(57)【要約】【課題】ビオチンの分解が低減されている、及び／又はビオチンの安定性が優れた、ビオチン含有酸性組成物を提供することを目的とする。【解決手段】エタノールの含有量が低減されていることを特徴とする、ビオチンを含有する酸性組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビオチンを含有する酸性組成物であって、エタノールの含有量が０．１重量％未満であることを特徴とする、組成物。
【請求項２】
エタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミンの含有量が合計で０．１重量％未満である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
プロトン性有機溶媒の含有量が合計で０．１重量％未満である、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
容器詰め飲料又は容器詰めゼリー飲料である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
ビオチンを含有する酸性組成物の製造方法であって、エタノールの量が０．１重量％未満となるように原材料を配合することを含む、方法。
【請求項６】
エタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミンの量が合計で０．１重量％未満となるように原材料を配合することを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
プロトン性有機溶媒の量が合計で０．１重量％未満となるように原材料を配合することを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記組成物が容器詰め飲料又は容器詰めゼリー飲料である、請求項５〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
酸性組成物中におけるビオチンの安定性を向上させる方法であって、前記組成物中に含まれるエタノールの量を０．１重量％未満とすることを含む、方法。
【請求項１０】
前記組成物中に含まれるエタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミンの量を合計で０．１重量％未満とすることを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記組成物中に含まれるプロトン性有機溶媒の量を合計で０．１重量％未満とすることを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記組成物が容器詰め飲料又は容器詰めゼリー飲料である、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ビオチンの分解速度が低減されている、及び／又はビオチンの安定性が優れた、ビオチン含有酸性組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ビオチンはビタミンＢ群の一種であり、ビタミンＨ又は補酵素Ｅとも称される。ビオチンは、生体内で、カルボキシラーゼの補酵素としてカルボキシル化反応を触媒している。カルボキシル化反応は、糖新生、分岐鎖アミノ酸、脂肪酸合成、エネルギー代謝等に関与する。ビオチンを配合した組成物が上市されている。
【０００３】
特許文献１には、ビオチンがビタミンＢ２共存条件で分解しやすいという課題を解決するために、ビオチンとビタミンＢ２とを含む液剤に更にビタミンＣを配合することで、ビオチンの安定性を向上させることが記載されている。
【０００４】
特許文献２には、ビオチンとビタミンＢ２とを含む液剤に更にトシシ抽出物を配合することで、ビオチンの安定性を向上させることが記載されている。
【０００５】
特許文献３には、内用液剤においてビオチンが還元糖（例えば砂糖）の存在下では不安定であることから、糖アルコールを甘味剤として配合することが好ましい場合があることが記載されている。
