(57)【要約】  記載されているのは、Ｃ型肝炎感染の予防または処置に有用な特性を有する、例えば、本明細書で定義の式Ｉ、ＩａまたはIIの、非免疫抑制性シクロフィリン結合性シクロスポリンである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
シクロスポリンが、(ｉ)０.７未満の結合率(ＢＲ)でヒト組み換えシクロフィリンと結合し(ＢＲは、競合ＥＬＩＳＡ試験で測定して、同時の試験でのシクロスポリンのＩＣ５０のシクロスポリンＡのＩＣ５０に対する比率の底１０の対数である)；そして(ii)混合リンパ球反応において、シクロスポリンＡの５％を超えない活性を有するものである、Ｃ型肝炎感染またはＣ型肝炎ウイルス(ＨＣＶ)誘発障害を予防または処置するための医薬組成物の製造における、シクロスポリンの使用。
【請求項２】
ＨＣＶ複製阻害のための医薬組成物の製造における、請求項１記載のシクロスポリンの使用。
【請求項３】
移植片レシピエントにおけるＨＣＶ感染の再発を予防するための医薬組成物の製造における、請求項１記載のシクロスポリンの使用。
【請求項４】
シクロスポリンが、式Ｉ
【化１】
2007504260.tif 000008
〔式中、
Ｗは、ＭｅＢｍｔ、ジヒドロ−ＭｅＢｍｔ、８'−ヒドロキシ−ＭｅＢｍｔまたはＯ−アセチル−ＭｅＢｍｔ１であり；
ＸはαＡｂｕ、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、ＮｖａまたはＯ−メチルスレオニン(ＭｅＯＴｈｒ)であり；
ＲはＰｒｏ、Ｓａｒ、(Ｄ)−ＭｅＳｅｒ、(Ｄ)−ＭｅＡｌａ、または(Ｄ)−ＭｅＳｅｒ(Ｏアセチル)であり；
ＹはＭｅＬｅｕ、チオＭｅＬｅｕ、γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ、ＭｅＩｌｅ、ＭｅＶａｌ、ＭｅＴｈｒ、ＭｅＡｌａ、ＭｅａＩｌｅまたはＭｅａＴｈｒ；Ｎ−エチルＶａｌ、Ｎ−エチルＩｌｅ、Ｎ−エチルＴｈｒ、Ｎ−エチルＰｈｅ、Ｎ−エチルＴｙｒまたはＮ−エチルＴｈｒ(Ｏアセチル)であり
ＺはＶａｌ、Ｌｅｕ、ＭｅＶａｌまたはＭｅＬｅｕであり、
ＱはＭｅＬｅｕ、γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ、ＭｅＡｌａまたはＰｒｏであり、
Ｔ１は(Ｄ)ＡｌａまたはＬｙｓであり、
Ｔ２はＭｅＬｅｕまたはγ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕであり、そして
Ｔ３はＭｅＬｅｕまたはＭｅＡｌａである。〕
の化合物、
式Ｉａ
【化２】
2007504260.tif 000009
〔式中、
Ｗ'はＭｅＢｍｔ、ジヒドロ−ＭｅＢｍｔまたは８'−ヒドロキシ−ＭｅＢｍｔであり；
ＸはαＡｂｕ、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、ＮｖａまたはＯ−メチルスレオニン(ＭｅＯＴｈｒ)であり；
Ｒ'はＳａｒ、(Ｄ)−ＭｅＳｅｒ、(Ｄ)−ＭｅＡｌａ、または(Ｄ)−ＭｅＳｅｒ(Ｏアセチル)であり；
Ｙ'はＭｅＬｅｕ、γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ、ＭｅＩｌｅ、ＭｅＶａｌ、ＭｅＴｈｒ、ＭｅＡｌａ、ＭｅａＩｌｅまたはＭｅａＴｈｒ；Ｎ−エチルＶａｌ、Ｎ−エチルＩｌｅ、Ｎ−エチルＴｈｒ、Ｎ−エチルＰｈｅ、Ｎ−エチルＴｙｒまたはＮ−エチルＴｈｒ(Ｏアセチル)であり、
ＺはＶａｌ、Ｌｅｕ、ＭｅＶａｌまたはＭｅＬｅｕであり；そして
Ｑ'はＭｅＬｅｕ、γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕまたはＭｅＡｌａである。〕
の化合物、
または式II
【化３】
2007504260.tif 000010
〔式中、
Ｗａは、
【化４】
2007504260.tif 000011
(式中、Ｒａは式ＩｃまたはＩｄ
【化５】
2007504260.tif 000012
の残基であり、ここで、Ｒ４はＣ１−４アルキルチオ、アミノＣ１−４アルキルチオ、Ｃ１−４アルキルアミノＣ１−４アルキルチオ、ジＣ１−４アルキルアミノ−Ｃ１−４アルキルチオ、ピリミジニルチオ、チアゾリルチオ、Ｎ−Ｃ１−４アルキルイミダゾリルチオ、ヒドロキシＣ１−４アルキルフェニルチオ、ヒドロキシＣ１−４アルキルフェノキシ、ニトロフェニルアミノまたは２−オキソピリミジン−１−イルであり、そしてＲ'４はＣ１−４アルキルである)、
であり、
ＸａはＡｂｕであり；
Ｒａは−ＮＭｅ−ＣＨ(Ｒｂ)−ＣＯ−であり、ここで、ＲｂはＨまたは−Ｓ−Ａｌｋ−Ｒ０であり、ここで、Ａｌｋ−Ｒ０はメチルであるか；またはＡｌｋは直鎖または分枝鎖Ｃ２−６アルキレンまたはＣ３−６シクロアルキレンであり、そしてＲ０はＨ；ＯＨ；ＣＯＯＨ；Ｃ２−５アルコキシ−カルボニル；ＮＲ１Ｒ２であり、ここで、各Ｒ１およびＲ２は、独立して、Ｈ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ３−６シクロアルキルおよびフェニル(各々所望によりハロゲン、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ２−５アルコキシカルボニル、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノおよび／またはジＣ１−４アルキル−アミノで置換されてよい)から、ならびにベンジルおよびヘテロ環式ラジカル(該ベンジルおよびヘテロ環式ラジカルは、飽和または不飽和であり、かつ５または６環員および１から３個のヘテロ原子を有する)から選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、それらが結合している窒素原子と一体となって、窒素、酸素および硫黄から選択されるもう一つのヘテロ原子を含んでいても良く、かつ所望によりＣ１−４アルキル、フェニルまたはベンジルで置換されている４−から６員ヘテロ環を形成するか；または各Ｒ１およびＲ２は、独立して、式Ｉｂ
