(57)【要約】  本発明は、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病(Ｂ-ＣＬＬ)、Ｂ細胞前リンパ球性白血病(Ｂ-ＰＬＬ)又はＢ細胞リンパ腫の治療のための医薬の製造における、ＬＴＢ４の生合成及び／又は機能のインヒビターの使用に関する。好ましくは、ＬＴＢ４の生合成及び／又は機能のインヒビターは、５-ＬＯのインヒビターのＢＷＡ４Ｃ、又はＦＬＡＰのインヒビターのＭＫ-８８６である。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｂ-ＣＬＬ、Ｂ-ＰＬＬ又はＢ細胞リンパ腫の治療方法において、該治療を必要とする患者に、ＬＴＢ４の生合成及び／又は機能のインヒビターを投与することを含んでなる方法。
【請求項２】
ＬＴＢ４の生合成及び／又は機能のインヒビターが、患者に投与される唯一の癌化学療法剤である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＬＴＢ４の機能のインヒビターが、ＢＬＴ１レセプターのアンタゴニストである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
ＬＴＢ４の生合成のインヒビターが、５-ＬＯのインヒビター、ＦＬＡＰのインヒビター、及び／又はＬＴＡ４加水分解酵素のインヒビターである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項５】
５-ＬＯのインヒビター又はＦＬＡＰのインヒビターを患者に投与することを含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項６】
５-ＬＯのインヒビターがＢＷＡ４Ｃであり、又はＦＬＡＰのインヒビターがＭＫ-８８６である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
Ｂ-ＣＬＬ、Ｂ-ＰＬＬ又はＢ細胞リンパ腫の治療方法において、該治療を必要とする患者に、ＬＴＢ４の生合成及び／又は機能のインヒビターを投与することを含み、該患者には、異なる作用機序を有する癌化学療法剤が投与されている方法。
【請求項８】
患者がヒトである、請求項１ないし７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
(Ａ)ＬＴＢ４の生合成及び／又は機能のインヒビター、又はその薬学的に許容可能な誘導体と；
(Ｂ)異なる作用機序を有する癌化学療法剤、又はその薬学的に許容可能な誘導体；
を含有し、各成分(Ａ)及び(Ｂ)が薬学的に許容可能なアジュバント、希釈液又は担体と混合されて製剤化される組合せ品。
【請求項１０】
Ｂ-ＣＬＬ、Ｂ-ＰＬＬ又はＢ細胞リンパ腫を治療するための医薬の調製における、ＬＴＢ４の生合成及び／又は機能のインヒビターの使用。
【請求項１１】
ＬＴＢ４の生合成及び／又は機能のインヒビターが、医薬の調製に使用される唯一の癌化学療法剤である、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
異なる作用機序を有する癌化学療法剤が投与されている患者のＢ-ＣＬＬ、Ｂ-ＰＬＬ又はＢ細胞リンパ腫を治療するための医薬の調製における、ＬＴＢ４の生合成及び／又は機能のインヒビターの使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
(発明の分野)
この発明は、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病(Ｂ-ＣＬＬ)、Ｂ細胞前リンパ球性白血病(Ｂ-ＰＬＬ)又はＢ細胞リンパ腫(非ホジキンリンパ腫、ＮＨＬ)の治療方法に関するもので、該方法は、ＬＴＢ４の生合成及び／又は機能のインヒビター(例えば、ロイコトリエンＢ４(ＬＴＢ４)の生合成のインヒビター及び／又はＢＬＴ１レセプターのアンタゴニスト)を利用するものである。
【０００２】
(背景及び従来技術)
ロイコトリエン類(ＬＴｓ)は、アラキドン酸の生物学的に活性な代謝産物である。ホスホリパーゼＡ２(E.C.3.1.1.4)によりひとたび遊離されると、アラキドン酸は、プロスタグランジン類、トロンボキサン類及びロイコトリエン類に転換され得る。ロイコトリエン生合成における重要な酵素は５-リポキシゲナーゼ(５-ＬＯ)(E.C.1.13.11.34)であり、これは２工程反応で、アラキドン酸からのロイコトリエンＡ４(ＬＴＡ４)の生成を触媒する。さらに、ＬＴＡ４は、ＬＴＡ４加水分解酵素(E.C.3.3.2.6)により触媒される反応で、ロイコトリエンＢ４(ＬＴＢ４)に代謝され得る。細胞内でのロイコトリエンの生合成は、アラキドン酸に結合し、５-リポキシゲナーゼ反応を容易にする膜結合タンパク質の５-リポキシゲナーゼ活性化タンパク質(ＦＬＡＰ)に依存する。
【０００３】
ほとんど全てのタイプの細胞により産生されるプロスタグランジン類と対照的に、アラキドン酸からのロイコトリエン類の生成は、ヒトの体内では数種の細胞タイプに限られている。ロイコトリエン類の生合成は、主として骨髄細胞及びＢ-リンパ球で生じる。ＬＴＢ４の産生及び骨髄細胞に対するこの化合物の生物学的効果は、よく特徴付けされており、ＬＴＢ４は非常に低濃度で好中球の輸送及び活性化を刺激する。
しかしながら、Ｂリンパ球によるロイコトリエン類の生合成及び機能は、あまり特徴付けされていない。骨髄細胞とは対照的に、無傷のＢ細胞は、カルシウムイオノフォアＡ２３１８７のみを用いた暴露後にはＬＴＢ４を生成しない。無傷のＢ細胞におけるロイコトリエン生合成の活性化のメカニズムは明らかではないが、細胞の酸化還元状態がロイコトリエン類の生合成のための重要なパラメータであるという多くの証拠が存在する。さらに、ｐ３８分裂促進因子活性化プロテインキナーゼがまたＢ細胞中でのストレス誘発性ロイコトリエン合成に関与していると思われる。
【０００４】
Ｔリンパ球が５-リポキシゲナーゼを含み、ロイコトリエン類を生成し得ることを裏付ける説得力のある報告はない。しかしながら、Ｔリンパ球はＦＬＡＰを発現するが、Ｔ細胞中でのこのタンパク質の機能は知られていない。
【０００５】
ロイコトリエン類に対するＬＴＢ４の作用は、好中球及び単球で発現される高親和性のＧ共役型ＬＴＢ４レセプターのＢＬＴ１により主に媒介される。ＢＬＴ１はまた活性化Ｔリンパ球、細胞傷害性ＣＤ８＋細胞及びＣＤ４＋細胞の双方において発現し、また末梢のヒト非活性化Ｂリンパ球では弱く発現する。低い基質親和性と広い組織分布を有する第２のＬＴＢ４レセプターもまた特徴付けされている。
【０００６】
ＬＴＢ４は免疫調節物質であり、この化合物は、Ｂ細胞、Ｔ細胞及びＮＫ細胞を活性化させる(Int. J. Immunopharmacol. 14, 441 (1992)を参照)。ＬＴＢ４は、扁桃線Ｂリンパ球における活性化、増殖及び抗体生成を高め(J. Immunol. 143, 1996 (1989); Cell Immunol. 156, 124 (1994)；及びJ. Immunol. 145, 3406 (1990)を参照)、種々のＴ-細胞機能を刺激する。ＬＴＢ４はＴリンパ球の活性化にとって非常に強力な走化性化合物であり、ＢＬＴ１-レセプター欠損マウスは、活性化したＣＤ８＋細胞及びＣＤ４＋細胞の輸送障害を有する。さらに、ＬＴＢ４は、ＮＫ細胞活性及び細胞傷害性Ｔ細胞機能も高める。
【０００７】
Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病(Ｂ-ＣＬＬ)は、西半球で１年間に３／１０００００の発生率を有する、成人で最も頻発する白血病である。Ｂ-ＣＬＬの治療法は病気の進行段階で異なる。進行したＢ-ＣＬＬに対するの現在の治療法には、クロラムブシル、プリン類似体(例えばフルダラビン)、モノクローナル抗体(例えばアレムツズマブ及びリツキシマブ)、及び他の化学療法(例えば、シクロホスファミド、クロラムブシル又はリツキシマブ)とフルダラビンの併用が含まれる。
Ｂ細胞前リンパ球性白血病(Ｂ-ＰＬＬ)は、通常、高齢の男性に見られる白血病の珍しい形態であり、化学治療剤で治療される。しかしながら、Ｂ-ＰＬＬを患っている患者の予後は乏しく、ほとんどが診断から４８ヶ月以内に死亡する。
【０００８】
リンパ腫(ホジキン及び非ホジキンリンパ腫；ＨＬ及びＮＨＬ)は、血液悪性腫瘍の最も大きな群を構成する。治療法の選択肢には、成り行きを見守る(緩慢性ＮＨＬを患っている患者)、放射線照射(限定された病気)、化学療法(最も多くの患者が併用化学療法を受けるであろう)、生物学的治療、及び幹細胞／骨髄移植が含まれる。侵襲性ＮＨＬに対しては、ＣＨＯＰを、リツキシマブ(ＣＤ２０抗原に対するモノクローナル抗体)、時折はエトポシド(若い患者)、しばしば顆粒球コロニー刺激因子補助剤と併用することが普及している。
しかしながら、上述した白血病は治療不能のままである。さらに、明らかに治療法が進歩しているにもかかわらず、Ｂ細胞リンパ腫を患っているほとんどの患者は、それらの病気か又は治療に関連した合併症により死亡している。よって、Ｂ-ＣＬＬ、Ｂ-ＰＬＬ及び／又はＢ細胞リンパ腫を治療可能なさらなる化学治療剤が必要とされている。
【０００９】
リポキシゲナーゼにより触媒される活性をブロックする薬剤は、発癌予防剤として潜在的に有用であることは知られている(例えば、Cancer Epidemiology, Biomarkers & Prevention 8, 467 (1998)を参照)。
実際、ＦＬＡＰのインヒビターのＭＫ-８８６は、急性又は慢性の骨髄性白血病を患っている患者のヒト肺癌細胞及び悪性細胞に対して抗増殖効果を有することが知見されている(J. Clin. Invest. 97, 806 (1996), Anticancer Res. 16, 2589 (1996)、Leukemia Res. 22(1), 49 (1998)及びLeukemia Res. 17(9), 759 (1993)を参照)。
しかしながら、上述したように、Ｂリンパ球中でのロイコトリエン類の機能は十分には理解されておらず、Ｂ細胞は、それらがＬＴＢ４を生成する条件に関し、骨髄細胞とは大きく異なる。よって、本出願人の知る限りでは、上述のいずれの文献にも、Ｂ-ＣＬＬ、Ｂ-ＰＬＬ又はＢ細胞リンパ腫の治療に、ＬＴＢ４の生合成及び／又は機能のインヒビターを使用することは、開示も示唆もされていない。
【００１０】
(発明の概要)
我々は、意外にも、ＬＴＢ４の生合成及び／又は機能のインヒビターが、Ｂ-ＣＬＬを患っている患者からのＢ細胞に対して抗増殖効果を有しており、よってＢ-ＣＬＬ、Ｂ-ＰＬＬ又はＢ細胞リンパ腫の治療において有用性を有していることを見出した。
したがって、本発明の第１の態様によれば、Ｂ-ＣＬＬ、Ｂ-ＰＬＬ又はＢ細胞リンパ腫の治療方法であって、このような治療を必要とする患者に、ＬＴＢ４の生合成及び／又は機能のインヒビターを投与することを含む方法が提供される。
【００１１】
本発明の第２の態様によれば、Ｂ-ＣＬＬ、Ｂ-ＰＬＬ又はＢ細胞リンパ腫の治療のための医薬の調製における、ＬＴＢ４の生合成及び／又は機能のインヒビターの使用が提供される。
