(57)【要約】      （修正有）【課題】体内のナトリウム排泄を促進及び／又はナトリウム吸収を抑制する組成物の提供。【解決手段】アンペロプシンを有効成分として含有するナトリウム排泄促進用組成物及び／又はナトリウム吸収抑制用組成物。藤茶抽出物を含むナトリウム排泄促進用組成物及び／又はナトリウム吸収抑制用組成物。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
アンペロプシンを有効成分として含有するナトリウム排泄促進用組成物及び／又はナトリウム吸収抑制用組成物。
【請求項２】
アンペロプシンを１０質量％以上含有するナトリウム排泄促進用組成物及び／又はナトリウム吸収抑制用組成物。
【請求項３】
藤茶抽出物を含むナトリウム排泄促進用組成物及び／又はナトリウム吸収抑制用組成物。
【請求項４】
アンペロプシンを１０質量％以上含有する請求項３記載のナトリウム排泄促進用組成物及び／又はナトリウム吸収抑制用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アンペロプシンを有効成分として含有する体内ナトリウム排泄促進用及び／又はナトリウム吸収抑制用組成物、それを含有する飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
食事中の食塩含有量を減らすことが健康維持の上で重要であると久しくいわれている。厚生労働省が２０１４年３月に発表した「日本人の食事摂取基準（２０１５年版）策定検討会」の報告書によれば、１８歳以上の男性は１日当たり８．０グラム未満、１８歳以上の女性は１日当たり７．０グラム未満という目標量が定められている。さらに、日本高血圧学会減塩委員会は、高血圧予防のために、１日６グラム未満という制限を勧めている。また、世界保健機関（ＷＨＯ）は、世界中の人の食塩摂取目標を１日５グラムとしているが、米国では心血管疾患の予防のためのガイドラインは、塩分の最大摂取量が１日３．８〜６．０グラムとなっている。食塩の過剰摂取は、腎臓の負担を高め、高血圧の原因となることが広く知られている。
【０００３】
高血圧の要因とされる食塩は、塩化ナトリウムであり、これはナトリウムイオンと塩素イオンが結合した無機塩であるが、特に高血圧の要因とされるものはナトリウムイオンである。ナトリウムは生体のホメオスタシスを維持する上で必須の成分であるが、過剰に存在すると、心拍出量の増加や末梢血管抵抗の増加を引き起こし、血圧を上昇させる要因となる。また細胞外液中でナトリウムをはじめとする電解質の濃度は厳密に保たれているが、この調節には腎臓が大きな役割を果たしている。すなわち、ナトリウム濃度が正常より高いと飲水行動が促され、腎臓では水分の再吸収が促進される。反対にナトリウム濃度が低い場合は腎臓での水分の排泄が促進される。血中ナトリウムが過剰の状態では、ナトリウム濃度を一定に保つため体内での水分量が増加し細胞外液量が過剰な状態となる。腎臓のナトリウム排泄能を超えて塩分を摂取している場合、上記のメカニズムで体液量が増加して高血圧をきたす。また塩分過剰摂取によりナトリウム排泄に関する遺伝子が不活性化されることも報告されている。
【０００４】
したがって、ナトリウムの摂取量を減らすか、あるいは吸収を抑制するか、またはナトリウム排泄量を増加させることにより高血圧、腎機能低下、動脈硬化などのナトリウム過剰摂取に伴うリスクを低下させることができる。ナトリウム摂取量の抑制の場合は、ナトリウムイオンに代えて一部をカリウム塩とした減塩や、食塩の配合量を減らした減塩食などがすでに普及している。ナトリウム吸収抑制の場合については、いくつかの発明が提案されている。特許文献１には、牛乳由来の蛋白質を蛋白質分解酵素により分解して得られるペプチドまたはペプチド混合物にナトリウム排泄促進作用を有することから、これを電解質排泄促進剤として利用することが記載されている。特許文献２には、褐藻類（コンブ、トロロコンブ及びモズクを除く）の水抽出物及び熱水抽出物並びにそれらの金属塩（ナトリウム塩は除く）のうちの少なくとも一種を有効成分とするナトリウムイオン排泄促進剤が記載されている。特許文献３には、酵母細胞壁または酵母細胞壁多糖類を有効成分とするナトリウムイオン排泄促進剤が記載されている。
