(57)【要約】  神経変性疾患の治療及び予防のための新規の神経保護剤が開示される。これは、ニューロンのＰＣ１２細胞の分化を誘導しかつそのアポトーシス細胞死経路を妨害する特異的な能力を有するテルル化合物の効果的な量を投与することに基づいている。【特許請求の範囲】
【請求項１】
神経変性疾患を治療及び予防する方法であって、以下の式の化合物の有効な量を、罹患しているか又は感受性の高い患者に投与することを含む方法：
2007514732.tif 000014
又はＴｅＯ２・ＨＯＣＨ２ＣＨ２・ＮＨ４Ｃｌの錯体；
又は
2007514732.tif 000015
又はＴｅＯ２もしくはＴｅＯ２の錯体（Ｃ）
又はＰｈＴｅＣｌ３（Ｄ）
又は（Ｃ６Ｈ５）４Ｐ＋（ＴｅＣｌ３（Ｏ２Ｃ２Ｈ４））−ＴｅＸ４
式中、ｔは１又は０であり、ｕは１又は０であり、ｖは１又は０であり；Ｒ，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，Ｒ６，Ｒ７，Ｒ８及びＲ９は同一か又は異なり、水素、１〜５個の炭素のヒドロキシアルキル、ヒドロキシ、１〜５個の炭素原子のアルキル、ハロゲン、１〜５個の炭素原子のハロアルキル、カルボキシ、２〜１０個の炭素のアルキルカルボニルアルキル、１〜５個の炭素原子のアルカノイルオキシ、１〜５個の炭素原子のカルボキシアルキル、アシル、アミド、シアノ、１〜５個の炭素のアミドアルキル、２〜１０個の炭素のＮ−モノアルキルアミドアルキル、４〜１０個の炭素のＮ，Ｎ−ジアルキルアミドアルキル、１〜５個の炭素のシアノアルキル、１〜５個の炭素原子のアルコキシ、２〜１０個の炭素原子のアルコキシアルキル、及び−ＣＯＲ１０からなる群から独立して選択され、Ｒ１０は１〜５個の炭素のアルキルであり；及びＸはハロゲン及びその錯体である。
【請求項２】
化合物が、アンモニウムトリクロロ（ジオキソエチレン−Ｏ，Ｏ′）テルレート又はＴｅＯ２、エチレングリコール及び塩化アンモニウムの錯体であるテルル化合物である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
化合物が、保護されるべきドパミン作用性ニューロンが位置する場所に非経口的に又は直接投与される請求項１に記載の方法。
【請求項４】
化合物が、神経向性の成長因子と組み合わされて投与される請求項３に記載の方法。
【請求項５】
化合物が、経口的に投与される請求項１に記載の方法。
【請求項６】
化合物が、抗痙攣剤又は抗炎症剤と組み合わされて投与される請求項５に記載の方法。
【請求項７】
医薬的に許容可能な担体又は希釈剤と混合された請求項１に規定される化合物の治療的に有効な量を含む医薬組成物。
【請求項８】
請求項１に規定される化合物の治療的に有効な量を前記患者に投与することを含む、神経変性疾患の予防又は治療方法。
【請求項９】
前記量が、約１ｍｇ／Ｍ２〜約１０ｍｇ／Ｍ２である請求項７に記載の神経変性疾患の予防又は治療方法。
【請求項１０】
前記量が、３ｍｇ／Ｍ２である請求項７に記載の神経変性疾患の予防又は治療方法。
【請求項１１】
前記神経変性疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、脳卒中症候群、及び筋萎縮性側索硬化症からなる群から選択される請求項８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
最近の証拠は、アポトーシスの過程が神経細胞の死（ヒト神経変性過程及び疾患の中心的な特徴）に主に寄与することを示している。本発明は、合成の非毒性テルル化合物を使用した新規な神経保護モダリティを提示する。これらの化合物は、アポトーシスを妨害することによって神経の死を予防する。
【背景技術】
【０００２】
変性過程を遅らせるための、予防するための、又は逆転させるための神経保護治療が必要である。神経栄養因子を用いて変性疾患を治療する可能性は、ドパミン栄養因子についての研究を動機付けた。塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）、内皮成長因子（ＥＧＦ）、インシュリン様成長因子（ＩＧＦ）及び脳由来の神経栄養因子（ＢＤＮＦ）の如きいくつかの神経栄養因子が、インビトロでのドパミン作用性ニューロンを救助する見込みがあることが示されている。しかし、インビボでのそれらの有効性は大部分についていくらか見込みが劣るものであった。神経栄養因子はしばしばそれらの標的受容体に到達できない。なぜなら、それらは血流中で迅速に分解され、細胞膜又は血液脳関門を通過できないからである。代わりに、グリア由来の神経栄養因子（ＧＤＮＦ）がインビトロで中脳のドパミン作用性ニューロンの生存を特異的に高めること、及びインビボでドパミン作用性ニューロンの変性に対する保護的効果を発揮することが見出されている。同様に、インシュリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）は、仮死又は虚血脳傷害の後の死から脳細胞を保護することが見出されている。
【０００３】
