(57)【要約】  式Ｉ【化１】2007504111.tif 000054［式中、Ｒ１、Ｒ２、ｎおよびｍは明細書中に記載の通りである］で示される化合物、その製造方法、それらの使用およびそれらを含む医薬組成物。
2007504111.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2007504111.tif 000044
［式中、
ｍおよびｎは、それぞれ独立して、１、２または３であり；
Ｘは、Ｏまたは直接結合であり；
Ｒ１は、
−フェニルアルキル（ここで、アルキルは、直鎖または分岐（Ｃ６−２０）炭素鎖である）であるか；または
−フェニルアルキル（ここで、アルキルは、直鎖または分岐（Ｃ１−３０）炭素鎖である）であり、ここで該フェニルアルキルは、
−所望によりハロゲンにより置換されていて良い直鎖または分岐（Ｃ６−２０）炭素鎖、
−所望によりハロゲンにより置換されていて良い直鎖または分岐（Ｃ６−２０）アルコキシ鎖、
−直鎖または分岐（Ｃ６−２０）アルケニルオキシ、
−フェニルアルコキシ、ハロフェニルアルコキシ、フェニルアルコキシアルキル、フェノキシアルコキシまたはフェノキシアルキル、
−Ｃ６−２０アルキルにより置換されるシクロアルキルアルキル、
−Ｃ６−２０アルキルにより置換されるヘテロアリールアルキル、
−ヘテロ環式Ｃ６−２０アルキル、または
−Ｃ２−２０アルキルにより置換されるヘテロ環式アルキル
によりフェニル残基にて置換されており、
かつ、前記アルキル部分は、
−炭素鎖にて、二重結合、三重結合、Ｏ、Ｓ、スルフィニル、スルホニルまたはＮＲ５（ここで、Ｒ５は、Ｈ、アルキル、アラルキル、アシルまたはアルコキシカルボニルである）から選択される結合またはヘテロ原子、および
−置換基として、アルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アラルキルオキシ、アシル、アルキルアミノ、アルキルチオ、アシルアミノ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アシルオキシ、アルキルカルバモイル、ニトロ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシまたはカルボキシ、
を有し得、そして
Ｒ２は、
【化２】
2007504111.tif 000045
〔式中、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して、ＨまたはＣ１−４アルキル（ここで、アルキルは、所望により１、２または３個のハロゲン原子により置換されていて良い）である〕である］
で示される、遊離型または塩形態の化合物。
【請求項２】
式ＩＩ：
【化３】
2007504111.tif 000046
［式中、ｍ、ｎ、Ｘ、Ｒ１およびＲ２は、式Ｉに記載の通りである］
で示される化合物であって、その化合物の７０重量％以上は、ＲまたはＳエナンチオマーの形態である化合物。
【請求項３】
下記の三次元構造
【化４】
2007504111.tif 000047
を有する本質的に純粋なエナンチオマーの形態である請求項１に記載の式Ｉの化合物または請求項２に記載の式ＩＩの化合物であって、好ましくはリン酸モノ−［２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−４−（４−オクチル−フェニル）−ブチル］エステルおよびリン酸モノ−［２−ヒドロキシメチル−４−（４−オクチル−フェニル）−２−（１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−ブチル］エステルのＳエナンチオマーである化合物。
【請求項４】
請求項２に記載の式ＩＩの化合物と芳香族１，２−ジカルバルデヒドを反応させ、得られる式Ｉの化合物を遊離型または塩形態で回収することを含む、式Ｉの化合物を製造するための方法。
【請求項５】
式ＩＩＩ、ＩＩＩａまたはＩＩＩｂ：
【化５】
2007504111.tif 000048
【化６】
2007504111.tif 000049
【化７】
2007504111.tif 000050
［式中、ｎ、ｍ、Ｘ、Ｒ１およびＲ２は上記の通りであり、Ｒ６はアミノ保護基であり、Ｒ６’は、同時にＯＨおよびアミノ保護基である］
で示される化合物の７０重量％以上がＲまたはＳエナンチオマーの形態である、式ＩＩＩ、ＩＩＩａまたはＩＩＩｂの化合物を脱保護すること；そして要すれば、遊離型で得られる式ＩＩの化合物を所望の塩形態に変換すること、またはその逆も含む、請求項２に記載の化合物を製造するための方法。
【請求項６】
カルバミン酸キニーネまたはカルバミン酸キニジンに基づくキラルイオン交換相を用いる高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によりエナンチオマーを分離することを含む、式Ｉの化合物のＲおよびＳエナンチオマーを分離するための方法。
【請求項７】
（ａ）試料中に存在する式ＩＩの化合物と芳香族１，２−ジカルバルデヒドを反応させ、式Ｉの化合物を形成し、そしてＨＰＬＣにより式Ｉの化合物のＲおよびＳ異性体を分離することを含む、試料中に存在する式ＩＩの化合物のＲおよび／またはＳ異性体の量を測定するための方法。
【請求項８】
医薬としての使用のための、遊離型または薬学的に許容される塩形態の請求項２に記載の化合物。
【請求項９】
急性または慢性移植拒絶反応、またはＴ細胞仲介炎症性疾患あるいは自己免疫性疾患の、かかる処置を必要とする対象における予防または処理のための方法であって、請求項２に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の有効量を該対象に投与することを含む方法。
【請求項１０】
式ＩＩＩ、ＩＩＩａまたはＩＩＩｂ：
【化８】
2007504111.tif 000051
【化９】
2007504111.tif 000052
【化１０】
2007504111.tif 000053
［式中、ｎ、ｍ、Ｘ、Ｒ１およびＲ２は、請求項１に記載の通りであり、Ｒ６’は、同時にＯＨおよびアミノ保護基である］
で示される、遊離型または塩形態の化合物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、有機化合物、その製造方法およびそれらを含む医薬組成物に関する。
より特には、本発明は、式Ｉ：
【化１】
2007504111.tif 000003
［式中、
ｍおよびｎはそれぞれ、独立して、１、２または３であり；
Ｘは、Ｏまたは直接結合であり；
Ｒ１は、
−フェニルアルキル（ここで、アルキルは、直鎖または分岐（Ｃ６−２０）炭素鎖である）であるか；または
−フェニルアルキル（ここで、アルキルは、直鎖または分岐（Ｃ１−３０）炭素鎖である）であり、ここで該フェニルアルキルは、
−所望によりハロゲンにより置換されていて良い直鎖または分岐（Ｃ６−２０）炭素鎖、
−所望によりハロゲンにより置換されていて良い直鎖または分岐（Ｃ６−２０）アルコキシ鎖、
−直鎖または分岐（Ｃ６−２０）アルケニルオキシ、
−フェニルアルコキシ、ハロフェニルアルコキシ、フェニルアルコキシアルキル、フェノキシアルコキシまたはフェノキシアルキル、
−Ｃ６−２０アルキルにより置換されるシクロアルキルアルキル、
−Ｃ６−２０アルキルにより置換されるヘテロアリールアルキル、
−ヘテロ環式Ｃ６−２０アルキル、または
−Ｃ２−２０アルキルにより置換されるヘテロ環式アルキル
によりフェニル残基にて置換されており、
かつ、前記アルキル部分は、
−炭素鎖にて、二重結合、三重結合、Ｏ、Ｓ、スルフィニル、スルホニルまたはＮＲ５（ここで、Ｒ５は、Ｈ、アルキル、アラルキル、アシルまたはアルコキシカルボニルである）から選択される結合またはヘテロ原子、および
−置換基として、アルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アラルキルオキシ、アシル、アルキルアミノ、アルキルチオ、アシルアミノ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アシルオキシ、アルキルカルバモイル、ニトロ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシまたはカルボキシ、
を有し得、そして
【０００２】
Ｒ２は、
【化２】
2007504111.tif 000004
〔式中、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して、ＨまたはＣ１−４アルキル（ここで、アルキルは、所望により１、２または３個のハロゲン原子により置換されていて良い）である〕である］
で示される、遊離型または塩形態の化合物を提供する。
【０００３】
ハロゲンは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである。アルキルまたはアルコキシは、直鎖または分岐鎖であり得る。
シクロアルキルは、好ましくはＣ３−１０シクロアルキル、より好ましくはＣ３−８シクロアルキルであり、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルまたはシクロヘプチルが含まれる。
アシルは、基Ｒｙ−ＣＯ−（ここで、ＲｙはＣ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、フェニルまたはフェニル−Ｃ１−４アルキルである）であり得る。
【０００４】
式Ｉの化合物中、Ｒ１としての炭素鎖が置換されるとき、ハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシまたはカルボキシにより置換されるのが好ましい。前記炭素鎖が、所望により置換フェニレンで中断されるとき、その炭素鎖は好ましくは非置換である。フェニレン部分が置換されるとき、ハロゲン、ニトロ、アミノ、メトキシ、ヒドロキシまたはカルボキシにより置換されるのが好ましい。
【０００５】
本発明の化合物にて、下記の意味は個別にまたはいずれかの下位の組合せであるのが好ましい：
１．ｍおよびｎはそれぞれ１または２、好ましくは１である。
２．ＸはＯである。
３．Ｒ１は、Ｃ１３−２０アルキルであり、所望によりニトロ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシまたはカルボキシにより置換されていてよく、より好ましくはＲ１は、所望によりハロゲンにより置換されていてよいＣ６−１４−アルキル鎖により置換されるフェニルアルキルであり、前記アルキル部分は、所望によりヒドロキシにより置換されていてよいＣ１−６アルキルである。より好ましくは、Ｒ１は、直鎖または分岐鎖、好ましくは直鎖Ｃ６−１４アルキル鎖によりフェニルを置換されるフェニル−Ｃ１−６アルキル、例えば、フェニル−Ｃ１−６アルキル、例えば、フェニル−Ｃ２アルキルである。前記Ｃ６−１４アルキル鎖は、オルト、メタまたはパラ、好ましくはパラであり得る。
４．Ｒ３およびＲ４はそれぞれＨである。
【０００６】
特に好ましい化合物は、リン酸モノ−［２−ヒドロキシメチル−４−（４−オクチル−フェニル）−２−（１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−ブチル］エステルである。
式Ｉの化合物は、遊離型または塩形態で、例えば、塩酸、臭化水素または硫酸などの例えば無機酸との付加塩、酢酸、フマル酸、マレイン酸、安息香酸、クエン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸またはベンゼンスルホン酸塩などの有機酸との塩で存在し得る；Ｒ３またはＲ４がＨであるとき、Ｒ２は、例えばアンモニウム塩またはナトリウム、カリウム、カルシウム、亜鉛あるいはマグネシウム、またはその混合物などの金属との塩などの塩形態でも存在し得る。式Ｉの化合物、および水和物または溶媒和物の形態のその塩もまた、本発明の一部である。
【０００７】
