(57)【要約】  本発明は、多数の顕微鏡スライドを使用して、アッセイサンプルを作製するデバイスに関する。各スライドは、スライドの平面上に離間した多数のアッセイ反応面位置を有する。好ましい実施態様では、デバイスは、ＳＢＳ標準マイクロプレート、例えば９６ウェルプレートの外部寸法を有する顕微鏡スライドホルダーを１部分として含む。デバイスは、中心で９ｍｍ離間する１６のマイクロアレイ面（又は９６ウェルプレートについては４）を備えた慣用の顕微鏡スライドを収容する。個々のチャンバープレートは、スライドの上に配置され、各アッセイ反応面位置の上に個々のウェルを製造する。好ましい実施態様では、各アッセイ反応面位置は、多数の反応部位を有するマイクロアレイを含みうる。従って、ゲノム又はプロテオーム解析用サンプルについて、並行プロセッシングを実行することができる。ＳＢＳ標準マイクロプレート用の慣用のハイスループットアッセイ装置を使用でき、同時に慣用の顕微鏡スライドを使用でき、そのため、スライド用にデザインされたロボットアッセイ読み取り装置の使用が可能であることが、本発明の利点である。
2007514448.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）1組の外縁と、分離して個別に離間された複数のアッセイ反応面位置で覆われた平面とを有する平面支持体を、それぞれが含むアッセイスライドを少なくとも１つ備え、上記アッセイ反応面位置は、ゲノム活性又はプロテオーム活性についてアッセイすべきサンプルに反応面を提供するために、それぞれ処理されており、１８平方センチメートル当り少なくとも８個の密度で存在し、
ｂ）上平面と底平面の間に位置し、１組の外側壁面により包囲されたボトムレスウェルをそれぞれが複数含む、平面マルチウェルチャンバープレートを少なくとも1つ備え、該各平面マルチウェルチャンバープレートは、対応するアッセイスライドのアッセイ反応面位置とウェルの位置とが正しく合うような寸法と構成であり、対応するアッセイスライドに隣接しかつ位置合わせされた位置にあり、各ウェルは、アッセイスライド上の対応するアッセイ反応面位置の領域を包囲する寸法であり、相互に分離し、サンプルを受容する寸法であり、かつ各ウェルは、対応するアッセイ反応面位置と連絡できる開口を有し、
ｃ）スライドホルダーを備え、該スライドホルダーは、それぞれ、アッセイスライドを受容する寸法及び構成としたスライド開口を少なくとも１つ有し、
ｄ）スライド保持手段を有し、スライド保持手段が、上記スライドホルダー内の対応する開口中に受容された各スライド及び対応するチャンバープレートを開口内に保持するように、スライドホルダーに取り付けられている、
複数のアッセイサンプルを作製するデバイス。
【請求項２】
各スライドがチャンバープレートに解除可能に係合できるように、チャンバープレートの底面上に解除式シーリング手段も配置される、請求項１に記載のデバイス。
【請求項３】
スライドホルダー内の各スライド開口が、スライドホルダーの外壁から内側に傾斜する壁を有し、開口上部は、スライド上部より面積が小さく、これによりスライドを開口内に受容するために傾けるようにしてなる、請求項１に記載のデバイス。
【請求項４】
各アッセイスライドは、外縁及び平面に沿って同じ寸法を有する、請求項１に記載のデバイス。
【請求項５】
各アッセイスライドは、同数及び同間隔のアッセイ反応面位置を有する、請求項１に記載のデバイス。
【請求項６】
各スライド上のアッセイ反応面位置は、中心間で約９ｍｍ離間し、スライドホルダーは、ＳＢＳ標準マイクロプレートに合致する外部寸法を有し、かつアッセイ反応面位置を、ＳＢＳ標準マイクロプレートに対応するウェルフォーマットに正しく合わせるように、各スライド開口は対応するスライドを受容する、請求項１に記載のデバイス。
【請求項７】
ＳＢＳ標準マイクロプレートは、２４ウェル、６４ウェル、９６ウェル又は３８４ウェルを有する、請求項６に記載のマルチアッセイサンプルデバイス。
【請求項８】
各アッセイ反応面位置は、複数のアッセイ反応部位を有する、請求項１に記載のデバイス。
【請求項９】
少なくとも２つのアッセイ反応面位置は、実質的に同一パターンのアッセイ反応部位を有する、請求項８に記載のデバイス。
【請求項１０】
スライド開口は、スライドホルダーの垂直面にあり、そのためスライドの水平移動によりこれを受容することができる、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１１】
スライド開口は、スライドホルダーの水平面にあり、そのためスライドの垂直移動によりこれを受容することができる、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１２】
