(57)【要約】  粉末剤はIL-13拮抗剤を含み、この粉末剤の空気動力学的粒径質量中央値(MMAD)は約10μm未満である。組成物はIL-13拮抗剤を含むスプレードライ粒子を含む。対象者の肺にIL-13拮抗剤を投与する方法は：IL-13拮抗剤を含む乾燥粉末組成物を分散させてエアゾールを形成する工程；及び対象者による上記エアゾールの吸入によって対象者の肺にエアゾールを送達し、それにより対象者の肺へのIL-13拮抗剤の送達を確実にする工程を含む。IL-13に関連した症状を治療する方法は：IL-13拮抗剤を含む治療上有効な量の乾燥粉末剤を肺に投与する工程を含む。IL-13拮抗剤を含む粉末剤を製造する方法は：IL-13拮抗剤、任意の添加剤及び溶媒を組み合わせて混合物又は溶液を形成する工程；及びこの混合物又は溶液をスプレードライして粉末剤を得る工程を含む。
2007522246.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
IL-13拮抗剤を含む粉末剤であって、約10μm未満の空気動力学的粒径質量中央値(MMAD)を有する粉末剤。
【請求項２】
上記IL-13拮抗剤が、IL-13Rα1、IL-13Rα2、IL-13の抗体、それらのフラグメント、それらの相同体、及びそれらの共役体から選択される少なくとも１つのIL-13結合メンバーを含む、請求項１に記載の粉末剤。
【請求項３】
上記IL-13拮抗剤がIL-13Rα2及びIL-13Rα2-IgG融合蛋白から選択される少なくとも１つのメンバーを含む、請求項１に記載の粉末剤。
【請求項４】
上記IL-13拮抗剤が粉末剤の全重量に対して約2 wt%から100 wt%までの範囲の量で存在する、請求項１に記載の粉末剤。
【請求項５】
上記IL-13拮抗剤が粉末剤の全重量に対して約5 wt%から約60wt%までの範囲の量で存在する、請求項１に記載の粉末剤。
【請求項６】
上記MMADが約0.5μmから約4μmまでの範囲に及ぶ、請求項１に記載の粉末剤。
【請求項７】
約0.4から約0.95までの範囲に及ぶ微粒子分画(FPF<3.3μm)を有する、請求項１に記載の粉末剤。
【請求項８】
約0.5から約0.7までの範囲に及ぶ微粒子分画(FPF<4.7μm)を有する、請求項１に記載の粉末剤。
【請求項９】
さらに医薬上許容しうる添加剤を含む、請求項１に記載の粉末剤。
【請求項１０】
上記の医薬上許容しうる添加剤が炭水化物、アミノ酸、ペプチド及び緩衝剤から選択される少なくとも1つのメンバーを含む、請求項９に記載の粉末剤。
【請求項１１】
上記の医薬上許容しうる添加剤が炭水化物を含む、請求項１０に記載の粉末剤。
【請求項１２】
上記炭水化物がセロビオース、デキストラン類、デキストロース、フルクトース、ガラクトース、グルシトール、グルコース、ラクチトール、ラクトース、マルトデキストラン類、マルトース、マンニトール、マンノース、メレチトース、ミオイノシトール、ピラノシル、ラフィノース、ソルビトール、ソルボース、デンプン類、スクロース、トレハロース及びキシリトールから選択される少なくとも1つのメンバーを含む、請求項１１に記載の粉末剤。
【請求項１３】
上記炭水化物がスクロース及びマンニトールから選択される少なくとも1つのメンバーを含む、請求項１１に記載の粉末剤。
【請求項１４】
上記の医薬上許容しうる添加剤がアミノ酸を含む、請求項１０に記載の粉末剤。
【請求項１５】
上記の医薬上許容しうる添加剤がペプチドを含む、請求項１０に記載の粉末剤。
【請求項１６】
上記ペプチドがジロイシン、leu-leu-gly、leu-leu-ala、leu-leu-val、leu-leu-leu、leu-leu-ile、leu-leu-met、leu-leu-pro、leu-leu-phe、leu-leu-trp、leu-leu-ser、leu-leu-thr、leu-leu-cys、leu-leu-tyr、leu-leu-asp、leu-leu-glu、leu-leu-lys、leu-leu-arg、leu-leu-his、leu-leu-nor、leu-gly-leu、leu-ala-leu、leu-val-leu、leu-ile-leu、leu-met-leu、leu-pro-leu、leu-phe-leu、leu-trp-leu、leu-ser-leu、leu-thr-leu、leu-cys-leu、leu-try-leu、leu-asp-leu、leu-glu-leu、leu-lys-leu、leu-arg-leu、leu-his-leu、及びleu-nor-leuから選択される少なくとも１つのメンバーを含む、請求項１５に記載の粉末剤。
【請求項１７】
上記ペプチドがジロイシン及びトリロイシンから選択される少なくとも１つのメンバーを含む、請求項１６に記載の粉末剤。
【請求項１８】
上記の医薬上許容しうる添加剤が緩衝剤を含む、請求項１０に記載の粉末剤。
【請求項１９】
上記緩衝剤がクエン酸ナトリウム、リン酸塩及びクエン酸から選択される少なくとも１つのメンバーを含む、請求項１８に記載の粉末剤。
【請求項２０】
免疫変調性サイトカイン及びサイトカイン拮抗剤から選択される少なくとも１つの追加的メンバーをさらに含む、請求項１に記載の粉末剤。
【請求項２１】
上記の少なくとも１つの追加的メンバーがIL-4拮抗剤を含む、請求項２０に記載の粉末剤。
【請求項２２】
粉末剤を40℃及び75%の相対湿度で1ヶ月間貯蔵した結果としての可溶性凝集の増加が、サイズ排除クロマトグラフィーによる測定で2.5%未満となる、請求項１に記載の粉末剤。
【請求項２３】
粉末剤を40℃及び75%の相対湿度で1ヶ月間貯蔵した結果としての共有結合性凝集の増加が、SDS-PAGEによる測定で2.5%未満となる、請求項１に記載の粉末剤。
【請求項２４】
IL-13拮抗剤を含むスプレードライ粒子を含む組成物。
【請求項２５】
上記IL-13拮抗剤が、IL-13Rα1、IL-13Rα2、IL-13の抗体、それらのフラグメント、それらの相同体、及びそれらの共役体から選択される少なくとも１つのIL-13結合メンバーを含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
上記IL-13拮抗剤がIL-13Rα2及びIL-13Rα2-IgG融合蛋白から選択される少なくとも１つのメンバーを含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２７】
上記IL-13拮抗剤がスプレードライ粒子の全重量に対して約2 wt%から100 wt%までの範囲の量で存在する、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２８】
上記IL-13拮抗剤がスプレードライ粒子の全重量に対して約5 wt%から約60wt%までの範囲の量で存在する、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２９】
約0.5μmから約5μmまでの範囲に及ぶ空気動力学的粒径質量中央値(MMAD)を有する粉末剤を含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項３０】
約0.4から約0.95までの範囲に及ぶ微粒子分画(FPF<3.3μm)を有する粉末剤を含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項３１】
約0.5から約0.7までの範囲に及ぶ微粒子分画(FPF<4.7μm)を有する粉末剤を含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項３２】
さらに医薬上許容しうる添加剤を含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項３３】
上記の医薬上許容しうる添加剤が炭水化物、アミノ酸、ペプチド及び緩衝剤から選択される少なくとも1つのメンバーを含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
上記の医薬上許容しうる添加剤が炭水化物を含む、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
上記炭水化物がセロビオース、デキストラン類、デキストロース、フルクトース、ガラクトース、グルシトール、グルコース、ラクチトール、ラクトース、マルトデキストラン類、マルトース、マンニトール、マンノース、メレチトース、ミオイノシトール、ピラノシル、ラフィノース、ソルビトール、ソルボース、デンプン類、スクロース、トレハロース及びキシリトールから選択される少なくとも1つのメンバーを含む、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
上記炭水化物がスクロース及びマンニトールから選択される少なくとも1つのメンバーを含む、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３７】
上記の医薬上許容しうる添加剤がアミノ酸を含む、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３８】
上記の医薬上許容しうる添加剤がペプチドを含む、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３９】
上記ペプチドがジロイシン、leu-leu-gly、leu-leu-ala、leu-leu-val、leu-leu-leu、leu-leu-ile、leu-leu-met、leu-leu-pro、leu-leu-phe、leu-leu-trp、leu-leu-ser、leu-leu-thr、leu-leu-cys、leu-leu-tyr、leu-leu-asp、leu-leu-glu、leu-leu-lys、leu-leu-arg、leu-leu-his、leu-leu-nor、leu-gly-leu、leu-ala-leu、leu-val-leu、leu-ile-leu、leu-met-leu、leu-pro-leu、leu-phe-leu、leu-trp-leu、leu-ser-leu、leu-thr-leu、leu-cys-leu、leu-try-leu、leu-asp-leu、leu-glu-leu、leu-lys-leu、leu-arg-leu、leu-his-leu、及びleu-nor-leuから選択される少なくとも１つのメンバーを含む、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
上記ペプチドがジロイシン及びトリロイシンから選択される少なくとも１つのメンバーを含む、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４１】
上記の医薬上許容しうる添加剤が緩衝剤を含む、請求項３３に記載の組成物。
【請求項４２】
上記緩衝剤がクエン酸ナトリウム、リン酸塩及びクエン酸から選択される少なくとも１つのメンバーを含む、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４３】
免疫変調性サイトカイン及びサイトカイン拮抗剤から選択される少なくとも１つの追加的メンバーをさらに含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項４４】
上記の少なくとも１つの追加的メンバーがIL-4拮抗剤を含む、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４５】
粉末剤を40℃及び75%の相対湿度で1ヶ月間貯蔵した結果としての可溶性凝集の増加が、サイズ排除クロマトグラフィーによる測定で2.5%未満となる、請求項２４に記載の組成物。
【請求項４６】
粉末剤を40℃及び75%の相対湿度で1ヶ月間貯蔵した結果としての共有結合性凝集の増加が、SDS-PAGEによる測定で2.5%未満となる、請求項２４に記載の組成物。
【請求項４７】
対象者の肺にIL-13拮抗剤を投与する方法であって：
IL-13拮抗剤を含む乾燥粉末組成物を分散させてエアゾール（乾燥粉末組成物が約10μm未満の空気動力学的粒径質量中央値(MMAD)を有する）を形成する工程；及び
対象者による上記エアゾールの吸入によって対象者の肺にエアゾールを送達し、それにより対象者の肺へのIL-13拮抗剤の送達を確実にする工程
を含む方法。
【請求項４８】
上記組成物が治療上有効な量のIL-13拮抗剤を含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
上記組成物が約0.1mgから約30mgの範囲の量のIL-13拮抗剤を含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】
治療上有効な量のIL-13拮抗剤が対象者の肺に送達されるように上記方法が繰り返される、請求項４７に記載の方法。
【請求項５１】
上記IL-13拮抗剤が、IL-13Rα1、IL-13Rα2、IL-13の抗体、それらのフラグメント、それらの相同体、及びそれらの共役体から選択される少なくとも１つのIL-13結合メンバーを含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項５２】
上記IL-13拮抗剤がIL-13Rα2及びIL-13Rα2-IgG融合蛋白から選択される少なくとも１つのメンバーを含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項５３】
上記組成物がスプレードライ粉末剤を含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項５４】
上記組成物が乾燥粉末吸入器によって送達される、請求項４７に記載の方法。
【請求項５５】
上記組成物が定量吸入器によって送達される、請求項４７に記載の方法。
【請求項５６】
IL-13に関連した症状を治療する方法であって：
IL-13拮抗剤を含む治療上有効な量の乾燥粉末剤（乾燥粉末剤は約10μm未満の空気動力学的粒径質量中央値(MMAD)を有する）を肺に投与する工程
を含む方法。
【請求項５７】
上記のIL-13に関連した症状が、炎症、喘息、アレルギー、繊維症、移植拒絶反応、肉芽腫、硬化症、進行性全身性硬化症及び住血吸虫症から選択される少なくとも1つの症状を含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
上記の少なくとも１つの症状が、特発性肺線維症、慢性移植拒否反応、ブレオマイシン誘導性肺線維症、放射線誘発性肺線維症、肺肉芽腫、進行性全身性硬化症、住血吸虫症及び肝線維症を含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
上記の治療上有効な量が約0.05mg/kgから約5mg/kgまでの範囲に及ぶ、請求項５６に記載の方法。
【請求項６０】
IL-13拮抗剤を含む粉末剤を製造する方法であって：
IL-13拮抗剤、任意の添加剤及び溶媒を組み合わせて混合物又は溶液を形成する工程；及び
この混合物又は溶液をスプレードライして粉末剤を得る工程
を含む方法。
【請求項６１】
上記粉末剤が乾燥している、請求の範囲第６０項に記載の方法。
【請求項６２】
上記粉末剤が肺への投与に適している、請求の範囲第６０項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本文書は、2004年2月12日に出願された米国仮出願No. 60/544,528に基づき米国特許法§119(e)による優先権を主張するものであり、その開示の全てを参照により本明細書に含める。
【０００２】
本発明は一般的には、インターロイキン-13（IL-13）拮抗剤に関する。例えば、本発明はIL-13拮抗剤を含む粉末剤又はスプレードライ粒子に関する。本発明はまたIL-13拮抗剤を肺に投与する方法に関する。本発明はさらに、肺にIL-13拮抗剤を投与することによるIL-13に関連した症状の治療方法に関する。さらにまた、本発明はIL-13拮抗剤を含む粉末剤を製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
インターロイキン-13(又は「IL-13」)は活性化T細胞によって生産されるサイトカインであり、喘息、アレルギー、アトピー及び炎症性反応における主要因子として関連付けられてきた。特に、IL-13は、B細胞増殖を促進し、B細胞を誘導してIgEを生産し、内皮細胞上のVCAM-1の発現を増加させ、単球上のクラスII組織適合性主複合体抗原及び様々な接着分子の発現を増強すると考えられている。Moy et al. (2001) J. Mol. Biol. 310:219-230を参照のこと。臨床的には、IL-13の発現は他の症状の中でも気道の過敏性(又は「AHR」)及び炎症に関係している。重要なことに、喘息患者では気道のIL-13レベルが増加している。Sypek et al. (2002) Am. J. Physiol. Lung. Cell Mol. Physiol. 282(1):L44-49。近年、IL-13はアレルギー性喘息において重大な役割を果たすことが示されている。Andrews et al. (2001) J. Immunol. 166(3):1716-1722。
【０００４】
IL-13は、インターロイキン-13受容体(又は「IL-13R」)、すなわち、ある細胞の表面上に存在する内在性の蛋白に結合する。IL-13と結合するとIL-13Rは生物学的信号を変換し、それによって最終的に臨床症状につながる連鎖反応を引き起こす。IL-13Rにはいくつかのサブタイプ(例えばIL13Rα1及びIL13Rα2)があり、２つ以上の結合鎖から成ることが知られている。ネズミのIL-13結合鎖の単離及び発現が米国特許 No. 6,268,480に記載されている。
【０００５】
IL-13は内在性の細胞表面IL-13Rにではなく溶液中で可溶性のIL-13R(すなわち、非結合型のIL-13R)に優先的に結合すると考えられ、それにより細胞の活性化を妨げ、IL-13により誘導される生体反応が遮断される。したがって、IL-13の喘息を誘導する作用は、外生IL-13Rの投与によって減衰すると考えられる。米国特許 No. 6,248,714 及び Chiaramonte et al. (1999) J. Immunol. 162(2):920-930を参照のこと。
【０００６】
多くの蛋白と同様に、IL-13Rは相対的に安定性が低い。IL-13Rは、一定の条件下(例えば、酸性又は塩基性が高いpH、高温)では分解及び／又は凝集する傾向にあり、酸化剤及び内在性のプロテアーゼの影響を受けやすい。IL-13Rの固有の化学及び物理的な不安定性は医薬製剤上、特に問題になる。IL-13Rを含む薬剤の皮下投与についての記述がある。米国特許出願公報 2003/0211104を参照のこと。
【０００７】
IL-13R自体に関連した問題とは別に、通常皮下及び静脈内投与に用いられる製剤のような溶液ベースの製剤にはそれ自身問題がある。第一に、溶液ベースの製剤はより多くの場所を取り固形製剤よりも多くの注意を必要とするためコストが高くなる。さらに、通常、溶液ベースの製剤は典型的には冷蔵され(例えば、2〜8 ℃の環境中に維持され)、そのことにより貯蔵及び輸送の選択肢がさらに制限される。その上、多くの溶液ベースの製剤は時間経過により蛋白濃度の減少を示し、それはおそらく溶液中でより高次の分子凝集体が形成されることによる。そのような製剤は多くの場合、溶液の不安定性を最小限にするために緩衝剤及び/又は酸化防止剤のような安定化用添加物を追加しなければならない。従って、IL-13Rの固体又は粉末ベースの組成物であって、特に製造及び貯蔵の間にいずれも安定で固体形態で投与できる組成物が提供されることが望ましいと考えられる。
【０００８】
