(57)【要約】【課題】表皮細胞におけるプロフィラグリンｍＲＮＡ発現促進作用を有し、皮膚におけるバリア機能や保湿機能に有用な新規化合物を提供する。【解決手段】  下式（Ｉ）で示される化合物、その塩またはそれらの溶媒和物：【化１】2019112362.tif 000012【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下式（Ｉ）で示される化合物、その塩またはそれらの溶媒和物：
【化１】
2019112362.tif 000010
【請求項２】
上記（Ｉ）で示される化合物が、下式（II）または（III）で示される立体異性体のいずれか少なくとも１つである、請求項１に記載する化合物、その塩またはそれらの溶媒和物：
【化２】
2019112362.tif 000011
【請求項３】
請求項１または２に記載する化合物を含む組成物。
【請求項４】
飲食物、医薬品、医薬部外品、または化粧品である、請求項３に記載する組成物。
【請求項５】
プロフィラグリン発現促進作用を有する請求項３または４に記載する組成物。
【請求項６】
フィラグリン産生促進用組成物である請求項３〜５のいずれかに記載する組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は新規化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ジンコウ（沈香）は、ジンチョウゲ科植物（樹木）の樹脂を含む木材を乾燥加工したものである。ジンチョウゲ科樹木としては、ジンチョウゲ科アクイラリア（Aquilaria）属、ギリノプス（Gyrinops）属、及びラミン（Gonystylus）属の樹木を挙げることができる。このなかでも、アクイラリア属樹木は、インドおよび中国からマレー諸島に約１５種が分布するとされているが、そのうち、アクイラリア・アガローチャ（A.agallocha）、アクイラリア・クラスナ（A.crassna）、アクイラリア・マラセニス（A.malaccennis）、アクイラリア・シネンシス（A.sinensis）、アクイラリア・ミクロカルパ（A.microcarpa）、アクイラリア・モシュコフスキー（A.moszkowskii）、アクイラリア・フィラリア（A.filaria）等から沈香が採れるとされている。
【０００３】
これらのジンチョウゲ科植物（樹木）は、樹幹が風雨、病気、害虫等により傷害を受けると、それに応答し、傷害部位において樹脂、具体的にはジンコウの香気成分であるセスキテルペン類やフェニルエチルクロモン誘導体等を含む樹脂が生成蓄積される。こうした樹脂が生成蓄積した樹木が倒れ、土中で朽ちると、当該樹脂が蓄積した部分は分解されずに残り、それが天然のジンコウとなる。すなわち、ジンコウは、様々な外的要因によって生成されるものであるため、天然のジンコウは極めて貴重なものになっている。また、天然のジンコウの生産には、微生物の感染が関わっているとも言われ、植物の病原菌応答シグナルであるサリチル酸の生理作用が沈香成分の生成蓄積に影響を与えているとも言われている。こうした樹脂生産に関与する微生物としては、いわゆるコウジカビであるアスペルギルス（Aspergillus）属に属する真菌類が挙げられているが、その一方で、必ずしも特定の細菌が必要であるというわけではない、との報告もある。
【０００４】
こうしたジンコウは、長い間薬剤や香料として使用されている。例えば、漢方では、従来より鎮静、健胃、通気、消化不良、食欲不振、嘔吐、気管支喘息などに使用されている。またジンコウの薬理活性として、抗鬱作用（非特許文献１〜３）、記憶障害軽減作用（非特許文献４）、神経弛緩作用（睡眠延長作用、体温低下作用、鎮痛作用および鎮静作用）（非特許文献５）、抗けいれん作用（非特許文献６）、抗炎症作用（非特許文献７〜８）、抗がん作用、抗酸化作用、及び抗菌作用（以上、非特許文献９）、発がん抑制作用（非特許文献１０）、NO産生阻害阻害作用（非特許文献１１）、及び抗アレルギー作用（非特許文献１２）等が知られている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】細胞  Vol.45 No.3 Page.146-151 (2013.03.20)
【非特許文献２】J Nat Prod   Vol.76 No.2 Page.216-222 (2013.02)
【非特許文献３】生薬学雑誌 Vol.63 No.2 Page.39-45 (2009.08.20)
