(57)【要約】【解決手段】  三環式３，４−プロピノペルヒドロプリンを含む薬学的組成物、及び創傷、裂肛、無弛緩症、上部及び下部食道括約筋疾患、胃不全麻痺、肥厚性幽門狭窄症、痔核、一過性直腸神経痔、過敏性腸症候群、筋肉痙攣、血管攣縮性疾患、子宮又は膀胱痙攣が関与する疾患、オディ括約筋機能不全、及び短区画ヒルシュスプルング病を治療するためのその使用が提供される。また、本発明の組成物を局所的に又は注入によって、筋肉又は筋肉付近に投与することにより、創傷及び筋障害を治療する方法が提供される。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
創傷の治癒を促進する方法であって、
前記治療を必要とする患者に、以下の化学式（Ｉ）で示される三環式３，４−プロピノペルヒドロプリンを少なくとも１つと、薬学的に許容可能な担体とを含む組成物の有効量を投与する工程を有するものであり、前記化学式（Ｉ）は、
【化１】
2007536269.tif 000010
であり、ここで、
Ｒ１及びＲ５はそれぞれ、−Ｈ及び−ＯＨから成る群から選択され、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ、−Ｈ及び−ＳＯ３から成る群から選択され、Ｒ４は−Ｈ、−ＯＨ、−ＣＯＯＮＨ２、−ＣＯＯＮＨＳＯ３−、及び−ＣＯＯＣＨ３から成る群から選択されるものであるが、ただし、Ｒ２及びＲ３のいずれか１つは−ＳＯ３−であるか、若しくはＲ４は−ＣＯＯＮＨＳＯ３−でなければならないものである
創傷の治癒を促進する方法。
【請求項２】
請求項１の方法において、前記組成物は、筋肉内に注入されるものである。
【請求項３】
請求項１の方法において、前記方法は、裂肛に苦しむ患者に適用されるものである。
【請求項４】
請求項１の方法において、前記化学式（Ｉ）の化合物の少なくとも１つは、ＧＴＸ−１、ＧＴＸ−２、ＧＴＸ−３、ＧＴＸ−４、及びＧＴＸ−５から成る群から選択されるものである。
【請求項５】
請求項１の方法において、前記組成物は、ＧＴＸ−２及びＧＴＸ−３の両方を含むものである。
【請求項６】
請求項１の方法において、前記組成物の有効量は、約１〜約１０００活性単位を有するものである。
【請求項７】
請求項１の方法において、前記組成物の有効量は、３２より大きく約１０００までの活性単位を有するものである。
【請求項８】
請求項１の方法において、前記組成物の有効量は、約５０〜約１０００活性単位を有するものである。
【請求項９】
請求項１の方法において、前記組成物の有効量は、約５０〜約５００活性単位を有するものである。
【請求項１０】
請求項１の方法において、前記組成物の有効量は、約７５〜約２００活性単位を有するものである。
【請求項１１】
請求項１の方法において、前記組成物は、さらに、サキシトキシン、ネオサキシトキシン、脱カルバモイルサキシトキシン、破傷風毒素、及びボツリヌスＡ毒素から成る群から選択される神経毒を有するものである。
【請求項１２】
請求項１の方法において、前記組成物は、さらに、局所麻酔剤を有するものである。
【請求項１３】
請求項１２の方法において、前記局所麻酔剤は、ベンゾカイン、テトラカイン、メピバカイン、プリロカイン、エチドカイン、ブピバカイン、リドカインから成る群から選択されるものである。
【請求項１４】
請求項１の方法において、前記組成物は、内肛門括約筋内に注入されるものである。
【請求項１５】
請求項１の方法において、前記方法は、無弛緩症及び裂肛から成る群から選択される少なくとも１つの病気に苦しむ患者に適用されるものである。
【請求項１６】
請求項１の方法において、前記方法は、創傷の治癒を促進する目的で、創傷を有する患者に適用されるものである。
【請求項１７】
請求項１５の方法において、前記組成物の有効量は、約５０〜約１０００活性単位を有するものである。
【請求項１８】
請求項１６の方法において、前記組成物の有効量は、約５０〜約１０００活性単位を有するものである。
【請求項１９】
請求項１の方法において、前記組成物は、局所的に適用されるものである。
【請求項２０】
請求項１９の方法において、前記局所的組成物は、前記化学式（Ｉ）の化合物の１若しくはそれ以上を、前記組成物の総重量を基準にして、約０．０００１重量％〜約０．０１重量％有するものである。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、複素環式グアニジン型化合物を含む薬学的組成物、及び創傷治療のためのその使用方法に関する。より具体的には、本発明は、創傷治療、特に裂肛及びその他の病気を治療するための三環式３，４−プロピノペルヒドロプリン及びその使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
麻痺性貝毒（ＰＳＰ）は、興奮細胞において見出される電位依存性ナトリウムチャネル上の受容体部位に可逆的に結合するフィコトキシン（ｐｈｙｃｏｔｏｘｉｎｓ）の混合物に由来するものである。主な臨床症状は急性麻痺疾患である。フィコトキシン又は藻類毒素は、微小なプランクトン藻類によって生産される。これらの毒素は、二枚貝などの濾過摂食物（ｆｉｌｔｅｒ  ｆｅｅｄｅｒｓ）に蓄積する。フィコトキシンによって汚染された貝類をヒトが消費すると、ＰＳＰ、下痢性貝毒（ＤＳＰ）、記憶喪失性貝毒（Ａｓｐ）、神経毒性貝毒（ＮＳＰ）、シガテラ中毒（ＣＰ）、及び藍色細菌中毒（ＣＮＰ）の６つの疾患を引き起こす。
