(57)【要約】  この発明は構造式（Ｉ）の化合物に関するものであり、ここでＲは−ＣＨ3または−ＣＨ2ＣＨ2Ｃｌであり、Ｒ’はＣ1−Ｃ7アルキルまたは−ＣＨ2ＣＨ2Ｃｌであり、Ｒ2またはＲ4はＯＰＯ3Ｈ2、ＮＯ2、ＯＣＯ（Ｇｌｕ−ＯＨ）、ＮＨＣＯ（Ｇｌｕ−ＯＨ）であり、ＮＭＲ7と割り当てられない群Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5およびＲ6は独立に、割り当てられない群Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5またはＲ6がＨ以外でありかつ他の２つがＨであるときに、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＰＯ3Ｈ2、ＯＣＨ3、ＣＦ3、ＯＣＦ3、ＮＯ2、ＣＮ、ＳＯ2ＣＨ3、ＳＯ2ＣＦ3、ＣＯＣＨ3、ＣＯＯＣＨ3、ＳＣＨ3、ＳＦ5、ＮＨ2、ＮＨＲ7、Ｎ（ＣＨ3）2、ＯＰＯ3Ｈ2またはＣ1−Ｃ7アルキル基であり、Ｒ7はＨまたは記載されたようなポリグルタミルである。リン酸およびグルタミル酸は遊離酸またはその薬学的に受容可能な塩である。
2007516228.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の構造式を有し、
【化１】
2007516228.tif 000010
ここでＲは−ＣＨ3または−ＣＨ2ＣＨ2Ｃｌであり、
Ｒ’はＣ1−Ｃ7アルキルまたは−ＣＨ2ＣＨ2Ｃｌ；Ｒ2またはＲ4の一方、双方ではない、はＯＰＯ3Ｈ2、ＮＯ2、ＯＣＯ（Ｇｌｕ）、ＮＨＣＯ（Ｇｌｕ）およびＮＨＲ7から選ばれ、他のＲ2またはＲ4は割り当てられず、
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5およびＲ6の少なくとも２つがＨであるとの前提で、Ｒ3、Ｒ5およびＲ6は独立にＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＰＯ3Ｈ2、ＯＣＨ3、ＣＦ3、ＯＣＦ3，ＮＯ2、ＣＮ、ＳＯ2ＣＨ3、ＳＯ2ＣＦ3、ＣＯＣＨ3、ＣＯＯＣＨ3、ＳＣＨ3、ＳＦ5、ＮＨＲ8、Ｎ（Ｒ9）2およびＣ1−Ｃ7アルキルから選ばれ、
Ｒ7は１〜５０のペプチド連鎖を有したグルタミルまたはポリグルタミン酸ポリペプチド残基であり、
Ｒ8はＨまたはＣ1−Ｃ7アルキルであり、
Ｒ9はＣＨ3またはＣＨ2ＣＨ3である
ことを特徴とする化合物またはその薬学的に受容可能な塩。
【請求項２】
Ｒが−ＣＨ2ＣＨ2Ｃｌであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ’がメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシルまたは置換へキシルであることを特徴とする請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ’がメチルであることを特徴とする請求項１〜３のいずれかひとつに記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ2がＯＰＯ3Ｈ2基またはその薬学的に受容可能な塩であることを特徴とする請求項１〜４のいずれかひとつに記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ3、Ｒ5およびＲ6がそれぞれＨのときに、Ｒ4がＦ、ＣｌまたはＯＣＨ3であることを特徴とする請求項１〜５のいずれかひとつに記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ3、Ｒ4、Ｒ6がそれぞれＨのときに、Ｒ5がＦ、Ｃｌ、ＯＣＨ3またはＯＣＦ3であることを特徴とする請求項１〜５のいずれかひとつに記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5またはＲ6の２つが独立にＦまたはＣｌであることを特徴とする請求項１〜５のいずれかひとつに記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ4とＲ5が独立にＦまたはＣｌであることを特徴とする請求項１〜５および８のいずれかひとつに記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ5とＲ6が独立にＦまたはＣｌであることを特徴とする請求項１〜５、８または９のいずれかひとつに記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ4とＲ5がＣｌであることを特徴とする請求項１〜５または８〜１０のいずれかひとつに記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ5とＲ6がＣｌであることを特徴とする請求項１〜５または８〜１０のいずれかひとつに記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ5がＯＰＯ3Ｈ2基またはその薬学的に受容可能な塩であることを特徴とする請求項１〜４のいずれかひとつに記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ2がＮＯ2であり、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ6がそれぞれＨであることを特徴とする請求項１〜４および６〜８のいずれかひとつに記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ4がＮＯ2であり、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ6がそれぞれＨであることを特徴とする請求項１〜５、８に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ4がＯＣＯ（Ｇｌｕ）であり、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5、Ｒ6がそれぞれＨである
ことを特徴とする請求項１〜５、８のいずれかひとつに記載の化合物。
【請求項１７】
ＯＣＯ（Ｇｌｕ）が薬学的に受容可能な塩の形態であることを特徴とする請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ4がＮＨＣＯ（Ｇｌｕ）であり、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5、Ｒ6がそれぞれＨであることを特徴とする請求項１〜４のいずれかひとつに記載の化合物。
【請求項１９】
ＮＨＣＯ（Ｇｌｕ）が薬学的に受容可能な塩の形態であることを特徴とする請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ4がＮＨＲ7であり、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5、Ｒ6がそれぞれＨであることを特徴とする請求項１〜４のいずれかひとつに記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ7がＨ、α−グルタミルまたはその薬学的に受容可能な塩または１〜５０のペプチド連鎖を有したポリグルタミン酸ポリペプチド残基またはその薬学的に受容可能な塩であることを特徴とする請求項２０に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ7がα−グルタミルまたはその薬学的に受容可能な塩または２〜１０のペプチド連鎖を有したポリグルタミン酸ポリペプチド残基またはその薬学的に受容可能な塩であることを特徴とする請求項２１に記載の図４の化合物ＩＶのための化合物。
【請求項２３】
選択的に薬学的に受容可能な添加剤、キャリアーまたは賦形剤と組み合わせた請求項１〜２２のいずれかひとつの化合物またはその薬学的に受容可能な塩の有効量を含んだ薬学的組成物。
【請求項２４】
薬学的に受容可能な添加剤、キャリアーまたは賦形剤と組み合わせた請求項１〜２２のいずれかひとつの化合物またはその薬学的に受容可能な塩の有効量を患者に投与することを特徴とする治療を要する患者中の癌処置方法。
【請求項２５】
癌が胃、結腸、直腸、肝臓、膵臓、肺、乳房、子宮頸部、子宮体部、卵巣、前立腺、精巣、膀胱、腎臓、脳／ＣＮＳ、頭部と首部、咽喉、多発性骨髄腫、黒色素細胞腫、急性リンパ白血病、急性骨髄性白血病、ユーウィング肉腫、小胞肺癌、絨毛腫、平滑筋組織腫瘍、ウィルムス腫瘍、神経芽細胞腫、ヘアリー細胞白血病、口／咽喉、食道、喉頭、腎臓またはリンパ腫からなる群から選ばれることを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
リンパ腫瘍がホジキン病または非ホジキンリンパ腫であることを特徴とする請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
必要なら患者中の抗薬性癌を処置する方法であって、請求項１〜２２のいずれかひとつの化合物の有効量を患者に投与することを特徴とする方法。
【請求項２８】
少なくともひとつの追加的な抗癌剤と組み合わせて請求項１〜２２のいずれかひとつの化合物の有効量を患者に投与することを特徴とする患者中の癌を処置する方法。
【請求項２９】
代謝拮抗物質、シタラビン（Ａｒａ  Ｃ）、エトポシド、ドキソルビシン、タクソール、ヒドロキシウレア、ビンクリスチン、サイトキサン、マイトマイシンＣ、アドリアマイシン、トポテカン、カンポセシン（ｃａｍｐｏｔｈｅｃｉｎ）、イリノテカン、ゲムシタビン、カンポセシン（ｃａｍｐｏｔｈｅｃｉｎ）、シスプラチン（ｃｉｓ−ｐｌａｔｉｎ）からなる群から選ばれた少なくともひとつの追加的抗癌剤と組み合わせて請求項１〜２２のいずれかひとつの化合物の有効量を患者に投与することを特徴とする患者中の癌を処置する方法。
【請求項３０】
選択的に薬学的に受容可能な添加剤、キャリアーまたは賦形剤と組み合わせて請求項１〜２２のいずれかひとつの化合物の有効量を患者に投与することを含んでいることを特徴とする患者中の腫瘍形成を処置する方法。
【請求項３１】
選択的に薬学的に受容可能な添加剤、キャリアーまたは賦形剤と組み合わせた少なくとも１種の追加的な抗癌剤と組み合わせた請求項１〜２２のいずれかの化合物の有効量を含んでいることを特徴とする薬学的組成物。
【請求項３２】
代謝拮抗物質、シタラビン（Ａｒａ  Ｃ）、エトポシド、ドキソルビシン、タクソール、ヒドロキシウレア、ビンクリスチン、サイトキサン、マイトマイシンＣ、アドリアマイシン、トポテカン、カンポセシン、イリノテカン、ゲムシタビン、カンポセシン、シスプラチンからなる群から選ばれた少なくともひとつの追加的抗癌剤と組み合わせて請求項１〜２２のいずれかひとつの化合物の有効量を含んでいることを特徴とする薬学的組成物。
【請求項３３】
選択的に薬学的に受容可能な添加剤、キャリアーまたは賦形剤と組み合わせた化合物の有効量を含んだ抗癌剤の製造のための請求項１〜２２のいずれかひとつの化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は哺乳類中で抗腫瘍活動を呈する代謝的に活性化されたスルホニル・ヒドラジンプロドラッグ（ＳＨＰ）に関するものである。この発明の化合物を用いた特に癌を含む腫瘍の処置方法にもこの発明は関するものである。
【０００２】
この発明はＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ＨｅａｌｔｈおよびＨｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓにより認可された許諾番号第１Ｒ４３ＣＡ９２９６８−０１号による政府の支持により完成されたものであり、しかして政府はこの発明についてある権利を保有するものである。
【背景技術】
【０００３】
アルキル化処置剤は悪性腫瘍の処置に現在利用できる最も有効な治療剤に属し、医療において広く使われている（Ｋａｔｚｕｎｇ、Ｉｎ  Ｂａｓｉｃ  ＆  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、７ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ、１９９８、Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ、Ｓｔａｍｆｏｒｄ、８８１）。高度の細胞毒性はＤＮＡストランド間架橋を導入して複製を抑制する能力によるものである（ＲａｊｓｋｉとＷｉｌｌｉａｍｓ、Ｃｈｅｍ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １９９８、９８：２７２３）。
【非特許文献１】Ｋａｔｚｕｎｇ、Ｉｎ  Ｂａｓｉｃ  ＆  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、７ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ、１９９８、Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ、Ｓｔａｍｆｏｒｄ、８８１
