(57)【要約】      （修正有）【課題】膀胱の充満度がその実働容積に対して１００％未満の時に尿意に悩まされる男性および女性対象の治療のための組成物及びその使用を提供する。【解決手段】排尿の頻度を低下させるための方法および組成物。１つの方法は、それを必要とする対象に遅延放出製剤に配合された１つの鎮痛剤を含む医薬組成物の有効量を投与することを含む。もう１つの方法は、それを必要とする対象に複数の有効成分を含む医薬組成物の有効量を投与することを含む。さらに他の方法は、それを必要とする対象に利尿薬の有効量を投与し、その後さらに鎮痛剤を含む医薬組成物を投与することを含む。【選択図】図１
2019055969.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
夜間頻尿患者における排尿の頻度を低下させるための医薬製剤の調製に於ける、アセトアミノフェン及びイブプロフェンを含む医薬組成物の使用であって、
前記アセトアミノフェン及びイブプロフェンの夫々が１ｍｇから２０００ｍｇの１日用量で経口投与され、アセトアミノフェン及びイブプロフェンのみが該医薬組成物に於ける治療上の有効成分である、前記使用。
【請求項２】
前記医薬組成物が遅延放出製剤に配合されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記遅延放出製剤がヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、メチルヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、アクリル酸エステルコポリマー、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、メタクリル酸コポリマー、酢酸フタル酸セルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酢酸フタル酸ポリビニル、シェラック、およびエチルセルロースからなる群から選択される材料を含むことを特徴とする、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記遅延放出製剤がモノステアリン酸グリセリンまたはジステアリン酸グリセリンをさらに含むことを特徴とする請求項２に記載の使用。
【請求項５】
前記遅延放出製剤が不溶性であるが、浸透性かつ膨潤性のハイドロゲルプラグで一方の端を閉じられた非水溶性カプセル本体を含むことを特徴とし、前記プラグがポリメタクリル酸エステル、被浸食性圧縮ポリマー、凝結融解ポリマーおよび酵素調節被浸食性ポリマーからなる群から選択される材料を含むことを特徴とする、請求項２に記載の使用。
【請求項６】
前記遅延放出製剤が腸溶コーティングをさらに含むことを特徴とする、請求項２に記載の使用。
【請求項７】
前記アセトアミノフェン及びイブプロフェンの夫々が５０ｍｇから５００ｍｇの１日用量で投与されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項８】
前記アセトアミノフェン及びイブプロフェンの夫々が５００ｍｇから２０００ｍｇの１日用量で投与されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項９】
前記アセトアミノフェン及びイブプロフェンの夫々が１００ｍｇから１５００ｍｇの１日用量で投与されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項１０】
前記アセトアミノフェン及びイブプロフェンの夫々が２５０ｍｇから１０００ｍｇの１日用量で投与されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項１１】
前記医薬組成物が即時放出製剤に配合されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項１２】
前記対象に利尿薬を投与することをさらに含み；
前記利尿薬が目標時間より少なくとも８時間前に投与されることを特徴とし、かつ前記医薬組成物が前記目標時間前２時間以内に投与されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項１３】
夜間頻尿患者における排尿の頻度を低下させるための経口投与用医薬組成物であって：
アセトアミノフェン；
イブプロフェン；および
１つ又はそれ以上の医薬品として許容できる担体を含み、
アセトアミノフェン及びイブプロフェンのみが該医薬組成物に於ける治療上の有効成分である、前記医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の参照
本願は、２０１２年６月４日に出願された米国特許出願第１３／４８７，３４３号、２０１２年３月１９日に出願された米国特許出願第１３／４２３，９４９号、および２０１２年１月４日に出願された米国特許出願第１３／３４３，３４９号からの優先権を主張する。
【０００２】
本願は、全般的に筋肉の収縮を阻害するための方法および組成物、具体的には膀胱平滑筋の収縮を阻害するための方法および組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
排尿筋は、らせん状、長軸方向、かつ輪状の束に配列された平滑筋線維よりなる膀胱壁の層である。膀胱が伸展すると、これが副交感神経系にシグナルを送って排尿筋を収縮させる。これにより膀胱は尿管を経て尿を排出するよう促される。
【０００４】
尿が膀胱から出るためには、自律的に調節される内括約筋および随意的に調節される外括薬筋が開かなければならない。これらの筋肉の問題は失禁につながることがある。尿の量が膀胱の絶対容量の１００％に達すれば、随意括約筋は不随意になりかつ直ちに尿が排泄されるであろう。
【０００５】
ヒト成人の膀胱は通常約３００〜３５０ｍＬ（実働容量）の尿を保持するものの、成人膀胱の全容量は、個人によって異なるが、約１０００ｍＬ（絶対容量）まで保持することもある。尿が蓄積するにつれ、膀胱壁のしわ（襞）によって生成される隆起が平坦化し、さらに膀胱壁が伸長するにつれて薄くなるので、膀胱は内部圧の大きな上昇を伴うことなくより大量の尿を蓄積することができる。
【０００６】
大半の人は、膀胱内の尿の体積が２００ｍＬ前後に達すると尿意が始まる。この段階では、所望であれば、対象が排尿衝動に抵抗することは容易である。膀胱が充満し続けると、尿意はより強くなり、無視することがより困難となる。最終的に、膀胱は排尿衝動が圧倒的となる時点まで充填され、さらに対象はそれをもはや無視することができなくなるであろう。一部の人では、膀胱の充満度がその実働容量に対して１００％未満の時にこの尿意が始まる。このような尿意の上昇によって、十分に連続した休息時間の間睡眠する能力を含む、正常な活動が妨害されうる。一部の例では、この上昇した尿意は、男性の良性前立腺肥大または前立腺癌、または女性の妊娠などの医学的状態と関連することもある。しかし尿意の上昇は、男性および女性共に、その他の医学的な状態を被っていない人にも発生する。
【０００７】
したがって、膀胱の充満度がその実働容積に対して１００％未満の時に尿意に悩まされる男性および女性対象の治療のための組成物および方法に対するニーズが存在する。前記組成物および方法は、前記対象において膀胱中の尿の体積がその実働容量の１００％前後を超える際に尿意が始まることを可能とすることを目的とした筋収縮の阻害のために必要とされる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本願の１つの態様は、排尿の頻度を減少させるための方法に関する。１つの実施形態においては、方法は、それを必要とする対象に、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセンナトリウム、およびアセトアミノフェンからなる群から選択される第１の鎮痛剤を含む医薬組成物を投与することを含み、医薬組成物が遅延放出製剤に配合されることを特徴としかつ前記第１の鎮痛剤が５ｍｇから２０００ｍｇの１日用量で経口投与されることを特徴とする。
【０００９】
他の実施形態においては、方法は、複数の有効成分を含む医薬組成物の有効量をそれを必要とする対象に投与することを含み、複数の有効成分が（１）１つまたはそれ以上の鎮痛剤および／または（２）１つまたはそれ以上の抗ムスカリン剤を含むことを特徴とし、かつ１つまたはそれ以上の鎮痛剤が５ｍｇから２０００ｍｇの併用１日用量で経口投与されることを特徴とする。一部の実施形態においては、１つまたはそれ以上の鎮痛剤はアスピリン、イブプロフェン、ナプロキセンナトリウム、およびアセトアミノフェンからなる群から選択される。抗ムスカリン剤の例は、オキシブチニン、ソリフェナシン、ダリフェナシン、フェソテロジン、トルテロジン、トロスピウム、およびアトロピンを含むが、これに限定されない。
【００１０】
本願の他の実施形態は：アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、およびアセトアミノフェンからなる群から選択される１つまたはそれ以上の鎮痛剤；１つまたはそれ以上の抗利尿剤；および医薬品として許容できる担体を含む医薬組成物であって、前記の１つまたはそれ以上の鎮痛剤のうち少なくとも１つが遅延放出を目的として配合されることを特徴とする医薬組成物に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】鎮痛剤（analgesic）がＬＰＳの非存在下（図１Ａ）または存在下（図１Ｂ）でＲａｗ２６４マクロファージ細胞による共刺激分子の発現を調節することを示す図である。細胞は、単独またはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｙｉｕｒｉｕｍ  ＬＰＳ（０．０５μｇ／ｍｌ）を伴う鎮痛剤の存在下で２４時間培養した。結果はＣＤ４０＋ＣＤ８０＋細胞の平均相対％である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下の発明を実施するための形態は、任意の当業者が本発明を作製および使用することを可能とするために提示される。説明を目的として、本発明の完全な理解を提供するために具体的な用語が示される。しかし、これらの具体的な詳細は本発明を実施するために必要でないことが当業者にとって明らかとなるであろう。具体的な応用の記載は、典型的な実施例としてのみ提供される。本発明は提示する実施形態に限定されることではなく、本願に開示される趣旨および性質と一致する可能な限り幅広い範囲で理解されることを意図する。
【００１３】
本願で用いる用語「有効量」は、選択された結果を達成するために必要な量を意味する。
【００１４】
本願で用いる用語「鎮痛剤」は、疼痛を緩和するために用いられる物質、化合物または薬剤を意味し、抗炎症化合物を含む。典型的な鎮痛剤および／または抗炎症物質、化合物または薬剤は以下の化合物を含むが、これに限定されない：非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、サリチラート類、アスピリン、サリチル酸、サリチル酸メチル、ジフルニサール、サルサレート、オルサラジン、スルファサラジン、パラアミノフェノール誘導体、アセトアニリド、アセトアミノフェン、フェナセチン、フェナメート類、メフェナム酸、メクロフェナメート類、メクロフェナム酸ナトリウム、ヘテロアリール酢酸誘導体、トルメチン、ケトロラク、ジクロフェナク、プロピオン酸誘導体、イブプロフェン、ナプロキセンナトリウム、ナプロキセン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、フルルビプロフェン、オキサプロジン；エノール酸、オキシカム誘導体、ピロキシカム、メロキシカム、テノキシカム、アンピロキシカム、ドロキシカム、ピボキシカム、ピラゾロン誘導体、フェニルブタゾン、オキシフェンブタゾン、アンチピリン、アミノピリン、ジピロン、コキシブ類、セレコキシブ、ロフェコキシブ、ナブメトン、アパゾン、インドメタシン、スリンダク、エトドラク、イソブチルフェニルプロピオン酸、ルミラコキシブ、エトリコキシブ、パレコキシブ、バルデコキシブ、チラコキシブ、エトドラク、ダルブフェロン、デクスケトプロフェン、アセクロフェナク、リコフェロン、ブロムフェナク、プラノプロフェン、ロキソプロフェン、ピロキシカム、ニメスリド、シゾリリン、３−ホルムアミノ−７−メチルスルホニルアミノ−６−フェノキシ−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン、メロキシカム、ロルノキシカム、ｄ−インドブフェン、モフェゾラク、アムトメチン、プラノプロフェン、トルフェナム酸、フルルビプロフェン、スプロフェン、オキサプロジン、ザルトプロフェン、アルミノプロフェン、チアプロフェン酸、その医薬的塩、その水和物、およびその溶媒和物。
【００１５】
本願で用いる用語「コキシブ」および「ＣＯＸ阻害薬」は、ＣＯＸ２酵素の活性または発現を阻害することができるか、または、疼痛および腫脹を含む、重度炎症反応を阻害するかまたはその重症度を低下させることのできる化合物の組成物を意味する。
【００１６】