ａ）1組の外縁と、分離して個別に離間された複数のアッセイ反応面位置で覆われた平面とを有する平面支持体を、それぞれが含むアッセイスライドを少なくとも１つ備え、上記アッセイ反応面位置は、ゲノム活性又はプロテオーム活性についてアッセイすべきサンプルに反応面を提供するために処理されており、１８平方センチメートル当り少なくとも８個の密度で存在し、
ｂ）上平面と底平面の間に位置し、１組の外側壁面により包囲されたボトムレスウェルをそれぞれが複数含む、平面マルチウェルチャンバープレートを少なくとも1つ備え、該各チャンバープレートは、対応するアッセイスライドのアッセイ位置面とウェルとを正しく合わせるような寸法と構成であり、対応するアッセイスライドに隣接しかつ位置合わせされた位置にあり、各ウェルは、対応するアッセイスライド上の対応するアッセイ反応面位置の領域を包囲する寸法であり、相互に分離し、サンプルを受容する寸法であり、かつ各ウェルは、対応するアッセイ反応面位置と連絡できる開口を有し、
ｃ）スライドホルダーを備え、該スライドホルダーは、上面、下面及び複数のスライド開口を含み、各スライド開口は、アッセイスライドを上面から受容する寸法及び構成であり、
ｄ）スライド保持手段を備え、該スライド保持手段は、スライドホルダーの上面に取り付けることのできる頂部を構成し、これは、スライドホルダー内の対応するスライド開口中に受容された各スライド及び対応するチャンバープレートを開口内に保持する、
複数のアッセイサンプルを作製するデバイス。
【請求項１３】
各スライドがチャンバープレートに解除可能に係合できるように、チャンバープレートの底面上に解除式シーリング手段も配置される、請求項１２に記載のデバイス。
【請求項１４】
スライドホルダー内の各開口は、スライドホルダーの外壁から内側に傾斜する壁を有し、開口上部が、スライド上部より面積が小さく、これによりスライドを開口内に受容するために傾けるようにしてなる、請求項１２に記載のデバイス。
【請求項１５】
各スライドは、外縁及び平面に沿って同じ寸法を有する、請求項１２に記載のデバイス。
【請求項１６】
各スライドは、同数及び同間隔のアッセイ反応面位置を有する、請求項１２に記載のデバイス。
【請求項１７】
各スライド上のアッセイ反応面位置は、中心で約９ｍｍ離間し、スライドホルダーは、ＳＢＳ標準マイクロプレートに相当する外部寸法を有し、かつアッセイ反応面位置を、ＳＢＳ標準マイクロプレートに対応するウェルフォーマットに合わせるように、各スライド開口は対応するスライドを受容する、請求項１２に記載のデバイス。
【請求項１８】
ＳＢＳ標準マイクロプレートは、２４ウェル、６４ウェル、９６ウェル又は３８４ウェルを有する、請求項１７に記載のマルチアッセイサンプルデバイス。
【請求項１９】
頂部は、複数のチャンバープレートも含み、該プレートは、保持されたスライド及び対応するアッセイ反応面位置に位置合わせされ、頂部周囲に離間して整列配置される、請求項１２に記載のデバイス。
【請求項２０】
頂部は、保持されたスライド及び対応するアッセイ反応面位置に位置合わせされた、離間して配列された複数のチャンバープレートを保持する、請求項１２に記載のデバイス。
【請求項２１】
各アッセイ反応面位置は、複数のアッセイ反応部位を有する、請求項１２に記載のデバイス。
【請求項２２】
少なくとも２つのアッセイ面位置は、実質的に同一パターンのアッセイ反応部位を有する、請求項２１に記載のデバイス。
【請求項２３】
スライド開口は、スライドホルダーの垂直面にあり、そのためスライドの水平移動によりこれを受容することができる、請求項１２に記載のデバイス。
【請求項２４】
スライド開口は、スライドホルダーの水平面にあり、そのためスライドの垂直移動によりこれを受容することができる、請求項１２に記載のデバイス。
【請求項２５】
複数のアッセイサンプルをプロセッシングする方法であって、
少なくとも１つのチャンバープレート及び請求項１に記載のデバイス内の対応するスライドの中の少なくとも１つのウェルにサンプルを添加するステップと、サンプルをウェル内のアッセイ反応面位置と反応させるステップと、反応済みサンプルからの信号を測定するステップとを含む、プロセッシング方法。
【請求項２６】
アッセイ反応面位置は、スライドをスライドホルダーに入れて、作製される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
アッセイ反応面位置は、スライドがスライドホルダー内に配置される前に作製される、請求項に２５記載の方法。
【請求項２８】
