に付して、ジクロロメタン中、１％トリフルオロ酢酸で処理した。２分後、該溶液は、圧力を用いて、直接１０％ピリジンのメタノール溶液に濾過した。開裂ステップは、９回繰り返した。併せた濾過液をその量の５％までエバポレートし、水で希釈し、氷水浴で冷却した。生じた沈殿をガラス濾過器で濾過により回収し、水で洗浄し、真空乾燥した。生じた残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製し、標記化合物を得た。
【０３２８】
パートＢ−１１−（Ｎ−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］エチル｝カルバモイル）ウンデシル｛［４−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−３−［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）フェニル］プロパノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）フェニル］メトキシ｝ホルメートの製造
【化９６】
2007504242.tif 000105
上記のパートＡの生成物、実施例２５・パートＥの生成物、ＨＯＡｔ、コリジン、およびＤＩＣを最少量のＤＭＳＯで溶解し、窒素下、室温で２４時間攪拌した。水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３２９】
パートＣ−２−｛（１Ｅ）−２−［（５−｛Ｎ−［２−（１２−｛［４−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロパノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）フェニル］メトキシカルボニルオキシ｝ドデカノイルアミノ）エチル］カルバモイル｝（２−ピリジル））アミノ］−２−アザビニル｝ベンゼンスルホン酸
パートＢの生成物をトリフルオロ酢酸：ジクロロメタン（５０：５０）で溶解し、窒素下、室温で６０分間攪拌した。該溶液を減圧濃縮した。残渣をトルエン：エタノール（１：１）で溶解し、ジイソプロピルエチルアミンで、ｐＨを７に調整し、該溶液を６−（｛（１Ｅ）−２−［２−（ソジオオキシスルホニル）フェニル］−１−アザビニル｝アミノ）ピリジン−３−カルボン酸（文献：Bioconjugate Chem. 1999, 10, 808-814）およびＥＥＤＱで処理した。反応液を窒素下、室温で４時間反応させて、減圧濃縮した。生じた残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。該生成物フラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３３０】
実施例４９
２−｛（１Ｅ）−２−［（５−｛Ｎ−［２−（８−｛［４−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロパノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）フェニル］メトキシカルボニルオキシ｝ドデカノイルアミノ）エチル］カルバモイル｝（２−ピリジル））アミノ］−２−アザビニル｝ベンゼンスルホン酸の合成
【化９７】
2007504242.tif 000106
パートＡ−（２Ｓ）−Ｎ−（｛Ｎ−［（１Ｓ）−１−（Ｎ−｛（１Ｓ）−１−［Ｎ−（（１Ｓ）−１−｛Ｎ−［４−（ヒドロキシメチル）フェニル］カルバモイル｝−３−メチルブチル）カルバモイル］−２−［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）フェニル］エチル｝カルバモイル）−３−フェニルプロピル］カルバモイル｝メチル）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタンアミドの製造
【化９８】
2007504242.tif 000107
トルエン：エタノール（１：１）中、実施例１０・パートＢの生成物の溶液、ＰＡＢＡ、およびＥＥＤＱを窒素下、室温で３日間攪拌した。もし反応が不完全であるなら、さらにＰＡＢＡを加えて、反応液をさらに２４時間攪拌した。該溶液を減圧濃縮し、生じた残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。該生成物フラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３３１】
パートＢ−４−ニトロフェニル｛［４−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−３−［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）フェニル］プロパノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）フェニル］メトキシ｝ホルメートの製造
【化９９】
2007504242.tif 000108
パートＡの生成物および４−ニトロフェニルクロロホルメートの無水ジクロロメタン溶液を０℃で冷却し、ピリジンで処理して、窒素下、室温で２時間攪拌した。該溶液をＣＨ2Ｃｌ2で希釈し、水および飽和食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、減圧濃縮した。生じた残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）で精製し、酢酸エチル／ヘキサンで溶離し、標記化合物を得た。
【０３３２】
パートＣ−２−（（１Ｅ）−２−｛［５−（Ｎ−｛２−［８−（｛［４−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−３−［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）フェニル］プロパノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）フェニル］メチル｝オキシカルボニルオキシ）ドデカノイルアミノ］エチル｝カルバモイル）（２−ピリジル）］アミノ｝−２−アザビニル）ベンゼンスルホン酸の製造
【化１００】
2007504242.tif 000109
上記パートＢの生成物、実施例２３の生成物、およびＤＭＡＰの無水ジクロロメタン溶液を窒素下、反応の完結をＨＰＬＣ分析で決定するまで、室温で攪拌した。該溶液を減圧濃縮し、生じた残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムで逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィーにより精製した。主生成物のフラクションは、凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３３３】
パートＤ−最終の脱保護
パートＣの生成物をトリフルオロ酢酸：ジクロロメタン（５０：５０）で溶解し、窒素下、室温で６０分間攪拌した。該溶液を減圧濃縮し、生じた残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。該生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３３４】
実施例５０
２−｛（１Ｅ）−２−［（５−｛Ｎ−［２−（８−｛［４−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−５−アミノペンタノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）フェニル］メトキシカルボニルオキシ｝ヘキサデック−１５−エノイルアミノ）エチル］カルバモイル｝（２−ピリジル））アミノ］−２−アザビニル｝ベンゼンスルホン酸の合成
【化１０１】
2007504242.tif 000110
パートＡ−エチル ８−オキソヘキサデック−１５−エノエートの製造
無水塩化亜鉛の無水エーテル溶液を−７８℃で、７−オクテニルマグネシウムブロミド（エーテル中、８−ブロモ−１−オクテンおよびマグネシウムから調製した）を滴下し処理した。温度は、０℃まで上昇し、該反応混合液を実施例２３・パートＡの生成物の無水ＴＨＦ溶液、続いて、Ｐｄ（ＰＰｈ3）4で処理した。生じた混合液を０℃で３０分間、次いで、ＴＬＣまたはＨＰＬＣ分析で完了するまで室温で攪拌した。該反応液を１Ｎ ＨＣｌの添加によってクエンチし、ヘキサンで抽出した。併せた有機層を飽和ＮａＨＣＯ3で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮した。生じた残渣を酢酸エチル／ヘキサンで溶離するシリカゲルでクロマトグラフし、標記化合物を得た。
【０３３５】
パートＢ−８−オキソヘキサデック−１５−エノイン酸の製造
パートＡの生成物のＴＨＦおよび水混合溶液を３Ｎ ＬｉＯＨで処理し、窒素下、室温で１８時間すばやく攪拌した。ＴＨＦを除去し、生じた混合液を濃ＨＣｌでｐＨ４まで酸性とし、ジクロロメタンで抽出した。併せた有機抽出液を飽和ＮａＨＣＯ3で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮し、標記化合物を得て、精製することなく次反応に使用した。
【０３３６】
パートＣ−８−ヒドロキシヘキサデック−１５−エノイン酸の製造
パートＢの生成物のエタノール溶液をＴＬＣまたはＨＰＬＣが反応完結を示すまで、窒素下、０℃でＮａＢＨ4と処理した。もし必要なら、さらにＮａＢＨ4を加えた。該反応液を１Ｎ ＨＣｌでクエンチした。エタノールを減圧下で除去し、生じた溶液をＣＨ2Ｃｌ2で抽出した。併せた有機層を乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮して標記化合物を得て、精製することなく次反応に使用した。
【０３３７】
パートＤ−２−｛（１Ｅ）−２−アザ−２−［（５−｛Ｎ−［２−（８−ヒドロキシヘキサデック−１５−エノイルアミノ）エチル］カルバモイル｝（２−ピリジル））アミノ］ビニル｝ベンゼンスルホン酸の製造
【化１０２】
2007504242.tif 000111
上記パートＣの生成物、実験２３パートＦの生成物、ジイソプロピルエチルアミン、およびＨＯＡｔの無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液をＤＩＣで処理し、該反応液を窒素下、室温で１８時間攪拌した。該溶液を減圧濃縮し、生じた残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。主生成物のピークを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３３８】
パートＥ−（２Ｓ）−Ｎ−（｛Ｎ−［（１Ｓ）−１−（Ｎ−｛（１Ｓ）−１−［Ｎ−（（１Ｓ）−１−｛Ｎ−［４−（ヒドロキシメチル）フェニル］カルバモイル｝−３−メチルブチル）カルバモイル］−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］ブチル｝カルバモイル）−３−フェニルプロピル］カルバモイル｝メチル）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタンアミドの製造
【化１０３】
2007504242.tif 000112
実施例１７・パートＢの生成物、ＰＡＢＡ、およびＥＥＤＱのトルエン：エタノール（１：１）の溶液を窒素下、室温で３日間攪拌した。もし反応が完結しないなら、さらにＰＡＢＡを加え、該反応液をさらに２４時間攪拌した。該溶液を減圧濃縮し、生じた残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。該生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３３９】
パートＦ−［４−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−５−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］ペンタノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）フェニル］メチル（４−ニトロフェノキシ）ホルメートの製造
【化１０４】
2007504242.tif 000113
パートＥの生成物および４−ニトロフェニルクロロホルメートの無水ジクロロメタン溶液を０℃で冷却し、ピリジンで処理し、窒素下、室温で２時間攪拌した。該溶液をＣＨ2Ｃｌ2で希釈し、水および飽和食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、減圧濃縮した。生じた残渣を水：アセトニトリル：０．１％ギ酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。該生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３４０】
パートＧ−２−｛（１Ｅ）−２−［（５−｛Ｎ−［２−（８−｛［４−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロパノイルアミノ｝−５−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］ペンタノイルアミノ）フェニル］メトキシカルボニルオキシ｝ヘキサデック−１５−エノイルアミノ）エチル］カルバモイル｝（２−ピリジル））アミノ］−２−アザビニル｝ベンゼンスルホン酸の製造
【化１０５】
2007504242.tif 000114
パートＤおよびＦの生成物、およびＤＭＡＰの無水ジクロロメタン溶液をＨＰＬＣ分析で、反応が完結したことを確認するまで攪拌した。溶液を減圧濃縮し、生じた残渣を水：アセトニトリル:０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムで逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィーを精製した。主生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３４１】
パートＨ−最終の脱保護
パートＧの生成物をトリフルオロ酢酸：ジクロロメタン（５０：５０）で溶解し、窒素下、室温で１０分間攪拌した。該反応液を減圧濃縮し、生じた残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。該生成物フラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３４２】
実施例５１
４−［（６−｛［（１Ｅ）−１−アザ−２−（２−スルホフェニル）ビニル］アミノ｝（３−ピリジル））カルボニルアミノ］（４Ｓ）−４−（Ｎ−｛２−［８−（４−｛２−［２−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロパノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）−フェニル］アセチルオキシ｝フェニル）−オクタノイルアミノ］エチル｝カルバモイル）酪酸の合成
【化１０６】
2007504242.tif 000115
パートＡ−（２Ｓ）−２−［（フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニルアミノ］−Ｎ−［２−（２−ヒドロキシエチル）フェニル］−４−メチルペンタンアミドの製造
【化１０７】
2007504242.tif 000116
Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、２−（４−アミノフェニル）エタノール、およびＥＥＤＱのトルエン：エタノール（１：１）溶液を窒素下、室温で３日間攪拌した。もし反応が完結しないなら、さらに、２−（４−アミノフェニル）エタノール、およびＥＥＤＱを加え、反応液をさらに２４時間攪拌した。該溶液を減圧濃縮し、生じた残渣をジクロロメタンで溶解し、０．１Ｎ ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ3、および飽和ＮａＣｌで連続的に洗浄した。有機溶液を乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮し、残渣をヘキサン：酢酸エチルの移動相を用いて、シリカフラッシュクロマトグラフィーで精製し、標記化合物を得た。
【０３４３】
パートＢ−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝フェニル）酢酸の製造
【化１０８】
2007504242.tif 000117
パートＡの生成物および重クロム酸ピリジニウムのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を室温で８時間攪拌した。該溶液を１０倍量の水で希釈し、沈殿生成物をエーテルで抽出した。併せたエーテル抽出液を水および飽和ＮａＣｌで連続的に洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮した。粗生成物をエタノールから再結晶で精製し、標記化合物を得た。
【０３４４】
パートＣ−Ｎ−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］エチル｝−８−（４−ヒドロキシフェニル）オクタンアミド
【化１０９】
2007504242.tif 000118
８−（４−ヒドロキシフェニル）オクタン酸、Ｎ−Ｂｏｃ−エチレンジアミン、およびＥＥＤＱのトルエン：エタノール（１：１）溶液を窒素下、室温で２４時間攪拌した。該溶液を減圧濃縮し、生じた残渣をジクロロメタンで溶解し、０．１Ｎ ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ3、および飽和ＮａＣｌで連続的に洗浄した。該有機溶液を乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮し、残渣をヘキサン：酢酸エチルの移動相を用いて、シリカフラッシュクロマトグラフィーを用いて精製し、標記化合物を得た。
【０３４５】
パートＤ−４−［７−（Ｎ−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］エチル｝カルバモイル）ヘプチル］フェニル２−［２−（メチルアミノ）フェニル］アセテートの製造
【化１１０】
2007504242.tif 000119
数滴のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを含む、パートＢの生成物の無水ジクロロメタン溶液を１当量の塩化オキサリルで処理し、室温で３時間攪拌した。溶液をパートＣの生成物およびジイソプロピルエチルアミンで処理し、窒素下、室温で１８時間攪拌した。溶液を０．１Ｎ ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ3、および飽和ＮａＣｌで連続的に洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮した。該残渣をヘキサン：酢酸エチルの移動相を用いて、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製し、標記化合物を得た。
【０３４６】
パートＥ−ｔｅｒｔ−ブチル（４Ｓ）−４−｛Ｎ−［２−（８−｛４−［２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝フェニル）アセチルオキシ］フェニル｝オクタノイルアミノ）エチル］カルバモイル｝−４−［（フェニルメトキシ）カルボニルアミノ］ブタノエートの製造
【化１１１】
2007504242.tif 000120
パートＥの生成物の溶液をトリフルオロ酢酸：ジクロロメタン（５０：５０）で溶解し、窒素下、室温で１０分間攪拌した。該溶液を濃縮し、残渣を無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで溶解し、ジイソプロピルエチルアミン（ｐＨ８〜９）、およびＣｂｚ−Ｇｌｕ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＳｕと処理した。溶液を室温で１８時間攪拌し、濃縮した。生じた残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。該生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物した。
【０３４７】
パートＦ−ｔｅｒｔ−ブチル （４Ｓ）−４−（Ｎ−｛２−［８−（４−｛２−［２−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝−アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−３−［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）フェニル］プロパノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）フェニル］アセチルオキシ｝フェニル）オクタノイルアミノ］エチル｝カルバモイル）−４−［（フェニルメトキシ）カルボニルアミノ］ブタノエートの製造
【化１１２】
2007504242.tif 000121
パートＥの生成物をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中、２０％ピペリジンで溶解し、室温で１０分間攪拌した。該溶液を減圧濃縮し、高真空下で乾燥した。生じた残渣を実施例４８、パートＡの生成物と一緒に最少量の無水ＤＭＳＯで溶解し、該溶液をＨＯＡｔ、コリジン、およびＤＩＣで処理した。該溶液を窒素下で、２４時間室温にて攪拌し、水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣによって精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３４８】
パートＧ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−［（６−｛［（１Ｅ）−１−アザ−２−（２−スルホフェニル）ビニル］アミノ｝（３−ピリジル））カルボニルアミノ］（４Ｓ）−４−（Ｎ−｛２−［８−（４−｛２−［２−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−３−（４−［ｔｅｒｔ−ブトキシ］フェニル）プロパノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）−フェニル］アセチルオキシ｝フェニル）−オクタノイルアミノ］エチル｝−カルバモイル）ブタノエートの製造
【化１１３】
2007504242.tif 000122
パートＦの生成物のエタノール溶液は、Ｃｂｚ基を全体的に除去したことをＨＰＬＣが示すまで、６０ｐｓｉ、１０％のＰｄ／Ｃで水素化した。触媒をセライト濾過により除去し、濾液を減圧濃縮した。残渣を無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで溶解し、ジイソプロピルエチルアミン、ＨＯＡｔ、および２−［（１Ｅ）−２−アザ−２−（｛５−［（２，５−ジオキソピロリジニル）オキシカルボニル］（２−ピリジル）｝アミノ）ビニル］ベンゼンスルホネートで処理した。該溶液を窒素下、室温で２４時間攪拌し、減圧濃縮した。該残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３４９】