膀胱は：尿の蓄積および内容物の排出という２つの重要な機能を有する。尿の蓄積は低い圧で発生し、これは膀胱筋が充填相で弛緩することを意味する。膀胱内容物の排出は、膀胱筋の収縮と尿道括約筋の弛緩の協調を必要とする。蓄積機能の障害は、過活動膀胱症候群の構成要素である切迫感、頻度、および切迫失禁などの下部尿路症状をもたらしうる。過活動膀胱症候群は、蓄積相における膀胱平滑筋（膀胱筋）の不随意的収縮によって起こることがあり、一般的かつ過小報告された問題であり、その有病率が評価されたのは最近になってからである。
【００１７】
本願の１つの態様は、遅延放出製剤に配合された医薬組成物を、それを必要とする人に対して投与することにより排尿頻度を低下させるための方法に関する。医薬組成物は１つまたはそれ以上の鎮痛剤および、任意に、１つまたはそれ以上の抗ムスカリン剤を含む。
【００１８】
本願に記載する用語「遅延放出」は、体内で即時に崩壊して有効成分を放出しない医薬品を意味する。一部の実施形態においては、用語「遅延放出」は、投与後の薬剤の放出に所定の遅延がある放出プロフィールを有する医薬製剤に関して用いられる。一部の実施形態においては、遅延放出製剤は、医薬品が小腸に達する前にその放出を防止する経口医薬品に適用されたバリアである腸溶コーティングを含む。腸溶コーティングなどの遅延放出製剤は、アスピリンなどの胃に対して刺激作用を有する薬剤が胃の中で溶解することを防止する。そのようなコーティングは、酸不安定性薬剤を胃の酸性への曝露から保護し、その替わりに分解の起こらない塩基性ｐＨ環境（腸のｐＨ５．５およびそれ以上）に送達し、かつその所望の作用を得るためにも用いられる。
【００１９】
用語「パルス型放出」は遅延放出の一種であり、本願においては、所定の遅延時間の直後短時間内での薬剤の迅速かつ一過性の放出を提供し、これにより薬剤投与後の薬剤の「パルス型」血漿プロフィールを生成する医薬製剤に関して用いられる。製剤は、投与後に単パルス型放出または所定の時間間隔での多パルス型放出を提供するよう設計しうる。
【００２０】
大半の腸溶コーティングは、胃内に認められる高酸性ｐＨで安定であるがより酸性度の低い（比較的塩基性の）ｐＨでは速やかに崩壊する表面を呈することによって作動する。したがって、腸溶コーティングされた丸剤は酸性の胃液（ｐＨ〜３）では溶解しないが、小腸内に存在するアルカリ性（ｐＨ７．９）環境においては溶解するであろう。腸溶コーティング材料の例は、アクリル酸メチル−メタクリル酸コポリマー、酢酸コハク酸セルロール、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース（酢酸コハク酸ハイプロメロース）、ポリ酢酸フタル酸ビニル（ＰＶＡＰ）、メタクリル酸メチル−メタクリル酸コポリマー、アルギン酸ナトリウム、およびステアリン酸を含むが、これに限定されない。
【００２１】
一部の実施形態においては、医薬組成物は、遅延放出を提供するために設計された種々の医薬製剤から経口的に投与される。遅延型経口剤型は、たとえば、錠剤、カプセル剤、カプレット剤などを含み、かつ封入してもしなくともよい複数の顆粒剤、ビーズ剤、散剤またはペレット剤も含みうる。錠剤およびカプセル剤は、その場合に固形医薬担体が採用される最も簡便な経口剤型を代表する。
【００２２】
遅延放出製剤においては、緩徐な溶解および薬剤の腸内への同時的放出を促進するために１つまたはそれ以上のバリアコーティングをペレット剤、錠剤、またはカプセル剤に適用しうる。典型的には、バリアコーティングは、治療組成物または有効な核の周囲を収容するか、包囲するか、または層または膜を形成する１つまたはそれ以上のポリマーを含有する。
【００２３】
一部の実施形態においては、有効物質は製剤内で送達されて投与後の所定の時間に遅延放出を提供する。遅延は最長約１０分であるか、または約２０分、約３０分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間またはそれ以上でありうる。
【００２４】
遅延放出組成物は、単一ユニット用量で投与される所与の有効物質の総用量の１００％を含みうる。代替的に、複合放出プロフィール製剤中のコンポーネントが医薬製剤によって送達される有効物質の総用量の約３０〜９５％を提供しうるので、遅延放出組成物が含まれることがある。たとえば、即時放出コンポーネントは、医薬製剤によって送達される有効物質の総用量の約５〜７０％、または約５０％を提供しうる。交互の実施形態においては、遅延放出コンポーネントは、製剤によって送達される有効物質の総用量の約３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０または９５％を提供する。
【００２５】
遅延放出製剤は、典型的には有効成分の放出を遅延させるバリアコーティングを含む。バリアコーティングは、目的に応じて、多様な異なる材料から構成されうる。さらに製剤は、一時的に放出を促進するための複数のバリアコーティングを含みうる。コーティングは、糖衣であるか、フィルムコーティング（例：ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、メチルヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、アクリル酸エステルコポリマー、ポリエチレングリコールおよび／またはポリビニルピロリドンによる）、またはメタクリル酸コポリマー、酢酸フタル酸セルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリ酢酸フタル酸ビニル、シェラック、および／またはエチルセルロースによるコーティングでありうる。さらに、製剤は、たとえばモノステアリン酸グリセリンまたはジステアリン酸グリセリンといった時間遅延材料を追加的に含みうる。
【００２６】
一部の実施形態においては、遅延放出製剤は、消化管の近位または遠位領域において有効物質の放出を促進する１つまたはそれ以上のポリマーが含まれた腸溶コーティングを含む。本願で用いる用語「腸溶ポリマーコーティング」はｐＨ依存性またはｐＨ非依存性放出プロフィールを有する１つまたはそれ以上のポリマーを含むコーティング。典型的には、コーティングは胃の酸性媒体内で溶解に抵抗するものの、小腸または結腸などの消化管のより遠位の領域においては溶解するかまたは浸食される。腸溶ポリマーコーティングは、典型的には投与後約３〜４時間の胃内容物排出による遅延後の多少の時間まで有効物質の放出に抵抗する。
【００２７】
胃の中のように低ｐＨではその構造的完全性を維持するが、小腸などの消化管のより遠位の領域においてより高いｐＨで溶解し、そこで薬剤内容物が放出される、１つまたはそれ以上のｐＨ依存性またはｐＨ感受性ポリマーを含むｐＨ依存性腸溶コーティング。本発明の目的については、「ｐＨ依存性」は環境ｐＨに応じて変動する特性（例：溶解）を有することと定義される。典型的なｐＨ依存性ポリマーは、メタクリル酸コポリマー、メタクリル酸−メチルメタクリル酸コポリマー（例：ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）Ｌ１００（Ａ型）、ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）Ｓ１００（Ｂ型）、Ｒｏｈｍ  ＧｍｂＨ、ドイツ；メタクリル酸−アクリル酸エチルコポリマー（例：ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）Ｌ１００−５５（Ｃ型）およびＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）Ｌ３０Ｄ−５５コポリマー分散剤、Ｒｏｈｍ  ＧｍｂＨ、ドイツ）；メタクリル酸−メタクリル酸メチルコポリマーおよびメタクリル酸メチル（ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）ＦＳ）；メタクリル酸、メタクリル酸エステルおよびアクリル酸エチルのターポリマー；酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）；フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣＰ）（例：ＨＰ−５５、ＨＰ−５０、ＨＰ−５５Ｓ、信越化学工業、日本）；ポリ酢酸フタル酸ビニル（ＰＶＡＰ）（例：ＣＯＡＴＥＲＩＣ（登録商標）、ＯＰＡＤＲＹ（登録商標）腸溶白色ＯＹ−Ｐ−７１７１）；酢酸コハク酸セルロース（ＣＡＳ）；酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣＡＳ）、例：ＡＱＯＡＴ（登録商標）ＬＦおよびＡＱＯＡＴ（登録商標）ＭＦ（信越化学工業、日本）を含むＨＰＭＣＡＳ  ＬＦグレード、ＭＦグレード、ＨＦグレード；信越化学工業、日本）；シェラック（例：Ｍａｒｃｏａｔ（登録商標）１２５およびＭａｒｃｏａｔ（登録商標）１２５Ｎ）；カルボキシメチエルエチルセルロース（ＣＭＥＣ、フロイント産業、日本）、酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）（例；ＡＱＵＡＴＥＲＩＣ（登録商標））；酢酸トリメリット酸セルロース（ＣＡＴ）；およびたとえば重量比約３：１から約２：１のＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）Ｌ１００−５５とＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）Ｓ１００の混合物、または重量比約３：１から約５：１でのＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）Ｌ３０Ｄ−５５とＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）ＦＳの混合物などといった、約２：１から約５：１の重量比でのその２つまたはそれ以上の混合物を含むが、これに限定されない。
【００２８】
ｐＨ依存性ポリマーは、典型的には特徴的な溶解至適ｐＨを示す。一部の実施形態においては、ｐＨ依存性ポリマーは約５．０と５．５の間、約５．５と６．０の間、約６．０と６．５の間、または約６．５と約７．０の間の至適ｐＨを示す。他の実施形態においては、ｐＨ依存性ポリマーは≧５．０、≧５．５、≧６．０、≧６．５、または≧７．０の至適ｐＨを示す。
【００２９】
他の実施形態においては、腸溶コーティングは１つまたはそれ以上のｐＨ非依存性ポリマーを含みうる。これらのポリマーは、ｐＨに非依存的に一定時間後の薬物の放出を提供する。本発明の目的については、「ｐＨ非依存性」はｐＨにほとんど影響されない特性（例：溶解）を有することと定義される。ｐＨ非依存性ポリマーは、「時間調節」または「時間依存性」放出プロフィールの文脈においてしばしば言及される。
【００３０】
ｐＨ非依存性ポリマーは、非水溶性でもまたは水溶性でもありうる。典型的な非水溶性ｐＨ非依存性ポリマーは、少量の塩化メタクリル酸トリメチルアンモニオエチル部分を有する中性メタクリル酸エステル（例：ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）ＲＳおよびＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）ＲＬ；官能基を全く持たない中性エステル分散剤（例：ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）ＮＥ３０ＤおよびＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）ＮＥ３０）；エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、酢酸セルロース、または混合物などのセルロース系ポリマーおよびその他のｐＨ非依存性コーティング製品を含むが、これに限定されない。典型的な水溶性ｐＨ非依存性ポリマーはＯＰＡＤＲＹ（登録商標）ａｍｂを含む。
【００３１】
一部の実施形態においては、ｐＨ非依存性ポリマーは胃および腸における浸食に対して抵抗性である１つまたはそれ以上の多糖類を含有する。そのようなポリマーは、たとえば多糖類コーティングなどを分解する生体分解性酵素を含有する大規模な微生物層を含む結腸においてのみ分解し、薬剤内容物を調節された時間依存的な様式で放出することができる。
【００３２】
一定の実施形態においては、コーティングの方法論は１つまたはそれ以上のｐＨ依存性ポリマーおよび１つまたはそれ以上のｐＨ非依存性ポリマーを配合することを採用する。ｐＨ依存性およびｐＨ非依存性ポリマーを配合することによって、一旦可溶性ポリマーがその可溶化至適ｐＨに到達した場合の有効成分の放出速度を低下させることができる。
【００３３】
一部の実施形態においては、１つまたはそれ以上の有効物質を収容する非水溶性カプセル本体であって、カプセル本体の一方の端が不溶性であるが浸透性かつ膨潤性のハイドロゲルのプラグで閉じられることを特徴とする非水溶性カプセル本体を用いて、「時間調節」または「時間依存性」放出プロフィールを得ることができる。消化管液または溶媒に触れると、プラグが膨潤し、それ自体をカプセルの外に押し出し、所定の遅延時間後に薬剤を放出するが、これはたとえばプラグの位置またはサイズなどによって調節することができる。カプセル本体は、カプセルが小腸に達するまでカプセルを無傷に保つために外側ｐＨ依存性腸溶コーティングでさらにコーティングすることもある。適切なプラグの材料は、たとえば、ポリメタクリル酸エステル、被浸食性圧縮ポリマー（例：ＨＰＭＣ、ポリビニルアルコール）、凝結融解ポリマー（例：モノオレイン酸グリセリン）、および酵素調節被浸食性ポリマー（例：アミロース、アラビノガラクタン、キトサン、コンドロイチン硫酸、シクロデキストリン、デキストラン、グアーゴム、ペクチンおよびキシランなどの多糖類）を含む。
