(57)【要約】本発明は、遺伝子機能の特徴付けに関与するトランスジェニック動物、ならびに組成物および方法に関する。具体的には、本発明は、遺伝子ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０の破壊を含むトランスジェニックマウスを提供する。このようなインビボ研究および特徴付けは、遺伝子破壊に関連する疾患または機能不全を予防、改善または矯正するのに有用な、治療剤および／または処置の価値のある同定および発明を提供し得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
遺伝子の破壊に関連する表現型を同定する方法であって、該遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードし、該方法は、以下：
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物を提供する工程であって、該非ヒトトランスジェニック動物のゲノムは、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする該遺伝子の破壊を含む、工程；
（ｂ）該非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴を測定する工程；および
（ｃ）該測定された生理学的特徴を、性別が一致する野生型動物の生理学的特徴と比較する工程であって、該野生型動物の生理学的特徴と異なる、該非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴は、該非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊の結果得られる表現型として同定される、工程
を包含する、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、前記非ヒトトランスジェニック動物は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする遺伝子の前記破壊についての異型接合体である、方法。
【請求項３】
請求項１に記載の方法であって、性別が一致する野生型同腹仔と比較した場合に前記非ヒトトランスジェニック動物によって示される前記表現型は、以下：神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；脂質代謝障害；または発生異常のうちの少なくとも１つである、方法。
【請求項４】
前記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の増加した不安様反応である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応である、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記神経障害は、ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズムである、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調である、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
前記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の障害された運動協調である、請求項３に記載の方法。
【請求項９】
前記神経障害は、鬱病、全般性不安障害、注意欠陥障害、睡眠障害、過活動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知障害、痛覚過敏または感覚性障害である、請求項３に記載の方法。
【請求項１０】
前記眼の異常は、網膜の異常である、請求項３に記載の方法。
【請求項１１】
前記眼の異常は、視覚上の問題または盲と一致する、請求項３に記載の方法。
【請求項１２】
前記網膜の異常は、色素性網膜炎と一致する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記網膜の異常は、網膜変性または網膜形成異常によって特徴付けられる、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
請求項１０に記載の方法であって、前記網膜の異常は、網膜形成異常、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑水腫、角膜新生血管形成、角膜移植片新生血管形成、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜新生血管形成、角の新生血管形成（ルベオーシス）、眼の血管新生疾患、脈管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーヴズ病を含む）、角膜および他の組織の移植、網膜の動脈の閉塞もしくは閉鎖；網膜脈管構造の二次的な萎縮を引き起こす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在夜盲、コロイデレミア、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディノ−メインザー症候群、シニア−ローケン症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候、先天性脊椎・骨端異形成症、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジル症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール−マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β−リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン症、またはマンノシドーシスと一致する、方法。
【請求項１５】
前記眼の異常は、白内障である、請求項３に記載の方法。
【請求項１６】
請求項１５に記載の方法であって、前記白内障が、ヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症またはコンラーディ症候群のような全身性疾患と一致する、方法。
【請求項１７】
前記発生異常は、胚の死亡または生存率の低下を包含する、請求項３に記載の方法。
【請求項１８】
請求項３に記載の方法であって、前記心血管障害、内皮障害または脈管形成障害は、糖尿病のような動脈疾患；乳頭水腫；眼の過形成；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；急性心筋梗塞のような心筋梗塞、心肥大およびうっ血性心不全のような心不全；高血圧症；炎症性脈管炎；レーノー病およびレーノー現象；動脈瘤および動脈再狭窄；血栓性静脈炎、リンパ管炎およびリンパ水腫のような静脈およびリンパの疾患；末梢性脈管疾患；脈管腫瘍（例えば、血管腫（毛細血管腫および海綿状血管腫））のような癌、グロムス腫瘍、毛細血管拡張症、杆菌性血管腫症状、血管内皮腫、血管肉腫、血管周囲細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫およびリンパ管肉腫；腫瘍新脈管形成；創傷、熱傷、および他の傷害された組織、移植片固定、瘢痕のような外傷；虚血、再灌流障害；慢性関節リウマチ；脳血管疾患；急性腎不全のような腎疾患、または骨粗鬆症である、方法。
【請求項１９】
請求項３に記載の方法であって、前記免疫障害は、全身性エリテマトーデス；慢性関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身性硬化症（強皮症）；特発性炎症性ミオパシー（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性脈管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫汎血球減少、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーヴズ病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ急性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎炎）；糖尿病；免疫媒介性腎臓病（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢神経系および末梢神経系の脱髄疾患（例えば、多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシーもしくはギヤン−バレー症候群および慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー）；感染性肝炎（Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎および他の非肝臓向性ウイルス性肝炎）、自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎および硬化性胆管炎のような、肝胆道疾患；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン感受性腸症、およびホウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑および接触皮膚炎、乾癬を含む、自己免疫性もしくは免疫媒介性の皮膚疾患；喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症およびじんま疹のような、アレルギー性疾患；好酸球性肺炎、特発性肺線維症および過敏性肺炎のような肺の免疫疾患；または移植片拒絶および対宿主性移植片病を含む移植関連疾患である、方法。
【請求項２０】
前記骨代謝異常または骨代謝障害は、関節炎、骨粗鬆症または大理石骨病である、請求項３に記載の方法。
【請求項２１】
請求項１に記載の方法であって、前記非ヒトトランスジェニック動物は、性別が一致する野生型同腹仔と比較して、以下の生理学的特徴：オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応；ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズム；逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調；機能観察試験における眼球突出；衰弱した網膜の脈管によって特徴付けられる重篤な網膜変性；微細動脈瘤；減少した平均動脈対静脈比；減少したレンズサイズ；成熟白内障；増加した平均血清コレステロールレベル；増加した平均血清トリグリセリドレベル；減少した平均血清コレステロールレベル；増強されたグルコース寛容；低下したグルコース寛容；増加した平均血清インスリンレベル；低下した平均血清インスリンレベル；オボアルブミン負荷に対する平均血清ＩｇＧ１応答および平均血清ＩｇＧ２ａ応答の低下；オボアルブミン負荷に対する平均血清ＩｇＧ１応答および平均血清ＩｇＧ２ａ応答の増大；オボアルブミン負荷に対するＩｇＧ２ａ応答の減損；減少した血中好中球平均絶対数；増加したＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＡ、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂの平均血清レベル；ＬＰＳ負荷に対する平均血清ＴＮＦ−α応答およびＩＬ６応答の増加；減少した平均血小板数；減少したＲＢＣ、血小板、ヘモグロビンおよびヘマトクリットのレベル；体脂肪の平均パーセントの増加；低下した皮膚線維芽細胞増殖；増加した皮膚線維芽細胞増殖；増加した総組織質量（ＴＴＭ）；増加した除脂肪体重（ＬＢＭ）；増加した骨塩密度（ＢＭＤ）；増加した骨塩量（ＢＭＣ）、増加した骨塩含有指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）；増加した大腿骨幹中央部の総面積；海綿質体積および結合密度の減少；減少した体積骨塩密度；減少した骨塩含有指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）；全身、大腿骨および脊椎骨における減少した平均骨塩密度；減少した平均骨塩密度（ＢＭＤ）、減少した平均海綿質体積、減少した厚み、および減少した結合密度；減少した体重および体長；減少した総組織質量（ＴＴＭ）；減少した除脂肪体重（ＬＢＭ）；減少した総脂肪質量；減少した骨塩量（ＢＭＣ）；全身および大腿骨における減少した平均体積骨塩密度（ｖＢＭＤ）；減少した大腿骨幹中央部の断面積および厚み；減少した平均体重および平均体長、減少した総体脂肪平均パーセント、減少した総組織質量および減少した骨塩密度を伴う増殖遅延；減少した大腿骨幹中央部皮質厚；心臓肥大；障害された腎機能；腎臓中腎管の発達異常；精細管変性；大きく減少した生存率［３匹のみの生き残った（−／−）変異マウスは、予測される１４匹の（−／−）変異体と比較して、重度の成長遅延を示す］；予測されるホモ接合体の数の顕著な減少；ならびに胚の死亡、のうちの少なくとも１つを示す、方法。
【請求項２２】
非ヒトトランスジェニック動物に由来する単離された細胞であって、該非ヒトトランスジェニック動物のゲノムは、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチドポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチド、をコードする遺伝子の破壊を含む、単離された細胞。
【請求項２３】
マウス細胞である、請求項２２に記載の単離された細胞。
【請求項２４】
前記マウス細胞は胚幹細胞である、請求項２３に記載の単離された細胞。
【請求項２５】
請求項２２に記載の単離された細胞であって、前記非ヒトトランスジェニック動物は、性別が一致する野生型同腹仔と比較して、以下の表現型：神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；脂質代謝障害；または発生異常のうちの少なくとも１つを示す、単離された細胞。
【請求項２６】
表現型を調節する因子を同定する方法であって、該表現型は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連し、該方法は、以下：
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物を提供する工程であって、該非ヒトトランスジェニック動物のゲノムは、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする該遺伝子の破壊を含む、工程；
（ｂ）該（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴を測定する工程；
（ｃ）該（ｂ）の測定された生理学的特徴を、性別が一致する野生型動物の生理学的特徴と比較する工程であって、該野生型動物の生理学的特徴と異なる、該非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴は、該非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊の結果得られる表現型として同定される、工程；
（ｄ）該（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に、試験因子を投与する工程；および
（ｅ）該非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊に関連する該同定される表現型を該試験因子が調節するか否かを、決定する工程
を包含する、方法。
【請求項２７】
請求項２６に記載の方法であって、前記遺伝子破壊に関連する前記表現型は、神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；脂質代謝障害；または発生異常を包含する、方法。
【請求項２８】
前記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の増加した不安様反応である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記神経障害は、ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズムである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
前記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３２】
前記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の障害された運動協調である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３３】
前記神経障害は、鬱病、全般性不安障害、注意欠陥障害、睡眠障害、過活動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知障害、痛覚過敏または感覚性障害である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３４】
前記眼の異常は、網膜の異常である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３５】
前記眼の異常は、視覚上の問題または盲と一致する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３６】
前記網膜の異常は、色素性網膜炎と一致する、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
前記網膜の異常は、網膜変性または網膜形成異常によって特徴付けられる、請求項３４に記載の方法。
【請求項３８】
請求項３４に記載の方法であって、前記網膜の異常は、網膜形成異常、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑水腫、角膜新生血管形成、角膜移植片新生血管形成、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜新生血管形成、角の新生血管形成（ルベオーシス）、眼の血管新生疾患、脈管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーヴズ病を含む）、角膜および他の組織の移植、網膜の動脈の閉塞もしくは閉鎖；網膜脈管構造の二次的な萎縮を引き起こす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在夜盲、コロイデレミア、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディノ−メインザー症候群、シニア−ローケン症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候、先天性脊椎・骨端異形成症、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジル症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール−マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β−リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン症、またはマンノシドーシスと一致する、方法。
【請求項３９】
前記眼の異常は、白内障である、請求項２７に記載の方法。
【請求項４０】
請求項３９に記載の方法であって、前記白内障が、ヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症またはコンラーディ症候群のような全身性疾患と一致する、方法。
【請求項４１】
前記発生異常は、胚の死亡または生存率の低下を包含する、請求項２７に記載の方法。
【請求項４２】
請求項２７に記載の方法であって、前記心血管障害、内皮障害または脈管形成障害は、糖尿病のような動脈疾患；乳頭水腫；眼の過形成；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；急性心筋梗塞のような心筋梗塞、心肥大およびうっ血性心不全のような心不全；高血圧症；炎症性脈管炎；レーノー病およびレーノー現象；動脈瘤および動脈再狭窄；血栓性静脈炎、リンパ管炎およびリンパ水腫のような静脈およびリンパの疾患；末梢性脈管疾患；脈管腫瘍（例えば、血管腫（毛細血管腫および海綿状血管腫））のような癌、グロムス腫瘍、毛細血管拡張症、杆菌性血管腫症状、血管内皮腫、血管肉腫、血管周囲細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫およびリンパ管肉腫；腫瘍新脈管形成；創傷、熱傷、および他の傷害された組織、移植片固定、瘢痕のような外傷；虚血、再灌流障害；慢性関節リウマチ；脳血管疾患；急性腎不全のような腎疾患、または骨粗鬆症である、方法。
【請求項４３】
請求項２７に記載の方法であって、前記免疫障害は、全身性エリテマトーデス；慢性関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身性硬化症（強皮症）；特発性炎症性ミオパシー（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性脈管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫汎血球減少、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーヴズ病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ急性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎炎）；糖尿病；免疫媒介性腎臓病（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢神経系および末梢神経系の脱髄疾患（例えば、多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシーもしくはギヤン−バレー症候群および慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー）；感染性肝炎（Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎および他の非肝臓向性ウイルス性肝炎）、自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎および硬化性胆管炎のような、肝胆道疾患；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン感受性腸症、およびホウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑および接触皮膚炎、乾癬を含む、自己免疫性もしくは免疫媒介性の皮膚疾患；喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症およびじんま疹のような、アレルギー性疾患；好酸球性肺炎、特発性肺線維症および過敏性肺炎のような、肺の免疫疾患；または、移植片拒絶および対宿主性移植片病を含む移植関連疾患である、方法。
【請求項４４】
前記骨代謝異常または骨代謝障害は、関節炎、骨粗鬆症または大理石骨病である、請求項２７に記載の方法。
【請求項４５】
請求項２６に記載の方法であって、前記非ヒトトランスジェニック動物は、性別が一致する野生型同腹仔と比較して、以下の生理学的特徴：オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応；ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズム；逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調；機能観察試験における眼球突出；衰弱した網膜の脈管によって特徴付けられる重篤な網膜変性；微細動脈瘤；減少した平均動脈対静脈比；減少したレンズサイズ；成熟白内障；増加した平均血清コレステロールレベル；増加した平均血清トリグリセリドレベル；減少した平均血清コレステロールレベル；増強されたグルコース寛容；低下したグルコース寛容；増加した平均血清インスリンレベル；低下した平均血清インスリンレベル；オボアルブミン負荷に対する平均血清ＩｇＧ１応答および平均血清ＩｇＧ２ａ応答の低下；オボアルブミン負荷に対する平均血清ＩｇＧ１応答および平均血清ＩｇＧ２ａ応答の増大；オボアルブミン負荷に対するＩｇＧ２ａ応答の減損；減少した血中好中球平均絶対数；増加したＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＡ、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂの平均血清レベル；ＬＰＳ負荷に対する平均血清ＴＮＦ−α応答およびＩＬ６応答の増加；減少した平均血小板数；減少したＲＢＣ、血小板、ヘモグロビンおよびヘマトクリットのレベル；体脂肪の平均パーセントの増加；低下した皮膚線維芽細胞増殖；増加した皮膚線維芽細胞増殖；増加した総組織質量（ＴＴＭ）；増加した除脂肪体重（ＬＢＭ）；増加した骨塩密度（ＢＭＤ）；増加した骨塩量（ＢＭＣ）、増加した骨塩含有指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）；増加した大腿骨幹中央部の総面積；海綿質体積および結合密度の減少；減少した体積骨塩密度；減少した骨塩含有指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）；全身、大腿骨および脊椎骨における減少した平均骨塩密度；減少した平均骨塩密度（ＢＭＤ）、減少した平均海綿質体積、減少した厚み、および減少した結合密度；減少した体重および体長；減少した総組織質量（ＴＴＭ）；減少した除脂肪体重（ＬＢＭ）；減少した総脂肪質量；減少した骨塩量（ＢＭＣ）；全身および大腿骨における減少した平均体積骨塩密度（ｖＢＭＤ）；減少した大腿骨幹中央部の断面積および厚み；減少した平均体重および平均体長、減少した総体脂肪平均パーセント、減少した総組織質量および減少した骨塩密度を伴う増殖遅延；減少した大腿骨幹中央部皮質厚；心臓肥大；障害された腎機能；腎臓中腎管の発達異常；精細管変性；大きく減少した生存率［３匹のみの生き残った（−／−）変異マウスは、予測される１４匹の（−／−）変異体と比較して、重度の成長遅延を示す］；予測されるホモ接合体の数の顕著な減少；ならびに胚の死亡、のうちの少なくとも１つを示す、方法。
【請求項４６】
請求項２６に記載の方法によって同定される、因子。
【請求項４７】
請求項４６に記載の因子であって、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストである、因子。
【請求項４８】
請求項４７に記載の因子であって、前記アゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体、または抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
【請求項４９】
請求項４７に記載の因子であって、前記アンタゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体、または抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
【請求項５０】
生理学的特徴を調節する因子を同定する方法であって、該生理学的特徴は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連し、該方法は、以下：
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物を提供する工程であって、該非ヒトトランスジェニック動物のゲノムは、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする該遺伝子の破壊を含む、工程；
（ｂ）該（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物によって表される生理学的特徴を測定する工程；
（ｃ）該（ｂ）の測定された生理学的特徴を、性別が一致する野生型動物の生理学的特徴と比較する工程であって、該野生型動物によって表される生理学的特徴と異なる、該非ヒトトランスジェニック動物によって表される生理学的特徴は、遺伝子破壊に関連する生理学的特徴として同定される、工程；
（ｄ）該（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験因子を投与する工程；および
（ｅ）遺伝子破壊に関連する該生理学的特徴が調節されるか否かを決定する工程
を包含する、方法。
【請求項５１】
請求項５０に記載の方法であって、前記非ヒトトランスジェニック動物は、性別が一致する野生型同腹仔と比較して、以下の生理学的特徴：オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応；ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズム；逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調；機能観察試験における眼球突出；衰弱した網膜の脈管によって特徴付けられる重篤な網膜変性；微細動脈瘤；減少した平均動脈対静脈比；減少したレンズサイズ；成熟白内障；増加した平均血清コレステロールレベル；増加した平均血清トリグリセリドレベル；減少した平均血清コレステロールレベル；増強されたグルコース寛容；低下したグルコース寛容；増加した平均血清インスリンレベル；低下した平均血清インスリンレベル；オボアルブミン負荷に対する平均血清ＩｇＧ１応答および平均血清ＩｇＧ２ａ応答の低下；オボアルブミン負荷に対する平均血清ＩｇＧ１応答および平均血清ＩｇＧ２ａ応答の増大；オボアルブミン負荷に対するＩｇＧ２ａ応答の減損；減少した血中好中球平均絶対数；増加したＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＡ、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂの平均血清レベル；ＬＰＳ負荷に対する平均血清ＴＮＦ−α応答およびＩＬ６応答の増加；減少した平均血小板数；減少したＲＢＣ、血小板、ヘモグロビンおよびヘマトクリットのレベル；体脂肪の平均パーセントの増加；低下した皮膚線維芽細胞増殖；増加した皮膚線維芽細胞増殖；増加した総組織質量（ＴＴＭ）；増加した除脂肪体重（ＬＢＭ）；増加した骨塩密度（ＢＭＤ）；増加した骨塩量（ＢＭＣ）、増加した骨塩含有指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）；増加した大腿骨幹中央部の総面積；海綿質体積および結合密度の減少；減少した体積骨塩密度；減少した骨塩含有指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）；全身、大腿骨および脊椎骨における減少した平均骨塩密度；減少した平均骨塩密度（ＢＭＤ）、減少した平均海綿質体積、減少した厚み、および減少した結合密度；減少した体重および体長；減少した総組織質量（ＴＴＭ）；減少した除脂肪体重（ＬＢＭ）；減少した総脂肪質量；減少した骨塩量（ＢＭＣ）；全身および大腿骨における減少した平均体積骨塩密度（ｖＢＭＤ）；減少した大腿骨幹中央部の断面積および厚み；減少した平均体重および平均体長、減少した総体脂肪平均パーセント、減少した総組織質量および減少した骨塩密度を伴う増殖遅延；減少した大腿骨幹中央部皮質厚；心臓肥大；障害された腎機能；腎臓中腎管の発達異常；精細管変性；大きく減少した生存率［３匹のみの生き残った（−／−）変異マウスは、予測される１４匹の（−／−）変異体と比較して、重度の成長遅延を示す］；予測されるホモ接合体の数の顕著な減少；ならびに胚の死亡、のうちの少なくとも１つを表す、方法。
【請求項５２】
請求項５０に記載の方法によって同定される、因子。
【請求項５３】
請求項５２に記載の因子であって、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストである、因子。
【請求項５４】
請求項５３に記載の因子であって、前記アゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体、または抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
【請求項５５】
請求項５３に記載の因子であって、前記アンタゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体、または抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
【請求項５６】
行動を調節する因子を同定する方法であって、該行動は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連し、該方法は、以下：
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物を提供する工程であって、該非ヒトトランスジェニック動物のゲノムは、ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする該遺伝子の破壊を含む、工程；
（ｂ）該（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物によって表された該行動を観察する工程；
（ｃ）該（ｂ）の観察された行動を、性別が一致する野生型動物の行動と比較する工程であって、該野生型動物によって表される観察された行動と異なる、該非ヒトトランスジェニック動物によって表される観察された行動は、遺伝子破壊に関連する行動として同定される、工程；
（ｄ）該（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に、試験因子を投与する工程；および
（ｅ）遺伝子破壊に関連する該行動を該因子が調節するか否かを、決定する工程
を包含する、方法。
【請求項５７】
前記行動は、オープンフィールド活動試験の間の増加した不安様反応である、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記行動は、オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応である、請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
前記行動は、ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズムである、請求項５６に記載の方法。
【請求項６０】
前記行動は、逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調である、請求項５６に記載の方法。
【請求項６１】
前記行動は、逆転スクリーン試験の間の障害された運動協調である、請求項５６に記載の方法。
【請求項６２】
前記行動は、鬱病、全般性不安障害、注意欠陥障害、睡眠障害、過活動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知障害、痛覚過敏または感覚性障害である、請求項５６に記載の方法。
【請求項６３】
請求項５６に記載の方法によって同定される、因子。
【請求項６４】
請求項６３に記載の因子であって、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストである、因子。
【請求項６５】
請求項６４に記載の因子であって、前記アゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体、または抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
【請求項６６】
請求項６４に記載の因子であって、前記アンタゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体、または抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
【請求項６７】
因子を同定する方法であって、該因子は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する、神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；脂質代謝障害；または発生異常を改善または調節し、該方法は、以下：
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物を提供する工程であって、該非ヒトトランスジェニック動物のゲノムは、ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする該遺伝子の破壊を含む、工程；
（ｂ）該非ヒトトランスジェニック動物に、試験因子を投与する工程；および
（ｃ）該試験因子が、該非ヒトトランスジェニック動物において、該神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；脂質代謝障害；または発生異常を改善または調節する否かを決定する工程
を包含する、方法。
【請求項６８】
前記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の増加した不安様反応である、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応である、請求項６７に記載の方法。
【請求項７０】
前記神経障害は、ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズムである、請求項６７に記載の方法。
【請求項７１】
前記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調である、請求項６７に記載の方法。
【請求項７２】
前記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の障害された運動協調である、請求項６７に記載の方法。
【請求項７３】
前記神経障害は、鬱病、全般性不安障害、注意欠陥障害、睡眠障害、過活動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知障害、痛覚過敏または感覚性障害である、請求項７３に記載の方法。
【請求項７４】
前記眼の異常は、網膜の異常である、請求項６７に記載の方法。
【請求項７５】
前記眼の異常は、視覚上の問題または盲と一致する、請求項６７に記載の方法。
【請求項７６】
前記網膜の異常は、色素性網膜炎と一致する、請求項７４に記載の方法。
【請求項７７】
前記網膜の異常は、網膜変性または網膜形成異常によって特徴付けられる、請求項７４に記載の方法。
【請求項７８】
請求項７４に記載の方法であって、前記網膜の異常は、網膜形成異常、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑水腫、角膜新生血管形成、角膜移植片新生血管形成、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜新生血管形成、角の新生血管形成（ルベオーシス）、眼の血管新生疾患、脈管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーヴズ病を含む）、角膜および他の組織の移植、網膜の動脈の閉塞もしくは閉鎖；網膜脈管構造の二次的な萎縮を引き起こす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在夜盲、コロイデレミア、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディノ−メインザー症候群、シニア−ローケン症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候、先天性脊椎・骨端異形成症、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジル症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール−マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β−リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン症、またはマンノシドーシスと一致する、方法。
【請求項７９】
前記眼の異常は、白内障である、請求項６７に記載の方法。
【請求項８０】
請求項７９に記載の方法であって、前記白内障が、ヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症またはコンラーディ症候群のような全身性疾患である、方法。
【請求項８１】
前記発生異常は、胚の死亡または生存率の低下を包含する、請求項６７に記載の方法。
【請求項８２】
請求項６７に記載の方法であって、前記心血管障害、内皮障害または脈管形成障害は、糖尿病のような動脈疾患；乳頭水腫；眼の過形成；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；急性心筋梗塞のような心筋梗塞、心肥大およびうっ血性心不全のような心不全；高血圧症；炎症性脈管炎；レーノー病およびレーノー現象；動脈瘤および動脈再狭窄；血栓性静脈炎、リンパ管炎およびリンパ水腫のような静脈およびリンパの疾患；末梢性脈管疾患；脈管腫瘍（例えば、血管腫（毛細血管腫および海綿状血管腫））のような癌、グロムス腫瘍、毛細血管拡張症、杆菌性血管腫症状、血管内皮腫、血管肉腫、血管周囲細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫およびリンパ管肉腫；腫瘍新脈管形成；創傷、熱傷、および他の傷害された組織、移植片固定、瘢痕のような外傷；虚血、再灌流障害；慢性関節リウマチ；脳血管疾患；急性腎不全のような腎疾患、または骨粗鬆症である、方法。
【請求項８３】
請求項６７に記載の方法であって、前記免疫障害は、全身性エリテマトーデス；慢性関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身性硬化症（強皮症）；特発性炎症性ミオパシー（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性脈管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫汎血球減少、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーヴズ病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ急性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎炎）；糖尿病；免疫媒介性腎臓病（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢神経系および末梢神経系の脱髄疾患（例えば、多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシーもしくはギヤン−バレー症候群および慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー）；感染性肝炎（Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎および他の非肝臓向性ウイルス性肝炎）、自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎および硬化性胆管炎のような、肝胆道疾患；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン感受性腸症およびホウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑および接触皮膚炎、乾癬を含む、自己免疫性もしくは免疫媒介性の皮膚疾患；喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症およびじんま疹のような、アレルギー性疾患；好酸球性肺炎、特発性肺線維症および過敏性肺炎のような肺の免疫疾患；または、移植片拒絶および対宿主性移植片病を含む移植関連疾患である、方法。
【請求項８４】
前記骨代謝異常または骨代謝障害は、関節炎、骨粗鬆症または大理石骨病である、請求項６７に記載の方法。
【請求項８５】
請求項６７に記載の方法であって、前記非ヒトトランスジェニック動物は、性別が一致する野生型同腹仔と比較して、以下の生理学的特徴：オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応；ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズム；逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調；機能観察試験における眼球突出；衰弱した網膜の脈管によって特徴付けられる重篤な網膜変性；微細動脈瘤；減少した平均動脈対静脈比；減少したレンズサイズ；成熟白内障；増加した平均血清コレステロールレベル；増加した平均血清トリグリセリドレベル；減少した平均血清コレステロールレベル；増強されたグルコース寛容；低下したグルコース寛容；増加した平均血清インスリンレベル；低下した平均血清インスリンレベル；オボアルブミン負荷に対する平均血清ＩｇＧ１応答および平均血清ＩｇＧ２ａ応答の低下；オボアルブミン負荷に対する平均血清ＩｇＧ１応答および平均血清ＩｇＧ２ａ応答の増大；オボアルブミン負荷に対するＩｇＧ２ａ応答の減損；減少した血中好中球平均絶対数；増加したＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＡ、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂの平均血清レベル；ＬＰＳ負荷に対する平均血清ＴＮＦ−α応答およびＩＬ６応答の増加；減少した平均血小板数；減少したＲＢＣ、血小板、ヘモグロビンおよびヘマトクリットのレベル；体脂肪の平均パーセントの増加；低下した皮膚線維芽細胞増殖；増加した皮膚線維芽細胞増殖；増加した総組織質量（ＴＴＭ）；増加した除脂肪体重（ＬＢＭ）；増加した骨塩密度（ＢＭＤ）；増加した骨塩量（ＢＭＣ）、増加した骨塩含有指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）；増加した大腿骨幹中央部の総面積；海綿質体積および結合密度の減少；減少した体積骨塩密度；減少した骨塩含有指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）；全身、大腿骨および脊椎骨における減少した平均骨塩密度；減少した平均骨塩密度（ＢＭＤ）、減少した平均海綿質体積、減少した厚み、および減少した結合密度；減少した体重および体長；減少した総組織質量（ＴＴＭ）；減少した除脂肪体重（ＬＢＭ）；減少した総脂肪質量；減少した骨塩量（ＢＭＣ）；全身および大腿骨における減少した平均体積骨塩密度（ｖＢＭＤ）；減少した大腿骨幹中央部の断面積および厚み；減少した平均体重および平均体長、減少した総体脂肪平均パーセント、減少した総組織質量および減少した骨塩密度を伴う増殖遅延；減少した大腿骨幹中央部皮質厚；心臓肥大；障害された腎機能；腎臓中腎管の発達異常；精細管変性；大きく減少した生存率［３匹のみの生き残った（−／−）変異マウスは、予測される１４匹の（−／−）変異体と比較して、重度の成長遅延を示す］；予測されるホモ接合体の数の顕著な減少；ならびに、胚の死亡、のうちの少なくとも１つを示す、方法。
【請求項８６】
請求項６７に記載の方法によって同定される、因子。
【請求項８７】
請求項８６に記載の因子であって、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストである、因子。
【請求項８８】
請求項８７に記載の因子であって、前記アゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体、または抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
【請求項８９】
請求項８７に記載の因子であって、前記アンタゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体、または抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
【請求項９０】
請求項６７に記載の方法によって同定される、治療因子。
【請求項９１】
以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドの発現を調節する因子を同定する方法であって、該方法は、以下：
（ａ）試験因子を宿主細胞と接触させる工程であって、該宿主細胞は、ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドを発現する、工程；および
（ｂ）該試験化合物が、該宿主細胞による、該ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドの該発現を調節するか否かを決定する、工程
を包含する、方法。
【請求項９２】
請求項９１に記載の方法によって同定される、因子。
【請求項９３】
請求項９２に記載の因子であって、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストである、因子。
【請求項９４】
請求項９３に記載の因子であって、前記アゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体、または抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
【請求項９５】
請求項９３に記載の因子であって、前記アンタゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体、または抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
【請求項９６】
遺伝子の破壊に関連する状態に影響し得る治療因子を評価する方法であって、該遺伝子は、ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードし、該方法は、以下：
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物を提供する工程であって、該非ヒトトランスジェニック動物のゲノムは、ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする該遺伝子の破壊を含む、工程；
（ｂ）該（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴を測定する工程；
（ｃ）該（ｂ）の測定された生理学的特徴を、性別が一致する野生型動物の生理学的特徴と比較する工程であって、該野生型動物の生理学的特徴と異なる、該非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴は、該非ヒトトランスジェニック動物における該遺伝子破壊の結果得られる状態として同定される、工程；
（ｄ）該（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に、試験因子を投与する工程；および
（ｅ）該非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊に関連する該同定される状態に対する該試験因子の効果を評価する工程
を包含する、方法。
【請求項９７】
請求項９６に記載の方法であって、前記状態は、以下：神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；脂質代謝障害；または発生異常である、方法。
【請求項９８】
請求項９６に記載の方法によって同定される、治療因子。
【請求項９９】
請求項９８に記載の治療因子であって、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストである、因子。
【請求項１００】
請求項９９に記載の因子であって、前記アゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体、または抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
【請求項１０１】
請求項９９に記載の因子であって、前記アンタゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体、または抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
【請求項１０２】
請求項９８に記載の治療因子を含有する、薬学的組成物。
【請求項１０３】
遺伝子の破壊に関連する、神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；または胚の死亡を、処置または予防または改善する方法であって、該遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードし、該方法は、このような処置を必要とする、既に該障害を有し得るか、または該障害を有する傾向にあり得るか、または該障害が予防されるべきであり得る被験体に、治療有効量の請求項９４に記載の治療因子またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与し、それによって該障害を効果的に処置または予防または改善する工程を包含する、方法。
【請求項１０４】
前記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の増加した不安様反応である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
前記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０６】
前記神経障害は、ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズムである、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０７】
前記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０８】
前記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の障害された運動協調である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０９】
前記神経障害は、鬱病、全般性不安障害、注意欠陥障害、睡眠障害、過活動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知障害、痛覚過敏または感覚性障害である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１０】
前記眼の異常は、網膜の異常である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１１】
前記眼の異常は、視覚上の問題または盲と一致する、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１２】
前記網膜の異常は、色素性網膜炎と一致する、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１３】
前記網膜の異常は、網膜変性または網膜形成異常によって特徴付けられる、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１４】
請求項１１０に記載の方法であって、前記網膜の異常は、網膜形成異常、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑水腫、角膜新生血管形成、角膜移植片新生血管形成、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜新生血管形成、角の新生血管形成（ルベオーシス）、眼の血管新生疾患、脈管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーヴズ病を含む）、角膜および他の組織の移植、網膜の動脈の閉塞もしくは閉鎖；網膜脈管構造の二次的な萎縮を引き起こす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在夜盲、コロイデレミア、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディノ−メインザー症候群、シニア−ローケン症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候、先天性脊椎・骨端異形成症、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジル症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール−マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β−リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン症、またはマンノシドーシスと一致する、方法。
【請求項１１５】
前記眼の異常は、白内障である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１６】
請求項１１５に記載の方法であって、前記白内障は、ヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症またはコンラーディ症候群のような全身性疾患である、方法。
【請求項１１７】
前記発生異常は、胚の死亡または生存率の低下を包含する、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１８】
請求項１０３に記載の方法であって、前記心血管障害、内皮障害または脈管形成障害は、糖尿病のような動脈疾患；乳頭水腫；眼の過形成；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；急性心筋梗塞のような心筋梗塞、心肥大およびうっ血性心不全のような心不全；高血圧症；炎症性脈管炎；レーノー病およびレーノー現象；動脈瘤および動脈再狭窄；血栓性静脈炎、リンパ管炎およびリンパ水腫のような静脈およびリンパの疾患；末梢性脈管疾患；脈管腫瘍（例えば、血管腫（毛細血管腫および海綿状血管腫））のような癌、グロムス腫瘍、毛細血管拡張症、杆菌性血管腫症状、血管内皮腫、血管肉腫、血管周囲細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫およびリンパ管肉腫；腫瘍新脈管形成；創傷、熱傷、および他の傷害された組織、移植片固定、瘢痕のような外傷；虚血  再灌流障害；慢性関節リウマチ；脳血管疾患；急性腎不全のような腎疾患、または骨粗鬆症である、方法。
【請求項１１９】
請求項１０３に記載の方法であって、前記免疫障害は、全身性エリテマトーデス；慢性関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身性硬化症（強皮症）；特発性炎症性ミオパシー（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性脈管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫汎血球減少、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーヴズ病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ急性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎炎）；糖尿病；免疫媒介性腎臓病（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢神経系および末梢神経系の脱髄疾患（例えば、多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシーもしくはギヤン−バレー症候群および慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー）；感染性肝炎（Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎および他の非肝臓向性ウイルス性肝炎）、自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎および硬化性胆管炎のような、肝胆道疾患；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン感受性腸症およびホウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑および接触皮膚炎、乾癬を含む、自己免疫性もしくは免疫媒介性の皮膚疾患；喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症およびじんま疹のような、アレルギー性疾患；好酸球性肺炎、特発性肺線維症および過敏性肺炎のような肺の免疫疾患；または移植片拒絶および対宿主性移植片病を含む移植関連疾患である、方法。
【請求項１２０】
前記骨代謝異常または骨代謝障害は、関節炎、骨粗鬆症または大理石骨病である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１２１】
因子を同定する方法であって、該因子は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する、神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；脂質代謝障害；または発生異常を改善または調節し、該方法は、以下：
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物細胞培養物を提供する工程であって、該培養物の各細胞は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする該遺伝子の破壊を含む、工程；
（ｂ）試験因子を該細胞培養物に投与する工程；および
（ｃ）該試験因子が、該細胞培養物において、該神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；脂質代謝障害；または発生異常を改善または調節するか否かを決定する工程
を包含する、方法。
【請求項１２２】
前記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の増加した不安様反応である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２３】
前記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２４】
前記神経障害は、ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズムである、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２５】
前記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２６】
前記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の障害された運動協調である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２７】
前記神経障害は、鬱病、全般性不安障害、注意欠陥障害、睡眠障害、過活動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知障害、痛覚過敏または感覚性障害である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２８】
前記眼の異常は、網膜の異常である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２９】
前記眼の異常は、視覚上の問題または盲と一致する、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１３０】
前記網膜の異常は、色素性網膜炎と一致する、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３１】
前記網膜の異常は、網膜変性または網膜形成異常によって特徴付けられる、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３２】
請求項１２８に記載の方法であって、前記網膜の異常は、網膜形成異常、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑水腫、角膜新生血管形成、角膜移植片新生血管形成、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜新生血管形成、角の新生血管形成（ルベオーシス）、眼の血管新生疾患、脈管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーヴズ病を含む）、角膜および他の組織の移植、網膜の動脈の閉塞もしくは閉鎖；網膜脈管構造の二次的な萎縮を引き起こす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在夜盲、コロイデレミア、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディノ−メインザー症候群、シニア−ローケン症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候、先天性脊椎・骨端異形成症、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジル症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール−マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β−リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン症、またはマンノシドーシスと一致する、方法。
【請求項１３３】
前記眼の異常は、白内障である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１３４】
請求項１３３に記載の方法であって、前記白内障は、ヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症またはコンラーディ症候群のような全身性疾患である、方法。
【請求項１３５】
前記発生異常は、胚の死亡または生存率の低下を包含する、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１３６】
請求項１２１に記載の方法であって、前記心血管障害、内皮障害または脈管形成障害は、糖尿病のような動脈疾患；乳頭水腫；眼の過形成；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；急性心筋梗塞のような心筋梗塞、心肥大およびうっ血性心不全のような心不全；高血圧症；炎症性脈管炎；レーノー病およびレーノー現象；動脈瘤および動脈再狭窄；血栓性静脈炎、リンパ管炎およびリンパ水腫のような静脈およびリンパの疾患；末梢性脈管疾患；脈管腫瘍（例えば、血管腫（毛細血管腫および海綿状血管腫））のような癌、グロムス腫瘍、毛細血管拡張症、杆菌性血管腫症状、血管内皮腫、血管肉腫、血管周囲細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫およびリンパ管肉腫；腫瘍新脈管形成；創傷、熱傷、および他の傷害された組織、移植片固定、瘢痕のような外傷；虚血、再灌流障害；慢性関節リウマチ；脳血管疾患；急性腎不全のような腎疾患、または骨粗鬆症である、方法。
【請求項１３７】
請求項１２１に記載の方法であって、前記免疫障害は、全身性エリテマトーデス；慢性関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身性硬化症（強皮症）；特発性炎症性ミオパシー（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性脈管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫汎血球減少、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーヴズ病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ急性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎炎）；糖尿病；免疫媒介性腎臓病（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢神経系および末梢神経系の脱髄疾患（例えば、多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシーもしくはギヤン−バレー症候群および慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー）；感染性肝炎（Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎および他の非肝臓向性ウイルス性肝炎）、自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎および硬化性胆管炎のような、肝胆道疾患；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン感受性腸症およびホウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑および接触皮膚炎、乾癬を含む、自己免疫性もしくは免疫媒介性の皮膚疾患；喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症およびじんま疹のような、アレルギー性疾患；好酸球性肺炎、特発性肺線維症および過敏性肺炎のような肺の免疫疾患；または、移植片拒絶および対宿主性移植片病を含む移植関連疾患である、方法。
【請求項１３８】
前記骨代謝異常または骨代謝障害は、関節炎、骨粗鬆症または大理石骨病である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１３９】
請求項１２１に記載の方法によって同定される、因子。
【請求項１４０】
請求項１３９に記載の因子であって、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストである、因子。
【請求項１４１】
請求項１４０に記載の因子であって、前記アゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体、または抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
【請求項１４２】
請求項１４０に記載の因子であって、前記アンタゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体、または抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
【請求項１４３】
請求項１２１に記載の方法によって同定される、治療因子。
【請求項１４４】
遺伝子の破壊に関連する表現型を調節する方法であって、該遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードし、該方法は、既に該表現型を有し得るか、または該表現型を有する傾向にあり得るか、または該表現型が防止されるべきであり得る被験体に、有効量の請求項４６に記載の因子またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与し、それによって該表現型を効果的に調節する工程を包含する、方法。
【請求項１４５】
遺伝子の破壊に関連する生理学的特徴を調節する方法であって、該遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードし、該方法は、既に該生理学的特徴を表し得るか、または該生理学的特徴を表す傾向にあり得るか、または該生理学的特徴が防止されるべきであり得る被験体に、有効量の請求項５２に記載の因子またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与し、それによって該生理学的特徴を効果的に調節する工程を包含する、方法。
【請求項１４６】
遺伝子の破壊に関連する行動を調節する方法であって、該遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードし、該方法は、既に該行動を表し得るか、または該行動を表す傾向にあり得るか、または該行動が防止されるべきであり得る被験体に、有効量の請求項６３に記載の因子またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与し、それによって該行動を効果的に調節する工程を包含する、方法。
【請求項１４７】
以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドの発現を調節する方法であって、該方法は、該ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドを発現する宿主細胞に、有効量の請求項９２に記載の因子またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与し、それによって該ポリペプチドの発現を効果的に調節する工程を包含する、方法。
【請求項１４８】
遺伝子の破壊に関連する状態を調節する方法であって、該遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードし、該方法は、既に該状態を有し得るか、または該状態を有する傾向にあり得るか、または該状態が予防されるべきであり得る被験体に、治療有効量の請求項９８に記載の治療因子またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与し、それによって該状態を効果的に調節する工程を包含する、方法。
【請求項１４９】
遺伝子の破壊に関連する、神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；または胚の死亡を、処置または予防または改善する方法であって、該遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードし、該方法は、非ヒトトランスジェニック動物細胞培養物に、治療有効量の請求項１３９に記載の因子またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与し、これによって、該障害を効果的に処置または予防または改善する工程を包含し、該培養物の各細胞は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、疾患または障害の診断および処置のための組成物（トランスジェニック動物およびノックアウト動物を含む）、ならびにそのような組成物を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
細胞外タンパク質は、とりわけ、多細胞生物の形成、分化および維持において、重要な役割を果たす。多くの個々の細胞の運命（例えば、増殖、移動、分化、または他の細胞との相互作用）は、代表的に、他の細胞および／または周辺の環境から受ける情報によって支配されている。この情報は、多くの場合、分泌されたポリペプチド（例えば、有糸分裂因子、生存因子、細胞毒性因子、分化因子、神経ペプチド、およびホルモン）によって伝達され、これらは、次いで、多様な細胞レセプターまたは膜結合タンパク質によって受容され、解釈される。これらの分泌されたポリペプチドまたはシグナル伝達分子は、通常、細胞の分泌経路を通過し、細胞外環境におけるそれらの作用部位に到達する。
【０００３】
分泌されたタンパク質は、種々の産業上の用途（製薬、診断、バイオセンサーおよびバイオリアクターを含む）を有する。現在利用可能なほとんどのタンパク質薬物（例えば、血栓溶解因子、インターフェロン、インターロイキン、エリトロポエチン、コロニー刺激因子、および種々の他のサイトカイン）は、分泌性タンパク質である。これらのレセプターは、膜タンパク質であり、やはり治療因子または診断用因子としての潜在能力を有する。新規の、ネイティブの分泌されたタンパク質を同定するために、産業界および学界の両方によって、努力がなされている。多くの努力が、新規の分泌タンパク質についてのコード配列を同定するために、哺乳動物組換えＤＮＡライブラリのスクリーニングに焦点を当てている。スクリーニング方法および技術の例は、文献に記載されている（例えば、非特許文献１；特許文献１）。
【０００４】
膜結合タンパク質およびレセプターは、とりわけ、多細胞生物の形成、分化および維持において重要な役割を果たし得る。多くの個々の細胞（例えば、増殖、移動、分化、または他の細胞との相互作用）の運命は、代表的に、他の細胞および／または種編の環境から受ける情報によって支配されている。この情報は、多くの場合、分泌されたポリペプチド（例えば、有糸分裂因子、生存因子、細胞毒性因子、分化因子、神経ペプチド、およびホルモン）によって伝達され、これらは、次いで、多様な細胞レセプターまたは膜結合タンパク質によって受容されて、解釈される。このような膜結合タンパク質および細胞レセプターとしては、サイトカインレセプター、レセプターキナーゼ、レセプターホスファターゼ、細胞−細胞相互作用に関与するレセプター、ならびにセレクチンおよびインテグリンのような細胞接着分子が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、細胞増殖および分化を調節するシグナルの伝達は、種々の細胞タンパク質のリン酸化によって部分的に調節される。タンパク質チロシンキナーゼ（上記プロセスを触媒する酵素）もまた、増殖因子レセプターとして作用し得る。例としては、線維芽細胞増殖因子レセプターおよび神経増殖因子レセプターが挙げられる。
【０００５】
膜結合タンパク質およびレセプター分子は、種々の産業上の用途（薬学的因子および診断用因子を含む）を有する。レセプター免疫接着は、例えば、レセプター−リガンド相互作用をブロックするための治療因子として利用され得る。膜結合タンパク質はまた、関連するレセプター／リガンド相互作用の潜在的なペプチドインヒビターまたは小分子インヒビターをスクリーニングするために利用され得る。
【０００６】
新規の、ネイティブのレセプターまたは膜結合タンパク質を同定するために、産業界および学界の両方によって、努力がなされている。多くの努力が、新規のレセプターまたは膜結合タンパク質についてのコード配列を同定するために、哺乳動物組換えＤＮＡライブラリのスクリーニングに焦点を当てている。
【０００７】
生物学的プロセスおよび疾患プロセスにおける分泌タンパク質および膜結合タンパク質の重要性を考慮して、インビボでの研究および特徴づけは、疾患および機能不全の予防、改善または矯正に有用な、価値のある療法および／または処置の同定および発見を提供し得る。これに関して、遺伝的に操作されたマウスは、ヒト疾患に関連する生物学的プロセス（免疫学、癌、神経生物学、心血管生物学、肥満および他の多くを含む）の機能的精査のための貴重な道具であることが証明されている。遺伝子ノックアウトは、インビボで高度に特異的なアンタゴニストの活性を予測することによって、薬物作用の生物学的機構をモデル化していると見られ得る。ノックアウトマウスは、薬物活性をモデル化することが示されている。特定の薬学的標的タンパク質について欠損しているマウスの表現型は、対応するアンタゴニスト薬物によって引き起こされたヒト臨床表現型に類似し得る。遺伝子ノックアウトは、標的の作用の機構、標的の主要な生理学的役割、および哺乳動物における標的の阻害から生じる機構ベースの副作用の発見を可能にする。これらの型の例としては、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）に欠損のあるマウス（非特許文献２）、およびシクロオキシゲナーゼ−１（ＣＯＸ１）遺伝子に欠損のあるマウス（非特許文献３）が挙げられる。逆に、マウスにおいてその遺伝子をノックアウトすることは、対応する標的に対するアゴニスト薬の投与後にヒトで観察される表現型効果と反対の表現型効果を有し得る。例としては、以下が挙げられる：エリスロポエチンノックアウト（非特許文献４）（ここで、この変異の結果は、赤血球産生の欠損である）、およびＧＡＢＡ（Ａ）−Ｒ−β３ノックアウト（非特許文献５）（ここで、変異マウスは、過活動性および過反応性を示す）。これらの表現型の両方は、ヒトにおけるエリスロポエチンおよびベンゾジアゼピンの投与の効果と反対である。マウス遺伝学を使用して検証される表暦の顕著な例は、ＡＣＣ２遺伝子である。ヒトＡＣＣ２遺伝子は、数年前に同定されたが、薬物開発のための標的としてのＡＣＣ２への関心は、ごく最近、ノックアウトマウスを使用したＡＣＣ２機能の分析後に刺激された。ＡＣＣ２変異マウスは、それらの野生型同腹仔よりも多く食べるが、より多く脂肪を燃焼し、その脂肪細胞中により少ない脂肪を貯蔵する。このことは、この酵素を、肥満の処置における化学的拮抗作用に関する有望な標的とさせる（非特許文献６）。
【０００８】
本出願では、変異された遺伝子破壊は、以下の種々の疾患状態または機能不全に関連する表現型観察をもたらした：ＣＮＳ／神経学的妨害または障害（例えば、不安）；眼の異常および関連する疾患；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害（アテローム性動脈硬化症が挙げられる）；異常代謝性障害（糖尿病、ならびに増加した血清トリグリセリドレベルおよびコレステロールレベルに関連する異脂肪血症（ｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉａｓ）が挙げられる）；免疫障害および炎症性障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害（例えば、関節炎、骨粗鬆症および大理石骨病）；または発生異常（例えば、胚の死亡）。
【特許文献１】米国特許第５，５３６，６３７号明細書
【非特許文献１】Ｋｌｅｉｎら，「Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．」，１９９６年，第９３巻，ｐ．７１０８−７１１３
【非特許文献２】Ｅｓｔｈｅｒ，Ｃ．Ｒ．ら，「Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．」，１９９６年，第７４巻，ｐ．９５３−９６５
【非特許文献３】Ｌａｎｇｅｎｂａｃｈ，Ｒ．ら，「Ｃｅｌｌ」，１９９５年，第８３巻，ｐ．４８３−４９２
【非特許文献４】Ｗｕ，Ｃ．Ｓ．ら，「Ｃｅｌｌ」，１９９６年，第８３巻，ｐ．５９−６７
【非特許文献５】ＤｅＬｏｒｅｙ，Ｔ．Ｍ．，「Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．」，１９９８年，第１８巻，ｐ．８５０５−８５１４
【非特許文献６】Ａｂｕ−Ｅｌｈｅｉｇａ，Ｌ．ら，「Ｓｃｉｅｎｃｅ」，２００１年，第２９１巻，ｐ．２６１３−２６１６
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
（発明の要旨）
（Ａ．実施形態）
本発明は、単離された核酸分子を提供する。この単離された核酸分子は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７、もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。
【００１０】
一局面において、上記単離された核酸分子は、（ａ）以下をコードするＤＮＡ分子：本明細書において開示されるような全長アミノ酸配列；本明細書において開示されるようなシグナルペプチドを欠くアミノ酸配列；本明細書において開示されるような、シグナルペプチドを有するかもしくは有さない、膜貫通タンパク質の細胞外ドメイン；または本明細書において開示されるような全長アミノ酸配列の任意の他の特別に定義されたフラグメント、を有する、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７、もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド、あるいは（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補体、に対して、少なくとも約８０％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８２％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８３％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８４％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８５％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８６％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８７％核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８８％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８９％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９０％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９１％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９２％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９３％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９４％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９５％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９６％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９７％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９８％の核酸配列同一性、およびあるいは少なくとも約９９％の核酸配列同一性を有する、ヌクレオチド配列を含む。
【００１１】
他の局面において、上記単離された核酸分子は、（ａ）以下を含むＤＮＡ分子：本明細書において開示されるような、全長の以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドのｃＤＮＡのコード配列；本明細書において開示されるようなシグナルペプチドを欠く、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドのコード配列；本明細書において開示されるような、シグナルペプチドを有するかもしくは有さない、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの膜貫通タンパク質の細胞外ドメインのコード配列；または本明細書において開示されるような全長アミノ酸配列の任意の他の特別に定義されたフラグメントのコード配列、あるいは（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補体、に対して、少なくとも約８０％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８２％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８３％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８４％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８５％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８６％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８７％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８８％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８９％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９０％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９１％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９２％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９３％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９４％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９５％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９６％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９７％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９８％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９９％の核酸配列同一性、を有する、ヌクレオチド配列を含む。
【００１２】
さらなる局面において、本発明は、単離された核酸分子に関する。この単離された核酸分子は、（ａ）本明細書において開示されるような、ＡＴＣＣに寄託された任意のヒトタンパク質ｃＤＮＡによってコードされるものと同一の成熟ポリペプチドをコードするＤＮＡ分子、または（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補体、に対して、少なくとも約８０％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８２％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８３％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８４％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８５％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８６％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８７％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８８％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８９％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９０％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９１％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９２％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９３％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９４％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９５％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９６％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９７％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９８％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９９％の核酸配列同一性、を有する、ヌクレオチド配列を含む。
【００１３】
本発明の別の局面は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子を提供する。上記は、欠失した膜貫通ドメイン（ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ｄｏｍａｉｎ−ｄｅｌｅｔｅｄ）または不活性化膜貫通ドメイン（ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ｄｏｍａｉｎ−ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ）のいずれかであるか、またはそれらをコードするヌクレオチド配列の相補体である。ここで、このようなポリペプチドの上記膜貫通ドメインは、本明細書において開示される。したがって、本明細書において記載される、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの可溶性細胞外ドメインが企図される。
【００１４】
本発明はまた、以下のポリペプチドをコードする配列のフラグメント、またはこれらの相補体を提供する：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０。これらは、例えば、以下のポリペプチドをコードするフラグメントに対するハイブリダイゼーションプローブとしての用途：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０（これらのフラグメントは、必要に応じて、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体に対する結合部位を含むポリペプチドをコードし得る）、またはアンチセンスオリゴヌクレオチドプローブとしての用途を見出し得る。このような核酸フラグメントは、通常、約１０ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約１０ヌクレオチド長であるか、あるいは、約１５ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約１５ヌクレオチド長であるか、あるいは、約２０ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約２０ヌクレオチド長であるか、あるいは、約３０ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約３０ヌクレオチド長であるか、あるいは、約４０ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約４０ヌクレオチド長であるか、あるいは、約５０ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約５０ヌクレオチド長であるか、あるいは、約６０ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約６０ヌクレオチド長であるか、あるいは、約７０ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約７０ヌクレオチド長であるか、あるいは、約８０ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約８０ヌクレオチド長であるか、あるいは、約９０ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約９０ヌクレオチド長であるか、あるいは、約１００ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約１００ヌクレオチド長であるか、あるいは、約１１０ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約１１０ヌクレオチド長であるか、あるいは、約１２０ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約１２０ヌクレオチド長であるか、あるいは、約１３０ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約１３０ヌクレオチド長であるか、あるいは、約１４０ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約１４０ヌクレオチド長であるか、あるいは、約１５０ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約１５０ヌクレオチド長であるか、あるいは、約１６０ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約１６０ヌクレオチド長であるか、あるいは、約１７０ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約１７０ヌクレオチド長であるか、あるいは、約１８０ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約１８０ヌクレオチド長であるか、あるいは、約１９０ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約１９０ヌクレオチド長であるか、あるいは、約２００ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約２００ヌクレオチド長であるか、あるいは、約２５０ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約２５０ヌクレオチド長であるか、あるいは、約３００ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約３００ヌクレオチド長であるか、あるいは、約３５０ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約３５０ヌクレオチド長であるか、あるいは、約４００ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約４００ヌクレオチド長であるか、あるいは、約４５０ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約４５０ヌクレオチド長であるか、あるいは、約５００ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約５００ヌクレオチド長であるか、あるいは、約６００ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約６００ヌクレオチド長であるか、あるいは、約７００ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約７００ヌクレオチド長であるか、あるいは、約８００ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約８００ヌクレオチド長であるか、あるいは、約９００ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約９００ヌクレオチド長であるか、そしてあるいは、約１０００ヌクレオチド長であるかまたは少なくとも約１０００ヌクレオチド長である。ここで、この文脈における用語「約」とは、参照ヌクレオチド配列長プラスまたはマイナスその参照長の１０％を意味する。以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の新規のフラグメントが、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と他の公知のヌクレオチド配列とを、多くの周知の配列アラインメントプログラムのいずれかを使用してアラインメントさせ、そして以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列フラグメントのいずれが新規であるか否かを決定することによって、慣習的な様式で決定され得ることに、注意すること。このようなＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の全てが、本明細書において企図される。また企図されるのは、これらのヌクレオチド分子フラグメントによってコードされるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドフラグメントであり、好ましくは、以下：抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体に対する結合部位を含む、それらのＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドフラグメントである。
【００１５】
本発明は、本明細書で上記に同定された任意の単離された核酸配列によってコードされる、単離された以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドを提供する。
【００１６】
特定の局面において、本発明は、単離された以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドに関し、これらのポリペプチドは、本明細書において開示されるような全長アミノ酸配列；本明細書において開示されるようなシグナルペプチドを欠くアミノ酸配列；本明細書において開示されるような、シグナルペプチドを有するかもしくは有さない、膜貫通タンパク質の細胞外ドメイン；または、本明細書において開示されるような全長アミノ酸配列の、任意の他の特別に定義されたフラグメント、を有する、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドに対して、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８２％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８３％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８４％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８６％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８７％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８８％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８９％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９１％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９２％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９３％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９４％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９６％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９７％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９８％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性、を有するアミノ酸配列を含む。
【００１７】
さらなる局面において、本発明は、単離された以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドに関する。これらのポリペプチドは、本明細書において開示されるような、ＡＴＣＣに寄託された任意のヒトタンパク質ｃＤＮＡによってコードされるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８２％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８３％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８４％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８５％  アミノ酸配列ｉｄｅｎｔｉｔｙ，ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｌｙ  少なくとも約８６％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８７％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８８％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８９％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９１％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９２％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９３％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９４％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９６％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９７％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９８％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性、を有するアミノ酸配列を含む。
【００１８】
１つの局面において、本発明は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の改変体ポリペプチドに関する。これらの改変体ポリペプチドは、約１０アミノ酸長であるかまたは少なくとも約１０アミノ酸長であるか、あるいは約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００アミノ酸長もしくはそれ以上であるか、または少なくとも約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００アミノ酸長もしくはそれ以上である。必要に応じて、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の改変体ポリペプチドは、ネイティブのＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド配列と比較した場合、１つの保存的アミノ酸置換を有するか、またはわずかに１つの保存的アミノ酸置換を有し、あるいはネイティブのＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド配列と比較した場合、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の保存的アミノ酸置換を有するか、またはわずかに２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の保存的アミノ酸置換を有する。
【００１９】
特定の局面において、本発明は、単離された以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドを提供する。これらのポリペプチドは、Ｎ末端シグナル配列および／または開始メチオニンがなく、そして本明細書において以前に記載されるようなアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列によってコードされる。上記を生成するためのプロセスもまた、本明細書において記載されており、これらのプロセスは、適切なコード核酸分子を含むベクターを含む宿主細胞を、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの発現に適切な条件下で培養する工程、ならびに上記細胞培養物から以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドを回収する工程を包含する。
【００２０】
本発明の別の局面は、単離された以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドを提供する。これらは、欠失した膜貫通ドメインまたは不活性化膜貫通ドメインのいずれかである。上記を生成するためのプロセスが本明細書において記載される。このプロセスは、適切なコード核酸分子を含むベクターを含む宿主細胞を、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの発現に適切な条件下で培養する工程、ならびに上記細胞培養物から以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドを回収する工程を包含する。
【００２１】
本発明は、本明細書において定義されるような、ネイティブのＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドのアゴニストおよびアンタゴニストを提供する。特に、上記アゴニストまたはアンタゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体であるか、または小分子である。
【００２２】
本発明は、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドに対するアゴニストまたはアンタゴニストを同定する方法を提供する。この方法は、上記ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドと候補分子とを接触させる工程、ならびに上記ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドによって媒介される生物学的活性をモニタリングする工程を包含する。好ましくは、上記ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドは、ネイティブのＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドである。
【００２３】
本発明は、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド；または本明細書において記載されるような、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドのアゴニストもしくはアンタゴニスト；または抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体を、キャリアとともに含む物質の、組成物を提供する。必要に応じて、上記キャリアは、薬学的に受容可能なキャリアである。
【００２４】
本発明は、医薬の調製のための、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド、または本明細書において以前に記載されるような、それらのアゴニストもしくはアンタゴニスト、または抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体の使用を提供する。この医薬は、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体に反応性の状態の処置に有用である。
【００２５】
本発明は、本明細書において記載される任意のポリペプチドをコードするＤＮＡを含むベクターを提供する。任意のこのようなベクターを含む宿主細胞もまた提供される。例として、この宿主細胞は、ＣＨＯ細胞、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、または酵母細胞であり得る。本明細書において記載される任意のポリペプチドを生成するためのプロセスがさらに提供され、このプロセスは、所望のポリペプチドの発現に適切な条件下で宿主細胞を培養する工程、およびその細胞培養物から上記所望のポリペプチドを回収する工程を包含する。
【００２６】
本発明は、異種ポリペプチドまたは異種アミノ酸配列に融合された本明細書において記載される任意の所望のポリペプチドを含む、キメラ分子を提供する。このようなキメラ分子の例は、エピトープタグ配列または免疫グロブリンのＦｃ領域に融合された本明細書において記載される任意の所望のポリペプチドを包含する。
【００２７】
本発明は、任意の上記もしくは下記のポリペプチドに対して、好ましくは特異的に、結合する抗体を提供する。必要に応じて、この抗体は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、抗体フラグメント、または単鎖抗体である。
【００２８】
本発明は、オリゴヌクレオチドプローブを提供する。このオリゴヌクレオチドプローブは、ゲノムＤＮＡおよびｃＤＮＡのヌクレオチド配列を単離するため、関連する遺伝子の発現を測定または検出するため、またはアンチセンスプローブとして有用であり得る。これらのプローブは、任意の上記もしくは下記のヌクレオチド配列に由来し得る。好ましいプローブ長は、上記されている。
【００２９】
本発明はまた、遺伝子の破壊に関連する表現型を同定する方法を提供する。この遺伝子は、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする。この方法は、以下を包含する：
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物を提供する工程であって、この非ヒトトランスジェニック動物のゲノムは、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む、工程；
（ｂ）上記非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴を測定する工程；および
（ｃ）上記測定された生理学的特徴を、性別が一致する野生型動物の生理学的特徴と比較する工程であって、上記野生型動物の生理学的特徴と異なる、上記非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴は、上記非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊の結果得られる表現型として同定される、工程。一局面において、上記非ヒトトランスジェニック動物は、哺乳動物である。別の局面において、上記哺乳動物は、げっ歯類である。さらに別の局面において、上記哺乳動物は、ラットまたはマウスである。一局面において、上記非ヒトトランスジェニック動物は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする遺伝子の破壊についての異型接合体である。別の局面において、上記表現型は、性別が一致する野生型同腹仔と比較した場合に上記非ヒトトランスジェニック動物によって示される上記表現型は、以下：神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；脂質代謝障害；または発生異常のうちの少なくとも１つである。
【００３０】
なお別の局面において、神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の増加した不安様反応である。なお別の局面において、上記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応である。なお別の局面において、上記神経障害は、ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズムである。なお別の局面において、上記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調である。なお別の局面において、上記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の障害された運動協調である。なお別の局面において、上記神経障害としては、鬱病、全般性不安障害、注意欠陥障害、睡眠障害、過活動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知障害、痛覚過敏および感覚性障害が挙げられる。このような神経障害は、「不安障害」として定義されるカテゴリーを含み、このカテゴリーは、以下を含むが、これらに限定されない：軽度から中程度の不安、全体的な病状に起因する不安障害、他の特定されない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を伴うパニック障害、広場恐怖症を伴わないパニック障害、心的外傷後ストレス障害、社会恐怖、社会不安、自閉症、特定の恐怖、物質誘発性不安障害、急性アルコール離脱、強迫性障害、広場恐怖症、単極性障害、双極性障害ＩもしくはＩＩ、他の特定されない双極性障害、循環病、鬱病性障害、大鬱病性障害、気分障害、物質誘発性気分障害、認知機能の増強、アルツハイマー病、脳卒中、または脳の外傷に関連する（しかしこれらに限定されない）認知機能の喪失、てんかんを含む（しかしこれらに限定されない）疾患または傷害から生じる発作、学習障害（ｄｉｓｏｒｄｅｒ）／障害（ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ）、脳性麻痺。さらに、不安障害は、人格障害にあてはまり得、人格障害としては、以下の型が挙げられるが、これらに限定されない：妄想、反社会性、回避性行動、境界性人格障害、依存、演技性（ｈｉｓｔｒｏｎｉｃ）、自己愛、強迫、分裂病質、および分裂型。
【００３１】
別の局面において、上記眼の異常は、網膜の異常である。さらに別の局面において、上記眼の異常は、視覚上の問題または盲と一致する。なお別の局面において、上記網膜の異常は、色素性網膜炎と一致するか、あるいは網膜変性または網膜形成異常によって特徴付けられる。
【００３２】
さらに別の局面において、上記網膜の異常は、以下と一致する：網膜形成異常、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑水腫、角膜新生血管形成、角膜移植片新生血管形成、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜新生血管形成、角（ａｎｇｌｅ）の新生血管形成（ルベオーシス）、眼の血管新生疾患、脈管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーヴズ病を含む）、角膜および他の組織の移植、網膜の動脈の閉塞もしくは閉鎖；網膜脈管構造の二次的な萎縮を引き起こす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在夜盲、コロイデレミア、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディノ−メインザー症候群（Ｓａｌｄｉｎｏ−Ｍａｉｎｚｅｒ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、シニア−ローケン症候群（Ｓｅｎｉｏｒ−Ｌｏｋｅｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候、先天性脊椎・骨端異形成症（ｄｙｓｐｌａｉｓａ  ｓｐｏｎｄｙｌｏｅｐｉｐｈｙｓａｒｉａ  ｃｏｎｇｅｎｔｉａ）、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジル（Ａｌａｇｉｌｅ）症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール−マリー（Ｐｉｅｒｒｅ−Ｍａｒｉｅ）症候群、スティックラー症候群、カロチン血症（ｃａｒｏｔｉｎｅｍｅｉａ）、シスチン症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β−リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン症、またはマンノシドーシス。
【００３３】
さらに別の局面において、上記眼の異常は、白内障である。さらになお別の局面において、上記白内障は、ヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー（Ｔｒｉｓｍｏｙ）１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症（ｈｙｐｏｐａｒａｔｈｒｏｉｄｉｓｍ）またはコンラーディ症候群のような全身性疾患である。
【００３４】
さらに別の局面において、上記発生異常は、胚の死亡または生存率の低下を包含する。
【００３５】
さらになお別の局面において、上記心血管障害、内皮障害または脈管形成障害は、以下である：糖尿病のような動脈疾患；乳頭水腫；眼の過形成；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；急性心筋梗塞のような心筋梗塞、心肥大およびうっ血性心不全のような心不全；高血圧症；炎症性脈管炎；レーノー病およびレーノー現象；動脈瘤および動脈再狭窄；血栓性静脈炎、リンパ管炎およびリンパ水腫のような静脈およびリンパの疾患；末梢性脈管疾患；脈管腫瘍（例えば、血管腫（毛細血管腫および海綿状血管腫））のような癌、グロムス腫瘍、毛細血管拡張症、杆菌性血管腫症状、血管内皮腫、血管肉腫、血管周囲細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫およびリンパ管肉腫；腫瘍新脈管形成；腫瘍新脈管形成；創傷、熱傷、および他の傷害された組織、移植片固定、瘢痕のような外傷；虚血  再灌流障害；慢性関節リウマチ；脳血管疾患；急性腎不全のような腎疾患、または骨粗鬆症。
【００３６】
さらに別の局面において、上記免疫障害は、以下に一致する：全身性エリテマトーデス；慢性関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身性硬化症（強皮症）；特発性炎症性ミオパシー（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性脈管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫汎血球減少、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーヴズ病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ急性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎炎）；糖尿病；免疫媒介性腎臓病（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢神経系および末梢神経系の脱髄疾患（例えば、多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシーもしくはギヤン−バレー症候群および慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー）；感染性肝炎（Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎および他の非肝臓向性ウイルス性肝炎）、自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎および硬化性胆管炎のような、肝胆道疾患；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン感受性腸症、およびホウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑および接触皮膚炎、乾癬を含む、自己免疫性もしくは免疫媒介性の皮膚疾患；喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症およびじんま疹のような、アレルギー性疾患；好酸球性肺炎、特発性肺線維症および過敏性肺炎のような、肺の免疫疾患；または、移植片拒絶および対宿主性移植片病を含む、移植関連疾患。
【００３７】
さらに別の局面において、上記骨代謝異常または骨代謝障害は、関節炎、骨粗鬆症、オステオペニアまたは大理石骨病である。
【００３８】
別の局面において、上記非ヒトトランスジェニック動物は、性別が一致する野生型同腹仔と比較して、以下の生理学的特徴うちの少なくとも１つを示す：オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応；ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズム；逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調；機能観察試験における眼球突出；衰弱した網膜の脈管によって特徴付けられる重篤な網膜変性；微細動脈瘤（ｍｉｃｒｏａｎｅｕｒｉｓｍｓ）；減少した平均動脈対静脈比；減少したレンズサイズ；成熟白内障；増加した平均血清コレステロールレベル；増加した平均血清トリグリセリドレベル；減少した平均血清コレステロールレベル；増強されたグルコース寛容；低下したグルコース寛容；増加した平均血清インスリンレベル；低下した平均血清インスリンレベル；オボアルブミン負荷に対する平均血清ＩｇＧ１応答および平均血清ＩｇＧ２ａ応答の低下；オボアルブミン負荷に対する平均血清ＩｇＧ１応答および平均血清ＩｇＧ２ａ応答の増大；オボアルブミン負荷に対するＩｇＧ２ａ応答の減損；減少した血中好中球平均絶対数；増加したＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＡ、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂの平均血清レベル；ＬＰＳ負荷に対する平均血清ＴＮＦ−α応答およびＩＬ６応答の増加；減少した平均血小板数；減少したＲＢＣ、血小板、ヘモグロビンおよびヘマトクリットのレベル；体脂肪の平均パーセントの増加；低下した皮膚線維芽細胞増殖；増加した皮膚線維芽細胞増殖；増加した総組織質量（ＴＴＭ）；増加した除脂肪体重（ＬＢＭ）；増加した骨塩密度（ＢＭＤ）；増加した骨塩量（ＢＭＣ），増加した骨塩含有指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）；増加した大腿骨幹中央部の総面積；海綿質体積および結合密度の減少；減少した体積骨塩密度；減少した骨塩含有指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）；全身、大腿骨および脊椎骨における減少した平均骨塩密度；減少した平均骨塩密度（ＢＭＤ），減少した平均海綿質体積、減少した厚み、および減少した結合密度；減少した体重および体長；減少した総組織質量（ＴＴＭ）；減少した除脂肪体重（ＬＢＭ）；減少した総脂肪質量；減少した骨塩量（ＢＭＣ）；全身および大腿骨における減少した平均体積骨塩密度（ｖＢＭＤ）；減少した大腿骨幹中央部の断面積および厚み；減少した平均体重および平均体長、減少した総体脂肪平均パーセント、減少した総組織質量および減少した骨塩密度を伴う増殖遅延；減少した大腿骨幹中央部皮質厚；心臓肥大；障害された腎機能；腎臓中腎管の発達異常；精細管変性；大きく減少した生存率［３匹のみの生き残った（−／−）変異マウスは、予測される１４匹の（−／−）変異体と比較して、重度の成長遅延を示す］；予測されるホモ接合体の数の顕著な減少；ならびに、胚の死亡。
【００３９】
本発明はまた、非ヒトトランスジェニック動物に由来する単離された細胞を提供する。この非ヒトトランスジェニック動物のゲノムは、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む。１つの局面において、上記単離された細胞は、マウス細胞である。なお別の局面において、上記マウス細胞は胚幹細胞である。さらに別の局面において、上記単離された細胞は、非ヒトトランスジェニック動物に由来し、この非ヒトトランスジェニック動物は、性別が一致する野生型同腹仔と比較して、以下の表現型のうちの少なくとも１つを示す：神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；脂質代謝障害；または発生異常。本発明はまた、表現型を調節する因子を同定する方法を提供する。この表現型は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する。この方法は、以下を包含する：