Ｂ-ＣＬＬ、Ｂ-ＰＬＬ又はＢ細胞リンパ腫の治療は、ＬＴＢ４の生合成及び／又は機能のインヒビターではない癌化学療法剤(すなわち、Ｂ-ＣＬＬ、Ｂ-ＰＬＬ又はＢ細胞リンパ腫の治療において異なる作用機序を有する薬剤)を同時投与することにより、なされ得る。
この点で、本発明の第３の態様によれば、Ｂ-ＣＬＬ、Ｂ-ＰＬＬ又はＢ細胞リンパ腫の治療方法であって、このような治療を必要とする患者に、ＬＴＢ４の生合成及び／又は機能のインヒビターを投与することを含み、該患者には異なる作用機序を有する癌化学療法剤が投与される方法が提供される。
【００１２】
また本発明の第４の態様によれば、異なる作用機序を有する癌化学療法剤が投与される患者のＢ-ＣＬＬ、Ｂ-ＰＬＬ又はＢ細胞リンパ腫の治療のための医薬の調製における、ＬＴＢ４の生合成及び／又は機能のインヒビターの使用が提供される。
【００１３】
逆に、本発明の第５及び第６の態様によれば、
(ａ)Ｂ-ＣＬＬ、Ｂ-ＰＬＬ又はＢ細胞リンパ腫の治療方法において、このような治療を必要とする患者に、唯一の癌化学療法剤として、ＬＴＢ４の生合成及び／又は機能のインヒビターを投与することを含む方法と；
(ｂ)Ｂ-ＣＬＬ、Ｂ-ＰＬＬ又はＢ細胞リンパ腫を治療するための医薬の調製における、唯一の癌化学療法剤としての、ＬＴＢ４の生合成及び／又は機能のインヒビターの使用；
が提供される。
【００１４】
さらに、本発明の第７の態様によれば：
(ａ)ＬＴＢ４の生合成及び／又は機能のインヒビター、又はそれらの薬学的に許容可能な誘導体と；
(ｂ)異なる作用機序を有する癌化学療法剤、又はそれらの薬学的に許容可能な誘導体；
を含有し、成分(Ａ)及び(Ｂ)の各々が薬学的に許容可能なアジュバント、希釈液又は担体と混合されて製剤化される組合せ品が提供される。
このような組合せ品は、その製剤の少なくとも一つがＬＴＢ４の生合成及び／又は機能のインヒビター／誘導体を含有し、少なくとも一つが他の癌化学療法剤を含有する、別々の製剤として提供されてもよいし、又は複合製剤として(つまり、成分(Ａ)及び(Ｂ)を含む単一製剤として提供されるもの)提供(すなわち製剤化)されてもよい。
本発明のこの態様の特定の実施態様では、成分(Ａ)は、ＬＴＢ４の生合成のインヒビター、又はそれらの薬学的に許容可能な誘導体である。
【００１５】
(定義)
ここで使用される場合、「ＬＴＢ４の生合成のインヒビター」なる用語には、５-ＬＯのインヒビター、ＦＬＡＰのインヒビター及び／又はロイコトリエンＡ４(ＬＴＡ４)加水分解酵素のインヒビターが言及される。ＬＴＢ４の生合成の好ましいインヒビターには、５-ＬＯのインヒビター及びＦＬＡＰのインヒビター、例えば以下に記載する特異的インヒビター(特に５-ＬＯインヒビターＢＷＡ４Ｃ及び／又はＦＬＡＰインヒビターＭＫ-８８６)が含まれる。
この点に関し、ＬＴＢ４の生合成のインヒビターは、ＢＷＡ４Ｃ又はＭＫ-８８６であってもよいしそうでなくてもよい。
ここで使用される場合、「ＬＴＢ４の機能のインヒビター」なる用語には、ＬＴＢ４のレセプターに拮抗する化合物、例えばＢＬＴ１レセプターのアンタゴニストが言及される。
【００１６】
よって、本発明の好ましい実施態様によれば、Ｂ-ＣＬＬ、Ｂ-ＰＬＬ又はＢ細胞リンパ腫の治療方法は、Ｂ-ＣＬＬ、Ｂ-ＰＬＬ又はＢ細胞リンパ腫の治療を必要とする患者に、ＬＴＢ４の生合成のインヒビター及び／又はＢＬＴ１レセプターのアンタゴニストを投与することを含む。
さらに、本発明のより好ましい実施態様によれば、Ｂ-ＣＬＬ、Ｂ-ＰＬＬ又はＢ細胞リンパ腫の治療方法は、Ｂ-ＣＬＬ、Ｂ-ＰＬＬ又はＢ細胞リンパ腫の治療を必要とする患者に、ＬＴＢ４の生合成インヒビター(例えば５-ＬＯ及び／又はＦＬＡＰインヒビター)を投与することを含む。特に好ましい実施態様では、本発明の方法は、５-ＬＯインヒビター(例えばＢＷＡ４Ｃ)又はＦＬＡＰインヒビター(例えばＭＫ-８８６)を患者に投与することを含む。
【００１７】
ある化合物が、５-ＬＯ、ＦＬＡＰ及び／又はＬＴＡ４加水分解酵素のインヒビター、及び／又はＢＬＴ１レセプターのアンタゴニストであるかどうかは、当業者に知られている技術によって決定することができる。例えば：
(ｉ)５-ＬＯの阻害は、アラキドン酸と共にインキュベートした超音波処理白血球において決定することができる；
(ｉｉ)ＦＬＡＰの阻害は、カルシウムイオノフォアＡ２３１８７で刺激された無傷の白血球をモニターすることにより決定することができる(インヒビターは、アラキドン酸と共にインキュベートされた超音波処理細胞において、ロイコトリエン類の生成をブロックしない)；
(ｉｉｉ)ＬＴＡ４加水分解酵素のインヒビターは、全細胞中で又は精製ＬＴＡ４加水分解酵素と共に合成ＬＴＡ４の代謝をモニターすることにより決定することができる；
(ｉｖ)ＢＬＴ１レセプターの拮抗作用は、ＢＬＴ１のＬＴＡ４-誘発活性をブロックする化合物の能力をモニター(ＦＬＥＸ ｓｔａｔｉｏｎにより細胞内カルシウムの増加を測定)することにより決定することができる。
【００１８】
典型的には、５-ＬＯ、ＦＬＡＰ及び／又はＬＴＡ４加水分解酵素のインヒビターは、１μＭ以下、好ましくは１００ｎＭ以下のその標的酵素に対するＩＣ５０を有するであろう。同様に、ＢＬＴ１レセプターのアンタゴニストは、５μＭ以下、好ましくは２５０ｎＭ以下のＢＬＴ１に対するＩＣ５０を有するであろう。全ての場合、引用されたＩＣ５０値は、好ましくはインビトロの細胞ベースアッセイ(例えば上述のアッセイの一つ)により決定されるものである。
【００１９】
挙げることのできる５-ＬＯの特異的インヒビターには、以下のものが含まれる。
(１)例えば、欧州特許第０２７９２６３号、米国特許第４８７３２５９号、 Int. J. Immunopharmacol. 14, 505 (1992), Br. J. Cancer 74, 683 (1996)及びAm. J. Resp. Critical Care Med. 157, Part 2, 1187 (1998)に記載されているジレウトン(同義語: Ａ-６４０７７、ＡＢＴ０７７、ジフロ(Zyflo)(登録商標))。
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(２)例えば、Anticancer Res. 14, 1951 (1994)に記載されているＡ-６３１６２。
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(３)Ａ-７２６９４。
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(４)例えば、Curr. Opin. Invest. Drugs 2, 69 (1993)に記載されているＡ-７８７７３。
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(５)例えば、Carcinogenesis 19, 1393 (1998)及びJ. Med. Chem. 40, 1955 (1997)に記載されているＡ-７９１７５（Ａ７８７７３のＲ-エナンチオマー）。
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(６)Ａ-８０２６３。
2007536359.tif 000008
(７)Ａ-８１８３４。
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(８)Ａ-９３１７８。
2007536359.tif 000010
(９)例えば、211th Am. Chem. Soc. Meeting. 211: abstr. 246, 3月24日(1996)に記載されているＡ-１２１７９８。
(１０)例えば、Exp. Opin. Therap. Patents 5 127 (1995)に記載されているアトレロイトン(Atreleuton)(同義語：ＡＢＴ-７６１及びＡ-８５７６１)。
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(１１)例えば、Curr. Opin. Anti-Inflamm. & Immunomod. Invest. Drugs 1, 468 (1999)に記載されているＭＬＮ-９７７(同義語：ＬＰＤ-９７７及びＣＭＩ-９７７)。この化合物並びに類似化合物は米国特許第５７０３０９３号に記載されている。
2007536359.tif 000012
(１２)例えば、215th Am. Chem. Soc. Meeting. 215: abstr. MEDI 004, 3月29日(1998)に記載されているＣＭＩ-９４７。この化合物並びに類似化合物は米国特許第５７９２７７６号に記載されている。
2007536359.tif 000013
(１３)例えば、211th Am. Chem. Soc. Meeting. 211: abstr. 205, 3月24日(1996)に記載されているＣＭＩ-５６８。
2007536359.tif 000014
(１４)例えば、Pharmacol. Res. 44, 213 (2001)に記載されているＬＤＰ３９２(同義語：ＣＭＩ３９２)。
2007536359.tif 000015
(１５)例えば、Int. J. Immunopharmacol. 22, 123 (2000)に記載されているリネタスチン(Linetastine)(同義語：リナゾラスト(linazolast)、ＴＭＫ６８８、ＹＭ２５７)。
2007536359.tif 000016
(１６)例えば、Pharm. Res. 9, 1145 (1992)に記載されているロナパレン(Lonapalene)(同義語：ＲＳ４３１７９)。
2007536359.tif 000017
(１７)例えば、Ann. N.Y. Acad. Sci. (Immunosuppressive and Antiinflammatory Drugs) 696, 415 (1993)に記載されているＬＹ-２２１０６８。
2007536359.tif 000018
(１８)例えば、Agents and Actions 42, 67 (1994)に記載されているＬＹ２６９４１５。
2007536359.tif 000019
(１９)例えば、Bioorg. Med. Chem. Lett. 14, 2265 (2004)に記載されている、ヒスタミンＨ１レセプターアンタゴニスト活性を有する５-ＬＯインヒビター、例えば次の化合物。
2007536359.tif 000020
(２０)ＢＦ-３８９。
2007536359.tif 000021
(２１)例えば、J. Pharmacol. Exp. Therap. 265, 483 (1993)に記載されている、ＢＩＬ２２６及びＢＩＬ３５７。
2007536359.tif 000022
(２２)例えば、J. Antibiotics 46, 705 (1993)に記載されている、ＢＵ４６０１Ａ、ＢＵ４６０１Ｂ及びＢＵ４６０１Ｃ。
2007536359.tif 000023
(２３)例えば、J. Pharm. Exp. Therap. 277, 17 (1996)に記載されているＢＷ７５５Ｃ。