【００３４】
他の実施形態においては、膨潤層によって被覆された薬剤含有核、および外側の不溶性であるが半透過性であるポリマーコーティングまたは膜を含むようカプセルまたは二層錠を製剤化しうる。破裂前の遅延時間は、ポリマーコーティングの浸透および機械特性および膨潤層の膨潤挙動によって調節することができる。典型的には、膨潤層は、膨潤してその構造内に水を保持する膨潤性親水性ポリマーなどの１つまたはそれ以上の膨潤剤を含む。
【００３５】
典型的な水膨潤性材料は、ポリエチレンオキシド（たとえばＰＯＬＹＯＸ（登録商標）のように平均分子量１，０００，０００から７，０００，０００を有する）、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース；ポリ（メチレンオキシド）、ポリ（ブチレンオキシド）を含むがこれに限定されない重量平均分子量１００，０００から６，０００，０００を有するポリアルキレンオキシド；分子量２５，０００から５，０００，０００を有するポリ（メタクリル酸ヒドロキシアルキル）；グリオキサール、ホルムアルデヒド、またはグルタルアルデヒドと架橋する低アセタール残基を有しかつ２００から３０，０００の重合度を有するポリ（ビニル）アルコール；メチルセルロース、架橋寒天およびカルボキシメチルセルロースの混合物；コポリマー中で無水マレイン酸１モルに対して０．００１から０．５モルの飽和架橋剤と架橋する無水マレイン酸とスチレン、エチレン、プロピレン、ブチレンまたはイソブチレンの微細に分割されたコポリマーの分散を形成することによって生成されるコポリマーを形成するハイドロゲル；分子量４５０，０００から４，０００，０００を有するＣＡＲＢＯＰＯＬ（登録商標）酸性カルボキシコポリマー；ＣＹＡＮＡＭＥＲ（登録商標）ポリアクリルアミド；架橋水膨潤性インデン無水マレイン酸ポリマー；分子量８０，０００から２００，０００を有するＧＯＯＤＲＩＴＥ（登録商標）ポリアクリル酸；デンプングラフトコポリマー；ジエステル架橋ポリグリカンといった縮合グルコース単位から構成されるＡＱＵＡ−ＫＥＥＰＳ（登録商標）アクリル酸ポリマー多糖；０．５〜１％ｗ／ｖ水溶液として３，０００から６０，０００ｍＰａの粘度を有するカルボマー；１％ｗ／ｗ水溶液（２５℃）として約１０００〜７０００ｍＰａの粘度を有するヒドロキシプロピルセルロースなどのセルロースエーテル；２％ｗ／ｖ水溶液として約１０００またはそれ以上、好ましくは２，５００またはそれ以上から最大２５，０００ｍＰａの粘度を有するヒドロキシプロピルメチルセルロース；約２０℃の１０％ｗ／ｖ水溶液として約３００〜７００ｍＰａの粘度を有するポリビニルピロリドン；およびその組み合わせを含むが、これに限定されない。
【００３６】
腸溶層は、タルクまたはモノステアリン酸グリセリンといった抗粘着剤および/または可塑化剤等をさらに含みうる。腸溶層は、クエン酸トリエチル、クエン酸アセチルトリエチル、クエン酸アセチルトリブチル、ポリエチレングリコールアセチル化モノグリセリド、グリセリン、トリアセチン、プロピレングリコール、フタル酸エステル（例：フタル酸ジエチル、フタル酸ジブチル）、二酸化チタン、酸化第二鉄、ヒマシ油、ソルビトールおよびセバシン酸ジブチルを含むがこれに限定されない１つまたはそれ以上の可塑化剤をさらに含みうる。
【００３７】
他の実施形態においては、遅延放出製剤は、封入を利用して有効成分および浸透圧剤を封入する水透過性であるが非水溶性であるフィルムコーティングを採用する。腸からの水がフィルムを通過して緩徐に核に拡散するにつれて、核はフィルムが破裂するまで膨張し、これにより有効成分が放出される。フィルムコーティングは、多様な水浸透速度または放出時間を可能とするよう調節しうる。
【００３８】
代替的に、薬剤の放出時間は、本体の底部にあって所定の細孔を含む（エチルセルロース（ＥＣ）といった）非水溶性ポリマー膜の耐性および厚さと、低置換ヒドロキシプロピルセルロース（Ｌ−ＨＰＣ）およびグリコール酸ナトリウムといった膨潤性賦形剤の量の間のバランスに依存した崩壊遅延時間によって調節することができる。経口投与後、ＧＩ液が細孔を経て浸透し、膨潤性賦形剤の膨潤を引き起こし、これが膨潤性材料を収容する第１のカプセル本体、薬剤を収容する第２のカプセル本体、および第１のカプセル本体に着接する外キャップを含むカプセルコンポーネントを分離させる内圧をもたらす。
【００３９】
他の実施形態においては、浸透圧機序によって薬剤が放出されうる。例として、カプセルは単一の浸透圧ユニットと共に製剤化されうるか、またはハードゼラチンカプセル内に封入された２、３、４、５、または６個のプッシュ−プルユニットを組み入れることによって各二層プッシュ−プルユニットがいずれも半透過性膜に囲まれた浸透圧プッシュ層および薬剤層を含みうる。１つまたはそれ以上の開口部が、薬剤層と隣接する膜を経て掘削される。この膜は、胃内容物の排出後まで放出を防止するｐＨ依存性腸溶コーティングでさらに被覆されうる。ゼラチンカプセルは摂取の直後に溶解する。プッシュ−プルユニットが小腸に入ると、腸溶コーティングが崩壊し、次にこれが半透過性膜を経た液体の流入を可能とし、浸透圧プッシュコンパートメントが膨潤し、半透膜を経た水輸送速度によって正確に調節された速度で開口部を経て薬剤を押し出すようにする。薬剤の放出は２４時間またはそれ以上まで一定の速度で生じることができる。
【００４０】
浸透圧プッシュ層は、半透過性膜を経た送達担体コアへの水の輸送のために駆動力を作り出す１つまたはそれ以上の浸透圧剤を含む。浸透圧剤の１分類は、親水性ビニルおよびアクリル酸ポリマー、アルギン酸カルシウムなどの多糖類、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリ（メタクリル酸２−ヒドロキシエチル）、ポリ（アクリル）酸、ポリ（メタクリル）酸、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、架橋ＰＶＰ、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ＰＶＡ／ＰＶＰコポリマー、メタクリル酸メチルおよび酢酸ビニルなどの疎水性単量体を有するＰＶＡ／ＰＶＰコポリマー、大分子ＰＥＯブロックを含む疎水性ポリウレタン、クロスカルメロースナトリウム、カラゲナン、ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）およびカルボキシエチルセルロース（ＣＥＣ）、アルギン酸ナトリウム、ポリカルボフィル、ゼラチン、キサンチンガム、およびデンプングリコール酸ナトリウムを含むがこれに限定されない、「オスモポリマー」および「ハイドロゲル」とも呼ばれる水膨潤性親水性ポリマーを含む。
【００４１】
その他の浸透圧剤の分類は、水を吸収して半透過性膜を横断する浸透圧勾配をもたらすことのできるオスモゲンを含む。典型的なオスモゲンは、硫酸マグネシウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、塩化ナトリウム、塩化リチウム、硫酸カリウム、リン酸カリウム、炭酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸リチウム、塩化カリウム、および硫酸ナトリウムなどの無機塩；デキストロース、フルクトース、グルコース、イノシトール、ラクトース、マルトース、マンニトール、ラフィノース、ソルビトール、シュークロース、トレハロース、およびキシリトールなどの糖類；アスコルビン酸、安息香酸、フマル酸、クエン酸、マレイン酸、セバシン酸、ソルビン酸、アジピン酸、エデト酸、グルタミン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、コハク酸、および酒石酸などの有機酸；尿素；およびその混合物を含むが、これに限定されない。
【００４２】
半透過性膜を形成する際に有用な材料は、生理的に妥当なｐＨで水透過性かつ非水溶性であるか、または架橋などの化学的変化によって非水溶性に変化することに対して感受性のある多様な等級のアクリル、ビニル、エーテル、ポリアミド、ポリエステル、およびセルロース誘導体を含む。
【００４３】
他の実施形態においては、遅延放出製剤は非水透過性の錠剤コーティングを採用し、これにより調節された開口部を経て核が破裂するまで水がコーティング内に入る。錠剤が破裂すると、薬剤内容物は即時に、またはより長い時間をかけて放出される。これらおよび他の技術は、薬剤の放出が開始される前の所定の遅延時間を考慮するために変更され得る。
【００４４】
有効物質を含有する顆粒剤、ビーズ剤、散剤またはペレット剤、錠剤、カプセル剤、またはその組み合わせに多様なコーティング技術を適用して相異なりかつ特徴的な放出プロフィールをもたらしうる。一部の実施形態においては、医薬組成物は単一コーティング層を含む錠剤またはカプセル剤形状にある。他の実施形態においては、医薬組成物は複数のコーティング層を含む錠剤またはカプセル剤形状にある。
【００４５】
一部の実施形態においては、医薬組成物は鎮痛剤、抗ムスカリン剤、抗利尿剤および鎮痙剤からなる群から選択される複数の有効成分を含む。鎮痙剤の例はカリソプロドール、ベンゾジアゼピン類、バクロフェン、シクロベンザプリン、メタキサロン、メトカルバモール、クロニジン、クロニジン類似体、およびダントロレンを含むが、これに限定されない。一部の実施形態においては、医薬組成物は１つまたはそれ以上の鎮痛剤を含む。他の実施形態においては、医薬組成物は（１）１つまたはそれ以上の鎮痛剤、および（２）抗ムスカリン剤、抗利尿剤および鎮痙剤からなる群から選択される１つまたはそれ以上の他の有効成分を含む。他の実施形態においては、医薬組成物は（１）１つまたは２つの鎮痛剤および（２）１つまたは２つの抗ムスカリン剤を含む。他の実施形態においては、医薬組成物は（１）１つまたは２つの鎮痛剤および（２）１つまたは２つの抗利尿剤を含む。他の実施形態においては、医薬組成物は（１）１つまたは２つの鎮痛剤および（２）１つまたは２つの鎮痙剤を含む。さらに他の実施形態においては、医薬組成物は（１）１つまたは２つの鎮痛剤、（２）１つまたは２つの抗ムスカリン剤、および（３）１つまたは２つの抗利尿剤を含む。
【００４６】
１つの実施形態においては、複数の有効成分は即時放出を目的として配合される。他の実施形態においては、複数の有効成分は遅延放出を目的として配合される。他の実施形態においては、複数の有効成分は即時放出および遅延放出の両者を目的として配合される（例：各有効成分の第１の部分は即時放出を目的として配合されかつ各有効成分の第２の部分は遅延放出を目的として配合される）。さらに他の実施形態においては、複数の有効成分の一部は即時放出を目的として配合されかつ複数の有効成分の一部は遅延放出を目的として配合される（例：有効成分Ａ、Ｂ、Ｃは即時放出を目的として配合されかつ有効成分のＣおよびＤは遅延放出を目的として配合される）。
【００４７】
一部の実施形態においては、医薬組成物は即時放出コンポーネントおよび遅延放出コンポーネントを含む。即時放出コンポーネントは、鎮痛剤、抗ムスカリン剤、抗利尿剤および鎮痙剤からなる群から選択される１つまたはそれ以上の有効成分を含みうる。遅延放出コンポーネントは、鎮痛剤、抗ムスカリン剤、抗利尿剤および鎮痙剤からなる群から選択される１つまたはそれ以上の有効成分を含みうる。一部の実施形態においては、即時放出コンポーネントおよび遅延放出コンポーネントは全く同じ有効成分を有する。他の実施形態においては、即時放出コンポーネントおよび遅延放出コンポーネントは異なる有効成分を有する。さらに他の実施形態においては、即時放出コンポーネントおよび遅延放出コンポーネントは１つおよびそれ以上の共通する有効成分を有する。
【００４８】
１つの実施形態においては、医薬組成物は、ほぼ同時的な即時放出を目的として配合される２つの有効成分（例：２つの鎮痛剤、または１つの鎮痛剤と１つの抗ムスカリン剤または抗利尿剤または鎮痙剤の混合物）を含む。他の実施形態においては、医薬組成物はほぼ同時的な遅延放出を目的として配合される２つの有効成分を含む。他の実施形態においては、医薬組成物はそれぞれに異なる遅延放出プロフィールを提供する２つの遅延放出コンポーネントとして配合される２つの有効成分を含む。たとえば、第１の遅延放出コンポーネントが第１の有効成分を第１の時点で放出し、かつ第２の遅延放出コンポーネントが第２の有効成分を第２の時点で放出する。他の実施形態においては、医薬組成物は、一方が即時放出を目的として配合されかつもう一方が遅延放出を目的として配合される２つの有効成分を含む。
【００４９】
他の実施形態においては、医薬組成物は、即時放出を目的として配合される２つの有効成分（例：２つの鎮痛剤、または１つの鎮痛剤と１つの抗ムスカリン剤または抗利尿剤または鎮痙剤の混合物）、および（２）遅延放出を目的として配合される２つの有効成分（例：２つの鎮痛剤、または１つの鎮痛剤と１つの抗ムスカリン剤または抗利尿剤または鎮痙剤の混合物）を有する。他の実施形態においては、医薬組成物は、即時放出を目的として配合される３つの有効成分および（２）遅延放出を目的として配合される３つの有効成分を含む。他の実施形態においては、医薬組成物は、即時放出を目的として配合される４つの有効成分および（２）遅延放出を目的として配合される４つの有効成分を含む。これらの実施形態においては、即時放出コンポーネント中の有効成分は遅延放出コンポーネント中の有効成分と同じであっても、または異なっていてもよい。