粉末製剤は溶液製剤に代わるものであり、蛋白は粉末形態が望ましい場合、凍結乾燥物として調製されることが最も多い。過去数年の間、スプレードライ法は特にエアゾール投与用の多くの治療用蛋白ベース粉末剤を調製するための手法として使用されてきた。例えば、WO 96/32149、WO 95/31479及びWO 97/41833を参照のこと。残念なことに、ある種の蛋白及び特にサイトカインは、スプレードライの間に分解しやすく、二次構造を損失しやすい。Maa et al. (1998) J. Pharm. Sciences, 87(2):152-159を参照のこと。
【０００９】
しかしながら、IL-13拮抗剤を含む粉末剤及びスプレードライ粒子は依然として必要である。IL-13拮抗剤組成物を製造し使用する方法も依然として必要である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
従って、本発明は、IL-13拮抗剤を含む、粉末剤及びスプレードライ粒子のような組成物を提供するものである。本発明はまた、IL-13拮抗剤を含む組成物を製造し使用する方法に関するものである。本発明の他の特徴及び利点は以下の発明の記載中に示され、一部はその記載から明白になるか、或いは本発明の実施により習得されるであろう。本発明はここに記述する明細書及び請求項中に特に示される組成物及び方法によって十分に理解され達成されるであろう。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明の第一の観点は、約10μm未満の空気動力学的粒径質量中央値(MMAD)を有する粉末剤のようなIL-13拮抗剤を含む粉末剤に関するものである。
【００１２】
本発明の第二の観点は、IL-13拮抗剤を含むスプレードライ粒子を含む組成物に関するものである。
【００１３】
本発明の第三の観点は、対象者の肺にIL-13拮抗剤を投与する方法に関するものである。この方法はIL-13拮抗剤を含む組成物を分散させてエアゾールを形成し、対象者による上記エアゾールの吸入によって対象者の肺にエアゾールを送達し、それにより対象者の肺へのIL-13拮抗剤の送達を確実にすることを含んでいる。
【００１４】
本発明の第四の観点は、治療上有効な量のIL-13拮抗剤を肺に投与することにより、IL-13に関連した症状を治療する方法に関するものである。
【００１５】
本発明の第五の観点は、IL-13の拮抗剤を含む粉末剤を製造する方法に関するものである。この方法はIL-13拮抗剤、任意の添加剤、及び溶媒を組み合わせて混合物又は溶液を形成し、この混合物又は溶液をスプレードライして粉末剤を得ることを含む。
【００１６】
表示した複数の非限定的な図面に関する以下の発明の記載により、本発明をさらに説明する：
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図1A及び1Bは、本発明の2種類の製剤の走査型電子顕微鏡写真である。図1Aは、実施例5の製剤Aの走査型電子顕微鏡写真(「SEM」)であり、図1Bは実施例9の製剤BのSEMである。
【００１８】
【図２】図2A及び2Bはそれぞれ、乾燥剤を入れたホイルパウチの中に封入したブリスターパックに入れて40℃/75% RHで1か月貯蔵した後の、製剤A及びBのSEM画像である。
【００１９】
【図３】図3Aは製剤Aの開始時の粒子分布プロフィールを示し、図4Aは乾燥剤を用いて40℃、75% の相対湿度でホイルパウチ中に入れたブリスターパック中で1か月貯蔵した後の製剤Aの粒子分布プロフィールを示す。
【００２０】
【図４】図3Bは製剤Bの開始時の粒子分布プロフィールを示し、図4Bは乾燥剤を用いて40℃、75% の相対湿度でホイルパウチ中に入れたブリスターパック中で1か月貯蔵した後の製剤Bの粒子分布プロフィールを示す。
【００２１】
【図５】図5は、喘息性ヒツジにおける肺抵抗性に対する複数のビヒクル投与(比較例)の効果を示す。
【００２２】
【図６】図6は、喘息性ヒツジにおける肺抵抗性に対するビヒクル(比較例)の肺用量(mg)増加の効果を示す。
【００２３】
【図７】図７は、喘息性ヒツジにおける肺抵抗性に対するビヒクル(比較例)の肺用量(mg/kg)増加の効果を示す。
【００２４】
【図８】図8は、ヒツジにおける抗原投与に対する反応についてビヒクル投与(比較例)の効果を示す。
【００２５】
【図９】図9は、ヒツジの喘息反応における本発明によるsIL-13Rα2-IgG処置の効果を示す。
【００２６】
【図１０】図10Aは製剤Aの開始時の粒子分布プロフィールを示し、図10Bは乾燥させてホイルパウチ中に貯蔵したブリスターパックに入れて輸送した後の製剤Aの粒子分布プロフィールを示す。
【００２７】
図10Cはビヒクル1(比較例)の開始時の粒子分布プロフィールを示し、図10Dは乾燥させてホイルパウチ中に貯蔵したブリスターパックに入れて輸送した後のビヒクル1(比較例)の粒子分布プロフィールを示す。
【００２８】
【図１１】図11A及び11Bは、乾燥剤とともにホイルパウチ中に貯蔵したブリスターパックに入れて輸送する前(11A)と後(11B)の、本発明のsIL-13Rα2-IgG製剤のSEM画像である。
【００２９】
【図１２】図12A及び12Bは、乾燥剤とともにホイルパウチ中に貯蔵したブリスターパックに入れて輸送する前(12A)と後(12B)の、ビヒクル-1(比較例)のSEM画像である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３０】
化合物又は成分に言及する場合、他の言及がなければ、その化合物又は成分自身と同様に、化合物の混合物のような他の化合物又は成分との組み合わせも包含する。
【００３１】
前後関係から明らかに他の意図が示される場合でなければ、ここに使用される単数形態「a」、「an」及び「the」は複数のものを含んだ言及である。すなわち、例えば、「an IL-13R」という言及は単一のIL-13Rとともに2つ又はそれ以上の同一又は異なるIL-13Rも含んでおり、「an」添加剤という言及は単一の添加剤とともに2つ又はそれ以上の同一又は異なる添加剤も言及している等である。
【００３２】
さらに考察する前に、以下の用語の定義は本発明の理解を助けるものとなるであろう。
【００３３】
「アミノ酸」という用語は、アミノ基及びカルボン酸基の両方を含むいずれかの分子を指し、添加剤として使用することができる。上記アミノ基はカルボキシル基に対してベータ位置(すなわち、カルボキシル基の炭素を数えずに、カルボキシル基から2番目の原子)に最も一般的に見られるが、アミノ基は分子内のいずれの位置にあってもよい。上記アミノ酸はさらにアミノ、チオ、カルボキシル、カルボキサミド、イミダゾールなどのような追加の官能基を含んでいてもよい。ここで用いる「アミノ酸」という用語は、アミノ酸とともに、それらに限定されるものではないが、ノルバリン、2-アミノヘプタン酸及びノルロイシンのようなアミノ酸の誘導体も含んでいる。上記アミノ酸は合成品又は自然発生のものでもよく、様々な比率の立体異性体を含むラセミ体又は光学活性形態(D体又はL体)のいずれかで使用されてもよい。上記アミノ酸はそのような化合物のいずれかの組み合わせでもよい。最も好ましいのは自然発生のアミノ酸である。自然発生のアミノ酸とは、フェニルアラニン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、バリン、セリン、プロリン、スレオニン、アラニン、チロシン、ヒスチジン、グルタミン、アスパラギン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システイン、トリプトファン、アルギニン及びグリシンである。
【００３４】
「オリゴペプチド」とは、モノマーがアミノ酸であって、一般的に全部で約100個より少ないアミノ酸、好ましくは25個より少ないアミノ酸であるいずれかのポリマーを意味する。オリゴペプチドという用語は、3個のアミノ酸からなるポリマーと同様に単一のアミド結合により結合した2個のアミノ酸からなるポリマーも含む。
【００３５】
「乾燥した」という表現を粉末剤を言及する際に用いる場合(例えば、「乾燥した粉末剤」）、約10wt%未満の湿気しか含まないことと定義される。組成物の含水率は、約7 wt%未満、約5 wt%未満、約3 wt%未満、又は約2 wt%未満でもよい。所定の組成物の湿気は例えば三菱水分計#CA-06モデルを使用してカール・フィッシャー滴定法により測定することができる。
【００３６】
ここで用いる「添加剤」とは、粒子、粉末剤又は組成物中に存在することが意図された粒子、粉末剤又は組成物の非IL13拮抗剤成分を意味する。従って、緩衝剤、糖類、アミノ酸などのような「添加剤」は意図された製剤の成分であって、不純物(例えば、ほこり)のような製剤の意図されない成分とは対照をなすものである。熱重量分析(「TGA」)も使用することができる。
【００３７】
「治療上有効な量」とは、求める治療効果をもたらすのに必要とされる IL-13拮抗剤(例えば、IL-13R)の量である。必要とされる正確な量は対象者によって異なり、他にも多くの要因の影響を受けると考えられるが、それらはさらに以下で詳細に説明される。しかしながら、当業者はいずれの個々の症例ついても適当な「治療上有効な量」を決定することができるであろう。
【００３８】
「実質的に」という用語は、提示された条件の50%以上が満たされている系を指す。例えば、条件の85%以上、92%以上、又は96%以上が満たされていてもよい。
【００３９】
「IL-13拮抗剤」における「拮抗剤」という用語は、IL-13の活性を減少又は消失させる作用を持つ部分を意味する。本発明での使用に好ましいIL-13拮抗剤は、IL-13に結合する受容体であるが、IL-13に結合する抗体のような他の部分も使用することができる。生体内に投与された場合、外生的に投与されたIL-13拮抗剤が内在性のIL-13に結合し、それにより膜結合型のIL-13受容体に結合できる内在性のIL-13の全体量が減少する。このようにして、IL-13により開始される信号伝達が減少し、それにより、例えば喘息性反応に関連した反応の連鎖反応の程度が弱められる。
【００４０】
「IL-13R」という用語は IL-13に結合する能力があるポリペプチドを意味し、天然由来又は合成された動物(例えばヒト、ネズミなど)の受容体 IL-13R、IL-13Rα1、IL-13Rα2、IL-13Rα1及びIL-4αを含む複合体、それらのフラグメント及び共役体、並びに上記のもののいずれかによる組み合わせを含む。さらに、IL-13Rは例えば、IL-13Rα2-IgG融合蛋白及び他の免疫グロブリン融合蛋白を含む。
【００４１】
ここで用いる「共役体」とは別の分子に共有結合したIL-13拮抗剤を意味する。例えば、共役体は融合蛋白を含む。
【００４２】
「対象者」という用語は、IL-13拮抗剤(例えば、IL-13R)の投与によって予防又は治療することができる症状を患っているか或いはそのような症状になり易い生体を指し、ヒト及び動物の両方を含む。
【００４３】
「任意の」及び「任意に」とは、続いて述べられる状況が発生するかもしれないし、発生しないかもしれないことを意味しており、従ってその記載は状況が発生する例と発生しない例を含んでいる。すなわち、例えば「任意の添加剤」を含む製剤とは、添加剤を欠く製剤とともに1つ以上の添加剤を含む製剤を含んでいる。
【００４４】
本発明の組成物は、それらが吸入療法に適している(すなわち、口又は鼻によって吸い込まれ気道を通って肺に吸入されうる)場合、及び/又は肺への送達(すなわち、肺深部の組織への局所送達及びそこの上皮細胞を通って血液循環への任意の吸収)に適している場合に、「呼吸に適している」とみなされる。本発明の組成物は迅速な作用を提供することができ、例えば、60分未満で治療上有効なレベルを局所に(例えば、局所的は肺組織に)及び/又は全身に(例えば、体循環中に)提供する。喘息系(例えば気道過敏性、炎症など)の治療に関して有利なことに、本発明の組成物は該組成物の標的が患者の気道であることを考慮すると、体循環を得る必要なしに効果的である。
【００４５】
「口での呼吸に適している」組成物とは経口吸入に特に適合した、呼吸に適している組成物である。同様に、「鼻での呼吸に適している」組成物とは鼻からの吸入(すなわち上気道中への鼻腔内送達)に特に適合した、呼吸に適している組成物である。
【００４６】
「放出用量」又は「ED」は、発射又は分散された後に適切な吸入用装置から送達された製剤量の指標を提供するものである。より具体的には、乾燥粉末製剤でEDは、単位量包装から出されて吸入用装置のマウスピースから出た粉末剤のパーセンテージを示す値である。EDは、名目用量(すなわち、発射に先立って適切な吸入用装置に入れられた単位用量あたりの粉末剤の質量)に対する、吸入用装置によって送達された用量の比率として定義される。EDは実験により測定されるパラメーターであり、典型的には患者への投与を模倣して調整された生体外の装置を使用して測定される。ED値を測定するには、典型的には単位用量形態にある名目用量の乾燥粉末を(米国特許No.5,785,049に記載されているような)適切な乾燥粉末吸入器に入れ、次いで始動して粉末剤を分散させる。その後、生じたエアゾールを減圧して装置から取り出し、装置のマウスピースに取り付けられた風袋を測定したフィルタ上に捕獲する。フィルタに到達した粉末剤の量が放出用量となる。例えば、乾燥粉末を含む投薬用製剤 5mgを吸入用装置に入れ、この粉末の分散により、上記のように風袋が測定されたフィルタ上に4mgの粉末が回収された場合、乾燥粉末組成物の放出用量は4mg(送達された用量)/5mg(名目用量)x 100 = 80%となる。非均質の粉末剤については、ED値は、乾燥粉末ではなくむしろ発射後に吸入用装置から出た薬物の送達量の指標となり、粉末の全体重量ではなく薬物量に基づくものとなる。同様に、MDI及び噴霧器の投薬形態では、EDは単位投薬形態から出されて吸入用装置のマウスピースから出た薬物のパーセンテージに対応する。
【００４７】
ここで用いる「分散される」粉末とは、少なくとも約5%、例えば少なくとも約10%、少なくとも約40%、少なくとも約55%、又は少なくとも約70%のED値を有するものである。
【００４８】
本発明の粉末剤は一般に多分散系である(すなわち、幅のある粒径から成る)ため、「粒径質量中央値」又は「MMD」が平均粒径の基準となる。ここで報告されるＭＭＤ値は遠心沈降法によって測定されているが、通常使用される多数の手法(例えば、電子顕微鏡検査、光散乱、レーザー回折)を用いて平均粒径を測定してもよい。典型的には、MMDは約0.5ミクロンから約10ミクロン、より好ましくは約1ミクロンから約5ミクロンまでであろう。
【００４９】
「空気動力学的粒径質量中央値」又は「MMAD」は、分散した粒子の空気動力学的サイズの基準である。空気動力学的粒径はエアゾール化された粉末をその静的性質の面で記述するために使用されるものであり、空気中でその粒子と同じ沈降速度を有する単位密度球体の直径である。空気動力学的粒径は、粒子の粒子形状、密度及び物理的サイズを包含する。ここで用いるMMADは、他の指示がない場合は、カスケード埋伏によって測定されたエアゾール化された粉末の空気動力学的粒子サイズ分布の中心点又は中央値を指す。
【００５０】
「FPF<3.3μm」又は「FPF<4.7μm」におけるような「微粒子分画(FPF)」は、カスケード埋伏による測定で、それぞれ3.3ミクロン又は4.7ミクロン未満となる粉末中の粒子の量として定義される。FPF<3.3μmに関して言えば、このパラメーターは1 cfm(28.3L/min)の流速で操作する場合の時、アンダーソン・インパクターのステージ3での全質量に相当する。粉末の所定量中の規定されたサイズ範囲を満たす粒子の実際の質量を計算することができ、「FPM」と略記される。
【００５１】
「かさ密度」は、圧縮する前の粉末の密度(すなわち、圧縮されていない粉末の密度)を指し、典型的には周知のUSP法によって測定される。典型的には、ここに記載される組成物は、1立方センチメートル当たり0.01から10グラムのかさ密度を有すると思われる。
【００５２】
本発明のIL-13拮抗剤粉末組成物の高次分子凝集体の形成に関して用いられる「本質的に無変化」とは、対応する乾燥前の溶液又は混合液のそれと比較した場合、典型的には5%未満、好ましくは約2%未満のパーセンテージの高次分子凝集体に変化が見られるだけの組成物を指す。
【００５３】
スプレードライ IL-13R粉末剤中のIL-13Rモノマー含有量に関して用いられる「最小変化」とは、対応する乾燥前の溶液又は混合液中のIL-13Rモノマーのレベルと比較して、約10％未満のモノマー含有量の変化(すなわち、減少)を指す。
【００５４】
「相同性」とは、2つのポリヌクレオチド又は2つのポリペプチド部分の間の類似性パーセントを指す。容易に利用可能なコンピュータ・プログラムを用いることができて相同性を分析する上で助けとなるが、例えばALIGN, Dayhoff, M. O. in Atlas of Protein Sequence and Structure M. O. Dayhoff ed., 5 Suppl. 3:353-358, National biomedical Research Foundation, Washington, D.C. が挙げられ、これはペプチド分析に関してSmith and Waterman Advances in Appl. Math. 2:482-489, 1981 の局所的相同性アルゴリズムに適合している。ヌクレオチド配列の相同性を測定するためのプログラムは、Wisconsin Sequence Analysis Package, Version 8 (Genetics Computer Group, Madison, Wis. から入手可能)にあるものが利用でき、例えば、BESTFIT、FASTA及びGAPプログラムであり、これらもSmith and Waterman のアルゴリズムに依存する。これらのプログラムは、製造元が推奨するデフォルトパラメーターを用いて容易に使用され、上に引用したWisconsin Sequence Analysis Packageに記載されている。例えば、特定のヌクレオチド配列の参照配列に対する相同性パーセントは、デフォルトスコアリングテーブル及び6ヌクレオチド位のギャップペナルティにより、Smith and Waterman の相同性アルゴリズムを用いて測定できる。
【００５５】
ここで用いる「腺維症」とは線維組織の(そのような形成が望ましいか望ましくないかにかかわらない)形成を伴う何らかの症状を含む。そのような症状としては、これに限定されるものではないが、結合織炎、腺維腫の形成(線維腫症)、腺維形成(肺性腺維形成を含む)、線維弾性症(心内膜線維弾性症を含む)、線維筋腫の形成、線維性強直、類線維腫の形成、線維腺腫の形成、線維乳頭腫の形成、及び腺維嚢胞炎(嚢胞性線維症を含む)が挙げられる。
【００５６】
概要として、本発明はIL-13拮抗剤組成物及びIL-13拮抗剤を伴う方法に関する。例えば、本発明は約10μm未満の空気動力学的粒径質量中央値(MMAD)を有する粉末剤のようなIL-13拮抗剤を含む粉末剤に関する。
【００５７】
本発明はまた、IL-13拮抗剤を含むスプレードライ粒子を含む組成物に関する。
【００５８】
さらに、本発明は対象者の肺にIL-13拮抗剤を投与する方法に関する。この方法はIL-13拮抗剤を含む組成物を分散させてエアゾールを形成し、対象者による上記エアゾールの吸入によって対象者の肺にエアゾールを送達し、それにより対象者の肺へのIL-13拮抗剤の送達を確実にすることを含んでいる。
【００５９】
さらにまた、本発明は治療上有効な量のIL-13拮抗剤を肺に投与することにより、IL-13に関連した症状を治療する方法に関するものである。
【００６０】
さらに、本発明はIL-13の拮抗剤を含む粉末剤を製造する方法に関するものである。この方法はIL-13拮抗剤、任意の添加剤、及び溶媒を組み合わせて混合物又は溶液を形成し、この混合物又は溶液をスプレードライして粉末剤を得ることを含む。
【００６１】