【化６】
2007504260.tif 000013
(式中、Ｒ１およびＲ２は上記で定義の通りであり、Ｒ３はＨまたはＣ１−４アルキルであり、そしてｎは２から４の範囲の整数である)
のラジカルであり；
ＹａはＭｅＬｅｕまたはγ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕであり；
ＺａはＶａｌであり；そして
ＱａはＭｅＬｅｕである。
ただし、ＹａがＭｅＬｅｕであるとき、ＲｂはＨではない。〕
の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項５】
請求項１記載のシクロスポリンを、１個またはそれ以上の薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む、Ｃ型肝炎感染またはＨＣＶ誘発障害の予防または処置のための医薬組成物。
【請求項６】
ａ)請求項１記載のシクロスポリンである第一剤、およびｂ)抗ＨＣＶ特性を有する併用剤を含む、医薬的組み合わせ。
【請求項７】
ａ)請求項１記載のシクロスポリンである第一剤、およびｂ)抗ＨＣＶ特性を有する薬剤、抗繊維形成剤、免疫調節剤またはＳ１Ｐ受容体アゴニストから選択される、併用剤を含む、Ｃ型肝炎感染またはＨＣＶ誘発障害の予防または処置に使用するための医薬的組み合わせ。
【請求項８】
処置を必要とする対象におけるＣ型肝炎感染またはＨＣＶ誘発障害を予防または処置する方法であり、該対象に治療的有効量の請求項１記載のシクロスポリンを投与することを含む、方法。
【請求項９】
培地中のＨＣＶ複製を阻害する方法であり、その培地に有効量の請求項１記載のシクロスポリンを適用することを含む、方法。
【請求項１０】
処置を必要とする患者におけるＨＣＶ複製を阻害する方法であり、該対象に治療的有効量の請求項１記載のシクロスポリンを投与することを含む、方法。
【請求項１１】
処置を必要とする移植片レシピエントにおけるＨＣＶ感染の再発を防止する方法であり、該レシピエントに治療的有効量の請求項１記載のシクロスポリンを投与することを含む、方法。
【請求項１２】
治療的有効量の請求項１記載のシクロスポリンと、抗ＨＣＶ特性を有する薬剤、抗繊維形成剤、免疫調節剤またはＳ１Ｐ受容体アゴニストから選択される併用剤を、同時にまたは連続して併用投与することを含む、請求項８から１１のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、非免疫抑制性シクロスポリンの新規使用に関する。
【０００２】
シクロスポリンは、一般的に薬理学的な、特に免疫抑制性、または抗炎症性活性を有する、構造的に特徴のある、環状、ポリ−Ｎ−メチル化ウンデカペプチドのクラスを構成する。単離された最初のシクロスポリンは、天然に存在する真菌代謝物シクロスポリン(Ciclosporin)またはシクロスポリン(Cyclospoine)であり、またシクロスポリンＡとしても既知である。
【０００３】
シクロスポリンＡがＴ細胞活性化の過程を、ＩＬ−２の転写開始の遮断により妨害することにより作用することはよく確立されている。シクロスポリンＡは、シクロフィリンと名付けられた１７ｋＤサイトソルタンパク質と複合体を形成することが示されており、これは多くの細胞系で起こり、タンパク質折りたたみに関与する酵素であるペプチジル−プロリルｃｉｓ−ｔｒａｎｓイソメラーゼと同一であることが示されている。
【０００４】
しかしながら、シクロフィリンへの結合は、免疫抑制活性に必要条件であるが、十分条件ではないことが判明した。シクロスポリンＡ／シクロフィリン複合体はまたホスファターゼスーパーファミリーに属するカルシニューリン(ＣＮ)と名付けられた細胞性タンパク質とも結合できる。この結合は、そのホスファターゼ活性を無くし、転写因子ＮＦ−ＡＴの沈黙化をもたらす。ＣＮ／ＮＦ−ＡＴ経路の阻害は、シクロスポリンＡ介在免疫抑制に必須の機構である。
【０００５】
シクロフィリンと強く結合するが、免疫抑制性ではないシクロスポリンが同定されている。シクロスポリンは、混合リンパ球反応(ＭＬＲ)において、シクロスポリンＡの５％を超えない、好ましくは２％を超えない活性を有するとき、非免疫抑制性であると見なされる。混合リンパ球反応は、T. Meo in “Immunological Methods”, L. Lefkovits and B. Peris, Eds., Academic Press, N.Y. pp. 227 - 239 (1979)により記載されている。Ｂａｌｂ／ｃマウス(雌、８−１０週齢)の脾臓細胞(０.５×１０６)を、５日間、０.５×１０６の照射した(２０００ラド)またはマイトマイシンＣ処置したＣＢＡマウス(雌、８−１０週齢)由来の脾臓細胞と共インキュベートする。照射した同種細胞は、Ｂａｌｂ／ｃ脾臓細胞の増殖性応答を誘発し、これは、ＤＮＡへの標識前駆体の取り込みにより測定でできる。刺激物質である細胞が照射(またはマイトマイシンＣ処置)されているため、それらはＢａｌｂ／ｃ細胞に増殖では応答しないが、それらの抗原性は維持している。ＭＬＲで判明した試験化合物のＩＣ５０は、並行実験で判明したシクロスポリンＡのそれと同等である。加えて、非免疫抑制性シクロスポリンは、ＣＮおよび下流ＮＦ−ＡＴ経路を阻害する能力が欠失している。