本出願人も、オリゴ糖の一種であるダイフラクトースアンハイドライドにナトリウム及びカリウムの排泄促進作用を見いだし、これをナトリウム及び／又はカリウムの排泄促進剤とする特許を取得している（特許文献４）。
しかし、生体内のナトリウム排泄促進や摂取したナトリウムの吸収抑制の目的に適したものは少なく、探索が続けられている。
【０００５】
このような背景にあって、本発明者らは、天然物や天然抽出物について、体内のナトリウム排泄の促進や、摂取ナトリウムの吸収を抑制する物質や、摂取したナトリウムの吸収抑制の探索を行っている。そして、中国や東南アジア地域の伝統的な食品である藤茶に体内のナトリウム排泄を促進する作用が存在することを発見した。藤茶には様々な薬効が存在することが知られている。その作用は、急性肝炎などの肝臓疾患治療効果（特許文献５）、抗菌効果（特許文献６）、色素退色防止作用（特許文献７）など多岐に渡っている。しかし藤茶に体内のナトリウム排泄を促進する作用や吸収を抑制する作用が存在することは、食経験の長い食品でありながらこれまでまったく知られていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第２００１／０８４９４８号
【特許文献２】特開２００２−０８７９８０号公報
【特許文献３】特開２００５−１７９３０６号公報
【特許文献４】特許第４７２１６８４号公報
【特許文献５】特開２００３−０２６５８４号公報
【特許文献６】特開２００２−１５９５６６号公報
【特許文献７】特開２００２−０６５２０１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明者らは、上記のような背景技術をもとに研究を行い、藤茶抽出物が強い体内のナトリウム排泄を促進する作用やナトリウム吸収抑制作用を有していることを発見した。そして、さらに研究を進めたところ、この作用の本質が藤茶中に含まれるフラボノイドの一種であるアンペロプシンであることを発見し、本発明をなした。
すなわち、本発明の課題はアンペロプシンを有効成分とする体内のナトリウム排泄促進及び／又はナトリウム吸収抑制する組成物を提供することにある。さらには、本発明は、体内のナトリウム排泄促進及び／又は体内へのナトリウム吸収を抑制するための飲食品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の主な構成は以下の通りである。
（１）アンペロプシンを有効成分として含有するナトリウム排泄促進用組成物及び／又はナトリウム吸収抑制用組成物。
（２）アンペロプシンを１０質量％以上含有するナトリウム排泄促進用組成物及び／又はナトリウム吸収抑制用組成物。
（３）藤茶抽出物を含むナトリウム排泄促進用組成物及び／又はナトリウム吸収抑制用組成物。
（４）アンペロプシンを１０質量％以上含有する（３）記載のナトリウム排泄促進用組成物及び／又はナトリウム吸収抑制用組成物。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によりあらたなナトリウム排泄促進用組成物及び／又はナトリウム吸収抑制用組成物が提供される。 
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ヒトに対するアンペロプシン投与の影響を評価するプラセボ対照並行群間二重盲検比較試験によるナトリウム排泄促進効果を示すグラフである。
【図２】マウスを用いた動物試験において、藤茶抽出物に含まれるアンペロプシンがナトリウム吸収を抑制し、糞中のナトリウム量が増加することを示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明は、アンペロプシンを有効成分として含有するナトリウム排泄促進用組成物及び／又はナトリウム吸収抑制用組成物に係る発明である。
藤茶は、ブドウ科蛇葡萄属の植物であり、中国名を顕歯蛇葡萄という。学名は、Ampelopsis grossedentataである。主には中国の広西、広東、雲南、貴州、湖南、湖北、江西、福建などの省並びに自治区に分布している。中国の広西、湖南などの省や自治区の壮族や瑶族の人々がこの茎および葉から作った飲料を常用しており、風邪、のどの痛みなどにも利用されている。アンペロプシンは、藤茶の示す肝臓疾患の治療作用や抗菌作用の活性本体として特定されている。
【００１２】
アンペロプシンは、下記の式で表される。
【００１３】
【化１】