本発明の具体例としての局面を見ると、上記組成物は1つ以上のIL-13拮抗剤を含み、それらはいくつかの形態を取ってもよい。IL-13拮抗剤はモノクローナル抗体のような抗体でもよい。IL-13拮抗剤は、IL-13の可溶性受容体の形態を取ってもよい。可溶性受容体は、体内を自由に循環する。上記受容体はIL-13に遭遇するとそれに結合し、IL-13が体内の生物標的にもはや結合できなくなるためにIL-13を効果的に不活性化する。有力な拮抗剤は、免疫グロブリン分子の特定部位(Fcフラグメント)にともに融合された2つの可溶性受容体を含む。これにより標的に対して高い親和性を有する2つの可溶性受容体からなる二量体が形成され、半減期が延びる。当技術分野では多くのIL-13拮抗剤が知られている。IL-13拮抗剤は、一般に約0.1 nMから約100 nMのKDでIL-13に結合する能力を有する。
【００６２】
上記の見地から、IL-13拮抗剤の例としては、これらに限定されないが、IL-13Rα1、sIL-13Rα2のようなIL-13Rα2、IL-13bc蛋白、IL-4/IL-13トラップ、IL-13トラップ、IL-13の抗体、IL-13Rα1の抗体、IL-13Rα2の抗体、IL-13bcの抗体、IL-4のIL-13R結合性変異体、IL-13とIL-13bcの相互作用を阻害することができる小分子、IL-13とIL-13Rα1の相互作用を阻害することができる小分子、及びIL-13とIL-13Rα2の相互作用を阻害することができる小分子が挙げられる。
【００６３】
IL-13拮抗剤の他の例としては、IL-13Rα1、sIL-13Rα2のようなIL-13Rα2、IL-13bc蛋白、IL-13の抗体、IL-13Rα1の抗体、IL-13Rα2の抗体、及びIL-13bcの抗体についてのIL-13結合性相同体が挙げられる。これらのIL-13結合性相同体は、IL-13Rα1、sIL-13Rα2のようなIL-13Rα2、IL-13bc蛋白、IL-13の抗体、IL-13Rα1の抗体、IL-13Rα2の抗体、又はIL-13bcの抗体に対して、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%、又は少なくとも98%の相同性を有するものでもよい。例えば、IL-13拮抗剤の変異形が米国特許No.5,696,234に開示されており、それは参照文献としてここにその全てが組み込まれる。
【００６４】
さらに他のIL-13拮抗剤の例としては、IL-13Rα1、sIL-13Rα2のようなIL-13Rα2、IL-13bc蛋白、IL-13の抗体、IL-13Rα1の抗体、IL-13Rα2の抗体、及びIL-13bcの抗体の結合性フラグメントが挙げられる。
【００６５】
IL-13拮抗剤の別の例としては、IL-13Rα1、sIL-13Rα2のようなIL-13Rα2、IL-13bc蛋白、IL-13の抗体、IL-13Rα1の抗体、IL-13Rα2の抗体、IL-13bcの抗体、それらの相同体、及びそれらのL-13結合性フラグメントの、融合タンパク質のような共役体が挙げられる。よって、IL-13拮抗剤は免疫グロブリンのような担体分子に融合されていてもよい。例えば、可溶性形態のIL-13拮抗剤は免疫グロブリンのFc部分に「リンカー」配列によって融合されていてもよい。免疫グロブリンに結合したIL-13拮抗剤は米国出願公報 No. 2005/0235555に開示されており、それは参照文献としてここにその全てが組み込まれる。GST、Lex-A又はMBPとの融合蛋白のような他の融合蛋白も使用してよい。
【００６６】
従って、共役体としてはポリマーに結合させた化学修飾したIL-13拮抗剤が含まれる。選択されるポリマーは、それが結合されているIL-13拮抗剤が生理的環境のような水性環境中で沈殿しないように、典型的には水溶性である。選択されたポリマーは、本発明の方法で規定されるように重合度が調節できるように、アシル化用の活性エステル又はアルキル化用のアルデヒドのような単一の反応性基を有するように通常修飾される。上記ポリマーはいずれの分子量でもよく、分枝状又は分枝していなくてもよい。ポリマーの混合物も本発明の範囲内に含まれる。好ましくは、最終生成物である製品を治療に使用するために、上記ポリマーは医薬上許容しうるものである。
【００６７】
上記ポリマーはそれぞれいずれの分子量でもよく、分枝状又は分枝していなくてもよい。ポリマーはそれぞれ典型的には約2 kDaから約100 kDaの間の平均分子量を有する(「約」という用語は水溶性ポリマーの製品中で、ある分子が提示の分子量よりも多いか幾分少ない重量となることを示す)。各ポリマーの平均分子量は典型的には、約0.5 kDaと約50 kDaの間、例えば約5 kDaから約40 kDaの間、又は約20 kDaから約35 kDaの間である。
【００６８】
適当な水溶性ポリマー又はその混合液としては、これらに限定されないが、N-結合型又は O-結合型の炭水化物、糖類、リン酸塩、炭水化物；糖類；リン酸塩；ポリエチレングリコール(PEG)(モノ-(C1-C10)アルコキシ-又はアリールオキシ-ポリエチレン・グリコールを含む、蛋白を誘導するために用いられてきたPEG形態を含む)；モノメトキシポリエチレングリコール；(例えば約6 kDといった低分子量のデキストランのような）デキストラン、セルロース；セルロース；他の炭水化物ベースのポリマー、ポリ(N-ビニルピロリドン)ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド/エチレンオキシド  コポリマー、ポリオキシエチル化多価アルコール(例えばグリセロール)及びポリビニルアルコールが挙げられる。
【００６９】
一般に、化学的誘導はIL-13拮抗剤を活性化されたポリマー分子と反応させるために使用される何らかの適当な条件下で行うことができる。ポリペプチドの化学誘導体を製造する方法は一般に、(a)IL-13拮抗剤が1つ以上のポリマー分子に結合するようになる条件下で、ポリペプチドを(ポリマー分子の反応性エステル又はアルデヒド誘導体のような)活性化されたポリマー分子と反応させること、及び(b)反応生成物を得ることを含む。最適な反応条件は既知のパラメーター及び必要とする結果に基づいて決定されるだろう。例えば、ポリマー分子：蛋白の比率が大きくなるほど、結合されるポリマー分子のパーセンテージが高くなる。1つの態様として、IL-13拮抗剤はアミノ末端においてポリマー分子部分を１つだけ有していてもよい。(例えば、米国特許No.5,234,784を参照のこと)。
【００７０】
ここでの使用に際して特に好ましい水溶性ポリマーはポリエチレングリコール、略してPEGである。ここで用いるポリエチレングリコールとは、モノ-(C1-C10)アルコキシ-又はアリールオキシ-ポリエチレングリコールのような他の蛋白を誘導するために使用されてきたいずれかの形態のPEGを含む意味を持つ。PEGは直線状又は分枝状の中性のポリエーテルで、広い範囲の分子量のものが利用可能で、水及びほとんどの有機溶媒に可溶性である。PEGは水中に存在する場合、第一に高い動的分枝鎖可動性及び高い親水性によって、他の蛋白又はポリマー表面に付着した際にウォーターシェル又は水和層を作成するために、他のポリマー又はペプチドを排除することにおいて効果的である。PEGは無毒で非免疫原性であり、国内消費用に食品医薬品局によって承認されている。
【００７１】
PEGに共役した蛋白又は酵素は、動物に投与された際に、生物活性、非抗原性の特性及び低クリアランス率を示している。F. M. Veronese et al., Preparation and Properties of Moonomthoxypoly(ethylene glyco.)-modified Enzymes for Therapeutic Applications, in J. M. Harris ed., Poly(Ethylene Clycol) Chemistry-Biotechnical and Biomedical Applications 127-36, 1992；これは参照文献としてここに組み込まれる。これは免疫系による認識を防ぐ際のPEGの排除特性による。さらに、蛋白の吸着を減少させ血液適合性を改善するための表面修飾処理の中で、PEGは広く使用されてきた。S. W. Kim et al, Ann. N. Y Acad. Sci. 516: 116-30 1987; Jacobs et al., Artif. Organs 12: 500-501, 1988; Park et al., J. Poly. Sci, Part A 29:1725-31, 1991；これらは参照文献としてここに組み込まれる。ポリウレタン及びポリスチレンのような疎水性ポリマー表面がPEG(MW 3400)の移植によって修飾され、抗血栓性表面として使用された。これらの研究で、PEGの水和作用によって表面特性(接触角)は親水性表面に、より一致していた。より重要なことには、蛋白(アルブミン及び他の血漿たんぱく)の吸着は、PEGの高い分子鎖運動性、水和層及び蛋白排除特性に起因して、大幅に減少した。
【００７２】
PEG(MW 3400)は、表面固定研究で最適サイズとして決定された；Park et al., J. Biomed. Mat. Res. 26:739-45, 1992。一方、PEG(MW 5000)は蛋白の抗原性を減少させる上で最も有益であった；F. M. Veronese et al., In J. M. Harris et., Poly(Ethylene Glycol) Chemistry-Biotechnical and Biomedical Applications 127-36 (同上)、これは参照文献としてここに組み込まれる。
【００７３】
一般に、化学的誘導は生物学的に活性な物質を活性化されたポリマー分子と反応させるために使用される何らかの適当な条件下で行うことができる。PEG化されたIL-13拮抗剤を製造する方法は一般に、(a)IL-13拮抗剤が1つ以上のPEG基に結合するようになる条件下で、IL-13拮抗剤を(PEGの反応性エステル又はアルデヒド誘導体のような)ポリエチレングルコールと反応させること、及び(b)反応生成物を得ることを含む。一般に、アシル化反応に最適な反応条件は既知のパラメーター及び必要とする結果に基づいて決定されるだろう。例えば、PEG：蛋白の比率が大きくなるほど、ポリ-PEG化生成物のパーセンテージが高くなる。
【００７４】
ここで述べる組成物に使用するためのIL-13Rは市販品を購入してもよく、又は、例えばMiloux et al. (1997) FEBS letter 401(2-3): 163-166 若しくは Zhang et al. (1997) J. Biol Chem 272:16921-16926に記載されている工程を用いて組換え技法により製造してもよい。例えば、IL-13Rα1に関しては、コード領域は3'末端の停止コドンを含む1284塩基対である。ネズミのIL-13Rα1のクローニング及び特性決定が記述されている。Hilton et al. (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:497-501を参照のこと。ヒトIL13Rα1に関しては、蛋白は427のアミノ酸残基から成ると考えられ、これもクローニング及び特性決定されている。Aman et al. (1996) J. Biol. Chem. 271(46) 29265-292670を参照のこと。好ましい受容体は、対になったIL-13Rα1及びIL-4Rαから成り、IL-13を特によく結合させることが分かっている。Andrews et al. (2001) J. Immunol. 166(3):1716-1722を参照のこと。当業者は、ここ又は他の文献中に引用された参考文献に基づいてIL-13Rの組み換え形を製造することができる。また、自然発生のIL-13Rは細胞を溶解し遠心分離及びクロマトグラフィーのような既知の分離技術によって膜結合型IL-13Rを回収することにより得ることができる。
【００７５】
IL-13bc、その相同体、そのフラグメント及びその共役体は、米国特許No.6,664,227に開示されており、それは参照文献としてここにその全てが組み込まれる。
【００７６】
IL-13拮抗剤は中性(すなわち、非荷電)でもよく、又は医薬上許容しうる塩、例えば、酢酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩などのような酸付加塩又は塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩などのような無機酸塩の形態を取ってもよい。ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩又はアンモニウム塩のような陽イオン性塩類も使用できる。IL-13拮抗剤が荷電している、荷電していない、又は塩の形態であるかどうかにかかわらず、IL-13拮抗剤は患者に投与する際には好ましくは可溶性である。すなわち、少なくとも全IL-13Rが含まれる分画は内在性のIL-13が結合できるように生体内で可溶性である。
【００７７】
本発明のIL-13拮抗剤を含む組成物は様々な形態を取ってもよい。例えば、上記組成物は、粉末剤、スプレードライ粒子又は噴霧化用溶液の形態を取ってもよい。
【００７８】
上記組成物中に含まれるIL-13拮抗剤の量は、投薬レジメの過程の間、単位用量あたり治療上有効な量(すなわち、治療効果を発揮するのに必要な量)のIL-13拮抗剤を肺に送達するのに十分な量でもよい。実際上、これは特定のIL-13拮抗剤(例えば、天然か合成か、全長かフラグメントか、及びその対応する生物活性)、患者の母集団、及び投薬の必要条件に依存して変わってくるであろう。本発明の呼吸に適した粉末剤のうちのあるものは非常によく分散される性質であるため、吸入装置にとっての損失は最小化されており、そのことはより多くの粉末剤用量が実際に患者に送達されることを意味している。これは次には、求める治療上の目標を達成するために必要とされる投薬量がより少なくて済むということに対応する。
【００７９】
一般に、組成物に含まれるIL-13拮抗剤の合計量は、組成物の全重量に対して約1wt%から100 wt%の範囲となり、例えば、約2 wt%から100 wt%まで、約5 wt%から約98%（例えば、約5 wt%から60 wt%)、約10 wt%から約95 wt%、約45 wt%から約95 wt%、又は約50 wt%から約90 wt%である。例えば、乾燥粉末組成物は、約40 wt%から約80 wt%の範囲の量、又は約0.2 wt%から約99 wt%の範囲の量のIL-13Rを含んでいてもよい。
【００８０】
IL-13拮抗剤の実際の治療上有効な量は、患者一人ひとり、及び治療レジメ一つ一つについて異なってくるであろう。投与の量及び頻度は、治療される適応症の性質及び重症度、求める反応、患者の母集団、患者の状態などのような要因にもちろん依存するだろう。一般に、治療上有効な量は、約0.001mg/kg/投与から100mg/kg/投与、例えば0.01mg/kg/投与から75mg/kg/投与、又は0.10mg/kg/日から50mg/kg/投与の範囲になるであろう。
【００８１】
それぞれの用量で様々な投薬スケジュールにより、さらに臨床医の判断、患者の必要性などに応じて、投与することができる。特定の投薬スケジュールは当業者によって周知であるか、或いは日常的な方法を使用して実験的に決定することができる。投薬スケジュールの例としては、それらに限定されるものではないが、1日5回、1日4回、1日3回、1日2回、1日1回、週に3回、週に2回、週に1回、月に2回、月に1回、及びそれらのいずれかの組み合わせが挙げられる。臨床的な終了点が達成されたならば、投薬を停止する。
【００８２】
本発明の組成物はさらに1つ以上の追加的な活性成分を含んでいてもよい。他の活性成分の例としては、それらに限定されるものではないが、サイトカイン(例えば、免疫変調性サイトカイン)、サイトカイン拮抗剤(例えば、IL-4拮抗剤)、リンホカイン、又はM-CSF、GM-CSF、インターロイキン(例えば、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4 ．．．IL-24、IL-25)、G-CSF、幹細胞因子及びエリスロポイエチンのような他の造血因子が挙げられる。上記組成物はまた抗サイトカイン抗体を含んでいてもよい。上記組成物はさらに他の抗炎症薬を含んでいてもよい。そのような追加の因子及び/又は薬物は、単離されたIL-13拮抗剤と相乗効果を生むか又は単離されたIL-13拮抗剤によって引き起こされる副作用を最小限にするために、上記組成物中に含まれていてもよい。反対に、特定のサイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓溶解若しくは抗血栓因子、又は抗炎症薬の製剤に、そのサイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓溶解若しくは抗血栓因子、又は抗炎症薬による副作用を最小限にするために、IL-13拮抗剤が含まれていてもよい。
【００８３】
上記の観点から、他の活性成分の例としては、それらに限定されるものではないが、1つ以上の吸入用喘息薬が挙げられ、それは例えば、喘息関連治療薬、TNF拮抗剤、抗リウマチ剤、筋弛緩薬、麻薬、鎮痛剤、麻酔薬、鎮静剤、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌剤、抗乾癬薬、副腎皮質ホルモン、アナボリックステロイド、喘息関連薬、無機塩類、栄養剤、甲状腺剤、ビタミン、カルシウム関連ホルモン、止瀉薬、鎮咳薬、鎮吐剤、抗潰瘍薬、緩下薬、抗凝血薬、エリスロポエチン、フィルグラスチム、サルグラモスチン、免疫処置、免疫グロブリン、免疫抑制薬、成長ホルモン、ホルモン置換薬、エストロゲン受容体調節物質、散瞳薬、毛様体筋麻痺薬、アルキル化剤、代謝拮抗薬、有糸分裂阻害剤、放射性医薬品、抗うつ薬、躁病治療剤、抗精神病薬、抗不安薬、催眠薬、交感神経作用薬、覚醒薬、ドネペジル、タクリン、喘息薬、ベータ作用薬、吸入用ステロイド、ロイコトリエン阻害剤、メチルキサンチン、クロモリン、エピネフリン又は類似体、ドルナーゼアルファ、サイトカイン、サイトカイン拮抗剤であるが、それらに限定されるものではない。
【００８４】
特に、本発明の喘息関連組成物は任意でさらに、喘息関連治療薬、TNF拮抗剤(例えば、それらに限定されるものではないが、TNF Ig誘導蛋白質又はフラグメント、可溶性TNF受容体又はフラグメント、融合タンパク質自身、又は小分子TNF拮抗剤)、抗リウマチ剤、筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド抗炎症薬(NSAID)、鎮痛剤、麻酔薬、鎮静剤、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌剤(例えば、アミノグリコシド、抗真菌剤、駆虫剤、抗ウイルス剤、カルバペネム、セファロスポリン、フルオロキノロン、マクロライド、ペニシリン、スルホンアミド、テトラサイクリン、他の抗菌剤)、抗乾癬薬、副腎皮質ホルモン、アナボリックステロイド、喘息関連薬、無機塩類、栄養剤、甲状腺剤、ビタミン、カルシウム関連ホルモン、止瀉薬、鎮咳薬、鎮吐剤、抗潰瘍薬、緩下薬、抗凝血薬、エリスロポエチン(例えば、エポエチンアルファ)、フィルグラスチム(例えば、G-CSF、ニューポゲン)、サルグラモスチン(GM-CSF、ロイキン)、免疫処置、免疫グロブリン、免疫抑制薬(例えば、バシリキマブ、シクロスポリン、ダクリツマブ)、成長ホルモン、ホルモン置換薬、エストロゲン受容体調節物質、散瞳薬、毛様体筋麻痺薬、アルキル化剤、代謝拮抗薬、有糸分裂阻害剤、放射性医薬品、抗うつ薬、躁病治療剤、抗精神病薬、抗不安薬、催眠薬、交感神経作用薬、覚醒薬、ドネペジル、タクリン、喘息薬、ベータ作用薬、吸入用ステロイド、ロイコトリエン阻害剤、メチルキサンチン、クロモリン、エピネフリン又は類似体、ドルナーゼアルファ(パルモザイム)、サイトカイン又はサイトカイン拮抗剤から選択される少なくとも１つを含むことができる。適当な量及び投与法は当技術分野において周知である。例えば、Wells et al., eds., Pharmacotherapy Handbook, 2nd Edition, Appleton and Lange, Stamford, Conn. (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, Deluxe Edition, Tarascon Publishing, Loma Linda, Calif. (2000)を参照のこと。これらはそれぞれ、参照文献としてここにその全てが組み込まれる。
