(57)【要約】  本発明はトランスジェニック動物、並びに遺伝子機能の特徴付けに関する組成物及び方法に関する。特に、本発明はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１遺伝子に破壊を有するトランスジェニックマウスを提供する。かかるインビボ研究及び特徴付けは、神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常のような遺伝子破壊に関連する疾患又は機能不全の予防、改善又は修復に有用な治療薬及び／又は治療法の貴重な同定及び発見をもたらしうる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型を同定する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質を測定し；
（ｃ）測定された生理学的性質を性別が一致した野生型動物のものと比較することを含み、野生型動物の生理学的性質と異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質が非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊から生じる表現型として同定される方法。
【請求項２】
非ヒトトランスジェニック動物が、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に対してヘテロ接合性である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
性別が一致した同腹仔と比較して非ヒトトランスジェニック動物によって示される表現型が次のもの：神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常の少なくとも一つである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
神経障害がオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
神経障害がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
神経障害がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である、請求項３に記載の方法。
【請求項９】
神経障害が鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏又は感覚器障害である、請求項３に記載の方法。
【請求項１０】
眼の異常が網膜異常である、請求項３に記載の方法。
【請求項１１】
眼の異常が視覚障害又は失明である、請求項３に記載の方法。
【請求項１２】
網膜異常が網膜色素変性症と一致している、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
網膜異常が網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
網膜異常が網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
眼の異常が白内障である、請求項３に記載の方法。
【請求項１６】
白内障が、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群と一致している、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
発生異常が胚性致死又は低減した生存率を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項１８】
循環器、内皮又は血管新生疾患が、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；及び外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である、請求項３に記載の方法。
【請求項１９】
免疫疾患が、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患である、請求項３に記載の方法。
【請求項２０】
骨代謝異常又は疾患が関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である、請求項３に記載の方法。
【請求項２１】
非ヒトトランスジェニック動物が、性別が一致した野生型同腹仔と比較して次の生理学的性質：オープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答；オープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答；機能観察バッテリ（ＦＯＢ）試験での禿げ、視床外所見、及び立毛所見；網膜変性に関連する増加した平均動静脈比；発育白内障；増加した平均血清中コレステロール値；増加した平均血清中トリグリセリド値；減少した平均血清中インスリン値、脾臓及びリンパ節における減少したＢ細胞の平均割合；卵白アルブミン投与に対する減少した平均血清ＩｇＧ２ａ応答；減少した平均血清中ＩｇＡ値；卵白アルブミン投与に対する増加した平均血清ＩｇＧ２ａ応答；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ値；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＡ及びＩｇＧ３値；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ値；脾臓及び胸腺におけるＣＤ４細胞の増加した平均割合及びＣＤ８細胞の減少した平均割合；腹膜炎症に応答する好中球の動員；亢進したＤＤＳ誘発性大腸炎応答；亢進したＣｏｎＡ誘発性肝炎応答；減少した皮膚線維芽細胞増殖；減少した骨体積密度、減少した骨ミネラル量指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）、及び全身、大腿及び脊椎における減少した骨密度；減少した平均骨密度、減少した平均小柱状骨体積、減少した厚み、及び減少した結合密度；減少した体重及び身長、減少した全組織体重及び除脂肪体重、減少したアルカリホスファターゼ値を持つ減少した大腿中軸横断面積；減少した体重及び身長、全組織体重、及び除脂肪体重を伴う発育遅延；横隔膜ヘルニア；増加した全組織体重、増加した除脂肪体重、増加した骨ミネラル量、増加した全身及び増加した大腿骨密度；亢進した糖耐性；腎臓発育不全を特徴とする異常な腎臓発育を含む発育性疾患；胚性致死；又はヘテロ接合性成体が減少した血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３値を示した胚性致死、の少なくとも一つを示す、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物に由来する単離細胞。
【請求項２３】
マウス細胞である、請求項２２に記載の単離細胞。
【請求項２４】
マウス細胞が胚性幹細胞である、請求項２３に記載の単離細胞。
【請求項２５】
非ヒトトランスジェニック動物が、性別が一致した同腹仔と比較して次の表現型：神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を示す、請求項２２に記載の単離細胞。
【請求項２６】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型を調節する薬剤を同定する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質を測定し；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的性質を性別が一致した野生型動物のものと比較し、ここで、野生型動物の生理学的性質と異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質が非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊から生じる表現型として同定され；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｅ）試験薬剤が非ヒトトランスジェニック動物の遺伝子破壊に関連した同定された表現型を調節するかどうかを決定する、ことを含む方法。
【請求項２７】
遺伝子破壊に関連した表現型が神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
神経障害がオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
神経障害がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
神経障害がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３２】
神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３３】
神経障害が鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏又は感覚器障害である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３４】
眼の異常が網膜異常である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３５】
眼の異常が視覚障害又は失明である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３６】
網膜異常が網膜色素変性症と一致している、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
網膜異常が網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている、請求項３４に記載の方法。
【請求項３８】
網膜異常が網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している、請求項３４に記載の方法。
【請求項３９】
眼の異常が白内障である、請求項２７に記載の方法。
【請求項４０】
白内障が、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群と一致している、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
発生異常が胚性致死又は低減した生存率を含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項４２】
循環器、内皮又は血管新生疾患が、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；及び外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である、請求項２７に記載の方法。
【請求項４３】
免疫疾患が、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患である、請求項２７に記載の方法。
【請求項４４】
骨代謝異常又は疾患が関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である、請求項２７に記載の方法。
【請求項４５】
非ヒトトランスジェニック動物が、性別が一致した野生型同腹仔と比較して次の生理学的性質：オープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答；オープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答；機能観察バッテリ（ＦＯＢ）試験での禿げ、視床外所見、及び立毛所見；網膜変性に関連する増加した平均動静脈比；発育白内障；増加した平均血清中コレステロール値；増加した平均血清中トリグリセリド値；減少した平均血清中インスリン値、脾臓及びリンパ節における減少したＢ細胞の平均割合；卵白アルブミン投与に対する減少した平均血清ＩｇＧ２ａ応答；減少した平均血清中ＩｇＡ値；卵白アルブミン投与に対する増加した平均血清ＩｇＧ２ａ応答；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ値；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＡ及びＩｇＧ３値；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ値；脾臓及び胸腺におけるＣＤ４細胞の増加した平均割合及びＣＤ８細胞の減少した平均割合；腹膜炎症に応答する好中球の動員；亢進したＤＤＳ誘発性大腸炎応答；亢進したＣｏｎＡ誘発性肝炎応答；減少した皮膚線維芽細胞増殖；減少した骨体積密度、減少した骨ミネラル量指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）、及び全身、大腿及び脊椎における減少した骨密度；減少した平均骨密度、減少した平均小柱状骨体積、減少した厚み、及び減少した結合密度；減少した体重及び身長、減少した全組織体重及び除脂肪体重、減少したアルカリホスファターゼ値を持つ減少した大腿中軸横断面積；減少した体重及び身長、全組織体重、及び除脂肪体重を伴う発育遅延；横隔膜ヘルニア；増加した全組織体重、増加した除脂肪体重、増加した骨ミネラル量、増加した全身及び増加した大腿骨密度；亢進した糖耐性；腎臓発育不全を特徴とする異常な腎臓発育を含む発育性疾患；胚性致死；又はヘテロ接合性成体が減少した血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３値を示した胚性致死、の少なくとも一つを示す、請求項２６に記載の方法。
【請求項４６】
請求項２６に記載の方法によって同定された薬剤。
【請求項４７】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項４６に記載の薬剤。
【請求項４８】
アゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項４７に記載の薬剤。
【請求項４９】
アンタゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項４７に記載の薬剤。
【請求項５０】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した生理学的性質を調節する薬剤を同定する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質を測定し；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的性質を性別が一致した野生型動物のものと比較し、ここで、野生型動物が示す生理学的性質と異なる非ヒトトランスジェニック動物が示す生理学的性質が遺伝子破壊に関連する生理学的性質として同定され；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｅ）遺伝子破壊に関連した生理学的性質が調節されるかどうかを決定する、ことを含む方法。
【請求項５１】
非ヒトトランスジェニック動物が、性別が一致した野生型同腹仔と比較して次の生理学的性質：オープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答；オープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答；機能観察バッテリ（ＦＯＢ）試験での禿げ、視床外所見、及び立毛所見；網膜変性に関連する増加した平均動静脈比；発育白内障；増加した平均血清中コレステロール値；増加した平均血清中トリグリセリド値；減少した平均血清中インスリン値、脾臓及びリンパ節における減少したＢ細胞の平均割合；卵白アルブミン投与に対する減少した平均血清ＩｇＧ２ａ応答；減少した平均血清中ＩｇＡ値；卵白アルブミン投与に対する増加した平均血清ＩｇＧ２ａ応答；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ値；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＡ及びＩｇＧ３値；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ値；脾臓及び胸腺におけるＣＤ４細胞の増加した平均割合及びＣＤ８細胞の減少した平均割合；腹膜炎症に応答する好中球の動員；亢進したＤＤＳ誘発性大腸炎応答；亢進したＣｏｎＡ誘発性肝炎応答；減少した皮膚線維芽細胞増殖；減少した骨体積密度、減少した骨ミネラル量指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）、及び全身、大腿及び脊椎における減少した骨密度；減少した平均骨密度、減少した平均小柱状骨体積、減少した厚み、及び減少した結合密度；減少した体重及び身長、減少した全組織体重及び除脂肪体重、減少したアルカリホスファターゼ値を持つ減少した大腿中軸横断面積；減少した体重及び身長、全組織体重、及び除脂肪体重を伴う発育遅延；横隔膜ヘルニア；増加した全組織体重、増加した除脂肪体重、増加した骨ミネラル量、増加した全身及び増加した大腿骨密度；亢進した糖耐性；腎臓発育不全を特徴とする異常な腎臓発育を含む発育性疾患；胚性致死；又はヘテロ接合性成体が減少した血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３値を示した胚性致死、の少なくとも一つを示す、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
請求項５０に記載の方法によって同定された薬剤。
【請求項５３】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項５２に記載の薬剤。
【請求項５４】
アゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項５３に記載の薬剤。
【請求項５５】
アンタゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項５３に記載の薬剤。
【請求項５６】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した行動を調節する薬剤を同定する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物が示す行動を観察し；
（ｃ）（ｂ）の観察された行動を性別が一致した野生型動物のものと比較し、ここで、野生型動物が示す観察された行動と異なる非ヒトトランスジェニック動物が示す観察された行動が遺伝子破壊に関連する行動として同定され；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｅ）薬剤が遺伝子破壊に関連した行動を調節するかどうかを決定する、ことを含む方法。
【請求項５７】
行動がオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
行動がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である、請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
行動がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである、請求項５６に記載の方法。
【請求項６０】
行動がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である、請求項５６に記載の方法。
【請求項６１】
行動がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である、請求項５６に記載の方法。
【請求項６２】
行動が鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏又は感覚器障害である、請求項５６に記載の方法。
【請求項６３】
請求項５６に記載の方法によって同定された薬剤。
【請求項６４】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項６３に記載の薬剤。
【請求項６５】
アゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項６４に記載の薬剤。
【請求項６６】
アンタゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項６４に記載の薬剤。
【請求項６７】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解又は調節する薬剤を同定する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）上記非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｃ）上記試験薬剤が非ヒトトランスジェニック動物において神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解又は調節するかどうかを決定する、ことを含む方法。
【請求項６８】
神経障害がオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
神経障害がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である、請求項６７に記載の方法。
【請求項７０】
神経障害がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである、請求項６７に記載の方法。
【請求項７１】
神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である、請求項６７に記載の方法。
【請求項７２】
神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である、請求項６７に記載の方法。
【請求項７３】
神経障害が鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏又は感覚器障害である、請求項６７に記載の方法。
【請求項７４】
眼の異常が網膜異常である、請求項６７に記載の方法。
【請求項７５】
眼の異常が視覚障害又は失明である、請求項６７に記載の方法。
【請求項７６】
網膜異常が網膜色素変性症と一致している、請求項７４に記載の方法。
【請求項７７】
網膜異常が網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている、請求項７４に記載の方法。
【請求項７８】
網膜異常が網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している、請求項７４に記載の方法。
【請求項７９】
眼の異常が白内障である、請求項６７に記載の方法。
【請求項８０】
白内障が、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群と一致している、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
発生異常が胚性致死又は低減した生存率を含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項８２】
循環器、内皮又は血管新生疾患が、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；及び外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である、請求項６７に記載の方法。
【請求項８３】
免疫疾患が、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患である、請求項６７に記載の方法。
【請求項８４】
上記骨代謝異常又は疾患が関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である、請求項６７に記載の方法。
【請求項８５】
非ヒトトランスジェニック動物が、性別が一致した野生型同腹仔と比較して次の生理学的性質：オープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答；オープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答；機能観察バッテリ（ＦＯＢ）試験での禿げ、視床外所見、及び立毛所見；網膜変性に関連する増加した平均動静脈比；発育白内障；増加した平均血清中コレステロール値；増加した平均血清中トリグリセリド値；減少した平均血清中インスリン値、脾臓及びリンパ節における減少したＢ細胞の平均割合；卵白アルブミン投与に対する減少した平均血清ＩｇＧ２ａ応答；減少した平均血清中ＩｇＡ値；卵白アルブミン投与に対する増加した平均血清ＩｇＧ２ａ応答；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ値；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＡ及びＩｇＧ３値；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ値；脾臓及び胸腺におけるＣＤ４細胞の増加した平均割合及びＣＤ８細胞の減少した平均割合；腹膜炎症に応答する好中球の動員；亢進したＤＤＳ誘発性大腸炎応答；亢進したＣｏｎＡ誘発性肝炎応答；減少した皮膚線維芽細胞増殖；減少した骨体積密度、減少した骨ミネラル量指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）、及び全身、大腿及び脊椎における減少した骨密度；減少した平均骨密度、減少した平均小柱状骨体積、減少した厚み、及び減少した結合密度；減少した体重及び身長、減少した全組織体重及び除脂肪体重、減少したアルカリホスファターゼ値を持つ減少した大腿中軸横断面積；減少した体重及び身長、全組織体重、及び除脂肪体重を伴う発育遅延；横隔膜ヘルニア；増加した全組織体重、増加した除脂肪体重、増加した骨ミネラル量、増加した全身及び増加した大腿骨密度；亢進した糖耐性；腎臓発育不全を特徴とする異常な腎臓発育を含む発育性疾患；胚性致死；又はヘテロ接合性成体が減少した血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３値を示した胚性致死、の少なくとも一つを示す、請求項６７に記載の方法。
【請求項８６】
請求項６７に記載の方法によって同定された薬剤。
【請求項８７】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項８６に記載の薬剤。
【請求項８８】
アゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項８７に記載の薬剤。
【請求項８９】
アンタゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項８７に記載の薬剤。
【請求項９０】
請求項６７に記載の方法によって同定された治療剤。
【請求項９１】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの発現を調節する薬剤を同定する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを発現する宿主細胞に試験薬剤を接触させ；
（ｂ）試験薬剤が宿主細胞によるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの発現を調節するかどうかを決定する、ことを含む方法。
【請求項９２】
請求項９１に記載の方法によって同定された薬剤。
【請求項９３】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項９２に記載の薬剤。
【請求項９４】
アゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項９３に記載の薬剤。
【請求項９５】
アンタゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項９３に記載の薬剤。
【請求項９６】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した症状に影響を及ぼすことが可能な治療剤を評価する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質を測定し；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的性質を性別が一致した野生型動物のものと比較し、ここで、野生型動物の生理学的性質と異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質が非ヒトトランスジェニック動物の遺伝子破壊から生じる症状として同定され；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｅ）非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊に関連した同定症状に対する試験薬剤の効果を評価する、ことを含む方法。
【請求項９７】
症状が、神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常である、請求項９６に記載の方法。
【請求項９８】
請求項９６に記載の方法によって同定された治療剤。
【請求項９９】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項９８に記載の治療剤。
【請求項１００】
アゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項９９に記載の治療剤。
【請求項１０１】
アンタゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項９９に記載の治療剤。
【請求項１０２】
請求項９８に記載の治療剤を含有する医薬組成物。
【請求項１０３】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患又は胚性致死を治療又は予防又は寛解する方法であって、疾患を既に有しているか、又は疾患を有している傾向があるか又は疾患が予防される治療を必要とする患者に、治療的有効量の請求項９４に記載の治療剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって上記疾患を効果的に治療又は予防又は寛解することを含む方法。
【請求項１０４】
神経障害がオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
神経障害がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０６】
神経障害がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０７】
神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０８】
神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０９】
神経障害が鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏又は感覚器障害である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１０】
眼の異常が網膜異常である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１１】
眼の異常が視覚障害又は失明である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１２】
網膜異常が網膜色素変性症と一致している、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１３】
網膜異常が網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１４】
網膜異常が網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１５】
眼の異常が白内障である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１６】
白内障が、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群と一致している、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１７】
発生異常が胚性致死又は低減した生存率を含む、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１８】
循環器、内皮又は血管新生疾患が、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；及び外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１９】
免疫疾患が、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１２０】
骨代謝異常又は疾患が関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１２１】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解又は調節する薬剤を同定する方法であって、
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物細胞培養物を提供し、該培養物の各細胞はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含み；
（ｂ）上記細胞培養物に試験薬剤を投与し；
（ｃ）上記試験薬剤が上記細胞培養物において神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解又は調節するかどうかを決定する、ことを含む方法。
【請求項１２２】
神経障害がオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２３】
神経障害がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２４】
神経障害がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２５】
神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２６】
神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２７】
神経障害が鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏又は感覚器障害である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２８】
眼の異常が網膜異常である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２９】
眼の異常が視覚障害又は失明である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１３０】
網膜異常が網膜色素変性症と一致している、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３１】
網膜異常が網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３２】
網膜異常が網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３３】
眼の異常が白内障である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１３４】
白内障が、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群と一致している、請求項１３３に記載の方法。
【請求項１３５】
発生異常が胚性致死又は低減した生存率を含む、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１３６】
循環器、内皮又は血管新生疾患が、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；及び外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１３７】
免疫疾患が、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１３８】
骨代謝異常又は疾患が関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１３９】
請求項１２１に記載の方法によって同定された治療剤。
【請求項１４０】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項１３９に記載の治療剤。
【請求項１４１】
アゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項１４０に記載の治療剤。
【請求項１４２】
アンタゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項１４０に記載の治療剤。
【請求項１４３】
請求項１２１に記載の方法によって同定された治療剤。
【請求項１４４】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型を調節する方法であって、表現型を既に有しているか、又は表現型を有している傾向があるか又は表現型が予防される患者に、有効量の請求項４６に記載の薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって表現型を効果的に調節することを含む方法。
【請求項１４５】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した生理学的性質を調節する方法であって、生理学的性質を既に有しているか、又は生理学的性質を有している傾向があるか又は生理学的性質が予防される患者に、有効量の請求項５２に記載の薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって生理学的性質を効果的に調節することを含む方法。
【請求項１４６】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した行動を調節する方法であって、行動を既に有しているか、又は行動を有している傾向があるか又は行動が予防される患者に、有効量の請求項６３に記載の薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって行動を効果的に調節することを含む方法。
【請求項１４７】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの発現を調節する方法であって、上記ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを発現する宿主に、有効量の請求項９２に記載の薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって上記ポリペプチドの発現を効果的に調節することを含む方法。
【請求項１４８】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した症状を調節する方法であって、症状を有しているか、又は症状を有している傾向があるか又は症状が予防される患者に、治療的有効量の請求項９８に記載の治療剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって症状を効果的に調節することを含む方法。
【請求項１４９】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患又は胚性致死を治療又は予防又は寛解する方法であって、非ヒトトランスジェニック動物細胞培養物に、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む上記培養物の各細胞に、治療的有効量の請求項９４に記載の薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって上記疾患を効果的に治療し又は予防し又は寛解する方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
発明の分野
本発明は、トランスジェニック及びノックアウト動物を含む組成物と疾病又は障害の診断及び治療のためにそのような組成物を使用する方法に関する。
【０００２】
発明の背景
細胞外タンパク質は、特に、多細胞生物の形成、分化及び維持において重要な役割を担っている。多くの個々の細胞の運命、例えば増殖、移動、分化又は他の細胞との相互作用は、典型的には、他の細胞及び／又は直近の環境から受け取る情報に支配される。この情報は、しばしば分泌ポリペプチド(例えば、分裂促進因子、生存因子、細胞傷害性因子、分化因子、神経ペプチド、及びホルモン)により伝達され、これが、今度は多様な細胞レセプター又は膜結合タンパク質により受け取られ解釈される。これらの分泌ポリペプチド又はシグナル伝達分子は、通常は細胞分泌経路を通過し、細胞外環境におけるその作用部位に到達する。
分泌タンパク質は、製薬、診断、バイオセンサー及びバイオリアクターを含む、様々な産業上の用途を有している。血栓溶解剤、インターフェロン、インターロイキン、エリスロポエチン、コロニー刺激因子、及び種々の他のサイトカインのような、現在入手可能な大抵のタンパク質薬物は分泌タンパク質である。膜タンパク質であるそのレセプターもまた治療又は診断用薬剤としての可能性を有している。新規な未変性の分泌タンパク質を同定する努力が産業界と学術界の双方によってなされている。多くの努力が新規な分泌タンパク質のコード配列を同定するために哺乳動物組換えＤＮＡライブラリーのスクリーニングに注がれている。スクリーニング方法及び技術の例は文献に記載されている[例えば、Klein等, Proc. Natl. Acad. Sci. 93;7108-7113(1996);米国特許第５５３６６３７号を参照されたい]。
【０００３】
膜結合タンパク質とレセプターは、とりわけ、多細胞生物の形成、分化及び維持において重要な役割を担っている。多くの個々の細胞の運命、例えば増殖、移動、分化又は他の細胞との相互作用は、典型的には他の細胞及び／又は直近の環境から受け取る情報に支配される。この情報は、しばしば分泌ポリペプチド(例えば、分裂促進因子、生存因子、細胞傷害性因子、分化因子、神経ペプチド、及びホルモン)により伝達され、これが次に多様な細胞レセプター又は膜結合タンパク質により受け取られ解釈される。このような膜結合タンパク質と細胞レセプターは、限定されるものではないが、サイトカインレセプター、レセプターキナーゼ、レセプターホスファターゼ、細胞-細胞間相互作用に関与するレセプター、及びセレクチン及びインテグリンのような細胞接着分子を含む。例えば、細胞の増殖及び分化を調節するシグナルの伝達は、様々な細胞タンパク質のリン酸化により部分的に調節される。そのプロセスを触媒する酵素であるプロテインチロシンキナーゼはまた成長因子レセプターとしても作用しうる。具体例には、線維芽細胞成長因子レセプター及び神経成長因子レセプターが含まれる。
膜結合タンパク質とレセプター分子は、製薬及び診断薬を含む、様々な産業的用途用を有している。例えば、レセプターイムノアドヘシンはレセプター-リガンド間相互作用を阻止する治療薬として使用することができる。膜結合タンパク質はまた、関連するレセプター／リガンド間相互作用の可能性のあるペプチド又は小分子インヒビターをスクリーニングするために使用することもできる。
新規な未変性のレセプター又は膜結合タンパク質を同定するための努力が産業界と学術界の双方によってなされている。多くの努力が、新規なレセプター又は膜結合タンパク質のコード配列を同定するために、哺乳動物組換えＤＮＡライブラリーのスクリーニングに注がれている。
【０００４】
生物学的及び疾病プロセスにおける分泌及び膜結合タンパク質の重要性が分かると、インビボ研究及び特徴付けは疾病又は機能不全の予防、改善又は修復に有用な治療薬及び／又は治療方法の貴重な特定と発見をもたらしうる。この点、遺伝子操作マウスは、免疫、癌、神経生物学、心臓血管生物学、肥満及び多くの他の疾病を含むヒトの疾病に関連した生物学的プロセスの機能的な詳細分析のための非常に有益なツールであることが証明されている。遺伝子ノックアウトは高度に特異的なアンタゴニストの活性をインビボで予測することにより薬物作用の生物学的機序をモデル化するものであると見ることができる。ノックアウトマウスは薬物活性をモデル化することが示されている；特定の薬学的標的タンパク質が欠損したマウスの表現型は対応するアンタゴニスト薬によって引き起こされるヒトの臨床表現型に類似しうる。遺伝子ノックアウトによって、標的の作用機序、標的の支配的な生理学的役割、及び哺乳類での標的の阻害から生じるかも知れない作用機序に基づく副作用の発見が可能になる。この種の例には、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）［Esther, C.R.等, Lab. Invest., 74:953-965 (1996)]及びシクロオキシゲナーゼ-１（ＣＯＸ１）遺伝子［Langenbach, R.等, Cell, 83:483-492 (1995)］が欠損したマウスが含まれる。逆に、マウスの遺伝子のノックアウトは、対応する標的へのアゴニスト薬の投与後にヒトにおいて観察されるものと反対の表現型効果を生じうる。例には、変異の結果が不十分な赤血球細胞の生成であるエリスロポエチンノックアウト［Wu, C.S.等, Cell, 83:59-67 (1996)］、及び変異マウスが過敏及び過敏反応性を示すGABA(A)-R-β3ノックアウト［DeLorey, T.M., J. Neurosci., 18:8505-8514 (1998)］が含まれる。これらの表現型の双方ともヒトにおけるエリスロポエチン及びベンゾジアゼピン投与の効果と逆である。マウス遺伝学を用いて確認された標的に特筆すべき例はＡＣＣ２遺伝子である。ヒトＡＣＣ２遺伝子は数年前に同定されているが、薬物開発のための標的としてＡＣＣ２に興味が注がれるようになったのはノックアウトマウスを用いたＡＣＣ２機能の分析後、極く最近になって刺激されたに過ぎない。ＡＣＣ２変異マウスはその野生型の同腹子よりも食欲が多いが、より多く脂肪を燃焼させその脂肪細胞に脂肪を蓄える量が少なく、この酵素は肥満症の治療における化学的拮抗作用に対する可能な標的になっている［Abu-Elheiga, L.等, Science, 291:2613-2616 (2001)]。
【０００５】
本出願において、変異遺伝子破壊は、中枢神経系／神経障害又は疾患、例えば不安神経症；眼の異常及び関連疾患；アテローム性動脈硬化症を含む循環器、内皮又は血管新生疾患；血清中トリグリセリド及びコレステロール量の増加を伴う糖尿病及び異常脂質血症；免疫学的及び炎症性疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患、例えば関節炎、骨粗鬆症及び大理石骨病；又は脂質代謝疾患；又は発達異常、例えば胚性致死を含む様々な疾病症状又は機能不全に関連した表現型観察を生じさせた。
【０００６】
(発明の概要)
Ａ．実施態様
本発明は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子を提供する。
一態様では、単離された核酸分子は、(ａ)ここに開示された完全長アミノ酸配列、ここに開示されたシグナルペプチドを欠くアミノ酸配列、ここに開示されたシグナルペプチドを伴うか又は伴わない膜貫通タンパク質の細胞外ドメイン又はここに開示された完全長アミノ酸配列の任意の他の特に決められた断片を有するＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードするＤＮＡ分子、又は(ｂ)(ａ)のＤＮＡ分子の相補鎖に対して、少なくとも約８０％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８２％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８３％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８４％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８５％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８６％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８７％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８８％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８９％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９０％の核酸酸配列同一性、あるいは少なくとも約９１％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９２％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９３％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９４％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９５％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９６％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９７％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９８％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９９％の核酸配列同一性を有するヌクレオチド配列を含んでなる単離された核酸分子を提供する。
【０００７】
他の側面では、単離された核酸分子は、（ａ）ここで開示される完全長ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドｃＤＮＡのコード化配列、ここに開示されたシグナルペプチドを欠くＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのコード化配列、ここに開示されたシグナルペプチドを伴うか又は伴わない膜貫通ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの細胞外ドメインのコード化配列、又はここに開示される完全長ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドアミノ酸配列の任意の他の具体的に定まった断片のコード化配列を含むＤＮＡ分子、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖に対して、少なくとも約８０％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８２％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８３％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８４％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８５％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８６％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８７％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８８％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８９％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９０％の核酸酸配列同一性、あるいは少なくとも約９１％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９２％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９３％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９４％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９５％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９６％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９７％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９８％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９９％の核酸配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０００８】
更なる側面では、本発明は、（ａ）ここで開示されるＡＴＣＣに寄託されたヒトタンパク質ｃＤＮＡの何れかによってコードされる同じ成熟ポリペプチドをコードするＤＮＡ分子、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖に対して、少なくとも約８０％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８２％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８３％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８４％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８５％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８６％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８７％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８８％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８９％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９０％の核酸酸配列同一性、あるいは少なくとも約９１％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９２％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９３％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９４％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９５％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９６％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９７％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９８％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９９％の核酸配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子に関する。
本発明の他の側面は、膜貫通ドメイン欠損又は膜貫通ドメイン不活性化のいずれかであるか、又はそのようなコード化ヌクレオチド配列と相補的であるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子を提供し、そのようなポリペプチドの膜貫通ドメインはここで開示されている。従って、ここに記載のＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの可溶性細胞外ドメインが考慮される。
【０００９】
本発明はまたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドコード化配列の断片、又はその相補鎖を提供し、それらは、例えば、場合によっては抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体に対する結合部位を含むポリペプチドをコードするＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのコード化断片の、ハイブリッド形成プローブとして、又はアンチセンスオリゴヌクレオチドプローブとしての用途が見いだされる。このような核酸断片は、通常は少なくとも約１０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１５ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約２０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約３０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約４０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約５０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約６０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約７０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約８０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約９０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１１０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１２０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１３０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１４０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１５０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１６０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１７０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１８０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１９０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約２００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約２５０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約３００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約３５０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約４００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約４５０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約５００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約６００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約７００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約８００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約９００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１０００ヌクレオチド長であり、ここで「約」という語の内容は参照する長さのプラス又はマイナス１０％のヌクレオチド配列長を指すことを意味する。ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドコード化ヌクレオチド配列の新規な断片は、多くの良く知られた配列アラインメントプログラムの任意のものを用いてＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドコード化ヌクレオチド配列と他の公知のヌクレオチド配列とを整列させ、いずれのＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドコード化ヌクレオチド配列断片が新規であるかを決定することにより、常套的に同定することができる。このようなＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドコード化ヌクレオチド配列は全てここで考慮される。また、これらのヌクレオチド分子断片、好ましくは抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体に対する結合部位を含むＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド断片によってコードされるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド断片も考慮される。
【００１０】
他の実施態様では、本発明は、上記で特定された単離された核酸配列の任意のものにコードされる単離されたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを提供する。
ある態様では、本発明は、ここに開示する完全長アミノ酸配列、ここに開示するシグナルペプチドを欠くアミノ酸配列、ここに開示するシグナルペプチド有又は無の膜貫通タンパク質の細胞外ドメイン、又はここに開示する完全長アミノ酸配列の特に同定された他の断片を持つＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドに対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８２％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８３％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８４％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８６％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８７％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８８％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８９％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９１％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９２％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９３％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９４％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９６％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９７％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９８％の配列同一性、あるいは少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む単離されたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドに関する。
【００１１】
更なる態様では、本発明は、ここに開示するＡＴＣＣに寄託されたヒトタンパク質ｃＤＮＡの任意のものにコードされるアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８２％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８３％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８４％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８６％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８７％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８８％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８９％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９１％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９２％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９３％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９４％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９６％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９７％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９８％の配列同一性、あるいは少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む単離されたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドに関する。
【００１２】
一態様では、本発明は、少なくとも約１０アミノ酸長、あるいは少なくとも約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００アミノ酸長、又はそれ以上であるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１変異体ポリペプチドに関する。場合によっては、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１変異体ポリペプチドは、天然のＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド配列と比較して１を越えない保存的アミノ酸置換を有するか、あるいは天然のＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド配列と比較して２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０を越えない保存的アミノ酸置換を有する。
【００１３】
特定の態様では、本発明は、Ｎ-末端シグナル配列及び／又は開始メチオニンを持たず、上記したようなアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列によってコードされる単離されたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを提供する。それらを製造する方法もここに記載され、それらの方法は、適当なコード化核酸分子を含むベクターを含む宿主細胞をＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの発現に適した条件下で培養し、培養培地からＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを回収することを含む。
他の態様では、本発明は、膜貫通ドメインの欠失した又は膜貫通ドメインが不活性化された、単離されたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを提供する。それらを製造する方法もここに記載され、それらの方法は、適当なコード化核酸分子を含むベクターを含む宿主細胞をＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの発現に適した条件下で培養し、培養培地からＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを回収することを含む。
【００１４】
本発明は、ここで定義されるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアゴニスト及びアンタゴニストを提供する。特に、アゴニスト又はアンタゴニストは、抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体又は小分子である。
本発明は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストを同定する方法を提供し、それは、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを候補分子と接触させ、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドによって媒介される生物学的活性を監視することを含む。好ましくは、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドは天然ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドである。
【００１５】
本発明は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド、又はここに記載するＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニスト、又は抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体を、担体と組み合わせて含有する物質の組成物を提供する。場合によっては、担体は製薬的に許容される担体である。
本発明は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド、又は上記したようなそのアゴニスト又はアンタゴニスト、又は抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体の、抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体に起因する症状の治療に有用な医薬の調製のための使用を提供する。
【００１６】
本発明は、ここに記載するポリペプチドの任意のものをコードするＤＮＡを含むベクターを提供する。そのようなベクターの任意のものを含む宿主細胞も提供される。例として、宿主細胞はＣＨＯ細胞、大腸菌、又はバキュウロウイルス感染昆虫細胞であってよい。ここに記載する任意のポリペプチドの製造方法がさらに提供され、それは、宿主細胞を所望のポリペプチドの発現に適した条件下で培養し、細胞培地から所望のポリペプチドを回収することを含む。
本発明は、異種ポリペプチド又はアミノ酸配列に融合した、ここに記載する任意のポリペプチドを含んでなるキメラ分子を提供する。そのようなキメラ分子の例は、エピトープタグ配列又は免疫グロブリンのＦｃ領域に融合したここに記載の任意のポリペプチドを含む。
本発明は、上記又は下記のポリペプチドの任意のものに特異的に結合する抗体を提供する。場合によっては、抗体はモノクローナル抗体、ヒト化抗体、抗体断片又は一本鎖抗体である。
本発明は、ゲノム及びｃＤＮＡヌクレオチド配列又はアンチセンスプローブの単離に有用なオリゴヌクレオチドプローブを提供し、それらのプローブは上記又は下記のヌクレオチド配列の任意のものから誘導されうる。
【００１７】
本発明はまたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型を同定する方法を提供し、該方法は、
（ａ）ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質を測定し；
（ｃ）測定された生理学的性質を性別が一致した野生型動物のものと比較することを含み、野生型動物の生理学的性質と異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質が非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊から生じる表現型として同定される。一態様では、非ヒトトランスジェニック動物は哺乳動物である。他の態様では、哺乳動物は齧歯類である。更に他の態様では、哺乳動物はラット又はマウスである。一態様では、非ヒトトランスジェニック動物は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に対してヘテロ接合性である。他の態様では、性別が一致した同腹仔と比較して非ヒトトランスジェニック動物によって示される表現型は次のもの：神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常の少なくとも一つである。
【００１８】
更に他の態様では、神経障害はオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である。更に他の態様では、神経障害がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である。更に他の態様では、神経障害がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである。更に他の態様では、神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である。更に他の態様では、神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である。更に他の態様では、神経障害は鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏又は感覚器障害を含む。このような神経障害には、限定されるものではないが、以下の「不安障害」と定義される範疇のものが含まれる：軽度から中度の不安、一般的な医学的状態による不安障害、別段特定しない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を示すパニック障害、広場恐怖症のないパニック障害、心的外傷後ストレス症候群、社会的な恐怖症、社会的な不安、自閉症、特定の恐怖症、物質誘発性不安障害、急性アルコール禁断、強迫性障害、広場恐怖症、単極型障害、双極性障害Ｉ又はＩＩ、別段特定しない双極性障害、循環気質者疾患、うつ病性障害、大うつ病性障害、気分障害、物質誘発性気分障害、認知機能の亢進、限定するものではないがアルツハイマー病、脳梗塞又は脳への外傷に伴う認知機能の喪失、限定するものではないが癲癇、学習障害／学習不能症、脳性麻痺を含む疾患又は損傷から生じる発作。加えて、不安障害は、限定しないが以下のタイプを含む人格障害に応用してもよい：偏執性、社交嫌い、回避性行動、境界線人格障害、依存症、麻薬性、ナルシスト的な、強迫神経症、統合失調症及び統合失調症型性格。
【００１９】
他の態様では、眼の異常は網膜異常である。更に他の態様では、眼の異常は視覚障害又は失明である。更に他の態様では、網膜異常は網膜色素変性症と一致しているか、網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている。
また他の態様では、網膜異常は網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン(Senior-Loken)症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症（carotinemeia）、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している。
更に他の態様では、眼の異常は白内障である。また更に他の態様では、白内障は、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群である。
また他の態様では、発生異常は胚性致死又は低減した生存率を含む。
更にまた他の態様では、循環器、内皮又は血管新生疾患は、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；及び外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である。
【００２０】
更に他の態様では、免疫疾患は、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患と一致している。
更に他の態様では、骨代謝異常又は疾患は関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である。
【００２１】
他の態様では、非ヒトトランスジェニック動物は、性別が一致した野生型同腹仔と比較して次の生理学的性質：オープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答；オープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答；機能観察バッテリ（ＦＯＢ）試験での禿げ、視床外所見、及び立毛所見；網膜変性に関連する増加した平均動静脈比；発育白内障；増加した平均血清中コレステロール値；増加した平均血清中トリグリセリド値；減少した平均血清中インスリン値、脾臓及びリンパ節における減少したＢ細胞の平均割合；卵白アルブミン投与に対する減少した平均血清ＩｇＧ２ａ応答；減少した平均血清中ＩｇＡ値；卵白アルブミン投与に対する増加した平均血清ＩｇＧ２ａ応答；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ値；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＡ及びＩｇＧ３値；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ値；脾臓及び胸腺におけるＣＤ４細胞の増加した平均割合及びＣＤ８細胞の減少した平均割合；腹膜炎症に応答する好中球の動員；亢進したＤＤＳ誘発性大腸炎応答；亢進したＣｏｎＡ誘発性肝炎応答；減少した皮膚線維芽細胞増殖；減少した骨体積密度、減少した骨ミネラル量指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）、及び全身、大腿及び脊椎における減少した骨密度；減少した平均骨密度、減少した平均小柱状骨体積、減少した厚み、及び減少した結合密度；減少した体重及び身長、減少した全組織体重及び除脂肪体重、減少したアルカリホスファターゼ値を持つ減少した大腿中軸横断面積；減少した体重及び身長、全組織体重、及び除脂肪体重を伴う発育遅延；横隔膜ヘルニア；増加した全組織体重、増加した除脂肪体重、増加した骨ミネラル量、増加した全身及び増加した大腿骨密度；亢進した糖耐性；腎臓発育不全を特徴とする異常な腎臓発育を含む発育性疾患；胚性致死；又はヘテロ接合性成体が減少した血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３値を示した胚性致死、の少なくとも一つを示す。
【００２２】
本発明はまたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物に由来する単離細胞を提供する。一態様では、単離細胞はマウス細胞である。更に他の態様では、マウス細胞は胚性幹細胞である。更に他の態様では、単離細胞は、性別が一致した同腹仔と比較して次の表現型：神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常の少なくとも一つを示す非ヒトトランスジェニック動物から誘導される。
【００２３】
本発明はまたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型を調節する薬剤を同定する方法を提供し、該方法は、
（ａ）ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質を測定し；
（ｃ）測定された生理学的性質を性別が一致した野生型動物のものと比較し、ここで、野生型動物の生理学的性質と異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質が非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊から生じる表現型として同定され；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｅ）試験薬剤が非ヒトトランスジェニック動物の遺伝子破壊に関連した同定された表現型を調節するかどうかを決定する、ことを含む。
一態様では、遺伝子破壊に関連した表現型は、神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を含む。
【００２４】
更に他の態様では、神経障害はオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である。更に他の態様では、神経障害はオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である。更に他の態様では、神経障害はホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである。更に他の態様では、神経障害はインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である。更に他の態様では、神経障害はインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である。更に他の態様では、神経障害は鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏又は感覚器障害である。このような神経障害には、限定されるものではないが、以下の「不安障害」と定義される範疇のものが含まれる：軽度から中度の不安、一般的な医学的状態による不安障害、別段特定しない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を示すパニック障害、広場恐怖症のないパニック障害、心的外傷後ストレス症候群、社会的な恐怖症、社会的な不安、自閉症、特定の恐怖症、物質誘発性不安障害、急性アルコール禁断、強迫性障害、広場恐怖症、単極型障害、双極性障害Ｉ又はＩＩ、別段特定しない双極性障害、循環気質者疾患、うつ病性障害、大うつ病性障害、気分障害、物質誘発性気分障害、認知機能の亢進、限定するものではないがアルツハイマー病、脳梗塞又は脳への外傷に伴う認知機能の喪失、限定するものではないが癲癇、学習障害／学習不能症、脳性麻痺を含む疾患又は損傷から生じる発作。加えて、不安障害は、限定しないが以下のタイプを含む人格障害に応用してもよい：偏執性、社交嫌い、回避性行動、境界線人格障害、依存症、麻薬性、ナルシスト的な、強迫神経症、統合失調症及び統合失調症型性格。
【００２５】
更に他の態様では、眼の異常は網膜異常である。更に他の態様では、眼の異常は視覚障害又は失明である。更に他の態様では、網膜異常は網膜色素変性症と一致しているか、網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている。
また他の態様では、網膜異常は網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症（carotinemeia）、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している。
【００２６】
更に他の態様では、眼の異常は白内障である。また更に他の態様では、白内障は、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群である。
また他の態様では、発生異常は胚性致死又は低減した生存率を含む。
更にまた他の態様では、循環器、内皮又は血管新生疾患は、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；及び外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である。
【００２７】
更に他の態様では、免疫疾患は、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患と一致している。
更に他の態様では、骨代謝異常又は疾患は関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である。
【００２８】
更に他の態様では、非ヒトトランスジェニック動物は、性別が一致した野生型同腹仔と比較して次の生理学的性質：オープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答；オープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答；機能観察バッテリ（ＦＯＢ）試験での禿げ、視床外所見、及び立毛所見；網膜変性に関連する増加した平均動静脈比；発育白内障；増加した平均血清中コレステロール値；増加した平均血清中トリグリセリド値；減少した平均血清中インスリン値、脾臓及びリンパ節における減少したＢ細胞の平均割合；卵白アルブミン投与に対する減少した平均血清ＩｇＧ２ａ応答；減少した平均血清中ＩｇＡ値；卵白アルブミン投与に対する増加した平均血清ＩｇＧ２ａ応答；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ値；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＡ及びＩｇＧ３値；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ値；脾臓及び胸腺におけるＣＤ４細胞の増加した平均割合及びＣＤ８細胞の減少した平均割合；腹膜炎症に応答する好中球の動員；亢進したＤＤＳ誘発性大腸炎応答；亢進したＣｏｎＡ誘発性肝炎応答；減少した皮膚線維芽細胞増殖；減少した骨体積密度、減少した骨ミネラル量指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）、及び全身、大腿及び脊椎における減少した骨密度；減少した平均骨密度、減少した平均小柱状骨体積、減少した厚み、及び減少した結合密度；減少した体重及び身長、減少した全組織体重及び除脂肪体重、減少したアルカリホスファターゼ値を持つ減少した大腿中軸横断面積；減少した体重及び身長、全組織体重、及び除脂肪体重を伴う発育遅延；横隔膜ヘルニア；増加した全組織体重、増加した除脂肪体重、増加した骨ミネラル量、増加した全身及び増加した大腿骨密度；亢進した糖耐性；腎臓発育不全を特徴とする異常な腎臓発育を含む発育性疾患；胚性致死；又はヘテロ接合性成体が減少した血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３値を示した胚性致死、の少なくとも一つを示す。
【００２９】
本発明はまた遺伝子破壊に関連した表現型を調節する薬剤を提供する。一態様では、薬剤は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである。更に他の態様では、アゴニスト薬剤は抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である。更に他の態様では、アンタゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である。
【００３０】
本発明はまたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した生理学的性質を調節する薬剤を同定する方法を提供し、該方法は、
（ａ）ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質を測定し；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的性質を性別が一致した野生型動物のものと比較し、ここで、野生型動物が示す生理学的性質と異なる非ヒトトランスジェニック動物が示す生理学的性質が遺伝子破壊に関連する生理学的性質として同定され；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｅ）遺伝子破壊に関連した生理学的性質が調節されるかどうかを決定する、ことを含む。
【００３１】
一態様では、非ヒトトランスジェニック動物は、性別が一致した野生型同腹仔と比較して次の生理学的性質：オープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答；オープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答；機能観察バッテリ（ＦＯＢ）試験での禿げ、視床外所見、及び立毛所見；網膜変性に関連する増加した平均動静脈比；発育白内障；増加した平均血清中コレステロール値；増加した平均血清中トリグリセリド値；減少した平均血清中インスリン値、脾臓及びリンパ節における減少したＢ細胞の平均割合；卵白アルブミン投与に対する減少した平均血清ＩｇＧ２ａ応答；減少した平均血清中ＩｇＡ値；卵白アルブミン投与に対する増加した平均血清ＩｇＧ２ａ応答；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ値；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＡ及びＩｇＧ３値；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ値；脾臓及び胸腺におけるＣＤ４細胞の増加した平均割合及びＣＤ８細胞の減少した平均割合；腹膜炎症に応答する好中球の動員；亢進したＤＤＳ誘発性大腸炎応答；亢進したＣｏｎＡ誘発性肝炎応答；減少した皮膚線維芽細胞増殖；減少した骨体積密度、減少した骨ミネラル量指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）、及び全身、大腿及び脊椎における減少した骨密度；減少した平均骨密度、減少した平均小柱状骨体積、減少した厚み、及び減少した結合密度；減少した体重及び身長、減少した全組織体重及び除脂肪体重、減少したアルカリホスファターゼ値を持つ減少した大腿中軸横断面積；減少した体重及び身長、全組織体重、及び除脂肪体重を伴う発育遅延；横隔膜ヘルニア；増加した全組織体重、増加した除脂肪体重、増加した骨ミネラル量、増加した全身及び増加した大腿骨密度；亢進した糖耐性；腎臓発育不全を特徴とする異常な腎臓発育を含む発育性疾患；胚性致死；又はヘテロ接合性成体が減少した血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３値を示した胚性致死、の少なくとも一つを示す。
【００３２】
本発明はまた遺伝子破壊に関連した生理学的性質を調節する薬剤を提供する。一態様では、薬剤は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型のアゴニスト又はアンタゴニストである。更に他の態様では、薬剤は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである。また更なる態様では、アゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である。更に他の態様では、アンタゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である。
【００３３】
本発明はまたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した行動を調節する薬剤を同定する方法を提供し、該方法は、
（ａ）ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物が示す行動を観察し；
（ｃ）（ｂ）の観察された行動を性別が一致した野生型動物のものと比較し、ここで、野生型動物が示す観察された行動と異なる非ヒトトランスジェニック動物が示す観察された行動が遺伝子破壊に関連する行動として同定され；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｅ）薬剤が遺伝子破壊に関連した行動を調節するかどうかを決定する、ことを含む。
【００３４】
一態様では、観察された行動はオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である。更に他の態様では、観察された行動はオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である。更に他の態様では、観察された行動はホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである。更に他の態様では、観察された行動はインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である。更に他の態様では、観察された行動はインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である。更に他の態様では、観察された行動は鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏及び感覚器障害を含む。このような神経障害には、限定されるものではないが、以下の「不安障害」と定義される範疇のものが含まれる：軽度から中度の不安、一般的な医学的状態による不安障害、別段特定しない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を示すパニック障害、広場恐怖症のないパニック障害、心的外傷後ストレス症候群、社会的な恐怖症、社会的な不安、自閉症、特定の恐怖症、物質誘発性不安障害、急性アルコール禁断、強迫性障害、広場恐怖症、単極型障害、双極性障害Ｉ又はＩＩ、別段特定しない双極性障害、循環気質者疾患、うつ病性障害、大うつ病性障害、気分障害、物質誘発性気分障害、認知機能の亢進、限定するものではないがアルツハイマー病、脳梗塞又は脳への外傷に伴う認知機能の喪失、限定するものではないが癲癇、学習障害／学習不能症、脳性麻痺を含む疾患又は損傷から生じる発作。加えて、不安障害は、限定しないが以下のタイプを含む人格障害に応用してもよい：偏執性、社交嫌い、回避性行動、境界線人格障害、依存症、麻薬性、ナルシスト的な、強迫神経症、統合失調症及び統合失調症型性格。
【００３５】
本発明はまた遺伝子の破壊に関連した行動を調節する薬剤を提供する。一態様では、薬剤はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型のアゴニスト又はアンタゴニストである。更に他の態様では、薬剤は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである。また更なる態様では、アゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である。更に他の態様では、アンタゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である。
【００３６】
本発明はまたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解又は調節する薬剤を同定する方法を提供し、該方法は、
（ａ）ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）上記非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｃ）上記試験薬剤が非ヒトトランスジェニック動物において神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解又は調節するかどうかを決定する、ことを含む。
【００３７】
