(57)【要約】【課題】抗原に対する免疫応答を増強する、改良された戦略が切望されている。【解決手段】本発明は癌抗原の治療用の新規ワクチン製剤を提供する。このワクチンは、改変型MAGE-3抗原、NY-ESO-1抗原、ならびに、サポニンおよび免疫刺激性オリゴヌクレオチドを含んでなるアジュバントを含む。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
(a) 改変型MAGE-3抗原およびNY-ESO-1抗原またはその誘導体の組み合わせを含んでなる抗原成分、ならびに
(b) １種以上の、ミョウバン塩；コレステロール；水中油型エマルジョン(O/W型エマルジョン)；低用量の水中油型エマルジョン；免疫刺激性オリゴヌクレオチド；トコフェロール；リポソーム；サポニン；ISCOMS；およびリポ多糖を含む免疫刺激性アジュバントを含んでなるアジュバント成分
を含んでなるワクチン組成物。
【請求項２】
前記アジュバント成分が、免疫刺激性オリゴヌクレオチドとサポニンの組み合わせを含んでなる、請求項１に記載のワクチン。
【請求項３】
前記改変型MAGE-3抗原が、配列番号１に記載のポリペプチド配列を有する、請求項１または２に記載のワクチン。
【請求項４】
前記NY-ESO-1抗原が、配列番号２に記載のポリペプチド配列を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載のワクチン。
【請求項５】
前記サポニンが、コレステロール含有リポソーム中に製剤化されたQS21である、請求項１〜４のいずれか１項に記載のワクチン。
【請求項６】
前記免疫刺激性オリゴヌクレオチドがCpGである、請求項１〜５のいずれか１項に記載のワクチン。
【請求項７】
さらに、3脱-O-アシル化モノホスホリルリピドAを含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規ワクチン製剤であって、(a) 改変型MAGE-3抗原およびNY-ESO-1抗原、またはその誘導体の組み合わせを含んでなる抗原成分、ならびに(b)アジュバントを含む前記ワクチン製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
金銭的および人的資源の莫大な投資にもかかわらず、癌は依然として主要な死亡原因の一つである。
【０００３】
癌の免疫療法は当技術分野で多年にわたって記載されており、例えば、個体における癌細胞を識別し破壊する免疫応答の誘導を目的として腫瘍関連抗原を用いた患者の能動的ワクチン接種を含む方法が挙げられる。多くの癌抗原がこの目的のために記載されており、これにはMAGEファミリー抗原やNY-ESO-1抗原が含まれる。
【０００４】
これらの治療法が研究された期間の長さにも関わらず、抗原に対する免疫応答を増強するための改良された戦略が依然として切望されている。そのような戦略には、腫瘍抗原と強力なワクチンアジュバントとの組み合わせが含まれる。
【０００５】
癌／精巣(CT)抗原は免疫原性タンパク質であり、種々の癌において優勢に発現されるが、配偶子形成組織(精巣)を除く正常組織では発現されない(Kirkin, A らCancer Investigation, 2002, 20(2), 222-236)。MAGE-3およびNY-ESO-1は、CT抗原の原型として知られている。CT抗原のファミリーとしては、NY-ESO-1、PRAME、GAGEファミリー、PAGEファミリー、BAGE、XAGE ファミリー、LAGEのメンバー、SSXファミリーのメンバー(そのうちのSSX-1、-2はHOM-MEL-40、-4、-5としても知られる)、SCP-1(HOM-TES-14としても知られる)、SART-1およびSART-3、HOM-TES-85、精子タンパク質Sp17、CTp11、TSP50、CT9/BRDT、TRAG-3(タキソール耐性関連遺伝子-3)、OY-MS-4MAGE (Kirkin A.らCancer Investigation, 2002, 20(2), 222-236の表１を参照されたい)が挙げられる。
【非特許文献１】Kirkin A.らCancer Investigation, 2002, 20(2), 222-236
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は新規ワクチン製剤であって、
(a) 改変型MAGE-3抗原およびNY-ESO-1抗原またはその誘導体、の組み合わせを含んでなる抗原成分、ならびに
(b) １種以上の、ミョウバン塩；コレステロール；水中油型エマルジョン(O/W型エマルジョン)；低用量の水中油型エマルジョン；免疫刺激性オリゴヌクレオチド；トコフェロール；リポソーム；サポニン；およびリポ多糖、を含む免疫刺激性アジュバント、
を含む前記ワクチン製剤に関する。
【０００７】
また、本発明のワクチンを投与することによる個体の治療法も提供され、特定の実施形態において、ワクチンは黒色腫、非小細胞肺癌(NSCLC)または膀胱癌の治療に使用される。