【０００３】
ＰＳＰを生成するフィコトキシンは、３，４，６−トリアルキルテトラヒドロプリンの共通構造を有する。２６個の自然発生フィコトキシンが記載されており、それらのフィコトキシンは非タンパク質であり、２８０〜４５０ダルトンの低分子量化合物である。貝類抽出物において見いだされるこれらのフィコトキシンの中ではＧＴＸｓが最も豊富であり、全毒素含有量の８０％以上の割合を占めている。
【０００４】
これらのフィコトキシンの高い毒性は、興奮細胞上の電位依存性ナトリウムチャネル上のレセプター部位における可逆結合によるものであり、すなわち、ナトリウムイオンの流入を遮断し、神経及び筋細胞が活動電位を産生するのを阻止し、その結果、神経伝達を遮断し、呼吸停止及び心血管ショックを介して哺乳類を死に導くものである。これらのフィコトキシンを少量適用すると、用量依存性である期間において、横紋筋の弛緩性麻痺を引き起こし得る。
【０００５】
筋肉の緊張は、組織を治癒させる上で悪影響を及ぼし、瘢痕形成の程度を決定する主な要因の１つである。外科医は、様々な縫合技術、ステロイド注射、創傷縁の侵食、及び弛緩した皮膚の緊張界線に平行した切開術を配置することを含む創傷治癒の方法における筋緊張への影響を克服するための措置を講じることによって、過剰な瘢痕形成を減少させる方法、及び創傷治癒を促進する方法を探し求めてきた。
【０００６】
裂肛は、粘膜皮膚移行部から歯状線まで伸びている肛門管における切れ目又は亀裂である。この一般的な問題は、男女両方において殆ど同等の発生率でかなりの罹患率を引き起こしており、処置することなく治癒するのは困難な問題である。古典的な症状は、苛酷で数時間続く排便中又は排便後の痛みである。多くの場合、トイレットペーパー上に鮮血が見られる。慢性的な亀裂の原因は、完全治癒の理由と同様に不明である。また、後正中線に好発し、割れ目部位において肉芽組織が欠如するこの病状の主な特徴は、原因不明である。
【０００７】
内肛門括約筋の痙攣は裂肛を伴うものである。治療方法は、前記括約筋の筋緊張亢進を軽減することに重点が置かれている。慢性裂肛の最も一般な治療は、側面の内部括約筋切開術である。この外科的処置に関する基本的問題は、ガス、粘液、及び便通の調整を永続的に変更することである。肛門緊張度を緩和する括約筋切開術の効力を一時的に引き起こすために、薬剤療法が用いられている。そのような方法は、ＢｏＴｏｘ（ボトックス）の注入、及びニトログリセリン又はニフェジピン軟膏の局所適用を含む。
【０００８】
ニトログリセリンによる慢性裂肛の治療は、２〜６ヵ月間で３６〜６０％の治癒率である。慢性裂肛のプラセボ治療は５０％の治癒率である。ニトログリセリンを用いる治療は、中程度から重度の頭痛を引き起こし、更に長期間の治療（３ヵ月以上）によって、ＭＶＣＰの顕著な変化なしに、１７〜３８％の範囲でＭＲＰの減少を引き起こす。
【０００９】
ニフェジピンの局所適用は、６週間以内で５０〜９４．５５の治癒率である。局所適用は、いかなる重篤な副作用をも引き起こさず、更にいかなるＭＶＣＰの変化をも引き起こさずに、ＭＲＰを基準から１１％減少させる。再発はニトログリセリン及びニフェジピンの両方の軟膏治療において頻繁に起こる問題であり、ニトログリセリンで治療された患者では３１％の再発発生であり、ニフェジピン患者においては４２％の再発発生である。
【００１０】
ＢｏＴｏｘ治療は、特発性裂肛患者に使用されるものであり、２〜６ヵ月で６０〜９６％の治癒率である。前記治癒率は投与計画の用量と関連し、２つの用量でＢｏｔｏｘを用いると９６％の治癒が得られる。この治療によると、注入後５日で、患者全員の肛門緊張が軽減される。ＢｏＴｏｘ注入後２ヶ月では、ＭＶＣＰの顕著な変化はなく、ＭＲＰが２８．４％に軽減された。ＢｏＴｏｘ治療によって、１０％の一時性大便失禁及び２０％の再発発生と共に、３ヵ月にわたって続く化学的除神経が引き起こされる。
【００１１】
創傷治癒及び／又は瘢痕組織形成を軽減するための安全で、効果的で、更に場合によっては持続性のある治療法の必要性が残されている。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明の目的に従って、麻痺性貝毒の新規な使用方法が提供される。
【００１３】
本発明の１つの態様において、三環式３，４−プロピノペルヒドロプリンを１若しくはそれ以上含む本発明の組成物を用いた創傷の治療方法が提供される。
【００１４】
本発明の別の態様において、裂肛の治療方法が提供される。
【００１５】
