(57)【要約】  本発明は構造化されたトリグリセリド、それを含んでいる非経口栄養分エマルション類、およびそれらの使用に関する。特に本発明は少なくとも１個の中鎖Ｃ６〜Ｃ１２脂肪酸類および長鎖Ｃ１４〜Ｃ１８脂肪酸類または超長鎖Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類からなる群より選んだ少なくとも１個の脂肪酸を含んでいて、好ましくは各脂肪酸が当該グリセロール骨格の予め決められた位置に存在する、構造化されたトリグリセリド類に関する。非経口栄養分エマルション類は早産児および満期産児、重病患者およびガン患者に栄養を与えるために特に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
エステル化している３種類の脂肪酸残基を有するグリセロール骨格を含む構造化されたトリグリセリドであって、少なくとも１種の脂肪酸残基はＣ６〜Ｃ１２脂肪酸類とその活性誘導体からなる群より選ばれ、少なくとも１種の脂肪酸残基はＣ１４〜Ｃ１８脂肪酸類、Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類およびそれらの活性誘導体類からなる群より選ばれるが、ただしＣ１８〜Ｃ２２  ω−３脂肪酸残基はガンマ−リノレン酸またはジホモガンマ−リノレン酸とともには同じグリセロール骨格に存在しないことが条件である、上記構造化されたトリグリセリド。
【請求項２】
該Ｃ１４〜Ｃ１８脂肪酸類はミリスチン酸、パルミチン酸、パルミトオレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、アルファ−リノレン酸およびそれらのいずれかの組合せからなる群より選ばれる、請求項１に記載の構造化されたトリグリセリド。
【請求項３】
Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類はアラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸およびそれらのいずれかの組合せからなる群より選ばれる、請求項１に記載の構造化されたトリグリセリド。
【請求項４】
該Ｃ１４〜Ｃ１８脂肪酸類およびＣ２０〜Ｃ２２脂肪酸類はω−３、ω−６、ω−９脂肪酸類およびそれらのいずれかの組合せからなる群より選ばれる、請求項１に記載の構造化されたトリグリセリド。
【請求項５】
エステル化した３種類の脂肪酸残基類を有するグリセロール骨格を含む構造化されたトリグリセリドであって、該トリグリセリド骨格の内側位置の少なくとも１種の脂肪酸残基はＣ６〜Ｃ１２脂肪酸類とその活性誘導体からなる群より選ばれ、該トリグリセリド骨格の外側位置の少なくとも１種の脂肪酸残基はＣ１４〜Ｃ１８脂肪酸類およびＣ２０〜Ｃ２２脂肪酸類とその活性誘導体からなる群より選ばれる、上記構造化されたトリグリセリド。
【請求項６】
Ｃ１４〜Ｃ１８脂肪酸類は、ミリスチン酸、パルミチン酸、パルミトオレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、アルファ−リノレン酸およびそれらのいずれかの組合せからなる群より選ばれる、請求項５に記載の構造化されたトリグリセリド。
【請求項７】
Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類はアラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸およびそれらのいずれかの組合せからなる群より選ばれる、請求項５に記載の構造化されたトリグリセリド。
【請求項８】
Ｃ１４〜Ｃ１８脂肪酸類およびＣ２０〜Ｃ２２脂肪酸類はω−３、ω−６、ω−９脂肪酸類およびそれらのいずれかの組合せからなる群より選ばれる、請求項５に記載の構造化されたトリグリセリド。
【請求項９】
構造化されたトリグリセリドを含み、該トリグリセリドはエステル化している３種類の脂肪酸残基を有するグリセロール骨格を含む非経口栄養分エマルション組成物であって、少なくとも１種の脂肪酸残基はＣ６〜Ｃ１２脂肪酸類とその活性誘導体からなる群より選ばれ、少なくとも１種の脂肪酸残基はＣ１４〜Ｃ１８脂肪酸類、Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類およびそれらの活性誘導体類からなる群より選ばれるが、ただしＣ１８〜Ｃ２２  ω−３脂肪酸残基はガンマ−リノレン酸またはジホモガンマ−リノレン酸とともには同じグリセロール骨格に存在しないことが条件である、上記非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項１０】
Ｃ１４〜Ｃ１８脂肪酸類、Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類およびそれらの活性誘導体類からなる群より選ばれた１種の脂肪酸残基、およびＣ６〜Ｃ１２脂肪酸類とその活性誘導体からなる群より選ばれた２種の脂肪酸残基を有する構造化されたトリグリセリド類を主として含む、請求項９に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項１１】
Ｃ１４〜Ｃ１８脂肪酸類、Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類およびそれらの活性誘導体類からなる群より選ばれた１種の脂肪酸残基、およびＣ６〜Ｃ１２脂肪酸類とその活性誘導体からなる群より選ばれた２種類の脂肪酸残基を有する構造化されたトリグリセリド類は、前記エマルションの構造化された全トリグリセリドの約８０％から約１００％を含む、請求項１０に記載の非経口栄養分エマルション組成物。    
【請求項１２】
Ｃ１４〜Ｃ１８脂肪酸類、Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類はω−３、ω−６、ω−９脂肪酸類およびそれらのいずれかの組合せからなる群より選ばれる、請求項９に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項１３】
全脂肪酸類の重量に基づき約９から約９０重量％のＣ６〜Ｃ１２脂肪酸類を含む、請求項９に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項１４】
全脂肪酸類の重量に基づき約４０から約５０重量％のＣ６〜Ｃ１２脂肪酸類を含む、請求項９に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項１５】
全脂肪酸類の重量に基づき約９から約９０重量％のＣ１４〜Ｃ１８脂肪酸類を含む、請求項９に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項１６】
全脂肪酸類の重量に基づき約３５から約５５重量％のＣ１４〜Ｃ１８脂肪酸類を含む、請求項９に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項１７】
全脂肪酸類の重量に基づき約１から約１０重量％のＣ２０〜Ｃ２２脂肪酸類を含む、請求項９に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項１８】
全脂肪酸類の重量に基づき約４．５から約５．５重量％のＣ２０〜Ｃ２２脂肪酸類を含む、請求項９に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項１９】
該ω−６脂肪酸類と該ω−３脂肪酸類は約７：１から約１：１の比である、請求項９に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項２０】
該ω−６脂肪酸類と該ω−３脂肪酸類は約２：１から約１．５：１の比である、請求項１９に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項２１】
該構造化されたトリグリセリドが該組成物の約１０から約４０％（ｗ／ｖ）を構成する、請求項９に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項２２】
該構造化されたトリグリセリドは該組成物の約２０から約２５％（ｗ／ｖ）を構成する、請求項９に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項２３】
前記エマルションの液滴直径が約１μｍ未満である、請求項９に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項２４】
前記エマルションの液滴直径が約０．２２μｍ未満である、請求項９に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項２５】
更にトコフェロールを含んでいる、請求項９に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項２６】
該トコフェロールがアルファ−トコフェロールである、請求項２５に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項２７】
更に乳化剤を含んでいる、請求項９に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項２８】
界面活性剤、炭水化物類、ビタミン類、アミノ酸類、微量のミネラル類、浸透圧調整剤類および水からなる群より選ばれる少なくとも１種の成分を更に含む、請求項９に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項２９】
（ａ）以下を含む構造化されたトリグリセリド類を２０％（ｗ／ｖ）：
全脂肪酸類の重量に基づいてＣ６〜Ｃ１２脂肪酸類約４０〜５０重量％、ここで該Ｃ６〜Ｃ１２脂肪酸類は全脂肪酸類の重量に基づき重量で０〜５％のカプロン酸、２０〜３０％のカプリル酸、１０〜３０％のカプリン酸および０〜５％のラウリン酸を含み；
全脂肪酸類の重量に基づいてＣ１４〜Ｃ１８脂肪酸類約３５〜５５重量％、ここで該Ｃ１４〜Ｃ１８脂肪酸類は全脂肪酸類の重量に基づき重量で０〜５％のミリスチン酸、５〜３０％のパルミチン酸、０〜５％のパルミトオレイン酸、０〜５％のステアリン酸、１０〜３０％のオレイン酸、１０〜３０％のリノール酸および５〜１５％のアルファ−リノレン酸を含み；そして
全脂肪酸類の重量に基づいてＣ２０〜Ｃ２２脂肪酸類約１〜１０重量％、ここで該Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類は全脂肪酸類の重量に基づき重量で１〜５％のＡＡ、０〜５％のＥＰＡ、および１〜５％のＤＨＡを含み，ω−６のω−３に対する比は約１：１から約２：１である；
（ｂ）リン脂質を１．２％（ｗ／ｖ）；
（ｃ）アルファ−トコフェロールを１．８〜２．０ｍｇ／１ｇ脂肪酸；
（ｄ）グリセリンを０〜２５ｇ／Ｌ；および
（ｅ）水
を含む、請求項９から２８のいずれか１つに記載の非経口栄養分組成物。
【請求項３０】
（ａ）以下を含む構造化されたトリグリセリド類を２０％（ｗ／ｖ）：
全脂肪酸類の重量に基づいてＣ６〜Ｃ１２脂肪酸類約４５重量％、ここで該Ｃ６〜Ｃ１２脂肪酸類は全脂肪酸類の重量に基づき重量で２．５％のカプロン酸、３０％のカプリル酸、１０％のカプリン酸および２．５％のラウリン酸を含み；
全脂肪酸類の重量に基づいてＣ１４〜Ｃ１８脂肪酸類約５０重量％、ここで該Ｃ１４〜Ｃ１８脂肪酸類は全脂肪酸類の重量に基づき重量で１０％のパルミチン酸、２．５％のステアリン酸、１５％のオレイン酸、１６％のリノール酸および７％のアルファ−リノレン酸を含み；そして
全脂肪酸類の重量に基づいてＣ２０〜Ｃ２２脂肪酸類約５重量％、ここで該Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類は全脂肪酸類の重量に基づき重量で１．５％のＡＡ、１．５％のＥＰＡ、および１．５％のＤＨＡを含み，ω−６のω−３に対する比は１．７５である；
（ｂ）リン脂質を約１．２％（ｗ／ｖ）；
（ｃ）アルファ−トコフェロールを約１．８ｍｇ／１ｇ脂肪酸；
（ｄ）グリセリンを約１０〜２５ｇ／Ｌ；および
（ｅ）水
を含む、請求項２９に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項３１】
構造化されたトリグリセリドを含む非経口栄養分エマルション組成物であって、該トリグリセリドはエステル化した３種類の脂肪酸残基を有するグリセロール骨格を含み、ここで該トリグリセリド骨格の内側位置において少なくとも１種の脂肪酸残基がＣ６〜Ｃ１２脂肪酸類とその活性誘導体からなる群より選ばれ、該トリグリセリド骨格の外側位置において少なくとも１種の脂肪酸残基がＣ１４〜Ｃ１８脂肪酸類、Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類およびそれらの活性誘導体類からなる群より選ばれる、上記非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項３２】
外側の位置にＣ１４〜Ｃ１８脂肪酸類、Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類およびそれらの活性誘導体類からなる群より選んだ１種の脂肪酸残基、およびＣ６〜Ｃ１２脂肪酸類とその活性誘導体からなる群より選んだ２種の脂肪酸残基類を有する構造化されたトリグリセリド類を主として含む、請求項３１に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項３３】
外側の位置にＣ１４〜Ｃ１８脂肪酸類、Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類およびそれらの活性誘導体類からなる群より選んだ１種の脂肪酸残基、およびＣ６〜Ｃ１２脂肪酸類とその活性誘導体からなる群より選んだ２種の脂肪酸残基類を有する構造化されたトリグリセリド類が、前記エマルションの全トリグリセリド類の約８０％から１００％を構成する、請求項３２に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項３４】
Ｃ１４〜Ｃ１８脂肪酸類、Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類はω−３、ω−６、ω−９脂肪酸類およびそれらのいずれかの組合せからなる群より選ばれる、請求項３１に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項３５】
全脂肪酸類の重量に基づき約９から約９０重量％のＣ６〜Ｃ１２脂肪酸類を含む、請求項３１に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項３６】
全脂肪酸類の重量に基づき約４０から約５０重量％のＣ６〜Ｃ１２脂肪酸類を含む、請求項３１に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項３７】
全脂肪酸類の重量に基づき約９から約９０重量％のＣ１４〜Ｃ１８脂肪酸類を含む、請求項３１に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項３８】
全脂肪酸類の重量に基づき約３５から約５５重量％のＣ１４〜Ｃ１８脂肪酸類を含む、請求項３１に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項３９】
全脂肪酸類の重量に基づき約１から約１０重量％のＣ２０〜Ｃ２２脂肪酸類を含む、請求項３１に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項４０】
全脂肪酸類の重量に基づき約４．５から約５．５重量％のＣ２０〜Ｃ２２脂肪酸類を含む、請求項３１に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項４１】
ω−６脂肪酸類とω−３脂肪酸類は約７：１から約１：１の比率である、請求項３１に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項４２】
ω−６脂肪酸類とω−３脂肪酸類は約２：１から約１．５：１の比率である、請求項４１に記載の非経口栄養エマルション組成物。
【請求項４３】
該構造化されたトリグリセリドは該組成物の約１０から約４０％（ｗ／ｖ）を構成する、請求項３１に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項４４】
該構造化されたトリグリセリドは該組成物の約２０から約２５％（ｗ／ｖ）を構成する、請求項３１に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項４５】
前記エマルションの液滴直径は約１μｍ未満である、請求項３１に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項４６】
前記エマルションの液滴直径は約０．２２μｍ未満である、請求項３１に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項４７】
更にトコフェロールを含んでいる、請求項３１に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項４８】
該トコフェロールがアルファ−トコフェロールである、請求項４７に記載の非経口栄養分エマルション。
【請求項４９】
更に乳化剤を含んでいる、請求項３１に記載の非経口栄養分エマルション。
【請求項５０】
界面活性剤類、炭水化物類、ビタミン類、アミノ酸類、微量のミネラル類、浸透圧調整剤類および水からなる群より選んだ少なくとも1種の成分を更に含んでいる、請求項３１に記載の非経口栄養分エマルション。
【請求項５１】
（ａ）以下を含む構造化されたトリグリセリド類を２０％（ｗ／ｖ）：
全脂肪酸類の重量に基づいてＣ６〜Ｃ１２脂肪酸類約４０〜５０重量％、ここで該Ｃ６〜Ｃ１２脂肪酸類は全脂肪酸類の重量に基づき重量で０〜５％のカプロン酸、２０〜３０％のカプリル酸、１０〜３０％のカプリン酸および０〜５％のラウリン酸を含み；
全脂肪酸類の重量に基づいてＣ１４〜Ｃ１８脂肪酸類約３５〜５５重量％、ここで該Ｃ１４〜Ｃ１８脂肪酸類は全脂肪酸類の重量に基づき重量で０〜５％のミリスチン酸、５〜３０％のパルミチン酸、０〜５％のパルミトオレイン酸、０〜５％のステアリン酸、１０〜３０％のオレイン酸、１０〜３０％のリノール酸および５〜１５％のアルファ−リノレン酸を含み；そして