【０００８】
本発明のある態様において、ワクチン組成物であって、(a) 配列番号１に記載のMAGE-3とトランケート型プロテインＤキャリアータンパク質の融合タンパク質(MAGE3-ProteinD 1/3)（本明細書および国際公開第99/40188号パンフレットに記載されている）、およびNY-ESO-1タンパク質抗原を含んでなる抗原成分、ならびに、(b)コレステロールおよびQS21を含むリポソーム構造体を、少なくとも一種の非メチル化オリゴヌクレオチドを含有する免疫刺激性オリゴヌクレオチドと組み合わせて含むアジュバント成分、を含む前記ワクチン組成物が提供される。
【０００９】
本発明のワクチンは、癌ワクチンの抗腫瘍効果を、腫瘍細胞が発現する抗原を一種類のみ含むワクチンと比較して強化することができる。この改良型ワクチンならば、より広範囲の患者を対象にできる(すなわち一つのワクチンでより多くの癌を標的とすることが可能になる)のみならず、標的腫瘍に対するより良好な免疫応答を誘導することができる。その上、ある種類の抗原の発現がワクチン接種後に低下したとしても、本発明のワクチンは腫瘍回避または逸脱の可能性を減少させる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明は、次の成分の特定の組み合わせに関する：
(i) 配列番号1に示すような、改変型MAGEタンパク質(MAGE3-プロテインD 1/3)、
(ii) NY-ESO1遺伝子産物の「免疫原性領域」、例えば、NY-ESO1タンパク質；NY-ESO1のクラスIおよび／またはクラスIIエピトープを含むタンパク質のC末端部分からなる、もしくは該部分を含むタンパク質、ポリペプチドまたはペプチド；この領域を含む重複する長大なペプチド；ならびに／あるいは特定のCD8ペプチド、
(iii) 免疫刺激性アジュバントであって、１種以上のミョウバン塩；コレステロール；水中油型エマルジョン(O/W型エマルジョン)；低用量の水中油型エマルジョン；免疫刺激性オリゴヌクレオチド、例えばCpG；トコフェロール；リポソーム；サポニン、例えばQS21；およびリポ多糖、例えばMPL、を含む免疫刺激性アジュバント。本発明での使用に適当なアジュバントの例としては、次の成分を含むかまたは次の成分からなるものが挙げられる：
a. CpG；O/W型エマルジョン/3D-MPL/QS21 (高用量); 
b. CpG/ O/W型エマルジョン低用量/3D-MPL/QS21; 
c. CpG/リポソーム/QS21;および
d. CpG/3D-MPL/QS21/リポソーム
e. QS21含有ISCOMS
f. QS21およびQS7を含むISCOMS
【００１１】
ある実施形態において、アジュバントはCpG/MPL/QS21/リポソームである。
【００１２】
同時投与のために成分(i)および(ii)を一緒に成分(iii)と製剤化してもよく、あるいは同時または逐次投与のために成分(i)および(ii)をそれぞれ別々に、成分(iii)と製剤化してもよい。
【００１３】
本発明のある実施形態において、成分(i)は、CpG/MPL/QS21/リポソームを含むアジュバント成分(iii)と製剤化され、また、成分(ii)はISCOMS、例えばQS21を含有するISCOMSまたはQS21およびQS7を含有するISCOMS、を含むアジュバント成分(iii)と製剤化される。このようにして成分(i)および(ii)を同時または逐次投与のために用意する。
【００１４】
成分(i)および(ii)は、別々の成分として発現させてもよく、または融合タンパク質として発現させてもよい。DNA／ウイルスベクターワクチンもまた想定され、その場合ワクチンは成分(i)および(ii)をコードする核酸を含み、成分(iii)はDNAワクチンに適当なアジュバントである。
【００１５】
ワクチン組成物は、MAGE-3誘導体抗原を含んでなる。本発明のある実施形態において誘導体は、異種性パートナーに連結されたMAGE-3抗原を含む融合タンパク質である。タンパク質は化学的にコンジュゲートされてもよく、または組換え融合タンパク質として発現されてもよく、そのことにより発現系において非融合タンパク質よりも増加したレベルの産生を可能にする。融合パートナーは、Tヘルパーエピトープ、例えばヒトにより認識されるTヘルパーエピトープ、を提供する補助(免疫学的融合パートナー)にもなり、または該タンパク質を天然型の組換えタンパク質よりも高収率で発現する補助(発現エンハンサー)にもなる。ある実施形態において融合パートナーは免疫学的融合パートナー、および発現エンハンサーパートナーの両方である。
【００１６】