本発明の別の態様において、本発明の組成物の方法は、別の神経毒及び／又は局所麻酔薬の有効量と組み合わせて使用されるものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明によると、外科手術の必要性を避けるか或いはその必要性を最小限に抑えるために、又は副作用、アレルギー、免疫拒絶、又は血腫を避けるか或いはそれらを最小限に抑えるために、複素環式グアニジン型化合物、より具体的には三環式３，４−プロピノペルヒドロプリンを含む組成物が、特定の臨床応用のために使用され得ることが見出されている。一部の観点において、本発明は部分的に、筋肉によって創傷に作用している緊張の低減又は脱離に基づくものである。一部の観点において、本発明は部分的に、本発明の様々な方法における特定の複素環式グアニジン型化合物によって提供される驚くほど長く続く効果に基づくものである。
【００１７】
一部の観点において、本発明は、緊張を与える能力を有する筋肉を弛緩又は麻痺させるための化学除神経剤を投与することに依存しており、改善された創傷治癒、又は筋肉が関連した障害の治療を提供するものである。驚くほど長く続く効果、及び筋肉の緊張を軽減するために別の方法を行うことを避ける能力などの別の利点は、本発明の特定の観点によって理解されるものである。
【００１８】
本発明を詳細に記載する前に、本発明が特定の薬物送達システム、装置構造、促進剤、又は担体に限定されないことが理解される。また、本願明細書において用いられる専門用語は、特定の実施形態のみを記載するためのものであって、限定することを目的としていないことも理解される。
【００１９】
本願明細書及び添付の請求項において用いられる単数形の「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、本文中において明らかに別のものを指示していない限り、複数の指示対象物を含むことに留意すべきである。つまり、例えば「薬理学的活性剤（ａ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  ａｃｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔ）」の言及は２若しくはそれ以上の活性物質の混合物を含み、「促進剤（ａｎ  ｅｎｈａｎｃｅｒ）」の言及は２若しくはそれ以上の促進剤の混合物を含む、などということである。
【００２０】
本発明の記載及び請求における以下の専門用語は、以下において設定される定義に従って使用されるものである。
【００２１】
本願明細書において使用される「治療する」及び「治療」という用語は、症状の重篤度及び／又は頻度を軽減すること、症状及び／又は根本的な原因を除去すること、症状及び／又はそれらの基本的な原因の発生を阻止すること、及び損傷を改善又は修復することに言及するものである。従って、患者を「治療する」本発明の方法は、この用語が本願明細書において使用される場合、病気にかかりやすい個人における１若しくはそれ以上の症状又は根本的な原因を阻止することだけではなく、臨床的症状を示す個人における１若しくはそれ以上の症状又は根本的な原因を阻止することも包含する。
【００２２】
「活性」、「活性物質」、「薬剤」及び「薬理学的な活性物質」という用語は、所望の効果を誘発する化学物質又は化合物に言及するものとして本明細書においてほとんど同じ意味で使用され、更に、治療上有効、予防的に有効、或いは美容上有効である物質を含むものである。また、これらの化合物の誘導体、代謝物、及び類似体、又は所望の効果を誘発することが具体的に述べられた化合物の種類もまた含まれる。
【００２３】
「治療上有効」な量とは、非毒性であるが、所望の治療効果を提供するために十分である活性剤の量を意味するものである。
【００２４】
「経皮的な」薬物送達とは、薬物が皮膚組織を通って個体の血流に入り、その結果、全身効果が引き起こされるように、個人の皮膚表面に薬物を投与することを意味するものである。「経皮的な」という用語は、薬物が粘膜組織を通って個人の血流に入るように、「経粘膜的」に薬物を投与すること、すなわち、個体の粘膜（例えば舌下、口腔、膣、直腸など）の表面に薬物を投与することを含むことが意図される。
【００２５】
「局所的投与」という用語は、例えば様々な皮膚障害の治療を目的とした、皮膚や粘膜への薬理学的活性物質の局所的薬剤の運搬を意味するその従来の意味で使用される。局所的薬剤投与は、経皮的投与と比較して、全身効果というよりはむしろ局所的効果を提供するものである。他に提示されているか或いは示唆されていない限り、「局所的薬剤投与」及び「経皮的薬物投与」は同じ意味で使用されるものである。
【００２６】
本願明細書において使用される「有効量」とは、神経筋プレート（ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒ  ｐｌａｔｅ）において、神経伝達物質アセチルコリンのシナプス前放出を少なくとも一部遮断することによって神経伝達を妨げるのに十分な量、つまり、伝達を妨げ、筋肉を麻痺させ、更に筋肉の収縮を阻止し、又は拘縮した筋肉の弛緩を引き起こすのに十分な量のことである。
【００２７】
そのような量は活性単位で与えられる。１活性単位は、２０グラムのＣＦ１アルビノ又はＢＡＬＢ−Ｃ系統マウスの脚における大腿二頭筋の筋肉収縮を、１．５時間〜２．０時間遮断するために必要な本発明の組成物の量に相当するものである。毒素は、０．５ｍｌ容積において、前記マウスの右脚の大腿二頭筋に筋肉注射で注入される。左脚はコントロールとして使用される。
【００２８】
