(57)【要約】  式Ｉの化合物、疾患、特に腫瘍および／または血管新生によって発生、媒介、および／または伝播される疾患を治療する薬剤を調製するためのそれらの調製および使用。式Ｉの化合物は、チロシンキナーゼ、特にＴＩＥ−２およびＶＥＧＦＲ、ならびにＲａｆキナーゼの有効な阻害剤である。（Ｉ）
2007506687.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物であって、
【化１】
2007506687.tif 000020
式中、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3は、それぞれ互いに独立して、Ｒ、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＯ2、ＮＨＲ、ＮＲＲ、ＮＨＣＯＲ、ＮＨＳＯ2Ｒ、ＯＲ、ＣＯ−Ｒ、ＣＯ−ＮＨＲ、ＣＦ3、ＯＣＦ3、ＳＣＦ3、ＳＯ3Ｒ、ＳＯ2Ｒ、ＳＯ2ＮＲ、ＳＲ、ＣＯＯＨ、またはＣＯＯＲを示し、
Ｒは、Ｈ、あるいは非置換、またはが一、二、三、または四−Ｒ4−置換のＡ、Ａｒ、Ｈｅｔ、（ＣＨ2）qＨｅｔ、または（ＣＨ2）qＡｒを示し、
Ａは、１〜１４個のＣ原子を有する非分岐、分岐、または環状アルキルを示し、１または２個のＣＨ2基は、ＯまたはＳ原子および／または−ＣＨ＝ＣＨ−基で置換されていてもよく、かつ／またはさらに１〜７個のＨ原子は、Ｆおよび／またはＣｌで置換されていてもよく、
Ａｒは、フェニル、ナフチル、またはビフェニルを示し、それぞれ非置換であるか、あるいはＡ、Ｈａｌ、ＯＨ、ＯＡ、ＣＮ、ＮＯ2、ＮＨ2、ＮＨＡ、ＮＡ2、ＮＨＣＯＡ、ＳＣＦ3、ＳＯ2Ａ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＡ、ＣＯＮＨ2、ＣＯＮＨＡ、ＣＯＮＡ2、ＮＨＳＯ2Ａ、ＳＯ2ＮＨ2、ＳＯ2ＮＨＡ、ＳＯ2ＮＡ2、ＣＨＯ、またはＣＯＡで一、二、または三置換されており、
Ｈｅｔは、１から４個のＮ、Ｏ、および／またはＳ原子を有する単環式または二環式の飽和、不飽和、または芳香族の複素環を示し、これは非置換であっても、あるいはカルボニル酸素、Ｈａｌ、Ａ、−（ＣＨ2）b−Ａｒ、−（ＣＨ2）b−シクロアルキル、ＯＨ、ＯＡ、ＮＨ2、ＮＨＡ、ＮＡ2、ＮＯ2、ＣＮ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＡ、ＣＯＮＨ2、ＣＯＮＨＡ、ＣＯＮＡ2、ＮＨＣＯＡ、ＮＨＣＯＮＨ2、ＮＨＳＯ2Ａ、ＣＨＯ、ＣＯＡ、ＳＯ2ＮＨ2、および／またはＳ（Ｏ）gＡで一、二、または三置換されていてもよく、
Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩを示し、
Ｒ4は、Ｈａｌ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ2、ＣＦ3、ＯＣＦ3、ＳＣＦ3、ＳＯ2Ａ、またはＯＡを示し、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＳＯ2ＮＨ、またはＮＨを示し、
【化２】
2007506687.tif 000021
は、フェニル、あるいは１から４個のＮ、Ｏ、および／またはＳ原子を有する単環式芳香族複素環を示し、
ｂは、０、１、２、３、または４を示し、
ｇは、０、１、または２を示し、
ｎ、ｍ、ｐ、ｑは、それぞれ互いに独立して、１、２、３、または４を示す、
化合物、ならびにあらゆる比率のそれらの混合物を含む、薬剤として許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体。
【請求項２】
Ｒ1が、Ｈａｌ、ＮＯ2、ＣＦ3、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ、またはＨを示す請求項１に記載の化合物、ならびにあらゆる比率のそれらの混合物を含む、薬剤として許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体。
【請求項３】
Ｒ2が、Ｈを示す請求項１または２に記載の化合物、ならびにあらゆる比率のそれらの混合物を含む、薬剤として許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体。
【請求項４】
Ｒ3が、Ｈ、Ｈａｌ、またはＣＯ−ＮＨＲを示す請求項１から３の一項または複数項に記載の化合物、ならびにあらゆる比率のそれらの混合物を含む、薬剤として許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体。
【請求項５】
Ｙが、フェニル、フリル、チエニル、ピロリル、イミダゾリル、ピリジル、またはピリミジニルを示す請求項１から４の一項または複数項に記載の化合物、ならびにあらゆる比率のそれらの混合物を含む、薬剤として許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体。
【請求項６】
Ｒ1は、Ｈａｌ、ＮＯ2、ＣＦ3、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ、またはＨを示し、
Ｒ2は、Ｈを示し、
Ｒ3は、Ｈ、Ｈａｌ、ＣＯ−ＮＨＲを示し、
Ｙは、フェニル、フリル、チエニル、ピロリル、イミダゾリル、ピリジル、またはピリミジニルを示し、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＳＯ2ＮＨ、またはＮＨを示し、
ｎ、ｐは、互いに独立して、１、２、３、または４を示し、
ｍは、１を示す、
請求項１に記載の化合物、ならびにあらゆる比率のそれらの混合物を含む、薬剤として許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体。
【請求項７】
下記の群から選択された請求項１に記載の化合物、
ａ）ベンゾオキサゾール−２−イル−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル］アミン、
ｂ）ベンゾオキサゾール−２−イル−［４−（ピリジン−４−イルスルファニル）フェニル］アミン、
ｃ）Ｎ−ベンゾオキサゾール−２−イル−Ｎ’−ピリジン−４−イルベンゼン−１，４−ジアミン、
ｄ）２−［４−（ピリジン−４−イルスルファニル）フェニルアミノ］ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸、
ｅ）２−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニルアミノ］ベンゾオキサゾール−６−カルボン酸、
ｆ）２−［４−（ピリジン−４−イルスルファニル）フェニルアミノ］ベンゾオキサゾール−６−カルボン酸、
ｇ）メチル  ２−［４−（ピリジン−４−イルアミノ）フェニルアミノ］ベンゾオキサゾール−６−カルボキシレート、
ｈ）（５−ニトロベンゾオキサゾール−２−イル）−［４−（ピリジン−４−イルスルファニル）フェニル］アミン、
ｉ）（５−ニトロベンゾオキサゾール−２−イル）−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル］アミン、
ｊ）Ｎ−（５−ニトロベンゾオキサゾール−２−イル）−Ｎ’−ピリジン−４−イルベンゼン−１，４−ジアミン、
ｋ）（６−ニトロベンゾオキサゾール−２−イル）−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル］アミン、
ｌ）（６−ニトロベンゾオキサゾール−２−イル）−［４−（ピリジン−４−イルスルファニル）フェニル］アミン、
ｍ）Ｎ−（６−ニトロベンゾオキサゾール−２−イル）−Ｎ’−ピリジン−４−イルベンゼン−１，４−ジアミン、
ｎ）（５−クロロ−７−ニトロベンゾオキサゾール−２−イル）−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル］アミン、
ｏ）（５−クロロ−７−ニトロベンゾオキサゾール−２−イル）−［４−（ピリジン−４−イルスルファニル）フェニル］−アミン、
ｐ）Ｎ−（５−クロロ−７−ニトロベンゾオキサゾール−２−イル）−Ｎ’−ピリジン−４−イルベンゼン−１，４−ジアミン、
ｑ）（７−ブロモ−５−トリフルオロメチルベンゾオキサゾール−２−イル）−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル］アミン、
ｒ）（７−ブロモ−５−トリフルオロメチルベンゾオキサゾール−２−イル）−［４−（ピリジン−４−イルスルファニル）−フェニル］アミン、
ｓ）（７−ブロモ−５−トリフルオロメチルベンゾオキサゾール−２−イル）−［４−（４−フルオロフェニルスルファニル）フェニル］アミン、
ｔ）Ｎ−［４−（ブロモトリフルオロメチルベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）フェニル］−４−フルオロベンゼンスルホンアミド、
ｕ）［４−（２−アミノ−６−メチルピリミジン−４−イルオキシ）フェニル］−（７−ブロモ−５−トリフルオロメチルベンゾオキサゾール−２−イル）アミン、
ｖ）Ｎ−メチル−４−［４−（ブロモトリフルオロメチルベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェノキシ］ピリジン−２−カルボキサミド、
ｗ）Ｎ−メチル−４−［４−（ブロモトリフルオロメチルベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）フェニルスルファニル］ピリジン−２−カルボキサミド、
ｘ）（７−ブロモ−５−トリフルオロメチルベンゾオキサゾール−２−イル）−［４−（２，４−ジフルオロフェニルスルファニル）フェニル］アミン、
ならびにあらゆる比率のそれらの混合物を含む、薬剤として許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体。
【請求項８】
式Ｉの化合物、ならびに生理的に許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体を調製する方法であって、
式中、Ｒ1およびｎが、請求項１に記載の意味を有する式ＩＩの化合物を、
【化３】
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式中、Ｒ2、Ｒ3、Ｘ、Ｙ、ｍ、およびｐが、請求項１に記載の意味を有する式ＩＩＩの化合物と反応させ、
【化４】
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かつ／または式Ｉの塩基または酸を、その塩の１つに変換することを特徴とする方法。
【請求項９】
請求項１から７の一項または複数項に記載の少なくとも１種の化合物、ならびに／またはあらゆる比率のそれらの混合物を含む、生理的に許容されるその塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体と、
場合によって賦形剤および／または補助剤と、を含む薬剤。
【請求項１０】
請求項１から７の一項または複数項に記載の少なくとも１種の化合物、ならびに／またはあらゆる比率のそれらの混合物を含む、生理的に許容されるその塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体と、
少なくとも１種のさらなる薬剤活性成分と、を含む薬剤。
【請求項１１】
（ａ）有効量の請求項１から７の一項または複数項に記載の化合物、ならびに／またはあらゆる比率のそれらの混合物を含む、生理的に許容されるその誘導体、溶媒和物、および立体異性体と、
（ｂ）有効量のさらなる薬剤活性成分と、の別個のパックからなるセット（キット）。
【請求項１２】
キナーゼの活性化剤または阻害剤としての、請求項１から７の一項または複数項に記載の化合物、ならびにあらゆる比率のそれらの混合物を含む、生理的に許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体。
【請求項１３】
チロシンキナーゼおよび／またはＲａｆキナーゼの阻害剤としての、請求項１から７の一項または複数項に記載の化合物、ならびにあらゆる比率のそれらの混合物を含む、生理的に許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体。
【請求項１４】
疾患を治療および／または予防する薬剤を調製するための、請求項１から７の一項または複数項に記載の化合物、ならびに／またはあらゆる比率のそれらの混合物を含む、生理的に許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体の使用。
【請求項１５】
キナーゼおよび／またはキナーゼ媒介シグナル伝達によって発生、媒介、および／または伝播される疾患を治療および／または予防する薬剤を調製するための、請求項１から７の一項または複数項に記載の化合物、ならびに／またはあらゆる比率のそれらの混合物を含む、生理的に許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体の使用。
【請求項１６】
キナーゼが、チロシンキナーゼの群から選択される請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
チロシンキナーゼが、ＴＩＥ−２またはＶＥＧＦＲである請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
キナーゼが、Ｒａｆキナーゼの群から選択される請求項１５に記載の使用。
【請求項１９】
Ｒａｆキナーゼが、Ａ−Ｒａｆ、Ｂ−Ｒａｆ、またはＲａｆ−１である請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
固形腫瘍を治療および／または予防する薬剤を調製するための、請求項１から７の一項または複数項に記載の化合物、ならびに／またはあらゆる比率のそれらの混合物を含む、生理的に許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体の使用。
【請求項２１】
固形腫瘍が、脳腫瘍、尿生殖路の腫瘍、リンパ系の腫瘍、胃腫瘍、咽頭腫瘍、および肺腫瘍からなる群から選択される請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
固形腫瘍が、単球性白血病、肺腺癌、小細胞肺癌、膵臓癌、膠芽細胞腫、および乳癌からなる群から選択される請求項２０に記載の使用。
【請求項２３】
血管新生によって発生、媒介、および／または伝播される疾患を治療および／または予防する薬剤を調製するための、請求項１から７の一項または複数項に記載の化合物、ならびに／またはあらゆる比率のそれらの混合物を含む、生理的に許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体の使用。
【請求項２４】
網膜血管形成、糖尿病性網膜症、加齢性黄斑変性、および／または炎症性疾患からなる群から選択された疾患を治療および／または予防する薬剤を調製するための、請求項１から７の一項または複数項に記載の化合物、ならびに／またはあらゆる比率のそれらの混合物を含む、生理的に許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体の使用。
【請求項２５】
骨肉腫、変形性関節症、およびくる病からなる群から選択された骨の異常を治療および／または予防する薬剤を調製するための、請求項１から７の一項または複数項に記載の化合物、ならびに／またはあらゆる比率のそれらの混合物を含む、生理的に許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体の使用。
【請求項２６】
乾癬、関節リウマチ、接触皮膚炎、遅延型過敏反応、炎症、子宮内膜症、瘢痕、良性前立腺肥大、免疫疾患、自己免疫疾患、および免疫不全疾患からなる群から選択された疾患を治療および／または予防する薬剤を調製するための、請求項１から７の一項または複数項に記載の化合物、ならびに／またはあらゆる比率のそれらの混合物を含む、生理的に許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体の使用。
【請求項２７】
脳腫瘍、肺癌、扁平上皮癌、膀胱癌、胃癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、結腸直腸癌、乳癌、頭部癌、頸部癌、食道癌、婦人科癌、甲状腺癌、リンパ腫、慢性白血病、および急性白血病からなる群から選択された疾患を治療および／または予防する薬剤を調製するための、請求項１から７の一項または複数項に記載の化合物、ならびに／またはあらゆる比率のそれらの混合物を含む、生理的に許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体の使用。
【請求項２８】
疾患を治療および／または予防する薬剤を調製するための、請求項１から７の一項または複数項に記載の化合物、ならびに／または生理的に許容されるそれらの塩および溶媒和物の使用であって、
治療上有効量の請求項１から７の一項または複数項に記載の化合物が、１）エストロゲン受容体モジュレータ、２）アンドロゲン受容体モジュレータ、３）レチノイド受容体モジュレータ、４）細胞毒性剤、５）抗増殖剤、６）プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、７）ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、８）ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、９）逆転写酵素阻害剤、１０）増殖因子受容体阻害剤、および１１）血管新生阻害剤の群の化合物と組み合わせて投与される使用。
【請求項２９】
疾患を治療および／または予防する薬剤を調製するための、請求項１から７の一項または複数項に記載の化合物、ならびに／または生理的に許容されるそれらの塩および溶媒和物の使用であって、
治療上有効量の請求項１から７の一項または複数項に記載の化合物が、放射線療法、ならびに１）エストロゲン受容体モジュレータ、２）アンドロゲン受容体モジュレータ、３）レチノイド受容体モジュレータ、４）細胞毒性剤、５）抗増殖剤、６）プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、７）ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、８）ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、９）逆転写酵素阻害剤、１０）増殖因子受容体阻害剤、および１１）血管新生阻害剤の群の化合物と組み合わせて投与される使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の化合物は、キナーゼ、特にチロシンキナーゼおよび／またはＲａｆキナーゼに媒介されるシグナル伝達の阻害、調節、および／または調整に関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、式Ｉの化合物であって、