本発明のある形態において、MAGE-3免疫学的融合パートナーは、グラム陰性細菌であるインフルエンザ菌B(Haemophilus influenzae B)の表面タンパク質であるプロテインDから誘導される(国際公開第91/18926号パンフレット)。ある実施形態において、プロテインD誘導体は、該タンパク質のおおよそ最初の１／３、特にN末端側の最初のおおよそ100〜110アミノ酸を含む。ある実施形態においてプロテインD誘導体は脂質化されている。ある実施形態においてはリポプロテインD融合パートナーの最初の109残基がN末端に付加され、ワクチン候補抗原に追加の外因性T細胞エピトープを付与し、また大腸菌(E. coli)での発現レベルを増大させる(したがって発現エンハンサーの機能も果たす)。脂質尾部は抗原の抗原提示細胞への最適な提示を保証する。
【００１７】
他のMAGE-3融合パートナーとしては、インフルエンザウイルス由来の非構造タンパク質であるNS1(血液凝集素)が挙げられる。典型的にはN末端の81アミノ酸が利用されるが、Tヘルパーエピトープを含むものであれば他の断片も使用可能である。
【００１８】
別の実施形態ではMAGE-3免疫学的融合パートナーはLYTAとして知られるタンパク質である。ある実施形態では該分子のC末端部分を使用する。LYTAは肺炎連鎖球菌 (Streptococcus pneumoniae)に由来するが、この細菌はペプチドグリカン骨格の特定の結合を特異的に分解する自己溶解酵素であるN-アセチル-L-アラニンアミダーゼ、すなわちアミダーゼLYTA(lytA遺伝子{Gene, 43 (1986) page 265-272}によりコードされる)を合成する。LYTAタンパク質のC末端ドメインは、コリンまたはいくつかのコリンアナログ（例えばDEAE)に対する親和性に関与する。この性質は、融合タンパク質の発現に有用なE.coli C-LYTA発現プラスミドの開発に利用されている。アミノ末端にC-LYTA断片を有するハイブリッドタンパク質の精製は{Biotechnology: 10, (1992) page 795-798}に記載されている。本発明において使用する場合、本発明のある実施形態は、C末端に存在し残基178から始まるLYTA分子の繰り返し成分を利用する。ある使用可能な形態は、残基188〜305を組み入れたものである。
【００１９】
本発明のある実施形態において改変型MAGE-3組成物は、国際公開第99/40188号パンフレットに開示された抗原、または免疫原性断片、例えばMAGEタンパク質を認識する免疫応答を誘導する能力を保持するペプチドを含む。本発明のワクチン用の具体的な抗原は、Gaugler B. ら, J. Exp. Med., 1994, 179, 921 (MAGE-3)に、または配列番号1(プロテインD1/3-MAGE-3、本明細書および国際公開第99/40188号パンフレットの両方に記載されている)に記載されるアミノ酸配列を有するMAGE-3ポリペプチドである。前記免疫原性組成物は、国際公開第99/40188号パンフレットに開示される方法、または当業者に知られたあらゆる周知技術により調製することができる。
【００２０】
NY-ESO-1は、国際公開第98/14464号パンフレットに記載されている腫瘍関連抗原である。該パンフレットの全内容を本明細書に組み入れる。NY-ESO-1は、Chen YT ら, Proc Natl Acad Sci USA 1997, 94: 1914-18; Scanlan ら, 2004, Cancer Immunity, 4, 1にも記載されている。NY-ESO-1のタンパク質およびポリヌクレオチド配列は、Genbank受託番号U87459、バージョンU87459.1 (配列番号2および3)に提供されている。
【００２１】
本発明の一部を成すワクチンアジュバントは、１種以上のミョウバン塩；コレステロール；水中油型エマルジョン(O/W型エマルジョン)；低用量の水中油型エマルジョン；免疫刺激性オリゴヌクレオチド；トコフェロール；リポソーム；サポニン；およびリポ多糖を含む免疫刺激性アジュバントを含んでなる。ある実施形態において、アジュバントは、免疫刺激性オリゴヌクレオチド、サポニンおよび場合によりリポ多糖(LPS)の誘導体を含む。場合により本発明のワクチンは、さらに担体を含んでいてもよい。
【００２２】
非メチル化CpGジヌクレオチド(「CpG」)を含む免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、全身性のおよび粘膜性の経路から投与されたときにアジュバントとなることが当技術分野で知られている(国際公開第96/02555号パンフレット、欧州特許第468520号明細書、Davis ら, J.Immunol, 1998, 160(2):870-876; McCluskie and Davis, J.Immunol., 1998, 161(9):4463-6)。CpGは、DNA中に存在するシトシン−グアノシン・ジヌクレオチドモチーフの略語である。歴史的には、BCGのDNA画分が抗腫瘍効果を示すことが観察された。その後の研究において、BCG遺伝子配列から導出された合成オリゴヌクレオチドが免疫刺激性効果を誘導することができることが示された(in vitroおよびin vivoの両方について)。