【０００６】
特許文献４には、砂糖などの甘味料を配合したｐＨ２〜５の内服液剤にビオチンを配合するとビオチンが分解することから、甘味料としてステビア抽出物を加えることで、ビオチンを安定化することが記載されている。
【０００７】
特許文献５には、ビオチンを含有する内服液剤にスクラロースを含有させることで、ビオチンを安定化することが記載されている。
【０００８】
特許文献６には、ビオチン含有水性内用液剤にポリビニルピロリドンを含有させることで、ビオチンを安定化することが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開２０１７−９５３７２号公報
【特許文献２】特開２００６−８９４３０号公報
【特許文献３】特開平１０−２６５３６９号公報
【特許文献４】特開平９−１０４６２５号公報
【特許文献５】特開２００１−１０９５５号公報
【特許文献６】特開平７−７６５２０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
特許文献１〜６では、組成物中にビオチンと共に、安定化のために他の成分を配合することを前提としており、サプリメントや飲料の用途・形態が限定されてしまう場合がある。当該分野においては依然として、酸性組成物中でのビオチンの安定性を向上させる技術が切望されている。
【００１１】
本発明は、ビオチンの分解速度が低減されている、及び／又はビオチンの安定性が優れた、ビオチン含有酸性組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を重ねた結果、酸性組成物中におけるビオチンは、エタノールが存在することによって、その分解速度が増大すること、及び／又はその安定性が低下することを見出した。また、酸性組成物中に存在するエタノールの量を低減させることによって、ビオチンの分解速度が低減すること、及び／又はその安定性が向上することを見出した。
【００１３】
本発明はこれらの知見に基づくものであり、以下の発明を包含する。
［１］ビオチンを含有する酸性組成物であって、エタノールの含有量が０．１重量％未満であることを特徴とする、組成物。
［２］エタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミンの含有量が合計で０．１重量％未満である、［１］に記載の組成物。
［３］プロトン性有機溶媒の含有量が合計で０．１重量％未満である、［２］に記載の組成物。
［４］容器詰め飲料又は容器詰めゼリー飲料である、［１］〜［３］のいずれかに記載の組成物。
［５］ビオチンを含有する酸性組成物の製造方法であって、エタノールの量が０．１重量％未満となるように原材料を配合することを含む、方法。
［６］エタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミンの量が合計で０．１重量％未満となるように原材料を配合することを含む、［５］に記載の方法。
［７］プロトン性有機溶媒の量が合計で０．１重量％未満となるように原材料を配合することを含む、［６］に記載の方法。
［８］前記組成物が容器詰め飲料又は容器詰めゼリー飲料である、［５］〜［７］のいずれかに記載の方法。
［９］酸性組成物中におけるビオチンの安定性を向上させる方法であって、前記組成物中に含まれるエタノールの量を０．１重量％未満とすることを含む、方法。
［１０］前記組成物中に含まれるエタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミンの量を合計で０．１重量％未満とすることを含む、［９］に記載の方法。
［１１］前記組成物中に含まれるプロトン性有機溶媒の量を合計で０．１重量％未満とすることを含む、［１０］に記載の方法。