【００８５】
本発明の組成物は「ニート(正味の)」製剤、すなわち医薬用添加剤又は添加物なしの製剤にしてもよい。さらに、本組成物は任意に1つ以上の医薬上許容しうる添加剤を含んで製造してもよい。そのような添加剤が存在する場合は、一般に粉末組成物中に約0.01 wt%から約99 wt%、約0.1 wt%から約95 wt%、約0.5 wt%から約80 wt%、又は約1 wt%から約60 wt%の範囲の量で存在する。実施例の項に様々な添加剤を含むIL-13拮抗剤組成物を述べる。典型的には、添加剤又は添加剤類は下記のうちの1つ以上を改善する働きをもつと考えられる：組成物のエアゾール特性；化学的安定性；物理的安定度；貯蔵安定性；及び取扱適性。
【００８６】
特に、添加剤物質はIL-13拮抗剤組成物の物理的及び化学的安定性を改善するように機能できることが多い。例えば、添加剤は残留水分含量を最小にしたり、吸湿を妨げたり、及び/又は、粒子サイズ、凝集の度合い、表面特性(すなわち、しわ)、吸入し易さ、及びできた粒子の肺への標的集中性を良くすることができる。添加剤(類)はまた、単に乾燥粉末組成物中の活性薬剤濃度を下げるための充填剤として使われてもよい。
【００８７】
本組成物に有用な医薬用添加剤としては、それらに限定されるものではないが、蛋白(すなわち、特定の順のアミノ酸の1つ以上の鎖からなる大きな分子)、オリゴペプチド(すなわち、ペプチド結合で結合したアミノ酸の短鎖)、ペプチド(すなわち、加水分解されてアミノ酸になる種類の分子)、アミノ酸、脂質(すなわち、典型的には水には不溶性だが有機溶媒に可溶性の脂肪質、ろう質又は油状の化合物であって、炭素、水素及びより少ない程度で酸素を含むもの) 、ポリマー、及び炭水化物(例えば、単糖類、ジ-、トリ-、テトラ-及びオリゴ糖類、；アルジトール、アルドン酸、エステル化された糖類などのような誘導化された糖類；並びに多糖類又は糖類ポリマー)が挙げられ、それらは単独又は組合わせで存在してもよい。適当な添加剤として、国際公開No. WO 96/32096で提供されるものが挙げられる。
【００８８】
好ましい添加剤としては糖アルコール、脂質、DPPC、DSPC、カルシウム/マグネシウム、アミノ酸(特に、疎水性アミノ酸)、オリゴペプチド、ポリペプチド及び糖類(特に、疎水性糖類)が挙げられる。特に好ましい添加剤としては亜鉛塩、ロイシン、クエン酸塩並びにショ糖及びマンニトールのような糖類が挙げられる。粒子状製剤において、好ましい添加剤は、ガラス遷移温度(Tg)が約35℃より高く、例えば約45℃より高いか又は約55℃よりも高いものである。
【００８９】
ポリペプチド及び蛋白の添加剤の例としては、人血清アルブミン(HSA)のような血清アルブミン、組み換えヒトアルブミン(rHA)、ゼラチン、カゼイン、ヘモグロビンなどが挙げられる。例えば、国際公開No. WO 96/32096に記載されているような、分散性強化ポリペプチド(例えばHSA)を使用してもよい。
【００９０】
代表的なアミノ酸/ポリペプチド成分としては、(それらはさらに緩衝能という点でも機能できるが、）アラニン、グリシン、アルギニン、ベタイン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、システイン、リジン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパルテーム、チロシン、トリプトファンなどが挙げられる。分散剤として機能するアミノ酸及びペプチドが好ましい。このカテゴリーに入るアミノ酸としては、ロイシン(leu)、バリン(val)、イソロイシン(isoleu)、トリプトファン(trp)、アラニン(ala)、メチオニン(met)、フェニルアラニン(phe)、チロシン(tyr)、ヒスチジン(his)及びプロリン(pro)のような疎水性アミノ酸が挙げられる。特に好ましいアミノ酸はアミノ酸ロイシンである。ここに記載する製剤に使用する場合のロイシンには、D-ロイシン、L-ロイシン及びラセミ体のロイシンが含まれる。本発明で使用される分散性強化ペプチドとしては、上に述べたような疎水性アミノ酸成分からなるダイマー、トリマー、テトラマー、及びペンタマーが挙げられる。例としてはジロイシン、ジバリン、ジイソロイシン、ジトリプトファン、ジアラニンなど、トリロイシン、トリバリン、トリイソロイシン、トリトリプトファンなど；leu-val、isoleu-leu、try-ala、leu-tryなど及び leu-val-leu、val-isoleu-try、ala-leu-valなどのような混合ジ-及びトリ-ぺプチド、並びにテトラアラニン及びペンタアラニンのようなホモ-テトラマー又はペンタマーが挙げられる。特に好ましいオリゴペプチド添加剤は、国際特許出願PCT/US00/09785に記載されているような、2つ以上のロイシン残基からなるダイマー及びトリマーである。従って例えば、好ましいオリゴペプチドは、ジロイシン、leu-leu-gly、leu-leu-ala、leu-leu-val、leu-leu-leu、leu-leu-ile、leu-leu-met、leu-leu-pro、leu-leu-phe、leu-leu-trp、leu-leu-ser、leu-leu-thr、leu-leu-cys、leu-leu-tyr、leu-leu-asp、leu-leu-glu、leu-leu-lys、leu-leu-arg、leu-leu-his、leu-leu-nor、leu-gly-leu、leu-ala-leu、leu-val-leu、leu-ile-leu、leu-met-leu、leu-pro-leu、leu-phe-leu、leu-trp-leu、leu-ser-leu、leu-thr-leu、leu-cys-leu、leu-try-leu、leu-asp-leu、leu-glu-leu、leu-lys-leu、leu-arg-leu、leu-his-leu、leu-nor-leu及びそれらの組み合わせからなる群より選択される。これらのうち、ジロイシン及びトリロイシンが特に好ましい。
【００９１】
本発明で使用される添加剤の別の好ましい特徴は界面活性である。疎水性アミノ酸(例えば、leu、val、isoleu、pheなど)、ジ-及びトリ‐ペプチド、ポリアミノ酸(例えば、ポリグルタミン酸)並びに蛋白(例えば、HSA、rHA、ヘモグロビン、ゼラチン)のような、分散剤としても機能できる界面活性添加剤は、これらの添加剤はその界面活性な性質のためにIL-13拮抗剤組成物の粒子表面に集結する傾向にあり結果として生じる粒子を非常に高度に分散される性質にするので、特に好ましい。ここに記載されるIL-13拮抗剤組成物に含まれていてもよい他の界面活性剤の例としては、これらに限定されるものではないが、ポリソルベート、レシチン、オレイン酸、塩化ベンザルコニウム及びソルビタンエステルが挙げられる。
【００９２】
本発明での使用に適した炭水化物添加剤としては、例えば、フルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、d-マンノース、ソルボースなどのような単糖類；スクロースのような二糖類、ラフィノース、メレチトース、マルトデストリン類、デキストラン類、デンプン類など；及びマンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトールソルビタール(グルチト)、ミオイナシトールなどのようなアルジトール類が挙げられる。
【００９３】
上記のIL-13拮抗剤組成物はさらに緩衝剤又はpH調節剤を含んでいてもよい；典型的には、上記緩衝剤は有機酸又は有機塩基から調製された塩である。代表的な緩衝剤としては、クエン酸(対応するクエン酸塩を提供する)、アスコルビン酸、グルコン酸、炭酸、酒石酸、コハク酸、酢酸若しくはフタル酸の塩類、トリス、トロメタミン塩酸塩又はリン酸緩衝剤のような有機酸塩が挙げられる。1つ以上の態様において、十分な緩衝剤(例えば、クエン酸塩)がIL-13拮抗剤の分解を最小限にするように含有されており、その量の緩衝剤は肺抵抗性にマイナスの作用を示さない。例えば、上記組成物は、約20 wt%未満の緩衝剤、例えば約10 wt%未満、約8 wt%未満、約5 wt%未満、又は約3 wt%未満の緩衝剤を含んでいてもよい。1つ以上の態様において、緩衝剤の量は、約20mg未満、例えば約15mg未満、約10mg未満、又は約5mg未満である。同様に、1つ以上の態様において、緩衝剤の量は、約1mg/kg未満、例えば約0.8mg/kg未満、約0.6mg/kg未満、約0.4mg/kg未満、又は約0.2mg/kg未満である。
【００９４】
さらに、本発明のIL-13拮抗剤組成物は、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロースのような誘導セルロース、フィコール(ポリマー性の砂糖)、ヒドロキシエチルスターチ、デキストレート(例えば、2-ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンやスルホブチルエーテル-β-シクロデキストリンのようなシクロデキストリン)、ポリエチレングリコール、塩類(例えば、塩化ナトリウム)、抗微生物薬、酸化防止剤、帯電防止剤、界面活性剤(例えば、「TWEEN 20」及び「TWEEN 80」のようなポリソルベート)、レシチン、オレイン酸、塩化ベンザルコニウム、ソルビタンエステル、脂質(例えば、リン脂質、脂肪酸)、ステロイド(例えば、コレステロール)及びキレート剤(例えば、EDTA)のようなポリマー性の添加剤/添加物を含んでいてもよい。ポリマー性成分を含む組成物において、ポリマーは典型的には組成物中に制限された範囲、すなわち約10%未満の重量レベルで存在してもよい。本発明の好ましい組成物は、IL-13拮抗剤が非リポソーム的カプセル若しくはポリマーカプセルに入れられているか又はコーティングされていない(すなわち、別個のコーティング層を持たない)ものである。ここに例示されるもののような好ましいIL-13拮抗剤組成物は即効作用性製剤、すなわち、徐放性の適用ではではなく即時放出の適用に設計されたものである。
【００９５】
本発明のIL-13拮抗剤組成物で使用するのに適した他の医薬用添加剤及び/又は添加物は、「レミングトン：薬学のサイエンス&実践」第19版、Williams & Williams, (1995)、「医師用添付文書集」第52版、Medical Economics, Montvale, NJ (1998)、及び「医薬用添加剤ハンドブック」、第3版、A. H. Kibbe, ed., American Pharmaceutical Association, Pharmaceutical Press, 2000に掲げられている。
【００９６】
本発明によれば、IL-13拮抗剤組成物は乾燥粉末、結晶の乾燥粉末、非晶質ガラス又は両方の形態の混合物でもよい。界面活性剤を含んでいる製剤では、(結晶又は非晶形のいずれかの形態の)界面活性物質が典型的には原薬粉末中よりも粒子表面上により高い濃度で存在するであろう。
【００９７】
本発明の化合物、粉末剤及びスプレードライ粒子は、当業者に既知かつ利用可能な様々な方法及び技術のいずれにより製造されてもよい。
【００９８】
例えば、乾燥粉末製剤のようなIL-13拮抗剤を含む粉末組成物は、スプレードライ法によって製造してもよい。スプレードライ法は、例えば、「スプレードライ・ハンドブック」第5版、K. Masters, John Wiley & Sons, Inc., NY, NY (1991)、及び Platz, R., et al. の国際特許公開 No. WO 97/41833 (1997) 及び No. WO 96/32149 (1996)に概説されているように行われる。
【００９９】
簡単に言えば、スプレードライ用のIL-13拮抗剤を含む溶液を製造するには、通常IL-13拮抗剤(及び他の何らかの添加剤)を、任意で生理学上許容しうる緩衝剤を含む水に溶解又は混合する。溶液のpH範囲は一般に約3と10の間であり、より中性に近いpHが好ましく、それはそのようなpHが肺の内で粉末剤が溶解された後の粉末剤の生理的な適合性を維持する助けになると考えられるからである。水性製剤は、任意でアセトン、アルコールなどのような追加の水混和性溶媒を含んでもよい。代表的なアルコールは、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノールなどのような低級アルコールである。上記溶液は一般に、約0.01%(w/v)から約20%(w/v)までの濃度、例えば約0.1%から約10%(w/v)、又は約1%(w/v)から約3%(w/v)までの濃度に溶解したIL-13拮抗剤を含むことになる。あるいは、IL-13拮抗剤製剤の成分を、アセトン、アルコール(例えば、メタノール及びエタノール)、エーテル、アルデヒド、炭化水素、ケトン及び極性非プロトン性溶媒のような1つ以上の溶媒を用いた有機溶媒又は有機共溶媒系を使用してスプレードライしてもよい。
【０１００】
IL-13拮抗剤を含む溶液は、Niro A/S(デンマーク)、Buchi(スイス)などのような民間供給元から入手可能なもののような周知のスプレードライヤーを用いてスプレードライし、好ましくは呼吸に適した乾燥粉末形態の、呼吸に適した分散性のIL-13拮抗剤組成物を得てもよい。活性薬物の溶液をスプレードライする最適な条件は製剤成分によって異なり、一般に実験により決定される。材料をスプレードライするのに用いられるガスは典型的には空気であるが、窒素又はアルゴンのような不活性ガスも適している。さらに、スプレーされた材料を乾かすために使用されるガスの吸入口及び排出口の両方の温度は、スプレーされた材料中のIL-13拮抗剤の分解を引き起こさないような温度である。そのような温度は典型的には実験により決定されるが、一般に吸入口の温度は約50℃から約200℃の範囲で、排出口の温度は約30℃から約150℃の範囲になるであろう。
【０１０１】
あるいは、IL-13拮抗剤粉末組成物は、凍結乾燥、真空乾燥、スプレー凍結乾燥、超臨界流体処理、空気乾燥、又は蒸発乾燥の他の形態によって製造してもよい。製粉及び他の微粉化技術も粒子を提供するのに使用することができる。
【０１０２】
いくつかの例では、改善された取り扱い特性／加工特性(例えば、少ない静電気、よりよい流動性、低い粘結性など)を有する形態のIL-13拮抗剤粉末製剤を、微粒子凝集体、すなわち、上記の呼吸に適したIL-13Rの凝集体又は凝集塊からなる組成物を製造することにより得ることが望ましいであろう。凝集体が容易に砕けて肺送達用の微細粉末成分に戻る乾燥粉末粒子が、例えば米国特許No.5,654,007に記載されている。あるいは、上記のIL-13拮抗剤粉末剤は、例えば、国際PCT公報No. WO 95/09616に記載されているように、粉末成分を塊状にし、この材料をふるいにかけて凝集塊を得て、球体化してより球状の凝集塊にし、整粒して均一サイズの生成物を得ることにより製造してもよい。
【０１０３】
上記のIL-13拮抗剤粉末剤は、製造、加工及び貯蔵期間中、乾燥した(すなわち、相対的に湿度の低い)条件下で維持されることが好ましい。使用した乾燥処理に関わらず、その処理により実質的に非晶質のIL-13R粒子からなる呼吸に適した、分散性の高い組成物が得られることが好ましい。
【０１０４】
スプレードライされた上記IL-13拮抗剤組成物のある種の物理的特性は、このような組成物の肺へのエアゾールによる送達の効率を最大にするものであることが好ましい。
【０１０５】
上記IL-13拮抗剤組成物は肺中に浸入するのに有効な粒子からできていてもよい。肺の生理機能中に粒子が移動することが本発明の重要な局面である。この目的のために、本発明の粒子は、約10μm未満、例えば約7.5μm未満、約5μm未満の粒径質量中央値(MMD)を有する。MMDは通常、約0.1μmないし約5μm、例えば約0.5から3.5μmの範囲である。上記IL-13拮抗剤組成物は、さらにラクトースのような呼吸に適していない担体粒子を含んでいてもよく、その場合の呼吸に適していない粒子は典型的には約40ミクロンよりも大きなサイズである。好ましい態様において、乾燥粉末は非リポソーム性又は非脂質含有性である。
【０１０６】
本発明のIL-13拮抗剤組成物は、約10μm未満、例えば約5μm未満、又は約3.5μm未満の空気動力学的粒径質量中央値(MMAD)のエアゾール粒子サイズ分布を有するものでもよい。MMADは特徴的には約0.5μmから約10μm、例えば約0.5μmから約5μm、約0.5μmから約4μm、約1μmからに約4μm、約1μmから約3.5μm、又は約1.5μmから約2.5μmの範囲になるであろう。
【０１０７】
本発明のIL-13拮抗剤組成物は、約60%より大きい、例えば約65%より大きい、約70%より大きい、約75%より大きい、又は約80%より大きい放出用量を有することができる。
【０１０８】
上記IL-13拮抗剤組成物、特に、呼吸に適した乾燥粉末組成物は、一般に約10 wt%未満、例えば約5 wt%未満又は約3 wt%未満の含水率を有する。このような低い含水率の固体は、包装及び貯蔵上、より高い安定性を示す傾向にある。
【０１０９】
上記乾燥粉末は、約0.1-10 g/cc、例えば約0.25-4 g/cc、約0.5-2 g/cc、又は約0.7-1.4 g/ccの範囲のかさ密度を有することが好ましい。
【０１１０】
乾燥粉末の総合的なエアゾール性能を特徴づけるための補足的基準は、微粒子用量若しくは質量(FPM)、又は微粒子分画(FPF)であり、これは、一定の値(例えば、3.3ミクロン又は4.7ミクロン)未満の空気動力学的粒径を有する粉末の質量パーセンテージを表すものである。乾燥粉末は、40%(又は0.40)以上、例えば50%(又は0.50)以上、60%(0.60)以上、若しくは70%以上(0.70)の、又は約0.4〜約0.95、若しくは約0.5〜約7の範囲のFPF価値を有するものでもよい。約0.5μmから約3.5μmの間のサイズのエアゾール粒子を少なくとも50パーセント含む粉末剤は、エアゾール化された形態で送達されて肺胞を含む肺の部位に到達させる際に非常に有効である。
【０１１１】
本発明のスプレードライされたIL-13拮抗剤含有粉末組成物は、そのスプレードライする前の溶液又は混合液のそれと比較して、好ましくは本質的に不変の高次分子凝集体を有する。言いかえると、スプレードライ処理は、連結した分子種又は他の凝集体の形成を誘導してそれにより組成物中の高次分子凝集体量の全体パーセントに影響を及ぼすようなことはない。すなわち、スプレードライ粉末とスプレードライする前の溶液又は懸濁液の間の高次分子凝集体の変化は「本質的に不変」であり、例えば、スプレードライ粉末のモノマー含量パーセンテージは、スプレードライする前の溶液又は懸濁液のそれと比較して、典型的には多くとも約15%未満、例えば多くとも約10%未満、多くとも約7%未満、又は約5%以下である。
【０１１２】
本発明のIL-13拮抗剤粉末組成物は典型的には「貯蔵安定性」であり、すなわち、極端な温度(「温度安定性」)及び極端な湿度(「湿度安定性」)で長期間貯蔵した場合の最少の分子凝集体形成及び/又は最少の微粒子凝集体形成により特徴付けられる。例えば、本発明のスプレードライされたIL-13拮抗剤組成物は、約25℃のような約2℃から約50℃の範囲の温度、及び/又は約33%のRHのような0%から約75%の範囲の相対湿度(「RH」)で一定期間(例えば、2週間以上)貯蔵した後に、最少の微粒子凝集体形成及び最少の高次分子凝集体形成を経験することになる。特に、貯蔵された本発明のIL-13拮抗剤含有粉末組成物は(スプレードライする前の溶液又は混合液と比較して）、約15%未満の不溶性凝集体しか形成しないことが好ましく、例えば、約10%未満の不溶性凝集体、約7%未満の不溶性凝集体、約5%未満の不溶性凝集体、約2.5%未満の不溶性凝集体、約2%未満の不溶性凝集体、又は約1%未満の不溶性凝集体しか形成しないことが好ましい。あるいは、貯蔵された本発明のIL-13拮抗剤含有粉末組成物は、高次分子凝集体含量の増加が多くても約20%以下となることが好ましく、例えば、約10%以下、約7%以下、又は約5%未満、約2.5%未満、約2%未満、若しくは約1%未満となることが好ましい。