全脂肪酸類の重量に基づいてＣ２０〜Ｃ２２脂肪酸類約１〜１０重量％、ここで該Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類は全脂肪酸類の重量に基づき重量で１〜５％のＡＡ、０〜５％のＥＰＡ、および１〜５％のＤＨＡを含み，ω−６のω−３に対する比は１：１〜２：１である；
（ｂ）リン脂質を約１．２％（ｗ／ｖ）；
（ｃ）アルファ−トコフェロールを約１．８〜２．０ｍｇ／１ｇ脂肪酸；
（ｄ）グリセリンを約０〜２５ｇ／Ｌ；および
（ｅ）水
を含む、請求項３１〜５０のいずれかに記載の非経口栄養分エマルション。
【請求項５２】
（ａ）以下を含む構造化されたトリグリセリド類を２０％（ｗ／ｖ）：
全脂肪酸類の重量に基づいてＣ６〜Ｃ１２脂肪酸類約４５重量％、ここで該Ｃ６〜Ｃ１２脂肪酸類は全脂肪酸類の重量に基づき重量で２．５％のカプロン酸、３０％のカプリル酸、１０％のカプリン酸および２．５％のラウリン酸を含み；
全脂肪酸類の重量に基づいてＣ１４〜Ｃ１８脂肪酸類約５０重量％、ここで該Ｃ１４〜Ｃ１８脂肪酸類は全脂肪酸類の重量に基づき重量で１０％のパルミチン酸、２．５％のステアリン酸、１５％のオレイン酸、１６％のリノール酸および７％のアルファ−リノレン酸を含み；そして
全脂肪酸類の重量に基づいてＣ２０〜Ｃ２２脂肪酸類約５重量％、ここで該Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類は全脂肪酸類の重量に基づき重量で１．５％のＡＡ、１．５％のＥＰＡ、および１．５％のＤＨＡを含み，ω−６のω−３に対する比は１．７５である；
（ｂ）リン脂質を約１．２％（ｗ／ｖ）；
（ｃ）アルファ−トコフェロールを約１．８ｍｇ／１ｇ脂肪酸；
（ｄ）グリセリンを約１０〜２５ｇ／Ｌ；および
（ｅ）水
を含む、請求項５１に記載の非経口栄養分エマルション組成物。
【請求項５３】
酸分解を実施する段階を含んでいる、請求項１から８のいずれかに記載の構造化されたトリグリセリドを合成する方法。
【請求項５４】
該酸分解反応はリパーゼが触媒する、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
該トリグリセリドは中鎖トリグリセリドである、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】
該脂肪酸はＣ１４〜Ｃ１８脂肪酸類、Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類およびそれらの活性誘導体類からなる群より選ばれる、請求項５３に記載の方法。
【請求項５７】
未反応ＭＣＴおよび脂肪酸を除去するために該反応混合物を蒸留する段階を更に含んでいる、請求項５３に記載の方法。
【請求項５８】
該エマルションの液滴直径を約１μｍ未満に小さくする段階を含んでいる、請求項９〜５２の何れかに記載の非経口栄養分エマルション組成物を調製する方法。
【請求項５９】
該液滴直径を約０．４５μｍ未満まで小さくする段階を含んでいる、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
該液滴直径を約０．２２μｍ未満まで小さくする段階を含んでいる、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
請求項９から５２のいずれかに記載の非経口栄養分エマルション組成物を患者に非経口的に投与することを含んでいる、それを必要としている患者への栄養を提供する方法。
【請求項６２】
該患者が早産児、満期産児、子供、成人、重症の患者、ガン患者、または外傷、火傷、栄養失調、飢餓、加齢および免疫抑制から選ばれる症状の一つを患う患者である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
該患者がＡＩＤＳ患者である、請求項６１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（本発明の分野）
本発明は、構造化されたトリグリセリド類、非経口栄養分に適している構造化されたトリグリセリド類を含むエマルション類およびそれらの使用に関する。具体的には、本発明は少なくとも１種類の中鎖Ｃ６〜Ｃ１２脂肪酸および少なくとも長鎖Ｃ１４〜Ｃ１６と超長鎖Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類から選んだ１種類の脂肪酸を含み、好ましくは各脂肪酸が当該グリセロール骨格の予め定められた位置にある構造化されたトリグリセリド類に関する。当該非経口栄養分エマルション類は早産児と満期産児、子供、重病患者およびガンの患者に対し栄養を与えるのに特に有用である。
【背景技術】
【０００２】
（本発明の背景）
脂質類はここ４０年に亘って非経口栄養分のなくてはならない成分として使用されてきた。脂質類は細胞の構造、具体的には細胞膜の必須脂肪酸類およびプログラスタンジン類、ロイコトリエン類、トロンボキサン類および他のエイコサノイド類の先駆体を提供する。脂質類はエネルギーの源を構成し、種々な生合成経路に加わり、そして脂溶性ビタミン類の担体である。このように、脂質類は代謝および免疫作用、中枢神経系および網膜の発達および機能で重要な役割を果たしている。
【０００３】
脂肪酸類（ＦＡ）は炭素の数、それらの飽和または非飽和の程度、不飽和結合の位置およびそれらの結合がシスかトランスであるかによりお互いに異なる。これらの変数の全ては栄養価またはそれらの酸を含有するトリグリセリド類から生じる利点に関係する。それに加えて、当該トリグリセリド類の酵素的分解はグリセロール骨格上での脂肪酸類の型および位置により影響される。
【０００４】
脂肪酸類は一般的に４種類に分けられる：短鎖ＦＡ、中鎖ＦＡ（ＭＣＦＡ），長鎖ＦＡ（ＬＣＦＡ）および超長鎖ＦＡ（ＶＬＣＦＡ）である。脂肪酸類は二重結合の有無、数および位置によっても分類される。この分類ではＦＡを３種類に分ける：飽和ＦＡ（二重結合なし）、一価不飽和ＦＡ（１個の二重結合）および多価不飽和ＦＡ（２個以上の二重結合）である。当該多価不飽和ＦＡの更なる分類は末端メチル炭素から最初の二重結合前の炭素位置で特性化する：ｎ−３またはω−３ＦＡ、ｎ−６またはω−６ＦＡおよびｎ−９またはω−９ＦＡである。これらの差異はＦＡの種々な特徴を決め、それゆえそれらの特異的な機能を決める。
【０００５】
（脂質エマルション）
非経口栄養分（ＰＮ）に必須で欠くことができない脂質類に必要なものは脂質無しのＰＮの使用後の臨床症状における知見から明らかになる。これらの臨床的症状には出血性皮膚炎、皮膚萎縮、高血糖症、体重減少、免疫機能の低下、代謝の増加などが含まれていた。
【０００６】
脂質エマルション類の第一世代は大豆油およびサフラワー油由来の純粋な長鎖トリグリセリド類（ＬＣＴ）に基づいていた。これらの投与は脂肪酸欠乏の症状の幾らかを防止した。それにもかかわらず、それらの脂質エマルションを受けた患者はリンパ球および細網内皮系の不正常な機能、Ｔ細胞数の低下、酸素フリーラジカル産生の増加、肝臓酵素の上昇、高トリグリセリド血症および感染症の罹患を示す。
【０００７】
脂質エマルションの次世代は中鎖トリグリセリド類（ＭＣＴ）５０％およびＬＣＴ５０％を含んでいた。これらのエマルション類は純粋のＬＣＴエマルション類と比較して多くの利点を有し、例えばそれらは効率的なエネルギー源であり、より溶解されやすくて迅速にリパーゼ類で加水分解され、血中から素早く消失し、急速に酸化され、より小さな球径をとる。ＭＣＦＡは全て飽和されているので、過酸化物形成がされにくく、それゆえ免疫系および細網内皮系を損傷しない。ＭＣＴ／ＬＣＴエマルションを受ける患者は良好な窒素バランスおよび良好なタンパク質節約効果を示す。
【０００８】
純粋なＬＣＴエマルションの欠点を克服する他の試みは一価不飽和オレイン酸（１８：１  ω−９）に富むオリーブ油を使用することであった。オリーブ油に基づくエマルションは耐容性良好であり、脂質過酸化を防止するのにより適しており、そして直鎖必須ＦＡの状態が保たれた。更にオリーブ油エマルションは主に、より生物的に活性なトコフェロールであるアルファトコフェロール含有するのに対し、大豆油エマルションは脂質過酸化に対して防御力が小さいガンマ−トコフェロールを含有する。オリーブ油または大豆油エマルションを受けている子供達でリポタンパク質類の組成および過酸化を比較すると、オリーブ油エマルションの投与は酸化的ストレスの減少を生じることを見出した。Ｇｏｂｅｌ等，およびＧｏｕｌｅｔ等は早産児および子供において他のＬＣＴエマルションと比較したときのオリーブ油エマルションの利点を示した（Ｇｏｂｅｌ  Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｎｕｔｒ．３７（２）：１６１〜１６７，２００３；Ｇｏｕｌｅｔ  Ｏ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．７０（３）：３３８〜３４５，１９９９）。オレイン酸および一般的にω−９脂肪酸類は、それらが白質およびミエリンの主な成分であるので脳の発達および機能に寄与することが示されている。
【０００９】
経腸栄養法における魚油に由来するω−３脂肪酸類の有益な効果は、非経口栄養分へのそれらの含有を推し進めた。最も成功した養生法はＭＣＴ５０％、大豆油４０％および魚油１０％の組合せで達せられた。本養生法は外科および重病患者の免疫系機能の改善、細胞膜でのＦＡプロフィールの改善、抗炎症および抗凝固効果、血しょうトリグリセリド（ＴＧ）とコレステロールの正常化および血圧の低下を示した。
【００１０】
構造化されたトリグリセリド類
無作為に構造化されたトリグリセリド類（ＳＴＧ）を含有する脂質エマルション類はＭＣＴおよびＬＣＴ油を混合し、触媒の存在下で当該混合物を加熱して得た。この工程間、ＭＣＦＡおよびＬＣＦＡは両方の油のグリセロール骨格において無作為に交換できる。こうして形成した新ＴＧは長および中鎖ＦＡの両方を同じグリセロール上に無作為に分配したように含有している。この種類のトリグリセリド類は素早くリパーゼ類で加水分解され、そこで血流中より良い具合に消失される。
【００１１】
数多くの臨床試験がＳＴＧエマルション類の安全性および良い点を示した。Ｓａｎｄｓｔｒｏｍ等は手術後の患者達に投与されたＳＴＧエマルションが素早く血しょうから消失し、素早く酸化され、いかなる副作用に関係しないことを示している（Ｓａｎｄｓｔｒｏｍ，Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，ＪＰＥＮ  １９（５）：３８１〜３８６，１９９５）。ＳＴＧの供給はＬＣＴに比べて顕著に高い全身的脂肪酸化を生じた。Ｒｕｂｉｎ等は患者達における家庭での非経口栄養分としてＳＴＧが長期間でも安全で良好な耐容性であることを示し、ＳＴＧエマルション類は肝臓不全の軽減可能性と関係し得ることを示唆した（Ｒｕｂｉｎ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，１６：９５〜１００，２０００）。
【００１２】
Ｋｒｕｉｍｅｌ等はＳＴＧ対ＭＣＴとＬＣＴの物理的混合物の、中等度異化の手術後患者の窒素バランスに対する効果を比較した。５日間に亘って、累積的窒素バランスはＳＴＧ群においてマイナスがより少なかった（Ｋｒｕｍｉｅｌ，Ｊ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．，ＪＰＥＮ  ２５（５）：２３７〜２４４，２００１）。この差異はＳＴＧ脂肪酸のエネルギーへの良好な利用および血液からのより良いクリアランスで説明可能である（同上）。Ｃｈａｍｂｒｉｅｒ等はＳＴＧ対ＭＣＴ−ＬＣＴの物理的混合物につき手術後の患者における肝機能への効果を比較した。肝臓酵素群および血しょうＴＧの顕著な増加がＭＣＴ−ＬＣＴの物理的混合物を投与した患者で生じることが見出される一方で、ＳＴＧを投与した患者では肝臓機能だけでなく血しょうＴＧレベルでも変化がないことが見出された（Ｃｈａｍｂｒｉｅｒ，Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，１５：２７４〜２７７、１９９９）。
【００１３】
米国特許第４，８７１，７６８号は結合している３種の脂肪酸を有するグリセロール骨格を含んでいる合成トリグリセリドを開示し、その中の少なくとも１種の脂肪酸はω３脂肪酸から選び、少なくとも１種の脂肪酸はＣ８〜Ｃ１０脂肪酸から選ばれている。当該ω３脂肪酸群は植物油群、海洋プランクトン油群、藻類油群、または魚油群から由来したものである。米国特許第４，８７１，７６８号は油画分１０から４０重量％を含む栄養補助食品も開示しているが、当該油画分は合成トリグリセリドを１０から９０重量％を含む。米国特許第４，８７１，７６８号による栄養補助食品中の合成トリグリセリドは更にω９脂肪酸類を含んでいる。それでも当該合成トリグリセリド中にドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）およびアラキドン酸の必要性、および栄養補助食品中にビタミンＥの必要性が示唆されていないばかりかω６に対するω３の最適な比率も示していない。
【００１４】
米国特許第４，９０６，６６４号はガン悪液質で悩まされている患者への栄養的支持を提供する方法を開示している。当該方法は構造化された脂質を含有する食物を非経口的に投与する段階を含む。米国特許第４，９０６，６６４号による構造化された脂質はトリグリセリドで、少なくとも１つの鎖は中鎖脂肪酸、少なくとも１つの鎖はω３長鎖脂肪酸であり、他の鎖は中鎖脂肪酸類および長鎖脂肪酸類からなる群より選ばれたものである。長鎖脂肪酸類と中鎖脂肪酸類の比率は約１：１である。当該長鎖脂肪酸は主にω３とω６脂肪酸類であるべきで、十分なω６は好ましくはリノール酸の形である。
【００１５】
米国特許第５，０８１，１０５号は構造化された脂質を含有する食事を非経口的に投与する段階を含んでいる栄養的援助を用いて患者内の肉腫を治療する方法を開示している。米国特許第５，０８１，１０５号による構造化された脂質はトリグリセリドで、当該鎖の１つは中鎖脂肪酸で、第２の鎖はω３脂肪酸であり、第３の鎖はＨ、ＯＨ、短、中および長鎖脂肪酸類から選ばれる。
【００１６】
米国特許第５，９６２，７１２号は脂肪酸残基群の１つがガンマ−リノレイン酸（ＧＬＡ）およびジホモガンマ−リノレイン酸（ＤＨＧＬＡ）からなる群より選ぶ構造化された脂質の一群を開示している。第二の脂肪酸残基はＣ１８〜Ｃ２２  ｎ−３脂肪酸類から選ばれ、第三の脂肪酸残基はＣ６〜Ｃ１２脂肪酸類から選ばれる。Ｃ１８〜Ｃ２２  ｎ−３脂肪酸残基およびＧＬＡまたはＤＨＧＬＡが同時に存在すると、ＧＬＡおよびＤＨＧＬＡのアラキドン酸への伸長を最小化するように働くようである。長鎖多価不飽和ｎ−３脂肪酸はプロスタグランジン代謝を前炎症性プロスタノイド類から非炎症性プロスタノイド類へ移行させると言われていて、炎症および感染を治療するのに良い効果がある。米国特許第５，６６１，１８０号では米国特許第５，９６２，７１２号に開示されている食物用の構造化された脂質を投与する段階を含む、患者での外傷および病状への代謝反応の調節方法を開示している。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
改良された経腸または非経口栄養分を提供するように設計された構造化されたトリグリセリド類に対し未だ満たされていない必要性があり、それは幼児、子供および強度のストレスまたは慢性的な病気に悩まされている患者でも簡単に吸収され、発育および免疫での必要性に対処するように最適化されることである。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
（本発明の要約）
中鎖（ＭＣＦＡ）、長鎖（ＬＣＦＡ）および超長鎖脂肪酸（ＶＬＣＦＡ）の残基を含んで構造化されたトリグリセリド類を含む非経口栄養分エマルション類は特に早産および満期産児、子供。重症患者およびガン患者用の非経口栄養分として非常に有用なことがここで開示される。本発明はＭＣＦＡ、ＬＣＦＡおよびＶＬＣＦＡの特定有効比率を有する構造化されたトリグリセリド類を含む非経口栄養分エマルション類を提供する。
【００１９】
本発明は更にグリセロール骨格上の当該脂肪酸残基の位置が予め定められた構造化されたトリグリセリド類を含む非経口栄養分エマルションを提供する。
【００２０】
本発明は初めて少なくとも１種のＭＣＦＡおよび少なくとも１種のＬＣＦＡまたはＶＬＣＦＡを含む構造化されたトリグリセリド類を含んでいる非経口栄養分エマルション類について開示するが、当該ＬＣＦＡまたはＶＬＣＦＡが主に当該グリセロール骨格の外側の位置でエステル化されている。幾つかの実施形態によれば、当該ＶＬＣＦＡはアラキドン酸（ＡＡ；２０：４  ω−６）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ；２０：５  ω−３）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ；２２：６  ω−３）またはそれらの何れかの組合せである。当該非経口栄養分エマルション類は高栄養的利点を提供し、免疫系機能を改善し、そして細胞膜の構造と機能、脳、ＣＮＳおよび網膜の発育と機能、血圧の制御および血液凝固工程への良い効果を及ぼす。本発明の非経口栄養分エマルションは、それゆえ特に早産児および満期産児、子供、ガン患者および重病患者にとって役に立つ。
【００２１】
本発明の構造化されたトリグリセリド類は少なくとも１種のＭＣＦＡおよび少なくとも１種のＬＣＦＡまたはＶＬＣＦＡを同じグリセロール骨格に含むので、これらの構造化されたトリグリセライドエマルションの物理的特徴は純粋のＬＣＴまたは混合ＬＣＴ／ＭＣＴエマルション類の特徴に比べて改善されている。そこで、本発明の構造化されたトリグリセリドエマルションは混合ＬＣＴ／ＭＣＴエマルション類より粒径が小さくて、結果として０．２２μｍの孔径のフィルターをろ過できる。本発明の構造化されたトリグリセリドエマルション類はまた混合ＬＣＴ／ＭＣＴエマルション類より溶解度が高く、より安定である。これに加えて、当該ＬＣＦＡおよびＶＬＣＦＡは当該グリセロール骨格の外側の位置に位置するので、血液からのこれらの脂肪酸類クリアランスは内側の位置に位置するものより迅速なので、これらの構造化されたトリグリセリド類は制御した血中トリグリセリドレベルの維持がしやすい。
【００２２】