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【００１４】
アンペロプシンは、例えば、藤茶（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ）、大叶蛇葡萄（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｍｅｇａｌｏｐｈｙｌｌａ）、広東蛇葡萄（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｃａｎｔｏｎｉｅｎｓｉｓ）、ケンポナシ（Ｈｏｖｅｎｉａ  ｄｕｌｃｉｓ）、オノエヤナギ（Ｓａｌｉｘ  ｓａｃｈａｌｉｎｅｎｓｉｓ）、ヨレハマツ（Ｐｉｎｕｓ  ｃｏｎｔｏｒｔａ）、アフリカブラックウッド（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｈｌｅｕｍ  ａｆｒｉｃａｎｕｍ）及びカツラ（Ｃｅｒｃｉｄｉｐｈｙｌｌｕｍ  ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）から選ばれる植物の抽出物より単離精製することができる。これらの中でも、藤茶が好ましい。
【００１５】
具体的には、Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ属植物である藤茶（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ）から、下記のようにしてアンペロプシンを得ることができる。
すなわち、乾燥させた藤茶の枝葉部を含水エタノールで抽出した抽出物を濃縮し、例えば多孔性樹脂（ＤＩＡＩＯＮ（登録商標）ＨＰ−２０）を用いたカラムクロマトグラフィーにかけ、８０容量％含水メタノールで溶出される分画にアンペロプシンが得られる。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィーや再結晶により、更に精製することができる。精製されたアンペロプシンは、試薬としても販売されており、これを用いることもできる。
【００１６】
本発明のナトリウム排泄促進用組成物及び／又はナトリウム吸収抑制用組成物としては、上記のアンペロプシンを１０質量％以上含有するものであれば使用可能である。このような組成物を藤茶から得るためには以下のような操作を行う。
乾燥した藤茶の葉又は茎の粉砕物又は粉末を抽出原料とし、水又は親水性有機溶媒若しくはこれらの混合溶媒に投入し、室温乃至溶媒の沸点以下の温度で任意の装置を用いて抽出することにより得ることができる。
【００１７】
抽出に用いる有機溶媒としては、例えばメタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、イソプロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられる。
また、これら親水性有機溶媒と水との混合溶媒などを用いることができる。なお、水と親水性有機溶媒との混合系溶媒を使用する場合には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して３０〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１０〜４０質量部、多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１０〜９０質量部添加することが好ましい。
【００１８】
抽出溶媒を満たした処理槽に、藤茶の乾燥・粉砕物を投入し、必要に応じて時々撹拌しながら、３０分〜２時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、この抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物が得られる。抽出溶媒量は、抽出原料の通常５〜１５倍量（質量比）であることが好ましく、抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０〜９５℃で１〜４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いる場合には、通常４０〜８０℃で３０分〜４時間程度である。