［１２］前記組成物が容器詰め飲料又は容器詰めゼリー飲料である、［９］〜［１１］のいずれかに記載の方法。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、ビオチンの分解速度が低減されている、及び／又はビオチンの安定性が優れた、ビオチン含有酸性組成物を提供することができる。本発明によれば、保存安定性に優れ、ビオチンを効率的に摂取することが可能な、ビオチン含有酸性組成物を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、ビオチンを含有し、かつエタノールの含有量が低減されていることを特徴とする酸性組成物に関する。
【００１６】
本発明において、「ビオチン」は必須の水溶性ビタミンの一つであり、下記構造式で表される化合物：
【化１】
2019110828.tif 000002
或いは、医薬品や飲食品において許容可能なその誘導体又はその塩を意味する。
【００１７】
ビオチンは食物から抽出又は精製されたものであってもよいし、化学的に合成されたものであってもよい。ビオチンを含有する食物としては、特に限定はされないが、ウシのレバーや卵黄、大豆などの豆・穀類を挙げることができる。
【００１８】
本発明の組成物にはビオチンを、０．００１ｐｐｍ〜１０ｐｐｍ、好ましくは０．０１ｐｐｍ〜１ｐｐｍ、より好ましくは、０．２ｐｐｍ〜０．３ｐｐｍの範囲より選択される量にて適宜含めることができる。例えば、本発明の組成物には一回の経口摂取量当たり、ビオチンを１０μｇ以上、１５μｇ以上、２０μｇ以上、２５μｇ以上、３０μｇ以上、３５μｇ以上、４０μｇ以上、４５μｇ以上、５０μｇ以上、６０μｇ以上、７０μｇ以上、１００μｇ以上の範囲で適宜含めることができる。例えば、厚生労働省が公表する「日本人の食事摂取基準（２０１５年版）」にて推奨されるビオチンの摂取量（日）が含まれる範囲が好ましい。「一回の経口摂取量」とは、上記組成物が一度に経口摂取される量、あるいは短い時間間隔（例えば１０分以下、好ましくは５分以下の時間）をおいて連続的に複数回で経口摂取される総量を意味する。当該組成物が液状又は半固形状（ゲル状、ゾル状等）の形態である場合には、例えば５０ｍＬ〜５００ｍＬ（典型的には５０ｍＬ、１００ｍＬ、１５０ｍＬ、１８０ｍＬ、２００ｍＬ、２５０ｍＬ、３００ｍＬ、３５０ｍＬ、４００ｍＬ、４５０ｍＬ又は５００ｍＬ）がその量である。一回の経口摂取量当たりに含まれるビオチンの量の上限は特に限定されず、例えば、１０００μｇ以下、５００μｇ以下、４００μｇ以下、３００μｇ以下、２００μｇ以下、１５０μｇ以下の範囲より適宜決定することができる。
【００１９】
本発明において、「プロトン性有機溶媒」とは、自分自身で解離してプロトンを生じる有機溶媒を意味し、電気陰性度の大きな原子、すなわち、窒素原子や酸素原子に結合した水素原子を有するものを意味する。このようなプロトン性有機溶媒としては、例えば、低級アルコール（エタノール、メタノール）、グリセリン、酢酸、ギ酸、ブチルアミン等が挙げられるが、これらに限定はされない。
【００２０】
下記実施例にて詳述されるとおり、エタノールは、酸性組成物中にてビオチンの分解速度を増大させる効果を有する。したがって、酸性組成物中に含まれるエタノールの量を低減することによって、酸性組成物中におけるビオチンの分解速度を低減することができ、酸性組成物中におけるビオチンの保存安定性を高めることができる。エタノールだけでなく、エタノールと同様にプロトン性有機溶媒であるグリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミンもまた、ビオチンの分解速度を増大させる効果を有するため、好ましくは、酸性組成物中に含まれるエタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミンの合計量を低減することによって、酸性組成物中におけるビオチンの分解速度を低減することができ、酸性組成物中におけるビオチンの保存安定性を高めることができる。特に好ましくは、酸性組成物中に含まれるプロトン性有機溶媒（エタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸、ブチルアミン等を含む）の合計量を低減することによって、酸性組成物中におけるビオチンの分解速度を低減することができ、酸性組成物中におけるビオチンの保存安定性を高めることができる。
【００２１】