信号は、スライドをスライドホルダーから取り外して測定される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
サンプルは、ロボットサンプル適用手段により適用される、請求項２５に記載の方法。
【請求項３０】
信号は、ロボット信号測定手段により測定される、請求項２５に記載の方法。
【請求項３１】
サンプルは、細胞可溶化物、細胞上清、血漿、血清又は体液からなる群より選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項３２】
複数のサンプルが、実質的に同一の一連の反応部位を有する各アッセイ反応面位置に、それぞれ適用される、請求項２５に記載の方法。
【請求項３３】
サンプルからの信号を比較して、サンプル内のなんらかの類似点を示す、重複した反応パターンを同定する、請求項３２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（１）発明分野
本発明は、多数の顕微鏡スライドを使用して、アッセイサンプルを作製するデバイスに関する。各スライドは、スライドの平面上に、多数の離間したアッセイ反応面位置を有する。好ましい実施態様では、デバイスは、ＳＢＳ標準マイクロプレート、例えば９６ウェルプレートの外部寸法を有する顕微鏡スライドホルダーを部材として含む。デバイスは、中心から９ｍｍ離間する１６のマイクロアレイ面（又は９６ウェルプレートについては４）を備えた慣用の顕微鏡スライドを受容する。各チャンバープレートは、スライドの上に配置され、各アッセイ反応面位置の上に個々のウェルを製造する。好ましい実施態様では、各アッセイ反応面位置は、多数の反応部位のマイクロアレイを含んでよい。従って、並行プロセッシングを、ゲノム又はプロテオーム解析用サンプルについて実行することができる。ＳＢＳ標準マイクロプレート用の慣用のハイスループットアッセイ装置を使用でき、同時に慣用の顕微鏡スライドを使用でき、従って、スライド用にデザインされたロボットアッセイ読み取り装置の使用が可能であることが、本発明の利点である。
【背景技術】
【０００２】
（２）３７ＣＦＲ１．９７＆１．９８の下で開示済みの情報を含む関連技術についての記述
マルチウェルテストプレート（他の場合は、当技術で、マイクロタイタープレート又はマイクロプレートと呼ばれる）は、多くのサンプルを同時にアッセイすることに関心のある科学者にとり不可欠なツールである。マイクロプレートに一層の柔軟性を備えさせるために、当技術は、種々の特徴を組み合わせた。米国特許第５６７９３１０号に見られるように、マイクロプレートは、ウェルの底内部に高表面積構造を含むように修正された。又、ウェルの底内部に多孔性分離媒体を使用して、サンプル中の固体からの液体の分離を促進するように修正された（米国特許第５４１７９２３号参照）。ガスケット頂部を、マイクロプレートに付けて、サンプルの相互汚染を防止した（米国特許第５５１６４９０号参照）。
【０００３】
ゲノム解析及びプロテオミクスの進歩と共に、多数の結合成分（ｂｉｎｄｉｎｇ  ｅｌｅｍｅｎｔｓ）を用いて取り調べる多数のサンプルを自動的にプロセッシングできる技術が必要とされている。マイクロチップ技術は、多数の解答を提供し、調査員に、所定の生物学的サンプル内の複数の反応性を決定することを可能にする。
【０００４】
ＤＮＡ及びタンパク質マイクロアレイは、複数の結合反応について同時反応測定を可能にする重要な方法となってきている（Ｓｃｈｅｎａ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７０：４６７〜４６９（１９９５），Ｄｕｇｇａｎ，Ｄ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ２１：１０〜１４（１９９９），ＭａｃＢｅａｔｈ，Ｇ．ａｎｄ  Ｓｃｈｒｉｅｂｅｒ，Ｓ．Ｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８９：１７６０〜１７６３（２０００）参照）。複数のサンプルを所定のアレイの全ての元素に対する結合活性について、同時にテストすることは、最小のサンプル容積で並行プロセッシングする能力を著しく増加させる。
【０００５】
例えばＳｃｈｅｎａ  ｅｔ．ａｌは、ゲノム配列を表す多数のオリゴヌクレオチドを固定化してガラス顕微鏡スライドにし、細胞の全ＲＮＡから製造された試料をこれらの配列とハイブリッド形成させることを記載する。これは、１つの結合実験で、その時点で細胞中に発現した遺伝子全てを見せる。同様なマイクロアレイで、ガラススライド上に固定化された多数の抗体を使用して、特定の時点で細胞又は細胞群中にどのタンパク質が、どれだけの量発現するか分かることが記載されている。これらのマイクロアレイの製造は、ガラススライドの正確な位置にサンプルの小容積を配達できるスポッティングロボットに部分的に依存する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
