(57)【要約】本発明は、癌の処置における５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸（「５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ」）の新規の使用および組成物を提供する。本発明は、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡが、腫瘍増殖の速度を低下させ生存期間を増加させる５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）の効力を増加させつつ、５−ＦＵの患者に対する毒性を低下させるという驚くべき結果に基づく。本発明は、５−ＦＵ、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、および１つ以上の付加的な抗癌薬を含む癌患者の処置のための方法および組成物を提供する。このような方法および組成物は、現在の治療様式と比較して増加した効力および低下した毒性を提供し得る。
2007531728.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌の処置のための薬学的組成物の製造における、以下：
（ａ）５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸；および
（ｂ）５−フルオロウラシルまたはそのアナログもしくはプロドラッグ；および
（ｃ）少なくとも１つの付加的な化学療法剤；
の使用であって、該少なくとも１つの付加的な化学療法剤が、以下：
アルキル化剤、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼインヒビター、微小管破壊薬、核酸合成インヒビター、キナーゼインヒビター、ホルモン遮断薬、プロテオソームインヒビター、血管新生インヒビター、免疫調節因子、抗炎症薬、サイトカイン、サイトカインインヒビター、レセプター結合薬および５−フルオロウラシル調節因子からなる群より選択される、使用。
【請求項２】
前記処置される癌が、結腸直腸癌、乳癌、胃癌、非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣癌、膵臓癌、食道癌または頭頸部癌である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記少なくとも１つの付加的な化学療法剤が、特異的結合メンバーまたは核酸分子もしくは核酸アナログ分子または低分子である、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記特異的結合メンバーが、増殖因子に結合する抗体を含む、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
前記増殖因子に結合する抗体が、ＶＥＧＦに結合する少なくとも１つの抗体である、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
前記ＶＥＧＦに結合する抗体がベバシツマブである、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
前記特異的結合メンバーが、増殖因子レセプターに結合する抗体を含む、請求項３に記載の使用。
【請求項８】
前記増殖因子に結合する抗体が、ＥＧＦＲに結合する少なくとも１つの抗体である、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
前記ＥＧＦＲに結合する抗体がセツキシマブである、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
前記少なくとも１つの付加的な化学療法剤が、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）、ジフルオロデオキシシチジン（ゲムシタビン）、（Ｅ）−２’−デオキシ−２’−（フルオロメチレン）シチジン（テザシタビン）、ドキソルビシン、エピルビシン、マイトマイシンＣ、シクロホスファミド、シスプラチン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンクリスチン、ビンブラスチンおよびビノレルビンを含む群から選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項１１】
前記薬学的組成物が、注射または静脈内供給により投与されるよう処方される、請求項１に記載の使用。
【請求項１２】
前記薬学的組成物の成分（ａ）、（ｂ）および（ｃ）が、単一の処方物として処方される、請求項１に記載の使用。
【請求項１３】
前記薬学的組成物の成分（ａ）、（ｂ）および（ｃ）が、別々に処方される、請求項１に記載の使用。
【請求項１４】
癌を有する患者を処置する方法であって、５−フルオロウラシルまたはそのアナログもしくはプロドラッグ；５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸；および少なくとも１つの付加的な抗癌薬を患者に投与する工程を包含する、方法。
【請求項１５】
前記５−フルオロウラシルまたはそのアナログもしくはプロドラッグが５−フルオロウラシルである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記５−フルオロウラシルが注射により投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記５−フルオロウラシルの投薬量が、１ｍ２当たり約２５ｍｇから約５ｇである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記５−フルオロウラシルの投薬量が、１ｍ２当たり約５０ｍｇから約２．５ｇである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記５−フルオロウラシルの投薬量が、１ｍ２当たり約１００ｍｇから約１ｇである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記５−フルオロウラシルまたはそのアナログもしくはプロドラッグがＮ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）である、請求項１４に記載の方法。
【請求項２１】
前記Ｎ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）の１日投薬量が、１ｍ２当たり約５００ｍｇから約７．５ｇである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記Ｎ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）の投薬量が、１ｍ２当たり約１０００ｍｇから約５ｇである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記Ｎ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）の投薬量が、１ｍ２当たり約１５００ｍｇから約３０００ｍｇである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸が注射により投与される、請求項１４に記載の方法。
【請求項２５】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸の投薬量が、１ｍ２当たり約１０ｍｇから１ｇである、請求項１４に記載の方法。
【請求項２６】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸の投薬量が、１ｍ２当たり約２０ｍｇから５００ｍｇである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸の投薬量が、１ｍ２当たり約５０ｍｇから２５０ｍｇである、請求項１４に記載の方法。
【請求項２８】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、以下：アルキル化剤、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼインヒビター、微小管破壊薬、核酸合成インヒビター、キナーゼインヒビター、ホルモン遮断薬、プロテオソームインヒビター、血管新生インヒビター、免疫調節因子、抗炎症薬、サイトカイン、サイトカインインヒビター、レセプター結合薬または５−フルオロウラシル調節因子のうちの少なくとも１つを含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項２９】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、特異的結合メンバー、核酸分子もしくは核酸アナログ分子または低分子のうちの少なくとも１つを含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項３０】
前記癌が、結腸直腸癌、乳癌、胃癌、非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣癌、膵臓癌、食道癌または頭頸部癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
前記癌が結腸直腸癌である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記癌が乳癌である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記癌が膵臓癌である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】
前記癌が胃癌である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３５】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが特異的結合メンバーを含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３６】
前記特異的結合メンバーが、ＶＥＧＦに結合する抗体を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＶＥＧＦに結合する抗体がベバシツマブである、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記特異的結合メンバーが、ＥＧＦＲに結合する抗体を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項３９】
前記ＥＧＦＲに結合する抗体がセツキシマブである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがトポイソメラーゼインヒビターである、請求項２８に記載の方法。
【請求項４１】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがイリノテカンである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが代謝拮抗物質である、請求項２８に記載の方法。
【請求項４３】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、ジフルオロデオキシシチジン（ゲムシタビン）、（Ｅ）−２’−デオキシ−２’−（フルオロメチレン）シチジン（テザシタビン）、ドキソルビシンまたはエピルビシンである、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがアルキル化剤である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４５】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、マイトマイシンＣ、シクロホスファミド、シスプラチンまたはオキサリプラチンである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがオキサリプラチンである、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがキナーゼインヒビターである、請求項２８に記載の方法。
【請求項４８】
前記キナーゼインヒビターがチロシンキナーゼインヒビターである、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記チロシンキナーゼインヒビターがＥＧＦＲチロシンキナーゼインヒビターまたはＶＥＧＦＲチロシンキナーゼインヒビターである、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが微小管破壊剤である、請求項２８に記載の方法。
【請求項５１】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンクリスチン、ビンブラスチンまたはビノレルビンである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
癌と診断された患者に投与される抗癌薬レジメンの毒性を低下させる方法であって、以下：
５−フルオロウラシルまたはそのアナログもしくはプロドラッグ；
フォリン酸；および
少なくとも１つの付加的な抗癌薬；
を含む抗癌薬レジメンを入手する工程；ならびに
癌と診断された患者に投与される抗癌薬レジメン中のフォリン酸を５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸に置換する工程；
を包含する、方法。
【請求項５３】
前記５−フルオロウラシルまたはそのアナログもしくはプロドラッグが５−フルオロウラシルである、請求項４２に記載の方法。
【請求項５４】
前記５−フルオロウラシルまたはそのアナログもしくはプロドラッグがＮ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸の投薬量が、１ｍ２当たり約１０ｍｇから１ｇである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５６】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸の投薬量が、１ｍ２当たり約２０ｍｇから５００ｍｇである、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸の投薬量が、１ｍ２当たり約３０ｍｇから２５０ｍｇである、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、以下：アルキル化剤、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼインヒビター、微小管破壊薬、核酸合成インヒビター、キナーゼインヒビター、ホルモン遮断薬、プロテオソームインヒビター、血管新生インヒビター、免疫調節因子、抗炎症薬、サイトカイン、サイトカインインヒビター、レセプター結合薬または５−フルオロウラシル調節因子のうちの少なくとも１つを含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５９】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、特異的結合メンバー、核酸分子もしくは核酸アナログ分子または低分子のうちの少なくとも１つを含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項６０】
前記癌が、結腸直腸癌、乳癌、胃癌、非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣癌、膵臓癌、胃癌または頭頸部癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項６１】
前記癌が結腸直腸癌である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記癌が乳癌である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
前記癌が膵臓癌である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６４】
前記癌が胃癌である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６５】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが特異的結合メンバーを含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項６６】
前記特異的結合メンバーが、増殖因子に結合する抗体を含む、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記増殖因子に結合する抗体が、ＶＥＧＦに結合する少なくとも１つの抗体である、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記ＶＥＧＦに結合する抗体がベバシツマブである、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記増殖因子に結合する抗体が、ＥＧＦＲに結合する少なくとも１つの抗体である、請求項６５に記載の方法。
【請求項７０】
前記ＥＧＦＲに結合する抗体がセツキシマブである、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがトポイソメラーゼインヒビターである、請求項５８に記載の方法。
【請求項７２】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがイリノテカンである、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが代謝拮抗物質である、請求項５８に記載の方法。
【請求項７４】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、ジフルオロデオキシシチジン（ゲムシタビン）、（Ｅ）−２’−デオキシ−２’−（フルオロメチレン）シチジン（テザシタビン）、ドキソルビシンまたはエピルビシンである、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがアルキル化剤である、請求項５８に記載の方法。
【請求項７６】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがマイトマイシンＣまたはシクロホスファミドである、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、シスプラチンまたはオキサリプラチンである、請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがオキサリプラチンである、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがキナーゼインヒビターである、請求項５８に記載の方法。
【請求項８０】
前記キナーゼインヒビターがチロシンキナーゼインヒビターである、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記チロシンキナーゼインヒビターがＥＧＦＲチロシンキナーゼインヒビターまたはＶＥＧＦＲチロシンキナーゼインヒビターである、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが微小管破壊剤である、請求項５８に記載の方法。
【請求項８３】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンクリスチン、ビンブラスチンまたはビノレルビンである、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
癌と診断された患者に投与される抗癌薬の毒性を低下させる方法であって、以下：
５−フルオロウラシルまたはそのアナログもしくはプロドラッグ；および
少なくとも１つの付加的な抗癌薬；
を含む抗癌薬レジメンを入手する工程；ならびに
癌と診断された患者に投与される抗癌薬レジメンに５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸を追加する工程；
を包含する、方法。
【請求項８５】
前記５−フルオロウラシルまたはそのアナログもしくはプロドラッグが５−フルオロウラシルである、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
前記５−フルオロウラシルが注射により投与される、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
前記５−フルオロウラシルの投薬量が、１ｍ２当たり約２５ｍｇから約５ｇである、請求項８５に記載の方法。
【請求項８８】
前記５−フルオロウラシルの投薬量が、１ｍ２当たり約５０ｍｇから約２．５ｇである、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記５−フルオロウラシルの投薬量が、１ｍ２当たり約１００ｍｇから約１ｇである、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記５−フルオロウラシルまたはそのアナログもしくはプロドラッグがＮ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）である、請求項８４に記載の方法。
【請求項９１】
前記Ｎ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）の１日投薬量が、１ｍ２当たり約５００ｍｇから約７．５ｇである、請求項８０に記載の方法。
【請求項９２】
前記Ｎ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）の投薬量が、１ｍ２当たり約１０００ｍｇから約５ｇである、請求項８２に記載の方法。
【請求項９３】
前記Ｎ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）の投薬量が、１ｍ２当たり約１５００ｍｇから約３０００ｍｇである、請求項８３に記載の方法。
【請求項９４】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸が注射により投与され得る、請求項８４に記載の方法。
【請求項９５】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸の投薬量が、１ｍ２当たり約１０ｍｇから１ｇである、請求項８４に記載の方法。
【請求項９６】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸の投薬量が、１ｍ２当たり約２０ｍｇから５００ｍｇである、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸の投薬量が、１ｍ２当たり約３０ｍｇから２５０ｍｇである、請求項９６に記載の方法。
【請求項９８】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、以下：アルキル化剤、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼインヒビター、微小管破壊薬、核酸合成インヒビター、キナーゼインヒビター、ホルモン遮断薬、プロテオソームインヒビター、血管新生インヒビター、免疫調節因子、抗炎症薬、サイトカイン、サイトカインインヒビター、レセプター結合薬または５−フルオロウラシル調節因子のうちの少なくとも１つを含む、請求項８４に記載の方法。
【請求項９９】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、特異的結合メンバー、核酸分子もしくは核酸アナログ分子または低分子のうちの少なくとも１つを含む、請求項７４に記載の方法。
【請求項１００】
前記癌が、結腸直腸癌、乳癌、胃癌、非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣癌、膵臓癌、食道癌または頭頸部癌である、請求項８４に記載の方法。
【請求項１０１】
前記癌が結腸直腸癌である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
前記癌が乳癌である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０３】
前記癌が膵臓癌である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０４】
前記癌が胃癌である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０５】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが特異的結合メンバーを含む、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０６】
前記特異的結合メンバーが、増殖因子に結合する抗体を含む、請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０７】
前記増殖因子に結合する抗体が、ＶＥＧＦに結合する少なくとも１つの抗体である、請求項１０６に記載の方法。
【請求項１０８】
前記ＶＥＧＦに結合する抗体がベバシツマブである、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１０９】
前記特異的結合メンバーが、増殖因子レセプターに結合する抗体を含む、請求項１０５に記載の方法。
【請求項１１０】
前記増殖因子に結合する抗体がＥＧＦＲに結合する少なくとも１つの抗体である、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
前記ＥＧＦＲに結合する抗体がセツキシマブである、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがトポイソメラーゼインヒビターである、請求項９８に記載の方法。
【請求項１１３】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがイリノテカンである、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが代謝拮抗物質である、請求項９８に記載の方法。
【請求項１１５】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、ジフルオロデオキシシチジン（ゲムシタビン）、（Ｅ）−２’−デオキシ−２’−（フルオロメチレン）シチジン（テザシタビン）、ドキソルビシンまたはエピルビシンである、請求項１１４に記載の方法。
【請求項１１６】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがアルキル化剤である、請求項９８に記載の方法。
【請求項１１７】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、マイトマイシンＣ、シクロホスファミド、シスプラチンまたはオキサリプラチンである、請求項１１６に記載の方法。
【請求項１１８】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがオキサリプラチンである、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１１９】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがキナーゼインヒビターである、請求項９８に記載の方法。
【請求項１２０】
前記キナーゼインヒビターがチロシンキナーゼインヒビターである、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
前記チロシンキナーゼインヒビターがＥＧＦＲチロシンキナーゼインヒビターまたはＶＥＧＦＲチロシンキナーゼインヒビターである、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２２】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが微小管破壊剤である、請求項９８に記載の方法。
【請求項１２３】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンクリスチン、ビンブラスチンまたはビノレルビンである、請求項１２２に記載の方法。
【請求項１２４】
癌を有する患者に投与される抗癌薬レジメンの毒性を低下させる方法であって、以下：
５−フルオロウラシルのアナログまたはプロドラッグおよびフォリン酸：
を含む抗癌薬レジメンを入手する工程；ならびに
癌と診断された患者に投与される抗癌薬レジメン中のフォリン酸を５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸に置換する工程；
を包含する、方法。
【請求項１２５】
前記５−フルオロウラシルのアナログまたはプロドラッグがＮ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）である、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１２６】
前記Ｎ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）の１日投薬量が、１ｍ２当たり約５００ｍｇから約７．５ｇである、請求項１２５に記載の方法。
【請求項１２７】
前記Ｎ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）の投薬量が、１ｍ２当たり約１０００ｍｇから約５ｇである、請求項１２６に記載の方法。
【請求項１２８】
前記Ｎ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）の投薬量が、１ｍ２当たり約２００ｍｇから約１５００ｍｇである、請求項１２７に記載の方法。
【請求項１２９】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸が注射により投与され得る、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１３０】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸の投薬量が、１ｍ２当たり約１０ｍｇから１ｇである、請求項１１４に記載の方法。
【請求項１３１】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸の投薬量が、１ｍ２当たり約２０ｍｇから５００ｍｇである、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１３２】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸の投薬量が、１ｍ２当たり約３０ｍｇから２５０ｍｇである、請求項１２２に記載の方法。
【請求項１３３】
癌と診断された患者に投与される抗癌薬レジメンの効力を増加させる方法であって、以下：
５−フルオロウラシルまたはそのアナログもしくはプロドラッグ；
フォリン酸；および
少なくとも１つの付加的な抗癌薬；
を含む抗癌薬レジメンを入手する工程；ならびに
癌と診断された患者に投与される抗癌薬レジメン中のフォリン酸を５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸に置換する工程；
を包含する、方法。
【請求項１３４】
前記５−フルオロウラシルまたはそのアナログもしくはプロドラッグが５−フルオロウラシルである、請求項１３３に記載の方法。
【請求項１３５】
前記５−フルオロウラシルまたはそのアナログもしくはプロドラッグがＮ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）である、請求項１３４に記載の方法。
【請求項１３６】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸の投薬量が、１ｍ２当たり約１０ｍｇから１ｇである、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１３７】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸の投薬量が、１ｍ２当たり約２０ｍｇから５００ｍｇである、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１３８】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸の投薬量が、１ｍ２当たり約３０ｍｇから２５０ｍｇである、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１３９】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、以下：アルキル化剤、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼインヒビター、微小管破壊薬、核酸合成インヒビター、キナーゼインヒビター、ホルモン遮断薬、プロテオソームインヒビター、血管新生インヒビター、免疫調節因子、抗炎症薬、サイトカイン、サイトカインインヒビター、レセプター結合薬または５−フルオロウラシル調節因子のうちの少なくとも１つを含む、請求項１３３に記載の方法。