本発明の組成物に含まれるエタノールの量は、ビオチンの分解速度を低減し、及び／又は、保存安定性を高めるために、可能な限り低減させることが好ましく、組成物に含まれるエタノールの含有量を低減させるほど、組成物におけるビオチンの保存安定性を高めることができる。例えば、ビオチンを含有する従来の酸性組成物よりも、含まれるエタノールの量を低減することによって、従来の酸性組成物と比べて、ビオチンの分解速度が低減し、及び／又は、保存安定性の高い組成物を得ることができる。したがって、本発明の組成物に含まれるエタノールの量は、ビオチンを含有する従来の酸性組成物におけるエタノールの量と比べて少ない量であればよく、特に限定されるものではないが、具体的には０．１重量％未満、例えば、０．０９重量％未満、０．０８重量％未満、０．０７重量％未満、又は０．０６重量％未満の範囲とすることができる。特に好ましくは、０．０５重量％以下、０．０４重量％以下、０．０３重量％以下、０．０２重量％以下、又は０．０１重量％以下の範囲とすることができる。
【００２２】
本発明の組成物における、エタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミンの合計量は、ビオチンの分解速度を更に低減し、及び／又は、保存安定性を更に高めるために、可能な限り低減させることが好ましい。本発明の組成物中のエタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミンの合計量は、ビオチンを含有する従来の酸性組成物における前記合計量と比べて少ない量であればよく、特に限定されるものではないが、具体的には０．１重量％未満、例えば、０．０９重量％未満、０．０８重量％未満、０．０７重量％未満、又は０．０６重量％未満の範囲とすることができる。特に好ましくは、０．０５重量％以下、０．０４重量％以下、０．０３重量％以下、０．０２重量％以下、又は０．０１重量％以下の範囲とすることができる。
【００２３】
本発明の組成物における、エタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸、ブチルアミン等を含むプロトン性有機溶媒の合計量は、ビオチンの分解速度を更に低減し、及び／又は、保存安定性を更に高めるために、可能な限り低減させることが好ましい。本発明の組成物中のプロトン性有機溶媒の合計量は、ビオチンを含有する従来の酸性組成物における前記合計量と比べて少ない量であればよく、特に限定されるものではないが、具体的には０．１重量％未満、例えば、０．０９重量％未満、０．０８重量％未満、０．０７重量％未満、又は０．０６重量％未満の範囲とすることができる。特に好ましくは、０．０５重量％以下、０．０４重量％以下、０．０３重量％以下、０．０２重量％以下、又は０．０１重量％以下の範囲とすることができる。
【００２４】
本発明における「エタノール」、「エタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミン」並びに「プロトン性有機溶媒」という用語は、それぞれ、本発明の酸性組成物の製造過程において配合されるものだけでなく、当該組成物の製造に用いられる原材料の製造過程において配合される／混入するものも包含する。例えば、今日、ほとんど全ての種類の香料製剤にはエタノールが含有される（植松ら、食衛誌、Vol.38,No.6,pp.452-459, December, 1997）。しかしながら、市販の香料製剤については、最終製品に配合した希釈剤は表示されるが、香料の抽出に用いた溶剤の場合には表示されない場合があり、また、香料製剤を調合する際に多種類の香料を混合することから、混合前の香料に含有されていた溶剤は表示されない場合がある。このため、香料製剤についてエタノールを含む旨の表示がない場合であっても、実際には含まれる場合があり、このような香料製剤を本発明の組成物に配合した場合には、組成物中のエタノールの含量を増大させ、ビオチンの分解速度を増大させ得る。
【００２５】
