(57)【要約】  本発明は１種以上の心臓イオンチャネルに影響を与える化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ心臓電気生理プロフィルの測定方法であり、前記化合物をラットに投与する段階と、心房不応期、心室不応期、及び房室結節不応期から構成される群から選択される１種以上の期間と、心電図間隔及び心臓電位図伝導間隔から選択される１種以上の間隔を同時に測定する段階を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
１種以上の心臓イオンチャネルに影響を与える化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ心臓電気生理プロフィルの測定方法であって、前記化合物をラットに投与し、及び心房不応期、心室不応期、及び房室結節不応期から構成される群から選択される１種以上の期間と、心電図間隔及び心臓電位図伝導間隔から選択される１種以上の間隔を同時測定する前記方法。
【請求項２】
１）ラットの左大腿動脈に第１のカテーテルを挿入し、
２）ラットの左大腿静脈に第２のカテーテルを、ラットの右大腿静脈に第３のカテーテルを挿入し、
３）ラットの右頸静脈に第１の記録及び刺激用カテーテルを導入し、該第１の記録及び刺激用カテーテルをラットの右心房又はその近傍まで前進させてラットの心臓をペーシングし、
４）第２の記録及び刺激用カテーテルをラットの右総頸動脈からラットの左心室まで前進させ、
５）ラットの右腋窩及び左鼠径領域の皮下に針電極を配置し、
６）試験化合物を持続的又は断続的に静脈内投与し、及び
７）心電図間隔及び心臓電位図伝導間隔から構成される群から選択される１種以上の間隔と、心房不応期、心室不応期、及び房室結節不応期から構成される群から選択される１種以上の期間を測定する
ことを含む請求項１に記載の方法。
【請求項３】
試験化合物がＫｖ１．５アンダコニストである請求項１に記載の方法。
【請求項４】
心臓イオンチャネルがＫｖ１．５カリウムイオンチャネルである請求項１に記載の方法。
【請求項５】
試験化合物がナトリウムチャネルアンダコニストである請求項１に記載の方法。
【請求項６】
試験化合物がカルシウムチャネルアンダコニストである請求項１に記載の方法。
【請求項７】
試験化合物がＥＲＧカリウムチャネル阻害剤である請求項１に記載の方法。
【請求項８】
試験化合物が心臓不応期調節剤又は心臓伝導調節剤である請求項１に記載の方法。
【請求項９】
心臓イオンチャネルとの直接相互作用によるか又は二次的に関連受容体との結合により１種以上の心臓イオンチャネルに影響を与える化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ心臓電気生理プロフィルの測定方法であって、前記化合物をラットに投与し、及び心房不応期、心室不応期、及び房室結節不応期から構成される群から選択される１種以上の期間と、心電図間隔及び心臓電位図伝導間隔から選択される１種以上の間隔を同時測定する前記方法。
【請求項１０】
心臓イオンチャネルがカリウムイオンチャネル、ナトリウムイオンチャネル、及びカルシウムイオンチャネルから構成される群から選択される請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
関連受容体がムスカリン受容体、アデノシン受容体及びセロトニン受容体から構成される群から選択される請求項１０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
