(57)【要約】  キレーター（ＤＯＴＡＧＡ）（１−(１−カルボキシ−３−カルボキシ−プロピル)−４，７，１０−(カルボキシメチル)−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン、ＤＯＴＡＳＡ（１−(１−カルボキシ−２−カルボキシ−エチル)−４，７，１０−(カルボキシメチル)−１，４，７，１０−テトラアザシクロ−ドデカン、またはキレーター（ＤＯＴＡ）[１，４，７，１０−テトラアザシクロ−ドデカン−１，４，７，１０−テトラ(酢酸)]と、サブスタンスＰおよびその類似体に基づいた、放射性核種標識コンジュゲートは、脳腫瘍、特にグリア細胞腫の標的化および処置において有用な放射性医薬品物質である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
キレーター−Ｒ−Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5−Ｇｌｎ6−Ｐｈｅ7−Ｐｈｅ8−Ｇｌｙ9−Ｌｅｕ10−Ｍｅｔ11−ＮＨ2という略称を有し、式Ｉ：
【化１】
2007527366.tif 000022
（式中、
Ｒは、−ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−、−Ｃ(ＣＯ2Ｈ)ＣＨ2ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−、または−Ｃ(ＣＯ2Ｈ)ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−である）
で示される化合物、あるいはサブスタンスＰのアミノ酸配列において以下の修飾：
ａ）Ｍｅｔ11の、−ＮＨ−ＣＨ(ＣＨ2ＣＨ2−ＳＯ2−ＣＨ3)−Ｃ(Ｏ)−(Ｍｅｔ(Ｏ2)11)、−ＮＨ−ＣＨ(ＣＨ2ＣＨ2−ＳＯ−ＣＨ3)−Ｃ(Ｏ)−(Ｍｅｔ(Ｏ)11)、または−ＮＨ−ＣＨ[ＣＨ(ＣＨ3)ＣＨ2ＣＨ3]−Ｃ(Ｏ)−(Ｉｌｅ11)による置き換え、
ｂ）Ｌｅｕ10の、−ＮＨ−ＣＨ[ＣＨ(ＣＨ3)ＣＨ2ＣＨ3)−Ｃ(Ｏ)−(Ｉｌｅ10)による置き換え、
ｃ）Ｇｌｙ9の、−Ｎ(ＣＨ3)−ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−(Ｓａｒ9)による置き換え、
ｄ）Ｐｈｅ7もしくはＰｈｅ8またはＰｈｅ7およびＰｈｅ8の両方の、式：
【化２】
2007527366.tif 000023
で示される残基による置き換え、
ｅ）Ｌｙｓ3の、式：
【化３】
2007527366.tif 000024
で示される残基による置き換え、
ｆ）配列Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5の１〜５アミノ酸のトランケーション、または
ｇ）配列Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5の１〜５アミノ酸の、−Ｎ(ＣＨ3)−ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−(Ｓａｒ)による置き換え、
の少なくとも１個を有する式Ｉの類似体を含む、サブスタンスＰとキレーター分子の放射性核種標識コンジュゲートの、脳腫瘍、特にグリア細胞腫の標的化または処置のための放射性医薬品または放射性診断製剤における活性成分としての使用であって、
前記コンジュゲートは、アクチニウム−２２５、ビスマス−２１２、ビスマス−２１３、鉛−２０３、銅−６４、銅−６７、ガリウム−６６、ガリウム−６７、ガリウム−６８、ルテチウム−１７７、インジウム−１１１、インジウム−１１３、イットリウム−８６およびイットリウム−９０、ジスプロシウム１６２、ジスプロシウム１６５、ジスプロシウム１６７、ホルミウム−１６６、プラセオジミウム−１４２、プラセオジミウム−１４３、プロメチウム−１４９、ならびにテルビウム−１４９からなる群より選択された放射性核種で標識されている、前記使用。
【請求項２】
式Ｉのアミノ酸配列が、式：
【表１】
2007527366.tif 000025
に対応する、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
式Ｉの化合物が、天然サブスタンスＰ配列の１１位において、メチオニン残基の代わりに、式−ＮＨ−ＣＨ(ＣＨ2ＣＨ2−ＳＯ2−ＣＨ3)−Ｃ(Ｏ)−のメチオニンスルホン残基を含む、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
天然サブスタンスＰ配列の９位のグリシン残基が、式−Ｎ(ＣＨ3)−ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−のサルコシン残基により置き換えられている、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
天然サブスタンスＰ配列の７位もしくは８位またはその両方の位置におけるフェニルアラニン残基が、式
【化４】
2007527366.tif 000026
で示される３−(２−チエニル)−アラニン残基により置き換えられている、請求項１に記載の使用。
【請求項６】
天然サブスタンスＰ配列の８位のフェニルアラニン残基が、３−(２−チエニル)−アラニンにより置き換えられ、９位のグリシン残基が、サルコシン残基により置き換えられている、請求項１に記載の使用。
【請求項７】
天然サブスタンスＰ配列の１１位のメチオニン残基が、メチオニンスルホン残基により置き換えられ、かつ天然サブスタンスＰ配列の８位のフェニルアラニン残基が、３−(２−チエニル)−アラニン残基により置き換えられているか、または９位のグリシン残基が、サルコシン残基により置き換えられている、請求項１に記載の使用。
【請求項８】
式Ｉのアミノ酸配列が、式：
【表２】
2007527366.tif 000027
に対応する、請求項１に記載の使用。
【請求項９】
式Ｉのアミノ酸配列が、式：
ａ）Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｓａｒ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ(Ｏ2)−ＮＨ2、または
ｂ）Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｔｈｉ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ(Ｏ2)−ＮＨ2に対応する、請求項１に記載の使用。
【請求項１０】
宿主に少なくとも１種の式Ｉの化合物または式Ｉの化合物の類似体を投与し、脳腫瘍、例えばグリア細胞腫に罹患した宿主における脳腫瘍に標的化し、脳腫瘍およびその周辺病変に局在化または処置する方法。
【請求項１１】
哺乳動物における脳腫瘍に標的化し、脳腫瘍およびその周辺病変に局在化または処置するための、治療方法または診断方法であって、そのような治療の必要な哺乳動物に、有効量の式Ｉの放射性核種標識サブスタンスＰコンジュゲートまたはその類似体を投与することを含む、方法。
【請求項１２】
宿主に、式Ｉの放射性核種標識サブスタンスＰコンジュゲートまたはその類似体を投与することを含む、宿主に、式Ｉの放射性核種標識サブスタンスＰコンジュゲートまたはその類似体を送達する方法。
【請求項１３】
ヒトなどの哺乳動物における脳腫瘍およびその周辺病変の検出および治療処置に有用な医薬品の製造における、式Ｉの放射性核種標識サブスタンスＰコンジュゲートまたはその類似体の使用。
【請求項１４】
医学療法における式Ｉの放射性核種標識サブスタンスＰコンジュゲートまたはその類似体。
【請求項１５】
サブスタンスＰコンジュゲートは、キレーター−Ｒ−Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5−Ｇｌｎ6−Ｐｈｅ7−Ｐｈｅ8−Ｇｌｙ9−Ｌｅｕ10−Ｍｅｔ11−ＮＨ2という略称を有し、式Ｉ：
【化５】
2007527366.tif 000028
（式中、
Ｒは、−ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−、−Ｃ(ＣＯ2Ｈ)ＣＨ2ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−、または−Ｃ(ＣＯ2Ｈ)ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−であり、ただし、コンジュゲートがサブスタンスＰ配列を含む場合には、Ｒは、−ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−である）
で示される化合物、ならびにサブスタンスＰのアミノ酸配列において以下の修飾：
ａ）Ｍｅｔ11の、−ＮＨ−ＣＨ(ＣＨ2ＣＨ2−ＳＯ2−ＣＨ3)−Ｃ(Ｏ)−(Ｍｅｔ(Ｏ2)11)、−ＮＨ−ＣＨ(ＣＨ2ＣＨ2−ＳＯ−ＣＨ3)−Ｃ(Ｏ)−(Ｍｅｔ(Ｏ)11)、または−ＮＨ−ＣＨ[ＣＨ(ＣＨ3)ＣＨ2ＣＨ3)−Ｃ(Ｏ)−(Ｉｌｅ11)による置き換え、
ｂ）Ｌｅｕ10の、−ＮＨ−ＣＨ[ＣＨ(ＣＨ3)ＣＨ2ＣＨ3)−Ｃ(Ｏ)−(Ｉｌｅ10)によるで置き換え、
ｃ）Ｇｌｙ9の、−Ｎ(ＣＨ3)−ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−(Ｓａｒ9)による置き換え、