【００５０】
用語「即時放出」は、本願においては溶解速度調節材料を含有しない医薬製剤に関して用いられる。即時放出製剤の投与後の有効物質の放出においてはほとんど遅延がない。即時放出コーティングは、その中の薬剤内容物を放出するため適切な投与直後に溶解する材料を含みうる。典型的な即時放出コーティング材料はゼラチン、ポリビニルアルコールポリエチレングリコール（ＰＶＡ−ＰＥＧ）コポリマー（例：ＫＯＬＬＩＣＯＡＴ（登録商標））および当業者に既知である多様な他の材料を含む。
【００５１】
即時放出組成物は、単一ユニット用量で投与された所与の有効物質の総用量の１００％を含みうる。代替的に、即時放出組成物は、医薬組成物によって送達される有効物質の総用量の約１％から約５０％を提供しうる複合放出プロフィール製剤中のコンポーネントとして含まれうる。たとえば、即時放出コンポーネントは、製剤によって送達される有効物質の総用量の少なくとも約５％、または少なくとも約１０％から約３０％、または約４５％から約５０％を提供しうる。有効物質の残りは遅延放出製剤として送達されうる。交互の実施形態においては、即時放出コンポーネントは、製剤によって送達される有効物質の総用量の約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４５、または５０％を提供する。遅延放出コンポーネントは、製剤によって送達される有効物質の総用量の約９０、８５、８０、７５、７０、６５、５５、または５０％を提供する。
【００５２】
一部の実施形態においては、即時放出または遅延放出製剤は、たとえば流動床技術または当業者に既知である他の方法論などを用いて、たとえば薬剤含有フィルム形成組成物の形態をとる薬物によりその表面がコーティングされたビーズ、ペレット、丸剤、顆粒状粒子、マイクロカプセル、マイクロスフェア、マイクロ顆粒、ナノカプセル、またはナノスフェアの形態をそれぞれにとる１つまたはそれ以上の不活性粒子から構成される活性な核を含む。不活性粒子は、溶解性が低いままであるのに十分な大きさである限り、多様なサイズであることができる。代替的に、活性な核は薬剤基質を含有するポリマー組成物の顆粒化および粉砕および／または押出およびスフェロニゼーションによって調製しうる。
【００５３】
核中の薬剤の量は必要とされる用量に依存し、典型的には約５から９０重量％まで変動する。全般的に、活性な核に対するポリマーコーティングは、必要とされる放出プロフィールの遅延時間および種類および／または選択されるポリマーおよびコーティング溶媒に応じて、コーティングされる粒子の重量の約１から５０％となるであろう。当業者は、所望の用量を達成するために核にコーティングまたは組み入れるための適切な薬剤の量を選択することができるであろう。１つの実施形態においては、不活性な核は、薬剤の放出を促進するためにその微小環境を変化させる糖類の球または緩衝剤の結晶または炭酸カルシウム、重炭酸ナトリウム、フマル酸、酒石酸などの封入された緩衝剤の結晶でありうる。
【００５４】
一部の実施形態においては、遅延放出製剤は、ビーズなどの水溶性／分散性薬剤含有粒子を、非水溶性ポリマーおよび腸溶性ポリマーが４：１から１：１の重量比で存在しうることを特徴とする、非水溶性ポリマーと腸溶性ポリマーの混合物でコーティングすることにより形成され、かつコーティングの総重量はコーティングされたビーズの総重量の１０から６０重量％である。薬剤積層ビーズは、エチルセルロースの内部溶解速度調節膜を任意に含みうる。ポリマー膜の外層の組成、さらには内層および外層の個々の重量は、インビトロ／インビボ相関に基づいて予測される、所与の活性についての所望の概日周期放出プロフィールを達成するために最適化される。
【００５５】
他の実施形態においては、製剤は、溶解速度調節ポリマー膜を伴わない即時放出薬剤含有粒子と、たとえば経口投与後２〜４時間の遅延時間などを示す遅延放出ビーズの混合物を含み、これにより２パルス放出プロフィールを提供する。さらに他の実施形態においては、製剤は：１〜３時間の遅延時間を示す第１の種類および４〜６時間の遅延時間を示す第２の種類の２種類の遅延放出ビーズの混合物を含む。
【００５６】
一部の実施形態においては、活性な核は、遅延時間の有無にかかわらず所望の放出プロフィールを得るために１つまたはそれ以上の溶解速度調節ポリマーでコーティングされる。内層膜は主として水または体液の核への吸収後の薬剤放出速度を調節できる一方、外層膜は所望の遅延時間（水または体液の核への吸収後の薬剤放出がほとんどない時間）を提供することができる。内層膜は非水溶性ポリマー、または非水溶性ポリマーと水溶性ポリマーの混合物を含みうる。
【００５７】
主として６時間までの遅延時間を調節する外膜に適したポリマーは、上述の腸溶性ポリマー、および１０から５０重量％の非水溶性ポリマーを含みうる。腸溶性ポリマーに対する非水溶性ポリマーの比率は４：１から１：２まで変動することがあり、好ましくはポリマーは約１：１の比率で存在する。典型的に用いられる非水溶性ポリマーはエチルセルロースである。
【００５８】
典型的な非水溶性ポリマーは、エチルセルロース、ポリ酢酸ビニル（ＢＡＳＦ製Ｋｏｌｌｉｃｏａｔ  ＳＲ＃０Ｄ）、アクリル酸エチルおよびメタクリル酸メチルベースの中性コポリマー、ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）ＮＥ、ＲＳおよびＲＳ３０Ｄ、ＲＬまたはＲＬ３０Ｄなどの四級アンモニウム基を有するアクリル酸およびメタクリル酸エステルのコポリマーを含む。典型的な水溶性ポリマーは、使用する水および溶媒またはラテックス懸濁液ベースコーティング製剤中の活性（有効成分）の溶解度に応じて約１重量％から１０重量％までの範囲の濃さにある低分子量ＨＰＭＣ、ＨＰＣ、メチルセルロース、ポリエチレングリコール（分子量＞３０００のＰＥＧ）を含む。水溶性ポリマーに対する非水溶性ポリマーは、典型的には９５：５から６０：４０、好ましくは８０：２０から６５：３５の間で変動する。
【００５９】
好ましくは、製剤は、人が通常排尿衝動のために覚醒するであろう時に製剤が薬剤を放出することを特徴とする、平穏な睡眠の中断を制限するための放出プロフィールで設計される。たとえば、午後１１時に眠り始め通常午前１２：３０，午前３：００および午前６：００に排尿のために覚醒する人を考えられたい。遅延放出担体は、午前１２：１５に薬剤を送達することによって排尿の必要性をおそらくは２〜３時間遅延させることが可能であろう。
【００６０】
医薬組成物は、連日投与しても、または必要に応じたベースで投与してもよい。一定の実施形態においては、医薬組成物は就寝の前に対象に投与される。一部の実施形態においては、医薬組成物は就寝の直前に投与される。一部の実施形態においては、医薬組成物は就寝より約２時間前以内、好ましくは就寝より約１時間前以内に投与される。他の実施形態においては、医薬組成物は就寝の約２時間前に投与される。さらなる実施形態においては、医薬組成物は就寝より少なくとも２時間前に投与される。他の実施形態においては、医薬組成物は就寝の約１時間前に投与される。さらなる実施形態においては、医薬組成物は就寝より少なくとも１時間前に投与される。またさらなる実施形態においては、医薬組成物は就寝前１時間未満に投与される。さらなる他の実施形態においては、医薬組成物は就寝の直前に投与される。好ましくは、医薬組成物は経口投与される。
【００６１】
即時コンポーネントまたは遅延放出コンポーネント中の有効物質の適切な用量（「治療的に有効な量」）は、たとえば状態の重症度および経過、投与形態、個々の物質のバイオアベイラビリティ、患者の年齢および体重、患者の臨床履歴および有効物質に対する反応、医師の裁量などに依存するであろう。
【００６２】
一般的な提案として、即時放出コンポーネントまたは遅延放出コンポーネント中の有効物質の治療的に有効な量は、１回の投与によるにせよまたはそれ以上の投与によるにせよ、約１００μｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲で投与される。一部の実施形態においては、連日投与される各有効物質の範囲は約１００μｇ／ｋｇ体重／日から約５０ｍｇ／ｋｇ体重／日、１００μｇ／ｋｇ体重／日から約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日、１００μｇ／ｋｇ体重／日から約１ｍｇ／ｋｇ体重／日、１００μｇ／ｋｇ体重／日から約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日、５００μｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日、５００μｇ／ｋｇ体重／日から約５０ｍｇ／ｋｇ体重／日、５００μｇ／ｋｇ体重／日から約５ｍｇ／ｋｇ体重／日、１ｍｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日、１ｍｇ／ｋｇ体重／日から約５０ｍｇ／ｋｇ体重／日、１ｍｇ／ｋｇ体重／日から約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日、５ｍｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日、５ｍｇ／ｋｇ体重／日から約５０ｍｇ／ｋｇ体重／日、１０ｍｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日、および１０ｍｇ／ｋｇ体重／日から約５０ｍｇ／ｋｇ体重／日である。
【００６３】
本願に記載の有効物質は、１ｍｇから２０００ｍｇ、５ｍｇから２０００ｍｇ、１０ｍｇから２０００ｍｇ、５０ｍｇから２０００ｍｇ、１００ｍｇから２０００ｍｇ、２００ｍｇから２０００ｍｇ、５００ｍｇから２０００ｍｇ、５ｍｇから１８００ｍｇ、１０ｍｇから１６００ｍｇ、５０ｍｇから１６００ｍｇ、１００ｍｇから１５００ｍｇ、１５０ｍｇから１２００ｍｇ、２００ｍｇから１０００ｍｇ、３００ｍｇから８００ｍｇ、３２５ｍｇから５００ｍｇ、１ｍｇから１０００ｍｇ、１ｍｇから５００ｍｇ、１ｍｇから２００ｍｇ、５ｍｇから１０００ｍｇ、５ｍｇから５００ｍｇ、５ｍｇから２００ｍｇ、１０ｍｇから１０００ｍｇ、１０ｍｇから５００ｍｇ、１０ｍｇから２００ｍｇ、５０ｍｇから１０００ｍｇ、５０ｍｇから５００ｍｇ、５０ｍｇから２００ｍｇ、１００ｍｇから２５０ｍｇ、１００ｍｇから５００ｍｇ、２５０ｍｇから１０００ｍｇ、２５０ｍｇから５００ｍｇ、５００ｍｇから１０００ｍｇ、５００ｍｇから２０００ｍｇの単一用量または複合用量範囲で、連日経口投与を目的として即時放出コンポーネントまたは遅延放出コンポーネントまたはその組み合わせに含まれうる。予測されるように、用量は状態、サイズ、年齢および患者の状態に依存するであろう。
【００６４】
一部の実施形態においては、医薬組成物は単一の鎮痛剤を含む。１つの実施形態においては、単一の鎮痛剤はアスピリンである。他の実施形態においては、単一の鎮痛剤はイブプロフェンである。他の実施形態においては、単一の鎮痛剤はナプロキセンナトリウムである。他の実施形態においては、単一の鎮痛剤はインドメタシンである。他の実施形態においては、単一の鎮痛剤はナブメトンである。他の実施形態においては、単一の鎮痛剤はアセトアミノフェンである。
【００６５】
一部の実施形態においては、単一の鎮痛剤は１ｍｇから２０００ｍｇ、５ｍｇから２０００ｍｇ、２０ｍｇから２０００ｍｇ、５ｍｇから１０００ｍｇ、２０ｍｇから１０００ｍｇ、５０ｍｇから５００ｍｇ、１００ｍｇから５００ｍｇ、２５０ｍｇから５００ｍｇ、２５０ｍｇから１０００ｍｇまたは５００ｍｇから１０００ｍｇの１日用量で投与される。一定の実施形態においては、医薬組成物はアセチルサリチル酸、イブプロフェン、ナプロキセンナトリウム、インドメタシン、ナブメトンまたはアセトアミノフェンを単一の鎮痛剤として含み、かつ鎮痛剤は５ｍｇから２０００ｍｇ、２０ｍｇから２０００ｍｇ、５ｍｇから１０００ｍｇ、２０ｍｇから１０００ｍｇ、５０ｍｇから５００ｍｇ、１００ｍｇから５００ｍｇ、２５０ｍｇから５００ｍｇ、２５０ｍｇから１０００ｍｇまたは５００ｍｇから１０００ｍｇの範囲の１日用量で経口投与される。一部の実施形態においては、１ｍｇから２０００ｍｇ、５ｍｇから２０００ｍｇ、２０ｍｇから２０００ｍｇ、５ｍｇから１０００ｍｇ、２０ｍｇから１０００ｍｇ、５０ｍｇから５００ｍｇ、１００ｍｇから５００ｍｇ、２５０ｍｇから５００ｍｇ、２５０ｍｇから１０００ｍｇまたは５００ｍｇから１０００ｍｇの１日用量で第２の鎮痛剤が投与される。
【００６６】