当該構造化されたトリグリセリド類を含んでいる非経口栄養分エマルション類におけるω−６のω−３脂肪酸に対する低い比率、特にω−６／ω−３の比が２：１より低いと早産および満期産児および子供における脳の発達に良い効果を与える。低いω−６／ω−３比は免疫系および心臓機能に良い効果を与え、これらの効果は特に重病患者やガン患者に必須なものである。十分な量のＡＡおよびＤＨＡの補給がなくて起こるω−６脂肪酸摂取の減少およびω−３脂肪酸摂取の増加は血液凝固カスケードおよび血圧の制御のような種々の生物的工程を損なうであろう。それは細胞膜、脳、ＣＮＳおよび網膜の発育および機能の化学的および物理的性質も損なう。そこで、本発明の構造化されたトリグリセリド類におけるＡＡおよびＤＨＡの存在は幼児、子供および成人患者にとって非常に重要である。
【００２３】
当該構造化されたトリグリセライド類中に一価不飽和オレイン酸（１８：１  ω−９）が含有されると、これは脳の構造および機能に必要とされるので、多価不飽和脂肪酸類と比較してより良い性質を与えることを更に開示する。これに加え、オレイン酸は多価不飽和脂肪酸と比べて過酸化物を形成しにくいので、この脂肪酸の包含は過酸化損傷への曝露をより少なくする。
【００２４】
ビタミンＥ、特にアルファ−トコフェロールを当該非経口栄養分エマルション類に添加すると、前記非経口栄養分で滋養を受けた被験者を過酸化物形成から防止し、それゆえ過酸化物損傷から被験者を守ることも開示される。
【００２５】
１つの態様によれば、本発明はエステル化した３種の脂肪酸残基を有するグリセロール骨格を含んでいる構造化されたトリグリセリドを提供し、そこでは少なくとも１種の脂肪酸残基はＣ６〜Ｃ１２脂肪酸類およびその活性誘導体からなる群より選ばれ、少なくとも１種の脂肪酸残基はＣ１４〜Ｃ１８脂肪酸類、Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類およびそれらの活性誘導体類からなる群より選ばれるが、ただしＣ１８〜Ｃ２２ω−３脂肪酸残基はガンマ−リノレン酸またはジホモガンマ−リノレイン酸とともには同じグリセロール骨格には存在しないことが条件となる。
【００２６】
他の態様によれば、本発明はエステル化した３種の脂肪酸残基を有するグリセロール骨格を含んでいる構造化されたトリグリセリドを提供し、そこでは当該グリセロール骨格の内側の位置に少なくとも１種の脂肪酸残基がＣ６〜Ｃ１２脂肪酸類およびその活性誘導体からなる群より選ばれ、当該グリセロール骨格の外側の位置に少なくとも１種の脂肪酸残基がＣ１４〜Ｃ１８脂肪酸類、Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類およびそれらの活性誘導体類からなる群より選ばれる。
【００２７】
幾つかの実施形態によると、当該Ｃ１４〜Ｃ１８脂肪酸類は飽和、一価不飽和、多価不飽和脂肪酸類およびそれらのいずれかの組合せからなる群より選ばれる。更なる実施形態によれば、当該Ｃ１４〜Ｃ１８脂肪酸類はミリスチン酸（１４：０）、パルミチン酸（１６：０）、パルミトオレイン酸（１６：１）、ステアリン酸（１８：０）、オレイン酸（１８：１  ω−９）、リノール酸（１８：２  ω−６）、アルファ−リノレン酸（１８：３  ω−３）、およびそれらのいずれかの組合せからなる群より選ばれる。
【００２８】
他の実施形態によれば、当該Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類はアラキドン酸（ＡＡ；２０：４  ω−６）、エイソサペンタエン酸（ＥＰＡ；２０：５  ω−３）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ；２２：６  ω−３）およびそれらの何れかの組合せからなる群より選ばれる。
【００２９】
他の態様によれば、本発明は構造化されたトリグリセリドを含む非経口栄養分エマルションを提供するが、当該構造化されたトリグリセリドはエステル化した３種の脂肪酸残基を有するグリセロール骨格を含み、そこでは少なくとも１種の脂肪酸残基がＣ６〜Ｃ１２脂肪酸類およびその活性誘導体からなる群より選ばれ、少なくとも１種の脂肪酸残基はＣ１４〜Ｃ１８脂肪酸類、Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類およびそれらの活性誘導体類からなる群より選ばれるが、ただしＣ１８〜Ｃ２２ω−３脂肪酸残基はガンマ−リノレイン酸またはジホモガンマ−リノレイン酸とともには同じグリセロール骨格には存在しないことが条件となる。
【００３０】
更なる態様によれば、本発明は構造化されたトリグリセリドを含む非経口栄養分エマルションを提供し、当該構造化されたトリグリセリドはエステル化した３種の脂肪酸残基を有しているグリセロール骨格を含み、そこでは当該グリセロール骨格の内側の位置に少なくとも１種の脂肪酸残基がＣ６〜Ｃ１２脂肪酸類およびその活性誘導体からなる群より選ばれ、当該グリセロール骨格の外側の位置に少なくとも１種の脂肪酸残基がＣ１４〜Ｃ１８脂肪酸類、Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類およびそれらの活性誘導体類からなる群より選ばれる。
【００３１】
幾つかの実施形態によれば、当該非経口栄養分エマルション組成物はＣ６〜Ｃ１２脂肪酸類を当該非経口栄養分エマルション組成物の重量に基づいて約９から約９０％含む。更なる実施形態によれば、当該非経口栄養分エマルション組成物はＣ６〜Ｃ１２脂肪酸類を当該非経口栄養分エマルション組成物中の全脂肪酸の重量に基づいて約３０から約６０％含む。更なる実施形態によれば、当該非経口栄養分エマルション組成物はＣ６〜Ｃ１２脂肪酸類を当該非経口栄養分エマルション組成物中の全脂肪酸類の重量に基づいて約４０から約５０％含む。非制限的な典型的実施形態によれば、当該非経口栄養分組成物はカプロン酸（６：０）、カプリル酸（８：０）、カプリン酸（１０：０）およびラウリン酸（１２：０）を含み、それらは非経口栄養分エマルション組成物中の全脂肪酸類重量のそれぞれ約０〜５％、約２０〜３０％、約１０〜３０％および約０〜５％含む。
【００３２】
他の実施形態によれば、当該非経口栄養分エマルション組成物はＣ１４〜Ｃ１８脂肪酸類を当該非経口栄養分エマルション組成物中の全脂肪酸類の重量に基づいて約９から約９０％含む。更なる実施形態によれば、当該非経口栄養分エマルション組成物はＣ１４〜Ｃ１８脂肪酸類を当該非経口栄養分エマルション組成物中の全脂肪酸類の重量に基づき約３０から約７０％含む。更なる実施形態によれば、当該非経口栄養分エマルション組成物はＣ１４〜Ｃ１８脂肪酸類を当該非経口栄養分エマルション組成物中の全脂肪酸類の重量に基づき約３５から約５５％含む。非制限的な典型的実施形態によれば、当該非経口栄養分エマルション組成物はミリスチン酸、パルミチン酸、パルミトオレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸およびアルファ−リノレイン酸を含み、それらは当該非経口栄養分エマルション組成物中にある全脂肪酸類の重量のそれぞれ約０〜５％、約５〜３０％、約０〜５％、約０〜５％、約１０〜３０％、約１０〜３０％および約５〜１５％を含む。
【００３３】
更なる実施形態によれば、当該非経口栄養分エマルション組成物はＣ２０〜Ｃ２２脂肪酸類を当該非経口栄養分エマルション組成物中の全脂肪酸類の重量に基づき１から２０％含む。幾つかの実施形態によれば、当該非経口栄養分エマルション組成物はＣ２０〜Ｃ２２脂肪酸類を当該非経口栄養分エマルション組成物中の全脂肪酸類の重量に基づき約１から約１０％含む。非制限的な典型的実施形態によれば、当該非経口栄養分エマルション組成物はＡＡ、ＥＰＡおよびＤＨＡを含み、それらは当該非経口栄養分エマルション組成物中の全脂肪酸類の重量に基づいてそれぞれ約１〜５％、約０〜５％よび約１〜５％を構成する。非経口栄養分エマルション中の以上で開示した脂肪酸類の組合せは早産児および満期産児、幼児、子供、成人、ガン患者、火傷で悩む患者および重病患者の栄養的要求に供するのに非常に有利であることは理解されるであろう。
【００３４】
幾つかの実施形態によれば、本発明の非経口栄養分エマルション組成物類の構造化されたトリグリセリド類の大半はＣ１４〜Ｃ１８脂肪酸類、Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類およびそれらの活性誘導体からなる群より選んだ１種の脂肪酸残基およびＣ６〜Ｃ１２脂肪酸類とその活性誘導体からなる群より選んだ２種の脂肪酸残基類を有している。更なる実施形態によれば、Ｃ１４〜Ｃ１８脂肪酸類、Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類およびそれらの活性誘導体からなる群より選んだ１種の脂肪酸残基およびＣ６〜Ｃ１２脂肪酸類とその活性誘導体からなる群より選んだ２種の脂肪酸残基類を有する構造化されたトリグリセリド類は、前記エマルション類の構造化されたトリグリセリド類の約８０％から約１００％を占める。
【００３５】
他の実施形態によれば、当該非経口栄養分エマルション組成物中のω−６／ω−３脂肪酸の比率は約７：１から１：１の範囲である。更なる実施形態によれば、当該比率は約３：１から約１：１の範囲である。典型的な実施形態によれば、当該非経口栄養分エマルション組成物中のω−６／ω−３脂肪酸の比率は約２：１から１．５：１の範囲である。本発明はそれゆえω−６のω−３脂肪酸類に対する比率１：１も包含する。
【００３６】
幾つかの実施形態によれば、当該非経口栄養分エマルション組成物は本発明の構造化されたトリグリセリド類を約１０から約４０％（ｗ／ｖ）含む。他の実施形態によれば、当該非経口栄養分エマルション組成物は本発明の構造化されたトリグリセリド類を約１５から約３０％（ｗ／ｖ）含む。典型的な実施形態によれば当該非経口栄養分エマルション組成物は本発明の構造化されたトリグリセリド類を２０％（ｗ／ｖ）含む。
【００３７】
更なる実施形態によれば、本発明の非経口栄養分エマルション組成物の液滴直径は約１μｍ未満である。幾つかの実施形態によれば、本発明の非経口栄養分エマルション組成物は約０．４５μｍ未満である。他の実施形態によれば、当該液滴直径は約０．２２μｍ未満である。この液滴直径なので０．２２μｍの孔径を有する膜フィルターをエマルションが通過でき、当該エマルションにつきより高度な滅菌を達成されることが理解できるであろう。
【００３８】
他の実施形態によれば、当該非経口エマルション組成物は更にビタミンＥを含む。幾つかの実施形態によれば、当該ビタミンＥはアルファ−トコフェロールである。本発明の非経口栄養分エマルション組成物中にある当該アルファ−トコフェロールの量は脂肪酸類１ｇ当たり約０．１から約５ｍｇである。好ましくは、当該アルファ−トコフェロールの量は脂肪酸類１ｇ当たり約１から約２ｍｇである。典型的な実施形態では、当該非経口栄養分エマルションは脂肪酸類１ｇ当たり１．８〜２．０ｍｇである。
【００３９】
幾つかの実施形態によれば、当該非経口栄養分エマルション組成物は更に乳化剤を含む。当該非経口栄養分エマルション組成物における例えばリン脂質のような乳化剤の量は、約０．５から約４％（ｗ／ｖ）である。更なる実施形態によれば、当該乳化剤の量は約０．５から約２．５％（ｗ／ｖ）である。典型的な実施形態によれば、当該非経口栄養分エマルション組成物は約１〜１．２％（ｗ／ｖ）のリン脂質を含む。
【００４０】
他の実施形態によれば、当該非経口栄養分エマルション組成物は更に浸透圧調整剤を含むことができる。浸透圧調整剤の例にはグリセリンがある。浸透圧調整剤の量は約１から約５％（ｗ／ｖ）の範囲でありうる。
【００４１】
当該非経口栄養分エマルション組成物は更に界面活性剤類、炭水化物栄養分、電解質類、アミノ酸類、ビタミン類、微量のミネラル類、保存料類および水からなる群より選んだ少なくとも1種類が含まれる。当該非経口栄養分エマルション組成物は滅菌水も含むことができる。
【００４２】
ある非制限的実施形態によれば、当該非経口栄養分エマルション組成物は、
（ａ）Ｃ６〜Ｃ１２脂肪酸類は全脂肪酸類の重量に基づきカプロン酸０〜５％、カプリル酸２０〜３０％、カプリン酸１０〜３０％およびラウリン酸０〜５％を含んでいる、全脂肪酸類の重量に基づき約４０〜５０重量％の当該Ｃ６〜Ｃ１２脂肪酸類；
Ｃ１４〜Ｃ１８脂肪酸類は全脂肪酸類の重量に基づきミリスチン酸０〜５％、パルミチン酸５〜３０％、パルミトオレイン酸０〜５％、ステアリン酸０〜５％、オレイン酸１０〜３０％、リノール酸１０〜３０％およびアルファ−リノレン酸５〜１５％を含んでいる、全脂肪酸類の重量に基づき約３５〜５５重量％の当該Ｃ１４〜Ｃ１８脂肪酸類；
Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類は全脂肪酸類の重量に基づきＡＡ１〜５％、ＥＰＡ０〜５％およびＤＨＡ１〜５％を含んでいてω−６のω−３脂肪酸類に対する比が約１：１〜２：１である、全脂肪酸類の重量に基づき約４．５〜５．５重量％の当該Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類；
を含んでいる構造化したトリグリセリド類約２０％（ｗ／ｖ）；
（ｂ）リン脂質類約１．２％（ｗ／ｖ）；
（ｃ）アルファ−トコフェロール約１．８〜２．０ｍｇ／脂肪酸類１ｇ；
（ｄ）グリセリン約１０〜２５ｇ／Ｌ；および
（ｅ）水
を含む。
【００４３】
他の典型的な実施形態によれば、当該非経口栄養分エマルション組成物は、
（ａ）Ｃ６〜Ｃ１２脂肪酸類は全脂肪酸類の重量に基づきカプロン酸２．５％、カプリル酸３０％、カプリン酸１０およびラウリン酸２．５％を含んでいる、全脂肪酸類の重量に基づき約４５重量％の当該Ｃ６〜Ｃ１２脂肪酸類；
Ｃ１４〜Ｃ１８脂肪酸類は全脂肪酸類の重量に基づきパルミチン酸１０％、ステアリン酸１５％、オレイン酸１５％、リノール酸１６％およびアルファ−リノレン酸７％を含んでいる、全脂肪酸類の重量に基づき約５０重量％の当該Ｃ１４〜Ｃ１８脂肪酸類；
Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類は全脂肪酸類の重量に基づきＡＡ１．５％、ＥＰＡ１．５％およびＤＨＡ１．５％を含んでいてω−６のω−３脂肪酸類に対する比が約１．７５である、全脂肪酸類の重量に基づき約５重量％の当該Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類；
を含んでいる構造化されたトリグリセリド類約２０％（ｗ／ｖ）；
（ｂ）リン脂質類約１．２％（ｗ／ｖ）；
（ｃ）アルファ−トコフェロール約１．８ｍｇ／脂肪酸類１ｇ；
（ｄ）グリセリン約１０〜２５ｇ／Ｌ；および
（ｅ）水
を含む。
【００４４】
更なる態様によれば、本発明は酸分解反応を実施する段階を含んでいる本発明の構造化されたトリグリセリドの合成の方法を提供する。幾つかの実施形態によれば、当該酸分解反応はリパーゼが触媒する。更なる実施形態によれば、当該トリグリセリドは中鎖トリグリセリドである。更なる実施形態によれば、当該脂肪酸はＣ１４〜Ｃ１８脂肪酸類、Ｃ２０〜Ｃ２２脂肪酸類およびそれらの活性誘導体からなる群より選ばれる。更なる実施形態によれば、本発明の構造化されたトリグリセリド合成の工程は更に未反応ＭＣＴおよび脂肪酸を除去するために反応混合物を蒸留する段階を含む。
【００４５】
他の態様によれば、本発明は約１μｍ未満のエマルションの液滴直径に小さくする段階を含む非経口栄養分エマルション組成物の調製工程を提供する。幾つかの実施形態によれば、当該液滴直径は０．４５μｍ未満に小さくされる。非制限的な典型的実施形態によれば、当該液滴直径は０．２２μｍ未満に小さくされる。
【００４６】
他の態様によれば、本発明は本発明の非経口栄養分エマルション組成物を被験者に非経口的に投与する方法を含み、それを必要としている被験者に栄養を与える方法を提供する。
【００４７】
幾つかの実施形態によれば、本発明の非経口栄養分エマルション組成物で養われる被験者は早産児、満期産児、子供、成人、重病患者、ガン患者または外科的外傷、火傷、栄養不良、飢餓、加齢または免疫抑制で悩んでいる患者である。他の実施形態によれば、本発明の非経口栄養分で養われる被験者はＡＩＤＳに罹っている患者である。
【００４８】
本発明のこれらおよび他の実施形態類は以下の明細、実施例類および請求項類によって、より理解されるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４９】
（本発明の詳細な説明）
本発明は、構造化されたトリグリセリド類および早産児および満期産児、子供達、成人達、重病患者達およびガン患者達の非経口栄養分として有効な構造化されたトリグリセリド類を含む非経口栄養分エマルション類を提供する。
【００５０】
１つの態様によれば、本発明はエステル化した３種の脂肪酸残基を有するグリセロール骨格を含んでいる構造化されたトリグリセリドを提供し、そこでは少なくとも１種の脂肪酸残基は中鎖脂肪酸類およびその活性誘導体類からなる群より選ばれ、少なくとも１種の脂肪酸残基は長鎖脂肪酸類、超長鎖脂肪酸類およびそれらの活性誘導体類からなる群より選ばれるが、ただしＣ１８〜Ｃ２２ω−３脂肪酸残基はガンマ−リノレイン酸またはジホモガンマ−リノレイン酸とともには同じグリセロール骨格には存在しないことが条件となる。
【００５１】
本明細書で使用される用語“活性誘導体類”にはエステル類、エーテル類、アミン類、アミド類、置換された脂肪酸類（例えば、ハロゲン置換脂肪酸類）および他の置換基が含まれるが、それは当該脂肪酸類の有益な性質には影響を与えない。
【００５２】
本明細書で使用される用語“ω−３”、“ω−６”および“ω−９”は炭化水素鎖のメチル末端からそれぞれ第３番目の炭素、第６番目の炭素および第９番目の炭素に二重結合が存在する脂肪酸を称する。この命名はｎ−３、ｎ−６およびｎ−９の記号表示と同じである。そこで、用語ω−３、ω３およびｎ−３；およびω−６、ω６およびｎ−６；およびω−９、ω９およびｎ−９は本発明の明細書および請求項を通して同義的意味で使用される。
【００５３】
本発明の構造化されたトリグリセリド類は“デザイナーオイル類”として製造される。特定の脂肪酸類をグリセロール分子の特定の位置に組み込むことを導く当分野で既知の酵素的手順を用いて、構造化されたトリグリセリド類は合成される。
【００５４】
本明細書で十分説明したように、内容が参照で組み込まれた米国特許第６，５３７，７８７号は位置特異的なリパーゼ、特に１，３−特異的リパーゼの存在下で多価不飽和脂肪酸トリグリセリド類が豊富な混合物を得る方法を開示する。米国特許第６，５３７，７８７号による特異なリパーゼは好ましくはＣａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａリパーゼである。
【００５５】