ラットにおける心臓不応期のｉｎ  ｖｉｖｏ測定方法は従来記載されている（例えばＨａｙｅｓら，２００２．Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．４６（１）：１９−２９及びＳａｉｔｏら，２００２．Ｃｉｒｃ  Ｊ．６６：９７−１０３）。これらの方法は胸壁を通すか又は開胸術によりペーシング／記録用ワイヤーを心室に直接挿入するものであった。これらの方法を使用すると、心室不応期を測定することができる。これらの方法は心房及び心室不応期と心臓伝導パラメーターを同時に測定する手段ではないため、心臓伝導及び電気生理パラメーターの詳細な分析は得られない。マウスにおける心臓伝導及び心房／心室不応期の分析は記載されている（Ｇｅｈｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｂｅｒｕｌ．２０００．Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌ．１１：３５４−３６８及びＲａｋｈｉｔら，２００１．Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌ．１２：１２９５−１３０１）。
【０００２】
新規化合物の心臓電気生理活性の初期スクリーンとして使用されている従来の方法は単離した心臓組織又は単離潅流した完全な心臓に大きく依存していた。これらの方法は所定の心臓電気生理パラメーターに及ぼす化合物依存効果を測定することができるが、ｉｎ  ｖｉｖｏ化合物依存効果に関する総合的データは得られず、ｉｎ  ｖｉｖｏ効力に関する情報を得ることができない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は無傷のラットにおける新規化合物の総合的ｉｎ  ｖｉｖｏ心臓電気生理プロフィルをアッセイするための方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は１種以上の心臓イオンチャネルに影響を与える化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ心臓電気生理プロフィルの測定方法であり、前記化合物をラットに投与する段階と、心房不応期、心室不応期、及び房室結節不応期から構成される群から選択される１種以上の期間と、心電図間隔及び心臓電位図伝導間隔から選択される１種以上の間隔を同時に測定する段階を含む。
【発明の効果】
【０００５】
本方法は各種心臓イオンチャネルを標的とする新規抗不整脈剤の開発に有用であり、限定するものではないが、具体的にはＫｖ１．５アンダコニストの開発に有用であると共に、広範な受容体、チャネル、及び酵素を標的とする新規化合物が心臓電気生理に影響を与える有意な標的外の活性、具体的には限定するものではないが、ＩＫｒ遮断活性をもつか否かを評価するために有用である。本方法は心臓不整脈又は心臓伝導異常の治療を開発するために有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
本発明は無傷のラットにおける新規化合物の総合的ｉｎ  ｖｉｖｏ心臓電気生理プロフィルをアッセイするための方法である。この方法を使用して得られる情報は大型動物又はヒトで従来使用されている完全な侵襲的心臓電気生理検査法と同様である。この方法は従来の大型動物電気生理検査法に比較して著しく低いコスト及び化合物要件で短時間に化合物の完全な電気生理プロフィルを作成することができるため、新規化合物の心臓電気生理活性の初期スクリーンとして利用することができる。
【０００７】
１態様において、本方法は、
１）ラットの左大腿動脈に第１のカテーテルを挿入する段階と、
２）ラットの左大腿静脈に第２のカテーテルを挿入し、ラットの右大腿静脈に第３のカテーテルを挿入する段階と、
３）ラットの右頸静脈に第１の記録及び刺激用カテーテルを挿入し、第１の記録及び刺激用カテーテルをラットの右心房又はその近傍まで前進させる段階と、
４）第２の記録及び刺激用カテーテルをラットの右総頸動脈からラットの左心室まで前進させる段階と、
５）ラットの右腋窩及び左鼠径領域の皮下に針電極を配置する段階と、
６）試験化合物を持続的又は断続的に静脈内投与する段階と、
７）心電図間隔及び心臓電位図伝導間隔から構成される群から選択される１種以上の間隔と、心房不応期、心室不応期、及び房室結節不応期から構成される群から選択される１種以上の期間を測定する段階を含む。
【０００８】