【０００３】
【化１】
2007506687.tif 000003
【０００４】
式中、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3は、それぞれ互いに独立して、Ｒ、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＯ2、ＮＨＲ、ＮＲＲ、ＮＨＣＯＲ、ＮＨＳＯ2Ｒ、ＯＲ、ＣＯ−Ｒ、ＣＯ−ＮＨＲ、ＣＦ3、ＯＣＦ3、ＳＣＦ3、ＳＯ3Ｒ、ＳＯ2Ｒ、ＳＯ2ＮＲ、ＳＲ、ＣＯＯＨ、またはＣＯＯＲを示し、
Ｒは、Ｈ、あるいは非置換、または一、二、三、または四−Ｒ4−置換Ａ、Ａｒ、Ｈｅｔ、（ＣＨ2）qＨｅｔ、または（ＣＨ2）qＡｒを示し、
Ａは、１〜１４個のＣ原子を有する非分岐、分岐、または環状アルキルを示し、１または２個のＣＨ2基は、ＯまたはＳ原子および／または−ＣＨ＝ＣＨ−基で置換されていてもよく、かつ／またはさらに１〜７個のＨ原子は、Ｆおよび／またはＣｌで置換されていてもよく、
Ａｒは、フェニル、ナフチル、またはビフェニルを示し、それぞれ非置換であるか、あるいはＡ、Ｈａｌ、ＯＨ、ＯＡ、ＣＮ、ＮＯ2、ＮＨ2、ＮＨＡ、ＮＡ2、ＮＨＣＯＡ、ＳＣＦ3、ＳＯ2Ａ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＡ、ＣＯＮＨ2、ＣＯＮＨＡ、ＣＯＮＡ2、ＮＨＳＯ2Ａ、ＳＯ2ＮＨ2、ＳＯ2ＮＨＡ、ＳＯ2ＮＡ2、ＣＨＯ、またはＣＯＡで一、二、または三置換されており、
Ｈｅｔは、１から４個のＮ、Ｏ、および／またはＳ原子を有する単環式または二環式の飽和、不飽和、または芳香族複素環を示し、これは非置換であるか、あるいはカルボニル酸素、Ｈａｌ、Ａ、−（ＣＨ2）b−Ａｒ、−（ＣＨ2）b−シクロアルキル、ＯＨ、ＯＡ、ＮＨ2、ＮＨＡ、ＮＡ2、ＮＯ2、ＣＮ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＡ、ＣＯＮＨ2、ＣＯＮＨＡ、ＣＯＮＡ2、ＮＨＣＯＡ、ＮＨＣＯＮＨ2、ＮＨＳＯ2Ａ、ＣＨＯ、ＣＯＡ、ＳＯ2ＮＨ2、および／またはＳ（Ｏ）gＡで一、二、または三置換されていることができ、
Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩを示し、
Ｒ4は、Ｈａｌ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ2、ＣＦ3、ＯＣＦ3、ＳＣＦ3、ＳＯ2Ａ、またはＯＡを示し、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＳＯ2ＮＨ、またはＮＨを示し、
【０００５】
【化２】
2007506687.tif 000004
【０００６】
は、フェニル、あるいは１から４個のＮ、Ｏ、および／またはＳ原子を有する単環式芳香族複素環を示し、
ｂは、０、１、２、３、または４を示し、
ｇは、０、１、または２を示し、
ｎ、ｍ、ｐ、ｑは、それぞれ互いに独立して、１、２、３、または４を示す化合物、ならびにあらゆる比率のそれらの混合物を含む、薬剤として許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体に関する。
【０００７】
式Ｉの化合物は、キナーゼ、特にチロシンキナーゼおよび／またはＲａｆキナーゼに媒介されるシグナル伝達を阻害、調節（ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ）、および／または調整（ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ）できることが見出された。特に、本発明による化合物は、チロシンキナーゼおよび／またはＲａｆキナーゼの阻害剤として適している。したがって、本発明による薬剤および薬剤組成物は、キナーゼ、および／またはキナーゼ媒介シグナル伝達、あるいは血管新生によって発生、媒介、および／または伝播される疾患を治療するために有効に用いることができる。したがって、本発明による化合物は、哺乳動物における、癌、腫瘍増殖、動脈硬化症、加齢性黄斑変性、糖尿病性網膜症、炎症性疾患などの治療および予防に適している。
【０００８】
チロシンキナーゼは、タンパク質基質においてチロシン残基へのアデノシン三リン酸の末端リン酸の転移を触媒する酵素の一種である。チロシンキナーゼは、基質リン酸化を介して、多くの細胞機能のシグナル伝達において重要な役割を果たすと考えられている。シグナル伝達の正確な機序は依然として不明であるが、チロシンキナーゼは、細胞増殖、発癌、および細胞分化の重要な要因であることが示されている。
【０００９】
チロシンキナーゼは、受容体型チロシンキナーゼ、または非受容体型チロシンキナーゼに分類することができる。受容体型チロシンキナーゼは、細胞外部分、膜貫通部分、および細胞内部分を有し、非受容体型チロシンキナーゼは、細胞内のみである。
【００１０】
受容体型チロシンキナーゼは、異なる生物活性を有する多数の膜貫通受容体からなる。それゆえ、受容体型チロシンキナーゼの約２０種の異なるサブファミリーが同定されている。ＥＧＦＲまたはＨＥＲサブファミリーと称される、１つのチロシンキナーゼサブファミリーは、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、およびＨＥＲ４からなる。この受容体サブファミリーのリガンドには、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、組織増殖因子（ＴＧＦ−α）、アンフィレグリン、ＨＢ−ＥＧＦ、ベータセルリン、およびヘレグリンが含まれる。これらの受容体型チロシンキナーゼの別のサブファミリーは、インスリンサブファミリーであり、ＩＮＳ−Ｒ、ＩＧＦ−ＩＲ、およびＩＲ−Ｒが含まれる。ＰＤＧＦサブファミリーには、ＰＤＧＦ−αおよび−β受容体、ＣＳＦＩＲ、ｃ−ｋｉｔ、ならびにＦＬＫ−ＩＩが含まれる。さらに、キナーゼ挿入ドメイン受容体（ＫＤＲ）すなわちＶＥＧＦＲ−２、胎児肝臓キナーゼ−１（ＦＬＫ−１）、胎児肝臓キナーゼ−４（ＦＬＫ−４）、およびｆｍｓチロシンキナーゼ−１（ｆｌｔ−１）すなわちＶＥＧＦＲ−１からなるＦＬＫファミリーがある。ＰＤＧＦおよびＦＬＫファミリーは、これら２つの群が類似しているため、通常、スプリットキナーゼドメイン（ｓｐｌｉｔ  ｋｉｎａｓｅ  ｄｏａｉｎ）受容体チロシンキナーゼの群にまとめられる（Ｌａｉｒｄ  Ａ．Ｄ．およびＪ．Ｍ．Ｃｈｅｒｒｉｎｇｔｏｎ、Ｅｘｐｅｒｔ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ  １２（１）：５１〜６４、２００３）。受容体型チロシンキナーゼに関する詳細な議論は、参照により本明細書の一部とする、Ｐｌｏｗｍａｎ等による論文、ＤＮ＆Ｐ７（６）：３３４〜３３９、１９９４を参照されたい。
【００１１】
非受容体型チロシンキナーゼも同様に、多数のサブファミリーからなり、Ｓｒｃ、Ｆｒｋ、Ｂｔｋ、Ｃｓｋ、Ａｂｌ、Ｚａｐ７０、Ｆｅｓ／Ｆｐｓ、Ｆａｋ、Ｊａｋ、Ａｃｋ、およびＬＩＭＫが含まれる。これらのサブファミリーはそれぞれ、種々のサブ群にさらに再分類される。たとえば、Ｓｒｃサブファミリーは、もっとも大きなサブファミリーの１つである。これには、Ｓｒｃ、Ｙｅｓ、Ｆｙｎ、Ｌｙｎ、Ｌｃｋ、Ｂｌｋ、Ｈｃｋ、Ｆｇｒ、およびＹｒｋが含まれる。酵素のＳｒｃサブファミリーは、腫瘍形成と関連づけられている。非受容体型チロシンキナーゼのより詳細な議論は、参照により本明細書の一部とする、Ｂｏｌｅｎによる論文、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、８：２０２５〜２０３１（１９９３）を参照されたい。
【００１２】
受容体型チロシンキナーゼおよび非受容体型チロシンキナーゼは共に、癌、乾癬、および過剰免疫応答などの状態をもたらす細胞シグナル経路に関与している。
【００１３】
癌は、その原因がシグナル伝達障害に認められる疾患である。特に、脱制御されたチロシンキナーゼによるシグナル伝達は、癌の増殖および拡散において主要な役割を果たす（Ｂｌｕｍｅ−Ｊｅｎｓｅｎ  Ｐ．およびＴ．Ｈｕｎｔｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ  ４１１：３５５〜３６５、２００１；Ｈａｎａｈａｎ  Ｄ．およびＲ．Ａ．Ｗｅｉｎｂｅｒｇ、Ｃｅｌｌ  １００：５７〜７０、２０００）。したがって、チロシンキナーゼ、特に受容体型チロシンキナーゼ、およびそれらに結合する増殖因子は、脱制御されたアポトーシス、組織浸潤、転移、および一般に癌をもたらすシグナル伝達機構に関与する可能性がある。
【００１４】
特に、受容体型チロシンキナーゼは、癌の増殖および拡散のさらなる重要な機序である血管新生において役割を果たす（ＭｕｓｔｏｎｅｎおよびＡｌｉｔａｌｏ、Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１２９：８９５〜８９８、１９９５）。これらの受容体型チロシンキナーゼの１つは、ＦＬＫ−１とも称される、胎児肝臓キナーゼ１である。ＦＬＫ−１のヒト類似体は、キナーゼ挿入ドメイン含有受容体ＫＤＲであり、これは高親和力でＶＥＧＦに結合することから、血管内皮細胞増殖因子受容体２、すなわちＶＥＧＦＲ−２としても知られている。マウス型のこの受容体もＮＹＫと称されている（Ｏｅｌｒｉｃｈｓ等、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ８（１）：１１〜１５、１９９３）。ＶＥＧＦおよびＫＤＲは、血管内皮細胞の増殖、ならびにそれぞれ血管形成および血管新生と称される、血管の形成および発芽において重要な役割を果たすリガンド−受容体対である。
【００１５】
血管新生は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の過剰な活性を特徴とする。ＶＥＧＦは、実際は、リガンドのファミリーからなる（ＫｌａｇｓｂｕｒｎおよびＤ’Ａｍｏｒｅ、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ＆Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ７：２５９〜２７０、１９９６）。ＶＥＧＦは、高親和性膜貫通チロシンキナーゼ受容体ＫＤＲ、およびＦｌｔ−１、または血管内皮細胞増殖因子受容体１（ＶＥＧＦＲ−１）とも称される関連するｆｍｓチロシンキナーゼ−１に結合する。細胞培養、および遺伝子ノックアウト実験は、それぞれの受容体が血管新生の種々の局面に寄与することを示唆している。ＫＤＲは、ＶＥＧＦのマイトジェン機能を媒介し、Ｆｌｔ−１は、細胞接着に関連する機能など、非マイトジェン機能を調整すると考えられる。したがって、ＫＤＲを阻害することによって、マイトジェンＶＥＧＦ活性レベルが調整される。実際、腫瘍増殖は、ＶＥＧＦ受容体アンタゴニストの抗血管新生作用に影響を受けることが示されている（Ｋｉｍ等、Ｎａｔｕｒｅ  ３６２、８４１〜８４４頁、１９９３）。
【００１６】
ＶＥＧＦの発現はまた、動物およびヒト腫瘍の、壊死部に隣接する低酸素領域で著しく増加する。さらに、ＶＥＧＦは、癌遺伝子ｒａｓ、ｒａｆ、ｓｒｃ、およびｐ５３変異型（いずれも癌治療に重要である）の発現によってアップレギュレートされる。抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体は、ヌードマウスにおいて、ヒト腫瘍の増殖を阻害する。同じ腫瘍細胞は培養においてＶＥＧＦを発現し続けるが、この抗体はその分裂速度を低減しない。それゆえ、腫瘍由来のＶＥＧＦは、自己分泌マイトジェン因子として機能しない。したがって、ＶＥＧＦは、その傍分泌性の血管内皮細胞の走化性およびマイトジェン活性を介して血管新生を促進することによって、ｉｎ  ｖｉｖｏで腫瘍増殖に寄与する。これらのモノクローナル抗体はまた、無胸腺マウスで典型的に血管化が充分でないヒト結腸癌の増殖を阻害し、接種細胞から生じる腫瘍数を低減する。
【００１７】
固形腫瘍は、その増殖を支えるのに必要とされる血管の形成に関して血管新生に依存しているため、チロシンキナーゼ阻害剤で治療することができる。これらの固形腫瘍には、単球性白血病、あるいは脳、尿生殖路、リンパ系、胃および咽頭の癌、ならびに肺腺癌および小細胞肺癌を含む肺の癌が含まれる。
【００１８】
固形腫瘍のさらなる例には、Ｒａｆ活性化癌遺伝子（たとえば、Ｋ−ｒａｓ、ｅｒｂ−Ｂ）の過剰発現または活性化が観察される癌腫が含まれる。そのような癌には、膵臓癌および乳癌が含まれる。したがって、これらのチロシンキナーゼおよび／またはＲａｆキナーゼの阻害剤は、これらの酵素に起因する増殖性疾患の予防および治療に適している。
【００１９】
ＶＥＧＦの血管新生活性は、腫瘍に限定されない。ＶＥＧＦは、糖尿病性網膜症において網膜または網膜近傍に生じる血管新生活性の原因となる。この網膜での血管増殖は、視力低下をもたらし、最後には失明に至る。新生血管形成に至る眼ＶＥＧＦｍＲＮＡおよびタンパク質レベルは、霊長類での網膜静脈閉塞、およびマウスでのｐＯ2レベルの低下などの状態によってさらに上昇する。抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体、またはＶＥＧＦ受容体免疫融合体（ｉｍｍｕｎｏｆｕｓｉｏｎ）の眼内注射は、霊長類モデルおよび齧歯類モデルの両方で、眼の新生血管形成を阻害する。ヒト糖尿病性網膜症におけるＶＥＧＦの誘発の原因にかかわらず、眼ＶＥＧＦの阻害はこの疾患の治療に適している。
【００２０】
細胞質チロシンキナーゼドメインを除去するが、膜アンカーを保持するように切断されたマウスＫＤＲ受容体相同体、Ｆｌｔ−１およびＦｌｋ−１のＶＥＧＦ結合構築体のウイルスでの発現は、おそらくは膜貫通内皮細胞ＶＥＧＦ受容体とのヘテロダイマー形成による優性阻害機序によって、マウスにおいて移植性膠芽細胞腫の増殖を実質的に停止する。ヌードマウスにおいて通常は固形腫瘍として増殖する胚幹細胞は、両方のＶＥＧＦ対立遺伝子がノックアウトされている場合、検出可能な腫瘍を形成しない。総合すると、これらのデータは、固形腫瘍の増殖におけるＶＥＧＦの役割を示している。ＫＤＲまたはＦｌｔ−１の阻害は、病的血管新生に関与し、腫瘍増殖は血管新生に依存することが知られているため、これらの受容体の阻害剤は、血管新生が病理全体の一部である疾患、たとえば炎症、糖尿病性網膜血管形成、ならびに種々の形態の癌の治療に適している（Ｗｅｉｄｎｅｒ等、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２４、１〜８頁、１９９１）。
【００２１】
本発明は、ＶＥＧＦＲを調節、調整、または阻害することのできる化合物、ならびに調節されていない、または障害のあるＶＥＧＦＲ活性に関連する疾患を予防および／または治療するためのそれらの使用を対象とする。したがって、特に本発明による化合物は、ある種の形態の癌の治療、および糖尿病性網膜症または炎症などの病的血管新生に起因する疾患の場合に用いることができる。
【００２２】
さらに、本発明による化合物は、ＶＥＧＦＲの活性または発現の単離および研究のために用いることができる。さらに、本発明による化合物は、特に、調節されていないまたは障害のあるＶＥＧＦＲ活性に関連する疾患の診断方法において用いるのに適している。
【００２３】
内皮特異的受容体型チロシンキナーゼＴＩＥ−２のリガンドであるアンギオポイエチン１（Ａｎｇ−１）は、新規な血管新生因子である（Ｄａｖｉｓ等、Ｃｅｌｌ、１９９６、８７：１１６１〜１１６９；Ｐａｒｔａｎｅｎ等、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１２：１６９８〜１７０７（１９９２）；米国特許第５，５２１，０７３号；第５，８７９，６７２号；第５，８７７，０２０号；および第６，０３０，８３１号）。頭字語ＴＩＥは、「ＩｇおよびＥＧＦ相同ドメインを有するチロシンキナーゼ」の略語である。ＴＩＥは、血管内皮細胞および初期造血細胞においてのみ発現する受容体型チロシンキナーゼのクラスを識別するために用いられる。ＴＩＥ受容体キナーゼは典型的に、ＥＧＦ様ドメイン、および鎖間のジスルフィド橋結合によって安定化した細胞外フォールドユニットからなる免疫グロブリン（ＩＧ）様ドメインの存在を特徴とする（Ｐａｒｔａｎｅｎ等、Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐｉｃｓ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９９、２３７：１５９〜１７２）。血管発生の初期段階にその機能を発揮するＶＥＧＦとは対照的に、Ａｎｇ１およびその受容体ＴＩＥ−２は、血管発生の後期段階、すなわち血管転換（血管内腔の形成に関連する転換）および成熟中に作用する（Ｙａｎｃｏｐｏｕｌｏｓ等、Ｃｅｌｌ、１９９８、９３：６６１〜６６４；Ｐｅｔｅｒｓ  Ｋ．Ｇ．、Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．、１９９８、８３（３）：３４２〜３；Ｓｕｒｉ等、Ｃｅｌｌ  ８７、１１７１〜１１８０（１９９６））。
【００２４】
したがって、ＴＩＥ−２の阻害は、血管新生によって開始される新しい血管系の転換および成熟を中断するはずであり、それにより血管新生のプロセスを中断するはずであることが予期される。さらに、ＶＥＧＦＲ−２のキナーゼドメイン結合部位における阻害は、チロシン残基のリン酸化を遮断し、血管新生の開始を阻止する働きをするであろう。したがって、ＴＩＥ−２および／またはＶＥＧＦＲ−２の阻害は腫瘍血管新生を妨げ、腫瘍増殖を遅延する、または完全に排除する働きをするはずであると仮定されなければならない。
【００２５】
したがって、ＴＩＥ−２および／またはＶＥＧＦＲ−２の阻害剤によって、不適切な血管新生に関連する癌および他の疾患の治療を提供することができる。
【００２６】
本発明は、ＴＩＥ−２を阻害、調節、および／または調整することのできる化合物、ならびに調節されていないまたは障害のあるＴＩＥ−２活性に関連する疾患を予防および／または治療するためのそれらの使用を対象とする。したがって、特に本発明による化合物は、ある種の形態の癌の治療、および糖尿病性網膜症または炎症などの病的血管新生に起因する疾患の場合に用いることができる。
【００２７】
さらに、本発明による化合物は、ＴＩＥ−２の活性または発現の単離および研究のために用いることができる。さらに、本発明による化合物は、特に、調節されていないまたは障害のあるＴＩＥ−２活性に関連する疾患の診断方法において用いるのに適している。
【００２８】
本発明による化合物はさらに、ある種の現存する癌化学療法および放射線療法において付加的または相乗的効果を提供するために用いることができ、かつ／またはある種の現存する癌化学療法および放射線療法の効力を回復させるために用いることができる。
【００２９】
本発明はさらに、Ｒａｆキナーゼの阻害剤としての化合物に関する。タンパク質リン酸化は、細胞機能を調節するための基礎的なプロセスである。タンパク質キナーゼおよびホスファターゼの協調作用は、リン酸化の程度を制御し、それゆえ特定の標的タンパク質の活性を制御する。タンパク質リン酸化の主たる役割の１つはシグナル伝達にあり、ここで細胞外シグナルは、たとえばｐ２１ras／ｒａｆ経路において、タンパク質リン酸化および脱リン酸化事象のカスケードによって増幅および伝播される。