なお、本発明の組成物中の「エタノール」、「エタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミン」並びに「プロトン性有機溶媒」の量は、それぞれ、従来公知の一般的な手法により測定することが可能である。例えば、組成物中の各溶媒成分の含有量は、当該組成物を無水硫酸ナトリウム及びアセトニトリルと混合し、これをろ過し、得られたろ液をアセトニトリルに溶解した液を分析サンプルとして、ガスクロマトグラフィーに付すことにより求めることができる（一色賢司、食衛誌．Ｖｏｌ．２６，Ｎｏ．１，ｐｐ.３９−４５，１９８５）。
【００２６】
本発明において、「酸性組成物」とは、ｐＨ値が４．５以下である組成物を意味し、例えば、ｐＨ４．５未満、ｐＨ４．４未満、ｐＨ４．３未満、ｐＨ４．２未満、ｐＨ４．１未満、ｐＨ４．０未満、ｐＨ３．９未満、ｐＨ３．８未満、ｐＨ３．７未満、ｐＨ３．６未満、ｐＨ３．５未満、ｐＨ３．４未満、又は、ｐＨ３．３未満とすることができる。ｐＨ値の下限は特に限定されず、酸性組成物の形態に応じて適宜決定することが可能であり、例えば、ｐＨ２．５以上、ｐＨ２．６以上、ｐＨ２．７以上、ｐＨ２．８以上、ｐＨ２．９以上、ｐＨ３．０以上、ｐＨ３．１以上、又は、ｐＨ３．２以上とすることができる。
【００２７】
本発明の酸性組成物が清涼飲料水の形態である場合には、当該ｐＨ値はｐＨ４．０未満とすることが好ましい。食品衛生法の食品別規格基準によれば、清涼飲料水の殺菌・除菌の方法はｐＨ４．０を境に大きく異なっており、ｐＨ４．０未満のものの殺菌は、中心部温度を６５℃にて１０分間加熱することが求められるのに対して、ｐＨ４．０以上のものの殺菌は、中心部温度を８５℃にて３０分間加熱することが求められる。故に、ｐＨ値の上限をｐＨ４．０未満とすることによって、殺菌工程による負荷を小さくし、殺菌工程におけるビオチンの分解を小さくすることができ、好ましい。なお、本明細書において、ｐＨ値は品温２０℃で測定された値を指す。
【００２８】
本発明の酸性組成物のｐＨ値は、加えられる酸味料の量を適宜調節することによって調節することができる。酸味料としては医薬や飲食品の製造に一般的に利用されるものが挙げられ、例えばクエン酸、リンゴ酸、グルコン酸、酒石酸、乳酸、コハク酸、又はこれらの塩などがあり、これらのうちの１種又は２種以上の混合物を加えることができる。
【００２９】
本発明の酸性組成物には、ビオチンに加えて、医薬又は飲食品として許容可能な賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、溶剤、溶解補助剤、等張化剤、安定化剤、矯味矯臭剤、ｐＨ調整剤、香料製剤、甘味料、増粘剤、防腐剤、ビタミン類、寒天等のその他の原材料を、当該組成物において所望される形態に応じて適宜選択、配合することができる。ただし、これらの成分は、エタノールを含まない、又はエタノールの含量が低いものを利用することが好ましく、エタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミンを含まない、又はそれらの合計含量が低いものを利用することがより好ましく、プロトン性有機溶媒（エタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸、ブチルアミン等を含む）を含まない、又はプロトン性有機溶媒の合計含量が低いものを利用することが特に好ましい。例えば、上記のとおり、今日、ほとんど全ての種類の香料製剤にはエタノールが溶媒として含有される。本発明においては、このような香料製剤に代えて、溶媒としてエタノールではなく、中鎖脂肪酸及び／又は乳化剤から選択される一又は複数を利用する香料製剤を含めることができる。ここで特に限定されるものではないが、中鎖脂肪酸としては、Ｃ８，Ｃ１０，Ｃ１２トリグリセライド等を利用することが可能であり、乳化剤としては、グリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル等を利用することができる。
【００３０】
本発明の酸性組成物は、医薬品（医薬部外品を含む）又は飲食品の形態で提供することができる。これらの形態は、液状組成物又は半固形状組成物（ゲル状、ゾル状等）等の形態とすることができ、上記ビオチンに加えて、上記その他の原材料をその剤形に応じて、適宜配合し、常法に従って調製することができる。