ｄ）Ｐｈｅ7もしくはＰｈｅ8またはＰｈｅ7およびＰｈｅ8の両方の、式：
【化６】
2007527366.tif 000029
で示される残基による置き換え、
ｅ）Ｌｙｓ3の、式：
【化７】
2007527366.tif 000030
で示される残基による置き換え、
ｆ）配列Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5の１〜５アミノ酸のトランケーション、または
ｇ）配列Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5の１〜５アミノ酸の、−Ｎ(ＣＨ3)−ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−(Ｓａｒ)による置き換え、
の少なくとも１個を有する式Ｉの類似体を含む、サブスタンスＰ類似体とキレーター分子とのコンジュゲートであって、
前記コンジュゲートは、標識されていないか、または、アクチニウム−２２５、ビスマス−２１２、ビスマス−２１３、鉛−２０３、銅−６４、銅−６７、ガリウム−６６、ガリウム−６７、ガリウム−６８、ルテチウム−１７７、インジウム−１１１、インジウム−１１３、イットリウム−８６およびイットリウム−９０、ジスプロシウム１６２、ジスプロシウム１６５、ジスプロシウム１６７、ホルミウム−１６６、プラセオジミウム−１４２、プラセオジミウム−１４３、プロメチウム−１４９、およびテルビウム−１４９からなる群より選択された放射性核種で標識されている、前記コンジュゲート。
【請求項１６】
（ａ）少なくとも１種の薬学的担体および（ｂ）サブスタンスＰまたはサブスタンスＰ類似体とキレーター分子との少なくとも１種のコンジュゲートを含む、組成物であって、サブスタンスＰコンジュゲートは、キレーター−Ｒ−Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5−Ｇｌｎ6−Ｐｈｅ7−Ｐｈｅ8−Ｇｌｙ9−Ｌｅｕ10−Ｍｅｔ11−ＮＨ2という略称を有し、式Ｉ：
【化８】
2007527366.tif 000031
（式中、
Ｒは、−ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−、−Ｃ(ＣＯ2Ｈ)ＣＨ2ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−、または−Ｃ(ＣＯ2Ｈ)ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−であり、ただし、コンジュゲートがサブスタンスＰ配列を含む場合には、Ｒは、−ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−である）
で示される化合物、ならびにサブスタンスＰのアミノ酸配列において以下の修飾：
ａ）Ｍｅｔ11の、−ＮＨ−ＣＨ(ＣＨ2ＣＨ2−ＳＯ2−ＣＨ3)−Ｃ(Ｏ)−(Ｍｅｔ(Ｏ2)11)、−ＮＨ−ＣＨ(ＣＨ2ＣＨ2−ＳＯ−ＣＨ3)−Ｃ(Ｏ)−(Ｍｅｔ(Ｏ)11)、または−ＮＨ−ＣＨ[ＣＨ(ＣＨ3)ＣＨ2ＣＨ3)−Ｃ(Ｏ)−(Ｉｌｅ11)による置き換え、
ｂ）Ｌｅｕ10の、−ＮＨ−ＣＨ[ＣＨ(ＣＨ3)ＣＨ2ＣＨ3)−Ｃ(Ｏ)−(Ｉｌｅ10)による置き換え、
ｃ）Ｇｌｙ9の、−Ｎ(ＣＨ3)−ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−(Ｓａｒ9)による置き換え、
ｄ）Ｐｈｅ7もしくはＰｈｅ8またはＰｈｅ7およびＰｈｅ8の両方の、式：
【化９】
2007527366.tif 000032
で示される残基による置き換え、
ｅ）Ｌｙｓ3の、式：
【化１０】
2007527366.tif 000033
で示される残基による置き換え、
ｆ）配列Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5の１〜５アミノ酸のトランケーション、または
ｇ）配列Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5の１〜５アミノ酸の、−Ｎ(ＣＨ3)−ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−(Ｓａｒ)による置き換え、
の少なくとも１個を有する式Ｉの類似体を含み、
前記コンジュゲートは、アクチニウム−２２５、ビスマス−２１２、ビスマス−２１３、鉛−２０３、銅−６４、銅−６７、ガリウム−６６、ガリウム−６７、ガリウム−６８、ルテチウム−１７７、インジウム−１１１、インジウム−１１３、イットリウム−８６およびイットリウム−９０、ジスプロシウム１６２、ジスプロシウム１６５、ジスプロシウム１６７、ホルミウム−１６６、プラセオジミウム−１４２、プラセオジミウム−１４３、プロメチウム−１４９、ならびにテルビウム−１４９からなる群より選択された放射性核種で標識されている、前記組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬学的担体、および適切な放射性核種で標識されている、有効量の、１−(１，３−カルボキシ−プロピル)−４，７，１０−(カルボキシメチル)−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン（キレーターＤＯＴＡＧＡ）、１−(１，２−カルボキシエチル)−４，７，１０−(カルボキシメチル)−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン（キレーターＤＯＴＡＳＡ）、または１，４，７，１０−テトラアザシクロ−ドデカン−１，４，７，１０−テトラ酢酸(キレーターＤＯＴＡ)とのサブスタンスＰ類似体コンジュゲートを含む薬学的組成物；脳腫瘍の標的化および処置におけるその使用または脳腫瘍の標的化および処置における対応する標識サブスタンスＰコンジュゲートの使用；適切な放射性核種で標識した、ＤＯＴＡＧＡ、ＤＯＴＡＳＡ、またはＤＯＴＡを含むサブスタンスＰ類似体コンジュゲート；および、ＤＯＴＡＧＡ、ＤＯＴＡＳＡ、またはＤＯＴＡおよびそのｔ−ブチルエステルを含むサブスタンスＰ類似体コンジュゲートに関する。
【０００２】
サブスタンスＰは、天然の１１−アミノ酸神経ペプチドであり、タキキニンとして知られる生物活性神経ペプチドのファミリーに属する［Payan(1989)Ann.Rev.Med.40、341］。このウンデカペプチドのアミノ酸配列は、Ｈ−Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5−Ｇｌｎ6−Ｐｈｅ7−Ｐｈｅ8−Ｇｌｙ9−Ｌｅｕ10−Ｍｅｔ11−ＮＨ2と同定された。
【０００３】
ＷＯ９２／１８５３６において、ニューロキニン１受容体に選択的親和性を有する標識小ペプチド、例えばサブスタンスＰおよび類似誘導体を含む組成物を投与し、その生体をアッセイすることにより、恒温動物の生体において、ニューロキニン１（ＮＫ１）受容体を有する組織、例えばＮＫ１受容体を有する腫瘍を検出し腫瘍に局在化する方法が記載されている。さらに、該発明は、悪性腫瘍、例えばグリア細胞腫、小細胞肺癌およびその他の治療処置の方法にも関する。
【０００４】
J.Fichnaらは、Bioconjugate Chem.2003、p.3-17において、診断造影のための標的特異的放射能標識ペプチドの合成、および、放射性医薬品としての適用可能性を要約している。様々なキレート形成分子を含む様々なペプチドおよびコンジュゲートが挙げられているが、ＤＯＴＡまたはＤＯＴＡＧＡとサブスタンスＰおよびその類似体の組合せは記載されておらず、この放射能標識コンジュゲートによる脳腫瘍の処置に関する指摘は全くなされていない。
【０００５】
プロキレーター（エステル）およびキレーター（酸）ＤＯＴＡ１，４，７，１０−テトラアザシクロ−ドデカン−１，４，７−トリス(酢酸−ｔ−ブチルエステル)−１０−酢酸が、Chem.Eur.J.1995、5、No.7、Seiten1974-1981に記載されている。
【０００６】
放射能標識サモスタチンをベースにしたコンジュゲートである、拡散性のソマトスタチン類似体111Ｉｎ／90Ｙ標識−ＤＯＴＡ0−Ｄ−Ｐｈｅ1−Ｔｙｒ3−オクトレオチド（ＤＯＴＡＴＯＣ）を用いての局所領域の調節性ペプチド受容体標的化に関する成功裏の研究により、初めて、インビボで、ヒト脳腫瘍患者において、ＤＯＴＡＴＯＣが低いナノモル範囲でＳＳＴＲ−２（ソマトスタチンサブタイプ２受容体）への高い結合親和性を有することが示され、これはA.Merioら(1999)Clin.Cancer Res.5、1025-1033により報告されている。さらに、S.Hoferらは、Swiss Med.Weekly 2001、131:640-644において、症候性の低グレードのグリア細胞腫に対処するための、局所注入した安定な放射性コンジュゲート90Ｙ標識ＤＯＴＡ0−Ｄ−Ｐｈｅ1−Ｔｙｒ3−オクトレオチド（ＤＯＴＡＴＯＣ）を使用した拡散性近接照射療法（ｄＢＴ）の効果を報告している。
【０００７】
