(57)【要約】  本発明は、腸の異常の処置のための組成物および方法に関する。本発明はまた、腸管上皮の傍細胞透過性を調節するために使用することができる組成物および方法に関する。本組成物および方法は、腸管上皮のタイトジャンクションの開放を調節するプロテアーゼインヒビターの使用に基づく。本発明は、哺乳動物、特に、ヒトにおいて消化管機能性障害（ＤＦＤ）ならびに特に、痛覚過敏および過敏性腸症候群（ＩＢＳ）を生じる腸管機能性障害（ＩＦＤ）のような様々な病状の予防的または治療的処置に使用することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
機能性消化管障害（ＦＧＩＤ）の予防的または治療的処置のための医薬品を調製するための少なくとも１つのプロテアーゼインヒビターの使用。
【請求項２】
プロテアーゼインヒビターが結腸内プロテアーゼインヒビターであることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
インヒビターが、セリンプロテアーゼのインヒビターまたはメタロプロテアーゼのインヒビターであることを特徴とする、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
セリンプロテアーゼインヒビターが、セルピンおよびその誘導体、アプロチニン、Ｎ−トシル−Ｌ−フェニルアラニルクロロメチルケトン、ジクロロイソクマリン、ネキシン−１、ＡＥＢＳＦ−ＨＣｌ、アンチパイン、ベンズアミジン、ロイペプチン、ＴＬＣＫ、オボムコイド、フッ化フェニルメチルスルホニル、ＰＥＦＡＢＬＯＣ（登録商標）およびダイズ抽出物よりなる群において選択されることを特徴とする、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
メタロプロテアーゼインヒビターが、アマスタチン、アルファメニン、ベスタチン、ジプロチンＡおよびホスホラミドンよりなる群において選択されることを特徴とする、請求項３に記載の使用。
【請求項６】
プロテアーゼインヒビターが、アンプレナビル、インディナビル、ロピナビル、リトナビル、サキナビル、ネルフィナビルおよびアタザナビルよりなる群において選択ことを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項７】
痛覚過敏の状態によって特徴付けられる機能性腸管障害を伴う被験体において腸管上皮の傍細胞透過性を制御するための医薬品を調製するための請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項８】
痛覚過敏の状態によって特徴付けられる機能性腸管障害を伴う被験体において腸管上皮の傍細胞透過性を減少するための医薬品を調製するための請求項７に記載の使用。
【請求項９】
痛覚過敏の状態によって特徴付けられる機能性腸管障害に苦しむかまたはかかり易い被験体において痛みに対する感受性を減少するための医薬品を調製するための請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０】
機能性腸管障害（ＩＦＤ）の予防的または治療的処置のための医薬品を調製するための請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１】
腸管機能性障害が、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、食物不耐症に関連する排便障害および痛みを伴わない機能性腹痛よりなる群において選択されることを特徴とする、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
インヒビターが経口または直腸経路によって投与されることを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１３】
腸の異常において発症する痛覚過敏の予防的または治療的処置のための医薬品を調製するための少なくとも１つのプロテアーゼインヒビターの使用。
【請求項１４】
プロテアーゼインヒビターが請求項２、３、４、５および６のいずれか１項において規定されるものであることを特徴とする、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
組み合わされるか、個別であるかまたは経時的に配分される使用の観点において、少なくとも１つのプロテアーゼインヒビターと、抗コリン化合物、消化管運動機能改善薬、下痢止め薬、緩下薬、運動もしくは内臓の感受性の修飾剤よりなる群において選択される少なくとも１つの他の活性な薬剤とを含んでなる薬学的製品。