【非特許文献４】漢方の臨床 Vol.51 No.12 Page.1681-1688 (2004.12.25)
【非特許文献５】Planta Med Vol.62 No.1 Page.2-6 (1996.02)
【非特許文献６】日本薬学会年会要旨集 Vol.111th No.Pt 2 Page.131 (1991.03)
【非特許文献７】Molecules (Web)   Vol.20 No.11 Page.20912-20925 (WEB ONLY) (2015.11)
【非特許文献８】J Nat Med   Vol.65 No.1 Page.194-197 (2011)
【非特許文献９】Molecules (Web) Vol.20 No.7 Page.11808-11829 (WEB ONLY) (2015.07)
【非特許文献１０】日本薬学会年会要旨集(CD-ROM) Vol.136th Page.ROMBUNNO.29Q-PM20 (2016)
【非特許文献１１】Eur J Org Chem Vol.2012 No.27 Page.5389-5397 (2012.09)
【非特許文献１２】Yakhak Hoeji Vol.41 No.2 Page.255-259 (1997.04)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、前述するジンコウ（沈香）に含まれる新規化合物を提供することを課題とする。具体的には、生体に有用な生理活性を有する新規化合物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記課題を解決すべく鋭意検討していたところ、数あるジンチョウゲ科植物のうち、ジンチョウゲ科アクイラリア属に属するアクイラリア・フィラリア（Aquilaria filaria Merrill）に由来するジンコウ（沈香）から抽出して調製した画分に、表皮細胞のプロフィラグリンの発現を促進する作用があることを見出し、その活性本体を確認したところ、文献未公開の新規化合物であることを確認した。
【０００８】
本発明はかかる知見に基づいて完成したものであり、下式（Ｉ）で示される化合物、その塩またはそれらの溶媒和物を提供する：
【化１】
2019112362.tif 000002
【０００９】
また本発明は、当該化合物を含む組成物、特に飲食物、医薬品、医薬部外品、または化粧品を提供する。当該組成物には、上記化合物を高含有するように調整された精製物も含まれる。但し、ジンコウそのものや単なる粗製物（ジンコウの破砕物、搾汁、公知の溶媒抽出物）は含まれない。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の化合物は、文献未公開の新規化合物である。本発明の化合物は、表皮細胞においてフィラグリンの産生を促進する作用を有する。具体的には、表皮細胞のプロフィラグリンの発現を促進することで、フィラグリン産生を促進することができるため、フィラグリンの量の低下または変異等が一因となって生じる症状や疾患の予防又は改善（治療）に有用である。つまり、本発明の化合物は、当該症状または疾患の予防又は改善用組成物（治療用組成物）の有効成分として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】実施例１において、ジンコウから本発明の化合物を単離調製する際に使用した処理工程を示す図である。
【図２】上記ＨＰＬＣクロマトグラムの保持時間27分のピーク画分のＵＶスペクトルを示す。
【図３】本発明の化合物の１Ｈ−ＮＭＲを示す。
【図４】本発明の化合物の１３Ｃ−ＮＭＲを示す。
【図５】本発明の化合物のＨＭＱＣ解析結果を示す。
【図６】本発明の化合物の１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹ解析結果を示す。
【図７】本発明の化合物のＨＭＢＣ解析結果を示す。
【図８】1H-1H COSYおよびHMBC相関などの解析結果から帰属させた本発明の化合物の構造を示す。
【図９】本発明の化合物の6’と8’位のOH基の配位を、NOESYの相関で確認した結果を示す。
【図１０】本発明の化合物（1μg/ml、10μg/ml）の存在下または非存在下（コントロール）で、表皮細胞を培養し、プロフィラグリンｍＲＮＡの発現量を測定した結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、下式（Ｉ）で示される化合物（以下、「化合物Ｉ」とも称する）、その塩、並びにそれらの溶媒和物である：