本明細書で十分説明したように、内容を参照で組み込まれた米国特許第６，５１８，０４９号は遊離脂肪酸類としてＥＰＡおよびＤＨＡを含有する魚油組成物をエステル化し、出発組成物と比較してこれらの脂肪酸類の少なくとも１種類に富んだ遊離脂肪酸画分を形成する工程を開示しているが、当該魚油組成物をグリセロールと基本的に溶媒無しの条件で減圧下リパーゼ触媒の存在において反応させて、少なくともＥＰＡおよびＤＨＡの１種に富む遊離脂肪酸を回収する工程を含む。米国特許第６，５１８，０４９号によれば、当該リパーゼは好ましくは担体に固定化し、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉリパーゼである。
【００５６】
Ｓｕｇｉｈａｒａ等（Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．ａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１９９３  ４０：２７９〜８３およびそこで引用した参考文献類）はグリセリド類のｓｎ−２位置への適度な選択性を有する微生物を開示した。Ｏｔａ等（Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２０００，６４：２４９７）はＧｅｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｃａｎｄｉｄｕｍの酵素を開示したが、それは１−または３−位置エステル結合と比較して２倍近くｓｎ−２−位置エステル結合を加水分解する。
【００５７】
本明細書で十分説明したように、内容を参照で組み込んだＢａｓｈｅｅｒの米国特許第６，６０５，４５２号はトリアシルグリセロール類について１，３−位置的特異性を好ましく有する不溶性母体上に固定化した酵素調合物を開示する。
【００５８】
こうして本発明の原則によれば、リパーゼは例えば製造業者が供給するまま、またはリパーゼの単離法として当技術分野で知られているいずれかの方法により単離して精製していない形態で使用することができたり、またはリパーゼ或いは界面活性剤被覆リパーゼ複合体は不溶性母体上に固定化したりし、次いで本発明の構造化されたトリグリセリド類を調製するのに使用することができる。当該リパーゼはいずれの源から由来したものでありうるが、好ましい源は微生物である。多くの異なる種をリパーゼの源として使用できるが、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｐ．、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉａ  ＡとＢのようなＣａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉａ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｒｕｇｏｓａ、Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｓｃｏｓｕｍ、Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｓｐ．、Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ  Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ａ、Ｍｕｃｏｒ  ｊａｖａｎｉｃｕｓ、Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ｃｅｐａｃｉａ、Ｐｏｒｃｉｎｅ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃリパーゼ（ＰＰＬ）、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ａｒｒｈｉｚｕｓ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｊａｖａｎｉｃｕｓ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｊａｐｏｎｉｃｕｓ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｍｉｅｈｅｉおよびＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｎｉｖｅｕｓ、Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓｅおよびＷｈｅａｔ  ｇｅｒｍ  リパーゼが含まれるが、これだけには限らない。本発明の構造化されたトリグリセリド類の製造する際に使用するリパーゼ類は当該構造化されたトリグリセリドについて１，３−位置特異性を有している。
【００５９】
本発明の構造化されたトリグリセリド類は当技術分野でよく知られている種々の方法で調製できる。当該構造化されたトリグリセリド類は脂肪酸類とグリセロールのエステル化、酸分解、エステル転移およびエステル交換により調製できる。当該明細書および後に続く請求項では、当該用語である酸分解には１種以上の遊離脂肪酸とトリグリセリドの間で、当該トリグリセリドの少なくとも１種の脂肪酸を遊離脂肪酸の１種と交換する反応を含む。幾つかの実施形態によれば、酸分解はＭＣＴと遊離脂肪酸を反応させて行われる（即ち、１種以上のＭＣＦＡを交換する当該遊離脂肪酸類とＭＣＴの反応）。当該明細書および後に続く請求項では、用語エステル転移反応には２種の異なるトリグリセリド類間で第１のトリグリセリドの少なくとも１種の脂肪酸と第２のトリグリセリドの少なくとも１種の脂肪酸類を交換する反応を含む。幾つかの実施形態によれば、エステル転移反応はＭＣＴとＬＣＴを反応して行われる。当該明細書および後に続く請求項では、用語エステル交換反応にはトリグリセリドと脂肪酸のアルキルエステルとの反応が含まれる。幾つかの実施形態によれば、脂肪酸アルキルエステルのエステル交換反応はＭＣＴについて１種以上のＭＣＦＡを交換する。当該脂肪酸アルキルエステルは典型的には限定的ではないがメチルまたはエチルエステルである。幾つかの実施形態によれば、当該反応ではリパーゼ調製液を触媒的に使用する。リパーゼ調製液と脂肪酸含有基質類の接触は反応容器、即ちタンク反応装置または固定床反応器内で達成できることには同様に留意すべきことである。当該構造化されたトリグリセリド類を調製する際の当技術分野で知られている方法はいずれも本発明に包含されることは理解されるであろう。
【００６０】
一般的に本発明の構造化されたトリグリセリド類は、製造業者が供給するまま、或いは不溶性母体上に固定化したリパーゼを用いてＭＣＴおよび遊離脂肪酸間の酸分解反応で調製できる。当該リパーゼの固定化にはケイ酸塩またはイオン交換樹脂のような不溶性母体を用い、当該リパーゼをその水溶液から固定化する。湿潤固定化リパーゼはリン酸緩衝液および油を含有する二相培地の混合物で前処理し、減圧下で乾燥して当該固定化リパーゼの水含量を減量して２重量％未満とする。リパーゼは当該技術分野でよく知られている手順により固定化して、活性化することもできる。例えば、酸分解活性を有する固定化し活性化したリパーゼは、Ｉｎａｄａ等の米国特許第４，６４５，７４１号による酵素の表面機能基にポリエチレン基を結合させて調製できる。Ｂｏｏｓｌｅｙ等（米国特許第５，２３２，８４３号）が記述した手順によりリパーゼ類は活性化し固定化することもでき、そこではリパーゼは非リパーゼタンパク質で前処理したシリカまたはイオン交換樹脂の疎水性表面に固定される。米国特許第５，７７３，２６６号および米国特許第６，５９６，５２０号により調製した乾燥した多孔性の微粒子疎水性支持体上にあり界面活性剤を含有する固定化リパーゼは同様に本発明の構造化されたトリグリセリド類の製造に応用できる。
【００６１】
これに加えてまたはこれに代えて、本発明の構造化されたトリグリセリド類を調製する他の方法はナトリウムのようなアルカリ金属触媒および／または水酸化物およびアルコキシドのような求核触媒を使用することができ、それがグリセロール分子のグリセロール骨格上の脂肪酸類を無作為に交換するように働く。
【００６２】
当該構造化されたトリグリセリド類中にＣ６〜Ｃ１２脂肪酸を包含することは幾つかの利点がある。当該Ｃ６〜Ｃ１２脂肪酸はミトコンドリア中に入るのにカルニチンを必要としないので、それらは急速に血中からなくなりエネルギー源として使用される。当該構造化されたトリグリセリド類の成分として、ＭＣＦＡは当該エマルションのより低分子量、より良い溶解性およびより良い安定性を達成するのに寄与する。
【００６３】
他の態様によれば、本発明は本発明の構造化されたトリグリセリドを含む非経口栄養分エマルションを提供する。本発明が、本発明の構造化されたトリグリセリド類を含む栄養分エマルション類を経腸栄養用として包含することは当技術分野の当事者には明白である。
【００６４】
幾つかの実施形態によれば、当該非経口栄養分エマルションは更にビタミンＥ、好ましくはアルファ−トコフェロールを含む。血しょうトコフェロール濃度の正常な範囲は０．７と１．６ｍｇ／１００ｍｌの間である。一般的に早産幼児に対するビタミンＥの推奨量は４．５５ｍｇ／日であり、成人に対しては１００〜２００ｍｇ／日である。ビタミンＥは実用上で非毒性物質に分類されている。１０００ｍｇ／日未満の投薬量は安全で、副作用はない。トコフェロールの正常な範囲を維持するためには、ビタミンＥは不飽和のＦＡと量的に釣り合わねばならない。そこで、本発明の日経口栄養エマルションは脂肪酸類１ｇ当たりアルファ−トコフェロール０．１から０．５ｍｇを含むことができる。好ましくは、当該非経口栄養エマルションは脂肪酸類１ｇ当たりアルファ−トコフェロール１から２ｍを含むことができる。
【００６５】
本発明による非経口栄養分エマルション組成物は天然の生物適合性乳化剤を更に有利な形で含むことができる。当該乳化剤は好ましくはレシチン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミンまたはそれらの混合物のようなリン脂質化合物またはリン脂質混合物である。本発明の組成物に使用することができるリン脂質の非制限的例はレシチン類である；両方ともＬｕｃａｓ  Ｍｅｙｅｒ（ドイツ）が製造している、約７０％（ｗ／ｖ）のホスファチジルコリン、１２％のホスファチジルエタノールアミンおよび約１６％の他のリン脂質の混合物であるＥＰＩＫＵＲＯＮ  １７０（登録商標）、または約６０％（ｗ／ｖ）のホスファチジルコリン、１８％（ｗ／ｖ）のホスファチジルエタノールアミンおよび１２％（ｗ／ｖ）の他のリン脂質を含む混合物であるＯＶＯＴＨＩＮ  １６０（登録商標）。主にホスファチジルコリンおよびホスファチジルエタノールアミンの混合物であるこれらは、精製卵黄リン脂質（Ｏｖａｔｈｉｎシリーズにつき）および大豆油リン脂質（Ｅｐｉｋｒｏｎシリーズにつき）のような天然源由来のものである；精製リン脂質混合物；ＬＩＰＯＩＤ  Ｅ−８０（登録商標）は約８０％（ｗ／ｖ）のホスファチジルコリン、約８％（ｗ／ｖ）のホスファチジルエタノールアミン、約３．６％の非極性脂質および約２％のスフィンゴミエリンを含むリン脂質混合物で、Ｌｉｐｏｉｄ  ＫＧ（Ｌｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ、ＦＲＧ）が製造している。当技術分野で知られている他の植物のリン脂質（例えば、レシチン）または動物源のレシチンは、本発明の非経口栄養分エマルション組成物調製用の乳化剤として使用ができる。例えば、ポリオール脂肪酸エステルのような脂肪酸アシル基を含有する乳化剤類の他の形態は当該エマルションの調製に使用することができる。
【００６６】
当該エマルションは薬学的に許容できる非天然界面活性剤を更に含むことができる。いずれの従来薬学的に許容できる非イオン性界面活性剤も使用できる。一般的に当該界面活性剤は有機化合物の非イオン性酸化アルキレン縮合物で、１個以上の水酸基を含む。例えば、エトキシル化および／またはプロポキシル化アルコールまたはエステル化合物あるいはそれらの混合物は通常入手可能で、当技術分野の当事者であれば良く知っている。適した界面活性剤類には、ＴＹＬＯＸＡＰＯＬ；ＰＯＬＯＸＡＭＥＲ  ４０７０；ＰＯＬＯＸＡＭＥＲ  １８８；ＰＯＬＹＯＸＹＬ  ４０ステアレート；ＰＯＬＹＳＯＲＢＡＴＥ  ８０およびＰＯＬＹＳＯＲＢＡＴＥ  ２０とともにＴＷＥＥＮ（ＩＣＩ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，Ｄｅｌ．，Ｕ．Ｓ．Ａ）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ  Ｆ−６８（ポリオキシエチレンとポリオキシプロピレンの共重合体に関するＢＡＳＦの商標、Ｌｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ，ドイツ）の商標で売買されている種々な化合物類が含まれる。好ましい界面活性剤にはポリオキシエチル化油またはポロキサミン類も含まれる。ＦＤＡがヒト使用に承認しているので、ＴＹＬＯＸＡＰＯＬおよびＴＷＥＥＮ系界面活性剤が大層好ましい。
【００６７】
当該非経口栄養分エマルション組成物は更に、例えばデキストロースのような炭水化物系栄養分、例えば塩化カリウムおよび塩化ナトリウムのような電解質類；必須および非必須アミノ酸類を含むアミノ酸類；ビタミンＡおよびビタミンＤのようなビタミン類；例えば亜鉛イオン類のような微量ミネラル類、および例えばメチル−、エチル−、プロピル−およびブチルパラベンのような防腐剤類を含むことができ、それらは非経口投与用に医学的に許容されている。
【００６８】
当該非経口栄養分エマルション組成物は更にグリセリン、ソルビトールまたはアラニンのような浸透圧調整剤（参照、例えば米国特許第４，５６７，０４５号で、その内容は本明細書で全てを説明しているように参照として組み込まれている）および滅菌水を含むことができる
【００６９】
一般的に、医療用エマルション中の脂質液滴は、当該液滴が小さければ小さいほど保存における安定性が良いので、好ましくは小さくあるべきで、即ち１μｍ未満である。当該液滴は約０．０５から０．５μｍ、好ましくは約０．１から０．３μｍの範囲であるのが有利である。液滴が大きければ細い毛細血管を容易には通過しないであろうし、それを必要とする患者に投与する前に当該エマルションをろ過する際に必要とするフィルターを通過しないであろうから、当該液滴直径は特に重要である。本発明の組成物類はそのような小さな液滴を得ることに特に適している。
【００７０】
本発明のエマルション類は数多くの方法で調製できる。１つの調製方法によれば水溶液および油性溶液を別々に調製し、水溶液はリン脂質および場合により浸透圧調節剤および防腐剤を含み、油性溶液は当該構造化されたトリグリセリド類および抗酸化剤を含んでいる。当該水溶液は２種類の予め作成した溶液から調製される：第１はリン脂質を含有するアルコール性溶液で、第２の溶液は水中に上記の他の任意の成分群を含有する。当該水溶液はそののち第１と第２の溶液を混合して調製して、例えば蒸発させるとアルコールが除かれて前述水溶液を生じる。
【００７１】
当該水溶液および当該油性溶液をそののちお互いに混合する。しかしながら、そのようにして得られた混合物は未だ充分な小さい液滴とはならず、その直径は（マグネチックスターラーで混合して得た）約１０μｍである。当該発明のエマルションの液滴直径はＵｌｔｒａ  Ｔｕｒｒａｘ（Ｊａｎｋｌ  ａｎｄ  Ｋｕｎｋｅｌ，Ｓｔａｕｆｅｎ，ＦＲＧ）のような乳化装置を使えば減少させることができ、約１．１μｍの平均直径をもつ液滴を生じ、例えばＰｏｌｙｔｒｏｎ（Ｋｉｎｅｍａｔｉｃａ，Ｌｕｃｅｒｎｅ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）のような高せん断力のミキサーを使えば約０．６５μｍの直径を有する液滴が得られる。
【００７２】
特に当該発明のエマルション類にて小さな液滴は二段階の高圧ホモジナイザーを使えば得ることができ、粗分散はバネ加重弁と弁座の間の角度間隔を高圧で通過させ、第二段階では第一と直列にすれば当該エマルションが２つの非常に速い分散工程を受ける。当該装置の例にはＧａｕｌｉｎ  Ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ（ＡＰＶ  Ｇａｕｌｉｎ，Ｈｉｌｖｅｒｓｕｍ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）がある。本発明に従ってそのような装置を用いれば当該液滴が比較的小さな偏差にて平均約０．２７μｍの直径を持つエマルションを生じる。
【００７３】
当該乳化工程がＰｏｌｙｔｒｏｎ型高せん断混合器を両方で組合せて、次いでホモジナイズすると、均一なより小さな液滴が得られる。このような組合せで得た液滴は約０．１〜０．１５μｍである。これら比較的小さな直径の液滴は、当該エマルションを静脈注射に用いたり、またはろ過で当該処方を滅菌したりする際に好ましい。
【００７４】
幾つかの実施形態によれば、本出願のエマルション類は高せん断混合器を混合速度１０，０００ＲＰＭで５分間適用して調製される。この段階後に得られたエマルション類を更にミクロフルイダイザーにて典型的には８００〜２６００バールの範囲の圧力にて５分間、室温で処理をする。そののち、当該エマルション類を室温まで冷やすと、平均液滴直径は０．２μｍ未満である。前述二段階の処理で得られたエマルション類を孔径０．４５μｍ未満、好ましくは０．２μｍ未満の膜フィルターを用いてろ過することで滅菌する。当該エマルションにおけるｐＨを０．５Ｍ  ＮａＯＨまたは０．５Ｍ  ＨＣｌ溶液にて生理的に許容されるｐＨ、典型的には６から８のｐＨに調節する。
【００７５】
本発明の非経口栄養分エマルション組成物類を調製するための他の調製方法は、各々別々に前もって調製したリポソーム混合物と油性混合物を一緒に混合して行う。当該リポソーム混合物は最終組成物では油相の部を形成しない全ての成分、即ちリン脂質類および場合により浸透圧調節剤および防腐剤を含む。これらの成分からのリポソーム混合物の調製は、当技術分野では知られた方法で実施される。
【００７６】
当該油性混合物は当該構造化されたトリグリセリド類および更に抗酸化剤を含む。
【００７７】
当該リポソーム混合物を当該油性混合物とともに混合すると、エマルションは比較的大きな液滴、例えば約１０μｍを形成するが、それを更に上述の如く同じ方法を最初の調製法と組合せ、細かな均一液滴を有するエマルションが得られるまで処理する。
【００７８】