【００３０】
ｐ２１ras遺伝子は、ハーベイ（Ｈａｒｖｅｙ）（Ｈ−Ｒａｓ）およびカーステン（Ｋｉｒｓｔｅｎ）（Ｋ−Ｒａｓ）ラット肉腫ウイルスの癌遺伝子として発見された。ヒトでは、細胞Ｒａｓ遺伝子（ｃ−Ｒａｓ）の特徴的な突然変異は、多くの異なる型の癌と関連づけられている。Ｒａｓを構成的に活性化するこれらの突然変異対立遺伝子は、培養において、たとえばマウス細胞系ＮＩＨ３Ｔ３などの細胞を形質転換することが示されている。
【００３１】
ｐ２１ras癌遺伝子は、ヒト固形癌腫の発生および進行の重要な要因であり、すべてのヒト癌腫の３０％で突然変異している（Ｂｏｌｔｏｎ等（１９９４）Ａｎｎ．Ｒｅｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２９、１６５〜７４；Ｂｏｓ．（１９８９）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４９、４６８２〜９）。その正常な非変異型では、Ｒａｓタンパク質は、ほぼすべての組織において、増殖因子受容体に導かれるシグナル伝達カスケードの主要な要素である（Ａｖｒｕｃｈ等（１９９４）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１９、２７９〜８３）。
【００３２】
生化学的には、Ｒａｓは、グアニンヌクレオチド結合タンパク質であり、ＧＴＰ結合活性化型とＧＤＰ結合静止型とのサイクリングは、Ｒａｓ内因性ＧＴＰアーゼ活性および他の調節タンパク質によって厳密に制御される。Ｒａｓ遺伝子産物は、グアニン三リン酸（ＧＴＰ）およびグアニン二リン酸（ＧＤＰ）に結合し、ＧＴＰをＧＤＰに加水分解する。Ｒａｓは、ＧＴＰ結合状態で活性である。癌細胞のＲａｓ突然変異体において、内因性ＧＴＰアーゼ活性は低下し、その結果として、タンパク質は、たとえば酵素Ｒａｆキナーゼなどの下流エフェクターに構成的増殖シグナルを伝達する。これがそれらの突然変異体を有する細胞の癌増殖をもたらす（Ｍａｇｎｕｓｏｎ等（１９９４）Ｓｅｍｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．５、２４７〜５３）。Ｒａｓ癌原遺伝子は、高等真核生物において、受容体型および非受容体型チロシンキナーゼによって開始された増殖および分化シグナルを伝達するために、機能的に無傷のＣ−Ｒａｆ−１癌原遺伝子を必要とする。
【００３３】
活性化Ｒａｓは、Ｃ−Ｒａｆ−１癌原遺伝子の活性化に必要であるが、それによりＲａｓがＲａｆ−１タンパク質（Ｓｅｒ／Ｔｈｒ）キナーゼを活性化する生化学的段階は充分に特徴が明らかにされている。Ｒａｆキナーゼに対する非活性化抗体を投与してＲａｆキナーゼシグナル経路を阻害することによって、あるいは優性阻害Ｒａｆキナーゼ、またはＲａｆキナーゼの基質である優性阻害ＭＥＫ（ＭＡＰＫＫ）の共発現によって活性Ｒａｓの作用を阻害することにより、形質転換細胞の逆戻りおよび正常な増殖表現型がもたらされることが示されている（Ｄａｕｍ等（１９９４）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１９、４７４〜８０；Ｆｒｉｄｍａｎ等（１９９４）Ｊ  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９、３０１０５〜８；Ｋｏｌｃｈ等（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３４９、４２６〜２８；概説としてＷｅｉｎｓｔｅｉｎ−Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍｅｒ等、Ｐｈａｒｍ．＆Ｔｈｅｒａｐ．（２０００）８８、２２９〜２７９を参照されたい）。
【００３４】
同様に、Ｒａｆキナーゼの阻害（アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドによる）は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで様々なヒト腫瘍型の増殖の阻害との関連が認められている（Ｍｏｎｉａ等、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１９９６、２、６６８〜７５）。
【００３５】
Ｒａｆ−セリンおよびトレオニン特異的タンパク質キナーゼは、種々の細胞系において細胞増殖を刺激する非受容体型酵素である（Ｒａｐｐ  Ｕ．Ｒ．等（１９８８）Ｔｈｅ  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ；Ｔ．Ｃｕｒｒａｎ、Ｅ．Ｐ．Ｒｅｄｄｙ、およびＡ．Ｓｋａｌｋａ（編）、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ；Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ、２１３〜２５３頁；Ｒａｐｐ  Ｕ．Ｒ．等（１９８８）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｓｙｍ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５３：１７３〜１８４；Ｒａｐｐ  Ｕ．Ｒ．等（１９９０）Ｉｎｖ  Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．ＰｏｔｔｅｒおよびＭｅｌｃｈｅｒｓ（編）、Ｂｅｒｌｉｎ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ  １６６：１２９〜１３９）。
【００３６】
３種のアイソザイムの特徴が明らかにされている。
【００３７】
Ｃ−Ｒａｆ（Ｒａｆ−１）（Ｂｏｎｎｅｒ  Ｔ．Ｉ．等（１９８６）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４：１００９〜１０１５）。Ａ−Ｒａｆ（Ｂｅｃｋ  Ｔ．Ｗ．等（１９８７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１５：５９５〜６０９）、およびＢ−Ｒａｆ（Ｑｋａｗａ  Ｓ．等（１９９８）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８：２６５１〜２６５４；Ｓｉｔｈａｎａｎｄａｍ  Ｇ．等（１９９０）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ：１７７５）。３種の酵素は、様々な組織での発現に差がある。Ｒａｆ−１は、研究されたすべての器官およびすべての細胞系で発現し、Ａ−ＲａｆおよびＢ−Ｒａｆは、それぞれ尿生殖組織および脳組織で発現する（Ｓｔｏｒｍ  Ｓ．Ｍ．（１９９０）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ５：３４５〜３５１）。
【００３８】
Ｒａｆ遺伝子は、癌原遺伝子である。これらの遺伝子は、特に改変形態で発現されたとき、細胞の悪性形質転換を開始し得る。発癌活性化を導く遺伝子変化は、タンパク質のＮ末端阻害調節ドメインを除去または妨げることによって、構成的に活性なタンパク質キナーゼを生じる（Ｈｅｉｄｅｃｋｅｒ  Ｇ．等（１９９０）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０：２５０３〜２５１２；Ｒａｐｐ  Ｕ．Ｒ．等（１９８７）、Ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ；Ｓ．Ａ．Ａａｒｏｎｓｏｎ、Ｊ．Ｂｉｓｈｏｐ、Ｔ．Ｓｕｇｉｍｕｒａ、Ｍ．Ｔｅｒａｄａ、Ｋ．Ｔｏｙｏｓｈｉｍａ、およびＰ．Ｋ．Ｖｏｇｔ（編）、Ｊａｐａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｋｙｏ）。発癌的に活性化されているが、野生型ではない、大腸菌発現ベクターを用いて調製されたＲａｆタンパク質型のＮＩＨ３Ｔ３細胞へのマイクロインジェクションは、形態変換をもたらし、ＤＮＡ合成を促進する（Ｒａｐｐ  Ｕ．Ｒ．等（１９８７）、Ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ；Ｓ．Ａ．Ａａｒｏｎｓｏｎ、Ｊ．Ｂｉｓｈｏｐ、Ｔ．Ｓｕｇｉｍｕｒａ、Ｍ．Ｔｅｒａｄａ、Ｋ．Ｔｏｙｏｓｈｉｍａ、およびＰ．Ｋ．Ｖｏｇｔ（編）、Ｊａｐａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｋｙｏ；Ｓｍｉｔｈ  Ｍ．Ｒ．等、（１９９０）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０：３８２８〜３８３３）。
【００３９】
したがって、活性化Ｒａｆ−１は、細胞増殖の細胞内活性化因子である。Ｒａｆ癌遺伝子が、細胞突然変異（Ｒａｓ復帰突然変異細胞）または抗Ｒａｓ抗体のマイクロインジェクションによる細胞Ｒａｓ活性の遮断に起因するアポトーシスに打ち勝つため、Ｒａｆ−１タンパク質セリンキナーゼは、マイトジェンシグナル伝達の下流エフェクターの候補である（Ｒａｐｐ  Ｕ．Ｒ．等（１９８８）Ｔｈｅ  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ；Ｔ．Ｃｕｒｒａｎ、Ｅ．Ｐ．Ｒｅｄｄｙ、およびＡ．Ｓｋａｌｋａ（編）、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ；Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ、２１３〜２５３頁；Ｓｍｉｔｈ  Ｍ．Ｒ．等（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）３２０：５４０〜５４３）。
【００４０】
Ｃ−Ｒａｆ機能は、種々の膜結合型癌遺伝子による形質転換、および血清に含まれるマイトジェンによる増殖刺激に必要とされる（Ｓｍｉｔｈ  Ｍ．Ｒ．等（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）３２０：５４０〜５４３）。Ｒａｆ−１タンパク質セリンキナーゼ活性は、リン酸化を介してマイトジェンによって調節され（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  Ｄ．Ｋ．等（１９８９）Ｃｅｌｌ  ５８：６４８〜６５７）、これはさらに細胞内分布をもたらす（Ｏｌａｈ  Ｚ．等（１９９１）Ｅｘｐ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．８４：４０３；Ｒａｐｐ  Ｕ．Ｒ．等（１９８８）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｓｙｍ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５３：１７３〜１８４）。Ｒａｆ−１活性化増殖因子には、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  Ｄ．Ｋ．等（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：８８５５〜８８５９）、コロニー刺激因子（Ｂａｃｃａｒｉｎｉ  Ｍ．等（１９９０）ＥＭＢＯ  Ｊ．９：３６４９〜３６５７）、インスリン（Ｂｌａｃｋｓｈｅａｒ  Ｐ．Ｊ．等、（１９９０）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１２１１５〜１２１１８）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  Ｒ．Ｋ．等、（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：８８５５〜８８５９）、インターロイキン−２（Ｔｕｒｎｅｒ  Ｂ．Ｃ．等（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：１２２７）およびインターロイキン-３、ならびに顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（Ｃａｒｒｏｌｌ  Ｍ．Ｐ．等、（１９９０）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１９８１２〜１９８１７）が含まれる。
【００４１】
細胞のマイトジェン処理後、一過性に活性化されたＲａｆ−１タンパク質セリンキナーゼは、核周囲領域および核に移動する（Ｏｌａｈ  Ｚ．等（１９９１）Ｅｘｐ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．８４：４０３；Ｒａｐｐ  Ｕ．Ｒ．等（１９８８）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｂｏｒ  Ｓｙｍ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５３：１７３〜１８４）。活性化Ｒａｆを含有する細胞は、遺伝子発現パターンが変わり（Ｈｅｉｄｅｃｋｅｒ  Ｇ．等（１９８９）Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｓｔａｇｅ  ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ、Ｎ．Ｃｏｌｂｕｒｎ（編）、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、３３９〜３７４頁）、Ｒａｆ癌遺伝子は、一過性トランスフェクションアッセイにおいて、Ａｐ−１／ＰＥＡ３依存性プロモーターからの転写を活性化する（Ｊａｍａｌ  Ｓ．等（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４４：４６３〜４６６；Ｋａｉｂｕｃｈｉ  Ｋ．等（１９８９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：２０８５５〜２０８５８；Ｗａｓｙｌｙｋ  Ｃ．等（１９８９）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．９：２２４７〜２２５０）。
【００４２】
細胞外マイトジェンによるＲａｆ−１活性化には少なくとも２つの独立した経路がある。１つは、タンパク質キナーゼＣ（ＫＣ）を伴い、もう１つは、タンパク質チロシンキナーゼによって開始される（Ｂｌａｃｋｓｈｅａｒ  Ｐ．Ｊ．等、（１９９０）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１２１３１〜１２１３４；Ｋｏｖａｃｉｎａ  Ｋ．Ｓ．等（１９９０）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１２１１５〜１２１１８；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  Ｄ．Ｋ．等（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：８８５５〜８８５９；Ｓｉｅｇｅｌ  Ｊ．Ｎ．等（１９９０）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１８４７２〜１８４８０；Ｔｕｒｎｅｒ  Ｂ．Ｃ．等（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：１２２７）。いずれの場合にも、活性化は、Ｒａｆ−１タンパク質リン酸化を伴う。Ｒａｆ−１リン酸化は、自己リン酸化によって増幅されたキナーゼカスケードの結果であるか、またはジアシルグリセロールによるＰＫＣ活性化に類似した、潜在的活性化リガンドとＲａｆ−１調節ドメインとの結合によって開始された自己リン酸化がもっぱらの原因である可能性がある（Ｎｉｓｈｉｚｕｋａ  Ｙ．（１９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３３：３０５〜３１２）。
【００４３】
本発明は、Ｒａｆキナーゼを阻害、調節、および／または調整することのできる化合物、ならびに調節されていないまたは障害のあるＲａｆキナーゼ活性に関連する疾患を予防および／または治療するためのそれらの使用を対象とする。したがって、特に本発明による化合物は、ある種の形態の癌の治療に用いることができる。すでに述べたように、本発明による化合物は、ある種の現存する癌化学療法および放射線療法において付加的または相乗的効果を提供するために用いることができ、かつ／またはある種の現存する癌化学療法および放射線療法の効力を回復させるために用いることができる。
【００４４】
さらに、本発明による化合物は、Ｒａｆキナーゼの活性または発現の単離および研究のために用いることができる。さらに、本発明による化合物は、特に、調節されていないまたは障害のあるＲａｆキナーゼ活性に関連する疾患の診断方法において用いるのに適している。
【００４５】
細胞調節が達成される主要な機序の１つは、膜を通過する細胞外シグナルの伝達、それに続く細胞内の生化学的経路の調整によるものである。タンパク質リン酸化は、細胞内シグナルが分子から分子に伝播され、最終的に細胞応答を引き起こす一過程である。これらのシグナル伝達カスケードは、高度に調節されており、多くのタンパク質キナーゼおよびタンパク質ホスファターゼの存在からわかるように、多くの場合重複している。タンパク質のリン酸化は、主としてセリン、トレオニン、またはチロシン残基で起こり、したがって、タンパク質キナーゼは、それらのリン酸化部位の特異性によって、すなわちセリン／トレオニンキナーゼ、およびチロシンキナーゼに分類されている。リン酸化は細胞内の非常に偏在的なプロセスであり、細胞表現型はこれらの経路の活性に大いに影響を受けるため、多数の疾病状態および／または疾患は、キナーゼカスケードの分子成分における異常活性化または機能的突然変異に起因すると現在考えられている。したがって、これらのタンパク質、およびそれらの活性を調整することのできる化合物の特徴を明らかにすることに、かなりの注目が向けられている（概説としてＷｅｉｎｓｔｅｉｎ−Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍｅｒ等、Ｐｈａｒｍａ．＆Ｔｈｅｒａｐ．２０００、８８、２２９〜２７９を参照されたい）。キナーゼの阻害、調節、および調整の種々の可能性には、たとえば、抗体、アンチセンスリボザイム、および阻害剤の提供が包含される。腫瘍学の研究において、チロシンキナーゼは特に、非常に有望な標的である。したがって、多数の合成小分子が、癌を治療するためのチロシンキナーゼ阻害剤として臨床開発中であり、たとえばイレッサ（Ｉｒｅｓｓａ）（登録商標）、またはグリベック（Ｇｌｅｅｖｅｃ）（登録商標）である。しかしながら、副作用、用量、腫瘍の耐性、腫瘍特異性、および患者選定などの多くの問題が、依然として解決されなければならない。