【非特許文献２】ＲａｊｓｋｉとＷｉｌｌｉａｍｓ、Ｃｈｅｍ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １９９８、９８：２７２３
【０００４】
アルキル化処置剤の間にあってＣＮＵ（クロロエチル・ニトロソウレア）シリーズは医療において広く使われ、脳腫瘍、結腸癌およびリンパ腫などの処置を行っている（ＤｅＶｉｔａ他、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９６５、２５：１８７６；およびＮｉｓｓｅｎ他、Ｃａｎｃｅｒ  １９７９、４３：３１）、しかし遅延累積骨髄圧縮および肝臓毒性の故にそれらの医療上の有用性は制約されている（Ｐａｎａｓｃｉ他、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９７７、３７：２６１５；およびＧｉｂｓｏｎとＨｉｃｋｍａｎ、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９８２、３１：２７９５）。
【非特許文献３】ＤｅＶｉｔａ他、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９６５、２５：１８７６
【非特許文献４】Ｎｉｓｓｅｎ他、Ｃａｎｃｅｒ  １９７９、４３：３１
【非特許文献５】Ｐａｎａｓｃｉ他、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９７７、３７：２６１５
【非特許文献６】ＧｉｂｓｏｎとＨｉｃｋｍａｎ、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９８２、３１：２７９５
【０００５】
ＣＮＵにより発生されたクロロエチル化およびカルバモイル化種を発生する能力を有するがヒドロキシエチル化およびビニル化種を発生する能力を欠いた一連の１，２−ビス（スルホニル）ヒドラジンプロドラッグ（ＳＨＰ）が最近開発されている（Ｓａｒｔｏｒｅｌｌｉ他、アメリカ特許第６，０４０，３３８号、５，６３７，６１９号、５，２５６，８２０号、５，２１４，０６８号、５，１０１，０７２号、４，８４９，５６３号、４，６８４，７４７号参照）
【特許文献１】アメリカ特許第６，０４０，３３８号
【特許文献２】アメリカ特許第５，６３７，６１９号
【特許文献３】アメリカ特許第５，２５６，８２０号
【特許文献４】アメリカ特許第５，２１４，０６８号
【特許文献５】アメリカ特許第５，１０１，０７２号
【特許文献６】アメリカ特許第４，８４９，５６３号
【特許文献７】アメリカ特許第４，６８４，７４７号
【０００６】
ＤＮＡのクロロエチル化とそれに続く架橋から抗癌活動が結果されることが提案されている（Ｋｏｈｎ、Ｉｎ  Ｒｅｃｅｎｔ  Ｒｅｓｕｌｔｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｅｄｓ．Ｃａｒｔｅｒ他、１９８１，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｂｅｒｌｉｎ、ｖｏｌ．７６：１４１；Ｓｈｅａｌｙ他、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９８４、２７：６６４）。カルバモイル化種（つまりイソシアネート）は蛋白質上のチオールおよびアミン官能基と反応して、ＤＮＡポリメラーゼ（Ｂａｒｉｌ他、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９７５：３５：１）、ＤＮＡストランド破壊の修復（Ｋａｎｎ他、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９７４、３４：３９８）、ＲＮＡ合成および処理（Ｋａｎｎ他、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９７４、３４：１９８２）を抑制する。しかしＤＮＡのヒドロキシエチル化は発癌および／または突然変異誘発事象である（Ｓｗｅｎｓｏｎ他、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．１９７９、６３：１４６９）。
【非特許文献７】Ｋｏｈｎ、Ｉｎ  Ｒｅｃｅｎｔ  Ｒｅｓｕｌｔｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｅｄｓ．Ｃａｒｔｅｒ他、１９８１，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｂｅｒｌｉｎ、ｖｏｌ．７６：１４１
【非特許文献８】Ｓｈｅａｌｙ他、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９８４、２７：６６４
【非特許文献９】Ｂａｒｉｌ他、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９７５：３５：１
【非特許文献１０】Ｋａｎｎ他、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９７４、３４：３９８
【非特許文献１１】Ｋａｎｎ他、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９７４、３４：１９８２
【非特許文献１２】Ｓｗｅｎｓｏｎ他、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．１９７９、６３：１４６９
【０００７】
現在のＳＨＰシリーズの先端化合物である１，２−ビス（メチルスルホニル）−１−（２−クロロエチル）−２−（メチルアミノ・カルボニル）ヒドラジン（ＶＮＰ４０１０１Ｍ）はホストに対する毒性が低く、クロロエチル・ニトロソウレア（ＣＮＵ）誘導体や他のＳＨＰ類似体よりも、Ｌ１２１０ネズミ（ｍｕｒｉｎｅ）白血病、Ｌ１２１０／ＢＣＮＵ、Ｌ１２１０／ＣＴＸ、Ｌ１２１０／ＭＥＬ（１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソウレア、シクロホスファミドおよび抗メルファランサブライン）、Ｐ３８８白血病、Ｍ１０９肺癌腫、Ｂ１６黒色素細胞腫、Ｃ２６結腸癌腫、およびＵ２５１神経膠腫に対するより良い抗癌活動を有している（Ｓｈｙａｍ他．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９９，４２：９４１）。
【非特許文献１３】Ｓｈｙａｍ他．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９９，４２：９４１
【０００８】
加えて、ＶＮＰ４０１０１Ｍは血液脳バリアー（ＢＢＢ）を架橋したり頭蓋内に移植された白血病細胞を根絶する（＞６．５４ｌｏｇ細胞殺戮）のに有効であり、ＢＣＮＵの効果に匹敵するものである（Ｆｉｎｃｈ他、Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ、２００１、６１：３０３３）。
【非特許文献１４】Ｆｉｎｃｈ他、Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ、２００１、６１：３０３３
【化２】
2007516228.tif 000003
【０００９】
ＶＮＰ４０１０１Ｍの抗癌活動は９０ＣＥとメチルイソシアネートの解放によるものであろう。９０ＣＥはさらに崩壊してメチル２−クロロエチル・ジアゾスルホン（１）図１、比較的特殊なＯ6−グアニン・クロロエチレーターを生じ、グアニンのＮ7−位置の最低限のアルキル化を来す（Ｐｅｎｋｅｔｈ他、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９４、３７：２９１２；Ｐｅｎｋｅｔｈ他、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０００、５９：２８３）。ＶＮＰ４０１０１Ｍから解放されたメチルイソシアネートは種々のＤＮＡ修復酵素を抑制する能力を有しており、該酵素としてはＯ6−アルキルグアニン−ＤＮＡアルキル転移酵素が含まれ、ＤＮＡ中のＯ6−アルキルグアニン・モノアルキル種の安定化を来たし、かなりの割合のストランド間架橋を結果する（Ｂａｒｉｌ他、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９７５、３５：１）。
【非特許文献１５】Ｐｅｎｋｅｔｈ他、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９４、３７：２９１２
【非特許文献１６】Ｐｅｎｋｅｔｈ他、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０００、５９：２８３
【非特許文献１７】Ｂａｒｉｌ他、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９７５、３５：１
【００１０】
ＶＮＰ４０１０１Ｍは現在固形腫瘍（ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ）と血液性悪性腫瘍を有した患者における医療的な試行段階にある。ＶＮＰ４０１０１Ｍは水性溶液に対する溶解性が非常に大きくはない。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）とエタノールは溶解性を促進する完成製品のビヒクルに含まれる。ＰＥＧとエタノールとはともに人間への使用に受容できるビヒクルではあるが、動物研究で示されるように高濃度において溶血および静脈炎などの副作用がある。
【００１１】
ＰＥＧとエタノールがビヒクルから除ける場合には、ＶＮＰ４０１０１Ｍは人間においては大きく許容され投与量が高くてもよく、理論的には高度の効果を呈するものである。したがって、我々の目的は（ａ）水溶性とｐＨ３〜９の水性溶液中での安定性を改善することのでき（ｂ）クロロエチル化種を形成することが可能であり、（ｃ）ヒドロキシエチル化活動がなく、（ｄ）メチルイソシアネートを形成することができ、（ｅ）薬物動態性（例えば生体中での長い半減期）の改善された一連のＳＨＰを合成することにある。
【００１２】
この発明においては、水溶性酵素的活性ＳＨＰ（Ｉ）は上記の条件を満たすものと考えている。そのようなＳＨＰの一例は以下の理由から図２に示す誘導体を含んだリン酸塩である。
【００１３】
（ａ）一般に、リン酸塩系類似体はその塩形態を含んでいて、中性ｐＨにおいて良好な水溶性および安定性を呈する。（ｂ）構造式Ｉの化合物の生物学的転換は酸素−亜リン酸結合のアルカリ性ホスファターゼ（ＡＰ）分解により進行してフェノール中間体を形成し、これが次いで断片化によりクロロエチル化またはメチル化種とカルバモイル化処置剤を形成するが、ヒドロキシエチル化処置剤は形成しない（図１、２）。
【００１４】
（ｃ）化合物Ｉの生物学的転換はキノンメチドを発生し、これがＤＮＡを損傷ししたがって細胞複製を抑制するのに貢献する（Ｌｉｎ他、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９８６、２９：８４）。（ｄ）化合物ＩはＶＮＰ４０１０１Ｍのプロドラッグと考えられ、これは広範囲な例えば種々の固形腫瘍を含む腫瘍性疾病状態の抗癌スペクトルに対するアルキル化処置剤として認識されている。かくして化合物ＩはＶＮＰ４０１０１Ｍと同じ活性種である。
【非特許文献１８】Ｌｉｎ他、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９８６、２９：８４
【００１５】
生物学的活性化されたプロドラッグのさらなる例を図３、４に示す。図３に示すニトロ類似体は水溶性でありかつ低酸素の条件下で選択的に活性化される化合物の例である。ＶＮＰ４０１０１Ｍの解放は低酸素条件下でのニトロ基の還元の場合にのみ起きる。化合物ＩＩはニトロレダクターゼ（ＮＲ）により対応するアミノ類似体に還元され、これが続いてＶＮＰ４０１０１Ｍとキノン−イミンメチドに断片化される。Ｅ．ＣｏｌｉまたはＢａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．から遊離された酵素であるＮＲはＡＤＥＰＴ（抗体指向酵素プロドラッグ治療）またはＧＤＥＰＴ（遺伝子指向酵素プロドラッグ治療）において癌治療に広く使われている（Ａｎｌｅｚａｒｋ他、ＷＯ９３／０８２８８、１９９３）。
【特許文献８】ＷＯ９３／０８２８８
【００１６】