2007536359.tif 000024
(２４)例えば、Eur. J. Biochem. 267, 3633 (2000)に記載されているＢＷ-Ａ４Ｃ。
2007536359.tif 000025
(２５)例えば、Br. J. Pharmacol. 108 (Suppl), 186P (1993)に記載されているＢＷＢ７０Ｃ。
2007536359.tif 000026
(２６)ＣＢＳ１１０８。
2007536359.tif 000027
(２７)例えば、Inflamm. Res. 44 (Suppl. 2) 147 (1995)に記載されているＣＧＳ２６５２９。
2007536359.tif 000028
(２８)例えば、J. Med. Chem. 38, 68 (1995)に記載されている、ＣＧＳ２５６６７、ＣＧＳ２５９９７及びＣＧＳ２５９９８。
2007536359.tif 000029
2007536359.tif 000030
(２９)例えば、J. Med. Chem. 36, 3580 (1993)に記載されているＣＧＳ-２３８８５。
2007536359.tif 000031
(３０)ＣＩ-９８６。
2007536359.tif 000032
(３１)例えば、J. Med. Chem. 35, 3153 (1992)に記載されているＣＴ３(同義語：アジュメル酸(ajumelic acid)、ＤＭＨ-１１Ｃ、ＨＵ２３９)。
2007536359.tif 000033
(３２)例えば、Ann. Oncol. 11, 1165 (2000)に記載されているＣＶ６５０４。
2007536359.tif 000034
(３３)例えば、Arthritis and Rheumatism 42 (Suppl.) 404 (1999)、同書 42 (Suppl.) 81 (及びポスター) (1999)及びJ. Med. Chem. 37, 322 (1994)に記載されているダルブフェロン(Darbufelone)(同義語：ＣＩ-１００４、ＰＤ１３６０９５-００７３)及びその類似体。
2007536359.tif 000035
(３４)例えば、Int. Arch. Allergy and Immunol. 100, 178 (1993)及びBiochim. Biophys. Acta 713, 470 (1982)に記載されている、ドセベノン(Docebenone)(同義語：ＡＡ８６１)及びその類似体。
2007536359.tif 000036
(３５)例えば、J. Med. Chem. 33, 360 (1990)に記載されているＤｕＰ６５４。
2007536359.tif 000037
(３６)例えば、BTG International Inc. Company Communication 15 10月(1999)、及びBioorg. Med. Chem. 3, 1255 (1995)に記載されているＸＡ５４７。
(３７)Ｅ-３０４０。
2007536359.tif 000038
(３８)例えば、Res. Commun. Mol. Pathol. Pharmacol. 86, 75 (1994)に記載されているＥ６０８０。
2007536359.tif 000039
(３９)Ｅ６７００。
2007536359.tif 000040
(４０)例えば、J. Antibiotics 46, 25 (1993)に記載されており、ストレプトミセス・アヌラタスＴ６８８-８から単離された化合物であるエポカルバゾリン(Epocarbazolin)Ａ。
2007536359.tif 000041
(４１)例えば、Inflamm. Res. 47, 375 (1998)に記載されているＥＲ３４１２２。
2007536359.tif 000042
(４２)例えば、Exp. Dermatol. 2, 165 (1993)に記載されているＥＴＨ６１５。
2007536359.tif 000043
(４３)例えば、XV International Congress of Allergology and Clinical Immunology (Suppl 2) 325 (1994)に記載されているＦ１３２２。
2007536359.tif 000044
(４４)例えば、Allergy (Suppl.) 47, 47 (1992)に記載されている、フレザラスチン(Flezalastine)(同義語：Ｄ１８０２４、ＩＤＢ１８０２４)。
2007536359.tif 000045
(４５)例えば、Int. Arch. Allergy and Applied Immunol. 90, 285 (1989)に記載されているアゼラスチン。
2007536359.tif 000046
(４６)例えば、Agents and Actions 30, 432 (1990)に記載されているＦＰＬ６２０６４。
2007536359.tif 000047
(４７)例えば、Am. Rev. Resp. Dis. 145, A614 (1992)に記載されているＦＲ１１０３０２。
2007536359.tif 000048
(４８)例えば、J. Med. Chem. 39, 246 (1996)に記載されている、ＨＰ９７７及びＰ１０２９４。
2007536359.tif 000049
(４９)Ｐ-８９７７。
2007536359.tif 000050
(５０)例えば、Rinsho Iyaku. 11, 1577 & 1587 (1995)に記載されているＨＸ-０８３５。
2007536359.tif 000051
(５１)例えば、J. Med. Chem. 36 3904 (1993)に記載されているＨＸ-０８３６。
2007536359.tif 000052
(５２)Bioorg. Med. Chem. Lett. 6, 93 (1996)に記載されている次の化合物。
2007536359.tif 000053
(５３)例えば、Arzneimittel-Forschung (Drug Research) 39, 1242 & 1246 (1989)に記載されているイコデュリニウム(Icodulinium)(同義語：ＣＢＳ１１３Ａ、イコデュリン(icoduline))。
2007536359.tif 000054
(５４)例えば、Eur. Resp. J. 7 (Suppl. 18), 48 (1994)に記載されているＫＣ-１１４０４。
2007536359.tif 000055
(５５)ＫＣ-１１４２５。
2007536359.tif 000056
(５６)ＫＭＥ４。
2007536359.tif 000057
(５７)例えば、Adv. Prostaglandin, Thromboxane and Leukotriene Res. 17, 554 (1987)に記載されているＬ６５１３９２。
2007536359.tif 000058
(５８)Ｌ６５１８９６。
2007536359.tif 000059
(５９)Ｌ６５２３４３。
2007536359.tif 000060
(６０)Ｌ６５３１５０。
2007536359.tif 000061
(６１)例えば、J. Gastroenterol. Hepatol. 11, 922 (1996)に記載されているＬ-６５６２２４。
2007536359.tif 000062
(６２)例えば、J. Med. Chem. 37, 512 (1994)に記載されているＬ-７０２５３９。
2007536359.tif 000063
(６３)Ｌ-６７０６３０。
2007536359.tif 000064
(６４)例えば、Curr. Opin. Invest. Drugs 2, 683 (1993)に記載されているＬ-６９１８１６。
2007536359.tif 000065
(６５)例えば、J. Med. Chem. 38, 4538 (1995)に記載されているＬ６９９３３３。
2007536359.tif 000066
(６６)Ｌ７３９０１０。
2007536359.tif 000067
(６７)例えば、J. Antibiotics 46, 900 (1993)に記載されているラグナマイシン(Lagunamycin)
2007536359.tif 000068
(６８)例えば、Eur. J. Pharm. 453, 131 (2002)及びJ. Med. Chem. 37, 1894 (1994)に記載されているリコフェロン(Licofelone)(同義語：ＭＬ３０００)。
2007536359.tif 000069
(６９)ＰＤ１４５２４６。
2007536359.tif 000070
(７０)Ｒ８４０(同義語：Ｓ２６４３１)。
2007536359.tif 000071
(７１)例えば、Arch. Dermatol. 128, 993 (1992)に記載されているＲ６８１５１。
2007536359.tif 000072
(７２)例えば、Skin Pharmacol. 9, 307 (1996)に記載されているＲ８５３５５。
2007536359.tif 000073
(７３)例えば、J. Allergy Clin. Immunol. 91, 214 (1993)に記載されているＲＥＶ５９０１(同義語：ＰＦ５９０１、レブロン(Revlon)５９０１、ＲＧ５９０１)。
2007536359.tif 000074
(７４)例えば、214th Am. Chem. Soc. Nat. Meeting. abstr. MEDI 091 (1997)に記載されているＲＷＪ６３５５６。
2007536359.tif 000075
(７５)例えば、Mediators of Inflammation 8 (Suppl. 1), 134 & 135 (1999)に記載されているＳ１９８１２。
2007536359.tif 000076
(７６)例えば、J. Allergy and Clin. Immunol. 89, 208 (1992)に記載されているＳＣ４５６６２。
2007536359.tif 000077
(７７)ＳＣ-４１６６１Ａ。
2007536359.tif 000078
(７８)ＳＣＨ４０１２０。
2007536359.tif 000079
(７９)ＳＫＦ-８６００２。
2007536359.tif 000080
(８０)ＳＫＦ１０４３５１及びＳＫＦ１０５８０９。
2007536359.tif 000081
(８１)例えば、J. Med. Chem. 39, 5035 (1996)に記載されているＳＫＦ-１０７６４９。
2007536359.tif 000082
(８２)例えば、Jap. J. Pharmacol. 66, 363 (1994)に記載されているＴ０７５７及びＴ０７９９。
2007536359.tif 000083
(８３)例えば、Naunyn-Schmiedeberg's Arch. Pharmacol. 358 (Suppl. 2) 737 (1998)に記載されているＴＡ２７０。
2007536359.tif 000084
(８４)例えば、Jap. J. Pharmacol. 65, 19 (1994)及び同書, 64 (Suppl. 1), 312 (1994)に記載されているタゴリジン(Tagorizine)(同義語：ＡＬ３２６４)。