式Ｉの化合物は、分子内に１個またはそれ以上の不斉中心を有し、故に様々な光学異性体を得ることができる。本発明はまた、エナンチオマー、ラセミ体、ジアステレオマーおよびその混合物を包含する。その不斉炭素原子中心は、ＲまたはＳ配置を有し得る。さらに、式Ｉの化合物が幾何異性体を含むとき、本発明はシス化合物、トランス化合物およびその混合物を包含する。同じことが、上記のような不斉炭素原子または不飽和結合を示す出発物質に関しても適用される。
【０００８】
式Ｉの化合物は、式ＩＩ：
【化３】
2007504111.tif 000005
［式中、ｍ、ｎ、Ｘ、Ｒ１およびＲ２は式Ｉに記載の通りである］
で示される化合物と、芳香族１，２−ジカルバルデヒド、例えば、ベンゼン−１，２−ジカルバルデヒドを反応させ、得られる式Ｉの化合物を遊離型または塩形態で回収することにより製造され得る。
【０００９】
本方法は、当技術分野で公知の方法、例えば、実施例に記載の方法に従って行われ得る。
式ＩＩの化合物（例えば、そのラセミ混合物）を、ＷＯ ０２／１８３９５またはＷＯ ０２／０７６９９５に記載の通りに得ることができる。
【００１０】
本発明はまた、式Ｉまたは式ＩＩの化合物を提供し、ここで前記化合物の７０重量％以上はＳエナンチオマーの形態であるか、または前記化合物の７０重量％以上はＲエナンチオマーの形態であり、例えば、９０％以上はＲまたはＳエナンチオマーの形態である。より好ましくは前記化合物の９５重量％以上、例えば、９９重量％以上はＲまたはＳエナンチオマーの形態である。故に、本発明は、式Ｉまたは式ＩＩの化合物の、本質的に純粋なＲまたはＳエナンチオマー（例えば、Ｒエナンチオマーを本質的に不含有であるＳエナンチオマー、またはその逆もある）、好ましくはＳエナンチオマーに関し得る。リン酸モノ−［２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−４−（４−オクチル−フェニル）−ブチル］エステル（ＦＴＹ７２０−リン酸塩）およびリン酸モノ−［２−ヒドロキシメチル−４−（４−オクチル−フェニル）−２−（１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−ブチル］エステルの、本質的に純粋な（例えば９９重量％以上）ＲまたはＳエナンチオマー、とりわけＳエナンチオマーが特に好ましい。
【００１１】
下記の三次元構造を有する化合物が、一般的に好ましい：
【化４】
2007504111.tif 000006
式ＩおよびＩＩの化合物のエナンチオマーは、標準方法により十分に分離され得ない。本発明に従い、エナンチオマーの分離は、新規の分離技術および合成法の使用により達成される。
【００１２】
前記化合物の７０重量％以上がＲまたはＳエナンチオマーの形態である、例えば、本質的に純粋なＲまたはＳエナンチオマーである式Ｉの化合物を、
ａ）キラル固定相のクロマトグラフィーを用いて、式Ｉの化合物のラセミ混合物にてＲエナンチオマーからＳエナンチオマーを分離すること；または
ｂ）前記化合物の７０重量％以上がＲまたはＳエナンチオマーの形態である式ＩＩの化合物、例えば、式ＩＩの化合物の本質的に純粋なＲまたはＳエナンチオマーと、芳香族１，２−ジカルバルデヒド、例えば、ベンゼン−１，２−ジカルバルデヒドを反応させること
により得ることができる。
【００１３】
方法ａ）に従い、クロマトグラフィー分離は、好ましくは商標名ＰｒｏｎｔｏＳＩＬ  Ｃｈｉｒａｌ  ＡＸ  ＱＮ−１として市販されている、キラルセレクターとしてカルバミン酸キニーネまたはカルバミン酸キニジンに基づくキラルイオン交換相、例えば、カルバミン酸キニーネ相（８Ｓ，９Ｒ）を用いて行われる：
【化５】
2007504111.tif 000007
【００１４】
式ＩＩの化合物（ここで、該化合物の７０重量％以上がＲまたはＳエナンチオマーの形態である）を、式ＩＩＩ：
【化６】
2007504111.tif 000008
［式中、ｍ、ｎ、Ｘ、Ｒ１およびＲ２は、上記で定義の通りであり、Ｒ６はアミノ保護基である］
で示される化合物（ここで、式ＩＩＩの化合物の７０重量％以上がＲまたはＳエナンチオマーの形態である）を脱保護すること、および要すれば、遊離型で得られる式Ｉの化合物を所望の塩形態に変換すること、またはその逆により得ることができる。
【００１５】
Ｒ６としての適したアミノ保護基の例は、例えば、“Protective Groups in Organic Synthesis” T.W. Greene, J.Wiley ＆ Sons NY, 2nd ed., chapter 7, 1991、およびその引用文献に記載されており、例えばアシル、例えばｔｅｒｔ−ブトキシ−カルボニル、ベンジルオキシカルボニル、９−フルオレニルメトキシカルボニル、トリフルオロアセチル、トリメチルシリルエタンスルホニルなどである。
【００１６】
あるいは、より好ましくは式ＩＩの化合物（ここで、該化合物の７０重量％以上がＲまたはＳエナンチオマーの形態である）を、式ＩＩＩａまたはＩＩＩｂ：
【化７】
2007504111.tif 000009
【化８】
2007504111.tif 000010
［式中、ｎ、ｍ、Ｘ、Ｒ１およびＲ２は、上記に定義の通りであり、Ｒ６’は同時にＯＨおよびアミノ保護基（例えば、Ｒ６’とそれが結合するＯおよびＮ原子、不斉炭素原子および１から３個のさらなる炭素原子とが一緒になって、環基、例えば、５から７員のヘテロ環、例えば、オキサゾリジン−２−オン（ＩＩＩａ中、Ｒ６’は−Ｃ（Ｏ）−である）または２−メチル−４，５−ジヒドロ−オキサゾール（ＩＩＩｂ中、Ｒ６’は−Ｃ（ＣＨ３）−である）を形成する）である］
で示される化合物（ここで、式ＩＩＩａまたはＩＩＩｂの化合物の７０重量％以上がＲまたはＳエナンチオマーの形態である）を脱保護することにより得ることができる。
【００１７】
式ＩＩＩ、ＩＩＩａまたはＩＩＩｂの化合物におけるＲ６またはＲ６’保護基の除去は、当技術分野で公知の方法、例えば水酸化バリウムなどの水酸化物を用いて、例えば塩基性媒体中、例えば加水分解により簡便に行うことができる。それはまた、例えば、J.Org.Chem., 1998, 63, 2375−2377に記載のように、例えばパールマン触媒の存在下、加水分解により行うこともできる。
【００１８】
故に、さらなる他の局面にて本発明は、遊離型または塩形態の、上記の式ＩＩＩ、ＩＩＩａまたはＩＩＩｂの化合物を提供する。式ＩＩＩ、ＩＩＩａまたはＩＩＩｂの化合物は、分子内に１個またはそれ以上の不斉中心を有し、それ故に様々な光学異性体が得られ得る。本発明はまた、エナンチオマー、ラセミ体、ジアステレオマーおよびそれらの混合物を含む。
【００１９】
式ＩＩＩ、ＩＩＩａまたはＩＩＩｂの化合物におけるＲ６またはＲ６’保護基の除去は、当技術分野で公知の方法、例えば水酸化バリウムなどの水酸化物を用いて、例えば塩基性媒体中、例えば加水分解により簡便に行うことができる。それはまた、例えば、J.Org.Chem., 1998, 63, 2375−2377に記載のように、例えばパールマン触媒の存在下、加水分解により行うことができる。
【００２０】
７０重量％以上のＲまたはＳエナンチオマーを含む式ＩＩＩ、ＩＩＩａまたはＩＩＩｂの化合物を、多糖類に基づくキラル固定相、好ましくは、例えば商標名ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＡＳの下に利用可能な、シリカゲル基質をアミロース・トリス［（Ｓ）−α−メチルベンジルカルバメート］でコートしたアミロース型相を備えるクロマトグラフィー（ＭＰＬＣ、ＨＰＬＣ、ＳＦＣ）または擬似移動床（多層カラム）クロマトグラフィーを用いて下記に示すように、式ＩＩＩ、ＩＩＩａまたはＩＩＩｂの化合物のラセミ混合物にてＲエナンチオマーからＳエナンチオマーを分離することによるか、またはＷＯ ９７／０４０１１およびＷＯ ９７／４９７３３に記載の方法により製造されるような固定化形態で得ることができる：
【００２１】
【化９】
2007504111.tif 000011
【００２２】
あるいは、７０重量％以上のＲまたはＳエナンチオマーを含む式ＩＩＩ、ＩＩＩａまたはＩＩＩｂの化合物を、７０重量％以上のＲまたはＳエナンチオマーを含む式ＩＶ、ＩＶａまたはＩＶｂ：
【化１０】
2007504111.tif 000012
【化１１】
2007504111.tif 000013
【化１２】
2007504111.tif 000014
［式中、ｍ、ｎ、Ｘ、Ｒ１、Ｒ６およびＲ６’は、上記に定義の通りであり、Ｒ２’は、
【化１３】
2007504111.tif 000015
〔式中、Ｒ３’およびＲ４’はそれぞれ、加水分解性基である〕である］
で示される化合物にてＲ２’に存在する加水分解性基を除去することにより得ることができる。
【００２３】
好ましくはＲ３’およびＲ４’は同一であり、例えば、フェニルまたはベンジルの意味を有するか、または１，５−ジヒドロ−２，４，３−ベンゾジオキサホスフェピンなどの還系を共に形成する。
【００２４】
７０重量％以上のＲまたはＳエナンチオマーを含む式ＩＶ、ＩＶａまたはＩＶｂの化合物を、例えば、式ＩＩＩ、ＩＩＩａまたはＩＩＩｂの化合物のエナンチオマーの分離について上記のように、式ＩＶ、ＩＶａまたはＩＶｂの化合物のラセミ混合物にて、ＲエナンチオマーからＳエナンチオマーを分離することにより得ることができる。
【００２５】
式ＩＶ、ＩＶａまたはＩＶｂの化合物、例えば、そのラセミ混合物（ここで、Ｘは、Ｏである）を、式Ｖ、ＶａまたはＶｂ：
【化１４】
2007504111.tif 000016
【化１５】
2007504111.tif 000017
【化１６】
2007504111.tif 000018
［式中、ｍ、ｎ、Ｒ１、Ｒ６およびＲ６’は上記に定義の通りである］
で示される化合物を、リン酸化試薬、例えば、ホスホロクロリデート、例えば、ジフェニルクロロホスフェートまたはジベンジルクロロホスフェート、シアノエチルホスフェート、Ｎ−フェニルホスホラミデートなどのホスホラミデート、３−（ジエチルアミノ）−１，５−ジヒドロ−２，４，３−ベンゾジオキサホスフェピンなどと反応させることにより得ることができる。前記反応を、当技術分野で公知の方法、例えば、上記のJ.Org.Chem.に開示のように行うことができる。式ＩＩＩａの化合物にて、前記アミノ基は、好ましくは、Ｒ４がアシル以外のときＲ’４としての保護形態である。
【００２６】
式ＩＶ、ＩＶａまたはＩＶｂの化合物、例えば、そのラセミ混合物（ここで、Ｘは直接結合である）を、式Ｖ’、Ｖａ’またはＶｂ’：
【化１７】
2007504111.tif 000019
【化１８】
2007504111.tif 000020
【化１９】
2007504111.tif 000021
［式中、ｍ、ｎ、Ｒ１、Ｒ６およびＲ６’は上記に定義の通りであり、Ｙは脱離基、例えば、Ｂｒである］
で示される化合物を、還元条件下、例えばＮａＨの存在下、リン酸化試薬、例えば、亜リン酸ジエチルと反応させることにより得ることができる。前記反応を、当技術分野で公知の方法により行うことができる。
【００２７】
あるいは、キラル分離を前記方法の前段階に行うことができる。故に、７０重量％以上のＲまたはＳエナンチオマーを含む式ＩＶ、ＩＶａまたはＩＶｂの化合物を、７０重量％以上のＲまたはＳエナンチオマーを含む式Ｖ、Ｖａ、Ｖｂ、Ｖ’、Ｖａ’またはＶｂ’の化合物とリン酸化試薬を反応させることにより得ることができる。７０重量％以上のＲまたはＳエナンチオマーを含む式Ｖ、Ｖａ、Ｖｂ、Ｖ’、Ｖａ’またはＶｂ’を、式ＩＶ、ＩＶａまたはＩＶｂの化合物のエナンチオマーの分離について上記のように、多糖類に基づくキラル固定相を備えるＨＰＬＣまたは擬似移動床（多層カラム）クロマトグラフィーを用いて、式Ｖ、Ｖａ、Ｖｂ、Ｖ’、Ｖａ’またはＶｂ’の化合物のラセミ混合物にてＲエナンチオマーからＳエナンチオマーを分離することにより得ることができる。
【００２８】
式ＶまたはＶ’の化合物を、式ＶＩ：
【化２０】
2007504111.tif 000022
［式中、ｍ、ｎおよびＲ１は上記に定義の通りであり、Ｒ９はＯＨまたは脱離基、例えば、Ｂｒである］