証拠は今や、いくつかの医薬が、ヒトの神経系の中枢又は末梢ニューロン内の神経細管を安定化、強化又は再生さえすることができることを示す。ブリモニジン及び様々なベータ−アドレナリン作用遮断薬の如き特定の医薬は、ヒトにおける急性虚血及び挫傷損傷から中枢神経系を保護することができる神経保護薬として受け入れられてきた。神経変性を阻害、緩和又は調節するのに役立つ特定の方法及び化学組成物が開発されているが、かかる神経学的傷害を遅延又は停止させることができる新規の方法及び薬物療法剤が必要である。様々な神経学的状態を治療するのに有用な追加の化合物に対する大きな要求が存在する。
【０００４】
神経変性の過程は、ニューロンの死の長く続く過程及び損傷に関与するニューロン集団又は脳構造の選択性によって一般的に特徴付けられる。かかる特異性の理由は、大部分が未知であり、疾患の一般的な作用機構である。しかし、これらの疾患の一つの共通の特徴は、ニューロンの死が少なくとも部分的にアポトーシスに関与すると考えられていることである。ニューロンのアポトーシスはプログラムされた細胞死の機構である。アポトーシスは神経系の正常な発達のためには必要であるが、病気の状態においても生ずる。広範囲の細胞死は脳卒中及び損傷を含む急性脳傷害の後に観察され、パーキンソン病及びアルツハイマー病の如き神経変性疾患に寄与すると考えられている。脳血栓症及び塞栓症の如き脳梗塞は、血管の狭窄、脳血栓又は脳塞栓による脳の虚血によって引き起こされる。治療は、虚血後の脳の水腫を改善するマンニトールの如き抗水腫剤、アルテプラーゼ又はウロキナーゼの如き血栓崩壊剤からなる。これらはニューロンの死に影響を与えず、ニューロン保護効果を奏しない。パーキンソン病では、黒質線状体経路においてドパミン作用性ニューロンの選択的な変性が起こる。Ｌ−ドパを用いた治療は、ドパミン作用性ニューロンにおける疾患の進行を阻止しない。パーキンソン病ではドパミン作用性ニューロンの死又はアポトーシスを防止するための薬物療法剤が必要である。同様に、アルツハイマー病はアミロイド老人性斑の沈着、神経細繊維の交絡形成及び脳萎縮によって特徴付けられる神経変性疾患であるが、アルツハイマー病でもアポトーシスがこれらの患者における痴呆でのニューロンの死の作用機構に関与する。薬物療法剤はアルツハイマー性痴呆ではほとんど効果がないと一般に言われている。
【０００５】
可溶性ペプチド因子のニューロトロフィンファミリーは、神経系の正確な発達及び分化のために必要である。ニューロトロフィンは、受容体チロシンキナーゼに結合し、ニューロンの生存及び分化のために必要な様々な細胞内情報伝達分子を活性化する（Ｅｂａｄｉ  Ｍ．，Ｂａｓｈｉｒ  Ｒ．Ｍ．，Ｈｅｉｄｒｉｃｋ  Ｍ．Ｌ．  ｅｔ  ａｌ，３０  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  Ｉｎｔ．  ３４７［１９９７］）。インビボで関与している特定分子の同定はかなりの注意を引き付けている。ニューロンにおける情報伝達を研究するのは比較的困難であるため、ニューロトロフィン情報伝達は褐色細胞腫ＰＣ１２細胞をモデル系として用いて主に研究されている。この細胞系はニューロンの生存、分化及び細胞死の作用機構を研究するのに有用であることが証明されている。ＰＣ１２細胞は、交感神経ニューロンに類似するように分化することによってＮＧＦ暴露に応答する。ＮＧＦ暴露により、ＰＣ１２細胞は分裂を停止し、神経突起を伸長し、電気的に興奮可能になり、そしてニューロンマーカーを発現する。増殖している神経芽細胞様ＰＣ１２細胞の血清の欠乏による、又はニューロン的に分化した細胞からのＮＧＦ／血清の除去による栄養的支持の撤回は、それらのアポトーシスによる死に導く。ＮＧＦの撤回は同様にインビボ及びインビトロの両方での交感神経の死を引き起こす。ニューロトロフィンが結合すると、二つの情報伝達カスケードは、これらの細胞の分化及び活性化並びにｒａｓ／ｅｒｋ経路の活性化に（Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｔ．，Ｓａｎｏｋａｗａ，Ｒ．，Ｓａｓａｋｉ，Ｙ．，  ｅｔ  ａｌ．，１３  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １１１１［１９９６］）及びＰ１３キナーゼ／Ｒａｃ情報伝達に（Ｒａｆｆｉｏｎｉ，Ｓ．，Ｂｒａｄｓｈａｗ，Ｒ．Ａ．，８９  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ９１２１［１９９２］）関係すると今までされてきた。ｒａｓ／ｅｒｋ情報伝達経路はＰＣ１２細胞のＮＧＦによって誘導される分化を媒介することにおいて極めて重要であるように見える。ｒａｓ及びその情報伝達中間体ｒａｆ、ｍｅｋ及びｅｒｋキナーゼの全てはこの活性のために重要である（Ｃｏｗｌｅｙ，Ｓ．，Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ，Ｈ．，Ｋｅｍｐ，Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．，７７  Ｃｅｌｌ  ８４１［１９９４］）。これは、これらの中間体の構成的な活性型を発現するＰＣ１２細胞のＮＧＦ独立性分化又はそれらの優性な干渉型の発現によるＮＧＦによって誘導される分化の阻害を示す研究によって証明されている。ｅｒｋ経路はＮＧＦによって媒介されるＰＣ１２細胞の生存に関係しており（Ｘｉａ，Ｚ．，Ｄｉｃｋｅｎｓ，Ｍ．