【０１１３】
本発明のIL-13拮抗剤粉末剤及び粒子は、高度に分散されて呼吸に適していてもよい。従って、本発明の粉末剤及び粒子は、肺中又は鼻腔内に送達されてもよい。ここに述べる粉末組成物は、ペプチド剤を投与した際にこれまでしばしば遭遇した問題の多く、とりわけ、IL-13拮抗剤の溶液ベースの製剤に関連する問題を克服するものである。そのような問題の例としては、応答時間の遅延(例えば、投与と生理的応答開始の間の時間)、全身的吸収の低さ及び組織及び分泌中の濃度の相対的な低さ、許容しうる局所濃度又は血中濃度を維持できないこと、ならびに溶液中でのペプチド及び特にサイトカインの不安定さが挙げられる。
【０１１４】
本発明はまた噴霧化用製剤に関するものである。噴霧化用製剤は当技術分野中で周知である。呼吸に適した粉末ベースの製剤と噴霧製剤は別個のものである。噴霧製剤は口を通って肺中に吸い込まれることから人によってはそれを「吸入することができる」ものと考えるかもしれないという事実にもかかわらず、それらはここに定義されるような「呼吸に適した」ものではない。例えば、噴霧製剤は通常、肺の深部の組織には到達できない。さらに、噴霧製剤は溶液ベースであり、すなわち、固体形態中ではなく溶液で投与される。
【０１１５】
本発明の組成物はIL-13に関連した症状を治療するために使用してもよい。IL-13に関連した症状の例としては、それらに限定されるものではないが、炎症；繊維症(例えば、特発性肺線維症、ブレオマイシン誘導性肺線維症、放射線誘導性肺線維症、肺肉芽腫及び肝線維症)；慢性移植拒否反応；進行性全身性硬化症；住血吸虫症；Igが介在する症状及び疾患、特にIgEが介在する症状(それらに限定されないが、アトピー、アレルギー症状、喘息、免疫複合疾患(例えば、狼瘡、ネフローゼ症候群、腎炎、糸球体腎炎、甲状腺炎及びグレーヴス病)を含む)；免疫不全、特に造血始原細胞の不全又はそれに関係した障害；癌及び他の疾患が挙げられる。そのような病理学的状態は疾患、放射線の被爆又は薬に起因するものでもよく、例えば、白血球減少症、バクテリア及びウイルス感染、貧血、骨髄移植後の免疫細胞又は造血細胞不全のようなB細胞又はT細胞不全が含まれる。IL-13はマクロファージ活性化を阻害するので、IL-13拮抗剤はマクロファージ活性化(すなわち、ワクチン接種、ミコバクテリウム若しくは細胞内有機体又は寄生虫感染の治療において)の増強にも有用と思われる。IL-13拮抗剤は、さらにHIV感染及びエイズ治療において有用と思われる。
【０１１６】
本発明のIL-13拮抗剤組成物は、喘息のようなアレルギー性疾患及び症状の治療に特に有効である。従って本発明はさらに、細胞、組織、器官又は患者(ヒト又は動物)において、喘息に関連した症状を調節又は治療する方法を提供するものであり、そのような症状には、それらに限定されるものではないが、喘息；気管支炎症；過剰気管支粘液又は栓塞；肺組織障害；好酸球蓄積；気管支痙攣；気道狭窄；気道過敏症；気道再建；吸気気道又は呼気気道の喘鳴、息切れ、胸部絞扼感、咳嗽、呼吸困難、灼熱感、気道浮腫、過剰粘液、気管支痙攣、頻呼吸、頻脈、チアノーゼ、アレルギー性鼻炎、感染症(例えば、真菌性又は細菌性)、アレルギーのうちの少なくとも１つに結びつく随伴性の肺又は副鼻腔の炎症；アトピー性皮膚炎；生体リズム異常；チャーグ・ストラウス症候群；インフルエンザワクチン接種；胃食道逆流症；枯草熱；室内アレルギーなどのうちの少なくとも１つが含まれる。そのような方法は上記のような調節、処置又は治療を必要とする細胞、組織、器官、動物又は患者に、有効な量の、喘息に関連した少なくとも1つのIg誘導蛋白を含む少なくとも1つの組成物又は医薬品組成物を投与することを任意で含むことができる。
【０１１７】
本発明はまた、細胞、組織、器官、動物又は患者において、喘息を伴う少なくとも１つの免疫関連疾患を調節又は治療する方法を提供するものであり、そのような症状には、それらに限定されるものではないが、喘息；吸気気道又は呼気気道の喘鳴、息切れ、胸部絞扼感、咳嗽、呼吸困難、灼熱感、気道浮腫、過剰粘液、気管支痙攣、頻呼吸、頻脈、チアノーゼ、アレルギー性鼻炎、感染症(例えば、真菌性又は細菌性)などのうちの少なくとも１つに結びつく随伴性の肺又は副鼻腔の炎症のうちの少なくとも１つを含む。例えば、the Merck Manual, 12th-17th Editions, Merck & Company, Rahway, N.J. (1972, 1977, 1982, 1987, 1992, 1999)；Pharmacotherapy Handbook, Wells et al., eds., Second Edition, Appleton and Lange, Stamford, Conn. (1998, 2001)を参照のこと。これらはそれぞれ参照文献としてその全てが組み込まれる。
【０１１８】
本発明のいずれの方法も、そのような調節、処置又は治療を必要とする細胞、組織、器官、動物又は患者に少なくとも1つのIL-13拮抗剤を含む有効な量の組成物又は医薬品組成物を投与することを含むことができる。そのような方法は任意で上記のような喘息に関連した疾患を治療するための同時投与又は併用を含むことができ、その場合にはIL-13拮抗剤の投与はさらに、事前に、同時、及び/又は事後に、少なくとも1つの喘息関連治療剤、TNF拮抗剤(例えば、限定するものではないが、TNF Ig誘導蛋白又はフラグメント、可溶性TNF受容体又はフラグメント、その融合蛋白、又は小分子TNF拮抗剤)、抗リウマチ剤、筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド性抗炎症薬(NSAID)、鎮痛剤、麻酔薬、鎮静剤、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌剤(例えば、アミノグリコシド、抗真菌剤、駆虫剤、抗ウイルス剤、カルバペネム、セファロスポリン、フルオロキノロン、マクロライド、ペニシリン、スルホンアミド、テトラサイクリン、他の抗菌剤)、抗乾癬薬、副腎皮質ホルモン、アナボリックステロイド、喘息関連薬、無機塩類、栄養剤、甲状腺剤、ビタミン、カルシウム関連ホルモン、止瀉薬、鎮咳薬、鎮吐剤、抗潰瘍薬、緩下薬、抗凝血薬、エリスロポエチン(例えば、エポエチンアルファ)、フィルグラスチム(例えば、G-CSF、ニューポゲン)、サルグラモスチン(GM-CSF、ロイキン)、免疫処置、免疫グロブリン、免疫抑制薬(例えば、バシリキマブ、シクロスポリン、ダクリツマブ)、成長ホルモン、ホルモン置換薬、エストロゲン受容体調節物質、散瞳薬、毛様体筋麻痺薬、アルキル化剤、代謝拮抗薬、有糸分裂阻害剤、放射性医薬品、抗うつ薬、躁病治療剤、抗精神病薬、抗不安薬、催眠薬、交感神経作用薬、覚醒薬、ドネペジル、タクリン、喘息薬、ベータ作用薬、吸入用ステロイド、ロイコトリエン阻害剤、メチルキサンチン、クロモリン、エピネフリン又は類似体、アナログ、ドルナーゼアルファ(パルモザイム)、サイトカイン又はサイトカイン拮抗剤
の投与を含む。適当な投与法は当技術分野において周知である。例えば、Wells et al., eds., Pharmacotherapy Handbook, 2nd Edition, Appleton and Lange, Stamford, Conn. (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, Deluxe Edition, Tarascon Publishing, Loma Linda, Calif. (2000)を参照のこと。これらはそれぞれ、参照文献としてここにその全てが組み込まれる。
【０１１９】
IL-13拮抗剤含有粉末組成物、特にここで述べる乾燥粉末組成物は、好ましくは何らかの適当な乾燥粉末吸入器(DPI)、すなわち、(受動的又は能動的手段によって)予め分散させた乾燥粉末を肺に輸送するために患者の吸入された息を媒体として利用する吸入装置を使用して送達される。好ましい乾燥粉末吸入装置は米国特許番号No. 5,458,135、5,740,794及び5,785,049、並びに国際特許公開WO 00/18084に記載されている。
【０１２０】
このタイプの装置を使用して投与する場合、IL-13拮抗剤組成物は、穴があけられる蓋又は他の出し入れ表面を有する容器、好ましくはブリスターパッケージ又はカートリッジ中に入れられ、その場合、その容器は単一の投薬単位又は複数の投薬単位を含んでいてもよい。国際特許公開WO 97/41031に記載されているように多数のキャビティに計量した用量の乾燥粉末薬物を充填すると都合が良い。
【０１２１】
同じく、ここで述べるIL-13拮抗剤組成物の送達に適しているのは、例えば、米国特許No.3,906,950及び4,013,075に記載されているタイプの乾燥粉末吸入器であり、それにおいては対象者に送達するための予め測定した用量の乾燥粉末が硬ゼラチンカプセル内に含まれている。
【０１２２】
乾燥粉末の肺投与用の他の乾燥粉末分散装置としては、例えば、ヨーロッパ特許 No. EP 129985、EP 472598、EP 467172、及び米国特許No.5,522,385に記載されたものが挙げられる。同じく、本発明のIL-13R粉末組成物の送達に適しているのは、アストラ・ドラコ"TURBUHALER"のような吸入装置である。このタイプの装置は、米国特許 No. 4,668,218；4,667,668；及び4,805,811に詳細に記載されている。同じく適当なのは、米国特許No.5,388,572に記載されているような、粉末薬物を浮遊させて運ぶか、空気をスクリーンに通すことにより担体スクリーンから薬物を押し上げるか、又は混合チャンバー内で空気を粉末薬物と混合するための空気の提供をピストンの使用により行う装置であって、次いでその装置のマウスピースを通って粉末剤が患者に導入されるような装置である。
【０１２３】
吸入可能なIL-13拮抗剤組成物を、米国特許No. 5,320,094及び5,672,581に記載されているような、薬剤、例えば乾燥粉末、の医薬上不活性な液体噴射剤、例えばクロロフルオロカーボン又はフルオロカーボン、による溶液又は懸濁液を入れた加圧式定量吸入器(MDI)を用いて送達してもよい。使用に先立ち、IL-13拮抗剤組成物は通常、周囲条件下の容器中で保存され、好ましくは約25℃以下の温度、及び約30〜60%の範囲の相対湿度で保存される。より好ましい相対湿度条件(例えば、約30%未満)は、投薬形態の二次包装中に乾燥剤を入れることにより達成することもできる。本発明の呼吸に適した乾燥粉末は、良好なエアゾール性能のみならず良好な安定性によっても特徴付けられる。
【０１２４】
肺への直接送達用にエアゾール化された場合、ここに述べるIL-13拮抗剤組成物は良好な肺中バイオアベラビリティーを示すであろう。
【０１２５】
本発明の方法又は組成物に用いる少なくとも1つのIL-13拮抗剤と任意で組み合わせることができる喘息関連療法には、喘息に関連した症状、疾患、病状などの治療に用いることができるいずれの薬物又は治療法も含まれる。本発明の方法に任意で含まれる喘息療法の特定の非限定的な例としては、ベータ-2作用薬、抗コリン作用薬、副腎皮質ステロイド、糖質副腎皮質ステロイド、抗アレルギー薬、抗炎症剤、気管支拡張剤、去痰薬、アレルギー治療薬、クロモリンナトリウム、アルブテロール、ベントリンTM、プロベンティルTM；ベクロメサゾン吸入器、ヴァンセリルTM；ブデソニド吸入器、パルミコート・チューブハラーTM、パルミコート・レスプルスTM；フルチカゾン及びサルメテロール経口吸入器(アドバイヤTMディスカス)；プロピオン酸フルチカゾンの経口吸入器、フロベントTM；
経口ヒドロコルチゾン、ハイドロコルトンTM、コルテフTM；臭化イプラトロピウム吸入器、アトロベントTM；モンテルカスト、シングレアTM；プレドニゾン、デルタゾーンTM、リキッドプレドTM；サルメテロール、セレベントTM；テルブタリン、ブレチンTM；ブリカニールTM；テオフィリン、テオデュールTM、レスプビッドTM、スロービッドTM、テオ-24TM、テオライアTM、ユニフィルTM、スロ-フィリンTM；トリアムシノロンアセトニド吸入器、アツマコートTM；メトトレキセート(MTX)；IL-4、IL-5、IL-12抗体のようなインターロイキン拮抗剤、受容体蛋白又は拮抗剤、及び拮抗剤融合蛋白、IgE抗体及び拮抗剤、CD4拮抗剤、抗ロイコトリエンス、血小板活性化因子、トロンボキサン拮抗剤、トリプターゼ阻害剤、NK2受容体拮抗薬、イプラトロピウム、テオフィレン、ジナトリウムクロモグリケート(DSCG)、それらの機能的又は構造的類似体、並びにそれらの誘導体又は変異体などが挙げられる。
【０１２６】
上記のことから、IL-13Rの拮抗剤含有粉末組成物は驚くほど安定である(すなわち、製造及び貯蔵の間に、温度及び湿度の極限条件下でも、最小の化学的及び物理的分解しか示さない)。本発明のIL-13拮抗剤粉末は、(i)エアゾール送達装置によって容易に分散され(すなわち、良好なエアゾール性能を証明している)、(ii)粉末剤製造及び加工の間、並びに貯蔵中に驚くほど良好な物理的及び化学的安定性を示し、(iii)再現性よく製造される。
【０１２７】
このように、IL-13RのようなIL-13拮抗剤の、化学的及び物理的に安定なスプレードライ粉末製剤の予期せぬ発見が本発明には含まれている。IL-13Rは、他の大抵の大きなペプチドと同様に、IL-13に結合し、スプレードライの剪断応力、液体‐壁相互作用、高温条件などにさらされた場合に特に不安定であることが知られている一群の蛋白を含んでいる。驚いたことに、(多くのスプレードライ粒子から成る)本発明のスプレードライ粉末剤はスプレードライを行った後も生物活性を示し、表面上、高次分子凝集体レベル及び微粒子凝集体レベルが両方とも容認できるほど低く維持されていることを示している。
【０１２８】
以下の実施例は本発明を具体的に述べるものであり、本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。これらの実施例を変化させたものや同等のものは、ここに示す本発明の開示、図面及び請求項を見れば当業者には明白であろう。
【０１２９】
ここで参照したすべての論文、書籍、特許、雑誌論文及び他の出版物は、参照文献としてその内容全てがここに組み込まれる。
【実施例】
【０１３０】
以下の実施例では以下の略号が含まれる：
用語            定義
ACI             アンダーセン・カスケード埋伏
AI              活性成分
BHR             気管支過敏性
BP              ブリスター・パッケージ
BW              体重
%ED             パーセント放出用量
ET              気管内
F               メス
FPM             5mgの充填重量の1個のBPを作動させた場合の
sIL-13Rα2-IgG粉末剤の微粒子質量(mg)；
カットオフサイズ<3.3μmでアンダーセンステージ(フィルターを含む)
上に回収された粉末の全重量を合計することにより算出される。
FPF%<3.3μm     微粒子分画(<3.3μmの空気動力学的粒径を持つ粒子の割合）
IH              吸入
MMAD            空気動力学的粒径質量中央値
MWM             分子量マーカー
PC400           誘発濃度
PDADS           空気駆動式エアゾール送達システム
PDS             肺送達システム
PSD             粒子サイズ分布
RH              相対湿度
RL              肺抵抗性
RSD             相対標準偏差
RT              保持時間
SDS-PAGE        ドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動
SEC-HPLC        サイズ排除高速液体クロマトグラフィー
SEM             走査電子顕微鏡
TGA             熱重量分析
【０１３１】
詳細を述べる前に、製剤、方法及び分析手法について説明する。
【０１３２】
IL-13Rα2-IgG製剤：スプレードライIL13-Rα2-IgG粒子は標準的スプレードライ法を使用して製造した。簡単に述べると、各製剤について、IL-13Rα2-IgGを表1に示すような規定の量の添加剤と共に脱イオン水と合わせた。各製剤の全固形物濃度も表1に示す。1%の固体値は10mg/mLの固体を示す。典型的には、約200-300 mLの液体供給溶液が各製剤について製造された。pH6.5になるように必要に応じてクエン酸ナトリウム及び水酸化ナトリウムが加えられた。
【０１３３】
実施例1、2及び3では残存量(例えば、約0.1-0.2%)のトウィーン80が含まれた。ダイアフィルトレーション(実施例16を参照)により、残存トウィーン80の量が約0.05%未満に減った。
【０１３４】
液体供給溶液をその後、ブッチスプレードライヤーを使用して下記の条件下でスプレードライした：排出口温度＝60-80℃；流速＝約5 mL/分。粉末を回収し、粉末のいくつかについては特性決定をした。
【０１３５】
水分含量．粉末の水分含量は熱重量分析によって測定した。
【０１３６】
MMAD．エアゾール粒径分布(MMAD)を28L/minの流量でカスケードインパクター(グレースビー・アンダーセン、スマーナ、GA)を使用して測定し、吸入口マニホルドでの粉末損失は無視した。
【０１３７】
放出用量(ED)．放出用量は、米国特許No.5,740,794に記載の乾燥粉末吸入器及び直径47mmのゲルマンガラスフィルターを使用して、「定義」の項に記載されているように決定した。
【０１３８】
走査電子顕微鏡(SEM)．粒子形態は、フィリップス電子光学(アイントホーヴェン、オランダ)により製造されたXL 30 ESEMを使用して測定した。
実施例 1-16
製剤の特性決定
【０１３９】
表1に、製造してその後スプレードライした製剤のリストを、sIL-13Rα2-IgGである組成物のバランスとともに示す。
【表１】
2007522246.tif 000003
【０１４０】
いくつかのスプレードライ製剤の特性決定を表2に示す。表2において、実施例15は原液であり、実施例16はダイアフィルトレーションを行っている。
【表２】
2007522246.tif 000004
【０１４１】
表2に見られるように、IL-13Rα2-IgG粉末製剤は肺送達に適したMMAD、FPF<3.3μm、FPF<4.7μm、FPM<3.3μm、及びFPM<4.7μmを示す。実施例5及び9も良好なED値を照明した。スプレードライ後の高次分子凝集体形成の測定はサイズ排除クロマトグラフィーを使用して行った。値はスプレードライ前及びスプレードライ後8.2分の時点で再び測定した高次凝集体含量を表わす。結果は良好な製剤安定性を示している。IL-13Rα2-IgGは蛋白とともに約14%(重量)の炭水化物を併せ持つと考えられたため、製剤中の活性%(炭水化物を全て除いた活性蛋白の量)は、製剤で測定されたIL-13Rα2-IgGの量の14%を差し引くことにより計算された。実施例5及び9では、活性%はそれぞれ55及び37であった。これらの各実施例について、名目用量はそれぞれ1.2mg及び0.8mgと決定された。上に指摘したように、これらの用量は所定の状況の特定の必要に応じて調節することができる。最後に、実施例1、2及び3の水分含量はすべて10%未満であった。
実施例17及び18
IL-13Rα2-IgG粉末剤製剤のSEM
【０１４２】
実施例5及び9について粒子形態を調べた。図1Aは、実施例5の製剤Aの粒子のSEMに対応し、図1Bは、実施例9の製剤Bの粒子のSEMに対応する。両方の例で、SEMはしわが寄り、「レーズン状の」形状の粒子を示し、これは優れたエアゾール特性を提供するものである。添加剤トリロイシンはこの望ましいる粒子形態を提供する上で重要な要因であると考えられる。