【００４６】
ＷＯ０２／４４１５６は、ＴＩＥ−２および／またはＶＥＧＦＲ２阻害剤としてのベンズイミダゾール誘導体を記載している。ＷＯ９９／３２４３６、ＷＯ０２／０６２７６３、ＷＯ９９／３２４５５、ＷＯ００／４２０１２、およびＷＯ０２／０８５８５７は、Ｒａｆキナーゼ阻害剤としての尿素誘導体を開示している。
【００４７】
本発明は、有用な特性を有する新規な化合物、特に薬剤の調製に用いることのできる新規な化合物を発見するという目的に基づいた。
【００４８】
したがって、チロシンキナーゼおよび／またはＲａｆキナーゼのシグナル伝達を特異的に阻害、調節、および／または調整する小化合物の同定および提供が望ましく、本発明の目的である。
【００４９】
本発明による化合物およびそれらの塩は、充分に耐性でありながら、非常に有用な薬理学的特性を有することが見出された。
【００５０】
特に、本発明による化合物は、意外にも有効なキナーゼ阻害剤であることが見出された。
【００５１】
たとえば、本発明による化合物は、チロシンキナーゼ阻害作用、特にＴＩＥ−２および／またはＶＥＧＦＲ阻害作用を示す。さらに、本発明による化合物は、Ｒａｆキナーゼの有効な阻害剤である。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００５２】
発明の概要
本発明は、上述の式Ｉの化合物に関する。
【００５３】
本発明を通じて、１回を超えて生じるすべての基は、同一であっても異なっていてもよく、すなわち互いに独立している。上述および下述の基および変数は、他に明示的な記載のない限り、式Ｉに関して示した意味を有する。したがって、本発明は、特に、前記基の少なくとも１つが以下に示す好ましい意味の１つを有する式Ｉの化合物に関する。
【００５４】
Ｈａｌは、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素、特にフッ素、または塩素を示す。
【００５５】
Ａは、非分岐（直鎖）、分岐、または環状であり、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、または１４個のＣ原子を有するアルキルを示す。Ａは、好ましくはメチル、さらにはエチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓ−ブチルまたはｔ−ブチル、さらにはペンチル、１−、２−、または３−メチルブチル、１，１−、１，２−、または２，２−ジメチルプロピル、１−エチルプロピル、ヘキシル、１−、２−、３−、または４−メチルペンチル、１，１−、１，２−、１，３−、２，２−、２，３−、または３，３−ジメチルブチル、１−または２−エチルブチル、１−エチル−１−メチルプロピル、１−エチル−２−メチルプロピル、１，１，２−または１，２，２−トリメチルプロピル、直鎖または分岐ヘプチル、オクチル、ノニル、またはデシルを示す。
【００５６】
Ａは、非常に特に好ましくは１、２、３、４、５、または６個のＣ原子を有するアルキルを示し、１または２個のＣＨ2基は、ＯまたはＳ原子および／または−ＣＨ＝ＣＨ−基で置換されていてもよく、かつ／またはさらに１〜７個のＨ原子は、Ｆおよび／またはＣｌで置換されていてもよく、たとえばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチル、または１，１，１−トリフルオロエチルなどである。
【００５７】
シクロアルキルは、好ましくはシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、またはシクロヘプチルを示す。
【００５８】
ＯＡは、好ましくはメトキシ、さらにはエトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓ−ブトキシ、またはｔ−ブトキシである。
【００５９】
Ａｒは、たとえば非置換フェニル、ナフチル、またはビフェニル、さらに好ましくは、たとえばＡ、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヒドロキシル、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ、ニトロ、シアノ、ホルミル、アセチル、プロピオニル、トリフルオロメチル、アミノ、メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ベンジルオキシ、スルホンアミド、メチルスルホンアミド、エチルスルホンアミド、プロピルスルホンアミド、ブチルスルホンアミド、ジメチルスルホンアミド、フェニルスルホンアミド、カルボキシル、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、アミノカルボニルで一、二、または三置換されているフェニル、ナフチル、またはビフェニルを示す。
【００６０】
Ａｒは、たとえばフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−トリル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−エチルフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−プロピルフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−イソプロピルフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−ｔ−ブチルフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−ヒドロキシフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−ニトロフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−アミノフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−（Ｎ−メチルアミノ）フェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−（Ｎ−メチルアミノカルボニル）フェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−アセトアミドフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−メトキシフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−エトキシフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−エトキシカルボニルフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）フェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノカルボニル）フェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−（Ｎ−エチルアミノ）フェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）フェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−フルオロフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−ブロモフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−クロロフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−（メチルスルホンアミド）フェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−（メチルスルホニル）フェニル、さらに好ましくは２，３−、２，４−、２，５−、２，６−、３，４−、または３，５−ジフルオロフェニル、２，３−、２，４−、２，５−、２，６−、３，４−、または３，５−ジクロロフェニル、２，３−、２，４−、２，５−、２，６−、３，４−、または３，５−ジブロモフェニル、２，４−または２，５−ジニトロフェニル、２，５−または３，４−ジメトキシフェニル、３−ニトロ−４−クロロフェニル、３−アミノ−４−クロロ−、２−アミノ−３−クロロ−、２−アミノ−４−クロロ−、２−アミノ−５−クロロ−、または２−アミノ−６−クロロフェニル、２−ニトロ−４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ−または３−ニトロ−４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノフェニル、２，３−ジアミノフェニル、２，３，４−、２，３，５−、２，３，６−、２，４，６−、または３，４，５−トリクロロフェニル、２，４，６−トリメトキシフェニル、２−ヒドロキシ−３，５−ジクロロフェニル、ｐ−ヨードフェニル、３，６−ジクロロ−４−アミノフェニル、４−フルオロ−３−クロロフェニル、２−フルオロ−４−ブロモフェニル、２，５−ジフルオロ−４−ブロモフェニル、３−ブロモ−６−メトキシフェニル、３−クロロ−６−メトキシフェニル、３−クロロ−４−アセトアミドフェニル、３−フルオロ−４−メトキシフェニル、３−アミノ−６−メチルフェニル、３−クロロ−４−アセトアミドフェニル、または２，５−ジメチル−４−クロロフェニルを示す。
【００６１】
Ｈｅｔは、好ましくは２−または３−フリル、２−または３−チエニル、１−、２−、または３−ピロリル、１−、２、４−、または５−イミダゾリル、１−、３−、４−、または５−ピラゾリル、２−、４−、または５−オキサゾリル、３−、４−、または５−イソキサゾリル、２−、４−、または５−チアゾリル、３−、４−、または５−イソチアゾリル、２−、３−、または４−ピリジル、２−、４−、５−、または６−ピリミジニル、さらに好ましくは、１，２，３−トリアゾール−１−、−４−、または−５−イル、１，２，４−トリアゾール−１−、−３−、または−５−イル、１−または５−テトラゾリル、１，２，３−オキサジアゾール−４−または−５−イル、１，２，４−オキサジアゾール−３−または−５−イル、１，３，４−チアジアゾール−２−または−５−イル、１，２，４−チアジアゾール−３−または−５−イル、１，２，３−チアジアゾール−４−または−５−イル、３−または４−ピリダジニル、ピラジニル、１−、２−、３−、４−、５−、６−、または７−インドリル、４−または５−イソインドリル、１−、２−、４−、または５−ベンズイミダゾリル、１−、３−、４−、５−、６−、または７−ベンゾピラゾリル、２−、４−、５−、６−、または７−ベンゾオキサゾリル、３−、４−、５−、６−、または７−ベンズイソキサゾリル、２−、４−、５−、６−、または７−ベンゾチアゾリル、２−、４−、５−、６−、または７−ベンズイソチアゾリル、４−、５−、６−、または７−ベンゾ−２，１，３−オキサジアゾリル、２−、３−、４−、５−、６−、７−、または８−キノリル、１−、３−、４−、５−、６−、７−、または８−イソキノリル、３−、４−、５−、６−、７−、または８−シンノリニル、２−、４−、５−、６−、７−、または８−キナゾリニル、５−または６−キノキサリニル、２−、３−、５−、６−、７−、または８−２Ｈ−ベンゾ−１，４−オキサジニル、さらに好ましくは１，３−ベンゾジオキソール−５−イル、１，４−ベンゾジオキサン−６−イル、２，１，３−ベンゾチアジアゾール−４−または−５−イル、あるいは２，１，３−ベンゾオキサジアゾール−５−イルを示し、それぞれ非置換であるか、あるいは、たとえばカルボニル酸素、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、メチル、エチル、プロピル、フェニル、ベンジル、−ＣＨ2−シクロヘキシル、ヒドロキシル、メトキシ、エトキシ、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、ニトロ、シアノ、カルボキシル、メトキシカルボニル、アミノカルボニル、メチルアミノカルボニル、ジメチルアミノカルボニル、アセトアミノ、ウレイド、メチルスルホニルアミノ、ホルミル、アセチル、アミノスルホニル、および／またはメチルスルホニルで一、二、または三置換されている。
【００６２】
複素環基は、部分的または完全に水素化されてもよく、たとえば２，３−ジヒドロ−２−、−３−、−４−、または−５−フリル、２，５−ジヒドロ−２−、−３−、−４−、または５−フリル、テトラヒドロ−２−または−３−フリル、１，３−ジオキソラン−４−イル、テトラヒドロ−２−または−３−チエニル、２，３−ジヒドロ−１−、−２−、−３−、−４−、または−５−ピロリル、２，５−ジヒドロ−１−、−２−、−３−、−４−、または−５−ピロリル、１−、２−、または３−ピロリジニル、テトラヒドロ−１−、−２−、または−４−イミダゾリル、２，３−ジヒドロ−１−、−２−、−３−、−４−、または−５−ピラゾリル、テトラヒドロ−１−、−３−、または−４−ピラゾリル、１，４−ジヒドロ−１、−２−、−３−、または−４−ピリジル、１，２，３，４−テトラヒドロ−１−、−２−、−３−、−４−、−５−、または−６−ピリジル、１−、２−、３−、または４−ピペリジニル、２−、３−、または４−モルホリニル、テトラヒドロ−２−、−３−、または−４−ピラニル、１，４−ジオキサニル、１，３−ジオキサン−２−、−４−、または−５−イル、ヘキサヒドロ−１−、−３−、または−４−ピリダジニル、ヘキサヒドロ−１−、−２−、−４−、または−５−ピリミジニル、１−、２−、または３−ピペラジニル、１，２，３，４−テトラヒドロ−１−、−２−、−３−、−４−、−５−、−６−、−７−、または−８−キノリル、１，２，３，４−テトラヒドロ−１−、−２−、−３−、−４−、−５−、−６−、−７−、または−８−イソキノリル、２−、３−、５−、６−、７−、または８−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ−１，４−オキサジニル、さらに好ましくは２，３−メチレンジオキシフェニル、３，４−メチレンジオキシフェニル、２，３−エチレンジオキシフェニル、３，４−エチレンジオキシフェニル、３，４−（ジフルオロメチレンジオキシ）フェニル、２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−または６−イル、２，３−（２−オキソメチレンジオキシ）フェニル、あるいは３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１，５−ベンゾジオキセピン−６−または−７−イル、さらに好ましくは２，３−ジヒドロベンゾフラニル、または２，３−ジヒドロ−２−オキソフラニルを示す。
【００６３】
Ｈｅｔはさらに、たとえば２−オキソピペリジン−１−イル、２−オキソピロリジン−１−イル、２−オキソ−１Ｈ−ピリジン−１−イル、３−オキソモルホリン−４−イル、４−オキソ−１Ｈ−ピリジン−１−イル、２，６−ジオキソピペリジン−１−イル、２−オキソピペラジン−１−イル、２，６−ジオキソピペラジン−１−イル、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル、２−オキソ−１，３−オキサゾリジン−３−イル、３−オキソ−２Ｈ−ピリダジン−２−イル、２−カプロラクタム−１−イル（＝２−オキソアゼパン−１−イル）、２−ヒドロキシ−６−オキソピペラジン−１−イル、２−メトキシ−６−オキソピペラジン−１−イル、または２−アザビシクロ［２．２．２］オクタン−３−オン−２−イルを示す。
【００６４】
Ｒ1は、好ましくはＨ、Ｈａｌ、ＣＦ3、ＮＯ2、ＣＯＯＨ、またはＣＯＯＲを示す。Ｒ2は、好ましくはＨを示す。Ｒ3は、好ましくはＨ、Ｈａｌ、またはＣＯ−ＮＨＲを示す。Ｒは、好ましくはＨ、あるいは非置換、または一、二、三、または四−Ｒ4−置換のＡ、Ａｒ、Ｈｅｔ、（ＣＨ2）qＨｅｔ、または（ＣＨ2）qＡｒを示す。Ｒ4は、好ましくはＨａｌ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ2、ＣＦ3、ＯＣＦ3、ＳＣＦ3、ＳＯ2Ａ、またはＯＡを示す。
【００６５】
【化３】
2007506687.tif 000005
【００６６】
は、好ましくはフェニル、あるいは１から４個のＮ、Ｏ、および／またはＳ原子を有する単環式芳香族複素環を示し、
【００６７】
【化４】
2007506687.tif 000006
【００６８】
は、特に好ましくはフェニル、フリル、チエニル、ピロリル、イミダゾリル、ピリジル、またはピリミジニルを示し、
【００６９】
【化５】
2007506687.tif 000007
【００７０】
は、非常に特に好ましくはフェニル、ピリジル、またはピリミジニルを示す。Ｘは、好ましくはＯ、Ｓ、ＳＯ2ＮＨ、またはＮＨを示す。
【００７１】
本明細書では、「基（ｇｒｏｕｐ）」「残基（ｒｅｓｉｄｕｅ）」「基（ｒａｄｉｃａｌ）」、または「基（ｇｒｏｕｐｓ）」「残基（ｒｅｓｉｄｕｅｓ）」「基（ｒａｄｉｃａｌｓ）」という用語は、当分野での通例どおり同義に用いられる。
「置換されている」という用語は、他に指定のない限り、好ましくは上述の置換基による置換を指し、複数の異なる置換度が可能である。
【００７２】
あらゆる比率のそれらの混合物を含む、これらの化合物の生理的に許容されるすべての塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体も本発明によるものである。
【００７３】
式Ｉの化合物は、１つまたは複数のキラル中心を有することができる。したがって、式Ｉの化合物は、種々のエナンチオマー形態で生じることができ、ラセミ体、または光学活性形態で存在することができる。したがって、本発明はさらに式Ｉの化合物の光学活性形態（立体異性体）、エナンチオマー、ラセミ体、ジアステレオマー、ならびにこれらの化合物の水和物および溶媒和物に関する。
【００７４】
本発明による化合物のラセミ体または立体異性体の薬剤有効性は異なる可能性があるため、エナンチオマーの使用が望ましいこともあり得る。これらの場合、最終生成物またはすでに中間体を、当分野の技術者に知られている化学的または物理的手段によってエナンチオマー化合物に分離することができ、あるいは合成においてそのようなものとして用いることもできる。
【００７５】
ラセミアミンの場合、ジアステレオマーは、光学活性分割剤との反応によって混合物から形成される。適切な分割剤は、例えば、ＲおよびＳ体の酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸、乳酸、適切にＮ保護されたアミノ酸（たとえばＮ−ベンゾイルプロリン、またはＮ−ベンゼンスルホニルプロリン）、または種々の光学活性カンファースルホン酸などの光学活性酸である。光学活性分割剤（たとえばジニトロベンゾイルフェニルグリシン、三酢酸セルロース、または炭水化物の他の誘導体、あるいはシリカゲルに固定されたキラル誘導体化メタクリル酸ポリマー）を用いるクロマトグラフエナンチオマー分割も有利である。この目的に適切な溶離剤は、水性またはアルコール性溶媒混合物であって、例えばヘキサン／イソプロパノール／アセトニトリルで、例えば８２：１５：３の比率のものである。化合物の好ましいいくつかの群は、以下の下位式ＩａからＩｅで表すことができ、これらは式Ｉに従い、式中、詳細に指定されない基は、式Ｉに関して示した意味を有するが、