【００１９】
得られた抽出液から抽出溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られる。更に乾燥すれば、固形の抽出物が得られる。本発明においては、アンペロプシンの含有量が１０質量％以上、好ましくは２０質量％以上であれば、上記抽出液又はその濃縮液の状態であっても良い。これらは、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂、液―液向流分配などの方法により精製してから用いても構わない。
したがって、上記の藤茶から抽出しアンペロプシンの濃度を高めた抽出物も本発明の組成物として使用可能である。
【００２０】
組成物中のアンペロプシンの含有量は、ＨＰＬＣなど公知の分析方法で分析することができる。定量方法の概略は次のとおりである。
・試料溶液の調製
試料（抽出物）約２０ｍｇを精秤し、蒸留水を加えて超音波処理して溶解し、正確に５０ｍＬとする。この溶液２ｍＬを５０ｍＬに正確に希釈し、試料溶液とする。
・標準溶液の調製と検量線作成  
標準品（Ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ  ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ社製）２．００ｍｇを精秤し、１００％アセトニトリルを適量加えて超音波処理して溶解し、さらにアセトニトリルを加えて正確に２５ｍＬとし、アンペロプシン標準原液８０μｇ／ｍＬを調製する。この標準原液を蒸留水にて正確に５倍希釈して、１６μｇ／ｍＬアンペロプシン標準溶液を調製する。ＨＰＬＣへの注入量を１０、２０、４０μＬとし、アンペロプシンのピークに基づいて検量線を作成する。
・ＨＰＬＣ測定条件
下記表１の条件に設定する。
【００２１】
【表１】
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【００２２】
本発明のナトリウム排泄促進用組成物及び／又はナトリウム吸収抑制用組成物は、そのまま、あるいは各種賦形剤を添加して製剤化する。製剤としては顆粒剤、錠剤、カプセル剤を例示することができる。
また組成物をそのまま飲食品として用いること、あるいは製剤化したものを医薬又は飲食品として用いることもできる。
なお製剤化に当たっては、賦形剤やその他の有効成分を本発明の組成物の目的を阻害しない範囲で使用することができる。具体的には、シクロデキストリン、へミセルロース、リグニン、グアーガム、コンニャクマンナン、イサゴール、アルギン酸、寒天、カラギーナン、キチン、カルボキシルメチルセルロース、ポリデキストロースなどの食物繊維や増粘剤、食用油、カルシウム、鉄、ナトリウム、亜鉛、銅、カリウム、リン、マグネシウム、ヨウ素、マンガン、セレンなどのミネラル；ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、ナイアシン、葉酸、パントテン酸などの脂溶性又は水溶性のビタミン群、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、リン脂質、アラビアガム、キサンタンガム、トラガカントガム、ローカストビーンガムなどの乳化剤や分散剤、増量剤、保存料・酸化防止剤、風味調整剤や香料、塩化ナトリウム、グルタミン酸ナトリウム、グリシン、コハク酸、乳酸ナトリウムなどの呈味料、クエン酸、クエン酸ナトリウム、酢酸、アジピン酸、フマル酸、リンゴ酸などの酸味料、マルチトール、アスパルテームなどの低カロリー甘味料、着色剤などである。
なお本発明の組成物には、アンペロプシンを１０〜２５００ｍｇ、好ましくは５０〜３００ｍｇ、特に好ましくは１００〜２００ｍｇを含有するように調製する。
【実施例】
【００２３】
以下に本発明の組成物の製造例及びこの組成物を用いた試験例を示し、本発明をさらに説明する。
＜藤茶抽出物の製造例＞
乾燥藤茶の重量に対して１０倍量の７０％エタノールで抽出物を得た。その後、抽出物を濃縮させ活性炭を用いて不純物を取り除きながら濾過をした。濃縮物にγシクロデキストリンを適当量配合し、噴霧乾燥で本発明の組成物を製造した。
【００２４】
＜ヒト試験＞
ヒトにおけるナトリウム排泄量促進効果をプラセボ対照並行群間二重盲検比較試験により検討した。
１．試験方法