段階３は心房電位図、心房不応期、及び房室結節不応期から構成される群から選択される１種以上の測定を実施するため、及び／又はラットの心臓をペーシングするために実施される。
【０００９】
段階４は心房電位図、心室電位図、及びヒス束電位図から選択される１種以上の電位図を記録するため、及び／又は左心室から心臓をペーシングするために実施される。
【００１０】
段階５は第２誘導心電図を記録するために実施される。
【００１１】
段階６は静脈内以外、例えば経皮、経口等の手段により化合物を投与することで実施することもできる。
【００１２】
別の態様において、試験化合物はＫｖ１．５アンダコニストである。
【００１３】
別の態様において、心臓イオンチャネルはＫｖ１．５カリウムイオンチャネルである。
【００１４】
別の態様において、試験化合物はナトリウムチャネルアンダコニストである。
【００１５】
別の態様において、試験化合物はカルシウムチャネルアンダコニストである。
【００１６】
別の態様において、試験化合物はＥＲＧカリウムチャネル阻害剤である。ＨＥＲＧはカリウムチャネル蛋白質ｅｔｈｅｒ−ａ−ｇｏ−ｇｏ遺伝子である。
【００１７】
別の態様において、試験化合物は心臓不応期調節剤又は心臓伝導調節剤である。
【００１８】
本発明の別の態様は心臓イオンチャネルとの直接相互作用によるか又は二次的に関連受容体との結合により１種以上の心臓イオンチャネルに影響を与える化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ心臓電気生理プロフィルの測定方法であり、前記化合物をラットに投与する段階と、心房不応期、心室不応期、及び房室結節不応期から構成される群から選択される１種以上の期間と、心電図間隔及び心臓電位図伝導間隔から選択される１種以上の間隔を同時に測定する段階を含む。
【００１９】
本発明の別の態様において、心臓イオンチャネルは一般に心臓血管系に関連するもの、例えばカリウム、ナトリウム及びカルシウムイオンチャネルである。
【００２０】
本発明の別の態様において、関連受容体は心臓イオンチャネルに関連するもの、例えばムスカリン受容体、アデノシン受容体及びセロトニン受容体である。
【００２１】
（定義）
本明細書で使用する「電位図」とは電気的イベントにより紙又はフィルム上に実施される記録を意味する。電気生理学において、電位図は単極又は双極リードにより表面から直接実施される記録である。「ヒス電位図」又は「ヒス束電位図」とはヒス束として知られる心臓の一部の電気活性を測定する試験である。ヒス束は心臓の収縮のシーケンスを確保するために心臓の中心部を通って電気インパルスを伝達する線維束である。
【００２２】
「心電図」（「ＥＣＧ」）は心臓の鼓動の電気活性を測定する。心臓内を流れる電気インパルス又は「電波」は筋肉を収縮させ、血液を拍出させる。心臓のある部分から別の部分まで電波が流れるために必要な時間を測定すると、電気活性が正常であるか、遅いか、速いか、又は不規則であるか否かが判明する。
【００２３】
「ＭＡＰ」とは動脈圧を意味する。
【００２４】
「ＨＲ」とは洞結節自動能の間接尺度である心拍数を意味する。
【００２５】
（不応期）
不応期は標準対ペーシング法を使用して測定される。要約すると、規定サイクル長の一連の調律刺激を与えた後に期外刺激を与える。次に調律刺激の最終パルスと期外刺激の間の連結間隔を短縮して不応期を得る。
【００２６】
「心房不応期」別称「ＡＲＰ」はペーシングペーシング／期外刺激法を使用する組織の不応性の直接尺度である。これは期外刺激の心房内伝播を可能にする一連の調律刺激の終点と期外刺激の間の最短間隔である。
【００２７】
「心室不応期」別称「ＶＲＰ」もペーシング／期外刺激法を使用する組織の不応性の直接尺度である。これは期外刺激の心室内伝播を可能にする一連の調律刺激の終点と期外刺激の間の最短間隔である。
【００２８】
「房室結節不応期」別称「ＡＶ結節不応期」別称「ＡＶＲＰ」は房室結節が期外刺激を心室に伝達する能力の尺度である。これは期外刺激のＡＶ（房室）結節内伝播を可能にし、その結果、心室脱分極をもたらす一連の調律刺激の終点と期外刺激の間の最短間隔である。