【請求項１６】
プロテアーゼインヒビターが、セリンプロテアーゼのインヒビターおよびメタロプロテアーゼのインヒビターよりなる群において選択されることを特徴とする、請求項１５に記載の製品。
【請求項１７】
結腸における微生物消化によってその内容物を放出するカプセルまたはゼラチンカプセルとして処方されることを特徴とする、請求項１５または１６に記載の薬学的製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腸の異常の処置のための組成物および方法に関する。本発明はまた、腸管上皮の傍細胞透過性を調節するために使用することができる組成物および方法に関する。本発明の組成物および方法は、特に、腸管上皮のタイトジャンクションの開放を調節するプロテアーゼインヒビターの使用に基づく。本発明は、哺乳動物、特に、ヒトにおける機能性消化管（胃腸）障害（ＦＧＩＤ）、より詳細には、腸管機能性障害（ＩＦＤ）、ならびに特に、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、痛覚過敏および他の腹痛などのような様々な病状の予防的または治療的処置に使用することができる。
【背景技術】
【０００２】
腸管上皮は、外部媒体および身体間の極めて重要な交換の部位である。前記交換は、上皮の細胞を横切るか、または並列ネットワークを介して生じることができる。例えば、胃、腸または結腸粘膜による水および電解質輸送、もしくはその他の小分子（一般に約１０００Ｄａ未満の分子量）の吸収は、経細胞経路によって、上皮細胞または腸細胞を横切って生じる。一方、大きな分子の吸収および抗体、毒素または免疫細胞の通過は、主に、上皮細胞間に局在する「タイトジャンクション」のレベルで傍細胞経路によって生じる。
【０００３】
上皮タイトジャンクション（ＴＪ）は、粘膜上皮（胃腸管、肺）を裏打ちする細胞に連結する構造である。前記構造は、多様な巨大分子（アレルゲン、刺激物、毒素、微生物）の上皮を横切る（外部から粘膜下組織への）傍細胞輸送を確実にし、制御する。前記構造はまた、免疫細胞（例えば、免疫担当細胞）の外部（消化管）への移動を可能にする。タイトジャンクションは、膜貫通タンパク質（オクルディン、クラウディン）および細胞質タンパク質（ゾナオクルデン（ｚｏｎａ  ｏｃｃｌｕｄｅｎ）タンパク質ＺＯ−１、ＺＯ−２、ＺＯ−３、タンパク質ＡＦ７、シングリン（ｃｉｎｇｕｌｉｎ）または７Ｈ６など）の複合的集成からなる可撓性構造であり、それらのタンパク質は細胞骨格の成分（アクチン、ミオシンフィラメントなど）と関連する。
【０００４】
機能性消化管（胃腸）障害（ＦＧＩＤ）のうち、排便の問題を伴わない腹痛は、腸管機能性障害と区別することができる。正常な排便を伴う腹痛は、アレルギーもしくは食物不耐症によって生じ得るかまたは例えば、セリアック病において生じ得る。腸管機能性障害は人口の１５〜２０％が罹患し、器質因が未だ同定されておらず、特定の処置が必要とされる消化管および／または腸管症状によって特徴付けられる。ＲＯＭＥ基準を満たす機能性消化管障害の一般的特徴は、それが上腹部（消化管症状）に局在するにせよまたは下腹部に局在するにせよ、食後腹痛である。下腹部に影響を及ぼす特定の障害は過敏性腸症候群（ＩＢＳ）である。腸管機能性障害に関連する痛みは、通常、排便によって緩和される。
【０００５】
機能性消化管障害の病態生理学についてはあまり理解されていないが、最近の臨床的調査から、罹患患者は、消化管過敏症の状態から生じる膨満（内臓の痛覚過敏）に対してより低い痛覚閾値を有することが示されている。これは、最初に、前炎症性メディエータによる壁の機械受容器の感作から生じるようである。事実、粘膜下組織、特に、結腸における所定の免疫細胞の構造および密度における修飾の存在は、存在する細菌叢を伴う改変された免疫上皮を支持している。ＩＢＳを伴う被験体の回腸および結腸生検から、マスト細胞および腸クロム親和性細胞の密度の増加が示される。この消化管微小炎症状態は、一次求心性神経終末の感作を促進し、次いで、侵害受容性のメッセージの脳への伝達を容易にし得る。実際、機能画像研究は、ＦＧＩＤを伴う被験体におけるこれらの神経シグナルの皮質投射領域の特徴的改変を示す。
【０００６】