各投与量において使用された毒素の量を測定するために、オンライン蛍光検出（ＨＰＬＣ−ＦＬＤ）を用いて、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析が行われる。この方法によって、任意の混合物、抽出物、又は製剤処方中における各毒素の質量を測定することが可能である。
【００２９】
本願明細書において使用される「担体（ｃａｒｒｉｅｒｓ）」又は「賦形剤（ｖｅｈｉｃｌｅｓ）」は、経皮的薬物投与に適した担体物質に言及する。本願明細書において有用な担体及び賦形剤は、無毒性であって、更に有害な方法で当該組成物の他成分と相互作用しない当業者に周知な任意の物質を含む。
【００３０】
「水溶性」という用語は、水を含むものであるか、若しくは皮膚或いは粘膜組織に適用した後に水を含有するようになる剤形又は薬剤送達システムに言及する。
【００３１】
本発明の方法は、創傷治癒に使用され得るものである。より具体的には、本発明の方法は、これらに限らないが、創傷治癒、無弛緩症、及び裂肛の改善を含む症状の治療に有用である。
【００３２】
本発明の組成物は、三環式３，４−プロピオペルヒドロプリン（以下に説明される化学式（Ｉ））の少なくとも１つの有効量と、薬学的に許容可能な局所担体とを有するものであり、
【００３３】
【化２】
2007536269.tif 000002
【００３４】
ここで、Ｒ１及びＲ５はそれぞれ、−Ｈ及び−ＯＨから成る群から選択されるものであり、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ、−Ｈ及び−ＳＯ３基から成る群から選択されるものであり、更にＲ４は、−Ｈ、−ＯＨ、−ＣＯＯＮＨ２、−ＣＯＯＮＨＳＯ３−及び−ＣＯＯＣＨ３から成る群から選択されるものであり、ただし、Ｒ２及びＲ３のうちいずれか１つが−ＯＳＯ３−であるか、或いはＲ４が−ＣＯＯＮＨＳＯ３−である。
【００３５】
本発明による好ましいな三環式３，４−プロピオペルヒドロキシプリンは、以下の表に説明する化学式（Ｉ）のゴニオトキシン（以下「ＧＴＸ」とする）である。
【００３６】
【表１】
2007536269.tif 000003
【００３７】
本発明の１つの観点において、本発明の薬学的組成物は、ＧＴＸ１、ＧＴＸ２、ＧＴＸ３、ＧＴＸ４、及びＧＴＸ５から選択される少なくとも１つのＧＴＸ化合物を含むものである。本発明の別の観点において、前記薬学的組成物は、三環式３，４−プロピオペルヒドロキシプリンの混合物を含むものである。例えば、２若しくはそれ以上のＧＴＸ化合物の混合物が考慮される。本発明の１つの実施形態においては、ＧＴＸ２とＧＴＸ３との混合物をそれぞれ約２：１の割合で使用する。本発明の別の実施形態では、ＧＴＸ１、ＧＴＸ２、ＧＴＸ３、及びＧＴＸ４の混合物を使用する。上記化学式（Ｉ）に関して説明した条件に従って、３，４−プロピオペルヒドロキシプリンの別の混合物及び組み合わせが本発明の範囲内であることは、当業者によって理解されるべきことである。
【００３８】
ボツリヌスＡ毒素と異なり、これらの製剤は室温で安定であり、冷蔵を必要とせず、滅菌可能であり、実質的に非アレルギー性であり、自然界ではペプチドでなく、実質的に速やかに作用し、更に有害な副作用なく繰り返し適用されても良いものである。
【００３９】
化学式（Ｉ）の化合物は、渦鞭毛虫又はシアノバクテリアから精製されても良く、また高度に汚染された軟体動物によって蓄積されていても良く、そこから前記化合物が精製される。任意の薬理学的に許容可能な担体が使用され、水、酢酸、及び食塩水を含むがこれらに限らない。酢酸及び０．０９％の塩化ナトリウム溶液は、好適な担体材料である。
【００４０】
もう一つの方法として、本発明の薬学的組成物は、上述で議論したように、少なくともＧＴＸ化合物を含み、更にサキシトキシン（ＳＴＸ）、ネオサキシトキシン、デカルバモイルサキシトキシン、テタヌストキシン、及びボツリヌスＡ毒から成る群から選択される少なくとも１つの化合物を含むものである。この組み合わせは、本発明の組成物が使用されるいかなる用途においても使用され得るものである。
【００４１】
別の観点において、本発明の組成物は、局所麻酔薬の有効量と組み合わせて使用される。この観点において、本発明の薬学的組成物は、エンゾカイン、テトラカイン、メピバカイン、プリロカイン、エチドカイン、ブピバカイン、リドカインなどの局所麻酔薬、又は類似の局所麻酔薬、及びそれらの組み合わせの有効量、及び三環式３，４−プロピオンペルヒドロキシプリンの少なくとも１つの有効量を含むものである。また、必要に応じて、本発明の組成物は、１若しくはそれ以上の神経毒、及び１若しくはそれ以上の局所麻酔薬と組み合わせて使用されても良い。
【００４２】
理論にとらわれることなく、これらの化合物は、局所的に適用される場合、全ての神経細胞及び興奮細胞に存在する唯一の生物学的な分子レセプター、すなわち電圧依存性ナトリウムチャネルに対して可逆的に結合することによって、神経インパルス又は神経細胞の伝達の伝播を遮断し、鎮痙作用をもたらすように思われる。このチャネルに対する結合によって、ナトリウムが神経細胞に侵入しなくなり、脱分極が起こらず、従って、前記インパルスの伝播が中断される。この作用機序は、神経筋板において、神経伝達物質であるアセチルコリンのシナプス前放出の少なくとも一部を遮断するものであり、従って、神経筋伝達を妨げ、筋肉を麻痺させて筋肉収縮を阻止し、又は病理学的問題により収縮した筋肉の弛緩を引き起こすものである。