【０００６】
ＥＰ０４８４２８１Ａ１は、ＡＩＤＳまたはＡＩＤＳ関連障害の処置における非免疫抑制性シクロスポリンの使用を記載している。
【０００７】
本発明により、驚くべきことに、シクロフィリンに結合する非免疫抑制性シクロスポリンが、Ｃ型肝炎ウイルス(ＨＣＶ)に対する阻害効果を有することが、判明した。
【０００８】
非Ａ非Ｂ型感染の主要な原因因子として同定されているＨＣＶによる持続的な感染は、慢性肝炎、肝硬変または肝細胞癌腫のような肝臓疾患と密接に関係していると見なされている。これらの肝臓疾患の発症は、主要な国民的健康問題である。有効な抗ＨＣＶ治療は、インターフェロン、またはインターフェロンとリバビリンの組み合わせでの治療に限定されている。しかしながら、約半数のＨＣＶ患者からウイルスが排除されないため、代替的な抗ＨＣＶ剤の強い必要性がまだ存在する。
【０００９】
従って、本発明は、Ｃ型肝炎感染またはＨＣＶ誘発障害の予防または処置における、非免疫抑制性シクロフィリン結合性シクロスポリンの使用を提供する。
【００１０】
Ｃ型肝炎感染またはＨＣＶ誘発障害は、例えば慢性肝炎、肝臓硬変または肝臓癌、例えば肝細胞癌腫である。非免疫抑制性シクロフィリン結合性シクロスポリンはまた、例えばＨＣＶ感染母体から生まれた新生児の、またはウイルスに曝されているヘルスケア従事者、または移植後のＨＣＶ感染の再発の可能性を排除するために移植片レシピエント、例えば臓器または組織移植片、例えば肝臓移植片レシピエントに、予防的処置として使用し得る。
【００１１】
シクロスポリンは、Quesniaux in Eur. J. Immunol. 1987 17 1359-1365により記載されている競合的ＥＬＩＳＡ試験において、ヒト組み換えシクロフィリンに、シクロスポリンＡの少なくとも１／５結合したとき、シクロフィリンに結合すると見なす。この試験において、試験すべきシクロスポリンを、シクロフィリンと、被覆ＢＳＡ−シクロスポリンＡのインキュベーションの間に添加し、競合剤なしの対照反応の５０％阻害をもたらすのに必要な濃度(ＩＣ５０)を計算する。結果を、試験化合物のＩＣ５０とシクロスポリンＡ自体のＩＣ５０の比率の底１０の対数である結合率(ＢＲ)として示す。故に、１.０のＢＲは、試験化合物が、シクロスポリンＡよりもシクロフィリンに１０倍少なく結合することを意味し、負の値は、シクロスポリンＡより強く結合することを意味する。ＨＣＶに対して活性なシクロスポリンは、０.７より低い、好ましくは０以下のＢＲを有する。
【００１２】
非免疫抑制性シクロフィリン結合性シクロスポリンの例は、例えば式Ｉ
【化１】
2007504260.tif 000002
〔式中、
ＷはＭｅＢｍｔ、ジヒドロ−ＭｅＢｍｔ、８'−ヒドロキシ−ＭｅＢｍｔまたはＯ−アセチル−ＭｅＢｍｔ１であり；
ＸはαＡｂｕ、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、ＮｖａまたはＯ−メチルスレオニン(ＭｅＯＴｈｒ)であり；
ＲはＰｒｏ、Ｓａｒ、(Ｄ)−ＭｅＳｅｒ、(Ｄ)−ＭｅＡｌａ、または(Ｄ)−ＭｅＳｅｒ(Ｏアセチル)であり；
ＹはＭｅＬｅｕ、チオＭｅＬｅｕ、γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ、ＭｅＩｌｅ、ＭｅＶａｌ、ＭｅＴｈｒ、ＭｅＡｌａ、ＭｅａＩｌｅまたはＭｅａＴｈｒ；Ｎ−エチルＶａｌ、Ｎ−エチルＩｌｅ、Ｎ−エチルＴｈｒ、Ｎ−エチルＰｈｅ、Ｎ−エチルＴｙｒまたはＮ−エチルＴｈｒ(Ｏアセチル)であり、
ＺはＶａｌ、Ｌｅｕ、ＭｅＶａｌまたはＭｅＬｅｕであり、
ＱはＭｅＬｅｕ、γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ、ＭｅＡｌａまたはＰｒｏであり、
Ｔ１は(Ｄ)ＡｌａまたはＬｙｓであり、
Ｔ２はＭｅＬｅｕまたはγ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕであり、そして
Ｔ３はＭｅＬｅｕまたはＭｅＡｌａである。〕
の化合物を含む。
【００１３】
式Ｉの好ましい化合物は、例えば式Ｉａ
【化２】
2007504260.tif 000003
〔式中、
Ｗ'はＭｅＢｍｔ、ジヒドロ−ＭｅＢｍｔまたは８'−ヒドロキシ−ＭｅＢｍｔであり；
ＸはαＡｂｕ、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、ＮｖａまたはＯ−メチルスレオニン(ＭｅＯＴｈｒ)であり；
Ｒ'はＳａｒ、(Ｄ)−ＭｅＳｅｒ、(Ｄ)−ＭｅＡｌａ、または(Ｄ)−ＭｅＳｅｒ(Ｏアセチル)であり；
Ｙ'はＭｅＬｅｕ、γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ、ＭｅＩｌｅ、ＭｅＶａｌ、ＭｅＴｈｒ、ＭｅＡｌａ、ＭｅａＩｌｅまたはＭｅａＴｈｒ；Ｎ−エチルＶａｌ、Ｎ−エチルＩｌｅ、Ｎ−エチルＴｈｒ、Ｎ−エチルＰｈｅ、Ｎ−エチルＴｙｒまたはＮ−エチルＴｈｒ(Ｏアセチル)であり、
ＺはＶａｌ、Ｌｅｕ、ＭｅＶａｌまたはＭｅＬｅｕであり；そして