【００２９】
「房室結節機能」別称「ＡＶ結節機能」は房室結節の評価であり、ＡＨ間隔により評価される房室結節不応期の測定及び／又は房室結節伝導の測定が挙げられる。
【００３０】
（測定間隔）
心電図及び心臓内伝導間隔はコンピューターデータ獲得システムにより記録される。その後、デジタルカリパーを使用して複数の心電図間隔（ＰＲ，ＱＲＳ，ＱＴ）と心臓内伝導パラメーター（ＡＨ及びＨＶ間隔）を測定する。
【００３１】
「心臓電位図伝導間隔」はＡＨ間隔とＨＶ間隔の測定に関する一般用語である。
【００３２】
「ＡＨ間隔」別称「ＡＨ」は心室電位図から得られる測定値である。ＡＨ間隔は一般に心房脱分極（Ａ）の始点からヒス束電位図（Ｈ）の始点までの距離として定義される。ＡＨ間隔は房室結節伝導を表す。
【００３３】
「ＨＶ間隔」別称「ＨＶ」は心室電位図から得られる測定値である。ＨＶ間隔は一般にヒス束電位図（Ｈ）の始点から心室脱分極の始点までの距離として定義される。ＨＶ間隔はヒス−プルキンエ伝導を表す。
【００３４】
「ＰＲ間隔」別称「ＰＲ」は第２誘導ＥＣＧから得られる測定値である。ＰＲ間隔はＰ波の始点からＱＲＳ複合波の始点まで測定される。この間隔は房室結節伝導の間接尺度である。
【００３５】
「ＱＴ間隔」別称「ＱＴ」は第２誘導ＥＣＧから得られる測定値である。ＱＴ間隔はＱＲＳ複合波の始点からＴ波の終点まで測定され、心室再分極の間接尺度である。これは対象の心拍数について補正後に「ＱＴｃ」として報告することが多い。
【００３６】
「ＱＲＳ間隔」別称「ＱＲＳ」は第２誘導ＥＣＧから得られる測定値である。ＱＲＳ間隔はＱＲＳ複合波の始点から終点まで測定され、心室伝導の尺度である。
【実施例１】
【００３７】
Ｋｖ１．５アンダコニストの評価
全試験で成体雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット（２４０−２８０ｇ）を使用した。ラットをケタミン：キシラジン混合物（８５ｍｇ／ｋｇ：５ｍｇ／ｋｇ，ｉｐ）で麻酔した。夫々同脈圧測定用と試験物質の投与用として左大腿動脈と左大腿静脈にカテーテルを挿入した。更に、ケタミン：キシラジン（４５ｍｇ／ｋｇ／ｈｒ：１．５ｍｇ／ｋｇ／ｈｒ）を持続注入投与するために右大腿静脈にカテーテルを挿入した。次に記録／刺激用カテーテルを右頸静脈に挿入し、右心房まで前進させた。双極心房電位図記録を得るために電極２個を使用し、心房／心臓の双極ペーシング用として２個を使用した。次に右頸動脈に第２の記録／刺激用カテーテルを挿入し、カテーテルを左心室まで前進させた。双極心室電位図とヒス束電位図を得るために電極２個を使用し、心室をペーシングするために２個を使用した。第２誘導心電図を記録するために右腋窩領域と左鼠径領域の皮下に針電極を挿入した。平衡と基線読み取り後に試験物質又は溶媒の持続注入を開始し、注入開始から１０分後と２０分後に読み取った。注入開始から１０分後と２０分後に大腿動脈カテーテルから血漿分析用血液サンプルを得た。心房有効不応期（ＡＲＰ）、心室有効不応期（ＶＲＰ）、及び房室結節有効不応期（ＡＶＲＰ）を以下のように測定した。心房と心室について励起閾値を測定した後、サイクル長１５０ｍｓの一連の調律刺激（Ｓ１，持続時間１ｍｓ）を閾値の１−２倍で与え、次いで期外刺激（Ｓ２，持続時間１ｍｓ）を閾値の２倍で与えた。Ｓ１−Ｓ２連結間隔を５ｍｓ間隔短縮した後、１ｍｓ間隔短縮し、不応期を得た。ＡＲＰとＶＲＰは心房又は心室期外刺激の伝播を可能にする最短連結間隔として定義した。ＡＶＲＰは心室脱分極を誘発するように心房期外刺激の房室結節内伝播を可能にする最短連結間隔として定義した。更に、１５０ｍｓの一定Ｓ１−Ｓ１間隔ペーシングの短周期（１０−２０秒）反復中にＰＲ、ＡＨ（いずれも房室結節伝導の尺度）及びＨＶ（ヒス−プルキンエ伝導の尺度）間隔を測定した。洞律動中にＱＴ間隔を得た。ラットについてＱＴ心拍数補正式は報告されておらず、ＱＴ間隔はラットで心拍数の変化と共に明白に変化しないことが少なくとも１件の研究により示唆されている（Ｈａｙｅｓ  Ｅ，Ｐｕｇｓｌｅｙ  ＭＫ，Ｐｅｎｚ  ＷＰ，Ａｄａｉｋａｎ  Ｇ，Ｗａｌｋｅｒ  ＭＪ．Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ＱａＴ  ａｎｄ  ＲＲ  ｉｎｔｅｒｖａｌｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ，ｇｕｉｎｅａ  ｐｉｇｓ，ｒａｂｂｉｔｓ，ａｎｄ  ｐｒｉｍａｔｅｓ．Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９９４；３２：２０１−７）ので、洞律動中のＱＴ間隔とマウスで従来検証されている式（ＱＴｃ＝ＱＴ／（ＲＲ／１００）１／２（Ｍｉｔｃｈｅｌｌ  ＧＦ，Ｊｅｒｏｎ  Ａ，Ｋｏｒｅｎ  Ｇ．Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅａｒｔ  ｒａｔｅ  ａｎｄ  Ｑ−Ｔ  ｉｎｔｅｒｖａｌ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｏｎｓｃｉｏｕｓ  ｍｏｕｓｅ．Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１９９８；２７４：Ｈ７４７−５１）を使用した心拍数補正ＱＴ（ＱＴｃ）の両者を報告した。化合物を食塩水又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶かした。試験物質又は溶媒の静脈内注入を体重で正規化した。
【００３８】
２種の構造的に異なるＫｖ１．５アンダコニストとして、３−［（ジメチルアミノ）メチル］−６−メトキシ−２−メチル−４−フェニルイソキノリン−１（２Ｈ）−オン塩酸塩（ＷＯ０２／２４６５５Ａ１に記載）と（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキシル）（ジフェニル）ホスフィンオキシド（ＵＳ６，２１４，８０９Ｂ１に記載）を使用して２種の注入パラダイムを試験した。初期の短時間注入パラダイムでは、化合物又は溶媒を５分間静脈内注入投与し、注入直後に心電図／電気生理読み取り値を測定した。要約すると、３−［（ジメチルアミノ）メチル］−６−メトキシ−２−メチル−４−フェニルイソキノリン−１（２Ｈ）−オン塩酸塩又は（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキシル）（ジフェニル）ホスフィンオキシドの注入の結果、ＱＴ間隔、ＡＲＰ及びＶＲＰは用量依存的に増加した。Ｋｖ１．５はラットの心房と心室の両者で発現されることが分かっているので、ＡＲＰとＶＲＰの両者の増加は従来公表されている発現調査（Ｂａｒｒｙ  ＤＭ，Ｔｒｉｍｍｅｒ  ＪＳ，Ｍｅｒｌｉｅ  ＪＰ，Ｎｅｒｂｏｎｎｅ  ＪＭ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｖｏｌｔａｇｅ−Ｇａｔｅｄ  Ｋ＋  Ｃｈａｎｎｅｌ  Ｓｕｂｕｎｉｔｓ  ｉｎ  Ａｄｕｌｔ  Ｒａｔ  Ｈｅａｒｔ：Ｒｅｌａｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｋ＋  Ｃｈａｎｎｅｌｓ？  Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．１９９５；７７：３６１−３６９）と一致した。溶媒を注入したラットでは有意変化がなかった。全体的に見て、これらのデータによると、Ｋｖ１．５アンダコニスト投与後の不応期とＱＴ間隔の変化をラットで実証できることが判明した。更に、これらのデータによると、これらの効果は用量依存的であり、特定構造類のＫｖ１．５アンダコニストに限られないことが分かった。
【００３９】