，Ｒａｉｎｇｅａｕｄ，Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．，２７０  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １３２６［１９９５］）、ＮＧＦによって媒介される細胞周期の拘束のために必要であるように見える。Ｎ−アセチルシステインの如き薬剤による栄養的支持の撤回によって引き起こされる死からニューロン細胞を保護することは、ｒａｓ／ｅｒｋ経路の活性化によって媒介されるものであり、それらの抗酸化特性によって媒介されるものではないことが示されている。栄養的支持の損失に対して、ＰＣ１２及び他の細胞型は、増大されたＪＵＮキナーゼ（ＪＮＫ）活性を示す。この増大は死のために必要である���いう証拠はＰＣ１２細胞を用いて与えられており、ＪＮＫ活性の増大が抑制されかつｅｒｋキナーゼ活性が刺激されたときに生存が生じるモデルが提案されている（Ｉｄ．）。ＪＮＫ／ｐ３８はＩＣＥプロテアーゼを活性化し、それによりアポトーシス細胞死を導く。以前の研究は、多数の分子が、特定の実験をうけたことがない、栄養的支持が欠乏しているニューロンＰＣ１２細胞の死を防止することを示している。Ｂｃ１２は多種類の細胞型を様々な刺激によって引き起こされる死から保護することが示されている。特に、このタンパク質は、栄養的支持の撤回によって誘導されるＰＣ１２細胞及び交感神経ニューロンの死を抑制する。これはおそらく、ＪＮＫの阻害及びミトコンドリアからのシトクロムＣの放出の抑制及び続いてのカスパーゼの阻害によるものである。それ故、アポトーシス死に導く経路に関与する一以上の情報伝達分子が栄養的支持又は他のストレス状態の欠失からの保護を与えるということになる。
【０００６】
本発明者によって初めて開発された非毒性の免疫調節剤ＡＳ１０１は、様々な前臨床及び臨床研究において有益な効果を有することが示されている。その活性の大部分は、様々なサイトカインの内因性生産の刺激に部分的に寄与されている。ＡＳ１０１はマウス及びヒト細胞の両方でＴｈ２サイトカインＩＬ−１０を減少させ、これに続いて特定のサイトカイン、特にＩＬ−１ａ、ＩＬ−６、幹細胞因子（ＣＳＦ）、ＩＬ−１２、ＩＬ−６、ＩＦＮγ及びＩＬ−２の同時増大が生じた。これらの免疫調節特性は前臨床研究において重要な役割を果たし、この前臨床研究は、寄生虫及びウイルスに感染されたマウスのモデルにおける、自己免疫疾患（全身性エリテマトーデスの如き）における、及び様々な腫瘍モデル（そこではＡＳ１０１が明らかな抗腫瘍効果を有していた）におけるＡＳ１０１の保護効果を証明する。ＡＳ１０１はまた、造血損傷及び脱毛からの保護を含めて照射及び化学療法の致死及び致死下作用に対する保護的特性を有し、増大した生存を生じることが示されている。ＡＳ１０１の保護的効果は、ＩＬ−１α及びＩＬ−６の内因性生産を増大させるその能力に寄与されている。癌患者に対するＡＳ１０１を用いた第一及び第二臨床段階試験は、それが非毒性でありかつその有益な臨床効果と関連する免疫調節効果を奏することを示した。
【０００７】
本発明のテルル医薬化合物は、ニューロンの死の抑制に直接作用する。これまで用いられてきた医薬療法剤とは異なり、この化合物はニューロンの機能不全、変性又はネクローシスを直接予防又は調節する。
【発明の開示】
【０００８】
本発明は、神経変性疾患及び過程の予防又は治療のためのテルル化合物の有効な量の投与に関する。特に、本発明は、新規のテルル化合物、これらの化合物を含む医薬組成物及びその使用に関する。
【０００９】
本発明の化合物は様々な非治療及び治療目的のために有用である。ここで用いられる用語「神経変性疾患」は、ニューロンの完全性がおびやかされている哺乳類における異常に言及する。ニューロンの完全性は、ニューロン細胞が減少した生存を示す場合、又はニューロンがもはや情報を伝達できない場合におびやかされていることがあり得る。神経変性過程の例は、脳卒中症候群、クモ膜下出血、脳手術後の脳の機能不全、低酸素症、低血糖症、脳又は脊髄の損傷による神経系の障害、薬物又はガス、化学療法の投与、アルコールなどによる中毒化を含み、神経変性疾患の例は、アルツハイマー症、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン症、重症性筋無力症、ＨＩＶ関連の脳炎、頸椎症、多発性硬化症、ダウン症候群、及びハンチントン舞踏病を含む。これらの疾患を治療する手掛かりは、アポトーシスを含むニューロンの死の制御である。本発明のテルル化合物は、神経変性疾患に罹患している人又はかかる疾患に対する感受性が高い（ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ）と信じられる人に全身的に投与されることができる。
【００１０】
従って、本発明の主な目的は、テルルベースの化合物を用いる神経変性疾患の予防又は治療方法を提供することである。
【００１１】
神経栄養成長因子の如き神経保護剤とテルル化合物の新規な組成物を提供することも本発明の目的である。
【００１２】
本発明のこれらの及び他の目的は、明細書を読めば明らかになるであろう。
【００１３】
図面の簡単な記述