生体分子（核酸、タンパク質等々）のハイスループット分析を提供かつ改良する方法及びデバイスは、タンパク質機能の解明、診断テスト、薬物発見及び薬物標的同定にとり重要である。多数の生体分子の同時反応測定を改良した一連の技術は、マイクロアレイの使用である。マイクロアレイは、一般に表面上に固定化された分子の順序付けられた表示である。そのようなアレイは、多くの元素の標的分子への結合の同時調査を可能にする。研究者に、マイクロアレイ上で反応をおこし、処理しかつ検出することを可能にする多様な技術が開発された。
【０００７】
本発明の目的は、多くの異なるタンパク質と結合し、タンパク質を３次元構造に保持し、これらを十分な量で固定化して高感度検出を可能にする、アドレス可能なタンパク質マイクロアレイを表面に設けることである。
【０００８】
本発明の第二の目的は、異なるサンプル又は結合パートナーで、タンパク質の同じアレイを鋭敏に調査できることである。固有のタンパク質結合パートナーは一般に数少ないので、最小量を使用できるどの技術も好まれる。
【０００９】
本発明の第三の目的は、都合のよい１組の手順を使用して、ハイスループットな技術を可能にすることである。特に、本発明の目的は、「マイクロプレート」９６ウェルフォーマットを使用することであり、これは、７ｍｍの直径又は７ｍｍ角のどちらかである反応域が、９ｍｍ間隔であることに基づく。多数のピペット操作補助、検出器具類、リキッドハンドリングシステム及びロボットが、このフォーマットに適合するようにデザインされている。
【００１０】
本発明の第四の目的は、複数サンプルの実質的に同一のマイクロアレイを並行プロセッシングすることである。
【００１１】
本発明の第五の目的は、顕微鏡スライドに基づく反応面を取り込み、これを慣用のマイクロプレート系ハイスルーポットロボット装置で使用するために変形できるデバイスを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本質的に、マイクロアレイが可能にするものは、並行プロセッシングによる大量のデーターの蓄積である。この時点でこのことは、単一の生体試料に多数の結合成分を施すことにより、大部分達成される。複数のサンプルを、マルチアレイに対しプロセスできる場合、その情報量は、増加するであろう。このことは、薬物配達、マイクロアレイの診断及び予測適用において、特に重要であり、その場合、複数サンプルの同時スクリーニングが、品質的に比較される結果にとり、最も重要である。
【００１３】
本発明は、少なくとも１つのアッセイスライド上に配置される複数の反応部位のための複数のアッセイサンプルを作製するためのデバイスである。各スライドは、1組の外縁と、分離して個別に離間された複数のアッセイ反応面位置で覆われた平面とを有する平面支持体を含む。各アッセイ反応面位置は、ゲノム活性又はプロテオーム活性についてアッセイすべきサンプルに反応面を提供するために処理されている。当業者に公知の慣用の試薬は、そのような反応に使用することができ、細胞及び組織から生じる配列から一般に由来する核酸並びにタンパク質を含む。各アッセイ位置は、少なくとも１つのアッセイ反応部位を有するべきだが、通常、アッセイ面位置あたり複数のアッセイ反応部位、場合によっては数百のアッセイ反応部位を有することもある。アッセイ位置面は、１８平方センチメートル当り少なくとも８個の密度で存在する。
【００１４】
本発明は、スライドの他に、少なくとも1つの平面マルチウェルチャンバープレートを含む。各チャンバープレートは、複数のボトムレスウェルを有し、このウェルは、上平面と底平面の間に位置し、１組の外側壁面により包囲されている。各チャンバープレートは、対応するアッセイスライドのアッセイ反応面位置とウェルとを正しく合わせるような寸法と配置である。各チャンバープレートは、対応するアッセイスライドに隣接しかつ位置あわせされる位置にある。各チャンバープレートウェルは、対応するアッセイスライド上の対応するアッセイ反応面位置の領域を包囲する寸法である。各ウェルは、相互に分離し、サンプルを受容する寸法である。各ウェルは、対応するアッセイ反応面位置と連絡できる開口を有する。
【００１５】
複数のスライド開口を装備したスライドホルダーが、スライドを保持する。各スライド開口は、アッセイスライドを受容する寸法及び構成である。１部の実施態様では、開口は、スライドホルダーの水平面にあり、スライドの垂直移動によりこれを受容するようにデザインされている（図１及び２参照）。他の実施態様では、開口は、スライドホルダーの垂直面にあり、スライドの水平移動によりこれを受容するようにデザインされている（図７及び８参照）。