パートＨ−最終の脱保護
パートＧの生成物を９５：２．５：２．５のトリフルオロ酢酸：アニソール：水（２ｍＬ）で溶解し、窒素下、室温で１０分間攪拌した。該溶液を減圧濃縮し、生じた残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。該生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３５０】
実施例５２
２−［（１Ｅ）−２−（｛５−［Ｎ−（２−｛８−［２−（Ｎ−｛２−［（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−６−（ジメチルアミノ）ヘキサノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）メチル］フェニル｝−Ｎ−メチルカルバモイルオキシ）−５−ブチルフェニル］オクタノイルアミノ｝−エチル）カルバモイル］（２−ピリジル）｝アミノ）−２−アザビニル］ベンゼンスルホン酸の合成
【化１１４】
2007504242.tif 000123
パートＡ−Ａｃ−ＰＬＧ−Ｈｐｈｅ−Ｋ（Ｍｅ２）−Ｌ−ＯＨの製造
標記化合物を２回目のカップリングステップにおいて、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨをＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｅ２）に置換することによって、実施例１０パートＡおよびＢの手順を用いて製造した。粗ペプチドを水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。該生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３５１】
パートＢ−（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−Ｎ−［（１Ｓ）−３−メチル−１−（Ｎ−｛［２−（メチルアミノ）フェニル］メチル｝カルバモイル）ブチル］−６−（ジメチルアミノ）ヘキサンアミドの製造
【化１１５】
2007504242.tif 000124
パートＡの生成物、Ｎ−メチル−２−アミノメチルアニリン（Coyne, W.E.; Cusic, J.W. J. Med. Chem. 1968, 11, 1208-1213）、ＨＢＴＵ、およびジイソプロピルエチルアミンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を窒素下、室温で１８時間攪拌した。該溶液を濃縮し、残渣を水：アセトニトリル:１０ｍＭのＮＨ4ＯＡｃのグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣによって精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３５２】
パートＣ−エチル ８−（５−ブチル−２−ヒドロキシフェニル）−８−オキソオクタノエートの製造
【化１１６】
2007504242.tif 000125
実施例２３パートＡの生成物の溶液、４−ブチルフェノール、およびピリジンのジクロロメタン溶液を窒素下、室温で２日間攪拌した。該溶液を連続的に１．０Ｎ ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ3、および飽和ＮａＣｌで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮した。残渣を最少量の１，２−ジクロロエタン（ＤＣＥ）で溶解し、塩化アルミニウムで処理した。該混合物を６時間加熱還流し、室温まで冷却し、氷に注いだ。層を分離し、水層をジクロロメタンで抽出した。ジクロロメタンおよびＤＣＥ層を併せて、飽和ＮａＨＣＯ3および飽和ＮａＣｌで連続的に洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮した。残渣をヘキサン：酢酸エチルの移動相を用いて、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）を用いて、標記化合物を得た。
【０３５３】
パートＤ−８−（５−ブチル−２−ヒドロキシフェニル）オクタン酸の製造
【化１１７】
2007504242.tif 000126
パートＣの生成物のエタノール性ＫＯＨ水溶液を３時間加熱還流し、エタノールを除去するまで濃縮した。該水溶液をエーテルで洗浄し、濃ＨＣｌで酸性にした。生じた沈殿をジクロロメタンで抽出した。該ジクロロメタン抽出液を水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮した。残渣をジエチレングリコールで溶解し、２当量のヒドラジン水和物および３当量のＫＯＨで処理した。溶液を１時間加熱還流し、冷却し、水で希釈した。溶液を濃ＨＣｌで酸性にし、生成物をジクロロメタンで抽出した。併せたジクロロメタン抽出液を乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮し、残渣を再結晶し、標記化合物を得た。
【０３５４】
パートＥ−Ｎ−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］エチル｝−８−（５−ブチル−２−ヒドロキシフェニル）オクタンアミドの製造
【化１１８】
2007504242.tif 000127
パートＤの生成物、Ｎ−Ｂｏｃ−エチレンジアミン、およびＥＥＤＱのトルエン：エタノール（１：１）溶液を窒素下、室温で２４時間攪拌した。該溶液を減圧濃縮し、生じた残渣をジクロロメタンで溶解し、連続的に０．１Ｎ ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ3、および飽和ＮａＣｌで洗浄した。該有機溶液を乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮し、残渣をヘキサン：酢酸エチルの移動相を用いて、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製し、標記化合物を得た。
【０３５５】
パートＦ−８−［２−（Ｎ−｛２−［（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−６−（ジメチルアミノ）ヘキサノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）メチル］フェニル｝−Ｎ−メチルカルバモイルオキシ）−５−ブチルフェニル］−Ｎ−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］エチル｝オクタンアミドの製造
【化１１９】
2007504242.tif 000128
パートＥの生成物、ピリジン、およびトリホスゲンのジクロロメタン溶液を０℃で３０分間攪拌した。パートＢの生成物を加え、溶液を室温で１８時間攪拌した。該溶液を濃縮し、残渣を水：アセトニトリル:０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３５６】
パートＧ−２−［（１Ｅ）−２−（｛５−［Ｎ−（２−｛８−［２−（Ｎ−｛２−［（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−６−（ジメチルアミノ）ヘキサノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）メチル］フェニル｝−Ｎ−メチルカルバモイルオキシ）−５−ブチルフェニル］オクタノイルアミノ｝エチル）カルバモイル］（２−ピリジル）｝アミノ）−２−アザビニル］ベンゼンスルホン酸の製造
パートＦの生成物をトリフルオロ酢酸：ジクロロメタン（５０：５０）で溶解し、窒素下、室温で１０分間攪拌した。溶液を濃縮し、残渣をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで溶解し、ジイソプロピルエチルアミンで塩基性にさせて、ナトリウム ２−［（１Ｅ）−２−アザ−２−（｛５−［（２，５−ジオキソピロリジニル）オキシカルボニル］（２−ピリジル）｝アミノ）ビニル］ベンゼンスルホネートおよびＨＯＡｔで処理した。該溶液を窒素下、室温で１８時間攪拌し、減圧濃縮した。残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３５７】
実施例５３
２−｛（１Ｅ）−２−［（５−｛Ｎ−［２−（１０−｛１−［（４−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−｛２−［Ｎ−（４−アミノブチル）アセチルアミノ］アセチル｝ピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−５−アミノペンタノイルアミノ｝−アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝−フェニル）メチル］（４−ピリジニウム）｝ウンデカノイルアミノ）−エチル］−カルバモイル｝（２−ピリジル））アミノ］−２−アザビニル｝ベンゼンスルホネート ビス−トリフルオロ酢酸塩の合成
【化１２０】
2007504242.tif 000129
パートＡ−メチル （１０Ｅ）−１１−（４−ピリジル）ウンデック−１０−エノエートの製造
【化１２１】
2007504242.tif 000130
メチル １０−ブロモデカノエートおよびトリフェニルホスフィンの酢酸エチル溶液を６時間加熱還流した。該混合液を冷却し、エーテルで希釈した。生じたホスホニウム塩の沈殿を濾過により回収し、エーテルで洗浄し、乾燥した。分離フラスコで、無水ＤＭＳＯをＮａＨで処理し、窒素下、６０℃に温めて、ジムシルナトリウム試薬を形成した。ホスホニウム塩をジムシルナトリウムの溶液に加え、該溶液を室温で３時間攪拌した。４−ピリジンカルボキシアルデヒドを加え、該溶液を室温で１８時間攪拌した。該溶液をヘキサンで希釈し、水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮した。生成物をヘキサン：酢酸エチルの移動相を用いて、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製し、標記化合物を得た。
【０３５８】
パートＢ−１１−（４−ピリジル）ウンデカエノイン酸の製造
【化１２２】
2007504242.tif 000131
パートＡの生成物をエタノールで溶解し、６０ｐｓｉで１０％Ｐｄ／Ｃにて水素化した。触媒をセライト（登録商標）濾過で除去し、濾過液を減圧濃縮した。残渣をわずかに過剰量のエタノール性ＫＯＨで溶解し、２４時間加熱還流した。溶液をＩＲＣ−５０レジンから製造したイオン交換カラムを通過させることにより脱塩した。溶離液を減圧濃縮し、標記化合物を得た。
【０３５９】
パートＣ−Ｎ−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］エチル｝−１１−（４−ピリジル）ウンデカンアミドの製造
【化１２３】
2007504242.tif 000132
パートＢの生成物、Ｎ−Ｂｏｃ−エチレンジアミン、およびＨＢＴＵの無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を窒素下、室温で１８時間攪拌した。溶液を減圧濃縮し、生じた残渣をジクロロメタンで溶解し、連続的に水、飽和ＮａＨＣＯ3、および飽和ＮａＣｌで洗浄した。該有機溶液を乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮し、残渣をヘキサン：酢酸エチルの移動相を用いて、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製し、標記化合物を得た。
【０３６０】
パートＤ−１１−｛１−［（４−｛（２Ｓ）−２−［（フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝フェニル）メチル］（４−ピリジニウム）｝−Ｎ−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］エチル｝ウンデカンアミド ブロミドの製造
【化１２４】
2007504242.tif 000133
実施例２５・パートＡの生成物、トリフェニルホスフィン、および四臭化炭素のジクロロメタン溶液を室温で１８時間攪拌した。該溶液を少量まで濃縮し、アルミナで濾過し、トリフェニルホスフィンオキシドを除去した。溶離液を濃縮し、残渣を無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、上記パートＣの生成物で処理した。溶液を室温で１８時間攪拌し、濃縮した。残渣を水：アセトニトリル：０．１％ギ酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３６１】
パートＥ−２−｛（１Ｅ）−２−［（５−｛Ｎ−［２−（１１−｛１−［（４−｛（２Ｓ）−２−［（フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝フェニル）メチル］（４−ピリジニウム）｝ウンデカノイルアミノ）エチル］カルバモイル｝（２−ピリジル））アミノ］−２−アザビニル｝ベンゼンスルホネートの製造
【化１２５】
2007504242.tif 000134
パートＤの生成物をトリフルオロ酢酸：ジクロロメタン（５０：５０）で溶解し、窒素下、室温で１０分間攪拌した。溶液を濃縮し、真空乾燥した。残渣を無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで溶解し、ジイソプロピルエチルアミン、ＨＯＡｔ、および２−［（１Ｅ）−２−アザ−２−（｛５−［（２，５−ジオキソピロリジニル）オキシカルボニル］（２−ピリジル）｝アミノ）ビニル］ベンゼンスルホネートで処理した。該溶液を窒素下、室温で２４時間攪拌し、減圧濃縮した。残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３６２】
パートＦ−Ａｃ−ＮＬｙｓ（Ｂｏｃ）−ＰＯ（Ｂｏｃ）Ｇ−Ｈｐｈｅ−ＯＨの製造
ＨＭＰＢ−ＢＨＡレジンをペプチド合成反応槽に付し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２回）で洗浄することによって膨張した。Ｆｍｏｃ−Ｈｐｈｅ−ＯＨのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を加え、該レジンを室温で１５分間混合した。ピリジンおよび２，６−ジクロロベンゾイルクロリドを加え、混合液を穏やかに２０時間振とうした。次いで、該レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で洗浄した。該レジンの残存するヒドロキシル基をジクロロメタン中で、ベンゾイルクロリドおよびピリジンと２時間反応することによりキャッピングした。置換レベルは、定量的フルベン−ピペリジンアッセイによって決定した。次いで、以下のステップを実施した：（ステップ１）Ｆｍｏｃ基をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中、３０分間、２０％ピペリジンを用いて、除去した。（ステップ２）該レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で洗浄した。（ステップ３）Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、ＨＯＢｔ、およびＨＢＴＵのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドおよびジイソプロピルエチルアミン溶液をレジンに加え、反応を８時間進行させた。（ステップ４）レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で洗浄した。（ステップ５）もし、定量的フルベン−ピペリジンアッセイで最初のカップリングが不完全であるなら、２回目のカップリングを実施した。（ステップ６）レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で洗浄した。ステップ１〜６は、Ｆｍｏｃ−ＮＬｙｓ（Ｂｏｃ）−ＰＯ（Ｂｏｃ）Ｇ−Ｈｐｈｅ−ＯＨ配列を得るまで繰り返した。
【０３６３】
ペプチド−レジンを２０％ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液で３０分間処理し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で洗浄した。無水酢酸およびジイソプロピルエチルアミンを加え、レジンは、開裂したペプチドの少量をＬＣ／ＭＳで評価することにより、キャッピング反応が完了するまで混合した。ペプチド−レジンをガラス濾過器に付して、１％トリフルオロ酢酸のジクロロメタン溶液で処理した。２分後、溶液は圧力を用いて、直接１０％ピリジンのメタノール溶液に濾過した。開裂ステップを９回繰り返した。濾過液を併せて、それらの５％の量になるまでエバポレートし、水で希釈し、氷水浴で冷却した。生じた沈殿をガラス濾過器で濾過することにより回収し、水で洗浄し、真空乾燥した。生じた残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣによって精製し、標記化合物を得た。
【０３６４】
パートＧ−２−［（１Ｅ）−２−（｛５−［Ｎ−（２−｛１０−［１−（｛４−［（２Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛２−［（２Ｓ）−２−（｛（２Ｓ）−１−［２−（Ｎ−｛４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］ブチル｝アセチルアミノ）アセチル］ピロリジン−２−イル｝カルボニルアミノ）−５−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］ペンタノイルアミノ］アセチルアミノ｝−４−フェニルブタノイルアミノ）−４−メチルペンタノイルアミノ］フェニル｝メチル）（４−ピリジニウム）］デカノイルアミノ｝エチル）カルバモイル］（２−ピリジル）｝アミノ）−２−アザビニル］ベンゼンスルホネートの製造
【化１２６】
2007504242.tif 000135
パートＥの生成物を２０％ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液で溶解し、室温で１０分間攪拌した。該溶液を減圧濃縮し、高真空下で乾燥した。生じた残渣をパートＦの生成物と一緒に最少量の無水ＤＭＳＯで溶解し、該溶液をＨＯＡｔ、コリジン、およびＤＩＣで処理した。溶液を窒素下、室温で２４時間攪拌し、減圧濃縮した。残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３６５】
パートＨ−最終の脱保護
パートＧの生成物のトリフルオロ酢酸：ジクロロメタン（５０：５０）溶液を窒素下、室温で１０分間攪拌し、高真空下で乾燥するまで濃縮した。該残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３６６】
実施例５４
２−｛（１Ｅ）−２−［（５−｛Ｎ−［２−（８−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−｛２−［Ｎ−（４−アミノブチル）アセチルアミノ］アセチル｝ピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−６−（アミジノアミノ）ヘキサノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝（７Ｚ）ウンデック−７−エノイルアミノ）エチル］カルバモイル｝（２−ピリジル））アミノ］−２−アザビニル｝ベンゼンスルホン酸 トリフルオロ酢酸塩の合成
【化１２７】
2007504242.tif 000136
パートＡ−Ａｃ−ＮＬｙｓ（Ｂｏｃ）Ｐ−Ｃｉｔ−Ｇ−Ｈｐｈｅ−ＯＨの製造
標記化合物は、Ｆｍｏｃ−Ｏ（Ｂｏｃ）−ＯＨをＦｍｏｃ−Ｃｉｔ−ＯＨに換えて、実施例５３・パートＦに記載した手順によって製造した。
【０３６７】
パートＢ−エチル （８Ｚ）−９−アザ−８−ブチル−１２，１２−ジメチル−１２−シラトリデック−８−エノエートの製造
【化１２８】
2007504242.tif 000137
実施例２３パートＢの生成物、２−（トリメチルシリル）エタンアミド（Sommer, L.H.; Rockett, J. J. Am. Chem. Soc. 1951, 73, 5130-5134）、および触媒量のｐ−トルエンスルホン酸のクロロホルム溶液に、活性化した４Åモレキュラーシーブズを加えた。反応液を窒素下、室温で２日間静置させた。該有機溶液をモレキュラーシーブズからデカントし、連続的に飽和ＮａＨＣＯ3、および飽和ＮａＣｌで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮し、標記化合物を得て、直接次反応に使用した。
【０３６８】
パートＣ−エチル ８−｛（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］−Ｎ−（３，３−ジメチル−３−シラブチル）−４−メチルペンタノイルアミノ｝（７Ｚ）ドデック−７−エノエートの製造
【化１２９】
2007504242.tif 000138
パートＢの生成物およびＦｍｏｃ−ロイシン無水物（Heimer, E.P.; Chang, C.D.; Lambros, T.; Meienhofer, J. Int. J. Peptide Protein Res. 1981, 18, 237）のピリジン溶液を１時間加熱還流した。該溶液を濃縮し、残渣を酢酸エチルで溶解し、０．１Ｎ ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ3、および飽和ＮａＣｌで連続的に洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮した。生じた残渣をヘキサン：酢酸エチルの移動相を用いて、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製し、標記化合物を得た。
【０３６９】
パートＤ−エチル ８−｛（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝（７Ｚ）ウンデック−７−エノエートの製造
【化１３０】
2007504242.tif 000139
パートＣの生成物のＴＨＦ溶液をＴＢＡＦで処理し、窒素下、室温で２時間攪拌した。該溶液を濃縮し、残渣を酢酸エチルで溶解した。該有機溶液を水および飽和ＮａＣｌで連続的に洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮した。粗生成物をヘキサン：酢酸エチルの移動相を用いて、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製し、標記化合物を得た。
【０３７０】
パートＥ−２−｛（１Ｅ）−２−［（５−｛Ｎ−［２−（８−｛（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝（７Ｚ）ウンデック−７−エノイルアミノ）エチル］カルバモイル｝（２−ピリジル））アミノ］−２−アザビニル｝ベンゼンスルホン酸の製造
【化１３１】
2007504242.tif 000140