2007536359.tif 000085
(８５)例えば、J. Pharmacol. Exp. Therap. 271, 1399 (1994)に記載されているテポキサリン(Tepoxalin)(同義語：ＯＲＦ２０４８５、ＲＷＪ２０４８５)。
2007536359.tif 000086
(８６)例えば、Inflamm. Res. 44 (Suppl. 3), 273 (1995)に記載されているＵＰＡ７８０。
2007536359.tif 000087
(８７)ＶＵＦＢ１９３６３。
2007536359.tif 000088
(８８)例えば、Arzneimittel-Forschung (Drug Research) 25, 155 (1995)に記載されているＶＺ５６４。
2007536359.tif 000089
(８９)J. Med. Chem. 40, 819 (1997)に記載されている次の化合物。
2007536359.tif 000090
(９０)ＷＡＹ１２０７３９。
2007536359.tif 000091
(９１)例えば、Agents and Actions 39 (Spec. issue C1) C30 (1993)及びExp. Opin. Invest. Drugs 6, 279 (1997)に記載されているＷＡＹ１２１５２０。
2007536359.tif 000092
(９２)例えば、Inflamm. Res. 44 (Suppl. 2), 170 (1995)に記載されているＷＡＹ-１２６２９９Ａ。
2007536359.tif 000093
(９３)例えば国際公開第０４／００４７７３号に記載されているＷＡＹ-１２５００７。
2007536359.tif 000094
(９４)例えば、216th Am. Chem. Soc. Nat. Meeting. abstr. MEDI 363 (1998)に記載されているＷＨＩＰ９７。
2007536359.tif 000095
(９５)例えば、J. Med. Chem. 38, 1473 (1995)に記載されているＷＹ２８３４２。
2007536359.tif 000096
(９６)例えば、Eur. J. Pharmacol. 236, 217 (1993)に記載されているＷＹ５０２９５(ＷＹ４９２３２のＳ-エナンチオマー)。
2007536359.tif 000097
(９７)例えば、Asthma 95: Theory to Treatment 15 (1995)及びTrends in Pharm. Sci. 13, 323 (1992)に記載されているＺＤ２１３８(同義語：ＩＣＩ Ｄ２１３８)。
2007536359.tif 000098
(９８)例えば、Inpharma 660, 9 (1994)に記載されているＺＭ２３０４８７(同義語：ＩＣＩ２３０４８７)。
2007536359.tif 000099
(９９)例えば、欧州特許第０６２３６１４号に記載されている、ＺＤ４００７及びＺＤ４４０７。
2007536359.tif 000100
(１００)例えば、欧州特許第０４６２８１３号に記載されているＺＤ７７１７。
2007536359.tif 000101
(１０１)ＺＭ-２１６８００。
2007536359.tif 000102
(１０２)例えば、Bioorg. Med. Chem. 11, 3879 (2003)に記載されている、ＣＪ-１２９１８及びその類似体。
2007536359.tif 000103
(１０３)Bioorg. Med. Chem. Lett. 12, 779 (2002)において、混合５-ＬＯ／ＣＯＸ-２インヒビターとして記載されている化合物、例えば次の化合物。
2007536359.tif 000104
(１０４)例えば、Br. J. Pharmacol. 117, 615 (1996)及びEur. J. Biochem. 256, 364 (1998)に記載されている、ＡＫＢＡ(アセチル-１１-ケト-β-ボスウェル酸)。
2007536359.tif 000105
(１０５)Eur. J. Med. Chem. 22, 147 (1997)、及びArzneimittel-Forschung (Drug Research) 35, 1260 (1985)において、５-ＬＯ及びＣＯＸ二重インヒビターとして記載されている化合物、例えば２-アセチルチオフェン-２-チアゾリルヒドラゾン(ＣＢＳ-１１０８)及びＮ-フェニルベンズアミドラゾン。
2007536359.tif 000106
2007536359.tif 000107
(１０６)例えば、Fifth Chemical Congress of North America, Abstract 01/1351 (1997)、及び同書. Abstract 01/1350 (1997)に記載されているボスエリン(Boswellin)(ボスウェリア・セラータ(Boswellia serrata)抽出物)。
(１０７)例えば、米国特許第５９８５９３７号において５-ＬＯインヒビターとして記載されている２,４,６-トリヨードフェノール。
(１０８)例えば、Curr. Opin. Invest. Drugs 4, 83 (2003)に記載されているニカラベン(Nicaraven)。
2007536359.tif 000108
(１０９)例えば、欧州特許第０１５６６０３号、米国特許第４５５６６７２号、Arthritis Rheum. 31, Suppl. S52 (1988)及びP. Katzら, 同書. S52に記載されているテニダップ(Tenidap)。
2007536359.tif 000109
(１１０)J. Med. Chem. 39, 3938 (1996)において、５-ＬＯインヒビターとして記載されている環状ヒドラジド類、例えばフェニドン(phenidone)、１-フェニル-２Ｈ-テトラヒドロピリダジン-３-オン、及び１-フェニルペルヒドロ-１,２,４-テトラヒドロピリダジン-３-オン。
2007536359.tif 000110
(１１１)例えば、J. Med. Chem. 34, 1028 (1991)に記載されているＩＣＩ２０７９６８。
2007536359.tif 000111
(１１２)例えば、J. Med. Chem. 34, 2176 (1991)に記載されているＩＣＩ２１１９６５、及び他の(メトキシアルキル)チアゾール類。
2007536359.tif 000112
(１１３)J. Med. Chem. 32, 1006 (1989)に記載されている、２,３-ジヒドロ-５-ベンゾフラノール類、例えば次の化合物。
2007536359.tif 000113
(１１４)Bioorg. Med. Chem. 11, 4207 (2003)に記載されている、２,６-ジ-tert-ブチルフェノール誘導体、例えばテブフェロン(tebufelone)、Ｒ-８３０及びＳ２４７４。
2007536359.tif 000114
(１１５)J. Med. Chem. 41, 1112 (1998)において、５-ＬＯ／ＣＯＸ-２インヒビターとして記載されている７-tert-ブチル-２,３-ジヒドロ-３,３-ジメチルベンゾフラン類、例えばＰＧＶ-２０２２９。
2007536359.tif 000115
(１１６)Eur. J. Med. Chem. 35, 1897 (2003)において、５-ＬＯ／ＣＯＸ二重インヒビターとして記載されている化合物、例えば次の化合物。
2007536359.tif 000116
(１１７)例えば、Biochem. Pharm. 62, 903 (2001)に記載されている、キク科のいくつかの植物種から単離できるセスキテルペンラクトンであるヘレナリン(Helenalin)。
(１１８)例えば、Int. J. Immunopharmacol. 22, 483 (2000)に記載されている、ＡＳ-３５、つまり(９-[(４-アセチル-３-ヒドロキシ-２-ｎ-プロピルフェノキシ)メチル]-３-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)-４Ｈ-ピリド[１,２-α]ピリミジン-４-オン)。
2007536359.tif 000117
(１１９)例えば、Planta Medica 65, 222 (1999)に記載されているマグノロール。
2007536359.tif 000118
(１２０)例えば、Arch. Allergy and Immunol. 110, 278 (1996)に記載され、漢方薬から抽出されるホノキオール(Honokiol)。
2007536359.tif 000119
(１２１)クリサロビン。
2007536359.tif 000120
(１２２)Ｅ-３０４０。
2007536359.tif 000121
(１２３)例えば、Chirality 16, 1 (2004)に記載されているフロブフェン(Flobufen)。
2007536359.tif 000122
(１２４)例えば、Eur. J. Pharmacol. 404, 375 (2000)に記載されているＹＰＥ-０１。
2007536359.tif 000123
(１２５)ＢＷ-Ａ１３７Ｃ
2007536359.tif 000124
(１２６)ＬＹ-２３３５６９
2007536359.tif 000125
(１２７)ＰＤ-１３８３８７
2007536359.tif 000126
(１２８)ＳＢ-２１０６６１
2007536359.tif 000127
(１２９)ＤｕＰ-９８３
2007536359.tif 000128
(１３０)ＢＴＳ-７１３２１
2007536359.tif 000129
(１３１)例えば、Toxicon. 24, 614 (1986)に記載されているピリポスト(Piripost)。
(１３２)例えば、Eur J Pharmacol 205, 259 (1991)に記載されているＭＫ-８６６。
(１３３)例えば、Chest 123, 371S (2003)に記載されているＵＣＢ６２０４５。
(１３４)例えば、J. Immunol. 140, 2361 (1988)に記載されているＯＮＯ-ＬＰ-０４９。
(１３５)３３２３Ｗ、Ｌ-６９７１９８、Ｌ-７０８０７８０、ＦＲ-１２２７８８、ＣＭＩ-２０６、ＦＰＬ-６４１７０及びＰＤ-０８９２４４。
【００２０】
挙げることのできる他の特異的５-ＬＯインヒビターには、概説論文Prog. Med. Chem., G. P. Ellis及びD. K. Luscombe, Elsevier 29, 1 (1992)、及びJ. Med. Chem. 14, 2501 (1992)に記載されているものが含まれる。
挙げることのできるＦＬＡＰの特異的インヒビターには、次のものが含まれる。
(ａ)例えば、Mol. Pharmacol. 40, 22 (1991)に記載されている、Ｌ-６７４５７３及び関連ＦＬＡＰインヒビター(例えばＬ-６５５２３８)。
2007536359.tif 000130
(ｂ)例えば、J. Med. Chem. 38, 4538 (1995)に記載されているＬ-６７４６３６。