【請求項１４０】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、特異的結合メンバー、核酸分子もしくは核酸アナログ分子または低分子のうちの少なくとも１つを含む、請求項１３３に記載の方法。
【請求項１４１】
前記癌が、結腸直腸癌、乳癌、胃癌、非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣癌、膵臓癌、胃癌または頭頸部癌である、請求項１３３に記載の方法。
【請求項１４２】
前記癌が結腸直腸癌である、請求項１３３に記載の方法。
【請求項１４３】
前記癌が乳癌である、請求項１３３に記載の方法。
【請求項１４４】
前記癌が膵臓癌である、請求項１３３に記載の方法。
【請求項１４５】
前記癌が胃癌である、請求項１３３に記載の方法。
【請求項１４６】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが特異的結合メンバーを含む、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１４７】
前記特異的結合メンバーが、増殖因子に結合する抗体を含む、請求項１４６に記載の方法。
【請求項１４８】
前記増殖因子に結合する抗体が、ＶＥＧＦに結合する少なくとも１つの抗体である、請求項１４７に記載の方法。
【請求項１４９】
前記ＶＥＧＦに結合する抗体がベバシツマブである、請求項１４８に記載の方法。
【請求項１５０】
前記特異的結合メンバーが、ＥＧＦＲに結合する少なくとも１つの抗体である、請求項１４６に記載の方法。
【請求項１５１】
前記ＥＧＦＲに結合する抗体がセツキシマブである、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１５２】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがトポイソメラーゼインヒビターである、請求項１３９に記載の方法。
【請求項１５３】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがイリノテカンである、請求項１５２に記載の方法。
【請求項１５４】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが代謝拮抗物質である、請求項１３９に記載の方法。
【請求項１５５】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、ジフルオロデオキシシチジン（ゲムシタビン）、（Ｅ）−２’−デオキシ−２’−（フルオロメチレン）シチジン（テザシタビン）、ドキソルビシンまたはエピルビシンである、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１５６】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがアルキル化剤である、請求項１３９に記載の方法。
【請求項１５７】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、マイトマイシンＣまたはシクロホスファミドである、請求項１５６に記載の方法。
【請求項１５８】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、シスプラチンまたはオキサリプラチンである、請求項１５６に記載の方法。
【請求項１５９】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがオキサリプラチンである、請求項１５８に記載の方法。
【請求項１６０】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがキナーゼインヒビターである、請求項１３９に記載の方法。
【請求項１６１】
前記キナーゼインヒビターがチロシンキナーゼインヒビターである、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１６２】
前記チロシンキナーゼインヒビターがＥＧＦＲチロシンキナーゼインヒビターまたはＶＥＧＦＲチロシンキナーゼインヒビターである、請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６３】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが微小管破壊剤である、請求項１３９に記載の方法。
【請求項１６４】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンクリスチン、ビンブラスチンまたはビノレルビンである、請求項１６３に記載の方法。
【請求項１６５】
癌と診断された患者に投与される抗癌薬レジメンの効力を増加させる方法であって、以下：
５−フルオロウラシルまたはそのアナログもしくはプロドラッグ；および
少なくとも１つの付加的な抗癌薬；
を含む抗癌薬レジメンを入手する工程；ならびに
癌と診断された患者に投与される抗癌薬レジメンに５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸を追加する工程；
を包含する、方法。
【請求項１６６】
前記５−フルオロウラシルまたはそのアナログもしくはプロドラッグが５−フルオロウラシルである、請求項１６５に記載の方法。
【請求項１６７】
前記５−フルオロウラシルが注射により投与され得る、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１６８】
前記５−フルオロウラシルの投薬量が、１ｍ２当たり約２５ｍｇから約５ｇである、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１６９】
前記５−フルオロウラシルの投薬量が、１ｍ２当たり約５０ｍｇから約２．５ｇである、請求項１６８に記載の方法。
【請求項１７０】
前記５−フルオロウラシルの投薬量が、１ｍ２当たり約１００ｍｇから約１ｇである、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１７１】
前記５−フルオロウラシルまたはそのアナログもしくはプロドラッグがＮ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）である、請求項１６５に記載の方法。
【請求項１７３】
前記Ｎ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）が、１日１〜６回、経口処方物中で投与され得る、請求項１７１に記載の方法。
【請求項１７４】
前記Ｎ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）の１日投薬量が、１ｍ２当たり約５００ｍｇから約７．５ｇである、請求項１６３に記載の方法。
【請求項１７５】
前記Ｎ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）の１日投薬量が、１ｍ２当たり約１０００ｍｇから約５ｇである、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１７６】
前記Ｎ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）の１日投薬量が、１ｍ２当たり約１５００ｍｇから約３０００ｍｇである、請求項１７５に記載の方法。
【請求項１７７】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸が注射により投与され得る、請求項１６５に記載の方法。
【請求項１７８】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸の投薬量が、１ｍ２当たり約１０ｍｇから１ｇである、請求項１６５に記載の方法。
【請求項１７９】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸の投薬量が、１ｍ２当たり約２０ｍｇから５００ｍｇである、請求項１６８に記載の方法。
【請求項１８０】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸の投薬量が、１ｍ２当たり約３０ｍｇから２５０ｍｇである、請求項１６９に記載の方法。
【請求項１８１】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、以下：アルキル化剤、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼインヒビター、微小管破壊薬、核酸合成インヒビター、キナーゼインヒビター、ホルモン遮断薬、プロテオソームインヒビター、血管新生インヒビター、免疫調節因子、抗炎症薬、サイトカイン、サイトカインインヒビター、レセプター結合薬または５−フルオロウラシル調節因子のうちの少なくとも１つを含む、請求項１６５に記載の方法。
【請求項１８２】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、特異的結合メンバー、核酸分子もしくは核酸アナログ分子または低分子のうちの少なくとも１つを含む、請求項１６５に記載の方法。
【請求項１８３】
前記癌が、結腸直腸癌、乳癌、胃癌、非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣癌、膵臓癌、食道癌または頭頸部癌である、請求項１６５に記載の方法。
【請求項１８４】
前記癌が結腸直腸癌である、請求項１８３に記載の方法。
【請求項１８５】
前記癌が乳癌である、請求項１８３に記載の方法。
【請求項１８６】
前記癌が膵臓癌である、請求項１８３に記載の方法。
【請求項１８７】
前記癌が胃癌である、請求項１８３に記載の方法。
【請求項１８８】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが特異的結合メンバーを含む、請求項１８２に記載の方法。
【請求項１８９】
前記特異的結合メンバーが、増殖因子に結合する抗体を含む、請求項１８８に記載の方法。
【請求項１９０】
前記増殖因子に結合する抗体が、ＶＥＧＦに結合する少なくとも１つの抗体である、請求項１８９に記載の方法。
【請求項１９１】
前記ＶＥＧＦに結合する抗体がベバシツマブである、請求項１９０に記載の方法。
【請求項１９２】
前記特異的結合メンバーが、増殖因子レセプターに結合する抗体を含む、請求項１８８に記載の方法。
【請求項１９３】
前記増殖因子に結合する抗体が、ＥＧＦＲに結合する少なくとも１つの抗体である、請求項１９２に記載の方法。
【請求項１９４】
前記ＥＧＦＲに結合する抗体がセツキシマブである、請求項１９３の方法。
【請求項１９５】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがトポイソメラーゼインヒビターである、請求項１８１に記載の方法。
【請求項１９６】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがイリノテカンである、請求項１９５に記載の方法。
【請求項１９７】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが代謝拮抗物質である、請求項１８１に記載の方法。
【請求項１９８】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、ジフルオロデオキシシチジン（ゲムシタビン）、（Ｅ）−２’−デオキシ−２’−（フルオロメチレン）シチジン（テザシタビン）、ドキソルビシンまたはエピルビシンである、請求項１９７に記載の方法。
【請求項１９９】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがアルキル化剤である、請求項１８１に記載の方法。
【請求項２００】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、マイトマイシンＣ、シクロホスファミド、シスプラチンまたはオキサリプラチンである、請求項１９９に記載の方法。
【請求項２０１】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがオキサリプラチンである、請求項２００に記載の方法。
【請求項２０２】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがキナーゼインヒビターである、請求項１８１に記載の方法。
【請求項２０３】
前記キナーゼインヒビターがチロシンキナーゼインヒビターである、請求項２０２に記載の方法。
【請求項２０４】
前記チロシンキナーゼインヒビターがＥＧＦＲチロシンキナーゼインヒビターまたはＶＥＧＦＲチロシンキナーゼインヒビターである、請求項２０３に記載の方法。
【請求項２０５】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが微小管破壊剤である、請求項１８１に記載の方法。
【請求項２０６】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンクリスチン、ビンブラスチンまたはビノレルビンである、請求項２０５に記載の方法。
【請求項２０７】
癌を有する患者に投与される抗癌薬レジメンの効力を増加させる方法であって、以下：
５−フルオロウラシルのアナログまたはプロドラッグおよびフォリン酸；
を含む抗癌薬レジメンを入手する工程；ならびに
癌と診断された患者に投与される抗癌薬レジメン中のフォリン酸を５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸に置換する工程；
を包含する、方法。
【請求項２０８】
前記５−フルオロウラシルのアナログまたはプロドラッグがＮ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）である、請求項２０７に記載の方法。
【請求項２０９】
前記Ｎ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）が、１日１〜６回、経口処方物中で投与され得る、請求項２０８に記載の方法。
【請求項２１０】
前記Ｎ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）の投薬量が、１ｍ２当たり約５００ｍｇから約７．５ｇである、請求項２０８に記載の方法。
【請求項２１１】
前記Ｎ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）の投薬量が、１ｍ２当たり約１０００ｍｇから約５ｇである、請求項２００に記載の方法。
【請求項２１２】
前記Ｎ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）の投薬量が、１ｍ２当たり約１５００ｍｇから約３０００ｍｇである、請求項２０１に記載の方法。
【請求項２１３】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸が注射により投与され得る、請求項１９７に記載の方法。
【請求項２１４】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸の投薬量が、１ｍ２当たり約１０ｍｇから１ｇである、請求項１９７に記載の方法。
【請求項２１５】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸の投薬量が、１ｍ２当たり約２０ｍｇから５００ｍｇである、請求項２１４に記載の方法。
【請求項２１６】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸の投薬量が、１ｍ２当たり約３０ｍｇから２５０ｍｇである、請求項２１５に記載の方法。
【請求項２１７】
癌と診断された患者に投与される抗癌薬レジメンの効力を増加させる方法であって、以下：
５−フルオロウラシルまたはそのアナログもしくはプロドラッグ；
フォリン酸；および
少なくとも１つの付加的な抗癌薬；
を含む抗癌薬レジメンを入手する工程；
抗癌薬レジメン中のフォリン酸を５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸に置換する工程；ならびに
増加した効力を有する抗癌薬レジメンを入手するため抗癌薬レジメン中の少なくとも１つの付加的な抗癌薬の投薬量を増加させる工程；
を包含する、方法。
【請求項２１８】
前記５−フルオロウラシルまたはそのアナログもしくはプロドラッグが５−フルオロウラシルである、請求項２１７に記載の方法。
【請求項２１９】
前記５−フルオロウラシルが注射により投与される、請求項２１８の方法。
【請求項２２０】
前記５−フルオロウラシルの投薬量が、１ｍ２当たり約２５ｍｇから約５ｇである、請求項２０８に記載の方法。
【請求項２２１】
前記５−フルオロウラシルの投薬量が、１ｍ２当たり約５０ｍｇから約２．５ｇである、請求項２２０に記載の方法。
【請求項２２２】
前記５−フルオロウラシルの投薬量が、１ｍ２当たり約１００ｍｇから約１ｇである、請求項２２１に記載の方法。
【請求項２２３】
前記５−フルオロウラシルまたはそのアナログもしくはプロドラッグがＮ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）である、請求項２１７に記載の方法。
【請求項２２４】
前記Ｎ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）が、１日１〜６回、経口処方物中で投与される、請求項２２３に記載の方法。
【請求項２２５】
前記Ｎ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）の１日投薬量が、１ｍ２当たり約５００ｍｇから約７．５ｇである、請求項２２３に記載の方法。
【請求項２２６】
前記Ｎ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）の投薬量が、１ｍ２当たり約１０００ｍｇから５ｇである、請求項２２５に記載の方法。
【請求項２２７】
前記Ｎ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）の投薬量が、１ｍ２当たり約１５００ｍｇから約３０００ｍｇである、請求項２２６に記載の方法。
【請求項２２８】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸が注射により投与される、請求項２２７に記載の方法。
【請求項２２９】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸の投薬量が、１ｍ２当たり約１０ｍｇから１ｇである、請求項２１７に記載の方法。
【請求項２３０】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸の投薬量が、１ｍ２当たり約２５ｍｇから５００ｍｇである、請求項２２９に記載の方法。
【請求項２３１】
前記５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸の投薬量が、１ｍ２当たり約５０ｍｇから２５０ｍｇである、請求項２２０に記載の方法。
【請求項２３２】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、以下：アルキル化剤、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼインヒビター、微小管破壊薬、核酸合成インヒビター、キナーゼインヒビター、ホルモン遮断薬、プロテオソームインヒビター、血管新生インヒビター、免疫調節因子、抗炎症薬、サイトカイン、サイトカインインヒビター、レセプター結合薬または５−フルオロウラシル調節因子のうちの少なくとも１つを含む、請求項２１７に記載の方法。
【請求項２３３】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、特異的結合メンバー、核酸分子もしくは核酸アナログ分子または低分子のうちの少なくとも１つを含む、請求項２１７に記載の方法。
【請求項２３４】
前記癌が、結腸直腸癌、乳癌、胃癌、非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣癌、膵臓癌、食道癌または頭頸部癌である、請求項２１７に記載の方法。
【請求項２３５】
前記癌が結腸直腸癌である、請求項２３４に記載の方法。
【請求項２３６】
前記癌が乳癌である、請求項２３４に記載の方法。
【請求項２３７】
前記癌が膵臓癌である、請求項２３４に記載の方法。
【請求項２３８】
前記癌が胃癌である、請求項２３４に記載の方法。
【請求項２３９】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが特異的結合メンバーを含む、請求項２３３に記載の方法。
【請求項２４０】
前記特異的結合メンバーが、増殖因子に結合する抗体を含む、請求項２３９に記載の方法。
【請求項２４１】
前記増殖因子に結合する抗体が、ＶＥＧＦに結合する少なくとも１つの抗体である、請求項２４０に記載の方法。
【請求項２４２】
前記ＶＥＧＦに結合する抗体がベバシツマブである、請求項２４１に記載の方法。
【請求項２４３】
前記特異的結合メンバーが、増殖因子レセプターに結合する抗体を含む、請求項２３９に記載の方法。
【請求項２４４】
前記増殖因子に結合する抗体が、ＥＧＦＲに結合する少なくとも１つの抗体である、請求項２４３に記載の方法。
【請求項２４５】
前記ＥＧＦＲに結合する抗体がセツキシマブである、請求項２３４に記載の方法。
【請求項２４６】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがトポイソメラーゼインヒビターである、請求項２３２に記載の方法。
【請求項２４７】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがイリノテカンである、請求項２４６に記載の方法。
【請求項２４８】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが代謝拮抗物質である、請求項２３２に記載の方法。
【請求項２４９】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、ジフルオロデオキシシチジン（ゲムシタビン）、（Ｅ）−２’−デオキシ−２’−（フルオロメチレン）シチジン（テザシタビン）、ドキソルビシンまたはエピルビシンである、請求項２４８に記載の方法。
【請求項２５０】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがアルキル化剤である、請求項２３２に記載の方法。
【請求項２５１】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、マイトマイシンＣ、シクロホスファミド、シスプラチンまたはオキサリプラチンである、請求項２５０に記載の方法。
【請求項２５２】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがオキサリプラチンである、請求項２４１に記載の方法。
【請求項２５３】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つがキナーゼインヒビターである、請求項２３２に記載の方法。
【請求項２５４】
前記キナーゼインヒビターがチロシンキナーゼインヒビターである、請求項２５３に記載の方法。
【請求項２５５】
前記チロシンキナーゼインヒビターがＥＧＦＲチロシンキナーゼインヒビターまたはＶＥＧＦＲチロシンキナーゼインヒビターである、請求項２５４に記載の方法。
【請求項２５６】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが微小管破壊剤である、請求項２３２に記載の方法。
【請求項２５７】
前記少なくとも１つの付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンクリスチン、ビンブラスチンまたはビノレルビンである、請求項２５６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、米国仮特許出願第６０／５５８，８８９号（２００４年４月２日出願、発明者Ｍａｒｋ  Ｃａｎｔｗｅｌｌおよび発明者Ｊｏａｎ  Ｒｏｂｂｉｎｓにより題された「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｕｓｉｎｇ  ５，１０−Ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ  Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅ  ｔｏ  Ｔｒｅａｔ  Ｃａｎｃｅｒ」）および米国仮特許出願第６０／６５８，７４５号（２００５年３月４日出願、発明者Ｍａｒｋ  Ｃａｎｔｗｅｌｌおよび発明者Ｊｏａｎ  Ｒｏｂｂｉｎｓにより題された「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  ｕｓｉｎｇ  ５，１０−ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅ  ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｔｏ  ｔｒｅａｔ  ｃａｎｃｅｒ」）に対する優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
癌は重要な公衆衛生問題である。結腸直腸癌は、単独で、米国内で１年におよそ５０，０００件の死を引き起こす。毎年診断されるおよそ１３０，０００の結腸直腸癌例のほぼ半分が、化学療法が唯一の治療法である転移性疾患を伴うかまたは転移性疾患へと進展する。結腸直腸癌のみならず、例えば、乳癌、膵臓癌、胃癌、肝臓癌、膀胱癌、子宮頸癌、頭頸部癌、肺癌、卵巣癌、および前立腺癌のようなその他の癌についても、治療のための新たな有効な薬物に基づく療法が緊急に求められている。
【０００３】
抗癌薬５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）は、核酸生合成に必要とされる酵素チミジル酸シンターゼ（ＴＳ）のインヒビターであるＦｄＵＭＰへと体内で変換される。５−ＦＵは、結腸直腸癌および乳癌、さらに頭頸部癌、膵臓癌、胃癌、および非小細胞肺癌のような癌を治療するために一般的に使用されている。５−ＦＵは、一般的に、チミジル酸シンターゼの補因子である還元型の葉酸（５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸またはポリグルタミン酸型の５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸）へと細胞内で変換されるフォリン酸（ＦＡ、ロイコボリン（ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ））と併用されている。５−ＦＵおよびロイコボリンの組み合わせは、５−ＦＵ単独の使用と比較して、増加した抗腫瘍効果を有していることが見出されている。５−ＦＵ、およびロイコボリンと組み合わせられた５−ＦＵは、再発性の結腸直腸癌、乳癌、胃癌、またはその他の癌を有する患者の生存期間（ｓｕｒｖｉｖｏｒｓｈｉｐ）を改善するためにその他の抗癌剤と組み合わせて使用されている。
【０００４】
５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸（「５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ」）は、直接、またはポリグルタミン酸型への変換の後、チミジル酸シンターゼの補因子として作用することができる還元型葉酸である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
５−ＦＵに関連した毒性には、口内炎、粘膜炎、胃腸症状、ならびに血液学的毒性、特に、好中球減少、血小板減少、および白血球減少が含まれる。毒性は、抗癌剤の投薬量を制限することにより、または癌患者の治療において医師が利用可能な手段を制限することにより、患者にとって利用可能な治療法を制限する場合がある。従って、患者の生存期間を延長するのに有効な、低下した毒性を有する、改良された抗癌薬レジメンを開発する必要が存在している。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の概要）
本発明は、患者に対して現在の様式より低下した毒性および大きい効力を提供する、癌の治療における５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸（「５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ」）の新規の使用を提供する。
【０００７】
本発明は、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡが、腫瘍増殖の速度を低下させ生存期間を増加させる５−ＦＵの効力を増加させつつ、５−ＦＵの患者に対する毒性を低下させるという驚くべき結果に基づく。本明細書に開示されるように、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡおよび５−ＦＵによる治療は、５−ＦＵ単独またはロイコボリン（フォリン酸；ＦＡ）と組み合わせられた５−ＦＵによる治療と比べて、腫瘍保持動物の腫瘍増殖速度を低下させ、生存期間を増加させつつ、いずれの治療よりも少ない毒性を示す。
【０００８】
本発明は、さらに、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡおよび５−ＦＵおよび付加的な抗癌薬による腫瘍保持動物の治療も、単一様式治療、またはロイコボリンと共に５−ＦＵを使用することを含む別の組み合わせ治療と比べて、結果を改良し得るという発見に基づく。
【０００９】
１つの局面において、本発明は、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）または５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグ；５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ；および１つ以上の付加的な抗癌薬を含む組み合わせ化学療法により癌患者を治療する方法を提供する。１つ以上の付加的な抗癌薬は、特異的結合メンバー、タンパク質、核酸、脂質、ステロイド、高分子、低分子、または金属を含む化学療法剤（これらに制限はされない）を含む、任意の型の１つ以上の化学療法剤であり得る。この１つ以上の抗癌薬は、アルキル化剤、代謝拮抗物質、有糸分裂インヒビター、トポイソメラーゼインヒビター、微小管破壊薬、核酸合成インヒビター、キナーゼインヒビター、ホルモン遮断薬、プロテオソームインヒビター、血管新生インヒビター、免疫調節因子、抗炎症薬、サイトカイン、サイトカインインヒビター、レセプター結合薬、または５−ＦＵ調節因子のうちの１つ以上を含み得る。その方法は、５−ＦＵまたはそのアナログもしくはプロドラッグ、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、および少なくとも１つの付加的な抗癌薬を、癌を有する患者に投与することを含む。
【００１０】
第二の局面において、本発明は、５−ＦＵまたはそのアナログもしくはプロドラッグ、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、および少なくとも１つの付加的な抗癌薬を含む、癌の治療のための組成物を提供する。１つ以上の付加的な抗癌薬は、特異的結合メンバー、タンパク質、核酸、脂質、ステロイド、高分子、低分子、または金属を含む化学療法剤（これらに制限はされない）を含む、任意の型の１つ以上の化学療法剤であり得る。この１つ以上の抗癌薬は、アルキル化剤、代謝拮抗物質、有糸分裂インヒビター、トポイソメラーゼインヒビター、微小管破壊薬、核酸生合成インヒビター、キナーゼインヒビター、ホルモン遮断薬、プロテオソームインヒビター、血管新生インヒビター、免疫調節因子、抗炎症薬、サイトカイン、サイトカインインヒビター、レセプター結合薬、または５−ＦＵ調節因子のうちの１つ以上を含み得る。本発明の多重薬物組成物は、１つの処方物または複数の処方物として提供され得る。
【００１１】