Ｑ'はＭｅＬｅｕ、γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕまたはＭｅＡｌａである。〕
の化合物である。
【００１４】
Ｗ'、Ｘ、Ｙ'、Ｚ、Ｑ'およびＲ'の基は、独立して、下記の好ましい意味を有する：
Ｗ'は好ましくはＷ”であり、ここで、Ｗ”はＭｅＢｍｔまたはジヒドロ−ＭｅＢｍｔである；
Ｘは好ましくはＸ'であり、ここで、Ｘ'はαＡｂｕまたはＮｖａであり、より好ましくはＸ”であり、ここで、Ｘ”はαＡｂｕである；
Ｒ'は好ましくはＲ”であり、ここで、Ｒ”はＳａｒである；
Ｙ'は好ましくはＹ”であり、ここで、Ｙ”はγ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ、ＭｅＶａｌ、ＭｅＴｈｒ、ＭｅＩｌｅ、Ｎ−エチルＩｌｅまたはＮ−エチルＶａｌである；
Ｚは好ましくはＺ'であり、ここで、Ｚ'はＶａｌまたはＭｅＶａｌである；そして
Ｑ'は好ましくはＱ”であり、ここで、Ｑ”はＭｅＬｅｕである。
【００１５】
式Ｉａの化合物の好ましい群は、Ｗ'がＷ”であり、ＸがＸ'であり、Ｙ'がＹ”であり、ＺがＺ'であり、Ｑ'がＱ”であり、そしてＲ'がＲ”であるものである。
【００１６】
式Ｉａの好ましい化合物の例は、例えば：
ａ)[ジヒドロ−ＭｅＢｍｔ]１−[γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]４−シクロスポリン；ＢＲ＊＝０.１；ＩＲ＜１％
ｂ)[ＭｅＶａｌ]４−シクロスポリン；ＢＲ＝０.１；ＩＲ＜１％
ｃ)[ＭｅＩｌｅ]４−シクロスポリン；ＢＲ＝−０.２；ＩＲ＜１％
ｄ)[ＭｅＴｈｒ]４−シクロスポリン；
ｅ)[γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]４−シクロスポリン；ＢＲ＝０.４；ＩＲ＜１％
ｆ)[エチル−Ｉｌｅ]４−シクロスポリン；ＢＲ＝０.１；ＩＲ＜２％
ｇ)[エチル−Ｖａｌ]４−シクロスポリン；ＢＲ＝０；ＩＲ＜２％
ｈ)[Ｎｖａ]２−[γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]４−シクロスポリン；
ｉ)[γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]４−[γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]６−シクロスポリン；
ｊ)[ＭｅＶａｌ]５−シクロスポリン；ＢＲ＝０.４；ＩＲ＝５.３％
ｋ)[Ｍｅ０Ｔｈｒ]２−[(Ｄ)ＭｅＡｌａ]３−[ＭｅＶａｌ]５−シクロスポリン；
ｊ)[８'−ヒドロキシ−ＭｅＢｍｔ]１−シクロスポリン；ＢＲ＝０.３５；ＩＲ＝１.８％
ｋ)[ＭｅＡｌａ]６−シクロスポリン；ＢＲ＝−０.４；ＩＲ＝３.２
ｌ)[γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]９−シクロスポリン；ＢＲ＝０.１５；ＩＲ＝２.９
ＩＲ＝免疫抑制比、シクロスポリンＡに対する活性のパーセントとして示す。
【００１７】
非免疫抑制性シクロスポリンのさらなる例は、それらの内容を本明細書に引用して包含するＷＯ９８／２８３３０、ＷＯ９８／２８３２９およびＷＯ９８／２８３２８に記載の化合物、例えば式II
【化３】
2007504260.tif 000004
〔式中、
Ｗａは
【化４】
2007504260.tif 000005
(式中、Ｒａは式ＩｃまたはＩｄ
【化５】
2007504260.tif 000006
の残基であり、ここで、Ｒ４はＣ１−４アルキルチオ、アミノＣ１−４アルキルチオ、Ｃ１−４アルキルアミノＣ１−４アルキルチオ、ジＣ１−４アルキルアミノ−Ｃ１−４アルキルチオ、ピリミジニルチオ、チアゾリルチオ、Ｎ−Ｃ１−４アルキルイミダゾリルチオ、ヒドロキシＣ１−４アルキルフェニルチオ、ヒドロキシＣ１−４アルキルフェノキシ、ニトロフェニルアミノまたは２−オキソピリミジン−１−イルであり、そしてＲ'４はＣ１−４アルキルである)、
であり、
ＸａはＡｂｕであり；
Ｒａは−ＮＭｅ−ＣＨ(Ｒｂ)−ＣＯ−であり、ここで、ＲｂはＨまたは−Ｓ−Ａｌｋ−Ｒ０であり、ここで、Ａｌｋ−Ｒ０はメチルであるか；またはＡｌｋは直鎖または分枝鎖Ｃ２−６アルキレンまたはＣ３−６シクロアルキレンであり、そしてＲ０はＨ；ＯＨ；ＣＯＯＨ；Ｃ２−５アルコキシ−カルボニル；ＮＲ１Ｒ２であり、ここで、各Ｒ１およびＲ２は、独立して、Ｈ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ３−６シクロアルキルおよびフェニル(各々所望によりハロゲン、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ２−５アルコキシカルボニル、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノおよび／またはジＣ１−４アルキル−アミノで置換されてよい)から、ならびにベンジルおよびヘテロ環式ラジカル(該ベンジルおよびヘテロ環式ラジカルは、飽和または不飽和であり、かつ５または６環員および１から３個のヘテロ原子を有する)から選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、それらが結合している窒素原子と一体となって、窒素、酸素および硫黄から選択されるもう一つのヘテロ原子を含んでいても良く、かつ所望によりＣ１−４アルキル、フェニルまたはベンジルで置換されている４−から６員ヘテロ環を形成するか；または各Ｒ１およびＲ２は、独立して、式Ｉｂ