2007536359.tif 000131
(ｃ)例えば、Mol. Pharmacol. 41, 267 (1992)に記載されている、Ｌ-６８９０３７、及び光親和性類似体[１２５Ｉ]-６６９０８３及び[１２５Ｉ]-６９１６７８。
2007536359.tif 000132
(ｄ)例えば、J. Med. Chem. 38, 4538 (1995)に記載されているＬ-７０５３０２。
2007536359.tif 000133
(ｅ)例えば、米国特許第５０８１１３８号、Am. Rev. Resp. Dis. 147, 839 (1993)、Eur. J. Pharmacol. 267, 275 (1994)、The Search for Anti-Inflammatory Drug. 233 (1995) V. J. Merluzzi及びJ. Adams編, Boston, Birkhauserに記載されているＭＫ-８８６(同義語：Ｌ６６３５３６、ＭＫ０８８６)。
2007536359.tif 000134
(ｆ)例えば、国際公開第９３／１６０６９号、米国特許第５３０８８５０号及び国際公開第９４／１３２９３号に記載されている、ＭＫ-８８６に構造的に関連した化合物。
(ｇ)例えば、J. Physiol. Pharmacol. 70, 799 (1992)及びJ. Lipid Mediators 6, 239(1993)に記載されているキフラポン(Quiflapon)(同義語：ＭＫ-５９１、Ｌ６８６７０８)。
2007536359.tif 000135
(ｈ)例えば、Thorax 52, 342 (1997)に記載されているＢＡＹＸ１００５。
2007536359.tif 000136
(ｉ)例えば、Arthritis and Rheumatism 39, 515 (1996)及びDrug & Market Devel. 7, 177 (1996)に記載されているＢＡＹＹ１０５。
2007536359.tif 000137
(ｊ)例えば、Pharmacologist 39, 33 (1997)に記載されているＶＭＬ５３０(同義語：ＡＢＴ０８０)。
2007536359.tif 000138
【００２１】
挙げることのできるＬＴＡ４加水分解酵素のインヒビターには、次のものが含まれる。
(Ａ)米国特許第５４５５２７１号及び国際公開第９４／００４２０号においてＬＴＡ４加水分解酵素のインヒビターとして記載されている化合物、例えば次のもの。
2007536359.tif 000139
2007536359.tif 000140
(Ｂ)J. Med. Chem. 36, 211 (1993)及びJ. Am. Chem. Soc. 114, 6552 (1992)において、ＬＴＡ４加水分解酵素インヒビターとして記載されている化合物、例えば次の化合物。
2007536359.tif 000141
(Ｃ)国際公開第００／５０５７７号の請求項２４の方法により同定可能な化合物。
(Ｄ)米国特許第６５０６８７６号においてＬＴＡ４加水分解酵素インヒビターとして記載されている化合物、例えばＳＣ-５６９３８。
2007536359.tif 000142
(Ｅ)例えば、Bioorg. Med. Chem. Lett. 12, 3383 (2002)に記載されているＳＣ-５６９３８の類似体。
(Ｆ)米国特許第５７１９３０６号においてＬＴＡ４加水分解酵素インヒビターとして記載されている化合物、例えば次のもの。
2007536359.tif 000143
(Ｇ)国際公開第９６／１１１９２号においてＬＴＡ４加水分解酵素インヒビターとして記載されている化合物、例えば次のもの。
2007536359.tif 000144
(Ｈ)米国特許第６２６５４３３号及び国際公開第９８／４０３６４号においてＬＴＡ４加水分解酵素インヒビターとして記載されている化合物、例えば次のもの。
2007536359.tif 000145
2007536359.tif 000146
(Ｉ)米国特許第６５０６８７６号及び国際公開第９６／１０９９９号においてＬＴＡ４加水分解酵素インヒビターとして記載されている化合物、例えば次のもの。
2007536359.tif 000147
(Ｊ)国際公開第９８／４０３７０号においてＬＴＡ４加水分解酵素インヒビターとして記載されている化合物、例えば次のもの。
2007536359.tif 000148
(Ｋ)国際公開第９８／４０３５４号においてＬＴＡ４加水分解酵素インヒビターとして記載されている化合物。
(Ｌ)欧州特許第０３６０２４６号においてＬＴＡ４加水分解酵素インヒビターとして記載されている化合物(３-オキシラニル安息香酸)、例えば次のもの。
2007536359.tif 000149
(Ｍ)例えば日本国特許公報第０１２１１５４９Ａ２号に記載されている２０,２０,２０-トリフルオロロイコトリエンＢ４誘導体、例えば次の化合物。
2007536359.tif 000150
(Ｎ)欧州特許第１１６５４９１号及び国際公開第００／０５９８６４号において、ＬＴＡ４加水分解酵素インヒビターとして記載されている化合物、例えば２-アミノ-６-(４-ベンジルフェノキシ)ヘキサン酸。
2007536359.tif 000151
(Ｏ)米国特許第６４３６９７３号及び国際公開第００／０１７１３３号において、ＬＴＡ４加水分解酵素インヒビターとして記載されている化合物、例えば(２Ｓ,３Ｒ)-２-アミノ-３-(ベンジルオキシ)ブタン-１-チオール。
2007536359.tif 000152
(Ｐ)Bioorg. Med. Chem. 3, 969 (1995)において、ＬＴＡ４加水分解酵素インヒビターとして記載されている化合物、例えば次のもの。
2007536359.tif 000153
(Ｑ)独国特許出願公開第４１２１８４９Ａ１号において、ＬＴＡ４加水分解酵素インヒビターとして記載されている[４-(ω-アリールアルキル)フェニル]アルカン酸、例えば次のもの。
2007536359.tif 000154
(Ｒ)独国特許出願公開第４１１８１７３Ａ１号において、ＬＴＡ４加水分解酵素インヒビターとして記載されているアラルキルチエニルアルカノアート類、例えば次のもの。
2007536359.tif 000155
(Ｓ)独国特許出願公開第４１１８０１４Ａ１号において、ＬＴＡ４加水分解酵素インヒビターとして記載されているω-[(４-アリールアルキル)チエン-２-イル]アルカノアート類、例えば次のもの。
2007536359.tif 000156
(Ｔ)J. Med. Chem. 35, 3156 (1992)において、ＬＴＡ４加水分解酵素インヒビターとして記載されている化合物、例えばＲＰ６４９６６。
2007536359.tif 000157
(Ｕ)J. Med. Chem. 35, 3170 (1992)に記載されており、ＲＰ６６１５３に構造的に関連した化合物。
(Ｖ)独国特許出願公開第４３１４９６６Ａ１号において、ＬＴＡ４加水分解酵素インヒビターとして記載されている２-ヒドロキシフェニル置換イソオキサゾール類、例えば次のもの。
2007536359.tif 000158
(Ｗ)例えば、J. Nat. Cancer Institute 95,1053 (2003)に記載されているベスタチン。
2007536359.tif 000159
(Ｘ)例えば、J. Med. Chem. 43, 721 (2000)に記載されているＳＣ-２２７１６(１-[２-(４-フェニルフェノキシ)エチル]ピロリジン)。
2007536359.tif 000160
(Ｙ)例えば、J. Med. Chem. 45, 3482 (2002)及びCurr. Pharm. Design 7, 163 (2001)に記載されているＳＣ５７４６１Ａ。
2007536359.tif 000161
(Ｚ)Med. Chem. Lett. 13, 1137 (2003)において、ＬＴＡ４加水分解酵素インヒビターとして記載されているイミダゾピリジン類及びプリン類。
(ＡＡ)例えば、FASEB Journal 16, 1648 (2002)に記載されているカプトプリル。
2007536359.tif 000162
(ＡＢ)国際公開第９９／４０９１０号において、ＬＴＡ４加水分解酵素インヒビターとして記載されているヒドロキサム酸誘導体、例えば次のもの。
2007536359.tif 000163
(ＡＣ)例えば、日本国特許第１１０４９６７５Ａ２号に記載されているＡＢ５３６６。
(ＡＤ)例えば、国際公開第９６／２７５８５号、Life Sci. 64, PL51-PL56 (1998)、及びEur. J. Pharmacol. 346, 81 (1998)に記載されているＳＡ６５４１。
2007536359.tif 000164
(ＡＥ)日本国特許公報第１０２６５４５６Ａ２号において、ＬＴＡ４加水分解酵素インヒビターとして記載されている、Ｎ-メルカプトアシルプロリン類を含む化合物、例えば次のもの。
2007536359.tif 000165
(ＡＦ)例えば、Biochem. J. 328, 225 (1997)に記載されている１４,１５-デヒドロロイコトリエンＡ４。
(ＡＧ)例えば、J. Natural Products 59, 962 (1996)に記載されており、ストレプトミセス・ジアスタティクス(Streptomyces diastaticus)により生成される８(Ｓ)-アミノ-２(Ｒ)-メチル-７-オキソノナン酸。
2007536359.tif 000166
(ＡＨ)例えば、Bioorg. Med. Chem. Lett. 5, 2517 (1995)に記載されている、ヒドロキサム酸含有ペプチドケラトルファン(kelatorphan)。
(ＡＩ)Bioorg. Med. Chem. 3, 1405 (1995)において、ＬＴＡ４加水分解酵素インヒビターとして記載されているアミノヒドロキサム酸、例えば次のもの。
2007536359.tif 000167
(ＡＪ)J. Pharmacol. Exp. Therap. 275, 31 (1995)において、ＬＴＡ４加水分解酵素インヒビターとして記載されている、α-ケト-β-アミノエステル及びチオアミン類。
(ＡＫ)日本国特許公報第０５３１０６６８Ａ２号において、ＬＴＡ４加水分解酵素インヒビターとして記載されているＮ-(フェニルブタノイル)ロイシン類。
2007536359.tif 000168
挙げることのできる他の特異的ＬＴＡ４加水分解酵素インヒビターには、概説論文Curr. Pharm. Design 7, 163 (2001)及びCurr. Med. Chem. 4, 67 (1997)に記載されているものが含まれる。
【００２２】
挙げることのできる(ＢＬＴ１等の)ＬＴＢ４レセプターのアンタゴニストには、次のものが含まれる。
(ｉ)米国特許第６２９１５３０号において、ＬＴＢ４レセプターアンタゴニストとして記載されている化合物、例えば(Ｅ)-[５-(２-ジエチルカルバモイル-１-メチルビニル)-２-(２,６-ジフルオロベンジルオキシ)フェノキシ]酢酸。
2007536359.tif 000169