痛みに対する腸管感作の前記プロセスは、ストレス、病原体、アレルゲン、例えば、トリプシンもしくはトリプターゼのような酵素、胆汁酸塩、生体異物、例えば、グリセロール、ＴＮＢＳもしくはタウロコール酸型の化学分子、および／または感染もしくは手術の続発症のような要因によって誘発され得る。しかし、前記要因が感作現象を誘発する機構は、インビボでは明確には記録されていない。例えば、アレルゲン、病原体および／または化学分子が吸収される場合、それらは、それらが身体に進入して免疫細胞と接触することを防止する腸管上皮壁に接触する。しかし、感作が発達するために、いくつかのアレルゲン、病原体および／または化学分子は、この上皮を横切り、免疫細胞と相互作用することが可能でなければならない。このような通過がインビボで可能である条件は、あいまいなままである。従って、インビトロでの細胞培養物に対するいくつかの研究から本プロセスにおけるタイトジャンクションの役割が示唆される一方、感作の発達におけるインビボでの前記ジャンクションの役割に関する証拠は存在しない。同様に、（非特許文献１）は、過敏性腸症候群を伴う被験体における胆汁酸塩の結腸内（ｉｎｔｒａｃｏｌｏｎｉｃ）輸注と腹痛との間の関係を示唆する一方、タイトジャンクションと痛みに対する腸管上皮の感作との間の相関関係を実証する結果は提示されていない。
【０００７】
過敏性腸症候群を伴う被験体の極少ない割合において胆汁酸塩の吸収不良が観察される一方、経上皮浸透性の改変が胃腸炎に続いてＩＢＳを生じた被験体において記載されている（非特許文献２）が、この研究は、傍細胞浸透性における修飾については記述しておらず、これについては調べられなかった。
【０００８】
慢性腸管炎症性障害または腸管機能性障害と腸壁の免疫活性化（炎症）の程度の変化との間の関係が観察されているように、実験的研究から、過敏性腸症候群と粘膜下組織における微生物の存在の増加との間に相関関係が認められている（非特許文献３）。しかし、これらの予備的所見は確認されておらず、または新規の治療アプローチを生じていない。
【非特許文献１】コレマンス（Ｃｏｒｅｍａｎｓ）ら、Ｉｔａｌ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ、１９９１年（８）Ｓ１：３９−４０
【非特許文献２】スピラー（Ｓｐｉｌｌｅｒ）ら、Ｇｕｔ、２０００年；４７：８０４−１１
【非特許文献３】ＡＧＡ、１９９９年
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、結腸内腔において放出される細菌性プロテアーゼが、タイトジャンクションの開放を調節する上皮細胞膜に局在するＰＡＲ受容体（プロテイナーゼ活性型受容体）を活性化し、前記開放は痛覚過敏の状態をもたらすという実証から生じる。
【００１０】
上記のプロテアーゼの細菌由来性は、叢を破壊する経口抗生物質カクテルによる処置の１０日間コースの処置は、タイトジャンクションの透過性を減少し、前記透過性が正常な結腸内容物の上清の結腸内輸注によって回復されるという事実によって実証された。本発明者らはまた、結腸内腔に輸注されるプロテアーゼインヒビターのカクテルが、結腸傍細胞浸透性および膨満に対する内臓の感受性を減少したことを示す。
【００１１】
痛みの感作のプロセスにおける腸管上皮タイトジャンクションのインビボでの役割もまた、国際公開第０３／０７７８９３号パンフレットにおいて実証されている。異なる分子またはストレスによる結腸上皮のタイトジャンクションの「開放」は、自発的痛覚過敏または膨満に対する過敏症（ＩＢＳの特有な特徴）を生じる。本発明の範囲において得られる結果は、はじめに、タイトジャンクションの開放が持続された、遅延された痛覚過敏の状態を誘導する驚くべき様式で確立されている。
【００１２】
本発明は、プロテアーゼインヒビターの援助で腸管上皮の傍細胞浸透性を調節することに基づいて、腸の異常を処置するための新規の治療ストラテジーの開発から生じる。特に、本発明は、腸管上皮のタイトジャンクションの開放を制御することを可能にするプロテアーゼインヒビターの使用に基づく腸の異常に対する治療アプローチを提供する。例えば、前記プロテアーゼインヒビターは、腸管上皮細胞の細胞骨格の張力を調節するかまたは腸内上皮タイトジャンクションの開放を直接調節し、おそらく減少し、阻止さえすることを可能にする。従って、前記アプローチは、上皮におけるデノボでのタンパク質合成ならびに／あるいは主要なタンパク質および／または構造分解を必ずしも必要としない腸管上皮タイトジャンクションの開放および閉鎖の制御を可能にする。前記ストラテジーは、特異的、精巧および反応的方法で腸管上皮透過性を調節し、従って、アレルゲン、病原体および／または化学分子の免疫細胞への通過に対して作用することを可能にする。前記ストラテジーは、経時的に制御する（可逆的）ことができる迅速な生物学的効果を得ることに特に適応される。
【００１３】