パートＤの生成物のＴＨＦおよび水溶液を３Ｎ ＬｉＯＨで処理し、エステル加水分解がＴＬＣで完了したことを確認するまで、窒素下、室温ですばやく攪拌した。ＴＨＦを除去し、生じた混合液をＨＣｌで注意深く、ｐＨ４まで酸性とし、ジクロロメタンで抽出した。該有機抽出液を水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮した。残渣をヘキサン：酢酸エチルの移動相を用いて、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製した。生じた生成物を、実施例２３パートＦの生成物と一緒に無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで溶解した。該溶液をジイソプロピルエチルアミンで塩基性にし、ＨＢＴＵおよびＨＯＡｔで処理した。反応液を窒素下、室温で６時間攪拌し、減圧濃縮した。生じた残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３７１】
パートＦ−２−［（１Ｅ）−２−（｛５−［Ｎ−（２−｛８−［（２Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛２−［（２Ｓ）−２−（｛（２Ｓ）−１−［２−（Ｎ−｛４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］ブチル｝アセチルアミノ）アセチル］ピロリジン−２−イル｝カルボニルアミノ）−６−（アミジノアミノ）ヘキサノイルアミノ］アセチルアミノ｝−４−フェニルブタノイルアミノ）−４−メチルペンタノイルアミノ］（７Ｚ）ウンデック−７−エノイルアミノ｝エチル）カルバモイル］（２−ピリジル）｝アミノ）−２−アザビニル］ベンゼンスルホン酸の製造
【化１３２】
2007504242.tif 000141
パートＥの生成物をトリフルオロ酢酸：ジクロロメタン（５０：５０）で溶解し、窒素下、室温で１０分間攪拌した。該溶液を濃縮し、高真空下乾燥した。残渣、上記パートＡの生成物、ＨＢＴＵ、ＨＯＡｔ、およびジイソプロピルエチルアミンの無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を窒素下、室温で２４時間攪拌した。溶液を濃縮し、残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３７２】
パートＧ−最終の脱保護
パートＧの生成物のトリフルオロ酢酸：ジクロロメタン（５０：５０）溶液を窒素下、室温で１０分間攪拌し、高真空下で乾燥するまで濃縮した。残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３７３】
実施例５５
２−（（１Ｅ）−２−｛［５−（Ｎ−｛２−［１１−（４−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−｛２−［Ｎ−（４−アミノブチル）アセチルアミノ］アセチル｝ピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−６−（アミジノアミノ）ヘキサノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝フェニル）ウンデカノイルアミノ］エチル｝カルバモイル）（２−ピリジル）］アミノ｝−２−アザビニル）ベンゼンスルホン酸 トリフルオロ酢酸塩の合成
【化１３３】
2007504242.tif 000142
パートＡ−メチル （１０Ｅ）−１１−［４−（２，２，２−トリフルオロアセチルアミノ）フェニル］ウンデック−１０−エノエートの製造
【化１３４】
2007504242.tif 000143
メチル １０−ブロモデカノエートおよびトリフェニルホスフィンの酢酸エチル溶液を６時間加熱還流した。該混合液を冷却し、エーテルで希釈した。ホスホニウム塩の生じた沈殿を濾過により回収し、エーテルで洗浄し、乾燥した。分離フラスコで、無水ＤＭＳＯをＮａＨで処理し、窒素下、ジムシルナトリウム試薬を形成するために６０℃に温めた。該ホスホニウム塩をジムシルナトリウム溶液に加え、溶液を室温で３時間攪拌した。４−（トリフルオロアセトアミド）ベンズアルデヒド（Bonar-Law, R.P. J. Org. Chem. 1996, 61, 3623-3634）を加え、溶液を室温で１８時間攪拌した。該溶液をヘキサンで希釈し、水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮した。生成物をヘキサン：酢酸エチルの移動相を用いて、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製し、標記化合物を得た。
【０３７４】
パートＢ−１１−（４−アミノフェニル）ウンデカノイン酸の製造
【化１３５】
2007504242.tif 000144
パートＡの生成物をエタノールで溶解し、６０ｐｓｉで、１０％Ｐｄ／Ｃにて水素化した。触媒をセライト（登録商標）濾過により除去し、濾過液を減圧濃縮した。残渣を僅かに過剰のエタノール性ＫＯＨに溶解し、２４時間加熱還流した。該溶液をＩＲＣ−５０レジンから製造したイオン交換カラムを通過することによって、脱塩した。溶離液を減圧濃縮し、標記化合物を得た。
【０３７５】
パートＣ−２−（（１Ｅ）−２−｛［５−（Ｎ−｛２−［１１−（４−アミノフェニル）ウンデカノイルアミノ］エチル｝カルバモイル）（２−ピリジル）］アミノ｝−２−アザビニル）ベンゼンスルホン酸の製造
【化１３６】
2007504242.tif 000145
パートＢの生成物、実施例２３・パートＦの生成物、およびＨＢＴＵの無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を窒素下、室温で１８時間攪拌した。溶液を減圧濃縮し、生じた残渣をジクロロメタンで溶解し、水、飽和ＮａＨＣＯ3、および飽和ＮａＣｌで連続的に洗浄した。該有機溶液を乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮し、残渣をヘキサン：酢酸エチルの移動相を用いて、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製し、標記化合物を得た。
【０３７６】
パートＤ−２−（（１Ｅ）−２−｛［５−（Ｎ−｛２−［１１−（４−｛（２Ｓ）−２−［（フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝フェニル）ウンデカノイルアミノ］エチル｝カルバモイル）（２−ピリジル）］アミノ｝−２−アザビニル）ベンゼンスルホン酸の製造
【化１３７】
2007504242.tif 000146
パートＣの生成物、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、パートＥ、ＨＯＡｔ、コリジン、およびＤＩＣを最少量のＤＭＳＯで溶解し、窒素下、室温で２４時間攪拌した。該溶液を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３７７】
パートＥ−２−｛（１Ｅ）−２−［（５−｛Ｎ−［２−（１１−｛４−［（２Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛２−［（２Ｓ）−２−（｛（２Ｓ）−１−［２−（Ｎ−｛４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］ブチル｝アセチルアミノ）アセチル］ピロリジン−２−イル｝カルボニルアミノ）−６−（アミジノアミノ）ヘキサノイルアミノ］アセチルアミノ｝−４−フェニルブタノイルアミノ）−４−メチルペンタノイルアミノ］フェニル｝ウンデカノイルアミノ）エチル］カルバモイル｝（２−ピリジル））アミノ］−２−アザビニル｝ベンゼンスルホン酸の製造
【化１３８】
2007504242.tif 000147
パートＤの生成物を２０％ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液で溶解し、室温で１０分間攪拌した。溶液を減圧濃縮し、高真空下で乾燥した。生じた残渣を実施例５４・パートＡの生成物と一緒に、最少量の無水ＤＭＳＯで溶解し、該溶液をＨＯＡｔ、コリジン、およびＤＩＣで処理した。該溶液を窒素下、室温で２４時間攪拌し、減圧濃縮した。残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３７８】
パートＦ−最終の脱保護
パートＥの生成物のフルオロ酢酸：ジクロロメタン（５０:５０）溶液を窒素下、室温で１０分間攪拌し、高真空下で乾燥するまで濃縮した。残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３７９】
実施例５６
２−［（１Ｅ）−２−（｛５−［Ｎ−（２−｛１２−［４−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロパノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）ピリジニウム］ドデカノイルアミノ｝エチル）カルバモイル］（２−ピリジル）｝アミノ）−２−アザビニル］ベンゼンスルホネートの合成
【化１３９】
2007504242.tif 000148
パートＡ−Ｎ−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］エチル｝−１２−ブロモドデカンアミドの製造
【化１４０】
2007504242.tif 000149
１２−ブロモドデカノイン酸、Ｎ−Ｂｏｃ−エチレンジアミン、ＨＢＴＵ、および２，６−ジ−ｔ−ブチルピリジンの無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を窒素下、室温で６時間攪拌した。溶液を減圧濃縮し、残渣を酢酸エチルで溶解した。該有機溶液を１．０Ｎ ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ3、および飽和ＮａＣｌで連続的に洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮した。生じた残渣をヘキサン：酢酸エチルの移動相を用いて、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製し、標記化合物を得た。
【０３８０】
パートＢ−（２Ｓ）−２−［（フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニルアミノ］−４−メチル−Ｎ−（４−ピリジル）ペンタンアミドの製造
【化１４１】
2007504242.tif 000150
Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、４−アミノピリジン、ＨＯＡｔ、コリジン、およびＤＩＣの最少量のＤＭＳＯ溶液を窒素下、室温で２４時間攪拌した。該溶液をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）で精製し、標記化合物を得た。
【０３８１】
パートＣ−（２Ｓ）−Ｎ−［（Ｎ−｛（１Ｓ）−１−［Ｎ−（（１Ｓ）−１−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３−メチル−１−（Ｎ−（４−ピリジル）カルバモイル）ブチル］カルバモイル｝−２−［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）フェニル］エチル）カルバモイル］−３−フェニルプロピル｝カルバモイル）メチル］−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタンアミドの製造
【化１４２】
2007504242.tif 000151
パートＢの生成物を２０％ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液で溶解し、室温で１０分間攪拌した。溶液を減圧濃縮し、高真空下で乾燥した。生じた残渣を実施例４８パートＡの生成物と一緒に最少量の無水ＤＭＳＯで溶解し、該溶液をＨＯＡｔ、コリジン、およびＤＩＣで処理した。該溶液を窒素下、室温で２４時間攪拌し、減圧濃縮した。残渣を水：アセトニトリル：５０ｍＭのＮＨ4ＯＡｃのグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３８２】
パートＤ−１２−［４−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−３−［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）フェニル］プロパノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）−ピリジル］−Ｎ−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］エチル｝ドデカンアミド ブロミドの製造
【化１４３】
2007504242.tif 000152
パートＡおよびＣの生成物を無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで溶解し、室温で１８時間攪拌し、濃縮した。残渣を水：アセトニトリル：０．１％ギ酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３８３】
パートＥ−２−［（１Ｅ）−２−（｛５−［Ｎ−（２−｛１２−［４−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロパノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）ピリジニウム］ドデカノイルアミノ｝エチル）カルバモイル］（２−ピリジル）｝−アミノ）−２−アザビニル］ベンゼンスルホネートの製造
【化１４４】
2007504242.tif 000153
パートＤの生成物をトリフルオロ酢酸：Ｅｔ3ＳｉＨ：水（９５：２．５：２．５）で溶解し、窒素下、６０℃で３０分間、加熱攪拌した。該溶液を減圧濃縮した。残渣をトルエン：エタノール（１：１）に溶解し、ジイソプロピルエチルアミンで、ｐＨを７に調整し、該溶液を６−（｛（１Ｅ）−２−［２−（ソジオオキシシルホニル）フェニル］−１−アザビニル｝アミノ）ピリジン−３−カルボン酸（Bioconjugate Chem. 1999, 10, 808-814）およびＥＥＤＱで処理した。反応液を窒素下、室温で４時間反応させて、減圧濃縮した。生じた残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣによって精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３８４】
実施例５７
２−［（１Ｅ）−２−（｛５−［Ｎ−（２−｛２−［４−（２−｛３−［２−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロパノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）−４，６−ジメチルフェニル］−３−メチルブタノイルオキシ｝プロップ−２−エノイル）フェニル］アセチルアミノ｝−エチル）カルバモイル］（２−ピリジル）｝アミノ）−２−アザビニル］ベンゼンスルホン酸の合成
【化１４５】
2007504242.tif 000154
パートＡ−３−（２−アミノ−４，６−ジメチルフェニル）−３−メチルブタン−１−オールの製造
【化１４６】
2007504242.tif 000155
３，５−ジメチルアニリン、３，３−ジメチルアクリロイルクロリド、およびＴＥＡのジクロロメタン溶液を室温で２時間攪拌した。該溶液を水、飽和ＮａＨＣＯ3、および飽和ＮａＣｌで連続的に洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮した。残渣をヘキサン：酢酸エチルの移動相を用いて、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製した。この精製した中間体を無水ＴＨＦに溶解し、水素化アルミニウムリチウムで処理した。該反応液を窒素下、室温で２時間攪拌し、飽和塩化アンモニウム溶液を加えることによりクエンチした。沈殿した無機塩をセライト（登録商標）濾過によって除去した。濾過液を濃縮し、残渣をヘキサン：酢酸エチルの移動相を用いて、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製し、標記化合物を得た。
【０３８５】
パートＢ−（２Ｓ）−２−［（フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニルアミノ］−Ｎ−［２−（３−ヒドロキシ−１，１−ジメチルプロピル）−３，５−ジメチルフェニル］−４−メチルペンタンアミドの製造
【化１４７】
2007504242.tif 000156
Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、パートＡの生成物、およびＥＥＤＱのトルエン：エタノール（１：１）溶液を窒素下、室温で３日間攪拌した。もし、反応が不完全なら、さらに、２−（４−アミノフェニル）エタノール、およびＥＥＤＱを加え、該反応液をさらに２４時間攪拌した。溶液を減圧濃縮し、生じた残渣をジクロロメタンで溶解し、０．１Ｎ ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ3、および飽和ＮａＣｌで連続的に洗浄した。該有機溶液を乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮し、残渣をヘキサン：酢酸エチルの移動相を用いて、シリカフラッシュクロマトグラフィーにより精製し標記化合物を得た。
【０３８６】
パートＣ−（２Ｓ）−Ｎ−（｛Ｎ−［（１Ｓ）−１−（Ｎ−｛（１Ｓ）−１−［Ｎ−（（１Ｓ）−１−｛Ｎ−［２−（３−ヒドロキシ−１，１−ジメチルプロピル）−３，５−ジメチルフェニル］カルバモイル｝−３−メチルブチル）カルバモイル］−２−［４−（３，３−ジメチル−３−シラブトキシ）フェニル］エチル｝カルバモイル）−３−フェニルプロピル］カルバモイル｝メチル）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタンアミドの製造
【化１４８】
2007504242.tif 000157
パートＢの生成物を２０％ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液で溶解し、室温で１０分間攪拌した。溶液を減圧濃縮し、高真空下で乾燥した。生じた残渣をＡｃ−ＰＬＧ−Ｈｐｈｅ−Ｙ（Ｔｓｅ）−ＯＨ（Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨをＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（Ｔｓｅ）−ＯＨに換え、実施例４８パートＡの手順に従い製造した）と一緒に、最少量の無水ＤＭＳＯで溶解し、該溶液をＨＯＡｔ、コリジン、およびＤＩＣで処理した。該溶液を窒素下、室温で２４時間攪拌し、水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３８７】
パートＤ−３−［２−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−３−［４−（３，３−ジメチル−３−シラブトキシ）フェニル］プロパノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）−４，６−ジメチルフェニル］−３−メチル酪酸の製造
【化１４９】
2007504242.tif 000158
パートＤの生成物、ＴＥＭＰＯ、およびＢＡＩＢのアセトニトリル：水（５０:５０）溶液を０℃で６時間攪拌し、濃縮した。副生成物のヨードベンゼンをｉ−ＰｒＯＨ：水（５０：５０）に残渣を溶解することによって、共沸的に除去し、濃縮する。粗生成物を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣによって精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３８８】
パートＥ−１−メチルビニル ３−［２−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−３−［４−（３，３−ジメチル−３−シラブトキシ）フェニル］プロパノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）−４，６−ジメチルフェニル］−３−メチルブタノエートの製造
【化１５０】
2007504242.tif 000159
パートＤの生成物、酢酸ビニル、酢酸水銀、および濃硫酸の溶液を３時間加熱還流した。酢酸ナトリウムは、酸で中和するために加え、混合液を乾燥するまで濃縮した。残渣を水：アセトニトリルのグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３８９】
パートＦ−Ｎ−｛２−［（フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニルアミノ］エチル｝−２−［４−（２−オキソプロパノイル）フェニル］アセトアミドの製造
【化１５１】
2007504242.tif 000160
２−［４−（２−オキソプロパノイル）フェニル］酢酸（McPherson, D.W.; Umbricht, G.; Knapp, F.F., Jr. J. Labelled Compounds Radiopharm. 1990, 28, 877-899）、Ｎ−（２−アミノエチル）（フルオレン−９−イルメトキシ）カルボキサミド、ＨＢＴＵ、およびジイソプロピルエチルアミンの無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を室温で６時間攪拌し、減圧濃縮した。残渣を酢酸エチルで溶解し、１．０Ｎ ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ3、および飽和ＮａＣｌで連続的に洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮した。残渣をヘキサン：酢酸エチルの移動相を用いて、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製し、標記化合物を得た。
【０３９０】
パートＧ−２−｛４−［（Ｎ−｛２−［（フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニルアミノ］エチル｝カルバモイル）メチル］フェニル｝−１−メチレン−２−オキソエチル ３−［２−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−３−［４−（３，３−ジメチル−３−シラブトキシ）フェニル］プロパノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）−４，６−ジメチルフェニル］−３−メチルブタノエートの製造
【化１５２】
2007504242.tif 000161
パートＥおよびＦの生成物およびｐ−ＴｓＯＨのＣＨＣｌ3溶液を１８時間加熱還流した。該溶液を１．０Ｎ ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ3、および飽和ＮａＣｌで連続的に洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、乾燥するまで濃縮した。残渣を水：アセトニトリルのグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３９１】