ＷＯ０２／２４２３５において、エフェクター分子のコンジュゲートの調製に使用される１−(１−カルボキシ−３−カルボ−ｔｅｒｔ.−ブトキシプロピル)−４，７，１０−(カルボ−ｔｅｒｔ.−ブトキシ−メチル)−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン（プロキレーターＤＯＴＡＧＡ）、および、１−(１，３−カルボキシ−プロピル)−４，７，１０−(カルボキシ−メチル)−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン（キレーターＤＯＴＡＧＡ）の調製が記載されている。エフェクター分子としては、これらの生物活性ペプチドのＮ末端に結合している、オクトレオチドまたはＣＣＫなどのペプチドが提唱されている。サブスタンスＰとのコンジュゲートも挙げられているが、調製されておらず、それ故、例証されていない。前記コンジュゲートは、診断適用（111Ｉｎ、67／68Ｇａ）および内部放射能治療適用（90Ｙ、177Ｌｕ）の両方のために放射性核種で標識されていてもよい。公報は、より良好な標識収率および高い安定性を付与する、オクトレオチドおよびオクトレオテートコンジュゲート、例えばＤＯＴＡＴＯＣに焦点を当てている。脳腫瘍、例えばグリア細胞腫の処置は記載されていない。
【０００８】
ＮＫ−１受容体が脳腫瘍において発現されており、サブスタンスＰおよびその類似体と、キレーターＤＯＴＡＧＡ、ＤＯＴＡＳＡ、またはＤＯＴＡとに基づいた放射能標識コンジュゲートへの結合に適用できること、そして、前記コンジュゲートは、腫瘍、特に脳腫瘍、例えばグリア細胞腫への標的化および処置において、キレート剤を含むまたは含まない、ＤＯＴＡＴＯＣ、放射能標識サブスタンスＰ、サブスタンスＰおよび類似体およびサポリン、および他の小さな放射能標識ペプチドよりも、はるかにより効果的であることが驚くべきことに判明した。また、金属複合体形成が短時間で達成されること、そして、前記複合体がより高い化学的安定性を有し、従って、組織または体液に遊離放射性核種が混入することが回避されることが驚くべきことに判明した。サブスタンスＰをベースにした放射能標識コンジュゲートは、内部放射能診断および放射能治療として適用するのに十分な意外に長い血清半減期を示す。サブスタンスＰ類似体に基づいたコンジュゲートの血清安定性は、ＮＫ１受容体への結合親和性を望ましくない程度まで減少させることなく、さらに高まっている。サブスタンスＰ類似体を使用した場合には、結合親和性がさらに向上する場合もある。また、１１位のメチオニンは、標識（スルホキシドを形成）後に酸化感受性（放射線分解）となること、そして、前記酸化は、メチオニンをメチオニンスルホンで置き換えることにより抑制でき、これにより結合親和性は、実質的に維持できるか、またはサブスタンスＰ配列のさらなるアミノ酸置換でさらに向上させることができることが判明した。また、サブスタンスＰに基づいた放射能標識コンジュゲートは、投与後に拡散でき、腫瘍細胞巣または周辺病変に浸潤でき、よって、検出および処置できることが驚くべきことに判明した。
【０００９】
本発明の第一の目的は、キレーター−Ｒ−Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5−Ｇｌｎ6−Ｐｈｅ7−Ｐｈｅ8−Ｇｌｙ9−Ｌｅｕ10−Ｍｅｔ11−ＮＨ2という略称を有し、式Ｉ：
【化１１】
2007527366.tif 000002
（式中、
Ｒは、−ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−、−Ｃ(ＣＯ2Ｈ)ＣＨ2ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−、または−Ｃ(ＣＯ2Ｈ)ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−である）
で示される化合物、あるいはサブスタンスＰのアミノ酸配列において以下の修飾：
ａ）Ｍｅｔ11の、−ＮＨ−ＣＨ(ＣＨ2ＣＨ2−ＳＯ2−ＣＨ3)−Ｃ(Ｏ)−(Ｍｅｔ(Ｏ2)11)、−ＮＨ−ＣＨ(ＣＨ2ＣＨ2−ＳＯ−ＣＨ3)−Ｃ(Ｏ)−(Ｍｅｔ(Ｏ)11)、または−ＮＨ−ＣＨ[ＣＨ(ＣＨ3)ＣＨ2ＣＨ3]−Ｃ(Ｏ)−(Ｉｌｅ11)による置き換え、
ｂ）Ｌｅｕ10の、−ＮＨ−ＣＨ[ＣＨ(ＣＨ3)ＣＨ2ＣＨ3)−Ｃ(Ｏ)−(Ｉｌｅ10)による置き換え、
ｃ）Ｇｌｙ9の、−Ｎ(ＣＨ3)−ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−(Ｓａｒ9)による置き換え、
ｄ）Ｐｈｅ7もしくはＰｈｅ8またはＰｈｅ7およびＰｈｅ8の両方の、式：
【化１２】
2007527366.tif 000003
で示される残基による置き換え、
ｅ）Ｌｙｓ3の、式：
【化１３】
2007527366.tif 000004
で示される残基による置き換え、
ｆ）配列Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5の１〜５アミノ酸のトランケーション、または
ｇ）配列Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5の１〜５アミノ酸の、−Ｎ(ＣＨ3)−ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−(Ｓａｒ)による置き換え、
の少なくとも１個を有する式Ｉの類似体を含む、サブスタンスＰとキレーター分子の放射性核種で標識されたコンジュゲートの、脳腫瘍、特にグリア細胞腫の標的化または処置のための放射性医薬品または放射性診断製剤における活性成分としての使用であって、前記コンジュゲートは、アクチニウム−２２５、ビスマス−２１２、ビスマス−２１３、鉛−２０３、銅−６４、銅−６７、ガリウム−６６、ガリウム−６７、ガリウム−６８、ルテチウム−１７７、インジウム−１１１、インジウム−１１３、イットリウム−８６およびイットリウム−９０、ジスプロシウム１６２、ジスプロシウム１６５、ジスプロシウム１６７、ホルミウム−１６６、プラセオジミウム−１４２、プラセオジミウム−１４３、プロメチウム−１４９、ならびにテルビウム−１４９からなる群より選択された放射性核種で標識されている。
【００１０】
テトラアザマクロ環残基に結合している式ＩのＲが、−ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−である場合、キレーターＤＯＴＡと略称され；テトラアザマクロ環残基に結合している式ＩのＲが、−Ｃ(ＣＯ2Ｈ)ＣＨ2ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−である場合、キレーターＤＯＴＡＧＡと略称され；テトラアザ環残基に結合している式ＩのＲが、−Ｃ(ＣＯ2Ｈ)ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−である場合、キレーターＤＯＴＡＳＡと略称される。キレーター部分のカルボン酸基が、例えばｔ−ブタノールを用いてエステル化されている場合、残基は、プロキレーターと称される。プロキレーターは、固相合成中におけるペプチドへの簡便な結合に使用できる。
【００１１】
本発明の文脈において標識とは、キレーター残基のカルボン酸基および窒素原子へ放射性核種が結合することを意味し、放射性核種塩におけるアニオンは、金属イオンの原子価に従って置換され、これは実質的に金属（ＩＩＩ）または金属（ＩＩ）イオンである。
【００１２】
アミノ酸の修飾に使用した略称は、以下で説明されている：Ｍｅｔ(Ｏ)は、メチオニン−スルホキシドであり；Ｍｅｔ(Ｏ2)は、メチオニン−スルホンであり；Ｉｌｅは、イソロイシンであり；Ｓａｒは、サルコシンであり；２−Ｔｈｉは、３−(２−チエニル)−アラニンであり；３−ＢｚＴｈｉは、３−(３−ベンゾチエニル)−アラニンであり；２−Ｎａｌは、３−(２−ナフチル)−アラニンであり；１−Ｎａｌは、３−(１−ナフチル)−アラニンであり；Ｃｈａは、シクロヘキシル−アラニンであり；Ａｒｇは、アルギニンであり；Ｏｒｎは、オルニチンであり；Ｐｈｅｇｌｙは、フェニルグリシンである。
【００１３】
本発明の好ましい実施形態において、式Ｉの残基Ｒは、−ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−を意味する。
【００１４】
さらなる好ましい実施形態において、式Ｉのアミノ酸配列は、式：
【表３】
2007527366.tif 000005
に対応する。
【００１５】
別の好ましい実施形態において、式Ｉの化合物は、天然サブスタンスＰ配列の１１位において、メチオニン残基の代わりに、式−ＮＨ−ＣＨ(ＣＨ2ＣＨ2−ＳＯ2−ＣＨ3)−Ｃ(Ｏ)−のメチオニンスルホン残基を含む。メチオニン残基は、酸化されやすく／空気中で特に放射性核種での標識過程中により容易に酸化され、これにより一貫しない最終生成物が得られることが判明した。メチオニンの代わりにメチオニンスルホンを使用した場合には、非一貫性を回避できる。
【００１６】
式Ｉの別の好ましいサブスタンスＰ類似体コンジュゲートは、天然サブスタンスＰ配列の９位のグリシン残基が、式−Ｎ(ＣＨ3)−ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−のサルコシン残基で置き換えられたものである。
【００１７】
式Ｉの別の好ましいサブスタンスＰ類似体コンジュゲートは、天然サブスタンスＰ配列の７位もしくは８位またはその両方の位置におけるフェニルアラニン残基が、式：
【化１４】
2007527366.tif 000006
で示される３−(２−チエニル)−アラニン残基により置換されたものである。
【００１８】