これに関して、以下に提示される結果は、上皮タイトジャンクション（ペプチドＳＬＩＧＲＬのようなＰＡＲ−２受容体アクチベーターペプチド）を弛緩させることができる物質が遅延した痛覚過敏、膨満に対する過敏症および結腸透過性の増加を誘発することを示す。実施例において提示される結果はまた、プロテアーゼインヒビターもしくはプロテアーゼインヒビターの混合物（カクテル）による傍細胞透過性のこのような増加を阻止することは、ＦＧＩＤおよび特にＩＢＳのこの痛覚過敏特徴を阻害または減少することを示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
従って、本発明の第１の目的は、機能性消化管障害の予防的または治療的処置のための医薬品を調製するための少なくとも１つのプロテアーゼインヒビターの使用にさらに特に基づく。本発明はまた、腸の異常において生じる痛覚過敏の予防的または治療的処置のための医薬品を調製するための前記使用に関する。プロテアーゼインヒビターは、好ましくは、結腸内プロテアーゼのインヒビターである。
【００１５】
本発明の別の目的は、有効量の少なくとも１つのプロテアーゼインヒビターを被験体に投与することを含んでなる、痛覚過敏の状態によって特徴付けられる腸の異常の予防的または治療的処置のための方法に基づく。
【００１６】
プロテアーゼインヒビターは、腸管上皮のタイトジャンクションの開放を制御することによって作用するようである。特に、前記インヒビターは、腸管上皮細胞において細胞骨格の張力を調節するインヒビターまたは腸管上皮タイトジャンクションの開放を減少、もしくは阻止するインヒビターである。
【００１７】
従って、本発明は、腸管上皮細胞の細胞骨格の張力および収縮の状態を調節するかまたは痛覚過敏もしくは腸管膨満に対する過敏症をもたらす過度のタイトジャンクションの開放を防止するプロテアーゼインヒビターの使用に基づく。
【００１８】
タイトジャンクションを含んでなるタンパク質は、それらが共に連結する細胞の細胞骨格に関連する。本発明は、細胞骨格の張力またはタイトジャンクションの開放が、腸管疾患もしくは障害を伴う被験体において、それらの腸管上皮の透過性に対して非破壊的かつ一過性の様式で作用するように調節され得ることを提唱する。従って、細胞骨格収縮は、タイトジャンクションの開放を促進するべきであるが、細胞骨格弛緩（または収縮の阻害）はタイトジャンクションの閉鎖を促進すべきである。その開放を減少または阻止することによって、タイトジャンクション、特に、該タイトジャンクションを含んでなるタンパク質を直接調節することも可能である。
【００１９】
好ましくは、次いで、本発明は、腸管上皮細胞の細胞骨格の収縮を調節する（特にヒト）か、または腸管上皮のタイトジャンクションの開放を制御する（特にヒト）プロテアーゼインヒビターを利用する。処置すべき病態に依存して、腸管上皮細胞の細胞骨格の収縮を阻害するか、または該収縮を活性化もしくは促進するプロテアーゼインヒビターを使用する。
【００２０】
プロテアーゼインヒビターは、タイトジャンクションの開放を調節する場合に、細胞骨格の張力を調節すると考えられる。アクチンおよび／またはミオシンフィラメントの収縮または張力に対する阻害効果は、完全または全体的である必要はないが、それがタイトジャンクションの開放を減少するのに十分なほどに細胞骨格収縮または張力を減少することを満たす。
【００２１】
タイトジャンクションの開放の減少は、腸管上皮の傍細胞透過性において、好ましくは、約２５％の最小の減少、有利には約３０％、さらにより好ましくは、約５０％の減少に対応する。傍細胞透過性は、循環への進入後、２４時間尿においてアッセイされる５１Ｃｒ−ＥＤＴＡのようなトレーサーの援助によって測定することができる（実施例１を参照のこと）。
【００２２】
使用されるプロテアーゼインヒビターは、好ましくは、セリンプロテアーゼおよび／またはメタロプロテアーゼに対して作用するインヒビターである。前記インヒビターは、結腸透過性に対する細菌性プロテアーゼの作用を減少するのに特に活性である。
【００２３】
有利なことに、使用されるプロテアーゼインヒビターは、カクテル、組み合わせ、生物学的抽出物などから単離することができるかまたはそれらの形態であることができる分子である。前記分子は、合成的、半合成的または特に動物、ウイルス、植物もしくは細菌由来の生物学的であることができる。
【００２４】
プロテアーゼインヒビターの例として、特に、セリンプロテアーゼ［セルピン（ｓｅｒｐｉｎｅ）およびその誘導体、アプロチニン、Ｎ−トシル−Ｌ−フェニルアラニルクロロメチルケトン（ＴＰＣＫ）、ジクロロイソクマリン、ネキシン−１、ＡＥＢＳＦ−ＨＣｌ、アンチパイン、ベンズアミジン、ロイペプチン、ＴＬＣＫ、オボムコイド、フッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ）、ＰＥＦＡＢＬＯＣ（登録商標）およびダイズ抽出物］ならびにメタロプロテアーゼの選択的または非選択的インヒビター（アマスタチン、アルファメニン、ベスタチン、ジプロチンＡ、ホスホラミドン）ならびに抗ウイルス剤（アンプレナビル、インディナビル、ロピナビル、リトナビル、サキナビル、ネルフィナビルおよびアタザナビル）として使用される非特異的分子が挙げられる。