【化６】
2007504260.tif 000007
(式中、Ｒ１およびＲ２は上記で定義の通りであり、Ｒ３はＨまたはＣ１−４アルキルであり、そしてｎは２から４の範囲の整数である)
のラジカルであり；
ＹａはＭｅＬｅｕまたはγ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕであり；
ＺａはＶａｌであり；そして
ＱａはＭｅＬｅｕである。
ただし、ＹａがＭｅＬｅｕであるとき、ＲｂはＨではない。〕
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。
【００１８】
式IIの化合物において、Ｒ１および／またはＲ２がヘテロ環式残基であるとき、それはピリジル、テトラヒドロ−ピリジル、ピペリジル、イミダゾリル、オキサゾリルまたはチアゾリルであり得る。Ｒ１およびＲ２がそれらが結合している窒素原子と共にヘテロ環式残基を形成するとき、例示として、ヘテロ環式残基は、アゼチジニル、ピペリジル、ピペラジニル、Ｎ−メチル−ピペラジニル、Ｎ−フェニルピペラジニル、Ｎ−ベンジルピペラジニル、ピリジル、イミダゾリル、モルホリノ、チオモルホリノ、テトラヒドロピリジル、メチルテトラヒドロピリジル(例えば４−メチル−テトラヒドロピリジル)またはフェニルテトラヒドロピリジル(例えば４−フェニルテトラヒドロピリジル)から選択し得る。
【００１９】
式Ｉ、ＩａまたはIIの化合物は、例えば、その内容を引用により本明細書に包含するＥＰ０４８４２８１Ａ１、ＷＯ００／０１７１５、ＷＯ９８／２８３３０、ＷＯ９８／２８３２９またはＷＯ９８／２８３２８に記載の通り、下記の通り分類し得る様々な方法で得ることができる：
１)発酵
２)バイオトランスフォーメーション
３)誘導体化
４)部分合成
５)全合成。
【００２０】
一連のさらなる具体的なまたは別の態様において、本発明はまた下記を提供する：
１.１  処置を必要とする対象におけるＣ型肝炎感染またはＨＣＶ誘発障害を予防または処置する方法であり、該対象に治療的有効量の非免疫抑制性シクロフィリン結合性シクロスポリン、例えば式Ｉ、ＩａまたはIIの化合物を投与することを含む、方法。
本発明によって、非免疫抑制性シクロフィリン結合性シクロスポリンは、Ｃ型肝炎の１種またはそれ以上の徴候または症状を軽減または排除するのに有効な量、例えば、対象の血清サンプルで測定したＨＣＶ−ＲＮＡを減少させるのに有効な量で投与し得る。
【００２１】
１.２  培地中のＨＣＶ複製を阻害する方法であり、その培地に有効量の非免疫抑制性シクロフィリン結合性シクロスポリン、例えば式Ｉ、ＩａまたはIIの化合物を適用することを含む、方法。
【００２２】
１.３  処置を必要とする患者におけるＨＣＶ複製を阻害する方法であり、該対象に治療的有効量の非免疫抑制性シクロフィリン結合性シクロスポリン、例えば式Ｉ、ＩａまたはIIの化合物を投与することを含む、方法。
【００２３】
１.４  処置を必要とする移植片レシピエントにおけるＨＣＶ感染の再発を防止する方法であり、該レシピエントに治療的有効量の非免疫抑制性シクロフィリン結合性シクロスポリン、例えば式Ｉ、ＩａまたはIIの化合物のシクロスポリンを投与することを含む、方法。
【００２４】
２.  上記の方法のいずれかに使用するための医薬組成物の製造のための、非免疫抑制性シクロフィリン結合性シクロスポリン、例えば式Ｉ、ＩａまたはIIの化合物の使用。
【００２５】
３.  非免疫抑制性シクロフィリン結合性シクロスポリン、例えば式Ｉ、ＩａまたはIIの化合物を、１個またはそれ以上の薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む、上記の方法のいずれかに使用するための医薬組成物。
【００２６】
非免疫抑制性シクロフィリン結合性シクロスポリン(以後、“本発明のシクロスポリン”)の、上記で特記の疾患および状態の処置における有用性は、標準動物試験または臨床試験で、例えば、下記に記載の方法に従って、証明し得る。
【００２７】
Ａ.  インビトロ
細胞培養：Ｈｕｈ−７およびＭＨ−１４細胞、ＨＣＶレプリコン細胞を、１０％ウシ胎児血清(ＦＢＳ)添加ダルベッコ改変イーグル培地(ＤＭＥＭ)で培養する。ＰＨ５ＣＨ８細胞を、１００ng／mlの上皮細胞生長因子、１０μ／mlのインスリン、０.３６μg／mlのヒドロコルチゾン、５μg／mlのトランスフェリン、５μg／mlのリノール酸、２０ng／mlのセレン、４μg／mlのグルカゴン、１０ng／mlのプロラクチン、１０μg／mlのゲンタマイシン、２００μg／mlのカナマイシンおよび２％ＦＢＳを添加したＤＭＥＭおよびＦ１２培地の１：１混合物で培養する。
【００２８】
免疫ブロット分析：免疫ブロット分析を、K. Watashi et al., Virology 2001, 286, 391-402に記載の通り行う。この実験で使用する一次抗体は、抗ＮＳ５Ａ、抗ＮＳ５Ｂおよび抗β−アクチン(Sigma)抗体である。
【００２９】
間接的免疫蛍光分析：間接的免疫蛍光分析を、K. Watashi, supraに記載の通り行う。この実験で使用する一次抗体は、抗ＮＳ５Ａおよび抗ＰＤＩ(StressGen)抗体である。
【００３０】
逆転写(ＲＴ)−ポリメラーゼ連鎖反応(ＰＣＲ)分析