（１）試験品（以下「被験食品」）
被験食品はアンペロプシン１５０ｍｇ含有カプセル剤（藤茶エキス末５００ｍｇ）、プラセボとしてデンプン５００ｍｇ含有カプセル剤を用いた。
【００２５】
（２）試験対象者
１）選択基準
（１）スクリーニング検査での血圧（収縮期）が１３０ｍｍＨｇ以上１６０ｍｍＨｇ
未満である者
（２）同意取得時の年齢が２０歳以上８０歳未満の検査施設への通所が可能な者
（３）ＢＭＩが１８．５ｋｇ／ｍ２以上３０．０ｋｇ／ｍ２未満の者
（４）文書同意を取得した者
【００２６】
２）除外基準
（１）重度な消化器疾患、肝疾患、腎疾患、循環器疾患、血液疾患、内分泌系疾患、
または悪性新生物が疑われる者、またはその既往がある者
（２）腎障害、左室肥大と診断された者
（３）二次性高血圧症の者
（４）ブドウ科の植物にアレルギーを引き起こす恐れのある者
（５）現在降圧薬服薬中、もしくは医師による降圧治療を受けている者
（６）試験期間中、医師による治療または投薬を受ける予定のある者
（７）試験期間中、特定保健用食品、機能性表示食品及びその他のサプリメントを摂
取する予定のある者
（８）試験期間中、食生活（食事回数、食事内容、アルコール摂取量）が変化する可
能性のある者
（９）試験期間中、生活習慣を変更する可能性のある者（夜間勤務、長期の旅行、転
勤など）
（１０）現在喫煙中、もしくは過去１年以内に喫煙歴のある者
（１１）スクリーニング検査における随時尿検査で推定１日塩分摂取量が男性で８．０
ｇ未満、女性で７．０ｇ未満の者
（１２）妊娠中あるいは妊娠の可能性のある女性または授乳中の女性
（１３）試験期間中に他の臨床試験に参加する予定のある者
（１４）その他、担当医師が不適当と判断した者
【００２７】
（３）評価項目
１）主要評価項目
尿中Ｎａ量    測定は電極法による。
【００２８】
２）安全性評価項目
有害事象、臨床検査値
【００２９】
（４）投与試験
１）試験デザイン
プラセボ対照並行群間二重盲検比較試験
【００３０】
２）試験期間（１４週間）
藤茶エキス末摂取前を初期観察期とする。その後、被験者を無作為に２群に振り分け、藤茶エキス末５００ｍｇもしくはプラセボを１２週間摂取させる。
来院はスクリーニング検査、摂取開始日、摂取４週後、摂取８週後、摂取１２週後の５回とする。
試験   初期観察期・摂取期（全１４週間）
【００３１】
３）摂取方法
選択、除外基準に抵触しないことを確認した上で、１日１回朝食後に前記の被験食品（藤茶エキス末）摂取を開始する。
摂取期間    １２週間
摂取方法    １日１回３粒を朝食後に経口摂取
【００３２】
４）併用薬剤・併用療法
併用薬剤の使用及び併用療法は原則禁止とする。但し、医師の判断により必要に応じて治療を開始することができる。薬剤などの使用状況について使用薬物・用量・期間等について調査する。
【００３３】
５）調査項目
（１）背景調査
スクリーニング検査で年齢、性別、現病歴、既往歴、生活歴（喫煙、飲酒、服薬状況、健康食品の使用の使用状況）を調査する。
（２）血液検査
一般血液検査（白血球、赤血球数、ヘモグロビン、ヘマトクリット、ＭＣＶ、ＭＣＨ、ＭＣＨＣ、血小板数）、一般生化学検査（ＴＧ、ＴＣ、ＨＤＬ−Ｃ、ＬＤＬ−Ｃ、血糖、ＨｂＡ１ｃ（ＮＧＳＰ）、γ−ＧＴＰ、ＡＳＴ、ＡＬＴ、総ビリルビン、総蛋白、アルブミン、Ａ／Ｇ比、ＡＬＰ、ＬＤＨ、ＣＰＫ、クレアチニン、尿酸、尿素窒素、Ｎａ、Ｋ、Ｃｌ、ＬＡＰ）、キマーゼ、レニン、アルドステロンを測定する。
血液検査については、空腹時採血とし、スクリーニング検査と摂取１２週後検査の計２回行う。
尿検査についてはスポット尿を用い、尿中Ｎａ及び尿中Ｃｒを測定する。また、スクリーニング検査のみ安全性確認のため尿中アルブミンを測定する。
（３）胸写・負荷心電図、ＡＢＩ、ＰＷＶ
スクリーニング検査で安全性確認のため実施する。心電図測定における負荷方法は階段の昇降とする。
（４）食事調査
来院日に検査前日の食事内容を調査する。
（５）日誌
飲酒内容、食生活の変化、体調の変化、試験食品の摂取状況を調査する。
【００３４】
６）中止基準
・被験者より中止の申し出があった場合
・有害事象で担当医師が試験を継続することが好ましくないと判断した場合
・その他、試験責任医師が中止を必要と判断した場合
【００３５】
７）有害事象
（１）有害事象の重症度
・軽度  ：日常的活動が妨げられない程度の有害事象