で示される化合物を、アミノ保護基供与化合物と反応させることにより製造することができる。式Ｖａ、Ｖａ’、ＶｂまたはＶｂ’の化合物を、式ＶＩの化合物をＯＨおよびアミノ保護化合物と反応させることにより製造することができ、例えばＯＨおよびアミノ保護を、環状基、例えば５から７員のヘテロ環、例えば、オキサゾリジン−２−オンまたは２−メチル−４，５−ジヒドロ−オキサゾールを得るために、式ＶＩの遊離アミノアルコールまたはアミノジオールを、例えば、Ｃｂｏ−Ｃｌ、Ｂｏｃ無水物、オルト酢酸トリエチルおよびアセトニトリル、またはホスゲンと塩基性条件下で反応させることにより同時に行うことができる。
【００２９】
本方法のいずれの段階においても、上記の式のすべてのＲ１は、所望により、公知の方法を用いて別のＲ１基に変換されていてよい。例えば、式Ｖｂの化合物（ここで、Ｒ１は、（４−ベンジルオキシ−フェニル）−エチルである）を、（ａ）（４−ヒドロキシ−フェニル）−エチル残基を除去するための水素化によるＲ１からのベンジル基の除去、次に（ｂ）１−ブロモ−６−フルオロヘキサンとの反応により、別の式Ｖｂの化合物（ここで、Ｒ１は、［４−（６−フルオロ−ヘキシルオキシ）−フェニル］−エチルである）に変換することができる。その後、この別の式Ｖｂの化合物をキラル分離するかまたは上記のように式ＩＶｂの化合物に変換する。
【００３０】
出発物質として用いる７０重量％以上のＲまたはＳエナンチオマーを含む式ＩＩＩ、ＩＩＩａ、ＩＩＩｂ、ＩＶ、ＩＶａおよびＩＶｂの化合物、およびそれらの塩はまた、新規であり、かつ本発明の一部である。
【００３１】
さらなる他の局面にて、式ＩＩの化合物（ここで、化合物の７０重量％以上がＲまたはＳエナンチオマーの形態である）を、式ＶＩＩ：
【化２１】
2007504111.tif 000023
［式中、ｍ、ｎ、ＸおよびＲ１は上記に定義の通りであり、Ｒ２’’は、
【化２２】
2007504111.tif 000024
〔式中、Ｒ３’およびＲ４’はそれぞれ、加水分解性基、例えば、ｔｅｒｔ−ブチルであり、Ｒ７はアミノ保護基、例えば、ベンジルオキシカルボニルである〕である］
で示される化合物（ここで、化合物の７０重量％以上がＲまたはＳエナンチオマー形態である）を脱保護し、加水分解することにより得ることができる。
【００３２】
式ＶＩＩの化合物（ここで、化合物の７０重量％以上がＲまたはＳエナンチオマーの形態である）を、式ＶＩＩＩ
【化２３】
2007504111.tif 000025
の化合物（ここで、化合物の７０重量％以上がＲまたはＳエナンチオマーの形態である）を、例えば、上記のようなリン酸化試薬と反応させることにより得ることができる。
【００３３】
出発物質の製造について特に記載していない限り、その化合物は公知であるか、または当技術分野で公知の方法または下記の実施例にて記載の方法と類似のように製造することができる。
【００３４】
下記の実施例は、本発明を説明する。
ＲＴ                  ＝  室温
ＣＢＯ                ＝  ベンジルオキシカルボニル
ＦＴＹ７２０          ＝  ２−アミノ−２−［２−（４−オクチルフェニル）エチル］プロパン−１，３−ジオール
ＥＤＴＡ              ＝  エチレンジアミンテトラ酢酸
ＯＰＡ                ＝  オルト−フタルアルデヒド（ベンゼン−１，２−ジカルバルデヒド）
【００３５】
実施例１：リン酸モノ−［（Ｒ／Ｓ）−２−ヒドロキシメチル−４−（４−オクチル−フェニル）−２−（１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−ブチル］エステル
【化２４】
2007504111.tif 000026
【００３６】
ａ）（Ｒ／Ｓ）−４−ヒドロキシメチル−４−［２−（４−オクチル−フェニル）−エチル］−オキサゾリジン−２−オン：
クロロギ酸ベンジル（０．４５ｍｌ；３．２ｍｍｏｌ）を、ＦＴＹ７２０．ＨＣｌ（１．０３ｇ、３ｍｍｏｌ）の２Ｎ  ＮａＯＨ（２０ｍｌ）懸濁液に加える。反応を一晩ＲＴに維持し、反応を完全にするためにさらにクロロギ酸ベンジル（０．９ｍｌ；６．４ｍｍｏｌ）を加える。ＲＴで２日後、反応物を１Ｎ  ＨＣｌで酸性化し、塩化メチレンで抽出し、移動相として塩化メチレン／メタノール／酢酸５０％（９／１／０．１２５）を用いたシリカゲルのカラムで精製する。
［Ｍ＋Ｈ］＋：３３４（ＥＳＩ−ＭＳ）
【００３７】
ｂ）（Ｒ／Ｓ）−４−［２−（４−オクチル−フェニル）−エチル］−４−（３−オキソ−１，５−ジヒドロ−３λ＊５＊−ベンゾ［ｅ］［１，３，２］ジオキサホスフェピン−３−イルオキシメチル）−オキサゾリジン−２−オン：
ａ）の最終産物（２．４ｇ；７．２ｍｍｏｌ）の塩化メチレン／ＴＨＦ  １／１（１００ｍｌ）溶液に、０℃で、テトラゾール（再結晶化；２．５２ｇ；３６ｍｍｏｌ）および３−（ジエチルアミノ）−１，５−ジヒドロ−２，４，３−ベンゾジオキサホスフェピントリフェニル−亜リン酸塩（５．１７ｇ；２１．６ｍｍｏｌ）を加える。ＲＴで１８時間後、Ｈ２Ｏ２（８．２ｍｌ［３０％水溶液］；７２ｍｍｏｌ）を、（冷ましながら）溶液に加え、さらに９０分間ＲＴで維持する。飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液（１００ｍｌ）でクエンチ後、反応物を酢酸エチル（３回）で抽出する。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、化合物を移動相としてシクロヘキサン／酢酸エチル  １／１を用いて精製する。
【００３８】
ｃ）リン酸モノ−｛（Ｒ／Ｓ）−４−［２−（４−オクチル−フェニル）−エチル］−２−オキソ−オキサゾリジン−４−イルメチル｝エステル
工程ｂ）の最終産物（１．０３ｇ；２ｍｍｏｌ）を、通常の圧力（Ｐｄ／Ｃ１０％；５０ｍｇ）で９０分かけて水素化する。ろ過後、反応物を濃縮し、さらなる精製なしに工程ｄ）に用いる。
【００３９】
ｄ）リン酸モノ−［（Ｒ／Ｓ）−２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−４−（４−オクチル−フェニル）−ブチル］エステル（（Ｒ／Ｓ）−ＦＴＹ７２０−リン酸塩）
工程ｃ）の最終産物のエタノール溶液（２０ｍｌ）に、ＬｉＯＨ（２０ｍｌ；１０％水溶液）を加える。還流にて２４時間後、反応物をＨＣｌ（水中１Ｎ）で中和し濃縮する。残渣を氷酢酸（５ｍｌ）で処理し、水（５０ｍｌ）の添加後に生じる最終産物を沈殿させる。ろ過後、（水で）洗浄し乾燥させることにより、純粋な最終産物をさらなる精製なしに得る。
【００４０】
ｅ）リン酸モノ−［（Ｒ／Ｓ）−２−ヒドロキシメチル−４−（４−オクチル−フェニル）−２−（１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−ブチル］エステル（ＯＰＡ誘導体化）
工程ｄ）の最終産物（（Ｒ／Ｓ）−ＦＴＹ７２０−リン酸塩）（５０ｍｇ；０．１２５ｍｍｏｌ）を、ＥＤＴＡ（０．５ｍｌ；水中１０ｍＭ）およびホウ酸水溶液（０．５ｍｌ；水中３％；ＫＯＨ１０％水溶液でｐＨ１０．５に合わせた）の溶液に懸濁する。ＯＰＡ（３３ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を添加後、エタノール（０．５ｍｌ）に溶解し、反応を１時間ＲＴに維持する（超音波）。その後、ｐＨを３．５に合わせ（ＨＣｌ水溶液；１Ｎ）、酢酸エチル（３回）で抽出する。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、前記化合物を移動相として塩化メチレン／メタノール（９５／５→０／１００）を用いてシリカゲルで精製する。
［Ｍ−Ｈ］−：５０２．５（ＥＳＩ−ＭＳ）
【００４１】
実施例２：リン酸モノ−［（Ｒ）−２−ヒドロキシメチル−４−（４−オクチル−フェニル）−２−（１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−ブチル］エステル
【化２５】
2007504111.tif 000027
実施例２を、実験規模(preparative scale)でのＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＡＳカラムのＨＰＬＣ（移動相としてエタノール／ｎ−ヘキサン  ４０／６０）によるか、または固定化アミロース・トリス［（Ｓ）−α−メチルベンジルカルバメートでコートしたシリカゲルを充填したＨＰＬＣカラムの擬似移動床クロマトグラフィー（移動相としてｎ−ヘキサン／エタノール／クロロホルム  ６０／２０／２０；供給濃度、１％）により、工程ｂ）の最終産物を分離し、実施例１に記載の工程ｃ）、ｄ）およびｅ）を適用した後に得る。
【００４２】
実施例３：リン酸モノ−［（Ｓ）−２−ヒドロキシメチル−４−（４−オクチル−フェニル）−２−（１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−ブチル］エステル
【化２６】
2007504111.tif 000028
実施例３を、実験規模でのＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＡＳカラムのＨＰＬＣ（移動相としてエタノール／ｎ−ヘキサン  ４０／６０）によるか、または固定化アミロース・トリス［（Ｓ）−α−メチルベンジルカルバメートでコートしたシリカゲルで充填したＨＰＬＣカラムの擬似移動床クロマトグラフィー（移動相としてｎ−ヘキサン／エタノール／クロロホルム  ６０／２０／２０；供給濃度、１％）により工程ｂ）の最終産物を分離し、実施例１に記載の工程ｃ）、ｄ）およびｅ）に適用した後に得る。
【００４３】
実施例４：（（Ｒ／Ｓ）−４−｛２−［４−（６−フルオロ−ヘキシルオキシ）−フェニル］−エチル｝−２−メチル−４，５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イル）−メタノール
ａ）４−（２−ヒドロキシ−エチル）−フェノール（５０ｇ、０．３６ｍｏｌ）のエタノール溶液（４００ｍｌ）に、炭酸カリウム（７５ｇ、０．５４ｍｏｌ、１．５当量）および臭化ベンジル（４７．２ｍｌ、０．３９ｍｏｌ、１．１当量）を加え、反応混合物をＲＴで一晩撹拌する。その後、反応混合物をセライトを通してろ過し、真空下で濃縮する。２−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−エタノールを、ジエチルエーテルで結晶化後に単離する。
【００４４】
ｂ）２−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−エタノール（７８．７２ｇ、０．３４ｍｏｌ）の塩化メチレン溶液（４００ｍｌ）に、トリエチルアミン（６７．３ｍｌ、０．４４ｍｏｌ、１．４当量）を加え、その後、０℃で、塩化メシル（３４．８ｍｌ、０．４４ｍｏｌ、１．３当量）を加える。反応混合物を０℃で３０分間撹拌し、ＲＴにする。反応混合物を塩化メチレン（２×３００ｍｌ）で抽出し、その後合わせた有機層を塩水（２×３００ｍｌ）で洗浄し、真空下で濃縮する。
【００４５】
ｃ）産物の酢酸エチル溶液（６００ｍｌ）に、ヨウ化ナトリウム（６７．２ｇ、０．４４ｍｏｌ、１．３当量）を加え、反応混合物を還流下で６時間撹拌する。ろ過後、有機層を塩水で洗浄し（３×４００ｍｌ）、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、真空下で濃縮する。１−ベンジルオキシ−４−（２−ヨード−エチル）−ベンゼンを、ジエチルエーテルで結晶化後に単離する。
【００４６】