パートＨ−２−［（１Ｅ）−２−（｛５−［Ｎ−（２−｛２−［４−（２−｛３−［２−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−フェニルブタノイルアミノ］−３−（４−（３，３−ジメチル−３−シラブトキシ）フェニル）プロパノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）−４，６−ジメチルフェニル］−３−メチルブタノイルオキシ｝プロップ−２−エノイル）フェニル］アセチルアミノ｝エチル）カルバモイル］（２−ピリジル）｝アミノ）−２−アザビニル］ベンゼンスルホン酸の製造
【化１５３】
2007504242.tif 000162
パートＧの生成物を２０％ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液で溶解し、室温で１０分間攪拌した。該溶液を減圧濃縮し、高真空下で乾燥した。残渣を無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで溶解し、ジイソプロピルエチルアミン、ＨＯＡｔ、および２−［（１Ｅ）−２−アザ−２−（｛５−［（２，５−ジオキソピロリジニル）オキシカルボニル］−（２−ピリジル）｝アミノ）ビニル］ベンゼンスルホネートで処理した。該溶液を窒素下、室温で２４時間攪拌し、減圧濃縮した。残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３９２】
パートＩ−最終の脱保護
パートＨの生成物のＴＨＦ溶液をＴＢＡＦで処理し、窒素下、室温で２時間攪拌した。該溶液を濃縮し、生じた残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３９３】
実施例５８
ペプチドＨ−Ｄ−Ｔｉｃ−Ｄ−Ｔｉｃ−ＰＬＧ−Ｈｐｈｅ−ＯＬＥＥ−ＯＨの４−［（（４，４，４−トリフェニルブチル）｛［Ｎ−（４，４，４−トリフェニルブチル）カルバモイル］メチル｝−アミノ）メチル］安息香酸コンジュゲート体の合成
【化１５４】
2007504242.tif 000163
パートＡ−Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｔｉｃ−Ｄ−Ｔｉｃ−Ａｈｘ−ＰＬＧ−Ｈｐｈｅ−Ｏ（Ｂｏｃ）ＬＥ（ｔ−Ｂｕ）Ｅ（ｔ−Ｂｕ）−ワンレジンの製造
実施例１・パートＡからのペプチド−レジンを５０ｍＬの反応槽に付して、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで洗浄することによって膨張させ、以下のステップを実施した。：（ステップ１）Ｆｍｏｃ基を３０分間、２０％ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を用いて除去した。（ステップ２）該レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で洗浄した。（ステップ３）Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｔｉｃ−ＯＨ、ＨＯＢｔ、およびＨＢＴＵのＤＭＳＯ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４０：６０）溶液およびジイソプロピルエチルアミンをレジンに加え、反応を１０時間進行させた。（ステップ４）レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で洗浄した。（ステップ５）Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドおよびジイソプロピルエチルアミン中、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｔｉｃ−ＯＨ、ＨＯＢｔ、およびＨＢＴＵの４０％ＤＭＳＯ（１０ｍｌ）をレジンに加え、反応を４時間行った。（ステップ６）該レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で洗浄した。（ステップ７）カップリング反応は、半定量的なニンヒドリンアッセイおよび定量的なピクリン酸アッセイまたはフルベン−ピペリジンアッセイによって、評価することにより完了したことを確認した。ステップ１〜７は、二度目のＤ−Ｔｉｃの付加を繰り返した。
【０３９４】
パートＢ−Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｔｉｃ−Ｄ−Ｔｉｃ−Ａｈｘ−ＰＬＧ−Ｈｐｈｅ−Ｏ（Ｂｏｃ）ＬＥ（ｔ−Ｂｕ）Ｅ（ｔ−Ｂｕ）−ワンレジンとコンジュゲートした４−［（（４，４，４−トリフェニルブチル）｛［Ｎ−（４，４，４−トリフェニルブチル）カルバモイル］メチル｝アミノ）メチル］安息香酸
パートＡのペプチド−レジンを２０％ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液で３０分間処理し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で洗浄した。２，５−ジオキソピロリジニル ４−［（（４，４，４−トリフェニルブチル）｛［Ｎ−（４，４，４−トリフェニルブチル）カルバモイル］メチル｝アミノ）メチル］ベンゾエート（Harris, T.D.; Rajopadhye, M.; Damphousse, P.R.; Glowacka, D.; Yu, K.; Bourque, J.P.; Barrett, J.A.; Damphousse, D.J.; Heminway, S.J.; Lazewatsky, J.; Mazaika, T.; Carroll, T.R.  Bioorg. Med. Chem. Lett. 1996, 6, 1741-1746）、およびＨＯＡｔのＤＭＳＯ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４０：６０）溶液およびジイソプロピルエチルアミンをレジンに加え、反応を１８時間行った。レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で洗浄した。上記のカップリング手順は、反応が開裂したペプチドの少量のＬＣ／ＭＳで評価によって完了したことが確認されるまで、繰り返した。
【０３９５】
パートＣ−開裂および最終の脱保護
パートＢのペプチド−レジンをトリフルオロ酢酸：Ｈ2Ｏ：ＴＩＳ（９５：２．５：２５．５）と２時間攪拌した。該レジンをガラス濾過器で濾過することにより除去し、トリフルオロ酢酸で洗浄した。濾過液を少量まで濃縮し、エーテルで希釈した。生じた沈殿を濾過によって回収し、エーテルで洗浄し、水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０３９６】
実施例５９
Ａｃ−ＲＲＲＲ−Ｋ［Ａｃ−ＰＬＧ−Ｈｐｈｅ−ＹＬ］−ＲＲＲＲ−ＯＨのＨＹＮＩＣコンジュゲート体の合成
【化１５５】
2007504242.tif 000164
パートＡ−Ａｃ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ｋ（Ｔｅｏｃ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＨＭＢＰ−ＢＨＡレジンの製造
ＨＭＰＢ−ＢＨＡレジンをペプチド合成反応槽に付し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２回）で洗浄することによって膨張させた。Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を加え、レジンを室温で１５分間混合した。ピリジンおよび２，６−ジクロロベンゾイルクロリドを加え、混合液を２０時間ゆっくり振とうした。該レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で洗浄した。レジンの残存したヒドロキシル基をジクロロメタン中、ベンゾイルクロリドおよびピリジンと２時間反応することにより、キャッピングした。置換レベルは、定量的フルベン−ピペリジンアッセイによって決定される。次いで、以下のステップを実施した：（ステップ１）Ｆｍｏｃ基を２０％ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を用いて、３０分間除去した。（ステップ２）該レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で洗浄した。（ステップ３）Ｆｍｏｃ−Ｈｐｈｅ−ＯＨ、ＨＯＢｔ、およびＨＢＴＵのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液およびジイソプロピルエチルアミンをレジンに加え、反応を８時間行った。（ステップ４）該レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で洗浄した。（ステップ５）もし、定量的フルベン−ピペリジンアッセイで、最初のカップリングが不完全であることを示すなら、二度目のカップリングを行う。（ステップ６）レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で洗浄した。ステップ３〜６は、配列Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ｋ（Ｔｅｏｃ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＨＭＰＢ−ＢＨＡレジンに達するまで、繰り返した。ペプチド−レジンを２０％ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液と３０分間処理し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で洗浄した。無水酢酸、およびジイソプロピルエチルアミンを加え、該レジンは、キャッピング反応が開裂したペプチドの少量のＬＣ／ＭＳの評価で完了することが確認されるまで混合した。該レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびメタノール（３回）で洗浄し、乾燥した。
【０３９７】
パートＢ−Ａｃ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｋ［Ａｃ−ＰＬＧ−Ｈｐｈｅ−Ｙ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌ］−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＨＭＢＰ−ＢＨＡレジンの製造
パートＡによるペプチド−レジンをペプチド合成反応槽に付し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２回）で洗浄することによって膨張させた。該レジンをＴＢＡＦのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液で処理し、該混合液をゆっくり１８時間振とうした。次いで、以下のステップを実施した：（ステップ１）該レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で洗浄した。（ステップ２）Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、ＨＯＢｔ、およびＨＢＴＵのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液およびジイソプロピルエチルアミンをレジンに加え、反応を８時間行った。（ステップ３）該レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で洗浄した。（ステップ４）もし、定量的フルベン−ピペリジンアッセイで、最初のカップリングが不完全であることを示すなら、二度目のカップリングを実施した。（ステップ５）該レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）で洗浄した。（ステップ６）Ｆｍｏｃ基を３０分間、２０％ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を用いて除去した。ステップ１〜６を配列Ｆｍｏｃ−ＰＬＧ−Ｈｐｈｅ−Ｙ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌがリジン側鎖に加えられるまで、繰り返した。無水酢酸、およびジイソプロピルエチルアミンを加え、レジンは、キャッピング反応が開裂したペプチドの少量のＬＣ／ＭＳの評価で完了したことを確認するまで混合した。該レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびメタノール（３回）で洗浄し、乾燥した。
【０３９８】
パートＣ−Ａｃ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ｋ［Ａｃ−ＰＬＧ−Ｈｐｈｅ−Ｙ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌ］−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨの製造
ペプチド−レジンをガラス濾過器に付し、ジクロロメタン中、１％トリフルオロ酢酸で処理した。２分後、溶液を直接１０％ピリジンのメタノール溶液に減圧濾過した。開裂ステップは、９回繰り返した。併せた濾過液をその５％の量になるまでエバポレートし、水で希釈し、氷水浴で冷却した。生じた沈殿をガラス濾過器で濾過することによって回収し、水で洗浄し、真空乾燥した。生じた残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製し、標記化合物を得た。
【０３９９】
パートＤ−Ａｃ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ｋ［Ａｃ−ＰＬＧ−Ｈｐｈｅ−Ｙ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌ］−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨのＨｙｎｉｃとのコンジュゲート体の製造
パートＣの生成物、実験２３・パートＦの生成物、ジイソプロピルエチルアミン、およびＨＯＡｔの無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液をＨＢＴＵで処理し、窒素下、室温で４８時間攪拌した。溶液を濃縮し、生じた残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０４００】
パートＥ−最終の脱保護
パートＤの生成物をトリフルオロ酢酸：Ｅｔ3ＳｉＨ：水（９５：２．５：２．５）で溶解し、窒素下、６０℃で３０分間加熱攪拌した。溶液を減圧濃縮し、生じた残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０４０１】
実施例６１
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−Ｎ−（４−アミノブチル）−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−メチルペンタノイルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝−６−（アセチルアミノ）ヘキサンアミド トリフルオロ酢酸塩の合成
【化１５６】
2007504242.tif 000165
パートＡ−Ｆｍｏｃ−ＰＬ−ＮＬｙｓ（Ｂｏｃ）−ＬＬ−ＨＭＰＢ−ＢＨＡレジンの製造
ＨＭＰＢ−ＢＨＡレジン（８．０００ｇ、置換レベル＝０．６８ｍｍｏｌ／ｇ）を２００ｍＬのアドバンスドケムテック反応槽に付し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２×４５ｍＬ）で洗浄することによって膨張した。Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（５．７７ｇ、１６．３２ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４５ｍＬ）溶液を容器に加え、該混合液を１５分間振とうした。２，６−ジクロロベンゾイルクロリド（２．５ｍＬ，１６．３２ｍｍｏｌ）およびピリジン（２．０ｍＬ，２４．５ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４５ｍＬ）溶液を加え、該混合液を窒素下、室温で１８時間振とうした。該レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（１回）、ジクロロメタン（３回）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）（９０ｍＬ量）で洗浄した。ベンゾイルクロリド（３．０ｍＬ，２６ｍｍｏｌ）およびピリジン（３．０ｍＬ，３６．７ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（９０ｍＬ）溶液をレジンに加え、容器を窒素下で３時間振とうし、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（１回）およびジクロロメタン（３回）（各９０ｍＬ）で洗浄した。フルベン−ピペリジンアッセイを０．３４０ｍｍｏｌ／ｇの負荷量を示すレジンの乾燥サンプルで実施した。
【０４０２】
以下のステップを実施した：（ステップ１）Ｆｍｏｃ基を３０分間、２０％ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（９０ｍＬ）溶液を用いて除去した。（ステップ２）該レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）（各９０ｍｌ）で洗浄した。（ステップ３）Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（２．８８ｇ，８．１６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１．２５ｇ，８．１６ｍｍｏｌ）、およびＨＢＴＵ（３．１０ｇ，８．１６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（９０ｍＬ）溶液およびジイソプロピルエチルアミン（２ｍｌ）をレジンに加え、反応を５時間行った。（ステップ４）該レジンをステップ２で洗浄した。（ステップ５）Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（２．８８ｇ，８．１６ｍｍｏｌ）およびＰｙＢｒｏＰ（３．８ｇ，８．１６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（９０ｍｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（２ｍＬ）をレジンに加え、反応を５時間行った。（ステップ７）該レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、およびジクロロメタン（３回）（各９０ｍＬ）で洗浄した。（ステップ６）反応完了は、フルベン−ピペリジンアッセイによってモニターした。ステップ１〜７を所望の配列を達成するまで繰り返した。カップリングの収率は、＞９５％であった。
【０４０３】
パートＢ−Ａｃ−ＰＬ−ＮＬｙｓ（Ｂｏｃ）−ＬＬ−ＯＨの製造
パートＡ（２．５ｇ）のペプチド−レジンを１００ｍＬのアドバンスドケムテック反応槽に付して、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２×３０ｍＬ）で洗浄することによって、膨張した。該レジンは、Ｆｍｏｃ保護基を除去するために３０分間、２０％ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）で処理し、続いて、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）（各３０ｍｌ）で洗浄した。無水酢酸（０．７８ｍＬ，４．２ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（０．８８ｍＬ，５．０ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）を加え、該混合液を穏やかに２時間攪拌した。該ペプチド−レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、およびジクロロメタン（３回）（各３０ｍＬ）で洗浄し、真空乾燥した。該ペプチド−レジンをガラス濾過器に付して、１％トリフルオロ酢酸のジクロロメタン（１２ｍＬ）溶液と２分間処理した。該溶液は、窒素圧を利用して、ピリジン：メタノール（１：９、２ｍＬ）を含む、フラスコに直接濾過した。開裂法を１０回繰り返した。濾過液を併せて、濃縮し、無色の油状固体を得た。この粗生成物を水（２×２５ｍＬ）でトリチュレートし、真空乾燥し、乾燥した固体を得た。この固体を２０ｍＬ／分の流量で、０．１％トリフルオロ酢酸を含む、３６→５４％アセトニトリルの０．９％／分グラジエントを用いて、フェノメネックスルナＣ１８（２）カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でＨＰＬＣにより精製した。１４．４分で溶離する主生成物のピークを凍結乾燥し、ＨＰＬＣにより１００％純度で、無色の固体として、標記化合物（６３．６ｍｇ，６３％）を得た。ＭＳ:m/e 725.4 [M+H](70%), 625.3 [M+H-Boc](100%)。
【０４０４】
パートＣ−Ｎ−アミノ−６−［（フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニルアミノ］ヘキサンアミド トリフルオロ酢酸塩の製造
【化１５７】
2007504242.tif 000166
実施例１３・パートＡの生成物（３．００ｇ、６．４４ｍｍｏｌ）を窒素下、室温で３０分間、５０％トリフルオロ酢酸のジクロロメタン溶液（２０ｍＬ）で処理した。溶液を減圧濃縮し、淡黄色の油状物を得た。該油状物をアセトニトリル：水（３０：７０、４０ｍＬ）で溶解し、凍結乾燥して、オフホワイトな固体（２．３０ｇ，７４％）を得た。1H NMR (CDCl3):δ10.36 (s, 1H), 7.89 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 7.67 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.41 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.33 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 7.25 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.30 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 4.20 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 2.96 (q, J = 6.0 Hz, 2H), 2.158 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.51 (pen, J = 7.8 Hz, 2H), 1.39 (pen, J = 7.8 Hz, 2H), 1.26 (m, 2H); ＭＳ: m/e 368.2 [M+H](100%)。
【０４０５】