培養細胞の総ＲＮＡを、Sepasol-RNA I Super(ナカライテスク)で、製造者の推奨に従い単離する。ＲＴ−ＰＣＲ分析を、一工程ＲＮＡ  ＰＣＲキット(タカラ)を製造者の指示通り、使用して行う。２',５'−オリゴアデニレートシンテターゼおよび二本鎖ＲＮＡ−依存性タンパク質キナーゼのｍＲＮＡの検出に使用するプライマーは、各々５'−ＣＣＧＴＧＡＡＧＴＴＴＧＡＧＧＴＣＣＡＧ−３'、５'−ＧＡＣＴＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＣＣＧＴＣＣＧ−３'および５'−ＴＧＧＣＣＧＣＴＡＡＡＣＴＴＧＣＡＴＡＴＣ−３'、５'−ＧＣＧＡＧＴＧＴＧＣＴＧＧＴＣＡＣＴＡＡＡＧ−３'である。
【００３１】
ノーザンブロット分析：ノーザンブロット分析を、H. Kishine et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 2002, 47, 119-125に記載の通り行う。本実験で使用するＮＳ５Ｂ配列に相補的なプローブは、H. Kishine, supraに記載されている。
【００３２】
リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ分析：ＨＣＶゲノムＲＮＡの５'−ＵＴＲを、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ７７００配列ディテクター(Applied Biosystems)を使用して、T. Takeuchi et al., Gastroenterology, 1999, 116, 636-642に記載のように定量する。本実験で使用する前向きおよび逆向きプライマーは各々５'−ＣＧＧＧＡＧＡＧＣＣＡＴＡＧＴＧＧ−３'および５'−ＡＧＴＡＣＣＡＣＡＡＧＧＣＣＴＴＴＣＧ−３'である。蛍光性プローブは５'−ＣＴＧＣＧＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＧＴＡＣＡＣ−３'である。内部対照として、リボソームＲＮＡをまたTaqMan Ribosomal RNA Control Reagents(Applied Biosystems)を使用して定量する。
【００３３】
インビトロＨＣＶ感染実験：インビトロＨＣＶ感染実験を、本質的にN. Kato et al., Jpn. J. Cancer Res. 1996, 87, 787-792およびM. Ikada et al., Virus Res., 1998, 56, 157-167に記載の通り行う。ＰＨ５ＣＨ８細胞(１×１０５)を、ＨＣＶ陽性血液ドナーから調製した血漿１Ｂ−２(１０４〜１０５ＨＣＶ  ＲＮＡコピーに等しいで感染させる。接種２４時間後、細胞を３回リン酸緩衝化食塩水(ＰＢＳ)で洗浄し、新鮮培地に維持する。
【００３４】
トランスフェクションおよびレポーターアッセイ：ＭＨ−１４およびＨ９細胞へのトランスフェクションを、各々FuGENE 6(Roche)およびLipofectamine 2000トランスフェクション試薬(Invitrogen)を使用して、製造者のプロトコールに従って行う。レポーターアッセイを、K. Watashi, supraに記載の通り行う。本試験で使用するレポータープラスミドは、ｐＮＦＡＴ−Ｌｕｃ、ｐＡＰ１−Ｌｕｃ、ｐＮＦＫＢ−Ｌｕｃ(PathDetect Reporter System;Stratagene)、およびｐＲＬ−ＴＫ(Dual-luciferase reporter assay system;Promega)である。
【００３５】
図１Ａに示す通りＨＣＶサブゲノムレプリコンが、自立的に複製しているＭＨ−１４細胞を使用した、本発明の様々なシクロスポリンの、ＨＣＶゲノムの複製に対する効果。本発明のシクロスポリン、例えば[ＭｅＩｌｅ]４−シクロスポリン、例えば１μg／mlでの、ならびに陽性対照として使用した１００Ｕ／ml  ＩＦＮαでの７日間の処置により、ＨＣＶ  ＮＳ５ＡおよびＮＳ５Ｂタンパク質は、免疫ブロット分析で検出不可能なレベルまで減少する。間接的免疫蛍光分析は、ＮＳ５Ａタンパク質産生が、本発明のシクロスポリン１μg／mlで処置した全ての細胞で減少するが、内部対照としての小胞体マーカーであるタンパク質ジスルフィドイソメラーゼ(ＰＤＩ)のレベルは、この条件下では変わらないことを示す。本発明のシクロスポリンは、このアッセイで、ＨＣＶレプリコン細胞におけるＨＣＶタンパク質発現を減少させる。
【００３６】
レプリコンＲＮＡを、本発明のシクロスポリンまたはＩＦＮαで７日間処置したまたは処置なしのＭＨ−１４細胞で、ノーザンブロット分析により分析する。例えば１μg／mlの本発明のシクロスポリン、例えば[ＭｅＩｌｅ]４−シクロスポリンでの処置は、レプリコンＲＮＡの量を検出可能なレベルまで減少させる。１００Ｕ／ml  ＩＦＮαでの処置は同様の効果を生む。加えて、力価が徐々に減少し、ＨＣＶ  ＲＮＡのレベルは、７日目には元々の約１／４００まで減少する。ＩＦＮαとの併用処置の場合、試験したいずれの時点でも(３日目、５日目および７日目)、シクロスポリンまたはＩＦＮαのいずれかでの単剤処置と比較してさらに減少する：シクロスポリンおよびＩＦＮαで７日間処置したＭＨ−１４細胞のレプリコンＲＮＡレベルは、ＩＦＮα単独で処置した細胞よりも有意に減少する。
【００３７】