【化２】
2019112362.tif 000003
【００１３】
上記式（Ｉ）で示される化合物には、下式（II）及び(III)で示される立体異性体（以下、それぞれ「化合物II」及び「化合物III」とも称する）の少なくとも１つが含まれる。
【化３】
2019112362.tif 000004
【００１４】
【化４】
2019112362.tif 000005
【００１５】
本発明が対象とする化合物Ｉは、上記立体異性体（化合物IIと化合物III）の混合物の状態であってもよい。以下、本明細書において、「化合物Ｉ」という用語は、化合物II及び化合物IIIを包括した総称として使用される。
【００１６】
化合物Ｉの塩は、制限されないものの、薬学的に許容される塩であることが好ましく、かかる薬学的に許容される塩としては、ヒトを含む生体に投与可能な無機酸、有機酸または無機塩基から形成された酸付加塩または塩基付加塩を挙げることができる。具体的には、酸付加塩を形成する無機酸としては、制限されないものの、塩酸、塩化水素酸などのハロゲン酸または硫酸；有機酸としては酢酸、乳酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロン酸、フマル酸、コハク酸、アジピン酸、プロピオン酸、グリコール酸、ヒドロキシブチル酸、サリチル酸、酒石酸、グルタル酸、及びクエン酸等のカルボン酸；リン酸や２−又は３−グリセロリン酸等のホスホン酸；並びにメタンスルホン酸などのスルホン酸を例示することができる。塩基付加塩を形成する塩基としては、制限されないものの、アルカリ金属（ナトリウム、カリウム、リチウム）やアルカリ土類金属（マグネシウム、カルシウム）の水酸化物、及びアンモニア水酸化物（テトラメチルアンモニウム水酸化物、第４アンモニウム水酸化物）を挙げることができる。また、アンモニア、アルキルアミン、ヒドロキシアルキルアミン、Ｎ−メチルグルカミン、ベンジルアミン、ピペリジン、及びピロリジン等の薬学的に許容されるアミンで形成される塩も、本発明の化合物の塩に含まれる。
【００１７】
化合物Ｉまたはその塩は、溶媒和物の状態であってもよい。本発明の化合物Ｉまたはその塩と溶媒和物を形成し得る溶媒としては、限定するものではないが、例えば、メタノール、エタノール、2-プロパノール（イソプロピルアルコール）、ジメチルスルホキシド（DMSO）、酢酸、エタノールアミン若しくは酢酸エチルのような有機溶媒、又は水を挙げることができる。
【００１８】
化合物Ｉは、化学合成によっても製造することができるが、他の方法として、後述する実施例に記載するように、ジンチョウゲ科アクイラリア属フィラリア（学名：Aquilaria filaria Merrill）に由来するジンコウ（沈香）の抽出物から単離することもできる。
【００１９】
化合物Ｉの単離に使用されるジンコウ（沈香）は、前述するようにアクイラリア・フィラリア（A.filaria Merrill）の材の樹脂が沈着した部分である。これは商業的に入手することができ、商取引上、１級から６級までの等級がある。香木として最も品質の良い１級品は樹脂だけからなる塊であり、２級品は主に樹脂からなり一部分に材が見られ、等級番号が多くなるほど品質は低下する。なお、本発明の化合物Ｉは、実施例に示すように４級のジンコウ（沈香）から単離されたものである。
【００２０】
化合物Ｉの単離材料として使用される「ジンコウ抽出物」は、上記ジンコウから、各種の溶媒を用いて、化合物Ｉを含む特定成分を抽出した抽出物である。ここで使用される抽出溶媒としては、極性溶媒及び非極性溶媒のいずれをも使用することもでき、これらを混合して使用することもできる。抽出溶媒としては、水：メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールなどの炭素数１〜１２の分岐を有していても良い一価アルコール：エチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコールなどの多価アルコール：アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン：酢酸メチル、酢酸エチルなどのエステル：テトラヒドロフラン、ジエチルエーテルなどのエーテル：ポリエチレングリコールなどのポリエーテル：ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素などのハロゲン化炭素：ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテルなどの炭化水素：ベンゼン、トルエンなどの芳香族炭化水素：ピリジン類、超臨界二酸化炭素、油脂、ワックスその他のオイル類を挙げることができる。これらは単独でも使用しても、二種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００２１】