Ｉａにおいて、Ｒ1は、Ｈａｌ、ＮＯ2、ＣＦ3、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ、またはＨを示し、
Ｉｂにおいて、Ｒ2は、Ｈを示し、
Ｉｃにおいて、Ｒ3は、Ｈ、Ｈａｌ、またはＣＯ−ＮＨＲを示し、
Ｉｄにおいて、Ｙは、フェニル、フリル、チエニル、ピロリル、イミダゾリル、ピリジル、またはピリミジニルを示し、
Ｉｅにおいて、Ｒ1は、Ｈａｌ、ＮＯ2、ＣＦ3、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ、またはＨを示し、
Ｒ2は、Ｈを示し、
Ｒ3は、Ｈ、Ｈａｌ、またはＣＯ−ＮＨＲを示し、
Ｙは、フェニル、フリル、チエニル、ピロリル、イミダゾリル、ピリジル、またはピリミジニルを示し、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＳＯ2ＮＨ、またはＮＨを示し、
ｎ、ｐは、互いに独立して、１、２、３、または４を示し、
ｍは、１を示すものであり、
ならびにあらゆる比率のそれらの混合物を含む、薬剤として許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体である。
【００７６】
化合物は、特に好ましくは下記の群から選択され、
ａ）ベンゾオキサゾール−２−イル−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル］アミン、
ｂ）ベンゾオキサゾール−２−イル−［４−（ピリジン−４−イルスルファニル）フェニル］アミン、
ｃ）Ｎ−ベンゾオキサゾール−２−イル−Ｎ’−ピリジン−４−イルベンゼン−１，４−ジアミン、
ｄ）２−［４−（ピリジン−４−イルスルファニル）フェニルアミノ］ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸、
ｅ）２−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニルアミノ］ベンゾオキサゾール−６−カルボン酸、
ｆ）２−［４−（ピリジン−４−イルスルファニル）フェニルアミノ］ベンゾオキサゾール−６−カルボン酸、
ｇ）メチル  ２−［４−（ピリジン−４−イルアミノ）フェニルアミノ］ベンゾオキサゾール−６−カルボキシレート、
ｈ）（５−ニトロベンゾオキサゾール−２−イル）−［４−（ピリジン−４−イルスルファニル）フェニル］アミン、
ｉ）（５−ニトロベンゾオキサゾール−２−イル）−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル］アミン、
ｊ）Ｎ−（５−ニトロベンゾオキサゾール−２−イル）−Ｎ’−ピリジン−４−イルベンゼン−１，４−ジアミン、
ｋ）（６−ニトロベンゾオキサゾール−２−イル）−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル］アミン、
ｌ）（６−ニトロベンゾオキサゾール−２−イル）−［４−（ピリジン−４−イルスルファニル）フェニル］アミン、
ｍ）Ｎ−（６−ニトロベンゾオキサゾール−２−イル）−Ｎ’−ピリジン−４−イルベンゼン−１，４−ジアミン、
ｎ）（５−クロロ−７−ニトロベンゾオキサゾール−２−イル）−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル］アミン、
ｏ）（５−クロロ−７−ニトロベンゾオキサゾール−２−イル）−［４−（ピリジン−４−イルスルファニル）フェニル］アミン、
ｐ）Ｎ−（５−クロロ−７−ニトロベンゾオキサゾール−２−イル）−Ｎ’−ピリジン−４−イルベンゼン−１，４−ジアミン、
ｑ）（７−ブロモ−５−トリフルオロメチルベンゾオキサゾール−２−イル）−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル］−アミン、
ｒ）（７−ブロモ−５−トリフルオロメチルベンゾオキサゾール−２−イル）−［４−（ピリジン−４−イルスルファニル）−フェニル］アミン、
ｓ）（７−ブロモ−５−トリフルオロメチルベンゾオキサゾール−２−イル）−［４−（４−フルオロフェニルスルファニル）−フェニル］アミン、
ｔ）Ｎ−［４−（ブロモトリフルオロメチルベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）フェニル］−４−フルオロベンゼンスルホンアミド、
ｕ）［４−（２−アミノ−６−メチルピリミジン−４−イルオキシ）フェニル］−（７−ブロモ−５−トリフルオロメチルベンゾオキサゾール−２−イル）アミン、
ｖ）Ｎ−メチル−４−［４−（ブロモトリフルオロメチルベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）フェノキシ］−ピリジン−２−カルボキサミド、
ｗ）Ｎ−メチル−４−［４−（ブロモトリフルオロメチルベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）フェニルスルファニル］ピリジン−２−カルボキサミド、
ｘ）（７−ブロモ−５−トリフルオロメチルベンゾオキサゾール−２−イル）−［４−（２，４−ジフルオロフェニルスルファニル）フェニル］アミン、
ならびにあらゆる比率のそれらの混合物を含む、薬剤として許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体である。
【００７７】
薬剤としてまたは生理的に許容される誘導体とは、たとえば本発明による化合物の塩、およびいわゆるプロドラッグ化合物を意味する。そのような誘導体は当分野の技術者に知られている。生理的に耐性である誘導体の概説は、Ｂｕｒｇｅｒ’ｓ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、第５版、Ｖｏｌ１：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅに記載されている。プロドラッグ化合物とは、たとえばアルキル基またはアシル基、糖またはオリゴペプチドで修飾されており、有機体において迅速に開裂または遊離されて、本発明による有効な化合物を提供する式Ｉの化合物を意味する。これらには、たとえばＩｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．１１５（１９９５）、６１〜６７に記載されているように、本発明による化合物の生分解性ポリマー誘導体も含まれる。
【００７８】
適切な酸付加塩は、生理的または薬理的に許容されるすべての酸の無機または有機塩であり、たとえばハロゲン化物、特に塩酸塩または臭化水素酸塩、乳酸塩、硫酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、シュウ酸塩、酢酸塩、リン酸塩、メチルスルホン酸塩、またはｐ−トルエンスルホン酸塩である。
【００７９】
式Ｉの化合物の溶媒和物とは、相互引力により形成される、式Ｉの化合物への不活性溶媒化合物の付加（ａｄｄｕｃｔｉｏｎ）を意味する。溶媒和物は、たとえば一水和物または二水和物などの水和物、あるいはアルコラート、すなわち、たとえばメタノールまたはエタノールなどのアルコールの付加化合物である。
「有効量」という表現は、組織、系、動物、またはヒトにおいて、たとえば研究者または医師から求められるまたは望まれる生物学的または医学的応答を引き起こす薬剤または薬剤活性成分の量を意味する。
【００８０】
さらに、「治療上有効量」という表現は、この量を与えられていない相当する対象と比較して、以下の結果を有する量を意味する。その結果とは、疾患、症候群、疾患状態、状態、障害の治療の改善、治癒、予防、または除去、あるいは副作用の予防、あるいは疾患、状態、または障害の進行における低減である。「治療上有効量」という表現はまた、正常な生理機能を増大するのに有効な量も包含する。
【００８１】
本発明はまた、本発明による式Ｉの化合物の混合物であって、例えば、２種のジアステレオマーの混合物で、例えば、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：１０、１：１００、または１：１０００の比率であるものに関する。これらは、特に好ましくは、立体異性化合物の混合物である。
【００８２】
式Ｉの化合物、ならびに生理的に許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体を調製する方法であり、式中、Ｒ1およびｎが、上述の意味を有する式ＩＩの化合物を、
【００８３】
【化６】
2007506687.tif 000008
【００８４】
式中、Ｒ2、Ｒ3、Ｘ、Ｙ、ｍ、およびｐが、上述の意味を有する式ＩＩＩの化合物と反応させ、
【００８５】
【化７】
2007506687.tif 000009
【００８６】
かつ／または式Ｉの塩基または酸を、その塩の１つに変換することを特徴とする。
【００８７】
式Ｉの化合物の調製は、以下のスキームで表すこともできる。
【００８８】
【化８】
2007506687.tif 000010
【００８９】
式ＩＶおよびＶの化合物は、特に好ましくは、溶媒ジクロロメタンおよびジメチルホルムアミドの存在下、室温で一晩、式ＩＩの化合物に変換される。式ＩＩおよびＩＩＩの化合物は、特に好ましくは、ジメチルホルムアミドの存在下、１１０℃で一晩、式Ｉの化合物に変換される。
【００９０】
それぞれの反応を、段階的に行うことも可能である。
【００９１】
出発原料は、一般に知られている。出発原料が新規である場合、それ自体が知られている方法で調製することができる。
【００９２】
所望であれば、出発原料は、反応混合物から単離されていないが、速やかに式Ｉの化合物にさらに変換されるように、その場で形成することもできる。
【００９３】
出発原料は、溶媒の不在下、密封反応容器またはオートクレーブにおいて混合（溶解）することができる。しかしながら、出発原料を、不活性溶媒の存在下で反応させることも可能である。
【００９４】
式ＩＩおよびＩＩＩの化合物の反応は、当分野の技術者に知られている方法で行われる。この反応は、まず適切な溶媒、特に不活性溶媒中で行われる。
【００９５】
適切な不活性溶媒は、たとえばヘプタン、ヘキサン、石油エーテル、ベンゼン、トルエン、キシレン、トリクロロエチレン、１，２−ジクロロエタン、テトラクロロメタン、クロロホルム、またはジクロロメタン；例えばメタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタノール、またはｔ−ブタノールなどのアルコール；例えばジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル（好ましくはインドール窒素を置換）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、またはジオキサンなどのエーテル；例えばエチレングリコールモノメチルまたはモノエチルエーテル（メチルグリコール、またはエチルグリコール）、エチレングリコールジメチルエーテル（ジグライム）などのグリコールエーテル；例えばアセトン、またはブタノンなどのケトン；例えばアセトアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）などのアミド；例えばアセトニトリルなどの二トリル；例えば酢酸エチルなどのエステル、例えば酢酸または無水酢酸などのカルボン酸または酸無水物、例えばニトロメタン、またはニトロベンゼンなどのニトロ化合物、あるいは所望であれば前記溶媒の相互の混合物、または水との混合物である。ジメチルホルムアミドが特に好ましい。
【００９６】
この反応は、不均質相において、好ましくは水相およびベンゼンまたはトルエン相を用いて行うこともできる。本発明では、たとえばヨウ化テトラブチルアンモニウムなどの相間移動触媒、および場合によって、たとえばジメチルアミノピリジンなどのアシル化触媒が用いられる。
【００９７】
溶媒の量は重要でなく、好ましくは反応させる式Ｉの化合物１ｇ当たり、１０ｇから５００ｇの溶媒を添加することができる。
【００９８】
適切な反応温度は、１０から１８０℃、好ましくは２０から１５０℃、特に好ましくは６０から１２０℃の温度である。
【００９９】
この反応は、好ましくは１から２００バールの圧力、特に好ましくは大気圧で行われる。
【０１００】
この反応は、好ましくはｐＨ４から１０で行われる。
【０１０１】
反応の持続期間は、選択された反応条件によって決まる。一般に、反応持続期間は、０．５時間から１０日、好ましくは１から２４時間、特に好ましくは２から１２時間である。
【０１０２】
式Ｉの化合物、およびそれらを調製するための出発原料は、さらに、たとえば前記反応に適している既知の条件下で、文献（たとえば、Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ、Ｍｅｔｈｏｄｅｎ  ｄｅｒ  ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ  Ｃｈｅｍｉｅ（有機化学の方法）、Ｇｅｒｏｇ−Ｔｈｉｅｍｅ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔなどの標準的な著作物）に記載されているような、知られている方法で調製される。それ自体知られているが、本明細書にはより詳細に述べられていない変法も用いることができる。
【０１０３】
溶媒を除去した後、式Ｉの化合物は、たとえば反応混合物に水を添加し、抽出するなどの、通常の後処理段階によって得ることができる。生成物をさらに精製するために、続いて蒸留または結晶化を行うことが有利であり得る。
【０１０４】
式ＩＶおよびＶの化合物の、式ＩＩの化合物への変換は、上に示したプロセスによって行われる。用いる不活性溶媒は、特に好ましくはジクロロメタンおよびジメチルホルムアミドである。このプロセスは、好ましくは１０から４０度の温度、特に好ましくは室温で、大気圧で行われる。反応持続期間は、特に好ましくは２から１２時間である。
【０１０５】
式Ｉの酸は、たとえば等量の酸および塩基をエタノールなどの不活性溶媒中で反応させ、蒸発することによって、塩基を用いて関連する付加塩に変換することができる。この反応に特に適切な塩基は、生理的に許容される塩を提供する塩基である。したがって、式Ｉの酸は、塩基（たとえば水酸化ナトリウムまたは炭酸ナトリウム、あるいは水酸化カリウムまたは炭酸カリウム）を用いて、対応する金属塩、特にアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩、あるいは対応するアンモニウム塩に変換することができる。たとえばエタノールアミンなどの、生理的に許容される塩を提供する有機塩基もこの反応に適している。
【０１０６】
他方、式Ｉの塩基は、たとえば等量の塩基および酸をエタノールなどの不活性溶媒中で反応させ、その後、蒸発させることによって、酸を用いて関連する酸付加塩に変換することができる。特にこの反応に適切な酸は、生理的に許容される塩を提供する酸である。したがって、例えば硫酸、硝酸、ハロゲン化水素酸（たとえば塩酸または臭化水素酸など）、リン酸（正リン酸など）、スルファミン酸などの無機酸、さらに有機酸、特に脂肪族、脂環式、アルアリファチック（ａｒａｌｉｐｈａｔｉｃ）、芳香族、または複素環式の一塩基または多塩基カルボン酸、スルホン酸、または硫酸であって、たとえばギ酸、酢酸、プロピオン酸、ピバリン酸、ジエチル酢酸、マロン酸、コハク酸、ピメリン酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、グルコン酸、アスコルビン酸、ニコチン酸、イソニコチン酸、メタンまたはエタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、２−ヒドロキシスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンモノおよびジスルホン酸、あるいはラウリル硫酸を用いることができる。
【０１０７】
生理的に許容されない酸との塩、たとえばピクリン酸塩は、式Ｉの化合物の単離および／または精製のために用いることができる。
【０１０８】
本発明はさらに、本発明による少なくとも１種の化合物、ならびに／またはあらゆる比率のそれらの混合物を含む、生理的に許容されるその塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体を含む薬剤に関する。
【０１０９】
本発明による薬剤組成物は、さらなる賦形剤および／または補助剤、および場合によって１種または複数のさらなる薬剤活性成分をさらに含んでもよい。
【０１１０】
本発明はさらに、薬剤を調製する方法であって、本発明による化合物、ならびに／またはあらゆる比率のそれらの混合物を含む、生理的に許容されるその塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体の１つが、固体、液体、または半液体賦形剤または補助剤と共に、適切な投与形態に形成されることを特徴とする方法に関する。
【０１１１】
本発明はまた、
（ａ）有効量の本発明による化合物、ならびに／またはあらゆる比率のそれらの混合物を含む、生理的に許容されるその塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体と、
（ｂ）有効量のさらなる薬剤活性成分と、の別個のパックからなるセット（キット）に関する。
【０１１２】
このセットは、たとえば箱、個別ボトル、袋、またはアンプルなどの適切な容器を含む。このセットは、たとえば、有効量の本発明による化合物、および／またはあらゆる比率のそれらの混合物を含む、薬剤として利用可能なその誘導体、溶媒和物、および立体異性体と、ならびに有効量のさらなる薬剤活性成分とを溶解または凍結乾燥形態でそれぞれ含有する別個のアンプルを含んでもよい。
【０１１３】
薬剤は、投与単位当たり所定量の活性成分を含む投与単位の形態で投与することができる。そのような単位は、治療される状態、投与方法、患者の年齢、体重および状態に応じて、たとえば０．５ｍｇから１ｇ、好ましくは１ｍｇから７００ｍｇ、特に好ましくは５ｍｇから１００ｍｇの本発明による化合物を含むことができる。好ましい投与単位製剤は、上述のとおり、活性成分の日用量または部分用量、あるいはそれらの用量に相当する活性成分部分を含むものである。
【０１１４】
さらに、この種の薬剤は、薬剤分野で一般に知られている方法を用いて調製することができる。
【０１１５】
薬剤は、任意の所望の適切な方法、たとえば経口（口腔または舌下を含む）、直腸、経鼻、局所（口腔、舌下、または経皮を含む）、膣内、あるいは非経口（皮下、筋内、静脈内、または皮内を含む）法によって投与するために適応させることができる。そのような製剤は、薬剤分野で知られているあらゆる方法を用いて、たとえば活性成分を賦形剤または補助剤と組み合わせることによって調製することができる。