図４に示すのはペプチターゼを使ってＶＮＰ４０１０１Ｍを腫瘍内に発生するものであって、カルボキシペプチダーゼＧ２（ＣＰＧ２）やカルボキシペプチターゼＡ（ＣＰＡ）などのカルボキシペプチターゼによるグルタミル残基の共役から引き出された化合物の適宜な置換フェノールおよび芳香族アミンへの分解を先に示した。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓから遊離された酵素であるＣＰＧ２は葉酸およびメトトレキサートからグルタメート残基を除くことができる。グルタメート残基を含んだプロドラッグを活性化することはＡＤＥＰＴまたはＧＤＥＰＴにおいて採用されてきた（Ｂａｇｓｈａｗｅ他、ＷＯ８８／０７３７８、１９８８；Ｓｐｒｉｎｇｅｒ他、アメリカ特許第６，０２５，３４０号、２０００；Ｓｐｒｉｎｇｅｒ他、アメリカ特許第６，００４，５５０号、１９９９）。
【特許文献９】ＷＯ８８／０７３７８
【特許文献１０】アメリカ特許第６，０２５，３４０号
【特許文献１１】アメリカ特許第６，００４，５５０号
【００１７】
ウシ科膵臓からのＣＰＡは容易に薬剤α−ペプチド（アミノ酸がグルタメート部のα−カルボキシル基に結合している誘導体）を分割する。またこれがＡＤＥＰＴにおいて採用されている（Ｗｏｌｆｅ他、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ．１９９９、１０：３８；Ｈｕｅｎｎｅｋｅｎｓ、Ａｄｖ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ．１９９７、３７：７７；Ｖｉｔｏｌｓ他、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９５、５５：４７８）。図４に示すように化合物ＩＩＩ、ＩＶは対応するＣＰＧ２またはＣＰＡにより分割され、これが抗体共役またはトランス遺伝子として導入されてＶＮＰ４０１０１Ｍおよびキノンメチドまたはキノン−イミンメチドを形成する（Ｐａｗｅｌｅｋ他、アメリカ特許第６，１９０，６５７号、２００１）。
【非特許文献１９】Ｗｏｌｆｅ他、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ．１９９９、１０：３８
【非特許文献２０】Ｈｕｅｎｎｅｋｅｎｓ、Ａｄｖ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ．１９９７、３７：７７
【非特許文献２１】Ｖｉｔｏｌｓ他、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９５、５５：４７８
【特許文献１２】アメリカ特許第６，１９０，６５７号
【発明の開示】
【発明の目的】
【００１８】
この発明の目的は、動物と人間の癌を含む腫瘍の処置のための化合物、薬学的組成物および方法を提供することにある。
【００１９】
この発明の他の目的は、好ましくかつ高められた活性特性と薬物動態学と生物学的利用性と低い毒性を呈する組成物を利用して腫瘍を処置する方法を提供することにある。
【００２０】
この発明のさらに他の目的は、化学療法処置剤での治療に抵抗性を有する癌の処置のための組成物と方法を提供することにある。
【００２１】
以下これらの目的を達成するこの発明について記載する。
【発明の要旨】
【００２２】
この発明は構造式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に受容可能な塩に関するものである。
【化３】
2007516228.tif 000004
【００２３】
ここでＲは−ＣＨ3または−ＣＨ2ＣＨ2Ｃｌであり、
Ｒ’はＣ1−Ｃ7アルキルまたは−ＣＨ2ＣＨ2Ｃｌであり、
Ｒ2またはＲ4のいずれか一方、両方ではない、がＯＰＯ3Ｈ2、ＮＯ2、ＯＣＯ（Ｇｌｕ）、ＮＨＣＯ（Ｇｌｕ）およびＮＨＲ7から選ばれ他方は割り当てられず、
Ｒ2〜Ｒ6の少なくとも２つがＨであるという条件で、Ｒ3、Ｒ5、Ｒ6は独立にＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＰＯ3Ｈ2、ＯＣＨ3、ＣＦ3、ＯＣＦ3、ＮＯ2、ＣＮ、ＳＯ2ＣＨ3、ＳＯ2ＣＦ3、ＣＯＣＨ3、ＣＯＯＣＨ3、ＳＣＨ3、ＳＦ5、ＮＨＲ8、Ｎ（Ｒ9）2、ＯＰＯ3Ｈ2、Ｃ1−Ｃ7アルキルから選ばれ、
Ｒ7はＨ、グルタミル、好ましくはα−グルタミル（−ＣＯＣＨ（ＮＨ2）ＣＨ2ＣＨ2ＣＯ2Ｈ）またはポリグルタミン酸ポリペプチド残基、（−ＣＯＣＨ（ＮＨＲ7a）ＣＨ2ＣＨ2ＣＯ2Ｈであり、
Ｒ7aはグルタミル（好ましくはα−グルタミル）または１〜５０ペプチド連鎖、好ましくは２〜１０ペプチド連鎖を有したポリグルタミン酸ポリペプチド残基）であり、
Ｒ8はＨまたはＣ1−Ｃ7アルキルであり、
Ｒ9はＣＨ3またはＣＨ2ＣＨ3である。
リン酸および／またはグルタミン酸置換基は遊離酸またはその薬学的に受容可能な塩である。
【００２４】
さらにこの発明の好ましき技術思想においては、化合物Ｉに属する好ましき処置剤は一連のオルト−リン酸塩−帯同であり、そこでは
Ｒは−ＣＨ2ＣＨ2Ｃｌであり、Ｒ’は−ＣＨ3であり、Ｒ2は遊離酸またはその薬学的に受容可能な塩（好ましくはＮａ）であるリン酸塩基である。特に好ましきオルト−リン酸塩−帯同ＳＨＰにあっては、Ｒ3、Ｒ5、Ｒ6がＨのときにＲ4はＣｌ、ＦまたはＢｒ（好ましくはＣｌ）である。
【００２５】
他の好ましきオルト−リン酸塩−帯同ＳＨＰにあっては、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ6がＨのときに、Ｒ5はＣｌ、ＦまたはＢｒ（好ましくはＣｌ、Ｆ）である。他の好ましきオルト−リン酸塩−帯同ＳＨＰにあってはＲ3〜Ｒ6の２つはＦ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ（好ましくは両置換基は同じであり、より好ましくは両置換基はＣｌである）から選ばれ、他はＨである。
【００２６】
化合物ＩＩに属する好ましき処置剤はＳＨＰのメタ−リン酸塩−帯同ニトロ含有類似体である。リン酸塩基は遊離酸またはその薬学的に受容可能な塩（好ましくはＮａ）である。ニトロ含有ＳＨＰの特に好ましき態様にあっては、Ｒ4がＨのときにＲ2はＮＯ2である。他の好ましき態様にあってはＲ2がＨのときにＲ4はＮＯ2である。
【００２７】
化合物ＩＩＩおよびＩＶに属する好ましき処置剤はＳＨＰのグルタミン酸残基共役類似体である。これら両方のＳＨＰの特に好ましき態様にあっては、酸端末（ａｃｉｄ−ｔｅｒｍｉｎａｌ）は遊離酸またはその薬学的に受容可能な塩（好ましくはＮａ）である。化合物ＩＶの他の好ましき態様にあっては、Ｒ7はＨまたはポリグルタミン酸ポリペプチド残基である。
【００２８】
この発明の化合物、特にこの発明の好ましき組成物は上記したように、腫瘍の処置において極めて効果的である。それらはまた高められた抗腫瘍活性、低減された毒性、高い水溶性、またはＶＮＰ４０１０１Ｍに比べてより好ましき薬物動学的特徴などの１つ以上の改善を齎すものである。かくしてこの発明の好ましき化合物はＶＮＰ４０１０１Ｍより高い治療指数（つまりより良い効果／危険比）を有するのである。
【００２９】
この発明の化合物は癌や他の状態および／または疾病状態の処置のための薬学的組成物に使用できる。この発明による例は他の化合物の合成における中間体であり、生物学的活性とこの発明の化合物の生物学的活性測定の標準を呈するものである。あるケースにおいては、この発明の化合物は微生物感染の処置、特にウイルス、バクテリアおよび真菌感染の処置に使われる。これらの化合物は上記したような化合物の１種以上の有効量を含んでおり、選択的に薬学的に受容可能な添加剤、キャリアー、賦形剤と組み合わされる。
【００３０】
この発明のさらなる態様は癌の処置に関するものであって、必要ある患者に上記した化合物の有効量を投与するもので、その際選択的には薬学的に受容可能な添加剤、キャリアーまたは賦形剤と組み合わせる。またこの発明は哺乳類における腫瘍の処置方法に関するものであって、上記した化合物の有効量を癌に苦しむ患者に投与する。この発明の好ましき実施例にあっては、悪性腫瘍、白血病およびリンパ腫の処置において１以上の処置剤の抗癌有効量を患者に投与する。
【００３１】
他の種々の関連疾病の処置もこの発明の化合物を使って行われる。この方法は関連類似体の活性を測定しかつこの発明の１以上の化合物に対する患者の癌の罹患性の測定などの分析などの比較テストにも用いることができる
【発明の詳細な説明】
【００３２】
この明細書の記載においては以下の用語を使用する。
【００３３】
用語「患者」とは、哺乳類および好ましくは人間を含む動物であって、この発明の組成物を用いた予防的処置を含む処置が提供されるものを言う。人間などの特定の動物に特有な感染、症状、疾病状態の処置に関しては、この用語はそれら特定の動物を意味する。この発明の全んどの態様においては患者は人間であるのが好ましい。
【００３４】
用語「有効量」とは、この発明の化合物の濃度または量であって、意図された結果、一般には処置された疾病または症状の好ましき変化を齎すのに使われ、処置された疾病または症状に応じて、該変化とは軽減、癌または腫瘍の成長またはサイズの低減、好ましき生理学的結果、腫瘍、癌組織などの成長または同化の低減を指す。
【００３５】
用語「腫瘍」とは腫瘍、つまり正常な組織より速く細胞増殖により成長してかつ新たな成長を開始する刺激が停止した後でも成長を続ける異常な組織、の形成と成長を結果する病理学的なプロセスを言う。腫瘍は良性（良性腫瘍）または悪性（癌腫）である組織の異常な塊であることもある。ここでは用語「腫瘍」は全ての癌性疾病を言い、悪性血行性、腹水および固形腫瘍に伴う病理学的プロセスを包含する。ここでは用語「癌（ｃａｎｃｅｒ）」と「腫瘍（ｔｕｍｏｒ）とは「腫瘍（ｎｅｏｐｌａｓｉａ）」と相互に言いかえることができる。
【００３６】
この発明の組成物により処置できる癌としては例えば、胃癌、結腸癌、直腸癌、肝臓癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、子宮頸部癌、子宮体部癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、膀胱癌、腎臓癌、脳／ＣＮＳ癌、頭部および首部癌、咽喉癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多重骨髄癌、黒色素細胞腫瘍、急性リンパ細胞白血病、急性骨髄性白血病、ユーウィング肉腫、小胞肺癌、絨毛癌、平滑筋組織腫瘍、ウィルムス腫瘍、神経芽細胞腫、ヘアリー細胞白血病、口腔／咽喉癌、食道癌、喉頭癌、腎臓癌、リンパ腫などがある。
【００３７】
患者にこれら１以上の処置剤の抗腫瘍有効量を投与することを含む腫瘍の処置はこの発明の好ましき実施例のひとつである。
【００３８】
用語「アルキル」とは完全飽和された炭化水素遊離基であって、１〜７個の炭素単体を含んだものを言う。この発明に使用するアルキル基としては好ましくはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、シクロヘキシル、メチルシクロ・プロピルおよびメチルシクロ・ヘキシルなどの線型、分枝鎖または環状基である。
【００３９】
用語「塩」とはこの発明の化合物の使用と両立するいかなる塩をも言うものである。化合物が癌の処置を含む薬学的徴候に使用される場合には、用語「塩」とは薬学的に受容可能な塩を言い、薬学的処置剤として化合物の使用と両立するものである。
【００４０】
この発明の化学構造式に使用される用語「ｇｌｕ」または「Ｇｌｕ」とはグルタミン酸残基または誘導体を言い、そのアミノ基上において他のカルボキシル基（例えばＲＣＯＯＨ）と結合されるか、またはそのカルボキシル基のひとつの上でヒドロキシル基またはアミノ基と結合される。
【００４１】
グルタミン酸（ＨＯＯＣＣＨ（ＮＨ2）ＣＨ2ＣＨ2ＣＯＯＨ）は２個の反応性カルボキシル酸基と反応性アミノ基とを有しており、この発明の化合物中においてグルタミル残基を形成する。化学構造で示されるように、グルタミン酸は２個のカルボキシル基のひとつ上で他のアミノ基（ＲＮＨ2）またはヒドロキシル基（ＲＯＨ）と結合して、対応するα−グルタミルまたはγ−グルタミルアミドまたはエステル化合物を形成する。
【００４２】
これに代えて、グルタメートはそのアミノ基上でカルボキシル基と結合してＮ−グルタミルアミド誘導体を形成する。この発明の化合物にあっては、単一のグルタミル残基およびポリグルタミル・ポリペプチド残基が存在し、後者は２以上のグルタメート・アミノ酸から形成されるポリペプチドである。用語「ＯＣＯ（Ｇｌｕ）」とはグルタミル残基（α−またはγ−）を言うもので、これは遊離ヒドロキシル基と結合してα−またはγ−カルボキシル基（好ましくはグルタミン酸のα−カルボキシル酸基）を有したエステルを形成する。
【００４３】
用語「ＮＨＣＯ（Ｇｌｕ）」とはグルタミル残基（α−またはγ−）を言うものであり、遊離アミン基に結合してα−またはγ−カルボキシル基（好ましくはグルタミン酸のα−カルボキシル酸基）を有したアミドを形成する。用語「グルタミル」とはグルタメートアミノ酸を言い、エステルまたはアミドとして誘導されたものである。用語「α−グルタミル」とはグルタミン酸（エステルまたはアミド）のα−カルボキシル基に形成されたグルタメート誘導体を言う。用語「γ−グルタミル」とはグルタミン酸（エステルまたはアミド）のγ−カルボキシル基に形成されたグルタメート誘導体を言う。用語「Ｎ−グルタミル」とはグルタミン酸（アミド）のアミノ基に形成されたグルタメート誘導体を言う。用語「ポリグルタミン酸・ポリペプチド残基」とは１以上のグルタミン酸および好ましくは排他的にグルタミン酸を含んだポリペプチド残基を言う。