本発明の第三の局面は、癌の治療のための組成物の製造における、５−ＦＵまたはそのアナログもしくはプロドラッグおよび少なくとも１つの付加的な化学療法剤と組み合わせられた５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの使用であり、ここで、少なくとも１つの付加的な化学療法剤は、アルキル化剤、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼインヒビター、微小管破壊薬、核酸生合成インヒビター、キナーゼインヒビター、ホルモン遮断薬、プロテオソームインヒビター、血管新生インヒビター、免疫調節因子、抗炎症薬、サイトカイン、サイトカインインヒビター、レセプター結合薬、または５−ＦＵ調節因子からなる群より選択される。その使用は、単一の処方物としてまたは複数の処方物として薬学的組成物を製造することを含む。
【００１２】
第四の局面において、本発明は、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを同時投与することにより、５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグの癌患者への投与を含む癌薬物治療レジメンの患者に対する毒性を減少させる方法を提供する。
【００１３】
この局面のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを同時投与することにより、カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）（これに制限はされない）のような５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグの毒性を減少させる方法を含む。
【００１４】
この局面のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを同時投与することにより、５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグおよび付加的な抗癌薬（５−ＦＵまたはチミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）を癌を有する患者へ投与することを含む抗癌治療の毒性を減少させる方法を含む。
【００１５】
本発明の第五の局面は、抗癌薬レジメンの中のロイコボリンを５，１０−５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換することを含む、５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグおよびロイコボリンを含む抗癌薬物治療レジメンの患者に対する毒性を低下させる方法である。
【００１６】
この局面のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、レジメンの中のロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換することによりレジメンの毒性が減少する、カペシタビン（これに制限はされない）のような５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグおよびロイコボリンを含む抗癌薬レジメンの毒性を減少させる方法を含む。
【００１７】
この局面のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、薬物レジメンの中のロイコボリンを５，１０−５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換することにより、癌を有する患者への５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグ、ロイコボリン、および少なくとも１つの付加的な抗癌薬（５−ＦＵまたはチミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）を含む抗癌治療の毒性を減少させる方法を含む。
【００１８】
第六の局面において、本発明は、５，１０−５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを同時投与することにより、５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグの癌患者への投与を含む癌薬物治療レジメンの効力を増加させる方法を提供する。
【００１９】
この局面のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを同時投与することにより、カペシタビン（これに制限はされない）のような５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグの効力を増加させる方法を含む。
【００２０】
この局面のその他の好ましい実施形態において、本発明は、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを同時投与することにより、５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグおよび付加的な抗癌薬（５−ＦＵまたはチミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）を癌を有する患者へ投与することを含む抗癌治療の効力を増加させる方法を含む。
【００２１】
本発明の第七の局面は、抗癌薬レジメンの中のロイコボリンを５，１０−５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換することを含む、５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグおよびロイコボリンを含む抗癌薬物治療レジメンの患者に対する効力を増加させる方法である。
【００２２】
この局面のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、レジメンの中のロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換することによりレジメンの効力が増加する、カペシタビン（これに制限はされない）のような５−ＦＵのアナログまたはプロドラッグおよびロイコボリンを含む抗癌薬レジメンの効力を増加させる方法を含む。
【００２３】
この局面のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、薬物レジメンの中のロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換することにより、癌を有する患者への５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグ、ロイコボリン、および少なくとも１つの付加的な抗癌薬（５−ＦＵまたはチミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）を含む抗癌治療の効力を増加させる方法を含む。
【００２４】
関連する局面において、本発明は、５−ＦＵおよびロイコボリンを含む抗癌薬レジメンの中の５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグの用量を増加させる方法を提供する。その方法は、５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグおよびロイコボリンを含む抗癌薬レジメンを入手すること；抗癌薬レジメンの中のロイコボリンを５，１０−５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換すること；ならびに抗癌薬レジメンの中の５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグの投薬量を増加させることを含む。この局面において、抗癌薬物の中のロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換しつつ、５−ＦＵの投薬量を増加させることは、やたらと毒性を増加させることなく、治療の効力を増加させ得る。
【００２５】
さらにもう一つの関連する局面において、本発明は、５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグ、ロイコボリン、および付加的な抗癌薬を含む抗癌薬レジメンの中の付加的な抗癌薬の用量を増加させる方法を提供する。その方法は、５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグ、ロイコボリン、および少なくとも１つの付加的な抗癌薬（５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグ、またはチミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）を含む抗癌薬レジメンを入手すること；抗癌薬レジメンの中のロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換すること；ならびに抗癌薬レジメンの中の１つ以上の付加的な抗癌薬の投薬量を増加させることを含む。この局面において、抗癌薬物の中のロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換しつつ、レジメンにおいて使用される付加的な抗癌薬の投薬量を増加させることは、やたらと毒性を増加させることなく、治療の効力を増加させ得る。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
（発明の詳細な説明）
（定義）
「抗癌薬」とは、癌の治療において使用される任意の薬物である。本発明の方法および組成物において使用され得るいくつかの研究中の抗癌薬のいくつかの非制限的な例は、表１に提供される。
【００２７】
「化学療法剤」とは、生物学的活性を有しており、疾患の治療において有用な化学的実体である。癌療法において、化学療法剤は、直接的または間接的に癌細胞の死を引き起こす化学的実体である。化学療法剤は、単一の薬剤として、または１つ以上の他の化学療法剤との組み合わせで抗癌効果を有し得る。
【００２８】
抗癌薬または化学療法剤の「アナログ」とは、抗癌薬または化学療法剤と構造的に類似しているが、（ある原子の異なる元素の原子への交換、または特定の官能基の付加もしくは置換のように）組成がわずかに異なっている化学化合物である。本明細書において使用されるように、「アナログ」とは、構造的には類似しているかまたは同一であるが、例えば、可溶性を増強するか、分解を遅延させるか、循環系における半減期を増加させるか、膜透過性を賦与するか、または例えば組織もしくは細胞の標的化を指示することができる付加的な部分を含む化学化合物を意味することもできる。好ましくは、化合物、抗癌薬、または化学療法剤のアナログは、治療的に有効な量で患者に投与された場合、化合物、抗癌薬、または化学療法剤と本質的に同一の活性を有している。
【００２９】
抗癌薬または化学療法剤の「プロドラッグ」とは、体内で抗癌薬または治療剤へと変換されるが、それ自体は活性を有していないか、または抗癌薬のものとは定量的もしくは定性的に異なる活性を有している分子である。
【００３０】
本明細書において使用されるように、「抗癌薬レジメン」、「化学療法薬物レジメン」、「抗癌薬物プロトコル」、または「化学療法プロトコル」とは、どのような治療を癌患者が受けるか、正確には、いつ、どのような投薬量で各々が与えられるかの正式の概要または計画である。
【００３１】
本明細書において使用されるように、「チミジル酸シンターゼの葉酸補因子」または「ＴＳの葉酸補因子」とは、５−ＦＵによるチミジル酸シンターゼの阻害を増強することができる５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡまたはポリグルタミン酸型５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡのような還元型葉酸分子である。本明細書において使用されるように、「チミジル酸シンターゼの葉酸補因子」は、チミジル酸シンターゼの阻害を増強する葉酸分子の前駆体またはプロドラッグであってもよい。例えば、フォリン酸（５−ホルミル−テトラヒドロ葉酸、ロイコボリン）のような葉酸補因子は、体内で５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡおよびポリグルタミン酸型５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡへと変換され得る。
【００３２】
「毒性」とは、身体の細胞、組織、器官、または系に対する実体の有害な効果をさす。毒性効果は、治療を受ける被験体の細胞または組織との実体の生化学的反応に起因し、全身性であるかもしれないし、または特定の系もしくは器官を含む、特異的なものであるかもしれない。毒性には、非制限的な例として、増加した流涙；粘膜炎；食道咽頭炎；感覚異常（ｐａｒａｓｔｈｅｓｉａｓ）、不眠、および眩暈のような神経学的毒性；悪心、嘔吐、および下痢のような胃腸毒性；体重減少毒性；心臓毒性；脱毛、発汗、および発疹を含む皮膚科学的毒性；ならびに好中球減少、血小板減少、リンパ球減少、および白血球減少（これらに制限はされない）のような血液学的毒性が含まれる。毒性パラメータの臨床的な定義は、国立癌研究所の共通毒性基準（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ’ｓ  Ｃｏｍｍｏｎ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ）（バージョン３）または世界保健機関の毒性基準（Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ）に見出され得る。
【００３３】
抗癌治療または化学療法レジメンの「効力」は、抗腫瘍効果または抗癌細胞効果、ならびに、例えば、寛解、進行までの時間、応答率、および生存期間のような治療の臨床的な結果を改良する能力により決定される。抗癌治療または化学療法レジメンの効力を査定する容認された方法は、癌治療の分野においてよく確立されている。例えば、抗癌効果は、例えば、血清中または血漿中の癌細胞またはマーカーを検出することにより査定され得る。検出され得る腫瘍タンパク質または抗原の例には、結腸癌に関するＣＥＡおよび膵臓癌に関するＣＡ１９−９が含まれる。固形腫瘍の場合、抗腫瘍効果は、腫瘍サイズ、および経時的な腫瘍サイズの変化をモニタリングすることにより測定され得る。臨床研究において、病巣の数、腫瘍サイズ、および腫瘍増殖速度は、ラジオグラフィ、断層撮影法によってモニタリングされ得、可能な場合には、腫瘍量の直接測定によりモニタリングされ得る。抗腫瘍効果は、ＥＬＩＳＡ、ＰＣＲ、ウェスタンブロッティング、または免疫細胞化学のような分子生物学および生化学の技術を使用しても測定され得る。
【００３４】
【表１】
2007531728.tif 000003
（Ｉ．５−ＦＵ、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、および少なくとも１つの付加的な抗癌薬を含む組み合わせ療法を使用して、癌を有する患者を治療する方法）
本発明は、５−５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグ；５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ；および１つ以上の付加的な抗癌薬を含む組み合わせ化学療法により癌患者を治療する方法を提供する。１つ以上の付加的な抗癌薬は、特異的結合メンバー、タンパク質、（アンチセンス分子、リボザイム、およびｓｉＲＮＡ（これらに制限はされない）のような）核酸もしくは核酸アナログ、脂質、ステロイド、高分子、低分子、または金属を含む化学療法剤（これらに制限はされない）を含む、任意の型の１つ以上の化学療法剤であり得る。１つ以上の抗癌薬には、トポイソメラーゼインヒビター（例えば、イリノテカン、トポテカン）、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、テザシタビン）、５−ＦＵ調節因子、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、カルムスチン）、核酸生合成インヒビター（例えば、マイトマイシン、ドキソルビシン、シスプラチン、オキサリプラチン）、微小管破壊薬（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、ビノレルビン（ｖｉｎｏｌｒｅｂｉｎｅ）、ビンクリスチン）、ホルモン遮断薬（例えば、タモキシフェン）、レセプターチロシンキナーゼおよび非レセプターチロシンキナーゼ（これらに制限はされない）を含むキナーゼのインヒビター（例えば、Ｉｒｅｓｓａ、Ｔａｒｃｅｖａ、ＳＵ５４１６、ＰＴＫ７８７、Ｇｌｅｅｖｅｃ）、プロテオソームインヒビター（例えば、ボルテゾミブ（ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ））、免疫調節因子（例えば、レバミゾール）、抗炎症薬、血管新生インヒビター、サイトカイン（例えば、インターロイキン、腫瘍壊死因子）、ならびにサイトカイン、ホルモン、またはサイトカインもしくはホルモンのレセプターの活性を阻害する薬物（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体ベバシツマブ（ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）または「アバスチン」）（これらに制限はされない）のような１つ以上の化学療法剤が含まれ得る。抗癌薬は、表１に列挙されたもののような抗癌活性の可能性について調査中の薬物であってもよい。抗癌薬には、サイトカイン、ホルモン、またはホルモンレセプターに結合するモノクローナル抗体（例えば、アバスチン、エルビタックス（ｅｒｂｕｔｕｘ）、ハーセプチン（ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）のようなＥＧＦまたはＶＥＧＦ増殖因子の活性化を遮断する抗体）（これらに制限はされない）などのようなモノクローナル抗体が含まれる。
【００３５】
その方法は、５−ＦＵまたはそのアナログもしくはプロドラッグ；５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ；および少なくとも１つの付加的な抗癌薬を、癌を有する患者に投与することを含む。本明細書において使用されるように、「付加的な」抗癌薬とは、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、５−ＦＵもしくは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグ、またはロイコボリンではない抗癌薬である。
【００３６】
癌患者は、任意の型の癌を有する患者であり得る。本発明のいくつかの好ましい実施形態において、患者は、例えば、結腸直腸癌、膵臓癌、乳癌、頭頸部癌、食道癌、または胃癌のような現在の実務において５−ＦＵにより一般的に治療されている腫瘍型を有している。本発明のいくつかの好ましい実施形態において、患者は、卵巣癌または子宮頸癌（これらに制限はされない）のような、現在の実務において５−ＦＵにより一般的に治療されていない腫瘍型を有している。また、本発明者らは、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、５−ＦＵ（またはそのアナログもしくはプロドラッグ）、および１つ以上の付加的な抗癌薬を使用する組み合わせ療法が５−ＦＵにより現在一般的に治療されているもの以外の癌を治療するための可能性を有していることを企図する。
【００３７】
癌治療および化学療法の分野の当業者は、毒性および効力の評価のためのよく確立されているプロトコルを使用して、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡおよび５−ＦＵの最適の投薬量およびレジメンを決定することができよう。５−ＦＵおよび５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡによる癌患者のいくつかの好ましい治療は、１ｍ２当たり１０ｍｇから１ｇの５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、好ましくは１ｍ２当たり２０ｍｇから５００ｍｇの５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、より好ましくは１ｍ２当たり約３０ｍｇから約２５０ｍｇの５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを使用したレジメンである。例えば、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの好ましい用量は１ｍ２当たり約３０から約１２０ｍｇであり得る。上記のものは、例えば、癌の型およびグレード、患者の年齢、健康状態、および性別、組み合わせて使用される特定の薬物、投与の経路および頻度、ならびに多重薬物組み合わせを使用した実験的および臨床的な所見に基づき、増大または改変させられ得る、一般的な指針に過ぎない。
【００３８】
５−ＦＵの投薬量は、１ｍ２当たり約２５ｍｇから約５ｇであり得、好ましくは１ｍ２当たり約５０ｍｇから２．５ｇ、より好ましくは１ｍ２当たり約１００ｍｇから約１ｇである。例えば、５−ＦＵの好ましい用量は、１ｍ２当たり約２５０から約７００ｍｇであり得る。上記のものは、例えば、癌の型およびグレード、患者の年齢、健康状態、および性別、組み合わせて使用される特定の薬物、投与の経路および頻度、ならびに多重薬物組み合わせを使用した実験的および臨床的な所見に基づき、増大または改変させられ得る、一般的な指針に過ぎない。５−ＦＵは、注射またはＩＶ供給を含む任意の実行可能な手段により投与され得る。
【００３９】
いくつかの好ましい実施形態において、５−ＦＵ自体ではなく５−ＦＵのプロドラッグまたはアナログが、組み合わせ療法において使用される。患者の組織において、５−ＦＵは、チミジル酸シンターゼのインヒビターである５−フルオロ−２’−デオキシウリジレート（ＦｄＵＭＰ）へと変換される。本願において、「５−ＦＵのアナログまたはプロドラッグ」とは、ＦｄＵＭＰのようなチミジル酸シンターゼのインヒビターへと直接的または間接的に変換され得るアナログまたはプロドラッグを意味するために使用される。本発明の方法において使用され得る５−ＦＵの１つのプロドラッグは、Ｎ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）である。１つの好ましい実施形態において、本発明の方法は、Ｎ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）；５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ；および少なくとも１つの付加的な抗癌薬を、癌を有する患者に投与することを含む。カペシタビンの投薬量は、熟練した医師により決定され得、一部分、投与の頻度に依る。例えば、カペシタビンの１日投薬量は、１ｍ２当たり約５００ｍｇから約７５００ｍｇ、好ましくは１ｍ２当たり約１０００ｍｇから約５０００ｍｇ、より好ましくは１ｍ２当たり約１５００ｍｇから約３０００ｍｇであり得る。用量は、１日１〜６（好ましくは２）回の投与へと分割され得る。上記のものは、例えば、癌の型およびグレード、患者の年齢、健康状態、および性別、組み合わせて使用される特定の薬物、投与の経路および頻度、ならびに多重薬物組み合わせを使用した実験的および臨床的な所見に基づき、増大または改変させられ得る、一般的な指針に過ぎない。カペシタビンは、注射、ＩＶ供給、または経口処方物を含む任意の実行可能な手段によって投与され得る。
【００４０】
本発明の方法において使用され得るアナログの組み合わせは、ＵＦＴとして公知の１：４の組み合わせで使用されるテガフール（ＴＦ）およびウラシル（Ｕ）である。１つの好ましい実施形態において、本発明の方法は、ＵＦＴ；５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ；および少なくとも１つの付加的な抗癌薬を、癌を有する患者に投与することを含む。ＵＦＴの投薬量は、熟練した医師により決定され得、部分的に、投与の頻度に依る。例えば、ＵＦＴの１日投薬量は、１ｍ２当たり約５０ｍｇから約３０００ｍｇ、好ましくは１ｍ２当たり約１００ｍｇから約２０００ｍｇ、より好ましくは１ｍ２当たり約２００ｍｇから約１０００ｍｇであり得る。ＵＦＴを含む抗癌レジメンは、場合により、ＵＦＴと共に投与されるフォリン酸カルシウムを含み得る。上記のものは、例えば、癌の型および悪性度、患者の年齢、健康状態、および性別、組み合わせて使用される特定の薬物、投与の経路および頻度、ならびに多重薬物組み合わせを使用した実験的および臨床的な所見に基づき、増大または改変され得る、一般的な指針に過ぎない。ＵＦＴは、注射、ＩＶ注入、または経口処方物を含む任意の実行可能な手段によって投与され得る。
【００４１】
本発明の多重薬物レジメンにおいて使用される１つ以上の付加的な抗癌薬の投薬量も、投薬量の上昇ならびに毒性および効力のモニタリングを使用した研究により決定され得る。化学療法レジメンにおいて独立に使用されている組み合わせ療法において使用される抗癌薬の投薬量の決定において、実務者は、確立されている化学療法レジメンにおいて使用されている薬物の投薬量を考慮に入れ得る。
【００４２】
５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡと組み合わせられた場合の５−ＦＵ（またはそのアナログもしくはプロドラッグ）の低下した毒性は、ＣＨ２−ＴＨＦＡの非存在下においては非常に毒性である１つ以上の付加的な抗癌薬と組み合わせて、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡおよび５−ＦＵ（またはそのアナログもしくはプロドラッグ）が使用される薬物レジメンを許容し得る。
【００４３】
薬物は、資格のある医師により決定され得るレジメンに従って、静脈内投与、経口投与、またはその他の任意の実行可能な手段により投与され得る。本発明の組み合わせプロトコルにおいて使用される抗癌薬は、別々に投与されてもよいし、または、組み合わせプロトコルにおいて使用される抗癌薬のうちの１つ以上が、一緒に投与されてもよい。１つ以上の抗癌薬が別々に投与される場合、各薬物の投与のタイミングおよびスケジュールは、変動し得る。
【００４４】
例えば、各薬物のボーラス注射が、多くの週にわたり週１回与えられ得る。好ましくは、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡは、５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグの前に投与される。例えば、患者は、５−ＦＵの投薬を受ける約１０分から約４時間前に、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの投薬を受け得る。組み合わせ療法において使用される付加的な抗癌薬は、５−ＦＵ（またはそのアナログもしくはプロドラッグ）の投与の前、投与の間、もしくは投与の後に投与されてもよいし、または患者が５−ＦＵ（またはそのアナログもしくはプロドラッグ）および５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを受けない期間に投与されてもよい。組み合わせ療法のためのプロトコルは、限定的ではなく、頻度、期間、および投薬量に関する多くの実行可能な投与プロトコルを含み得る。
【００４５】
本発明のこの局面のいくつかの実施形態において、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、５−ＦＵ（またはそのアナログもしくはプロドラッグ）および１つ以上の付加的な抗癌薬による癌患者の処置は、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡおよび５−ＦＵ（またはそのアナログもしくはプロドラッグ）の非存在下での１つ以上の付加的な抗癌薬による患者の処置と比較して、または５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの非存在下での５−ＦＵ（またはそのアナログもしくはプロドラッグ）および１つ以上の付加的な抗癌薬による患者の処置と比較して、癌患者における腫瘍増殖の速度を低下させ得る。
【００４６】
本発明のこの局面のいくつかの実施形態において、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、５−ＦＵ（またはそのアナログもしくはプロドラッグ）、および１つ以上の付加的な抗癌薬による癌患者の処置は、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡおよび５−ＦＵ（またはそのアナログもしくはプロドラッグ）の非存在下での１つ以上の付加的な抗癌薬による患者の処置と比較して、または５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの非存在下での５−ＦＵ（またはそのアナログもしくはプロドラッグ）および１つ以上の付加的な抗癌薬による患者の処置と比較して、癌患者の生存率を増加させ得る。
【００４７】
（ＩＩ．５−ＦＵ、５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸、および少なくとも１つの付加的な抗癌薬を含む癌の処置のための組成物）
本発明の第２の局面は、５−ＦＵまたはそのアナログもしくはプロドラッグ、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、および少なくとも１つの付加的な抗癌薬：を含む、癌の処置のための組成物である。１つ以上の付加的な抗癌薬は、特異的結合メンバー、タンパク質、（アンチセンス分子、リボザイム、およびｓｉＲＮＡ（これらに限定されない）のような）核酸もしくは核酸アナログ、脂質、ステロイド、高分子、低分子、または金属を含む化学療法剤（これらに限定されない）を含む、任意の型の１つ以上の化学療法剤であり得る。１つ以上の抗癌薬には、トポイソメラーゼインヒビター（例えば、イリノテカン、トポテカン）、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、ゲムシタビン）、有糸分裂インヒビター、５−フルオロウラシル調節因子、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、カルムスチン）、核酸生合成インヒビター（例えば、マイトマイシン、ドキソルビシン、シスプラチン、オキサリプラチン）、微小管破壊薬（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、ビノレルビン（ｖｉｎｏｌｒｅｂｉｎｅ）、ビンクリスチン）、ホルモン遮断薬（例えば、タモキシフェン）、レセプターチロシンキナーゼおよび非レセプターチロシンキナーゼ（これらに限定されない）を含むキナーゼのインヒビター（例えば、Ｉｒｅｓｓａ、Ｔａｒｃｅｖａ、ＳＵ５４１６、ＰＴＫ７８７、Ｇｌｅｅｖｅｃ）、プロテオソームインヒビター（例えば、ボルテゾミブ）、免疫調節因子（例えば、レバミゾール）、抗炎症薬、血管新生インヒビター、サイトカイン（例えば、インターロイキン、腫瘍壊死因子）、ならびにサイトカイン、ホルモン、またはサイトカインもしくはホルモンのレセプターの活性を阻害する薬物（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体ベバシツマブまたは「Ａｖａｓｔｉｎ」）（これらに限定されない）：のような１つ以上の化学療法剤が含まれ得る。抗癌薬はまた、表１に列挙されたもののような可能性のある抗癌活性のため調査中の薬物であり得る。抗癌薬には、サイトカイン、ホルモン、またはホルモンレセプターに結合するモノクローナル抗体（例えば、Ａｖａｓｔｉｎ、エルビタックス（ｅｒｂｕｔｕｘ）、ハーセプチンのようなＥＧＦまたはＶＥＧＦ増殖因子の活性化を阻止する抗体）等（これらに限定されない）のようなモノクローナル抗体が含まれる。
【００４８】
本発明は、薬学的組成物として処方された５−ＦＵ（またはそのアナログもしくはプロドラッグ）、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、および１つ以上の付加的な抗癌薬を含む抗癌薬の組み合わせを包含する。抗癌薬の組み合わせは１つ以上の薬学的処方物を含み得る。例えば、５−ＦＵ（またはそのアナログもしくはプロドラッグ）、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、および１つ以上の付加的な抗癌薬は、各々、別々の処方物として提供され得る。代替的に、５−ＦＵ（またはそのアナログもしくはプロドラッグ）、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、および１つ以上の付加的な抗癌薬のうちの２つ以上が、１つの処方物で一緒に提供され得る。本発明の多重薬物抗癌レジメンにおいて使用される別々の処方物は、同一の投与経路または異なる投与経路のために設計され得る。
【００４９】
（ＩＩＩ．癌の処置のための薬学的組成物の製造における、５−ＦＵ、５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸、および少なくとも１つの付加的な抗癌薬の使用）