ｄ）アセトアミドマロン酸（５９．４ｇ、０．２７ｍｏｌ、２当量）の乾燥ジメチルホルムアミド溶液（４００ｍｌ）に、０℃で不活性雰囲気下にて水素化ナトリウム（油中６０％）（９．９４ｇ、０．４９ｍｏｌ、１．８当量）を加え、反応混合物を０℃で３時間撹拌する。その後、１−ベンジルオキシ−４−（２−ヨード−エチル）−ベンゼン（４６．８ｇ、０．１３ｍｏｌ、１当量）の乾燥ジメチルホルムアミド溶液（２５０ｍｌ）を、０℃でゆっくりと加え、反応混合物をＲＴで一晩撹拌する。反応混合物を数滴のメタノールでクエンチし、真空下でほとんど乾固するまで濃縮し、その後、酢酸エチルで抽出し、次に１Ｎ  ＨＣｌ（２×５００ｍｌ）、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２×５００ｍｌ）および塩水（２×５００ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、真空下で濃縮する。２−アセチルアミノ−２−［２−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−エチル］−マロン酸ジエチルエステルを、ジエチルエーテルを用いる複数回の結晶化後に単離する。
【００４７】
ｅ）２−アセチルアミノ−２−［２−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−エチル］−マロン酸ジエチルエステル（４４．１ｇ、０．１ｍｏｌ）のエタノール／水（２／１）溶液（２８５ｍｌ／２８５ｍｌ）に、ＣａＣｌ２（２８．５ｇ、０．２６ｍｏｌ、２．５当量）およびＮａＢＨ４（１９．４ｇ、０．５２ｍｏｌ、５．０当量）を少しずつ加え、反応混合物をＲＴで一晩撹拌する。０℃にて、反応混合物を、メタノール（１０ｍｌ）を滴下して慎重にクエンチし、真空下でほとんど乾固するまで濃縮する。粗混合物を酢酸エチル（４×５００ｍｌ）で抽出し、次に１Ｎ  ＨＣｌ（２×３００ｍｌ）、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２×３００ｍｌ）および塩水（２×３００ｍｌ）で洗浄する。その後、合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、真空下で濃縮する。Ｎ−［３−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−１，１−ビス−ヒドロキシメチル−プロピル］−アセトアミドを、さらなる精製なしに用いる。
【００４８】
ｆ）粗Ｎ−［３−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−１，１−ビス−ヒドロキシメチル−プロピル］−アセトアミドのテトラヒドロフラン／メタノール／水（１／２／２）混合溶液（４５０ｍｌ／９００ｍｌ／９００ｍｌ）に、ＲＴにて、水酸化リチウム（３２．７ｇ、１．３６ｍｏｌ、８．０当量）を加える。反応混合物を５５℃で５時間撹拌し、その後、酢酸エチル（５００ｍｌ）で抽出し、塩水（２×３００ｍｌ）で洗浄し、その後、合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、真空下で濃縮する。２−アミノ−２−［２−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−エチル］−プロパン−１，３−ジオールを、酢酸エチルを用いる結晶化後に単離する。
【００４９】
ｇ）２−アミノ−２−［２−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−エチル］−プロパン−１，３−ジオール（３１．１ｇ、０．１０ｍｏｌ）のアセトニトリル溶液（２．３８ｌ）に、オルト酢酸トリエチル（１７．１ｍｌ、０．１２ｍｏｌ、１．２当量）および酢酸（５．４８ｍｌ、０．１１ｍｏｌ、１．１当量）を加え、その後、反応混合物を８０℃で５時間撹拌する。その後、反応混合物を真空下で濃縮し、｛４−［２−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−エチル］−２−メチル−４，５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イル｝−メタノールを、酢酸エチルで結晶化後に単離する。
【００５０】
ｈ）｛４−［２−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−エチル］−２−メチル−４，５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イル｝−メタノール（２６．１ｇ、０．０８ｍｏｌ）のメタノール溶液（８００ｍｌ）に、パラジウム活性炭（２．６ｇ、１０％ｗｔ）を加え、反応混合物をＲＴで５時間、水素雰囲気下で撹拌する。反応混合物をセライトを通してろ過し、真空下で濃縮する。（Ｒ／Ｓ）−４−［２−（４−ヒドロキシメチル−２−メチル−４，５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イル）−エチル］−フェノールを、酢酸エチルおよびヘキサンで結晶化後に定量的収率で単離する。
【００５１】
ｉ）（Ｒ／Ｓ）−４−［２−（４−ヒドロキシメチル−２−メチル−４，５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イル）−エチル］−フェノール（５００ｍｇ、２．１２ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ溶液（８ｍｌ）に、不活性雰囲気下でＣｓ２ＣＯ３（９０１ｍｇ、２．７６ｍｍｏｌ、１．３当量）および１−ブロモ−６−フルオロ−ヘキサン（４６４．１ｍｇ、２．５５ｍｍｏｌ、１．２当量）を加える。反応混合物を不活性雰囲気下、８５℃にて一晩撹拌する。その後、ＮａＨＣＯ３（２０ｍｌ）および酢酸エチル（４０ｍｌ）の飽和溶液を加える。有機層を分離し、水層を酢酸エチル（３×４０ｍｌ）で抽出する。合わせた有機抽出物を、塩水および１Ｍ  ＨＣｌで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、そして蒸発乾固する。フラッシュクロマトグラフィー（ｃｙ  ヘキサン／酢酸エチル（９／１）から（１／１）および（０／１））による精製により、（Ｒ／Ｓ）−（４−｛２−［４−（６−フルオロ−ヘキシルオキシ）−フェニル］−エチル｝−２−メチル−４，５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イル）−メタノールを無色の油状物として得る。
【００５２】
（（Ｒ／Ｓ）−４−｛２−［４−（６−フルオロ−ヘキシルオキシ）−フェニル］−エチル｝−２−メチル−４，５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イル）−メタノールのエナンチオマー分離を、実験規模でのＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＡＤカラムのＨＰＬＣにより行う（移動相としてｎ−ヘキサン／２−プロパノール  ９６／６）。
【化２７】
2007504111.tif 000029
【００５３】
実施例５：リン酸モノ−｛（Ｓ）−２−アミノ−４−［４−（６−フルオロ−ヘキシルオキシ）−フェニル］−２−ヒドロキシメチル−ブチル｝エステル
【化２８】
2007504111.tif 000030
ａ）キラル（（Ｓ）−４−｛２−［４−（６−フルオロ−ヘキシルオキシ）−フェニル］−エチル｝−２−メチル−４，５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イル）−メタノール（３００ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）およびテトラゾール（３３７．４ｍｇ、４．８２ｍｍｏｌ、６当量、トルエンから再結晶されたもの）の乾燥ＴＨＦ溶液（６ｍｌ）に、−２５℃にて、３−ジエチルアミノ−１，５−ジヒドロ−ベンゾ［ｅ］［１，３，２］ジオキサホスフェピン（４３３．５μＬ、１．５６ｍｍｏｌ、１．９５当量）を加える。反応混合物をアルゴン下で−２５℃にて３時間撹拌し、その後、ＲＴに戻す。その後、Ｈ２Ｏ２（３０％、７５μＬ、４．０ｍｍｏｌ、５当量）を、０℃にてよく撹拌しながら注入する。反応混合物をさらに３０分間撹拌し、次に飽和チオ硫酸ナトリウム溶液（１ｍｌ）を加える。有機層を分離し、水層をエーテル（３×２０ｍｌ）で抽出する。合わせた有機抽出物を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固する。フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル）による精製により、リン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（Ｓ）−４−｛２−［４−（６−フルオロ−ヘキシルオキシ）−フェニル］−エチル｝−２−メチル−４，５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イルメチルエステルを無色の油状物として得る。
【００５４】
ｂ）リン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（Ｓ）−４−｛２−［４−（６−フルオロ−ヘキシルオキシ）−フェニル］−エチル｝−２−メチル−４，５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イルメチルエステル（３３ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）のエタノール溶液（２ｍｌ）に、濃ＨＣｌ（２ｍｌ）を加える。反応混合物を８５℃で２時間撹拌し、その後、乾固するまで濃縮する。残渣を酢酸エチルに再溶解し、ヘキサンで沈殿させる。固体をろ取し、乾燥エーテルで洗浄し、真空下で乾燥させ、リン酸モノ−｛（Ｓ）−２−アミノ−４−［４−（６−フルオロ−ヘキシルオキシ）−フェニル］−２−ヒドロキシメチル−ブチル｝エステルを無色の粉末として得る。
【００５５】
実施例６：リン酸モノ−｛（Ｒ）−２−アミノ−４−［４−（６−フルオロ−ヘキシルオキシ）−フェニル］−２−ヒドロキシメチル−ブチル｝エステル
【化２９】
2007504111.tif 000031
合成を、実施例５に記載の化学を用いて行う。
【００５６】
実施例７：リン酸モノ−［（Ｓ）−４−［４−（６−フルオロ−ヘキシルオキシ）−フェニル］−２−ヒドロキシメチル−２−（１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−ブチル］エステル
【化３０】
2007504111.tif 000032
ＯＰＡ誘導体化を、実施例１、工程ｅに記載の方法により行う。
【００５７】
実施例８：リン酸モノ−［（Ｒ）−４−［４−（６−フルオロ−ヘキシルオキシ）−フェニル］−２−ヒドロキシメチル−２−（１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−ブチル］エステル
【化３１】
2007504111.tif 000033
ＯＰＡ誘導体化を、実施例１、工程ｅに記載の方法により行う。
【００５８】
実施例９：リン酸モノ−（（Ｒ）−２−アミノ−４−｛４−［２−（３−フルオロ−フェノキシ）−エトキシ］−フェニル｝−２−ヒドロキシメチル−ブチル）エステル
【化３２】
2007504111.tif 000034
４−（２−ヒドロキシ−エチル）−フェノール（５０ｇ、０．３６ｍｏｌ）のエタノール溶液（４００ｍｌ）に、炭酸カリウム（７５ｇ、０．５４ｍｏｌ、１．５当量）および臭化ベンジル（４７．２ｍｌ、０．３９ｍｏｌ、１．１当量）を加え、反応混合物を室温で一晩撹拌する。その後、反応混合物をセライトを通してろ取し、真空下で濃縮する。２−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−エタノールを、ジエチルエーテル（８２．６ｇ、９５％）で結晶化後に単離する。
【００５９】