【０１１６】
経口投与用に適応された薬剤は、別個の単位として投与することができ、たとえばカプセル剤または錠剤、粉剤または顆粒剤、水性または非水性溶液の液剤または懸濁剤、食用泡剤または泡状食品、あるいは水中油型液体エマルションまたは油中水型液体エマルションなどである。
【０１１７】
したがって、たとえば、錠剤またはカプセル剤形態での経口投与の場合、活性成分は、経口、非毒性かつ薬剤として許容される不活性賦形剤、たとえばエタノール、グリセロール、水などと組み合わせることができる。粉剤は、化合物を適切な微細粒度に粉砕し、それを同様に粉砕した薬剤賦形剤、たとえば食用炭水化物、たとえばデンプンまたはマンニトールなどと混合することによって調製される。同様に、香味剤、保存剤、分散剤、および染料も含有させてもよい。
【０１１８】
カプセル剤は、上述のとおり粉末混合物を調製し、成形したゼラチン外皮にそれを充填することによって製造される。流動促進剤および潤滑剤、たとえば高度分散ケイ酸、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、または固体形態のポリエチレングリコールなどを、充填操作前に、粉末混合物に添加することができる。崩壊剤または可溶化剤、たとえば寒天、炭酸カルシウム、または炭酸ナトリウムなども、カプセル摂取後の薬剤の有用性を向上させるために、同様に添加してもよい。
【０１１９】
さらに、所望であるか必要であれば、適切な結合剤、潤滑剤、および崩壊剤、ならびに染料を、同様に混合物に組み入れることができる。適切な結合剤には、デンプン、ゼラチン、天然糖、たとえばグルコースまたはβ−ラクトースなど、トウモロコシから作られた甘味剤、天然および合成ゴム、たとえばアカシア、トラガカント、またはアルギン酸ナトリウムなど、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ロウなどが含まれる。これらの投与形態に用いられる潤滑剤には、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが含まれる。崩壊剤には、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどが含まれるが、これらに限定されない。錠剤は、たとえば、粉末混合物を調製し、混合物を粒状にするか、または乾燥圧縮し、潤滑剤および崩壊剤を添加し、全混合物を圧縮して錠剤を得ることによって製剤化される。粉末混合物は、上述のとおり、適切な様式で粉砕した化合物を、希釈剤またはベースと、場合によって結合剤、たとえばカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、またはポリビニルピロリドンなどと、分解遅延剤、たとえばパラフィンなど、吸収促進剤、たとえば第四級塩などと、および／または吸収剤、たとえばベントナイト、カオリン、または第二リン酸カルシウムなどと混合することによって調製される。粉末混合物は、結合剤、たとえば糖ミツ、デンプン糊、アカディア（ａｃａｄｉａ）粘液、あるいはセルロースまたはポリマー材料の溶液などを用いて湿潤させ、ふるいを通してそれを圧縮することによって粒状にすることができる。粒状化の別法として、粉末混合物を打錠機に通して、分解されて小粒を形成する不均一な形状の塊を得ることができる。小粒は、錠剤鋳型に粘着するのを防ぐために、ステアリン酸、ステアリン酸塩、タルク、または鉱油を添加することによって、潤滑にすることができる。その後、潤滑混合物を圧縮して、錠剤を得る。本発明による化合物は、流動性不活性賦形剤と組み合わせ、その後粒状化または乾燥圧縮段階を行わずに、直接圧縮して錠剤を得ることもできる。シェラック密封層、糖またはポリマー材料層、およびロウの光沢層からなる透明または不透明保護層が存在してもよい。異なる投与単位を識別できるように、これらの被覆物に染料を添加することができる。
【０１２０】
経口液体、たとえば液剤、シロップ剤、およびエリキシル剤などは、所与の量が予め指定された量の化合物を含むような投与単位の形態で調製することができる。シロップ剤は、化合物を適切な香味剤と共に水溶液に溶解することによって調製することができ、エリキシル剤は、非毒性アルコール媒体を用いて調製される。懸濁剤は、化合物を非毒性媒体に分散することによって製剤化することができる。可溶化剤および乳化剤、たとえばエトキシル化イソステアリルアルコール、およびポリオキシエチレンソルビトールエーテルなど、保存剤、香味添加剤、たとえばハッカ油、あるいは天然甘味剤またはサッカリン、あるいは他の人工甘味剤なども同様に添加することができる。
【０１２１】
経口投与用の投与単位製剤は、所望であれば、マイクロカプセルに封入することができる。この製剤は、たとえば粒状材料をポリマー、ロウなどで被覆または包埋することによって、放出が延長または遅延するように調製することもできる。
【０１２２】
本発明による化合物、その塩、溶媒和物、および生理的機能性誘導体は、たとえば小さい単層ベシクル、大きい単層ベシクル、および多層ベシクルなどのリポソーム送達系の形態で投与することもできる。リポソームは、種々のリン脂質、たとえばコレステロール、ステアリルアミン、またはホスファチジルコリンなどから形成することができる。
【０１２３】
本発明による化合物、ならびにその塩、溶媒和物、および生理的機能性誘導体は、化合物分子が結合する個別の担体としてモノクローナル抗体を用いて送達することもできる。これらの化合物は、標的薬剤担体として、可溶性ポリマーに結合させることもできる。そのようなポリマーは、パルミトイル基で置換された、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミドフェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルトアミドフェノール、またはポリエチレンオキシドポリリシンを含むことができる。これらの化合物は、さらに薬剤の制御放出を達成するのに適したある種の生分解性ポリマー、たとえばポリ酢酸、ポリ−ε−カプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロキシピラン、ポリシアノアクリレート、およびヒドロゲルの架橋または両親媒性ブロックコポリマーに結合させてもよい。
【０１２４】
経皮投与用に適応された薬剤は、受容者の表皮と密接に長期接触させるための個別の硬膏剤として投与することができる。したがって、たとえば、活性成分は、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、３（６）、３１８（１９８６）の一般項に記載されているように、イオン導入法によって硬膏剤から送達することができる。
【０１２５】
局所投与用に適応された薬剤は、軟膏剤、クリーム、懸濁剤、ローション剤、粉剤、液剤、ペースト（ｐａｓｔｅｓ）、ゲル、スプレー、エアロゾル、または油として製剤化することができる。
【０１２６】
眼または他の外部組織、たとえば口および皮膚の治療の場合、製剤は、好ましくは局所軟膏剤またはクリームとして適用される。軟膏を提供する製剤の場合、活性成分は、パラフィン系または水混和性クリームベースと共に用いることができる。あるいは、水中油型クリームベースまたは油中水型ベースを用いてクリームを提供するように製剤化することができる。
【０１２７】
眼への局所適用に適応された薬剤には、点眼液が含まれ、この場合、活性成分は、適切な担体、特に水性溶媒に溶解または懸濁される。
【０１２８】
口への局所適用に適応された薬剤は、ロゼンジ（ｌｏｚｅｎｇｅｓ）、トローチ剤、およびマウスウォッシュを含む。
【０１２９】
直腸投与用に適応された薬剤は、坐剤または浣腸の形態で投与することができる。
【０１３０】
担体物質が固体である経鼻投与用に適応された薬剤は、たとえば２０〜５００ミクロンの範囲の粒径を有する粗い粉末を含み、この薬剤は、鼻からの吸入が行われる様式、すなわち鼻に近接して保持された粉末を含有する容器から鼻道を経由して急速に吸入されることによって投与される。担体物質として液体を含む鼻用スプレーまたは点鼻薬として投与される適切な製剤には、活性成分の水溶液または油溶液が含まれる。
【０１３１】
吸引による投与に適応された薬剤には、微細粒状ダストまたはミストが含まれ、これはエアロゾル、ネブライザー、または注入器を備えた様々な型の加圧式ディスペンサによって発生させることができる。
【０１３２】
膣内投与用に適応された薬剤は、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト（ｐａｓｔｅｓ）、泡、またはスプレー製剤として投与することができる。
【０１３３】
非経口投与用に適応された薬剤には、それによって製剤が治療される受容者の血液と等張となる、溶質、抗酸化剤、緩衝剤、および静菌剤を含む水性または非水性滅菌注射液、ならびに懸濁媒質および増粘剤を含んでもよい水性または非水性滅菌懸濁液が含まれる。これらの製剤は、単回用量または多回用量容器、たとえば密封アンプルおよびバイアルで投与することができ、使用直前に注射のために、滅菌担体液体、たとえば水の添加のみが必要であるように、凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｉｅｄ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｓｅｄ））状態で保存される。この製法に従って調製される注射液および懸濁液は、滅菌粉末、顆粒、および錠剤から調製することができる。
【０１３４】
特に上に述べた成分に加えて、本発明による薬剤は、その特定の種類の薬剤製剤に関して当分野で通例である他の薬剤も含むことができるのは言うまでもなく、したがって、たとえば経口投与に適している製剤は、香味剤を含んでもよい。
【０１３５】
本発明の化合物の治療上有効量は、たとえば動物の年齢および体重、治療を要する正確な疾患状態、およびその重篤度、製剤の性質、ならびに投与方法を含むいくつかの要因によって決まり、最終的には治療を行う医師または獣医師によって決定される。しかしながら、腫瘍性増殖、たとえば結腸癌または乳癌を治療するための、本発明による化合物の有効量は、一般に１日当たり、受容者（哺乳動物）の体重１ｋｇ当たり、０．１から１００ｍｇの範囲、特に典型的には１日当たり、体重１ｋｇ当たり、１から１０ｍｇの範囲である。したがって、体重７０ｋｇである成体哺乳動物の１日当たりの実際量は、通常７０から７００ｍｇであり、この量を、総日用量が同一となるように、１日当たりの単回用量として、または通常１日当たり一連（たとえば、２、３、４、５、または６回など）の部分用量で投与することができる。その塩、または溶媒和物、あるいは生理的機能性誘導体の有効量は、それ自体が本発明による化合物の有効量の一部分として決定することができる。類似の用量が上に挙げた他の状態の治療にも適していることが推測され得る。
使用
本発明による化合物は、好ましくは、本実施例に記載したように酵素アッセイにおいて容易に検出され得る有利な生物活性を示す。そのような酵素に基づくアッセイにおいて、本発明による化合物は、好ましくは、通常は適切な範囲、好ましくはマイクロモル範囲、より好ましくはナノモル範囲のＩＣ50値によって示される阻害作用を示し、そのような作用をもたらす。
【０１３６】
本発明は、本明細書に記載のシグナル経路の活性化剤または阻害剤、好ましくは阻害剤としての本発明による化合物に関する。したがって本発明は、特に好ましくは、キナーゼの活性化剤または阻害剤、特に好ましくはチロシンキナーゼ、特にＴＩＥ−２および／またはＶＥＧＦＲの阻害剤、および／またはＲａｆキナーゼ、特にＡ−Ｒａｆ、Ｂ−Ｒａｆ、およびＣ−Ｒａｆ−１の阻害剤としての本発明による化合物に関する。
【０１３７】
上に論じたように、本発明による化合物に影響を受けるシグナル経路は、種々の疾患に関連している。したがって、本発明による化合物は、１つまたは複数の前記シグナル経路と相互に作用することによって前記シグナル経路に依存している疾患の予防および／または治療に有用である。
【０１３８】
したがって、本発明はさらに、疾患、特にキナーゼおよび／またはキナーゼ媒介シグナル伝達によって発生、媒介、および／または伝播される疾患を治療および／または予防する薬剤を調製するための、本発明による化合物ならびに／またはあらゆる比率のそれらの混合物を含む、生理的に許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体の使用に関する。本発明では、チロシンキナーゼの群から選択されたキナーゼが好ましい。チロシンキナーゼは、特に好ましくはＴＩＥ−２またはＶＥＧＦＲである。Ｒａｆキナーゼの群から選択されたキナーゼも好ましい。Ｒａｆキナーゼは、特に好ましくはＡ−Ｒａｆ、Ｂ−Ｒａｆ、またはＲａｆ−１である。
【０１３９】
本発明による化合物は、酵素Ｒａｆキナーゼの阻害剤であることが見出された。この酵素は、ｐ２１rasの下流エフェクターであるため、この阻害剤は、たとえばＲａｆキナーゼに媒介される腫瘍および／または癌細胞増殖の治療において、Ｒａｆキナーゼ経路の阻害が指示されているヒトまたは動物薬で用いるための薬剤組成物に適していることがわかる。特に、ヒトおよび動物の固形癌、たとえばマウス癌の進行は、Ｒａｓタンパク質シグナル伝達カスケードに依存しており、したがってカスケードの中断、すなわちＲａｆキナーゼの阻害による治療に感受性であるため、これらの化合物は、それらの癌の治療に適している。したがって、本発明による化合物、または薬剤として許容されるその塩は、Ｒａｆキナーゼ経路に媒介される疾患、特に、固形癌を含む癌、たとえば癌腫（たとえば、肺、膵臓、甲状腺、膀胱、または結腸）、骨髄疾患（たとえば、骨髄性白血病）、または腺腫（たとえば、絨毛状結腸腺腫）、病的血管新生、および転移性細胞遊走を治療するために投与される。これらの化合物はさらに、補体活性化依存性の慢性炎症（Ｎｉｃｕｌｅｓｃｕ等（２００２）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．２４：１９１〜１９９）、およびＨＩＶ−１（ヒト免疫不全ウイルス１型）誘発性免疫不全（Ｐｏｐｉｋ等（１９９８）Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７２：６４０６〜６４１３）の治療に適している。
【０１４０】
さらに、本発明の化合物は、チロシンキナーゼ誘発性疾患の治療における、哺乳動物、特にヒトに対する薬剤活性成分として適している。「チロシンキナーゼ誘発性疾患」という表現は、１種または複数のチロシンキナーゼの活性に依存する病的状態を指す。チロシンキナーゼは、増殖、接着、遊走、および分化を含む種々の細胞活動のシグナル伝達経路に、直接または間接的に関与する。チロシンキナーゼ活性に関連する疾患には、腫瘍細胞の増殖、固形腫瘍の増殖を促進する病的新生血管形成、眼新生血管形成（糖尿病性網膜症、加齢性黄斑変性など）、および炎症（乾癬、関節リウマチなど）が含まれる。
【０１４１】
本明細書に論じた疾患は、通常２つの群、過剰増殖性疾患および非過剰増殖性疾患に分類される。これに関して、乾癬、関節炎、炎症、子宮内膜症、瘢痕、良性前立腺肥大、免疫疾患、自己免疫疾患、および免疫不全疾患は、非癌性疾患とみなされ、その中で関節炎、炎症、免疫疾患、自己免疫疾患、および免疫不全疾患は、通常、非過剰増殖性疾患とみなされる。
【０１４２】
これに関して、脳腫瘍、肺癌、扁平上皮癌、膀胱癌、胃癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、結腸直腸癌、乳癌、頭部癌、頸部癌、食道癌、婦人科癌、甲状腺癌、リンパ腫、慢性白血病、および急性白血病は、癌性疾患とみなされ、そのすべてが、通常、過剰増殖性疾患の群であるとみなされる。特に癌細胞増殖、特にＴＩＥ−２、ＶＥＧＦＲ、およびＲａｆキナーゼに直接または間接的に媒介される癌細胞増殖は、本発明の標的となる疾患である。
【０１４３】
したがって本発明は、前記疾患を治療および／または予防する薬剤を調製するための本発明による化合物の使用、ならびにそのような投与を必要としている患者に本発明による１種または複数の化合物を投与することを含む、前記疾患を治療するための方法に関する。
【０１４４】
本発明による化合物は、異種移植腫瘍モデルにおいて、ｉｎ  ｖｉｖｏで抗増殖作用を有することを示すことができる。本発明による化合物は、たとえば腫瘍増殖を阻害する、リンパ増殖性疾患に伴う炎症を緩和する、移植拒絶または組織修復による神経障害を阻害するなどのために、過剰増殖性疾患を有する患者に投与される。本発明の化合物は、予防または治療目的に適している。本明細書では、「治療」という用語は、疾患の予防および既存状態の治療の両方を指すために用いられる。増殖の予防は、たとえば腫瘍の増殖を防ぐ、転移増殖を防ぐ、心臓血管手術に伴う再狭窄を減じるなどのために、顕性疾患の発症に先立って本発明による化合物を投与することによって達成される。あるいは、化合物は、患者の臨床症状を安定または改善することによって、進行中の疾患を治療するために用いられる。
【０１４５】
宿主および患者は、任意の哺乳動物種、たとえば霊長類種、特にヒト、ならびにマウス、ラット、およびハムスターを含む齧歯動物、ウサギ、ウマ、ウシ、イヌ、ネコなどに属することができる。動物モデルは、実験的研究に重要であり、ヒトの疾患治療のモデルを提供する。
【０１４６】
本発明の化合物による治療に対する特定の細胞の感受性は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験によって判定することができる。典型的に、細胞の培養を、活性剤が細胞死を誘発する、または遊走を阻害するのに充分な期間、通常は約１時間から１週間、様々な濃度の本発明による化合物と共にインキュベートする。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験は、生検試料由来の培養細胞を用いて行うことができる。その後、処置後に残存する生存細胞をカウントする。
【０１４７】
用量は、用いられる特定の化合物、特定の疾患、患者の状態などに応じて異なる。治療用量は、典型的に、患者の生存性を維持しながら、標的組織において望ましくない細胞集団を大幅に減少するのに充分な量である。治療は、一般的に、大幅な低減が生じるまで、たとえば特定の細胞のカウントが少なくとも約５０％低減するまで継続され、望ましくない細胞が体内で本質的に検出されなくなるまで継続してもよい。
【０１４８】
キナーゼ阻害剤を同定するために、種々のアッセイ系が利用可能である。シンチレーション近接アッセイ（Ｓｏｒｇ等、Ｊ．ｏｆ  Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ、２００２、７、１１〜１９）、およびフラッシュプレートアッセイでは、γＡＴＰを用いて基質としてのタンパク質またはペプチドの放射性リン酸化を測定する。阻害化合物の存在下では、検出される放射性シグナルが低減するか、まったく検出されない。さらに、ホモジニアス時間分解蛍光共鳴エネルギー転移（ＨＴＲ−ＦＲＥＴ）、および蛍光偏光（ＦＰ）技法は、アッセイ法として適している（Ｓｉｌｌｓ等、Ｊ．ｏｆ  Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ、２００２、１９１〜２１４）。