化合物Ｉは、親油性を有する成分であるため、好適には当該化合物が溶解しうる親油性溶媒を用いて抽出し、この抽出物を精製することで、効率的に上記化合物Ｉを単離することができる。このような化合物が溶解しうる親油性溶媒としては、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン：酢酸エチルなどのエステル：テトラヒドロフラン、ジエチルエーテルなどのエーテル：ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素などのハロゲン化炭素等の中極性の非プロトン溶媒を挙げることができる。かかる親油性溶媒による抽出液は、溶媒を除去して親油性画分として使用できるが、親油性溶媒抽出液を水洗し、次いで親油性溶媒を除去して親油性画分としてもよい。
【００２２】
なお、上記の親油性溶媒に代えて、親油性溶媒１００質量部に対し、水：メタノールやエタノールなどの炭素数１〜３の一価低級アルコール：エチレングリコールなどの多価アルコール：これらの混合物、その他の親水性溶媒を６０〜１００容量部の範囲で添加した親油性溶媒−親水性溶媒混合液で抽出することもできる。親油性溶媒と親水性溶媒とは混合後の静置によって二層に分離する場合があり、このような親油性溶媒と親水性溶媒とを組み合わせることで、目的物を親油性溶媒層に移行させると共にジンコウに含まれる水溶性成分を親水性溶媒層に移行させることができる（液液分配）。このような親油性溶媒として酢酸エチルがあり、親水性溶媒として水やメタノールがある。酢酸エチルと水を４：５(容量比）で混合した混合液は、抽出後に放置すると酢酸エチル層と水層とに分離するため、目的成分を酢酸エチル層に回収すると共に、水溶性成分を水層に移行させ、親油性である目的成分と水溶性成分との分離を簡便に行うことができる。
【００２３】
より詳細には、後述する実施例に示すように、ジンコウから下記の操作に従って酢酸エチルによる抽出画分（AcOEt画分）を取得することで、「ジンコウ抽出物」を調製することができる。なお、下記操作のうち、特に言及しない操作は、室温で実施される。
（1）まずジンコウ（乾燥物）の細切、破砕または粉砕物を、室温で一晩メタノールに浸漬し抽出する（冷浸抽出）。得られた冷浸抽出液はエバポレーターなどで濃縮乾固し、ジンコウMeOH抽出物とする。
（2）これを、分液ロートを用いて、酢酸エチル(AcOEt)と水の混合溶媒（酢酸エチル：水＝４：５（容量比））に分配し（液液分配）、酢酸エチルを２回換えて抽出して、AcOEt画分を取得する。
【００２４】
上記方法で取得されるジンコウ抽出物（AcOEt画分）に化合物Ｉが含まれている。かかるジンコウ抽出物から化合物Ｉを単離する方法としては、制限されないものの、例えば化合物Ｉの分子量（549）に基づいてゲルろ過ないし分子篩クロマトグラフィーを用いて単離する方法、極性や溶媒への溶解度の違いに基づいて吸着カラムクロマトグラフィー（順相または逆相カラムクロマトグラフィー）を用いて単離する方法、その他、活性炭素処理等により夾雑物を除去するなどの方法を例示することができ、これらを単独で、またはこれらを組み合わせて行うことができる。また、化合物Ｉの表皮細胞におけるプロフィラグリン発現促進作用を指標として、単離精製することもできる。前記ジンコウ抽出物（AcOEt画分）から化合物Ｉを単離取得する具体的な方法については、実施例において説明する。
【００２５】
化合物Ｉの塩及びその溶媒和は、上記方法で調製した化合物Ｉを原料として定法に従って製造することができる。
【００２６】