他の実施形態においては、医薬組成物は一対の鎮痛剤を含む。そのような一対の鎮痛剤の例はアセチルサリチル酸とイブプロフェン、アセチルサリチル酸とナプロキセンナトリウム、アセチルサリチル酸とナブメトン、アセチルサリチル酸とアセトアミノフェン、アセチルサリチル酸とインドメタシン、イブプロフェンとナプロキセンナトリウム、イブプロフェンとナブメトン、イブプロフェンとアセトアミノフェン、イブプロフェンとインドメタシン、ナプロキセンナトリウムとナブメトン、ナプロキセンナトリウムとアセトアミノフェン、ナプロキセンナトリウムとインドメタシン、ナブメトンとアセトアミノフェン、ナブメトンとインドメタシン、およびアセトアミノフェンとインドメタシンを含むが、これに限定されない。鎮痛剤の対は、５ｍｇから２０００ｍｇ、２０ｍｇから２０００ｍｇ、１００ｍｇから２０００ｍｇ、２００ｍｇから２０００ｍｇ、５００ｍｇから２０００ｍｇ、５ｍｇから１５００ｍｇ、２０ｍｇから１５００ｍｇ、１００ｍｇから１５００ｍｇ、２００ｍｇから１５００ｍｇ、５００ｍｇから１５００ｍｇ、５ｍｇから１０００ｍｇ、２０ｍｇから１０００ｍｇ、１００ｍｇから１０００ｍｇ、２５０ｍｇから５００ｍｇ、２５０ｍｇから１０００ｍｇ、２５０ｍｇから１５００ｍｇ、５００ｍｇから１０００ｍｇ、５００ｍｇから１５００ｍｇ、１０００ｍｇから１５００ｍｇおよび１０００ｍｇから２０００ｍｇの範囲の複合用量で、０．１：１から１０：１、０．２：１から５：１または０．３：１から３：１の範囲の重量比で混合される。１つの実施形態においては、鎮痛剤の対は重量比１：１で混合される。
【００６７】
一部の他の実施形態においては、本願の医薬組成物は１つまたはそれ以上の抗ムスカリン剤をさらに含む。抗ムスカリン剤の例は、オキシブチニン、ソリフェナシン、ダリフェナシン、フェソテロジン、トルテロジン、トロスピウム、およびアトロピンを含むが、これに限定されない。抗ムスカリン剤の１日用量は、０．０１ｍｇから１００ｍｇ、０．１ｍｇから１００ｍｇ、１ｍｇから１００ｍｇ、１０ｍｇから１００ｍｇ、０．０１ｍｇから２５ｍｇ、０．１ｍｇから２５ｍｇ、１ｍｇから２５ｍｇ、１０ｍｇから２５ｍｇ、０．０１ｍｇから１０ｍｇ、０．１ｍｇから１０ｍｇ、１ｍｇから１０ｍｇ、１０ｍｇから１００ｍｇおよび１０ｍｇから２５ｍｇの範囲にある。
【００６８】
本願の他の態様は、即時放出製剤に配合された医薬組成物を、それを必要とする人に対して投与することにより排尿頻度を低下させるための方法に関する。一部の実施形態においては、医薬組成物は１つまたはそれ以上の鎮痛剤および１つまたはそれ以上の抗ムスカリン剤を含む。他の実施形態においては、医薬組成物は１つまたはそれ以上の鎮痛剤および１つまたはそれ以上の抗利尿剤を含む。さらに他の実施形態においては、医薬組成物は１つまたはそれ以上の鎮痛剤、１つまたはそれ以上の抗ムスカリン剤、および１つまたはそれ以上の抗利尿剤を含む。
【００６９】
他の実施形態においては、本願の医薬組成物は１つまたはそれ以上の鎮痙剤をさらに含む。鎮痙剤の例はカリソプロドール、ベンゾジアゼピン類、バクロフェン、シクロベンザプリン、メタキサロン、メトカルバモール、クロニジン、クロニジン類似体、およびダントロレンを含むが、これに限定されない。一部の実施形態においては、鎮痙剤は１ｍｇから１０００ｍｇ、１ｍｇから１００ｍｇ、１０ｍｇから１０００ｍｇ、１０ｍｇから１００ｍｇ、２０ｍｇから１０００ｍｇ、２０ｍｇから８００ｍｇ、２０ｍｇから５００ｍｇ、２０ｍｇから２００ｍｇ、５０ｍｇから１０００ｍｇ、５０ｍｇから８００ｍｇ、５０ｍｇから２００ｍｇ、１００ｍｇから８００ｍｇ、１００ｍｇから５００ｍｇ、２００ｍｇから８００ｍｇ、および２００ｍｇから５００ｍｇの１日用量で用いられる。鎮痙剤は、即時放出、遅延延長放出またはその組み合わせを目的として、単一でまたは他の有効成分と共に医薬組成物に配合しうる。
【００７０】
一定の実施形態においては、医薬組成物は２つまたはそれ以上の鎮痛剤を含む。他の実施形態においては、医薬組成物は１つまたはそれ以上の鎮痛剤および１つまたはそれ以上の抗ムスカリン剤および／または１つまたはそれ以上の抗利尿剤を含む。医薬組成物は錠剤、カプセル剤、糖剤、散剤、顆粒剤、液剤、ゲル剤、または乳濁剤の形態に配合されうる。前記液剤、ゲル剤または乳濁剤は、裸の形態またはカプセル内に収容されて対象に摂取されうる。
【００７１】
一定の実施形態においては、鎮痛剤はサリチラート類、アスピリン、サリチル酸、サリチル酸メチル、ジフルニサール、サルサレート、オルサラジン、スルファサラジン、パラアミノフェノール誘導体、アセトアニリド、アセトアミノフェン、フェナセチン、フェナメート類、メフェナム酸、メクロフェナメート、メクロフェナム酸ナトリウム、ヘテロアリール酢酸誘導体、トルメチン、ケトロラク、ジクロフェナク、プロピオン酸誘導体、イブプロフェン、ナプロキセンナトリウム、ナプロキセン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、フルルビプロフェン、オキサプロジン；エノール酸、オキシカム誘導体、ピロキシカム、メロキシカム、テノキシカム、アンピロキシカム、ドロキシカム、ピボキシカム、ピラゾロン誘導体、フェニルブタゾン、オキシフェンブタゾン、アンチピリン、アミノピリン、ジピロン、コキシブ類、セレコキシブ、ロフェコキシブ、ナブメトン、アパゾン、ニメスリド、インドメタシン、スリンダク、エトドラク、およびイソブチルフェニルプロピオン酸からなる群から選択される。抗ムスカリン剤はオキシブチニン、ソリフェナシン、ダリフェナシンおよびアトロピンからなる群から選択される。
【００７２】
一部の実施形態においては、医薬組成物は単一の鎮痛剤および単一の抗ムスカリン剤を含む。１つの実施形態においては、単一の鎮痛剤はアスピリンである。他の実施形態においては、単一の鎮痛剤はイブプロフェンである。他の実施形態においては、単一の鎮痛剤はナプロキセンナトリウムである。他の実施形態においては、単一の鎮痛剤はインドメタシンである。他の実施形態においては、単一の鎮痛剤はナブメトンである。他の実施形態においては、単一の鎮痛剤はアセトアミノフェンである。鎮痛剤および抗ムスカリン剤は上述の範囲の用量で投与しうる。
【００７３】
本願の他の態様は、（１）１つまたはそれ以上の鎮痛剤および（２）１つまたはそれ以上の抗利尿剤をそれを必要とする対象に投与することにより夜間頻尿を治療するための方法に関する。一定の実施形態においては、抗利尿剤は：（１）バソプレシン分泌を上昇させ；（２）バソプレシン受容体の活性化を高め；（３）心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）またはＣ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）の分泌を低下させるか；または（４）ＡＮＰおよび／またはＣＮＰ受容体活性化を低下させるよう作用する。
【００７４】
典型的な抗利尿剤は、抗利尿ホルモン（ＡＤＨ）、アンジオテンシンＩＩ、アルドステロン、バソプレシン、バソプレシン類似体（例：デスモプレシンアルギプレシン、リプレシン、フェリプレシン、オルニプレシン、テルリプレシン）；バソプレシン受容体作動物質、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）およびＣ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）受容体（すなわちＮＰＲ１、ＮＰＲ２、ＮＰＲ３）拮抗物質（例：ＨＳ−１４２−１、イサチン、［Ａｓｕ７，２３’］ｂ−ＡＮＰ−（７−２８）］、アナンチン、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｏｅｒｕｌｅｓｃｅｎｓ由来環状ペプチド、および３Ｇ１２モノクローナル抗体）、ソマトスタチン２型受容体拮抗物質（例：ソマトスタチン）、および医薬品として許容できるその誘導体、類似体、塩、水和物および溶媒和物を含むが、これに限定されない。
【００７５】
一定の実施形態においては、１つまたはそれ以上の鎮痛剤および１つまたはそれ以上の抗利尿剤は遅延放出を目的として配合される。
【００７６】
本発明の他の態様は、それを必要とする人に対し、１つの利尿剤を含む第１の医薬組成物を投与し、その後１つまたはそれ以上の鎮痛剤を含む第２の医薬組成物を投与することにより夜間頻尿を治療するための方法に関する。第１の医薬組成物は、投与より６時間以内に利尿効果を示すよう投与および配合されかつ就寝より少なくとも８時間前に投与される。第２の医薬組成物は就寝の２時間前以内に投与される。
【００７７】
利尿剤の例は、ＣａＣｌ２およびＮＨ４Ｃｌなどの酸性化塩；アムホテリシンＢおよびクエン酸リチウムなどのアルギニンバソプレシン受容体２拮抗物質；アキノキリンソウおよびＪｕｎｉｐｅなどの水利尿薬；ドパミンなどのＮａ−Ｈ交換拮抗物質；アセタゾラミドおよびドルゾラミドなどの炭酸脱水素酵素阻害物質；ブメタニド、エタクリン酸、フロセミドおよびトルセミドなどのループ利尿剤；グルコースおよびマンニトールなどの浸透圧利尿剤；アミロライド、スピロノラクトン、トリアムテレン、カンレノ酸カリウムなどのカリウム保持性利尿剤；ベンドロフルメチアジドおよびヒドロクロロチアジドなどのチアジド類；およびカフェイン、テオフィリンおよびテオブロミンなどのキサンチン類を含むがこれに限定されない。
【００７８】
一部の実施形態においては、第２の医薬組成物は１つまたはそれ以上の抗ムスカリン剤をさらに含む。抗ムスカリン剤の例は、オキシブチニン、ソリフェナシン、ダリフェナシン、フェソテロジン、トルテロジン、トロスピウム、およびアトロピンを含むが、これに限定されない。第２の医薬組成物は、即時放出製剤または遅延放出製剤に配合されうる。１つの実施形態においては、第１の医薬組成物は即時放出を目的として配合されかつ第２の医薬組成物は遅延放出を目的として配合される。
【００７９】
一部の実施形態においては、第２の医薬組成物は１つまたはそれ以上の抗利尿剤をさらに含む。
【００８０】
本願の他の態様は、複数の有効成分および医薬品として許容できる担体を含む医薬組成物に関する。一部の実施形態においては、複数の有効成分は２つまたはそれ以上の鎮痛剤を含む。他の実施形態においては、複数の有効成分は１つまたはそれ以上の鎮痛剤および１つまたはそれ以上の抗ムスカリン剤を含む。他の実施形態においては、複数の有効成分は１つまたはそれ以上の鎮痛剤および１つまたはそれ以上の抗利尿剤を含む。さらに他の実施形態においては、複数の有効成分は１つまたはそれ以上の鎮痛剤、１つまたはそれ以上の抗利尿剤、および１つまたはそれ以上の抗ムスカリン剤を含む。他の実施形態においては、前記複数の有効成分のうち少なくとも１つは遅延放出を目的として配合される。
【００８１】
一部の実施形態においては、医薬組成物はアセチルサリチル酸、イブプロフェン、ナプロキセンナトリウム、ナブメトン、アセトアミノフェンおよびインドメタシンからなる群から選択される２つの鎮痛剤を含む。他の実施形態においては、医薬組成物はセチルサリチル酸、イブプロフェン、ナプロキセンナトリウム、ナブメトン、アセトアミノフェンおよびインドメタシンからなる群から選択される１つまたはそれ以上の鎮痛剤；およびオキシブチニン、ソリフェナシン、ダリフェナシンおよびアトロピンからなる群から選択される１つの抗ムスカリン剤を含む。
【００８２】
本願で用いる「医薬品として許容できる担体」は、任意のかつ全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張化および吸収遅延剤、甘味料などを含む。医薬品として許容できる担体は、着香料、甘味料および特定の治療組成物を調製するために必要とされうる緩衝化剤および吸収剤などの種々の材料を含むがこれに限定されない広い範囲の材料から調製されうる。そのような媒体および物質の医薬品として活性な物質との使用は技術上周知である。任意の従来の培地または物質が有効成分に適合しない場合を除き、治療組成物におけるその使用は意図されている。
【００８３】
本願の他の態様は、それを必要とする対象に対し、薬剤抵抗性の発生を予防するために２つまたはそれ以上の鎮痛剤を交互に投与することにより排尿頻度を低下させるための方法に関する。１つの実施形態においては、方法は第１の期間に第１の鎮痛剤を投与することおよびその後に第２の期間に第２の鎮痛剤を投与することを含む。他の実施形態においては、方法は第３の期間に第３の鎮痛剤を投与することをさらに含む。第１、第２および第３の鎮痛剤は互いに異なり、かつ：サリチラート類、アスピリン、サリチル酸、サリチル酸メチル、ジフルニサール、サルサレート、オルサラジン、スルファサラジン、パラアミノフェノール誘導体、アセトアニリド、アセトアミノフェン、フェナセチン、フェナメート類、メフェナム酸、メクロフェナメート、メクロフェナム酸ナトリウム、ヘテロアリール酢酸誘導体、トルメチン、ケトロラク、ジクロフェナク、プロピオン酸誘導体、イブプロフェン、ナプロキセンナトリウム、ナプロキセン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、フルルビプロフェン、オキサプロジン；エノール酸、オキシカム誘導体、ピロキシカム、メロキシカム、テノキシカム、アンピロキシカム、ドロキシカム、ピボキシカム、ピラゾロン誘導体、フェニルブタゾン、オキシフェンブタゾン、アンチピリン、アミノピリン、ジピロン、コキシブ類、セレコキシブ、ロフェコキシブ、ナブメトン、アパゾン、ニメスリド、インドメタシン、スリンダク、エトドラク、およびイソブチルフェニルプロピオン酸からなる群から選択されうる。
【００８４】
１つの実施形態においては、第１の鎮痛剤はアセトアミノフェン、第２の鎮痛剤はイブプロフェンかつ第３の鎮痛剤はナプロキセンナトリウムである。各期間の長さは、各鎮痛剤に対する対象の反応に応じて異なる。一部の実施形態においては、各期間は３日から３週間続く。他の実施形態においては、第１，第２および第３の鎮痛剤のうち１つまたはそれ以上が遅延放出を目的として配合される。
【００８５】
本発明は、制限的であると解釈されるべきでない以下の実施例によってさらに例示される。本願の全文に渡って引用された全ての参照文献、特許および公開特許明細書の内容は、その全文を参照文献として本願に取り込む。