【００４４】
この発明は構造式（Ｉ）の化合物に関するものである。
【化４】
2007516228.tif 000005
【００４５】
ここでＲは−ＣＨ3または−ＣＨ2ＣＨ2Ｃｌであり、
Ｒ’はＣ1−Ｃ7アルキルまたは−ＣＨ2ＣＨ2Ｃｌであり、
Ｒ2またはＲ4の一方、両方ではない、はＯＰＯ3Ｈ2、ＮＯ2、ＯＣＯ（Ｇｌｕ）、ＮＨＣＯ（Ｇｌｕ）およびＮＨＲ7から選ばれ、
その他方は割り当てられず、
Ｒ2〜Ｒ6の少なくとも２つがＨであるとの条件下で、Ｒ3、Ｒ5およびＲ6は独立にＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＰＯ3Ｈ2、ＯＣＨ3、ＣＦ3、ＯＣＦ3、ＮＯ2、ＣＮ、ＳＯ2ＣＨ3、ＳＯ2ＣＦ3、ＣＯＣＨ3、ＣＯＯＣＨ3，ＳＣＨ3、ＳＦ5、ＮＨＲ8、Ｎ（Ｒ9）2、ＯＰＯ3Ｈ2およびＣ1−Ｃ7アルキルから選ばれ、
Ｒ7はＨ、グルタミル、好ましくは、α−グルタミル（−ＣＯＣＨ（ＮＨ2）ＣＨ2ＣＨ2ＣＯ2Ｈ）またはポリグルタミン酸ポリペプチド残基−ＣＯＣＨ（ＮＨＲ7ａ）ＣＨ2ＣＨ2ＣＯ2Ｈであり、
Ｒ7aはグルタミル（好ましくはα−グルタミル）または１〜５０のペプチド連鎖、好ましくは２〜１０のペプチド連鎖を有したポリグルタミン酸ポリペプチド残基であり、
Ｒ8はＨまたはＣ1−Ｃ7アルキルであり、
Ｒ9はＣＨ3またはＣＨ2ＣＨ3である。リン酸およびグルタミン酸（グルタミル）は遊離酸またはその薬学的に受容可能な塩である。
【００４６】
この発明の化合物は中間体のプロドラッグ形態であり、図１〜４に示すように、クロロエチレン化、メチレン化および／またはカルバミル化メカニズムによりその活性を呈する。新たなプロドラッグデザインの根本的理由は、酵素活性化されたプロドラッグは、一連の酵素活性化および迅速断片化を介して、活性アルキル化種１およびメチルイソシアネートに変換できるからである。化合物Ｉについては、脱リン酸化はＡＰ酵素活性化により完結されて、中間体２または３を与え、図２に示すように後続のベンジル基断片化はアルキル化およびカルバモイル化種を発生する。
【００４７】
化合物ＩＩについては図３に示すように、ＡＰ活性化脱リン酸化およびＮＲ−活性化還元が中間体６または７を与え、これが迅速な断片化を介してアルキル化およびカルバモイル化種を発生する。
【００４８】
化合物ＩＩＩとＩＶについては、化合物の分割がＣＰＧ２またはＣＰＡ酵素により触媒作用を受けて、フェノール１０および芳香族アミン１１を適宜置換する。ついで図４に示すように、迅速な断片化によりアルキル化およびカルバモイル化種を形成する。
【００４９】
理論によって制約はされないが、このプロドラッグ活性化プロセスにおける速度測定ステップはＰ−Ｏ結合分割ステップであるようで、これがＡＰ酵素により触媒作用を受ける。後続の断片化ステップは通常迅速であると理論付け得る。循環においてより長い半減期を有したリン酸塩連鎖プロドラッグはそれらをして活性アルキル化種補給源として機能させるか、またはＶＮＰ４０１０１Ｍとは異なる分散を有したプロドラッグとして機能させ、所望の性質を有している。
【００５０】
この目的へのひとつのアプローチとしては、脱リン酸化ステップとリン酸帯同ＳＨＰの生物活性化における速度制約ステップを減速することである。これにはリン酸基に位置αにおいて大きな置換基を導入する。これらのアルキル基はＰ−Ｏ結合分割サイトに近いことにより立体障害を与えて、酵素脱リン酸化事象を減速する。
【００５１】
該目的への他のアプローチとしては、フェニル環に電子解放または電子吸収基を導入することであって、これがＰ−Ｏ結合分割の速度に影響を与える。加えて、続いて起こる断片化ステップもフェニル環における電子解放または電子吸収基による置換に影響される。これらの考慮に基づいて、多くのリン酸帯同ＳＨＰがたやすく良い量に合成され評価されている。これらプロドラッグのジソジウム（ｄｉｓｏｄｉｕｍ）塩は水溶性がよい。
【００５２】
この発明の化合物は主としてそれらの抗腫瘍活性の故に有用であって、この活性には固形腫瘍に対するものも含まれる。加えてこれらの組成物は他の有用な抗腫瘍処置剤の化学合成において中間体としても使用できる。つまり治療剤またはその他として有用である。
【００５３】
この発明の好ましき化合物Ｉにあっては、Ｒは−ＣＨ2ＣＨ2Ｃｌであり、Ｒ’は−ＣＨ3であり、Ｒ2はリン酸基であって遊離酸または塩（好ましくはＮａ）である。オルト−リン酸帯同ＳＨＰの特に好ましき態様にあっては、Ｒ3、Ｒ5、Ｒ6がＨのときに、Ｒ4はＣｌ、ＦまたはＢｒ（好ましくはＣｌ）である。オルト−リン酸帯同ＳＨＰの他の好ましき態様にあってはＲ3、Ｒ4、Ｒ6がＨのときに、Ｒ5はＣｌ、ＦまたはＢｒ（好ましくはＣｌ、Ｆ）である。
【００５４】
オルト−リン酸帯同ＳＨＰのさらに他の好ましき態様にあっては、Ｒ3〜Ｒ6のうち２つはＦ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ（好ましくは両置換基は同じであって、より好ましくは両置換基はＣｌ）であり、他の２つはＨである。
【００５５】
この発明の好ましき化合物ＩＩはＳＨＰのメタ−リン酸帯同・ニトロ含有類似体である。リン酸塩基は遊離酸または塩（好ましくはＮａ）である。ニトロ含有ＳＨＰの特に好ましき態様にあっては、Ｒ4がＨのときにＲ2はＮＯ2である。他の好ましき態様では、Ｒ2がＨのときにＲ4はＮＯ2である。
【００５６】
この発明の好ましき化合物ＩＩＩおよびＩＶはＳＨＰのグルタミル残基−共役類似体である。両ＳＨＰの特に好ましき態様にあっては、酸端末は遊離酸または塩（好ましくはＮａ）である。さらに好ましき化合物ＩＶの態様にあっては、Ｒ7はＨまたはポリグルタミルである。
【００５７】
この発明の化合物は周知でかつ９０ＣＥからの技術の採用により合成される。９０ＣＥの合成を図５（Ｓａｒｔｏｒｅｌｌｉ他、アメリカ特許第４，６８４，７４７号、１９８７参照）に示す。
【特許文献１３】アメリカ特許第４，６８４，７４７号
【００５８】
図６に示すように、化合物Ｉの２−アミノカルボニルー１，２−ビス（メチルスルホニル）−１−（置換）ヒドラジン（１９および２０、Ｒ＝−ＣＨ2ＣＨ2Ｃｌ）はそれぞれ、９０ＣＥをホスゲンまたはトリホスゲンまたはトリクロロメチル・クロロホルメートなどのその当量で反応させ、さらに適宜なＮ−アルキル−Ｎ−ベンジルアミン（１５または１６であり、ここでＲ’は−ＣＨ3；Ｒ2またはＲ4はジエチルホスホノオキシ基などのリン酸基であり、Ｒ2〜Ｒ6の２つがＨではなく他の２つがＨであるとの条件下で、Ｒ2〜Ｒ6の割り当てられない基はそれぞれ独立に表示された構造または関連アルキル基である。）で濃縮することにより合成される（Ｍａｊｅｒ他、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９４，５９：１９３７；Ｐｒｉｄｇｅｎ他、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８９，５４：３２３１）。
【非特許文献２２】Ｍａｊｅｒ他、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９４，５９：１９３７
【非特許文献２３】Ｐｒｉｄｇｅｎ他、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８９，５４：３２３１
【００５９】
Ｎ、Ｎ−ジイソプロピル・エチルアミン（ＤＩＥＡ）を塩基として、用い、かつ乾燥アセトニトリル・ジクロロメタン溶媒中で終夜０℃に反応を保つことにより、この結合反応は高い収量で達成される。１７または１８のトリメチルシリル・ブロマイド（ＴＭＳＢｒ）による非保護化（ｄｅｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ）に続いて（Ｍａｔｕｌｉｃ−Ａｄａｍｉｃ他、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９５、６０：２５６３）、１９または２０からのリン酸遊離酸は重炭酸ナトリウム（ＮａＨＣＯ3）溶液で処理されて、対応するジソジウム塩２１、２２をそれぞれ与える。逆相コラムクロマトグラフィーを使用して上記した水溶性ＳＨＰ（１９−２２）を精製できる。
【非特許文献２４】Ｍａｔｕｌｉｃ−Ａｄａｍｉｃ他、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９５、６０：２５６３
【００６０】
図７に示すように、Ｎ−ベンジル−Ｎ−メチルアミン（１５、１６）は対応するサリチルアルデヒド、サリチル酸または４−置換フェノールから生成できる。市販入手可能なサリチルアルデヒドはジエチル・クロロリン酸と反応して穏和な条件下で対応するジエチル・ホスホノキシ−ベンズアルデヒド（２３または２４）を与える。還元剤として水素化ホウ素ナトリウムを用いて、メチルアミンにより２３または２４をアミノ化すると対応するＮ−ベンジルメチル・アミン（１５または１６）を与える。
【００６１】
市販入手可能なサリチル酸は、リチウム・アルミニウムハイドライド（ＬＡＨ）を還元剤として還流で用いて、まず対応するサリチルアルコール（２５）に還元される。２５のフェノールの選択的なリン酸化（Ｓｉｌｖｅｒｂｅｒｇ他、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９９６、３７：７７１）を亜リン酸ジエチル、カーボンテトラクロライド、ＤＩＥＡおよび４−ジメチルアミノ・ピリジン（ＤＭＡＰ）の触媒量を用いて達成して、ベンジルアルコール（２６）を得た。ベンジルアルコール（２６）からベンゾアルデヒド（２４）への変換にはピリジニウム・クロロクロメート（ＰＣＣ）−酸化（Ｋａｓｍａｉ他、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９５、６０：２２６７）を用いた。
【非特許文献２５】Ｋａｓｍａｉ他、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９５、６０：２２６７
【００６２】
還流においてトリフルオロアセチル酸（ＴＦＡ）中のヘキサメチレン−テトラアミン（ＨＭＴＡ）を用いたＤｕｆｆフォルミル化状態下では（Ｌｉｎｄｏｙ他、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、１９９８、１０２９）、対応するサリチルアルデヒド（２７または２８）が市販入手可能な４−置換フェノールから得られ、ついで上記した同様なリン酸化と還元型アミノ化ステップを介して２４と１６とに変換された。これらの反応計画において使われる適宜なＮ−アルキル−Ｎ−ベンジルアミン誘導体の合成は公知であり標準化学技術を使用する。
【００６３】
化合物ＩＩのニトロ含有ＳＨＰのために同様な合成手法が図８に示すように使用できる。市販入手可能なニトロベンズアルデヒドを出発材料として用いて、ジエチル・クロロリン酸と反応させると、対応するジエチル・ホスホノキシ−ベンズアルデヒド（２９または３０）が穏和な条件下で得られる。還元剤として水素化ホウ素ナトリウムを用いて、各２９または３０のメチルアミンとの還元型アミノ化により対応するニトロ含有Ｎ−ベンジル・メチルアミン（３１または３２）が得られた。
【００６４】
ホスゲンまたはその当量をカルボニル結合剤としてまたＤＩＥＡを塩基として用いると、９０ＣＥとの３１または３２のこの結合反応は収量が高い。３３または３４のＴＭＳＢｒ非保護化についで、リン酸遊離酸形態３５または３６が飽和ＮａＨＣＯ3溶液により処理されて、対応するジソジウム塩３７または３８がそれぞれ得られる。逆相カラムクロマトグラフィーを使って上記の水溶性化合物ＩＩ（３５−３８）の精製を行える。
【００６５】
化合物ＩＩＩのグルタミン酸置換フェノールの生成の概要を図９に示す。ホスゲンまたはその当量とのグルタミン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３９）反応、ついで４−ヒドロキシル−ベンズアルデヒドによる０℃での終夜濃縮によりグルタメート帯同ベンズアルデヒド４０が良い収量で得られる。４０の還元アミノ化は第２アミン４１を良い収量で与える。化合物４１のホスゲンの０℃での反応はそれに続く９０ＣＥによる濃縮により４２を成功裡に得た。
【００６６】
公表された手法（Ｍａｎｎ他、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、１９９０、４６：５３７７）に続いて、蟻酸で処理することにより４２の非保護化が容易に完成されて、遊離酸４３を与える。さらに４３を飽和ＮａＨＣＯ3溶液または適宜なアミンで処理すると、ジソジウム塩、トリエタノールアミン塩、トリエチルアミン塩またはルチジン塩などの水溶性グルタメート４４が得られる。
【非特許文献２６】Ｍａｎｎ他、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、１９９０、４６：５３７７