化合物Ｉは、後述する実施例２に示すように、表皮細胞におけるプロフィラグリンｍＲＮＡの発現を促進する作用を有する。このため、化合物Ｉは、表皮細胞におけるフィラグリン産生を促進することができる。フィラグリンは皮膚において最終的にはＮＭＦと呼ばれるアミノ酸含有物群に分解されるため、化合物Ｉによれば、皮膚のバリア機能を改善したり、皮膚の保湿機能を保つことが可能である。また、皮膚保湿機能を保持することで、乾燥肌、しわ、肌荒れ、またはアトピー性皮膚炎を予防し、または改善することが可能である。また、フィラグリン遺伝子の変異はアトピー性疾患の発症要因とされている（秋山真志、皮膚の科学、第10巻・増刊16号、2011年10月）。このため、化合物Ｉは、正常なフィラグリンの産生を促進することでアトピー性疾患の改善または予防に役立つと考えられる。こうした目的または効果を期待して使用される本発明の化合物Ｉの投与経路は、外用組成物（外用医薬品、外用医薬部外品、化粧品）として塗布などの経皮投与のほか、サプリメントなどの飲食品、または経口用医薬品若しくは経口医薬部外品として口腔内投与や舌下投与などを含む経口投与を挙げることができる。
【００２７】
化粧品の剤型としては、軟膏、液剤、スプレー、硬膏、油脂、粉末剤などがある。美白化粧品としては、化粧水、乳液、クリーム、パックなどの基礎化粧品、化粧下地、日焼け止め、ファンデーション、おしろいなどのメーキャップ化粧品、シャンプー、洗顔料などの洗浄剤がある。これら化粧品に対する化合物Ｉの配合量は、基材によって適宜選択しうるが、０．００００１％〜２０質量％、好ましくは０．０００１％〜５質量％、より好ましくは０．００１〜３質量％である。
【００２８】
化粧品を構成する他の成分は、通常の化粧品、医薬部外品、医薬品などの化粧品に配合される成分を剤型その他に応じて配合することができる。このような成分としては、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸プロピル、フェノキシエタノール、チモールなどの保存料、亜硫酸水素ナトリウム、アスコルビン酸、トコフェロール、ジブチルヒドロキシトルエン、エデト酸ナトリウム水和物、ベンゾトリアゾールなどの抗酸化剤、モノステアリン酸グリセリン、モノステアリン酸ソルビタン、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０、ポリソルベート６０などの界面活性剤、クエン酸水和物、クエン酸ナトリウム水和物、乳酸、ジイソプロパノールアミン、酢酸、酢酸ナトリウム水和物などのｐＨ調製剤、保湿剤、増粘剤、無機充填剤、着色料、香料、紫外線吸収剤、細胞賦活剤、各種皮膚栄養成分などがある。その他基材などを適宜添加し、外用液剤、外用固形剤、スプレー剤、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、貼付剤、その他のいずれにも調製することができる。
【００２９】
本発明において飲食品は、経口的に摂取可能なものであればよく、その形態に特に制限されない。液状、半液体状、固体状のいずれであってもよく、飲料のような形態も包含する。また飲食品には、一般の飲食品（生鮮食品、加工食品）のほか、機能性食品も包含される。また本発明が対象とする飲食品には、病者用食品、妊産婦・授乳婦用食品、乳児用調製粉乳、高齢者用食品等の特別用途食品が含まれる。
【００３０】
機能性食品は、生体に対して一定の機能性を有する食品を意味し、例えば、特定保健用食品（条件付きトクホ[特定保健用食品]を含む）、機能性表示食品および栄養機能食品を含む保健機能食品；特別用途食品；栄養補助食品；健康補助食品；サプリメント（例えば、錠剤、被覆錠、糖衣錠、カプセルおよび液剤などの各種剤形のもの）および美容食品（例えばダイエット食品）などのいわゆる健康食品全般を包含する。本発明の機能性食品はまた、コーデックス（FAO/WHO合同食品規格委員会）の食品規格に基づく健康強調表示（Health claim）が適用される健康食品を包含する。
【００３１】
本発明において医薬品または医薬部外品は、化合物Ｉまたはその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和を有効成分として含み、必要により、その形態に応じた担体、賦形剤、結合剤及び／または希釈剤等を含有する。これらは、経口または非経口的に投与することが可能であり、経口投与する場合には、顆粒剤、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、シロップ剤等の形態を有することができる。また、非経口用の投与形態としては、注射剤、点滴剤、経鼻投与製剤等の外用剤等が挙げられるが、これらに限られるものではない。非経口の場合、その用量の一例として、１回当たり、皮膚１ｃｍ2当たり、本発明の化合物Ｉが０．１〜２０ｍｇ程度となる量で、１日１〜数回程度の頻度が挙げられる。