２−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−エタノール（７８．７２ｇ、０．３４ｍｏｌ）の塩化メチレン溶液（４００ｍｌ）に、トリエチルアミン（６７．３ｍｌ、０．４４ｍｏｌ、１．４当量）を加え、その後、０℃で塩化メシル（３４．８ｍｌ、０．４４ｍｏｌ、１．３当量）を加える。反応混合物を０℃で３０分間撹拌し、室温にする。反応混合物を塩化メチレン（２×３００ｍｌ）で抽出し、その後合わせた有機層を塩水（２×３００ｍｌ）で洗浄し、真空下で濃縮する。粗生成物の酢酸エチル溶液（６００ｍｌ）に、ヨウ化ナトリウム（６７．２ｇ、０．４４ｍｏｌ、１．３当量）を加え、反応混合物を還流下で６時間撹拌する。ろ過後、有機層を塩水（３×４００ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、真空下で濃縮する。１−ベンジルオキシ−４−（２−ヨード−エチル）−ベンゼンを、ジエチルエーテル（１１６．５ｇ、８６％）で結晶化後に単離する。
【００６０】
アセトアミドマロン酸（５９．４ｇ、０．２７ｍｏｌ、２当量）の乾燥ジメチルホルムアミド溶液（４００ｍｌ）に、０℃にて、不活性雰囲気下にて水素化ナトリウム（油中６０％）（９．９４ｇ、０．４９ｍｏｌ、１．８当量）を加え、反応混合物を０℃で３時間撹拌する。その後、１−ベンジルオキシ−４−（２−ヨード−エチル）−ベンゼン（４６．８ｇ、０．１３ｍｏｌ、１当量）の乾燥ジメチルホルムアミド溶液（２５０ｍｌ）を、０℃でゆっくりと加え、反応混合物を室温で一晩撹拌する。反応混合物を数滴のメタノールでクエンチし、真空下でほとんど乾固するまで濃縮し、その後、酢酸エチルで抽出し、次に１Ｎ  ＨＣｌ（２×５００ｍｌ）、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２×５００ｍｌ）および塩水（２×５００ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、真空下で濃縮する。２−アセチルアミノ−２−［２−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−エチル］−マロン酸ジエチルエステルを、ジエチルエーテル（４７．３ｇ、８０％）を用いた複数回の結晶化後に単離する。
【００６１】
２−アセチルアミノ−２−［２−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−エチル］−マロン酸ジエチルエステル（４４．１ｇ、０．１ｍｏｌ）のエタノール／水（２／１）溶液（２８５ｍｌ／２８５ｍｌ）に、ＣａＣｌ２（２８．５ｇ、０．２６ｍｏｌ、２．５当量）およびＮａＢＨ４（１９．４ｇ、０．５２ｍｏｌ、５．０当量）を少しずつ加え、反応混合物を室温で一晩撹拌する。０℃にて、反応混合物を、メタノール（１０ｍｌ）の滴下により慎重にクエンチし、真空下でほとんど乾固するまで濃縮する。粗混合物を酢酸エチル（４×５００ｍｌ）で抽出し、次に１Ｎ  ＨＣｌ（２×３００ｍｌ）、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２×３００ｍｌ）および塩水（２×３００ｍｌ）で洗浄する。その後、合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、真空下で濃縮する。Ｎ−［３−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−１，１−ビス−ヒドロキシメチル−プロピル］−アセトアミドを、さらなる精製なしに用いる。
【００６２】
粗Ｎ−［３−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−１，１−ビス−ヒドロキシメチル−プロピル］−アセトアミドのテトラヒドロフラン／メタノール／水（１／２／２）混合溶液（４５０ｍｌ／９００ｍｌ／９００ｍｌ）に、室温にて、水酸化リチウム（３２．７ｇ、１．３６ｍｏｌ、８．０当量）を加える。反応混合物を５５℃で５時間撹拌し、その後、酢酸エチル（５００ｍｌ）で抽出し、塩水（２×３００ｍｌ）で洗浄し、その後合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、真空下で濃縮する。２−アミノ−２−［２−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−エチル］−プロパン−１，３−ジオールを、酢酸エチル（２８．８ｇ、９７％）を用いる結晶化後に単離する。
【００６３】
２−アミノ−２−［２−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−エチル］−プロパン−１，３−ジオール（２００ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）のジオキサン溶液（１０ｍｌ）に、１Ｍ  ＮａＯＨ（０．７３ｍｌ、０．７３ｍｍｏｌ、１．１当量）および無水Ｂｏｃ（２１７ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を加える。その後、反応混合物を室温で一晩撹拌する。酢酸エチル（８０ｍｌ）で抽出し、塩水（２×５０ｍｌ）で洗浄し、その後、合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、真空下で濃縮する。２−アミノ−２−［２−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−エチル］−プロパン−１，３−ジオールを、フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン（３／１））およびジエチルエーテル（２０４ｍｇ、８７％）での結晶化後に白色固体として単離する。
【００６４】
２−アミノ−２−［２−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−エチル］−プロパン−１，３−ジオール（６．３１ｇ、０．１６ｍｏｌ）のジクロロメタン（１２０ｍｌ）およびピリジン（１．２６ｍｌ、０．１６ｍｏｌ）溶液に、室温にて、ｏ−塩化ニトロベンゾイル（２．２７ｍｌ、０．０１７ｍｏｌ）を加える。その後、反応混合物を室温で一晩撹拌する。ジクロロメタン（３００ｍｌ）で抽出し、塩水（２×２００ｍｌ）で洗浄し、その後合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、真空下で濃縮する。２−ニトロ−安息香酸  ４−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシメチル−ブチルエステルを、フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン（１／１））およびジエチルエーテル（６．５５ｍｇ、７６％）での結晶化後に分離する。１．４０ｇの出発物質を単離することができた。
【００６５】
２−ニトロ−安息香酸４−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシメチル−ブチルエステル（１０５ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）のトルエン溶液（２ｍｌ）に、２，２−ジメトキシプロパン（０．０６ｍｌ、０．５７ｍｍｏｌ、３当量）および触媒量のｐ−トルエンスルホン酸を加える。反応混合物を９５℃で６時間撹拌し、その後、陰圧下で乾固するまで濃縮する。４−［２−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−エチル］−２，２−ジメチル−４−（２−ニトロ−ベンゾイルオキシメチル）−オキサゾリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを、フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン（１／３））による精製後に油状物（８８ｍｇ、７８％）として単離する。
【００６６】
４−［２−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−エチル］−２，２−ジメチル−４−（２−ニトロ−ベンゾイルオキシメチル）−オキサゾリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（８０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）のメタノール（１ｍｌ）およびＴＨＦ（１ｍｌ）溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１．５ｍｇ、０．０７６当量）を加え、反応混合物を室温で一晩撹拌する。反応混合物を乾固するまで濃縮し、４−［２−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−エチル］−４−ヒドロキシメチル−２，２−ジメチル−オキサゾリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（５１ｍｇ、８５％）を、フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン（１／４））後に白色固体として単離する。
【００６７】
４−［２−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−エチル］−４−ヒドロキシメチル−２，２−ジメチル−オキサゾリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２５ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（１０ｍｌ）に、触媒量の活性炭パラジウム（１０％ｗｔ）を加える。反応混合物を、室温で２時間、Ｈ２雰囲気下で撹拌する。４−ヒドロキシメチル−４−［２−（４−ヒドロキシ−フェニル）−エチル］−２，２−ジメチル−オキサゾリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを、セライトを通して懸濁物をろ過し、乾固するまで濃縮した後白色固体として単離する。
【００６８】
（Ｓ）−４−ヒドロキシメチル−４−［２−（４−ヒドロキシ−フェニル）−エチル］−２，２−ジメチル−オキサゾリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１００ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（５ｍｌ）に、ＣｓＣＯ３（１２０．５ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ、１．３当量）および１−（２−ブロモ−エトキシ）−３−フルオロ−ベンゼン（８０．７ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ、１．３当量）を加える。反応混合物を８５℃で４時間撹拌する。その後、酢酸エチルおよび水を加え、有機層を分け、水層を酢酸エチル（３×５０ｍｌ）で抽出する。合わせた有機抽出物を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固する。フラッシュクロマトグラフィー（ＡｃＯＥｔ／Ｈｘ  ９：１）による精製により、（Ｓ）−４−（２−｛４−［２−（３−フルオロ−フェノキシ）−エトキシ］−フェニル｝−エチル）−４−ヒドロキシメチル−２，２−ジメチル−オキサゾリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを無色の油状物として得る。
【００６９】