【実施例１】
【００８６】
（排尿衝動の阻害）
各々が早すぎる排尿衝動または尿意を経験し、適度な休息を感じる十分な時間睡眠するその能力が妨げられている男性および女性の志願被験者２０名を組み入れた。各被験者は、就寝前にイブプロフェン４００〜８００ｍｇを単回用量として摂取した。少なくとも１４名の被験者が、排尿衝動によって目覚める頻度が高くないためにより良く休息が取れるようになったと報告した。
【００８７】
数例の被験者は、数週間イブプロフェンを夜間に使用した後、排尿衝動の頻度の減少による利益はもはや認識されなかったと報告した。しかし、これらの被験者は、いずれも投与量の摂取を数日控えると利益が回復するとさらに報告した。
【実施例２】
【００８８】
（炎症性および非炎症性刺激物へのマクロファージの反応に対する鎮痛剤、ボツリヌス神経毒素および抗ムスカリン剤の効果）
（実験デザイン）
本試験は、Ｃｏｘ−２およびプロスタグランジン（ＰＧＥ、ＰＧＨなど）を介した炎症性および非炎症性刺激物に対するマクロファージ反応を調節する際の、鎮痛剤および抗ムスカリン剤の用量およびインビトロ有効性を判定するようデザインされている。膀胱細胞における炎症および非炎症エフェクターに対するベースライン（用量および動態）反応を確立する。簡単に述べると、多様なエフェクターの存在下および非存在下で培養細胞を鎮痛剤および／または抗ムスカリン剤に曝露する。
【００８９】
エフェクターは：炎症性刺激物として炎症性物質かつＣＯＸ２誘導物質であるリポ多糖（ＬＰＳ）；非炎症性刺激物として平滑筋収縮刺激物物質であるカルバコールまたはアセチルコリン；陽性対照として既知のアセチルコリン放出阻害物質であるボツリヌス神経毒素Ａ；および細胞内でシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ１およびＣＯＸ２）および末端プロスタグランジンシンターゼによるアラキドン酸（ＡＡ）、γ−リノレン酸（ＤＧＬＡ）またはエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の連続酸化後に生成されるプロスタグランジンの前駆体としてＡＡ、ＤＧＬＡまたはＥＰＡを含む。
【００９０】
鎮痛剤は：アスピリンなどのサリチラート、アドビル、モトリン、ヌプリンおよびメディプレンなどのイソブチルプロパン酸フェノール酸誘導体（イブプロフェン）、アレベ、アナプロックス、アンタルジン、フェミナックスウルトラ、フラナックス、インザ、ミドール長時間鎮痛、ナルゲシン、ナポシン、ナプレラン、ナプロゲシック、ナプロシン、ナプロシン懸濁液、ＥＣ−ナプロシン、ナロシン、プロキセン、シンフレックスおよびゼノビドなどのナプロキセンナトリウム、インドメタシン（インドシン）などの酢酸誘導体、ナブメトンまたはレラフェンなどの１−ナフタレン酢酸誘導体、アセトアミノフェンまたはパラセタモール（タイレノール）などのＮ−アセチル−パラ−アミノフェノール（ＡＰＡＰ）誘導体、およびセレコキシブを含む。
【００９１】
抗ムスカリン薬は：オキシブチニン、ソリフェナシン、ダリフェナシンおよびアトロピンを含む。
【００９２】
マクロファージを：
１）種々の用量の各鎮痛剤単独。
（２）ＬＰＳ存在下で種々の用量の各鎮痛剤。
（３）カルバコールまたはアセチルコリン存在下で種々の用量の各鎮痛剤。
（４）ＡＡ、ＤＧＬＡまたはＥＰＡ存在下で種々の用量の各鎮痛剤。
（５）種々の用量のボツリヌス神経毒素Ａ単独。
（６）ＬＰＳ存在下で種々の用量のボツリヌス神経毒素Ａ。
（７）カルバコールまたはアセチルコリン存在下で種々の用量のボツリヌス神経毒素Ａ。
（８）ＡＡ、ＤＧＬＡまたはＥＰＡ存在下で種々の用量のボツリヌス神経毒素Ａ。
（９）種々の用量の各抗ムスカリン剤単独。
（１０）ＬＰＳ存在下で種々の用量の各抗ムスカリン剤。
（１１）カルバコールまたはアセチルコリン存在下で種々の用量の各抗ムスカリン剤。
（１２）ＡＡ、ＤＧＬＡまたはＥＰＡ存在下で種々の用量の各抗ムスカリン剤による短時間（１〜２時間）または長時間（２４〜４８時間）の刺激に付す。
【００９３】
次に、ＰＧＨ２、ＰＧＥ、ＰＧＥ２、プロスタサイジン、トロンボキサン、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦ−αの放出、ＣＯＸ２活性、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰの産生、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦ−αおよびＣＯＸ２  ｍＲＮＡの産生、およびＣＤ８０、ＣＤ８６およびＭＨＣクラスＩＩ分子の表面発現について細胞を分析する。
【００９４】
（材料および方法）
（マクロファージ細胞）
本試験ではマウスＲＡＷ２６４．７またはＪ７７４マクロファージ細胞（ＡＴＣＣより入手）を用いた。細胞は、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、および１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ１６４０を含有する培地で維持した。細胞は、５％ＣＯ２雰囲気下３７℃で培養し、週に１回分割（継代）した。
【００９５】
（マクロファージ細胞のインビトロ鎮痛剤処理）
ＲＡＷ２６４．７マクロファージ細胞は、細胞培地１００μＬを１．５×１０５個細胞／ウェルの細胞密度で９６ウェルプレートに播種した。細胞は、（１）種々の濃度の鎮痛剤（アセトアミノフェン、アスピリン、イブプロフェンまたはナプロキセン）、（２）マクロファージ細胞に対する炎症性刺激物のエフェクターである、種々の濃度のリポ多糖（ＬＰＳ）、（３）非炎症性刺激物のエフェクターである、種々の濃度のカルバコールまたはアセチルコリン、（４）鎮痛剤とＬＰＳまたは（５）鎮痛剤とカルバコールまたはアセチルコリンで処理した。簡単に述べると、鎮痛剤を無ＦＢＳ培地（すなわち１５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、および１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ１６４０）に溶解し、同培地で連続希釈することにより所望の濃度に希釈した。ＬＰＳ非存在下で鎮痛剤処理する細胞については、鎮痛剤溶液５０μＬと無ＦＢＳ培地５０μＬを各ウェルに加えた。ＬＰＳ存在下で鎮痛剤処理する細胞については、鎮痛剤溶液５０μＬと無ＦＢＳ培地中のＬＰＳ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ由来）５０μＬを各ウェルに加えた。全ての条件を２回ずつ試験した。
【００９６】
２４または４８時間培養後、培養上清１５０μＬを採取し、８，０００ｒｐｍ、４℃で２分間遠心分離して細胞および残渣を除去し、ＥＬＩＳＡによるサイトカイン反応の分析のため−７０℃で保存した。細胞は、リン酸緩衝液（ＰＢＳ）５００μＬに捕集して遠心分離（１，５００ｒｐｍ、４℃で５分間）することにより洗浄した。その後、細胞の半分は液体窒素中で急速冷凍し、さらに−７０℃で保存した。残りの細胞は蛍光モノクローナル抗体で染色し、かつフローサイトメトリーで分析した。
【００９７】
（共刺激分子発現のフローサイトメトリー分析）
フローサイトメトリー分析については、マクロファージを１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液（２％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）および０．０１％ＮａＮ３を含有するリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ））で希釈し、ＦＩＴＣ−コンジュゲート抗ＣＤ４０、ＰＥ−コンジュゲート抗ＣＤ８０、ＰＥコンジュゲート抗ＣＤ８６抗体、抗ＭＨＣクラスＩＩ（Ｉ−Ａｄ）ＰＥ（ＢＤバイオサイエンス）を添加して４℃で３０分間染色した。その後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液３００μＬ中で遠心分離（１，５００ｒｐｍ、４℃で５分間）することにより洗浄した。２回目の洗浄後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液２００μＬに再懸濁し、さらにＡｃｃｕｒｉ  Ｃ６フローサイトメーター（ＢＤバイオサイエンス）により所与のマーカー（単陽性）、またはマーカーの組み合わせ（二重陽性）を発現した細胞の割合を分析した。
【００９８】
（ＥＬＩＳＡによるサイトカイン反応の分析）
培養上清をサイトカイン特異的ＥＬＩＳＡに付し、鎮痛剤、ＬＰＳ単独またはＬＰＳと鎮痛剤の組み合わせにより処理したマクロファージの培養におけるＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＴＮＦ−α反応を判定した。分析は、０．１Ｍ重炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．５）中の抗マウスＩＬ−６、ＴＮＡ−αｍＡｂｓ（ＢＤバイオサイエンス）またはＩＬ−１βｍＡｂ（Ｒ＆Ｄシステムズ）１００μＬで一晩コーティングしたＮｕｎｃ  ＭａｘｉＳｏｒｐ  Ｉｍｍｕｎｏｐｌａｔｅｓ（Ｎｕｎｃ）上で実施した。ＰＢＳ（２００μＬ／ウェル）で２回洗浄した後、各ウェルにＰＢＳ３％ＢＳＡ２００μＬを添加し（ブロッキング）さらにプレートを室温で２時間インキュベートした。２００μＬ／ウェルを添加することによりプレートを再度２回洗浄し、サイトカイン標準液および培養上清の連続希釈１００μＬをそれぞれ２ウェルに添加し、さらにプレートを４℃で一晩インキュベートした。最後に、プレートを２回洗浄し、さらに二次ビオチニル化抗マウスＩＬ−６、ＴＮＡ−α  ｍＡｂｓ（ＢＤバイオサイエンス）またはＩＬ−１β（Ｒ＆Ｄシステムズ）１００μＬ、その後ペルオキシダーゼ標識ヤギ抗ビオチンｍＡｂ（ベクターラボラトリーズ）でインキュベートした。２，２’−アジノ−ビス（３）−エチルベンジルチアゾリン−６−スルホン酸（ＡＢＴＳ）基質およびＨ２Ｏ２（シグマ）の添加によって呈色反応を発生させ、さらにＶｉｃｔｏｒ（登録商標）Ｖマルチラベルプレートリーダー（パーキンエルマー）により４１５ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００９９】
（ＣＯＸ２活性およびｃＡＭＰおよびｃＧＭＰの産生の測定）
培養マクロファージ中のＣＯＸ２活性は、ＣＯＸ２活性アッセイにより測定した。ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰの産生は、ｃＡＭＰアッセイおよびｃＧＭＰアッセイにより測定した。これらのアッセイは当該技術で常用的に実施される。
【０１００】
（結果）
表１は、Ｒａｗ２６４マクロファージ細胞株を用いて実施した実験、および共刺激分子ＣＤ４０およびＣＤ８０の細胞表面発現に対する鎮痛剤の効果についての主要な所見を要約する。これらの分子の発現はＣＯＸ２および炎症性シグナルによって刺激されるので、ＣＯＸ２阻害の機能的結果を判定するよう評価した。
【０１０１】
表２に示すように、アセトアミノフェン、アスピリン、イブプロフェンおよびナプロキセンは、共刺激分子の発現を阻害するのではなくむしろ促進するように見受けられる最高用量（すなわち５×１０６ｎＭ）を除き、全ての試験用量（すなわち５×１０５ｎＭ、５×１０４ｎＭ、５×１０３ｎＭ、５×１０２ｎＭ、５０ｎＭおよび５ｎＭ）でマクロファージによる共刺激分子ＣＤ４０およびＣＤ８０の基底発現を阻害する。図１Ａおよび１Ｂに示すように、ＣＤ４０およびＣＤ５０発現に対するそのような阻害効果は、０．０５ｎＭ（すなわち０．００００５μＭ）と低い鎮痛剤用量で認められた。この所見は、小用量の鎮痛剤の制御放出は大用量の急激な送達よりも好ましくなりうるという概念を裏付ける。実験より、アセトアミノフェン、アスピリン、イブプロフェンおよびナプロキセンがＬＰＳの誘導によるＣＤ４０およびＣＤ８０の発現に対して同様の阻害効果を有することも明らかになった。
【０１０２】
（表１．実験の要約）
【表１】
2019055969.tif 000003
【０１０３】
（表２．主要な所見の要約）
【表２】
2019055969.tif 000004
【０１０４】
表３は、ヒト成人における経口治療用量の投与後の鎮痛剤の血清レベルを測定した数件の試験結果を要約する。表３に示すように、経口治療用量の投与後の最大血清レベルは、１０４から１０５ｎＭの範囲内にある。したがって、表２のインビトロで試験した鎮痛剤の用量は、ヒトにおいてインビボで達成可能な濃度の範囲を包含する。
【０１０５】
（表３．経口治療用量投与後のヒト血液における鎮痛剤の血清レベル）
【表３】
2019055969.tif 000005
【実施例３】
【０１０６】
（炎症性および非炎症性刺激物への膀胱平滑筋細胞の反応に対する鎮痛剤、ボツリヌス神経毒素および抗ムスカリン剤の効果）
（実験デザイン）
本試験は、実施例２で判定した鎮痛剤の至適用量が細胞培養または組織培養中の膀胱平滑筋細胞にどのように作用するか特性解析し、かつ異なる分類の鎮痛剤が協調してＣＯＸ２およびＰＧＥ２反応をより効率よく阻害することができるか検討するようデザインされる。
【０１０７】
エフェクター、鎮痛剤および抗ムスカリン剤は実施例２に記載されている。