【００４３】
本発明の薬学的製剤は、例えば局所的、経皮的、又は注射などの任意の適切な方法に適用される。好適な実施形態において、本発明の製剤は、麻痺させられているか或いは収縮を阻止されている筋肉周辺において、局所的に適用されるものである。前記適用は、用量あたり１〜１０００活性単位、より好ましくは用量あたり１０〜１０００活性単位を前記筋肉に十分に提供できる量であるべきである。この効果はすぐに明らかになるものであり、活性化合物が皮膚を通過して進入した後、通常、最大３０秒〜５分以内に生じる。この最大効果は、活性化合物が皮膚を通過して進入した後、通常１５分以内で達成される。前記効果持続時間は、投与された用量、問題の筋肉だけでなく、投与された容量及び具体的な組成物に依存するものである。これは、全ての臨床応用及び病理学の傾向である。
【００４４】
驚くべきことに、本発明の特定の方法は、実質的に迅速な麻酔効果及び筋肉弛緩効果を提供するだけでなく、予想外に長い期間にわたり有益な筋肉弛緩効果を提供するものであることがわかった。結果として、予想外のより長期間の筋肉弛緩効果によって治癒工程を促進するにすることが見出されたため、本発明の特定の方法は、特に創傷治癒及び前述の別の徴候の治療に適切である。
【００４５】
より好ましくは、各用量は、３２活性単位より大きく最大約５０００活性単位までを含むものである。さらにより好ましくは、各用量は、３２より大きく約１０００までの活性単位、より好ましくは４０より大きく約１０００ユニットまでの活性、及び更になお好ましくは、約５０〜約５００活性単位である。最も好ましくは、各用量は約７５〜約２００ユニットの活性を含むものである。所望の効果が得られるまで筋肉弛緩を継続するために、用量は必要に応じて適宜繰り替えされても良い。
【００４６】
本発明の１つの方法によると、哺乳類は、本発明の組成物を筋肉周辺に直接に局所注入することにより処理される。一部の実施形態において、前記注入された位置の筋肉は、緊張或いは痙攣の高まりを示すが、これはすべての処理における効果に必要なものではない。
【００４７】
各注入において、溶媒、アジュバント、及び／又は担体物質を含む組成物は２ミリリットル以下に限定されても良い。投与は、例えば、２７〜３０ゲージのシリンジを備えた１ミリリットルのツベルクリン型使い捨てシリンジを用いて達成されるものであっても良い。また、特定の方法においては、例えば米国特許第５，６７４，２０５号明細書において記載されているように、内視鏡を用いて投与することが望ましい可能性があり、前記開示は、本発明の方法の使用に適した内視鏡に関する詳細を提供する目的のものであり、前記公開物はこの参照により本願明細書に組み込まれるものである。
【００４８】
また、本発明の薬学的組成物は、局所製剤の形態で局所的に適用され得るものである。本発明の薬学的組成物の有効量を薬学的許容可能な局所担体に添加することによって、局所製剤が形成される。局所的に適用される場合、前記組成物は、身体表面への適用に適したいかなる形態であっても良く、例えばクリーム、ローション、溶液、ゲル、軟膏、ペースト又は同様のものなどを含み、及び／又はリポソーム、ミセル、及び／又はミクロスフェアを含むように調整されても良い。前記局所製剤は、前記製剤重量に基づき約０．０００１重量％〜約０．０１重量％のＧＴＸ化合物を含む。または、前記局所製剤は、前記製剤重量に基づき約０．００１重量％〜約０．０１重量％のＧＴＸ化合物を含む。
【００４９】
前記組成物は、身体表面に直接塗布されても良く、或いは薬物送達装置の使用が関与しても良い。従って、処方若しくは薬物貯蔵剤形は、水溶性、すなわち水を含むものであってもよく、或いは非水溶性であって、更に薬物投与期間内において、身体表面から蒸発する水分が剤形或いは経皮システム内に維持されるように、密封塗布と組み合わせて使用されていても良い。しかしながら、一部の場合においては、例えば密封ゲルなどを用いることにより非水溶性剤形が密封層の有無にかかわらず使用されてもよい。
【００５０】
以下の実施例において、「用量」は、１人の患者に対して１回の投与期間に使用される毒素の量に言及するものである。１用量は１若しくはそれ以上の部位に適用されても良い。「治療」は、所望の効果を達成するために患者に与えられる用量の総数に言及するものである。マウスアッセイによって測定されるＧＴＸ２及びＧＴＸ３の混合物の１００ユニットは、ＨＰＬＣ−ＦＬＤで測定した場合、２５μｇのＧＴＸ２及びＧＴＸ３に相当する。
【実施例１】
【００５１】
正常な括約筋の収縮（肛門直腸検圧法によって測定した場合に７２ｍｍＨｇ未満の圧力）を有する２４〜４８歳の健常成人男性１０人を試験した。前記被験者は、痔、痔瘻、膿漏のような肛門直腸の病状を保持していなかった。診療の前に、肛門直腸検圧法、筋電図検査法、血液像、基礎代謝パネル、及び尿検査を含む検査を実施した。
【００５２】