【００２５】
プロテアーゼインヒビターは、単独で、あるいは例えば、過敏性腸症候群の処置において使用される他の活性な物質のような他の活性な薬剤との組み合わせおよび／または集合物として使用することができる。
【００２６】
従って、プロテアーゼインヒビターは、場合により、特に、細胞骨格の張力を調節することによって腸管上皮のタイトジャンクションの開放を減少するかもしくは阻止するか、またはその開放を増加する化合物との組み合わせおよび／または集合物として使用される。
【００２７】
前記化合物の活性は、直接的または間接的であることができ、即ち、細胞骨格成分自体もしくは細胞骨格の張力の調節因子に指向され得る。制限する趣旨はないが、好適な化合物は細胞骨格の張力に対して直接作用する化合物である。さらに、細胞骨格の張力に対して選択的活性を示す化合物、即ち、典型的に、タイトジャンクションを含んでなるタンパク質の構造に直接影響を及ぼさない化合物が好ましい。同様に、本発明に従うプロテアーゼインヒビターは、好ましくは、タイトジャンクションを含んでなるタンパク質の構造に直接影響を及ぼさない。
【００２８】
異なるタイプの化合物を、本発明の範囲において、プロテアーゼインヒビターと組み合わせて使用することができる。従って、本発明の趣旨において、用語「化合物」は、広範な意味で、即ち、任意の薬剤、物質、組成、条件、処置または腸管上皮タイトジャンクションの開放の調節を可能にする方法を表すものとして理解すべきである。有利なことに、それは、薬剤（例えば、分子）または薬剤の組み合わせもしくは集合物である。そのような化合物の例は、国際特許出願国際公開第０３／０７７８９３号パンフレットにおいて見出され得る。特に、それらは、ミオシン軽鎖キナーゼ（ＭＬＣＫ）のインヒビターである。選択的ＭＬＣＫインヒビターの特定の例は、化合物ＭＬ−７｛１−（５−ヨードナフタレン−１−スルホニル）−１Ｈ−ヘキサヒドロ−１，４−ジアゼピン｝である（マキシマ  Ｍ．（Ｍａｋｉｓｈｉｍａ  Ｍ．）ら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．１９９１年；２８７：１７５）。そのようなインヒビターの他の特定の例は、化合物ＭＬ−９（ウィルソン  ＤＰ．（Ｗｉｌｓｏｎ  ＤＰ．）ら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２００１年；１３：１６５）または他の非選択的化合物：ワートマニン（ワラシナ  Ａ．（Ｗａｒａｓｈｉｎａ  Ａ．）、Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ２０００年；１３：２５８７−９３）、Ｈ−７（ピアオ  Ｚｆ（Ｐｉａｏ  Ｚｆ）ら、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ２００１年；４：３０７−１２）およびＫＴ７６９２（ワラシナ  Ａ．（Ｗａｒａｓｈｉｎａ  Ａ．）、Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ２０００年；１３：２５８７−９３）である。プロテアーゼインヒビターと組み合わせて使用することができる細胞骨格の張力に対して作用する化合物の他の標的は、特に、例えば、シングリンのようなミオシン結合タンパク質、またはカドヘリン−Ｅ、カテニン−αもしくはデスモソームのような接合分子（ｊｕｎｃｔｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）である。前記タンパク質の活性または発現の調節は、本発明の範囲において、細胞骨格の張力の調節を可能にする。タンパク質の合成を阻害する化合物または細胞骨格タンパク質とタイトジャンクションタンパク質との間の連結を確実にする他の分子と組み合わされたプロテアーゼインヒビターを使用することも可能である。本発明の範囲では、化合物ＰＤ０９８，０５９｛２−（アミノ−３−メトキシフェニル）−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン｝（アレシ（Ａｌｅｓｓｉ）ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９５年；２７０：２７５８９）またはＬＹ２９４００２｛２−（４−モルホリニル）−８−フェニル−１（４Ｈ）−ベンゾピラン−４−オン｝（ブラホス（Ｖｌａｈｏｓ）ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ１９９４年；２６９：５２４１）のようなマイトジェン活性化キナーゼ（ＭＡＰＫＫ）、特に、キナーゼＭＥＫ１もしくはキナーゼ−ＰＩ３のインヒビターを使用することも可能である。