パートＤ−Ｎ−（（２Ｓ）−２−｛（２Ｓ）−２−［２−（（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−Ｎ−｛４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］ブチル｝−４−メチルペンタノイルアミノ）アセチルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝−４−メチルペンタノイルアミノ）−６−アミノヘキサンアミド トリフルオロ酢酸塩の製造
【化１５８】
2007504242.tif 000167
パートＢ（３１．０ｍｇ，０．０４３ｍｍｏｌ）によるペプチドおよびＨＯＡｔ（５．８ｍｇ，０．０４３ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（１ｍＬ）をコリジン（２８．３μＬ，０．２１４ｍｍｏｌ）で塩基性にした。溶液をＤＩＣ（１３．２μＬ，０．０８６ｍｍｏｌ）で処理し、窒素下、室温で１５分間攪拌した。パートＣの生成物（３１．４ｍｇ，０．０８６ｍｍｏｌ）を加え、該反応液を室温で攪拌した。さらに、パートＣの生成物（３１．４ｍｇ，０．０８６ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（１３．２μＬ，０．０８６ｍｍｏｌ）を１８時間後加えた。３日後、反応を完了し、溶媒を減圧留去し、黄色油状物として、粗の標記化合物を得た。
【０４０６】
２０％ピペリジン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．２５ｍＬ）で溶解した上記の油状物を窒素下、室温で１５分間攪拌した。溶液を減圧濃縮し、生じた残渣を２０ｍＬ／分の流量で、０．１％トリフルオロ酢酸（ｐＨ２）を含む、１８→４５％アセトニトリルの０．９％／分グラジエントを用いて、フェノメネックスルナＣ１８（２）カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でＨＰＬＣにより精製した。２４．０分で溶離する主生成物のピークを凍結乾燥し、無色の固体として、標記化合物（１４．３ｍｇ，３９％，ＨＰＬＣ純度１００％）を得た。ＭＳ: m/e 852.6 [M+H](100%)。
【０４０７】
パートＥ−Ｎ−｛（２Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−Ｎ−（４−アミノブチル）−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）−４−メチルペンタノイルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝−６−（アセチルアミノ）ヘキサンアミド トリフルオロ酢酸塩の製造
【化１５９】
2007504242.tif 000168
パートＤの生成物（４．４ｍｇ，０．００５ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）を無水酢酸（２．４μＬ，０．０２６ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（４．５μＬ，０．０２６ｍｍｏｌ）で処理した。該溶液を窒素下、室温で５分間攪拌し、溶媒を減圧下でエバポレートした。生じた残渣をトリフルオロ酢酸：水（５０：５０、１ｍＬ）で溶解し、窒素下、室温で２０分間攪拌した。溶液を減圧濃縮し、生じた残渣を２０ｍＬ／分の流量で、０．１％トリフルオロ酢酸（ｐＨ２）を含む、１３．５→３１．５％アセトニトリルの０．９％／分グラジエントを用いて、フェノメネックスルナＣ１８（２）カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でＨＰＬＣにより精製した。１８．５分で溶離する主生成物ピークを凍結乾燥し、無色固体として、標記化合物（３．２ｍｇ，８３％，ＨＰＬＣ純度１００％）を得た。ＭＳ: m/e 794.5 [M+H](100%), 397.8 [M+2H](80%); 高分解能ＭＳ:計算値 C39H71N9O8 [M+H]：794.5498, 実測値：794.5491. Ｌ−ロイシンのキラル分析：９９．８％。
【０４０８】
実施例６２
（２Ｓ）−Ｎ−｛（１Ｓ）−１−［Ｎ−（（１Ｓ）−１−｛Ｎ−［６−（アセチルアミノ）ヘキサノイルアミノ］カルバモイル｝−３−メチルブチル）カルバモイル］−２−（４−ヒドロキシフェニル）エチル｝−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）ヘプト−６−エナミドの合成
【化１６０】
2007504242.tif 000169
パートＡ−Ｆｍｏｃ−ＰＬＧ−Ａｈｐ−ＹＬ−ＨＭＰＢ−ＢＨＡレジンの製造
ＨＭＰＢ−ＢＨＡレジン（８．０００ｇ，置換レベル＝０．６８ｍｍｏｌ／ｇ）を２００ｍＬのアドバンスドケムテック反応槽に付して、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２×４５ｍＬ）で洗浄することによって膨張させた。Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（５．７７ｇ，１６．３２ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（４５ｍＬ）を容器に加え、混合液を１５分間振とうした。２，６−ジクロロベンゾイルクロリド（２．５ｍＬ，１６．３２ｍｍｏｌ）およびピリジン（２．０ｍＬ，２４．５ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４５ｍＬ）溶液を加え、該混合液を窒素下、室温で１８時間振とうした。レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（１回）、ジクロロメタン（３回）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）（各９０ｍＬ）で洗浄した。ベンゾイルクロリド（３．０ｍＬ，２６ｍｍｏｌ）およびピリジン（３．０ｍＬ，３６．７ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（９０ｍＬ）をレジンに加え、容器を窒素下、３時間振とうし、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（１回）およびジクロロメタン（３回）（各９０ｍＬ）で洗浄した。フルベン−ピペリジンアッセイを０．３４０ｍｍｏｌ／ｇの負荷量を示すレジンの乾燥サンプルで実施した。
【０４０９】
以下のステップを実施した：（ステップ１）Ｆｍｏｃ基を３０分間、２０％ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（９０ｍＬ）で除去した。（ステップ２）該レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）（各９０ｍｌ）で洗浄した（ステップ３）Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（Ｏ−ｔＢｕ）−ＯＨ（３．７５ｇ，８．１６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１．２５ｇ，８．１６ｍｍｏｌ）、およびＨＢＴＵ（３．１０ｇ，８．１６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（９０ｍＬ）およびジイソプロピルエチルアミン（２ｍｌ）をレジンに加え、反応を５時間行った。（ステップ４）該レジンをステップ２のとおり洗浄した。（ステップ５）Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（Ｏ−ｔＢｕ）−ＯＨ（３．７５ｇ，８．１６ｍｍｏｌ）およびＰｙＢｒｏＰ（３．８ｇ，８．１６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（９０ｍｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（２ｍＬ）をレジンに加え、反応を５時間行った。（ステップ７）該レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、およびジクロロメタン（３回）（各９０ｍＬ）で洗浄した。（ステップ６）反応完了は、フルベン−ピペリジンアッセイでモニターした。ステップ１〜７を所望の配列に達するまで繰り返した。カップリングの収率は、＞９５％であった。
【０４１０】
パートＢ−Ａｃ−ＰＬＧ−Ａｈｐ−Ｙ（Ｏ−ｔＢｕ）Ｌ−ＯＨの製造
パートＡのペプチド−レジン（２．５ｇ）を１００ｍＬのアドバンスドケムテック反応槽に付して、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２×３０ｍＬ）で洗浄することによって膨張させた。該レジンは、Ｆｍｏｃ保護基を除去するために、３０分間、２０％ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（３０ｍＬ）で処理し、続いて、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、ジクロロメタン（３回）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）（各３０ｍｌ）で洗浄した。無水酢酸（０．７８ｍＬ，４．２ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（０．８８ｍＬ，５．０ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）を加え、混合液を２時間穏やかに攪拌した。該ペプチド−レジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３回）、ジクロロメタン（３回）、メタノール（３回）、およびジクロロメタン（３回）（各３０ｍＬ）で洗浄し、真空乾燥した。該ペプチド−レジンをガラス濾過器に付して、１％トリフルオロ酢酸のジクロロメタン溶液（１２ｍＬ）で、２分間処理した。溶液は、窒素圧を利用して、直接ピリジン：メタノール（１：９、２ｍＬ）を含むフラスコに濾過した。該開裂手順を１０回繰り返した。濾過液を併せて、濃縮し、無色の油状固体を得た。この粗生成物を水（２×２５ｍＬ）でトリチュレートし、真空乾燥し、乾燥固体を得た。この固体を２０ｍＬ／分の流量で、０．１％トリフルオロ酢酸を含む、４０→６５％アセトニトリルの１．０％／分グラジエントを用いて、フェノメネックスルナＣ１８（２）カラム（２１．２×２５０ｍｍ）で、ＨＰＬＣにより精製した。２１．４分で溶離する主生成物ピークを凍結乾燥し、無色の固体として、標記化合物（８４．６ｍｇ，７７％，ＨＰＬＣ純度１００％）を得た。ＭＳ：m/e 785.5 [M+H](100%); 高分解能ＭＳ：計算値 C41H64N6O9 [M+H]：785.4807, 実測値：785.4806。
【０４１１】
パートＣ−（２Ｓ）−Ｎ−［（１Ｓ）−１−（Ｎ−｛（１Ｓ）−１−［Ｎ−（６−アミノヘキサノイルアミノ）カルバモイル］−３−メチルブチル｝カルバモイル）−２−［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）フェニル］エチル］−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）ヘプト−６−エンアミド トリフルオロ酢酸塩の製造
【化１６１】
2007504242.tif 000170
パートＢの生成物（５２．１ｍｇ，０．０６６ｍｍｏｌ）およびＨＯＡｔ（９．０ｍｇ，０．０６６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）溶液をコリジン（４３．９μＬ，０．３３２ｍｍｏｌ）で塩基性にした。該溶液をＤＩＣ（２０．６μＬ，０．１３３ｍｍｏｌ）で処理し、窒素下、室温で１５分間攪拌した。実施例６１・パートＣの生成物（４８．８ｍｇ，０．１３３ｍｍｏｌ）を加え、該反応液を室温で攪拌した。さらに、実施例６１・パートＣの生成物（４８．８ｍｇ，０．１３３ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（４１．２μＬ，０．２６５ｍｍｏｌ）を１８時間後に加えた。反応を３日以内に完了し、溶媒を減圧留去して、黄色油状物を得た。
【０４１２】
ＴＡＥＡ（０．２５ｍＬ，１．６５９ｍｍｏｌ）で溶解した上記の油状物を窒素下、室温で３０分攪拌した。該溶液を減圧濃縮し、生じた残渣を２０ｍＬ／分の流量で、０．１％トリフルオロ酢酸（ｐＨ２）を含む、３１．５→４９．５％アセトニトリルの０．９％／分グラジエントを用いて、フェノメネックスルナＣ１８（２）カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でＨＰＬＣにより精製した。２５．６分で溶離する主生成物のピークを凍結乾燥し、無色固体として、標記化合物（３８．３ｍｇ，６３％，ＨＰＬＣ純度１００％）を得た。ＭＳ: m/e 912.6 [M+H](100%); 高分解能ＭＳ：計算値 C47H77N9O9 [M+H]：912.5917, 実測値：912.5913。
【０４１３】
パートＤ−（２Ｓ）−Ｎ−｛（１Ｓ）−１−［Ｎ−（（１Ｓ）−１−｛Ｎ−［６−（アセチルアミノ）ヘキサノイルアミノ］カルバモイル｝−３−メチルブチル）カルバモイル］−２−（４−ヒドロキシフェニル）エチル｝−２−（２−｛（２Ｓ）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−４−メチルペンタノイルアミノ｝アセチルアミノ）ヘプト−６−エンアミドの製造
【化１６２】
2007504242.tif 000171
パートＣの生成物（９．１ｍｇ，０．０１０ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（０．５ｍＬ）をＡｃ2Ｏ（４．７μＬ，０．０５０ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（８．７μＬ，０．０５０ｍｍｏｌ）で処理した。該溶液を窒素下、室温で５分間攪拌し、溶媒を減圧留去した。生じた残渣をトリフルオロ酢酸：アニソール：水（９５：２．５：２．５、１ｍＬ）で溶解し、窒素下、室温で２０分間攪拌した。該溶液を減圧濃縮して、生じた残渣を２０ｍＬ／分の流量で０．１％トリフルオロ酢酸（ｐＨ２）を含む、２２．５〜４５％アセトニトリルの０．９％／分グラジエントを用いて、フェノメネックスルナＣ１８（２）カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でＨＰＬＣにより精製した。１８．５分で溶離する主生成物ピークを凍結乾燥し、無色の固体として、標記化合物（８．５ｍｇ，９４％，ＨＰＬＣ純度１００％）を得た。1H NMR(DMSO-d6):δ9.78-9.76 (m, 1H), 9.70-9.69 (m, 1H), 9.12 (bs, 1H), 7.99-7.89 (m, 3H), 7.80-7.70 (m, 2H), 7.01 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.62 (d, J = 8.3 Hz), 5.77-5.70 (m, 1H), 4.98 (d, J = 17.1 Hz, 1H), 4.92 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.44-4.35 (m, 3H), 4.28-4.20 (m, 2H), 3.78-3.64 (m, 2H), 3.57-3.51 (m, 1H), 2.99 (q, J = 6.5 Hz, 2H), 2.89-2.86 (m, 1H), 2.67-2.62 (m, 1H), 2.09 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.03-1.73 (m, 13H), 1.66-1.21 (m, 17H), 0.89-0.81 (m, 12H);MS: m/e 898.5 [M+H] (90%), 449.4 [M+2H] (100%); Ｌ−ロイシンのキラル分析：９９．８％。
【０４１４】
実施例６３
Ｎ−［（１Ｅ）−８−（アセチルアミノ）オクト−１−エニル］（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルペンタンアミド ギ酸塩
【化１６３】
2007504242.tif 000172
パートＡ−８−ヨードオクト−１−インの製造
【化１６４】
2007504242.tif 000173
ＰＰｈ3（１３．７ｇ，５２．４ｍｍｏｌ）およびイミダゾール（３.５７ｇ，５２．４ｍｍｏｌ）をＣＨ2Ｃｌ2（１００ｍＬ）で溶解し、Ｉ2（１３．３ｇ，５２．４ｍｍｏｌ）で一度に処理した。この溶液にオクト−７−イン−１−オール（４．４０ｇ，３４．９ｍｍｏｌ）のＣＨ2Ｃｌ2溶液（５０ｍＬ）を２２℃で、カニューラを用いて５分間で移した。２時間攪拌後、該混合液をペンタン（４５０ｍＬ）で希釈し、生じた沈殿をガラス漏斗に通して、濾過することによって除去した。濾過液を減圧濃縮し、トリチュレートステップを繰り返した。生じた淡黄色の油状物をクロマトグラフィー（シリカゲル）（１００％ペンタン；Ｒf＝０．４（ペンタン））で精製し、無色の油状物（７．０１ｇ，２９．７ｍｍｏｌ；８５．１％）を得た。1H NMR(CDCl3,600 MHz):δ3.20 (2H, t, J = 6.6 Hz), 2.21 (2H, td, J = 6.6, 2.4 Hz), 1.95 (1H, t, J = 2.4 Hz), 1.85 (2H, quin, J = 7.2 Hz), 1.55 (2H, m), 1.43 (4H, m). 13C NMR(CDCl3,150MHz):δ84.6, 68.5, 33.6, 30.2, 28.4, 27.8, 18.5, 7.2。
【０４１５】
パートＢ−（１Ｅ）−１，８−ジヨードオクト−１−エンの製造
【化１６５】
2007504242.tif 000174
パートＡの生成物（４．３２ｇ，１８．３ｍｍｏｌ）のＣＨ2Ｃｌ2溶液（２０ｍＬ）を２２℃で、カニューラを用いて、Ｃｐ2ＺｒＨＣｌ（１１．８ｇ，４５．８ｍｍｏｌ）のＣＨ2Ｃｌ2溶液（８０ｍＬ）へ移した。該黄色溶液を２．５時間攪拌した後、Ｉ2のＣＨ2Ｃｌ2飽和溶液が紫色を維持するまで（〜１００ｍＬ）、滴下漏斗を用いて滴下した。次いで、混合液をペンタン（５００ｍＬ）に注ぎ、生じた沈殿をガラス漏斗で濾過することによって除去した。次いで、濾過液を飽和Ｎａ2Ｓ2Ｏ3（３×２００ｍＬ）溶液、Ｈ2Ｏ（１００ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ（２００ｍＬ）で洗浄した。次いで、有機層を乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）し、濾過し、減圧濃縮して、黄色油状物を得た。クロマトグラフィー（シリカゲル）（１００％ペンタン；Ｒf＝０．６（ペンタン））によって精製し、無色油状物（４．２７ｇ，１１．７ｍｍｏｌ；６４．１％）を得た。1H NMR (CDCl3, 600MHz):δ6.49 (1H, dt, J = 14.4, 7.2 Hz), 5.84 (1H, dt, J = 14.4, 1.5 Hz), 3.17 (2H, t, J = 6.9 Hz), 2.05 (2H, qd, J = 7.2, 1.8 Hz), 1.81 (2H, m), 1.37 (4H, m), 1.31 (2H, m). 13C NMR (CDCl3, 150MHz):δ146.4, 74.6, 35.6, 33.3, 30.2, 28.1, 27.8, 7.0。
【０４１６】
パートＣ−（１Ｅ）−８−アジド−１−ヨードオクト−１−エンの製造
【化１６６】
2007504242.tif 000175
パートＢの生成物（２．１７ｇ，５．９６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）溶液を２２℃で、固体のＮａＮ3（６５７ｍｇ，１０．１ｍｍｏｌ）に移した。生じた均一溶液を１時間攪拌し、次いで、飽和ＮａＣｌ溶液（１５０ｍＬ）で希釈した。次いで、生じた混合液を分液漏斗に移し、ペンタン（３×５０ｍＬ）で洗浄した。有機洗浄液を併せて、乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）し、濾過し、減圧濃縮した。クロマトグラフィー（シリカゲル）（１００％ペンタン；Ｒf＝０．３（ペンタン））で精製し、無色油状物（１．３０ｇ，４．６６ｍｍｏｌ；７８．１％）を得た。1H NMR(CDCl3, 600MHz):δ6.49 (1H, dt, J = 14.2, 7.1 Hz), 5.98 (1H, dt, J = 14.4, 1.5 Hz), 3.25 (2H, t, J = 6.9 Hz), 2.05 (2H, qd, J = 7.4, 1.5 Hz), 1.59 (2H, m), 1.42-1.29 (6H, m). 13C NMR (CDCl3, 150 MHz):δ 146.4, 74.5, 51.4, 35.9, 28.7, 28.4, 28.2, 26.4。
【０４１７】
パートＤ−Ｎ−（（１Ｅ）−８−アジドオクト−１−エニル）（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルペンタンアミドの製造
【化１６７】
2007504242.tif 000176
５ｍＬの三角フラスコに、パートＣの生成物（２７９ｍｇ，１．００ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミン（１１μＬ，０．１０ｍｍｏｌ；１０ｍｏｌ％）および無水ＴＨＦ（１．００ｍＬ）を加えて、横に置いた。ヨウ化銅（Ｉ）（０．９５×１０1ｍｇ，０．０５０ｍｍｏｌ；５ｍｏｌ％）、ロイシンアミド（２．６０×１０2ｍｇ，２．００ｍｍｏｌ）およびＣｓ2ＣＯ3（４８９ｍｇ，１．５０ｍｍｏｌ）をオーブンで乾燥した２５ｍＬのシュレンク管に加えた。この容器を次いで、乾燥した窒素で３回置換した。気密シリンジを用いて、次いで、該の製造したビニルヨージドの溶液を側枝から、このフラスコに移し；さらに、移動液を定量するためにＴＨＦ（１．００ｍＬ）を用いた。次いで、フラスコを密封し、予め加熱した油浴に浸し、７０℃で１６時間維持した。２２℃まで冷却後、生じた懸濁液を酢酸エチル（１ｍＬ）で希釈し、予め製造したシリカゲルカラムの上に直接置いた。ＣＨ2Ｃｌ2／メタノール（９：１）（Ｒf＝０．４（ＣＨ2Ｃｌ2／メタノール（９：１））で溶離し、濃縮後、淡黄色の油状物（２４４ｍｇ，０．８６７ｍｍｏｌ；８６．７％）を得た。1H NMR (C6D6, 600MHz):δ8.77 (1H, brd, J = 10.2 Hz), 7.12 (1H, ddt, J = 14.3, 11.1, 1.4 Hz), 4.94 (1H, dt, J = 14.3, 7.2 Hz), 3.05 (1H, dd, J = 9.6, 4.3 Hz), 2.67 (2H, t, J = 7.0 Hz), 1.86 (2H, qd, J = 7.2, 1.4 Hz), 1.72 (1H, ddd, J = 13.8, 9.3, 4.4 Hz), 1.40 (1H, m), 1.16 (4H, m), 1.04 (1H, ddd, J = 13.8, 9.6, 5.2 Hz), 1.00 (5H, m), 0.79 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.72 (3H, d, J = 6.6 Hz).  13C NMR (C6D6, 150MHz):δ171.8, 123.4, 111.9, 53.3, 51.2, 44.2, 30.1, 29.9, 28.9, 28.7, 26.7, 24.9, 23.4, 21.4. ＭＳ(ESI): m/z 304.4 (4, M+Na), 282.4 (100, M+H).