これらの研究を行った著者らは、中央CGモチーフを含む特定のパリンドローム配列がこの活性を有すると結論付けた。免疫刺激におけるCGモチーフの中心的な役割は後にKrieg, Nature 374, p546 1995の刊行物において解明された。詳細な解析から、CGモチーフは特定の配列内になければならず、またこのような配列は細菌DNAには一般的であるが脊椎動物DNAには希であることが示された。免疫刺激性配列は多くの場合、プリン、プリン、C、G、ピリミジン、ピリミジンであり、ジヌクレオチドCGモチーフはメチル化されていない。しかしながら他の非メチル化CpG配列も免疫刺激性であることが知られており、本発明に使用可能である。６つのヌクレオチドの特定の組み合わせではパリンドローム配列が存在する。複数のこれらのモチーフが、一種類のモチーフの繰り返し、または異なるモチーフの組み合わせとして、同じオリゴヌクレオチド中に存在することができる。オリゴヌクレオチドを含有する１種以上のこうした免疫刺激性配列の存在は、種々の免疫サブセットを活性化することができるが、そうした種々の免疫サブセットにはナチュラルキラー細胞(これらはインターフェロンγを産生し、細胞溶解活性を有する)およびマクロファージ(Wooldrige ら第89巻 (no. 8), 1977)が含まれる。ワクチンに製剤化された場合、CpGは一般的に自由溶液として遊離の
抗原と一緒に投与される(国際公開第96/02555号パンフレット; McCluskie and Davis, 上記)か、または抗原に共有結合でコンジュゲートされる(PCT公開、国際公開第98/16247号パンフレット)か、または水酸化アルミニウムのような担体と共に製剤化される((肝炎表面抗原) Davis ら同上; Brazolot-Millanら, Proc.Natl.Acad.Sci., USA, 1998, 95(26), 15553-8)。
【００２３】
本発明のある態様において、本発明のワクチンに用いるオリゴヌクレオチドは、少なくとも３または少なくとも６以上のヌクレオチド分、離れた非メチル化CpGモチーフを少なくとも１つ含み得る。本発明のオリゴヌクレオチドは典型的にはデオキシヌクレオチドである。ある実施形態において、オリゴヌクレオチド中のヌクレオチド間結合はジチオリン酸結合である。別の実施形態ではヌクレオチド間結合はチオリン酸結合である。しかしながら、ホスホジエステル結合および他のヌクレオチド間結合も本発明の範囲内であり、これには入り交じったヌクレオチド間結合を有するオリゴヌクレオチドも含まれる。チオリン酸オリゴヌクレオチドまたはジチオリン酸を製造する方法は、米国特許第5,666,153号明細書、米国特許第5,278,302号明細書および国際公開第95/26204号パンフレットに記載されている。
【００２４】
使用可能なオリゴヌクレオチドの例としては以下の配列のものが挙げられる。これらの配列はチオリン酸修飾されたヌクレオチド間結合を有することができる。
【００２５】
OLIGO 1(配列番号4): TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT (CpG 1826)
OLIGO 2(配列番号5): TCT CCC AGC GTG CGC CAT (CpG 1758)
OLIGO 3(配列番号6): ACC GAT GAC GTC GCC GGT GAC GGC ACC ACG
OLIGO 4(配列番号7): TCG TCG TTT TGT CGT TTT GTC GTT (CpG 2006)
OLIGO 5(配列番号8): TCC ATG ACG TTC CTG ATG CT (CpG 1668)
【００２６】
他のCpGオリゴヌクレオチドは、重要ではない欠失または付加を有する上述の配列からなっていてもよい。
【００２７】
本発明に利用されるCpGオリゴヌクレオチドは、当技術分野の任意の方法(例えば欧州特許第468520号明細書)で合成することができる。都合の良いことに、こうしたオリゴヌクレオチドは、自動化合成装置を利用して合成することができる。典型的にはそれらは長さにして10〜50塩基である。
【００２８】
本発明に利用するオリゴヌクレオチドは典型的にはデオキシヌクレオチドである。ある実施形態においてオリゴヌクレオチド中のヌクレオチド間結合は、ジチオリン酸結合であり、またはさらに例示するならばチオリン酸結合であり、またリン酸ジエステルも本発明の範囲内にある。異なるヌクレオチド間結合を有するオリゴヌクレオチドも考慮され、例えば入り交じったチオリン酸・ホスホジエステルが挙げられる。オリゴヌクレオチドを安定化させる他のヌクレオチド間結合も利用可能である。
【００２９】