実施例 19-27
製剤の実現可能性評価
１．要約
【０１４３】
これらの実施例の目的は、(1) sIL-13Rα2-IgGが肺送達システム(PDS)を用いるエアゾール送達に適した乾燥粉末として製剤化することができるかどうかを測定すること、及び(2) ヒツジモデルでの吸入効率試験に使用する製剤を識別することであった。望ましい粉末剤は以下の特性を有するものと定義された：
・パーセント放出用量(%ED)が >60%
・空気動力学的粒径質量中央値(MMAD)が <3.5μm 
・微粒子分画(FPF<3.3μm)が >45% 
・1か月間の加速条件(40℃/75% RHのパッケージ)下における安定貯蔵後：
開始時の活性医薬成分(API)に対して、可溶性凝集体の増加が <2.5%、
かつ共有結合性凝集体の増加が <2.5%
【０１４４】
9個の製剤をスクリーニングし、2個を完全な特性決定用に選んだ(製剤A及びB)。製剤Aは55 wt%の sIL-13Rα2-IgGを含み(上記の実施例5に相当)、製剤Bは37 wt%の sIL-13Rα2-IgGを含んだ(上記の実施例9に相当)。これら2つの粉末剤のエアゾール性能並びに物理的及び化学的性質を、スプレードライ直後及び1ヶ月の安定貯蔵後に評価した。初期のエアゾールデータに基づいて、sIL13Rα2IgG製剤の5mg充填ブリスターパック(BP)1個から肺に送達されうるsIL-13Rα2-IgGの量を計算した。
【０１４５】
製剤A及びBを、より詳細な特性決定及び安定性評価を行うために製造した。スプレードライ後、両方の製剤を判定基準に照らし合わせた。製剤Aは、67%の%ED、2.8μmのMMAD、及び64%のFPF<3.3μmを示し；製剤Bは、61%の%ED、2.4μmのMMAD、及び77%のFPF<3.3μmを示した。スプレーしていない蛋白とスプレードライ粉末剤の比較から、製剤Aも製剤Bもどちらもスプレードライの後に何ら化学的分解も示さなかったことがわかった。製剤Aは40℃にさらされた場合に、高分子量の凝集体含量が(APIに関して)2.4%の増加を示したが、判定基準内に維持されていた。どちらの製剤も、安定性試験の時間経過中、エアゾール性能の損失を全く示さなかった。
２．目的及び範囲
2.1 目的
【０１４６】
この研究課題の目的は、(1) エアゾール送達用の乾燥粉末剤としてsIL-13Rα2-IgGを製剤化すること；及び(2) ヒツジモデルでの吸入効率試験に使用できる、より優れた製剤を識別することであった。
2.2 範囲
【０１４７】
米国特許No.6,257,233(これは参照文献としてここにその全てが組み込まれる）に開示されているように、肺送達システム(PDS)を使用した評価を行うために、sIL-13Rα2-IgGの製剤を製造しブリスターパッケージ(BP)中に5mgずつ充填した。sIL-13Rα2-IgG製剤のエアゾール性能、物性及び化学的安定性を、いくつかの条件でスプレードライ後(開始時点)、及び1か月の貯蔵後に評価した。安定性試験用に、粉末剤はBPに充填し、それをさらに乾燥剤とともにホイルパウチの中に封入した。
【０１４８】
sIL-13Rα2-IgG乾燥粉末剤の目標とするエアゾール特性及び化学的安定性を表3に掲げる。
【表３】
2007522246.tif 000005
３．材料及び方法
3.1 活性医薬成分(API)
【０１４９】
sIL-13Rα2α2-IgGのおよその分子量は142 kDaであり、これはグリコシル化された蛋白での表示である。炭水化物は、sIL-13Rα2-IgGの全質量の14パーセントを構成する。蛋白濃度を測定するのに用いた吸光係数は、280nmで2.18 mL mg-1 cm-1であり、これはグリコシル化による効果を調節していない。
【０１５０】
トウィーン80を含むsIL-13Rα2-IgGを用いたいくつかの予備試験から、トウィーン80が粉末製剤のエアゾール性能に有害な作用を及ぼすことが示された。したがって、これらの実施例のAPIのロットはトウィーン80を含まないものを用いた。
3.2 製剤の調製及び選択
【０１５１】
sIL-13Rα2-IgG(トウィーン80を含まない)を2.5mMクエン酸緩衝液、pH 6.5中にダイアフィルトレーションし、得られた粉末のエアゾール性能及び化学的安定性を強めるために添加剤を加え、得られた溶液を実験室規模のブッチシステムを用いてスプレードライすることにより9個のsIL-13Rα2-IgG製剤を製造した。これら9個の粉末剤をエアゾール性能及び化学的安定性に基づいて１ヶ月間初期スクリーニングを行い(粉末はBPに充填し、乾燥剤とともにホイルパウチ中に包装）、開発及びさらに特性決定するために2つの製剤(製剤A及びB)を選択するに至った。
【０１５２】
2個の優れた製剤A及びBの組成(重量対重量; w/w)を表4に示す。製剤中の個体含量を計算する目的で、表4中に示す活性医薬成分(API)含量は、アグリコンsIL-13Rα2-IgGによって表わされる粉末の割合を指す；グリカンパーセンテージは、sIL-13Rα2-IgGの全質量の14%として計算される。
【表４】
2007522246.tif 000006
3.3 製剤評価
3.3.1 安定性試験
【０１５３】
1ヶ月間、試験製剤中でのsIL-13Rα2-IgGの安定性を試験するために、粉末剤を5mgの総充填重量でブリスターパック(BP)中に充填した。その後、BPを乾燥剤とともにホイルパウチ中に封入し、2セットの条件下のインキュベーションチャンバー中に貯蔵した。別の粉末サンプル(「パッケージされていない」サンプルと呼ぶ)を蓋をしていないガラス瓶中に入れ、調節された温度及び湿度の条件下で保護せずに貯蔵した。パッケージされた粉末剤のエアゾール試験を貯蔵されたBPを使用して行ない、化学的試験はパッケージされた粉末剤(BP)及びパッケージされていない粉末剤(バルク)を再溶解した溶液で行った。これらの分析は、開始時、及び表5に示す条件下で1ヶ月貯蔵した後に行った。
【表５】
2007522246.tif 000007
【０１５４】
エアゾール性能の特性決定及びsIL-13Rα2-IgGの安定性評価のために使用する具体的な方法を表6に掲げる。
【表６】
2007522246.tif 000008
3.3.2 エアゾール粉末性能
【０１５５】
米国特許No.6,257,233(これは参照文献としてここにその全てが組み込まれる）に開示されるように、PDS吸入器を使用して各粉末剤のエアゾール性能を測定した。エアゾール性能は、放出用量パーセント(%ED；1つのBPを作動させた後に吸入器から放出されるBP充填重量のパーセンテージ)を重量測定により測定し、アンダーセン・カスケードインパクタ(ACI)を使用してBPに充填された製剤の粒子サイズ分布(PSD)を決定することにより評価した。PSDパラメーターには空気動力学的粒径質量中央値(MMAD)、微粒子分画(FPF<3.3μm；3.3μm未満の空気動力学的粒径を持つ送達された粒子の割合）及び微粒子用量(FPD<3.3μm；<3.3μmの粒子で送達されたアグリコンsIL-13Rα2-IgG APIの質量)が含まれる。
【０１５６】
ガンマシンチグラフィー及び薬物動態学の両方を使用したヒトにおける様々な歴史上の臨床研究から、ヒトの肺に送達されるsIL-13Rα2-IgGの量は、PDSについて以下のように評価された：
【数１】
2007522246.tif 000009
式中、φLはヒトの肺に入った分画、φEDは放出用量、BPfillはBPの充填重量、及びWtAIは製剤中の活性成分の重量パーセントである。
3.3.2 物理的及び化学的評価
【０１５７】
粒子の全体的形態を走査電子顕微鏡(SEM)により評価し、粉末剤の化学的安定性は全可溶性凝集体についてはサイズ排除クロマトグラフィー(SEC)によって、また共有結合凝集体についてはドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS-PAGE)によって評価した。粉末剤の水分含量は、サンプルを10℃/minで110℃まで加熱し、20分間110℃に温度を維持することによって、熱重量分析(TGA)により測定した。
４．結果
【０１５８】
スプレードライ及びパッケージング(BP中に充填し、乾燥剤とともにホイルパウチ中に封入)した後、試験条件下で1ヶ月間の安定貯蔵の後、両方のsIL-13Rα2-IgG製剤について、表3に掲げた目標とする粉末特性について調べた。
4.1 エアゾール性能
【０１５９】
sIL-13Rα2-IgG製剤を試験して得られた結果としてのエアゾール性能を表7に掲げる。製剤Aについては、開始時及び1ヶ月後の%ED値は67から70%までの範囲；開始時及び1ヶ月後のMMAD値は2.6から2.8μmまでの範囲；開始時及び1ヶ月後のFPF<3.3μm値は64から71%までの範囲；並びに開始時及び1ヶ月後のFPD<3.3μm値は1.4から1.7mgまでの範囲であった。製剤Bについては、開始時及び1ヶ月後の%ED値は61から63%までの範囲；開始時及び1ヶ月後のMMAD値は2.3から2.4μmまでの範囲；開始時及び1ヶ月後のFPF<3.3μm値は77から78%までの範囲；並びに開始時及び1ヶ月後のFPD<3.3μm値は1.1mgであった。
【０１６０】
製剤A又はBのどちらも、試験したいずれの安定性条件下でもエアゾール性能の変化は観察されなかった。
【表７】
2007522246.tif 000010
【０１６１】
粉末剤の粒子サイズ分布プロフィールを図3A、3B、4A、及び4Bに示す。図中の粒子サイズ分布プロフィールは表8に示す粒子サイズ区分を使用して決定した。図3Aは、製剤Aの開始時の粒子分布プロフィールを示し、図4Aは、乾燥剤を入れて40℃、75%相対湿度で1ヶ月間、ホイルパウチに入れたBP中で貯蔵した後の製剤Aの粒子分布プロフィールを示す。図3Bは、製剤Bの開始時の粒子分布プロフィールを示し、図4Bは、乾燥剤を入れて40℃、75%相対湿度で1ヶ月間、ホイルパウチに入れたBP中で貯蔵した後の製剤Bの粒子分布プロフィールを示す。
【表８】
2007522246.tif 000011
【０１６２】
表9は、式1によって計算された試験sIL-13Rα2-IgG製剤の予想肺沈着量を示す。
【表９】
2007522246.tif 000012
4.2 形態
【０１６３】
図2A及び2Bは、乾燥剤を入れたホイルパウチ中に封入したBP中で40℃、75%RHで1ヶ月間、貯蔵した後の、それぞれ製剤A及びBのSEM画像である。いずれの試験粉末剤の全体的形態にも目に見える変化はなかった。
4.3 化学的安定性
4.3.1 水分含量
【０１６４】
表10は、スプレードライ後、及び乾燥剤を入れたホイルパウチ中に封入したBP中で1ヶ月間、貯蔵した後の各製剤の水分含量を示す。貯蔵中に粉末剤から水分の消失が観察されたが、おそらくは充填及び貯蔵によってもたらされた低湿度環境によるものである。
【表１０】
2007522246.tif 000013
4.3.2 SECにより測定される凝集
【０１６５】
SEC分析を、BP中に充填されホイルパウチ中に乾燥剤とともに封入された粉末剤とともに、調節された温度及び湿度条件にさらされた原末について行なった。
【０１６６】
サイズ排除クロマトグラフィーは、25℃/60% RHのパッケージされたサンプル中又は40℃/75% RHの製剤B中の可溶性凝集体形成に増加を示さなかった。しかしながら、40℃/75% RHで貯蔵された製剤Aのパッケージされたサンプル、並びに高温及び高RH条件に直接さらされた両製剤のパッケージされていないサンプルは、可溶性凝集体形成の兆候を示し、対照のAPIに対して最大2.4%を占める可溶性凝集が見られた。しかしながら、乾燥剤とともにパッケージされ40℃/75% RHで1ヶ月貯蔵された製剤A及びBの両方が、APIに対して可溶性凝集体含量の増加が<2.5%という目標基準を満たしていた。
4.3.2 SDS-PAGEによる凝集
【０１６７】
SDS-PAGEは、パッケージされたサンプルのいずれにも、APIに関するsIL-13Rα2-IgGの分解、又は共有結合による凝集体形成の兆候を示さなかった。SDS-PAGEはまた、パッケージされた、又はパッケージされていない安定貯蔵サンプルのいずれにも共有結合による凝集体形成の兆候を示さなかった。
５．結論と提案
【０１６８】
2つのsIL-13Rα2-IgG製剤のエアゾール性能は予め決めた判定基準を満たしていた。
【０１６９】
sIL-13Rα2-IgG製剤のエアゾール及び化学的性質は、スプレードライ処理において、並びに、40 ℃までの温度で乾燥剤を入れたホイル包装BP及び25℃で最高60%のRH値にさらした原末の両方についての1ヶ月の貯蔵において安定であった。
【０１７０】
ヒツジモデルでの用量はおよそ0.2mgが肺に送達される必要がある。両方の製剤が目標となる特性を満たしていたが、製剤Aのほうが予想沈着量が高く、それはヒツジにおける吸入効力試験は製剤Aを用いて進めるべきことを示唆していた。製剤Bの方が、製剤Aより化学的に安定であることが示された。
比較例1-3
活性物質の2日用量に対応する、低1日用量(0.14mg/kg)ないし高1日用量(0.5mg/kg)を送達するのに必要な乾燥粉末の代表的な用量範囲での乾燥粉末ビヒクル単独での耐用性の決定
１．要約
【０１７１】
最大耐用量を決定し、かつsIL-13Rα2-IgGを用いた有効性試験で使用する用量の耐用性を決定するために、3頭の喘息性ヒツジに吸入ビヒクル(賦形剤)乾燥粉末を用量を増加させて投与した。2つの異なるビヒクル粉末、すなわちビヒクル-1及びビヒクル-2をこの試験で用いた。ビヒクル-1は添加剤クエン酸塩を含んでおり、ビヒクル-2はクエン酸塩を含まなかった。最大耐用量は、ベースラインに対して100%の肺抵抗性の増加を引き起こした粉末量として定義された。ビヒクル乾燥粉末(ビヒクル-1又はビヒクル-2)の肺用量をより高用量に増加させると、喘息性ヒツジの肺抵抗性の増加を引き起こした。この限定的試験では、2つの異なる製剤間でビヒクルの耐用性に違いがあった。このモデルで肺抵抗性を100%増加させる用量は、およそ19mgのビヒクル-1粉末(0.38又は0.54mg/kg)及びおよそ37mgのビヒクル-2粉末(0.91mg/kg)であった。乾燥粉末ビヒクル-1の吸入はカルバコールに対する非特異的な気管支過敏性(BHR)に影響を及ぼさなかった。ブリスターパック2個の用量(およそ10mgの合計粉末用量と推定)において、肺の反応は低く(<50%)、また一過性であった(5分以内にベースラインに戻った）。
２．目的
【０１７２】
この試験の目的は、ヒツジ喘息モデルでの乾燥粉末ビヒクルの最大耐用量を決定することであった。この試験は、ヒツジ喘息モデルでsIL-13Rα2-IgGの乾燥粉末製剤の有効性を試験の準備として行なわれた。気管支収縮はヒツジ喘息モデルにおける測定パラメーターである。
３．試験デザイン
【０１７３】
この試験では3頭のヒツジを使用した。2頭のヒツジにビヒクル-1の用量を増加させて(1〜8個のブリスターパック、BP)与えた。ビヒクル-1はクエン酸塩を含む。肺抵抗性(RL)を用量送達の前後に測定した。15分後、又は抵抗性がベースラインに戻った時点で、次の用量を投与した。肺抵抗性がベースラインから100%増加した時点で、用量増加を停止した。用量増加の24時間後に、カルバコールに対する非特異的な気管支過敏性(BHR)を測定し、ベースライン結果と比較した。
【０１７４】
用量増加処置は第三のヒツジでも行った。この時は、異なるビヒクル(ビヒクル-2)を使用した。ビヒクル-2は添加剤クエン酸塩を含まなかった。BHR反応はこのヒツジでは測定しなかった。
４．材料
4.1 試験システム及び動物管理
【０１７５】
雌のヒツジ成獣(n=3；体重、BW = 35-50kg)を、これらの試験に使用した。これらのヒツジはカルバコールを使用して予めBHRについて試験した。雌のヒツジ2頭をグループ1に、雌のヒツジ1頭をグループ2に使用した(合計3頭の雌のヒツジ)。
4.1.1 種
【０１７６】
ヒツジ
4.1.2 グループ当たりの数/性別
【０１７７】
2F/グループ1及び1F/グループ2
4.1.3 飼育室
【０１７８】
ヒツジは、実験動物施設の囲いの中で12時間明るく12時間の暗いサイクルで飼育された。室温と相対湿度はモニターした。
4.1.4 識別
【０１７９】
ヒツジはそれぞれ、動物の側腹部の毛を剃った領域に消えないマーカーで記すとともに、耳タグでユニークに識別された。
4.1.5 体重
【０１８０】
試験に先立ってそれぞれのヒツジの体重を測定した。動物の体重は、35、41及び50kgであった。
4.1.6 動物の処分
【０１８１】
これらの実験は、終了点として死亡を測定することを意図したものではなかった。全身毒性又は苦痛の兆候を示した動物はいなかった。動物は試験から回復し、将来の試験に使用するための動物プール中に戻された。
5.2 対照物
5.2.1 対照物−ビヒクル-1
化学物質/一般名：ビヒクル-1
記載事項：表11を参照のこと
貯蔵：乾燥剤を入れたホイルパウチ中に封入したブリスターパック。
周囲条件での貯蔵。
5.2.2 対照物−ビヒクル-2
化学物質/一般名：ビヒクル-2
記載事項：表11を参照のこと
貯蔵：乾燥剤を入れたホイルパウチ中に封入したブリスターパック。
周囲条件での貯蔵。
６．方法
6.1 製剤
【０１８２】
2つの製剤の組成(重量対重量；w/w)を表11に示すこと以外は、製剤を実施例1-16の手順を用いて製造した。
【表１１】
2007522246.tif 000014
6.2 乾燥粉末送達手順
【０１８３】
試験はフロリダで2日間行なわれた。1日目に、空気駆動式エアゾール送達システム(PDADS)をセットアップした。米国特許No.6,257,233(これは参照文献としてここにその全てが組み込まれる）に開示されるように、PDADSにはハーバードアパラタス大型動物人工呼吸器に接続されたPDSが含まれていた。PDADSのインビトロでの効率は、気管内(ET)チューブを通って送達された粉末剤の質量によって測定された。結果を、試験サイトへの出荷に先立ってカリフォルニアでのシステム上で得られたものと比較した。インビトロでのシステム効率測定は毎日繰り返した。使用した換気パラメーターは以下のとおりである：500mLの一回呼吸量、毎分5回の呼吸、及び50:50の吸気：呼気サイクル。ヒツジの肺に乾燥粉末エアゾールを送達するために使用された操作工程は以下のとおりであった：
１．通風装置が吸入器の終端にあり、ブリスターをPDS装置中に入れ分散チャンバー中にエアゾール化した。
２．その後、空気ピストンを分散チャンバー方向へスウィッチを切り替えた。
３．通風装置が吸気のサイクルを開始すると(通風装置が吸気を開始すると、発射と同期された薬量計が賦活化してわかるように)、空気ピストンが起動してヒツジに粉末剤を送達した。
４．システムがETチューブから切断されピストンがシリンダから引き戻される前に、もう一回の完全な吸入サイクルが行われた。
５．２個以上のブリスターが送達される場合には、ステップ1-4が繰り返された。
【０１８４】
ビヒクル乾燥粉末エアゾールは意識のある拘束されたヒツジに送達した。ヒツジは挿管されて、ETチューブがPDADS及びハーバード通風装置に接続された。約2分後にヒツジがシステムに慣れてから、乾燥粉末送達を開始した。
6.3 生理的反応
【０１８５】
吸入された粉末剤に対する生理的反応はベースラインに対する肺抵抗性(RL)のパーセント変化として測定した。ビヒクル-1送達の24時間後に、カルバコールを使用してBHRを測定した。ビヒクルが気道反応性に効果があったかどうかを判定するために、ビヒクル投与24時間にRLに400%の変化を達成するのに必要なカルバコール用量(PC400)を歴史的なPC400値と比較した。Abraham et al., J. Clin. Invest. 93:776-787, 1994,「A4-インテグリンはヒツジにおける抗原誘導性の遅延気管支反応及び延長性気道過敏症に介在する」を参照のこと；これは参照文献としてここにその全てが組み込まれる。
6.4 用量増加手順
【０１８６】