本発明はまた、癌の処置のための薬学的組成物の製造における５−ＦＵまたはそのアナログもしくはプロドラッグ、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、および少なくとも１つの付加的な抗癌薬の使用を包含する。少なくとも１つの付加的な抗癌薬は、トポイソメラーゼインヒビター（例えば、イリノテカン、トポテカン）、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、ゲムシタビン）、有糸分裂インヒビター、５−Ｆｕ調節因子、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、カルムスチン）、核酸生合成インヒビター（例えば、マイトマイシン、ドキソルビシン、シスプラチン、オキサリプラチン）、微小管破壊薬（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、ビノレルビン（ｖｉｎｏｌｒｅｂｉｎｅ）、ビンクリスチン）、ホルモン遮断薬（例えば、タモキシフェン）、レセプターチロシンキナーゼおよび非レセプターチロシンキナーゼ（これらに限定されない）を含むキナーゼのインヒビター（例えば、Ｉｒｅｓｓａ、Ｔａｒｃｅｖａ、ＳＵ５４１６、ＰＴＫ７８７、グリーベック）、プロテオソームインヒビター（例えば、ボルテゾミブ）、免疫調節因子（例えば、レバミゾール）、抗炎症薬、血管新生インヒビター、サイトカイン（例えば、インターロイキン、腫瘍壊死因子）、ならびにサイトカイン、ホルモン、またはサイトカインもしくはホルモンのレセプターの活性を阻害する薬物（例えば、ベバシツマブまたは「Ａｖａｓｔｉｎ」）：のいずれかであり得る。その使用には、単一の処方物として、または複数の処方物としての薬学的組成物の製造が含まれる。例えば、５−ＦＵが注射可能な一定分量として提供され、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡおよび少なくとも１つの付加的な抗癌薬が、５−ＦＵの投薬の前に投与される付加的な注射可能な一定分量として提供され得る。代替的に、５−ＦＵ、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、および少なくとも１つの付加的な抗癌薬は、各々が別々に投与され得るように、全て別々の処方物で提供され得、その場合、各薬物の一定分量は、特定の組み合わせ薬物レジメンに適切な用量を有するように製造される。
【００５０】
薬学的組成物は、保管および好ましくはその後の投与のために調製された薬学的に受容可能なキャリアを含み、薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤の中に薬学的に有効な量の化合物を有する。治療的な使用のための受容可能なキャリアまたは希釈剤は、薬学分野において周知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９９０））に記載されている。薬学的組成物には、保存剤、安定剤、色素が提供され得、矯味矯臭剤さえも提供され得る。例えば、安息香酸ナトリウム、アスコルビン酸、およびｐ−ヒドロキシ安息香酸のエステルが、保存剤として添加され得る。さらに、抗酸化剤および懸濁化剤が使用され得る。
【００５１】
標的組織に依って、本発明の薬学的組成物は、経口投与用の錠剤、カプセル、または溶液；局所適用用の軟膏（ｓａｌｖｅ）または軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）；直腸投与用の坐剤；吸入剤または鼻腔用スプレーとして使用するための無菌の溶液、懸濁剤等として処方され使用され得る。注射剤も、液状の溶液もしくは懸濁剤として、注射の前に液体に溶解もしくは懸濁させるのに適している固形の形態として、または乳濁剤として、従来の形態で調製され得る。適当な賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、マンニトール、乳糖、レシチン、アルブミン、グルタミン酸ナトリウム、塩酸システイン等である。さらに、所望により、注射可能な薬学的組成物は、湿潤剤、ｐＨ緩衝剤等のような微量の非毒性の補助物質を含有し得る。
【００５２】
一用量として必要とされる組成物の薬学的に有効な量は、投与経路、処置される癌の型、および患者の身体的特徴に依る。用量は、所望の効果を達成するために調整され得るが、体重、食事、同時の薬物治療、および医学分野の当業者が認識するその他の因子のような因子に依る。本発明の方法の実施において、薬学的組成物は、単独で使用されるか、または他の治療剤もしくは診断剤と組み合わせられて使用され得る。薬学的組成物は、多様な剤形を利用して、局所、非経口、静脈内、皮下、筋肉内、結腸、直腸、経鼻、または腹腔内（ｉｎｔｒａｐｅｒｉｏｔｏｎｅａｌｌｙ）を含む多様な方式で患者に投与され得る。好ましくは、薬学的組成物は、非経口投与、静脈内投与、または経口投与される。そのような方法は、インビボでの試験化合物の活性の試験においても使用され得る。
【００５３】
懸濁剤として経口投与される場合、本発明の組成物は、薬学的処方の分野において周知の技術に従って調製され、かさを与えるための微晶質セルロース、懸濁化剤としてのアルギン酸またはアルギン酸ナトリウム、粘性増強剤としてのメチルセルロース、および当技術分野において公知の甘味剤／矯味矯臭剤を含有し得る。即放型の錠剤としてのこれらの組成物は、当技術分野において公知の微晶質セルロース、第二リン酸カルシウム、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ならびに乳糖および／またはその他の賦形剤、結合剤、増量剤（ｅｘｔｅｎｄｅｒ）、崩壊剤、希釈剤、および滑沢剤を含有し得る。マウスウォッシュまたはリンスの処方物の成分には、抗微生物薬、界面活性剤、補助界面活性剤（ｃｏｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）、油、水、および当技術分野において公知の甘味剤／矯味矯臭剤のようなその他の添加剤が含まれる。
【００５４】
飲用溶液により投与される場合、組成物は、適切にｐＨを調整しながら、キャリアを用いて、水に溶解され本発明の化合物のうちの１つ以上を含む。化合物は、蒸留水、生水、湧水等に溶解され得る。ｐＨは、好ましくは、約３．５と約８．５との間に調整され得る。甘味剤、例えば、１％（ｗ／ｖ）ショ糖が添加され得る。
【００５５】
本発明の処方物は、（１）ｐＨを調整するためのその他の酸および塩基；（２）ソルビトール、グリセリン、およびデキストロースのようなその他の張力付与剤；（３）その他のパラヒドロキシ安息香酸エステル、ソルベート、ベンゾエート、プロピオネート、クロルブタノール、フェニルエチルアルコール、塩化ベンザルコニウム、および水銀剤のような他の抗微生物性保存剤；（４）ナトリウムカルボキシメチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、およびその他のゴムのようなその他の粘性付与剤；（５）適当な吸収増強剤；（６）亜硫酸水素塩およびアスコルベートのような抗酸化剤、エデト酸ナトリウムのような金属キレート化剤、およびポリエチレングリコールのような薬物可溶性増強剤のような安定剤；を含むよう変動し得る。
【００５６】
（ＩＶ．５−ＦＵを含む抗癌薬物処置レジメンの患者に対する毒性を減少させる方法）
本発明はまた、薬物レジメンに５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを追加することにより、癌患者への５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグを含む癌薬物処置レジメンの患者に対する毒性を減少させる方法を提供する。
【００５７】
１つの局面において、その方法は、５−ＦＵまたはそのアナログもしくはプロドラッグを含む抗癌薬物プロトコルを入手すること、および患者に対する低下した毒性を有する抗癌薬物プロトコルを入手するため、抗癌薬物プロトコルに５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを追加すること：を含む。５−ＦＵまたはそのアナログもしくはプロドラッグの投与を含む、癌薬物処置の毒性を減少させる方法は、５−ＦＵの毒性を低下させるため、５−ＦＵの投与の前、投与後、または投与と同時に５，１０−５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを患者に投与することを含む。好ましくは、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの投与は５−ＦＵの投与の前である。本発明のこの局面のいくつかの好ましい実施形態において、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡは、５−ＦＵの血液学的毒性を低下させるため、５−ＦＵを受容する患者に投与される。本発明のこの局面の好ましい実施形態において、５−ＦＵおよび５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡは、ロイコボリン（フォリン酸、ＦＡ）の非存在下で患者に投与される。
【００５８】
癌患者は、任意の型の癌を有する患者であり得る。５−ＦＵを受容する癌患者に５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡが投与される本発明のいくつかの好ましい実施形態において、患者は、例えば、結腸直腸癌、膵臓癌、乳癌、頭頸部癌、食道癌、または胃癌のような、５−ＦＵにより現在処置されている腫瘍型を有している。
【００５９】
本発明は、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡが、腫瘍増殖の速度を低下させ、生存率を増加させる５−ＦＵの効力を増加させつつ、非腫瘍細胞に対する５−ＦＵの毒性を低下させるという驚くべき結果に基づく。実施例１および実施例２に開示されるように、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡおよび５−ＦＵによる処置は、５−ＦＵ単独、またはロイコボリン（フォリン酸）と組み合わせられた５−ＦＵによる処置と比べて、腫瘍を有する動物の腫瘍増殖速度を低下させ、生存率を増加させつつ、いずれの処置よりも動物に対して低い毒性を示す。
【００６０】
本明細書において使用される場合、「毒性を低下させる」とは、患者に対する全身的な毒性効果または患者の非癌性細胞に対する毒性効果を低下させることをさす。毒性には、非限定的な例として、増加した流涙；粘膜炎；食道咽頭炎；知覚異常（ｐａｒａｓｔｈｅｓｉａｓ）、不眠、および眩暈のような神経学的毒性；悪心、嘔吐、および下痢のような胃腸毒性；体重減少毒性；心臓毒性；脱毛、発汗、および発疹を含む皮膚科学的毒性；ならびに好中球減少、血小板減少、リンパ球減少、および白血球減少（これらに限定されない）のような血液学的毒性が含まれる。
【００６１】
本発明のこの局面のいくつかの好ましい実施形態において、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡは、５−ＦＵによる処置に関連した血液学的毒性の程度を低下させるため、５−ＦＵとの組み合わせ療法において投与される。例えば、５−ＦＵと一緒の５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの投与は、５−ＦＵおよびロイコボリン（フォリン酸）を含む化学療法レジメン（これに制限はされない）を含む、５−ＦＵを含む化学療法レジメンに関連した好中球減少、血小板減少、リンパ球減少、または白血球減少を低下させ得る。
【００６２】
癌処置および化学療法の分野の当業者は、毒性および効力の評価のための十分に確立されているプロトコルを使用して、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡおよび５−ＦＵの最適な投薬量およびレジメンを決定し得る。５−ＦＵおよび５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡによる癌患者のいくつかの好ましい処置は、１ｍ２当たり１０ｍｇから１ｇの５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、好ましくは１ｍ２当たり２０ｍｇから５００ｍｇの５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、より好ましくは１ｍ２当たり約３０ｍｇから約２５０ｍｇの５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを使用したレジメンである。例えば、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの好ましい用量は、１ｍ２当たり約３０ｍｇから約１２０ｍｇであり得る。上記のものは、例えば、癌の型および悪性度、患者の年齢、健康状態、および性別、組み合わせて使用される特定の薬物、投与の経路および頻度、ならびに多重薬物組み合わせを使用した実験的および臨床的な所見に基づき、増大または改変され得る、一般的な指針に過ぎない。
【００６３】
５−ＦＵの投薬量は、１ｍ２当たり約２５ｍｇから約５ｇであり得、好ましくは１ｍ２当たり約５０ｍｇから２．５ｇ、より好ましくは１ｍ２当たり約１００ｍｇから約１ｇである。例えば、５−ＦＵの好ましい用量は、１ｍ２当たり約２５０ｍｇから約７００ｍｇであり得る。上記のものは、例えば、癌の型および悪性度、患者の年齢、健康状態、および性別、組み合わせて使用される特定の薬物、投与の経路および頻度、ならびに多重薬物組み合わせを使用した実験的および臨床的な所見に基づき、増大または改変され得る、一般的な指針に過ぎない。５−ＦＵは、注射またはＩＶ注入を含む任意の実行可能な手段により投与され得る。
【００６４】
いくつかの好ましい実施形態において、５−ＦＵ自体ではなく５−ＦＵのプロドラッグまたはアナログが、組み合わせ療法において使用される。患者の組織において、５−ＦＵは、チミジル酸シンターゼのインヒビターである５−フルオロ−２’−デオキシウリジレート（ＦｄＵＭＰ）へと変換される。本出願において、「５−ＦＵのアナログまたはプロドラッグ」とは、ＦｄＵＭＰのようなチミジル酸シンターゼのインヒビターへと直接的または間接的に変換され得るアナログまたはプロドラッグを意味するために使用される。本発明の方法において使用され得る５−ＦＵの１つのプロドラッグは、Ｎ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）である。１つの好ましい実施形態において、本発明の方法は、Ｎ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）；５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ；および少なくとも１つの付加的な抗癌薬を、癌を有する患者に投与することを含む。カペシタビンの投薬量は、熟練した医師により決定され得、部分的に、投与の頻度に依る。例えば、カペシタビンの１日投薬量は、１ｍ２当たり約５００ｍｇから約７５００ｍｇ、好ましくは１ｍ２当たり約１０００ｍｇから約５０００ｍｇ、より好ましくは１ｍ２当たり約１５００ｍｇから約３０００ｍｇであり得る。用量は、１日１〜６回（好ましくは２回）の投与へと分割され得る。上記のものは、例えば、癌の型および悪性度、患者の年齢、健康状態、および性別、組み合わせて使用される特定の薬物、投与の経路および頻度、ならびに多重薬物組み合わせを使用した実験的および臨床的な所見に基づき、増大または改変され得る、一般的な指針に過ぎない。カペシタビンは、注射、ＩＶ注入、または経口処方物を含む任意の実行可能な手段によって投与され得る。
【００６５】
本発明の方法において使用され得るアナログの組み合わせは、ＵＦＴとして公知の１：４の組み合わせで使用されるテガフール（ＴＦ）およびウラシル（Ｕ）である。１つの好ましい実施形態において、本発明の方法は、ＵＦＴ；５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ；および少なくとも１つの付加的な抗癌薬を、癌を有する患者に投与することを含む。ＵＦＴの投薬量は、熟練した医師により決定され得、一部分、投与の頻度に依る。例えば、ＵＦＴの１日投薬量は、１ｍ２当たり約５０ｍｇから約３０００ｍｇ、好ましくは１ｍ２当たり約１００ｍｇから約２０００ｍｇ、より好ましくは１ｍ２当たり約２００ｍｇから約１０００ｍｇであり得る。ＵＦＴを含む抗癌レジメンは、場合により、ＵＦＴと共に投与されるフォリン酸カルシウムを含み得る。上記のものは、例えば、癌の型および悪性度、患者の年齢、健康状態、および性別、組み合わせて使用される特定の薬物、投与の経路および頻度、ならびに多重薬物組み合わせを使用した実験的および臨床的な所見に基づき、増大または改変され得る、一般的な指針に過ぎない。ＵＦＴは、注射、ＩＶ注入、または経口処方物を含む任意の実行可能な手段によって投与され得る。
【００６６】
カペシタビンを使用する抗癌薬物プロトコルのいくつかの例は、Ｂｌｕｍ  ＪＬ，ｅｔ  ａｌ．「Ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ  ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ  ｉｎ  ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ−ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．」Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  １９９９；１７：４８５−９３；Ｈｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．「Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｏｒａｌ  ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ  ｖｅｒｓｕｓ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ  ｐｌｕｓ  ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ  ａｓ  ｆｉｒｓｔ−ｌｉｎｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｉｎ  ６０５  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ：ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｐｈａｓｅ  ＩＩＩ  ｓｔｕｄｙ．」Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２００１；１９（８）：２２８２−９２；およびＶａｎ  Ｃｕｔｓｅｍ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．「Ｏｒａｌ  ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ  ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｗｉｔｈ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ  ｐｌｕｓ  ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ：ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  ａ  ｌａｒｇｅ  ｐｈａｓｅ  ＩＩＩ  ｓｔｕｄｙ．」Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２００１；１９（２１）：４０９７−１０６（全て、特に、カペシタビンを使用した化学療法レジメンの開示のため、参考として本明細書に援用される）に記載されている。本発明は、カペシタビン処置の毒性を低下させるために、カペシタビンを含むプロトコルにおいて５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを投与することを含む。
【００６７】
例えば、１つのプロトコルは、２週間、１日２回カペシタビン（１ｍ２当たり１０００〜１２５０ｍｇ）を投与した後、１週間の休薬期間を置き、次いでさらなる３週間のサイクルを行うことを含む。５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡは、例えば、これらのようなプロトコルに追加され得、プロトコルは毒性および効力に関する臨床試験に基づき最適化され得る。
【００６８】
この局面のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、５，１０−５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを同時投与することにより、５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグおよび付加的な抗癌薬（５−ＦＵまたはチミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）を癌を有する患者に投与することを含む抗癌処置の毒性を減少させる方法を含む。その方法は、５−フルオロウラシルまたはそのアナログもしくはプロドラッグおよび少なくとも１つの付加的な抗癌薬を含む抗癌薬物プロトコルを入手すること、ならびに患者に対する低下した毒性を有する抗癌薬物プロトコルを入手するために、抗癌薬物プロトコルに５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを追加すること：を含む。
【００６９】
付加的な抗癌薬は、非限定的に、トポイソメラーゼインヒビター（例えば、イリノテカン、トポテカン）、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、ゲムシタビン）、５−フルオロウラシル調節因子、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、カルムスチン）、核酸生合成インヒビター（例えば、マイトマイシン、ドキソルビシン、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン）、微小管破壊薬（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、ビノレルビン（ｖｉｎｏｌｒｅｂｉｎｅ）、ビンクリスチン）、ホルモン遮断薬（例えば、タモキシフェン）、レセプターチロシンキナーゼおよび非レセプターチロシンキナーゼ（これらに限定されない）を含むキナーゼインヒビター（例えば、Ｉｒｅｓｓａ、Ｔａｒｃｅｖａ、ＳＵ５４１６、ＰＴＫ７８７、グリーベック）、プロテオソームインヒビター（例えば、ボルテゾミブ）、免疫調節因子（例えば、レバミゾール）、抗炎症薬、血管新生インヒビター、サイトカイン（例えば、インターロイキン、腫瘍壊死因子）、またはサイトカイン、ホルモン、もしくはサイトカインもしくはホルモンのレセプターの活性を阻害する薬物（例えば、ベバシツマブ（Ａｖａｓｔｉｎ）、セツキシマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）（エルビタックス（ｅｕｂｕｔｕｘ））を含む、任意の型の抗癌薬であり得る。抗癌薬は、表１に列挙されたもののような可能性のある抗癌活性のため調査中の薬物であり得る。抗癌薬には、サイトカイン、ホルモン、またはホルモンレセプターに結合するモノクローナル抗体（例えば、Ａｖａｓｔｉｎ、エルビタックス（ｅｒｂｕｔｕｘ）、ハーセプチンのようなＥＧＦまたはＶＥＧＦ増殖因子の活性化を阻止する抗体）等（これらに限定されない）のようなモノクローナル抗体が含まれる。本発明の方法は、複数の付加的な抗癌薬が、５−ＦＵと組み合わせて使用される方法を含む。
【００７０】
５−ＦＵまたはそのアナログもしくはプロドラッグおよび付加的な抗癌薬の投与を含む、癌薬物処置の毒性を減少させる方法は、５−ＦＵ（またはそのアナログもしくはプロドラッグ）の投与の前、投与後、または投与と同時に、５，１０−５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを患者に投与することを含む。好ましくは、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの投与は５−ＦＵの投与の前である。付加的な抗癌薬は、５−ＦＵの投与の前、投与後、または投与と同時に投与され得る。
【００７１】
本発明の多重薬物レジメンにおいて使用される１つ以上の付加的な抗癌薬の投薬量もまた、投薬量の上昇ならびに毒性および効力のモニタリングを使用した研究により決定され得る。化学療法レジメンにおいて独立に使用されている組み合わせ療法において使用される抗癌薬の投薬量の決定において、実務者は、確立されている化学療法レジメンにおいて使用されている薬物の投薬量を考慮に入れ得る。
【００７２】
５−ＦＵを１つ以上の抗癌薬（チミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）と組み合わせた多数の化学療法プロトコルが、癌療法の領域において公知である。例えば、１つ以上の付加的な薬物（葉酸補因子以外）と組み合わせて５−ＦＵを含む抗癌プロトコルには、シクロホスファミド、エピルビシン、およびフルオロウラシルを含む乳癌のための療法（これに限定されない）が含まれる（例えば、Ｌｅｖｉｎｅ  ＭＮ，Ｂｒａｍｗｅｌｌ  ＶＨ，Ｐｒｉｔｃｈａｒｄ  ＫＩ  ｅｔ  ａｌ．「Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ，ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ，ａｎｄ  ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｗｉｔｈ  ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ，ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ，ａｎｄ  ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ  ｉｎ  ｐｒｅｍｅｎｏｐａｕｓａｌ  ｗｏｍｅｎ  ｗｉｔｈ  ｎｏｄｅ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．」Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  １９９８；１６（８）：２６５１−８（特に、５−ＦＵを使用する抗癌プロトコルの開示のため、参考として本明細書に援用される）を参照のこと）。１つ以上の付加的な抗癌薬（葉酸補因子以外）と組み合わせて５−ＦＵを含む抗癌プロトコルには、シクロホスファミド、ドキソルビシン、およびフルオロウラシルを含む乳癌のための療法も含まれる（例えば、Ｂｅｎｎｅｔｔ  ＪＭ，Ｍｕｓｓ  ＨＢ，Ｄｏｒｏｓｈａｗ  ＪＨ，ｅｔ  ａｌ．「Ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ  ｔｒｉａｌ  ｃｏｍｐａｒｉｎｇ  ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ，ｃｙｃｌｏｐｈｏｐｈａｍｉｄｅ，ａｎｄ  ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ  ｗｉｔｈ  ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ，ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ，ａｎｄ  ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．」Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  １９８８；６（１０）：１６１１−２０（特に、５−ＦＵを含む抗癌プロトコルの開示のため、参考として本明細書に援用される）を参照のこと）。本発明は、化学療法レジメンの毒性を低下させるための、これらのような化学療法レジメンへの５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの追加を含む。
【００７３】
処置の毒性を低下させるために５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡが追加され得る抗癌プロトコルの別の例は、Ｋｅａｎｅ  ＴＪ，Ｃｕｍｍｉｎｇｓ  ＢＪ，Ｏ’Ｓｕｌｌｉｖａｎ  Ｂ，Ｐａｙｎｅ  Ｄ，Ｒａｗｌｉｎｓｏｎ  Ｅ，ＭａｃＫｅｎｚｉｅ  Ｒ，Ｄａｎｊｏｕｘ  Ｃ，Ｈｏｄｓｏｎ  Ｉ．「Ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｔｏ  ｓｐｌｉｔ  ｃｏｕｒｓｅ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｗｉｔｈ  ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ  Ｃ  ａｎｄ  ５−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ  ａｓ  ｉｎｉｔｉａｌ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｌａｒｙｎｇｅａｌ  ａｎｄ  ｈｙｐｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．」ＩＪ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｂｉｏｌ  Ｐｈｙｓ，１９９３：２５（４）：６１３−８（特に、５−ＦＵを使用する抗癌プロトコルに関する開示のため、参考として本明細書に援用される）に開示されたような、マイトマイシンＣおよびフルオロウラシルの使用を含む頭頸部癌の処置のためのプロトコルである。この場合、抗癌処置プロトコルは、化学療法に加え、放射線療法を含む。
【００７４】
処置の毒性を低下させるために５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡが追加され得るさらにその他の型のプロトコルは、Ｋｅａｎｅ  ＴＪ，Ｃｕｍｍｉｎｇｓ  ＢＪ，Ｏ’Ｓｕｌｌｉｖａｎ  Ｂ，Ｐａｙｎｅ  Ｄ，Ｒａｗｌｉｎｓｏｎ  Ｅ，ＭａｃＫｅｎｚｉｅ  Ｒ，Ｄａｎｊｏｕｘ  Ｃ，Ｈｏｄｓｏｎ  Ｉ．「Ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｔｏ  ｓｐｌｉｔ  ｃｏｕｒｓｅ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｗｉｔｈ  ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ  Ｃ  ａｎｄ  ５−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ  ａｓ  ｉｎｉｔｉａｌ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｌａｒｙｎｇｅａｌ  ａｎｄ  ｈｙｐｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．」ＩＪ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｂｉｏｌ  Ｐｈｙｓ，１９９３：２５（４）：６１３−８（特に、５−ＦＵを含む抗癌プロトコルに関する開示のため、参考として本明細書に援用される）に開示されたもののような、５−ＦＵをマイトマイシンＣと組み合わせる抗癌プロトコル、およびＣａｌａｉｓ  Ｇ，Ａｌｆｏｎｓｉ  Ｍ，Ｂａｒｄｅｔ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．「Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｖｅｒｓｕｓ  ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ａｄｖａｎｃｅｄ−ｓｔａｇｅ  ｏｒｏｐｈａｒｙｎｘ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．」Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ  １９９９；９１：２０８１−６（特に、５−ＦＵを含む抗癌プロトコルに関する開示のため、参考として本明細書に援用される）に開示されたような、カルボプラチンの使用を５−ＦＵと組み合わせるその他のものである。これらの処置において、抗癌処置プロトコルは、化学療法に加え、放射線療法を含む。
【００７５】