【００６７】
グルタミル置換芳香族アミノ類似体（化合物ＩＶ）の合成を図１０に示す。文献の手法（Ｊｏｎｅｓ他、Ｂｉｏ−ｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２０００，１０：１９８７）に続いて、市販入手可能なＮ−Ｂｏｃ−グルタミン酸５−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４５）は４−アミノベンジルアルコールと反応してアミド４６を高い収量で形成する。この際１−（３−ジメチル・アミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ）および１−ヒドロキシ・ベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）を緩やかな条件下で助媒剤として用いる。
【非特許文献２７】Ｊｏｎｅｓ他、Ｂｉｏ−ｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２０００，１０：１９８７
【００６８】
ＰＣＣ−酸化および還元アミノ化によりＮーベンジル−Ｎ−メチルアミンを形成する代わりに、第２アミン４７への公表されたベンジルアルコール４６のワンポット変換手法を採用することもでき、水素化ホウ素ナトリウムの存在下で二酸化マンガンを利用する（Ｋａｎｎｏ他、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２００２、４３：７３３７）。アミン４７をホスゲンを０℃で反応させ、ついでＤＩＥＡを助媒剤として用いて９０ＣＥによる濃縮を行うと４８を成功裡に形成できる。
【非特許文献２８】Ｋａｎｎｏ他、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２００２、４３：７３３７
【００６９】
４８の非保護化は希釈塩酸で処理して容易に完成でき、遊離酸４９を形成する。最後に、飽和ＮａＨＣＯ3溶液での処理後に、ナトリウム塩５０などの薬学的に受容可能な塩が形成される。
【００７０】
合成後、未完成品は一般に逆相カラムクロマトグラフィーと凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｙｌｉｚａｔｉｏｎ）により精製される。この合成により、この発明のＳＨＰが対応するリン酸塩に容易に変換されることが証明された。開示された化学的合成方法の変更は当業者により容易に行うことができ、この発明の化合物への代わりの合成手法が与えられ得るのである。
【００７１】
この発明の新規な化学的化合物に基づいた薬学的な組成物は上記の化合物を癌などの症状または疾患のために治療上有効な量で含有しており、選択的に薬学的に受容可能な添加剤やキャリアーや賦形剤と組み合わされる。
【００７２】
薬学的投与形態の化合物のあるものは予防剤として使用されて、それ自身明らかな疾病や症状を予防する．
【００７３】
この発明の化合物またはその誘導体は薬学的に受容可能な塩の形態で与えられる。ここで用語「薬学的に受容可能な塩またはその複合体」とはこの発明の活性化合物の適宜な塩または複合体であって、親化合物の所望の生物学的活性を残しているものである。ソジウム、リン酸およびグルタメートのカリウム塩を含む塩に限定されず、とりわけトリエタノールアミン、塩、トリエチル・アミン塩、ルチジン塩または他の薬学的受容可能な当業界公知の塩などである。
【００７４】
活性化合物の変更は溶解度、薬物動態学的パラメータおよび活性種の代謝速度に影響を及ぼし、活性種の形成に制御を与える。さらに変更により化合物の抗癌活性に影響を及ぼし、あるケースでは親化合物を超して活性を増加させる。誘導体を用意して当業者公知の方法で抗癌活性をテストすることにより実証される。
【００７５】
この発明の化合物は全ての経路の投与のための調合物に組み込むことが可能であり、該経路としてはたとえば経口、非経口を含み、経静脈内、経筋肉内、経腹膜内、経口内、経皮および座薬形態などがある。非経口投与および特に静脈内または筋肉内投与が望ましい。
【００７６】
これらの新規な化学的化合物に基づいた薬学的組成物としては、癌およびここに記載した他の疾病および症状を処置するのに治療上有効な量の上記の化合物を含んでおり、選択的には薬学的に受容可能な添加物、キャリアーおよび／または賦形剤と組み合わされる。１以上のこの発明の化合物の治療上有効な量は処置される感染または症状、その厳しさ、静養する処置方法、使用した処理時の薬物動態学および処置される患者（動物または人間）により変動する。
【００７７】
この発明による薬学的な観点にあっては、この発明の化合物は好ましくは薬学的に受容可能なキャリアーと混合される。一般に、腸管外に薬学的な組成物を投与するのが望ましく、特に静脈内または筋肉内投与形態が望ましいが、他の腸管外経路を介しての多くの調合物の投与が可能であり、例えば経皮、経口、皮下、座薬または経口経路投与を含む他の経路なども含まれる。
【００７８】
静脈内および筋肉内調合物は好ましくは無菌生理的食塩水（ｓａｌｉｎｅ）中で投与される。勿論、当業者はここに教示の範囲内で調合物を変更して、この発明の組成物を不安定にしたりまたはそれらの治療的活性を妥協することなしに、特定の投与経路のための多数の調合物を提供することができる。特にこの発明の化合物を水や他のビヒクル中により可溶にしたりする変更は僅かな変更（塩調合物など）で達成でき、当業者の範囲である。また投与経路や特定の化合物の投与方法を変更してこの発明の化合物の薬物動態学を管理して患者に最大の効果を与えることも通常行われるところである。
【００７９】
この発明の化合物をホスト器官または患者中の対象の部位に与えて化合物の効果を最大に伸ばすに際して、この発明のプロドラッグ形態の好ましい薬物動態学的パラメータを有利に利用することも通常行われることである。
【００８０】
活性化合物の投与は連続から（静脈内滴下）、塊薬投与、静脈内または筋肉内を含んで１日当り１回より少ない頻度でも、１日当り数回の投与に亙り、局部、非経口、静脈内、筋肉内、皮下、経皮（浸透向上処理剤を含む）、口および座薬、ケースによっては経口投与を含んだものである。
【００８１】
この発明の薬学的組成物と形成すべく、この発明の１以上の化合物の治療的に有効な量が好ましくは従来の薬学的調剤技術（例えば静脈内または筋肉内）による薬学的に受容可能なキャリアーとよく混合されて投薬量を形成する。投与に望まれる形成態様に応じてキャリアーは広範な形態をとることができる。適正な投薬量形態で薬学的組成物の形成においては、いかなる通常の薬学的媒体も使用できる。
【００８２】
非経口調合物には、キャリアーは無菌水または水性塩化ナトリウム溶液を含んでおり、分散を助けるエタノールや他の薬学的受容可能な溶媒（ＤＭＳＯなど）などの他の成分と組み合わせてもよい。勿論溶液が使われて無菌に保たれる場合には、組成物とキャリアーとは無菌でなければならない。注射可能な懸濁液も形成でき、この場合適宜な液体キャリアー、懸濁剤などが使用される。
【００８３】
非経口、皮膚内、皮下または局部投与に使われる溶液または懸濁液は以下の成分に含まれる。注射用水などの無菌希釈液、食塩水（ｓａｌｉｎｅ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）、不揮発性油、ポリエチレン・グリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒、ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗バクテリア剤、アスコルビン酸または亜硫酸水素塩ナトリウムなどの抗酸化剤、エチレンジアミン・テトラアセチル酸（ＥＤＴＡ）などのキレート剤、アセテート、クエン酸塩またはリン酸塩などの緩衝剤および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの緊張調節剤。
【００８４】
親調合物はアンプル、使い捨て注射器またはガラスまたはプラスチック製の複投薬量瓶に入れられる。静脈内で投与される場合には、好ましきキャリアーとしては例えば生理的食塩水またはリン酸緩衝生理的食塩水（ＰＢＳ）などがある。
【００８５】
経口投薬形態で薬学的組成物を形成するに際しては、通常の薬学的媒体の１以上が使用できる。懸濁液やエリキシル剤および溶液などの液体経口調合物のためには、適宜なキャリアーや水、グリコール、油、アルコール、芳香剤、保存剤、着色剤などの添加物が用いられる。
【００８６】
粉、錠剤、カプセルなどの固体経口調合剤および座薬などの固体調合物には適宜なキャリアーと澱粉、砂糖キャリアー（デキストロース、マニトール、ラクトースおよび関連キャリアーなど）、希釈剤、粒化剤、潤滑剤、バインダー、分解剤などの添加物が用いられる。必要なら、錠剤またはカプセルは溶腸被覆されまたは標準技術により解放延期処理してもよい。
【００８７】
一実施例においては、活性化合物は制御放出調合物などのような化合物を身体からの急速な排除に対して保護するキャリアーを使って形成できるもので、移植およびマイクロカプセル化投与システムなどを含んでいる。エチレン・ビニルアセテートやポリアンハイドライドやポリグリコール酸やコラーゲンやポリオルトエステルやポリアクテイック酸（ｐｏｌｙａｃｔｉｃ  ａｃｉｄ）などの生物分解性、生体適合性ポリマーを使うこともできる。そのような調合物の形成方法は当業者周知である。
【００８８】
リポソーム懸濁液も薬学的に受容可能なキャリアーであり得る。これらは当業者周知の方法で形成される。例えば、リポソーム調合物の形成に当たっては、適宜な脂質を爾後蒸発される無機溶媒に溶解して、容器の表面上に乾燥脂質の薄層を残す。ついで活性化合物の水性溶液を容器に注入する。ついで容器を手で回転させて容器の側面から脂質を遊離させて、集合脂質を分散させる。それによってリポソーム懸濁液が形成される。その他にも当業者周知の方法を使ってやることができる。
【００８９】
この発明の化合物は動物特に人間を含む哺乳動物を患者として処置することに使用できる。腫瘍や特に癌や上記した他の疾病に罹病した人間、馬、犬、牛その他の動物、特に哺乳動物の処置に際しては、患者にこの発明の化合物の１以上またはその誘導体またはその薬学的に受容可能な塩などの有効量を投与し、選択的には薬学的に受容可能なキャリアー、希釈剤、などと組み合せるか処置される疾病に応じてまたは単独でまたは他の公知の薬学的処理剤と組み合せて使用される。
【００９０】
この処置は他の放射線治療や手術など従来の癌治療方法とも組み合せて投与できる。好ましくは、この発明の組成物は抗薬品性の腫瘍や癌の処置にも使用でき、特に従来の抗癌剤に抵抗性の腫瘍や癌に使用できる。
【００９１】
活性化合物は薬学的受容可能なキャリアーまたは希釈剤中に患者に所望の症状に治療的に有効な量を放出するのに充分な量が、処置された患者中に深刻な毒性を起因することないように、含まれる。
【００９２】
この発明の化合物は反応性（ｒｅａｃｔｉｖｅ）中間体のプロドラッグ形態である。ある種の薬学的投薬形態では、この発明の化合物は他のプロドラッグ形態に変更されて、活性化合物の特殊な投与経路を利用する。この発明の化合物を代わりのプロドラッグ形態に変更して患者中の対象部位への投与を容易にすることは当業者は認識できる。当業者はまた、この発明の化合物を患者中の対象部位に投与して化合物の意図された抗腫瘍性効果を最大にするに際して、プロドラッグ形態の好ましい薬物動態学的なパラメータを利用する。
【００９３】
この発明において治療上活性な調合物に含まれる化合物の量は癌を処置するのに有効な量である。一般に、投薬形態中の発明の化合物に治療上有効な量は通常処置される患者の体重の約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇより少ないか、または使用される化合物、処置される腫瘍のタイプ、処置される組織を突き止める活性化合物の能力、投与経路および患者中の化合物の薬物動態学などに応じて、それよりかなり多くなる。
【００９４】
癌を処置する場合の、化合物の好ましい投与量は１回当り約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約２５０ｍｇ／ｋｇかまたはそれ以上である。この投薬範囲は一般に活性化合物の有効な血液レベル濃度を生じ、処置される患者中の血液ｍｌ当り約０．０１μｇ〜約５００μｇである。処置される疾病状態に応じて、処置の期間は１日以上または数ヶ月続きまたは非常に長く（年）なる。より好ましき実施例では、化合物は患者に１日当り２回から１４日に１回０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、１週間並５２週間にも及ぶ。
【００９５】