【００１６】
図から分かるように、本発明は、スライドホルダーに取り付けられるスライド保持手段も含む。スライド保持手段は、スライドホルダー中の対応する開口内に、各マイクロアレイスライド及び対応するチャンバープレートが受容され、さらにスライドが適切な合わせ位置に配置されると、開口内にこれを保持することを可能にする。従って、反応容器としてチャンバープレートのウェルを用いる、各アッセイ反応面位置の更なる反応プロセッシングのために、スライドを固定することができる。
【００１７】
本発明は、固定手段用頂部の使用も含んでよい。図３及び４に見られるように、スライドホルダー中の対応する開口中に受容された各マイクロアレイスライド及び対応するチャンバープレートを開口内で保持するために、スライド保持手段は、スライドホルダーの上面に取り付けることのできる頂部を含む。
【００１８】
本発明では、図５及び６に見られるように、頂部とチャンバープレートとを合わせて単一構造物にすることもできる。
【００１９】
本発明のデバイスは、複数のアッセイサンプルをプロセッシングする方法に使用することができる。一般に、サンプルを、前記いずれかのデバイスの少なくとも１つのチャンバープレート及び対応するスライド中に作製されたウェルの少なくとも１つに加える。アッセイ反応面位置は、スライドホルダー中のスライドと一緒に又はスライドホルダーにスライドを置く前に、作製することができる。一般に複数のサンプルが、各スライドに適用され、それぞれ各アッセイ反応面位置に適用されるであろう。並行プロセッシングが所望される場合には、各スライド上に、実質的に同一の１組のアッセイ反応部位を有するであろう。
【００２０】
慣用のパラメーターを使用して、サンプルをウェル中のアッセイ反応面位置と反応させる。
【００２１】
最後に、選択された信号化学に適切な慣用の信号測定技術を使用して、反応したサンプルからの信号を測定する。場合によっては、サンプルを、作製済み面と反応させた後に、少なくとも１つの追加反応を施行して、測定可能な信号を製造する必要があろう。信号は、スライドホルダー中のスライドで又はスライドホルダーから外したスライドで測定することができる。信号は、慣用のロボット信号測定手段により測定することができる。スライドについて、並行プロセッシングが所望される場合、サンプルからの信号を比較して、サンプル内のなんらかの類似点を示す、重複した反応パターンを同定する。
【００２２】
好適なサンプルは、細胞可溶化物、細胞上清、血漿、血清又は体液からなる群より選択されるプロテオーム又はゲノムサンプルを含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
好ましい実施態様において、本発明は、複数のアッセイサンプルを作製するデバイス（１０）に関する。第一の好ましい実施態様は、図１と図２に示される。デバイスは、ＳＢＳ標準マルチウェルマイクロプレートの寸法に合わせたサイズであり、この説明図では、９ｍｍ間隔のフォーマットを有する９６ウェルマイクロプレートである。デバイスは、スライドホルダー（４０）に保持された４つのアッセイスライド（２０）を含む。各スライドは、標準サイズのガラス顕微鏡スライド（７５ｍｍ×１２５ｍｍ）であり、外縁（２２）及び平面（２４）の１組を有する平面支持体を含み、この平面は、１６個の分離し、個別に離間したアッセイ位置（２６）で覆われている。アッセイ位置は、ゲノム又はプロテオーム活性についてアッセイすべきサンプルに反応面を提供するように処理される。アッセイ反応面位置は、９６ウェルマイクロプレートのそれと正しく合わせられる密度及び間隔で存在する。他の慣用のマイクロプレートのフォーマットは、２４ウェル、６４ウェル及び３８４ウェルを含む。
【００２４】
図に見られるように、本発明は、また、対応するスライドと同じ平面面積を有する寸法にされた平面マルチウェルチャンバープレート（３０）を４つ含む。各チャンバープレートは、上平面（３４）と底平面（３６）との間に位置し、１組の外壁面（３８）に包囲されたボトムレスウェル（３２）を１６個含む。各チャンバープレートは、マイクロアレイアッセイスライド（２０）のアッセイ位置面（２６）とウェルとを正しく位置あわせできるような寸法と構成である。各チャンバープレートは、対応するアッセイスライドに隣接し、かつ位置合わせされている。各ウェルは、対応するアッセイスライド上の対応するアッセイ反応面位置の領域を包囲する寸法であり、かつ他から分離し、サンプルを受容する寸法である。かつ各ウェルは、対応するアッセイ位置面と連絡できる開口を有する。