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物を提供する工程であって、この非ヒトトランスジェニック動物のゲノムは、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む、工程；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴を測定する工程；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的特徴を、性別が一致する野生型動物の生理学的特徴と比較する工程であって、上記野生型動物の生理学的特徴と異なる、上記非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴は、上記非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊の結果得られる表現型として同定される、工程；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に、試験因子を投与する工程；および
（ｅ）上記非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊に関連する上記同定される表現型を上記試験因子が調節するか否かを、決定する工程。
【００４０】
１つの局面において、上記遺伝子破壊に関連する表現型は、神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；脂質代謝障害；または発生異常を包含する。
【００４１】
なお別の局面において、上記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の増加した不安様反応である。なお別の局面において、上記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応である。なお別の局面において、上記神経障害は、ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズムである。なお別の局面において、上記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調である。なお別の局面において、上記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の障害された運動協調である。なお別の局面において、上記神経障害としては、鬱病、全般性不安障害、注意欠陥障害、睡眠障害、過活動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知障害、痛覚過敏および感覚性障害が挙げられる。このような神経障害としては、「不安障害」として定義されるカテゴリーが挙げられ、このカテゴリーは、以下を含むが、これらに限定されない：軽度から中程度の不安、全体的な病状に起因する不安障害、他の特定されない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を伴うパニック障害、広場恐怖症を伴わないパニック障害、心的外傷後ストレス障害、社会恐怖、社会不安、自閉症、特定の恐怖、物質誘発性不安障害、急性アルコール離脱、強迫性障害、広場恐怖症、単極性障害、双極性障害ＩもしくはＩＩ、他の特定されない双極性障害、循環病、鬱病性障害、大鬱病性障害、気分障害、物質誘発性気分障害、認知機能の増強、アルツハイマー病、脳卒中、または脳の外傷に関連する（しかしこれらに限定されない）認知機能の喪失、てんかんを含む（しかしこれらに限定されない）疾患または傷害から生じる発作、学習障害（ｄｉｓｏｒｄｅｒ）／障害（ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ）、脳性麻痺。さらに、不安障害は、人格障害にあてはまり得、人格障害としては、以下の型が挙げられるが、これらに限定されない：妄想、反社会性、回避性行動、境界性人格障害、依存、演技性、自己愛、強迫、分裂病質、および分裂型。
なお別の局面において、上記眼の異常は、網膜の異常である。さらに別の局面において、上記眼の異常は、視覚上の問題または盲と一致する。なお別の局面において、上記網膜の異常は、色素性網膜炎と一致するか、あるいは網膜変性または網膜形成異常によって特徴付けられる。
【００４２】
さらに別の局面において、上記網膜の異常は、以下と一致する：網膜形成異常、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑水腫、角膜新生血管形成、角膜移植片新生血管形成、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜新生血管形成、角の新生血管形成（ルベオーシス）、眼の血管新生疾患、脈管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーヴズ病を含む）、角膜および他の組織の移植、網膜の動脈の閉塞もしくは閉鎖；網膜脈管構造の二次的な萎縮を引き起こす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在夜盲、コロイデレミア、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディノ−メインザー症候群、シニア−ローケン症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候、先天性脊椎・骨端異形成症、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジル症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール−マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β−リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン症、またはマンノシドーシス。
【００４３】
さらに別の局面において、上記眼の異常は、白内障である。さらになお別の局面において、上記白内障は、ヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症、またはコンラーディ症候群のような全身性疾患である。
【００４４】
さらに別の局面において、上記発生異常は、胚の死亡または生存率の低下を包含する。
【００４５】
さらに別の局面において、上記心血管障害、内皮障害または脈管形成障害は、以下である：糖尿病のような動脈疾患；乳頭水腫；眼の過形成；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；急性心筋梗塞のような心筋梗塞、心肥大、およびうっ血性心不全のような心不全；高血圧症；炎症性脈管炎；レーノー病およびレーノー現象；動脈瘤および動脈再狭窄；血栓性静脈炎、リンパ管炎およびリンパ水腫のような静脈およびリンパの疾患；末梢性脈管疾患；脈管腫瘍（例えば、血管腫（毛細血管腫および海綿状血管腫））のような癌、グロムス腫瘍、毛細血管拡張症、杆菌性血管腫症状、血管内皮腫、血管肉腫、血管周囲細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫およびリンパ管肉腫；腫瘍新脈管形成；創傷、熱傷、および他の傷害された組織、移植片固定、瘢痕のような外傷；虚血  再灌流障害；慢性関節リウマチ；脳血管疾患；急性腎不全のような腎疾患、または骨粗鬆症。
【００４６】
さらに別の局面において、上記免疫障害は、以下に一致する：全身性エリテマトーデス；慢性関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身性硬化症（強皮症）；特発性炎症性ミオパシー（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性脈管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫汎血球減少、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーヴズ病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ急性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎炎）；糖尿病；免疫媒介性腎臓病（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢神経系および末梢神経系の脱髄疾患（例えば、多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシーもしくはギヤン−バレー症候群、および慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー）；感染性肝炎（Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎および他の非肝臓向性ウイルス性肝炎）、自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、および硬化性胆管炎のような、肝胆道疾患；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン感受性腸症およびホウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑および接触皮膚炎、乾癬を含む、自己免疫性もしくは免疫媒介性の皮膚疾患；喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症およびじんま疹のような、アレルギー性疾患；好酸球性肺炎、特発性肺線維症および過敏性肺炎のような、肺の免疫疾患；または、移植片拒絶および対宿主性移植片病を含む、移植関連疾患。
【００４７】
なお別の局面において、上記骨代謝異常または骨代謝障害は、関節炎、骨粗鬆症、オステオペニアまたは大理石骨病である。
【００４８】
別の局面において、上記非ヒトトランスジェニック動物は、性別が一致する野生型同腹仔と比較して、以下の生理学的特徴うちの少なくとも１つを示す：オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応；ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズム；逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調；機能観察試験における眼球突出；衰弱した網膜の脈管によって特徴付けられる重篤な網膜変性；微細動脈瘤；減少した平均動脈対静脈比；減少したレンズサイズ；成熟白内障；増加した平均血清コレステロールレベル；増加した平均血清トリグリセリドレベル；減少した平均血清コレステロールレベル；増強されたグルコース寛容；低下したグルコース寛容；増加した平均血清インスリンレベル；低下した平均血清インスリンレベル；オボアルブミン負荷に対する平均血清ＩｇＧ１応答および平均血清ＩｇＧ２ａ応答の低下；オボアルブミン負荷に対する平均血清ＩｇＧ１応答および平均血清ＩｇＧ２ａ応答の増大；オボアルブミン負荷に対するＩｇＧ２ａ応答の減損；減少した血中好中球平均絶対数；増加したＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＡ、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂの平均血清レベル；ＬＰＳ負荷に対する平均血清ＴＮＦ−α応答およびＩＬ６応答の増加；減少した平均血小板数；減少したＲＢＣ、血小板、ヘモグロビンおよびヘマトクリットのレベル；体脂肪の平均パーセントの増加；低下した皮膚線維芽細胞増殖；増加した皮膚線維芽細胞増殖；増加した総組織質量（ＴＴＭ）；増加した除脂肪体重（ＬＢＭ）；増加した骨塩密度（ＢＭＤ）；増加した骨塩量（ＢＭＣ）、増加した骨塩含有指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）；増加した大腿骨幹中央部の総面積；海綿質体積および結合密度の減少；減少した体積骨塩密度；減少した骨塩含有指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）；大腿骨および脊椎骨における減少した平均骨塩密度；減少した平均骨塩密度（ＢＭＤ）、減少した平均海綿質体積、減少した厚み、および減少した結合密度；減少した体重および体長；減少した総組織質量（ＴＴＭ）；減少した除脂肪体重（ＬＢＭ）；減少した総脂肪質量；減少した骨塩量（ＢＭＣ）；全身および大腿骨における減少した平均体積骨塩密度（ｖＢＭＤ）；減少した大腿骨幹中央部の断面積および厚み；減少した平均体重および平均体長、減少した総体脂肪平均パーセント、減少した総組織質量および減少した骨塩密度を伴う増殖遅延；減少した大腿骨幹中央部皮質厚；心臓肥大；障害された腎機能；腎臓中腎管の発達異常；精細管変性；大きく減少した生存率［３匹のみの生き残った（−／−）変異マウスは、予測される１４匹の（−／−）変異体と比較して、重度の成長遅延を示す］；予測されるホモ接合体の数の顕著な減少；ならびに、胚の死亡。
【００４９】
本発明は、遺伝子破壊に関連する表現型を調節する因子を提供する。１つの局面において、上記因子は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドのアゴニストもしくはアンタゴニストである。なお別の局面において、上記アゴニスト因子は、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である。さらに別の局面において、上記アンタゴニスト因子は、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である。
【００５０】
本発明はまた、遺伝子破壊に関連する生理学的特徴を調節する因子を同定する方法を提供する。上記生理学的特徴は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連し、この方法は、以下を包含する：
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物を提供する工程であって、上記非ヒトトランスジェニック動物のゲノムは、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む、工程；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物によって表される生理学的特徴を測定する工程；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的特徴を、性別が一致する野生型動物の生理学的特徴と比較する工程であって、野生型動物によって表される生理学的特徴と異なる、上記非ヒトトランスジェニック動物によって表される生理学的特徴は、遺伝子破壊に関連する生理学的特徴として同定される、工程；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験因子を投与する工程；および
（ｅ）遺伝子破壊に関連する上記生理学的特徴が調節されるか否かを決定する工程。
【００５１】
１つの局面において、上記非ヒトトランスジェニック動物は、性別が一致する野生型同腹仔と比較して、以下の生理学的特徴のうちの少なくとも１つを表す：
別の局面において、上記非ヒトトランスジェニック動物は、性別が一致する野生型同腹仔と比較して、以下の生理学的特徴のうちの少なくとも１つを表す：オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応；ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズム；逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調；機能観察試験における眼球突出；衰弱した網膜の脈管によって特徴付けられる重篤な網膜変性；微細動脈瘤；減少した平均動脈対静脈比；減少したレンズサイズ；成熟白内障；増加した平均血清コレステロールレベル；増加した平均血清トリグリセリドレベル；減少した平均血清コレステロールレベル；増強されたグルコース寛容；低下したグルコース寛容；増加した平均血清インスリンレベル；低下した平均血清インスリンレベル；オボアルブミン負荷に対する平均血清ＩｇＧ１応答および平均血清ＩｇＧ２ａ応答の低下；オボアルブミン負荷に対する平均血清ＩｇＧ１応答および平均血清ＩｇＧ２ａ応答の増大；オボアルブミン負荷に対するＩｇＧ２ａ応答の減損；減少した血中好中球平均絶対数；増加したＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＡ、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂの平均血清レベル；ＬＰＳ負荷に対する平均血清ＴＮＦ−α応答およびＩＬ６応答の増加；減少した平均血小板数；減少したＲＢＣ、血小板、ヘモグロビンおよびヘマトクリットのレベル；体脂肪の平均パーセントの増加；低下した皮膚線維芽細胞増殖；増加した皮膚線維芽細胞増殖；増加した総組織質量（ＴＴＭ）；増加した除脂肪体重（ＬＢＭ）；増加した骨塩密度（ＢＭＤ）；増加した骨塩量（ＢＭＣ）、増加した骨塩含有指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）；増加した大腿骨幹中央部の総面積；海綿質体積および結合密度の減少；減少した体積骨塩密度；減少した骨塩含有指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）；全身、大腿骨および脊椎骨における減少した平均骨塩密度；減少した平均骨塩密度（ＢＭＤ）、減少した平均海綿質体積、減少した厚み、および減少した結合密度；減少した体重および体長；減少した総組織質量（ＴＴＭ）；減少した除脂肪体重（ＬＢＭ）；減少した総脂肪質量；減少した骨塩量（ＢＭＣ）；全身および大腿骨における減少した平均体積骨塩密度（ｖＢＭＤ）；減少した大腿骨幹中央部の断面積および厚み；減少した平均体重および平均体長、減少した総体脂肪平均パーセント、減少した総組織質量および減少した骨塩密度を伴う増殖遅延；減少した大腿骨幹中央部皮質厚；心臓肥大；障害された腎機能；腎臓中腎管の発達異常；精細管変性；大きく減少した生存率［３匹のみの生き残った（−／−）変異マウスは、予測される１４匹の（−／−）変異体と比較して、重度の成長遅延を示す］；予測されるホモ接合体の数の顕著な減少；ならびに、胚の死亡。
【００５２】
本発明はまた、遺伝子破壊に関連する生理学的特徴を調節する因子を提供する。１つの局面において、上記因子は、遺伝子の破壊に関連する表現型のアゴニストもしくはアンタゴニストであり、この遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする。なお別の局面において、上記因子は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドのアゴニストもしくはアンタゴニストである。なお別の局面において、上記アゴニスト因子は、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である。さらに別の局面において、上記アンタゴニスト因子は、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である。
【００５３】
本発明はまた、行動を調節する因子を同定する方法を提供する。この行動は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連し、この方法は、以下を包含する：
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物を提供する工程であって、この非ヒトトランスジェニック動物のゲノムは、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む、工程；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物によって示された上記行動を観察する工程；
（ｃ）（ｂ）の観察された行動を、性別が一致する野生型動物の行動と比較する工程であって、上記野生型動物によって示される観察された行動と異なる、上記非ヒトトランスジェニック動物によって示される観察された行動は、遺伝子破壊に関連する行動として同定される、工程；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に、試験因子を投与する工程；および
（ｅ）遺伝子破壊に関連する行動を上記因子が調節するか否かを、決定する工程。
【００５４】
１つの局面において、上記観察された行動は、オープンフィールド活動試験の間の増加した不安様反応である。なお別の局面において、上記観察された行動は、オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応である。なお別の局面において、上記観察された行動は、ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズムである。なお別の局面において、上記観察された行動は、逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調である。なお別の局面において、上記観察された行動は、逆転スクリーン試験の間の障害された運動協調である。なお別の局面において、上記観察された行動としては、鬱病、全般性不安障害、注意欠陥障害、睡眠障害、過活動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知障害、痛覚過敏および感覚性障害が挙げられる。このような障害は、「不安障害」として定義されるカテゴリーを含み、このカテゴリーは、以下を含むが、これらに限定されない：軽度から中程度の不安、全体的な病状に起因する不安障害、他の特定されない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を伴うパニック障害、広場恐怖症を伴わないパニック障害、心的外傷後ストレス障害、社会恐怖、社会不安、自閉症、特定の恐怖、物質誘発性不安障害、急性アルコール離脱、強迫性障害、広場恐怖症、単極性障害、双極性障害ＩもしくはＩＩ、他の特定されない双極性障害、循環病、鬱病性障害、大鬱病性障害、気分障害、物質誘発性気分障害、認知機能の増強、アルツハイマー病、脳卒中、または脳の外傷に関連する（しかしこれらに限定されない）認知機能の喪失、てんかんを含む（しかしこれらに限定されない）疾患または傷害から生じる発作、学習障害（ｄｉｓｏｒｄｅｒ）／障害（ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ）、脳性麻痺。さらに、不安障害は、人格障害にあてはまり得、人格障害としては、以下の型が挙げられるが、これらに限定されない：妄想、反社会性、回避性行動、境界性人格障害、依存、演技性、自己愛、強迫、分裂病質、および分裂型。
【００５５】
本発明はまた、遺伝子の破壊に関連する行動を調節する因子を提供する。１つの局面において、上記因子は、遺伝子の破壊に関連する表現型のアゴニストもしくはアンタゴニストであり、この遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする。なお別の局面において、上記因子は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドのアゴニストもしくはアンタゴニストである。なお別の局面において、上記アゴニスト因子は、以下：抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である。さらに別の局面において、上記アンタゴニスト因子は、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である。
【００５６】
本発明はまた、因子を同定する方法を提供する。この因子は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する、神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；脂質代謝障害；または発生異常を、改善または調節し、この方法は、以下を包含する：
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物を提供する工程であって、この非ヒトトランスジェニック動物のゲノムは、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む、工程；
（ｂ）上記非ヒトトランスジェニック動物に、試験因子を投与する工程；および
（ｃ）上記試験因子が、上記非ヒトトランスジェニック動物において、上記遺伝子破壊に関連する神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；脂質代謝障害；または発生異常を改善または調節する否かを決定する工程。
【００５７】
なお別の局面において、上記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の増加した不安様反応である。なお別の局面において、上記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応である。なお別の局面において、上記神経障害は、ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズムである。なお別の局面において、上記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調である。なお別の局面において、上記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の障害された運動協調である。なお別の局面において、上記神経障害としては、鬱病、全般性不安障害、注意欠陥障害、睡眠障害、過活動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知障害、痛覚過敏および感覚性障害が挙げられる。このような神経障害は、「不安障害」として定義されるカテゴリーを含み、このカテゴリーは、以下を含むが、これらに限定されない：軽度から中程度の不安、全体的な病状に起因する不安障害、他の特定されない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を伴うパニック障害、広場恐怖症を伴わないパニック障害、心的外傷後ストレス障害、社会恐怖、社会不安、自閉症、特定の恐怖、物質誘発性不安障害、急性アルコール離脱、強迫性障害、広場恐怖症、単極性障害、双極性障害ＩもしくはＩＩ、他の特定されない双極性障害、循環病、鬱病性障害、大鬱病性障害、気分障害、物質誘発性気分障害、認知機能の増強、アルツハイマー病、脳卒中、または脳の外傷に関連する（しかしこれらに限定されない）認知機能の喪失、てんかんを含む（しかしこれらに限定されない）疾患または傷害から生じる発作、学習障害（ｄｉｓｏｒｄｅｒ）／障害（ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ）、脳性麻痺。さらに、不安障害は、人格障害にあてはまり得、この人格障害としては、以下の型があげられるが、これらに限定されない：妄想、反社会性、回避性行動、境界性人格障害、依存、演技性、自己愛、強迫、分裂病質、および分裂型。
別の局面において、上記眼の異常は、網膜の異常である。さらに別の局面において、上記眼の異常は、視覚上の問題または盲と一致する。なお別の局面において、上記眼の異常は、色素性網膜炎と一致するか、または網膜変性または網膜形成異常によって特徴付けられる。
【００５８】
さらに別の局面において、上記網膜の異常は、以下と一致する：網膜形成異常、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑水腫、角膜新生血管形成、角膜移植片新生血管形成、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜新生血管形成、角の新生血管形成（ルベオーシス）、眼の血管新生疾患、脈管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーヴズ病を含む）、角膜および他の組織の移植、網膜の動脈の閉塞もしくは閉鎖；網膜脈管構造の二次的な萎縮を引き起こす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在夜盲、コロイデレミア、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディノ−メインザー症候群、シニア−ローケン症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候、先天性脊椎・骨端異形成症、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジル症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール−マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β−リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン症、またはマンノシドーシス。
【００５９】
さらに別の局面において、上記眼の異常は、白内障である。さらになお別の局面において、上記白内障は、ヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症、またはコンラーディ症候群のような全身性疾患である。
【００６０】
さらに別の局面において、上記発生異常は、胚の死亡または生存率の低下を包含する。
【００６１】
なお別の局面において、前記心血管障害、内皮障害または脈管形成障害は、以下である：糖尿病のような動脈疾患；乳頭水腫；眼の過形成；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；急性心筋梗塞のような心筋梗塞、心肥大、およびうっ血性心不全のような心不全；高血圧症；炎症性脈管炎；レーノー病およびレーノー現象；動脈瘤および動脈再狭窄；血栓性静脈炎、リンパ管炎およびリンパ水腫のような静脈およびリンパの疾患；末梢性脈管疾患；脈管腫瘍（例えば、血管腫（毛細血管腫および海綿状血管腫））のような癌、グロムス腫瘍、毛細血管拡張症、杆菌性血管腫症状、血管内皮腫、血管肉腫、血管周囲細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫およびリンパ管肉腫；腫瘍新脈管形成；創傷、熱傷、および他の傷害された組織、移植片固定、瘢痕のような外傷；虚血  再灌流障害；慢性関節リウマチ；脳血管疾患；急性腎不全のような腎疾患、または骨粗鬆症。
【００６２】
さらになお別の局面において、上記免疫障害は、以下に一致する：全身性エリテマトーデス；慢性関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身性硬化症（強皮症）；特発性炎症性ミオパシー（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性脈管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫汎血球減少、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーヴズ病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ急性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎炎）；糖尿病；免疫媒介性腎臓病（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢神経系および末梢神経系の脱髄疾患（例えば、多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシー  ｏｒ  ギヤン−バレー症候群、および慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー）；感染性肝炎（Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎および他の非肝臓向性ウイルス性肝炎）、自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、および硬化性胆管炎のような、肝胆道疾患；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン感受性腸症およびホウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑および接触皮膚炎、乾癬を含む、自己免疫性もしくは免疫媒介性の皮膚疾患；喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症およびじんま疹のような、アレルギー性疾患；好酸球性肺炎、特発性肺線維症および過敏性肺炎のような、肺の免疫疾患；または、移植片拒絶および対宿主性移植片病を含む、移植関連疾患。
【００６３】
なお別の局面において、上記骨代謝異常もしくは骨代謝障害は、関節炎、骨粗鬆症、オステオペニアまたは大理石骨病である。
【００６４】
別の局面において、上記非ヒトトランスジェニック動物は、性別が一致する野生型同腹仔と比較して、以下の生理学的特徴うちの少なくとも１つを表す：オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応；ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズム；逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調；機能観察試験における眼球突出；衰弱した網膜の脈管によって特徴付けられる重篤な網膜変性；微細動脈瘤；減少した平均動脈対静脈比；減少したレンズサイズ；成熟白内障；増加した平均血清コレステロールレベル；増加した平均血清トリグリセリドレベル；減少した平均血清コレステロールレベル；増強されたグルコース寛容；低下したグルコース寛容；増加した平均血清インスリンレベル；低下した平均血清インスリンレベル；オボアルブミン負荷に対する平均血清ＩｇＧ１応答および平均血清ＩｇＧ２ａ応答の低下；オボアルブミン負荷に対する平均血清ＩｇＧ１応答および平均血清ＩｇＧ２ａ応答の増大；オボアルブミン負荷に対するＩｇＧ２ａ応答の減損；減少した血中好中球平均絶対数；増加したＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＡ、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂの平均血清レベル；ＬＰＳ負荷に対する平均血清ＴＮＦ−α応答およびＩＬ６応答の増加；減少した平均血小板数；減少したＲＢＣ、血小板、ヘモグロビンおよびヘマトクリットのレベル；体脂肪の平均パーセントの増加；低下した皮膚線維芽細胞増殖；増加した皮膚線維芽細胞増殖；増加した総組織質量（ＴＴＭ）；増加した除脂肪体重（ＬＢＭ）；増加した骨塩密度（ＢＭＤ）；増加した骨塩量（ＢＭＣ）、増加した骨塩含有指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）；増加した大腿骨幹中央部の総面積；海綿質体積および結合密度の減少；減少した体積骨塩密度；減少した骨塩含有指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）；全身、大腿骨および脊椎骨における減少した平均骨塩密度；減少した平均骨塩密度（ＢＭＤ）、減少した平均海綿質体積、減少した厚み、および減少した結合密度；減少した体重および体長；減少した総組織質量（ＴＴＭ）；減少した除脂肪体重（ＬＢＭ）；減少した総脂肪質量；減少した骨塩量（ＢＭＣ）；全身および大腿骨における減少した平均体積骨塩密度（ｖＢＭＤ）；減少した大腿骨幹中央部の断面積および厚み；減少した平均体重および平均体長、減少した総体脂肪平均パーセント、減少した総組織質量および減少した骨塩密度を伴う増殖遅延；減少した大腿骨幹中央部皮質厚；心臓肥大；障害された腎機能；腎臓中腎管の発達異常；精細管変性；大きく減少した生存率［３匹のみの生き残った（−／−）変異マウスは、予測される１４匹の（−／−）変異体と比較して、重度の成長遅延を示す］；予測されるホモ接合体の数の顕著な減少；ならびに、胚の死亡。
【００６５】
本発明はまた、遺伝子の破壊に関連する、神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；脂質代謝障害；または発生異常を、処置または予防または改善する因子を提供する。１つの局面において、上記因子は、遺伝子の破壊に関連する表現型のアゴニストもしくはアンタゴニストであり、上記遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする。なお別の局面において、上記因子は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの、アゴニストもしくはアンタゴニストである。なお別の局面において、上記アゴニスト因子は、以下：抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である。さらに別の局面において、上記アンタゴニスト因子は、以下：抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である。
【００６６】
本発明はまた、神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；脂質代謝障害；または発生異常の処置のための、治療因子を提供する。
【００６７】
本発明はまた、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの発現を調節する因子を同定する方法を提供し、この方法は、以下を包含する：
（ａ）試験因子を宿主細胞と接触させる工程であって、この宿主細胞は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドを発現する、工程；および
（ｂ）上記試験化合物が、上記宿主細胞による、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの発現を調節するか否かを決定する、工程。
【００６８】
本発明はまた、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの発現を調節する因子を提供する。１つの局面において、上記因子は、遺伝子の破壊に関連する表現型のアゴニストもしくはアンタゴニストであり、この遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする。なお別の局面において、上記因子は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドのアゴニストもしくはアンタゴニストである。なお別の局面において、上記アゴニスト因子は、以下：抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である。さらに別の局面において、上記アンタゴニスト因子は、以下：抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である。
【００６９】
本発明はまた、遺伝子の破壊に関連する状態に影響し得る治療因子を評価する方法を提供する。この遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードし、この方法は、以下を包含する：
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物を提供する工程であって、この非ヒトトランスジェニック動物のゲノムは、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む、工程；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴を測定する工程；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的特徴を、性別が一致する野生型動物の生理学的特徴と比較する工程であって、上記野生型動物の生理学的特徴と異なる、上記非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴は、上記非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊の結果得られる状態として同定される、工程；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に、試験因子を投与する工程；および
（ｅ）非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊に関連する上記同定される状態に対する上記試験因子の効果を評価する工程。
【００７０】
１つの局面において、上記状態は、以下：神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；脂質代謝障害；または発生異常である。
【００７１】
本発明はまた、遺伝子の破壊に関連する状態に影響し得る治療因子を提供する。１つの局面において、上記因子は、遺伝子の破壊に関連する表現型のアゴニストもしくはアンタゴニストであり、この遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする。なお別の局面において、上記因子は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドのアゴニストもしくはアンタゴニストである。なお別の局面において、上記アゴニスト因子は、以下：抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である。さらに別の局面において、上記アンタゴニスト因子は、以下：抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である。
【００７２】
本発明はまた、遺伝子の破壊に関連する状態に影響し得る治療因子を含有する薬学的組成物を提供する。
【００７３】
本発明はまた、遺伝子の破壊に関連する、神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害、または胚の死亡を、処置または予防または改善する方法を提供する。この遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードし、この方法は、上記のような処置を必要とする、既に上記障害を有し得るか、または上記障害を有する傾向にあり得るか、または上記障害が予防されるべきであり得る被験体に、治療有効量の治療因子またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与し、それによって上記疾患または障害を効果的に処置または予防または改善する工程を包含する。
【００７４】
なお別の局面において、上記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の増加した不安様反応である。なお別の局面において、上記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応である。なお別の局面において、上記神経障害は、ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズムである。なお別の局面において、上記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調である。なお別の局面において、上記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の障害された運動協調である。なお別の局面において、上記神経障害としては、鬱病、全般性不安障害、注意欠陥障害、睡眠障害、過活動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知障害、痛覚過敏および感覚性障害が挙げられる。このような神経障害は、「不安障害」として定義されるカテゴリーを含み、このカテゴリーは、以下を含むが、これらに限定されない：軽度から中程度の不安、全体的な病状に起因する不安障害、他の特定されない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を伴うパニック障害、広場恐怖症を伴わないパニック障害、心的外傷後ストレス障害、社会恐怖、社会不安、自閉症、特定の恐怖、物質誘発性不安障害、急性アルコール離脱、強迫性障害、広場恐怖症、単極性障害、双極性障害ＩもしくはＩＩ、他の特定されない双極性障害、循環病、鬱病性障害、大鬱病性障害、気分障害、物質誘発性気分障害、認知機能の増強、アルツハイマー病、脳卒中、または脳の外傷に関連する（しかしこれらに限定されない）認知機能の喪失、てんかんを含む（しかしこれらに限定されない）疾患または傷害から生じる発作、学習障害（ｄｉｓｏｒｄｅｒ）／障害（ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ）、脳性麻痺。さらに、不安障害は、人格障害にあてはまり得、この人格障害としては、以下の型が挙げられるが、これらに限定されない：妄想、反社会性、回避性行動、境界性人格障害、依存、演技性、自己愛、強迫、分裂病質、および分裂型。別の局面において、上記眼の異常は、網膜の異常である。さらに別の局面において、上記眼の異常は、視覚上の問題または盲と一致する。なお別の局面において、上記網膜の異常は、色素性網膜炎と一致するか、あるいは網膜変性または網膜形成異常によって特徴付けられる。
【００７５】
さらに別の局面において、上記網膜の異常は、以下と一致する：網膜形成異常、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑水腫、角膜新生血管形成、角膜移植片新生血管形成、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜新生血管形成、角の新生血管形成（ルベオーシス）、眼の血管新生疾患、脈管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーヴズ病を含む）、角膜および他の組織の移植、網膜の動脈の閉塞もしくは閉鎖；網膜脈管構造の二次的な萎縮を引き起こす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在夜盲、コロイデレミア、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディノ−メインザー症候群、シニア−ローケン症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候、先天性脊椎・骨端異形成症、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジル症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール−マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β−リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン症、またはマンノシドーシス。
【００７６】
さらに別の局面において、上記眼の異常は、白内障である。さらになお別の局面において、上記白内障は、ヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症またはコンラーディ症候群のような、全身性疾患である。
【００７７】
さらに別の局面において、上記発生異常は、胚の死亡または生存率の低下を包含する。
【００７８】
なお別の局面において、上記心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害は。以下である：糖尿病のような動脈疾患；乳頭水腫；眼の過形成；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；急性心筋梗塞のような心筋梗塞、心肥大、およびうっ血性心不全のような心不全；高血圧症；炎症性脈管炎；レーノー病およびレーノー現象；動脈瘤および動脈再狭窄；血栓性静脈炎、リンパ管炎およびリンパ水腫のような静脈およびリンパの疾患；脈管腫瘍（例えば、血管腫（毛細血管腫および海綿状血管腫））のような癌、グロムス腫瘍、毛細血管拡張症、杆菌性血管腫症状、血管内皮腫、血管肉腫、血管周囲細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫およびリンパ管肉腫；腫瘍新脈管形成；創傷、熱傷、および他の傷害された組織、移植片固定、瘢痕のような外傷；虚血  再灌流障害；慢性関節リウマチ；脳血管疾患；急性腎不全のような腎疾患、または骨粗鬆症。
【００７９】
さらになお別の局面において、上記免疫障害は、以下に一致する：全身性エリテマトーデス；慢性関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身性硬化症（強皮症）；特発性炎症性ミオパシー（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性脈管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫汎血球減少、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーヴズ病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ急性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎炎）；糖尿病；免疫媒介性腎臓病（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢神経系および末梢神経系の脱髄疾患（例えば、多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシー  ｏｒ  ギヤン−バレー症候群、および慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー）；感染性肝炎（Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎および他の非肝臓向性ウイルス性肝炎）、自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎および硬化性胆管炎のような、肝胆道疾患；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン感受性腸症およびホウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑および接触皮膚炎、乾癬を含む、自己免疫性もしくは免疫媒介性の皮膚疾患；喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症およびじんま疹のような、アレルギー性疾患；好酸球性肺炎、特発性肺線維症および過敏性肺炎のような、肺の免疫疾患；移植片拒絶および対宿主性移植片病を含む、移植関連疾患。
【００８０】
なお別の局面において、上記骨代謝異常または骨代謝障害は、関節炎、骨粗鬆症、オステオペニアまたは大理石骨病である。
【００８１】
別の局面において、上記治療因子は、遺伝子の破壊に関連する表現型のアゴニストもしくはアンタゴニストであり、この遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする。なお別の局面において、上記因子は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドのアゴニストもしくはアンタゴニストである。なお別の局面において、上記アゴニスト因子は、以下：抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である。さらに別の局面において、上記アンタゴニスト因子は、以下：抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である。
【００８２】
本発明はまた、因子を同定する方法を提供する。この因子は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する、神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；脂質代謝障害；または発生異常を、改善または調節し、この方法は、以下を包含する：
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物細胞培養物を提供する工程であって、上記培養物の各細胞は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む、工程；
（ｂ）試験因子を上記細胞培養物に投与する工程；および
（ｃ）上記試験因子が、上記培養物において、上記神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；脂質代謝障害；または発生異常を改善または調節するか否かを決定する工程。
【００８３】
なお別の局面において、上記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の増加した不安様反応である。なお別の局面において、上記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応である。なお別の局面において、上記神経障害は、ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズムである。なお別の局面において、上記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調である。なお別の局面において、上記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の障害された運動協調である。なお別の局面において、上記神経障害としては、鬱病、全般性不安障害、注意欠陥障害、睡眠障害、過活動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知障害、痛覚過敏および感覚性障害が挙げられる。このような神経障害は、「不安障害」として定義されるカテゴリーを含み、このカテゴリーは、以下を含むが、これらに限定されない：軽度から中程度の不安、全体的な病状に起因する不安障害、他の特定されない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を伴うパニック障害、広場恐怖症を伴わないパニック障害、心的外傷後ストレス障害、社会恐怖、社会不安、自閉症、特定の恐怖、物質誘発性不安障害、急性アルコール離脱、強迫性障害、広場恐怖症、単極性障害、双極性障害ＩもしくはＩＩ、他の特定されない双極性障害、循環病、鬱病性障害、大鬱病性障害、気分障害、物質誘発性気分障害、認知機能の増強、アルツハイマー病、脳卒中、または脳の外傷に関連する（しかしこれらに限定されない）認知機能の喪失、てんかんを含む（しかしこれらに限定されない）疾患または傷害から生じる発作、学習障害（ｄｉｓｏｒｄｅｒ）／障害（ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ）、脳性麻痺。さらに、不安障害は、人格障害にあてはまり得、人格障害としては、以下の型が挙げられるが、これらに限定されない：妄想、反社会性、回避性行動、境界性人格障害、依存、演技性、自己愛、強迫、分裂病質、および分裂型。
【００８４】
別の局面において、上記眼の異常は、網膜の異常である。さらに別の局面において、上記眼の異常は、視覚上の問題または盲と一致する。なお別の局面において、上記網膜の異常は、色素性網膜炎と一致するか、あるいは網膜変性または網膜形成異常によって特徴付けられる。
【００８５】
さらに別の局面において、上記網膜の異常は、以下と一致する：網膜形成異常、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑水腫、角膜新生血管形成、角膜移植片新生血管形成、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜新生血管形成、角の新生血管形成（ルベオーシス）、眼の血管新生疾患、脈管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーヴズ病を含む）、角膜および他の組織の移植、網膜の動脈の閉塞もしくは閉鎖；網膜脈管構造の二次的な萎縮を引き起こす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在夜盲、コロイデレミア、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディノ−メインザー症候群、シニア−ローケン症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候、先天性脊椎・骨端異形成症、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジル症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール−マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β−リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン症、またはマンノシドーシス。
【００８６】
さらに別の局面において、上記眼の異常は、白内障である。さらになお別の局面において、上記白内障は、ヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症またはコンラーディ症候群のような全身性疾患である。
【００８７】
さらに別の局面において、上記発生異常は、胚の死亡または生存率の低下を包含する。
【００８８】
なお別の局面において、上記心血管障害、内皮障害または脈管形成障害は、以下である：糖尿病のような動脈疾患；乳頭水腫；眼の過形成；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；急性心筋梗塞のような心筋梗塞、心肥大およびうっ血性心不全のような心不全；高血圧症；炎症性脈管炎；レーノー病およびレーノー現象；動脈瘤および動脈再狭窄；血栓性静脈炎、リンパ管炎およびリンパ水腫のような静脈およびリンパの疾患；末梢性脈管疾患；脈管腫瘍（例えば、血管腫（毛細血管腫および海綿状血管腫））のような癌、グロムス腫瘍、毛細血管拡張症、杆菌性血管腫症状、血管内皮腫、血管肉腫、血管周囲細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫およびリンパ管肉腫；腫瘍新脈管形成；創傷、熱傷、および他の傷害された組織、移植片固定、瘢痕のような外傷；虚血  再灌流障害；慢性関節リウマチ；脳血管疾患；急性腎不全のような腎疾患、または骨粗鬆症。
【００８９】
さらになお別の局面において、上記免疫障害は、以下に一致する：全身性エリテマトーデス；慢性関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身性硬化症（強皮症）；特発性炎症性ミオパシー（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性脈管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫汎血球減少、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーヴズ病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ急性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎炎）；糖尿病；免疫媒介性腎臓病（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢神経系および末梢神経系の脱髄疾患（例えば、多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシーもしくはギヤン−バレー症候群、および慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー）；感染性肝炎（Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎および他の非肝臓向性ウイルス性肝炎）、自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、および硬化性胆管炎のような、肝胆道疾患；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン感受性腸症およびホウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑および接触皮膚炎、乾癬を含む、自己免疫性もしくは免疫媒介性の皮膚疾患；喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症およびじんま疹のような、アレルギー性疾患；好酸球性肺炎、特発性肺線維症および過敏性肺炎のような、肺の免疫疾患；または、移植片拒絶および対宿主性移植片病を含む、移植関連疾患。
【００９０】
なお別の局面において、上記骨代謝異常または骨代謝障害は、関節炎、骨粗鬆症、オステオペニアまたは大理石骨病である。
【００９１】
本発明はまた、遺伝子の破壊に関連する神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；脂質代謝障害；または発生異常を、上記培養物中において、改善または調節する因子を提供する。１つの局面において、遺伝子の破壊に関連する表現型の上記アゴニストもしくはアンタゴニストであり、上記遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする。なお別の局面において、上記因子は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドのアゴニストもしくはアンタゴニストである。なお別の局面において、上記アゴニスト因子は、以下：抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である。さらに別の局面において、上記アンタゴニスト因子は、以下：抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である。
【００９２】
本発明はまた、遺伝子の破壊に関連する表現型を調節する方法を提供する。この遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードし、この方法は、既に上記表現型を有し得るか、または上記表現型を有する傾向にあり得るか、または上記表現型が防止されるべきであり得る被験体に、有効量の、上記表現型を調節すると同定された因子またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与し、それによって上記表現型を効果的に調節する工程を包含する。
【００９３】
本発明はまた、遺伝子の破壊に関連する生理学的特徴を調節する方法を提供する。この遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードし、この方法は、既に上記生理学的特徴を表し得るか、または上記生理学的特徴を表す傾向にあり得るか、または上記生理学的特徴が防止されるべきであり得る被験体に、有効量の、上記表現型を調節すると同定された因子またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与し、それによって上記生理学的特徴を効果的に調節する工程を包含する。
【００９４】
本発明はまた、遺伝子の破壊に関連する行動を調節する方法を提供する。この遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードし、この方法は、既に上記行動を表し得るか、または上記行動を表す傾向にあり得るか、または上記行動が防止されるべきであり得る被験体に、有効量の、上記行動を調節すると同定された因子またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与し、それによって上記行動を効果的に調節する工程を包含する。
【００９５】
本発明はまた、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの発現を調節する方法を提供する。この方法は、上記ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドを発現する宿主細胞に、有効量の、上記発現を調節すると同定された因子またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与し、それによって上記ポリペプチドの発現を効果的に調節する工程を包含する。
【００９６】
本発明はまた、遺伝子の破壊に関連する状態を調節する方法を提供する。この遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードし、この方法は、既に上記状態を有し得るか、または上記状態を有する傾向にあり得るか、または上記状態が防止されるべきであり得る被験体に、治療有効量の、上記発現を調節すると同定された因子またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与し、それによって上記状態を効果的に調節する工程を包含する。
【００９７】
本発明はまた、遺伝子の破壊に関連する、神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害、または胚の死亡を、処置または予防または改善する方法を提供する。この遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードし、この方法は、非ヒトトランスジェニック動物細胞培養物に、有効量の、上記障害を処置または予防または改善すると同定された因子またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与し、これによって、上記障害を効果的に処置または予防または改善する工程を包含し、上記培養物の各細胞は、以下：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む。
【００９８】
（Ｂ．さらなる実施形態）
なおさらなる実施形態において、本発明は、本出願に関して可能性のある以下の請求項のセットに関する：
１．遺伝子の破壊に関連する表現型を同定する方法であって、上記遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードし、上記方法は、以下：
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物を提供する工程であって、上記非ヒトトランスジェニック動物のゲノムは、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする上記遺伝子の破壊を含む、工程；
（ｂ）上記非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴を測定する工程；および
（ｃ）上記測定された生理学的特徴を、性別が一致する野生型動物の生理学的特徴と比較する工程であって、上記野生型動物の生理学的特徴と異なる、上記非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴は、上記非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊の結果得られる表現型として同定される、工程
を包含する、方法。
２．請求項（ｃｌａｉｍ）１に記載の方法であって、上記非ヒトトランスジェニック動物は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチド
をコードする遺伝子の上記破壊についての異型接合体である、方法。
３．請求項１に記載の方法であって、性別が一致する野生型同腹仔と比較した場合に上記非ヒトトランスジェニック動物によって示される上記表現型は、以下：神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；脂質代謝障害；または発生異常のうちの少なくとも１つである、方法。
４．上記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の増加した不安様反応である、請求項３に記載の方法。
５．上記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応である、請求項３に記載の方法。
６．上記神経障害は、ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズムである、請求項３に記載の方法。
７．上記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調である、請求項３に記載の方法。
８．上記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の障害された運動協調である、請求項３に記載の方法。
９．上記神経障害は、鬱病、全般性不安障害、注意欠陥障害、睡眠障害、過活動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知障害、痛覚過敏または感覚性障害である、請求項３に記載の方法。
１０．上記眼の異常は、網膜の異常である、請求項３に記載の方法。
１１．上記眼の異常は、視覚上の問題または盲と一致する、請求項３に記載の方法。
１２．上記網膜の異常は、色素性網膜炎と一致する、請求項１０に記載の方法。
１３．上記網膜の異常は、網膜変性または網膜形成異常によって特徴付けられる、請求項１０に記載の方法。
１４．請求項１０に記載の方法であって、上記網膜の異常は、網膜形成異常、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑水腫、角膜新生血管形成、角膜移植片新生血管形成、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜新生血管形成、角の新生血管形成（ルベオーシス）、眼の血管新生疾患、脈管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーヴズ病を含む）、角膜および他の組織の移植、網膜の動脈の閉塞もしくは閉鎖；網膜脈管構造の二次的な萎縮を引き起こす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在夜盲、コロイデレミア、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディノ−メインザー症候群、シニア−ローケン症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候、先天性脊椎・骨端異形成症、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジル症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール−マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β−リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン症、またはマンノシドーシスと一致する、方法。
１５．上記眼の異常は、白内障である、請求項３に記載の方法。
１６．請求項１５に記載の方法であって、上記白内障が、ヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症またはコンラーディ症候群のような全身性疾患と一致する、方法。
１７．上記発生異常は、胚の死亡または生存率の低下を包含する、請求項３に記載の方法。
１８．請求項３に記載の方法であって、上記心血管障害、内皮障害または脈管形成障害は、糖尿病のような動脈疾患；乳頭水腫；眼の過形成；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；急性心筋梗塞のような心筋梗塞、心肥大およびうっ血性心不全のような心不全；高血圧症；炎症性脈管炎；レーノー病およびレーノー現象；動脈瘤および動脈再狭窄；血栓性静脈炎、リンパ管炎およびリンパ水腫のような静脈およびリンパの疾患；末梢性脈管疾患；脈管腫瘍（例えば、血管腫（毛細血管腫および海綿状血管腫））のような癌、グロムス腫瘍、毛細血管拡張症、杆菌性血管腫症状、血管内皮腫、血管肉腫、血管周囲細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫およびリンパ管肉腫；腫瘍新脈管形成；創傷、熱傷、および他の傷害された組織、移植片固定、瘢痕のような外傷；虚血  再灌流障害；慢性関節リウマチ；脳血管疾患；急性腎不全のような腎疾患、または骨粗鬆症である、方法。
１９．請求項３に記載の方法であって、上記免疫障害は、全身性エリテマトーデス；慢性関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身性硬化症（強皮症）；特発性炎症性ミオパシー（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性脈管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫汎血球減少、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーヴズ病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ急性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎炎）；糖尿病；免疫媒介性腎臓病（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢神経系および末梢神経系の脱髄疾患（例えば、多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシーもしくはギヤン−バレー症候群および慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー）；感染性肝炎（Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎および他の非肝臓向性ウイルス性肝炎）、自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎および硬化性胆管炎のような、肝胆道疾患；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン感受性腸症、およびホウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑および接触皮膚炎、乾癬を含む、自己免疫性もしくは免疫媒介性の皮膚疾患；喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症およびじんま疹のような、アレルギー性疾患；好酸球性肺炎、特発性肺線維症および過敏性肺炎のような肺の免疫疾患；または、移植片拒絶および対宿主性移植片病を含む移植関連疾患である、方法。
２０．上記骨代謝異常または骨代謝障害は、関節炎、骨粗鬆症または大理石骨病である、請求項３に記載の方法。
２１．請求項１に記載の方法であって、上記非ヒトトランスジェニック動物は、性別が一致する野生型同腹仔と比較して、以下の生理学的特徴：オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応；ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズム；逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調；機能観察試験における眼球突出；衰弱した網膜の脈管によって特徴付けられる重篤な網膜変性；微細動脈瘤；減少した平均動脈対静脈比；減少したレンズサイズ；成熟白内障；増加した平均血清コレステロールレベル；増加した平均血清トリグリセリドレベル；減少した平均血清コレステロールレベル；増強されたグルコース寛容；低下したグルコース寛容；増加した平均血清インスリンレベル；低下した平均血清インスリンレベル；オボアルブミン負荷に対する平均血清ＩｇＧ１応答および平均血清ＩｇＧ２ａ応答の低下；オボアルブミン負荷に対する平均血清ＩｇＧ１応答および平均血清ＩｇＧ２ａ応答の増大；オボアルブミン負荷に対するＩｇＧ２ａ応答の減損；減少した血中好中球平均絶対数；増加したＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＡ、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂの平均血清レベル；ＬＰＳ負荷に対する平均血清ＴＮＦ−α応答およびＩＬ６応答の増加；減少した平均血小板数；減少したＲＢＣ、血小板、ヘモグロビンおよびヘマトクリットのレベル；体脂肪の平均パーセントの増加；低下した皮膚線維芽細胞増殖；増加した皮膚線維芽細胞増殖；増加した総組織質量（ＴＴＭ）；増加した除脂肪体重（ＬＢＭ）；増加した骨塩密度（ＢＭＤ）；増加した骨塩量（ＢＭＣ）、増加した骨塩含有指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）；増加した大腿骨幹中央部の総面積；海綿質体積および結合密度の減少；減少した体積骨塩密度；減少した骨塩含有指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）；全身、大腿骨および脊椎骨における、減少した平均骨塩密度；減少した平均骨塩密度（ＢＭＤ）、減少した平均海綿質体積、減少した厚み、および減少した結合密度；減少した体重および体長；減少した総組織質量（ＴＴＭ）；減少した除脂肪体重（ＬＢＭ）；減少した総脂肪質量；減少した骨塩量（ＢＭＣ）；全身および大腿骨における減少した平均体積骨塩密度（ｖＢＭＤ）；減少した大腿骨幹中央部の断面積および厚み；減少した平均体重および平均体長、減少した総体脂肪平均パーセント、減少した総組織質量および減少した骨塩密度を伴う増殖遅延；減少した大腿骨幹中央部皮質厚；心臓肥大；障害された腎機能；腎臓中腎管の発達異常；精細管変性；大きく減少した生存率［３匹のみの生き残った（−／−）変異マウスは、予測される１４匹の（−／−）変異体と比較して、重度の成長遅延を示す］；予測されるホモ接合体の数の顕著な減少；ならびに胚の死亡、のうちの少なくとも１つを示す、方法。
２２．非ヒトトランスジェニック動物に由来する単離された細胞であって、上記非ヒトトランスジェニック動物のゲノムは、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチド、をコードする遺伝子の破壊を含む、単離された細胞。
２３．マウス細胞である、請求項２２に記載の単離された細胞。
２４．上記マウス細胞は胚幹細胞である、請求項２３に記載の単離された細胞。
２５．請求項２２に記載の単離された細胞であって、上記非ヒトトランスジェニック動物は、性別が一致する野生型同腹仔と比較して、以下の表現型：神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；脂質代謝障害；または発生異常のうちの少なくとも１つを示す、単離された細胞。
２６．表現型を調節する因子を同定する方法であって、上記表現型は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連し、上記方法は、以下：
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物を提供する工程であって、上記非ヒトトランスジェニック動物のゲノムは、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする上記遺伝子の破壊を含む、工程；
（ｂ）上記（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴を測定する工程；
（ｃ）上記（ｂ）の測定された生理学的特徴を、性別が一致する野生型動物の生理学的特徴と比較する工程であって、上記野生型動物の生理学的特徴と異なる、上記非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴は、上記非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊の結果得られる表現型として同定される、工程；
（ｄ）上記（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に、試験因子を投与する工程；および
（ｅ）上記非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊に関連する上記同定される表現型を上記試験因子が調節するか否かを、決定する工程
を包含する、方法。
２７．請求項２６に記載の方法であって、上記遺伝子破壊に関連する上記表現型は、神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；脂質代謝障害；または発生異常を包含する、方法。
２８．上記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の増加した不安様反応である、請求項２７に記載の方法。
２９．上記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応である、請求項２７に記載の方法。
３０．上記神経障害は、ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズムである、請求項２７に記載の方法。
ｈｏｍｅ−ｃａｇｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｔｅｓｔｉｎｇ．
３１．上記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調である、請求項２７に記載の方法。
３２．上記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の障害された運動協調である、請求項２７に記載の方法。
３３．上記神経障害は、鬱病、全般性不安障害、注意欠陥障害、睡眠障害、過活動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知障害、痛覚過敏または感覚性障害である、請求項２７に記載の方法。
３４．上記眼の異常は、網膜の異常である、請求項２７に記載の方法。
３５．上記眼の異常は、視覚上の問題または盲と一致する、請求項２７に記載の方法。
３６．上記網膜の異常は、色素性網膜炎と一致する、請求項３４に記載の方法。
３７．上記網膜の異常は、網膜変性または網膜形成異常によって特徴付けられる、請求項３４に記載の方法。
３８．請求項３４に記載の方法であって、上記網膜の異常は、網膜形成異常、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑水腫、角膜新生血管形成、角膜移植片新生血管形成、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜新生血管形成、角の新生血管形成（ルベオーシス）、眼の血管新生疾患、脈管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーヴズ病を含む）、角膜および他の組織の移植、網膜の動脈の閉塞もしくは閉鎖；網膜脈管構造の二次的な萎縮を引き起こす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在夜盲、コロイデレミア、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディノ−メインザー症候群、シニア−ローケン症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候、先天性脊椎・骨端異形成症、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジル症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール−マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β−リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン症、またはマンノシドーシスと一致する、方法。
３９．上記眼の異常は、白内障である、請求項２７に記載の方法。
４０．請求項３９に記載の方法であって、上記白内障が、ヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症またはコンラーディ症候群のような全身性疾患と一致する、方法。
４１．上記発生異常は、胚の死亡または生存率の低下を包含する、請求項２７に記載の方法。
４２．請求項２７に記載の方法であって、上記心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害は、糖尿病のような動脈疾患；乳頭水腫；眼の過形成；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；急性心筋梗塞のような心筋梗塞、心肥大およびうっ血性心不全のような心不全；高血圧症；炎症性脈管炎；レーノー病およびレーノー現象；動脈瘤および動脈再狭窄；血栓性静脈炎、リンパ管炎およびリンパ水腫のような静脈およびリンパの疾患；末梢性脈管疾患；脈管腫瘍（例えば、血管腫（毛細血管腫および海綿状血管腫））のような癌、グロムス腫瘍、毛細血管拡張症、杆菌性血管腫症状、血管内皮腫、血管肉腫、血管周囲細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫およびリンパ管肉腫；腫瘍新脈管形成；創傷、熱傷、および他の傷害された組織、移植片固定、瘢痕のような外傷；虚血  再灌流障害；慢性関節リウマチ；脳血管疾患；急性腎不全のような腎疾患、または骨粗鬆症である、方法。
４３．請求項２７に記載の方法であって、上記免疫障害は、全身性エリテマトーデス；慢性関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身性硬化症（強皮症）；特発性炎症性ミオパシー（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性脈管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫汎血球減少、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーヴズ病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ急性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎炎）；糖尿病；免疫媒介性腎臓病（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢神経系および末梢神経系の脱髄疾患（例えば、多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシーもしくはギヤン−バレー症候群および慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー）；感染性肝炎（Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎および他の非肝臓向性ウイルス性肝炎）、自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎および硬化性胆管炎のような、肝胆道疾患；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン感受性腸症、およびホウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑および接触皮膚炎、乾癬を含む、自己免疫性もしくは免疫媒介性の皮膚疾患；喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症およびじんま疹のような、アレルギー性疾患；好酸球性肺炎、特発性肺線維症および過敏性肺炎のような、肺の免疫疾患；または、移植片拒絶および対宿主性移植片病を含む移植関連疾患である、方法。
４４．上記骨代謝異常または骨代謝障害は、関節炎、骨粗鬆症または大理石骨病である、請求項２７に記載の方法。
４５．請求項２６に記載の方法であって、上記非ヒトトランスジェニック動物は、性別が一致する野生型同腹仔と比較して、以下の生理学的特徴：オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応；ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズム；逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調；機能観察試験における眼球突出；衰弱した網膜の脈管によって特徴付けられる重篤な網膜変性；微細動脈瘤；減少した平均動脈対静脈比；減少したレンズサイズ；成熟白内障；増加した平均血清コレステロールレベル；増加した平均血清トリグリセリドレベル；減少した平均血清コレステロールレベル；増強されたグルコース寛容；低下したグルコース寛容；増加した平均血清インスリンレベル；低下した平均血清インスリンレベル；オボアルブミン負荷に対する平均血清ＩｇＧ１応答および平均血清ＩｇＧ２ａ応答の低下；オボアルブミン負荷に対する平均血清ＩｇＧ１応答および平均血清ＩｇＧ２ａ応答の増大；オボアルブミン負荷に対するＩｇＧ２ａ応答の減損；減少した血中好中球平均絶対数；増加したＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＡ、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂの平均血清レベル；ＬＰＳ負荷に対する平均血清ＴＮＦ−α応答およびＩＬ６応答の増加；減少した平均血小板数；減少したＲＢＣ、血小板、ヘモグロビンおよびヘマトクリットのレベル；体脂肪の平均パーセントの増加；低下した皮膚線維芽細胞増殖；増加した皮膚線維芽細胞増殖；増加した総組織質量（ＴＴＭ）；増加した除脂肪体重（ＬＢＭ）；増加した骨塩密度（ＢＭＤ）；増加した骨塩量（ＢＭＣ）、増加した骨塩含有指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）；増加した大腿骨幹中央部の総面積；海綿質体積および結合密度の減少；減少した体積骨塩密度；減少した骨塩含有指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）；全身、大腿骨および脊椎骨における減少した平均骨塩密度；減少した平均骨塩密度（ＢＭＤ）、減少した平均海綿質体積、減少した厚み、および減少した結合密度；減少した体重および体長；減少した総組織質量（ＴＴＭ）；減少した除脂肪体重（ＬＢＭ）；減少した総脂肪質量；減少した骨塩量（ＢＭＣ）；全身および大腿骨における減少した平均体積骨塩密度（ｖＢＭＤ）；減少した大腿骨幹中央部の断面積および厚み；減少した平均体重および平均体長、減少した総体脂肪平均パーセント、減少した総組織質量および減少した骨塩密度を伴う増殖遅延；減少した大腿骨幹中央部皮質厚；心臓肥大；障害された腎機能；腎臓中腎管の発達異常；精細管変性；大きく減少した生存率［３匹のみの生き残った（−／−）変異マウスは、予測される１４匹の（−／−）変異体と比較して、重度の成長遅延を示す］；予測されるホモ接合体の数の顕著な減少；ならびに胚の死亡、のうちの少なくとも１つを示す、方法。
４６．請求項２６に記載の方法によって同定される、因子。
４７．請求項４６に記載の因子であって、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドのアゴニストもしくはアンタゴニストである、因子。
４８．請求項４７に記載の因子であって、上記アゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
４９．請求項４７に記載の因子であって、上記アンタゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
５０．生理学的特徴を調節する因子を同定する方法であって上記生理学的特徴は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連し、上記方法は、以下：
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物を提供する工程であって、上記非ヒトトランスジェニック動物のゲノムは、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする上記遺伝子の破壊を含む、工程；
（ｂ）上記（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物によって表される生理学的特徴を測定する工程；
（ｃ）上記（ｂ）の測定された生理学的特徴を、性別が一致する野生型動物の生理学的特徴と比較する工程であって、上記野生型動物によって表される生理学的特徴と異なる、上記非ヒトトランスジェニック動物によって表される生理学的特徴は、遺伝子破壊に関連する生理学的特徴として同定される、工程；
（ｄ）上記（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験因子を投与する工程；および
（ｅ）遺伝子破壊に関連する上記生理学的特徴が調節されるか否かを決定する工程
を包含する、方法。
５１．請求項５０に記載の方法であって、上記非ヒトトランスジェニック動物は、性別が一致する野生型同腹仔と比較して、以下の生理学的特徴：オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応；ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズム；逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調；機能観察試験における眼球突出；衰弱した網膜の脈管によって特徴付けられる重篤な網膜変性；微細動脈瘤；減少した平均動脈対静脈比；減少したレンズサイズ；成熟白内障；増加した平均血清コレステロールレベル；増加した平均血清トリグリセリドレベル；減少した平均血清コレステロールレベル；増強されたグルコース寛容；低下したグルコース寛容；増加した平均血清インスリンレベル；低下した平均血清インスリンレベル；オボアルブミン負荷に対する平均血清ＩｇＧ１応答および平均血清ＩｇＧ２ａ応答の低下；オボアルブミン負荷に対する平均血清ＩｇＧ１応答および平均血清ＩｇＧ２ａ応答の増大；オボアルブミン負荷に対するＩｇＧ２ａ応答の減損；減少した血中好中球平均絶対数；増加したＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＡ、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂの平均血清レベル；ＬＰＳ負荷に対する平均血清ＴＮＦ−α応答およびＩＬ６応答の増加；減少した平均血小板数；減少したＲＢＣ、血小板、ヘモグロビンおよびヘマトクリットのレベル；体脂肪の平均パーセントの増加；低下した皮膚線維芽細胞増殖；増加した皮膚線維芽細胞増殖；増加した総組織質量（ＴＴＭ）；増加した除脂肪体重（ＬＢＭ）；増加した骨塩密度（ＢＭＤ）；増加した骨塩量（ＢＭＣ）、増加した骨塩含有指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）；増加した大腿骨幹中央部の総面積；海綿質体積および結合密度の減少；減少した体積骨塩密度；減少した骨塩含有指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）；全身、大腿骨および脊椎骨における減少した平均骨塩密度；減少した平均骨塩密度（ＢＭＤ）、減少した平均海綿質体積、減少した厚み、および減少した結合密度；減少した体重および体長；減少した総組織質量（ＴＴＭ）；減少した除脂肪体重（ＬＢＭ）；減少した総脂肪質量；減少した骨塩量（ＢＭＣ）；全身および大腿骨における減少した平均体積骨塩密度（ｖＢＭＤ）；減少した大腿骨幹中央部の断面積および厚み；減少した平均体重および平均体長、減少した総体脂肪平均パーセント、減少した総組織質量および減少した骨塩密度を伴う増殖遅延；減少した大腿骨幹中央部皮質厚；心臓肥大；障害された腎機能；腎臓中腎管の発達異常；精細管変性；大きく減少した生存率［３匹のみの生き残った（−／−）変異マウスは、予測される１４匹の（−／−）変異体と比較して、重度の成長遅延を示す］；予測されるホモ接合体の数の顕著な減少；ならびに胚の死亡、のうちの少なくとも１つを表す、方法。
５２．請求項５０に記載の方法によって同定される、因子。
５３．請求項５２に記載の因子であって、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドのアゴニストもしくはアンタゴニストである、因子。
５４．請求項５３に記載の因子であって、上記アゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
５５．請求項５３に記載の因子であって、上記アンタゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
５６．行動を調節する因子を同定する方法であって、上記行動は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連し、上記方法は、以下：
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物を提供する工程であって、上記非ヒトトランスジェニック動物のゲノムは、ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする上記遺伝子の破壊を含む、工程；
（ｂ）上記（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物によって表された上記行動を観察する工程；
（ｃ）上記（ｂ）の観察された行動を、性別が一致する野生型動物の行動と比較する工程であって、上記野生型動物によって表される観察される行動と異なる、上記非ヒトトランスジェニック動物によって表される観察される行動は、遺伝子破壊に関連する行動として同定される、工程；
（ｄ）上記（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に、試験因子を投与する工程；および
（ｅ）遺伝子破壊に関連する上記行動を上記因子が調節するか否かを、決定する工程
を包含する、方法。
５７．上記行動は、オープンフィールド活動試験の間の増加した不安様反応である、請求項５６に記載の方法。
５８．上記行動は、オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応である、請求項５６に記載の方法。
５９．上記行動は、ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズムである、請求項５６に記載の方法。
６０．上記行動は、逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調である、請求項５６に記載の方法。
６１．上記行動は、逆転スクリーン試験の間の障害された運動協調である、請求項５６に記載の方法。
６２．上記行動は、鬱病、全般性不安障害、注意欠陥障害、睡眠障害、過活動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知障害、痛覚過敏または感覚性障害である、請求項５６に記載の方法。
６３．請求項５６に記載の方法によって同定される、因子。
６４．請求項６３に記載の因子であって、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドのアゴニストもしくはアンタゴニストである、因子。
６５．請求項６４に記載の因子であって、上記アゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
６６．請求項６４に記載の因子であって、上記アンタゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
６７．因子を同定する方法であって、上記因子は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する、神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；脂質代謝障害；または発生異常を改善または調節し、上記方法は、以下：
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物を提供する工程であって、上記非ヒトトランスジェニック動物のゲノムは、ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする上記遺伝子の破壊を含む、工程；
（ｂ）上記非ヒトトランスジェニック動物に、試験因子を投与する工程；および
（ｃ）上記試験因子が、上記非ヒトトランスジェニック動物において、上記神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；脂質代謝障害；または発生異常を改善または調節する否かを決定する工程
を包含する、方法。
６８．上記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の増加した不安様反応である、請求項６７に記載の方法。
６９．上記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応である、請求項６７に記載の方法。
７０．上記神経障害は、ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズムである、請求項６７に記載の方法。
７１．上記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調である、請求項６７に記載の方法。
７２．上記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の障害された運動協調である、請求項６７に記載の方法。
７３．上記神経障害は、鬱病、全般性不安障害、注意欠陥障害、睡眠障害、過活動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知障害、痛覚過敏または感覚性障害である、請求項７３に記載の方法。
７４．上記眼の異常は、網膜の異常である、請求項６７に記載の方法。
７５．上記眼の異常は、視覚上の問題または盲と一致する、請求項６７に記載の方法。
７６．上記網膜の異常は、色素性網膜炎と一致する、請求項７４に記載の方法。
７７．上記網膜の異常は、網膜変性または網膜形成異常によって特徴付けられる、請求項７４に記載の方法。
７８．請求項７４に記載の方法であって、上記網膜の異常は、網膜形成異常、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑水腫、角膜新生血管形成、角膜移植片新生血管形成、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜新生血管形成、角の新生血管形成（ルベオーシス）、眼の血管新生疾患、脈管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーヴズ病を含む）、角膜および他の組織の移植、網膜の動脈の閉塞もしくは閉鎖；網膜脈管構造の二次的な萎縮を引き起こす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在夜盲、コロイデレミア、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディノ−メインザー症候群、シニア−ローケン症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候、先天性脊椎・骨端異形成症、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジル症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール−マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β−リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン症、またはマンノシドーシスと一致する、方法。
７９．上記眼の異常は、白内障である、請求項６７に記載の方法。
８０．請求項７９に記載の方法であって、上記白内障が、ヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症またはコンラーディ症候群のような全身性疾患である、方法。
８１．上記発生異常は、胚の死亡または生存率の低下を包含する、請求項６７に記載の方法。
８２．請求項６７に記載の方法であって、上記心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害は、糖尿病のような動脈疾患；乳頭水腫；眼の過形成；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；急性心筋梗塞のような心筋梗塞、心肥大、およびうっ血性心不全のような心不全；高血圧症；炎症性脈管炎；レーノー病およびレーノー現象；動脈瘤および動脈再狭窄；血栓性静脈炎、リンパ管炎およびリンパ水腫のような静脈およびリンパの疾患；末梢性脈管疾患；脈管腫瘍（例えば、血管腫（毛細血管腫および海綿状血管腫））のような癌、グロムス腫瘍、毛細血管拡張症、杆菌性血管腫症状、血管内皮腫、血管肉腫、血管周囲細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫およびリンパ管肉腫；腫瘍新脈管形成；創傷、熱傷、および他の傷害された組織、移植片固定、瘢痕のような外傷；虚血  再灌流障害；慢性関節リウマチ；脳血管疾患；急性腎不全のような腎疾患、または骨粗鬆症である、方法。
８３．請求項６７に記載の方法であって、上記免疫障害は、全身性エリテマトーデス；慢性関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身性硬化症（強皮症）；特発性炎症性ミオパシー（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性脈管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫汎血球減少、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーヴズ病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ急性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎炎）；糖尿病；免疫媒介性腎臓病（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢神経系および末梢神経系の脱髄疾患（例えば、多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシーもしくはギヤン−バレー症候群および慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー）；感染性肝炎（Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎および他の非肝臓向性ウイルス性肝炎）、自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎および硬化性胆管炎のような、肝胆道疾患；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン感受性腸症、およびホウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑および接触皮膚炎、乾癬を含む、自己免疫性もしくは免疫媒介性の皮膚疾患；喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症およびじんま疹のような、アレルギー性疾患；好酸球性肺炎、特発性肺線維症および過敏性肺炎のような、肺の免疫疾患；または、移植片拒絶および対宿主性移植片病を含む移植関連疾患である、方法。
８４．上記骨代謝異常または骨代謝障害は、関節炎、骨粗鬆症または大理石骨病である、請求項６７に記載の方法。
８５．請求項６７に記載の方法であって、上記非ヒトトランスジェニック動物は、性別が一致する野生型同腹仔と比較して、以下の生理学的特徴：オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応；ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズム；逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調；機能観察試験における眼球突出；衰弱した網膜の脈管によって特徴付けられる重篤な網膜変性；微細動脈瘤；減少した平均動脈対静脈比；減少したレンズサイズ；成熟白内障；増加した平均血清コレステロールレベル；増加した平均血清トリグリセリドレベル；減少した平均血清コレステロールレベル；増強されたグルコース寛容；低下したグルコース寛容；増加した平均血清インスリンレベル；低下した平均血清インスリンレベル；オボアルブミン負荷に対する平均血清ＩｇＧ１応答および平均血清ＩｇＧ２ａ応答の低下；オボアルブミン負荷に対する平均血清ＩｇＧ１応答および平均血清ＩｇＧ２ａ応答の増大；オボアルブミン負荷に対するＩｇＧ２ａ応答の減損；減少した血中好中球平均絶対数；増加したＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＡ、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂの平均血清レベル；ＬＰＳ負荷に対する平均血清ＴＮＦ−α応答およびＩＬ６応答の増加；減少した平均血小板数；減少したＲＢＣ、血小板、ヘモグロビンおよびヘマトクリットのレベル；体脂肪の平均パーセントの増加；低下した皮膚線維芽細胞増殖；増加した皮膚線維芽細胞増殖；増加した総組織質量（ＴＴＭ）；増加した除脂肪体重（ＬＢＭ）；増加した骨塩密度（ＢＭＤ）；増加した骨塩量（ＢＭＣ）、増加した骨塩含有指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）；増加した大腿骨幹中央部の総面積；海綿質体積および結合密度の減少；減少した体積骨塩密度；減少した骨塩含有指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）；全身、大腿骨および脊椎骨における減少した平均骨塩密度；減少した平均骨塩密度（ＢＭＤ）、減少した平均海綿質体積、減少した厚み、および減少した結合密度；減少した体重および体長；減少した総組織質量（ＴＴＭ）；減少した除脂肪体重（ＬＢＭ）；減少した総脂肪質量；減少した骨塩量（ＢＭＣ）；全身および大腿骨における減少した平均体積骨塩密度（ｖＢＭＤ）；減少した大腿骨幹中央部の断面積および厚み；減少した平均体重および平均体長、減少した総体脂肪平均パーセント、減少した総組織質量および減少した骨塩密度を伴う増殖遅延；減少した大腿骨幹中央部皮質厚；心臓肥大；障害された腎機能；腎臓中腎管の発達異常；精細管変性；大きく減少した生存率［３匹のみの生き残った（−／−）変異マウスは、予測される１４匹の（−／−）変異体と比較して、重度の成長遅延を示す］；予測されるホモ接合体の数の顕著な減少；ならびに胚の死亡、のうちの少なくとも１つを示す、方法。
８６．請求項６７に記載の方法によって同定される、因子。
８７．請求項８６に記載の因子であって、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドのアゴニストもしくはアンタゴニストである、因子。
８８．請求項８７に記載の因子であって、上記アゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
８９．請求項８７に記載の因子であって、上記アンタゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
９０．請求項６７に記載の方法によって同定される、治療因子。
９１．以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドの発現を調節する因子を同定する方法であって、上記方法は、以下：
（ａ）試験因子を宿主細胞と接触させる工程であって、上記宿主細胞は、ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドを発現する、工程；および
（ｂ）上記試験化合物が、上記宿主細胞による、上記ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドの上記発現を調節するか否かを決定する、工程
を包含する、方法。
９２．請求項９１に記載の方法によって同定される、因子。
９３．請求項９２に記載の因子であって、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドのアゴニストもしくはアンタゴニストである、因子。
９４．請求項９３に記載の因子であって、上記アゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
９５．請求項９３に記載の因子であって、上記アンタゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
９６．遺伝子の破壊に関連する状態に影響し得る治療因子を評価する方法であって、上記遺伝子は、ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードし、上記方法は、以下：
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物を提供する工程であって、上記非ヒトトランスジェニック動物のゲノムは、ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする上記遺伝子の破壊を含む、工程；
（ｂ）上記（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴を測定する工程；
（ｃ）上記（ｂ）の測定された生理学的特徴を、性別が一致する野生型動物の生理学的特徴と比較する工程であって、上記野生型動物の生理学的特徴と異なる、上記非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴は、上記非ヒトトランスジェニック動物における上記遺伝子破壊の結果得られる状態として同定される、工程；
（ｄ）上記（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に、試験因子を投与する工程；および
（ｅ）上記非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊に関連する上記同定される状態に対する上記試験因子の効果を評価する工程
を包含する、方法。
９７．請求項９６に記載の方法であって、上記状態は、以下：神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；脂質代謝障害；または発生異常である、方法。
９８．請求項９６に記載の方法によって同定される、治療因子。
９９．請求項９８に記載の治療因子であって、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドのアゴニストもしくはアンタゴニストである、因子。
１００．請求項９９に記載の因子であって、上記アゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
１０１．請求項９９に記載の因子であって、上記アンタゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
１０２．請求項９８に記載の治療因子を含有する、薬学的組成物。
１０３．遺伝子の破壊に関連する、神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害、または胚の死亡を、処置または予防または改善する方法であって、上記遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードし、上記方法は、このような処置を必要とする、既に上記障害を有し得るか、または上記障害を有する傾向にあり得るか、または上記障害が予防されるべきであり得る被験体に、治療有効量の請求項９４に記載の治療因子またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与し、それによって上記障害を効果的に処置または予防または改善する工程を包含する、方法。
１０４．上記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の増加した不安様反応である、請求項１０３に記載の方法。
１０５．上記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応である、請求項１０３に記載の方法。
１０６．上記神経障害は、ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズムである、請求項１０３に記載の方法。
１０７．上記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調である、請求項１０３に記載の方法。
１０８．上記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の障害された運動協調である、請求項１０３に記載の方法。
１０９．上記神経障害は、鬱病、全般性不安障害、注意欠陥障害、睡眠障害、過活動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知障害、痛覚過敏または感覚性障害である、請求項１０３に記載の方法。
１１０．上記眼の異常は、網膜の異常である、請求項１０３に記載の方法。
１１１．上記眼の異常は、視覚上の問題または盲と一致する、請求項１０３に記載の方法。
１１２．上記網膜の異常は、色素性網膜炎と一致する、請求項１１０に記載の方法。
１１３．上記網膜の異常は、網膜変性または網膜形成異常によって特徴付けられる、請求項１１０に記載の方法。
１１４．請求項１１０に記載の方法であって、上記網膜の異常は、網膜形成異常、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑水腫、角膜新生血管形成、角膜移植片新生血管形成、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜新生血管形成、角の新生血管形成（ルベオーシス）、眼の血管新生疾患、脈管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーヴズ病を含む）、角膜および他の組織の移植、網膜の動脈の閉塞もしくは閉鎖；網膜脈管構造の二次的な萎縮を引き起こす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在夜盲、コロイデレミア、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディノ−メインザー症候群、シニア−ローケン症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候、先天性脊椎・骨端異形成症、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジル症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール−マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β−リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン症、またはマンノシドーシスと一致する、方法。
１１５．上記眼の異常は、白内障である、請求項１０３に記載の方法。
１１６．請求項１１５に記載の方法であって、上記白内障は、ヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症またはコンラーディ症候群のような全身性疾患である、方法。
１１７．上記発生異常は、胚の死亡または生存率の低下を包含する、請求項１０３に記載の方法。
１１８．請求項１０３に記載の方法であって、上記心血管障害、内皮障害または脈管形成障害は、糖尿病のような動脈疾患；乳頭水腫；眼の過形成；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；急性心筋梗塞のような心筋梗塞、心肥大およびうっ血性心不全のような心不全；高血圧症；炎症性脈管炎；レーノー病およびレーノー現象；動脈瘤および動脈再狭窄；血栓性静脈炎、リンパ管炎およびリンパ水腫のような静脈およびリンパの疾患；末梢性脈管疾患；脈管腫瘍（例えば、血管腫（毛細血管腫および海綿状血管腫））のような癌、グロムス腫瘍、毛細血管拡張症、杆菌性血管腫症状、血管内皮腫、血管肉腫、血管周囲細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫およびリンパ管肉腫；腫瘍新脈管形成；創傷、熱傷、および他の傷害された組織、移植片固定、瘢痕のような外傷；虚血  再灌流障害；慢性関節リウマチ；脳血管疾患；急性腎不全のような腎疾患、または骨粗鬆症である、方法。
１１９．請求項１０３に記載の方法であって、上記免疫障害は、全身性エリテマトーデス；慢性関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身性硬化症（強皮症）；特発性炎症性ミオパシー（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性脈管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫汎血球減少、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーヴズ病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ急性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎炎）；糖尿病；免疫媒介性腎臓病（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢神経系および末梢神経系の脱髄疾患（例えば、多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシーもしくはギヤン−バレー症候群および慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー）；感染性肝炎（Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎および他の非肝臓向性ウイルス性肝炎）、自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎および硬化性胆管炎のような、肝胆道疾患；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン感受性腸症、およびホウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑および接触皮膚炎、乾癬を含む、自己免疫性もしくは免疫媒介性の皮膚疾患；喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症およびじんま疹のような、アレルギー性疾患；好酸球性肺炎、特発性肺線維症および過敏性肺炎のような、肺の免疫疾患；移植片拒絶および対宿主性移植片病を含む移植関連疾患である、方法。
１２０．上記骨代謝異常または骨代謝障害は、関節炎、骨粗鬆症または大理石骨病である、請求項１０３に記載の方法。
１２１．因子を同定する方法であって、上記因子は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する、神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；脂質代謝障害；または発生異常を改善または調節し、上記方法は、以下：
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物細胞培養物を提供する工程であって、上記培養物の各細胞は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする上記遺伝子の破壊を含む、工程；
（ｂ）試験因子を上記細胞培養物に投与する工程；および
（ｃ）上記試験因子が、上記細胞培養物において、上記神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害；脂質代謝障害；または発生異常を改善または調節するか否かを決定する工程
を包含する、方法。
１２２．上記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の増加した不安様反応である、請求項１２１に記載の方法。
１２３．上記神経障害は、オープンフィールド活動試験の間の減少した不安様反応である、請求項１２１に記載の方法。
１２４．上記神経障害は、ホームケージ活動試験の間の異常なサーカディアンリズムである、請求項１２１に記載の方法。
１２５．上記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の増強された運動協調である、請求項１２１に記載の方法。
１２６．上記神経障害は、逆転スクリーン試験の間の障害された運動協調である、請求項１２１に記載の方法。
１２７．上記神経障害は、鬱病、全般性不安障害、注意欠陥障害、睡眠障害、過活動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知障害、痛覚過敏または感覚性障害である、請求項１２１に記載の方法。
１２８．上記眼の異常は、網膜の異常である、請求項１２１に記載の方法。
１２９．上記眼の異常は、視覚上の問題または盲と一致する、請求項１２１に記載の方法。
１３０．上記網膜の異常は、色素性網膜炎と一致する、請求項１２８に記載の方法。
１３１．上記網膜の異常は、網膜変性または網膜形成異常によって特徴付けられる、請求項１２８に記載の方法
１３２．請求項１２８に記載の方法であって、上記網膜の異常は、網膜形成異常、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑水腫、角膜新生血管形成、角膜移植片新生血管形成、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜新生血管形成、角の新生血管形成（ルベオーシス）、眼の血管新生疾患、脈管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーヴズ病を含む）、角膜および他の組織の移植、網膜の動脈の閉塞もしくは閉鎖；網膜脈管構造の二次的な萎縮を引き起こす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在夜盲、コロイデレミア、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディノ−メインザー症候群、シニア−ローケン症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候、先天性脊椎・骨端異形成症、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジル症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール−マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β−リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン症、またはマンノシドーシスと一致する、方法。
１３３．上記眼の異常は、白内障である、請求項１２１に記載の方法。
１３４．請求項１３３に記載の方法であって、上記白内障は、ヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症またはコンラーディ症候群のような全身性疾患である、方法。
１３５．上記発生異常は、胚の死亡または生存率の低下を包含する、請求項１２１に記載の方法。
１３６．請求項１２１に記載の方法であって、上記心血管障害、内皮障害または脈管形成障害は、糖尿病のような動脈疾患；乳頭水腫；眼の過形成；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；急性心筋梗塞のような心筋梗塞、心肥大およびうっ血性心不全のような心不全；高血圧症；炎症性脈管炎；レーノー病およびレーノー現象；動脈瘤および動脈再狭窄；血栓性静脈炎、リンパ管炎およびリンパ水腫のような静脈およびリンパの疾患；末梢性脈管疾患；脈管腫瘍（例えば、血管腫（毛細血管腫および海綿状血管腫））のような癌、グロムス腫瘍、毛細血管拡張症、杆菌性血管腫症状、血管内皮腫、血管肉腫、血管周囲細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫およびリンパ管肉腫；腫瘍新脈管形成；創傷、熱傷、および他の傷害された組織、移植片固定、瘢痕のような外傷；虚血  再灌流障害；慢性関節リウマチ；脳血管疾患；急性腎不全のような腎疾患、または骨粗鬆症である、方法。