典型的には、本発明のエマルション類は０．４５μｍ未満の孔径を有し、好ましくは０．２μｍの孔径を有する膜フィルターを通してろ過される。当該エマルション類は更に、例えば窒素のような不活性ガス雰囲気下で１２１℃まで昇温して１５分間オートクレーブしている間当該エマルションを回転させる。しかしながら、当技術分野で知られているような滅菌方法に関するいずれの方法も本発明に包含される。
【００７９】
当該構造化されたトリグリセリド類の蒸留は、好ましくは減圧下でトリグリセリド類の加熱および蒸発で行われる。好ましくは、本発明の構造化されたトリグリセリド類は分子蒸留または短経路蒸留を行うが、これは低温で非常に低い圧、典型的には０．０１ｍｍＨｇ未満で行われる。好ましくは、当該蒸留は１２０℃から２３０℃の温度で行われる。当該圧力は約１×１０−３ｋＰａから０．５３３ｋＰａで変動できる。この低圧が本発明の構造化されたトリグリセリド類のような高分子量化合物類を分離可能とする。遊離脂肪酸類は、好ましくは０．５Ｍの水酸化ナトリウムまたはアルコキシド溶液で当該反応混合物を洗浄して除去できる。これに代わるものとしてまたはこれに加えて、当該遊離脂肪酸は当該反応混合物の水蒸気蒸留でも除去可能である。
【００８０】
本発明のエマルション類を容器に詰めて、保存用の密封容器内で長期間または短期間貯蔵する。当該エマルション類の含まれる添加物類は当該エマルション類がどの程度保存されるかによる。長期間保存は蔗糖、アミノ酸類および幾つかの電解質類を含有する水相であるエマルション類については許容される。デキストロースは長期間保存用に調製されるエマルション類には含まれるべきではない。
【００８１】
（脂肪酸類の異なる種類の利点）
中鎖脂肪酸類（ＭＣＦＡ）の群には６〜１２個の炭素原子からなる脂肪酸類が含まれる。これらの化学的および物理的構造が長鎖または超長鎖脂肪酸類（それぞれＬＣＦＡまたＶＬＣＦＡ）と比べてＭＣＦＡの溶解性を高めている；後者の用語はそれぞれ１４〜１８および２０〜２２炭素原子を指している。ＭＣＦＡ群中の全ての脂肪酸類は飽和である。迅速に酸化されるのでＭＣＦＡはエネルギーの良好な源と考えられている。
【００８２】
中鎖トリグリセリド類（ＭＣＴ）を含有するエマルション類は純粋な長鎖トリグリセリド類（ＬＣＴ）を含有するものより安定である。ＭＣＴが血流に入るとリパーゼがトリグリセリド類を加水分解的にグリセロールと脂肪酸類へ分解する。ＭＤＦＡはミトコンドリアに入るときカルニチンを必要としないので、放出されたＦＡの大部分は直ちに組織に取り込まれて迅速に酸化される。この代謝経路はＭＤＦＡを血流からＬＣＦＡより迅速に消失させるので、血中トリグリセリドレベルを増加させず、組織脂質に取り込まれる傾向が低い。ＭＣＦＡは体中タンパク質を維持させること、窒素保持を増加させることおよび窒素バランスを改善させることも知られている。ＭＣＦＡはそれゆえ迅速なエネルギー源として使用される。
【００８３】
ＬＣＦＡは１４〜１８個の炭素原子からなる。それらは飽和、一価不飽和または多価不飽和でありうる。長鎖トリグリセリド類はリポタンパク質類として血流中輸送される。リポタンパク質リパーゼおよび肝性リパーゼはＬＣＴをＦＡとグリセロールに加水分解する。血中からのＬＣＴのクリアランスはＭＣＴより遅い。ＬＣＦＡはクレアチンとともにミトコンドリアに入る。ベータ酸化によるエネルギー源、より長鎖のＦＡの前駆体および脂肪組織での貯蔵物としてＬＣＦＡは機能する。最も重要なＬＣＦＡはリノール酸（１８：２  ω−６）およびアルファ−リノレン酸（１８：３  ω−３）で、両方ともヒト体中では合成できないので必須ＦＡと考えられており、それゆえ食物中で供給されねばならない。
【００８４】
超長鎖脂肪酸類（ＶＬＣＦＡ）には２０炭素原子以上の鎖が含まれる。ＶＬＣＦＡの多くは多価不飽和である。これらはＬＣＦＡから伸長工程で合成され、それには数種の酵素類が関与している。最も重要なＶＬＣＦＡはアラキドン酸（ＡＡ）、ω−６脂肪酸およびω−３酸であるドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）であり、それらは脳、中枢神経系（ＣＮＳ）および網膜の通常の発育および機能に必要であることが示されている。ＡＡおよびＤＨＡはＣＮＳ構造の機械的要素であるばかりかニューロンにおける細胞情報伝達系でも必要とされている。ＤＨＡ欠乏が注意欠陥と多動性障害、失読症、老人性認知症、視覚と認識機能の低下、臨床性うつ病、統合失調症および他の心理的および生理的性質の問題と関連している証拠がある。これに加えて、エイコサペンタン酸（ＥＰＡ）およびＤＨＡ，両方ともω−３脂肪酸類であり冠状動脈性心臓病、高血圧、炎症、関節炎、乾癬および他の自己免疫障害群とガンへの良い効果を有していることが示唆された。ＤＨＡおよびＡＡはプロスタグランジン類、トロンボキサン類およびロイコトリエン類の合成にも関与している。これに加えて、ＤＨＡおよびＡＡは生物的細胞膜類の不可欠な成分である。胎児、早産児と満期産児ではそれらの正常な発育では、これら脂肪酸類が必要とされることがはっきり証明されている。
【００８５】
幼児の赤血球細胞膜でのＤＨＡおよびＡＡの取り込み速度は、ＤＨＡとＡＡの補給なしでは低下する。ヒトの乳（ＤＨＡおよびＡＡを含有する）またはこれらの脂肪酸類を補填した調乳で育てた幼児は正常な取り込み速度を維持することが示された。他の研究はＶＬＣＦＡを含有する調乳で育てた満期産児および早産児はＶＬＣＦＡを含有しない調乳で育てた満期産児および早産児より認識挙動および精神運動の発達が良いことを示した。
【００８６】
ＤＨＡおよびＥＰＡのようなω−３  ＶＬＣＦＡの免疫系への効果は動物およびヒトで研究されてきた。ＤＨＡおよびＥＰＡを含んでいる非経口栄養分を与えられた外科患者はインターロイキン２が上昇した。ＤＨＡおよびＥＰＡを含有する非経口または腸内投与用の栄養分を受けた炎症性腸疾患の患者はステロイド摂取の削減を伴う臨床状態での改善を示した。炎症性疾患へのＶＬＣＦＡ  ω−３のこれらの有益な効果は、炎症過程を抑制するインターロイキン産生におけるそれらの関与によるものと思われる。
【００８７】
当該ＶＬＣＦＡ  ω−３は、それらが血小板凝結および血液の粘度を低下させ、毛細血管の流れを増加させ、心筋梗塞の危険度を低減するので、冠状動脈疾患につき良好な効果を示すことも示された。これら超長鎖脂肪酸類のそれらの前駆体類からの転換速度は身体の要求を満たすのには充分でないので、当該脂肪酸類は非経口栄養分に含まれてなければならない。
【００８８】
本発明の原則によれば、少なくとも非経口栄養分エマルション中に取り入れられる当該トリグリセリド類の１部はω−６脂肪酸類を含む。ω−６  ＶＬＣＦＡの中で、ＡＡはより好ましいω−６脂肪酸類の１つであることは理解されるであろう。本発明の原則によれば、当該構造化されたトリグリセリド類はいずれのω−６脂肪酸も含むことができるが、ガンマ−リノレン酸およびジホモリノレン酸はＣ１８〜２２  ｎ−３脂肪酸残基を伴った同じグリセロール骨格には同時には存在しない。
【００８９】
（ビタミンＥ）
ビタミンＥは必須生物的活性物質の群であるトコフェロール類の栄養学的な記号表示である。当該種々のトコフェロール類は植物の胚芽細胞中、卵黄中および肉中に見出される。当該天然トコフェロール類には４種の異性体が含まれる：アルファ、ベータ、ガンマおよびデルタである。最も生物的に活性なビタミンＥはアルファ−トコフェロール異性体である。
【００９０】
二重結合を含有している脂肪酸類の消費は過酸化物形成の危険性を高め、それは細胞膜内の構造的変化を導く。これらの変化は特に免疫系機能の損傷、肺合併症および増加する溶血で示される。
【００９１】
早産児および重病患者は過酸化の危険性により弱い。ビタミンＥは大層効果的な抗酸化剤で、不飽和脂肪酸類の二重結合を酸化的破壊から防ぐ。この防御的機能は生体外では脂質エマルション類および生体内では膜の脂質破壊防止の両方で示される。
【００９２】
ビタミンＥは同様に機能的免疫系の維持についても必須である。ビタミンＥ欠乏では、感染への抵抗、免疫反応、Ｔリンパ球の活性化、インターロイキン２の産生および食細胞能力において低下する。非経口栄養分で脂質エマルションを受けている患者はビタミンＥへの要求が増加する。
【００９３】
以下の実施例は単なる例示で事実上非制限的である。本発明に関連する技術分野の当事者にとっては、多くの修正、入れ替えおよび変化が本発明の目的から外れることなく行えることは明らかである。
【実施例１】
【００９４】
構造化されたトリグリセリド類の合成に適切であるリパーゼ類の識別
材料および方法
ＭＣＴ溶液は（Ｃｒｏｄａ，シンガポール）から購入した。当該ＭＣＴ溶液はカプリル酸５８％およびカプリン酸４２％を含有する。当該製造会社によれば、両脂肪酸は当該グリセロール骨格に任意に分布している。異なる純度の遊離脂肪酸類をＳｉｇｍａ社から購入した。ＤＨＡおよびＥＰＡはＫ．Ｄ．Ｐｈａｒｍａ社、ドイツから得た。グリセロールにトリグリセリドの形で結合したアラキドン酸をＭａｒｔｅｋ社、米国から濃度２０％で得た。全ての溶媒類および試薬類はＳｉｇｍａ社から得たが、分析用級であった。リパーゼ類はＳｉｇｍａ社、米国から購入した。
【００９５】
酸分解反応
合成反応に採用した粗酵素類および酵素類の酸分解活性度はＭＣＴおよび遊離脂肪酸を、両物質のモル比１：１で含有する１０ｍｌの反応溶液に酵素調製液（５００ｍｇ）を加えて定量した。当該反応混合物を５０℃で１６時間振とうした。試料群（０．１ｍｌ）を当該反応混合物から採取し、アセトン−ジクロロメタンを９０：１０の比率で含む１０ｍｌの溶媒と混合した。当該試料群をＭｉｌｌｉｐｏｒｅフィルター（孔径０．４５μｍ）を通してろ過して、その後ＨＰＬＣに注入した。当該反応は図１に示す。
【００９６】
分析
当該反応の進行は当該反応混合物中のトリグリセリド成分をＥＬＳＤ（蒸発光散乱検出器）を備えたＨＰＬＣを用いて当該酵素反応の前後で分析して追跡した。当該ＨＰＬＣはＬｉＣｈｒｏｓｏｒｂ  ＣＨ−１８  Ｓｕｐｅｒ（２５０×４ｍｍ，５μｍ，ＭＥＲＫ社）を備えていた。当該ＨＰＬＣ操作条件は以下の通りであった：移動相Ａ、アセトニトリル／ジクロロメタン／アセトン（８０／１５／５）；移動相Ｂ：アセトン／ジクロロメタン／アセトン（２０／６０／２０）。当該流速は１ｍｌ／分で、勾配は０から１００％Ｂを３０分間で行った。
【００９７】
図２Ａおよび図２ＢはＭＣＴの酸分解反応の前後でのＨＰＬＣクロマトグラムを示す。図２Ａでのピーク１は当該遊離脂肪酸、即ちパルミチン酸を示し、ピーク２，３，４および５は当該反応前のＭＣＴを表し、ピーク６は内部標準のトリラウリンである。図２Ｂでのピーク１，２および３は遊離した中鎖脂肪酸類を表し、ピーク４は未反応パルミチン酸を表す。ピーク５，６，７および８は媒質中の未反応ＭＣＴを表し、ピーク９，１０および１１は１個の長鎖脂肪酸アシル基を含有する新生成物を表す。ピーク１２および１３は２個の長鎖脂肪酸アシル基を含有する新生成物を表す。
【００９８】
当該基質転換は以下のように計算した：
転換％＝１００×（ゼロ時におけるＭＣＴを表す４ピークの面積の合計）−（反応の１６時間後のＭＣＴを表す４ピークの面積の合計）／ゼロ時におけるＭＣＴを表す４ピークの面積の合計。
ＭＣＴ転換（％）は望む生成物を得る際の酵素活性の効率用指標パラメーターとして使用された。
【００９９】
結果
表１〜１２は種々な酵素類の酸分解活性を示し、図１で表した酵素的触媒反応による無溶媒系におけるＭＣＴと遊離脂肪酸類の反応について触媒するそれらの能力を選別した。全てのリパーゼ類は製造業者（Ｓｉｇｍａ社）が供給した粗製のまま、または不溶性母体に固定化して使用した。固定化リパーゼ類はＭＣＴおよび長鎖脂肪酸を含有する酸分解反応で使用する前に、オリーブ油、大豆油などのトリグリセリド油５０％および水５０％を含有する二相系で前処理して活性化した。この前処理は合成的応用に関して固定化酵素類の活性化を導く。
【０１００】
本実施例で使用した典型的な酵素活性化および固定化手順は以下の通りである：粗リパーゼ調製液１ｇを酵素製造業者の推奨する適切なｐＨのリン酸緩衝液１Ｌに溶解した。支持母体１０ｇ（シリカ、セライト、ＤＯＵＬＩＴＥ（登録商標）Ａ５６、ＤＯＵＬＩＴＥ（登録商標）Ａ７、ＤＯＵＬＩＴＥ（登録商標）ＸＡＤ７６１またはＡｍｂｅｒｌｉｔｅ（商標）ＸＡＤ１６のようなイオン交換樹脂）を攪拌している酵素溶液中に添加した。当該スラリーを温度１０℃で８時間振とうした。冷アセトンの１００ｍｌを母体表面に固定するのを促進するために状況に応じて当該攪拌しているスラリーに加えた。当該固定化酵素を当該混合物からろ過し、そののち凍結乾燥するか以下の段階にて湿ったままで使用した。凍結乾燥した固定化リパーゼ（水含量が２重量％未満）または湿潤固定化リパーゼ（水含量が約２０％）の１ｇをオリーブ油５ｇおよびｐＨ７の緩衝液２ｇからなる二相系に室温で添加した。当該混合物を１０分間攪拌した。当該固定化リパーゼを当該混合物からろ過し、冷アセトンで洗浄し、デシケーター中で乾燥してＭＣＴと脂肪酸アシル供与体の間での酸分解反応に用いた。
【０１０１】
表１．ＭＣＴとカプロン酸を用いての異なる酵素類の酸分解活性度
――――――――――――――――――――――――――――――――――
リパーゼ源                                    転換％（２４時間）
――――――――――――――――――――――――――――――――――
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ                        ５
Ｃａｎｄｉｄａ  Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ                    ３０
Ｃａｎｄｉｄａ  ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ                    ２
Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ                                ３５
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ            ４
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｅｐａｃｉａ                  ２７
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ａｒｒｈｉｚｕｓ                      ４２
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｎｉｖｅｕｓ                            ３
Ｐｏｒｃｉｎｅ  ｐａｎｃｒｅａｓ  ｌｉｐａｓｅ            ６
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ                      ８
Ｃａｎｄｉｄａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ                      ８
Ｍｕｃｏｒ  ｊａｖａｎｉｃｕｓ                          ３２
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ              ３
Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ                      ３１
Ｗｈｅａｔ  ｇｅｒｍ                                      ２
Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｓｃｏｓｕｍ        １８
Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ  
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ａ                            １７
Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ｂ                            １８
――――――――――――――――――――――――――――――――――
【０１０２】
反応条件：ＭＣＴ（１ｇｒ）、カプロン酸（０．２３ｇｒ）および酵素調製液５００ｍｇ。当該反応混合物を振とうし、１６時間５０℃で自動調節した。
【０１０３】
表１に示した結果はカプロン酸およびＭＣＴの酸分解反応についてのリパーゼ類には６種類の異なる好ましい源があることを示す。リパーゼ類のこれらの源にはＣａｎｄｉｄａ  Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ、Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｅｐａｃｉａ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ａｒｒｈｉｚｕｓ、Ｍｕｃｏｒ  ｊａｖａｎｉｃｕｓおよびＲｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉが含まれる。微生物の異なる源から抽出した他のリパーゼ類は有機媒質中では適当な酸分解活性を示さなかった。
【０１０４】
表２．ＭＣＴおよびカプリル酸を用いての異なる酵素類の酸分解活性度
――――――――――――――――――――――――――――――――――
リパーゼ源                                    転換％（２４時間）
――――――――――――――――――――――――――――――――――
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ                        ３
Ｃａｎｄｉｄａ  Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ                    ３４
Ｃａｎｄｉｄａ  ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ                    ５
Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ                                ４２