図１は、ＧＤＰ／ＧＴＰ変換によるｐ２１ｒａｓの活性化を示す。ＡＳ１０１（アンモニウムトリクロロ（ジオキソエチレン−Ｏ，−Ｏ′）テルレート）は組み換えｐ２１ｒａｓと１０分間インキュベートされた。
図２は、ミエリン塩基性タンパク質を基質として用いるＡＳ１０１によるＥＲＫ１／ＥＲＫ２の活性化を示す。ＮＩＨ３Ｔ３細胞は、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤あり又はなしでＡＳ１０１と１０分間インキュベートされた。
図３は、ＡＳ１０１でのＰＣ１２細胞の処理は用量依存的な様式でニューロンの分化を誘導したことを示す。
図３ａは、ＡＳ１０１がＰＣ１２細胞においてニューロンの分化を誘導したことを示す。
図３ｂは、ｒａｓの優性陰性形（Ｎ１７）を発現するＰＣ１２細胞のＡＳ１０１での処理はニューロンの分化を誘導しなかったことを示す。
図３ｃは、Ｐ２１ｒａｓのＣＳＹ１１８における点突然変異を発現するＰＣ１２細胞のＡＳ１０１での処理はニューロンの分化を生じなかったことを示す。
図４は、ＡＳ１０１で１５分間インキュベートされた細胞ではＡＳ１０１はｐ２１ｒａｓ下流エフェクター分子ｃ−ｒａｆ−１を活性化できることを示す。
図５は、ＡＳ１０１で２４時間インキュベートされた細胞ではＡＳ１０１は用量依存的な様式でｐ２１ｗａｆタンパク質発現における著しい増大を生じることを示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本発明で用いるためのテルル化合物は以下の式のものを含む：
2007514732.tif 000002
又は
2007514732.tif 000003
又はＴｅＯ２もしくはＴｅＯ２の錯体（Ｃ）
又はＰｈＴｅＣｌ３（Ｄ）
又はＴｅＸ４（式中、ＸはＣｌ、Ｂｒ又はＦである）
又は次の錯体：ＴｅＯ２・ＨＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ・ＮＨ４Ｃｌ；
又は（Ｃ６Ｈ５）４Ｐ＋（ＴｅＣｌ３（Ｏ２Ｃ２Ｈ４））−  （Ｅ）
式中、ｔは１又は０であり、ｕは１又は０であり、ｖは１又は０であり；Ｒ，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，Ｒ６，Ｒ７，Ｒ８及びＲ９は同一か又は異なり、水素、１〜５個の炭素のヒドロキシアルキル、ヒドロキシ、１〜５個の炭素原子のアルキル、ハロゲン、１〜５個の炭素原子のハロアルキル、カルボキシ、２〜１０個の炭素のアルキルカルボニルアルキル、１〜５個の炭素原子のアルカノイルオキシ、１〜５個の炭素原子のカルボキシアルキル、アシル、アミド、シアノ、１〜５個の炭素のアミドアルキル、２〜１０個の炭素のＮ−モノアルキルアミドアルキル、４〜１０個の炭素のＮ，Ｎ−ジアルキルアミドアルキル、１〜５個の炭素のシアノアルキル、１〜５個の炭素原子のアルコキシ、２〜１０個の炭素原子のアルコキシアルキル、及び−ＣＯＲ１０からなる群から独立して選択され、Ｒ１０は１〜５個の炭素のアルキルであり；及びＸはハロゲンであり；アンモニウム塩が例示されているが、Ｋ＋の如き他の医薬的に許容可能な塩も本発明の範囲内であることが理解される。五員環を有する化合物が好ましい。
【００１５】
明細書及び特許請求の範囲で用いられる通り、用語「１〜５個の炭素原子のアルキル」はメチル；エチル；ｎ−プロピル；ｎ−ブチルなどの如き直鎖及び分枝鎖アルキル基を含む。用語「１〜５個の炭素原子のヒドロキシアルキル」はヒドロキシメチル；ヒドロキシエチル；ヒドロキシ−ｎ−ブチルを含む。用語「１〜５個の炭素原子のハロアルキル」はクロロメチル；２−ヨードエチル；４−ブロモ−ｎ−ブチル；ヨードエチル；４−ブロモ−ｎ−ペンチルなどを含む。用語「１〜５個の炭素原子のアルカノイルオキシ」はアセチル、プロピオニル、ブタノイルなどを含む。用語「カルボキシアルキル」はカルボキシメチル、カルボキシエチル、エチレンカルボキシなどを含む。用語「アルキルカルボニルアルキル」はメタノイルメチル、エタノイルエチルなどを含む。用語「アミドアルキル」は−ＣＨ２ＣＯＮＨ２；−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２；−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２などを含む。用語「シアノアルキル」は−ＣＨ２ＣＮ；−ＣＨ２ＣＨ２ＣＮ；−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＮなどを含む。用語「１〜５個の炭素原子のアルコキシ」はメトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｎ−ペントキシなどを含む。用語「ハロ」及び「ハロゲン」はクロロ、ブロモ、ヨード及びフルオロを表すために用いられる。用語「アシル」はＲ１６ＣＯを含み、式中Ｒ１６はＨ又はメタノイル、エタノイルなどの１〜５個の炭素のアルキルである。用語「アリール」はフェニル、アルキルフェニル、及びナフチルを含む。用語「Ｎ−モノアルキルアミドアルキル」は−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨＣＨ３、−ＣＨ２ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ３を含む。用語「Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミドアルキル」は−ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ３）２；ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２−ＣＨ３）２を含む。好ましいテルルベースの化合物は以下の式のものを含む：