１３７．請求項１２１に記載の方法であって、上記免疫障害は、全身性エリテマトーデス；慢性関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身性硬化症（強皮症）；特発性炎症性ミオパシー（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性脈管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫汎血球減少、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーヴズ病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ急性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎炎）；糖尿病；免疫媒介性腎臓病（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢神経系および末梢神経系の脱髄疾患（例えば、多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシーもしくはギヤン−バレー症候群および慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー）；感染性肝炎（Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎および他の非肝臓向性ウイルス性肝炎）、自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎および硬化性胆管炎のような、肝胆道疾患；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン感受性腸症、およびホウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑および接触皮膚炎、乾癬を含む、自己免疫性もしくは免疫媒介性の皮膚疾患；喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症およびじんま疹のような、アレルギー性疾患；好酸球性肺炎、特発性肺線維症および過敏性肺炎のような、肺の免疫疾患；または、移植片拒絶および対宿主性移植片病を含む移植関連疾患である、方法。
１３８．上記骨代謝異常または骨代謝障害は、関節炎、骨粗鬆症または大理石骨病である、請求項１２１に記載の方法。
１３９．請求項１２１に記載の方法によって同定される、因子。
１４０．請求項１３９に記載の因子であって、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドのアゴニストもしくはアンタゴニストである、因子。
１４１．請求項１４０に記載の因子であって、上記アゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
１４２．請求項１４０に記載の因子であって、上記アンタゴニストは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体である、因子。
１４３．請求項１２１に記載の方法によって同定される、治療因子。
１４４．遺伝子の破壊に関連する表現型を調節する方法であって、上記遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードし、上記方法は、既に上記表現型を有し得るか、または上記表現型を有する傾向にあり得るか、または上記表現型が防止されるべきであり得る被験体に、有効量の請求項４６に記載の因子またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与し、それによって上記表現型を効果的に調節する工程を包含する、方法。
１４５．遺伝子の破壊に関連する生理学的特徴を調節する方法であって、上記遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードし、上記方法は、既に上記生理学的特徴を表し得るか、または上記生理学的特徴を表す傾向にあり得るか、または上記生理学的特徴が防止されるべきであり得る被験体に、有効量の請求項５２に記載の因子またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与し、それによって上記生理学的特徴を効果的に調節する工程を包含する、方法。
１４６．遺伝子の破壊に関連する行動を調節する方法であって、上記遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードし、上記方法は、既に上記行動を表し得るか、または上記行動を表す傾向にあり得るか、または上記行動が防止されるべきであり得る被験体に、有効量の請求項６３に記載の因子またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与し、それによって上記行動を効果的に調節する工程を包含する、方法。
１４７．以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドの発現を調節する方法であって、上記方法は、上記ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドを発現する宿主細胞に、有効量の請求項９２に記載の因子またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与し、それによって上記ポリペプチドの発現を効果的に調節する工程を包含する、方法。
１４８．遺伝子の破壊に関連する状態を調節する方法であって、上記遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードし、上記方法は、既に上記状態を有し得るか、または上記状態を有する傾向にあり得るか、または上記状態が予防されるべきであり得る被験体に、治療有効量の請求項９８に記載の治療因子またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与し、それによって上記状態を効果的に調節する工程を包含する、方法。
１４９．遺伝子の破壊に関連する、神経障害；心血管障害、内皮障害もしくは脈管形成障害；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常もしくは骨代謝障害、または胚の死亡を、処置または予防または改善する方法であって、上記遺伝子は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードし、上記方法は、非ヒトトランスジェニック動物細胞培養物に、治療有効量の請求項１３９に記載の因子またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与し、これによって、上記障害を効果的に処置または予防または改善する工程を包含し、上記培養物の各細胞は、以下：ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む、方法。
【発明を実施するための最良の形態】
【００９９】
（好ましい実施形態の詳細な説明）
（Ｉ．定義）
用語「ＰＲＯポリペプチド」および「ＰＲＯ」は、本明細書に記載されるように、かつその直後に数値指定が続く場合、種々のポリペプチドであって、ここで完全な指定（すなわち、ＰＲＯ／数字）は、本明細書で使用される場合、特定のポリペプチド配列をいう。用語「ＰＲＯ／数字ポリペプチド」および「ＰＲＯ／数字」は、用語「数字」が本明細書で使用される場合に実際の数値指定として提供される場合、ネイティブ配列ポリペプチドおよびポリペプチド改変体（本明細書でさらに規定される）を包含する。本明細書で記載される、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドは、種々の供給源から（例えば、ヒト組織型からまたは別の供給源から）単離され得るか、または組換え法または合成法によって調製され得る。用語「ＰＲＯポリペプチド」とは、本明細書に開示される個々の各ＰＲＯ／数字ポリペプチドをいう。「ＰＲＯポリペプチド」に言及する本明細書の全ての開示は、個々におよび合わせて、ポリペプチドの各々をいう。例えば、本発明の各ポリペプチドの調製、本発明の各ポリペプチドの精製、本発明の各ポリペプチドの誘導、本発明の各ポリペプチドに対する抗体の形成、本発明の各ポリペプチドの投与、本発明の各ポリペプチドを含む組成物、本発明の各ポリペプチドによる疾患の処置などの記載は、本発明の各ポリペプチド個々に関する。用語「ＰＲＯポリペプチド」はまた、本明細書に開示されるＰＲＯ／数字ポリペプチドの改変体を包含する。
【０１００】
「ネイティブ配列の、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド」とは、天然に由来するその対応するＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドと同じアミノ酸配列を有するポリペプチドを包含する。このようなネイティブ配列の、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドは、天然から単離されてもよいし、組換え手段または合成手段によって生成されてもよい。用語「ネイティブ配列のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド」とは、特定のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド（例えば、細胞外ドメイン配列）の天然に存在する末端切断形態または分泌形態、これらポリペプチドの天然に存在する改変体形態（例えば、選択的にスプライスされた形態）および天然に存在する対立遺伝子改変体を具体的に包含する。本発明は、本明細書に開示されるネイティブ配列のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドであって、添付の図面に示される全長アミノ酸配列を含む、成熟または全長ネイティブ配列のポリペプチドを提供する。開始コドンおよび終止コドンは、図面において太字および下線を伏して示される。しかし、添付の図面に開示されるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドが、本明細書で図面においてアミノ酸１位として指定されるメチオニン残基で始まることが示されるが、図面においてアミノ酸１位から上流または下流のいずれかに位置する他の眼チオニン残基が、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの開始アミノ酸残基として使用され得ることが、想定されかつ考えられ得る。
【０１０１】
このＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの「細胞外ドメイン」または「ＥＣＤ」とは、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの一形態であって、膜貫通ドメインも細胞質ドメインも実質的に含まないものをいう。通常、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドのＥＣＤは、このような膜貫通ドメインおよび／または細胞質ドメインの１％未満を有し、好ましくは、このようなドメインの０．５％未満を有する。本発明のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドについて同定される任意の膜貫通ドメインは、疎水性ドメインのその型を同定するために当該分野で慣用的に使用される基準に従って同定されることが理解される。膜貫通ドメインの正確な境界は変動し得るが、本明細書で最初に同定されるドメインのいずれかの末端において約５アミノ酸以下で変動し得る可能性が最も高い。従って、最適には、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの細胞外ドメインは、実施例または明細書中で同定される膜貫通ドメイン／細胞外ドメイン境界のいずれかの側の約５個以下のアミノ酸を含み得る。このようなポリペプチド（関連したシグナルペプチドありまたはなし）、およびこれらをコードする核酸は、本発明によって企図される。
【０１０２】
本明細書に開示される種々のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの「シグナルペプチド」の適切な位置は、本明細書および／または添付の図面において示される。しかし、シグナルペプチドのＣ末端境界は変動し得るが、本明細書で最初に同定されるシグナルペプチドＣ末端境界のいずれかの側の約５アミノ酸以下である可能性が最も高い。このシグナルペプチドのＣ末端境界が、アミノ酸配列要素のその型（例えば、Ｎｉｅｌｓｅｎら，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．１０：１−６（１９９７）およびｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．１４：４６８３−４６９０（１９８６））を同定するために当該分野で慣用的に使用される基準に従って同定され得ることに注意すること。いくらかの場合において、分泌ポリペプチドからのシグナル配列の切断は、完全に均一な１つより多くの種の分泌ペプチドであるわけではないことも認識される。これらの成熟ポリペプチド（そのシグナルペプチドが、本明細書で同定されるシグナルペプチドのＣ末端のいずれかの側の約５個以下のアミノ酸で切断される）、およびこれらをコードするポリヌクレオチドは、本発明によって企図される。
【０１０３】
「ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド改変体」とは、本明細書で規定されるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド、好ましくは、本明細書で開示される全長ネイティブ配列のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド配列と少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有すると本明細書で規定される活性なＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド、本明細書に開示されるシグナルペプチドを欠いている、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド配列、本明細書で開示されるような、シグナルペプチドありまたはなしのＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの細胞外ドメイン、あるいは本明細書に開示される全長のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド配列の任意の他のフラグメント（例えば、全長のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドについての完全コード配列の一部のみを示す核酸によってコードされるもの）を意味する。このようなＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド改変体としては、全長アミノ酸配列のＮＢにおいてまたはＣ末端において１個または数個のアミノ酸残基が付加または欠失された、例えば、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドが挙げられる。通常、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド改変体は、本明細書で規定される全長ネイティブ配列のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド配列、本明細書で開示されるシグナルペプチドを欠いているＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド配列、本明細書で開示されるシグナルペプチドありまたはなしのＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの細胞外ドメイン、あるいは本明細書に開示される全長のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド配列の任意の他の具体的に規定されるフラグメントと少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有し、あるいはこれらと少なくとも約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％のアミノ酸配列同一性を有する。通常、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の改変ポリペプチドは、少なくとも約１０アミノ酸長であるか、あるいは、少なくとも約２０アミノ酸長、３０アミノ酸長、４０アミノ酸長、５０アミノ酸長、６０アミノ酸長、７０アミノ酸長、８０アミノ酸長、９０アミノ酸長、１００アミノ酸長、１１０アミノ酸長、１２０アミノ酸長、１３０アミノ酸長、１４０アミノ酸長、１５０アミノ酸長、１６０アミノ酸長、１７０アミノ酸長、１８０アミノ酸長、１９０アミノ酸長、２００アミノ酸長、２１０アミノ酸長、２２０アミノ酸長、２３０アミノ酸長、２４０アミノ酸長、２５０アミノ酸長、２６０アミノ酸長、２７０アミノ酸長、２８０アミノ酸長、２９０アミノ酸長、３００アミノ酸長、３１０アミノ酸長、３２０アミノ酸長、３３０アミノ酸長、３４０アミノ酸長、３５０アミノ酸長、３６０アミノ酸長、３７０アミノ酸長、３８０アミノ酸長、３９０アミノ酸長、４００アミノ酸長アミノ酸長、４１０アミノ酸長、４２０アミノ酸長、４３０アミノ酸長、４４０アミノ酸長、４５０アミノ酸長、４６０アミノ酸長、４７０アミノ酸長、４８０アミノ酸長、４９０アミノ酸長、５００アミノ酸長、５１０アミノ酸長、５２０アミノ酸長、５３０アミノ酸長、５４０アミノ酸長、５５０アミノ酸長、５６０アミノ酸長、５７０アミノ酸長、５８０アミノ酸長、５９０アミノ酸長、６００アミノ酸長、またはそれ以上である。通常、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の改変ポリペプチドは、ネイティブのＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド配列と比較して、わずか１個の保存的アミノ酸置換を有するか、あるいは、ネイティブのＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド配列と比較して、わずか２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、または１０個の保存的アミノ酸置換を有する。
【０１０４】
本明細書で同定されるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド配列に対する、の「パーセント（％）  アミノ酸配列同一性」とは、最大パーセント配列同一性を達成するために、配列同一性の一部としていかなる保存的置換も考慮しないでこれら配列を整列して必要な場合にはギャップを導入した後の、特定のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして規定される。％アミノ酸配列同一性を決定する目的のアラインメントは、当該分野の技術範囲内である種々の方法において、例えば、公に利用可能なコンピューターソフトウェア（例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア）を用いて達成され得る。当業者は、その配列の全長が比較される最大アラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメーターを決定し得る。しかし、本明細書中の目的のために、％  アミノ酸配列同一性値は、配列比較コンピュータープログラムＡＬＩＧＮ−２を用いて生成され、ＡＬＩＧＮ−２プログラムについてのこの完全なソースコードを、以下の表１に提供する。このＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータープログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって作られ、以下の表１において示されるソースコードは、米国商標庁（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．，２０５５９）においてユーザー説明書とともにファイルした（米国商標登録番号ＴＸＵ５１００８７の下で登録されている）。このＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を通じて公に利用可能であるか、または以下の表１に提供されるソースコードからコンパイルされ得る。このＡＬＩＧＮ−２プログラムは、ＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステム、好ましくは、デジタルＵＮＩＸ（登録商標）  Ｖ４．０Ｄ上で使用するためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメーターは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定され、変動しない。
【０１０５】
ＡＬＩＧＮ−２がアミノ酸配列比較のために使用される状況において、所定のアミノ酸配列Ｂに対する（所定のアミノ酸配列Ｂとの）、所定のアミノ酸配列Ａの％アミノ酸配列同一性（あるいは、所定のアミノ酸配列Ｂに対する（所定のアミノ酸配列Ｂと）特定の％  アミノ酸配列同一性を有するまたは含む所定のアミノ酸配列Ａとしてよばれ得る）は、以下のように計算される：
１００×分数Ｘ／Ｙ
ここでＸは、配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２によって、そのプログラムのＡおよびＢのアラインメントにおける同一マッチとしてスコア付けされるアミノ酸残基の数である。そしてＹは、Ｂ中のアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ｂに対するＡの％  アミノ酸配列同一性は、Ａに対するＢの％  アミノ酸配列同一性と等しくないことが認識される。この方法を使用する％  アミノ酸配列同一性計算の例として、表２および表３は、「ＰＲＯ」と指定されるアミノ酸配列に対する「Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ」といわれるアミノ酸配列の％  アミノ酸配列同一性をどのように計算するかを示す。ここで「ＰＲＯ」とは、目的の仮定（ｈｙｐｏｔｈｅｔｉｃａｌ）ＰＲＯポリペプチドのアミノ酸配列を示し、「Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ」とは、この目的の「ＰＲＯ」ポリペプチドが比較されるポリペプチドのアミノ酸配列を示し、そして「Ｘ」、「Ｙ」、および「Ｚ」とは各々、異なる仮定アミノ酸残基を示す。別段述べられない限り、本明細書で使用される全ての％  アミノ酸配列同一性値は、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータープログラムを使用して直前の段落において記載されるように得られる。
【０１０６】
「ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の改変ポリヌクレオチド」または「ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の改変核酸配列」とは、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド、好ましくは、本明細書に規定されかつ本明細書に開示される全長ネイティブ配列のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列と少なくとも約８０％の核酸配列同一性を有する、活性なＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする核酸分子、本明細書に開示されるシグナルペプチドを欠いている、全長ネイティブ配列のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド配列をコードする核酸分子、本明細書に開示されるシグナルペプチドありまたはなしのＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの細胞外ドメインをコードする核酸分子、または本明細書に開示される全長のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド配列の任意の他のフラグメントをコードする核酸分子（例えば、全長のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの完全コード配列の一部分のみを示す核酸によってコードされるもの）を意味する。通常、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の改変ポリヌクレオチドは、本明細書で開示される全長ネイティブ配列のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド配列、本明細書に開示されるシグナルペプチドを欠いている全長ネイティブ配列のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド配列、本明細書に開示されるようなシグナル配列ありまたはなしのＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの細胞外ドメイン、または全長のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド配列の任意の他の配列をコードする核酸配列と、少なくとも８０％の核酸配列同一性を有し、あるいは、少なくとも約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の核酸配列同一性を有する。改変体は、ネイティブヌクレオチド配列を包含しない。
【０１０７】
通常、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の改変ポリヌクレオチドは、少なくとも約５ヌクレオチド長であるか、あるいは少なくとも約６ヌクレオチド長、７ヌクレオチド長、８ヌクレオチド長、９ヌクレオチド長、１０ヌクレオチド長、１１ヌクレオチド長、１２ヌクレオチド長、１３ヌクレオチド長、１４ヌクレオチド長、１５ヌクレオチド長、１６ヌクレオチド長、１７ヌクレオチド長、１８ヌクレオチド長、１９ヌクレオチド長、２０ヌクレオチド長、２１ヌクレオチド長、２２ヌクレオチド長、２３ヌクレオチド長、２４ヌクレオチド長、２５ヌクレオチド長、２６ヌクレオチド長、２７ヌクレオチド長、２８ヌクレオチド長、２９ヌクレオチド長、３０ヌクレオチド長、３５ヌクレオチド長、４０ヌクレオチド長、４５ヌクレオチド長、５０ヌクレオチド長、５５ヌクレオチド長、６０ヌクレオチド長、６５ヌクレオチド長、７０ヌクレオチド長、７５ヌクレオチド長、８０ヌクレオチド長、８５ヌクレオチド長、９０ヌクレオチド長、９５ヌクレオチド長、１００ヌクレオチド長、１０５ヌクレオチド長、１１０ヌクレオチド長、１１５ヌクレオチド長、１２０ヌクレオチド長、１２５ヌクレオチド長、１３０ヌクレオチド長、１３５ヌクレオチド長、１４０ヌクレオチド長、１４５ヌクレオチド長、１５０ヌクレオチド長、１５５ヌクレオチド長、１６０ヌクレオチド長、１６５ヌクレオチド長、１７０ヌクレオチド長、１７５ヌクレオチド長、１８０ヌクレオチド長、１８５ヌクレオチド長、１９０ヌクレオチド長、１９５ヌクレオチド長、２００ヌクレオチド長、２１０ヌクレオチド長、２２０ヌクレオチド長、２３０ヌクレオチド長、２４０ヌクレオチド長、２５０ヌクレオチド長、２６０ヌクレオチド長、２７０ヌクレオチド長、２８０ヌクレオチド長、２９０ヌクレオチド長、３００ヌクレオチド長、３１０ヌクレオチド長、３２０ヌクレオチド長、３３０ヌクレオチド長、３４０ヌクレオチド長、３５０ヌクレオチド長、３６０ヌクレオチド長、３７０ヌクレオチド長、３８０ヌクレオチド長、３９０ヌクレオチド長、４００ヌクレオチド長、４１０ヌクレオチド長、４２０ヌクレオチド長、４３０ヌクレオチド長、４４０ヌクレオチド長、４５０ヌクレオチド長、４６０ヌクレオチド長、４７０ヌクレオチド長、４８０ヌクレオチド長、４９０ヌクレオチド長、５００ヌクレオチド長、５１０ヌクレオチド長、５２０ヌクレオチド長、５３０ヌクレオチド長、５４０ヌクレオチド長、５５０ヌクレオチド長、５６０ヌクレオチド長、５７０ヌクレオチド長、５８０ヌクレオチド長、５９０ヌクレオチド長、６００ヌクレオチド長、６１０ヌクレオチド長、６２０ヌクレオチド長、６３０ヌクレオチド長、６４０ヌクレオチド長、６５０ヌクレオチド長、６６０ヌクレオチド長、６７０ヌクレオチド長、６８０ヌクレオチド長、６９０ヌクレオチド長、７００ヌクレオチド長、７１０ヌクレオチド長、７２０ヌクレオチド長、７３０ヌクレオチド長、７４０ヌクレオチド長、７５０ヌクレオチド長、７６０ヌクレオチド長、７７０ヌクレオチド長、７８０ヌクレオチド長、７９０ヌクレオチド長、８００ヌクレオチド長、８１０ヌクレオチド長、８２０ヌクレオチド長、８３０ヌクレオチド長、８４０ヌクレオチド長、８５０ヌクレオチド長、８６０ヌクレオチド長、８７０ヌクレオチド長、８８０ヌクレオチド長、８９０ヌクレオチド長、９００ヌクレオチド長、９１０ヌクレオチド長、９２０ヌクレオチド長、９３０ヌクレオチド長、９４０ヌクレオチド長、９５０ヌクレオチド長、９６０ヌクレオチド長、９７０ヌクレオチド長、９８０ヌクレオチド長、９９０ヌクレオチド長、もしくは１０００ヌクレオチド長であり、ここでこの状況において、用語「約」とは、その参照される長さの、その参照されるヌクレオチド配列長±１０％を意味する。
【０１０８】
本明細書中で同定されるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０をコードする核酸配列に関する「パーセント（％）  核酸配列同一性」とは、最大パーセント配列同一性を達成するために、これら配列を整列し、必要であればギャップを導入した後に、目的のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の核酸配列におけるヌクレオチドに対する、同定される候補配列におけるヌクレオチドのパーセンテージとして同定される。パーセント核酸配列同一性を決定する目的でのアラインメントは、当該分野の技術範囲内である種々の方法において、例えば、公に利用可能なコンピューターソフトウェア（例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア）を用いて、達成され得る。しかし、本明細書中の目的のために、％  核酸配列同一性値は、配列比較コンピュータープログラムＡＬＩＧＮ−２を用いて生成され、ＡＬＩＧＮ−２プログラムについてのこの完全なソースコードを、以下の表１に提供する。このＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータープログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって作られ、以下の表１において示されるソースコードは、米国商標庁（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．，２０５５９）においてユーザー説明書とともにファイルした（米国商標登録番号ＴＸＵ５１００８７の下で登録されている）。このＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を通じて公に利用可能であるか、または以下の表１に提供されるソースコードからコンパイルされ得る。このＡＬＩＧＮ−２プログラムは、ＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステム、好ましくは、デジタルＵＮＩＸ（登録商標）  Ｖ４．０Ｄ上で使用するためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメーターは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定され、変動しない。
【０１０９】
ＡＬＩＧＮ−２が核酸配列比較のために使用される状況において、所定の核酸配列Ｄに対する（所定の核酸配列Ｄとの）、所定の核酸配列Ｃの％核酸配列同一性（あるいは、所定の核酸配列Ｄに対する（所定の核酸配列Ｄと）特定の％  核酸配列同一性を有するかまたは含む所定の核酸配列Ｃとしてよばれ得る）は、以下のように計算される：
１００×分数Ｗ／Ｚ
ここでＷは、配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２によって、そのプログラムのＣおよびＤのアラインメントにおける同一マッチとしてスコア付けされるヌクレオチドの数である。そしてＺは、Ｄ中のヌクレオチドの総数である。核酸配列Ｃの長さが核酸配列Ｄの長さと等しくない場合、Ｄに対するＣの％  核酸配列同一性は、Ｃに対するＤの％  核酸配列同一性と等しくないことが認識される。この方法を使用する％  核酸配列同一性計算の例として、表４および表５は、「ＰＲＯ−ＤＮＡ」と指定される核酸配列に対する「Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ＤＮＡ」といわれる核酸配列の％  核酸配列同一性をどのように計算するかを示す。ここで「ＰＲＯ−ＤＮＡ」とは、目的の仮定（ｈｙｐｏｔｈｅｔｉｃａｌ）ＰＲＯコード核酸配列を示し、「Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ＤＮＡ」とは、この目的の「ＰＲＯ−ＤＮＡ」核酸が比較される核酸分子のヌクレオチド配列を示し、そして「Ｎ」、「Ｌ」、および「Ｖ」とは各々、異なる仮定ヌクレオチドを示す。別段述べられない限り、本明細書で使用される全ての％  核酸配列同一性値は、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータープログラムを使用して直前の段落において記載されるように得られる。
【０１１０】
本発明はまた、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする核酸分子でありかつ好ましくはストリンジェントなハイブリダイゼーションおよび洗浄条件で、本明細書で開示される全長のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列にハイブリダイズし得るＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の改変ポリヌクレオチドを提供する。ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の改変ポリヌクレオチドは、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の改変ポリヌクレオチドによってコードされるものであり得る。
【０１１１】
用語「全長のコード領域」とは、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする核酸に対する言及において使用される場合、本発明の全長のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードするヌクレオチドの配列（これは、しばしば、添付の図面において、開始コドンから終止コドンの間で（開始コドンと終止コドンを含めて）示される）をいう。用語「全長のコード領域」とは、ＡＴＣＣに寄託された核酸に対する言及において使用される場合、ＡＴＣＣに寄託されたベクターに挿入されるｃＤＮＡ（これは、しばしば、添付の図面において、開始コドンから終止コドンの間で（開始コドンと終止コドンを含めて）のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドコード部分をいう。
【０１１２】
「単離された（単離される）」とは、本明細書に開示される種々のポリペプチドを記載するために使用される場合、同定されておりかつその天然の環境の構成要素から分離および／もしくは回収されているポリペプチドを意味する。その天然の環境の夾雑する構成要素は、そのポリペプチドについての診断用途もしくは治療用途を代表的には妨害する物質であり、そしてその構成要素としては、酵素、ホルモン、および他のタンパク質様溶質もしくは非タンパク質様溶質が挙げられ得る。本発明は、（１）Ｎ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るために十分な程度まで、スピニングカップシークエネーター（ｓｐｉｎｎｉｎｇ  ｃｕｐ  ｓｅｑｕｅｎａｔｏｒ）の使用によって、または（２）非還元条件下または還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによって、クーマシーブルー、もしくは好ましくは、銀染色を用いて一様になるまで、精製されているポリペプチドを提供する。単離されたポリペプチドは、組換え細胞内のインサイチュのポリペプチドを含む。なぜなら、このＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの天然環境の少なくとも１種の構成要素は、存在しないからである。しかし、通常、単離されたポリペプチドは、少なくとも１回の精製工程によって調製される。
【０１１３】
「単離された」ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドコード核酸もしくは他のポリペプチドコード核酸は、同定されかつ少なくとも１種の夾雑核酸分子（これと、これらのポリペプチドコード核酸もしくは他のポリペプチドコード核酸は、ポリペプチドコード核酸の天然の供給源中で通常関連している）から分離される核酸分子である。単離されたポリペプチドコード核酸分子は、天然で見いだされる形態または状況以外のものである。単離されたポリペプチドコード核酸分子は、従って、これが天然の細胞において存在する特定のポリペプチドコード核酸分子から区別される。しかし、単離されたポリペプチドコード核酸分子は、そのポリペプチドを通常発現する細胞中に含まれるポリペプチドコード核酸分子を含み、この細胞中で、例えば、この核酸分子は、天然の細胞の染色体位置とは異なる染色体位置中に存在している。
【０１１４】
用語「制御配列」とは、特定の宿主生物において作動可能に連結されたコード配列の発現に必要なＤＮＡ配列をいう。原核生物に適した制御配列としては、例えば、プロモーター、必要に応じて、オペレーター配列、およびリボソーム結合部位が挙げられる。真核生物細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、およびエンハンサーを利用することが公知である。
【０１１５】
核酸とは、その核酸が別の核酸配列との機能的な関係にあるように配置されている場合に、「作動可能に連結される」。例えば、プレ配列または分泌リーダーのＤＮＡは、これがそのポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合に、ポリペプチドのＤＮＡに作動可能に連結される；プロモーターまたはエンハンサーは、これがコード配列の転写に影響を及ぼす場合に、コード配列に作動可能に連結される；またはリボソーム結合部位は、これが翻訳を促進するように配置されている場合に、コード配列に作動可能に連結される。一般に、「作動可能に連結される」とは、ＤＮＡ配列が連結されかつ連続しており、そして分泌リーダーの場合には、連続しておりリーディング相に存在することを意味する。しかし、エンハンサーは、連続している必要はない。連結は、都合のよい制限部位における連結によって達成される。このような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが、従来の慣例に従って使用される。
【０１１６】
ハイブリダイゼーション反応の「ストリンジェンシー」とは、当業者によって容易に決定され得るので、一般に、プローブ長、洗浄温度、および塩濃度に依存して経験的な計算結果である。一般に、プローブが長いほど、適切なアニーリングにはより高い温度が必要であり、一方でプローブが短いほど、より低い温度が必要である。ハイブリダイゼーションは、一般に、相補鎖が、それらの融解温度より低い環境に存在する場合に、変性ＤＮＡが再アニールする能力に依存する。そのプローブとハイブリダイズ可能な配列との間の望ましい相同姓の程度が高いほど、使用され得る相対温度が高くなる。結果として、より高い相対温度が、反応条件をよりストリンジェントにする傾向がある一方、より低い温度が、より低いストリンジェントにする傾向があることが理解される。ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーのさらなる詳細および説明については、Ａｕｓｕｂｅｌら，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，（１９９５）を参照のこと。
【０１１７】
「ストリンジェントな条件」または「高ストリンジェンシー条件」とは、本明細書で規定される場合、（１）洗浄については低イオン強度および高温（例えば、５０℃での０．０１５Ｍ  塩化ナトリウム／０．００１５Ｍ  クエン酸ナトリウム／０．１％  ドデシル硫酸ナトリウム）を使用するもの；（２）ハイブリダイゼーションの間に、変性剤（例えば、ホルムアルデヒド）を使用すること（例えば、０．１％  ウシ血清アルブミン含有５０％（ｖ／ｖ）ホルムアルデヒド／０．１％  Ｆｉｃｏｌｌ／０．１％  ポリビニルピロリドン／７５０ｍＭ  塩化ナトリウム、７５ｍＭ  クエン酸ナトリウム含有５０ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．５）（４２℃）を使用する；または（３）  ｅｍｐｌｏｙ  ４２℃での５０％  ホルムアルデヒド、５×ＳＳＣ（０．７５Ｍ  ＮａＣｌ、０．０７５Ｍ  クエン酸ナトリウム）、５０ｍＭ  リン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％  ピロリン酸ナトリウム、５×デンハルト溶液、超音波処理サケ精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍｌ）、０．１％  ＳＤＳ、および１０％  硫酸デキストランと４２℃での０．２×ＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）における洗浄、および５５℃での５０％  ホルムアミド、続いて、ＥＤＴＡ含有０．１×ＳＳＣからなる高ストリンジェンシー洗浄条件（５５℃で）を使用するもの、によって同定され得る。
【０１１８】
「中程度にストリンジェントな条件」とは、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，１９８９によって記載されるように同定され得る。この条件は、上記のもののような低ストリンジェントでの洗浄溶液およびハイブリダイゼーション条件（例えば、温度、イオン強度および％ＳＤＳ）を含む。中程度にストリンジェントな条件の例は、ある溶液（２０％  ホルムアミド、５×ＳＳＣ（１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１５ｍＭ  クエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭ  リン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハルト溶液、１０％  硫酸デキストラン、および２０ｍｇ／ｍｌ  変性剪断サケ精子ＤＮＡを含む）中での３７℃での一晩のインキュベーション、続いて、１×  ＳＳＣ中で、約３７〜５０℃でのフィルターの洗浄である。当業者は、プローブ長などのような因子を適合させるために必要なその温度、イオン強度などをどのように調節するかを認識する。
【０１１９】
用語「エピトープタグ化」とは、本明細書で使用される場合、「タグポリペプチド」に融合されたＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドを含むキメラポリペプチドをいう。このタグポリペプチドは、抗体が作製され得るエピトープを提供するために十分な残基を有するが、融合されるポリペプチドの活性を妨害しないように十分短い。そのタグポリペプチドはまた、好ましくは、その抗体が他のエピトープと実質的に交叉反応しないように、かなり特有である。適したタグポリペプチドは、一般に、少なくとも６アミノ酸残基を有し、ふつうは、約８〜５０アミノ酸残基の間（好ましくは、約１０〜２０アミノ酸残基の間）を有する。
【０１２０】
「活性な」または「活性」とは、本明細書中での目的に関して、ネイティブのまたは天然に存在するＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの生物学的活性および／または免疫学的活性を保持するＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの形態をいい、ここで「生物学的」活性とは、ネイティブのまたは天然に存在するＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドが有する抗原エピトープに対する抗体の生成を誘導し得る能力以外のネイティブのまたは天然に存在するＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドによって引き起こされる生物学的機能（阻害機能または刺激機能いずれか）をいい、そして「免疫学的」活性とは、ネイティブのまたは天然に存在するＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドが有する抗原エピトープに対する抗体の生成を誘導する能力をいう。
【０１２１】
用語「アンタゴニスト」とは、［別段限定されなければ］その最も広い意味において使用され、本明細書で開示されるネイティブのＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの生物学的活性を部分的にまたは完全にブロックするか、阻害するかまたは中和する任意の分子を包含する。類似の様式において、用語「アゴニスト」とは、［別段限定されなければ］その最も広い意味において使用され、本明細書で開示されるネイティブのＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの生物学的活性を模倣する任意の分子を包含する。適切なアゴニスト分子またはアンタゴニスト分子は、ネイティブのＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のペプチド、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のアンチセンスオリゴヌクレオチド、有機低分子などのアゴニスト、アンタゴニスト抗体または抗体フラグメント、フラグメントまたはアミノ酸配列改変体を具体的に包含する。ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストを同定するための方法は、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドと、候補アゴニスト分子または候補アンタゴニスト分子とを接触させる工程、およびＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドと通常関連する１種以上の生物学的活性において検出可能な変化を測定する工程を包含し得る。
【０１２２】
「処置する」または「処置」または「緩和」とは、治療的処置手段および予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ｏｒ  ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）処置手段の両方であって、その目的が、標的とした病理学的状態または障害を予防または遅らせる（軽減する）ことであるものをいう。処置が必要な被験体は、既にその障害を有していてもよいし、その障害を有する傾向があってもよいし、その障害が予防されるべきであってもよい。
【０１２３】
「長期間（ｃｈｒｏｎｉｃ）」投与とは、短期間（ａｃｕｔｅ）様式とは対照的に、長期間にわたって最初の治療効果（活性）を維持するように、連続様式で薬剤を投与することをいう。「断続的な」投与とは、中断なしで連続的に行われるのではなく、むしろ本質亭に周期的な処置である。
【０１２４】
治療の目的に関して「哺乳動物」とは、哺乳動物として分類される任意の動物をいい、これらの動物としては、ヒト、齧歯類（例えば、ラットまたはマウス）、飼い慣らされた動物および家畜、ならびに動物園の動物、競技に使用される（ｓｐｏｒｔ）動物、または愛玩動物（例えば、イヌ、ネコ、家畜、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウサギなど）が挙げられる。好ましくは、この哺乳動物はヒトである。
【０１２５】
１種異常のさらなる治療剤「と組み合わせた」投与とは、あらゆる順番での同時に起こる（当時に伴う）かつ連続的な投与を包含する。
【０１２６】
「キャリア」とは、本明細書中で使用される場合、使用される投与量および濃度において、これに曝されている細胞または動物に対して毒性である、薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、または安定化剤を包含する。しばしば、生理学的に受容可能なキャリアは、ｐＨ緩衝化水溶液である。生理学的に受容可能なキャリアの例としては、緩衝液（例えば、リン酸、クエン酸、および他の有機酸）；抗酸化剤（アスコルビン酸を含む）；低分子量（約１０残基未満の）ポリペプチド；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン）；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジン）；単糖類、二糖類、および他の炭水化物（グルコース、マンノース、またはデキストリンが挙げられる）；キレート化剤（例えば、ＥＤＴＡ）；糖アルコール（例えば、マンニトールまたはソルビトール）；塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）；および／または非イオン性界面活性剤（例えば、ＴＷＥＥＮＴＭ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭ）が挙げられる。
【０１２７】
「固相」とは、本発明の抗体が接着され得る非水性マトリクスを意味する。本明細書で包含される固相の例としては、部分的にまたは完全に、ガラス（例えば、制御された孔ガラス）、多糖類（例えば、アガロース）、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリビニルアルコールおよびシリコーンから形成されるものが挙げられる。状況に依存して、固相は、アッセイプレートのウェルを包含し得；他では、精製カラムである（例えば、アフィニティークロマトグラフィーカラム）。この用語はまた、分離した粒子の不連続固相（例えば、米国特許第４，２７５，１４９号において記載されるもの）が挙げられる。
【０１２８】
「リポソーム」とは、哺乳動物への薬物（例えば、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドまたはこれに対する抗体）の送達に有用な、種々の型の脂質、リン脂質および／または界面活性剤から構成される小さな小胞である。リポソームの成分は、生物学的膜の脂質配列と同様の二層形成において一般に配列される。
【０１２９】
「低分子」とは、約５００ダルトン未満の分子量を有すると本明細書で規定される。
【０１３０】
本明細書中に開示されるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体または抗ＰＲＯ１４８０抗体、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の結合オリゴヌクレオチド、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の結合有機分子またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストの「有効量」とは、具体的に記載される目的を実行するために十分な例である。「有効量」は、示される目的に関して、経験的にかつ慣用的な様式で決定され得る。
【０１３１】
用語「治療的に有効な量」とは、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体または抗ＰＲＯ１４８０抗体、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の結合オリゴペプチド、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の結合有機分子または被験体もしくは哺乳動物における疾患もしくは障害の処置に有効な他の薬物の量をいう。癌の場合において、薬物の治療上有効な量とは、癌細胞の数を低下させ得るか；腫瘍の大きさを縮小し得るか；末梢器官への癌細胞侵襲を阻害し得る（すなわち、ある程度まで遅らせ、好ましくは停止させる）か；腫瘍転移を阻害し得る（すなわち、ある程度緩やかにし得、そして好ましくは、停止させ得る）か；腫瘍増殖をある程度阻害し得るか；そして／または癌に関連する１以上の症状をある程度軽減し得る。「処置」の本明細書中での規定を参照のこと。薬物が増殖を妨げ得るかそして／または既存の癌細胞を殺傷し得る程度まで、薬物は、細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性であり得る。
【０１３２】
語句「心血管の、内皮および血管原性障害」、「心血管の、内皮および血管形成」および「心血管内の皮もしくは血管の障害」および「心血管の、内皮もしくは血管の機能不全」とは、交換可能に使用されかつ。一部、血管に影響を及ぼす全身の障害（例えば、糖尿病）、および血管自体の疾患（例えば、動脈、毛細管、静脈および／またはリンパ管の疾患）をいう。これは、脈管形成および／または心血管新生を刺激する徴候（ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎ）、および脈管形成および／または心血管新生を阻害する徴候（ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎ）を包含する。このような障害としては、例えば、動脈疾患（例えば、アテローム硬化症、高血圧症、炎症性脈管炎、レイノー病（Ｒｅｙｎａｕｄ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）およびレイノー現象、動脈瘤、および動脈再狭窄；静脈およびリンパ障害（例えば、血栓静脈炎、リンパ管炎、およびリンパ水腫）；ならびに他の脈管障害（例えば、末梢血管の疾患）、癌（例えば、脈管の腫瘍（例えば、血管腫（毛細管および海綿体）、グロムス腫瘍、毛細血管拡張症、細菌性血管腫症、結果内皮腫、血管肉腫、血管周皮腫、カポージ肉腫、リンパ管腫、およびリンパ管肉腫）、腫瘍血管形成、外傷（例えば、創傷、熱傷、および他の傷害組織）、インプラント固定、瘢痕化、虚血性再灌流傷害、関節リウマチ、脳血管の疾患、腎臓病（例えば、急性腎不全）、または骨粗鬆症が挙げられる。これらとしてはまた、アンギナ、心筋梗塞（例えば、急性心筋梗塞、心臓肥大、および心不全（例えば、ＣＨＦ））が挙げられる。
【０１３３】
「肥大」とは、本明細書で使用される場合、腫瘍形成を伴わない自然の成長と無関係な、器官または構造体の大きさの増大として規定される。器官または組織の肥大は、個々の細胞の大きさの増大（真性肥大）、または組織を構成する細胞数の増大（過形成）、またはその両方のいずれかに起因する。特定の器官（例えば、心臓）は、生まれた直後に分裂する能力を失う。よって、「心臓肥大」とは、心臓の大きさの増大であって、成人において付随した細胞分裂なしで心筋細胞の大きさおよび収縮タンパク質含有量の増大によって特徴づけられるものとして規定される。この肥大への刺激を担うストレスの特徴（例えば、増大した前負荷、増大した後負荷、心筋梗塞におけるような心筋細胞の喪失、または収縮性の原発性抑制）は、応答の性質の決定において重要な役割を果たすようである。心臓肥大の初期段階は、通常、筋原線維およびミトコンドリアの大きさの増大によって、ならびにミトコンドリアおよび各の拡大によって、形態学的に特徴づけられる。この段階において、筋細胞が通常より大きいが、細胞組織化は、たいてい保存されている。心臓肥大のより進行した段階では、特定のオルガネラ（例えば、ミトコンドリア）の大きさおよび数の選択的な増大が存在し、および新たな収縮性要素は、その細胞の局在領域において不規則な様式で付加される。長年にわたる肥大を受けている細胞は、細胞組織化におけるより明らかな混乱（高度に有溝性の膜（ｈｉｇｈｌｙ  ｌｏｂｕｌａｔｅｄ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）を伴う顕著に拡大した核が挙げられる）を示し、この混乱は、隣接する筋原線維に取って代わりかつ正常なＺ帯記録の破壊を引き起こす。語句「心臓肥大」とは、根底にある心臓障害に関係なく、種々の程度の心筋の構造的損傷によって特徴づけられる、この状態の進行の全ての段階を包含するために使用される。従って、この用語はまた、心臓肥大の発生において助けになる生理学的状態（例えば、血圧上昇、大動脈狭窄、または心筋梗塞）を包含する。
【０１３４】
「心不全」とは、心機能の異常であって、心臓が代謝している組織の要求に必要とされる速度で血液をポンプ輸送しない異常をいう。この心不全は、多くの要因（虚血による、先天的な、リウマチ性のまたは突発性の形態が挙げられる）によって引き起こされ得る。
【０１３５】
「欝血性心不全」（ＣＨＦ）とは、末梢組織に酸素化した血液を送達するために、心臓が徐々に十分な心拍出量（心臓によって経時的にポンプ輸送される血液容積）を供給できなくなる進行性の病的状態である。ＣＨＦが進行するにつれて、構造的損傷および血行動態の損傷が起こる。これらの損傷は種々の発現を有するが、１つの特徴的な症状は、心室肥大である。ＣＨＦは、多くの種々の心臓障害の一般的な最終的な結果である。
【０１３６】
「心筋梗塞」とは、一般に、冠状動脈のアテローム硬化症から生じ、しばしば、ｓｕｐｅｒｉｍｐｏｓｅｄ冠状動脈血栓症を伴う。心筋梗塞は、以下の２つの主要な型に分けられ得る：貫壁性梗塞（ここで心筋壊死は、完全な厚さの心室壁に影響を及ぼす）、および心室壁から心外膜への途中全てに延びない、心内膜下（非貫壁性）梗塞（ここで壊死は、心内膜下、壁内心筋、またはその両方に影響を及ぼす）。心筋梗塞は、心臓の損傷を受けたゾーンおよび健康なゾーンの構造において血行動態的な影響の変化および変性の両方を引き起こすことが公知である。従って、例えば、心筋梗塞は、心臓の最大心拍出量および１回拍出量を低下させる。間隙において生じるＤＮＡ合成の刺激および罹患していない心臓の領域におけるコラーゲンの形成の増大もまた、心筋梗塞と関連する。
【０１３７】
例えば、増大した全末梢抵抗に起因する、長期化した高血圧症の心臓に対して置かれた増大したストレスまたは緊張の結果として、心臓肥大は、「高血圧症」と関連していた。慢性的な血圧過負荷の結果として心臓肥大になった心室の特徴は、拡張機能が損なわれていることである。Ｆｏｕａｄら，Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，４：１５００−１５０６（１９８４）；Ｓｍｉｔｈら，Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，５：８６９−８７４（１９８５）。長期化した左心室弛緩は、正常なまたは正常より高い（ｓｕｐｒａｎｏｒｍａｌ）収縮機能にも拘わらず、初期の本態性高血圧症において検出された。Ｈａｒｔｆｏｒｄら，Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，６：３２９−３３８（１９８４）。しかし、血圧レベルと心臓肥大との間の並行性は近くない。降圧治療に応答した左心室機能の改善は、ヒトにおいて報告されたが、利尿剤（ヒドロクロロチアジド）、β−ブロッカー（プロプラノロール）、またはカルシウムチャネルブロッカー（ジルチアゼム）で種々に処置された患者は、拡張機能における改善なしで、左心室肥大の改善を示した。Ｉｎｏｕｙｅら，Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，５３：１５８３−７（１９８４）。
【０１３８】
心臓肥大と関連する別の複雑な心臓疾患は、「肥大型心筋症」である。この状態は、非常に多様な形態、機能、および臨床的特徴によって特徴づけられ（Ｍａｒｏｎら，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３１６：７８０−７８９（１９８７）；Ｓｐｉｒｉｔｏら，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３２０：７４９−７５５（１９８９）；Ｌｏｕｉｅ  ａｎｄ  Ｅｄｗａｒｄｓ，Ｐｒｏｇ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｄｉｓ．，３６：２７５−３０８（１９９４）；Ｗｉｇｌｅら，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，９２：１６８０−１６９２（１９９５））、その不均質性は、全ての年代の患者を苦しめるという事実によって悪化される。Ｓｐｉｒｉｔｏら，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．  Ｍｅｄ．，３３６：７７５−７８５（１９９７）。肥大型心筋症の原因因子はまた、多様であり、ほとんど理解されていない。一般に、サルコメアタンパク質をコードする遺伝子における変異が、肥大型心筋症と関連する。最近のデータでは、β−ミオシン重鎖変異が、家族性肥大型心筋症の症例の約３０〜４０％の原因であり得ることが示唆される。Ｗａｔｋｉｎｓら，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３２６：１１０８−１１１４（１９９２）；Ｓｃｈｗａｒｔｚら，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，９１：５３２−５４０（１９９５）；Ｍａｒｉａｎ  ａｎｄ  Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，９２：１３３６−１３４７（１９９５）；Ｔｈｉｅｒｆｅｌｄｅｒら，Ｃｅｌｌ，７７：７０１−７１２（１９９４）；Ｗａｔｋｉｎｓら，Ｎａｔ．Ｇｅｎ．，１１：４３４−４３７（１９９５）。β−ミオシン重鎖の他に、遺伝子変異の他の位置としては、心臓トロポニンＴ、αと歩ミオシン、心臓ミオシン結合タンパク質Ｃ、必須ミオシン軽鎖、および調節性ミオシン軽鎖が挙げられる。Ｍａｌｉｋ  ａｎｄ  Ｗａｔｋｉｎｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，１２：２９５−３０２（１９９７）を参照のこと。
【０１３９】
「大動脈弁上部狭窄症」とは、上行大動脈の狭窄によって特徴づけられる遺伝性血管障害であるが、肺動脈を含む他の動脈もまた、冒され得る。未処置の大動脈狭窄は、増大した大動脈内圧をもたらし得、この増大した大動脈内圧は、心筋肥大を生じ、最終的には、心不全および死亡を生じる。この障害の病原は、完全には理解されていないが、肥大およびおそらく内側平滑筋の過形成が、この障害の顕著な特徴である。エラスチン遺伝子の分子改変体が、大動脈狭窄の発生および病因に関与していることが報告された。米国特許第５，６５０，２８２号（１９９７年７月２２日発行）。
【０１４０】
「弁閉鎖不全」とは、心臓弁の障害において生じる心臓疾患の結果として生じる。種々の疾患（リウマチ熱のような）は、弁口の収縮または弁口を離すように引っ張ることを引き起こし得るが、他の疾患が、心内膜炎、心内膜もしくは房室口の内膜の炎症、および心臓手術において生じ得る。欠損（例えば、弁狭窄症の狭窄または弁の不完全な閉鎖が、心臓腔中の血液の蓄積または弁を通り過ぎる血液の閉鎖不全を生じる。補正されていない場合、長期化した弁狭窄症または閉鎖不全は、心臓肥大および心筋に対する関連する損傷を生じ得、最終的に弁置換を必要とし得る。
【０１４１】
用語「免疫関連疾患」とは、哺乳動物の免疫系の構成要素が引き起こすか、媒介するか、または他の方法で哺乳動物における罹患率に寄与する疾患を意味する。免疫応答の刺激または介入がその疾患の進行に対する改善効果を有する疾患もまた包含される。この用語には、免疫媒介性炎症疾患、非免疫媒介性炎症疾患、感染性疾患、免疫不全疾患、神経性などが包含される。
【０１４２】
用語「Ｔ細胞媒介性疾患」とは、Ｔ細胞が、直接的にまたは間接的に媒介するか、または別の方法で哺乳動物の罹病性に寄与する疾患を意味する。このＴ細胞媒介性疾患は、細胞媒介性効果、リンホカイン媒介性効果など、およびさらにＢ細胞が、例えば、Ｔ細胞により分泌されるリンホカインによって刺激される場合には、Ｂ細胞と関連する効果とも関連し得る。
【０１４３】
免疫関連疾患および炎症疾患の例（そのうちのいくつかは、免疫媒介性またはＴ細胞媒介性である）としては、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、脊椎性関節症、全身性硬化症（強皮症）、突発性炎症性ミオパシー（皮膚筋炎、多発性筋炎）、シェーグレン症候群、全身性脈管炎、サルコイドーシス、自己免疫溶血性貧血（免疫汎血球減少症、発作性夜間ヘモグロビン尿症）、自己免疫血小板減少症（突発性血小板減少性紫斑、免疫媒介性血小板減少症）、甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ球性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）、糖尿病、免疫媒介性腎臓疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）、中枢神経系および末梢神経系の脱髄疾患（例えば、多発性硬化症、突発性脱髄ポリニューロパシーまたはギラン・バレー症候群、および慢性炎症性脱髄ポリニューロパシー）、胆管疾患（例えば、感染性肝炎（Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎および他の非肝親和性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、および硬化性胆管炎）、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）、グルテン感受性腸疾患、およびホイップル秒、自己免疫性皮膚病または免疫媒介性皮膚病（水疱性皮膚病、多形性紅疹および接触性皮膚炎、乾癬、アレルギー疾患（例えば、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症、および蕁麻疹熱、肺の免疫学的疾患（例えば、好酸球性肺炎、突発性肺線維症および過敏性肺炎）、または移植関連疾患（移植片拒絶および対宿主性移植片病が挙げられる）が挙げられる。乾癬性疾患としては、ウイルス性疾患（例えば、ＡＩＤＳ（ＨＩＶ乾癬）、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、およびＥ型肝炎、ヘルペスなど）、細菌感染、真菌感染、原虫感染および寄生生物感染が挙げられる。
【０１４４】
本明細書で「自己免疫疾患」とは、個体の自己の組織から生じるもしくはこれらに対する疾患もしくは障害、またはこれらから生じる状態の同時分離もしくは発現である。自己免疫疾患または障害の例としては、関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節炎、乾癬性関節炎、および強直性脊椎炎）、乾癬、皮膚炎（アトピー性皮膚炎が挙げられる）；慢性突発性蕁麻疹熱（慢性自己免疫性蕁麻疹熱が挙げられる）、多発性筋炎／皮膚筋炎、中毒性表皮壊死融解、全身性強皮症および硬化症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）と関連する応答（クローン病、潰瘍性大腸炎）、および壊疽性膿皮症、結節性紅斑、原発性硬化性胆管炎、および／もしくは上胸膜炎の共分離を伴うＩＢＤ）、呼吸窮迫症候群（成人呼吸逼迫症候群（ＡＲＤＳ）、髄膜炎、ＩｇＥ媒介性疾患（例えば、アナフィラキシーおよびアレルギー性鼻炎）、脳炎（例えば、ラスムッセン脳炎、ぶどう膜炎、大腸炎（例えば、顕微鏡的大腸炎およびコラーゲン形成大腸炎（ｃｏｌｌａｇｅｎｏｕｓ  ｃｏｌｉｔｉｓ）））、糸球体腎炎（ＧＮ）（例えば、膜性糸球体腎炎、突発性膜性糸球体腎炎、Ｉ型およびＩＩ型を含む膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）、ならびに急速進行性糸球体腎炎）、アレルギー性状態、湿疹、喘息、Ｔ細胞の浸潤に関連する状態および慢性炎症性応答、アテローム硬化症、自己免疫性心筋炎、白血球接着不全症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）（例えば、皮膚ＳＬＥ、狼瘡（腎炎、脳炎、小児の、非腎性の、ジスコイド、脱毛症が挙げられる）、若年発症性糖尿病、多発性硬化症（ＭＳ）（例えば、脊椎−光学（ｓｐｉｎｏ−ｏｐｔｉｃａｌ）多発性硬化症、アレルギー性脳脊髄炎、サイトカインおよびＴリンパ球によって媒介される急性過敏症および遅延型過敏症と関連する免疫応答、結核、サルコイドーシス、肉芽腫症（ウェーゲナー肉芽腫症、無顆粒球症、脈管炎（大血管脈管炎（リウマチ性多発筋痛症および巨細胞（高安）動脈炎が挙げられる）、中血管脈管炎（川崎病および結節性多発動脈炎が挙げられる）、ＣＮＳ脈管炎、およびＡＮＣＡ関連脈管炎（例えば、チャーグ・ストラウス脈管炎またはチャーグ・ストラウス症候群（ＣＳＳ）が挙げられる）、再生不良性貧血、クームス陽性貧血、ダイアモンド・ブラックファン貧血、免疫溶血性貧血（自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）が挙げられる）、悪性貧血、赤芽球疲（ＰＲＣＡ）、第ＶＩＩＩ因子欠乏症、血友病Ａ、自己免疫性好中球減少症、汎血球減少症、白血球減少症、白血球漏出を伴う疾患、ＣＮＳ炎症性障害、多臓器傷害症候群、重症筋無力症、抗原−抗体複合体媒介性疾患、抗糸球体基底膜疾患、抗リン脂質抗体症候群、アレルギー性鼻炎、ベーチェット病、キャッスルマン症候群、グッドパスチャー症候群、ランバート・イートン筋無力症性症候群、レイノー症候群、シェーグレン症候群、スチーブンス・ジョンソン症候群、充実性器官移植拒絶（高パネル反応性抗体力価、組織におけるＩｇＡ沈着、および腎移植、肝臓移植、腸移植、心臓移植から生じる拒絶など）に対する予備処置が挙げられる）、対宿主性移植片病（ＧＶＨＤ）、類天疱瘡水疱、天疱瘡（尋常性天疱瘡、落葉性天疱瘡、および天疱瘡粘液−膜類天疱瘡が挙げられる）、自己免疫���多腺性内分泌不全症、ライター病、スティッフマン症候群、免疫複合体腎炎、ＩｇＭポリニューロパシーまたはＩｇＭ媒介性ニューロパシー、突発性血小板減少性紫斑（ＩＴＰ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、血小板減少症（例えば、心筋梗塞患者によって発症されるような）、（自己免疫性血小板減少症、精巣および卵巣の自己免疫性疾患（自己免疫性精巣炎および自己免疫性卵巣炎が挙げられる）が挙げられる）、原発性甲状腺機能低下症；自己免疫性内分泌疾患（自己免疫性甲状腺炎、慢性甲状腺炎（橋本甲状腺炎）、亜急性甲状腺炎、突発性甲状腺機能低下症、アジソン病、グレーブス病、多腺性自己免疫性症候群（または多腺性内分泌病症候群）、Ｉ型糖尿病（インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）ともいわれる）（小児性ＩＤＤＭ、およびシーハン症候群が挙げられる）が挙げられる）；自己免疫性肝炎、リンパ性間質性肺炎（ＨＩＶ）、細気管支炎閉塞（非移植）  対  ＮＳＩＰ、ギラン・バレー症候群、ベルジェ病（ＩｇＡ腎症）、原発性胆汁性肝硬変、セリアックスプルー（ｃｅｌｉａｃ  ｓｐｒｕｅ）（グルテン腸疾患）、疱疹状皮膚炎と同時分離する無反応性スプルー、寒性グロブリン血症、筋萎縮性側索硬化症（ａｍｙｌｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｌａｔｅｒａｌ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）（ＡＬＳ；ルー・ゲーリック病）、冠状動脈疾患、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫性聴覚喪失、眼球クローヌスミオクローヌス症候群（ＯＭＳ）、多発性軟骨炎（例えば、不応性多発性軟骨炎、肺胞たんぱく症、アミロイドーシス、巨細胞肝炎、強膜炎、断定できない／未知の重要性のモノクローナルガンマグロブリン異常（ＭＧＵＳ）、末梢ニューロパシー、傍腫瘍性症候群、チャネル病（例えば、癲癇、片頭痛、不整脈、筋障害、難聴、失明、周期性麻痺、およびＣＮＳのチャネル病）；自閉症、炎症性ミオパシー、および巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４５】
語句「不安関連障害」とは、不安、気分、および物質乱用の障害（鬱病、汎発性不安障害、注意欠陥障害、睡眠障害、機能亢進障害、強迫障害、精神分裂病、認知障害、痛覚過敏症および感覚性障害が挙げられるが、これらに限定されない）をいう。このような障害としては、軽度から中程度の不安、全身の医学的状態に起因する不安障害、他の方法で特定されない不安障害、汎発性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を伴うパニック障害、広場恐怖症なしのパニック障害、外傷後ストレス障害、対人恐怖症、社会不安、自閉症、特定の恐怖症、物質誘導性不安障害、急性アルコール離脱、脅迫障害、広場恐怖症、単極性障害、双極性障害Ｉまたは双極性障害ＩＩ、他の方法で特定されない双極性障害、循環病性障害、抑鬱障害、大鬱病、気分障害、物質誘導性気分障害（ｓｕｂｓｔａｎｃｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｍｏｏｄ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、認知機能の増強、アルツハイマー病と関連するがこれに限定されない認知機能の喪失、脳卒中、または脳に対する外傷性傷害、癲癇を含むがこれらに限定されない疾患または傷害から生じる発作、学習障害（ｌｅａｒｎｉｎｇ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）／学習障害（ｌｅａｒｎｉｎｇ  ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ）、脳性麻痺が挙げられる。さらに、不安障害は、以下の型が挙げられるが、これらに限定されない人格障害に適用され得る：偏執病様行動、反社会的行動、回避行動、境界型人格障害、依存性人格障害、演技性人格障害（ｈｉｓｔｒｏｎｉｃ）、自己愛人格障害、強迫性人格障害、分裂病質人格障害、および精神分裂症型人格障害。
【０１４６】
用語「脂質代謝障害」とは、コレステロールおよびトリグリセリドの異常な臨床的化学物質レベルをいい、ここでこれらの脂質の上昇したレベルが、アテローム硬化症に関する徴候である。さらに、異常な血清脂質レベルは、種々の心臓血管疾患（高血圧症、発作、冠状動脈疾患、糖尿病および／または肥満が挙げられる）の徴候であり得る。
【０１４７】
語句「眼の異常」とは、アテローム硬化症または種々の眼科的異常性に関連し得るので、眼のこのような潜在的な障害をいう。このような障害としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：網膜形成異常、種々の網膜症、再狭窄、網膜動脈閉塞または閉鎖；網膜血管系の二次的な萎縮を引き起こす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑萎縮、スタルガルド病、先天性定常性夜盲症、脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、先天性レーベル黒内障、網膜分離障害、ワグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ−マインザー症候群、Ｓｅｎｉｏｒ−Ｌｏｋｅｎ症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、Ａｌｓｔｒｏｍ症候群、コケイン症候群、先天性脊椎骨端形成異常、Ｆｌｙｎｎ−Ａｉｒｄ症候群、フリードライヒ遺伝性運動失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー症、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール−マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、Ｗｏｌｆｒａｍ症候群、Ｂａｓｓｅｎ−Ｋｏｒｎｚｗｅｉｇ症候群、β−リポタンパク欠損血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖沈着証、ホモシスチン尿、またはマンノシドーシス。白内障もまた、目の異常と考えられ、以下のような全身性疾患と関連する：ヒトダウン症候群、ハレルマン・ストレフ症候群、Ｌｏｗｅ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、１３〜１５トリソミー状態、Ａｌｐｏｒｔ症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、甲状腺機能低下症、またはコンラジ病。他の目の発達性異常としては、無虹彩、前方セグメント欠損症候群が挙げられる。白内障はまた、眼内感染または炎症（ぶどう膜炎）の結果として発生し得る。
【０１４８】
抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体または抗ＰＲＯ１４８０抗体、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の結合オリゴペプチドまたはＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の結合有機分子の「増殖阻害量」は、インビトロまたはインビボのいずれかで、細胞（特に腫瘍（例えば、癌細胞））の増殖を阻害し得る量である。新生物増殖を阻害する目的で、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体または抗ＰＲＯ１４８０抗体、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の結合オリゴペプチド、またはＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の結合有機分子の「増殖阻害量」とは、経験的かつ慣用的様式において決定され得る。
【０１４９】
抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の結合オリゴペプチドまたはＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の結合有機分子の「細胞傷害量」とは、インビトロまたはインビボのいずれかで、細胞（特に腫瘍（例えば、癌細胞））の破壊を引き起こし得る量である。新生物細胞増殖の阻害する目的で、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の結合オリゴペプチドまたはＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の結合有機分子の「細胞傷害量」とは、経験的かつ慣用的様式において決定され得る。
【０１５０】
用語「抗体」とは、その最も広い意味で使用され、そして具体的に、例えば、単一の抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体のモノクローナル抗体（アゴニスト、アンタゴニスト、および中和抗体が挙げられる）、ポリエピトープ特異性を有する抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体の組成物、ポリクローナル抗体、単鎖の抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体、ならびに望ましい生物学的活性もしくは免疫学的活性を示す限りにおいて、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体のフラグメント（以下を参照のこと）を包含する。用語「免疫グロブリン」（Ｉｇ）とは、本明細書で抗体と交換可能に使用される。
【０１５１】
「単離された抗体」とは、その天然の環境の成分から同定および分離ならびに／または回収されたものである。その天然の環境の夾雑する構成要素は、その抗体についての診断用途または治療用途を妨害する物質であり、そしてその構成要素としては、酵素、ホルモン、および他のタンパク質様溶質もしくは非タンパク質様溶質が挙げられ得る。本発明は、（１）Ｌｏｗｒｙ法によって決定される場合、抗体の９５重量％より高く、最も好ましくは、９９重量％より高く、（２）Ｎ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るために十分な程度まで、スピニングカップシークエネーター（ｓｐｉｎｎｉｎｇ  ｃｕｐ  ｓｅｑｕｅｎａｔｏｒ）の使用によって、または（３）非還元条件下または還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによって、クーマシーブルー、もしくは好ましくは、銀染色を用いて一様になるまで、精製された抗体を提供する。単離された抗体は、組換え細胞内のインサイチュのポリペプチドを含む。なぜなら、この抗体の天然環境の少なくとも１種の構成要素は、存在しないからである。しかし、通常、単離された抗体は、少なくとも１回の精製工程によって調製される。
【０１５２】
基本的な４本の鎖の抗体ユニットが、２本の同一の軽（Ｌ）鎖および２本の同一の重（Ｈ）鎖から構成されるヘテロ四量体糖タンパク質である（ＩｇＭ抗体は、この基本的なヘテロ四量体ユニットとともにさらなるポリペプチド（Ｊ鎖とよばれる）の５つからなり、従って、１０子の抗原結合部位を含むが、分泌型ＩｇＡ抗体は、この基本的な４本の鎖のユニットとともにＪ鎖の２〜５つを含む多価の集合物を形成するように重合し得る。ＩｇＧの場合、この４本の鎖のユニットは、一般に、約１５０，０００ダルトンである。各Ｌ鎖は、１つの共有ジスルフィド結合により重鎖に連結されるが、２つのＨ鎖は、Ｈ鎖の亜いっそタイプに依存して、１つ以上のジスルフィド結合によって互いに連結される。各Ｈ鎖およびＬ鎖はまた、規則的に間隔の空いた鎖内ジスルフィド結合を有する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端において、可変ドメイン（ＶＨ）と、α鎖およびγ鎖の各々については、それに続く３つの定常ドメイン（ＣＨ）を、μアイソタイプおよびεアイソタイプについては４つのＣＨドメインを有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端において可変ドメイン（ＶＬ）を、そしてそのもう一方の末端において定常ドメイン（ＣＬ）を有する。ＶＬは、重鎖の定常ドメインと整列され、ＣＬは、重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）と共に整列される。特定のアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間の境界を形成すると考えられる。ＶＨとＶＬとを一緒に対形成すると、１つの抗原結合部位が形成される。抗体の種々のクラスの構造および特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第８版，Ｄａｎｉｅｌ  Ｐ．Ｓｔｉｔｅｓ，Ａｂｂａ  Ｉ．ＴｅｒｒおよびＴｒｉｓｔｒａｍ  Ｇ．Ｐａｒｓｌｏｗ（編），Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ，１９９４，第７１頁および第６章を参照のこと。
【０１５３】
任意の脊椎動物種に由来するＬ鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、２つの明確に区別される型（カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる）のうちの１つに割り当てられ得る。それらの重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に依存して、免疫グロブリンは、異なる「クラス」または「アイソタイプ」に割り当てられ得る。α、δ、ε、γ、およびμといわれる重鎖を有するそれぞれ５つのクラスの免疫グロブリン（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ）が存在する。γクラスおよびαクラスは、ＣＨ配列および機能における比較的微小な差異に基づいて、さらにサブクラスに分類され得る。例えば、ヒトは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡおよびＩｇＡ２のサブクラスを表す。
【０１５４】
用語「可変」とは、可変ドメインの特定の部分が、抗体間で広範にわたって配列が異なるという事実をいう。ＶＨドメインは、抗原結合を媒介し、その特定の抗原に対するその特定の抗体の特異性を規定する。しかし、可変性は、可変ドメインの１１０アミノ酸のスパンにわたり均等には分布しない。代わりに、Ｖ領域は、各９〜１２アミノ酸長である「超可変領域」と呼ばれる極めて可変性の短い方の領域によって分離される１５〜３０アミノ酸長のフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる比較的不変のストレッチからなる。ネイティブの重鎖および軽鎖の可変ドメインは、各々、４つのＦＲを含み、それらのＦＲは、大部分がβシート構造をとり、３つの超可変領域に連結され、これらの超可変領域は、βシート構造に連結するループを形成し、そして場合によっては、このβシート構造の一部を形成する。各鎖中の超可変領域は、ＦＲによって互いに近位に保持され、そして、他の鎖からの超可変領域と共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１）を参照のこと）。定常ドメインは、抗原への抗体の結合に直接関与しないが、種々のエフェクター機能（例えば、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）における抗体の関与）を示す。
【０１５５】
本明細書中で使用される場合、用語「超可変領域」は、抗原結合を担う抗体のアミノ酸残基をいう。超可変領域は、一般に、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基（例えば、ＶＬ中の残基２４−３４（Ｌ１）、残基５０−５６（Ｌ２）および残基８９−９７（Ｌ３）ならびにＶＨ中の残基３１−３５（Ｈｌ）、残基５０−６５（Ｈ２）および残基９５−１０２（Ｈ３）；Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））ならびに／または「超可変ループ」からのアミノ酸残基（例えば、ＶＬ中の残基２６−３２（Ｌｌ）、残基５０−５２（Ｌ２）および残基９１−９６（Ｌ３）ならびにＶＨ中の残基２６−３２（Ｈ１）、残基５３−５５（Ｈ２）および残基９６−１０１（Ｈ３）；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−９１７（１９８７））を含む。
【０１５６】
本明細書中で使用される場合、用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体の集団（すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る、天然に存在する可能性のある変異を除いて同一である）から得られる抗体をいう。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原性部位に対して指向される。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の抗体が混入せずに合成され得る点で有利である。修飾語「モノクローナル」は、任意の特定の方法によるこの抗体の産生を必要とするとは解釈されない。例えば、本発明において有用なモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）により最初に記載されたハイブリドーマ法により作製され得るか、または細菌、真核生物の動物細胞または植物細胞において（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）、組換えＤＮＡ法により作製され得る。「モノクローナル抗体」はまた、例えばＣｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）に記載される技術を使用して、ファージ抗体ライブラリーから単離され得る。
【０１５７】
本明細書中のモノクローナル抗体は、特に「キメラ」抗体ならびにそのような抗体のフラグメント（これらが、所望の生物学的活性を示す限り）を含み、ここでは、重鎖および／または軽鎖の一部が、特定の種に由来するかまたは特定の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるかまたは相同であり、一方、その鎖の残りが、別の種に由来するかまたは別の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるかまたは相同である（米国特許第４，８１６，５６７号およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４）を参照のこと）。本明細書中の目的のキメラ抗体は、非ヒト霊長類（例えば、旧世界ザル、サル（Ａｐｅ）など）由来の可変ドメイン抗原結合配列およびヒト定常領域配列を含む「霊長類化（ｐｒｉｍａｔｉｚｅｄ）」抗体を含む。
【０１５８】
「インタクトな」抗体は、抗原結合部位ならびにＣＬおよび重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）を含む抗体である。定常ドメインは、ネイティブ配列定常ドメイン（例えば、ヒトネイティブ配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列改変体であり得る。好ましくは、インタクトな抗体は、１つ以上のエフェクター機能を有する。
【０１５９】
「抗体フラグメント」は、インタクトな抗体の一部、好ましくは抗原結合領域またはその可変領域、を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、およびＦｖフラグメント；ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）；直鎖状抗体（米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２；Ｚａｐａｔａら，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１０６２［１９９５］を参照のこと）；単鎖抗体分子；ならびに抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が挙げられる。
【０１６０】
抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一の抗原結合フラグメントおよび残りの「Ｆｃ」フラグメント（この名前は、その容易に結晶化する能力を反映する）を生成する。このＦａｂフラグメントは、Ｌ鎖全体とともに、Ｈ鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）、および１つの重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）からなる。各Ｆａｂフラグメントは、抗原結合に関して一価である（すなわち、単一の抗原結合部位を有する）。ペプシン処理は、単一のＦ（ａｂ’）２のフラグメントを生じ、このフラグメントは、二価の抗原結合活性を有する２つのジスルフィド結合されたＦａｂフラグメントに主に対応し、そしてこれは、依然として抗原を架橋し得る。Ｆａｂ’フラグメントは、抗体ヒンジ領域からの１個異常のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシ末端においてさらに数残基有することで、Ｆａｂフラグメントとは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基がＦａｂ’に対して遊離チオール基を有するので、本明細書中でそのように呼ばれる。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは、もともと、Ｆａｂ’フラグメントの対として精製された。このＦａｂ’フラグメントは、そのフラグメント間にヒンジシステインを含む。抗体フラグメントの他の化学的連結もまた、公知である。
【０１６１】
Ｆｃフラグメントは、ジスルフィドによって一緒に保持された両方のＨ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域における配列によって決定される。このＦｃ領域はまた、細胞の特定の型において見いだされたＦｃレセプター（ＦｃＲ）によって認識される部分である。
【０１６２】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位および抗原結合部位を含む、最小の抗体フラグメントである。このフラグメントは、密接に非共有結合した、１つの重鎖可変領域ドメインおよび１つの軽鎖可変領域ドメインの二量体からなる。これら２つのドメインの折りたたみから、アミノ酸残基を抗原結合のために与え、抗体に抗原結合特異性を付与する６つの超可変ループ（３つのループは、Ｈ鎖およびＬ鎖に各々由来する）が出現する。しかし、１つの可変ドメイン（または抗原に対して特異的な３つの超可変領域のみを含むＦｖの半分）でさえも、結合部位全体よりも低い親和性ではあるが、抗原を認識および結合する能力を有する。
【０１６３】
「単鎖Ｆｖ」は、「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」と略称され、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含み、ここでこれらのドメインは、一本のポリペプチド鎖中に接続される。好ましくは、このＦｖポリペプチドは、このｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にする、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間のポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓｃＦｖの総説については、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，第１１３巻，ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２６９−３１５頁（１９９４）中のＰｌｕｅｃｋｔｈｕｎ；Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ  １９９５（後出）を参照のこと。
【０１６４】
用語「ダイアボディ」は、Ｖドメインの鎖内対形成ではなく鎖間対形成が達成され、二価のフラグメント（すなわち、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体フラグメント）を生じるように、ＶＨドメインとＶＬドメインの間に短いリンカー（約５〜１０残基）とともにｓＦｖフラグメント（前段落を参照のこと）を構築することによって、調製され得る。二価特異性（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）ダイアボディーは、２つの抗体のＶＨドメインとＶＬドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在する２つの「交差型（ｃｒｏｓｓｏｖｅｒ）」ｓＦｖフラグメントである。ダイアボディーは、例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）に、より完全に記載される。
【０１６５】
非ヒト（例えば、げっ歯類）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含むキメラ抗体である。たいていは、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域由来の残基が、所望の抗体特異性、親和性および能力を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギまたは非ヒトげっ歯類）（ドナー抗体）の超可変領域由来の残基により置換されているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。ある場合では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）の残基は、対応する非ヒト残基により置換される。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体中にもドナー抗体中にも見出されない残基を含み得る。これらの改変は、抗体の性能をさらに改良するためになされる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、そして代表的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、非ヒト免疫グロブリンの超可変ループに対応する全て、または実質的に全ての超可変ループおよびＦＲの全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体はまた、必要に応じて免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、代表的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部を含む。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２９（１９８８）；およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３−５９６（１９９２）を参照のこと。
【０１６６】
「種依存性抗体」（例えば、哺乳動物抗ヒトＩｇＥ抗体）は、第２の哺乳動物種に由来するその抗原のホモログについての抗原特異性より、第１の哺乳動物種に由来する、抗原に対する強い結合特異性を有する抗体である。通常、この種依存性抗体は、ヒト抗原に「特異的に結合」し、すなわち、約１×１０−７Ｍ以下、好ましくは、約１×１０−８Ｍ以下、最も好ましくは、約１×１０−９Ｍ以下の結合親和性（Ｋｄ）値）を有するが、ヒト抗原に対するその結合親和性よりも少なくとも約５０倍、または少なくとも約５００倍、または少なくとも約１０００倍弱い、第２の非ヒト哺乳動物種に由来する抗原のホモログに対する結合親和性を有する。この種依存性抗体は、上記に規定されるような抗体の種々の型のいずれかであり得るが、好ましくは、ヒト化抗体またはヒト抗体である。
【０１６７】
「ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の結合オリゴペプチド」とは、本明細書に記載されるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドに結合する（好ましくは特異的に結合する）オリゴペプチドである。ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の結合オリゴペプチドは、公知のオリゴペプチド合成方法論を用いて化学的に合成されてもよいし、組換え技術を用いて調製および精製されてもよい。ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の結合オリゴペプチドは、通常、少なくとも約５アミノ酸長、あるいは、ａｒｅ  ｏｒ  ａｒｅ  少なくとも約６アミノ酸長、７アミノ酸長、８アミノ酸長、９アミノ酸長、１０アミノ酸長、１１アミノ酸長、１２アミノ酸長、１３アミノ酸長、１４アミノ酸長、１５アミノ酸長、１６アミノ酸長、１７アミノ酸長、１８アミノ酸長、１９アミノ酸長、２０アミノ酸長、２１アミノ酸長、２２アミノ酸長、２３アミノ酸長、２４アミノ酸長、２５アミノ酸長、２６アミノ酸長、２７アミノ酸長、２８アミノ酸長、２９アミノ酸長、３０アミノ酸長、３１アミノ酸長、３２アミノ酸長、３３アミノ酸長、３４アミノ酸長、３５アミノ酸長、３６アミノ酸長、３７アミノ酸長、３８アミノ酸長、３９アミノ酸長、４０アミノ酸長、４１アミノ酸長、４２アミノ酸長、４３アミノ酸長、４４アミノ酸長、４５アミノ酸長、４６アミノ酸長、４７アミノ酸長、４８アミノ酸長、４９アミノ酸長、５０アミノ酸長、５１アミノ酸長、５２アミノ酸長、５３アミノ酸長、５４アミノ酸長、５５アミノ酸長、５６アミノ酸長、５７アミノ酸長、５８アミノ酸長、５９アミノ酸長、６０アミノ酸長、６１アミノ酸長、６２アミノ酸長、６３アミノ酸長、６４アミノ酸長、６５アミノ酸長、６６アミノ酸長、６７アミノ酸長、６８アミノ酸長、６９アミノ酸長、７０アミノ酸長、７１アミノ酸長、７２アミノ酸長、７３アミノ酸長、７４アミノ酸長、７５アミノ酸長、７６アミノ酸長、７７アミノ酸長、７８アミノ酸長、７９アミノ酸長、８０アミノ酸長、８１アミノ酸長、８２アミノ酸長、８３アミノ酸長、８４アミノ酸長、８５アミノ酸長、８６アミノ酸長、８７アミノ酸長、８８アミノ酸長、８９アミノ酸長、９０アミノ酸長、９１アミノ酸長、９２アミノ酸長、９３アミノ酸長、９４アミノ酸長、９５アミノ酸長、９６アミノ酸長、９７アミノ酸長、９８アミノ酸長、９９アミノ酸長、もしくは１００アミノ酸長またはそれ以上であり、ここでこのようなオリゴペプチドは、本明細書中で記載されるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドに結合し得、好ましくは特異的に結合し得る。ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の結合オリゴペプチドは、周知の技術を用いて過度の実験なくして同定され得る。この点に関して、ポリペプチド標的に特異的に結合し得るオリゴペプチドについてオリゴペプチドライブラリーをスクリーニングするための技術は、当該分野で周知であることに注意のこと（例えば、米国特許第５，５５６，７６２号、同第５，７５０，３７３号、同第４，７０８，８７１号、同第４，８３３，０９２号、同第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５７１，６８９号、同第５，６６３，１４３号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ８４／０３５０６およびＷＯ８４／０３５６４；Ｇｅｙｓｅｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８１：３９９８−４００２（１９８４）；Ｇｅｙｓｅｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８２：１７８−１８２（１９８５）；Ｇｅｙｓｅｎら，Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｓ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ，１３０−１４９（１９８６）；Ｇｅｙｓｅｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．，１０２：２５９−２７４（１９８７）；Ｓｃｈｏｏｆｓら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４０：６１１−６１６（１９８８），Ｃｗｉｒｌａ，Ｓ．Ｅ．ら．（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：６３７８；Ｌｏｗｍａｎ，Ｈ．Ｂ．ら（１９９１）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３０：１０８３２；Ｃｌａｃｋｓｏｎ，Ｔ．ら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４；Ｍａｒｋｓ，Ｊ．Ｄ．ら（１９９１），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１；Ｋａｎｇ，Ａ．Ｓ．ら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：８３６３，ならびにＳｍｉｔｈ，Ｇ．Ｐ．（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏ���ｅｃｈｎｏｌ．，２：６６８を参照のこと）。
【０１６８】
「ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の結合有機分子」とは、本明細書中に記載されるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドに結合する（好ましくは特異的に結合する）と規定されるようなオリゴペプチドまたは抗体以外の有機分子である。ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の結合有機分子は、公知の方法論を用いて同定されかつ化学的に合成され得る（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ００／００８２３およびＷＯ００／３９５８５を参照のこと）。ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の結合有機分子は、通常、大きさが約２０００ダルトン未満であるか、あるいは、大きさが約１５００ダルトン未満、７５０ダルトン未満、５００ダルトン未満、２５０ダルトン未満または２００ダルトン未満であり、ここで本明細書中に記載されるように、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドに結合し得る（好ましくは特異的に結合し得る）このような有機分子は、周知の技術を用いて過度の実験なくして同定され得る。この点に関して、ポリペプチド標的に結合し得る分子について有機分子ライブラリーをスクリーニングするための技術は、当該分野で周知であることに注意のこと（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ００／００８２３およびＷＯ００／３９５８５を参照のこと）。
【０１６９】
目的の抗原（例えば、腫瘍関連ポリペプチド抗原標的）を「結合する」抗体、オリゴペプチドもしくは他の有機分子は、その抗体、オリゴペプチドもしくは他の有機分子が、その抗原を発現する細胞もしくは組織を標的化する際に診断剤および／もしくは治療剤として有用であるような十分な親和性で、その抗原を結合し得、他のタンパク質と有意に交叉反応しないものである。この抗体、オリゴペプチドもしくは他の有機分子が「非標的」タンパク質に結合する程度は、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）分析または放射免疫沈降（ＲＩＡ）によって測定した場合に、その特定の標的タンパク質への、その抗体、オリゴペプチドもしくは他の有機分子の結合の１０％未満である。時には、この抗ＥｒｂＢ２抗体は、ラットｎｅｕタンパク質（例えば、Ｓｃｈｅｃｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，３１２：５１３（１９８４）およびＤｒｅｂｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：５４５−５４８（１９８４）に記載のような）と有意に交差反応しない。標的分子への抗体、オリゴペプチドもしくは他の有機分子の結合に関して、特定のポリペプチドもしくは特定のポリペプチド標的上のエピトープに関して、用語「特異的結合」または「〜に特異的に結合する」または「〜に対して特異的である」とは、非特異的相互作用とははっきりと異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、コントロール分子の結合と比較して、分子の結合を決定することによって測定され得る。コントロール分子は、一般に、結合活性を有さない類似の構造の分子である。例えば、特異的結合は、標的と類似のコントロール分子（例えば、過剰量の非標識標的）との競合によって決定され得る。この場合、特異的結合は、そのプローブへの標識標的の結合が、過剰の非標識標的によって競合的に阻害される場合に示される。本明細書中で使用される場合、特定のポリペプチドもしくは特定のポリペプチド標的上のエピトープに関して、用語「特異的結合」または「〜に特異的に結合する」または「〜に対して特異的である」とは、例えば、少なくとも約１０−４Ｍ、あるいは少なくとも約１０−５Ｍ、あるいは少なくとも約１０−６Ｍ、あるいは少なくとも約１０−７Ｍ、あるいは少なくとも約１０−８Ｍ、あるいは少なくとも約１０−９Ｍ、あるいは少なくとも約１０−１０Ｍ、あるいは少なくとも約１０−１１Ｍ、あるいは少なくとも約１０−１２Ｍ、またはそれ以上の標的に対するＫｄを有する分子によって示され得る。用語「特異的結合」とは、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド上のエピトープに結合する分子が、いかなる他のポリペプチドにもポリペプチドエピトープにも実質的に結合しない結合をいう。
【０１７０】
ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０を発現する腫瘍細胞の成長を「阻害する」抗体、オリゴペプチドまたは他の有機分子、または「成長阻害性」抗体、オリゴペプチドまたは他の有機分子は、適切なＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドを発現または過剰発現する癌細胞の測定可能な成長阻害を生じるものである。このＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドは、癌細胞の表面で発現される膜貫通ポリペプチドであってもよいし、癌細胞によって生成されかつ分泌されるポリペプチドであってもよい。好ましい成長阻害性の抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体、オリゴペプチドまたは有機分子は、適切なコントロールと比較して、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の発現腫瘍細胞の成長を、２０％以上、好ましくは、約２０％〜約５０％、なおより好ましくは、約５０％以上（例えば、約５０％〜約１００％）阻害する。このコントロールは、代表的には、試験されるその抗体、オリゴペプチドもしくは他の亭有機分子で処理されない腫瘍細胞である。成長阻害は、約０．１〜３０μｇ／ｍｌの抗体濃度で、または細胞培養物中約０．５ｎＭ〜２００ｎＭで測定され得る。ここでこの成長阻害は、腫瘍細胞をこの抗体に曝して１〜１０日後に決定される。腫瘍細胞のインビボでの成長阻害は、種々の方法で決定され得る。この抗体は、抗ＰＲ���２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体の、約１μｇ／ｋｇ体重〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重での投与が、その抗体の１回目の投与から約５日〜約３ヶ月内で、好ましくは約５日〜３０日以内で、腫瘍の大きさまたは腫瘍細胞の増殖の低下が生じる場合に、インビボで増殖阻害性である。
【０１７１】
「アポトーシスを誘導する」抗体、オリゴペプチドまたは他の有機分子とは、アネキシンＶの結合、ＤＮＡのフラグメント化、細胞収縮、小胞体の拡張、細胞断片化、および／または膜小胞の形成（アポトーシス小体といわれる）によって決定されるプログラムされた細胞死を誘導するものである。その細胞は、通常、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドを過剰発現するものである。好ましくは、その細胞は、腫瘍細胞、例えば、前立腺細胞、乳房細胞、卵巣細胞、胃細胞、子宮内膜細胞、肺細胞、腎細胞、結腸細胞、膀胱臍棒である。種々の方法が、アポトーシスと関連する細胞事象を評価するために利用可能である。例えば、ホスファチジルセリン（ＰＳ）転移は、アネキシン結合によって測定され得る；ＤＮＡフラグメント化は、ＤＮＡ標識を介して評価され得る；核／クロマチン凝集とともにＤＮＡフラグメント化は、低二倍体細胞における任意の増加によって評価され得る。好ましくは、アポトーシスを誘導するその抗体、オリゴペプチドまたは他の有機分子は、アネキシン結合アッセイにおける未処理細胞に対して、約２〜５０倍において、好ましくは、約５〜５０倍において、最も好ましくは、約１０〜５０倍においてアネキシン結合の誘導を生じるものである。
【０１７２】
抗体の「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（ネイティブ配列Ｆｃ領域またはＦｃ領域のアミノ酸配列改変体）に起因し得かつ抗体アイソタイプとともに変動し得る抗体の生物学的活性をいう。抗体のエフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合；補体依存性細胞傷害性；Ｆｃレセプター結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面レセプター（例えば、Ｂ細胞レセプター）の下方制御；およびＢ細胞活性化などが挙げられる。
【０１７３】
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」および「ＡＤＣＣ」は、細胞傷害性の一形態であって、特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）上に存在するＦｃレセプター（ＦｃＲ）に結合した分泌型Ｉｇが、これらの細胞傷害性エフェクター細胞を抗原保有標的細胞に特異的に結合させることを可能にし、その後、標的細胞を細胞毒素によって死滅させることをいう。抗体は、細胞傷害性細胞を「武装させ（ａｒｍ）」、このような死滅に絶対的に必要とされる。ＡＤＣＣの媒介についての主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９：４５７−９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約される。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号および同第５，８２１，３３７号に記載されるようなインビトロＡＤＣＣアッセイが実施され得る。このようなアッセイのための有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。あるいは、またはさらに、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボ（例えば、Ｃｌｙｎｅｓら、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ），９５：６５２−６５６（１９９８）において開示されるような動物モデルにおいて）で評価され得る。
【０１７４】
用語「Ｆｃレセプター」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合するレセプターを記載するために使用される。好ましいＦｃＲは、ネイティブ配列ヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体を結合するＦｃＲ（γレセプター）であり、そしてこれらとしては、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩサブクラスのレセプター（これらのレセプターの対立遺伝子改変体および選択的スプライシングされた形態を含む）が挙げられる。ＦｃγＲＩＩレセプターとしては、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化レセプター」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害レセプター」）が挙げられ、これらは、そのレセプターの細胞質ドメイン中で主に異なる類似のアミノ酸配列を有する。活性化レセプター（ＦｃγＲＩＩＡ）は、その細胞質ドメイン中に免疫レセプターチロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。阻害レセプター（ＦｃγＲＩＩＢ）は、その細胞質ドメイン中に免疫レセプターチロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む。（Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５：２０３−２３４（１９９７）中の総説Ｍ．を参照のこと）。ＦｃＲは、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９：４５７−９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２５−３４（１９９４）；ならびにｄｅ  Ｈａａｓら、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．，１２６：３３０−４１（１９９５）に概説される。他のＦｃＲ（将来同定されるＦｃＲを含む）が、本明細書中の用語「ＦｃＲ」により包含される。この用語はまた、胎児への母性ＩｇＧの移行を担う新生児レセプター（ＦｃＲｎ）を含む（Ｇｕｙｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１７：５８７（１９７６）およびＫｉｍら、Ｊ．Ｉｍｍｕｒｉｏｌ．，２４：２４９（１９９４））。
【０１７５】
「ヒトエフェクター細胞」は、１つ以上のＦｃＲを発現しそしてエフェクター機能を果たす白血球である。好ましくは、この細胞は、少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、そしてＡＤＣＣエフェクター機能を果たす。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞傷害性Ｔ細胞および好中球が挙げられ；ＰＢＭＣおよびＮＫ細胞が好ましい。エフェクター細胞は、そのネイティブな供給源から（例えば、血液から）単離され得る。
【０１７６】
「補体依存性細胞傷害性」または「ＣＤＣ」は、補体の存在下での標的細胞の溶解をいう。古典的補体経路の活性化は、同族抗原と結合した（適切なサブクラスの）抗体への、補体系の第１の成分（Ｃｌｑ）の結合により開始される。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０２：１６３（１９９６）に記載されるようなＣＤＣアッセイが行われ得る。
【０１７７】
用語「癌」および「癌性」とは、調節されない細胞増殖によって代表的に特徴付けられる、哺乳動物の生理学的状態を言及または記載する。癌の例としては、癌腫、リンパ腫、芽腫、肉腫、および白血病が挙げられるが、これらに限定されない。このような癌のより特定の例としては、扁平細胞癌、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌を含む）、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌（胃腸癌を含む）、膵臓癌、神経膠芽細胞腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーム、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺腫、腎臓癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、頭頸部癌の種々の型、ならびにＢ細胞リンパ腫（低い進行度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中程度の進行度／濾胞性ＮＨＬ；中程度の進行度のびまん性ＮＨＬ；高度な進行度の免疫芽球性ＮＨＬ；高度な進行度のリンパ芽球性ＮＨＬ；高度の進行度の小型異型細胞ＮＨＬ；かさばり病変のＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症）；慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；毛髪細胞白血病；慢性骨髄芽球性白血病；ならびに移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）が挙げられる。好ましくは、癌は、ＩＧＦレセプターを発現する腫瘍、より好ましくは、乳癌、肺癌、結腸直腸癌、または前立腺癌、および最も好ましくは、乳癌または前立腺癌を含む。
【０１７８】
「化学療法剤」は、癌の処置に有用な化学化合物である。化学療法剤の例としては、以下が挙げられる：アルキル化剤（例えば、チオテパおよびＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）（シクロホスファミド）（ｃｙｃｌｏｓｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）；アルキルスルホネート（例えば、ブスルファン、イムプロスルファンおよびピポスルファン）；アジリジン（例えば、ベンゾデパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレデパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）およびウレデパ（ｕｒｅｄｏｐａ））；エチレンイミンおよびメチルメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）（アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈａｏｒａｍｉｄｅ）およびトリメチロールメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含む）；アセトゲニン（特に、ブラタシンおよびブラタシノン）；カンプトテシン（合成アナログであるトポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン（ｃａｌｌｙｓｔａｔｉｎ）；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシン合成アナログが挙げられる）；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（その合成アナログであるＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エルーセロビン（ｅｌｅｕｔｈｅｒｏｂｉｎ）；パンクラチスタチン；サルコディクチン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンジスタチン；ナイトロジェンマスタード（例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベンビシン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード）；ニトロソウレア（例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン）；エンジイン抗生物質のような抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特に、カリケアマイシンγＩＩおよびカリケアマイシンωＩＩ（例えば、Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４）を参照のこと）；ダイネミシン（ダイネミシンＡを含む）；ビホスホネート（例えば、クロドロネート）；エスペラマイシン；ならびにネオカルジノスタチン発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アウスラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カラミノマイシン（ｃａｒｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルチノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、アドリアマイシン（登録商標）ドキソルビシン（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン（例えば、マイトマイシンＣ）、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン）；代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ））；葉酸アナログ（例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート）；プリンアナログ（例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン）；ピリミジンアナログ（例えば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン）；アンドロゲン（例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン）；抗副腎剤（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌｓ）（例えば、アミノグルテチミド、ミトーテン、トリロスタン）；葉酸補助剤（例えば、フロリニン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ））；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラムブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン；エダトラキサート；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジクオン；エルフォルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン；マイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）（例えば、マイタンシンおよびアンサマイトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖類複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ−２毒素、ベラクリン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ、ロリジンＡおよびアングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド（例えば、例えば、（ＴＡＸＯＬ（登録商標）パクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．），ＡＢＲＡＸＡＮＥＴＭ  Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ−ｆｒｅｅ、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子処方物（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）、およびＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）ドセタキセル（Ｒｈｏ＾ｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔ���ｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ））；クロランブシル；ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金アナログ（例えば、シスプラチンおよびカルボプラチン）；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標）ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；キセロダ（ｘｅｌｏｄａ）；イバンドロネート（ｉｂａｎｄｒｏｎａｔｅ）；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド（例えば、レチノイン酸）；カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）；ならびにそれらのいずれかの薬学的に受容可能な塩、酸または誘導体。
【０１７９】