式Ｉの別の好ましいサブスタンスＰ類似体コンジュゲートは、天然サブスタンスＰ配列の８位のフェニルアラニン残基が、３−(２−チエニル)−アラニンで置き換えられ、９位のグリシン残基がサルコシン残基で置き換えられているものである。
【００１９】
式Ｉの別の好ましいサブスタンスＰ類似体コンジュゲートは、天然サブスタンスＰ配列の１１位のメチオニン残基が、メチオニンスルホン残基により置き換えられ、天然サブスタンスＰ配列の８位のフェニルアラニン残基が、３−(２−チエニル)−アラニン残基により置き換えられているか、または９位のグリシン残基がサルコシン残基により置き換えられているものである。
【００２０】
前記したように８位が修飾されている、式ＩのサブスタンスＰ類似体コンジュゲートは、それぞれ、はるかに良好な血清安定性またはより低いペプチダーゼ感受性を示す。前記したように７位、８位、９位および／または１１位が修飾されている、式ＩのサブスタンスＰ類似体コンジュゲートはまた、天然サブスタンスＰに比べて、ＮＫ−１受容体に対して満足のいく高い結合親和性を示す。なぜなら、ＩＣ50値の測定でオートラジオグラフィーにより検出できるからであり、これは、０．１〜５０、好ましくは０．５〜２０、より好ましくは０．７〜１０であり得る。
【００２１】
より好ましい実施形態において、式Ｉのアミノ酸配列は、式：
【表４】
2007527366.tif 000007
に対応する。
【００２２】
特に好ましい実施形態において、式Ｉのアミノ酸配列は、式：
【表５】
2007527366.tif 000008
に対応し、なぜなら、これらの化合物は、顕著な酸化安定性および血清安定性ならびに非常に高い結合親和性を示し、これは、天然サブスタンスＰ配列と同等であるか、または高くさえある。
【００２３】
アミノ末端に結合したキレーターＤＯＴＡＧＡ、ＤＯＴＡＳＡまたはＤＯＴＡのいずれかを有する、前記した式Ｉのコンジュゲートおよび好ましい放射性コンジュゲートは、インジウム−１１１標識サブスタンスＰまたは類似体による慣用的なシンチグラフィーを使用した、あるいはトレーサーであるガリウム−６８、ガリウム−６６、イットリウム−８６、または銅−６４によるポジトロンエミッショントモグラフィーを使用した、診断的調査に有用である。診断ペプチドベクターは、局所領域または全身に適用できる。
【００２４】
治療的処置のために、キレーターＤＯＴＡＧＡ、ＤＯＴＡＳＡまたはＤＯＴＡのいずれかを含む前記した式Ｉのコンジュゲートおよび類似体コンジュゲートを、例えば、α線放出アイソトープ、例えばビスマス−２１３、アクチニウム−２２５、およびβ線放出物質イットリウム−９０およびルテチウム−１７７で標識できる。
【００２５】
本発明の別の態様は、宿主に少なくとも１種の式Ｉの化合物または式Ｉの類似体を投与し、脳腫瘍、例えばグリア細胞腫に罹患した宿主における脳腫瘍に標的化し、脳腫瘍およびその周辺病変に局在化または処置する方法を提供する。この方法は、脳腫瘍およびその周辺病変の検出および治療処置に特に有用である。
【００２６】
本発明の目的はまた、哺乳動物における脳腫瘍に標的化し、脳腫瘍およびその周辺病変に局在化または処置するための、治療法または診断法であって、そのような治療の必要な哺乳動物に、有効量の式Ｉの放射性核種標識サブスタンスＰコンジュゲートまたはその類似体を投与することを含む、方法である。
【００２７】
本発明の別の目的は、ヒト脳腫瘍を診断または処置するために、宿主に、式Ｉの放射性核種標識サブスタンスＰコンジュゲートまたはその類似体を投与することを含む、宿主に、式Ｉの放射性核種標識サブスタンスＰコンジュゲートまたはその類似体を送達する方法である。
【００２８】
本発明のさらなる目的は、ヒトなどの哺乳動物における脳腫瘍およびその周辺病変の検出および治療処置に有用な医薬品の製造における、式Ｉの放射性核種標識サブスタンスＰコンジュゲートまたはその類似体；および、医学療法における式Ｉの放射性核種標識サブスタンスＰコンジュゲートまたはその類似体の使用である。
【００２９】
本発明のさらなる目的は、サブスタンスＰまたはサブスタンスＰ類似体とキレーター分子とのコンジュゲートであり、ここでサブスタンスＰコンジュゲートは、キレーター−Ｒ−Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5−Ｇｌｎ6−Ｐｈｅ7−Ｐｈｅ8−Ｇｌｙ9−Ｌｅｕ10−Ｍｅｔ11−ＮＨ2という略称を有し、式Ｉ：
【化１５】
2007527366.tif 000009
（式中、
Ｒは、−ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−、−Ｃ(ＣＯ2Ｈ)ＣＨ2ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−、または−Ｃ(ＣＯ2Ｈ)ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−であり、ただし、コンジュゲートがサブスタンスＰ配列を含む場合には、Ｒは、−ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−である）
で示される化合物、ならびにサブスタンスＰのアミノ酸配列において以下の修飾：
ａ）Ｍｅｔ11の、−ＮＨ−ＣＨ(ＣＨ2ＣＨ2−ＳＯ2−ＣＨ3)−Ｃ(Ｏ)−(Ｍｅｔ(Ｏ2)11)、−ＮＨ−ＣＨ(ＣＨ2ＣＨ2−ＳＯ−ＣＨ3)−Ｃ(Ｏ)−(Ｍｅｔ(Ｏ)11)、または−ＮＨ−ＣＨ[ＣＨ(ＣＨ3)ＣＨ2ＣＨ3)−Ｃ(Ｏ)−(Ｉｌｅ11)による置き換え、
ｂ）Ｌｅｕ10の、−ＮＨ−ＣＨ[ＣＨ(ＣＨ3)ＣＨ2ＣＨ3)−Ｃ(Ｏ)−(Ｉｌｅ10)による置き換え、
ｃ）Ｇｌｙ9の、−Ｎ(ＣＨ3)−ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−(Ｓａｒ9)による置き換え、
ｄ）Ｐｈｅ7もしくはＰｈｅ8またはＰｈｅ7およびＰｈｅ8の両方の、式：
【化１６】
2007527366.tif 000010
で示される残基による置き換え、
ｅ）Ｌｙｓ3の、式：
【化１７】
2007527366.tif 000011
で示される残基による置き換え、
ｆ）配列Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5の１〜５アミノ酸のトランケーション、または
ｇ）配列Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5の１〜５アミノ酸の、−Ｎ(ＣＨ3)−ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−(Ｓａｒ)による置き換え、
の少なくとも１個を有する式Ｉの類似体を含み、前記コンジュゲートは、標識されていないか、または、アクチニウム−２２５、ビスマス−２１２、ビスマス−２１３、鉛−２０３、銅−６４、銅−６７、ガリウム−６６、ガリウム−６７、ガリウム−６８、ルテチウム−１７７、インジウム−１１１、インジウム−１１３、イットリウム−８６およびイットリウム−９０、ジスプロシウム１６２、ジスプロシウム１６５、ジスプロシウム１６７、ホルミウム−１６６、プラセオジミウム−１４２、プラセオジミウム−１４３、プロメチウム−１４９、ならびにテルビウム−１４９からなる群より選択された放射性核種で標識されている。
【００３０】
本発明のまたさらなる目的は、（ａ）少なくとも１種の薬学的担体および（ｂ）少なくとも１種のサブスタンスＰまたはサブスタンスＰ類似体とキレーター分子とのコンジュゲートを含む、組成物であり、ここでサブスタンスＰコンジュゲートは、キレーター−Ｒ−Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5−Ｇｌｎ6−Ｐｈｅ7−Ｐｈｅ8−Ｇｌｙ9−Ｌｅｕ10−Ｍｅｔ11−ＮＨ2という略称を有し、式Ｉ：
【化１８】
2007527366.tif 000012
（式中、
Ｒは、−ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−、−Ｃ(ＣＯ2Ｈ)ＣＨ2ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−、または−Ｃ(ＣＯ2Ｈ)ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−であり、ただし、コンジュゲートがサブスタンスＰ配列を含む場合には、Ｒは、−ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−である）
で示される化合物、ならびにサブスタンスＰのアミノ酸配列において以下の修飾：
ａ）Ｍｅｔ11の、−ＮＨ−ＣＨ(ＣＨ2ＣＨ2−ＳＯ2−ＣＨ3)−Ｃ(Ｏ)−(Ｍｅｔ(Ｏ2)11)、−ＮＨ−ＣＨ(ＣＨ2ＣＨ2−ＳＯ−ＣＨ3)−Ｃ(Ｏ)−(Ｍｅｔ(Ｏ)11)、または−ＮＨ−ＣＨ[ＣＨ(ＣＨ3)ＣＨ2ＣＨ3)−Ｃ(Ｏ)−(Ｉｌｅ11)による置き換え、
ｂ）Ｌｅｕ10の、−ＮＨ−ＣＨ[ＣＨ(ＣＨ3)ＣＨ2ＣＨ3)−Ｃ(Ｏ)−(Ｉｌｅ10)による置き換え、
ｃ）Ｇｌｙ9の、−Ｎ(ＣＨ3)−ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−(Ｓａｒ9)による置き換え、
ｄ）Ｐｈｅ7もしくはＰｈｅ8またはＰｈｅ7およびＰｈｅ8の両方の、式：
【化１９】
2007527366.tif 000013