【０４１８】
パートＥ−Ｎ−（（１Ｅ）−８−アジドオクト−１−エニル）（２Ｓ）−４−メチル−２−（プロプ−２−エニルオキシカルボニルアミノ）ペンタンアミドの製造
【化１６８】
2007504242.tif 000177
パートＤの生成物（１１１ｍｇ，０．３９４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（３.００ｍＬ）をｉ−Ｐｒ2ＮＥｔ（７５μＬ，０．４３ｍｍｏｌ）で処理し、次いで、０℃まで冷却した。次いで、アリールクロロホルメート（４４μＬ，０．４１ｍｍｏｌ）を加えて、該溶液を０℃で１時間攪拌した。生じた溶液を次いで、２２℃まで温め、減圧濃縮した。上で述べたように得られた粗油状物をクロマトグラフィー（シリカゲル）（ペンタン／ジエチルエーテル／メタノール（６０：３１：９）；Ｒf＝０．４（ペンタン／ジエチルエーテル／メタノール（６０：３１：９））で精製し、無色油状物（１４２ｍｇ，０．３８９ｍｍｏｌ；９８．５％）を得た。1H NMR (C6D6, 600MHz):δ8.08 (1H, brd, J = 8.5 Hz), 7.03 (1H, dd, J = 14.2, 10.5 Hz), 5.72 (1H, ddt, J = 17.0, 10.7, 5.5 Hz), 5.37 (1H, d, J = 7.8 Hz), 5.12 (1H, dq, J = 17.2, 1.6 Hz), 5.03 (1H, dt, J = 14.2, 7.1 Hz), 4.97 (1H, dq, J = 10.5, 1.4 Hz), 4.46 (2H, ABqdt, JAB = 13.4 Hz, Jd = 5.6 Hz, Jt = 1.4 Hz), 4.34-4.30 (1H, m), 2.68 (2H, t, J = 6.9 Hz), 1.83 (2H, brq, J = 7.3 Hz), 1.61-1.56 (2H, m), 1.45-1.40 (1H, m), 1.21-1.12 (4H, m), 1.07-0.99 (4H, m), 0.84 （3H, d, J = 5.8 Hz), 0.80 （3H, d, J = 6.4 Hz). 13C NMR (C6D6, 150MHz):δ169.5, 156.8, 133.1, 123.2, 117.5, 113.5, 66.0, 53.8, 51.2, 41.2, 30.0(2), 28.8, 28.7, 26.7, 24.8, 23.0, 21.9. ＭＳ(ESI): m/z 388.3 (61, M+Na), 366.3 (100, M+H)。
【０４１９】
パートＦ−Ｎ−（（１Ｅ）−８−アミノオクト−１−エニル）（２Ｓ）−４−メチル−２−（プロップ−２−エニルオキシカルボニルアミノ）ペンタンアミド ギ酸塩の製造
【化１６９】
2007504242.tif 000178
パートＥの生成物（１２３ｍｇ，０．３３７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（５．００ｍＬ）を２２℃で、ＰＰｈ3（２２１ｍｇ，０．８４３ｍｍｏｌ）と処理した。完全に溶解後、Ｈ2Ｏ（１８２μＬ，１０．１ｍｍｏｌ）を加え、該溶液を２２℃で１時間、続いて、７０℃で１時間攪拌した。イミノホスホランの加水分解を完了し、すべての揮発性成分を減圧留去し、残渣を２０ｍＬ／分の流量で、０．１％ＨＣＯ2Ｈを含む１０〜４０％アセトニトリルの１．５％／分グラジエントを用いて、フェノメネックスルナＣ１８カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でＨＰＬＣにより精製した。１０分で溶離する主生成物のピークを凍結乾燥し、白色固体（４５．０ｍｇ，０．１１７ｍｍｏｌ；３４．７％）を得た。1H NMR (C6D6, 600MHz):δ9.94 (1H, brd, J = 10.0 Hz), 8.83 (1H, s), 7.36 (1H, d, J = 8.6 Hz), 6.93 (1H, dd, J = 14.3, 10.0 Hz), 5.76 (1H, ddt, J = 17.1, 10.6, 5.4 Hz), 5.36 (1H, dt, J = 14.3, 7.2 Hz), 5.18 (1H, dq, J = 17.2, 1.7 Hz), 4.96 (1H, dq, J = 10.5, 1.6 Hz), 4.49-4.41 （3H, m), 2.62 (2H, dd, J = 7.5, 7.4 Hz), 1.87 (2H, q, J = 7.0 Hz), 1.78-1.73 (1H, m), 1.66 (1H, ddd, J = 13.5, 10.1, 5.2 Hz), 1.57 (1H, ddd, J = 13.5, 8.8, 5.1 Hz), 1.44 (2H, m), 1.19 (2H, m), 1.15-1.09 (5H, m), 0.87 （3H, d, J = 6.6 Hz), 0.85 （3H, d, J = 6.6 Hz).  13C NMR (C6D6, 150MHz):δ170.6, 166.7, 156.5, 133.9, 124.0, 116.9, 112.6, 65.0, 54.0, 41.8, 30.2(2) 29.9, 28.7, 26.6, 24.9, 23.3, 21.9.  ＭＳ(ＥＳＩ): m/z 362.3 （3, M+Na), 340.4 (100, M+H)。
【０４２０】
パートＧ−Ｎ−［（１Ｅ）−８−（アセチルアミノ）オクト−１−エニル］（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルペンタンアミド ギ酸塩の製造
【化１７０】
2007504242.tif 000179
パートＦの生成物（１５．０ｍｇ，３８．９μｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（３.００ｍＬ）をｉ−Ｐｒ2ＮＥｔ（２７．０μＬ，１５５μｍｏｌ）、続いて２２℃で、Ａｃ2Ｏ（１１．０μＬ，１１７μｍｏｌ）で処理した。該溶液を０．５時間攪拌し、次いで、Ｈ2Ｏ（３０ｍＬ）で希釈し、分液漏斗に移し、酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を併せて、飽和ＮａＨＣＯ3溶液（２０ｍＬ）、Ｈ2Ｏ（２０ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ（２０ｍＬ）で洗浄し、次いで、乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）し、濾過し、減圧濃縮した。この原料をさらに精製することなく、次ステップに使用した。ＭＳ(ESI): m/z 404.3 (22, M+Na), 382.4 (100, M+H)。
【０４２１】
粗のアセトアミド体をアセトニトリル／Ｈ2Ｏ（３.００ｍＬ；２：１ ｖ／ｖ）で再溶解し、Ｐｄ（ＯＡｃ）2（０．１７ｍｇ，０．７６μｍｏｌ；２ｍｏｌ％）で処理し、続いて、２２℃で、ＴＰＰＴＳ（０．８９ｍｇ，１．６μｍｏｌ；４ｍｏｌ％）およびＥｔ2ＮＨ（１０．０μＬ，９７．３μｍｏｌ）で処理した。脱保護の完了は、０．５時間以内に観察された。該溶液を２０ｍＬ／分の流量で、０．１％ＨＣＯ2Ｈを含む１０〜３０％アセトニトリルの０．８０％／分グラジエントを用いて、フェノメネックスルナＣ１８カラム（２１．２×２５０ｍｍ）に直接充填した。１４分で溶離する主生成物のピークを白色固体（８．０ｍｇ，２３μｍｏｌ；２ステップ６０％以上）になるまで、凍結乾燥した。 1H NMR (C6D6, 600MHz):δ9.82 (1H, brd, J = 9.9 Hz), 7.57 (1H, brs), 6.97 (1H, dd, J = 14.2, 9.9 Hz), 5.33 (1H, dt, J = 14.3, 7.2 Hz), 3.61 (1H, dd, J = 8.5, 5.6 Hz), 3.20 (2H, td, J = 7.1, 5.8 Hz), 1.92-1.88 (2H, m), 1.89 （3H, s), 1.77(1H, ddd, J = 14.4, 6.5, 5.0 Hz), 1.67 (1H, ddd, J = 13.7, 8.2, 5.6 Hz), 1.47-1.40 （3H, m), 1.25-1.15 (6H, m), 0.86 （3H, d, J = 6.6 Hz), 0.84 （3H, d, J = 6.5 Hz).  13C NMR (C6D6, 150MHz):δ172.0, 163.3, 123.7, 112.8, 53.5, 43.8, 42.1, 30.2, 30.1, 29.9, 28.9, 27.0, 24.8, 23.3, 23.1, 22.1. ＭＳ(ESI): m/z 298.4 (100, M+H), 284.4 （3)。
【０４２２】
実施例６４
Ｎ−［（１Ｅ）−５−（アセチルアミノ）ペント−１−エニル］（２Ｒ）−２−アミノ−４−メチルペンタンアミド ギ酸塩
【化１７１】
2007504242.tif 000180
パートＡ−Ｎ−（（１Ｅ）−５−アジドペント−１−エニル）（２Ｒ）−２−アミノ−４−メチルペンタンアミドの製造
【化１７２】
2007504242.tif 000181
実施例６３・パートＤに記載したとおり、５ｍＬの三角フラスコに、（１Ｅ）−５−アジド−１−ヨードペント−１−エン（２３７ｍｇ，１．００ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミン（１１μＬ，０．１０ｍｍｏｌ；１０ｍｏｌ％）および無水ＴＨＦ（１．００ｍＬ）に加え、横に置いた。ヨウ化銅（Ｉ）（０．９５×１０1ｍｇ，０．０５０ｍｍｏｌ；５ｍｏｌ％），ロイシンアミド（２．６０×１０2ｍｇ，２．００ｍｍｏｌ）およびＣｓ2ＣＯ3（４８９ｍｇ，１．５０ｍｍｏｌ）をオーブンで乾燥した２５ｍＬのシュレンク管に加えた。次いで、この容器を３回窒素置換した。気密シリンジを用いて、次いで、前に製造したヨウ化ビニル溶液を側枝からこのフラスコに移し；さらに、移動液を定量するためにＴＨＦ（１．００ｍＬ）を用いた。次いで、該フラスコを密封し、予め加熱した油浴に浸し、７０℃で１６時間維持した。２２℃まで冷却後、生じた懸濁液を酢酸エチル（１ｍＬ）で希釈し、予め製造したシリカゲルカラムの上に直接充填した。ＣＨ2Ｃｌ2／メタノール（９：１）（Ｒf＝０．３（ＣＨ2Ｃｌ2／メタノール（９：１））で溶離し、濃縮後、淡黄色の油状物（２．１０×１０2ｍｇ，０．８７７ｍｍｏｌ；８７．７％）を得た。1H NMR (C6D6), 600MHz):δ8.70 (1H, brd, J = 9.0 Hz), 7.01 (1H, ddt, J = 14.3, 11.1, 1.3 Hz), 4.69 (1H, dt, J = 14.3, 7.2 Hz), 3.03 (1H, dd, J = 9.7, 4.3 Hz), 2.63 (2H, t J = 7.0 Hz), 1.73 (1H, ddd, J = 13.7, 9.3, 4.3 Hz), 1.72-1.68 (2H, m), 1.43-1.36 (1H, m), 1.19 (2H, quin, J = 7.1 Hz), 1.04 (1H, ddd, J = 14.0, 9.6, 5.2 Hz), 0.80 （3H, d, J = 6.6 Hz), 0.72 （3H, d, J = 6.6 Hz). ＨＲＭＳ計算値 C11H22N5O： 240.1824 (M+H). 実測値： 240.1819.