本発明は、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを同時投与することにより、５−ＦＵのアナログまたはプロドラッグおよび付加的な抗癌薬（チミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）を含むプロトコルの毒性を減少させる方法を含む。カペシタビンおよびドセタキセルを含む抗癌レジメンの例は、Ｏ’Ｓｈａｕｇｈｎｅｓｓｙ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．Ｓｕｐｅｒｉｏｒ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｗｉｔｈ  ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ  ｐｌｕｓ  ｄｏｃｅｔａｘｅｌ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ  ｐｒｅ−ｔｒｅａｔｅｄ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ：ｐｈａｓｅ  ＩＩＩ  ｔｒｉａｌ  ｒｅｓｕｌｔｓ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２００２；２０：２８１２−２３（特に、カペシタビンを使用した抗癌プロトコルの開示のため、参考として本明細書に援用される）に開示されている。５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡは、付加的な癌薬物と組み合わせてテガフール−ウラシル（ＵＦＴ）を含むプロトコル、例えば、Ｆｅｌｉｕ  Ｊ．ｅｔ  ａｌ．”Ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ＵＦＴ  ａｎｄ  ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ  ｉｎ  ｆｉｒｓｔ−ｌｉｎｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ．”Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ２００４  ９１：１７５８−６２（特に、ＵＦＴを使用した抗癌プロトコルの開示のため、参考として本明細書に援用される）に開示されたような、オキサリプラチンを含むプロトコルにも追加され得る。
【００７６】
上記のプロトコルの参照は例にすぎず、決して限定的なものではない。処置の毒性を低下させるために５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡが追加され得る抗癌プロトコルは、科学文献および医学文献、ならびに病院、癌センター、および診療所の資源を含む信頼性のある情報源から入手され得る。５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの投与を含めることによりプロトコルの毒性を低下させる際、５−ＦＵ、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡのいずれかまたは両方、そして妥当である場合には、１つ以上の付加的な抗癌薬の投薬量およびスケジュールを改変することは、本発明の範囲内である。そのような改変は、容認されている医学的実務に従い、処置に対する患者の反応をモニタリングする訓練された医師によってなされ得る。
【００７７】
本発明のこの局面のいくつかの好ましい実施形態は、チミジル酸シンターゼの葉酸補因子としてのロイコボリンが５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換される、５−ＦＵ（またはそのアナログもしくはプロドラッグ）およびチミジル酸シンターゼの葉酸補因子を含む抗癌薬レジメンの毒性を低下させる方法を含む。その方法は、５−ＦＵまたはそのアナログもしくはプロドラッグおよびロイコボリンを含む抗癌薬物プロトコルを入手すること；ならびに抗癌薬物プロトコルの中のロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置き換えること：を含む。
【００７８】
この局面のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、レジメンの中のロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置き換えることによりレジメンの毒性が減少する、カペシタビンまたはＵＦＴ（これらに限定されない）のような５−ＦＵのアナログまたはプロドラッグおよびロイコボリンを含む抗癌薬レジメンの毒性を減少させる方法を含む。
【００７９】
この局面のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、薬物レジメンの中のロイコボリンを５，１０−５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置き換えることにより、癌を有する患者への５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグ、ロイコボリン、および少なくとも１つの付加的な抗癌薬（５−ＦＵまたはチミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）を含む抗癌処置の毒性を減少させる方法を含む。その方法は、５−ＦＵまたはそのアナログもしくはプロドラッグ；ロイコボリン；および少なくとも１つの付加的な抗癌薬を含む抗癌薬物プロトコルを入手すること；ならびに抗癌薬物プロトコルの中のロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置き換えること：を含む。
【００８０】
５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの抗腫瘍活性およびロイコボリンと比較して減少した全身毒性、ならびにロイコボリンおよび５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの類似した化学的および代謝的な経路のため、本発明者らは、ある範囲の現在の化学療法レジメンの中のロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置き換え得ることを企図する。現在、一般的に５−ＦＵ＋ロイコボリンと組み合わせて使用されている薬物の非限定的な例は、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）、オキサリプラチン、ゲムシタビン、マイトマイシンＣ、レバミゾール、およびビノレルビンである。本発明は、これらのレジメンの中のロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置き換えた処置を含む。ロイコボリンの５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡへの置換は、低下した毒性と共に、等価なまたは増強された処置効果を提供し得る。非限定的な例として、ロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置き換え得る現在の薬物組み合わせレジメンには、結腸直腸癌の処置において使用されている以下のプロトコルが含まれる：
・ＡＩＯレジメン（フォリン酸、５−ＦＵ、イリノテカン）：
・５２週毎に、４週間、週１回、１日目に２時間かけてイリノテカン（１００ｍｇ／ｍ２）を点滴；１日目に２時間かけてロイコボリン（５００ｍｇ／ｍ２）を点滴；その後、２４時間かけて移動式ポンプを介して５−ＦＵ（２，０００ｍｇ／ｍ２）を静脈内（ＩＶ）ボーラス。
・Ｄｏｕｉｌｌａｒｄレジメン（フォリン酸、５−ＦＵ、イリノテカン）：
・２週毎に、１日目に２時間かけてイリノテカン（１８０ｍｇ／ｍ２）を点滴；１日目および２日目に２時間かけてロイコボリン（２００ｍｇ／ｍ２）を点滴；その後、初回負荷量の５−ＦＵ（４００ｍｇ／ｍ２）をＩＶボーラス、次いで、１日目および２日目に２２時間かけて移動式ポンプを介して５−ＦＵ（６００ｍｇ／ｍ２）。
・ＦＯＬＦＯＸ４レジメン（オキサリプラチン、ロイコボリン、５−ＦＵ）：
・２週毎に、１日目に２時間かけてオキサリプラチン（８５ｍｇ／ｍ２）を点滴；１日目および２日目に２時間かけてロイコボリン（２００ｍｇ／ｍ２）を点滴；その後、初回負荷量の５−ＦＵ（４００ｍｇ／ｍ２）をＩＶボーラス、次いで、１日目および２日目に２２時間かけて移動式ポンプを介して５−ＦＵ（６００ｍｇ／ｍ２）。
・ＦＯＬＦＯＸ６レジメン（オキサリプラチン、ロイコボリン、５−ＦＵ）：
・２週毎に、１日目に２時間かけてオキサリプラチン（８５〜１００ｍｇ／ｍ２）を点滴；１日目に２時間かけてロイコボリン（４００ｍｇ／ｍ２）を点滴；その後、１日目に初回負荷量の５−ＦＵ（４００ｍｇ／ｍ２）をＩＶボーラス、次いで、４６時間かけて移動式ポンプを介して５−ＦＵ（２，４００〜３，０００ｍｇ／ｍ２）。
・ＦＯＬＦＩＲＩレジメン（フォリン酸、５−ＦＵ、イリノテカン）：
・２週毎に、１日目に２時間かけてイリノテカン（１８０ｍｇ／ｍ２）を点滴；１日目に２時間かけてロイコボリン（４００ｍｇ／ｍ２）を点滴；その後、１日目に初回負荷量の５−ＦＵ（４００ｍｇ／ｍ２）をＩＶボーラス、次いで、４６時間かけて移動式ポンプを介して５−ＦＵ（２，４００〜３，０００ｍｇ／ｍ２）。
・ＩＦＬ（またはＳａｌｔｚ）レジメン（イリノテカン、５−ＦＵ、ロイコボリン）：
・６週のうち４週間、週１回、イリノテカン（１２５ｍｇ／ｍ２）、５−ＦＵ（５００ｍｇ／ｍ２）ＩＶボーラス、およびロイコボリン（２０ｍｇ／ｍ２）ＩＶボーラス。
【００８１】
ロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換し得るその他のレジメンには、例えば、（Ａｎｄｒｅ  ｅｔ  ａｌ．「Ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ，５−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ，ａｎｄ  ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ  ｆｏｒ  ｌｏｃａｌｌｙ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ａｎｄ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ（ＦＯＬＦＵＧＥＭ  ２）  Ｇａｓｔｒｏｅｎｅｔｅｒｏｌ  Ｃｌｉｎ  Ｂｉｏｌ；２００４  ２８：６４５−６５０（特に、５−ＦＵを含む癌処置プロトコルの開示のため、参考として本明細書に援用される）に開示されたような）膵臓癌を処置するために使用されているＦＯＬＦＵＧＥＭ１（（５−フルオロウラシル（ＦＵ）ボーラス４００ｍｇ／ｍ２、次いで５−ＦＵ  ２〜３ｇ／ｍ２／４６時間およびゲムシタビン１０００ｍｇ／ｍ２（３０分）と組み合わせられたロイコボリン４００ｍｇ／ｍ２）およびＦＯＬＦＵＧＥＭ２（１４日毎のサイクルで、ロイコボリン４００ｍｇ／ｍ２（２時間）、その後、５−ＦＵ  １０００ｍｇ／ｍ２（２２時間）、次いでゲムシタビン８００ｍｇ／ｍ２（１０ｍｇ／ｍ２／分））を含む、５−ＦＵおよび少なくとも１つのその他の抗癌薬との組み合わせが含まれる。
【００８２】
別の例において、（Ｐｏｐｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．「Ｐｈａｓｅ  ＩＩＩ  Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｇｒｏｕｐ  ９４１５／Ｉｎｔｅｒｇｒｏｕｐ  ０１５３  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ，ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ，ａｎｄ  ｌｅｖａｍｉｓｏｌｅ  ｖｅｒｓｕｓ  ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ  ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  ｉｎｆｕｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｌｅｖａｍｉｓｏｌｅ  ｆｏｒ  ａｄｊｕｖａｎｔ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｔａｇｅ  ＩＩＩ  ａｎｄ  ｈｉｇｈ−ｒｉｓｋ  ｓｔａｇｅ  ＩＩ  ｃｏｌｏｎ  ｃａｎｃｅｒ．」Ｊ．Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２００５  ２３：１８１９−２５（特に、５−ＦＵを含む癌処置プロトコルの開示のため、参考として本明細書に援用される）に開示されたような）５−ＦＵおよびレバミゾールも含む組み合わせ療法において、ロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置き換え得る。
【００８３】
さらに別の例において、（Ｙｅｈ  ｅｔ  ａｌ．「Ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｗｅｅｋｌｙ  ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ  ａｎｄ  ２４−ｈｒ  ｉｎｆｕｓｉｏｎ  ｏｆ  ｈｉｇｈ−ｄｏｓｅ  ５−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ  ｐｌｕｓ  ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ  ａｓ  ｆｉｒｓｔ−ｌｉｎｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．」Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ２００５  ９２：１０１３−８（特に、５−ＦＵを含む癌処置プロトコルの開示のため、参考として本明細書に援用される）に開示されたような）５−ＦＵおよびビノレルビンも含む組み合わせ療法において、ロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置き換え得る。
【００８４】
上記の例は、決して限定的なものであることは意図されない。例えば、投薬量およびレジメンは、患者に対する毒性を最小限に抑えるか、または効力を改良するため、改変または最適化され得る。さらに、本明細書に記載されていない多くの抗癌薬が、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡおよび５−ＦＵと組み合わせられ得る。５−ＦＵおよびロイコボリンが、複数の付加的な抗癌薬と組み合わせて使用されるプロトコルにおいても、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡは、ロイコボリンで置換され得る。本発明者らは、次世代型の５−ＦＵ、特に、経口型の５−ＦＵ（例えば、ゼローダ、カペシタビン）およびＵＦＴとの組み合わせ療法における５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの使用も包含する。
【００８５】
５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの他の使用は、抗腫瘍活性を有するモノクローナル抗体のような新たなクラスの生物学的抗腫瘍試薬との組み合わせ療法における使用である。５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡと（好ましくは５−ＦＵと）組み合わせられ得る抗体の例には、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、ベバシツマブ（ｂｅｖａｃｕｚｉｍａｂ）または「アバスチン」）および抗ＥＧＦレセプター（例えば、エルビタックス（Ｅｒｂｉｔｕｘ）、セツキシマブ、ハーセプチン）が含まれる。実施例１および２に示されるように、ヌードマウスにおける結腸直腸癌の組み合わせ５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ／アバスチンによる処置は、他の薬物組み合わせより大きく腫瘍増殖を阻害する。
【００８６】
本明細書に開示された５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡのより低い毒性プロファイルのため、本発明は、毒性が高すぎて広範囲には使用し得ないと典型的に考えられている薬物と組み合わせた５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの使用もまた含む。例えば、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ／シスプラチン療法が、そのような組み合わせである。白金ベースの化学療法剤であるシスプラチンは、高度に毒性である。さらに、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡのより低い毒性プロファイルは、増加した薬物（例えば５−ＦＵ）の濃度または延長された投薬期間のいずれかの使用を可能にし得る。次に、これは、薬物の効力を増加させ得る。
【００８７】
本発明は、５−ＦＵを使用しない療法においてロイコボリン（ロイコボリン）の代わりに５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを使用することも含む。例えば、ロイコボリン（ロイコボリン）と比較して、より低い５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの毒性プロファイルおよび増加した活性に基づき、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡは、メトトレキサートレスキュー療法のために使用され得る。この療法の様式は、現在、ロイコボリンを使用している。
【００８８】
（Ｖ．５−ＦＵを含む抗癌薬物治療レジメの効力を増加させるための方法）
本発明は、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを同時投与することにより、５−５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグの癌患者への投与を包含する、抗癌薬物処置レジメンの効力を増加させるための方法も提供する。
【００８９】
１つの局面において、その方法は、５−フルオロウラシルまたはそのアナログもしくはプロドラッグを含む抗癌薬レジメンを得る工程、および抗癌薬レジメンの効力を増加させるため、薬物レジメンに５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを追加する工程を包含する。本発明のこの局面の好ましい実施形態において、５−ＦＵおよび５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡは、ロイコボリン（フォリン酸、ＦＡ）の非存在下で患者に投与される。５−ＦＵまたはそのアナログもしくはプロドラッグの投与を含む癌薬物処置の効力を増加させるための方法は、５−ＦＵの毒性を低下させるため、５−ＦＵの投与の前、後、または同時に、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを患者に投与する工程を包含する。好ましくは、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの投与は５−ＦＵの投与の前である。
【００９０】
関連する局面において、本発明は、５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグを含む、患者に投与される抗癌薬レジメンに５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを追加することにより、癌患者の生存期間を増加させるための方法を提供する。その方法は、５−フルオロウラシルまたはそのアナログもしくはプロドラッグを含む抗癌薬物プロトコルを得る工程、抗癌薬物プロトコルに５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを追加する工程；および改変された抗癌薬物プロトコルにより癌患者を処置する工程、を包含する。その方法は、５−ＦＵの投与の前、後、または同時に、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを患者に投与する工程を包含する。本発明のこの局面の好ましい実施形態において、５−ＦＵおよび５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡは、ロイコボリン（フォリン酸、ＦＡ）の非存在下で患者に投与される。
【００９１】
癌患者は、任意の型の癌を有する患者であり得る。５−ＦＵを受容する癌患者に５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡが投与される本発明のいくつかの好ましい実施形態において、患者は、例えば、結腸直腸癌、膵臓癌、乳癌、頭頸部癌、または胃癌のような、現在５−ＦＵにより処置されている腫瘍型を有している。
【００９２】
抗癌薬レジメンの効力（例えば、処置後の腫瘍サイズ、腫瘍増殖（または退縮）の速度、癌細胞またはマーカーの検出、処置後の寛解期の長さ、およびそのレジメンにより処置された癌患者の生存期間（これらに限定はされない））は、方法によって決定され得る。
【００９３】
癌処置および化学療法の分野の当業者は、毒性および効力の評価のためのよく確立されているプロトコルを使用して、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡおよび５−ＦＵの最適な投薬量およびレジメンを決定することが可能である。５−ＦＵおよび５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡによる癌患者のいくつかの好ましい処置は、１ｍ２当たり１０ｍｇから１ｇの５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、好ましくは１ｍ２当たり２０ｍｇから５００ｍｇの５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、より好ましくは１ｍ２当たり約３０ｍｇから約２５０ｍｇの５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを使用するレジメンである。例えば、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの好ましい用量は、１ｍ２当たり約３０ｍｇから約１２０ｍｇであり得る。上記のものは、例えば、癌の型およびグレード、患者の年齢、健康状態、および性別、組み合わせて使用される特定の薬物、投与の経路および頻度、ならびに多重薬物組み合わせを使用した実験的所見および臨床的所見に基づき、増大または改変され得る、一般的な指針に過ぎない。
【００９４】
５−ＦＵの投薬量は、１ｍ２当たり約２５ｍｇから約５ｇであり得、好ましくは１ｍ２当たり約５０ｍｇから２．５ｇ、より好ましくは１ｍ２当たり約１００ｍｇから約１ｇである。例えば、５−ＦＵの好ましい用量は、１ｍ２当たり約２５０ｍｇから約７００ｍｇであり得る。上記のものは、例えば、癌の型およびグレード、患者の年齢、健康状態、および性別、組み合わせて使用される特定の薬物、投与の経路および頻度、ならびに多重薬物組み合わせを使用した実験的所見および臨床的所見に基づき、増大または改変され得る、一般的な指針に過ぎない。５−ＦＵは、注射またはＩＶ注入を含む任意の実行可能な手段により投与され得る。
【００９５】
いくつかの好ましい実施形態において、５−ＦＵ自体ではなく５−ＦＵのプロドラッグまたはアナログが、組み合わせ療法において使用される。患者の組織において、５−ＦＵは、チミジル酸シンターゼのインヒビターである５−フルオロ−２’−デオキシウリジレート（ＦｄＵＭＰ）へと変換される。本願において、「５−ＦＵのアナログまたはプロドラッグ」とは、ＦｄＵＭＰのようなチミジル酸シンターゼのインヒビターへと直接的もしくは間接的に変換され得るアナログまたはプロドラッグを意味するために使用される。本発明の方法において使用され得る５−ＦＵの１つのプロドラッグは、Ｎ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）である。１つの好ましい実施形態において、本発明の方法は、Ｎ４−ペントキシルカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（カペシタビン）；５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ；および少なくとも１つの付加的な抗癌薬を、癌を有する患者に投与する工程を包含する。カペシタビンの投薬量は、熟練した医師により決定され得、部分的には、投与の頻度に依存する。例えば、カペシタビンの１日投薬量は、１ｍ２当たり約５００ｍｇから約７５００ｍｇ、好ましくは１ｍ２当たり約１０００ｍｇから約５０００ｍｇ、より好ましくは１ｍ２当たり約１５００ｍｇから約３０００ｍｇであり得る。用量は、１日１〜６（好ましくは２）回の投与へと分割され得る。上記のものは、例えば、癌の型およびグレード、患者の年齢、健康状態、および性別、組み合わせて使用される特定の薬物、投与の経路および頻度、ならびに多重薬物組み合わせを使用した実験的所見および臨床的所見に基づき、増大または改変され得る、一般的な指針に過ぎない。カペシタビンは、注射、ＩＶ注入、または経口処方物を含む任意の実行可能な手段によって投与され得る。
【００９６】
本発明の方法において使用され得るアナログの組み合わせは、ＵＦＴとして既知の１：４の組み合わせで使用されるテガフール（ＴＦ）およびウラシル（Ｕ）である。１つの好ましい実施形態において、本発明の方法は、ＵＦＴ；５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ；および少なくとも１つの付加的な抗癌薬を、癌を有する患者に投与する工程を包含する。ＵＦＴの投薬量は、熟練した医師により決定され得、部分的には、投与の頻度に依存する。例えば、ＵＦＴの１日投薬量は、１ｍ２当たり約５０ｍｇから約３０００ｍｇ、好ましくは１ｍ２当たり約１００ｍｇから約２０００ｍｇ、より好ましくは１ｍ２当たり約２００ｍｇから約１０００ｍｇであり得る。ＵＦＴを含む抗癌レジメンはまた、必要に応じて、ＵＦＴと共に投与されるフォリン酸カルシウムを含み得る。上記のものは、例えば、癌の型およびグレード、患者の年齢、健康状態、および性別、組み合わせて使用される特定の薬物、投与の経路および頻度、ならびに多重薬物組み合わせを使用した実験的所見および臨床的所見に基づき、増大または改変され得る、一般的な指針に過ぎない。ＵＦＴは、注射、ＩＶ注入、または経口処方物を含む任意の実行可能な手段によって投与され得る。
【００９７】
カペシタビンを使用する抗癌薬物プロトコルのいくつかの例は、Ｂｌｕｍ  ＪＬら，「Ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ  ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ  ｉｎ  ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ−ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．」Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  １９９９；１７：４８５−９３；Ｈｏｆｆら「Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｏｒａｌ  ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ  ｖｅｒｓｕｓ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ  ｐｌｕｓ  ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ  ａｓ  ｆｉｒｓｔ−ｌｉｎｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｉｎ  ６０５  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ：ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｐｈａｓｅ  ＩＩＩ  ｓｔｕｄｙ．」Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２００１；１９（８）：２２８２−９２；およびＶａｎ  Ｃｕｔｓｅｍ  Ｅら，「Ｏｒａｌ  ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ  ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｗｉｔｈ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ  ｐｌｕｓ  ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ：ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  ａ  ｌａｒｇｅ  ｐｈａｓｅ  ＩＩＩ  ｓｔｕｄｙ．」Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２００１；１９（２１）：４０９７−１０６（これらの全ては、特に、カペシタビンを使用する化学療法レジメンの開示のため、本明細書において参考として援用される）に記載されている。本発明は、処置の効力を改良するため、カペシタビンを含むプロトコルにおいて５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを投与することを含む。
【００９８】
例えば、１つのプロトコルは、２週間、１日２回カペシタビン（１ｍ２当たり１０００〜１２５０ｍｇ）を投与し、その後、１週間の休薬期間を置き、次いでさらなる３週間のサイクルを行うことを含む。５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡは、例えば、これらのようなプロトコルに追加され得、プロトコルは毒性および効力に関する臨床試験に基づき最適化され得る。
【００９９】
この局面の他の好ましい実施形態において、本発明は、５，１０−５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを同時投与することにより、５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグおよび少なくとも１つの付加的な抗癌薬（５−ＦＵまたはチミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）を癌を有する患者へ投与する工程を包含する、抗癌処置の効力を増加させるための方法を含む。その方法は、５−フルオロウラシルまたはそのアナログもしくはプロドラッグおよび少なくとも１つの付加的な抗癌薬を含む抗癌薬物プロトコルを得る工程、ならびに増加した効力を有する抗癌薬物プロトコルを得るため、抗癌薬物プロトコルに５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を追加する工程、を包含する。
【０１００】
５−ＦＵまたはそのアナログもしくはプロドラッグおよび付加的な抗癌薬の投与を含む癌薬物処置の効力を増加させるための方法は、５−ＦＵ（またはそのアナログもしくはプロドラッグ）の投与の前、後、または同時に、５，１０−５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを患者に投与する工程を包含する。好ましくは、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの投与は５−ＦＵの投与の前である。付加的な抗癌薬は、５−ＦＵの投与の前、後、または同時に投与され得る。
【０１０１】
関連する局面において、本発明は、５−５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグおよび少なくとも１つの付加的な抗癌薬（５−ＦＵまたはチミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）を含む、患者に投与される抗癌薬レジメンに５，１０−５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを追加することにより、癌患者の生存期間を増加させるための方法を提供する。その方法は、５−ＦＵまたはそのアナログもしくはプロドラッグおよび少なくとも１つの付加的な抗癌薬を含む抗癌薬物プロトコルを得る工程；抗癌薬物プロトコルに５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを追加する工程；ならびに改変された抗癌薬物プロトコルにより癌患者を処置する工程、を包含する。その方法は、５−ＦＵの投与の前、後、または同時に、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを患者に投与する工程を包含する。本発明のこの局面の好ましい実施形態において、５−ＦＵおよび５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡは、ロイコボリン（フォリン酸、ＦＡ）の非存在下で患者に投与される。付加的な抗癌薬は、５−ＦＵの投与の前、後、または同時に投与され得る。