この定義にはまた、以下のような、腫瘍に対するホルモン作用を調節または阻害するよう作用する抗ホルモン剤が含まれる：抗エストロゲンおよび選択的エストロゲンレセプターモジュレーター（ＳＥＲＭ）（例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）タモキシフェン）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン（ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ）、ＬＹ１１７０１８、オナプリストンおよびＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）トレミフェン）；酵素アロマターゼを阻害し、副腎におけるエストロゲン生成を調節しするアロマターゼインヒビター（例えば、４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）メガステロールアセテート、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）エキセメスタン、フォルメスタン（ｆｏｒｍｅｓｔａｎｉｅ）、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）ボロゾール、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）レトロゾール、およびＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）アナストロゾール；ならびに抗アンドロゲン（例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド（ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ）、ロイプロリドおよびゴセレリン）；ならびにトロキサシタビン（ｔｒｏｘａｃｉｔａｂｉｎｅ）（ａ  １，３−ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）；アンチセンスオリゴヌクレオチド（特に、異常な細胞増殖に関するシグナル伝達経路における遺伝子（例えば、ＰＫＣ−α、ＲａｌｆおよびＨ−Ｒａｓ）の発現を阻害するもの；リボザイム（例えば、ＶＥＧＦ発現インヒビター（例えば、ＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（登録商標）リボザイム）およびＨＥＲ２発現インヒビター；ワクチン（例えば、遺伝子治療ワクチン（例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、およびＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン））；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）ｒＩＬ−２；ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）トポイソメラーゼ１インヒビター；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒｍＲＨ；ならびに上記のいずれかの薬学的に受容可能な塩、酸または誘導体。
【０１８０】
用語「細胞増殖障害」および「増殖障害」とは、ある程度の異常な細胞増殖と関連する障害をいう。本発明の一局面において、この細胞増殖障害は癌である。
【０１８１】
「腫瘍」とは、本明細書で使用される場合、悪性または良性に拘わらず、新生物細胞の成長および増殖全て、ならびに全ての前癌および癌性の細胞および組織をいう。
【０１８２】
「細胞死を誘導する」抗体、オリゴペプチドまたは他の有機分子とは、生存細胞を生育不能にさせる抗体である。この細胞は、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドを発現する細胞であり、好ましくは、同じ組織型の正常細胞と比較して、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドを過剰発現する細胞である。このＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドは、癌細胞の表面に発現される膜貫通ポリペプチドであってもよいし、癌細胞によって生成かつ分泌されるポリペプチドであってもよい。好ましくは、細胞は、癌細胞（例えば、乳癌細胞、卵巣癌細胞、胃癌細胞、子宮内膜癌細胞、唾液腺癌細胞、肺癌細胞、腎臓癌細胞、結腸癌細胞、甲状腺癌細胞、膵臓癌細胞または膀胱癌細胞）である。インビトロでの細胞死は、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）によって誘導される細胞死を区別するために、補体および免疫エフェクター細胞の非存在下で決定され得る。従って、細胞死についてのアッセイは、熱不活化血清を使用して（すなわち、補体の非存在下で）かつ免疫エフェクター細胞の非存在下で行われ得る。抗体、オリゴペプチド、または他の有機分子が細胞死を誘導し得るか否かを決定するために、膜の完全性の損失（ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）、トリパンブルー（Ｍｏｏｒｅら、Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １７：１−１１（１９９５）を参照のこと）または７ＡＡＤの取り込みによって評価されるような）が、非処理細胞と比較して評価され得る。好ましい細胞死誘導抗体は、ＢＴ４７４細胞におけるＰＩ取り込みアッセイにおいて、ＰＩ取り込みを誘導するものである。
【０１８３】
本明細書で使用される場合、用語「免疫接着物質（ｉｍｍｕｎｏａｄｈｅｓｉｏｎ）」とは、異種タンパク質の結合特異性と、免疫グロブリン定常ドメインのエフェクター機能とを合わせる抗体様分子（「接着物質」）をいう。構造的には、免疫接着分子は、抗原認識および抗体結合部位（すなわち、「異種」である）、および免疫グロブリン定常領域配列以外の望ましい結合特異性を有するアミノ酸配列の融合物を包含する。免疫接着物質分子の接着部分は、代表的には、レセプターまたはリガンドの少なくとも結合部位を含む連続するアミノ酸配列である。この免疫接着物質における免疫グロブリン定常領域配列は、任意の免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ−１、ＩｇＧ−２、ＩｇＧ−３、またはＩｇＧ−４サブタイプ、ＩｇＡ（ＩｇＡ−１およびＩｇＡ−２を含む）、ＩｇＥ、ＩｇＤまたはＩｇＭ）から得られ得る。
【０１８４】
語「標識」とは、本明細書中で使用される場合、「標識された」抗体を生成するために、抗体に直接的にまたは間接的に結合体化された、検出可能な化合物または組成物をいう。この標識は、それ自体が（例えば、放射性同位体標識または蛍光標識）検出可能であってもよいし、酵素標識の場合には、検出可能である基質化合物または組成物の化学的変化を触媒してもよい。
【０１８５】
「複製防止剤」とは、その機構（例えば、アポトーシス、止血、サイトーシス、殺腫瘍剤（ｔｕｍｏｒｉｃｉｄｅ）、有糸分裂阻害、細胞周期進行のブロック、細胞成長の停止、腫瘍への結合、細胞メディエーターとしての作用などによる）が何であっても、細胞の複製、機能、および／もしくは増殖が阻害されるかまたは防止されるか、あるいは細胞が破壊される薬剤である。このような薬剤としては、化学療法剤、細胞傷害性薬剤、サイトカイン、成長阻害剤、または抗ホルモン剤（例えば、抗エストロゲン化合物（例えば、タモキシフェン）、抗プロゲステロン（例えば、オナプリストン（ＥＰ  ６１６  ８１２を参照のこと）））；または抗アンドロゲン（例えば、フルタミド）、ならびにアロマターゼ（ａｒｏｍｉｄａｓｅ）インヒビター、あるいはホルモン剤（例えば、アンドロゲン）が挙げられる。
【０１８６】
用語「細胞傷害性薬剤」とは、本明細書中で使用される場合、細胞の機能を阻害するかまたは妨げ、そして／または細胞の破壊を引き起こす物質をいう。この用語は、以下を含むことが意図される：放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、およびＬｕの放射性同位体）、化学療法剤（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシンまたは他のインターカレート剤）、酵素およびそのフラグメント（例えば、ヌクレオチド分解酵素）、抗生物質、およびトキシン（例えば、細菌、真菌、植物または動物起源の小分子トキシンまたは酵素的に活性なトキシン（そのフラグメントおよび／または改変体を含む）、ならびに以下に開示される種々の抗腫瘍剤または抗癌剤。他の細胞障害製薬剤は、以下に記載される。殺腫瘍剤は、腫瘍細胞の破壊を引き起こす。
【０１８７】
本明細書中のアンタゴニストと組み合わせて使用するための特定の腫瘍型に対する本明細書中の好ましい細胞障害性薬剤は、以下の通りである：
１．前立腺癌：アンドロゲン、ドセタキソール、パクリタキセル、エストラムスチン、ドキソルビシン、ミトキサントロン、ＥｒｂＢ２ドメインに対する抗体（例えば、２Ｃ４  （ＷＯ０１／００２４５；ハイブリドーマＡＴＣＣ  ＨＢ−１２６９７）（これは、ＥｒｂＢ２の細胞外ドメイン中の領域（例えば、ＥｒｂＢ２のほぼ残基２２〜ほぼ残基５８４（両端を含む）の領域における任意の１個以上の残基）に結合する）、ＡＶＡＳＴＩＮＴＭ抗血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）、ＴＡＲＣＥＶＡＴＭ  ＯＳＩ−７７４（エルロチニブ（ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ））（ＧｅｎｅｎｅｔｅｃｈおよびＯＳＩ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、または他の表皮増殖因子レセプターチロシンキナーゼインヒビター（ＥＧＦＲ  ＴＫＩ’ｓ）。
【０１８８】
２．胃癌：５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、ＸＥＬＯＤＡＴＭカペシタビン、メトトレキサート、エトポシド、シスプラチン／カルボプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、ゲムシタビン、ドキソルビシン、およびＣＰＴ−１１（カンプトテシン−１１；イリノテカン、ＵＳＡ  Ｂｒａｎｄ  Ｎａｍｅ：ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））。
【０１８９】
３．膵臓癌：ゲムシタビン、５ＦＵ、ＸＥＬＯＤＡＴＭカペシタビン、ＣＰＴ−１１、ドセタキセル、パクリタキセル、シスプラチン、カルボプラチン、ＴＡＲＣＥＶＡＴＭエルロチニブ、および他のＥＧＦＲ  ＴＫＩ。
【０１９０】
４．結腸直腸癌：５ＦＵ、ＸＥＬＯＤＡＴＭカペシタビン、ＣＰＴ−１１、オキサリプラチン、ＡＶＡＳＴＩＮＴＭ  抗ＶＥＧＦ、ＴＡＲＣＥＶＡＴＭ  エルロチニブおよび他のＥＧＦＲ  ＴＫＩ、ならびにＥＲＢＩＴＵＸＴＭ（以前は、ＩＭＣ−Ｃ２２５として公知）ヒト：マウスキメラモノクローナル抗体（これは、ＥＧＦＲに結合しかつＥＧＦがレセプター活性化および腫瘍へのシグナル伝達を開始する能力をブロックする）。
【０１９１】
５．腎臓癌：ＩＬ−２、インターフェロンα、ＡＶＡＳＴＩＮＴＭ  抗ＶＥＧＦ、ＭＥＧＡＣＥＴＭ（メガステロールアセテート）プロゲスチン、ビンブラスチン、ＴＡＲＣＥＶＡＴＭ  エルロチニブ、ならびに他のＥＧＦＲ  ＴＫＩ。
【０１９２】
「成長阻害剤」とは、本明細書中で使用される場合、インビトロまたはインビボで、細胞（特に、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の発現癌細胞）の増殖を阻害する化合物または組成物をいう。従って、増殖阻害薬剤は、Ｓ期にあるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の発現細胞の割合を有意に減少させる薬剤であり得る。増殖阻害薬剤の例としては、（Ｓ期以外で）細胞周期進行をブロックする薬剤（例えば、Ｇ１阻止およびＭ期阻止を誘導する薬剤）が挙げられる。古典的なＭ期ブロッカーとしては、ビンカ（ビンクリスチンおよびビンブラスチン）、タキサン、およびトポイソメラーゼＩＩインヒビター（例えば、ドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシドおよびブレオマイシン）が挙げられる。Ｇ１を阻止する薬剤はまた、Ｓ期阻止をももたらし、例えば、ＤＮＡアルキル化剤（例えば、タモキシフェン、プレドニソン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキサート、５−フルオロウラシルおよびａｒａ−Ｃ）が挙げられる。さらなる情報は、Ｔｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ、ＭｅｎｄｅｌｓｏｈｎおよびＩｓｒａｅｌ編、第１章、Ｍｕｒａｋａｍｉらによる表題「Ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ、ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ、ａｎｄ  ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ｄｒｕｇｓ」（ＷＢ  Ｓａｕｎｄｅｒｓ：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９５）（特に、１３頁）に見出され得る。タキサン（パクリタキセルおよびドセタキセル）は、ともにイチイの木から得られた抗癌剤である。ドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ）は、ヨーロッパイチイから得られ、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）の半合成アナログである。パクリタキセルおよびドセタキセルは、チューブリン二量体からの微小管のアセンブリを促進し、脱重合を防止することによって微小管を安定化する。その結果、細胞における有糸分裂の阻害が生じる。
【０１９３】
「ドキソルビシン」とは、アントラサイクリン抗生物質である。ドキソルビシンの正式な化学名は、（８Ｓ−ｃｉｓ）−１０−［（３−アミノ−２，３，６−トリデオキシ−α−Ｌ−リゾ（ｌｙｘｏ）−ヘキサピラノシル）オキシ］−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，８，１１−トリヒドロキシ−８−（ヒドロキシアセチル）−１−メトキシ−５，１２−ナフタセンジオンである。
【０１９４】
用語「サイトカイン」とは、細胞内媒介因子として別の細胞に対して作用する、ある細胞集団により放出されるタンパク質についての包括的用語である。そのようなサイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン、および従来のポリペプチドホルモンである。このサイトカインの中に包含されるのは、成長ホルモン（例えば、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン、およびウシ成長ホルモン）；副甲状腺ホルモン；サイロキシン；インスリン；プロインスリン；レラキシン；プロレラキシン；糖タンパク質ホルモン（例えば、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）；甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）；および黄体形成ホルモン（ＬＨ）；肝増殖因子；線維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤ラクトゲン；腫瘍壊死因子αおよび腫瘍壊死因子β；ミューラー阻害物質；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；脈管内皮増殖因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；神経成長因子（例えば、ＮＧＦ−β）；血小板増殖因子；トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）（例えば、ＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−β）；インスリン様増殖因子Ｉおよびインスリン様増殖因子ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン（例えば、インターフェロンα、インターフェロンβおよびインターフェロンγ）；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）（例えば、マクロファージＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）；顆粒球マクロファージＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；および顆粒球ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ））；インターロイキン（ＩＬ）（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２）；腫瘍壊死因子（例えば、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−β）；ならびに他のポリペプチド因子（ＬＩＦおよびキットリガンド（ＫＬ））である。本明細書中で使用される場合、用語サイトカインとは、天然供給源由来のタンパク質、または組換え細胞培養物由来のタンパク質、およびネイティブ配列のサイトカインの生理活性等価物を包含する。
【０１９５】
用語「パッケージ挿入物」は、治療剤製品の市販のパッケージ内に慣習的に備えられる説明書をいうために使用され、これは、そのような治療剤製品の使用に関する適応症、用法、投薬量、投与、禁忌および／または警告についての情報を含む。
【０１９６】
用語「遺伝子」とは、（ａ）本明細書中で開示されるＤＮＡ配列のうちの少なくとも１つを含む遺伝子；（ｂ）本明細書中で開示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列をコードする任意のＤＮＡ配列、および／または；ｃ）本明細書中に開示されるコード配列の相補体にハイブリダイズする任意のＤＮＡ配列、をいう。好ましくは、この用語は、コード領域および非コード領域を含み、好ましくは、正常な遺伝子発現に必須の全ての配列を含む。
【０１９７】
用語「遺伝子標的化」とは、ゲノムＤＮＡのフラグメントが哺乳動物細胞へ導入される場合に生じ、フラグメントが位置しかつ内因性の相同配列と組換わる、相同組換えの型をいう。相同組換えによる遺伝子標的化は、特定のゲノム配列を特定の設計の外因性ＤＮＡと置き換えるために、組換えＤＮＡ技術を採用する。
【０１９８】
用語「相同組換え」とは、相同ヌクレオチド配列の部位での２つのＤＮＡ分子または染色分体の間でのＤＮＡフラグメントの交換をいう。
【０１９９】
用語「標的遺伝子」（あるいは、「標的遺伝子配列」もしくは「標的ＤＮＡ配列」ともいわれる）とは、相同組換えによって改変されるべき、任意の核酸分子、ポリヌクレオチド、または遺伝子をいう。この標的配列は、インタクトな遺伝子、エキソンまたはイントロン、調節配列または遺伝子間の任意の領域を包含する。この標的遺伝子は、個々のゲノムＤＮＡにおける特定の遺伝子または遺伝子座の部分を包含し得る。
【０２００】
ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の遺伝子の「破壊」とは、ゲノムＤＮＡのフラグメントが位置し、内因性の相同配列と組換わる場合に生じる。この場合、その破壊は、ネイティブ遺伝子もしくはその一部分の欠失であるか、またはネイティブ遺伝子における変異であるか、あるいはその場合、この破壊は、ネイティブ遺伝子の機能的不活性化である。あるいは、配列破壊は、遺伝子トラップベクター（すなわち、ランダムに挿入された導入遺伝子を含みかつ発現する非ヒトトランスジェニック動物；例えば、米国特許第６，４３６，７０７号（２００２年８月２０日発行）を参照のこと）を用いて非特異的挿入不活性化によって生成され得る。これら配列破壊または改変は、ＤＮＡ配列の挿入、ミスセンス、フレームシフト、欠失、もしくは置換（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）、または置き換え（ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ）、あるいはこれらの任意の組み合わせを包含し得る。挿入は、遺伝子全体の挿入（この遺伝子は、動物起源、植物起源、真菌起源、昆虫起源、原核生物起源またはウイルス起源のものであり得る）の挿入を包含する。例えば、破壊は、通常の遺伝子生成物を、その生成を部分的にもしくは完全に阻害することによって、またはその通常の遺伝子生成物の活性を増強することによって、変化させ得る。好ましくは、その破壊は、ヌル破壊であり、ここでＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の遺伝子の有意な発現はない。
【０２０１】
用語「ネイティブ発現」とは、野生型マウスに存在する発現レベルでの、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の遺伝子によってコードされる全長ポリペプチドの発現をいう。従って、内因性ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の遺伝子の「非ネイティブ発現」が存在しない破壊とは、哺乳動物の単一細胞、選択された細胞、または細胞全ての内因性ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の遺伝子によってコードされるポリペプチドの少なくとも一部の発現の部分的または完全な変化をいう。
【０２０２】
用語「ノックアウト」とは、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の遺伝子の破壊であって、その破壊が、ｒｅｓｕｌｔｓ  ｉｎ：  ネイティブ遺伝子の機能的不活性化；ネイティブ遺伝子もしくはその一部の欠失；またはネイティブ遺伝子における変異をいう。
【０２０３】
用語「ノックイン」とは、マウスオルソログ（または他のマウス遺伝子）の、特定のヒトＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のコード遺伝子もしくはその改変体のいずれかをコードするヒトｃＤＮＡでの置き換え（すなわち、ネイティブマウス遺伝子の、ネイティブヒト遺伝子での置き換えを生じる破壊）をいう。
【０２０４】
用語「構築物」または「標的化構築物」とは、標的組織、細胞株または動物に移入される、人工的に組み立てられたＤＮＡセグメントをいう。代表的には、この標的化構築物とは、特に目的の遺伝子または核酸配列、マーカー遺伝子および適切な制御配列を包含する。標的化構築物は、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の標的化構築物を含むものが、本明細書中に提供される。「ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の標的化構築物」は、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の遺伝子の少なくとも一部分に相同なＤＮＡ配列を含み、宿主細胞におけるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の遺伝子の破壊を生じ得る。
【０２０５】
用語「トランスジェニック細胞」とは、そのゲノム内にＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の遺伝子（これは、遺伝子標的化の方法によって完全にまたは部分的に破壊されるか、改変されるか、代えられるかまたは置き換えられる）を含む細胞をいう。
【０２０６】
用語「トランスジェニック動物」とは、本明細書中で記載される方法または他の当該分野で周知の方法によって破壊または他の方法で改変もしくは変異されている、そのゲノム特異的遺伝子を内部に含む動物をいう。好ましくは、非ヒトトランスジェニック動物は、哺乳動物である。より好ましくは、哺乳動物は、ラットもしくはマウスのような齧歯類である。さらに、「トランスジェニック動物」とは、ヘテロ接合性動物（すなわち、１つの欠損性対立遺伝子および１つの野生型対立遺伝子）またはホモ接合性動物（すなわち、２つの欠損性対立遺伝子）であり得る。胚は、動物の定義内に入ると考えられる。動物の準備は、交配または他の方法に拘わらず、かつ胚が生まれてくる時期を迎えるか否かに拘わらず、子宮内の胚または胎児の準備を包含する。
【０２０７】
本明細書で使用される場合、用語「選択マーカー」および「位置選択マーカー」とは、遺伝子を保有する細胞のみが、特定の条件下で生存および／もしくは成長することができる、ある生成物をコードする遺伝子をいう。例えば、導入されたネオマイシン耐性（Ｎｅｏｒ）遺伝子を発現する、植物細胞および動物細胞は、化合物Ｇ４１８に耐性である。Ｎｅｏｒ遺伝子マーカーを有さない細胞は、Ｇ４１８によって死滅させられる。他の陽性選択マーカーは、当業者に公知であり、当業者の技術範囲内である。
【０２０８】
用語「モジュレーター」または「調節」とは、本明細書中で使用される場合、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の遺伝子の機能、発現、活性、または代わりにＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の遺伝子と関連する表現型の減少、阻害、低下、改善、増大または増強をいう。
【０２０９】
用語「改善する」または「改善」とは、本明細書中で使用される場合、状態、疾患、障害、または表現型（異常または症状を含む）の減少、低下または排除をいう。
【０２１０】
用語「異常（性）」とは、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０が影響を与える、病的状態および行動観察を含む、任意の疾患、障害、状態または表現型をいう。
【０２１１】
【表１−１】
2007536931.tif 000002
【０２１２】
【表１−２】
2007536931.tif 000003
【０２１３】
【表１−３】
2007536931.tif 000004
【０２１４】
【表１−４】
2007536931.tif 000005
【０２１５】
【表１−５】
2007536931.tif 000006
【０２１６】
【表１−６】
2007536931.tif 000007
【０２１７】
【表１−７】
2007536931.tif 000008
【０２１８】
【表１−８】
2007536931.tif 000009
【０２１９】
【表１−９】
2007536931.tif 000010
【０２２０】
【表１−１０】
2007536931.tif 000011
【０２２１】
【表１−１１】
2007536931.tif 000012
【０２２２】
【表１−１２】
2007536931.tif 000013
【０２２３】
【表１−１３】
2007536931.tif 000014
【０２２４】
【表１−１４】
2007536931.tif 000015
【０２２５】
【表１−１５】
2007536931.tif 000016
【０２２６】
【表１−１６】
2007536931.tif 000017
【０２２７】
【表１−１７】
2007536931.tif 000018
【０２２８】
【表２】
2007536931.tif 000019
％  アミノ酸配列同一性＝
（ＡＬＩＧＮ−２によって決定される２つのポリペプチド配列間の同一のマッチするアミノ酸残基数）÷（ＰＲＯポリペプチドのアミノ酸残基の総数）＝
５÷１５＝３３．３％
【０２２９】
【表３】
2007536931.tif 000020
％  アミノ酸配列同一性＝
（ＡＬＩＧＮ−２によって決定される２つのポリペプチド配列間の同一のマッチするアミノ酸残基数）÷（ＰＲＯポリペプチドのアミノ酸残基の総数）＝
５÷１０＝５０％
【０２３０】
【表４】
2007536931.tif 000021
％  核酸配列同一性＝
（ＡＬＩＧＮ−２によって決定される２つの核酸配列間の同一のマッチするヌクレオチド数）÷（ＰＲＯ−ＤＮＡ核酸配列のヌクレオチド総数）＝
６÷１４＝４２．９％
【０２３１】
【表５】
2007536931.tif 000022
％  核酸配列同一性＝
（ＡＬＩＧＮ−２によって決定される２つの核酸配列間の同一のマッチするヌクレオチド数）÷（ＰＲＯ−ＤＮＡ核酸配列のヌクレオチド総数）＝
４÷１２＝３３．３％。
【０２３２】
ＩＩ．本発明の組成物および方法
Ａ．全長のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド
本発明は、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドとして本願中でいわれるポリペプチドをコードする新たに同定されかつ単離されたヌクレオチド配列を提供する。特に、種々のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードするｃＤＮＡは、以下の実施例でさらに詳細に記載されるように、同定されかつ単離された。配列発現ラウンドによって生成されるタンパク質は、所定の異なるＰＲＯ数字であり得るが、ＵＮＱ数字は、任意の所定のＤＮＡおよびそのコードされるタンパク質に対して特有であり、変化されないことに注意のこと。しかし、単純化する目的で、本明細書において、本明細書中に開示される全長のネイティブ核酸分子によってコードされるタンパク質、ならびに前述のＰＲＯの定義において包含される全てのさらなるネイティブホモログおよび改変体は、調製の起源または様式に拘わらず、「ＰＲＯ／数字」といわれる。
【０２３３】
以下の実施例に開示されるように、種々のｃＤＮＡクローンが、ＡＴＣＣに寄託された。これらのクローンの実際のヌクレオチド配列は、当該分野で慣用的な方法を用いて、寄託されたクローンの配列決定によって、当業者によって容易に決定され得る。推定アミノ酸配列は、慣用的な技術を用いて、ヌクレオチド配列から決定され得る。ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドおよび本明細書中に記載されるコード核酸に関して、出願人は、この時点で入手可能な配列情報で最も同定可能なリーディングフレームであると考えられるものを同定した。
【０２３４】
Ｂ．ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド改変体
本明細書中に記載される全長のネイティブ配列ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドに加えて、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の改変体が調製され得ることが企図される。ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の改変体は、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のＤＮＡに適切なヌクレオチド変化を導入することによって、そして／または望ましいＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの合成によって調製され得る。当業者は、アミノ酸変化が、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの翻訳後修飾を変化させ得る（例えば、グリコシル化部位の数または位置を変化させるかまたは膜アンカー特徴を変化させる）ことを認識する。
【０２３５】
ネイティブの全長配列のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドにおけるバリエーションまたは本明細書中に記載されるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの種々のドメインにおけるバリエーションが、例えば、米国特許第５，３６４，９３４号において記載される、例えば、保存的変異および非保存的変異のための技術およびガイドラインのいずれかを用いて、作製され得る。バリエーションは、ネイティブ配列のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドと比較して、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドのアミノ酸配列における変化を生じるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする１個または数個のコドンの置換、欠失もしくは挿入であり得る。必要に応じて、このバリエーションは、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドのドメインのうちの１個以上において、少なくとも１個のアミノ酸を任意の他のアミノ酸で置換することによる。望ましい活性に悪影響を及ぼすことなくどのアミノ酸残基が挿入され得るか、置換され得るかまたは欠失され得るかを決定することにおけるガイダンスは、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの配列と、相同な既知のタンパク質分子の配列とを比較し、そして高い相同性の領域において作製されたアミノ酸配列変化の数を最小にすることによって、見いだされ得る。アミノ酸置換は、あるアミノ酸を、類似の構造的特性および／または化学的特性を有する別のアミノ酸で置き換えること（例えば、ロイシンをセリンで置き換えること、すなわち、保存的アミノ酸置換）の結果であり得る。挿入または欠失は、必要に応じて、約１個〜５個のアミノ酸の範囲であり得る。許容されるバリエーションは、その配列においてアミノ酸の挿入、欠失または置換を体系的に作製し、得られた改変体を、全長または成熟したネイティブ配列が示す活性について試験することによって、決定され得る。
【０２３６】
ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドフラグメントは、本明細書中で提供される。このようなフラグメントは、例えば、全長のネイティブタンパク質と比較した場合、Ｎ末端またはＣ末端において先端切断されてもよいし、内部残基を欠失していてもよい。特定のフラグメントは、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの望ましい生物学的活性に必須ではないアミノ酸残基を欠いている。
【０２３７】
ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のフラグメントは、多くの従来技術のいずれかによって調製され得る。望ましいペプチドフラグメントは、化学的に合成されてもよい。代替的なアプローチは、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のフラグメントを酵素消化によって（例えば、特定のアミノ酸残基によって規定される得部位でタンパク質を切断することが公知の酵素でそのタンパク質を処理することによって、またはそのＤＮＡを、適切な制限酵素で消化して望ましいフラグメントを単離することによって）生成することを包含する。なお別の適切な技術は、望ましいポリペプチドフラグメントをコードするＤＮＡフラグメントを単離し、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅することを包含する。ＤＮＡフラグメントの望ましい末端を規定するオリゴヌクレオチドは、ＰＣＲにおいて５’プライマーおよび３’プライマーで使用される。好ましくは、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドフラグメントは、本明細書中で開示されるネイティブのＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドと少なくとも１つの生物学的活性および／もしくは免疫学的活性を共有する。
【０２３８】
目的の保存的置換は、好ましい置換の見出しで表６に示される。このような置換が、生物学的活性の変化を生じる場合、表６の例示的置換と示されるか、またはアミノ酸クラスを参照して以下にさらに記載されるより実質的な変化が、好ましくは、導入され、生成物がスクリーニングされる。
【０２３９】
【表６】
2007536931.tif 000023
ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの機能または免疫学的同一性における実質的改変は、（ａ）例えば、シートまたはらせんのコンホメーションとしての、置換の領域でのポリペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位での分子の変化もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖のかさ高さを維持することに対するそれらの効果において有意に異なる置換を選択することによって、達成され得る。天然に存在する残基は、共通する側鎖特性に基づいて、グループに分けられる：
アミノ酸は、それらの側鎖の特性における類似性に従って分けられ得る（Ａ．Ｌ．Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第２版，ｐｐ．７３−７５，Ｗｏｒｔｈ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９７５））：
（１）非極性：Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）；
（２）無電荷極性：Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）；
（３）酸性：Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）；
（４）塩基性：Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）；
あるいは、天然に存在する残基は、共通する側鎖特性に基づいてグループに分けられ得る。
【０２４０】
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖方向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および
（６）芳香族性：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０２４１】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスのものに交換することを包含する。このような置換された残基はまた、保存的置換部位に、より好ましくは、残りの（非保存的）部位に導入され得る。
【０２４２】
これらのバリエーションは、オリゴヌクレオチド媒介性（部位指向性）変異誘発、アラニンスキャンニング、およびＰＣＲ変異誘発のような当該分野で公知の方法を用いてなされ得る。部位指向性変異誘発［Ｃａｒｔｅｒら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１３：４３３１（１９８６）；Ｚｏｌｌｅｒら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１０：６４８７（１９８７）］、カセット変異誘発［Ｗｅｌｌｓら，Ｇｅｎｅ，３４：３１５（１９８５）］、制限選択変異誘発［Ｗｅｌｌｓら，Ｐｈｉｌｏｓ．Ｔｒａｎｓ．Ｒ．Ｓｏｃ．Ｌｏｎｄｏｎ  ＳｅｒＡ，３１７：４１５（１９８６）］または他の公知の技術が、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の改変ＤＮＡを生成するために、クローニングされたＤＮＡに対して行われ得る。
【０２４３】
アミノ酸スキャンニング分析はまた、連続配列に沿って１個以上のアミノ酸を同定するために使用され得る。スキャンニング中でも、好ましいアミノ酸は、比較的小さな中性アミノ酸である。このようなアミノ酸としては、アラニン、グリシン、セリン、およびシステインが挙げられる。アラニンは、代表的には、この群の中で好ましいスキャンニングアミノ酸である。なぜなら、これは、β−炭素以外を排除し、改変体の主鎖コンホメーションを改変する可能性が低いからである［Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５（１９８９）］。アラニンがまた代表的には、好ましい。なぜなら、アラニンは、最も一般的なアミノ酸であるからである。さらに、アラニンは、埋め込まれた位置および露出した位置の両方で頻繁に見いだされる［Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｔｈｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，（Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．，Ｎ．Ｙ．）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５０：１（１９７６）］。アラニン置換が適切な量の改変体を生じない場合、アイソテリック（ｉｓｏｔｅｒｉｃ）アミノ酸が使用され得る。
【０２４４】
Ｃ．ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの改変
ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの共有結合改変が、本発明の範囲内に包含される。１つの型の共有結合改変は、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの標的化されたアミノ酸残基と、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの選択された側鎖またはＮＢもしくはＣ末端残基と反応し得る有機性誘導体化剤とを反応させることを包含する。二官能性薬剤での誘導体化は、例えば、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドを水不溶性支持体マトリクスまたは抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体もしくは抗ＰＲＯ１４８０抗体を精製するための方法において使用するための表面に架橋するために、有用であり、そしてその逆も同様である。一般に使用される架橋剤としては、例えば、１，１−ビス（ジアゾアセチル）−２−フェニルエタン、グルタルアルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（例えば、４−アジドサリチル酸とのエステル）、ホモ二官能性イミドエステル（ジスクシンイミジルエステル（例えば、３，３’−ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）が挙げられる）、二官能性マレイミド（例えば、ビス−Ｎ−マレイミド−１，８−オクタン）およびメチル−３−［（ｐ−アジドフェニル）ジチオ］プロピオイミデートのような薬剤が挙げられる。
【０２４５】
他の改変としては、グルタミニル残基およびアスパラギニル残基を、それぞれ、対応するグルタミル残基およびアスパルチル残基へ脱アミド化すること、プロリンおよびリジンのヒドロキシル化、セリル残基もしくはスレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リジン、アルギニン、およびヒスチジンの側鎖のα−アミノ基のメチル化［Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ｐｐ．７９−８６（１９８３）］、Ｎ末端アミンのアセチル化、および任意のＣ末端カルボキシル基のアミド化が挙げられる。
【０２４６】
本発明の範囲内に包含されるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの共有結合改変の別の型は、そのポリペプチドのネイティブのグリコシル化パターンを改変することを包含する。「そのネイティブのグリコシル化パターンを改変する」とは、ネイティブ配列のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドにおいて見いだされる１個以上の炭水化物部分を（基礎にあるグリコシル化部位を除去することによってまたは化学的手段および／もしくは酵素的手段によってグリコシル化を欠失することによってかのいずれかで）欠失すること、ならびに／またはネイティブ配列のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドに存在しない１個以上のグリコシル化部位を付加することを意味するように、本明細書中の目的で意図される。さらに、この語句は、存在する種々の炭水化物部分の性質および特性における変化を含む、ネイティブタンパク質のグリコシル化における定性的変化を包含する。
【０２４７】
ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドに対するグリコシル化部位の付加は、そのアミノ酸配列を改変することによって達成され得る。この改変は、例えば、（Ｏ結合型グリコシル化部位のための）１または数個のセリン残基もしくはスレオニン残基をそのネイティブ配列のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０に付加するかまたは置換することによって、なされ得る。このＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のアミノ酸配列は、必要に応じて、ＤＮＡレベルでの変化を介して、特に、コドンが生成され、望ましいアミノ酸に翻訳されるように、予め選択された塩基でそのＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードするＤＮＡを変異させることによって、改変され得る。
【０２４８】
ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド上の炭水化物部分の数を増大させる別の手段は、ポリペプチドにグリコシドを化学的にまたは酵素的にカップリングすることによる。このような方法は、当該分野で、例えば、ＷＯ８７／０５３３０（１９８７年９月１１日公開）、およびＡｐｌｉｎ  ａｎｄ  Ｗｒｉｓｔｏｎ，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，ｐｐ．２５９−３０６（１９８１）に記載されている。
【０２４９】
ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドに存在する炭水化物部分の除去は、化学的にもしくは酵素的に、またはグリコシル化のための標的として働くアミノ酸残基をコードするコドンの変異による置換によって、達成され得る。化学的脱グリコシル化技術は、当該分野で公知であり、例えば、Ｈａｋｉｍｕｄｄｉｎら，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，２５９：５２（１９８７）によって、およびＥｄｇｅら，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１１８：１３１（１９８１）によって記載される。ポリペプチド上の炭水化物部分の酵素的切断は、Ｔｈｏｔａｋｕｒａら，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１３８：３５０（１９８７）によって記載されるような種々のエンドグリコシダーゼおよびエキソグリコシダーゼの使用によって達成され得る。
【０２５０】
ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの共有結合的改変の別の型は、そのＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドを、米国特許第４，６４０，８３５号；同第４，４９６，６８９号；同第４，３０１，１４４号；同第４，６７０，４１７号；同第４，７９１，１９２号または同第４，１７９，３３７号に記載される様式で、種々の非タンパク質性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、もしくはポリオキシアルキレン）のうちの１つに架橋することを包含する。
【０２５１】
本発明のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドはまた、別の異種ポリペプチドもしくはアミノ酸配列に融合されたＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドを含むキメラ分子を形成する方法において改変され得る。
【０２５２】
このようなキメラ分子は、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドと、抗タグ抗体が選択的に結合し得るエピトープを提供するタグポリペプチドとの融合物を含む。このエピトープタグは、一般に、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端に配置される。ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドのこのようなエピトープタグ化形態の存在は、タグポリペプチドに対する抗体を用いて検出され得る。また、このエピトープタグを提供すると、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドが、抗タグ抗体またはエピトープタグに結合するアフィニティーマトリクスの別の型を使用するアフィニティー精製によって容易に精製されることを可能にする。種々のタグポリペプチドおよびそれらそれぞれの抗体は、当該分野で周知である。例としては、ポリ−ヒスチジン（ポリ−ｈｉｓ）タグまたはポリ−ヒスチジン−グリシン（ポリ−ｈｉｓ−ｇｌｙ）タグ；ｆｌｕ  ＨＡタグポリペプチドおよびその抗体１２ＣＡ５［Ｆｉｅｌｄら，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，８：２１５９−２１６５（１９８８）］；ｃ−ｍｙｃタグおよびこれに対する８Ｆ９抗体、３Ｃ７抗体、６Ｅ１０抗体、Ｇ４抗体、Ｂ７抗体および９Ｅ１０抗体［Ｅｖａｎら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，５：３６１０−３６１６（１９８５）］；ならびに単純ヘルペスウイルス糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）タグおよびその抗体［Ｐａｂｏｒｓｋｙら，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，３（６）：５４７−５５３（１９９０）］が挙げられる。他のタグポリペプチドとしては、Ｆｌａｇ−ペプチド［Ｈｏｐｐら，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，６：１２０４−１２１０（１９８８）］；ＫＴ３エピトープペプチド［Ｍａｒｔｉｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，��５５：１９２−１９４（１９９２）］；α−チューブリンエピトープペプチド［Ｓｋｉｎｎｅｒら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６６：１５１６３−１５１６６（１９９１）］；ならびにＴ７遺伝子１０タンパク質ペプチドタグ［Ｌｕｔｚ−Ｆｒｅｙｅｒｍｕｔｈら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：６３９３−６３９７（１９９０）］が挙げられる。
【０２５３】
このキメラ分子は、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドと、免疫グロブリンとのまたは免疫グロブリンの特定の領域との融合物を包含し得る。キメラ分子の二価形態（「免疫接着物質」ともいわれる）に関して、このような融合は、ＩｇＧ分子のＦｃ領域への融合であり得る。このＩｇ融合は、好ましくは、Ｉｇ分子内のすくなくとも１つの可変領域の代わりに、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの可溶性（膜貫通ドメインが欠失または不活性化された）形態の置換を包含する。本発明の特に好ましい局面において、この免疫グロブリン融合物は、ＩｇＧ１分子のヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域、またはヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３領域を含む。免疫グロブリン融合物の生成に関しては、米国特許第５，４２８，１３０号（１９９５年６月２７日発行）も参照のこと。
【０２５４】
Ｄ．ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの調製
以下の説明は、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の核酸を含むベクターで形質転換またはトランスフェ右とした細胞を培養することによって、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドを生成することに主に関する。当然のことながら、当該分野で周知の代替法が、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドを調製するために使用され得ることが企図される。例えば、このＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の配列、またはその一部分は、固相技術を用いて直接ペプチド合成によって生成され得る［例えば、Ｓｔｅｗａｒｔら，Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｃｏ．，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ（１９６９）；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８５：２１４９−２１５４（１９６３）を参照のこと］。インビトロでのタンパク質合成は、手動技術によってまたは自動化によって行われ得る。自動化合成は、例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を用いて、製造業者の説明書を用いて達成され得る。ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの種々の部分は、全長のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、��ＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドを生成するために、別個に化学的に合成されて、化学的方法または酵素的方法を用いて結合され得る。
【０２５５】
１．ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードするＤＮＡの単離
ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードするＤＮＡは、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のｍＲＮＡを有しかつ検出可能なレベルでこれを発現すると考えられる組織から調製されるｃＤＮＡライブラリーから得られ得る。従って、ヒトのＰＲＯ２５６−ＤＮＡ、ＰＲＯ３４４２１−ＤＮＡ、ＰＲＯ３３４−ＤＮＡ、ＰＲＯ７７０−ＤＮＡ、ＰＲＯ９８３−ＤＮＡ、ＰＲＯ１００９−ＤＮＡ、ＰＲＯ１１０７−ＤＮＡ、ＰＲＯ１１５８−ＤＮＡ、ＰＲＯ１２５０−ＤＮＡ、ＰＲＯ１３１７−ＤＮＡ、ＰＲＯ４３３４−ＤＮＡ、ＰＲＯ４３９５−ＤＮＡ、ＰＲＯ４９１９２−ＤＮＡ、ＰＲＯ９７９９−ＤＮＡ、ＰＲＯ２１１７５−ＤＮＡ、ＰＲＯ１９８３７−ＤＮＡ、ＰＲＯ２１３３１−ＤＮＡ、ＰＲＯ２３９４９−ＤＮＡ、ＰＲＯ６９７−ＤＮＡもしくはＰＲＯ１４８０−ＤＮＡは、実施例に記載されるように、ヒト組織から調製されるｃＤＮＡライブラリーから従来通り得られ得る。このＰＲＯ２５６コード遺伝子、ＰＲＯ３４４２１コード遺伝子、ＰＲＯ３３４コード遺伝子、ＰＲＯ７７０コード遺伝子、ＰＲＯ９８３コード遺伝子、ＰＲＯ１００９コード遺伝子、ＰＲＯ１１０７コード遺伝子、ＰＲＯ１１５８コード遺伝子、ＰＲＯ１２５０コード遺伝子、ＰＲＯ１３１７コード遺伝子、ＰＲＯ４３３４コード遺伝子、ＰＲＯ４３９５コード遺伝子、ＰＲＯ４９１９２コード遺伝子、ＰＲＯ９７９９コード遺伝子、ＰＲＯ２１１７５コード遺伝子、ＰＲＯ１９８３７コード遺伝子、ＰＲＯ２１３３１コード遺伝子、ＰＲＯ２３９４９コード遺伝子、ＰＲＯ６９７コード遺伝子もしくはＰＲＯ１４８０コード遺伝子はまた、ゲノムライブラリーから、または公知の合成手順（例えば、自動化核酸合成）によって、得られ得る。
【０２５６】
ライブラリーは、目的の遺伝子またはこれによってコードされるタンパク質を同定するために設計されたプローブ（例えば、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドに対する抗体またはすくなくとも約２０〜８０塩基のオリゴヌクレオチド）でスクリーニングされ得る。選択されたプローブでのｃＤＮＡライブラリーまたはゲノムライブラリーのスクリーニングは、標準的な手順（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９８９）において記載される）を用いて行われ得る。ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０をコードする遺伝子を単離するための代替的手段は、ＰＣＲ方法論［Ｓａｍｂｒｏｏｋら，前出；Ｄｉｅｆｆｅｎｂａｃｈら，ＰＣＲ  Ｐｒｉｍｅｒ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９９５）］を用いることである。
【０２５７】
以下の実施例は、ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするための技術を記載する。プローブとして選択されるオリゴヌクレオチド配列は、十分な長さであるべきであり、偽陽性が最小にされるように十分に明白である。このオリゴヌクレオチドは、好ましくは、スクリーニングされるライブラリーにおいてＤＮＡへのハイブリダイゼーションの際に検出され得るように、標識される。標識法は、当該分野で周知であり、３２Ｐ標識ＡＴＰのような放射性標識、ビオチン化、または酵素標識の使用が挙げられる。ハイブリダイゼーション条件は、中程度のストリンジェンシーおよび高度のストリンジェンシーを含め、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，前出において提供される。
【０２５８】
このようなライブラリースクリーニング法において同定される配列は、公のデータベース（例えば、ＧｅｎＢａｎｋまたは他の私的な配列データベース）において寄託され、入手可能な他の公知の配列に対して比較および整列され得る。分子の規定される領域内または全長の配列にわたる配列同一性（アミノ酸レベルまたはヌクレオチドレベルのいずれかで）は、当該分野で公知のかつ本明細書中に記載される方法を用いて決定され得る。
【０２５９】
タンパク質コード配列を有する核酸は、初めて、前駆体およびｃＤＮＡに逆転写されていないかもしれないｍＲＮＡのプロセシング中間体を検出するために、選択されたｃＤＮＡまたはゲノムライブラリーを本明細書中で開示される推定アミノ酸配列を用いて、そして必要に応じて、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，前出に記載される従来のプライマー伸長手順を用いて、スクリーニングすることによって得られ得る。
【０２６０】
２．宿主細胞の選択および形質転換
宿主細胞は、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド生成のための本明細書中に記載される発現ベクターもしくはクローニングベクターでトランスフェクトもしくは形質転換され、そしてプロモーターを誘導するため、形質転換体を選択するため、または望ましい配列をコードする遺伝子を増幅するために、適切な場合に改変される従来の栄養培地中で培養される。この培養条件（例えば、培地、温度、ｐＨなど）は、過度な実験なくして、当業者によって選択され得る。一般に、細胞培養物の生成を最大限にするための原理、プロトコル、実施技術は、Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｍ．Ｂｕｔｌｅｒ編，（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，１９９１）およびＳａｍｂｒｏｏｋら，前出において見いだされ得る。
【０２６１】
真核生物細胞トランスフェクションおよび原核生物細胞形質転換の方法は、当業者に公知である（例えば、ＣａＣｌ２、ＣａＰＯ４、リポソーム媒介性およびエレクトロポレーション）。使用される宿主細胞に依存して、形質転換は、このような細胞に適切な標準的な技術を用いて実施される。Ｓａｍｂｒｏｏｋら，前出に記載される塩化カルシウムを使用するカルシウム処理、またはエレクトロポレーションは、一般に、原核生物細胞について使用される。Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓでの感染は、Ｓｈａｗら，Ｇｅｎｅ，２３：３１５（１９８３）およびＷＯ  ８９／０５８５９（１９８９年６月２９日公開）によって記載されるように、特定の植物細胞の形質転換のために使用される。このような細胞壁がない哺乳動物細胞については、Ｇｒａｈａｍおよびｖａｎ  ｄｅｒ  Ｅｂ，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，５２：４５６−４５７（１９７８）のリン酸カルシウム沈殿法が、使用され得る。哺乳動物宿主細胞系トランスフェクションの一般的な局面は、米国特許第４，３９９，２１６号において記載された。酵母への形質転換は、代表的には、Ｖａｎ  Ｓｏｌｉｎｇｅｎら，Ｊ．Ｂａｃｔ．，１３０：９４６（１９７７）およびＨｓｉａｏら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ），７６：３８２９（１９７９）の方法に従って行われる。しかし、ＤＮＡを細胞に導入するための（例えば、核マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、インタクトな細胞との細菌プロトプラスト融合、またはポリカチオン（例えば、ポリブレン、ポリオルニチンによる）他の方法はまた、使用され得る。哺乳動物細胞を形質転換するための種々の方法について、Ｋｅｏｗｎら，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１８５：５２７−５３７（１９９０）およびＭａｎｓｏｕｒら，Ｎａｔｕｒｅ，３３６：３４８−３５２（１９８８）を参照のこと。
【０２６２】
本明細書中のベクターにおいてＤＮＡをクローニングまたは発現するために適した宿主細胞は、原核生物細胞、酵母、または高等真核生物細胞を含む。適切な原核生物細胞としては、真性細菌（例えば、グラム陰性生物もしくはグラム陽性生物、例えば、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ））が挙げられるが、これらに限定されない。種々のＥ．  ｃｏｌｉ株が、公に入手可能である。例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｋ１２株ＭＭ２９４（ＡＴＣＣ  ３１，４４６）；Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｘ１７７６（ＡＴＣＣ  ３１，５３７）；Ｅ．ｃｏｌｉ株Ｗ３１１０（ＡＴＣＣ  ２７，３２５）およびＫ５  ７７２（ＡＴＣＣ  ５３，６３５）。他の適切な原核生物宿主細胞としては、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ（例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｅｒｗｉｎｉａ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ（例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、Ｓｅｒｒａｔｉａ（例えば、Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ）、およびＳｈｉｇｅｌｌａ、ならびにＢａｃｉｌｌｉ（例えば、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓおよびＢ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ（例えば、ＤＤ  ２６６，７１０（１９８９年４月１２日公開）に開示されるＢ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ  ４１Ｐ）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ（例えば、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、およびＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓが挙げられる。これらの例は、限定ではなくむしろ例示である。株Ｗ３１１０は、特に好ましい宿主または親宿主である。なぜなら、これは、組換えＤＮＡ生成物の発酵にとって一般的な宿主株であるからである。好ましくは、宿主細胞は、最小量のタンパク質分解酵素を分泌する。例えば、株Ｗ３１１０は、宿主に対して内因性のタンパク質をコードする遺伝子における遺伝的変異をもたらすように改変され得る。このような宿主の例としては、完全遺伝子型ｔｏｎＡを有するＥ．ｃｏｌｉ  Ｗ３１１０株１Ａ２；完全遺伝子型ｔｏｎＡ  ｐｔｒ３を有するＥ．ｃｏｌｉ  Ｗ３１１０株９Ｅ４；完全遺伝子型ｔｏｎＡ  ｐｔｒ３  ｐｈｏＡ  Ｅ１５（ａｒｇＦ−ｌａｃ）１６９  ｄｅｇＰ  ｏｍｐＴ  ｋａｎｒを有するＥ．ｃｏｌｉ  Ｗ３１１０株２７Ｃ７（ＡＴＣＣ  ５５，２４４）；完全遺伝子型ｔｏｎＡ  ｐｔｒ３  ｐｈｏＡ  Ｅ１５  （ａｒｇＦ−ｌａｃ）１６９  ｄｅｇＰ  ｏｍｐＴ  ｒｂｓ７  ｉｌｖＧ  ｋａｎｒを有するＥ．ｃｏｌｉ  Ｗ３１１０株３７Ｄ６；非カナマイシン耐性ｄｅｇＰ欠失変異を有する株３７Ｄ６であるＥ．ｃｏｌｉ  Ｗ３１１０株４０Ｂ４；および米国特許第４，９４６，７８３号（１９９０年８月７日発行）に開示される変異周辺細胞質プロテアーゼを有するＥ．ｃｏｌｉ株が挙げられる。あるいは、クローニングのインビトロ方法、例えば、ＰＣＲもしくは他の核酸ポリメラーゼ反応が、適している。
【０２６３】
原核生物に加えて、真核微生物（例えば、糸状菌または酵母）が、ＰＲＯ２５６コードベクター、ＰＲＯ３４４２１コードベクター、ＰＲＯ３３４コードベクター、ＰＲＯ７７０コードベクター、ＰＲＯ９８３コードベクター、ＰＲＯ１００９コードベクター、ＰＲＯ１１０７コードベクター、ＰＲＯ１１５８コードベクター、ＰＲＯ１２５０コードベクター、ＰＲＯ１３１７コードベクター、ＰＲＯ４３３４コードベクター、ＰＲＯ４３９５コードベクター、ＰＲＯ４９１９２コードベクター、ＰＲＯ９７９９コードベクター、ＰＲＯ２１１７５コードベクター、ＰＲＯ１９８３７コードベクター、ＰＲＯ２１３３１コードベクター、ＰＲＯ２３９４９コードベクター、ＰＲＯ６９７コードベクターもしくはＰＲＯ１４８０コードベクターに適したクローニング宿主または発現宿主である。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅは、一般に使用される下等真核生物宿主微生物である。他のものとしては、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ（Ｂｅａｃｈ  ａｎｄ  Ｎｕｒｓｅ，Ｎａｔｕｒｅ，２９０：１４０［１９８１］；ＥＰ  １３９，３８３（１９８５年５月２日公開））；Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ宿主（米国特許第４，９４３，５２９号；Ｆｌｅｅｒら，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９：９６８−９７５（１９９１））（例えば、例えば、Ｋ．ｌａｃｔｉｓ（ＭＷ９８−８Ｃ、ＣＢＳ６８３、ＣＢＳ４５７４；Ｌｏｕｖｅｎｃｏｕｒｔら，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１５４（２）：７３７−７４２［１９８３］）、Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ（ＡＴＣＣ  １２，４２４）、Ｋ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ（ＡＴＣＣ  １６，０４５）、Ｋ．ｗｉｃｋｅｒａｍｉｉ（ＡＴＣＣ  ２４，１７８）、Ｋ．ｗａｌｔｉｉ（ＡＴＣＣ  ５６，５００）、Ｋ．ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｒｕｍ（ＡＴＣＣ  ３６，９０６；Ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｅｒｇら，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，８：１３５（１９９０））、Ｋ．ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓおよびＫ．ｍａｒｘｉａｎｕｓ；ｙａｒｒｏｗｉａ（ＥＰ  ４０２，２２６））；Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ（ＥＰ  １８３，０７０；Ｓｒｅｅｋｒｉｓｈｎａら，Ｊ．Ｂａｓｉｃ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，２８：２６５−２７８［１９８８］）；Ｃａｎｄｉｄａ；Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｉａ（ＥＰ  ２４４，２３４）；Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ（Ｃａｓｅら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７６：５２５９−５２６３［１９７９］）；Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ（例えば、Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ  ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ（ＥＰ  ３９４，５３８（１９９０年１０月３１日公開））；ならびに糸状菌（例えば、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ、Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ（ＷＯ  ９１／００３５７（１９９１年１月１０日公開）、およびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ宿主（例えば、Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓ（Ｂａｌｌａｎｃｅら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１１２：２８４−２８９［１９８３］；Ｔｉｌｂｕｒｎら，Ｇｅｎｅ，２６：２０５−２２１［１９８３］；Ｙｅｌｔｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：１４７０−���４７４［１９８４］）およびＡ．ｎｉｇｅｒ（Ｋｅｌｌｙ  ａｎｄ  Ｈｙｎｅｓ，ＥＭＢＯ  Ｊ．，４：４７５−４７９［１９８５］））が挙げられる。メチル栄養性（ｍｅｔｈｙｌｏｔｒｏｐｉｃ）酵母が、本明細書中では適切であり、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｋｌｏｅｃｋｅｒａ、Ｐｉｃｈｉａ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ、およびＲｈｏｄｏｔｏｒｕｌａからなる属より選択される、メタノールで増殖できる酵母が挙げられるが、これらに限定されない。このクラスの酵母の例示である特定の種のリストは、Ｃ．Ａｎｔｈｏｎｙ，Ｔｈｅ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｍｅｔｈｙｌｏｔｒｏｐｈｓ，２６９（１９８２）において見いだされ得る。
【０２６４】
グリコシル化ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの発現に適した宿主細胞は、多細胞生物から得られ得る。無脊椎動物細胞の例としては、昆虫細胞（例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  Ｓ２およびＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ  Ｓｆ９）ならびに植物細胞が挙げられる。有用な哺乳動物宿主細胞株の例としては、有用な哺乳動物宿主細胞株の例としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞およびＣＯＳ細胞が挙げられる。より具体的な例としては、ＳＶ４０により形質転換したサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）；ヒト胚性腎臓株（２９３細胞または懸濁培養中での増殖に関してサブクローニングした２９３細胞、Ｇｒａｈａｍら，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．，３６：５９  （１９７７））；チャイニーズハムスター卵巣細胞／−ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６  （１９８０））；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．，２３：２４３−２５１（１９８０））；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７５）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２、ＨＢ  ８０６５）；およびマウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５１）が挙げられる。適切な宿主細胞の選択は、当該分野の技術班以内であるとみなされる。
【０２６５】
３．複製ベクターの選択および使用
ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする核酸（例えば、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ）は、クローニング（ＤＮＡの増幅）または発現のための複製ベクターに挿入され得る。種々のベクターは、公に入手可能である。そのベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルス粒子、またはファージの形態であり得る。適切な核酸配列は、種々の手順によってベクターに挿入され得る。一般に、ＤＮＡは、適切な制限エンドヌクレアーゼ部位に、当該分野で公知の技術を用いて挿入され得る。ベクター成分は、一般に、シグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、および転写終結配列のうちの１つ以上を含むが、これらに限定されない。これらの成分のうちの１つ以上を含む適切なベクターの構築は、当業者に公知の標準的ライゲーション技術を用いる。
【０２６６】
このＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドは、直接的に組換え生成され得るだけではなく、異種ポリペプチドとの融合ポリペプチドとしても生成され得る。この異種ポリペプチドは、シグナル配列または成熟タンパク質もしくはポリペプチドのＮ末端における特定の切断部位を有する他のポリペプチドであり得る。一般に、このシグナル配列は、ベクターの成分であってもよいし、ベクターに挿入される、ＰＲＯ２５６コードＤＮＡ、ＰＲＯ３４４２１コードＤＮＡ、ＰＲＯ３３４コードＤＮＡ、ＰＲＯ７７０コードＤＮＡ、ＰＲＯ９８３コードＤＮＡ、ＰＲＯ１００９コードＤＮＡ、ＰＲＯ１１０７コードＤＮＡ、ＰＲＯ１１５８コードＤＮＡ、ＰＲＯ１２５０コードＤＮＡ、ＰＲＯ１３１７コードＤＮＡ、ＰＲＯ４３３４コードＤＮＡ、ＰＲＯ４３９５コードＤＮＡ、ＰＲＯ４９１９２コードＤＮＡ、ＰＲＯ９７９９コードＤＮＡ、ＰＲＯ２１１７５コードＤＮＡ、ＰＲＯ１９８３７コードＤＮＡ、ＰＲＯ２１３３１コードＤＮＡ、ＰＲＯ２３９４９コードＤＮＡ、ＰＲＯ６９７コードＤＮＡ、もしくはＰＲＯ１４８０コードＤＮＡの一部であってもよい。そのシグナル配列は、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、ｌｐｐ、または熱安定性腸毒素ＩＩリーダーの群から選択される原核生物シグナル配列であり得る。酵母分泌に関しては、このシグナル配列は、例えば、酵母インベルターゼリーダー、α因子リーダー（ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓおよびＫｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓα因子リーダー、米国特許第５，０１０，１８２号に記載されるリーダー）、または酸性ホスファターゼリーダー、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓグルコアミラーゼリーダー（ＥＰ  ３６２，１７９（１９９０年４月４日公開））、またはＷＯ  ９０／１３６４６（公開１９９０年１１月１５日）に記載されるシグナルであり得る。哺乳動物細胞発現において、哺乳動物シグナル配列は、タンパク質の分泌（例えば、同じ種もしくは関連種の分泌型ポリペプチドからのシグナル配列、ならびにウイルス分泌リーダー）を指向するために使用され得る。
【０２６７】
発現ベクターおよびクローニングベクターはともに、そのベクターが１種異常の選択された宿主細胞において複製することができる核酸配列を含む。このような配列は、種々の細菌、酵母、およびウイルスについて周知である。プラスミドｐＢＲ３２２からの複製起点は、大部分のグラム陰性細菌に適しており、２μプラスミド起点は、酵母に適しており、種々のウイルス起点（ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、ＶＳＶもしくはＢＰＶ）は、哺乳動物におけるクローニングベクターに有用である。
【０２６８】
発現ベクターおよびクローニングベクターは、代表的には、選択遺伝子（選択マーカーともいわれる）を含む。代表的な選択遺伝子は、（ａ）抗生物質もしくは他の毒素（例えば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサート、もしくはテトラサイクリン）に対する耐性を付与するタンパク質、（ｂ）栄養要求性欠損を補完するタンパク質、または（ｃ）複雑な培地から利用できない重要な栄養を供給するタンパク質をコードする（例えば、Ｂａｃｉｌｌｉに関してはＤ−アラニンラセミ体をコードする遺伝子）。
【０２６９】
哺乳動物宿主細胞に適した選択マーカーの例は、ＰＲＯ２５６コード核酸、ＰＲＯ３４４２１コード核酸、ＰＲＯ３３４コード核酸、ＰＲＯ７７０コード核酸、ＰＲＯ９８３コード核酸、ＰＲＯ１００９コード核酸、ＰＲＯ１１０７コード核酸、ＰＲＯ１１５８コード核酸、ＰＲＯ１２５０コード核酸、ＰＲＯ１３１７コード核酸、ＰＲＯ４３３４コード核酸、ＰＲＯ４３９５コード核酸、ＰＲＯ４９１９２コード核酸、ＰＲＯ９７９９コード核酸、ＰＲＯ２１１７５コード核酸、ＰＲＯ１９８３７コード核酸、ＰＲＯ２１３３１コード核酸、ＰＲＯ２３９４９コード核酸、ＰＲＯ６９７コード核酸、もしくはＰＲＯ１４８０コード核酸を取り込む能力のある細胞の同定を可能にするもの（例えば、ＤＨＦＲもしくはチミジンキナーゼ）である。野生型ＤＨＦＲが使用される場合に適切な宿主細胞は、Ｕｒｌａｕｂら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６（１９８０）によって記載されるような、調製され増殖されたＤＨＦＲ活性を欠損したＣＨＯ細胞株である。酵母における使用に適した選択遺伝子は、酵母プラスミドＹＲｐ７に存在するｔｒｐ１遺伝子である［Ｓｔｉｎｃｈｃｏｍｂら，Ｎａｔｕｒｅ，２８２：３９（１９７９）；Ｋｉｎｇｓｍａｎら，Ｇｅｎｅ，７：１４１（１９７９）；Ｔｓｃｈｅｍｐｅｒら，Ｇｅｎｅ，１０：１５７（１９８０）］。このｔｒｐ１遺伝子は、トリプトファン中で増殖できる能力を欠いている酵母の変異株（例えば、ＡＴＣＣ番号４４０７６もしくはＰＥＰ４−１［Ｊｏｎｅｓ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，８５：１２（１９７７）］）についての選択マーカーを抵抗する。
【０２７０】
発現ベクターおよびクローニングベクターは、通常、ｍＲＮＡ合成を指向するために、ＰＲＯ２５６コード核酸配列、ＰＲＯ３４４２１コード核酸配列、ＰＲＯ３３４コード核酸配列、ＰＲＯ７７０コード核酸配列、ＰＲＯ９８３コード核酸配列、ＰＲＯ１００９コード核酸配列、ＰＲＯ１１０７コード核酸配列、ＰＲＯ１１５８コード核酸配列、ＰＲＯ１２５０コード核酸配列、ＰＲＯ１３１７コード核酸配列、ＰＲＯ４３３４コード核酸配列、ＰＲＯ４３９５コード核酸配列、ＰＲＯ４９１９２コード核酸配列、ＰＲＯ９７９９コード核酸配列、ＰＲＯ２１１７５コード核酸配列、ＰＲＯ１９８３７コード核酸配列、ＰＲＯ２１３３１コード核酸配列、ＰＲＯ２３９４９コード核酸配列、ＰＲＯ６９７コード核酸配列もしくはＰＲＯ１４８０コード核酸配列に作動可能に連結されるプロモーターを含む。種々の潜在的な宿主細胞によって認識されるプロモーターは、周知である。原核生物宿主とともに使用するために適したプロモーターとしては、β−ラクタマーゼプロモーター系およびラクトースプロモーター系［Ｃｈａｎｇら，Ｎａｔｕｒｅ，２７５：６１５（１９７８）；Ｇｏｅｄｄｅｌら，Ｎａｔｕｒｅ，２８１：５４４（１９７９）］、アルカリホスファターゼ、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系［Ｇｏｅｄｄｅｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，８：４０５７（１９８０）；ＥＰ  ３６，７７６］、およびハイブリッドプロモーター（例えば、ｔａｃプロモーター［ｄｅＢｏｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８０：２１−２５（１９８３）］が挙げられる。細菌系における使用のためのプロモーターはまた、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードするＤＮＡに作動可能に連結されたシャイン・ダルガルノ（Ｓ．Ｄ．）配列を含む。
【０２７１】
酵母宿主とともに使用するために適したプロモーター配列の例としては、３−ホスホグリセレートキナーゼ［Ｈｉｔｚｅｍａｎら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５５：２０７３（１９８０）］または他の解糖酵素［Ｈｅｓｓら，Ｊ．Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇ．，７：１４９（１９６８）；Ｈｏｌｌａｎｄ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１７：４９００（１９７８）］（例えば、エノラーゼ、グリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピルベートデカルボキシラーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、グルコース−６−ホスフェートイソメラーゼ、３−ホスホグリセレートムターゼ、ピルベートキナーゼ、トリオースホスフェートイソメラーゼ、ホスホグルコースイソメラーゼ、およびグルコキナーゼ）についてのプロモーターが挙げられる。
【０２７２】
他の酵母プロモーターは、増殖条件によって制御された転写のさらなる利点を有するプロモーターを含み、これらプロモーターは、アルコールデヒドロゲナーゼ２、イソシトクロームＣ、酸性ホスファターゼ、窒素代謝と関連する分解酵素、メタロチオネイン、グリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼ、ならびにマルトースおよびガラクトース利用を担う酵素についてのプロモーター領域である。酵母での発現における使用に適切なベクターおよびプロモーターは、ＥＰ  ７３，６５７においてさらに記載される。
【０２７３】
哺乳動物宿主細胞におけるベクターからのＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の転写は、このようなプロモーターが宿主細胞形と適合性であれば、例えば、ウイルス（例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス（ＵＫ  ２，２１１，５０４（１９８９年７月５日公開）、アデノウイルス（例えば、アデノウイルス２）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルスおよびシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）のゲノムから得られるプロモーターによって、異種の哺乳動物プロモーター（例えば、アクチンプロモーターまたは免疫グロブリンプロモーター）から、および熱ショックプロモーターから制御される。
【０２７４】
高等真核生物によるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードするＤＮＡの転写は、エンハンサー配列をベクターに挿入することによって増大され得る。エンハンサーは、その転写を増大するようにプロモーターに対して作用する、通常約１０〜３００ｂｐのＤＮＡのシス作用性エレメントである。多くのエンハンサー配列は、哺乳動物遺伝子由来であることが知られている（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α−フェトプロテイン、およびインスリン）。しかし、代表的には、真核生物細胞のウイルスからのエンハンサーが使用される。例としては、複製起点の後期に対するＳＶ４０エンハンサー（ｂｐ１００〜２７０）、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期に対するポリオーマエンハンサー、およびアデノウイルスエンハンサーが挙げられる。このエンハンサーは、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のコード配列に対して５’側または３’側にある位置でベクターにスプライスされ得るが、好ましくは、プロモーターから５’側にある部位に位置する。
【０２７５】
真核生物宿主細胞（酵母細胞、真菌細胞、昆虫細胞、植物細胞、動物細胞、ヒト細胞または他の多細胞生物からの有核細胞）はまた、転写の終結のために、およびｍＲＮＡを安定化するために必須の配列を含む。このような配列は、真核生物ＤＮＡもしくはウイルスＤＮＡもしくはｃＤＮＡの５’領域、および場合によって３’領域、非翻訳領域から一般に利用可能である。これらの領域は、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードするｍＲＮＡの非翻訳部分においてポリアデニル化フラグメントとして転写されるヌクレオチドセグメントを含む。
【０２７６】
組換え脊椎動物細胞培養物におけるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの合成に適合させるために適したなお他の方法、ベクター、および宿主細胞は、Ｇｅｔｈｉｎｇら，Ｎａｔｕｒｅ，２９３：６２０−６２５（１９８１）；Ｍａｎｔｅｉら，Ｎａｔｕｒｅ，２８１：４０−４６（１９７９）；ＥＰ  １１７，０６０；およびＥＰ  １１７，０５８に記載される。
【０２７７】
４．遺伝子増幅／発現の検出
遺伝子増幅および／または発現は、例えば、従来のサザンブロッティング、ｍＲＮＡの転写を定量するノーザンブロッティング［Ｔｈｏｍａｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：５２０１−５２０５（１９８０）］、ドットブロッティング（ＤＮＡ分析）、またはインサイチュハイブリダイゼーションによって、適切に標識されたプローブを用いて、本明細書中に提供される配列に基づいて、サンプル中で直接測定され得る。あるいは、ＤＮＡ二本鎖、ＲＮＡ二本鎖、およびＤＮＡ−ＲＮＡハブリッド二本鎖またはＤＮＡ−タンパク質二本鎖を含む、特定の二本鎖を認識し得る抗体が、使用され得る。次に、抗体は標識され得、表面で二本鎖を形成した際に、二本鎖に結合した抗体の存在は、検出され得るように、二本鎖が表面に結合されるアッセイが、行われ得る。
【０２７８】
あるいは、遺伝子発現は、遺伝子産物の発現を直接定量するために、免疫学的方法（例えば、細胞または組織切片の免疫組織化学染色および細胞培養物または体液のアッセイによって測定され得る。免疫組織化学的染色および／またはサンプル流体のアッセイに有用な抗体は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体のいずれかであってもよいし、任意の哺乳動物において調製されてもよい。都合よいことに、この抗体は、ネイティブ配列のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドに対してかまたは本明細書中に提供されるＤＮＡ配列に基づく合成ペプチドに対してまたはＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のＤＮＡおよび特定の抗体エピトープをコードするＤＮＡに対して融合される外因性配列に対して調製され得る。
【０２７９】
５．ポリペプチドの精製
ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの形態は、細胞培養物からまたは宿主細胞溶解物から回収され得る。膜結合されている場合、このポリペプチドは、適切な界面活性剤溶液（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ  １００）を用いてまたは酵素による切断によって、その膜から遊離され得る。ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの発現において使用される細胞は、種々の物理的手段または化学的手段（例えば、凍結融解サイクル、超音波処理、機械的破壊、または細胞溶解剤）によって破壊され得る。
【０２８０】
組換え細胞タンパク質またはポリペプチドからＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドを精製することが望ましいことであり得る。以下の手順は、適切な精製手順の例示である：イオン交換カラムでの分画；エタノール沈澱；逆相ＨＰＬＣ；シリカゲルもしくはカチオン交換樹脂（例えば、ＤＥＡＥ）でのクロマトグラフィー；等電点電気泳動；ＳＤＳ−ＰＡＧＥ；硫酸アンモニウム沈澱；例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−７５を使用するゲル濾過；ＩｇＧのような夾雑物を除去するためのプロテインＡ  セファロースカラム；およびＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドのエピトープタグ化形態を結合するための金属キレート化カラムによる。タンパク質精製の種々の方法が使用され得、このような方法は、当該分野で公知であり、例えば、Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１８２（１９９０）；Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８２）に記載される。選択される精製工程は、例えば、使用される生成プロセスの性質および生成される特定のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドに依存する。
【０２８１】
Ｅ．ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの使用
ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（またはそれらの相補体）は、分子生物学の分野における種々の適用（ハイブリダイゼーションプローブとしての使用、染色体および遺伝子マッピングにおける使用、ならびにアンチセンスＲＮＡおよびアンチセンスＤＮＡの生成における使用を含む）を有する。ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の核酸はまた、本明細書中に記載される組換え技術によって、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの調製に有用である。
【０２８２】
全長のネイティブ配列のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の遺伝子、またはその一部分は、全長のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のｃＤＮＡを単離するために、または本明細書中で開示されるネイティブのＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の配列に対して望ましい配列同一性を有するなお他のｃＤＮＡ（例えば、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの天然に存在する改変体もしくは他の種からのＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードするもの）を単離するために、ｃＤＮＡライブラリーに対するハイブリダイゼーションプローブとして使用され得る。必要に応じて、プローブの長さは、約２０〜約５０塩基である。ハイブリダイゼーションプローブは、全長のネイティブヌクレオチド配列のすくなくとも部分的に新規な領域から得られ得る。ここでこれらの領域は、過度の実験なくして、またはゲノム配列（ネイティブ配列のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のプロモーター、エンハンサー、エレメントおよびイントロンを含む）から決定され得る。例示によって、スクリーニング方法は、約４０塩基の選択されたプローブを合成するために、既知のＤＮＡ配列を用いて、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の遺伝子のコード領域を単離する工程を包含する。ハイブリダイゼーションプローブは、３２Ｐもしくは３５Ｓのような放射性ヌクレオチド、またはアビジン／ビオチン結合系を介してプローブに結合されるアルカリホスファターゼのような酵素標識を含む種々の標識によって、標識され得る。本発明のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の遺伝子の配列に相補的な配列を有する標識プローブは、ヒトｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡもしくはｍＲＮＡのライブラリーをスクリーニングして、このようなライブラリーのそのメンバーがプローブにハイブリダイズするか否かを決定するために使用され得る。ハイブリダイゼーション技術は、以下の実施レセプター得においてさらに詳細に記載される。
【０２８３】
本願で開示される任意のＥＳＴ配列は、本明細書中で開示される方法を用いて、プローブとして同様に使用され得る。
【０２８４】
ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の核酸の他の有用なフラグメントは、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のｍＲＮＡ（センス）配列もしくはＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のＤＮＡ（アンチセンス）配列を標的化するために結合し得る一本鎖核酸配列（ＲＮＡもしくはＤＮＡのいずれか）を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはセンスオリゴヌクレオチドを包含する。アンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはセンスオリゴヌクレオチドは、本発明に従って、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のＤＮＡのコード領域のフラグメントを包含する。このようなフラグメントは、一般に、すくなくとも約１４ヌクレオチド、好ましくは、約１４〜３０ヌクレオチドを含む。所定のタンパク質をコードするｃＤＮＡ配列に基づいて、アンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはセンスオリゴヌクレオチドを誘導する能力は、例えば、Ｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｏｈｅｎ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４８：２６５９，１９８８）およびｖａｎ  ｄｅｒ  Ｋｒｏｌら（ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ６：９５８，１９８８）に記載される。
【０２８５】
標的核酸配列へのアンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはセンスオリゴヌクレオチドの結合は、いくつかの手段（二本鎖の増強された分解、転写もしくは翻訳の早すぎる終結を含む）のうちの１つによって、または他の手段によって、標的配列の転写または翻訳をブロックする二本鎖の形成を生じる。このアンチセンスオリゴヌクレオチドは、従って、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の発現をブロックするために使用され得る。アンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはセンスオリゴヌクレオチドは、改変糖−ホスホジエステル骨格（または他の糖連結（例えば、ＷＯ  ９１／０６６２９に記載されるもの））を有するオリゴヌクレオチドをさらに包含し、ここでこのような糖連結は、内因性ヌクレアーゼに対して耐性である。耐性の糖連結を有するこのようなオリゴヌクレオチドは、インビボで安定である（すなわち、酵素分解に対して耐性であり得る）が、ヌクレオチド配列を標的化するために結合し得るように配列特異性を保持する。
【０２８６】
センスオリゴヌクレオチドもしくはアンチセンスオリゴヌクレオチドの他の例は、有機分子（ＷＯ  ９０／１００４８において記載されるもののような有機分子）、および標的核酸配列に対するオリゴヌクレオチドの親和性を増大させる他の部分（例えば、ポリ−（Ｌ−リジン））に共有結合されるオリゴヌクレオチドを包含する。さらになお、インターカレート剤（例えば、エリプチシン）、およびアルキル化剤または金属錯体は、その標的ヌクレオチド配列に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはセンスオリゴヌクレオチドの結合特異性を改変するために、センスオリゴヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドに付着され得る。
【０２８７】
アンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはセンスオリゴヌクレオチドは、任意の遺伝子移入方法（例えば、ＣａＰＯ４媒介性ＤＮＡトランスフェクション、エレクトロポレーションが挙げられる）によって、またはエプスタイン−バーウイルスのような遺伝子移入ベクターを使用することによって、標的核酸配列を含む細胞に導入され得る。好ましい手順において、アンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはセンスオリゴヌクレオチドは、適切なレトロウイルスベクターに挿入される。標的核酸配列を含む細胞は、組換えレトロウイルスベクターと、インビボまたはエキソビボのいずれかで接触させられる。適切なレトロウイルスベクターとしては、マウスレトロウイルスＭ−ＭｕＬＶ、Ｎ２（Ｍ−ＭｕＬＶ由来のレトロウイルス）、またはＤＣＴ５Ａ、ＤＣＴ５ＢおよびＤＣＴ５Ｃと名付けられた二重コピーベクター（ｄｏｕｂｌｅ  ｃｏｐｙ  ｖｅｃｔｏｒ）（ＷＯ  ９０／１３６４１を参照のこと）に由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２８８】
センスオリゴヌクレオチドもしくはアンチセンスオリゴヌクレオチドはまた、ＷＯ  ９１／０４７５３に記載されるように、リガンド結合分子との結合体の形成によって、標的ヌクレオチド配列を含む細胞に導入され得る。適切なリガンド結合分子としては、細胞表面レセプター、増殖因子、他のサイトカイン、もしくは細胞表面レセプターに結合する他のリガンドが挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、リガンド結合分子の結合体化は、リガンド結合分子がその対応する分子もしくはレセプターに結合する能力を実質的に妨害もせず、センスオリゴヌクレオチドもしくはアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその結合体化したバージョンの細胞への浸入をブロックもしない。
【０２８９】
あるいは、センスオリゴヌクレオチドもしくはアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＷＯ  ９０／１０４４８において記載されるように、オリゴヌクレオチド−脂質複合体の形成によって標的核酸配列を含む細胞に導入され得る。センスオリゴヌクレオチドもしくはアンチセンスオリゴヌクレオチド−脂質複合体は、好ましくは、内因性リパーゼによって細胞内で解離される。
【０２９０】
アンチセンスもしくはアンチセンスのＲＮＡもしくはＤＮＡ分子は、一般に、少なくとも約５塩基長、約１０塩基長、約１５塩基長、約２０塩基長、約２５塩基長、約３０塩基長、約３５塩基長、約４０塩基長、約４５塩基長、約５０塩基長、約５５塩基長、約６０塩基長、約６５塩基長、約７０塩基長、約７５塩基長、約８０塩基長、約８５塩基長、約９０塩基長、約９５塩基長、約１００塩基長、もしくはそれ以上である。
【０２９１】
プローブはまた、密に関連したＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のコード配列の同定のための配列のプールを生成するために、ＰＣＲ技術において使用され得る。
【０２９２】
ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列はまた、そのＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする遺伝子をマッピングするために、および遺伝的障害を有する個体の遺伝子分析のために、ハイブリダイゼーションプローブを構築するために使用され得る。本明細書中で提供されるヌクレオチド配列は、公知の技術（例えば、インサイチュハイブリダイゼーション、公知の染色体マーカーに対する連鎖分析、およびライブラリーでのハイブリダイゼーションスクリーニング）を使用して、染色体もしくは染色体の特定の領域にマッピングされ得る。
【０２９３】
ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０についてのコード配列が別のタンパク質（例えば、ここでＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０はレセプターである）に結合するタンパク質をコードする場合、このＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドは、他のタンパク質または結合相互作用に関与する分子を同定するためにアッセイにおいて使用され得る。このような方法によって、レセプター／リガンド結合相互作用のインヒビターが、同定され得る。このような結合相互作用に関与するタンパク質はまた、結合相互作用のペプチドもしくは低分子インヒビターもしくはアゴニストについてスクリーニングするために使用され得る。また、このレセプターであるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０は、相関的リガンドを単離するために使用され得る。スクリーニングアッセイは、ネイティブのＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドまたはＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドについてのレセプターの生物学的活性を模倣するリード化合物を見いだすために設計され得る。このようなスクリーニングアッセイは、化学ライブラリーのハイスループットスクリーニングに供しやすいアッセイを包含し、このことは、このアッセイを、低分子薬物候補を同定するために特に適切にする。企図される低分子は、合成の有機化合物もしくは無機化合物を包含する。このアッセイは、当該分野で十分に特徴づけられている種々の形式（タンパク質−タンパク質結合アッセイ、生化学的スクリーニングアッセイ、イムノアッセイおよび細胞ベースのアッセイが挙げられる）において実施され得る。
【０２９４】
ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドもしくはその改変形態をコードする核酸はまた、トランスジェニック動物もしくは「ノックアウト」動物いずれかを生成するために使用され得、これらの動物は、次に、治療的に結う湯女試薬の開発およびスクリーニングにおいて有用である。トランスジェニック動物（例えば、マウスもしくはラット）は、導入遺伝子を含む細胞を有する動物である。この導入遺伝子は、動物に、または出生前に、例えば、胚段階で、動物の先祖に導入される。導入遺伝子は、細胞（この細胞からトランスジェニック動物が発生する）のゲノムに組み込まれるＤＮＡである。本発明は、確立された技術およびゲノム配列（これは、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードするＤＮＡを発現する細胞を含むトランスジェニック動物を発生するために使用される）に従って、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードするゲノムＤＮＡをクローニングするために使用され得る、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードするｃＤＮＡを提供する。当該分野で公知の任意の技術は、標的遺伝子である導入遺伝子を動物に導入して、トランスジェニック動物の創始系統を作り出すために使用され得る。このような技術としては、前核マイクロインジェクション（米国特許第４，８７３，１９１号、同第４，７３６，８６６号および同第４，８７０，００９号）；生殖系列へのレトロウイルス媒介性遺伝子移入（Ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｐｕｔｔｅｎ，ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８２：６１４８−６１５２（１９８５））；胚性幹細胞における遺伝子標的化（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，ら，Ｃｅｌｌ，５６：３１３−３２１（１９８９））；遺伝子トラップベクターを使用する非特異的挿入不活性化（米国特許第６，４３６，７０��号）；胚のエレクトロポレーション（Ｌｏ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，３：１８０３−１８１４（１９８３））；および精子媒介性遺伝子移入（Ｌａｖｉｔｒａｎｏ，ら，Ｃｅｌｌ，５７：７１７−７２３（１９８９））；などが挙げられるが、これらに限定されない。代表的には、特定の細胞は、組織特異的エンハンサーを用いるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の導入遺伝子組み込みに対して標的化される。胚段階で動物の生殖系列に導入されたＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする導入遺伝子のコピーを含むトランスジェニック動物は、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードするＤＮＡの増大した発現の効果を試験するために使用され得る。このような動物は、例えば、その発現と関連する病原性状態からの保護を付与すると考えられる試薬について、試験動物として使用され得る。本発明のこの局面に従って、動物は、試薬で処置され、導入遺伝子を有する処置されていない動物と比較して、病的状態の減少した発生率は、病的状態についての潜在的治療的介入を示す。あるいは、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの非ヒトホモログは、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする内因性遺伝子と、動物の胚性幹細胞に導入されたＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３��７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする改変ゲノムＤＮＡとの間での相同組換えの結果として、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のタンパク質をコードする欠損遺伝子または改変遺伝子を有するＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の「ノックアウト」動物を構築するために使用され得る。好ましくは、ノックアウト動物は、哺乳動物である。より好ましくは、その哺乳動物は、ラットまたはマウスのような齧歯類である。例えば、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードするｃＤＮＡは、確立された技術に従って、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードするゲノムＤＮＡをクローニングするために使用され得る。ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードするゲノムＤＮＡの一部分は、欠失され得るかまたは別の遺伝子（例えば、組み込みをモニターするために使用され得る選択マーカーをコードする遺伝子）と置換され得る。代表的には、数キロベースの非改変隣接ＤＮＡ（５’末端および３’末端の両方において）は、ベクターに含まれる［相同組換えベクターの説明については、例えば、Ｔｈｏｍａｓ  ａｎｄ  Ｃａｐｅｃｃｈｉ，Ｃｅｌｌ，５１：５０３（１９８７）を参照のこと］。このベクターは、胚性肝細胞株および導入されたＤＮＡが、���因性ＤＮＡと相同的に組換わった細胞に（例えば、エレクトロポレーションによって）導入され、選択される［例えば、Ｌｉら，Ｃｅｌｌ，６９：９１５（１９９２）を参照のこと］。この選択された細胞は、次いで、凝集キメラを形成するために、動物（例えば、マウスもしくはラット）の胞胚に注射される［例えば、Ｂｒａｄｌｅｙ，Ｔｅｒａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａｓ  ａｎｄ  Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｅ．Ｊ．Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ，編（ＩＲＬ，Ｏｘｆｏｒｄ，１９８７），ｐｐ．１１３−１５２を参照のこと］。キメラ胚は、次いで、適切な偽妊娠雌創始動物に移植され、その胚は、生まれる時期まで過ごさせて、「ノックアウト」動物が作出される。生殖細胞において相同的に組み換えられたＤＮＡを有する子孫は、標準的な技術によって同定され得、動物（動物の全ての細胞が相同的に組み換えられたＤＮＡを含む）を繁殖させるために使用され得る。ノックアウト動物は、例えば、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする遺伝子がないことに起因する特定の病的状態に対して防御する能力について、および病的状態の発生について特徴づけられ得る。
【０２９５】
さらに、ノックアウトマウスは、遺伝子機能の発見および薬物標的に対する薬学的有用性において、および所定の標的と関連する潜在的な的を射た副作用の決定において非常に有益であり得る。遺伝子機能および生理学は、マウスとヒトとの間で十分に保存されている。なぜなら、マウスおよびヒトは、ともに哺乳動物であり、種間で非常によく保存されている、類似する遺伝子数を含むからである。例えば、マウス染色体１６上の遺伝子の９８％がヒトオルソログを有することは、最近になって十分に立証された（Ｍｕｒａｌら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９６：１６６１−７１（２００２））。
【０２９６】
胚性幹（ＥＳ）細胞において標的化されている遺伝子が、ヒト疾患と関連する多くの遺伝子においてヌル変異を有するマウスの構築を可能にしたが、全てではないが、遺伝子疾患は、ヌル変異に起因する。マウス遺伝子座を破壊する遺伝子置換（ノックイン）のための方法を確立することによって、ヒト疾患の価値あるマウスモデルが設計され得、変異を有するヒト対応物が導入され得る。その後、ヒトタンパク質を標的とするインビボでの薬物研究が行われ得る（Ｋｉｔａｍｏｔｏら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２２２：７４２−４７（１９９６））。
【０２９７】
ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする核酸はまた、遺伝子治療において使用され得る。遺伝子治療適用において、遺伝子は、例えば、欠損遺伝子の置換のための、治療上有効な遺伝子産物のインビボ合成を達成するために、細胞に導入される。「遺伝子治療」は、持続性の効果が１回の処置によって達成される従来の遺伝子治療、および治療上有効なＤＮＡもしくはｍＲＮＡの１回の投与もしくは反復投与を包含する遺伝子治療剤の投与の両方を包含する。アンチセンスＲＮＡもしくはアンチセンスＤＮＡは、インビボで特定の遺伝子の発現をブロックするために、治療剤として使用され得る。短いアンチセンスオリゴヌクレオチドが、細胞膜によるこれらの制限された取り込みにより引き起こされる低い細胞内濃度にも拘わらず、これらがインヒビターとして作用する細胞へ入れられ得ることが既に示された（Ｚａｍｅｃｎｉｋら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：４１４３−４１４６［１９８６］）。このオリゴヌクレオチドは、例えば、非荷電基によって負に荷電したホスホジエステル基を置換することによって、それらの取り込みを増給するように改変され得る。
【０２９８】
核酸を生細胞に導入するために利用可能な種々の技術が存在する。これらの技術は、核酸がインビトロで培養細胞に移入されるか、意図された宿主の細胞にインビボで移入されるかどうかに依存して、変動する。核酸を哺乳動物細胞にインビトロで移入するために適した技術は、リポソーム、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、細胞融合、ＤＥＡＥ−デキストラン、リン酸カルシウム沈殿法などの使用が挙げられる。現在好ましいインビボでの遺伝子移入技術は、ウイルス（代表的には、レトロウイルス）ベクターおよびウイルスコートタンパク質−リポソーム媒介トランスフェクションによるトランスフェクションを含む（Ｄｚａｕら，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １１，２０５−２１０［１９９３］）。いくつかの状況において、核酸供給源に標的細胞を標的化する薬剤（例えば、細胞表面膜タンパク質または標的細胞に対して特異的な抗体、標的細胞上のレセプターに対するリガンドなど）を提供することが望ましい。リポソームが使用される場合、エンドサイトーシスと関連する細胞表面膜タンパク質に結合するタンパク質は、標的化のためにおよび／または（例えば、特定の細胞型に向性のキャプシドタンパク質もしくはそのフラグメント、周期回転することにおいてインターナリゼーションを受けるタンパク質に対する抗体、細胞内位置を標的化しかつ細胞内半減期を増強するタンパク質の）取り込みを促進するために使用され得る。例えば、Ｗｕら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２，４４２９−４４３２（１９８７）；およびＷａｇｎｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７，３４１０−３４１４（１９９０）によって、レセプター媒介性エンドサイトーシスの技術が記載される。遺伝子マーキングおよび遺伝子治療プロトコルの総説については、Ａｎｄｅｒｓｏｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６，８０８−８１３（１９９２）を参照のこと。
【０２９９】
本明細書中に記載されるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドはまた、タンパク質電気泳動目的で、分子量マーカーとして使用され得る。この単離された核酸配列は、これらのマーカーを組換え的に発現するために使用され得る。
【０３００】
本明細書中に記載のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドもしくはそのフラグメントをコードする核酸分子は、染色体同定のために有用である。この点に関して、比較的少ない染色体マーキング試薬が、実際の配列データに基づいて、現在利用可能であるだけなので、新たな染色体マーカーを同定する必要性が継続している。本発明のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の核酸分子各々は、染色体マーカーとして使用され得る。
【０３０１】
本発明のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドおよび核酸分子はまた、組織型決定のために診断的に使用され得る。ここで本発明のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドは、同じ組織型の正常組織に比較して、別の、好ましくは、罹患組織において比較すると、１つの組織において差示的に発現され得る。ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の核酸分子は、ＰＣＲ、ノーザン分析、サザン分析およびウェスタン分析についてのプローブを生成するための用途が見いだされ得る。
【０３０２】
本明細書中に記載されるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドはまた、治療剤として使用され得る。本発明のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドは、薬学的に有用な組成物を調製するために公知の方法に従って処方され得る。それによってこのＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０の産物は、薬学的に受容可能なキャリアビヒクルと混合されて合わされる。治療的処方物は、所望の純度を有する活性薬剤と、任意の生理学的に受容可能なキャリア、賦形剤、または安定化剤とを混合することによって、凍結乾燥処方物または水溶液形態で、貯蔵のために調製され得る（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  第１６版，Ｏｓｏｌ，Ａ．編．（１９８０））。受容可能なキャリア、賦形剤または安定化剤は、使用される投与量および濃度においてレシピエントに対して非毒性であり、緩衝液（例えば、リン酸、クエン酸および他の有機酸）；抗酸化剤（アスコルビン酸を含む）；低分子量（約１０残基未満の）ポリペプチド；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン）；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジン）；単糖類、二糖類、および他の炭水化物（グルコース、マンノース、またはデキストリンが挙げられる）；キレート化剤（例えば、ＥＤＴＡ）；糖アルコール（例えば、マンニトールまたはソルビトール）；塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）；および／または非イオン性界面活性剤（例えば、ＴＷＥＥＮＴＭ、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭ、またはＰＥＧ）が挙げられる。
【０３０３】
インビトロ投与のために使用される処方物は、無菌でなければならない。これは、凍結乾燥および再構成前または凍結乾燥および再構成後の滅菌濾過膜を通す濾過によって容易に達成される。
【０３０４】
本明細書中の治療用組成物は、一般に、滅菌アクセスポートを有する容器（例えば、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針によって穿刺可能なストッパーを有するバイアル）に配置される。
【０３０５】
投与経路は、公知の方法（例えば、静脈内経路、腹腔内経路、脳内経路、筋肉内経路、眼内経路、動脈内経路もしくは病巣内経路による注射もしくは注入、局所投与、または徐放系による）に従う。
【０３０６】
本発明の薬学的組成物の投与量および望ましい薬物濃度は、想定される特定の使用に依存して変動し得る。適切な投与量もしくは投与経路の決定は、通常の医師の技術範囲内である。動物実験は、ヒト治療のための有効量の決定のための信頼性の高いガイダンスを提供する。有効量を種間で比率に応じて決めることは、Ｍｏｒｄｅｎｔｉ，Ｊ．ａｎｄ  Ｃｈａｐｐｅｌｌ，Ｗ．「Ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｅｓ  ｓｃａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ」Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｙａｃｏｂｉら，編，Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８９，ｐｐ．４２−９６によって規定される原理に従って行われ得る。
【０３０７】
ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドまたはそのアゴニストもしくはアンタゴニストのインビボでの投与が使用され、津状の投与量は、投与経路に依存して、哺乳動物体重で１日あたり約１０ｎｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ以上、好ましくは、約１μｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日で変動し得る。特定の投与量および送達方法に関するガイダンスは、文献中で提供される（例えば、米国特許第４，６５７，７６０号；同第５，２０６，３４４号；もしくは同第５，２２５，２１２号を参照のこと）。種々の処方物が種々の処置化合物および種々の障害に有効であり、ｔｈａｔ  ある器官もしくは組織を標的化する投与は、例えば、別の器官もしくは組織のものとは異なる様式において送達を必要とし得ることが理解される。
【０３０８】
ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの徐放投与が、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの投与を要する任意の疾患もしくは障害の処置に適した放出特徴を有する処方において望まれる場合、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの微小な被包化が、意図される。徐放のための組換えタンパク質の微小被包化は、ヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）、インターフェロン−（ｒｈＩＦＮ−  ）、インターロイキン−２、およびＭＮ  ｒｇｐ１２０で首尾よく実施された。Ｊｏｈｎｓｏｎら，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，２：７９５−７９９（１９９６）；Ｙａｓｕｄａ，Ｂｉｏｍｅｄ．Ｔｈｅｒ．，２７：１２２１−１２２３（１９９３）；Ｈｏｒａら，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，８：７５５−７５８（１９９０）；Ｃｌｅｌａｎｄ，「Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｉｎｇｌｅ  Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  Ｕｓｉｎｇ  Ｐｏｌｙｌａｃｔｉｄｅ  Ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌｉｄｅ  Ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ」，Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｐｏｗｅｌｌ  ａｎｄ  Ｎｅｗｍａｎ，編，（Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９５），ｐｐ．４３９−４６２；ＷＯ  ９７／０３６９２、ＷＯ  ９６／４００７２、ＷＯ  ９６／０７３９９；および米国特許第５，６５４，０１０号。
【０３０９】
これらのタンパク質の徐放性処方物を、その生体適合性および広範な生分解性特性に起因するポリ−乳酸−コグリコール酸（ＰＬＧＡ）ポリマーを使用して開発した。ＰＬＧＡの分解生成物である乳酸およびグリコール酸は、ヒト身体内で素早く消失し得る。さらに、このポリマーの分解性は、その分子量および組成物に依存して、数ヶ月〜数年まで調節され得る。Ｌｅｗｉｓ，「Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔｓ  ｆｒｏｍ  ｌａｃｔｉｄｅ／ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ  ｐｏｌｙｍｅｒ」，Ｍ．Ｃｈａｓｉｎ  ａｎｄ  Ｒ．Ｌａｎｇｅｒ（編），Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ａｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９０），ｐｐ．１−４１。
【０３１０】
本発明は、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドを模倣するもの（アゴニスト）を同定するかまたはＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの効果を防止するもの（アンタゴニスト）を同定するために化合物をスクリーニングする方法を包含する。ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドを模倣するアゴニストは、ネガティブ表現型が、非ヒトトランスジェニック動物（そのゲノムは、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む）での知見に基づいて観察される場合に、特に治療的に価値がある。ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの効果を妨げるアンタゴニストは、ポジティブな表現型が、非ヒトトランスジェニックノックアウト動物での観察に基づいて観察される場合に、特に治療的に価値がある。アンタゴニスト薬物候補のスクリーニングアッセイは、本明細書中において同定された遺伝子によってコードされるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドと結合するかまたは複合体を形成するか、さもなければ、そのコードされたポリペプチドと他の細胞タンパク質との相互作用を妨害する化合物を同定するために設計される。このようなスクリーニングアッセイは、化学的ライブラリーのハイスループットスクリーニングしやすいアッセイを包含する。このことは、これらのアッセイを、低分子薬物候補の同定に特に適切にする。
【０３１１】
これらアッセイは、当該分野で十分に特徴づけられた種々の形式（タンパク質−タンパク質結合アッセイ、生化学的スクリーニングアッセイ、イムノアッセイ、および細胞ベースのアッセイが挙げられる）において行われ得る。
【０３１２】
アンタゴニストに関する全てのアッセイは、アッセイが、その薬物候補と、本明細書中で同定される核酸によってコードされるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドとをこれら２つの成分の相互作用が可能であるように十分な条件および十分な時間にわたって、接触させることを必要とすることにおいて、一般的である。
【０３１３】
結合アッセイにおいて、相互作用は、結合であり、この形成される複合体は、反応混合物中で単離または検出され得る。本明細書中で同定される遺伝子によってコードされるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチド、または薬物候補は、固相で、例えば、マイクロタイタープレートに、ｂｙ  共有結合または非共有結合による付着によって、固定される。非共有結合による付着は、一般に、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの溶液で固相の表面をコーティングし、乾燥させることによって、達成される。あるいは、固定されるべきＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドに対して特異的な固定化抗体（例えば、モノクローナル抗体）は、固相表面にこれらポリペプチドをアンカーするために使用され得る。このアッセイは、非固定化成分（これは、検出可能な標識によって標識され得る）を、固定化成分（例えば、アンカーした成分を含むコーティング表面）に添加することによって行われる。反応が完了した場合、例えば、洗浄によって、反応していない成分が除去され、固相表面にアンカーされた複合体が、検出される。最初に固定されていない成分が検出可能な標的を有する場合、その表面に固定された標識の検出は、複合体化が起こったことを示す。本来固定されていない成分が標識を有さない場合、複合体化は、例えば、固定した複合体を特異的に結合する標識抗体を使用することによって、検出され得る。