患者中の活性化合物の濃度は薬剤の吸収、分布、不活性化、および排出速度その他当業者周知の要因により左右される。ここで注目すべきは、患者に与えられる投薬量は緩和されるべき症状の厳しさにより変動する。また理解すべきは、いかなる特定の患者についても、特定の投薬計画は個々の必要および投与する人の職業的判断または組成物の投与を行う人の判断により時間に亙って調節されるべきである。またここに定めた濃度範囲は単なる例示であり、この発明の組成物の範囲を限定するものではない。活性成分は一度に投与されまたは小さな投薬量に分割されて種々の期間について投与される。
【００９６】
この発明の活性化合物はまた所望の活動を損ねない他の活性物質と混合してもよい。または所望の活動を補助する活性物質と混合してもよい。例えば他の抗癌剤である。ある場合には、所望の治療または対象、抗生物質、抗真菌性剤、抗炎症剤、抗ウイルス化合物に応じて混合される。
【００９７】
この発明の化合物は単独または他の処理剤と組み合わせて投与され、特にこの発明の他の化合物を含むものである。その場合、この発明の化合物の１以上の有効量が少なくとも１種の追加的な抗腫瘍／抗癌剤の有効量と共投与される。例えば代謝拮抗産物、シタラビン（Ａｒａ  Ｃ）、エトポシド、ドキソルビシン、タクソール、ヒドロキシウレア、ビンクリスチン、サイトキサン（シクロホスファミド）またはマイトマイシンＣなどである。その他にもアドリアマイシンやトポテカンやカンポセシンやイリノテカンなどのトポイソメラーゼＩおよびトポイソメラーゼＩＩ抑制剤などがあり、その他にもゲムシタビンなどの処理剤、カンポセシンとシスプラチンなどに基づいた処理剤がある。
【００９８】
理論的には、ＤＮＡを損傷するメカニズムで働くこの発明の化合物はＤＮＡ修復を低減・予防するメカニズムで働く化合物と顕著に作用する。この発明の化合物はＤＮＡ修復を低減・予防するメカニズムで働くいかなる化合物とも有利に組み合わされる。特に酵素触媒化されたＤＮＡ修復の抑制剤を含むものであって、リボヌクレオチド・レダクターゼ（ＲＲ）抑制剤やＯ6−アルキルグアニン−ＤＮＡアルキルトランスフェラーゼ（ＡＧＴ）の抑制剤などがある。
【００９９】
用語「共投与」とは、この発明の化合物が患者に投与されて共投与された化合物が患者の血液中に同時に見出されること、を言うものであって、同時の場合を含めていつ化合物が実際に投与されるかは問わないのである。
【０１００】
多くの場合、この発明の化合物と従来の抗癌剤の共投与は予期しない相乗的効果（すなわち相加的よりも）を生じるものである。他の実施例では、この発明の化合物は抗体（共役または非共役）、ウイルスまたはバクテリア物質と同時にまたは前後して投与される。抗体、ウイルスまたはバクテリア物質は開示した化合物を活性化させる酵素または遺伝子エンコード酵素を運ぶこともできる。酵素とはＮＲ、ＣＰＧ２およびＣＰＡを含むがこれらに限定されるものではない。
【０１０１】
またこの発明の化合物はここに開示した１以上の従来の抗腫瘍剤／抗癌剤に抵抗性を有する腫瘍および／または癌を処置するのに使用できる。この場合、有効量の組成物が薬剤抵抗性腫瘍または癌に苦しむ患者に投与されて腫瘍または癌を処置する。この場合この発明の組成物は単独または他の有効な抗腫瘍剤／抗癌剤と組み合わせて投与される。
【０１０２】
理論により制約されるものではないが、この発明のクロロエチル化とカルバモイル化処理剤の組合せの機能性により、化合物は主としてその治療的な効果を悪性腫瘍の処置において発揮するものと考えられる。
【０１０３】
この発明について一般的に言うと、以下の実験例によりこの発明の好ましき実施例と比較を説明する。またそれらの実験例はこの発明を限定制約するものではない。実験例において言及されない化合物でも当業界周知の合成手法により形成され得るものである。
【実験例】
【０１０４】
全ての試薬は市販の性能において購入され、さらなる精製なしに使用された。必要前に溶媒は乾燥および／または希釈された。全てのＮＭＲスペクトル（1Ｈ、13Ｃおよび31Ｐ）はＢｒｕｃｋｅｒ  ＡＣ３００スペクトルメータ上で測定された。化学的な変化はテトラメチルシランに対比して百万分率（ｐｐｍ）で測定された。結合定数はヘルツ（Ｈｚ）で報告された。フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＦＣＣ）はＭｅｒｃｋシリカゲル６０（２３０−４００ｍｅｓｈ）で行われ、逆相カラムクロマトグラフィー（ＲＰＣＣ）はＣＡＴゲル（水、準備Ｃ−１８、１２５Å、５５−１０５μｍ）でパックされ、溶離はミリ−Ｑ  ジ−イオン化水で行われた。Ｙａｌｅ大学のＫｅｃｋ  ＬａｂｏｒａｔｏｒｙのＭｉｃｒｏｍａｓｓ（マンチェスター、イギリス）により製造されたＱ−Ｔｏｆにエレクトロスプレー  マス（ＥＳＭＳ）分析が行われた。重量精度は＜０．０２％であった。
【０１０５】
実験例１−３。４−置換フェノールのホルミル化（Ｄｕｆｆ  ｆｏｒｍｙｌａｔｉｏｎ）によるサリチルアルデヒド（２７ａ、２７ｂ、２８ｂ）の形成。一般的手順。ＴＦＡ（１００ｍＬ）中の適宜に置換されたフェノールの溶液（１０．０ｇ）に少量のＨＭＴＡ（１．１当量）を添加した。反応溶液は終夜還流で熱せられた。冷却後、溶液を５０％Ｈ2ＳＯ4溶液（４０ｍＬ）で室温下で４時間処理した。ついでエーテル（３ｘ１００ｍＬ）で抽出を行なった。結合したエーテル相を５Ｍ  ＨＣｌ溶液と水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ4上で乾燥した。濾過後濾過物を蒸発精製した。
【０１０６】
２−ヒドロキシ−５−トリフルオロメチル−ベンズアルデヒド（２７ａ）。一般的手順に続いて、３０％エチル・アセテートへキサン、４−トリフルオロメチルフェノール（１０．０ｇ、６１．７ｍｍｏｌ）によるＦＣＣ精製によりピンク色の固体として２−ヒドロキシ−５−トリフルオロメチル−ベンズアルデヒド２７（３．９ｇ、３４％）を得た。Ｒｆ（２０％エチル・アセテート−ヘキサン）：０．４７。1Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  １１．３１  （ｓ，  １Ｈ，  ＯＨ），  ９．９６  （ｓ，  １Ｈ，  ＣＨＯ），  ７．８７  （ｄ，  Ｊ  ＝  １．６  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ６−Ｈ  （Ｐｈ）），  ７．７６  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ２．０  ａｎｄ  ８．５  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ４−Ｈ  （Ｐｈ）  ）  ａｎｄ  ７．１１  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．８  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ３−Ｈ  （Ｐｈ））。13Ｃ  ＮＭＲ  （７５  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  １９５．８，  １６３．８，  １３３．４  （ｄ），  １３１．０  （ｄ），  １２５．３，  １２２．１  （ｍ），  １１９．８  ａｎｄ  １１８．６。
【０１０７】
４，５−ジクロロ−２−ヒドロキシ−ベンズアルデヒド（２７ｂ）および５，６−ジクロロ−２−ヒドロキシ−ベンズアルデヒド（２８）。一般的手順に続いて５−１０％エチルアセテート−ヘキサン、３，４−ジクロロフェノール（１０．０ｇ、６１．１ｍｍｏｌ）によるＦＣＣ精製により５，６−ジクロロ−２−ヒドロキシ−ベンズアルデヒド２８（２．２ｇ、１９％）を浅黄色固体として得た。Ｒｆ（４０％エチルアセテート−ヘキサン）：０．６３。1Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  １１．９８  （ｓ，  １Ｈ，  ＯＨ），  １０．４４  （ｓ，  １Ｈ，  ＣＨＯ），  ７．５５  （ｄ，  Ｊ  ＝  ９．４  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ４−Ｈ  （Ｐｈ）  ）  ａｎｄ  ６．８９  （ｄ，  Ｊ  ＝  ９．３  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ３−Ｈ  （Ｐｈ））。  13Ｃ  ＮＭＲ  （７５  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  １９５．４，  １６２．４，  １３７．８  （２Ｃ），  １３５．６，  １２３．８  ａｎｄ  １１８．１。
【０１０８】
同じ反応から連続して１０％エチルアセテート−ヘキサンによるＦＣＣ精製により４，５−ジクロロ−２−ヒドロキシ−ベンズアルデヒド２７ｂ（１．８ｇ、１５％）を浅黄色固体として得た。Ｒｆ（４０％エチルアセテート−ヘキサン）：０．４７。1Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  １０．９７  （ｓ，  １Ｈ，  ＯＨ），  ９．８４  （ｓ，  １Ｈ，  ＣＨＯ），  ７．６４  （ｓ，  １Ｈ，  Ｃ３−Ｈ  （Ｐｈ）  ）  ａｎｄ  ７．１５  （ｓ，  １Ｈ，  Ｃ６−Ｈ  （Ｐｈ））。13Ｃ  ＮＭＲ  （７５  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  １９４．７，  １６０．０，  １４９．９，  １４１．５，  １３４．０，  １２３．６  ａｎｄ  １１９．９。
【０１０９】
実験例４−６。フェノール性アルデヒドからのジエチルホスホノキシ−ベンズアルデヒド（２３，２４ａ−ｂ）の形成。一般的手順。アセトニトリル（１２０ｍＬ）中の適宜に置換したアルデヒド（１０．０ｇ）の攪拌氷冷溶液にジエチル・クロロリン酸塩（１．１当量）とＴＥＡ（１．１当量）を添加した。反応混合物を室温で終夜保った。濾過により沈殿物を除いた後、濾過物を蒸発・乾燥した。さらなる精製なしに未精製（ｃｒｕｄｅ）のジエチルホスホノキシ−ベンズアルデヒドが使用できた。
【０１１０】
４−ジエチルホスホノキシ−ベンズアルデヒド（２３）。一般的手順に続いて、４−ヒドロキシ・ベンズアルデヒド（９．０ｇ、７３．８ｍｍｏｌ）を浅黄色油として分離した４−ジエチルホスホノキシ−ベンズアルデヒド２３（１８．９ｇ、９９％）に変換した。1Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  ９．９８  （ｓ，  １Ｈ，  ＣＨＯ），  ７．９１  （ｄ，  Ｊ  ＝  ９．０  Ｈｚ，  ２Ｈ，  Ｃ３−Ｈ  （Ｐｈ）），  ７．３９  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，  ２Ｈ，  Ｃ２−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ４．２６  （ｍ，  ４Ｈ，  ＣＨ2）  ａｎｄ  １．３８  （ｔ，  Ｊ  ＝  ６．９  Ｈｚ，  ６Ｈ，  ＣＨ3）。13Ｃ  ＮＭＲ  （７５  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  １９０．５，  １５５．２  （ｄ），  １３３．０，  １３１．４，  １２０．３（ｄ），  ６４．７  （ｄ）  ａｎｄ  １５．８  （ｄ）。31Ｐ  ＮＭＲ  （１２１  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  ４．６。ＴＯＦ  ＥＳＭＳ  ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｆｏｒ  （Ｍ＋Ｈ）  ＝  ２５９．０７，  ｏｂｓｅｒｖｅｄ  ２５９．１０。
【０１１１】
２−ジエチル・ホスホノキシ−ベンズアルデヒド（２４ａ）。一般的手順に続いて、サリチルアルデヒド（９．０ｇ、７３．８ｍｍｏｌ）により無色油として２４ａ（１８．９ｇ、９９％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  １０．４２  （ｓ，  １Ｈ，  ＣＨＯ），  ７．９０  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．７  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ３−Ｈ  （Ｐｈ）），  ７．６１  （ｔ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ５−Ｈ  （Ｐｈ）），  ７．４８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．７  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ６−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ７．３１  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ４−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ４．２７  （ｍ，  ４Ｈ，  ＣＨ2）  ａｎｄ  １．３７  （ｔ，  Ｊ＝  ７．１  Ｈｚ，  ６Ｈ，  ＣＨ3）。13Ｃ  ＮＭＲ  （７５  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  １８８．２，  １５２．５  （ｄ），  １３５．５，  １２８．５，  １２７．１  （ｄ），  １２５．２，  １２０．９  （ｄ），  ６４．９  （ｄ）  ａｎｄ  １５．８  （ｄ）。