細胞骨格の張力を間接的に調節するために使用することができる他の分子は、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、内皮増殖因子（ＥＧＦ）のような増殖因子あるいはインターロイキン−１、−４、−１３、またはＩＧＦ−１もしくはγインターフェロンのような因子のような免疫細胞によって放出され得る所定のサイトカインである。細胞骨格の張力を間接的に調節す���別のアプローチは、細胞骨格収縮に対する間接的効果によって腸管上皮透過性を修飾することができるペプチドＧＬＰ２（グルカゴン様ペプチド２）またはその誘導体の使用に基づく。同様に、上皮細胞の頂極に局在する受容体に対して作用するいくつかの分子（例えば、プロテイナーゼ受容体；ＰＡＲ−２）は、細胞骨格に対して間接的に作用することができる。活性な薬剤の他の例は、抗コリン化合物、消化管運動機能改善薬、下痢止め薬、腸運動の修飾剤などである。これらの異なる薬剤は治療的組み合わせで使用し、個別に、組み合わせで、経時的に分配、または併用で投与される。
【００２９】
本発明の別の目的は、組み合わされるか、個別であるかまたは経時的に配分される使用の観点において、少なくとも１つのプロテアーゼインヒビターと、抗コリン化合物、消化管運動機能改善剤、下痢止め薬、緩下薬または運動、内臓の感受性（もしくは消化管の感受性）の修飾剤よりなる群において選択される少なくとも１つの他の活性な薬剤とを含んでなる製品、カクテルあるいは薬学的集合物に基づく。
【００３０】
本発明は、痛覚過敏の状態によって特徴付けられる消化器系の病状もしくは障害、特に、機能性腸管障害、慢性腸管炎症性疾患（ＣＩＩＤ）、慢性の腹痛によって特徴付けられる食物不耐症（アレルギー、製剤など）の処置または管理のために使用することができる。本発明は、痛覚過敏、ならびに特に、そのタイプ（便秘、下痢または前記２つの組み合わせ）にかかわらない過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、しかしまた、排便障害を伴わない機能性腹痛（ＦＡＰ：機能性腹痛）ならびに食物不耐症およびセリアック病に関連する痛みのようなＩＢＳに分類されない慢性の腹痛の予防的または治療的処置に特に適応される。本発明は、このタイプの障害に対する素因を伴うか、該障害にかかり易い被験体において予防的に、または例えば、急性エピソードもしくはより長期間にかけて治療的様式で使用することができる。本発明の組成物および方法は、被験体の苦痛を軽減し、前記障害の症状または原因を減弱することを可能にする。
【００３１】
事実、本発明は、驚くべき様式で、ＰＡＲ受容体（例えば、ＰＡＲ−２受容体）の活性化に関連する傍細胞透過性の増加を抑制すると、内臓の痛覚過敏の発達が防止されることを実証する。
【００３２】
本発明の特定の目的は、痛覚過敏の状態によって特徴付けられる腸管疾患、特に、免疫細胞（例えば、マスト細胞および／または腸クロム親和性細胞）の粘膜下蓄積、壁の機械受容器の高められた感受性、およびおそらく、腸内細菌の粘膜下層への侵入によって特徴付けられる慢性炎症性疾患、例えば、痛覚過敏および特に、過敏性腸症候群を伴う被験体における腸管上皮の傍細胞浸透性を制御する、特に減少するための医薬品を調製するための上記で規定されるようなプロテアーゼインヒビターの使用に基づく。
【００３３】
本発明の別の特定の目的は、機能性腸管障害、特に、免疫細胞、例えば、特に、マスト細胞および／または腸クロム親和性細胞の粘膜下蓄積、壁の機械受容器の高められた感受性、およびおそらく、腸内細菌の粘膜下層への侵入によって特徴付けられる腸の異常、例えば、痛覚過敏および特に、過敏性腸症候群を患っているかあるいは罹患しやすい被験体におけるアレルゲン、病原体および／または化学分子に対する感作を減少するための医薬品を調製するための上記で規定されるようなプロテアーゼインヒビターの使用に基づく。
【００３４】
本発明の別の特定の目的は、腸管機能性病状、特に、内臓の痛覚過敏、例えば、免疫細胞、特に、マスト細胞および／または腸クロム親和性細胞の粘膜下蓄積、壁の機械受容器の高められた感受性、およびおそらく、腸内細菌の粘膜下層への侵入によって特徴付けられる過敏性腸症候群を誘導する腸の異常を伴う被験体における粘膜下層での免疫細胞の経上皮移動およびその蓄積を減少するための医薬品を調製するための上記で規定されるようなプロテアーゼインヒビターの使用に基づく。