更に他の態様では、神経障害はオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である。更に他の態様では、神経障害はオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である。更に他の態様では、神経障害はホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである。更に他の態様では、神経障害はインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である。更に他の態様では、神経障害はインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である。更に他の態様では、神経障害は鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏及び感覚器障害を含む。このような神経障害には、限定されるものではないが、以下の「不安障害」と定義される範疇のものが含まれる：軽度から中度の不安、一般的な医学的状態による不安障害、別段特定しない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を示すパニック障害、広場恐怖症のないパニック障害、心的外傷後ストレス症候群、社会的な恐怖症、社会的な不安、自閉症、特定の恐怖症、物質誘発性不安障害、急性アルコール禁断、強迫性障害、広場恐怖症、単極型障害、双極性障害Ｉ又はＩＩ、別段特定しない双極性障害、循環気質者疾患、うつ病性障害、大うつ病性障害、気分障害、物質誘発性気分障害、認知機能の亢進、限定するものではないがアルツハイマー病、脳梗塞又は脳への外傷に伴う認知機能の喪失、限定するものではないが癲癇、学習障害／学習不能症、脳性麻痺を含む疾患又は損傷から生じる発作。加えて、不安障害は、限定しないが以下のタイプを含む人格障害に応用してもよい：偏執性、社交嫌い、回避性行動、境界線人格障害、依存症、麻薬性、ナルシスト的な、強迫神経症、統合失調症及び統合失調症型性格。
【００３８】
更に他の態様では、眼の異常は網膜異常である。更に他の態様では、眼の異常は視覚障害又は失明である。更に他の態様では、網膜異常は網膜色素変性症と一致しているか、網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている。
また他の態様では、網膜異常は網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症（carotinemeia）、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している。
【００３９】
また他の態様では、発生異常は胚性致死又は低減した生存率を含む。
更にまた他の態様では、循環器、内皮又は血管新生疾患は、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；及び外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である。
【００４０】
更に他の態様では、免疫疾患は、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患と一致している。
更に他の態様では、骨代謝異常又は疾患は関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である。
【００４１】
更に他の態様では、非ヒトトランスジェニック動物は、性別が一致した野生型同腹仔と比較して次の生理学的性質：オープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答；オープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答；機能観察バッテリ（ＦＯＢ）試験での禿げ、視床外所見、及び立毛所見；網膜変性に関連する増加した平均動静脈比；発育白内障；増加した平均血清中コレステロール値；増加した平均血清中トリグリセリド値；減少した平均血清中インスリン値、脾臓及びリンパ節における減少したＢ細胞の平均割合；卵白アルブミン投与に対する減少した平均血清ＩｇＧ２ａ応答；減少した平均血清中ＩｇＡ値；卵白アルブミン投与に対する増加した平均血清ＩｇＧ２ａ応答；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ値；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＡ及びＩｇＧ３値；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ値；脾臓及び胸腺におけるＣＤ４細胞の増加した平均割合及びＣＤ８細胞の減少した平均割合；腹膜炎症に応答する好中球の動員；亢進したＤＤＳ誘発性大腸炎応答；亢進したＣｏｎＡ誘発性肝炎応答；減少した皮膚線維芽細胞増殖；減少した骨体積密度、減少した骨ミネラル量指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）、及び全身、大腿及び脊椎における減少した骨密度；減少した平均骨密度、減少した平均小柱状骨体積、減少した厚み、及び減少した結合密度；減少した体重及び身長、減少した全組織体重及び除脂肪体重、減少したアルカリホスファターゼ値を持つ減少した大腿中軸横断面積；減少した体重及び身長、全組織体重、及び除脂肪体重を伴う発育遅延；横隔膜ヘルニア；増加した全組織体重、増加した除脂肪体重、増加した骨ミネラル量、増加した全身及び増加した大腿骨密度；亢進した糖耐性；腎臓発育不全を特徴とする異常な腎臓発育を含む発育性疾患；胚性致死；又はヘテロ接合性成体が減少した血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３値を示した胚性致死、の少なくとも一つを示す。
【００４２】
本発明はまた遺伝子破壊に関連する神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解し又は調節する薬剤を提供する。一態様では、薬剤はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型のアゴニスト又はアンタゴニストである。更に他の態様では、薬剤は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである。また更なる態様では、アゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である。更に他の態様では、アンタゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である。
【００４３】
本発明はまた神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常の治療のための治療剤を提供する。
本発明はまたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの発現を調節する薬剤を同定する方法を提供し、該方法は、
（ａ）ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを発現する宿主細胞に試験薬剤を接触させ；
（ｂ）試験薬剤が宿主細胞によるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの発現を調節するかどうかを決定する、ことを含む。
【００４４】
本発明はまたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの発現を調節する薬剤を提供する。一態様では、薬剤はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型のアゴニスト又はアンタゴニストである。更に他の態様では、薬剤は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである。また更なる態様では、アゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である。更に他の態様では、アンタゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である。
【００４５】
本発明はまたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した症状に影響を及ぼすことが可能な治療剤を評価する方法を提供し、該方法は、
（ａ）ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質を測定し；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的性質を性別が一致した野生型動物のものと比較し、ここで、野生型動物の生理学的性質と異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質が非ヒトトランスジェニック動物の遺伝子破壊から生じる症状として同定され；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｅ）非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊に関連した同定症状に対する試験薬剤の効果を評価する、ことを含む。
一態様では、症状は、神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常である。
【００４６】
本発明はまた遺伝子破壊に関連した症状に影響を及ぼしうる治療剤を提供する。一態様では、薬剤はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型のアゴニスト又はアンタゴニストである。更に他の態様では、薬剤は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである。また更なる態様では、アゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である。更に他の態様では、アンタゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である。
【００４７】
本発明はまた遺伝子破壊に関連した症状に影響を及ぼしうる治療剤を含有する医薬組成物を提供する。
本発明はまたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を治療又は予防又は寛解する方法を提供し、該方法は、疾患を既に有しているか、又は疾患を有している傾向があるか又は疾患が予防される治療を必要とする患者に、治療的有効量の請求項９４に記載の治療剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって上記疾患を効果的に治療又は予防又は寛解することを含む。
【００４８】
更に他の態様では、神経障害はオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である。更に他の態様では、神経障害はオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である。更に他の態様では、神経障害はホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである。更に他の態様では、神経障害はインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である。更に他の態様では、神経障害はインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である。更に他の態様では、神経障害は鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏及び感覚器障害を含む。このような神経障害には、限定されるものではないが、以下の「不安障害」と定義される範疇のものが含まれる：軽度から中度の不安、一般的な医学的状態による不安障害、別段特定しない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を示すパニック障害、広場恐怖症のないパニック障害、心的外傷後ストレス症候群、社会的な恐怖症、社会的な不安、自閉症、特定の恐怖症、物質誘発性不安障害、急性アルコール禁断、強迫性障害、広場恐怖症、単極型障害、双極性障害Ｉ又はＩＩ、別段特定しない双極性障害、循環気質者疾患、うつ病性障害、大うつ病性障害、気分障害、物質誘発性気分障害、認知機能の亢進、限定するものではないがアルツハイマー病、脳梗塞又は脳への外傷に伴う認知機能の喪失、限定するものではないが癲癇、学習障害／学習不能症、脳性麻痺を含む疾患又は損傷から生じる発作。加えて、不安障害は、限定しないが以下のタイプを含む人格障害に応用してもよい：偏執性、社交嫌い、回避性行動、境界線人格障害、依存症、麻薬性、ナルシスト的な、強迫神経症、統合失調症及び統合失調症型性格。
【００４９】
更に他の態様では、眼の異常は網膜異常である。更に他の態様では、眼の異常は視覚障害又は失明である。更に他の態様では、網膜異常は網膜色素変性症と一致しているか、網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている。
また他の態様では、網膜異常は網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症（carotinemeia）、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している。
【００５０】
更に他の態様では、眼の異常は白内障である。また更に他の態様では、白内障は、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群である。
また他の態様では、発生異常は胚性致死又は低減した生存率を含む。
更にまた他の態様では、循環器、内皮又は血管新生疾患は、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；及び外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である。
【００５１】
更に他の態様では、免疫疾患は、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患と一致している。
更に他の態様では、骨代謝異常又は疾患は関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である。
【００５２】
他の態様では、治療剤はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型のアゴニスト又はアンタゴニストである。更に他の態様では、薬剤は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである。また更なる態様では、アゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である。更に他の態様では、アンタゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である。
【００５３】
本発明はまたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解又は調節する薬剤を同定する方法を提供し、該方法は、
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物細胞培養物を提供し、該培養物の各細胞はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含み；
（ｂ）上記細胞培養物に試験薬剤を投与し；
（ｃ）上記試験薬剤が上記細胞培養物において神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解又は調節するかどうかを決定する、ことを含む。
【００５４】
更に他の態様では、神経障害はオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である。更に他の態様では、神経障害はオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である。更に他の態様では、神経障害はホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである。更に他の態様では、神経障害はインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である。更に他の態様では、神経障害はインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である。更に他の態様では、神経障害は鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏及び感覚器障害を含む。このような神経障害には、限定されるものではないが、以下の「不安障害」と定義される範疇のものが含まれる：軽度から中度の不安、一般的な医学的状態による不安障害、別段特定しない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を示すパニック障害、広場恐怖症のないパニック障害、心的外傷後ストレス症候群、社会的な恐怖症、社会的な不安、自閉症、特定の恐怖症、物質誘発性不安障害、急性アルコール禁断、強迫性障害、広場恐怖症、単極型障害、双極性障害Ｉ又はＩＩ、別段特定しない双極性障害、循環気質者疾患、うつ病性障害、大うつ病性障害、気分障害、物質誘発性気分障害、認知機能の亢進、限定するものではないがアルツハイマー病、脳梗塞又は脳への外傷に伴う認知機能の喪失、限定するものではないが癲癇、学習障害／学習不能症、脳性麻痺を含む疾患又は損傷から生じる発作。加えて、不安障害は、限定しないが以下のタイプを含む人格障害に応用してもよい：偏執性、社交嫌い、回避性行動、境界線人格障害、依存症、麻薬性、ナルシスト的な、強迫神経症、統合失調症及び統合失調症型性格。
【００５５】
更に他の態様では、眼の異常は網膜異常である。更に他の態様では、眼の異常は視覚障害又は失明である。更に他の態様では、網膜異常は網膜色素変性症と一致しているか、網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている。
また他の態様では、網膜異常は網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症（carotinemeia）、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している。
【００５６】
更に他の態様では、眼の異常は白内障である。また更に他の態様では、白内障は、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群である。
また他の態様では、発生異常は胚性致死又は低減した生存率を含む。
更にまた他の態様では、循環器、内皮又は血管新生疾患は、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；及び外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である。
【００５７】
更に他の態様では、免疫疾患は、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患と一致している。
更に他の態様では、骨代謝異常又は疾患は関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である。
【００５８】
本発明はまたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解又は調節する薬剤を提供する。一態様では、薬剤はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型のアゴニスト又はアンタゴニストである。更に他の態様では、薬剤は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである。また更なる態様では、アゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である。更に他の態様では、アンタゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である。
【００５９】
本発明はまたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型を調節する方法を提供し、該方法は、表現型を既に有しているか、又は表現型を有している傾向があるか又は表現型が予防される患者に、有効量の上記表現型を調節すると同定された薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって表現型を効果的に調節することを含む。
本発明はまたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した生理学的性質を調節する方法を提供し、該方法は、生理学的性質を既に有しているか、又は生理学的性質を有している傾向があるか又は生理学的性質が予防される患者に、有効量の上記生理学的性質を調節すると同定された薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって生理学的性質を効果的に調節することを含む。
【００６０】
本発明はまたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した行動を調節する方法を提供し、該方法は、行動を既に有しているか、又は行動を有している傾向があるか又は行動が予防される患者に、有効量の上記行動を調節すると同定された薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって行動を効果的に調節することを含む。
本発明はまたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの発現を調節する方法を提供し、該方法は、上記ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを発現する宿主に、有効量の上記発現を調節すると同定された薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって上記ポリペプチドの発現を効果的に調節することを含む。
【００６１】
本発明はまたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した症状を調節する方法を提供し、症状を有しているか、又は症状を有している傾向があるか又は症状が予防される患者に、治療的有効量の上記症状を調節すると同定された治療剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって症状を効果的に調節することを含む。
本発明はまたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を治療又は予防又は寛解する方法を提供し、該方法は、非ヒトトランスジェニック動物細胞培養物に、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む上記培養物の各細胞に、治療的有効量の上記疾患を予防又は寛解すると同定された薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって上記疾患を効果的に治療し又は予防し又は寛解する。
【００６２】
Ｂ．更なる実施態様
また更なる実施態様では、本発明は本願の潜在的な特許請求の範囲である次のものを対象とする：
１．  ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型を同定する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質を測定し；
（ｃ）測定された生理学的性質を性別が一致した野生型動物のものと比較することを含み、野生型動物の生理学的性質と異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質が非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊から生じる表現型として同定される方法。
２．  非ヒトトランスジェニック動物が、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に対してヘテロ接合性である、請求項１に記載の方法。
３．  性別が一致した同腹仔と比較して非ヒトトランスジェニック動物によって示される表現型が次のもの：神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常の少なくとも一つである、請求項１に記載の方法。
４．  神経障害がオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である、請求項３に記載の方法。
５．  神経障害がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である、請求項３に記載の方法。
６．  神経障害がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである、請求項３に記載の方法。
７．  神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である、請求項３に記載の方法。
８．  神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である、請求項３に記載の方法。
９．  神経障害が鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏又は感覚器障害である、請求項３に記載の方法。
１０．  眼の異常が網膜異常である、請求項３に記載の方法。
１１．  眼の異常が視覚障害又は失明である、請求項３に記載の方法。
１２．  網膜異常が網膜色素変性症と一致している、請求項１０に記載の方法。
１３．  網膜異常が網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている、請求項１０に記載の方法。
１４．  網膜異常が網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症（carotinemeia）、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している、請求項１０に記載の方法。
１５．  眼の異常が白内障である、請求項３に記載の方法。
１６．  白内障が、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群と一致している、請求項１５に記載の方法。
１７．  発生異常が胚性致死又は低減した生存率を含む、請求項３に記載の方法。
１８．  循環器、内皮又は血管新生疾患が、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；及び外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である、請求項３に記載の方法。
１９．  免疫疾患が、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患である、請求項３に記載の方法。
２０．  骨代謝異常又は疾患が関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である、請求項３に記載の方法。
２１．  非ヒトトランスジェニック動物が、性別が一致した野生型同腹仔と比較して次の生理学的性質：オープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答；オープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答；機能観察バッテリ（ＦＯＢ）試験での禿げ、視床外所見、及び立毛所見；網膜変性に関連する増加した平均動静脈比；発育白内障；増加した平均血清中コレステロール値；増加した平均血清中トリグリセリド値；減少した平均血清中インスリン値、脾臓及びリンパ節における減少したＢ細胞の平均割合；卵白アルブミン投与に対する減少した平均血清ＩｇＧ２ａ応答；減少した平均血清中ＩｇＡ値；卵白アルブミン投与に対する増加した平均血清ＩｇＧ２ａ応答；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ値；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＡ及びＩｇＧ３値；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ値；脾臓及び胸腺におけるＣＤ４細胞の増加した平均割合及びＣＤ８細胞の減少した平均割合；腹膜炎症に応答する好中球の動員；亢進したＤＤＳ誘発性大腸炎応答；亢進したＣｏｎＡ誘発性肝炎応答；減少した皮膚線維芽細胞増殖；減少した骨体積密度、減少した骨ミネラル量指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）、及び全身、大腿及び脊椎における減少した骨密度；減少した平均骨密度、減少した平均小柱状骨体積、減少した厚み、及び減少した結合密度；減少した体重及び身長、減少した全組織体重及び除脂肪体重、減少したアルカリホスファターゼ値を持つ減少した大腿中軸横断面積；減少した体重及び身長、全組織体重、及び除脂肪体重を伴う発育遅延；横隔膜ヘルニア；増加した全組織体重、増加した除脂肪体重、増加した骨ミネラル量、増加した全身及び増加した大腿骨密度；亢進した糖耐性；腎臓発育不全を特徴とする異常な腎臓発育を含む発育性疾患；胚性致死；又はヘテロ接合性成体が減少した血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３値を示した胚性致死、の少なくとも一つを示す、請求項１に記載の方法。
２２．  ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物に由来する単離細胞。
２３．  マウス細胞である、請求項２２に記載の単離細胞。
２４．  マウス細胞が胚性幹細胞である、請求項２３に記載の単離細胞。
２５．  非ヒトトランスジェニック動物が、性別が一致した同腹仔と比較して次の表現型：神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を示す、請求項２２に記載の単離細胞。
２６．  ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型を調節する薬剤を同定する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質を測定し；
（ｃ）測定された生理学的性質を性別が一致した野生型動物のものと比較し、ここで、野生型動物の生理学的性質と異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質が非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊から生じる表現型として同定され；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｅ）試験薬剤が非ヒトトランスジェニック動物の遺伝子破壊に関連した同定された表現型を調節するかどうかを決定する、ことを含む方法。
２７．  遺伝子破壊に関連した表現型が神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を含む、請求項２６に記載の方法。
２８．  神経障害がオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である、請求項２７に記載の方法。
２９．  神経障害がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である、請求項２７に記載の方法。
３０．  神経障害がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである、請求項２７に記載の方法。
３１．  神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である、請求項２７に記載の方法。
３２．  神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である、請求項２７に記載の方法。
３３．  神経障害が鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏又は感覚器障害である、請求項２７に記載の方法。
３４．  眼の異常が網膜異常である、請求項２７に記載の方法。
３５．  眼の異常が視覚障害又は失明である、請求項２７に記載の方法。
３６．  網膜異常が網膜色素変性症と一致している、請求項３４に記載の方法。
３７．  網膜異常が網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている、請求項３４に記載の方法。
３８．  網膜異常が網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症（carotinemeia）、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している、請求項３４に記載の方法。
３９．  眼の異常が白内障である、請求項２７に記載の方法。
４０．  白内障が、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群と一致している、請求項３９に記載の方法。
４１．  発生異常が胚性致死又は低減した生存率を含む、請求項２７に記載の方法。
４２．  循環器、内皮又は血管新生疾患が、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；及び外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である、請求項２７に記載の方法。
４３．  免疫疾患が、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患である、請求項２７に記載の方法。
４４．  骨代謝異常又は疾患が関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である、請求項２７に記載の方法。
４５．  非ヒトトランスジェニック動物が、性別が一致した野生型同腹仔と比較して次の生理学的性質：オープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答；オープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答；機能観察バッテリ（ＦＯＢ）試験での禿げ、視床外所見、及び立毛所見；網膜変性に関連する増加した平均動静脈比；発育白内障；増加した平均血清中コレステロール値；増加した平均血清中トリグリセリド値；減少した平均血清中インスリン値、脾臓及びリンパ節における減少したＢ細胞の平均割合；卵白アルブミン投与に対する減少した平均血清ＩｇＧ２ａ応答；減少した平均血清中ＩｇＡ値；卵白アルブミン投与に対する増加した平均血清ＩｇＧ２ａ応答；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ値；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＡ及びＩｇＧ３値；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ値；脾臓及び胸腺におけるＣＤ４細胞の増加した平均割合及びＣＤ８細胞の減少した平均割合；腹膜炎症に応答する好中球の動員；亢進したＤＤＳ誘発性大腸炎応答；亢進したＣｏｎＡ誘発性肝炎応答；減少した皮膚線維芽細胞増殖；減少した骨体積密度、減少した骨ミネラル量指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）、及び全身、大腿及び脊椎における減少した骨密度；減少した平均骨密度、減少した平均小柱状骨体積、減少した厚み、及び減少した結合密度；減少した体重及び身長、減少した全組織体重及び除脂肪体重、減少したアルカリホスファターゼ値を持つ減少した大腿中軸横断面積；減少した体重及び身長、全組織体重、及び除脂肪体重を伴う発育遅延；横隔膜ヘルニア；増加した全組織体重、増加した除脂肪体重、増加した骨ミネラル量、増加した全身及び増加した大腿骨密度；亢進した糖耐性；腎臓発育不全を特徴とする異常な腎臓発育を含む発育性疾患；胚性致死；又はヘテロ接合性成体が減少した血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３値を示した胚性致死、の少なくとも一つを示す、請求項２６に記載の方法。
４６．  請求項２６に記載の方法によって同定された薬剤。
４７．  ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項４６に記載の薬剤。
４８．  アゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項４７に記載の薬剤。
４９．  アンタゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項４７に記載の薬剤。
５０．  ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した生理学的性質を調節する薬剤を同定する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質を測定し；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的性質を性別が一致した野生型動物のものと比較し、ここで、野生型動物が示す生理学的性質と異なる非ヒトトランスジェニック動物が示す生理学的性質が遺伝子破壊に関連する生理学的性質として同定され；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｅ）遺伝子破壊に関連した生理学的性質が調節されるかどうかを決定する、ことを含む方法。
５１．  非ヒトトランスジェニック動物が、性別が一致した野生型同腹仔と比較して次の生理学的性質：オープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答；オープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答；機能観察バッテリ（ＦＯＢ）試験での禿げ、視床外所見、及び立毛所見；網膜変性に関連する増加した平均動静脈比；発育白内障；増加した平均血清中コレステロール値；増加した平均血清中トリグリセリド値；減少した平均血清中インスリン値、脾臓及びリンパ節における減少したＢ細胞の平均割合；卵白アルブミン投与に対する減少した平均血清ＩｇＧ２ａ応答；減少した平均血清中ＩｇＡ値；卵白アルブミン投与に対する増加した平均血清ＩｇＧ２ａ応答；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ値；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＡ及びＩｇＧ３値；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ値；脾臓及び胸腺におけるＣＤ４細胞の増加した平均割合及びＣＤ８細胞の減少した平均割合；腹膜炎症に応答する好中球の動員；亢進したＤＤＳ誘発性大腸炎応答；亢進したＣｏｎＡ誘発性肝炎応答；減少した皮膚線維芽細胞増殖；減少した骨体積密度、減少した骨ミネラル量指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）、及び全身、大腿及び脊椎における減少した骨密度；減少した平均骨密度、減少した平均小柱状骨体積、減少した厚み、及び減少した結合密度；減少した体重及び身長、減少した全組織体重及び除脂肪体重、減少したアルカリホスファターゼ値を持つ減少した大腿中軸横断面積；減少した体重及び身長、全組織体重、及び除脂肪体重を伴う発育遅延；横隔膜ヘルニア；増加した全組織体重、増加した除脂肪体重、増加した骨ミネラル量、増加した全身及び増加した大腿骨密度；亢進した糖耐性；腎臓発育不全を特徴とする異常な腎臓発育を含む発育性疾患；胚性致死；又はヘテロ接合性成体が減少した血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３値を示した胚性致死、の少なくとも一つを示す、請求項５０に記載の方法。
５２．  請求項５０に記載の方法によって同定された薬剤。
５３．  ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項５２に記載の薬剤。
５４．  アゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項５３に記載の薬剤。
５５．  アンタゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項５３に記載の薬剤。
５６．  ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した行動を調節する薬剤を同定する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物が示す行動を観察し；
（ｃ）（ｂ）の観察された行動を性別が一致した野生型動物のものと比較し、ここで、野生型動物が示す観察された行動と異なる非ヒトトランスジェニック動物が示す観察された行動が遺伝子破壊に関連する行動として同定され；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｅ）薬剤が遺伝子破壊に関連した行動を調節するかどうかを決定する、ことを含む方法。
５７．  行動がオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である、請求項５６に記載の方法。
５８．  行動がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である、請求項５６に記載の方法。
５９．  行動がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである、請求項５６に記載の方法。
６０．  行動がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である、請求項５６に記載の方法。
６１．  行動がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である、請求項５６に記載の方法。
６２．  行動が鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏又は感覚器障害である、請求項５６に記載の方法。
６３．  請求項５６に記載の方法によって同定された薬剤。
６４．  ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項６３に記載の薬剤。
６５．  アゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項６４に記載の薬剤。
６６．  アンタゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項６４に記載の薬剤。
６７．  ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解又は調節する薬剤を同定する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）上記非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｃ）上記試験薬剤が非ヒトトランスジェニック動物において神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解又は調節するかどうかを決定する、ことを含む方法。
６８．  神経障害がオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である、請求項６７に記載の方法。
６９．  神経障害がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である、請求項６７に記載の方法。
７０．  神経障害がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである、請求項６７に記載の方法。
７１．  神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である、請求項６７に記載の方法。
７２．  神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である、請求項６７に記載の方法。
７３．  神経障害が鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏又は感覚器障害である、請求項６７に記載の方法。
７４．  眼の異常が網膜異常である、請求項６７に記載の方法。
７５．  眼の異常が視覚障害又は失明である、請求項６７に記載の方法。
７６．  網膜異常が網膜色素変性症と一致している、請求項７４に記載の方法。
７７．  網膜異常が網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている、請求項７４に記載の方法。
７８．  網膜異常が網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症（carotinemeia）、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している、請求項７４に記載の方法。
７９．  眼の異常が白内障である、請求項６７に記載の方法。
８０．  白内障が、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群と一致している、請求項７９に記載の方法。
８１．  発生異常が胚性致死又は低減した生存率を含む、請求項６７に記載の方法。
８２．  循環器、内皮又は血管新生疾患が、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；及び外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である、請求項６７に記載の方法。
８３．  免疫疾患が、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患である、請求項６７に記載の方法。
８４．  上記骨代謝異常又は疾患が関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である、請求項６７に記載の方法。
８５．  非ヒトトランスジェニック動物が、性別が一致した野生型同腹仔と比較して次の生理学的性質：オープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答；オープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答；機能観察バッテリ（ＦＯＢ）試験での禿げ、視床外所見、及び立毛所見；網膜変性に関連する増加した平均動静脈比；発育白内障；増加した平均血清中コレステロール値；増加した平均血清中トリグリセリド値；減少した平均血清中インスリン値、脾臓及びリンパ節における減少したＢ細胞の平均割合；卵白アルブミン投与に対する減少した平均血清ＩｇＧ２ａ応答；減少した平均血清中ＩｇＡ値；卵白アルブミン投与に対する増加した平均血清ＩｇＧ２ａ応答；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ値；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＡ及びＩｇＧ３値；増加した平均血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ値；脾臓及び胸腺におけるＣＤ４細胞の増加した平均割合及びＣＤ８細胞の減少した平均割合；腹膜炎症に応答する好中球の動員；亢進したＤＤＳ誘発性大腸炎応答；亢進したＣｏｎＡ誘発性肝炎応答；減少した皮膚線維芽細胞増殖；減少した骨体積密度、減少した骨ミネラル量指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）、及び全身、大腿及び脊椎における減少した骨密度；減少した平均骨密度、減少した平均小柱状骨体積、減少した厚み、及び減少した結合密度；減少した体重及び身長、減少した全組織体重及び除脂肪体重、減少したアルカリホスファターゼ値を持つ減少した大腿中軸横断面積；減少した体重及び身長、全組織体重、及び除脂肪体重を伴う発育遅延；横隔膜ヘルニア；増加した全組織体重、増加した除脂肪体重、増加した骨ミネラル量、増加した全身及び増加した大腿骨密度；亢進した糖耐性；腎臓発育不全を特徴とする異常な腎臓発育を含む発育性疾患；胚性致死；又はヘテロ接合性成体が減少した血清中ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３値を示した胚性致死、の少なくとも一つを示す、請求項６７に記載の方法。
８６．  請求項６７に記載の方法によって同定された薬剤。
８７．  ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項８６に記載の薬剤。
８８．  アゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項８７に記載の薬剤。
８９．  アンタゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項８７に記載の薬剤。
９０．  請求項６７に記載の方法によって同定された治療剤。
９１．  ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの発現を調節する薬剤を同定する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを発現する宿主細胞に試験薬剤を接触させ；
（ｂ）試験薬剤が宿主細胞によるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの発現を調節するかどうかを決定する、ことを含む方法。
９２．  請求項９１に記載の方法によって同定された薬剤。
９３．  ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項９２に記載の薬剤。
９４．  アゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項９３に記載の薬剤。
９５．  アンタゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項９３に記載の薬剤。
９６．  ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した症状に影響を及ぼすことが可能な治療剤を評価する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質を測定し；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的性質を性別が一致した野生型動物のものと比較し、ここで、野生型動物の生理学的性質と異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質が非ヒトトランスジェニック動物の遺伝子破壊から生じる症状として同定され；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｅ）非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊に関連した同定症状に対する試験薬剤の効果を評価する、ことを含む方法。
９７．  症状が、神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常である、請求項９６に記載の方法。
９８．  請求項９６に記載の方法によって同定された治療剤。
９９．  ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項９８に記載の治療剤。
１００．  アゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項９９に記載の治療剤。
１０１．  アンタゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項９９に記載の治療剤。
１０２．  請求項９８に記載の治療剤を含有する医薬組成物。
１０３．  ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患又は胚性致死を治療又は予防又は寛解する方法であって、疾患を既に有しているか、又は疾患を有している傾向があるか又は疾患が予防される治療を必要とする患者に、治療的有効量の請求項９４に記載の治療剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって上記疾患を効果的に治療又は予防又は寛解することを含む方法。
１０４．  神経障害がオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である、請求項１０３に記載の方法。
１０５．  神経障害がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である、請求項１０３に記載の方法。
１０６．  神経障害がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである、請求項１０３に記載の方法。
１０７．  神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である、請求項１０３に記載の方法。
１０８．  神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である、請求項１０３に記載の方法。
１０９．  神経障害が鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏又は感覚器障害である、請求項１０３に記載の方法。
１１０．  眼の異常が網膜異常である、請求項１０３に記載の方法。
１１１．  眼の異常が視覚障害又は失明である、請求項１０３に記載の方法。
１１２．  網膜異常が網膜色素変性症と一致している、請求項１１０に記載の方法。
１１３．  網膜異常が網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている、請求項１１０に記載の方法。
１１４．  網膜異常が網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症（carotinemeia）、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している、請求項１１０に記載の方法。
１１５．  眼の異常が白内障である、請求項１０３に記載の方法。
１１６．  白内障が、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群と一致している、請求項１１５に記載の方法。
１１７．  発生異常が胚性致死又は低減した生存率を含む、請求項１０３に記載の方法。
１１８．  循環器、内皮又は血管新生疾患が、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；及び外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である、請求項１０３に記載の方法。
１１９．  免疫疾患が、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患である、請求項１０３に記載の方法。
１２０．  骨代謝異常又は疾患が関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である、請求項１０３に記載の方法。
１２１．  ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解又は調節する薬剤を同定する方法であって、
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物細胞培養物を提供し、該培養物の各細胞はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含み；
（ｂ）上記細胞培養物に試験薬剤を投与し；
（ｃ）上記試験薬剤が上記細胞培養物において神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解又は調節するかどうかを決定する、ことを含む方法。
１２２．  神経障害がオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である、請求項１２１に記載の方法。
１２３．  神経障害がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である、請求項１２１に記載の方法。
１２４．  神経障害がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである、請求項１２１に記載の方法。
１２５．  神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である、請求項１２１に記載の方法。
１２６．  神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である、請求項１２１に記載の方法。
１２７．  神経障害が鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏又は感覚器障害である、請求項１２１に記載の方法。
１２８．  眼の異常が網膜異常である、請求項１２１に記載の方法。
１２９．  眼の異常が視覚障害又は失明である、請求項１２１に記載の方法。
１３０．  網膜異常が網膜色素変性症と一致している、請求項１２８に記載の方法。
１３１．  網膜異常が網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている、請求項１２８に記載の方法。
１３２．  網膜異常が網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症（carotinemeia）、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している、請求項１２８に記載の方法。
１３３．  眼の異常が白内障である、請求項１２１に記載の方法。
１３４．  白内障が、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群と一致している、請求項１３３に記載の方法。
１３５．  発生異常が胚性致死又は低減した生存率を含む、請求項１２１に記載の方法。
１３６．  循環器、内皮又は血管新生疾患が、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；及び外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である、請求項１２１に記載の方法。
１３７．  免疫疾患が、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患である、請求項１２１に記載の方法。
１３８．  骨代謝異常又は疾患が関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である、請求項１２１に記載の方法。
１３９．  請求項１２１に記載の方法によって同定された治療剤。
１４０．  ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項１３９に記載の治療剤。
１４１．  アゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項１４０に記載の治療剤。
１４２．  アンタゴニストが抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体である請求項１４０に記載の治療剤。
１４３．  請求項１２１に記載の方法によって同定された治療剤。
１４４．  ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型を調節する方法であって、表現型を既に有しているか、又は表現型を有している傾向があるか又は表現型が予防される患者に、有効量の請求項４６に記載の薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって表現型を効果的に調節することを含む方法。
１４５．  ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した生理学的性質を調節する方法であって、生理学的性質を既に有しているか、又は生理学的性質を有している傾向があるか又は生理学的性質が予防される患者に、有効量の請求項５２に記載の薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって生理学的性質を効果的に調節することを含む方法。
１４６．  ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した行動を調節する方法であって、行動を既に有しているか、又は行動を有している傾向があるか又は行動が予防される患者に、有効量の請求項６３に記載の薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって行動を効果的に調節することを含む方法。
１４７．  ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの発現を調節する方法であって、上記ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを発現する宿主に、有効量の請求項９２に記載の薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって上記ポリペプチドの発現を効果的に調節することを含む方法。
１４８．  ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した症状を調節する方法であって、症状を有しているか、又は症状を有している傾向があるか又は症状が予防される患者に、治療的有効量の請求項９８に記載の治療剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって症状を効果的に調節することを含む方法。
１４９．  ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患又は胚性致死を治療又は予防又は寛解する方法であって、非ヒトトランスジェニック動物細胞培養物に、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む上記培養物の各細胞に、治療的有効量の請求項９４に記載の薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって上記疾患を効果的に治療し又は予防し又は寛解する方法。
【００６３】
（好ましい実施態様の詳細な説明）
Ｉ．定義
ここで使用される「ＰＲＯポリペプチド」及び「ＰＲＯ」という用語は、直後に数値表示がある場合には種々のポリペプチドを指し、完全な表示（つまり、ＰＲＯ／数字）は、ここに記載する特定のポリペプチド配列を意味する。「数字」という用語がここでは実際の数的表示として提供されている「ＰＲＯ／数字ポリペプチド」及び「ＰＲＯ／数字」という用語には、天然配列ポリペプチド、ポリペプチド変異体及び天然配列ポリペプチドとポリペプチド変異体の断片（ここでさらに定義される）を包含する。ここに記載されているＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドは、ヒト組織型又は他の供給源といった種々の供給源から単離してもよく、あるいは組換え又は合成法によって調製してもよい。「ＰＲＯポリペプチド」という用語は、ここに記載の各個々のＰＲＯ／数字ポリペプチドを指す。「ＰＲＯポリペプチド」を指すこの明細書の全ての開示は、各ポリペプチドを個々に指すと同時に集合的に指す。例えば、調製、精製、誘導、抗体の形成、ＰＲＯ結合オリゴペプチドの形成、ＰＲＯ結合有機分子の形成、投与、含有する組成物、疾患の治療等の記載は、本発明の各ポリペプチドに関している。「ＰＲＯポリペプチド」という用語は、また、ここに記載のＰＲＯ／数字ポリペプチドの変異体を含む。
【００６４】
「天然配列ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド」には、天然由来の対応するＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドと同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドが含まれる。このような天然配列ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドは、自然から単離することもできるし、組換え又は合成手段により生成することもできる。「天然配列ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド」という用語には、特に、特定のＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの自然に生じる切断又は分泌形態(例えば、細胞外ドメイン配列)、自然に生じる変異形態(例えば、選択的にスプライシングされた形態)及びそのポリペプチドの自然に生じる対立遺伝子変異体が含まれる。本発明は、添付図に示される完全長アミノ酸配列を含む成熟又は完全長天然配列ポリペプチドであるここに開示される天然配列ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを提供する。開始及び停止コドンは、図において太字及び下線で示した。添付図に「Ｎ」で示した核酸残基は、任意の核酸残基である。しかし、添付図に開示したＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドは、図面においてアミノ酸位置１としてここに表示されたメチオニン残基で始まるように示されているが、図面におけるアミノ酸位置１の上流又は下流に位置する他のメチオニン残基をＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９��３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの開始アミノ酸残基として用いることも考えられるし、可能でもある。
【００６５】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド「細胞外ドメイン」又は「ＥＣＤ」は、膜貫通及び細胞質ドメインを実質的に有しないＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの形態を意味する。通常、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドＥＣＤは、それらの膜貫通及び／又は細胞質ドメインを１％未満、好ましくはそのようなドメインを０．５％未満しか持たない。本発明のＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドについて同定された任意の膜貫通ドメインは、疎水性ドメインのその型を同定するために当該分野において日常的に使用される基準に従い同定されることが理解されるであろう。膜貫通ドメインの厳密な境界は変わり得るが、最初に同定されたドメインの何れかの末端から約５アミノ酸を越えない可能性が高い。場合によっては、従って、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの細胞外ドメインは、実施例又は明細書で同定されるように膜貫通ドメイン／細胞外ドメインの境界の何れかの側から約５を越えないアミノ酸を含んでもよく、シグナルペプチドを伴う又は伴わない、それらのポリペプチド及びそれらをコードする核酸は、本発明で考慮される。
【００６６】
ここに開示する種々のＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの「シグナルペプチド」のおおよその位置は、本明細書及び／又は添付図に示されうる。しかし、シグナルペプチドのＣ末端境界は変化しうるが、ここで最初に定義したようにシグナルペプチドＣ末端境界の何れかの側で約５アミノ酸未満である可能性が最も高く、シグナルペプチドのＣ末端境界は、そのような型のアミノ酸配列成分を同定するのに日常的に使用される基準に従って同定しうることに留意される（例えば、Nielsen等, Prot. Eng.10: 1-6 (1997)及びvon Heinje等, Nucl. Acids. Res. 14: 4683-4690 (1986)）。更に、幾つかの場合には、分泌ポリペプチドからのシグナル配列の切断は完全に均一ではなく、一つ以上の分泌種をもたらすことも認められる。シグナルペプチドがここに同定されるシグナルペプチドのＣ末端境界の何れかの側の約５アミノ酸未満内で切断されるこれらの成熟ポリペプチド、及びそれらをコードするポリヌクレオチドは、本発明で考慮される。
【００６７】
「ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド変異体」とはＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド、好ましくは、ここに開示するような完全長天然配列ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド配列、ここで開示するようなシグナルペプチドを欠くＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド配列、ここに開示するようなシグナルペプチドを有する又は有しないＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの細胞外ドメイン又はここに開示する完全長ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド配列の任意の他の断片（例えば、完全長ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの完全なコード配列の一部のみを示す核酸によってコードされるもの）と少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有するここで定義するような活性なＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを意味する。このようなＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド変異体には、例えば、完全長天然アミノ酸配列のＮ末端又はＣ末端において一又は複数のアミノ酸残基が付加、もしくは欠失されたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドが含まれる。通常、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド変異体は、ここに開示する完全長天然配列ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド配列、ここに開示するシグナルペプチドを欠くＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド配列、シグナルペプチドを有する又は有しないここに開示するＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの細胞外ドメイン、又はここに開示する完全長ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド配列の任意の具体的に定義した他の断片に対して、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のアミノ酸配列同一性を有している。通常、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１変異体ポリペプチドは、少なくとも約１０アミノ酸長、あるいは少なくとも約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００アミノ酸長、又はそれ以上である。場合によっては、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１変異体ポリペプチドは、天然ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド配列に比較して一つ以下の保存的アミノ酸置換、あるいは天然ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド配列に比較して２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０以下の同類アミノ酸置換を有するにすぎない。
【００６８】
ここで同定したＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド配列に関する「パーセント(％)アミノ酸配列同一性」とは、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために必要ならば間隙を導入し、如何なる保存的置換も配列同一性の一部と考えないとした後の、特定のＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド配列のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセントとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当業者の技量の範囲にある種々の方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ-２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウエアのような公に入手可能なコンピュータソフトウエアを使用することにより達成可能である。当業者であれば、比較される配列の完全長に対して最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。しかし、ここでの目的のためには、％アミノ酸配列同一性値は、ＡＬＩＧＮ-２プログラム用の完全なソースコードが下記の表１に提供されている配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ-２を使用することによって得られる。ＡＬＩＧＮ-２配列比較コンピュータプログラムはジェネンテック社によって作成され、下記の表１に示したソースコードは米国著作権庁, ワシントンD.C., 20559に使用者用書類とともに提出され、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７で登録されている。ＡＬＩＧＮ-２プログラムはジェネンテック社、サウス サン フランシスコ, カリフォルニアから公的に入手可能であり、下記の表１に提供されたソースコードからコンパイルしてもよい。ＡＬＩＧＮ-２プログラムは、ＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステム、好ましくはデジタルＵＮＩＸ（登録商標）Ｖ４．０Ｄでの使用のためにコンパイルされる。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ-２プログラムによって設定され変動しない。
【００６９】
アミノ酸配列比較にＡＬＩＧＮ-２が用いられる状況では、与えられたアミノ酸配列Ａの、与えられたアミノ酸配列Ｂへの、それとの、又はそれに対する％アミノ酸配列同一性(あるいは、与えられたアミノ酸配列Ｂへの、それとの、又はそれに対する或る程度の％アミノ酸配列同一性を持つ又は含む与えられたアミノ酸配列Ａと言うこともできる)は次のように計算される：
分率Ｘ／Ｙの１００倍
ここで、Ｘは配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ-２のＡ及びＢのプログラムアラインメントによって同一であると一致したスコアのアミノ酸残基の数であり、ＹはＢの全アミノ酸残基数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと異なる場合、ＡのＢに対する％アミノ酸配列同一性は、ＢのＡに対する％アミノ酸配列同一性とは異なると認識されるであろう。％アミノ酸配列同一性の計算の例として、表２及び３は、「比較タンパク質」と称されるアミノ酸配列の「ＰＲＯ」と称されるアミノ酸配列に対する％アミノ酸配列同一性の計算方法を示し、ここで「ＰＲＯ」は対象の仮想ＰＲＯポリペプチドのアミノ酸配列を表し、「比較タンパク質」は対象の「ＰＲＯ」ポリペプチドと比較され、これに対するポリペプチドのアミノ酸配列を表し、「Ｘ」、「Ｙ」及び「Ｚ」は、それぞれ異なる仮定アミノ酸残基を表す。特に断らない限りは、ここで使用される全ての％アミノ酸配列同一性値は、ＡＬＩＧＮ-２コンピュータプログラムを用いて直ぐ上の段落に記載されるようにして得られる。
【００７０】
「ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１変異体ポリヌクレオチド」又は「ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１変異体核酸配列」とは、ここで定義されるように、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド、好ましくは活性ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードし、ここに開示する完全長天然配列ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド配列、ここに開示するシグナルペプチドを欠いた完全長天然配列ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド配列、シグナルペプチドを有する又は有しないここに開示するＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの細胞外ドメイン、又はここに開示する完全長ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド配列の他の任意の断片をコードする核酸配列（完全長ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの完全なコード化配列の一部分のみを表す核酸によってコードされた）と、少なくとも約８０％の核酸配列同一性を有する核酸分子を意味する。通常、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１変異体ポリヌクレオチドは、ここに開示する完全長天然配列ＰＲＯポリペプチド配列、ここに開示するシグナルペプチドを欠く完全長天然配列ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド配列、シグナルペプチドを有する又は有しないここに開示するＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの細胞外ドメイン、又はここに開示する完全長ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド配列の任意の他の断片をコードする核酸配列と、少なくとも約８０％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の核酸配列同一性を有している。変異体は、天然ヌクレオチド配列を含まない。
【００７１】
通常、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１変異体ポリヌクレオチドは、少なくとも約５ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、又は１０００ヌクレオチド長であり、この文脈の「約」という用語は、表示ヌクレオチド配列長にその表示長の１０％を加えるか又は減じたものを意味する。
【００７２】
ここで同定されるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１コード化核酸配列に対する「パーセント(％)核酸配列同一性」は、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために必要ならば間隙を導入し、対象のＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１核酸配列のヌクレオチドと同一である候補配列中のヌクレオチドのパーセントとして定義される。パーセント核酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当業者の知る範囲にある種々の方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ-２、ＡＬＩＧＮ又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウエアのような公に入手可能なコンピュータソフトウエアを使用することにより達成可能である。ここでの目的のためには、％核酸配列同一性値は、ＡＬＩＧＮ-２プログラム用の完全なソースコードが下記の表１に提供されている配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ-２を使用することによって得られる。ＡＬＩＧＮ-２配列比較コンピュータプログラムはジェネンテック社によって作成され、下記の表１に示したソースコードは米国著作権庁,ワシントン D.C.，20559に使用者用書類とともに提出され、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下で登録されている。ＡＬＩＧＮ-２プログラムはジェネンテック社、サウスサンフランシスコ, カリフォルニアから公的に入手可能であり、下記の表１に提供されたソースコードからコンパイルしてもよい。ＡＬＩＧＮ-２プログラムは、ＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステム、好ましくはデジタルＵＮＩＸ（登録商標）Ｖ４．０Ｄでの使用のためにコンパイルされる。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ-２プログラムによって設定され変動しない。
【００７３】
核酸配列比較にＡＬＩＧＮ-２が用いられる状況では、与えられた核酸配列Ｃの、与えられた核酸配列Ｄとの、又はそれに対する％核酸配列同一性（あるいは、与えられた核酸配列Ｄと、又はそれに対して或る程度の％核酸配列同一性を持つ又は含む与えられた核酸配列Ｃと言うこともできる）は次のように計算される：
分率Ｗ／Ｚの１００倍
ここで、Ｗは配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ-２のＣ及びＤのアラインメントによって同一であると一致したスコアのヌクレオチドの数であり、ＺはＤの全ヌクレオチドである。核酸配列Ｃの長さが核酸配列Ｄの長さと異なる場合、ＣのＤに対する％核酸配列同一性は、ＤのＣに対する％核酸配列同一性とは異なることは理解されるであろう。％核酸配列同一性の計算の例として、「ＰＲＯ-ＤＮＡ」が対象となる仮説的ＰＲＯコード化核酸配列を表し、「比較ＤＮＡ」が対象となる「ＰＲＯ-ＤＮＡ」核酸分子が比較されている核酸配列を表し、そして「Ｎ」、「Ｌ」及び「Ｖ」の各々が異なった仮想ヌクレオチドを表していて、表４及び５が「比較ＤＮＡ」と称される核酸配列の「ＰＲＯ-ＤＮＡ」と称される核酸配列に対する％核酸配列同一性の計算方法を示す。特に断らない限りは、ここでの全ての％核酸配列同一性値は、直ぐ上のパラグラフに示したようにＡＬＩＧＮ-２コンピュータプログラムを用いて得られる。
【００７４】
本発明は、また、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする核酸分子であり、好ましくはストリンジェントなハイブリダイゼーション及び洗浄条件下で、ここに記載の完全長ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列とハイブリダイゼーションすることができるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１変異体ポリペプチドを提供する。ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１変異体ポリペプチドは、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１変異体ポリヌクレオチドによってコードされているものであり得る。
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする核酸に関して使用される場合の「完全長コード領域」という用語は、（添付図において開始及び停止コドンの間でしばしば示される）本発明の完全長ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を意味する。ＡＴＣＣ寄託核酸に関して使用される場合の「完全長コード領域」という用語は、（添付図において開始及び停止コドンの間でしばしば示される）ＡＴＣＣに寄託されたベクター中に挿入されているｃＤＮＡのＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドコード部分を意味する。
【００７５】
ここに開示される種々のＰＲＯポリペプチドを記載するために使用される「単離」とは、自然環境の成分から同定され及び分離及び／又は回収されたポリペプチドを意味する。その自然環境の汚染成分とは、そのポリペプチドの診断又は治療への使用を典型的には妨害する物質であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質様又は非タンパク質様溶質が含まれる。好ましい実施態様では、ポリペプチドは、(１)スピニングカップシークエネーターを使用することにより、少なくとも１５残基のＮ末端あるいは内部アミノ酸配列を得るのに充分なほど、あるいは、(２)クーマシーブルーあるいは好ましくは銀染色を用いた非還元あるいは還元条件下でＳＤＳ-ＰＡＧＥにより均一になるまで精製される。単離されたポリペプチドには、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの自然環境の少なくとも一つの成分が存在しないため、組換え細胞内のインサイツのポリペプチドが含まれる。しかしながら、通常は、単離されたポリペプチドは少なくとも一つの精製工程により調製される。
【００７６】
「単離された」ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする核酸又は他のポリペプチドコード化核酸は、同定され、ポリペプチドをコードする核酸の天然源に通常付随している少なくとも一つの汚染核酸分子から分離された核酸分子である。単離されたポリペプチドをコードする核酸分子は、天然に見出される形態あるいは設定以外のものである。故に、単離されたポリペプチドをコードする核酸分子は、天然の細胞中に存在する特異的なポリペプチドをコードする核酸分子とは区別される。しかし、ポリペプチドをコードする単離された核酸分子には、例えば、核酸分子が天然細胞のものとは異なった染色体位置にあるポリペプチドを通常は発現する細胞に含まれるポリペプチドをコードする核酸分子が含まれる。
「コントロール配列」という用語は、特定の宿主生物において作用可能に結合したコード配列を発現するために必要なＤＮＡ配列を指す。例えば原核生物に好適なコントロール配列は、プロモーター、場合によってはオペレータ配列と、リボソーム結合部位を含む。真核生物の細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル及びエンハンサーを利用することが知られている。
【００７７】
核酸は、他の核酸配列と機能的な関係にあるときに「作用可能に結合し」ている。例えば、プレ配列あるいは分泌リーダーのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に参画するプレタンパク質として発現されているなら、そのポリペプチドのＤＮＡに作用可能に結合している；プロモーター又はエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼすならば、コード配列に作用可能に結合している；又はリボソーム結合部位は、もしそれが翻訳を容易にするような位置にあるなら、コード配列と作用可能に結合している。一般的に、「作用可能に結合している」とは、結合したＤＮＡ配列が近接しており、分泌リーダーの場合には近接していて読みフェーズにあることを意味する。しかし、エンハンサーは必ずしも近接している必要はない。結合は簡便な制限部位でのライゲーションにより達成される。そのような部位が存在しない場合は、従来の手法に従って、合成オリゴヌクレオチドアダプターあるいはリンカーが使用される。
【００７８】
ハイブリダイゼーション反応の「ストリンジェンシー」は、当業者によって容易に決定され、一般的にプローブ長、洗浄温度、及び塩濃度に依存する経験的な計算である。一般に、プローブが長くなると適切なアニーリングに必要な温度が高くなり、プローブが短くなるとそれに必要な温度は低くなる。ハイブリダイゼーションは、一般的に、相補鎖がその融点より低い環境に存在する場合に、変性ＤＮＡの再アニールする能力に依存する。プローブとハイブリダイゼーション配列の間で所望される相同性の程度が高くなればなるほど、用いることができる相対温度が高くなる。その結果、より高い相対温度は、反応条件をよりストリンジェントにすることになり、低い温度はストリンジェントを低下させることになる。ハイブリダイゼーション反応のストリンジェンシーの更なる詳細及び説明については、Ausubel等, Current Protocols in Molecular Biology（Wiley Interscience Publishers, 1995）を参照のこと。
【００７９】
ここで定義される「ストリンジェント条件」又は「高度のストリンジェンシー条件」は、（１）洗浄のために低イオン強度及び高温度、例えば、５０℃において０．０１５Ｍの塩化ナトリウム／０．００１５Ｍのクエン酸ナトリウム／０．１％のドデシル硫酸ナトリウムを用いるもの；（２）ハイブリダイゼーション中にホルムアミド等の変性剤、例えば、４２℃において５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミドと０．１％ウシ血清アルブミン／０．１％フィコール／０．１％のポリビニルピロリドン／５０ｍＭのｐＨ６．５のリン酸ナトリウムバッファー、及び７５０ｍＭの塩化ナトリウム、７５ｍＭクエン酸ナトリウムを用いるもの；又は（３）４２℃における５０％ホルムアミド、５ｘＳＳＣ（０．７５ＭのＮａＣｌ、０．０７５Ｍのクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％のピロリン酸ナトリウム、５ｘデンハード液、超音波処理サケ精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍｌ）、０．１％ＳＤＳ、及び４２℃での１０％の硫酸デキストランと、４２℃における０．２ｘＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）の１０分間の洗浄、ついで５５℃におけるＥＤＴＡを含む０．１ｘＳＳＣからなる高ストリンジェンシー洗浄を用いるものによって同定される。
【００８０】
「中程度のストリンジェント条件」は、Sambrook等, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (New York: Cold Spring Harbor Press, 1989）に記載されているように同定され、上記のストリンジェントより低い洗浄溶液及びハイブリダイゼーション条件（例えば、温度、イオン強度及び％ＳＤＳ）の使用を含む。中程度のストリンジェント条件は、２０％ホルムアミド、５ｘSSC（１５０ｍＭのＮａＣｌ、１５ｍＭのクエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５ｘデンハード液、１０％硫酸デキストラン、及び２０ｍｇ／ｍｌの変性剪断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中の３７℃での終夜インキュベーション、ついで１ｘＳＳＣ中３７−５０℃でのフィルターの洗浄といった条件である。当業者であれば、プローブ長などの因子に適合させる必要に応じて、どのようにして温度、イオン強度等を調節するかを認識する。
【００８１】
「エピトープタグ」なる用語は、ここで用いられるときは、「タグポリペプチド」と融合したＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを含んでなるキメラポリペプチドを意味する。タグポリペプチドは、その抗体が産生され得るエピトープを提供するのに十分な残基を有し、その長さは融合するポリペプチドの活性を阻害しないよう充分に短い。また、タグポリペプチドは、好ましくは抗体が他のエピトープと実質的に交差反応をしないようにかなり独特である。適切なタグポリペプチドは、一般に、少なくとも６のアミノ酸残基、通常は約８〜５０のアミノ酸残基(好ましくは、約１０〜２０の残基)を有する。
【００８２】
ここでの目的に対する「活性な」又は「活性」とは、天然又は天然に生じるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１の生物学的及び／又は免疫学的活性を保持するＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの形態を意味し、ここで、「生物学的」活性とは、天然又は天然に生じるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１が保持する抗原性エピトープに対する抗体の生成を誘発する能力以外の、天然又は天然に生じるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１によって引き起こされる生物機能（阻害又は刺激）を意味し、「免疫学的」活性とは、天然又は天然に生じるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１が保持する抗原性エピトープに対する抗体の生成を誘発する能力を意味する。
【００８３】
「アンタゴニスト」なる用語は［特段の定義がない場合は］最も広い意味で用いられ、ここに開示した天然ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの生物学的活性を部分的又は完全にブロック、阻害、又は中和する任意の分子が含まれる。同様に、「アゴニスト」という用語は［特段の定義がない場合は］最も広い意味で用いられ、ここに開示した天然ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの生物学的活性を模倣する任意の分子が含まれる。適切なアゴニスト又はアンタゴニスト分子には、特にアゴニスト又はアンタゴニスト抗体又は抗体断片、断片、又は天然ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアミノ酸配列変異体、ペプチド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、小有機分子等が含まれる。ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストを同定する方法は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドと候補アゴニスト又はアンタゴニスト分子を接触させ、そして通常はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドに関連している一又は複数の生物学的活性の検出可能な変化を測定することが含まれ得る。
【００８４】
「治療する」又は「治療」又は「緩和」とは、治療上の処置及び予防的療法又は防護的療法の双方を称し、その目的は、標的である病的症状又は疾患を防ぐか又は衰え（小さく）させることである。治療を必要とするものには、疾患に罹りやすいものと同時に疾患に既に罹っているもの、又は疾患が予防されるべきものを含む。
「慢性」投与とは、初期の治療効果（活性）を長期間にわたって維持するようにするために、急性態様とは異なり連続的な態様での薬剤の投与を意味する。「間欠」投与とは、中断無く連続的になされるのではなく、むしろ本質的に周期的になされる処理である。
治療のための「哺乳動物」とは、哺乳動物に分類される任意の動物を意味し、ヒト、家畜用及び農場用動物、動物園、スポーツ、又はペット動物、例えばイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウサギなどを含む。好ましくは、哺乳動物はヒトである。