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ            ６
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｅｐａｃｉａ                  ３２
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ａｒｒｈｉｚｕｓ                      ３８
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｎｉｖｅｕｓ                            ２
Ｐｏｒｃｉｎｅ  ｐａｎｃｒｅａｓ  ｌｉｐａｓｅ            ５
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ                      ９
Ｃａｎｄｉｄａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ                      ３
Ｍｕｃｏｒ  ｊａｖａｎｉｃｕｓ                          ３７
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ              ５
Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ                      ３７
Ｗｈｅａｔ  ｇｅｒｍ                                      ６
Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｓｃｏｓｕｍ        ２８
Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ  
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ａ                            １５
Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ｂ                            ２４
――――――――――――――――――――――――――――――――――
【０１０５】
反応条件は表１で説明した如くであるが、１箇所の変更があり、即ちカプリル酸（０．２８ｇｒ）を脂肪酸として使用した。
【０１０６】
表２はＣａｎｄｉｄａ  Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ、Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｅｐａｃｉａ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ａｒｒｈｉｚｕｓ、Ｍｕｃｏｒ  ｊａｖａｎｉｃｕｓ、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ、Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｓｃｏｓｕｍおよびＬｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ  Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ａから抽出したリパーゼ類は、出発原料としてカプリル酸とＭＣＴを用いるとき酸分解活性が適切であった。
【０１０７】
以下の本明細書中の表３〜９は同様にＭＣＴとＦＦＡ間の反応を触媒する最も活性なリパーゼ類には主に微生物類の前出群から抽出した酵素類が含まれる。これらの結果は、基質類がＭＣＴとＦＦＡである酸分解反応に関して、当該脂肪酸が飽和、一価不飽和、二価不飽和または三価不飽和で６〜１８炭素からなる場合であれば当該リパーゼ類は効率的であることを示唆する。
【０１０８】
表３．ＭＣＴおよびカプリン酸を用いての異なる酵素類の酸分解活性度
――――――――――――――――――――――――――――――――――
リパーゼ源                                    転換％（２４時間）
――――――――――――――――――――――――――――――――――
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ                        ３
Ｃａｎｄｉｄａ  Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ                    ２５
Ｃａｎｄｉｄａ  ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ                    ８
Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ                                ３９
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ            ９
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｅｐａｃｉａ                  ３７
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ａｒｒｈｉｚｕｓ                      ４２
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｎｉｖｅｕｓ                            ３
Ｐｏｒｃｉｎｅ  ｐａｎｃｒｅａｓ  ｌｉｐａｓｅ            ５
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ                    １５
Ｃａｎｄｉｄａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ                      ５
Ｍｕｃｏｒ  ｊａｖａｎｉｃｕｓ                          ３７
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ              ５
Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ                      ３７
Ｗｈｅａｔ  ｇｅｒｍ                                      ６
Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｓｃｏｓｕｍ        ２８
Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ  
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ａ                            １５
Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ｂ                            ２４
――――――――――――――――――――――――――――――――――
【０１０９】
反応条件は表１で説明した如くであるが、一箇所の変更があり、即ちカプリン酸（０．３４ｇｒ）を脂肪酸として使用した。
【０１１０】
表４．ＭＣＴとラウリン酸を用いての異なる酵素類の酸分解活性度
――――――――――――――――――――――――――――――――――
リパーゼ源                                    転換％（２４時間）
――――――――――――――――――――――――――――――――――
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ                        ５
Ｃａｎｄｉｄａ  Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ                    １４
Ｃａｎｄｉｄａ  ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ                    ２
Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ                                ３８
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ          １２
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｅｐａｃｉａ                  １７
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ａｒｒｈｉｚｕｓ                      ２９
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｎｉｖｅｕｓ                            ５
Ｐｏｒｃｉｎｅ  ｐａｎｃｒｅａｓ  ｌｉｐａｓｅ            ６
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ                    １４
Ｃａｎｄｉｄａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ                      ８
Ｍｕｃｏｒ  ｊａｖａｎｉｃｕｓ                          ４１
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ              ７
Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ                      ３９
Ｗｈｅａｔ  ｇｅｒｍ                                      ４
Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｓｃｏｓｕｍ        ３１
Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ  
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ａ                            １７
Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ｂ                            ２７
―――――――――――――――――――――――――――――――――
【０１１１】
反応条件は表１で説明した如くであるが、一箇所の変更があり、即ちラウリン酸（０．４ｇｒ）を脂肪酸として使用した。
【０１１２】
表５．ＭＣＴとパルミチン酸を用いての異なる酵素類の酸分解活性度
――――――――――――――――――――――――――――――――――
リパーゼ源                                    転換％（２４時間）
――――――――――――――――――――――――――――――――――
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ                        ３
Ｃａｎｄｉｄａ  Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ                    ２２
Ｃａｎｄｉｄａ  ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ                    ６
Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ                                ４１
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ            ２
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｅｐａｃｉａ                  ３１
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ａｒｒｈｉｚｕｓ                      ３９
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｎｉｖｅｕｓ                            １
Ｐｏｒｃｉｎｅ  ｐａｎｃｒｅａｓ  ｌｉｐａｓｅ            １
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ                    １５
Ｃａｎｄｉｄａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ                      ５
Ｍｕｃｏｒ  ｊａｖａｎｉｃｕｓ                          ４０
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ              ２
Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ                      ３３
Ｗｈｅａｔ  ｇｅｒｍ                                      ２
Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｓｃｏｓｕｍ        ３１
Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ  
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ａ                            １５
Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ｂ                            ２６
――――――――――――――――――――――――――――――――――
【０１１３】
反応条件は表１で説明した如くであるが、一箇所の変更があり、即ちパルミチン酸（０．５１ｇｒ）を脂肪酸として使用した。
【０１１４】
表６．ＭＣＴとステアリン酸を用いての異なる酵素類の酸分解活性度
――――――――――――――――――――――――――――――――――
リパーゼ源                                    転換％（２４時間）
――――――――――――――――――――――――――――――――――
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ                        ３
Ｃａｎｄｉｄａ  Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ                    ３４
Ｃａｎｄｉｄａ  ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ                    ５
Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ                                ４２
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ            ６
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｅｐａｃｉａ                  ３２
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ａｒｒｈｉｚｕｓ                      ３８
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｎｉｖｅｕｓ                            ２
Ｐｏｒｃｉｎｅ  ｐａｎｃｒｅａｓ  ｌｉｐａｓｅ            ５
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ                      ９
Ｃａｎｄｉｄａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ                      ３
Ｍｕｃｏｒ  ｊａｖａｎｉｃｕｓ                          ３７
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ              ５
Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ                      ３７
Ｗｈｅａｔ  ｇｅｒｍ                                      ６
Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｓｃｏｓｕｍ        ２８
Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ  