31Ｐ  ＮＭＲ  （１２１  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  ５．０。ＴＯＦ  ＥＳＭＳ  ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｆｏｒ  （Ｍ＋Ｈ）  ＝  ２５９．０７，  ｏｂｓｅｒｖｅｄ  ２５９．０７。
【０１１２】
５−クロロ−２−ジエチルホスホノキシ−ベンズアルデヒド（２４ｂ）。一般的手順に続いて、５−クロロ・サリチルアルデヒド（１０．０ｇ、７３．８ｍｍｏｌ）により無色油として２４ｂ（１９．４ｇ、９０％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  １０．３４  （ｓ，  １Ｈ，  ＣＨＯ），  ７．８４  （ｄ，  Ｊ  ＝  ２．５  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ３−Ｈ  （Ｐｈ）），  ７．５５  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ８．８  ａｎｄ  ２．５  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ５−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ７．４５  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．８  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ６−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ４．２７  （ｍ，  ４Ｈ，  ＣＨ2）  ａｎｄ  １．３８  （ｔ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ，  ６Ｈ，  ＣＨ3）。13Ｃ  ＮＭＲ  （７５  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  １８７．０，  １５１．１  （ｄ），  １３５．２，  １３１．２，  １２８．２  （ｄ），  １２８．１，  １２２．６  （ｄ），  ６５．２  （ｄ）  ａｎｄ  １６．０  （ｄ）。31Ｐ  ＮＭＲ  （１２１  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  ５．１。ＴＯＦ  ＥＳＭＳ  ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｆｏｒ  （Ｍ＋Ｈ）  ＝  ２９３．０３，  ｏｂｓｅｒｖｅｄ  ２９３．０４。
【０１１３】
実験例７−９。４−クロロサリチル酸からの４−クロロ−２−ジエチル・ホスホノキシ−ベンズアルデヒド（２４ｃ）の形成。５−クロロ−２−ヒドロキシメチル−フェノール（２５）。ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中の４−クロロサリチル酸（１０．０ｇ、５８．０ｍｍｏｌ）の溶液をＬＡＨ（１．５当量）で２時間環流処理した。室温に冷却後、反応溶液を１Ｎ  ＮａＨＳＯ4溶液（２００ｍＬ）で冷却し、エーテル（３００ｍＬ）で抽出した。分離後、有機層を無水ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過濃縮した。乾燥未精製製品２５（７．５ｇ、８１％）を灰色固体として得た。これはさらなる精製なしに充分純粋で使用に供せた。1Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ９．８５  （ｓ，  １Ｈ，  Ｐｈ−ＯＨ），  ７．２７  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．２  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ３−Ｈ  （Ｐｈ）），  ６．８１  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．２  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ４−Ｈ  （Ｐｈ）），  ６．７８  （ｓ，  １Ｈ，  Ｃ６−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ５．０３  （ｍ，  １Ｈ，  ＯＨ）  ａｎｄ  ４．４１  （ｄ，  Ｊ  ＝  ４．１  Ｈｚ，  ２Ｈ，  ＰｈＣＨ2）。13Ｃ  ＮＭＲ  （７５  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １５５．０，  １３１．０，  １２８．６，  １２８．０，  １１８．５，  １１４．２  ａｎｄ  ５７．７。
【０１１４】
４−クロロ−２−ジエチル・ホスホノキシ−ベンジルアルコール（２６）。アセトニトリル（２００ｍＬ）中の２５（８．６ｇ、５４．８ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（２．１当量）およびＤＭＡＰ（０．１当量）の溶液を−２０℃の浴中に入れた。上記の冷溶液にＣＣｌ4（５．０当量）とジエチル亜リン酸塩（１．１当量）を添加した。反応溶液を室温で２時間保った。溶媒を回転蒸発し、未精製油を６０％エチルアセテート−ヘキサンを含むＦＣＣで精製して浅黄色油状の２６（１０．９ｇ、６８％）を得た。Ｒｆ（８０％エチルアセテート−ヘキサン）：０．３４。1Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  ７．４０  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．２  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ３−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ７．２３  （ｓ，  １Ｈ，  Ｃ６−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ７．１９  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ４−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ４．６２  （ｓ，  ２Ｈ，  ＰｈＣＨ2），  ４．２４  （ｍ，  ４Ｈ，  ＣＨ2）  ａｎｄ  １．３７  （ｔ，  Ｊ＝  ７．４  Ｈｚ，  ６Ｈ，  ＣＨ3）。13Ｃ  ＮＭＲ  （７５  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  １４８．２  （ｄ），  １３３．６  （ｄ），  １３１．６  （ｄ），  １３１．０，  １２５．８，  １２０．９  （ｄ），  ６５．１  （ｄ），  ５９．１  ａｎｄ  １５．９  （ｄ）。31Ｐ  ＮＭＲ  （１２１  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  ６．０。
【０１１５】
４−クロロ−２−ジエチル・ホスホノキシ−ベンズアルデヒド（２４ｃ）。ジクロロメタン（６００ｍＬ）中の２６（１０．７ｇ、３６．３ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に少量のＰＣＣを室温で３０分添加した。反応をＴＬＣでモニターした。ついで反応混合物をセライト（Ｃｅｌｉｔｅ）フィルターパッドに通し、濾過物を回転蒸発した。残油をシリカゲルパッドで精製し、エチルアセテートで溶離して緑色油状の２４ｄ（９．５ｇ、９０％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  １０．３４  （ｓ，  １Ｈ，  ＣＨＯ），  ７．８４  （ｓ，  １Ｈ，  Ｃ３−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ７．５２  （ｓ，  １Ｈ，  Ｃ６−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ７．２９  （ｓ，  １Ｈ，  Ｃ４−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ４．２９  （ｍ，  ４Ｈ，  ＣＨ2）  ａｎｄ  １．３９  （ｓ，  ６Ｈ，  ＣＨ3）。13Ｃ  ＮＭＲ  （７５  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  １８６．８，  １５２．４  （ｄ），  １４０．９，  １２９．３，  １２５．４  （ｄ），  １２５．３，  １２１．１，  ６４．９  （ｄ）  ａｎｄ  １５．６  （ｄ）。31Ｐ  ＮＭＲ  （１２１  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  ４．８。ＴＯＦ  ＥＳＭＳ  ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｆｏｒ  （Ｍ＋Ｈ）  ＝  ２９３．０３，  ｏｂｓｅｒｖｅｄ  ２９３．０６。
【０１１６】
実験例１０−１３。Ｎ−（ジエチルホスホノキシ・ベンジル）−Ｎ−メチルアミン（１５，１６ａ−ｃ）の形成。一般的手順。ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の対応するジエチルホスホノキシ−ベンズアルデヒド（２３または２４ａ−ｃ、１０ｍｍｏｌ）の溶液にメチルアミン（ＴＨＦ中に２Ｎ、２．０当量）を添加した。反応溶液を室温で終夜保ち、シリカゲルパッドを通して濾過し、濾過物を回転蒸発し真空中で乾燥した。得られた未精製油をメタノール（５０ｍＬ）中に溶解した。上記の溶液に少量のＮａＢＨ4（２．０当量）を０℃で添加し、溶液を４時間連続攪拌した。蒸発後、残留物を水（５０ｍＬ）とジクロロメタン（５０ｍＬ）中に分散させ、ジクロロメタン（５０ｍＬ）で１回液相を分離抽出した。結合有機相を無水ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過蒸発した。未精製のＮ−（ジエチルホスホノキシ・ベンジル）−Ｎ−メチルアミン（１５または１６ａ−ｃ）はさらなる精製なしで使用に供することができた。
【０１１７】
Ｎ−（４−ジエチルホスホノキシ・ベンジル）−Ｎ−メチルアミン（１５）。一般的手順に続いて、２３（２９．９ｇ、１１６ｍｍｏｌ）により黄色油状の１５（２２．３ｇ、７１％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  ７．３１  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ，  ２Ｈ，  Ｃ３−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ７．１７  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ，  ２Ｈ，  Ｃ２−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ４．２１  （ｍ，  ４Ｈ，  ＣＨ2），  ３．７３  （ｓ，  ２Ｈ，  ＰｈＣＨ2），  ２．４２  （ｓ，  ３Ｈ，  ＮＣＨ3）  ａｎｄ  １．３４  （ｔ，  Ｊ  ＝  ６．９  Ｈｚ，  ６Ｈ，  ＣＨ3）。13Ｃ  ＮＭＲ  （７５  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  １４９．４  （ｄ），  １３５．６，  １２９．３，  １１９．５  （ｄ），  ６４．２  （ｄ），  ５４．５，  ３５．１  ａｎｄ  １５．７  （ｄ）。31Ｐ  ＮＭＲ  （１２１  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  ５．３。ＴＯＦ  ＥＳＭＳ  ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｆｏｒ  （Ｍ＋Ｈ）  ＝  ２７４．１１，  ｏｂｓｅｒｖｅｄ  ２７４．１１。