【００３１】
例えば、本発明の酸性組成物は、容器詰め飲料とすることができる。本発明の酸性組成物（液状組成物）を収容するための容器は、飲料用容器として使用される容器を適宜用いることができ、限定されないが、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）製容器、所謂ＰＥＴボトルや、金属缶容器等が挙げられる。容器の形態は特に限定されない。また、容器の容量は特に限定されないが、例えば５０〜５００ｍＬ（典型的には５０ｍＬ、１００ｍＬ、１５０ｍＬ、１８０ｍＬ、２００ｍＬ、２５０ｍＬ、３００ｍＬ、３５０ｍＬ、４００ｍＬ、４５０ｍＬ又は５００ｍＬ）、好ましくは１００〜２００ｍＬとすることができる。
【００３２】
あるいは、本発明の酸性組成物は、容器詰めゼリー飲料とすることができる。本発明の酸性組成物（半固形状（ゲル状、ゾル状等）組成物）を収容するための容器は、ゼリー飲料用容器として使用される容器を適宜用いることができ、限定されないが、樹脂フィルム、及び／又は、金属フィルム製容器、パウチ容器等が挙げられる。また、容器の容量は特に限定されないが、例えば５０ｍＬ〜２００ｍＬ（典型的には５０ｍＬ、１００ｍＬ、１５０ｍＬ、１８０ｍＬ、２００ｍＬ）とすることができる。
【００３３】
本発明の酸性組成物は、食物から抽出もしくは精製されたビオチン、又は、化学的に合成されたビオチン、酸味料、必要に応じて上述のようなその他の原材料、並びに残部として水を混合し、エタノールの含有量がビオチンを含有する従来の酸性組成物におけるエタノールの含有量と比べて少ない量、具体的には０．１重量％未満、例えば、０．０９重量％未満、０．０８重量％未満、０．０７重量％未満、又は０．０６重量％未満の範囲、好ましくは、０．０５重量％以下、０．０４重量％以下、０．０３重量％以下、０．０２重量％以下、又は０．０１重量％以下の範囲となるようにして製造することができる。本発明のより好ましい実施形態に係る酸性組成物は、食物から抽出もしくは精製されたビオチン、又は、化学的に合成されたビオチン、酸味料、必要に応じて上述のようなその他の原材料、並びに残部として水を混合し、エタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミンの合計の含有量がビオチンを含有する従来の酸性組成物におけるエタノールの含有量と比べて少ない量、具体的には０．１重量％未満、例えば、０．０９重量％未満、０．０８重量％未満、０．０７重量％未満、又は０．０６重量％未満の範囲、好ましくは、０．０５重量％以下、０．０４重量％以下、０．０３重量％以下、０．０２重量％以下、又は０．０１重量％以下の範囲となるようにして製造することができる。本発明の特に好ましい実施形態に係る酸性組成物は、食物から抽出もしくは精製されたビオチン、又は、化学的に合成されたビオチン、酸味料、必要に応じて上述のようなその他の原材料、並びに残部として水を混合し、プロトン性有機溶媒の合計の含有量がビオチンを含有する従来の酸性組成物におけるプロトン性有機溶媒の合計の含有量と比べて少ない量、具体的には０．１重量％未満、例えば、０．０９重量％未満、０．０８重量％未満、０．０７重量％未満、又は０．０６重量％未満の範囲、好ましくは、０．０５重量％以下、０．０４重量％以下、０．０３重量％以下、０．０２重量％以下、又は０．０１重量％以下の範囲となるようにして製造することができる。本発明の酸性組成物の容器への収容、及び殺菌の手段は任意に選択することができる。
【００３４】
以下に実施例及び試験例を示し、本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれら実施例に制限されるものではない。
【実施例】
【００３５】
＜実施例＞
（測定方法）
「食品表示基準について別添  栄養成分等の分析方法等」（平成２７年３月３０日消食表第１３９号消費者庁次長通知）に示される公定法に準ずる方法（微生物学的定量法）でビオチンの測定を行った。