本発明のワクチンの組み合わせに使用可能なサポニンには、キラヤ(Quillaja Saponaria Molina、バラ科植物)の樹皮から誘導されるQuil Aと呼ばれるもの、およびその画分が含まれ、これは米国特許第5,057,540号明細書、および “Saponins as vaccine adjuvants”, Kensil, C. R., Crit Rev Ther Drug Carrier Syst, 1996, 12 (1-2):1-55;および欧州特許第0 362 279 号明細書に記載されている。Quil Aの適当な画分の例はQS21、QS7およびQS17である。溶血性サポニンであるQS21およびQS17(Quil AのHPLC精製画分)は強力な全身用アジュバントとして記載されており、その製造方法は米国特許第5,057,540号明細書および欧州特許第0 362 279号明細書に開示されている。これらの文献にはまた、全身用ワクチンの強力なアジュバントとして作用するQS7(Quil-Aの非溶血性画分)の使用も記載されている。QS21の使用はKensil ら (1991,J.Immunology vol 146, 431-437)にさらに記載されている。QS21および、ポリソルベートまたはシクロデキストリンの組み合わせもまた知られている(国際公開第99/10008号パンフレット)。
【００３０】
免疫刺激性複合体(ISCOMS)と呼ばれる微粒子構造体のうち、Quil Aのある画分を含むものは溶血性であり、ワクチン製造に使用されている(Morein, B.,欧州特許第0 109 942号明細書)。こうした構造体はアジュバント活性を有すると報告されている(欧州特許第0 109 942 号明細書、国際公開第96/11711号パンフレット)。QS21および、ポリソルベートまたはシクロデキストリンの組み合わせもまた知られている(国際公開第99/10008号パンフレット)。Quil Aの画分、例えばQS21およびQS7を含む微粒子アジュバント系は、国際公開第96/33739号パンフレットおよび国際公開第96/11711号パンフレットに記載されている。
【００３１】
本発明のある実施形態において、アジュバント成分は、QS21含有ISCOMSを含んでなる。さらなる実施形態において、アジュバント成分はQS21およびQS7を含有するISCOMSを含む。
【００３２】
本発明のアジュバント組み合わせはさらに担体を含んでもよい。この担体はアジュバントと簡単に混合するだけでもよく、あるいはアジュバントを微粒子担体実体と組み合わせて該組み合わせのアジュバント性を増強することができる。全身用ワクチンは例えば担体分子を含んでもよい。例となる担体としては、無機塩類(例えば、限定するものではないが、アルミニウムまたはカルシウム塩)、リポソーム、ISCOMS、エマルジョン(水中油型、油中水型、水中油中水型エマルジョン)、ポリマー(例えば、限定するものではないが、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリホスファジン、ポリアミノ酸、アルギネート、キトサンポリマー)または微粒子が挙げられる。本発明のワクチンはさらに抗原を含み、その抗原はCpG-担体複合体と組み合わせてもよく、またはしなくてもよい。その場合、抗原は自由懸濁液中に存在していてもよく、または別の担体と組み合わせてもよい。
【００３３】
本発明の一部分を成すサポニンは、ミセルの形態で別に存在してもよく、または巨大な秩序ある構造体の形態、例えばISCOM(欧州特許第0 109 942号明細書)またはコレステロールおよび脂質と製剤化する場合にはリポソーム(国際公開第96/33739号パンフレットに記載されている「DQ」)として、または水中油型エマルジョンの形態(国際公開第95/17210号パンフレット)で存在してもよい。サポニンは金属塩、例えば水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウムなどと組み合わせてもよい(国際公開第98/15287号パンフレット)。あるいは、サポニンは微粒子担体、例えばキトサンと組み合わせてもよい。サポニンはまた、粉末のような乾燥状態であってもよい。最終的な製剤は、それがワクチン接種される者の粘膜表面に投与される形態では、性質として溶血性であってもよい。サポニンは、同一の微粒子担体分子との、直接連結を介してまたは共相互作用により抗原と物理的に結合していてもよく、またはしていないくてもよい(英国特許第9822712.7号明細書、国際公開第98/16247号パンフレット)。
【００３４】
本発明のアジュバントまたはワクチンに使用可能なCpGおよびサポニンは、それ自身別に存在してもよく、または組み合わせてもよい。例えばCpGおよびサポニンは自由懸濁液中に存在してもよく、または担体、例えば水酸化アルミニウムのような微粒子担体を介して、またはカチオン性リポソームまたはISCOMにより結合していてもよい。
【００３５】