・中等度：日常的活動が妨げられる程度の有害事象
・重度  ：日常的活動が不能となる有害事象
（２）重篤な有害事象
・死亡に至るもの
・生命を脅かすもの
注：その事象の発現時点において患者が死の危険にさらされている場合をいい、仮にもっと重度であれば死を招いたかもしれないという意味ではない。
・治療のため入院または入院期間の延長が必要となるもの
・永続的または顕著な障害・機能不全に陥るもの
・先天異常を来すもの
・その他の医学的に重要な状態と判断される事象又は反応
（３）試験食品との関連性
・なし：試験食品との間に合理的な可能性がない場合
・あり：試験食品との間に少なくとも合理的な可能性があり、因果関係が否定できない場合
・不明：試験食品との因果関係が情報不足のため判定できない場合
（４）転帰
有害事象の転帰を以下の６段階で判定する。
・回復
・軽快
・未回復
・回復したが後遺症あり
・死亡
・不明
（５）重篤な有害事象が発生した際の報告
重篤である有害事象が発生し、試験責任者が当該有害事象を知った後、速やかに試験実施機関の長に報告し、試験担当者に連絡するとともに、重篤な有害事象に関する報告書を作成し、試験実施機関の長に提出する。
【００３６】
８）統計解析
二元配置分散分析を実施する。
【００３７】
２．試験実施症例数
各群６症例で両群合わせて１２症例とする。
【００３８】
３．試験結果
Ａ．ナトリウム排泄量の測定結果を図１に示す。
アンペロプシン投与群（藤茶）は投与開始８週目に、排泄量が増加し、１２週目にはさらに排泄量が増加した。一方プラセボ群はナトリウム排泄量が減少傾向にあった。
被験食摂取群とプラセボ群の比較の結果、１２週間後には、両群間で有意な差が観察された。アンペロプシン含有の藤茶は尿中ナトリウム排泄量を増加させることが明らかとなった。また有害な事象は観察されず、途中中止の被験者はいなかった。
【００３９】
＜動物試験＞
マウスを用いた動物試験によりアンペロプシン含有藤茶抽出物が消化管でのナトリウム吸収を抑制することを確認した試験例を以下に示す。
１．試験方法
（１）試験品          ：藤茶エキス（以下「藤茶」という。）（１ｇあたりアンペロプシン３００ｍｇ含有）
（２）使用動物
種                ：マウス
系統              ：Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ
微生物学的グレード：ＳＰＦ
性別              ：雄
入手時の週齢      ：６週齢
投与時の週齢      ：７週齢
使用動物数        ：１８匹
供給源            ：日本エスエルシー株式会社
【００４０】
（３）検疫及び馴化
検疫・馴化期間    ：入手日を含めて６日間
観察及び測定      ：入手時に動物の健康状態を肉眼的に確認して異常の認められない動物を飼育室に収容し、試験と同様の飼育条件及び飼育環境下で６日間検疫・馴化飼育した。検疫・馴化期間中は、毎日の一般状態観察及び入手日と検疫終了日に電子天秤（ＵＷ４２００Ｓ、(株)島津製作所）を用いて体重測定を行った。検疫・馴化期間中の一般状態に全例異常はみられず、体重増加も良好であった。
【００４１】
（４）識別方法
個体識別          ：入手時にフェルトペンで尾根部に個体識別番号を表記した。群分け後は仮番号と本番号との対応表を用いて識別した。
【００４２】
（５）飼料
種類              ：固型飼料ＭＦ
供給源            ：オリエンタル酵母工業株式会社
給餌方法          ：飼料をステンレス製給餌器に入れ自由摂取させた。
【００４３】
（６）飲水
１）検疫馴化期間中及び投与開始前
種類            ：水道水
給水方法        ：水道水を透明ポリカーボネイト製給水瓶に入れ、金属製ノズルを介して自由摂取させた。
２）投与開始後
種類            ：２％食塩水
調製方法        ：電子天秤にて塩化ナトリウム１６０  ｇを秤量し、蒸留水（全自動蒸留水製造装置アクエリアス、ＧＳＨ−５００、アドバンテック東洋(株)）に溶かして８０００  ｍＬとした。
給水方法        ：透明ポリカーボネイト製給水瓶に入れ、金属製ノズルを介して自由摂取させた。
【００４４】
（７）試験群構成
１群６匹を用い、下記表２に示す３群を設定した。