【０１０２】
本発明の多重薬物レジメンにおいて使用される１つ以上の付加的な抗癌薬の投薬量も、投薬量の上昇ならびに毒性および効力のモニタリングを使用する研究により決定され得る。化学療法レジメンにおいて独立に使用されている組み合わせ療法において使用される抗癌薬の投薬量の決定において、実務者は、確立されている化学療法レジメンにおいて使用されている薬物の投薬量を考慮に入れることができる。
【０１０３】
５−ＦＵを１つ以上の抗癌薬（チミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）と組み合わせた多数の化学療法プロトコルが、癌療法の領域において公知である。例えば、１つ以上の付加的な薬物（チミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）と組み合わせた５−ＦＵを含む抗癌プロトコルには、シクロホスファミド、エピルビシン、およびフルオロウラシルを含む乳癌のための療法（これに限定はされない）が含まれる（例えば、Ｌｅｖｉｎｅ  ＭＮ，Ｂｒａｍｗｅｌｌ  ＶＨ，Ｐｒｉｔｃｈａｒｄ  ＫＩら「Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ，ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ，ａｎｄ  ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｗｉｔｈ  ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ，ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ，ａｎｄ  ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ  ｉｎ  ｐｒｅｍｅｎｏｐａｕｓａｌ  ｗｏｍｅｎ  ｗｉｔｈ  ｎｏｄｅ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．」Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  １９９８；１６（８）：２６５１−８（特に、５−ＦＵを使用する抗癌プロトコルの開示のため、本明細書において参考として援用される）を参照のこと）。１つ以上の付加的な薬物（葉酸補因子以外）と組み合わせた５−ＦＵを含む抗癌プロトコルには、シクロホスファミド、ドキソルビシン、およびフルオロウラシルを含む乳癌のための療法も含まれる（例えば、Ｂｅｎｎｅｔｔ  ＪＭ，Ｍｕｓｓ  ＨＢ，Ｄｏｒｏｓｈａｗ  ＪＨら，「Ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ  ｔｒｉａｌ  ｃｏｍｐａｒｉｎｇ  ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ，ｃｙｃｌｏｐｈｏｐｈａｍｉｄｅ，ａｎｄ  ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ  ｗｉｔｈ  ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ，ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ，ａｎｄ  ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．」Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  １９８８；６（１０）：１６１１−２０（特に、５−ＦＵを含む抗癌プロトコルの開示のため、本明細書において参考として援用される）を参照のこと）。５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの追加は、これらの化学療法レジメンの効力を増強し得、改変されたレジメンにより処置された患者の生存期間を改良し得る。
【０１０４】
処置の効力を増加させるために５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡが追加され得る抗癌プロトコルの別の例は、Ｋｅａｎｅ  ＴＪ，Ｃｕｍｍｉｎｇｓ  ＢＪ，Ｏ’Ｓｕｌｌｉｖａｎ  Ｂ，Ｐａｙｎｅ  Ｄ，Ｒａｗｌｉｎｓｏｎ  Ｅ，ＭａｃＫｅｎｚｉｅ  Ｒ，Ｄａｎｊｏｕｘ  Ｃ，Ｈｏｄｓｏｎ  Ｉ．「Ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｔｏ  ｓｐｌｉｔ  ｃｏｕｒｓｅ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｗｉｔｈ  ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ  Ｃ  ａｎｄ  ５−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ  ａｓ  ｉｎｉｔｉａｌ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｌａｒｙｎｇｅａｌ  ａｎｄ  ｈｙｐｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．」ＩＪ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｂｉｏｌ  Ｐｈｙｓ，１９９３：２５（４）：６１３−８（特に、５−ＦＵを使用する抗癌プロトコルに関する開示のため、本明細書において参考として援用される）に開示されたような、マイトマイシンＣおよびフルオロウラシルの使用を含む頭頸部癌の処置のためのプロトコルである。この場合、抗癌処置プロトコルは、化学療法に加え、放射線療法を含む。
【０１０５】
処置の効力を増加させるために５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡが追加され得るさらに他の型のプロトコルは、Ｋｅａｎｅ  ＴＪ，Ｃｕｍｍｉｎｇｓ  ＢＪ，Ｏ’Ｓｕｌｌｉｖａｎ  Ｂ，Ｐａｙｎｅ  Ｄ，Ｒａｗｌｉｎｓｏｎ  Ｅ，ＭａｃＫｅｎｚｉｅ  Ｒ，Ｄａｎｊｏｕｘ  Ｃ，Ｈｏｄｓｏｎ  Ｉ．「Ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｔｏ  ｓｐｌｉｔ  ｃｏｕｒｓｅ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｗｉｔｈ  ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ  Ｃ  ａｎｄ  ５−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ  ａｓ  ｉｎｉｔｉａｌ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｌａｒｙｎｇｅａｌ  ａｎｄ  ｈｙｐｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．」ＩＪ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｂｉｏｌ  Ｐｈｙｓ，１９９３：２５（４）：６１３−８（特に、５−ＦＵを含む抗癌プロトコルに関する開示のため、本明細書において参考として援用される）に開示されたもののような、５−ＦＵをマイトマイシンＣと組み合わせる抗癌プロトコル、およびＣａｌａｉｓ  Ｇ，Ａｌｆｏｎｓｉ  Ｍ，Ｂａｒｄｅｔ  Ｅら，「Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｖｅｒｓｕｓ  ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ａｄｖａｎｃｅｄ−ｓｔａｇｅ  ｏｒｏｐｈａｒｙｎｘ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．」Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ  １９９９；９１：２０８１−６（特に、５−ＦＵを使用する抗癌レジメンに関する開示のため、本明細書において参考として援用される）に開示されたような、カルボプラチンの使用を５−ＦＵと組み合わせるものである。これらの処置において、抗癌処置プロトコルは、化学療法に加え、放射線療法を含む。
【０１０６】
本発明は、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを同時投与することにより、５−ＦＵのアナログまたはプロドラッグおよび付加的な抗癌薬（チミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）を含むプロトコルの効力を増加させる方法を含む。カペシタビンおよびドセタキセルを含む抗癌レジメンの例は、Ｏ’Ｓｈａｕｇｈｎｅｓｓｙ  Ｊら，Ｓｕｐｅｒｉｏｒ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｗｉｔｈ  ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ  ｐｌｕｓ  ｄｏｃｅｔａｘｅｌ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ  ｐｒｅ−ｔｒｅａｔｅｄ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ：ｐｈａｓｅ  ＩＩＩ  ｔｒｉａｌ  ｒｅｓｕｌｔｓ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２００２；２０：２８１２−２３（特に、カペシタビンを使用した抗癌プロトコルの開示のため、本明細書において参考として援用される）に開示されている。５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡは、付加的な癌薬物と組み合わせてテガフール−ウラシル（ＵＦＴ）を含むプロトコル、例えば、Ｆｅｌｉｕ  Ｊ．ら「Ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ＵＦＴ  ａｎｄ  ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ  ｉｎ  ｆｉｒｓｔ−ｌｉｎｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ．」Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ２００４  ９１：１７５８−６２（特に、ＵＦＴを使用した抗癌プロトコルの開示のため、本明細書において参考として援用される）に開示されたような、オキサリプラチンを含むプロトコルにも追加され得る。
【０１０７】
上記のプロトコルへの参照は、例にすぎず、決して本発明を限定することは意図されない。処置の効力を増加させるために５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡが追加され得る抗癌プロトコルは、科学文献および医学文献、ならびに病院、癌センター、および診療所の供給源を含む任意の信頼性のある情報源から入手され得る。５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの投与を含めることによりプロトコルの効力を増加させる際、５−ＦＵ、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡのいずれかまたは両方、そして妥当である場合には、１つ以上の付加的な抗癌薬の投薬量およびスケジュールを改変することは、本発明の範囲内である。そのような改変は、容認されている医学的実務に従い、処置に対する患者の反応をモニタリングする訓練された医師によってなされ得る。
【０１０８】
いくつかの好ましい実施形態において、本発明は、チミジル酸シンターゼの葉酸補因子としてのロイコボリンが５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換される、５−ＦＵおよびチミジル酸シンターゼの葉酸補因子を含む抗癌薬レジメンの効力を増加させる方法を含む。本発明は、抗癌薬レジメンの効力を増加させる方法を含み、ここで上記抗癌薬レジメンは、５−ＦＵおよびチミジル酸シンターゼの葉酸補因子を含み、そして効力は、チミジル酸シンターゼの葉酸補因子としてのロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換することによって増加される。
【０１０９】
本発明のこの局面の好ましい実施形態において、その方法は、５−ＦＵまたはそのアナログもしくはプロドラッグ、ロイコボリン、および付加的な抗癌薬を含む抗癌薬レジメンを入手する工程；ならびに改良された効力を有する薬物レジメンを得るため、薬物レジメンの中のロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換する工程、を包含する。
【０１１０】
関連する局面において、本発明は、５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグを含む、患者に投与される抗癌薬レジメンの中のロイコボリンを５，１０−５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換することにより、癌患者の生存期間を増加させるための方法を提供する。その方法は、５−ＦＵまたはそのアナログもしくはプロドラッグおよびロイコボリンを含む抗癌薬物プロトコルを得る工程；抗癌薬物プロトコルの中のロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換する工程；ならびに改変された抗癌薬物プロトコルにより癌患者を処置する工程、を包含する。その方法は、５−ＦＵの投与の前、後、または同時に、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを患者に投与する工程を包含する。
【０１１１】
この局面のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、レジメンの中のロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換することによりレジメンの効力が増加する、カペシタビンまたはＵＦＴ（これらに限定されない）のような５−ＦＵのアナログまたはプロドラッグおよびロイコボリンを含む抗癌薬レジメンの効力を増加させるための方法を含む。本発明は、カペシタビンまたはＵＦＴ（これらに限定されない）のような５−ＦＵのアナログまたはプロドラッグを含む、患者へ投与される抗癌薬レジメンの中のロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換することにより、癌患者の生存期間を増加させるための方法も提供する。
【０１１２】
この局面のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、薬物レジメンの中のロイコボリンを５，１０−５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換することにより、癌を有する患者への５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグ、ロイコボリン、および少なくとも１つの付加的な抗癌薬（５−ＦＵまたはチミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）を含む抗癌処置の効力を増加させるための方法を含む。その方法は、５−ＦＵまたはそのアナログもしくはプロドラッグ；ロイコボリン；および少なくとも１つの付加的な抗癌薬を含む抗癌薬物プロトコルを得る工程；ならびに抗癌薬物プロトコルの中のロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換する工程、を包含する。
【０１１３】
関連する局面において、本発明は、５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグおよび少なくとも１つの付加的な抗癌薬（５−ＦＵまたはチミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）を含む、患者に投与される抗癌薬レジメンの中のロイコボリンを５，１０−５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換することにより、癌患者の生存期間を増加させるための方法を提供する。その方法は、５−ＦＵまたはそのアナログもしくはプロドラッグ、ロイコボリン、および少なくとも１つの付加的な抗癌薬を含む抗癌薬物プロトコルを得る工程；抗癌薬物プロトコルの中のロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換する工程；ならびに改変された抗癌薬物プロトコルにより癌患者を処置する工程、を包含する。その方法は、５−ＦＵの投与の前、後、または同時に、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを患者に投与する工程を包含する。付加的な抗癌薬は、５−ＦＵの投与の前、後、または同時に投与され得る。
【０１１４】
ロイコボリンと比較して、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの抗腫瘍活性および減少した全身毒性のため、ならびにロイコボリンおよび５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの類似した化学的経路および代謝的経路のため、本発明者らは、ある範囲の現在の化学療法レジメンの中のロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換し得ることを企図する。現在、一般的に５−ＦＵ＋ロイコボリンと組み合わせて使用されている薬物の例は、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）、オキサリプラチン、ゲムシタビン、レバミゾール、マイトマイシンＣ、およびビノレルビンである。本発明は、これらのレジメンの中のロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換した処置を含む。ロイコボリンの５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡへの置換は、低下した毒性と共に、増強された治療効果を提供し得る。非限定的な例として、ロイコボリンが５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換され得る現在の薬物組み合わせレジメンには、以下のものが含まれる：
・ＡＩＯレジメン（フォリン酸、５−ＦＵ、イリノテカン）：
・５２週毎に、４週間、週１回、１日目に２時間かけてイリノテカン（１００ｍｇ／ｍ２）を点滴；１日目に２時間かけてロイコボリン（５００ｍｇ／ｍ２）を点滴；その後、２４時間かけて移動式ポンプを介して５−ＦＵ（２，０００ｍｇ／ｍ２）を静脈内（ＩＶ）ボーラス
・Ｄｏｕｉｌｌａｒｄレジメン（フォリン酸、５−ＦＵ、イリノテカン）：
・２週毎に、１日目に２時間かけてイリノテカン（１８０ｍｇ／ｍ２）を点滴；１日目および２日目に２時間かけてロイコボリン（２００ｍｇ／ｍ２）を点滴；その後、負荷量の５−ＦＵ（４００ｍｇ／ｍ２）をＩＶボーラス、次いで、１日目および２日目に２２時間かけて移動式ポンプを介して５−ＦＵ（６００ｍｇ／ｍ２）
・ＦＯＬＦＯＸ４レジメン（オキサリプラチン、ロイコボリン、５−ＦＵ）：
・２週毎に、１日目に２時間かけてオキサリプラチン（８５ｍｇ／ｍ２）を点滴；１日目および２日目に２時間かけてロイコボリン（２００ｍｇ／ｍ２）を点滴；その後、負荷量の５−ＦＵ（４００ｍｇ／ｍ２）をＩＶボーラス、次いで、１日目および２日目に２２時間かけて移動式ポンプを介して５−ＦＵ（６００ｍｇ／ｍ２）
・ＦＯＬＦＯＸ６レジメン（オキサリプラチン、ロイコボリン、５−ＦＵ）：
・２週毎に、１日目に２時間かけてオキサリプラチン（８５〜１００ｍｇ／ｍ２）を点滴；１日目に２時間かけてロイコボリン（４００ｍｇ／ｍ２）を点滴；その後、１日目に負荷量の５−ＦＵ（４００ｍｇ／ｍ２）をＩＶボーラス、次いで、４６時間かけて移動式ポンプを介して５−ＦＵ（２，４００〜３，０００ｍｇ／ｍ２）
・ＦＯＬＦＩＲＩレジメン（フォリン酸、５−ＦＵ、イリノテカン）：
・２週毎に、１日目に２時間かけてイリノテカン（１８０ｍｇ／ｍ２）を点滴；１日目に２時間かけてロイコボリン（４００ｍｇ／ｍ２）を点滴；その後、１日目に負荷量の５−ＦＵ（４００ｍｇ／ｍ２）をＩＶボーラス、次いで、４６時間かけて移動式ポンプを介して５−ＦＵ（２，４００〜３，０００ｍｇ／ｍ２）
・ＩＦＬ（またはＳａｌｔｚ）レジメン（イリノテカン、５−ＦＵ、ロイコボリン）：
・６週のうち４週間、週１回、イリノテカン（１２５ｍｇ／ｍ２）、５−ＦＵ（５００ｍｇ／ｍ２）ＩＶボーラス、およびロイコボリン（２０ｍｇ／ｍ２）ＩＶボーラス。
【０１１５】
ロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換し得る他のレジメンとしては、例えば、（Ａｎｄｒｅら「Ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ，５−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ，ａｎｄ  ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ  ｆｏｒ  ｌｏｃａｌｌｙ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ａｎｄ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ（ＦＯＬＦＵＧＥＭ  ２）Ｇａｓｔｒｏｅｎｅｔｅｒｏｌ  Ｃｌｉｎ  Ｂｉｏｌ；２００４  ２８：６４５−６５０（特に、５−ＦＵを含む癌処置プロトコルの開示のため、本明細書において参考として援用される）に開示されたような）膵臓癌を処置するために使用されるＦＯＬＦＵＧＥＭ１（（５−フルオロウラシル（ＦＵ）ボーラス４００ｍｇ／ｍ２、次いで５−ＦＵ  ２〜３ｇ／ｍ２／４６時間およびゲムシタビン１０００ｍｇ／ｍ２（３０分）と組み合わせたロイコボリン４００ｍｇ／ｍ２）およびＦＯＬＦＵＧＥＭ２（１４日毎のサイクルで、ロイコボリン４００ｍｇ／ｍ２（２時間）、その後、５−ＦＵ  １０００ｍｇ／ｍ２（２２時間）、次いでゲムシタビン８００ｍｇ／ｍ２（１０ｍｇ／ｍ２／分））を含む、５−ＦＵおよび少なくとも１つのその他の抗癌薬との組み合わせが挙げられる。
【０１１６】
別の例において、（Ｐｏｐｌｉｎら「Ｐｈａｓｅ  ＩＩＩ  Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｇｒｏｕｐ  ９４１５／Ｉｎｔｅｒｇｒｏｕｐ  ０１５３  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｔｒｉｌａ  ｏｆ  ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ，ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ，ａｎｄ  ｌｅｖａｍｉｓｏｌｅ  ｖｅｒｓｕｓ  ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ  ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  ｉｎｆｕｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｌｅｖａｍｉｓｏｌｅ  ｆｏｒ  ａｄｊｕｖａｎｔ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｔａｇｅ  ＩＩＩ  ａｎｄ  ｈｉｇｈ−ｒｉｓｋ  ｓｔａｇｅ  ＩＩ  ｃｏｌｏｎ  ｃａｎｃｅｒ．」Ｊ．Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２００５  ２３：１８１９−２５（特に、５−ＦＵを使用する癌処置プロトコルの開示のため、本明細書において参考として援用される）に開示されたような）５−ＦＵおよびレバミゾールも含む組み合わせ療法において、ロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換することができる。
【０１１７】
さらに別の例において、（Ｙｅｈら「Ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｗｅｅｋｌｙ  ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ  ａｎｄ  ２４−ｈｒ  ｉｎｆｕｓｉｏｎ  ｏｆ  ｈｉｇｈ−ｄｏｓｅ  ５−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ  ｐｌｕｓ  ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ  ａｓ  ｆｉｒｓｔ−ｌｉｎｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．」Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ２００５  ９２：１０１３−８（特に、５−ＦＵを含む癌処置プロトコルの開示のため、本明細書において参考として援用される）に開示されたような）５−ＦＵおよびビノレルビンも含む組み合わせ療法において、ロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換することができる。
【０１１８】
上記の例は、決して限定的なものであることは意図されない。例えば、投薬量およびレジメンは、患者に対する毒性を最小限に抑えるか、または効力を改良するため、改変または最適化され得る。さらに、本明細書に記載されていない多くの抗癌薬が、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡおよび５−ＦＵと組み合わせられ得る。本発明者らは、次世代型の５−ＦＵ、特に、経口型の５−ＦＵ（例えば、ゼローダ、カペシタビン）およびＵＦＴとの組み合わせ療法における５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの使用も提唱する。
【０１１９】
５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの他の使用は、抗腫瘍活性を有するモノクローナル抗体のような新たなクラスの生物学的抗腫瘍試薬との組み合わせ療法における使用である。５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡと（好ましくは５−ＦＵと）組み合わせられ得る抗体の例には、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、アバスチン、ベバシツマブ（Ｂｅｖａｃｕｚｉｍａｂ））および抗ＥＧＦレセプター（例えば、エルビタックス（Ｅｒｂｉｔｕｘ）、セツキシマブ、ハーセプチン）が含まれる。実施例１および２に示されるように、ヌードマウスにおける結腸直腸癌の組み合わせ５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ／アバスチンによる処置は、他の薬物組み合わせより大きく腫瘍増殖を阻害する。
【０１２０】
５−ＦＵ（またはそのアナログもしくはプロドラッグ）および付加的な抗癌薬を含む処置レジメンに５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡが追加される方法の他の局面において、本発明者らは、１つ以上の付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つが、５−ＦＵを含むレジメンにおいて典型的に使用されている付加的な抗癌薬の投薬量に比べて増加した投薬量で投与され得ることを企図する。従って、本発明は、薬物レジメンに５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを追加すること、および１つ以上の付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つの投薬量を増加させることにより、５−ＦＵおよび少なくとも１つの付加的な抗癌薬（５−ＦＵまたはそのアナログもしくはプロドラッグ、またはチミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）を含む抗癌薬物プロトコルの効力を増加させる方法を含む。その方法は、５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグおよび少なくとも１つの付加的な抗癌薬（５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグ、またはチミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）を含む抗癌薬物プロトコルを得る工程；抗癌薬物プロトコルに５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを追加する工程；ならびに抗癌薬物プロトコルの中の１つ以上の付加的な抗癌薬の投薬量を増加させる工程、を包含する。この局面において、抗癌レジメンに５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを追加しながら、そのレジメンにおいて使用される付加的な抗癌薬の投薬量を増加させることは、禁制的に毒性を増加させることなく、処置の効力を増加させ得る。
【０１２１】
関連する局面において、本発明は、５−ＦＵおよび１つ以上の付加的な抗癌薬（５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグ、またはチミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）を含む抗癌レジメンに５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを追加すること、ならびにレジメンにおいて使用される１つ以上の付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つの投薬量を増加させることにより、癌患者の生存期間を増加させる方法を含む。
【０１２２】
５−ＦＵを１つ以上の抗癌薬（チミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）と組み合わせる多数の化学療法プロトコルが、癌療法の領域において公知である。例えば、この適用において参照されるプロトコルには、５−ＦＵが、シクロホスファミド、エピルビシン、ドコルビシン（ｄｏｃｏｒｕｂｉｃｉｎ）、カルボプラチン、またはマイトマイシンＣと組み合わせられるプロトコルが含まれる。これらの例は、本発明の範囲を限定するものでは決してない。５−ＦＵと組み合わせてこれらまたは他の抗癌薬を使用する癌療法の領域において公知の、または将来的に使用される他のプロトコルも、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを含めること、および１つ以上の付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つの投薬量を増加させることによって改変され得る。
【０１２３】
本発明は、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを同時投与することにより、５−ＦＵのアナログまたはプロドラッグおよび少なくとも１つの付加的な抗癌薬（チミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）を含むプロトコルの効力を増加させる方法を含む。５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを含めること、および付加的な抗癌薬の投薬量を増加させることにより改変され得るプロトコルの非限定的な例としては、カペシタビンおよびドセタキセルを含む抗癌レジメン、ならびにＵＦＴおよびオキサリプラチンを含む抗癌レジメンが本明細書において参照される。
【０１２４】