本発明のアジュバント組み合わせの一例は、２つの隣接するCGモチーフの間に少なくとも３または少なくとも６ヌクレオチドを含む１以上のCpGオリゴヌクレオチドと、水中油型エマルジョンまたはDQからなる群より選択される微粒子担体およびQS21とから構成される。リポ多糖はジ-またはモノホスホリル脂質誘導体であってもよい。リポ多糖は3脱-Oアシル化されたもの、特に3脱Oアシル化モノホスホリルリピドAであってもよい。ある実施形態において、アジュバント組み合わせは、QS21と混合されたCpG 2006(配列番号4)、またはCpG 1758(配列番号2)またはCpG 1826(配列番号1)、および水中油型エマルジョンまたはDQからなる群より選択される微粒子担体を含む。これに従い本発明のワクチンは、例えば、このようなアジュバント組み合わせおよび抗原を含む。本発明のワクチンは、全身性の経路を介して個体に投与後、全身性の免疫応答が誘導されるように使用することができる。
【００３６】
本発明のワクチンの一部を形成し得る典型的なアジュバント組成物は、国際公開第00/62800号パンフレットに記載されている。
【００３７】
本発明のアジュバント組み合わせは、油に基づくエマルジョンを含むことができる。油型エマルジョンアジュバントは長年に渡って知られており、これにはフロイントの完全および不完全鉱油エマルジョンアジュバントの研究も含まれる。その時以来、こうした強力だが免疫応答誘発性でもあるアジュバント製剤の代わりとなる安定でよく許容されるものを設計すべく多くの研究がなされてきた。
【００３８】
多くの単相または多相型エマルジョン系が記述されている。水中油型エマルジョンアジュバント自体がアジュバント組成物として有用であると提唱されており(欧州特許第O 399 843号明細書)、また、水中油型エマルジョンおよび他の有効成分の組み合わせがワクチン用のアジュバントとして記載されている(国際公開第95/17210号パンフレット、国際公開第98/56414号パンフレット、国際公開第99/12565号パンフレット、国際公開第99/11241号パンフレット)。他の油型エマルジョンアジュバントも記述されており、例えば油中水型エマルジョン(米国特許第5,422,109号明細書、欧州特許第0 480 982号明細書)、および水中油中水型エマルジョン(米国特許第5,424,067号明細書、欧州特許第0 480 981号明細書)が挙げられる。
【００３９】
本発明に使用する油型エマルジョンアジュバントは、天然または合成性であってもよく、無機または有機であってもよい。鉱油および有機油の例は、当業者に容易に明らかとなるであろう。
【００４０】
水中油型組成物がヒト投与に適するためには、エマルジョン系の油相が代謝可能な油を含んでもよい。代謝可能な油という用語の意味は当技術分野でよく知られている。代謝可能とは「代謝により変換され得る」と定義される(Dorland’s Illustrated Medical Dictionary, W.B. Sanders Company, 第25版(1974))。油は、受容者に有毒でなく、かつ代謝により変換され得る、あらゆる植物油、魚油、動物油または合成油であってもよい。ナッツ(例えばラッカセイ油)、種子および穀類は、植物油の一般的な供給源である。合成油もまた本発明の一部であり、市販の油、例えばNEOBEE（登録商標）などが含まれる。スクアレン(2,6,10,15,19,23-ヘキサメチル-2,6,10,14,18,22-テトラコサヘキサエン)は、不飽和油であり、鮫肝油に多量存在し、オリーブ油、コムギ胚芽油、コメ糠油および酵母に少量存在する、本発明に使用するのに適した油である。スクアレンは、コレステロール生合成の中間体である(Merck index, 第10版, entry no.8619)ことから、代謝可能な油である。
【００４１】
本発明に使用するための油型エマルジョンの例は、水中油型エマルジョン、特に水中スクアレン型エマルジョンである。
【００４２】
さらに、本発明の油型エマルジョンアジュバントは、抗酸化剤を含んでもよく、それは油α-トコフェロール(ビタミンE、欧州特許第0 382 271号明細書)であってもよい。
【００４３】
国際公開第95/17210号パンフレットおよび国際公開第99/11241号パンフレットは、スクアレン、α-トコフェロール、およびTWEEN 80に基づくエマルジョンアジュバントであって、場合により免疫刺激物質QS21および／または3D-MPLと共に製剤化されたものを開示する。国際公開第99/12565号パンフレットは、油相にステロールを添加することによる、こうしたスクアレン型エマルジョンの改良を開示する。さらに、トリグリセリド、例えばトリカプリリン(C27H50O6)を油相に添加してエマルジョンを安定化することができる(国際公開第98/56414号パンフレット)。
【００４４】