これらの試験をより長時間の注入に拡張し、３−［（ジメチルアミノ）メチル］−６−メトキシ−２−メチル−４−フェニルイソキノリン−１（２Ｈ）−オン塩酸塩と（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキシル）（ジフェニル）ホスフィンオキシドを２０分間静脈内持続注入プロトコールで試験した。３−［（ジメチルアミノ）メチル］−６−メトキシ−２−メチル−４−フェニルイソキノリン−１（２Ｈ）−オン塩酸塩０．１ｍｇ／ｋｇ／ｍｉｎ注入の開始から１０分後に、ＱＴ（及びＱＴｃ）がやや増加したが、ＡＲＰ又はＶＲＰは変化しなかった。他方、注入開始から２０分後に心拍数（５％）とＶＲＰ（５％）はやや増加し、ＱＴとＱＴｃは更に増加した（夫々１０％と１６％）が、ＡＲＰは変化しなかった。０．１ｍｇ／ｋｇ／ｍｉｎ注入の開始から１０分後と２０分後の３−［（ジメチルアミノ）メチル］−６−メトキシ−２−メチル−４−フェニルイソキノリン−１（２Ｈ）−オン塩酸塩の血漿濃度は夫々３．４±０．２μＭと２．８±０．３μＭであった。
【００４０】
３−［（ジメチルアミノ）メチル］−６−メトキシ−２−メチル−４−フェニルイソキノリン−１（２Ｈ）−オン塩酸塩の注入速度を０．２ｍｇ／ｋｇ／ｍｉｎに増加した結果、注入から１０分後にＶＲＰとＱＴは有意に増加した。０．２ｍｇ／ｋｇ／ｍｉｎ注入開始から２０分後に、３−［（ジメチルアミノ）メチル］−６−メトキシ−２−メチル−４−フェニルイソキノリン−１（２Ｈ）−オン塩酸塩は心拍数（ＲＲ間隔〜１７％変化）、ＡＲＰ（１２％）、ＶＲＰ（１１％）及びＱＴ間隔（１４％、ＱＴｃ２４％増加）の有意増加をもたらした。０．２ｍｇ／ｋｇ／ｍｉｎ注入開始から１０分後と２０分後の３−［（ジメチルアミノ）メチル］−６−メトキシ−２−メチル−４−フェニルイソキノリン−１（２Ｈ）−オン塩酸塩の血漿濃度は夫々６．３±０．５μＭと５．５±０．２μＭであった。食塩水溶媒を注入した場合には測定した変数のいずれにも有意変化を生じなかった。
【００４１】
一次ｉｎ  ｖｉｖｏスクリーンの制限因子は試験物質の水性溶媒溶解度であると思われる。従って、ＤＭＦの２０分間注入が心電図／電気生理パラメーターに及ぼす効果を試験した後、食塩水又はＤＭＦに溶かした３−［（ジメチルアミノ）メチル］−６−メトキシ−２−メチル−４−フェニルイソキノリン−１（２Ｈ）−オン塩酸塩の心電図／電気生理効果を比較した。要約すると、１００％ＤＭＦの２０分間注入中に測定した変数のいずれにも有意変化はなかった。次に、ＤＭＦに溶かした３−［（ジメチルアミノ）メチル］−６−メトキシ−２−メチル−４−フェニルイソキノリン−１（２Ｈ）−オン塩酸塩０．２ｍｇ／ｋｇ／ｍｉｎをラットに注入し、異なる溶媒間の３−［（ジメチルアミノ）メチル］−６−メトキシ−２−メチル−４−フェニルイソキノリン−１（２Ｈ）−オン塩酸塩依存的心電図／電気生理効果を比較した。全体的に見て、血漿濃度とＱＴ、ＡＲＰ、及びＶＲＰの増加百分率はいずれも３−［（ジメチルアミノ）メチル］−６−メトキシ−２−メチル−４−フェニルイソキノリン−１（２Ｈ）−オン塩酸塩／食塩水群と３−［（ジメチルアミノ）メチル］−６−メトキシ−２−メチル−４−フェニルイソキノリン−１（２Ｈ）−オン塩酸塩／ＤＭＦ群で同等であった。食塩水溶媒中の−［（ジメチルアミノ）メチル］−６−メトキシ−２−メチル−４−フェニルイソキノリン−１（２Ｈ）−オン塩酸塩の２０分間注入の結果、ＱＴ、ＡＲＰ、及びＶＲＰは夫々１４％、１２％、及び１１％増加した。同様に、ＤＭＦ溶媒中の３−［（ジメチルアミノ）メチル］−６−メトキシ−２−メチル−４−フェニルイソキノリン−１（２Ｈ）−オン塩酸塩の２０分間注入の結果、ＱＴ、ＡＲＰ、及びＶＲＰは夫々１１％、８％、及び１３％増加した。３−［（ジメチルアミノ）メチル］−６−メトキシ−２−メチル−４−フェニルイソキノリン−１（２Ｈ）−オン塩酸塩の効果の試験に加え、構造的に異なるＫｖ１．５遮断薬であるホスフィンオキシド（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキシル）（ジフェニル）ホスフィンオキシドの効果を試験した。３−［（ジメチルアミノ）メチル］−６−メトキシ−２−メチル−４−フェニルイソキノリン−１（２Ｈ）−オン塩酸塩の０．２ｍｇ／ｋｇ／ｍｉｎ注入中に認められた変化と同様に、（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキシル）（ジフェニル）ホスフィンオキシドの０．２ｍｇ／ｋｇ／ｍｉｎ注入の結果、注入から１０分後にＱＴ、ＡＲＰ、及びＶＲＰは有意に増加した。注入開始から２０分後に、ＱＴ（２７％、ＱＴｃ３３％増加）、ＡＲＰ（２４％）、及びＶＲＰ（２２％）は更に増加したが、３−［（ジメチルアミノ）メチル］−６−メトキシ−２−メチル−４−フェニルイソキノリン−１（２Ｈ）−オン塩酸塩０．２ｍｇ／ｋｇ／ｍｉｎで観察された増加と同等であった。