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ａ                            １５
Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ｂ                            ３０
――――――――――――――――――――――――――――――――――
【０１１５】
反応条件は表１で説明した如くであるが、一箇所の変更があり、即ちステアリン酸（０．５６ｇｒ）を脂肪酸として使用した。
【０１１６】
表７．ＭＣＴとオレイン酸を用いての異なる酵素類の酸分解活性度
――――――――――――――――――――――――――――――――――
リパーゼ源                                    転換％（２４時間）
――――――――――――――――――――――――――――――――――
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ                        １
Ｃａｎｄｉｄａ  Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ                    ２０
Ｃａｎｄｉｄａ  ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ                    ３
Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ                                ４０
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ            ３
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｅｐａｃｉａ                  ３７
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ａｒｒｈｉｚｕｓ                      ４１
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｎｉｖｅｕｓ                            １
Ｐｏｒｃｉｎｅ  ｐａｎｃｒｅａｓ  ｌｉｐａｓｅ            ４
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ                    １２
Ｃａｎｄｉｄａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ                      １
Ｍｕｃｏｒ  ｊａｖａｎｉｃｕｓ                          ４２
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ              ２
Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ                      ４３
Ｗｈｅａｔ  ｇｅｒｍ                                      ２
Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｓｃｏｓｕｍ        ３３
Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ  
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ａ                            １７
Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ｂ                            ２９
――――――――――――――――――――――――――――――――――
【０１１７】
反応条件は表１で説明した如くであるが、一箇所の変更があり、即ちオレイン酸（０．５６ｇｒ）を脂肪酸として使用した。
【０１１８】
表８．ＭＣＴとリノール酸を用いての異なる酵素類の酸分解活性度
――――――――――――――――――――――――――――――――――
リパーゼ源                                    転換％（２４時間）
――――――――――――――――――――――――――――――――――
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ                        ２
Ｃａｎｄｉｄａ  Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ                    １９
Ｃａｎｄｉｄａ  ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ                    ２
Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ                                ４１
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ            ３
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｅｐａｃｉａ                  ３７
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ａｒｒｈｉｚｕｓ                      ４２
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｎｉｖｅｕｓ                            ４
Ｐｏｒｃｉｎｅ  ｐａｎｃｒｅａｓ  ｌｉｐａｓｅ            ５
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ                    １７
Ｃａｎｄｉｄａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ                      ２
Ｍｕｃｏｒ  ｊａｖａｎｉｃｕｓ                          ３３
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ              ３
Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ                      ３５
Ｗｈｅａｔ  ｇｅｒｍ                                      ４
Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｓｃｏｓｕｍ        ２０
Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ  
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ａ                            １２
Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ｂ                            １７
――――――――――――――――――――――――――――――――――
【０１１９】
反応条件は表１で説明した如くであるが、一箇所の変更があり、即ちリノール酸（０．５５ｇｒ）を脂肪酸として使用した。
【０１２０】
表９．ＭＣＴとアルファ−リノレン酸を用いての異なる酵素類の酸分解活性度
――――――――――――――――――――――――――――――――――
リパーゼ源                                    転換％（２４時間）
――――――――――――――――――――――――――――――――――
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ                        １
Ｃａｎｄｉｄａ  Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ                    １５
Ｃａｎｄｉｄａ  ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ                    ２
Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ                                ３１
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ            ２
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｅｐａｃｉａ                  ３５
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ａｒｒｈｉｚｕｓ                      ３７
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｎｉｖｅｕｓ                            １
Ｐｏｒｃｉｎｅ  ｐａｎｃｒｅａｓ  ｌｉｐａｓｅ            ６
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ                    １２
Ｃａｎｄｉｄａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ                      ２
Ｍｕｃｏｒ  ｊａｖａｎｉｃｕｓ                          ２２
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ              ３
Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ                      ３９
Ｗｈｅａｔ  ｇｅｒｍ                                      ３
Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｓｃｏｓｕｍ        １５
Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ  
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ａ                            １３
Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ｂ                            １２
――――――――――――――――――――――――――――――――――
【０１２１】
反応条件は表１で説明した如くであるが、一箇所の変更があり、即ちアルファ−リノレン酸（０．５５ｇｒ）を脂肪酸として使用した。
【０１２２】
表１０．ＭＣＴとアラキドン酸を用いての異なる酵素類の酸分解活性度
――――――――――――――――――――――――――――――――――
リパーゼ源                                    転換％（２４時間）
――――――――――――――――――――――――――――――――――
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ                        ３
Ｃａｎｄｉｄａ  Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ                    １０
Ｃａｎｄｉｄａ  ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ                    ３
Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ                                  ３
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ            ６
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｅｐａｃｉａ                  １９
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ａｒｒｈｉｚｕｓ                        ２
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｎｉｖｅｕｓ                            ５
Ｐｏｒｃｉｎｅ  ｐａｎｃｒｅａｓ  ｌｉｐａｓｅ            ２
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ                      ６
Ｃａｎｄｉｄａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ                      ２
Ｍｕｃｏｒ  ｊａｖａｎｉｃｕｓ                            ６
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ              ４
Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ                      １５
Ｗｈｅａｔ  ｇｅｒｍ                                      ２
Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｓｃｏｓｕｍ        １２
Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ  
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ａ                              ７
Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ｂ                              ８
――――――――――――――――――――――――――――――――――
【０１２３】
反応条件は表１で説明した如くであるが、一箇所の変更があり、即ちアラキドン酸（０．６ｇｒ）を脂肪酸として使用した。
【０１２４】
表１０で示した結果は種々な源からの多くのリパーゼ類はここまでに開示した他の実験のようにはアラキドン酸とＭＣＴの酸分解を触媒しないことを示す。この程度の低い酸分解は異なるリパーゼ類にとって、脂肪酸基質がＡＲＡ、ＥＰＡおよびＤＨＡに存在するような高度な不飽和を含む環境では一般的である。表１０での結果はＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｅｐａｃｉａ、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａおよびＣｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｓｃｏｓｕｍから抽出したリパーゼ類がＡＲＡをＭＣＴ基質に組入れる最も効率的な酵素群である。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｅｐａｃｉａおよびＣｈｒｏｍｏｂｅｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｓｃｏｓｕｍは食品応用には認可されていないので、他の２種類のリパーゼがＡＲＡとＭＣＴの酸分解に使用される。
【０１２５】
表１１．ＭＣＴとＥＰＡを用いたときの異なる酵素類の酸分解活性度
――――――――――――――――――――――――――――――――――
リパーゼ源                                    転換％（２４時間）
――――――――――――――――――――――――――――――――――
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ                        ２
Ｃａｎｄｉｄａ  Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ                    ２２
Ｃａｎｄｉｄａ  ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ                    ３
Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ                                ２５
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ            ３
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｅｐａｃｉａ                  ２５
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ａｒｒｈｉｚｕｓ                      ２２