2007514732.tif 000004
及び
2007514732.tif 000005
式中、Ｘはハロゲンである。好ましいハロゲン種はクロロである。
【００１６】
テルルベースでありかつ本発明の実施で用いられることができる他の化合物はＰｈＴｅＣｌ３、ＴｅＯ２及びＴｅＸ４（Ｃ６Ｈ５）４Ｐ＋（ＴｅＣｌ３（Ｏ２Ｃ２Ｈ４））−を含む（Ｚ．Ｎａｔｕｒｆｏｒｓｈ，３６，３０７−３１２（１９８１））。以下の構造の化合物も含まれる：
2007514732.tif 000006
本発明の実施のために有用な他の化合物は以下のものを含む：
2007514732.tif 000007
式中、Ｒ１１，Ｒ１２，Ｒ１３及びＲ１４は独立して水素、１〜５個の炭素原子のヒドロキシアルキル、ヒドロキシ及び１〜５個の炭素原子のアルキルからなる群から選択される。
【００１７】
構造Ａ又はＢの化合物の調製において用いるための有用なジヒドロキシ化合物は式Ｉのものを含み、式中、Ｒ，Ｒ１，Ｒ４及びＲ５は以下の表に示される通りである。
2007514732.tif 000008
【００１８】
化合物Ａ及びＢの調製において用いられるための他のジヒドロキシ化合物は式ＩＩのものを含み、式中、Ｒ，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４及びＲ５は以下の表に示される通りである。
2007514732.tif 000009
【００１９】
式Ａ及びＢの化合物の製造において用いられるための他のジヒドロキシ化合物は式ＩＩＩのものを含み、式中、Ｒ，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４及びＲ５は以下の表に示される通りである。
2007514732.tif 000010
【００２０】
追加のジヒドロキシ化合物は式ＩＶのものを含み、式中、Ｒ，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４及びＲ５は以下の表に示される通りである。
2007514732.tif 000011
【００２１】
以下の式の化合物も含まれる：
2007514732.tif 000012
式中、Ｒ１５，Ｒ１６，Ｒ１７，及びＲ１８はハロゲン、１〜５個の炭素のアルキル、アリール、１〜５個の炭素のアシル、１〜５個の炭素のヒドロキシアルキル、及び１〜５個の炭素のアミノアルキルから独立して選択される。又は、かかる化合物は好適なジ、トリ又はテトラハロテルライドを、式ＨＯ−Ｒ１９のものであることができる好適なヒドロキシ化合物と反応させることによって生成されることができ、式中、Ｒ１９は１〜５個の炭素のアルキル、１〜５個の炭素のハロアルキル、アリール、アルキルアリール、１〜５個の炭素のアルキルアミド、１〜５個の炭素のアルキルカルボニル、１〜５個の炭素のシアノアルキル、及び２〜１０個の炭素のアルコキシアルキルから選択される。Ｒ１６の特別な例はメチル、エチル、ｎ−プロピル、フェニル、トリル、アミドエチル、シアノメチル、メチルオキシメチル、及びＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨを含む。
【００２２】
これらの化合物は米国特許第４７６１４９０号に記述されており、これは参照としてここに組み入れられる。加えて、ＴｅＣｌ４；ＴｅＢｒ４及び水溶液中でＴｅＯ２を与える化合物、好ましくはクエン酸又はエチレングリコールとＴｅＯ２の錯体の如き錯体の形態のものも挙げられる。
【００２３】
好ましい化合物はアンモニウムトリクロロ（ジオキソエチレン−Ｏ，Ｏ′）テルレートである。
【実施例】
【００２４】
方法：ＡＳ１０１の神経保護効果を評価するため、ＰＣ１２細胞は、８％の熱不活性化ウマ血清、８％の熱不活性化ウシ胎児血清、グルタミン（５ｍＭ）及び５０μｇ／ｍｌのゲンタマイシンを補充されたＤｕｌｂｅｃｃｏの改良されたＥａｇｌｅ培地中で３７℃で維持される。
【００２５】
ＰＣ１２細胞は血清非含有培地中で洗浄され、１〜５×１０６細胞／ｍｌに再懸濁される。培地中で３７℃での２４時間のインキュベーション後、細胞は３ｍｌの培地（１０％のＦＣＳ、２％のグルタミン及び１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８を含むＲＰＭＩ  １６４０（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．））を補充される。さらに２４時間後、細胞は再懸濁され、選択培地で維持される。選択培地で３〜４週間の培養後、トランスフェクトされた細胞はウェスタンブロッティングにより分析される。結果は陰性（薬剤なし）のコントロールと比較したｐ２１のパーセントとして表される。
【００２６】