【００４２】
表１は実施例１に対応するデータを示す。
【実施例２】
【００４３】
ｈＥＲＧアンダコニストの評価
実施例１に記載した方法を使用してラット心電図／電気生理モデルにおけるｈＥＲＧアンダコニストの効果を試験した。ｈＥＲＧのラット等価物であるｒＥＲＧはラット心房及び心室で発現されることが報告されている（Ｐｏｎｄ  ＡＬ，Ｓｃｈｅｖｅ  ＢＫ，Ｂｅｎｅｄｉｃｔ  ＡＴ，Ｐｅｔｒｅｃｃａ  Ｋ，Ｖａｎ  Ｗａｇｏｎｅｒ  ＤＲ，Ｓｈｒｉｅｒ  Ａ，Ｎｅｒｂｏｎｎｅ  ＪＭ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ＥＲＧ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｉｎ  ｒａｔ，ｍｏｕｓｅ，ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  ｈｅａｒｔ．Ｒｅｌａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｉ（Ｋｒ）  ｃｈａｎｎｅｌｓ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２０００；２７５：５９９７−６００６、及びＷｙｍｏｒｅ  ＲＳ，Ｇｉｎｔａｎｔ  ＧＡ，Ｗｙｍｏｒｅ  ＲＴ，Ｄｉｘｏｎ  ＪＥ，ＭｃＫｉｎｎｏｎ  Ｄ，Ｃｏｈｅｎ  ＩＳ．Ｔｉｓｓｕｅ  ａｎｄ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍＲＮＡ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ＩＫｒ−ｌｉｋｅ  Ｋ＋  ｃｈａｎｎｅｌ，ｅｒｇ．Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．１９９７；８０：２６１−８）。更に、ＩＫｒ電流がラット心筋細胞で観察されており、このチャネルを周知ＩＫｒ遮断薬で遮断すると、カリウム電流はｉｎ  ｖｉｔｒｏで低下した（Ｐｏｎｄ  ＡＬ，Ｓｃｈｅｖｅ  ＢＫ，Ｂｅｎｅｄｉｃｔ  ＡＴ，Ｐｅｔｒｅｃｃａ  Ｋ，Ｖａｎ  Ｗａｇｏｎｅｒ  ＤＲ，Ｓｈｒｉｅｒ  Ａ，Ｎｅｒｂｏｎｎｅ  ＪＭ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ＥＲＧ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｉｎ  ｒａｔ，ｍｏｕｓｅ，ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  ｈｅａｒｔ．Ｒｅｌａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｉ（Ｋｒ）  ｃｈａｎｎｅｌｓ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２０００；２７５：５９９７−６００６，及びＷｙｍｏｒｅ  ＲＳ，Ｇｉｎｔａｎｔ  ＧＡ，Ｗｙｍｏｒｅ  ＲＴ，Ｄｉｘｏｎ  ＪＥ，ＭｃＫｉｎｎｏｎ  Ｄ，Ｃｏｈｅｎ  ＩＳ．Ｔｉｓｓｕｅ  ａｎｄ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍＲＮＡ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ＩＫｒ−ｌｉｋｅ  Ｋ＋  ｃｈａｎｎｅｌ，ｅｒｇ．Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．