【００３５】
本発明はまた、腸の異常を伴うかまたは腸の異常にかかり易い被験体に、プロテアーゼインヒビターまたは上記で規定されるような処置を投与することを含んでなる、上記の病態を処置するための方法に関する。好ましくは、プロテアーゼインヒビターあるいは処置は、腸管上皮の傍細胞浸透性を減少するおよび／または痛みに対する感受性を減少するおよび／またはアレルゲン、毒素、刺激物もしくは微生物の経上皮移動および従って、腸の粘膜下層における免疫細胞の蓄積を減少するのに有効である用量で投与される。
【００３６】
プロテアーゼインヒビターは、異なる経路および異なる剤形で投与することができる。例えば、プロテアーゼインヒビターは、液体または固体の処方、典型的に、錠剤、ゼラチンカプセル、カプセル、アンプルまたは経口用溶液、注射用溶液などの剤形であることができる。経口投与（経口用溶液、錠剤、アンプル、ゼラチンカプセル、カプセル、シロップなど）または直腸投与（坐剤）のために処方される化合物が好適である。これが可能である場合、結腸における微生物消化によってそれらの内容物を放出するカプセルまたはゼラチンカプセル処方が特に好適である。もちろん、注射（腹腔内、経皮、皮下、筋肉内、静脈内、動脈内など）、軟膏、ゲルなどのような他の処方も可能である。
【００３７】
本発明の別の目的は、少なくとも１つのプロテアーゼインヒビターおよび薬学的に許容可能な賦形剤を含んでなる薬学的組成物であり、前記組成物は、好ましくは、経口または直腸投与のために処方される。好ましくは、組成物は、坐剤、または結腸における微生物消化によってその内容物を放出するカプセルもしくはゼラチンカプセルとして処方される。
【００３８】
本発明の他の局面および利点は、例示の目的のためであって、制限的方法によるものではない以下の実施例において理解されよう。
【実施例】
【００３９】
実施例１：タイトジャンクションのブロッカーによる直腸痛覚過敏の減少
腸管上皮は、免疫細胞の腸粘膜下組織への制御された通過を確実にする上皮細胞を連結する構造を含有する。本実施例は、ＳＬＩＧＲＬのような腸傍細胞浸透性を増加することが公知であるいくつかの分子が腸粘膜下組織における免疫細胞（マスト細胞、腸クロム親和性細胞）の蓄積を促進すること、およびこの効果が、タイトジャンクションのブロッカーによる結腸内処置によって防止（例えば、阻害、減少）され得ることを示す。
【００４０】
８匹の雄性Ｗｉｓｔａｒラット（２００〜２５０ｇ）からなる６群を本研究に使用した。動物に対し、近位結腸（盲腸−結腸接合部から３ｃｍ）に結腸内留置カテーテルを固定した。これらの実験では、４群のラットに、５１Ｃｒ−ＥＤＴＡ（０．５μＣ／時）の１０時間結腸内輸注を投与した。動物を個別のケージに配置し、すべての２４時間尿を回収した。尿中の放射能を測定して、結腸粘膜の５１Ｃｒ−ＥＤＴＡに対する浸透性を評価した。増加用量のＰＡＲ−２アクチベーターペプチド（ＳＬＩＧＲＬ）を、結腸内腔（群２、３および４）に、時間ｔ＝０（５１Ｃｒ−ＥＤＴＡ輸注の開始）、０．０５、０．２および０．５ｍｇ／ラットの用量で注入した。群１には溶媒を投与した。図１は、ＳＬＩＧＲＬが５１Ｃｒ−ＥＤＴＡに対する浸透性の用量依存的増加を誘導したことを例示し、前記ペプチドが傍細胞浸透性を増加することができることを実証する。
【００４１】
実施例２：マウス結腸における傍細胞透過性。異なる細菌性プロテアーゼインヒビターの効果
１０匹の雄性Ｓｗｉｓｓマウス（２５〜３０ｇ）からなる６群を本研究に使用した。動物に、直腸を通して挿入し、尾の基底部に固定したカテーテルを介して、異なるプロテアーゼインヒビター溶液の５時間結腸内輸注（２５０μｌ／時）を投与し；５１Ｃｒ−ＥＤＴＡを３〜５時間目に輸注に添加した（図２）。ｔ＝５時間に、動物を屠殺し、結腸を取り出し、身体に残留する放射能を傍細胞浸透性の指標とみなした。傍細胞浸透性は、プロテアーゼインヒビターカクテル（Ｒｏｃｈｅ参照番号：１  ８７３  ５８０、ＥＤＴＡなし）、セリンプロテアーゼインヒビター（アプロチニン、Ｓｉｇｍａ  Ａ１１５３）および非特異的マトリックスメタロプロテアーゼインヒビター（ガラルジン、Ｓｉｇｍａ：Ｍ５９３９）の輸注後、有意に低かった（図２）。
【００４２】
実施例３：トリプシンおよび結腸内容物の上清の腔内輸注によって、および抗生物質カクテルによる処置後に誘導されるマウスにおける結腸傍細胞浸透性の変化