【００３６】
（ベース液調整方法）
イオン交換水にグラニュー糖２．５％、果糖１．２％、Ｌ−アスコルビン酸０．８％、クエン酸０．２％、クエン酸三ナトリウム０．２％、ビオチン０．３ｐｐｍになるように添加し、１．０Ｎ塩酸（和光純薬工業株式会社）、１．０Ｎ水酸化ナトリウム（和光純薬工業株式会社）を用いて目標ｐＨに調整しベース液とした。
【００３７】
（試験例１）
表１に示す組成の各溶液を公定法に準ずる微生物学的定量法に従いビオチン量を測定した。各溶液についてのビオチン量の測定値を０日目の値とし、これを１００％とした。表１に示す組成の各溶液を遮光されたレトルトパウチに約１００ｍＬ室温充填後、ＬＡＵＤＡ製恒温水槽（Ｄ２０ＫＰ）を使用して８０℃１０分間の湯殺菌を行った。殺菌後の各溶液を、ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製恒温庫（ＡＧＸ−３４５）を使用して５０℃で保存し同様に０日目および３日目のビオチンの測定を行った。
【００３８】
【表１】
2019110828.tif 000003
【００３９】
結果を表２に示す。これより、プロトン供与性有機溶媒であるエタノールを添加した比較例１Ｅのみが各ｐＨ域でビオチンの分解を促進した。溶解パラメーター（ＳＰ値、エタノール：１２．７、アセトニトリル：１１．９）がほぼ同等であるアセトニトリルを添加した比較例１Ａはほぼ実施例と同様の分解率となった。このことからビオチンの溶解度の影響はほぼなく、ビオチンの分解促進はエタノール特有の現象でビオチンの分解機構からプロトン供与性が原因と推察された。
【００４０】
【表２】
2019110828.tif 000004
【００４１】
＜参考実験＞
Ｉ．材料・測定方法
１．標準原液
葉酸１００ｍｇを２００ｍＬ褐色ビーカーに精秤し、０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液（和光純薬）を５ｍＬ添加して溶解した。次いで、特級エタノール（和光純薬）１０ｍＬを添加・混和後、イオン交換水１００ｍＬと０．１Ｎ塩酸（和光純薬）にて溶液のｐＨを７．０〜８．０に調整した。２００ｍＬ褐色メスフラスコとイオン交換水を用いて所定量に定容し、ＨＰＬＣ測定における検量線作成のための標準原液とした。
【００４２】
２．ＨＰＬＣ測定
葉酸を含む溶液サンプルは、重量を測定後、１．０Ｎ水酸化ナトリウム溶液（和光純薬）を用いてｐＨ１２．０（ＨＯＲＩＢＡ製ｐＨメーター（Ｆ−７２））に調整した。次いで、１０分間撹拌後（ＡＳ  ＯＮＥ製マグネティックスターラー（ＲＳＨ−１ＡＮ））、１．０Ｎ塩酸（和光純薬）を用いてｐＨ７．０に調整し、ろ過し（ＡＳ  ＯＮＥ製０．４５μｍフィルター（ＳＹ２５ＴＦ））、得られたろ液をＨＰＬＣ測定に付した。
【００４３】
ＨＰＬＣ測定は、以下の条件にて実施した。
装置：Ｗａｔｅｒｓ  ＡＣＱＵＩＴＹ  Ｈ−Ｃｌａｓｓシステム
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  ５μｍ  ６×２５０ｍｍ
温度：５０℃
流量：１．２ｍｌ／ｍｉｎ
移動相：１２％メタノール（和光純薬）、０．３％酢酸（和光純薬）、１．０８％オクタスルホン酸Ｎａ溶液（和光純薬）
【００４４】
３．ベース液
イオン交換水にグラニュー糖２．５重量％、果糖１．２重量％、Ｌ−アスコルビン酸０．８重量％、クエン酸０．２重量％、クエン酸三ナトリウム０．２重量％、及び葉酸０．０００３重量％を添加し、１．０Ｎ塩酸（和光純薬）、及び１．０Ｎ水酸化ナトリウム（和光純薬）を用いて、所定のｐＨに調整し、ベース液とした。
【００４５】
ＩＩ．参考試験１：エタノール添加の影響（１）
下記表３に示す組成に従って、ベース液、ならびに、エタノール、又は、アセトニトリルを含み、所定のｐＨを有する溶液（参考例１〜７、参考比較例１Ｅ〜７Ｅ（エタノール添加）、参考比較例１Ａ〜７Ａ（アセトニトリル添加））をそれぞれ調製した（０日目）。
【００４６】
【表３】
2019110828.tif 000005
【００４７】