(ｉｉ)米国特許出願公開第２００２／０１２８３１５号において、ＬＴＢ４レセプターアンタゴニストとして記載されている化合物、例えば４-(４-フェニルピペリジニルメチル)安息香酸４-アミジノフェニルエステル及び４-(２-フェニルイミダゾリルメチル)安息香酸４-アミジノフェニルエステル。
2007536359.tif 000170
(ｉｉｉ)米国特許出願公開第２００４／００５３９６２号において、ＬＴＢ４レセプターアンタゴニストとして記載されている化合物、例えば２-(２-プロピル-３-(３-(２-エチル-４-(４-フルオロフェニル)-５-ヒドロキシフェノキシ)プロポキシ)フェノキシ)安息香酸。
2007536359.tif 000171
(ｉｖ)例えば、J. Pharmacol. Exp. Therap. 297, 458 (2001)及び国際公開第０２／０５５０６５号に記載されているＢＩＩＬ。
2007536359.tif 000172
(ｖ)例えば、J. Pharmacol. Exp. Therap. 285, 946 (1998)に記載されている、ＣＰ１０５６９６及びＣＰ１９５５４３。
2007536359.tif 000173
(ｖｉ)ＬＹ２１００７３
2007536359.tif 000174
(ｖｉｉ)ＬＹ２２３９８２(同義語：ＣＧＳ２３１３１、ＳＫＦ１０７３２４)。
2007536359.tif 000175
(ｖｉｉｉ)例えば、Eur. J. Pharmacol. 223, 57 (1992)に記載されている、ＬＹ２５５２８３(同義語：ＣＧＳ２３３５６、ＬＹ１７７４５５)。
2007536359.tif 000176
(ｉｘ)ＬＹ２９２７２８。
2007536359.tif 000177
(ｘ)例えば、Drugs of the Future 21, 610 (1996)、Clin. Cancer Res. 8, 3232 (2002)及び国際公開第０１／０８５１６６号に記載されている、ＬＹ２９３１１１(同義語：ＶＭＬ２９５)。
2007536359.tif 000178
(ｘｉ)ＬＴＢ０１９。
(ｘｉｉ)例えば、Exp. Opin. Therap. Patents 5, 127 (1995)に記載されている、モキシルバント(Moxilubant)(同義語：ＣＧＳ２５０１９Ｃ)。
2007536359.tif 000179
(ｘｉｉｉ)例えば、Drugs of the Future 18, 794 (1993)に記載されているオロパチジン(Olopatidine)(同義語：アレロック(allelock)、ＡＬＯ４９４３Ａ、ＫＷ４６７９、パタノール(Patanol)(登録商標))。
2007536359.tif 000180
(ｘｉｖ)例えば、Gastroenterology 110 (Suppl.), 110 (1996)に記載されている、ＯＮＯ４０５７(同義語：ＬＢ４５７)。
2007536359.tif 000181
(ｘｖ)例えば、J. Pharm. Exp. Therap. 271, 1418 (1994)に記載されているオンタゾラスト(Ontazolast)(同義語：ＢＩＲＭ２７０)。
2007536359.tif 000182
(ｘｖｉ)例えば、Eur. J. Pharmacol. - Enviromental Toxicology and Pharmacology Section 293, 369 (1995)に記載されているＰＦ１００４２。
2007536359.tif 000183
(ｘｖｉｉ)例えば、Pharmacologist 34, 205 (1992)に記載されているＲＧ１４８９３。
2007536359.tif 000184
(ｘｖｉｉｉ)例えば、ISSX Proceedings 6, 232 (1994)に記載されているＲＯ２５４０９４。
2007536359.tif 000185
(ｘｉｘ)ＲＰ６６１５３。
2007536359.tif 000186
(ｘｘ)ＲＰ６６３６４。
2007536359.tif 000187
(ｘｘｉ)ＲＰ６９６９８。
2007536359.tif 000188
(ｘｘｉｉ)例えば、Thorax 53, 137 (1998)に記載されているＳＢ２０１１４６。
2007536359.tif 000189
(ｘｘｉｉｉ)例えば、J. Med. Chem. 36, 2703 (1993)に記載されているＳＢ２０１９９３。
2007536359.tif 000190
(ｘｘｉｖ)例えば、J. Pharmacol. Exp. Therap. 269, 917 (1994)に記載されているＳＣ４１９３０。
2007536359.tif 000191
(ｘｘｖ)ＳＣ５０６０５。
2007536359.tif 000192
(ｘｘｖｉ)ＳＣ５１１４６。
2007536359.tif 000193
(ｘｘｖｉｉ)例えば、Inflammation Res. 44 (Suppl. 2), 143 (1995)に記載されているＳＣ５３２２８。
2007536359.tif 000194
(ｘｘｖｉｉｉ)例えば、Adv. Prostaglandin Thromboxane and Leukotriene Res. 23, 275 (1995)に記載されている、チコルバント(Ticolubant)(同義語：ＳＢ２０９２４７)。
2007536359.tif 000195
(ｘｘｉｘ)例えば、Adv. Prostaglandin Thromboxane and Leukotriene Res. 23, 275 (1995)に記載されているＵ７５３０２(同義語：Ｕ７５４８５、Ｕ７７６９２、Ｕ７８４８９)。
2007536359.tif 000196
(ｘｘｘ)例えば、Inflammation Res. 44, (Suppl. 3) 268 (1995)に記載されているＶＭ３０１(同義語：ＯＡＳ１０００、シュードプテロシン(pseudopterosin)Ａメチルエーテル)。
(ｘｘｘｉ)例えば、Inpharma 1094, 9 (1997)に記載されているＺＤ１５８２５２。
(ｘｘｘｉｉ)例えば、Inpharma 1094, 9 (1997)に記載されているＺＫ１５８２５２。
2007536359.tif 000197
(ｘｘｘｉｉｉ)例えば、Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2004, Mar 11[印刷より早い電子版]に記載されているＵ-７５５０９。
(ｘｘｘｉｖ)例えば、Br. J. Pharmacol. 139, 388 (2003)に記載されているＣＰ-１０５６９６。
(ｘｘｘｖ)例えば、Clin. Cancer Res. 8, 3232 (2002)に記載されているＬＹ２９３１１１。
【００２３】
上に列挙され又は言及された化合物は、商業的に入手可能であり、商業的に入手可能な材料から当業者に知られている技術により調製することができ、及び／又は上述した文献を介して特定できる方法(すなわち、その文献又はそこで特定された文献において詳述されている方法)により調製することができる。よって、ＬＴＢ４の合成及び／又は機能を阻害する特定の化合物について記載している上述の文献の開示は出典明示によりここに援用する。
【００２４】
本発明の方法による治療を必要とする患者(例えばヒト患者)には、標準的な診断方法で、Ｂ-ＣＬＬ、Ｂ-ＰＬＬ又はＢ細胞リンパ腫を患っていると決定(例えば、患者が熱、貧血、発汗及び／又は疲労を感じているかどうかの決定−また例えば：Epidemiol. Rev. 20, 187 (1998); Blood 87, 4990 (1996); J. Clin. Oncol. 17, 3835 (1999); Cancer 48, 198 (1981); 及びBlood 46, 219 (1975)を参照)された患者が含まれる。
【００２５】
ここで使用される場合、「異なる作用機序を有する癌化学療法剤」なる用語には、ＬＴＢ４の生合成及び／又は機能のインヒビター以外で、癌を治療するために使用することができる任意の化合物が含まれる。
よって、その用語には、次の薬剤が含まれる。
(ａ)(ｉ)ナイトロジェンマスタード、例えばメクロレタミン(ＨＮ２)、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン(Ｌ-サルコリシン)及びクロラムブシル；
(ｉｉ)エチレンイミン類及びメチルメラミン類、例えばヘキサメチルメラミン、チオテパ；
(ｉｉｉ)アルキルスルホナート類及びチオスルホナート類、例えばブスルファン、メタンスルホン酸メチル(ＭＭＳ)及びメタンチオスルホン酸メチル；
(ｉｖ)ニトロソ尿素類及びニトロソグアニジン類、例えばカルムスチン(ＢＣＮＵ)、ロリムスチン(ＣＣＮＵ)、セムスチン(メチル-ＣＣＮＵ)、ストレプトゾシン(ストレプトゾトシン)及びＮ-メチル-Ｎ'-ニトロ-Ｎ-ニトロソグアニジン(ＭＮＮＧ)；及び
(ｖ)トリアゼン類、例えばダカルバジン(ＤＴＩＣ；ジメチルトリアゼノイミダゾールカルボキシアミド)；
を含むアルキル化剤。
(ｂ)(ｉ)葉酸類似体、例えばメトトレキセート(アメトプテリン)；
(ｉｉ)ピリミジン類似体、例えばフルオロウラシル(５-フルオロウラシル；５-ＦＵ)、フロクスウリジン(フルオロデオキシウリジン；ＦＵｄＲ)及びシタラビン(シトシンアラビノシド)；及び
(ｉｉｉ)プリン類似体及び関連インヒビター、例えばメルカプトプリン(６-メルカプトプリン；６-ＭＰ)、チオグアニン(６-チオグアニン；ＴＧ)及びペントスタチン(２'-デオキシコホルマイシン)；
を含む代謝拮抗剤。
(ｃ)(ｉ)ビンカアルカロイド類、例えばビンブラスチン(ＶＬＢ)及びビンクリスチン；
(ｉｉ)エピポドフィロトキシン類(epipodophyllotoxins)、例えばエトポシド及びテニポシド；
(ｉｉｉ)抗生物質、例えばダクチノマイシン(アクチノマイシンＡ、Ｃ、Ｄ又はＦ)、ダウノルビシン(ダウノマイシン；ルビドマイシン(rubidomycin))、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン(ミトラマイシン)、及びマイトマイシン(マイトマイシンＡ、Ｂ又はＣ)；
(ｉｖ)酵素、例えばＬ-アスパラギナーゼ；及び
(ｖ)生物学的応答調節物質、例えばインターフェロンアルフェノームズ(alphenomes)；
を含む天然産物。
(ｄ)(ｉ)白金配位錯体、例えばシスプラチン(cis-ＤＤＰ)及びカルボプラチン；
(ｉｉ)アントラセンジオン、例えばミトキサントロン及びアントラサイクリン；
(ｉｉｉ)ヒドロキシ尿素；
(ｉｖ)メチルヒドラジン誘導体、例えばプロカルバジン(Ｎ-メチルヒドラジン、ＭＩＨ)；
(ｖ)副腎皮質抑制剤、例えばミトタン(ｏ,ｐ'-ＤＤＤ)及びアミノグルテチミド；
(ｖｉ)タキソール及び類似体／誘導体；
(ｖｉｉ)ホルモンアゴニスト／アンタゴニスト、例えばフルタミド及びタモキシフェン；
(ｖｉｉｉ)光活性化される化合物(例えばソラレン)；
(ｉｘ)ＤＮＡトポイソメラーゼインヒビター(例えば、ｍ-アムサクリン及びカンプトセシン)；