一又は複数の更なる治療薬と「組み合わせた」投与とは、同時（同時期）及び任意の順序での連続した投与を含む。
【００８５】
ここで用いられる「担体」は、製薬的に許容されうる担体、賦形剤、又は安定化剤を含み、用いられる服用量及び濃度でそれらに曝露される細胞又は哺乳動物に対して非毒性である。生理学的に許容されうる担体は、水性ｐＨ緩衝溶液であることが多い。生理学的に許容されうる担体の例は、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸塩のバッファー；アスコルビン酸を含む酸化防止剤；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン；疎水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリジン；グルコース、マンノース又はデキストランを含む単糖類、二糖類、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；マンニトール又はソルビトール等の糖アルコール；ナトリウム等の塩形成対イオン；及び／又は非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮＴＭ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭを含む。
【００８６】
「固相」とは、本発明の抗体、ＰＲＯ結合オリゴペプチド又はＰＲＯ結合有機分子が接着できる非水性マトリクスを意味する。ここに包含される固相の例は、部分的又は全体的にガラス（例えば、調整孔ガラス）、ポリサッカリド（例えばアガロース）、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリビニルアルコール及びシリコーンで形成されたものを含む。或る実施態様では、前後関係に応じて、固相はアッセイ用プレートのウェル；その他では精製用カラム（例えばアフィニティクロマトグラフィーカラム）を含むことができる。また、この用語は、米国特許第４２７５１４９号に記載されたような別々の粒子の不連続な固相も含む。
「リポソーム」は、哺乳動物への薬物（例えばＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド、又はそれらに対する抗体）の輸送に有用な、脂質、リン脂質及び／又は界面活性剤を含む種々のタイプの小胞体である。リポソームの成分は、通常は細胞膜の脂質配向に類似した２層構造に配列される。
【００８７】
ここで定義されている「小分子」とは、約５００ダルトン未満の分子量である。
ここに開示するＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド、抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１結合オリゴペプチド、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１結合有機分子、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストの「有効量」とは、特に述べた目的を実施するために十分な量のことである。「有効量」は、述べられた目的に関連して、経験的及び常套的な形で決定することができる。
【００８８】
「治療的有効量」という用語は、患者又は哺乳動物の疾患又は疾病を「治療」するのに効果的な抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１結合オリゴペプチド、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１結合有機分子又は他の薬剤の量を指す。癌の場合、治療的に有効量の薬は癌細胞の数を減じ；腫瘍の大きさを減じ；末梢器官への癌細胞の浸潤を阻害（すなわち、ある程度まで減速、好ましくは停止）し；腫瘍転移を阻害（すなわち、ある程度まで減速及び好ましくは停止）し；腫瘍成長をある程度まで阻害し；及び／又は癌に関連する一又は複数の症状をある程度まで緩和する。「治療する」のここでの定義を参照せよ。薬が存在する癌細胞の成長を妨げ及び／又は死滅させる程度まで、それは、細胞分裂停止及び／又は細胞傷害性であり得る。
【００８９】
「循環器、内皮及び血管新生疾患」、「循環器、内皮及び血管形成機能不全」、「循環器、内皮又は血管新生疾患」及び「循環器、内皮又は血管形成機能不全」という言葉は互換可能に使用され、部分的には血管に影響する全身性の疾患、例えば糖尿病、並びに血管、例えば動脈、毛細管、静脈、及び／又はリンパ管それ自体の病気を意味する。これには、血管形成及び／又は心血管新生を刺激する徴候、及び血管形成及び／又は心血管新生を阻害する徴候が含まれている。このような疾患には、例えば動脈の病気、例えばアテローム性動脈硬化、高血圧、炎症性脈管炎、レーノー病及びレーノー現象、動脈瘤、及び動脈再狭窄；静脈及びリンパ管の疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；及び他の血管疾患、例えば末梢血管病、癌、例えば血管腫瘍、例えば血管腫(毛細管及び海綿状)、グロムス腫瘍、毛細管拡張症、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ管肉腫、腫瘍血管形成、外傷、例えば傷、火傷、及び他の組織損傷、移植固定、瘢痕化、虚血再潅流傷害、関節リュウマチ、脳血管の病気、腎臓病、例えば急性腎不全、及び骨粗鬆症が含まれる。また、アンギナ、心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えばＣＨＦも含まれる。
【００９０】
ここで使用される場合の「肥大」とは、腫瘍形成に関与しない正常な成長とは無関係に組織又は構造体の大きさが増加することとして定義される。器官又は組織の肥大は個々の細胞の大きさの増加(真性肥大)、又は組織を形成する細胞数の増加(過形成)、又はその両方のいずれかによる。ある種の器官、例えば心臓は誕生後、短い期間で分割能力を失う。従って、「心肥大」は心臓の大きさが増加するものとして定義され、成人においては、細胞分割を伴わない、収縮性タンパク質の含有量とミオサイトの細胞サイズの増加により特徴付けられる。肥大を刺激する原因となるストレスの特徴(例えば、プレロードの増加、アフターロードの増加、心筋梗塞の場合と同様のミオサイトの損失、収縮性の一次低下)が、反応の性質の決定において重要な役割を担っていることは明らかである。心肥大の初期段階は、通常、ミオフィブリルとミトコンドリアのサイズの増加、並びにミトコンドリアと核の拡大により形態学的に特徴付けられる。この段階において、筋細胞は正常なものよりもより大きくなり、細胞の構成はほとんど維持される。心肥大の段階がさらに進行すると、特定のオルガネラ、例えばミトコンドリアの数及びサイズが優先的に増加し、新規の収縮エレメントは不規則な方法で、細胞の局在領域に添加される。長年にわたって肥大を被っている細胞は、隣接するミオフィブリルを置換して正常なＺ膜レジストレーションの破壊を引き起こす高度分葉膜を有し、かなり拡大した核を含む、細胞組織化においてより明確な分裂を示す。「心肥大」という用語は、根底にある心疾患に関係なく、心筋の種々の度合いの構造的ダメージにより特徴付けられる病状の進行における全ての段階を含むように使用される。従って、その用語は、心肥大の発達における生理学的病状、例えば血圧の上昇、大動脈狭窄、又は心筋梗塞も含まれる。
【００９１】
「心不全」は、心臓が代謝中の組織の要求が必要とする速さで血液を送らない心機能の異常を指す。心不全は虚血性、先天的、リュウマチ性又は特発的形態を含む、種々の因子が原因となり得る。
「鬱血性心不全」(ＣＨＦ)は、末梢組織まで酸素化された血液を送達させるために、十分な心拍出量(経時的に心臓により押し出される血液量)を供給することのできない心臓の進行性の病状である。CHFが進行すると、構造的及び血行力学的ダメージが生じる。これらのダメージは様々な徴候を有するが、一つの特徴的な症状は心室肥大である。ＣＨＦは多くの様々な心疾患の共通した終末的な結果である。
「心筋梗塞」は、しばしば多重冠動脈血栓症を伴う、冠動脈のアテローム性動脈硬化の結果であると一般的にされている。それは、心室壁の全厚みにわたって心筋壊死がある壁内梗塞、及び心室壁を通って心外膜に至る全ての経路に伸長することなく、壊死が内皮下層、心筋壁内、又はその両方にある副心内膜(非壁内)梗塞の２つのタイプに分けることができる。心筋梗塞は血行力学的影響の変化と心臓のダメージを受けた、及び健康な領域における構造の変化の両方に原因があることが知られている。よって、例えば心筋梗塞により心臓の最大流出量及び心臓鼓動容量が低減する。また、心筋梗塞に関連して、間隙に生じるＤＮＡ合成が刺激され、影響を受けていない心臓領域におけるコラーゲンの形成が増加する。
長期間にわたる高血圧において、心臓のストレス及び圧力が増加する結果、例えば全末梢耐性が増加して、心肥大は長期間「高血圧」を付随するようになる。慢性的に圧力が加わった結果肥大した心室の特徴は、障害性の心拡張能である。Fouad等,  J. Am. Coll. Cardiol., 4：1500-1506(1984)；Smith等,  J. Am. Coll. Cardiol., 5：869-874(1985)。長期間にわたる左心室の弛緩には、心収縮機能が正常又は非正常にかかわらず、早期に本態性高血圧が検出された。Hartford等,Hypertension, 6: 329-338(1984)。しかし、血圧レベルと心肥大との間に密接な平行関係はない。ヒトにおいて、抗高血圧治療に応じて左心室機能の改善は繰り返されるが、利尿薬(ヒドロクロロチアジド)、β-ブロッカー(プロプラノロール)、又はカルシウムチャンネルブロッカー(ジルチアゼム)で治療している患者は、心拡張機能が改善されることなく左心室肥大への逆戻りがみられる。Inouye等, Am. J. Cardiol., 53：1583-7(1984)。
【００９２】
心肥大に関連した他の複合的心疾患は「肥大性心筋症」である。この病状は形態学的、機能的及び臨床的特性が非常に多様であること(Maron等, N. Engl. J. Med., 316：780-789(1987)；Spirito等,  N. Engl. J. Med., 320：749-755(1989)；Louie及びEdwards, Prog. Cardiovasc. Dis., 36：275-308(1994)；Wigle等, Circulation, 92：1680-1692(1995))、全年齢の患者を悩ます事実により強調される異種性により特徴付けられる。Spirito等, N. Engl. J. Med., 336：775-785(1997)。また、肥大心筋症の原因となる要因は多様であり、ほとんど理解されていない。一般的に、サルコメアタンパク質をコードする遺伝子における変異が肥大性心筋症に関与している。近年のデータでは、β-ミオシン重鎖変異が、家族性肥大性心筋症の原因の約３０から４０パーセントであると計測されていることを示唆している。Watkins等, N. Engl. J. Med., 326：1108-1114(1992)；Schwartz等, Circulation, 91：532-540(1995)；Marian及びRoberts,  Circulation, 92：1336-1347(1995)；Thierfelder等, Cell, 77：701-712(1994)；Watkins等, Nat. Gen., 11：434-437(1995)。β-ミオシン重鎖の他にも、他の位置の遺伝子変異に、心臓トロポニンＴ、アルファトポミオシン、心臓ミオシン結合プロテインＣ、必須ミオシン軽鎖、及び調節性ミオシン軽鎖が含まれる。Malik及びWatkins, Curr. Opin. Cardiol., 12：295-302(1997)を参照されたい。
【００９３】
上弁「大動脈狭窄」は、上行大動脈が狭くなることにより特徴付けられる遺伝性血管疾患であるが、肺動脈を含む他の動脈もさらに影響をうけるおそれがある。未治療の大動脈狭窄では、心内圧力が増加し、結果として心肥大が生じ、実際には心不全及び死に至る。この疾患の病因は十分には理解されていないが、中間平滑筋の過形成可能性及び肥大はこの疾患の顕著な特徴である。エラスチン遺伝子の分子変異体が大動脈狭窄の発現の病因に関与していることが、１９９７年７月２２日公開の米国特許第５６５０２８２号に報告されている。
「心臓弁逆流」は心臓弁の疾患の結果による心臓病の結果として生じる。リュウマチ熱のような種々の病気は、弁オリフィスの収縮又は引っ張りを引き起こすものであるが、他の病気は、心内膜炎、心内膜又は心房オリフィスの内側の膜の炎症、及び心臓の手術になる。欠損、例えば弁狭窄又は弁の欠損近接により、心臓腔における血液の蓄積、又は弁を通過しての血液の逆流が生じる。弁狭窄又は不全を長期間治癒しないと、心肥大や心筋に関連したダメージを被る結果となり、最終的には弁の交換が必要となる。
【００９４】
「免疫関連疾患」という用語は、哺乳動物の免疫系の成分が哺乳動物の罹患を生じさせる、媒介する又は他に寄与する疾患を意味する。また、免疫反応の刺激又は介入が疾患の進行に寛解的効果を有する疾患も包含する。この用語には、免疫媒介炎症性疾患、非免疫媒介炎症性疾患、感染性疾患、免疫不全疾患、腫瘍形成などが含まれる。
「Ｔ細胞媒介」疾患という用語は、Ｔ細胞が哺乳動物の罹患を直接的又は間接的に媒介する又は他に寄与する疾患を意味する。Ｔ細胞媒介疾患は、細胞媒介効果ｍリンホカイン媒介効果など、及び、例えばＢ細胞がＴ細胞により分泌されたリンホカインによって刺激される場合はＢ細胞に関連する効果にも関連する。
免疫関連及び炎症性疾患であって、それらの幾つかはＴ細胞媒介性である疾患の例は、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、若年性慢性関節炎、脊髄関節症、全身性硬化症（強皮症）、特発性炎症性ミオパシー（皮膚筋炎、多発性筋炎）、シェーグレン症候群、全身性脈管炎、サルコイドーシス、自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）、自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介血小板減少症）、甲状腺炎（グレーヴズ病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ球甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）、真性糖尿病、免疫媒介腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）、多発性硬化症、特発性脱髄性多発性ニューロパシー又はギヤン‐バレー症候群及び慢性炎症性脱髄性多発性ニューロパシー等の中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、感染性肝炎（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎等の肝臓胆管疾患、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）、グルテン感受性腸炎、及びホウィップル病、水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触皮膚炎を含む自己免疫性又は免疫媒介皮膚疾患、乾癬、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及びじんま疹等のアレルギー性疾患、好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎等の肺の免疫性疾患、又は移植拒絶及び対宿主性移植片病を含む移植関連疾患を含む。感染性疾患はＡＩＤＳ（ＨＩＶ感染）、肝炎Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥ、細菌感染、真菌感染、原生動物感染及び寄生虫感染を含む。
【００９５】
ここで言う「自己免疫疾患」とは、個体自身の組織から生じて個体自身の組織に対して起こる疾患又は障害、あるいはその同時分離いたものないしは徴候又は結果として生じる症状である。自己免疫疾患又は障害の例には、限定するものではないが、関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節症、乾癬の関節炎及び強直性脊椎炎）、乾癬、アトピー性皮膚炎を含む皮膚炎；慢性特発性蕁麻疹、例えば慢性自己免疫蕁麻疹、多発性筋炎／皮膚筋炎、中毒性表皮の表皮壊死症、全身強皮症及び硬化症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（クローン病、潰瘍性大腸炎）と関連している応答、及び膿皮症壊疽の同時分離を伴うＩＢＤ、結節性紅斑、原発性硬化性胆管炎、及び／又は上強膜炎）、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）を含む呼吸窮迫症候群、髄膜炎、ＩｇＥ媒介性疾患、例えばアナフィラキシー及びアレルギー性鼻炎、ラスマッセン脳炎のような脳炎、ブドウ膜炎、大腸炎、例えば顕微鏡的大腸炎及び膠原性大腸炎、膜性ＧＮなどの糸球体腎炎（ＧＮ）、特発性膜性ＧＮ、Ｉ型及びＩＩ型及び急速進行性ＧＮを含む膜性増殖性ＧＮ（ＭＰＧＮ）、アレルギー症状、湿疹、喘息、Ｔ細胞の浸潤が関与している症状及び慢性炎症反応、アテローム性動脈硬化症、自己免疫心筋炎、白血球癒着不全、皮膚ＳＬＥのような全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ループス（腎炎、脳炎、小児科、非腎臓、ジスコイド、脱毛症を含む）、若年型糖尿病、脊髄視覚ＭＳなどの多発性硬化症（ＭＳ）、アレルギー性脳脊髄炎、サイトカイン及びＴリンパ球によって媒介される急性及び遅発性過敏症と関連している免疫応答、結核、サルコイドーシス、ヴェゲナー肉芽腫症を含む肉芽腫症、無顆粒球症、脈管炎（大動脈管炎（リウマチ性多発筋痛症及び巨細胞（高安）動脈炎を含む）、中脈管炎（川崎病および結節性多発性動脈炎を含む）、ＣＮＳ脈管炎、及び脈管炎関連ＡＮＣＡ、例えばチャーグ・ストラウス脈管炎又は症候群（ＣＳＳ））、無形成性貧血、クームス陽性貧血症、ダイアモンド・ブラックファン(Blackfan)貧血症、自己免疫溶血性貧血（ＡＩＨＡ）を含む免疫溶血性貧血、悪性貧血、純粋な赤血球形成不全（赤芽球癆）、第ＶＩＩＩ因子欠乏症、血友病Ａ、自己免疫好中球減少症、汎血球減少症、白血球減少症、白血球血管外遊出が関与している疾患、ＣＮＳ炎症性障害、多器官損傷症候群、重症筋無力症、抗原抗体複合体媒介性疾患、抗糸球体基底膜疾患、抗リン脂質抗体症候群、アレルギー性神経炎、ベーチェット病、キャッスルマン症候群、グッドパスチュア症候群、ランバート・イートン筋無力症候群、レイノー症候群、シェーグレン症候群、スティーブンス・ジョンソン症候群、固形臓器移植拒絶反応（高い試験板反応性の抗体価、組織のＩｇＡ沈澱物及び腎移植、肝移植、腸移植、心臓移植に起因している拒絶などのための前処置を含む）、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、類天疱瘡水疱、天疱瘡（尋常性、落葉状及び天疱瘡粘液膜類天疱瘡を含む）、自己免疫多腺性内分泌障害、ライター症候群、スティッフマン症候群、免疫複合体腎炎、ＩｇＭ多発性神経炎又はＩｇＭ媒介性神経病、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、血栓症血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、自己免疫血小板減少を含む血小板減少（例えば心筋梗��患者に発現）、自己免疫精巣炎及び卵巣炎を含む精巣及び卵巣の自己免疫疾患、原発性甲状腺機能低下症；自己免疫性甲状腺炎を含む自己免疫内分泌性疾患、慢性甲状腺炎（橋本甲状腺炎）、亜急性の甲状腺炎、特発性の甲状腺機能低下症、アジソン病、甲状腺機能亢進症、自己免疫多腺性症候群（又は多腺性内分泌障害症候群）、小児ＩＤＤＭを含むインシュリン依存性真正糖尿病（ＩＤＤＭ）とも称されるＩ型糖尿病、及びシーハン症候群；自己免疫肝炎、リンパ系間質性肺炎（ＨＩＶ）、閉塞性細気管支炎（非移植）対ＮＳＩＰ、ギランバレ症候群、ベルジェ病（ＩｇＡネフロパシ）、原発性胆管萎縮症、脂肪便症（グルテン腸疾患）、同時分離疱疹状皮膚炎を有する抵抗性スプルー、クリオグロブリン血症、アミル栄養側索硬化症（ＡＬＳ；筋萎縮性側索硬化症）、冠状動脈疾患、自己免疫内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫聴力障害、眼球クローヌス筋硬直症候群（ＯＭＳ）、抵抗性多発性軟骨炎のような多発性軟骨炎、肺胞蛋白症、アミロイドーシス、巨細胞肝炎、強膜炎、不明な／未知の重大なモノクローナル免疫グロブリン増多症（ＭＧＵＳ）、末梢神経障害、腫瘍随伴症候群、チャンネル病、例えば癲癇、片頭痛、不整性、筋疾患、難聴、失明、周期性麻痺及びＣＮＳのチャンネル病；自閉症、炎症性筋疾患及び巣状分節状糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）が含まれる。
【００９６】
「不安関連障害」なる語句は、限定されるものでないが以下のものを含む不安、気分及び物質濫用の障害を指す：欝状態、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、過活動性障害、強迫性障害、精神分裂症、認識力障害、痛覚過敏および感覚障害。このような障害は、軽度から中度の不安、一般的な医学的状態による不安障害、別段特定されない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を示すパニック障害、広場恐怖症のないパニック障害、心的外傷後ストレス症候群、社会的恐怖症、社会的不安、自閉症、特定恐怖症、物質誘発性不安障害、急性アルコール禁断、強迫性障害、広場恐怖症、単極型障害を含む双極性障害Ｉ又はＩＩ（別段特定されない双極性障害、気分循環性障害、鬱病性障害、大鬱病性障害、気分障害、物質誘発性気分障害、認知機能の亢進、限定するものではないがアルツハイマー病、脳梗塞又は脳への外傷に伴う認知機能の喪失、限定するものではないが癲癇、学習障害／学習不能症、脳性麻痺を含む疾患又は損傷から生じる発作。加えて、不安障害は、限定しないが以下のタイプを含む人格障害に応用してもよい：偏執性、社交嫌い、回避性行動、境界線人格障害、依存症、麻薬性、ナルシスト的な、強迫神経症、統合失調症及び統合失調症型性格。
「脂質代謝性障害」という用語は、コレステロール及びトリグリセライドの異常な臨床化学レベルを指すものであり、これら脂質の高いレベルはアテローム性動脈硬化の徴候である。加えて、異常な血清中脂質レベルは、高血圧、脳卒中、冠状動脈疾患、糖尿病及び／又は肥満を含む様々な循環器疾患の徴候でありうる。
【００９７】
「眼の異常」という用語は、それらがアテローム性動脈硬化又は様々な眼科異常に関連しうるような目の潜在的障害を指す。このような障害は、これに限定されるものではないが以下のものを含む：網膜形成不全、種々の網膜症、再狭窄、網膜動脈閉塞又は閉塞；網膜脈管系の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症（carotinemeia）、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスを含まれる。白内障はまた眼の異常と考えられ、次のような全身性疾患と関連している：ヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群。他の眼の発達異常は、無虹彩、前部分及び異発生症候群を含む。白内障はまた眼内感染又は炎症（ブドウ膜炎）の結果として起こる場合がある。
【００９８】
抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１結合オリゴペプチド又はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１結合有機分子の「成長阻害量」は、細胞、特に腫瘍、例えば癌細胞の成長をインビトロ又はインビボで阻害できる量である。腫瘍性細胞成長の阻害の目的のための抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１結合オリゴペプチド又はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１結合有機分子の「成長阻害量」は、経験的及び常套的な形で決定することができる。
【００９９】
抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１結合オリゴペプチド又はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１結合有機分子の「細胞傷害性量」は、細胞、特に腫瘍、例えば癌細胞をインビトロ又はインビボで破壊できる量である。腫瘍性細胞成長の阻害の目的のための抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１結合オリゴペプチド又はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１結合有機分子の「細胞傷害性量」は、経験的及び常套的な形で決定することができる。
【０１００】
「抗体」という用語は最も広い意味において使用され、例えば、単一の抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１モノクローナル抗体(アゴニスト、アンタゴニスト、及び中和抗体を含む)、多エピトープ(polyepitopic)特異性を持つ抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体組成物、ポリクローナル抗体、一本鎖抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体、及び所望する生物学的又は免疫学的活性を示す限りは抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体の断片（下記を参照）を包含する。「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、ここでの抗体と相互に置き換え可能に用いられる。
【０１０１】
「単離された抗体」とは、その自然環境の成分から同定され分離され及び／又は回収されたものを意味する。その自然環境の汚染成分とは、抗体の診断又は治療への使用を妨害する物質であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質様又は非タンパク質様溶質が含まれる。好ましい実施態様では、抗体は、(１)ローリー(Lowry)法によって定量して９５重量％以上の、最も好ましくは９９重量％以上の抗体まで、（２）スピニングカップシークエネーターを使用することにより、少なくとも１５のＮ末端あるいは内部アミノ酸配列の残基を得るのに充分な程度まで、あるいは(３)クーマシーブルーあるいは好ましくは銀染色を用いた還元又は非還元条件下でのＳＤＳ-ＰＡＧＥによる均一性まで精製される。単離された抗体には、組換え体細胞内のインサイツの抗体が含まれるが、これは抗体の自然環境の少なくとも一つの成分が存在しないからである。しかしながら、通常は、単離された抗体は少なくとも一つの精製工程により調製される。
【０１０２】
基本的な４-鎖抗体ユニットは２つの同一の軽(Ｌ)鎖と２つの同一の重(Ｈ)鎖から構成されるヘテロ四量体の糖タンパクである(ＩｇＭ抗体は、基本的なヘテロ四量体ユニットとそれに付随するＪ鎖と称される付加的なポリペプチドの５つからなり、よって１０の抗原結合部位を有するが、分泌されたＩｇＡ抗体は重合して、基本的４-鎖ユニットとそれ付随するＪ鎖のうち２-５つを含む多価集合を形成可能である)。ＩｇＧの場合、４-鎖ユニットは一般的に約１５００００ダルトンである。それぞれのＬ鎖は１つの共有ジスルフィド結合によってＨ鎖に結合するが、２つのＨ鎖はＨ鎖のアイソタイプに応じて一又は複数のジスルフィド結合により互いに結合している。それぞれのＨ及びＬ鎖はまた規則的な間隔を持った鎖内ジスルフィド結合を持つ。それぞれのＨ鎖は、α及びγ鎖の各々に対しては３つの定常ドメイン(ＣＨ)が、μ及びεアイソタイプに対しては４つのＣＨドメインが続く可変ドメイン(ＶＨ)をＮ末端に有する。それぞれのＬ鎖は、その他端に定常ドメイン(ＣＬ)が続く可変ドメイン(ＶＬ)をＮ末端に有する。ＶＬはＶＨと整列し、ＣＬは重鎖の第一定常ドメイン(ＣＨ１)と整列している。特定のアミノ酸残基が、軽鎖及び重鎖可変ドメイン間の界面を形成すると考えられている。ＶＬとＶＨは共同して対になって、単一の抗原結合部位を形成する。異なるクラスの抗体の構造及び特性は、例えばBasic and Clinical Immunology, ８版, Daniel P. Stites, Abba I. Terr and Tristram G. Parslow(編), Appleton ＆ Lange, Norwalk, CT, 1994, ７１頁及び６章を参照のこと。
【０１０３】
任意の脊椎動物種からのＬ鎖には、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ及びラムダと呼ばれる２つの明確に区別される型の一つを割り当てることができる。また、その重鎖の定常ドメイン(ＣＨ)のアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンには異なったクラス又はアイソタイプを割り当てることができる。ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭという免疫グロブリンの５つの主要なクラスがあり、それぞれα、δ、ε、γ及びμと呼ばれる重鎖を有する。さらにγ及びαのクラスは、ＣＨ配列及び機能等の比較的小さな差異に基づいてサブクラスに分割され、例えば、ヒトにおいては次のサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２が発現する。
「可変」という用語は、可変ドメインのある部分が抗体の間で配列が広範囲に異なることを意味する。Ｖドメインは抗原結合性を媒介し、その特定の抗原に対する特定の抗体の特異性を定める。しかし、可変性は可変ドメインの１１０-アミノ酸スパンを通して均等には分布されていない。代わりに、Ｖ領域は、それぞれ９−１２アミノ酸長である「高頻度可変領域」と称される極度の可変性を有するより短い領域によって分離された１５−３０アミノ酸のフレームワーク領域(ＦＲ)と呼ばれる比較的不変の伸展からなる。天然重鎖及び軽鎖の可変ドメイン各々は、大きなβ-シート配置をとり、３つの高頻度可変領域により接続された４つのＦＲ領域を含み、それはループ状の接続を形成し、β-シート構造の一部を形成することもある。各鎖の高頻度可変領域はＦＲにより他の鎖からの高頻度可変領域とともに極近傍に保持され、抗体の抗原結合部位の形成に寄与している（Kabat等, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ED. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)）。定常ドメインは抗体の抗原への結合に直接は関係ないが、種々のエフェクター機能、例えば抗体依存性細胞障害(ＡＤＣＣ)における抗体の寄与を示す。
【０１０４】
ここで使用される場合、「高頻度可変領域」なる用語は、抗原結合性の原因となる抗体のアミノ酸残基を意味する。高頻度可変領域は「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基(すなわち、ＶＬにおいては、およそ残基２４−３４(Ｌ１)、５０−５６(Ｌ２)及び８９−９７(Ｌ３)、及びＶＨにおいては、およそ１−３５(Ｈ１)、５０−６５(Ｈ２)及び９５−１０２(Ｈ３)；Kabat等, Sequences of Proteins of Immunological Interest,５版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD.(1991))及び／又は「高度可変ループ」からの残基(例えば、ＶＬにおいては、およそ残基２６−３２(Ｌ１)、５０−５２(Ｌ２)及び９１−９６(Ｌ３)、及びＶＨにおいては、およそ２６−３２(Ｈ１)、５３−５５(Ｈ２)及び９６−１０１(Ｈ３);Chothia及びLesk J.Mol.Biol. 196:901-917 (1987))を含んでなる。
【０１０５】
ここで使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を意味する、すなわち、集団に含まれる個々の抗体が、少量で存在しうる自然に生じる可能性のある突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、一つの抗原部位に対している。さらに、異なる決定基(エピトープ)に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物と比べて、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。その特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の抗体によって汚染されずに合成される点で有利である。「モノクローナル」との修飾詞は、抗体を何か特定の方法で生成しなければならないことを意味するものではない。例えば、本発明において有用なモノクローナル抗体は、最初にKohler等, Nature 256, 495 (1975)により記載されたハイブリドーマ法によって作ることができ、あるいは組換えＤＮＡ法によって、細菌、真核細胞動物又は植物細胞から作ることができる(例えば、米国特許第４８１６５６７号参照)。また「モノクローナル抗体」は、例えばClackson等, Nature 352:624-628(1991)、及びMarks等, J. Mol. Biol. 222:581-597(1991)に記載された技術を用いてファージ抗体ライブラリーから単離することもできる。
【０１０６】
ここで、モノクローナル抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の種由来の抗体、あるいは特定の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一であるか又は相同性があり、鎖の残りの部分が他の種由来の抗体、あるいは他の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一であるか又は相同である「キメラ」抗体、並びにそれが所望の生物的活性を有する限りこのような抗体の断片を特に含む(米国特許第４８１６５６７号;及びMorrison等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855(1984))。ここで対象のキメラ抗体には、非ヒト霊長類(例えば旧世界ザル、類人猿等)から由来する可変ドメイン抗原-結合配列及びヒト定常領域配列を含む「プリマタイズ(primatized)」抗体を含む。
「無傷」の抗体は、抗原-結合部位、並びにＣＬ及び少なくとも重鎖定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含むものである。定常ドメインは天然配列定常ドメイン(例えば、ヒト天然配列定常ドメイン)又はそれらのアミノ酸配列変異体であってよい。好ましくは、無傷の抗体は一又は複数のエフェクター機能を有する。
【０１０７】
「抗体断片」は、無傷の抗体の一部、好ましくは無傷の抗体の抗原結合又は可変領域を含む。抗体断片の例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ(ａｂ')２、及びＦｖ断片；ダイアボディ(diabodies)；直鎖状抗体（米国特許第５６４１８７０号、実施例２；Zapata等, Protein Eng. 8(10): 1057-1062 [1995]）；単鎖抗体分子；及び抗体断片から形成された多重特異性抗体を含む。
抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗体結合断片と、容易に結晶化する能力を反映して命名された残留「Ｆｃ」断片を産生する。Ｆａｂ断片は全長Ｌ鎖とＨ鎖の可変領域ドメイン(ＶＨ)、及び一つの重鎖の第一定常ドメイン(ＣＨ１)からなる。各Ｆａｂ断片は抗原結合性に関して一価である、すなわち単一の抗原-結合部位を有する。抗体のペプシン処理により、単一の大きなＦ(ａｂ')２断片が生じ、これは２価の抗原結合部位を持つ２つのジスルフィド結合されたＦａｂ断片にほぼ対応し、抗原を交差結合させることができるものである。Ｆａｂ'断片は、抗体ヒンジ領域からの一又は複数のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に幾つかの残基が付加されていることによりＦａｂ断片と相違する。Ｆａｂ'-ＳＨは、ここでは定常ドメインのシステイン残基(類)が遊離のチオール基を持つＦａｂ'を表す。Ｆ(ａｂ')２抗体断片は、通常はＦａｂ'断片の対として生成され、それらの間にヒンジシステインを有する。抗体断片の他の化学的結合も知られている。
【０１０８】
Ｆｃ断片はジスルフィドにより一緒に保持されている双方のＨ鎖のカルボキシ末端部位を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域の配列により決定され、その領域は、所定の型の細胞に見出されるＦｃレセプター(ＦｃＲ)によって認識される部位である。
「Ｆｖ」は、完全な抗原-認識及び-結合部位を含む最小の抗体断片である。この断片は、密接に非共有結合した１本の重鎖と１本の軽鎖の可変領域の二量体からなる。これら２つのドメインの折り畳みから、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し、抗体に対する抗原結合特異性を付与する６つの高頻度可変ループ(Ｈ及びＬ鎖から、それぞれ３つのループ)が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含んでなるＦｖの半分）でさえ、結合部位全体よりは低い親和性であるが、抗原を認識し結合する能力を持つ。
【０１０９】
「ｓＦｖ」又は「ｓｃＦｖ」とも略称される「単鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖内に結合したＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドはＶＨ及びＶＬドメイン間にポリペプチドリンカーをさらに含み、それはｓＦＶが抗原結合に望まれる構造を形成するのを可能にする。ｓＦｖの概説については、Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg及びMoore編, Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)；Borrebaeck 1995, 以下を参照のこと。
「ダイアボディ(diabodies)」という用語は、鎖間ではなく鎖内でＶドメインを対形成させ、結果として二価の断片、すなわち２つの抗原-結合部位を有する断片が得られるように、ＶＨとＶＬドメインとの間に、短いリンカー(約５-１０残基)を持つｓＦｖ断片（前の段落を参照）を構築することにより調製される小型の抗体断片を意味する。二重特異性ダイアボディは２つの「交差」ｓＦｖ断片のヘテロダイマーであり、そこでは２つの抗体のＶＨ及びＶＬドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在する。ダイアボディは、例えば、欧州特許第４０４０９７号；国際公開９３／１１１６１号；及びHollinger等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993)により十分に記載されている。
【０１１０】
非ヒト(例えば齧歯類)抗体の「ヒト化」型とは、非ヒト抗体から得られた最小配列を含むキメラ抗体である。大部分において、ヒト化抗体は、レシピエントの高頻度可変領域の残基が、マウス、ラット、ウサギ又は非ヒト霊長類のような所望の抗体特異性、親和性及び能力を有する非ヒト種(ドナー抗体)の高頻度可変領域の残基によって置換されたヒト免疫グロブリン(レシピエント抗体)である。ある場合には、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域(ＦＲ)残基は、対応する非ヒト残基によって置換される。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見出されない残基を含んでいてもよい。これらの修飾は抗体の特性をさらに洗練するために行われる。一般的に、ヒト化抗体は、全て又はほとんど全ての高頻度可変ループが非ヒト免疫グロブリンのものに一致し、全て又はほとんど全てのＦＲがヒト免疫グロブリン配列である、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含む。ヒト化抗体は、状況に応じて免疫グロブリン定常領域(Ｆｃ)、典型的にはヒトの免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部を含む。さらなる詳細は、Jones等, Nature 321, 522-525(1986)；Riechmann等, Nature 332, 323-329(1988)；及びPresta, Curr. Op. Struct. Biol. 2, 593-596(1992)を参照のこと。
【０１１１】
「種依存性抗体」、例えば哺乳動物抗-ヒトＩｇＥ抗体は、二番目の哺乳動物種からの抗原の相同体に対して有している結合親和性よりも、一番目の哺乳動物種からの抗原に対してより強力な結合親和性を有する抗体である。通常、種依存性抗体は、ヒト抗原（すなわち、約１ｘ１０−７Ｍ以下、好ましくは約１ｘ１０−８以下、最も好ましくは約１ｘ１０−９Ｍ以下の結合親和性（Ｋｄ）値を有する）と「特異的に結合」するが、そのヒト抗原に対する結合親和性よりも、少なくとも約５０倍、又は少なくとも約５００倍、又は少なくとも約１０００倍弱い、二番目の非ヒト哺乳動物種からの抗原の相同体に対する結合親和性を有する。種依存性抗体は、上にて定義した種々の型の抗体のいずれでもあることが可能だが、好ましくはヒト化又はヒト抗体である。
【０１１２】
「ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１結合オリゴペプチド」はここで記載されるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドに好ましくは特異的に結合するオリゴペプチドである。ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１結合オリゴペプチドは、既知のオリゴペプチド合成方法論を用いて化学的に合成することができ、あるいは組み換え技術を用いて調製及び精製することができる。ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１結合オリゴペプチドは通常、少なくとも約５のアミノ酸長であり、或いは少なくとも約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９又は１００のアミノ酸長以上であり、このようなオリゴペプチドはここに記載される様なＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドに対して好ましくは特異的に結合する能力がある。ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１結合オリゴペプチドは、よく知られた技術を用いて過度の実験をすることなしに同定することができる。この点において、ポリペプチド標的に特異的に結合する能力のあるオリゴペプチドのオリゴペプチドライブラリーを検索する技術は当分野でよく知られていることを注記する（例えば、米国特許第５５５６７６２号、同第５７５０３７３号、同第４７０８８７１号、同第４８３３０９２号、同第５２２３４０９号、同第５４０３４８４号、同第５５７１６８９号、同第５６６３１４３号；ＰＣＴ公開第ＷＯ８４／０３５０６号、及びＷＯ８４／０３５６４号；Geysen等, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 81:3998-4002 (1984)；Geysen等, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 82:178-182 (1985)；Geysen等, in Synthetic Peptides as Antigens, 130-149 (1986)；Geysen等, J. Immunol. Meth., 102:259-274 (1987)；Schoofs等, J. Immunol., 140:611-616 (1988), Cwirla,S.E.等(1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:6378；Lowman,H.B.等 (1991) Biochemistry, 30:10832；Clackson,T.等 (1991) Nature, 352:624；Marks,J.D.等 (1991) J. Mol. Biol., 222:581；Kang,A.S.等 (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:8363、及びSmith, G.P. (1991) Current Opin. Biotechnol., 2:668参照）。
【０１１３】
「ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１結合有機分子」とは、ここに記載されるようなＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドに、好ましくは特異的に、結合する、ここに定義されるようなオリゴペプチド又は抗体以外の有機分子である。ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１結合有機分子は既知の方法（例えばＰＣＴ公開第ＷＯ００／００８２３号及びＷＯ００／３９５８５号参照）を用いて同定され、化学的に合成されうる。ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１結合有機分子は通常、約２０００ダルトン未満の大きさであり、あるいは約１５００、７５０、５００、２５０又は２００ダルトン未満の大きさであり、ここに記載されるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドに、好ましくは特異的に結合する能力のあるこのような有機分子は、よく知られた技術を用いて過度の実験をすることなしに同定されうる。この点において、ポリペプチド標的に結合する能力のある分子の有機分子ライブラリーを検索する技術は当該分野でよく知られていることを注記する（例えばＰＣＴ公開第ＷＯ００／００８２３号及びＷＯ００／３９５８５号参照）。
【０１１４】
対象の抗原、例えば腫瘍関連ポリペプチド抗原標的と「結合する」抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子は、その抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子がその抗原を発現している細胞又は組織を標的とする診断及び／又は治療剤として有用であり、他のタンパク質と有意には交差反応しないように十分な親和性でその抗原と結合するものである。そのような実施態様では、抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子の「非標的」タンパク質との結合の程度は、蛍光標示式細胞分取器（ＦＡＣＳ）分析又は放射免疫沈降（ＲＩＡ）によって定量して、その特定の標的タンパク質との抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子の結合の約１０％よりも低い。標的分子への抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子の結合に関して、特定のポリペプチド又は特定のポリペプチド標的上のエピトープと「特異的に結合」又は「特異的に結合する」、又はそれに対して「特異的である」という用語は、非特異的な相互作用とは測定して異なる結合を意味する。特異的な結合は、例えば、一般に結合活性を持たない類似した構造の分子であるコントロール分子の結合性と比較して、分子の結合性を定量することによって測定することができる。例えば、特異的な結合性は、標的、例えば過剰の非標識標的に類似したコントロール分子とも競合にとって定量することができる。この場合、プローブに対する標識標的の結合が過剰の非標識標的によって競合的に阻害されるならば、特異的結合が表示される。ここで使用される特定のポリペプチド又は特定のポリペプチド標的上のエピトープと「特異的に結合」又は「特異的に結合する」、又はそれに対して「特異的である」という用語は、例えば標的に対して少なくとも約１０−４Ｍ、あるいは少なくとも約１０−５Ｍ、あるいは少なくとも約１０−６Ｍ、あるいは少なくとも約１０−７Ｍ、あるいは少なくとも約１０−８Ｍ、あるいは少なくとも約１０−９Ｍ、あるいは少なくとも約１０−１０Ｍ、あるいは少なくとも約１０−１１Ｍ、あるいは少なくとも約１０−１２Ｍ、あるいはそれ以上のＫｄを持つ分子によって示されうる。一実施態様では、「特異的に結合する」という用語は、如何なる他のポリペプチド又はポリペプチドエピトープへ実質的に結合することなく分子が特定のポリペプチド又は特定のポリペプチドのエピトープに結合する結合を意味する。
【０１１５】
「ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを発現する腫瘍細胞の成長を阻害する」抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子、又は「成長阻害」抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子は、適切なＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを発現又は過剰発現する癌細胞の測定可能な程の成長阻害を引き起こすものである。ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドは、癌細胞の表面上に発現される膜貫通ポリペプチドであることができ、癌細胞によって産生され分泌されるポリペプチドであり得る。好ましい成長阻害抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子は、一般的には、試験された抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子で処理されていない腫瘍細胞であるコントロールである、適切なコントロールと比較して、２０％より多く、好ましくは約２０％から約５０％、そしてさらに好ましくは５０％よりも多く（例えば、約５０％から約１００％）でＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１発現腫瘍細胞の成長を阻害する。成長阻害は、細胞培養で約０．１から３０μｇ／ｍｌ又は約０．５ｎＭから２００ｎＭの抗体濃度で測定することができ、抗体への腫瘍細胞の曝露の後、成長阻害を１−１０日で確かめる。インビボでの腫瘍細胞の成長阻害は、種々の方法で決定することができる。約１μｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇ体重の抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体の投与が、最初の抗体の投与から約５日から３ヶ月内、好ましくは約５から３０日内に腫瘍の大きさ又は腫瘍細胞増殖に減少を引き起こす場合、抗体はインビボで成長阻害性である。
【０１１６】
「アポトーシスを誘発する」抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子は、アネキシンＶの結合、ＤＮＡの断片化、細胞収縮、小胞体の拡張、細胞断片化、及び／又は膜小胞の形成(アポトーシス体と呼ばれる)等により決定されるようなプログラム細胞死を誘発するものである。細胞は、通常、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを過剰発現しているものである。好ましくは、細胞は腫瘍細胞、例えば前立腺、乳房、卵巣、胃、子宮内膜、肺、腎臓、結腸、膀胱細胞である。アポトーシスに伴う細胞のイベントを評価するために種々の方法が利用できる。例えば、ホスファチジルセリン(ＰＳ)転位置をアネキシン結合により測定することができ；ＤＮＡ断片化はＤＮＡラダーリングにより評価することができ；ＤＮＡ断片化に伴う細胞核／クロマチン凝結は低二倍体細胞の何らかの増加により評価することができる。好ましくは、アネキシン結合アッセイにおいて、アポトーシスを誘発する抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子は、未処理細胞の約２〜５０倍、好ましくは約５〜５０倍、最も好ましくは約１０〜５０倍のアネキシン結合を誘発するという結果を生じるものである。
抗体の「エフェクター機能」とは、抗体のＦｃ領域（天然配列Ｆｃ領域又はアミノ酸配列変異体Ｆｃ領域）に帰する生物学的活性を意味し、抗体のアイソタイプにより変わる。抗体のエフェクター機能の例には、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞障害；Ｆｃレセプター結合性；抗体依存性細胞媒介性細胞障害(ＡＤＣＣ)；貪食作用；細胞表面レセプター（例えば、Ｂ細胞レセプター）のダウンレギュレーション；及びＢ細胞活性化が含まれる。
【０１１７】
「抗体依存性細胞媒介性細胞障害」又は「ＡＤＣＣ」とは、ある種の細胞障害細胞(例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球及びマクロファージ）上に存在するＦｃレセプター(ＦｃＲｓ)と結合した分泌Ｉｇにより、これらの細胞障害エフェクター細胞が抗原-担持標的細胞に特異的に結合し、続いて細胞毒により標的細胞を死滅させることを可能にする細胞傷害性の形態を意味する。抗体は細胞障害細胞を「備えて」おり、これはこのような死滅には絶対に必要なものである。ＡＤＣＣを媒介する主要な細胞ＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩのみを発現するのに対し、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃＲの発現は、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991) の４６４頁の表３に要約されている。対象の分子のＡＤＣＣ活性をアッセイするために、米国特許第５５００３６２号又は同第５８２１３３７号に記載されているようなインビトロＡＤＣＣアッセイを実施することができる。このようなアッセイにおいて有用なエフェクター細胞には、末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）が含まれる。代わりとして、もしくは付加的に、対象の分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Clynes等, (USA) 95:652-656 (1998)において開示されているような動物モデルにおいて、インビボで評価することが可能である。
【０１１８】
「Ｆｃレセプター」又は「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合するレセプターを記載するものである。好適なＦｃＲは天然配列ヒトＦｃＲである。さらに好適なＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマレセプター）と結合するもので、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスのレセプターを含み、これらのレセプターの対立遺伝子変異体、選択的にスプライシングされた形態のものも含まれる。ＦｃγＲＩＩレセプターには、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性型レセプター」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害型レセプター」）が含まれ、主としてその細胞質ドメインは異なるが、類似のアミノ酸配列を有するものである。活性型レセプターＦｃγＲＩＩＡは、細胞質ドメインにチロシン依存性免疫レセプター活性化モチーフ（immunoreceptor tyrosine-based activation motif ;ＩＴＡＭ）を含んでいる。阻害型レセプターＦｃγＲＩＩＢは、細胞質ドメインにチロシン依存性免疫レセプター阻害性モチーフ（immunoreceptor tyrosine-based inhibition motif ;ＩＴＩＭ）を含んでいる（Daeron, Annu. Rev. immunol. 15:203-234 (1997)を参照）。ＦｃＲsに関しては、 Ravetch and Kinet, Annu.Rev. Immunol. 9:457-492 (1991); Capel等, Immunomethods 4:25-34 (1994); 及びde Haas等, J.Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995) に概説されている。将来的に同定されるものも含む他のＦｃＲsはここでの「ＦｃＲ」という言葉によって包含される。また、該用語には、母性ＩｇＧｓが胎児に受け継がれる要因となっている新生児性レセプターＦｃＲｎ（Guyer等, J. Immunol. 117:587 (1976) Kim等, J. Immunol.24:249 (1994))も含まれる。
【０１１９】
「ヒトエフェクター細胞」とは、一又は複数のＦｃＲｓを発現し、エフェクター機能を実行する白血球のことである。その細胞が少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、ＡＤＣＣエフェクター機能を実行することが望ましい。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例として、末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞傷害性Ｔ細胞及び好中球が含まれるが、ＰＢＭＣとＮＫ細胞が好適である。エフェクター細胞は天然源、例えば血液から単離してもよい。
「補体依存性細胞障害」もしくは「ＣＤＣ」は、補体の存在下で標的を溶解することを意味する。典型的な補体経路の活性化は補体系(Ｃｌｑ)の第１補体が、同族抗原と結合した(適切なサブクラスの)抗体に結合することにより開始される。補体の活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを、例えばGazzano-Santoro等, J. Immunol. Methods 202:163 (1996)に記載されているように実施することができる。
【０１２０】
「癌」及び「癌性」という用語は、典型的には調節されない細胞成長を特徴とする、哺乳動物における生理学的状態を指すか記述する。癌の例には、これらに限定されるものではないが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が含まれる。このような癌のより特定の例には、扁平細胞癌、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌、及び肺の扁平癌腫(squamous carcinoma)を含む）、腹膜癌、肝細胞癌、胃(gastric)又は腹部(stomach)癌（胃腸癌を含む）、膵臓癌、神経膠芽細胞腫、子宮頸管癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、大腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓(kidney)又は腎(renal)癌、肝臓癌、前立腺癌、産卵口癌、甲状腺癌、肝臓癌及び様々なタイプの頭部及び頸部の癌、並びにＢ細胞リンパ腫（低級／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球（ＳＬ）ＮＨＬ；中級／濾胞性ＮＨＬ；中級びまん性ＮＨＬ；高級免疫芽細胞性ＮＨＬ；高級リンパ芽球性ＮＨＬ；高級小非分割細胞ＮＨＬ；バルキー疾患ＮＨＬ；外套細胞リンパ腫；エイズ関連リンパ腫；及びワルデンストロームのマクログロブリン病を含む）；慢性リンパ性白血病(ＣＬＬ)；急性リンパ芽球白血病(ＡＬＬ)；ヘアリー細胞白血病；慢性骨髄芽球性白血病；及び移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）を含む。好ましくは、癌はＩＧＦレセプターを発現する腫瘍、より好ましくは乳癌、肺ガン、結腸直腸癌、又は前立腺癌、更に最も好ましくは乳癌又は前立腺癌である。
【０１２１】
「化学療法剤」は癌の治療に有用な化学的化合物である。化学療法剤の例には、チオテパ及びシクロスホスファミド(CYTOXAN(登録商標))のようなアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファンのようなスルホン酸アルキル類；ベンゾドーパ(benzodopa)、カルボコン、メツレドーパ(meturedopa)、及びウレドーパ(uredopa)のようなアジリジン類；アルトレートアミン(altretamine)、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド(triethylenethiophosphaoramide)及びトリメチローロメラミン(trimethylolomelamine)を含むエチレンイミン類及びメチラメラミン類；アセトゲニン(acetogenins）(特にブラタシン(bullatacin)及びブラタシノン(bullatacinone)）；カンプトセシン(合成類似体トポテカン（topotecan）を含む）；ブリオスタチン；カリスタチン(callystatin）；ＣＣ-１０６５(そのアドゼレシン(adozelesin)、カルゼレシン(carzelesin)及びバイゼレシン(bizelesin）合成類似体を含む）；クリプトフィシン(cryptophycin）(特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン(dolastatin）；デュオカルマイシン(duocarmycin ）（合成類似体、KW-2189及びCBI-TMIを含む）； エレトロビン(eleutherobin）；パンクラチスタチン(pancratistatin）；サルコディクチン(sarcodictyin）；スポンジスタチン(spongistatin）；クロランブシル、クロルナファジン(chlornaphazine)、チョロホスファミド(cholophosphamide)、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン(novembichin)、フェネステリン(phenesterine)、プレドニムスチン(prednimustine)、トロフォスファミド(trofosfamide)、ウラシルマスタード等のナイトロジェンマスタード；ニトロスレアス(nitrosureas)、例えばカルムスチン(carmustine)、クロロゾトシン(chlorozotocin)、フォテムスチン(fotemustine)、ロムスチン(lomustine)、ニムスチン、ラニムスチン；エネジイン(enediyne) 抗生物質等の抗生物質（例えば、カリケアマイシン(calicheamicin)、特にカリケアマイシンガンマ１I及びカリケアマイシンオメガＩ１（例えば、Agnew  Chem Intl. Ed. Engl., 33：183-186(1994)を参照）；ダイネミシンＡ(dynemicinＡ）を含むダイネミシン(dynemicin）；エスペラマイシン(esperamicin）；並びにネオカルチノスタチン発光団及び関連色素蛋白エネジイン(enediyne) 抗生物質発光団）、アクラシノマイシン(aclacinomysins)、アクチノマイシン、オースラマイシン(authramycin)、アザセリン、ブレオマイシン(bleomycins)、カクチノマイシン(cactinomycin)、カラビシン(carabicin)、カルミノマイシン(carminomycin）、カルジノフィリン(carzinophilin)、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン(detorubicin）、６-ジアゾ-５-オキソ-Ｌ-ノルロイシン、ADRIAMYCIN(登録商標)ドキソルビシン (モルフォリノ−ドキソルビシン、シアノモルフォリノ-ドキソルビシン、２-ピロリノ-ドキソルビシン及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン(esorubicin）、イダルビシン、マセロマイシン(marcellomycin）、マイトマイシンＣのようなマイトマイシン(mitomycins）、マイコフェノール酸(mycophenolic acid)、ノガラマイシン(nogalamycin)、オリボマイシン(olivomycins)、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン(potfiromycin)、ピューロマイシン、クエラマイシン(quelamycin)、ロドルビシン(rodorubicin)、ストレプトニグリ���、ストレプトゾシン、ツベルシジン(tubercidin)、ウベニメクス、ジノスタチン(zinostatin)、ゾルビシン(zorubicin)；メトトレキセート及び５-フルオロウラシル(５-ＦＵ）のような抗代謝産物；デノプテリン(denopterin)、メトトレキセート、プテロプテリン(pteropterin)、トリメトレキセート(trimetrexate)のような葉酸類似体；フルダラビン(fludarabine)、６-メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンのようなプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン(azacitidine)、６-アザウリジン(azauridine)、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン(enocitabine)、フロキシウリジン(floxuridine)のようなピリミジン類似体；カルステロン(calusterone)、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン(testolactone)のようなアンドロゲン類；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンのような抗副腎剤；フロリン酸(frolinic acid)のような葉酸リプレニッシャー(replenisher)；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン(amsacrine)；ベストラブシル(bestrabucil)；ビサントレン(bisantrene)；エダトラキセート(edatraxate)；デフォファミン(defofamine)；デメコルシン(demecolcine)；ジアジコン(diaziquone)；エルフォルニチン(elfornithine)；酢酸エリプチニウム(elliptinium acetate)；エポチロン(epothilone)；エトグルシド(etoglucid)；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン(lonidamine)；メイタンシン(maytansine)及びアンサマイトシン(ansamitocin)のようなメイタンシノイド(maytansinoid)；ミトグアゾン(mitoguazone)；ミトキサントロン；モピダモール(mopidamol)；ニトラクリン(nitracrine)；ペントスタチン；フェナメット(phenamet)；ピラルビシン；ロソキサントロン(losoxantrone)；ポドフィリン酸(podophyllinic acid)；２-エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＫＳ(登録商標)多糖複合体（JHS Natural Products, Eugene, OR）；ラゾキサン(razoxane)；リゾキシン(rhizoxin)；シゾフィラン；スピロゲルマニウム(spirogermanium)；テニュアゾン酸(tenuazonic acid)；トリアジコン(triaziquone)；２,２',２''-トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン(trichothecenes)(特にＴ-２トキシン、ベラキュリンＡ(verracurin A)、ロリデンＡ(roridin A)及びアングイデン(anguidine)）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン(mannomustine)；ミトブロニトール；ミトラクトール(mitolactol)；ピポブロマン(pipobroman)；ガシトシン(gacytosine)；アラビノシド（「Ara-C」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えばTAXOL(登録商標)パクリタキセル（Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ）、パクリタキセルのABRAXANETMクレモホール非含有アルブミン操作ナノ粒子製剤(American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois)、及びTAXOTERE(登録商標)ドキセタキセル（Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France）；クロランブシル；GEMZAR(登録商標)ゲンシタビン(gemcitabine)；６-チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；シスプラチン及びカルボプラチンのようなプラチナ類似体；ビンブラスチン；プラチナ；エトポシド(ＶＰ-１６）；イフォスファミド；ミトキサントン；ビンクリスチン；NAVELBINE(登録商標)ビノレルビン；ノバントロン(novantrone)；テニポシド；エダトレキセート(edatrexate)；ダウノマイシン；アミノプテリン；キセローダ(xeloda)；イバンドロ��ート(ibandronate)；ＣＰＴ-１１；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ２０００；ジフルオロメチロールニチン(ＤＭＦＯ)；レチノイン酸のようなレチノイド類；カペシタビン(capecitabine)；及び上述したものの製薬的に許容可能な塩、酸又は誘導体が含まれる。
【０１２２】
また、この定義に含まれるものには、腫瘍でホルモン作用を調節又は阻害するように働く抗ホルモン剤、例えば抗エストロゲン及び選択的エストロゲン受容体調節物質（ＳＥＲＭ）であり、例えば、タモキシフェン（NOLVADEX(登録商標)タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン(raloxifene)、ドロロキシフェン、４-ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン(trioxifene)、ケオキシフェン(keoxifene)、ＬＹ１１７０１８、オナプリストーン(onapristone)、及びFARESTONトレミフェン；副腎のエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば４(５)-イミダゾール、アミノグルテチミド、MEGASE(登録商標)酢酸メゲストロール、AROMASIN(登録商標)エキセメスタン、フォルメスタン、ファドロゾール、RIVISOR(登録商標)ボロゾール、FEMARA(登録商標)レトロゾール、及びARIMIDEX(登録商標)アナストロゾール；及び抗アンドロゲン、例えばフルタミド(flutamide)、ニルタミド(nilutamide)、ビカルタミド、ロイプロリド、及びゴセレリン；並びにトロキサシタビン(troxacitabine)（１,３-ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に付着細胞の増殖に結びつくシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えばＰＫＣ-α、Ｒａｌｆ及びＨ-Ｒａｓ；リボザイム、例えばＶＥＧＦ発現阻害剤（例えば、ANZIOZYME(登録商標)リボザイム）及びＨＥＲ２発現阻害剤；遺伝子治療ワクチン等のワクチン、例えばALLOVECTIN(登録商標)ワクチン、LEUVECTIN(登録商標)ワクチン、及びVAXID(登録商標)ワクチン；PROLEUKIN(登録商標)ｒＩＬ-２；LURTOTECAN(登録商標)トポイソメラーゼＩ阻害剤；ABARELIX(登録商標)rGnRH；及び上記のものの製薬的に許容される塩、酸又は誘導体である。
「細胞増殖性疾患」及び「増殖性疾患」という用語は、ある程度の異常な細胞増殖を伴う疾患を意味する。本発明の一態様では、細胞増殖性疾患は癌である。
ここで用いられる「腫瘍」は、悪性又は良性に関わらず、全ての腫瘍形成細胞成長及び増殖、及び全ての前癌性及び癌性細胞及び組織を意味する。
【０１２３】
「細胞死を誘導する」抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子は、生細胞を生育不能にするものである。細胞は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを発現するもの、好ましくは、同じ組織型の正常細胞と比較してＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを過剰発現する細胞である。ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドは、癌細胞の表面上で発現される膜貫通ポリペプチドであることができ、癌細胞により生成され分泌されるポリペプチドであり得る。好ましくは、その細胞は癌細胞、例えば、乳房、卵巣、胃、子宮内膜、唾液腺、肺、腎臓、結腸、甲状腺、膵臓又は膀胱細胞である。インビトロ細胞死は、抗体依存性細胞媒介細胞障害（ＡＤＣＣ）又は補体依存性障害（ＣＤＣ）によって誘導される細胞死を識別するために、補体及び免疫エフェクター細胞の無い状態で確かめてもよい。従って、細胞死に関するアッセイは、熱不活性化血清（すなわち、補体の無い）を用いて、免疫エフェクター細胞が無い状態でおこなってもよい。抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子が細胞死を誘導するか否かを確かめるために、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）、トリパンブルー（Moore等 Cytotechnology 17: 1-11(1995)）又は７ＡＡＤの取り込みによって評価した膜整合性の損失を、未処理細胞と関連して評価することができる。好ましい細胞死を誘導する抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子は、ＢＴ４７４細胞でのＰＩ取り込みアッセイで、ＰＩ取り込みを誘導するものである。
【０１２４】
ここで用いられているように、「イムノアドヘシン」という用語は、免疫グロブリン定常ドメインのエフェクター機能を持つ異種タンパク質（「アドヘシン」）の結合特異性を付与した抗体様分子を指す。構造的には、イムノアドヘシンは抗体の抗原認識及び結合部位以外の所望の結合特異性を持つアミノ酸配列（即ち「異種」）と免疫グロブリン定常ドメイン配列との融合物である。イムノアドヘシン分子のアドへシン部分は、典型的には少なくともレセプター又はリガンドの結合部位を含む近接アミノ酸配列を含む。イムノアドヘシンの免疫グロブリン定常ドメイン配列は、ＩｇＧ-１、ＩｇＧ-２、ＩｇＧ-３、又はＩｇＧ-４サブタイプ、ＩｇＡ（ＩｇＡ-１及びＩｇＡ-２を含む）、ＩｇＥ、ＩｇＤ又はＩｇＭなどの任意の免疫グロブリンから得ることができる。
「標識」という語は、ここで用いられる場合、「標識化」抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子を作製するために、抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子に直接的又は間接的に結合させる検出可能な化合物又は組成物を意味する。標識はそれ自身によって検出可能でもよく（例えば、放射性同位体標識又は蛍光標識）、あるいは、酵素標識の場合には、検出可能な基質化合物又は組成物の化学的変換を触媒してもよい。
【０１２５】
「複製防止剤」とは、アポトーシス、血管静止、サイトーシス、殺腫瘍、有糸分裂阻害、細胞周期進行のブロック、細胞成長停止、腫瘍への結合、細胞メディエーターとしての作用などのメカニズムを問わず、細胞の複製、機能、及び／又は成長が阻害又は防止されるか、あるいは細胞が破壊される薬剤である。このような薬剤には、化学療法剤、細胞障害剤、サイトカイン、成長阻害剤、又は抗ホルモン剤、例えばタモキシフェン等の抗エストロゲン化合物、オナプリストン（ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎ）等の抗プロゲステロン（ＥＰ６１６８１２参照）、あるいはフルタミド等の抗アンドロゲン、並びにａｒｏｍｉｄａｓｅ阻害薬、マラはアンドロゲンなどのホルモン剤が含まれる。
【０１２６】
ここで用いられる「細胞傷害性剤」という用語は、細胞の機能を阻害又は阻止し及び／又は細胞破壊を生ずる物質を指す。この用語は、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２及びＬｕの放射性同位体）、化学治療薬、例えばメトトレキセート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド類（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン又は他の挿入剤、酵素及びその断片、例えば核溶解性酵素、抗生物質、及び毒素、例えばその断片及び／又は変異体を含む小分子毒素又は細菌、糸状菌、植物又は動物起源の酵素的に活性な毒素、そして下記に開示する種々の抗腫瘍又は抗癌剤を含むように意図されている。他の細胞傷害性薬が下記に記載されている。殺腫瘍性剤は、腫瘍細胞の破壊を引き起こす。
【０１２７】
ここでアンタゴニストと組み合わせて特定の腫瘍型に使用するのに好ましい細胞傷害剤は以下の通りである。
１．前立腺癌：アンドロゲン、ドセタキセル、パクリタキセル、エストラムスチン、ドキソルビシン、ミトキサントロン、ＥｒｂＢ２の細胞外領域内の一領域（例えば、ＥｒｂＢ２の残基２２から残基５８４の領域における一つ以上の任意の残基）と結合する２Ｃ４（WO 01/00245;ハイブリドーマATCC HB 12697）のようなＥｒｂＢ２領域に対する抗体、ＡＶＡＳＴＩＮＴＭ抗血管性内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、ＴＡＲＣＥＶＡＴＭ  ＯＳＩ−７７４（エルロチニブ）（ジェネンテック及びＯＳＩ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、又はその他上皮性成長因子レセプターチロシンキナーゼ阻害薬（ＥＧＦＲ ＴＫＩ類）。
２．胃癌：５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、XELODATMカペシタビン、メトトレキセート、エトポシド、シスプラチン／カルボプラチン、パクリタキセル(pacliitaxel)、ドセタキセル、ゲムシタビン、ドキソルビシン、及びＣＰＴ−１１（カンプトシン(camptothcin)１１；イリノテカン、米国商品名：CAMPTOSAR（登録商標））。
３．膵臓癌：ゲムシタビン、５ＦＵ、XELODATMカペシタビン、ＣＰＴ−１１、ドセタキセル、パクリタキセル、シスプラチン、カルボプラチン、TARCEVATMエルロチニブ及びその他のＥＧＦＲ ＴＫＩ類。
４．結直腸癌：５ＦＵ（XELODATMカペシタビン、ＣＰＴ−１１、オキサリプラチン、AVASTINTM抗ＶＥＧＦ、TARCEVATMエルロチニブ及びその他のＥＧＦＲ ＴＫＩ類、並びに、ＥＧＦＲに結合してＥＧＦのレセプター活性化の開始能及び腫瘍へのシグナル伝達能を遮断する、ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）（ＩＭＣ Ｃ２２５として以前に知られていたもの）ヒト：ネズミ−キメラ化モノクローナル抗体。
５．腎癌：ＩＬ−２、インターフェロンα、AVASTINTM抗ＶＥＧＦ、MEGACETM（メゲストロールアセテート）プロゲスチン、ビンブラスチン、TARCEVATMエルロチニブ及びその他のＥＧＦＲ ＴＫＩ類。
【０１２８】
ここで用いられる際の「成長阻害剤」は、細胞、特にＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１発現癌細胞の成長をインビトロ又はインビボの何れかで阻害する化合物又は組成物を意味する。よって、成長阻害剤は、Ｓ期でＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１発現細胞の割合を有意に減少させるものである。成長阻害剤の例は、細胞周期の進行を（Ｓ期以外の位置で）阻害する薬剤、例えばＧ１停止又はＭ期停止を誘発する薬剤を含む。古典的なＭ期ブロッカーは、ビンカス（ビンクリスチン及びビンブラスチン）、タキサン類、及びトポイソメラーゼＩＩ阻害剤、例えばドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、及びブレオマイシンを含む。またＧ１停止させるこれらの薬剤は、Ｓ期停止にも波及し、例えば、ＤＮＡアルキル化剤、例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキセート、５-フルオロウラシル、及びアラ-Ｃである。更なる情報は、The Molecular Basis of Cancer, Mendelsohn及びIsrael, 編, Chapter 1, 表題「Cell cycle regulation, oncogene, and antineoplastic drugs」, Murakami等, (WB Saunders: Philadelphia, 1995)、特に１３頁に見出すことができる。タキサン類（パクリタキセル及びドセタキセル）は、共にイチイに由来する抗癌剤である。ヨーロッパイチイに由来するドセタキセル（TAXOTERE（登録商標）、ローン・プーラン ローラー）は、パクリタキセル（TAXOL（登録商標）、ブリストル-マイヤー スクウィブ）の半合成類似体である。パクリタキセル及びドセタキセルは、チューブリン二量体から微小管の集合を促進し、細胞の有糸分裂を阻害する結果となる脱重合を防ぐことによって微小管を安定化にする。
「ドキソルビシン」はアントラサイクリン抗生物質である。ドキソルビシンの完全な化学名は、(８Ｓ-シス)-１０-[(３-アミノ-２，３，６-トリデオキシ-α-Ｌ-リキソ-ヘキサピラノシル)オキシ]-７，８，９，１０-テトラヒドロ-６，８，１１-トリヒドロキシ-８-(ヒドロキシアセチル)-１-メトキシ-５，１２-ナフタセンジオンである。
【０１２９】
「サイトカイン」なる用語は、一つの細胞集団から放出され、他の細胞に細胞間メディエータとして作用するタンパク質の一般用語である。このようなサイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン、及び伝統的なポリペプチドホルモンである。サイトカインに含まれるのは、成長ホルモン、例えばヒト成長ホルモン、Ｎ-メチオニルヒト成長ホルモン、及びウシ成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インシュリン；プロインシュリン；レラキシン；プロレラキシン；糖タンパク質ホルモン、例えば濾胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、及び黄体化ホルモン（ＬＨ）；肝臓成長因子；線維芽成長因子；プロラクチン；胎盤ラクトゲン；腫瘍壊死因子-α及び-β；ミューラー阻害因子；マウス生殖腺刺激ホルモン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮成長因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦ-β等の神経成長因子；血小板成長因子；ＴＧＦ-α及びＴＧＦ-β等のトランスフォーミング成長因子（ＴＧＦｓ）；インシュリン様成長因子-Ｉ及びＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘発因子；インターフェロン-α、-β、及び-γ等のインターフェロン；コロニー刺激因子（ＣＳＦｓ）、例えばマクロファージ-ＣＳＦ（Ｍ-ＣＳＦ）；顆粒球-マクロファージ-ＣＳＦ（ＧＭ-ＣＳＦ）；及び顆粒球-ＣＳＦ（Ｇ-ＣＳＦ）；インターロイキン（ＩＬｓ）、例えばＩＬ-１、ＩＬ-１ａ、ＩＬ-２、ＩＬ-３、ＩＬ-４、ＩＬ-５、ＩＬ-６、ＩＬ-７、ＩＬ-８、ＩＬ-９、ＩＬ-１１、ＩＬ-１２；腫瘍壊死因子、例えばＴＮＦ-α及びＴＮＦ-β；及びＬＩＦ及びキットリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子である。ここで用いられる際、用語サイトカインには、天然供給源から、又は組換え細胞培養からのタンパク質、及び天然配列サイトカインの生物学的に活性な等価物が含まれる。
「パッケージ挿入物」という用語は、効能、用途、服用量、投与、配合禁忌及び／又はその治療薬の用途に関する警告についての情報を含む、治療薬の商業的包装を慣習的に含めた指示書を指す。
【０１３０】
「遺伝子」という用語は（ａ）ここに開示されたＤＮＡ配列の少なくとも一つを含む遺伝子；（ｂ）ここに開示されたＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列をコードする任意のＤＮＡ配列及び／又は；（ｃ）ここに開示されたコード化配列の相補鎖にハイブリダイズする任意のＤＮＡ配列を意味する。好ましくは、その用語にはコード化並びに非コード領域が含まれ、好ましくは正常な遺伝子発現に必要な全ての配列を含む。
「ジーンターゲティング」は、ゲノムＤＮＡの断片が哺乳動物細胞中に導入され、その断片が内因性相同配列と共に位置し、それと共に組換えが生じるときに生じる一種の相同組換えを意味する。相同組換えによるジーンターゲティングは特定のゲノム配列を特定の設計の外因性ＤＮＡと置き換えるために組換えＤＮＡ法を用いる。
「相同組換え」という用語は相同ヌクレオチド配列の部位での二つのＤＮＡ分子又は染色分体間のＤＮＡ断片の交換を意味する。
「標的遺伝子」（あるいは「標的遺伝子配列」又は「標的ＤＮＡ配列」と称す）という用語は、相同組換えによって改変されるべき任意の核酸分子、ポリヌクレオチド、又は遺伝子を意味する。標的配列には、インタクトな遺伝子、エキソン又はイントロン、調節遺伝子又は遺伝子間の任意の領域が含まれる。標的遺伝子は個体のゲノムＤＮＡ中に特定の遺伝子又は遺伝子座の一部を含みうる。
【０１３１】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１遺伝子の「破壊」は、ゲノムＤＮＡの断片が内因性相同配列と共に位置し、それと共に組換えが生じるときに生じ、ここで、破壊は天然の遺伝子又はその一部の欠失、又は天然の遺伝子における変異であり、あるいは破壊は天然の遺伝子の機能的不活化である。あるいは、配列破壊は、ジーントラップベクター（つまり、無作為に挿入された導入遺伝子を含み発現する非ヒトトランスジェニック動物；例えば２００２年８月２０日に発行された米国特許第６４３６７０７号を参照）を用いる非特異的挿入不活化によって生じさせることができる。これらの配列破壊又は修飾には、挿入、ミスセンス、フレームシフト、欠失、又は置換、又はＤＮＡ配列の置換(replacement)、又はそれらの任意の組み合わせが含まれうる。挿入には、動物、植物、真菌、昆虫、原核生物、又はウイルス由来でありうる遺伝子全体の挿入が含まれる。破壊は、例えば正常な遺伝子産物を、その生産を部分的に又は完全に阻害することによって、あるいは正常な遺伝子産物の活性を亢進することによって改変することができる。好ましくは、破壊はヌル破壊であり、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１遺伝子の有意な発現がない。
「天然の発現」という用語は、野生型マウスに存在する発現レベルでのＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１遺伝子によってコードされる完全長ポリペプチドの発現を意味する。よって、内因性ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１遺伝子の「天然の発現がない」破壊は、哺乳動物の単細胞、選択された細胞、又は細胞の全ての内因性ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１遺伝子によってコードされるポリペプチドの少なくとも一部の発現の部分的な又は完全な低下を意味する。
【０１３２】
「ノックアウト」という用語は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１遺伝子の破壊を意味し、ここで破壊は、天然の遺伝子の機能的不活化；天然の遺伝子又はその一部の欠失；又は天然の遺伝子の変異を生じる。
「ノックイン」という用語は、特定のヒトＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１コード化遺伝子又はその変異体の任意のものをコードするヒトｃＤＮＡとのマウスのオルソログ（又は他のマウス遺伝子）の置換を意味する（つまり、破壊が天然のヒト遺伝子との天然のマウス遺伝子の置換を生じる）。
「コンストラクト」又は「ターゲティングコンストラクト」という用語は標的組織、細胞株又は動物中に移入されるべき人為的に組み立てられたＤＮＡセグメントを意味する。典型的には、ターゲティングコンストラクトは特定の興味ある遺伝子又は核酸配列、マーカー遺伝子及び適切な制御配列を含む。ここで提供される場合、ターゲティングコンストラクトはＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ターゲティングコンストラクトを含む。「ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ターゲティングコンストラクト」は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１遺伝子の少なくとも一部に相同なＤＮＡ配列を含み、宿主細胞中でＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１遺伝子に破壊を生じさせることができる。
【０１３３】
「トランスジェニック細胞」という用語は、破壊され、改変され、又はジーンターゲティング法によって完全に又は部分的に置換されたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１遺伝子をそのゲノム内に含む細胞を意味する。
「トランスジェニック動物」という用語は、ここに記載された方法又は当該分野でよく知られている他の方法によって、破壊され又はその他の改変がなされ又は変異が施された特定の遺伝子をそのゲノム内に含む動物を意味する。好ましくは、非ヒトトランスジェニック動物は哺乳動物である。より好ましくは、哺乳動物はラット又はマウスのような齧歯類である。また、「トランスジェニック動物」はヘテロ接合体動物（つまり、一つの欠損対立遺伝子と一つの野生型対立遺伝子）又はホモ接合体動物（つまり、二つの欠損対立遺伝子）でありうる。胎仔は動物の定義に入ると考えられる。動物の提供は、交尾によるか又は他の手段によるものであろうと、また胎仔が出産に至ろうと至るまいと、子宮内の胎仔又は胎児の提供を含む。
ここで使用される場合、「選択マーカー」という用語は、遺伝子を持つ細胞だけをある条件下で生存させ及び／又は成長させることを可能にする産物をコードする遺伝子を意味する。例えば、導入されたネオマイシン耐性(Neor)遺伝子を発現する植物及び動物細胞は化合物Ｇ４１８に耐性がある。Neor遺伝子マーカーを持たない細胞はＧ４１８によって殺される。他のポジティブな選択マーカーは当業者に知られており、あるいはその範囲内にある。
ここで使用される「調節する」又は「調節」という用語はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１遺伝子機能、発現、活性、あるいはＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１遺伝子に関連した表現型の減少、阻害、低減、改善、増加又は亢進を意味する。
ここで使用される「改善する」又は「改善」という用語は、異常又は徴候を含む、症状、疾患、障害、又は表現型の減少、低減又は除去を意味する。
「異常」という用語は、病理的症状及び行動観察を含む、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１が関与している任意の疾患、障害、症状、又は表現型を意味する。
【０１３４】
2007518404.tif 000002
2007518404.tif 000003
2007518404.tif 000004
2007518404.tif 000005
2007518404.tif 000006
2007518404.tif 000007
2007518404.tif 000008
2007518404.tif 000009
2007518404.tif 000010
2007518404.tif 000011
2007518404.tif 000012
2007518404.tif 000013
2007518404.tif 000014
2007518404.tif 000015
2007518404.tif 000016
2007518404.tif 000017
2007518404.tif 000018
【０１３５】
2007518404.tif 000019
2007518404.tif 000020
2007518404.tif 000021
2007518404.tif 000022
【０１３６】
ＩＩ．本発明の組成物及び方法
Ａ．完全長ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド
本発明は、本出願でＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドと命名されるポリペプチドをコードする新規に同定され単離されたヌクレオチド配列を提供する。特に下記の実施例でさらに詳細に説明するように、種々のＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードするｃＤＮＡが同定され単離された。別々の発現ラウンドで生成されたタンパク質には異なるＰＲＯ番号が与えられるが、ＵＮＱ番号は全ての与えられたＤＮＡ及びコード化タンパク質に独特であり、変わることはないことを記しておく。しかしながら、単純化のために、本明細書において、ここに開示した全長天然核酸分子にコードされるタンパク質並びに上記のＰＲＯの定義に含まれるさらなる天然相同体及び変異体は、それらの起源又は調製形式に関わらず、「ＰＲＯ」又は「ＰＲＯ／番号」で呼称する。
下記の実施例に開示するように、種々のｃＤＮＡクローンをＡＴＣＣに寄託している。これらのクローンの正確なヌクレオチド配列は、この分野で日常的な方法を用いて寄託されたクローンを配列決定することにより容易に決定することができる。予測されるアミノ酸配列は、ヌクレオチド配列から常套的技量を用いて決定できる。ここに記載したＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド及びコード化核酸について、本出願人は、現時点で入手可能な配列情報と最も良く一致するリーディングフレームであると考えられるものを同定した。
【０１３７】
Ｂ．ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド変異体
ここに記載した完全長天然配列ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドに加えて、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１変異体も調製できると考えられる。ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１変異体は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ ＤＮＡに適当なヌクレオチド変化を導入することにより、あるいは所望のＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを合成することにより調製できる。当業者であれば、グリコシル化部位の数又は位置の変化あるいは膜固着特性の変化などのアミノ酸変化がＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１の翻訳後プロセスを変えうることを理解するであろう。
【０１３８】