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｎｉｖｅｕｓ                            ２
Ｐｏｒｃｉｎｅ  ｐａｎｃｒｅａｓ  ｌｉｐａｓｅ            ３
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ                    １４
Ｃａｎｄｉｄａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ                      ３
Ｍｕｃｏｒ  ｊａｖａｎｉｃｕｓ                          ２９
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ              ７
Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ                      ３０
Ｗｈｅａｔ  ｇｅｒｍ                                      ３
Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｓｃｏｓｕｍ        ２５
Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ  
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ａ                              ６
Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ｂ                            １４
――――――――――――――――――――――――――――――――――
【０１２６】
反応条件は表１で説明した如くであるが、一箇所の変更があり、即ちＥＰＡ（０．６ｇｒ）を脂肪酸として使用した。
【０１２７】
表１２．ＭＣＴとＤＨＴを用いたときの異なる酵素類の酸分解活性度
――――――――――――――――――――――――――――――――――
リパーゼ源                                    転換％（２４時間）
――――――――――――――――――――――――――――――――――
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ                        ２
Ｃａｎｄｉｄａ  Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ                    ２４
Ｃａｎｄｉｄａ  ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ                    ２
Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ                                ２７
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ            ３
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｅｐａｃｉａ                  １９
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ａｒｒｈｉｚｕｓ                      ２１
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｎｉｖｅｕｓ                            ３
Ｐｏｒｃｉｎｅ  ｐａｎｃｒｅａｓ  ｌｉｐａｓｅ            ５
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ                      ２
Ｃａｎｄｉｄａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ                      ３
Ｍｕｃｏｒ  ｊａｖａｎｉｃｕｓ                            ２
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ              ５
Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ                      １６
Ｗｈｅａｔ  ｇｅｒｍ                                      ６
Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｓｃｏｓｕｍ        １２
Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ  
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ａ                            １１
Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ｂ                            １０
――――――――――――――――――――――――――――――――――
【０１２８】
反応条件は表１で説明した如くであるが、一箇所の変更があり、即ちＤＨＡ（０．６５ｇｒ）を脂肪酸として使用した。
【０１２９】
表１１および表１２は、数種のリパーゼ類はＥＰＡおよびＤＨＡについての確実な酸加水分解活性度を、両方が別々にＭＣＴとエステル交換を行っていれば示すことを表している。表１１および表１２に表された結果はＣａｎｄｉｄａ  Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ、Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ｃｅｐａｃｉａ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ａｒｒｈｉｚｕｓおよびＲｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉから抽出したリパーゼ類は、ＭＣＴ内にＤＨＡおよびＥＰＡを組入れるのに最も効率的な酵素群であることを表す。
【０１３０】
これらの結果は異なる型の長鎖脂肪酸群は、有機媒体中での応用に適応させた異なるリパーゼ群を用いることでＭＣＴ分子類のｓｎ−１位置に効率的に組み込むことができることを示す。食品用に認定されていて、ＭＣＴ分子のｓｎ−１位置で結合した中鎖脂肪酸アシル基類を長鎖脂肪酸アシル基類と交換する最も活性的なリパーゼ類が特定され、Ｃａｎｄｉｄａ  Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ、Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ａｒｒｈｉｚｕｓ、Ｍｕｃｏｒ  ｊａｖａｎｉｃｕｓ、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ、Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓｅおよびＬｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｐａｓｅ  Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ａから抽出した酵素群が含まれる。本結果はＭＣＴ分子中への多価不飽和ＦＡｓ（ＰＵＦＡｓ）の組入れは、有機合成に適応させた酵素類による適応した反応系を用いても可能であることも示す。
【実施例２】
【０１３１】
構造化されたトリグリセリド類の合成
当該酸分解またはエステル交換反応はＭＣＴ１０ｇと同量の遊離脂肪酸または脂肪酸エチルエステルに固定化リパーゼ調製液１ｇを加えて開始する。当該反応混合物は５０℃で２時間から８時間振とうする。当該固定化酵素は繰返して使用されて、即ち当該反応の完了後、当該反応容器に固定化酵素を残したまま、当該反応混合物をＭＣＴおよび脂肪酸か脂肪酸エチルエステルを含む新しく調製した反応混合物に置き換えて反応を続ける。この後、当該トリグリセリド混合物は分子蒸留系を用いて単離するが、１２０℃の温度および０．００５ｍｍＨｇの真空での第１の蒸留画分には主に中鎖および長鎖遊離脂肪酸類またはそれらのエチルエステル類と部分的に未反応ＭＣＴを含有する。当該媒体中の過剰なＭＣＴは２００℃、０．００５ｍｍＨｇの圧で蒸留される。当該得られた油は主に１個の長鎖脂肪酸をｓｎ−１位置に有する反応ＭＣＴ（８０％まで）および２個の長鎖脂肪酸アシル基をｓｎ−１とｓｎ−３の位置に有する反応ＭＣＴも含有する。当該油を酸化から守るために、アルファ−トコフェロール（構造化された油１ｇ当たり２ｍｇ）を構造化された油に添加する。この油は乳化する前に滅菌フィルター（孔径０．２μｍ）を通すろ過で滅菌する。
【実施例３】
【０１３２】
予め決めた含量脂肪酸類の構造化されたトリグリセリド類の調製
５８．３％のＣ８および４１．７％のＣ１０からなる出発原料のＭＣＴｓ（１００ｇ、０．２モル）を特定の長鎖脂肪酸供与体、好ましくは遊離脂肪酸か脂肪酸エチルエステル（０．２４モル）と混合する。当該溶液を５５℃に加熱して均一な混合物とする。Ｌｉｐｏｚｙｍｅ  ＲＭ  ＩＭまたはいずれかの他のリパーゼ調製液のような１，３−位置特異性のリパーゼ（１０ｇ）を当該反応混合物に添加した。当該反応混合物を５５℃で８時間振とうした。当該酵素を当該反応媒体から繰り返し使用のためにろ過して取除いた。当該ろ液を分子蒸留にかけ、第１の画分を１２０℃、圧０．００５ｍｍＨｇで回収したが、これには未反応脂肪酸類および当該反応中で生じた中鎖脂肪酸類が含有されている。第二の画分は温度２００℃、圧０．００５ｍｍｇで回収したが、これには主に未反応ＭＣＴｓが主に含有されていた。当該蒸留反応混合物の残留物（約９０ｇ）には主に特定長鎖脂肪酸（８０〜９０％）がｓｎ−１位置にモノアシル化したＭＣＴｓ、および出発原料中に存在した特定の長鎖脂肪酸でｓｎ−１およびｓｎ−３位置が主にジアシル化されているＭＣＴｓを含有していた。異なる比率の反応残留物を混合し、形式、濃度およびグリセロール骨格での結合脂肪酸の位置に関して望ましい構造化されたトリグリセリド類を得た。アルファ−トコフェロール（２ｍｇ／油１ｇ）を乳化前に当該構造化されたトリグリセリド類混合物に添加した。
【実施例４】
【０１３３】
アラキドン酸を含有する構造化されたトリグリセリド混合物の調製
ＭＣＴｓ（１００ｇ、０．２モル）およびアラキドン酸（遊離またはそのエチルエステル０．２４モル）またはＡＲＡとＤＨＡをそれぞれ約２０％（５０ｇ）を含有するＭａｒｔｅｋ'ｓ油のどちらかを混合して均一な溶液を得た。Ｌｉｓｏｚｙｍｅ  ＲＭ  ＩＭのような１，３−位置特異性のリパーゼ（１０ｇ）または何れか他のリパーゼ調製液を当該反応混合物に添加した。当該反応混合物を５０℃で８時間振とうした。当該酵素を繰り返し使用のために当該反応媒体からろ過して除いた。当該ろ液を分子蒸留にかけたが、第１の画分は温度１２０℃、圧０．００５ｍｍＨｇで回収したが、それには主に未反応脂肪酸類またはそれらのエチルエステルおよび当該反応で生じた中鎖脂肪酸類を含有していた。第２の画分は温度２００℃、圧０．００５ｍｍＨｇにて回収したが、それには主に未反応ＭＣＴｓが含有されていた。当該残留物（約９０ｇ）は主として特定の長鎖脂肪酸がｓｎ−１位置でモノアシル化したＭＣＴｓ（８０〜９０％）および出発原料中に存在した特定の長鎖脂肪酸がｓｎ−１とｓｎ−３位置（１０〜２０％）で主としてジアシル化したＭＣＴｓを含有していた。
【実施例５】
【０１３４】
当該構造化されたトリグリセリド類を含んだエマルションの調製
２００ｇの当該構造化されたトリグリセリド調製液を上記して開示した手順（実施例２）に従って大規模に調製した。当該構造化されたトリグリセリド調製液を２２．５ｇのグリセリン、１２ｇのリン脂質（Ｌｉｐｏｉｄ  Ｅ  ８０）および７６５．５ｇの蒸留水からなる均一な混合物に加えて望ましいｐＨ値に調整した。乳化安定剤としてオレイン酸ナトリウム（０．３ｇ）の当該混合物への添加は状況による。当該混合物を１０，０００ｒｐｍのホモジナイザー（Ｕｌｔｒａｔｕｒｒａｘ）で数回均一化した。当該エマルションの調製用に採用したすべての段階で、温度は７０℃を超えない。当該得られたマクロエマルションを更に２，６００ｐｓｉの高圧ホモジナイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）で５分間４０℃未満の温度で更に処理した。この処理後、当該エマルションは孔径０．２μｍの膜フィルターを通過させた。
【０１３５】
非経口栄養分の組成物はかくして以下のようである：
構造化されたトリグリセリド類−２０％（ｗ／ｖ）
アルファ−トコフェロール−１．８ｍｇ／脂肪酸１ｇ
リン脂質−１２ｇ／リットル
グリセリン−２５ｇ／Ｌ
水で１リットルとする。
【０１３６】
前記脂質エマルションの２００ｍｌをプラスチック製袋に充填した後、当該プラスチック製袋につき高圧蒸気を用い、１２１℃で２０分間滅菌し、栄養分エマルション組成物を得た。
【実施例６】
【０１３７】
構造化されたトリグリセリド組成物の調製
本実施例は構造化されたトリグリセリド類の脂肪酸組成を説明する。表１３で示したように、ＭＣＦＡ、ＬＣＦＡおよびＶＬＣＦＡは当該構造化されたトリグリセリド類の全ＦＡの重量でそれぞれ４０〜５０％、３５〜５５％および４．５〜５．５％を構成する。当該構造化されたトリグリセリド類中でのω−６のω−３に対する比は１．７５である。
【０１３８】
表１３．構造化されたトリグリセリド類の脂肪酸組成（重量％）
カプロン酸                  ６：０                ０〜５
カプリル酸                  ８：０              ２０〜３０
カプリン酸                １０：０              １０〜３０
ラウリン酸                １２：０                ０〜５
ミリスチン酸              １４：０                ０〜５
パルミチン酸              １６：０                ５〜３０
パルミトオレイン酸        １６：１                ０〜５
ステアリン酸              １８：０                ０〜５
オレイン酸                １８：１              １０〜３０
リノール酸                １８：２  ω−６      １０〜３０
アルファ−リノレン酸      １８：３  ω−３        ５〜１５
アラキドン酸（ＡＡ）      ２０：４  ω−６        １〜５
エイコサペンタエン酸      ２０：５  ω−３        ０〜５
（ＥＰＡ）
ドコサヘキサエン酸        ２２：６  ω−３        １〜５
（ＤＨＡ）
【実施例７】
【０１３９】
構造化されたトリグリセリド組成物の調製
本実施例は構造化されたトリグリセリド類の脂肪酸組成を示す。表１４に示したように、ＭＣＦＡ、ＬＣＦＡおよびＶＬＣＦＡは当該構造化されたトリグリセリド類中の全ＦＡの重量でそれぞれ４５、５０．５および４．５％を構成する。当該構造化されたトリグリセリド類中のω−６のω−３脂肪酸に対する比率は１．７５である。
【０１４０】
表１４．構造化されたトリグリセリド類の脂肪酸組成（％）
カプロン酸                  ６：０                ２．５
カプリル酸                  ８：０              ３０
カプリン酸                １０：０              １０
ラウリン酸                １２：０                ２．５
パルミチン酸              １６：０              １０
ステアリン酸              １８：０                ２．５
オレイン酸                １８：１              １５
リノール酸                １８：２  ω−６      １６
アルファ−リノレン酸      １８：３  ω−３        ７
アラキドン酸（ＡＡ）      ２０：４  ω−６        １．５
エイコサペンタエン酸      ２０：５  ω−３        １．５
（ＥＰＡ）
ドコサヘキサエン酸        ２２：６  ω−３        １．５
（ＤＨＡ）
【０１４１】
当技術分野の当事者であれば、本発明は本明細書の上で特に示し、本明細書にて説明されたことで制限されることないことは理解するであろう。むしろ本発明の範囲は以下の請求項で規定される。
【図面の簡単な説明】
【０１４２】
【図１】図１は溶媒無しにおけるＭＣＴおよび遊離脂肪酸類の間におけるリパーゼ触媒による酸分解反応の図式的な説明を示す。Ｍは中鎖脂肪酸のアシル基を示し、Ｌｃは長鎖または超長鎖脂肪酸のアシル基を示す。
【図２Ａ】図２Ａ〜ＢはＭＣＴの酸分解反応の前後におけるＨＰＬＣクロマトグラム群を示す。図２Ａでのピーク１は遊離脂肪酸を表し、即ちパルミチン酸であり、ピーク群２，３，４および５は当該反応前のＭＣＴを示し、そしてピーク６は内部標準のトリラウリンである。
【図２Ｂ】図２Ａ〜ＢはＭＣＴの酸分解反応の前後におけるＨＰＬＣクロマトグラム群を示す。図２Ｂでのピーク１，２および３は遊離した中鎖脂肪酸類を表し、ピーク４は未反応のパルミチン酸である。ピーク群５，６，７および８は反応媒質中の未反応ＭＣＴで、ピーク群９，１０および１１は１種の長鎖脂肪酸群を含有する新規生成物を表す。ピーク群１２および１３は２種の長鎖脂肪酸アシル基を含む新規生成物群である。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【国際調査報告】
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