(ｘ)抗血管新生剤(例えば、ＳＵ６６６８、ＳＵ５４１６、コンブレタスタチン(combretastatin)Ａ４、アンジオスタチン及びエンドスタチン)；及び
(ｘｉ)免疫療法剤(例えば放射標識抗体、例えばベグザーＴＭ及びセラギン(Theragyn)ＴＭ(ペムツモマブ(Pemtumomab)ＴＭ))；
を含む種々の薬剤。
【００２６】
本発明の第３及び第４の態様に関し、「投与される」なる用語には、他の癌化学療法剤(すなわち、異なる作用機序を有する薬剤)を、ＬＴＢ４の生合成及び／又は機能のインヒビターを用いた患者の治療前、治療中及び／又は治療後に投与することが含まれる。他の癌化学療法剤の投与は、好ましくは、この医薬を用いた治療の４８時間前から４８時間後の期間(例えば、２４時間前から２４時間後の期間内)になされる。特に好ましいのは、治療の１２時間前から１２時間後の期間(例えば、６時間前から６時間後の期間内)、特に治療の３時間前から３時間後の期間内、又は治療の２から５時間前の期間内に投与がなされることである。また、他の癌化学療法剤及び／又はＬＴＢ４の生合成及び／又は機能のインヒビターを複数回投与することも考慮される。
そのような場合、上述の相対的時間スケールは、他の癌化学療法剤とＬＴＢ４の生合成及び／又は機能のインヒビターの隣接用量の投与間の時間分離に関連している。
【００２７】
「薬学的に許容可能な誘導体」なる用語には、塩(薬学的に許容可能な無毒の有機又は無機酸付加塩)及び溶媒和物が含まれる。
ここで記載された方法は、Ｂ-ＣＬＬ、Ｂ-ＰＬＬ又はＢ細胞リンパ腫の治療において、従来から知られている類似の方法(治療法)よりも、医者及び／又は患者にとってより簡便で、より効果があり、より毒性が少なく、より広範囲の活性を有し、より強力で、副作用の発生がより少なく、あるいは他の有用な薬理学的性質を有しうるという効果を奏しうる。
【００２８】
(生物学的試験)
材料及び方法
試薬及び細胞株：
カルシウムイオノフォアＡ２３１８７を、カルバイオケム-ベーリング社(Calbiochem-Behring)(ラ・ホーヤ、カルフォルニア、Ｕ.Ｓ.Ａ.)から購入した。ＨＰＬＣ溶媒をラスバーン・ケミカルズ(Rathburn chemicals)(ウォーカーバーン(Walkerburn)、Ｕ.Ｋ.)から、ＬＴＢ４及びプロスタグランジン(ＰＧ)Ｂ１の合成標準体をバイオモール(Biomol)(プリマス・ミーティング(Plymouth meeting)、Ｐａ、Ｕ.Ｓ.Ａ.)から得た。ＢＷＡ４Ｃはローリー・ジー・ガーランド(Lawrie G Garland)、ウェルカム・リサーチ(Wellcome Research)研究所、ＵＫから、ＭＫ-８８６はジリー・エフ・エバンス(Jilly F.Evans)、治療法研究のためのメルク・フロスト・センター(Merck Frosst Centre)、ＣＡからの贈与品である。アゾジカルボン酸ビス(ジメチルアミド)(ジアミド)はシグマ社(Sigma)(ストックホルム、ＳＥ)から購入した。活性化のために、ヒトＣＤ４０Ｌを形質移入したマウス線維芽Ｌ細胞(ＣＤ４０Ｌ＋Ｌ細胞)を、またコントロールとして形質移入していないＬ細胞(ＣＤ４０Ｌ−)を使用した(J. Exp. Med. 182, 1265 (1995)を参照)。
【００２９】
細胞の単離：
直前の６週間内に化学療法を受けていない、Ｂ-ＣＬＬ又はＢ細胞前リンパ球性白血病(Ｂ-ＰＬＬ)を患っている患者から、Ｂ細胞を単離した(以下の表１を参照)。
2007536359.tif 000198
（診断時における患者のデータ及びＲａｉ病期(Rai stadium)。生存期間は診断からの月数として測定する(＋は患者がまだ生存していることを意味する)。患者３及び６は治療を受けていなかった。他の患者は１から６の異なる治療法で数種の治療コースを受けていた。）
【００３０】
インフォームド・コンセント後に地方の倫理委員会の承認を得て、末梢血液試料を得た。血液試料を、フィコール・イソペーク(Ficoll-Isopaque)で精製し、リン酸緩衝生理食塩水(ＰＢＳ)で２回洗浄した。その後、細胞を、５０％のヒトＡＢ血清及び１０％のジメチルスルホキシドを含むＰＢＳ中で凍結させるか、又は新鮮なまま分析した。凍結した細胞試料を解凍し、分析前に、氷冷されたウシ胎児血清と続いてＰＢＳで洗浄した。２人の患者からの細胞を、新鮮に単離された細胞と、類似した結果の凍結後の双方で、２回使用した。しかしながら、類似した結果が得られた(データは示さず)。単離された細胞の純度は、フローサイトメトリー分析(FACS Calibur、ベクトン・ディッキンソン、マウンテンビュー、ＣＡ)により推定した。メイ-グリューネバルト(May-Grunewald)／ギームザ溶液を用いて染色した後に、形態学的分析を実施した。Ｂ-ＣＬＬ及びＢ-ＰＬＬ細胞の純度は＞９８％であった。
【００３１】
無傷のＢ-ＣＬＬ細胞のインキュベーション：
１０×１０６の細胞を１ｍＬのＰＢＳ中に懸濁させ、アラキドン酸(４０μＭ)及び／又はカルシウムイオノフォアＡ２３１８７(１μＭ)で刺激する前に、ジアミドと略したアゾジカルボン酸ビス(ジメチルアミド)(１００μＭ)と共に／これを伴わずに２分間プレインキュベートした。細胞を３７℃で５分間刺激し、１ｍＬのメタノールを用いてインキュベーションを終了させた。
【００３２】
超音波処理したＢ-ＣＬＬ細胞のインキュベーション：
１０×１０６の細胞を、ＥＤＴＡ(２ｍＭ)を含むカルシウム非含有のＰＢＳ１ｍｌ中に再懸濁させ、５秒で３回、超音波処理した。塩化カルシウム(２ｍＭ)及びアラキドン酸(４０μＭ)を添加する前に、ＡＴＰ(１ｍＭ)の存在下で、細胞を２分間プレインキュベートした。３７℃でのインキュベーションの５分後に、１ｍＬのメタノールを用いて反応を終了させた。
【００３３】
ロイコトリエン類の分析：
試料に０．５ｍｌのＰＢＳ及び内部標準ＰＧＢ１(１００ｐｍｏｌ)を添加した後、細胞を遠心分離(２５００ｒｐｍ、５分)した。続いて、上清をクロマボンド(Chromabond)Ｃ１８カラム(２００ｍｇ、マシュレ＆ナーゲル(Macherey & Nagel))での固相抽出にかけた。メタノール溶出液をウォーターズ・アライアンス(Waters Alliance)２６９５逆相ＨＰＬＣで分析し、ウォーターズＰＤＡ９９６を用いて検出した。移動相として、メタノール：水：トリフルオロ酢酸(７０：３０：０．００７、ｖ／ｖ)を流量１．２ｍＬ／分で使用した。合成標準体の保持時間との比較によって定性分析を行い、溶出ピークの面積のコンピュータでの積分によって定量を実施した。
【００３４】
ＢＬＴ１の発現：
正常なドナーからの新鮮な血液試料と患者からの新鮮な試料を、フィコール・イソペークで分離し、ＰＢＳで洗浄した。健常なドナーからの全血白血球(顆粒球を含む)を分析するために、細胞をＰＢＳで洗浄し、ＦＡＣＳ溶解溶液(ベクトン・ディッキンソン)を用いて溶解させ、ＰＢＳで洗浄した。凍結した患者試料(Ｂ-ＣＬＬ及びＢ-ＰＬＬ)を(上述したようにして)解凍し、ＰＢＳで洗浄した。１００μＬのＰＢＳ中に細胞を再懸濁させた後、製造者の使用説明書に従って抗体を添加し、室温で１０分間、インキュベートした。細胞を２ｍＬのＰＢＳで洗浄し、セルクエスト(CellQuest)ソフトウェアを使用したＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ(ベクトン・ディッキンソン)で分析する前に、１％のパラホルムアルデヒドで固定した。
この研究では、フローサイトメトリーで使用する全ての抗体は、フルオレセインイソチオニン(ＦＩＴＣ)、フィコエリトリン(Ｐｅ)又はペリディニン(peridinin)クロロフィルタンパク質(ＰｅｒＣＰ)と、直接結合させた。
ＢＬＴ１抗体７Ｂ１ ＦＩＴＣを社内で産生した(Biochem. Biophys. Res. Commun. 279, 520 (2000)を参照)。ＩｇＧ１-ＦＩＴＣ、ＩｇＧ１-Ｐｅ、ＩｇＧ１ Ｐｅｒｃｐ、ＣＤ４-Ｐｅ、ＣＤ５-Ｐｅ、ＣＤ８-Ｐｅｒｃｐ、ＣＤ１４-ＦＩＴＣ、ＣＤ１４-Ｐｅ、ＣＤ１９-ＦＩＴＣ、ＣＤ１９-Ｐｅ、ＣＤ２０-Ｐｅｒｃｐ、ＣＤ２２-Ｐｅ、ＣＤ３３-ＦＩＴＣ、ＣＤ３３-Ｐｅ、ＩｇＧ２ａ-ＦＩＴＣ(ベクトン・ディッキンソン)。
【００３５】
ＤＮＡ合成：
精製されたＢ-ＣＬＬ細胞を、１０％のＦＣＳ、２ｍＭのＬ-グルタミン、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン及び１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンが補填されたＲＰＭＩ１６４０培地で培養し、５％のＣＯ２雰囲気下、３７℃でインキュベートした。２×１０５のＢ-ＣＬＬ細胞を、９６-ウェルプレート中で２００μＬの培地に播種した。インヒビターの存在下、放射線照射(１５０００Ｒａｄ)されたＣＤ４０Ｌ発現Ｌ(ＣＤ４０Ｌ-Ｌ)細胞又はコントロールＬ(Ｌ)細胞と同時培養する前に、Ｂ-ＣＬＬ細胞を、ＭＫ-８８６(特異的ＦＬＡＰインヒビター)(１０−６〜１０−９Ｍ)又はＢＷＡ４Ｃ(特異的５-ＬＯインヒビター)(１０−７〜１０−９Ｍ)を用いて３０分、前処理した。ＬＴＢ４(１０−７Ｍ)は標示された培養物中に存在していた。各試料は３組を代表する。１μＣｉ３Ｈ-チミジンは、９６時間の培養の最後の８時間の間、ウェル中に存在していた。細胞をガラス繊維フィルター上に収集し、放射能を液体シンチレーションカウンターで測定した。
【００３６】
ＣＤ２３、ＣＤ５４及びＣＤ１５０の発現のフローサイトメトリー分析：
(上述したようにして)培養されたＢ-ＣＬＬ細胞を収集し(プラスチックに付着したＬ細胞は用いず)、ＦＡＣＳ検出に使用した。表面マーカーの発現を間接的な免疫蛍光測定により検出した。１００万の細胞／試料を、１％のＦＣＳ及び０．１％のアジ化ナトリウムを含む冷ＰＢＳで洗浄し、ついで関連抗体に暴露した。細胞を洗浄し、ＲＰＥ結合二次抗体と共にインキュベートした。全てのインキュベーションは４℃で行った。
試料を、ベクトン・ディッキンソンＦＡＣＳｃａｎフローサイトメーター(ベクトン・ディッキンソン、マウンテンビュー、ＣＡ)に流した。セルクエストソフトウェア(ベクトン・ディッキンソン)を、試料の取得と分析の双方に使用した。１万の事象をＦＡＣＳｃａｎフローサイトメーターで収集し、セルクエスト(ベクトン・ディッキンソン)ソフトウェアを使用して結果を分析した。
【００３７】
生存細胞のみを、その光散乱(ＦＳＣ／ＳＳＣ)特性に基づいた分析用に考慮した。次の抗体を使用した：ＭＡｂ ＭＨＭ-６(抗ＣＤ２３、Dr. M. Rowe、ウェールズ大学、カーディフ、ＵＫ)、ＭＡｂ ＬＢ-２(抗ＣＤ５４、E.A. Clark、ワシントン大学、シアトル、ＷＡ)、ＭＡｂ ＩＰＯ-３(抗ＳＬＡＭ、S. Sidorenkoからの贈与品、ウクライナ科学アカデミー、キエフ、ウクライナ)及びＲＰＥ結合ウサギ抗マウスＩｇ Ｆ(ａｂ')２(ダコ(Dako)、コペンハーゲン、デンマーク)を二次抗体として使用した。
【００３８】
結果