で示される残基による置き換え、
ｅ）Ｌｙｓ3の、式：
【化２０】
2007527366.tif 000014
で示される残基による置き換え、
ｆ）配列Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5の１〜５アミノ酸のトランケーション、または
ｇ）配列Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5の１〜５アミノ酸の、−Ｎ(ＣＨ3)−ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−(Ｓａｒ)による置き換え、
の少なくとも１個を有する式Ｉの類似体（前記した類似体の好ましい実施形態を含む）を含み、前記コンジュゲートは、アクチニウム−２２５、ビスマス−２１２、ビスマス−２１３、鉛−２０３、銅−６４、銅−６７、ガリウム−６６、ガリウム−６７、ガリウム−６８、ルテチウム−１７７、インジウム−１１１、インジウム−１１３、イットリウム−８６およびイットリウム−９０、ジスプロシウム１６２、ジスプロシウム１６５、ジスプロシウム１６７、ホルミウム−１６６、プラセオジミウム−１４２、プラセオジミウム−１４３、プロメチウム−１４９、ならびにテルビウム−１４９からなる群より選択された放射性核種で標識されている。
【００３１】
本発明は、式Ｉの放射性核種標識コンジュゲートおよびその類似体の薬学的に許容されうる塩および複合体、ならびに、式Ｉの非標識コンジュゲートおよびその類似体の薬学的に許容されうる塩および複合体を含む。塩は、無機酸で形成されても、有機酸で形成されてもよい。適切な無機酸の例は、塩酸、フッ化水素酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、およびホウ酸である。適切な有機酸の例は、酢酸、トリフルオロ酢酸、ギ酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、酒石酸、マレイン酸、フマル酸、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、安息香酸、グリコール酸、乳酸、クエン酸、およびマンデル酸である。例えばアルカリ金属水酸化物、およびアンモニアからの水酸化物、ヒドロキシエチルアミン、ヒドラジン、メチルアミン、エチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチレンジアミン、ヒドロキシエチルアミン、モルホリン、ピペラジンならびにグアニジンのような無機塩基または有機塩基から、塩を形成してもよい。
【００３２】
放射性核種標識コンジュゲートは、粉末（微細化粒子）、顆粒、懸濁液または溶液として薬学的製剤中に使用しても、または、他の薬学的に許容されうる成分と一緒に合わせ、成分を混合し、場合により細かく分割し、その後、例えば硬または軟ゼラチンカプセルからなるカプセルに充填するか、経皮パッチを調製するか、錠剤、丸剤またはトローチ剤に圧縮するか、あるいは溶液、懸濁液、エリキシルおよびシロップ用の担体に懸濁または溶解してもよい。コーティングを圧縮後に適用して丸剤を形成してもよい。
【００３３】
様々なタイプの製剤における薬学的に許容されうる成分は、公知であり、例えば、様々な製剤タイプ用の、天然または合成ポリマーなどの結合剤、溶媒、賦形剤、潤滑剤、界面活性剤、甘味剤および芳香剤、コーティング材料、保存剤、染料、増粘剤、補助剤、抗微生物剤、安定剤、浸透圧調節剤および他の担体であり得る。
【００３４】
脳腫瘍の標的化および処置のための、式Ｉの放射性核種標識サブスタンスＰコンジュゲートおよびその類似体は、あらゆる既知の経路により投与し得、静脈内経路、動脈内経路、皮膚内経路、皮下経路、経口経路、頬側経路、筋肉内経路、肛門経路、経皮経路、皮内経路、くも膜下腔内経路などからなる群より選択され得る。
【００３５】
１つの好ましい実施形態において、薬学的担体は、液体であり、薬学的組成物は、懸濁液、エマルション、好ましくは溶液の形態である。
【００３６】
液体担体の例は、水、アルコール、例えばエタノール、グリセロール、プロピレングリコール、液状ポリエチレングリコール、トリアセチンおよび油であり、これは、単独で使用しても、または、少なくとも２種の成分との組合せで使用してもよい。
【００３７】
製剤中の放射性核種標識コンジュゲートの量は、実質的に、製剤のタイプおよび投与期間中の所望の用量に依存する。量は、薬学的組成物に対して、０．０１〜４０重量％、好ましくは０．１〜２５重量％、より好ましくは０．５〜１５重量％であり得る。
【００３８】
無菌溶液または懸濁液である液体薬学的組成物は、筋肉内、髄腔内、気管内、硬膜外、腹腔内または皮下注入用に使用できる。無菌溶液はまた、静脈内にも投与できる。コンジュゲートは、無菌固体組成物として調製してもよく、これは、滅菌水、生理食塩水、または他の適切な無菌注射用媒体を使用して投与時に溶解または懸濁（拡散）してもよい。
【００３９】
特に好ましいのは、局所領域適用のための、本発明に従って使用する拡散性ペプチドベクターの局所注入である。放射性医薬品を、定位にインプラントされた心室カテーテルに、または、カプセル（このカプセルからカテーテルにより腫瘍中心に至る）に、または、切除腔に注入する（また中心静脈穿刺デバイス（port-a-cath-device）とも呼ばれる）。多くの異なる市販のカプセルおよびカテーテルをこの目的のために使用することができる。
【００４０】
切除されていない主要な腫瘍塊では、カテーテルの先端部を、腫瘍の推定的な中心部分へと中心を合わせなければならず、これは通常、３次元定位計画装置（3-dimensional stereotactic planning system）を使用して達成できる。標的部位から離れて、くも膜下腔、硬膜下腔、硬膜外腔、または皮下腔へとカテーテルの外側に沿って逆流する問題を制御するために、カテーテル挿入から最初の適用までの間に、少なくとも１日間、好ましくは数日間待つことが重要である。この現象は、放射性医薬品の適用前に、浸透圧性利尿薬および高用量のデキサメタゾンを使用して、上昇した頭蓋内圧を低下させることによりさらに減少させることができる。固形の切除されていない場合では、１〜２時間かけて５〜１０mlの容量を連続注入することができる注入ポンプを利用して、ゆっくりとした注入技術を使用する。この技術は、サイズが原因で拡散しない大きな分子の浸透が可能となるようにさらによりゆっくりとした注入速度を使用する脳実質への巨大分子のいわゆる「逆流増強送達（convection enhanced delivery）」とは異なる。本発明に従って使用するコンジュゲートは、実質的に小さな薬物（１〜２ｋＤａ）であり、高い拡散特性を示す。広い腫瘍領域におよぶ、さらには脳梁から他の半球までおよぶ拡散が、本発明に従って使用する放射性医薬品２〜３mlをボーラス注射した３０分後以内に繰り返し観察された。
【００４１】
放射性核種標識サブスタンスＰコンジュゲートおよびその類似体は、単独で、または、他の薬学的に活性な物質と組み合わせて使用できる。他の薬学的に活性な化合物との組合せの場合、２種以上の成分の一定の組合せ（例えば部分からなるキット）を、当業者にはすでに既知のように調製し、前記コンジュゲートおよび任意の他の活性な化合物を、脳腫瘍および／または処置、例えばグリア細胞腫の標的化および処置において一般的な、相加的な、または好ましくは相乗的な効果が可能となる間隔で投与する。
【００４２】
任意の処置措置において、放射性核種標識サブスタンスＰコンジュゲートおよびその類似体の薬学的組成物は、患者に、単独で投与しても、または、２種以上の標的化毒素、他の治療剤または組成物（例えば、免疫抑制剤、耐容性誘導剤、増強剤、および副作用軽減剤を含む）を含むカクテルで投与してもよい。特に好ましい副作用軽減剤は、宿主のアレルギー反応を抑制するのに有用なものである。好ましい免疫抑制剤には、プレドニゾン、ＤＥＣＡＤＲＯＮ（Merck、Sharp and Dohme、West Point、Pa.）、シクロホスファミド、シクロスポリン、６−メルカプトプリン、メトトキレサート、アザチオプリン、およびγグロブリン、またはその組合せが含まれる。好ましい増強剤には、モネンシン、塩化アンモニウム、ペルヘキシリン、ベラパミルアマンタジン、およびクロロキンが含まれる。全てのこれらの薬剤は、一般的に許容される効果的な用量範囲で投与される。
【００４３】
投与する最適な用量は、当業者により決定され得、特定の標的および使用する化合物、調製物の強度、投与形態、および疾患状態の進行度により変更する。対象の年齢、体重、性別、食事および投与時刻を含む、処置する対象に依存する他の因子により、この特別な目的のために用量を調整する必要がでてくるだろう。コンジュゲートおよび場合により追加的な薬学的薬剤の投与は、連続的にまたは断続的に行ない得る。
【００４４】
処置において、適切な用量レベルは、一般に、約０．００１〜５０mg／kg（患者体重）／日であり、これは単回用量で投与しても、複数回用量で投与してもよい。好ましくは、用量レベルは、約０．００５〜約２５mg／kg／日であり、より好ましくは約０．０１〜約１０mg／kg／日であり、さらに最も好ましくは約０．０５〜１mg／kg／日である。
【００４５】