【００２５】
チャンバープレートは、ウェル内で生じる何れの反応にも不活性であり、エラストマーの性質を有する物質、例えばシリコーンゴム、から製造することができる。各スライドが、チャンバープレートに解除可能に係合できるように、チャンバープレートの底平面に配置された解除式シーリング手段、例えば慣用の解除可能な接着剤、により、チャンバープレートは対応するスライドに解除可能に固定することができる。
【００２６】
本発明は、４つの開口（４２）を有するスライドホルダー（４０）も含む。各スライド開口は、アッセイスライドを受容するような寸法及び構成である。開口まわりのショルダー（４４）は、各スライドを正しく位置付けた場所に支持する。更に、各スライド開口は、スライドホルダーの外壁から内側へ傾斜する壁を有するので、開口上部がスライドの上部より面積が小さく、そのため開口内に受容するためにスライドを傾斜させる必要がある。
【００２７】
本発明のスライドホルダー部材に好適な材料は、当業者に慣用のものであり、公知である。例として、アセタール、ポリプロピレン、ＰＴＦＥ、アルミニウム、ステンレススチール、ポリスチレン又はポリアクリレートがある。
【００２８】
最後に、本発明は、スライドホルダーに取付けられたスライド保持手段（５０）を有することもある。スライド保持手段は、バネ付勢押圧性ボール手段（ｓｐｒｉｎｇ−ｌｏａｄｅｄ  ｄｅｐｒｅｓｓａｂｌｅ  ｂａｌｌ  ｍｅａｎｓ）（５２）又は可動性突出手段（ｍｏｖｅａｂｌｅ  ｐｒｏｔｕｓｉｏｎ  ｍｅａｎｓ）であってよい。スライド保持手段は、各スライド及び対応するチャンバープレートを、スライドホルダー内の対応する開口内に受容し、しかも開口内に一旦収容すると直ちに、その中に保持できるように機能する。
【００２９】
本発明の第二の好ましい実施態様は、チャンバープレート及び顕微鏡スライドをスライドホルダーに固定する蓋を使用する。図３及び４に見られるように、第一の好ましい実施態様におけるように、少なくとも１つのアッセイスライド（２０）は、少なくとも１つの対応するマルチウェルチャンバープレート（３０）に接続される。このペアをスライドホルダー（４０）の開口（４２）内に設置し、また、第一の好ましい実施態様に記載のように、スライドホルダーは、上面、下面及び複数のスライド開口を含み、各スライド開口は、上面からアッセイスライドを受容するような寸法及び構成である。しかしながら、この実施態様では、スライド保持手段は、頂部（６０）を構成し、これは、スライドホルダーの上面に取付けられて、スライドホルダー中の対応するスライド開口に受容された各スライド及び対応するチャンバープレートを開口内に保持することができる。頂部は、チャンバーウェルと位置を合わせた一連の開口（６２）を有し、これにより、頂部は、チャンンバーウェルプレートを所定の位置に固定して、ウェルへのアクセスを可能とする。頂部は、複数のチャンバープレートを離間した配列で保持し、このプレートは、保持されたスライド及び対応するアッセイ反応面位置と位置が正しく合っている。
【００３０】
第二の好ましい実施態様は、第一の好ましい実施態様の任意の特徴を多く含んでよく、すなわち、各スライドが、チャンバープレートに解除可能に係合できるようにチャンバープレートの底面部に解除式シーリング手段が配置される。また、スライドホルダー中の各開口は、スライドホルダーの外壁から内側へ傾斜する壁を有するので、開口上部がスライド上部より面積が小さく、そのため開口内に受容するためにマイクロアレイスライドを傾斜させる必要がある。各アッセイスライドは、外縁及び平面に沿って同じ寸法を有し、各スライドは、アッセイ反応面位置の同じセットを有する。
【００３１】
第三の好ましい実施態様は、図５と６に示される。これは、第二の好ましい実施態様の変法であり、この変法では、頂部が、間隔を置いて整列配置された複数のチャンバープレートを含み、これは、保持されたスライド及び対応するアッセイ反応面位置と正しく位置合わせされている。
【００３２】
第四の好ましい実施態様は、図７〜９に示される。第一の好ましい実施態様と同様に、スライド保持手段は、スライドホルダー内に設置される。しかしながら、第一の好ましい実施態様と異なり、スライド保持手段（バネ付勢押圧性ボール５２）は、垂直動作位置に設置される。更に、スライドホルダーは、垂直外壁にスライド開口（４２）を有する。スライド開口周囲のショルダー（４４）と共に、フランジ（５４）が、上面に沿って設置され、各スライドが水平移動により外れるのを回避する。この構造は、スライドが、水平移動でスライドホルダー中に配置されることを可能にし、スライドの１端が、スライド開口の遠位端に係合すると、停止し、次いでバネ付勢ボールがスライド開口の近位端でスライドから開放される。