ロイコトリエン類を産生するＢ-ＣＬＬ細胞の能力を調べた。細胞を、カルシウムイオノフォアＡ２３１８７、アラキドン酸、又はカルシウムイオノフォアとスアラキドン酸併用のいずれかに暴露した。カルシウムイオノフォアＡ２３１８７又はアラキドン酸のみへの暴露では、いずれの細胞クローンも検出可能な量のロイコトリエン類を生成しなかった。カルシウムイオノフォアＡ２３１８７とアラキドン酸を併用した細胞の活性化により、ＬＴＢ４の生成に至った(平均２．６±０．８ｐｍｏｌ／１０６細胞)。カルシウムイオノフォアとアラキドン酸を添加する前に、チオール反応性剤ジアミドと共に無傷細胞をプレインキュベートすることにより、未処理の無傷細胞と比較して、ＬＴＢ４の顕著な生成増に至った(平均３３．５±１．２ｐｍｏｌ／１０６細胞)(図１)。これらの結果は先の報告と一致する(Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, 3521 (1992) 及びEur. J. Biochem. 242, 90 (1996)を参照)。同様の量のＬＴＢ４(平均３４．８±１．７ｐｍｏｌ／１０６細胞)が、アラキドン酸と共にインキュベートした破壊細胞調製物中に生成された。ロイコトリエン類を生成する能力と病気の臨床段階との間には明白な相関関係はなかった(データは示さず)。総合すれば、これらの結果は、調べたＢ-ＣＬＬクローンの全てがＬＴＢ４を生成する能力を有しており、全てのＢ-ＣＬＬクローンは、所定条件下で活性化され得る実質的な量の５-リポキシゲナーゼを含んでいることを証明している。
【００３９】
ＢＬＴ１の発現：
ＢＬＴＲ１の発現に対して、健常なドナーからの末梢血白血球をＦＡＣＳで分析した。顆粒球、リンパ球及び単球のゲートを、前方及び側方散乱光に基づいて設定した。顆粒球にゲートをかけた(及びＣＤ３３陽性の)実質的に全ての細胞がＢＬＴ１を発現した(図２)。単球ゲート(ＣＤ１４陽性)の細胞は、同じパターンのＢＬＴ１発現を示した(データは示さず)。リンパ球ゲートでは、活性化されていない末梢ＣＤ４＋陽性又はＣＤ８＋陽性Ｔリンパ球では、ＢＬＴ１の発現は観察されなかった(図２ｂ及び２ｃ)。これらの結果は、活性化されていない天然のマウスＴリンパ球がＢＬＴ１を発現しないという観察と一致する(Nat. Immunol. 4, 982 (2003)を参照)。対照的に、３０−５０％のＣＤ１９、ＣＤ２０及びＣＤ２２発現末梢Ｂリンパ球は、ＢＬＴ１に対してポジティブに染色された(図２ｄ)。末梢Ｂリンパ球でのＢＬＴ１の発現は顆粒球及び単球における場合よりも弱く、末梢Ｂリンパ球集団内において、徐々に増加する発現パターンを示した。同様の結果が近年報告されている(Int. Immunopharmacol. 3, 1467 (2003)を参照)。
【００４０】
Ｂ-ＣＬＬを患っている５人の患者とＢ細胞前リンパ球性白血病(Ｂ-ＰＬＬ)を患っている２人の患者からのＢ細胞を、ＢＬＴ１の発現についてＦＡＣＳで分析した。ＦＡＣＳで分析したＢＬＴ１の発現は、５つのＢ-ＣＬＬクローンにおいて約１５％から８５％と様々であった(平均４２％)(図２ｅ)。Ｂ-ＰＬＬグループでは、２つの調査クローンで、ＢＬＴ１の平均発現度は７４％であった。
【００４１】
Ｂ-ＣＬＬ細胞中でのＤＮＡ合成に対するロイコトリエン合成インヒビターの効果：
ロイコトリエン類がＢ-ＣＬＬの増殖にとって重要であるかどうかを解明するために、細胞を、ロイコトリエン生合成インヒビターの存在下で培養した。ＭＫ-８８６(特異的ＦＬＡＰインヒビター)又はＢＷＡ４Ｃ(特異的５-リポキシゲナーゼインヒビター)の不存在下又は存在下で、９６時間、Ｂ-ＣＬＬ細胞を、ＣＤ４０Ｌ発現Ｌ細胞又はコントロールＬ細胞と同時培養した。ＣＤ４０-ＣＤ４０Ｌ相互作用によりＢ-ＣＬＬ細胞は活性化した結果、４日間の培養の最後の８時間の間での３Ｈ-チミジン取り込みとして測定して、ＤＮＡ合成が増加した(図３)。１００ｎＭ濃度のＭＫ-８８６は、ＣＤ４０-リガンド刺激により誘導されるＤＮＡ合成を顕著に阻害した(図３Ａ)。血清タンパク質に対するＭＫ-８８６の比較的高い結合性のため(Can. J. Physiol. Pharmacol. 67, 456 (1989)を参照)、ＤＮＡ合成に対する１μＭのＭＫ-８８６の効果も所定の実験において調べた。インヒビターのこの濃度は、ＤＮＡ合成の阻害をほんの少しより顕著に生じさせた。チミジン取り込みに対する１μＭ及び１００ｎＭのＭＫ-８８６の阻害作用は、それぞれ４６及び３８％であった。ロイコトリエンＢ４(最終濃度、１５０ｎＭ)は、ＣＤ４０誘発性チミジン取り込みを増幅しなかった。しかしながら、外因性に加えられたＬＴＢ４(１５０ｎＭ)は、チミジン取り込みに対するＭＫ-８８６の阻害効果をほとんど完全に逆転させた。特異的５-リポキシゲナーゼインヒビターＢＷＡ４Ｃは、ＤＮＡ合成をブロックするのに、ＭＫ-８８６よりも強力なインヒビターである(図３Ｂ)。チミジン取り込みに対するＢＷＡ４Ｃの有意な阻害効果は１０ｎＭで観察された。ＭＫ-８６６での結果と一致して、ＬＴＢ４(１５０ｎＭ)の外因性の添加により、チミジン取り込みに対する１００ｎＭのＢＷＡ４Ｃの阻害作用が、ほとんど完全に逆転した(図３Ｂ)。４日の培養後の細胞生存率は、インヒビター又はＬＴＢ４の不存在下又は存在下の双方で、ＣＤ４０Ｌ-Ｌで刺激された全てのＢ-ＣＬＬ培養物で約８０％であった(データは示さず)。総合すれば、ロイコトリエン合成のこれらの特異的インヒビターは、ＤＮＡ合成の顕著な阻害を低濃度で生じさせ、これは、ＬＴＢ４の外因性の添加により逆転させることができる。
【００４２】
Ｂ-ＣＬＬ細胞中でのＣＤ２３、ＣＤ５４及びＣＤ１５０発現に対するロイコトリエン生合成インヒビター及びＬＴＢ４の効果
ＣＤ２３の発現は、Ｂ細胞の活性化のマーカーである。ＣＤ５４(ＩＣＡＭ-１)は、多くのＢ-ＣＬＬクローンで様々な程度で発現する重要な付着分子である。ＣＤ１５０は、Ｔ細胞及びＢ細胞の双方向刺激に関与している抗原であり、活性化されたＢ細胞でアップレギュレートされる。ＦＡＣＳ分析により、ＣＤ４０-ＣＤ４０Ｌ相互作用が３種全ての抗原の発現を増加させる原因であることが証明された(図４)。１００ｎＭ濃度のＭＫ-８８６及びＢＷＡ４Ｃは、ＣＤ４０により誘発されるＣＤ２３、ＣＤ５４及びＣＤ１５０の発現増加に対して顕著に逆作用した。ロイコトリエンＢ４は、調べた抗原の発現に対して、単独では如何なる有意な効果も生じさせなかった。しかしながら、１５０ｎＭのＬＴＢ４の添加は、抗原発現に対するインヒビターの阻害効果をほとんど完全に逆転させた(図４)。これらの結果は、ＬＴＢ４が、Ｂ-ＣＬＬ細胞の活性化及び組織浸潤に関連したこれらの抗原の発現に関与していることを示している。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】図１は種々の条件下でのＢ-ＣＬＬ細胞によるＬＴＢ４の生合成レベルを示す。Ｂ-ＣＬＬ細胞(１０×１０６)は、カルシウムイオノフォアＡ２３１８７(最終濃度、１μＭ)と共に３７℃で５分間インキュベートし；アラキドン酸(ＡＡ)(最終濃度、４０μＭ)と共に３７℃で５分間インキュベートし；Ａ２３１８７(１μＭ)及びアラキドン酸(４０μＭ)と共に３７℃で５分間インキュベートし；超音波処理し、続いてＡＴＰ(１ｍＭ)、塩化カルシウム(２ｍＭ)及びアラキドン酸(４０μＭ)と共に３７℃で５分間インキュベートし；あるいはジアミド(１００μＭ)と共に２分間プレインキュベート(無傷細胞)し、続いてＡ２３１８７(１μＭ)及びアラキドン酸(４０μＭ)で刺激した。図１に示した値は、６回の独立した実験の平均±標準偏差である。
【図２ａ】図２はヒト白血球でのＢＬＴＲ１の発現を示す。発現ＢＬＴＲ１をＦＡＣＳにより種々の白血球において分析した。特定の白血球は、Ａ）ＰＭＮＬ；Ｂ）末梢ＣＤ８＋Ｔ-細胞；Ｃ）末梢ＣＤ４＋Ｔ-細胞であった。図２に示される全てのグラフにおいて、大パネルは細胞特異的抗原とＢＬＴＲ１の発現を示し、小パネルは陰性のコントロール抗体を用いた結果を示す。図は６回のうちの一つの典型的な実験を示す。
【図２ｂ】図２はヒト白血球でのＢＬＴＲ１の発現を示す。発現ＢＬＴＲ１をＦＡＣＳにより種々の白血球において分析した。特定の白血球は、Ｄ）正常な末梢Ｂ細胞；Ｅ）Ｂ-ＣＬＬ細胞；Ｆ）Ｂ-ＰＬＬ細胞であった。図２に示される全てのグラフにおいて、大パネルは細胞特異的抗原とＢＬＴＲ１の発現を示し、小パネルは陰性のコントロール抗体を用いた結果を示す。図は、Ｂ-ＰＬＬ(２回の実験)を除いて、６回のうちの一つの典型的な実験を示す。
【図３】図３は、Ｂ-ＣＬＬ細胞中でのＣＤ４０Ｌ誘導性チミジン取り込みに対するロイコトリエン生合成インヒビターの効果を示す。Ｂ-ＣＬＬ細胞(２×１０５)を、放射線照射されたＬ細胞単独(Ｌ)、放射線照射されたＣＤ４０Ｌ-Ｌ細胞又は放射線照射されたＣＤ４０Ｌ-Ｌ細胞と標示したインヒビターのいずれかとともに、９６時間同時培養した。インヒビターを使用する場合は、Ｂ-ＣＬＬ細胞を、Ｌ細胞又はＣＤ４０Ｌ-Ｌ細胞との同時培養の３０分前に、インヒビターで前処理した。使用したインヒビターは、Ａ）ＭＫ８８６(１０−６〜１０−９Ｍ(１０−６Ｍは３回の実験でのみ使用))；又はＢ）ＢＷＡ４Ｃ(１０−７〜１０−９Ｍ)であり、３組、９６時間で、ＬＴＢ４(１０−７Ｍ)のある場合とない場合であった。図において報告されているコントロールの結果は、放射線照射されたＣＤ４０Ｌ-Ｌ細胞単独と共に同時培養されたＢ-ＣＬＬ細胞を表す。３Ｈ-チミジン(１μＣｉ)は最後の８時間の間、存在していた。ＣＤ４０Ｌ-Ｌ処理されたＢ-ＣＬＬ細胞の活性化は、種々の実験において３５８０と１５３６９ｃｐｍの間の(３Ｈ-チミジン)取り込み(コントロール)を生じさせた。これを各実験において１００％とした。結果は、８回の別々の実験(２人の患者からのＢ-ＣＬＬ細胞を２回分析した)の平均±標準偏差を示す。スチューデントｔ検定を使用して統計、すなわちコントロール対コントロールプラス標示化合物(類)を算出した(**Ｐ＜０．０１，***Ｐ＜０．００１)。
【図４】図４は、ＣＤ４０Ｌ活性化Ｂ-ＣＬＬでのＣＤ２３、ＣＤ５４及びＣＤ１５０の発現に対するロイコトリエン生合成インヒビターの効果を示す。精製されたＢ-ＣＬＬ細胞を、ＭＫ８８６(１０−７Ｍ)、ＢＷＡ４Ｃ(１０−７Ｍ)、及び／又はＬＢＴ４(１０−７Ｍ)のある場合とない場合において、９６時間、Ｌ細胞又はＣＤ４０Ｌ-Ｌ細胞と共に同時培養した。インヒビターを使用する場合は、Ｂ-ＣＬＬ細胞を、Ｌ細胞又はＣＤ４０Ｌ-Ｌ細胞との同時培養の３０分前に、インヒビターで前処理した。Ｂ-ＣＬＬ細胞を収集し、ＣＤ２３、ＣＤ５４又はＣＤ１５０に対する抗体を用いたＦＡＣＳにより分析した。図は６回のうちの一つの典型的な実験を表す。種々の試料中での標示抗原の異なった発現度合いをより明確に証明するために、挿入した破線は、ＣＤ４０Ｌ-Ｌ単独で刺激されたＢ-ＣＬＬ細胞中での標示抗原の発現を示す。
【図１】
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【図２ａ】
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【図２ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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