プロトコルへの上記の参照は、例にすぎず、決して本発明を限定することは意図されない。５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡが追加され得る抗癌プロトコルは、科学文献および医学文献、ならびに病院、癌センター、および診療所の供給源を含む任意の信頼性のある供給源から入手され得る。用量上昇研究は、毒性および効力をモニタリングする確立されたプロトコルに従って実施され得る。抗癌処置プロトコルの最適化において、５−ＦＵ、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡのいずれかまたは両方、および１つ以上の付加的な抗癌薬の投薬量およびスケジュールを改変することは、本発明の範囲内である。そのような改変は、容認された医学的な実務に従い、処置に対する患者の応答をモニタリングする訓練された医師によってなされ得る。
【０１２５】
さらに別の関連する局面において、本発明は、プロトコルの中のロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに交換すること、および少なくとも１つの付加的な抗癌薬の投薬量を増加させることにより、５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグ、ロイコボリン、および少なくとも１つの付加的な抗癌薬を含む抗癌薬物プロトコルの効力を増加させる方法を提供する。その方法は、５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグ、ロイコボリン、および少なくとも１つの付加的な抗癌薬（５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグ、またはチミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）を含む抗癌薬物プロトコルを得る工程；抗癌薬物プロトコルの中のロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換する工程；ならびに抗癌薬物プロトコルの中の少なくとも１つの付加的な抗癌薬の投薬量を増加させる工程、を包含する。この局面において、抗癌の中のロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換しながら、レジメンにおいて使用される付加的な抗癌薬の投薬量を増加させることは、禁制的に毒性を増加させることなく、処置の効力を増加させ得る。
【０１２６】
関連する局面において、本発明は、５−ＦＵおよび１つ以上の付加的な抗癌薬（５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグ、またはチミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）を含む抗癌レジメンの中のロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換すること、ならびにレジメンにおいて使用される１つ以上の付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つの投薬量を増加させることにより、癌患者の生存期間を増加させる方法を含む。
【０１２７】
５−ＦＵおよびロイコボリンを１つ以上の抗癌薬（チミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）と組み合わせる多数の化学療法プロトコルが、癌療法の領域において公知である。例えば、この適用において参照されるプロトコルには、５−ＦＵが、ゲムシタビン、ビノレルビン、レバミゾール、イリノテカン、オキサリプラチン、またはマイトマイシンＣと組み合わせられるプロトコルが含まれる。これらの例は、本発明の範囲を限定するものでは決してない。５−ＦＵおよびロイコボリンと組み合わせてこれらまたは他の抗癌薬を使用する癌療法の領域において公知の、または将来的に使用される他のプロトコルも、ロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換すること、および１つ以上の付加的な抗癌薬のうちの少なくとも１つの投薬量を増加させることによって改変され得る。
【０１２８】
本発明は、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換すること、および付加的な抗癌薬の投薬量を増加させることにより、５−ＦＵのアナログまたはプロドラッグ、ロイコボリン、および少なくとも１つの付加的な抗癌薬（チミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）を含むプロトコルの効力を増加させる方法を含む。
【０１２９】
プロトコルへの上記の参照は、例にすぎず、決して本発明を限定することは意図されない。ロイコボリンが５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換され得る、複数の抗癌薬を含む抗癌プロトコルは、科学文献および医学文献、ならびに病院、癌センター、および診療所の供給源を含む任意の信頼性のある供給源から入手され得る。用量上昇研究は、毒性および効力をモニタリングする確立されたプロトコルに従って実施され得る。抗癌処置プロトコルの最適化において、５−ＦＵ、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡのいずれかまたは両方、および１つ以上の付加的な抗癌薬の投薬量およびスケジュールを改変することは、本発明の範囲内である。そのような改変は、容認された医学的な実務に従い処置に対する患者の応答をモニタリングする訓練された医師によってなされ得る。
【０１３０】
本発明者らは、薬物レジメンに５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡが追加された場合、５−ＦＵが、組み合わせ療法において典型的に使用されている投薬量に比べて増加した投薬量で投与され得ることも企図する。従って、本発明は、薬物レジメンに５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを追加することにより、５−ＦＵ（またはそのアナログもしくはプロドラッグ）および付加的な抗癌薬（チミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）を含む癌を処置するための薬物レジメンにおいて使用される５−ＦＵの投薬量を増加させることにより、抗癌薬物プロトコルの効力を増加させる方法を含む。その方法は、５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグおよび少なくとも１つの付加的な抗癌薬（チミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）を含む抗癌薬物プロトコルを得る工程；抗癌薬物プロトコルに５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを追加する工程；ならびに抗癌薬物プロトコルの中の５−ＦＵの投薬量を増加させる工程、を包含する。この局面において、抗癌レジメンに５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡを追加しながら、そのレジメンにおいて使用される５−ＦＵの投薬量を増加させることは、禁制的に毒性を増加させることなく、処置の効力を増加させ得る。
【０１３１】
さらに別の関連する局面において、本発明は、ロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに交換することにより、５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグ、ロイコボリン、および付加的な抗癌薬を含む抗癌薬物プロトコルにおける５−ＦＵの用量を増加させる方法を提供する。その方法は、５−ＦＵまたは５−ＦＵのアナログもしくはプロドラッグ、ロイコボリン、および少なくとも１つの付加的な抗癌薬（チミジル酸シンターゼの葉酸補因子以外）を含む抗癌薬物プロトコルを得る工程；抗癌薬物プロトコルの中のロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換する工程；ならびに抗癌薬物プロトコルの中の５−ＦＵ（またはそのアナログもしくはプロドラッグ）の投薬量を増加させる工程、を包含する。この局面において、抗癌の中のロイコボリンを５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡに置換しながら、レジメンにおいて使用される５−ＦＵの投薬量を増加させることは、禁制的に毒性を増加させることなく、処置の効力を増加させ得る。
【実施例】
【０１３２】
（実施例１：５−ＦＵ、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、ロイコボリン、抗ＶＥＧＦ、およびオキサリプラチンによる結腸直腸腫瘍ＨＴ−２９の処置に関するヌードマウス研究）
（材料および方法）
（マウス）
ヌード（ｎｕ／ｎｕ）マウスはチャールズリバー研究所（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）から入手された。マウスは、全ての研究の開始時、６〜８週齢であった。マウスは、ＬＡＢインターナショナル（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）の飼育施設（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で、１ケージ当たり４匹で、隔離されたヘパフィルター換気ケージにおいて維持された。
【０１３３】
（細胞株）
ヒト結腸癌ＨＴ−２９は、アメリカンティッシュカルチャーコレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（ＡＴＣＣ）から入手された。細胞株は、３７℃、５％ＣＯ２の加湿インキュベーターにおいて、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、２ｍＭ  ｌ−グルタミン、１００単位／ｍｌのペニシリン、および１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを含有しているＤＭＥＭ（ＤＭＥＭ−１０）において維持された。細胞株は、インビボ実験の前に２〜３日毎に継代された。
【０１３４】
（薬物）
５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）は、カルバイオケム（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）から入手された。ロイコボリン（ロイコボリン）およびオキサリプラチンは、シグマアルドリッチ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）から入手された。５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡは、エプロバ（Ｅｐｒｏｖａ）ＡＧ製であった。血管内皮増殖因子に対するモノクローナル抗体（抗ＶＥＧＦ）は、Ｒ＆Ｄシステムズ（Ｓｙｓｔｅｍｓ）（ヒトＶＥＧＦアイソフォーム１６５を認識するクローン２６５０３）またはジェネンテック（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）（アバスチン）から入手された。
【０１３５】
（ＨＴ−２９結腸直腸癌ヌードマウス研究＃１）
ＨＴ−２９細胞を、注射のため以下のように調製した。ＨＴ−２９細胞のコンフルエントな組織培養フラスコを、ＰＢＳにより１回洗浄した後、トリプシンにより細胞を剥離した。次いで、剥離された細胞を、ＤＭＥＭ−１０で１回洗浄した後、ＰＢＳにより１回洗浄した。最後に、細胞をＰＢＳに２×１０７細胞／ｍｌで再懸濁させた。ヌードマウス（ｎｕ／ｎｕ）に、２８ゲージインスリン針／注射器を使用して、１００μｌ（２×１０６細胞）のＨＴ−２９細胞を皮下接種した。腫瘍が体積１００〜３００ｍｍ３に達した時点で、マウスを、腹腔内注射により投与された５−ＦＵ、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、ロイコボリン、オキサリプラチン、および抗ＶＥＧＦ（Ｒ＆Ｄシステムズの抗体）の様々な組み合わせにより処置した。抗ＶＥＧＦおよびオキサリプラチンを除く全ての薬物が、５日間連続で１日１回投薬された（０．６ｍｇ／マウス／薬物）。抗ＶＥＧＦは、５日目に１回（１００μｇ／マウス）投薬された。オキサリプラチンは、１日目に１回投薬された（０．３ｍｇ／マウス）。さらに、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡまたはロイコボリンは、５−ＦＵ注射の２０分前に注射された。腫瘍サイズはノギスを使用して２〜３日毎に測定された。腫瘍体積は以下の式を使用して計算された：腫瘍体積＝（長さ×幅２）／２。腫瘍が直径＞２ｃｍに達するか、または腫瘍が潰瘍化した時点で、マウスをＣＯ２により安楽死させた後、頚部脱臼を行った。
【０１３６】
（データ分析）
腫瘍および血液のデータの統計分析は、グラフパッドプリズム（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ）科学ソフトウェアを使用して実施された。ボンフェロニ（Ｂｏｎｆｅｒｏｎｎｉ’ｓ）Ｔ検定が、複数の群の間の腫瘍サイズを比較するために使用された。ログランク（Ｌｏｇｒａｎｋ）検定は、群生存曲線間の統計的な差を決定するために使用された。２つの群のみが比較されるいくつかの場合には、スチューデント（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ）Ｔ検定が群測定値間の有意性を決定するために使用された。
【０１３７】
（結果）
ヌードマウスを、表２に記載された薬物組み合わせにより処置した。この研究において、本発明者らは、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ処置をオキサリプラチンもしくは（Ｒ＆Ｄシステムズから入手された）抗ＶＥＧＦ抗体と組み合わせることにより、他の薬物組み合わせより大きく結腸直腸腫瘍の増殖を阻害し得るか否かを調査することを望んだ。薬物濃度および処置日は、材料および方法のセクションに記載されている。処置後、腫瘍サイズを２〜３日毎に測定し、腫瘍体積を計算した。次いで、処置開始からの時間に対して腫瘍体積をプロットした（図１および２）。グラフを単純化するため、本発明者らは、分析を、抗ＶＥＧＦデータを含むグラフと、オキサリプラチンデータを含む別のセットを含むグラフとに分割した。各処置群についてのベストフィット曲線を計算し、これらの図中にプロットした。図１に見られるように、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ／抗ＶＥＧＦで処置されたマウスは、最も遅い腫瘍増殖曲線を有しており、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡまたは５−ＦＵ／抗ＶＥＧＦで処置されたマウスがそれに続いた。
【０１３８】
【表２】
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本発明者らは、処置後の平均腫瘍体積間の差も分析した。抗ＶＥＧＦデータセットについての様々な処置の組み合わせ（図３）を比較し、本発明者らは、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ／抗ＶＥＧＦで処置されたマウスの平均腫瘍体積（４７８．６±１０２．７、平均値±ＳＥＭ、ｎ＝７）が、５−ＦＵ（７５２．５±１０４．２、ｎ＝８）、５−ＦＵ／ロイコボリン（７０７．５±９３．６、ｎ＝８）、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ（５２２．５±７８．２、ｎ＝８）、および５−ＦＵ／抗ＶＥＧＦ（５０２．５±６４．１、ｎ＝８）で処置されたマウスより小さいことを観察した。オキサリプラチンで処置されたマウスは、最大の腫瘍を有しており（腫瘍体積８７５．０＋９０．６、平均＋ＳＥＭ、ｎ＝８）（図４）、このことから、ＨＴ−２９腫瘍がこの薬物に対しては応答性でないことが示された（Ｐｌａｓｅｎｃｉａら（２００２）Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｏ．２１８８を参照のこと）。３重組み合わせ５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ／抗ＶＥＧＦで処置されたマウスが、全ての抗ＶＥＧＦ組み合わせの中で最も小さな腫瘍サイズを有していたのに対し（図３）、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ／オキサリプラチン（７３５．０±８０．３、ｎ＝８）という３重薬物組み合わせを受容した処置群には等価な腫瘍阻害が欠けていたのは、おそらく、オキサリプラチンに対するＨＴ−２９腫瘍の抵抗性のためである（図４）。
【０１３９】
全ての処置群についてのマウス生存曲線も計算した。明白な全身毒性、腫瘍潰瘍化が見られるか、または腫瘍直径が＞２ｃｍに達した時点で、マウスを安楽死させた。研究期間の完了時（４２日）、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡにより処置されたマウスの７５％がまだ生存していた（図５）。この生存率は、５−ＦＵのみにより処置されたマウス（２５％、ｐ＜０．０５、Ｌｏｇｒａｎｋテスト）より有意に長かった。５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡで処置されたマウスに加え、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ／抗ＶＥＧＦで処置されたマウスも、全ての他の処置群より長く生存した（５７％）。他の処置群と比較して、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ／オキサリプラチンにより処置されたマウス（２５％）（図６）において防御が欠如していたのは、オキサリプラチンに対するＨＴ−２９腫瘍の明らかな抵抗性が原因である可能性が最も高い（図３）。オキサリプラチン処置亜群分析について、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ処置は、最も大きな生存率上の利益を提供した。
【０１４０】
（実施例２：５−ＦＵ、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、ＦＡ、および抗ＶＥＧＦによる結腸直腸腫瘍ＨＴ−２９の処置に関するヌードマウス研究）
（材料および方法）
（マウス）
ヌード（ｎｕ／ｎｕ）マウスはチャールズリバー研究所から入手された。マウスは、全ての研究の開始時、６〜８週齢であった。マウスは、ＬＡＢインターナショナルの飼育施設（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で、１ケージ当たり４匹で、隔離されたヘパフィルター換気ケージにおいて維持された。
【０１４１】
（細胞株）
ヒト結腸癌ＨＴ−２９は、アメリカンティッシュカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から入手された。細胞株は、３７℃、５％ＣＯ２の加湿インキュベーターにおいて、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、２ｍＭ  ｌ−グルタミン、１００単位／ｍｌのペニシリン、および１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを含有しているＤＭＥＭ（ＤＭＥＭ−１０）において維持された。細胞株は、インビボ実験の前に２〜３日毎に継代された。
【０１４２】
（薬物）
５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）は、カルバイオケムから入手された。ロイコボリン（ロイコボリン）およびオキサリプラチンは、シグマアルドリッチから入手された。５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸は、エプロバＡＧ製であった。血管内皮増殖因子に対するモノクローナル抗体（抗ＶＥＧＦ）は、Ｒ＆Ｄシステムズ（ヒトＶＥＧＦアイソフォーム１６５を認識するクローン２６５０３）またはジェネンテック（アバスチン）から入手された。
【０１４３】
（ＨＴ−２９結腸直腸癌ヌードマウス研究＃２）
ＨＴ−２９細胞を、注射のため以下のように調製した。ＨＴ−２９細胞のコンフルエントな組織培養フラスコを、ＰＢＳにより１回洗浄した後、トリプシンにより細胞を剥離した。次いで、剥離された細胞を、ＤＭＥＭ−１０で１回洗浄した後、ＰＢＳにより１回洗浄した。最後に、細胞をＰＢＳに１×１０７細胞／ｍｌで再懸濁させた。ヌードマウス（ｎｕ／ｎｕ）に、２８ゲージインスリン針／注射器を使用して、１００μｌ（１０６細胞）のＨＴ−２９細胞を皮下接種した。腫瘍が体積３０〜１００ｍｍ３に達した時点で、マウスを、腹腔内注射により投与された５−ＦＵ、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、ロイコボリン、および抗ＶＥＧＦ（ジェネンテックのアバスチン抗体）の様々な組み合わせにより処置した。１日目および７日目に２回（１００μｇ／マウス）投薬された抗ＶＥＧＦを除き、全ての薬物が、７日間連続で１日１回投薬された（０．６ｍｇ／マウス／薬物）。さらに、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡまたはロイコボリンは、５−ＦＵ注射の２０分前に注射された。腫瘍サイズはノギスを使用して２〜３日毎に測定された。腫瘍体積は以下の式を使用して計算された：腫瘍体積＝（長さ×幅２）／２。腫瘍が直径＞２ｃｍに達するか、または腫瘍が潰瘍化した時点で、マウスをＣＯ２により安楽死させた後、頚部脱臼を行った。
【０１４４】
（データ分析）
腫瘍および血液のデータの統計分析は、グラフパッドプリズム科学ソフトウェアを使用して実施された。ボンフェロニＴ検定が、複数の群の間の腫瘍サイズを比較するために使用された。ログランク検定は、群生存曲線間の統計的な差を決定するために使用された。２つの群のみが比較されるいくつかの場合には、スチューデントＴ検定が群測定値間の有意性を決定するために使用された。
【０１４５】
（結果）
上記の最初のヌードマウス研究において得られた予備結果に基づき、本発明者らは、研究設計を一部改変して、別のＨＴ−２９ヌードマウス研究を繰り返した。改変には、より大きい群サイズ、Ｒ＆Ｄシステムズの抗体のジェネンテックの抗ＶＥＧＦアバスチン抗体への置換、オキサリプラチンの排除、増加した処置日数、および抗ＶＥＧＦ抗体の増加した投薬回数が含まれていた。ヌードマウスを、表３に記載された薬物組み合わせにより処置した。この研究において、本発明者らは、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ処置を抗ＶＥＧＦ抗体アバスチンと組み合わせることにより、他の薬物組み合わせより大きく結腸直腸腫瘍の増殖を阻害し得るか否かを調査することを望んだ。薬物濃度および処置日は、材料および方法のセクションに記載されている。処置後、腫瘍サイズを２〜３日毎に測定し、腫瘍体積を計算した。次いで、腫瘍体積を、処置開始からの時間に対してプロットした（図７）。各処置群についてのベストフィット曲線を計算し、この図中にプロットした。ベストフィット曲線分析に基づき、各群についての平均倍化時間を計算した（表４）。５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ／アバスチンの組み合わせで処置されたマウスは、他の全ての群と比較して、最も遅い増殖速度論を示した（倍化時間＝９．９日）。これらの結果は、先に記載された１回目のヌードマウス腫瘍研究で得られた結果と一致している。
【０１４６】
【表３】
2007531728.tif 000005
【０１４７】
【表４】
2007531728.tif 000006
本発明者らは、処置開始後１９日目に決定した平均腫瘍体積の差も分析した。平均腫瘍体積±ＳＥＭは、図８にプロットされている。本発明者らは、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ／アバスチンで処置されたマウスの平均腫瘍体積（９４．０±１０．２、平均±ＳＥＭ、ｎ＝１２）が、５−ＦＵ（３６８．５±６３．７、ｎ＝１０）、５−ＦＵ／ロイコボリン（２６２．０±３６．５、ｎ＝１１）、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ（２２５．４±３２．０、ｎ＝１２）、５−ＦＵ／アバスチン（２２５．５±２８．８、ｎ＝１２）で処置されたマウスより有意に少ないが（ｐ＜０．０５、ボンフェロニＴ検定）、５−ＦＵ／ロイコボリン／アバスチンで処置されたマウス（１４０．８±２０．３、ｎ＝１２）よりは有意に少なくないことを観察した。対照的に、５−ＦＵ／ロイコボリン／アバスチンで処置されたマウスの平均腫瘍体積は、５−ＦＵで処置されたマウスにおける腫瘍体積より有意に少ないのみであり、他の処置群よりは有意に少なくなかった。
【０１４８】
全ての処置群についてのマウス生存曲線も計算した。明白な全身毒性、腫瘍潰瘍化が見られるか、または腫瘍直径が＞２ｃｍに達した時点で、マウスを安楽死させた。研究完了前（処置開始から３８日目）、生理食塩水、５−ＦＵ、または５−ＦＵ＋アバスチンで処置されたマウスの≦５０％がまだ生存していた（図９）。対照的に、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡまたはロイコボリンのいずれかと組み合わせられた５−ＦＵ＋アバスチンで処置されたマウスの９２％が生存していた。様々な薬物組み合わせについてのこの生存率パターンは、前記の１回目のヌードマウス結腸直腸腫瘍研究において観察された結果と類似している。
【０１４９】
（実施例３：５−ＦＵ、ロイコボリン、および５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの組み合わせにより処置されたＢａｌｂ／ｃマウスの血液分析）
（材料および方法）
（マウス）
Ｂａｌｂ／ｃマウスはチャールズリバー研究所から入手された。マウスは、全ての研究の開始時、６〜８週齢であった。マウスは、ＬＡＢインターナショナルの飼育施設（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で、１ケージ当たり４匹で、隔離されたヘパフィルター換気ケージにおいて維持された。
【０１５０】
（薬物）
５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）は、カルバイオケムから入手された。ロイコボリン（フォリン酸）は、シグマアルドリッチから入手された。５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸（５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ）は、エプロバＡＧ製であった。
【０１５１】
（Ｂａｌｂ／ｃ血液分析研究）
Ｂａｌｂ／ｃマウス、７週齢の雌マウスに、７日間連続で５−ＦＵ、ロイコボリン、および５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの組み合わせを注射した。全ての薬物が、２８ゲージインスリン針／注射器を使用して腹腔内注射された（１００μｌ／マウス、０．６ｍｇ／マウス／薬物）。０日目（薬物注射の前）、８日目、および１３日目に、２００〜２５０μｌ／マウスの血液を、眼窩静脈叢（ｒｅｔｒｏ−ｏｒｂｉｔａｌ）穿刺によりＥＤＴＡでコーティングされたマイクロテイナー（ｍｉｃｒｏｔａｉｎｅｒ）チューブ（ＶＷＲインターナショナル（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ））へと収集した。全血球算定＋血球差は、バイエルアドビア（Ｂａｙｅｒ  Ａｄｖｉａ）１２０ヘマトロジー（Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ）分析装置を使用して、アメリカのラブコープコーポレーション（Ｌａｂｃｏｒｐ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）により決定された。
【０１５２】
（結果）
殺腫瘍活性に加え、５−ＦＵは、骨髄抑制効果のため、正常細胞、特に、造血系の細胞に対して細胞障害性である。ロイコボリンおよび５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの関連した化学的特徴および作用様式のため、本発明者らは、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ組み合わせ療法の類似した毒性プロファイルが存在するか否かを決定することを望んだ。そのため、本発明者らは、５−ＦＵ、ロイコボリン、および５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの様々な組み合わせ（表５）を正常なＢａｌｂ／ｃマウスに注射した。処置前、処置後１週間目および２週間目に、本発明者らは、血液パラメータの変化に関して全血球算定＋差を分析した。さらに、本発明者らは、薬物毒性の定性的および定量的な測定値を分析した。
【０１５３】
【表５】
2007531728.tif 000007
薬物の投薬から１週間後、本発明者らは、全てのマウスが、体毛の毛羽立ち（ｒｕｆｆｌｅｄ  ｆｕｒ）、瀕死、および脱水症を含む、薬物に関連した毒性を有していることを観察した。薬物処置の開始から１２日以内に、５−ＦＵのみおよび５−ＦＵ／ロイコボリンの処置群の全てのマウスが死亡した。対照的に、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ処置群においては、３８％のマウス（１３匹中５匹）が、１４日後に生存していた。全ての処置群についてのカプランマイヤー生存曲線をプロットした（図１０）。５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ処置群  対  ５−ＦＵ／ロイコボリン処置群のログランク統計比較は、生存率の有意な差（ｐ＜０．０５）を示した。
【０１５４】
血液分析は、選択血球型の差も明らかにした（図１１）。本発明者らは、以下の血液パラメータを測定した：白血球（ＷＢＣ）、赤血球（ＲＢＣ）、ヘモグロビン（ＨＧＢ）、ヘマトクリット（ＨＣＴ）、平均細胞体積（ＭＣＶ）、平均細胞ヘモグロビン（ＭＣＨ）、平均細胞ヘモグロビン含量（ＭＣＨＣ）、好中球、リンパ球、血小板（ＰＬＴ）、好酸球、好塩基球、および単球。薬物処置後１週間目に、本発明者らは、５−ＦＵ／ロイコボリンで処置されたマウスより有意に多い白血球を５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡで処置されたマウスにおいて観察した（ｐ＜０．０５、スチューデントｔ検定）。白血球サブセットの中で、本発明者らは、他の処置群より有意に多い血小板および好中球を、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡで処置された群において観察した。
【０１５５】
５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ処置後に血小板および好中球両方のレベルの差が観察されたため、本発明者らは、これらの細胞型をさらに査定した。ＮＣＩの毒性グレード判定基準を使用して、本発明者らは、合わせたグレード１／２の毒性、グレード３の毒性、またはグレード４の毒性のいずれかを有するマウスの割合（％）を計算した。血小板については、本発明者らは、５−ＦＵ単独で処置されたマウスの２５％が、グレードの４毒性を示すことを観察した（図１２）。対照的に、５−ＦＵ／ロイコボリンまたは５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡで処置されたマウスについては、グレード４の毒性は認められなかった。しかしながら、グレード３の毒性を有する５−ＦＵ／ロイコボリンマウス（４５％）とは異なり、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡで処置されたマウスは１５％しかグレード３の血小板毒性を示さなかった。残りの５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡで処置されたマウス（８５％）は、グレード１または２の毒性しか示さない。そのため、このデータは、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡが、５−ＦＵ単独または５−ＦＵ／ロイコボリンよりも軽度の血小板毒性を誘導することを示唆している。
【０１５６】