天然完全長配列ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１又はここに記載したＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの種々のドメインにおける変異は、例えば、米国特許第５３６４９３４号に記載されている保存的及び非保存的変異についての任意の技術及び指針を用いてなすことができる。変異は、天然配列ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１と比較してＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアミノ酸配列が変化することになるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする一又は複数のコドンの置換、欠失又は挿入であってよい。場合によっては、変異は少なくとも一つのアミノ酸のＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの一又は複数のドメインの任意の他のアミノ酸による置換である。どのアミノ酸残基が所望の活性に悪影響を与えることなく挿入、置換又は欠失されるかの指針は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの配列を、相同性な既知のタンパク質分子のものと比較し、相同性の高い領域になされるアミノ酸配列変化の数を最小にすることによって見出される。アミノ酸置換は、一のアミノ酸の類似した構造及び／又は化学特性を持つ他のアミノ酸での置換、例えばロイシンのセリンでの置換、即ち保存的アミノ酸置換の結果とすることができる。挿入及び欠失は、場合によっては約１から５のアミノ酸の範囲内とすることができる。許容される変異は、配列においてアミノ酸の挿入、欠失又は置換を系統的に作成し、得られた変異体について全長又は成熟天然配列が示す活性を試験することにより決定される。
【０１３９】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド断片がここに提供される。このような断片は、例えば、全長天然タンパク質と比較した際に、Ｎ末端又はＣ末端で切断されてもよく、又は内部残基を欠いていてもよい。或る種の断片は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの所望の生物学的活性に必須ではないアミノ酸残基を欠いている。
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１断片は、多くの一般的な技術の任意のものによって調製されうる。所望のペプチド断片は化学合成されてもよい。代替方法は、酵素的消化、例えば特定のアミノ酸残基によって定められる部位のタンパク質を切断することが知られた酵素でタンパク質を処理することにより、あるいは適当な制限酵素でＤＮＡを消化して所望の断片を単離することによるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１断片の生成を含む。さらに他の好適な技術は、ポリメラーゼ連鎖反応(ＰＣＲ)により、所望のポリペプチド断片をコードするＤＮＡ断片を単離し増幅することを含む。ＤＮＡ断片の所望の末端を定めるオリゴヌクレオチドは、ＰＣＲの５’及び３’プライマーで用いられる。好ましくは、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド断片は、ここに開示した天然ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドと少なくとも一つの生物学的及び／又は免疫学的活性を共有する。
関心ある保存的置換を、好ましい置換との表題で表６に示す。このような置換が生物学的活性の変化をもたらす場合、表６に置換例と命名され、又は以下にアミノ酸分類に関してさらに記載されるような、より実質的な変化が導入され、生成物がスクリーニングされる。
【０１４０】
2007518404.tif 000023
【０１４１】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの機能又は免疫学的同一性の実質的修飾は、(ａ)置換領域のポリペプチド骨格の構造、例えばシート又は螺旋配置、(ｂ)標的部位の分子の電荷又は疎水性、又は(ｃ)側鎖の嵩を維持しながら、それらの効果において実質的に異なる置換基を選択することにより達成される。天然に生じる残基は共通の側鎖特性に基づいてグループ分けすることができる：
アミノ酸はその側鎖の性質における類似性に従ってグループ分けすることができる（ A. L. Lehninger, Biochemistry, ２版, pp. 73-75, Worth Publishers, New York (1975)）：
（１）非極性：Ala (A), Val (V), Leu (L), Ile (I), Pro (P), Phe (F), Trp (W), Met (M)
（２）非荷電極性：Gly (G), Ser (S), Thr (T), Cys c), Tyr (Y), Asn (N), Gln (Q)
（３）酸性：Asp (D), Glu (E)
（４）塩基性：Lys (K), Arg , His(H)
あるいは、天然に生じる残基を共通の側鎖の性質に基づいて分けることができる：
(１)疎水性：ノルロイシン, met, ala, val, leu, ile;
(２)中性の親水性：cys, ser, thr;
(３)酸性：asp, glu;
(４)塩基性：asn, gln, his, lys, arg;
(５)鎖配向に影響する残基：gly, pro; 及び
(６)芳香族：trp, tyr, phe。
非保存的置換は、これらの分類の一つのメンバーを他の分類に交換することを必要とするであろう。また、そのように置換された残基は、保存的置換部位、好ましくは残された(非保存)部位に導入されうる。
【０１４２】
変異は、オリゴヌクレオチド媒介(部位特異的)突然変異誘発、アラニンスキャンニング、及びＰＣＲ突然変異誘発等の当該分野において公知の技術を使用して作成することができる。部位特異的突然変異誘発［Carter等, Nucl. Acids Res., 13: 4331 (1986); Zoller等, Nucl. Acids Res., 10: 6487 (1987)］、カセット突然変異誘発［Wells等, Gene, 34: 315 (1985)］、制限選択突然変異誘発［Wells等, Philos. Trans. R. Soc. London SerA, 317: 415 (1986)］又は他の周知の技術が、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１変異体ＤＮＡを製造するために、クローン化されたＤＮＡに実施できる。
また、隣接配列に沿って一又は複数のアミノ酸を同定するのにスキャンニングアミノ酸分析を用いることができる。好ましいスキャンニングアミノ酸は比較的小さく、中性のアミノ酸である。そのようなアミノ酸は、アラニン、グリシン、セリン、及びシステインを含む。アラニンは、ベータ炭素を越える側鎖を排除し変異体の主鎖構造を変化させにくいので、この群の中で典型的に好ましいスキャンニングアミノ酸である［Cuningham及びWells, Science, 244: 1081-1085 (1989)］。また、アラニンは最もありふれたアミノ酸であるため典型的には好ましい。さらに、それは埋もれた及び露出した位置の両方に見られることが多い［Creighton, The Proteins, (W.H. Freeman &amp; Co., N.Y.); Chothia, J. Mol. Biol., 150: 1 (1976)］。アラニン置換が十分な量の変異体を生じない場合は、アイソテリック(isoteric)アミノ酸を用いることができる。
【０１４３】
Ｃ．ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１の修飾
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの共有結合的修飾は本発明の範囲内に含まれる。共有結合的修飾の一型は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの標的とするアミノ酸残基を、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの選択された側鎖又はＮ又はＣ末端残基と反応できる有機誘導体化試薬と反応させることを含む。二官能性試薬での誘導体化が、例えばＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを水不溶性支持体マトリクスあるいは抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体の精製方法又はその逆で用いるための表面に架橋させるのに有用である。通常用いられる架橋剤は、例えば、１，１-ビス(ジアゾアセチル)-２-フェニルエタン、グルタルアルデヒド、Ｎ-ヒドロキシスクシンイミドエステル、例えば４-アジドサリチル酸、３，３’-ジチオビス(スクシンイミジルプロピオネート)等のジスクシンイミジルエステルを含むホモ二官能性イミドエステル、ビス-Ｎ-マレイミド-１，８-オクタン等の二官能性マレイミド、及びメチル-３-[(ｐ-アジドフェニル)-ジチオ］プロピオイミダート等の試薬を含む。
【０１４４】
他の修飾は、グルタミニル及びアスパラギニル残基の各々対応するグルタミル及びアスパルチル残基への脱アミノ化、プロリン及びリシンのヒドロキシル化、セリル又はトレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リシン、アルギニン、及びヒスチジン側鎖のα-アミノ基のメチル化[T.E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W.H. Freeman & Co., San Francisco, pp.79-86 (1983)]、Ｎ末端アミンのアセチル化、及び任意のＣ末端カルボキシル基のアミド化を含む。
本発明の範囲内に含まれるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの共有結合的修飾の他の型は、ポリペプチドの天然グリコシル化パターンの変更を含む。「天然グリコシル化パターンの変更」とは、この目的で意図されるのは、天然配列ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドに見られる一又は複数の炭水化物部分の欠失(存在するグリコシル化部位の除去又は化学的及び／又は酵素的手段によるグリコシル化の削除のいずれかによる)、及び／又は天然配列ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドに存在しない一又は複数のグリコシル化部位の付加を意味する。さらに、この文節は、存在する種々の炭水化物部分の性質及び特性の変化を含む、天然タンパク質のグリコシル化における定性的変化を含む。
【０１４５】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドへのグリコシル化部位の付加はアミノ酸配列の変更を伴ってもよい。この変更は、例えば、一又は複数のセリン又はトレオニン残基の天然配列ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１(Ｏ-結合グリコシル化部位)への付加、又は置換によってなされてもよい。ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１アミノ酸配列は、場合によっては、ＤＮＡレベルでの変化、特に、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードするＤＮＡを予め選択された塩基において変異させ、所望のアミノ酸に翻訳されるコドンを生成させることを通して変更されてもよい。
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド上に炭水化物部分の数を増加させる他の手段は、グリコシドのポリペプチドへの化学的又は酵素的結合による。このような方法は、この技術分野において、例えば、1987年9月11日に公開されたWO 87/05330、及びAplin及びWriston, CRC Crit. Rev. Biochem., pp. 259-306 (1981)に記載されている。
【０１４６】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド上に存在する炭水化物部分の除去は、化学的又は酵素的に、あるいはグルコシル化の標的として提示されたアミノ酸残基をコードするコドンの変異的置換によってなすことができる。化学的脱グリコシル化技術は、この分野で知られており、例えば、Hakimuddin等, Arch. Biochem. Biophys., 259:52 (1987)により、及びEdge等, Anal. Biochem., 118: 131 (1981)により記載されている。ポリペプチド上の炭水化物部分の酵素的切断は、Thotakura等, Meth. Enzymol. 138:350 (1987)に記載されているように、種々のエンド及びエキソグリコシダーゼを用いることにより達成される。
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの共有結合的修飾の他の型は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリぺプチドの、種々の非タンパク質様ポリマー、例えばポリエチレングリコール(PEG)、ポリプロピレングリコール、又はポリオキシアルキレンの一つへの、米国特許第４６４０８３５号；第４４９６６８９号；第４３０１１４４号；第４６７０４１７号；第４７９１１９２号又は第４１７９３３７号に記載された方法での結合を含む。
また、本発明のＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドは、他の異種ポリペプチド又はアミノ酸配列に融合したＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを含むキメラ分子を形成する方法で修飾してもよい。
【０１４７】
このようなキメラ分子は、抗タグ抗体が選択的に結合できるエピトープを提供するタグポリペプチドとＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドとの融合を含む。エピトープタグは、一般的にはＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアミノ又はカルボキシル末端に位置する。このようなＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのエピトープタグ形態の存在は、タグポリペプチドに対する抗体を用いて検出することができる。また、エピトープタグの提供は、抗-タグ抗体又はエピトープタグに結合する他の型の親和性マトリクスを用いたアフィニティ精製によってＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを容易に精製できるようにする。種々のタグポリペプチド及びそれら各々の抗体はこの分野で良く知られている。例としては、ポリ-ヒスチジン(poly-his)又はポリ-ヒスチジン-グリシン(poly-his-gly)タグ；flu HAタグポリペプチド及びその抗体１２ＣＡ５［Field等, Mol. Cell. Biol., 8:2159-2165 (1988)］；c-mycタグ及びそれに対する８Ｆ９、３Ｃ７、６Ｅ１０、Ｇ４、Ｂ７及び９Ｅ１０抗体［Evan等, Molecular and Cellular Biology, 5:3610-3616 (1985)］；及び単純ヘルペスウイルス糖タンパク質Ｄ(gD)タグ及びその抗体［Paborsky等, Protein Engineering, 3(6):547-553 (1990)］を含む。他のタグポリペプチドは、フラッグペプチド［Hopp等, BioTechnology, 6:1204-1210 (1988)］；ＫＴ３エピトープペプチド［Martin等, Science, 255:192-194 (1992)］；α-チューブリンエピトープペプチド［Skinner等, J. Biol. Chem., 266:15163-15166 (1991)］；及びＴ７遺伝子１０タンパク質ペプチドタグ［Lutz-Freyermuth等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:6393-6397 (1990)］を含む。
キメラ分子はＰＲＯの免疫グロブリン又は免疫グロブリンの特定領域との融合体を含んでもよい。キメラ分子の二価形態(「イムノアドヘシン」とも呼ばれる)については、そのような融合体はＩｇＧ分子のＦｃ領域であり得る。Ｉｇ融合体は、好ましくはＩｇ分子内の少なくとも一つの可変領域に換えてＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの可溶化(膜貫通ドメイン欠失又は不活性化)形態を含む。特に好ましい実施態様では、免疫グロブリン融合体は、ＩｇＧ１分子のヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３、又はヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３領域を含む。免疫グロブリン融合体の製造については、１９９５年６月２７日発行の米国特許第５４２８１３０号を参照のこと。
【０１４８】
Ｄ．ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの調製
以下の説明は、主として、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１核酸を含むベクターで形質転換又は形質移入された細胞を培養することによりＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを生産する方法に関する。もちろん、当該分野においてよく知られている他の方法を用いてＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを調製することができると考えられる。例えば、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１配列、又はその一部は、固相技術を用いた直接ペプチド合成によって生産してもよい［例えば、Stewart等, Solid-Phase Peptide Synthesis, W.H. Freeman Co., San Francisco, CA (1969)；Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85:2149-2154 (1963)参照］。手動技術又は自動によるインビトロタンパク質合成を行ってもよい。自動合成は、例えば、アプライド・バイオシステムズ・ペプチド合成機(Foster City, CA)を用いて、製造者の指示により実施してもよい。ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの種々の部分は、別々に化学的に合成され、化学的又は酵素的方法を用いて結合させて完全長ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを生産してもよい。
【０１４９】
１．ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードするＤＮＡの単離
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードするＤＮＡは、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ｍＲＮＡを保有していてそれを検出可能なレベルで発現すると考えられる組織から調製されたｃＤＮＡライブラリーから得ることができる。従って、ヒトＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ＤＮＡは、実施例に記載されるように、ヒトの組織から調製されたｃＤＮＡライブラリーから簡便に得ることができる。またＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１-コード化遺伝子は、ゲノムライブラリーから又は公知の合成方法(例えば、自動化核酸合成)により得ることもできる。
ライブラリーは、関心ある遺伝子あるいはその遺伝子によりコードされるタンパク質を同定するために設計されたプローブ(ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドに対する抗体又は少なくとも約２０−８０塩基のオリゴヌクレオチド等)によってスクリーニングできる。選択されたプローブによるｃＤＮＡ又はゲノムライブラリーのスクリーニングは、例えばSambrook等, Molecular Cloning: A Laboratory Manual(New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)に記載されている標準的な手順を使用して実施することができる。ＰＲＯポリペプチドをコードする遺伝子を単離する他の方法はＰＣＲ法を使用するものである［Sambrook等,上掲；Dieffenbach等, PCR Primer：A Laboratory Manual(Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1995)］。
【０１５０】
下記の実施例には、ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニング技術を記載している。プローブとして選択されたオリゴヌクレオチド配列は、充分な長さで、疑陽性が最小化されるよう充分に明瞭でなければならない。オリゴヌクレオチドは、スクリーニングされるライブラリー内のＤＮＡとのハイブリッド形成時に検出可能であるように標識されていることが好ましい。標識化の方法は当該分野において良く知られており、３２Ｐ標識されたＡＴＰのような放射線標識、ビオチン化あるいは酵素標識の使用が含まれる。中程度の厳密性及び高度の厳密性を含むハイブリッド形成条件は、上掲のSambrook等に与えられている。
このようなライブラリースクリーニング法において同定された配列は、Genbank等の公共データベース又は個人の配列データベースに寄託され公衆に利用可能とされている周知の配列と比較及びアラインメントすることができる。分子の決定された領域内又は全長に渡っての(アミノ酸又はヌクレオチドレベルのいずれかでの)配列同一性は、この分野で知られた、そしてここに記載した方法を用いて決定することができる。
タンパク質コード配列を有する核酸は、初めてここで開示された推定アミノ酸配列を使用し、また必要ならば、ｃＤＮＡに逆転写されなかったｍＲＮＡの生成中間体及び先駆物質を検出する上掲のSambrook等に記述されているような従来のプライマー伸展法を使用し、選択されたｃＤＮＡ又はゲノムライブラリーをスクリーニングすることにより得られる。
【０１５１】
２．宿主細胞の選択及び形質転換
宿主細胞を、ここに記載したＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド生産のための発現又はクローニングベクターで形質移入又は形質転換し、プロモーターを誘導し、形質転換体を選択し、又は所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために適当に変性された常套的栄養培地で培養する。培養条件、例えば培地、温度、ｐＨ等々は、過度の実験をすることなく当業者が選ぶことができる。一般に、細胞培養の生産性を最大にするための原理、プロトコール、及び実用技術は、Mammalian Cell Biotechnology: a Practical Approach, M.Butler編 (IRL Press, 1991)及びSambrook等, 上掲に見出すことができる。
原核生物細胞形質移入及び真核生物細胞形質転換の方法、例えば、ＣａＣｌ２、ＣａＰＯ４、リポソーム媒介及びエレクトロポレーションは当業者に知られている。用いられる宿主細胞に応じて、その細胞に対して適した標準的な方法を用いて形質転換はなされる。前掲のSambrook等に記載された塩化カルシウムを用いるカルシウム処理又はエレクトロポレーションが、一般的に原核生物に対して用いられる。アグロバクテリウム・トゥメファシエンスによる感染が、Shaw等, Gene, 23:315 (1983)及び１９８９年６月２９日公開のＷＯ  ８９／０５８５９に記載されているように、或る種の植物細胞の形質転換に用いられる。このような細胞壁のない哺乳動物の細胞に対しては、Graham及びvan der Eb, Virology, 52:456-457 (1978)のリン酸カルシウム沈降法を使用することができる。哺乳動物細胞の宿主系形質転換の一般的な態様は米国特許第４３９９２１６号に記載されている。酵母菌中への形質転換は、典型的には、Van Solingen等, J. Bact., 130:946 (1977)及びHsiao等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76:3829 (1979)の方法に従って実施される。しかしながら、ＤＮＡを細胞中に導入する他の方法、例えば、核マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、無傷の細胞、又はポリカチオン、例えばポリブレン、ポリオルニチン等を用いる細菌プロトプラスト融合もまた用いることもできる。哺乳動物細胞を形質転換するための種々の技術については、Keown等, Methods in Enzymology, 185:527-537 (1990)及び Mansour等, Nature, 336:348-352 (1988)を参照のこと。
【０１５２】
ここに記載のベクターにＤＮＡをクローニングあるいは発現するために適切な宿主細胞は、原核生物、酵母菌、又は高等真核生物細胞である。適切な原核生物は、限定するものではないが、真正細菌、例えばグラム陰性又はグラム陽性生物体、例えば大腸菌のような腸内細菌科を含む。種々の大腸菌株が公衆に利用可能であり、例えば、大腸菌Ｋ１２株ＭＭ２９４(ATCC31,446)；大腸菌Ｘ１７７６(ATCC31,537)；大腸菌株Ｗ３１１０(ATCC27,325)及びＫ５７７２(ATCC53,635)である。他の好ましい原核動物宿主細胞は、大腸菌、例えば、E. coli、エンテロバクター、エルビニア(Erwinia)、クレブシエラ(Klebsiella)、プロテウス(Proteus)、サルモネラ、例えば、ネズミチフス菌、セラチア、例えば、セラチアマルセサンス(Serratia marcescans) 、及び赤痢菌、並びに桿菌、例えばバシリスブチリス(B. subtilis)及びバシリリチェニフォルミス(B. licheniformis)(例えば、1989年4月12日発行のDD 266,710に記載されたバシリリチェニフォルミス４１Ｐ)、シュードモナス、例えば緑膿筋及びストレプトマイセスなどの腸内細菌科を含む。これらの例は限定ではなく例示である。株Ｗ３１１０は、組換えＤＮＡ生産発行のための共通の宿主株であるので一つの特に好ましい宿主又は親宿主である。好ましくは、宿主細胞は最小量のタンパク質分解酵素を分泌する。例えば、株Ｗ３１１０は、細胞に外来のタンパク質をコードする遺伝子における遺伝子変異をするように修飾してもよく、そのような宿主の例としては、完全な遺伝子型ｔｏｎＡを有する大腸菌Ｗ３１１０株１Ａ２；完全な遺伝子型ｔｏｎＡ  ｐｔｒ３を有する大腸菌Ｗ３１１０株９Ｅ４；完全な遺伝子型ｔｏｎＡ  ｐｒｔ３  ｐｈｏＡ  Ｅ１５  (ａｒｇＦ-ｌａｃ)１６９  ｄｅｇＰ  ｏｍｐＴ ｋａｎrを有する大腸菌Ｗ３１１０株２７Ｃ７(ATCC 55,244)；完全な遺伝子型ｔｏｎＡ  ｐｔｒ３  ｐｈｏＡ  Ｅ１５  (ａｌｇＦ-ｌａｃ)１６９  ｄｅｇＰ  ｏｍｐＴ  ｒｂｓ７ｉｌｖＧｋａｎｒを有する大腸菌Ｗ３１１０株３７Ｄ６；非カナマイシン耐性ｄｅｇＰ欠失変異を持つ３７Ｄ６株である大腸菌Ｗ３１１０株４０Ｂ４；及び1990年8月7日発行の米国特許第4,946,783号に開示された変異周辺質プロテアーゼを有する大腸菌株を含む。あるいは、クローニングのインビトロ法、例えばＰＣＲ又は他の核酸ポリメラーゼ反応が好ましい。
【０１５３】
原核生物に加えて、糸状菌又は酵母菌のような真核微生物は、ＰＲＯポリペプチドコード化ベクターのための適切なクローニング又は発現宿主である。サッカロミセス・セレヴィシアは、通常用いられる下等真核生物宿主微生物である。他に、シゾサッカロミセスプロンブ(Schizosaccharomyces prombe)(Beach及びNurse, Nature, 290: 140 [1981]; 1985年5月2日公開のEP 139,383)；クルベロミセスホスツ(Kluveromyces hosts)(米国特許第4,943,529号; Fleer等, Bio/Technology, 9: 968-975 (1991))、例えばケー・ラクチス(K. lactis)(MW98-8C, CBS683, CBS4574; Louvencourt等, J. Bacteriol. 154(2): 737-742 [1983])、ケー・フラギリス(K. fragilis)(ATCC 12,424)、ケー・ブルガリクス(K. bulgaricus)(ATCC 16,045)、ケー・ウィケラミイ(K. wickeramii)(ATCC 24,178)、ケー・ワルチイ(K. waltii)(ATCC 56,500)、ケー・ドロソフィラルム(K. drosophilarum)(ATCC 36,906; Van den Berg等, Bio/Technology, 8: 135 (1990))、ケー・テモトレランス(K. themotolerans)及びケー・マルキシアナス(K. marxianus)；ヤロウィア(yarrowia)(EP 402,226)；ピッチャパストリス(Pichia pastoris)(EP 183,070; Sheekrishna等, J. Basic Microbiol, 28: 265-278 [1988])；カンジダ；トリコデルマレーシア(reesia)(EP 244,234)；アカパンカビ(Case等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76: 5259-5263 [1979])；シュワニオマイセス(schwanniomyces)、例えばシュワニオマイセスオクシデンタリス(occidentalis)(1990年10月31日公開のEP 394,538)；及び糸状真菌、例えば、ニューロスポラ、ペニシリウム、トリポクラジウム(Tolypocladium)(1991年1月10日公開のWO 91/00357)；及びコウジ菌、例えば偽巣性コウジ菌(Ballance等, Biochem. Biophys. Res. Commun., 112: 284-289 [1983]; Tilburn等, Gene, 26: 205-221 [1983]; Yelton等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 1470-1474 [1984])及びクロカビ(Kelly及びHynes, EMBO J., 4: 475-479 [1985])が含まれる。ここで好ましいメチロトロピック(methylotropic)酵母は、これらに限られないが、ハンセヌラ(Hansenula)、カンジダ、クロエケラ(Kloeckera)、ピチア(Pichia)、サッカロミセス、トルロプシス(Torulopsis)、及びロドトルラ(Rhodotorula)からなる属から選択されるメタノールで成長可能な酵母を含む。この酵母の分類の例示である特定の種のリストは、C. Anthony, The Biochemistry of Methylotrophs, 269 (1982)に記載されている。
【０１５４】
グリコシル化ＰＲＯの発現に適切な宿主細胞は、多細胞生物から誘導される。無脊椎動物細胞の例としては、ショウジョウバエＳ２及びスポドスペラＳｆ９等の昆虫細胞並びに植物細胞が含まれる。有用な哺乳動物宿主株化細胞の例は、チャイニーズハムスター卵巣(ＣＨＯ)及びＣＯＳ細胞を含む。多くの特異的な例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株 (COS-7, ATCC CRL 1651);ヒト胚腎臓株(293又は懸濁培養での増殖のためにサブクローン化された293細胞、Graham等, J. Gen Virol., 36:59 (1977));チャイニーズハムスター卵巣細胞／-ＤＨＦＲ(CHO, Urlaub及びChasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216 (1980));マウスのセルトリ細胞(TM4, Mather, Biol. Reprod., 23:243-251 (1980))ヒト肺細胞 (W138, ATCC CCL 75); ヒト肝細胞 (Hep G2, HB 8065); 及びマウス乳房腫瘍細胞 (MMT 060562, ATTC CCL51)を含む。適切な宿主細胞の選択は、この分野の技術常識内にある。
【０１５５】
３．複製可能なベクターの選択及び使用
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする核酸(例えば、ｃＤＮＡ又はゲノムＤＮＡ)は、クローニング(ＤＮＡの増幅)又は発現のために複製可能なベクター内に挿入される。様々なベクターが公的に入手可能である。ベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルス粒子、又はファージの形態とすることができる。適切な核酸配列が、種々の手法によってベクターに挿入される。一般に、ＤＮＡはこの分野で周知の技術を用いて適当な制限エンドヌクレアーゼ部位に挿入される。ベクター成分としては、一般に、これらに制限されるものではないが、一又は複数のシグナル配列、複製開始点、一又は複数のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、及び転写終結配列を含む。これらの成分の一又は複数を含む適当なベクターの作成には、当業者に知られた標準的なライゲーション技術を用いる。
【０１５６】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドは直接的に組換え手法によって生産されるだけではなく、シグナル配列あるいは成熟タンパク質あるいはポリペプチドのＮ-末端に特異的切断部位を有する他のポリペプチドである異種性ポリペプチドとの融合ペプチドとしても生産される。一般に、シグナル配列はベクターの成分であるか、ベクターに挿入されるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１-コード化ＤＮＡの一部である。シグナル配列は、例えばアルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、ｌｐｐあるいは熱安定性エンテロトキシンIIリーダーの群から選択される原核生物シグナル配列であってよい。酵母の分泌に関しては、シグナル配列は、酵母インベルターゼリーダー、α因子リーダー(酵母菌属(Saccharomyces)及びクルイベロマイシス(Kluyveromyces)α因子リーダーを含み、後者は米国特許第5,010,182号に記載されている)、又は酸ホスフォターゼリーダー、白体(C.albicans)グルコアミラーゼリーダー(1990年4月4日公開のEP362179)、又は1990年11月15日に公開されたWO 90/13646に記載されているシグナルであり得る。哺乳動物細胞の発現においては、哺乳動物シグナル配列は、同一あるいは関連ある種の分泌ポリペプチド由来のシグナル配列並びにウイルス分泌リーダーのようなタンパク質の直接分泌に使用してもよい。
【０１５７】
発現及びクローニングベクターは共に一又は複数の選択された宿主細胞においてベクターの複製を可能にする核酸配列を含む。そのような配列は多くの細菌、酵母及びウイルスに対してよく知られている。プラスミドｐＢＲ３２２に由来する複製開始点は大部分のグラム陰性細菌に好適であり、２μプラスミド開始点は酵母に適しており、様々なウイルス開始点(ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、ＶＳＶ又はＢＰＶ)は哺乳動物細胞におけるクローニングベクターに有用である。
発現及びクローニングベクターは、典型的には、選択性マーカーとも称される選択遺伝子を含む。典型的な選択遺伝子は、(a)アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキセートあるいはテトラサイクリンのような抗生物質あるいは他の毒素に耐性を与え、(b)栄養要求性欠陥を補い、又は(c)例えばバシリに対する遺伝子コードＤ-アラニンラセマーゼのような、複合培地から得られない重要な栄養素を供給するタンパク質をコードする。
哺乳動物細胞に適切な選べるマーカーの例は、ＤＨＦＲあるいはチミジンキナーゼのように、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１-コード化核酸を取り込むことのできる細胞成分を同定することのできるものである。野生型ＤＨＦＲを用いた場合の好適な宿主細胞は、Urlaub 等により, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216 (1980)に記載されているようにして調製され増殖されたＤＨＦＲ活性に欠陥のあるＣＨＯ株化細胞である。酵母菌中での使用に好適な選択遺伝子は酵母プラスミドＹＲｐ７に存在するｔｒｐ１遺伝子である［Stinchcomb等, Nature, 282：39(1979)；Kingman等, Gene, 7：141(1979)；Tschemper等, Gene, 10：157(1980)］。ｔｒｐ１遺伝子は、例えば、ＡＴＣＣ番号４４０７６あるいはＰＥＰ４-１のようなトリプトファン内で成長する能力を欠く酵母菌の突然変異株に対する選択マーカーを提供する［Jones, Genetics, 85:12 (1977)］。
【０１５８】
発現及びクローニングベクターは、通常、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１-コード化核酸配列に作用可能に結合し、ｍＲＮＡ合成を制御するプロモーターを含む。種々の可能な宿主細胞により認識されるプロモーターが知られている。原核生物宿主での使用に好適なプロモーターはβ-ラクタマーゼ及びラクトースプロモーター系［Cahng等, Nature, 275:615 (1978)；Goeddel等, Nature, 281:544 (1979)］、アルカリホスファターゼ、トリプトファン(trp)プロモーター系［Goeddel, Nucleic Acids Res., 8:4057 (1980); EP 36,776］、及びハイブリッドプロモーター、例えばｔａｃプロモーター［deBoer 等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80:21-25 (1983)］を含む。細菌系で使用するプロモータもまたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードするＤＮＡと作用可能に結合したシャイン・ダルガーノ(S.D.)配列を有する。
酵母宿主と共に用いて好適なプロモーター配列の例としては、３-ホスホグリセラートキナーゼ［Hitzeman 等, J. Biol. Chem., 255:2073 (1980)］又は他の糖分解酵素［Hess 等, J. Adv. Enzyme Reg., 7:149 (1968)；Holland, Biochemistry, 17：4900(1978)］、例えばエノラーゼ、グリセルアルデヒド-３-リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、グルコース-６-リン酸イソメラーゼ、３-ホスホグリセレートムターゼ、ピルビン酸キナーゼ、トリオセリン酸イソメラーゼ、ホスホグルコースイソメラーゼ、及びグルコキナーゼが含まれる。
【０１５９】
他の酵母プロモーターとしては、成長条件によって転写が制御される付加的効果を有する誘発的プロモーターであり、アルコールデヒドロゲナーゼ２、イソチトクロムＣ、酸ホスファターゼ、窒素代謝と関連する分解性酵素、メタロチオネイン、グリセルアルデヒド-３-リン酸デヒドロゲナーゼ、及びマルトース及びガラクトースの利用を支配する酵素のプロモーター領域がある。酵母菌での発現に好適に用いられるベクターとプロモータはＥＰ７３６５７に更に記載されている。
哺乳動物の宿主細胞におけるベクターからのＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１転写は、例えば、ポリオーマウィルス、伝染性上皮腫ウィルス(1989年7月5日公開のUK 2,211,504)、アデノウィルス(例えばアデノウィルス２)、ウシ乳頭腫ウィルス、トリ肉腫ウィルス、サイトメガロウィルス、レトロウィルス、Ｂ型肝炎ウィルス及びサルウィルス４０(SV40)のようなウィルスのゲノムから得られるプロモーター、異種性哺乳動物プロモーター、例えばアクチンプロモーター又は免疫グロブリンプロモーター、及び熱衝撃プロモーターから得られるプロモーターによって、このようなプロモーターが宿主細胞系に適合し得る限り制御される。
より高等の真核生物による所望のＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードするＤＮＡの転写は、ベクター中にエンハンサー配列を挿入することによって増強され得る。エンハンサーは、通常は約１０から３００塩基対で、プロモーターに作用してその転写を増強するＤＮＡのシス作動要素である。哺乳動物遺伝子由来の多くのエンハンサー配列が現在知られている(グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α-フェトプロテイン及びインスリン)。しかしながら、典型的には、真核細胞ウィルス由来のエンハンサーが用いられるであろう。例としては、複製起点の後期側のＳＶ４０エンハンサー(１００-２７０塩基対)、サイトメガロウィルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー及びアデノウィルスエンハンサーが含まれる。エンハンサーは、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１コード配列の５’又は３’位でベクター中にスプライシングされ得るが、好ましくはプロモーターから５’位に位置している。
【０１６０】
また真核生物宿主細胞(酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒト、又は他の多細胞生物由来の有核細胞)に用いられる発現ベクターは、転写の終結及びｍＲＮＡの安定化に必要な配列も含む。このような配列は、真核生物又はウィルスのＤＮＡ又はｃＤＮＡの通常は５’、時には３’の非翻訳領域から取得できる。これらの領域は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードするｍＲＮＡの非翻訳部分にポリアデニル化断片として転写されるヌクレオチドセグメントを含む。
組換え脊椎動物細胞培養でのＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの合成に適応化するのに適切な他の方法、ベクター及び宿主細胞は、Gething等, Nature, 293:620-625 (1981); Mantei等, Nature, 281:40-46 (1979); EP 117,060; 及びEP 117,058に記載されている。
【０１６１】
４．遺伝子増幅／発現の検出
遺伝子増幅及び／又は発現は、ここで提供された配列に基づき、適切に標識されたプローブを用い、例えば一般的なサザンブロット法、ｍＲＮＡの転写を定量化するノーザンブロット法［Thomas, Proc. Natl. Acad. Sci. USA,77:5201-5205 (1980)］、ドットブロット法(ＤＮＡ分析)、又はインサイツハイブリッド形成法によって、直接的に試料中で測定することができる。あるいは、ＤＮＡ二本鎖、ＲＮＡ二本鎖及びＤＮＡ-ＲＮＡハイブリッド二本鎖又はＤＮＡ-タンパク二本鎖を含む、特異的二本鎖を認識することができる抗体を用いることもできる。ついで、抗体を標識し、アッセイを実施することができ、ここで二本鎖は表面に結合していて、その結果、二本鎖の表面での形成の時点でその二本鎖に結合した抗体の存在を検出することができる。
あるいは、遺伝子の発現は、遺伝子産物の発現を直接的に定量する免疫学的な方法、例えば細胞又は組織切片の免疫組織化学的染色及び細胞培養又は体液のアッセイによって、測定することもできる。試料液の免疫組織化学的染色及び／又はアッセイに有用な抗体は、モノクローナルでもポリクローナルでもよく、任意の哺乳動物で調製することができる。簡便には、抗体は、天然配列ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドに対して、又はここで提供されるＤＮＡ配列をベースとした合成ペプチドに対して、又はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ＤＮＡに融合し特異的抗体エピトープをコードする外因性配列に対して調製され得る。
【０１６２】
５．ポリペプチドの精製
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの形態は、培地又は宿主細胞の溶菌液から回収することができる。膜結合性であるならば、適切な洗浄液(例えばトリトン-Ｘ１００)又は酵素的切断を用いて膜から引き離すことができる。ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの発現に用いられる細胞は、凍結融解サイクル、超音波処理、機械的破壊、又は細胞溶解剤などの種々の化学的又は物理的手段によって破壊することができる。
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを、組換え細胞タンパク又はポリペプチドから精製することが望ましい。適切な精製手順の例である次の手順により精製される：すなわち、イオン交換カラムでの分画；エタノール沈殿；逆相ＨＰＬＣ；シリカ又はカチオン交換樹脂、例えばＤＥＡＥによるクロマトグラフィー；クロマトフォーカシング；ＳＤＳ-ＰＡＧＥ；硫酸アンモニウム沈殿；例えばセファデックスＧ-７５を用いるゲル濾過；ＩｇＧのような汚染物を除くプロテインＡセファロースカラム；及びＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのエピトープタグ形態を結合させる金属キレート化カラムである。様々なタンパク質精製方法を用いることができ、そのような方法は、例えばDeutcher, Methodes in Enzymology, 182 (1990)；Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, Springer-Verlag, New York (1982)に記載されている。選ばれる精製過程は、例えば、用いられる生産方法及び特に生産される特定のＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの性質に依存する。
【０１６３】
Ｅ．ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの用途
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（又はそれらの補体鎖）は、ハイブリダイゼーションプローブとしての使用を含む分子生物学の分野において、染色体及び遺伝子マッピングにおいて、及びアンチセンスＲＮＡ及びＤＮＡの生成において種々の用途を有している。また、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１核酸も、ここに記載される組換え技術によるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの調製に有用である。
【０１６４】
完全長天然配列ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１遺伝子又はその一部は、完全長ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１cＤＮＡの単離又は天然ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１配列に対して所望の配列同一性を持つ更に他のcＤＮＡ（例えば、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの自然発生変異体又は他の種からのＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードするもの）の単離のためのcＤＮＡライブラリー用のハイブリダイゼーションプローブとして使用できる。場合によっては、プローブの長さは約２０〜約５０塩基である。ハイブリダイゼーションプローブは、少なくとも部分的には、完全長天然ヌクレオチド配列の新規な領域から誘導してもよく、それらの領域は、過度の実験をすることなく、又は天然配列ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１のプロモーター、エンハンサー成分及びイントロンを含むゲノム配列から決定され得る。例えば、スクリーニング法は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１遺伝子のコード化領域を既知のＤＮＡ配列を用いて単離して約４０塩基の選択されたプローブを合成することを含む。ハイブリダイゼーションプローブは、３２Ｐ又は３５Ｓ等の放射性ヌクレオチド、又はアビジン／ビオチン結合系を介してプローブに結合したアルカリホスファターゼ等の酵素標識を含む種々の標識で標識されうる。本発明のＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１遺伝子に相補的な配列を有する標識されたプローブは、ヒトcＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ又はｍＲＮＡのライブラリーをスクリーニングし、そのライブラリーの何れのメンバーがプローブにハイブリッド形成するかを決定するのに使用できる。ハイブリダイゼーション技術は、以下の実施例において更に詳細に記載する。
【０１６５】
本出願で開示する任意のＥＳＴ配列は、同様に、ここに記載した方法でプローブとして用いることができる。
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１核酸の他の有用な断片は、標的ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ｍＲＮＡ（センス）又はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ＤＮＡ（アンチセンス）配列に結合できる一本鎖核酸配列（ＲＮＡ又はＤＮＡのいずれか）を含むアンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドを含む。アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドは、本発明によると、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ＤＮＡのコード化領域の断片を含む。このような断片は、一般的には少なくとも約１４ヌクレオチド、好ましくは約１４から３０ヌクレオチドを含む。与えられたタンパク質をコードするcＤＮＡ配列に基づく、アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドを制御する能力は、例えば、Stein及びCohen（Cancer Res. 48: 2659: 1988）及び van der Krolら,（BioTechniques 6: 958, 1988）に記載されている。
アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドの標的核酸配列への結合は二重鎖の形成をもたらし、それは、二重鎖の分解の促進、転写又は翻訳の中途での停止を含む幾つかの方法の一つ、又は他の方法により、標的配列の転写又は翻訳を阻止する。よって、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１の発現を阻止するのに用いられる。アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドは、修飾糖−ホスホジエステル骨格（又は他の糖結合、ＷＯ９１／０６６２９に記載のもの等）を有するオリゴヌクレオチドをさらに含み、そのような糖結合は内因性ヌクレアーゼ耐性である。そのような耐性糖結合を持つオリゴヌクレオチドは、インビボで安定であるが（即ち、酵素分解に耐えうるが）、標的ヌクレオチド配列に結合できる配列特異性は保持している。
【０１６６】
センス又はアンチセンスオリゴヌクレオチドの他の例は、ＷＯ９０／１００４８に記載されているもののような、有機部分、及びオリゴヌクレオチドの標的核酸配列への親和性を向上させる他の部分、例えばポリ-(Ｌ-リジン)に共有結合したオリゴヌクレオチドを含む。さらにまた、エリプチシン等のインターカレート剤、アルキル化剤又は金属錯体をセンス又はアンチセンスオリゴヌクレオチドに結合させ、アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドの標的ヌクレオチド配列への結合特異性を改変してもよい。
アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、ＣａＰＯ４-媒介ＤＮＡ形質移入、エレクトロポレーションを含む任意の遺伝子転換方法により、又はエプスタイン-バーウイルスなどの遺伝子転換ベクターを用いることにより、標的核酸配列を含む細胞に導入される。好ましい方法では、アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドは、適切なレトロウイルスベクターに挿入される。標的核酸配列を含む細胞は、インビボ又はエキソビボで組換えレトロウイルスベクターに接触させる。好適なレトロウイルスベクターは、これらに限られないが、マウスレトロウイルスＭ−ＭｕＬＶから誘導されるもの、Ｎ２（Ｍ−ＭｕＬＶから誘導されたレトロウイルス）、又はＤＣＴ５Ａ、ＤＣＴ５Ｂ及びＤＣＴ５Ｃと命名されたダブルコピーベクター（ＷＯ９０／１３６４１参照）を含む。
また、センス又はアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＷＯ９１／０４７５３に記載されているように、リガンド結合分子との結合体の形成により標的ヌクレオチド配列を含む細胞に導入してもよい。適切なリガンド結合分子は、これらに限られないが、細胞表面レセプター、増殖因子、他のサイトカイン、又は細胞表面レセプターに結合する他のリガンドを含む。好ましくは、リガンド結合分子の結合体形成は、リガンド結合分子がその対応する分子又はレセプターに結合する、あるいはセンス又はアンチセンスオリゴヌクレオチド又はその複合体の細胞への侵入を阻止する能力を実質的に阻害しない。
【０１６７】
あるいは、センス又はアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＷＯ９０／１０４４８に記載されたように、オリゴヌクレオチド−脂質複合体の形成により標的核酸配列を含む細胞に導入してもよい。センス又はアンチセンスオリゴヌクレオチド−脂質複合体は、好ましくは内因性リパーゼにより細胞内で分解される。
アンチセンス又はセンスＲＮＡ又はＤＮＡ分子は一般に少なくとも約５塩基長、約１０塩基長、約１５塩基長、約２０塩基長、約２５塩基長、約３０塩基長、約３５塩基長、約４０塩基長、約４５塩基長、約５０塩基長、約５５塩基長、約６０塩基長、約６５塩基長、約７０塩基長、約７５塩基長、約８０塩基長、約８５塩基長、約９０塩基長、約９５塩基長、約１００塩基長又はそれ以上である。
また、プローブは、ＰＣＲ技術に用いて、密接に関連したＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１コード化配列の同定のための配列のプールを作成することができる。
また、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子のマッピングのため、及び遺伝子障害を持つ個体の遺伝子分析のためのハイブリダイゼーションプローブの構築にも用いることができる。ここに提供されるヌクレオチド配列は、インサイツハイブリダイゼーション、既知の染色体マーカーに対する結合分析、及びライブラリーでのハイブリダイゼーションスクリーニング等の周知の技術を用いて、染色体及び染色体の特定領域にマッピングすることができる。
【０１６８】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１のコード化配列が他のタンパク質に結合するタンパク質をコードする場合（例えば、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１がレセプターである場合）、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドは、結合相互作用に関与している他のタンパク質又は分子を同定するためのアッセイに用いることができる。このような方法により、レセプター／リガンド結合性相互作用の阻害剤を同定することができる。このような結合性相互作用に関与するタンパク質も、ペプチド又は小分子阻害剤又は結合性相互作用のアゴニストのスクリーニングに用いることができる。また、レセプターＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１は関連するリガンドの単離にも使用できる。スクリーニングアッセイは、天然ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド又はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのレセプターの生物活性を模倣するリード化合物の発見のために設計される。このようなスクリーニングアッセイは、化学的ライブラリーのハイスループットスクリーニングにも使用可能なアッセイを含み、小分子候補薬剤の同定に特に適したものとする。考慮される小分子は、合成有機又は無機化合物を含む。アッセイは、この分野で良く知られ特徴付けられているタンパク質−タンパク質結合アッセイ、生物学的スクリーニングアッセイ、免疫検定及び細胞ベースのアッセイを含む種々の型式で実施される。
【０１６９】
また、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド又はその修飾型をコードする核酸は、トランスジェニック動物又は「ノックアウト」動物のいずれかを産生することに使用でき、また、これらは治療的に有用な試薬の開発やスクリーニングに有用である。トランスジェニック動物(例えばマウス又はラット)とは、出生前、例えば胚段階で、その動物又はその動物の祖先に導入された導入遺伝子を含む細胞を有する動物である。導入遺伝子とは、トランスジェニック動物が発生する細胞のゲノムに組み込まれたＤＮＡである。本発明は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードするcＤＮＡを提供し、これは、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードするＤＮＡを発現する細胞を含むトランスジェニック動物を作製するために使用するゲノム配列及び確立された技術に基づいて、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードするゲノムＤＮＡをクローン化するために使用することができる。動物に標的遺伝子の導入遺伝子を導入してトランスジェニック動物の創始系統を産生するために当該分野で知られている任意の方法を使用することができる。そのような技術には、限定されるものではないが、前核マイクロインジェクション(米国特許第４８７３１９１号、第４７３６８６６号及び第４８７０００９号)；胚系列へのレトロウイルス媒介遺伝子転移(Van der Putten等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82, 6148-6152(1985))；胚性幹細胞でのジーンターゲティング(Thompson等, Cell 56, 313-321 (1989))；ジーントラップベクターを使用する非特異的挿入不活性化（米国特許第６４３６７０７号）；胚のエレクトロポレーション(Lo, Mol. Cel. Biol. 3, 1803-1814 (1983))；及び精子媒介遺伝子移入(Lavitrano等, Cell 57: 717-73 (1989))を含む。典型的には、特定の細胞を組織特異的エンハンサーでのＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１導入遺伝子の導入の標的にする。胚段階で動物の生殖系列に導入されるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１コード化導入遺伝子のコピーを含むトランスジェニック動物はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１をコードするＤＮＡの増大した発現の影響を調べるために使用できる。このような動物は、例えばその過剰発現を伴う病理学的状態に対して保護をもたらすと思われる試薬のテスター動物として使用できる。本発明のこの態様においては、動物を試薬で治療し、導入遺伝子を有する未治療の動物に比べ病理学的状態の発症率が低ければ、病理学的状態に対する治療上の処置の可能性が示される。
【０１７０】
あるいは、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの非ヒト相同体は、動物の胚幹細胞に導入されたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする変更ゲノムＤＮＡと、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする内在性遺伝子との間の相同的組換えによって、欠損した又は変更されたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１コード化遺伝子を有するＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１「ノックアウト」動物を作成するために使用できる。好ましくはノックアウト動物は哺乳動物である。より好ましくは、哺乳動物は齧歯類、例えばラット又はマウスである。例えばＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードするcＤＮＡは、確立された技術に従い、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードするゲノムＤＮＡのクローニングに使用できる。ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードするゲノムＤＮＡの一部は、組込みをモニターするために使用可能な選択マーカーをコード遺伝子のような他の遺伝子によって欠失させたり、置換させることが可能である。典型的には、ベクターは無変化のフランキングＤＮＡ(5'と3'末端の両方)を数キロベース含む��例えば、相同的組換えベクターについてはThomas及びCapecchi, Cell, 51:503(1987)を参照］。ベクターは胚幹細胞に(例えばエレクトロポレーションによって)導入し、導入されたＤＮＡが内在性ＤＮＡと相同的に組換えられた細胞が選択される［例えば、Liら, Cell, 69:915(1992)参照］。選択された細胞は次に動物(例えばマウス又はラット)の胚盤胞内に注入されて集合キメラを形成する［例えば、Bradley, Teratocarcinomas and Embryonic Stem Cells: A Practical Approach, E. J. Robertson, ed. (IRL, Oxford, 1987), pp. 113-152参照のこと］。その後、キメラ性胚を適切な偽妊娠の雌性乳母に移植し、期間をおいて「ノックアウト」動物を作り出す。胚細胞に相同的に組換えられたＤＮＡを有する子孫は標準的な技術により同定され、それらを利用して動物の全細胞が相同的に組換えられたＤＮＡを含む動物を繁殖させることができる。ノックアウト動物は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの欠乏によるある種の病理的状態及びその病理的状態の進行に対する防御能力によって特徴付けられる。  
【０１７１】
また、ノックアウトマウスは、薬剤標的の遺伝子機能及び薬学的有用性の発見において、並びに与えられた標的に関連する潜在的な標的への(on-target)副作用の決定において、得る情報が非常に多い場合がある。遺伝子機能と生理学は、双方とも哺乳動物であり類似の遺伝指数を含み、それが種間で高度に保存されているので、マウスとヒトの間で非常によく保存されている。例えば、マウス染色体１６の遺伝子の９８％がヒトオルソログを有することが最近よく文書化されている（Mural等, Science 296:1661-71 (2002)）。
胚性幹(ＥＳ)細胞におけるジーンターゲティングにより、ヒト疾患に関連した多くの遺伝子に変異ゼロのマウスを作成することが可能になったが、必ずしも全ての遺伝子疾患がヌル変異に起因するものではない。マウス座を破壊し、変異を持つヒトの対応物を導入する遺伝子置換の方法を確立することによってヒトの疾患の貴重なマウスモデルを設計することができる。
また、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする核酸は遺伝子治療にも使用できる。遺伝子治療用途においては、例えば欠陥遺伝子を置換するため、治療的有効量の遺伝子産物のインビボ合成を達成するために遺伝子が導入される。「遺伝子治療」とは、１回の処理により継続的効果が達成される従来の遺伝子治療と、治療的に有効なＤＮＡ又はmＲＮＡの１回又は繰り返し投与を含む遺伝子治療薬の投与の両方を含む。アンチセンスＲＮＡ及びＤＮＡは、ある種の遺伝子のインビボ発現を阻止する治療薬として用いることができる。短いアンチセンスオリゴヌクレオチドを、細胞膜による制限された取り込みに起因する低い細胞内濃度にもかかわらず、それが阻害剤として作用する細胞中に移入できることは既に示されている（Zamecnikら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 4143-4146 [1986]）。オリゴヌクレオチドは、それらの負に荷電したリン酸ジエステル基を非荷電基で置換することによって取り込みを促進するように修飾してもよい。
【０１７２】
生存可能な細胞に核酸を導入するための種々の技術が存在する。これらの技術は、核酸が培養細胞にインビトロで、あるいは意図する宿主の細胞においてインビボで移入されるかに応じて変わる。核酸を哺乳動物細胞にインビトロで移入するのに適した方法は、リポソーム、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、細胞融合、ＤＥＡＥ-デキストラン、リン酸カルシウム沈殿法などを含む。現在好ましいインビボ遺伝子移入技術は、ウイルス（典型的にはレトロウイルス）ベクターでの形質移入及びウイルス被覆タンパク質-リポソーム媒介形質移入である（Dzau等, Trends in Biotechnology 11, 205-210[1993]）。幾つかの状況では、核酸供給源を、細胞表面膜タンパク質又は標的細胞に特異的な抗体、標的細胞上のレセプターに対するリガンド等の標的細胞を標的化する薬剤とともに提供するのが望ましい。リポソームを用いる場合、エンドサイトーシスを伴う細胞表面膜タンパク質に結合するタンパク質、例えば、特定の細胞型向性のキャプシドタンパク質又はその断片、サイクルにおいて内部移行を受けるタンパク質に対する抗体、細胞内局在化を標的とし細胞内半減期を向上させるタンパク質が、標的化及び／又は取り込みの促進のために用いられる。レセプター媒介エンドサイトーシスは、例えば、Wu等, J. Biol. Chem. 262, 4429-4432 (1987); 及びWagner等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 3410-3414 (1990)によって記述されている。遺伝子作成及び遺伝子治療のプロトコールの概説については、Anderson等, Science 256, 808-813 (1992)を参照のこと。
【０１７３】
ここに記載したＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをタンパク質電気泳動目的の分子量マーカーとして用いてもよい。
ここに記載したＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド又はその断片をコードする核酸分子は、染色体の同定に有用である。この点において、実際の配列データに基づく染色体マーキング試薬は殆ど利用可能ではないため、新規な染色体マーカーの同定が必要である。本発明の各ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１核酸分子は染色体マーカーとして使用できる。
また、本発明のＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド及び核酸分子は組織タイピングに使用でき、本発明のＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドは、好ましくは同じ組織型の正常組織と比較した疾患組織において、一方の組織において他方に比較して異なる発現をする。ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１核酸分子には、ＰＣＲ、ノーザン分析、サザン分析及びウェスタン分析のプローブ生成のための用途が見出されるであろう。
【０１７４】
ここに記載したＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドは治療薬として用いてもよい。本発明のＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドは、薬学的に有用な組成物を調製するのに知られた方法に従って製剤され、これにより、このＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１産物は薬学的に許容される担体媒体と混合される。治療用製剤は、凍結乾燥された製剤又は水性溶液の形態で、任意的な製薬上許容可能な担体、賦形剤又は安定剤と、所望の精製度を有する活性成分とを混合することにより(Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. Ed., (1980))、調製され保管される。許容される担体、賦形剤又は安定剤は、用いる投与量及び濃度ではレシピエントに対して無毒性であり、リン酸、クエン酸及び他の有機酸等の緩衝液；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量(残基数１０個未満)ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性重合体；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリジン等のアミノ酸；グルコース、マンノース又はデキストリン等の単糖類、二糖類又は他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；マンニトール又はソルビトール等の糖アルコール；ナトリウム等の塩形成対イオン；及び／又はＴＷＥＥＮ(登録商標)、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ(登録商標)又はＰＥＧ等の非イオン性界面活性剤を含む。
【０１７５】
インビボ投与に使用される製剤は滅菌されていなくてはならない。これは、凍結乾燥及び再構成の前又は後に、滅菌フィルター膜を通す濾過により容易に達成される。
ここでの治療用組成物は一般に、無菌のアクセスポートを具備する容器、例えば、皮下注射針で貫通可能なストッパーを持つ静脈内バッグ又はバイアル内に配される。
投与経路は周知の方法、例えば、静脈内、腹膜内、脳内、筋肉内、眼内、動脈内又は病巣内経路での局所投与などの注射又は注入、又は徐放系による。
本発明の医薬組成物の用量及び望ましい薬物濃度は、意図する特定の用途に応じて変化する。適切な用量又は投与経路の決定は、通常の内科医の技量の範囲内である。動物実験は、ヒト治療のための有効量の決定についての信頼できる指針を提供する。有効量の種間スケーリングは、Toxicokinetics and New Drug Development, Yacobi等編, Pergamon Press, New York 1989, pp. 42-96のMordenti, J. 及びChappell, W. 「The use of interspecies scaling in toxicokinetics」に記載された原理に従って実施できる。
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド又はそのアゴニスト又はアンタゴニストのインビボ投与が用いられる場合、正常な投与量は、投与経路に応じて、哺乳動物の体重当たり１日に約１０  ｎｇ／ｋｇから１００  ｍｇ／ｋｇまで、好ましくは約１μｇ／ｋｇ／日から１０ｍｇ／ｋｇ／日である。特定の用量及び輸送方法の指針は文献に与えられている；例えば、米国特許第４６５７７６０号、第５２０６３４４号、又は第５２２５２１２号参照。異なる製剤が異なる治療用化合物及び異なる疾患に有効であること、例えば一つの器官又は組織を標的とする投与には、他の器官又は組織とは異なる方式で輸送することが必要であることが予想される。
【０１７６】
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの投与を必要とする任意の疾患又は疾病の治療に適した放出特性を持つ製剤でＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの持続放出が望まれる場合、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのマイクロカプセル化が考えられる。持続放出のための組換えタンパク質のマイクロカプセル化は、ヒト成長ホルモン（rhGH）、インターフェロン-（rhIFN-）、インターロイキン-２、及びMN rgp120で成功裏に実施されている。Johnson等, Nat. Med., 2: 795-799 (1996); Yasuda, Biomed. Ther., 27: 1221-1223 (1993); Horaら, Bio/Technology, 8: 755-758 (1990); Cleland, 「Design and Production of Single Immunization Vaccines Using Polylactide Polyglycolide Microsphere Systems」Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach, Powell 及び Newman編, (Plenum Press: New York, 1995), p.439-462; ＷＯ９７／０３６９２、ＷＯ９６／４００７２、ＷＯ９６／０７３９９；及び米国特許第５６５４０１０号。
これらのタンパク質の持続放出製剤は、ポリ-乳酸-グリコール酸（PLGA）コポリマーを用い、その生体適合性及び広範囲の生分解特性に基づいて開発された。ＰＬＧＡの分解生成物である乳酸及びグリコール酸は、ヒト身体内で即座にクリアされる。さらに、このポリマーの分解性は、分子量及び組成に依存して数ヶ月から数年まで調節できる。Lewis, 「Controlled release of bioactive agents from lactide/glycolide polymer」: M. Chasin及び R. Langer (編), Biodegradable Polymers as Drug Delivery Systems (Marcel Dekker: New York, 1990), pp. 1-41。
【０１７７】
本発明は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを模倣するもの（アゴニスト）又はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの効果を阻害するもの（アンタゴニスト）を同定するための化合物のスクリーニング方法も包含する。ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを模倣するアゴニストは、そのゲノムがＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む非ヒトトランスジェニック動物での知見に基づいて陰性の表現型が観察される場合に特に治療上価値が高いであろう。ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの効果を妨げるアンタゴニストは、陽性の表現型が非ヒトトランスジェニックノックアウト動物での観察時に観察される場合に特に治療上価値が高いであろう。アンタゴニスト候補薬のスクリーニングアッセイは、ここに同定した遺伝子にコードされるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドと結合又は複合体形成する化合物、又は他にコード化ポリペプチドの他の細胞性タンパク質との相互作用を阻害する化合物を同定するために設計される。このようなスクリーニングアッセイは、それを特に小分子候補薬の同定に適したものにする、化学的ライブラリーの高スループットスクリーニングに適用可能なアッセイを含む。
該アッセイは、タンパク質−タンパク質結合アッセイ、生化学的スクリーニングアッセイ、イムノアッセイ、及び細胞ベースのアッセイで、この分野で知られたものを含む種々の方式で実施される。
アンタゴニストについての全てのアッセイは、それらが候補薬をここで同定された核酸にコードされるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドと、これら２つの成分が相互作用するのに十分な条件下及び時間で接触させることを必要とすることにおいて共通する。
【０１７８】
結合アッセイにおいて、相互作用は結合であり、形成された複合体は単離されるか、又は反応混合物中で検出されうる。ここで同定される遺伝子にコードされるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド又は候補薬が、共有又は非共有結合により固相、例えばミクロタイタープレートに固定化される。非共有結合は、一般的に固体表面をＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの溶液で被覆し乾燥させることにより達成される。あるいは、固定化されるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドに特異的な固定化抗体、例えばモノクローナル抗体を、それを固体表面に固着させるために用いることができる。アッセイは、固定化成分、例えば固着成分を含む被覆表面に、検出可能な標識で標識されていてもよい非固定化成分を添加することにより実施される。反応が完了したとき、未反応成分を例えば洗浄により除去し、固体表面に固着した複合体を検出する。最初の非固定化成分が検出可能な標識を有している場合、表面に固定化された標識の検出は複合体形成が起こったことを示す。最初の非固定化成分が標識を持たない場合は、複合体形成は、例えば、固定化された複合体に特異的に結合する標識抗体によって検出できる。
【０１７９】
候補化合物が相互作用するがここに同定した遺伝子にコードされる特定のＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチに結合しない場合、そのポリペプチドとの相互作用は、タンパク質−タンパク質相互作用を検出するために良く知られている方法によってアッセイすることができる。そのようなアッセイは、架橋、同時免疫沈降、及び勾配又はクロマトグラフィカラムを通す同時精製などの伝統的な手法を含む。さらに、タンパク質−タンパク質相互作用は、Chevray及びNathans,Proc.Natl. Acad. Sci. USA 89, 5789-5793 (1991)に開示されているように、Fields及び共同研究者［Fiels及びSong, Nature(London) 340, 245-246 (1989); Chien等, Proc.Natl. Acad. Sci. USA 88, 9578-9582 (1991)］に記載された酵母ベースの遺伝子系を用いることによってモニターすることができる。酵母ＧＡＬ４などの多くの転写活性化剤は、２つの物理的に別個のモジュラードメインからなり、一方はＤＮＡ結合ドメインとして作用し、他方は転写活性化ドメインとして機能する。前出の文献に記載された酵母発現系（一般に「２-ハイブリッド系」と呼ばれる）は、この特性の長所を利用し、並びに２つのハイブリッドタンパク質を用い、一方では標的タンパク質がＧＡＬ４のＤＮＡ結合ドメインに融合し、他方では候補となる活性化タンパク質が活性化ドメインに融合している。ＧＡＬ１-ｌａｃＺリポーター遺伝子のＧＡＬ４活性化プロモーターの制御下での発現は、タンパク質-タンパク質相互作用を介したＧＡＬ４活性の再構成に依存する。相互作用するポリペプチドを含むコロニーは、β-ガラクトシダーゼに対する色素生産性物質で検出される。２-ハイブリッド技術を用いた２つの特定なタンパク質間のタンパク質-タンパク質相互作用を同定するための完全なキット（MATCHMAKERTM）は、Clontechから商業的に入手可能である。また、この系は、特定のタンパク質相互作用に含まれるタンパク質ドメインのマッピング、並びにこれら相互作用にとって重要なアミノ酸残基の特定へ拡大適用することができる。
【０１８０】
ここで同定されたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子と細胞内又は細胞外成分との相互作用を阻害する化合物は、次のようにして試験できる：通常、反応混合物は、遺伝子産物と細胞外又は細胞内成分を、これら２つの生成物の相互作用及び結合が可能な条件下及び時間に渡って含むように調製される。候補化合物が結合を阻害する能力を試験するために、反応は試験化合物の不存在及び存在下で実施される。さらに、プラシーボを第３の反応混合物に添加してポジティブコトロールを提供してもよい。混合物中に存在する試験化合物と細胞内又は細胞外成分との結合（複合体形成）は上記のようにモニターされる。試験化合物を含有する反応混合物ではなく、コントロール反応における複合体の形成は、試験化合物が試験化合物とその結合パートナーとの相互作用を阻害することを示す。
【０１８１】
アンタゴニストをアッセイするためには、特定の活性についてスクリーニングされる化合物とともにＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを細胞へ添加してもよく、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド存在下における対象活性を阻害する化合物の能力は、化合物がＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアンタゴニストであることを示す。あるいは、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドと膜結合ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドレセプター又は組換えレセプターを有する潜在的アンタゴニストを競合的阻害アッセイに適した条件下で結合させることによって、アンタゴニストを検出してもよい。放射性などでＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを標識することが可能であり、潜在的アンタゴニストの有効性を判断するためにレセプターに結合したＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの数を利用することができる。レセプターをコードする遺伝子は、当業者に知られた多くの方法、例えばリガンドパンニング及びＦＡＣＳソートによって同定できる。Coligan等, Current Protocols in Immun., 1(2): 第５章(1991)。好ましくは、発現クローニングが用いられ、ポリアデニル化ＲＮＡがＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５���８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドに反応性の細胞から調製され、このＲＮＡから生成されたｃＤＮＡライブラリーがプールに分配され、ＣＯＳ細胞又はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド反応性でない他の細胞の形質移入に使用される。スライドガラスで成長させた形質移入細胞を、標識したＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドで暴露する。このＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドは、ヨウ素化又は部位特異的タンパク質キナーゼの認識部位の封入を含む種々の手段で標識できる。固定及びインキュベーションの後、スライドにオートラジオグラフィ分析を施す。ポジティブプールを同定し、相互作用サブプール化及び再スクリーニング工程を用いてサブプールを調製して再形質移入し、最終的に推定レセプターをコードする単一のクローンを生成する。
【０１８２】
レセプター同定の代替的方法として、標識されたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをレセプター分子を発現する細胞膜又は抽出調製物に光親和性結合させることができる。架橋材料をＰＡＧＥで溶解させ、Ｘ線フィルムへ暴露する。レセプターを含む標識複合体を励起し、ペプチド断片へ分解し、タンパク質マイクロ配列決定を施すことができる。マイクロ配列決定から得たアミノ酸配列は、推定レセプターをコードする遺伝子を同定するｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングする縮重オリゴヌクレオチドプローブの一組の設計に用いられる。
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドに対するアンタゴニストの効果を評価する際の他のアプローチ法は、既知のノックアウト表現型を模倣するために野生型マウスにＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１アンタゴニストを投与することであろう。よって、先ず、対象のＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１遺伝子をノックアウトし、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１遺伝子をノックアウトし又は破壊した結果として生じる表現型を観察する。引き続いて、野生型マウスにＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアンタゴニストを投与することによってＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドに対するアンタゴニストの効果を評価する。効果的なアンタゴニストはノックアウト動物において最初に観察された表現型を模倣することが予想される。
【０１８３】
同様にＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドに対するアンタゴニストの効果を、既知の陰性のノックアウト表現型を改善するために非ヒトトランスジェニックマウスに対するＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１アゴニストを投与することによって、評価することができるであろう。よって、先ず、対象のＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１遺伝子をノックアウトし、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１遺伝子をノックアウトし又は破壊した結果として生じる表現型を観察する。引き続いて、非ヒトトランスジェニックマウスにＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのアゴニストを投与することによってＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドに対するアゴニストの効果を評価する。効果的なアゴニストはノックアウト動物において最初に観察された陰性表現型効果を改善することが予想される。
【０１８４】
アンタゴニストの他の検定では、レセプターを発現する哺乳動物細胞又は膜調製物を、候補化合物の存在下で標識ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドと共にインキュベートする。ついで、この相互作用を促進又は阻止する化合物の能力を測定する。
潜在的なアンタゴニストのより特別な例は、免疫グロブリンとＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドとの融合体に結合するオリゴヌクレオチドで、特に、限られないが、ポリペプチド-及びモノクローナル抗体及び抗体断片、一本鎖抗体、抗-イディオタイプ抗体、及びこれらの抗体又は断片のキメラ又はヒト化形態、並びにヒト抗体及び抗体断片を含む抗体を含んでいる。あるいは、潜在的アンタゴニストは、密接に関連したタンパク質、例えば、レセプターを認識するが効果を与えず、従ってＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの作用を競合的に阻害するＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの変異型であってもよい。
【０１８５】
他の潜在的なＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドアンタゴニストは、アンチセンス技術を使用して調製されるアンチセンスＲＮＡ又はＤＮＡ作成物であり、ここで例えばアンチセンスＲＮＡ又はＤＮＡ分子が標的とされているｍＲＮＡにハイブリダイズしタンパク質の翻訳を妨害することによってｍＲＮＡの翻訳を直接阻止するように作用する。アンチセンス技術はトリプルヘリックス形成又はアンチセンスＤＮＡ又はＲＮＡを通して遺伝子発現を制御するために使用することができ、その双方の方法はＤＮＡ又はＲＮＡに対するポリヌクレオチドの結合に基づいている。例えば、ここでの成熟ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の５'コード部分を用いて、約１０から４０の塩基対長のアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドを設計する。ＤＮＡオリゴヌクレオチドは転写に関与する遺伝子の領域に相補的であるように設計され（トリプルヘリックス−Lee等, Nucl. Acids Res., 6:3073(1979)；Cooney等, Science, 241: 456(1988)；Dervan等, Science, 251:1360 (1991)）、よってＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの転写と産生を防止する。アンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドはインビボでｍＲＮＡにハイブリダイズし、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドへのｍＲＮＡ分子の翻訳を阻止する（アンチセンス- Okano, Neurochem., 56:560 (1991)；Okigodeoxynucleotides as Antisense Inhibitors of Gene Expression(CRC Oress: Boca Raton, FL, 1988）。上に記載したオリゴヌクレオチドはまた細胞に移送され得、アンチセンスＲＮＡ又はＤＮＡがインビボで発現されて、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの産生を阻害する。アンチセンスＤＮＡが用いられる場合、翻訳開始部位、例えば標的遺伝子ヌクレオチド配列の約−１０及び＋１０一の間から取り出されたオリゴデオキシリボヌクレオチドが好適である。
【０１８６】
潜在的アンタゴニストは、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの活性部位、レセプター結合部位、又は成長因子又は他の関連結合部位に結合し、それによりＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの正常な生物学的活性を阻止する小分子を含む。小分子の例は、これらに限られないが、小型ペプチド又はペプチド様分子、好ましくは可溶性ペプチド、及び合成非ペプチド有機又は無機化合物を含む。
リボザイムは、ＲＮＡの特異的切断を触媒できる酵素的ＲＮＡ分子である。リボザイムは、相補的標的ＲＮＡへの配列特異的ハイブリダイゼーション、ついでヌクレオチド鎖切断的切断により作用する。潜在的ＲＮＡ標的内の特異的リボザイム切断部位は、既知の技術で同定できる。更なる詳細は、例えば、Rossi, Current Biology 4: 469-471 (1994)及びＰＣＴ公報、番号ＷＯ９７／３３５５１（１９９７年９月１８日公開）を参照。
【０１８７】
転写の阻害に用いられるトリプルヘリックス形成における核酸分子は一本鎖であるべきでありデオキシヌクレオチドからなる。これらのオリゴヌクレオチドの基本組成は、フーグスチン塩基対則を介するトリプルヘリックス形成を促進するように設計され、それは一般に二重鎖の一方の鎖上のプリン又はピリミジンのサイズ変更可能な伸展を必要とする。更なる詳細は、例えば、上掲のＰＣＴ公報のＷＯ９７／３３５５１を参照。
これらの小分子は、上記で検討したスクリーニングアッセイの何れか一つ又は複数のものにより及び／又は当業者に良く知られた他の任意のスクリーニング技術により同定することができる。
また、ここで開示されている分子の診断的及び治療的利用は、下記に開示及び記載のポジティブ機能アッセイヒットに基づいている。
【０１８８】
Ｆ．抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体
本発明は、ここで治療及び／又は診断薬としての用途が見出され得る抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体を提供する。例示的な抗体には、ポリクローナル、モノクローナル、ヒト化、二重特異性及びヘテロコンジュゲート抗体が含まれる。
【０１８９】
１．ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体は、好ましくは、関連する抗原とアジュバントを複数回皮下(sc)又は腹腔内(ip)注射することにより、動物に産生される。それは、免疫化されるべき種において免疫原性であるタンパク質へ、関連する抗原（特に、合成ペプチドが用いられる場合）を結合させるために有用である。例えば、この抗原を、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、又は大豆トリプシンインヒビターへ、二重官能性又は誘導体形成剤、例えばマレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル(システイン残基を介する抱合)、Ｎ-ヒドロキシスクシンイミド(リジン残基を介する抱合)、グルタルアルデヒド、及び無水コハク酸、ＳＯＣｌ２、又はＲ及びＲ１が異なるアルキル基であるＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲを用いて結合させることができる。
動物を、例えばタンパク質又はコンジュゲート１００μｇ又は５μｇ（それぞれウサギ又はマウスの場合）を完全フロイントアジュバント３容量と併せ、この溶液を複数部位に皮内注射することによって、抗原、免疫原性コンジュゲート、又は誘導体に対して免疫する。１ヶ月後、該動物を、完全フロイントアジュバントに入れた初回量の１／５ないし１／１０のペプチド又はコンジュゲートを用いて複数部位に皮下注射することにより、追加免疫する。７ないし１４日後に動物を採血し、抗体価について血清を検定する。動物は、力価がプラトーに達するまで追加免疫する。コンジュゲートはまた、タンパク融合として組換え細胞培養中で調製することができる。また、ミョウバンのような凝集化剤が、免疫反応の増強のために好適に使用される。
【０１９０】
２．モノクローナル抗体
モノクローナル抗体は、Kohler等, Nature, 256:495 (1975)により最初に記載されたハイブリドーマ法、又は組換えＤＮＡ法(米国特許第４８１６５６７号)によって作成することができる。
ハイブリドーマ法においては、マウス又はその他の適当な宿主動物、例えばハムスターを上記のように免疫し、免疫化に用いられたタンパク質と特異的に結合する抗体を産生する、又は産生することのできるリンパ球を導き出す。別法として、リンパ球をインビトロで免疫することもできる。免疫化の後、リンパ球を単離し、ポリエチレングリコールのような適当な融合剤を用いて骨髄腫細胞と融合させ、ハイブリドーマ細胞を形成させる(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, 59-103頁(Academic Press, 1986))。
このようにして調製されたハイブリドーマ細胞を、融合していない親の骨髄腫細胞（融合のパートナーとも呼ばれる）の増殖または生存を阻害する一又は複数の物質を好ましくは含む適当な培地に蒔き、増殖させる。例えば、親の骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ(ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ)を欠失するならば、ハイブリドーマのための培地は、典型的には、ＨＧＰＲＴ−欠失細胞の増殖を妨げる物質であるヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジンを含有するであろう(ＨＡＴ培地)。