ｒａｓ  Ａｓｎ−１７遺伝子は次に哺乳動物の発現ベクター中にクローニングされる。プラスミドＤＮＡでのＰＣ１２細胞のトランスフェクションは、以前に記述されているようにリン酸カルシウム沈殿技術を用いて行われる。
【００２７】
還元条件下で煮沸されたＰＣ１２細胞抽出物（２０μｇ／タンパク質のレーン）は、７．５及び１２．５％のポリアクリルアミドゲル上での電気泳動に供され、ニトロセルロース膜に電気的に移行される。膜は、０．２％のＴｗｅｅｎ２０、トリス緩衝化生理食塩水中の１０％の粉末化ミルクで１時間ブロッキングされ、次に好適な特異的な検出抗体とインキュベートされる。免疫反応性のタンパク質はホースラディッシュペルオキシダーゼに結合された二次抗体（Ａｍｅｒｓｈａｍ、Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ  Ｈｅｉｇｈｔｓ、ＩＬ）及び化学発光剤で検出される。免疫沈降研究のためには、免疫複合体はＰｒｏｔｅｉｎ  Ａ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）で沈降され、電気泳動後にそれらは抗ホスホセリン又は抗ホスホチロシン抗体でブロッティングされる。
【００２８】
内因性ＪＮＫ及びｅｒｋは特異的な抗体を用いて細胞溶解物から免疫沈降され、それらの活性はＰ３２  ＡＴＰ及びグルタチオンｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）ｅ−ｊｕｎ又はミエリン塩基性タンパク質（ＭＰＢ）をそれぞれ基質として用いることによって測定される。サンプルはＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動ゲル上で電気泳動され、Ｐｈｏｓｐｈｏｒｌｍａｇｅｒ分析に供される。
【００２９】
ＲａｓスーパーファミリーＧＴＰａｓｅの活性化
ＲａｓスーパーファミリーＧＴＰａｓｅによって制御される情報伝達経路に対するＡＳ１０１の効果は、ＲａｓファミリーＧＴＰａｓｅ及びそれらのエフェクターの活性化の平行分析によってスクリーニングされる。異なるＲａｓスーパーファミリーＧＴＰａｓｅの活性化を研究する主な方法は、（ａ）活性化されたＧＴＰ結合型への特異的な組み換え体の精製されたエフェクターＧＴＰａｓｅ結合ドメインの結合によって細胞溶解物から活性化されたＲａｓスーパーファミリーＧＴＰａｓｅを区別化する（ｐｕｌｌ  ｄｏｗｎ）ことによる方法（この場合、活性化されたＧＴＰａｓｅの区別化に続いて、タンパク質は検出され、ウェスタンブロッティングによって定量される）；（ｂ）Ｒａｆ又はＲＡＣの如きＧＴＰａｓｅエフェクターの活性化がレポーター遺伝子アッセイによって行われる方法；及び（ｃ）免疫沈降キナーゼアッセイを用いた直接キナーゼアッセイによる方法である。
【００３０】
アポトーシスの検出
アポトーシスを受けている細胞の割合は、アネキシンＶに結合しヨウ化物を放出するそれらの能力に基づくアポトーシス検出キット、及びＨＴＣ標識化及びＴＵＮＥＬを組み入れるインシチュー細胞検出キットを用いて定量的に測定される。
【００３１】
細胞周期の分布
細胞周期の分布の研究は、以前に記述されたようにして行われる。細胞はトリプシン処理され、１ｍｇ／ｍｌのＲＮＡｓｅ、１％のＮＰ−４０、１０μｇ／ｍｌのヨウ化プロピジウム及び０．１％のクエン酸ナトリウムを含む緩衝液１ｍｌ当たり１×１０６個の細胞で室温で１０分間懸濁される。ヨウ化プロピジウムの蛍光は、４８８ｎｍで１５ｍＷの光を送出する空冷アルゴンレーザーを備えたＦＡＣＳｔａｒ  ｐｌｕｓフローサイトメーターを用いて測定される。各サンプルからの１×１０４個の細胞からの赤色蛍光は、６１０ｎｍの帯域通過フィルターを通して集められる。
【００３２】
ＡＳ１０１とｐ２１ｒａｓシステインとの間の分子相互作用の部位の同定
ｐ２１ｒａｓはシアノゲンブロマイドによって開裂されるであろう。この過程は三つの断片を生じ、そのそれぞれが一つのシステイン残基を含む：Ｃｙｓ５１を含む断片１（Ｍｒ７２０３）；Ｃｙｓ６０を含む断片２（Ｍｒ４５４０）；及びＣｙｓ１１８を含む断片３（Ｍｒ６２２３）。Ｃｙｓ１１８がＡＳ１０１の分子標的であるということを確認するために、Ｃｙｓ１１８がＳｅｒ残基によって置換されたことを除いては野生型酵素と同一の形態のｐ２１ｒａｓ（ｐ２１ｒａｓＣ１１８Ｓと称される）が作成される。この改変は、Ｃｙ１１８の硫黄原子を酸素に置換するだけである。ＧＤＰを予め添加されたｐ２１ｒａｓＣ１１８Ｓに対するヌクレオチド置換のＡＳ１０１によるインビトロでの刺激が測定された。
【００３３】