安定な水中油型エマルジョン中に存在する油滴の大きさは、１ミクロン未満であってもよく、実質的に30〜600nmの範囲であってもよく、例えば直径が実質的に約30〜500nm、例えば直径が実質的に150〜500nm、特に直径が約150nmであってもよく、これは光子相関分光法により測定される。この点に関連して、数にして油滴の80％はこれらの例示した範囲内に収まるべきであり、または例えば数にして油滴の90％より多く、または95％より多くが所定の粒径範囲内に収まるべきである。本発明の油型エマルジョンに存在する成分の量は、一般的に、２〜10％の油(例えばスクアレン)、存在するならば２〜10％のα-トコフェロール、0.3〜3％の界面活性剤(例えばモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン)である。油：α-トコフェロールの比率は１以下であってもよい、なぜならばこの比率はより安定なエマルジョンをもたらすからである。Span 85もまた約１％のレベルで存在してもよい。いくつかの場合には、本発明のワクチンがさらに安定剤を含んでなることが有利である。
【００４５】
水中油型エマルジョンの製造方法は当業者によく知られている。一般的にはこの方法は、油相を界面活性剤、例えばPBS/TWEEN80TM溶液と混合し、その後ホモジェナイザーを用いてホモジェナイズすることを含む。当業者にとって、この混合物を注射針に２回通すことを含む方法が、少量の液体をホモジェナイズするのに適当であることは明らかであろう。同様に、当業者ならば、マイクロ流動化装置によるエマルジョン化処理工程(M110Sマイクロ流動化装置、最大50パス、6 barの最大入口圧力(約850 barの出口圧力)で２分間)を適応して、より小さなまたは大きな容量のエマルジョンを製造することができる。この適応は、所定の直径を有する油滴の調製物が得られるまで、生じるエマルジョンを測定することを含む、定型的な実験により達成することができる。
【００４６】
本発明のワクチンは、全身性のまたは非経口の経路、例えば筋内、皮内、経皮、皮下、腹腔内、または静脈内投与を介して投与することができる。
【００４７】
本発明の全身用ワクチン調製物は、癌に易罹患性であるか、または癌を罹患している哺乳動物を保護または処置するために使用することができ、これは前記ワクチンを筋内、腹腔内、皮内、経皮、静脈内または皮下投与することによって投与してもよい。本発明のワクチンは、非小細胞肺癌(NSCLC)、黒色腫、または膀胱癌を罹患している個体を治療するために使用することができる。
【００４８】
従って、個体におけるMAGE-3およびNY-ESO-1に対する免疫応答を誘導する方法であって、本発明のワクチンを該個体に投与することを含む前記方法が提供される。
【００４９】
本発明のアジュバントに使用するためのサポニンの量は、用量当たり1〜1000μg、例えば用量当たり1〜500μg、または例えば用量当たり1〜250μg、または例えば用量当たり1〜100μgの範囲であり得る。従ってCpG：サポニンの比(w/w)は、1:1000〜1000:1の範囲であり、典型的には1:100〜100:1の範囲であり、または例えば1:10〜1:1もしくは1:1〜10:1の範囲である。ある実施形態において、該比率は1:1、4:1または10:1である。
【００５０】
本発明のアジュバントまたはワクチン中のCpGまたは免疫刺激性オリゴヌクレオチドの量は一般的には少ないが、ワクチン製剤に応じて用量当たり1〜1000μg、例えば用量当たり1〜500μg、または例えば用量当たり1〜100μgの範囲であり得る。
【００５１】
ワクチン調製はNew Trends and Developments in Vaccines, Voller ら編集, University Park Press, Baltimore, Maryland, U.S.A. 1978に概略記載されている。
【００５２】
本発明は、個体がNSCLC、黒色腫、および膀胱癌からなる群より選択される疾患を罹患するのを予防する方法であって、本明細書に実質的に記載された組成物を該個体の全身性経路を介して投与することを含む前記方法を提供する。
【００５３】
本発明の組み合わせに使用するための適当な製薬上許容される賦形剤の例としては、水、リン酸緩衝生理食塩水、等張性緩衝溶液が挙げられる。
【００５４】
場合により、ワクチンアジュバント成分はさらに、LPSの誘導体、例えば3D-MPLを含む。こうしたアジュバントの例としては、CpG、3D-MPLおよびQS21の組み合わせ(欧州特許第0 671 948号明細書)、CpG、3D-MPLおよびQS21を含む水中油型エマルジョン(国際公開第95/17210号パンフレット、国際公開第98/56414号パンフレット)、または他の担体と製剤化された3D-MPL(欧州特許第0 689 454号明細書)を、本明細書に記載するCpGオリゴヌクレオチドと組み合わせたものが挙げられる。
【００５５】
本発明のアジュバント組み合わせは、少なくとも１種の腸内細菌性のリポ多糖由来アジュバントを含んでもよい。
【００５６】