【０１９１】
好ましい融合のパートナーである骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定な高レベルの発現を支援し、融合しない親細胞に対して選択する選択培地に対して感受性である細胞である。これらの中でも、好ましい骨髄腫株化細胞は、マウス骨髄腫ライン、例えば、ソーク・インスティテュート・セル・ディストリビューション・センター、サンディエゴ、カリフォルニア、ＵＳＡより入手し得るＭＯＰＣ-２１およびＭＰＣ-１１マウス腫瘍、及び、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション、マナッサス、バージニア、ＵＳＡより入手し得るＳＰ-２又はＸ６３-Ａｇ８-６５３細胞から誘導されるものである。ヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫株化細胞もまたヒトモノクローナル抗体の産生のために開示されている（Kozbor, J.Immunol., 133:3001 (1984)；Brodeur等, Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,51-63頁、(Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)）。
ハイブリドーマ細胞が生育している培地を、抗原に対するモノクローナル抗体の産生について検定する。好ましくは、ハイブリドーマ細胞により産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降又はインビトロ結合検定、例えばラジオイムノアッセイ(ＲＩＡ)又は酵素結合免疫吸着検定(ＥＬＩＳＡ)によって測定する。
【０１９２】
例えば、モノクローナル抗体の結合親和性は、Munson等, Anal. Biochem., 107:220(1980)のスキャッチャード分析によって測定することができる。
所望の特異性、親和性、及び／又は活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が確定された後、そのクローンを限界希釈法によりサブクローニングし、標準的な方法により増殖させることができる(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, 59-103頁(Academic Press, 1986))。この目的に対して好適な培地は、例えば、Ｄ-ＭＥＭ又はＲＰＭＩ-１６４０培地を包含する。また、このハイブリドーマ細胞は、動物の腹水症腫瘍として、例えばマウスへの細胞の腹腔内注射によって、インビボで増殖させることができる。
サブクローンにより分泌されたモノクローナル抗体は、例えばアフィニティークロマトグラフィー（例えばプロテインＡ又はプロテインＧ-セファロースを用いる）又はイオン交換クロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析等のような常套的な抗体精製法によって、培地、腹水、又は血清から上手く分離される。
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、常法を用いて(例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードしている遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを用いることにより)即座に分離されて、配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好ましい供給源となる。ひとたび分離されたならば、ＤＮＡを発現ベクター中に入れ、ついでこれを、この状況以外では抗体タンパク質を産生しない大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣(ＣＨＯ)細胞、又は骨髄腫細胞のような宿主細胞中に形質移入し、組換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成を獲得することができる。抗体をコードするＤＮＡの細菌での組み換え発現に関する概説論文には、Skerra等, Curr. Opinion in Immunol., 5:256-262(1993)及びPluckthun, Immunol. Revs. 130: 151-188(1992)が含まれる。
【０１９３】
モノクローナル抗体又は抗体断片は、McCafferty等, Nature, 348:552-554 (1990)に記載された技術を使用して産生される抗体ファージライブラリーから分離することができる。Clackson等, Nature, 352:624-628 (1991)及び Marks等, J.Mol.Biol., 222:581-597 (1991)は、ファージライブラリーを使用したマウス及びヒト抗体の分離を記述している。続く刊行物は、鎖シャフリングによる高親和性(ｎＭ範囲)のヒト抗体の生成(Marks等, Bio/Technology, 10:779-783[1992])、並びに非常に大きなファージライブラリーを構築するための方策としてコンビナトリアル感染とインビボ組換え(Waterhouse等, Nuc.Acids.Res., 21:2265-2266[1993])を記述している。従って、これらの技術はモノクローナル抗体の分離に対する伝統的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ法に対する実行可能な別法である。
抗体をコードするＤＮＡは、例えば、ヒト重鎖及び軽鎖定常ドメイン（ＣＨ及びＣＬ）の配列を、相同的マウス配列に代えて置換することによって(米国特許第４，８１６，５６７号；Morrison等, Proc.Nat.Acad.Sci.,USA,81:6851(1984))、又は免疫グロブリンコード配列に非免疫グロブリンポリペプチド（異種ポリペプチド）のコード配列の全部又は一部を共有結合させることによって修飾してキメラ又は融合抗体ポリペプチドを生成することができる。非免疫グロブリンポリペプチド配列は、抗体の定常ドメインと置き代わることができるか、又は抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインが置換されて、抗原に対する特異性を有する１つの抗原結合部位と異なる抗原に対する特異性を有するもう一つの抗原結合部位とを含むキメラ二価抗体を作り出す。
【０１９４】
３．ヒト及びヒト化抗体
本発明の抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体は、さらにヒト化抗体又はヒト抗体を含む。非ヒト(例えばマウス)抗体のヒト化形とは、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖又はその断片(例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２あるいは抗体の他の抗原結合サブ配列)であって、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むものである。ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域(ＣＤＲ)の残基が、マウス、ラット又はウサギのような所望の特異性、親和性及び能力を有する非ヒト種(ドナー抗体)のＣＤＲの残基によって置換されたヒト免疫グロブリン(レシピエント抗体)を含む。幾つかの例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基によって置換されている。また、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、移入されたＣＤＲもしくはフレームワーク配列にも見出されない残基を含んでいてもよい。一般的に、ヒト化抗体は、全て又はほとんど全てのＣＤＲ領域が非ヒト免疫グロブリンのものに一致し、全て又はほとんど全てのＦＲ領域がヒト免疫グロブリンのコンセンサス配列である、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含む。ヒト化抗体は、最適には免疫グロブリン定常領域(Ｆｃ)、典型的にはヒトの免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部を含む［Jones等, Nature, 321:522-525 (1986); Riechmann等, Nature, 332:323-329 (1988); 及びPresta, Curr. Op Struct. Biol., 2:593-596 (1992)］。
【０１９５】
非ヒト抗体をヒト化する方法はこの分野でよく知られている。一般的に、ヒト化抗体には非ヒト由来の一又は複数のアミノ酸残基が導入される。これら非ヒトアミノ酸残基は、しばしば、典型的には「移入」可変ドメインから得られる「移入」残基と称される。ヒト化は基本的にウィンター(Winter)及び共同研究者［Jones等, Nature, 321:522-525 (1986)；Riechmann等, Nature, 332:323-327 (1988)；Verhoeyen等, Science, 239:1534-1536 (1988)］の方法に従って、齧歯類ＣＤＲ又はＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列に置換することにより実施される。よって、このような「ヒト化」抗体は、無傷のヒト可変ドメインより実質的に少ない分が非ヒト種由来の対応する配列で置換されたキメラ抗体(米国特許第４８１６５６７号)である。実際には、ヒト化抗体は典型的には幾つかのＣＤＲ残基及び場合によっては幾つかのＦＲ残基が齧歯類抗体の類似する部位からの残基によって置換されたヒト抗体である。
抗体がヒトの治療用途を意図している場合、抗原性及びＨＡＭＡ反応(ヒト抗-マウス抗体)を低減するには、ヒト化抗体を生成する際に使用するヒトの軽重両方のヒト可変ドメインの選択が非常に重要である。いわゆる「ベストフィット法」では、齧歯動物抗体の可変ドメインの配列を、既知のヒト可変ドメイン配列のライブラリー全体に対してスクリーニングする。次に齧歯動物のものと最も近いヒトＶドメイン配列を同定し、その中のヒトフレームワーク（ＦＲ）をヒト化抗体のために受け入れる(Sims等, J. Immunol., 151:2296 (1993)；Chothia等, J. Mol. Biol., 196:901(1987))。他の方法では、軽又は重鎖の特定のサブグループのヒト抗体全てのコンセンサス配列から誘導される特定のフレームワーク領域を使用する。同じフレームワークをいくつかの異なるヒト化抗体に使用できる(Carter等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)；Presta等, J. Immunol., 151:2623(1993))。
【０１９６】
更に、抗体を、抗原に対する高結合親和性や他の好ましい生物学的性質を保持してヒト化することが重要である。この目標を達成するべく、好ましい方法では、親及びヒト化配列の三次元モデルを使用して、親配列及び様々な概念的ヒト化産物の分析工程を経てヒト化抗体を調製する。三次元免疫グロブリンモデルは一般的に入手可能であり、当業者にはよく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の推測三次元立体配座構造を図解し、表示するコンピュータプログラムは購入可能である。これら表示を見ることで、候補免疫グロブリン配列の機能における残基のありそうな役割の分析、すなわち候補免疫グログリンの抗原との結合能力に影響を及ぼす残基の分析が可能になる。このようにして、例えば標的抗原に対する親和性が高まるといった、望ましい抗体特性が達成されるように、ＦＲ残基をレシピエント及び移入配列から選択し、組み合わせることができる。一般的に、高頻度可変領域残基は、直接かつ最も実質的に抗原結合性に影響を及ぼしている。
ヒト化抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体の種々の形態が考えられる。例えばヒト化抗体は、免疫結合体を生成するために、状況に応じて一又は複数の細胞傷害剤(類)と結合していてもよい抗体断片、例えばＦａｂであってもよい。また、ヒト化抗体は無傷抗体、例えば無傷ＩｇＧ１抗体であってもよい。
【０１９７】
ヒト化の別法として、ヒト抗体を生成することができる。例えば、現在では、免疫化することで、内因性免疫グロブリンの産生がなく、ヒト抗体の全レパートリーを産生することのできるトランスジェニック動物(例えば、マウス)を作ることが可能である。例えば、キメラ及び生殖細胞系突然変異体マウスにおける抗体重鎖結合領域(ＪＨ)遺伝子のホモ接合体欠失によって、結果として内因性抗体産生の完全な阻害が起こることが説明されてきた。ヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子配列の、このような生殖細胞系突然変異体マウスへの転移によって、結果として抗原投与時にヒト抗体の産生がおこる。Jakobovits等, Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 90:2551 (1993)；Jakobovits等, Nature 362:255-258 (1993); Bruggeman等, Year in Immuno., 7:33 (1993)；米国特許第５５４５８０６号、同５５６９８２５号、同５５９１６６９号（全てジェンファーム(GenPharm)）；同５５４５８０７号；及び国際公開第９７／１７８５２号を参照されたい。
別法として、ファージディスプレイ技術(McCafferty等, Nature 348：552-553[1990])を使用して、非免疫化ドナーの免疫グロブリン可変(Ｖ)ドメイン遺伝子レパートリーから、インビトロでヒト抗体及び抗体断片を産出させることができる。この技術によれば、抗体Ｖドメイン遺伝子を、フレーム単位で、繊維状バクテリオファージ、例えばＭ１３又はｆｄの大きい又は小さいコートタンパク質遺伝子のどちらかでクローンし、ファージ粒子の表面で機能的抗体断片として表示させる。繊維状粒子がファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含むので、抗体の機能特性に基づいた選択に基づいても、結果としてこれらの特性を示す抗体をコードする遺伝子の選択が成される。よって、このファージはＢ細胞のいくつかの特性を模倣している。ファージディスプレイは多様な形式で行うことができる；例えばJohnson, Kevin S. 及びChiswell, David J., Current Opinion in Structural Biology 3：564-571(1993)を参照せよ。Ｖ-遺伝子セグメントのいくつかの供給源を、ファージディスプレイのために使用できる。Clackson等, Nature, 352：624-628(1991)は、免疫化したマウス脾臓由来のＶ遺伝子の小さいランダムなコンビナトリアルライブラリーから、多様で多くの抗-オキサゾロン抗体を単離した。非免疫化ヒトドナーのＶ遺伝子のレパートリーが構成可能であり、多様で多くの抗原(自己抗原を含む)に対する抗体は、Marks等, J. Mol. Biol. 222：581-597(1991)、又はGriffith等, EMBO J. 12：725-734(1993)に記載の技術にそのまま従うことで単離することができる。また、米国特許第５５６５３３２号及び同５５７３９０５号を参照のこと。
上述したように、ヒト抗体はインビトロで活性化したＢ細胞により産生することができる(米国特許第５５６７６１０号及び同５２２９２７５号)。
【０１９８】
４．抗体断片
ある状況下では、抗体全体よりも、抗体断片を用いることに利点がある。より小さな大きさの断片によって迅速なクリアランスが可能となり、固形腫瘍への接近の改良につながり得る。
抗体断片を産生するために様々な技術が開発されている。伝統的には、これらの断片は、無傷の抗体のタンパク分解性消化によって誘導された(例えば、Morimoto等, Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992)及びBrennan等, Science, 229:81(1985)を参照されたい)。しかし、これらの断片は、現在は組換え宿主細胞により直接産生することができる。Ｆａｂ、Ｆｖ及びＳｃＦｖ抗体断片は、すべて大腸菌で発現させ分泌させることができ、従って、大量のこれら断片の産生が容易となった。抗体断片は、上で論じた抗体ファージライブラリーから単離することができる。別法として、Ｆａｂ'-ＳＨ断片は大腸菌から直接回収することができ、化学的に結合させてＦ(ａｂ')２断片を形成することができる(Carter等, Bio/Technology 10:163-167(1992))。他のアプローチ法では、Ｆ(ａｂ')２断片を組換え宿主細胞培養から直接分離することができる。インビボ半減期が増した、サルベージレセプター結合性エピトープ残基を含むＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２が、米国特許第５８６９０４６号に記載されている。抗体断片を生成するのための他の方法は、当業者には明らかであろう。他の実施態様では、選択する抗体は単鎖Ｆｖ断片(ｓｃＦｖ)である。国際公開９３／１６１８５号；米国特許第５５７１８９４号；及び米国特許第５５８７４５８号を参照のこと。Ｆｖ及びｓＦｖは、定常領域を欠く無傷の連結部位を有する唯一の種である；従って、インビボで使用している間の減少した非特異的結合に適している。ｓＦｖ融合タンパク質は、ｓＦｖのアミノ又はカルボキシ末端のどちらかで、エフェクタータンパク質の融合体が生成されるように構成されてもよい。上掲のAntibody Engineering, Borrebaeck編を参照のこと。また、抗体断片は、例えば米国特許第５６４１８７０号に記載されているような「直鎖状抗体」であってもよい。そのような直鎖状抗体断片は単一特異性又は二重特異性であってもよい。
【０１９９】
５．二重特異性抗体
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに対して結合特異性を有する抗体である。例示的な二重特異性抗体は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１タンパク質の２つの異なるエピトープに結合しうる。他のこのような抗体では他のタンパク質に対する結合部位とＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１結合部位とが結合しうる。あるいは、抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体アームは、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１発現細胞に細胞防御メカニズムを集中させ局在させるように、ＦｃγＲＩ(ＣＤ６４)、ＦｃγＲＩＩ(ＣＤ３２)及びＦｃγＲＩＩＩ(ＣＤ１６)等のＩｇＧ(ＦｃγＲ)に対するＦｃレセプター、又はＴ細胞レセプター分子(例えばＣＤ３)等の白血球上のトリガー分子に結合するアームと結合しうる。また、二重特異性抗体はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１を発現する細胞に細胞障害剤を局在化するためにも使用されうる。これらの抗体はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１結合アーム及び細胞障害剤(例えば、サポリン(saporin)、抗インターフェロン-α、ビンカアルカロイド、リシンＡ鎖、メトトレキセート又は放射性同位体ハプテン)と結合するアームを有する。二重特異性抗体は完全長抗体又は抗体断片(例えばＦ(ａｂ')２二重特異性抗体)として調製することができる。
【０２００】
国際公開第９６／１６６７３号には、二重特異性抗-ＥｒｂＢ２／抗-ＦｃγＲＩＩＩ抗体が記載されており、米国特許第５８３７２３４号には、二重特異性抗-ＥｒｂＢ２／抗-ＦｃγＲＩ抗体が開示されている。二重特異性抗-ＥｒｂＢ２／Ｆｃα抗体は国際公開第９８／０２４６３号に示されている。米国特許第５８２１３３７号は、二重特異性抗-ＥｒｂＢ２／抗-ＣＤ３抗体を教示するものである。
二重特異性抗体を作成する方法は当該分野において既知である。完全長二重特異性抗体の伝統的な産生は二つの免疫グロブリン重鎖-軽鎖対の同時発現に基づき、ここで二つの鎖は異なる特異性を持っている(Millstein等, Nature, 305:537-539(1983))。免疫グロブリン重鎖及び軽鎖が無作為に取り揃えられているため、これらのハイブリドーマ(四部雑種)は１０個の異なる抗体分子の可能性ある混合物を産生し、そのうちただ一つが正しい二重特異性構造を有する。通常、アフィニティークロマトグラフィー工程により行われる正しい分子の精製は、かなり煩わしく、生成物収率は低い。同様の方法が国際公開第９３／０８８２９号及びTraunecker等、EMBO J. 10:3655-3659(1991)に開示されている。
異なったアプローチ法では、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン(抗原-抗体結合部位)を免疫グロブリン定常ドメイン配列と融合させる。該融合は好ましくは、少なくともヒンジの一部、ＣＨ２及びＣＨ３領域を含むＩｇ重鎖定常ドメインである。軽鎖の結合に必要な部位を含む第一の重鎖定常領域(ＣＨ１)を、融合の少なくとも一つに存在させることが望ましい。免疫グロブリン重鎖の融合、望まれるならば免疫グロブリン軽鎖をコードしているＤＮＡを、別個の発現ベクター中に挿入し、適当な宿主生物に同時トランスフェクトする。これにより、組立に使用される三つのポリペプチド鎖の等しくない比率が所望の二重特異性抗体の最適な収率をもたらす態様において、三つのポリペプチド断片の相互の割合の調節に大きな融通性が与えられる。しかし、少なくとも二つのポリペプチド鎖の等しい比率での発現が高収率をもたらすとき、又はその比率が所望の鎖の結合にあまり影響がないときは、２または３個全てのポリペプチド鎖のためのコード化配列を一つの発現ベクターに挿入することが可能である。
【０２０１】
この手法の好ましい実施態様では、二重特異性抗体は、第一の結合特異性を有する一方のアームのハイブリッド免疫グロブリン重鎖と他方のアームのハイブリッド免疫グロブリン重鎖-軽鎖対(第二の結合特異性を提供する)とからなる。二重特異性分子の半分にしか免疫グロブリン軽鎖がないと容易な分離法が提供されるため、この非対称的構造は、所望の二重特異性化合物を不要な免疫グロブリン鎖の組み合わせから分離することを容易にすることが分かった。このアプローチ法は、国際公開第９４／０４６９０号に開示されている。二重特異性抗体を産生する更なる詳細については、例えばSuresh等, Methods in Enzymology, 121:210 (1986)を参照されたい。
米国特許第５７３１１６８号に記載された他の手法によれば、一対の抗体分子間の界面を操作して組換え細胞培養から回収されるヘテロダイマーのパーセントを最大にすることができる。好適な界面はＣＨ３ドメインの少なくとも一部を含む。この方法では、第１抗体分子の界面からの一又は複数の小さいアミノ酸側鎖がより大きな側鎖(例えばチロシン又はトリプトファン)と置き換えられる。大きな側鎖と同じ又は類似のサイズの相補的「キャビティ」を、大きなアミノ酸側鎖を小さいもの(例えばアラニン又はスレオニン)と置き換えることにより第２の抗体分子の界面に作り出す。これにより、ホモダイマーのような不要の他の最終産物に対してヘテロダイマーの収量を増大させるメカニズムが提供される。
【０２０２】
二重特異性抗体は、架橋した又は「ヘテロコンジュゲート」抗体もまた含む。例えば、ヘテロコンジュゲートの抗体の一方はアビジンに結合され、他方はビオチンに結合され得る。そのような抗体は、例えば、不要の細胞に対する免疫系細胞をターゲティングするため(米国特許第４６７６９８０号）、及びＨＩＶ感染の治療のために提案された（国際公開第９１／００３６０号、同９２／２００３７３号、及び欧州特許第０３０８９号)。ヘテロコンジュゲート抗体は、あらゆる簡便な架橋法を用いて作製することができる。好適な架橋剤は当該分野において良く知られており、幾つかの架橋技術と共に米国特許第４６７６９８０号に開示されている。
抗体断片から二重特異性抗体を産生する技術もまた文献に記載されている。例えば、化学結合を使用して二重特異性抗体を調製することができる。Brennan等, Science, 229:81 (1985) は無傷の抗体をタンパク分解性に切断してＦ(ａｂ')２断片を産生する手順を記述している。これらの断片は、ジチオール錯体形成剤、亜砒酸ナトリウムの存在下で還元して近接ジチオールを安定化させ、分子間ジスルフィド形成を防止する。産生されたＦａｂ'断片はついでチオニトロベンゾアート(ＴＮＢ)誘導体に変換される。Ｆａｂ'-ＴＮＢ誘導体の一つをついでメルカプトエチルアミンでの還元によりＦａｂ'-チオールに再変換し、他のＦａｂ'-ＴＮＢ誘導体の等モル量と混合して二重特異性抗体を形成する。作られた二重特異性抗体は酵素の選択的固定化用の薬剤として使用することができる。
【０２０３】
最近の進歩により、大腸菌からのＦａｂ'-ＳＨ断片の直接の回収が容易になり、これは化学的に結合して二重特異性抗体を形成することができる。Shalaby等,J.Exp.Med., 175:217-225 (1992)は完全にヒト化された二重特異性抗体Ｆ(ａｂ')２分子の製造を記述している。各Ｆａｂ'断片は大腸菌から別個に分泌され、インビトロで定方向化学共役を受けて二重特異性抗体を形成する。このようにして形成された二重特異性抗体は、正常なヒトＴ細胞、及びＥｒｂＢ２レセプターを過剰発現する細胞に結合可能で、ヒト乳房腫瘍標的に対するヒト細胞傷害性リンパ球の細胞溶解活性の誘因となる。組換え細胞培養から直接的に二重特異性抗体断片を作成し分離する様々な技術もまた記述されている。例えば、二重特異性抗体はロイシンジッパーを使用して生成されている。Kostelny等, J.Immunol. 148(5):1547-1553 (1992)。Ｆｏｓ及びＪｕｎタンパク質からのロイシンジッパーペプチドを遺伝子融合により二つの異なった抗体のＦａｂ'部分に結合させる。抗体ホモダイマーをヒンジ領域で還元してモノマーを形成し、ついで再酸化して抗体ヘテロダイマーを形成する。この方法はまた抗体ホモダイマーの生成に対して使用することができる。Hollinger等, Proc.Natl.Acad.Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)により記述された「ダイアボディ」技術は二重特異性抗体断片を作成する別のメカニズムを提供した。断片は、同一鎖上の２つのドメイン間の対形成を可能にするには十分に短いリンカーによりＶＬにＶＨを結合してなる。従って、一つの断片のＶＨ及びＶＬドメインは他の断片の相補的ＶＬ及びＶＨドメインと強制的に対形成させられ、よって２つの抗原結合部位を形成する。単鎖Ｆｖ(ｓＦｖ)ダイマーの使用により二重特異性抗体断片を製造する他の方策もまた報告されている。Gruber等, J.Immunol. 152:5368 (1994)を参照されたい。
二価より多い抗体も考えられる。例えば、三重特異性抗体を調製することができる。Tutt等 J.Immunol. 147:60(1991)。
【０２０４】
６．ヘテロコンジュゲート抗体
ヘテロコンジュゲート抗体もまた本発明の範囲に入る。ヘテロコンジュゲート抗体は、２つの共有結合した抗体からなる。このような抗体は、例えば、免疫系細胞を不要な細胞に対してターゲティングさせるため［米国特許第４６７６９８０号］及びＨＩＶ感染の治療のために［国際公開第９１／００３６０；国際公開第９２／２００３７３；欧州特許第０３０８９号］提案されている。この抗体は、架橋剤に関連したものを含む合成タンパク化学における既知の方法を使用して、インビトロで調製することができると考えられる。例えば、ジスルフィド交換反応を使用するか又はチオエーテル結合を形成することによって、免疫毒素を作成することができる。この目的に対して好適な試薬の例には、イミノチオレート及びメチル-４-メルカプトブチルイミダート、及び例えば米国特許第４６７６９８０号に開示されたものが含まれる。
【０２０５】
７．多価抗体
多価抗体は、抗体が結合する抗原を発現する細胞により、二価抗体よりも早くインターナリゼーション(及び／又は異化)されうる。本発明の抗体は、３又はそれ以上の結合部位を有する多価抗体(ＩｇＭクラス以外のもの)であり得(例えば四価抗体)、抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組換え発現により容易に生成することができる。多価抗体は二量化ドメインと３又はそれ以上の抗原結合部位を有する。好ましい二量化ドメインはＦｃ領域又はヒンジ領域を有する(又はそれらからなる)。このシナリオにおいて、抗体はＦｃ領域と、Ｆｃ領域のアミノ末端に３又はそれ以上の抗原結合部位を有しているであろう。ここで、好ましい多価抗体は３ないし８、好ましくは４の抗原結合部位を有する(又はそれらからなる)。多価抗体は少なくとも１つのポリペプチド鎖(好ましくは２つのポリペプチド鎖)を有し、ポリペプチド鎖(類)は２又はそれ以上の可変ドメインを有する。例えば、ポリペプチド鎖(類)はＶＤ１-(Ｘ１)ｎ-ＶＤ２-(Ｘ２)ｎ-Ｆｃを有し、ここでＶＤ１は第１の可変ドメインであり、ＶＤ２は第２の可変ドメインであり、ＦｃはＦｃ領域のポリペプチド鎖の一つであり、Ｘ１及びＸ２はアミノ酸又はポリペプチドを表し、ｎは０又は１である。例えば、ポリペプチド鎖(類)は：ＶＨ-ＣＨ１-柔軟なリンカー-ＶＨ-ＣＨ１-Ｆｃ領域鎖；又はＶＨ-ＣＨ１-ＶＨ-ＣＨ１-Ｆｃ領域鎖を有し得る。ここで多価抗体は、好ましくは少なくとも２つ(好ましくは４つ)の軽鎖可変ドメインポリペプチドをさらに有する。ここで多価抗体は、例えば約２〜約８の軽鎖可変ドメインポリペプチドを有する。ここで考察される軽鎖可変ドメインポリペプチドは軽鎖可変ドメインを有し、場合によってはＣＬドメインを更に有する。
【０２０６】
８．エフェクター機能の加工
本発明の抗体をエフェクター機能について改変し、例えば抗体の抗原-依存細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）及び／又は補体依存細胞傷害性（ＣＤＣ）を向上させることは望ましい。これは、抗体のＦｃ領域で一又は複数のアミノ酸置換を誘導することによりなされうる。あるいは又はさらに、システイン残基をＦｃ領域に導入し、それにより、この領域に鎖間ジスルフィド結合を形成するようにしてもよい。そのようにして生成された同種二量体抗体は、向上したインターナリゼーション能力及び／又は増加した補体媒介細胞殺傷及び抗体−依存細胞性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を有する可能性がある。Caron等, J. Exp. Med. 176: 1191-1195 (1992)及びShopes,  B. J. Immunol. 148: 2918-2922 (1992)参照。また、向上した抗腫瘍活性を持つ同種二量体抗体は、Wolff等, Cancer Research 53: 2560-2565 (1993)に記載されている異種二官能性架橋を用いて調製することができる。あるいは、抗体は、２つのＦｃ領域を有するように加工して、それにより補体溶解及びＡＤＣＣ能力を向上させることもできる。Stevenson等, Anti-Cancer Drug Design 3: 219-230 (1989)参照。
抗体の血清半減期を増大させるために、例えば米国特許第５７３９２７７号に記載のように、抗体(特に抗体断片)へサルベージレセプター結合エピトープを導入してもよい。ここで使用される場合の「サルベージレセプター結合エピトープ」なる用語は、ＩｇＧ分子のインビボ血清半減期を増加させる原因であるＩｇＧ分子(例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４)のＦｃ領域のエピトープを意味する。
【０２０７】
９．免疫複合体
また、本発明は、化学治療薬、成長阻害剤、毒素（例えば、細菌、真菌、植物又は動物由来の酵素活性毒素、又はその断片）などの細胞傷害性剤、あるいは放射性同位体（即ち、放射性コンジュゲート）と抱合している抗体を含む免疫複合体に関する。
このような免疫複合体の生成に有用な化学治療薬を上に記載した。用いることのできる酵素活性毒素及びその断片には、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、（緑膿菌からの）外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシン(modeccin)Ａ鎖、アルファ-サルシン、アレウリテス・フォーディ(Aleurites fordii)タンパク質、ジアンチン(dianthin)タンパク質、フィトラカ・アメリカーナ(Phytolaca americana)タンパク質（PAPI、PAPII、及びPAP-S）、モモルディカ・チャランチア(momordica charantia)インヒビター、クルシン(curcin)、クロチン(crotin)、サパオナリア・オフィシナリス(sapaonaria officinalis)インヒビター、ゲロニン(gelonin)、ミトゲリン(mitogellin)、レストリクトシン(restrictocin)、フェノマイシン(phenomycin)、エノマイシン(enomycin)及びトリコテセン(tricothecene)が含まれる。放射性コンジュゲート抗体の生成には、様々な放射性ヌクレオチドが利用可能である。例としては、２１２Ｂｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、９０Ｙ及び１８６Ｒｅが含まれる。抗体及び細胞傷害性薬の複合体は、種々の二官能性タンパク質カップリング剤、例えば、Ｎ-スクシンイミジル-３-(２-ピリジルジチオール)プロピオナート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（ジメチルアジピミデートＨＣＬ等）、活性エステル（ジスクシンイミジルスベレート等）、アルデヒド（グルタルアルデヒド等）、ビス-アジド化合物（ビス(ｐ-アジドベンゾイル)ヘキサンジアミン等）、ビス-ジアゾニウム誘導体（ビス-(ｐ-ジアゾニウムベンゾイル)-エチレンジアミン等）、ジイソシアネート（トリエン２，６-ジイソシアネート等）、及びビス-活性フッ素化合物（１，５-ジフルオロ-２，４-ジニトロベンゼン等）を用いて作成できる。例えば、リシン免疫毒素は、Vitetta等, Science 238: 1098 (1987)に記載されているように調製することができる。カーボン-１４-標識１-イソチオシアナトベンジル-３-メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ-ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドの抗体への抱合のためのキレート剤の例である。国際公開９４／１１０２６参照。
抗体のコンジュゲートと一又は複数の小分子毒素、例えばカリケアマイシン、メイタンシノイド、トリコセン(trichothene)及びＣＣ１０６５、及び毒性活性を有するこれらの毒素の誘導体が、ここで考察される。
【０２０８】
メイタンシン及びメイタンシノイド
本発明の抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体(完全長又は断片)は一又は複数のメイタンシノイド分子と結合している。
メイタンシノイドは、チューブリン重合を阻害するように作用する分裂阻害剤である。メイタンシンは、最初、東アフリカシラブMaytenus serrataから単離されたものである(米国特許第３８９６１１１号)。その後、ある種の微生物がメイタンシノイド類、例えばメイタンシノール及びＣ-３メイタンシノールエステルを生成することが発見された(米国特許第４１５１０４２号)。合成メイタンシノール及びその誘導体及び類似体は、例えば米国特許第４１３７２３０号；同４２４８８７０号；同４２５６７４６号；同４２６０６０８号；同４２６５８１４号；同４２９４７５７号；同４３０７０１６号；同４３０８２６８号；同４３０８２６９号；同４３０９４２８号；同４３１３９４６号；同４３１５９２９号；同４３１７８２１号；同４３２２３４８号；同４３３１５９８号；同４３６１６５０号；同４３６４８６６号；同４４２４２１９号；同４４５０２５４号；同４３６２６６３号；及び同４３７１５３３号に開示されており、その開示は出典を明示してここに援用する。
【０２０９】
メイタンシノイド-抗体コンジュゲート
治療指標を改善する試みにおいて、メイタンシン及びメイタンシノイドは、腫瘍細胞抗原に特異的に結合する抗体と結合している。メイタンシノイドを含有する免疫コンジュゲート及びそれらの治療用途は、例えば米国特許第５，２０８，０２０号、同５，４１６，０６４号、欧州特許第０４２５２３５Ｂ１号に開示されており、その開示は出典を明示してここに取り込まれる。Liu等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93：8618-8623(1996)には、ヒト結腸直腸癌に対するモノクローナル抗体Ｃ２４２に結合するＤＭ１と命名されたメイタンシノイドを含有する免疫コンジュゲートが記載されている。前記コンジュゲートは培養された結腸癌細胞に対して高い細胞傷害性を有することが見出されており、インビボ腫瘍成長アッセイにおいて抗腫瘍活性を示す。Chari等, Cancer Research, 52：127-131(1992)には、メイタンシノイドが、ジスルフィド結合を介して、ヒト結腸癌株化細胞の抗原に結合するマウス抗体Ａ７、又はＨＥＲ-２／ｎｅｕオンコジーンに結合する他のマウスモノクローナル抗体ＴＡ.１に結合している免疫コンジュゲートが記載されている。ＴＡ.１-メイタンシノイドコンジュゲートの細胞傷害性はヒト乳癌株化細胞ＳＫ-ＢＲ-３におけるインビトロで試験され、細胞当たり３ｘ１０５ＨＥＲ-２表面抗原が発現した。薬剤コンジュゲートにより、遊離のメイタンシノイド剤に類似した細胞障害度が達成され、該細胞障害度は、抗体分子当たりのメイタンシノイド分子の数を増加させることにより増加する。Ａ７-メイタンシノイドコンジュゲートはマウスにおいては低い全身性細胞傷害性を示した。
【０２１０】
抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体-メイタンシノイドコンジュゲート(免疫コンジュゲート)
抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体-メイタンシノイドコンジュゲートは、抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体又はメイタンシノイド分子のいずれの生物学的活性もほとんど低減することなく、メイタンシノイド分子に抗ＰＲＯ抗体を化学的に結合させることにより調製される。１分子の毒素／抗体は、裸抗体の使用において細胞傷害性を高めることが予期されているが、抗体分子当たり、平均３−４のメイタンシノイド分子が結合したものは、抗体の機能又は溶解性に悪影響を与えることなく、標的細胞に対する細胞傷害性を向上させるといった効力を示す。メイタンシノイドは当該技術分野でよく知られており、公知の技術で合成することも、天然源から単離することもできる。適切なメイタンシノイドは、例えば米国特許第５２０８０２０号、及び他の特許、及び上述した特許ではない刊行物に開示されている。好ましいメイタンシノイドは、メイタンシノール、及び種々のメイタンシノールエステル等の、メイタンシノール分子の芳香環又は他の位置が修飾されたメイタンシノール類似体である。
例えば、米国特許第５２０８０２０号又は欧州特許第０４２５２３５Ｂ１号、及びChari等, Cancer Research, 52：127-131(1992)に開示されているもの等を含む、抗体-メイタンシノイドコンジュゲートを作製するために、当該技術で公知の多くの結合基がある。結合基には、上述した特許に開示されているようなジスルフィド基、チオエーテル基、酸不安定性基、光不安定性基、ペプチターゼ不安定性基、又はエステラーゼ不安定性基が含まれるが、ジスルフィド及びチオエーテル基が好ましい。
【０２１１】
抗体とメイタンシノイドとのコンジュゲートは、種々の二官能性タンパク質カップリング剤、例えばＮ-スクシンイミジル-３-(２-ピリジルジチオ)プロピオナート(ＳＰＤＰ)、スクシンイミジル-４-(Ｎ-マレイミドメチル)シクロヘキサン-１-カルボキシラート、イミノチオラン(ＩＴ)、イミドエステル類の二官能性誘導体(例えばジメチルアジピミダートＨＣＬ)、活性エステル類(例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル)、アルデヒド類(例えば、グルタルアルデヒド)、ビスアジド化合物(例えば、ビス(ｐ-アジドベンゾイル)ヘキサンジアミン)、ビス-ジアゾニウム誘導体(例えば、ビス-(ｐ-ジアゾニウムベンゾイル)エチレンジアミン)、ジイソシアネート(例えば、トルエン-２,６-ジイソシアネート)、及び二活性フッ素化合物(例えば、１,５-ジフルオロ-２,４-ジニトロベンゼン)を使用して作製することができる。特に好ましいカップリング剤には、ジスルフィド結合により提供されるＮ-スクシンイミジル-４-(２-ピリジルチオ)ペンタノアート(ＳＰＰ)及びＮ-スクシンイミジル-３-(２-ピリジルジチオ)プロピオナート(ＳＰＤＰ)(Carlsson等, Biochem. J. 173：723-737[1978])が含まれる。
リンカーは結合の種類に応じて、種々の位置でメイタンシノイド分子に結合し得る。例えば、従来からのカップリング技術を使用してヒドロキシル基と反応させることによりエステル結合を形成することができる。反応はヒドロキシル基を有するＣ-３位、ヒドロキシメチルで修飾されたＣ-１４位、ヒドロキシル基で修飾されたＣ-１５位、及びヒドロキシル基を有するＣ-２０位で生じる。好ましい実施態様において、結合はメイタンシノール又はメイタンシノールの類似体のＣ-３位で形成される。
【０２１２】
カリケアマイシン
対象の他の免疫コンジュゲートには、一又は複数のカリケアマイシン分子と結合した抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体が含まれる。抗生物質のカリケアマイシンファミリーはサブ-ピコモルの濃度で二重鎖ＤＮＡ破壊を生じることができる。カリケアマイシンファミリーのコンジュゲートの調製については、米国特許第５７１２３７４号、同５７１４５８６号、同５７３９１１６号、同５７６７２８５号、同５７７０７０１号、同５７７０７１０号、同５７７３００１号、同５８７７２９６号(全て、American Cyanamid Company)を参照のこと。使用可能なカリケアマイシンの構造類似体には、限定するものではないが、γ１Ｉ、α２Ｉ、α３Ｉ、Ｎ-アセチル-γ１Ｉ、ＰＳＡＧ及びθＩ１(Hinman等, Cancer Research, 53：3336-3342(1993)、Lode等 Cancer Research, 58：2925-2928(1998)及び上述したAmerican Cyanamidの米国特許)が含まれる。抗体が結合可能な他の抗腫瘍剤は、葉酸代謝拮抗薬であるＱＦＡである。カリケアマイシン及びＱＦＡは双方共、細胞内に作用部位を有し、原形質膜を容易に通過しない。よって抗体媒介性インターナリゼーションによるこれらの薬剤の細胞への取込により、細胞障害効果が大きく向上する。
【０２１３】
他の細胞障害剤
本発明の抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体と結合可能な他の抗腫瘍剤には、ＢＣＮＵ、ストレプトゾイシン、ビンクリスチン及び５-フルオロウラシル、米国特許第５０５３３９４号、同５７７０７１０号に記載されており、集合的にＬＬ-Ｅ３３２８８複合体として公知の薬剤のファミリー、並びにエスペラマイシン(esperamicine)(米国特許第５８７７２９６号)が含まれる。
使用可能な酵素活性毒及びその断片には、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合性活性断片、外毒素Ａ鎖(シュードモナス・アエルギノーサ(Pseudomonas aeruginosa))、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシン(modeccin)Ａ鎖、アルファ-サルシン(sarcin)、アレウライツ・フォルディイ(Aleurites fordii)プロテイン、ジアンシン(dianthin)プロテイン、フィトラッカ・アメリカーナ(Phytolaca americana)プロテイン(ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ及びＰＡＰ-Ｓ)、モモルディカ・キャランティア(momordica charantia)インヒビター、クルシン(curcin)、クロチン、サパオナリア(sapaonaria)オフィシナリスインヒビター、ゲロニン(gelonin)、マイトゲリン(mitogellin)、レストリクトシン(restrictocin)、フェノマイシン、エノマイシン及びトリコセセンス(tricothecenes)が含まれる。例えば、１９９３年１０月２８日公開の国際公開第９３／２１２３２号を参照のこと。
本発明は、抗体と核酸分解活性を有する化合物(例えばリボヌクレアーゼ又はＤＮＡエンドヌクレアーゼ、例えばデオキシリボヌクレアーゼ；ＤＮアーゼ)との間に形成される免疫コンジュゲートをさらに考察する。
【０２１４】
腫瘍を選択的に破壊するため、抗体は高い放射性を有する原子を含有してよい。放射性コンジュゲートした抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体を生成するために、種々の放射性同位体が利用される。例には、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２及びＬｕの放射性同位体が含まれる。コンジュゲートが診断用に使用される場合、それはシンチグラフィー研究用の放射性原子、例えばｔｃ９９ｍ又はＩ１２３、又は核磁気共鳴(ＮＭＲ)映像(磁気共鳴映像、mriとしても公知)用のスピン標識、例えばヨウ素-１２３、ヨウ素-１３１、インジウム-１１１、フッ素-１９、炭素-１３、窒素-１５、酸素-１７、ガドリニウム、マンガン又は鉄を含有し得る。
放射-又は他の標識が、公知の方法でコンジュゲートに導入される。例えば、ペプチドは生物合成されるか、又は水素の代わりにフッ素-１９を含む適切なアミノ酸前駆体を使用する化学的なアミノ酸合成により合成される。標識、例えばｔｃ９９ｍ又はＩ１２３、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８及びＩｎ１１１は、ペプチドのシステイン残基を介して結合可能である。イットリウム-９０はリジン残基を介して結合可能である。IODOGEN法(Fraker等(1978) Biochem. Biophys. Res. Commun. 80：49-57)は、ヨウ素-１２３の導入に使用することができる。他の方法の詳細は、「Monoclonal Antibodies in Immunoscintigraphy」(Chatal, CRC Press 1989)に記載されている。
【０２１５】
抗体と細胞障害剤のコンジュゲートは、種々の二官能性タンパク質カップリング剤、例えばＮ-スクシンイミジル-３-(２-ピリジルジチオ)プロピオナート(ＳＰＤＰ)、スクシンイミジル-４-(Ｎ-マレイミドメチル)シクロヘキサン-１-カルボキシラート、イミノチオラン(ＩＴ)、イミドエステル類の二官能性誘導体(例えばジメチルアジピミダートＨＣＬ)、活性エステル類(例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル)、アルデヒド類(例えば、グルタルアルデヒド)、ビスアジド化合物(例えば、ビス(ｐ-アジドベンゾイル)ヘキサンジアミン)、ビス-ジアゾニウム誘導体(例えば、ビス-(ｐ-ジアゾニウムベンゾイル)エチレンジアミン)、ジイソシアネート(例えば、トリエン-２,６-ジイソシアネート)、及び二活性フッ素化合物(例えば、１,５-ジフルオロ-２,４-ジニトロベンゼン)を使用して作製することができる。例えば、リシン免疫毒素は、Vitetta等, Science 238:1098(1987)に記載されているようにして調製することができる。炭素-１４標識１-イソチオシアナトベンジル-３-メチルジエチレン-トリアミン五酢酸(ＭＸ-ＤＴＰＡ)が抗体に放射性ヌクレオチドをコンジュゲートするためのキレート剤の例である。国際公開第９４／１１０２６号を参照されたい。リンカーは細胞中の細胞障害剤の放出を容易にするための「切断可能リンカー」であってよい。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ過敏性リンカー、光不安定性リンカー、ジメチルリンカー又はジスルフィド含有リンカーが使用され得る(Chari等, Cancer Research, 52：127-131(1992)；米国特許第５２０８０２０号)。
【０２１６】
別法として、抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体及び細胞障害剤を含有する融合タンパク質は、例えば組換え技術又はペプチド合成により作製される。ＤＮＡの長さは、コンジュゲートの所望する特性を破壊しないリンカーペプチドをコードする領域により離間しているか、又は互いに隣接しているコンジュゲートの２つの部分をコードする領域をそれぞれ含有する。
本発明は、腫瘍の事前ターゲティングに利用するために、「レセプター」(例えばストレプトアビジン)に抗体をコンジュゲートしうることを提供し、ここで抗体-レセプターコンジュゲートを患者に投与し、続いて清澄剤を使用し、循環から未結合コンジュゲートを除去し、細胞障害剤(例えば放射性ヌクレオチド)にコンジュゲートする「リガンド」(例えばアビジン)を投与する。
【０２１７】
１０．免疫リポソーム
ここで開示されている抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体は、免疫リポソームとして処方することもできる。「リポソーム」は、哺乳動物への薬物輸送に有用な、脂質、リン脂質及び／又は界面活性剤を含む種々のタイプの小胞体である。リポソームの成分は、通常は生物膜の脂質配向に類似した２層構造に配列される。抗体を含有するリポソームは、例えばEpstein等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688(1985)；Hwang等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4030(1980)；及び米国特許第４４８５０４５号及び同４５４４５４５号；及び１９９７年１０月２３日に公開の国際公開９７／３８７３１に記載されているように、当該分野において既知の方法により調製される。循環時間が増したリポソームは米国特許第５０１３５５６号に開示されている。
特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール及びＰＥＧ-誘導体化ホスファチジルエタノールアミン(ＰＥＧ-ＰＥ)を含有する脂質組成物を用いた逆相蒸発法により作製することができる。リポソームは孔径が定められたフィルターを通して押し出され、所望の直径を有するリポソームが得られる。本発明の抗体のＦａｂ'断片は、ジスルフィド交換反応を介して、Martin等, J. Biol. Chem. 257:286-288(1982)に記載されているようにしてリポソームにコンジュゲートすることができる。場合によっては、化学療法剤はリポソーム内に包含される。Gabizon等, J. National Cancer Inst. 81(19)1484(1989)を参照されたい。
【０２１８】
１１．抗体の製薬組成物
ここで同定されるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドに特異的に結合する抗体、並びに上記に開示したスクリーニングアッセイで同定された他の分子は、種々の疾患の治療のために、製薬組成物の形態で投与することができる。
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドが細胞内であり、全抗体が阻害剤として用いられる場合、内在化抗体が好ましい。しかし、リポフェクション又はリポソームも抗体、又は抗体断片を細胞に導入するのに使用できる。抗体断片が用いられる場合、標的タンパク質の結合ドメインに特異的に結合する最小阻害断片が好ましい。例えば、抗体の可変領域配列に基づいて、標的タンパク質配列に結合する能力を保持したペプチド分子が設計できる。このようなペプチドは、化学的に合成でき、又は組換えＤＮＡ技術によって生成できる。例えば、Marasco等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90, 7889-7893 (1993)参照。ここでの製剤は、治療すべき特定の徴候に必要な場合に１以上の活性化合物、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を持つものも含んでよい。あるいは、又はそれに加えて、組成物は、細胞毒性薬、サイトカイン又は成長阻害剤を含んでもよい。これらの分子は、適切には、意図する目的に有効な量の組み合わせで存在する。
【０２１９】
また、活性成分は、例えばコアセルベーション技術により又は界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えば、各々ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン-マイクロカプセル及びポリ（メタクリル酸メチル）マイクロカプセル中、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミン小球、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）中、又はマイクロエマルション中に包括されていてもよい。これらの技術は上掲のRemington's Pharmaceutical Scienceに開示されている。
インビボ投与に使用される製剤は無菌でなけらばならない。これは、滅菌濾過膜を通した濾過により容易に達成される。
徐放性製剤を調製してもよい。徐放性製剤の好適な例は、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスを含み、このマトリクスは成形された物品、例えばフィルム、又はマイクロカプセルの形状である。除放性マトリクスの例は、ポリエステルヒドロゲル（例えば、ポリ(２-ヒドロキシエチル-メタクリレート)又はポリ(ビニルアルコール））、ポリアクチド（米国特許第３７７３９１９号）、Ｌ-グルタミン酸及びγ-エチル-Ｌ-グルタメート、非分解性エチレン-酢酸ビニル、LUPRON DEPOT(商品名)（乳酸-グリコール酸コポリマーと酢酸リュープロリドの注射可能な小球）などの分解性乳酸-グリコール酸コポリマー、ポリ-Ｄ-(-)-３-ヒドロキシブチル酸を含む。エチレン-酢酸ビニル及び乳酸-グリコール酸などのポリマーは分子を１００日に渡って放出することができるが、ある種のヒドロゲルはより短時間でタンパク質を放出してしまう。カプセル化された抗体が身体内に長時間残ると、それらは３７℃の水分に露出されることにより変性又は凝集し、その結果、生物学的活性の低下及び起こりうる免疫原性の変化をもたらす。合理的な方法は、含まれる機構に依存する安定化について工夫することができる。例えば、凝集機構がチオ−ジスルフィド交換を通した分子間Ｓ−Ｓ結合形成であると発見された場合、安定化はスルフヒドリル残基の修飾、酸性溶液からの凍結乾燥、水分含有量の制御、適切な添加剤の付加、及び特異的ポリマーマトリクス組成物の開発によって達成されうる。
【０２２０】
Ｇ．抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体の用途
本発明の抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体は、神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；胚性発生障害又は致死、又は代謝異常に対して様々な治療上及び／又は診断上の有用性を有している。例えば、抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１の診断アッセイ、例えばその特定細胞、組織、又は血清での発現（ある場合には次差的発現）の検出に用いられる。競合的結合アッセイ、直接又は間接サンドウィッチアッセイ及び不均一又は均一相で行われる免疫沈降アッセイ［Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, CRC Press, Inc. (1987) pp. 147-158］等のこの分野で知られた種々の診断アッセイ技術が使用される。診断アッセイで用いられる抗体は、検出可能な部位で標識されうる。検出可能な部位は、直接又は間接に、検出可能なシグナルを発生しなければならない。例えば、検出可能な部位は、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ又は１２５Ｉ等の放射性同位体、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン又はルシフェリン等の蛍光又は化学発光化合物、あるいはアルカリホスファターゼ、ベータ-ガラクトシダーゼ又はセイヨウワサビペルオキシダーゼ等の酵素であってよい。抗体に検出可能な部位を抱合させるためにこの分野で知られた任意の方法が用いられ、それにはHunter等 Nature, 144:945 (1962)；David等, Biochemistry, 13: 1014 (1974)；Pain等, J. Immunol. Meth., 40:219 (1981) ;及びNygren, J. Histochem. and Cytochem., 30:407 (1982)に記載された方法が含まれる。
【０２２１】
また、抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体は組換え細胞培養又は天然供給源からのＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１のアフィニティー精製にも有用である。この方法においては、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドに対する抗体を、当該分野でよく知られている方法を使用して、セファデックス樹脂や濾紙のような適当な支持体に固定化する。次に、固定化された抗体を、精製するＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを含む試料と接触させた後、固定化された抗体に結合したＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド以外の試料中の物質を実質的に全て除去する適当な溶媒で支持体を洗浄する。最後に、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを抗体から脱離させる他の適当な溶媒で支持体を洗浄する。
【０２２２】
以下の実施例は例示するためにのみ提供されるものであって、本発明の範囲を決して限定することを意図するものではない。
本明細書で引用した全ての特許及び参考文献の全てを、出典明示によりここに援用する。
【０２２３】
実施例１
新規なポリペプチド及びそれをコードするｃＤＮＡを同定するための細胞外ドメイン相同性スクリーニング
Swiss-Prot公的データベースからの約９５０の既知の分泌タンパク質からの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）配列（もしあれば、分泌シグナル配列を含む）を、ＥＳＴデータベースの検索に使用した。ＥＳＴデータベースは、公的データベース（例えば、Dayhoff、GenBank）及び企業のデータベース（例えば、LIFESEQTM、Incyte Pharmaceuticals、Palo Alto, CA）を含む。検索は、コンピュータプログラムBLAST又はBLAST-2（Altschul等, Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)）を用いて、ＥＣＤタンパク質配列のＥＳＴ配列の６フレーム翻訳との比較として実施した。既知のタンパク質をコードせず、BLASTスコア７０（９０の場合もある）又はそれ以上を持つ比較物は、プログラム「phrap」（Phil Green, University of Washington, Seattle, Washington）で集団化してコンセンサスＤＮＡ配列を構築した。
この細胞外ドメイン相同性スクリーニングを用いて、phrapを用いて他の同定されたＥＳＴ配列に対してコンセンサスＤＮＡ配列を構築した。更に、得られたコンセンサスＤＮＡ配列を、しばしば（常にではない）BLAST又はBLAST-2及びphrapの繰り返しサイクルを用いて伸長し、コンセンサス配列を上で議論したＥＳＴ配列の供給源を用いて可能な限り伸長させた。
上記のように得られたコンセンサス配列に基づいて、ついでオリゴヌクレオチドを合成し、ＰＣＲにより対象とする配列を含むｃＤＮＡライブラリーを同定するため、及びＰＲＯポリペプチドの完全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして用いるために使用した。正方向及び逆方向ＰＣＲプライマーは一般的に２０から３０ヌクレオチドの範囲であり、しばしば約１００−１０００ｂｐ長のＰＣＲ産物を与えるために設計される。プローブ配列は、典型的に４０−５５ｂｐ長である。幾つかの場合には、コンセンサス配列が約１−１．５ｋｂｐより大きいときに付加的なオリゴヌクレオチドが合成される。完全長クローンについて幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、ライブラリーからのＤＮＡを、Ausubel等, Current Protocols in Molecular Biology のように、ＰＣＲプライマー対でのＰＣＲによりスクリーニングした。ポジティブライブラリーを、ついで、プローブオリゴヌクレオチド及びプライマー対の一方を用いて対象とする遺伝子をコードするクローンを単離するのに使用した。
ｃＤＮＡクローンの単離に用いたｃＤＮＡライブラリーは、Invitrogen, San Diego, CAからのもの等の市販試薬を用いて標準的な方法によって作成した。ｃＤＮＡは、ＮｏｔＩ部位を含むオリゴｄＴでプライムし、平滑末端でＳａｌＩヘミキナーゼアダプターに結合させ、ＮｏｔＩで切断し、ゲル電気泳動でおよそのサイズ分類し、そして適切なクローニングベクター（ｐＲＫＢ又はｐＲＫＤ等；ｐＲＫ５ＢはＳｆｉＩ部位を含まないｐＲＫ５Ｄの前駆体である；Holmes等, Science, 253: 1278-1280 (1991)参照）に、独特のＸｈｏＩ及びＮｏｔＩ部位において、所定の方向でクローニングした。
【０２２４】
実施例２：アミラーゼスクリーニングによるｃＤＮＡクローンの単離
１．オリゴｄＴプライムｃＤＮＡライブラリーの調製
ｍＲＮＡを対象とするヒト組織からInvitrogen, San Diego, CAからの試薬及びプロトコールを用いて単離した（Fast Track 2）。このＲＮＡを、Life Technologies, Gaithersburg, MD (Super Script Plasmid System)からの試薬及びプロトコールを用いるベクターｐＲＫ５ＤにおけるオリゴｄＴプライムしたｃＤＮＡの生成に使用した。この方法において、二本鎖ｃＤＮＡは１０００ｂｐを越えるサイズに分類し、ＳａｌＩ／ＮｏｔＩ結合ｃＤＮＡをＸｈｏＩ／ＮｏｔＩ切断ベクターにクローニングした。ｐＲＫ５Ｄを、ｓｐ６転写開始部位、それに続くＳｆｉＩ制限酵素部位、さらにＸｈｉＩ／ＮｏｔＩｃＤＮＡクローニング部位を持つベクターにクローニングした。
２．ランダムプライムｃＤＮＡライブラリーの調製
一次ｃＤＮＡクローンの５’末端を好ましく表すために二次ｃＤＮＡライブラリーを作成した。Ｓｐ６ＲＮＡを（上記の）一次ライブラリーから生成し、このＲＮＡを、ベクターｐＳＳＴ-ＡＭＹ．０におけるLife Technologies (上で参照したSuper Script Plasmid System)からの試薬及びプロトコールを用いてランダムプライムしたｃＤＮＡライブラリーの生成に使用した。この方法において、二本鎖ｃＤＮＡを５００−１０００ｂｐにサイズ分類し、平滑末端でＮｏｔＩアダプターに結合させ、ＳｆｉＩ部位で切断し、そしてＳｆｉＩ／ＮｏｔＩ切断ベクターにクローニングした。ｐＳＳＴ-ＡＭＹ．０は、ｃＤＮＡクローニング部位の前に酵母アルコールデヒドロゲナーゼプロモータ、及びクローニング部位の後にマウスアミラーゼ配列（分泌シグナルを持たない成熟配列）についでアルコールデヒドロゲナーゼ転写終結区を有するクローニングベクターである。よって、アミラーゼ配列にインフレームで融合されたこのベクターにクローニングされたｃＤＮＡは、適当に形質移入された酵母コロニーからのアミラーゼの分泌を導くであろう。
【０２２５】
３．形質転換及び検出
上記パラグラフ２に記載されたライブラリーからのＤＮＡを氷上で冷却し、それにエレクトロコンピテントＤＨ１０Ｂ細菌（Life Technoligies、２０ｍｌ）を添加した。細菌及びベクターの混合物を、ついで製造者に推奨されているようにして電気穿孔した。ついで、ＳＯＣ培地（Life Technologies、１ｍｌ）を添加し、この混合物を３７℃で３０分間インキュベートした。形質転換体を、ついで、アンピシリンを含む２０標準１５０ｍｍＬＢプレートに蒔き、１６時間インキュベートした（３７℃）。ポジティブコロニーをプレートから廃棄し、細菌ペレットから標準的な方法、例えばＣｓＣｌ-勾配法を用いてＤＮＡを単離した。精製ＤＮＡに、ついで以下の酵母プロトコールを施した。
酵母方法は３つの範疇に分けられる：（１）酵母のプラスミド／ｃＤＮＡ結合ベクターでの形質転換；（２）アミラーゼを分泌する酵母クローンの検出及び単離；及び（３）酵母コロニーから直接的な挿入物のＰＣＲ増幅及び配列決定及び更なる分析のためのＤＮＡの精製。
用いた酵母菌株はＨＤ５６-５Ａ（ATCC-90785）であった。この株は以下の遺伝子型：ＭＡＴアルファ、ｕｒａ３-５２、ｌｅｕ２-３、ｌｅｕ２-１１２、ｈｉｓ３-１１、ｈｉｓ３-１５、ＭＡＬ＋、ＳＵＣ＋、ＧＡＬ＋を有する。好ましくは、不完全な翻訳後経路を持つ酵母変異体を用いることができる。このような変異体は、ｓｅｃ７１、ｓｅｃ７２、ｓｅｃ６２に転位不全対立遺伝子を持つが、切断されたｓｅｃ７１が最も好ましい。あるいは、これらの遺伝子の正常な操作を妨害するアンタゴニスト（アンチセンスヌクレオチド及び／又はリガンドを含む）、この翻訳後経路に関与する他のタンパク質（例えば、ＳＥＣ６１ｐ、ＳＥＣ７２ｐ、ＳＥＣ６２ｐ、ＳＥＣ６３ｐ、ＴＤＪ１ｐ、ＳＳＡ１ｐ-４ｐ）又はこれらのタンパク質の複合体形成も、アミラーゼ発現酵母と組み合わせて好ましく用いられる。
【０２２６】
形質転換は、Gietz等, Nucl. Acid. Res., 20: 1425 (1992)に概略が記されたプロトコールに基づいて実施された。ついで、形質転換細胞を寒天からＹＥＰＤ複合培地ブロス（１００ｍｌ）に播種し、３０℃で終夜成長させた。ＹＥＰＤブロスは、Kaiser等, Methods in Yeast Genetics, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY, p. 207 (1994)に記載されているようにして調製した。ついで、終夜培地を、新鮮なＹＥＰＤブロス（５００ｍｌ）中でおよそ２ｘ１０６細胞／ｍｌ（約ＯＤ６００＝０．１）に希釈し、１ｘ１０７細胞／ｍｌ（約ＯＤ６００＝０．４−０．５）まで再成長させた。
ついで細胞を収穫し、５０００ｒｐｍで５分間のSorval GS3 ローターのＧＳ３ローターボトルに移し、上清を捨て、ついで無菌水に再懸濁することにより、形質転換のために調製し、５０ｍｌのファルコン管内で、Beckman GS-6KR遠心機において３５００ｒｐｍで再度遠心分離した。上清を捨て、細胞をＬｉＡｃ／ＴＥ（１０ｍｌ、１０ｍＭのトリス-ＨＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ ｐＨ７．５、１００ｍＭのＬｉ２ＯＯＣＣＨ３）で続けて洗浄し、ＬｉＡｃ／ＴＥ（２．５ｍｌ）中に再懸濁させた。
形質転換は、マイクロチューブ内で、調製した細胞（１００μｌ）を新鮮な変性一本鎖サケ精子ＤＮＡ（Lofstrand Labs, Gaitherburg, MD）及び形質転換ＤＮＡ（１μｇ  ｖｏｌ．＜１０μｌ）と混合することにより生じさせた。混合物はボルテックスにより簡単に混合し、ついで４０％ＰＥＧ／ＴＥ（６００μｌ、４０％のポリエチレングリコール-４０００、１０ｍＭのトリス-ＨＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、１００ｍＭのＬｉ２ＯＯＣＣＨ３、ｐＨ７．５）を添加した。この混合物を緩く撹拌し、３０℃で撹拌しながら３０分間インキュベートした。ついで細胞に４２℃で１５分間熱衝撃を与え、反応容器をマイクロチューブ内で１２０００ｒｐｍで５−１０秒間遠心分離し、デカントしＴＥ（５００μｌ、１０ｍＭのトリス-ＨＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ ｐＨ７．５）へ再懸濁させた後、遠心分離した。ついで、細胞をＴＥ（１ｍｌ）中に希釈し、アリコート（２００μｌ）を、１５０ｍｍ成長プレート（ＶＷＲ）に予め調製した選択培地に拡げた。
【０２２７】
あるいは、複数の少量反応ではなく、形質転換を１回の大規模反応で実施したが、試薬の量はしかるべくスケールアップした。
用いた選択培地は、Kaiser等, Methods in Yeast Genetics, Cold Spring Harbor press, Cold Spring Harbor, NY, p. 208-210 (1994)に記載されているように調製したウラシルを欠く合成完全デキストロース寒天（ＳＣＤ-Ｕｒａ）であった。形質転換体は３０℃で２−３日成長させた。
アミラーゼを分泌するコロニーの検出は、選択成長培地に赤色デンプンを含有せしめることにより実施した。Biely等, Anal. Biochem., 172: 176-179 (1988)に記載された方法に従って、デンプンを赤色染料（反応性 Red-120, Sigma）に結合させた。結合したデンプンをＳＣＤ-Ｕｒａ寒天プレートに最終濃度０．１５％（ｗ／ｖ）で導入し、リン酸カリウムでｐＨ７．０に緩衝した（最終濃度５０−１００ｍＭ）。
ポジティブコロニーを拾って新鮮な選択培地（１５０ｍｍプレート）に画線し、良好に単離され同定可能な単一コロニーを得た。アミラーゼ分泌についてポジティブな良好に単離されたコロニーは、緩衝ＳＣＤ-Ｕｒａ寒天への赤色デンプンの直接導入により検出した。ポジティブコロニーは、デンプンを分解して、ポジティブコロニーの周囲に直接目視できるハローを生じる能力により決定した。
【０２２８】
４．ＰＣＲ増幅によるＤＮＡの単離
ポジティブコロニーが単離された場合、その一部を楊枝で拾い、９６ウェルプレートにおいて無菌水（３０μｌ）に希釈した。この時点で、ポジティブコロニーは凍結して次の分析のために保存するか、即座に増幅するかのいずれかである。細胞のアリコート（５μｌ）を、０．５μｌのKlentaq（Clontech, Palo Alto, CA）;  ４．０μｌの１０ｍＭ ｄＮＴＰ（Perkin Elmer-Cetus）;２．５μｌのKentaqバッファー(Clontech);０．２５μｌの正方向オリゴ１；０．２５μｌの逆方向オリゴ２；１２．５μｌの蒸留水を含有する２５μｌ容量中でのＰＣＲ反応のテンプレートとして使用した。正方向オリゴヌクレオチド１の配列は：
5'-TGTAAAACGACGGCCAGTTAAATAGACCTGCAATTATTAATCT-3'（配列番号：３１）であった。
逆方向オリゴヌクレオチド２の配列は：
5'-CAGGAAACAGCTATGACCACCTGCACACCTGCAAATCCATT-3'（配列番号：３２）であった。
ついで、ＰＣＲは以下の通り実施した：
ａ．                  変性            ９２℃、５分間
ｂ．次の３サイクル    変性            ９２℃、３０秒間
アニール        ５９℃、３０秒間
伸長            ７２℃、６０秒間
ｃ．次の３サイクル    変性            ９２℃、３０秒間
アニール        ５７℃、３０秒間
伸長            ７２℃、６０秒間
ｄ．次の２５サイクル  変性            ９２℃、３０秒間
アニール        ５５℃、３０秒間
伸長            ７２℃、６０秒間
ｅ．                  保持            ４℃
オリゴヌクレオチドの下線を施した領域は、各々ＡＤＨプロモーター領域及びアミラーゼ領域にアニーリングされ、挿入物が存在しない場合はベクターｐＳＳＴ-ＡＭＹ．０からの３０７ｂｐ領域を増幅した。典型的には、これらのオリゴヌクレオチドの５’末端の最初の１８ヌクレオチドは、配列プライマーのアニーリング部位を含んでいた。よって、空のベクターからのＰＣＲ反応の全産物は３４３ｂｐであった。しかしながら、シグナル配列融合ｃＤＮＡは、かなり長いヌクレオチド配列をもたらした。
ＰＣＲに続いて、反応のアリコート（５μｌ）を、上掲のSambrook等に記載されたように１％アガロースゲル中でトリス-ボレート-ＥＤＴＡ（ＴＢＥ）緩衝系を用いたアガローススゲル電気泳動により試験した。４００ｂｐより大きな単一で強いＰＣＲ産物をもたらすクローンを、96 Qiaquick PCR 清浄化カラム（Quagen Inc., Chatsworth, CA）での精製の後にＤＮＡ配列により更に分析した。
【０２２９】
実施例３：シグナルアルゴリズム分析法を用いたｃＤＮＡクローンの単離
種々のポリペプチドコード化核酸配列は、ジェネンテック社（South San Francisco, CA）によって開発された専売のシグナル配列発見アルゴリズムを、公的（例えば、GenBank）及び／又は私的（LIFESEQ(登録商標), Incyte Pharmaceuticals, Inc., Palo Alto, CA）データベースからのＥＳＴｓ並びに集団化及び構築されたＥＳＴ断片に適用することにより同定した。シグナル配列アルゴリズムは、検討下の配列又は配列断片の５'-末端の第１及び場合によっては第２のメチオニンコドン（ＡＴＧ）を取り囲むＤＮＡヌクレオチドの文字に基づく分泌シグナルスコアを計算する。第１のＡＴＧに続くヌクレオチドは、停止コドンを持たない少なくとも３５の不明瞭でないアミノ酸をコードしなければならない。第１のＡＴＧが必要なアミノ酸を有する場合、第２のものは解析しない。何れも要件を満たさない場合、候補配列にスコアをつけない。ＥＳＴ配列が真正のシグナル配列を含むか否かを決定するために、ＡＴＧコドンを取り囲むＤＮＡ及び対応するアミノ酸配列を、分泌シグナルに関連することが知られた７つのセンサー（評価パラメータ）の組を用いてスコアをつける。このアルゴリズムの使用により、多くのポリペプチドコード化核酸配列の同定を行った。
【０２３０】
上の実施例１から３に記載した方法を使用して、ここに開示したＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする多くの完全長ｃＤＮＡクローンを同定した。ついで、これらのｃＤＮＡは以下の表７に示すようにブタペスト条約に則り、合衆国バージニア州２０１１０−２２０９マナッサス、ユニバーシティ通り１０８０１のアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションに寄託した。また、ｈｕＡ３３としても知られるＤＮＡ９８５５７の配列はジェンバンク受入番号ＡＹ１１２７０８から同定された。ｈｕＴＲＰＭ２としても知られるＤＮＡ２２６６５９の配列はジェンバンク受入番号ＡＢ００１５３５から同定された。  
【０２３１】
表７
材料 ATCC寄託番号 寄託した日付 
DNA33221-1133          209263                    1997年9月16日
DNA131590-2962           PTA-2297                  2000年7月25日
DNA58848-1472            209955                    1998年6月9日
DNA203528-3014           PTA-2780                  2000年9月12日
DNA34387-1138            209260                    1997年9月16日
DNA52192-1369            203042                    1998年7月1日
DNA33223-1136            209264                    1997年9月16日
DNA23339-1130            209282                    1997年9月18日
DNA65351-1366-2          209856                    1998年5月12日
DNA84210-2576            203818                    1999年3月2日
DNA65423-1595            203227                    1998年9月15日
DNA145887-2849           PTA-1532                  2000年3月21日
DNA50921-1458            209859                    1998年5月12日
DNA83500-2506            203391                    1998年10月29日
これらの寄託は、特許手続き上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約及びその規則(ブダペスト条約)の規定に従って行われた。これは、寄託の日付から３０年間、寄託の生存可能な培養が維持されることを保証するものである。寄託物はブダペスト条約の条項に従い、またジェネンテク社とＡＴＣＣとの間の合意に従い、ＡＴＣＣから入手することができ、これは、どれが最初であろうとも、関連した米国特許の発行時又は任意の米国又は外国特許出願の公開時に、寄託培養物の後代を永久かつ非制限的に入手可能とすることを保証し、米国特許法第１２２条及びそれに従う特許庁長官規則(特に参照番号８８６ＯＧ６３８の３７ＣＦＲ第１．１４条を含む)に従って権利を有すると米国特許庁長官が決定した者に子孫を入手可能とすることを保証するものである。
本出願の譲受人は、寄託した培養物が、適切な条件下で培養されていた場合に死亡もしくは損失又は破壊されたならば、材料は通知時に同一の他のものと即座に取り替えることに同意する。寄託物質の入手可能性は、特許法に従いあらゆる政府の権限下で認められた権利に違反して、本発明を実施するライセンスであるとみなされるものではない。
【０２３２】
実施例４
ヒトＰＲＯ２２４ポリペプチド（ＵＮＱ１９８）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
Swiss-Prot公的タンパク質データベースからの約９５０の既知の分泌タンパク質からの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）配列（もしあれば、分泌シグナル配列を含む）を、ＥＳＴデータベースの検索に使用した。ＥＳＴデータベースは、公的ＥＳＴデータベース（例えば、GenBank）及び企業のＥＳＴＤＮＡデータベース（例えば、LIFESEQTM、Incyte Pharmaceuticals、Palo Alto, CA）を含んでいた。検索は、コンピュータプログラムBLAST又はBLAST-2（Altschul等, Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)）を用いて、ＥＣＤタンパク質配列のＥＳＴ配列の６フレーム翻訳との比較として実施した。既知のタンパク質をコードせず、BLASTスコア７０（９０の場合もある）又はそれ以上を持つ比較物を、プログラム「phrap」（Phil Green, University of Washington, Seattle, Washington）で集団化してコンセンサスＤＮＡ配列を構築した。
ＰＲＯ２２４をコードするコンセンサスＤＮＡ配列を、他の同定されたＥＳＴ配列に対して構築し、該コンセンサス配列をここでＤＮＡ３０８４５と命名した。ＤＮＡ３０８４５コンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、対象の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲにより同定するために、またＰＲＯ２２４の完全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして使用するために合成した。
一組のＰＣＲ用プライマー（正方向および逆方向）を合成した：
正方向ＰＣＲ用プライマー  5'-AAGTTCCAGTGCCGCACCAGTGGC-3'(配列番号：３３)
逆方向ＰＣＲ用プライマー  5'-TTGGTTCCACAGCCGAGCTCGTCG-3'(配列番号：３４)
更に、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を持つコンセンサスＤＮＡ３０８４５配列から構築した。
ハイブリダイゼーションプローブ
5'-GAGGAGGAGTGCAGGATTGAGCCATGTACCCAGAAAGGGCAATGCCCACC-3'(配列番号：３５)
【０２３３】
完全長クローンのソースとして幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、上記のごとく同定したＰＣＲプライマー組によりライブラリーから調製したＤＮＡをＰＣＲ増幅によりスクリーニングした。その後、ポジティブなライブラリーを用い、オリゴヌクレオチドプローブ及びＰＣＲプライマーの一つを用いてＰＲＯ２２４遺伝子をコードするクローンを単離した。
ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡをヒト胎児肝臓組織から単離した。ｃＤＮＡクローンを単離するために用いたｃＤＮＡライブラリーは、Invitrogen, San Diego, CA からのもの等の市販試薬を用いて標準的方法によって構築した。ｃＤＮＡは、ＮｏｔＩ部位を含むオリゴｄＴでプライムし、ＳａｌＩヘミリン酸化アダプターへ平滑末端で結合させ、ＮｏｔＩで切断し、ゲル電気泳動でおよそのサイズ分割をし、決められた方向で適当なクローニングベクター（ｐＲＫＢ又はｐＲＫＤ；ｐＲＫ５Ｂは、ＳｆｉＩ部位を持たないｐＲＫ５Ｄの前駆体である；Holmes等, Science, 253:1278-1280 (1991)）に独特のＸｈｏｌ及びＮｏｔＩ部位においてクローン化した。  
上記のようにして単離されたクローンのＤＮＡ配列決定により、ＰＲＯ２２４の完全長ＤＮＡ配列［ここでＵＮＱ１９８（ＤＮＡ３３２２１−１１３３）と命名］とＰＲＯ２２４の誘導タンパク質配列が得られた。
ＵＮＱ１９８（ＤＮＡ３３２２１−１１３３）の全ヌクレオチド配列は、図１（配列番号：１）に示す。クローンＵＮＱ１９８（ＤＮＡ３３２２１−１１３３）は、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置９６−９８に見かけの翻訳開始部位を有しており（上掲のKozak等）、ヌクレオチド位置９４２−９４４の停止コドンで終わっていた（図１；配列番号：１）。膜貫通領域の開始は位置７７７で始まっている。予測されるポリペプチド前駆体は２８２アミノ酸長である（図２；配列番号：２）。ＵＮＱ１９８（ＤＮＡ３３２２１−１１３３）は１９９７年９月１６日にＡＴＣＣに寄託し、ＡＴＣＣ寄託番号２０９２６３が付与されている。
完全長ＰＲＯ２２４のアミノ酸配列の解析より、超低密度リポタンパク質レセプター、アポリポタンパクＥレセプター及びニワトリ卵母細胞レセプターＰ９５と相同性を有することが示唆される。完全長配列のＢＬＡＳＴ及びＦａｓｔＡ配列アラインメント解析に基づいて、ＰＲＯ２２４はこれらのタンパク質の一部と２８％から４５％の範囲のアミノ酸同一性を有し、これらのタンパク質と３３％から３９％の範囲の全体の同一性を有している。
【０２３４】
実施例５
ヒトＰＲＯ９７８３ポリペプチド（ＵＮＱ２９１４）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
Swiss-Prot公的タンパク質データベースからの約９５０の既知の分泌タンパク質からの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）配列（もしあれば、分泌シグナル配列を含む）を、ＥＳＴデータベースの検索に使用した。ＥＳＴデータベースは、（１）公的ＥＳＴデータベース（例えば、GenBank）、（２）企業のＥＳＴデータベース（LIFESEQTM、Incyte Pharmaceuticals、Palo Alto, CA）、（３）ジェネンテック社の企業のＥＳＴデータベースを含んでいた。検索は、コンピュータプログラムBLAST又はBLAST-2（Altschul等, Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)）を用いて、ＥＣＤタンパク質配列のＥＳＴ配列の６フレーム翻訳との比較として実施した。既知のタンパク質をコードせず、BLASTスコア７０（９０の場合もある）又はそれ以上を持つ比較物を、プログラム「phrap」（Phil Green, University of Washington, Seattle, Washington）で集団化してコンセンサスＤＮＡ配列を構築した。
上述のphrapを用いて他の同定されたＥＳＴ配列に対してコンセンサスＤＮＡ配列を構築した。このコンセンサス配列をここでＤＮＡ５２１６０と命名する。ある場合には、コンセンサス配列は、BLAST及びphrapの繰り返しサイクルを用いて伸長し、その中間のコンセンサス配列を上で議論したＥＳＴ配列の供給源を用いて可能な限り伸長させた中間のコンセンサスＤＮＡ配列から誘導する。
ＤＮＡ５２１６０コンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、１）対象の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲにより同定するために、また２）ＰＲＯ９７８３の完全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして使用するために合成した。正方向及び逆方向ＰＣＲプライマーは一般に２０から３０ヌクレオチドの範囲であり、しばしば約１００−１０００ｂｐ長のＰＣＲ産物を得るように設計される。プローブ配列は、典型的に４０−５５ｂｐ長である。幾つかの場合には、コンセンサス配列が約１−１．５ｋｂｐより大きいときに付加的なオリゴヌクレオチドが合成される。完全長クローンについて幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、ライブラリーからのＤＮＡを、Ausubel等, Current Protocols in Molecular Biology のように、ＰＣＲプライマー対でのＰＣＲによりスクリーニングした。ポジティブライブラリーを、ついで、プローブオリゴヌクレオチド及びプライマー対の一方を用いて対象とする遺伝子をコードするクローンを単離するのに使用した。
ＰＣＲ用プライマー（正方向および逆方向）を合成した：
正方向ＰＣＲ用プライマー  5'-CGAACCTTCCTACTGGGCTCCGGTG-3'(配列番号：３６)
逆方向ＰＣＲ用プライマー  5'-CCAACATCTATGCAGATACCTCAAGCATCTGCAAGACAGCCGTGC-3'(配列番号：３７)
更に、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を持つコンセンサスＤＮＡ５２１６０配列から構築した。
ハイブリダイゼーションプローブ
5'-GCCTGACAGCAAAGATCCGGAAGG-3'(配列番号：３８)
【０２３５】
ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡをヒト胎盤組織から単離した。ｃＤＮＡクローンを単離するために用いたｃＤＮＡライブラリーは、Invitrogen, San Diego, CA からのもの等の市販試薬を用いて標準的方法によって構築した。ｃＤＮＡは、ＮｏｔＩ部位を含むオリゴｄＴでプライムし、ＳａｌＩヘミリン酸化アダプターへ平滑末端で結合させ、ＮｏｔＩで切断し、ゲル電気泳動でおよそのサイズ分割をし、決められた方向で適当なクローニングベクター（ｐＲＫ５Ｂ又はｐＲＫ５Ｄ等；ｐＲＫ５Ｂは、ＳｆｉＩ部位を持たないｐＲＫ５Ｄの前駆体である；Holmes等, Science, 253:1278-1280 (1991)）に独特のＸｈｏｌ及びＮｏｔＩ部位においてクローン化した。  
上記のようにして単離されたクローンのＤＮＡ配列決定により、ＰＲＯ９７８３の完全長ＤＮＡ配列（ここでＤＮＡ１３１５９０−２９６２（ＵＮＱ２９１４）と命名）［図３、配列番号：３］とＰＲＯ９７８３ポリペプチドの誘導タンパク質配列が得られた。
上で同定された完全長クローンは、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置２３７−２３９に見かけの翻訳開始部位を、ヌクレオチド位置１７２８−１７３０に停止シグナルを有していた（図３；配列番号：３）。予測されるポリペプチド前駆体は４９７アミノ酸長であり、およそ５５９０６ダルトンの算定分子量とおよそ８．４３の推定ｐＩを有している。図４（配列番号：４）に示される完全長ＰＲＯ９７８３配列の解析により、図４に示されるような様々な重要なポリペプチドドメインの存在が明らかになったが、その重要なポリペプチドドメインに対して与えられた位置は上述のようにおおよそのものである。クローンＤＮＡ１３１５９０−２９６２（ＵＮＱ２９１４）は２０００年７月２５日にＡＴＣＣに寄託し、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ-２２９７が付与されている。
図４（配列番号：４）に示した完全長配列のALIGN-２配列アラインメント解析を使用するDayhoffデータベース（バージョン３５．４５ SwissProt３５）の解析により、ＰＲＯ９７８３アミノ酸配列と次のDayhoff配列との間の配列同一性が明らかになった：P_Y41738,  AF109674_1, D45027_1, P_Y13392, GLIP_HUMAN, CRS3_HUMAN, TPX1_HUMAN, AF078552_1, P_Y17828, CRS1_HUMAN。
【０２３６】
実施例６：ヒトＰＲＯ１１０８ポリペプチド（ＵＮＱ５５１）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
Swiss-Prot公的タンパク質データベースからの約９５０の既知の分泌タンパク質からの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）配列（もしあれば、分泌シグナルを含む）を、過剰発現タグ（ＥＳＴ）データベースの検索に使用した。ＥＳＴデータベースは、公的ＥＳＴデータベース（例えば、GenBank）及び企業のＥＳＴ ＤＮＡデータベース（LIFESEQTM、Incyte Pharmaceuticals、Palo Alto, CA）を含む。検索は、コンピュータプログラムBLAST又はBLAST-2（Altschul等, Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)）を用いて、ＥＣＤタンパク質配列のＥＳＴ配列の６フレーム翻訳との比較として実施した。既知のタンパク質をコードせず、BLASTスコア７０（９０の場合もある）又はそれ以上を持つ比較物は、プログラム「phrap」（Phil Green, University of Washington, Seattle, Washington）で集団化してコンセンサスＤＮＡ配列を構築した。
コンセンサスＤＮＡ配列を、phrapを用いて他のＥＳＴ配列に対して作成した。このコンセンサス配列を、ここで「コンセンサス(Consensus)」と命名する。また、「コンセンサス」ＤＮＡ配列を、BLAST及びphrapの繰り返しサイクルを用いて伸長し、上で議論したＥＳＴ配列の供給源を用いて可能な限り伸長させた。
「コンセンサス」配列とIncyteのＥＳＴクローン番号２３７９８８１との間の観察された配列相同性に鑑みて、IncyteＥＳＴクローン２３７９８８１を購入し、ｃＤＮＡ挿入物を得て配列決定した。このｃＤＮＡ挿入物の配列を図５に示し、ここでＤＮＡ５８８４８-１４７２と命名する。
ＵＮＱ５５１（ＤＮＡ５８８４８-１４７２）の全ヌクレオチド配列を図５（配列番号：５）に示す。クローンＵＮＱ５５１（ＤＮＡ５８８４８-１４７２）は単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置７７−７９に見かけの翻訳開始部位を持ち、ヌクレオチド位置１４４５−１４４７の停止コドンで終端する（図５）。予測されるポリペプチド前駆体は４５６アミノ酸長である（図６）。図６に示す全長ＰＲＯ１１０８タンパク質は、約５２０７１ダルトンの推定分子量と約９．４６のｐＩを有する。図６（配列番号：６）に示された全長ＰＲＯ１１０８配列の解析は、以下のものの存在を明らかにした：約アミノ酸２２〜約アミノ酸４２、約アミノ酸１５６〜約アミノ酸１７６、約アミノ酸１８０〜約アミノ酸１９９及び約アミノ酸３６９〜約アミノ酸３８８のＩＩ型膜貫通ドメイン、約アミノ酸２４７〜約アミノ酸２５０、約アミノ酸３２７〜約アミノ酸３３０、約アミノ酸３２８〜約アミノ酸３３１及び約アミノ酸３６２〜約アミノ酸３６５の潜在的Ｎ-グリコシル化部位、及び約アミノ酸１５３〜約アミノ酸１９０のＥＲルーメンタンパク質保持レセプタータンパク質と相同性を持つアミノ酸ブロック。クローンＵＮＱ５５１（ＤＮＡ５８８４８−１４７２）は１９９８年６月９日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０９９５５が付与されている。全長ＰＲＯ１１０８ポリペプチドのアミノ酸配列の解析により、ＬＰＡＡＴタンパク質と有意な配列類似性を有することが示唆され、それによりＰＲＯ１１０８が新規なＬＰＡＡＴ相同体でありうることが示された。より詳細には、Dayhoffデータベース（バージョン35.45 SwissProt 35）の分析により、ＰＲＯ１１０８アミノ酸配列と以下のDayhoff配列の間の有意な相同性が明らかになった：AF015811_1, CER07E3_2, YL35_CAEEL, S73863, CEF59F4_4, P_W06422, MMU41736_1, MTV008_39, P_R99248及びY67_BPT7。
【０２３７】
実施例７：ヒトＰＲＯ３４０００ポリペプチド（ＵＮＱ９１９６）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
Swiss-Prot公的データベースからの約９５０の既知の分泌タンパク質からの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）配列（もしあれば、分泌シグナル配列を含む）を、配列データベースの検索に使用した。データベースは、公的データベース（例えば、GenBank）を含んでいた。この例では、スタンフォード大学からライセンスした遺伝子予測区別化(preditiction)プログラムGENSCANを使用して解析した。GENSCAN分析は、ＥＣＤ検索にかけることができる配列を作り出す遺伝子コード領域を予想するものである。検索は、コンピュータプログラムBLAST又はBLAST-2［Altschul等, Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)］を用いて、ＥＣＤタンパク質配列のその配列の６フレーム翻訳との比較として実施した。既知のタンパク質をコードせず、BLASTスコア７０（９０の場合もある）又はそれ以上を持つ比較物は、プログラム「phrap」（Phil Green, University of Washington, Seattle, Washington）で集団化してコンセンサスＤＮＡ配列を構築した。
上述したコンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、１）対象の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲにより同定するために、また２）ＰＲＯ３４０００の完全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして使用するために合成した。正方向及び逆方向ＰＣＲプライマーは一般に２０から３０ヌクレオチドの範囲であり、しばしば約１００−１０００ｂｐ長のＰＣＲ産物を得るように設計される。プローブ配列は、典型的に４０−５５ｂｐ長である。幾つかの場合には、コンセンサス配列が約１−１．５ｋｂｐより大きいときに付加的なオリゴヌクレオチドが合成される。完全長クローンについて幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、ライブラリーからのＤＮＡを、Ausubel等, Current Protocols in Molecular Biology のように、ＰＣＲプライマー対でのＰＣＲによりスクリーニングした。ポジティブライブラリーを、ついで、プローブオリゴヌクレオチド及びプライマー対の一方を用いて対象とする遺伝子をコードするクローンを単離するのに使用した。
【０２３８】