（Ｓ）−４−（２−｛４−［２−（３−フルオロ−フェノキシ）−エトキシ］−フェニル｝−エチル）−４−ヒドロキシメチル−２，２−ジメチル−オキサゾリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（７０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）およびテトラゾール（４９ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ、５当量、トルエンから再結晶下してもの）の乾燥ＴＨＦ溶液（５ｍｌ）に、ジ−ｔＢｕ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホラミド（１５５ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ、４当量）を加える。アルゴン下でＲＴにて３時間撹拌後、Ｈ２Ｏ２（３０％、１０当量）を、よく撹拌しながらゆっくりと０℃で加える。反応混合物をさらに３０分間攪拌し、次に飽和チオ硫酸ナトリウム溶液（５ｍｌ）を加える。有機層を分け、水層をエーテル（３×２０ｍｌ）で抽出する。合わせた有機抽出物を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固する。フラッシュクロマトグラフィー（ＡｃＯＥｔ／Ｈｘ  １：１）による精製により、（Ｒ）−４−（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシ−ホスホリルオキシメチル）−４−（２−｛４−［２−（３−フルオロ−フェノキシ）−エトキシ］−フェニル｝−エチル）−２，２−ジメチル−オキサゾリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを無色の結晶として得る。
【００７０】
最後に、（Ｒ）−４−（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシ−ホスホリルオキシメチル）−４−（２−｛４−［２−（３−フルオロ−フェノキシ）−エトキシ］−フェニル｝−エチル）−２，２−ジメチル−オキサゾリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（７０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）の濃ＨＣｌ溶液（２ｍｌ）を、室温で１時間撹拌し、その後２時間、９５℃まで加熱し、次に乾固するまで濃縮する。残渣を酢酸エチルに再溶解し、ヘキサンで沈殿させる。固体をろ取し、乾燥エーテルで洗浄し、真空下で乾燥することにより、リン酸モノ−（（Ｒ）−２−アミノ−４−｛４−［２−（３−フルオロ−フェノキシ）−エトキシ］−フェニル｝−２−ヒドロキシメチル−ブチル）エステルを無色の粉末として得る。
【００７１】
実施例１０：リン酸モノ−（（Ｓ）−２−アミノ−４−｛４−［２−（３−フルオロ−フェノキシ）−エトキシ］−フェニル｝−２−ヒドロキシメチル−ブチル）エステル
【化３３】
2007504111.tif 000035
リン酸モノ−（（Ｓ）−２−アミノ−４−｛４−［２−（３−フルオロ−フェノキシ）−エトキシ］−フェニル｝−２−ヒドロキシメチル−ブチル）エステルを、（Ｓ）−４−ヒドロキシメチル−４−［２−（４−ヒドロキシ−フェニル）−エチル］−２，２−ジメチル−オキサゾリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの代わりに（Ｒ）−４−ヒドロキシメチル−４−［２−（４−ヒドロキシ−フェニル）−エチル］−２，２−ジメチル−オキサゾリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを用いて、実施例９に記載の通りに製造する。
【００７２】
実施例１１：リン酸モノ−｛（Ｒ）−２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−４−［４−（２−ｍ−トリルオキシ−エトキシ）−フェニル］−ブチル｝エステル
【化３４】
2007504111.tif 000036
リン酸モノ−｛（Ｒ）−２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−４−［４−（２−ｍ−トリルオキシ−エトキシ）−フェニル］−ブチル｝エステルを、実施例９に記載の方法と類似の方法を用いて製造する。
【００７３】
実施例１２：リン酸モノ−（（Ｒ）−２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−４−｛４−［２−（４−メトキシ−フェニル）−エトキシ］−フェニル｝−ブチル）エステル
【化３５】
2007504111.tif 000037
リン酸モノ−（（Ｒ）−２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−４−｛４−［２−（４−メトキシ−フェニル）−エトキシ］−フェニル｝−ブチル）エステルを、実施例９に記載の方法と類似の方法を用いて製造する。
【００７４】
実施例１３：リン酸モノ−｛（Ｒ）−２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−４−［４−（２−ｐ−トリル−エトキシ）−フェニル］−ブチル｝エステル
【化３６】
2007504111.tif 000038
リン酸モノ−｛（Ｒ）−２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−４−［４−（２−ｐ−トリル−エトキシ）−フェニル］−ブチル｝エステルを、実施例９に記載の方法と類似の方法を用いて製造する。
【００７５】
実施例１４：リン酸モノ−（（Ｒ）−２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−４−｛４−［２−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−エトキシ］−フェニル｝−ブチル）エステル
【化３７】
2007504111.tif 000039
リン酸モノ−（（Ｒ）−２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−４−｛４−［２−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−エトキシ］−フェニル｝−ブチル）エステルを、実施例９に記載の方法と類似の方法を用いて製造する。
【００７６】
実施例１５：リン酸ジエチルエステル４−（２−｛４−［２−（３−フルオロ−４−メトキシ−フェニル）−エトキシ］−フェニル｝−エチル）−２−メチル−４，５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イルメチルエステル
【化３８】
2007504111.tif 000040
リン酸モノ−（２−アミノ−４−｛４−［２−（３−フルオロ−４−メトキシ−フェニル）−エトキシ］−フェニル｝−２−ヒドロキシメチル−ブチル）エステル（１００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）のオルト酢酸トリエチル溶液（５ｍｌ）に、酢酸（１３ｕｌ、０．２２ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を８０℃で２時間撹拌し、乾固するまで濃縮する。フラッシュクロマトグラフィー（ＡｃＯＥｔ／Ｈｘ  １：４）による精製により、リン酸ジエチルエステル４−（２−｛４−［２−（３−フルオロ−４−メトキシ−フェニル）−エトキシ］−フェニル｝−エチル）−２−メチル−４，５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イルメチルエステルを無色の油状物として得る。
【００７７】
実施例１６：リン酸ジエチルエステル（Ｓ）−２−メチル−４−［２−（４−オクチル−フェニル）−エチル］−４，５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イルメチルエステル
【化３９】
2007504111.tif 000041
リン酸ジエチルエステル（Ｓ）−２−メチル−４−［２−（４−オクチル−フェニル）−エチル］−４，５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イルメチルエステルを、リン酸モノ−（２−アミノ−４−｛４−［２−（３−フルオロ−４−メトキシ−フェニル）−エトキシ］−フェニル｝−２−ヒドロキシメチル−ブチル）エステルを用いて、実施例１５に記載の通りに製造する。
【００７８】
実施例１７：リン酸ジエチルエステル（Ｒ）−２−メチル−４−［２−（４−オクチル−フェニル）−エチル］−４，５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イルメチルエステル
【化４０】
2007504111.tif 000042
リン酸ジエチルエステル（Ｒ）−２−メチル−４−［２−（４−オクチル−フェニル）−エチル］−４，５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イルメチルエステルを、リン酸モノ−（２−アミノ−４−｛４−［２−（３−フルオロ−４−メトキシ−フェニル）−エトキシ］−フェニル｝−２−ヒドロキシメチル−ブチル）エステルを用いて、実施例１５に記載の通りに製造する。
【００７９】
実施例１８：ラセミ体  ４−ヒドロキシメチル−４−［２−（４−ヒドロキシ−フェニル）−エチル］−２，２−ジメチル−オキサゾリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルのクロマトグラフィー分離
ラセミ体  ４−ヒドロキシメチル−４−［２−（４−ヒドロキシ−フェニル）−エチル］−２，２−ジメチル−オキサゾリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの０．１％エタノール溶液１０マイクロリットルを、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＤ−Ｈカラム（０．４６×２５ｃｍ；Ｃｈｉｒａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓにより市販されている）に注入する。クロマトグラフィー分離を、室温にて、移動相としてｎ−ヘキサン／エタノール  ９０／１０（容量）混合物含有０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いて１ｍｌ／分の流速で行う。検出を、２１０ｎｍのＵＶにより行う。エナンチオマーは、７．２３分および９．３９分後にそれぞれ溶出する（分離係数α：１．５２）。
【００８０】
実施例１９：ラセミ体リン酸ジエチルエステル４−（２−｛４−［２−（３−フルオロ−４−メトキシ−フェニル）−エトキシ］−フェニル｝−エチル）−２−メチル−４，５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イルメチルエステルのクロマトグラフィー分離
ラセミ体  リン酸ジエチルエステル４−（２−｛４−［２−（３−フルオロ−４−メトキシ−フェニル）−エトキシ］−フェニル｝−エチル）−２−メチル−４，５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イルメチルエステルの０．１％エタノール溶液１０マイクロリットルを、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＤ−Ｈカラム（０．４６×２５ｃｍ；Ｃｈｉｒａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから市販されている）に注入する。クロマトグラフィー分離を、室温にて、移動相としてｎ−ヘキサン／エタノール  ９５／５（容量）混合物を用いて１ｍｌ／分の流速で行う。検出を、２１０ｎｍのＵＶにより行う。エナンチオマーは、３１．１７分および３５．４４分後にそれぞれ溶出する（分離係数α：１．１５）。
【００８１】