【０３１４】
この候補化合物が、本明細書中で同定される遺伝子によってコードされる特定のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のポリペプチドと相互作用するが、これらに結合しない場合、そのポリペプチドとの相互作用は、タンパク質−タンパク質相互作用を検出するための周知の方法によってアッセイされ得る。このようなアッセイとしては、伝統的なアプローチ（例えば、架橋、同時免疫沈澱、および勾配もしくはクロマトグラフィーカラムを介する同時精製）が挙げられる。さらに、タンパク質−タンパク質相互作用は、Ｃｈｅｖｒａｙ  ａｎｄ  Ｎａｔｈａｎｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：５７８９−５７９３（１９９１）によって開示されるように、Ｆｉｅｌｄｓ  ａｎｄ  ｃｏ−ｗｏｒｋｅｒｓ（Ｆｉｅｌｄｓ  ａｎｄ  Ｓｏｎｇ，Ｎａｔｕｒｅ  （Ｌｏｎｄｏｎ），３４０：２４５−２４６（１９８９）；Ｃｈｉｅｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：９５７８−９５８２（１９９１））によって記載される酵母ベースの遺伝子系を使用することによってモニターされ得る。多くの転写アクチベーター（例えば、酵母ＧＡＬ４）は、２つの物理的に分離したモジュラードメイン（一方は、ＤＮＡ結合ドメインとして作用し、他方は、転写活性化ドメインとして機能する）からなる。前述の刊行物において記載される酵母発現系（一般には、「ツーハイブリッド系」といわれる）は、この特性を利用し、２つのハイブリッドタンパク質（一方は、標的タンパク質がＧＡＬ４のＤＮＡ結合ドメインに融合されているものであり、他方は、候補活性化タンパク質が、その活性化ドメインに融合されているものである）を使用する。ＧＡＬ４活性化プロモーターの制御下でのＧＡＬ１−ｌａｃＺレポーター遺伝子の発現は、タンパク質−タンパク質相互作用を介してＧＡＬ４活性の再構成に依存する。相互作用するポリペプチドを含むコロニーは、β−ガラクトシダーゼに対する色素産生性基質で検出される。このツーハイブリッド技術を使用する、２つの特定のタンパク質間のタンパク質−タンパク質相互作用を同定するための完全なキット（ＭＡＴＣＨＭＡＫＥＲＴＭ）は、Ｃｌｏｎｔｅｃｈから市販されている。この系はまた、特定のタンパク質相互作用に関与するタンパク質ドメインをマッピングすることに、およびこれらの相互作用にとって重要なアミノ酸残基を正確に指摘することに拡張され得る。
【０３１５】
本明細書中に同定されるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードする遺伝子と他の細胞内成分もしくは細胞外成分との相互作用を妨害する化合物が、以下のように試験され得る：通常は、反応混合物が、上記遺伝子の生成物と上記細胞内成分もしくは細胞外成分とを、それらの２つの生成物の相互作用および結合を可能にする条件下でそれを可能にする時間服務、反応混合物が調製される。候補化合物が結合を阻害する能力を試験するために、上記反応は、その試験化合物の非存在下および存在下で実施される。さらに、プラシーボが、第三反応混合物に添加され得て、ポジティブコントロールとして役立ち得る。上記混合物中に存在する試験化合物と細胞内成分もしくは細胞外成分との間の結合（複合体形成）が、本明細書中で上記されるようにモニターされる。上記コントロール反応において複合体が形成されるが、上記試験化合物を含む反応混合物において複合体が形成されないことは、その試験化合物が、その試験化合物とその反応パートナーとの相互作用を妨害することを示す。
【０３１６】
アンタゴニストについてアッセイするために、上記のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドが、特定の活性についてスクリーニングされるべき化合物とともに細胞に添加され得る。上記化合物が上記のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの存在下で目的とする活性を阻害する能力は、その化合物が上記のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドに対するアンタゴニストであることを示す。あるいは、アンタゴニストは、上記のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドと、潜在的なアンタゴニストとを、膜結合型のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９，  ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドレセプターもしくは組換えレセプターと、競合阻害アッセイのために適切な条件下で合わせることによって、検出されえる。上記のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドは、標識（例えば、放射性標識）され得、その結果、上記レセプターに結合しているＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５���ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチド分子の数が、上記の潜在的なアンタゴニストの有効性を決定するために使用され得る。上記レセプターをコードする遺伝子は、当業者にとって公知である多数の方法（例えば、リガンドパニングおよびＦＡＣＳソーティング）によって同定され得る。Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎ．，１（２）：Ｃｈａｐｔｅｒ  ５（１９９１）。    好ましくは、発現クローニングが使用され、その発現クローニングにおいて、ポリアデニル化ＲＮＡが、上記のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドに対して応答性である細胞から調製される。このＲＮＡから生成されたｃＤＮＡライブラリーは、複数のプールへと分割され、そして上記のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドに対して応答性ではないＣＯＳ細胞などの細胞をトランスフェクトするために使用される。スライド硝子上で増殖されたトランスフェクトされた細胞は、標識されたＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドに対して曝露される。上記のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドは、種々の手段（ヨウ素化、または部位特異的プロテインキナーゼに対する認識部位を含めることを包含する）によって標識され得る。固定およびインキュベーションの後、上記スライドは、オートラジオグラフィー分析に供される。ポジティブプールが、同定される。サブプールが調製され、そして相互作用的なサブプール形成プロセスおよび再スクリーニングプロセスを使用して再トランスフェクトされ、最終的には、推定レセプターをコードする単一クローンが生じる。
【０３１７】
レセプター同定のための代替的なアプローチとして、上記の標識されたＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドが、上記レセプター分子を発現する細胞膜もしくは細胞抽出物調製物と、光親和性結合され得る。架橋された物質が、ＰＡＧＥによって分離され、Ｘ線フィルムに対して曝露される。上記レセプターを含む標識された複合体が、切除され得、ペプチドフラグメントへと分離され得、そしてタンパク質微量配列決定に今日され得る。微量配列決定から得られるアミノ酸配列は、上記の推定レセプターをコードする遺伝子を同定するためにｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするための一組の縮重オリゴヌクレオチドプローブを設計するために使用される。
【０３１８】
ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドに対するアンタゴニストの効果を評価することにおける別のアプローチは、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のアンタゴニストを、既知のノックアウト表現型を模倣するために野生型マウスに投与することである。従って、目的とする上記ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０の遺伝子をまずノックアウトし、そして上記ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０の遺伝子をノックアウトもしくは破壊することの結果として生じる表現型を観察する。その後、上記のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドに対するアンタゴニストの有効性を、上記のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドに対するアンタゴニストを野生型マウスに投与することによって評価し得る。有効なアンタゴニストは、上記のノックアウト動物においてまず観察される表現型の影響を模倣することが予期される。
【０３１９】
同様に、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドに対するアゴニストの影響を、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のアゴニストを非ヒトトランスジェニックマウスに投与して既知のネガティブなノックアウト表現型を軽減することによって、評価し得る。従って、まず、目的とする上記ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０の遺伝子をノックアウトし得、そして上記ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０の遺伝子をノックアウトもしうくは破壊することの結果として生じる表現型を観察し得る。その後、その後、上記のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドに対するアゴニストの有効性を、上記のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドを非ヒトトランスジェニックマウスに投与することによって、評価し得る。有効なアゴニストは、上記のノックアウト動物においてまず観察されるネガティブな表現型の影響を軽減することが予期される。
【０３２０】
アンタゴニストについての別のアッセイにおいて、上記レセプターを発現する哺乳動物細胞もしくは膜調製物が、標識されたＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドと、上記の候補化合物の存在下で相互作用させられる。その後、その化合物がこの相互作用を増強もしくはブロックする能力が、測定され得る。
【０３２１】
潜在的なアンタゴニストのより具体的な例としては、上記のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドと免疫グロブリン（特に、抗体（ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体、および抗体フラグメント、単鎖抗体、抗イディオタイプ抗体、およびそのような抗体もしくはフラグメントのヒト化バージョン、ならびにヒト抗体およびヒト抗体フラグメントが挙げられるが、これらに限定はされない）との融合物に結合するオリゴヌクレオチドが挙げられる。あるいは、潜在的なアンタゴニストは、上記のレセプターを認識するが何の影響も及ぼさず、それによって上記のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの作用を競合的に阻害する、密接に関連するタンパク質（例えば、変異形態の上記のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチド）が挙げられる。
【０３２２】
別の潜在的なＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９，  ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドのアンタゴニストは、アンチセンス技術を使用して調製されるアンチセンスＲＮＡ構築物もしくはアンチセンスＤＮＡ構築物であり、例えば、アンチセンスＲＮＡ分子もしくはアンチセンスＤＮＡ分子は、標的とするｍＲＮＡにハイブリダイズしてタンパク質翻訳を防止することによって、ｍＲＮＡの翻訳を直接ブロックするように作用する。アンチセンス技術は、三重螺旋形成またはアンチセンスＤＮＡもしくはアンチセンスＲＮＡ（これらの方法の両方ともが、ＤＮＡもしくはＲＮＡへのポリヌクレオチドの結合に基づく）を介して遺伝子発現を制御するために使用され得る。例えば、本明細書中に記載されるマウスのＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の５’コード部分が、約１０塩基長〜約４０塩基長のアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドを設計するために使用される。ＤＮＡオリゴヌクレオチドは、転写に関与する遺伝子領域と相補的であり（三重螺旋−Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，  ６：３０７３  （１９７９）；Ｃｏｏｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４１：４５６（１９８８）；Ｄｅｒｖａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５１：１３６０（１９９１）を参照のこと）、そによって、上記のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの転写および生成を防止するように設計される。上記のアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドは、インビボで上記ｍＲＮＡにハイブリダイズし、そしてそのｍＲＮＡ分子から上記のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドへの翻訳をブロックする（アンチセンス−Ｏｋａｎｏ，Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，５６：５６０（１９９１）；Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｓ  Ａｎｔｉｓｅｎ���ｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ：Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，ＦＬ，１９８８）。上記のオリゴヌクレオチドはまた、上記のアンチセンスＲＮＡもしくはＲＮＡが上記のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの生成を阻害するためにインビボで発現され得るように、細胞に送達され得る。アンチセンスＤＮＡが使用される場合、翻訳開始部位（例えば、上記の標的遺伝子ヌクレオチド配列のうちのほぼ−１０位〜＋１０位）に由来するオリゴデオキシリボヌクレオチドが、好ましい。
【０３２３】
潜在的なアンタゴニストとしては、上記のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの活性部位、レセプター認識部位、または増殖因子結合部位もしくは他の関連する結合部位に結合し、それによって、上記のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの正常な生物学的活性をブロックする、低分子が挙げられる。低分子の例としては、小さいペプチドまたはペプチド様分子（好ましくは、可溶性ペプチド）、および合成非ペプチジル有機化合物もしくは合成非ペプチジル無機化合物が挙げられるが、これらに限定はされない。
【０３２４】
リボザイムは、ＲＮＡの特異的切断を触媒可能な酵素的ＲＮＡ分子である。リボザイムは、その相補的標的ＲＮＡへの配列特異的ハイブリダイゼーションと、その後のヌクレオチド鎖切断とによって、作用する。潜在的なＲＮＡ標的内の特異的リボザイム切断部位は、公知技術によって同定され得る。さらなる詳細については、例えば、Ｒｏｓｓｉ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，４：４６９−４７１（１９９４）、および国際公開番号ＷＯ  ９７／３３５５１（１９９７年９月１８日公開）を参照のこと。
【０３２５】
転写を阻害するために使用される三重螺旋形成中の核酸分子は、一本鎖であるべきであり、そしてデオキシヌクレオチドから構成されるべきである。これらのオリゴヌクレオチドの塩基組成は、そのオリゴヌクレオチドが、Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎ塩基対形成規則を介して三重螺旋形成（これには、一般的には、二重鎖のうちの一本の鎖における大きなプリンストレッチもしくはピリミジンストレッチを促進するように、設計される。さらなる詳細については、例えば、上記の国際公開番号ＷＯ  ９７／３３５５１を参照のこと。
【０３２６】
これらの低分子は、本明細書中上記で考察されたスクリーニングアッセイおよび／または当業者にとって周知である他の任意のスクリーニング技術のうちのいずれか１つ以上によって、同定され得る。
【０３２７】
本明細書中に開示される分子の診断的使用および治療的使用もまた、下記に開示および記載されるポジティブな機能的アッセイヒットに基づき得る。
【０３２８】
（Ｆ．抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体または抗ＰＲＯ１４８０抗体）
本発明は、本明細書中で治療剤および／もしくは診断剤としての使用を見出し得る抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体または抗ＰＲＯ１４８０抗体を提供する。例示的な抗体としては、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、二重特異的抗体、およびヘテロ結合体抗体が挙げられる。
【０３２９】
（１．ポリクローナル抗体）
ポリクローナル抗体は、関連する抗原およびアジュバントの複数回皮下（ｓｃ）注射もしくは腹腔内（ｉｐ）注射によって、動物において惹起される。関連する抗原を（特に、合成ペプチドが使用される場合には）、免疫されるべき種において免疫原性であるタンパク質に結合体化することが、有用であり得る。例えば、上記抗原は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、またはダイズトリプシンインヒビターに対して、二官能性因子もしくは誘導体化剤（例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介する結合体化）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基を介する結合体化）、グルタルアルデヒド、コハク酸無水物、ＳＯＣｌ２またはＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（ＲおよびＲ１は異なるアルキル基である）を使用して、結合体化され得る。
【０３３０】
動物は、上記の抗原、免疫原性結合体、または誘導体に対して、例えば、１００μｇもしくは５μｇの上記タンパク質または結合体（それぞれ、ウサギもしくはマウスについて）を３容量のフロイント完全アジュバントと合わせること、そして複数の部位にその溶液を皮内注射することによって、免疫される。１ヵ月後、上記動物は、フロイント完全アジュバント中にあるもとの量の１／５〜１／１０のペプチドまたは結合体を用いて、複数の部位での皮下注射によってブーストされる。７日間後〜１４日間後、上記動物から採血され、その結果製が、抗体力価についてアッセイされる。動物は、その力価がプラトーに達するまでブーストされる。結合体はまた、タンパク質融合物として組換え細胞培養物において生成され得る。また、凝集剤（例えば、ミョウバン）が、上記免疫応答を増強するために適切に使用される。
【０３３１】
（２．モノクローナル抗体）
モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマ法を使用して生成され得るか、または組換えＤＮＡ法（米国特許第４，８１６，５６７号）によって生成され得る。
【０３３２】
上記のハイブリドーマ法において、マウスもしくは他の適切な宿主動物（例えば、ハムスター）が、上記のように免疫されて、免疫のために使用されるタンパク質に特異的に結合する抗体を生成するかもしくは生成可能であるリンパ球を惹起する。あるいは、リンパ球が、インビボで免疫され得る。免疫の後、リンパ球が単離され、その後、適切な融合剤（例えば、ポリエチレングリコール）を使用して骨髄腫細胞と融合され、ハイブリドーマ細胞が形成される（Ｇｏｄｉｎｇ，  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。
【０３３３】
そのように調製されたハイブリドーマは、適切な培養培地（その培地は、好ましくは、は、融合していない親骨髄腫細胞（融合パートナーとも呼ばれる）の増殖もしくは生存を阻害する１つ以上の物質を含む）中に播種されて増殖される。例えば、その親骨髄腫細胞が、酵素（ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴもしくはＨＰＲＴ）を欠く場合、そのハイブリドーマのための選択的な培養培地としては、代表的には、ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジン（ＨＡＴ培地）（これらの物質は、ＨＧＲＰＴ欠損細胞の増殖を防止する）が挙げられる。
【０３３４】
好ましい融合パートナー骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による安定した高レベルの抗体産生を支持し、そして融合していない親細胞に対して選択する選択培地に対して感受性である、骨髄腫細胞である。好ましい骨髄腫細胞株は、マウス骨髄腫株（例えば、ＭＯＰＣ−２１マウス腫瘍およびＭＰＣ−１１マウス腫瘍（Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  ＵＳＡから入手可能）ならびにＳＰ−２および誘導体（例えば、Ｘ６３−Ａｇ８−６５３細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ，ＵＳＡから入手可能））である。ヒト骨髄腫細胞株およびマウス−ヒトへテロ骨髄腫細胞株もまた、ヒトモノクローナル抗体のために記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；およびＢｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  ｐｐ．  ５１−６３  （Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７））。
【０３３５】
ハイブリドーマ細胞が増殖する培養培地は、上記抗原に対するモノクローナル抗体の生成についてアッセイされる。好ましくは、ハイブリドーマ細胞により生成されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降によって、またはインビトロ結合アッセイ（例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ））によって、決定される。
【０３３６】
上記モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Ｍｕｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０７：２２０  （１９８０）において記載されるスキャッチャード分析によって決定され得る。
【０３３７】
一旦、望ましい特異性、親和性、および／または活性の抗体を生成するハイブリドーマ細胞が同定された後は、そのクローンが、限界希釈手順によってサブクローン化され得、そして標準的方法（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））によって増殖される。この目的のために適切な培養培地としては、例えば、Ｄ−ＭＥＭ培地またはＲＰＭＩ−１６４０培地が挙げられる。さらに、そのハイブリドーマ細胞は、例えば、その細胞をマウス中に注射することによって、動物のいて腹水腫瘍としてインビボで増殖され得る。
【０３３８】
上記サブクローンによって選択されたモノクローナル抗帯は、培養培地、腹水、または血清から、従来の抗体精製手順（例えば、アフィニティクロマトグラフィー（例えば、プロテインＡ−ＳｅｐｈａｒｏｓｅもしくはプロテインＣ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅを使用する）またはイオン交換クロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析など）によって適切に分離される。
【０３３９】
上記のモノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、マウス抗体の重鎖をコードする遺伝子もしくは軽鎖をコードする遺伝子に対して特異的に結合可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離および配列決定される。上記ハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡの好ましい供給源として役立つ。一旦単離された後は、そのＤＮＡは、発現ベクター中に配置され得、そのベクターは、その後、トランスフェクトされなければ抗体タンパク質を生成しない宿主細胞（例えば、Ｅ．  ｃｏｌｉ細胞、シミアンＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または骨髄腫細胞）中にトランスフェクトされて、その組換え宿主細胞におけるモノクローナル抗対の合成が得られる。上記の抗体をコードするＤＮＡの細菌における組換え発現に関する概説論文としては、Ｓｋｅｒｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５：２５６−２６２（１９９３）およびＰｌuｃｋｔｈｕｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．１３０：１５１−１８８（１９９２）が挙げられる。
【０３４０】
モノクローナル抗体または抗体フラグメントは、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４８：５５２−５５４（１９９０）において記載される技術を使用して生成される抗体ファージライブラリーから、単離され得る。Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）は、それぞれ、ファージライブラリーを使用するマウス抗体およびヒト抗体の単離を記載する。その後の刊行物は、鎖シャッフリング（Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９−７８３（１９９２））による高親和性（ｎＭ範囲の）ヒト抗体の生成、ならびに非常に大きなファージライブラリーを構築するためのストラテジーとしての感染とインビボ組換えとの組み合わせ（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．２１：２２６５−２２６６（１９９３））を記載する。従って、これらの技術は、モノクローナル抗体の単離のための伝統的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術に対する実行可能な代替法である。
【０３４１】
上記抗体をコードするＤＮＡは、例えば、ヒト重鎖定常ドメイン（ＣＨ）配列およびヒト軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）配列で相同なマウス配列を置換すること（米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎ，  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１（１９８４））によって、またはその免疫グロブリンコード配列を非免疫グロブリンポリペプチド（異種ポリペプチド）のコード配列のうちのすべてもしくは一部と融合することによって、キメラ抗体ポリペプチドもしくは融合抗体ポリペプチドを生成するように改変され得る。上記非免疫グロブリンポリペプチド配列は、抗体の定常ドメインを置換し得るか、またはそれらの配列は、抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインを置換して、ある抗原に対して特異性を有する１つの抗原結合部位と、別の抗原に対して特異性を有する別の抗原結合部位とを含む、キメラ二価抗体を生成し得る。
【０３４２】
（３．ヒト抗体およびヒト化抗体）
本発明の抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体または抗ＰＲＯ１４８０抗体は、さらに、ヒト抗体またはヒト化抗体を包含し得る。非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含む、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、もしくはそのフラグメント（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または抗体の他の抗原結合部分配列）である。ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）が、望ましい特異性、親和性、および能力を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、もしくはウサギ）（ドナー抗体）のＣＤＲに由来する残基で置換されている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）を包含する。いくつかの場合において、上記ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基によって置換される。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体においても移入されたＣＤＲ配列においてもフレームワーク配列においても見出されない残基を含み得る。一般的には、上記ヒト抗体は、少なくとも１つ（代表的には２つの）可変ドメインのうちの実質的にすべてを含み、そのＣＤＲ領域のすべてもしくは実質的にすべては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものに対応する。上記ヒト化抗体はまた、必要に応じて、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部（代表的には、ヒト免疫グロブリンのもの）を含む［Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２９（１９８８）；およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３−５９６（１９９２）］。
【０３４３】
非ヒト抗体をヒト化するための方法は、当該分野において周知である。一般的には、ヒト化抗体は、非ヒト供給源に由来する１つ以上のアミノ酸残基が導入されている。これらの非ヒトアミノ酸残基は、しばしば、「移入（ｉｍｐｏｒｔ）」残基と呼ばれ、これらの残基は、代表的には、「移入（ｉｍｐｏｒｔ）」可変ドメインから得られる。ヒト化は、基本的には、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者［Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６（１９８８）］の方法に従って、齧歯類のＣＤＲもしくはＣＤＲ配列でヒト抗体の対応する配列を置換することによって、実施され得る。従って、そのような「ヒト化」抗体は、キメラ抗体であり（米国特許第４，８１６，５６７号）、その抗体において、実質的には完全ではないヒト可変ドメインが、非ヒト種に由来する対応する配列で置換されている。実際には、ヒト化抗体は、代表的には、いくつかのＣＤＲ残基とおそらくはいくつかのＦＲ残基とが、齧歯類抗体における同様の部位に由来する残基で置換されている、ヒト抗体である。
【０３４４】
上記ヒト化抗体を生成する際に使用されるヒト可変ドメイン（軽鎖ドメインおよび重鎖ドメインの両方）の選択は、その抗体がヒト治療用途のために意図される場合には、抗原性およびＨＡＭＡ応答（ヒト抗マウス抗体）を低減するために非常に重要である。いわゆる「ベストフィット（ｂｅｓｔ−ｆｉｔ）」法に従って、齧歯類抗体の可変ドメインの配列が、既知のヒト可変ドメイン配列のライブラリー全体に対してスクリーニングされる。その齧歯類のＶドメイン配列と最も近いヒトＶドメイン配列が、同定され、そしてその中にあるヒトフレームワーク領域（ＦＲ）が、ヒト化抗体のために許容される（Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１（１９８７））。別の方法は、特定の軽鎖サブグループもしくは重鎖サブグループのすべてのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワーク領域を使用する。同じフレームワークが、いくつかの異なるヒト化抗体のために使用され得る（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３））。
【０３４５】
抗体は、その抗原に対する高い結合親和性および他の好ましい生物学的特性を保持しながらヒト化されることが、さらに重要である。この目的を達成するために、好ましい方法に従って、ヒト化抗体は、親配列およびヒト化配列の３次元モデルを使用する親配列および種々の概念的ヒト化生成物の分析プロセスによって、調製される。３次元免疫グロブリンモデルは、一般的に利用可能であり、当業者が精通している。選択された候補免疫グロブリン配列のあり得る３次元立体構造を例示して提示するコンピュータプログラムが、利用可能である。これらの提示を検討することにより、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能な役割の分析（すなわち、候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響を与える残基の分析）が、可能になる。このようしいで、ＦＲ残基は、望ましい抗体特徴（例えば、標的抗原に対する増加した親和性）が達成されるように、選択され得、そしてレシピエント配列および移入（ｉｍｐｏｒｔ）配列から合わされ得る。一般的に、超可変領域の残基が、抗原結合に影響を与えることに直接的かつ最も実質的に関与する。種々の形態のヒト化抗ＰＲＯ２５６抗体、ヒト化抗ＰＲＯ３４４２１抗体、ヒト化抗ＰＲＯ３３４抗体、ヒト化抗ＰＲＯ７７０抗体、ヒト化抗ＰＲＯ９８３抗体、ヒト化抗ＰＲＯ１００９抗体、ヒト化抗ＰＲＯ１１０７抗体、ヒト化抗ＰＲＯ１１５８抗体、ヒト化抗ＰＲＯ１２５０抗体、ヒト化抗ＰＲＯ１３１７抗体、ヒト化抗ＰＲＯ４３３４抗体、ヒト化抗ＰＲＯ４３９５抗体、ヒト化抗ＰＲＯ４９１９２抗体、ヒト化抗ＰＲＯ９７９９抗体、ヒト化抗ＰＲＯ２１１７５抗体、ヒト化抗ＰＲＯ１９８３７抗体、ヒト化抗ＰＲＯ２１３３１抗体、ヒト化抗ＰＲＯ２３９４９抗体、ヒト化抗ＰＲＯ６９７抗体またはヒト化抗ＰＲＯ１４８０抗体が、企図される。例えば、上記ヒト化抗体は、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ）であり得、これは、必要に応じて、免疫結合体を生成するために１つ以上の細胞傷害性因子と結合体化される。あるいは、上記ヒト化抗体は、インタクトな抗体（例えば、インタクトなＩｇＧ１抗体）であり得る。
【０３４６】
ヒト化に対する代替法として、ヒト抗体が、生成され得る。例えば、例えば、内因性免疫グロブリン生成が存在しない状態でヒト抗体の完全なレパートリーを免疫の際に生成可能であるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を生成することが、現在可能である。例えば、キメラ生殖系列変異体マウスにおける抗体重鎖結合領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合性欠失は、内因性抗体産生の完全な阻害を生じることが、記載されている。ヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子群をそのような生殖系列変異体マウス中に移入すると、抗原チャレンジの際にヒト抗体の産生を生じる。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏ．７：３３（１９９３）；米国特許第５，５４５，８０６号、米国特許第５，５６９，８２５号、米国特許第５，５９１，６６９号  （すべてＧｅｎＰｈａｒｍ）；米国特許第５，５４５，８０７号；ならびにＷＯ  ９７／１７８５２を参照のこと。
【０３４７】
あるいは、ファージディスプレイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３［１９９０］）が、非免疫ドナーに由来する免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーから、インビトロでヒト抗体および抗体フラグメントを生成するために使用され得る。この技術に従って、抗体Ｖドメイン遺伝子が、繊維状バクテリオファージ（例えば、Ｍ１３またはｆｄ）の大被膜タンパク質もしくは小被膜タンパク質のいずれか中にインフレームでクローン化され、そしてファージ粒子の表面上に機能的抗体フラグメントとして提示される。その繊維状粒子は、そのファージゲノム一本鎖ＤＮＡコピーを含むので、その抗体の機能的特性に基づく選択は、それらの特性を示す抗体をコードする遺伝子の選択をもたらす。従って、そのファージは、Ｂ細胞の特性のうちのいくつかを模倣する。ファージディスプレイは、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ  Ｓ．ａｎｄ  Ｃｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ  Ｊ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３：５６４−５７１（１９９３）に概説される種々の形態で実施され得る。Ｖ遺伝子セグメントのいくつかの供給源が、ファージディスプレイのために使用され得る。Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）は、免疫されたマウスの秘蔵に由来するＶ遺伝子の小さなランダムコンビナトリアルライブラリーに由来する多様な抗オキサゾロン抗体群を単離した。非免疫ヒトドナーに由来するＶ遺伝子のレパートリーが、構築され得、そして多様な抗原（自己抗原を含む）に対する抗体が、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１）またはＧｒｉｆｆｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：７２５−７３４（１９９３）に記載される技術に基本的に従って、単離され得る。また、米国特許第５，５６５，３３２号および米国特許第５，５７３，９０５号も参照のこと。
【０３４８】
上記で考察されるように、ヒト抗体はまた、インビトロ活性化Ｂ細胞によって生成され得る（米国特許第５，５６７，６１０号および米国特許第５，２２９，２７５号を参照のこと）。
【０３４９】
（４．抗体フラグメント）
特定の場合において、抗体全体ではなく、抗体フラグメントを使用することに利点が存在する。それらのフラグメントはサイズがより小さいので、迅速なクリアランスを可能にし、そして固形腫瘍に対する接近の改善をもたらし得る。
【０３５０】
抗体フラグメント生成のための、種々の技術が開発されている。伝統的には、これらのフラグメントは、インタクトな抗体のタンパク質分解性消化を介して誘導された（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４：１０７−１１７（１９９２）；およびＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照のこと）。しかし、これらのフラグメントは、現在では、組換え宿主細胞によって直接産生され得る。Ｆａｂ抗体フラグメント、Ｆｖ抗体フラグメント、およびＳｃＦｖ抗体フラグメントはすべて、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて発現され得そして分泌され得る。これによって、大量のこれらのフラグメントの容易な生成が可能になる。抗体フラグメントは、上記で考察される抗体ファージライブラリーから単離され得る。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントが、直接Ｅ．ｃｏｌｉから回収され得、そしてＦ（ａｂ’）２フラグメントを形成するように化学的に結合され得る（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７（１９９２））。別のアプローチに従って、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントが、組換え宿主細胞培養物から直接単離され得る。インビボ半減期が増加しているＦａｂフラグメントおよびＦ（ａｂ’）２フラグメント（サルベージ（ｓａｌｖａｇｅ）レセプター結合エピトープ残基を含む）が、米国特許第５，８６９，０４６号において記載されている。抗体フラグメントの生成のための他の技術は、当業者にとって明らかである。選択された抗体は、単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である。ＷＯ  ９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号；および米国特許第５，５８７，４５８号を参照のこと。ＦｖおよびｓＦｖは、定常領域を欠くインタクトな結合部位を備える唯一の種である。従って、これらは、インビボ使用の間の減少した非特異的結合のために適切である。ｓＦｖ融合タンパク質は、ｓｃＦｖのアミノ末端またはカルボキシ末端のいずれかにおけるエフェクタータンパク質の融合をもたらすように構築され得る。Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ編（上記）を参照のこと。上記抗体フラグメントはまた、例えば、米国特許第５，６４１，８７０号に記載されるような、「直鎖状抗体」であり得る。そのような直鎖状抗体フラグメントは、一重特異的であっても、二重特異性であってもよい。
【０３５１】
（５．二重特異性抗体）
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに対して結合特異性を有する抗体である。例示的な二重特異性抗体は、本明細書虫に記載されるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のタンパク質の２つの異なるエピトープに結合し得る。他のそのような抗体は、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０の結合部位を、別のタンパク質の結合部位と合わせ得る。あるいは、抗ＰＲＯ２５６アーム、抗ＰＲＯ３４４２１アーム、抗ＰＲＯ３３４アーム、抗ＰＲＯ７７０アーム、抗ＰＲＯ９８３アーム、抗ＰＲＯ１００９アーム、抗ＰＲＯ１１０７アーム、抗ＰＲＯ１１５８アーム、抗ＰＲＯ１２５０アーム、抗ＰＲＯ１３１７アーム、抗ＰＲＯ４３３４アーム、抗ＰＲＯ４３９５アーム、抗ＰＲＯ４９１９２アーム、抗ＰＲＯ９７９９アーム、抗ＰＲＯ２１１７５アーム、抗ＰＲＯ１９８３７アーム、抗ＰＲＯ２１３３１アーム、抗ＰＲＯ２３９４９アーム、抗ＰＲＯ６９７アーム、または抗ＰＲＯ１４８０アームが、リンパ球上の誘発分子（例えば、Ｔ細胞レセプター分子（例えば、ＣＤ３）、またはＩｇＧに対するＦｃレセプター（ＦｃγＲ）（例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６））に結合するアームと合わされ得て、そのＰＲＯ２５６発現細胞、ＰＲＯ３４４２１発現細胞、ＰＲＯ３３４発現細胞、ＰＲＯ７７０発現細胞、ＰＲＯ９８３発現細胞、ＰＲＯ１００９発現細胞、ＰＲＯ１１０７発現細胞、ＰＲＯ１１５８発現細胞、ＰＲＯ１２５０発現細胞、ＰＲＯ１３１７発現細胞、ＰＲＯ４３３４発現細胞、ＰＲＯ４３９５発現細胞、ＰＲＯ４９１９２発現細胞、ＰＲＯ９７９９，  ＰＲＯ２１１７５発現細胞、ＰＲＯ１９８３７発現細胞、ＰＲＯ２１３３１発現細胞、ＰＲＯ２３９４９発現細胞、ＰＲＯ６９７発現細胞またはＰＲＯ１４８０発現細胞に対して細胞性防御機構を集中させて位置づける。二重特異性抗体はまた、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドを発現する細胞に対して、細胞傷害性因子を位置づけるために使用され得る。これらの抗体は、
ＰＲＯ２５６結合アーム、ＰＲＯ３４４２１結合アーム、ＰＲＯ３３４結合アーム、ＰＲＯ７７０結合アーム、ＰＲＯ９８３結合アーム、ＰＲＯ１００９結合アーム、ＰＲＯ１１０７結合アーム、ＰＲＯ１１５８結合アーム、ＰＲＯ１２５０結合アーム、ＰＲＯ１３１７結合アーム、ＰＲＯ４３３４結合アーム、ＰＲＯ４３９５結合アーム、ＰＲＯ４９１９２結合アーム、ＰＲＯ９７９９，  ＰＲＯ２１１７５結合アーム、ＰＲＯ１９８３７結合アーム、ＰＲＯ２１３３１結合アーム、ＰＲＯ２３９４９結合アーム、ＰＲＯ６９７結合アームまたはＰＲＯ１４８０結合アームと、細胞傷害性因子（例えば、サポニン、抗インターフェロンα、ビンカアルカロイド類、リシンＡ鎖、メトトレキサート、または放射性同位体ハプテン）に結合するアームとを、保有する。二重特異性抗体は、全長抗体または抗体フラグメント（例えば、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント二重特異性抗体）として、調製され得る。
【０３５２】
ＷＯ  ９６／１６６７３は、二重特異性抗ＥｒｂＢ２／抗ＦｃγＲＩＩＩ抗体を記載し、米国特許第５，８３７，２３４号は、二重特異性抗ＥｒｂＢ２／抗ＦｃγＲＩ抗体を記載する。二重特異性抗ＥｒｂＢ２／Ｆｃα抗体が、ＷＯ９８／０２４６３に記載される。米国特許第５，８２１，３３７号は、二重特異性抗ＥｒｂＢ２／抗ＣＤ３抗体を記載する。
【０３５３】
二重特異性抗体を生成するための方法は、当該分野で公知である。全長二重特異性抗体の伝統的生成は、２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対（その２つの鎖は、異なる特異性を有する）に基づく（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７−５３９（１９８３））。免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖のランダムな類別が原因で、これらのハイブリドーマ（クアドローマ（ｑｕａｄｒｏｍａ））は、１０種の異なる抗体分子のあり得る混合物を生成し、そのうち、唯１つだけが、正確な二重特異性構造を有する。その正確な分子の精製（これは、通常は、親和性クロマトグラフィー工程によってなされる）は、多少面倒であり、その生成物の収率は、低い。同様な手順が、ＷＯ  ９３／０８８２９およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５−３６５９（１９９１）に開示されている。
【０３５４】
異なるアプローチに従って、望ましい結合特異性（抗体−抗原結合部位）を有する抗体可変ドメインが、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合される。好ましくは、その融合物は、Ｉｇ重鎖定常ドメインとの融合物であり、ヒンジ領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域のうちの少なくとも一部を含む。その融合物のうちの少なくとも１つに存在する軽鎖結合のために必要な部位を含む第一重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが、好ましい。その免疫グロブリン重鎖融合物をコードするＤＮＡ、そして望ましい場合には免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡが、別個の発現ベクター中に挿入され、そして適切な宿主細胞中に同時トランスフェクトされる。このことは、その構築において使用される３つのポリペプチド鎖の等しくない比率が、望ましい二重特異性抗体の最適な収率を提供する場合に、それらの３つのポリペプチドフラグメントの相互の比率を調整する場合により大きな柔軟性を提供する。しかし、等しい比率での少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現が高収率を生じる場合、またはその比率が望ましい鎖の組み合わせの収率に対して有意な影響を何ら有さない場合に、２つまたは３つすべてのポリペプチド鎖のコード配列を単一の発現ベクター中に挿入することが、可能である。
【０３５５】
本発明は、１つのアームにおいて第一結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖と、もう１つのアームにおける（第二結合特異性を手夾する）ハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖対とから構成される、二重特異性抗体を提供する。この非対称的構造が、望ましくない免疫グロブリン鎖の組み合わせからの望ましい二重特異性化合物の分離を容易にすることが、見出された。なぜなら、その二重特異性分子のうちの半分だけに免疫グロブリン軽鎖が存在することが、容易な分離方法を提供するからである。このアプローチは、ＷＯ  ９４／０４６９０に記載されている。二重特異性抗体を生成することのさらなる詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １２１：２１０  （１９８６）を参照のこと。
【０３５６】
米国特許第５，７３１，１６８号に記載される別のアプローチに従って、一対の抗体分子の間の境界は、組換え細胞培養物から回収されるヘテロダイマーの割合を最大にするように操作され得る。好ましい境界は、ＣＨ３ドメインのうちｎ少なくとも一部を含む。この方法において、第一抗体分子の境界に由来する１つ以上の小さなアミノ酸側鎖が、より大きな側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置換される。同じサイズもしくは同様のサイズから大きな側鎖への補償的な「空洞」が、大きなアミノ酸側鎖を、それよりも小さなアミノ酸側鎖（例えば、アラニンまたはスレオニン）で置換することによって、第二抗体分子の境界に生成される。このことは、他の望ましくない最終産物（例えば、ホモダイマー）よりもヘテロダイマーの収率を増加させる機構を提供する。
【０３５７】
二重特異性抗体は、架橋抗体または「ヘテロ結合体」抗体を包含する。例えば、そのヘテロ結合体中の抗体の一方は、アビジンと結合され得、もう一方は、ビオチンと結合され得る。そのような抗体は、例えば、免疫系細胞を望ましくない細胞に標的化するため（米国特許第４，６７６，９８０号）、およびＨＩＶ感染の処置のため（ＷＯ  ９１／００３６０、ＷＯ  ９２／２００３７３、およびＥＰ  ０３０８９）に提唱されている。へテロ結合体抗体は、簡便な任意の架橋方法を使用して生成され得る。適切な架橋剤は、当該分野で周知であり、多数の架橋技術とともに、米国特許第４，６７６，９８０号において開示されている。
【０３５８】
抗体フラグメントから二重特異性抗体を生成するための技術はまた、文献において記載されている。例えば、二重特異性抗体は、化学的結合を使用して調製され得る。Ｂｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１（１９８５）は、インタクトな抗体がＦ（ａｂ’）２フラグメントを生成するようにタンパク質分解性切断される手順を記載する。これらのフラグメントは、ジチオール錯化剤（亜砒酸ナトリウム）の存在下で還元されて、ビシナルチオールを安定化させて分子間ジスルフィド形成を防止する。その後、生成されたＦａｂ’フラグメントは、チオニトロベンゾエート（ＴＮＢ）誘導体へと変換される。その後、そのＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体のうちの１つは、メルカプトエチルアミンによる還元によってＦａｂ’−チオールへと再変換され、等モル量の他のＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体と混合されて、二重特異性抗体を形成する。生成された二重特異性抗体は、酵素の選択的固定のための因子として使用され得る。
【０３５９】
最近の進歩は、Ｅ．ｃｏｌｉからのＦａｂ’−ＳＨフラグメントの直接的回収を容易にした。このＦａｂ’−ＳＨフラグメントは、二重特異性抗体を形成するように化学的に結合され得る。Ｓｈａｌａｂｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：２１７−２２５（１９９２）は、完全ヒト化に住特異性抗体Ｆ（ａｂ’）２分子の生成を記載する。各Ｆａｂ’フラグメントが、Ｅ．ｃｏｌｉから別個に分泌され、そして二重特異性抗体を形成するように、インビトロで指向性化学結合に供された。そのようにして形成された二重特異性抗体は、ＥｒｂＢ２レセプターを過剰発現する細胞および正常なヒトＴ細胞に結合可能であり、かつ、ヒト乳房腫瘍標的に対するヒト細胞傷害性リンパ球の溶解活性を誘発可能であった。組換え細胞培養物から直接二重特異性抗体フラグメントを生成および単離するための種々の技術もまた、記載されている。例えば、ロイシンジッパーを使用する二重特異性抗体が、生成されている。Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）。Ｆｏｓタンパク質に由来するロイシンジッパーペプチドおよびＪｕｎタンパク質に由来するロイシンジッパーペプチドが、遺伝子融合によって２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に連結された。その抗体ホモダイマーは、モノマーを形成するようにヒンジ領域で還元され、その後、抗体へテロダイマーを形成するように再酸化された。この方法はまた、抗体ホモダイマーの生成のために利用され得る。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８（１９９３）に記載される「二重抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）」技術は、二重特異性抗体フラグメントを生成するための代替的機構を提供した。そのフラグメントは、同じ鎖上にある２つのドメインの間における対形成を可能にするには短過ぎるリンカーによってＶＬに結合されたＶＨを含む。従って、１つのフラグメントのＶＨドメインおよびＶＬドメインが、別のフラグメントの相補的ＶＬドメインおよびＶＨドメインと対形成するように強制され、それによって、２つの抗原結合部位が形成される。単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーの使用により二重特異性抗体フラグメントを生成するための別のストラテジーもまた、報告されている。Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照のこと。２つよりも多くの価を有する抗体が、企図される。例えば、三重特異性抗体が、調製される。Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）。
【０３６０】
（６．へテロ結合体抗体）
ヘテロ結合体抗体もまた、本発明の範囲内にある。へテロ結合体抗体は、２つの共有結合した抗体から構成される。そのような抗体は、例えば、免疫系細胞を望ましくない細胞へと標的化するため［米国特許第４，６７６，９８０号］、およびＨＩＶ感染の処置のため［ＷＯ  ９１／００３６０；ＷＯ  ９２／２００３７３；ＥＰ  ０３０８９］に提唱された。その抗体を、合成タンパク質化学における公知方法を使用してインビトロで調製し得ることが、企図される。例えば、免疫毒素は、ジスルフィド交換反応を使用して、またはチオエーテル結合を形成することによって、構築され得る。この目的のための適切な試薬の例としては、イミノチオレートおよびメチル−４−メルカプトブチルイミデート、ならびに例えば、米国特許第４，６７６，９８０において開示される試薬などが挙げられる。
【０３６１】
（７．多価抗体）
多価抗体は、その抗体が結合する抗原を発現する細胞によって、二価抗体よりも速くインターナライズ（および／または異化）され得る。本発明の抗体は、３つ以上の抗原結合部位を有する多価抗体（ＩｇＭクラス以外の多価抗体である）（例えば、四価抗体）デアリ得、これは、その抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組換え発現によって容易に生成され得る。その多価抗体は、二量体化ドメインおよび３つ以上の抗原結合部位を含み得る。好ましい二量体化ドメインは、Ｆｃ領域またはヒンジ領域を含む（またはこれらからなる）。このシナリオにおいて、その抗体は、Ｆｃ領域を含み、そしてそのＦｃ領域のアミノ末端側に、３つ以上の抗原結合部位を含む。本明細書における好ましい多価抗体は、３個〜約８個（しかし、好ましくは、４個）の抗原結合部位を含む。その多価抗体は、少なくとも１つのポリペプチド鎖（好ましくは、２つのポリペプチド鎖）を含み、そのポリペプチド鎖は、２つ以上の可変ドメインを含む。例えば、そのポリペプチド鎖は、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−（Ｘ２）ｎ−Ｆｃを含み得、ＶＤ１は、第一可変ドメインであり、ＶＤ２は、第二可変ドメインであり、Ｆｃは、Ｆｃ領域の一ポリペプチド鎖であり、Ｘ１およびＸ２は、アミノ酸またはポリペプチドを示し、ｎは、０または１である。例えば、そのポリペプチド鎖は、ＶＨ−ＣＨ１−可撓性リンカー−ＶＨ−ＣＨ１−Ｆｃ領域鎖；またはＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１−Ｆｃ領域鎖を包含する。本明細書における多価抗体は、好ましくは、少なくとも２つの（好ましくは、４つの）軽鎖可変ドメインポリペプチドをさらに含む。本明細書における多価抗体は、例えば、約２個〜約４個の軽鎖可変ドメインポリペプチドを含み得る。本明細書において企図される軽鎖可変ドメインは、軽鎖可変ドメインを含み、必要に応じて、ＣＬドメインをさらに含む。
【０３６２】
（８．エフェクター機能操作）
本発明の抗体を、エフェクター機能に関して改変して、例えば、その抗体の抗原依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を増強することが、望ましいものであり得る。このことは、その抗体のＦｃ領域中に１つ以上のアミノ酸置換を導入することによって、達成され得る。あるいは、またはさらに、システイン残基をＦｃ領域中に導入し得、それによって、この領域における鎖間ジスルフィド結合を可能にし得る。そのようにして生成されたホモダイマー交代は、改善されたインターナライゼーション能力ならびに／または増加した補体媒介性細胞傷害および抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有し得る。Ｃａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１７６：１１９１−１１９５（１９９２）およびＳｈｏｐｅｓ，Ｂ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：２９１８−２９２２（１９９２）を参照のこと。抗腫瘍活性が増強したホモダイマー抗体もまた、Ｗｏｌｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３：２５６０−２５６５（１９９３）に記載されるヘテロ二官能性架橋剤を使用して調製され得る。あるいは、二重Ｆｃ領域を有する抗体が、操作され得、それによって、増強した補体溶解能力およびＡＤＣＣ能力を有し得る。Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ３：２１９−２３０（１９８９）を参照のこと。その抗体の血清半減期を増加するために、例えば、米国特許第５，７３９，２７７号に記載されるように、サルベージ（ｓａｌｖａｇｅ）レセプター結合エピトープを上記抗体（特に、抗体フラグメント）中に組み込み得る。本明細書中で使用される場合、用語「サルベージ（ｓａｌｖａｇｅ）（レセプター結合エピトープ」とは、ＩｇＧ分子のインビボ血清半減期を増加することを担う、ＩｇＧ分子の（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す。
【０３６３】
（９．免疫結合体）
本発明はまた、細胞傷害性因子（例えば、化学療法剤、増殖阻害因子、毒素（例えば、酵素的に活性な細胞起源毒素、真菌起源毒素、植物起源毒素、もしくは動物起源毒素、またはそれらのフラグメント）、または放射性同位体（すなわち、放射性結合体）に結合された抗体を含む、免疫結合体に関する。
【０３６４】
そのような免疫結合体の生成において有用な化学療法剤が、上記されている。使用され得る酵素的に活性な毒素およびそのフラグメントとしては、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリン（ａｂｒｉｎ）Ａ鎖、モデシン（ｍｏｄｅｃｃｉｎ）Ａ鎖、αサルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａインヒビター、キュルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓインヒビター、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン、エオマイシン、およびトリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅｓ）が挙げられる。種々の放射性核種が、放射性結合体化抗体の生成のために利用可能である。例としては、２１２Ｂｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、９０Ｙおよび１８６Ｒｅが挙げられる。上記抗体と細胞傷害性因子との結合体は、種々の二官能性タンパク質結合剤（例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、ジメチルアジピミデートＨＣＬ）、活性エステル（例えば、ジスクシンイミジルスベレート）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド）、ビスアジド化合物（例えば、ビス（ｐ−アジドペンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビスジアゾニウム誘導体（例えば、ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）‐エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、トルエン２，６−ジイソシアネート）、およびビス活性フッ素化合物（例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）を使用して、生成される。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３８：１０９８（１９８７）に記載されるように調製され得る。炭素１４標識化１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミ五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、上記抗体に対する放射性核種の結合体化のための例示的キレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照のこと。
【０３６５】
抗体と１つ以上の小さな毒素（例えば、カリケアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）、メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）、トリコテン（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｎｅ）、およびＣＣ１０６５、ならびに毒素活性を有するこれらの毒素の誘導体）との結合体もまた、本明細書において企図される。
【０３６６】
（メイタンシンおよびメイタンシノイド）
本発明は、１つ以上のメイタンシノイド分子と結合体化された、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体または抗ＰＲＯ１４８０抗体（全長またはフラグメント）を提供する。
【０３６７】
メイタンシノイドは、チューブリン重合によって作用する有糸分裂インヒビターである。メイタンシンは、東アフリカの低木であるＭａｙｔｅｎｕｓ  ｓｅｒｒａｔａから初めて単離された（米国特許第３，８９６，１１１号）。その後、特定の微生物もまたメイタンシノイド（例えば、メイタンシノールおよびＣ−３メイタンシノールエステル（米国特許第４，１５１，０４２号））を生成することが、発見された。合成メイタンシノールならびにその誘導体およびアナログが、例えば、米国特許第４，１３７，２３０号；米国特許第４，２４８，８７０号；米国特許第４，２５６，７４６号；米国特許第４，２６０，６０８号；米国特許第４，２６５，８１４号；米国特許第４，２９４，７５７号；米国特許第４，３０７，０１６号；米国特許第４，３０８，２６８号；米国特許第４，３０８，２６９号；米国特許第４，３０９，４２８号；米国特許第４，３１３，９４６号；米国特許第４，３１５，９２９号；米国特許第４，３１７，８２１号；米国特許第４，３２２，３４８号；米国特許第４，３３１，５９８号；米国特許第４，３６１，６５０号；米国特許第４，３６４，８６６号；米国特許第４，４２４，２１９号；米国特許第４，４５０，２５４号；米国特許第４，３６２，６６３号；および米国特許第４，３７１，５３３号（これらの開示は、本明細書によって明示的に参考として援用される）に開示される。
【０３６８】
（メイタンシノイド−抗体結合体）
その治療指数を改善する試みにおいて、メイタンシンおよびメイタンシノイドは、腫瘍細胞抗原に対して特異的に結合する抗体に結合体化された。メイタンシノイドを含む免疫結合体およびその治療的使用が、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号、米国特許第５，４１６，０６４号、および欧州特許ＥＰ  ０  ４２５  ２３５  Ｂ１（それらの開示は、本明細書によって明示的に参考として援用される）に開示される。Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：８６１８−８６２３（１９９６）は、ヒト結腸直腸癌に対するモノクローナル抗体Ｃ２４２に結合したマイタンシノイド（ＤＭ１という）を含む免疫結合体を記載した。その結合体は、培養結腸癌細胞に対して高度に細胞傷害性であることが見出され、そしてインビボ腫瘍増殖アッセイにおいて抗腫瘍活性を示した。Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：１２７−１３１（１９９２）は、メイタンシノイドがジスルフィドリンカーを介して、ヒト結腸癌細胞株上の抗原に対して結合するマウス抗体Ａ７にかまたはＨＥＲ−２／ｎｅｕオンコジーンに結合する別のマウスモノクローナル抗体ＴＡ．１に結合体化された、免疫結合体を記載する。そのＴＡ．１−メイタンシノイド結合体の細胞傷害性が、ヒト乳癌細胞株（ＳＫ−ＢＲ−３）（これは、１細胞につき３×１０５個のＨＥＲ−２表面抗原を発現する）において、インビトロで試験された。その薬物結合体は、遊離メイタンシノイドと同程度の細胞傷害性を達成した。これは、抗体分子１つ当たりのメイタンシノイド分子の数を増加することによって、増加され得た。Ａ７−メイタンシノイド結合体は、マウスにおいて低い全身細胞傷害性を示した。
【０３６９】
（抗ＰＲＯ２５６抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ３３４抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ７７０抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ９８３抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ１００９抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ１１０７抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ１１５８抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ１２５０抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ１３１７抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ４３３４抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ４３９５抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ９７９９抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ６９７抗体−メイタンシノイド結合体または抗ＰＲＯ１４８０抗体−メイタンシノイド結合体−メイタンシノイド結合体（免疫結合体））
抗ＰＲＯ２５６抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ３３４抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ７７０抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ９８３抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ１００９抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ１１０７抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ１１５８抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ１２５０抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ１３１７抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ４３３４抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ４３９５抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ９７９９抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体−メイタンシノイド結合体、抗ＰＲＯ６９７抗体−メイタンシノイド結合体または抗ＰＲＯ１４８０抗体−メイタンシノイド結合体−メイタンシノイド結合体は、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体または抗ＰＲＯ１４８０抗体を、メイタンシノイド分子に化学的に結合することによって、その抗体の生物学的活性もメイタンシノイド分子の生物学的活性も有意には減少させることなく、調製される。１抗体分子について平均３個〜４個の結合体化されたメイタンシノイド分子は、その抗体の機能にも可溶性にも負の影響を与えることなく標的細胞の細胞傷害性を増強することにおいて効力を示したが、毒素／抗体の１分子だけでさえも、裸の抗体の使用よりも細胞傷害性を増強することが予期された。マイタンシノイドは、当該分野で周知であり、公知技術によって合成され得るか、または天然供給源から単離され得る。適切なメイタンシノイドは、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号、ならびに本明細書中で上記に言及された他の特許および非特許刊行物において開示される。好ましいメイタンシノイドは、メイタンシノール、およびそのメイタンシノール分子の芳香環もしくは他の位置において改変されたメイタンシノールアナログ（例えば、種々のメイタンシノールエステル）である。
【０３７０】
抗体‐メイタンシノイド結合体を生成するために当該分野で公知の多くの連結基（例えば、米国特許第５，２０８，０２０号または欧州特許０  ４２５  ２３５  Ｂ１、およびＣｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：１２７−１３１（１９９２）に開示されるものを含む）が、存在する。その連結基としては、上記の特許において開示されるようなジスルフィド基、チオエーテル基、酸不安定性基、光不安定性基、ペプチダーゼ不安定性基、またはエステラーゼ不安定性基が挙げられ、ジスルフィド基およびチオエーテル基が好ましい。
【０３７１】
抗体とメイタンシノイドとの結合体は、種々の二官能性タンパク質カップリング剤（例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、ジメチルアジピミデートＨＣＬ）、活性エステル（例えば、ジスクシンイミジルスベレート）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド）、ビスアジド化合物（例えば、ビス（ｐ−アジドペンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビスジアゾニウム誘導体（例えば、ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）‐エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、トルエン２，６−ジイソシアネート）、およびビス活性フッ素化合物（例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン））を使用して、生成され得る。特に好ましいカップリング剤としては、Ｎ−スクシイミジル−３−（２ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）（Ｃａｒｌｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１７３：７２３−７３７［１９７８］）およびＮ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）が、ジスルフィド結合を提供するために挙げられる。
【０３７２】
上記リンカーは、結合の型に依存して、種々の位置でメイタンシノイド分子に結合され得る。例えば、エステル結合が、従来のカップリング技術を使用してヒドロキシル基との反応によって形成され得る。その反応は、ヒドロキシル基を有するＣ−３位、ヒドロキシメチルで改変されたＣ−１４位、ヒドロキシル基で改変されたＣ−１５位、およびヒドロキシル基を有するＣ−２０位で生じ得る。この結合は、メイタンシノールまたはメイタンシノールアナログのＣ−３位において形成される。
【０３７３】
（カリケアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ））
対象とされる別の免疫結合体は、１つ以上のカリケアマイシン分子に結合体化された、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体または抗ＰＲＯ１４８０抗体を包含する。カリケアマイシンファミリーの抗生物質は、ｐＭ未満の濃度で二本鎖ＤＮＡの破壊を生成可能である。カリケアマイシンファミリーの結合体の調製について、米国特許第５，７１２，３７４号、米国特許第５，７１４，５８６号、米国特許第５，７３９，１１６号、米国特許第５，７６７，２８５号米国特許第５，７７０，７０１号、米国特許第５，７７０，７１０号、米国特許第５，７７３，００１号、米国特許第５，８７７，２９６号（すべてＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｙａｎａｍｉｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ）を参照のこと。使用され得るカリケアマイシンの構造アナログとしては、γ１Ｉ、α２Ｉ、α３Ｉ、Ｎ−アセチル−γ１Ｉ、ＰＳＡＧおよびθＩ１（Ｈｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３：３３３６−３３４２（１９９３），Ｌｏｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５８：２９２５−２９２８（１９９８）、および上記のＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｙａｎａｍｉｄに対する米国特許）が挙げられるが、これらに限定はされない。上記の抗体が結合され得る別の抗腫瘍剤は、ＱＦＡ（これは、葉酸代謝拮抗剤である）。カリケアマイシンおよびＱＦＡの両方は、細胞内作用部位を有し、そして形質膜を容易には通らない。従って、抗体媒介性インターナライゼーションを介するこれらの因子の細胞取り込みは、その細胞傷害性効果を大いに増強する。
【０３７４】
（他の細胞傷害性因子）
本発明の抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体または抗ＰＲＯ１４８０抗体に結合され得る他の抗腫瘍剤としては、ＢＣＮＵ、ストレプトゾイシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｉｃｉｎ）、ビンクリスチン、５−フルオロウラシル（米国特許第５，０５３，３９４号、米国特許第５，７７０，７１０号に記載される、集合的にＬＬ−Ｅ３３２８８複合体として公知の因子のファミリー）、ならびにエスペラマイシン（ｅｓｐｅｒａｍｉｃｉｎ）（米国特許第５，８７７，２９６号）が挙げられる。
【０３７５】
使用され得る酵素的に活性な毒素およびそのフラグメントとしては、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリン（ａｂｒｉｎ）Ａ鎖、モデシン（ｍｏｄｅｃｃｉｎ）Ａ鎖、αサルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａインヒビター、キュルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓインヒビター、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン、エオマイシン、およびトリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅｓ）が挙げられる。例えば、ＷＯ  ９３／２１２３２（１９９３年１０月２８日公開）を参照のこと。
【０３７６】
本発明は、抗体と、核酸溶解活性を有する化合物（例えば、リボヌクレアーゼまたはＤＮＡエンドヌクレアーゼ（例えば、デオキシリボヌクレアーゼ；  ＤＮａｓｅ））との間に形成される、免疫結合体をさらに企図する。
【０３７７】
腫瘍の選択的破壊のたまえに、上記抗体は、高度に放射性の原子を含み得る。種々の放射性同位体が、放射性結合体化した、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体または抗ＰＲＯ１４８０抗体の生成のために利用可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、およびＬｕの放射性同位体が挙げられる。上記結合体が診断のために使用される場合、その結合体は、シンチグラフィー研究のための放射性原子（ｔｃ９９ｍもしくはＩ１２３）、または核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像化（磁気共鳴画像化（ｍｒｉ）としても公知）のためのスピン標識（例えば、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン、もしくは鉄）を含み得る。
【０３７８】
その放射性標識または他の標識は、公知の様式で結合体中に組み込まれ得る。例えば、上記ペプチドは、生合成され得るか、または適切なアミノ酸前駆体（例えば、水素の代わりにフッ素−１９を含む）を使用する化学的アミノ酸合成によって合成され得る。標識（例えば、ｔｃ９９ｍもしくはＩ１２３、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８およびＩｎ１１１）は、上記ペプチド中のシステイン残基を介して結合され得る。イットリウム−９０が、リジン残基を介して結合され得る。ＩＯＤＯＧＥＮ法（Ｆｒａｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ（１９７８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．８０：４９−５７）は、ヨウ素−１２３を組み込むために使用され得る。「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｓｃｉｎｔｉｇｒａｐｈｙ」（Ｃｈａｔａｌ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  １９８９）は、他の方法を詳細に記載する。
【０３７９】
上記抗体と細胞傷害性因子との結合体は、種々の二官能性タンパク質カップリング剤（例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、ジメチルアジピミデートＨＣＬ）、活性エステル（例えば、ジスクシンイミジルスベレート）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド）、ビスアジド化合物（例えば、ビス（ｐ−アジドペンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビスジアゾニウム誘導体（例えば、ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）‐エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、トルエン２，６−ジイソシアネート）、およびビス活性フッ素化合物（例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン））を使用して、生成され得る。特に好ましいカップリング剤としては、Ｎ−スクシイミジル−３−（２ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）（Ｃａｒｌｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１７３：７２３−７３７［１９７８］）およびＮ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）が、ジスルフィド結合を提供するために挙げられる。リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３８：１０９８（１９８７）に記載されるように調製され得る。炭素−１４標識化１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、上記抗体への放射性核種の結合体化のための例示的キレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照のこと。上記リンカーは、「切断可能なリンカー」であり得、細胞における細胞傷害性薬物の放出を促進する。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ不安定性リンカー、光不安定性リンカー、ジメチルリンカー、またはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：１２７−１３１（１９９２）；米国特許第５，２０８，０２０号）が、使用され得る。
【０３８０】
あるいは、上記の抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体または抗ＰＲＯ１４８０抗体と、細胞傷害性因子とを含む融合タンパク質が、例えば、組換え技術またはペプチド合成によって生成され得る。ＤＮＡの長さは、互いに隣接するか、またはその結合体の望ましい特性を破壊しないリンカーペプチドをコードする領域によって隔てられている、結合体の２つの部分をコードする個々の領域を含み得る。
【０３８１】
本発明は、腫瘍の予備標的化において利用するための「レセプター」（例えば、ストレプトアビジン）に結合体化され得、その際、上記抗体−レセプター結合体が患者に投与され、その後、除去剤を使用して循環から未結合結合体が除去され、その後、細胞傷害性因子（例えば、放射性ヌクレオチド）に結合体化した「リガンド」（例えば、アビジン）が投与される。
【０３８２】
（１０．免疫リポソーム）
本明細書中に開示される抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体または抗ＰＲＯ１４８０抗体はまた、免疫リポソームとして処方され得る。「リポソーム」とは、種々の型の脂質、リン脂質、および／または界面活性剤から構成される小さな小胞であり、哺乳動物への薬物送達のために有用である。リポソームの成分は、生物膜の脂質配置と同様の二重層形態で、一般的に整列される。上記抗体を含むリポソームは、当該分野で公知の方法（例えば、Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：３６８８（１９８５）；Ｈｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４０３０（１９８０）；米国特許第４，４８５，０４５号および米国特許第４，５４４，５４５号；ならびにＷＯ９７／３８７３１（１９９７年１０月２３日公開）に記載される）によって、調製される。樹幹時間が増強されたリポソームが、
米国特許第５，０１３，５５６号に開示される。
【０３８３】
特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、およびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成を用いる逆相エバポレーション法によって生成され得る。リポソームは、望ましい直径のリポソームを生じるように、規定された孔径のフィルターを通して押出される。本発明の抗体のＦａｂ’フラグメントは、ジスルフィド交換反応を介して、Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７：２８６−２８８（１９８２）に記載されるようにリポソームに結合され得る。化学療法剤が、必要に応じて、リポソーム内に含まれる。Ｇａｂｉｚｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８１（１９）：１４８４（１９８９）を参照のこと。
【０３８４】
（１１．抗体の薬学的組成物）
本明細書中で同定されるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチド、ならびに本明細書中で上記で開示されるスクリーニングアッセイによって同定される他の分子に、特異的に結合する抗体が、薬学的組成物の形態で種々の障害の処置のために投与され得る。
【０３８５】
上記のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドが、細胞内にあり、抗体全体がインヒビターとして使用される場合、インターナライズする抗体が、好ましい。しかし、リポフェクションまたはリポソームもまた、上記抗体もしくは抗体フラグメントを細胞中に送達するために使用され得る。抗体フラグメントが使用される場合、標的タンパク質の結合ドメインに特異的に結合する最小の阻害フラグメントが、好ましい。例えば、抗体の可変領域配列に基づいて、その標的タンパク質配列に結合する能力を保持するペプチド分子が、設計され得る。そのようなペプチドは、化学的に合成され得、かつ／または組換えＤＮＡ技術によって生成され得る。例えば、Ｍａｒａｓｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：７８８９−７８９３（１９９３）を参照のこと。本明細書における処方物はまた、所定される特定の適応症のために必要な１種よりも多くの活性化合物（好ましくは、互いに有害な影響を及ぼさない相補的活性を有する化合物）を含み得る。あるいは、または、さらに、その組成物は、その機能を増強する因子（例えば、細胞傷害性因子、サイトカイン、化学療法剤、または増殖阻因子）を含み得る。そのような分子は、意図される目的のために有効な量で組合わせて適切に存在する。
【０３８６】
活性成分はまた、例えば、コアセルベーション技術によってか、または界面重合（例えば、ヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチン−マイクロカプセル、およびポリ（メチルメタシレート）マイクロカプセル）によって、それぞれ、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル）中またはマイクロエマルジョン中に調製される、マイクロカプセル中に捕捉される。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（上記）に開示される。
【０３８７】
インビボ投与のために使用される処方物は、滅菌されていなければならない。これは、滅菌濾過膜を通す濾過によって容易に達成され得る。
【０３８８】
徐放性調製物が、調製され得る。徐放性調製物の適切な例としては、上記抗体を含む固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックス（このマトリックスは、成形された粒子（例えば、フィルムまたはマイクロカプセル）の形態である）が挙げられる。徐放性マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタミン酸とのコポリマー、非分解性エチレン酢酸ビニル、分解性乳酸−グリコール酸コポリマー（例えば、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴＴＭ（乳酸−グリコール酸コポリマーと酢酸ロイプロリドとから構成される、注射可能なミクロスフェア））、およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。エチレン酢酸ビニルおよび乳酸−グリコール酸などのポリマーは、１００日間にわたる分子の放出を可能にするが、特定のヒドロゲルは、より短い期間の間、タンパク質を放出する。封入された抗体が長期間にわたって身体中に残る場合、その抗体は、３７℃での水分に対する曝露の結果として変性または凝集し得、その結果、生物学的活性の喪失および免疫原性の起こり得る変化を生じ得る。合理的研究が、関与する機構に依存する安定化について考案され得る。例えば、その凝集機構がチオ字スルフィド交換を介する細胞内Ｓ−Ｓ結合形成であることが発見された場合、安定化は、スルフヒドリル残基を改変すること、酸性溶液から凍結乾燥すること、水分含量を制御すること、適切な添加剤を使用すること、そして特定のポリマーマトリックス組成を開発することによって、達成され得る。
【０３８９】
（Ｇ．抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体または抗ＰＲＯ１４８０抗体についての使用）
本発明の抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体または抗ＰＲＯ１４８０抗体は、神経学的障害；心血管障害、内皮障害、もしくは脈管形成障害；免疫学的障害；腫瘍学的障害；胚発生障害；もしくは致死性；または代謝異常のために、腫瘍の治療的有用性および／または診断的有用性を有する。例えば、抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体または抗ＰＲＯ１４８０抗体は、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９，  ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のための診断アッセイにおいて、例えば、特定の細胞、組織、または血清におけるその発現（そしてある場合には、差次的発言）を検出することにおいて、使用され得る。当該分野で公知の種々の診断アッセイ技術（例えば、競合的結合アッセイ、直接的サンドイッチアッセイもしくは間接的サンドイッチアッセイ、および不均質相もしくは均質相のいずれかにおいて実施される免疫沈降アッセイ［Ｚｏｌａ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．（１９８７）ｐｐ．１４７−１５８］）が、使用され得る。その診断アッセイにおいて使用される抗体は、検出可能な部分で標識され得る。その検出可能な部分は、検出可能なシグナルを、直接的もしくは間接的に生成可能であるべきである。例えば、その検出可能な部分は、放射性同位体（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、もしくは１２５Ｉ）、蛍光化合物もしくは化学発光化合物（例えば、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、もしくはルシフェリン）、または酵素（例えば、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、もしくは西洋ワサビペルオキシダーゼ）であり得る。上記抗体を、上記の検出可能な部分に結合体化するための当該分野で公知の任意の方法が、使用され得、その方法としては、Ｈｕｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１４４：９４５（１９６２）；Ｄａｖｉｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１３：１０１４（１９７４）；Ｐａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．，４０：２１９（１９８１）；およびＮｙｇｒｅｎ，Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．ａｎｄ  Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．，３０：４０７（１９８２）によって記載される方法が挙げられる。
【０３９０】
抗ＰＲＯ２５６抗体、抗ＰＲＯ３４４２１抗体、抗ＰＲＯ３３４抗体、抗ＰＲＯ７７０抗体、抗ＰＲＯ９８３抗体、抗ＰＲＯ１００９抗体、抗ＰＲＯ１１０７抗体、抗ＰＲＯ１１５８抗体、抗ＰＲＯ１２５０抗体、抗ＰＲＯ１３１７抗体、抗ＰＲＯ４３３４抗体、抗ＰＲＯ４３９５抗体、抗ＰＲＯ４９１９２抗体、抗ＰＲＯ９７９９抗体、抗ＰＲＯ２１１７５抗体、抗ＰＲＯ１９８３７抗体、抗ＰＲＯ２１３３１抗体、抗ＰＲＯ２３９４９抗体、抗ＰＲＯ６９７抗体または抗ＰＲＯ１４８０抗体はまた、組換え細胞培養物または天然供給源からのＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの親和性精製のために有用である。このプロセスにおいて、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドに対する抗体は、当該分野において周知の方法を使用して、適切な支持体（例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ樹脂または濾紙）に固定される。その後、固定された抗体は、精製されるべき上記のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドを含むサンプルと接触させられ、その後、その支持体は、上記のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチド（これは、固定した抗体に結合される）以外の上記サンプル中の実質的にあらゆる物質を除去する適切な溶媒で洗浄される。最後に、上記支持体は、上記抗体から上記のＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドを遊離させる別の適切な溶媒で洗浄される。
【０３９１】
以下の実施例は、例示目的のみのために提供され、本発明の範囲をいかなる様式でも限定することは意図しない。
【０３９２】
本明細書において引用されるすべての特許および参考文献は、その全体が本明細書によって参考として援用される。
【実施例】
【０３９３】
実施例において言及される市販の試薬は、そうではないと示されない限りは製造業者の指示に従って使用した。以下の実施例および本明細書全体においてＡＴＣＣ受託番号によって同定される細胞の供給源は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）である。
【０３９４】
（実施例１：新規ポリペプチドおよびそれをコードするｃＤＮＡを同定するための細胞外ドメイン相同性スクリーニング）
Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ公開データベースからの約９５０個の公知の分泌タンパク質に由来する細胞外ドメイン（ＥＣＤ）配列（存在する場合は、分泌シグナル配列を含む）を、ＥＳＴデータベースを検索するために使用した。そのＥＳＴデータベースは、公開データベース（例えば、Ｄａｙｈｏｆｆ、ＧｅｎＢａｎｋ）および私有データベース（例えば、ＬＩＦＥＳＥＱＴＭ，Ｉｎｃｙｔｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を包含した。その検索は、コンピュータプログラムであるＢＬＡＳＴまたはＢＬＡＳＴ−２（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２６６：４６０−４８０（１９９６））を使用して、ＥＳＴ配列の６フレーム翻訳に対するＥＣＤタンパク質配列の比較として実施した。公知タンパク質をコードしないＢＬＡＳＴスコアが７０（またはある場合には９０）以上である比較を、クラスター化し、そしてプログラムである「ｐｈｒａｐ」（Ｐｈｉｌ  Ｇｒｅｅｎ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）を用いてコンセンサスＤＮＡ配列へとアセンブルした。
【０３９５】
この細胞外ドメイン相同性スクリーニングを使用して、コンセンサスＤＮＡ配列を、ｐｈｒａｐを使用して他の同定されたＥＳＴ配列に対してアセンブルした。さらに、得られたコンセンサスＤＮＡ配列を、しばしば（しかし、常にではない）、上記のＥＳＴ配列の供給源を使用して可能な限りそのコンセンサス配列を伸長するためにＢＬＡＳＴもしくはＢＬＡＳＴ−２とｐｈｒａｐとの反復サイクルを使用して伸長させた。
【０３９６】
上記のようにして得られたコンセンサス配列に基づいて、その後、オリゴヌクレオチドを合成し、それを使用して、目的の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲによって同定し、ＰＲＯポリペプチドの全長コード配列のクローンを単離するためのプローブとして使用した。フォワードＰＣＲプライマーおよびリバースＰＣＲプライマーは、一般的には、２０ヌクレオチド〜３０ヌクレオチドの範囲であり、しばしば、全長約１００ｂｐ〜約１０００ｂｐのＰＣＲ生成物を生じるように設計する。そのプローブ配列は、代表的には、長さが４０ｂｐ〜５５ｂｐである。ある場合には、コンセンサス配列が約１〜１．５ｋｂｐよりも長い場合には、さらなるオリゴヌクレオチドを合成する。全長クローンについていくつかのライブラリーをスクリーニングするために、そのライブラリー由来のＤＮＡを、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙに従って、ＰＣＲプライマー対を用いて、ＰＣＲ増幅によってスクリーニングした。その後、陽性ライブラリーを使用して、プローブオリゴヌクレオチドと、そのプライマー対のうちの１つとを使用して、目的の遺伝子をコードするクローンを単離した。
【０３９７】
上記ｃＤＮＡクローンを単離するために使用したｃＤＮＡライブラリーは、市販の試薬（例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから市販される試薬）を使用して、標準的方法によって構築した。そのｃＤＮＡを、ＮｏｔＩ部位を含むオリゴｄＴを用いてプライミングし、平滑〜ＳａｌＩヘミキナーゼ処理アダプターで連結し、ＮｏｔＩで切断し、ゲル電気泳動によって適切にサイズ決定し、唯一のＸｈｏＩ部位およびＮｏｔＩ部位において適切なクローニングベクター（例えば、ｐＲＫＢまたはｐＲＫＤ；ｐＲＫ５Ｂは、ＳｆｉＩ部位を含まないｐＲＫ５Ｄの前駆体である；Ｈｏｌｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５３：１２７８−１２８０（１９９１）を参照のこと）中に望ましい方向でクローン化した。
【０３９８】
（実施例２：アミラーゼスクリーニングによるｃＤＮＡクローンの単離）
（１．オリゴｄＴプライムｃＤＮＡライブラリーの調製）
ｍＲＮＡを、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから得た試薬およびプロトコル（Ｆａｓｔ  Ｔｒａｃｋ  ２）を使用して、目的とするヒト組織から単離した。このＲＮＡを使用して、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤから得た試薬およびプロトコル（Ｓｕｐｅｒ  Ｓｃｒｉｐｔ  Ｐｌａｓｍｉｄ  Ｓｙｓｔｅｍ）を使用して、ベクターｐＲＫ５Ｄ中にてオリゴｄＴプライムｃＤＮＡライブラリーを生成した。この手順において、その二本鎖ｃＤＮＡを、１０００ｂｐよりも大きなサイズにし、ＳａｌＩ／ＮｏｔＩリンカー処理したｃＤＮＡを、ＸｈｏＩ／ＮｏｔＩ切断済みベクター中にクローン化した。ｐＲＫ５Ｄは、ｓｐ６転写開始部位を有し、その後に、ＳｆｉＩ制限酵素部位を有し、その後に、ＸｈｏＩ／ＮｏｔＩ  ｃＤＮＡクローニング部位を有する、クローニングベクターである。
【０３９９】
（２．ランダムプライムｃＤＮＡライブラリーの調製）
二次ｃＤＮＡライブラリーを、一次ｃＤＮＡクローンの５’末端を優先的に示すために生成した。ｓｐ６  ＲＮＡを、（上記の）一次ライブラリーから生成し、このＲＮＡを使用して、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから得た試薬およびプロトコル（上記のＳｕｐｅｒ  Ｓｃｒｉｐｔ  Ｐｌａｓｍｉｄ  Ｓｙｓｔｅｍ）を使用して、ベクターｐＳＳＴ−ＡＭＹ．０においてランダムプライムｃＤＮＡライブラリーを生成した。この手順において、その二本鎖ｃＤＮＡを、５００〜１０００ｂｐのサイズにし、平滑〜ＮｏｔＩアダプターで連結し、ＳｆｉＩで切断し、そしてＳｆｉＩ／ＮｏｔＩ切断済みベクター中にクローン化した。ｐＳＳＴ−ＡＭＹ．０は、酵母アルコールデヒドロゲナーゼプロモーターを有し、その後にｃＤＮＡクローニング部位およびマウスアミラーゼ配列（分泌シグナルを含まない成熟配列）を有し、その後に、クローニング部位の後に酵母アルコールデヒドロゲナーゼを有する、クローニングベクターである。従って、アミラーゼ配列とインフレームで融合されたこのベクター中にクローン化されたｃＤＮＡは、適切にトランスフェクトされた酵母コロニーからアミラーゼの分泌をもたらす。
【０４００】
（３．形質転換および検出）
上記段落２に記載されたライブラリーに由来するＤＮＡを、氷上で冷却し、そのＤＮＡに、エレクトロコンピテントなＤＨ１０Ｂ細菌（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，２０ｍｌ）を添加した。その後、この細菌・ベクター混合物を、製造業者によって推奨されるようにエレクトロポレートした。その後、ＳＯＣ培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，１ｍｌ）を添加し、その混合物を、３７℃にて３０分間インキュベートした。その後、その形質転換体を、アンピシリンを含む２０個の標準的な１５０ｍｍ  ＬＢプレート上にプレーティイングし、１６時間インキュベートした（３７℃）。陽性コロニーをそのプレートから掻き取り、そのＤＮＡを、標準的プロトコル（例えば、ＣｓＣｌ勾配）を使用して、細菌ペレットから単離した。その後、精製したＤＮＡを、下記の酵母プロコールに続けて使用した。
【０４０１】
その酵母方法は、３つのカテゴリーに分割された：（１）プラスミド／ｃＤＮＡ組み合わせベクターによる酵母の形質転換；（２）アミラーゼを分泌する酵母クローンの検出および単離；ならびに（３）その酵母コロニーからのインサートの直接的ＰＣＲ増幅ならびに配列決定およびさらなる分析のためのそのＤＮＡの精製であった。
【０４０２】
使用した酵母株は、ＨＤ５６−５Ａ（ＡＴＣＣ−９０７８５）であった。この株は、以下の遺伝子型を有する：  ＭＡＴα，ｕｒａ３−５２，ｌｅｕ２−３，ｌｅｕ２−１１２，ｈｉｓ３−１１，ｈｉｓ３−１５，ＭＡＬ＋，ＳＵＣ＋，ＧＡＬ＋。好ましくは、欠損性翻訳後経路を有する酵母変異体を、使用し得る。そのような変異体は、ｓｅｃ７１、ｓｅｃ７２、ｓｅｃ６２においてトランスロケーション欠損性対立遺伝子を有し得、短縮型ｓｅｃ７１が、最も好ましい。あるいは、これらの遺伝子の正常の作動を妨害するアンタゴニスト（アンチセンスヌクレオチドおよび／もしくはリガンドを含む）、この翻訳後経路に関与する他のタンパク質（例えば、ＳＥＣ６１ｐ、ＳＥＣ７２ｐ、ＳＥＣ６２ｐ、ＳＥＣ６３ｐ、ＴＤＪ１ｐもしくはＳＳＡ１ｐ−４ｐ）、またはこれらのタンパク質の複合体形成に関与する他のタンパク質もまた、好ましくは、アミラーゼ発現酵母と組み合わせて使用され得る。
【０４０３】
形質転換を、Ｇｉｅｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．，２０：１４２５（１９９２）により概略されたプロトコルに基づいて実施した。その後、形質転換細胞を、寒天から、ＹＥＰＤ複合培地（１００ｍｌ）へと接種し、そして３０℃にて一晩増殖させた。そのＹＥＰＤ培地は、Ｋａｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｙｅａｓｔ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ｐ．２０７（１９９４）に記載されるように調製した。その後、その一晩晩用物を、新鮮なＹＥＰＤ培地（５００ｍｌ）中に約２×１０６細胞／ｍｌ（約ＯＤ６００＝０．１）になるように希釈し、そして１×１０７細胞／ｍｌ（約ＯＤ６００＝０．４-〜０．５）になるまで再増殖させた。
【０４０４】
その後、その細胞を収集し、Ｓｏｒｖａｌ  ＧＳ３ローター中にあるＧＳ３ローターボトル中に５０００ｒｐｍにて５分間移入することによって形質転換用に調製し、上清を捨て、その後、滅菌水中に再懸濁し、Ｂｅｃｋｍａｎ  ＧＳ−６ＫＲ遠心分離機において３，５００ｒｐｍにて５０ｍｌファルコンチューブにおいて再度遠心分離した。その上清を捨て、その後、その細胞を、ＬｉＡｃ／ＴＥ（１０ｍｌ，１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，１ｍＭ  ＥＤＴＡ  ｐＨ７．５，１００ｍＭ  Ｌｉ２ＯＯＣＣＨ３）で洗浄し、ＬｉＡｃ／ＴＥ（２．５ｍｌ）中に再懸濁した。
【０４０５】
形質転換は、調製した細胞（１００μｌ）を、新たに変性させた一本鎖サケ精子ＤＮＡ（Ｌｏｆｓｔｒａｎｄ  Ｌａｂｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）と混合すること、そして微量遠心管においてＤＮＡ（１  μｇ，体積＜１０μｌ）を形質転換することによって、行った。その混合物を、ボルテックスすることによって短く混合し、その後、４０％  ＰＥＧ／ＴＥ（６００μｌ，４０％ポリエチレングリコール−４０００，１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，１ｍＭ  ＥＤＴＡ，１００ｍＭ  Ｌｉ２ＯＯＣＣＨ３，ｐＨ  ７．５）を添加した。この混合物を穏やかに混合し、３０分間攪拌しながら３０℃においてインキュベートした。その後、その細胞に、４２℃で１５分間熱ショックを与え、その反応容器を、微量遠心機において１２，０００ｒｐｍにて５秒間〜１０秒間遠心分離させ、デカントし、そしてＴＥ（５００μｌ，１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，１ｍＭ  ＥＤＴＡ  ｐＨ  ７．５）中に再懸濁し、その後、再遠心分離した。その後、その細胞をＴＥ（１ｍｌ）中に希釈し、アリコート（２００μｌ）を、１５０ｍｍ増殖プレート（ＶＷＲ）中の以前に調製した選択培地上にスプレッディングした。
【０４０６】
あるいは、複数回の小さな反応の代わりに、この形質転換を、１回の大規模反応を使用して実施し、試薬量は適宜拡大した。
【０４０７】
使用した選択培地は、Ｋａｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｙｅａｓｔ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ｐ．２０８−２１０（１９９４）において記載されたようにして調製される、ウラシルを欠く合成複合デキストロース寒天（ＳＣＤ−Ｕｒａ）であった。形質転換体を、３０℃にて２〜３日間増殖させた。
【０４０８】
アミラーゼ分泌コロニーの検出を、選択増殖培地に赤色デンプンを含めることによって実施した。デンプンを、Ｂｉｅｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１７２：１７６−１７９（１９８８）によって記載される手順に従って、赤色色素（Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｒｅｄ−１２０，Ｓｉｇｍａ）に結合した。その結合型デンプンを、上記のＳＣＤ−Ｕｒａ寒天プレート中に、最終濃度０．１５％（ｗ／ｖ）で組込み、リン酸カリウムでｐＨ  ７．０になるように緩衝化した（最終濃度５０〜１００ｍＭ）。
【０４０９】
陽性コロニーを選択し、新しい選択番地（１５０ｍｍプレート）に線引きして、充分に単離されて同定可能なシングルコロニーを得た。アミラーゼ選択について陽性である充分に単離されたシングルコロニーは、緩衝化ＳＣＤ−Ｕｒａ寒天中へ赤色デンプンを直接組み込むことによって検出した。陽性コロニーは、それがデンプンを分解してその陽性コロニーの周囲に直接可視化される明瞭なハロを生じる能力によって、決定した。
【０４１０】
（４．ＰＣＲ増幅によるＤＮＡの単離）
陽性コロニーを単離した場合、その一部を、爪楊枝で拾い、９６ウェルプレート中の滅菌水（３０μｌ）中に希釈した。この時点で、その陽性コロニーを、凍結してその後に分析するまで保存するか、またはすぐに増幅した。細胞アリコート（５μｌ）を、０．５μｌ  Ｋｌｅｎｔａｑ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）；４．０μｌ  １０ｍＭ  ｄＮＴＰ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ−Ｃｅｔｕｓ）；２．５μｌ  Ｋｅｎｔａｑ緩衝液（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）；０．２５μｌ  フォワードオリゴ１；０．２５μｌリバースオリゴ２；１２．５μｌ蒸留水を含む２５μｌ体積において、ＰＣＲ反応のためのテンプレートとして使用した。フォワードオリゴヌクレオチド１の配列は、
【０４１１】
【化１】
2007536931.tif 000024
であった。リバースオリゴヌクレオチド２の配列は、
【０４１２】
【化２】
2007536931.tif 000025
であった。その後、ＰＣＲを、以下のように実施した：
【０４１３】
【化３】
2007536931.tif 000026
上記オリゴヌクレオチドの下線領域は、ＡＤＨプロモーター領域およびアミラーゼ領域にそれぞれアニールし、インサートが存在しない場合には、ベクターｐＳＳＴ−ＡＭＹ．０から３０７ｂｐ領域を増幅した。代表的には、これらのオリゴヌクレオチドの５’末端の最初の１８ヌクレオチドは、配列決定プライマーのアニーリング部位を含んだ。従って、空のベクターからのＰＣＲ反応の全生成物は、３４３ｂｐであった。しかし、シグナル配列に融合したｃＤＮＡは、それよりもかなり大きなヌクレオチド配列を生じた。
【０４１４】
ＰＣＲの後、その反応のアリコート（５μｌ）を、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（上記）により記載されるようなＴｒｉ−ホウ酸−ＥＤＴＡ（ＴＢＥ）緩衝系を使用して、１％アガロースゲル電気泳動によって試験した。４００ｂｐよりも大きな単一の強いＰＣＲ生成物を生じるクローンを、９６  Ｑｉａｑｕｉｃｋ  ＰＣＲ  ｃｌｅａｎ−ｕｐ  ｃｏｌｕｍｎ（Ｑｉａｇｅｎ  Ｉｎｃ．，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ）で精製した後に、ＤＮＡ配列決定によってさらに分析した。
【０４１５】
（実施例３：シグナルアルゴリズム分析を使用するｃＤＮＡクローンの単離）
種々のポリペプチドコード核酸配列を、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，  Ｉｎｃ．（Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）によって開発された自社所有シグナル配列発見アルゴリズムを、公開データベース（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ）および／もしくは私有データベース（ＬＩＦＥＳＥＱ（登録商標），Ｉｎｃｙｔｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）から得たＥＳＴならびにクラスター化してアセンブルしたＥＳＴフラグメントに対して適用することによって、同定した。そのシグナル配列アルゴリズムは、考慮中の配列または配列フラグメントの５’末端における最初のメチオニンコドンおよび必要に応じて第二のメチオニンコドン（ＡＴＧ）を取り囲むＤＮＡヌクレオチドの特徴に基づいて、分泌シグナルスコアを算出する。最初のＡＴＧの後のヌクレオチドは、いかなる終止コドンも含まずに少なくとも３５個の明確なアミノ酸をコードしなければならない。最初のＡＴＧが必要なアミノ酸を有する場合には、第二のＡＴＧは、試験しない。いずれの要件も満たない場合に、候補配列はスコア決定されない。ＥＳＴ配列が本物のシグナル配列を含むか否かを決定するために、そのＡＴＧコドンを取り囲むＤＮＡおよび対応するアミノ酸配列は、分泌シグナルと関連することが公知である１組の７つのセンサー（評価パラメーター）を使用してスコア決定される。このアルゴリズムの使用は、多数のポリペプチドコード核酸配列の同定をもたらした。
【０４１６】
上記の実施例１〜３に記載される技術を使用して、多数の全長ｃＤＮＡクローンを、本明細書において開示されるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ６９７およびＰＲＯ１４８０のポリペプチドをコードするものとして同定した。その後、これらのｃＤＮＡを、ブダペスト条約に基づいて、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ  ２０１１０−２２０９，ＵＳＡ）（ＡＴＣＣ）に、下記の表７において示されるように寄託した。さらに、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド（ＥＧＦＬ６（ヒトＥＧＦ様ドメイン，ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ６）としても公知である）をコードするＤＮＡ２１２９３７の配列を、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＦ１８６０８４から同定した。ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド（ＳＬＣ７Ａ５（ヒト溶質キャリアファミリー７，メンバー５のオルソログ）としても公知である）をコードするＤＮＡ２３７６３７を、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＢ０１７９０８から同定した。ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド（ＴＭＰＲＳＳ２（ヒト膜貫通プロテアーゼ，セリン２）としても公知である）をコードするＤＮＡ１９４６０７を、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＦ１２３４５３から同定した。
【０４１７】
【表７】
2007536931.tif 000027
これらの寄託物は、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約（ブダペスト条約）に基づいてなされた。これは、寄託日から３０年間、寄託物の生存培養物の維持を保証する。これらの寄託物は、ブダペスト条約に基づいてＡＴＣＣによって入手可能にされ、そしてＧｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．とＡＴＣＣとの間の同意に従う。このことは、関連する米国特許の発行の際または何らかの米国特許出願もしくは外国特許出願が公開された際（いずれか早い方）に公開されるその寄託物の培養物の子孫が永続的かつ無制限に利用可能であることを保証し、米国特許法第１２２条および関連する規則（３７  ＣＦＲ  §１．１４、８８６  ＯＧ  ６３８に対する特定の言及を含む）に従って、米国特許商標庁によって決定された者に対して上記子孫を利用可能な権利が付与されることを保証する。
【０４１８】
本出願の譲受人は、寄託された物質の培養物が、適切な条件下で培養した場合に死ぬか、失われるか、または破壊された場合には、その物質が、その物質の別の培養物によって通知時に速やかに置換されることに同意する。寄託物質の利用性は、特許法に従って何らかの政府当局によって付与された権利に違反して本発明を実施することに関するライセンスとして解釈されるべきではない。
【０４１９】
（実施例４：ヒトＰＲＯ２５６ポリペプチド［ＵＮＱ２２３］をコードするｃＤＮＡクローンの単離）
コンセンサスＤＮＡ配列を、上記実施例１に記載されるように、ｐｈｒａｐを使用して他のＥＳＴ配列に対してアセンブルした。このコンセンサス配列は、本明細書においてはＤＮＡ２８７２５と呼ぶ。このＤＮＡ２８７２５コンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、１）目的の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲするため、および２）ＰＲＯ２５６の全長コード配列のクローンを単離するためのプローブとして使用するために、合成した。フォワードＰＣＲプライマーおよびリバースＰＣＲプライマーは、一般的には、２０〜３０ヌクレオチドの範囲であり、しばしば、長さが約１００〜１０００ｂｐのＰＣＲ生成物を生成するように設計する。そのプローブ配列は、代表的には、長さが４０ｂｐ〜５５ｂｐである。ある場合には、コンセンサス配列が約１〜１．５ｋｂｐよりも長い場合には、さらなるオリゴヌクレオチドを合成する。全長クローンについていくつかのライブラリーをスクリーニングするために、そのライブラリー由来のＤＮＡを、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙに従って、ＰＣＲプライマー対を用いて、ＰＣＲ増幅によってスクリーニングした。その後、陽性ライブラリーを使用して、プローブオリゴヌクレオチドと、そのプライマー対のうちの１つとを使用して、目的の遺伝子をコードするクローンを単離した。
【０４２０】
一対のＰＣＲプライマー（フォワードおよびリバース）：
【０４２１】
【化４】
2007536931.tif 000028
を合成した。さらに、２つの合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブを、コンセンサスＤＮＡ２８７２５配列から構築した。これらのハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を有した：
【０４２２】
【化５】
2007536931.tif 000029
全長クローンについていくつかのライブラリーをスクリーニングするために、そのライブラリー由来のＤＮＡを、上記で同定されたＰＣＲプライマー対を用いて、ＰＣＲ増幅によってスクリーニングした。その後、陽性ライブラリーを使用して、上記プローブオリゴヌクレオチドと、上記ＰＣＲプライマー対のうちの１つとを使用して、ＰＲＯ２５６遺伝子をコードするクローンを単離した。
【０４２３】
上記ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡを、ヒト胎盤組織から単離した。このｃＤＮＡクローンを単離するために使用したｃＤＮＡライブラリーは、市販の試薬（例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから市販される試薬）を使用して、標準的方法によって構築した。そのｃＤＮＡを、ＮｏｔＩ部位を含むオリゴｄＴを用いてプライミングし、平滑〜ＳａｌＩヘミキナーゼ処理アダプターで連結し、ＮｏｔＩで切断し、ゲル電気泳動によって適切にサイズ決定し、唯一のＸｈｏＩ部位およびＮｏｔＩ部位において適切なクローニングベクター（例えば、ｐＲＫＢまたはｐＲＫＤ；ｐＲＫ５Ｂは、ＳｆｉＩ部位を含まないｐＲＫ５Ｄの前駆体である；Ｈｏｌｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５３：１２７８−１２８０（１９９１）を参照のこと）中に望ましい方向でクローン化した。
【０４２４】
上記のようにして単離したクローンのＤＮＡ配列決定によって、ＰＲＯ２５６の全長ＤＮＡ配列［本明細書においてＤＮＡ３５８８０−１１６０と呼ぶ］（配列番号１）およびＰＲＯ２５６の誘導したタンパク質配列が得られた。
【０４２５】
ＤＮＡ３５８８０−１１６０の全ヌクレオチド配列が、図１（配列番号１）において示される。クローンＤＮＡ３５８８０−１１６０は、ヌクレオチド位置１８８〜１９０において見かけ上の翻訳開始部位を含み、ヌクレオチド位置１７７５〜１７７７にある終止コドンにおいて終止する、１つのオープンリーディングフレームを含む。推定ポリペプチド前駆体は、５２９アミノ酸長（図２；配列番号２）である。クローンＤＮＡ３５８８０−１１６０を、１９９７年１０月１６日にＡＴＣＣに寄託した。これは、ＡＴＣＣ受託番号２０９３７９を割り当てられた。
【０４２６】
全長ＰＲＯ２５６ポリペプチドのアミノ酸配列の分析は、その一部が、ヒトビクニンタンパク質に対して有意な相同性を保有することを示唆し、それによってＰＲＯ２５６は新規なプロテイナーゼインヒビターであり得ることを示す。
【０４２７】
（実施例５：ヒトＰＲＯ３３４ポリペプチド［ＵＮＱ２９５］をコードするｃＤＮＡクローンの単離）
コンセンサスＤＮＡ配列を、上記実施例１に記載されるように、ｐｈｒａｐを使用して他のＥＳＴ配列に対してアセンブルした。このＤＮＡ２８７２５コンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、１）目的の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲするため、および２）ＰＲＯ３３４の全長コード配列のクローンを単離するためのプローブとして使用するために、合成した。
【０４２８】
フォワードＰＣＲプライマーおよびリバースＰＣＲプライマーを、ＰＲＯ３３４の決定のために合成した：
【０４２９】
【化６】
2007536931.tif 000030
さらに、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブを、ＰＲＯ３３４の決定のために構築した。これらのハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を有した：
ハイブリダイゼーションプローブ
【０４３０】
【化７】
2007536931.tif 000031
全長クローンについていくつかのライブラリーをスクリーニングするために、そのライブラリー由来のＤＮＡを、上記で同定されたＰＣＲプライマー対を用いて、ＰＣＲ増幅によってスクリーニングした。その後、陽性ライブラリーを使用して、上記プローブオリゴヌクレオチドと、上記プライマー対のうちの１つとを使用して、ＰＲＯ３３４遺伝子をコードするクローンを単離した。
【０４３１】
ｃＤＮＡクローンを単離するために使用したヒト胎児腎臓ｃＤＮＡライブラリーは、市販の試薬（例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから市販される試薬）を使用して、標準的方法によって構築した。
【０４３２】
上記で単離されたクローンのＤＮＡ配列決定によって、ＰＲＯ３３４の全長ＤＮＡ配列［本明細書においてＤＮＡ４１３７９−１２３６と呼ぶ］（配列番号５）およびＰＲＯ３３４の誘導したタンパク質配列が得られた。
【０４３３】
ＤＮＡ４１３７９−１２３６（ＵＮＱ２９５とも呼ばれる）の全ヌクレオチド配列が、図５（配列番号５）において示される。クローンＤＮＡ４１３７９−１２３６は、ヌクレオチド位置２０３〜２０５において見かけ上の翻訳開始部位を含み、ヌクレオチド位置１７３０〜１７３２にある終止コドンにおいて終止する、１つのオープンリーディングフレームを含む（図５）。推定ポリペプチド前駆体は、５０９アミノ酸長（図６；配列番号６）である。クローンＤＮＡ４１３７９−１２３６を、１９９７年１１月２１日にＡＴＣＣに寄託した。これは、ＡＴＣＣ受託番号  ２０９４８８を割り当てられた。
【０４３４】
全長ＰＲＯ３３４ポリペプチドのアミノ酸配列の分析は、その一部が、フィブリンタンパク質およびフィブリリンタンパク質に対して有意な相同性を保有することを示唆し、それによってＰＲＯ３３４はＥＧＦタンパク質ファミリーの新規メンバーであり得ることを示す。
【０４３５】
（実施例６：ヒトＰＲＯ７７０ポリペプチド［ＵＮＱ４０８］をコードするｃＤＮＡクローンの単離）
発現配列タグ（ＥＳＴ）の公開ＤＮＡデータベース（Ｍｅｒｃｋ／Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）を、全長マウスｍ−ＦＩＺＺ１  ＤＮＡを用いて検索し、ＥＳＴ（ＡＡ５２４３００と呼ばれる）を同定した。このＥＳＴは、ｍ−ＦＩＺＺ１  ＤＮＡと相同性を支援した。
【０４３６】
このＥＳＴ  ＡＡ５２４３００に対応する全長クローンを、Ｉｎｃｙｔｅ（Ｉｎｃｙｔｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）から購入して全体を配列決定した。
【０４３７】
全長クローンをコードする得られるＰＲＯ７７０の全ヌクレオチド配列を、図７（配列番号７）に示す。この全長クローン（ＤＮＡ５４２２８−１３６６−１と呼ぶ）（配列番号７）は、ヌクレオチド位置１００〜１０２において見かけ上の翻訳開始部位を含み（図７；配列番号７）、ヌクレオチド位置４３３〜４３５にある終止コドンにおいて終止する（太字下線によって示される）、１つのオープンリーディングフレームを含む（図５）。推定ＰＲＯ７７０ポリペプチド前駆体（２０アミノ酸の推定シグナル配列を含む）（すなわち、ＵＮＱ４０８、図８；配列番号８）は、１１１アミノ酸長（図６；配列番号６）であり、計算分子量１１，７３０およびｐＩ  ７．８２を有する。ｍ−ＦＩＺＺ１に対するその相同性（５０％、ＡＬＩＧＮソフトウェアを使用する）に基づいて、そのタンパク質は、ｍ−ＦＩＺＺ１のヒトホモログであると考えられ、ｈ−ＦＩＺＺ１と名づけられた。ＤＮＡ５４２２８−１３６６−１（配列番号７）を含むｃＤＮＡクローンを、１９９８年４月２３日にＡＴＣＣに寄託した。これは、ＡＴＣＣ受託番号２０９８０１を割り当てられた。
【０４３８】
（実施例７：ヒトＰＲＯ９８３ポリペプチド［ＵＮＱ４８４］をコードするｃＤＮＡクローンの単離）
コンセンサス配列を、上記の実施例１において記載されるように種々のＥＳＴ配列に対して得た。得られたコンセンサス配列は、本明細書においてＤＮＡ４７４７３と呼ばれる。種々の私有のＧｅｎｅｎｔｅｃｈ  ＥＳＴ配列を、このアセンブリにおいて使用した。このＤＮＡ４７４７３コンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、１）目的の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲするため、および２）ＰＲＯ９８３の全長コード配列のクローンを単離するためのプローブとして使用するために、合成した。
【０４３９】
一対のＰＣＲプライマー（フォワードおよびリバース）を合成した：
【０４４０】
【化８】
2007536931.tif 000032
さらに、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブを、ＤＮＡ４７４７３の決定のために構築した。これらのハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を有した：