【実施例】
【００３２】
次に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、これらの実施例は何ら本発明を制限するものではない。
【００３３】
実施例１  化合物Ｉの調製
ジンチョウゲ科アクイラリア・フィラリア（A.filaria Merrill）に由来するジンコウ（沈香）（等級４）を用いてジンコウ抽出物を調製し、当該ジンコウ抽出物から化合物Ｉを単離した（図１参照）。なお、上記ジンコウとして、高砂薬業株式会社から販売されている「ジンコウ刻み生薬」を用いた。また下記の調製操作は、特に記載しない限り、室温条件で行った。
【００３４】
（１）ジンコウ抽出物（AcOEt画分）の調製（図１参照）
（i）ジンコウ刻み生薬（高砂薬業）50 gを、1000 mL の100％メタノールに1晩浸漬して抽出を行った。抽出後、濾紙で濾過を行い、残渣に再び1000 mL の100％メタノールを添加し、これに同条件下で1晩浸漬して抽出を行った（合計3回の抽出処理）。３回の抽出処理で得られた抽出液を一緒にして、エバポレーターで濃縮乾固し、ジンコウMeOH抽出エキス3.7ｇを得た。
【００３５】
（ii）上記で得られたジンコウMeOH抽出エキスを、１L容量の分液ロートを用いて、酢酸エチル（AcOEt）(400 mL)と水(500 mL)の混合液で分配抽出した。静置して二層になったAcOEt層を回収し、水層に再び酢酸エチル(400 mL)を加えて分配抽出した（合計3回の分配抽出処理）。再び静置して二層になったAcOEt層を回収し、先に回収しておいたAcOEt層を一緒にして、濾紙を用いて濾過し、不溶物（不溶性画分）を除去した。回収したAcOEt層をエバポレーターで濃縮乾固してAcOEt画分（2.7g）とした。以下、これをジンコウ抽出物として、これを材料として化合物Ｉを単離した。
【００３６】
（２）順相カラムクロマトフィー（分離１）
上記で調製したジンコウ抽出物（AcOEt画分）2.7ｇを、充分量のメタノールに溶解して（検体）、順相担体（SiO2）に吸着させ、下記の分離条件を有する順相オープンカラムクロマトグラフィーの上部に供した。なお、下記担体を充填したオープンカラムには事前に酢酸エチル：n- Hexane＝9：1（容量比）の溶液を流して平衡化しておいた。
【００３７】
［分離条件１］
カラム：GLサイエンス（内径45mm、長さ500mm）
充填担体：Silica Gel 60（ナカライテスク社製）（内径45mm、長さ300mm）
溶出溶媒：AcOEt：n-Hexane＝9:1（容量比）2000mL
【００３８】
上記担体を充填しAcOEt：n-Hexane＝9:1の溶液で平衡化したオープンカラムに検体を供した後、溶出溶媒として同溶液を2000mLを流し、カラムからの溶出液を100mLずつ分取し、16の画分（Fr.1〜Fr.16）とした。各フラクションにおける収量は、Fr.1〜9（総量）が1198mg、Fr.10〜12（総量）が82mg、Fr.13〜14（総量）が37mg、Fr.15〜16（総量）が801mgであった。
【００３９】
（３）Fr.10〜12に含まれている化合物の単離
上記で調製したFr.10〜12（82mg）を100％メタノールに溶解し、下記条件のＨＰＬＣに供した。
【００４０】
［ＨＰＬＣ条件］
固定相（カラム）：COSMOSIL 5C8-MS(内径20 mm、長さ250 mm) (ナカライテスク)
移動相（溶離液）：80％MeOH水溶液(40 min)  アイソクラティック溶出
流速：5 mL/min
送液ポンプ：LC-10AD(SHIMADZU)
検出器：SPD-M10A(SHIMADZU)
システムコントローラー：SCL-10A(SHIMADZU)
ソフトウェア：LC-Solution(SHIMADZU)
デガッサー：DGU-14A(SHIMADZU)
【００４１】
その結果、保持時間27分にメインピークを有するクロマトグラムが得られた。当該保持時間27分のピーク画分を分取し（乾燥重量7.6mg）、そのＵＶスペクトルを測定したところ、図２に示すように、229nm、248nm、及び330nmをそれぞれ中心とする付近に極大吸収波長を有する化合物であることが確認された。
【００４２】
（４）化合物の構造決定