様々な組織からの５０の異なったヒトｃＤＮＡライブラリーのプールをクローニングに使用した。ｃＤＮＡクローンを単離するために用いたｃＤＮＡライブラリーは、Invitrogen, San Diego, CA からのもの等の市販試薬を用いて標準的方法によって構築した。ｃＤＮＡは、ＮｏｔＩ部位を含むオリゴｄＴでプライムし、ＳａｌＩヘミリン酸化アダプターへ平滑末端で結合させ、ＮｏｔＩで切断し、ゲル電気泳動でおよそのサイズ分割をし、決められた方向で適当なクローニングベクター（ｐＲＫＢ又はｐＲＫＤ；ｐＲＫ５Ｂは、ＳｆｉＩ部位を持たないｐＲＫ５Ｄの前駆体である；Holmes等, Science, 253:1278-1280 (1991)）に独特のＸｈｏｌ及びＮｏｔＩ部位においてクローン化した。  
上記のようにして単離されたクローンのＤＮＡ配列決定により、完全長ＰＲＯ３４０００ポリペプチドの完全長ＤＮＡ配列（ここでＤＮＡ２０３５２８−３０１４［図７Ａ−Ｂ、配列番号：７］と命名）とそのＰＲＯ３４０００ポリペプチドの誘導タンパク質配列が得られた。
上で同定された完全長クローンは、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置５８４−５８６に見かけの翻訳開始部位を、ヌクレオチド位置３２０３−３２０５に停止シグナルを有していた（図７Ａ−Ｂ、配列番号：７）。予測されるポリペプチド前駆体は８７３アミノ酸長であり、およそ９３９９６ダルトンの算定分子量とおよそ８．３５の推定ｐＩを有している。図８Ａ−Ｂ（配列番号：８）に示される完全長ＰＲＯ３４０００配列の解析により、図８Ａ−Ｂに示されるような様々な重要なポリペプチドドメインの存在が明らかになったが、その重要なポリペプチドドメインに対して与えられた位置は上述のようにおおよそのものである。クローンＤＮＡ２０３５２８−３０１４は２０００年９月１２日にＡＴＣＣに寄託し、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ-２７８０が付与されている。
図８Ａ−Ｂ（配列番号：８）に示した完全長配列のALIGN-２配列アラインメント解析を使用するタンパク質データベース（バージョン３５．４５ SwissProt３５）の解析により、ＰＲＯ３４０００アミノ酸配列と次の配列との間の配列同一性が明らかになった：AB019120_1。
【０２３９】
実施例８：ヒトＰＲＯ２４０ポリペプチド（ＵＮＱ２１４）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
Swiss-Prot公的タンパク質データベースからの約９５０の既知の分泌タンパク質からの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）配列（もしあれば、分泌シグナルを含む）を、配列データベースの検索に使用した。ＥＳＴデータベースは、公的ＥＳＴデータベース（例えば、GenBank）及び企業のＥＳＴＤＮＡデータベース（LIFESEQTM、Incyte Pharmaceuticals、Palo Alto, CA）を含んでいた。検索は、コンピュータプログラムBLAST又はBLAST-2（Altschul等, Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)）を用いて、ＥＣＤタンパク質配列のＥＳＴ配列の６フレーム翻訳との比較として実施した。既知のタンパク質をコードせず、BLASTスコア７０（９０の場合もある）又はそれ以上を持つ比較物は、プログラム「phrap」（Phil Green, University of Washington, Seattle, Washington）で集団化してコンセンサスＤＮＡ配列を構築した。
ＰＲＯ２４０をコードするコンセンサスＤＮＡ配列を、他の同定されたＥＳＴ配列に対して構築した。ここで、コンセンサス配列はＤＮＡ３０８７３と命名した。このコンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを合成し、ＰＣＲにより対象とする配列を含むｃＤＮＡライブラリーを同定するため、及びＰＲＯ２４０ポリペプチドの完全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして用いるために使用した。
一組のＰＣＲ用プライマー（正方向および逆方向）を合成した：
正方向ＰＣＲ用プライマー  5'-TCAGCTCCAGACTCTGATACTGCC-3'(配列番号：３９)
逆方向ＰＣＲ用プライマー  5'-TGCCTTTCTAGGAGGCAGAGCTCC-3'(配列番号：４０)
更に、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を持つコンセンサスＤＮＡ３０８７３配列から構築した。
ハイブリダイゼーションプローブ
5'-GGACCCAGAAATGTGTCCTGAGAATGGATCTTGTGTACCTGATGGTCCAG-3'(配列番号：４１)
【０２４０】
完全長クローンのソースとして幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、上記のごとく同定したＰＣＲプライマー組によりライブラリーから調製したＤＮＡをＰＣＲ増幅によりスクリーニングした。その後、ポジティブなライブラリーを用い、オリゴヌクレオチドプローブ及びＰＣＲプライマーの一つを用いてＰＲＯ２４０遺伝子をコードするクローンを単離した。
ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡをヒト胎児肝臓組織から単離した。ｃＤＮＡクローンを単離するために用いたｃＤＮＡライブラリーは、Invitrogen, San Diego, CA からのもの等の市販試薬を用いて標準的方法によって構築した。ｃＤＮＡは、ＮｏｔＩ部位を含むオリゴｄＴでプライムし、ＳａｌＩヘミリン酸化アダプターへ平滑末端で結合させ、ＮｏｔＩで切断し、ゲル電気泳動でおよそのサイズ分割をし、決められた方向で適当なクローニングベクター（ｐＲＫＢ又はｐＲＫＤ等；ｐＲＫ５Ｂは、ＳｆｉＩ部位を持たないｐＲＫ５Ｄの前駆体である；Holmes等, Science, 253:1278-1280 (1991)）に独特のＸｈｏｌ及びＮｏｔＩ部位においてクローン化した。  
上記のようにして単離されたクローンのＤＮＡ配列決定により、ＰＲＯ２４０の完全長ＤＮＡ配列［ここでＵＮＱ２１４（ＤＮＡ３４３８７−１１３８）と命名］とＰＲＯ２４０の誘導タンパク質配列が得られた。
ＵＮＱ２１４（ＤＮＡ３４３８７−１１３８）の全ヌクレオチド配列は、図９（配列番号：９）に示す。クローンＵＮＱ２１４（ＤＮＡ３４３８７−１１３８）は、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置１２−１４に見かけの翻訳開始部位を有しており、ヌクレオチド位置６９９−７０１の停止コドンで終わっていた（図９；配列番号：９）。予測されるポリペプチド前駆体は２２９アミノ酸長である（図１０；配列番号：１０）。クローンＵＮＱ２１４（ＤＮＡ３４３８７−１１３８）は１９９７年９月１６日にＡＴＣＣに寄託し、ＡＴＣＣ寄託番号２０９２６０が付与されている。完全長ＰＲＯ２４０のアミノ酸配列の解析より、それは、キイロショウジョウバエ由来のserrate前駆体タンパク質とニワトリ由来のC-serrate-１タンパク質と３０％及び３５％のアミノ酸配列同一性を有していることが示唆される。
【０２４１】
実施例９：ヒトＰＲＯ９４３ポリペプチド（ＵＮＱ４８０）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
Swiss-Prot公的データベースからの約９５０の既知の分泌タンパク質からの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）配列（もしあれば、分泌シグナル配列を含む）を、ＥＳＴデータベースの検索に使用した。ＥＳＴデータベースは、公的ＥＳＴデータベース（例えば、GenBank）及び企業のＥＳＴデータベース（LIFESEQTM、Incyte Pharmaceuticals、Palo Alto, CA）を含んでいた。検索は、コンピュータプログラムBLAST又はBLAST-2（Altschul等, Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)）を用いて、ＥＣＤタンパク質配列のＥＳＴ配列の６フレーム翻訳との比較として実施した。既知のタンパク質をコードせず、BLASTスコア７０（９０の場合もある）又はそれ以上を持つ比較物は、プログラム「phrap」（Phil Green, University of Washington, Seattle, Washington）で集団化してコンセンサスＤＮＡ配列を構築した。
ＰＲＯ９４３をコードするコンセンサスＤＮＡ配列を、phrapを使用して他のＥＳＴ配列に対して構築した。ついで、このコンセンサス配列を、BLAST及びphrapの繰り返しサイクルを用いて伸長し、上で議論したＥＳＴ配列の供給源を用いて可能な限り伸長させた。伸長させたコンセンサス配列をここでＤＮＡ３６３６０と命名する。
ＤＮＡ３６３６０コンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、１）対象の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲにより同定するために、また２）ＰＲＯ９４３の完全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして使用するために合成した。正方向及び逆方向ＰＣＲプライマーは一般に２０から３０ヌクレオチドの範囲であり、しばしば約１００−１０００ｂｐ長のＰＣＲ産物を得るように設計される。プローブ配列は、典型的に４０−５５ｂｐ長である。幾つかの場合には、コンセンサス配列が約１−１．５ｋｂｐより大きいときに付加的なオリゴヌクレオチドが合成される。完全長クローンについて幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、ライブラリーからのＤＮＡを、Ausubel等, Current Protocols in Molecular Biology のように、ＰＣＲプライマー対でのＰＣＲによりスクリーニングした。ポジティブライブラリーを、ついで、プローブオリゴヌクレオチド及びプライマー対の一方を用いて対象とする遺伝子をコードするクローンを単離するのに使用した。
ＰＣＲ用プライマー（正方向および逆方向）を合成した：
正方向ＰＣＲ用プライマー(36360.f1)  5'-CGAGATGACGCCGAGCCCCC-3'(配列番号：４２)
逆方向ＰＣＲ用プライマー(36360.r1)  5'-CGGTTCGACACGCGGCAGGTG-3'(配列番号：４３)
更に、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を持つコンセンサスＤＮＡ３６３６０配列から構築した。
ハイブリダイゼーションプローブ(36360.p1)
5'-TGCTGCTCCTGCTGCCGCCGCTGCTGCTGGGGGCCTTCCCGCCGG-3'(配列番号：４４)
【０２４２】
完全長クローンのソースとして幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、上記のごとく同定したＰＣＲプライマー組によりライブラリーから調製したＤＮＡをＰＣＲ増幅によりスクリーニングした。その後、ポジティブなライブラリーを用い、オリゴヌクレオチドプローブ及びＰＣＲプライマーの一つを用いてＰＲＯ９４３遺伝子をコードするクローンを単離した。
ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡをヒト胎児脳組織から単離した。ｃＤＮＡクローンを単離するために用いたｃＤＮＡライブラリーは、Invitrogen, San Diego, CA からのもの等の市販試薬を用いて標準的方法によって構築した。ｃＤＮＡは、ＮｏｔＩ部位を含むオリゴｄＴでプライムし、ＳａｌＩヘミリン酸化アダプターへ平滑末端で結合させ、ＮｏｔＩで切断し、ゲル電気泳動でおよそのサイズ分割をし、決められた方向で適当なクローニングベクター（ｐＲＫＢ又はｐＲＫＤ等；ｐＲＫ５Ｂは、ＳｆｉＩ部位を持たないｐＲＫ５Ｄの前駆体である；Holmes等, Science, 253:1278-1280 (1991)）に独特のＸｈｏｌ及びＮｏｔＩ部位においてクローン化した。  
上記のようにして単離されたクローンのＤＮＡ配列決定により、ＰＲＯ９４３の完全長ＤＮＡ配列（ここでＵＮＱ４８０（ＤＮＡ５２１９２−１３６９）と命名［図１１、配列番号：１１］）とＰＲＯ９４３の誘導タンパク質配列が得られた。
ＵＮＱ４８０（ＤＮＡ５２１９２−１３６９）の全ヌクレオチド配列は、図１１（配列番号：１１）に示す。クローンＵＮＱ４８０（ＤＮＡ５２１９２−１３６９）は、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置１５０−１５２に見かけの翻訳開始部位を有しており、ヌクレオチド位置１６６２−１６６４の停止コドンで終わっていた（図１１）。予測されるポリペプチド前駆体は５０４アミノ酸長である（図１２；配列番号：１２）。図１２に示した全長ＰＲＯ９４３タンパク質は約５４５３７ダルトンの推定分子量及び約１０．０４のｐＩを有する。図１２（配列番号：１２）に示した完全長ＰＲＯ９４３配列の分析により、以下のものの存在が明らかとなった：約アミノ酸１〜約アミノ酸１７のシグナルペプチド；約アミノ酸３７６〜約アミノ酸３９６の膜貫通ドメイン、約アミノ酸２１２〜約アミノ酸２１９及び約アミノ酸３２９〜約アミノ酸３３６のチロシンキナーゼリン酸化部位、約アミノ酸１１１〜約アミノ酸１１４、約アミノ酸２３１〜約アミノ酸２３４、約アミノ酸２５５〜約アミノ酸２５８及び約アミノ酸２９３〜約アミノ酸２９６の潜在的Ｎ-グリコシル化部位、及び約アミノ酸２１９〜約アミノ酸２３６の免疫グロブリン及びＭＨＣタンパク質配列相同ブロック。クローンＵＮＱ４８０（ＤＮＡ５２１９２−１３６９）は１９９８年７月１日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０３０４２が付与されている。
図１２（配列番号：１２）に示した全長配列のWU-BLAST-2配列アラインメント分析を用いたDayhoffデータベース（バージョン35.45 SwissProt 35）の分析により、ＰＲＯ９４３アミノ酸配列と以下のDayhoff配列との間の有意な相同性が明らかになった：B49151, A39752, FGR1_XENLA, S38579, RATHBFGFRB_1, TVHU2F, FGR2_MOUSE, CEK3_CHICK, P_R21080及びA27171_1。
【０２４３】
実施例１０：ヒトＰＲＯ２３０ポリペプチド（ＵＮＱ２０４）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
Swiss-Prot公的タンパク質データベースからの約９５０の既知の分泌タンパク質からの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）配列（もしあれば、分泌シグナルを含む）を、発現配列タグ（ＥＳＴ）データベースの検索に使用した。ＥＳＴデータベースは、公的ＥＳＴデータベース（例えば、GenBank）及び企業のＥＳＴＤＮＡデータベース（LIFESEQTM、Incyte Pharmaceuticals、Palo Alto, CA）を含んでいた。検索は、コンピュータプログラムBLAST又はBLAST-2（Altschul等, Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)）を用いて、ＥＣＤタンパク質配列のＥＳＴ配列の６フレーム翻訳との比較として実施した。既知のタンパク質をコードせず、BLASTスコア７０（９０の場合もある）又はそれ以上を持つ比較物は、プログラム「phrap」（Phil Green, University of Washington, Seattle, Washington）で集団化してコンセンサスＤＮＡ配列を構築した。
ＰＲＯ２３０をコードするコンセンサスＤＮＡ配列を、他のＥＳＴ配列に対して構築し、そのコンセンサス配列をここでＤＮＡ３０８５７と命名した。ジェネンテック社保有のＥＳＴをコンセンサス構築に用いた。
ＤＮＡ３０８５７コンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、対象の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲにより同定するために、またＰＲＯ２３０の完全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして使用するために合成した。
ＰＣＲプライマー組（正方向及び逆方向）を合成した：
正方向ＰＣＲ用プライマー  5'-TTCGAGGCCTCTGAGAAGTGGCCC-3'(配列番号：４５)
逆方向ＰＣＲ用プライマー  5'-GGCGGTATCTCTCTGGCCTCCC-3'(配列番号：４６)
更に、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を持つコンセンサスＤＮＡ３０８５７配列から構築した。
ハイブリダイゼーションプローブ
5'-TTCTCCACAGCAGCTGTGGCATCCGATCGTGTCTCAATCCATTCTCTGGG-3'(配列番号：４７)
完全長クローンのソースとして幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、上記のごとく同定したＰＣＲプライマー組によりライブラリーから調製したＤＮＡをＰＣＲ増幅によりスクリーニングした。その後、ポジティブなライブラリーを用い、オリゴヌクレオチドプローブ及びＰＣＲプライマーの一つを用いてＰＲＯ２３０遺伝子をコードするクローンを単離した。
【０２４４】
ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡをヒト胎児肺組織から単離した。ｃＤＮＡクローンを単離するために用いたｃＤＮＡライブラリーは、Invitrogen, San Diego, CA からのもの等の市販試薬を用いて標準的方法によって構築した。ｃＤＮＡは、ＮｏｔＩ部位を含むオリゴｄＴでプライムし、ＳａｌＩヘミリン酸化アダプターへ平滑末端で結合させ、ＮｏｔＩで切断し、ゲル電気泳動でおよそのサイズ分割をし、決められた方向で適当なクローニングベクター（ｐＲＫＢ又はｐＲＫＤ等；ｐＲＫ５Ｂは、ＳｆｉＩ部位を持たないｐＲＫ５Ｄの前駆体である；Holmes等, Science, 253:1278-1280 (1991)）に独特のＸｈｏｌ及びＮｏｔＩ部位においてクローン化した。  
上記のようにして単離されたクローンのＤＮＡ配列決定により、ＰＲＯ２３０の完全長ＤＮＡ配列（ここでＵＮＱ２０４（ＤＮＡ３３２２３−１１３６）と命名）とＰＲＯ２３０の誘導タンパク質配列が得られた。
ＵＮＱ２０４（ＤＮＡ３３２２３−１１３６）の全ヌクレオチド配列は、図１３（配列番号：１３）に示す。クローンＵＮＱ２０４（ＤＮＡ３３２２３−１１３６）は、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置１００−１０３に見かけの翻訳開始部位を有しており（上掲のKozak等）、ヌクレオチド位置１５０１−１５０３の停止コドンで終わっていた（図１３；配列番号：１３）。予測されるポリペプチド前駆体は４６７アミノ酸長である（図１４；配列番号：１４）。クローンＵＮＱ２０３（ＤＮＡ３３２２３−１１３６）は１９９７年９月１６日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０９２６４が付与されている。
【０２４５】
実施例１１：ヒトＰＲＯ１７８ポリペプチド（ＵＮＱ１５２）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
発現配列タグ（ＥＳＴ）ＤＮＡデータベース（LIFESEQ(登録商標)、Incyte Pharmaceuticals、Palo Alto, CA）を検索し、ＴＩＥリガンドファミリーと相同性を示すＥＳＴを同定した。
ついで、ｃＤＮＡライブライの作成のためのＲＮＡをヒト胎児肺組織から単離した。ヒトＰＲＯ１７８をコードするｃＤＮＡクローンを単離するために用いたｃＤＮＡライブラリーは、Invitrogen, San Diego, CA からのもの等の市販試薬を用いて標準的方法によって形成した。ｃＤＮＡは、ＮｏｔＩ部位を含むオリゴｄＴでプライムし、ＳａｌＩヘミキナーゼアダプターの平滑末端で結合させ、ＮｏｔＩで切断し、ゲル電気泳動で適当にサイズ分割をし、定まった方向で適当なクローニングベクター（ｐＲＫＢ又はｐＲＫＤ等；ｐＲＫ５Ｂは、ＳｆｉＩ部位を持たないｐＲＫ５Ｄの前駆体である；Holmes等, Science, 253:1278-1280 (1991)を参照されたい）に独特のＸｈｏｌ及びＮｏｔＩ部位においてクローン化した。
上述のＥＳＴ配列に基づいて、１）ＰＣＲにより対象とする配列を含むｃＤＮＡライブラリーを同定するため、また２）ＰＲＯ１７８の全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして使用するために、オリゴヌクレオチドを合成した。正方向及び逆方向ＰＣＲプライマーは一般的に２０から３０ヌクレオチドの範囲であり、しばしば約１００−１０００ｂｐ長のＰＣＲ産物を与えるように設計される。プローブ配列は典型的には４０−５５ｂｐ長である。全長クローンについて幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、ライブラリーからのＤＮＡを上掲のAusubel等, Current Protocols in Molecular Biologyに従って、ＰＣＲプライマー対でのＰＣＲ増幅によりスクリーニングした。ついでポジティブライブラリーを、プローブオリゴヌクレオチド及びプライマー対の一方を用いた興味ある遺伝子をコードするクローンの単離に使用した。
用いたオリゴヌクレオチドプローブは以下の通り：
ＮＬ８.５-１：
5'-ACGTAGTTCCAGTATGGTGTGAGCAGCAACTGGA-3'（配列番号：４８）
ＮＬ８.３-１：
5'-AGTCCAGCCTCCACCCTCCAGTTGCT-3'（配列番号：４９）
ＮＬ８.３-２：
5'-CCCCAGTCCTCCAGGAGAACCAGCA-3'（配列番号：５０）
【０２４６】
単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置１１８−１２０に見かけの翻訳開始部位、ヌクレオチド位置１５２８−１５３０に停止シグナルを持つ全長クローン［ＤＮＡ２３３３９−１１３０；ＵＮＱ１５２］が同定された（図１５、配列番号：１５）。予測されるポリペプチド前駆体は４７０アミノ酸長であり、約５１６９４ダルトンの算定分子量及び約８．８６の推定ｐＩを持つ。図１６（配列番号：１６）に示した全長ＰＲＯ１７８配列の分析により、図１６に示すような種々の重要なポリペプチドドメインの存在が明らかになり、それらの重要なポリペプチドドメインに与えられた位置は、上記の通りおおよそである。図１６に示した全長ＰＲＯ１７８ポリペプチドの分析により、以下の存在が明らかになった：約アミノ酸１〜約アミノ酸２０のシグナルペプチド；約アミノ酸５８〜約アミノ酸６２、約アミノ酸１４５〜約アミノ酸１４９のＮ-グリコシル化部位；約アミノ酸９７〜約アミノ酸１０１のｃＡＭＰ-及びｃＧＭＰ-依存性プロテインキナーゼリン酸化部位；約アミノ酸４４１〜約アミノ酸４４８のチロシンキナーゼリン酸化部位；約アミノ酸１６〜約アミノ酸２２、約アミノ酸２３〜約アミノ酸２９、約アミノ酸８７〜約アミノ酸９３、約アミノ酸１０８〜約アミノ酸１１４、約アミノ酸１２１〜約アミノ酸１２７、約アミノ酸１２５〜約アミノ酸１３１、約アミノ酸１２９〜約アミノ酸１３５、約アミノ酸１８７〜約アミノ酸１９３、約アミノ酸２９３〜約アミノ酸２９９、約アミノ酸３５３〜約アミノ酸３５９、約アミノ酸３７８〜約アミノ酸３８４、約アミノ酸４４５〜約アミノ酸４５１、及び約アミノ酸４５３〜約アミノ酸４５９のＮ-ミリストイル化部位；約アミノ酸３４０〜約アミノ酸３４３の細胞接着部位；及び約アミノ酸４１８〜約アミノ酸４３１のフィブリノーゲンベータ及びガンマ鎖Ｃ-末端ドメインシグネーチャー。クローンＤＮＡ２３３３９−１１３０は１９９７年９月１８日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０９２８２が付与された。
図１６（配列番号：１６）に示した全長配列のBLAST及びFastA配列アラインメント分析に基づいて、ＰＲＯ１７８（ここでＮＬ８と命名する）はＴＩＥ２レセプターのリガンド１及びリガンド２の両方と２３％のアミノ酸配列同一性を示す。ＴＩＥ２レセプターのリガンド１及びリガンド２は、ＰＲＯ１７８に対して各々６４％同一及び４０−４３％同一である。「ＴＩＥ」という略語は、「チロシンキナーゼ含有Ｉｇ及びＥＧＦ相同ドメイン(tyrosine kinase containing Ig and EGF homology domains)」の頭文字を表し、レセプターチロシンキナーゼ類の新たなファミリーを示すために作られた。
【０２４７】
実施例１２：ヒトＰＲＯ１１９９ポリペプチド（ＵＮＱ４０７）をコードするｃＤＮＡの単離
公的な発現配列タグ（ＥＳＴ）ＤＮＡデータベース(GenBank)を全長マウスｍ-ＦＩＺＺ１(ＤＮＡ５３５１７)で検索し、ｍ-ＦＩＺＺ１ＤＮＡと相同性を示した、ＡＡ３１１２２３と命名し、ＤＮＡ５３０２８と改名したＥＳＴを同定した。
ＥＳＴ配列に基づいて、ＰＣＲにより対象とする配列を含むｃＤＮＡライブラリーを同定するために、またｈ-ＰＲＯ１１９９（またＦＩＺＺ３とも命名）の全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして用いるために、オリゴヌクレオチドを合成した。
ＰＣＲ用プライマー組（正方向及び逆方向）とプローブを合成した：
正方向プライマー（h-FIZZ3.f）：GGATTTGGTTAGCTGAGCCCACCGAGA（配列番号：５１）
逆方向プライマー（h-FIZZ3.r）：GCACTGCGCGCGACCTCAGGGCTGCA（配列番号：５２）
プローブ（h-FIZZ3.p）：CTTATTGCCCTAAATATTAGGGAGCCGGCGACCTCCTGGATCCTCTCATT（配列番号：５３）
全長クローンの供給源に対して幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、ライブラリーからのＤＮＡを、上記において特定したＰＣＲプライマー対でのＰＣＲ増幅によりスクリーニングした。正のライブラリーをついで使用して、プローブオリゴヌクレオチド及びＰＣＲプライマーの一つを使用してＰＲＯ１１９９（ｈＦＩＺＺ-３）遺伝子をコードしているクローンを単離した。
【０２４８】
ｍＲＮＡをヒト骨髄組織組織からInvitrogen, San Diego, CAからの試薬及びプロトコールを用いて単離した（Fast Track 2）。このＲＮＡを、Life Technologies, Gaithersburg, MD (Super Script Plasmid System)からの試薬及びプロトコールを用いるベクターｐＲＫ５ＤにおけるオリゴｄＴプライムしたｃＤＮＡの生成に使用した。この方法において、二本鎖ｃＤＮＡは３−４ｋｂを越えるサイズに分類し、ＳａｌＩ／ＮｏｔＩ結合ｃＤＮＡをＸｈｏＩ／ＮｏｔＩ切断ベクターにクローニングした。ｐＲＫ５Ｄを、ｓｐ６転写開始部位、それに続くＳｆｉＩ制限酵素部位、さらにＸｈｉＩ／ＮｏｔＩｃＤＮＡクローニング部位を持つベクターにクローニングした。
上述のようにして単離されたクローンのＤＮＡ配列の決定により、ｈＦＩＺＺ-３（ＤＮＡ６５３５１−１３６６−２；ＵＮＱ４０７）の完全長ＤＮＡ配列及びＰＲＯ１１９９の誘導タンパク質配列が得られた。ｃＤＭＡクローンは全体を配列決定した。ＤＮＡ６５３５１−１３６６−２（ｈＦＩＺＺ-３）の全ヌクレオチド配列を図１７（配列番号：１７）に示す。クローンＤＮＡ６５３５１−１３６６−２は、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置２５−２７に見かけの翻訳開始部位を持っていた（図１７；配列番号：１７）。予測されるポリペプチド前駆体は１０８アミノ酸長である（図１８；配列番号：１８）。Ｎ末端アミノ酸１−１８は推定シグナルペプチドを表し、位置５７に始まる細胞接着配列モチーフ（ＲＧＤ）を同定した。クローンＤＮＡ６５３５１−１３６６−２は１９９８年５月１２日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０９８５６が付与された。
【０２４９】
実施例１３：ヒトＰＲＯ４３３３ポリペプチド（ＵＮＱ１８８８）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
上述のＥＣＤ相同性手順下で上述したものと類似した方法で、発現配列タグ（ＥＳＴ）ＤＮＡデータベース（LIFESEQ(登録商標)、Incyte Pharmaceuticals、Palo Alto, CA）を検索し、リンフォトキシン-ベータレセプターと相同性を示すＥＳＴを同定した。
ＥＳＴをオリゴヌクレオチドプライマー及びプローブを作成するためのテンプレートとして、ＥＣＤ相同性手順下で上述したものと類似した方法でヒト胎児腎臓ライブラリーをスクリーニングした。
上述の手順で作成されたオリゴヌクレオチドは以下の通りである：
正方向ＰＣＲプライマー：
5'-GCAAGAATTCAGGGATCGGTCTGG-3' (配列番号：５４)
プローブ：
5'-CTGTGTTCCCTGCAACCAGTGTGGGCCAGGCATGGAGTTGTCTAAGG-3' (配列番号：５５)
逆方向：
5'-AGATGGCATCACTGGTGGCTGAAC-3' (配列番号：５６)
正方向：
5'-CAGAAGGCAAATTGTTCAGCCACCAG-3' (配列番号：５７)
逆方向：
5'-ACAGTTTCCAGACCGATCCCTGAATTC-3' (配列番号：５８)
【０２５０】
その結果、全長ＤＮＡ配列ＤＮＡ８４２１０−２５７６(配列番号：２１、図２１Ａ−Ｂ)が単離された。太字の下線で示したように、図２１Ａ−Ｂに示したＤＮＡ８４２１０−２５７６(配列番号：２１)クローンは、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置１８５-１８７に見かけの翻訳開始部位、ヌクレオチド位置１４３６-１４３８に停止コドン(ＴＡＡ)を有する。予測されるＰＲＯ４３３３ポリペプチド前駆体(すなわちＵＮＱ１８８８、配列番号：２２)は４１７アミノ酸長である。図２２に示すＵＮＱ１８８８タンパク質(配列番号：２２)は、約４５３０５ダルトンの算定分子量と約５．１２の算定ｐＩを持つ。
図２２のＵＮＱ１８８８ポリペプチド(配列番号：２２)の分析により、およそアミノ酸残基１-２５にシグナルペプチド、およそ残基１６９-１９２に膜貫通ドメイン、およそ残基１０５-１０９、２１４-２１８、３１９-３２３、３５０-３５４、３６８-３７２、３７９-３８３にＮ-グルコシル化部位、およそ残基２００-２０４及び２３８-２４２にｃＡＭＰ-及びｃＧＭＰ-依存性プロテインキナーゼリン酸化部位、およそ残基２０７-２１４にチロシンキナーゼリン酸化部位、およそ残基５５-６１、２１５-２１８及び２７０-２７６にＮ-ミリストイル化部位、およそ残基２５９-２７０に原核生物膜リポタンパク質脂質付着部位、及びおよそ残基８９-９６にＴＮＦＲ／ＮＧＦＲファミリーシステインリッチ領域があることが明らかになった。
ＤＮＡ８４２１０−２５７６と命名された、ＤＮＡ８４２１０-２５７６を含むｃＤＮＡクローン(配列番号：２１)は１９９９年３月２日にＡＴＣＣに寄託され、寄託番号２０３８１８が付与されている。
【０２５１】
実施例１４：ヒトＰＲＯ１３３６ポリペプチド（ＵＮＱ６９１）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
ＥＳＴ配列を同定し、企業のGenentechデータベースに入った。ＥＳＴを様々なＥＳＴデータベースに対してブラストした。ＥＳＴデータベースは、公的ＥＳＴデータベース（例えば、GenBank）及び企業のＥＳＴデータベース（LIFESEQ(商品名)、Incyte Pharmaceuticals、Palo Alto, CA）、及びGenentechの企業のＥＳＴを含んでいた。検索は、コンピュータプログラムBLAST又はBLAST2［Altschul等, Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)］を用いて、ＥＳＴ配列の６フレーム翻訳とのＥＣＤタンパク質配列の比較として実施した。既知のタンパク質をコードせず、BLASTスコア７０（９０の場合もある）又はそれ以上を持つ比較物を、プログラム「phrap」（Phil Green, University of Washington, Seattle, Washington）で集団化してコンセンサスＤＮＡ配列を構築した。
ＰＲＯ１３３６をコードしているコンセンサスＤＮＡ配列を、phrapを使用して他の整列されたＥＳＴ配列（アセンブリを形成）に対して構築した。このコンセンサス配列をここで「ＤＮＡ４３３１９」と命名する。ＤＮＡ４３３１９コンセンサス配列に基づいて、１）ＰＣＲにより対象とする配列を含むｃＤＮＡライブラリーを同定するため、また２）ＰＲＯ１３３６の全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして使用するために、オリゴヌクレオチドを合成した。
ＰＣＲプライマー（正及び逆）を合成した：
正方向ＰＣＲプライマー 5'ATGGAGATTCCTGCCAACTTGCCG3'(配列番号：５９）；及び
逆方向ＰＣＲプライマー 5'TTGTTGGCATTGAGGAGGAGCAGC3'(配列番号：６０）。
更に、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を持つコンセンサスＤＮＡ４３３１９配列から作成した。
ハイブリダイゼーションプローブ
5'GAGGGCATCGTCGAAATACGCCTAGAACAGAACTCCATCAAAGCCATCCC3'(配列番号：６１）
全長クローンの供給源について幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、ライブラリーからのＤＮＡを上で同定したＰＣＲプライマー対でＰＣＲ増幅した。ついで、ポジティブライブラリーを、プローブオリゴヌクレオチド及びＰＣＲプライマー対の一方を用いてＰＲＯ１３３６遺伝子をコードするクローンを単離するのに使用した。ｃＤＮＡライブラリー作成のためのＲＮＡはヒト胎児肺組織から単離された。
【０２５２】
上述のようにして単離されたクローンのＤＮＡ配列決定により、ＰＲＯ１３３６に対する全長ＤＮＡ配列（ここでＤＮＡ６５４２３−１５９５［図２３Ａ−Ｂ、配列番号：２３］）とＰＲＯ１３３６の誘導タンパク質が得られた。
ＰＲＯ１３３６の全コード化配列を図２３Ａ−Ｂ（配列番号：２３）に示す。クローンＤＮＡ６５４２３−１５９５は、単一のオープンリーディングフレームを含み、配列番号：２３のヌクレオチド位置８３−８５に見かけの翻訳開始部位を持ち、ヌクレオチド位置４６５２−４６５４に見かけの停止コドンを持つ。予測されるポリペプチド前駆体は１５２３アミノ酸長である（図２４Ａ−Ｂ；配列番号：２４）。シグナルペプチド（アミノ酸１−２７）、アスパラギン酸及びアスパラギンヒドロキシル化部位、ＥＧＦ-様ドメインシステインパターンシグネチャー領域、ロイシンジッパーパターン領域、免疫グロブリン及び主要組織適合複合体中に保存された領域、及びＮ-グリコシル化部位のおおよその位置は図２４Ａ−Ｂに示される。クローンＤＮＡ６５４２３−１５９５は１９９８年９月１５日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０３２２７が付与された。図２４Ａ−Ｂに示した全長ＰＲＯ１３３６タンパク質は約１６７７１５ダルトンの推定分子量及び約８．０６のｐＩを有する。
図２４Ａ−Ｂ（配列番号：２４）に示した全長配列のWU-BLAST2配列アラインメント分析法を使用しての、Dayhoffデータベース（バージョン35.45 SwissProt 35）の分析により、ＰＲＯ１３３６のアミノ酸配列と以下のDayhoff配列（ここにデータを援用する）との間の配列同一性が明らかにされた：SLIT_DROME, CEF40E10_1, LCU58977_1, AF029779_1, FBP1_STRPU, NOTC_XENLA, AC004663_1, XELXDEL_1, P_W05835及びHSU77720_1。
【０２５３】
実施例１５：ヒトＰＲＯ１９５９８ポリペプチド（ＵＮＱ５７９３）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
Swiss-Prot公的データベースからの約９５０の既知の分泌タンパク質からの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）配列（もしあれば、分泌シグナル配列を含む）を、配列データベースの検索に使用した。データベースは、公的データベース（例えば、GenBank）を含んでいた。この例では、スタンフォード大学からライセンスした遺伝子予測区別化(preditiction)プログラムGENSCANを使用して解析した。GENSCANは、ＥＣＤ検索にかけることができる配列を作り出す遺伝子コード領域を予想するものである。検索は、コンピュータプログラムBLAST又はBLAST-2［Altschul等, Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)］を用いて、ＥＣＤタンパク質配列のその配列の６フレーム翻訳との比較として実施した。既知のタンパク質をコードせず、BLASTスコア７０（９０の場合もある）又はそれ以上を持つ比較物は、プログラム「phrap」（Phil Green, University of Washington, Seattle, Washington）で集団化してコンセンサスＤＮＡ配列を構築した。
コンセンサスＤＮＡ配列を構築した。コンセンサス配列をここでＤＮＡ１３２８７９と命名した。
ＤＮＡ１３２８７９コンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、１）対象の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲにより同定するために、また２）ＰＲＯ１９５９８の完全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして使用するために合成した。正方向及び逆方向ＰＣＲプライマーは一般に２０から３０ヌクレオチドの範囲であり、しばしば約１００−１０００ｂｐ長のＰＣＲ産物を得るように設計される。プローブ配列は、典型的に４０−５５ｂｐ長である。幾つかの場合には、コンセンサス配列が約１−１．５ｋｂｐより大きいときに付加的なオリゴヌクレオチドが合成される。完全長クローンについて幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、ライブラリーからのＤＮＡを、Ausubel等, Current Protocols in Molecular Biology のように、ＰＣＲプライマー対でのＰＣＲによりスクリーニングした。ポジティブライブラリーを、ついで、プローブオリゴヌクレオチド及びプライマー対の一方を用いて対象とする遺伝子をコードするクローンを単離するのに使用した。
【０２５４】
ＰＣＲプライマー（正及び逆）を合成した：
正方向ＰＣＲプライマー
><H3 ecd.snf1 5'CTGGCAACAGCAGTGTCTATTTTGTGC 3' (配列番号：６２）
逆方向ＰＣＲプライマー
><H3 ecd.snr1 5'TAAGTGCCCTCCCAGGCTGCC 3' (配列番号：６３）
更に、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を持つコンセンサスＤＮＡ１３２８７９配列から作成した。
ハイブリダイゼーションプローブ
5'TCCTCCAGTCATGAATATAACCCAAGTCAATGGCTCTTTGTTGGTAATTCTC 3'
(配列番号：６４）
様々な組織からの５０の異なったヒトｃＤＮＡライブラリーのプールをクローニングに使用した。ｃＤＮＡクローンを単離するために用いたｃＤＮＡライブラリーは、Invitrogen, San Diego, CA からのもの等の市販試薬を用いて標準的方法によって構築した。ｃＤＮＡは、ＮｏｔＩ部位を含むオリゴｄＴでプライムし、ＳａｌＩヘミリン酸化アダプターへ平滑末端で結合させ、ＮｏｔＩで切断し、ゲル電気泳動でおよそのサイズ分割をし、決められた方向で適当なクローニングベクター（ｐＲＫＢ又はｐＲＫＤ等；ｐＲＫ５Ｂは、ＳｆｉＩ部位を持たないｐＲＫ５Ｄの前駆体である；Holmes等, Science, 253:1278-1280 (1991)）に独特のＸｈｏｌ及びＮｏｔＩ部位においてクローン化した。  
上記のようにして単離されたクローンのＤＮＡ配列決定により、完全長ＰＲＯ１９５９８ポリペプチドの完全長ＤＮＡ配列（ここでＤＮＡ１４５８８７−２８４９［図２５、配列番号：２５］と命名）とそのＰＲＯ１９５９８ポリペプチドの誘導タンパク質配列が得られた。
上で同定された完全長クローンは、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置２４１−２４３に見かけの翻訳開始部位を、ヌクレオチド位置１０２７−１０３０に停止シグナルを有していた（図２５、配列番号：２５）。予測されるポリペプチド前駆体は２６２アミノ酸長であり、およそ３０４１９ダルトンの算定分子量とおよそ８．４４の推定ｐＩを有している。図２６（配列番号：２６）に示される完全長ＰＲＯ１９５９８配列の解析により、図２６に示されるような様々な重要なポリペプチドドメインの存在が明らかになったが、その重要なポリペプチドドメインに対して与えられた位置は上述のようにおおよそのものである。クローンＤＮＡ１４５８８７−２８４９は２０００年３月２１日にＡＴＣＣに寄託し、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ-１５３２が付与されている。
図２６（配列番号：２６）に示した完全長配列のALIGN-２配列アラインメント解析を使用するDayhoffデータベース（バージョン３５．４５ SwissProt３５）の解析により、ＰＲＯ１９５９８アミノ酸配列と次のDayhoff配列との間の配列同一性が明らかになった：AF184971_1。
【０２５５】
実施例１６：ヒトＰＲＯ１０８３ポリペプチド（ＵＮＱ５４０）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
上記の実施例２に記載したアミラーゼスクリーニング法を使用してｃＤＮＡ配列を同定した。ついで、そのｃＤＮＡ配列を、上の実施例１に記載したような他の既知のＥＳＴ配列と比較し、整列させて、ＤＮＡ４３４２２とここで命名するコンセンサスＤＮＡ配列を得た。ＤＮＡ４３４２２コンセンサス配列に基づいて、１)対象の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲにより同定するために、また２）ＰＲＯ１０８３の完全長コード配列のクローンを単離するためのプローブとして使用するためにオリゴヌクレオチドを合成した。
一組のＰＣＲプライマー（正方向および逆方向）を合成した：
正方向ＰＣＲプライマー 5'-GGCATTGGAGCAGTGCTGGGTG-3' (配列番号：６５)
逆方向ＰＣＲプライマー 5'-TGGAGGCCTAGATGCGGCTGGACG-3' (配列番号：６６) 
完全長クローンのソースとして幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、上記のごとく同定したＰＣＲプライマー組によりライブラリーから調製したＤＮＡをＰＣＲ増幅によりスクリーニングした。その後、ポジティブなライブラリーは、逆方向ＰＣＲプライマーを用い、ＰＲＯ１０８３遺伝子をコードするクローンを単離するために用いた。ｃＤＮＡライブラリー構築のためのＲＮＡは、ヒト胎児腎臓組織（LIB227）から単離した。
上記のようにして単離されたクローンのＤＮＡ配列決定により、ＰＲＯ１０８３の完全長ＤＮＡ配列［ここでＵＮＱ５４０（ＤＮＡ５０９２１−１４５８）］（配列番号：２７；図２７）とＰＲＯ１０８３の誘導タンパク質配列が得られた。
【０２５６】
ＵＮＱ５４０（ＤＮＡ５０９２１−１４５８）の全ヌクレオチド配列は図２７（配列番号：２７）に示す。クローンＵＮＱ５４０（ＤＮＡ５０９２１−１４５８）は、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置２１４−２１６に見かけの翻訳開始部位を、ヌクレオチド位置２２９３−２２９５に停止コドンを有していた（図２７）。予測されるポリペプチド前駆体は６９３アミノ酸長である（図２８；配列番号：２８）。図２８に示される全長ＰＲＯ１０８３タンパク質はおよそ７７７３８ダルトンの推定分子量とおよそ８．８７のｐＩを有している。クローンＵＮＱ５４０（ＤＮＡ５０９２１−１４５８）は１９９８年５月１２日にＡＴＣＣ寄託番号２０９８５９でＡＴＣＣに寄託されている。配列に関しては、寄託されたクローンは正しい配列を含み、ここに提供した配列は既知の配列決定方法に基づいていることが理解される。
配列番号：２８のアミノ酸配列の更なる分析により、推定シグナルペプチドは配列番号：２８のおよそアミノ酸１−２５である。膜貫通ドメインは配列番号：２８のおよそアミノ酸３８２−３９８、４０２−４２０、４４５−４６８、４７３−４９１、５１９−５３７、５６８−５９０及び６３４−６５７である。微小体Ｃ-末端標的化シグナルは配列番号：２８のおよそアミノ酸６９１−６９３である。ｃＡＭＰ-及びｃＧＭＰ-依存性タンパク質キナーゼリン酸化部位は配列番号：２８のおよそアミノ酸１９８−２０１及び３７０−３７３である。Ｎ-グリコシル化部位は配列番号：２８のおよそアミノ酸３９−４２、１４８−１５１、１７１−１７４、２３４−２３７、３０３−３０６、３２４−２２７及び３４１−３４４である。Ｇ-プロテイン結合ファミリードメインは配列番号：２８のおよそアミノ酸４７５−５０４である。対応するヌクレオチドは、ここに提供した配列から常套的に決定できる。
【０２５７】
実施例１７：ヒトＰＲＯ１８０１ポリペプチド（ＵＮＱ８５２）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
企業の発現配列タグ（ＥＳＴ）ＤＮＡデータベース（LIFESEQ(商品名)、Incyte Pharmaceuticals、Palo Alto, CA）を検索して、ＩＬ-１９タンパク質に対して相同性を示すＥＳＴを同定した。このＥＳＴ配列はIncyteＥＳＴクローン番号８１９５９２であり、ここでＤＮＡ７９２９３と命名する。ＤＮＡ７９２９３配列に基づいて、１）ＰＣＲにより対象とする配列を含むｃＤＮＡライブラリーを同定するため、また２）ＰＲＯ１８０１の全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして使用するために、オリゴヌクレオチドを合成した。
ＰＣＲプライマー（正及び逆）を合成した：：
正方向ＰＣＲプライマー 5'-CTCCTGTGGTCTCCAGATTTCAGGCCTA-3'（配列番号：６９）；及び
逆方向ＰＣＲプライマー 5'-AGTCCTCCTTAAGATTCTGATGTCAA-3'（配列番号：７０）。
ｃＤＮＡライブラリーの作成のためのＲＮＡはヒト胎児腎臓組織から単離された。ｃＤＮＡクローンの単離に用いたｃＤＮＡライブラリーは、Invitrogen, San Diego, CAからのもの等の市販試薬を用いて標準的な方法によって作成した。ｃＤＮＡは、ＮｏｔＩ部位を含むオリゴｄＴでプライムし、平滑末端でＳａｌＩヘミキナーゼアダプターに結合させ、ＮｏｔＩで切断し、ゲル電気泳動でおよそのサイズ分類し、そして適切なクローニングベクター（ｐＲＫＢ又はｐＲＫ５Ｄ等；ｐＲＫ５ＢはＳｆｉＩ部位を含まないｐＲＫ５Ｄの前駆体である；Holmes等, Science, 253: 1278-1280 (1991)参照）に、独特のＸｈｏＩ及びＮｏｔＩ部位において、所定の方向でクローニングした。
上記のように単離したクローンのＤＮＡ配列決定により、ＰＲＯ１８０１の全長ＤＮＡ配列（ここではＤＮＡ８３５００−２５０６と命名［図３１、配列番号：６７］）；及びＰＲＯ１８０１の誘導タンパク質配列が得られた。
【０２５８】
ＤＮＡ８３５００−２５０６の全ヌクレオチド配列は図３１に示される（配列番号：６７）。クローンＤＮＡ８３５００−２５０６は単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置１０９−１１１に見かけの翻訳開始部位を持ち、ヌクレオチド位置８９２−８９４の停止コドンで終端する（図３２）。予測されるポリペプチド前駆体は２６１アミノ酸長である（図３２）。図３２に示した全長ＰＲＯ１８０１タンパク質は約２９６６７ダルトンの推定分子量及び約８．７６のｐＩを有する。図３２（配列番号：６８）に示された全長ＰＲＯ１８０１の分析により次のものの存在が証明される：約アミノ酸１から約アミノ酸４２のシグナルペプチド、約アミノ酸１９２から約アミノ酸１９５及び約アミノ酸２２５から約アミノ酸２２８のｃＡＭＰ-及びｃＧＭＰ-依存性プロテインキナーゼリン酸化部位及び約アミノ酸４２から約アミノ酸４７、約アミノ酸４６から約アミノ酸５１及び約アミノ酸１３６から約アミノ酸１４１の潜在的なＮ-ミリストイル化部位。クローンＤＮＡ８３５００−２５０６は１９９８年１０月２９日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０３３９１が付与された。
図３２（配列番号：６８）に示した全長配列のWU-BLAST2配列アラインメント分析法を使用しての、Dayhoffデータベース（バージョン35.45 SwissProt 35）の分析により、ＰＲＯ１８０１のアミノ酸配列と以下のDayhoff配列との間の有意な相同性が証明された：P_W37935, HGS_B477, P_R32277, IL10_MACFA, P_W46585, P_W46585, P_R39714, P_R71471, P_R10159, IL10_RAT 及びP_W57201。
【０２５９】
実施例１８：ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１遺伝子破壊を有するマウスの発生又は分析
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１遺伝子の役割を調査するために、相同組換えにより産出させた。すなわち、特に、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１遺伝子に破壊を含むトランスジェニックマウス(すなわちノックアウトマウス)を、ジーンターゲティング又はジーントラッピングによりつくりだした。変異をサザンブロット分析法により確認し、３'及び５'末端の双方に対する正しいターゲティングを確認した。また遺伝子特異的ジェノタイピングをゲノムＰＣＲにより実施し、挿入部位に隣接するエキソンにアニールするプライマーを使用したＲＴ-ＰＣＲにより裏付けられるように、内在性の未変性転写物の損失を確認した。ターゲティングベクターを１２９系統ＥＳ細胞に電気穿孔し、標的クローンを同定した。標的クローンを宿主胚盤胞に微量注入し、キメラを生成させた。キメラをＣ５７動物と共に飼育し、Ｆ１ヘテロ接合体をつくった。ヘテロ接合体を交雑受精させ、表現型分析に使用したＦ２野生型、ヘテロ接合体及びホモ接合体のコホートを産生した。希にＦ１ヘテロ接合体が十分に産生されない場合、Ｆ１hetsを野生型Ｃ５７マウスに交配させて、十分なヘテロ接合体を作製し、表現型の分析のコホートのために交配させた。誕生後１２−１６週で、全ての表現型分析を実施した。
【０２６０】
表現型の全体的観察の要約：
Ａ．ＤＮＡ３３２２１-１１３３(ＵＮＱ１９８)遺伝子破壊を有するマウスの産生と分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ２２４ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ３３２２１-１１３３[ＵＮＱ１９８]と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：変異したマウス遺伝子は次のものに対応する：ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿０１９４２１又はムスムスクルス仮定タンパク質(hypothetical protein)４２５Ｏ１８-１、タンパク質参照番号：ＮＰ＿０６２２９４又は仮定タンパク質４２５Ｏ１８-１；推定ＶＬＤＬリポタンパク質レセプター前駆体；ＤＮＡセグメント、Ｃｈｒ１７、ＥＲＡＴＯ Ｄｏｉ ７１６が発現[ムスムスクルス]；ヒト遺伝子配列参照番号：ＢＣ００７０８３又はホモサピエンス、８Ｄ６抗原、クローンＭＧＣ：１４６２３ ＩＭＡＧＥ：４０７６２３７；ヒトタンパク質配列は次の参照番号に対応する：ＮＰ＿０５７６６３又は８Ｄ６抗原(ホモサピエンス)。
変異したマウス遺伝子は、ヒト８Ｄ６抗原(８Ｄ６Ａ)に対してオルソロガスであってよい仮定タンパク質４２５Ｏ１８-１(LocusLink54219)をコードしている。別名及び同義語には、推定ＶＬＤＬリポタンパク質レセプター前駆体、ＤＮＡセグメント Ｃｈｒ１７ ＥＲＡＴＯ Ｄｏｉ ７１６、ＬＯＣ５１２９３、ｃＤＮＡ ＤＫＦＺｐ５６４Ｏ１７６２、Ｄ１７Ｅｒｔｄ７１６ｅ及びＮＧ２９が含まれる。
タンパク質は、未知の生物学的機能を有する低密度リポタンパク質(ＬＤＬ)レセプターのファミリーメンバー、Ａクラス(Ｐｆａｍ受入番号ＰＦ００００５７)である。ＬＤＬレセプターはコレステロール代謝において重要な役割を担っており、このようなモチーフは幾つかの細胞外及び膜タンパク質で観察されている(Daly等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92(14):6334-8 (1995))。仮定タンパク質は、ヒト８Ｄ６抗原(LocusLink 51293)、つまりＢ細胞の成長を刺激する濾胞樹状細胞のシグナル分子と５６％(２８１を超えるアミノ酸)類似している(Li等, J. Exp. Med., 191(6):1077-84 (2000))。
標的突然変異又はジーントラップ突然変異を株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ-由来胚性幹(ＥＳ)細胞において生じさせた。キメラマウスをＣ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスに交雑してＦ１ヘテロ接合体動物を産生した。これらの子孫を交雑させてＦ２野生型、ヘテロ接合体、及びホモ接合体突然変異子孫を産生した。極くたまに、例えばＦ１マウスがキメラからほとんど得られなかった場合に、Ｆ１ヘテロ接合マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交雑させ、交雑受精のための付加的なヘテロ接合動物を生じさせてＦ２マウスを産生せしめた。レトロウイルス挿入(ＯＳＴ)が生じた；挿入はアミノ酸４５をコードするエキソンの前に順方向であったように思われた。
wt        het      hom    合計
観察値      22        39        18      79
予想値      19.75     39.5      19.75   79
カイ二乗 = 0.42  有意性=0.81151  (hom/n) = 0.23  平均産仔数 = 0
標的遺伝子の野生型発現は、胚性幹(ＥＳ)細胞に検出され、ＲＴ-ＰＣＲで試験された１３の成体組織試料のうち、腎臓、精巣及び脂肪においてのみ検出された。ＲＴ-ＰＣＲ分析により、分析された(-/-)マウスには転写がなかったことが明らかとなった。
表現型分析を、以下に記載するようにして、この世代からのマウスについて実施した。
【０２６１】
１．表現型分析(破壊された遺伝子：ＤＮＡ３３２２１-１１３３(ＵＮＱ１９８))
（ａ）心血管表現型分析
心血管生物学の領域では、表現型試験を実施して、循環器、内皮又は血管新生疾患を治療するための潜在的標的を同定した。このような表現型試験には、眼底撮影法及び血管造影法が含まれ、種々の眼性異常の注意を与えるための網膜動静脈比(Ａ／Ｖ比)が測定される。異常なＡ／Ｖ比は、高血圧による血管疾患に関連したもののような全身性の疾患又は障害(及び高血圧に起因する任意の病気、例えばアテローム性動脈硬化症)、糖尿病、又は眼科的疾患に対応する他の眼病の徴候を表している。このような眼の異常には、限定されるものではないが、次のものが含まれうる：網膜の異常は、網膜形成不全、種々の網膜症、再狭窄、網膜動脈閉塞症又は閉塞；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症（carotinemeia）、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスである。
【０２６２】
手順：
４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体のコホートをこのアッセイで試験した。Hawes及び共著者により修正されたKowa Genesis小動物用眼底カメラを使用し、意識のある動物について眼底撮影を行った(Hawes等, 1999 Molecular Vision 1999; 5:22)。フルオレセインの腹膜内注射により、各検査の蛍光アルゴリズム及び直射光による眼底画像の獲得が可能になった。直接的な眼科的変化に加えて、この試験では、糖尿病及びアテローム性動脈硬化症又は他の網膜異常等の全身性疾患に伴う網膜変化を検出することができる。正常光の下での眼底写真が提供された。血管造影写真により、眼の動脈及び静脈の検査が可能になった。更に、眼に対する静脈に対する動脈の比(Ａ／Ｖ)が決定された。
上述したプロトコールを使用し、産生したＦ２野生型、ヘテロ接合体及びホモ接合体の変異子孫について眼科的分析を実施した。すなわち、Ａ／Ｖ比を測定し、Kowa COMIT＋ソフトウェアを用い、眼底画像に従って算出した。この試験は、散大した瞳孔を通してカラー写真が撮影されるものであり：画像が多くの病気の検出及び分類分けに役立つ。静脈に対する動脈の比(Ａ／Ｖ)は、静脈の直径に対する動脈の直径(血管の分岐前に測定)の比である。多くの病気、すなわち糖尿病、循環器疾患、乳頭浮腫、視神経萎縮又は他の眼の異常、例えば網膜変性症(網膜色素変性症としても知られている)、又は網膜形成不全、視覚障害又は失明がこの比に影響を及ぼしているであろう。よって、野生型(+/+)同腹仔と比較し、ホモ接合体(-/-)及びヘテロ接合体(+/-)の変異子孫における静脈に対する動脈の比が増加している結果となる表現型観察はこのような病理状態を示している。
結果：
この研究では、(-/-)及び(+/-)マウスは、その(+/+)同腹仔と比較した場合、増加した静脈に対する動脈(Ａ／Ｖ)の平均比率を示しており、網膜変性症を示している。要約すると、ＰＲＯ２２４ポリペプチドをコードするＤＮＡ３３２２１-１１３３と同定された遺伝子をノックアウトすることにより、ヘテロ接合体とホモ接合体の変異子孫の双方とも、網膜変性症に関連した表現型を示す。このような検出された網膜変化は、高血圧による血液疾患に関連し得る循環器系の全身性の病気又は疾患(及び高血圧を引き起こすあらゆる疾患、例えばアテローム性動脈硬化症)、糖尿病又は網膜変性症等の眼科的疾患に対応する他の眼病に最も一般的に関連している。よって、ＰＲＯ２２４をコードする遺伝子のアンタゴニストは、類似した病理的網膜変化を生じさせる一方、アゴニストは高血圧、アテローム性動脈硬化症、又は網膜変性症とこの症状に関連した疾患を含む他の眼科的疾患(上述したもの)の治療における治療剤として有用であろう。
【０２６３】
Ｂ．ＤＮＡ１３１５９０-２９６２(ＵＮＱ２９１４)遺伝子破壊を有するマウスの産生と分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ９７８３ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ１３１５９０-２９６２[ＵＮＱ２９１４]と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：変異したマウス遺伝子ヌクレオチド参照番号は次のものに対応する：ＮＭ＿０３０２０９又はムスムスクルスＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ１８１００４９Ｋ２４遺伝子(１８１００４９Ｋ２４Ｒｉｋ)、タンパク質参照番号：ＮＰ＿０８４４８５又はＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ１８１００４９Ｋ２４[ムスムスクルス]；ヒトヌクレオチド参照番号は次のものに対応する：ＮＭ＿０３１４７６、タンパク質参照番号：ＮＰ＿１１３６６４又はホモサピエンス仮定タンパク質ＤＫＦＺｐ４３４Ｂ０４４(ＤＫＦＺＰ４３４Ｂ０４４)。
破壊されたマウス遺伝子は、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ１８１００４９Ｋ２４Ｒｉｋ、ヒト仮定タンパク質ＤＫＦＺｐ４３４Ｂ０４４のオルソログにより表される。推定タンパク質は、細胞外ドメイン含有タンパク質のＳＣＰ様(Ｐｆａｍ ＰＦ００１８８)及びＬＣＣＰ(Ｐｆａｍ ＰＦ０３８１５)ファミリーのメンバーである。これらのファミリーの個々のメンバーは多様な生理学的機能を有しているところ、ＬＣＣＰドメインを含むタンパク質はタンパク質の折り畳みに関与しているのではないかと思われる。
マウスタンパク質は、マウスcocoacrisp(システインリッチの分泌タンパク質、すなわちＣＲＩＳＰ)及びトリプシンインヒビターと最も大きな類似性を有しており、ＬＣＣＬとＳＣＰ様細胞外ドメインも含んでいる。ＣＲＩＳＰタンパク質は、典型的には雄性生殖器官に分泌され、発現している。それらは、精子成熟中又は受精中、雄の生殖細胞と他の細胞との細胞-細胞相互作用を媒介すると考えられている(Giese等, Gene, 299(1-2):101-9 (2002))。全体的に、これは、ハチアレルゲン、植物ＰＲ型タンパク質、カタツムリプロテアーゼ、及び更には爬虫類毒素の成分を含む真核生物タンパク質の大きく多様なファミリーである(Milne等, J. Biol. Chem., 278(33):31105-10 (2003))。
標的又はジーントラッピング変異を、系統１２９ＳｖＥｖＢｒｄから派生した胚性幹(ＥＳ)細胞に生じせしめた。野生型発現パネルの結果は次の観察のようになった：標的遺伝子の発現を、胚性幹(ＥＳ)細胞と、ＲＴ-ＰＣＲにより試験した１３の成体組織試料のうち、骨、皮膚線維芽細胞、脂肪及び尾部において、検出した。標的遺伝子の破壊はサザンハイブリッド分析法により確認した。キメラマウスをＣ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスに交雑してＦ１ヘテロ接合体動物を産生した。これらの子孫を交雑させてＦ２野生型、ヘテロ接合体、及びホモ接合体突然変異子孫を産生した。極くたまに、例えばＦ１マウスがキメラからほとんど得られなかった場合に、Ｆ１ヘテロ接合マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交雑させ、交雑受精のための付加的なヘテロ接合動物を生じさせてＦ２マウスを産生せしめた。
wt        het      hom    合計
観察値      22        50        28    100
予想値      25        50        25    100
カイ二乗 = 0.72  有意性=0.69768  (hom/n) = 0.28  平均産仔数 = 0
表現型分析は、以下に記載するようにして、この世代からのマウスにおいて実施した。
【０２６４】
１．表現型分析(破壊された遺伝子：ＤＮＡ１３１５９０-２９６２(ＵＮＱ２９１４))
（ａ）全体的な表現型の要約
ホモ接合体変異マウスは、その野生型同腹仔及び背景的平均と比較した場合、多くの免疫学的異常を示した。またその性別が一致した野生型同腹仔及び背景的平均と比較した場合、雄のホモ接合体変異マウスは、試験された全３回の間隔で、亢進したグルコース耐性を示し、顕著に減少した骨関連測定値を示した。雌の(-/-)マウスは、減少した皮膚線維芽細胞の増殖速度を示した。標的遺伝子の破壊はサザンハイブリッド分析により確認した。
【０２６５】
（ｂ）表現型分析：代謝-血液化学
代謝の領域において、種々の循環器病、糖尿病及び／又は肥満の治療のための標的を同定することができる。血液化学表現型分析には、インシュリン感受性及びグルコース代謝における変化を測定するためのグルコース耐性試験が含まれる。グルコース代謝試験の結果が異常であると、限定されるものではないが、次の障害又は病状が示唆される：１型及び２型糖尿病、Ｘ症候群、種々の循環器病又は肥満。
手順：
２匹の野生型及び４匹のホモ接合体雄のコホートをこのアッセイで使用した。グルコース耐性試験は哺乳動物において損なわれたグルコースホメオスタシスを定めるための標準である。グルコース耐性試験をＬｉｆｅｓｃａｎグルコメーターを使用して実施した。２０％溶液として送達されるＤ-グルコースを２ｇ／ｋｇ、動物にＩＰ注射し、血糖値を、注射０、３０、６０及び９０分後に測定した。
結果：
これらの研究では、雄(-/-)マウスは、それらの性別が一致した(+/+)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、試験された全て３回の間隔で、正常空腹時グルコースの存在下では亢進したグルコース耐性を示すことが示された。更に、高インシュリン血症は(-/-)マウスには顕れなかった。よって、ノックアウトマウスは、損傷したグルコースホメオスタシスの反対の表現型パターンを示し、よって、ＰＲＯ９７８３ポリペプチド又はそのコード化遺伝子のアンタゴニストは、損なわれたグルコースホメオスタシス及び／又は種々の循環器病、例えば糖尿病の治療に有用であろう。
【０２６６】
（ｃ）免疫学的表現型分析
免疫関連及び炎症性疾患は、正常な生理では、傷害又は損傷に応答し、傷害又は損傷からの修復を開始し、外来生物に対して生得的及び獲得した防御を開始するかなり複雑でしばしば複数の相互に関連した生物学的経路の徴候又は結果である。疾患又は病態は、これらの正常な生理学的経路が、応答の強さに直接関連して、異常な調節又は過度の刺激の結果として、又は自己に対する反応として、又はこれらの組み合せとして、更なる傷害又は損傷を引き起こす場合に生じる。
これらの病気の起源はしばしば多段階経路及び多くの異なる生物学的システム／経路に関連しているが、これらの経路の一又は複数における重要な点への介入は、改善又は治療効果を有し得る。治療的介入は、有害なプロセス／経路への拮抗作用、又は有益なプロセス／経路の刺激により生じ得る。
Ｔリンパ球(Ｔ細胞)は哺乳動物の免疫反応における重要な成分である。Ｔ細胞は、主要組織適合複合体(ＭＨＣ)内の遺伝子によりコードされる自己分子に関連する抗原を認識する。抗原は、抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片等の表面上のＭＨＣ分子と共にディスプレイされうる。Ｔ細胞系は、宿主哺乳動物に対して健康への脅威をもたらすこれらの改変細胞を排除する。Ｔ細胞には、ヘルパーＴ細胞及び細胞傷害性Ｔ細胞が含まれる。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞上にある抗原-ＭＨＣ複合体の認識に続き、広範囲に増殖する。またヘルパーＴ細胞は、Ｂ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞及び免疫反応に関与する種々の他の細胞の活性化において中心的な役割を担っている様々なサイトカイン、すなわちリンホカインを分泌する。
多くの免疫反応では、炎症細胞が損傷又は感染の部位に浸潤する。遊走細胞は、罹患組織の組織学的検査により決定することができる、好中球、好酸球、単球又はリンパ球でありうる。Current Protocols in Immunology, John E. Coligan編, 1994, John Wiley & Sons, Inc。
多くの免疫介在性疾患が知られており、広く研究されている。このような疾患には、免疫媒介炎症性疾患(例えば、関節リウマチ、免疫媒介性腎疾患、胆肝汁性疾患、炎症性大腸炎(ＩＢＤ)、乾癬、及び喘息)、非免疫媒介炎症性疾患、感染症、免疫不全症、新生組織形成、及び移植片拒絶等が含まれる。免疫学の領域において、炎症及び炎症性疾患の治療のための標的をここで同定した。
免疫学の領域において、炎症及び炎症性疾患の治療のための標的をここで同定した。免疫関連疾患は、一例では、免疫反応を抑制することにより治療することができる。免疫刺激活性を有する分子を阻害する中和抗体の使用は、免疫媒介性及び炎症性疾患の治療に有益である。免疫反応を阻害する分子を利用して（タンパク質を直接に又は抗体アゴニストの使用により）、免疫反応を阻害し、よって免疫関連疾患を改善することができる。
次の試験を実施した：
【０２６７】
蛍光-活性化細胞-選別(ＦＡＣＳ)分析
手順：  ＣＤ４、ＣＤ８及びＴ細胞レセプターの分析を含む、末梢血からの免疫細胞組成のＦＡＣＳ分析を実施し、ナチュラルキラー細胞のｐａｎ ＮＫ及び白血球マーカーとして、ＣＤ４５、Ｂリンパ球のためのＣＤ１９、Ｔリンパ球を評価した。ＦＡＣＳ分析は、２匹の野生型及び６匹のホモ接合マウスで実施し、胸腺、脾臓、骨髄及びリンパ節から派生した細胞を含む。
これらの研究では、分析された細胞を、胸腺、末梢血、脾臓、骨髄、及びリンパ節から単離した。単核細胞個体群中における単核細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、ＣＤ４及びＣＤ８陽性Ｔ細胞の相対割合を測定するためにフローサイトメトリーを設計した。Becton-Dickinson FACSCalibur３レーザーFACS機を使用し、免疫状態を評価した。表現型アッセイ及びスクリーニングのために、この機械は、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比に加え、ＣＤ４＋／ＣＤ８-、ＣＤ８＋／ＣＤ４-、ＮＫ、Ｂ細胞及び単球数を記録する。
単核細胞の特性を、６つの系統特異性抗体：ＣＤ４５ ＰｅｒＣＰ、抗-ＴＣＲｂ ＡＰＣ、ＣＤ４ ＰＥ、ＣＤ８ ＦＩＴＣ、ｐａｎ-ＮＫ ＰＥ、及びＣＤ１９ ＦＩＴＣのパネルで各マウスからの溶解した末梢血の単一試料を染色することにより、得た。２つのＦＩＴＣ及びＰＥ標識抗体は、相互に排他的な細胞型を染色する。試料を、CellQuestソフトウェアを用いるBecton Dickinson FACSCaliburフローサイトメーターを使用して分析した。
結果：  ＦＡＣＳ分析により次の結果が得られた：雄(-/-)マウスでは、その(+/+)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、減少したＢ細胞の平均パーセンテージが示された。
【０２６８】
卵白アルブミン投与
手順：  このアッセイは６匹の野生型と１４匹のホモ接合体で実施した。ニワトリの卵白アルブミン(ＯＶＡ)はＴ細胞依存性抗原であり、マウスにおける抗原特異性免疫反応の研究のためのモデルタンパク質として一般に使用されている。ＯＶＡは無毒で不活性であり、よって何の免疫反応も誘発されなくても、動物には害とはならないであろう。ＯＶＡに対するマウスの免疫反応は、Ｔ細胞反応を誘発させるための免疫優性ペプチドが同定されているといった程度まで、十分に特徴付けられている。抗ＯＶＡ抗体は、酵素結合免疫吸着測定法(ＥＬＩＺＡ)を使用し、免疫化８〜１０日後に検出可能であり、異なるアイソタイプ抗体を測定することで、遺伝子操作マウスにおける欠失反応に至り得る複合プロセスに対する更なる情報が得られる。
上に記載したように、このプロトコールは、抗原特異性免疫反応を生じせしめるマウスの能力を評価するものである。動物に、完全フロインド(Feund's)アジュバントに乳化させたニワトリ卵白アルブミン５０ｍｇをＩＰ注射し、１４日後、抗卵白アルブミン抗体(ＩｇＭ、ＩｇＧ１及びＩｇＧ２サブクラス)の血清力価を測定した。血清試料中のＯＶＡ特異的抗体の量は、９６ウェル試料プレートをスキャンする機器により発生する光学密度(ＯＤ)値に比例する。各血清試料の一組の連続希釈に対してデータをまとめた。[分析値  wt／het／hom：６／４／１４]。
この投与の結果：  雄の(-/-)マウスは、その(+/+)同腹仔と比較した場合、卵白アルブミン投与に対して減少した平均血清ＩｇＧ２ａ反応を示した。よって、これらのノックアウトマウスでは、Ｔ細胞依存性ＯＶＡ抗原に対してＯＶＡ特異的抗原反応を誘発する能力の低下が示された。
要約すると、末梢血からの免疫細胞組成のＦＡＣＳ分析と卵白アルブミン投与研究の双方が、ＰＲＯ９７８３ポリペプチドをコードする遺伝子を欠失したノックアウトマウスがその野生型同腹仔と比較した場合に免疫学的異常を示すことを示している。一例では、変異マウスでは、Ｔ細胞依存性ＯＶＡ抗原を投与した場合に、免疫反応を誘発する能力の低下が示された。これは、末梢血の免疫細胞組成分析と組み合わせると、ＰＲＯ９７８３ポリペプチド又はそれらのアゴニストが免疫系(例えばＴ細胞増殖)の刺激に有用であることを示唆しており、この効果が白血病、及び他の種類の癌、及び免疫不全患者、例えばＡＩＤＳ患者の場合のように個体に有益であるような場合に有用性が見出されるであろう。従って、ＰＲＯ９７８３ポリペプチドの阻害剤（アンタゴニスト）は、免疫反応の阻害に有用であり、例えば移植片拒絶又は移植片対宿主病の場合におけるように、有害な免疫反応を抑制するための有用な候補薬であろう。
【０２６９】
（ｄ）オンコロジー表現型分析
オンコロジーの領域において、標的は、固形腫瘍、リンパ腫及び白血病の治療のために、ここで同定される。
成体皮膚細胞の増殖
手順：皮膚細胞を１６週齢の動物から単離した(２匹の野生型と４匹のホモ接合体)。これらを初代線維芽細胞培養にて発育させ、線維芽細胞増殖速度を、厳密にコントロールしたプロトコールで測定した。過剰増殖表現型と低増殖表現型を検出するこのアッセイの能力をｐ５３及びＫｕ８０で証明した。増殖はＢｒｄｕ取り込みを使用して測定した。
すなわち、これらの研究では、皮膚線維芽細胞増殖アッセイを使用した。標準化した培地中の細胞数の増加を、相対的増殖能力の測定値として使用した。初代線維芽細胞は、野生型及び変異マウスから取り出された皮膚バイオプシーから樹立した。２通り又は３通りの５００００の細胞培養物を蒔き、６日間成長させた。培養期間の終わりに、培養物中に存在する細胞数を、電子粒子計測器を使用して測定した。
結果：雌(+/+)マウスは、その性別が一致した(+/+)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、低下した皮膚線維芽細胞の増殖速度を示した。[分析値  wt／het／hom：２／０／４]
よって、ホモ接合マウスでは、低増殖表現型が証明された。これらの観察から示唆されることは、ＰＲＯ９７８３ポリペプチド又はそれをコードする遺伝子のアンタゴニストは異常な細胞増殖の低減に有用であることである。
【０２７０】
（ｅ）骨代謝：放射線学的表現型分析
骨代謝の領域において、標的は、ここでは関節炎、骨粗鬆症、骨減少症及び大理石骨病の治療に対して同定し、並びに骨折治癒を促進する標的が同定される。試験には次のものが含まれる：
・大腿及び椎骨における骨塩量の測定のためのＤＥＸＡ
・骨梁及び皮質骨の双方の骨塩量の非常に高い解像度で非常に高い感度での測定のためのマイクロＣＴ。
Ｄｅｘａ分析−試験法の記述
手順：４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重エネルギーＸ線吸収測定法(ＤＥＸＡ)を成功裏に使用し、骨中の変化を同定した。麻酔した動物を検査し、骨塩量(ＢＭＣ)、ＢＭＣ／ＬＢＭ比、容積測定骨塩量(ｖＢＭＤ)、全身ＢＭＤ、大腿ＢＭＤ及び椎骨ＢＭＤを測定した。
Avertin(１．２５％の２,２,２-トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重)を腹腔内注射することにより、マウスを麻酔し、体長及び体重を測定し、ついでＤＥＸＡスキャンのためにPIXImusTMデンシトメータ(Lunar Inc.)の台にマウスを腹臥位で置いた。Lunar PIXImusソフトウェアを使用し、骨塩量(ＢＭＤ)及び脂肪組成(％脂肪)及び全組織量(ＴＴＭ)を関心領域(ＲＯＩ)[すなわち、全身、椎骨及び両大腿]で測定した。
ＤＥＸＡ結果：雄の(-/-)マウスでは、その性別が一致した(+/+)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、全身、大腿及び椎骨における平均骨塩量、骨ミネラル体積密度、骨塩量指標(ＢＭＣ／ＬＢＭ)、骨ミネラル密度の減少が示された。
【０２７１】
骨マイクロＣＴ分析
手順：マイクロＣＴをまた使用して非常に高感度のＢＭＤ測定を得た。１つの椎骨と１つの大腿を、４匹の野生型及び８匹のホモ接合体マウスのコホートから取り出した。腰部の５つの椎骨梁(veterbra traebecular)体積、骨梁(traebecular)厚、結合密度、及び中軸大腿の全骨領域及び皮質厚の測定を行った。マイクロＣＴ４０スキャンにより、骨量及び構造の詳細な情報が得られた。複数の骨を試料ホルダーに配し、自動的にスキャンした。機器ソフトウェアを使用し、分析のための関心領域を選択した。骨梁パラメータを１６マイクロメーター解像度で第５腰椎(ＬＶ５)において分析し、皮質骨パラメータを２０マイクロメーターの解像度で大腿中軸において分析した。
マイクロ-ＣＴ分析の結果：雄の(-/-)マウスでは、それらの性別が一致した(+/+)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、顕著に減少した平均腰部の５つの椎骨梁の体積、数、厚み、及び結合密度が示された。またこれらの変異体も、平均大腿中軸断面積に顕著な減少が示された。[分析値  wt／het／hom：４／４／８]。
これらの結果には、ＰＲＯ９７８３ポリペプチドをコードする遺伝子が欠失した雄のノックアウト変異マウスは、密度の低下と場合によっては骨折に至る脆弱化を伴う骨量の減少によって特徴付けられる顕著な骨減少を伴う異常な骨代謝を示すことを裏付けている。高カルシウム血症、高血糖、又はアルカリホスファートの増加も血液化学試験で検出されず、ＤＥＸＡスキャンで見られた骨密度の減少に関連しているかもしれない腎臓、甲状腺、又は副腎の機能障害が示唆される。雄のノックアウトマウスにおいてのみ骨密度の減少が見られたので、この骨異常の観察はテストステロン欠乏を示唆している。よって、ＰＲＯ９７８３ポリペプチド又はそのアゴニストは、テストステロン等の雄性ホルモンにより媒介される骨のホメオスタシスの維持に有用であると思われる。更に、ＰＲＯ９７８３ポリペプチド又はそのコード化遺伝子は骨のホメオスタシスの維持に有用であり、関節炎又は骨粗鬆症の治療又は骨折治癒に重要である一方、ＰＲＯ９７８３ポリペプチド又はそのコード化遺伝子のアンタゴニストは、異常な骨代謝、例えば関節炎、骨粗鬆症及び骨減少症に関連した炎症性疾患を含む異常な病理学的骨疾患に至らしめる。
【０２７２】
Ｃ．ＤＮＡ５８８４８-１４７２(ＵＮＱ５５１)遺伝子破壊を含むマウスの産生と分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ１１０８ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ５８８４８-１４７２[ＵＮＱ５５１]と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：マウスヌクレオチド参照番号は次のものに対応：ＮＭ＿０１８７４３又はムスムスクルス推定リゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼ(ＬＯＣ５５９３３)、タンパク質参照番号：ＮＰ＿０６１２１３又は推定リゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼ[ムスムスクルス]；ヒトヌクレオチド参照番号は次のものに対応：ＡＦ３１７５１６又はホモサピエンス推定リゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼ、タンパク質参照番号：ＡＡＧ３３０６３又は推定リゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼ[ホモサピエンス]。レトロウイルの挿入(ＯＳＴ)は、長さ約２９５アミノ酸の予測タンパク質の開始コドンの前で順方向であると思われる。
これらの動物において変異した遺伝子は、ＮＣＢＩ配列 ＮＭ＿０１８７４３(配列ＡＵ０４１７０７で表される)により示され、これはヒト配列ＡＦ３１７５１６(ＤＫＦＺｐ５８６Ｍ１８１９)のオルソログである。双方の座位は仮説上、推定リゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼをコードしている。ＤＫＦＺｐ５８６Ｍ１８１９は、グリセロ脂質又はリン脂質の生合成を触媒する酵素であると思われる。ＤＫＦＺｐ５８６Ｍ１８１９は、ホスファートアシルトランスフェラーゼドメインを含有しており、そのドメインは、グリセロールホスファート、１-アシルグリセロールホスファート、又は２-アシルグリセロールホスホエタノールアミンアシルトランスフェラーゼ活性を有する酵素に見出される(ＳＭＡＲＴ ＳＭ００５６３)。
ＤＫＦＺｐ５８６Ｍ１８１９は、１-アシルグリセロール-３-ホスファート-Ｏ-アシルトランスフェラーゼ１(ＡＧＰＡＴ１；ＯＭＩＭ ６０３０９９)とある程度の類似性(２７０残基に対して３３％の類似性)を有する。ＡＧＰＡＴ１はリゾホスファチジン酸のホスファチジン酸への転換を触媒する。リゾホスファチジン酸及びホスファチジン酸は、シグナル伝達及び脂質生合成に関与している(Leung, D. W., Front Biosci., 6:D944-53 (2001))。
標的突然変異又はジーントラップ突然変異を株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ-由来胚性幹(ＥＳ)細胞において生じさせた。キメラマウスをＣ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスに交雑してＦ１ヘテロ接合体動物を産生した。これらの子孫を交雑させてＦ２野生型、ヘテロ接合体、及びホモ接合体突然変異子孫を産生した。極くたまに、例えばＦ１マウスがキメラからほとんど得られなかった場合に、Ｆ１ヘテロ接合マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交雑させ、交雑受精のための付加的なヘテロ接合動物を生じさせてＦ２マウスを産生せしめた。
wt        het      hom    合計
観察値      19        34        0      53
予想値      13.25     26.5     13.25   53
カイ二乗 = 17.87  有意性=0.00013  (hom/n) = 0.00  平均産仔数 = 0
野生型動物において、標的遺伝子の発現は、胚性幹(ＥＳ)細胞中と、骨及び尾部を除き、ＲＴ-ＰＣＲで試験された全１３の成体組織試料中において検出された。遺伝的データには、このレトロウイルスの挿入により、ホモ接合変異体が死亡する結果になることが示されている。致死のため、転写物発現分析を実施しなかった。致死が生じた場合には、それは明らかではない。遺伝子の発現はＥ８．５で開始し、それまで検査された全ての後続の段階に続く(Ｅ１３まで)。正常な発現は、インシトゥーハイブリダイゼーションによって示されたように遍在性である。
【０２７３】
致死の胚性発生異常に関連した検討
ノックアウトマウスにおける胚死亡は、限定されるものではないが、神経変性病、血管新生疾患、炎症性疾患を含む種々の重大な発生問題に起因し、又は遺伝子／タンパク質は、多くの細胞型における基本細胞のシグナル伝達プロセスで重要な役割を有する。更に胚死亡は潜在的な癌モデルとして有用である。同様に、対応するヘテロ接合体(+/-)変異動物は、それらがノックアウト遺伝子の機能に関して高度に情報的有用な糸口を明らかにする表現型及び／又は病理学的報告を示す場合に、特に有用である。例えば、ＥＰＯノックアウト動物は胚死亡するが、胚における病理学的報告には、ＲＢＣｓの著明な欠失が示された。
本実施例において、ＵＮＱ５５１は、リゾホスファチジン酸(ＬＰＡ)のホスファチジン酸(ＰＡ)への転換を触媒する新規のリゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼである。ＬＰＡはリン脂質の天然に生じる成分であり、特定のＧ-プロテイン結合レセプターの活性化を介し、多くの細胞反応を調節する成長因子様活性を有することが知られている。近年、ＬＰＡは卵巣癌の診断マーカーとして認識されており、よってＵＮＱ５５１媒介経路は癌の進行に関連していることが示されている(Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 13(7):1185-91 (2004))。
【０２７４】
１．表現型分析(破壊された遺伝子：ＤＮＡ５８８４８-１４７２(ＵＮＱ５５１)用)
（ａ）全体的な表現型の要約
ヘテロ接合体(-/+)変異マウスは、それらの野生型同腹仔及び背景的平均と比較した場合、免疫的異常を示した。血清ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３はヘテロ接合成人において減少していた。
（ｂ）更なる胚分析
ＵＮＱ５５１は、マウスの胚発生の初期段階で発現する。８．５日目の原腸形成一日後、ＵＮＱ５５１は新規に形成された中胚葉と、更には最終的には胎盤の一因となる構造である栄養膜錐体で発現する。一日後、ＵＮＱ５５１発現は、少なくとも妊娠中期まで、広範囲に広がり一様である。１２．５日までに胎盤は完全に形成され、機能するようになる。胎盤により母と胎仔との結びつきがもたらされ、ガス、栄養及び廃物の交換が可能になる。また、胎盤はホルモン及び成長因子の供給源であり、胎仔の免疫保護に関与している。これらの特性の何れかが欠失すると、成長遅延及び死に至る場合がある。ＵＮＱ５５１は胎盤の海綿栄養芽細胞層に発現する。
ホモ接合体ＵＮＱ５５１変異胚は、約１４．５日に死亡し始めた。変異体はその小胎盤により１２．５日目で最初に同定することができる。また変異体の羊水は黄色であり、卵黄嚢は減少している。双方の知見は、死亡しつつあり融食作用を被る不健康な胚に特徴的である。１２．５日目の胎盤組織検査により、変異体では、海綿栄養芽細胞層中への内耳層の突出が数及び度合いにおいて低下していることが明らかとなった。マーカー遺伝子分析により、ＵＮＱ５５１を発現する海綿栄養芽細胞層の大きさが減少していることが確認された。
胎盤の内耳層は、母系性及び胎性の血液循環を代謝的に交換するために並んでいる箇所である。分岐の減少、よってＵＮＱ５５１変異胚にある２つの系が接触する表面領域が減少することより、酸素／栄養交換が不十分になり、胚死亡に至る。ＵＮＱ５５１は、胎盤発育において、特に胎盤に見られる他のものへの一つの組織型の浸潤の媒介において重要である。ＵＮＱ５５１に対して類似した役割が転移中にも生じる可能性がある。
【０２７５】
（ｃ）免疫学的表現型分析
免疫関連及び炎症性疾患は、正常な生理では、傷害又は損傷に応答し、傷害又は損傷からの修復を開始し、外来生物に対して生得的及び獲得した防御を開始するかなり複雑でしばしば複数の相互に関連した生物学的経路の徴候又は結果である。疾患又は病態は、これらの正常な生理学的経路が、応答の強さに直接関連して、異常な調節又は過度の刺激の結果として、又は自己に対する反応として、又はこれらの組み合せとして、更なる傷害又は損傷を引き起こす場合に生じる。
これらの病気の起源はしばしば多段階経路及び多くの異なる生物学的システム／経路に関連しているが、これらの経路の一又は複数における重要な点への介入は、改善又は治療効果を有し得る。治療的介入は、有害なプロセス／経路への拮抗作用、又は有益なプロセス／経路の刺激により生じ得る。
Ｔリンパ球(Ｔ細胞)は哺乳動物の免疫反応における重要な成分である。Ｔ細胞は、主要組織適合複合体(ＭＨＣ)内の遺伝子によりコードされる自己分子に関連する抗原を認識する。抗原は、抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片等の表面上のＭＨＣ分子と共にディスプレイされうる。Ｔ細胞系は、宿主哺乳動物に対して健康への脅威をもたらすこれらの改変細胞を排除する。Ｔ細胞には、ヘルパーＴ細胞及び細胞傷害性Ｔ細胞が含まれる。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞上にある抗原-ＭＨＣ複合体の認識に続き、広範囲に増殖する。またヘルパーＴ細胞は、Ｂ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞及び免疫反応に関与する種々の他の細胞の活性化において中心的な役割を担っている様々なサイトカイン、すなわちリンホカインを分泌する。
多くの免疫反応では、炎症細胞が損傷又は感染の部位に浸潤する。遊走細胞は、罹患組織の組織学的検査により決定することができる、好中球、好酸球、単球又はリンパ球でありうる。Current Protocols in Immunology, John E. Coligan編, 1994, John Wiley & Sons, Inc。
多くの免疫介在性疾患が知られており、広く研究されている。このような疾患には、免疫媒介炎症性疾患(例えば、関節リウマチ、免疫媒介性腎疾患、胆肝汁性疾患、炎症性大腸炎(ＩＢＤ)、乾癬、及び喘息)、非免疫媒介炎症性疾患、感染症、免疫不全症、新生組織形成、及び移植片拒絶等が含まれる。免疫学の領域において、炎症及び炎症性疾患の治療のための標的をここで同定した。
免疫学の領域において、炎症及び炎症性疾患の治療のための標的を同定した。免疫関連疾患は、一例では、免疫反応を抑制することにより治療することができる。免疫刺激活性を有する分子を阻害する中和抗体の使用は、免疫媒介性及び炎症性疾患の治療に有益である。免疫反応を阻害する分子を利用して（タンパク質を直接に又は抗体アゴニストの使用により）、免疫反応を阻害し、よって免疫関連疾患を改善することができる。
次の試験を実施した：
【０２７６】
血清免疫グロブリンアイソタイプ分析：
血清免疫グロブリンアイソタイプ分析を、Cytometric Bead Array(ＣＢＡ)キットを使用して実施した。このアッセイは、単一の試料中のマウスモノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖アイソタイプを素早く同定するために使用した。表された値は「相対的蛍光単位」であり、カッパ軽鎖の検出に基づく。＜６の値は有意ではない。
結果：
血清免疫グロブリンアイソタイプアッセイにより、ヘテロ接合成体が、低下したＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３レベルを示すことが明らかとなった。よって、ヘテロ接合体では、(+/+)同腹仔と比較して、血清免疫グロブリンレベルの異常な低下が示された。ホモ接合体変異マウスでは、胚死亡となった。よって、ＰＲＯ１１０８ポリペプチド又はＰＲＯ１１８０をコードする遺伝子は、胚発生に必須である。更に、ＰＲＯ１１０８をコードする遺伝子は、免疫グロブリン(又はガンマグロブリン)の作製にも必須である。ガンマグロブリンの作製不全に関連した病気は、Ｘ染色体における単一遺伝子欠陥に関連する無ガンマグロブリン血症として特徴付けられており、よって主として雄に生じる。抗体生成におけるこの単一遺伝子欠陥は、ＩｇＭ、ＩｇＡ及びＩｇＧの幾つかのサブクラスとして公知の免疫グロブリンアイソタイプの不在が原因である。殆どの遺伝的な免疫不全症は劣性遺伝子欠損により引き起こされる。よって、双方の染色体が欠損した場合のみ、劣性欠損により病気又は死亡に至る。この場合、ヘテロ接合体変異マウスは、無ガンマグロブリン血症等の免疫不全症を研究するための優れたモデルを提供する。
【０２７７】
Ｄ．ＤＮＡ２０３５２８-３０１４(ＵＮＱ９１９６)遺伝子破壊を有するマウスの産生と分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ３４０００ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ２０３５２８-３０１４[ＵＮＱ９１９６]と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：変異したマウス遺伝子は、ヌクレオチド参照番号：ＢＹ７３１９６３又はＢＹ７３１９６３ ＲＩＫＥＮ全長の富んだ８つの細胞胚ムスムスクルスに対応；ヒトヌクレオチド参照番号は：ＮＭ＿１５３８３５又はホモサピエンスＧプロテイン結合レセプター１１３(ＧＰＲ１１３)に対応、タンパク質参照番号：ＮＰ＿７２２５７７又はＧ-プロテイン結合レセプター１１３[ホモサピエンス]。
変異したマウス遺伝子は、ヒトＧＰＲ１１３(Ｇ-プロテイン結合レセプター１１３)に対してオルソロガスであるＮＣＢＩ ｃＤＮＡ ＢＹ７３１９６３により表される。別名には、ＰＧＲ２３及びｈＧＰＣＲ３７が含まれる。単一の出版物には、名称ＰＧＲ２３の下、ヒト及びマウス座位が存在することが記載されている(Vassilatis等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 100(8):4903-8 (2003))。ＧＰＲ１１３(Ｑ８ＩＺＦ５)のSwissProt記録には、表題：ＧＰＳドメイン及びＳｅｒ／Ｔｈｒリッチ領域を含む長Ｎ末端を有する新規のヒトＧ-プロテイン結合レセプターという表題で、配列が電子的にアップロードされたことが記載されている。
ヒトタンパク質の生物情報学的分析により、４２８−４８１残基内でコードされたホルモン-レセプタードメイン(ＨＲＭ、Ｐｆａｍ０２７９３)と、Ｃ末端のセクレチン型Ｇプロテイン-結合レセプターモチーフ(Ｐｆａｍ０１８２５、Ｐｆａｍ００００２)に弱く類似した領域が予測される。Ｎ末端(アミノ酸２０-４２７)は、ほぼ２０％のセリン又はスレオニン残基からなる。
ＧＰＲ１１３は、他のヒトＧ-プロテイン結合レセプターに密接には関連していない。しかしながら、それは、他のオルファンレセプターのＧＰＲ１１６(ＫＩＡＡ０７５８タンパク質)と７８０残基に対して約４０％の類似性がある。
標的突然変異又はジーントラップ突然変異を株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ-由来胚性幹(ＥＳ)細胞において生じさせた。キメラマウスをＣ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスに交雑してＦ１ヘテロ接合体動物を産生した。これらの子孫を交雑させてＦ２野生型、ヘテロ接合体、及びホモ接合体突然変異子孫を産生した。極くたまに、例えばＦ１マウスがキメラからほとんど得られなかった場合に、Ｆ１ヘテロ接合マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交雑させ、交雑受精のための付加的なヘテロ接合動物を生じさせてＦ２マウスを産生せしめた。
wt        het      hom    合計
観察値      23        46       31     100
予想値      25        50       25     100
カイ二乗 = 1.92  有意性=0.38289  (hom/n) = 031  平均産仔数 = 0
レベルＩの表現型分析を以下に記載したようにしてこの世代からのマウスについて実施した。
標的遺伝子の野生型発現が、胚性幹(ＥＳ)細胞において、またＲＴ-ＰＣＲで試験された４４の成体及び胎仔組織試料のなかで、胸腺、脾臓、精巣、唾液線、骨格筋、子宮、脂肪、膀胱、甲状腺、大動脈、眼、胎盤、９．５日目の胚、１２．５日目の胚、胎児脳、及び胎児肺において検出された。
標的遺伝子の破壊はサザンハイブリッド分析法で確認した。
【０２７８】
１．表現型分析(破壊された遺伝子：ＤＮＡ２０３５２８-３０１４(ＵＮＱ９１９６))
（ａ）全体的な表現型の要約
ヒト推定Ｇプロテイン-結合レセプター１１３(ＧＰＲ１１３)のオルソログをコードする遺伝子の変異により、(-/-)変異体における骨梁容量、厚み、及び結合密度が低下した。またノックアウトにおいても、異常なグルコース耐性が示された。遺伝子の破壊をサザンブロット法で確認した。
（ｂ）骨代謝：放射線学的表現型分析
手順：
骨代謝の領域において、標的は、ここでは関節炎、骨粗鬆症、骨減少症及び大理石骨病の治療に対して同定し、並びに骨折治癒を促進する標的が同定される。試験には骨梁及び皮質骨の双方の骨塩量の非常に高い解像度で非常に高い感度での測定のためのマイクロＣＴが含まれる。
骨マイクロＣＴ分析：
手順：マイクロＣＴをまた使用して非常に高感度のＢＭＤ測定を得た。１つの椎骨と１つの大腿を、４匹の野生型及び８匹のホモ接合体マウスのコホートから取り出した。腰部の５つの椎骨梁体積、骨梁厚、結合密度、及び中軸大腿の全骨領域及び皮質厚の測定を行った。マイクロＣＴ４０スキャンにより、骨量及び構造の詳細な情報が得られた。複数の骨を試料ホルダーに配し、自動的にスキャンした。機器ソフトウェアを使用し、分析のための関心領域を選択した。骨梁パラメータを１６マイクロメーター解像度で第５腰椎(ＬＶ５)において分析し、皮質骨パラメータを２０マイクロメーターの解像度で大腿中軸において分析した。
マイクロ-ＣＴ分析の結果：(-/-)マウスは、それらの性別が一致した(+/+)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、顕著に減少した平均した椎骨梁の体積、数、厚み、及び結合密度を示した。[分析値  wt／het／hom：４／０／８]。
これらの結果には、ノックアウト変異マウスは、密度の低下と場合によっては骨折に至る脆弱化を伴う骨量の減少によって特徴付けられる顕著な骨減少を伴う異常な骨代謝を示すことを裏付けている。よって、ＰＲＯ３４０００ポリペプチド又はそのアゴニストは、骨のホメオスタシスに有用であろう。更に、ＰＲＯ３４０００ポリペプチド又はそのコード化遺伝子は、骨のホメオスタシスの維持に有用であり、関節炎又は骨粗鬆症の治療又は骨折治癒に重要である；一方、ＰＲＯ３４０００ポリペプチド又はそのコード化遺伝子に対するアンタゴニストは、関節炎、骨粗鬆症及び骨減少症を含む異常な骨代謝に関連した炎症性疾患を含む異常又は病理学的骨疾患に至らしめる。
【０２７９】
（Ｃ）表現型分析：代謝-血液化学
代謝の領域において、糖尿病の治療のための標的を同定することができる。血液化学表現型分析には、インシュリン感受性及びグルコース代謝における変化を測定するためのグルコース耐性試験が含まれる。グルコース代謝試験の結果が異常であると、限定されるものではないが、次の障害又は病状が示唆される：１型及び２型糖尿病、Ｘ症候群、種々の循環器病及び／又は肥満。
手順：  ２匹の野生型及び４匹のホモ接合体雄のコホートをこのアッセイで使用した。グルコース耐性試験は哺乳動物において損なわれたグルコースホメオスタシスを定めるための標準である。グルコース耐性試験をＬｉｆｅｓｃａｎグルコメーターを使用して実施した。２０％溶液として送達されるＤ-グルコースを２ｇ／ｋｇ、動物にＩＰ注射し、血糖値を、注射０、３０、６０及び９０分後に測定した。