【０１０８】
マウス膀胱平滑筋細胞の一次培養を：
（１）種々の用量の各鎮痛剤単独。
（２）ＬＰＳ存在下で種々の用量の各鎮痛剤。
（３）カルバコールまたはアセチルコリン存在下で種々の用量の各鎮痛剤。
（４）ＡＡ、ＤＧＬＡまたはＥＰＡ存在下で種々の用量の各鎮痛剤。
（５）種々の用量のボツリヌス神経毒素Ａ単独。
（６）ＬＰＳ存在下で種々の用量のボツリヌス神経毒素Ａ。
（７）カルバコールまたはアセチルコリン存在下で種々の用量のボツリヌス神経毒素Ａ。
（８）ＡＡ、ＤＧＬＡまたはＥＰＡ存在下で種々の用量のボツリヌス神経毒素Ａ。
（９）種々の用量の各抗ムスカリン剤単独。
（１０）ＬＰＳ存在下で種々の用量の各抗ムスカリン剤。
（１１）カルバコールまたはアセチルコリン存在下で種々の用量の各抗ムスカリン剤。
（１２）ＡＡ、ＤＧＬＡまたはＥＰＡ存在下で種々の用量の各抗ムスカリン剤による短時間（１〜２時間）または長時間（２４〜４８時間）の刺激に付す。
【０１０９】
次に、ＰＧＨ２、ＰＧＥ、ＰＧＥ２、プロスタサイジン、トロンボキサン、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦ−αの放出、ＣＯＸ２活性、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰの産生、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦ−αおよびＣＯＸ２  ｍＲＮＡの産生、およびＣＤ８０、ＣＤ８６およびＭＨＣクラスＩＩ分子の表面発現について細胞を分析する。
【０１１０】
（材料および方法）
（マウス膀胱細胞の分離および精製）
安楽死動物Ｃ５７ＢＬ／６マウス（８〜１２週齢）より膀胱細胞を摘出し、さらに酵素消化により細胞を分離した後パーコール勾配上で精製した。簡単に述べると、マウス１０匹に由来する膀胱を、消化緩衝液（ＲＰＭＩ１６４０、２％ウシ胎児血清、０．５ｍｇ／ｍＬコラゲナーゼ、３０μｇ／ｍＬＤＮアーゼ）１０ｍＬ中ではさみで細かくスラリー状に細断した。膀胱スラリーを３７℃で３０分間酵素的に消化した。未消化の断片はｃｅｌｌ−ｔｒａｉｎｅｒでさらに分散させた。細胞懸濁液をペレット化し、単核球上の精製用不連続２０％、４０％、および７５％パーコール勾配に加えた。各実験には５０〜６０個の膀胱を用いた。
【０１１１】
ＲＰＭＩ１６４０で複数回洗浄した後、膀胱細胞を１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、および１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ１６４０に再懸濁し、１００μＬを細胞密度３×１０４／ウェルで透明底黒色９６ウェル細胞培養マイクロプレートに播種した。細胞は、５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃で培養した。
【０１１２】
（細胞のインビトロ鎮痛剤処理）
膀胱細胞を、鎮痛剤溶液（５０μＬ／ウェル）単独か、または非炎症性刺激物の例としてカルバコール（１０モル、５０μＬ／ウェル）、または非炎症性刺激物の例としてＳａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍのリポ多糖（ＬＰＳ）（１μｇ／ｍＬ，５０μＬ／ウェル）と共に処理した。細胞に他のエフェクターを添加しない場合は、ウシ胎児血清を含有しないＲＰＭＩ１６４０をウェルに５０μＬ加えて最終体積２００μＬに調節した。
【０１１３】
２４時間培養した後、培養上清１５０μＬを採取し、８，０００ｒｐｍ、４℃で２分間遠心分離して細胞および残渣を除去し、ＥＬＩＳＡによるプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）反応の分析のため−７０℃で保存した。細胞を固定し、透過処理しさらにブロッキングし、蛍光基質を用いてシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ２）を検出した。一部の実験細胞は、ＣＯＸ２反応の分析のためにインビトロで１２時間刺激した。
【０１１４】
（ＣＯＸ２反応の分析）
ＣＯＸ２反応は、ヒト／マウス総ＣＯＸイムノアッセイ（Ｒ＆Ｄシステムズ）を用いメーカーの指示に従って、細胞ベースＥＬＩＳＡにより分析した。簡単に述べると、細胞を固定して透過処理した後、マウス抗総ＣＯＸ２およびウサギ抗総ＧＡＰＤＨを透明底黒色９６ウェル細胞培養マイクロプレートのウェルに加えた。インキュベーションおよび洗浄後、ＨＲＰコンジュゲート抗マウスＩｇＧおよびＡＰコンジュゲート抗ウサギＩｇＧをウェルに加えた。さらに１回インキュベートして１連の洗浄を実施した後、ＨＲＰ−およびＡＰ−蛍光原基質を添加した。最後に、Ｖｉｃｔｏｒ（登録商標）Ｖマルチラベルプレートリーダー（パーキンエルマー）を用いて、６００ｎｍ（ＣＯＸ２蛍光）および４５０ｎｍ（ＧＡＰＤＨ蛍光）で発光する蛍光を読み取った。結果は、相対蛍光単位（ＲＦＵ）として測定し、さらにハウスキーピングタンパク質ＧＡＰＤＨに対して正規化した総ＣＯＸ２の相対レベルとして表記する。
【０１１５】
（ＰＧＥ２反応の分析）
プロスタグランジンＥ２反応は、連続競合ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄシステムズ）により分析した。より具体的には、培養上清またはＰＧＥ２標準液を、ヤギ抗ウサギポリクローナル抗体でコーティングした９６ウェルポリスチレンマイクロプレートのウェルに加えた。マイクロプレートシェーカー上で１時間インキュベートした後、ＨＲＰコンジュゲートＰＧＥ２を添加し、プレートを室温でさらに２時間インキュベートした。その後、プレートを洗浄しＨＲＰ基質溶液を各ウェルに加えた。３０分間呈色させ、さらに硫酸を添加して反応を停止した後、５７０ｎｍで波長補正しながら４５０ｎｍでプレートを読み取った。結果はＰＧＥ２の平均ｐｇ／ｍＬとして表記する。
【０１１６】
（その他の分析）
ＰＧＨ２、ＰＧＥ、プロスタサイジン、トロンボキサン、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、およびＴＮＦ−αの放出、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰの産生、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦ−αおよびＣＯＸ２  ｍＲＮＡの産生、およびＣＤ８０、ＣＤ８６およびＭＨＣクラスＩＩ分子の表面発現を、実施例２に記載の通りに測定する。
【０１１７】
（結果）
（鎮痛剤は炎症性刺激物に対するマウス膀胱細胞のＣＯＸ２反応を阻害する）
数種類の鎮痛剤（アセトアミノフェン、アスピリン、イブプロフェンおよびナプロキセン）を、５μＭまたは５０μＭの濃度でマウス膀胱細胞に対して試験して、鎮痛剤がＣＯＸ２反応を誘導することが可能であるか判定した。２４時間培養の分析より、試験した鎮痛剤はいずれもインビトロマウス膀胱細胞のＣＯＸ２反応を誘導しないことが示された。
【０１１８】
カルバコールまたはＬＰＸ刺激に対するマウス膀胱細胞のＣＯＸ２反応に及ぼすこれらの鎮痛剤の効果もインビトロで試験した。表１に示すように、試験したカルバコールの用量はマウス膀胱細胞のＣＯＸ２レベルに対して有意な効果がなかった。その一方で、ＬＰＳは総ＣＯＸ２レベルを有意に上昇させた。興味深いことに、アセトアミノフェン、アスピリン、イブプロフェンおよびナプロキセンはいずれもＣＯＸ２レベルに対するＬＰＳの影響を抑制することが可能であった。鎮痛剤の抑制効果は、これらの薬剤が５μＭまたは５０μＭのいずれかで試験された場合でも見られた（表４）。
【０１１９】
（表４．インビトロ刺激および鎮痛剤処理後のマウス膀胱細胞によるＣＯＸ２発現）
【表４】
2019055969.tif 000006
【０１２０】
（鎮痛剤は炎症性刺激物に対するマウス膀胱細胞のＰＧＥ２反応を阻害する）
マウス膀胱細胞の培養上清におけるＰＧＥ２の分泌を測定して、鎮痛剤によるマウス膀胱細胞ＣＯＸ２レベルの変化の生物学的重要性を判定した。表５に示すように、非刺激膀胱細胞またはカルバコールの存在下で培養された膀胱細胞の培養上清中にＰＧＥ２は検出されなかった。上述のＣＯＸ２反応と一致して、ＬＰＳによるマウス膀胱細胞の刺激は高レベルのＰＧＥ２の分泌を誘導した。鎮痛剤アセトアミノフェン、アスピリン、イブプロフェンおよびナプロキセンの添加により、ＰＧＥ２分泌に対するＬＰＳの影響が抑制され、また５または５０μＭ用量の鎮痛剤で処理された細胞の反応の間には差は見られなかった。
【０１２１】
（表５．インビトロ刺激および鎮痛剤処理後のマウス膀胱細胞によるＰＧＥ２分泌）
【表５】
2019055969.tif 000007
【０１２２】
まとめると、これらのデータより、５μＭまたは５０μＭの鎮痛剤単独ではマウス膀胱細胞のＣＯＸ２およびＰＧＥ２反応を誘導しないことが示された。しかし、５μＭまたは５０μＭの鎮痛剤は、ＬＰＳでインビトロ刺激したマウス膀胱細胞のＣＯＸ２およびＰＧＥ２反応を有意に阻害した。カルバコール（１ｍＭ）で刺激されたマウス膀胱細胞のＣＯＸ２およびＰＧＥ２反応に対する鎮痛剤の有意な効果は認められなかった。
【実施例４】
【０１２３】
（膀胱平滑筋細胞収縮に対する鎮痛剤、ボツリヌス神経毒素および抗ムスカリン剤の効果）
（実験デザイン）
培養マウスまたはラット膀胱平滑筋細胞およびマウスまたはラット膀胱平滑筋組織を、種々の濃度の鎮痛剤および／または抗ムスカリン剤の存在下で炎症性刺激物および非炎症性刺激物に曝露する。刺激物誘導性筋収縮を測定して、鎮痛剤および／または抗ムスカリン剤の阻害効果を評価する。
【０１２４】
エフェクター、鎮痛剤および抗ムスカリン剤は実施例２に記載されている。
【０１２５】
マウス膀胱平滑筋細胞の一次培養を：
（１）種々の用量の各鎮痛剤単独。
（２）ＬＰＳ存在下で種々の用量の各鎮痛剤。
（３）カルバコールまたはアセチルコリン存在下で種々の用量の各鎮痛剤。
（４）ＡＡ、ＤＧＬＡまたはＥＰＡ存在下で種々の用量の各鎮痛剤。
（５）種々の用量のボツリヌス神経毒素Ａ単独。
（６）ＬＰＳ存在下で種々の用量のボツリヌス神経毒素Ａ。
（７）カルバコールまたはアセチルコリン存在下で種々の用量のボツリヌス神経毒素Ａ。
（８）ＡＡ、ＤＧＬＡまたはＥＰＡ存在下で種々の用量のボツリヌス神経毒素Ａ。
（９）種々の用量の各抗ムスカリン剤単独。
（１０）ＬＰＳ存在下で種々の用量の各抗ムスカリン剤。
（１１）カルバコールまたはアセチルコリン存在下で種々の用量の各抗ムスカリン剤。
（１２）ＡＡ、ＤＧＬＡまたはＥＰＡ存在下で種々の用量の各抗ムスカリン剤による短時間（１〜２時間）または長時間（２４〜４８時間）の刺激に付す。
【０１２６】
（材料および方法）
実施例３に記載の通りに一次マウス膀胱細胞を分離する。一部の実験においては、膀胱組織の培養を用いる。膀胱平滑筋細胞の収縮をＧｒａｓｓポリグラフ（Ｑｕｉｎｃｙ  Ｍａｓｓ、米国）で記録する。
【実施例５】
【０１２７】
（膀胱平滑筋細胞のＣＯＸ２およびＰＧＥ２反応に対する経口鎮痛剤および抗ムスカリン剤の効果）
（実験デザイン）
正常マウスおよび過活動膀胱症候群を有するマウスに、アスピリン、ナプロキセンナトリウム、イブプロフェン、インドシン、ナブメトン、タイレノール、セレコキシブ、オキシブチニン、ソリフェナシン、ダリフェナシン、アトロピンおよびその組み合わせの経口用量を投与する。対照群は、非投与正常マウスおよび過活動膀胱症候群のない非投与ＯＡＢマウスを含む。最終投与より３０分後、膀胱を採取して生体外でカルバコールまたはアセチルコリンにより刺激する。一部の実験においては、カルバコールで刺激する前に膀胱をボツリヌス神経毒素Ａで処理する。動物は代謝ケージで維持し、排尿の頻度（および体積）を評価する。水摂取量およびケージ敷き藁重量をモニタリングすることにより膀胱排出量を算出する。ＥＬＩＳＡにより血清ＰＧＨ２、ＰＧＥ、ＰＧＥ２、プロスタサイジン、トロンボキサン、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰレベルを測定する。フローサイトメトリーで全血中のＣＤ８０、ＣＤ８６、ＭＨＣクラスＩＩ発現を測定する。
【０１２８】
実験終了時に、動物を麻酔し、Ｇｒａｓｓポリグラフで生体外膀胱収縮を記録する。膀胱の一部をホルマリンで固定し、免疫組織化学検査によりＣＯＸ２反応を分析する。
【実施例６】
【０１２９】
（炎症性および非炎症性刺激物へのヒト膀胱平滑筋細胞の反応に対する鎮痛剤、ボツリヌス神経毒素および抗ムスカリン剤の効果）
（実験デザイン）
本試験は、実施例１〜５で測定した鎮痛剤の至適用量が細胞培養または組織培養中のヒト膀胱平滑筋細胞にどのように作用するか特性解析し、かつ異なる分類の鎮痛剤が協調してＣＯＸ２およびＰＧＥ２反応をより効率よく阻害することができるか検討するようデザインされる。
【０１３０】
エフェクター、鎮痛剤および抗ムスカリン剤は実施例２に記載されている。
【０１３１】
ヒト膀胱平滑筋細胞を：
（１）種々の用量の各鎮痛剤単独。
（２）ＬＰＳ存在下で種々の用量の各鎮痛剤。
（３）カルバコールまたはアセチルコリン存在下で種々の用量の各鎮痛剤。
（４）ＡＡ、ＤＧＬＡまたはＥＰＡ存在下で種々の用量の各鎮痛剤。
（５）種々の用量のボツリヌス神経毒素Ａ単独。
（６）ＬＰＳ存在下で種々の用量のボツリヌス神経毒素Ａ。
（７）カルバコールまたはアセチルコリン存在下で種々の用量のボツリヌス神経毒素Ａ。