【００３３】
第五の有利な実施態様は、図１０及び１１に示される。第四の好ましい実施態様と同様に、スライドは、水平移動によりスライドホルダー中に置かれる。しかしながら、第四の好ましい実施態様とは異なり、フランジ（５４）は、スライドホルダーの上面の周囲にぐるりと結合していない。その代わりにＴ−レールを使用して、Ｔ−レールの垂直壁に各スライドを配置するための横側拘束を備え、同様にチャンバープレート（３０）及びスライド（２０）のための水平拘束を備える。更に、端止め（５６）は、単一壁として連結されておらず、個々の柱である。好ましくは、スライドホルダーは、各スライド受容域に開口（４６）を有してよい。スライド底部が、適切な材料、例えばガラス、から製造されるならば、スライドがスライドホルダー内にある間、光エネルギー信号を下から読むことができる。隅きりされた角１つを有する慣用のマイクロウェルの頂部（６０）は、その角に最近接した端止めが適切に配置される場合、スライドホルダー（４０）と共に使用することができる。この構造では、水平移動によりスライドを、スライドホルダー内に配置することができ、スライドの１端が、スライド開口の遠位端に係合すると、停止し、次いでバネ付勢ボールが、スライド開口の近位端でスライドから開放される。
【００３４】
これらの実施態様の全てで、マイクロアレイサンプルデバイスは、各アッセイ反応面位置にアッセイ反応部位を複数有することができる。反応部位は、グループ分けされ、各アッセイ面反応位置でマイクロアレイを形成することができる。
【００３５】
これらの実施態様の全てで、マイクロアレイサンプルデバイスは、少なくとも２つのアッセイ面位置を有し、実質的に同一のパターンのアッセイ反応部位を有することができる。
【実施例】
【００３６】
ＦＡＳＴ（商標）スライド（１６ｐａｄ）（Ｓｉｘｔｅｅｎ  ｐａｄ  ＦＡＳＴ  ｂｒａｎｄ  ｓｌｉｄｅｓ：Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ  ａｎｄ  Ｓｃｈｕｅｌｌ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．，Ｋｅｅｎｅ，ニューハンプシャ，ＵＳＡ製造）を、バッファー及び市販の抗−ＩＬ６抗体（１ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、０．２５ｍｇ／ｍｌ濃度）を用いて、Ｐｅｒｋｅｒ  Ｅｌｍｅｒ  ＢｉｏＣｈｉｐ  Ａｒｒａｙｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，ボストン，マサチューセッツ製造）を使用して、アレイ化した。アレイ化されたスライドは、図１に示されたスライドホルダー内に置き、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｍｕｌｔｉｐｒｏｂｅ  II  ＨＴ  リキッドハンドラー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，
ボストン，マサチューセッツ製造）を使用して処理した。
【００３７】
スライドを、ブロッキング用緩衝液（１×トリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）、２％Ｔｗｅｅｎ２０界面活性剤、０．１％ポリビニルピリラドン及び０．５％ポリビニルアルコール）７０μｌ／ウェルで１５分間ブロックした。ブロッキング用緩衝液を、リキッドハンドラーを用いて除去した。１０％ウシ胎仔血清を含むＲＰＭＩ中のＩＬ６抗原１ｍｇ／ｍｌの溶液をウェルに、７０μｌ／ウェルで添加した。スライドホルダーを回転させながら、このスライドを抗原と共に１時間インキュベートした。
【００３８】
最初のインキュベーション後、抗原溶液を除去し、スライドを洗浄緩衝液（１×ＴＢＳ及び０．１％Ｔｗｅｅｎ２０界面活性剤）７０μｌで３回洗浄した。これは、緩衝液を分配し、ピペットで上下に操作することを３度行い、緩衝液をリキッドハンドラーで除去することにより行なった。スライドホルダーを回転させながら、このスライドをビオチニル化した抗−ＩＬ６抗体７０μｌ（１００ｎｇ／ｍｌ濃度）と共に、１時間インキュベートした。
【００３９】