【０４２３】
パートＢ−Ｎ−（（１Ｅ）−５−アジドペント−１−エニル）（２Ｒ）−４−メチル−２−（プロプ−２−エニルオキシカルボニルアミノ）ペンタンアミドの製造
【化１７３】
2007504242.tif 000182
パートＡの生成物（１０５ｍｇ，０．４３９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（５．００ｍＬ）をｉ−Ｐｒ2ＮＥｔ（８４．０μＬ，０．４８２ｍｍｏｌ）で処理し、次いで、０℃まで冷却した。次いで、アリールクロロホルメート（４９．０μＬ，０．４６１ｍｍｏｌ）を加え、該溶液を０℃で０．５時間攪拌し、次いで、２２℃に温め、０．７５時間攪拌した。次いで、生じた溶液を減圧濃縮し、直接、クロマトグラフィー（シリカゲル）（ペンタン／酢酸エチル／メタノール（７１：２４：５）；Ｒf＝０．９（ＣＨ2Ｃｌ2／メタノール（９：１））で精製し、白色固体（１４１ｍｇ，０．４３６ｍｍｏｌ；９９．４％）を得た。1H NMR (C6D6, 600MHz):δ7.36 (1H, brs), 6.86 (1H, ddt, J = 14.3, 10.4, 1.4 Hz), 5.70 (1H, ddt, J = 17.1, 10.5, 5.5 Hz), 5.09 (1H, dq, J = 17.2, 1.6 Hz), 4.96 (1H, dq, J = 10.5, 1.4 Hz), 4.75 (1H, brd, J = 7.0 Hz), 4.64 (1H, dt, J = 14.3, 7.2 Hz), 4.44 (2H, ABqdt, JAB = 13.4 Hz, Jd = 5.6 Hz, Jt = 1.4 Hz), 4.18-4.14 (1H, m), 2.60 (2H, t, J = 6.9 Hz), 1.65-1.61 (2H, m), 1.56-1.46 (2H, m), 1.26 (1H, brs), 1.14 (2H, quin, J = 7.2 Hz), 0.80 （3H, d, J = 6.1 Hz), 0.74 （3H, d, J = 6.5 Hz). ＭＳ(ESI): m/z 324.3 (10, M+H), 296.4 (100, M+H-N2)。
【０４２４】
パートＣ−Ｎ−（（１Ｅ）−５−アミノペント−１−エニル）（２Ｒ）−４−メチル−２−（プロプ−２−エニルオキシカルボニルアミノ）ペンタンアミド ギ酸塩の製造
【化１７４】
2007504242.tif 000183
パートＢの生成物（１３４ｍｇ，０．４１４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５．００ｍＬ）溶液をＰＰｈ3（２７３ｍｇ，１．０４ｍｍｏｌ）およびＨ2Ｏ（２２３μＬ，１２．４ｍｍｏｌ）で処理し、２２℃で１時間、続いて、７０℃で１時間攪拌した。イミノホスホランの加水分解の後、すべての揮発物を減圧留去し、残渣を２０ｍＬ／分の流量で、０．１％ＨＣＯ2Ｈを含む９→３６％アセトニトリルの１．５％／分グラジエントを用いて、フェノメネックスルナＣ１８カラム（２１．２×２５０ｍｍ）でＨＰＬＣにより精製した。９分で溶離する主生成物のピークを凍結乾燥し、白色固体（６９．０ｍｇ，０．２０１ｍｍｏｌ；４８．５％）を得た。1H NMR (DMSO-d6, 600MHz):δ9.91 (1H, brd, J = 9.8 Hz), 8.50 (1H, s), 7.52 (1H, d, J = 8.2 Hz), 6.66 (1H, dd, J = 14.3, 10.0 Hz), 5.91 (1H, ddt, J = 17.1, 10.6, 5.3 Hz), 5.30 (1H, dt, J = 17.2, 1.4 Hz), 5.25 (1H, dt, J = 14.2, 7.2 Hz), 5.17 (1H, brd, J = 10.5 Hz), 4.51-4.45 (2H, m), 4.07 (1H, ddd, J = 10.1, 8.2, 5.0 Hz), 2.72 (2H, dd, J = 7.5, 7.3 Hz), 2.04 (2H, q, J = 7.1 Hz), 1.66-1.62 (1H, m), 1.59 (2H, quin, J = 7.3 Hz), 1.51 (1H, ddd, J = 13.3, 10.4, 5.1 Hz), 1.39 (1H, ddd, J = 13.6, 8.9, 4.9 Hz), 0.89 （3H, d, J = 6.7 Hz), 0.87 （3H, d, J = 6.6 Hz). ＨＲＭＳ計算値 C15H28N3O3 (M+H): 298.2131. 実測値：298.2123.
【０４２５】
パートＤ−Ｎ−［（１Ｅ）−５−（アセチルアミノ）ペント−１−エニル］（２Ｒ）−４−メチル−２−（プロプ−２−エニルオキシカルボニルアミノ）ペンタンアミドの製造
【化１７５】
2007504242.tif 000184
パートＣの生成物（５６．０ｍｇ，０．１６３ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（４．００ｍＬ）をｉ−Ｐｒ2ＮＥｔ（１４２μＬ，０．８１５ｍｍｏｌ）、続いて、２２℃でＡｃ2Ｏ（７７．０μＬ，０．８１５ｍｍｏｌ）と処理した。該溶液を０．５時間攪拌し、次いで、Ｈ2Ｏおよび酢酸エチル（各４０ｍＬ）で希釈し、分液漏斗に移した。該層を分離し、水層を酢酸エチル（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を併せて、飽和ＮａＨＣＯ3溶液（２０ｍＬ）、Ｈ2Ｏ（２０ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ（２０ｍＬ）で洗浄し、次いで、乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）し、濾過し、減圧濃縮して、淡黄色の油状物（４５．０ｍｇ）を得た。この原料をさらに精製することなく次ステップに使用した。1H NMR (DMSO-d6, 600MHz):δ9.75 (1H, d, J = 9.9 Hz), 7.78 (1H, brs), 7.38 (1H, d, J = 8.2 Hz), 6.57 (1H, dd, J = 14.3, 9.9 Hz), 5.90 (1H, ddt, J = 17.1, 10.6, 5.3 Hz), 5.28 (1H, dq, J = 17.2, 1.6 Hz), 5.21 (1H, dt, J = 14.3, 7.2 Hz), 5.17 (1H, dq, J = 10.5, 1.3 Hz), 4.48-4.43 (2H, m), 4.00 (1H, ddd, J = 10.1, 8.5, 5.0 Hz), 3.00 (2H, td, J = 6.8, 6.0 Hz), 1.96 (2H, q, J = 7.0 Hz), 1.78 （3H, s), 1.63-1.56 (1H, m), 1.47 (1H, ddd, J = 13.6, 10.2, 5.1 Hz), 1.42 (2H, quin, J = 7.2 Hz), 1.35 (1H, ddd, J = 13.6, 8.8, 4.9 Hz), 0.87 （3H, d, J = 6.6 Hz), 0.85 （3H, d, J = 6.6 Hz). ＭＳ(ESI): m/z 362.4 (23.2, M+Na), 340.4 (100, M+H), 215.3 (6)。
【０４２６】
パートＥ−Ｎ−［（１Ｅ）−５−（アセチルアミノ）ペント−１−エニル］（２Ｒ）−２−アミノ−４−メチルペンタンアミド ギ酸塩の製造
【化１７６】
2007504242.tif 000185
パートＤ（４５．０ｍｇ，０．１３３ｍｍｏｌ）からの粗のアセトアミド体をアセトニトリル／Ｈ2Ｏ（３．００ｍＬ；２：１ ｖ／ｖ）で再溶解し、Ｐｄ（ＯＡｃ）2（０．６０ｍｇ，２．７μｍｏｌ；２ｍｏｌ％）、続いて２２℃で、ＴＰＰＴＳ（３．０ｍｇ，５．３μｍｏｌ；４ｍｏｌ％）およびＥｔ2ＮＨ（３５．０μＬ，０．３３８ｍｍｏｌ）で処理した。脱保護の完了は、０．５時間以内に観察された。溶液を２０ｍＬ／分の流量で、０．１％ＨＣＯ2Ｈを含む５→３５％アセトニトリルの０．８６％／分グラジエントを用いて、フェノメネックスルナＣ１８カラム（２１．２×２５０ｍｍ）に直接充填した。１７分で溶離する主生成物のピークを凍結乾燥し、白色固体（３１．０ｍｇ，０．１０３ｍｍｏｌ；６３．１％以上（２ステップ））を得た。1H NMR(C6D6, 600MHz):δ9.99 (1H, brd, J = 9.3 Hz), 8.21 (1H, s), 7.54 (1H, brs), 7.07 (1H, dd, J = 14.1, 9.9 Hz), 5.39 (1H, dt, J = 14.3, 7.3 Hz), 3.65 (1H, dd, J = 8.3, 5.9 Hz), 3.25 (2H, td, J = 6.6, 6.1 Hz), 2.04-1.99 (2H, m), 1.91 (3H, s), 1.82-1.78 (1H, m), 1.73 (1H, ddd, J = 13.6, 8.1, 5.7 Hz), 1.55 (2H, quin, J = 7.1 Hz), 1.50 (1H, ddd, J = 13.5, 8.4, 5.8 Hz), 0.90 （3H, d, J = 6.5 Hz), 0.88 （3H, d, J = 6.5 Hz).  13C NMR (C6D6, 150MHz):δ171.2, 168.8, 162.9, 123.5, 111.6, 52.8, 43.0, 38.1, 29.8, 27.0, 24.2, 22.7, 22.5, 21.5. ＨＲＭＳ計算値 C13H26N3O2 (M+H)：256.2025. 実測値：256.2016。
【０４２７】
実施例６５〜１４７
ＭＭＰ基質−ヒドラジド−Ｈｙｎｉｃコンジュゲート体の合成
実施例１０〜１８のＨｙｎｉｃコンジュゲート体を製造するために使用する手順は、実施例６５〜１４７のＭＭＰ基質−ヒドラジド−Ｈｙｎｉｃコンジュゲート体の合成に使用した。収率および純度データは、表５に示し、マススペクトルデータは、表６に示す。
表５．実施例６５〜１４７における収率および純度データ
【表３】
2007504242.tif 000186
【表４】
2007504242.tif 000187
表６．実施例６５〜１４７におけるマススペクトルデータ
【表５】
2007504242.tif 000188
【表６】
2007504242.tif 000189
【０４２８】
実施例１４８〜２３０
複合体［99mＴｃ（ＨＹＮＩＣ−ＭＭＰ基質）（トリシン）（ＴＰＰＴＳ）］の合成
実施例２７〜４４に記載された手順をこの追加の99mＴｃ複合体を製造するために使用した。これらの複合体の分析および収率データは、表７に示す。
表７．複合体［99mＴｃ（ＨＹＮＩＣ−ＭＭＰ基質）（トリシン）（ＴＰＰＴＳ）］における分析および収率データ
【表７】
2007504242.tif 000190
【表８】
2007504242.tif 000191
【０４２９】
実施例２３１
インビトロの血漿蛋白結合
パートＡ−サンプル製造
マウス、ウサギおよびヒト血漿を市販品業者（バイオロジカル スペシャルティ社（Biological Specialty Corporation）コルマール、ペンシルバニア州）から購入した。同じ業者から購入した、限外濾過／脱蛋白化したヒトの血漿は、バックグラウンド減算法による蛋白質フリーのコントロール基質として使用した。放射性ラベルした化合物（Ｔｃ−９９ｍまたはＣ−１４）を、それぞれ最終濃度が、０．６〜２．０ｕＣｉ／ｍＬまたは０．０１〜０．２ｕＣｉ／ｍＬに達するまで血漿に加えた。サンプルをボルテックスし、ロッカープラットフォームで３７℃にて、３０分間インキュベートした。化合物も脱蛋白化血漿中で製造し、非特異的な結合を決定するために使用した。
【０４３０】
パートＢ−サンプル分析
血漿または脱蛋白質化した血漿（０．０２５ｍＬ）アリコート（ｎ＝３）は、Ｔｒｉ−ｃａｒｂ（登録商標）２５００ＴＲ液体シンチレーションカウンター（パーキンエルマー社、ゲイサーズバーグ、ＭＤ）またはワラックウィザードガンマカウンター（Wallac Wizard gamma counter）(パーキンエルマー社、ボストン、ＭＡ）を用いて、濾過前の測定をするために分離容器に移した。血漿または脱蛋白質化した血漿の０．３ｍＬのアリコートをＣｅｎｔｒｉｆｒｅｅ（登録商標）のマイクロパーティションカートリッジに移し、３００００ダルトンのＭＷ分画（ｎ＝３）し、室温で２０分間、２５００×ｇで遠心分離した。遠心分離後、濾過液の０．０２５ｍＬのアリコート（ｎ＝４）を容器に移し、放射能を測定した。
【０４３１】
パートＣ−データ分析
血漿蛋白質に結合した化合物の割合を下記の式を用いて、計算した：
2007504242.tif 000192
式中：
全化合物＝限外濾過前のサンプルの０．０２５ｍＬ中の放射能（ｄｐｍ）
非結合化合物＝濾過液の０．０２５ｍＬ中の放射能（ｄｐｍ）
限外濾過／脱蛋白質化したヒト血漿に結合した化合物を計算し、血漿中でインキュベートしたすべてのサンプルからバックグラウンドを差し引いた。データは表８に示す。
【０４３２】
実施例２３２
インビトロでの血液安定性
放射性ラベルした試験化合物（Ｔｃ−９９ｍ，Ｃ−１４）を３７℃で１５分間振とうしながら、新鮮なマウスのヘパリン添加血液（０．２〜５．０ｕＣｉ／ｍＬ）でインキュベートした。血液（０．３ｍＬ）をアセトニトリル（１ｍＬ）に直接移し、化合物のエステラーゼ活性および代謝を阻害した。試験化合物も非基質安定性を評価するために１５分間、生理食塩水中でインキュベートした。サンプルを３０秒間ボルテックスし、２５００×ｇで２０分間遠心分離した。上清をきれいな管に移し、アセトニトリルを３７℃以上の加熱を妨げながら、窒素気流下、乾燥するまでエバポレートした。サンプルは、０．１％ギ酸で、０．３ｍＬに再構成した。アリコート（０．０５ｍＬ）は、放射化学検出を持つ逆相ＨＰＬＣによって化合物を分析した。データは、表８に示す。
【０４３３】
実施例２３３
生体内での血液安定性
血液サンプル（０．３ｍＬ）を放射性ラベルした試験化合物（Ｔｃ−９９ｍ，Ｃ−１４）の０．１〜７．０ｍＣｉ／ｋｇのｉ．ｖ．投与後、１５分でマウスから採取し、すぐにアセトニトリル（０．９ｍＬ）に加えた。サンプルは、３０秒間ボルテックスし、２５００×ｇで２０分間遠心分離した。上清をきれいな管に移し、アセトニトリルを３７℃以上の加熱を妨げながら、窒素気流下、乾燥するまでエバポレートした。サンプルは、０．１％ギ酸で、０．３ｍＬに再構成した。アリコート（０．０５ｍＬ）は、放射化学検出を持つ逆相ＨＰＬＣによって化合物を分析した。データは、表８に示す。
表８．実施例１８、２７〜３０、３２〜４０、および１４８〜２３０のＭＭＰ−２およびＭＭＰ−９活性、蛋白質結合、および安定性
【表９】
2007504242.tif 000193
【表１０】
2007504242.tif 000194
【表１１】
2007504242.tif 000195
【表１２】
2007504242.tif 000196
【０４３４】
実施例２３４〜２６９
ＭＭＰ基質−ヒドラジドアミンの合成
実施例６１および６２の手順を実施例２３４〜２６９のコンジュゲートしたＭＭＰ基質−ヒドラジド遊離アミンを製造するために使用した。収率および純度データは、表９に示し、マススペクトルデータは、表１０に示す。
表９．実施例２３４〜２６９についての収率および純度データ
【表１３】
2007504242.tif 000197
表１０．実施例２３４〜２６９についてのマススペクトルデータ
【表１４】
2007504242.tif 000198
【０４３５】
実施例２７０〜３０５
［14Ｃ］アセチル−ＭＭＰ基質−ヒドラジドコンジュゲート体の合成
パートＡ−［14Ｃ］酢酸ナトリウム溶液の製造
固体の５０〜６０ｍＣｉ／ｍｍｏｌの特異的な活性を持つ［１−14Ｃ］酢酸ナトリウム塩（２５０μＣｉ）をジェネラルエレクトリックヘルスケア社（旧社名アマシャムバイオサイエンス社）から入手した。［１−14Ｃ］酢酸ナトリウム塩の固体は、14Ｃ酢酸ナトリウム保存溶液を製造するために、無水アセトニトリル（２５．０ｍＬ）で溶解した。該溶液を１０分間ボルテックス混合した。アリコートは、液体シンチレーションカウンター（ＬＳＣ）法を用いて、ラジオアッセイで除去した。ＬＳＣラジオアッセイは、パーキンエルマーウルティマゴールド（登録商標）液体シンチレーション（５ｍＬ）を含む、１０ｍＬのガラスシンチレーション容器で、放射能溶液の測定したアリコートに分配することによって実施し、続いて、パッカードモデル２５００ＴＲまたは１６００ＴＲ ＬＳＣのどちらかを用いて、放射量を測定した。続いて、１０倍の希釈液は、反応で使用した溶液を製造するために、この保存溶液から製造した。各反応の前に、ＬＳＣラジオアッセイを試薬溶液に実施した。
【０４３６】
パートＢ−［14Ｃ］酢酸ナトリウムのＭＭＰ基質−ヒドラジドへの結合
ＭＭＰ基質およびエナミドのアセチル化は、ジメチルホルムアミド（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）中、周囲温度（２５℃）で、Ｏ−ベンゾトリアゾリル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ジイソプロピルエチルアミン）の溶液で、14Ｃ含有酢酸ナトリウムで、アミンのカップリングによって実施した。内容物を５ｍＬのホイートン（登録商標）（Wheaton）製円錐型の肉厚反応容器で併せて、１時間反応させた。