実施例２０：エナンチオマー  リン酸ジエチルエステル４−（２−｛４−［２−（３−フルオロ−４−メトキシ−フェニル）−エトキシ］−フェニル｝−エチル）−２−メチル−４，５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イルメチルエステルのクロマトグラフィー分離
エナンチオマー  リン酸ジエチルエステル４−（２−｛４−［２−（３−フルオロ−４−メトキシ−フェニル）−エトキシ］−フェニル｝−エチル）−２−メチル−４，５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イルメチルエステルの混合物の０．１％エタノール溶液１０マイクロリットルを、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＪ−Ｈカラム（０．４６×２５ｃｍ；Ｃｈｉｒａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから市販されている）に注入する。クロマトグラフィー分離を、室温にて、移動相としてｎ−ヘキサン／２−プロパノール  ７５／２５（容量）混合物を用いて１ｍｌ／分の流速で行う。検出を、２１０ｎｍのＵＶにより行う。エナンチオマーは、１３．８９分および１６．７７分後にそれぞれ溶出する（分離係数α：１．２７）。
【００８２】
実施例２１：エナンチオマー  リン酸ジエチルエステル（Ｓ）−２−メチル−４−［２−（４−オクチル−フェニル）−エチル］−４，５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イルメチルエステルのクロマトグラフィー分離
エナンチオマー  リン酸ジエチルエステル（Ｓ）−２−メチル−４−［２−（４−オクチル−フェニル）−エチル］−４，５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イルメチルエステルの混合物の０．１％エタノール溶液１０マイクロリットルを、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈカラム（０．４６×２５ｃｍ；Ｃｈｉｒａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから市販されている）に注入する。クロマトグラフィー分離を、室温にて、移動相としてｎ−ヘキサン／エタノール  ９５／５（容量）混合物を用いて１ｍｌ／分の流速で行う。検出を、２１０ｎｍのＵＶにより行う。エナンチオマーは、１０．３５分および１２．３２分後にそれぞれ溶出する（分離係数α：１．２７）。
【００８３】
ＲまたはＳエナンチオマー、とりわけＳエナンチオマーの７０重量％以上を含む、遊離型または薬学的に許容される塩形態の式ＩＩの化合物（以降、本発明の化合物と称する）は、有益な薬理学的特性、例えば、インビボおよびインビトロ試験で示されるような、例えばリンパ球再循環調節特性を示し、よって治療に用いられる。
【００８４】
Ａ．インビトロ
本発明の化合物は、下記の分析にて決定されるように個々のヒトＳ１Ｐ受容体に対する結合親和力を有する：
ＨＥＫ２９３細胞へのヒトＳ１Ｐ受容体の一過性トランスフェクション
Ｓ１Ｐ受容体およびＧｉタンパク質をクローニングし、等量のＳ１Ｐ受容体の４個のｃＤＮＡ、Ｇｉ−α、Ｇｉ−βおよびＧｉ−γを混合し、そしてリン酸カルシウム沈殿法（M. Wigler et al., Cell. 1977,;11;223およびDS. Im et al., Mol. Pharmacol. 2000;57;753）を用いてＨＥＫ２９３細胞の単層にトランスフェクトするために用いる。簡単には、２５μｇのＤＮＡを含むＤＮＡ混合物および０．２５Ｍ  ＣａＣｌを、ＨＥＰＥＳ緩衝２ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４に加える。ＨＥＫ２９３細胞のサブコンフルエントな単層を２５ｍＭ  クロロキンで毒化し、その後ＤＮＡ沈殿物を前記細胞に用いる。４時間後、前記単層をリン酸緩衝食塩水およびrefed培地（９０％  １：１  ダルベッコの修飾必須培地（ＤＭＥＭ）：Ｆ−１２＋１０％ウシ胎児血清）で洗浄する。細胞を、ＤＮＡの添加後４８−７２時間で、１０％スクロースを含むＨＭＥ緩衝液（１ｍＭ中：２０  ＨＥＰＥＳ、５  ＭｇＣｌ２、１  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）中に氷上で剥離することにより集め、Ｄｏｕｎｃｅ  ホモジナイザーを用いて破壊する。８００×ｇで遠心後、上清をスクロース不含有ＨＭＥで希釈し、１００，０００×ｇで１時間遠心する。得られるペレットを再ホモジナイズし、１００，０００×ｇでさらに１時間遠心する。この粗膜ペレットをスクロース含有ＨＭＥに再懸濁し、アリコートに分け、液体窒素に浸して簡易に凍結する。その膜を−７０℃で保存する。タンパク質濃度を、Ｂｒａｄｆｏｒｄタンパク質分析により分光学的に測定する。
【００８５】
Ｓ１Ｐ受容体／ＨＥＫ２９３膜調製物を用いたＧＴＰγＳ結合分析
ＧＴＰγＳ結合実験を、DS. Im et al., Mol. Pharmacol. 2000; 57:753に記載の通りに行う。Ｇタンパク質とのリガンド仲介ＧＴＰγＳ結合を、一過性トランスフェクションしたＨＥＫ２９３細胞からの膜調製物２５μｇを用いて、ＧＴＰ結合緩衝液（１ｍＭ中：５０  ＨＥＰＥＳ、１００  ＮａＣｌ、１０  ＭｇＣｌ２、ｐＨ７．５）にて測定する。リガンドを、１０μＭ  ＧＤＰおよび０．１ｎＭ［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ（１２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）の存在下で膜に加え、３０℃で３０分間インキュベートする。結合ＧＴＰγＳを、ブランデル・ハーベスター（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）を用いて非結合のものから分け、液体シンチレーションカウンターで計測する。
これらの分析にて、本発明の化合物は、マイクロＭより低い範囲でＳ１Ｐ受容体との結合親和性を有する。
【００８６】
特に、様々なＳ１Ｐ受容体での下記の化合物の１ｎＭにおけるＥＣ５０値を、下の表に示す：
【表１】
2007504111.tif 000043
【００８７】
ここで、（Ｒ）−ＦＴＹ７２０−Ｐは、（Ｒ）−ＦＴＹ７２０−リン酸塩、（Ｓ）−ＦＴＹ７２０−Ｐは、（Ｓ）−ＦＴＹ７２０−リン酸塩である。
Ｓ１Ｐ受容体に非常に高濃度でのみアゴニスト作用を示す（Ｒ）−ＦＴＹ７２０−リン酸塩とは対照的に、（Ｓ）−ＦＴＹ７２０−リン酸塩は、Ｓ１Ｐ１およびＳ１Ｐ３の完全なアゴニストであり、低いナノモル範囲でＳ１Ｐ４およびＳ１Ｐ５の部分的アゴニストである。
【００８８】
Ｂ．インビボ：血中リンパ球枯渇
本発明の化合物またはビヒクルを、ラットに強制経口投与により投与する。血液測定のための尾の血液を個々の基準値を得るために−１日目に、そして薬剤投与後２、６、２４、４８および７２時間後に得る。この分析にて、本発明の化合物は、０．０３から３ｍｇ／ｋｇの投与量で投与したとき、末梢血リンパ球を枯渇させる。
【００８９】
故に、本発明の化合物は、リンパ球相互作用により仲介される疾患または障害、例えば移植における、急性または慢性の、細胞、組織あるいは器官の同種または異種移植拒絶または移植片機能遅延、移植片対宿主疾患など、例えばリウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、ＩまたはＩＩ型糖尿病およびそれらの合併症、脈管炎、悪性貧血、シェーグレン症候群、ブドウ膜炎、乾癬、甲状腺性眼症、円形脱毛症などの自己免疫性疾患、例えばアレルギー性喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎／結膜炎、アレルギー性接触性皮膚炎、任意に基礎的な異常反応を伴う炎症性疾患、例えば、炎症性腸疾患、クローン病または潰瘍性大腸炎、内因性喘息、炎症性肺損傷、炎症性肝臓損傷、炎症性糸球体損傷、アテローム性動脈硬化症、骨関節炎、刺激性接触性皮膚炎およびさらなる湿疹様皮膚炎、脂漏性皮膚炎、免疫を介する障害の皮膚症状、炎症性眼疾患、角結膜炎、心筋炎または肝炎などのアレルギー性疾患、例えば心筋梗塞、卒中、腸管虚血、腎不全または出血性ショック、外傷性ショック、その他などの虚血／再潅流損傷、例えばＴ細胞リンパ腫またはＴ細胞白血病などのガン、例えば毒性ショック（例えば、スーパー抗原誘発）、敗血性ショック、成人呼吸窮迫症候群またはウイルス性感染症、例えば、ＡＩＤＳ、ウイルス性肝炎または慢性細菌感染症などの感染症の処置および／または予防に有用である。細胞、組織または固形臓器移植の例には、例えば、膵島、幹細胞、骨髄、角膜組織、神経組織、心臓、肺、複合心臓−肺、腎臓、肝臓、腸、すい臓、気管または食道が含まれる。
【００９０】
上記使用のための必要投与量は、もちろん、投与方法、処置される特定の状態および所望の効果に依存して変化するだろう。一般的に、満足する結果は、体重１ｋｇ当たり約０．０３から２．５ｍｇの全身的な日用量で得られることが示される。大きな哺乳動物、例えばヒトにおける指示される日用量は、約０．５ｍｇから約１００ｍｇの範囲で、例えば、１日４回までの分割量でかまたは遅延型で簡便に投与される。経口投与のための適する単位投与量には、約１から５０ｍｇの活性成分が含まれる。
【００９１】
本発明の化合物は、特に、例えば、錠剤またはカプセルの形態で例えば経口投与などの経腸的に、または、典型的には、例えばローション、ゲル、軟膏またはクリームの形態などの例えば注射可能溶液または懸濁液の形態で非経腸的に、または経鼻的に、または坐剤の形態で、いずれかの簡便な経路により投与され得る。少なくとも１つの薬学的に許容される担体または希釈剤と共に、遊離型または薬学的に許容される塩形態の本発明の化合物を含む医薬組成物は、薬学的に許容される担体または希釈剤と混合物ことにより常套的な方法で製造され得る。
【００９２】
本発明の化合物は、例えば上記のような遊離型または薬学的に許容される塩形態で投与され得る。かかる塩は、常套的な方法で製造され得、遊離化合物と同程度の活性を示す。
【００９３】
上記に従い、本発明はさらに下記を提供する：
１．１  例えば上記のような、リンパ球により仲介される障害または疾患を予防または処置するための方法であって、かかる処置を必要とする対象にて、７０重量％以上のＲまたはＳエナンチオマーを含む式ＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩の有効量を該対象に投与することを含む方法；
【００９４】
１．２  例えば上記のような、急性あるいは慢性移植拒絶またはＴ細胞仲介炎症性または自己免疫性疾患を予防または処置するための方法であって、かかる処置を必要とする対象にて、７０重量％以上のＲまたはＳエナンチオマーを含む式ＩＩの化合物、またはその薬学的に許容される塩の有効量を該対象に投与することを含む方法；
【００９５】
２．  例えば、上記１．１または１．２にて示されるいずれかの方法にて、医薬としての使用ための、遊離型または薬学的に許容される塩形態の７０重量％以上のＲまたはＳエナンチオマーを含む式ＩＩの化合物。
３．  例えば、上記の１．１または１．２のいずれかの方法における使用のための、薬学的に許容される希釈剤またはその担体と共に遊離型または薬学的に許容される塩形態の７０重量％以上のＲまたはＳエナンチオマーを含む式ＩＩの化合物を含む医薬組成物。
【００９６】
４．  上記１．１または１．２のいずれかの方法における使用のための医薬組成物の製造に用いるための７０重量％以上のＲまたはＳエナンチオマーを含む式ＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩。
【００９７】