結果：  これらの研究では、(-/-)マウスは、それらの性別が一致した(+/+)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、試験された全３回の間隔で、正常空腹時グルコースの存在下では亢進したグルコース耐性を示すことが示された。更に、高インシュリン血症は(-/-)マウスには顕れなかった。残りの臨床的化学データには、何の異常も見られなかった。よって、ノックアウトマウスは、損傷したグルコースホメオスタシスの反対の表現型パターンを示し、よって、ＰＲＯ３４０００ポリペプチド又はそのコード化遺伝子のアンタゴニストは、損なわれたグルコースホメオスタシス及び／又は糖尿病の治療に有用であろう。
【０２８０】
Ｅ．ＤＮＡ３４３８７-１１３８(ＵＮＱ２１４)遺伝子破壊を有するマウスの産生と分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ２４０ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ３４３８７-１１３８[ＵＮＱ２１４]と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：変異したマウス遺伝子は、ヌクレオチド参照番号：ＡＫ００２２７６又はムスムスクルス成人雄腎臓ｃＤＮＡ、ＲＩＫＥＮ全長に富むライブラリー、クローン：０６１０００７Ｃ２１：ＨＳＰＣ０１３に対する相同体、全挿入配列、タンパク質参照番号はＢＡＢ２１９８１又はデータ源であり：ＳＰＴＲ、ソースキー(source key)：Ｑ９Ｙ２Ｒ７、証拠：ＩＳＳ〜ＨＳＰＣ０１３に対する相同体〜推定[ムスムスクルス]。ヒト遺伝子配列は次の通りである：ヌクレオチド参照番号：ＢＣ０２１２３７又はホモサピエンス、クローンＩＭＡＧＥ：４３０３５１３；タンパク質参照番号：ＡＡＨ１１００６。未知(ＭＧＣ：１３３２２のタンパク質)[ホモサピエンス]。
これらの動物において変異した遺伝子は、ヒトＵｎｉＧｅｎｅ Ｈｓ．９５２７(ＡＰＲ-３)のオルソログであるマウスＵｎｉＧｅｎｅクラスターＭｍ．２８１４４により表される。ＡＰＲ-３はアポトーシスに関連したタンパク質ＡＰＲ-３をコードする。またタンパク質はｐ１８、ＨＳＰＣ０１３、及びｐ１８タンパク質としても知られている。
ＳＭＡＲＴ(Shultz等, Nucleic Acids Res., 28(1):231-4 (2000))分析は、ＥＧＦ-様ドメイン(Ｐｆａｍ ＰＦ００００８)及び仮定タンパク質において切断可能なシグナルペプチド、並びに場合によっては膜貫通ドメインを予測している。ＥＧＦ-様ドメインは、分泌タンパク質及び膜結合性タンパク質の細胞外部分に見出される共通の特色である。
特定の情報は、ＡＰＲ-３に関して殆ど入手できないが、これは、アポトーシスに関連し、造血発生及び分化にも関与していると思われる(Zhang等, Genome Res., 10(10):1546-60 (2000))。マウス及びヒトＡＰＲ-３遺伝子の幾つかの選択的スプライシング型が存在する。
標的突然変異又はジーントラップ突然変異を株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ-由来胚性幹(ＥＳ)細胞において生じさせた。キメラマウスをＣ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスに交雑してＦ１ヘテロ接合体動物を産生した。これらの子孫を交雑させてＦ２野生型、ヘテロ接合体、及びホモ接合体突然変異子孫を産生した。極くたまに、例えばＦ１マウスがキメラからほとんど得られなかった場合に、Ｆ１ヘテロ接合マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交雑させ、交雑受精のための付加的なヘテロ接合動物を生じさせてＦ２マウスを産生せしめた。レベルＩ表現型分析を、以下に記載するようにして、この世代からのマウスにおいて実施した。
wt        het      hom    合計
観察値      12        31       17     60
予想値      15        30       15     60
カイ二乗 = 0.90  有意性=0.63763  (hom/n) = 0.28  平均産仔数 = 0
レトロウイルスの挿入は、約２２５のアミノ酸のうち、約アミノ酸３０で順方向であるように思われた。標的遺伝子の野生型発現が、胚性幹(ＥＳ)細胞と、ＲＴ-ＰＣＲで試験された全１３の成体組織において検出された。ＲＴ-ＰＣＲ分析により、分析された(-/-)マウスに転写物がないことが明らかになった(Ｆ-９１)。
【０２８１】
１．表現型分析(破壊された遺伝子：ＤＮＡ３４３８７-１１３８(ＵＮＱ２１４))
（ａ）心血管表現型分析
心血管生物学の領域では、表現型試験を実施して、循環器、内皮又は血管新生疾患を治療するための潜在的標的を同定した。このような表現型試験には、眼底撮影法及び血管造影法が含まれ、種々の眼性異常の注意を与えるための網膜動静脈比(Ａ／Ｖ比)が測定される。異常なＡ／Ｖ比は、高血圧による血管疾患に関連したもののような全身性の疾患又は障害(及び高血圧に起因する任意の病気、例えばアテローム性動脈硬化症)、糖尿病、又は眼科的疾患に対応する他の眼病の徴候を表している。このような眼の異常には、限定されるものではないが、次のものが含まれうる：網膜の異常は、網膜形成不全、種々の網膜症、再狭窄、網膜動脈閉塞症又は閉塞；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症（carotinemeia）、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスである。
また、眼底撮影法及び血管造影法は白内障形成を測定するためにも使用され得る。白内障は：ヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群等の、このような全身性疾患に関連している。他の眼に発生する異常には：無虹彩症、前区及び発育異常症候群が含まれる。また白内障は眼内の感染及び炎症(ブドウ膜炎)の結果としても生じ得る。
【０２８２】
手順：
４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体のコホートをこのアッセイで試験した。Hawes及び共著者により修正されたKowa Genesis小動物用眼底カメラを使用し、意識のある動物について眼底撮影を行った(Hawes等, 1999 Molecular Vision 1999; 5:22)。フルオレセインの腹膜内注射により、各検査の蛍光アルゴリズム及び直射光による眼底画像の獲得が可能になった。直接的な眼科的変化に加えて、この試験では、糖尿病及びアテローム性動脈硬化症又は他の網膜異常等の全身性疾患に伴う網膜変化を検出することができる。正常光の下での眼底写真が提供された。血管造影写真により、眼の動脈及び静脈の検査が可能になった。更に、眼に対する静脈に対する動脈の比(Ａ／Ｖ)が決定された。
上述したプロトコールを使用し、産生したＦ２野生型、ヘテロ接合体及びホモ接合体の変異子孫について眼科的分析を実施した。すなわち、Ａ／Ｖ比を測定し、Kowa COMIT＋ソフトウェアを用い、眼底画像に従って算出した。この試験は、散大した瞳孔を通してカラー写真が撮影されるものであり：画像が多くの病気の検出及び分類分けに役立つ。静脈に対する動脈の比(Ａ／Ｖ)は、静脈の直径に対する動脈の直径(血管の分岐前に測定)の比である。多くの病気、すなわち糖尿病、循環器疾患、乳頭浮腫、視神経萎縮又は他の眼の異常、例えば網膜変性症(網膜色素変性症としても知られている)、又は網膜形成不全、視覚障害又は失明がこの比に影響を及ぼしているであろう。よって、野生型(+/+)同腹仔と比較し、ホモ接合体(-/-)及びヘテロ接合体(+/-)の変異子孫における静脈に対する動脈の比が増加している結果となる表現型観察はこのような病理状態を示している。
結果：
この研究において、進行性白内障が、６匹の(-/-)マウス(Ｆ-９７、−１１５、−１１７、Ｆ-１２０、−１３４、及び−１３７)及び１匹の(+/-)マウス(Ｆ-９９)で観察され、(-/-)マウスにおいては、より重症であった。検査された雄の(-/-)マウス(−１４１)では、右目に白内障が表れた。また、比率に対する動脈のわずかな増加も見られた。要約すると、ＰＲＯ２４０ポリペプチドをコードするＤＮＡ３４３８７-１１３８(ＵＮＱ２１４)と同定された遺伝子をノックアウトすることにより、ヘテロ接合体及びホモ接合体の変異子孫の双方とも、白内障形成及び／又は他の眼科的疾患に関連した表現型を示す。このように検出された眼科的変化は、循環器系の病気に最も共通して関連している。特に白内障形成は、血液凝固系における障害に関連した循環器系合併症を示唆している可能性もある。また白内障は、ヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレイフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリスモイ１３-１５状態、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、甲状腺機能低下症、コンラーディ症候群等の、このような全身性疾患にも関連している。よって、ＰＲＯ２４０ポリペプチド又はそのコード化遺伝子のアンタゴニストにより、類似した病的変化に至るが、アゴニストは白内障形成及び／又は潜在する循環器病又は眼科的疾患の予防における治療剤として有用である。
【０２８３】
Ｆ．ＤＮＡ５２１９２-１３６９(ＵＮＱ４８０)遺伝子破壊を有するマウスの産生と分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ９４３ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ５２１９２-１３６９[ＵＮＱ４８０]と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：マウスヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿０５４０７１又はムスムスクルス線維芽細胞成長因子レセプター様１(Ｆｇｆｒｌ１)に対応；タンパク質参照番号：ＮＰ＿４７３４１２又は線維芽細胞成長因子レセプター様１；線維芽細胞成長因子レセプター５[ムスムスクルス]；ヒトヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿０２１９２３又はホモサピエンス線維芽細胞成長因子レセプター様１(ＦＧＦＲＬ１)に対応、タンパク質参照番号：ＮＰ＿０６８７４２又は線維芽細胞成長因子レセプター様１前駆体[ホモサピエンス]。
これらの動物において変異した遺伝子は、ヒトＵｎｉＧｅｎｅクラスターＨｓ．１９３３２６(ＦＧＦＲＬ１)のオルソログであるマウスＵｎｉＧｅｎｅクラスターＭｍ．３５６９１により表される。ＦＧＦＲＬ１は線維芽細胞成長因子レセプター様１をコードする。またタンパク質はＦＧＦＲ５、ＦＧＦＲ５ベータ、ＦＧＦＲ５ガンマ、及び線維芽細胞成長因子レセプター５としても知られている。
ＦＧＦＲＬ１、線維芽細胞成長因子レセプターファミリーのメンバーは、１つのシグナルペプチド、３つの細胞外Ｉｇ様ドメイン、６つのシステイン、ＨＡＶモチーフを有さない１つの酸性ボックス、１つの膜貫通セグメント、及びトランスリン酸化によるシグナル伝達に必要であり(Wiedemann, M., 及びTrued, B., Genomics, 69(2):275-9 (2000)；Kimら, Biocim Biophys Acta, 1518(1-2):152-6 (2001); Wiedemann, M. 及びTrued, B.,Biochim Biophys Acta, 1520(3):247-50 (2001), Sleemanら, Gene, 271(2):171-82 (2001))、更に公知のＦＧＦＲｓと一致し、Ｉｇ-サブファミリーのＩ-ｓｅｔサブグループのメンバーとしてＦＧＦＲＬ１を分類する、通常のチロシンキナーゼを欠く細胞内ドメインを含む。
正確な機能はＦＧＦＲＬ１に起因するものではないが、Wiedemann, M. 及びTrued, B.は、ＦＧＦＲＬ１がＦＧＦレセプター活性化の調節における役割を担っている可能性を示唆している。ＦＧＦＲＬ１は膵臓において高レベルで発現しており、ＦＧＦＲＬ１が膵臓機能を調節している可能性を示唆している(Kim等, 2002 上掲)。腎臓に加え、ＦＧＦＲＬ１発現は脳及び肺において高い(Sleeman等, 2001 上掲)。
標的突然変異又はジーントラップ突然変異を株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ-由来胚性幹(ＥＳ)細胞において生じさせた。キメラマウスをＣ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスに交雑してＦ１ヘテロ接合体動物を産生した。これらの子孫を交雑させてＦ２野生型、ヘテロ接合体、及びホモ接合体突然変異子孫を産生した。極くたまに、例えばＦ１マウスがキメラからほとんど得られなかった場合に、Ｆ１ヘテロ接合マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交雑させ、交雑受精のための付加的なヘテロ接合動物を生じさせてＦ２マウスを産生せしめた。
wt        het      hom    合計
観察値      30        68        1      99
予想値      24.75     49.5     24.75   99
カイ二乗 = 30.82  有意性=0.00000  (hom/n) = 0.01  平均産仔数 = 0
野生型動物において、標的遺伝子の発現が、胚性幹(ＥＳ)細胞、及びＲＴ-ＰＣＲで試験された全１３の成体組織試料において検出された。標的遺伝子の破壊をサザンハイブリッド分析により確認した。遺伝的データには、この変異により、ホモ接合体変異が死亡する結果になることが示されている。ヘテロ接合マウスに顕著な表現型は観察されなかった。死亡したため、転写発現分析は行わなかった。
【０２８４】
１．表現型分析(破壊された遺伝子：ＤＮＡ５２１９２-１３６９(ＵＮＱ４８０))
標的遺伝子(ＵＮＱ４８０)の変異は胚死亡という結果になった。雄のヘテロ接合(+/-)マウスは、それらの性別が一致した同腹仔及び背景的平均と比較した場合、増加した平均大腿中軸断面積を示した。
ＵＮＱ４８０による胚死亡の発育異常、及び雄のヘテロ接合体変異マウスに関連した陰性表現型に関する議論：
ノックアウトマウスにおける胚死亡は、限定されるものではないが、神経変性病、血管新生疾患、炎症性疾患を含む種々の重大な発生問題に通常起因し、又は遺伝子／タンパク質は、多くの細胞型における基本細胞のシグナル伝達プロセスで重要な役割を有する。更に胚死亡は潜在的な癌モデルとして有用である。同様に、対応するヘテロ接合体(+/-)変異動物は、それらがノックアウト遺伝子の機能に関して高度に情報的有用な糸口を明らかにする表現型及び／又は病理学的報告を示す場合に、特に有用である。例えば、ＥＰＯノックアウト動物は胚死亡するが、胚における病理学的報告には、ＲＢＣｓの著明な欠失が示された。
ＵＮＱ４８０に関し、胚死亡に関連していると思われる病状は次のものである：
軟骨形成不全
骨関節炎
膵臓病
血管発生
多発性硬化症
胚発生中、ＵＮＱ４８０は、軟骨細胞の分化及び増殖のコントロールへの関与が示される骨格組織の軟骨に優先的に発現している。軟骨タンパク質における変異は、種々の形態の軟骨形成不全を含む、重大な先天的疾患の原因となり得る。成体において軟骨が変性すると、骨関節炎に至るおそれもある。
またＵＮＱ４８０は、膵臓類似体を発生させるであろう発生中の前腸内胚葉において、高レベルで発現している。成人ヒト組織において、ＵＮＱ４８０は膵臓で優先的に発現している。幾つかのＦＧＦｓ及びそれらのレセプターは、ヒト膵臓癌細胞系で発現しており、ヒト膵臓癌又は慢性膵炎の膵臓において過剰発現している。よって、ＵＮＱ４８０の過剰発現は膵臓病の病理生物学に関与している。
更にＵＮＱ４８０は、このプロセスへの関与が知られているＦＧＦ２に結合するとして、血管発生における役割を担っている。また更に、ＦＧＦ２は脱髄における役割を担っていることが示されており、よって多発性硬化症等の脱髄病に関与しているおそれがあり：推測すれば、ＵＮＱ４８０もそうであるかもしれない。
【０２８５】
（ａ）骨代謝：放射線学的表現型分析
手順：
骨代謝の領域において、標的は、ここでは関節炎、骨粗鬆症、骨減少症及び大理石骨病の治療に対して同定し、並びに骨折治癒を促進する標的が同定される。試験には骨梁及び皮質骨の双方の骨塩量の非常に高い解像度で非常に高い感度での測定のためのマイクロＣＴが含まれる。
骨マイクロＣＴ分析：
手順：マイクロＣＴをまた使用して非常に高感度のＢＭＤ測定を得た。１つの椎骨と１つの大腿を、４匹の野生型及び８匹のホモ接合体マウスのコホートから取り出した。腰部の５つの椎骨梁体積、骨梁厚、結合密度、及び中軸大腿の全骨領域及び皮質厚の測定を行った。マイクロＣＴ４０スキャンにより、骨量及び構造の詳細な情報が得られた。複数の骨を試料ホルダーに配し、自動的にスキャンした。機器ソフトウェアを使用し、分析のための関心領域を選択した。骨梁パラメータを１６マイクロメーター解像度で第５腰椎(ＬＶ５)において分析し、皮質骨パラメータを２０マイクロメーターの解像度で大腿中軸において分析した。
マイクロ-ＣＴ分析の結果：雄の(+/-)マウスは、それらの性別が一致した(+/+)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、増加した平均大腿中軸断面積を示した。
【０２８６】
（ｂ）更なる病理学的観察
上述した論議に加え、何の因子が、ホモ接合マウスに対する胚死亡表現型への寄与に関連しているのかを決定するために、ＵＮＱ４８０ノックアウトマウスを更に研究した。これらの研究の結果には、ＵＮＱ４８０(ＦＧＦＲＬ１と命名)が腎臓発生に必須であり、ＦＧＦシグナル伝達における積極的な役割を担うことができることが示されている。
ＦＧＦＲＬ１は、腎臓の２つの前駆細胞集団；後腎間充織及びウォルフ管を発生させる中間中胚葉での胚発生中に発現する。後腎間充織が隣接する上皮ウォルフ管にシグナル伝達し、尿管芽の形成が誘発される場合、胚日数１０．５日目に腎臓発生が開始する。ＦＧＦＲＬ１はこの段階で後腎間充織に発現する。尿管芽は成長し、後腎間充織からのシグナルに応じて分岐し、成熟した腎臓の集合管系を形成する。尿管芽からの相反シグナルは、後腎間充織に起因し、間充織から上皮への移行を受け、腎臓の排泄部分、ネフロンが形成される。
ＵＮＱ４８０ホモ接合変異体は誕生前後に死亡し、腎臓非形成がみられた。最初の尿管芽は、胚日数１０．５日目のｃ-ｒｅｔの正常な発現パターンで例証されるように、ＵＮＱ４８０変異体において、通常に形成される。しかしながら、１日後、尿管芽は、分岐して特徴的なＴ型構造体を形成することに失敗する。Ｗｎｔ-１１は分岐の前に尿管芽で発現するが、Ｗｎｔ-１１はＵＮＱ４８０変異体ではほとんど又は全く発現しない。Ｐａｘ２は、尿管芽の先端部周囲で濃縮する間充織で発現し、Ｐａｘ２はＵＮＱ４８０変異体で発現するが、細胞数及び発現レベルはかなり減少している。これらの観察により、ＦＧＦＲＬ１は後腎間充織から尿管芽へシグナル伝達し、分岐状形態形成することが示唆される。ｃ-ｒｅｔ発現で例証されるように、１３．５日目までに、尿管芽は多数回正常に分岐している。同様に、Ｗｎｔ-１１はこれらの段階で分岐末端をマークする。これらの遺伝子双方とも、ＵＮＱ４８０変異体において欠損しているか、又はかなりダウンレギュレーションしている。
腎臓発生の初期段階におけるＦＧＦシグナル伝達の役割について、詳細はほとんど知られていない。しかしながら、ＦＧＦＲ２の優性ネガティブ形態の過剰発現は、ＦＧＦシグナル伝達が重要な役割を担っているという説得力のある証拠を提供する尿管分岐をブロックする。ＦＧＦＲ２ノックアウトは正常に腎臓を発生させるため、優性ネガティブモデルに影響を及ぼす内在性レセプターは知られていない。しかしながら、ＦＧＦＲＬ１はこのプロセスにおける役割を担っている。
要約すると、我々は、腎臓発生の初期段階における重要なレギュレータとしてＵＮＱ４８０(ＦＧＦＲＬ１)を同定した。このデータにより、ＦＧＦＲＬ１がＦＧＦシグナル伝達にポジティブな役割を担っていることが示唆される。
【０２８７】
Ｇ．ＤＮＡ９８５５７(ＵＮＱ１４２５)遺伝子破壊を含むマウスの産生と分析
これらのノックアウト実験では、ｈｕＡ３３ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ９８５５７[ＵＮＱ１４２５]と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：マウスヌクレオチド参照番号は次のものに対応：ＮＭ＿０２１６１０又はムスムスクルス糖タンパク質Ａ３３(膜貫通)(Ｇｐａ３３)、タンパク質参照番号：ＮＰ＿０６７２３又は糖タンパク質Ａ３３(膜貫通)；Ａ３３抗原[ムスムスクルス]；ヒトヌクレオチド参照番号は次のものに対応：ＮＭ＿００５８１４又はホモサピエンス糖タンパク質Ａ３３(膜貫通)(ＧＰＡ３３)、タンパク質参照番号：ＮＰ＿００５８０５又は膜貫通糖タンパク質Ａ３３前駆体[ホモサピエンス]。レトロウイルスの挿入により、３１５のアミノ酸のタンパク質(マウスＮＣＢＩ受入番号ＮＰ＿０６７２３)におけるアミノ酸３をコードするエキソンの前で、遺伝子が破壊された。
破壊されたマウス遺伝子は、糖タンパク質Ａ３３(ＧＰＡ３３)、ヒトＧＰＡ３３のオルソログに存在する。別名には、細胞表面抗原Ａ３３；Ａ３３、Ａ３３抗原、及び細胞表面Ａ３３抗原が含まれる。
ＧＰＡ３３は２つの免疫グロブリンドメインを含む膜貫通タンパク質(Ｐｆａｍ ＰＦ０００４７)であり、腸上皮細胞にほぼ排他的に発現している(Abud等, Mech. Dev., 98(1-2):111-4 (2000))。
標的突然変異又はジーントラップ突然変異を株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ-由来胚性幹(ＥＳ)細胞において生じさせた。キメラマウスをＣ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスに交雑してＦ１ヘテロ接合体動物を産生した。これらの子孫を交雑させてＦ２野生型、ヘテロ接合体、及びホモ接合体突然変異子孫を産生した。極くたまに、例えばＦ１マウスがキメラからほとんど得られなかった場合に、Ｆ１ヘテロ接合マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交雑させ、交雑受精のための付加的なヘテロ接合動物を生じさせてＦ２マウスを産生せしめた。レベルＩ表現型分析をこの世代からのマウスにおいて実施した。
標的遺伝子の野生型発現が、胚性幹(ＥＳ)細胞、及びＲＴ-ＰＣＲで試験された１３の成体組織試料のうち、胸腺、精巣、及び小腸及び大腸において検出された。ＲＴ-ＰＣＲ分析により、分析された(-/-)マウス(Ｆ-９９)には転写物が存在しなかったことが明らかとなった。
wt        het      hom    合計
観察値      29        47        24    100
予想値      25        50        25    100
カイ二乗 = 0.86  有意性=0.65051  (hom/n) = 0.24  平均産仔数 = 0
【０２８８】
１．表現型分析(破壊された遺伝子：ＤＮＡ９８５５７(ＵＮＱ１４２５))
（ａ）全体的な表現型の要約
ホモ接合体変異マウスは、その野生型同腹仔と比較した場合、脾臓及び胸腺におけるＣＤ８細胞の平均パーセンテージの減少、ＣＤ４細胞の平均パーセンテージの増加を示した。更に変異体は、リンパ節におけるＣＤ２１ｈｉＣＤ２３ｍｅｄＢ細胞の平均パーセンテージの減少を示した。ＲＴ-ＰＣＲ分析により、ホモ接合体変異マウスには転写物が存在しないことが明らかとなった。
また性別が一致した(+/+)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、雄の(-/-)マウスは、増加した平均血清コレステロールレベルを示した。
（ｂ）表現型分析：心臓病学
心血管生物学の領域において、高血圧、アテローム性動脈硬化症、心不全、脳卒中、種々の冠動脈疾患、異脂肪血症、例えば高コレステロール(高コレステロール血症)及び血清トリグリセリドの上昇(高トリグリセリド血症)、癌及び／又は肥満の治療のための標的をここで同定した。
表現型試験には、血清コレステロール及びトリグリセリドの測定が含まれる。更に、炎症アッセイを実施し、アテローム性動脈硬化症の炎症成分のための潜在的標的を同定した。
血中脂質
手順：
５匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体のコホートをこのアッセイで試験した。高コレステロールレベルは、循環器疾患の進行における認識された危険因子である。血中脂質を測定することで、循環器病の危険性を低減に至らしめる阻害、及び血中脂質レベルを調節する生物学的スイッチの発見が容易になる。血中脂質レベルを上昇させる因子の阻害は循環器疾患のリスクを低減させるのに有用である。これらの血液化学試験では、コレステロール測定はCOBAS Integra400(mfr：Roche)を使用して記録した。
結果：
上にまとめたように、それらの性別が一致した(+/+)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、(-/-)マウスでは、平均血清コレステロールレベルの３５％増加が示された。トリグリセリドにおいては、何の変化も観察されなかった(分析値  wt／het／hom：５／４／８)。
よって、Ａ３３遺伝子が欠失したマウスは、循環器病のモデルとして提供することができる。Ａ３３ポリペプチド又はそのコード化遺伝子は、血中脂質の調節、特に正常なコレステロール代謝の維持に有用である。しかして、Ａ３３ポリペプチドは、高血圧、アテローム性動脈硬化症、心不全、脳卒中、種々の冠動脈疾患、又は糖尿病等のこのような循環器病の治療に有用である。
【０２８９】
（ｃ）免疫学的表現型分析
免疫関連及び炎症性疾患は、正常な生理では、傷害又は損傷に応答し、傷害又は損傷からの修復を開始し、外来生物に対して生得的及び獲得した防御を開始するかなり複雑でしばしば複数の相互に関連した生物学的経路の徴候又は結果である。疾患又は病態は、これらの正常な生理学的経路が、応答の強さに直接関連して、異常な調節又は過度の刺激の結果として、又は自己に対する反応として、又はこれらの組み合せとして、更なる傷害又は損傷を引き起こす場合に生じる。
これらの病気の起源はしばしば多段階経路及び多くの異なる生物学的システム／経路に関連しているが、これらの経路の一又は複数における重要な点への介入は、改善又は治療効果を有し得る。治療的介入は、有害なプロセス／経路への拮抗作用、又は有益なプロセス／経路の刺激により生じ得る。
Ｔリンパ球(Ｔ細胞)は哺乳動物の免疫反応における重要な成分である。Ｔ細胞は、主要組織適合複合体(ＭＨＣ)内の遺伝子によりコードされる自己分子に関連する抗原を認識する。抗原は、抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片等の表面上のＭＨＣ分子と共にディスプレイされうる。Ｔ細胞系は、宿主哺乳動物に対して健康への脅威をもたらすこれらの改変細胞を排除する。Ｔ細胞には、ヘルパーＴ細胞及び細胞傷害性Ｔ細胞が含まれる。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞上にある抗原-ＭＨＣ複合体の認識に続き、広範囲に増殖する。またヘルパーＴ細胞は、Ｂ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞及び免疫反応に関与する種々の他の細胞の活性化において中心的な役割を担っている様々なサイトカイン、すなわちリンホカインを分泌する。
多くの免疫反応では、炎症細胞が損傷又は感染の部位に浸潤する。遊走細胞は、罹患組織の組織学的検査により決定することができる、好中球、好酸球、単球又はリンパ球でありうる。Current Protocols in Immunology, John E. Coligan編, 1994, John Wiley & Sons, Inc。
多くの免疫介在性疾患が知られており、広く研究されている。このような疾患には、免疫媒介炎症性疾患(例えば、関節リウマチ、免疫媒介性腎疾患、胆肝汁性疾患、炎症性大腸炎(ＩＢＤ)、乾癬、及び喘息)、非免疫媒介炎症性疾患、感染症、免疫不全症、新生組織形成、及び移植片拒絶等が含まれる。
免疫学の領域において、炎症及び炎症性疾患の治療のための標的をここで同定した。免疫関連疾患は、一例では、免疫反応を抑制することにより治療することができる。免疫刺激活性を有する分子を阻害する中和抗体の使用は、免疫媒介性及び炎症性疾患の治療に有益である。免疫反応を阻害する分子を利用して（タンパク質を直接に又は抗体アゴニストの使用により）、免疫反応を阻害し、よって免疫関連疾患を改善することができる。
次の試験を実施した：
【０２９０】
蛍光-活性化細胞-選別(ＦＡＣＳ)分析
手順：
ＣＤ４、ＣＤ８及びＴ細胞レセプターを含む、末梢血からの免疫細胞組成のＦＡＣＳ分析を実施し、ナチュラルキラー細胞のｐａｎ ＮＫ及び白血球マーカーとして、ＣＤ４５、Ｂリンパ球のためのＣＤ１９、Ｔリンパ球を評価した。ＦＡＣＳ分析を、２つの野生型及び６つのホモ接合マウスで実施し、胸腺、脾臓、骨髄及びリンパ節から派生した細胞を含む。
これらの研究において、分析された細胞を、胸腺、末梢血、脾臓、骨髄、及びリンパ節から単離した。単核細胞個体群における単核細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、ＣＤ４及びＣＤ８ポシティブＴ細胞の相対的個体群を測定するように、フローサイトメトリーを設計した。Becton-Dickinson FACSCalibur３レーザーFACS機を使用し、免疫状態を評価した。表現型アッセイ及びスクリーニングのために、この機械では、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比率に加え、ＣＤ４＋／ＣＤ８-、ＣＤ８＋／ＣＤ４-、ＮＫ、Ｂ細胞及び単球数を記録する。単核細胞の特性を、６つの系統特異性抗体：ＣＤ４５ ＰｅｒＣＰ、抗-ＴＣＲｂ ＡＰＣ、ＣＤ４ ＰＥ、ＣＤ８ ＦＩＴＣ、ｐａｎ-ＮＫ ＰＥ、及びＣＤ１９ ＦＩＴＣのパネルと共に、各マウスからの溶解した末梢血の単一試料を染色することにより誘導した。２つのＦＩＴＣ及びＰＥでラベルされた抗体は、相互に排他的な細胞型を染色する。試料を、CellQuestソフトウェアを具備するBecton Dickinson FACSCaliburフローサイトメーターを使用して分析した。
結果：
ホモ接合体変異マウスでは、それらの野生型同腹仔と比較した場合、脾臓及び胸腺においては、ＣＤ４−／ＣＤ８＋細胞の平均パーセンテージの減少、及びＣＤ４＋／ＣＤ８−細胞の平均パーセンテージの増加が示された。更に、組織特異性ＦＡＣＳ分析の結果として、次の観察がなされた：(-/-)マウスでは、それらの(+/+)同腹仔と比較した場合、リンパ節においてはＣＤ２１ｈｉＣＤ２３ｍｅｄＢ細胞の平均パーセンテージの減少が示され；(-/-)マウスでは、骨髄において、Ｂ２２０ｄｉｍ ＣＤ４３ｄｉｍ及びＢ２２０Ｍｅｄ ＩｇＤ-細胞の平均パーセンテージの減少が示された。
要約すると、末梢血からの免疫細胞組成のＦＡＣＳ分析により、ノックアウトマウスでは、それらの野生型同腹仔と比較した場合、ＣＤ４及びＣＤ８細胞に関して免疫学的差異を示すことが示唆された。よって、Ａ３３ポリペプチド又はそのコード化遺伝子のアンタゴニストは、これらの効果を模倣することが予期される。コレセプターＣＤ４分子は、抗原認識プロセスにおいてＭＨＣクラスＩＩ分子を区別して認識するＴ細胞レセプターと協同する。平均パーセンテージが増加したＣＤ４細胞は、Ｂ細胞活性化の中心的役割を担っている。
【０２９１】
Ｈ．ＤＮＡ３３２２３-１１３６(ＵＮＱ２０４)遺伝子破壊を含むマウスの産生と分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ２３０ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ３３２２３-１１３６[ＵＮＱ２０４]と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：マウスヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿０２３４７６又はムスムスクルスリポカリン７(Ｌｃｎ７)；マウスタンパク質参照番号：ＮＰ＿０７５９６５又はリポカリン７；アンドロゲン-調節遺伝子１[ムスムスクルス]；ヒト遺伝子ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿０２２１６４又はホモサピエンスリポカイン７(ＬＣＮ７)、タンパク質参照番号：ＮＰ＿０７１４４７又はＰ３ＥＣＳＬ；糖質コルチコイド-誘導性タンパク質；酸化-ＬＤＬ反応性遺伝子２；尿細管間質性腎炎抗原-関連タンパク質前駆体；リポカイン７のありそうなオルソログ；アンドロゲン-調節遺伝子１[ホモサピエンス]。
標的となるマウス遺伝子はリポカリン７(Ｌｃｎ７)、ヒトリポカリン７のオルソログ(ＬＣＮ７) である。別名には、アンドロゲン-調節遺伝子１、Ａｒｇ１、Ｐ３ＥＣＳＬ、酸化-ＬＤＬ反応性遺伝子２、糖質コルチコイド-誘導性タンパク質、及び尿細管間質性腎炎抗原-関連タンパク質前駆体が含まれる。
ＬＣＮ７は、カテプシン様プロテアーゼに対して、弱い類似性を有する分泌タンパク質である。約４６０のアミノ酸のタンパク質には、シグナルペプチド、上皮成長因子様反復部、及びタンパク質分解的に不活性なカテプシンＢ-関連ドメインが含まれる(Mukaiら, J. Biol. Chem., 278(19):17084-92 (2003))。また、ＬＣＮ７は、小さな疎水性分子と典型的には結合している、リポカリン痕跡を含む(Kobayashiら, J. Steroid Biochem. Mol. Biol., 77(2-3):109-15 (2001))。ＬＣＮ７の分子機能は知られておらず；タンパク質分解活性は有していないが、プロテアーゼの特色は有している。
ＬＣＮ７発現は、アンドロゲン-依存性マウス乳腺Shionogi癌腫ＳＣ-３細胞及び前立腺におけるアンドロゲンにより誘発される。またＬＣＮ７は、腎臓、心臓、肺、脾臓、及び肝臓(Kobayashiら, 2001 上掲)でも検出される。タンパク質の発現は、血管平滑筋細胞、並びに骨格筋、心筋、及び腎臓細胞に制限されている可能性がある(Wexら, Biochemistry, 40(5):1350-7(2001))。ＬＣＮ７は、副腎皮質(Mukalら, 2003 上掲)、又はエンドソーム輸送(Brommeら, Biochem. Biophys. Res. Commun., 271(2):474-80 (2000))におけるゾーン分化に関与し得る。また構造又は調節タンパク質であってもよい。
標的突然変異又はジーントラップ突然変異を株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ-由来胚性幹(ＥＳ)細胞において生じさせた。キメラマウスをＣ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスに交雑してＦ１ヘテロ接合体動物を産生した。これらの子孫を交雑させてＦ２野生型、ヘテロ接合体、及びホモ接合体突然変異子孫を産生した。極くたまに、例えばＦ１マウスがキメラからほとんど得られなかった場合に、Ｆ１ヘテロ接合マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交雑させ、交雑受精のための付加的なヘテロ接合動物を生じさせてＦ２マウスを産生せしめた。レベルＩ表現型分析を以下に示すように、この世代からのマウスにおいて実施した。
wt        het      hom    合計
観察値      27        51       22      100
予想値      25        50       25      100
カイ二乗 = 0.54  有意性=0.76338  (hom/n) = 0.22  平均産仔数 = 0
標的遺伝子の野生型発現が、脳、骨格筋、骨、胃、小腸、及び大腸、及び脂肪を除き、ＲＴ-ＰＣＲで試験された全１３の成体組織試料において検出された。標的遺伝子の破壊はサザンハイブリッド分析法により確認した。
【０２９２】
１．表現型分析（破壊された遺伝子：ＤＮＡ３３２２３-１１３６（ＵＮＱ２０４））
（ａ）全体的な表現型の要約
雌ホモ接合体変異マウスはその性別が一致した野生型同腹仔及び背景的平均と比較した場合、オープンフィールド活動試験の間、減少した不安様応答を示した。ホモ接合体変異マウスはまた卵白アルブミン投与に対して増加した応答性を示した。標的遺伝子の破壊はサザンハイブリダイゼーション分析法によって確認した。
（ｂ）表現型分析：ＣＮＳ／神経学
神経学の分野において、分析は、ここでは、神経学的及び精神疾患の治療のためのインビボで有効にされた標的を同定することに集中させた。神経障害は、限定されるものではないが、鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏及び感覚器障害、軽度から中度の不安、一般的な医学的状態による不安障害、別段特定しない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を示すパニック障害、広場恐怖症のないパニック障害、心的外傷後ストレス症候群、社会的な恐怖症、社会的な不安、自閉症、特定の恐怖症、物質誘発性不安障害、急性アルコール禁断、強迫性障害、広場恐怖症、単極型障害、双極性障害Ｉ又はＩＩ、別段特定しない双極性障害、循環気質者疾患、うつ病性障害、大うつ病性障害、気分障害、物質誘発性気分障害、認知機能の亢進、限定するものではないがアルツハイマー病、脳梗塞又は脳への外傷に伴う認知機能の喪失、限定するものではないが癲癇、学習障害／学習不能症、脳性麻痺を含む疾患又は損傷から生じる発作を含む。加えて、不安障害は、限定しないが以下のタイプを含む人格障害に応用してもよい：偏執性、社交嫌い、回避性行動、境界線人格障害、依存症、麻薬性、ナルシスト的な、強迫神経症、統合失調症及び統合失調症型性格。
【０２９３】
手順：
行動スクリーニングを４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体変異マウスのコホートに対して実施した。全ての行動試験は、生存性の低下のためにより早期の試験が必要とならない限り、１２週齢と１６週齢の間で行った。これらの試験は不安、活動レベル及び探査を測定するオープンフィールドを含んでいた。
オープンフィールド試験
既知の薬物の幾つかの標的はオープンフィールド試験で表現型を示した。これらにはセラトニントランスポーター、ドーパミントランスポーター（Giros等,  Nature. 1996 Feb 15;379(6566):606-12)、及びＧＡＢＡレセプター(Homanics等, Proc Natl Acad Sci U S A. 1997 Apr 15;94(8):4143-8）のノックアウトを含む。自動化されたオープンフィールドアッセイをカスタマイズして感情状態及び学習に関する探索パターンに関する変化を扱った。先ず、フィールド（４０Ｘ４０ｃｍ）をマウスに対して比較的大きくなるように選択し、よって探索に関連する自発運動の変化を取り上げた。また、床には、探索に特に関連した活動である鼻を突っ込むことを可能にする４つの穴がある。幾つかのファクターがこの試験に関連した感情状態を高めるためにまた設計された。オープンフィールド試験はマウスが試験される最初の実験的手順であり、なされる測定は被験体のチャンバーとの最初の経験であった。また、オープンフィールドは明るく照らした。これらのファクターの全てが新しくオープンな空間に関連した自然の不安を高める。ついで、探索活動のパターンと度合い、特に中心からの全移動距離比は、不安又は鬱に対する罹りやすさに関する変化を識別することができる。３つの異なったレベルでの赤外線ビームを用いた大きな活動領域（４０ｃｍｘ４０ｃｍ、AccuScan InstrumentsのVersaMax動物活動性モニターシステム）を用いて、立ち上がり、穴への突っ込み、及び自発運動を記録した。動物を中心に置き、その活動を２０分間測定した。この試験のデータを５回の４分間隔で分析した。移動した全距離（ｃｍ）、垂直移動数（立ち上がり）、穴突っ込み数、及び中心からの全移動距離比を記録した。
マウスが新しい環境に対して正常な馴化応答を示す傾向を、５回の時間間隔にわたるその水平自発運動の全変化を決定することにより評価する。経時的な活動性の変化のこの算定傾きは、絶対値よりも正規化された全移動距離を使用して決定する。傾きは５回の時間間隔のそれぞれにおける正規化された活動を通しての回帰直線から決定する。正常な習慣作用は負の傾き値によって表される。
結果：
オープンフィールド活動試験の間、顕著な差が観察された。雌(-/-)マウスは、その性別が一致した(+/+)同腹仔と比較した場合、中心領域において増加した中央合計時間を示しており、変異体における減少した不安様応答を示している。よって、ノックアウトマウスは、鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、認知機能障害、痛覚過敏及び感覚器障害、抑鬱障害に一致する表現型を示した。よって、ＰＲＯ２３０ポリペプチド及びそのアゴニストはそのような抑鬱障害に伴う徴候の治療又は改善に有用であろう。
【０２９４】
（ｃ）免疫学的表現型分析
免疫関連及び炎症性疾患は、正常な生理では、傷害又は損傷に応答し、傷害又は損傷からの修復を開始し、外来生物に対して生得的及び獲得した防御を開始するかなり複雑でしばしば複数の相互に関連した生物学的経路の徴候又は結果である。疾患又は病態は、これらの正常な生理学的経路が、応答の強さに直接関連して、異常な調節又は過度の刺激の結果として、又は自己に対する反応として、又はこれらの組み合せとして、更なる傷害又は損傷を引き起こす場合に生じる。
これらの病気の起源はしばしば多段階経路及び多くの異なる生物学的システム／経路に関連しているが、これらの経路の一又は複数における重要な点への介入は、改善又は治療効果を有し得る。治療的介入は、有害なプロセス／経路への拮抗作用、又は有益なプロセス／経路の刺激により生じ得る。
Ｔリンパ球(Ｔ細胞)は哺乳動物の免疫反応における重要な成分である。Ｔ細胞は、主要組織適合複合体(ＭＨＣ)内の遺伝子によりコードされる自己分子に関連する抗原を認識する。抗原は、抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片等の表面上のＭＨＣ分子と共にディスプレイされうる。Ｔ細胞系は、宿主哺乳動物に対して健康への脅威をもたらすこれらの改変細胞を排除する。Ｔ細胞には、ヘルパーＴ細胞及び細胞傷害性Ｔ細胞が含まれる。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞上にある抗原-ＭＨＣ複合体の認識に続き、広範囲に増殖する。またヘルパーＴ細胞は、Ｂ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞及び免疫反応に関与する種々の他の細胞の活性化において中心的な役割を担っている様々なサイトカイン、すなわちリンホカインを分泌する。
多くの免疫反応では、炎症細胞が損傷又は感染の部位に浸潤する。遊走細胞は、罹患組織の組織学的検査により決定することができる、好中球、好酸球、単球又はリンパ球でありうる。Current Protocols in Immunology, John E. Coligan編, 1994, John Wiley & Sons, Inc。
多くの免疫介在性疾患が知られており、広く研究されている。このような疾患には、免疫媒介炎症性疾患(例えば、関節リウマチ、免疫媒介性腎疾患、胆肝汁性疾患、炎症性大腸炎(ＩＢＤ)、乾癬、及び喘息)、非免疫媒介炎症性疾患、感染症、免疫不全症、新生組織形成、及び移植片拒絶等が含まれる。免疫学の領域において、炎症及び炎症性疾患の治療のための標的を同定した。
免疫学の領域において、炎症及び炎症性疾患の治療のための標的をここで同定した。免疫関連疾患は、一例では免疫反応を抑制することにより治療することができる。免疫刺激活性を有する分子を阻害する中和抗体の使用は、免疫媒介性及び炎症性疾患の治療に有益である。免疫反応を阻害する分子を利用して（タンパク質を直接に又は抗体アゴニストの使用により）、免疫反応を阻害し、よって免疫関連疾患を改善することができる。
次の試験を実施した：
【０２９５】
卵白アルブミン投与
手順：  このアッセイは６匹の野生型と１４匹のホモ接合体で実施した。ニワトリの卵白アルブミン(ＯＶＡ)はＴ細胞依存性抗原であり、マウスにおける抗原特異性免疫反応の研究のためのモデルタンパク質として一般に使用されている。ＯＶＡは無毒で不活性であり、よって何の免疫反応も誘発されなくても、動物には害とはならないであろう。ＯＶＡに対するマウスの免疫反応は、Ｔ細胞反応を誘発させるための免疫優性ペプチドが同定されているといった程度まで、十分に特徴付けられている。抗ＯＶＡ抗体は、酵素結合免疫吸着測定法(ＥＬＩＺＡ)を使用し、免疫化８〜１０日後に検出可能であり、異なるアイソタイプ抗体を測定することで、遺伝子操作マウスにおける欠失反応に至り得る複合プロセスに対する更なる情報が得られる。
上に記載したように、このプロトコールは、抗原特異性免疫反応を生じせしめるマウスの能力を評価するものである。動物に、完全フロインド(Feund's)アジュバントに乳化させたニワトリ卵白アルブミン５０ｍｇをＩＰ注射し、１４日後、抗卵白アルブミン抗体(ＩｇＭ、ＩｇＧ１及びＩｇＧ２サブクラス)の血清力価を測定した。血清試料中のＯＶＡ特異的抗体の量は、９６ウェル試料プレートをスキャンする機器により発生する光学密度(ＯＤ)値に比例する。各血清試料の一組の連続希釈に対してデータをまとめた。[分析値  wt／het／hom：６／４／１４]。
この投与の結果：  (-/-)マウスは、その(+/+)同腹仔と比較した場合、卵白アルブミン投与に対して増加した平均血清ＩｇＧ２ａ反応の傾向を示した。よって、これらのノックアウトマウスでは、Ｔ細胞依存性ＯＶＡ抗原に対してＯＶＡ特異的抗原反応を誘発する能力の上昇が示された。ＰＲＯ２３０ポリペプチドの阻害剤（アンタゴニスト）は、免疫系をまた刺激することが予想され、白血病や他のタイプの癌の場合、及び免疫不全患者、例えばエイズ患者のような個体にこの効果が有益である場合に有用性が見出されるであろう。従って、ＰＲＯ２３０ポリペプチド又はそのアゴニストは免疫反応を阻害するのに有用であり、例えば移植片拒絶又は移植片対宿主病の場合におけるように、有害な免疫反応を抑制するための有用な候補薬であろう。
【０２９６】
Ｉ．ＤＮＡ２３３３９-１１３０(ＵＮＱ１５２)遺伝子破壊を有するマウスの産生と分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ１７８ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ２３３３９-１１３０と命名)[ＵＮＱ１５２]を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：マウス遺伝子配列ヌクレオチド参照番号：ＮＭ １４５１５４又は受入番号：ＮＭ １４５１５４ＮＩＤ：ｇｉ２１６９９０６１ｒｅｆＮＭ １４５１５４．１、ムスムスクルスＲＩＫＥＮｃＤＮＡ６３３０４０４Ｅ１１遺伝子（６３３０４０４Ｅ１１Ｒｉｋ）、タンパク質参照番号：Ｑ９ＣＵ５０又は受入番号：Ｑ９ＣＵ５０ＮＩＤ：、ムスムスクルス（マウス）又は６３３０４０４Ｅ１１ＲＩＫタンパク質（断片）又はＭＯＵＳＥＳＰＴＲＮＲＤＢ；ヒト遺伝子配列ヌクレオチド参照番号：ＮＭ ０３１９１７又は受入番号：ＮＭ ０３１９１７ＮＩＤ：１３９９４２８４ホモサピエンス［ホモサピエンスアンジオポエチン関連タンパク質５（ＡＲＰ５）］、タンパク質参照番号：Ｑ９ＢＺＺ０又は受入番号：Ｑ９ＢＺＺ０ＮＩＤ：ホモサピエンス（ヒト）又はANGIOPOIETIN-RELATED PROTEIN 5.HUMANSPTRNRDB。挿入は約４６０のうちアミノ酸１８０近くで前方方向であるようである。
これらの動物において変異されている遺伝子はマウスＵｎｉＧｅｎｅクラスターＭｍ．３４０１９によって表され、これはヒトＵｎｉＧｅｎｅクラスターＨｓ．３０６９７１（ＡＲＰ５）のオルソログである。ＡＲＰ５はアンジオポエチン関連タンパク質５をコードしている。そのタンパク質はまたＡＲＰ３又はＡＮＧＰＴＬ５としても知られている。
アンジオポエチン関連タンパク質１、３及び５は命名問題があり、混乱を招いている。三種全てがいつだったかＡＲＰ３と呼ばれていた（マウス又はヒト）。また、他のタンパク質はｂＡＲＰｂ接頭辞（例えばアクチン関連タンパク質）を有している。
ＡＲＰ５はフィブリノーゲンのベータ及びガンマ鎖（Ｐｆａｍ００１４７；ＦＢＧ）のｂＣ末端球状ドメインとして知られるドメインをコードすると予想されている。このドメインは２７０残基長までであり、２つのジスルフィド結合に関与する４つの保存されたシステインを含んでいる。ＦＢＧモチーフはフィブリノーゲンのベータ及びガンマ鎖のＣ末端に見出されているがアルファ鎖にはない。
ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ記録の検査は、モチーフが、アンジオポエチン１及びｂ２（Ｑ１５３８９、Ｏ１５１２３）、アンジオポエチン関連タンパク質２（Ｑ９ＵＫＵ９）、ニューレキシン４（Ｐ７８３５７）、フィコリン２（Ｑ１５４８５）、及びミクロフィブリル関連糖タンパク質４（Ｐ５５０８３）を含む様々な、典型的には細胞外又は表面の、ヒトタンパク質に見出されることを示している。また、ＦＢＧドメインは北紫ウニの２つのフィブリノーゲン様タンパク質（Xu, X.及びDoolittle, R.F., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87(6):2097-101 (1990)）及びショウジョウバエ粗面(scabrous)タンパク質（Ｐ２１５２０）中に存在している。
シグナルペプチドが予想され膜アンカー機構が予想されていないので、また関連タンパク質が分泌されているので、タンパク質は分泌されうる。
標的突然変異又はジーントラップ突然変異を株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ-由来胚性幹(ＥＳ)細胞において生じさせた。キメラマウスをＣ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスに交雑してＦ１ヘテロ接合体動物を産生した。これらの子孫を交雑させてＦ２野生型、ヘテロ接合体、及びホモ接合体突然変異子孫を産生した。極くたまに、例えばＦ１マウスがキメラからほとんど得られなかった場合に、Ｆ１ヘテロ接合マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交雑させ、交雑受精のための付加的なヘテロ接合動物を生じさせてＦ２マウスを産生せしめた。レベルＩの表現型分析を以下に示すようにこの世代からのマウスについて実施した。
wt        het      hom    合計
観察値      31        29        22      82
予想値      20.5      41        20.5    82
カイ二乗 = 9.00  有意性=0.01111  (hom/n) = 0.27  平均産仔数 = 0
標的遺伝子の野生型発現は、胚性幹(ＥＳ)細胞に検出され、ＲＴ-ＰＣＲで試験された１３の成体組織試料のうち、脳、胸腺、肝臓、及び皮膚線維芽細胞において検出された。ＲＴ-ＰＣＲ分析により、分析された(-/-)マウスには転写がなかったことが明らかとなった（Ｍ-６８）。
【０２９７】
１．表現型分析（破壊された遺伝子：ＤＮＡ２３３３９-１１３０（ＵＮＱ１５２））
（ａ）全体的な表現型の要約
雄のホモ接合体変異マウスはその性別が一致した野生型同腹仔及び背景的平均と比較した場合、顕著に増加した平均血清トリグリセリド及びコレステロールレベルを示した。ホモ接合体変異マウスに対しては他の顕著な表現型は観察されなかった。ＲＴ-ＰＣＲ分析により、ホモ接合体変異マウスには転写がないことが明らかになった。
（ｂ）表現型分析：心臓病学
心血管生物学の領域において、高血圧、アテローム性動脈硬化症、心不全、脳卒中、種々の冠動脈疾患、異脂肪血症、例えば高コレステロール(高コレステロール血症)及び血清トリグリセリドの上昇(高トリグリセリド血症)、糖尿病及び／又は肥満の治療のための標的をここで同定した。表現型試験には、血清コレステロール及びトリグリセリドの測定が含まれる。
血中脂質
手順：  ４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体のコホートをこのアッセイで試験した。高コレステロールレベル及び増加したトリグリセリド血中レベルは、循環器疾患及び／又は糖尿病の進行における認識された危険因子である。血中脂質を測定することで、血中脂質レベルを調節する生物学的スイッチの発見が容易になる。血中脂質レベルを上昇させる因子の阻害は循環器疾患のリスクを低減させるのに有用である。これらの血液化学試験では、コレステロール測定はCOBAS Integra400(mfr：Roche)を使用して記録した。
結果：  上にまとめたように、雄(-/-)マウスは、その性別が一致した(+/+)同腹仔及び雄(-/-)マウスに対する背景的平均と比較した場合、顕著に増加したトリグリセリド及びコレステロールレベルを示した。よって、ＰＲＯ１７８遺伝子が欠失したマウスは、循環器病のモデルとなりうる。ＰＲＯ１７８ポリペプチド又はそのコード化遺伝子は、コレステロールやトリグリセリドのような血中脂質を調節するのに有用である。よって、ＰＲＯ１７８ポリペプチド又はそのアゴニストは、高血圧、アテローム性動脈硬化症、心不全、脳卒中、種々の冠動脈疾患、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、糖尿病及び／又は肥満症のような循環器疾患の治療に有用であろう。
【０２９８】
Ｊ．ＤＮＡ６５３５１-１３６６-２(ＵＮＱ４０７)遺伝子破壊を有するマウスの産生と分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ１１９９ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ６５３５１-１３６６-２[ＵＮＱ４０７]と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：マウス遺伝子配列ヌクレオチド参照番号：ＮＭ ０２２９８４又はムスムスクルスレジスチン（Ｒｅｔｎ）、タンパク質参照番号：ＮＰ ０７５３６０又はレジスチン；炎症性領域３に見出される；脂肪細胞特異的分泌因子；Ｆｉｚｚ３-ペンディング［ムスムスクルス］；ヒト遺伝子配列ヌクレオチド参照番号：ＮＭ ０２０４１５又はホモサピエンスレジスチン（ＲＥＴＮ）、タンパク質参照番号：ＮＰ ０６５１４８又はレジスチン［ホモサピエンス］。
変異された遺伝子はレジスチン（Ｒｅｔｎ）、つまりヒトレジスチン（ＲＥＴＮ）のオルソログである。同義語にはＡＤＳＦ、ＲＳＴＮ、ＦＩＺＺ３、ＲＥＴＮ１で、炎症性領域３で見出されたもの、Ｃ／ＥＢＰ-イプシロン調節骨髄特異的分泌システインリッチタンパク質、システインリッチ分泌タンパク質Ａ１２-アルファ-様２、システインリッチ分泌タンパク質ＦＩＺＺ３及び脂肪細胞特異的分泌因子が含まれる。
ＲＥＴＮはＮ末端シグナルペプチドとシステインリッチＣ末端を含んでいる。Ｃ末端システインの間隔はＦＩＺＺファミリーメンバーの間で高度に保存されている（Holcomb等, EMBO J., 19(15):4046-55 (2000)；Steppan等, Nature, 409:307-312 (2001)；OMIM605565）。ＲＥＴＮは炎症に関与しているＲＥＳＩＳＴＩＮ／ＦＩＺＺファミリーのタンパク質に属している。
ＲＥＴＮは、インスリンにより刺激された脂肪細胞へのグルコースの取り込みと末梢組織でのインスリン作用を抑制する白色脂肪組織において主に発現されるホルモンである。肥満した個体では、ＲＥＴＮは脂肪組織中で過剰発現されることが報告されている；よってＲＥＴＮはインスリン耐性に寄与しうる（上掲のSteppan等, 2001；Pizzuti等, J. Clin. Endocr. Metab., 87:4403-4406 (2002)）。しかしながら、他の研究では脂肪組織中でのRETN過剰発現が発見されていない（Beltowski, J., Med. Sci. Monit., 9(2):RA55-61 (2003)）。
標的突然変異又はジーントラップ突然変異を株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ-由来胚性幹(ＥＳ)細胞において生じさせた。キメラマウスをＣ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスに交雑してＦ１ヘテロ接合体動物を産生した。これらの子孫をハイブリッド１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７Ｃｒｅホモ接合体マウスに交雑して、変異体及びＣｒｅ対立遺伝子を共に有するマウス（複合ヘテロ接合体マウス）を産生した。ついで、雄の複合ヘテロ接合体マウスを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスへの１２９ＳｖＥｖＢｒｄの交雑から誘導したハイブリッド１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７Ｆ１マウスに交雑させて、ヘテロ接合体Ｃｒｅ切除動物を産生した。最後に、これらの子孫を異系交配させて野生型Ｃｒｅ切除ヘテロ接合体及びＣｒｅ切除ホモ接合体マウスを産生した。レベルＩの表現型分析を以下に示すようにこの世代からのマウスについて実施した。
標的遺伝子の野生型発現は、ＲＴ-ＰＣＲで試験された１３の成体組織試料のうち、脳、肝臓、精巣、胃、及び皮膚線維芽細胞を除いて検出された。標的遺伝子の破壊はサザンハイブリダイゼーション分析法によって確認した。
wt        het      hom    合計
観察値      29        48        23    100
予想値      25        50        25    100
カイ二乗 = 0.88  有意性=0.64404  (hom/n) = 0.23  平均産仔数 = 0
【０２９９】
１．表現型分析（破壊された遺伝子：ＤＮＡ６５３５１-１３６６-２（ＵＮＱ４０７））
（ａ）全体的な表現型の要約
ホモ接合体変異体マウスはその野生型同腹仔及び背景的平均と比較した場合、炎症刺激に対して増加した応答性を示した。また、雌のホモ接合体変異マウスは増加した平均全組織量及び除脂肪体重及び増加した平均血清トリグリセルドレベルを示した。
（ｂ）免疫学的表現型分析
免疫関連及び炎症性疾患は、正常な生理では、傷害又は損傷に応答し、傷害又は損傷からの修復を開始し、外来生物に対して生得的及び獲得した防御を開始するかなり複雑でしばしば複数の相互に関連した生物学的経路の徴候又は結果である。疾患又は病態は、これらの正常な生理学的経路が、応答の強さに直接関連して、異常な調節又は過度の刺激の結果として、又は自己に対する反応として、又はこれらの組み合せとして、更なる傷害又は損傷を引き起こす場合に生じる。
これらの病気の起源はしばしば多段階経路及び多くの異なる生物学的システム／経路に関連しているが、これらの経路の一又は複数における重要な点への介入は、改善又は治療効果を有し得る。治療的介入は、有害なプロセス／経路への拮抗作用、又は有益なプロセス／経路の刺激により生じ得る。
Ｔリンパ球(Ｔ細胞)は哺乳動物の免疫反応における重要な成分である。Ｔ細胞は、主要組織適合複合体(ＭＨＣ)内の遺伝子によりコードされる自己分子に関連する抗原を認識する。抗原は、抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片等の表面上のＭＨＣ分子と共にディスプレイされうる。Ｔ細胞系は、宿主哺乳動物に対して健康への脅威をもたらすこれらの改変細胞を排除する。Ｔ細胞には、ヘルパーＴ細胞及び細胞傷害性Ｔ細胞が含まれる。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞上にある抗原-ＭＨＣ複合体の認識に続き、広範囲に増殖する。またヘルパーＴ細胞は、Ｂ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞及び免疫反応に関与する種々の他の細胞の活性化において中心的な役割を担っている様々なサイトカイン、すなわちリンホカインを分泌する。
多くの免疫反応では、炎症細胞が損傷又は感染の部位に浸潤する。遊走細胞は、罹患組織の組織学的検査により決定することができる、好中球、好酸球、単球又はリンパ球でありうる。Current Protocols in Immunology, John E. Coligan編, 1994, John Wiley & Sons, Inc。
多くの免疫介在性疾患が知られており、広く研究されている。このような疾患には、免疫媒介炎症性疾患(例えば、関節リウマチ、免疫媒介性腎疾患、胆肝汁性疾患、炎症性大腸炎(ＩＢＤ)、乾癬、及び喘息)、非免疫媒介炎症性疾患、感染症、免疫不全症、新生組織形成、及び移植片拒絶等が含まれる。
免疫学の領域において、炎症及び炎症性疾患の治療のために、標的をここで同定した。免疫関連疾患は免疫反応を抑制することにより治療することができる。免疫刺激活性を有する分子を阻害する中和抗体の使用は、免疫媒介性及び炎症性疾患の治療に有益である。免疫反応を阻害する分子を利用して（タンパク質を直接に又は抗体アゴニストの使用により）、免疫反応を阻害し、よって免疫関連疾患を改善することができる。
次の試験を実施した：
【０３００】
ザイモサン投与アッセイ−腹膜炎症：
手順：  １匹の野生型と２匹のホモ接合体変異体のコホートをこのアッセイにおいて用いた。腹膜白血球補充アッセイを使用してアテローム性動脈硬化症の炎症性成分を調節しうる標的を同定した。これらのアッセイは炎症部位への免疫細胞補充における異常を検出する。ザイモサン（炎症を誘発する薬剤）を腹腔内腔中に注入し、液体を後で除去し、測定を、ｉｐ液中の全ＷＢＣカウント、好中球／単球比及びパーセント顆粒球、単球、リンパ球及び好酸球について行った。
結果：(-/-)マウスは、その(+/+)同腹仔及び背景的範囲と比較した場合、ザイモサン投与後に顕著に増加した全白血球細胞数を示しており、これらの変異体における炎症性刺激に対する増加した応答性を示唆している。
まとめると、ザイモサン投与研究は、ＰＲＯ１１９９ポリペプチドをコードする遺伝子を欠くノックアウトマウスがその野生型同腹仔と比較して炎症誘発性応答を示すことを示している。よって、ＰＲＯ１１９９ポリペプチドのアンタゴニストは免疫系(例えばＴ細胞増殖)の刺激に有用であることを示唆しており、この効果が白血病、及び他の種類の癌、及び免疫不全患者、例えばＡＩＤＳ患者の場合のように個体に有益であるような場合に有用性が見出されるであろう。従って、ＰＲＯ１１９９ポリペプチド又はそのアゴニストは、免疫反応の阻害に有用であり、例えば移植片拒絶又は移植片対宿主病の場合におけるように、有害な免疫反応を抑制するための有用な候補薬であろう。
【０３０１】
（ｃ）表現型分析：心臓病学
手順：
心血管生物学の領域において、高血圧、アテローム性動脈硬化症、心不全、脳卒中、冠動脈疾患、及び高コレステロール及びトリグリセリドの血清レベルのような異脂肪血症の治療のための標的を同定した。表現型試験には、血清コレステロール及びトリグリセリドの測定が含まれる。
血中脂質
手順：  ４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体のコホートをこのアッセイで試験した。高血清トリグリセリドレベルは、循環器疾患の進行における認識された危険因子である。また異脂肪血症は肥満症及び糖尿病に関連しうる。血中脂質を測定することで、血中脂質レベルを調節する生物学的スイッチの発見が容易になる。血中脂質レベルを上昇させる因子の阻害は循環器疾患のリスクを低減させるのに有用である。
上にまとめたように、雄ホモ接合体変異マウスは、ホモ接合体ノックアウトマウスにおいて増加した平均全組織量及び除脂肪体重及び増加した平均血清トリグリセリドレベルを示した（野生型同腹仔の１６７％）。よって、ＰＲＯ１１９９遺伝子が欠失した変異マウスは、循環器病及び／又は肥満症及び糖尿病に伴う異脂肪血症のモデルとなうる。ＰＲＯ１１９９ポリペプチド又はそのコード遺伝子は、血中脂質の調節、特に正常な脂質代謝の維持に所定の役割を担いうる。
（ｄ）Ｄｅｘａ分析−試験法の記述
手順：４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重エネルギーＸ線吸収測定法(ＤＥＸＡ)を成功裏に使用し、全組織量（ＴＴＭ）の変化を同定した。
Avertin(１．２５％の２,２,２-トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重)を腹腔内注射することにより、マウスを麻酔し、体長及び体重を測定し、ついでＤＥＸＡスキャンのためにPIXImusTMデンシトメータ(Lunar Inc.)の台にマウスを腹臥位で置いた。Lunar PIXImusソフトウェアを使用し、骨塩量(ＢＭＤ)及び脂肪組成(％脂肪)及び全組織量(ＴＴＭ)を関心領域（ＲＯＩ、すなわち、全身、椎骨及び両大腿）で測定した。
ＤＥＸＡ結果：
上にまとめたように、雌ホモ接合体変異マウスは、８週の初めに僅かに増加した平均全組織量及び除脂肪体重を示した；１８週で、雌ノックアウトマウスは、その性別が一致した(+/+)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、１８％重かった。
これらの研究は、変異体(-/-)非ヒトトランスジェニック動物が肥満症に関連しうるネガティブな表現型を示すことを示唆している。よって、ＰＲＯ１１９９ポリペプチド又はそのアゴニストは肥満症の治療に有用であろう。
【０３０２】
Ｋ．ＤＮＡ８４２１０-２５７６(ＵＮＱ１８８８)遺伝子破壊を有するマウスの産生と分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ４３３３ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ８４２１０-２５７６(ＵＮＱ１８８８)と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：マウス遺伝子配列ヌクレオチド参照番号：ＮＭ ０１３８６９又はＭｕｓ腫瘍壊死因子レセプタースーパーファミリー、メンバー１９（Ｔｎｆｒｓｆ１９）、タンパク質参照番号：ＮＰ ０３８８９７又は腫瘍壊死因子レセプタースーパーファミリー、メンバー１９；腫瘍壊死因子レセプタースーパーファミリー、メンバー２０［ムスムスクルス]；ヒト遺伝子配列ヌクレオチド参照番号：ＮＭ ０１８６４７又はホモサピエンス腫瘍壊死因子レセプタースーパーファミリー、メンバー１９（ＴＮＦＲＳＦ１９）、タンパク質参照番号：ＮＰ＿０６１１１７又は腫瘍壊死因子レセプタースーパーファミリー、メンバー１９［ホモサピエンス］。
破壊されたマウス遺伝子は腫瘍壊死因子レセプタースーパーファミリー、メンバー１９（ＴＮＦＲＳＦ１９）であり、ヒトＴＮＦＲＳＦ１９のオルソログである。別名及び同義語にはＴＡＪ；Ｔｒｏｙ；ＴＡＪ-ＡＬＰＨＡ；Ｔｎｆｒｓｆ２０；腫瘍壊死因子レセプタースーパーファミリー、メンバー２０；ＴＲＡＤＥ；及び毒性及びＪＮＫ誘導因子が含まれる。
ＴＮＦＲＳＦ１９は細胞外リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び腫瘍壊死因子レセプター関連因子（ＴＲＡＦ）２結合コンセンサス配列を含むがデスドメインを有しない細胞質ドメインからなる。ＴＮＦＲＳＦ１９はＴＲＡＦｓの結合を補充し、核因子カッパＢ（ＮＦ-ｋＢ）及びｃ-Ｊｕｎ Ｎ末端キナーゼを活性させる（Eby等, J. Biol. Chem., 275(20):15336-42 ( 2000)；Kojima等, J. Biol. Chem., 275(27):20742-7 (2000)；Hu等, Genomics, 62(1):103-7 (1999)）。
発育中のマウス胎仔では、ＴＮＦＲＳＦ１９が皮膚に高レベルで発現される一方、出生後マウスでは、発現は脳では高く、心臓、胚、肝臓及び毛胞では中程度である。ＴＮＦＲＳＦ１９の活性化はまたカスパーゼ非依存性細胞死を誘導する。ＴＮＦＲＳＦ１９の機能は多面的であり、胚性発達及び皮膚及び毛胞発生において重要である（ＯＭＩＭ６０６１２２）。
マウスにおいて、選択的スプライシングにより２つの更なる変異体が生じる；一つは可溶性レセプターとして機能し他のものはデコイレセプターとして機能しうる。
標的突然変異又はジーントラップ突然変異を株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ-由来胚性幹(ＥＳ)細胞において生じさせた。キメラマウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄマウスに飼育してＦ１ヘテロ接合体動物を産生した。これらの子孫を交雑して、Ｆ２野生型、ヘテロ接合体及びホモ接合体変異マウスを産生した。極くたまに、例えばＦ１マウスがキメラからほとんど得られなかった場合に、Ｆ１ヘテロ接合マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄマウスと交雑させ、交雑受精のための付加的なヘテロ接合動物を生じさせてＦ２マウスを産生せしめた。標的遺伝子の破壊はＲＴ-ＰＣＲによって試験した胚性幹(ＥＳ)細胞及び１３の成体組織試料のうち脳においてのみ検出された。ＲＴ-ＰＣＲ分析は、分析された(-/-)マウス（Ｍ-６６）において転写がないことを明らかにした。レベルＩ表現型分析は以下に示したこの世代のマウスについて実施された。
wt        het      hom    合計
観察値      25        46       15      86
予想値      21.5      43       21.5    86
カイ二乗 = 2.74  有意性=0.25358  (hom/n) = 0.17  平均産仔数 = 0
【０３０３】
１．表現型分析（破壊された遺伝子：ＤＮＡ８４２１０-２５７６（ＵＮＱ１８８８））
（ａ）全体的な表現型の要約
ホモ接合体変異体マウスはその野生型同腹仔と比較した場合、減少した探索応答及び自発運動の抑制を示した。(-/-)マウスは減少した血清ＩｇＡレベルを示した。また、これらの変異体は試験した全ての３回の間隔で亢進したグルコース耐性を示した。(-/-)変異マウスはまた減少した平均全組織量及び除脂肪体重を示した。雄(-/-)変異マウスはヒストロイカル手段と比較した場合に顕著に減少した大腿中軸断面積を示した。
（ｂ）表現型分析：ＣＮＳ／神経学
神経学の分野において、分析は、ここでは、神経学的及び精神疾患の治療のためのインビボで有効にされた標的を同定することに集中させた。神経障害は、限定されるものではないが、鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏及び感覚器障害、軽度から中度の不安、一般的な医学的状態による不安障害、別段特定しない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を示すパニック障害、広場恐怖症のないパニック障害、心的外傷後ストレス症候群、社会的な恐怖症、社会的な不安、自閉症、特定の恐怖症、物質誘発性不安障害、急性アルコール禁断、強迫性障害、広場恐怖症、単極型障害、双極性障害Ｉ又はＩＩ、別段特定しない双極性障害、循環気質者疾患、うつ病性障害、大うつ病性障害、気分障害、物質誘発性気分障害、認知機能の亢進、限定するものではないがアルツハイマー病、脳梗塞又は脳への外傷に伴う認知機能の喪失、限定するものではないが癲癇、学習障害／学習不能症、脳性麻痺を含む疾患又は損傷から生じる発作を含む。加えて、不安障害は、限定しないが以下のタイプを含む人格障害に応用してもよい：偏執性、社交嫌い、回避性行動、境界線人格障害、依存症、麻薬性、ナルシスト的な、強迫神経症、統合失調症及び統合失調症型性格。
【０３０４】
手順：
行動スクリーニングを４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体変異マウスのコホートに対して実施した。全ての行動試験は、生存性の低下のためにより早期の試験が必要とならない限り、１２週齢と１６週齢の間で行った。これらの試験は不安、活動レベル及び探査を測定するオープンフィールドを含んでいた。
オープンフィールド試験
既知の薬物の幾つかの標的はオープンフィールド試験で表現型を示した。これらにはセラトニントランスポーター、ドーパミントランスポーター（Giros等,  Nature. 1996 Feb 15;379(6566):606-12)、及びＧＡＢＡレセプター(Homanics等, Proc Natl Acad Sci U S A. 1997 Apr 15;94(8):4143-8）のノックアウトを含む。自動化されたオープンフィールドアッセイをカスタマイズして感情状態及び学習に関する探索パターンに関する変化を扱った。先ず、フィールド（４０Ｘ４０ｃｍ）をマウスに対して比較的大きくなるように選択し、よって探索に関連する自発運動の変化を取り上げた。また、床には、探索に特に関連した活動である鼻を突っ込むことを可能にする４つの穴がある。幾つかのファクターがこの試験に関連した感情状態を高めるためにまた設計された。オープンフィールド試験はマウスが試験される最初の実験的手順であり、なされる測定は被験体のチャンバーとの最初の経験であった。また、オープンフィールドは明るく照らした。これらのファクターの全てが新しくオープンな空間に関連した自然の不安を高める。ついで、探索活動のパターンと度合い、特に中心からの全移動距離比は、不安又は鬱に対する罹りやすさに関する変化を識別することができる。３つの異なったレベルでの赤外線ビームを用いた大きな活動領域（４０ｃｍｘ４０ｃｍ、AccuScan InstrumentsのVersaMax動物活動性モニターシステム）を用いて、立ち上がり、穴への突っ込み、及び自発運動を記録した。動物を中心に置き、その活動を２０分間測定した。この試験のデータを５回の４分間隔で分析した。移動した全距離（ｃｍ）、垂直移動数（立ち上がり）、穴突っ込み数、及び中心からの全移動距離比を記録した。
マウスが新しい環境に対して正常な馴化応答を示す傾向を、５回の時間間隔にわたるその水平自発運動の全変化を決定することにより評価する。経時的な活動性の変化のこの算定傾きは、絶対値よりも正規化された全移動距離を使用して決定する。傾きは５回の時間間隔のそれぞれにおける正規化された活動を通しての回帰直線から決定する。正常な習慣作用は負の傾き値によって表される。
結果：
表現型分析の要約において示したように、オープンフィールド活動試験の間、顕著な差が観察された。(-/-)マウスは、(+/+)マウスと比較した場合、全ての間隔にわたって、自発運動、立ち上がり、及び穴突っ込み活動の減少を示しており、機能減退及び減少した探索応答を示唆している。よって、ノックアウトマウスは、鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、認知機能障害、痛覚過敏及び感覚器障害、統合失調症及び／又は双極性障害に一致して含む様々な神経変性疾患に一致した表現型を示した。よって、ＰＲＯ４３３３ポリペプチド及びそのアゴニストはそのような抑鬱障害に伴う徴候の治療又は改善に有用であろう。
【０３０５】
（ｃ）骨代謝：放射線学的表現型分析
骨代謝の領域において、標的は、ここでは関節炎、骨粗鬆症、骨減少症及び大理石骨病の治療に対して同定し、並びに骨折治癒を促進する標的が同定される。試験には骨梁及び皮質骨の双方の骨塩量の非常に高い解像度で非常に高い感度での測定のためのマイクロＣＴが含まれる。
Ｄｅｘａ分析−試験法の記述
手順：４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重エネルギーＸ線吸収測定法(ＤＥＸＡ)を成功裏に使用し、全組織量（ＴＴＭ）の変化を同定した。
Avertin(１．２５％の２,２,２-トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重)を腹腔内注射することにより、マウスを麻酔し、体長及び体重を測定し、ついでＤＥＸＡスキャンのためにPIXImusTMデンシトメータ(Lunar Inc.)の台にマウスを腹臥位で置いた。Lunar PIXImusソフトウェアを使用し、骨塩量(ＢＭＤ)及び脂肪組成(％脂肪)及び全組織量(ＴＴＭ)を関心領域（ＲＯＩ、すなわち、全身、椎骨及び両大腿）で測定した。
ＤＥＸＡ結果：
上にまとめたように、雌(-/-)マウスは、それらの性別が一致した(+/-)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、平均全組織量及び除脂肪体重の減少が示された。
【０３０６】
骨マイクロＣＴ分析
手順：  マイクロＣＴをまた使用して非常に高感度のＢＭＤ測定を得た。μＣＴ４０スキャンは骨を細かく調べ、骨質量と構造に関する詳細な情報を提供する。１つの椎骨と１つの大腿を、４匹の野生型及び８匹のホモ接合体マウスのコホートから取り出した。腰部の５つの椎骨梁体積、骨梁厚、結合密度、及び中軸大腿の全骨領域及び皮質厚の測定を行った。マイクロＣＴ４０スキャンにより、骨量及び構造の詳細な情報が得られた。複数の骨を試料ホルダーに配し、自動的にスキャンした。機器ソフトウェアを使用し、分析のための関心領域を選択した。骨梁パラメータを１６マイクロメーター解像度で第５腰椎(ＬＶ５)において分析し、皮質骨パラメータを２０マイクロメーターの解像度で大腿中軸において分析した。
マイクロＣＴ分析の結果：雄(-/-)マウスでは、その性別が一致した(+/+)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、顕著に減少した大腿中軸断面積が示された。
これらの結果は、ノックアウト変異マウスが、密度の低下と場合によっては骨折に至る脆弱化を伴う骨量の減少によって特徴付けられる骨粗鬆症に類似の顕著な骨減少を伴う異常な骨代謝を示すことを裏付けている。血液化学試験もまた骨粗鬆症に一般的に伴う(-/-)変異マウスにおいて増加したアルカリホスファターゼ活性を示した。よって、ＰＲＯ４３３３ポリペプチド又はそのコード化遺伝子は骨ホメオスタシスの維持に有用であり、又は骨折治癒又は関節炎又は骨粗鬆症の治療に重要である一方、アンタゴニストは、骨粗鬆症に類似した異常な又は病理的な骨疾患に至らしめると思われる。これらの研究に加えて。(-/-)変異マウスは発育遅延の徴候を示した。そのような発育疾患は糖尿病又は悪液質のような組織浪費疾患に関連した表現型又は生理的状態を伴いうる。よって、ＰＲＯ４３３３ポリペプチド又はそのアゴニストは糖尿病又は悪液質を治療するのに有用であろう。
【０３０７】
（ｄ）表現型分析：代謝-血液化学
代謝の領域において、糖尿病の治療のため、標的を同定することができる。血液化学表現型分析には、インシュリン感度及びグルコース代謝における変化を測定するためのグルコース耐性試験が含まれる。グルコース代謝試験の結果が異常であると、次の疾患又は病状：１型及び２型糖尿病、Ｘ症候群、種々の循環器病が示される。
手順：  ４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体マウスのコホートを、このアッセイで使用した。哺乳動物における損傷したグルコースホメオスタシスを定めるために、グルコース耐性試験は標準である。腹腔内グルコース耐性試験（ＩＰＧＴＴ）はグルコース負荷投与後のグルコースレベルを測定する。グルコース耐性試験をＬｉｆｅｓｃａｎグルコメーターを使用して実施した。２０％溶液として送達されるＤ-グルコースを２ｇ／ｋｇ、動物にＩＰ注射し、血糖値を、注射後０、３０、６０及び９０分経過したところで測定した。
結果：
これらの研究では、雄(-/-)マウスは、性別が一致した(+/+)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、試験された３回全ての間隔で、正常空腹時グルコースの存在下では向上したグルコース耐性を示した。また、高インシュリン血症は(-/-)マウスには現れなかった。
【０３０８】
（ｅ）免疫学的表現型分析
免疫関連及び炎症性疾患は、正常な生理では、傷害又は損傷に応答し、傷害又は損傷からの修復を開始し、外来生物に対して生得的及び獲得した防御を開始するかなり複雑でしばしば複数の相互に関連した生物学的経路の徴候又は結果である。疾患又は病態は、これらの正常な生理学的経路が、応答の強さに直接関連して、異常な調節又は過度の刺激の結果として、又は自己に対する反応として、又はこれらの組み合せとして、更なる傷害又は損傷を引き起こす場合に生じる。
これらの病気の起源はしばしば多段階経路及び多くの異なる生物学的システム／経路に関連しているが、これらの経路の一又は複数における重要な点への介入は、改善又は治療効果を有し得る。治療的介入は、有害なプロセス／経路への拮抗作用、又は有益なプロセス／経路の刺激により生じ得る。
Ｔリンパ球(Ｔ細胞)は哺乳動物の免疫反応における重要な成分である。Ｔ細胞は、主要組織適合複合体(ＭＨＣ)内の遺伝子によりコードされる自己分子に関連する抗原を認識する。抗原は、抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片等の表面上のＭＨＣ分子と共にディスプレイされうる。Ｔ細胞系は、宿主哺乳動物に対して健康への脅威をもたらすこれらの改変細胞を排除する。Ｔ細胞には、ヘルパーＴ細胞及び細胞傷害性Ｔ細胞が含まれる。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞上にある抗原-ＭＨＣ複合体の認識に続き、広範囲に増殖する。またヘルパーＴ細胞は、Ｂ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞及び免疫反応に関与する種々の他の細胞の活性化において中心的な役割を担っている様々なサイトカイン、すなわちリンホカインを分泌する。
多くの免疫反応では、炎症細胞が損傷又は感染の部位に浸潤する。遊走細胞は、罹患組織の組織学的検査により決定することができる、好中球、好酸球、単球又はリンパ球でありうる。Current Protocols in Immunology, John E. Coligan編, 1994, John Wiley & Sons, Inc。
多くの免疫介在性疾患が知られており、広く研究されている。このような疾患には、免疫媒介炎症性疾患(例えば、関節リウマチ、免疫媒介性腎疾患、胆肝汁性疾患、炎症性大腸炎(ＩＢＤ)、乾癬、及び喘息)、非免疫媒介炎症性疾患、感染症、免疫不全症、新生組織形成、及び移植片拒絶等が含まれる。
免疫学の領域において、炎症及び炎症性疾患の治療のために、標的をここで同定した。一例では、免疫関連疾患は免疫反応を抑制することにより治療することができる。免疫刺激活性を有する分子を阻害する中和抗体の使用は、免疫媒介性及び炎症性疾患の治療に有益である。免疫反応を阻害する分子を利用して（タンパク質を直接に又は抗体アゴニストの使用により）、免疫反応を阻害し、よって免疫関連疾患を改善することができる。
次の試験を実施した：
【０３０９】
血清免疫グロブリンアイソタイプ分析：
血清免疫グロブリンアイソタイプ分析を、Cytometric Bead Array(ＣＢＡ)キットを使用して実施した。このアッセイは、単一の試料中のマウスモノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖アイソタイプを素早く同定するために使用した。表された値は「相対的蛍光単位」であり、カッパ軽鎖の検出に基づく。＜６の値は有意ではない。
結果：
血清免疫グロブリンアイソタイプ分析では、ホモ接合体成体が(+/+)同腹仔と比較して減少した血清ＩｇＡレベルを示した。これらの結果は、これらのノックアウトマウスに関連する表現型がＩｇＡの免疫グロブリン欠損症であることを示唆している。免疫グロブリン欠損症の最もありふれた遺伝型は選択的ＩｇＡ欠損症であり、これは約８００名中１人に見られる。明らかな疾患感受性は選択的ＩｇＡ欠損症には関連していないが、それらは、一般的な集団におけるよりも慢性肺疾患の人々においてより一般的である。これは、ＩｇＡの欠如が様々な病原体での肺感染への素因となり、体表面での防御におけるＩｇＡの役割に一致している。よって、ＰＲＯ４３３３ポリペプチド又はそのアゴニストは、皮膚感染に対する自然の免疫防御に有用であり、より重要なことには、肺感染に罹患する恐れを防止するであろう。
【０３１０】
Ｌ．ＤＮＡ６５４２３-１５９５(ＵＮＱ６９１)遺伝子破壊を有するマウスの産生と分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ１３３６ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ６５４２３-１５９５(ＵＮＱ６９１)と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：マウス遺伝子配列ヌクレオチド参照番号：ＡＦ１４４６２９又はムスムスクルスＳＬＩＴ３（Ｓｌｉｔ３）、タンパク質参照番号：ＡＡＤ４４７６０又はＳＬＩＴ３［ムスムスクルス]；ヒト遺伝子配列ヌクレオチド参照番号：ＮＭ ００３０６２又はホモサピエンスｓｌｉｔホモログ３（ショウジョウバエ）（ＳＬＩＴ３）、タンパク質参照番号：ＮＰ＿００３０５３又はｓｌｉｔホモログ３（ショウジョウバエ）；ｓｌｉｔ（ショウジョウバエ）ホモログ３；ｓｌｉｔ（ショウジョウバエ）ホモログ２；ｓｌｉｔ２［ホモサピエンス］。
これらの動物において変異された遺伝子はマウスＵｎｉＧｅｎｅクラスターＭｍ．２８５０９によって表され、これはヒトＵｎｉＧｅｎｅクラスターＨｓ．５７９２９（ＳＬＩＴ３）のオルソログである。ＳＬＩＴ３はｓｌｉｔホモログ３（ショウジョウバエ）をコードする。そのタンパク質はまたＭＥＧＦ５、ＳＬＩＬ２、ＳＬＩＴ１、ＳＬＩＴ-３、ｓｌｉｔ２、ｓｌｉｔ（ショウジョウバエ）ホモログ２、ｓｌｉｔ（ショウジョウバエ）ホモログ３及び複数の表皮増殖因子様ドメイン５としても知られている。ショウジョウバエ及び脊椎動物ＳＬＩＴタンパク質は、神経軸索及びニューロンの案内のために主に機能するＲＯＢＯレセプタータンパク質によって認識される分泌された化学忌避物質(chemo-repellents)として特徴づけられた大きな細胞外糖タンパク質である。ショウジョウバエＳＬＩＴ３の発現は初期発生において肢芽の将来の軟骨コアに制限され、後の段階では、軟骨形成中に増殖している軟骨細胞において発現する(Holmes等, Dev. Dyn., 222(2): 301-7 (2001))。
ＳＬＩＴ３タンパク質はマウス腎臓上皮細胞内の二つの異なった部位：ミトコンドリア、及びその後より密集した細胞、細胞表面を標的とし局在化される。研究者は、それらの結果がＳＬＩＴ３が他のＳＬＩＴタンパク質によっては共有されない独特の機能を潜在的に有していることを示していると結論づけた(Little等, Am J Physiol Cell Physiol, 281(2):C486-95 (August 2001))。
標的突然変異又はジーントラップ突然変異を株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ-由来胚性幹(ＥＳ)細胞において生じさせた。キメラマウスをＣ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスに交雑してＦ１ヘテロ接合体動物を産生した。これらの子孫をハイブリッド１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７Ｃｒｅホモ接合体マウスに交雑して、変異体及びＣｒｅ対立遺伝子を共に有するマウス（複合ヘテロ接合体マウス）を産生した。ついで、雄の複合ヘテロ接合体マウスを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスへの１２９ＳｖＥｖＢｒｄの交雑から誘導したハイブリッド１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７Ｆ１マウスに交雑させて、ヘテロ接合体Ｃｒｅ切除動物を産生した。最後に、これらの子孫を異系交配させて野生型Ｃｒｅ切除ヘテロ接合体及びＣｒｅ切除ホモ接合体マウスを産生した。
標的遺伝子の野生型発現はＲＴ-ＰＣＲによって試験した胚性幹(ＥＳ)細胞及び全ての１３の成体組織試料において検出された。ＲＴ-ＰＣＲ分析は、分析された(-/-)マウス（Ｍ-１０７）において転写が腎臓ではなく、肺では殆ど検出できないことを明らかにした。新しい転写の遺伝子発現は胃、副腎皮質、腎臓集合管、小腸細尿管、心臓柔組織、及び脳海馬において検出された。[分析値 wt/ het/ hom: 0/ 1/ 5]。ＲＴ-ＰＣＲ分析は、ホモ接合変異マウスには転写がないことを明らかにした。レベルＩ表現型分析は以下に示したこの世代のマウスについて実施された。
wt        het      hom    合計
観察値      22        39       22      83
予想値      20.75     41.5     20.75   83
カイ二乗 = 0.30  有意性=0.86019  (hom/n) = 0.27  平均産仔数 = 0
【０３１１】
１．表現型分析（破壊された遺伝子：ＤＮＡ６５４２３-１５９５（ＵＮＱ６９１））
（ａ）全体的な表現型の要約
２週齢で、ホモ接合体変異新生児は禿を示した；しかしその毛は成長し、成体では正常になったようであった。ホモ接合体マウスの半分が１６週齢で発意既知炎の徴候を示した。すなわち、その野生型同腹仔と比較した場合、体重及び体長、全組織量、及び除脂肪体重が減少していた。ホモ接合体変異マウスはまた横隔膜ヘルニアと減少した探索的行動及びオープンフィールド試験中での減少した不安関連応答を示した。
（ｂ）表現型分析：ＣＮＳ／神経学
神経学の分野において、分析は、ここでは、神経学的及び精神疾患の治療のためのインビボで有効にされた標的を同定することに集中させた。神経障害は、限定されるものではないが、鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏及び感覚器障害、軽度から中度の不安、一般的な医学的状態による不安障害、別段特定しない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を示すパニック障害、広場恐怖症のないパニック障害、心的外傷後ストレス症候群、社会的な恐怖症、社会的な不安、自閉症、特定の恐怖症、物質誘発性不安障害、急性アルコール禁断、強迫性障害、広場恐怖症、単極型障害、双極性障害Ｉ又はＩＩ、別段特定しない双極性障害、循環気質者疾患、うつ病性障害、大うつ病性障害、気分障害、物質誘発性気分障害、認知機能の亢進、限定するものではないがアルツハイマー病、脳梗塞又は脳への外傷に伴う認知機能の喪失、限定するものではないが癲癇、学習障害／学習不能症、脳性麻痺を含む疾患又は損傷から生じる発作を含む。加えて、不安障害は、限定しないが以下のタイプを含む人格障害に応用してもよい：偏執性、社交嫌い、回避性行動、境界線人格障害、依存症、麻薬性、ナルシスト的な、強迫神経症、統合失調症及び統合失調症型性格。
【０３１２】
手順：
行動スクリーニングを４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体変異マウスのコホートに対して実施した。全ての行動試験は、生存性の低下のためにより早期の試験が必要とならない限り、１２週齢と１６週齢の間で行った。これらの試験は不安、活動レベル及び探査を測定するオープンフィールドを含んでいた。
オープンフィールド試験
既知の薬物の幾つかの標的はオープンフィールド試験で表現型を示した。これらにはセラトニントランスポーター、ドーパミントランスポーター（Giros等,  Nature. 1996 Feb 15;379(6566):606-12)、及びＧＡＢＡレセプター(Homanics等, Proc Natl Acad Sci U S A. 1997 Apr 15;94(8):4143-8）のノックアウトを含む。自動化されたオープンフィールドアッセイをカスタマイズして感情状態及び学習に関する探索パターンに関する変化を扱った。先ず、フィールド（４０Ｘ４０ｃｍ）をマウスに対して比較的大きくなるように選択し、よって探索に関連する自発運動の変化を取り上げた。また、床には、探索に特に関連した活動である鼻を突っ込むことを可能にする４つの穴がある。幾つかのファクターがこの試験に関連した感情状態を高めるためにまた設計された。オープンフィールド試験はマウスが試験される最初の実験的手順であり、なされる測定は被験体のチャンバーとの最初の経験であった。また、オープンフィールドは明るく照らした。これらのファクターの全てが新しくオープンな空間に関連した自然の不安を高める。ついで、探索活動のパターンと度合い、特に中心からの全移動距離比は、不安又は鬱に対する罹りやすさに関する変化を識別することができる。３つの異なったレベルでの赤外線ビームを用いた大きな活動領域（４０ｃｍｘ４０ｃｍ、AccuScan InstrumentsのVersaMax動物活動性モニターシステム）を用いて、立ち上がり、穴への突っ込み、及び自発運動を記録した。動物を中心に置き、その活動を２０分間測定した。この試験のデータを５回の４分間隔で分析した。移動した全距離（ｃｍ）、垂直移動数（立ち上がり）、穴突っ込み数、及び中心からの全移動距離比を記録した。
マウスが新しい環境に対して正常な馴化応答を示す傾向を、５回の時間間隔にわたるその水平自発運動の全変化を決定することにより評価する。経時的な活動性の変化のこの算定傾きは、絶対値よりも正規化された全移動距離を使用して決定する。傾きは５回の時間間隔のそれぞれにおける正規化された活動を通しての回帰直線から決定する。正常な習慣性はネガティブな傾きの値により表す。
【０３１３】
結果：
一般的及び探索活動／不安行動に関して、オープンフィールド活動試験の間、顕著な差が観察された。(-/-)マウスは、(+/+)マウスと比較した場合、立ち上がり及び穴突っ込み活動の減少を示しており、(-/-)マウスにおける探索応答の減少を示唆している。(-/-)マウスはまた(+/+)マウスと比較した場合、間隔２、３及び５において中心からの全移動距離比の減少を示しており、(-/-)マウスにおける不安様応答の減少を示唆している。よって、ノックアウトマウスは、鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、認知機能障害、痛覚過敏及び感覚器障害、統合失調症及び／又は双極性障害を含む多くの神経変性疾患に一致した表現型を示した。よって、ＰＲＯ１３３６ポリペプチド及びそのアゴニストはそのような抑鬱障害に伴う徴候の治療又は改善に有用であろう。
【０３１４】
機能観察バッテリ（ＦＯＢ）試験
ＦＯＢは全体感覚及び運動欠陥を決定するための動物に適用される一連の状況である。全体の神経学的機能を評価するＩｒｗｉｎ神経学的スクリーン試験のサブセットを使用する。一般に、短期間の触覚、嗅覚、及び視覚刺激を動物に適用してその正常に検知し反応する能力を決定する。これらの簡単な試験はおよそ１０分かかり、マウスは試験の終わりにそのホームケージに戻る。
結果：
上にまとめたように、機能観察バッテリの間に顕著な差が観察された。雄ヘテロ接合体(-/+)マウスが中程度の眼球突出症（眼球の異常な突出）を示し；雌ホモ接合体(-/-)変異マウスが重篤な眼球突出症を示した。雄及び雌(-/-)の双方とも立毛を示した。立毛は寒さ、ショック又は恐怖により通常は惹起される交感神経反射性によるか又は交感神経模倣剤による毛の無意識の直立化又は逆立である。(-/-)マウスの全てが２週齢で突き出た鼻の回りに禿の毛の斑を伴った禿を示した。しかし、その毛は成長し、成体になったときは正常になった。よって、機能的観察バッテリ試験は、変異マウスが減少した探索活動表現型を示すことを示した。このタイプの行動に伴う神経疾患は、パニックのような不安障害、広場恐怖症を示すパニック障害、広場恐怖症又は気分循環性障害を含みうる。気分循環性障害は幻覚又は妄想のような精神病性特徴を持たない興奮した、のんびりした、又はいらいらした気分に憂鬱な気分が変化することによって特徴づけられる。
【０３１５】
（ｃ）表現型分析：体重：
Ｄｅｘａ分析−試験法の記述
手順：４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び６匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重エネルギーＸ線吸収測定法(ＤＥＸＡ)を成功裏に使用し、全組織中（ＴＴＭ）の変化を同定した。
Avertin(１．２５％の２,２,２-トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重)を腹腔内注射することにより、マウスを麻酔し、体長及び体重を測定し、ついでＤＥＸＡスキャンのためにPIXImusTMデンシトメータ(Lunar Inc.)の台にマウスを腹臥位で置いた。Lunar PIXImusソフトウェアを使用し、骨塩量(ＢＭＤ)及び脂肪組成(％脂肪)及び全組織量(ＴＴＭ)を関心領域（ＲＯＩ、すなわち、全身、椎骨及び両大腿）で測定した。
結果：
ＤＥＸＡによって分析した(-/-)マウスでは、それらの(+/+)同腹仔と比較した場合、顕著に減少した全組織量及び除脂肪体重を示し、これらの変異体における発育遅延が示唆される。これらの変異体はまた顕著に増加した骨ミネラル量指数（ＢＭＣ／ＬＢＭ）を示した。血液化学分析は、雄(-/-)マウスがその性別が一致した(+/+)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、減少した平均インスリン量を示したことを示していた。これは、減少した平均体重及び減少した平均体長の観察と共に、悪液質、１型及び２型糖尿病のような組織浪費症状を示唆している。よって、ＰＲＯ１３３６ポリペプチド又はそのアゴニストは悪液質及び／又は糖尿病の治療又は予防に有用であろう。
【０３１６】
ＣＡＴ-スキャンプロトコール：
ＣＴ造影剤、オムニパーク３００（Nycomed Amersham、ｍｌ当たり３００ｍｇのヨウ素、動物当たり０．２５ｍｌ、又は２．５０−３．７５ｇヨウ素／ｋｇ体重）をマウスに腹腔内注射した。〜１０分間ケージで休止させた後、Avertin(１．２５％の２,２,２-トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重)を腹腔内注射することにより、マウスを落ち着かせた。ＣＡＴスキャンは、試験ベッドに腹臥位で置いた麻酔動物でＭｉｃｒｏＣＡＴスキャナー（ImTek, Inc.）を使用して実施した。ImTek 3D RECONソフトウェアを使用してワークステーションクラスターにおいてFeldkampアルゴリズムによって三次元画像を再構成した。
結果：