各溶液を遮光されたレトルトパウチに１００ｍＬ室温充填し、その後８０℃にて１０分間湯殺菌（ＬＡＵＤＡ製恒温水槽（Ｄ２０ＫＰ））を行った。次いで、各溶液を５０℃で所定の期間保存し（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製恒温庫（ＡＧＸ−３４５））、保存後の各溶液中の葉酸量をＨＰＬＣにより測定した。
【００４８】
保存後の各溶液中の葉酸量の測定結果を下記表４に示す。なお、表中の葉酸量の数値は、０日目の溶液中の葉酸量を「１００」とする相対値にて示す。
【００４９】
表４に示すとおり、プロトン供与性有機溶媒であるエタノールを添加した参考比較例１Ｅ〜７Ｅにおいて、葉酸の分解速度が顕著に増大したことが確認された。
【００５０】
一方、溶解パラメーター（ＳＰ値）がエタノールと同程度であるアセトニトリル（ＳＰ値、エタノール：１２．７、アセトニトリル：１１．９）を添加した参考比較例１Ａ〜７Ａにおいては、参考例と同程度の葉酸量が確認され、アセトニトリルの添加により葉酸の分解速度が顕著に増大することは認められなかった。
【００５１】
これらの結果は、参考比較例１Ｅ〜７Ｅにおいて認められる葉酸の分解速度の増大が、葉酸の溶媒に対する溶解度に由来するものではなく、エタノール添加に基づく、エタノールの存在に由来するものであることを示す。
【００５２】
【表４】
2019110828.tif 000006
【００５３】
ＩＩＩ．参考試験２：エタノール添加の影響（２）
下記表５に示す組成にしたがって、ベース液、及びエタノールを含み、ｐＨを３．５とする溶液（参考例８、９、参考比較例８Ｅ）をそれぞれ調製した（０日目）。
【００５４】
【表５】
2019110828.tif 000007
【００５５】
各溶液を上記参考試験１と同様に、レトルトパウチに充填、殺菌、保存し、保存後の各溶液中の葉酸量をＨＰＬＣにより測定した。
【００５６】
保存後の各溶液中の葉酸量の測定結果を下記表６に示す。なお、表中の葉酸量の数値は、０日目の溶液中の葉酸量を「１００」とする相対値にて示す。
【００５７】
表６に示すとおり、エタノールの添加によって保存後の葉酸量の低下が認められたが（上記表４の参考例４と比較）、エタノールを０．０３重量％及び０．０５重量％含む参考例８及び９と比べて、エタノールを０．５重量％含む参考比較例８Ｅにおいては、保存後の葉酸量が顕著に低いことが確認された。一方、参考例８及び９との間で、保存後の葉酸量に大きな差は認められなかった。
【００５８】
この結果より、エタノールの含量が多いほど葉酸の分解速度が大きいことが確認されるが、エタノールの含量が０．０５重量％以下となる場合には、葉酸の分解速度があまり変化しないことが示唆される。
【００５９】
【表６】
2019110828.tif 000008
【００６０】
ＩＶ．参考試験３：エタノール添加の影響（３）
下記表７に示す組成にしたがって、葉酸を含む溶液（参考例１０、参考比較例９Ｅ）をそれぞれ調製した（０日目）。なお、香料１はエタノールを含まず中鎖脂肪酸とグリセリン脂肪酸エステルを溶媒として用いて、溶液化した香料であり、香料２は溶媒としてエタノールを５０重量％（最終製品濃度０．１重量％）含む香料である。
【００６１】
【表７】
2019110828.tif 000009
【００６２】
各溶液を上記参考試験１と同様に、殺菌、保存し、保存後の各溶液中の葉酸量をＨＰＬＣにより測定した。
【００６３】
保存後の各溶液中の葉酸量の測定結果を下記表８に示す。なお、表中の葉酸量の数値は、０日目の溶液中の葉酸量を「１００」とする相対値にて示す。
【００６４】
表８に示すとおり、香料に含まれるという形にしてもエタノールが添加されることによって、溶液中の葉酸の分解速度は増大することが確認された。
【００６５】
一般的に、飲料や水系食品においては、分散性を高めるために香料はエタノール含有製剤が用いられている。しかしながら、上記の結果より、葉酸の分解速度を低減し、安定化を図るためには、エタノールを含有しない香料を用いること、すなわち、エタノールを含有しない原材料を用いることが有利であることが示された。
【００６６】
【表８】
2019110828.tif 000010