２５〜３０ｇに秤量した１０匹の雄性Ｓｗｉｓｓマウス（Ｊａｎｖｉｅｒ−仏国）からなる群を本研究に使用した。基本条件において、トリプシン（５０μＬ、６００Ｕ）ならびにコントロールマウス、および１日（Ｄ１）または２連続日（Ｄ２）に３時間結腸内輸注（２５０μＬ／時）を与えたマウスから採取した結腸内容物の上清の結腸内輸注の結腸傍細胞浸透性に対する効果について評価した。次いで、同じ輸注を、１２日間の経口による抗生物質カクテル（ネオマイシン２ｍｇ／ｋｇ／日＋アンピシリン１ｍｇ／ｋｇ／日）での処置後に、反復した。結果は、１）抗生物質処置が結腸浸透性を減少すること、２）トリプシンによって誘導される浸透性の増加がおそらく上皮プロテアーゼ受容体の消失を誘導する抗生物質処置後に認められなかったこと、および３）これらの動物における結腸上清の輸注が２日目に浸透性を増加したことを示す（図３）。
【００４３】
実施例４：ラットにおけるプロテアーゼインヒビターカクテルの結腸内輸注による膨満に対する直腸感受性の減少
本研究では、８匹の雄性Ｗｉｓｔａｒラット（２５０〜３００ｇ）からなる３群を、痛みの基準であることが公知である腹部収縮の筋電記録のための腹部横紋筋への電極の挿入後、塞栓摘出プローブ（ＦＯＲＧＡＴＹ（登録商標））を介して投与した０〜１．６ｍｌの漸増（０．４ｍｌずつ）容積による直腸膨満プロトコルに供した。
【００４４】
時間ｔ＝０に、動物に、プロテアーゼインヒビターカクテル（Ｒｏｃｈｅ参照番号：１  ８７３  ５８０）（２パケット−０．５ｍｌ／時）またはその溶液０．９％ＮａＣｌの１２時間結腸内輸注を投与した。輸注の終了時に、動物に直腸膨満プロトコルを施した。コントロール群と比較して、プロテアーゼインヒビターの輸注は、０．８、１．２および１．６ｍｌの膨満容積について腹部応答の有意な減少を誘導し（図４）、それによって、結腸内腔の細菌叢によって放出されるプロテアーゼが膨満に対する直腸結腸感受性の基底状態を決定する役割を果たすことが実証された（図４）。
【００４５】
実施例５：ラットにおける膨満に対する直腸感受性に対する結腸内トリプシン輸注の効果
本研究では、８匹の雄性Ｗｉｓｔａｒラット（２５０〜３００ｇ）からなる２群を、痛みの基準であることが公知である腹部収縮の筋電記録のための腹部横紋筋への電極の挿入後、塞栓摘出プローブ（ＦＯＲＧＡＴＹ（登録商標））を介して投与した０〜１．６ｍｌの漸増（０．４ｍｌずつ）容積による直腸膨満プロトコルに供した。
【００４６】
時間ｔ＝０で、動物に、トリプシン（４００単位）、２０単位の用量（群１）での特異的ＰＡＲ−２受容体アクチベーターまたは溶媒（群２）の結腸内輸注を投与した。時間ｔ＝１０時間に、結腸内トリプシン輸注後、動物を、直腸膨満プロトコルに供した。コントロール群と比較して、トリプシンは、０．８、１．２および１．６ｍｌの膨満容積について腹部応答の有意な減少を誘導し（図５）、それによって、結腸内プロテアーゼ濃度の増加が膨満に対する結腸の感受性を増加することが示された。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】ラットの２４時間尿における回収百分率として表される巨大分子（５１Ｃｒ−ＥＤＴＡ）の吸収に対する増加用量のＰＡＲ−２受容体アクチベーターペプチド（ＳＬＩＧＲＬ）の効果を表す。
【図２】マウス結腸における傍細胞透過性。次の異なる細菌性プロテアーゼインヒビターの効果（平均±ＳＤ；ｎ＝１２）を表す：プロテアーゼインヒビターカクテル（１／２パケット）；システインプロテアーゼインヒビター（１００μｇ／ｍｌ）；セリンプロテアーゼインヒビター（１００および５００μｇ／ｍｌ）；マトリックスメタロプロテアーゼインヒビター（１００μｇ／ｍｌ）。
【図３】正常マウス（コントロール）におけるトリプシンおよび結腸内容物の上清の腔内輸注により誘導される、ならびにマウスにおける経口抗生物質カクテル（ネオマイシン２ｍｇ／ｋｇ／日＋アンピシリン１ｍｇ／ｋｇ／日）による１０日間処置後の、結腸傍細胞浸透性の変化（平均±ＳＤ；ｎ＝１２）を表す。
【図４】ラットにおけるプロテアーゼインヒビターカクテルの結腸内輸注によって誘導される膨満に対する直腸感受性の減少（平均±ＳＤ；ｎ＝８）を表す。
【図５】ラットにおける膨満に対する直腸感受性に対するトリプシンの結腸内輸注の効果（平均±；ｎ＝８）。
【図１】
2007518779.tif 000002
【図２】
2007518779.tif 000003
【図３】
2007518779.tif 000004
【図４】
2007518779.tif 000005
【図５】
2007518779.tif 000006
【国際調査報告】
2007518779.tif 000007
2007518779.tif 000008
2007518779.tif 000009
2007518779.tif 000010
2007518779.tif 000011
2007518779.tif 000012