ＧＴＸ−２及びＧＴＸ−３を約２：１の割合で組み合わせた総容量１．０ｍｌの１００活性単位の用量を、インシュリンシリンジ（２５ゲージ）を用いて、肛門内部括約筋の両側（各側面０．５ｍｌ）に浸潤させた。前記ＧＴＸ−２及びＧＴＸ−３の混合物は、ＰＳＰ毒素によって高度に汚染されていたチリのパタゴニアフィヨルドにおいて採取した貝類から、標準精製法によって精製した。
【００５３】
注入２分後、肛門直腸検圧法を実施した。静止及び随意収縮圧を測定して記録し、基準測定値と比較した。毒素注入前後において、各参加者の直腸肛門及び皮質肛門の反射も測定して記録した。水充填したマイクロバルーン及び外部変換機（ＰＶＢ）かん流装置を用いた固定貫通技術によって肛門管圧を記録した。出力の記録及び分析は、コンピューターシステムを用いて行った（８チャネルポリグラフＩＤ、Ｐｏｌｙｇｒａｍ  ９８  バージョン２．２を備えたＭｅｔｒｏｎｉｃ  Ｐｏｌｙｇｒａｐｈ）。
【００５４】
肛門静止圧は前記固定貫通技術を用いて水銀柱ミリメートルで記録し、コンピューターによって平均圧力を確認した。最大随意収縮は、各参加者の肛門括約筋の随意収縮を評価することにより判定した。振幅は水銀柱ミリメートルにおいて示した。
【００５５】
前記参加者は１週間後及び１２日後の２４及び４８時間に評価した。実験室分析のために、血液及び尿検体を注入から１週間後に、各参加者から収集した。尿中の毒素値は注入から４時間後に測定した。脈拍及び血圧は、副作用及び痛みのスコアと同様に、各診察時に記録した。注入時の痛み及び注入後２分の痛みのスコアは、１０を最大の痛み値とする１〜１０の痛み尺度を用いて、参加者の診察によって測定した。
【００５６】
長期的な結果は、中央値１２ヶ月の追跡調査の後、参加者との個人的なコミュニケーションを通じて、前記参加者の要望に応じて臨床検査を行うことにより測定した。
【００５７】
いずれの参加者も本試験から脱落せず、不都合な或いは否定的な副作用はなかった。臨床検査値はいかなる顕著な変化も見られず、注入から４時間後に収集した尿検体中に毒素はなかった。毒素の検出は、オンライン蛍光検出器を備えた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析によって行い、本方法の検出限界は１０ｍｌあたり１マイクログラムであった。この結果は、また、ＰＳＰ毒素が一旦注入されると直ちに細胞外媒体に入り、希釈を引き起こすという事実に相当するものでもある。
【００５８】
表１は試験結果の概要である。表１に示すように、注入の間は臨床的に肛門直腸検査を実施し、その２分後に肛門直腸検圧法を用いた場合、すべての参加者において、注入後３０秒以内に肛門括約筋の弛緩が見られた。前記参加者全員が、平均時間５９．５分±７．１２分（平均値±標準偏差）の間、肛門麻酔を感じたと述べており、更に４０．０±４．２０分間、括約筋の低調感覚を感じたと述べた。前記参加者のいずれも腸内ガス失禁又は一時的便失禁を示さなかった。
【００５９】
【表２】
2007536269.tif 000004
【００６０】
表２は肛門直腸検圧記録の概要である。検圧記録において、肛門最大随意収縮圧の有意な減少が見られた。注入後２分の前記圧力は基準値の５５．２±６．２％（平均値±標準偏差）であり、４４．８％の減少であった。注入後２４時間後、前記肛門最大随意収縮圧における低下は、基準値の５３％のまで上昇した。注入後１５日、前記肛門最大随意収縮はすべて基準値に戻った。注入前及び注入後に記録した筋電図検査法（ＥＭＧ）において、前記注入により筋活動が殆どなくなったことが示された。１２ヶ月の追跡診察（長期追跡調査）において、前記参加者はいずれも任意の逆効果又は全身的な副作用（すなわち肛門直腸の問題）を示さなかった。
【００６１】
【表３】
2007536269.tif 000005
【００６２】
表２から見られるように、ＧＴＸ−２及びＧＴＸ−３混合物の投与後、前記参加者の１００％において、直ちに完全な肛門括約筋の弛緩が達成された。これは、これらの毒素の局所的な注入によって、前記肛門括約筋における運動麻痺が引き起こされることを示すものである。このような弛緩は、前記注入の間に結腸肛門病学者によって行われる肛門臨床評価によって確認されるものである。前記毒素の注入によって、例えば腸内ガス失禁又は便失禁などの任意の持続的副作用を引き起こすことはなく、直腸−肛門及び皮質−肛門の反射は正常のままであった。注入された前記毒素値は、特別な筋収縮を遮断するが、正常な機能を提供するのには十分な強度を残すものである。
【００６３】
毒素の局部的末梢適用は、神経筋の伝達を妨げ、活動電位を変化させて括約筋の一時的な麻痺をもたらすものである。ＧＴＸの作用形態は、注入された筋肉を対象とし、その領域にある他の筋肉には影響を与えないものである。前記麻痺作用は、括約筋への局所注入によって１２日間継続する。副作用がないため、局所的に注入されたこの毒素の使用は安全であり、特に肛門括約筋の使用に効果的である。治癒組織の固定は基本的な治療原理であり、麻痺性毒素を用いた治療は、眼瞼痙攣、顔面痙攣、振戦、歯ぎしり、片側顔面痙攣、頸部ジストニア、脳性麻痺、作家又は音楽家の痙攣などの筋肉痙攣痛、手の震え、痙攣性ジストニアなどの別の病状を回復する上で効果的である可能性があり、堅苦しく厄介な動作を引き起こす筋緊張亢進の僅かな病気を記載している。