ハイブリダイゼーションプローブ
【０４４１】
【化９】
2007536931.tif 000033
全長クローンについていくつかのライブラリーをスクリーニングするために、そのライブラリー由来のＤＮＡを、上記で同定されたＰＣＲプライマー対を用いて、ＰＣＲ増幅によってスクリーニングした。その後、陽性ライブラリーを使用して、上記プローブオリゴヌクレオチドと、上記プライマー対のうちの１つとを使用して、ＰＲＯ９８３遺伝子をコードするクローンを単離した。上記ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡは、ヒト骨髄（ＬＩＢ２５６）から単離した。
【０４４２】
上記のようにして単離したクローンのＤＮＡ配列決定によって、ＰＲＯ９８３［本明細書においてＵＮＱ４８４（ＤＮＡ５３９７７−１３７１）と呼ばれる］の全長ＤＮＡ配列（配列番号９）およびＰＲＯ９８３の誘導したタンパク質配列が得られた。
【０４４３】
ＵＮＱ４８４の全ヌクレオチド配列（ＤＮＡ５３９７７−１３７１）を、図９（配列番号９）に示す。クローンＵＮＱ４８４（ＤＮＡ５３９７７−１３７１）は、ヌクレオチド位置２３４〜２３６において見かけ上の翻訳開始部位を含み、ヌクレオチド位置９６３〜９６５にある終止コドンにおいて終止する（図９）、１つのオープンリーディングフレームを含む（配列番号９）。その推定ポリペプチド前駆体は、２４３アミノ酸長（図１０；配列番号１０）である。図１０において示される全長ＰＲＯ９８３タンパク質は、推定分子量約２７，２２８ダルトンおよびｐＩ約７．４３を有する。図１０（配列番号１０）に示される全長ＰＲＯ９８３配列の分析は、以下の特徴の存在を証明する：ほぼアミノ酸２２４〜ほぼアミノ酸２３９にある推定膜貫通ドメイン；ほぼアミノ酸６８〜ほぼアミノ酸７１にあるあり得るＮ−グリコシル化部位；およびほぼアミノ酸５９〜ほぼアミノ酸６４、ほぼアミノ酸６４〜ほぼアミノ酸６９、およびほぼアミノ酸２３５〜ほぼアミノ酸２４０にある３つのあり得るＮ−ミリストイル化部位。クローンＵＮＱ４８４（ＤＮＡ５３９７７−１３７１）は、１９９８年５月１４日にＡＴＣＣに寄託され、これは、ＡＴＣＣ受託番号２０９８６２を割り当てられた。
【０４４４】
全長ＰＲＯ９８３ポリペプチドのアミノ酸配列の分析は、このポリペプチドが、小胞結合型タンパク質であるＶＡＰ−３３に対して有意な相同性を有することを示唆し、それによって、ＰＲＯ９８３が、新規な小胞結合型膜タンパク質であり得ることを示す。より具体的には、Ｄａｙｈｏｆｆデータベース（バージョン３５．４５  ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  ３５）の分析は、ＰＲＯ９８３アミノ酸配列と、以下のＤａｙｈｏｆｆ配列：ＶＰ３３＿ＡＰＬＣＡ、ＣＥＬＦ３３Ｄ１１＿１２、ＣＥＬＦ４２Ｇ２＿２、Ｓ５０６２３、ＹＤＦＣ＿ＳＣＨＰＯ、ＣＥＬＦ５４Ｈ５＿２、ＣＥＬＺＣ１９６＿８、ＣＥＦ５７Ａ１０＿３、ＭＳＰ３＿ＧＬＯＲＯ、ＣＥＣ１５Ｈ１１＿１との間に有意な相同性を証明した。
【０４４５】
（実施例８：ヒトＰＲＯ１００９ポリペプチド［ＵＮＱ４９３］をコードするｃＤＮＡクローンの単離）
ネイティブヒトＰＲＯ１００９ポリペプチドをコードするｃＤＮＡクローン（ＤＮＡ５７１２９−１４１３）を、一次ｃＤＮＡクローンの５’末端を優先的に示すヒトＳＫ−Ｌｕ−１腺癌細胞株ｃＤＮＡライブラリーにおいて、酵母スクリーニングを使用することによって同定しちゃ。最初に、プレコンセンサス配列を同定し、それを、他のＥＳＴ配列に対するアライメントによって伸長してコンセンサス配列を形成した。上記のコンセンサス配列に基づくオリゴヌクレオチドを合成し、それを使用して、ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングし、それによって、全長ＤＮＡ５７１２９−１４１３クローンを得た。
【０４４６】
図１１に示される全長ＤＮＡ５７１２９−１４１３クローンは、ヌクレオチド位置４１〜４３において見かけ上の翻訳開始部位を含み、ヌクレオチド位置１８８６〜１８８８にある終止コドンにおいて終止する、１つのオープンリーディングフレームを含む（図１１；配列番号１１）。その推定ポリペプチド前駆体（図１２；配列番号１２）は、６１５アミノ酸長である。図１２はまた、そのシグナル配列、膜貫通ドメイン、ミリストイル化部位、グリコシル化部位、およびＡＭＰ結合ドメインのおよその位置を示す。ＰＲＯ１００９は、算出分子量約６８，１２５ダルトンおよび推定ｐＩ  ７．８２を有する。クローンＤＮＡ５７１２９−１４１３は、１９９８年６月１６日にＡＴＣＣに寄託され、これは、ＡＴＣＣ受託番号２０９９７７を割り当てられている。この寄託クローンは、実際の正確な配列を有すること、そして本明細書中における例示は、微細な通常の配列決定エラーを有し得ることが、理解される。
【０４４７】
全長配列のＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２配列アライメント分析（ＡＬＩＧＮコンピュータープログラムを使用する）に基づいて、ＰＲＯ１００９は、以下のようにＤａｙｈｏｆｆデータベースにおいて名づけられた少なくとも以下のタンパク質に対して、アミノ酸配列同一性を示す：  Ｆ６９８９３、ＣＥＦ２８Ｆ８＿２、ＢＳＹ１３９１７＿７、ＢＳＹ１３９１７＿７、Ｄ６９１８７、Ｄ６９６４９、ＸＣＲＰＦＢ＿１、Ｅ６４９２８、ＹＤＩＤ＿ＥＣＯＬＩ、ＢＮＡＣＳＦ８＿１およびＲＰＵ７５３６３＿２。
【０４４８】
（実施例９：ヒトＰＲＯ１１０７ポリペプチド［ＵＮＱ５５０］をコードするｃＤＮＡクローンの単離）
上記の実施例３に記載されるシグナル配列アルゴリズムの使用によって、Ｉｎｃｙｔｅデータベースからの特定のＥＳＴクラスター配列の同定が可能になった。その後、このＥＳＴクラスター配列を、種々の発現配列タグ（ＥＳＴ）データベース（これは、公開ＥＳＴデータベース（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ）および私有ＥＳＴ  ＤＮＡデータベース（ＬＩＦＥＳＥＱ（登録商標），Ｉｎｃｙｔｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を含んだ）と比較して、存在する相同性を同定した。相同性検索を、コンピュータープログラムＢＬＡＳＴまたはＢＬＡＳＴ２（Ａｌｔｓｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２６６：４６０−４８０（１９９６））を使用して実施した。公知タンパク質をコードしない７０（またはある場合には９０）以上のＢＬＡＳＴスコアを生じる比較を、プログラム「ｐｈｒａｐ」（Ｐｈｉｌ  Ｇｒｅｅｎ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｓｅａｔｔｌｅ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ）をを用いてクラスター化してコンセンサスＤＮＡ配列へとアセンブルした。それから得られたコンセンサス配列を、本明細書においてＤＮＡ５６４０２と呼ぶ。
【０４４９】
ＤＮＡ５６４０２配列と、Ｉｎｃｙｔｅ  ＥＳＴクローン番号３２０３６９４に含まれるＥＳＴ配列との間で観察される配列相同性を考慮して、Ｉｎｃｙｔｅ  ＥＳＴクローン番号３２０３６９４を購入し、そのｃＤＮＡインサートを得て配列決定した。そのインサートは、全長タンパク質をコードすることが見出された。このＤＮＡインサートの配列を、図１３において示し、本明細書においてＤＮＡ５９６０６−１４７１と呼ぶ。
【０４５０】
ＤＮＡ５９６０６−１４７１の全ヌクレオチド配列を、図１３（配列番号１３）に示す。クローンＤＮＡ５９６０６−１４７１は、配列番号１３（図１３）のヌクレオチド位置２４４〜２４６において見かけ上の翻訳開始部位を含み、ヌクレオチド位置１６７５〜１６７７にある終止コドンにおいて終止する、１つのオープンリーディングフレームを含む。図１４において示されるその推定ＰＲＯ１１０７ポリペプチド前駆体は、推定分子量約５４，６６８ダルトンおよびｐＩ約６．３３を有する。クローンＤＮＡ５９６０６−１４７１は、１９９８年６月９日にＡＴＣＣ受託番号２０９９４５としてＡＴＣＣに受託された。この寄託クローンは、実際核酸配列を有すること、そして本明細書中に提供される配列、公知の配列決定技術に基づくことが、理解される。
【０４５１】
全長ＰＲＯ１１０７ポリペプチドのアミノ酸配列の分析は、このポリペプチドが、ホスホジエステラーゼＩ／ヌクレオチドフィロホスファターゼ、ヒトインスリンレセプターチロシンキナーゼインヒビター、アルカリホスホジエステラーゼ、およびオートタキシンに対する有意な配列類似性を保有することを示唆し、それによって、ＰＲＯ１１０７が、これらのタンパク質の活性のうちの少なくとも１つもしくはすべてを有し得ること、およびＰＲＯ１１０７が新規なホスホジエステラーゼであることを示す。より具体的には、Ｄａｙｈｏｆｆデータベース（バージョン３５．４５  ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  ３５）の分析によって、ＰＲＯ１１０７アミノ酸配列と、少なくとも以下のＤａｙｈｏｆｆ配列：ＡＦ００５６３２＿１、Ｐ＿Ｒ７９１４８、ＲＮＵ７８７８７＿１、ＡＦ０６０２１８＿４、Ａ５７０８０およびＨＵＭＡＴＸＴ＿１との間の配列同一性が証明された。
【０４５２】
（実施例１０：ヒトＰＲＯ１１５８ポリペプチド［ＵＮＱ５８８］をコードするｃＤＮＡクローンの単離）
上記の実施例３に記載されるシグナル配列アルゴリズムの使用によって、Ｉｎｃｙｔｅデータベースからの単一のＥＳＴクラスター配列の同定が可能になった。その後、このＥＳＴクラスター配列を、種々の発現配列タグ（ＥＳＴ）データベース（これは、公開ＥＳＴデータベース（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ）および私有ＥＳＴ  ＤＮＡデータベース（ＬＩＦＥＳＥＱ（登録商標），Ｉｎｃｙｔｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を含んだ）と比較して、存在する相同性を同定した。相同性検索を、コンピュータープログラムＢＬＡＳＴまたはＢＬＡＳＴ２（Ａｌｔｓｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２６６：４６０−４８０（１９９６））を使用して実施した。公知タンパク質をコードしない７０（またはある場合には９０）以上のＢＬＡＳＴスコアを生じる比較を、プログラム「ｐｈｒａｐ」（Ｐｈｉｌ  Ｇｒｅｅｎ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｓｅａｔｔｌｅ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ）をを用いてクラスター化してコンセンサスＤＮＡ配列へとアセンブルした。それから得られたコンセンサス配列を、本明細書においてＤＮＡ５７２４８と呼ぶ。
【０４５３】
ＤＮＡ５７２４８配列と、Ｉｎｃｙｔｅ  ＥＳＴクローン番号２６４０７７６内に含まれるＥＳＴ配列との間で観察される配列相同性を考慮して、Ｉｎｃｙｔｅ  ＥＳＴクローン番号２６４０７７６を購入し、そのｃＤＮＡインサートを得て配列決定した。そのインサートは、全長タンパク質をコードすることが見出された。このＤＮＡインサートの配列を、図１５において示し、本明細書において  ＤＮＡ６０６２５−１５０７（配列番号１５）と呼ぶ。
【０４５４】
図１５において示される全長クローンは、ヌクレオチド位置１６３〜１６５において見かけ上の翻訳開始部位を含み、ヌクレオチド位置５３２〜５３４にある終止コドンにおいて終止する、１つのオープンリーディングフレームを含む（図１５；配列番号１５）。その推定ポリペプチド前駆体（図１６；配列番号１６）は、１２３アミノ酸長である。ＰＲＯ１１５８は、算出分子量約１３，１１３ダルトンおよびｐＩ約８．５３を有する。さらなる特徴として、ほぼアミノ酸１〜１９におけるシグナルペプチド配列、ほぼアミノ酸５６〜８０における膜貫通ドメイン、およびほぼアミノ酸３６〜３９におけるあり得るＮ−グリコシル化部位が挙げられる。クローンＤＮＡ６０６２５−１５０７は、１９９８年６月１６日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ受託番号２０９９７５を割り当てられている。
【０４５５】
Ｄａｙｈｏｆｆデータベース（バージョン３５．４５  ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  ３５）の分析（図１６（配列番号１６）に示される全長配列のＷＵ  ＢＬＡＳＴ２配列アライメント分析を使用する）は、ＰＲＯ１１５８アミノ酸配列と、以下のＤａｙｈｏｆｆ配列との間のいくらかの相同性を示した：ＡＴＡＣ００３１０５１０Ｆ１８Ａ８．１０、Ｐ＿Ｒ８５１５１、ＰＨＳ２＿ＳＯＬＴＵ、ＲＮＭＨＣＩＢＡＣ＿１、ＲＮＡ１ＦＭＨＣ＿１、Ｉ６８７７１、ＲＮＲＴ１Ａ１０Ｇ＿１、ＰＴＰＡ＿ＨＵＭＡＮ、ＨＵＭＧＡＣＡ＿１、およびＣＨＫＰＴＰＡ＿１。
【０４５６】
（実施例１１：ヒトＰＲＯ１２５０ポリペプチド［ＵＮＱ６３３］をコードするｃＤＮＡクローンの単離）
上記の実施例３に記載されるシグナル配列アルゴリズムの使用によって、ＩｎｃｙｔｅデータベースからのＥＳＴクラスター配列（Ｉｎｃｙｔｅ  ＥＳＴクラスター配列番号５６５２３）の同定が可能になった。その後、このＥＳＴクラスター配列を、種々の発現配列タグ（ＥＳＴ）データベース（これは、公開ＥＳＴデータベース（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ）および私有ＥＳＴ  ＤＮＡデータベース（ＬＩＦＥＳＥＱ（登録商標），Ｉｎｃｙｔｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を含んだ）と比較して、存在する相同性を同定した。相同性検索を、コンピュータープログラムＢＬＡＳＴまたはＢＬＡＳＴ２（Ａｌｔｓｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２６６：４６０−４８０（１９９６））を使用して実施した。公知タンパク質をコードしない７０（またはある場合には９０）以上のＢＬＡＳＴスコアを生じる比較を、プログラム「ｐｈｒａｐ」（Ｐｈｉｌ  Ｇｒｅｅｎ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｓｅａｔｔｌｅ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ）をを用いてクラスター化してコンセンサスＤＮＡ配列へとアセンブルした。それから得られたコンセンサス配列を、本明細書においてＤＮＡ５６１０３と呼ぶ。
【０４５７】
ＤＮＡ５６１０３配列と、Ｉｎｃｙｔｅ  ＥＳＴクローン番号３３７１７８４内に含まれるＥＳＴ配列との間で観察される配列相同性を考慮して、Ｉｎｃｙｔｅ  ＥＳＴクローン番号３３７１７８４６を購入し、そのｃＤＮＡインサートを得て配列決定した。そのインサートは、全長タンパク質をコードすることが見出された。このＤＮＡインサートの配列を、図１７において示し、本明細書においてＤＮＡ６０７７５−１５３２と呼ぶ。
【０４５８】
クローンＤＮＡ６０７７５−１５３２は、ヌクレオチド位置７４〜７６において見かけ上の翻訳開始部位を含み、ヌクレオチド位置２２９１〜２２９３４にある終止コドンにおいて終止する、１つのオープンリーディングフレームを含む（図１７；配列番号１７）。その推定ポリペプチド前駆体は、７３９アミノ酸長である（図１８；配列番号１８）。図１８において示されるＰＲＯ１２５０タンパク質は、推定分子量約８２，２６３ダルトンおよびｐＩ約７．５５を有する。図１８（配列番号１８）において示される全長ＰＲＯ１２５０配列の分析は、以下の存在を示す：ほぼアミノ酸６１〜ほぼアミノ酸８０におけるＩＩ型膜貫通ドメイン、ほぼアミノ酸３１４〜ほぼアミノ酸３２５における推定ＡＭＰ結合ドメイン、およびほぼアミノ酸１０２〜ほぼアミノ酸１０５、ほぼアミノ酸５８８〜ほぼアミノ酸５９１、およびほぼアミノ酸６１９〜ほぼアミノ酸６２２におけるあり得るＮ−グリコシル化部位。クローンＤＮＡ６０７７５−１５３２は、１９９８年９月１日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ受託番号２０３１７３を割り当てられている。
【０４５９】
Ｄａｙｈｏｆｆデータベース（バージョン３５．４５  ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  ３５）の分析（図１８（配列番号１８）に示される全長配列のＷＵ  ＢＬＡＳＴ２配列アライメント分析を使用する）は、ＰＲＯ１２５０アミノ酸配列と、以下のＤａｙｈｏｆｆ配列との間のいくらかの相同性を示した：ＬＣＦＢ＿ＨＵＭＡＮ、Ｓ５６５０８＿１、ＢＮＡＭＰＢＰ２＿１、ＢＮＡＣＳ７＿１、ＣＥＬＴ０８Ｂ１＿６、ＣＥＬＣ４６Ｆ４＿２、ＡＦ００８２０６＿６、ＣＥＬＲ０７Ｃ３＿１１、ＬＭＵ７０２５３＿２およびＡＦ００８２０６＿７。
【０４６０】
（実施例１２：ヒトＰＲＯ１３１７ポリペプチド［ＵＮＱ７８３］をコードするｃＤＮＡクローンの単離）
コンセンサスＤＮＡ配列を、上記の実施例１に記載されるようにｐｈｒａｐを使用して他のＥＳＴ配列に対してアセンブルした。このコンセンサス配列を、本明細書において「Ｃｏｎｓｅｎ８８６５」と呼ぶ。さらに、このＣｏｎｓｅｎ８８６５コンセンサス配列を、ＢＬＡＳＴとｐｈｒａｐとの反復サイクルを使用して伸長して、上記で考察したＥＳＴ配列を使用して上記コンセンサス配列を可能な限り伸長した。伸長したコンセンサス配列を、本明細書において「ＤＮＡ６３３３４」と呼ぶ。このＤＮＡ６３３３４コンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、１）目的の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲするため、および２）ＰＲＯ１３１７の全長コード配列のクローンを単離するためのプローブとして使用するために、合成した。
【０４６１】
ＰＣＲプライマー（フォワードおよびリバース）を合成した：：
【０４６２】
【化１０】
2007536931.tif 000034
さらに、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブを、コンセンサスＤＮＡ６３３３４配列から構築した。これらのハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を有した：
【０４６３】
【化１１】
2007536931.tif 000035
全長クローンについていくつかのライブラリーをスクリーニングするために、そのライブラリー由来のＤＮＡを、上記で同定されたＰＣＲプライマー対を用いて、ＰＣＲ増幅によってスクリーニングした。その後、陽性ライブラリーを使用して、上記プローブオリゴヌクレオチドと、上記プライマー対のうちの１つとを使用して、ＰＲＯ１３１７遺伝子をコードするクローンを単離した。そのｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡを、ヒト海馬組織から単離した。
【０４６４】
上記のようにして単離したクローンのＤＮＡ配列決定によって、ＰＲＯ１３１７の全長ＤＮＡ配列（本明細書においてＤＮＡ７１１６６−１６８５と呼ぶ［図１９、配列番号１９］；ならびにＰＲＯ１３１７の誘導したタンパク質配列が得られた。
【０４６５】
ＰＲＯ１３１７の全コード配列が、図１９（配列番号１９）において示される。クローン  ＤＮＡ７１１６６−１６８５は、ヌクレオチド位置１０５〜１０７において見かけ上の翻訳開始部位を含み、ヌクレオチド位置２３８８〜２３９０にある終止コドンにおいて終止する、１つのオープンリーディングフレームを含む。推定ポリペプチド前駆体は、７６１アミノ酸長を有し、推定分子量約８３，５７４ダルトンおよびｐＩ約６．７８（図２０；配列番号２０）を有する。
【０４６６】
Ｄａｙｈｏｆｆデータベース（バージョン３５．４５  ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  ３５）の分析（図２０（配列番号２０）に示される全長配列のＷＵ  ＢＬＡＳＴ２配列アライメント分析を使用する）は、ＰＲＯ１３１７アミノ酸配列と、以下のＤａｙｈｏｆｆ配列との間の有意な相同性を示した：Ｉ４８７４６、ＧＥＮ１３４１８、Ｐ＿Ｗ５８５４０、Ｐ＿２１７６５７、ＭＵＳＣ１＿１、Ｐ＿４７１３８０、Ｕ７３１６７＿５、ＨＳＵ３３９２０＿１、およびＧＧ８２８２４０＿１。
【０４６７】
クローンＤＮＡ７１１６６−１６８５は、１９９８年１０月２０日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ受託番号２０３３５５を割り当てられている。
【０４６８】
（実施例１３：ヒトＰＲＯ４３３４ポリペプチド［ＵＮＱ１８８９］をコードするｃＤＮＡクローンの単離）
上記の実施例３に記載されるシグナル配列アルゴリズムの使用によって、ＩｎｃｙｔｅデータベースからのＥＳＴクラスター配列の同定が可能になった。その後、このＥＳＴクラスター配列を、種々の発現配列タグ（ＥＳＴ）データベース（これは、公開ＥＳＴデータベース（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ）および私有ＥＳＴ  ＤＮＡデータベース（ＬＩＦＥＳＥＱ（登録商標），Ｉｎｃｙｔｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を含んだ）と比較して、存在する相同性を同定した。相同性検索を、コンピュータープログラムＢＬＡＳＴまたはＢＬＡＳＴ２（Ａｌｔｓｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２６６：４６０−４８０（１９９６））を使用して実施した。公知タンパク質をコードしない７０（またはある場合には９０）以上のＢＬＡＳＴスコアを生じる比較を、プログラム「ｐｈｒａｐ」（Ｐｈｉｌ  Ｇｒｅｅｎ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｓｅａｔｔｌｅ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ）をを用いてクラスター化してコンセンサスＤＮＡ配列へとアセンブルした。それから得られたコンセンサス配列を、本明細書においてＤＮＡ５６４２１と呼ぶ。
【０４６９】
ＤＮＡ５６４２１配列と、Ｉｎｃｙｔｅ  ＥＳＴクローン番号３３４７５３２内に含まれるＥＳＴ配列との間で観察される配列相同性を考慮して、上記Ｉｎｃｙｔｅクローンを購入し、そのｃＤＮＡインサートを得て配列決定した。このｃＤＮＡインサートの配列を、図２１において示し、本明細書においてＤＮＡ５９６０８−２５７７と呼ぶ。
【０４７０】
図２１において示される全長クローンは、ヌクレオチド位置８３〜８５において見かけ上の翻訳開始部位を含み、ヌクレオチド位置１４０４〜１４０６にある終止コドンにおいて終止する、１つのオープンリーディングフレームを含む（図２１；配列番号２１）。その推定ポリペプチド前駆体（図２２、配列番号２２）は、４４０アミノ酸長である。ＰＲＯ４３３４は、算出分子量約５０，２１１ダルトンおよびｐＩ約８．２９を有する。
【０４７１】
Ｄａｙｈｏｆｆデータベース（バージョン３５．４５  ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  ３５）の分析（図２２（配列番号２２）に示される全長配列のＷＵ  ＢＬＡＳＴ２配列アライメント分析を使用する）は、ＰＲＯ４３３４アミノ酸配列と、本明細書中に組み込まれる以下のＤａｙｈｏｆｆ配列との間の相同性を示した：ＡＢ０２０６８６＿１、ＰＣ１＿ＨＵＭＡＮ、Ｐ＿Ｒ７９１４８、ＰＣ１＿ＭＯＵＳＥ、ＲＮＵ７８７８８＿１、ＲＡＴＰＤＩＢ＿１、Ｐ＿Ｗ７５８５９、ＡＣ００５５８７＿１、Ｐ＿Ｒ８６５９５およびＰＰＤ１＿ＢＯＶＩＮ。
【０４７２】
クローンＤＮＡ５９６０８−２５７７は、１９９９年３月２３日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ受託番号２０３８７０を割り当てられている。
【０４７３】
（実施例１４：ヒトＰＲＯ４３９５ポリペプチド［ＵＮＱ１９２１］をコードするｃＤＮＡクローンの単離）
私有ＥＳＴ  ＤＮＡデータベース（ＬＩＦＥＳＥＱ（登録商標），Ｉｎｃｙｔｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を検索し、フィブリリンタンパク質と相同性を示すＥＳＴを、同定した。
【０４７４】
そのＤＮＡ３８２２８コンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、１）目的の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲするため、および２）ＰＲＯ４３９５の全長コード配列のクローンを単離するためのプローブとして使用するために、合成した。フォワードＰＣＲプライマーおよびリバースＰＣＲプライマーは、一般的には、２０ヌクレオチド〜３０ヌクレオチドの範囲であり、しばしば、全長約１００ｂｐ〜約１０００ｂｐのＰＣＲ生成物を生じるように設計する。そのプローブ配列は、代表的には、長さが４０ｂｐ〜５５ｂｐである。ある場合には、コンセンサス配列が約１〜１．５ｋｂｐよりも長い場合には、さらなるオリゴヌクレオチドを合成する。全長クローンについていくつかのライブラリーをスクリーニングするために、そのライブラリー由来のＤＮＡを、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙに従って、ＰＣＲプライマー対を用いて、ＰＣＲ増幅によってスクリーニングした。その後、陽性ライブラリーを使用して、上記プローブオリゴヌクレオチドと、上記プライマー対のうちの１つとを使用して、目的の遺伝子をコードするクローンを単離した。
【０４７５】
ＰＣＲプライマー（フォワードおよびリバース）：
【０４７６】
【化１２】
2007536931.tif 000036
を合成した。
【０４７７】
さらに、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブを、上記のコンセンサスＤＮＡ３８２２８配列から構築した。このハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を有した：
【０４７８】
【化１３】
2007536931.tif 000037
全長クローンについていくつかのライブラリーをスクリーニングするために、そのライブラリー由来のＤＮＡを、上記で同定されたＰＣＲプライマー対を用いて、ＰＣＲ増幅によってスクリーニングした。その後、陽性ライブラリーを使用して、上記プローブオリゴヌクレオチドと、上記ＰＣＲプライマー対のうちの１つとを使用して、ＰＲＯ４３９５遺伝子をコードするクローンを単離した。
【０４７９】
上記ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡを、ヒト胎児腎臓組織から単離した。このｃＤＮＡクローンを単離するために使用したｃＤＮＡライブラリーは、市販の試薬（例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから市販される試薬）を使用して、標準的方法によって構築した。そのｃＤＮＡを、ＮｏｔＩ部位を含むオリゴｄＴを用いてプライミングし、平滑〜ＳａｌＩヘミキナーゼ処理アダプターで連結し、ＮｏｔＩで切断し、ゲル電気泳動によって適切にサイズ決定し、唯一のＸｈｏＩ部位およびＮｏｔＩ部位において適切なクローニングベクター（例えば、ｐＲＫＢまたはｐＲＫＤ；ｐＲＫ５Ｂは、ＳｆｉＩ部位を含まないｐＲＫ５Ｄの前駆体である；Ｈｏｌｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５３：１２７８−１２８０（１９９１）を参照のこと）中に望ましい方向でクローン化した。
【０４８０】
上記のようにして単離したクローンのＤＮＡ配列決定によって、ＰＲＯ４３９５６の全長ＤＮＡ配列（本明細書においてＤＮＡ８０８４０−２６０５と呼ぶ）［図２３、配列番号２３］およびＰＲＯ４３９５の誘導したタンパク質配列が得られた。
【０４８１】
ＰＲＯ４３９５の全コード配列が、図２３（配列番号２３）において示される。クローンＤＮＡ８０８４０−２６０５は、図２３のヌクレオチド位置１７〜１９において見かけ上の翻訳開始部位を含み、ヌクレオチド位置１２３５〜１２３７にある終止コドンにおいて終止する、１つのオープンリーディングフレームを含む。推定ポリペプチド前駆体は、４０６アミノ酸長（図２４；配列番号２４）である。クローンＤＮＡ８０８４０−２６０５（ＵＮＱ１９２１）（ＤＮＡ８０８４０−２６０５と呼ばれる）を、１９９９年４月２０日にＡＴＣＣに寄託した。これは、ＡＴＣＣ受託番号２０３９４９を割り当てられている。図２４において示される全長ＰＲＯ４３９５たんぱく質は、推定分子量約４４１０３ダルトンおよびｐＩ約７．９３を有する。
【０４８２】
Ｄａｙｈｏｆｆデータベース（バージョン３５．４５  ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  ３５）の分析（図２４（配列番号２４）に示される全長配列のＷＵ  ＢＬＡＳＴ２配列アライメント分析を使用する）は、ＰＲＯ４３９５アミノ酸配列と、以下のＤａｙｈｏｆｆ配列（本明細書中に援用される配列および関連する文）との間の相同性を示した：Ｐ＿Ｗ０７５３９、Ｐ＿Ｗ５７６４５、Ｐ＿Ｗ５７６４６、Ｐ＿Ｒ９５１１５、＿Ｒ９３２５０、Ｐ＿Ｒ３７７４０、＿Ｗ５７６５１、Ｐ＿Ｒ３７７４１、Ｐ＿Ｗ０１４１８、およびＰ＿Ｒ９３２５４。
【０４８３】
（実施例１５：ヒトＰＲＯ９７９９ポリペプチド［ＵＮＱ３０１８］をコードするｃＤＮＡクローンの単離）
（１．オリゴｄＴプライムｃＤＮＡライブラリーの調製）
ｍＲＮＡを、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから得た試薬およびプロトコル（Ｆａｓｔ  Ｔｒａｃｋ  ２）を使用して、ヒト精巣組織から単離した。このＲＮＡを使用して、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤから得た試薬およびプロトコル（Ｓｕｐｅｒ  Ｓｃｒｉｐｔ  Ｐｌａｓｍｉｄ  Ｓｙｓｔｅｍ）を使用して、ベクターｐＲＫ５Ｄ中にてオリゴｄＴプライムｃＤＮＡライブラリーを生成した。この手順において、その二本鎖ｃＤＮＡを、１０００ｂｐよりも大きなサイズにし、ＳａｌＩ／ＮｏｔＩリンカー処理したｃＤＮＡを、ＸｈｏＩ／ＮｏｔＩ切断済みベクター中にクローン化した。ｐＲＫ５Ｄは、ｓｐ６転写開始部位を有し、その後に、ＳｆｉＩ制限酵素部位を有し、その後に、ＸｈｏＩ／ＮｏｔＩ  ｃＤＮＡクローニング部位を有する、クローニングベクターである。
【０４８４】
（２．ランダムプライムｃＤＮＡライブラリーの調製）
二次ｃＤＮＡライブラリーを、一次ｃＤＮＡクローンの５’末端を優先的に示すために生成した。ｓｐ６  ＲＮＡを、（上記の）一次ライブラリーから生成し、このＲＮＡを使用して、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから得た試薬およびプロトコル（上記のＳｕｐｅｒ  Ｓｃｒｉｐｔ  Ｐｌａｓｍｉｄ  Ｓｙｓｔｅｍ）を使用して、ベクターｐＳＳＴ−ＡＭＹ．０においてランダムプライムｃＤＮＡライブラリーを生成した。この手順において、その二本鎖ｃＤＮＡを、５００〜１０００ｂｐのサイズにし、平滑〜ＮｏｔＩアダプターで連結し、ＳｆｉＩで切断し、そしてＳｆｉＩ／ＮｏｔＩ切断済みベクター中にクローン化した。ｐＳＳＴ−ＡＭＹ．０は、酵母アルコールデヒドロゲナーゼプロモーターを有し、その後にｃＤＮＡクローニング部位およびマウスアミラーゼ配列（分泌シグナルを含まない成熟配列）を有し、その後に、クローニング部位の後に酵母アルコールデヒドロゲナーゼを有する、クローニングベクターである。従って、アミラーゼ配列とインフレームで融合されたこのベクター中にクローン化されたｃＤＮＡは、適切にトランスフェクトされた酵母コロニーからアミラーゼの分泌をもたらす。
【０４８５】
（３．形質転換および検出）
上記段落２に記載されたライブラリーに由来するＤＮＡを、氷上で冷却し、そのＤＮＡに、エレクトロコンピテントなＤＨ１０Ｂ細菌（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，２０ｍｌ）を添加した。その後、この細菌・ベクター混合物を、製造業者によって推奨されるようにエレクトロポレートした。その後、ＳＯＣ培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，１ｍｌ）を添加し、その混合物を、３７℃にて３０分間インキュベートした。その後、その形質転換体を、アンピシリンを含む２０個の標準的な１５０ｍｍ  ＬＢプレート上にプレーティイングし、１６時間インキュベートした（３７℃）。陽性コロニーをそのプレートから掻き取り、そのＤＮＡを、標準的プロトコル（例えば、ＣｓＣｌ勾配）を使用して、細菌ペレットから単離した。その後、精製したＤＮＡを、下記の酵母プロコールに続けて使用した。
【０４８６】
その酵母方法は、３つのカテゴリーに分割された：（１）プラスミド／ｃＤＮＡ組み合わせベクターによる酵母の形質転換；（２）アミラーゼを分泌する酵母クローンの検出および単離；ならびに（３）その酵母コロニーからのインサートの直接的ＰＣＲ増幅ならびに配列決定およびさらなる分析のためのそのＤＮＡの精製であった。
【０４８７】
使用した酵母株は、ＨＤ５６−５Ａ（ＡＴＣＣ−９０７８５）であった。この株は、以下の遺伝子型を有する：  ＭＡＴα，ｕｒａ３−５２，ｌｅｕ２−３，ｌｅｕ２−１１２，ｈｉｓ３−１１，ｈｉｓ３−１５，ＭＡＬ＋，ＳＵＣ＋，ＧＡＬ＋。好ましくは、欠損性翻訳後経路を有する酵母変異体を、使用し得る。そのような変異体は、ｓｅｃ７１、ｓｅｃ７２、ｓｅｃ６２においてトランスロケーション欠損性対立遺伝子を有し得、短縮型ｓｅｃ７１が、最も好ましい。あるいは、これらの遺伝子の正常の作動を妨害するアンタゴニスト（アンチセンスヌクレオチドおよび／もしくはリガンドを含む）、この翻訳後経路に関与する他のタンパク質（例えば、ＳＥＣ６１ｐ、ＳＥＣ７２ｐ、ＳＥＣ６２ｐ、ＳＥＣ６３ｐ、ＴＤＪ１ｐもしくはＳＳＡ１ｐ−４ｐ）、またはこれらのタンパク質の複合体形成に関与する他のタンパク質もまた、好ましくは、アミラーゼ発現酵母と組み合わせて使用され得る。
【０４８８】
形質転換を、Ｇｉｅｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．，２０：１４２５（１９９２）により概略されたプロトコルに基づいて実施した。その後、形質転換細胞を、寒天から、ＹＥＰＤ複合培地（１００ｍｌ）へと接種し、そして３０℃にて一晩増殖させた。そのＹＥＰＤ培地は、Ｋａｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｙｅａｓｔ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ｐ．２０７（１９９４）に記載されるように調製した。その後、その一晩晩用物を、新鮮なＹＥＰＤ培地（５００ｍｌ）中に約２×１０６細胞／ｍｌ（約ＯＤ６００＝０．１）になるように希釈し、そして１×１０７細胞／ｍｌ（約ＯＤ６００＝０．４-〜０．５）になるまで再増殖させた。
【０４８９】
その後、その細胞を収集し、Ｓｏｒｖａｌ  ＧＳ３ローター中にあるＧＳ３ローターボトル中に５０００ｒｐｍにて５分間移入することによって形質転換用に調製し、上清を捨て、その後、滅菌水中に再懸濁し、Ｂｅｃｋｍａｎ  ＧＳ−６ＫＲ遠心分離機において３，５００ｒｐｍにて５０ｍｌファルコンチューブにおいて再度遠心分離した。その上清を捨て、その後、その細胞を、ＬｉＡｃ／ＴＥ（１０ｍｌ，１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，１ｍＭ  ＥＤＴＡ  ｐＨ７．５，１００ｍＭ  Ｌｉ２ＯＯＣＣＨ３）で洗浄し、ＬｉＡｃ／ＴＥ（２．５ｍｌ）中に再懸濁した。
【０４９０】
形質転換は、調製した細胞（１００μｌ）を、新たに変性させた一本鎖サケ精子ＤＮＡ（Ｌｏｆｓｔｒａｎｄ  Ｌａｂｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）と混合すること、そして微量遠心管においてＤＮＡ（１  μｇ，体積＜１０μｌ）を形質転換することによって、行った。その混合物を、ボルテックスすることによって短く混合し、その後、４０％  ＰＥＧ／ＴＥ（６００μｌ，４０％ポリエチレングリコール−４０００，１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，１ｍＭ  ＥＤＴＡ，１００ｍＭ  Ｌｉ２ＯＯＣＣＨ３，ｐＨ  ７．５）を添加した。この混合物を穏やかに混合し、３０分間攪拌しながら３０℃においてインキュベートした。その後、その細胞に、４２℃で１５分間熱ショックを与え、その反応容器を、微量遠心機において１２，０００ｒｐｍにて５秒間〜１０秒間遠心分離させ、デカントし、そしてＴＥ（５００μｌ，１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，１ｍＭ  ＥＤＴＡ  ｐＨ  ７．５）中に再懸濁し、その後、再遠心分離した。その後、その細胞をＴＥ（１ｍｌ）中に希釈し、アリコート（２００μｌ）を、１５０ｍｍ増殖プレート（ＶＷＲ）中の以前に調製した選択培地上にスプレッディングした。
【０４９１】
あるいは、複数回の小さな反応の代わりに、この形質転換を、１回の大規模反応を使用して実施し、試薬量は適宜拡大した。
【０４９２】
使用した選択培地は、Ｋａｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｙｅａｓｔ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ｐ．２０８−２１０（１９９４）において記載されたようにして調製される、ウラシルを欠く合成複合デキストロース寒天（ＳＣＤ−Ｕｒａ）であった。形質転換体を、３０℃にて２〜３日間増殖させた。
【０４９３】
アミラーゼ分泌コロニーの検出を、選択増殖培地に赤色デンプンを含めることによって実施した。デンプンを、Ｂｉｅｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１７２：１７６−１７９（１９８８）によって記載される手順に従って、赤色色素（Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｒｅｄ−１２０，Ｓｉｇｍａ）に結合した。その結合型デンプンを、上記のＳＣＤ−Ｕｒａ寒天プレート中に、最終濃度０．１５％（ｗ／ｖ）で組込み、リン酸カリウムでｐＨ  ７．０になるように緩衝化した（最終濃度５０〜１００ｍＭ）。
【０４９４】
陽性コロニーを選択し、新しい選択番地（１５０ｍｍプレート）に線引きして、充分に単離されて同定可能なシングルコロニーを得た。アミラーゼ選択について陽性である充分に単離されたシングルコロニーは、緩衝化ＳＣＤ−Ｕｒａ寒天中へ赤色デンプンを直接組み込むことによって検出した。陽性コロニーは、それがデンプンを分解してその陽性コロニーの周囲に直接可視化される明瞭なハロを生じる能力によって、決定した。
【０４９５】
（４．ＰＣＲ増幅によるＤＮＡの単離）
陽性コロニーを単離した場合、その一部を、爪楊枝で拾い、９６ウェルプレート中の滅菌水（３０μｌ）中に希釈した。この時点で、その陽性コロニーを、凍結してその後に分析するまで保存するか、またはすぐに増幅した。細胞アリコート（５μｌ）を、０．５μｌ  Ｋｌｅｎｔａｑ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）；４．０μｌ  １０ｍＭ  ｄＮＴＰ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ−Ｃｅｔｕｓ）；２．５μｌ  Ｋｅｎｔａｑ緩衝液（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）；０．２５μｌ  フォワードオリゴ１；０．２５μｌリバースオリゴ２；１２．５μｌ蒸留水を含む２５μｌ体積において、ＰＣＲ反応のためのテンプレートとして使用した。フォワードオリゴヌクレオチド１の配列は、
【０４９６】
【化１４】
2007536931.tif 000038
であった。リバースオリゴヌクレオチド２の配列は、
【０４９７】
【化１５】
2007536931.tif 000039
であった。その後、ＰＣＲを、以下のように実施した：
【０４９８】
【化１６】
2007536931.tif 000040
上記オリゴヌクレオチドの下線領域は、ＡＤＨプロモーター領域およびアミラーゼ領域にそれぞれアニールし、インサートが存在しない場合には、ベクターｐＳＳＴ−ＡＭＹ．０から３０７ｂｐ領域を増幅した。代表的には、これらのオリゴヌクレオチドの５’末端の最初の１８ヌクレオチドは、配列決定プライマーのアニーリング部位を含んだ。従って、空のベクターからのＰＣＲ反応の全生成物は、３４３ｂｐであった。しかし、シグナル配列に融合したｃＤＮＡは、それよりもかなり大きなヌクレオチド配列を生じた。
【０４９９】
ＰＣＲの後、その反応のアリコート（５μｌ）を、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（上記）により記載されるようなＴｒｉ−ホウ酸−ＥＤＴＡ（ＴＢＥ）緩衝系を使用して、１％アガロースゲル電気泳動によって試験した。４００ｂｐよりも大きな単一の強いＰＣＲ生成物を生じるクローンを、９６  Ｑｉａｑｕｉｃｋ  ＰＣＲ  ｃｌｅａｎ−ｕｐ  ｃｏｌｕｍｎ（Ｑｉａｇｅｎ  Ｉｎｃ．，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ）で精製した後に、ＤＮＡ配列決定によってさらに分析した。
【０５００】
（５．全長クローンの同定）
上記のスクリーニングにおいて単離されたｃＤＮＡ配列は、ＤＮＡ８２９５３と呼ばれる。発現配列タグ（ＥＳＴ）ＤＮＡデータベース（Ｉｎｃｙｔｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を探索し、ＤＮＡ８２９５３に対して相同性を示すＥＳＴを同定した。
【０５０１】
その後、ＥＳＴクローン番号１９３３１８６をＩｎｃｙｔｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡから購入し、そのクローンのｃＤＮＡインサートを得て全体を配列決定した。
【０５０２】
そのクローン（ＤＮＡ１０８６９６−２９６６と本明細書中で呼ぶ）の全ヌクレオチド配列を、図２７（配列番号２７）において示す。そのＤＮＡ１０８６９６−２９６６クローンは、ヌクレオチド位置９８〜１００において見かけ上の翻訳開始部位を含み、ヌクレオチド位置１７３０〜１７３２にある終止コドンを含む、１つのオープンリーディングフレームを含む（図２７；配列番号２７）。その推定ポリペプチド前駆体は、５４４アミノ酸長であり、算出分子量約６２，２６３ダルトンおよびｐＩ約９．１７を有する。図２８（配列番号２８）において示される全長ＰＲＯ９７９９配列の分析は、図２８において示される種々の重要なポリペプチドドメインの存在を証明し、それらの重要なポリペプチドドメインについて与えられる位置は、上記のような近似値である。クローンＤＮＡ１０８６９６−２９６６は、２０００年８月１日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−２３１５を割り当てられている。
【０５０３】
Ｄａｙｈｏｆｆデータベース（バージョン３５．４５  ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  ３５）の分析（図２８（配列番号２８）に示される全長配列のＡＬＩＧＮ−２配列アライメント分析を使用する）は、ＰＲＯ９７９９アミノ酸配列と、以下のＤａｙｈｏｆｆ配列との間の配列相同性を示した：ＢＢ６１＿ＲＡＢＩＴおよびＡＫ０００１３４＿１。
【０５０４】
（実施例１６：ヒトＰＲＯ２１１７５ポリペプチド［ＵＮＱ３０９６］をコードするｃＤＮＡクローンの単離）
Ｍｅｒｃｋ／Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙから得た発現配列タグ（ＥＳＴ）ＤＮＡデータベースを検索し、インターロイキン１７に対して相同性を示すＥＳＴを同定した。
【０５０５】
種々の組織由来の５０種の異なるヒトｃＤＮＡライブラリーのプールを、クローニングにおいて使用した。ヒトＰＲＯ２１１７５をコードするｃＤＮＡクローンを単離するために使用したｃＤＮＡライブラリーは、市販の試薬（例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから市販される試薬）を使用して、標準的方法によって構築した。そのｃＤＮＡを、ＮｏｔＩ部位を含むオリゴｄＴを用いてプライミングし、平滑〜ＳａｌＩヘミキナーゼ処理アダプターで連結し、ＮｏｔＩで切断し、ゲル電気泳動によって適切にサイズ決定し、唯一のＸｈｏＩ部位およびＮｏｔＩ部位において適切なクローニングベクター（例えば、ｐＲＫＢまたはｐＲＫＤ；ｐＲＫ５Ｂは、ＳｆｉＩ部位を含まないｐＲＫ５Ｄの前駆体である；Ｈｏｌｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５３：１２７８−１２８０（１９９１）を参照のこと）中に望ましい方向でクローン化した。
【０５０６】
その後、上記のＥＳＴ配列に基づいて、オリゴヌクレオチドプローブを、１）目的の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲするため、および２）ＰＲＯ２１１７５６の全長コード配列のクローンを単離するためのプローブとして使用するために、合成した。フォワードＰＣＲプライマーおよびリバースＰＣＲプライマーは、一般的には、２０〜３０ヌクレオチドの範囲であり、しばしば、長さが約１００〜１０００ｂｐのＰＣＲ生成物を生成するように設計する。そのプローブ配列は、代表的には、長さが４０ｂｐ〜５５ｂｐである。ある場合には、コンセンサス配列が約１〜１．５ｋｂｐよりも長い場合には、さらなるオリゴヌクレオチドを合成する。全長クローンについていくつかのライブラリーをスクリーニングするために、そのライブラリー由来のＤＮＡを、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙに従って、ＰＣＲプライマー対を用いて、ＰＣＲ増幅によってスクリーニングした。その後、陽性ライブラリーを使用して、上記プローブオリゴヌクレオチドと、上記プライマー対のうちの１つとを使用して、目的の遺伝子をコードするクローンを単離した。
【０５０７】
使用したオリゴヌクレオチドプローブは、以下の通りであった：
【０５０８】
【化１７】
2007536931.tif 000041
全長クローンを同定した。この全長クローンは、ヌクレオチド位置１〜３において見かけ上の翻訳開始部位を含み、ヌクレオチド位置６０７〜６０９にある終止コドンを含む、１つのオープンリーディングフレームを含む（図２９、配列番号２９）（本明細書において、ＤＮＡ１７３８９４−２９４７と同定される）。推定ポリペプチド前駆体は、２０２アミノ酸長であり、計算分子量２１，８７９および推定ｐＩ  ９．３を有する。図３０（配列番号３０）において示される全長ＰＲＯ２１１７５配列の分析は、図３０において示される種々の重要なポリペプチドドメインの存在を証明し、それらの重要なポリペプチドドメインについて与えられる位置は、上記のような近似値である。染色体マッピングは、ＰＲＯ２１１７５コード核酸が、ヒトにおいて１３ｑ１１にマッピングされることを示した。クローンＤＮＡ１７３８９４−２９４７は、２０００年６月２０日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−２１０８を割り当てられている。
【０５０９】
単離された全長ＰＲＯ２１１７５のアミノ酸配列の分析は、このＰＲＯ２１１７５が、ＩＬ−１７と類似性を有することを示唆し、それによって、ＰＲＯ２１１７５が、新規なサイトカインであり得ることを示し、これは、本明細書においてＩＬ−１７Ｄと呼ばれる。具体的には、上記のタンパク質データベース（バージョン３５．４５  ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  ３５）の分析（図３０（配列番号３０）に示される全長配列のＡＬＩＧＮ−２配列アライメント分析を使用する）は、ＰＲＯ２１１７５アミノ酸配列と、以下の配列との間の配列同一性を示した：ＡＦ１５２０９９＿１。
【０５１０】
（実施例１７：ヒトＰＲＯ１９８３７ポリペプチド［ＵＮＱ５９３１］をコードするｃＤＮＡクローンの単離）
Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ公開データベースからの約９５０個の公知の分泌タンパク質に由来する細胞外ドメイン（ＥＣＤ）配列（存在する場合は、分泌シグナル配列を含む）を、ＥＳＴデータベースを検索するために使用した。そのＥＳＴデータベースは、公開データベース（例えば、Ｄａｙｈｏｆｆ、ＧｅｎＢａｎｋ）および私有データベース（例えば、ＬＩＦＥＳＥＱ（登録商標），Ｉｎｃｙｔｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を包含した。その検索は、コンピュータプログラムであるＢＬＡＳＴまたはＢＬＡＳＴ−２（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２６６：４６０−４８０（１９９６））を使用して、ＥＳＴ配列の６フレーム翻訳に対するＥＣＤタンパク質配列の比較として実施した。公知タンパク質をコードしないＢＬＡＳＴスコアが７０（またはある場合には９０）以上である比較を、クラスター化し、そしてプログラムである「ｐｈｒａｐ」（Ｐｈｉｌ  Ｇｒｅｅｎ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）を用いてコンセンサスＤＮＡ配列へとアセンブルした。
【０５１１】
コンセンサスＤＮＡ配列を、上記の実施例１に記載されるようにｐｈｒａｐを使用して他のＥＳＴ配列に対してアセンブルした。このコンセンサス配列を、本明細書においてＤＮＡ１３１７３６と呼ぶ。ある場合には、このＤＮＡ１３１７３６コンセンサス配列は、中間体コンセンサスＤＮＡ配列に由来し、この配列は、ＢＬＡＳＴとｐｈｒａｐとの反復サイクルを使用して伸長して、上記で考察したＥＳＴ配列供給源を使用して中間体コンセンサス配列を可能な限り伸長した。
【０５１２】
このＤＮＡ１３１７３６コンセンサス配列に基づいて、ｆｌｉｐクローニングを実施した。オリゴヌクレオチドを、１）目的の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲするため、および２）ＰＲＯ１９８３７の全長コード配列のクローンを単離するためのプローブとして使用するために、合成した。フォワードＰＣＲプライマーおよびリバースＰＣＲプライマーは、一般的には、２０ヌクレオチド〜３０ヌクレオチドの範囲であり、しばしば、全長約１００ｂｐ〜約１０００ｂｐのＰＣＲ生成物を生じるように設計する。そのプローブ配列は、代表的には、長さが４０ｂｐ〜５５ｂｐである。ある場合には、コンセンサス配列が約１〜１．５ｋｂｐよりも長い場合には、さらなるオリゴヌクレオチドを合成する。全長クローンについていくつかのライブラリーをスクリーニングするために、そのライブラリー由来のＤＮＡを、Ｓｃｈａｎｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１６：４１４−４１６（１９９４）に従って、上記ＰＣＲプライマー対を用いて、Ｆｌｉｐ  ＰＣＲ増幅によってスクリーニングした。その後、陽性ライブラリーを使用して、上記プローブオリゴヌクレオチドと、上記プライマー対のうちの１つとを使用して、目的の遺伝子をコードするクローンを単離した。
【０５１３】
ＰＣＲプライマー（フォワードおよびリバース）を合成した：
【０５１４】
【化１８】
2007536931.tif 000042
さらに、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブを、上記のコンセンサスＤＮＡ１３１７３６配列から構築した。このハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を有した：
ハイブリダイゼーションプローブ：
【０５１５】
【化１９】
2007536931.tif 000043
上記ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡを、ヒト組織から単離した。このｃＤＮＡクローンを単離するために使用したｃＤＮＡライブラリーは、市販の試薬（例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから市販される試薬）を使用して、標準的方法によって構築した。そのｃＤＮＡを、ＮｏｔＩ部位を含むオリゴｄＴを用いてプライミングし、平滑〜ＳａｌＩヘミキナーゼ処理アダプターで連結し、ＮｏｔＩで切断し、ゲル電気泳動によって適切にサイズ決定し、唯一のＸｈｏＩ部位およびＮｏｔＩ部位において適切なクローニングベクター（例えば、ｐＲＫＢまたはｐＲＫＤ；ｐＲＫ５Ｂは、ＳｆｉＩ部位を含まないｐＲＫ５Ｄの前駆体である；Ｈｏｌｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５３：１２７８−１２８０（１９９１）を参照のこと）中に望ましい方向でクローン化した。
【０５１６】
上記のようにして単離したクローンのＤＮＡ配列決定によって、ＰＲＯ１９８３７の全長ＤＮＡ配列（本明細書においてＤＮＡ１４８００９−２８８９と呼ぶ）［図３１、配列番号３１］およびＰＲＯ１９８３の誘導したタンパク質配列が得られた。
【０５１７】
上記で同定された全長クローンは、ヌクレオチド位置２１７〜２１９において見かけ上の翻訳開始部位を含み、ヌクレオチド位置２３６８〜２３７０にある終止コドンを含む、１つのオープンリーディングフレームを含む（図３１、配列番号３１）。推定ポリペプチド前駆体は、７１７アミノ酸長を有し、算出分子量約７７，７５０ダルトンおよび推定ｐＩ約５．９２を有する。図３２（配列番号３２）において示される全長ＰＲＯ１９８３７配列の分析は、図３２において示される種々の重要なポリペプチドドメインの存在を証明し、それらの重要なポリペプチドドメインについて与えられる位置は、上記のような近似値である。クローンＤＮＡ１４８００９−２８８９６は、２０００年５月９日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１８３９を割り当てられている。
【０５１８】
Ｄａｙｈｏｆｆデータベース（バージョン３５．４５  ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  ３５）の分析（図３２（配列番号３２）に示される全長配列のＡＬＩＧＮ−２配列アライメント分析を使用する）は、ＰＲＯ１９８３７アミノ酸配列と、以下のＤａｙｈｏｆｆ配列との間の配列同一性を示した：ＡＦ１８１６４４＿１、ＡＦ２００３４８＿１、Ｐ＿Ｗ８１０３０、ＡＢ０３２６０２＿１、ＡＦ２１７５２５＿１、Ｐ＿Ｙ０８４０４、ＡＦ０４０９９０＿１、Ｐ＿Ｗ８２９３７、ＡＢ０１３８０２＿１、およびＯＰＣＭ＿ＨＵＭＡＮ。
【０５１９】
（実施例１８：ヒトＰＲＯ２１３３１ポリペプチド［ＵＮＱ６４２７］をコードするｃＤＮＡクローンの単離）
Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ公開データベースからの約９５０個の公知の分泌タンパク質に由来する細胞外ドメイン（ＥＣＤ）配列（存在する場合は、分泌シグナル配列を含む）を、ＥＳＴデータベースを検索するために使用した。そのＥＳＴデータベースは、公開データベース（例えば、Ｄａｙｈｏｆｆ、ＧｅｎＢａｎｋ）および私有データベース（例えば、ＬＩＦＥＳＥＱ（登録商標），Ｉｎｃｙｔｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を包含した。その検索は、コンピュータプログラムであるＢＬＡＳＴまたはＢＬＡＳＴ−２（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２６６：４６０−４８０（１９９６））を使用して、ＥＳＴ配列の６フレーム翻訳に対するＥＣＤタンパク質配列の比較として実施した。公知タンパク質をコードしないＢＬＡＳＴスコアが７０（またはある場合には９０）以上である比較を、クラスター化し、そしてプログラムである「ｐｈｒａｐ」（Ｐｈｉｌ  Ｇｒｅｅｎ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）を用いてコンセンサスＤＮＡ配列へとアセンブルした。
【０５２０】
コンセンサスＤＮＡ配列を、上記のようにｐｈｒａｐを使用して他のＥＳＴ配列に対してアセンブルした。このコンセンサス配列を、本明細書においてＤＮＡ１３９１００と呼ぶ。ある場合には、このＤＮＡ１３９１００コンセンサス配列は、中間体コンセンサスＤＮＡ配列に由来し、この配列は、ＢＬＡＳＴとｐｈｒａｐとの反復サイクルを使用して伸長して、上記で考察したＥＳＴ配列供給源を使用して中間体コンセンサス配列を可能な限り伸長した。
【０５２１】
このＤＮＡ１３９１００コンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、１）目的の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲするため、および２）ＰＲＯ２１３３１の全長コード配列のクローンを単離するためのプローブとして使用するために、合成した。フォワードＰＣＲプライマーおよびリバースＰＣＲプライマーは、一般的には、２０ヌクレオチド〜３０ヌクレオチドの範囲であり、しばしば、全長約１００ｂｐ〜約１０００ｂｐのＰＣＲ生成物を生じるように設計する。そのプローブ配列は、代表的には、長さが４０ｂｐ〜５５ｂｐである。ある場合には、コンセンサス配列が約１〜１．５ｋｂｐよりも長い場合には、さらなるオリゴヌクレオチドを合成する。全長クローンについていくつかのライブラリーをスクリーニングするために、そのライブラリー由来のＤＮＡを、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（上記）に従って、上記ＰＣＲプライマー対を用いて、ＰＣＲ増幅によってスクリーニングした。その後、陽性ライブラリーを使用して、上記プローブオリゴヌクレオチドと、上記プライマー対のうちの１つとを使用して、目的の遺伝子をコードするクローンを単離した。
【０５２２】
ＰＣＲプライマー（フォワードおよびリバース）を合成した：
【０５２３】
【化２０】
2007536931.tif 000044
さらに、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブを、上記のコンセンサスＤＮＡ１３９１００配列から構築した。このハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を有した：
【０５２４】
【化２１】
2007536931.tif 000045
上記ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡを、ヒト組織の混合物から単離した。このｃＤＮＡクローンを単離するために使用したｃＤＮＡライブラリーは、市販の試薬（例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから市販される試薬）を使用して、標準的方法によって構築した。そのｃＤＮＡを、ＮｏｔＩ部位を含むオリゴｄＴを用いてプライミングし、平滑〜ＳａｌＩヘミキナーゼ処理アダプターで連結し、ＮｏｔＩで切断し、ゲル電気泳動によって適切にサイズ決定し、唯一のＸｈｏＩ部位およびＮｏｔＩ部位において適切なクローニングベクター（例えば、ｐＲＫＢまたはｐＲＫＤ；ｐＲＫ５Ｂは、ＳｆｉＩ部位を含まないｐＲＫ５Ｄの前駆体である；Ｈｏｌｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５３：１２７８−１２８０（１９９１）を参照のこと）中に望ましい方向でクローン化した。
【０５２５】
上記のようにして単離したクローンのＤＮＡ配列決定によって、ＰＲＯ２１３３１の全長ＤＮＡ配列（本明細書においてＤＮＡ１７５９５９−２９４８と呼ぶ）［図３３、配列番号３３］およびＰＲＯ２１３３１の誘導したタンパク質配列が得られた。
【０５２６】
上記で同定された全長クローンは、ヌクレオチド位置８５〜８７において見かけ上の翻訳開始部位を含み、ヌクレオチド位置２８３０〜２８３２にある終止コドンを含む、１つのオープンリーディングフレームを含む（図３３、配列番号３３）。推定ポリペプチド前駆体は、９１５アミノ酸長を有し、算出分子量約９９，２６７ダルトンおよび推定ｐＩ約５．９３を有する。図３４（配列番号３４）において示される全長ＰＲＯ２１３３１配列の分析は、図３４において示される種々の重要なポリペプチドドメインの存在を証明し、それらの重要なポリペプチドドメインについて与えられる位置は、上記のような近似値である。クローンＤＮＡ１７５９５９−２９４８は、２０００年７月１８日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ受託番号  ＰＴＡ−２２４８を割り当てられている。
【０５２７】
Ｄａｙｈｏｆｆデータベース（バージョン３５．４５  ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  ３５）の分析（図３４（配列番号３４）に示される全長配列のＡＬＩＧＮ−２配列アライメント分析を使用する）は、ＰＲＯ２１３３１アミノ酸配列と、以下のＤａｙｈｏｆｆ配列との間の配列同一性を示した：Ｐ＿Ｙ５３５７５、Ｐ＿Ｙ５３５７４、Ｐ＿Ｗ９３８８９、ＡＦ０６１４４４＿１、ＡＦ１１０８１８＿１、Ｐ＿Ｙ４２１６８、ＡＦ２５７１８２＿１、Ｐ＿Ｗ８２３１８、Ｐ＿Ｙ５３５７１、ＦＳＨＲ＿ＨＵＭＡＮ。
【０５２８】
（実施例１９：ヒトＰＲＯ６９７ポリペプチド［ＵＮＱ３６１］をコードするｃＤＮＡクローンの単離）
Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ公開データベースからの約９５０個の公知の分泌タンパク質に由来する細胞外ドメイン（ＥＣＤ）配列（存在する場合は、分泌シグナル配列を含む）を、ＥＳＴデータベースを検索するために使用した。そのＥＳＴデータベースは、公開データベース（例えば、Ｄａｙｈｏｆｆ、ＧｅｎＢａｎｋ）および私有データベース（例えば、ＬＩＦＥＳＥＱ（登録商標），Ｉｎｃｙｔｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を包含した。その検索は、コンピュータプログラムであるＢＬＡＳＴまたはＢＬＡＳＴ−２（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２６６：４６０−４８０（１９９６））を使用して、ＥＳＴ配列の６フレーム翻訳に対するＥＣＤタンパク質配列の比較として実施した。公知タンパク質をコードしないＢＬＡＳＴスコアが７０（またはある場合には９０）以上である比較を、クラスター化し、そしてプログラムである「ｐｈｒａｐ」（Ｐｈｉｌ  Ｇｒｅｅｎ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）を用いてコンセンサスＤＮＡ配列へとアセンブルした。
【０５２９】
コンセンサスＤＮＡ配列を、Ｉｎｃｙｔｅクローン１９１０７５５を含むｐｈｒａｐを使用して他のＥＳＴ配列に対してアセンブルした。このコンセンサス配列を、本明細書においてＤＮＡ１３９１００と呼ぶ。このＤＮＡ１３９１００コンセンサス配列を、ＢＬＡＳＴとｐｈｒａｐとの反復サイクルを使用して伸長して、上記で考察したＥＳＴ配列供給源（時には、ＤＮＡ４３０５２とも呼ばれる）を使用して上記コンセンサス配列を可能な限り伸長した。このコンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、１）目的の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲするため、および２）ＰＲＯ６９７の全長コード配列のクローンを単離するためのプローブとして使用するために、合成した。フォワードＰＣＲプライマーおよびリバースＰＣＲプライマーは、一般的には、２０ヌクレオチド〜３０ヌクレオチドの範囲であり、しばしば、全長約１００ｂｐ〜約１０００ｂｐのＰＣＲ生成物を生じるように設計する。そのプローブ配列は、代表的には、長さが４０ｂｐ〜５５ｂｐである。ある場合には、コンセンサス配列が約１〜１．５ｋｂｐよりも長い場合には、さらなるオリゴヌクレオチドを合成する。全長クローンについていくつかのライブラリーをスクリーニングするために、そのライブラリー由来のＤＮＡを、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（上記）に従って、上記ＰＣＲプライマー対を用いて、ＰＣＲ増幅によってスクリーニングした。その後、陽性ライブラリーを使用して、上記プローブオリゴヌクレオチドと、上記プライマー対のうちの１つとを使用して、目的の遺伝子をコードするクローンを単離した。
【０５３０】
一対のＰＣＲプライマー（フォワードおよびリバース）を合成した：
【０５３１】
【化２２】
2007536931.tif 000046
さらに、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブを、上記のコンセンサス配列から構築した。このハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を有した：
【０５３２】
【化２３】
2007536931.tif 000047
全長クローンの供給源についていくつかのライブラリーをスクリーニングするために、上記ライブラリー由来のＤＮＡを、上記で同定されたＰＣＲプライマーを用いるＰＣＲ増幅によってスクリーニングした。その後、陽性ライブラリーを使用して、上記プローブオリゴヌクレオチドと上記ＰＣＲプライマーのうちの１つとを使用して、ＰＲＯ６９７遺伝子をコードするクローンを単離した。
【０５３３】
上記ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡを、ヒト胎児腎臓組織（ＬＩＢ２２７）から単離した。このｃＤＮＡクローンを単離するために使用したｃＤＮＡライブラリーは、市販の試薬（例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから市販される試薬）を使用して、標準的方法によって構築した。そのｃＤＮＡを、ＮｏｔＩ部位を含むオリゴｄＴを用いてプライミングし、平滑〜ＳａｌＩヘミキナーゼ処理アダプターで連結し、ＮｏｔＩで切断し、ゲル電気泳動によって適切にサイズ決定し、唯一のＸｈｏＩ部位およびＮｏｔＩ部位において適切なクローニングベクター（例えば、ｐＲＫＢまたはｐＲＫＤ；ｐＲＫ５Ｂは、ＳｆｉＩ部位を含まないｐＲＫ５Ｄの前駆体である；Ｈｏｌｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５３：１２７８−１２８０（１９９１）を参照のこと）中に望ましい方向でクローン化した。
【０５３４】
上記のようにして単離したクローンのＤＮＡ配列決定によって、ＰＲＯ６９７の全長ＤＮＡ配列［本明細書においてＵＮＱ３６１（ＤＮＡ５０９２０−１３２５）と呼ぶ］（配列番号３７）およびＰＲＯ６９７の誘導したタンパク質配列が得られた。
【０５３５】
ＵＮＱ３６１の全ヌクレオチド配列（ＤＮＡ５０９２０−１３２５）が、図３７（配列番号３７）において示される。クローンＵＮＱ３６１（ＤＮＡ５０９２０−１３２５）は、ヌクレオチド位置４４〜４６において見かけ上の翻訳開始部位を含み、ヌクレオチド位置９２９〜９３１にある終止コドンで終止する、１つのオープンリーディングフレームを含む（図３７）。推定ポリペプチド前駆体は、２９５アミノ酸長を有する（図３８；配列番号３８）。図３８において示される全長ＰＲＯ６９７タンパク質は、推定分子量約３３５１８ダルトンおよび推定ｐＩ約７．７４を有する。クローンＵＮＱ３６１  （ＤＮＡ５０９２０−１３２５）は、１９９８年３月２６日にＡＴＣＣに寄託された（ＡＴＣＣ受託番号２０９７００）。
【０５３６】
全長ＰＲＯ６９７ポリペプチドのアミノ酸配列の分析は、そのＰＲＯ６９７ポリペプチドの一部が、ｓＦＲＰと有意な配列同一性を有することを示唆し、それによって、ＰＲＯ６９７が、新規なｓＦＲＰファミリーのメンバーであり得ることを支援する。
【０５３７】
ＰＲＯ６９７のアミノ酸配列をさらに分析すると、そのシグナルペプチドは、配列番号３８のほぼアミノ酸１〜２０に存在する。ｆｒｉｚｚｌｅｄ  Ｎ末端との同一性を有するシステインリッチドメインが、配列番号３８のほぼアミノ酸６〜１５３に存在する。対応するヌクレオチドは、本明細書において提供される配列から慣用的に決定され得る。
【０５３８】
（実施例２０：ヒトＰＲＯ１４８０ポリペプチド［ＵＮＱ７４９］をコードするｃＤＮＡクローンの単離）
Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ公開データベースからの約９５０個の公知の分泌タンパク質に由来する細胞外ドメイン（ＥＣＤ）配列（存在する場合は、分泌シグナル配列を含む）を、ＥＳＴデータベースを検索するために使用した。そのＥＳＴデータベースは、公開データベース（例えば、Ｄａｙｈｏｆｆ、ＧｅｎＢａｎｋ）および私有データベース（例えば、ＬＩＦＥＳＥＱ（登録商標），Ｉｎｃｙｔｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を包含した。その検索は、コンピュータプログラムであるＢＬＡＳＴまたはＢＬＡＳＴ−２（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２６６：４６０−４８０（１９９６））を使用して、ＥＳＴ配列の６フレーム翻訳に対するＥＣＤタンパク質配列の比較として実施した。これらの方法において、Ｉｎｃｙｔｅ  ＥＳＴ番号５５０４１５および１６２８８４７を、公知タンパク質をコードしない７０以上のＢＬＡＳＴスコアを有する目的配列として同定した。これらの配列を、クラスター化し、そしてプログラムである「ｐｈｒａｐ」（Ｐｈｉｌ  Ｇｒｅｅｎ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）を用いてコンセンサスＤＮＡ配列へとアセンブルした。このコンセンサス配列を、本明細書において「ＤＮＡ１３９５」と呼ぶ。
【０５３９】
さらに、このＤＮＡ１３９５コンセンサス配列を、ＢＬＡＳＴとｐｈｒａｐとの反復サイクルを使用して伸長して、上記で考察したＥＳＴ配列供給源を使用して上記コンセンサス配列を可能な限り伸長した。この伸長したコンセンサス配列を、本明細書において「ＤＮＡ４０６４２」と呼ぶ。
【０５４０】
このＤＮＡ４０６４２コンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、１）目的の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲするため、および２）ＰＲＯ１４８０の全長コード配列のクローンを単離するためのプローブとして使用するために、合成した。フォワードＰＣＲプライマーおよびリバースＰＣＲプライマーは、一般的には、２０ヌクレオチド〜３０ヌクレオチドの範囲であり、しばしば、全長約１００ｂｐ〜約１０００ｂｐのＰＣＲ生成物を生じるように設計する。そのプローブ配列は、代表的には、長さが４０ｂｐ〜５５ｂｐである。ある場合には、コンセンサス配列が約１〜１．５ｋｂｐよりも長い場合には、さらなるオリゴヌクレオチドを合成する。全長クローンについていくつかのライブラリーをスクリーニングするために、そのライブラリー由来のＤＮＡを、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（上記）に従って、上記ＰＣＲプライマー対を用いて、ＰＣＲ増幅によってスクリーニングした。その後、陽性ライブラリーを使用して、上記プローブオリゴヌクレオチドと、上記プライマー対のうちの１つとを使用して、目的の遺伝子をコードするクローンを単離した。
【０５４１】
ＰＣＲプライマー（フォワードおよびリバース）を合成した：
【０５４２】
【化２４】
2007536931.tif 000048
さらに、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブを、上記のコンセンサスＤＮＡ４０６４２配列から構築した。これらのハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を有した：
【０５４３】
【化２５】
2007536931.tif 000049
全長クローンの供給源についていくつかのライブラリーをスクリーニングするために、上記ライブラリー由来のＤＮＡを、上記で同定されたＰＣＲプライマーを用いるＰＣＲ増幅によってスクリーニングした。その後、陽性ライブラリーを使用して、上記プローブオリゴヌクレオチドと上記ＰＣＲプライマーのうちの１つとを使用して、ＰＲＯ１４８０遺伝子をコードするクローンを単離した。
【０５４４】
上記ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡを、ヒト胎児腎臓組織から単離した。このｃＤＮＡクローンを単離するために使用したｃＤＮＡライブラリーは、市販の試薬（例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから市販される試薬）を使用して、標準的方法によって構築した。そのｃＤＮＡを、ＮｏｔＩ部位を含むオリゴｄＴを用いてプライミングし、平滑〜ＳａｌＩヘミキナーゼ処理アダプターで連結し、ＮｏｔＩで切断し、ゲル電気泳動によって適切にサイズ決定し、唯一のＸｈｏＩ部位およびＮｏｔＩ部位において適切なクローニングベクター（例えば、ｐＲＫＢまたはｐＲＫＤ；ｐＲＫ５Ｂは、ＳｆｉＩ部位を含まないｐＲＫ５Ｄの前駆体である；Ｈｏｌｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５３：１２７８−１２８０（１９９１）を参照のこと）中に望ましい方向でクローン化した。
【０５４５】
上記のようにして単離したクローンのＤＮＡ配列決定によって、ＰＲＯ１４８０の全長ＤＮＡ配列（本明細書においてＤＮＡ６７９６２−１６４９と呼ぶ）［図３９、配列番号３９］およびＰＲＯ１４８０の誘導したタンパク質配列が得られた。
【０５４６】
ＰＲＯ１４８０の全コード配列が、図３９（配列番号３９）において示される。クローンＤＮＡ６７９６２−１６４９は、ヌクレオチド位置２４１〜２４３において見かけ上の翻訳開始部位を含み、ヌクレオチド位置２７５２〜２７５４にある見かけ上の終止コドンを含む、１つのオープンリーディングフレームを含む。推定ポリペプチド前駆体は、８３７アミノ酸長である。図４０（配列番号４０）において示される全長ＰＲＯ１４８０タンパク質は、推定分子量約９２，７５０ダルトンおよび推定ｐＩ約７．０４を有する。さらなる特徴としては、ほぼアミノ酸配列２３〜４６および７１８〜７３８にある膜貫通ドメイン（ＩＩ型）；ほぼアミノ酸配列６９〜７２、９６〜９９、１６５〜１６８、４１０〜４１３、５２５〜５２８、および６３０〜６３３にあるあり得るＮ−グリコシル化部位；ならびにほぼアミノ酸１２〜３３にあるロイシンジッパーパターンが挙げられる。
【０５４７】
Ｄａｙｈｏｆｆデータベース（バーション３５．４５  ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  ３５）（図４０（配列番号４０）に示される全長配列のＷＵ  ＢＬＡＳＴ２配列アライメント分析を使用する）は、ＰＲＯ１４８０アミノ酸配列と、Ｄａｙｈｏｆｆ配列Ｉ４８７４６との間の有意な相同性を示した。相同性はまた、ＰＲＯ１４８０アミノ酸配列と、以下のＤａｙｈｏｆｆ配列：Ｓ６６４９８；Ｐ＿Ｗ１７６５８；ＭＭＵ６９５３５＿１；ＨＳＵ６０８００＿１；Ｉ４８７４５；Ａ４９０６９；Ｉ４８７４７；ＧＧＵ２８２４０＿１；およびＡＦ０２２９４６＿１との間でも示された。
【０５４８】
クローンＤＮＡ６７９６２−１６４９（ＵＮＱ７４９）は、１９９８年９月２９日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ受託番号２０３２９１を割り当てられている。
【０５４９】
（実施例２１：ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９，  ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０の遺伝子破壊を含むマウスの生成および分析）
ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のポリペプチドの役割を調査するために、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９，  ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０の遺伝子における破壊を、相同組換えによって生成した。具体的には、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９，  ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０の遺伝子における破壊を含むトランスジェニックマウス（すなわち、ノックアウトマウス）を、遺伝子ターゲッティングまたは遺伝子トラッピングのいずれかによって生成した。変異を、５’末端および３’末端の両方における正確なターゲッティングを確認するためにサザンブロット分析によって確認した。遺伝子特異的遺伝子型決定もまた、ゲノムＰＣＲによって実施して、挿入部位に隣接するエキソンにアニールするプライマーを使用するＲＴ−ＰＣＲによって示されるような内因性ネイティブ転写物の喪失を確認した。標的化ベクターを、１２９株のＥＳ細胞中にエレクトロポレートし、標的化クローンを、宿主胚盤胞中にマイクロインジェクトしてキメラを生成した。キメラを、Ｃ５７動物と交配してＦ１ヘテロ接合体を生成した。ヘテロ接合体を、異種交配して、Ｆ２野生型コホート、Ｆ２ヘテロ接合体コホート、およびＦ２ホモ接合体コホートを生成し、これらを表現型分析のために使用した。まれに、十分なＦ１ヘテロ接合体が生成しなかった場合には、そのＦ１ヘテロ接合体を野生型Ｃ５７マウスと交配させて、表現型を分析するコホートを育種するために十分なヘテロ接合体を生成した。すべての表現型分析は、出生後１２週間〜１６週間で実施した。
【０５５０】
（表現型結果の全体的まとめ）
（Ａ．ＤＮＡ３５８８０−１１６０（ＵＮＱ２２３）遺伝子破壊を含むマウスの生成および分析）
これらのノックアウト実験において、ＰＲＯ２５６ポリペプチドをコードする遺伝子（ＤＮＡ３５８８０−１１６０（ＵＮＱ２２３）と呼ぶ）を破壊した。これらの研究についての遺伝子特異的な情報は、以下の通りである：変異したマウス遺伝子は、ヌクレオチド参照物：ＮＭ＿０１６９０７．ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ：ＮＭ＿０１６９０７  ＮＩＤ：８３９４３５０またはＭｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓセリンプロテアーゼインヒビター，Ｋｕｎｉｔｚ型１（Ｓｐｉｎｔ１）；タンパク質参照物：Ｑ９９Ｊ０４．ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ：Ｑ９９Ｊ０４  ＮＩＤ：またはＭｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（Ｍｏｕｓｅ）．ＳＥＲＩＮＥ  ＰＲＯＴＥＡＳＥ  ＩＮＨＩＢＩＴＯＲ，ＫＵＮＩＴＺ  ＴＹＰＥ  １．ＭＯＵＳＥＳＰＴＲＮＲＤＢ；ヒト遺伝子配列参照物：ＮＭ＿００３７１０．ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ：ＮＭ＿００３７１０  ＮＩＤ：４５０４３２８またはＨｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓセリンプロテアーゼインヒビター，Ｋｕｎｉｔｚ型１（ＳＰＩＮＴ１）に対応する；上記ヒトタンパク質配列は、参照物：Ｏ４３２７８．ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ：Ｏ４３２７８  ＮＩＤ：またはＨｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ヒト）．ＫＵＮＩＴＺ  ＴＹＰＥ  ＰＲＯＴＥＡＳＥ  ＩＮＨＩＢＩＴＯＲ  １  ＰＲＥＣＵＲＳＯＲ（ＨＥＰＡＴＯＣＹＴＥ  ＧＲＯＷＴＨ  ＦＡＣＴＯＲ  ＡＣＴＩＶＡＴＯＲ  ＩＮＨＩＢＩＴＯＲ  ＴＹＰＥ  １）（ＨＡＩ  １）。ＨＵＭＡＮＳＰＴＲＮＲＤＢに対応する。
【０５５１】
対象とするマウス遺伝子は、Ｓｐｉｎｔ１（セリンプロテアーゼインヒビター，Ｋｕｎｉｔｚ型１）（ヒトＳＰＩＮＴ１のオルソログ）である。別名としては、ＨＡＩ  １、ＨＡＩ、ＨＡＩ１、Ｋｕｎｉｔｚ型プロテアーゼインヒビター１，および肝細胞増殖因子アクチベーターインヒビター１が挙げられる。
【０５５２】
ＳＰＩＮＴ１は、上皮細胞および白質神経膠星状細胞上に発現される内在性膜タンパク質であり、肝細胞増殖因子アクチベーター（ＨＧＦＡ）およびマトリプターゼ（プロ肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）を生理活性ＨＧＦへと変換するセリンプロテアーゼ）を阻害する。ＳＰＩＮＴ１は、上皮由来の膜においてのみならず、血液および乳汁においても見出される。このことは、このタンパク質が、タンパク質分解性切断され得て細胞外液中に放出され得ることを示す。ＳＰＮＴ１は、ＨＧＦシグナル伝達に関与する組織再生および腫瘍形成を調節する可能性がある。ＳＰＩＮＴ１は、卵巣および乳腺などの組織に由来する癌腫においてアップレギュレートされるようである（Ｋｉｒｃｈｈｏｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７８（３８）：３６３４１−９（２００３）；Ｏｂｅｒｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．１５８（４）：１３０１−１１（２００１）；Ｉｔｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ  Ｌｉｖｅｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．２７８（４）：Ｇ６３５−４３（２０００）；Ｙａｍａｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ  Ｎｅｕｒｏｌ．１５３（１）：６０  ４（１９９８））。
【０５５３】
標的化変異または遺伝子トラップ（ｔｒａｐ）変異を、株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ由来胚性幹（ＥＳ）細胞において生成した。そのキメラマウスを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスと交配させて、Ｆ１ヘテロ接合性動物を生成した。これらの子孫を異種交配させてＦ２野生型、Ｆ２ヘテロ接合性変異体子孫、およびＦ２ホモ接合性変異体子孫を生成した。稀な場合、例えば、ほんの少数のＦ１マウスしか上記キメラから得られなかった場合、Ｆ１ヘテロ接合性マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交配させて、Ｆ２マウスを生成するための異種交配のためのさらなるヘテロ接合性動物を得た。
【０５５４】
【化２６】
2007536931.tif 000050
ｘ２乗＝１８．１１  有意差＝０．０００１２  （ホモ接合性／ｎ）＝０．００  同腹仔の平均サイズ＝５
【０５５５】
レトロウイルス挿入が、コードエキソン１とコードエキソン２との間のイントロンにおいて生じた（ＮＣＢＩ登録番号ＮＭ＿０１６９０７．２）。
【０５５６】
標的遺伝子の野生型発現を、胚性幹（ＥＳ）細胞において検出し、ＲＴ−ＰＣＲによって試験した１３種の成体組織サンプルのうち、胸腺、脾臓、肺、腎臓、精巣、および小腸、および結腸において検出した。致死性が原因で、転写物発現分析は、実施しなかたった。ＵＮＱ２２３は、発生の間に劇的な発現パターンを示す。これは、いくつかのパターン中心（尾芽および四肢のＡＥＲ（これは、肢芽の急速に成長する縁である）を含む）において発現される。これはまた、卵黄嚢および体節間血管（好ましくは血管）において発現される。
【０５５７】
（１．表現型分析（破壊された遺伝子：ＤＮＡ３５８８０−１１６０（ＵＮＱ２２３）について）
（ａ）全体的表現型のまとめ
ヒトセリンプロテアーゼインヒビター，Ｋｕｎｉｔｚ  １型（ＳＰＩＮＴ１）のオルソログをコードする遺伝子の変異は、（−／−）変異体の致死性をもたらした。顕著な表現型は、（＋／−）マウスについては観察されなかった。従って、ＤＮＡ３５８８０−１１６０またはそのコードするポリペプチドであるＰＲＯ２５６は、胚発生のために必須であるはずである。特に、胚致死性は、起こり得る胎盤欠損に起因するようである。
【０５５８】
ＵＮＱ２２３は、発生の間に劇的な発現パターンを示す。これは、いくつかのパターン中心（尾芽および四肢のＡＥＲ（これは、肢芽の急速に成長する縁である）を含む）において発現される。これはまた、卵黄嚢および体節間血管（好ましくは血管）において発現される。具体的には、マウス胚におけるＵＮＱ２２３発現は、小血管（循環血球）；卵黄；四肢のＡＥＲ（肢芽の急速に成長する縁）；鰓弓；および耳胞における染色を示す（Ｅ１０．５およびＥ１１．５）。
【０５５９】
（致死性である胚発生異常に関連する考察）
ノックアウトマウスにおける胚致死性は、通常は、種々の深刻な発生上の問題（神経変性疾患、脈管形成障害、炎症性疾患、または遺伝子／タンパク質が多くの細胞型における基本的細胞シグナルプロセスにおいて重要な役割を有する場合が挙げられるが、これらに限定はされない）から生じる。さらに、胚致死性は、潜在的癌モデルとして有用である。同様に、対応するヘテロ接合性（＋／−）変異体動物は、ノックアウト遺伝子の機能に関する非常に有益な手掛りを示す表現型および／または病理的な報告を示す場合には、特に有用である。例えば、ＥＰＯノックアウト動物は、胚致死性であったが、胚に関する病理学的報告は、ＲＢＣの顕著な欠失を示した。
【０５６０】
ＵＮＱ２２３は、膜結合型セリンプロテアーゼインヒビターであり、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）アクチベーターインヒビター１型（ＨＡＩ−１）と呼ばれる。ＵＮＱ２２３は、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈの科学者であるＤａｎｉｅｌ  Ｋｉｒｃｈｈｏｆｅｒによって同定された。これは、ＨＧＦ／ｃ−Ｍｅｔレセプター系の活性を調節すると仮定されており、この系は、組織再生、形態発生、および腫瘍形成において十分に記録された役割を果たす。ＵＮＱ２２３ノックアウトマウスの分析は、ＨＡＩ−１が、胎盤発生において重要な役割を果たすことを示す。さらなる特徴付けは、ＵＮＱ２２３が胎盤栄養膜の分化および増殖のために必要であるか否か、またはＵＮＱ２２３が胚細胞による母体脱落膜組織の浸潤において役割を果たすか否かを決定する。
【０５６１】
インサイチュでのＲＮＡ全量とゲル染色との組み合わせを使用して、初期胚発生の間のＵＮＱ２２３発現の注意深い試験が、実施された。この分析は、原腸形成期に、ＵＮＱ２２３発現が、２つの特定のドメイン（胚の原腸形成における明確な内胚葉；および胚外絨毛膜）に制限されることを示す。その絨毛膜組織は、胎盤の迷路層になる運命である。これは、胚血管供給と母体血管供給との間の境界として作用する領域である。より後期には、ＵＮＱ２２３は、迷路層において発現される。妊娠中期には、ＵＮＱ２２３はまた、胚パターン形成事象を調整するシグナル伝達中心を示す複数のドメインにおいて発現される。例えば、発生中の肢芽のパターン形成に関与する外胚葉頂堤（ＡＥＲ）である。ＵＮＱ２２３はまた、循環血液において発現されるようである。
【０５６２】
ＵＮＱ２２３ノックアウトマウスは、発生９．５日〜１１．５日に死ぬことが示された。これらのマウスは、成長遅延し、異常な胎盤発生と一致する発生異常を示す。胎盤発生の間の多数のマーカー遺伝子の発現を試験する予備データは、胎盤の迷路層がＵＮＱ２２３ホモ接合体において大きさが大いに低減することを示す。胎盤の迷路層の形成は、胚栄養膜から母体脱落膜組織への注意深く調整された浸潤を必要とする。ＨＡＩ−１の同様の役割は、腫瘍浸潤性を調節することにおいて重要であり得る。
【０５６３】
（Ｂ．ＤＮＡ２１２９３７（ＵＮＱ２８１）遺伝子破壊を含むマウスの生成および分析）
これらのノックアウト実験において、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチドをコードする遺伝子（ＤＮＡ２１２９３７（ＵＮＱ２８１）と呼ぶ）を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的な情報は、以下の通りである：変異したマウス遺伝子は、ヌクレオチド参照物：ＮＭ＿０１９３９７またはＭｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  ＥＧＦ様ドメイン，ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ６（Ｅｇｆｌ６）；タンパク質参照物：ＮＰ＿０６２２７０またはＥＧＦ様ドメイン，ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ６［Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ］；ヒト遺伝子配列参照物：ＮＭ＿０１５５０７またはＨｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  ＥＧＦ様ドメイン，ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ６  （ＥＧＦＬ６）；に対応する。ヒトタンパク質配列は、参照物：ＮＰ＿０５６３２２、上皮増殖因子様タンパク質６前駆体；ＭＡＭドメインおよびＥＧＦドメイン含有タンパク質前駆体；ＥＧＦ反復含有タンパク質６前駆体；ＥＧＦ反復含有タンパク質６［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］に対応する。
【０５６４】
破壊したマウス遺伝子は、Ｅｇｆｌ６（ＥＧＦ様ドメイン，ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ６）であり、これは、ヒトＥＧＦＬ６のオルソログである。同義語および別名としては、Ｗ８０、ＭＡＥＧ、ＤＫＦＺｐ５６４Ｐ２０６３、ＥＧＦ反復含有タンパク質６、ＥＧＦ反復含有タンパク質６前駆体、ならびにＭＡＭドメインおよびＥＧＦドメイン含有タンパク質前駆体が挙げられる。
【０５６５】
ＥＧＦＬ６は、ヒトＸ染色体およびマウスＸ染色体上にコードされる分泌タンパク質であり、発生障害に関与する因子として提唱されている（Ｂｕｃｈｎｅｒ，Ｏｒｆａｎｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ６５（１）：１６〜２３（２０００））。上記タンパク質の転写物は、胎盤ならびに脳腫瘍、胎児腫瘍、および肺腫瘍において見出される。さらに、ＥＧＦＬ６は、皮膚節および皮膚節誘導体において発現される。マウス胚において、ＵＮＱ２８１は、腹側体節（強膜（これは、椎骨および肋骨の前駆体である））において発現される。四肢において、発現は、骨形成前の骨において生じる。
この事象（ｐｒｏｊｅｃｔ）は、Ｘ連鎖型である。
性別および遺伝子型によるＸ連鎖型遺伝子破壊の概要
（雄キメラに由来するアグーチのサナギのみ、含まれる）。
【０５６６】
【化２７】
2007536931.tif 000051
標的化変異または遺伝子トラップ変異を、株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ由来胚性幹（ＥＳ）細胞において生成する。そのキメラマウスを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスと交配させて、Ｆ１ヘテロ接合性動物を生成する。これらの子孫を（１２９ＳｖＥｖＢｒｄマウスとＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスとの交配に由来する）ハイブリッド１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７  Ｆ１マウスと交配させて、Ｆ１野生型、Ｆ１雌ヘテロ接合性マウス、およびＦ１雄ヘミ接合性マウスを生成する。レベルＩ表現型分析を、この世代からのマウスに対して実施する。
【０５６７】
【化２８】
2007536931.tif 000052
ｘ２乗＝２０．３９  有意差＝０．００００４  （ホモ接合性／ｎ）＝０．４７  同腹仔の平均サイズ＝７
【０５６８】
変異型：相同組換え（標準）。コードエキソン１を標的化した（ＮＭ＿０１９３９７）。
【０５６９】
標的遺伝子の野生型発現を、胚性幹（ＥＳ）細胞において検出し、ＲＴ−ＰＣＲによって試験した１９種の成体組織サンプルのうち、脳、脊髄、脾臓、肺、および腎臓において検出した。標的遺伝子の破壊を、サザンハイブリダイゼーション分析によって確認した。
【０５７０】
（１．表現型分析（破壊した遺伝子ＤＮＡ２１２９３７（ＵＮＱ２８１）について）
（ａ）全体的な表現型のまとめ
この変異は、Ｘ連鎖型遺伝子においてである。雄野生型マウスおよび雌野生型マウスの両方を分析し、一方、雄ヘミ接合性変異体および雌ヘテロ接合性マウスのみを、分析した。ヒトＥＧＦ様ドメイン，ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ６（ＥＧＦＬ６）をコードする遺伝子の変異は、雄（０／−）マウスにおけるオボアルブミンチャレンジに対するＩｇＧ１応答およびＩｇＧ２ａ応答の低下を生じた。この雄（０／−）マウスはまた、血清インスリンレベルの増加を示した。さらに、雄（０／−）マウスは、平均多重の増加および脂肪増加を、その性別が一致する同腹仔および歴史的平均と比較して示した。そのノックアウトマウスはまた、総組織質量（ＴＴＭ）の増加、除脂肪体重（ＬＢＭ）の増加、および骨塩関連測定値の増加を示した。遺伝子破壊を、サザンブロットによって確認した。
【０５７１】
（ｂ）免疫学表現型分析
免疫関連疾患および炎症関連疾患は、かなり複雑でしばしば複数の相互連絡した生物学的経路の症状発現または結果であり、これは、正常な生理学においては、傷害もしくは損傷に応答するため、傷害もしくは損傷からの修復を開始するため、および外来生物に対する先天的防御および後天的防御を惹起するために、重要である。疾患または病理は、これらの正常な生理学的経路が、その応答の強度に直接関連し、異常な調節もしくは過度の刺激の結果として、自己に対する反応として、またはこれらの組合わせとして、さらなる傷害もしくは損傷を引き起こした場合に、生じる。
【０５７２】
これらの疾患の発生はしばしば多段階経路に関与し、しばしば複数の異なる生物学的系／経路に関与するが、これらの経路のうちの１つ以上における重要な点における介入が、軽減効果または治療効果を有し得る。治療介入は、有害なプロセス／経路の拮抗、または有益なプロセス／経路の刺激のいずれかによって生じ得る。
【０５７３】
Ｔリンパ球（Ｔ細胞）は、哺乳動物免疫応答の重要な成分である。Ｔ細胞は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）内の遺伝子によってコードされる自己分子と会合した抗原を認識する。この抗原は、抗原提示細胞、ウイルスに感染した細胞、癌細胞、移植物などの表面上で、ＭＨＣ分子とともに提示され得る。Ｔ細胞としては、ヘルパーＴ細胞および細胞傷害性Ｔ細胞が挙げられる。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞上にある抗原−ＭＨＣ複合体の認識の後に広汎に増殖する。ヘルパーＴ細胞はまた、種々のサイトカイン（すなわち、リンホカイン）を分泌する。このサイトカインは、Ｂ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、および免疫応答に関与する他の種々の細胞の活性化において、中心的役割を果たす。
【０５７４】
多くの免疫応答において、炎症細胞は、傷害部位もしくは感染部位に浸潤する。遊走細胞は、罹患組織の組織学的検査によって決定され得るように、好中球、好酸球、単球、またはリンパ球であり得る。Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｅ．  Ｃｏｌｉｇａｎ編，１９９４，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ。
【０５７５】
多くの免疫関連疾患が、公知であり、そして広汎に研究されている。そのような疾患としては、免疫媒介性炎症疾患（例えば、慢性関節リウマチ、免疫媒介性腎疾患、肝胆道疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬、および喘息）、非免疫媒介性炎症疾患、感染性疾患、免疫不全疾患、新形成、および移植片拒絶などが挙げられる。免疫学の領域においては、標的が、炎症および炎症障害の処置のために同定される。
【０５７６】
免疫学の領域においては、標的が、炎症および炎症障害の処置のために本明細書において同定された。免疫関連疾患は、ある場合には、その免疫応答を抑制することによって処置され得る。免疫刺激活性を有する分子を阻害する中和抗体を使用することは、免疫媒介性疾患および炎症疾患の処置において有益である。その免疫応答を阻害する分子（タンパク質は、直接、または抗体アゴニストの使用を介して）は、免疫応答を阻害し、それによって免疫関連疾患を軽減するために使用され得る。
【０５７７】
以下の試験を実施した：
（オボアルブミンチャレンジ）
（手順）  このアッセイは、７匹の野生型および８匹のホモ接合体に対して実施した。ニワトリオボアルブミン（ＯＶＡ）は、Ｔ細胞依存性抗原であり、これは、マウスにおいて抗原特異的免疫応答を研究するためのモデルタンパク質として一般的に使用される。ＯＶＡは、非毒性かつ不活性であり、従って、免疫応答が誘導されない場合でさえ、動物に対して危害を引き起こさない。ＯＶＡに対するマウス免疫応答は、Ｔ細胞応答を惹起するための免疫ドミナントペプチドが同定される程度まで、十分に特徴付けられている。抗ＯＶＡ抗体は、酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して免疫の８日間後〜１０日間後に検出可能であり、種々の抗体アイソタイプの決定は、遺伝子操作したマウスにおいて欠損性応答をもたらし得る複雑なプロセスに関するさらなる情報を与える。
【０５７８】
上記のように、このプロトコルは、抗原特異的免疫応答をマウスが惹起する能力を評価する。動物に、完全フロイントアジュバント中に乳化した５０ｍｇのニワトリオボアルブミンをＩＰ注射し、１４日間後に、抗オボアルブミン抗体（ＩｇＭサブクラス、ＩｇＧ１サブクラスおよびＩｇＧ２サブクラス）の血清力価を測定した。ＯＶＡ特異的抗体の量は、９６ウェルサンプルプレートをスキャンする機器によって作成した光学密度（ＯＤ）値に比例する。データを、各血清サンプルの一組の連続希釈物について収集した。
【０５７９】
（このチャレンジの結果）  雄（０／−）マウスは、その（＋／＋）同腹仔と比較した場合に、オボアルブミンチャレンジに対する平均血清ＩｇＧ１応答および平均血清ＩｇＧ２応答の低下を示した。従って、これらのノックアウトマウスは、Ｔ細胞依存性ＯＶＡ抗原に対するＯＶＡ特異的抗体応答を惹起する能力の低下を示した。
【０５８０】
まとめると、オボアルブミンチャレンジ研究は、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチドをコードする遺伝子が欠損したノックアウトマウスが、その野生型同腹仔と比較した場合に、免疫学的以上を示すことを示す。ある場合においては、その変異体マウスは、Ｔ細胞依存性ＯＶＡ抗原でチャレンジした場合に、免疫学的応答を惹起する能力の低下を示した。このことは、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチドまたはそのアゴニストは、免疫系（例えば、Ｔ細胞増殖）を刺激し得る重要な因子であり、そしてこの効果が個体に対して有益である場合（例えば、白血病および他の型の癌の場合、および免疫無防備状態の患者（例えば、ＡＩＤＳ罹患者）において）、有用性を見出す。従って、ＰＲＰ３４４２１ポリペプチドのインヒビター（アンタゴニスト）は、免疫応答を阻害することにおいて有用であり、例えば、移植片拒絶もしくは移植片対宿主病の場合に、有害な免疫応答を抑制するための有用な候補である。
【０５８１】
（ｃ）表現型分析：代謝−血液化学
代謝の領域において、標的は、糖尿病の処置のために同定され得る。血液化学表現型分析は、グルコース代謝における変化の指標としての血清インスリンレベルの測定を包含する。異常なグルコース代謝は、以下の障害もしくは状態に関連し得る：１型糖尿病および２型糖尿病、Ｘ症候群、種々の心血管疾患、および／または肥満。
【０５８２】
（インスリンデータ）
（試験の説明）：Ｌｅｘｉｃｏｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓは、マウスに対して定量的インスリンアッセイを実施するために臨床条件においてＣｏｂｒａ  ＩＩ  Ｓｅｒｉｅｓ  Ａｕｔｏ−Ｇａｍｍａ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍを使用する。
【０５８３】
（結果）
血清インスリンレベルの血液化学分析は、雄ヘミ接合性（０／−）変異体マウスをもｔらし、このマウスは、その性別が一致する（０／＋）同腹仔および歴史的平均と比較した場合に、メジアン血清インスリンレベルの増加を示した。従って、ノックアウトマウスは、異常なグルコース代謝に関連し得るインスリンレベルの上昇という表現型パターンを示した。さらに、雄（０／−）変異体マウスは、その性別が一致する（０／＋）同腹仔と比較して、総体脂肪の増加を示した。このことは、雄（０／−）変異体マウスにおける平均体重の増加という知見と合わせると、肥満の表現型を示唆する。
【０５８４】
（ｄ）骨代謝：放射線学表現型分析
骨代謝の領域において、標的は、関節炎、骨粗鬆症、骨減少症、および大理石骨病の処置のため、ならびに骨治癒を促進する標的を同定するために、本明細書において同定された。試験は、
・大腿骨および椎骨における骨塩密度の測定のための、ＤＥＸＡ
・海面質および皮質骨の両方についての骨塩密度の非常に高い解像度および非常に高感度の測定のための、ＭｉｃｒｏＣＴ
を含んだ。
【０５８５】
（Ｄｅｘａ分析−試験の説明）
（手順）
４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体、および８匹のヘミ接合体からなるコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重エネルギーＸ線吸収測定（ＤＥＸＡ）を使用して、骨における変化を首尾良く同定した。麻酔した動物を試験し、骨塩量（ＢＭＣ）、ＢＭＣ／ＬＢＭ比、容積測定骨塩密度（ｖＢＭＤ）、全身ＢＭＤ、大腿骨ＢＭＤ、および椎骨ＢＭＤを、測定した。
【０５８６】
マウスを、アベルチン（Ａｖｅｒｔｉｎ）（１．２５％  ２，２，２，−トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重）の腹腔内注射によって麻酔し、体長および体重を測定し、その後、そのマウスを、ＤＥＸＡスキャンのためにＰＩＸＩｍｕｓＴＭ  Ｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｅｒ（Ｌｕｎａｒ  Ｉｎｃ．）のプラットフォームに腹臥位で配置した。Ｌｕｎａｒ  ＰＩＸＩｍｕｓソフトウェアを使用して、骨塩密度（ＢＭＤ）および脂肪組成（脂肪％）および総組織質量（ＴＴＭ）を、目的領域（ＲＯＩ）［すなわち、全身、椎骨、両大腿骨］において決定した。
【０５８７】
（ＤＥＸＡの結果）  雄（０／−）マウスは、その性別が一致する（＋／＋）同腹仔および歴史的平均と比較した場合に、全身、大腿骨、および椎骨において、平均骨塩量（ＢＭＣ）の増加を示した。さらに、その雄変異体（０／−）マウスは、総組織質量（ＴＴＭ）の増加、除脂肪体重（ＬＢＭ）の増加、および脂肪の割合の増加を示した。これらの結果は、異常な骨代謝と一致する。これらの結果は、ノックアウト変異体表現型が、大理石骨病などの骨異常と関連することを示す。大理石骨病は、骨の異常な薄化および硬化、ならびに骨の異常な脆弱さによって特徴付けられる状態である。従って、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチドまたはそのアゴニストは、大理石骨病の処置のために有益である。骨塩量の増加ならびに全身骨塩密度の増加および大腿骨塩密度の増加に関連する表現型は、これらの影響を模倣する因子（例えば、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチドのアンタゴニスト）が、骨治癒において有用であることを示唆する。
【０５８８】
（Ｃ．ＤＮＡ４１３７９−１２３６（ＵＮＱ２９５）遺伝子破壊を含むマウスの生成および分析）
これらのノックアウト実験において、ＰＲＯ３３４ポリペプチドをコードする遺伝子（ＤＮＡ４１３７９−１２３６（ＵＮＱ２９５）と呼ぶ）を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は、以下の通りである：変異した遺伝子は、ヌクレオチド参照物：ＮＭ＿０３３５２５またはＭｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓネフロネクチン（ｎｅｐｈｒｏｎｅｃｔｉｎ）（Ｎｐｎｔ）；タンパク質参照物：Ｑ９２３Ｔ５．  ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ：Ｑ９２３Ｔ５  ＮＩＤ：またはＭｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（マウス）．  ＮＥＰＨＲＯＮＥＣＴＩＮ．  ＭＯＵＳＥＳＰＴＲＮＲＤＢ；ヒト遺伝子配列参照物：ＮＭ＿１９８２７８またはＨｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ仮定タンパク質ＬＯＣ２５５７４３  （ＬＯＣ２５５７４３）に対応する；上記ヒトタンパク質配列は、参照物：ＩＰＩ００３７５２２３  ．  ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ：ＩＰＩ００３７５２２３  ＮＩＤ：またはＨｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ヒト）．  ＨＹＰＯＴＨＥＴＩＣＡＬ  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＬＯＣ２５５７４３．  ＩＰＩ＿ｈｕｍａｎに対応する。
【０５８９】
破壊した位置は、ネフロネクチン（Ｎｐｎｔ）であり、これは、ヒト仮定タンパク質ＬＯＣ２５５７４３のオルソログである。別名としては、Ｎｃｔｎ、ＰＯＥＭ、ＡＡ６８２０６３および１１１０００９Ｈ０２Ｒｉｋが挙げられる。
【０５９０】
Ｎｐｎｔは、インテグリンα８β１のリガンドとして機能する、細胞外マトリックスタンパク質である。このタンパク質は、シグナルペプチド、５つの上皮増殖因子様反復、ＲＧＤ配列を含むムチン領域、およびＣ末端「メプリン（ｍｅｐｒｉｎ）Ａ５レセプタータンパク質チロシンホスファターゼμ」（ＭＡＭ）ドメインを含み、これらはすべて、分泌タンパク質またはまくタンパク質細胞外ドメインにおいて見いだされる。Ｎｐｎｔは、発生中の腎臓細管、副甲状腺、および甲状腺、骨、歯胚、ならびに脳の内分泌器官において強く発現される（Ｍｏｒｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７６（４５）：４２１７２〜８１（２００１））。Ｎｐｎｔは、尿管上皮細胞によって合成され、胚腎臓においてインテグリンα８β１と複合体を形成する。このことは、腎臓発生における役割を示唆する（Ｂｒａｎｄｅｎｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１５４（２）：４４７〜５８（２００１）；Ｍｉｎｅｒ，Ｊ．Ｈ．，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１５４（２）：２５７〜９（２００１））。
【０５９１】
標的化変異または遺伝子トラップ変異を、株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ由来胚性幹（ＥＳ）細胞において生成した。そのキメラマウスを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスと交配させて、Ｆ１ヘテロ接合性動物を生成した。これらの子孫を異種交配させて、Ｆ２野生型子孫、Ｆ２ヘテロ接合性変異体子孫、およびＦ２ホモ接合性変異体子孫を生成した。稀な場合、例えば、ほんの少数のＦ１マウスしか上記キメラから得られなかった場合、Ｆ１ヘテロ接合性マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交配させて、Ｆ２マウスを生成するための異種交配のためのさらなるヘテロ接合性動物を得た。レベルＩ表現型分析を、下記のようにこの世代からのマウスに対して実施した。
【０５９２】
【化２９】
2007536931.tif 000053
ｘ２乗＝１１．５７  有意差＝０．００３０７  （ホモ接合性／ｎ）＝０．０５  同腹仔の平均サイズ＝７
【０５９３】
変異型：相同組換え（標準）。コードエキソン１およびコードエキソン２を標的化した（ＮＣＢＩ登録番号ＡＹ０３５８９９）。
【０５９４】
標的遺伝子の野生型発現を、胚性幹（ＥＳ）細胞において検出し、ＲＴ−ＰＣＲによって試験した１３種の成体組織サンプルすべて（尾を除く）において検出した。標的遺伝子の破壊を、サザンハイブリダイゼーション分析によって確認した。
【０５９５】
ＵＮＱ２９５／ネフロネクチンは、発生中の腎臓において発現される。これは、正常な腎臓発生のために必須であるα８β１インテグリンのリガンドであると仮定される。α８β１インテグリンノックアウト変異体マウスのほんの一部だけしか、生存可能ではなく、これらは、１つしか腎臓を有さない。
【０５９６】
（１．表現型分析（破壊した遺伝子：ＤＮＡ４１３７９−１２３６（ＵＮＱ２９５）について）
（ａ）全体的表現型のまとめ
ネフロネクチン（Ｎｐｎｔ）をコードする遺伝子の変異は、（−／−）変異体の大きく低下した生存能を生じた。試験のために利用可能な１匹の雄（−／−）マウスが、成長遅延の徴候を示した。この変異体マウスは、その性別が一致した（＋／＋）および（＋／−）同腹仔および歴史的平均と比較した場合に、平均体重の低下および総組織質量の低下、ならびに骨塩密度の低下、および椎骨海綿質の体積および厚さの低下、ならびに大腿骨幹中間部の皮質の厚さの低下を示した。ホモ接合性生存体数の有意な低下が存在した。（予測または期待された１４匹のホモ接合体のうち）３匹のホモ接合体変異体マウスのみが、分析のために利用可能であった。ヘテロ接合体マウスは、改善された耐糖能を示したが、試験のためには、１匹のヘテロ接合体系統マウスだけが、利用可能であった。遺伝子破壊は、サザンブロットによって確認した。
【０５９７】
（致死性という胚発生異常に関連する考察）
ノックアウトマウスにおける胚致死性は、通常は、種々の深刻な発生上の問題（神経変性疾患、脈管形成障害、炎症性疾患、または遺伝子／タンパク質が多くの細胞型における基本的細胞シグナルプロセスにおいて重要な役割を有する場合が挙げられるが、これらに限定はされない）から生じる。さらに、胚致死性は、潜在的癌モデルとして有用である。同様に、対応するヘテロ接合性（＋／−）変異体動物は、ノックアウト遺伝子の機能に関する非常に有益な手掛りを示す表現型および／または病理的な報告を示す場合には、特に有用である。例えば、ＥＰＯノックアウト動物は、胚致死性であったが、胚に関する病理学的報告は、ＲＢＣの顕著な欠失を示した。
【０５９８】
ＵＮＱ２９５（ネフロネクチン）は、５つのＥＧＦ様反復、ＭＡＭドメイン、およびＲＧＤ配列を含む、細胞外マトリックスタンパク質である。公開されたデータは、ＵＮＱ２９５が、α８β１インテグリンのリガンドであることを示す。ＵＮＱ２９５ノックアウトマウスのさらなる分析は、ネフロネクチンが腎臓発生のために必要であること、そして神経堤由来系統の移動および分化のために重要であり得ることを、示す。
【０５９９】
ＵＮＱ２９５ノックアウトマウスにおけるｇａｌレポーターを分析することによって、胚発生の間のネフロネクチンの劇的な発現パターンが、実証され得る。ネフロネクチンは、発生中の腎臓において、尿管間葉に隣接する尿管芽上皮において発現される。この間葉組織は、α８β１インテグリンを発現することが公知である。出生時付近に解剖したヘテロ接合性異種交配からの予備データは、ＵＮＱ２９５が、正常な腎臓の発生のために必要であることを示す。５匹のホモ接合体のうちの２匹が、完全な腎臓無発育を示し、１匹が、小さな腎臓を有し、２匹は、明らかな腎臓異常は有さなかった。これらの知見は、ＵＮＱ２９５が、腎臓形態発生の間に生じる上皮間葉相互作用において重要な役割を果たすことを示す。ＵＮＱ２９５は、腫瘍進行（特に、腎癌腫）の間に同様の役割を果たし得る。
【０６００】
胚の吻側領域において、ＵＮＱ２９５は、頭側神経堤細胞において発現される。この細胞集団は、頭において多数の構造体（脳を取り囲む髄膜を含む）を形成し続ける。この発現パターンは、特に興味深い。なぜなら、マイクロアレイ分析データは、神経堤由来脳腫瘍（髄膜腫と呼ばれる）におけるＵＮＱ２９５の発現の有意かつ非常に大きな増加を示すからである。
【０６０１】
ＵＮＱ２９５は、発生中の強膜において高レベルで発現される。この組織は、椎骨および四肢を生じる。ＵＮＱ２９５ノックアウトは、椎骨においても四肢においても明らかな欠損は示さないが、このことは、別の非常に関連するＥｇｆｌ６（ＵＮＱ２８１）と呼ばれる分子が同じ強膜細胞において発現されてＵＮＱ２９５活性の喪失を補償し得るという事実が原因である。ＵＮＱ２８１はまた、Ｌｅｘｉｃｏｎスクリーニングにおいてノックアウトされ、ホモ接合性マウスは、生存可能である。興味深いことに、このスクリーニングにおける最初の表現型段階まで生存した１匹のＵＮＱ２９５ホモ接合性マウスは、骨の厚さおよび密度における欠損を示した。このことは、この分子が骨疾患において役割を果たし得ることを示す。
【０６０２】
（ｂ）  骨代謝：放射線学表現型分析
（手順）
放射線表現型分析を実施した。骨代謝の領域において、標的を、関節炎、骨粗鬆症、骨減少症、および大理石骨病の処置のため、ならびに骨治癒を促進する標的を同定するために、同定し得る。試験は、ＤＥＸＡ、ならびに海面質および皮質骨の両方についての骨塩密度の非常に高い解像度および非常に高感度の測定のための、ＭｉｃｒｏＣＴを含んだ。
【０６０３】
（Ｄｅｘａ分析−試験の説明）
（手順）
４匹の野生型、８匹のヘテロ接合体、および１匹のホモ接合体からなるコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重エネルギーＸ線吸収測定（ＤＥＸＡ）を使用して、総組織質量（ＴＴＭ）における変化を首尾良く同定した。
【０６０４】
マウスを、アベルチン（Ａｖｅｒｔｉｎ）（１．２５％  ２，２，２，−トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重）の腹腔内注射によって麻酔し、体長および体重を測定し、その後、そのマウスを、ＤＥＸＡスキャンのためにＰＩＸＩｍｕｓＴＭ  Ｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｅｒ（Ｌｕｎａｒ  Ｉｎｃ．）のプラットフォームに腹臥位で配置した。Ｌｕｎａｒ  ＰＩＸＩｍｕｓソフトウェアを使用して、骨塩密度（ＢＭＤ）および脂肪組成（脂肪％）および総組織質量（ＴＴＭ）を、目的領域（ＲＯＩ）［すなわち、全身、椎骨、両大腿骨］において決定した。
【０６０５】
（ＤＥＸＡの結果）
上記にまとめたように、試験のために利用可能であった雄（−／−）マウスは、その性別が一致する（＋／−）同腹仔および歴史的平均と比較した場合に、平均体重の低下、平均総組織執拗の低下、および骨塩密度の低下を示した。２匹の雌（−／−）マウスが、その（＋／＋）同腹仔および（＋／−）同腹仔ならびに歴史的平均と比較した場合に、平均総体脂肪パーセントの低下を示した。
【０６０６】
（骨ｍｉｃｒｏＣＴ分析）
（手順）ｍｉｃｒｏＣＴもまた使用して、非常に高感度のＢＭＤ測定値を得た。μＣＴ４０は、解剖した骨をスキャンし、骨の質量および構造に関する詳細な情報を提供する。１本の椎骨および１本の大腿骨を、４匹の野生型および３匹のホモ接合性マウスからなるコホートから取得した。第５腰椎の海綿質体積、海綿質厚、結合密度、大腿骨幹中間部の総骨面積、および皮質厚の測定値を、得た。このμＣＴ４０スキャンは、骨の質量および構造に関する詳細な情報を提供した。複数の骨を、サンプルホルダー中に配置し、自動的にスキャンした。機器ソフトウェアを使用して、分析のために目的領域を選択した。海綿質パラメーターを、第５腰椎（ＬＶ５）において、１６μｍ解像度で分析し、皮質パラメーターを、大腿骨幹中間部において、２０μｍ解像度で分析した。
【０６０７】
（ｍｉｃｒｏ−ＣＴ分析の結果）
試験のために利用可能であった１匹の雄（−／−）変異体が、性別が一致する（＋／＋）同腹仔および歴史的平均と比較した場合に、顕著に減少した椎骨の海綿質の体積および厚み、ならびに顕著に減少した大腿骨幹中間部断面皮質厚を示した。
【０６０８】
これらの結果は、ノックアウトマウスが、骨折をもたらす骨質量の低下および骨密度の低下およびあり得る脆弱性によって特徴付けられる骨粗鬆症と類似する、顕著な骨損失を伴う異常な骨代謝を示すことを示す。従って、ＰＲＯ３３４またはそのコードする遺伝子は、胚発生および生存能において重要な役割を果たすようである。ＰＲＯ３３４ポリペプチドは、骨ホメオスタシスを維持するために特に重要であり、骨治癒のため、または関節炎もしくは骨粗鬆症の処置のために有用であり、一方、ＰＲＯ３３４アンタゴニストは、異常な骨代謝と関連する炎症疾患を含む異常な骨障害もしくは病理的骨障害（関節炎、骨粗鬆症、および骨減少症が挙げられるが、これらに限定はされない）をもたらす。これらの研究に加えて、（−／−）変異体マウスは、成長遅延の徴候を示した。そのような成長障害は、糖尿病または悪液質などの組織消耗病に関連する表現型もしくは病理学的状態に関連する。従って、ＰＲＯ３３４ポリペプチドまたはそのアゴニストは、糖尿病または悪液質を処置するために有用である。
【０６０９】
（Ｄ．ＤＮＡ５４２２８−１３６６−１（ＵＮＱ４０８）遺伝子破壊を含むマウスの生成および分析）
これらのノックアウト実験において、ＰＲＯ７７０ポリペプチドをコードする遺伝子（ＤＮＡ５４２２８−１３６６−１（ＵＮＱ４０８）と呼ぶ）を破壊した。これらの研究についての遺伝子特異的な情報は、以下の通りである：変異したマウス遺伝子は、ヌクレオチド参照物：ＮＭ＿０２３８８１またはＭｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓレジスチン（ｒｅｓｉｓｔｉｎ）様β（Ｒｅｔｎｌｂ）；タンパク質参照物：ＮＰ＿０７６３７０またはレジスチン様β；（炎症帯２において見いだされる［Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ］）；ヒト遺伝子配列参照物：ＮＭ＿０３２５７９またはＨｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓレジスチン様β（ＲＥＴＮＬＢ）に対応する；上記ヒトタンパク質配列は、参照物：ＮＰ＿１１５９６８または結腸・小腸特異的システインリッチタンパク質前駆体；システインリッチ分泌Ａ１２−α様タンパク質１；（炎症帯１において見いだされる［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］）に対応する。
【０６１０】
破壊したマウス遺伝子は、Ｒｅｔｎｌｂ（レジスチン様β）であり、これは、ヒトＲＥＴＮＬＢ（レジスチン様β）のオルソログである。別名としては、ＦＩＺＺ１、Ｆｉｚｚ２、Ｒｅｌｍｂ、ＲＥＬＭｂｅｔａ、９０３００１２Ｂ２１Ｒｉｋ、ＨＸＣＰ２（炎症帯１において見出される），（炎症帯２において見いだされる），システインリッチ分泌Ａ１２α様タンパク質１，結腸・小腸特異的システインリッチタンパク質前駆体，および推定結腸癌腫関連タンパク質前駆体（ＣＣＲＧ）が挙げられる。
【０６１１】
ＲＥＴＮＬＢは、肥厚性増殖性気管支上皮におけるアレルギー性肺炎症の間に増加した発現を示す、システインリッチタンパク質である。さらに、そのような炎症の間に、ＲＥＴＮＬＢは、ＩＩ型肺胞上皮細胞において存在する（Ｈｏｌｃｏｍｂ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１９（１５）：４０４６〜５５（２０００））。ＲＥＴＮＬＢは、細菌コロニー形成に応答して腸の杯細胞によって分泌される（Ｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １２５（５）：１３８８〜９７（２００３））。レジスチン（ＲＥＴＮ）およびＲＥＴＮＬＡとは異なり、ＲＥＴＮＬＢは、明らかに、脂肪組織において発現されず、インスリン耐性とも関連しない（Ｂｅｌｔｏｗｓｋｉ，Ｊ．，Ｍｅｄ  Ｓｃｉ  Ｍｏｎｉｔ．９（２）：ＲＡ５５〜６１（２００３））；、ＲＥＴＮＬＢは、胃腸管においてのみ発現されることが報告されている（Ｓｔｅｐｐａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．９８（２）：５０２〜６（２００１））。ＲＥＴＮＬＢ（ＣＣＲＧ）は、結腸癌細胞の増殖を刺激する（Ｄｅ  Ｙｏｕｎｇ，Ｉｎ  Ｖｉｖｏ．１６（４）：２３９〜４８（２００２））。
【０６１２】
標的化変異または遺伝子トラップ変異を、株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ由来胚性幹（ＥＳ）細胞において生成した。そのキメラマウスを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスと交配させて、Ｆ１ヘテロ接合性動物を生成した。これらの子孫を異種交配させてＦ２野生型、Ｆ２ヘテロ接合性変異体子孫、およびＦ２ホモ接合性変異体子孫を生成した。稀な場合、例えば、ほんの少数のＦ１マウスしか上記キメラから得られなかった場合、Ｆ１ヘテロ接合性マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交配させて、Ｆ２マウスを生成するための異種交配のためのさらなるヘテロ接合性動物を得た。レベルＩ表現型分析を、下記のようにこの世代からのマウスに対して実施した。
【０６１３】
【化３０】
2007536931.tif 000054
ｘ２乗＝２．７４  有意差＝０．２５４０７  （ホモ接合性／ｎ）＝０．２９  同腹仔の平均サイズ＝８
【０６１４】
変異型：相同組換え（標準）。コードエキソン１〜コードエキソン３を、標的化した（ＮＣＢＩ登録番号ＮＭ＿０２３８８１．１）。
【０６１５】
標的遺伝子の野生型発現を、ＲＴ−ＰＣＲによって試験した１３種の成体組織サンプルのうち、胸腺および小腸および結腸において検出した。標的遺伝子の破壊は、サザンハイブリダイゼーション分析によって確認した。
【０６１６】
（１．表現型分析（破壊した遺伝子：ＤＮＡ５４２２８−１３６６−１（ＵＮＱ４０８）について）
（ａ）全体的表現型のまとめ
ヒトレジスチン様β（ＲＥＴＮＬＢ）オルソログをコードする遺伝子の変異は、変異体（−／−）マウスにおける不安関連応答の減少を生じた。さらに、（−／−）マウスは、性別が一致する同腹仔と比較して、骨塩量の増加および骨塩密度の増加ならびに大腿骨幹中間部全面積の増加を示したが、海面質体積および結合密度の減少を示した。遺伝子破壊を、サザンブロットによって確認した。
【０６１７】
（ｂ）表現型分析：ＣＮＳ／神経学
神経学の領域において、分析は、本明細書において、神経学的障害および精神医学的障害（鬱病、全般性不安障害、注意欠陥過活動性障害、強迫障害、精神分裂病、認知障害、痛覚過敏、および感覚障害が挙げられる）の処置のためのインビボで確認された標的を同定することに焦点を合わせた。神経学的障害としては、「不安障害」として定義されるカテゴリーが挙げられ、これには、軽度〜中程度の不安、全身の医学的状態に起因する中程度の不安、他のように特定されていない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を伴うパニック障害、広場恐怖症を伴わないパニック障害、外傷後ストレス障害、社会恐怖、特定の恐怖、物質誘導性不安障害、急性アルコール禁断症状、強迫障害、広場恐怖症、双極性障害Ｉまたは双極性障害ＩＩ、他のように特定されない双極性障害、循環病、抑鬱性障害、大鬱病性障害、気分障害、物質誘導性気分障害が挙げられるが、これらに限定はされない。さらに、不安障害は、人格障害に適用され得る。人格障害としては、以下の型が挙げられるが、これらに限定はされない：妄想性障害、反社会的人格異常、回避性挙動、境界性人格障害、依存性人格障害、演技性人格障害、自己愛性人格障害、強迫性人格障害、分裂病質人格障害、および分裂病型人格障害。
【０６１８】
（手順）
挙動スクリーニングを、４匹の野生型マウス、４匹のヘテロ接合性変異体マウス、および８匹のホモ接合性変異体マウスからなるコホートに対して実施した。すべての挙動試験は、生存能低下によって早期試験が必要となる場合以外は、１２週齢〜１６週齢にて実施した。これらの試験は、不安、不安レベル、および診査を測定するためのオープンフィールド試験を含んだ。
【０６１９】
（オープンフィールド試験）
公知薬物のいくつかの標的は、このオープンフィールド試験において表現型を示した。これらの標的としては、セラトニントラスポーター、ドーパミントランスポーター（Ｇｉｒｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．１９９６  Ｆｅｂ  １５；３７９（６５６６）：６０６−１２）、およびＧＡＢＡレセプター（Ｈｏｍａｎｉｃｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．１９９７  Ａｐｒ  １５；９４（８）：４１４３−８）が挙げられた。自動オープンフィールドアッセイを特別製作して、感情状態に関連する変化および学習に関連する診査パターンを取り扱った。第一に、このフィールド（４０×４０ｃｍ）は、マウスにとって比較的大きいように選択し、従って、診査に関連する運動活性の変化を拾得するように設計した。さらに、床に４つの穴を存在させて、鼻を突き出す（診査に特に関連する活動）ことを可能にした。いくつかの要因がまた、この試験に関連する感情状態を強調するように設計された。このオープンフィールド試験は、上記マウスを試験する最初の実験手順であり、得られた測定値は、チャンバーに関するこの被験体の最初の経験であった。さらに、このオープンフィールドを、明るく照らした。これらの要因すべては、新規な開放空間に関連する自然な不安を強調する。その後、診査活動のパターンおよび程度、特に、中央〜全移動距離比（ｃｅｎｔｅｒ−ｔｏ−ｔｏｔａｌ  ｄｉｓｔａｎｃｅ  ｔｒａｖｅｌｅｄ  ｒａｔｉｏ）は、不安または抑鬱に対する感受性に関連する変化を識別可能であり得る。３つの異なるレベルの赤外ビームを含む大きな活動領域（４０×４０ｃｍ，ＡｃｃｕＳｃａｎ  ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓからのＶｅｒｓａＭａｘ動物活動モニタリングシステム）を使用して、立ち上がり（ｒｅａｒｉｎｇ）、穴突っつき（ｈｏｌｅ  ｐｏｋｅ）、および運動活動を記録した。上記動物を中央に配置し、その活動を、２０分間にわたって測定した。この試験からのデータを、４分間間隔で５回分析した。総移動距離（ｃｍ）、垂直運動回数（立ち上がり）、穴突っつき回数、および中央〜総距離比を、記録した。
【０６２０】
新しい環境に対して正常な慣れ応答をマウスが示す傾向を、５回の時間間隔にわたるそのマウスの水平方向運動活動の全体的変化を決定することによって、評価する。経時的な活動変化のこの計算した傾きは、絶対的総移動距離ではなく正規化した総移動距離を使用して、決定する。その傾きは、５回の時間間隔尾の各々における正規化した活動を通る回帰直線から決定する。正常な慣れが、負の傾き値によって示される。
【０６２１】
（結果）  顕著な差が、オープンフィールド活動試験の間に観察された。この（−／−）マウスは、その性別が一致する（＋／＋）同腹仔と比較した場合に、中央領域において増加したメジアン合計時間を示した。これは、その変異体における不安様応答の減少の指標である。［（−／−）マウスは、より低いΔＴ値を支援した。このことは、不安関連効果の低下を示唆した］。従って、ノックアウトマウスは、抑鬱障害、精神分裂病、および／または双極性障害と一致する表現型を示した。従って、ＰＲＯ７７０ポリペプチドおよびそのアゴニストは、抑鬱障害に関連する症状の処置または軽減のために有用である。
【０６２２】
（ｃ）骨代謝：放射線学表現型分析
骨代謝の領域において、標的は、関節炎、骨粗鬆症、骨減少症、および大理石骨病の処置のため、ならびに骨治癒を促進する標的を同定するために、本明細書において同定された。試験は、
・大腿骨および椎骨における骨塩密度の測定のための、ＤＥＸＡ
・海面質および皮質骨の両方についての骨塩密度の非常に高い解像度および非常に高感度の測定のための、ＭｉｃｒｏＣＴ
を含んだ。
【０６２３】
（Ｄｅｘａ分析−試験の説明）
（手順）
４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体、および８匹のホモ接合体からなるコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重エネルギーＸ線吸収測定（ＤＥＸＡ）を使用して、骨における変化を首尾良く同定した。麻酔した動物を試験し、骨塩量（ＢＭＣ）、ＢＭＣ／ＬＢＭ比、容積測定骨塩密度（ｖＢＭＤ）、全身ＢＭＤ、大腿骨ＢＭＤ、および椎骨ＢＭＤを、測定した。
【０６２４】
マウスを、アベルチン（Ａｖｅｒｔｉｎ）（１．２５％  ２，２，２，−トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重）の腹腔内注射によって麻酔し、体長および体重を測定し、その後、そのマウスを、ＤＥＸＡスキャンのためにＰＩＸＩｍｕｓＴＭ  Ｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｅｒ（Ｌｕｎａｒ  Ｉｎｃ．）のプラットフォームに腹臥位で配置した。Ｌｕｎａｒ  ＰＩＸＩｍｕｓソフトウェアを使用して、骨塩密度（ＢＭＤ）および脂肪組成（脂肪％）および総組織質量（ＴＴＭ）を、目的領域（ＲＯＩ）［すなわち、全身、椎骨、両大腿骨］において決定した。
【０６２５】
（骨ｍｉｃｒｏＣＴ分析）
（手順）ｍｉｃｒｏＣＴもまた使用して、非常に高感度のＢＭＤ測定値を得た。１本の椎骨および１本の大腿骨を、４匹の野生型および８匹のホモ接合性マウスからなるコホートから取得した。第５腰椎の海綿質体積、海綿質厚、結合密度、大腿骨幹中間部の総骨面積、および皮質厚の測定値を、得た。このμＣＴ４０スキャンは、骨の質量および構造に関する詳細な情報を提供した。複数の骨を、サンプルホルダー中に配置し、自動的にスキャンした。機器ソフトウェアを使用して、分析のために目的領域を選択した。海綿質パラメーターを、第５腰椎（ＬＶ５）において、１６μｍ解像度で分析し、皮質パラメーターを、大腿骨幹中間部において、２０μｍ解像度で分析した。