本発明の化合物は、単一の活性成分としてか、または、例えばアジュバントとして他の薬剤、例えば、同種または異種移植の急性または慢性拒絶、または炎症性あるいは自己免疫性疾患の処置または予防のための、例えば免疫抑制剤または免疫調節剤または他の抗炎症剤、または化学療法剤、例えば悪性細胞の抗増殖剤と併用して投与され得る。例えば、本発明の化合物は、カルシニューリン阻害剤、例えば、シクロスポリンＡまたはＦＫ５０６；ｍＴＯＲ阻害剤、例えば、ラパマイシン、４０−Ｏ−（２−ヒドロキシエチル）−ラパマイシン、ＣＣＩ７７９またはＡＢＴ５７８；免疫抑制特性を有するアスコマイシン、例えば、ＡＢＴ−２８１、ＡＳＭ９８１など；コルチコステロイド；シクロホスファミド；アザチオプレン；メトトレキサート；レフルノミド；ミゾリビン；ミコフェノール酸；ミコフェノール酸モフェチル；１５−デオキシスペルグアリンまたはその免疫抑制剤相同体、類似体または誘導体；免疫抑制モノクローナル抗体、例えば、白血球受容体に対するモノクローナル抗体、例えば、ＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ５８、ＣＤ８０、ＣＤ８６またはそれらのリガンド；他の免疫調節化合物、例えば、ＣＴＬＡ４またはその変異体の細胞外ドメインの少なくとも一部、例えば、非ＣＴＬＡ４タンパク質配列と結合したＣＴＬＡ４またはその変異体の細胞外ドメインの少なくとも一部を有する結合分子組換え体、例えばＣＴＬＡ４Ｉｇ（例えば、ＡＴＣＣ６８６２９に示される）またはその変異体、例えば、ＬＥＡ２９Ｙ；接着分子阻害剤、例えば、ＬＦＡ−１アンタゴニスト、ＩＣＡＭ−１または−３アンタゴニスト、ＶＣＡＭ−４アンタゴニストまたはＶＬＡ−４アンタゴニスト；または、化学療法剤、例えば、パクリタキセル、ゲムシタビン、シスプラチン、ドキソルビシンまたは５−フルオロウラシルとの組合せに用いられ得る。
【００９８】
本発明の化合物を、他の免疫抑制剤／免疫調節剤、抗炎症剤または化学療法剤と組合せて投与するとき、共投与される免疫抑制剤、免疫調節剤、抗炎症剤または化学療法化合物の投与量はもちろん、用いる共薬剤の型（例えばそれがステロイドであるか、カルシニューリン阻害剤であるか）、用いる特定の薬剤、処置される状態などに依存して変化する。上記に従い、本発明は、さらなる局面：
【００９９】
５．  例えば、治療的有効量かつ無毒量の本発明の化合物および少なくとも第二の薬物、例えば上記のような、例えば免疫抑制剤、免疫調節剤、抗炎症剤または化学療法剤を、同時にまたは連続して共投与することを含む上記のような方法。
【０１００】
６．  薬学的組合せ、例えば、ａ）第一の薬剤（それは、遊離型または薬学的に許容される塩形態の本明細書中に開示の本発明の化合物である）、およびｂ）少なくとも１つの共薬剤、例えば、免疫抑制剤、免疫調節剤、抗炎症剤または化学療法剤を含むキット、
を提供する。前記キットは、その投与のための説明書を含み得る。
【０１０１】
本明細書中に用いる用語“共投与”または“併用投与”などは、１人の患者に対して選択された治療剤（複数）の投与を含むことを意味し、その薬剤が、同じ投与経路でまたは同じ時間に投与される必要はない処置レジメンを含むことを意図する。
【０１０２】
本明細書中に用いる用語“薬学的組合せ”は、２以上の活性成分の混合または組合せの結果得られる産物を意味し、活性成分の固定化または非固定化組合せの両方を含む。用語“固定化組合せ”は、活性成分、例えば、本発明の化合物および共薬剤が両方とも、単一体または投与量の形態で対象に同時に投与されることを意味する。用語“非固定化組合せ”は、活性成分、例えば、本発明の化合物および共薬剤が両方とも、特定の時間に限られないで同時に、共にまたは連続して、分割体として対象に投与されることを意味し、ここで、かかる投与は、患者の体内に治療的に有効なレベルの２個の化合物を提供する。後者はまた、例えば、３個またはそれ以上の活性成分の投与などのカクテル療法にも用いられる。
【０１０３】
さらなる局面にて、本発明は、例えば、上記のカルバミン酸キニーネまたはカルバミン酸キニジンに基づくキラルイオン交換層を用いる高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によりエナンチオマーを分けることを含む、式Ｉの化合物のＲおよびＳエナンチオマーを分ける方法を提供する。
【０１０４】
さらなる局面にて、本発明は、（ａ）試料中に存在する式ＩＩの化合物とベンゼン−１，２−ジカルバルデヒドを反応させ、式Ｉの化合物を形成させ、ＨＰＬＣにより式Ｉの化合物のＲおよびＳ異性体を分けることを含む、試料中に存在する式ＩＩの化合物のＲおよび／またはＳ異性体の量を測定する方法を提供する。前記ＨＰＬＣは、好ましくは、例えば、カルバミン酸キニーネまたはカルバミン酸キニジンに基づくキラルイオン交換層を用いて上記の通りに行われる。式Ｉの化合物は、かかる方法における中間体として有用である。試料は、例えば、体液、例えば血液、血漿、唾液または尿に由来する試料であり得、そして最初に、前記液体から式ＩＩの化合物を分けるために１回またはそれ以上の分離工程（例えば、メタノールでの抽出および／または非キラルＨＰＬＣ）を行われ得る。かかる方法により、試料中の活性なＲまたはＳエナンチオマーの量を決定する。故に、本方法は、例えば、対象への式ＩＩの化合物（例えば、そのラセミ混合物）の投与または式ＩＩの化合物の前駆体（体内にて代謝物として式ＩＩの化合物を形成する）の投与による、対象における活性な式ＩＩの化合物のＳエナンチオマーの血中濃度を測定するのに有用であり得る。
【０１０５】
例えば、アキラル１４Ｃ標識ＦＴＹ７２０を、経口的に（７．５ｍｇ／ｋｇ）、または静脈内注射（４ｍｇ／ｋｇ）によるどちらかでラットに投与する。キラル１４Ｃ標識ＦＴＹ７２０−リン酸塩は、１４Ｃ標識ＦＴＹ７２０の代謝物としてラットの体内に形成される。血液試料を、投与後異なる時間（例えば、３または７２時間）に採取する。それぞれの血液試料をメタノールで抽出し、［１４Ｃ］ＦＴＹ７２０−リン酸塩を非キラルＨＰＬＣにより単離する。単離した［１４Ｃ］ＦＴＹ７２０−リン酸塩を、ＯＰＡで誘導体化する。その誘導体を、保持時間マーカー（２１５ｎｍのＵＶにより測定される）として非標識ＯＰＡ誘導ＲおよびＳ  ＦＴＹ７２０−リン酸塩と共に導入し、ＰｒｏｎｔｏＳＩＬ  Ｃｈｉｒａｌ  ＡＸ  ＱＮ−１カラムを用いてキラルＨＰＬＣ分離を行う。全血液試料中の［１４Ｃ］ＦＴＹ７２０−リン酸塩は、薬理学的に活性なＳ−エナンチオマーのみを示す。不活性Ｒ−エナンチオマーは検出されない。
【手続補正書】
【提出日】平成18年4月25日(2006.4.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2007504111.tif 000055
［式中、
ｍおよびｎは、それぞれ独立して、１、２または３であり；
Ｘは、Ｏまたは直接結合であり；
Ｒ１は、
−フェニルアルキル（ここで、アルキルは、直鎖または分岐（Ｃ６−２０）炭素鎖である）であるか；または
−フェニルアルキル（ここで、アルキルは、直鎖または分岐（Ｃ１−３０）炭素鎖である）であり、ここで該フェニルアルキルは、
−所望によりハロゲンにより置換されていて良い直鎖または分岐（Ｃ６−２０）炭素鎖、
−所望によりハロゲンにより置換されていて良い直鎖または分岐（Ｃ６−２０）アルコキシ鎖、
−直鎖または分岐（Ｃ６−２０）アルケニルオキシ、
−フェニルアルコキシ、ハロフェニルアルコキシ、フェニルアルコキシアルキル、フェノキシアルコキシまたはフェノキシアルキル、
−Ｃ６−２０アルキルにより置換されるシクロアルキルアルキル、
−Ｃ６−２０アルキルにより置換されるヘテロアリールアルキル、
−ヘテロ環式Ｃ６−２０アルキル、または
−Ｃ２−２０アルキルにより置換されるヘテロ環式アルキル
によりフェニル残基にて置換されており、
かつ、前記アルキル部分は、
−炭素鎖にて、二重結合、三重結合、Ｏ、Ｓ、スルフィニル、スルホニルまたはＮＲ５（ここで、Ｒ５は、Ｈ、アルキル、アラルキル、アシルまたはアルコキシカルボニルである）から選択される結合またはヘテロ原子、および
−置換基として、アルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アラルキルオキシ、アシル、アルキルアミノ、アルキルチオ、アシルアミノ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アシルオキシ、アルキルカルバモイル、ニトロ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシまたはカルボキシ、
を有し得、そして
Ｒ２は、
【化２】
2007504111.tif 000056
〔式中、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して、ＨまたはＣ１−４アルキル（ここで、アルキルは、所望により１、２または３個のハロゲン原子により置換されていて良い）である〕である］
で示される、遊離型または塩形態の化合物。
【請求項２】
式ＩＩ：
【化３】
2007504111.tif 000057
［式中、ｍ、ｎ、Ｘ、Ｒ１およびＲ２は、式Ｉに記載の通りである］
で示される化合物であって、その化合物の７０重量％以上は、ＲまたはＳエナンチオマーの形態である化合物。
【請求項３】
下記の三次元構造
【化４】
2007504111.tif 000058
を有する本質的に純粋なエナンチオマーの形態である請求項１に記載の式Ｉの化合物または請求項２に記載の式ＩＩの化合物であって、好ましくはリン酸モノ−［２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−４−（４−オクチル−フェニル）−ブチル］エステルおよびリン酸モノ−［２−ヒドロキシメチル−４−（４−オクチル−フェニル）−２−（１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−ブチル］エステルのＳエナンチオマーである化合物。
【請求項４】
請求項２に記載の式ＩＩの化合物と芳香族１，２−ジカルバルデヒドを反応させ、得られる式Ｉの化合物を遊離型または塩形態で回収することを含む、式Ｉの化合物を製造するための方法。
【請求項５】
式ＩＩＩ、ＩＩＩａまたはＩＩＩｂ：
【化５】
2007504111.tif 000059
【化６】
2007504111.tif 000060
【化７】
2007504111.tif 000061
［式中、ｎ、ｍ、Ｘ、Ｒ１およびＲ２は上記の通りであり、Ｒ６はアミノ保護基であり、Ｒ６’は、同時にＯＨおよびアミノ保護基である］
で示される化合物の７０重量％以上がＲまたはＳエナンチオマーの形態である、式ＩＩＩ、ＩＩＩａまたはＩＩＩｂの化合物を脱保護すること；そして要すれば、遊離型で得られる式ＩＩの化合物を所望の塩形態に変換すること、またはその逆も含む、請求項２に記載の化合物を製造するための方法。
【請求項６】
カルバミン酸キニーネまたはカルバミン酸キニジンに基づくキラルイオン交換相を用いる高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によりエナンチオマーを分離することを含む、式Ｉの化合物のＲおよびＳエナンチオマーを分離するための方法。
【請求項７】
（ａ）試料中に存在する式ＩＩの化合物と芳香族１，２−ジカルバルデヒドを反応させ、式Ｉの化合物を形成し、そしてＨＰＬＣにより式Ｉの化合物のＲおよびＳ異性体を分離することを含む、試料中に存在する式ＩＩの化合物のＲおよび／またはＳ異性体の量を測定するための方法。
【請求項８】
医薬としての使用のための、遊離型または薬学的に許容される塩形態の請求項２に記載の化合物。
【請求項９】
式ＩＩＩ、ＩＩＩａまたはＩＩＩｂ：
【化８】
2007504111.tif 000062
【化９】
2007504111.tif 000063
【化１０】
2007504111.tif 000064
［式中、ｎ、ｍ、Ｘ、Ｒ１およびＲ２は、請求項１に記載の通りであり、Ｒ６’は、同時にＯＨおよびアミノ保護基である］
で示される、遊離型または塩形態の化合物。
【国際調査報告】
2007504111.tif 000065
2007504111.tif 000066