検査した５匹の(-/-)変異マウスのなかで、４匹が横隔膜の発達欠陥を示した（横隔膜ヘルニア）。また、(-/-)マウスは拡大した右心房を示した。顕微鏡観察は次の通りであった：これらの変異体の組織学的分析は、肝臓萎縮、鬱血、門脈周囲の線維化、アテローム性大動脈硬化症、及び胃炎を含む様々な病巣を明らかにした。しかしながら、これらの病巣の全ては、原発性遺伝子関連病巣というよりも横隔膜ヘルニアに対して二次的と考えられた。
【０３１７】
Ｍ．ＤＮＡ１４５８８７-２８４９(ＵＮＱ５７９３)遺伝子破壊を有するマウスの産生と分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ１９５９８ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ１４５８８７-２８４９(ＵＮＱ５７９３)と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：マウス遺伝子配列ヌクレオチド参照番号：インターロイキン２２結合タンパク質（ＬＯＣ２３７３１０）に類似のムスムスクルス又はＸＭ＿１３６９５１、タンパク質参照番号：インターロイキン２２結合タンパク質に類似のＸＰ＿１３６９５１［ムスムスクルス]；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ ０５２９６２又はホモサピエンスクラスＩＩサイトカインレセプター（ＩＬ２２ＲＡ２）、タンパク質参照番号：ＮＰ＿４４３１９４又はクラスＩＩサイトカインレセプター；インターロイキン２２結合タンパク質［ホモサピエンス］。
これらの動物において変異された遺伝子はマウスヌクレオチド配列ＸＭ １３６９５１によって表され、これはヒトＵｎｉＧｅｎｅクラスターＨｓ．１２６８９１（ＩＬ２２ＲＡ２）のオルソログである。ＩＬ２２ＲＡ２はインターロイキン２２レセプターアルファ-２をコードする。そのタンパク質はまたインターロイキン２２結合タンパク質（ＩＬ２２ＢＰ）及びクラスＩＩサイトカインレセプター、ＩＬ２２ＢＰ、ＣＲＦ２-Ｓ１、及びＩＬ-２２ＢＰとしても知られている。
２つのサイトカイン結合フィブロネクチンＩＩＩ型ドメインを含むＩＬ２２ＲＡ２はサイトカインレセプターＩＬ２０ＲＡ及びＩＬ２２Ｒの細胞外ドメインに似ている分泌糖タンパク質である（３３％同一性）(Dumoutier等, J. Immunol., 166(12):7090-5 (2001))；Xu等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 98(17):9511-6 (2001)）。ＩＬ２２ＲＡ２はＴ細胞によって作られるサイトカインのＩＬ２２に結合し、多くの細胞株においてＩＬ２２シグナル伝達を阻害することが示されている。よって、ＩＬ２２ＲＡ２はＩＬ２２によって誘導される炎症性応答のネガティブな調節因子である(上掲のDumoutier等, 2001；上掲のXu等, 2001；Kotenko等, J. Immunol., 166(12):7096-103 (2001))。ＩＬ２２ＲＡ２は乳房、肺、大腸、皮膚、胎盤、脾臓、単核細胞において検出され、幾つかの他の組織においてより少ない程度で検出されている(上掲のDumoutier等, 2001；上掲のXu et al, 2001；上掲のKotenko等, 2001)。最も高いＩＬ２２ＲＡ２発現は炎症性浸潤部位の単核細胞、形質細胞、及び上皮において生じた。ＩＬ２２ＲＡ２発現はまたある種の腫瘍においても検出された(２００２年９月２６日公開の米国特許出願公開番号US-2002-0137909-A1を参照)。
標的突然変異又はジーントラップ突然変異を株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ-由来胚性幹(ＥＳ)細胞において生じさせた。キメラマウスをＣ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスに交雑してＦ１ヘテロ接合体動物を産生した。これらの子孫を交雑させてＦ２野生型、ヘテロ接合体、及びホモ接合体突然変異子孫を産生した。極くたまに、例えばＦ１マウスがキメラからほとんど得られなかった場合に、Ｆ１ヘテロ接合マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交雑させ、交雑受精のための付加的なヘテロ接合動物を生じさせてＦ２マウスを産生せしめた。標的遺伝子の破壊はサザンハイブリダイゼーション分析法によって確認された。レベルＩ表現型分析はこの世代のマウスについて実施された。
wt        het      hom    合計
観察値      22        52       23      97
予想値      24.25     48.5     24.25   97
カイ二乗 = 0.53  有意性=0.76883  (hom/n) = 0.24  平均産仔数 = 0
【０３１８】
１．表現型分析（破壊された遺伝子：ＤＮＡ１４５８８７-２８４９（ＵＮＱ５７９３））
（ａ）全体的な表現型の要約
変異(-/-)マウスは、その性別が一致した(+/+)同腹仔と比較して血清免疫グロブリンの上昇を示した。また、(-/-)マウスは、ＣｏｎＡで肝炎表現型を誘導後、コントロール及び野生型同腹仔と比較した場合、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）レベルの上昇レベルを示した。
【０３１９】
（ｂ）免疫学的表現型分析
免疫関連及び炎症性疾患は、正常な生理では、傷害又は損傷に応答し、傷害又は損傷からの修復を開始し、外来生物に対して生得的及び獲得した防御を開始するかなり複雑でしばしば複数の相互に関連した生物学的経路の徴候又は結果である。疾患又は病態は、これらの正常な生理学的経路が、応答の強さに直接関連して、異常な調節又は過度の刺激の結果として、又は自己に対する反応として、又はこれらの組み合せとして、更なる傷害又は損傷を引き起こす場合に生じる。
これらの病気の起源はしばしば多段階経路及び多くの異なる生物学的システム／経路に関連しているが、これらの経路の一又は複数における重要な点への介入は、改善又は治療効果を有し得る。治療的介入は、有害なプロセス／経路への拮抗作用、又は有益なプロセス／経路の刺激により生じ得る。
Ｔリンパ球(Ｔ細胞)は哺乳動物の免疫反応における重要な成分である。Ｔ細胞は、主要組織適合複合体(ＭＨＣ)内の遺伝子によりコードされる自己分子に関連する抗原を認識する。抗原は、抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片等の表面上のＭＨＣ分子と共にディスプレイされうる。Ｔ細胞系は、宿主哺乳動物に対して健康への脅威をもたらすこれらの改変細胞を排除する。Ｔ細胞には、ヘルパーＴ細胞及び細胞傷害性Ｔ細胞が含まれる。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞上にある抗原-ＭＨＣ複合体の認識に続き、広範囲に増殖する。またヘルパーＴ細胞は、Ｂ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞及び免疫反応に関与する種々の他の細胞の活性化において中心的な役割を担っている様々なサイトカイン、すなわちリンホカインを分泌する。
多くの免疫反応では、炎症細胞が損傷又は感染の部位に浸潤する。遊走細胞は、罹患組織の組織学的検査により決定することができる、好中球、好酸球、単球又はリンパ球でありうる。Current Protocols in Immunology, John E. Coligan編, 1994, John Wiley & Sons, Inc。
多くの免疫介在性疾患が知られており、広く研究されている。このような疾患には、免疫媒介炎症性疾患(例えば、関節リウマチ、免疫媒介性腎疾患、胆肝汁性疾患、炎症性大腸炎(ＩＢＤ)、乾癬、及び喘息)、非免疫媒介炎症性疾患、感染症、免疫不全症、新生組織形成、及び移植片拒絶等が含まれる。
免疫学の領域において、炎症及び炎症性疾患の治療のために、標的をここで同定した。免疫関連疾患は免疫反応を抑制することにより治療することができる。免疫刺激活性を有する分子を阻害する中和抗体の使用は、免疫媒介性及び炎症性疾患の治療に有益である。免疫反応を阻害する分子を利用して（タンパク質を直接に又は抗体アゴニストの使用により）、免疫反応を阻害し、よって免疫関連疾患を改善することができる。
【０３２０】
血清免疫グロブリンアイソタイプ分析：
血清免疫グロブリンアイソタイプ分析を、Cytometric Bead Array(ＣＢＡ)キットを使用して実施した。このアッセイは、単一の試料中のマウスモノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖アイソタイプを素早く同定するために使用した。表された値は「相対的蛍光単位」であり、カッパ軽鎖の検出に基づく。＜６の値は有意ではない。
結果：
変異体(-/-)マウスはその性別が一致した(+/+)同腹仔と比較して、ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ血清免疫グロブリンの上昇が明らかとなった。ＩｇＭ免疫グロブリンは細菌毒素の中和のための体液性免疫応答において最初に産生され、補体系の活性化に特に重要である。同様に、ＩｇＧ免疫グロブリンは中和効果を有しており、より少ない程度に補体系の活性化に重要である。観察された表現型は、ＰＲＯ１９５９８ポリペプチドが炎症性応答のネガティブな調節因子であることを示唆している。これらの免疫学的異常は、ＰＲＯ１９５９８ポリペプチドの阻害剤（アンタゴニスト）が（Ｔ細胞増殖のような）免疫系を刺激しうる重要な薬剤として有用であり、この効果が白血病及び他のタイプの癌、及びエイズ患者のような免疫不全患者の場合のように個体に有益である場合に有用性が見いだされることを示唆している。従って、ＰＲＯ９７８３ポリペプチド又はそのアゴニストは免疫応答の阻害に有用であり、例えば移植拒絶又は移植片対宿主病において有害な免疫反応を抑制するための有用な候補であろう。
【０３２１】
ＣｏｎＡ誘導肝炎
その野生型の性別が一致した同腹仔と比較してホモ接合体及びヘテロ接合体変異マウスに対するＣｏｎＡ誘導肝炎の効果を見るために研究を実施した。
手順：
ＣｏｎＡ誘導肝炎の効果をＵＮＱ５７９３ノックアウトマウスにおいて研究した。この研究に使用したグループは、野生型(+/+)マウス、ヘテロ接合体(+/-)マウス、ＵＮＱ５７９３ホモ接合体(-/-)マウス、及び未処置Ｃ５７Ｂ１６マウスを含む。Ｃ５７Ｂ１６コントロールグループ以外の全マウスには静脈内注射により１００μｌ生理食塩水中１０ｍｇ／ｋｇのＣｏｎＡを注射した。１６時間後、マウスを犠牲にし、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）レベルの分析のために血清を集めた。血清を水で１：３に希釈し、ロシェ試薬カセットに配し、ケミストリーアナライザー（Integra４００）を使用して読み取った。１６時間で肝臓も集めた。肝臓試料を固定し、ヘマトキシリン及びエオシンで染色し肝臓の損傷の度合いを決定した。
結果：
ホモ接合体(-/-)及びヘテロ接合体(+/-)変異マウスの双方が、ＣｏｎＡの注射後１６時間で未処置のＣ５７Ｂ１６コントロール及びその野生型(+/+)性別一致同腹仔と比較して血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）の有意な上昇レベルを示した。また組織学的所見は、未処置コントロール及び野生型同腹仔と比較して変異(+/-)及び(-/-)マウスにおいて有意な肝臓の損傷を示した。ノックアウト(-/-)マウスは顕著な程度から中程度の多発性架橋急性肝細胞壊死を示した。同様に、ヘテロ接合体(+/-)は、広範な肝臓損傷の徴候である顕著な程度から中程度の多発性急性肝細胞壊死を示した。よって、変異ノックアウトマウスは肝炎がＣｏｎＡで誘導された場合、悪化した肝臓損傷を有していたと思われ、亢進された炎症性応答を示唆している。これらの研究は、ＰＲＯ９７８３ポリペプチド又はそのアゴニストが有害な免疫応答を阻害し又は抑制するのに有用であり、特に肝炎の治療に有用であることを示している。
【０３２２】
Ｎ．ＤＮＡ５０９２１-１４５８(ＵＮＱ５４０)遺伝子破壊を有するマウスの産生と分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ１０８３ポリペプチド（ＤＮＡ５０９２１-１４５８(ＵＮＱ５４０）と命名）をコードする遺伝子を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：マウス遺伝子配列ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿０１８８８２又はムスムスクルスＧプロテイン結合レセプター５６（Ｇｐｒ５６）、タンパク質参照番号：ＮＰ＿０６１３７０又はサーペンタインレセプター；セクレチンレセプター［ムスムスクルス]；ヒト遺伝子配列ヌクレオチド参照番号：ＮＭ ００５６８２又はホモサピエンスＧプロテイン結合レセプター５６（Ｇｐｒ５６）、タンパク質参照番号：ＮＰ＿００５６７３又はＧプロテイン結合レセプター５６；ＥＧＦ-ＴＭ７様［ホモサピエンス］。
これらの動物において変異される遺伝子はマウスＵｎｉＧｅｎｅクラスターＭｍ.１３７９９によって表され、これはヒトＵｎｉＧｅｎｅクラスターＨｓ.６５２７のオルソログである（ＧＰＲ５６）。ＧＰＲ５６はＧプロテイン結合レセプター５６をコードする。そのタンパク質はまたＣｙｔ２８、ＴＭ７ＬＮ４、ＴＭ７ＸＮ１、セクレチンレセプター、サーペンタインレセプター、及びＥＧＦ-ＴＭ７様としても知られている。ＧＰＲ５６は海馬及び視床下部核で強く発現され(Liu等, Genomics, 55(3):296-305 (1999))、高度に転移性の細胞株において強く下方制御されていた(Zendman等, FEBS Lett., 446(2-3):292-8 (March 12, 1999))。細胞外ムチン様ドメインの存在は細胞-細胞相互作用におけるタンパク質に対しての可能な役割を示唆している。
標的突然変異又はジーントラップ突然変異を株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ-由来胚性幹(ＥＳ)細胞において生じさせた。キメラマウスをＣ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスに交雑してＦ１ヘテロ接合体動物を産生した。これらの子孫を交雑させてＦ２野生型、ヘテロ接合体、及びホモ接合体突然変異子孫を産生した。極くたまに、例えばＦ１マウスがキメラからほとんど得られなかった場合に、Ｆ１ヘテロ接合マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交雑させ、交雑受精のための付加的なヘテロ接合動物を生じさせてＦ２マウスを産生せしめた。レベルＩ表現型分析をこの世代からのマウスについて実施した。標的遺伝子の野生型発現は胚性幹(ＥＳ)細胞と、ＲＴ-ＰＣＲによって試験された１３の成体組織試料の脂肪を除く全てにおいて検出された。
標的遺伝子の破壊はサザンハイブリダイゼーション分析法によって確認された。
wt        het      hom    合計
観察値      14        43       16      73
予想値      18.25     36.5     18.25   73
カイ二乗 = 2.42  有意性=0.29750  (hom/n) = 0.22  平均産仔数 = 0
【０３２３】
１．表現型分析（破壊された遺伝子：ＤＮＡ５０９２１-１４５８（ＵＮＱ５４０））
（ａ）全体的な表現型の要約
(-/-)マウスは、その(+/+)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、増加した平均血清中ＩｇＭ量及び顕著に増加した平均血清中ＩｇＡ及びＩｇＧ３量を示した。雌(-/-)マウスは、その性別が一致した(+/+)同腹仔と比較した場合、僅かに増加した平均全組織量、除脂肪体重、骨塩量、及び全身及び大腿骨骨ミネラル密度を示した。
【０３２４】
（ｂ）免疫学的表現型分析
免疫関連及び炎症性疾患は、正常な生理では、傷害又は損傷に応答し、傷害又は損傷からの修復を開始し、外来生物に対して生得的及び獲得した防御を開始するかなり複雑でしばしば複数の相互に関連した生物学的経路の徴候又は結果である。疾患又は病態は、これらの正常な生理学的経路が、応答の強さに直接関連して、異常な調節又は過度の刺激の結果として、又は自己に対する反応として、又はこれらの組み合せとして、更なる傷害又は損傷を引き起こす場合に生じる。
これらの病気の起源はしばしば多段階経路及び多くの異なる生物学的システム／経路に関連しているが、これらの経路の一又は複数における重要な点への介入は、改善又は治療効果を有し得る。治療的介入は、有害なプロセス／経路への拮抗作用、又は有益なプロセス／経路の刺激により生じ得る。
Ｔリンパ球(Ｔ細胞)は哺乳動物の免疫反応における重要な成分である。Ｔ細胞は、主要組織適合複合体(ＭＨＣ)内の遺伝子によりコードされる自己分子に関連する抗原を認識する。抗原は、抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片等の表面上のＭＨＣ分子と共にディスプレイされうる。Ｔ細胞系は、宿主哺乳動物に対して健康への脅威をもたらすこれらの改変細胞を排除する。Ｔ細胞には、ヘルパーＴ細胞及び細胞傷害性Ｔ細胞が含まれる。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞上にある抗原-ＭＨＣ複合体の認識に続き、広範囲に増殖する。またヘルパーＴ細胞は、Ｂ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞及び免疫反応に関与する種々の他の細胞の活性化において中心的な役割を担っている様々なサイトカイン、すなわちリンホカインを分泌する。
多くの免疫反応では、炎症細胞が損傷又は感染の部位に浸潤する。遊走細胞は、罹患組織の組織学的検査により決定することができる、好中球、好酸球、単球又はリンパ球でありうる。Current Protocols in Immunology, John E. Coligan編, 1994, John Wiley & Sons, Inc。
多くの免疫介在性疾患が知られており、広く研究されている。このような疾患には、免疫媒介炎症性疾患(例えば、関節リウマチ、免疫媒介性腎疾患、胆肝汁性疾患、炎症性大腸炎(ＩＢＤ)、乾癬、及び喘息)、非免疫媒介炎症性疾患、感染症、免疫不全症、新生組織形成、及び移植片拒絶等が含まれる。
免疫学の領域において、炎症及び炎症性疾患の治療のために、標的をここで同定した。免疫関連疾患は免疫反応を抑制することにより治療することができる。免疫刺激活性を有する分子を阻害する中和抗体の使用は、免疫媒介性及び炎症性疾患の治療に有益である。免疫反応を阻害する分子を利用して（タンパク質を直接に又は抗体アゴニストの使用により）、免疫反応を阻害し、よって免疫関連疾患を改善することができる。
【０３２５】
血清免疫グロブリンアイソタイプ分析：
血清免疫グロブリンアイソタイプ分析を、Cytometric Bead Array(ＣＢＡ)キットを使用して実施した。このアッセイは、単一の試料中のマウスモノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖アイソタイプを素早く同定するために使用した。表された値は「相対的蛍光単位」であり、カッパ軽鎖の検出に基づく。＜６の値は有意ではない。
結果：
変異体(-/-)マウスはその性別が一致した(+/+)同腹仔と比較して、ＩｇＭ、ＩｇＡ、及びＩｇＧ３レベルの上昇が明らかとなった。ＩｇＭ免疫グロブリンは細菌毒素の中和のための体液性免疫応答において最初に産生され、補体系の活性化に特に重要である。同様に、ＩｇＧ免疫グロブリンは中和効果を有しており、より少ない程度に補体系の活性化に重要である。ＩｇＡは細菌毒素及びウイルスを中和することができる上皮細胞プロテクターとして主に機能する。明らかな疾患感受性は選択的ＩｇＡ欠陥には関連していないが、それらは一般的な集団におけるよりも慢性肺疾患の人々においてより一般的である。これは、ＩｇＡの欠如が様々な病原体での肺感染への素因となり、体表面での防御におけるＩｇＡの役割に一致している。この場合、ノックアウトマウスに対して観察された表現型は血清中ＩｇＡ量を増加させ、ＰＲＯ１０８３ポリペプチドの阻害剤（アンタゴニスト）が皮膚感染に対する自然の免疫防御に対して有用であり、より重要なことには肺感染への感受性を防止する。観察された表現型は、ＰＲＯ１０８３ポリペプチドが炎症性応答のネガティブな調節因子であることを示唆している。これらの免疫学的異常は、ＰＲＯ１０８３ポリペプチドの阻害剤（アンタゴニスト）が（Ｔ細胞増殖のような）免疫系を刺激しうる重要な薬剤として有用であり、この効果が白血病及び他のタイプの癌、及びエイズ患者のような免疫不全患者の場合のように個体に有益である場合に有用性が見いだされることを示唆している。従って、ＰＲＯ１０８３ポリペプチド又はそのアゴニストは免疫応答の阻害に有用であり、例えば移植拒絶又は移植片対宿主病において有害な免疫反応を抑制するための有用な候補であろう。
【０３２６】
（ｂ）骨代謝：放射線学的表現型分析
骨代謝の領域において、標的は、ここでは関節炎、骨粗鬆症、骨減少症及び大理石骨病の治療に対して同定し、並びに骨折治癒を促進する標的が同定される。試験には次のものが含まれる：
・大腿及び椎骨における骨塩量の測定のためのＤＥＸＡ
・骨梁及び皮質骨の双方の骨塩量の非常に高い解像度で非常に高い感度での測定のためのマイクロＣＴ。
Ｄｅｘａ分析−試験法の記述
手順：４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重エネルギーＸ線吸収測定法(ＤＥＸＡ)を成功裏に使用し、骨中の変化を同定した。麻酔した動物を検査し、骨塩量(ＢＭＣ)、ＢＭＣ／ＬＢＭ比、容積測定骨塩量(ｖＢＭＤ)、全身ＢＭＤ、大腿ＢＭＤ及び椎骨ＢＭＤを測定した。
Avertin(１．２５％の２,２,２-トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重)を腹腔内注射することにより、マウスを麻酔し、体長及び体重を測定し、ついでＤＥＸＡスキャンのためにPIXImusTMデンシトメータ(Lunar Inc.)の台にマウスを腹臥位で置いた。Lunar PIXImusソフトウェアを使用し、骨塩量(ＢＭＤ)及び脂肪組成(％脂肪)及び全組織量(ＴＴＭ)を関心領域(ＲＯＩ)[すなわち、全身、椎骨及び両大腿]で測定した。
ＤＥＸＡ結果：
雌(-/-)マウスでは、それらの性別が一致した(+/+)同腹仔と比較した場合、平均全組織量、除脂肪体重、骨ミネラル量、及び全身及び大腿骨ミネラル密度の増加が示された。これらの結果は、ノックアウト変異体表現型が骨粗鬆症のような骨異常と関連していることを示している。骨粗鬆症は骨の異常な肥厚化及び硬化及び異常な脆性によって特徴づけられる症状である。よって、ＰＲＯ１０８３ポリペプチド又はそのアゴニストは骨粗鬆症の治療に有用である。増加した骨ミネラル量、及び全身及び大腿骨ミネラル密度を伴う表現型は、これらの効果を模倣する薬剤（例えばＰＲＯ１０８３ポリペプチドのアンタゴニスト）が骨折治癒に有用であることを示唆している。
【０３２７】
Ｏ．ＤＮＡ２２６６５９(ＵＮＱ５０７０)遺伝子破壊を有するマウスの産生と分析
これらのノックアウト実験では、ｈｕＴＲＰＭ２ポリペプチドＤＮＡ２２６６５９(ＵＮＱ５０７０）をコードする遺伝子を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：マウス遺伝子配列ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿１３８３０１又はムスムスクルス一過性レセプター電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー２（Ｔｒｍｐ２）、タンパク質参照番号：ＮＰ＿６１２１７４又は一過性レセプター電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー２；一過性レセプター電位チャネル７；一過性レセプタータンパク質７［ムスムスクルス]；ヒト遺伝子配列ヌクレオチド参照番号：ＮＭ ００３３０７又はホモサピエンス一過性レセプター電位チャネル、サブファミリーＭ、メンバー２（ＴＲＰＭ２）、タンパク質参照番号：ＮＰ＿００３２９８又は一過性レセプター電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー２；一過性レセプター電位関連チャネル７；新規な推定Ｃａ２＋チャネルタンパク質７；一過性レセプター電位チャネル７［ホモサピエンス］。
破壊されたマウス遺伝子は一過性レセプター電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー２（Ｔｒｐｍ２）、ヒト一過性レセプター電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー２（ＴＲＰＭ２）のオルソログである。同義語にはＴＲＰＣ７；Ｔｒｒｐ７；ＬＴＲＰＣ２；一過性レセプタータンパク質７；一過性レセプター電位チャネル７；ＫＮＰ３；及び一過性レセプター電位関連チャネル７、新規な推定Ｃａ２＋チャネルタンパク質が含まれる。
一過性レセプター電位チャネルの短いサブファミリーのメンバーであるＴＲＰＭ２は脳及び免疫細胞（ＯＭＩＭ６０３７４９）に高度に発現されるＣａ２＋透過性非選択的カチオンチャネルとして機能する。そのタンパク質はイオン輸送タンパク質ドメイン（ＰｆａｍＰＦ００５２０）及び特異的ＡＤＰリボースピロホスファターゼとして機能するＮＵＤＩＸドメイン（ＰｆａｍＰＦ００２９３）を含む。
カルシウム放出二次メッセンジャーサイクリックＡＤＰリボース及びＮＡＤ加水分解の破壊産物であるＡＤＰリボースはＣ末端Ｎｕｄｉｘドメインに結合することによってＴＲＰＭ２を活性化する。ＡＤＰリボース活性化ＴＲＰＭ２は、ある種の免疫細胞において免疫反応を惹起させるのに重要な役割を担っていると思われる(Sano等, Science, 293(5533):1327-30 ( August 17, 2001)；Perraud等, Nature, 411(6837):595-9 (May 31, 2001))。
Ｃ末端Ｎｕｄｉｘドメインを欠く特異的ＴＲＰＭ２はＡＤＰリボースではなく過酸化水素によって活性化され、よって酸化ストレスによって活性化される。この変異体は好中球顆粒球で発現され、呼吸バーストにおいてある役割を担っていると思われ、これが高濃度のスーパーオキシドアニオンとフリーラジカルを生成する(Wehage等, J. Biol. Chem., 277(26):23150-6 (2002))。更に、Ｎｕｄｉｘドメインを持つＴＲＰＭ２変異体は過酸化水素によっても活性化される。このＴＲＰＭ２変異体は広く発現されるので、酸化ストレスに応答しての壊死及びアポトーシスにおいてより一般的な役割を担っている(Hara等, Mol. Cell., 9(1):163-73 (2002))。
標的突然変異又はジーントラップ突然変異を株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ-由来胚性幹(ＥＳ)細胞において生じさせた。キメラマウスをＣ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスに交雑してＦ１ヘテロ接合体動物を産生した。これらの子孫を交雑させてＦ２野生型、ヘテロ接合体、及びホモ接合体突然変異子孫を産生した。極くたまに、例えばＦ１マウスがキメラからほとんど得られなかった場合に、Ｆ１ヘテロ接合マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交雑させ、交雑受精のための付加的なヘテロ接合動物を生じさせてＦ２マウスを産生せしめた。レベルＩ表現型分析をこの世代からのマウスについて実施した。標的遺伝子の野生型発現は胚性幹(ＥＳ)細胞と、ＲＴ-ＰＣＲによって試験された１９の成体組織試料のなかで、脾臓、肝臓、骨、胃、小腸及び大腸、皮膚線維芽細胞、前立腺、心臓、及び大動脈ツリーにおいて検出された。標的遺伝子の破壊はサザンハイブリダイゼーション分析法によって確認された。
wt        het      hom    合計
観察値      22        43       22      87
予想値      21.75     43.5     21.75   87
カイ二乗 = 0.01  有意性=0.99427  (hom/n) = 0.25  平均産仔数 = 0
【０３２８】
１．表現型分析（破壊された遺伝子：ＤＮＡ２２６６５９（ＵＮＱ５０７０））
（ａ）全体的な表現型の要約
雄(-/-)マウスは、その性別が一致した(+/+)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、減少した平均脊椎骨梁の骨体積、厚み、及び結合性密度及び減少した平均大腿中軸皮質の厚み及び断面積を示した。
（ｂ）骨代謝：放射線学的表現型分析
骨代謝の領域において、標的は、ここでは関節炎、骨粗鬆症、骨減少症及び大理石骨病の治療に対して同定し、並びに骨折治癒を促進する標的が同定される。試験には次のものが含まれる：
・大腿及び椎骨における骨塩量の測定のためのＤＥＸＡ
・骨梁及び皮質骨の双方の骨塩量の非常に高い解像度で非常に高い感度での測定のためのマイクロＣＴ。
Ｄｅｘａ分析−試験法の記述
手順：４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重エネルギーＸ線吸収測定法(ＤＥＸＡ)を成功裏に使用し、骨中の変化を同定した。麻酔した動物を検査し、骨塩量(ＢＭＣ)、ＢＭＣ／ＬＢＭ比、容積測定骨塩量(ｖＢＭＤ)、全身ＢＭＤ、大腿ＢＭＤ及び椎骨ＢＭＤを測定した。
Avertin(１．２５％の２,２,２-トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重)を腹腔内注射することにより、マウスを麻酔し、体長及び体重を測定し、ついでＤＥＸＡスキャンのためにPIXImusTMデンシトメータ(Lunar Inc.)の台にマウスを腹臥位で置いた。Lunar PIXImusソフトウェアを使用し、骨塩量(ＢＭＤ)及び脂肪組成(％脂肪)及び全組織量(ＴＴＭ)を関心領域(ＲＯＩ)[すなわち、全身、椎骨及び両大腿]で測定した。
【０３２９】
骨マイクロＣＴ分析
手順：
マイクロＣＴをまた使用して非常に高感度のＢＭＤ測定を得た。１つの椎骨と１つの大腿を、４匹の野生型及び８匹のホモ接合体マウスのコホートから取り出した。腰部の５つの椎骨梁体積、骨梁厚、結合密度、及び中軸大腿の全骨領域及び皮質厚の測定を行った。マイクロＣＴ４０スキャンにより、骨量及び構造の詳細な情報が得られた。複数の骨を試料ホルダーに配し、自動的にスキャンした。機器ソフトウェアを使用し、分析のための関心領域を選択した。骨梁パラメータを１６マイクロメーター解像度で第５腰椎(ＬＶ５)において分析し、皮質骨パラメータを２０マイクロメーターの解像度で大腿中軸において分析した。
マイクロＣＴ分析の結果：雄(-/-)マウスでは、その性別が一致した(+/+)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、平均した腰部の５つの椎骨梁の体積、数、厚み、及び結合密度に顕著な減少が示された。これらの変異体もまたその性別が一致した(+/+)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、平均大腿中軸皮質厚み及び断面積に顕著な減少が示された[分析したwt／het／hom：５／４／８]。
これらの結果は、ｈｕＴＲＰＭ２ポリペプチドをコードする遺伝子に欠失がある雄のノックアウト変異マウスが、密度の低下と場合によっては骨折に至る脆弱化を伴う骨量の減少によって特徴付けられる顕著な骨減少を伴う異常な骨代謝を示すことを裏付けている。よって、ｈｕＴＲＰＭ２ポリペプチド又はそのコード化遺伝子は骨ホメオスタシスの維持に有用であり、骨折治癒又は関節炎又は骨粗鬆症の治療に重要である一方；ｈｕＴＲＰＭ２に対するアンタゴニスト又はそのコード化遺伝子は、関節炎、骨粗鬆症及び骨減少症を含む異常な骨代謝に関連した炎症性疾患を含む異常な又は病理的な骨疾患に至らしめると思われる。
【０３３０】
Ｐ．ＤＮＡ８３５００-２５０６(ＵＮＱ８５２)遺伝子破壊を有するマウスの産生と分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ１８０１ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ８３５００-２５０６(ＵＮＱ８５２)と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：変異したマウス遺伝子は、ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿０２１３８０又はムスムスクルスインターロイキン２０（Ｉｌ２０）；タンパク質参照番号：ＮＰ＿０６７３５５又はインターロイキン２０；４ヘリックス束サイトカイン１０［ムスムスクルス]；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ ０１８７２４又はホモサピエンスインターロイキン２０（Ｉｌ２０）に対応；ヒトタンパク質配列は、参照番号：ＮＰ＿０６１１９４又はインターロイキン２０［ホモサピエンス］に対応。
これらの動物において変異された遺伝子はインターロイキン２０（Ｉｌ２０）であり、これはヒトＩＬ２０のオルソログである。別名には、ＩＬ-２０、ＩＬ１０Ｄ、ＺＣＹＴＯ１０、及び４アルファヘリックスサイトカインが含まれる。
ＩＬ２０はＩＬ１０ファミリー：ＩＬ１９、ＭＤＡ７、及びＩＬ１０（ＯＭＩＭ６０５６１９）の７つのメンバーに配列が最も近く関連している。ノーザンブロット実験は、その遺伝子が皮膚及び気管において発現されることを裏付けている。マウス中でのその遺伝子の過剰発現は新生児死亡並びに皮膚の異常を引き起こした。ＩＬ２０レセプター分子もまた皮膚で発現される。
ＩＬ２０はＩＬ１９及びＩＬ２４とレセプター複合体を共有することが報告されているが、リガンド-レセプター相互作用の生物学的結果は３種のサイトカインでは非常に異なっている。ＩＬ２０は造血を亢進させることが報告され、炎症性皮膚疾患の治療の標的として提案されている。
標的突然変異又はジーントラップ突然変異を株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ-由来胚性幹(ＥＳ)細胞において生じさせた。キメラマウスをＣ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスに交雑してＦ１ヘテロ接合体動物を産生した。これらの子孫を交雑させてＦ２野生型、ヘテロ接合体、及びホモ接合体突然変異子孫を産生した。極くたまに、例えばＦ１マウスがキメラからほとんど得られなかった場合に、Ｆ１ヘテロ接合マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交雑させ、交雑受精のための付加的なヘテロ接合動物を生じさせてＦ２マウスを産生せしめた。レベルＩ表現型分析をこの世代からのマウスについて実施した。標的遺伝子の野生型発現は胚性幹(ＥＳ)細胞と、ＲＴ-ＰＣＲによって試験された１９の成体組織試料のなかで、脾臓、肝臓、骨、胃、小腸及び大腸、皮膚線維芽細胞、前立腺、心臓、及び大動脈ツリーにおいて検出された。標的遺伝子の破壊はサザンハイブリダイゼーション分析法によって確認された。
wt        het      hom    合計
観察値      18        34        18      70
予想値      17.5      35        17.5    70
カイ二乗 = 0.06  有意性=0.97183  (hom/n) = 0.26  平均産仔数 = 8
【０３３１】
４１.１.１.表現型分析(破壊された遺伝子：ＤＮＡ８３５００-２５０６(ＵＮＱ８５２))
（ａ）全体的な表現型の要約
ヒトインターロイキン２０（ＩＬ-２０）のオルソログをコードする遺伝子の変異により、(-/-)マウスにおいて炎症応答の顕著な増加が生じた。標的破壊はサザンブロット法により確認した。
【０３３２】
（ｂ）免疫学的表現型分析
免疫関連及び炎症性疾患は、正常な生理では、傷害又は損傷に応答し、傷害又は損傷からの修復を開始し、外来生物に対して生得的及び獲得した防御を開始するかなり複雑でしばしば複数の相互に関連した生物学的経路の徴候又は結果である。疾患又は病態は、これらの正常な生理学的経路が、応答の強さに直接関連して、異常な調節又は過度の刺激の結果として、又は自己に対する反応として、又はこれらの組み合せとして、更なる傷害又は損傷を引き起こす場合に生じる。
これらの病気の起源はしばしば多段階経路及び多くの異なる生物学的システム／経路に関連しているが、これらの経路の一又は複数における重要な点への介入は、改善又は治療効果を有し得る。治療的介入は、有害なプロセス／経路への拮抗作用、又は有益なプロセス／経路の刺激により生じ得る。
Ｔリンパ球(Ｔ細胞)は哺乳動物の免疫反応における重要な成分である。Ｔ細胞は、主要組織適合複合体(ＭＨＣ)内の遺伝子によりコードされる自己分子に関連する抗原を認識する。抗原は、抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片等の表面上のＭＨＣ分子と共にディスプレイされうる。Ｔ細胞系は、宿主哺乳動物に対して健康への脅威をもたらすこれらの改変細胞を排除する。Ｔ細胞には、ヘルパーＴ細胞及び細胞傷害性Ｔ細胞が含まれる。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞上にある抗原-ＭＨＣ複合体の認識に続き、広範囲に増殖する。またヘルパーＴ細胞は、Ｂ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞及び免疫反応に関与する種々の他の細胞の活性化において中心的な役割を担っている様々なサイトカイン、すなわちリンホカインを分泌する。
多くの免疫反応では、炎症細胞が損傷又は感染の部位に浸潤する。遊走細胞は、罹患組織の組織学的検査により決定することができる、好中球、好酸球、単球又はリンパ球でありうる。Current Protocols in Immunology, John E. Coligan編, 1994, John Wiley & Sons, Inc。
多くの免疫介在性疾患が知られており、広く研究されている。このような疾患には、免疫媒介炎症性疾患(例えば、関節リウマチ、免疫媒介性腎疾患、胆肝汁性疾患、炎症性大腸炎(ＩＢＤ)、乾癬、及び喘息)、非免疫媒介炎症性疾患、感染症、免疫不全症、新生組織形成、及び移植片拒絶等が含まれる。
免疫学の領域において、炎症及び炎症性疾患の治療のために、標的をここで同定した。免疫関連疾患は免疫反応を抑制することにより治療することができる。免疫刺激活性を有する分子を阻害する中和抗体の使用は、免疫媒介性及び炎症性疾患の治療に有益である。免疫反応を阻害する分子を利用して（タンパク質を直接に又は抗体アゴニストの使用により）、免疫反応を阻害し、よって免疫関連疾患を改善することができる。
【０３３３】
ＤＳＳ誘導結腸炎：
雄の野生型及びホモ接合体(-/-)変異体マウスの双方に、３％のＤＳＳ（デキストラン硫酸ナトリウム）を飲料水に入れて０日から７日まで与えた。７日目に飲料水を通常の水に置き換えた。７日目と１４日目にマウスの体重を量り大腸を組織学的に分析した。ノックアウト(-/-)マウスは、その野生型同腹仔コントロール（１００％生存）と比較して７日目に顕著に生存率が減少した（６０％生存）。ノックアウト(-/-)マウスは（結腸炎症状を誘導する）ＤＳＳ投与に更に敏感であり、その性別が一致した同腹仔コントロールと比較して亢進した炎症応答性を示した。よって、ＰＲＯ１８０１ポリペプチド又はそのアゴニストは結腸炎又は炎症性腸障害において生じるような大腸の炎症症状の治癒過程において有用であろう。
【０３３４】
実施例１９：ハイブリダイゼーションプローブとしてのＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１の使用
以下の方法は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１をコードするヌクレオチド配列のハイブリダイゼーションプローブとしての使用を記述している。
ここに開示されている完全長又は成熟ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１をコードする配列を含むＤＮＡは、ヒト組織ｃＤＮＡライブラリー又はヒト組織ゲノムライブラリーの相同的なＤＮＡ（ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１の天然に生じる変異体をコードするもの等）のスクリーニングのためのプローブとして用いられる。
何れかのライブラリーＤＮＡを含むフィルターのハイブリダイゼーションと洗浄を、次の高緊縮性条件下で実施した。放射標識ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１誘導プローブのフィルターへのハイブリダイゼーションを、５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、０．１％ピロリン酸ナトリウム、５０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．８、２×デンハード液、及び１０％デキストラン硫酸の溶液中において４２℃で２０時間にわたって実施した。フィルターの洗浄は、０．１×ＳＳＣ及び０．１％ＳＤＳ水溶液中において４２℃で実施した。
ついで、全長天然配列ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１をコードするＤＮＡと所望の配列同一性を有するＤＮＡを、この分野で知られている標準的技術を用いて同定することができた。
【０３３５】
実施例２０：大腸菌中でのＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１の発現
この実施例は、大腸菌中における組み換え発現によるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１の非グリコシル化型の調製を例証する。
まず、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１をコード化するＤＮＡ配列を選択されたＰＣＲプライマーを利用して増幅した。このプライマーは、選択された発現ベクター上の制限酵素部位に対応する制限酵素部位を含まなければならない。様々な発現ベクターを使用することができる。適したベクターの例としては、アンピシリン及びテトラサイクリン耐性に対する遺伝子を含むｐＢＲ３２２（大腸菌由来；Bolivar等, Gene, 2:95 (1997)を参照のこと）がある。ベクターを制限酵素によって消化し、脱リン酸化した。ついで、ＰＣＲ増幅配列をベクターにライゲーションした。ベクターは好ましくは抗生物質耐性遺伝子、ｔｒｐプロモーター、ポリＨｉｓリーダー（最初の６つのＳＴＩＩコドン、ポリＨｉｓリーダー、及びエンテロキナーゼ切断部位を含む）、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１コード領域、ラムダ転写集結因子及びａｒｇＵ遺伝子をコードする配列を含む。
ついで、Sambrook等（上掲）に記載されている方法を用いて選択された大腸菌株を形質転換するために、このライゲーション混合物を利用した。形質転換体をＬＢ部レート上でのその成長能力によって同定し、ついで抗生物質耐性コロニーを選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、それを制限分析及びＤＮＡ配列決定によって確認することができた。
選択されたクローンを、抗生物質が補填されたＬＢブロスのような液体培地で一晩かけて成長させることができた。この一晩の培養を、次により大きなスケールでの培養を播種するために使用してもよい。そして細胞を所望の光学密度になるまで成長させ、その間に発現プロモーターが作用し始める。
更に数時間細胞を培養した後に、遠心分離によって細胞を収集することができる。遠心分離によって得られた細胞ペレットは、当該分野で公知の様々な薬剤を使用して可溶化でき、ついで溶解したＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１タンパク質を、タンパク質の堅固な結合を可能にする条件下において金属キレート化カラムを用いて精製することが可能である。
【０３３６】
以下の手法を用いて、ポリ-Ｈｉｓタグ形態でＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１を大腸菌で発現させてもよい。ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１をコードするＤＮＡを、選択したＰＣＲプライマーを用いて最初に増幅した。このプライマーは、選択された発現ベクターの制限酵素部位に対応する制限酵素部位、及び効率的で信頼性のある翻訳開始、金属キレートカラムでの迅速な精製、及びエンテロキナーゼでのタンパク質分解的除去を与える他の有用な配列を含む。ついで、ＰＣＲ増幅されたポリ-Ｈｉｓタグ配列を発現ベクターへライゲートさせ、これを株５２（W3110 fuhA(tonA) lon galE rpoHts(htpRts) clpP(lacIq)）に基づく大腸菌宿主の形質転換に使用した。形質転換体を、最初に５０ｍｇ／ｍｌのカルベニシリンを含有するＬＢ中で、３０℃で振盪しながら３〜５のＯ．Ｄ．６００に達するまで成長させた。ついで培養液をＣＲＡＰ培地（３．５７ｇの（ＮＨ４）２ＳＯ４、０．７１ｇのクエン酸ナトリウム・２Ｈ２Ｏ、１．０７ｇのＫＣｌ、５．３６ｇのＤｉｆｃｏ酵母抽出物、５００ｍＬ水中の５．３６ｇのSheffield hycase SF、並びに１１０ｍＭのＭＰＯＳ、ｐＨ７．３、０．５５％（ｗ／ｖ）のグルコース及び７ｍMのＭｇＳＯ４の混合で調製）中にて５０〜１００倍希釈し、３０℃で振盪によって約２０〜３０時間成長させた。ＳＤＳ-ＰＡＧＥにより発現を確認するために試料を取り出し、細胞がペレットとなるようにバルク培地を遠心分離した。精製及びリフォールディング（再折り畳み）まで、細胞ペレットを凍結させた。
【０３３７】
０．５から１Ｌの発酵（６〜１０ｇペレット）からの大腸菌ペーストを、７Ｍのグアニジン、２０ｍＭのトリス、ｐＨ８バッファー中で１０容量（ｗ／ｖ）で再懸濁させた。固体硫酸ナトリウム及びテトラチオン酸ナトリウムを添加して最終濃度を各々０．１Ｍ及び０．０２Ｍとし、溶液を４℃で終夜撹拌した。この工程により、すべてのシステイン残基が亜硫酸によりブロックされた変性タンパク質が生じる。溶液をBeckman Ultracentrifuge中で４０，０００ｒｐｍで３０分間濃縮した。上清を金属キレートカラムバッファー（６Ｍのグアニジン、２０ｍＭのトリス、ｐＨ７．４）の３−５容量で希釈し、透明にするために０．２２ミクロンフィルターを通して濾過する。透明抽出物を、金属キレートカラムバッファーで平衡化させた５ｍｌのQiagen Ｎｉ-ＮＴＡ金属キレートカラムに負荷した。カラムを５０ｍＭのイミダゾール（Calbiochem, Utrol grade）を含む添加バッファー、ｐＨ７．４で洗浄した。タンパク質を２５０ｍＭのイミダゾールを含有するバッファーで溶離した。所望のタンパク質を含有する画分をプールし、４℃で保存した。タンパク質濃度は、そのアミノ酸配列に基づいて計算した吸光係数を用いて２８０ｎｍにおけるその吸収により見積もった。
試料を２０ｍＭのトリス、ｐＨ８．６、０．３ＭのＮａＣｌ、２．５Ｍの尿素、５ｍＭのシステイン、２０ｍＭのグリシン及び１ｍＭのＥＤＴＡからなる新たに調製した再生バッファー中で徐々に希釈することによって、タンパク質を再生させた。リフォールディング容量は、最終的なタンパク質濃度が５０〜１００μｇ／ｍｌとなるように選択した。リフォールディング溶液を４℃で１２〜３６時間ゆっくりと撹拌した。リフォールディング反応はＴＦＡを採取濃度０．４％（約３のｐＨ）で添加することにより停止させた。タンパク質をさらに精製する前に、溶液を０．２２ミクロンフィルターを通して濾過し、アセトニトリルを最終濃度２−１０％で添加した。再生したタンパク質を、Ｐｏｒｏｓ Ｒ1／H逆相カラムで、０．１％ＴＦＡの移動バッファーと１０〜８０％のアセトニトリル勾配での溶離を用いてクロマトグラフにかけた。Ａ２８０吸収を持つ画分のアリコートをＳＤＳポリアクリルアミドゲルで分析し、相同な再生タンパク質を含有する画分をプールした。一般的に、殆どの正しく再生したタンパク質種は、これらの種が最もコンパクトであり、その疎水性内面が逆相樹脂との相互作用から遮蔽されているので、アセトニトリルの最低濃度で溶離される。凝集した種は通常、より高いアセトニトリル濃度で溶離される。誤って再生したタンパク質を所望の形態から除くのに加えて、逆相工程は試料からエンドトキシンも除去する。
所望の再生したＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを含有する画分をプールし、溶液に向けた窒素の弱い気流を用いてアセトニトリルを除去した。タンパク質を、透析又は調製バッファーで平衡化したG25 Superfine（Pharmacia）樹脂でのゲル濾過及び滅菌濾過により、０．１４Ｍの塩化ナトリウム及び４％のマンニトールを含む２０ｍＭのＨｅｐｅｓ、ｐＨ６．８に調製した。
【０３３８】
実施例２１：哺乳動物細胞におけるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１の発現
この実施例は、哺乳動物細胞における組み換え発現による潜在的にグリコシル化した形態のＰＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１の調製を例証する。
発現ベクターとしてベクターｐＲＫ５（1989年3月15日公開のEP307,247参照）を用いた。場合によっては、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ ＤＮＡを選択した制限酵素を持つｐＲＫ５に結合させ、上記のSambrook等に記載されたようなライゲーション方法を用いてＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ＤＮＡを挿入させる。得られたベクターは、ｐＲＫ５-ＰＲＯ２２４、ｐＲＫ５-ＰＲＯ９７８３、ｐＲＫ５-ＰＲＯ１１０８、ｐＲＫ５-ＰＲＯ３４０００、ｐＲＫ５-ＰＲＯ２４０、ｐＲＫ５-ＰＲＯ９４３、ｐＲＫ５-ｈｕＡ３３、ｐＲＫ５-ＰＲＯ２３０、ｐＲＫ５-ＰＲＯ１７８、ｐＲＫ５-ＰＲＯ１１９９、ｐＲＫ５-ＰＲＯ４３３３、ｐＲＫ５-ＰＲＯ１３３６、ｐＲＫ５-ＰＲＯ１９５９８、ｐＲＫ５-ＰＲＯ１０８３、ｐＲＫ５-ｈｕＴＲＰＭ２又はｐＲＫ５-ＰＲＯ１８０１と呼ばれる。
一実施態様では、選択された宿主細胞は２９３細胞とすることができる。ヒト２９３細胞（ATCC CCL 1573）は、ウシ胎児血清及び場合によっては滋養成分及び／又は抗生物質を添加したＤＭＥＭなどの培地中で組織培養プレートにおいて成長させて集密化した。約１０μｇのｐＲＫ５-ＰＲＯ２２４、ｐＲＫ５-ＰＲＯ９７８３、ｐＲＫ５-ＰＲＯ１１０８、ｐＲＫ５-ＰＲＯ３４０００、ｐＲＫ５-ＰＲＯ２４０、ｐＲＫ５-ＰＲＯ９４３、ｐＲＫ５-ｈｕＡ３３、ｐＲＫ５-ＰＲＯ２３０、ｐＲＫ５-ＰＲＯ１７８、ｐＲＫ５-ＰＲＯ１１９９、ｐＲＫ５-ＰＲＯ４３３３、ｐＲＫ５-ＰＲＯ１３３６、ｐＲＫ５-ＰＲＯ１９５９８、ｐＲＫ５-ＰＲＯ１０８３、ｐＲＫ５-ｈｕＴＲＰＭ２又はｐＲＫ５-ＰＲＯ１８０１ＤＮＡを約１μgのＶＡ ＲＮＡ遺伝子コード化ＤＮＡ［Thimmappaya等, Cell, 31:543 (1982))］と混合し、5００μｌの１ｍＭ トリス-ＨＣｌ、０．１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．２２７Ｍ ＣａＣｌ２に溶解させた。この混合物に、滴状の５００μｌの５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３５）、２８０ｍＭ ＮａＣｌ、１．５ｍＭ ＮａＰＯ４を添加し、２５℃で１０分間析出物を形成させた。析出物を懸濁し、２９３細胞に加えて３７℃で約４時間定着させた。培地を吸引し、２ｍｌのＰＢＳ中２０％グリセロールを３０秒間添加した。２９３細胞は、ついで無血清培地で洗浄し、新鮮な培地を添加し、細胞を約５日間インキュベートした。
トランスフェクションの約２４時間後、培地を除去し、培地（のみ）又は２００μＣｉ／ｍｌ３５Ｓ-システイン及び２００μＣｉ／ｍｌ３５Ｓ-メチオニンを含む培地で置換した。１２時間のインキュベーションの後、条件培地を収集し、スピンフィルターで濃縮し、１５％ＳＤＳゲルに添加した。処理したゲルを乾燥させ、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの存在を現す選択された時間にわたってフィルムにさらした。形質転換した細胞を含む培地に、更なるインキュベーションを施し（無血清培地で）、培地を選択されたバイオアッセイで試験した。
【０３３９】
これに換わる技術において、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１は、Somparyac等, Proc. Natl. Acad. Sci., 12:7575 (1981)に記載されたデキストラン硫酸法を用いて２９３細胞に一過的に導入される。２９３細胞は、スピナーフラスコ内で最大密度まで成長させ、７００μｇのｐＲＫ５-ＰＲＯ２２４、ｐＲＫ５-ＰＲＯ９７８３、ｐＲＫ５-ＰＲＯ１１０８、ｐＲＫ５-ＰＲＯ３４０００、ｐＲＫ５-ＰＲＯ２４０、ｐＲＫ５-ＰＲＯ９４３、ｐＲＫ５-ｈｕＡ３３、ｐＲＫ５-ＰＲＯ２３０、ｐＲＫ５-ＰＲＯ１７８、ｐＲＫ５-ＰＲＯ１１９９、ｐＲＫ５-ＰＲＯ４３３３、ｐＲＫ５-ＰＲＯ１３３６、ｐＲＫ５-ＰＲＯ１９５９８、ｐＲＫ５-ＰＲＯ１０８３、ｐＲＫ５-ｈｕＴＲＰＭ２又はｐＲＫ５-ＰＲＯ１８０１ＤＮＡを添加する。細胞は、まずスピナーフラスコから遠心分離によって濃縮し、ＰＢＳで洗浄した。ＤＮＡ-デキストラン沈殿物を細胞ペレット上で４時間インキュベートした。細胞を２０％グリセロールで９０秒間処理し、組織培地で洗浄し、組織培地、５μｇ／ｍｌウシインシュリン及び０．１μｇ／ｍｌウシトランスフェリンを含むスピナーフラスコに再度導入した。約４日後に、条件培地を遠心分離して濾過し、細胞及び細胞片を除去した。ついで発現したＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１を含む試料を、透析及び／又はカラムクロマトグラフィー等の選択した方法によって濃縮し精製することが可能である。
他の実施態様では、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１をＣＨＯ細胞で発現させることができる。ｐＲＫ５-ＰＲＯ２２４、ｐＲＫ５-ＰＲＯ９７８３、ｐＲＫ５-ＰＲＯ１１０８、ｐＲＫ５-ＰＲＯ３４０００、ｐＲＫ５-ＰＲＯ２４０、ｐＲＫ５-ＰＲＯ９４３、ｐＲＫ５-ｈｕＡ３３、ｐＲＫ５-ＰＲＯ２３０、ｐＲＫ５-ＰＲＯ１７８、ｐＲＫ５-ＰＲＯ１１９９、ｐＲＫ５-ＰＲＯ４３３３、ｐＲＫ５-ＰＲＯ１３３６、ｐＲＫ５-ＰＲＯ１９５９８、ｐＲＫ５-ＰＲＯ１０８３、ｐＲＫ５-ｈｕＴＲＰＭ２又はｐＲＫ５-ＰＲＯ１８０１は、ＣａＰＯ４又はＤＥＡＥ−デキストランなどの公知の試薬を用いてＣＨＯ細胞にトランスフェクションすることができる。上記したように、細胞培地をインキュベートし、培地を培養培地（のみ）又は３５Ｓ-メチオニン等の放射性標識を含む培地に置換することができる。ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの存在を同定した後、培地を無血清培地に置換してもよい。好ましくは、培地を約６日間インキュベートし、ついで条件培地を収集する。ついで、発現したＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１を含む培地を、任意の選択した方法によって濃縮し精製することができる。
【０３４０】
また、エピトープタグＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１は、宿主ＣＨＯ細胞において発現させてもよい。ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１はｐＲＫ５ベクターからサブクローニングしてもよい。サブクローン挿入物は、ＰＣＲを施してバキュロウィルス発現ベクター中のポリ-ｈｉｓタグ等の選択されたエピトープタグを持つ枠に融合できる。ついで、ポリ-ｈｉｓタグＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１挿入物は、安定なクローンの選択のためのＤＨＦＲ等の選択マーカーを含むＳＶ４０プロモーター／エンハンサー含有ベクターにサブクローニングできる。最後に、ＣＨＯ細胞をＳＶ４０プロモーター／エンハンサー含有ベクターで（上記のように）トランスフェクションした。発現を確認するために、上記のように標識化を行ってもよい。発現されたポリ-ｈｉｓタグＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１を含む培地は、ついで濃縮し、Ｎｉ２＋-キレートアフィニティクロマトグラフィー等の選択された方法により精製できる。
またＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１は、一過性発現法によりＣＨＯ及び／又はＣＯＳ細胞で、他の安定な発現方法によりＣＨＯ細胞で発現させてもよい。
ＣＨＯ細胞における安定な発現は以下の方法を用いて実施された。タンパク質は、それぞれのタンパク質の可溶化形態のコード配列（例えば、細胞外ドメイン）がＩｇＧ１のヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ２ドメインを含む定常領域配列に融合したＩｇＧ作成物（イムノアドヘシン）、又はポリ-Ｈｉｓタグ形態として発現された。
【０３４１】
ＰＣＲ増幅に続いて、対応するＤＮＡを、Ausubel等, Current Protocols of Molecular Biology, Unit 3.16, John Wiley and Sons (1997)に記載されたような標準的技術を用いてＣＨＯ発現ベクターにサブクローニングした。ＣＨＯ発現ベクターは、対象とするＤＮＡの５’及び３’に適合する制限部位を有し、ｃＤＮＡの便利なシャトル化ができるように作成される。ベクターは、Lucas等, Nucl. Acids Res. 24: 9, 1774-1779 (1996)に記載されたようにＣＨＯ細胞での発現を用い、対象とするｃＤＮＡ及びジヒドロフォレートレダクターゼ（ＤＨＦＲ）の発現の制御にＳＶ４０初期プロモーター／エンハンサーを用いる。ＤＨＦＲ発現は、トランスフェクションに続くプラスミドの安定な維持のための選択を可能にする。
所望のプラスミドＤＮＡの１２マイクログラムを、市販のトランスフェクション試薬Superfect(登録商標)（Quiagen）、Dosper(登録商標)及びFugene(登録商標)（Boehringer Mannheim）約１千万のＣＨＯ細胞に導入する。細胞は、上記のLucas等に記載されているように成長させた。約３×１０７細胞を、下記のような更なる成長及び生産のためにアンプル中で凍結させた。
プラスミドＤＮＡを含むアンプルを水槽に配して解凍し、ボルテックスにより混合した。内容物を１０ｍＬの媒質を含む遠心管にピペットして、１０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上清を吸引して細胞を１０ｍＬの選択培地（０．２μｍ濾過ＰＳ２０、５％の０．２μｍ透析濾過ウシ胎児血清を添加）中に懸濁させた。ついで細胞を９０ｍＬの選択培地を含む１００ｍＬスピナーに分ける。１〜２日後、細胞を１５０ｍＬの選択培地を満たした２５０ｍＬスピナーに移し、３７℃でインキュベートする。さらに２〜３日後、２５０ｍＬ、５００ｍＬ及び２０００ｍＬのスピナーを３×１０５細胞／ｍＬで播種した。細胞培地を遠心分離により新鮮培地に交換し、生産培地に再懸濁させた。任意の適切なＣＨＯ培地を用いてもよいが、実際には１９９２年６月１６日に発行された米国特許第５１２２４６９号に記載された生産培地を使用した。３Ｌの生産スピナーを１．２×１０６細胞／ｍＬで播種した。０日目に、ｐＨを測定した。１日目に、スピナーをサンプルし、濾過空気での散布を実施した。２日目に、スピナーをサンプルし、温度を３３℃に変え、３０ｍＬの５００ｇ／Ｌのグルコース及び０．６ｍＬの１０％消泡剤（例えば３５％ポリジメチルシロキサンエマルション、Dow Corning 365 Medical Grade Emulsion）をとった。生産を通して、ｐＨは７．２近傍に調節し維持した。１０日後、又は生存率が７０％を下回るまで、細胞培地を遠心分離で収集して０．２２μｍフィルターを通して濾過した。濾過物は、４℃で貯蔵するか、即座に精製用カラムに充填した。
【０３４２】
ポリ-Ｈｉｓタグ作成物に関して、タンパク質をＮｉ-ＮＴＡカラム（Qiagen）を用いて精製した。精製の前に、イミダゾールを条件培地に５ｍＭの濃度まで添加した。条件培地を、０．３ＭのＮａＣｌ及び５ｍＭイミダゾールを含む２０ｍＭのＨｅｐｅｓ、ｐＨ７．４バッファーで平衡化した６ｍｌのＮｉ−ＮＴＡカラムへ４−５ｍｌ／分の流速によって４℃でポンプ供給した。充填後、カラムをさらに平衡バッファーで洗浄し、タンパク質を０．２５Ｍイミダゾールを含む平衡バッファーで溶離した。高度に精製されたタンパク質は、続いて１０ｍＭのHepes、０．１４ＭのＮａＣｌ及び４％のマンニトール，ｐＨ６．８を含む貯蔵バッファー中で２５ｍｌのＧ２５Superfine（Pharmacia）を用いて脱塩し、−８０℃で貯蔵した。
イムノアドヘシン（Ｆｃ含有）作成物を、以下通りに条件培地から精製した。条件培地を、２０ｍＭのリン酸ナトリウムバッファー、ｐＨ６．８で平衡化した５ｍｌのプロテインＡカラム（Pharmacia）へポンプ注入した。充填後、カラムを平衡バッファーで強く洗浄した後、１００ｍＭのクエン酸，ｐＨ３．５で溶離した。溶離したタンパク質は、１ｍｌの画分を２７５μＬの１Ｍトリスバッファー，ｐＨ９を含む管に収集することにより即座に中性化した。高度に精製されたタンパク質は、続いてポリ-Ｈｉｓタグタンパク質について上記した貯蔵バッファー中で脱塩した。均一性はＳＤＳポリアクリルアミドゲルとエドマン（Edman）分解によるＮ-末端アミノ酸配列決定により評価した。
【０３４３】
実施例２２：酵母菌でのＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１の発現
以下の方法は、酵母菌中でのＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１の組換え発現を記載する。
第一に、ＡＤＨ２／ＧＡＰＤＨプロモーターからのＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１の細胞内生産又は分泌のための酵母菌発現ベクターを作成する。ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１をコードするＤＮＡ及びプロモーターを選択したプラスミドの適当な制限酵素部位に挿入してＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１の細胞内発現を指示する。分泌のために、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１をコードするＤＮＡを選択したプラスミドに、ＡＤＨ２／ＧＡＰＤＨプロモーターをコードするＤＮＡ、天然ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１シグナルペプチド又は他の哺乳動物シグナルペプチド、又は、例えば酵母菌α因子又はインベルターゼ分泌シグナル／リーダー配列、及び（必要ならば）ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１の発現のためのリンカー配列とともにクローニングすることができる。
酵母菌株ＡＢ１１０等の酵母菌は、ついで上記の発現プラスミドで形質転換し、選択された発酵培地中で培養できる。形質転換した酵母菌上清は、１０％トリクロロ酢酸での沈降及びＳＤＳ−ＰＡＧＥによる分離で分析し、ついでクマシーブルー染色でゲルの染色をすることができる。
続いて組換えＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１は、発酵培地から遠心分離により酵母菌細胞を除去し、ついで選択されたカートリッジフィルターを用いて培地を濃縮することによって単離及び精製できる。ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１を含む濃縮物は、選択されたカラムクロマトグラフィー樹脂を用いてさらに精製してもよい。
【０３４４】
実施例２３：バキュロウィルス感染昆虫細胞でのＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１の発現
以下の方法は、バキュロウィルス感染昆虫細胞中におけるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１の組換え発現を記載する。
ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１をコードする配列を、バキュロウィルス発現ベクターに含まれるエピトープタグの上流に融合させた。このようなエピトープタグは、ポリ-ｈｉｓタグ及び免疫グロブリンタグ（ＩｇＧのＦｃ領域など）を含む。ｐＶＬ１３９３（Navagen）などの市販されているプラスミドから誘導されるプラスミドを含む種々のプラスミドを用いることができる。簡単には、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１又はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１コード配列の所定部分、例えば膜貫通タンパク質の細胞外ドメインをコードする配列又はタンパク質が細胞外である場合の成熟タンパク質をコードする配列などが、５’及び３’領域に相補的なプライマーでのＰＣＲにより増幅される。５’プライマーは、隣接する（選択された）制限酵素部位を包含していてもよい。生産物は、ついで、選択された制限酵素で消化され、発現ベクターにサブクローニングされる。
組換えバキュロウィルスは、上記のプラスミド及びBaculoGold(商品名)ウィルスＤＮＡ（Pharmingen）を、Spodoptera frugiperda（「Ｓｆ９」）細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １７１１）中にリポフェクチン（GIBCO-BRLから市販）を用いて同時トランスフェクションすることにより作成される。２８℃で４〜５日インキュベートした後、放出されたウィルスを収集し、更なる増幅に用いた。ウィルス感染及びタンパク質発現は、O'Reilley等, Baculovirus expression vectors: A laboratory Manual, Oxford: Oxford University Press (1994)に記載されているように実施した。
【０３４５】
次に、発現されたポリ-ｈｉｓタグＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１は、例えばＮｉ２＋-キレートアフィニティクロマトグラフィーにより次のように精製される。抽出は、Rupert等, Nature, 362:175-179 (1993)に記載されているように、ウィルス感染した組み換えＳｆ９細胞から調製した。簡単には、Ｓｆ９細胞を洗浄し、超音波処理用バッファー（２５ｍＬのＨｅｐｅｓ、ｐＨ７．９；１２．５ｍＭのＭｇＣｌ２；０．１ｍＭ ＥＤＴＡ；１０％グリセロール；０．１％のＮＰ−４０；０．４ＭのＫＣｌ）中に再懸濁し、氷上で２回２０秒間超音波処理した。超音波処理物を遠心分離で透明化し、上清を負荷バッファー（５０ｍＭリン酸塩、３００ｍＭのＮａＣｌ、１０％グリセロール、ｐＨ７．８）で５０倍希釈し、０．４５μｍフィルターで濾過した。Ｎｉ２＋-ＮＴＡアガロースカラム（Qiagenから市販）を５ｍＬの総容積で調製し、２５ｍＬの水で洗浄し、２５ｍＬの負荷バッファーで平衡させた。濾過した細胞抽出物は、毎分０．５ｍＬでカラムに負荷した。カラムを、分画収集が始まる点であるＡ２８０のベースラインまで負荷バッファーで洗浄した。次に、カラムを、結合タンパク質を非特異的に溶離する二次洗浄バッファー（５０ｍＭリン酸塩；３００ｍＭのＮａＣｌ、１０％グリセロール、ｐＨ６．０）で洗浄した。Ａ２８０のベースラインに再度到達した後、カラムを二次洗浄バッファー中で０から５００ｍＭイミダゾール勾配で展開した。１ｍＬの分画を収集し、ＳＤＳ-ＰＡＧＥ及び銀染色又はアルカリホスファターゼ（Qiagen）に複合したＮｉ２＋-ＮＴＡでのウェスタンブロットで分析した。溶離したＨｉｓ１０-タグＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１を含む画分をプールして負荷バッファーで透析した。
あるいは、ＩｇＧタグ（又はＦｃタグ）ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１の精製は、例えば、プロテインＡ又はプロテインＧカラムクロマトグラフィーを含む公知のクロマトグラフィー技術を用いて実施できる。
【０３４６】
実施例２４：ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドに結合する抗体の調製
この実施例は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１に特異的に結合できるモノクローナル抗体の調製を例示する。
モノクローナル抗体の生産のための技術は、この分野で知られており、例えば、上記のGodingに記載されている。用いられ得る免疫原は、精製されたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを含む融合タンパク質、細胞表面に組換えＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを発現する細胞を含む。免疫原の選択は、当業者が過度の実験をすることなくなすことができる。
Ｂａｌｂ／ｃ等のマウスを、完全フロイントアジュバントに乳化して皮下又は腹腔内に１−１００マイクログラムで注入したＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１免疫原で免疫化する。あるいは、免疫原をＭＰＬ−ＴＤＭアジュバント（Ribi Immunochemical Researh, ハミルトン, モンタナ）に乳化し、動物の後足蹠に注入してもよい。免疫化したマウスは、ついで１０から１２日後に、選択したアジュバント中に乳化した付加的免疫源で追加免疫する。その後、数週間、マウスをさらなる免疫化注射で追加免疫する。抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１抗体の検出のためのＥＬＩＳＡアッセイで試験するために、レトロオービタル出血からの血清試料をマウスから周期的に採取してもよい。
適当な抗体力価が検出された後、抗体に「ポジティブ（陽性）」な動物に、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１静脈内注射の最後の注入をすることができる。３から４日後、マウスを屠殺し、脾臓細胞を取り出した。ついで脾臓細胞を（３５％ポリエチレングリコールを用いて）、ＡＴＣＣから番号ＣＲＬ１５９７で入手可能なＰ３Ｘ６３ＡｇＵ．１等の選択されたマウス骨髄腫株化細胞に融合させた。融合によりハイブリドーマ細胞が生成され、ついで、ＨＡＴ（ヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジン）培地を含む９６ウェル組織培養プレートに蒔き、非融合細胞、骨髄腫ハイブリッド、及び脾臓細胞ハイブリッドの増殖を阻害した。
ハイブリドーマ細胞は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１に対する反応性についてのＥＬＩＳＡでスクリーニングされる。ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１に対する所望のモノクローナル抗体を分泌する「ポジティブ（陽性）」ハイブリドーマ細胞の決定は、技術常識の範囲内である。
陽性ハイブリドーマ細胞を同系のＢａｌｂ／ｃマウスに腹腔内注入し、抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１モノクローナル抗体を含む腹水を生成させる。あるいは、ハイブリドーマ細胞を、組織培養フラスコ又はローラーボトルで成長させることもできる。腹水中に生成されたモノクローナル抗体の精製は、硫酸アンモニウム沈降、それに続くゲル排除クロマトグラフィ−を用いて行うことができる。あるいは、抗体のプロテインＡ又はプロテインＧへの親和性に基づくアフィニティクロマトグラフィーを用いることもできる。
【０３４７】
実施例２５：特異的抗体を用いたＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの精製
天然又は組換えＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドは、この分野の種々の標準的なタンパク質精製方法によって精製できる。例えば、プロ-ＰＲＯ２２４、プロ-ＰＲＯ９７８３、プロ-ＰＲＯ１１０８、プロ-ＰＲＯ３４０００、プロ-ＰＲＯ２４０、プロ-ＰＲＯ９４３、プロ-ｈｕＡ３３、プロ-ＰＲＯ２３０、プロ-ＰＲＯ１７８、プロ-ＰＲＯ１１９９、プロ-ＰＲＯ４３３３、プロ-ＰＲＯ１３３６、プロ-ＰＲＯ１９５９８、プロ-ＰＲＯ１０８３、プロ-ｈｕＴＲＰＭ２又はプロ-ＰＲＯ１８０１ポリペプチド、又はプレ-ＰＲＯ２２４、プレ-ＰＲＯ９７８３、プレ-ＰＲＯ１１０８、プレ-ＰＲＯ３４０００、プレ-ＰＲＯ２４０、プレ-ＰＲＯ９４３、プレ-ｈｕＡ３３、プレ-ＰＲＯ２３０、プレ-ＰＲＯ１７８、プレ-ＰＲＯ１１９９、プレ-ＰＲＯ４３３３、プレ-ＰＲＯ１３３６、プレ-ＰＲＯ１９５９８、プレ-ＰＲＯ１０８３、プレ-ｈｕＴＲＰＭ２又はプレ-ＰＲＯ１８０１ポリペプチドは、対象とするＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドに特異的な抗体を用いた免疫親和性クロマトグラフィーによって精製される。一般に、免疫親和性カラムは抗ＰＲＯ２２４、抗ＰＲＯ９７８３、抗ＰＲＯ１１０８、抗ＰＲＯ３４０００、抗ＰＲＯ２４０、抗ＰＲＯ９４３、抗ｈｕＡ３３、抗ＰＲＯ２３０、抗ＰＲＯ１７８、抗ＰＲＯ１１９９、抗ＰＲＯ４３３３、抗ＰＲＯ１３３６、抗ＰＲＯ１９５９８、抗ＰＲＯ１０８３、抗ｈｕＴＲＰＭ２又は抗ＰＲＯ１８０１ポリペプチド抗体を活性化クロマトグラフィー樹脂に共有結合させて作成される。
ポリクローナル免疫グロブリンは、硫酸アンモニウムでの沈殿又は固定化プロテインＡ（Pharmacia LKB Biotechnology, Piscataway, N.J.）での精製のいずれかにより免疫血清から調製される。同様に、モノクローナル抗体は、硫酸アンモニウム沈殿又は固定化プロテインＡでのクロマトグラフィーによりマウス腹水液から調製される。部分的に精製された免疫グロブリンは、ＣｎＢｒ-活性化セファロース(商品名)（Pharmacia LKB Biotechnology）等のクロマトグラフィー樹脂に共有結合される。抗体が樹脂に結合され、樹脂がブロックされ、誘導体樹脂は製造者の指示に従って洗浄される。
このような免疫親和性カラムは、可溶化形態のＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドを含有する細胞からの画分を調製することによるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの精製において利用される。この調製物は、洗浄剤の添加又はこの分野で公知の方法により微分遠心分離を介して得られる全細胞又は細胞成分画分の可溶化により誘導される。あるいは、シグナル配列を含む可溶化ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドは、細胞が成長する培地中に有用な量で分泌される。
可溶化ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド含有調製物は、免疫親和性カラムを通され、カラムはＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの好ましい吸着をさせる条件下（例えば、洗浄剤存在下の高イオン強度バッファー）で洗浄される。ついで、カラムは、抗体／ＰＲＯ２２４、抗体／ＰＲＯ９７８３、抗体／ＰＲＯ１１０８、抗体／ＰＲＯ３４０００、抗体／ＰＲＯ２４０、抗体／ＰＲＯ９４３、抗体／ｈｕＡ３３、抗体／ＰＲＯ２３０、抗体／ＰＲＯ１７８、抗体／ＰＲＯ１１９９、抗体／ＰＲＯ４３３３、抗体／ＰＲＯ１３３６、抗体／ＰＲＯ１９５９８、抗体／ＰＲＯ１０８３、抗体／ｈｕＴＲＰＭ２又は抗体／ＰＲＯ１８０１ポリペプチド結合を分解する条件下（例えば、約２〜３といった低ｐＨ、高濃度の尿素又はチオシアン酸イオン等のカオトロープ）で溶離され、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドが収集される。
【０３４８】
実施例２６：薬物スクリーニング
本発明は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド又はその結合断片を種々の薬物スクリーニング技術において使用することによる化合物のスクリーニングとって特に有用である。そのような試験に用いられるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド又は断片は、溶液中の自由状態でも、固体支持体に固定されても、細胞表面に担持されていても、或いは細胞内に位置していてもよい。薬剤スクリーニングの一つの方法では、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド又は断片を発現する組換え核酸で安定にトランスフェクションされる真核生物又は原核生物宿主細胞を利用する。薬剤は、そのようなトランスフェクション細胞に対して、競合的結合アッセイによってスクリーニングされる。生存可能又は固定化形態のいずれかによって、このような細胞は標準的な結合アッセイで使用できる。例えば、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド又は断片と試験される試薬の間での複合体の形成を測定してよい。あるいは、試験する試薬によって生ずるＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドとその標的細胞との間の複合体形成における減少を試験することもできる。
従って、本発明は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド関連疾患又は障害に影響を与えうる薬剤又は任意の他の試薬のスクリーニング方法を提供する。これらの方法は、その試薬をＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド又は断片に接触させ、（ｉ）試薬とＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド又は断片との間の複合体の存在について、又は（ｉｉ）ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド又は断片と細胞との間の複合体の存在について、検定することを含む。これらの競合結合アッセイでは、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド又は断片が典型的には標識される。適切なインキュベーションの後、自由なＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド又は断片を結合形態のものから分離し、自由又は未複合の標識の量が、特定の試薬がＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドに結合する又はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド／細胞複合体を阻害する能力の尺度となる。
【０３４９】
薬剤スクリーニングのための他の技術は、ポリペプチドに対して適当な結合親和性を持つ化合物についての高スループットスクリーニングを提供し、1984年9月13日に公開されたＷＯ84/03564に詳細に記載されている。簡単に述べれば、多数の異なる小型ペプチド試験化合物が、プラスチックピン等の固体支持体又は幾つかの他の表面上で合成される。ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドに適用すると、ペプチド試験化合物はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドと反応して洗浄される。結合したＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドはこの分野で良く知られた方法により検出される。精製したＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドは、上記の薬剤スクリーニング技術に使用するためにプレート上に直接被覆することもできる。さらに、非中和抗体は、ペプチドを捕捉し、それを固体支持体上に固定化するのに使用できる。
また、本発明は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドに結合可能な中和抗体がＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド又はその断片について試験化合物と特異的に競合する競合薬剤スクリーニングアッセイも考慮する。この方法において、抗体は、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドで、一つ又は複数の抗原決定基を持つ任意のペプチドの存在を検出するのに使用できる。
【０３５０】
実施例２７：合理的薬物設計
合理的薬物設計の目的は、対象とする生物学的活性ポリペプチド（例えば、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド）又はそれらが相互作用する小分子、例えばアゴニスト、アンタゴニスト、又はインヒビターの構造的類似物を製造することである。これらの例の任意のものが、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドのより活性で安定な形態又はインビボでＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドに機能を促進又は阻害する薬物の創作に使用できる（参考、Hodgson, Bio/Technology, 9: 19-21 (1991)）。
一つの方法において、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド、又はＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド-インヒビター複合体の三次元構造が、ｘ線結晶学により、コンピュータモデル化により、最も典型的には二つの方法の組み合わせにより決定される。分子の構造を解明し活性部位を決定するためには、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの形状及び電荷の両方が確認されなければならない。数は少ないが、ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドの構造に関する有用な情報が相同タンパク質の構造に基づいたモデル化によって得られることもある。両方の場合において、関連する構造情報は、類似ＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチド様分子の設計又は効果的なインヒビターの同定に使用される。合理的な薬剤設計の有用な例は、Braxton及びWells, Biochemistry, 31:7796-7801 (1992)に示されているような向上した活性又は安定性を持つ分子、又はAthauda等, J. Biochem., 113:742-746 (1993)に示されているような天然ペプチドのインヒビター、アゴニスト、又はアンタゴニストとして作用する分子を含む。
また、上記のような機能アッセイによって選択された標的特異的な抗体を単離しその結晶構造を解明することもできる。この方法は、原理的には、それに続く薬剤設計が基礎をおくことのできるファーマコア(pharmacore)を生成する。機能的な薬理学的に活性な抗体に対する抗-イディオタイプ抗体（抗-ｉｄｓ）を生成することにより、タンパク質結晶学をバイパスすることができる。鏡像の鏡像として、抗-ｉｄｓの結合部位は最初のレセプターの類似物であると予測できる。抗-ｉｄは、ついで、化学的又は生物学的に製造したペプチドのバンクからペプチドを同定及び単離するのに使用できる。単離されたペプチドは、ファーマコアとして機能するであろう。
本発明によって、Ｘ線結晶学などの分析実験を実施するために十分な量のＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドが入手可能である。さらに、ここに提供したＰＲＯ２２４、ＰＲＯ９７８３、ＰＲＯ１１０８、ＰＲＯ３４０００、ＰＲＯ２４０、ＰＲＯ９４３、ｈｕＡ３３、ＰＲＯ２３０、ＰＲＯ１７８、ＰＲＯ１１９９、ＰＲＯ４３３３、ＰＲＯ１３３６、ＰＲＯ１９５９８、ＰＲＯ１０８３、ｈｕＴＲＰＭ２又はＰＲＯ１８０１ポリペプチドアミノ酸配列の知識は、Ｘ線結晶学に代わる又はそれに加わるコンピュータモデル化技術で用いられるガイダンスを提供する。
【図面の簡単な説明】
【０３５１】
【図１】図１は天然配列ＰＲＯ２２４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１）を示し、ここで配列番号：１は「ＤＮＡ３３２２１−１１３３」（ＵＮＱ１９８）とここで命名されたクローンである。
【図２】図２は図１に示した配列番号：１のコード配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２）を示す。
【図３】図３は天然配列ＰＲＯ９７８３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３）を示し、ここで配列番号：３は「ＤＮＡ１３１５９０−２９６２」（ＵＮＱ２９１４）とここで命名されたクローンである。
【図４】図４は図３に示した配列番号：３のコード配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４）を示す。
【図５】図５は天然配列ＰＲＯ１１０８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５）を示し、ここで配列番号：５は「ＤＮＡ５８８４８−１４７２」（ＵＮＱ５５１）とここで命名されたクローンである。
【図６】図６は図５に示した配列番号：５のコード配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：６）を示す。
【図７Ａ】図７Ａは天然配列ＰＲＯ３４０００ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：７）を示し、ここで配列番号：７は「ＤＮＡ２０３５２８−３０１４」（ＵＮＱ９１９６）とここで命名されたクローンである。
【図７Ｂ】図７Ｂは天然配列ＰＲＯ３４０００ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：７）を示し、ここで配列番号：７は「ＤＮＡ２０３５２８−３０１４」（ＵＮＱ９１９６）とここで命名されたクローンである。
【図８Ａ】図８Ａは図７Ａ−Ｂに示した配列番号：７のコード配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：８）を示す。
【図８Ｂ】図８Ｂは図７Ａ−Ｂに示した配列番号：７のコード配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：８）を示す。
【図９】図９は天然配列ＰＲＯ２４０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：９）を示し、ここで配列番号：９は「ＤＮＡ３４３８７−１１３８」（ＵＮＱ２１４）とここで命名されたクローンである。
【図１０】図１０は図９に示した配列番号：９のコード配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１０）を示す。
【図１１】図１１は天然配列ＰＲＯ９４３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１１）を示し、ここで配列番号：１１は「ＤＮＡ５２１９２−１３６９」（ＵＮＱ４８０）とここで命名されたクローンである。
【図１２】図１２は図１１に示した配列番号：１１のコード配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１２）を示す。
【図１３】図１３は天然配列ＰＲＯ２３０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１３）を示し、ここで配列番号：１３は「ＤＮＡ３３２２３−１１３６」（ＵＮＱ２０４）とここで命名されたクローンである。
【図１４】図１４は図１３に示した配列番号：１３のコード配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１４）を示す。
【図１５】図１５は天然配列ＰＲＯ１７８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１５）を示し、ここで配列番号：１５は「ＤＮＡ２３３３９−１１３０」（ＵＮＱ１５２）とここで命名されたクローンである。
【図１６】図１６は図１５に示した配列番号：１５のコード配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１６）を示す。
【図１７】図１７は天然配列ＰＲＯ１１９９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１５）を示し、ここで配列番号：１５は「ＤＮＡ６５３５１−１３６６−２」（ＵＮＱ４０７）とここで命名されたクローンである。
【図１８】図１８は図１７に示した配列番号：１７のコード配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１８）を示す。
【図１９Ａ】図１９Ａは天然配列ｈｕＡ３３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１９）を示し、ここで配列番号：１９は「ＤＮＡ９８５５７」（ＵＮＱ１４２５）とここで命名されたクローンである。
【図１９Ｂ】図１９Ｂは天然配列ｈｕＡ３３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１９）を示し、ここで配列番号：１９は「ＤＮＡ９８５５７」（ＵＮＱ１４２５）とここで命名されたクローンである。
【図２０】図２０は図１９Ａ−Ｂに示した配列番号：１９のコード配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２０）を示す。
【図２１Ａ】図２１Ａは天然配列ＰＲＯ４３３３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２１）を示し、ここで配列番号：２１は「ＤＮＡ８４２１０−２５７６」（ＵＮＱ１８８８）とここで命名されたクローンである。
【図２１Ｂ】図２１Ｂは天然配列ＰＲＯ４３３３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２１）を示し、ここで配列番号：２１は「ＤＮＡ８４２１０−２５７６」（ＵＮＱ１８８８）とここで命名されたクローンである。
【図２２】図２２は図２１Ａ−Ｂに示した配列番号：２１のコード配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２２）を示す。
【図２３Ａ】図２３Ａは天然配列ＰＲＯ１３３６ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２３）を示し、ここで配列番号：２３は「ＤＮＡ６５４２３−１５９５」（ＵＮＱ６９１）とここで命名されたクローンである。
【図２３Ｂ】図２３Ｂは天然配列ＰＲＯ１３３６ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２３）を示し、ここで配列番号：２３は「ＤＮＡ６５４２３−１５９５」（ＵＮＱ６９１）とここで命名されたクローンである。
【図２４Ａ】図２４Ａは図２３Ａ−Ｂに示した配列番号：２３のコード配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２４）を示す。
【図２４Ｂ】図２４Ｂは図２３Ａ−Ｂに示した配列番号：２３のコード配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２４）を示す。
【図２５】図２５は天然配列ＰＲＯ１９５９８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２５）を示し、ここで配列番号：２５は「ＤＮＡ１４５８８７−２８４９」（ＵＮＱ５７９３）とここで命名されたクローンである。
【図２６】図２６は図２５に示した配列番号：２５のコード配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２６）を示す。
【図２７】図２７は天然配列ＰＲＯ１０８３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２７）を示し、ここで配列番号：２７は「ＤＮＡ５０９２１−１４５８」（ＵＮＱ５４０）とここで命名されたクローンである。
【図２８】図２８は図２７に示した配列番号：２７のコード配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２８）を示す。
【図２９Ａ】図２９Ａは天然配列ｈｕＴＲＰＭ２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２９）を示し、ここで配列番号：２９は「ＤＮＡ２２６６５９」（ＵＮＱ５０７０）とここで命名されたクローンである。
【図２９Ｂ】図２９Ｂは天然配列ｈｕＴＲＰＭ２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２９）を示し、ここで配列番号：２９は「ＤＮＡ２２６６５９」（ＵＮＱ５０７０）とここで命名されたクローンである。
【図２９Ｃ】図２９Ｃは天然配列ｈｕＴＲＰＭ２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２９）を示し、ここで配列番号：２９は「ＤＮＡ２２６６５９」（ＵＮＱ５０７０）とここで命名されたクローンである。
【図３０】図３０は図２９Ａ−Ｃに示した配列番号：２９のコード配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３０）を示す。
【図３１】図３１は天然配列ＰＲＯ１８０１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：６７）を示し、ここで配列番号：６７は「ＤＮＡ８３５００−２５０６」（ＵＮＱ８５２）とここで命名されたクローンである。
【図３２】図３２は図３１に示した配列番号：６７のコード配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：６８）を示す。
【図１】
2007518404.tif 000024
【図２】
2007518404.tif 000025
【図３】
2007518404.tif 000026
【図４】
2007518404.tif 000027
【図５】
2007518404.tif 000028
【図６】
2007518404.tif 000029
【図７Ａ】
2007518404.tif 000030
【図７Ｂ】
2007518404.tif 000031
【図８Ａ】
2007518404.tif 000032
【図８Ｂ】
2007518404.tif 000033
【図９】
2007518404.tif 000034
【図１０】
2007518404.tif 000035
【図１１】
2007518404.tif 000036
【図１２】
2007518404.tif 000037
【図１３】
2007518404.tif 000038
【図１４】
2007518404.tif 000039
【図１５】
2007518404.tif 000040
【図１６】
2007518404.tif 000041
【図１７】
2007518404.tif 000042
【図１８】
2007518404.tif 000043
【図１９Ａ】
2007518404.tif 000044
【図１９Ｂ】
2007518404.tif 000045
【図２０】
2007518404.tif 000046
【図２１Ａ】
2007518404.tif 000047
【図２１Ｂ】
2007518404.tif 000048
【図２２】
2007518404.tif 000049
【図２３Ａ】
2007518404.tif 000050
【図２３Ｂ】
2007518404.tif 000051
【図２４Ａ】
2007518404.tif 000052
【図２４Ｂ】
2007518404.tif 000053
【図２５】
2007518404.tif 000054
【図２６】
2007518404.tif 000055
【図２７】
2007518404.tif 000056
【図２８】
2007518404.tif 000057
【図２９Ａ】
2007518404.tif 000058
【図２９Ｂ】
2007518404.tif 000059
【図２９Ｃ】
2007518404.tif 000060
【図３０】
2007518404.tif 000061
【図３１】
2007518404.tif 000062
【図３２】
2007518404.tif 000063
【国際調査報告】
2007518404.tif 000064
2007518404.tif 000065
2007518404.tif 000066
2007518404.tif 000067
2007518404.tif 000068