腸内細菌性のリポ多糖(LPS)が免疫系の強力な刺激物質であることは長い間知られてきたが、アジュバント中でのその使用はその有毒作用のために制限されてきた。LPSの非毒性誘導体であるモノホスホリルリピドA(MPL)は、コア糖鎖基を除去し還元末端グルコサミンからリン酸を除去することにより生成されるが、これはRibi ら(1986, Immunology and Immunopharmacology of bacterial endotoxins, Plenum Publ. Corp., NY, p407-419)によって記載されており、次の構造を有する：
【化１】
2007536326.tif 000002
【００５７】
さらなる毒性を抑えたバージョンのMPLは、二糖骨格の３位からアシル鎖を除去することにより得られ、3-O-脱アシル化モノホスホリルリピドA(3D-MPL)と呼ばれる。これは、英国特許第2122204号明細書に教示されている方法により精製し調製することができ、この文献はまたジホスホリルリピドA、およびその3-O-脱アシル化変形化合物の調製を開示している。3D-MPLの形態の一例は、直径が0.2μm未満の小さな粒径の粒子を有するエマルジョンの形態のものであり、その製造方法は国際公開第94/21292号パンフレットに開示されている。モノホスホリルリピドAおよび界面活性剤を含む水性製剤は国際公開第98/43670号パンフレットに記載されている。
【００５８】
本発明のアジュバント組み合わせに製剤化することのできる細菌性のリポ多糖誘導アジュバントは、細菌性の供給源から精製して加工してもよく、あるいはそれらは合成されたものであってもよい。例えば精製されたモノホスホリルリピドAはRibi ら 1986(同上)に記載されており、また、サルモネラ菌種(Salmonella sp.)から誘導される3-O-脱アシル化モノホスホリルまたはジホスホリルリピドAは英国特許第2220211号明細書および米国特許第4912094号明細書に記載されている。他の精製および合成リポ多糖も記載されている(国際公開第98/01139号パンフレット、米国特許第6,005,099号明細書および欧州特許第0 729 473号明細書、Hilgers ら, 1986, Int. Arch. Allergy. Immunol., 79(4):392-6、Hilgersら, 1987, Immunology, 60(1):141-6、および欧州特許第0 549 074号明細書)。細菌性のリポ多糖アジュバントは、3D-MPLおよびβ(1-6)グルコサミン二糖類(米国特許第6,005,099号明細書および欧州特許第0 729 473号明細書に記載)であってもよい。
【００５９】
従って本発明に使用可能なLPS誘導体は、LPSまたはMPLまたは3D-MPLと構造が類似している免疫刺激物質である。本発明の別の態様においてLPS誘導体は、上述のMPLの構造の一部分である、アシル化単糖類であってもよい。
【００６０】
二糖類アジュバントの一例は、次の化学式で表される精製または合成リピドAである：
【化２】
2007536326.tif 000003
[式中、R2はHまたはPO3H2であってもよく、R3はアシル鎖またはβ-ヒドロキシミリストイル基または次の化学式：
【化３】
2007536326.tif 000004
{式中R４は
【化４】
2007536326.tif 000005
であり、XおよびYは0〜約20の値である}
で表される3-アシルオキシアシル基であってもよい]。
【００６１】
ある典型的なワクチン製剤は、油相に約12mgのα-トコフェロール、約11mgのスクアレン、および約5mgのtween 80を有し、かつ水相に50μgの3D-MPLおよび50μgのQS21および500μgのCpGを有する水中油型エマルジョンを含有する、0.5 mlのアジュバント組成物を含む。別の例証的なワクチン製剤は、油相に約2 mgのα-トコフェロール、約2mgのスクアレン、および約1mgのtween 80を有し、かつ水相に50μgの3D-MPLおよび50μgのQS21を有する、水中油型エマルジョンを含有する。
【００６２】
別の実施形態においては、国際公開第99/40188号パンフレットに記載されたような改変型MAGEタンパク質；NY-ESO1遺伝子産物の「免疫原性領域」、例えばNY-ESO1タンパク質；NY-ESO1のクラスIおよび／またはクラスIIエピトープを有するタンパク質のC末端部分からなるかもしくは該部分を含むタンパク質、ポリペプチドまたはペプチド；該領域を含む重複する長大なペプチド；ならびに／あるいは特定のCD8ペプチド；１種以上のミョウバン塩、水中油型エマルジョン(O/Wエマルジョン)を含む免疫刺激性アジュバント、を含むワクチン組成物を提供する。
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【配列表】
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【国際調査報告】
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