【０１４９】
他の非放射性ＥＬＩＳＡアッセイ法は、特定のホスホ−抗体（ホスホ−ＡＢ）を用いる。このホスホ−ＡＢは、リン酸化基質にのみ結合する。この結合は、二次ペルオキシダーゼ複合抗ヒツジ抗体を用いて、化学発光によって検出することができる（Ｒｏｓｓ等、２００２、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．、まもなく発行、原稿ＢＪ２００２０７８６）。
【０１５０】
細胞増殖の脱制御および細胞死（アポトーシス）に関連する多くの疾患がある。しかしながら、本発明による化合物で治療、予防、または緩和することのできる疾患および状態には、以下に挙げる疾患および状態が含まれるが、これらに限定されるものではない。本発明による化合物は、平滑筋細胞および／または炎症細胞の増殖、および/または脈管の内膜層への遊走の結果、たとえば新生内膜の閉塞性病変の場合など、脈管の血流が制限されるような、多くの異なる疾患および状態の治療および／または予防に適している。対象となる閉塞性移植血管疾患には、アテローム性動脈硬化症、移植後の冠血管疾患、静脈移植血管狭窄、吻合周囲プロテーゼ再狭窄、血管形成またはステント留置術後の再狭窄などが含まれる。
【０１５１】
本発明は、癌を治療または予防するための、本発明による化合物の使用を包含する。特に本発明は、固形腫瘍を治療および／または予防する薬剤を調製するための、本発明による化合物ならびに／またはあらゆる比率のそれらの混合物を含む、生理的に許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体の使用に関し、固形腫瘍は、特に好ましくは脳腫瘍、尿生殖路の腫瘍、リンパ系の腫瘍、胃腫瘍、咽頭腫瘍、肺腫瘍からなる群から選択される。単球性白血病、肺腺癌、小細胞肺癌、膵臓癌、膠芽細胞腫、および乳癌からなる群から選択された固形腫瘍も、好ましくは、本発明による化合物を含む薬剤で治療することができる。
【０１５２】
本発明による化合物は、癌を治療するために患者に投与することができる。本発明の化合物は、腫瘍血管新生を阻害し、それによって腫瘍の増殖に影響を及ぼす（Ｊ．Ｒａｋ等、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｈ、５５：４５７５〜４５８０、１９９５）。本発明による化合物の血管新生阻害特性は、網膜新生血管形成に関連するある種の形態の失明の治療にも適している。
【０１５３】
したがって、本発明はさらに、血管新生によって発生、媒介、および／または伝播される疾患を治療および／または予防する薬剤を調製するための、本発明による化合物ならびに／またはあらゆる比率のそれらの混合物を含む、生理的に許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体の使用に関する。
【０１５４】
血管新生が関与するそのような疾患は、眼疾患、たとえば網膜血管形成、糖尿病性網膜症、加齢性黄斑変性などである。
【０１５５】
しがたがって、本発明はさらに、上述の疾患を治療および／または予防する薬剤を調製するための、本発明による化合物の使用に関する。
【０１５６】
炎症性疾患を治療および／または予防する薬剤を調製するための、本発明による化合物ならびに／または生理的に許容されるそれらの塩および溶媒和物の使用も本発明の範囲内である。そのような炎症性疾患の例には、関節リウマチ、乾癬、接触皮膚炎、遅延型過敏反応などが含まれる。
【０１５７】
本発明による化合物はまた、骨肉腫、変形性関節症、および腫瘍性骨軟化症とも称される、くる病などのある種の骨の異常の治療にも適している（Ｈａｓｅｇａｗａ等、Ｓｋｅｌｅｔａｌ  Ｒａｄｉｏｌ．２８、４１〜４５頁、１９９９；Ｇｅｒｂｅｒ等、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｖｏｌ．５、Ｎｏ．６、６２３〜６２８頁、１９９９年６月）。ＶＥＧＦは、成熟破骨細胞に発現するＫＤＲ／Ｆｌｋ−１によって破骨細胞骨吸収を直接促進するので（ＦＥＢＳ  Ｌｅｔ．４７３：１６１〜１６４（２０００）；Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、１４１：１６６７（２０００））、本発明の化合物は、骨粗鬆症、およびパジェット病など、骨吸収に関連する状態の治療および予防にも適している。
【０１５８】
したがって、本発明はさらに、骨肉腫、変形性関節症、およびくる病からなる群から選択された骨の異常を治療する薬剤を調製するための、本発明による化合物ならびに／またはあらゆる比率のそれらの混合物を含む、生理的に許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体の使用に関する。
【０１５９】
これらの化合物はまた、脳水腫、組織損傷、および虚血誘発性再潅流障害を低減することによって、発作などの脳虚血事象後に起こる組織損傷を低減または予防するために用いることもできる（Ｄｒｕｇ  Ｎｅｗｓ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔ  １１：２６５〜２７０（１９９８）；Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０４：１６１３〜１６２０（１９９９））。
【０１６０】
本発明による化合物は、Ｒａｆキナーゼによって発生、媒介、および／または伝播される疾患を治療および予防する薬剤の調製にも適しており、Ｒａｆキナーゼは、Ａ−Ｒａｆ、Ｂ−Ｒａｆ、およびＲａｆ−１からなる群から選択される。
【０１６１】
疾患、好ましくは過剰増殖性疾患および非過剰増殖性疾患の群の疾患を治療するための使用が好ましい。これらは癌性疾患または非癌性疾患である。
【０１６２】
本発明はまた、乾癬、関節炎、炎症、子宮内膜症、瘢痕、良性前立腺肥大、免疫疾患、自己免疫疾患、および免疫不全疾患からなる非癌性疾患の群から選択された疾患を治療する薬剤を調製するための、本発明による化合物ならびに／またはあらゆる比率のそれらの混合物を含む、生理的に許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体の使用に関する。
【０１６３】
本発明はさらに、脳腫瘍、肺癌、扁平上皮癌、膀胱癌、胃癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、結腸直腸癌、乳癌、頭部癌、頸部癌、食道癌、婦人科癌、甲状腺癌、リンパ腫、慢性白血病、および急性白血病からなる癌性疾患の群から選択された疾患を治療する薬剤を調製するための、本発明による化合物ならびに／またはあらゆる比率のそれらの混合物を含む、生理的に許容されるそれらの塩、誘導体、溶媒和物、および立体異性体の使用に関する。
【０１６４】
本発明による化合物は、治療される状態に対して特に有用であるように選択されるよく知られた他の治療剤と同時に投与してもよい。たとえば、骨疾患の場合、好ましい組み合わせには、たとえばアレンドロネート、およびリセドロネートなどの抗吸収性ビスホスホネート、たとえばαｖβ３アンタゴニストなどのインテグリン遮断薬（以下にさらに定義する）、たとえばＰｒｅｍｐｒｏ（登録商標）、Ｐｒｅｍａｒｉｎ（登録商標）、およびＥｎｄｏｍｅｔｒｉｏｎ（登録商標）などのホルモン置換療法に用いられる結合型エストロゲン、たとえばラロキシフェン、ドロロキシフェン、ＣＰ−３３６，１５６（Ｐｆｉｚｅｒ）、およびラソフォキシフェンなどの選択的エストロゲン受容体調整剤（ＳＥＲＭ）、カテプシンＫ阻害剤、ならびにＡＴＰプロトンポンプ阻害剤との組み合わせが含まれる。
【０１６５】
本発明の化合物はまた、知られている抗癌剤との組み合わせにも適している。これらの知られている抗癌剤には、以下のものが含まれる。エストロゲン受容体モジュレータ、アンドロゲン受容体モジュレータ、レチノイド受容体モジュレータ、細胞毒性剤、抗増殖剤、プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤（ｐｒｅｎｙｌ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ）、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、逆転写酵素阻害剤、増殖因子阻害剤、および血管新生阻害剤である。本発明の化合物は、放射線療法と同時に投与するのに特に適している。放射線療法と組み合わせたＶＥＧＦ阻害の相乗効果は、当分野において記載されている（ＷＯ００／６１１８６を参照のこと）。
「エストロゲン受容体モジュレータ」とは、機序にかかわらず、エストロゲンの受容体への結合を妨害または阻害する化合物を指す。エストロゲン受容体モジュレータの例には、これらに限定されるものではないが、タモキシフェン、ラロキシフェン、イドキシフェン、ＬＹ３５３３８１、ＬＹ１１７０８１、トレミフェン、フルベストラント、４−［７−（２，２−ジメチル−１−オキソプロポキシ−４−メチル−２−［４−［２−（１−ピペリジニル）エトキシ］フェニル］−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル］−フェニル２，２−ジメチルプロパノエート、４，４’−ジヒドロキシベンゾフェノン−２，４−ジニトロフェニルヒドラゾン、およびＳＨ６４６が含まれる。
「アンドロゲン受容体モジュレータ」とは、機序にかかわらず、アンドロゲンの受容体への結合を妨害または阻害する化合物を指す。アンドロゲン受容体モジュレータの例には、フィナステリド、および他の５α−レダクターゼ阻害剤、ニルタミド、フルタミド、ビカルタミド、リアロゾール、および酢酸アビラテロン（ａｂｉｒａｔｅｒｏｎｅ）が含まれる。
「レチノイド受容体モジュレータ」とは、機序にかかわらず、レチノイドの受容体への結合を妨害または阻害する化合物を指す。そのようなレチノイド受容体モジュレータの例には、ベキサロテン、トレチノイン、１３−シス−レチノイン酸、９−シス−レチノイン酸、α−ジフルオロメチルオルニチン、ＩＬＸ２３−７５５３、トランス−Ｎ−（４’−ヒドロキシフェニル）レチンアミド、およびＮ−４−カルボキシフェニルレチンアミドが含まれる。
「細胞毒性剤」とは、主として細胞機能に対する直接作用によって細胞死を引き起こすか、あるいは細胞減数分裂を阻害または妨害する化合物を指し、アルキル化剤、腫瘍壊死因子、インターカレータ、ミクロチューブリン阻害剤、およびトポイソメラーゼ阻害剤が含まれる。
【０１６６】
細胞毒性剤の例には、これらに限定されるものではないが、チラパジミン（ｔｉｒａｐａｚｉｍｉｎｅ）、セルテネフ、カケクチン、イホスファミド、タソネルミン、ロニダミン、カルボプラチン、アルトレタミン、プレドニムスチン、ジブロモダルシトール、ラニムスチン、フォテムスチン、ネダプラチン、オキサリプラチン、テモゾロミド、ヘプタプラチン、エストラムスチン、トシル酸インプロスルファン、トロフォスファミド、ニムスチン、塩化ジブロスピジウム（ｄｉｂｒｏｓｐｉｄｉｕｍ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、プミテパ（ｐｕｍｉｔｅｐａ）、ロバプラチン、サトラプラチン、プロフィロマイシン（ｐｒｏｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、シスプラチン、イロフルベン、デキシフォスファミド（ｄｅｘｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、シス−アミンジクロロ（２−メチルピリジン）白金、ベンジルグアニン、グルフォスファミド、ＧＰＸ１００、（トランス，トランス，トランス）−ビス−μ−（ヘキサン−１，６−ジアミン）μ−［ジアミン−白金（ＩＩ）］ビス［ジアミン（クロロ）白金（ＩＩ）］テトラクロリド、ジアリジジニルスペルミン、三酸化ヒ素、１−（１１−ドデシルアミノ−１０−ヒドロキシウンデシル）−３，７−ジメチルキサンチン、ゾルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、ビスアントレン、ミトキサントロン、ピラルビシン、ピナフィド（ｐｉｎａｆｉｄｅ）、バルルビシン、アムルビシン、アンチネオプラストン、３’−デアミノ−３’−モルホリノ−１３−デオキソ−１０−ヒドロキシカルミノマイシン、アナマイシン、ガラルビシン（ｇａｌａｒｕｂｉｃｉｎ）、エリナフィド、ＭＥＮ１０７５５、および４−デメトキシ−３−デアミノ−３−アジリジニル−４−メチルスルホニルダウノルビシンが含まれる（ＷＯ００／５００３２を参照のこと）。
【０１６７】
ミクロチューブリン阻害剤の例には、パクリタキセル、硫酸ビンデシン、３’，４’−ジデヒドロ−４’−デオキシ−８’−ノルビンカロイコブラスチン（ｎｏｒｖｉｎｃａｌｅｕｋｏｂｌａｓｔｉｎｅ）、ドセタキソール、リゾキシン、ドラスタチン、イセチオン酸ミボブリン、アウリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）、セマドチン、ＲＰＲ１０９８８１、ＢＭＳ１８４４７６、ビンフルニン、クリプトフィシン（ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ）、２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−Ｎ−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）ベンゼンスルホンアミド、アンヒドロビンブラスチン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｌ−バリル−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリル−Ｌ−プロリン−ｔ−ブチルアミド、ＴＤＸ２５８、およびＢＭＳ１８８７９７が含まれる。
【０１６８】
トポイソメラーゼ阻害剤のいくつかの例は、トポテカン、ヒカプタミン（ｈｙｃａｐｔａｍｉｎｅ）、イリノテカン、ルビテカン、６−エトキシプロピオニル−３’，４’−Ｏ−エキソベンジリデンシャールトルーシン（ｅｘｏｂｅｎｚｙｌｉｄｅｎｅｃｈａｒｔｒｅｕｓｉｎ）、９−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−５−ニトロピラゾロ［３，４，５−ｋｌ］アクリジン−２−（６Ｈ）プロパンアミン、１−アミノ−９−エチル−５−フルオロ−２，３−ジヒドロ−９−ヒドロキシ−４−メチル−１Ｈ，１２Ｈ−ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：ｂ，７］インドリジノ［１，２ｂ］キノリン−１０，１３（９Ｈ，１５Ｈ）ジオン、ルルトテカン（ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ）、７−［２−（Ｎ−イソプロピルアミノ）エチル］−（２０Ｓ）カンプトテシン、ＢＮＰ１３５０、ＢＮＰＩ１１００、ＢＮ８０９１５、ＢＮ８０９４２、リン酸エトポシド、テニポシド、ソブゾキサン、２’−ジメチルアミノ−２’−デオキシエトポシド、ＧＬ３３１、Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−９−ヒドロキシ−５，６−ジメチル−６Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］カルバゾール−１−カルボキサミド、アスラクリン（ａｓｕｌａｃｒｉｎｅ）、（５ａ，５ａＢ，８ａａ，９ｂ）−９−［２−［Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−Ｎ−メチルアミノ］エチル］−５−［４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシフェニル］−５，５ａ，６，８，８ａ，９−ヘキソヒドロフロ（３’，４’：６，７）ナフト（２，３−ｄ）−１，３−ジオキソール−６−オン、２，３−（メチレンジオキシ）−５−メチル−７−ヒドロキシ−８−メトキシベンゾ［ｃ］フェナンスリジニウム、６，９−ビス［（２−アミノエチル）アミノ］ベンゾ［ｇ］イソキノリン−５，１０−ジオン、５−（３−アミノプロピルアミノ）−７，１０−ジヒドロキシ−２−（２−ヒドロキシエチルアミノメチル）−６Ｈ−ピラゾロ［４，５，１−ｄｅ］アクリジン−６−オン、Ｎ−［１−［２（ジエチルアミノ）エチルアミノ］−７−メトキシ−９−オキソ−９Ｈ−チオキサンテン−４−イルメチル］ホルムアミド、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）アクリジン−４−カルボキサミド、６−［［２−（ジメチルアミノ）エチル］アミノ］−３−ヒドロキシ−７Ｈ−インデノ［２，１−ｃ］キノリン−７−オン、およびジメスナである。
【０１６９】
「抗増殖剤」には、アンチセンスＲＮＡおよびＤＮＡオリゴヌクレオチド、たとえばＧ３１３９、ＯＤＮ６９８、ＲＶＡＳＫＲＡＳ、ＧＥＭ２３１、およびＩＮＸ３００１など、ならびに代謝拮抗剤、たとえばエノシタビン、カルモフール、テガフール、ペントスタチン、ドキシフルリジン、トリメトレキサート、フルダラビン、カペシタビン、ガロシタビン、シタラビンオクホスフェート、フォステアビン（ｆｏｓｔｅａｂｉｎｅ）ナトリウム水和物、ラルチトレキセド、パルチトレキシド（ｐａｌｔｉｔｒｅｘｉｄ）、エミテフール、チアゾフリン、デシタビン、ノラトレキセド、ペメトレキセド、ネルザラビン、２’−デオキシ−２’−メチリデンシチジン、２’−フルオロメチレン−２’−デオキシシチジン、Ｎ−［５−（２，３−ジヒドロベンゾフリル）スルホニル］−Ｎ’−（３，４−ジクロロフェニル）尿素、Ｎ６−［４−デオキシ−４−［Ｎ２−［２（Ｅ），４（Ｅ）−テトラデカジエノイル］グリシルアミノ］−Ｌ−グリセロ−Ｂ−Ｌ−マンノヘプトピラノシル］アデニン、アプリジン、エクテイナシディン、トロキサシタビン（ｔｒｏｘａｃｉｔａｂｉｎｅ）、４−［２−アミノ−４−オキソ−４，６，７，８−テトラヒドロ−３Ｈ−ピリミジノ［５，４−ｂ］−１，４−チアジン−６−イル−（Ｓ）−エチル］−２，５−チエノイル−Ｌ−グルタミン酸、アミノプテリン、５−フルオロウラシル、アラノシン、１１−アセチル−８−（カルバモイルオキシメチル）−４−ホルミル−６−メトキシ−１４−オキサ−１、１１−ジアザテトラシクロ（７．４．１．０．０）テトラデカ−２，４，６−トリエン−９−イル酢酸エステル、スワインソニン、ロメトレキソール、デクスラゾキサン、メチオニナーゼ、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−Ｂ−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン、および３−アミノピリジン−２−カルボキシアルデヒドチオセミカルバゾンなどが含まれる。「抗増殖剤」にはさらに、トラスツズマブなど「血管新生阻害剤」の項に挙げたもの以外の増殖因子に対するモノクローナル抗体、および組換えウイルス媒介遺伝子転移を介して送達され得るｐ５３などの腫瘍抑制遺伝子が含まれる（たとえば、米国特許第６，０６９，１３４号を参照のこと）。