１９９７；８０：２６１−８）。ＩＫｒ遮断がラットにおける心電図／電気生理プロフィルに影響を与えるか否かを調べるために、ＩＫｒ遮断薬であるＮ−［１’−（６−シアノ−１，２，３，４−テトラヒドロ−２（Ｒ）−ナフタレニル）−３，４−ジヒドロ−４（Ｒ）−ヒドロキシスピロ［２Ｈ−ｌ−ベンゾピラン−２，４’−ピペリジン］−６−ＹＬ］−，（＋）−，１塩酸塩（米国特許第５，２０６，２４０号に記載）をラットに２０分間持続注入投与した。Ｋｖ１．５アンダコニストと同様にＶＲＰを増加させる用量でＮ−［１’−（６−シアノ−１，２，３，４−テトラヒドロ−２（Ｒ）−ナフタレニル）−３，４−ジヒドロ−４（Ｒ）−ヒドロキシスピロ［２Ｈ−１−ベンゾピラン−２，４’−ピペリジン］−６−ＹＬ］−，（＋）−，１塩酸塩を注入した結果、ＡＶＲＰが著しく増加（２１％）すると共に、房室結節伝導が著しく遅延（ＡＨ間隔〜１３％増加）し、血漿濃度〜６００ｎＭであった。更に、ＭＡＰ（１８％）とＨＲ（２２％）の増加も認められた。用量を下げてＮ−［１’−（６−シアノ−１，２，３，４−テトラヒドロ−２（Ｒ）−ナフタレニル）−３，４−ジヒドロ−４（Ｒ）���ヒドロキシスピロ［２Ｈ−１−ベンゾピラン−２，４’−ピペリジン］−６−ＹＬ］−，（＋）−，１塩酸塩を注入した結果、ＡＶＲＰは有意に変化したが、ＡＲＰ又はＶＲＰは変化せず、血漿濃度２７ｎＭであった。これらのデータから、このモデルはｉｎ  ｖｉｖｏ  ＩＫｒ活性の評価に有用であることが判明した。
【００４４】
表２は実施例２に対応するデータを示す。
【００４５】
【表１】
2007525509.tif 000002
【００４６】
【表２】
2007525509.tif 000003
【実施例３】
【００４７】
カルシウムチャネルアンダコニストの評価
実施例１に記載した方法を使用し、カルシウムチャネルアンダコニストが公開文献に比較してラットの心電図及び電気生理にも大型動物及びヒトと同様の効果をもつかどうかを評価した。このために、アムロジピン又はジルチアゼムを注入し、異なる心臓電気生理効果をもつ２種の構造的に異なるカルシウムチャネル遮断薬の評価を行った。アムロジピンとジルチアゼムの臨床的相違点としては、ジルチアゼムのほうがアムロジピンよりも房室結節機能に顕著な効果があるという点が挙げられる。
【００４８】
アムロジピン０．０３ｍｇ／ｋｇ／ｍｉｎを２０分間注入した結果、血圧が若干低下（〜１４％）したが、心拍数に有意変化はなかった。房室結節伝導又は房室結節不応期は変化しなかった。他方、同等の血圧低下を生じる用量でジルチアゼムを注入すると、心拍数の有意低下（１２％）と、房室結節伝導（９％）及び房室結節不応期（１０％）の有意増加を生じた。
【００４９】
血圧の劇的低下（３０％）を生じるようにアムロジピンの注入速度を上げると、房室結節伝導（６％）と房室結節不応期（７％）がほんの僅かに増加した。他方、同等の血圧低下（２３％）を生じる用量でジルチアゼムを注入すると、房室結節伝導（１５％）と房室結節不応期（１９％）の増加は増大した。カルシウムチャネルアンダコニストを使用する実験では心室不応期の有意増加は生じなかった。
【実施例４】
【００５０】
ナトリウムチャネルアンダコニストの評価
実施例１に記載した方法を使用し、ナトリウムチャネル遮断薬をこのラットモデルに注入した場合に大型動物モデル及びヒトで生じる特徴的伝導変化が生じるか否かを評価した。速度を増加しながらプロカインアミド（クラス１ａ）又はプロパフェノン（クラス１ｃ）を注入すると、血圧又は心拍数に有意影響を及ぼすことなく、ＱＲＳ間隔とＨＶ間隔が用量依存的に増加した。
【００５１】
全体的に見て、これらのデータによると、心電図間隔、心臓伝導間隔、、心房不応期、房室結節不応期、及び心室不応期の基線及び化合物依存的変化をラットモデルで測定できることが判明した。従って、上記ラット心電図／電気生理モデルは心臓電気生理に及ぼす化合物依存的効果を評価するためのアッセイとして有用である。
【国際調査報告】
2007525509.tif 000004
2007525509.tif 000005