【実施例２】
【００６４】
裂肛の治療において、肛門緊張度の低減を介して治癒工程を促進し、外科的介入の必要性を排除すると同時に、安全かつ効果的な軟膏治療の代替法を提供するＧＴＸの局所浸潤効能の効果を検査するための試験を包含するために、症候性裂肛を有する１８〜７０歳の５０人の成人を評価した。
【００６５】
以下の試験対象患者基準、すなわち前部、後部、又はその両方の限局性潰瘍の痕跡、肛門内部括約筋の水平線維の境界と後部の硬化について、排便後の症状又は永続的な痛み、出血、又はその両方と共に患者を評価した。２ヶ月間継続性の裂肛歴を有する患者を慢性であるとみなした。表３は試験のために選択した患者の詳細を含むものである。妊娠している患者、又は痔、痔瘻、肛門膿瘍など別の病状と関連する裂肛を有する患者、１８歳より若い患者、又は７０歳より高齢の患者は本試験から除去した。
【００６６】
【表４】
2007536269.tif 000006
【００６７】
本試験における治癒基準及び第一の評価項目は、鎮痛及び亀裂の上皮化であった。前記患者には、ＧＴＸの作用及び機序について完全に情報を与え、その情報のすべてを患者に与えた承諾書に含ませた。この試験は無作為二重盲検試験であり、前記患者を診断し、ＧＴＸ−２及びＧＴＸ−３の混合物又は０．９％塩化ナトリウム溶液のプラセボを注入した。３週間の処理後、１５人のプラセボ処置患者において、症状の改善或いは悪化のいずれも見られなかった後、及びＧＴＸを注入した患者において際立った改善が見られた後に、人道主義及び倫理的な理由により本試験を開示した。
【００６８】
試験用量は、１．０ｍｌ容量中、ＧＴＸ−２及びＧＴＸ−３の混合物の１００活性単位から成るものであり、肛門内部括約筋の裂肛の両側に同じ容量で局所的に浸潤させた。前記注入はインスリン針（２５ゲージ）を用いて行った。
【００６９】
前述したように、肛門圧を測定して記録した。患者は、注入後７、１４、２８日後に臨床評価した。前記患者に最大値を１０とする１〜１０の尺度で痛みを評価してもらい、注入期間及び２分間の痛みを評価した。便柔軟剤、膨張性下剤、又は腰湯座浴は処方しなかった。１２ヶ月の追跡検査において、長期転帰を測定した。
【００７０】
【表５】
2007536269.tif 000007
【００７１】
【表６】
2007536269.tif 000008
【００７２】
本試験に登録した５０人の患者において、いずれも副作用或いは悪影響はなかった。表５に示したように、検診及び肛門直腸検圧法で測定した場合、前記患者の１００％が、注入直後、肛門括約筋の弛緩を示した。前記検診の間、結腸直腸学者が肛門緊張の減少を測定し、すべての患者が注入後に肛門麻酔を感じたことを言明した。注入後７日の試験において、すべての患者が肛門緊張の大幅な減少を示した。失禁は観察されず、すべての患者が直腸−肛門、及び皮質−肛門の反射を維持していた（表４）。
【００７３】
表５は、検圧記録によって示したすべての患者の最大静止圧力（ＭＲＰ）の顕著な減少を示したものである。前記ＭＲＰの記録は、１０８．８±２４．９から６１．１±２２．８ｍｍＨｇ（平均値±標準偏差）に降下し、５６．２±１２．５のＭＲＰ基準値に減少した。これは、４８．３％の平均の減少を示している。同様に、最大自然収縮圧（ＭＶＣＰ）は７４．３±１３．１のＭＶＣＰ基準値に減少し、２５．７％の平均の減少であった。
【００７４】
急性裂肛を有する患者は、注入４８時間以内に出血が停止した。この患者は、注入後７日の試験までに、排便後においてのみわずかな痛みがあり、前記損傷の上皮形成が見られた。注入後１４日の試験において、前記患者はすべて、瘢痕形成を伴った完全な上皮形成が見られた。
【００７５】
また、慢性裂肛を有する患者においても、４８時間以内に出血が停止した。注入試験後７日の指診検査までに、前記慢性裂肛を有する患者の５０％において、前記急性患者と類似した上皮形成を示した。それでもなお注入後１４日の試験までに上皮形成は明瞭に認められ、注入後２８日の試験までに前記慢性裂肛を有する患者の９８％において上皮形成が完了していた。すべての患者が排便後の痛みがなく無症状であった。
【００７６】
注入３ヵ月後、１人の患者が再発し、外科的介入を必要とした。この患者は、８年間の激痛及び出血周期を伴う再発性裂肛暦を有する５９歳の女性であり、さらに前記裂肛は亜裂性浸潤及び出血傾向を伴い複雑なものであった。基準において読み込まれた彼女の肛門直腸検圧法においては、１１８ｍｍＨｇのＭＲＰ及び１７１ｍｍＨｇのＭＶＣＰが見られた。本試験の残った患者においては、無症候性で健康のままであった。３８ヵ月後の追跡調査においては、わずか２人の患者が別の処置を必要とする裂肛の再発を示した。
【００７７】
この結果は、前記患者の１００％が、浸潤直後、肛門括約筋の弛緩を経験したことを示すものである。内部括約筋において運動麻痺が生じ、同時に肛門緊張の減少がもたらされた。腸内ガス失禁及び便失禁は観察されず、すべての患者が機能的肛門及び皮質−肛門反射を維持しており、浸潤によって過剰な筋収縮が遮断されるが、正常な筋肉が動作するための強度は十分残されていた。反復注入によって、いかなる問題も副作用も生じなかった。前記麻酔効果は１週間以上続いた。１２ヶ月の試験で副作用は観察されなかった。