【０１７０】
上記および下記において、すべての温度は℃で示される。以下の実施例において、「通常の後処理」は、必要であれば水を添加し、最終生成物の構成に応じて、必要であればｐＨを２から１０に調整し、混合物を酢酸エチルまたはジクロロメタンで抽出、相を分離し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させ、生成物をシリカゲルのクロマトグラフィおよび／または結晶化によって精製することを意味する。シリカゲル上のＲｆ値；溶離液：酢酸エチル／メタノール９：１。
質量分析（ＭＳ）：ＥＩ（電子衝撃イオン化）Ｍ+
ＦＡＢ（高速原子衝撃）（Ｍ＋Ｈ）+
ＥＳＩ（エレクトロスプレーイオン化）（Ｍ＋Ｈ）+（他に指定のない限り）
実施例１
実施例に記載の本発明による化合物を、以下に記載のアッセイによって試験し、キナーゼ阻害活性を有することを見出した。他のアッセイは文献から知られており、当分野の技術者は容易に実施することができる（たとえば、Ｄｈａｎａｂａｌ等、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５９：１８９〜１９７；Ｘｉｎ等、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：９１１６〜９１２１；Ｓｈｅｕ等、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１８：４４３５〜４４４１；Ａｕｓｐｒｕｎｋ等、Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．３８：２３７〜２４８；Ｇｉｍｂｒｏｎｅ等、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．５２：４１３〜４２７；Ｎｉｃｏｓｉａ等、Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  １８：５３８〜５４９を参照のこと）。
ＶＥＧＦ受容体キナーゼアッセイ
４：１のポリグルタミン酸／チロシン基質（ｐＥＹ）に、放射性標識リン酸を組み込むことによって、ＶＥＧＦ受容体キナーゼ活性を測定する。そのリン酸化ｐＥＹ生成物を濾過膜にトラップし、放射性標識リン酸の組み込みを、シンチレーションカウントによって定量する。
ＶＥＧＦ受容体キナーゼ
ヒトＫＤＲ（Ｔｅｒｍａｎ、Ｂ．Ｉ．等、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（１９９１）Ｖｏｌ．６、１６７７〜１６８３頁）、およびＦｌｔ−１（Ｓｈｉｂｕｙａ、Ｍ．等、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（１９９０）Ｖｏｌ．５、５１９〜５２４頁）の細胞内チロシンキナーゼドメインを、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）遺伝子融合タンパク質としてクローン化した。これは、ＫＤＲキナーゼの細胞質ドメインを、ＧＳＴ遺伝子のカルボキシ末端においてインフレーム融合としてクローニングすることによって行った。可溶性組換えＧＳＴ−キナーゼドメイン融合タンパク質を、バキュロウイルス発現ベクター（ｐＡｃＧ２Ｔ、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を用いて、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ（Ｓｆ２１）昆虫細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に発現させた。
溶解緩衝液：５０ｍＭのトリスｐＨ７．４、０．５ＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＤＴＴ、１ｍＭのＥＤＴＡ、０．５％のトリトンＸ−１００、１０％のグリセロール、それぞれ１０ｍｇ／ｍｌのロイペプチン、ペプスタチン、およびアプロチニン、ならびに１ｍＭのフェニルメチルスルホニルフルオリド（いずれもＳｉｇｍａ）。
洗浄緩衝液：５０ｍＭのトリスｐＨ７．４、０．５ＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＤＴＴ、１ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％のトリトンＸ−１００、１０％のグリセロール、それぞれ１０ｍｇ／ｍｌのロイペプチン、ペプスタチン、およびアプロチニン、ならびに１ｍＭのフェニルメチルスルホニルフルオリド。
透析緩衝液：５０ｍＭのトリスｐＨ７．４、０．５ＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＤＴＴ、１ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％のトリトンＸ−１００、５０％のグリセロール、それぞれ１０ｍｇ／ｍｌのロイペプチン、ペプスタチン、およびアプロチニン、ならびに１ｍＭのフェニルメチルスルホニルフルオリド。
１０×反応緩衝液：２００ｍＭのトリス、ｐＨ７．４、１．０ＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのＭｎＣｌ2、１０ｍＭのＤＴＴ、および５ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン［ＢＳＡ］（Ｓｉｇｍａ）。
酵素希釈緩衝液：５０ｍＭのトリス、ｐＨ７．４、０．１ＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＤＴＴ、１０％のグリセロール、１００ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ。
１０×基質：７５０μｇ／ｍｌのポリ（グルタミン酸／チロシン４：１）（Ｓｉｇｍａ）。
停止溶液：３０％のトリクロロ酢酸、０．２Ｍのピロリン酸ナトリウム（共にＦｉｓｈｅｒ）。
洗浄溶液：１５％のトリクロロ酢酸、０．２Ｍのピロリン酸ナトリウム。
フィルタプレート：Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ＃ＭＡＦＣ  ＮＯＢ、ＧＦ／Ｃガラスファイバ９６ウェルプレート。
方法Ａ−タンパク質精製
１．Ｓｆ２１細胞を、５ウイルス粒子／細胞の感染多重度で組換えウイルスによって感染させ、２７℃で４８時間増殖させる。
２．すべてのステップを４℃で行う。感染細胞を１０００×ｇの遠心分離によって収穫し、１／１０容量の溶解緩衝液を用いて４℃で３０分間溶解し、その後１００．０００×ｇで１時間遠心分離する。次いで、上澄みを、溶解緩衝液で平衡させたグルタチオンＳｅｐｈａｒｏｓｅカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）に通し、５容量の同じ緩衝液で洗浄、続いて５容量の洗浄緩衝液で洗浄する。組換えＧＳＴ−ＫＤＲタンパク質を、洗浄緩衝液／１０ｍＭ還元グルタチオン（Ｓｉｇｍａ）で溶出し、透析緩衝液で透析する。
方法Ｂ−ＶＥＧＦ受容体キナーゼアッセイ
１．５０％ＤＭＳＯ中のアッセイに阻害剤またはコントロール５μｌを添加する。
２．１０×反応緩衝液５μｌ、２５ｍＭのＡＴＰ／１０μＣｉ［33Ｐ］ＡＴＰ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）５μｌ、および１０×基質５μｌを含有する反応混合物３５μｌを添加する。
３．酵素希釈緩衝液中のＫＤＲ（２５ｎＭ）１０μｌを添加して、反応を開始する。
４．混合し、室温で１５分間インキュベートする。
５．停止溶液５０μｌを添加して、反応を停止する。
６．４℃で１５分間インキュベートする。
７．アリコート９０μｌをフィルタプレートに移す。
８．吸引し、洗浄溶液で３回洗浄する。
９．シンチレーションカクテル３０μｌを添加し、プレートを密封して、Ｗａｌｌａｃ  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａシンチレーションカウンタでカウントする。
ヒト臍静脈内皮細胞有糸分裂誘発アッセイ
増殖因子に対するマイトジェン応答を媒介するＶＥＧＦ受容体の発現は、血管内皮細胞に主として限定される。培養中のヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）は、ＶＥＧＦ処理に応答して増殖し、ＶＥＧＦ刺激に対するＫＤＲキナーゼ阻害剤の効果を定量するためのアッセイ系として用いることができる。記載のアッセイでは、静止状態のＨＵＶＥＣ単層を、ビヒクルまたは試験化合物で処理し、２時間後にＶＥＧＦまたは塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）を添加する。ＶＥＧＦまたはｂＦＧＦに対するマイトジェン応答を、細胞ＤＮＡへの［3Ｈ］チミジンの取り込みを測定することによって求める。
ＨＵＶＥＣ
初代培養単離物として凍結したＨＵＶＥＣを、Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｒｐ．から入手する。細胞を内皮増殖培地（ＥＧＭ、Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ）に維持し、継代３〜７でマイトジェンアッセイに用いる。
培養プレート：ＮＵＮＣＬＯＮ９６ウェルポリスチレン組織培養プレート（ＮＵＮＣ＃１６７００８）
アッセイ培地：１ｇ／ｍｌグルコース（低グルコースＤＭＥＭ、Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ）および１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ）を含有するダルベッコ改変イーグル培地
試験化合物：試験化合物の作業ストック溶液を、１００％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で連続希釈して、所望の最終濃度の４００倍濃度とする。１倍濃度の最終希釈液は、細胞への添加の直前にアッセイ培地で作製する。
１０×増殖因子：ヒトＶＥＧＦ１６５（５００ｎｇ／ｍｌ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）およびｂＦＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）をアッセイ培地溶液で調製する。
１０×［3Ｈ］チミジン：［メチル−3Ｈ］チミジン（２０Ｃｉ／ｍｍｏｌ、Ｄｕｐｏｎｔ−ＮＥＮ）を希釈して、低グルコースＤＭＥＭ倍地中８０μＣｉ／ｍｌとする。
細胞洗浄培地：１ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミン（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍ）を含有するハンクス平衡塩溶液（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ）
細胞溶解溶液：１ＮのＮａＯＨ、２％（ｗ／ｖ）Ｎａ2ＣＯ3
方法１
ＥＧＭに維持したＨＵＶＥＣ単層をトリプシン処理によって収穫し、９６ウェルプレートで、ウェル当たり、アッセイ培地１００μｌ当たり細胞４０００個の密度で平板培養する。５％ＣＯ2を含有する加湿雰囲気中３７℃で２４時間、細胞増殖を停止する。
方法２
増殖停止培地を、ビヒクル（０．２５％［ｖ／ｖ］ＤＭＳＯ］または所望の最終濃度の試験化合物を含有するアッセイ培地１００μｌと交換する。判定はすべて３重で行う。次いで、３７℃／５％ＣＯ2で２時間インキュベートして、試験化合物を細胞に取り込ませる。
方法３
２時間の前処理後、アッセイ培地、１０×ＶＥＧＦ溶液、または１０×ｂＦＧＦ溶液のいずれかをウェル当たり１０μｌ添加することによって、細胞を刺激する。次いで、細胞を３７℃／５％ＣＯ2でインキュベートする。
方法４
増殖因子の存在下、２４時間後に、１０×［3Ｈ］チミジン（１０μｌ／ウェル）を添加する。
方法５
［3Ｈ］チミジンを添加して３日後、培地を吸引によって除去し、細胞を細胞洗浄培地で２回洗浄する（４００μｌ／ウェル、次いで２００μｌ／ウェル）。細胞溶解溶液（１００μｌ／ウェル）を添加し、３０分間３７℃に加温することによって、洗浄した接着細胞を溶解する。細胞溶解産物を、水１５０μｌを含有する７ｍｌガラスシンチレーションバイアルに移す。シンチレーションカクテル（５ｍｌ／バイアル）を添加し、細胞関連放射能を液体シンチレーション分光分析法によって求める。
【０１７１】
これらのアッセイによれば、式Ｉの化合物はＶＥＧＦの阻害剤であり、したがって、たとえば糖尿病性網膜症のような眼疾患の治療、およびたとえば固形腫瘍のような癌の治療などにおいて、血管新生の阻害に適している。本発明の化合物は、培養中のヒト血管内皮細胞のＶＥＧＦ刺激有糸分裂誘発を阻害し、ＩＣ５０値は０．０１〜５．０μＭの間である。これらの化合物はさらに、関連するチロシンキナーゼに対して選択性を示す（たとえば、ＦＧＦＲ１、およびＳｒｃファミリー。ＳｒｃキナーゼおよびＶＥＧＦＲキナーゼの関係に関しては、Ｅｌｉｃｅｉｒｉ等、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ、Ｖｏｌ．４、９１５〜９２４頁、１９９９年１２月を参照のこと）。
【０１７２】
ＴＩＥ−２試験は、たとえばＷＯ０２／４４１５６に記載の方法と同様に行うことができる。
【０１７３】
このアッセイは、放射性33Ｐ−ＡＴＰの存在下、ＴＩＥ−２キナーゼによる基質ポリ（Ｇｌｕ、Ｔｙｒ）のリン酸化における試験物質の阻害活性を求めるものである。リン酸化された基質は、インキュベーション時に「フラッシュプレート」マイクロタイタープレートの表面に結合する。反応混合物を除去した後、マイクロタイタープレートを数回洗浄し、続いて表面上の放射性を測定する。測定される物質の阻害効果は、阻害を受けていない酵素反応と比べて低い放射性をもたらす。
実施例２
（５−クロロ−７−ニトロベンゾオキサゾール−２−イル）−［４−（ピリジン−４−イルスルファニル）フェニル］アミンの調製
この調製は、以下のスキームと同様に行う。
【０１７４】
【化９】
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【０１７５】
２−アミノ−４−クロロ−６−ニトロフェノール２ｇおよびジイミダゾール−１−イル−メタンチオン０．９２ｇを、ジクロロメタン３５ｍｌおよびジメチルホルムアミド１５ｍｌに溶解し、室温で一晩攪拌する。この溶液を１ＮのＨＣｌで抽出する。ＭｇＳＯ4を用いて有機相を乾燥し、濾過し、減圧下で蒸発乾固して、１．５６ｇの５−クロロ−７−ニトロ−３Ｈ−ベンゾオキサゾール−２−チオンを得る。
【０１７６】
５−クロロ−７−ニトロ−３Ｈ−ベンゾオキサゾール−２−チオン１００ｍｇおよび４−（ピリジン−４−イルスルファニル）フェニルアミン８８ｍｇを、ジメチルホルムアミド３ｍｌに溶解し、１１０℃で一晩攪拌する。混合物を減圧下で蒸発乾固し、分取ＨＰＬＣを用いて残渣を精製して、無定形固体物質である４０ｍｇの（５−クロロ−７−ニトロベンゾオキサゾール−２−イル）−［４−（ピリジン−４−イルスルファニル）フェニル］アミンを得る。保持時間：３．６８分、ＥＩ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）+３９９。
【０１７７】
保持時間の決定方法
カラム：ＭｅｒｃｋのＣｈｒｏｍｏｌｉｔｈ  ＳｐｅｅｄＲＯＤ、５０×４．６ｍｍ2
溶離液：Ａ：Ｈ2Ｏ、０．１％ＴＦＡ
Ｂ：アセトニトリル、０．０８％ＴＦＡ
波長：２２０ｎｍ
勾配：５分、ｔ＝０分、Ａ：Ｂ＝９５：５、ｔ＝４．４分：Ａ：Ｂ＝２５：７５、ｔ＝４．５分からｔ＝５．０分：Ａ：Ｂ＝０：１００
流速：３．００ｍｌ／分
以下の化合物を同様に得る。
【０１７８】
【表１】
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【０１７９】
【表２】
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【０１８０】
【表３】
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【０１８１】
【表４】
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【０１８２】
【表５】
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【０１８３】
【表６】
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【０１８４】
【表７】
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【０１８５】
実施例３
薬理試験結果
【０１８６】
【表８】
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【０１８７】
以下の実施例は薬剤組成物に関する。
実施例４
注射バイアル
本発明による活性成分１００ｇおよびリン酸水素二ナトリウム５ｇの再蒸留水３ｌ溶液を、２Ｎの塩酸を用いてｐＨ６．５に調整し、無菌濾過し、注射バイアルに移し、無菌条件下で凍結乾燥し、無菌条件下で密封する。各注射バイアルは、５ｍｇの活性成分を含有する。
実施例５
坐剤
本発明による活性剤２０ｇと大豆レシチン１００ｇ、カカオ脂１４００ｇとの混合物を溶解し、鋳型に注入し、冷ます。各坐剤は、２０ｍｇの活性成分を含有する。
実施例６
液剤
本発明による活性成分１ｇ、ＮａＨ2ＰＯ4・２Ｈ2Ｏ９．３８ｇ、Ｎａ2ＨＰＯ4・１２Ｈ2Ｏ２８．４８ｇ、および塩化ベンザルコニウム０．１ｇから再蒸留水９４０ｍｌ中の溶液を調製する。ｐＨを６．８に調整し、溶液を１ｌとし、照射により滅菌する。この液剤は、点眼液の形態で用いることができる。
実施例７
軟膏剤
本発明による活性成分５００ｍｇを、無菌条件下、ワセリン（Ｖａｓｅｌｉｎｅ）９９．５ｇと混合する。
実施例８
錠剤
活性成分１ｋｇ、ラクトース４ｋｇ、ジャガイモデンプン１．２ｋｇ、タルク０．２ｋｇ、およびステアリン酸マグネシウム０．１ｋｇの混合物を圧縮し、各錠剤が１０ｍｇの活性成分を含むように、通常の方法で錠剤を得る。
実施例９
被覆錠剤
錠剤を実施例Ｅと同様に圧縮し、続いて、スクロース、ジャガイモデンプン、タルク、トラガカント、および染料の被覆物を用いて通常の方法で被覆する。
実施例１０
カプセル剤
活性成分２ｋｇを、各カプセル剤が２０ｍｇの活性成分を含有するように、通常の方法で硬質ゼラチンカプセルに導入する。
実施例１１
アンプル
本発明による活性成分１ｋｇの再蒸留水６０ｌ溶液を、無菌濾過し、アンプルに移し、無菌条件下で凍結乾燥し、無菌条件下で密封する。各アンプルは、１０ｍｇの活性成分を含有する。
【国際調査報告】
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