サブスタンスＰコンジュゲート、その類似体、およびサブスタンスＰの放射性核種標識コンジュゲートおよびその類似体は、通常好ましい合成様式としての一般的な側鎖保護形で、標準的な固相合成（ＳＰＰＳ）に従って、既知の方法で調製される。
【００４６】
固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）は、例えばＦｍｏｃ（９−フルオレンメトキシカルボニル）戦略を使用して、アプライド・バイオシステムズ・モデル４３１Ａまたは４３２Ａペプチドシンセサイザーで実施し得る。追随した一般的な原理および方法は、当分野において公知である。より正確な記載については、「フルオレンメトキシカルボニル−ポリアミド固相合成：一般的な合成および開発」−第３章「固体ペプチド合成：実践的なアプローチ」、E.AthertonおよびR.C.Sheppard、Information Press Ltd.Oxford、U.K.(1989)に言及されている。
【００４７】
得られたウンデカペプチド（サブスタンスＰまたは類似体）を、例えば、プロキレーターＤＯＴＡＧＡ（ｔＢｕ）4、ＤＯＴＡＳＡ（ｔＢｕ）4、またはＤＯＴＡ（ｔＢｕ）3と結合させる。レジンから切断し、場合により脱保護した後、生成物を、分取ＨＰＬＣにより、９９．５％より高い純度まで精製し得る。
【００４８】
得られたサブスタンスＰコンジュゲートおよび類似体コンジュゲートを、場合により脱保護しまたは脱保護しテトラアザ環残基に結合したカルボン酸基を形成した後に、既知の方法で放射性核種で標識し得る。標識は、水溶液中、脱保護コンジュゲートを、ハロゲン化物（塩化物塩、臭化物塩、ヨウ化物塩）、硫酸塩、硝酸塩、スルホン酸塩、例えばフェニルまたはトルイルスルホン酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、安息香酸塩、またはシュウ酸塩などの、無機酸または有機酸からの放射性核種塩と接触させることにより行ない得る。
【００４９】
本発明は、以下の実施例でさらに説明され、ここでサブスタンスＰコンジュゲート、その類似体、およびサブスタンスＰの放射性核種標識コンジュゲートおよびその類似体の合成および適用が、より詳しく記載されている。
【００５０】
Ａ）サブスタンスＰコンジュゲートおよびサブスタンスＰ類似体コンジュゲートの調製
ａ）ペプチド合成のための一般的な調製手順
すでに前記したように、ペプチドは、ｆｍｏｃ戦略（ｆｍｏｃ＝９−フルオレニルメトキシカルボニル）を使用して、固相で合成した。Ｎ末端アミドを得るために、ＲｉｎｋアミドＭＢＨＡレジンを使用した。合成は、RINK Engineering、Bubendorf、スイスの半自動ペプチド合成機で実施した。この合成機は、１〜１０個までの反応容器を備えていた。アミノ酸は、Novabiochem AG、Laeufelfingen、スイスから購入した。全ての試薬は、Fluka Chemie GmbH、Buchs、スイスから購入した。
【００５１】
一般に、理論的に０．７mmol／ｇのレジンをのせた１当量のＲｉｎｋ−アミドＭＢＨＡレジンを、リアクターに加えた。ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）をリアクターに加え、１５分間振とうして、レジンを膨潤させた。溶媒を除去した後、再び一部のＤＭＦを２分間以内で加えた。予め膨潤したレジンに、２０％ピペリジンのＤＭＦ溶液を５分間以内に加えて、レジンからｆｍｏｃ保護を除去した。このステップを５分以内に一度繰り返し、その後再び１２分以内に繰り返した。この手順後に、固相を、２回、０．５分間ＤＭＦで洗浄し、再度１回１分間ＤＭＦで洗浄した。ピペリジン溶液および最後の３回の洗浄のＤＭＦ溶液を収集し、エタノール（ＥｔＯＨ）で充填し５００mlとした。この溶液からアリコートを採取して、除去されたｆｍｏｃ保護基の量を分光光学的に決定した。それ故、３００nmでの溶液の吸光度を決定し、元のｆｍｏｃ量を計算した。
【００５２】
ｆｍｏｃ−アミノ酸誘導体を固相に結合させる前に、レジンを、２回、２分間、Ｎ−メチル−ピロリジノン（ＮＭＰ）で洗浄した。一方では、３当量のｆｍｏｃ保護アミノ酸誘導体を、３．３当量の１−ヒドロキシベンゾトリアゾールおよび３．３当量のＮ，Ｎ′−ジイソプロピルカルボジイミドと一緒に、ＮＭＰに溶かし、４５分間インキュベートした。その後、この結合溶液を固相に加え、約５当量のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）を加えることにより、ｐＨを７〜８の数値に調整した。反応液を、穏やかに振とうしながら、９０分間インキュベートした。反応溶液を除去した後、固相を、２回、ＤＭＦで１分間洗浄した。反応は、カイザーテストを実施して制御した：約１０ビーズの固相を、５回、エタノールで洗浄した。２０ｇフェノールの１０mlエタノール溶液を、１mlの０．０１Ｍ  ＫＣＮの４９mlピリジン溶液の１mlと混合した。５０μlのこの混合物を、ビーズに加え、５００ｇのニンヒドリンの１０mlエタノール溶液１０μlを加えた。ビーズを、１０分間、９５℃で加熱した。青いビーズにより、残りの遊離アミノ官能基が示された。
【００５３】
最初のアミノ酸の結合後、以下のｆｍｏｃ−アミノ酸を、類似の方法であるがしかし僅かに異なる時間プログラムで結合させた。それ故、合成機を、以下の表に記載のようにプログラム化した。
【表６】
2007527366.tif 000015
【００５４】
全てのアミノ酸を、Ｎ末端ｆｍｏｃ保護誘導体として使用した。リジンは、側鎖アミノ官能基上でｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）保護基を付して使用した。アルギニンは、側鎖の２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロ−ベンゾフラン−５−スルホニル（Ｐｂｆ）で保護して使用した。ペプチド合成を単一のリアクターで実施する場合、各アミノ酸の結合後にカイザーテストを行なった。カイザーテストにより残留する遊離アミノ官能基が示された場合、アミノ酸の結合を繰り返した。
【００５５】
全ての所望のペプチド配列を構築した後、固相を、５回、イソプロパノールで洗浄し、その後、各１分間５回ジエチルエーテルで洗浄した。５分間の一定の空気流により、固相を乾燥した。
【００５６】
ｂ）プロキレーターＤＯＴＡＧＡ（ｔＢｕ）4およびＤＯＴＡ（ｔＢｕ）3との結合
プロキレーターＤＯＴＡＧＡ（ｔＢｕ）4を、ＷＯ０２／２４２３５（H.R.Maeckeら）に記載のように合成した。ＤＯＴＡ（ｔＢｕ）3は、Macrocyclics Inc.、ダラス、米国で購入した。プロキレーターを結合する前に、Ｎ末端ｆｍｏｃ保護を、レジン結合ペプチドから除去した。それ故、それを１５分間ＤＭＦ中で膨潤させ、再び２分間ＤＭＦで洗浄し、その後２回２０％ピペリジンのＤＭＦ溶液で５分間処理した。その後、固相を、さらに１２分間この溶液で処理し、２回０．５分間ＤＭＦで洗浄し、さらに１分間再びＤＭＦで洗浄した。ピペリジン処理および続くＤＭＦ洗浄からの溶液を収集して、切断されたｆｍｏｃ基の含量を決定した。
【００５７】
２当量のプロキレーターおよび１．２当量のＯ−(７−アザベンゾトリアゾール−１−イル)−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）をＤＭＦに溶かし、４５分間インキュベートした。この後、２当量のＤＩＰＥＡを溶液に加えた。その後、この反応溶液を固相に加え、２分後、反応液のｐＨを制御し、必要であれば、いくらかのより多くのＤＩＰＥＡを加えることにより７〜８の間の数値に調整した。反応混合物を一晩振とうした。溶液を除去した後、固相を２回ＤＭＦで２分間洗浄し、５回イソプロパノールで洗浄し、５回ジエチルエーテルで１分間洗浄した。その後、空気流で１０分間乾燥した。
【００５８】
ｃ）脱保護、切断、および精製
固相を、フリットを備えたシリンジに加えた。９１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、５％チオアニソール、３％水、および１％トリイソプロピルシランの溶液を加え、シリンジを１時間攪拌した。その後、溶液をポリプロピレンチューブに注いだ。この溶液に、５０％ジイソプロピルエーテルおよび５０％石油エーテルの混合物を加えた。３０分間、チューブを−２０℃で冷却した。沈降物を、１００６ｇで５分間のチューブの遠心分離により収集し、溶媒をデカントした。一方で、シリンジ中の固相を、再度、上の脱保護溶液で２時間処理した。脱保護溶液を、すでに得られた沈降物に加え、固体をこれで希釈した。さらに３時間脱保護した後、粗生成物を再度沈降させ、冷却し、遠心分離にかけ、デカントにより溶媒から分離した。その後、粗生成物を、一晩真空（＜１００mbar）で保持して、残留溶媒を除去した。
【００５９】
粗生成物を、アセトニトリル：水＝１：１の混合物に溶かし、Macherey-Nagel VP Nucleosil 100-5C18、21×250mmで分取ＨＰＬＣにより精製した。実施した溶出勾配は、以下であった：Ａ＝アセトニトリル、Ｂ＝０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液；流速＝１５ml／分：０分、１５％Ａ；２５分、５０％Ａ；２６分、１００％Ａ；２８分、１００％Ａ；３０分、１５％Ａ。主ピークを収集し、蒸発乾固した。定性ＨＰＬＣおよび質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ）により分析した。Macherey-Nagel CC250/4Nucleosil 120-3C18カラムを、以下の溶出勾配を使用して分析分離に使用した：Ａ＝アセトニトリル、Ｂ＝０．１％ＴＦＡ水溶液；流速＝０．７５ml／分；０分、９０％Ａ；２０分、４０％Ａ；２３分、０％Ａ；２４分、０％Ａ；２７分、９０％Ａ。