【００４５】
【表２】
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【００４６】
（８）供試動物の抽出及び群分け方法
投与開始前日に検疫・馴化期間中の体重増加が順調で一般状態にも異常を認めない動物から無作為に３群に分けた。
【００４７】
（９）試験日数
試験日数は、試験品投与開始日を「Ｄａｙ０」と定義した。
【００４８】
（１０）体重測定
測定頻度          ：Ｄａｙ  −１、７、１４、２１及び２８
検査匹数          ：１８匹
測定方法          ：電子天秤（ＵＷ４２００Ｓ、(株)島津製作所）を用いて測定した。
【００４９】
（１１）試験品の投与方法
投与経路          ：経口投与
投与匹数          ：１８匹
投与量            ：６００ｍｇ／ｋｇ
投与容量          ：１０ｍＬ／ｋｇ（最新の体重にて投与量を算出した）
投与方法          ：ポリプロピレン製ディスポーザブル注射筒及びマウス用胃ゾンデを用いて強制投与した。
投与回数          ：１回／日の２８日間（Ｄａｙ０〜Ｄａｙ２７）。
【００５０】
（１２）摂水量の測定
測定頻度          ：投与開始日以降、３日に一度の割合で測定した。
実施匹数          ：１８匹
測定方法          ：電子天秤（ＵＷ４２００Ｓ、(株)島津製作所）を用いて測定した。
【００５１】
（１３）採糞
採取頻度          ：投与開始前及びＤａｙ２６〜２７
実施匹数          ：１８匹
採取・処理方法    ：代謝ケージを用い、２４時間の糞を採取した。糞は回収し電子天秤（ＡＧ２０４ＤＲ、メトラー・トレド株式会社）を用いて湿重量を測定後、超低温槽で凍結保存した。
【００５２】
（１４）糞測定試料の調製
糞を濃縮遠心機（ＣＣ−１０５株式会社トミー精工）にて２時間以上乾燥させ、乾燥重量を測定後、一部を採取した。一部採取分の重量を測定後、重量の２．５倍量の注射用水を加えて冷蔵下に２４時間放置し、遠心分離（４°Ｃ、１５０００ｒｐｍ、１０分間）して得た上清を測定試料とした。
【００５３】
（１５）糞中ナトリウム（Ｎａ）の測定
糞測定試料を用いて、糞中Ｎａ量を全自動電解質分析装置（ＥＡ０７、株式会社アットウィル）で測定した。糞中Ｎａ量は糞重量及び添加蒸留水量より、重量当たりの量を算出した。
【００５４】
（１６）統計学的処理
測定値は、群ごとの平均±標準誤差（ｍｅａｎ±Ｓ．Ｅ．）で表し、コントロール１．水道水負荷群、コントロール２．２％食塩水負荷群、藤茶＋２％食塩水負荷群の有意差検定を実施した。
【００５５】
２．試験結果
（１）体重
試験群のいずれの動物も順調な体重増加を示した。
（２）摂水量
試験群のコントロール１．水道水負荷群とコントロール２．２％食塩水負荷群を比較すると、コントロール２．２％食塩水負荷群はＤａｙ４から最終測定日（Ｄａｙ２５）まで飲水量が有意な高値（ｐ＜０．０１）を示した。コントロール１．水道水負荷群と藤茶＋２％食塩水負荷群を比較すると、藤茶＋２％食塩水負荷群はＤａｙ４から最終測定日（Ｄａｙ２５）まで飲水量が高値を示した。コントロール２．２％食塩水負荷群と藤茶＋２％食塩水負荷群を比較すると、差は認められなかった。
【００５６】
（３）糞中Ｎａ総量
投与開始前では、いずれの群間でも糞中Ｎａ総量に差は認められなかった。
投与Ｄａｙ２７では、コントロール１．水道水負荷群とコントロール２．２％食塩水負荷群間では、コントロール２．２％食塩水負荷群の糞中Ｎａ総量は高値（ｐ＜０．０１）を示した。
コントロール１．水道水負荷群と藤茶＋２％食塩水負荷群を比較すると、藤茶＋２％食塩水負荷群の糞中Ｎａ総量は、高値（ｐ＜０．０１）を示した。
コントロール２．２％食塩水負荷群と藤茶＋２％食塩水負荷群を比較すると、図２に示すとおり、藤茶＋２％食塩水負荷群の糞中Ｎａ量は高値を示した（Ｐ＜０．１）。
以上の試験から、試験品藤茶エキスに含有されるアンペロプシンは、経口で摂取した食塩の吸収を阻害することが明らかとなった。
【図１】
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【図２】
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