【００７８】
本試験の５０人の患者のうち、３人の急性患者及び３３人の慢性患者は、以前に、座浴、便軟化剤、高繊維質の食事、腸の制御及び局所軟膏を用いて保存治療を行ったが効果がなかった（治癒しなかった）。本試験における治癒率は、すべての患者に対して２８日以内で９８％であったが、１７人の急性患者は１５日以内に治癒した。これらの結果は、他の薬学的処理（ＢｏＴｏｘ，ニトログリセリン又はニフェジピン）より高い効果を示すものである。
【００７９】
本実施例は、組織の固定化が治癒の基本的な治療原理であることを強調するものである。毒素を用いた治療は、毒素を局所的に注入した場合に、筋麻痺を引き起こし化学的除神経をもたらすものである。裂肛の治癒にはわずか２０日間のみが必要であるように、３ヶ月又はそれ以上の期間の除神経による生産物は不必要であるように思われる。ＧＴＸ処理により化学除神経誘導期間は減少する。タンパク質分解構造の損傷と共に３ヶ月又はそれ以上の期間の不可逆的化学除神経をもたらすＢｏＴｏｘ処理と比較して、ＧＴＸは、１００活性単位用量を与える場合、１２日間の可逆的化学除神経をもたらすものである。筋細胞壁の新たな領域における新たな接合プレート（ｊｕｎｃｔｉｏｎ  ｐｌａｔｅｓ）を形成する神経から、新たな小線維が増殖するまで、筋不活性が持続する。
【００８０】
【表７】
2007536269.tif 000009
【００８１】
従って、表６が示しているように、ＧＴＸは、ＢｏＴｏｘ或いは外科的処理などの現在の治療方法より安全な急性及び慢性裂肛を治療するための治療計画を提供するものである。ＧＴＸ処理は、腸内ガス失禁又は便失禁という不都合をもたらすことがなく、さらに５〜７週間の治癒期間を要するものでもない。ＧＴＸ処理は、長期入院に繋がる永続的な括約筋の損傷をもたらすことがないものである。
【実施例３】
【００８２】
２０グラムのＣＦ１アルビノ株マウスの脚の二頭筋の筋収縮を１．５〜２．０時間遮断するのに必要な本発明の組成物の量が１活性単位に相当する。毒素は、前記マウスの右脚の二頭筋に、０．５ｍｌ容量で筋肉内注入した。左脚はコントロールとして用いた。３匹のマウスにおいて前述の作業を３回繰り返し、最初の２時間は３０分毎に、更にそれぞれ２、４、８時間と一晩、麻痺効果を検証した。注入した用量により、前記麻痺効果は２４時間或いはそれ以上続く可能性がある。この実施例は、本発明の毒素の化学的天然効果を確認するものであり、前記効果の継続時間は、前記毒素の用量を変えることで制御され得るものであることを示すものである。
【実施例４】
【００８３】
実施例２で使用したように、２００単位〜５０００単位用量のＧＴＸ２及びＧＴＸ３混合物を、正常なボランティアの肛門内部括約筋に注入により投与した。これらの用量は、不都合な或いは否定的な副作用がなく、十分許容するものであった。前記ボランティアは、このような比較的大容量の毒素を局所的に注入した期間及びその後においても、健康なままであった。
【実施例５】
【００８４】
裂肛治療のための軟膏
ワセリン                    ７５．０００％ｗ／ｗ
セスキオレイン酸ソルビタン  １０．０００％ｗ／ｗ
白ろう                      １０．０００％ｗ／ｗ
毒素ＧＴＸ２／ＧＴＸ３    ０．０１−０．０００１％ｗ／ｗ
水                          １００％まで
【００８５】
成分の目的
ワセリン                    皮膚軟化剤軟膏基材
セスキオレイン酸ソルビタン  乳化剤、浸透促進剤
白ろう                      増粘剤、安定剤
【００８６】
混合方法
ワセリン、セスキオレインソルビタン、及び白ろうを６０℃で融解させて、均一になるまで混合する。毒素水溶液をゆっくり加え、軟膏が凝固するまで混合し続ける。
【００８７】
本試験は、使用した処方と毒素の投与方法が異なる外は上述の実施例２の記載と同様の手順であり、本試験に２０人の患者が参加した。この場合、１０〜２００単位のＧＴＸ２／ＧＴＸ３混合物を含む軟膏を、裂肛が露呈した痛みのある領域を含む肛門括約筋近辺の筋組織領域に塗布した。医師によって、１０分のマッサージと共に、この局所塗布が行われた。
【００８８】
前記軟膏塗布前１０分及び塗布後、肛門直腸検圧法を行った。前記クリームを塗布した後の前記圧力測定においては、顕著な変化が見られなかった。患者は、クリームと１日２回（朝と夜、約各１２時間）クリームを塗布するための使用説明書とを持って家に帰ってもらった。前記患者が、毎週、前記医師を訪問することによって、追跡調査を行った。前記患者は、第１週、第２週、第３週後、前記切れ目において上皮形成を示し始め、裂肛の種類（急性又は慢性、或いは後部又は前部）によって第３週〜第５週の間の処理で治癒が完了した。
【００８９】
前述の本発明の詳細な記載は、図示及び説明の目的のみで示されているものであり、本発明を限定するものとして解釈されるものではない。本発明の範囲は、本明細書に添付した請求項から決定されるものである。
【国際調査報告】
2007536269.tif 000011