ＡＳ１０１の効果の細胞レベルでの作用機構を解明する試みの中で、我々はＡＳ１０１の主要な細胞標的は小さなＧタンパク質ｐ２１ｒａｓであることを観察した。ＡＳ１０１は組み換えｐ２１ｒａｓに直接結合し、ＧＤＰ／ＧＴＰ置換によりそれを活性化する（図１）。Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞又はＮＩＨ３Ｔ３細胞の細胞モデルでは、ＡＳ１０１はｒａｓ及びその下流のエフェクターＥｒｋを活性化する。このことは、ミエリン塩基性タンパク質を基質として用いる免疫沈降されたＥｒｋのキナーゼアッセイによって示された（図２）。さらに、我々は最近、ＡＳ１０１がＢ１６メラノーマ細胞においてｒａｓ／ｒａｆ／ｅｒｅ経路を活性化する能力を有することを示した。この特性は、Ｇ０／Ｇ１細胞周期拘束を引き起こすＡＳ１０１の能力にとって必要であることが見出された。これらの情報伝達特性、及びＰＣ１２細胞の生存及び分化におけるｒａｓ／ｅｒｋの役割に基づき、この細胞系はＡＳ１０１の分化能力及び栄養的支持の欠失によって引き起こされるアポトーシス死を防止するＡＳ１０１の潜在的能力を研究するために利用された。ＰＣ１２細胞をＡＳ１０１で処理すると、ニューロンの分化を用量依存的な様式で誘導した（図３）。最適な用量は０．５〜１μｇ／ｍｌであることが見出された。形態学的な変化がＡＳ１０１で処理された細胞に見出され、これは膜の波打ち運動、細胞の平坦化、細胞体の拡大、及び安定な神経突起の形成を含んでいた。ＡＳ１０１で処理された細胞の形態学的な外観はＮＧＦで処理された細胞のそれと変わらなかった。ｒａｓの優性な陰性型（Ｎ１７）を発現するＰＣ１２細胞のＡＳ１０１での処理はそれらの分化を生じず、ＡＳ１０１の分化能力における重要な情報伝達分子としてのｒａｓの役割を示した。さらに、Ｐ２１ｒａｓのＣｙｓ１１８の点突然変異を発現するＰＣ１２細胞のＡＳ１０１での処理は細胞分化を生じなかったが、それはＮＧＦによるこの活性を防止せず、ｐ２１ｒａｓ分子におけるＡＳ１０１の標的としてのＣｙｓ１１８の役割を示唆した（図３）。
【００３４】
ＡＳ１０１はｐ２１ｒａｓの下流エフェクター分子ｃ−ｒａｆ−１を活性化することができた（図４）。ＰＣ１２細胞のニューロンの分化を誘導するＡＳ１０１の能力は、ＮＧＦによる細胞の分化後に増大することが知られているｐ２１ｗａｆの発現に対するその効果を我々に研究させた。ＰＣ１２細胞をＡＳ１０１で２４時間処理すると、用量依存的な様式で発現するｐ２１ｗａｆタンパク質の顕著な増大を生じた。ＡＳ１０１の効果的な濃度はＰＣ１２細胞の分化を誘導する効果的な濃度と同様であった（図５）。ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤での、ゲルダナマイシン（ｃ−ｒａｆ−１を薬理学的に欠損させる）での、又はＰＤ９８０５９（ＭＥＫ阻害剤）での細胞の予めの処理は、ＡＳ１０１によって誘導されるｐ２１ｗａｆタンパク質の発現を完全に破壊した。これらの結果は、ＡＳ１０１によって誘導されるｐ２１ｗａｆタンパク質発現はｒａｓ、ｃ−ｒａｆ−１、及びＭＡＰＫの全てに依存性であるということを意味する。
【００３５】
ｒａｓ／ｅｒｋ経路を活性化するＡＳ１０１の能力に基づいて、ｐ２１ｗａｆを上向き調節するために（その効果は全て、ＰＣ１２細胞の生存を媒介することが示されている）、我々は、栄養的支持の撤回後の分化したＰＣ１２細胞のアポトーシス死を防止するその能力を分析した。表１に示されるように、ＡＳ１０１でのＰＣ１２細胞の処理はＧ１拘束を用量依存的な様式で誘導した。細胞をＡＳ１０１と２４時間インキュベートした後、未処理細胞の３３％と比較して、０．５μｇ／ｍｌのＡＳ１０１で刺激された細胞の６８．１％はＧ１に蓄積した。さらに重要なことに、細胞をＮＧＦとインキュベートした５日後に抗ＮＧＦ抗体でＰＣ１２細胞を処理すると、２４時間後に５０％のアポトーシスを生じた。０．５μｇ／ｍｌのＡＳ１０１と抗ＮＧＦ抗体の添加は、１日後に起こるアポトーシスの割合を有意に減少させ、一方、それはＡＳ１０１なしでインキュベートされたコントロールの細胞の値と有意には異ならず、３４．９％であった。結果は表１に示される。
【００３６】
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【００３７】
細胞死のシグナルにかかわらず、細胞死プログラムの操作によってニューロンの死が阻止されることができるという証明は、細胞死のシグナルが未知の起源のものであるか又は既に生じている神経変性疾患の治療に多大な希望を生じた。最近、死後の脳組織における明らかなＤＮＡ開裂を有するニューロン核の検出に主に基づいて、アポトーシスは様々なヒトの神経変性疾患において記述されている。アポトーシスを支持するかかる核限定的な証拠は、ＰＤ脳の黒質緻密部（ＳＮＣ）における核クロマチンの凝縮の電子顕微鏡による発見である。
【００３８】
重大な観察がＴａｔｔｏｎ及びＯｌａｎｏｗによってなされており、神経変性疾患では、変性している神経細胞は、クロマチンの凝縮及びＤＮＡの開裂によって記録されるようにアポトーシスの最終段階に入る前のいくらかの時間、前アポトーシス段階にあるかもしれないということが示唆されている。従って、神経変性疾患は、前アポトーシス性でありかつ後の時点でアポトーシスを受けるニューロンの死期の現象の結果としての加速されたアポトーシスを反映しているのかもしれない。この観察は、細胞死の過程を妨害する機会及び仮想的な神経保護剤を設定する機会を提供する。
【００３９】