各ヒツジについてベースラインRLを測定し、次いで、ビヒクル(1又は2)の初回用量を投与した(用量1、表12を参照のこと)。次の10分間、RLを再び測定した。15分後、又はRLがベースラインに戻った時点で、第二の高用量ビヒクル(1又は2)で投薬を繰り返した。この用量−作用の連続を、RLがベースライン上100%に増加するまで繰り返した。
【表１２】
2007522246.tif 000015
6.5 用量推定
【０１８７】
試験プランニング用にインビトロのシステム効率を決定し、かつヒツジに送達される目標用量を推定するために、PDADSシステムについて特性決定した(表12を参照のこと)。効率測定は通風装置を使用して行わず、室内の空気供給によりチェースエア塊を加えて粉末剤をフィルターに送達することにより行った。
【０１８８】
PDADSシステム効率をハーバード通風装置を使用して再び推定し、これらの測定値を試験サイトで送達される用量を推定するために使用した。インビトロでの評価用に、送達された粉末剤を回収するためにフィルター(ガラスフィルター)をETチューブの末端に取り付けた。効率は、フィルター上に沈着した質量をBP充填質量で割り、100を掛けた値である。フィルター上に沈着した粉末剤用量は重量測定により決定された。毎日5回ずつ別個の効率測定を行った(各測定当たりBP１個)。少なくとも2日の実験日について5回ずつ測定したシステムの平均効率を、ヒツジに送達する用量を推定するために使用した。
6.6 グループ割り当て
【０１８９】
表13に、2つのグループの処置レジメを要約する。
【表１３】
2007522246.tif 000016
７．結果と考察
7.1 エアゾールシステム効率
【０１９０】
PDADSシステムの平均送達効率は、試験サイトで3日連続の試験で測定したように、ビヒクル-1については64±6%であった。この効率数値を使用して、各ヒツジに送達されるビヒクルの推定用量を、以下の表14に掲げる。送達される推定用量は、およそ3〜19mg (0.07〜0.54 mg/kg)まで増加された。
【表１４】
2007522246.tif 000017
【０１９１】
ビヒクル-2についてのPDADSのエアゾール送達効率は62±2%であった。この効率数値を使用して、各ヒツジに送達されるビヒクル-2の推定用量を、以下の表15に掲げる。ビヒクル-2について送達される推定用量は、およそ5〜37 mg (0.12〜0.91 mg/kg)まで増加された。
【表１５】
2007522246.tif 000018
7.2 RLにおける用量の効果
【０１９２】
ビヒクル-1又はビヒクル-2の乾燥粉末の1個又は2個のBP(およそ3〜10mg；0.07〜0.28mg/kg)の吸入による投与は、効果を示さないか又はRLにわずかな増加をもたらしただけであった(ベースラインからの増加が<50%、図5)。ビヒクル-1の4個のBPによる高用量(およそ19 mg；0.38又は0.54 mg/kg)は、RLの100%を超える増加をもたらした。ビヒクル-2の同じ用量に対する反応は、より少なかった(RLの約50%の変化)。図6及び7は、喘息性ヒツジにおける用量とRLの即時増加の関係を示している。抵抗性はビヒクル-1及びビヒクル-2の両方について、用量が増加するにつれて増加する。このモデルでの肺抵抗性の少なくとも100%の増加を引き起こす用量は、ビヒクル-1についてはおよそ19  mg (0.38又は0.54mg/kg)で、ビヒクル-2についてはおよそ37mg (0.91 mg/kg)であった。
【０１９３】
乾燥粉末送達の24時間後にBHRを測定した。この測定はビヒクル-1を投与された2頭のヒツジだけに行なった。歴史的な対照と比較して違いは見られなかった。
８．結論
【０１９４】
乾燥粉末ビヒクルの吸入用量を高用量に増加させることにより、喘息性ヒツジに気管支収縮反応(すなわちRLの増加)が誘発される。この試験で、異なる製剤では反応を誘発する耐用性に違いがあった。このモデルで肺抵抗性の100%の増加を引き起こす用量は、ビヒクル-1についてはおよそ19  mg (0.38又は0.54mg/kg)で、ビヒクル-2についてはおよそ37mg (0.91 mg/kg)であった。ビヒクル-1と共に製剤化されたsIL-13Rα2-IgGの効率試験ではわずか2個のブリスターパック(BP、およそ10mgの推定された目標粉末剤肺用量)しか必要とされなかった。この用量では肺の反応は低く(<50%)、かつ一過性であった(5分でベースラインに戻った)。およそ10mgの乾燥粉末の吸入への一過性の反応によって、sIL-13Rα2-IgGに関する有効性試験の解釈が邪魔されるべきではない。
実施例28及び29、並びに比較例4
吸入後のヒツジにおける0.2mg/kg sIL-13Rα2-IgG の薬物動態学及び薬力学
１．要約
【０１９５】
喘息の抗原投与モデルにおける有効性を調べるために、ヒツジをビヒクル(n=1)又はsIL-13Rα2-IgG(活性；n=2)の吸入乾燥粉末のいずれかで処置した。乾燥粉末の2用量を抗原投与に先立つ24時間前、及び再び2時間前に吸入により投与した。1用量当たりで送達される乾燥粉末ビヒクルの合計量は、およそ10mg(0.27mg/kg)であった。1量当たりで送達される活性乾燥粉末の合計量は、およそ5mgのsIL-13Rα2-IgG(0.14mg/kg)であった。肺抵抗性の変化をその後8時間にわたり測定した。抗原投与の24時間後にカルバコールに対する非特異的な気管支過敏性(BHR)を測定し、結果を先の対照データと比較した。吸入ビヒクルでの処理はBHR又は抗原投与に対する反応に影響を及ぼさなかった。
0.14又は0.15mg/kgの吸入sIL-13Rα2-IgGを抗原投与に先立つ24時間前、及び再び2時間前にヒツジに投与したところ(0.28又は0.30mg/kgの累積用量)、遅発性喘息反応を抑制し、BHRを低下させた。
２．目的
【０１９６】
この試験の目的は、喘息のヒツジモデルにおいて、乾燥粉末sIL-13Rα2-IgGの有効性及び薬物動態学を測定することであった。
３．試験デザイン
【０１９７】
3頭のヒツジに、ビヒクル又はsIL-13Rα2-IgGのいずれかの吸入(IH)乾燥粉末製剤を抗原投与に先立つ24時間前又は2時間前に投与した。肺抵抗性(RL)を、用量送達前及び直後に、さらに再び抗原投与の直前(時間0)に測定した。次いで、ヒツジをエアゾール化された抗原(豚回虫)にさらした。RLをその後8時間にわたり測定した。用量増加の24時間後にカルバコールに対するBHRを測定し、歴史的なベースラインデータと比較した。
４．材料
4.1 試験システム及び動物管理
【０１９８】
雌のヒツジ成獣(n=3；体重、BW = 35-37kg)を、これらの試験に使用した。これらのヒツジはカルバコールを使用して予めBHRについて試験した。雌のヒツジ1頭をグループ1に、雌のヒツジ2頭をグループ2に使用した(合計3頭の雌のヒツジ)。ヒツジは、実験動物施設中で飼育された。
4.1.1 種
【０１９９】
ヒツジ
4.1.2 グループ当たりの数/性別
【０２００】
1F/グループ1及び2F/グループ2
4.1.3 飼育室
【０２０１】
ヒツジは、実験動物施設の囲いの中で12時間明るく12時間暗いサイクルで飼育された。室温と相対湿度はモニターした。
4.1.4 識別
【０２０２】
ヒツジはそれぞれ、動物の側腹部の毛を剃った領域に消えないマーカーで記すとともに、耳タグでユニークに識別された。
4.1.5 体重
【０２０３】
試験に先立ってそれぞれのヒツジの体重を測定した。動物の体重は、35-37kgであった。
4.1.6 動物の処分
【０２０４】
これらの実験は、終了点として死亡を測定することを意図したものではなかった。全身毒性又は苦痛の兆候を示した動物はいなかった。動物は試験から回復し、将来の試験に使用するための動物プール中に戻された。
4.2 対照及び試験物
4.2.1 対照物−ビヒクル
化学物質/一般名：ビヒクル1
記載事項：表16を参照のこと
貯蔵：乾燥剤を入れたホイルパウチ中に封入したブリスターパック。
周囲条件での貯蔵。
4.2.2 試験物−活性
化学物質/一般名：sIL-13Rα2-IgG
記載事項：表16を参照のこと
貯蔵：乾燥剤を入れたホイルパウチ中に封入したブリスターパック。
周囲条件での貯蔵。
５．方法
5.1 製剤
【０２０５】
2つの製剤の組成(%重量対重量；%w/w)を表16に示すこと以外は、製剤を実施例1-16と同様に製造した。この報告の目的のために、また用量及び製剤中の固体含量を計算するために、表16中に示す活性医薬成分(API)含量は、sIL-13Rα2-IgGのアグリコン(非炭水化物)部分によって表わされる粉末の割合を指す；グリカンパーセンテージは、sIL-13Rα2-IgGの全質量の14%として計算される。
【表１６】
2007522246.tif 000019
5.2 乾燥粉末送達手順
【０２０６】
試験は３日間にわたって行われた。その前日、この試験で使用する吸入粉末剤の用量に対するヒツジの耐用性を比較例1-3に述べたように試験した。乾燥粉末エアゾール(ビヒクル又は活性)は意識のある拘束されたヒツジに送達した。ヒツジは挿管されて、気管内(ET)チューブが大型動物人工呼吸器(ハーバードアパラタス)に連結された空気駆動式エアゾール送達システム(PDADS)に接続された。約2分後にヒツジがシステムに慣れてから、乾燥粉末送達を開始した。
5.3 生理的反応
【０２０７】
抗原投与に対する生理的反応はベースラインに対する肺抵抗性(RL)のパーセント変化として測定した。抗原投与の24時間後に、カルバコールを使用してBHRを測定した。処理が気道反応性に効果があったかどうかを判定するために、抗原投与の24時間にRLに400%の変化を達成するのに必要なカルバコール用量(PC400)を歴史的なPC400値と比較した。この技法の詳細はAbraham et al., J. Clin. Invest. 93:776-787, 1994,「A4-インテグリンはヒツジにおける抗原誘導性の遅延気管支反応及び延長性気道過敏症に介在する」に開示されており、これは参照文献としてここにその全てが組み込まれる。
5.4 用量推定
【０２０８】
試験プランニング用にインビトロのシステム効率を決定し、かつヒツジに送達される目標用量を推定するために、PDADSシステムについて特性決定した(表17を参照のこと)。効率測定は通風装置を使用して行わず、室内の空気供給により空気塊を加えて粉末剤をフィルターに送達することにより行った。
【０２０９】
PDADSシステム効率をハーバード通風装置を使用して再び推定し、これらの測定値を試験サイトで送達される用量を推定するために使用した。インビトロでの評価用に、送達された粉末剤を回収するためにフィルター(ガラスフィルター)をETチューブの末端に取り付けた。フィルター上に沈着した粉末剤用量は重量測定により決定された。効率は、フィルター上に沈着した質量をBP充填質量で割り、100を掛けた値である。毎日5回ずつ別個の効率測定を行った(各測定当たりBP１個)。少なくとも2日の実験日について5回ずつ測定したシステムの平均効率を、ヒツジに送達する用量を推定するために使用した。
【表１７】
2007522246.tif 000020
5.5 グループ割り当て
【０２１０】
表18に、2つのグループの処置レジメを要約する。
【表１８】
2007522246.tif 000021
６．結果と考察
6.1 エアゾールシステム効率
【０２１１】
PDADSシステムの平均送達効率は、試験サイトで3日連続の試験で測定したように、ビヒクルについては64±6%(平均±RSD)であった。sIL-13Rα2-IgG乾燥粉末についてのPDADSシステムの平均効率は、試験サイトで2日連続の試験で測定して、64±5%であった。これらの効率数値を使用して、各ヒツジに送達されるビヒクル及びsIL-13Rα2-IgGの推定用量を計算し、以下の表19に掲げる。
【表１９】
2007522246.tif 000022
【０２１２】
およそ10mgのビヒクル粉末剤(0.27mg/kg)を毎日、ビヒクル対照ヒツジ(#2116)に送達し、2日間で粉末剤累積用量は合計0.53mg/kgになった。sIL-13Rα2-IgGについては、1日の粉末剤用量はおよそ10mg(0.26又は0.27mg/kg)であった。2日間の累積粉末剤用量はおよそ19mg(0.52又は0.55mg/kg)であった。sIL-13Rα2-IgGの1日当たりに送達された用量はおよそ5mg(0.14又は0.15mg/kg)であった。2日間で送達されたsIL-13Rα2-IgGの累積用量は、およそ11mg(0.28又は0.30mg/kg)であった。
6.2 喘息反応におけるビヒクル用量の効果
【０２１３】
2個のビヒクルのBPを抗原投与に先立ち2回、ヒツジに投与したところ喘息反応に効果はなかった(図8を参照のこと)。抗原投与に先立つ24及び2時間前におよそ10mgのビヒクル乾燥粉末で処置したところ、早期(抗原投与後0-3時間)又は遅発性(抗原投与後4-8時間)の喘息反応(ベースラインからのRLの%変化)に効果はなかった。
6.3 ヒツジの喘息反応におけるsIL-13Rα2-IgGの効果
【０２１４】
抗原投与に先立つ24及び2時間前にsIL-13Rα2-IgG(およそ5mg、0.14 又は0.15mg/kg)で処置したところ、両方のヒツジで遅発性喘息反応を抑制した(図9)。
７．結論
【０２１５】
吸入ビヒクル乾燥粉末での処置はヒツジにおける豚回虫抗原投与に対する喘息反応に効果がなかった。2用量(1用量当たりおよそ5mg；1用量当たり0.14又は0.15mg/kg)の吸入sIL-13Rα2-IgGによる処置(抗原投与に先立つ24及び2時間前)は、ヒツジにおける抗原に対する遅発性気管支収縮反応及びBHRを抑制した。
実施例30、比較例5及び6
ヒツジの肺への投薬試験のためのsIL-13Rα2-IgGの製造及び特性決定
１．要約
【０２１６】
これらの実施例の目的は、(1)ヒツジにおける吸入有効性試験に用いるだけのために、添加剤を含むsIL-13Rα2-IgGの乾燥粉末剤及びビヒクル粉末剤を製造すること；及び(2)試験期間中の粉末剤のエアゾール、固体状態及び化学的安定性を評価することであった。
【０２１７】
sIL-13Rα2-IgG粉末剤を製剤の実現可能性試験(実施例19-27)で粉末剤を製造するために用いたのと同じ製剤及び加工条件を用いて製造した。活性製剤(実現可能性試験からの製剤A)は、添加剤の混合物である製剤の残りの部分とともに55%のsIL-13Rα2-IgGを含んでいた。ビヒクル対照は活性医薬成分(API)を除いて製剤にした。得られた粉末剤を、エアゾール性能及び凝集体含量についてアッセイした。
【０２１８】
動物施設への輸送又は制御された安定貯蔵の結果として、sIL-13Rα2-IgG又はビヒクル製剤の、エアゾール性能の変化又は可溶性凝集体の増加を示すような証拠は見られなかった(表23)。
【０２１９】
上記粉末剤類は、ヒツジの肺での試験の期間中、許容可能かつ安定であることが分かった。
２．目的
【０２２０】
この研究課題の目的は、(1)ヒツジにおける吸入有効性試験に用いるだけのために、添加剤を含むsIL-13Rα2-IgGの乾燥粉末剤及びビヒクル粉末剤を製造すること；及び(2)試験期間中の粉末剤のエアゾール、固体状態及び化学的安定性を評価することであった。
３．範囲
【０２２１】
ヒツジの肺での試験に用いるために、sIL-13Rα2-IgG及びビヒクル対照の粉末剤を製造しブリスターパッケージ(BP)中に7.5mgずつ充填した。sIL13Rα2IgG製剤は、もともと実現可能性試験で製剤Aとして製造されたものであった。実現可能性試験では、BPは5mgを充填し試験したが、本試験では投薬要件に適合するようにBPには7.5mgを充填した。粉末剤は空気駆動式エアゾール送達システム(PDADS)を使用して、ヒツジに送達された。
【０２２２】
sIL-13Rα2-IgG及びビヒクル対照粉末剤は、動物に投薬する前にPDADSを使用して、粉末剤送達について分析した。結果はエアゾール投薬効率を測定するために記録した。
【０２２３】
sIL-13Rα2-IgG製剤のエアゾール性能、物性及び化学的安定性を、いくつかの条件でスプレードライ後(開始時点)、及び3週間の貯蔵後に評価した。安定性試験用に、粉末剤はBPに充填し、それをさらに乾燥剤とともにホイルパウチの中に封入した。
４．材料と方法
4.1 製剤の調製
【０２２４】
sIL-13Rα2-IgG(トウィーン80を含まない)を2.5mMクエン酸緩衝液、pH 6.5中にダイアフィルトレーションすることにより、sIL-13Rα2-IgG製剤を製造した。得られた粉末のエアゾール性能及び化学的安定性を強めるために添加剤を加えた。ビヒクル-1粉末剤は添加剤を表20に見られる割合で合わせてpH を6.5に調整することにより製造した。これらの製剤は実験室規模のブッチシステムを用いてスプレードライした。ビヒクル-2粉末剤はpH 7.0で製造された非クエン酸塩対照粉末剤であった。
【０２２５】
3つの製剤の組成(重量対重量；w/w)を表20に示す。この報告の目的のために、また製剤中の固体含量を計算するために、表20中に示す活性医薬成分(API)含量は、アグリコンsIL-13Rα2-IgGによって表わされる粉末の割合を指す；グリカンパーセンテージは、sIL-13Rα2-IgGの全質量の14%として計算される。
【表２０】
2007522246.tif 000023
4.2 製剤の評価
【０２２６】
sIL-13Rα2-IgG及びビヒクル-1製剤の安定性を3週間にわたって試験するために、粉末剤を7.5mgの総充填重量でブリスターパック(BP)中に充填した。その後、BPを乾燥剤とともにホイルパウチ中に封入した。サンプルは試験に使用するためにカリフォルニアからフロリダへ輸送するか、又は25℃/60% RH又は40℃/75% RHのインキュベーションチャンバー中で貯蔵した。パッケージされた粉末剤のエアゾール及び固体状態の分析を貯蔵されたBPを使用して行ない、化学的試験はパッケージされた粉末剤(BP)を再溶解した溶液で行った。これらの分析は、開始時、及び表21に示す条件下で3週間貯蔵した後に行った。
【表２１】
2007522246.tif 000024
【０２２７】
sIL-13Rα2-IgGのエアゾール性能の特性決定及び安定性の評価のために使用した特定の方法を、表22に掲げる。
【表２２】
2007522246.tif 000025
4.2.1 エアゾール性能の評価
【０２２８】
米国特許No.6,257,233(これは参照文献としてここにその全てが組み込まれる）に開示されるように、PDS吸入器を使用してsIL-13Rα2-IgG粉末剤及びビヒクル-1粉末剤のエアゾール性能を測定した。エアゾール性能は、放出用量パーセント(%ED；1つのBPを作動させた後に吸入器から放出されるBP充填重量のパーセンテージ)を重量測定により測定し、アンダーセン・カスケードインパクタ(ACI)を使用してBPに充填された製剤の粒子サイズ分布(PSD)を重量測定により測定して評価した。PSDパラメーターには空気動力学的粒径質量中央値(MMAD)、微粒子分画(FPF<3.3μm；3.3μm未満の空気動力学的粒径を持つ送達された粒子の割合）及び微粒子用量(FPD<3.3μm；<3.3μmの粒子で送達されたアグリコンsIL-13Rα2-IgG APIの質量)が含まれる。エアゾール方法の概要は上記の表22に示す。
【０２２９】
ガンマシンチグラフィー及び薬物動態学の両方を使用したヒトにおける様々な歴史上の臨床研究から、ヒトの肺に送達されるsIL-13Rα2-IgGの量は、PDSについて以下のように評価された：
【数２】
2007522246.tif 000026
式中、φLは歴史的な臨床データ及び前臨床データに基づく、ヒトの肺に入った分画、φEDは放出用量、BPfillはBPの充填重量、及びWtAIは製剤中の活性成分の重量パーセントである。
4.2.1.1 空気駆動式エアゾール送達システムにおける粉末剤の特性決定
【０２３０】
BPからの粉末剤をPDSから分散チャンバー中へ始動させる。空気駆動式ピストンが気管内チューブに分散された粉末剤を押し入れる。PDADSを使用した各粉末剤のエアゾール効率を重量測定により測定した。パーセント放出用量(%ED)は、1個のBPの作動後にPDADSから放出されたBP充填重量のパーセンテージである。
4.2.2 物理的及び化学的評価
【０２３１】