【０６２６】
（ＤＥＸＡの結果およびｍｉｃｒｏＣＴの結果）
雄（−／−）マウスは、その性別が一致する（＋／＋）同腹仔と比較した場合に、平均骨塩量（ＢＭＣ）の増加、ならびにＢＭＣ／ＬＢＭおよび骨塩密度（ＢＭＤ）の増加を示した。さらに、ｍｉｃｒｏＣＴの結果は、（−／−）マウスが、大腿骨幹中間部の総面積の増加を有するが、海綿質体積および結合密度の低下を有することを示した。これらの結果は、ノックアウト変異体表現型が、大理石骨病などの骨異常と関連することを示す。大理石骨病は、骨の異常な薄化および硬化、ならびに骨の異常な脆弱さによって特徴付けられる状態である。従って、ＰＲＯ７７０ポリペプチドまたはそのアゴニストは、大理石骨病の処置のために有益である。骨塩量の増加ならびに全身骨塩密度の増加および大腿骨塩密度の増加に関連する表現型は、これらの影響を模倣する因子（例えば、ＰＲＯ７７０ポリペプチドのアンタゴニスト）が、骨治癒において有用であることを示唆する。
【０６２７】
（Ｅ．ＤＮＡ５３９７７−１３７１（ＵＮＱ４８４）遺伝子破壊を含むマウスの生成および分析）
これらのノックアウト実験において、ＰＲＯ９８３ポリペプチドをコードする遺伝子（ＤＮＡ５３９７７−１３７１（ＵＮＱ４８４））と呼ぶ）を破壊した。これらの研究についての遺伝子特異的な情報は、以下の通りである：変異したマウス遺伝子は、ヌクレオチド参照物：ＮＭ＿０１９８０６またはＡＣＣＥＳＳＩＯＮ：ＮＭ＿０１９８０６  ＮＩＤ：ｇｉ  ９７９０２８２  ｒｅｆ  ＮＭ＿０１９８０６．１またはＭｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ小胞結合型膜タンパク質，関連タンパク質ＢおよびＣ（Ｖａｐｂ）；タンパク質参照物：Ｑ９ＱＹ７６またはＡＣＣＥＳＳＩＯＮ：Ｑ９ＱＹ７６  ＮＩＤ：またはＭｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（マウス）．ＶＡＭＰ  ＡＳＳＯＣＩＡＴＥＤ  ＰＲＯＴＥＩＮ  ３３Ｂ．ＭＯＵＳＥＳＰＴＲＮＲＤＢ；ヒト遺伝子配列参照物：ＮＭ＿００４７３８またはＡＣＣＥＳＳＩＯＮ：ＮＭ＿００４７３８  ＮＩＤ：またはｇｉ  ４７５９３０１  ｒｅｆ  ＮＭ＿００４７３８．１  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  ＶＡＭＰ（小胞結合型膜タンパク質）  関連タンパク質ＢおよびＣ（ＶＡＰＢ）に対応する；上記ヒトタンパク質配列は、参照物：Ｏ９５２９２またはＡＣＣＥＳＳＩＯＮ：Ｏ９５２９２  ＮＩＤ：またはＨｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  （Ｈｕｍａｎ）．ＶＡＭＰ  ＡＳＳＯＣＩＡＴＥＤ  ＰＲＯＴＥＩＮ  Ｂ  （ＤＪ１０１８Ｅ９．１）（ＶＡＭＰ  （ＶＥＳＩＣＬＥ  ＡＳＳＯＣＩＡＴＥＤ  ＭＥＭＢＲＡＮＥ  ＰＲＯＴＥＩＮ）  ＡＳＳＯＣＩＡＴＥＤ  ＰＲＯＴＥＩＮ  Ｂ  ＡＮＤ  Ｃ）．  ＨＵＭＡＮＳＰＴＲＮＲＤＢに対応する。
【０６２８】
目的のマウス遺伝子は、Ｖａｐｂ（小胞結合型膜タンパク質，関連タンパク質ＢおよびＣ）であり、これは、ヒトＶＡＰＢ（ＶＡＭＰ［小胞結合型膜タンパク質］関連タンパク質ＢおよびＣ）のオルソログである。別名としては、ＶＡＰ３３ｂ、Ｄ２Ａｂｂ２ｅ、Ｖａｍｐ３３ｂ、ＶＡＭＰ関連タンパク質３３ｂ、ＶＡＰＣ、ＶＡＰ−Ｂ、ＶＡＰ−Ｃ、ＶＡＭＰ関連タンパク質Ｂ、ＶＡＭＰ関連タンパク質Ｃ、およびＶＡＭＰ関連３３  ｋＤａタンパク質が挙げられる。
【０６２９】
ＶＡＰＢは、小胞体において見出される普遍的なＩＶ型膜タンパク質である（Ｓｋｅｈｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。このタンパク質は、保存的Ｎ末端ドメイン、コイルドコイルドメイン、およびＣ末端膜貫通ドメインを含む。ＶＡＰＣ（同じ遺伝子の代替産物である）は、７０個の保存的Ｎ末端残基からなるが、上記のコイルドコイルドメインおよび膜貫通セグメントを欠く。ＶＡＰＢは、ｖ−ＳＮＡＲＥ（可溶性Ｎ−エチルマレイミド感受性因子付着タンパク質レセプター）タンパク質であるＶＡＭＰ１（小胞結合型膜タンパク質１）およびＶＡＭＰ２（Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ２５４（１）：２１  ６  （１９９９））に結合する。ＶＡＰＢは、小胞輸送または神経伝達因子放出の制御に関与する可能性がある（Ｓｋｅｈｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  ９７（３）：１１０１  ６  （２０００）；  Ｆｏｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｒａｆｆｉｃ  １（６）：５１２  ２１  （２０００））。Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａにおいて、ＤＶＡＰ−３３Ａ（ヒトＶＡＰＢのホモログである）は、神経筋接合部においてシナプスボタンの数を制御することにおいて役割を果たす（Ｐｅｎｎｅｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｅｕｒｏｎ    ３５（２）：２９１  ３０６（  ２００２））。
【０６３０】
標的化変異または遺伝子トラップ変異を、株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ由来胚性幹（ＥＳ）細胞において生成した。そのキメラマウスを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスと交配させて、Ｆ１ヘテロ接合性動物を生成した。これらの子孫を異種交配させてＦ２野生型、Ｆ２ヘテロ接合性変異体子孫、およびＦ２ホモ接合性変異体子孫を生成した。稀な場合、例えば、ほんの少数のＦ１マウスしか上記キメラから得られなかった場合、Ｆ１ヘテロ接合性マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交配させて、Ｆ２マウスを生成するための異種交配のためのさらなるヘテロ接合性動物を得た。レベルＩ表現型分析を、下記のようにこの世代からのマウスに対して実施した。
【０６３１】
【化３１】
2007536931.tif 000055
ｘ２乗＝４．２４  有意差＝０．１２０３１  （ホモ接合性／ｎ）＝０．３４  同腹仔の平均サイズ＝８
【０６３２】
変異型：レトロウイルス挿入（ＯＳＴ）。レトロウイルス挿入は、コードエキソン１とコードエキソン２との間で生じた（ＮＣＢＩ登録番号ＮＭ＿０１９８０６．３）。
【０６３３】
標的遺伝子の野生型発現を、胚性幹（ＥＳ）細胞において検出し、ＲＴ−ＰＣＲによって試験した１３種すべての成体組織において検出した。ＲＴ−ＰＣＲ分析は、上記転写物が、分析した（−／−）マウス（Ｆ−７３）中に存在しないことを明らかにした。
【０６３４】
（１．表現型分析（破壊された遺伝子；ＤＮＡ５３９７７−１３７１（ＵＮＱ４８４）について）
（ａ）全体的な表現型のまとめ
プロテインＢおよびプロテインＣに結合したヒトＶＡＭＰ（小胞結合膜タンパク質）（ＶＡＰＢ）のオルソログをコードする遺伝子の変異は、（−／−）マウスにおいて、増強された運動協調性をもたらした。さらに、雄性（−／−）マウスは、総組織重量および脂肪の減少を示す一方で、雌性（−／−）マウスは、総組織重量および脂肪の増加を示した。転写は、ＲＴ  ＰＣＲによると存在しなかった。
【０６３５】
（ｂ）表現型分析：ＣＮＳ／神経学
分析は、本明細書において、神経学の領域において、神経学的障害および精神医学的障害（抑うつ、全般性不安障害、注意欠陥過活動性障害、強迫性障害、精神分裂病、認知障害、痛覚過敏、および感覚障害が挙げられる）の処置のための、インビボで有効な標的を同定することに焦点をあてた。神経学的障害としては、「不安障害」と規定される分類が挙げられ、この不安障害としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：軽度〜中程度の不安、全身性の病状に起因する不安障害、他に特定されていない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を伴うパニック障害、広場恐怖症を伴わないパニック障害、心的外傷後ストレス障害、社会恐怖、特定の恐怖、物質誘発性不安障害、急性アルコール離脱、強迫性障害、広場恐怖症、双極性障害Ｉ型もしくはＩＩ型、他に特定されていない双極性障害、循環病、抑うつ障害、大鬱病性障害、気分障害（ｍｏｏｄ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、物質誘発性気分障害。さらに、不安障害は、人格障害にも適用され得、この人格障害としては、以下の型が挙げられるがこれらに限定されない：妄想性、反社会的、回避性行動、境界性人格障害、依存性、演技性、自己愛性、強迫性、分裂病質的、および分裂病型。
【０６３６】
手順：
行動のスクリーニングを、４匹の野生型マウス、４匹のヘテロ接合性変異型マウスおよび８匹のホモ接合性変異型マウスのコホートについて行なった。全ての行動試験を、生存度の減少が、より早期の試験を必要としない限り、１２週齢と１６週齢との間に行なった。これらの試験には、不安、活動レベルおよび診査を測定するために、オープンフィールドを含んだ。
【０６３７】
倒立スクリーン（Ｉｎｖｅｒｔｅｄ  Ｓｃｒｅｅｎ）試験データ：
運動の強度／協調性を測定するために、倒立スクリーンを使用する。訓練されていないマウスを、金属棒の上に水平に設置された、正方形（７．５ｃｍ×７．５ｃｍ）のワイヤスクリーンの上に、個々に置いた。次いで、マウスが、スクリーンの底に来るように、この棒を１８０°回転させた。以下の行動反応を、１分間の試験セッションにわたり記録した：落ちた、登らなかった、および登る。
【０６３８】
【化３２】
2007536931.tif 000056
運動強度の不足は（−／−）または（＋／−）のマウスと、（＋／＋）のマウスとの間に、落ちた反応について、５０％ポイントの相違が生じた場合に見た目に明らかとなる。の、（−／−）もしくは（＋／−）の登らなかったマウスが０／８もしくは１／８であったということは、運動の協調性が損なわれたことを示す。（−／−）もしくは（＋／−）の登ったマウスが７／８もしくは８／８であったということは、運動の協調性が高められたことを示す。
【０６３９】
結果：
基本的な感覚および運動の観察を測定するために、倒立スクリーン試験を計画する：８匹全ての（−／−）変異型マウス（１００％）は、倒立スクリーンを登ったが、（＋／＋）マウス（Ｍ  １２１およびＦ  １１６）は、２／４のみが登り、変異型マウスにおける運動の協調性の向上が示唆される。従って、神経筋接合部における変化に、興味を持ち得る。
【０６４０】
これらの観察は、ホモ接合体（−／−）が、運動協調性の向上を示すことを示唆し、この運動協調性の向上は、神経筋の能力の向上または正の神経学的表現型を示唆する。従って、ＰＲＯ９８３ポリペプチドまたはこれをコードする遺伝子に対するアンタゴニストは、損なわれた神経筋の状態を処置または改善するのに有用である。ＰＲＯ９８３ポリペプチドまたはそのアゴニストは、このような神経筋の障害もしくは疾患を模倣するか、または、これらに関連すると予想される。
【０６４１】
（Ｆ．ＤＮＡ５７１２９−１４１３（ＵＮＱ４９３）遺伝子破壊を含むマウスの作製および分析）
これらのノックアウト実験において、ＰＲＯ１００９ポリペプチドをコードする遺伝子（ＤＮＡ５７１２９−１４１３（ＵＮＱ４９３）と称される）を破壊した。これらの研究についてのこの遺伝子特有の情報は、以下の通りである：変異型マウスの遺伝子は、以下に対応する：ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿１５３８０７、すなわち、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  ｃＤＮＡ配列ＢＣ０１８３７１（ＢＣ０１８３７１）；タンパク質参照番号：Ｑ８ＶＣＷ８、すなわち、登録番号：Ｑ８ＶＣＷ８  ＮＩＤ：すなわち、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（Ｍｏｕｓｅ）．仮定タンパク質ＦＬＪ２０９２０．ＭＯＵＳＥＳＰＴＲＮＲＤＢに類似；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ＿０２５１４９、すなわち、登録番号：ＮＭ＿０２５１４９  ＮＩＤ：１３３７６７４０  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ仮定タンパク質ＦＬＪ２０９２０（ＦＬＪ２０９２０）；ヒトタンパク質の配列は、参照番号：Ｑ９Ｈ７Ｇ２．仮定タンパク質ＦＬＪ２０９２０に対応する。
【０６４２】
破壊されたマウスの遺伝子は、仮定タンパク質（暫定的な名称、ＭＧＣ２５８７８）であり、これは、ヒト仮定タンパク質ＦＬＪ２０９２０に対してオルトログ性（ｏｒｔｈｏｌｏｇｏｕｓ）である。別名としては、「ｃＤＮＡ配列ＢＣ０１８３７１」および「クローンＤＮＡ５７１２９  ＡＶＹＶ４９３」が挙げられる。
【０６４３】
ＦＬＪ２０９２０は、ミトコンドリアの酵素であるようである；ＦＬＪ２０９２０は、Ｎ末端のミトコンドリア横断ペプチド、および、ＡＭＰ結合酵素ドメイン（Ｐｆａｍ  ＰＦ００５０１）を含む。このモチーフを共有する他のタンパク質としては、ホタルルシフェラーゼ、長鎖脂肪酸ＣｏＡリガーゼ、アセチルＣｏＡリガーゼ、およびアセチルＣｏＡが挙げられる。ＫＯＧ（真核生物の完全ゲノムについてのオルトログ性群のクラスター（ｃｌｕｓｔｅｒｓ  ｏｆ  ｏｒｔｈｏｌｏｇｏｕｓ  ｇｒｏｕｐｓ  ｆｏｒ  ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ  ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｇｅｎｏｍｅｓ））分析は、ＦＬＪ２０９２０が、長鎖脂肪酸アシルＣｏＡリガーゼとして機能することを示唆する（ＫＯＧ１１７７）。
【０６４４】
標的化した変異もしくはジーントラップによる変異を、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ株に由来する胚性幹（ＥＳ）細胞において作製した。キメラマウスを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊのアルビノマウスと交配させて、Ｆ１のヘテロ接合性の動物を作製した。これらの子孫を交雑させて、Ｆ２の野生型子孫、ヘテロ接合性変異型子孫、およびホモ接合性変異型子孫を作製した。ごくたまに、例えば、キメラからＦ１マウスがほとんど得られない場合、Ｆ１のヘテロ接合性のマウスを、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７雑種マウスと交配させて、交雑のためのさらなるヘテロ接合性の動物を得て、Ｆ２マウスを作製した。この世代からのマウスについて、レベルＩの表現型分析を行なった。
【０６４５】
【化３３】
2007536931.tif 000057
変異の情報：変異型：レトロウイルスの挿入（Ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ  ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ）（ＯＳＴ）。レトロウイルスの挿入は、エキソン１とエキソン２との間をコードするイントロンにおいて生じていた（ＮＣＢＩ登録番号ＮＭ＿１５３８０７．１）。
【０６４６】
標的遺伝子の野生型の発現は、胚性幹（ＥＳ）細胞、および、ＲＴ−ＰＣＲにより試験した１３匹全ての成体組織サンプルにおいて検出された。ＲＴ  ＰＣＲ分析により、分析した（−／−）マウス（Ｍ  １１４）においては、転写が起こっていなかったことが明らかとなった。
【０６４７】
（１．表現型分析（破壊した遺伝子：ＤＮＡ５７１２９−１４１３（ＵＮＱ４９３）について）
（ａ）全体的な表現型のまとめ：
ヒト仮定ミトコンドリア酵素のオルソログをコードする遺伝子（ＦＬＪ２０９２０）の変異は、ＲＢＣ、血小板、ヘモグロビンおよびヘマトクリットのレベルの減少を示す、（−／−）変異型マウスを生じた。さらに、この変異型（−／−）マウスは、眼球突出（ｅｘｏｐｈｔｈａｌｕｍｕｓ）を示した。ＲＴ  ＰＣＲによると、転写物は存在しなかった。
【０６４８】
（ｂ）免疫学による表現型分析
免疫が関連する疾患および炎症性疾患は、複合体の出現または結果をほとんどもたらさず、そして、しばしば、正常な生理学において損傷もしくは傷害に対して重要な、複数の相互に関連した生物学的経路が、この損傷もしくは傷害からの修復を開始し、そして、外来生物に対して、生得的な防御および獲得された防御を提示し始める。疾患または病状は、これらの正常な生理学的経路が、応答の強度に直接的に関連してか、異常な調節もしくは過度の刺激の結果としてか、そのもの自体に対する反応としてか、または、これらの組み合わせとしてのいずれかで、さらなる損傷もしくは傷害をもたらす場合に生じる。
【０６４９】
これらの疾患の発生は、しばしば、多工程の経路を必要とし、そして、しばしば、複数の異なる生物学的な系／経路を必要とするが、これらの経路のうちの１つ以上における、重要な点におけるインターベンションは、寛解性の効果もしくは治療効果を有し得る。治療的なインターベンションは、有害なプロセス／経路の拮抗、または、有益なプロセス／経路の刺激のいずれかによって生じ得る。
【０６５０】
Ｔリンパ球（Ｔ細胞）は、哺乳動物の免疫応答の重要な構成要素である。Ｔ細胞は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）内の遺伝子によりコードされる自己の分子と会合した抗原を認識する。この抗原は、抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片などの表面上に、ＭＨＣ分子と共に提示され得る。Ｔ細胞系は、宿主の哺乳動物に健康への脅威を突きつける、これらの変質された細胞を排除する。Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞および細胞傷害性Ｔ細胞を含む。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞上の抗原−ＭＨＣ複合体を認識した後、広範囲に増殖する。ヘルパーＴ細胞もまた、Ｂ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、および免疫応答に関与する種々の他の細胞の活性化において中心的な役割を果たす、種々のサイトカイン（すなわち、リンホカイン）を分泌する。
【０６５１】
多くの免疫応答において、炎症性細胞は、傷害または感染の部位に潜入する。遊走細胞は、罹患組織の組織学的検査によって検査され得るように、好中球性、好酸球性、単球性またはリンパ球性であり得る。Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ編，１９９４，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．を参照のこと。
【０６５２】
多くの免疫関連疾患が公知であり、そして、これらは、広範囲に研究されている。このような疾患としては、免疫媒介性の炎症性疾患（例えば、慢性関節リウマチ、免疫媒介性の腎疾患、肝胆嚢疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬および喘息）、非免疫媒介性の炎症性疾患、感染病、免疫不全疾患、新生物形成、および移植片拒絶などが挙げられる。免疫学の領域において、炎症および炎症性障害の処置のための標的が同定された。
【０６５３】
免疫学の領域において、炎症および炎症性障害の処置のための標的が、本明細書において同定された。１つの例において、免疫関連の疾患は、免疫応答を抑制することによって処置され得る。免疫刺激活性を有する分子を阻害する中和抗体を用いることは、免疫媒介性疾患および炎症性疾患の処置において有用である。免疫応答を阻害する分子は、（タンパク質によって直接的に、または、抗体のアゴニストを使用することによって）免疫応答を阻害し、従って、免疫関連疾患を寛解するために利用され得る。
【０６５４】
以下の試験を行なった：
血液学：
試験の説明：Ａｂｂｏｔｔ社製のＣｅｌｌ  Ｄｙｎ  ３５００Ｒ自動血液分析装置によって、血液検査を行う。その特徴のいくつかとしては、５つの部分のＷＢＣの差が挙げられる。「患者」への報告は、全体で２２を超えるパラメーターを包含し得る。
【０６５５】
血液学の観察は、（−／−）マウスが、その同じ性別の同腹仔と比較して、ＲＢＣ、血小板、ヘモグロビンおよびヘマトクリットのレベルの減少を示すことを示した。これらの結果は、ノックアウトマウスが、貧血様の表現型を有したことを示した。従って、ＰＲＯ１００９に対するアンタゴニストは、この負の表現型を模倣し、一方で、ＰＲＯ１００９またはそのアゴニストは、正常なヘマトクリットと、赤血球の酸素運搬能力を維持するのに重要である。
【０６５６】
（Ｇ．ＤＮＡ５９６０６−１４７１（ＵＮＱ５５０）遺伝子破壊を含むマウスの作製および分析）
これらのノックアウト実験において、ＰＲＯ１１０７ポリペプチドをコードする遺伝子（ＤＮＡ５９６０６−１４７１（ＵＮＱ５５０）と称される）を破壊した。これらの研究についてのこの遺伝子特有の情報は、以下の通りである：変異型マウスの遺伝子は、以下に対応する：ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿０３２００３、すなわち、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓエクトヌクレオチド（ｅｃｔｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）ピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼ５（Ｅｎｐｐ５）；タンパク質参照番号：ＮＰ＿１１４３９２、すなわち、エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼ５［Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ］；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ＿０２１５７２、すなわち、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼ５（推定の機能）（ＥＮＰＰ５）；ヒトタンパク質の配列は、参照番号：ＮＰ＿０６７５４７、すなわち、エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼ５（推定の機能）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］に対応する。
【０６５７】
破壊されたマウスの遺伝子は、Ｅｎｐｐ５（エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼ５）であり、これは、ヒトＥＮＰＰ５に対してオルトログ性である。
【０６５８】
ＥＮＰＰ５は、Ｉ型ホスホジエステラーゼ／ヌクレオチドピロホスファターゼモチーフ（Ｐｆａｍ  ＰＦ０１６６３）を含む。このようなホスファターゼとしては、ヒト形質細胞膜糖タンパク質ＰＣ１、アルカリホスホジエステラーゼＩ、およびヌクレオチドピロホスファターゼが挙げられる。これらの酵素は、ＮＡＤ、デオキシヌクレオチド、およびヌクレオチド糖におけるホスホジエステル結合およびホスホスルフェート結合の切断を触媒し、それにより、種々のヌクレオチド５’一リン酸を生成する。ヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼ（ＥＮＰＰ５）の構造特徴の比較は、これら全てが、類似の触媒機能を共有することを示した（Ｇｉｊｓｂｅｒｓら，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６（２）：１３６１−８（２００１））。
【０６５９】
標的化した変異もしくはジーントラップによる変異を、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ株に由来する胚性幹（ＥＳ）細胞において作製した。キメラマウスを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊのアルビノマウスと交配させて、Ｆ１のヘテロ接合性の動物を作製した。これらの子孫を交雑させて、Ｆ２の野生型子孫、ヘテロ接合性変異型子孫、およびホモ接合性変異型子孫を作製した。ごくたまに、例えば、キメラからＦ１マウスがほとんど得られない場合、Ｆ１のヘテロ接合性のマウスを、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７雑種マウスと交配させて、交雑のためのさらなるヘテロ接合性の動物を得て、Ｆ２マウスを作製した。以下に示されるように、この世代からのマウスについて、レベルＩの表現型分析を行なった。
【０６６０】
【化３４】
2007536931.tif 000058
変異の情報：変異型：相同組換え（標準的）。エキソン１をコードする領域を標的化した（ＮＣＢＩ登録番号ＮＭ＿０３２００３．１）。
【０６６１】
標的遺伝子の野生型の発現は、胚性幹（ＥＳ）細胞、および、ＲＴ−ＰＣＲにより試験した１３の成体組織サンプルの中でも、腎臓、前立腺、精巣、肝臓；骨格筋；骨；胃、小腸および結腸、心臓；ならびに、脂肪組織（ａｄｉｐｏｓｅ）において検出された。標的遺伝子の破壊を、サザンハイブリダイゼーション分析により確認した。
【０６６２】
（１．表現型分析（破壊した遺伝子：ＤＮＡ５９６０６−１４７１（ＵＮＱ５５０）について）
（ａ）全体的な表現型のまとめ：
ヒトエクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼ５（ＥＮＰＰ５）のオルソログをコードする遺伝子の変異は、（−／−）マウスにおいて、平均血清インシュリンレベルの減少をもたらした。さらに、ホモ接合性の（−／−）マウスは、成長の遅れ（平均体重および平均体長の減少）を示し、そして、骨塩密度（ｂｏｎｅ  ｍｉｎｅｒａｌ  ｄｅｎｓｉｔｙ）の測定値の減少を伴う、顕著な骨代謝障害を示した。ＣＡＴ−スキャンの結果は、（−／−）マウスが、心臓肥大および腎機能障害を有することを示した。成熟白内障もまた、数匹の変異ホモ接合性マウスの左右両方の眼において形成された。サザンブロットにより遺伝子破壊を確認した。
【０６６３】
（ｂ）表現型分析：代謝−血液化学
代謝の領域において、糖尿病の処置のための標的が同定され得る。血液化学による表現型分析としては、糖代謝における変化の指標としての血清インシュリンレベルの測定が挙げられる。異常な糖代謝は、以下の障害または状態に関連し得る：１型および２型の糖尿病、シンドロームＸ、種々の心臓血管疾患および／または肥満。
【０６６４】
インシュリンのデータ：
試験の説明：Ｌｅｘｉｃｏｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓは、マウスに関して定量的なインシュリン分析を実行するために、その臨床の状況において、Ｃｏｂｒａ  ＩＩ  Ｓｅｒｉｅｓ  Ａｕｔｏ  Ｇａｍｍａ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍを使用する。
【０６６５】
結果：雄性および雌性の（−／−）マウスは、その同じ性別の（＋／＋）同腹仔および歴史的な平均と比べた場合、減少した平均血清インシュリンレベルを示した（分析した野生型／ヘテロ接合体／ホモ接合体の比は、４／６／９であった）。さらに、（−／−）マウスは、その同じ性別の（＋／＋）同腹仔および歴史的な平均と比べ、減少した平均体重および平均体長を示すことも観察され、これは、成長の遅れ、または、糖尿病もしくは悪液質に関連する組織消耗病の結果の可能性を示唆している。こうして、ＰＲＯ１１０７ポリペプチドをコードする遺伝子における変異欠失は、糖尿病に付随する負の表現型を示した。ＰＲＯ１１０７ポリペプチドおよびそのアゴニストは、従って、正常な糖代謝を維持する際に重要な役割を果たすことが予想され、そして、糖尿病、または悪液質のような組織消耗病の処置において有用である。
【０６６６】
（ｃ）骨代謝：放射線学による表現型分析
手順：
上述のように、変異型（−／−）マウスは、成長の遅れの徴候を示した（同じ性別の（＋／＋）同腹仔および歴史的な平均と比べた場合、平均体重および平均体長が減少していた）。この理由から、放射線学の表現型分析を行なった。骨代謝の領域において、関節炎、骨粗鬆症、骨減少症および大理石骨病の処置のための標的が同定され得、ならびに、骨治癒を促進する標的が同定され得る。試験としては、海綿質および皮質骨の両方についての、非常に高解像度でかつ、非常に高感度の骨塩密度の測定のためのマイクロＣＴが挙げられる。
【０６６７】
ＤＥＸＡ分析−試験の説明：
手順：４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体および８匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重Ｘ線吸収骨塩定量（Ｄｕａｌ  Ｅｎｅｒｇｙ  Ｘ  ｒａｙ  Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｍｅｔｒｙ）（ＤＥＸＡ）を首尾よく使用して、総組織質量（ＴＴＭ）における変化を同定した。
【０６６８】
マウスを、Ａｖｅｒｔｉｎ（１．２５％の２，２，２，トリブロモエタノール、２０ｍｌ／体重ｋｇ）を腹腔内注射して麻酔をかけ、体長および体重を測定し、次いで、マウスを、ＤＥＸＡスキャンのために、ＰＩＸＩｍｕｓＴＭデンシトメーター（Ｌｕｎａｒ  Ｉｎｃ．）のプラットフォーム上に、腹臥位で置いた。Ｌｕｎａｒ  ＰＩＸＩｍｕｓソフトウェアを用いて、目的の領域（ＲＯＩ、すなわち、全身、椎骨、および両大腿骨）において骨塩密度（ＢＭＤ）および脂肪組成（％脂肪）および総組織質量（ＴＴＭ）を決定した。
【０６６９】
ＤＥＸＡの結果：
（−／−）マウスは、その同じ性別の（＋／＋）同腹仔および歴史的な平均と比較した場合、総組織質量、除脂肪体重、総脂肪質量、骨塩密度、ならびに全身および大腿骨における骨塩密度の、顕著な減少を示した。
【０６７０】
骨のマイクロＣＴ分析：
手順：また、マイクロＣＴを用いて、ＢＭＤの非常に感度の高い測定値を得た。マイクロＣＴ４０スキャンで骨を精査し、骨の質量および構造に関する詳細な情報を提供した。１つの椎骨および１つの大腿骨を、４匹の野生型および３匹のホモ接合性マウスのコホートから採取した。以下について測定を行なった：第５腰椎骨の海綿質容積（ｌｕｍｂａｒ  ５  ｖｅｔｅｒｂｒａ  ｔｒａｅｂｅｃｕｌａｒ  ｂｏｎｅ）、小柱の厚み（ｔｒａｅｂｅｃｕｌａｒ  ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ）、結合密度（ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｉｔｙ  ｄｅｎｓｉｔｙ）、ならびに大腿骨の中心軸の総骨面積（ｍｉｄｓｈａｆｔ  ｆｅｍｕｒ  ｔｏｔａｌ  ｂｏｎｅ  ａｒｅａ）およびａｎｄ  皮質の厚み（ｃｏｒｔｉｃａｌ  ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ）。マイクロＣＴ４０は、骨の質量および構造に関する詳細な情報を提供した。複数の骨を、サンプルホルダーに入れ、自動的にスキャンした。機器のソフトウェアを用いて、分析のための目的の領域を選択した。第５腰椎骨（ｆｉｆｔｈ  ｌｕｍｂａｒ  ｖｅｒｔｅｂｒａｅ）（ＬＶ５）において、１６マイクロメートルの解像度で海綿質のパラメーターを分析し、そして、大腿骨の中心軸において、２０マイクロメートルの解像度で皮質骨のパラメーターを分析した。
【０６７１】
マイクロＣＴ分析の結果：
（−／−）マウスは、その同じ性別の（＋／＋）同腹仔および歴史的な平均と比較した場合、脊椎の海綿質の測定値および大腿骨中心軸の断面積の測定値において顕著な減少を示した。
【０６７２】
ＣＡＴスキャンのプロトコール：
マウスに、ＣＴ造影剤Ｏｍｎｉｐａｑｕｅ  ３００（Ｎｙｃｏｍｅｄ  Ａｍｅｒｓｈａｎ，３００ｍｇ／ｍｌのヨウ素を動物１匹あたり０．２５ｍｌ、すなわち、体重１ｋｇあたり２．５０〜３．７５ｇのヨウ素）を腹腔内に注射した。約１０分間ケージ内で休ませた後、次いで、マウスに、Ａｖｅｒｔｉｎ（１．２５％の２，２，２，トリブロモエタノール、２０ｍｌ／体重ｋｇ）を腹腔内注射して落ち着かせた。麻酔をかけた動物を試験台の上に腹臥に寝かせて、ＭｉｃｒｏＣＡＴスキャナ（ＩｍＴｅｋ，Ｉｎｃ．）を用いてＣＡＴスキャンを実施した。ＩｍＴｅｋ  ３Ｄ  ＲＥＣＯＮソフトウェアを用い、一群のワークステーションにおけるＦｅｌｄｋａｍｐのアルゴリズムにより、三次元画像を再構築した。
【０６７３】
ＣＡＴスキャンの結果：
分析した（−／−）マウスは、心臓肥大および腎機能不全を示した。胸部のＣＡＴスキャンは、正常なサイズの約２倍に拡大した心臓を示した。膀胱にほとんど尿がないことから、排泄の遅れまたは乱れが示唆された。
【０６７４】
これらの結果は、ノックアウト変異型マウスが、密度の減少、そしておそらくは、骨折につながる骨のもろさと共に、骨質量の減少により特徴付けられる骨粗鬆症と類似する、有意な骨質量の減少と共に、異常な骨代謝を示すことを実証する。さらに、ＣＡＴスキャンの結果は、（−／−）マウスが、心臓血管疾患に関連し得る心臓肥大を発症していたことを示唆した。胸部のＣＡＴスキャンは、正常なサイズの約２倍に拡大した心臓を示した。膀胱にほとんど尿がないことから、排泄の遅れまたは乱れが示唆される。腎機能不全もまたみられた。従って、ＰＲＯ１１０７ポリペプチドは、正常な腎機能、正常な糖代謝を維持するため、ならびに、骨のホメオスタシスを維持するために、特に重要である。一方で、ＰＲＯ１１０７ポリペプチドまたはこれをコードするＤＮＡのアンタゴニストもしくはインヒビターは、骨粗鬆症に類似する異常な、もしくは病理学的な骨の障害をもたらす。上述のように、（−／−）変異型マウスは、成長の遅れの徴候を示した。このような成長障害は、糖尿病もしくは悪液質のような組織消耗病に関連する、表現型もしくは病理学的な状態と関連し得る。
【０６７５】
（ｄ）心臓血管の表現型分析：
心臓血管生物学の領域において、心臓血管、内皮または血管新生の障害の処置のための、潜在的な標的を同定するために、表現型試験を行なった。種々の眼の異常に警告を与えるための１つのこのような表現型試験には、網膜動静脈比（Ａ／Ｖ比）を決定するための、眼底写真撮影および血管造影法が含まれた。異常なＡ／Ｖ比は、高血圧の血管病（および、高血圧を引き起こすあらゆる疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症）に関連し得るこのような全身性の疾患もしくは障害、糖尿病、または、眼科学障害に対応する他の眼の疾患を示唆する。このような眼の異常としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：網膜形成異常、種々の網膜症、再狭窄、網膜動脈の閉塞もしくは閉鎖；網膜脈管構造の続発的な萎縮を引き起こす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑形成異常、シュタルガルト病、先天性停在夜盲症、コロイデレミア、脳回転萎縮症、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ−マインザー症候群、Ｓｅｎｉｏｒ  Ｌｏｋｅｎ症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎・骨端異形成症、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフスム症候群、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジル症候群、筋緊張性ジストロフィ、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール−マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β−リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖体症、ホモシスチン尿症、またはマンノシドーシス。
【０６７６】
種々の眼の異常に警告を与えるための１つのこのような表現型試験には、網膜動静脈比（Ａ／Ｖ比）を決定するための、眼底写真撮影および血管造影法が含まれた。異常なＡ／Ｖ比は、高血圧の血管病（および、高血圧を引き起こすあらゆる疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症）に関連し得るこのような全身性の疾患もしくは障害、糖尿病、または、眼科学障害に対応する他の眼の疾患を示唆する。このような眼の異常としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：網膜形成異常、種々の網膜症、再狭窄、網膜動脈の閉塞もしくは閉鎖；網膜脈管構造の続発的な萎縮を引き起こす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑形成異常、シュタルガルト病、先天性停在夜盲症、コロイデレミア、脳回転萎縮症、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ−マインザー症候群、Ｓｅｎｉｏｒ  Ｌｏｋｅｎ症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎・骨端異形成症、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフスム症候群、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジル症候群、筋緊張性ジストロフィ、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール−マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β−リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖体症、ホモシスチン尿症、またはマンノシドーシス。
【０６７７】
手順：４匹の野生型、５匹のヘテロ接合体および９匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。Ｈａｗｅｓおよび共同研究者ら（Ｈａｗｅｓら，１９９９  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｖｉｓｉｏｎ  １９９９；５：２２）に従って修正した、Ｋｏｗａ  Ｇｅｎｅｓｉｓ小動物底部カメラを用いて、知覚反応のある動物において眼底写真撮影を行なった。フルオレセインの腹膜内注射により、各試験について、直接日光の底部画像および蛍光血液造影図の獲得が可能となった。直接的な眼科学変化に加えて、この試験は、糖尿病およびアテローム性動脈硬化症のような全身性疾患に伴う眼の変化、または、他の眼の異常を検出できる。正常な光の下での眼底の写真が提供された。血管造影法による写真は、眼の動脈および静脈の検査を可能にした。さらに、眼について、動脈／静脈（Ａ／Ｖ）比を決定した。
【０６７８】
上述のプロトコールを使用して、作製されたＦ２の、野生型子孫、ヘテロ接合性変異型子孫およびホモ接合性変異型子孫について眼科学の分析を行なった。具体的には、Ｋｏｗａ  ＣＯＭＩＴ＋ソフトウェアを用いて、底部の画像に基づいて、Ａ／Ｖ比を測定し、計算した。この試験は、開いた瞳孔を通してカラー写真を撮る：この画像は、多くの疾患を検出および分類するのに役立つ。動脈／静脈比（Ａ／Ｖ）は、（脈管の分岐前に測定した）静脈の直径に対する動脈の直径の比である。多くの疾患（すなわち、糖尿病、心臓血管障害、乳頭浮腫、視神経萎縮（ｏｐｔｉｃ  ａｔｒｏｐｈｙ）、または、他の眼の異常（例えば、網膜変性（色素性網膜炎として知られる）または網膜形成異常、視力の問題、または、盲目））は、この比に影響を及ぼす。従って、ホモ接合性の（−／−）変異型子孫およびヘテロ接合性の（＋／−）変異型子孫において、野生型の（＋／＋）同腹仔と比較して、動脈／静脈比の増加をもたらす、表現型のこの知見は、このような病理学的状態を示す。
【０６７９】
結果：この研究において、眼底の写真は、数匹の（−／−）マウスが、眼の異常の徴候を示したことを示した。（−／−）マウスは、（＋／＋）同腹仔と比較して、左右両方の眼において成熟白内障を示した。動脈／静脈比におけるわずかな増加も見られた。まとめると、ＰＲＯ１１０７ポリペプチドをコードする、ＤＮＡ５９６０６−１４７１（ＵＮＱ５５０）として同定される遺伝子をノックアウトすることによって、ホモ接合性の変異型子孫は、白内障の形成、および／または、他の眼科学の障害に関連する表現型を示す。このように検出された眼科学の変化は、最も一般的に、心臓血管による全身性の疾患に関連している。特に、白内障の形成は、血液凝固カスケードにおける障害に関連する、心臓血管の合併症を示し得る。白内障はまた、以下のような全身性の疾患にも関連する：ヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、１３〜１５トリソミー状態、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィ、ファブリー病、低トロンビン血症、コンラーディ症候群。従って、ＰＲＯ１１０７をコードする遺伝子のアンタゴニストは、類似の病理学的変化をもたらし、これに対し、アゴニストは、白内障の形成および／またはその根底にある心臓血管疾患もしくは眼科学の障害の予防において、治療剤として有用である。
【０６８０】
（Ｈ．ＤＮＡ６０６２５−１５０７（ＵＮＱ５８８）遺伝子破壊を含むマウスの作製および分析）
これらのノックアウト実験において、ＰＲＯ１１５８ポリペプチドをコードする遺伝子（ＤＮＡ６０６２５−１５０７（ＵＮＱ５８８）と称される）を破壊した。これらの研究についてのこの遺伝子特有の情報は、以下の通りである：変異型マウスの遺伝子は、以下に対応する：ヌクレオチド参照番号：ＢＣ０２４４６２、すなわち、登録番号：ＢＣ０２４４６２  ＮＩＤ：１９３５４４７０、すなわち、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ、未知（ＩＭＡＧＥ：３６１０２５７に対するタンパク質）．クローンＭＧＣ：３７３２６  ＩＭＡＧＥ：４９７５５６２に対して類似；タンパク質参照番号：Ｑ８ＱＺＴ４、すなわち、登録番号：Ｑ８ＱＺＴ４  ＮＩＤ：すなわち、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（Ｍｏｕｓｅ）．未知（ＩＭＡＧＥ：３０１０２５７に対するタンパク質）．ＭＯＵＳＥＳＰＴＲＮＲＤＢに対して類似；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ＿１７４８８１、すなわち、登録番号：ＮＭ＿１７４８８１  ＮＩＤ：ｇｉ  ２８１４４８９２  参照番号ＮＭ＿１７４８８１．１  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓクラムス（ｃｒｕｍｓ）ホモログ３（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）（ＣＲＢ３）、転写改変体３；ヒトタンパク質の配列は、参照番号：Ｑ８ＷＶＡ０．登録番号：Ｑ８ＷＶＡ０  ＮＩＤ：Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ヒト）仮定タンパク質ＨＵＭＡＮＳＰＴＲＮＲＤＢに対応する。
【０６８１】
破壊されたマウスの遺伝子は、ヒトＣＲＢ４のオルソログである、Ｃｒｂ３（クラムスホモログ３［Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ］）である。別名としては、「クラムス３アイソフォームａ」および「クラムス３アイソフォームｂ」が挙げられる。
【０６８２】
ＣＲＢ３は、先端部と基底面の膜が接触する接着結合部に位置する膜貫通タンパク質であり、上皮細胞における先端部の極性決定基である。ＣＲＢ３は、短い細胞外ドメインと、系統学的に保存された細胞内ドメインとから構成され、細胞質内の骨格タンパク質Ｐａｌｓ１（Ｌｉｎ７に結合するタンパク質）およびＰＡＴＪ（接着結合タンパク質に結合するＰａｌｓ１）と、複合体を形成することを可能にする。ＣＲＢ３は、接着結合の生物発生および、上皮細胞の極性の確立において役割を果たすようである（Ｍａｋａｒｏｖａら，Ｇｅｎｅ  ３０２（１−２）：２１−９（２００３））。
【０６８３】
標的化した変異もしくはジーントラップによる変異を、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ株に由来する胚性幹（ＥＳ）細胞において作製した。キメラマウスを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊのアルビノマウスと交配させて、Ｆ１のヘテロ接合性の動物を作製した。これらの子孫を交雑させて、Ｆ２の野生型子孫、ヘテロ接合性変異型子孫、およびホモ接合性変異型子孫を作製した。ごくたまに、例えば、キメラからＦ１マウスがほとんど得られない場合、Ｆ１のヘテロ接合性のマウスを、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７雑種マウスと交配させて、交雑のためのさらなるヘテロ接合性の動物を得て、Ｆ２マウスを作製した。以下に示すように、この世代からのマウスについて、レベルＩの表現型分析を行なった。
【０６８４】
【化３５】
2007536931.tif 000059
注：ホモ接合性は致死であった。（−／−）と同定された３０匹の変異体のうち、１１匹の新生仔が、遺伝子型決定の時点で死亡していた。残りの死亡（−／−）変異体は、胚として回収した。従って、ＤＮＡ６０６２５−１５０７またはこれがコードするポリペプチドＰＲＯ１１５８は、胚の発生に必須であるはずである。
変異の情報：変異型：相同組換え（標準的）。エキソン１〜４を標的化した（ＮＣＢＩ登録番号ＢＣ０２４４６２．１）。
【０６８５】
標的遺伝子の野生型の発現は、胚性幹（ＥＳ）細胞、および、ＲＴ−ＰＣＲにより試験した１３全ての成体組織サンプルにおいて検出された。標的遺伝子の破壊を、サザンハイブリダイゼーション分析により確認した。
【０６８６】
（１．表現型分析（破壊した遺伝子：ＤＮＡ６０６２５−１５０７（ＵＮＱ５８８）について）
（ａ）全体的な表現型のまとめ
Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａクラムスのヒトホモログ３（ＣＲＢ３）のオルソログをコードする遺伝子の変異は、（−／−）変異体の致死性をもたらした。ノックアウトの約半数が子宮内で死に、そして、半数が誕生時に死んだ。１９匹の死んだ変異体は、胚として集めた。雄性および雌性のヘテロ接合性の（＋／−）マウスは、総組織質量および総体脂肪レベルの減少を示した。ヘテロ接合性の（＋／−）マウスは、明暗活性の増加に向かう、サーカディアンリズムの傾向の増強を示した。遺伝子破壊を、サザンブロットにより確認した。
【０６８７】
胚の発生段階での死亡率の異常に関連する議論：
ノックアウトマウスにおける胚性致死は、通常、種々の深刻な発生段階での問題（神経変性疾患、脈管形成障害、炎症性疾患が挙げられるがこれらに限定されない）から生じ、ここでは、遺伝子／タンパク質が、多くの細胞型における基本的な細胞のシグナル伝達プロセスにおいて重要な役割を有する。さらに、胚性致死は、潜在的な癌のモデルとして有用である。同様に、対応するヘテロ接合性の（＋／−）変異型動物は、ノックアウトされた遺伝子の機能に関して、非常に情報の豊富な手がかりを示す、表現型および／または病理学的なレポートを示す場合、特に有用である。例えば、ＥＰＯノックアウト動物は、胚性致死であるが、胚に関する病理学的なレポートは、ＲＢＣの顕著な欠乏を示した。
【０６８８】
クラムスホモログ３（ＵＮＱ５８８）は、接着結合において発現される、膜貫通型タンパク質である。ＵＮＱ５８８ノックアウトマウスの分析は、接着結合の生物発生、および、上皮細胞の極性の確立における、ＵＮＱ５８８の潜在的な役割の研究を可能にする。いくつかの癌は、上皮組織において、慢性的に成長因子を漏出させる、欠陥性の接着結合が生じた結果として生じるものと考えられる。ＵＮＱ５８８は、多数の卵巣腺癌において有意にアップレギュレートされていることを示しているので、特に、このプロセスにおいて役割を果たし得る。
【０６８９】
ＵＮＱ５８８ノックアウトマウスの分析により、ホモ接合体が、生後の最初の１時間以内に死亡することが明らかとなる。膨張できない肺を除いて、全ての器官は、肉眼で見て正常であるように見える。従って、ＵＮＱ５８８は、肺の成熟に必要とされるようである。従って、ＵＮＱ５８８ノックアウトマウスは、乳児呼吸窮迫障害（ＲＤＳ）のモデルを提供し得る。
【０６９０】
（ｂ）表現型分析：ＣＮＳ／神経学
分析は、本明細書において、神経学の領域において、神経学的障害および精神医学的障害（抑うつ、全般性不安障害、注意欠陥過活動性障害、強迫性障害、精神分裂病、認知障害、痛覚過敏、および感覚障害が挙げられる）の処置のための、インビボで有効な標的を同定することに焦点をあてた。神経学的障害としては、「不安障害」と規定される分類が挙げられ、この不安障害としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：軽度〜中程度の不安、全身性の病状に起因する不安障害、他に特定されていない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を伴うパニック障害、広場恐怖症を伴わないパニック障害、心的外傷後ストレス障害、社会恐怖、特定の恐怖、物質誘発性不安障害、急性アルコール離脱、強迫性障害、広場恐怖症、双極性障害Ｉ型もしくはＩＩ型、他に特定されていない双極性障害、循環病、抑うつ障害、大鬱病性障害、気分障害（ｍｏｏｄ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、物質誘発性気分障害。さらに、不安障害は、人格障害にも適用され得、この人格障害としては、以下の型が挙げられるがこれらに限定されない：妄想性、反社会的、回避性行動、境界性人格障害、依存性、演技性、自己愛性、強迫性、分裂病質的、および分裂病型。
【０６９１】
手順：
行動のスクリーニングを、４匹の野生型マウスおよび４匹のヘテロ接合性変異型マウスのコホートについて行なった。全ての行動試験を、生存度の減少が、より早期の試験を必要としない限り、１２週齢と１６週齢との間に行なった。これらの試験には、不安、活動レベルおよび診査を測定するために、オープンフィールドを含んだ。
【０６９２】
サーカディアンリズム：
試験の説明：
野生型のマウスおよびヘテロ接合性マウスを、個々に、試験の第１日目の午後４時に、４８．２ｃｍ×２６．５ｃｍのホームケージ（ｈｏｍｅ  ｃａｇｅ）に入れ、自由に食餌と水を与えた。動物を、午前７時に点灯し、午後７時に消灯する、１２時間の明／暗周期に供した。システムソフトウェアにより、動物の動きにより生じる光線の中断の数を記録し、光線の中断を自動的に自発運動に分ける。３日間の試験の間に、６０、１時間間隔で行動を記録した。生成したデータは、３日間の試験期間にわたって、毎時記録した活動レベルのメジアンによって（サーカディアンリズム）、そして、各明／暗周期の間の総活動のメジアンによって（自発運動活性（ｌｏｃｏｍｏｔｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ））、表した。
【０６９３】
結果：
このホームケージにおける行動試験の間に、顕著な差が観察された。（＋／−）マウスは、その（＋／＋）同腹仔と比較した場合、２日目の明期の間の歩行カウントの増加を示した。さらに、（−／−）マウスは、その（＋／＋）同腹仔と比較した場合、暗期に対する明期の、および、総活動に対する明期の比の増加を示した。これは、変異体における、異常なサーカディアンリズムの応答を示唆する。
【０６９４】
これらの結果は、ヘテロ接合性の変異型マウスが、通常、睡眠障害および／または不安様の挙動に関連する、異常なサーカディアンリズムを示すことを示唆する。従って、ＰＲＯ１１５８ポリペプチドまたはこれをコードする遺伝子のアンタゴニストは、類似の異常な挙動を示すことが予測される。一方で、ＰＲＯ１１５８ポリペプチドまたはそのアゴニストは、睡眠障害もしくは他の不安様の症状を含む、このような神経学的障害の処置に有用である。
【０６９５】
（Ｉ．ＤＮＡ６０７７５−１５３２（ＵＮＱ６３３）遺伝子破壊を含むマウスの作製および分析）
これらのノックアウト実験において、ＰＲＯ１２５０ポリペプチドをコードする遺伝子（ＤＮＡ６０７７５−１５３２（ＵＮＱ６３３）と称される）を破壊した。これらの研究についてのこの遺伝子特有の情報は、以下の通りである：変異型マウスの遺伝子は、以下に対応する：ヌクレオチド参照番号：ＡＫ００６５４１、すなわち、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ雄性精巣ｃＤＮＡ、ＲＩＫＥＮ全長富化ライブラリー、クローン：１７０００３０Ｆ０５  生成物：脂肪酸補酵素Ａリガーゼ、長鎖５、全長配列；タンパク質参照番号：ＡＡＨ３１５４４、すなわち、脂肪酸補酵素Ａリガーゼ、長鎖５［Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ］に類似；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ＿０１６２３４、すなわち、脂肪酸補酵素Ａリガーゼ、長鎖５（ＦＡＣＬ５）；ヒトタンパク質の配列は、参照番号：Ｑ９ＵＬＣ５、すなわち、長鎖脂肪酸ＣｏＡリガーゼ５（長鎖アシルＣｏＡシンテターゼ５）（ＬＡＣＳ５）に対応する。
【０６９６】
変異したマウスの遺伝子は、脂肪酸補酵素Ａリガーゼ、長鎖５（Ｆａｃｌ５）のオルソログ（ＦＡＣＬ５）である。別名としては、１７０００３０Ｆ０５Ｒｉｋ、ＡＣＳ２、ＡＣＳ５、長鎖アシルＣｏＡシンテターゼ５、脂肪酸補酵素Ａリガーゼ５、および長鎖脂肪酸補酵素Ａリガーゼ５が挙げられる。
【０６９７】
補酵素Ａリガーゼは、複数の遺伝子によりコードされる。一般に、全てのアイソザイムが、種々の鎖長から構成される、複数の基質を有する。この酵素は、（ＡＴＰおよびＣｏＡを利用する）脂肪酸からのアシルＣｏＡの形成を触媒する。補酵素Ａリガーゼは、いくつかの様式において、細胞膜を横切って脂肪酸を輸入するために、脂肪酸輸送タンパク質と協働する（Ｍａｒｔｉｎら，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７２（４５）：２８２１０−７（１９９７））。
【０６９８】
ＡＣＳ５は、腸管上皮細胞および増殖性の前脂肪細胞において発現される（Ｏｉｋａｗａら，Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ（Ｔｏｋｙｏ）１２４（３）：６７９−８５（１９９８））。ＦＡＣＬ５は、神経膠腫細胞の増殖および悪性神経膠腫における因子として関与が示唆されている（Ｙａｍａｓｈｉｔａら，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９（５１）：５９１９−２５（２０００））。ラットのＦａｃｌ５は、イリアクシン（ｉｒｉａｃｓｉｎ）Ｃおよびチオゾリジンジオンにより阻害され得る（Ｋｉｍら，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６（２７）：２４６６７−７３（２００１））。
【０６９９】
標的化した変異もしくはジーントラップによる変異を、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ株に由来する胚性幹（ＥＳ）細胞において作製した。キメラマウスを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊのアルビノマウスと交配させて、Ｆ１のヘテロ接合性の動物を作製した。これらの子孫を交雑させて、Ｆ２の野生型子孫、ヘテロ接合性変異型子孫、およびホモ接合性変異型子孫を作製した。ごくたまに、例えば、キメラからＦ１マウスがほとんど得られない場合、Ｆ１のヘテロ接合性のマウスを、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７雑種マウスと交配させて、交雑のためのさらなるヘテロ接合性の動物を得て、Ｆ２マウスを作製した。この世代からのマウスについて、レベルＩの表現型分析を行なった。
【０７００】
【化３６】
2007536931.tif 000060
変異の情報：変異型：相同組換え（標準的）。エキソン５のコード領域を標的化した。
【０７０１】
標的遺伝子の野生型の発現は、胚性幹（ＥＳ）細胞、および、ＲＴ−ＰＣＲにより試験した１９匹全ての成体組織サンプルにおいて検出された。標的遺伝子の破壊は、サザンハイブリダイゼーション分析により確認した。マウス胚におけるＵＮＱ６３３は、胎児の肝臓において、強い発現シグナルを示した（Ｅ１１．５〜Ｅ１２．５）。マウス胚におけるＵＮＱ６３３の発現はまた、小さな血管の一部において弱いシグナルを示した（Ｅ１０．５  ミッドトランク（ｍｉｄ  ｔｒｕｎｋ））。
【０７０２】
（１．表現型分析（破壊した遺伝子：ＤＮＡ６０７７５−１５３２（ＵＮＱ６３３）について）
（ａ）全体的な表現型のまとめ
ヒト脂肪酸補酵素Ａリガーゼ、長鎖５（ＦＡＣＬ５）のオルソログをコードする遺伝子の変異は、（−／−）マウスにおいて、骨塩の含量および密度の測定値の減少と、血小板数の減少をもたらした。さらに、（−／−）マウスは、その同じ性別の（＋／＋）同腹仔および歴史的な平均と比べた場合、平均体重および平均体長の減少を示した。サザンブロットにより遺伝子破壊を確認した。
【０７０３】
（ｂ）骨代謝：放射線学による表現型分析
手順：
上述のように、変異型（−／−）マウスは、成長の遅れの徴候を示した（同じ性別の（＋／＋）同腹仔および歴史的な平均と比べた場合、平均体重および平均体長が減少していた）。（分析した野生型／ヘテロ接合体／ホモ接合体の比は、１４／３４／１７であった）。この理由から、放射線学の表現型分析を行なった。骨代謝の領域において、関節炎、骨粗鬆症、骨減少症および大理石骨病の処置のための標的が同定され得、ならびに、骨治癒を促進する標的が同定され得る。試験としては、海綿質および皮質骨の両方についての、非常に高解像度でかつ、非常に高感度の骨塩密度の測定のためのマイクロＣＴが挙げられる。
【０７０４】
ＤＥＸＡ分析−試験の説明：
手順：４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体および８匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重Ｘ線吸収骨塩定量（ＤＥＸＡ）を首尾よく使用して、総組織質量（ＴＴＭ）における変化を同定した。
【０７０５】
マウスを、Ａｖｅｒｔｉｎ（１．２５％の２，２，２，トリブロモエタノール、２０ｍｌ／体重ｋｇ）を腹腔内注射して麻酔をかけ、体長および体重を測定し、次いで、マウスを、ＤＥＸＡスキャンのために、ＰＩＸＩｍｕｓＴＭデンシトメーター（Ｌｕｎａｒ  Ｉｎｃ．）のプラットフォーム上に、腹臥位で置いた。Ｌｕｎａｒ  ＰＩＸＩｍｕｓソフトウェアを用いて、目的の領域（ＲＯＩ、すなわち、全身、椎骨、および両大腿骨）において骨塩密度（ＢＭＤ）および脂肪組成（％脂肪）および総組織質量（ＴＴＭ）を決定した。
【０７０６】
ＤＥＸＡの結果：
（−／−）マウスは、その同じ性別の（＋／＋）同腹仔および歴史的な平均と比較した場合、平均骨塩含量、骨塩含量指数（ＢＭＣ／ＬＭＢ）、ならびに全身および大腿骨における骨塩密度の減少を示した。雌性の（−／−）マウスは、容積測定による、全身および大腿骨における骨塩密度の平均の減少を示した。
【０７０７】
骨のマイクロＣＴ分析：
手順：また、マイクロＣＴを用いて、ＢＭＤの非常に感度の高い測定値を得た。マイクロＣＴ４０スキャンで骨を精査し、骨の質量および構造に関する詳細な情報を提供した。１つの椎骨および１つの大腿骨を、４匹の野生型および３匹のホモ接合性マウスのコホートから採取した。以下について測定を行なった：第５腰椎骨の海綿質容積、小柱の厚み、結合密度、ならびに大腿骨の中心軸の総骨面積および皮質の厚み。マイクロＣＴ４０は、骨の質量および構造に関する詳細な情報を提供した。複数の骨を、サンプルホルダーに入れ、自動的にスキャンした。機器のソフトウェアを用いて、分析のための目的の領域を選択した。第５腰椎骨（ＬＶ５）において、１６マイクロメートルの解像度で海綿質のパラメーターを分析し、そして、大腿骨の中心軸において、２０マイクロメートルの解像度で皮質骨のパラメーターを分析した。
【０７０８】
マイクロＣＴ分析の結果：
雄性の（−／−）マウスは、その同じ性別の（＋／＋）同腹仔および歴史的な平均と比較した場合、脊椎の海綿質の厚み、ならびに、大腿骨中心軸の皮質の厚みおよび断面積の平均の減少を示した。これらの結果は、ノックアウト変異型マウスが、密度の減少、そしておそらくは、骨折につながる骨のもろさと共に、骨質量の減少により特徴付けられる骨粗鬆症と類似する、有意な骨質量の減少と共に、異常な骨代謝を示すことを実証する。従って、ＰＲＯ１２５０ポリペプチドは、骨のホメオスタシスを維持するために特に重要であり、そして、骨治癒のため、または、関節炎もしくは骨粗鬆症の処置のために有用である。一方で、ＰＲＯ１２５０ポリペプチドまたはこれをコードするＤＮＡのアンタゴニストもしくはインヒビターは、骨粗鬆症に類似する異常な、もしくは病理学的な骨の障害をもたらす。これらの研究に加えて、（−／−）変異型マウスは、成長の遅れの徴候を示した。このような成長障害は、糖尿病もしくは悪液質のような組織消耗病に関連する、表現型もしくは病理学的な状態と関連する。
【０７０９】
（ｃ）免疫学による表現型分析
免疫が関連する疾患および炎症性疾患は、複合体の出現または結果をほとんどもたらさず、そして、しばしば、正常な生理学において損傷もしくは傷害に対して応答するのに重要な、複数の相互に関連した生物学的経路が、この損傷もしくは傷害からの修復を開始し、そして、外来生物に対して、生得的な防御および獲得された防御を提示し始める。疾患または病状は、これらの正常な生理学的経路が、応答の強度に直接的に関連してか、異常な調節もしくは過度の刺激の結果としてか、そのもの自体に対する反応としてか、または、これらの組み合わせとしてのいずれかで、さらなる損傷もしくは傷害をもたらす場合に生じる。
【０７１０】
これらの疾患の発生は、しばしば、多工程の経路を必要とし、そして、しばしば、複数の異なる生物学的な系／経路を必要とするが、これらの経路のうちの１つ以上における、重要な点におけるインターベンションは、寛解性の効果もしくは治療効果を有し得る。治療的なインターベンションは、有害なプロセス／経路の拮抗、または、有益なプロセス／経路の刺激のいずれかによって生じ得る。
【０７１１】
Ｔリンパ球（Ｔ細胞）は、哺乳動物の免疫応答の重要な構成要素である。Ｔ細胞は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）内の遺伝子によりコードされる自己の分子と会合した抗原を認識する。この抗原は、抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片などの表面上に、ＭＨＣ分子と共に提示され得る。Ｔ細胞系は、宿主の哺乳動物に健康への脅威を突きつける、これらの変質された細胞を排除する。Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞および細胞傷害性Ｔ細胞を含む。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞上の抗原−ＭＨＣ複合体を認識した後、広範囲に増殖する。ヘルパーＴ細胞もまた、Ｂ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、および免疫応答に関与する種々の他の細胞の活性化において中心的な役割を果たす、種々のサイトカイン（すなわち、リンホカイン）を分泌する。
【０７１２】
多くの免疫応答において、炎症性細胞は、傷害または感染の部位に潜入する。遊走細胞は、罹患組織の組織学的検査によって検査され得るように、好中球性、好酸球性、単球性またはリンパ球性であり得る。Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ編，１９９４，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．を参照のこと。
【０７１３】
多くの免疫関連疾患が公知であり、そして、これらは、広範囲に研究されている。このような疾患としては、免疫媒介性の炎症性疾患（例えば、慢性関節リウマチ、免疫媒介性の腎疾患、肝胆嚢疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬および喘息）、非免疫媒介性の炎症性疾患、感染病、免疫不全疾患、新生物形成、および移植片拒絶などが挙げられる。
【０７１４】
免疫学の領域において、炎症および炎症性障害の処置のための標的が、本明細書において同定された。免疫関連の疾患は、免疫応答を抑制することによって処置され得る。免疫刺激活性を有する分子を阻害する中和抗体を用いることは、免疫媒介性疾患および炎症性疾患の処置において有用である。免疫応答を阻害する分子は、（タンパク質によって直接的に、または、抗体のアゴニストを使用することによって）免疫応答を阻害し、従って、免疫関連疾患を寛解するために利用され得る。
【０７１５】
以下の試験を行なった：
血液学：
試験の説明：Ａｂｂｏｔｔ社製のＣｅｌｌ  Ｄｙｎ  ３５００Ｒ自動血液分析装置によって、血液検査を行う。その特徴のいくつかとしては、５つの部分のＷＢＣの差が挙げられる。「患者」への報告は、全体で２２を超えるパラメーターを包含し得る。
【０７１６】
結果：
（−／−）マウスは、その同じ性別の同腹仔および歴史的な平均と比較した場合、血小板数の顕著な減少を示した。これらの結果は、ＰＲＯ１２５０ポリペプチドまたはこれをコードするＤＮＡが、正常な血液凝固に重要であることを示す。従って、ＤＮＡ６０７７５−１５３２における変異型マウスの欠陥は、凝固障害をもたらす負の表現型を生じた。ＰＲＯ１２５０ポリペプチドまたはそのアゴニストは、血友病のような血液凝固の異常に関連する障害を処置するのに有用である。
【０７１７】
（Ｊ．ＤＮＡ７１１６６−１６８５（ＵＮＱ７８３）遺伝子破壊を含むマウスの作製および分析）
これらのノックアウト実験において、ＰＲＯ１３１７ポリペプチドをコードする遺伝子（ＤＮＡ７１１６６−１６８５（ＵＮＱ７８３）と称される）を破壊した。これらの研究についてのこの遺伝子特有の情報は、以下の通りである：変異型マウスの遺伝子は、以下に対応する：ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿０１３６５８、すなわち、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓセマ（ｓｅｍａ）ドメイン、（セマフォリン）４Ａ（Ｓｅｍａ４ａ）；タンパク質参照番号：Ｑ６２１７８、すなわち、登録番号：Ｑ６２１７８  ＮＩＤ：Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（マウス）．セマフォリン４Ａ前駆体（セマフォリンＢ）（ＳＥＭＡ  Ｂ）．ＭＯＵＳＥＳＰＴＲＮＲＤＢ；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ＿０２２３６７、すなわち、セマフォリン（ＦＬＪ１２２８７）に類似するＨｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ仮定タンパク質ＦＬＪ１２２８７；ヒトタンパク質の配列は、参照番号：Ｑ９Ｈ３Ｓ１、すなわち、登録番号：Ｑ９Ｈ３Ｓ１  ＮＩＤ：Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ヒト）．セマフォリン４Ａ前駆体（セマフォリンＢ）（Ｓｅｍａ  Ｂ）．ｓｐ＿ｔｒ＿ｎｒｄｂに対応する。
【０７１８】
目的のマウス遺伝子は、Ｓｅｍａ４ａ（セマドメイン、免疫グロブリンドメイン（Ｉｇ）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）および短い細胞質ドメイン、（セマフォリン）４Ａ）であり、これは、セマフォリン（ＦＬＪ１２２８７）に類似するＨｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ仮定タンパク質ＦＬＪ１２２８７，ｍＲＮＡ（ＮＣＢＩ登録番号ＮＭ＿０２２３６７）により表されるヒト遺伝子のオルソログである。別名としては、ＳｅｍＢおよびＳｅｍａｂが挙げられる。
【０７１９】
Ｓｅｍａ４ａは、Ｉ型の原形質膜タンパク質であり、Ｎ末端シグナルペプチド配列と、セマフォリンドメインと、プレキシン（ｐｌｅｘｉｎ）と、セマフォリンと、インテグリン（ＰＳＩ）ドメインと、Ｃ末端膜貫通セグメントを含む（Ｐｕｓｃｈｅｌら，Ｎｅｕｒｏｎ  １４（５）：９４１−８（１９９５））。Ｓｅｍａ４ａは、ニューロンにおいて、プレキシンおよびニューロフィリンのようなレセプターと（Ｃｈｅｎら，Ｎａｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  １（６）：４３６−９（１９９８））、そして、免疫系の樹状細胞におけるレセプターＴＩＭ２と（ＫｉｋｕｔａｎｉおよびＫｕｍａｎｏｇｏｈ，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３（２）：１５９−６７（２００３））相互作用するリガンドであり得る。Ｓｅｍａ４ａは、ニューロンの再生および発生の間の主な嗅覚経路において差次的に発現されており、そして、嗅覚受容ニューロンの軸索突出を導く、化学忌避因子（ｃｈｅｍｏｒｅｐｅｌｌｅｎｔ）として機能するようである（Ｗｉｌｌｉａｍｓ−Ｈｏｇａｒｔｈら，Ｊ  Ｃｏｍｐ  Ｎｅｕｒｏｌ  ４２３（４）：５６５−７８（２０００））。Ｓｅｍａ４ａはまた、樹状細胞上でも発現され、そして、活性型Ｔ細胞の表面に発現されるレセプターであるＴＩＭ２に結合することによって、Ｔ細胞の活性化に関与するようである（ＫｉｋｕｔａｎｉおよびＫｕｍａｎｏｇｏｈ，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３（２）：１５９−６７（２００３））。
【０７２０】
標的化した変異もしくはジーントラップによる変異を、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ株に由来する胚性幹（ＥＳ）細胞において作製した。キメラマウスを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊのアルビノマウスと交配させて、Ｆ１のヘテロ接合性の動物を作製した。これらの子孫を交雑させて、Ｆ２の野生型子孫、ヘテロ接合性変異型子孫、およびホモ接合性変異型子孫を作製した。ごくたまに、例えば、キメラからＦ１マウスがほとんど得られない場合、Ｆ１のヘテロ接合性のマウスを、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７雑種マウスと交配させて、交雑のためのさらなるヘテロ接合性の動物を得て、Ｆ２マウスを作製した。以下に示されるように、この世代からのマウスについて、レベルＩの表現型分析を行なった。
【０７２１】
【化３７】
2007536931.tif 000061
変異の情報：変異型：レトロウイルス挿入（ＯＳＴ）。レトロウイルス挿入は、エキソン１０のコード領域とエキソン１１のコード領域との間のイントロンで生じた（ＮＣＢＩ登録番号ＮＭ＿０１３６５８．２）。
【０７２２】
標的遺伝子の野生型の発現は、胚性幹（ＥＳ）細胞、および、精巣を除く、ＲＴ−ＰＣＲにより試験した１３匹全ての成体組織サンプルにおいて検出された。ＲＴ  ＰＣＲ分析により、分析した（−／−）マウス（Ｍ  ７５）においては、転写が起こっていなかったことが明らかとなった。
【０７２３】
（１．表現型分析（破壊した遺伝子：ＤＮＡ（ＵＮＱ７８３）について）
（ａ）全体的な表現型のまとめ
ヒト仮定セマフォリン（ＦＬＪ１２２８７）のオルソログをコードする遺伝子の変異は、重篤な網膜変性、および網膜血管の顕著な減弱、および、網膜の動脈／静脈比の平均の減少をもたらした。（−／−）マウスはまた、固形腫瘍の形成を示す、皮膚の線維芽細胞増殖速度の増加を示した。血清の免疫グロブリン測定は、その（＋／＋）同腹仔と比較した場合に、変異型（−／−）マウスが、血清ＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＡ、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂの平均レベルが顕著に増加していたことを示した。ＫＯマウスもまた、インシュリンおよびグルコースに対する耐性の減少を示した。ＲＴ−ＰＣＲによるよ、転写は起こっていなかった。
【０７２４】
（ｂ）心臓血管の表現型分析：
心臓血管生物学の領域において、心臓血管、内皮または血管新生の障害の処置のための、潜在的な標的を同定するために、表現型試験を行なった。種々の眼の異常に警告を与えるための１つのこのような表現型試験には、網膜動静脈比（Ａ／Ｖ比）を決定するための、眼底写真撮影および血管造影法が含まれた。異常なＡ／Ｖ比は、高血圧の血管病（および、高血圧を引き起こすあらゆる疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症）に関連し得るこのような全身性の疾患もしくは障害、糖尿病、または、眼科学障害に対応する他の眼の疾患を示唆する。このような眼の異常としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：網膜形成異常、種々の網膜症、再狭窄、網膜動脈の閉塞もしくは閉鎖；網膜脈管構造の続発的な萎縮を引き起こす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑形成異常、シュタルガルト病、先天性停在夜盲症、コロイデレミア、脳回転萎縮症、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ−マインザー症候群、Ｓｅｎｉｏｒ  Ｌｏｋｅｎ症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎・骨端異形成症、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフスム症候群、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジル症候群、筋緊張性ジストロフィ、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール−マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β−リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖体症、ホモシスチン尿症、またはマンノシドーシス。
【０７２５】
種々の眼の異常に警告を与えるための１つのこのような表現型試験には、網膜動静脈比（Ａ／Ｖ比）を決定するための、眼底写真撮影および血管造影法が含まれた。異常なＡ／Ｖ比は、高血圧の血管病（および、高血圧を引き起こすあらゆる疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症）に関連し得るこのような全身性の疾患もしくは障害、糖尿病、または、眼科学障害に対応する他の眼の疾患を示唆する。このような眼の異常としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：網膜形成異常、種々の網膜症、再狭窄、網膜動脈の閉塞もしくは閉鎖；網膜脈管構造の続発的な萎縮を引き起こす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑形成異常、シュタルガルト病、先天性停在夜盲症、コロイデレミア、脳回転萎縮症、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ−マインザー症候群、Ｓｅｎｉｏｒ  Ｌｏｋｅｎ症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎・骨端異形成症、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフスム症候群、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジル症候群、筋緊張性ジストロフィ、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール−マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β−リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖体症、ホモシスチン尿症、またはマンノシドーシス。
【０７２６】
手順：４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体および８匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。Ｈａｗｅｓおよび共同研究者ら（Ｈａｗｅｓら，１９９９  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｖｉｓｉｏｎ  １９９９；５：２２）に従って修正した、Ｋｏｗａ  Ｇｅｎｅｓｉｓ小動物底部カメラを用いて、知覚反応のある動物において眼底写真撮影を行なった。フルオレセインの腹膜内注射により、各試験について、直接日光の底部画像および蛍光血液造影図の獲得が可能となった。直接的な眼科学変化に加えて、この試験は、糖尿病およびアテローム性動脈硬化症のような全身性疾患に伴う眼の変化、または、他の眼の異常を検出できる。正常な光の下での眼底の写真が提供された。血管造影法による写真は、眼の動脈および静脈の検査を可能にした。さらに、眼について、動脈／静脈（Ａ／Ｖ）比を決定した。
【０７２７】
上述のプロトコールを使用して、作製されたＦ２の、野生型子孫、ヘテロ接合性変異型子孫およびホモ接合性変異型子孫について眼科学の分析を行なった。具体的には、Ｋｏｗａ  ＣＯＭＩＴ＋ソフトウェアを用いて、底部の画像に基づいて、Ａ／Ｖ比を測定し、計算した。この試験は、開いた瞳孔を通してカラー写真を撮る：この画像は、多くの疾患を検出および分類するのに役立つ。動脈／静脈比（Ａ／Ｖ）は、（脈管の分岐前に測定した）静脈の直径に対する動脈の直径の比である。多くの疾患（すなわち、糖尿病、心臓血管障害、乳頭浮腫、視神経萎縮、または、他の眼の異常（例えば、網膜変性（色素性網膜炎として知られる）または網膜形成異常、視力の問題、または、盲目））は、この比に影響を及ぼす。従って、ホモ接合性の（−／−）変異型子孫およびヘテロ接合性の（＋／−）変異型子孫において、野生型の（＋／＋）同腹仔と比較して、動脈／静脈比の増加をもたらす、表現型のこの知見は、このような病理学的状態を示す。
【０７２８】
結果：この研究において、眼底の写真は、（−／−）マウスが、重篤な網膜変性の徴候、すなわち、その（＋／＋）同腹仔と比較した場合の、網膜血管の顕著な減弱および網膜の動脈／静脈比の平均の減少を示すことを示した。血管造影図は、変異型（−／−）マウスが、毛細血管瘤を伴う網膜血管の減弱を示したこを実証した。同様に、顕微鏡での観察は、変異型（−／−）マウスにおける両側性の網膜変性、および、レンズの大きさの顕著な現象の両方を示した。まとめると、ＰＲＯ１３１７ポリペプチドをコードする、ＤＮＡ７１１６６−１６８５として同定される遺伝子をノックアウトすることによって、ホモ接合性の変異型子孫は、網膜変性に関連する表現型を示す。
このように検出された網膜の変化は、最も一般的に、心臓血管による全身性の疾患もしくは障害（高血圧（および、高血圧を引き起こすあらゆる疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症））、糖尿病または、網膜変性のような眼科学の障害に対応する他の眼疾患に関連し得る）に関連している。従って、ＰＲＯ１３１７をコードする遺伝子のアンタゴニストは、類似の病理学的な網膜の変化をもたらし、これに対し、アゴニストは、高血圧、アテローム性動脈硬化症、または、他の眼科学の障害（網膜変性およびこの状態に関連する疾患（上に示したもの））の処置において、治療剤として有用である。
【０７２９】
（ｃ）腫瘍学による表現型分析
腫瘍学の領域において、本明細書において、固形腫瘍、リンパ腫および白血病の処置のための標的を同定した。
【０７３０】
成体の皮膚細胞増殖：
手順：皮膚細胞を、１６週齢の動物（２匹の野生型および４匹のホモ接合体）から単離した。これらを、初代線維芽細胞クラスターに発生させ、そして、線維芽細胞の増殖速度を、厳密に制御されたプロトコールにおいて測定した。このアッセイの、過増殖性および低増殖性の表現型を検出する能力を、ｐ５３およびＫｕ８０で実証した。増殖は、ＢｒｄＵの取り込みを用いて測定した。
【０７３１】
具体的には、これらの研究において、皮膚の線維芽細胞の増殖アッセイを用いた。標準的な培養における細胞数の増加を、相対的な増殖能力の指標として用いた。初代線維芽細胞を、野生型マウスおよび変異型マウスから採取した皮膚の生検から樹立した。５０００個の細胞の、二連または三連の培養物をプレーティングし、そして、６日間成長させた。培養期間の終わりに、培養物中に存在する細胞の数を、電子粒子計数装置を用いて決定した。
【０７３２】
結果：雌性の（−／−）マウスは、その同じ性別の（＋／＋）同腹仔および歴史的な平均と比較した場合、皮膚の線維芽細胞の増殖速度の増加を示した［分析した野生型／ヘテロ接合体／ホモ接合体の比は、２／０／４であった］。従って、ホモ接合性の変異型マウスは、過増殖性の表現型を示した。これらの知見により示唆されるように、ＰＲＯ１３１７ポリペプチドまたはこのアゴニストは、腫瘍抑制性の表現型を有し、そして、異常な細胞増殖を減少させるのに有用である。
【０７３３】
（ｄ）免疫学による表現型分析
免疫が関連する疾患および炎症性疾患は、複合体の出現または結果をほとんどもたらさず、そして、しばしば、正常な生理学において損傷もしくは傷害に対して重要な、複数の相互に関連した生物学的経路が、この損傷もしくは傷害からの修復を開始し、そして、外来生物に対して、生得的な防御および獲得された防御を提示し始める。疾患または病状は、これらの正常な生理学的経路が、応答の強度に直接的に関連してか、異常な調節もしくは過度の刺激の結果としてか、そのもの自体に対する反応としてか、または、これらの組み合わせとしてのいずれかで、さらなる損傷もしくは傷害をもたらす場合に生じる。
【０７３４】
これらの疾患の発生は、しばしば、多工程の経路を必要とし、そして、しばしば、複数の異なる生物学的な系／経路を必要とするが、これらの経路のうちの１つ以上における、重要な点におけるインターベンションは、寛解性の効果もしくは治療効果を有し得る。治療的なインターベンションは、有害なプロセス／経路の拮抗、または、有益なプロセス／経路の刺激のいずれかによって生じ得る。
【０７３５】
Ｔリンパ球（Ｔ細胞）は、哺乳動物の免疫応答の重要な構成要素である。Ｔ細胞は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）内の遺伝子によりコードされる自己の分子と会合した抗原を認識する。この抗原は、抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片などの表面上に、ＭＨＣ分子と共に提示され得る。Ｔ細胞系は、宿主の哺乳動物に健康への脅威を突きつける、これらの変質された細胞を排除する。Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞および細胞傷害性Ｔ細胞を含む。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞上の抗原−ＭＨＣ複合体を認識した後、広範囲に増殖する。ヘルパーＴ細胞もまた、Ｂ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、および免疫応答に関与する種々の他の細胞の活性化において中心的な役割を果たす、種々のサイトカイン（すなわち、リンホカイン）を分泌する。
【０７３６】
多くの免疫応答において、炎症性細胞は、傷害または感染の部位に潜入する。遊走細胞は、罹患組織の組織学的検査によって検査され得るように、好中球性、好酸球性、単球性またはリンパ球性であり得る。Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ編，１９９４，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．を参照のこと。
【０７３７】
多くの免疫関連疾患が公知であり、そして、これらは、広範囲に研究されている。このような疾患としては、免疫媒介性の炎症性疾患（例えば、慢性関節リウマチ、免疫媒介性の腎疾患、肝胆嚢疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬および喘息）、非免疫媒介性の炎症性疾患、感染病、免疫不全疾患、新生物形成、および移植片拒絶などが挙げられる。
【０７３８】
免疫学の領域において、炎症および炎症性障害の処置のための標的が、本明細書において同定された。免疫関連の疾患は、免疫応答を抑制することによって処置され得る。免疫刺激活性を有する分子を阻害する中和抗体を用いることは、免疫媒介性疾患および炎症性疾患の処置において有用である。免疫応答を阻害する分子は、（タンパク質によって直接的に、または、抗体のアゴニストを使用することによって）免疫応答を阻害し、従って、免疫関連疾患を寛解するために利用され得る。
【０７３９】
血清の免疫グロブリンアイソアイプ決定アッセイ：
血清の免疫グロブリンアイソタイプ決定アッセイを、Ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  Ｂｅａｄ  Ａｒｒａｙ（ＣＢＡ）キットを用いて行なった。このアッセイを用いて、単一のサンプルにおいて、マウスモノクローナル抗体の重鎖および軽鎖のアイソタイプを迅速に同定した。表される値は、「相対蛍光単位」であり、これは、κ軽鎖の検出に基づいている。６未満の全ての値は、有意ではない。
【０７４０】
結果：
変異型（−／−）マウスは、その（＋／＋）同腹仔と比較した場合に、血清ＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＡ、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂの平均レベルの顕著な増加を示した。ＩｇＧ免疫グロブリンは、毒素に対する中和効果を有し、そして、それほどではないにせよ、補体系の活性化に重要である。観察された表現型は、ＰＲＯ１３１７ポリペプチドが、炎症性応答の負の調節因子であることを示唆する。これらの免疫学的な異常は、ＰＲＯ１３１７ポリペプチドのインヒビター（アンタゴニスト）が、免疫系を刺激し得（例えば、Ｔ細胞を増殖させる）、そして、白血病、および他のタイプの癌のような場合の個体に対して、ならびに、ＡＩＤＳ罹患患者のような、免疫無防備状態の患者において有用である場合に、有用性を見出すことを示唆する。従って、ＰＲＯ１３１７ポリペプチドまたはそのアゴニストは、免疫応答を阻害するために有用であり、そして、例えば、移植片拒絶、または、移植片対宿主病の場合に、有害な免疫応答を抑制するための有用な候補である。
【０７４１】
（ｅ）表現型分析：代謝−血液化学−耐糖能試験
代謝の領域において、糖尿病の処置のための標的が同定され得る。血液化学による表現型分析としては、インシュリンの感受性および糖代謝における変化を測定するための、血清インシュリンレベルの測定、および耐糖能試験が挙げられる。異常な耐糖能試験の結果は、以下の障害または状態に関連し得るがこれらに限定されない：１型および２型の糖尿病、シンドロームＸ、種々の心臓血管疾患および／または肥満。
【０７４２】
手順：２匹の野生型マウスおよび４匹のホモ接合体マウスのコホートを、このアッセイにおいて用いた。耐糖能試験は、動物におけるグルコースのホメオスタシスの不全を規定するための基準である。耐糖能試験を、Ｌｉｆｅｓｃａｎ血糖計を用いて行なった。動物に、２０％溶液として送達される２ｇ／ｋｇのＤグルコースを腹腔内注射し、血中グルコースレベルを、注射後０分、３０分、６０分および９０分で測定した。
【０７４３】
結果：これらの研究は、（−／−）マウスが、その同じ性別の（＋／＋）同腹仔および歴史的な平均と比べ、正常な糖の食餌の存在下で、試験した３つ全ての間隔において、インシュリンレベルの減少、および、耐糖能の減少を示すことを示した。ノックアウトマウスが、グルコースのホメオスタシスの不全の表現型パターンを示したので、ＰＲＯ１３１７またはこれをコードする遺伝子は、グルコースのホメオスタシスの不全および／または糖尿病の処置において有用である。
【０７４４】
（Ｋ．ＤＮＡ５９６０８−２５７７（ＵＮＱ１８８９）遺伝子破壊を含むマウスの作製および分析）
これらのノックアウト実験において、ＰＲＯ４３３４ポリペプチドをコードする遺伝子（ＤＮＡ５９６０８−２５７７（ＵＮＱ１８８９）と称される）を破壊した。これらの研究についてのこの遺伝子特有の情報は、以下の通りである：変異型マウスの遺伝子は、以下に対応する：ヌクレオチド参照番号：ＡＫ０４６７９７、すなわち、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  １０日齢新生仔延髄ｃＤＮＡ，ＲＩＫＥＮ全長富化ライブラリー，クローン：Ｂ８３００１０Ｋ１９  生成物：仮定Ｉ型ホスホジエステラーゼ／ヌクレオチドピロホスファターゼ含有タンパク質，全長挿入配列；タンパク質参照番号：Ｑ８ＢＧＮ３、すなわち、登録番号：Ｑ８ＢＧＮ３  ＮＩＤ：Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（マウス）．仮定Ｉ型ホスホジエステラーゼ／ヌクレオチドピロホスファターゼ含有タンパク質．ｓｐ＿ｔｒ＿ｎｒｄｂ；ヒト遺伝子配列参照番号：ＡＫ０５７３７０、すなわち、登録番号：ＡＫ０５７３７０  ＮＩＤ：１６５５３０４４  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  ｃＤＮＡ  ＦＬＪ３２８０８  ｆｉｓ，クローンＴＥＳＴＩ２００２７０７（形質細胞膜糖タンパク質ＰＣ  １に弱く類似［アルカリホスホジエステラーゼＩ（ＥＣ  ３．１．４．１）；ヌクレオチドピロホスファターゼ（ＥＣ  ３．６．１．９）（ＮＰＰＡＳＥ）を含む］；ヒトタンパク質の配列は、参照番号：Ｑ９６Ｍ５７．登録番号：Ｑ９６Ｍ５７  ＮＩＤ：Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ヒト）．仮定タンパク質ＦＬＪ３２８０８（エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼ５に類似）．ＨＵＭＡＮＳＰＴＲＮＲＤＢに対応する。
【０７４５】
目的のマウス遺伝子は、「仮定Ｉ型ホスホジエステラーゼ／ヌクレオチドピロホスファターゼ含有タンパク質，全長挿入配列」（ＡＫ０４６７９７）として規定されるｃＤＮＡにより表され、これは、ヒトエクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼ６（ＥＮＰＰ６）のオルソログである。別名としては、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  Ｂ８３００４７Ｌ２１遺伝子が挙げられる。
【０７４６】
ＥＮＰＰ６は、ＮＡＤ、デオキシヌクレオチド、およびヌクレオチド糖におけるホスホジエステル結合およびホスホスルフェート結合の切断を触媒する、仮定酵素である。ＥＮＰＰ６は、シグナルペプチドと、Ｉ型ホスホジエステラーゼ／ヌクレオチドピロホスファターゼドメインと、潜在的なＣ末端ＧＰＩアンカーを含み、この酵素が、原形質膜の細胞外表面上に位置するか、または、分泌されることを示唆する。このタンパク質の生物学的な役割は、未知である。
【０７４７】
標的化した変異もしくはジーントラップによる変異を、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ株に由来する胚性幹（ＥＳ）細胞において作製した。キメラマウスを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊのアルビノマウスと交配させて、Ｆ１のヘテロ接合性の動物を作製した。これらの子孫を交雑させて、Ｆ２の野生型子孫、ヘテロ接合性変異型子孫、およびホモ接合性変異型子孫を作製した。ごくたまに、例えば、キメラからＦ１マウスがほとんど得られない場合、Ｆ１のヘテロ接合性のマウスを、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７雑種マウスと交配させて、交雑のためのさらなるヘテロ接合性の動物を得て、Ｆ２マウスを作製した。以下に示されるように、この世代からのマウスについて、レベルＩの表現型分析を行なった。
【０７４８】
【化３８】
2007536931.tif 000062
変異の情報：変異型：相同組換え（標準的）。エキソン１をコードする領域を標的化した（ＮＣＢＩ登録番号ＮＭ＿１７７３０４．１）。
【０７４９】
標的遺伝子の野生型の発現は、ＲＴ−ＰＣＲにより試験した１３の成体組織サンプルの中でも、脳、脊髄、眼、腎臓、肝臓および心臓において検出された。サザンハイブリダイゼーション分析により、標的遺伝子の破壊を確認した。
【０７５０】
（１．表現型分析（破壊した遺伝子：ＤＮＡ５９６０８−２５７７（ＵＮＱ１８８９）について）
（ａ）全体的な表現型のまとめ
ヒトエクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼ６（ＥＮＰＰ６）のオルソログをコードする遺伝子の変異は、肥満を示す、平均体脂肪率の増加を示す雄性の（−／−）マウスをもたらした。雌性（−／−）マウスは、骨塩密度の上昇を示した。サザンブロットにより、遺伝子破壊を確認した。
【０７５１】
（ｂ）表現型分析：ボディマス：
Ｄｅｘａ分析−試験の説明：
手順：４匹の野生型マウス、４匹のヘテロ接合体マウスおよび１０匹のホモ接合体マウスのコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重Ｘ線吸収骨塩定量（ＤＥＸＡ）を首尾よく使用して、総組織質量（ＴＴＭ）における変化を同定した。
【０７５２】
マウスを、Ａｖｅｒｔｉｎ（１．２５％の２，２，２，トリブロモエタノール、２０ｍｌ／体重ｋｇ）を腹腔内注射して麻酔をかけ、体長および体重を測定し、次いで、マウスを、ＤＥＸＡスキャンのために、ＰＩＸＩｍｕｓＴＭデンシトメーター（Ｌｕｎａｒ  Ｉｎｃ．）のプラットフォーム上に、腹臥位で置いた。Ｌｕｎａｒ  ＰＩＸＩｍｕｓソフトウェアを用いて、目的の領域（ＲＯＩ、すなわち、全身、椎骨、および両大腿骨）において骨塩密度（ＢＭＤ）および脂肪組成（％脂肪）および総組織質量（ＴＴＭ）を決定した。
【０７５３】
結果：ＤＥＸＡにより分析した（−／−）変異型マウスは、その（＋／＋）同腹仔と比較して、平均体脂肪率の増加を示し、これは、これらの変異型マウスにおける肥満を示唆する。従って、ＰＲＯ４３３４またはそのアゴニストは、肥満のような代謝障害の処置に有用である。さらに、雌性の（−／−）マウスは、骨塩密度の増加を示した。これらの結果は、ノックアウトの変異型表現型が、大理石骨病のような骨の異常を伴うことを示唆する。大理石骨病は、骨を異常にもろくする、骨の異常な厚化および硬化により特徴付けられる状態である。従って、ＰＲＯ４３３４ポリペプチドまたはそのアゴニストは、大理石骨病の処置に有益であり得る。骨塩密度の増加を伴う表現型は、この負の表現型を模倣する因子（例えば、ＰＲＯ４３３４のアンタゴニスト）が、骨治癒において役割を果たすことを示唆する。
【０７５４】
（Ｌ．ＤＮＡ８０８４０−２６０５（ＵＮＱ１９２１）遺伝子破壊を含むマウスの作製および分析）
これらのノックアウト実験において、ＰＲＯ４３９５ポリペプチドをコードする遺伝子（ＤＮＡ８０８４０−２６０５（ＵＮＱ１９２１）と称される）を破壊した。これらの研究についてのこの遺伝子特有の情報は、以下の通りである：変異型マウスの遺伝子は、以下に対応する：ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿１７８７９３、すなわち、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ９４３００９３Ｎ２４遺伝子（９４３００９３Ｎ２４Ｒｉｋ）；タンパク質参照番号：Ｑ８ＢＦＷ１、すなわち、登録番号：Ｑ８ＢＦＷ１  ＮＩＤ：Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（マウス）．癌胎児性ラミニン結合コラーゲン．ｓｐ＿ｔｒ＿ｎｒｄｂに弱く類似；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ＿１３３４５９、すなわち、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  ＫＩＡＡ１９８３タンパク質（ＦＬＪ３０６８１）；ヒトタンパク質の配列は、参照番号：Ｑ８ＴＦ１９、すなわち、登録番号：Ｑ８ＴＦ１９  ＮＩＤ：Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ヒト）．仮定タンパク質ＫＩＡＡ１９８３（フラグメント）．ｓｐ＿ｔｒ＿ｎｒｄｂに対応する。
【０７５５】
破壊された遺伝子は、ＮＣＢＩ登録番号ＮＭ＿１７８７９３により表され、これは、ヒトＫＩＡＡ１９８３タンパク質のオルソログである。別名としては、ＦＬＪ３０６８１および９４３００９３Ｎ２４Ｒｉｋが挙げられる。
【０７５６】
ＫＩＡＡ１９８３は、シグナルペプチド、ＥＧＦ様ドメイン（ＳＭＡＲＴ登録番号ＳＭ００００１）、カルシウム結合ＥＧＦ様ドメイン（ＳＭＡＲＴ登録番号ＳＭ００１７９）、およびコラーゲン三重らせんリピート（ＩｎｔｅｒＰｒｏ登録番号ＩＰＲ００８１６０）を含有する、仮定の分泌型タンパク質である。このタンパク質は、ＳＣＯＰソフトウェア（Ｍｕｒｚｉｎら，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２４７（４）：５３６−４０（１９９５））により規定されるタンパク質のＥＦＧ／ラミニンスーパーファミリーと特徴を共有する。種々の注釈は、この仮定タンパク質を、「癌胎児性ラミニン結合コラーゲンに弱く類似するもの」として記載している（例えば、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  Ｑ８ＢＪＣ３）。
【０７５７】
標的化した変異もしくはジーントラップによる変異を、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ株に由来する胚性幹（ＥＳ）細胞において作製した。キメラマウスを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊのアルビノマウスと交配させて、Ｆ１のヘテロ接合性の動物を作製した。これらの子孫を交雑させて、Ｆ２の野生型子孫、ヘテロ接合性変異型子孫、およびホモ接合性変異型子孫を作製した。ごくたまに、例えば、キメラからＦ１マウスがほとんど得られない場合、Ｆ１のヘテロ接合性のマウスを、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７雑種マウスと交配させて、交雑のためのさらなるヘテロ接合性の動物を得て、Ｆ２マウスを作製した。以下に示されるように、この世代からのマウスについて、レベルＩの表現型分析を行なった。
【０７５８】
【化３９】
2007536931.tif 000063
まとめ：ホモ接合性の致死性：
従って、ＤＮＡ８０８４０−２６０５またはこれをコードするポリペプチドＰＲＯ４３９５は、胚発生に必須であるはずである。
変異の情報：変異型：相同組換え（標準的）。エキソン１をコードする領域を標的化した（ＮＣＢＩ登録番号ＡＫ０２８３７７．１）。
【０７５９】
標的遺伝子の野生型の発現は、膵臓、胃、子宮、膀胱、胆嚢、脊髄、気管、大動脈および眼を除いて、ＲＴ−ＰＣＲにより試験した４４全ての成体組織サンプルにおいて検出された。サザンハイブリダイゼーション分析により、標的遺伝子の破壊を確認した。
【０７６０】
（１．表現型分析（破壊した遺伝子：ＤＮＡ８０８４０−２６０５（ＵＮＱ１９２１）について）
（ａ）全体的な表現型のまとめ
ヒトＫＩＡＡ１９８３タンパク質（ＦＬＪ３０６８１）のオルソログをコードする遺伝子の変異は、（−／−）変異体の致死性をもたらした。（＋／−）マウスについて、成長の遅れおよび骨の異常が観察された。ヘテロ接合性のマウスは、その同じ性別の（＋／＋）同腹仔と比較して、総組織質量の減少、総体脂肪の減少、および、骨塩密度の減少を示した。さらに、８匹中７匹のヘテロ接合性マウスが、眼球突出を有した。サザンブロットにより遺伝子破壊を確認した。
【０７６１】
胚の発生段階での死亡率の異常に関連する議論：
ノックアウトマウスにおける胚性致死は、通常、種々の重篤な発生における問題（神経変性疾患、脈管形成障害、炎症性疾患、または、遺伝子／タンパク質が、多くの細胞型における基本的な細胞のシグナル伝達プロセスにおいて重要な役割を有する場合を含むがこれらに限定されない）から生じる。さらに、胚性致死は、潜在的な癌モデルとして有用である。同様に、対応するヘテロ接合性の（＋／−）変異型動物は、ノックアウトされた遺伝子の機能に関する、大いに情報を与える手がかりを明らかにする、表現型および／または病理学のレポートを示す場合、特に有用である。例えば、ＥＰＯノックアウト動物は、胚性致死であるが、その胚についての病理学のレポートは、ＲＢＣの深刻な欠如を示した。
【０７６２】
ＵＮＱ１９２１は、ＥＧＦ様ドメインおよびコラーゲン三重らせんドメインを含む、新規ＳＰＤＩ遺伝子である。これは、細胞の接着および／または移動に関与し得る、ラミニンスーパーファミリーのメンバーに類似する、仮定分泌型タンパク質である。ＵＮＱ１９２１ノックアウトマウスの分析は、ＵＮＱ１９２１が、肝臓の発生および造血において役割を果たすことを示唆する。
【０７６３】
Ｇａｌ発現分析は、ＵＮＱ１９２１が、９．５ｄで、中隔横筋において最初に発現されることを実証する。この構造は、肝臓の発生に重要であり、そして、その派生物は、その後、横隔膜および心臓を取り囲む心膜を形成する。その２〜３日後、ＵＮＱ１９２１は、遊走細胞、またはその近くにおいて、非常に制限されたドメインにおいて発現される。これは、頭部の神経冠、および、筋肉前駆体の小集団の周りで発現される。ＵＮＱ１９２１ノックアウトマウスは、出生付近で死亡する。これらは、蒼白であり、そして、重篤な腸管水腫を呈する。この水腫は、１４．５ｄほど早期に明らかであり、そして、通常、以下の４つの系のうちの１つ以上における欠陥に寄与している：肝臓、造血系、リンパ系または心臓血管系。肝臓は、一般に、ＵＮＱ１９２１変異体においてサイズが減少している。肝機能不全は、血流におけるアルブミンレベルの減少をもたらし得、これは、ＵＮＱ１９２１変異体において見られる腸管水腫の原因となり得る、浸透圧の低下をもたらす。
【０７６４】
ＵＮＱ１９２１変異体の肝臓の領域は、白色であり、その一方、この段階におけるコントロールの肝臓は、完全に赤色である。変異体の肝臓からの切片は、これらの白色の領域が、造血細胞の数が減少していることを明らかにする。より高解像度の切片は、発生途中の肝細胞の健康度と、生存している造血細胞の数との間の相関を示す。１２．５ｄにおいて、造血肝細胞（ＨＳＣ）による胎児の肝臓の定着は、ＡＧＭ（大動脈、前腎（ｍｅｓｅｎｅｐｈｒｏｓ）、性腺）および卵黄嚢からのＨＳＧの能動的な移動により生じることを示唆する証拠がある。１つのインテグリンが、この移動において重要な役割を果たす。ＵＮＱ１９２１は、インテグリンを結合し得るＲＧＤモチーフを含む。これらの知見は、ＨＳＣの肝臓への移動を媒介する、ＵＮＱ１９２１の類似の役割を支持する。
【０７６５】
ＵＮＱ１９２１はまた、心膜においても発現される。１７．５ｄでの心膜は、通常、その底にある心筋と密接に結合している。ＵＮＱ１９２１変異体の心臓において、心膜は、心筋とゆるく結合しているだけに見える。異常な心膜から生じる、心臓血管機能の低下は、血圧に影響を及ぼし得、そして、腸管の水腫をもたらし得る可能性がある。
【０７６６】
ＵＮＱ１９２１は、肝機能および造血において重要であるようである。ＵＮＱ１９２１は、成体の肝臓の星状細胞（ｓｔｅｌｌａｒ  ｃｅｌｌ）において発現される可能性がある。これらの細胞は、ＵＮＱ１９２１が発現される、中隔横筋に由来するものと考えられる。これらは、肝臓の損傷に対して、再生の応答を誘発することを担う細胞である。これらの細胞はまた、線維性および硬化性の肝臓において、過活性である。従って、ＵＮＱ１９２１は、これらの型の肝臓の状態において役割を果たし得る。
【０７６７】
（ｂ）骨代謝：放射線学による表現型分析
骨代謝の領域において、本明細書においては、関節炎、骨粗鬆症、骨減少症、および大理石骨病の処置のための標的を同定し、ならびに、骨治癒を促進する標的を同定した。
【０７６８】
Ｄｅｘａ分析−試験の説明：
手順：４匹の野生型マウスおよび４匹のヘテロ接合体マウスのコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重Ｘ線吸収骨塩定量（ＤＥＸＡ）を首尾よく使用して、骨における変化を同定した。麻酔した動物を試験し、骨塩含量（ＢＭＣ）、ＢＭＣ／ＬＢＭ比、容積測定による骨塩密度（ｖＢＭＤ）、全身のＢＭＤ、大腿骨のＢＭＤ、および椎骨のＢＭＤを測定した。
【０７６９】
マウスを、Ａｖｅｒｔｉｎ（１．２５％の２，２，２，トリブロモエタノール、２０ｍｌ／体重ｋｇ）を腹腔内注射して麻酔をかけ、体長および体重を測定し、次いで、マウスを、ＤＥＸＡスキャンのために、ＰＩＸＩｍｕｓＴＭデンシトメーター（Ｌｕｎａｒ  Ｉｎｃ．）のプラットフォーム上に、腹臥位で置いた。Ｌｕｎａｒ  ＰＩＸＩｍｕｓソフトウェアを用いて、目的の領域（ＲＯＩ、すなわち、全身、椎骨、および両大腿骨）において骨塩密度（ＢＭＤ）および脂肪組成（％脂肪）および総組織質量（ＴＴＭ）を決定した。
【０７７０】
ＤＥＸＡの結果：
上に概説したように、雄性の（＋／−）マウスは、その同じ性別の（＋／＋）同腹仔および歴史的な平均と比較した場合、平均総組織質量および総体脂肪の減少を示し、これらの変異体における成長の遅れを示唆した。さらに、（＋／−）マウスは、骨塩密度の減少を示した。このことは、平均総組織質量および総体脂肪の減少の知見と合せて、これらのヘテロ接合性のマウスにおける、悪液質のような組織消耗状態を示唆する。従って、ＰＲＯ４３９５ポリペプチドまたはそのアゴニストは、成長および発生に必須であるようである。
【０７７１】
（Ｍ．ＤＮＡ２３７６３７（ＵＮＱ２２３９）遺伝子破壊を含むマウスの作製および分析）
これらのノックアウト実験において、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチドをコードする遺伝子（ＤＮＡ２３７６３７（ＵＮＱ２２３９）と称される）を破壊した。これらの研究についてのこの遺伝子特有の情報は、以下の通りである：変異型マウスの遺伝子は、以下に対応する：ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿０１１４０４、すなわち、Ｍｕｓｍｕｓｃｕｌｕｓ可溶性キャリアファミリー７（カチオン性アミノ酸トランスポーター，ｙシステム），メンバー５（Ｓｌｃ７ａ５）；タンパク質参照番号：ＢＡＡ９０５５６、すなわち、Ｌ型アミノ酸トランスポーター１［Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ］；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ＿００３４８６、すなわち、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ可溶性キャリアファミリー７（カチオン性アミノ酸トランスポーター，ｙシステム），メンバー５（ＳＬＣ７Ａ５）；ヒトタンパク質の配列は、参照番号：ＮＰ＿００３４７７、すなわち、可溶性キャリアファミリー７（カチオン性アミノ酸トランスポーター，ｙシステム），メンバー５；膜タンパク質Ｅ１６；可溶性キャリアファミリー７，メンバー５；４Ｆ２軽鎖［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］に対応する。
【０７７２】
破壊された遺伝子は、ヒトＳＬＣ７Ａ５のオルソログである、Ｓｌｃ７ａ５（可溶性キャリアファミリー７［カチオン性アミノ酸トランスポーター，ｙシステム］，メンバー５）である。別名としては、ＴＡ１、Ｄ０Ｈ１６Ｓ４７４Ｅ、Ｅ１６、ＣＤ９８、ＣＤ９８軽鎖、ＬＡＴ１、ＭＰＥ１６、Ｄ１６Ｓ４６９Ｅ、４Ｆ２軽鎖、膜タンパク質Ｅ１６が挙げられる。
【０７７３】
ＳＬＣ７Ａ５は、最初に、活性型リンパ球において発現される配列として同定された（Ｇａｕｇｉｔｓｃｈら，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２６７（１６）：１１２６７−７３（１９９２））。ＳＬＣ７Ａ５は、ヒト細胞表面糖タンパク質４Ｆ２重鎖（ＳＬＣ３Ａ２）とヘテロ二量体を形成し；このヘテロ二量体の複合体は、次いで、Ｌ型アミノ酸の輸送を促進する（Ｍａｓｔｒｏｂｅｒａｒｄｉｎｏら，Ｎａｔｕｒｅ  ３９５（６６９９）：２８８−９１（１９９８））。
【０７７４】
ＳＬＣ７ファミリーメンバーは、一般に、ヘテロ二量体のアミノ酸トランスポーターとして機能すると考えられている。このＳＬＣ７Ａ５（すなわち、Ｓｌｃ３ａ２）のヘテロマーのパートナーがないと、マウスにおける胚性の致死を生じる（Ｔｓｕｍｕｒａら，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ３０８（４）：８４７−５１．（２００３）。
【０７７５】
標的化した変異もしくはジーントラップによる変異を、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ株に由来する胚性幹（ＥＳ）細胞において作製した。キメラマウスを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊのアルビノマウスと交配させて、Ｆ１のヘテロ接合性の動物を作製した。これらの子孫を交雑させて、Ｆ２の野生型子孫、ヘテロ接合性変異型子孫、およびホモ接合性変異型子孫を作製した。ごくたまに、例えば、キメラからＦ１マウスがほとんど得られない場合、Ｆ１のヘテロ接合性のマウスを、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７雑種マウスと交配させて、交雑のためのさらなるヘテロ接合性の動物を得て、Ｆ２マウスを作製した。以下に示されるように、この世代からのマウスについて、レベルＩの表現型分析を行なった。
【０７７６】
【化４０】
2007536931.tif 000064
まとめ：致死性
変異の情報：変異型：相同組換え（標準的）。エキソン１をコードする領域を標的化した（ＮＣＢＩ登録番号ＮＭ＿０１１４０４．２）。
【０７７７】
標的遺伝子の野生型の発現は、胚性幹（ＥＳ）細胞、および、眼；ＬＰＳの肝臓；骨格筋；骨；胃、小腸および結腸；脂肪組織；皮膚線維芽細胞；および前立腺を除き、ＲＴ−ＰＣＲにより試験した１８全ての成体組織サンプルにおいて検出された。サザンハイブリダイゼーション分析により、標的遺伝子の破壊を確認した。
【０７７８】
（１．表現型分析（破壊した遺伝子：ＤＮＡ２３７６３７（ＵＮＱ２２３９）について）
（ａ）全体的な表現型のまとめ
ヒト可溶性キャリアファミリー７［カチオン性アミノ酸トランスポーター，ｙ＋システム］，メンバー５（ＳＬＣ７Ａ５）のオルソログをコードする遺伝子の変異は、（−／−）変異体の致死性をもたらした。ヘテロ接合性の（＋／−）マウスは、総組織質量、除脂肪体重、総体脂肪、骨塩密度および骨塩含量の増加を示した。試験した３匹の（＋／−）マウスの中でも、１匹のマウスは、左の腎臓に結石を有した。遺伝子破壊は、サザンブロットにより確認した。
【０７７９】
胚の発生段階での死亡率の異常に関連する議論：
ノックアウトマウスにおける胚性致死は、通常、種々の深刻な発生段階での問題（神経変性疾患、脈管形成障害、炎症性疾患が挙げられるがこれらに限定されない）から生じ、ここでは、遺伝子／タンパク質が、多くの細胞型における基本的な細胞のシグナル伝達プロセスにおいて重要な役割を有する。さらに、胚性致死は、潜在的な癌のモデルとして有用である。同様に、対応するヘテロ接合性の（＋／−）変異型動物は、ノックアウトされた遺伝子の機能に関して、非常に情報の豊富な手がかりを示す、表現型および／または病理学的なレポートを示す場合、特に有用である。例えば、ＥＰＯノックアウト動物は、胚性致死であるが、胚に関する病理学的なレポートは、ＲＢＣの顕著な欠乏を示した。
【０７８０】
ＵＮＱ２２３９は、Ｅ１６と呼ばれるアミノ酸トランスポーターであり、以前に、新規腫瘍抗原として、出願人らによって同定されたものである。これは、多くの癌細胞株（特に、肺癌および乳癌）において、非常に高いレベルの発現を示す。ＵＮＱ２２３９ノックアウトマウスの分析は、出願人らが血管系におけるＵＮＱ２２３９の発現を可視化することを、初めて可能にした。本発明者らは、ＵＮＱ２２３９が、マウスの発生のごく初期の段階の間に必要とされることを観察した。
【０７８１】
インサイチュにおけるＲＮＡホールマウントと、ｇａｌ染色との組み合わせを用いることによって、ＵＮＱ２２３９は、発生途中の微小な血管に特異的に発現されることが示された。１２．５ｄの胎盤における発現は、もっぱら、胎盤の胎児の血管成分を含む、迷路（ｌａｂｙｒｉｎｔｈ）層において生じる。
【０７８２】
ＵＮＱ２２３９ヘテロ接合性の交雑種（星印）の胚の遺伝子型分析により、ＵＮＱ２２３９が、原腸形成前の段階（７．５ｄ）における胚発生に必要とされることが示唆される。アミノ酸は、胚発生の３．５ｄにおいて、胞胚形成のプロセスが生じるのに必須であることが知られている。
【０７８３】
（ｂ）骨代謝：放射線学による表現型分析
骨代謝の領域において、本明細書においては、関節炎、骨粗鬆症、骨減少症、および大理石骨病の処置のための標的を同定し、ならびに、骨治癒を促進する標的を同定した。
試験は、以下を含んだ：
大腿骨および椎骨についての骨塩密度の測定のためのＤＥＸＡ
海綿質および皮質骨の両方についての骨塩密度の、非常に高い解像度および非常に高い感度の測定のための、マイクロＣＴ。
【０７８４】
Ｄｅｘａ分析−試験の説明：
手順：４匹の野生型および４匹のヘテロ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重Ｘ線吸収骨塩定量（ＤＥＸＡ）を首尾よく使用して、総組織質量（ＴＴＭ）における変化を同定した。麻酔した動物を試験し、骨塩含量（ＢＭＣ）、ＢＭＣ／ＬＢＭ比、容積測定による骨塩密度（ｖＢＭＤ）、全身のＢＭＤ、大腿骨のＢＭＤ、および椎骨のＢＭＤを測定した。
【０７８５】
マウスを、Ａｖｅｒｔｉｎ（１．２５％の２，２，２，トリブロモエタノール、２０ｍｌ／体重ｋｇ）を腹腔内注射して麻酔をかけ、体長および体重を測定し、次いで、マウスを、ＤＥＸＡスキャンのために、ＰＩＸＩｍｕｓＴＭデンシトメーター（Ｌｕｎａｒ  Ｉｎｃ．）のプラットフォーム上に、腹臥位で置いた。Ｌｕｎａｒ  ＰＩＸＩｍｕｓソフトウェアを用いて、目的の領域（ＲＯＩ、すなわち、全身、椎骨、および両大腿骨）において骨塩密度（ＢＭＤ）および脂肪組成（％脂肪）および総組織質量（ＴＴＭ）を決定した。
【０７８６】
ＤＥＸＡの結果：
（＋／−）ヘテロ接合性マウスは、その同じ性別の（＋／＋）同腹仔と比較して、総組織質量、除脂肪体重、総体脂肪、骨塩密度、および骨塩含量の増加を示した。
【０７８７】
骨のマイクロＣＴ分析：
手順：また、マイクロＣＴを用いて、ＢＭＤの非常に感度の高い測定値を得た。１つの椎骨および１つの大腿骨を、４匹の野生型および４匹のヘテロ接合性マウスのコホートから採取した。以下について測定を行なった：第５腰椎骨の海綿質容積、小柱の厚み、結合密度、ならびに大腿骨の中心軸の総骨面積および皮質の厚み。マイクロＣＴ４０のスキャンは、骨の質量および構造に関する詳細な情報を提供した。複数の骨を、サンプルホルダーに入れ、自動的にスキャンした。機器のソフトウェアを用いて、分析のための目的の領域を選択した。第５腰椎骨（ＬＶ５）において、１６マイクロメートルの解像度で海綿質のパラメーターを分析し、そして、大腿骨の中心軸において、２０マイクロメートルの解像度で皮質骨のパラメーターを分析した。
【０７８８】
マイクロＣＴの結果：
（＋／−）のヘテロ接合性マウスは、骨の測定において増加を示した。これらの結果は、上述のＤＥＸＡの結果と組み合せて、ヘテロ接合性のマウスが、肥満ならびに、大理石骨病のような骨の異常に関連する表現型を示すことを実証する。大理石骨病は、骨を異常にもろくする、骨の異常な厚化および硬化により特徴付けられる状態である。従って、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチドまたはそのアゴニストは、骨の正常な発生に必須であり、そして、大理石骨病の処置に有益であり得る。骨塩密度の増加を伴う表現型は、この負の表現型を模倣する因子（例えば、ＰＲＯ４９１９２のアンタゴニスト）が、骨治癒において役割を果たすことを示唆する。
【０７８９】
（Ｎ．ＤＮＡ１０８６９６−２９６６（ＵＮＱ３０１８）遺伝子破壊を含むマウスの作製および分析）
これらのノックアウト実験において、ＰＲＯ９７９９ポリペプチドをコードする遺伝子（ＤＮＡ１０８６９６−２９６６（ＵＮＱ３０１８）と称される）を破壊した。これらの研究についてのこの遺伝子特有の情報は、以下の通りである：変異型マウスの遺伝子は、以下に対応する：ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿０３００６９、すなわち、Ｍｕｓｍｕｓｃｕｌｕｓ  ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ４４３２４１６Ｊ０３遺伝子（４４３２４１６Ｊ０３Ｒｉｋ）；タンパク質参照番号：ＮＰ＿０８４３４５、すなわち、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ４４３２４１６Ｊ０３［Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ］；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ＿１５２３１５、すなわち、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ仮定タンパク質ＭＧＣ３４２９０（ＭＧＣ３４２９０）；ヒトタンパク質の配列は、参照番号：ＮＰ＿６８９５２８、すなわち、仮定タンパク質ＭＧＣ３４２９０［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］に対応する。
【０７９０】
破壊された遺伝子は、ＮＣＢＩ登録番号ＮＭ＿０３００６９により表される、ヒト仮定タンパク質ＭＧＣ３４２９０のオルソログである。
【０７９１】
バイオインフォマティクスによる分析によれば、ＭＧＣ３４２９０は、シグナルペプチドおよびオーバーラップするＳＣＯＰドメイン（ｄ１ｑｆｈａ１，免疫グロブリン様βサンドイッチの折り畳みタンパク質のＥセットスーパーファミリー）を含む。この予測される（ＰｒｏｔＣｏｍｐ，Ｓｏｆｔｂｅｒｒｙ  Ｃｏｒｐ）細胞の位置は、曖昧である；以下の３つの可能性が示唆されている：細胞外、原形質膜、およびミトコンドリア。ＭＧＣ３４２９０は、刷子縁の６１．９ｋＤａの前駆体ファミリー（ＥＮＳＥＭＢＬタンパク質ファミリーＥＮＳＦ０００００００３５５４）のメンバーである。
【０７９２】
標的化した変異もしくはジーントラップによる変異を、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ株に由来する胚性幹（ＥＳ）細胞において作製した。キメラマウスを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊのアルビノマウスと交配させて、Ｆ１のヘテロ接合性の動物を作製した。これらの子孫を交雑させて、Ｆ２の野生型子孫、ヘテロ接合性変異型子孫、およびホモ接合性変異型子孫を作製した。ごくたまに、例えば、キメラからＦ１マウスがほとんど得られない場合、Ｆ１のヘテロ接合性のマウスを、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７雑種マウスと交配させて、交雑のためのさらなるヘテロ接合性の動物を得て、Ｆ２マウスを作製した。以下に示されるように、この世代からのマウスについて、レベルＩの表現型分析を行なった。
【０７９３】
【化４１】
2007536931.tif 000065
変異の情報：変異型：相同組換え（標準的）。エキソン１および２をコードする領域を標的化した（ＮＣＢＩ登録番号ＮＭ＿０３００６９．１）。
【０７９４】
標的遺伝子の野生型の発現は、胚性幹（ＥＳ）細胞、および、ＲＴ−ＰＣＲにより試験した１３全ての成体組織サンプルにおいて（特に、結腸において）検出され、小腸、脾臓、肺、肝臓、骨および心臓においては、かなり発現の程度が低かった。サザンハイブリダイゼーション分析により、標的遺伝子の破壊を確認した。
【０７９５】
（１．表現型分析（破壊した遺伝子：ＤＮＡ１０８６９６−２９６６（ＵＮＱ３０１８）について）
（ａ）全体的な表現型のまとめ
ヒト仮定タンパク質（ＭＧＣ３４２９０）のオルソログをコードする遺伝子の変異は、（−／−）マウスにおける異常なサーカディアンリズムの応答をもたらした。（−／−）ノックアウトマウスは、その（＋／＋）同腹仔と比較して、血中好中球の低いレベルを示した。さらに、（−／−）変異体は、オボアルブミンチャレンジに対する応答において、ＩｇＧ２ａのレベルの上昇を示した。雄性および雌性の両方の（−／−）マウスが、野生型の同腹仔と比較して、体脂肪率の増加を示した。（−／−）マウスはまた、皮膚増殖速度の低下を示した。遺伝子破壊を、サザンブロットにより確認した。
【０７９６】
（ｂ）表現型分析：ＣＮＳ／神経学
分析は、本明細書において、神経学の領域において、神経学的障害および精神医学的障害（抑うつ、全般性不安障害、注意欠陥過活動性障害、強迫性障害、精神分裂病、認知障害、痛覚過敏、および感覚障害が挙げられる）の処置のための、インビボで有効な標的を同定することに焦点をあてた。神経学的障害としては、「不安障害」と規定される分類が挙げられ、この不安障害としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：軽度〜中程度の不安、全身性の病状に起因する不安障害、他に特定されていない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を伴うパニック障害、広場恐怖症を伴わないパニック障害、心的外傷後ストレス障害、社会恐怖、特定の恐怖、物質誘発性不安障害、急性アルコール離脱、強迫性障害、広場恐怖症、双極性障害Ｉ型もしくはＩＩ型、他に特定されていない双極性障害、循環病、抑うつ障害、大鬱病性障害、気分障害、物質誘発性気分障害。さらに、不安障害は、人格障害にも適用され得、この人格障害としては、以下の型が挙げられるがこれらに限定されない：妄想性、反社会的、回避性行動、境界性人格障害、依存性、演技性、自己愛性、強迫性、分裂病質的、および分裂病型。
【０７９７】
手順：
行動のスクリーニングを、４匹の野生型マウス、４匹のヘテロ接合性変異型マウス、および８匹のホモ接合性変異型マウスのコホートについて行なった。全ての行動試験を、生存度の減少が、より早期の試験を必要としない限り、１２週齢と１６週齢との間に行なった。これらの試験には、不安、活動レベルおよび診査を測定するために、オープンフィールドを含んだ。
【０７９８】
サーカディアンリズム：
試験の説明：
野生型のマウスおよびヘテロ接合性マウスを、個々に、試験の第１日目の午後４時に、４８．２ｃｍ×２６．５ｃｍのホームケージに入れ、自由に食餌と水を与えた。動物を、午前７時に点灯し、午後７時に消灯する、１２時間の明／暗周期に供した。システムソフトウェアにより、動物の動きにより生じる光線の中断の数を記録し、光線の中断を自動的に自発運動に分ける。３日間の試験の間に、６０、１時間間隔で行動を記録した。生成したデータは、３日間の試験期間にわたって、毎時記録した活動レベルのメジアンによって（サーカディアンリズム）、そして、各明／暗周期の間の総活動のメジアンによって（自発運動活性）、表した。
【０７９９】
結果：
このホームケージにおける行動試験の間に、いくらかの差が観察された。４匹中２匹の雌性（−／−）マウスは、その（＋／＋）同腹仔と比較した場合、２日目の明期の間の歩行カウントの増加を示した（この効果は、おおむね２日目の試験に制限される）。さらに、（−／−）マウスは、その（＋／＋）同腹仔と比較した場合、暗期に対する明期の、および、総活動に対する明期の比の増加を示した。これは、変異体における、異常なサーカディアンリズムの応答を示唆する。分析した野生型／ヘテロ接合体／ホモ接合体の比は、４／４／４であった。
【０８００】
これらの結果は、ヘテロ接合性の変異型マウスが、通常、睡眠障害および／または不安様の挙動に関連する、異常なサーカディアンリズムを示すことを示唆する。従って、ＰＲＯ９７９９ポリペプチドまたはこれをコードする遺伝子のアンタゴニストは、類似の異常な挙動を示すことが予測される。一方で、ＰＲＯ９７９９ポリペプチドまたはそのアゴニストは、睡眠障害もしくは他の不安様の症状を含む、このような神経学的障害の処置に有用である。
【０８０１】
（ｃ）免疫学による表現型分析
免疫が関連する疾患および炎症性疾患は、複合体の出現または結果をほとんどもたらさず、そして、しばしば、正常な生理学において損傷もしくは傷害に対して重要な、複数の相互に関連した生物学的経路が、この損傷もしくは傷害からの修復を開始し、そして、外来生物に対して、生得的な防御および獲得された防御を提示し始める。疾患または病状は、これらの正常な生理学的経路が、応答の強度に直接的に関連してか、異常な調節もしくは過度の刺激の結果としてか、そのもの自体に対する反応としてか、または、これらの組み合わせとしてのいずれかで、さらなる損傷もしくは傷害をもたらす場合に生じる。
【０８０２】
これらの疾患の発生は、しばしば、多工程の経路を必要とし、そして、しばしば、複数の異なる生物学的な系／経路を必要とするが、これらの経路のうちの１つ以上における、重要な点におけるインターベンションは、寛解性の効果もしくは治療効果を有し得る。治療的なインターベンションは、有害なプロセス／経路の拮抗、または、有益なプロセス／経路の刺激のいずれかによって生じ得る。
【０８０３】
Ｔリンパ球（Ｔ細胞）は、哺乳動物の免疫応答の重要な構成要素である。Ｔ細胞は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）内の遺伝子によりコードされる自己の分子と会合した抗原を認識する。この抗原は、抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片などの表面上に、ＭＨＣ分子と共に提示され得る。Ｔ細胞系は、宿主の哺乳動物に健康への脅威を突きつける、これらの変質された細胞を排除する。Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞および細胞傷害性Ｔ細胞を含む。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞上の抗原−ＭＨＣ複合体を認識した後、広範囲に増殖する。ヘルパーＴ細胞もまた、Ｂ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、および免疫応答に関与する種々の他の細胞の活性化において中心的な役割を果たす、種々のサイトカイン（すなわち、リンホカイン）を分泌する。
【０８０４】
多くの免疫応答において、炎症性細胞は、傷害または感染の部位に潜入する。遊走細胞は、罹患組織の組織学的検査によって検査され得るように、好中球性、好酸球性、単球性またはリンパ球性であり得る。Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ編，１９９４，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．を参照のこと。
【０８０５】
多くの免疫関連疾患が公知であり、そして、これらは、広範囲に研究されている。このような疾患としては、免疫媒介性の炎症性疾患（例えば、慢性関節リウマチ、免疫媒介性の腎疾患、肝胆嚢疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬および喘息）、非免疫媒介性の炎症性疾患、感染病、免疫不全疾患、新生物形成、および移植片拒絶などが挙げられる。免疫学の領域において、炎症および炎症性障害の処置のための標的が同定された。
【０８０６】
免疫学の領域において、炎症および炎症性障害の処置のための標的が、本明細書において同定された。１つの例において、免疫関連の疾患は、免疫応答を抑制することによって処置され得る。免疫刺激活性を有する分子を阻害する中和抗体を用いることは、免疫媒介性疾患および炎症性疾患の処置において有用である。免疫応答を阻害する分子は、（タンパク質によって直接的に、または、抗体のアゴニストを使用することによって）免疫応答を阻害し、従って、免疫関連疾患を寛解するために利用され得る。
【０８０７】
以下の試験を行なった：
オボアルブミンチャレンジ
手順：このアッセイを、６匹の野生型および１４匹のホモ接合体について行なった。トリオボアルブミン（ＯＶＡ）は、Ｔ細胞依存性抗原であり、これは、一般に、マウスにおける抗原特異的な免疫応答を研究するためのモデルタンパク質として使用される。ＯＶＡは、非毒性かつ不活性であり、従って、免疫応答が誘導されない場合でさえ、動物に対して害を及ぼさない。マウスのＯＶＡに対する免疫応答は、Ｔ細胞応答を惹起するための免疫優性ペプチドが同定されている程度に十分に特徴付けられている。抗ＯＶＡ抗体は、抗体連結イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いた免疫の後８〜１０日で検出可能であり、そして、抗体の異なるアイソタイプの決定は、遺伝子操作されたマウスにおいて不十分な応答をもたらし得る、複雑なプロセスに関するさらなる情報を提供する。
【０８０８】