同様に、本発明者らは、好中球毒性プロファイルを査定した。血小板の差とは対照的に、標準的なＮＣＩグレード決定システムは、処置群間の認めうる程度の好中球の差を明らかにしなかった。例えば、５−ＦＵのみおよび５−ＦＵ／ロイコボリンで処置されたマウスの両方の１００％は、グレード４の毒性を示し、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡで処置されたマウスの９２％が同じグレード４の毒性を示した。５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡで処置されたマウスの残りの８％は、グレード３の毒性を示した（図１３）。しかしながら、グレード４の毒性を示したマウスのより綿密な分析は、定量可能な好中球の差を明らかにした。本発明者らは、グレード４の毒性を有するマウスを、処置後の好中球数の範囲に基づく亜群へと分割した（図１４）。この分析は、５−ＦＵのみにより処置されたマウスの１００％および５−ＦＵ／ロイコボリンで処置されたマウスの８０％が、０〜９９の間の好中球数を有していることを明らかにした。対照的に、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡで処置されたマウスは、４０％しか、この最低レベルの好中球数を示さなかった。グレード４と判定された５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡで処置されたマウスの過半数（５０％）が、２００〜４９９の範囲の好中球数を有していた。従って、このデータは、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡが、５−ＦＵ単独または５−ＦＵ／ロイコボリンより軽度の好中球毒性をもたらすことを示唆している。
【０１５７】
（実施例４：５−ＦＵ、ロイコボリン、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、およびゲムシタビンの組み合わせにより処置されたＢａｌｂ／ｃマウスの体重減少毒性分析）
（材料および方法）
（マウス）
Ｂａｌｂ／ｃマウスはチャールズリバー研究所から入手された。マウスは、研究の開始時、６〜８週齢であった。マウスは、ＬＡＢインターナショナルの飼育施設（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で、１ケージ当たり４匹で、隔離されたヘパフィルター換気ケージにおいて維持された。
【０１５８】
（薬物）
５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）およびロイコボリン（ロイコボリン）は、シグマアルドリッチから入手された。５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸（５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ）は、エプロバＡＧ製であった。ゲムシタビンはイーライリリー（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）製であり、ミオダーム社（Ｍｙｏｄｅｒｍ  Ｉｎｃ．）から購入された。
【０１５９】
（Ｂａｌｂ／ｃ体重分析研究）
Ｂａｌｂ／ｃ雌マウスに、５−ＦＵ、ロイコボリン、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、およびゲムシタビンの組み合わせを注射した。５−ＦＵ、ロイコボリン、および５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡは、５日間連続で（１〜５日目）、腹腔内注射された（１００μｌ／マウス、０．６ｍｇ／マウス／薬物）。ゲムシタビンは、３日毎（１日目、４日目、および７日目）に腹腔内注射された（１００μｌ／マウス、１００μｇ／マウス）。全ての薬物が２７ゲージインスリン針／注射器を使用して注射された。薬物投薬の開始前（処置前）および８日目に、分析用天秤を使用してマウスの体重を測定した。
【０１６０】
（結果）
５−ＦＵの既知の毒性は、胃腸毒性および関連する体重減少である。ロイコボリンは、胃腸毒性を悪化させる可能性があることが報告されている。さらに、膵臓癌のための現在の標準的な療法であるゲムシタビンは、それ自体の関連する毒性プロファイルを有している。組み合わせ５−ＦＵ／ゲムシタビンおよび５−ＦＵ／ロイコボリン／ゲムシタビンによる療法は、診療所において調査されており、増強された臨床活性を有していることが示されているが、これらの組み合わせは、典型的には、ゲムシタビン単独または５−ＦＵ／ロイコボリン単独より重度の毒性を示す。５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ／ゲムシタビン組み合わせ療法は、膵臓癌のための可能性のある処置レジメンであるため、ロイコボリンおよび５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの関連する化学的特徴および作用様式のため、本発明者らは、ゲムシタビンと組み合わせられた５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの毒性プロファイルを調査することを望んだ。さらに、本発明者らは、組み合わせ５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの以前の毒性分析を拡張し、この組み合わせ（ｃｏｍｂｏ）が、５−ＦＵ／ロイコボリンまたは５−ＦＵ単独と比較して、付加的な明白でない毒性プロファイルを有しているか否かを決定することを望んだ。そのため、本発明者らは、５−ＦＵ、ロイコボリン、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、およびゲムシタビンの様々な組み合わせ（表６）を正常なＢａｌｂ／ｃマウスに注射した。処置前および処置開始後１週間目に、本発明者らは胃腸毒性の測定値として体重の減少／増加を調査した。
【０１６１】
【表６】
2007531728.tif 000008
薬物投与の開始前（処置前）、無作為化されたマウスの群（１群当たり１２匹）は、類似した平均体重を示した。処置後（８日目）、マウスの体重は全ての処置群で減少した。有害事象に関する国立癌研究所（ＮＣＩ）の共通用語法基準（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ’ｓ（ＮＣＩ）Ｃｏｍｍｏｎ  Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ａｄｖｅｒｓｅ  Ｅｖｅｎｔｓ）を使用して、体重減少の重度を各処置群についてプロットした（図１５）。毒性グレード決定は、出発基線体重からの体重減少率（％）に基づく（表７）。これらの結果は、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡが、５−ＦＵ単独または組み合わせ５−ＦＵ／ロイコボリンによる処置（いずれの処置群についても１００％がグレード２〜３の毒性）より有意に低い（ｐ＜０．０５、フィッシャーの正確確率検定（Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ  ｅｘａｃｔ  ｔｅｓｔ））グレード２〜３の毒性（５０％）を誘導したことを示している。
【０１６２】
【表７】
2007531728.tif 000009
ゲムシタビン処置は、単独では、毒性濃度未満の濃度の投与に起因して、グレード１より大きな体重減少毒性を誘導しなかったが、５−ＦＵ／ロイコボリンまたは５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡによる処置へのゲムシタビンの追加は、グレード３の毒性を有するマウスを１００％とした（図１５）。しかしながら、これらの処置群の間には体重減少率の定量的な差が検出され得た（図１６）。このデータは、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡが、２重細胞毒性薬物５−ＦＵおよびゲムシタビンと組み合わせて使用された場合、ロイコボリンより効果的に、マウスを体重減少から防御することを示唆している。５−ＦＵ／ロイコボリン／ゲムシタビンで処置されたマウスの９２％が、＞２５％の体重減少を有していたが、有意に少ない（ｐ＜０．０５、フィッシャーの正確確率検定）５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ／ゲムシタビンで処置されたマウスが、この重度の体重減少を有していた（３３％のマウス）。
【０１６３】
各処置群についてのマウス生存率も経時的に追跡した（図１７）。５−ＦＵ／ロイコボリンおよび５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの群は、いずれも、５−ＦＵのみにより処置されたマウス（３６％）と比較して、最大１４日（各群８３％）の有意に大きなマウス生存率（％）を有していた（ｐ＜０．０５、ログランク検定）。最短の生存時間は、１００％のマウスが１４日目以前に死亡した５−ＦＵ／ロイコボリン／ゲムシタビンまたは５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ／ゲムシタビンの３重薬物組み合わせにおいて観察された。しかしながら、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ／ゲムシタビンマウスは、５−ＦＵ／ロイコボリン／ゲムシタビンで処置されたマウス（８日）より有意に長く生存した（９日、ｐ＜０．０５、ログランク検定）。これは、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ／ゲムシタビン組み合わせ群について上に記載されたより体重減少毒性の重度が低いことと相関しており、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡが、組み合わせ５−ＦＵ／ゲムシタビンレジメンと共に使用された場合、ロイコボリンと比較して、より軽度の体重減少を誘導することを再び示唆している。
【０１６４】
（実施例５：５−ＦＵ、ロイコボリン、および５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの組み合わせにより処置されたＢａｌｂ／ｃマウスのリンパ球分析）
（材料および方法）
（マウス）
Ｂａｌｂ／ｃマウスはチャールズリバー研究所から入手された。マウスは、全ての研究の開始時、６〜８週齢であった。マウスは、ＬＡＢインターナショナルの飼育施設（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で、１ケージ当たり４匹で、隔離されたヘパフィルター換気ケージにおいて維持された。
【０１６５】
（薬物）
５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）は、カルバイオケムから入手された。ロイコボリン（ロイコボリン）は、シグマアルドリッチから入手された。５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸（５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ）は、エプロバＡＧ製であった。
【０１６６】
（Ｂａｌｂ／ｃ血液分析研究）
Ｂａｌｂ／ｃマウス、７週齢の雌マウスに、７日間連続で５−ＦＵ、ロイコボリン、および５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの組み合わせを注射した。全ての薬物が、２８ゲージインスリン針／注射器を使用して腹腔内注射された（１００μｌ／マウス、０．６ｍｇ／マウス／薬物）。０日目（薬物注射の前）、８日目、および１３日目に、２００〜２５０μｌ／マウスの血液を、眼窩静脈叢穿刺によりＥＤＴＡでコーティングされたマイクロテイナーチューブ（ＶＷＲインターナショナル）へと収集した。全血球算定＋血球差は、バイエルアドビア１２０ヘマトロジー分析装置を使用して、アメリカのラブコープコーポレーションにより決定された。
【０１６７】
（結果）
実施例３に記載された実験の付加的な分析は、処置群間の毒性の差をさらに明らかにした。初めに記載されたように、本発明者らは、５−ＦＵ／ロイコボリンおよび５−ＦＵ単独と比較した、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ処置群における、血小板および好中球を含む白血球の防御を認めた。基線リンパ球レベルに対する割合（％）に基づくＮＣＩ毒性グレード決定（表８）を使用したデータの新たな分析も、他の群と比較して、より大きな５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ処置群におけるリンパ球の防御を示している（図１８）。５−ＦＵのみおよび５−ＦＵ／ロイコボリンによる処置群のマウスの１００％が、グレード３〜４のリンパ球減少を示したが、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ処置群においては有意に少ない（ｐ＜０．０５、フィッシャーの正確確率検定）マウスが、このレベルの毒性を示した（６２％）。そのため、このデータは、５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡが、５−ＦＵのみまたは５−ＦＵ／ロイコボリンのいずれよりも軽度のリンパ球毒性を誘導することを示唆している。
【０１６８】
【表８】
2007531728.tif 000010
（実施例６：カペシタビン（ゼローダ）、５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸（５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ）、およびロイコボリンによるＨＴ−２９結腸直腸腫瘍の処置に関するヌードマウス研究）
（材料および方法）
（マウス）
ヌード（ｎｕ／ｎｕ）マウスはシモンセン研究所（Ｓｉｍｏｎｓｅｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）から入手された。マウスは、全ての研究の開始時、６〜８週齢であった。マウスは、ペリーサイエンティフィック（Ｐｅｒｒｙ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）の飼育施設（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で、１ケージ当たり４匹で、隔離されたヘパフィルター換気ケージにおいて維持された。
【０１６９】
（細胞株）
ヒト結腸癌ＨＴ−２９は、アメリカンティッシュカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から入手された。細胞は、３７℃、１０％ＣＯ２の加湿インキュベーターにおいて、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、２ｍＭ  ｌ−グルタミン、１００単位／ｍｌのペニシリン、および１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを含有しているＤＭＥＭ（ＤＭＥＭ−１０）において維持された。細胞は、インビボ実験の前に２〜３日毎に継代された。
【０１７０】
（薬物）
カペシタビン（ゼローダ）は、ロシュラボラトリーズ（Ｒｏｃｈｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）（Ｎｕｔｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）製であった。ロイコボリン（ロイコボリン）は、シグマアルドリッチから入手された。５，１０メチレンテトラヒドロ葉酸（５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ）は、エプロバＡＧ製であった。
【０１７１】
（処置）
ＨＴ−２９細胞を、注射のため以下のように調製した。ＨＴ−２９細胞のコンフルエントな組織培養フラスコを、ＰＢＳにより１回洗浄した後、トリプシンにより細胞を剥離した。次いで、剥離された細胞を、ＤＭＥＭ−１０で１回洗浄した後、ＰＢＳにより１回洗浄した。最後に、細胞をＰＢＳに１０７細胞／ｍｌで再懸濁させた。ヌードマウス（ｎｕ／ｎｕ）に、２８ゲージ針／１ｍｌインスリン注射器を使用して、１００μｌのＨＴ−２９細胞（１０６細胞）を皮下接種した。腫瘍が体積１００〜３００ｍｍ３に達した時点で、マウスを、ゼローダ、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ、ロイコボリン、または水の様々な組み合わせにより処置した。水およびゼローダ（７２ｍｇ／マウス／日）は経口胃管栄養により投与された。５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡおよびロイコボリンは、ゼローダのおよそ２０分前に腹腔内注射により投与された（０．６ｍｇ／マウス／薬物／日）。全ての薬物が１４日間連続で１日１回投薬された。腫瘍サイズおよびマウスの体重が２〜４日毎に測定された。腫瘍体積は以下の式を使用して計算された：腫瘍体積＝（長さ×幅２）／２。腫瘍が直径＞２ｃｍに達するか、または腫瘍が潰瘍化した時点で、マウスをＣＯ２により安楽死させた後、頚部脱臼を行った。
【０１７２】
（データ分析）
腫瘍の増殖、生存率、および重量減少の統計分析および曲線フィッティングは、グラフパッドプリズム科学ソフトウェアを使用して実施された。
【０１７３】
（結果）
（腫瘍増殖）
腫瘍保持マウスを、表９に示される薬物の組み合わせにより処置した。ゼローダは、ヒトにおける使用について承認されている臨床レジメンと同様に経口投薬された。コントロールで処置されたマウス（水）と比較して、全てのゼローダ含有処置群が、より遅い腫瘍増殖を有していた（図１９）。さらに、ロイコボリンおよび５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡの両方が、ゼローダの抗腫瘍活性を増加させた。これらの差は、表１０に示される、指数関数的な腫瘍増殖のベストフィット直線回帰から計算された腫瘍倍化時間に見出され得る。
【０１７４】
【表９】
2007531728.tif 000011
【０１７５】
【表１０】
2007531728.tif 000012
（生存率）
実験の間中、マウス生存率を追跡した（図２０）。これらの結果は、薬物投薬の最初の日を１日目と定義して、実験の３３日目に、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ＋ゼローダが、ロイコボリン＋ゼローダ（２５％）またはゼローダ単独（３８％）と比較して、最も大きな生存率（６７％）をもたらすことを示した。さらに、このデータは、全ての他の処置群についての≧３０日と比較して、ロイコボリン＋ゼローダにより処置されたマウスが、１９日という中央生存率により示されるような、より急速な死亡率を有していたことを示唆する。
【０１７６】
（薬物毒性）
薬物毒性の代理マーカーとして、本発明者らは、マウスの体重を経時的に調査した。体重減少に関する国立癌研究所の共通毒性判定基準バージョン３グレード決定システム（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ’ｓ  Ｃｏｍｍｏｎ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ３  ｇｒａｄｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ）（表１１）を使用して、最高毒性グレードの体重減少をプロットした（図２１）。ゼローダは、単独では、比較的毒性はなく、マウスの３６％においてグレード１の毒性を誘導するに過ぎなかったが、ロイコボリンは、グレード１〜３全体の毒性をマウスの９０％にまで増加させた。この増加した毒性は、ロイコボリンが下痢、嘔吐、および粘膜炎症のようなゼローダ毒性パラメータを増加させることを示す第ＩＩ相ヒト臨床試験結果と一致している（Ｖａｎ  Ｃｕｔｓｅｍ，Ｅ．，Ｍ．Ｆｉｎｄｌａｙ，Ｂ．Ｏｓｔｅｒｗａｌｄｅｒ，Ｗ．Ｋｏｃｈａ，Ｄ．Ｄａｌｌｅｙ，Ｒ．Ｐａｚｄｕｒ，Ｊ．Ｃａｓｓｉｄｙ，Ｌ．Ｄｉｒｉｘ，Ｃ．Ｔｗｅｌｖｅｓ，Ｄ．Ａｌｌｍａｎ，Ｊ．Ｆ．Ｓｅｉｔｚ，Ｊ．Ｓｃｈｏｌｍｅｒｉｃｈ，Ｈ．Ｕ．Ｂｕｒｇｅｒ，およびＪ．Ｖｅｒｗｅｉｊ．２０００．Ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ，ａｎ  ｏｒａｌ  ｆｌｕｏｒｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ  ｃａｒｂａｍａｔｅ  ｗｉｔｈ  ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ：ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｓｔｕｄｙ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  １８：１３３７）。対照的に、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡは、ロイコボリンほどマウスにおけるゼローダ毒性を増加させず、マウスの５０％のみがグレード１〜３の体重減少を有しており、ロイコボリン処置群と比較して毒性は４０％低下していた。
【０１７７】
【表１１】
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（結論）
総合すると、このデータは、５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡがロイコボリンより少ない毒性でゼローダの抗腫瘍効力を増強することを示唆する。
【０１７８】
（参考文献）
【０１７９】
【表１２】
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全ての標題は読者の便宜のためのものであり、明示されない限り、標題に続く本文の意味を限定するためには使用されるべきではない。
【０１８０】
上記参考文献（ｂｉｂｌｉｏｇｒａｐｈｙ）において引用されたものを含む、本明細書において引用された全ての参考文献は、その全体が本明細書において参考として援用される。
【図面の簡単な説明】
【０１８１】
【図１】５−ＦＵ；５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ（ここでは「補因子」と表されている）；抗ＶＥＧＦ（アバスチン（Ａｖａｓｔｉｎ））；およびロイコボリンの組み合わせにより処置されたヌードマウスにおけるＨＴ−２９腫瘍の増殖速度論を示すグラフである。ＨＴ−２９腫瘍の体積を、示された薬物による処置開始からの時間に対してプロットした。平均腫瘍体積±平均値の標準誤差がプロットされている。曲線はベストフィット（ｂｅｓｔ−ｆｉｔ）分析により作成された。
【図２】５−ＦＵ；５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ（ここでは「補因子」と表されている）；およびオキサリプラチンの組み合わせにより処置されたヌードマウスにおけるＨＴ−２９腫瘍の増殖速度論を示すグラフである。ＨＴ−２９腫瘍の体積を、示された薬物による処置開始からの時間に対してプロットした。平均腫瘍体積±平均値の標準誤差がプロットされている。曲線はベストフィット分析により作成された。
【図３】５−ＦＵ；５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ（ここでは「補因子」と表されている）；抗ＶＥＧＦ（アバスチン）；およびロイコボリンの組み合わせによるＨＴ−２９腫瘍を保持しているヌードマウスの処置後の平均腫瘍体積を示すグラフである。処置開始後２２日目の平均腫瘍体積を各処置群についてプロットした。エラーバーは、平均値の標準誤差を表す。
【図４】５−ＦＵ；５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ（ここでは「補因子」と表されている）；およびオキサリプラチンの組み合わせによるＨＴ−２９腫瘍を保持しているヌードマウスの処置後の平均腫瘍体積を示すグラフである。処置開始後２２日目の平均腫瘍体積を各処置群についてプロットした。エラーバーは、平均値の標準誤差を表す。
【図５】５−ＦＵ；５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ（ここでは「補因子」と表されている）；ロイコボリン；および抗ＶＥＧＦ（アバスチン）の組み合わせによる処置後のＨＴ−２９腫瘍を保持しているヌードマウスの生存率のカプランマイヤー（Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ）プロットを示す。
【図６】５−ＦＵ；５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ（ここでは「補因子」と表されている）；およびオキサリプラチンの組み合わせによる処置後のＨＴ−２９腫瘍を保持しているヌードマウスの生存率のカプランマイヤープロットを示す。
【図７】５−ＦＵ；５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ（ここでは「補因子」と表されている）；ロイコボリン；および抗ＶＥＧＦ（アバスチン）の組み合わせにより処置されたヌードマウスにおけるＨＴ−２９腫瘍の増殖速度論を示すグラフである。ＨＴ−２９腫瘍の体積を、処置開始からの時間に対してプロットした。平均腫瘍体積±平均値の標準誤差がプロットされている。曲線はベストフィット分析により作成された。
【図８】５−ＦＵ；５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ（ここでは「補因子」と表されている）；ロイコボリン；および抗ＶＥＧＦ（アバスチン）の組み合わせによるＨＴ−２９腫瘍を保持しているヌードマウスの処置後の平均腫瘍体積を示すグラフである。処置開始後１９日目の平均腫瘍体積を各処置群についてプロットした。エラーバーは、平均値の標準誤差を表す。
【図９】５−ＦＵ；５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ（ここでは「補因子」と表されている）；および抗ＶＥＧＦ（アバスチン）の組み合わせによる処置後のＨＴ−２９腫瘍を保持しているヌードマウスの生存率のカプランマイヤープロットである。
【図１０】５−ＦＵ、５−ＦＵ／ロイコボリン、および５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ（５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡは「補因子」と表記されている）による処置後のＢａｌｂ／ｃマウスの生存率のカプランマイヤープロットである。
【図１１】５−ＦＵ、５−ＦＵ／ロイコボリン、および５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ（５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡは「補因子」と表記されている）による処置後のＢａｌｂ／ｃマウスの血液分析を示すグラフである。グラフにプロットされた基線測定値に対する割合（％）を計算するため、薬物療法後１週間目に採取された血液測定値を、処置前の血液測定値により割った。平均データ値±平均値の標準誤差が、各処置群についてプロットされている。ＷＢＣ、白血球；ＲＢＣ、赤血球；ＨＧＢ、ヘモグロビン；ＨＣＴ、ヘマトクリット；ＭＣＶ、平均細胞容積；ＭＣＨ、平均細胞ヘモグロビン（ｍｅａｎ  ｃｅｌｌ  ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ）；ＭＣＨＣ、平均細胞ヘモグロビン含量（ｍｅａｎ  ｃｅｌｌ  ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ  ｃｏｎｔｅｎｔ）；ＰＬＴ、血小板。
【図１２】５−ＦＵ、５−ＦＵ／ロイコボリン、および５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ（５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡは「補因子」と表記されている）による処置後のＢａｌｂ／ｃマウスの血小板毒性グレード決定を示すグラフである。薬物処置後１週間目に、血小板毒性のグレードを各マウスについて計算した。グレード１または２、グレード３、およびグレード４の毒性を有するマウスの割合（％）が各処置群についてプロットされている。
【図１３】５−ＦＵ、５−ＦＵ／ロイコボリン、および５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ（５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡは「補因子」と表記されている）による処置後のＢａｌｂ／ｃマウスの好中球毒性グレード決定を示すグラフである。薬物処置後１週間目に、好中球毒性のグレードを各マウスについて計算した。各処置群の中のグレード１または２、グレード３、およびグレード４の毒性を有するマウスの割合（％）がプロットされている。
【図１４】５−ＦＵ、５−ＦＵ／ロイコボリン、および５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ（５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡは「補因子」と表記されている）による処置後のＢａｌｂ／ｃマウスの好中球毒性分析を示すグラフである。薬物処置後１週間目に、グレード４の好中球毒性を有するマウスを、絶対好中球数に基づき細分した。示された好中球数を有するこれらのマウスの割合（％）が各処置群についてプロットされている。
【図１５】５−ＦＵ；ロイコボリン；１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ（ここでは「補因子」と表記されている）；およびゲムシタビンの組み合わせによる処置後のＢａｌｂ／ｃマウスの体重減少毒性グレード決定を示すグラフである。薬物処置後１週間目に、体重減少毒性のグレードを各マウスについて計算した。グレード０、１、２、および３の毒性を有するマウスの割合（％）が各処置群についてプロットされている。Ｇｅｍ．＝ゲムシタビン。
【図１６】５−ＦＵ；ロイコボリン；１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ（ここでは「補因子」と表記されている）；およびゲムシタビンの組み合わせによる処置後のＢａｌｂ／ｃマウスの体重減少率（％）を示すグラフである。薬物処置後１週間目に、出発基線体重からの体重減少率（％）を各マウスについて計算した。次いで、図中に示された体重減少の範囲に属するマウスの割合（％）を、各処置群についてプロットした。Ｇｅｍ．＝ゲムシタビン。
【図１７】５−ＦＵ；ロイコボリン；１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ（ここでは「補因子」と表記されている）；およびゲムシタビンの組み合わせによる処置後のＢａｌｂ／ｃマウスのカプランマイヤー生存率プロットである。Ｇｅｍ．＝ゲムシタビン。
【図１８】５−ＦＵ、５−ＦＵ／ロイコボリン、および５−ＦＵ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ（５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡは「補因子」と表記されている）による処置後のＢａｌｂ／ｃマウスのリンパ球減少毒性グレード決定を示すグラフである。薬物処置後１週間目に、リンパ球減少のグレードを各マウスについて計算した。グレード１／２、グレード３、およびグレード４の毒性を有するマウスの割合（％）が各処置群についてプロットされている。
【図１９】カペシタビン（ゼローダ（Ｘｅｌｏｄａ））、ゼローダ／ロイコボリン、およびゼローダ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ（５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡは「補因子」と表記されている）により処置されたヌードマウスにおけるＨＴ−２９腫瘍の増殖速度論を示すグラフである。ＨＴ−２９腫瘍の体積を、処置開始からの時間に対してプロットした。平均腫瘍体積±平均値の標準誤差がプロットされている。曲線はベストフィット分析により作成された。
【図２０】カペシタビン（ゼローダ）、ゼローダ／ロイコボリン、およびゼローダ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ（５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡは「補因子」と表記されている）による処置後のＢａｌｂ／ｃマウスのカプランマイヤー生存率プロットである。
【図２１】カペシタビン（ゼローダ）、ゼローダ／ロイコボリン、およびゼローダ／５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡ（５，１０−ＣＨ２−ＴＨＦＡは「補因子」と表記されている）による８日間の処置後のＢａｌｂ／ｃマウスの体重減少毒性を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【国際調査報告】
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