粒子の全体的形態を走査電子顕微鏡(SEM)により評価した。粉末剤を、全可溶性凝集体についてはサイズ排除クロマトグラフィー(SEC)によって、また共有結合凝集体についてはドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS-PAGE)によって評価した。粉末剤の水分含量は、サンプルを10℃/minで110℃まで加熱し、20分間110℃に温度を維持することによって、熱重量分析(TGA)により測定した。
５．結果と考察
【０２３２】
スプレードライ及びパッケージング(BP中に充填し、乾燥剤とともにホイルパウチ中に封入)した後、試験条件下で3週間の安定貯蔵の後、sIL-13Rα2-IgG製剤及びビヒクル-1製剤はエアゾール性能に変化を示さず、また化学分解の増加も示さなかった。
5.1 エアゾール性能
【０２３３】
スプレードライ粉末をパッケージングし、エアゾール性能を開始時及び3週間の貯蔵後に試験した。sIL-13Rα2-IgG製剤及びビヒクル-1製剤のエアゾール性能の結果を表23に掲げる。試験したいずれの安定性条件下においても、sIL-13Rα2-IgG又はビヒクル対照のどちらもエアゾール性能に変化は観察されなかった。
【表２３】
2007522246.tif 000027
【０２３４】
粉末剤の粒子サイズ分布プロフィールを図10A-10Dに示す。図中の粒子サイズ分布プロフィールは表24に示す粒子サイズ区分を使用して決定した。図10Aは、製剤Aの開始時の粒子分布プロフィールを示し、図10Bは、乾燥剤とともにホイルパウチ中に保管されるBPに入れて、カリフォルニアからフロリダに輸送し、カリフォルニアに戻した後の製剤Aの粒子分布プロフィールを示す。図10Cは、ビヒクル1の開始時の粒子分布プロフィールを示し、図10Dは、乾燥剤とともにホイルパウチ中に保管されるBPに入れて、カリフォルニアからフロリダに輸送し、カリフォルニアに戻した後のビヒクル1の粒子分布プロフィールを示す。
【表２４】
2007522246.tif 000028
【０２３５】
7.5mgの充填重量のBP1個の作動に基づいて、式1によって計算された試験sIL-13Rα2-IgG製剤の予想肺沈着量は1.9mgであった。
5.1.1 PDADSを使用した粉末剤送達効率
【０２３６】
スプレードライsIL-13Rα2-IgG及びビヒクル-1対照粉末剤を、PDADSを使用して、粉末剤送達効率について分析した。カリフォルニアでは、システムを通ってエアゾール化された粉末剤を押し入れるエアラインにPDADSが接続された。放出用量値は、表25に記録している。しかしながら、計画を立てる目的から、50%放出用量を使用して用量を推定した。この数は充填するブリスターパックの数を決定するために使用した。
【表２５】
2007522246.tif 000029
【０２３７】
sIL-13Rα-IgG及び両方のビヒクル対照粉末剤を、動物投薬の前にPDADSを使用して粉末剤送達について分析した。結果はエアゾール投薬効率を決定するために記録した(表26)。これらの値はヒツジに送達する用量を計算するために使用された。
【０２３８】
プレードライ粉末剤の送達効率は、同じ粉末剤をカリフォルニアで試験した場合と比較してフロリダで試験した時のほうが高い。効率が高くなったのは恐らくはセットアップの違いに起因する：フロリダでのセットアップはPDADSに接続した通風装置を使用したのに対して、カリフォルニアでのセットアップはチェースエアを使用した。フロリダで通風装置を用いてヒツジに投薬されたため、通風装置を用いて測定した効率を用量決定するために使用した。
【表２６】
2007522246.tif 000030
5.2 形態
【０２３９】
図11A及び11Bはそれぞれ、乾燥剤とともにホイルパウチ中に保管されるBPに入れて、カリフォルニアからフロリダに輸送しカリフォルニアに戻した前後のsIL-13Rα-IgG製剤のSEM画像である。図12A及び12Bはそれぞれ、乾燥剤とともにホイルパウチ中に保管されるBPに入れて、カリフォルニアからフロリダに輸送しカリフォルニアに戻した前後のビヒクル-1製剤のSEM画像である。カリフォルニアからフロリダに輸送しカリフォルニアに戻したサンプル、又は25℃/60% RH又は40℃/75% RHで3週間貯蔵した後の試験粉末剤のいずれにも、全体的な形態に目に見える変化はなかった。
5.3 化学的安定性
5.3.1 残留溶媒含量
【０２４０】
表27は、スプレードライ後、及び乾燥剤とともにホイルパウチ中に封入したBPに入れて3週間貯蔵した後の各製剤の残留溶媒含量を示す。カリフォルニアからフロリダに輸送し、分析のためにカリフォルニアに戻したsIL-13Rα2-IgG BPは、開始時の3.4%から3.7%に増加した。湿気を評価するためにTGAを使用するために、この変化はアッセイの誤差範囲内にあると見られる。
【表２７】
2007522246.tif 000031
5.3.2 SECによる凝集
【０２４１】
BPに充填し乾燥剤とともにホイルパウチ中に封入した粉末剤について、SEC分析を行なった。sIL-13Rα2-IgG粉末剤は水中に再溶解し、分析した。sIL-13Rα2-IgGサイズ排除クロマトグラムは、カリフォルニアからフロリダに輸送しカリフォルニアに戻したパッケージされたサンプル中においても、又は25℃/60% RH又は40℃/75% RHで貯蔵されたサンプルのいずれにおいても、可溶性凝集体形成の増加を示さなかった。
5.3.3 SDS-PAGEによる凝集
【０２４２】
SDS-PAGEは、カリフォルニアからフロリダに輸送しカリフォルニアに戻したパッケージされたサンプル中においても、又は25℃/60% RH若しくは40℃/75% RHで貯蔵されたサンプルのいずれにおいても、APIに関するsIL-13Rα2-IgG分解、又は共有結合による凝集体形成の証拠を示さなかった。
６．結論
【０２４３】
動物施設への輸送又は制御された安定貯蔵の結果として、sIL-13Rα2-IgG又はビヒクル製剤の、エアゾール性能の変化又は可溶性凝集体の増加を示すような証拠は見られなかった(表23)。
【０２４４】
上記粉末剤類は、ヒツジの肺での試験の期間中、許容可能かつ安定であることが分かった。
実施例31
ヒツジの肺での投薬試験用のスプレードライsIL-13Rα2-IgGの製造及び特性決定
１．要約
【０２４５】
可溶性のインターロイキン-13受容体(sIL-13Rα2-IgG)製剤粉末を、ヒツジの肺における送達試験用に製造した。スプレードライsIL-13Rα2-IgG粉末剤は、動物施設へ輸送されたものも25℃/60% RHで11週間貯蔵されたものもいずれも、動物試験の開始時及び終了時において許容可能な性能及び安定性を有することがわかった。
【０２４６】
sIL-13Rα2-IgG粉末剤は、動物に投薬する前に空気駆動式エアゾール送達システム(PDADS)を使用して送達する用量を推定するために分析した。結果から、上記のエアゾール送達が動物試験という目的について許容しうることが示された。
２．目的
【０２４７】
この研究課題の目的は：ヒツジにおける吸入有効性試験に用いるためにスプレードライsIL-13Rα2-IgG粉末剤を製造すること；並びに試験の開始時及び終了時における粉末剤のエアゾール性能及び物理化学的安定性を評価することであった。
【０２４８】
実施例28及び29では、sIL-13Rα2-IgGをヒツジ喘息モデルに24時間投薬し、さらに抗原投与(1用量当たり0.15mg/kg)に先立つ2時間前に投薬し、効果的であることが示された。この試験は、抗原投与に先立つ24時間前に施す一回のsIL-13Rα2-IgG処置がヒツジモデルにおいて効果的であるかどうかを調べるために設計された。この試験では、2つの用量、0.07mg/kg及び0.14mg/kgを試験した。
３．方法
3.1 活性医薬成分(API)
【０２４９】
sIL-13Rα2-IgG(トウィーン80を含まない)のおよその分子量は、142 kDaである。蛋白をグリコシル化し、グリコン部分はsIL-13Rα2-IgGの全質量の14%を構成する。蛋白濃度測定用に用いる吸光係数は、280nmで 2.18 mL mg-1 cm-1であり、グリコシル化の効果について調節はしなかった。
3.1.1 製剤の調製
【０２５０】
sIL-13Rα2-IgGを2.5mMクエン酸緩衝液、pH 6.5中にダイアフィルトレーションすることにより、sIL-13Rα2-IgG製剤を製造し、エアゾール化できる粒子を製造し得られた粉末の生理化学的な安定性を保つために添加剤を加えた。このsIL-13Rα2-IgG製剤は先に実現可能性試験で製剤Aと呼ばれたものである(例えば実施例19-27を参照のこと)。粉末剤は実験室規模のブッチシステムを用いてスプレードライした。上記粉末剤の製剤組成は表28に要約する。
【０２５１】
表28に示すAPI含量は、sIL-13Rα2-IgGのアグリコン(非炭水化物)部分によって表わされる粉末の割合を指す；グリコンパーセンテージは、sIL-13Rα2-IgGの全質量の14%として計算される。
【表２８】
2007522246.tif 000032
3.1.2 BP充填、パッケージング、及び貯蔵
【０２５２】
スプレードライsIL-13Rα2-IgGを、7.50mg/BPの名目充填重量で手作業でブリスターパック(BP)に充填した。その後、BP(BP 10個/プラスチックBPホルダー)を乾燥剤とともにホイルパウチ(ホルダー1個/パウチ)中に封入した。サンプルはダンボール箱に入れて動物投薬用にカリフォルニアからフロリダへ輸送するか、又はカリフォルニアで25℃/60% RH若しくは40℃/75% RHで維持されるチャンバー中に貯蔵した。
3.1.3 分析手順
【０２５３】
表示の分析技術を使用して、スプレードライsIL-13Rα2-IgG粉末剤について以下のパラメーターを評価した。
● エアゾール性能をPDS吸入器を使用して評価した。
○ 放出された用量(ED)：作動後に吸入器から放出されたBP含量のパーセンテージ。重量分析は30.0L/minの流速で行った。
○ 粒子サイズ分布(PSD)パラメーターには、空気動力学的粒径質量中央値(MMAD)、微粒子質量(FPM<3.3μm；空気動力学的粒径が<3.3μmの送達された粒子の累積重量(mg))、及び微粒子用量(FPD<3.3μm；空気動力学的粒径が<3.3μmの送達されたsIL-13Rα2-IgGのアグリコン部分の質量)が含まれる。FPD<3.3μmは、FPM<3.3μmに名目用量分画を掛けることにより計算した。PSDパラメーターは、PDS吸入器を用いて28.3L/minの流速で重量ベースのアンダーセン・カスケード埋伏(ACI)(ステージ区分サイズ：9.0、5.8、4.7、3.3、2.1、1.1、0.4μm及びフィルター)により測定した。
○ 空気駆動式エアゾール送達システム(PDADS)送達効率：作動後にPDADSからフィルター上に放出された粉末剤のパーセンテージ。BPからの粉末剤は、PDS吸入器から分散チャンバー中に始動した。空気駆動式ピストンに空気塊が続いて、分散された粉末剤を気管内チューブ中に押し入れた。動物への送達効率は、気管内チューブの末端に接続されたフィルター上に回収された粉末剤の重量を実際のBP充填重量で割ってパーセンテージで表したものである。送達効率は推定用量(mg)を計算するために用いられる。
● 生理化学的分析
○ 全体的形態は、Au/Pdイオンスパッタ法を使用して走査電子顕微鏡(SEM)により調べた。
○ 残留溶媒含量は熱重量分析(TGA)により測定した。
○ 全可溶性凝集体はサイズ排除クロマトグラフィー(SEC)にり測定し、共有結合凝集体及び分解はドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS-PAGE)により測定した。
3.1.4 製剤評価
【０２５４】
スプレードライsIL-13Rα2-IgG粉末剤を開始時点で分析し、その後カリフォルニアで貯蔵するか又はカリフォルニアからフロリダへ輸送した。動物試験が終結すると、動物に投薬するのに用いたスプレードライsIL-13Rα2-IgG粉末剤のサンプルはフロリダからカリフォルニアに返送され、カリフォルニアに留め置かれてインキュベーションチャンバー中に貯蔵されていた貯蔵sIL-13Rα2-IgG粉末剤と共に分析された。
【０２５５】
安定性分析は、表29に掲げるようなスプレードライsIL-13Rα2-IgG粉末剤について行なわれた。
【表２９】
2007522246.tif 000033
４．結果と考察
4.1 エアゾール性能
4.1.1 PDSを用いた性能
【０２５６】
スプレードライ粉末剤をパッケージングし、エアゾール性能を開始時及び11週間の貯蔵後に試験した。表30に示すように、スプレードライsIL-13Rα2-IgG粉末剤のエアゾール性能は、すべての試験条件下、及び動物試験の終了時において許容しうるものであった。
【表３０】
2007522246.tif 000034
4.1.2 PDADSを用いた粉末剤送達効率
【０２５７】
スプレードライsIL-13Rα2-IgG粉末剤を、PDADSを用いた粉末剤送達効率について分析した。カリフォルニアでは、システムを通ってエアゾール化された粉末剤を押し入れるエアラインにPDADSが接続された。PDADS放出用量値を表31に記録する。
【表３１】
2007522246.tif 000035
【０２５８】
フロリダでは、スプレードライsIL-13Rα2-IgG粉末剤を動物投薬の直前に、PDADSを使用して粉末剤送達効率について分析した。PDADSはシステムを通ってエアゾール化された粉末剤を押し入れる通風装置に接続された。実験結果を表32に記録する。
【０２５９】
スプレードライ粉末剤の送達効率は、同じ粉末剤をカリフォルニアで試験した場合と比較してフロリダで試験した時のほうが高い。効率が高くなったのは恐らくはセットアップの違いに起因する：フロリダでのPDADSセットアップは通風装置に接続したのに対して、カリフォルニアでのPDADSセットアップはチェースエアセットアップに接続した。ヒツジにはフロリダで通風装置を用いて投薬したので、通風装置を用いて測定した効率をヒツジへの推定用量を計算するために使用した。
【表３２】
2007522246.tif 000036
4.2 生理化学的安定性
4.2.1 形態
【０２６０】
試験前に調べたsIL-13Rα2-IgG粉末剤、カリフォルニアからフロリダに輸送しカリフォルニアに戻した粉末剤、又は25℃/60% RH及び40℃/75% RHで11週間貯蔵したsIL-13Rα2-IgG粉末剤のいずれにも全体的形態に目に見える違いはなかった。
4.2.2 残留溶媒含量
【０２６１】
表33は、スプレードライ後、及び乾燥剤とともにホイルパウチ中に封入したBPに入れて11週間貯蔵した後にTGAを用いて測定した各製剤の推定残留溶媒含量を示す。カリフォルニアからフロリダに輸送し、分析のためにカリフォルニアに戻したsIL-13Rα2-IgG BPの水分含量は、開始時の1.8%から2.7%に増加した。この変化は湿気を推定するために用いるTGAアッセイの誤差範囲内にある。
【表３３】
2007522246.tif 000037
4.2.3 SECによる凝集
【０２６２】
BPに充填し乾燥剤とともにホイルパウチ中に封入した粉末剤について、SEC分析を行なった。スプレードライsIL-13Rα2-IgG粉末剤は水中に再溶解し、分析した。
【０２６３】
処方されたスプレードライ前の溶液のHMW凝集体の含量は、製剤原料に比べて約3.5%増加した。処方された溶液のHMW凝集体の増加は、恐らく製剤原料のダイアフィルトレーションプロセスに起因する。以前の研究で、開始時の時点で分析した同じ製剤組成物を用いたスプレードライ粉末剤は、製剤原料と比較して、HMW含量の有意な増加を示さなかった(0.3%及び0%)。この研究でも先の研究と同様に、スプレードライプロセスはHMW含量に目に見える変化をもたらさなかった。
【０２６４】
sIL-13Rα2-IgGサイズ排除クロマトグラムは、40℃/75% RHで貯蔵された安定化サンプル中に開始時からの変化として、最高3.1%のHMW凝集体の増加が示された。25℃/60% RHで貯蔵されたか、又はカリフォルニアからフロリダへ輸送されカリフォルニアに戻されたサンプルには、試験期間中に変化は無かった。
4.2.4 SDS-PAGEで測定される凝集
【０２６５】
カリフォルニアからフロリダに輸送しカリフォルニアに戻したパッケージされたサンプル中においても、又は25℃/60% RH若しくは40℃/75% RHで貯蔵されたサンプルのいずれにおいても、APIに関するsIL-13Rα2-IgG分解、又は共有結合による凝集体形成の証拠は示されなかった。
５．結論
【０２６６】
可溶性のインターロイキン-13受容体(sIL-13Rα2-IgG)製剤粉末を、ヒツジの肺における送達試験用に製造した。スプレードライsIL-13Rα2-IgG粉末剤は、動物施設へ輸送されたものも25℃/60% RHで11週間貯蔵されたものもいずれも、許容可能な性能及び安定性を有することがわかった。
【０２６７】
sIL-13Rα2-IgG粉末剤を、動物に投薬する前に空気駆動式エアゾール送達システム(PDADS)を使用して送達する用量を推定するために分析した。結果から、上記のエアゾール送達が動物試験という目的について許容しうることが示された。
実施例32
吸入後のヒツジにおける0.14及び0.7mg/kgのsIL-13Rα2-IgG の薬物動態学及び薬力学
【０２６８】
喘息の抗原投与モデルにおける有効性を評価するために、ヒツジをsIL-13α2-IgG乾燥粉末製剤の単回吸入(ブリスターパック(BP)１個；目標用量＝0.07mg/kg)又は2回吸入(2 BP；目標用量＝0.14mg/kg)のいずれかで処置した。この実施例の製剤及び送達手順は実施例28及び29と同様であった。
【０２６９】
乾燥粉末用量を抗原投与に先立つ24時間前に1回投与した。1回吸入(1 BP；平均 0.17mg/kg)で送達される乾燥粉末剤の合計量はおよそ5mgであり、2回吸入(2 BP；平均 0.27mg/kg)では合計10mgであった。送達されたsIL-13Rα2-IgGの合計量は1回の吸入(1 BP；平均 0.10mg/kg)ではおよそ3mg、2回の吸入(2 BP；平均 0.15mg/kg)ではおよそ5mgであった。肺抵抗性の変化をその後8時間にわたり測定し、抗原投与の24時間後にカルバコールに対する非特異的な気管支過敏性(BHR)を測定し、先の対照データと比較した。抗原投与の24時間前に吸入投与された、sIL-13Rα2-IgGの1回吸入(1 BP中、平均0.10mg/kg)はBHR又は喘息反応に効果を示さなかった。抗原投与の24時間前に1度、ヒツジに2回吸入(2 BP中、平均0.15mg/kg)したsIL-13Rα2-IgGの送達は遅発性喘息反応を抑制した。
【０２７０】
上記の態様及び利点は単に例示的なものであって、本発明を限定するものと解釈すべきではない。本発明の記載は、実例を示しなおかつ請求項の範囲を制限しないことを意図している。多くの選択肢、修飾及び変更が当業者には明らかであろう。
【０２７１】
本発明をここに完全に記載したことにより、本発明又はその任意の態様の範囲から外れることなく、広く同等な範囲の条件、製剤及び他のパラメーターを用いて本発明の方法を実行することができることは当業者に理解されるであろう。
【図３】
2007522246.tif 000038
【図４】
2007522246.tif 000039
【図５】
2007522246.tif 000040
【図６】
2007522246.tif 000041
【図７】
2007522246.tif 000042
【図８】
2007522246.tif 000043
【図９】
2007522246.tif 000044
【図１０】
2007522246.tif 000045
【図１】
2007522246.tif 000046
【図２】
2007522246.tif 000047
【図１１】
2007522246.tif 000048
【図１２】
2007522246.tif 000049
【国際調査報告】
2007522246.tif 000050
2007522246.tif 000051
2007522246.tif 000052
2007522246.tif 000053