【００６０】
以下のコンジュゲートを調製した：
【００６１】
ＤＯＴＡＧＡは、
【化２１】
2007527366.tif 000016
で示される残基を意味し、ＤＯＴＡは、
【化２２】
2007527366.tif 000017
で示される残基を意味する。
【００６２】
実施例Ａ１：
ＤＯＴＡＧＡ−Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5−Ｇｌｎ6−Ｐｈｅ7−Ｐｈｅ8−Ｇｌｙ9−Ｌｅｕ10−Ｍｅｔ11−ＮＨ2
ＤＯＴＡＧＡ−サブスタンスＰ：Ｃ82Ｈ128Ｎ22Ｏ22Ｓ、計算値（ｍ／ｚ）：１８０６．１、実測値１８０７．２；Ｒｆ：２９．８。
【００６３】
実施例Ａ２：
ＤＯＴＡ−Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5−Ｇｌｎ6−Ｐｈｅ7−Ｐｈｅ8−Ｇｌｙ9−Ｌｅｕ10−Ｍｅｔ(Ｏ2)11−ＮＨ2
ＤＯＴＡ−[Ｍｅｔ(Ｏ2)11]−サブスタンスＰ：Ｃ79Ｈ126Ｎ22Ｏ22Ｓ、計算値（ｍ／ｚ）：１７６６．９、実測値１７６６．２；Ｒｆ：２６．０。
【００６４】
実施例Ａ３：
ＤＯＴＡ−Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5−Ｇｌｎ6−Ｐｈｅ7−Ｐｈｅ8−Ｓａｒ9−Ｌｅｕ10−Ｍｅｔ11−ＮＨ2
ＤＯＴＡ−[Ｓａｒ9]−サブスタンスＰ：Ｃ80Ｈ128Ｎ22Ｏ22Ｓ、計算値（ｍ／ｚ）：１７４８．９、実測値１７４８．５；Ｒｆ：２８．０３。
【００６５】
実施例Ａ４：
ＤＯＴＡ−Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5−Ｇｌｎ6−Ｐｈｅ7−Ｔｈｉ8−Ｇｌｙ9−Ｌｅｕ10−Ｍｅｔ11−ＮＨ2
ＤＯＴＡ−[Ｔｈｉ8]−サブスタンスＰ：Ｃ77Ｈ124Ｎ22Ｏ20Ｓ2、計算値（ｍ／ｚ）：１７４０．９、実測値１７４０．７；Ｒｆ：２７．８７。
【００６６】
実施例Ａ５：
ＤＯＴＡ−Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5−Ｇｌｎ6−Ｔｈｉ7−Ｐｈｅ8−Ｇｌｙ9−Ｌｅｕ10−Ｍｅｔ11−ＮＨ2
ＤＯＴＡ−[Ｔｈｉ8]−サブスタンスＰ：Ｃ77Ｈ124Ｎ22Ｏ20Ｓ2、計算値（ｍ／ｚ）：１７４０．９、実測値１７４０．６；Ｒｆ：２７．６６。
【００６７】
実施例Ａ６：
ＤＯＴＡ−Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5−Ｇｌｎ6−Ｐｈｅ7−Ｐｈｅ8−Ｓａｒ9−Ｌｅｕ10−Ｍｅｔ(Ｏ2)11−ＮＨ2
ＤＯＴＡ−[Ｓａｒ9、Ｍｅｔ(Ｏ2)11]−サブスタンスＰ：Ｃ80Ｈ128Ｎ22Ｏ22Ｓ、計算値（ｍ／ｚ）：１７８０．９、実測値１７８０．１；Ｒｆ：２５．３４。
【００６８】
実施例Ａ７：
ＤＯＴＡ−Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5−Ｇｌｎ6−Ｐｈｅ7−Ｔｈｉ8−Ｇｌｙ9−Ｌｅｕ10−Ｍｅｔ(Ｏ2)11−ＮＨ2
ＤＯＴＡ−[Ｔｈｉ8、Ｍｅｔ(Ｏ2)11]−サブスタンスＰ：Ｃ77Ｈ124Ｎ22Ｏ22Ｓ、計算値（ｍ／ｚ）：１７７２．９、実測値１７７２．７；Ｒｆ：２５．３４。
【００６９】
実施例Ａ８：
ＤＯＴＡ−Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5−Ｇｌｎ6−Ｐｈｅ7−Ｔｈｉ8−Ｓａｒ9−Ｌｅｕ10−Ｍｅｔ11−ＮＨ2
ＤＯＴＡ−[Ｔｈｉ8、Ｓａｒ9]−サブスタンスＰ：Ｃ78Ｈ126Ｎ22Ｏ20Ｓ2、計算値（ｍ／ｚ）：１７５４．９、実測値１７５４．９；Ｒｆ：２６．７０。
【００７０】
実施例Ａ９：
ＤＯＴＡ−Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5−Ｇｌｎ6−Ｔｈｉ7−Ｔｈｉ8−Ｇｌｙ9−Ｌｅｕ10−Ｍｅｔ11−ＮＨ2
ＤＯＴＡ−[Ｔｈｉ7、Ｔｈｉ8]−サブスタンスＰ：Ｃ75Ｈ122Ｎ22Ｏ20Ｓ3、計算値（ｍ／ｚ）：１７４６．８、実測値１７４６．４；Ｒｆ：２７．２９。
【００７１】
Ｂ）放射性核種標識コンジュゲートの調製
一般的手順
90Ｙ−／111Ｉｎ−ＤＯＴＡＧＡ−サブスタンスＰ：キレーター−ペプチドコンジュゲート水溶液の無菌の３０μgアリコートに、３０ｍＣｉ90ＹＣｌ3水溶液または０．５ｍＣｉ111ＩｎＣｌ3水溶液を加え、無菌０．４Ｍ  ＮａＯＡｃ−緩衝液（ｐＨ５）で５００μlまで充填した。この溶液を、３０分間９５℃まで加熱し、１５分間室温まで冷却した。この溶液を、生理的ＮａＣｌ溶液で１mlまで希釈した。その試料を、非結合放射性核種の含量を決定するために、放射性ＨＰＬＣで制御した。90Ｙ−ＤＯＴＡＧＡ−サブスタンスＰを使用して、少量の酸化生成物90Ｙ−ＤＯＴＡＧＡ−[Ｍｅｔ(Ｏ)11]−サブスタンスＰが形成されたことが判明した。定性ＨＰＬＣを、実施例Ａ(ｃ)で記載したように実施した。
【００７２】
以下の放射性核種標識コンジュゲートを調製した：
【００７３】
実施例Ｂ１：
111Ｉｎ−ＤＯＴＡＧＡ−Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5−Ｇｌｎ6−Ｐｈｅ7−Ｐｈｅ8−Ｇｌｙ9−Ｌｅｕ10−Ｍｅｔ11−ＮＨ2
111Ｉｎ−ＤＯＴＡＧＡ−サブスタンスＰ：
Ｃ82Ｈ125ＩｎＮ22Ｏ22Ｓ計算値（ｍ／ｚ）：１９１６．８１、実測値：１９１７．６（Ｍ＋Ｈ）＋、Ｒｆ：２９．８０
【００７４】
実施例Ｂ２：
90Ｙ−ＤＯＴＡＧＡ−Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5−Ｇｌｎ6−Ｐｈｅ7−Ｐｈｅ8−Ｇｌｙ9−Ｌｅｕ10−Ｍｅｔ11−ＮＨ2
90Ｙ−ＤＯＴＡＧＡ−サブスタンスＰ
【００７５】
実施例Ｂ３：
111Ｉｎ−ＤＯＴＡ−Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5−Ｇｌｎ6−Ｐｈｅ7−Ｐｈｅ8−Ｇｌｙ9−Ｌｅｕ10−Ｍｅｔ(Ｏ2)11−ＮＨ2
111Ｉｎ−ＤＯＴＡ−[Ｍｅｔ(Ｏ2)11]−サブスタンスＰ
【００７６】
実施例Ｂ４：
111Ｉｎ−ＤＯＴＡ−Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5−Ｇｌｎ6−Ｐｈｅ7−Ｐｈｅ8−Ｓａｒ9−Ｌｅｕ10−Ｍｅｔ11−ＮＨ2
111Ｉｎ−ＤＯＴＡ−[Ｓａｒ9]−サブスタンスＰ
【００７７】
実施例Ｂ５：
111Ｉｎ−ＤＯＴＡ−Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5−Ｇｌｎ6−Ｐｈｅ7−Ｔｈｉ8−Ｇｌｙ9−Ｌｅｕ10−Ｍｅｔ11−ＮＨ2
111Ｉｎ−ＤＯＴＡ−[Ｔｈｉ8]−サブスタンスＰ
【００７８】
実施例Ｂ６：
111Ｉｎ−ＤＯＴＡ−Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5−Ｇｌｎ6−Ｔｈｉ7−Ｐｈｅ8−Ｇｌｙ9−Ｌｅｕ10−Ｍｅｔ11−ＮＨ2
111Ｉｎ−ＤＯＴＡ−[Ｔｈｉ8]−サブスタンスＰ
【００７９】
実施例Ｂ７：
111Ｉｎ−ＤＯＴＡ−Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5−Ｇｌｎ6−Ｐｈｅ7−Ｐｈｅ8−Ｓａｒ9−Ｌｅｕ10−Ｍｅｔ(Ｏ2)11−ＮＨ2
111Ｉｎ−ＤＯＴＡ−[Ｓａｒ9、Ｍｅｔ(Ｏ2)11]−サブスタンスＰ
【００８０】
実施例Ｂ８：
111Ｉｎ−ＤＯＴＡ−Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5−Ｇｌｎ6−Ｐｈｅ7−Ｔｈｉ8−Ｇｌｙ9−Ｌｅｕ10−Ｍｅｔ(Ｏ2)11−ＮＨ2
111Ｉｎ−ＤＯＴＡ−[Ｔｈｉ8、Ｍｅｔ(Ｏ2)11]−サブスタンスＰ
【００８１】
実施例Ｂ９：
111Ｉｎ−ＤＯＴＡ−Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5−Ｇｌｎ6−Ｐｈｅ7−Ｔｈｉ8−Ｓａｒ9−Ｌｅｕ10−Ｍｅｔ11−ＮＨ2
111Ｉｎ−ＤＯＴＡ−[Ｔｈｉ8、Ｓａｒ9]−サブスタンスＰ
【００８２】
実施例Ｂ１０：
111Ｉｎ−ＤＯＴＡ−Ａｒｇ1−Ｐｒｏ2−Ｌｙｓ3−Ｐｒｏ4−Ｇｌｎ5−Ｇｌｎ6−Ｔｈｉ7−Ｔｈｉ8−Ｇｌｙ9−Ｌｅｕ10−Ｍｅｔ11−ＮＨ2
111Ｉｎ−ＤＯＴＡ−[Ｔｈｉ7、Ｔｈｉ8]−サブスタンスＰ
【００８３】
実施例Ｂ１１：標識プロトコル
Ｂ）で記載したような一般的手順を５０℃で繰り返し、90ＹＣｌ3の結合を、規定された反応時間の後に検出した。以下の表の結果から、反応は、約１５分後に完了したと判断できることが理解できる。
【表７】
2007527366.tif 000018
【００８４】
Ｃ）適用実施例
実施例Ｃ１：一般的観察