上記で単離した化合物はHR-ESI/TOF/MSでは、m/z 571.1734 [M+Na]+(Calcd. 571.1733)に疑似分子イオンピークを示すことから、分子式C34H28O7 (不飽和度:21)であると推定された。1H-NMRスペクトル（図３）では、オルトカップリングするプロトンシグナル [δH 7.08 (1H, d, J = 9.5), 7.27 (1H, overlap)] 、7.14-7.27に10H分のプロトンシグナルが存在することから、2個の一置換ベンゼンの存在が推定された。さらに4個のメチン [δH 4.37 (1H, dd, J = 2.0, 9.3), 4.46 (1H, brq), 4.69 (1H, m), 6.17 (1H, brt)] と思われるシグナルが観測された。
【００４３】
13C-NMRスペクトル（図４）およびDEPTスペクトルでは、8個の4級炭素 (δC: 120.5, 121.0, 121.1, 148.9, 150.9, 161.7, 165.9, 167.3), 18個のメチン (δC: 29.5, 63.0, 68.2, 73.7, 110.2, 112.7, 118.1, 121.4, 128.4―126.2), 4個のメチレン (δC: 31.9×2, 33.9, 34.2)、2個のカルボニル基 (δC: 177.1, 178.1) が観測された。またHMQCスペクトル（図５）を解析した結果、表1のような炭素と水素の繋がりが推定された。さらに1H-1H COSY（図６）およびHMBC（図７）の相関を詳細に検討したところ、表１や図８に示す相関が認められた。これらの結果により本化合物を決定した。表１の下に、当該化合物の構造とその位置番号を示す。
【表１】
2019112362.tif 000006
【化５】
2019112362.tif 000007
【００４４】
また図９に示すように、NOESYの相関で、本発明の化合物Ｉの水酸基は同じ方向にあることが確認された。このことから、本発明の化合物Ｉは下式(II)または(III)に示す立体構造を有すると考えられる。
【００４５】
【化６】
2019112362.tif 000008
【００４６】
【化７】
2019112362.tif 000009
【００４７】
実施例２  フィラグリン産生促進作用
本発明の化合物Ｉの作用を確認するために以下の実験を行った。
【００４８】
１．実験材料
（細胞）
本試験例において細胞は、下記の表皮モデル細胞を使用した。
（Ａ）表皮モデル細胞（ＨａＣａＴ細胞）
表皮モデル細胞として、ＨａＣａＴ細胞（ヒト表皮角化細胞（Deutsches  Krebsforschungszentrum,Stiftung  desoffentlichen Rechts(DKFZ), Heidelberg, Germany)）を使用した。
【００４９】
（培地）
Ｄ−ＭＥＭ／Ｈａｍ’ｓ  Ｆ−１２（和光純薬工業株式会社）／１０％ＦＣＳ添加
【００５０】
（被験物質）
実施例１で単離した化合物（本発明の化合物Ｉ）
【００５１】
２．実験方法
（１）表皮モデル細胞におけるプロフィラグリンｍＲＮＡの発現量の測定
１２ウェルプレートの各ウェルに表皮モデル細胞を４×１０5個／ウェルの濃度で播種し、３７℃、５％ＣＯ2条件下で培養した。翌日に、ウェルに本化合物を１μｇ／ｍＬまたは１０μｇ／ｍＬとなるように添加し、３７℃、５％ＣＯ2条件下で培養した。その翌日に、表皮モデル細胞を回収し、RNeasy mini kit（株式会社キアゲン製）を用いて全ＲＮＡを抽出した。その後、ReverTra  Ace（東洋紡株式会社製）を用いて逆転写を行い、ｃＤＮＡを合成した。次いで、MyGo Pro（アイティ−アイエスライフサイエンス株式会社製）を用いて、qRT-PCRにてプロフィラグリン遺伝子の増幅を行った。β−アクチンを内部標準として使用し、プロフィラグリンｍＲＮＡの発現量を標準化した。このｍＲＮＡの発現量を、本化合物を添加しなかった以外は前記と同様にして確認したｍＲＮＡの発現量（コントロール値）で除算した。
【００５２】
３．実験結果
得られた結果を図１０に示す。図１０から分かるように、表皮モデル細胞において、本化合物を添加した条件で、フィラグリンの前駆体であるプロフィラグリンｍＲＮＡの発現量の増加が認められた。この結果から、化合物Ｉは、表皮細胞においてプロフィラグリンｍＲＮＡの発現量を増大させる作用があり、その結果、フィラグリンの産生を促進することが示された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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