（８）ＡＡ、ＤＧＬＡまたはＥＰＡ存在下で種々の用量のボツリヌス神経毒素Ａ。
（９）種々の用量の各抗ムスカリン剤単独。
（１０）ＬＰＳ存在下で種々の用量の各抗ムスカリン剤。
（１１）カルバコールまたはアセチルコリン存在下で種々の用量の各抗ムスカリン剤。  
（１２）ＡＡ、ＤＧＬＡまたはＥＰＡ存在下で種々の用量の各抗ムスカリン剤による短時間（１〜２時間）または長時間（２４〜４８時間）の刺激に付す。
【０１３２】
次に、ＰＧＨ２、ＰＧＥ、ＰＧＥ２、プロスタサイジン、トロンボキサン、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦ−αの放出、ＣＯＸ２活性、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰの産生、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦ−αおよびＣＯＸ２  ｍＲＮＡの産生、およびＣＤ８０、ＣＤ８６およびＭＨＣクラスＩＩ分子の表面発現について細胞を分析する。
【実施例７】
【０１３３】
（ヒト膀胱平滑筋細胞収縮に対する鎮痛剤、ボツリヌス神経毒素および抗ムスカリン剤の効果）
（実験デザイン）
培養ヒト膀胱平滑筋細胞を種々の濃度の鎮痛剤および／または抗ムスカリン剤の存在下で炎症性刺激物および非炎症性刺激物に曝露する。刺激物誘導性筋収縮を測定して、鎮痛剤および／または抗ムスカリン剤の阻害効果を評価する。
【０１３４】
エフェクター、鎮痛剤および抗ムスカリン剤は実施例２に記載されている。
【０１３５】
ヒト膀胱平滑筋細胞を：
（１）種々の用量の各鎮痛剤単独。
（２）ＬＰＳ存在下で種々の用量の各鎮痛剤。
（３）カルバコールまたはアセチルコリン存在下で種々の用量の各鎮痛剤。
（４）ＡＡ、ＤＧＬＡまたはＥＰＡ存在下で種々の用量の各鎮痛剤。
（５）種々の用量のボツリヌス神経毒素Ａ単独。
（６）ＬＰＳ存在下で種々の用量のボツリヌス神経毒素Ａ。
（７）カルバコールまたはアセチルコリン存在下で種々の用量のボツリヌス神経毒素Ａ。
（８）ＡＡ、ＤＧＬＡまたはＥＰＡ存在下で種々の用量のボツリヌス神経毒素Ａ。
（９）種々の用量の各抗ムスカリン剤単独。
（１０）ＬＰＳ存在下で種々の用量の各抗ムスカリン剤。
（１１）カルバコールまたはアセチルコリン存在下で種々の用量の各抗ムスカリン剤。
（１２）ＡＡ、ＤＧＬＡまたはＥＰＡ存在下で種々の用量の各抗ムスカリン剤による短時間（１〜２時間）または長時間（２４〜４８時間）の刺激に付す。
【０１３６】
膀胱平滑筋細胞の収縮をＧｒａｓｓポリグラフ（Ｑｕｉｎｃｙ  Ｍａｓｓ、米国）で記録する。
【実施例８】
【０１３７】
（炎症性および非炎症性シグナルへの正常ヒト膀胱平滑筋細胞の反応に対する鎮痛剤の効果）
（実験デザイン）
（正常ヒト膀胱平滑筋細胞の培養）
正常ヒト膀胱平滑筋細胞は、肉眼的に正常なヒト膀胱片から酵素消化によって分離した。細胞は、１０％ウシ胎児血清、１５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１００Ｕ／ｍＬペニシリンおよび１００ｍｇ／ｍＬストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ１６４０中で５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃での培養によりインビトロで増殖させ、細胞を剥離させるトリプシン処理の後新たな培養フラスコに再播種することにより週１回継代した。培養第１週目は、培地に０．５ｎｇ／ｍＬ上皮成長因子、２ｎｇ／ｍＬ線維芽細胞成長因子、および５μｇ／ｍＬインスリンを添加した。
【０１３８】
（正常ヒト膀胱平滑筋細胞のインビトロ鎮痛剤処理）
トリプシン処理しかつ細胞密度３×１０４細胞／ウェルで１００μＬをマイクロプレートに播種した膀胱平滑筋細胞を、鎮痛剤溶液（５０μＬ／ウェル）単独か、または非炎症性刺激物の例としてカルバコール（１０モル、５０μＬ／ウェル）、または非炎症性刺激物の例としてＳａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍのリポ多糖（ＬＰＳ）（１μｇ／ｍＬ、５０μＬ／ウェル）と共に処理した。細胞に他のエフェクターを添加しない場合は、ウシ胎児血清を含有しないＲＰＭＩ１６４０をウェルに５０μＬ加えて最終体積２００μＬに調節した。
【０１３９】
２４時間培養した後、培養上清１５０μＬを採取し、８，０００ｒｐｍ、４℃で２分間遠心分離して細胞および残渣を除去し、ＥＬＩＳＡによるプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）反応の分析のため−７０℃で保存した。細胞を固定し、透過処理しさらにブロッキングし、蛍光基質を用いてＣＯＸ２を検出した。一部の実験細胞は、ＣＯＸ２、ＰＧＥ２およびサイトカイン反応を分析するためにインビトロで１２時間刺激した。
【０１４０】
（ＣＯＸ２、ＰＧＥ２およびサイトカイン反応の分析）
実施例３に記載の通りにＣＯＸ２およびＰＧＥ２反応を分析した。実施例２に記載の通りにサイトカイン反応を分析した。
【０１４１】
（結果）
鎮痛剤は炎症性および非炎症性刺激物に対する正常ヒト膀胱平滑筋細胞のＣＯＸ２反応を阻害する―２４時間培養後の細胞および培養上清の分析により、試験した鎮痛剤はいずれも単独で正常ヒト膀胱平滑筋細胞のＣＯＸ２反応を誘導しないことが示された。しかし表６に要約したように、カルバコールは正常ヒト膀胱平滑筋細胞において低いながらも有意なＣＯＸ２反応を誘導した。その一方で、ＬＰＳ処置は正常ヒト膀胱平滑筋細胞においてより高いレベルのＣＯＸ２反応をもたらした。アセトアミノフェン、アスピリン、イブプロフェンおよびナプロキセンはいずれもＣＯＸ２レベルに対するカルバコールおよびＬＰＳの影響を抑制することが可能であった。これらの薬剤が５μＭまたは５０μＭのいずれで試験された場合でも、ＬＰＳ誘導性反応に対する鎮痛剤の抑制効果が見られた。
【０１４２】
（表６．炎症性および非炎症性刺激物によるインビトロ刺激および鎮痛剤処理後の正常ヒト膀胱平滑筋細胞によるＣＯＸ２発現）
【表６】
2019055969.tif 000008
【０１４３】
鎮痛剤は炎症性および非炎症性刺激物に対する正常ヒト膀胱平滑筋細胞のＰＧＥ２反応を阻害する―上述のＣＯＸ２反応の誘導と一致して、カルバコールおよびＬＰＳはいずれも正常ヒト膀胱平滑筋細胞によるＰＧＥ２の産生を誘導した。アセトアミノフェン、アスピリン、イブプロフェンおよびナプロキセンも、５μＭまたは５０μＭでＬＰＳ誘導性ＰＧＥ２反応を抑制することが確認された（表７）。
【０１４４】
（表７．炎症性および非炎症性刺激物によるインビトロ刺激および鎮痛剤処理後の正常ヒト膀胱平滑筋細胞によるＰＧＥ２分泌）
【表７】
2019055969.tif 000009
【０１４５】
鎮痛剤は炎症性刺激物に対する正常ヒト膀胱平滑筋細胞のサイトカイン反応を阻害する―２４時間培養後の細胞および培養上清の分析により、試験した鎮痛剤はいずれも単独で正常ヒト膀胱平滑筋細胞におけるＩＬ−６またはＴＮＦα分泌を誘導しないことが示された。表８および９に示されるように、カルバコール試験用量は正常ヒト膀胱平滑筋細胞において低いながらも有意なＴＮＦβおよびＩＬ−６反応を誘導した。その一方で、ＬＰＳ処理によりこれらの炎症誘発性サイトカインの強い誘導がもたらされた。アセトアミノフェン、アスピリン、イブプロフェンおよびナプロキセンはＴＦＮαおよびＩＬ−６反応に対するカルバコールおよびＬＰＳの影響を抑制する。これらの薬剤が５μＭまたは５０μＭのいずれで試験された場合でも、ＬＰＳ誘導性反応に対する鎮痛剤の抑制効果が見られた。
【０１４６】
（表８．炎症性および非炎症性刺激物によるインビトロ刺激および鎮痛剤処理後の正常ヒト膀胱平滑筋細胞によるＴＮＦα分泌）
【表８】
2019055969.tif 000010
【０１４７】
（表９．炎症性および非炎症性刺激物によるインビトロ刺激および鎮痛剤処理後の正常ヒト膀胱平滑筋細胞によるＩＬ−６分泌）
【表９】
2019055969.tif 000011
【０１４８】
一次正常ヒト膀胱平滑筋細胞を分離し、培養し、さらに非炎症性（カルバコール）および炎症性（ＬＰＳ）刺激物の存在下での鎮痛剤に対するその反応について評価した。この試験の目標は、正常ヒト膀胱平滑筋細胞が、マウス膀胱細胞で先に見られた所見を再現するか否かを判定することであった。
【０１４９】
上述の実験は、遅延放出、または延長放出製剤、または遅延および延長放出製剤中の鎮痛剤および／または抗ムスカリン剤によって繰り返されるであろう。
【０１５０】
上記は、当業者に本発明を実践する方法を教示することを目的としており、かつ、当業者が本記載を読んだ後で明らかになるであろうその明白な変更または変法の全てを詳細に説明することを意図していない。しかし、そうした全ての明白な変更および変法は、以下の請求項に定義される本発明の範囲内に含まれることが意図される。請求項は、文脈が具体的に反対のことを示さない限り、請求された要素およびそこで意図される目的に合致するために有効である任意の順にある段階を包含するよう意図される。
【図１】
2019055969.tif 000012
【手続補正書】
【提出日】平成30年12月13日(2018.12.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
適度な休息を感じる十分な時間の睡眠をする能力が尿意の上昇によって妨害されている夜間頻尿患者における尿意を低下させるための医薬製剤の調製に於ける、アセトアミノフェン及びイブプロフェンを含む医薬組成物の使用であって、
前記アセトアミノフェン及びイブプロフェンの夫々が１ｍｇから２０００ｍｇの１日用量で経口投与され、アセトアミノフェン及びイブプロフェンのみが該医薬組成物に於ける治療上の有効成分である、前記使用。
【請求項２】
前記医薬組成物が遅延放出製剤に配合されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記遅延放出製剤がヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、メチルヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、アクリル酸エステルコポリマー、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、メタクリル酸コポリマー、酢酸フタル酸セルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酢酸フタル酸ポリビニル、シェラック、およびエチルセルロースからなる群から選択される材料を含むことを特徴とする、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記遅延放出製剤がモノステアリン酸グリセリンまたはジステアリン酸グリセリンをさらに含むことを特徴とする請求項２に記載の使用。
【請求項５】
前記遅延放出製剤が不溶性であるが、浸透性かつ膨潤性のハイドロゲルプラグで一方の端を閉じられた非水溶性カプセル本体を含むことを特徴とし、前記プラグがポリメタクリル酸エステル、被浸食性圧縮ポリマー、凝結融解ポリマーおよび酵素調節被浸食性ポリマーからなる群から選択される材料を含むことを特徴とする、請求項２に記載の使用。
【請求項６】
前記遅延放出製剤が腸溶コーティングをさらに含むことを特徴とする、請求項２に記載の使用。
【請求項７】
前記アセトアミノフェン及びイブプロフェンの夫々が５０ｍｇから５００ｍｇの１日用量で投与されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項８】
前記アセトアミノフェン及びイブプロフェンの夫々が５００ｍｇから２０００ｍｇの１日用量で投与されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項９】
前記アセトアミノフェン及びイブプロフェンの夫々が１００ｍｇから１５００ｍｇの１日用量で投与されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項１０】
前記アセトアミノフェン及びイブプロフェンの夫々が２５０ｍｇから１０００ｍｇの１日用量で投与されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項１１】
前記医薬組成物が即時放出製剤に配合されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項１２】
前記対象に利尿薬を投与することをさらに含み；
前記利尿薬が目標時間より少なくとも８時間前に投与されることを特徴とし、かつ前記医薬組成物が前記目標時間前２時間以内に投与されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項１３】
適度な休息を感じる十分な時間の睡眠をする能力が尿意の上昇によって妨害されている夜間頻尿患者における、膀胱の充満度が実働容量に対して１００％未満の時に尿意を低下させるための経口投与用医薬組成物であって：
アセトアミノフェン；
イブプロフェン；および
１つ又はそれ以上の医薬品として許容できる担体を含み、
アセトアミノフェン及びイブプロフェンのみが該医薬組成物に於ける治療上の有効成分である、前記医薬組成物。