上述のように、このプロトコールは、マウスが抗原特異的な免疫応答を惹起する能力を評価する。動物に、完全フロイントアジュバント（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｆｅｕｎｄ’ｓ  Ａｄｊｕｖａｎｔ）中に乳化させた５０ｍｇのトリオボアルブミンをＩＰ注射し、１４日後に、抗オボアルブミン抗体（ＩｇＭ、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２のサブクラス）の血清中力価を測定した。血清サンプル中のＯＶＡ特異的抗体の量は、９６ウェルサンプルプレートをスキャンする機器によって生成される、光学密度（ＯＤ）の値に比例する。各血清サンプルの一連の限界希釈について、データを収集した。このチャレンジの結果：（−／−）マウスは、その（＋／＋）同腹仔と比較した場合、オボアルブミンチャレンジに対して、平均血清ＩｇＧ２ａが増加に向かう傾向を示した（４匹中２匹の（−／−）マウス）。従って、これらのノックアウトマウスは、Ｔ細胞依存性のＯＶＡ抗原に対してＯＶＡ特異的な抗体の応答を惹起する能力の増加を示した。ＰＲＯ９７９９ポリペプチドのインヒビター（アンタゴニスト）はまた、免疫系を刺激することが予想され、この効果が、白血病、および他のタイプの癌の場合のような個体に対して、ならびに、ＡＩＤＳ罹患患者のような、免疫無防備状態の患者において有用である場合に、有用性を見出すことを示唆する。従って、ＰＲＯ９７９９ポリペプチドまたはそのアゴニストは、免疫応答を阻害するために有用であり、そして、例えば、移植片拒絶、または、移植片対宿主病の場合に、有害な免疫応答を抑制するための有用な候補である。オボアルブミンチャレンジに加え、血液学により、（−／−）ノックアウトマウスが、野生型の同腹仔よりも低い循環好中球のレベルを示したことが明らかとなった。
【０８０９】
（ｄ）腫瘍学による表現型分析
腫瘍学の領域において、本明細書において、固形腫瘍、リンパ腫および白血病の処置のために標的を同定した。
【０８１０】
成体皮膚細胞の増殖：
手順：皮膚細胞を、１６週齢の動物（２匹の野生型および４匹のホモ接合体）から単離した。これらを、初代線維芽細胞培養物へと発生させ、そして、線維芽細胞の増殖速度を、厳密に制御したプロトコールにて測定した。過増殖性および低増殖性の表現型を検出するこのアッセイの能力を、ｐ５３およびＫｕ８０により実証した。増殖を、ＢｒｄＵの取り込みを用いて測定した。
【０８１１】
具体的には、これらの研究において、皮膚の線維芽細胞の増殖アッセイを用いた。標準的な培養における細胞数の増加を、相対的な増殖能力の指標として用いた。初代線維芽細胞を、野生型マウスおよび変異型マウスから採取した皮膚の生検から樹立した。５万個の細胞の、二連または三連の培養物をプレーティングし、そして、６日間成長させた。培養期間の終わりに、培養物中に存在する細胞の数を、電子粒子計数装置を用いて決定した。
【０８１２】
結果：雌性の（−／−）マウスは、その同じ性別の（＋／＋）同腹仔および歴史的な平均と比較した場合、皮膚の線維芽細胞の増殖速度の減少を示した［分析した野生型／ヘテロ接合体／ホモ接合体の比は、２／０／４であった］。
【０８１３】
従って、ホモ接合性の変異型マウスは、低増殖性の表現型を示した。これらの知見により示唆されるように、ＰＲＯ９７９９ポリペプチドまたはこれをコードする遺伝子のアンタゴニストは、異常な細胞増殖を減少させるのに有用である。
【０８１４】
（Ｏ．ＤＮＡ１７３８９４−２９４７（ＵＮＱ３０９６）遺伝子破壊を含むマウスの作製および分析）
これらのノックアウト実験において、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチドをコードする遺伝子（ＤＮＡ１７３８９４−２９４７（ＵＮＱ３０９６）と称される）を破壊した。これらの研究についてのこの遺伝子特有の情報は、以下の通りである：変異型マウスの遺伝子は、以下に対応する：ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿１４５８３７、すなわち、登録番号：ＮＭ＿１４５８３７  ＮＩＤ：ｇｉ  ２２００３８８５  ｒｅｆ  ＮＭ＿１４５８３７．１  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓインターロイキン１７Ｄ（ＩＬ  １７Ｄ）；タンパク質参照番号：ＮＰ＿６６５８３６、すなわち、登録番号：ＮＰ＿６６５８３６  ＮＩＤ：ｇｉ  ２２００３８８６  ｒｅｆ  ＮＰ＿６６５８３６．１（ＮＭ＿１４５８３７）インターロイキン１７Ｄ；インターロイキン２７Ａ［Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ］；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ＿１３８２８４、すなわち、登録番号：ＮＭ＿１３８２８４  ＮＩＤ：ｇｉ  １９９２３７１４  ｒｅｆ  ＮＭ＿１３８２８４．１  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓインターロイキン１７Ｄ（ＩＬ１７Ｄ）；ヒトタンパク質の配列は、参照番号：ＮＰ＿６１２１４１、すなわち、登録番号：ＮＰ＿６１２１４１  ＮＩＤ：ｇｉ  １９９２３７１５  ｒｅｆ  ＮＰ＿６１２１４１．１（ＮＭ＿１３８２８４）インターロイキン１７Ｄ前駆体［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］に対応する。
【０８１５】
破壊された遺伝子は、ＩＬ１７ｄ（インターロイキン１７ｄ）であり、これは、ヒトＩＬ１７Ｄのオルソログである。別名としては、ＩＬ２７、ＩＬ２２、ＩＬ２７およびＩＬ２７Ａが挙げられる。
【０８１６】
ＩＬ１７Ｄは、骨格筋、脳、脂肪組織、心臓、肺および膵臓において高いレベルで発現され、そして、骨髄、胎児の肝臓、腎臓、白血球、肝臓、リンパ節、胎盤、脾臓、胸腺、扁桃腺、安静時（ｒｅｓｔｉｎｇ）ＣＤ４  Ｔ細胞、および安静時ＣＤ１９Ｂ細胞において低いレベルで発現される、サイトカインである。ＩＬ１７Ｄは、免疫応答および組織のホメオスタシスを調節する役割を果たすようである。ＩＬ１７Ｄは、内皮細胞におけるサイトカインの産生を調整し、そして、骨髄前駆細胞のコロニー形成を阻害するが、末梢血単核細胞の増殖は阻害しない（Ｓｔａｒｎｅｓら，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６９（２）：６４２−６（２００２）；Ｍｏｓｅｌｅｙら，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖ  １４（２）：１５５−７４（２００３））。
【０８１７】
サイトカインの命名については、一定せずに発展してきた；明らかに、ＩＬ１７Ｄは、過去にはＩＬ２２と呼ばれていたが、この名前は、現在ではＩＬ２２のために取っておかれている。同様に、この遺伝子をＩＬ２７Ａと呼ぶ研究者もいる（例えば、ＮＣＢＩ登録番号ＡＦ５０２５８４）。
【０８１８】
標的化した変異もしくはジーントラップによる変異を、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ株に由来する胚性幹（ＥＳ）細胞において作製した。キメラマウスを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊのアルビノマウスと交配させて、Ｆ１のヘテロ接合性の動物を作製した。これらの子孫を交雑させて、Ｆ２の野生型子孫、ヘテロ接合性変異型子孫、およびホモ接合性変異型子孫を作製した。ごくたまに、例えば、キメラからＦ１マウスがほとんど得られない場合、Ｆ１のヘテロ接合性のマウスを、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７雑種マウスと交配させて、交雑のためのさらなるヘテロ接合性の動物を得て、Ｆ２マウスを作製した。以下に示されるように、この世代からのマウスについて、レベルＩの表現型分析を行なった。
【０８１９】
【化４２】
2007536931.tif 000066
変異の情報：変異型：相同組換え（標準的）。エキソン３をコードする領域を標的化した（ＮＣＢＩ登録番号ＡＦ４５８０６３）。
【０８２０】
野生型の発現パネル：試験せず。サザンハイブリダイゼーション分析により、標的遺伝子の破壊を確認した。
【０８２１】
（１．表現型分析（破壊した遺伝子：ＤＮＡ１７３８９４−２９４７（ＵＮＱ３０９６）について）
（ａ）全体的な表現型のまとめ
ヒトインターロイキン１７ｄ（ＩＬ１７ｄ）のオルソログをコードする遺伝子の変異は、腎機能不全を示す、複数の腎皮質嚢胞および水腎症の顕微鏡による観察をもたらした。ノックアウトマウスはまた、炎症の徴候も示した。さらに、（−／−）マウスは、総組織質量、除脂肪体重および骨塩密度の増加を示した。全ての（−／−）マウスが、尾懸垂試験（ｔａｉｌ  ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ  ｔｅｓｔ）において、何の反応も示さず（ｎｏｔｅｄ  ｎｏ）、一方で、５匹中３匹（３／５）の野生型マウスおよび３匹中３匹（３／３）のヘテロ接合性の（＋／−）マウスが、反応を示した（ｎｏｔｅｄ  ｙｅｓ）、すなわち、同側の（ｉｓｐｓｉｌａｔｅｒａｌ）脚をつかんだ。７匹中５匹（５／７）の（−／−）マウス、３匹中３匹（３／３）の（＋／−）マウス、および５匹中２匹（２／５）の（＋／＋）マウスが、立ち上がりの反応を示さなかった。遺伝子破壊を、サザンブロットにより確認した。
【０８２２】
（ｂ）病理学および放射線学による観察
ＣＡＴスキャン：
試験の説明：
マウスに、ＣＴ造影剤Ｏｍｎｉｐａｑｕｅ  ３００（Ｎｙｃｏｍｅｄ  Ａｍｅｒｓｈａｎ，３００ｍｇ／ｍｌのヨウ素を動物１匹あたり０．２５ｍｌ、すなわち、体重１ｋｇあたり２．５０〜３．７５ｇのヨウ素）を腹腔内に注射した。約１０分間ケージ内で休ませた後、次いで、マウスに、Ａｖｅｒｔｉｎ（１．２５％の２，２，２，トリブロモエタノール、２０ｍｌ／体重ｋｇ）を腹腔内注射して落ち着かせた。麻酔をかけた動物を試験台の上に腹臥に寝かせて、ＭｉｃｒｏＣＡＴスキャナ（ＩｍＴｅｋ，Ｉｎｃ．）を用いてＣＡＴスキャンを実施した。ＩｍＴｅｋ  ３Ｄ  ＲＥＣＯＮソフトウェアを用い、一群のワークステーションにおけるＦｅｌｄｋａｍｐのアルゴリズムにより、三次元画像を再構築した。
【０８２３】
結果：１匹の（−／−）マウスにおいて、腎臓の右上に、その同じ性別の同腹仔と比較して、低密度の病変（嚢胞）を観察した［分析した野生型／ヘテロ接合体／ホモ接合体の比は、７／５／９であった］。
【０８２４】
放射線学：
顕微鏡による観察：分析した（−／−）マウスは、片側の水腎症と、複数の腎皮質嚢胞とを示した。これらの病変は、中腎管の発生における欠損を表す［分析した野生型／ヘテロ接合体／ホモ接合体の比は、０／３／５であった］。
【０８２５】
まとめると、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチドをコードする遺伝子が欠失しているノックアウトの（−／−）変異型マウスは、腎機能不全および／または腎疾患に関連する負の表現型をもたらす。より具体的には、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチドをコードする遺伝子が欠失している変異型マウスは、腎機能障害をもたらす、不完全な中腎管の発生を示す。従って、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチドまたはこれに対するアゴニストは、正常な腎機能を維持するのに重要であることが予測され、一方で、ＰＲＯ２１１７５のアンタゴニスト（インヒビター）は、腎疾患を模倣し、腎機能を研究するためのモデルとして役立ち得る。
【０８２６】
（ｃ）骨代謝：放射線学による表現型分析
骨代謝の領域において、本明細書においては、関節炎、骨粗鬆症、骨減少症、および大理石骨病の処置のための標的を同定し、ならびに、骨治癒を促進する標的を同定した。
試験は、以下を含んだ：
大腿骨および椎骨について、骨塩密度を測定するためのＤＥＸＡ
海綿質および皮質骨の両方についての、骨塩密度の非常に高解像度かつ非常に高感度の測定のための、マイクロＣＴ。
【０８２７】
Ｄｅｘａ分析−試験の説明：
手順：４匹の野生型および匹のヘテロ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重Ｘ線吸収骨塩定量（ＤＥＸＡ）を首尾よく使用して、総組織質量（ＴＴＭ）における変化を同定した。麻酔した動物を試験し、骨塩含量（ＢＭＣ）、ＢＭＣ／ＬＢＭ比、容積測定による骨塩密度（ｖＢＭＤ）、全身のＢＭＤ、大腿骨のＢＭＤ、および椎骨のＢＭＤを測定した。
【０８２８】
マウスを、Ａｖｅｒｔｉｎ（１．２５％の２，２，２，トリブロモエタノール、２０ｍｌ／体重ｋｇ）を腹腔内注射して麻酔をかけ、体長および体重を測定し、次いで、マウスを、ＤＥＸＡスキャンのために、ＰＩＸＩｍｕｓＴＭデンシトメーター（Ｌｕｎａｒ  Ｉｎｃ．）のプラットフォーム上に、腹臥位で置いた。Ｌｕｎａｒ  ＰＩＸＩｍｕｓソフトウェアを用いて、目的の領域（ＲＯＩ）［すなわち、全身、椎骨、および両大腿骨］において骨塩密度（ＢＭＤ）および脂肪組成（％脂肪）および総組織質量（ＴＴＭ）を決定した。
【０８２９】
ＤＥＸＡの結果：
（−／−）ホモ接合性マウスは、その同じ性別の（＋／＋）同腹仔と比較して、総組織質量、除脂肪体重および骨塩密度の増加を示した。
【０８３０】
これらの結果は、（−／−）マウスが、成長の異常と、大理石骨病のような骨の異常とに関連する表現型を示すことを実証する。これらの結果は、ノックアウトの変異型表現型が、大理石骨病のような骨の異常を伴うことを示唆する。大理石骨病は、骨を異常にもろくする、骨の異常な厚化および硬化により特徴付けられる状態である。従って、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチドまたはそのアゴニストは、正常な骨の発生に必須であり、そして、大理石骨病の処置に有益である。骨塩密度の増加を伴う表現型は、この負の表現型を模倣する因子（例えば、ＰＲＯ２１１７５のアンタゴニスト）が、骨治癒において有用であることを示唆する。
【０８３１】
（Ｐ．ＤＮＡ１４８００９−２８８９（ＵＮＱ５９３１）遺伝子破壊を含むマウスの作製および分析）
これらのノックアウト実験において、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチドをコードする遺伝子（ＤＮＡ１４８００９−２８８９（ＵＮＱ５９３１）と称される）を破壊した。これらの研究についてのこの遺伝子特有の情報は、以下の通りである：変異型マウスの遺伝子は、以下に対応する：ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿０３３６０８、すなわち、登録番号：ＮＭ＿０３３６０８  ＮＩＤ：ｇｉ  １８４２６８０６  ｒｅｆ  ＮＭ＿０３３６０８．１  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ免疫グロブリンスーパーファミリー，メンバー９（Ｉｇｓｆ９）；タンパク質参照番号：ＮＰ＿２９１０８６、すなわち、登録番号：ＮＰ＿２９１０８６  ＮＩＤ：ｇｉ  １８４２６８０７  ｒｅｆ  ＮＰ＿２９１０８６．１（ＮＭ＿０３３６０８）免疫グロブリンスーパーファミリー，メンバー９；ＫＩＡＡ１３５５仮定タンパク質（ヒト）；ＮＣＡＭ様タンパク質ＮＲＴ１；中性細胞接着分子（Ｎｃａｍ）様［Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ］；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ＿０２０７８９、すなわち、登録番号：ＮＭ＿０２０７８９  ＮＩＤ：ｇｉ  ２１３５７３２６  ｒｅｆ  ＮＭ＿０２０７８９．１  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ免疫グロブリンスーパーファミリー，メンバー９（ＩＧＳＦ９）；ヒトタンパク質の配列は、参照番号：ＮＰ＿０６５８４０、すなわち、登録番号：ＮＰ＿０６５８４０  ＮＩＤ：ｇｉ  ２１３５７３２７  ｒｅｆ  ＮＰ＿０６５８４０．１（ＮＭ＿０２０７８９）免疫グロブリンスーパーファミリー，メンバー９［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］に対応する。
【０８３２】
破壊された遺伝子は、Ｉｇｓｆ９（免疫グロブリンスーパーファミリー，メンバー９）であり、これは、ヒトＩＧＳＦ９のオルソログである。別名としては、ＮＲＴ１、Ｎｃａｍｌ、６４４ＥＴＤ８、Ｋｉａａ１３５５  ｈｐ、ＮＣＡＭ様タンパク質ＮＲＴ１（中性細胞接着分子（Ｎｃａｍ）様ＩＧＳＦ９は、仮定Ｉ型膜タンパク質であり；これは、５つのＩｇＧドメイン、２つのフィブロネクチンドメイン、ならびに、１つのＣ末端細胞質ドメインを有する、細胞外ドメインを有する）が挙げられる。ＩＧＳＦ９の構造は、中性細胞接着分子の構造と類似する。胎仔のマウスにおいて、ＩＧＳＦ９は、後根神経節、三叉神経節および嗅覚上皮において発現される。ヒトにおいて、ＩＧＳＦ９は、より広く発現しているようである（Ｄｏｕｄｎｅｙら，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ７９（５）：６６３−７０（２００２））。ＩＧＳＦ９は、神経系の発生に関与していると推定される。
【０８３３】
標的化した変異もしくはジーントラップによる変異を、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ株に由来する胚性幹（ＥＳ）細胞において作製した。キメラマウスを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊのアルビノマウスと交配させて、Ｆ１のヘテロ接合性の動物を作製した。これらの子孫を交雑させて、Ｆ２の野生型子孫、ヘテロ接合性変異型子孫、およびホモ接合性変異型子孫を作製した。ごくたまに、例えば、キメラからＦ１マウスがほとんど得られない場合、Ｆ１のヘテロ接合性のマウスを、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７雑種マウスと交配させて、交雑のためのさらなるヘテロ接合性の動物を得て、Ｆ２マウスを作製した。この世代からのマウスについて、レベルＩの表現型分析を行なった。
【０８３４】
【化４３】
2007536931.tif 000067
変異の情報：変異型：レトロウイルス挿入（ＯＳＴ）。レトロウイルス挿入は、エキソン１をコードする領域の前のイントロンにおいて生じた（ＮＣＢＩ登録番号ＮＭ＿０３３６０８．２）。
【０８３５】
標的遺伝子の野生型の発現は、ＲＴ−ＰＣＲにより試験した１３全ての成体組織サンプルの中で眼においてのみ検出された。ＲＴ  ＰＣＲ分析により、分析した（−／−）マウス（Ｍ  ８６）においては、転写が起こっていなかったことが明らかとなった。標的遺伝子の破壊を、インバースＰＣＲ（Ｉｎｖｅｒｓｅ  ＰＣＲ）により確認した。マウス胚におけるＵＮＱ５９３１の発現は、広範な発現を示したが、心臓および卵黄嚢（Ｅ１０．５）は除かれる。
【０８３６】
（１．表現型分析（破壊した遺伝子：ＤＮＡ１４８００９−２８８９（ＵＮＱ５９３１）について）
（ａ）全体的な表現型のまとめ
ヒト免疫グロブリンスーパーファミリー，メンバー９（ＩＧＳＦ９）のオルソログをコードする遺伝子の変異は、（−／−）マウスにおけるコレステロールレベルの増加をもたらした。（−／−）マウスは、その同じ性別の（＋／＋）同腹仔と比較して、耐糖能試験における増強、ならびに、血清インスリンレベルの増加を示した。８匹中２匹（２／８）の（−／−）マウスが立ち上がりの挙動を示さなかった。８匹中２匹（２／８）の（−／−）マウス、４匹中１匹（１／４）の（＋／−）マウスが、排便しなかった。さらに、雄性の（−／−）変異型マウスが、精細管の中程度の変性を示した。ＲＴ−ＰＣＲによれば、転写は起こっていなかった。
【０８３７】
（ｂ）表現型分析：心臓病学
心臓血管生物学の領域において、本明細書において、高血圧、アテローム性動脈硬化症、心不全、発作、種々の冠動脈疾患、異脂肪血症（例えば、高いコレステロール（高コレステロール血症）および血清トリグリセリドの増加（高グリセリド血症））、癌および／または肥満の処置のための標的を同定した。
【０８３８】
表現型の試験には、血清のコレステロールおよびトリグリセリドの測定を含めた。
【０８３９】
血中の脂質
手順：４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体および８匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。高いコレステロールレベルは、心臓血管疾患の発症における危険因子と認識される。血中の脂質の測定は、血中の脂質レベルを調整し、阻害されると、心臓血管疾患の危険を減少させる、生物学的スイッチの発見を可能にした。コレステロールの測定を記録した。マウスについて、血液化学試験を行なうために、ＣＯＢＡＳ  Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００（Ｒｏｃｈｅ製）を用いた。
【０８４０】
結果：上にまとめたように、ホモ接合性の（−／−）変異型マウスは、その同じ性別の（＋／＋）同腹仔および歴史的な平均と比較した場合、（正常なレベルと比較して）平均血清コレステロールレベルの増加を示した。トリグリセリドには変化が観察されなかった（分析した野生型／ヘテロ接合体／ホモ接合体の比は、４／４／８であった）。
【０８４１】
従って、ＰＲＯ１９８３７を欠失する変異型マウスは、心臓血管疾患、特に、異常なコレステロール代謝に関連する疾患についてのモデルとして役立ち得る。ＰＲＯ１９８３７ポリペプチドまたはこれをコードする遺伝子は、血中の脂質を調整し、そして、特に、正常なコレステロールを維持するのに有用である。従って、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチドは、高血圧、アテローム性動脈硬化症、心不全、発作、種々の冠動脈疾患および／または肥満もしくは糖尿病のような心臓血管疾患の処置に有用である。
【０８４２】
表現型分析：代謝−血液化学−耐糖能
代謝の領域において、糖尿病の処置のための標的が同定され得る。血液化学の表現型分析には、インシュリンの感受性および糖代謝の変化を測定するための、耐糖能試験が含まれる。異常な耐糖能試験の結果としては、１型糖尿病および２型糖尿病、シンドロームＸ、種々の心臓血管疾患および／または肥満のような障害または状態が挙げられ得るが、これらに限定されない。
【０８４３】
手順：４匹の野生型マウスおよび８匹のホモ接合性マウスのコホートをこのアッセイにおいて用いた。耐糖能試験は、哺乳動物におけるグルコースのホメオスタシスの不全を規定するための基準である。耐糖能試験を、Ｌｉｆｅｓｃａｎ血糖計を用いて行った。動物に、２０％溶液として送達される２ｇ／ｋｇのＤグルコースを腹腔内注射し、血中グルコースレベルを、注射後０分、３０分、６０分および９０分で測定した。
【０８４４】
結果：これらの研究は、（−／−）マウスが、その同じ性別の（＋／＋）同腹仔および歴史的な平均と比べ、正常な糖の食餌の存在下で、試験した３つのうち２つ（２／３）の間隔において、耐糖能の増加を示すことを示した。さらに、（−／−）マウスにおいては、血清インシュリンレベルのわずかな増加（すなわち高インスリン血症）が明らかであった。
【０８４５】
（ｃ）病理学
試験した２匹の雄性（−／−）マウスについての顕微鏡による観察は、精細管の中程度の変性を示した。この病変は、片側だけのものであり、付随する精巣上体には、精子が存在しなかった。この負の表現型は、ＰＲＯ１９８３７に対するアンタゴニストが、雄性生殖器官障害をもたらすことを示唆する。対照的に、ＰＲＯ１９８３７またはそのアゴニストは、このような障害の予防または処置に有用である。
【０８４６】
（Ｑ．ＤＮＡ１７５９５９−２９４８（ＵＮＱ６４２７）遺伝子破壊を含むマウスの作製および分析）
これらのノックアウト実験において、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチドをコードする遺伝子（ＤＮＡ１７５９５９−２９４８（ＵＮＱ６４２７）と称される）を破壊した。これらの研究についてのこの遺伝子特有の情報は、以下の通りである：変異型マウスの遺伝子は、以下に対応する：ヌクレオチド参照番号：ＸＭ＿２８３６４７、すなわち、Ｍｕｓｍｕｓｃｕｌｕｓ  ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  Ａ５３００３７Ｃ０４遺伝子（Ａ５３００３７Ｃ０４Ｒｉｋ）；タンパク質参照番号：ＸＰ＿２８３６４７−ＶＴＳ２０６３１［Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ］に類似；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ＿０２１６３６、すなわち、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役レセプター６（ＬＧＲ６）；ヒトタンパク質の配列は、参照番号：ＮＰ＿０６７６４９、すなわち、ロイシンリッチ含有Ｇタンパク質共役レセプター６［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］ｇｉ｜３７１８１３４４｜ｇｂ｜ＡＡＱ８８４８６．１｜ゴナドトロピンレセプター［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］に対応する。
【０８４７】
破壊された遺伝子は、マウス遺伝子Ｌｇｒ６（ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役レセプター）であり、これは、ヒトＬＧＲ６のオルソログである。
【０８４８】
ＬＧＲ６は、ロドプシン様Ｇタンパク質共役レセプターのロイシンリッチリピートサブファミリーのメンバーである。ＬＧＲ６遺伝子は、８４６アミノ酸ペプチドをコードし、糖タンパク質ホルモンレセプターと同様に、ロイシンリッチなリピートを含む、大きな細胞外Ｎ末端ドメインを有する。このレセプターのための内因性のリガンドおよびシグナル伝達経路は、未知である。ＬＧＲ６遺伝子は、オルタナティブスプライシングを受けて、異なるＬＧＲ６レセプターサブタイプを作製するようである。ＬＧＲ６  ｍＲＮＡは、卵管、子宮、結腸、脾臓、腎臓、副腎、脳および心臓において発現される。高いＬＧＲ６  ｍＲＮＡの発現が、小腸、精巣および卵巣に存在する（Ｈｓｕら，Ｍｏｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  １４（８）：１２５７−７１（２０００））。
【０８４９】
標的化した変異もしくはジーントラップによる変異を、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ株に由来する胚性幹（ＥＳ）細胞において作製した。キメラマウスを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊのアルビノマウスと交配させて、Ｆ１のヘテロ接合性の動物を作製した。これらの子孫を交雑させて、Ｆ２の野生型子孫、ヘテロ接合性変異型子孫、およびホモ接合性変異型子孫を作製した。ごくたまに、例えば、キメラからＦ１マウスがほとんど得られない場合、Ｆ１のヘテロ接合性のマウスを、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７雑種マウスと交配させて、交雑のためのさらなるヘテロ接合性の動物を得て、Ｆ２マウスを作製した。この世代からのマウスについて、レベルＩの表現型分析を行なった。
【０８５０】
【化４４】
2007536931.tif 000068
変異の情報：変異型：相同組換え（標準的）。エキソン１８をコードする領域を標的化した（ＮＣＢＩ登録番号ＡＫ０８５９０１）。
【０８５１】
野生型の発現パネル：試験せず。サザンハイブリダイゼーション分析により、標的遺伝子の破壊を確認した。
【０８５２】
（１．表現型分析（破壊した遺伝子：ＤＮＡ１７５９５９−２９４８（ＵＮＱ６４２７）について）
（ａ）全体的な表現型のまとめ
ヒトロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役レセプター６（ＬＧＲ６）のホモログをコードする遺伝子の変異は、ホモ接合性の（−／−）マウスにおけるトリグリセリドの増加をもたらした。さらに、変異型（−／−）マウスは、マイクロＣＴ分析により示されるように、骨塩密度の測定値が低下する傾向を示した。８匹中４匹、すなわち、５０％の（−／−）マウスが排便せず、そして、８匹中２匹の（−／−）マウスが、立ち上がりの挙動を示さなかった。１匹の（−／−）マウス、そしてまた、１匹の（＋／−）マウスにおいて、眼球突出が観察された。サザンブロットにより、遺伝子破壊を確認した。
【０８５３】
（ｂ）表現型分析：心臓病学
心臓血管生物学の領域において、本明細書において、高血圧、アテローム性動脈硬化症、心不全、発作、種々の冠動脈疾患、異脂肪血症（例えば、高いコレステロール（高コレステロール血症）および血清トリグリセリドの増加（高グリセリド血症））、癌および／または肥満の処置のための標的を同定した。
【０８５４】
表現型の試験には、血清のコレステロールおよびトリグリセリドの測定を含めた。
【０８５５】
血中の脂質
手順：４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体および８匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。高いコレステロールレベルは、心臓血管疾患の発症における危険因子と認識される。血中の脂質の測定は、血中の脂質レベルを調整し、阻害されると、心臓血管疾患の危険を減少させる、生物学的スイッチの発見を可能にした。コレステロールの測定を記録した。マウスについて、血液化学試験を行なうために、ＣＯＢＡＳ  Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００（Ｒｏｃｈｅ製）を用いた。
【０８５６】
結果：上にまとめたように、ホモ接合性の（−／−）変異型マウスは、その同じ性別の（＋／＋）同腹仔および歴史的な平均と比較した場合、（正常なレベルと比較して）平均血清コレステロールレベルの増加を示した（１８８ｍｇ／ｄＬ  （−／−）  対  ８８ｍｇ／ｄＬ；ｐ＝０．０４）。（分析した野生型／ヘテロ接合体／ホモ接合体の比は、４／４／８であった）。
【０８５７】
従って、ＰＲＯ２１３３１を欠失する変異型マウスは、心臓血管疾患、糖尿病および／または肥満についてのモデルとして役立ち得る。ＰＲＯ２１３３１ポリペプチドまたはこれをコードする遺伝子は、血中の脂質を調整し、そして、特に、正常なコレステロールを維持するのに有用である。従って、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチドは、高血圧、アテローム性動脈硬化症、心不全、発作、種々の冠動脈疾患および／または肥満もしくは糖尿病のような心臓血管疾患の処置に有用である。
【０８５８】
（ｃ）骨代謝：放射線学による表現型分析
骨代謝の領域において、本明細書においては、関節炎、骨粗鬆症、骨減少症、および大理石骨病の処置のための標的を同定し、ならびに、骨治癒を促進する標的を同定した。
【０８５９】
骨のマイクロＣＴ分析：
手順：また、マイクロＣＴを用いて、ＢＭＤの非常に感度の高い測定値を得た。１つの椎骨および１つの大腿骨を、４匹の野生型および８匹のホモ接合性マウスのコホートから採取した。以下について測定を行なった：第５腰椎骨の海綿質容積、小柱の厚み、結合密度、ならびに大腿骨の中心軸の総骨面積および皮質の厚み。マイクロＣＴ４０は、骨の質量および構造に関する詳細な情報を提供した。複数の骨を、サンプルホルダーに入れ、自動的にスキャンした。機器のソフトウェアを用いて、分析のための目的の領域を選択した。第５腰椎骨（ＬＶ５）において、１６マイクロメートルの解像度で海綿質のパラメーターを分析し、そして、大腿骨の中心軸において、２０マイクロメートルの解像度で皮質骨のパラメーターを分析した。
【０８６０】
マイクロＣＴ分析の結果：（−／−）マウスは、その同じ性別の（＋／＋）同腹仔および歴史的な平均と比較した場合、第５椎骨の海面質の平均体積、数、厚みおよび結合密度の顕著な減少を示した。これらの変異体はまた、大腿骨中心軸の平均断面積の顕著な減少も示した［分析した野生型／ヘテロ接合体／ホモ接合体の比は、４／４／８であった］。
【０８６１】
これらの結果は、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチドをコードする遺伝子を欠失するノックアウト変異型雄性マウスが、密度の減少、そしておそらくは、骨折につながる骨のもろさと共に、骨質量の減少により特徴付けられる有意な骨質量の減少と共に、異常な骨代謝を示すことを実証する。骨塩密度の減少に関連する可能性のある、腎臓、甲状腺または副腎の機能不全を示唆する高カルシウム血症、高血糖、または、アルカリホスフェートの増加は、血液化学の検査においては検出されなかった。従って、ＰＲＯ２１３３１またはそのアゴニストは、骨のホメオスタシスを維持するために特に重要であり、そして、骨治癒のため、または、関節炎もしくは骨粗鬆症の処置のために有用である；一方で、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチドまたはこれをコードする遺伝子に対するアンタゴニストは、関節炎、骨粗鬆症および骨減少症のような異常な骨代謝を伴う炎症性疾患を含めて、異常な、もしくは、病理学的な骨の障害をもたらす。
【０８６２】
（Ｒ．ＤＮＡ１９４６０７（ＵＮＱ８９２３）遺伝子破壊を含むマウスの作製および分析）
これらのノックアウト実験において、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチドをコードする遺伝子（ＤＮＡ１９４６０７（ＵＮＱ８９２３）と称される）を破壊した。これらの研究についてのこの遺伝子特有の情報は、以下の通りである：変異型マウスの遺伝子は、以下に対応する：ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿０１５７７５、すなわち、登録番号：ＮＭ＿０１５７７５  ＮＩＤ：ｇｉ  ７６５７６５０  ｒｅｆ  ＮＭ＿０１５７７５．１  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ膜貫通型プロテアーゼ，セリン２（Ｔｍｐｒｓｓ２）；タンパク質参照番号：Ｑ９ＪＩＱ８、すなわち、登録番号：Ｑ９ＪＩＱ８  ＮＩＤ：Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（マウス）．膜貫通型プロテアーゼ，セリン２  （ＥＣ  ３．４．２１．）（ＥＰＩＴＨＥＬＩＡＳＩＮ）（原形質膜貫通タンパク質Ｘ）．ＭＯＵＳＥＳＰＴＲＮＲＤＢ；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ＿００５６５６、すなわち、登録番号：ＮＭ＿００５６５６  ＮＩＤ：ｇｉ  １４６０２４５８  ｒｅｆ  ＮＭ＿００５６５６．２  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ膜貫通型プロテアーゼ，セリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）；ヒトタンパク質の配列は、参照番号：Ｏ１５３９３、すなわち、登録番号：Ｏ１５３９３  ＮＩＤ：Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ヒト）．膜貫通型プロテアーゼ，セリン２前駆体（ＥＣ  ３．４．２１．  ）．ＨＵＭＡＮＳＰＴＲＮＲＤＢに対応する。
【０８６３】
破壊された遺伝子は、Ｔｍｐｒｓｓ２（膜貫通型プロテアーゼ，セリン２）であり、これは、ヒトＴＭＰＲＳＳ２のオルソログである。別名としては、エピセリアシン、原形質膜タンパク質ＸおよびＰＲＳＳ１０が挙げられる。
【０８６４】
ＴＭＰＲＳＳ２，ＩＩ型原形質膜タンパク質は、主に、腎尿細管および気道上皮の先端表面に見られる、セリンプロテアーゼである。前立腺、結腸、胃および唾液腺もまた、ＴＭＰＲＳＳ２を発現する。このタンパク質は、シグナルアンカー配列、低密度リポタンパク質レセプタークラスＡドメイン、リッチなスカベンジャーレセプター様ドメイン、およびトリプシン様セリンプロテアーゼドメインを含む（Ｐａｏｌｏｎｉ−Ｇｉａｃｏｂｉｎｏら，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ４４（３）：３０９−２０（１９９７）；Ｊａｃｑｕｉｎｅｔら，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  ４６８（１）：９３−１００（２０００）；Ｖａａｒａｌａら，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ９４（５）：７０５−１０（２００１））。ＴＭＰＲＳＳ２は、依存性の前立腺癌において、アンドロゲンをダウンレギュレートし（Ａｆａｒら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６１（４）：１６８６−９２（２００１））、そして、切断された形態が、前立腺から分泌される。しかし、ＴＭＰＲＳＳ２は、前立腺腫瘍の大部分において過剰発現され（Ｖａａｒａｌａら，１９９９）、そして、アンドロゲンが、調整されるものと考えられる（Ｌｉｎら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５９（１７）：４１８０−４（１９９９））。従って、ＴＭＰＲＳＳ２は、癌治療および診断についての標的であり得る。ＴＭＰＲＳＳ２はまた、上皮ナトリウムチャネル（ＥＮａＣ）を切断し得、これは、気道上皮を横切るナトリウムの吸収を減少させる。従って、ＴＭＰＲＳＳ２は、気道表面の液体体積の調整および粘膜毛様体のクリアランス効率において役割を果たし得る（Ｄｏｎａｌｄｓｏｎら，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７（１０）：８３３８−４５（２００２））。
【０８６５】
標的化した変異もしくはジーントラップによる変異を、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ株に由来する胚性幹（ＥＳ）細胞において作製した。キメラマウスを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊのアルビノマウスと交配させて、Ｆ１のヘテロ接合性の動物を作製した。これらの子孫を交雑させて、Ｆ２の野生型子孫、ヘテロ接合性変異型子孫、およびホモ接合性変異型子孫を作製した。ごくたまに、例えば、キメラからＦ１マウスがほとんど得られない場合、Ｆ１のヘテロ接合性のマウスを、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７雑種マウスと交配させて、交雑のためのさらなるヘテロ接合性の動物を得て、Ｆ２マウスを作製した。この世代からのマウスについて、レベルＩの表現型分析を行なった。
【０８６６】
【化４５】
2007536931.tif 000069
変異の情報：変異型：相同組換え（標準的）。エキソン１および２をコードする領域を標的化した（ＮＣＢＩ登録番号ＮＭ＿０１５７７５．２）。
【０８６７】
標的遺伝子の野生型の発現は、胚性幹（ＥＳ）細胞、および、ＲＴ−ＰＣＲにより試験した１３の成体組織サンプルの中でも、腎臓および小腸および結腸において検出された。サザンハイブリダイゼーション分析により、標的遺伝子の破壊を確認した。
【０８６８】
（１．表現型分析（破壊した遺伝子：ＤＮＡ１９４６０７（ＵＮＱ８９２３）について）
（ａ）全体的な表現型のまとめ
ヒト膜貫通型プロテアーゼ，セリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）のオルソログをコードする遺伝子の変異は、ホモ接合性の変異型（−／−）マウスにおけるコレステロールレベルの減少をもたらした。さらに、雄性の（−／−）マウスは、その同じ性別の（＋／＋）同腹仔および歴史的な平均と比べた場合、大腿骨中軸の皮質の厚みおよび断面積の減少を示した。変異型（−／−）マウスは、野生型のコントロールと比較して、皮膚の線維芽細胞の増殖の低下を示した。サザンブロットにより遺伝子破壊を確認した。
【０８６９】
（ｂ）心臓血管の表現型分析／代謝−血液化学
心臓血管生物学の領域において、高血圧、アテローム性動脈硬化症、心不全、発作、種々の冠動脈疾患、異脂肪血症（例えば、高いコレステロール（高コレステロール血症）および血清トリグリセリドの増加（高グリセリド血症））、癌および／または肥満のような、心臓血管、内皮または血管新生の障害の処置のための潜在的な標的を同定するために表現型試験を行った。この場合の表現型の試験には、血清コレステロールの測定を含めた。
【０８７０】
血中の脂質
手順：４匹の野生型および８匹のホモ接合体の雄性のコホートを、このアッセイにおいて試験した。コレステロールの平均血清レベルを測定し、同じ性別の（＋／＋）同腹仔と比較した。マウスについて、血液化学試験を行なうために、ＣＯＢＡＳ  Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００（Ｒｏｃｈｅ製）を用いた。
【０８７１】
結果：ホモ接合性の変異型マウスは、その同じ性別の野生型同腹仔および歴史的な平均と比較した場合、平均血清コレステロールレベルの減少を示した（約２０ｍｇ／ｄＬ）。まとめると、これらのノックアウト変異型マウスは、脂質代謝に関して、正の表現型を示した。従って、ＰＲＯ２３９４９を欠失する変異型マウスは、心臓血管疾患の処置についてのモデルとして役立ち得る。ＰＲＯ２３９４９またはこれをコードする遺伝子に対するアンタゴニストは、血中の脂質を調整し、そして、特に、正常なコレステロールを維持するのに有用である。このようなＰＲＯ２３９４９ポリペプチドに対するインヒビターもしくはアンタゴニストは、高血圧、アテローム性動脈硬化症、心不全、発作、種々の冠動脈疾患および／または肥満もしくは糖尿病のような異脂肪血症の処置に有用である。
【０８７２】
（ｃ）骨代謝：放射線学による表現型分析
骨代謝の領域において、本明細書においては、関節炎、骨粗鬆症、骨減少症、および大理石骨病の処置のための標的を同定し、ならびに、骨治癒を促進する標的を同定した。
試験には、以下を含めた：
大腿骨および椎骨についての骨塩密度の測定のためのＤＥＸＡ
海綿質および皮質骨の両方についての骨塩密度の、非常に高い解像度および非常に高い感度の測定のための、マイクロＣＴ。
【０８７３】
Ｄｅｘａ分析−試験の説明：
手順：４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体および８匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重Ｘ線吸収骨塩定量（ＤＥＸＡ）を首尾よく使用して、総組織質量（ＴＴＭ）における変化を同定した。麻酔した動物を試験し、骨塩含量（ＢＭＣ）、ＢＭＣ／ＬＢＭ比、容積測定による骨塩密度（ｖＢＭＤ）、全身のＢＭＤ、大腿骨のＢＭＤ、および椎骨のＢＭＤを測定した。
【０８７４】
マウスを、Ａｖｅｒｔｉｎ（１．２５％の２，２，２，トリブロモエタノール、２０ｍｌ／体重ｋｇ）を腹腔内注射して麻酔をかけ、体長および体重を測定し、次いで、マウスを、ＤＥＸＡスキャンのために、ＰＩＸＩｍｕｓＴＭデンシトメーター（Ｌｕｎａｒ  Ｉｎｃ．）のプラットフォーム上に、腹臥位で置いた。Ｌｕｎａｒ  ＰＩＸＩｍｕｓソフトウェアを用いて、目的の領域（ＲＯＩ）［すなわち、全身、椎骨、および両大腿骨］において骨塩密度（ＢＭＤ）および脂肪組成（％脂肪）および総組織質量（ＴＴＭ）を決定した。
【０８７５】
骨のマイクロＣＴ分析：
手順：また、マイクロＣＴを用いて、ＢＭＤの非常に感度の高い測定値を得た。１つの椎骨および１つの大腿骨を、４匹の野生型および８匹のホモ接合性マウスのコホートから採取した。以下について測定を行なった：第５腰椎骨の海綿質容積、小柱の厚み、結合密度、ならびに大腿骨の中心軸の総骨面積および皮質の厚み。マイクロＣＴ４０は、骨の質量および構造に関する詳細な情報を提供した。複数の骨を、サンプルホルダーに入れ、自動的にスキャンした。機器のソフトウェアを用いて、分析のための目的の領域を選択した。第５腰椎骨（ＬＶ５）において、１６マイクロメートルの解像度で海綿質のパラメーターを分析し、そして、大腿骨の中心軸において、２０マイクロメートルの解像度で皮質骨のパラメーターを分析した。
【０８７６】
マイクロＣＴ分析の結果：雄性の（−／−）マウスは、その同じ性別の（＋／＋）同腹仔および歴史的な平均と比較した場合、大腿骨中心軸の皮質の厚みおよび断面積の平均の顕著な減少を示した［分析した野生型／ヘテロ接合体／ホモ接合体の比は、４／４／８であった］。
【０８７７】
これらの結果は、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチドをコードする遺伝子を欠失するノックアウト変異型マウスが、密度の減少、そしておそらくは、骨折につながる骨のもろさと共に、骨質量の減少により特徴付けられる有意な骨質量の減少と共に、異常な骨代謝を示すことを実証する。骨塩密度の減少に関連し得る、腎臓、甲状腺または副腎の機能不全を示唆する、高カルシウム血症、高血糖またはアルカリホスフェートの増加は、血液化学の検査において検出されなかった。骨塩密度の欠陥は、雄性のノックアウトマウスにおいてのみ見られたので、この骨の異常の知見は、テストステロンの欠損を示唆し得る。従って、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチドまたはそのアゴニストは、テストステロンのような男性ホルモンにより媒介される骨のホメオスタシスの維持に有用である。さらに、ＰＲＯ２３９４９またはこれをコードする遺伝子は、骨のホメオスタシスの維持に有用であり、そして、骨治癒において、または、関節炎もしくは骨粗鬆症の処置のために重要である；一方で、ＰＲＯ２３９４９またはこれをコードする遺伝子に対するアンタゴニストは、関節炎、骨粗鬆症および骨減少症のような異常な骨代謝を伴う炎症性疾患を含む、異常な、もしくは病理学的な障害をもたらす。
【０８７８】
（ｄ）腫瘍学による表現型分析
腫瘍学の領域において、本明細書において、固形腫瘍、リンパ腫および白血病の処置のために標的を同定した。
【０８７９】
成体皮膚細胞の増殖：
手順：皮膚細胞を、１６週齢の動物（２匹の野生型および４匹のホモ接合体）から単離した。これらを、初代線維芽細胞培養物へと発生させ、そして、線維芽細胞の増殖速度を、厳密に制御したプロトコールにて測定した。過増殖性および低増殖性の表現型を検出するこのアッセイの能力を、ｐ５３およびＫｕ８０により実証した。増殖を、ＢｒｄＵの取り込みを用いて測定した。
【０８８０】
具体的には、これらの研究において、皮膚の線維芽細胞の増殖アッセイを用いた。標準的な培養における細胞数の増加を、相対的な増殖能力の指標として用いた。初代線維芽細胞を、野生型マウスおよび変異型マウスから採取した皮膚の生検から樹立した。５万個の細胞の、二連または三連の培養物をプレーティングし、そして、６日間成長させた。培養期間の終わりに、培養物中に存在する細胞の数を、電子粒子計数装置を用いて決定した。
【０８８１】
結果：雌性の（−／−）マウスは、その同じ性別の（＋／＋）同腹仔および歴史的な平均と比較した場合、皮膚の線維芽細胞の増殖速度の減少を示した（注：雌のみを試験した）［分析した野生型／ヘテロ接合体／ホモ接合体の比は、２／０／４であった］。
【０８８２】
従って、ホモ接合性の雌性変異型マウスは、低増殖性の表現型を示した。これらの知見により示唆されるように、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチドまたはこれをコードする遺伝子のアンタゴニストは、異常な細胞増殖を減少させるのに有用である。
【０８８３】
（Ｓ．ＤＮＡ５０９２０−１３２５（ＵＮＱ３６１）遺伝子破壊を含むマウスの作製および分析）
これらのノックアウト実験において、ＰＲＯ６９７ポリペプチドをコードする遺伝子（ＤＮＡ５０９２０−１３２５（ＵＮＱ３６１）と称される）を破壊した。これらの研究についてのこの遺伝子特有の情報は、以下の通りである：変異型マウスの遺伝子は、以下に対応する：ヌクレオチド参照番号：ＢＣ０１４７２２、すなわち、Ｍｕｓｍｕｓｃｕｌｕｓ，分泌型縮れ関連配列タンパク質（ｆｒｉｚｚｌｅｄ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ）２，クローンＭＧＣ：２５２９９  ＩＭＡＧＥ：４４８７４６９；タンパク質参照番号：ＮＰ＿０３３１７０、すなわち、分泌方縮れ関連配列タンパク質２；間質細胞由来因子５；分泌型縮れ関連配列タンパク質５［Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ］；ヒト遺伝子配列参照番号：ＡＫ０７５３７２、すなわち、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  ｃＤＮＡ  ＰＳＥＣ００６０  ｆｉｓ，クローンＮＴ２ＲＰ２０００６３８，Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ膵臓腫瘍関連タンパク質（ＦＫＳＧ１２）に非常に類似；ヒトタンパク質の配列は、参照番号：ＡＡＨ０８６６６（間質細胞由来因子５［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］と類似）に対応する。
【０８８４】
変異された遺伝子は、縮れ関連配列タンパク質２（Ｓｆｒｐ２）であり、これは、ヒトＳＦＲＰ２（Ｈｓ．３１３８６）ある。ＳＦＲＰ２は、分泌型縮れ関連タンパク質２をコードする。このタンパク質はまた、Ｓｄｆ５、ＡＩ８５１５９６、間質細胞由来因子５、分泌型縮れ関連配列タンパク質５、ＦＲＰ  ２、ＳＡＲＰ１、ＳＤＦ  ５、および分泌型アポトーシス関連タンパク質１としても公知である。
【０８８５】
縮れタンパク質は、Ｗｎｔ様のシグナル伝達タンパク質の膜貫通型レセプターである。分泌型縮れ関連タンパク質は、Ｗｎｔ型のタンパク質と細胞外で相互作用し、それによって、Ｗｎｔ型のタンパク質の、膜結合タンパク質と相互作用する有用性を調節する。全体として、このプロセスは、細胞内プロセスの際に、Ｗｎｔファミリータンパク質の衝撃の調子を合わせると考えられる（ＯＭＩＭ  ６０４１５７；Ｒａｔｔｎｅｒら，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．９４（７）：２８５９−６３（１９９７））。
【０８８６】
ＳＦＲＰ２でトランスフェクトしたヒト細胞株は、アポトーシス誘発因子に対してより感受性になる（Ｍｅｌｋｏｎｙａｎら，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．９４（２５）：１３６３６−４１（１９７７））。ＳＦＲＰ２は、腎臓の変性プロセス（Ｊｏｎｅｓら，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．４１（６）：１２９７−３０１（２０００））、神経細胞前駆体の形成（Ａｕｂｅｒｔら，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０（１２）：１２４０−５（２００２））、または、筋肉のプロセス（Ｌｅｖｉｎら，Ｊ  Ｍｕｓｃｌｅ  Ｒｅｓ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｔｉｌ．２２（４）：３６１−９（２００１））にさえ関与し得る。
【０８８７】
標的化した変異もしくはジーントラップによる変異を、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ株に由来する胚性幹（ＥＳ）細胞において作製した。キメラマウスを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊのアルビノマウスと交配させて、Ｆ１のヘテロ接合性の動物を作製した。これらの子孫を交雑させて、Ｆ２の野生型子孫、ヘテロ接合性変異型子孫、およびホモ接合性変異型子孫を作製した。ごくたまに、例えば、キメラからＦ１マウスがほとんど得られない場合、Ｆ１のヘテロ接合性のマウスを、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７雑種マウスと交配させて、交雑のためのさらなるヘテロ接合性の動物を得て、Ｆ２マウスを作製した。この世代からのマウスについて、レベルＩの表現型分析を行なった。
【０８８８】
【化４６】
2007536931.tif 000070
変異型：レトロウイルス挿入（ＯＳＴ）
レトロウイルス挿入は、２９５アミノ酸のタンパク質において、アミノ酸１６４をコードするエキソンの前の遺伝子を破壊した（ＮＣＢＩ登録番号ＮＰ＿０３３１７０）。
【０８８９】
標的遺伝子の野生型の発現は、胚性幹（ＥＳ）細胞、および、ＲＴ−ＰＣＲにより試験した１３全ての成体組織サンプルの中でも、脳、肺、腎臓、皮膚線維芽細胞、心臓および脂肪組織において検出された。ＲＴ  ＰＣＲ分析により、分析した（−／−）マウスにおいては、転写が起こっていなかったことが明らかとなった。
【０８９０】
（１．表現型分析（破壊した遺伝子：ＤＮＡ５０９２０−１３２５（ＵＮＱ３６１）について）
（ａ）全体的な表現型のまとめ
ヒト分泌型縮れ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）のオルソログをコードする遺伝子の変異は、変異型（−／−）マウスが、オボアルブミンチャレンジに対する応答の低下もしくは欠失を示したという観察をもたらした。雄性の（−／−）マウスは、骨塩含量、除脂肪体重および骨塩密度の増加を有するようであった。雌性の（−／−）マウスは、総組織質量および脂肪の減少を有した。病理は、１匹の（−／−）マウスにおける、慢性の炎症を伴う限局的な肝臓凝固性壊死と、子宮内膜の乳頭過形成を広める。ＲＴ−ＰＣＲによれば、転写は起こっていなかった。
【０８９１】
（ｂ）免疫学による表現型分析
免疫が関連する疾患および炎症性疾患は、複合体の出現または結果をほとんどもたらさず、そして、しばしば、正常な生理学において損傷もしくは傷害に対して重要な、複数の相互に関連した生物学的経路が、この損傷もしくは傷害からの修復を開始し、そして、外来生物に対して、生得的な防御および獲得された防御を提示し始める。疾患または病状は、これらの正常な生理学的経路が、応答の強度に直接的に関連してか、異常な調節もしくは過度の刺激の結果としてか、そのもの自体に対する反応としてか、または、これらの組み合わせとしてのいずれかで、さらなる損傷もしくは傷害をもたらす場合に生じる。
【０８９２】
これらの疾患の発生は、しばしば、多工程の経路を必要とし、そして、しばしば、複数の異なる生物学的な系／経路を必要とするが、これらの経路のうちの１つ以上における、重要な点におけるインターベンションは、寛解性の効果もしくは治療効果を有し得る。治療的なインターベンションは、有害なプロセス／経路の拮抗、または、有益なプロセス／経路の刺激のいずれかによって生じ得る。
【０８９３】
Ｔリンパ球（Ｔ細胞）は、哺乳動物の免疫応答の重要な構成要素である。Ｔ細胞は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）内の遺伝子によりコードされる自己の分子と会合した抗原を認識する。この抗原は、抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片などの表面上に、ＭＨＣ分子と共に提示され得る。Ｔ細胞系は、宿主の哺乳動物に健康への脅威を突きつける、これらの変質された細胞を排除する。Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞および細胞傷害性Ｔ細胞を含む。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞上の抗原−ＭＨＣ複合体を認識した後、広範囲に増殖する。ヘルパーＴ細胞もまた、Ｂ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、および免疫応答に関与する種々の他の細胞の活性化において中心的な役割を果たす、種々のサイトカイン（すなわち、リンホカイン）を分泌する。
【０８９４】
多くの免疫応答において、炎症性細胞は、傷害または感染の部位に潜入する。遊走細胞は、罹患組織の組織学的検査によって検査され得るように、好中球性、好酸球性、単球性またはリンパ球性であり得る。Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ編，１９９４，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．を参照のこと。
【０８９５】
多くの免疫関連疾患が公知であり、そして、これらは、広範囲に研究されている。このような疾患としては、免疫媒介性の炎症性疾患（例えば、慢性関節リウマチ、免疫媒介性の腎疾患、肝胆嚢疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬および喘息）、非免疫媒介性の炎症性疾患、感染病、免疫不全疾患、新生物形成、および移植片拒絶などが挙げられる。免疫学の領域において、炎症および炎症性障害の処置のための標的が同定された。
【０８９６】
免疫学の領域において、炎症および炎症性障害の処置のための標的が、本明細書において同定された。１つの例において、免疫関連の疾患は、免疫応答を抑制することによって処置され得る。免疫刺激活性を有する分子を阻害する中和抗体を用いることは、免疫媒介性疾患および炎症性疾患の処置において有用である。免疫応答を阻害する分子は、（タンパク質によって直接的に、または、抗体のアゴニストを使用することによって）免疫応答を阻害し、従って、免疫関連疾患を寛解するために利用され得る。
【０８９７】
以下の試験を実施した：
オボアルブミンチャレンジ
手順：このアッセイを、８匹の野生型および１６匹のホモ接合体について行なった。トリオボアルブミン（ＯＶＡ）は、Ｔ細胞依存性抗原であり、これは、一般に、マウスにおける抗原特異的な免疫応答を研究するためのモデルタンパク質として使用される。ＯＶＡは、非毒性かつ不活性であり、従って、免疫応答が誘導されない場合でさえ、動物に対して害を及ぼさない。マウスのＯＶＡに対する免疫応答は、Ｔ細胞応答を惹起するための免疫優性ペプチドが同定されている程度に十分に特徴付けられている。抗ＯＶＡ抗体は、抗体連結イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いた免疫の後８〜１０日で検出可能であり、そして、抗体の異なるアイソタイプの決定は、遺伝子操作されたマウスにおいて不十分な応答をもたらし得る、複雑なプロセスに関するさらなる情報を提供する。
【０８９８】
上述のように、このプロトコールは、マウスが抗原特異的な免疫応答を惹起する能力を評価する。動物に、完全フロイントアジュバント（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｆｅｕｎｄ’ｓ  Ａｄｊｕｖａｎｔ）中に乳化させた５０ｍｇのトリオボアルブミンをＩＰ注射し、１４日後に、抗オボアルブミン抗体（ＩｇＭ、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２のサブクラス）の血清中力価を測定した。血清サンプル中のＯＶＡ特異的抗体の量は、９６ウェルサンプルプレートをスキャンする機器によって生成される、光学密度（ＯＤ）の値に比例する。各血清サンプルの一連の限界希釈について、データを収集した［分析した野生型／ヘテロ接合体／ホモ接合体の比は、１８／４／１６であった］。
【０８９９】
このチャレンジの結果：（−／−）マウスは、その（＋／＋）同腹仔と比較した場合、オボアルブミンチャレンジに対して、平均血清ＩｇＧ２ａの減少を示した。従って、これらのノックアウトマウスは、Ｔ細胞依存性のＯＶＡ抗原に対してＯＶＡ特異的な抗体の応答を惹起する能力の減少を示した。これらの結果は、不十分なＴＨ１応答と一致する。ＰＲＯ６９７ポリペプチドまたはそのアゴニストは、それゆえ、免疫系を刺激することが予想され、この効果が、白血病、および他のタイプの癌の場合のような個体に対して、ならびに、ＡＩＤＳ罹患患者のような、免疫無防備状態の患者において有用である場合に、有用性を見出すことを示唆する。従って、ＰＲＯ６９７ポリペプチドのインヒビターもしくはアンタゴニストは、免疫応答を阻害するために有用であり、そして、例えば、移植片拒絶、または、移植片対宿主病の場合に、有害な免疫応答を抑制するための有用な候補である。
【０９００】
（ｃ）骨代謝：放射線学による表現型分析
骨代謝の領域において、本明細書においては、関節炎、骨粗鬆症、骨減少症、および大理石骨病の処置のための標的を同定し、ならびに、骨治癒を促進する標的を同定した。試験は、以下を含めた：
大腿骨および椎骨についての骨塩密度の測定のためのＤＥＸＡ
海綿質および皮質骨の両方についての骨塩密度の、非常に高い解像度および非常に高い感度の測定のための、マイクロＣＴ。
【０９０１】
Ｄｅｘａ分析−試験の説明：
手順：４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体および８匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重Ｘ線吸収骨塩定量（ＤＥＸＡ）を首尾よく使用して、総組織質量（ＴＴＭ）における変化を同定した。麻酔した動物を試験し、骨塩含量（ＢＭＣ）、ＢＭＣ／ＬＢＭ比、容積測定による骨塩密度（ｖＢＭＤ）、全身のＢＭＤ、大腿骨のＢＭＤ、および椎骨のＢＭＤを測定した。
【０９０２】
マウスを、Ａｖｅｒｔｉｎ（１．２５％の２，２，２，トリブロモエタノール、２０ｍｌ／体重ｋｇ）を腹腔内注射して麻酔をかけ、体長および体重を測定し、次いで、マウスを、ＤＥＸＡスキャンのために、ＰＩＸＩｍｕｓＴＭデンシトメーター（Ｌｕｎａｒ  Ｉｎｃ．）のプラットフォーム上に、腹臥位で置いた。Ｌｕｎａｒ  ＰＩＸＩｍｕｓソフトウェアを用いて、目的の領域（ＲＯＩ）［すなわち、全身、椎骨、および両大腿骨］において骨塩密度（ＢＭＤ）および脂肪組成（％脂肪）および総組織質量（ＴＴＭ）を決定した。
【０９０３】
ＤＥＸＡの結果：雄性（−／−）マウスは、その同じ性別の（＋／＋）同腹仔および歴史的な平均と比較した場合、骨塩密度（ＢＭＤ）、骨塩含量（ＢＭＣ）、および除脂肪体重（ＬＢＭ）の増加示した。さらに、雌性（−／−）マウスは、総組織質量（ＴＴＭ）および脂肪率の減少を示した。これらの結果は、異常な骨代謝と一致する。これらの結果は、ノックアウトの雄性変異型表現型が、大理石骨病のような骨の異常を伴うことを示唆する。大理石骨病は、骨を異常にもろくする、骨の異常な厚化および硬化により特徴付けられる状態である。従って、ＰＲＯ６９７ポリペプチドまたはそのアゴニストは、大理石骨病の処置に有益である。骨塩含量、ならびに、全身および大腿骨の骨塩密度の増加を伴う表現型は、この負の効果を模倣する因子（例えば、ＰＲＯ６９７ポリペプチドのアンタゴニスト）が、骨治癒において有用であることを示唆する。雌性の変異型（−／−）マウスは、総組織質量および脂肪の減少を示し、これは、組織が消耗している状態を示唆する。
【０９０４】
（Ｔ．ＤＮＡ６７９６２−１６４９（ＵＮＱ７４９）遺伝子破壊を含むマウスの作製および分析）
これらのノックアウト実験において、ＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードする遺伝子（ＤＮＡ６７９６２−１６４９（ＵＮＱ７４９）と称される）を破壊した。これらの研究についてのこの遺伝子特有の情報は、以下の通りである：変異型マウスの遺伝子は、以下に対応する：ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿０１３６５９、すなわち、Ｍｕｓｍｕｓｃｕｌｕｓセマドメイン，免疫グロブリンドメイン（Ｉｇ），膜貫通ドメイン（ＴＭ）および短い細胞質ドメイン，（セマフォリン）４Ｂ（Ｓｅｍａ４ｂ）；タンパク質参照番号：ＩＰＩ００２２２２２０−登録番号：ＩＰＩ００２２２２２０  ＮＩＤ、すなわち、Ｍｕｓｍｕｓｃｕｌｕｓ（マウス）．ＳＥＭＡＰＨＯＲＩＮ  ４Ｂ．  ＩＰＩ＿ｍｏｕｓｅ；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ＿０２０２１０、すなわち、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓセマドメイン，免疫グロブリンドメイン（Ｉｇ），膜貫通ドメイン（ＴＭ）および短い細胞質ドメイン，（セマフォリン）４Ｂ（ＳＥＭＡ４Ｂ），転写改変体１；ヒトタンパク質の配列は、参照番号：Ｑ９ＮＰＲ２、すなわち、セマフォリン４Ｂ前駆体に対応する。
【０９０５】
目的の遺伝子は、Ｓｅｍａ４ｂ（セマドメイン、免疫グロブリンドメイン（Ｉｇ）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）および短い細胞質ドメイン，（セマフォリン）４Ｂ）であり、これは、ヒトＳＥＭＡ４Ｂのオルソログである。別名としては、ＳｅｍＣおよびＳｅｍａｃが挙げられる。ＳＥＭＡ４Ｂは、セマフォリンファミリーに属する、予想されるＩ型の原形質膜タンパク質である。このタンパク質は、セマドメインと、免疫グロブリン様Ｃ２型ドメインと、膜貫通セグメントと、短い細胞質セグメントとから構成される、細胞外セグメントを含む。セマフォリンは、分泌型としても、Ｉ型の膜タンパク質としても存在する。ＳＥＭＡ４Ｂは、プレキシンドメインを含有するタンパク質もしくはニューロフィリンのようなリガンドと結合するレセプターとして機能するようである。ＳＥＭＡ４Ｂの生物学的な役割は、未知である；しかし、セマフォリンは、一般に、軸索の案内、細胞の移動、癌および免疫の調節において役割を果たす（Ｐｕｓｃｈｅｌら，Ｎｅｕｒｏｎ  １４（５）：９４１−８（１９９５）；Ｗｉｌｌｉａｍｓ  Ｈｏｇａｒｔｈら，Ｊ  Ｃｏｍｐ  Ｎｅｕｒｏｌ  ４２３（４）：５６５−７８（２０００）；Ｈｅら，Ｓｃｉ  ＳＴＫＥ（２００２）（１１９）：ＲＥ１；ＴｒｕｓｏｌｉｎｏおよびＣｏｍｏｇｌｉｏ，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  ２（４）：２８９−３００（２００２）；ＫｕｍａｎｏｇｏｈおよびＫｉｋｕｔａｎｉ，Ａｄｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ８１：１７３−９８（２００３）；ＰａｓｔｅｒｋａｍｐおよびＫｏｌｏｄｋｉｎ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  １３（１）：７９−８９（２００３））。
【０９０６】
標的化した変異もしくはジーントラップによる変異を、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ株に由来する胚性幹（ＥＳ）細胞において作製した。キメラマウスを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊのアルビノマウスと交配させて、Ｆ１のヘテロ接合性の動物を作製した。これらの子孫を交雑させて、Ｆ２の野生型子孫、ヘテロ接合性変異型子孫、およびホモ接合性変異型子孫を作製した。ごくたまに、例えば、キメラからＦ１マウスがほとんど得られない場合、Ｆ１のヘテロ接合性のマウスを、１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７雑種マウスと交配させて、交雑のためのさらなるヘテロ接合性の動物を得て、Ｆ２マウスを作製した。この世代からのマウスについて、レベルＩの表現型分析を行なった。
【０９０７】
【化４７】
2007536931.tif 000071
野生型の発現パネルは、試験しなかった。ＲＴ  ＰＣＲ分析により、分析したホモ接合性の変異型マウス（Ｍ  ４５）においては、転写が起こっていなかったことが明らかとなった。
【０９０８】
（１．表現型分析（破壊した遺伝子：ＤＮＡ６７９６２−１６４９（ＵＮＱ７４９）について）
（ａ）全体的な表現型のまとめ
ヒトセマフォリン４Ｂ（ＳＥＭＡ４Ｂ）のオルソログをコードする遺伝子の変異は、変異型の雄性（−／−）マウスが、容積測定による骨塩密度（ｖＢＭＤ）、骨塩密度（ＢＭＤ）、骨塩含量（ＢＭＣ）、総組織質量（ＴＴＭ）、除脂肪体重（ＬＢＭ）およびＢＭＣ／ＬＢＭマウスの減少を示したという知見をもたらした。８匹中２匹の（−／−）マウス（２５％）が、排尿を行った。８匹中３匹の（−／−）マウス（３８％）が、２０秒間の尾懸垂応答について反応を示した−実際に、同側の脚をつかまず、そして、８匹中１匹の（−／−）マウス（１３％）が、２０秒間の尾懸垂応答において−反対側の脚をつかまない。ＲＴ−ＰＣＲによれば、転写は起こっていなかった。また、ホモ接合体の予測数も減少しており（有意差＝０．０４８１２）、ある程度の生存率の減少を示唆する。
【０９０９】
（ｂ）骨代謝：放射線学による表現型分析
骨代謝の領域において、本明細書においては、関節炎、骨粗鬆症、骨減少症、および大理石骨病の処置のための標的を同定し、ならびに、骨治癒を促進する標的を同定した。
試験は以下を含んだ：
大腿骨および椎骨についての骨塩密度の測定のためのＤＥＸＡ
海綿質および皮質骨の両方についての骨塩密度の、非常に高い解像度および非常に高い感度の測定のための、マイクロＣＴ。
【０９１０】
Ｄｅｘａ分析−試験の説明：
手順：４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体および８匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重Ｘ線吸収骨塩定量（ＤＥＸＡ）を首尾よく使用して、総組織質量（ＴＴＭ）における変化を同定した。麻酔した動物を試験し、骨塩含量（ＢＭＣ）、ＢＭＣ／ＬＢＭ比、容積測定による骨塩密度（ｖＢＭＤ）、全身のＢＭＤ、大腿骨のＢＭＤ、および椎骨のＢＭＤを測定した。
【０９１１】
マウスを、Ａｖｅｒｔｉｎ（１．２５％の２，２，２，トリブロモエタノール、２０ｍｌ／体重ｋｇ）を腹腔内注射して麻酔をかけ、体長および体重を測定し、次いで、マウスを、ＤＥＸＡスキャンのために、ＰＩＸＩｍｕｓＴＭデンシトメーター（Ｌｕｎａｒ  Ｉｎｃ．）のプラットフォーム上に、腹臥位で置いた。Ｌｕｎａｒ  ＰＩＸＩｍｕｓソフトウェアを用いて、目的の領域（ＲＯＩ）［すなわち、全身、椎骨、および両大腿骨］において骨塩密度（ＢＭＤ）および脂肪組成（％脂肪）および総組織質量（ＴＴＭ）を決定した。
【０９１２】
結果：雄性（−／−）マウスが、容積測定による骨塩密度（ｖＢＭＤ）、骨塩密度（ＢＭＤ）、骨塩含量（ＢＭＣ）、総組織質量（ＴＴＭ）、除脂肪体重（ＬＢＭ）およびＢＭＣ／ＬＢＭの減少を伴う、骨の変化を示した。これらの結果は、ノックアウト変異型マウスが、密度の減少、そしておそらくは、骨折につながる骨のもろさと共に、骨質量の減少により特徴付けられる骨粗鬆症に類似する有意な骨の減少と共に、異常な骨代謝を示すことを実証する。従って、ＰＲＯ１４８０またはこれをコードする遺伝子は、骨のホメオスタシスの維持において重要な役割を果たし、そして、骨治癒に、または、関節炎もしくは骨粗鬆症の処置のために有用である；一方で、ＰＲＯ１４８０アンタゴニスト（または、ＰＲＯ１４８０もしくはこれをコードする遺伝子のインヒビター）は、関節炎、骨粗鬆症および骨減少症のような（これらに限定されない）異常な骨代謝を伴う炎症性疾患を含む、異常な、もしくは病理学的な障害をもたらす。これらの研究に加え、（−／−）変異型マウスは、生存率の減少の兆候を示した。なぜならば、ホモ接合体の予測数が減少していたからである（有意差＝０．０４８１２）。
【０９１３】
（実施例２２：ハイブリダイゼーションプローブとしての、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０の使用）
以下の方法は、ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の、ハイブリダイゼーションプローブとしての使用を記載する。
【０９１４】
本明細書中に開示される、ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドの全長もしくは成熟型のコード配列を含むＤＮＡを、ヒト組織ｃＤＮＡライブラリーまたはヒト組織ゲノムライブラリーにおいて、相同なＤＮＡ（例えば、ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドの天然に存在する改変体をコードするＤＮＡ）をスクリーニングするためのプローブとして用いる。
【０９１５】
いずれかのライブラリーのＤＮＡを含むフィルターのハイブリダイゼーションおよび洗浄を、以下の高ストリンジェンシー条件下で行う。放射標識したＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０に由来するプローブの、上記フィルターへのハイブリダイゼーションを、５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、０．１％  ＳＤＳ、０．１％ピロリン酸ナトリウム、５０ｍＭ  リン酸ナトリウム、ｐＨ６．８、２×Ｄｅｎｈａｒｄｔ溶液および１０％硫酸デキストランの溶液中、４２℃にて２０時間行う。フィルターの洗浄を、０．１×ＳＳＣおよび０．１％  ＳＤＳの水溶液中で４２℃にて行う。
【０９１６】
ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドの全長ネイティブ配列をコードするＤＮＡと所望の配列同一性を有するＤＮＡは、次いで、当該分野において公知の標準的な技術を用いて同定され得る。
【０９１７】
（実施例２３：Ｅ．ｃｏｌｉにおける、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０の発現）
この実施例は、Ｅ．ｃｏｌｉにおける組換え発現による、ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドのグリコシル化されていない形態の調製を例示する。
【０９１８】
ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を、まず、選択されたＰＣＲプライマーを用いて増幅する。これらのプライマーは、選択された発現ベクター上の制限酵素部位に対応する、制限酵素部位を含むべきである。種々の発現ベクターが使用され得る。適切なベクターの一例は、アンピシリン耐性およびテトラサイクリン耐性の遺伝子を含む、ｐＢＲ３２２（Ｅ．ｃｏｌｉ由来；Ｂｏｌｉｖａｒら，Ｇｅｎｅ，２：９５（１９７７）を参照のこと）である。ベクターを、制限酵素で消化し、脱リン酸化する。次いで、ＰＣＲで増幅した配列を、ベクター内にライゲーションする。ベクターは、好ましくは、抗生物質耐性遺伝子、ｔｒｐプロモーター、ポリｈｉｓリーダー（最初の６個のＳＴＩＩ個ドン、ポリｈｉｓ配列およびエンテロキナーゼ切断部位を含む）、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７もしくはＰＲＯ１４８０のコード領域、λ転写終結因子、およびａｒｇＵ遺伝子をコードする配列を含む。
【０９１９】
次いで、ライゲーション混合物を用いて、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、上掲に記載される方法を用いて、選択されたＥ．ｃｏｌｉ株を形質転換する。形質転換体を、ＬＢプレート上で増殖する能力により同定し、次いで、抗生物質耐性コロニーを選択する。プラスミドＤＮＡを単離し、そして、制限酵素分析およびＤＮＡ配列決定により確認し得る。
【０９２０】
選択されたクローンを、抗生物質を補充したＬＢブロスのような液体培地中で一晩増殖させ得る。この一晩の培養物は、その後、大規模な培養へと播種するために使用し得る。次いで、細胞を、所望の光学密度まで増殖させ、この間に、発現プロモーターがオンに切り替わる。
【０９２１】
さらに数時間細胞を培養した後、細胞を遠心分離により回収し得る。遠心分離により得られた細胞ペレットは、当該分野で公知の種々の薬剤を用いて可溶化し得、そして、この可溶化したＰＲＯ２５６タンパク質、ＰＲＯ３４４２１タンパク質、ＰＲＯ３３４タンパク質、ＰＲＯ７７０タンパク質、ＰＲＯ９８３タンパク質、ＰＲＯ１００９タンパク質、ＰＲＯ１１０７タンパク質、ＰＲＯ１１５８タンパク質、ＰＲＯ１２５０タンパク質、ＰＲＯ１３１７タンパク質、ＰＲＯ４３３４タンパク質、ＰＲＯ４３９５タンパク質、ＰＲＯ４９１９２タンパク質、ＰＲＯ９７９９タンパク質、ＰＲＯ２１１７５タンパク質、ＰＲＯ１９８３７タンパク質、ＰＲＯ２１３３１タンパク質、ＰＲＯ２３９４９タンパク質、ＰＲＯ６９７タンパク質またはＰＲＯ１４８０タンパク質は、次いで、タンパク質の強い結合を可能にする条件下で、金属キレート化カラムを用いて精製し得る。
【０９２２】
ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０は、以下の手順を用いて、ポリ−Ｈｉｓタグ化した形状で、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて発現させ得る。ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０をコードするＤＮＡを、まず、選択されたＰＣＲプライマーを用いて増幅する。これらのプライマーは、選択された発現ベクター上の制限酵素部位に対応する、制限酵素部位と、効率的かつ信頼性のある翻訳開始、金属キレート化カラムにおける迅速な精製、およびエンテロキナーゼを用いたタンパク質分解による除去を提供する、他の有用な配列とを含む。次いで、このＰＣＲで増幅した、ポリ−Ｈｉｓタグ化配列を、発現ベクター中にライゲーションし、これを用いて、株５２（Ｗ３１１０  ｆｕｈＡ（ｔｏｎＡ）ｌｏｎ  ｇａｌＥ  ｒｐｏＨｔｓ（ｈｔｐＲｔｓ）ｃｌｐＰ（ｌａｃＩｑ）ベースのＥ．ｃｏｌｉ宿主を形質転換する。形質転換体を、まず、Ｏ．Ｄ．６００が３５に達するまで、５０ｍｇ／ｍｌのカルベニシリンを含有するＬＢ中で、振盪させながら、３０℃にて増殖させる。次いで、この培養物を、ＣＲＡＰ培地（５００ｍＬの水中に、３．５７ｇの（ＮＨ４）２ＳＯ４、０．７１ｇのクエン酸ナトリウム・２Ｈ２Ｏ、１．０７ｇ  ＫＣｌ、５．３６ｇ  Ｄｉｆｃｏ酵母抽出物、５．３６ｇ  Ｓｈｅｆｆｉｅｌｄハイケース（ｈｙｃａｓｅ）ＳＦ、ならびに、１１０ｍＭ  ＭＰＯＳ、ｐＨ７．３、０．５５％（ｗ／ｖ）グルコースおよび７ｍＭ  ＭｇＳＯ４を混合することによって調製）中に５０〜１００倍希釈し、そして、３０℃にて振盪させながら、約２０〜３０時間増殖させる。サンプルを回収して、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析により発現を確認し、そして、バルクの培養物を遠心分離して、細胞をペレット状にする。細胞ペレットは、精製およびリフォールディング（ｒｅｆｏｌｄｉｎｇ）まで凍結する。
【０９２３】
０．５〜１Ｌの発酵物（ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ）からのＥ．ｃｏｌｉペースト（６〜１０ｇのペレット）を、７Ｍグアニジン、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ８．０の緩衝液中、１０容量（ｗ／ｖ）に再懸濁する。固体亜硫酸ナトリウムおよびテトラチオン酸ナトリウムを加えて、それぞれ、０．１Ｍおよび０．０２Ｍの最終濃度にし、そして、この溶液を、４℃にて一晩撹拌する。この工程により、亜硫酸化により全てのシステイン残基がブロックされた、変性タンパク質が生じる。この溶液を、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｕｌｔｒａｃｅｎｔｉｆｕｇｅにて、４０，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離する。上清を、３．５容量の金属キレートカラム緩衝液（６Ｍ  グアニジン、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ，ｐＨ７．４）で希釈し、そして、０．２２ミクロンフィルターに通して濾過して、清澄にする。この清澄にした抽出物を、金属キレートカラム緩衝液中で平衡化した５ｍｌのＱｕｉａｇｅｎ  Ｎｉ  ＮＴＡ金属キレートカラム上にロードする。このカラムを、５０ｍＭ  イミダゾール（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ，Ｕｔｒｏｌグレード）を含有するさらなる緩衝液（ｐＨ７．４）で洗浄する。タンパク質を、２５０ｍＭのイミダゾールを含有する緩衝液で溶出する。所望のタンパク質を含む画分をプールし、４℃にて保存する。そのアミノ酸配列に基づく、理論吸光係数を用いて、２８０ｎｍにおけるその吸光度によって推定する。
【０９２４】
このタンパク質を、上記サンプルを新たに調製したリフォールディング緩衝液（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ８．６、０．３Ｍ  ＮａＣｌ、２．５Ｍ尿素、５ｍＭ  システイン、２０ｍＭ  グリシンおよび１ｍＭ  ＥＤＴＡから構成される）中にゆっくりと希釈することによってリフォールディングする。リフォールディングの体積は、タンパク質の最終濃度が５０〜１００マイクログラム／ｍｌの間になるように選択する。リフォールディング溶液を、４℃にて１２〜３６時間、おだやかに撹拌する。リフォールディング反応を、（ｐＨ約３において）０．４％の最終濃度までＴＦＡを加えることによりクエンチする。このタンパク質をさらに精製する前に、溶液を０．２２ミクロンのフィルターに通して濾過し、そして、２〜１０％の最終濃度まで、アセトニトリルを加える。このリフォールディングしたタンパク質を、０．１％  ＴＦＡの移動緩衝液と、１０％〜８０％ののアセトニトリル勾配の溶出を用いる、Ｐｏｒｏｓ  Ｒ１／Ｈ逆相カラム上でのクロマトグラフィーに供する。Ａ２８０吸光度での画分のアリコートを、ＳＤＳポリアクリルアミドゲル上で分析し、そして、均質なリフォールディングされたタンパク質を含む画分をプールする。一般に、多くのタンパク質の適切にリフォールディングされた種は、最低濃度のアセトニトリルで溶出される。なぜならば、これらの種は、逆相樹脂と相互作用しないように疎水性の内側が遮蔽されている、最もコンパクトな種であるからである。凝集した種は、通常、より高いアセトニトリル濃度において溶出される。所望の形態からのタンパク質の誤ったフォールディング形態を除くことに加え、この逆相の工程はまた、サンプルから外毒素も除く。
【０９２５】
所望するようにフォールディングされたＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドを含む画分をプールし、そして、溶液に向けられた穏やかな窒素流を用いて、アセトニトリルを除去する。２０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ、ｐＨ６．８、０．１４Ｍ塩化ナトリウムおよび４％マンニトール中に、透析によってか、または、この処方緩衝液（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｂｕｆｆｅｒ）中で平衡化し、滅菌濾過したＧ２５  Ｓｕｐｅｒｆｉｎｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）樹脂を用いるゲル濾過によって、タンパク質を処方する（ｆｏｒｍｕｌａｔｅ）。
【０９２６】
（実施例２４：哺乳動物細胞における、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０の発現）
この実施例は、哺乳動物細胞における組換え発現による、ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドの潜在的なグリコシル化形態の調製を例示する。
【０９２７】
ベクターｐＲＫ５（１９８９年３月１５日に公開されたＥＰ  ３０７，２４７を参照のこと）を、発現ベクターとして用いる。必要に応じて、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のＤＮＡを、選択された制限酵素を用い、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，上掲に記載されたようなライゲーション法を使用して、ｐＲＫ５にライゲーションし、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０のＤＮＡを挿入させる。得られたベクターを、ｐＲＫ５−ＰＲＯ２５６、ｐＲＫ５−ＰＲＯ３４４２１、ｐＲＫ５−ＰＲＯ３３４、ｐＲＫ５−ＰＲＯ７７０、ｐＲＫ５−ＰＲＯ９８３、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１００９、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１１０７、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１１５８、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１２５０、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１３１７、ｐＲＫ５−ＰＲＯ４３３４、ｐＲＫ５−ＰＲＯ４３９５、ｐＲＫ５−ＰＲＯ４９１９２、ｐＲＫ５−ＰＲＯ９７９９、ｐＲＫ５−ＰＲＯ２１１７５、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１９８３７、ｐＲＫ５−ＰＲＯ２１３３１、ｐＲＫ５−ＰＲＯ２３９４９、ｐＲＫ５−ＰＲＯ６９７またはｐＲＫ５−ＰＲＯ１４８０と呼ぶ。
【０９２８】
選択される宿主細胞は、２９３細胞であり得る。ヒト２９３細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １５７３）を、胎仔ウシ血清、ならびに、必要に応じて栄養成分および／または抗生物質を補充したＤＭＥＭのような培地中で、組織培養プレートにて、コンフルエントになるまで増殖させる。約１０μｇのｐＲＫ５−ＰＲＯ２５６、ｐＲＫ５−ＰＲＯ３４４２１、ｐＲＫ５−ＰＲＯ３３４、ｐＲＫ５−ＰＲＯ７７０、ｐＲＫ５−ＰＲＯ９８３、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１００９、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１１０７、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１１５８、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１２５０、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１３１７、ｐＲＫ５−ＰＲＯ４３３４、ｐＲＫ５−ＰＲＯ４３９５、ｐＲＫ５−ＰＲＯ４９１９２、ｐＲＫ５−ＰＲＯ９７９９、ｐＲＫ５−ＰＲＯ２１１７５、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１９８３７、ｐＲＫ５−ＰＲＯ２１３３１、ｐＲＫ５−ＰＲＯ２３９４９、ｐＲＫ５−ＰＲＯ６９７またはｐＲＫ５−ＰＲＯ１４８０のＤＮＡを、約１μｇのＶＡ  ＲＮＡ遺伝子をコードするＤＮＡ［Ｔｈｉｍｍａｐｐａｙａら，Ｃｅｌｌ，３１：５４３（１９８２）］と混合し、そして、１ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．２２７Ｍ  ＣａＣｌ２（５００μｌ）に溶解する。この混合物に、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３５）、２８０ｍＭ  ＮａＣｌ、１．５ｍＭ  ＮａＰＯ４（５００μｌ）を滴下して加え、そして、２５℃にて１０分間、沈殿を形成させる。この沈殿を懸濁して、２９３細胞に加え、そして、３７℃にて約４時間、そのままにする。培養培地を吸引し、そして、３０秒かけてＰＢＳ中２０％グリセロール（２ｍｌ）を加える。次いで、２９３細胞を無血清培地で洗浄し、新しい培地を加え、そして、細胞を、約５日間インキュベートする。
【０９２９】
トランスフェクションから約２４時間後、培地を取り除き、そして、培地（単独）または２００μＣｉ／ｍｌの３５Ｓ−システインおよび２００μＣｉ／ｍｌの３５Ｓ−メチオニンを含有する培地と交換する。１２時間のインキュベーションの後、馴化培地を回収し、スピンフィルター上で濃縮し、そして、１５％  ＳＤＳゲル上にロードする。この処理したゲルを乾燥させ、そして、ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドの存在を明らかにするための選択された時間にわたって、フィルムに対して曝露させ得る。トランスフェクトした細胞を含む培養物は、（無血清培地中で）さらにインキュベートさせ得、そして、この培地を、選択されたバイオアッセイにおいて試験する。
【０９３０】
代替的な技術において、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０は、Ｓｏｍｐａｒｙｒａｃら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１２：７５７５（１９８１）により記載される、硫酸デキストラン法を用いて、一過的に２９３細胞内に導入し得る。２９３細胞を、撹拌フラスコ（ｓｐｉｎｎｅｒ  ｆｌａｓｋ）内で最大密度まで増殖し、そして、７００μｇのｐＲＫ５−ＰＲＯ２５６  ＤＮＡ、ｐＲＫ５−ＰＲＯ３４４２１  ＤＮＡ、ｐＲＫ５−ＰＲＯ３３４  ＤＮＡ、ｐＲＫ５−ＰＲＯ７７０  ＤＮＡ、ｐＲＫ５−ＰＲＯ９８３  ＤＮＡ、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１００９  ＤＮＡ、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１１０７  ＤＮＡ、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１１５８  ＤＮＡ、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１２５０  ＤＮＡ、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１３１７  ＤＮＡ、ｐＲＫ５−ＰＲＯ４３３４  ＤＮＡ、ｐＲＫ５−ＰＲＯ４３９５  ＤＮＡ、ｐＲＫ５−ＰＲＯ４９１９２  ＤＮＡ、ｐＲＫ５−ＰＲＯ９７９９  ＤＮＡ、ｐＲＫ５−ＰＲＯ２１１７５  ＤＮＡ、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１９８３７  ＤＮＡ、ｐＲＫ５−ＰＲＯ２１３３１  ＤＮＡ、ｐＲＫ５−ＰＲＯ２３９４９  ＤＮＡ、ｐＲＫ５−ＰＲＯ６９７  ＤＮＡまたはｐＲＫ５−ＰＲＯ１４８０  ＤＮＡを加える。この細胞を、まず、遠心分離により撹拌フラスコから濃縮し、そして、ＰＢＳで洗浄する。ＤＮＡデキストラン沈殿物を、４時間、細胞ペレット上でインキュベートする。この細胞を、２０％グリセロールで９０秒間処理し、組織培養培地で洗浄し、そして、組織培養培地、５μｇ／ｍｌのウシインシュリンおよび０．１μｇ／ｍｌのウシトランスフェリンを含有する撹拌フラスコ内に再び移す。約４日後、馴化培地を遠心分離して、ろ過し、細胞および砕片を除去する。発現されたＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０を含むサンプルは、次いで、濃縮して、あらゆる選択された方法（例えば、透析および／またはカラムクロマトグラフィー）により精製し得る。
【０９３１】
ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０は、ＣＨＯ細胞において発現され得る。ｐＲＫ５−ＰＲＯ２５６、ｐＲＫ５−ＰＲＯ３４４２１、ｐＲＫ５−ＰＲＯ３３４、ｐＲＫ５−ＰＲＯ７７０、ｐＲＫ５−ＰＲＯ９８３、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１００９、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１１０７、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１１５８、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１２５０、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１３１７、ｐＲＫ５−ＰＲＯ４３３４、ｐＲＫ５−ＰＲＯ４３９５、ｐＲＫ５−ＰＲＯ４９１９２、ｐＲＫ５−ＰＲＯ９７９９、ｐＲＫ５−ＰＲＯ２１１７５、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１９８３７、ｐＲＫ５−ＰＲＯ２１３３１、ｐＲＫ５−ＰＲＯ２３９４９、ｐＲＫ５−ＰＲＯ６９７またはｐＲＫ５−ＰＲＯ１４８０は、ＣａＰＯ４またはＤＥＡＥ−デキストランのような公知の試薬を用いて、ＣＨＯ細胞にトランスフェクトされ得る。上述のように、細胞培養物をインキュベートして、培地を、培養培地（単独）または３５Ｓ−メチオニンのような放射標識を含有する培地と交換する。ＰＲＯ２５６ポリペプチド、ＰＲＯ３４４２１ポリペプチド、ＰＲＯ３３４ポリペプチド、ＰＲＯ７７０ポリペプチド、ＰＲＯ９８３ポリペプチド、ＰＲＯ１００９ポリペプチド、ＰＲＯ１１０７ポリペプチド、ＰＲＯ１１５８ポリペプチド、ＰＲＯ１２５０ポリペプチド、ＰＲＯ１３１７ポリペプチド、ＰＲＯ４３３４ポリペプチド、ＰＲＯ４３９５ポリペプチド、ＰＲＯ４９１９２ポリペプチド、ＰＲＯ９７９９ポリペプチド、ＰＲＯ２１１７５ポリペプチド、ＰＲＯ１９８３７ポリペプチド、ＰＲＯ２１３３１ポリペプチド、ＰＲＯ２３９４９ポリペプチド、ＰＲＯ６９７ポリペプチドもしくはＰＲＯ１４８０ポリペプチドの存在を決定した後、培養培地を、無血清培地と交換し得る。好ましくは、培養物は、約６日間インキュベートし、その後、馴化培地を回収する。発現されたＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０を含む培地は、次いで、濃縮して、あらゆる選択された方法により精製し得る。
【０９３２】
エピトープでタグ化した、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０もまた、宿主ＣＨＯ細胞において発現させ得る。ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０を、ｐＲＫ５ベクターからサブクローニングし得る。サブクローンの挿入物を、ＰＣＲに供して、ポリ−ｈｉｓタグのような選択されたエピトープタグを用いて、バキュロウイルス発現ベクター内へとインフレームで融合させ得る。ＰＲＯ２５６挿入物、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ３４４２１挿入物、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ３３４挿入物、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ７７０挿入物、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ９８３挿入物、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ１００９挿入物、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ１１０７挿入物、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ１１５８挿入物、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ１２５０挿入物、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ１３１７挿入物、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ４３３４挿入物、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ４３９５挿入物、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ４９１９２挿入物、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ９７９９挿入物、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ２１１７５挿入物、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ１９８３７挿入物、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ２１３３１挿入物、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ２３９４９挿入物、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ６９７挿入物またはポリＨｉｓ化ＰＲＯ１４８０挿入物は、次いで、安定なクローンを選択するために、ＤＨＦＲのような選択マーカーを含有すうるＳＶ４０駆動ベクター内にサブクローニングし得る。最終的に、ＣＨＯ細胞を、ＳＶ４０駆動ベクターを用いて（上記のように）トランスフェクトし得る。上記のように、発現を確認するために、標識が行なわれ得る。発現されたポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ２５６、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ３４４２１、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ３３４、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ７７０、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ９８３、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ１００９、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ１１０７、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ１１５８、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ１２５０、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ１３１７、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ４３３４、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ４３９５、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ４９１９２、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ９７９９、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ２１１７５、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ１９８３７、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ２１３３１、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ２３９４９、ポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ６９７またはポリＨｉｓタグ化ＰＲＯ１４８０を含む培養培地は、次いで、濃縮され、そして、あらゆる選択された方法（例えば、Ｎｉ２＋−キレート親和性クロマトグラフィー）により精製し得る。
【０９３３】
ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０はまた、一過性の発現手順により、ＣＨＯ細胞および／もしくはＣＯＳ細胞において、または、別の安定な発現手順により、ＣＨＯ細胞において、発現させ得る。
【０９３４】
ＣＨＯ細胞における安定な発現は、以下の手順を用いて行なわれる。タンパク質を、それぞれのタンパク質の可溶性形態（例えば、細胞外ドメイン）についてのコード配列を、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ２ドメインを含むＩｇＧ１定常領域配列に融合させるか、そして／または、ポリ−Ｈｉｓタグ化された形態にした、ＩｇＧ構築物（イムノアドヘシン（ｉｍｍｕｎｏａｄｈｅｓｉｎ））として発現させる。
【０９３５】
ＰＣＲで増幅させた後、それぞれのＤＮＡを、Ａｕｓｕｂｅｌら，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｕｎｉｔ  ３．１６，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９９７）に記載されるような標準的な技術を用いて、ＣＨＯ発現ベクターにおいてサブクローニングする。ＣＨＯ発現ベクターを、挿入物のＤＮＡの５’および３’に適合性の制限部位を持つように構築し、ｃＤＮＡの簡便な入れ替えを可能にする。ＣＨＯ細胞における、ベクターを用いる発現は、Ｌｕｃａｓら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２４：９  １７７４−１７７９（１９９６）に記載されるとおりであり、目的のｃＤＮＡおよびジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）の発現を駆動させるために、ＳＶ４０早期プロモーター／エンハンサーを使用する。ＤＨＦＲの発現は、トランスフェクション後のプラスミドの安定な維持のための選択を可能にする。
【０９３６】
１２μｇの所望のプラスミドＤＮＡを、市販のトランスフェクション試薬であるＳｕｐｅｒｆｅｃｔ（登録商標）（Ｑｉａｇｅｎ）、Ｄｏｓｐｅｒ（登録商標）またはＦｕｇｅｎｅ（登録商標）（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ）を用いて、約１０００万個のＣＨＯ細胞に導入する。Ｌｕｃａｓら，前出に記載されるように、細胞を増殖させる。約３×１０７個の細胞を、以下に記載されるようなさらなる増殖および生産のために、アンプル中で凍結する。
【０９３７】
プラスミドＤＮＡを含むアンプルを、水浴中に置くことによって溶かし、ボルテックスにより混合する。この内容物を、１０ｍＬの培地を含む遠心管にピペットで入れ、そして、１００ｒｐｍにて５分間遠心分離する。上清を吸引し、そして、細胞を、１０ｍＬの選択培地（０．２μｍｍ濾過した、ＰＳ２０（５％  ０．２μｍで透析したウシ胎仔血清を含む））中に再懸濁する。この細胞を、次いで、９０ｍＬの選択培地を含む１００ｍＬのスピナー（ｓｐｉｎｎｅｒ）に等分する。１〜２日後、細胞を、１５０ｍＬの選択増殖培地を充填した２５０ｍＬのスピナー中に移し、３７℃にてインキュベートする。さらに２〜３日後、２５０ｍＬ、５００ｍＬ、および２０００ｍＬのスピナーを、３×１０５細胞／ｍＬで播種する。この細胞の培地を、遠心分離により新しい培地と交換し、生産用培地中に再懸濁する。あらゆる適切なＣＨＯ培地が使用され得るが、実際には、米国特許第５，１２２，４６９号（１９９２年６月１６日発行）に記載された生産用培地が使用され得る。３Ｌの生成物スピナーを、１．２×１０６細胞／ｍＬで播種する。０日目に、細胞数、ｐＨを決定する。１日目に、スピナーをサンプリングし、そして、濾過空気での散布を開始させる。２日目に、スピナーをサンプリングし、温度を３３℃に変え、そして、３０ｍＬの５００ｇ／Ｌグルコースおよび０．６ｍＬの１０％消泡剤（例えば、３５％ポリジメチルシロキサネマルジョン、Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ  ３６５  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｇｒａｄｅ  Ｅｍｕｌｓｉｏｎ）を入れる。生産の間中、必要に応じて、ｐＨを７．２付近に維持するように調節する。１０日後、または、生存率が７０％を下回るまで、細胞培養物を遠心分離により回収し、０．２２μｍフィルターを通して濾過する。濾液を、４℃にて保存するか、または、精製のために、直ちにカラム上にロードした。
【０９３８】
ポリ−Ｈｉｓタグ化した構築物については、タンパク質を、Ｎｉ−ＮＴＡカラム（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて精製する。精製の前に、イミダゾールを馴化培地に５ｍＭの濃度まで加える。馴化培地を、４℃にて、２０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ，ｐＨ７．４、０．３Ｍ  ＮａＣｌおよび５ｍＭイミダゾールを含む緩衝液で平衡化した６ｍｌのＮｉ−ＮＴＡカラム上に、４〜５ｍｌ／分の流速で注ぐ。ロードした後、カラムを、追加の平衡緩衝液で洗浄し、そして、０．２５Ｍのイミダゾールを含む平衡緩衝液でタンパク質を溶出させる。高度に精製されたタンパク質を、その後、１０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ、０．１４Ｍ  ＮａＣｌおよび４％  マンニトール，ｐＨ６．８を含む保存緩衝液中に、２５ｍｌのＧ２５  Ｓｕｐｅｒｆｉｎｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）カラムを用いて脱塩し、そして、−８０℃にて保存する。
【０９３９】
イムノアドヘシン（Ｆｃ含有）構築物を、以下のようにして、馴化培地から精製する。馴化培地を、２０ｍＭ  リン酸Ｎａ緩衝液，ｐＨ６．８で平衡化した５ｍｌプロテインＡカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）上に注ぐ。ロードした後、カラムを、平衡化緩衝液で広範囲に洗浄し、その後、１００ｍＭクエン酸，ｐＨ３．５で溶出する。この溶出したタンパク質を、１ｍｌの画分を、２７５μＬの１Ｍ  Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ９）を含むチューブに取ることによって、直ぐに中和する。この高度に精製されたタンパク質を、その後、ポリ−Ｈｉｓタグ化したタンパク質について上記したように、保存緩衝液中に脱塩する。均一性を、ＳＤＳポリアクリルアミドゲルおよびエドマン分解法によるＮ末端アミノ酸の配列決定により評価する。
【０９４０】
（実施例２５：酵母における、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０の発現）
以下の方法は、酵母におけるＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０の組換え発現を記載する。
【０９４１】
第一に、酵母の発現ベクターを、ＡＤＨ２／ＧＡＰＤＨプロモーターから、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０の細胞内での産生もしくは分泌のために構築する。ＰＲＯ２５６をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ３４４２１をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ３３４をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ７７０をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ９８３をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ１００９をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ１１０７をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ１１５８をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ１２５０をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ１３１７をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ４３３４をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ４３９５をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ４９１９２をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ９７９９をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ２１１７５をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ１９８３７をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ２１３３１をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ２３９４９をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ６９７をコードするＤＮＡまたはＰＲＯ１４８０をコードするＤＮＡと、プロモーターとを、選択されたプラスミド内の適切な制限酵素部位に挿入し、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０の細胞内での発現を指向させる。分泌について、ＰＲＯ２５６、ＰＲＯ３４４２１、ＰＲＯ３３４、ＰＲＯ７７０、ＰＲＯ９８３、ＰＲＯ１００９、ＰＲＯ１１０７、ＰＲＯ１１５８、ＰＲＯ１２５０、ＰＲＯ１３１７、ＰＲＯ４３３４、ＰＲＯ４３９５、ＰＲＯ４９１９２、ＰＲＯ９７９９、ＰＲＯ２１１７５、ＰＲＯ１９８３７、ＰＲＯ２１３３１、ＰＲＯ２３９４９、ＰＲＯ６９７またはＰＲＯ１４８０の発現のために、ＰＲＯ２５６をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ３４４２１をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ３３４をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ７７０をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ９８３をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ１００９をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ１１０７をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ１１５８をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ１２５０をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ１３１７をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ４３３４をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ４３９５をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ４９１９２をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ９７９９をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ２１１７５をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ１９８３７をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ２１３３１をコードするＤＮＡ、ＰＲＯ２３９４９をコードするＤＮＡ、をコードするＤＮＡＰＲＯ６９７またはをコードするＤＮＡＰＲＯ１４８０を、選択されたプラスミド内に、ＡＤＨ２／ＧＡＰＤＨプロモーターをコードするＤＮＡと、ネイティブなＰＲＯ２５６シグナルペプチド、ネイティブなＰＲＯ３４４２１シグナルペプチド、ネイティブなＰＲＯ３３４シグナルペプチド、ネイティブなＰＲＯ７７０シグナルペプチド、ネイティブなＰＲＯ９８３シグナルペプチド、ネイティブなＰＲＯ１００９シグナルペプチド、ネイティブなＰＲＯ１１０７シグナルペプチド、ネイティブなＰＲＯ１１５８シグナルペプチド、ネイティブなＰＲＯ１２５０シグナルペプチド、ネイティブなＰＲＯ１３１７シグナルペプチド、ネイティブなＰＲＯ４３３４シグナルペプチド、ネイティブなＰＲＯ４３９５シグナルペプチド、ネイティブなＰＲＯ４９１９２シグナルペプチド、ネイティブなＰＲＯ９７９９シグナルペプチド、ネイティブなＰＲＯ２１１７５シグナルペプチド、ネイティブなＰＲＯ１９８３７シグナルペプチド、ネ苣蚃苣隃臣낼볯꾼볯醼볯鎼볯랂苣誃菣骃菣膃菣膀菣ꒂ菣ꎂ菣ꪁ볯늼볯銼볯馼볯馼苣낂菣ꮃ菣鞃菣覃胣趃苣蚃苣隃臣낼볯꾼볯馼볯랂苣誃菣骃菣膃菣节臣辁臣낼볯꾼볯钼볯邼苣낂菣ꮃ菣鞃菣覃胣뺁臣꾁胣隻臣몓매開觧랂苣誃菣骃菣膃菣膀臣龁臣膀뻤袁臣膀藩趯뇎裢ꂛ귥节臣辁臣ꒂ菣馃菣뾂菣벂裥貳苣낂菣ꮃ볯ꪃ菣肃菣超裥膀臣袂臣ꪃ菣ꮂ菣超裥袼뿥膦臣뒠郥覼臣銂苣궃菣讃菣낂臣鞾苣芀㰊䥄㹖胣邼볯钼볯醀⼼䥄㹖 떅꿦ꪠ볯ꊼ볯醼볯꺁苣蚁臣떅꿦내菨銂胣ꆬ臣ꞁ胣誸꣨꺁駧뺏菣ꦃ苣龃菣ꞁ뷥ꪳ믨鮏臣ꚁ胣뢁諦閁苣龁駧떅鿥난룤ꞁ鿥誤臣鞾苣芀뷥ꪳ믨鮏臣龁藩趯臣誸룦銂胣醼볯薼菣ꪃ苣궃菣ꊅ藩ꞁ닦뾮臣鮁臣膀볯꒼볯銈볯ꆼ볯ꖼ臣袂苣蚈鯩鞁胣鶁臣貾胣꾂菣麃苣벃菣ꮃ菣鎟觨ꮁ苣誂苣ꮃ苣鎟觨馁苣鎁臣ꮁ苣ꎁ臣蚈黦鞁뻥讂胣ં䐼噉邀볯馼볯鎼胣㲑䐯噉ਾ†뗧鮏臣낼볯꾼볯閼볯膀뗧鮏臣낼볯꾼볯钼볯銼볯膀뗧鮏臣낼볯꾼볯鎼볯膀뗧鮏臣낼볯꾼볯鞼볯膀뗧鮏臣낼볯꾼볯颼볯膀뗧鮏臣낼볯꾼볯邼볯馼胣蒵迦袁볯늼볯醼볯邼볯膀뗧鮏臣낼볯꾼볯醼볯颼胣蒵迦袁볯늼볯醼볯閼볯膀뗧鮏臣낼볯꾼볯鎼볯鞼胣蒵迦袁볯늼볯钼볯鎼볯膀뗧鮏臣낼볯꾼볯鎼볯閼胣蒵迦袁볯늼볯钼볯醼볯銼胣蒵迦袁볯늼볯馼볯馼볯膀뗧鮏臣낼볯꾼볯醼볯鞼볯膀뗧鮏臣낼볯꾼볯馼볯鎼볯膀뗧鮏臣낼볯꾼볯醼볯鎼볯膀뗧鮏臣낼볯꾼볯鎼볯钼볯膀뗧鮏臣낼볯꾼볯馼볯뺁臣꾁뗧鮏臣낼볯꾼볯钼볯邼臣膀臣꺁뻥膀臩莿裥ꊛ臣袂苣몙藩릟鳥讁苣떅꿦내菨銂駩趁胣ꆬ臣ꞁ胣뢁諦閁苣龁苣벃菣ꪃ菣뢂菣ꎂ菣뾂苣ꢔ臣ꚁ鿥난苣莿룧馁苣鎁臣ꮁ苣ꎁ臣膀跥ꊛ臣袂臣뺲ꏨ鞁뻥讂胣낼볯꾼볯閼볯膀볯늼볯鎼볯钼볯醼胣낼볯꾼볯鎼볯膀볯늼볯鞼볯邼胣낼볯꾼볯颼볯膀볯늼볯醼볯邼볯膀볯늼볯醼볯邼볯膀볯늼볯醼볯閼볯膀볯늼볯醼볯閼볯膀볯늼볯醼볯醼볯膀볯늼볯钼볯鎼볯膀볯늼볯钼볯馼볯膀볯늼볯钼볯醼볯銼胣낼볯꾼볯鞼볯馼胣낼볯꾼볯醼볯鞼볯膀볯늼볯醼볯颼볯鞼胣낼볯꾼볯醼볯鎼볯膀볯늼볯銼볯馼볯馼胣낼볯꾼볯馼볯뺁臣꾁볯늼볯醼볯颼볯銂郥覜臣讂뿦꺸觧꾁胣閁苣ꮁ胣뢁諦閁苣龁苣ꦃ菣꾂菣麃菣낂菣閃苣벃꣦芄苣ꢔ臣ꚁ닧붣臣鞾苣芀㰊䥄㹖胣邼볯钼볯醀⼼䥄㹖 袼껥붖뻤銼볯骼菣궂菣궃苣ꒂ菣릂臣龄鿦鞁臣蚘駨내菨ꮁ臣醁苣낼볯꾼볯閼볯膀볯늼볯鎼볯钼볯醼胣낼볯꾼볯鎼볯膀볯늼볯鞼볯邼胣낼볯꾼볯颼볯膀볯늼볯醼볯邼볯膀볯늼볯醼볯邼볯膀볯늼볯醼볯閼볯膀볯늼볯醼볯閼볯膀볯늼볯醼볯醼볯膀볯늼볯钼볯鎼볯膀볯늼볯钼볯馼볯膀볯늼볯钼볯醼볯銼胣낼볯꾼볯鞼볯馼胣낼볯꾼볯醼볯鞼볯膀볯늼볯醼볯颼볯鞼胣낼볯꾼볯醼볯鎼볯膀볯늼볯銼볯馼볯馼胣낼볯꾼볯馼볯뺁臣꾁볯늼볯醼볯颼볯꺁駧뺏볯㲉牢ਾ†믤许臣릖돦꾁胣邃苣ꖃ菣Ꚃ苣ꮃ苣ꮁ蓦鎟臣龁飦ꮙ듧麃臣誁臣讂볯늼볯銼볯隼胣낼볯꾼볯钼볯銼볯膀볯늼볯鎼볯钼胣낼볯꾼볯鞼볯膀볯늼볯馼볯鎼胣낼볯꾼볯邼볯馼胣낼볯꾼볯醼볯鞼胣낼볯꾼볯醼볯颼胣낼볯꾼볯銼볯邼胣낼볯꾼볯鎼볯鞼胣낼볯꾼볯鎼볯钼胣낼볯꾼볯鎼볯閼胣낼볯꾼볯馼볯馼볯膀볯늼볯馼볯馼볯膀볯늼볯銼볯醼볯閼胣낼볯꾼볯馼볯鎼볯膀볯늼볯銼볯鎼볯醼胣낼볯꾼볯鎼볯钼볯膀볯늼볯隼볯鞼臣龁臣낼볯꾼볯钼볯邼臣蒵迦袁駧뺏苣風볨馁苣芀㰊䥄㹖胣邼볯钼볯醀⼼䥄㹖 낼볯꾼볯閼볯膀볯늼볯鎼볯钼볯醼胣낼볯꾼볯鎼볯膀볯늼볯鞼볯邼胣낼볯꾼볯颼볯膀볯늼볯醼볯邼볯膀볯늼볯醼볯邼볯膀볯늼볯醼볯閼볯膀볯늼볯醼볯閼볯膀볯늼볯醼볯醼볯膀볯늼볯钼볯鎼볯膀볯늼볯钼볯馼볯膀볯늼볯钼볯醼볯銼胣낼볯꾼볯鞼볯馼胣낼볯꾼볯醼볯鞼볯膀볯늼볯醼볯颼볯鞼胣낼볯꾼볯醼볯鎼볯膀볯늼볯銼볯馼볯馼胣낼볯꾼볯馼볯뺁臣꾁볯늼볯醼볯颼볯銂苣벃菣馁苣超裥銂胣邃苣ꖃ菣Ꚃ苣ꮃ苣몙迧馃苣뾂菣薆臣ꮐ臣貂苣ꢂ菣袃菣鞃苣낂臣誸뗦ꮁ黨袐臣鮁苣芀臣꺁苣蚁臣ꢂ菣袃菣鞃苣낂臣鞁臣꾁胣鶃菣銈뷯覽뷯뾂苣誁苣뎁藥ꮖ苣궃菣ꪃ菣뾂苣袼볯螽볯꺁볯莽ꃩ龟臣ꦁ볯貁賦銁苣貂苣芀꣧薀臣鞃菣릂菣覃臣ꢔ臣覂苣鞾苣貁胣鎁苣覂臣鞁臣꾁胣邽볯겼볯鎼볯鎼볯꺼뷯隽뷯螽뷯躽볯꺁苣蚁臣芸단꺁菣ꦃ苣龃菣ꮁ铧ꖝ臣讂菣ꦃ苣龃菣貁郥뺁苣讂胣ꆰ跥ꮁ뿨릁苣ꢁ胣낼볯꾼볯閼볯銂苣벃菣馁苣超裥膀볯늼볯鎼볯钼볯醼苣뎂菣覃臣讂藩鞈胣낼볯꾼볯鎼볯銂苣벃菣馁苣超裥膀볯늼볯鞼볯邼苣뎂菣覃臣讂藩鞈胣낼볯꾼볯颼볯銂苣벃菣馁苣超裥膀볯늼볯醼볯邼볯銂苣벃菣馁苣超裥膀볯늼볯醼볯邼볯銂苣벃菣馁苣超裥膀볯늼볯醼볯閼볯銂苣벃菣馁苣超裥膀볯늼볯醼볯閼볯銂苣벃菣馁苣超裥膀볯늼볯醼볯醼볯銂苣벃菣馁苣超裥膀볯늼볯钼볯鎼볯銂苣벃菣馁苣超裥膀볯늼볯钼볯馼볯銂苣벃菣馁苣超裥膀볯늼볯钼볯醼볯銼苣뎂菣覃臣讂藩鞈胣낼볯꾼볯鞼볯馼苣뎂菣覃臣讂藩鞈胣낼볯꾼볯醼볯鞼볯銂苣벃菣馁苣超裥膀볯늼볯醼볯颼볯鞼苣뎂菣覃臣讂藩鞈胣낼볯꾼볯醼볯鎼볯銂苣벃菣馁苣超裥膀볯늼볯銼볯馼볯馼苣뎂菣覃臣讂藩鞈胣낼볯꾼볯馼볯銂苣벃菣馁苣超裥节臣辁臣낼볯꾼볯钼볯邼苣뎂菣覃臣讂藩鞈胣뺁臣꾁胣낼볯꾼볯閼볯銂苣벃菣馁苣超裥膀볯늼볯鎼볯钼볯醼苣뎂菣覃臣讂藩鞈胣낼볯꾼볯鎼볯銂苣벃菣馁苣超裥膀볯늼볯鞼볯邼苣뎂菣覃臣讂藩鞈胣낼볯꾼볯颼볯銂苣벃菣馁苣超裥膀볯늼볯醼볯邼볯銂苣벃菣馁苣超裥膀볯늼볯醼볯邼볯銂苣벃菣馁苣超裥膀볯늼볯醼볯閼볯銂苣벃菣馁苣超裥膀볯늼볯醼볯閼볯銂苣벃菣馁苣超裥膀볯늼볯醼볯醼볯銂苣벃菣馁苣超裥膀볯늼볯钼볯鎼볯銂苣벃菣馁苣超裥膀볯늼볯钼볯馼볯銂苣벃菣馁苣超裥膀볯늼볯钼볯醼볯銼苣뎂菣覃臣讂藩鞈胣낼볯꾼볯鞼볯馼苣뎂菣覃臣讂藩鞈胣낼볯꾼볯醼볯鞼볯銂苣벃菣馁苣超裥膀볯늼볯醼볯颼볯鞼苣뎂菣覃臣讂藩鞈胣낼볯꾼볯醼볯鎼볯銂苣벃菣馁苣超裥膀볯늼볯銼볯馼볯馼苣뎂菣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覃藩鞈臣놔鷦馁苣ꊂ菣躃藩超裥袼藩鞈闧랏볯邼볯銂ꓧ馁胣㲂䐯噉ਾ䐼噉邀鯥醼볯醀鯥醼볯꾁胣趃苣蚃苣隃藩鞈볯늼볯醼볯邼볯ₙ莽볯꺼볯꺁菣꾂菣ꪂ菣覃藩鞈볯超裥ꪕ迥醼볯覼苣몤臣芀藩鞈闧랏볯醼臣膀胣꒼볯ꆼ볯鞼볯銼볯銈볯钼볯鎼胣袼볯꺼볯钼볯鎼볯ꢁ臣ꚁ鳦躘듧뢛臣誁臣ꚁꓧ閁苣讂苣궃菣뎃臣芁苣芀⼼䥄㹖㰊䥄㹖胣뎛볯銼胣뎛볯銼臣膀鯥醼볯ꮁꓧ閁苣讂藩鞈闧랏볯醼臣뎂菣覃藩鞈臣놔鷦馁苣ꊂ菣躃藩超裥袼藩鞈闧랏볯銼볯銂ꓧ馁胣㲂䐯噉ਾ䐼噉邀鯥醼볯醀鯥醼볯꾁胣趃苣蚃苣隃藩鞈볯늼볯醼볯邼볯ₗ莽볯꺼볯꺁菣꾂菣ꪂ菣覃藩鞈볯超裥ꪕ迥醼볯覼苣몤臣芀藩鞈闧랏볯鎼臣膀胣꒼볯ꆼ볯馼볯邼볯銈볯钼볯醼胣袼볯꺼볯閼볯邼볯ꢁ臣ꚁ鳦躘듧뢛臣誁臣ꚁꓧ閁苣讂苣궃菣뎃臣芁苣芀⼼䥄㹖㰊䥄㹖胣뎛볯钼胣뎛볯钼臣膀鯥醼볯ꮁꓧ閁苣讂藩鞈闧랏볯鎼臣뎂菣覃藩鞈臣놔鷦馁苣ꊂ菣躃藩超裥袼藩鞈闧랏볯钼볯銂ꓧ馁胣㲂䐯噉ਾ䐼噉邀鯥醼볯醀鯥醼볯꾁胣趃苣蚃苣隃藩鞈볯늼볯醼볯閼볯ₘ莽볯꺼볯꺁菣꾂菣ꪂ菣覃藩鞈볯超裥ꪕ迥醼볯覼苣몤臣芀藩鞈闧랏볯閼臣膀胣꒼볯ꆼ볯邼볯銼볯銈볯閼볯鞼胣袼볯꺼볯閼볯颼볯ꢁ臣ꚁ鳦躘듧뢛臣誁臣ꚁꓧ閁苣讂苣궃菣뎃臣芁苣芀⼼䥄㹖㰊䥄㹖胣뎛볯隼胣뎛볯隼臣膀鯥醼볯ꮁꓧ閁苣讂藩鞈闧랏볯閼臣뎂菣覃藩鞈臣놔鷦馁苣ꊂ菣躃藩超裥袼藩鞈闧랏볯隼볯銂ꓧ馁胣㲂䐯噉ਾ䐼噉邀鯥醼볯醀鯥醼볯꾁胣趃苣蚃苣隃藩鞈볯늼볯醼볯閼볯ₐ莽볯꺼볯꺁菣꾂菣ꪂ菣覃藩鞈볯超裥ꪕ迥醼볯覼苣몤臣芀藩鞈闧랏볯鞼臣膀胣꒼볯ꆼ볯邼볯鞼볯銈볯閼볯銼胣袼볯꺼볯隼볯鎼볯ꢁ臣ꚁ鳦躘듧뢛臣誁臣ꚁꓧ閁苣讂苣궃菣뎃臣芁苣芀⼼䥄㹖㰊䥄㹖胣뎛볯颼胣뎛볯颼臣膀鯥醼볯ꮁꓧ閁苣讂藩鞈闧랏볯鞼臣뎂菣覃藩鞈臣놔鷦馁苣ꊂ菣躃藩超裥袼藩鞈闧랏볯颼볯銂ꓧ馁胣㲂䐯噉ਾ䐼噉邀鯥醼볯醀鯥醼볯꾁胣趃苣蚃苣隃藩鞈볯늼볯醼볯醼볯ₗ莽볯꺼볯꺁菣꾂菣ꪂ菣覃藩鞈볯超裥ꪕ迥醼볯覼苣몤臣芀藩鞈闧랏볯馼臣膀胣꒼볯ꆼ볯醼볯隼볯銈볯隼볯閼胣袼볯꺼볯鞼볯鎼볯ꢁ臣ꚁ鳦躘듧뢛臣誁臣ꚁꓧ閁苣讂苣궃菣뎃臣芁苣芀⼼䥄㹖㰊䥄㹖胣뎛볯邼胣뎛볯邼臣膀鯥醼볯ꮁꓧ閁苣讂藩鞈闧랏볯馼臣뎂菣覃藩鞈臣놔鷦馁苣ꊂ菣躃藩超裥袼藩鞈闧랏볯邼볯銂ꓧ馁胣㲂䐯噉ਾ䐼噉邀鯥銼볯醀鯥銼볯꾁胣趃苣蚃苣隃藩鞈볯늼볯钼볯鎼볯ₔ莽볯꺼볯꺁菣꾂菣ꪂ菣覃藩鞈볯超裥ꪕ迥銼볯覼苣몤臣芀藩鞈闧랏볯醼臣膀胣꒼볯ꆼ볯馼볯邼볯銈볯閼볯鞼胣袼볯꺼볯醼볯颼볯覼臣鞁臣겜飦내鯦ꮁ臣蒁臣몤臣貂苣꾂菣벃菣ꞁ臣讂胣㲂䐯噉ਾ䐼噉邀鯥銼볯醀鯥銼볯꾁胣뎛볯醼臣몤臣貂苣超裥ꪕ迥銼볯꺁苣벃菣超裥ꮁ铧ꖝ臣讂苣龃菣뢅藩鞈볯超裥ꪕ迥銼볯覼苣몤臣芀⼼䥄㹖㰊䥄㹖胣뎛볯鎼胣뎛볯鎼臣膀菣ꒂ菣ꎂ菣超裥낼볯꾼볯鎼볯閼†뷯꒼볯ꆼ臣貃苣것苣膃菣超裥袼藩鞈闧랏볯鎼볯銂ꓧ馁胣超裥ꪕ迥銼볯꾁胣貀볯꺼볯颼볯颼볯邼裢銼볯邼볯趀볯떼볯놼볯馼볯醼볯ꢁ臣ꚁ鳦躘듧뢛臣誁臣ꚁꓧ閁苣讂苣궃菣뎃臣芁苣芀⼼䥄㹖㰊䥄㹖胣뎛볯钼胣뎛볯钼臣膀鯥銼볯ꮁꓧ閁苣讂藩鞈闧랏볯鎼臣뎂菣覃藩鞈臣놔鷦馁苣ꊂ菣躃藩超裥袼藩鞈闧랏볯钼볯銂ꓧ馁胣㲂䐯噉ਾ䐼噉邀鯥銼볯醀鯥銼볯꾁胣趃苣蚃苣隃藩鞈볯늼볯钼볯醼볯銼†뷯꒼볯ꆼ臣貃苣것苣膃菣超裥袼藩鞈闧랏볯閼苣몤臣芀藩鞈闧랏볯閼臣膀胣꒼볯ꆼ볯鎼볯隼볯鞼胣袼볯꺼볯銼볯鎼볯覼臣鞁臣겜飦내鯦ꮁ臣蒁臣몤臣貂苣꾂菣벃菣ꞁ臣讂胣㲂䐯噉ਾ䐼噉邀鯥銼볯醀鯥銼볯꾁胣뎛볯閼臣몤臣貂苣超裥ꪕ迥銼볯꺁苣벃菣超裥ꮁ铧ꖝ臣讂苣龃菣뢅藩鞈볯超裥ꪕ迥銼볯覼苣몤臣芀⼼䥄㹖㰊䥄㹖胣뎛볯鞼胣뎛볯鞼臣膀菣ꒂ菣ꎂ菣超裥낼볯꾼볯鞼볯馼†뷯꒼볯ꆼ臣貃苣것苣膃菣超裥袼藩鞈闧랏볯鞼볯銂ꓧ馁胣超裥ꪕ迥銼볯꾁胣貀볯꺼볯醼볯颼볯馼볯銈볯馼볯隼胣袼볯꺼볯鎼볯醼볯覼臣鞁臣겜飦내鯦ꮁ臣蒁臣몤臣貂苣꾂菣벃菣ꞁ臣讂胣㲂䐯噉ਾ䐼噉邀鯥銼볯醀鯥銼볯꾁胣뎛볯鞼臣몤臣貂苣超裥ꪕ迥銼볯꺁苣벃菣超裥ꮁ铧ꖝ臣讂苣龃菣뢅藩鞈볯超裥ꪕ迥銼볯覼苣몤臣芀⼼䥄㹖㰊䥄㹖胣뎛볯馼胣뎛볯馼臣膀菣ꒂ菣ꎂ菣超裥낼볯꾼볯醼볯鞼볯ₕ莽볯꺼볯꺁菣꾂菣ꪂ菣覃藩鞈볯超裥ꪕ迥銼볯覼苣몤臣芀藩鞈闧랏볯馼臣膀胣꒼볯ꆼ볯鞼볯颼볯钼裢銼볯钼볯趀볯떼볯놼볯邼볯隼볯ꢁ臣ꚁ鳦躘듧뢛臣誁臣ꚁꓧ閁苣讂苣궃菣뎃臣芁苣芀⼼䥄㹖㰊䥄㹖胣뎛볯邼胣뎛볯邼臣膀鯥銼볯ꮁꓧ閁苣讂藩鞈闧랏볯馼臣뎂菣覃藩鞈臣놔鷦馁苣ꊂ菣躃藩超裥袼藩鞈闧랏볯邼볯銂ꓧ馁胣㲂䐯噉ਾ䐼噉邀鯥鎼볯醀鯥鎼볯꾁胣趃苣蚃苣隃藩鞈볯늼볯醼볯颼볯鞼†뷯꒼볯ꆼ臣貃苣것苣膃菣超裥袼藩鞈闧랏볯醼볯銂ꓧ馁胣超裥ꪕ迥鎼볯꾁胣貀볯꺼볯醼볯颼볯邼볯銈볯颼볯馼胣袼볯꺼볯閼볯鎼볯覼臣鞁臣겜飦내鯦ꮁ臣蒁臣몤臣貂苣꾂菣벃菣ꞁ臣讂胣㲂䐯噉ਾ䐼噉邀鯥鎼볯醀鯥鎼볯꾁胣뎛볯醼臣몤臣貂苣超裥ꪕ迥鎼볯꺁苣벃菣超裥ꮁ铧ꖝ臣讂苣龃菣뢅藩鞈볯超裥ꪕ迥鎼볯覼苣몤臣芀⼼䥄㹖㰊䥄㹖胣뎛볯鎼胣뎛볯鎼臣膀菣ꒂ菣ꎂ菣超裥낼볯꾼볯醼볯鎼볯ₑ莽볯꺼볯꺁菣꾂菣ꪂ菣覃藩鞈볯超裥ꪕ迥鎼볯覼苣몤臣芀藩鞈闧랏볯鎼臣膀胣꒼볯ꆼ볯鞼볯馼볯馼裢銼볯钼볯趀볯떼볯놼볯钼볯鞼볯ꢁ臣ꚁ鳦躘듧뢛臣誁臣ꚁꓧ閁苣讂苣궃菣뎃臣芁苣芀⼼䥄㹖㰊䥄㹖胣뎛볯钼胣뎛볯钼臣膀鯥鎼볯ꮁꓧ閁苣讂藩鞈闧랏볯鎼臣뎂菣覃藩鞈臣놔鷦馁苣ꊂ菣躃藩超裥袼藩鞈闧랏볯钼볯銂ꓧ馁胣㲂䐯噉ਾ䐼噉邀鯥鎼볯醀鯥鎼볯꾁胣趃苣蚃苣隃藩鞈볯늼볯銼볯馼볯馼†뷯꒼볯ꆼ臣貃苣것苣膃菣超裥袼藩鞈闧랏볯閼볯銂ꓧ馁胣超裥ꪕ迥鎼볯꾁胣貀볯꺼볯醼볯钼볯邼볯趀볯떼볯놼볯馼볯鎼볯ꢁ臣ꚁ鳦躘듧뢛臣誁臣ꚁꓧ閁苣讂苣궃菣뎃臣芁苣芀⼼䥄㹖㰊䥄㹖胣뎛볯隼胣뎛볯隼臣膀鯥鎼볯ꮁꓧ閁苣讂藩鞈闧랏볯閼臣뎂菣覃藩鞈臣놔鷦馁苣ꊂ菣躃藩超裥袼藩鞈闧랏볯隼볯銂ꓧ馁胣㲂䐯噉ਾ䐼噉邀鯥鎼볯醀鯥鎼볯꾁胣趃苣蚃苣隃藩鞈볯늼볯隼볯鞼†뷯꒼볯ꆼ臣貃苣것苣膃菣超裥袼藩鞈闧랏볯鞼볯銂ꓧ馁胣超裥ꪕ迥鎼볯꾁胣貀볯꺼볯閼볯馼볯邼裢醼볯銼볯趀볯떼볯놼볯隼볯覼臣鞁臣겜飦내鯦ꮁ臣蒁臣몤臣貂苣꾂菣벃菣ꞁ臣讂胣㲂䐯噉ਾ䐼噉邀鯥鎼볯醀鯥鎼볯꾁胣뎛볯鞼臣몤臣貂苣超裥ꪕ迥鎼볯꺁苣벃菣超裥ꮁ铧ꖝ臣讂苣龃菣뢅藩鞈볯超裥ꪕ迥鎼볯覼苣몤臣芀⼼䥄㹖㰊䥄㹖胣뎛볯馼胣뎛볯馼臣膀菣ꒂ菣ꎂ菣超裥낼볯꾼볯钼볯邼†뷯꒼볯ꆼ臣貃苣것苣膃菣超裥袼藩鞈闧랏볯馼볯銂ꓧ馁胣超裥ꪕ迥鎼볯꾁胣貀볯꺼볯隼볯馼볯銼裢醼볯钼볯趀볯떼볯놼볯钼볯覼臣鞁臣겜飦내鯦ꮁ臣蒁臣몤臣貂苣꾂菣벃菣ꞁ臣讂胣㲂䐯噉ਾ䐼噉邀鯥钼볯醀鯥钼볯꾁胣뎛볯馼臣몤臣貂苣超裥ꪕ迥鎼볯꺁苣벃菣超裥ꮁ铧ꖝ臣讂苣龃菣뢅藩鞈볯超裥ꪕ迥钼볯覼苣몤臣芀⼼䥄㹖㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣뎛볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢〰㔷㘳㌹⸱楴≦㈾〰㔷㘳㌹⸱楴쉦゠〰㜰㰲愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥銼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩㸢〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩ꃂ〰〰㌷⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢〰㔷㘳㌹⸱楴≦㈾〰㔷㘳㌹⸱楴쉦゠〰㜰㰴愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥钼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩㸢〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩ꃂ〰〰㔷⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢〰㔷㘳㌹⸱楴≦㈾〰㔷㘳㌹⸱楴쉦゠〰㜰㰶愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥閼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩㸢〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩ꃂ〰〰㜷⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢〰㔷㘳㌹⸱楴≦㈾〰㔷㘳㌹⸱楴쉦゠〰㜰㰸愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥鞼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩㸢〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩ꃂ〰〰㤷⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢〰㔷㘳㌹⸱楴≦㈾〰㔷㘳㌹⸱楴쉦゠〰㠰㰰愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥馼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩㸢〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩ꃂ〰〰ㄸ⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯邼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩㸢〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩ꃂ〰〰㈸⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯醼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩㸢〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩ꃂ〰〰㌸⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯銼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩㸢〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩ꃂ〰〰㐸⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯鎼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩㸢〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩ꃂ〰〰㔸⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯鎼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩㸢〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩ꃂ〰〰㘸⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯钼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩㸢〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩ꃂ〰〰㜸⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯閼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩㸢〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩ꃂ〰〰㠸⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯隼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩㸢〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩ꃂ〰〰㤸⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯鞼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩㸢〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩ꃂ〰〰〹⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯鞼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩㸢〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩ꃂ〰〰ㄹ⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯颼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩㸢〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩ꃂ〰〰㈹⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯馼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩㸢〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩ꃂ〰〰㌹⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯馼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩㸢〲㜰㌵㤶ㄳ琮晩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