【０４３７】
パートＣ−脱保護および最終精製
側鎖の保護基は、下記の方法のうちの一つを用いて除去した。
方法Ａ：トリフルオロ酢酸：ジクロロメタン（５０：５０）で、室温にて１５分。
方法Ｂ：トリフルオロ酢酸：アニソール：水（９５：２．５：２．５）で、室温にて４５分。
方法Ｃ：アセトニトリル：水（２：１）中、２ｍｏｌ％のＰｄ（ＯＡｃ）2、４ｍｏｌ％のＴＰＰＴＳ、Ｅｔ2ＮＨ。
【０４３８】
粗の反応混合物をゾルバックス エクリプス（Zorbax Eclipse）ＸＤＢ Ｃ−１８ （４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）カラムで、マススペクトル（ＬＣ／ＭＳ）と連結したＨＰＬＣを用いて分析した。溶液を減圧濃縮し、粗生成物を５ｍＬ／分の流量で、０．１％トリフルオロ酢酸を含む０→６３％アセトニトリルの４．２％／分グラジエントを用いて、フェノメネックス（登録商標）ルナ Ｃ１８（２）カラム（１０ｍｍ×２５０ｍｍ）でＨＰＬＣによって精製した。生成物のフラクションを減圧濃縮し、０．１％ギ酸を含む０→６３％アセトニトリルの４．２％／分グラジエントを用いて、ゾルバックス エクリプスＸＤＢ Ｃ−１８カラム（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）で、ＬＣ／ＭＳにより分析した。放射能検出器は、ＲＣＰを確認するために使用した。純度データは、表１１に示す。
表１１．［14Ｃ］アセチル−ＭＭＰ基質−ヒドラジドコンジュゲート体についての分析およびデータ
【表１５】
2007504242.tif 000199
【０４３９】
実施例２７０〜３０５
ＭＭＰ活性、蛋白質結合、インビトロでの安定性、および生体内での安定性
２７０〜３０５の14Ｃ−ラベルしたヒドラジドコンジュゲート体を実施例４５に記載した手順を用いて、ＭＭＰ−２およびＭＭＰ−９を基質として評価した。蛋白質結合は、実施例２３１に記載した手順を用いて、測定した。インビトロおよびインビボでの安定性は、実施例２３２および２３３のそれぞれの方法によって決定した。これらのデータは、表１２に一緒に集めた。
表１２．実施例２７０〜３０５のＭＭＰ−２およびＭＭＰ−９アッセイ、蛋白質結合、および安定性
【表１６】
2007504242.tif 000200
【表１７】
2007504242.tif 000201
【０４４０】
実施例３０６〜３３１
実施例２３４〜２６９の12Ｃ代替物の合成および特徴
実施例６１および６２の手順を実施例２３４〜２６９から選択された化合物の12Ｃ代替物を製造するために使用した。収率および純度データを表１３に示し、マススペクトルデータは、表１４に示す。
表１３．実施例３０６〜３３１の収率および純度データ
【表１８】
2007504242.tif 000202
表１４．実施例３０６〜３３１のマススペクトルデータ
【表１９】
2007504242.tif 000203
【０４４１】
実施例３３２〜３４４
エナミドの合成およびＡＰＮ活性
実施例６３および６４の手順をこれらの追加のエナミドを製造するために使用した。エナミド体の構造、カップリング反応の収率およびマススペクトルデータを表１５に示す。末端アミノ酸を除去するためのアミノペプチダーゼ−Ｎ（ＡＰＮ）の能力は、実施例４６に記載された手順を用いることによって決定した。加水分解速度は、表１６に示す。
表１５．選択されたエナミド体の収率および物理データ
【表２０】
2007504242.tif 000204
【表２１】
2007504242.tif 000205
表１６．選択されたエナミド体のＡＰＮによるＮ−末端残基の加水分解
2007504242.tif 000206
ａ）ＡＰＮアッセイを３つの酵素濃度：０、６．５×１０4および１５．０×１０3Ｕで実施した。速度データは、６．５×１０4Ｕ濃度で得た。１５．０×１０3Ｕで得られた値は、括弧内に挙げた。酵素活性は、３０％ＡｃＯＨ水溶液の希釈によって中止した。すべての値は、ｎ＝２を持つ。ｂ）酵素は、基質の酸感受性のためにアセトニトリルで変性した。ｃ）３つの実施の平均。ｄ）２つの実施の平均
【０４４２】
実施例３４５−３５０
［14Ｃ］アセチル−エナミド体の合成
実施例２７０〜３０５の手順は、放射能ラベルしたエナミド体を製造するために使用した。純度データは、表１７に示し、蛋白質結合および安定性データは、表１８に示す。
表１７．［14Ｃ］アセチル−エナミド体の分析および収率データ
【表２２】
2007504242.tif 000207
表１８．選択された［Ｃ１４］ラベル化したエナミド体の蛋白質結合および安定性データ
【表２３】
2007504242.tif 000208
【０４４３】
実施例３５１
（２Ｓ）−Ｎ−［（Ｎ−｛（１Ｓ）−１−［Ｎ−（（１Ｓ）−１−｛Ｎ−［７−（［14Ｃ］アセチルアミノ）−２−オキソヘプチル］カルバモイル｝−３−メチルブチル）カルバモイル］−３−メチルブチル｝カルバモイル）メチル］−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−Ｎ−（４−アミノブチル）−４−メチルペンタンアミド トリフルオロ酢酸塩の合成
【化１７７】
2007504242.tif 000209
パートＡ−Ｎ−（７−ブロモ−６−オキソヘプチル）（フルオレン−９−イルメトキシ）カルボキシアミドの製造
【化１７８】
2007504242.tif 000210
６−［（フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニルアミノ］ヘキサノイン酸およびＮ−メチルモルホリンの無水ＴＨＦ溶液を０℃に冷却し、イソブチル クロロホルメートで処理した。混合液を窒素下で３０分攪拌し、セライトパッドで濾過した。濾過液を新たに製造したジアゾメタンのエーテル溶液に、０℃で１０分かけて加えた。生じた溶液を３時間攪拌し、過剰量のジアゾメタンを除去するために窒素のゆっくりとした気流で、溶液を泡立たせた。該溶液を３５℃以下の温度でロータリーエバポレーターにて、濃縮した。残渣をエーテルに溶解し、−２０℃に冷却し、４８％ＨＢｒ水溶液で処理した。該溶液を−２０℃で３０分間攪拌し、エーテルで希釈し、水（３回）で洗浄した。有機層を乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製し、標記化合物を得た。
【０４４４】
パートＢ−（フルオレン−９−イルメトキシ）−Ｎ−｛６−オキソ−７−［Ｎ−（オキソメチル）カルボニルアミノ］ヘプチル｝カルボキシアミドの製造
【化１７９】
2007504242.tif 000211
パートＡの生成物およびナトリウム ジホルミルアミンの無水アセトニトリル混合溶液をＴＬＣで出発原料の消失を示すまで、窒素下で室温にて攪拌した。該混合液を沈殿したＮａＢｒを除去するために濾過し、濾過液を濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）で精製し、標記化合物を得た。
【０４４５】
パートＣ−Ｎ−（７−アミノ−６−オキソヘプチル）（フルオレン−９−イルメトキシ）カルボキシアミド トリフルオロ酢酸塩の製造
【化１８０】
2007504242.tif 000212
パートＢの生成物および６Ｎ ＨＣｌの混合液を３０分間で加熱還流した。該溶液を乾燥するまで濃縮し、粗生成物を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０４４６】
パートＤ−（２Ｓ）−Ｎ−｛［Ｎ−（（１Ｓ）−１−｛Ｎ−［（１Ｓ）−１−（Ｎ−｛７−［（フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニルアミノ］−２−オキソヘプチル｝カルバモイル）−３−メチルブチル］カルバモイル｝−３−メチルブチル）カルバモイル］メチル｝−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−Ｎ−｛４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］ブチル｝−４−メチルペンタンアミドの製造
【化１８１】
2007504242.tif 000213
パートＣの生成物を実施例６１・パートＢの生成物と一緒に、無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで溶解し、ＨＢＴＵおよびジイソプロピルエチルアミンで処理した。該溶液を窒素下、室温で４時間攪拌し、減圧濃縮した。残渣を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエントを用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０４４７】
パートＥ−（２Ｓ）−Ｎ−（｛Ｎ−［（１Ｓ）−１−（Ｎ−｛（１Ｓ）−１−［Ｎ−（７−アミノ−２−オキソヘプチル）カルバモイル］−３−メチルブチル｝カルバモイル）−３−メチルブチル］カルバモイル｝メチル）−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−Ｎ−｛４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］ブチル｝−４−メチルペンタンアミド トリフルオロ酢酸塩の製造
【化１８２】
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パートＤの生成物を２０％ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで溶解し、周囲温度で２０分間攪拌した。該溶液を減圧濃縮し、高真空下で乾燥した。粗生成物を水：アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸のグラジエント条件を用いて、Ｃ１８カラムでＨＰＬＣにより精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、標記化合物を得た。
【０４４８】
パートＦ−（２Ｓ）−Ｎ−［（Ｎ−｛（１Ｓ）−１−［Ｎ−（（１Ｓ）−１−｛Ｎ−［７−（［14Ｃ］アセチルアミノ）−２−オキソヘプチル］カルバモイル｝−３−メチルブチル）カルバモイル］−３−メチルブチル｝カルバモイル）メチル］−２−［（（２Ｓ）−１−アセチルピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−Ｎ−（４−アミノブチル）−４−メチルペンタンアミド トリフルオロ酢酸塩の製造
【化１８３】
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実施例２７０〜３０５に記載した放射ラベル化する手順は、標記化合物を製造するために使用した。
【０４４９】
一般
1Ｈ ＮＭＲスペクトルは、ブルカーアバンス（Bruker Avance）ＤＲＸ（６００ＭＨｚ）分光計で記録した。化学シフトは、内部標準（ＣＤＣｌ3：δ７．２５ｐｐｍ，Ｃ6Ｄ6：δ７．１６ｐｐｍ、ＤＭＳＯ−ｄ6：δ２．５０ｐｐｍ）として、不完全な重水素化から生じる残存溶媒共鳴で、テトラメチルシランからｐｐｍで報告した。データは、下記の通りで報告する：化学シフト、積分、多重度（ｓ＝シングレット、ｄ＝ダブレット、ｔ＝トリプレット、ｑ＝カルテット、ｑｕｉｎ＝クインテット、ｂｒ＝ブロード、ｍ＝マルチプレット）、およびカップリング定数。13Ｃ ＮＭＲスペクトルは、ブルカーアバンスＤＲＸ（１５０ＭＨｚ）の完全プロトンデカップリングで、記録した。化学シフトは、内部標準（ＣＤＣｌ3：δ７７．０ｐｐｍ、Ｃ6Ｄ6：１２８．４ｐｐｍ、ＤＭＳＯ−ｄ6：３９．５ｐｐｍ）として、溶媒とテトラメチルシランからのｐｐｍで報告した。低分解能のマススペクトルは、アギレント テクノロジー（Agilent Technologies）１１００シリーズ ＬＣ／ＭＳ ＥＳＩ−ＭＳ（陽イオンモード）で実施した。高分解能マススペクトルは、イオンスペクト（IonSpect）ＦＴＭＳで実施した；ＥＳＩ−ＭＳ（陽イオンモード）。
【０４５０】
特に指示しない限り、すべての反応は、乾燥窒素の不活性な雰囲気下で、オーブン（１５０℃）および火炎乾燥したガラス製品で実施した。示した温度は、反応浴の温度を意味し、実験室の環境温度は、２２℃を意味する。無水溶媒は、アルドリッチから入手した。
【０４５１】
下記は、製造または精製前に必要な試薬を記載する（本明細書に記載した技術を含む、一般的なテキストが入手できる：Armarego, W. L. F.; Perrin, D. D. Purification of Laboratory Chemicals, 4th ed.; Butterworth-Heinemann: Oxford, U. K., 1998.）。オクト−７−イン−１−オールは、刊行物の手順により、オクト−３−イン−１−オールから製造した（Denmark, S. E.; Yang, S. -M. J. Am. Chem. Soc. 2002, 124, 2102.）。ＰＰｈ3（ヘキサン）およびイミダゾール（ＣＨ2Ｃｌ2）の両方は、再結晶によって精製した。Ｎ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミンは、使用前すぐに固体ＫＯＨから蒸留した。ヨウ化銅は、ヨウ化ナトリウムの飽和水溶液から再結晶した。ロイシンアミドは、対応するＣｂｚ保護したアミノ酸から２ステップで遊離塩基として、製造した：ａ）ＥｔＯ2ＣＣｌ、Ｅｔ3Ｎ、ＮＨ4ＯＨ；ｂ）Ｈ2、Ｐｄ／Ｃ、アリールクロロホルメート、Ｅｔ3ＮおよびＥｔ2ＮＨは、使用する前すぐに、ＣａＨ2から蒸留した。（１Ｅ）−５−アジド−１−ヨードペント−１−エンは、（１Ｅ）−８−アジド−１−ヨードオクト−１−エン（代替的な製造法、参照：Tucker, C. E.; Majid, T. N.; Knochel, P.  J. Am. Chem. Soc. 1992, 114, 3983.）に記載したのと同様の様式で、ペント−４−イン−１−オールから製造した。すべて他の試薬は、アルドリッチ、フルカまたは ストレムケミカルから入手したとおり使用した。
【０４５２】
略語
Ａｂｕ＝２−アミノ酪酸
Ａｈｐ＝２−アミノ−６−ヘプテノイン酸
Ａｈｘｈ＝６−アミノヘキサノイルヒドラジド
Ａｉｂ＝２−アミノイソ酪酸
Ａｍｂｈ＝４−（アミノメチル）ベンゾイルヒドラジド
Ｃｈａ＝シクロヘキシルアラニン
Ｃｈｇ＝シクロヘキシルグリシン
Ｄａｂ＝２，４−ジアミノ酪酸
Ｈｃｉｔ＝ホモシトルーリン
Ｈｐｒｏ＝ホモプロリン
Ｈｓｅ＝ホモセリン
Ｉｇｌ＝インダニルグリシン
Ｉｎｐ＝イソニピコチン酸
Ｏｉｃ＝オクタヒドロインドリル−２−カルボン酸
Ｐａｂｕ＝２−アミノ−４−（１’−ピリジニウム）ブタノエート
Ｐｉｖ＝ピバロイル
Ｐｒａ＝プロパルギルグリシン
Ｐｙａ＝３−（４’−ピリジル）アラニン
Ｓｍｃ＝Ｓ−メチルシステイン
Ｓｕｃ＝スクシノイル
Ｔｉｃ＝１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸
標準アミノ酸は、その一文字表記で示した。
Ａｈｘ＝６−アミノヘキサノイン酸
Ａｍｂ＝４−アミノメチル安息香酸
ＡＰＭＡ＝アミノフェニル酢酸水銀
ＢＡＩＢ＝［ビス（アセトキシ）ヨード］ベンゼン
Ｃｉｔ＝シトルーリン
Ｃｓａ＝システイン酸
ＤＩＣ＝ジイソプロピルカルボジイミド
ＥＥＤＱ＝２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン
ＧＭ６００１＝ＭＭＰ阻害剤イロマスタット
Ｈｐｈｅ＝ホモフェニルアラニン
Ｈｙｎｉｃ＝６−ヒドラジノニコチン酸
ＭＰｅｇ３＝２−［２−（メトキシエトキシ）エトキシ］酢酸
ＮＧｌｕ＝グルタミン酸のペプトイドモノマー
ＮＬｙｓ＝リジンのペプトイドモノマー
ＰＡＢＡ＝パラ−アミノベンジル アルコール
ＴＢＡＦ＝テトラブチルアンモニウム フルオリド
ＴＣＮ緩衝液＝５０ＭＭ トリス−ＨＣｌ／ｐＨ７．５、１０ｍＭ ＣａＣｌ2、１５０ｍＭ ＮａＣｌ
ＴＥＡ＝トリエチルアミン
ＴＥＭＰＯ＝２，２，６，６−テトラメチル−１−ピペリジニルオキシ フリーラジカル
Ｔｓｅ＝トリメチルシリルエチル
ＷＳＣ＝１−エチル−３−（３’−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
【０４５３】
一般
固相ペプチド合成は、アドバンスドケムテックモデルＡＣＴ９０ペプチド合成装置で実施した。
【０４５４】
キラルなアミノ酸の分析は、J.; Nicholson, G. J. Editor(s): Hodges, Robert S.; Smith, John A.らの文献：Proc. Am. Pept. Symp., 13th (1994), 241-3 に記載の手順を以下の僅かな変更で実施した。Ｎ−トリフルオロアセチル アミノ酸 メチルエステルを検出用のＥＩ−ＳＩＭ−マススペクトルを用いて、Ｃｈｉｒａｓｉｌ−Ｖａｌ（０．２５ｍｍ×２５ｍ）キャピラリーカラムを用いて、分離した。該サンプルを５０℃のカラム温度で注入し、４℃／分で２００℃までプログラムした。
【国際調査報告】
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