第二インキュベーション後、スライドを前記のようにして再度洗浄した。ストレプトアビジン−Ｃｙ５の溶液（１ｍｇ／ｍｌ株を１：８０００希釈）をウェルに７０μｌ／ウェルで添加した。スライドホルダーを回転させながら、このスライドを１時間インキュベートした。次いで、スライドを前記のようにして再度洗浄し、８０℃でほぼ１分間乾燥させ、ＧＳＩ  Ｌｕｍｏｎｉｃｓ  ＳｃａｎＡｒｒａｙ  ４０００スキャナー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，ボストン，マサチューセッツ製造）を使用して、レーザー／ＰＭＴを８５：５０に設定して、スキャンした。スライド全てを個々にプロセスしたかのように読み取ることができた。
【００４０】
図１２に示されるように、結果は、本発明デバイスがマルチアレイ上の複数のサンプルの同時プロセッシングを可能にすることを示した。本発明で装填され、自動リキッドハンドリングシステム（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＭｕｌｔｉＰＲＯＢＥ（登録商標）ＩＩ）を使用してプロセスした１６−ｐａｄ  ＦＡＳＴスライド上の抗ヒトサイトカイン抗体６つのアレイのデジタル画像を見ることができる。抗体を、処理済み又は未処理細胞可溶化物を調べるために使用した。簡潔にいうと、ＴＨＰ−１細胞を、リポポリサッカリド（ＬＰＳ）と共に又は無しでインキュベートした。細胞は溶解した。粗溶解物は媒質で１：１０に希釈して、予め配列された１６−ｐａｄ  ＦＡＳＴスライド４個と共にインキュベートした。インキュベーション後、アレイは、ビオチニル化抗体カクテル及びストレプトアビジンーＣｙ（商標）５染料マーカーを用いて現像させた。アレイをＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＳｃａｎＡｒｒａｙ（登録商標）４０００デバイスで画像化した。
【００４１】
左手画像は、ＩＬ−１ｂ発現を示し、ＬＰＳ−処理細胞中で増加されており、他方、右手画像は、ＩＬ−８発現を示し、これもＬＰＳ−処理細胞中で増加されている。全てのトランスファーステップは、自動リキッドハンドリングを用いて実行される。
【００４２】
図１２の画像は、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＱｕａｎｔＡｒｒａｙ（商標）ソフトウェアを使用して数量化した。６つのサイトカイン抗原の複製からの固有強度は平均化し、未処理及びＬＰＳ処理細胞における発現レベルを比較する為にプロットした。図１３に示されるように、未処理溶解物からのデーターは、ＴＨＰ−１細胞中の内生サイトカイン発現を示し、処理済アレイは、ＬＰＳでの刺激後にＩＬ−１ｂ及びＩＬ−８レベルの増加を示す。
【００４３】
通常の技能を有する当業者は、本発明が、前記の好ましい特徴を数多く組み込みうることを理解するであろう。
【００４４】
本明細書中に述べられた全ての公開済み又は未公開の特許出願は、引用することにより本発明の１部を構成する。
【００４５】
現在又は本特許明細書から由来するいずれの特許の存続期間の間、当業者に明白である、本発明の他の実施態様は、ここで提示されないが、本発明の精神及び範囲内にある。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】スライドホルダー水平面内のスライド開口とスライドホルダー内の水平スライド保持手段とを用いる、本発明の第一の好ましい実施態様の分解斜視図である。
【図２】図１の第一の好ましい実施態様の横断面図である。
【図３】スライドホルダー水平面内のスライド開口と、スライドホルダー頂部に基づくスライド保持手段とを用いる、本発明の第二の好ましい実施態様の分解斜視図である。
【図４】図３の第二の好ましい実施態様の横断面図である。
【図５】スライドホルダー水平面内のスライド開口と、チャンバープレートを組込んだ、スライドホルダー頂部に基づくスライド保持手段とを用いる、本発明の第三の好ましい実施態様の分解斜視図である。
【図６】図５の第三の好ましい実施態様の横断面図である。
【図７】スライドホルダー垂直面内のスライド開口とスライドホルダー中の垂直スライド保持手段とを用いる、本発明の第四の好ましい実施態様の分解斜視図である。
【図８】図７の第四の好ましい実施態様の横断面図である。
【図９】図７の第四の好ましい実施態様のスライドホルダーの端断面図である。
【図１０】Ｔ−レールと端部止めを使用する本発明の第五の実施態様の分解斜視図である。
【図１１】図１０の第五の好ましい実施態様のスライドホルダーの平面図である。
【図１２】本発明を用いたアレイのデジタル画像である。
【図１３】図１２の画像の結果を数量化するグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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