テルル化合物は様々な形態で投与されることができる。これらは、経口、非経口、経直腸、経鼻、又は吸入を介した投与を含む。投与の非経口経路は、静脈内、皮下、筋肉内などであることができる。化合物は、保護されるべきドパミン作用性ニューロンが位置する場所に直接投与されることもできる。即ち、化合物は脳室注入によって、脳柔組織への注入によって、又は脳の側部脳室内へ外科手術により挿入されたシャントによって、脳又は脳脊髄液中に直接投与されることができる。一般的に、本発明の組成物は、生物学的に活性なテルル化合物の効果的な量が、組成物の効果的な投与を容易とするための好適な賦形剤と組み合わされるように処方されるであろう。経口投与は、固体用量形態として、即ちラクトース、微小結晶質セルロースなどの慣用の賦形剤を含む錠剤として行われることができる。本発明の実施において有用なテルル化合物は、水の存在下で加水分解するものであることが見出されている。これらの加水分解された組成物は、最終的には分解されるが、インビボ及びインビトロにおいて活性である。この理由のため、組成物は調製したてのものであるか又は乾燥形態で経口投与されるべきである。好ましくは、化合物は使用直前まで無水条件下で保存されるべきである。
【００４０】
医薬的に許容可能な担体又は希釈剤は、例えば結合剤（例えばシロップ、アラビアガム、ゼラチン、ソルビトール、トラガカントガム、ポリビニルピロリドン）、賦形剤（例えばラクトース、スクロース、トウモロコシ澱粉、ソルビトール）、潤滑剤（例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール、シリカ）、崩壊剤（例えば微小結晶質セルロース、ジャガイモ澱粉）、湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウム）などであることができる。経口投与される場合、これらの医薬製剤は、錠剤、カプセル、粉末などの固体製剤の形態、又は溶液、懸濁液、乳液などの如き液体製剤であることができる。非経口投与される場合、医薬製剤は、坐剤、注射又は静脈内点滴、生理的食塩水溶液などの形態であることができる。
【００４１】
ＡＳ１０１及び他のテルル化合物の治療的適用は、当業者に現在又は将来的に知られるいかなる好適な治療方法及び技術によって達成されると予期されることができる。加えて、テルル化合物は唯一の活性剤として単独で、又は一以上の本発明の化合物と、又は例えば当該技術分野で公知の神経保護化合物を含む第二の活性な成分との組合せで用いられることができる。いくつかの例は、インターフェロン、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）、又はＧＤＮＦを含む。
【００４２】
用量は、個々の患者に対して決定されることができる。アンモニウムトリクロロ（ジオキソエチレン−Ｏ，Ｏ′）テルレート又はその医薬的に許容可能な塩の用量は、投与経路、年齢、体重及び個々の患者の症状、又は疾患の重症度によって変化するが、ヒトではそれは１〜１０ｍｇ／Ｍ２、好ましくは２〜４ｍｇ／Ｍ２、最も好ましくは３ｍｇ／Ｍ２であることができる。これらは一日おきに、又は一日のうちに一以上の分割された用量で投与されることができる。
【００４３】
以上の本発明の記述は例示及び記述の目的に提示されたものである。それは網羅的であることや開示された正確な形態に本発明を限定することを意図されない。自明な改変又は変形は、上述の技術に鑑みれば可能である。すべてのかかる自明な改変及び変形は、添付の特許請求の範囲の範囲内にあることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】ＧＤＰ／ＧＴＰ変換によるｐ２１ｒａｓの活性化を示す。
【図２】ミエリン塩基性タンパク質を基質として用いるＡＳ１０１によるＥＲＫ１／ＥＲＫ２の活性化を示す。
【図３−３ａ】図３は、ＡＳ１０１でのＰＣ１２細胞の処理は用量依存的な様式でニューロンの分化を誘導したことを示す。図３ａは、ＡＳ１０１がＰＣ１２細胞においてニューロンの分化を誘導したことを示す。
【図３ｂ】ｒａｓの優性陰性形（Ｎ１７）を発現するＰＣ１２細胞のＡＳ１０１での処理はニューロンの分化を誘導しなかったことを示す。
【図３ｃ】Ｐ２１ｒａｓのＣＳＹ１１８における点突然変異を発現するＰＣ１２細胞のＡＳ１０１での処理はニューロンの分化を生じなかったことを示す。
【図４】ＡＳ１０１で１５分間インキュベートされた細胞ではＡＳ１０１はｐ２１ｒａｓ下流エフェクター分子ｃ−ｒａｆ−１を活性化できることを示す。
【図５】ＡＳ１０１で２４時間インキュベートされた細胞ではＡＳ１０１は用量依存的な様式でｐ２１ｗａｆタンパク質発現における著しい増大を生じることを示す。
【図１】
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【図２】
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【図４】
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【図５】
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【図３−３ａ】
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【図３ｂ】
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【図３ｃ】
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【国際調査報告】
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