ウンデカペプチドである放射性核種サブスタンスＰコンジュゲートおよびその類似体を、一般的な側鎖保護形で、標準的な固相合成（ＳＰＰＳ）に従って調製し、得られたペプチドをプロキレーターＤＯＴＡＧＡ（ｔＢｕ）4に結合させた。切断およびその後の脱保護後に、ＤＯＴＡＧＡ−サブスタンスＰおよび類似体を、分取ＨＰＬＣにより、９５％より高い純度まで精製した。得られたサブスタンスＰおよび類似体コンジュゲートを滅菌し、その後、例えば、アスコルビン酸（２ｇ／１０ml）および２，５−ジヒドロキシ安息香酸（３７０mg／１９ml）を含むｐＨ５．０に調整した０．４Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液を使用して、前記したような放射性核種塩、例えば造影のための111ＩｎＣｌ3（１回の適用につき１８ＭＢｑ）および90ＹＣｌ3（３７ＭＢｑ／μgＤＯＴＡＧＡ−サブスタンスＰ）で標識した。
【００８５】
標識はまた、Ａｃ−２２５／Ｂｉ−２１３発生物質から得られる非常に見込みのあるα線放出物質である213Ｂｉを用いて実施できた。標識収率は、Ｙ−９０およびＩｎ−１１１と同じ範囲であったが（＞９５％）、Ｂｉ−２１３は、僅か４７分間という短い半減期を示した。
【００８６】
標識過程中に、ＨＰＬＣクロマトグラム上で第二ピークが同定され、これは標識過程中の放射線分解の生成物としての90Ｙ／111Ｉｎ−ＤＯＴＡＧＡ−[Ｍｅｔ(Ｏ)11]−サブスタンスＰであると同定された。残念なことに、この誘導体は、非酸化物質に比べて１１倍低いＮＫ１受容体に対する結合親和性を示した。大量の還元剤（例えばアスコルビン酸）を緩衝液に添加することによってさえ、望ましくない酸化は完全に抑制できなかった。一方で、合成した誘導体90Ｙ／111Ｉｎ−ＤＯＴＡＧＡ−またはＤＯＴＡ−[Ｓａｒ9、Ｍｅｔ(Ｏ2)11]−サブスタンスＰは、スルホキシド誘導体よりも極めて高い親和性を示した（天然配列よりも２倍未満低い）。従って、ペプチド配列の１１位のＭｅｔ(Ｏ2)を、親和性を有意に低下させることなく導入でき、最終的に来る酸化問題は解消されることが明確に示された。
【００８７】
患者からの異なるＣＳＦ（脳脊髄液）吸引液中で90Ｙ−ＤＯＴＡＧＡ−サブスタンスＰをインキュベートするインビトロ実験によるさらなる安定性試験を実行した。ＣＳＦプローブの「品質」に関連した放射性ペプチド分解の有意差を実証できた。吸引液が無色であり透明な外見であれば（血液を含まない）、標識コンジュゲートは数時間安定であり、一方、目に見えて血清の混入した吸引液では、前記物質は、５時間以内に完全に分解した。
【００８８】
この酵素分解はまた、０〜２４時間（腹腔内注射）後の異なる尿試料および１週間（腹腔内注射）後のＣＳＦ吸引液に見られるように、患者において大きな影響があった。全ての試料は、血清の混入したＣＳＦプローブを用いてのインビトロ実験と同じ２つの放射活性代謝物を示した。尿中の放射活性の定量によりまた、ＤＯＴＡＧＡ−サブスタンスＰの代謝物に結合した適用した90Ｙの非常に急速な洗浄除去が示された。
【００８９】
実施例Ｃ２：安定性試験（競合的キレーターＤＴＰＡへの放射性核種の転移）
90Ｙ−ＤＯＴＡＧＡ−サブスタンスＰを、ｐＨ７の水に溶かし、１０5過剰のジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）と混合した。無傷の放射性核種の量を、特定の時間の後に決定した。高い安定性を示す結果を、以下の表に示した。
【表８】
2007527366.tif 000019
【００９０】
実施例Ｃ３：血清に対する代謝安定性
表に記載したような111Ｙ標識化合物を、血清と接触させ、無傷な割合の量を、特定の時間の後に決定した。修飾されたサブスタンスＰコンジュゲートのより高い安定性を示す結果を、以下の表に示した。
【表９】
2007527366.tif 000020
【００９１】
実施例Ｃ４：ＮＫ−１受容体に対する結合親和性
インビトロオートラジオグラフィーを、ＮＫ１受容体を発現している腫瘍組織を用いて実施した。使用した放射性リガンドは、125Ｉ−Bolton−Hunter-SPであった。置換実験を、０．１nMから１，０００nMの範囲の濃度で、示した表に列挙した種々の化合物を用いて、連続切片において実施した。ＩＣ50値を、１０個の放射能標識した別個のサブスタンスＰ類似体から計算し、天然ＳＰと比較した。結果を、以下の表に示した。
【表１０】
2007527366.tif 000021
【００９２】
実施例Ｃ５：ソマトスタチン標的化系とニューロキニン−１（ＮＫ−１）標的化系を比較した初期脳腫瘍における受容体オートラジオグラフィー
実施した初期グリア細胞腫の代表例の免疫組織化学的試験により、正常脳組織上でのソマトスタチン受容体のバックグラウンド発現のために、多くの場合、腫瘍浸潤脳組織と正常脳の間の区別が実質的に不可能であることが示された。この観察にも関わらず、Ｉｎ−１１１ＤＯＴＡＴＯＣシンチグラムにより、ＭＲＩで可視化されるように、腫瘍区画に、注入された放射性医薬品が限局していることが示された。これは、腫瘍内の細胞外組織構築の無秩序な構造と、非浸潤脳組織と比較した浸潤脳により最もよく説明され得た。Bakayは、彼の刊行物（Brain 1970、93、693-698）において、正常脳では約５％の細胞外空間を含むのに対して、脳腫瘍組織の特定容量の２０〜４０％を細胞外空間が占め得ることを示した。物理的に言えば、腫瘍は、利用可能なエネルギーを利用して増殖し浸潤し、そして正常脳組織がするように（エントロピーの法則）分子構築の次元を最大限にしない。グリア芽細胞腫においてのニューロキニン−１受容体の一貫した高い発現が記載されているが、また低等級および中等級のグリア細胞腫においても記載されている。従って、ソマトスタチン／ＤＯＴＡＴＯＣとサブスタンスＰ／ＮＫ−１系の間の比較オートラジオグラフィック試験を実施して、脳腫瘍における局所領域療法のための最善の標的化化合物を規定した。たった１つの上皮腫の例外を除いて、ＮＫ−１受容体の発現は、等級ＩＩ〜ＩＶの大半のグリア細胞腫において少なくとも同等またはより高い。結果により、サブスタンスＰ／ＮＫ−１系をソマトスタチン／ＤＯＴＡＴＯＣ系と容易に置き換えることで、明らかにより好ましい腫瘍対脳バックグラウンドの比により優れた応答を生じることが教義された。
【００９３】
実施例Ｃ６：90Ｙ−ＤＯＴＡＧＡ−サブスタンスＰ処置を用いた予備試験
以下のサブスタンスＰ予備試験において、生検のみとその後の90Ｙ−ＤＯＴＡＧＡ−サブスタンスＰ（処置）を含む４症例（全ての症例において、開放手術が第一処置選択肢として賢明とは思われない深部または遍在的に位置する腫瘍を有する）、および開放肉眼的全切除およびその後の放射性核種コンジュゲート近接照射療法を含む５症例が含まれた。対照として作用できる第三の群として、実質的に治療選択肢がこれ以上残っていないいわゆる標準的な措置により処置されていた５つの進行症例が含まれた。これは非対照予備試験であるので、２０年より昔に実行され公開された唯一の無作為な大規模グリア細胞腫検査の結果に依拠しなければならなかった（Walkerら、1980、N Engl J Med）。生検のみの場合、平均生存度は、さらなる処置を行なわない場合には約９週間であった。この予備試験の４症例の場合、全患者が少なくとも２ヶ月間から９ヶ月間まで生き延び、特殊な場合では、さらに、顕著な部分的応答を示しさえした。その後に内部放射性核種コンジュゲート近接照射療法を行なった切除した５症例では、全体的な生存度は、期待されたよりも明らかに長く、１４ヶ月から２６ヶ月の範囲であった。過去症例として作用する１９７０年代の唯一の大規模な無作為検査によれば、切除のみにより、約４ヶ月間の生存が期待されるが、切除に加えて外的ビーム放射性療法により、約９．５ヶ月間の平均生存度がもたらされた。極めて顕著なことには、全生存数は、時間軸上でこれらの期待される数値よりも右に位置しており、これは、コンジュゲートＹ−９０ＤＯＴＡＧＡサブスタンスＰが純水溶液よりも確かにより効果的である強い示唆と考えることができる。
【００９４】
データのこのような解釈は、90Ｙ−ＤＯＴＡＧＡ−サブスタンスＰ単独療法を使用して、切除不可能な左側視床グリア芽細胞腫（ここでは８０％を超えるグリア芽細胞腫の容量減少が観察された）で得られた、印象的な部分応答（症例W.M.）によりさらに支持された。局所グリア細胞腫療法における重要な問題は、浸潤腫瘍細胞巣または周辺病変に到達できるかどうかであった。111Ｉｎ−ＤＯＴＡＧＡ−サブスタンスＰを用いた照射症例では、４cmの遠位周辺病変において拡散性が示され、これは区画腔への腔内注射後に見えるようになった。良好な標識化にも関わらず、周辺病変は、Ｙ−９０サブスタンスＰでは制御できなかった。この症例は、標的を標識できたとしても、狭い範囲をもつ放射性核種は、この病変をはるかにより根治する可能性が高いことを証明する。これに対し、現在のα線放出物質（μm範囲）および狭い範囲のβ線放出物質（例えばＬｕ−１７７、１〜２mm）は、浸襲性腫瘍細胞クラスターの処置において優れていることが証明された。現在使用される散逸性Ｙ−９０（範囲３〜６mm）は、かさ高い病変により適していた。
【手続補正書】
【提出日】平成17年11月22日(2005.11.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2007527366000001.app
【国際調査報告】
2007527366.tif 000034
2007527366.tif 000035
2007527366.tif 000036
2007527366.tif 000037