さらに、ＰＨ５ＣＨ８細胞(非新生物性肝細胞系)を、ＨＣＶ陽性血漿で処置し、続いて接種後種々の時点のＨＣＶ  ＲＮＡゲノム力価を、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ分析で定量する。この細胞における接種５日後のＨＣＶ  ＲＮＡゲノム力価は、１日目と比較して約１０倍増加しているが、本発明のシクロスポリン、例えば[ＭｅＩｌｅ]４−シクロスポリン、またはＩＦＮαで連続的に処置した細胞において、この時点でのＨＣＶ  ＲＮＡゲノム力価増加は観察されなかった。本発明のシクロスポリンは、ＨＣＶ感染培養肝細胞の複製を阻害する。
【００３８】
結果は図２Ｅ、２Ｆおよび２Ｇに示す：免疫ブロット分析(２Ｅ)、間接的免疫蛍光分析(２Ｆ)およびリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ分析(２Ｇ)を、[ＭｅＩｌｅ]４−シクロスポリン(■)または非シクロフィリン結合性シクロスポリン(●)、例えば６−[[Ｒ−(Ｅ)]−６,７−ジデヒドロ−Ｎ,４−ジメチル−３−オキソ−Ｌ−２−アミノオクタン酸]−７−Ｌ−バリン−シクロスポリンＡで処置したＭＨ−１４細胞を使用して行う。２Ｅおよび２Ｆにおける対照(一列目)、処置無し；２ＥのＣｙｓＡ、１μg／ml；２Ｅ(■)および２Ｆ(■)の[ＭｅＩｌｅ]４−シクロスポリン、１μg／ml；２Ｅ(●)および２Ｆ(●)の非シクロフィリン結合性シクロスポリン、１μg／ml。
【００３９】
Ｂ.  臨床試験
慢性Ｃ型肝炎感染を有する合計１５名の患者を、２週間の試験に登録する。各患者に、本発明のシクロスポリン、例えば[ＭｅＩｌｅ]４−シクロスポリンを、７から１５mg／kg  ｐ.ｏ.で投与する。Ｃ型肝炎抗原の血清レベルを、各患者で０日目および１４日目に測定する。
【００４０】
Ｃ型肝炎感染、特に慢性ＨＣＶ感染を有する人は、下記徴候または症状の１種またはそれ以上を示し得る：(ａ)上昇したＡＬＴ、(ｂ)抗ＨＣＶ抗体試験陽性、(ｃ)ＨＣＶ−ＲＮＡの試験陽性で証明されるようなＨＣＶの存在、(ｄ)慢性肝臓疾患の臨床的徴候、(ｅ)肝細胞傷害。このような基準はＣ型肝炎の診断に使用し得るだけでなく、薬剤処置に対する患者の応答の評価にも使用できる。
【００４１】
上昇した血清アラニンアミノトランスフェラーゼ(ＡＬＴ)およびアスパルテートアミノトランスフェラーゼ(ＡＳＴ)は、制御されていないＣ型肝炎において起こることが知られており、処置に対する完全な応答は、これらの血清酵素、特にＡＬＴの正常化として一般に定義される(Davis et al., 1989, New Eng. J. Med. 321:1501-1506)。ＡＬＴは、肝臓細胞が破壊されたときに放出される酵素であり、ＨＣＶ感染を示す。
【００４２】
薬剤処置に応答する対象におけるＨＣＶ複製の経過を追うため、ＨＣＶ  ＲＮＡを、血清サンプルにおいて、例えば、ＨＣＶゲノムのＮ５３およびＮ５４非構造的遺伝子領域に由来する２セットのプライマーを使用するネスティッド・ポリメラーゼ連鎖反応アッセイにより測定し得る。Farci et al., 1991, New Eng. J. Med. 325:98-104. Ulrich et al., 1990, J. Clin. Invest., 86:1609-1614。
【００４３】
肝臓生検サンプルの組織学的試験を、評価の第２基準として使用し得る。例えば、その組織学的活動指数(肝門炎症、断片的または架橋壊死、小葉傷害および線維症)が、疾患活動の採点法を提供する、Knodell et al., 1981, Hepatology 1:431-435参照。
【００４４】
本発明の方法の実施に際し必要な一日投与量は、例えば、用いる非免疫抑制性シクロフィリン結合性シクロスポリン、宿主、投与形態、処置すべき状態の重症度に依存して変化するであろう。好ましい一日投与量は、１回投与量または分割投与量として、約１から５０mg／kg／日である。患者への適当な一日投与量は、例えば１から２０mg／kg  ｐ.ｏ.またはｉ.ｖ.の程度である。経口投与用の適当な単位投与形は、約０.２５から１０mg／kg活性成分、例えば[ＭｅＩｌｅ]４−シクロスポリンを、１個またはそれ以上の薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む。
【００４５】
本発明のシクロスポリンは、任意の慣用の経路で、特に経腸的に、例えば経口で、例えば飲用液、錠剤またはカプセルの形で、または非経腸的に、例えば注射用溶液または懸濁液の形で投与し得る。好ましい医薬組成物は、例えばＵＫ２,２２２,７７０Ａに記載のようなマイクロエマルジョンを利用したものであり得る。
【００４６】
本発明のシクロスポリンを、唯一の成分として、または、他の薬剤、例えば抗ＨＣＶ活性を有する薬剤、例えばインターフェロン、例えばインターフェロン−α−２ａまたはインターフェロン−α−２ｂ、例えばＩｎｔｒｏｎＲＡ、ＲｏｆｅｒｏｎＲ、ＡｖｏｎｅｘＲ、ＲｅｂｉｆＲまたはＢｅｔａｆｅｒｏｎＲ、または水溶性ポリマーに、またはヒトアルブミンと結合したインターフェロン、例えばａｌｂｕｆｅｒｏｎ、抗ウイルス剤、例えばリバビリン、ラミブジン、ＮＶ０８またはＮＭ２８３、ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ、ヘリカーゼまたはＲＮＡポリメラーゼのようなＨＣＶコード化因子の阻害剤またはこのような阻害剤のプロドラッグ、抗繊維形成剤、例えばＮ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体、例えばイマチニブ、免疫調節剤、例えばミコフェノール酸、その塩もしくはプロドラッグ、例えばミコフェノール酸ナトリウムもしくはミコフェノール酸モフェチル、またはＳ１Ｐ受容体アゴニスト、例えばＦＴＹ７２０または、例えばＥＰ６２７４０６Ａ１、ＥＰ７７８２６３Ａ１、ＥＰ１００２７９２Ａ１、ＷＯ０２／１８３９５、ＷＯ０２／７６９９５、ＷＯ０２／０６２６８、ＪＰ２００２３１６９８５、ＷＯ０３／２９１８４、ＷＯ０３／２９２０５、ＷＯ０３／６２２５２およびＷＯ０３／６２２４８に記載のような、所望によりリン酸化されているそれらの類似体と共に投与し得る。
【００４７】
水溶性ポリマーへのインターフェロンの結合は、とりわけポリエチレングリコール(ＰＥＧ)またはポリプロピレングリコールのようなポリアルキレンオキシドホモポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール、そのコポリマーおよびそのブロックコポリマーへの結合を含むことを意味する。ポリアルキレンオキシドベースのポリマーの代わりに、デキストラン、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコール、炭水化物−ベースのポリマーなどを使用できる。このようなインターフェロン−ポリマー結合体は、米国特許４,７６６,１０６、４,９１７,８８８、欧州特許出願０２３６９８７、欧州特許出願０５１０３５６および国際出願公開ＷＯ９５／１３０９０に記載されている。重合化修飾が抗原性応答の減少に十分であるため、外来インターフェロンは、完全に自己由来である必要はない。ポリマー結合体の製造に使用するインターフェロンは、ヒト、反芻動物またはウシインターフェロンのような哺乳類抽出物由来、または組み換えにより製造したものであってよい。好ましいのは、ペグ化インターフェロンとしても既知の、ポリエチレングリコールに結合したインターフェロンである。
【００４８】
とりわけ好ましいインターフェロンの結合体は、α−インターフェロン、例えばペグ化インターフェロン−α−２ａ、ペグ化インターフェロン−α−２ｂ；ペグ化コンセンサスインターフェロンまたはペグ化精製インターフェロン−α産物である。ペグ化インターフェロン−α−２ａは、例えば欧州特許５９３,８６８に記載されており、例えば商品名ＰＥＧＡＳＹＳ(登録商標)(Hoffmann-La Roche)として商業的に入手可能である。ペグ化インターフェロン−α−２ｂは、例えば欧州特許９７５,３６９に記載されており、例えば商品名ＰＥＧ−ＩＮＴＲＯＮ  Ａ(登録商標)(Schering Plough)として商業的に入手可能である。ペグ化コンセンサスインターフェロンはＷＯ９６／１１９５３に記載されている。好ましいペグ化α−インターフェロンは、ペグ化インターフェロン−α−２ａおよびペグ化インターフェロン−α−２ｂである。また好ましいのは、ペグ化コンセンサスインターフェロンである。
【００４９】
使用する併用剤の一日投与量は、例えば、用いる化合物、宿主、投与形態および処置すべき状態の重症度に依存して変換するであろう。例えば、ラミブジンは１００mgの一日量で投与し得る。ペグ化インターフェロンは、非経腸で週に１回から３回、好ましくは週に１回、１週間の総量が２００から１０００万ＩＵ、より好ましい５００から１０００万ＩＵ、最も好ましくは、８００から１０００万ＩＵで投与する。
【００５０】
前記によって、本発明は、さらに別の局面において、下記を提供する：
４.  ａ)非免疫抑制性シクロフィリン結合性シクロスポリン、例えば式Ｉ、ＩａまたはIIの化合物である第一剤、およびｂ)併用剤、例えば上記で定義の第二薬剤を含む、例えば上記で定義の方法のいずれかに使用するための、医薬的組み合わせ。
【００５１】
５.  治療的有効量の非免疫抑制性シクロフィリン結合性シクロスポリン、例えば式Ｉ、ＩａまたはIIの化合物、および併用剤、例えば上記で定義の第二薬剤を、同時にまたは連続して併用投与することを含む、上記で定義の方法。
【００５２】
本明細書で使用する“併用投与”または“組み合わせ投与”などの用語は、選択した治療剤を、単独の患者に投与することを包含することを意味し、薬剤を必ずしも同じ投与経路でまたは同時に投与するものではない処置レジメンを含むことを意図する。
【００５３】
本発明の医薬的組み合わせの投与は、その薬学的活性成分の一方のみを投与する単剤両方と比較して、優れた効果、例えば、相乗的値量効果をもたらす。好ましい相乗的組み合わせは、非免疫抑制性シクロフィリン結合性シクロスポリンと、所望によりポリマーに結合しているインターフェロンの組み合わせである。
【００５４】
さらに好ましい組み合わせは、非免疫抑制性シクロフィリン結合性シクロスポリンと、ミコフェノール酸、その塩もしくはプロドラッグとの、または、Ｓ１Ｐ受容体アゴニスト、例えばＦＴＹ７２０との組み合わせである。
【００５５】
[ＭｅＩｌｅ]４−シクロスポリンまたは[ＭｅＶａｌ]４−シクロスポリンが、本発明での使用に好ましい非免疫抑制性シクロフィリン結合性シクロスポリンである。
【図面の簡単な説明】
【００５６】
(原文に記載なし)
【図１】
2007504260.tif 000014
【図２】
2007504260.tif 000015
【国際調査報告】
2007504260.tif 000016
2007504260.tif 000017
2007504260.tif 000018
2007504260.tif 000019
2007504260.tif 000020