【０１１８】
Ｎ−（２−ジエチルホスホノキシ・ベンジル）−Ｎ−メチルアミン（１６ａ）。一般的手順に続いて、２４ａ（１９．０ｇ、７３．６ｍｍｏｌ）により浅黄色油状の１６ａ（１６．４ｇ、８２％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  ７．３７  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ３−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ７．３３  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．９  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ６−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ７．２４  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ５−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ７．１４  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．３  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ４−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ４．２２  （ｍ，  ４Ｈ，  ＣＨ2），  ３．８２  （ｓ，  ２Ｈ，  ＰｈＣＨ2），  ２．４４  （ｓ，  ３Ｈ，  ＮＣＨ3）  ａｎｄ  １．３５  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ，  ６Ｈ，  ＣＨ3）。13Ｃ  ＮＭＲ  （７５  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  １４８．６  （ｄ），  １３０．５  （ｄ），  １３０．２，  １２８．１，  １２４．８，  １１９．７，  ６４．４  （ｄ），  ４９．９，  ３５．５  ａｎｄ  １５．８  （ｄ）。31Ｐ  ＮＭＲ  （１２１  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  ５．６。ＴＯＦ  ＥＳＭＳ  ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｆｏｒ  （Ｍ＋Ｈ）  ＝  ２７４．１１，  ｏｂｓｅｒｖｅｄ  ２７４．１３。
【０１１９】
Ｎ−（４−クロロ−２−ジエチルホスホノキシ・ベンジル）−Ｎ−メチルアミン（１６ｂ）。一般的手順に続いて、２４ｂ（２１．９ｇ、７４．９ｍｍｏｌ）により浅黄色油状の１６ｂ（１８．３ｇ、８０％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  ７．３９  （ｄ，  Ｊ  ＝  ２．２  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ３−Ｈ  （Ｐｈ）），  ７．２７  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．９  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ６−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ７．２０  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ８．３  ａｎｄ  ２．６  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ５−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ４．２３  （ｍ，  ４Ｈ，  ＣＨ2），  ３．７８  （ｓ，  ２Ｈ，  ＰｈＣＨ2），  ２．４５  （ｓ，  ３Ｈ，  ＮＣＨ3）  ａｎｄ  １．３６  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ，  ６Ｈ，  ＣＨ3）。13Ｃ  ＮＭＲ  （７５  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  １４７．１  （ｄ），  １３２．８  （ｄ），  １３０．１  （ｄ），  １２９．７，  １２７．７，  １２１．１，  ６４．６  （ｄ），  ４９．６，  ３５．６  ａｎｄ  １５．９  （ｄ）。31Ｐ  ＮＭＲ  （１２１  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  ５．６。ＴＯＦ  ＥＳＭＳ  ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｆｏｒ  （Ｍ＋Ｈ）  ＝  ３０８．０７，  ｏｂｓｅｒｖｅｄ  ３０８．０８。
【０１２０】
Ｎ−（５−クロロ−２−ジエチルホスホノキシ・ベンジル）−Ｎ−メチルアミン（１６ｃ）。一般的手順に続いて２４ｃ（２３．９ｇ、８１．７ｍｍｏｌ）により浅黄色油状の１６ｃ（１８．９ｇ、７６％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  ７．３５  （ｓ，  １Ｈ，  Ｃ６−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ７．３０  （ｄ，  Ｊ  ＝  １０．４  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ３−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ７．１４  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ４−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ４．２４  （ｍ，  ４Ｈ，  ＣＨ2），  ３．７８  （ｓ，  ２Ｈ，  ＰｈＣＨ2），  ２．４３  （ｓ，  ３Ｈ，  ＮＣＨ3）  ａｎｄ  １．３７  （ｔ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ，  ６Ｈ，  ＣＨ3）。13Ｃ  ＮＭＲ  （７５  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  １４０．９  （ｄ），  １３３．０，  １３１．０，  １２９．４  （ｄ），  １２５．１，  １２０．３  （ｄ），  ６４．７  （ｄ），  ４９．４，  ３５．５  ａｎｄ  １５．９  （ｄ）。31Ｐ  ＮＭＲ  （１２１  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  ５．４。ＴＯＦ  ＥＳＭＳ  ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｆｏｒ  （Ｍ＋Ｈ）  ＝  ３０８．０７，  ｏｂｓｅｒｖｅｄ  ３０８．０８。
【０１２１】
実験例１４−１５。遊離ホスホン酸（１９、２０ａ−ｃ）の形成。一般的手順。アセトニトリル（４０ｍＬ）中の９０ＣＥ（１０ｍｍｏｌ）の冷攪拌溶液にホスゲン（トルエン中２０％、１．０当量）とＤＩＥＡ（１．０当量）を添加した。反応溶液を０℃で２０分保った。ついで上記した溶液にジクロロメタン（５ｍＬ）およびＤＩＥＡ（他の１．０当量）中の対応するＮ−（ジエチルホスホノキシ−ベンジル）−Ｎ−メチルアミン（１５または１６ａ−ｃ、１０ｍｍｏｌ）を添加した。最後の反応溶液を５℃で終夜保った。蒸発後、残留物を水（８０ｍＬ）とジクロロメタン（８０ｍＬ）中に分散させた。ジクロロメタン（８０ｍＬ）で液相を２回分離抽出し、結合有機相を無水ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過蒸発した。未精製（ｃｒｕｄｅ）保護リン酸塩（１７または１８ａ−ｃ）を油状で得た。
【０１２２】
ジクロロメタン（６０ｍＬ）中の各ジエチル−保護リン酸塩（１７または１８ａ−ｃ、１０ｍｍｏｌ）の溶液は５℃で終夜多くのＴＭＳＢｒ（４０ｍＬ）で処理された。真空中で蒸発、乾燥後、未精製遊離リン酸（１９または２０ａ−ｃ）がガラス状固体として得られた。
【０１２３】
未精製化合物（１９または２０ａ、１０ｍｍｏｌ）に水（約３０ｍＬ）を添加した。懸濁液を室温で２時間攪拌し、最少量の水を添加して完全に溶解させた。水溶液を非イオン化水を含んだＲＰＣＣで精製し、分留を31Ｐ  ＮＭＲでモニターし組み合せた。凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｙｌｉｚａｔｉｏｎ）後、白色粉状の精製遊離リン酸（１９または２０ａ）を得た。
【０１２４】
１，２−ビス（メチルスルフォニル）−１−（２−クロロエチル）−ヒドラジン（９０ＣＥ）。一般的手順（Ｓｈｙａｍ他、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．  １９８７、３０：２１５７）に続いて、塩基としてのピリジンの存在下での２−ヒドロキシエチル−ヒドラジンとメタンスルフォニルクロライドの反応によりメシレート（ｍｅｓｙｌａｔｅ）を得て、後に塩化リチウムと反応させて９０ＣＥを得た。ジクロロメタン中の５％メタノール含有のＦＣＣによる精製後白色固体状の９０ＣＥを得た。Ｒｆ  （５０％酢酸エチル−ヘキサン）：  ０．３０。1Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  ６．８２  （ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ），  ３．９９  （ｔ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ，  ２Ｈ，  ＣｌＣＨ2），  ３．８６  （ｔ，  Ｊ  ＝  ５．６  Ｈｚ，  ２Ｈ，  ＮＣＨ2），  ３．１９  （ｓ，  ３Ｈ，  ＳＣＨ3）  ａｎｄ  ３．１３  （ｓ，  ３Ｈ，  ＳＣＨ3）。13Ｃ  ＮＭＲ  （７５  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  ５４．０，  ４１．０，  ４０．２  ａｎｄ  ３８．４。
【０１２５】
リン酸モノ−｛４−｛Ｎ−［１，２−ビス（メチルスルフォニル）−２−（２−クロロエチル）−ヒドラジニルカルボニル］−Ｎ−メチルアミノメチル｝−フェニル｝エステル（１９）。一般的手順に続いて、１５（１５．４ｇ、５６．８ｍｍｏｌ）と９０ＣＥ（１４．２ｇ、１．０当量）とによりリン酸４−｛Ｎ−［１，２−ビス（メチルスルフォニル）−２−（２−クロロエチル）−ヒドラジニルカルボニル］−Ｎ−メチルアミノメチル｝−フェニルエステル・ジエチルエステル（１７、２５．２ｇ、８０％）を得た。化合物１７（１１．０ｇ、２０．１ｍｍｏｌ）を白色粉状の１９（３．８ｇ。３８％）に変換した。1Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  Ｄ2Ｏ）  δ  ７．１１  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．１  Ｈｚ，  ２Ｈ，  Ｃ３−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ６．９５  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  ２Ｈ，  Ｃ２−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ４．３６  （ｍ，  ２Ｈ，  ＰｈＣＨ2），  ３．８９  （ｍ，  ２Ｈ，  ＣｌＣＨ2），  ３．６７  （ｍ，  ２Ｈ，  ＮＣＨ2），  ３．２３  （ｓ，  ３Ｈ，  ＮＣＨ3），  ２．９２  （ｓ，  ３Ｈ，  ＳＣＨ3）  ａｎｄ  ２．８７  （ｓ，  ３Ｈ，  ＳＣＨ3）。13Ｃ  ＮＭＲ  （７５  ＭＨｚ，  Ｄ2Ｏ）  δ  １５６．６，  １５３．８  （ｄ），  １３３．４，  １３２．０，  １２３．０  （ｄ），  ５７．３，  ５５．７，  ４３．６，  ４２．０，  ４０．４  ａｎｄ  ３９．１。31Ｐ  ＮＭＲ  （１２１  ＭＨｚ，  Ｄ2Ｏ）  δ  ９．９。ＴＯＦ  ＥＳＭＳ  ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｆｏｒ  （Ｍ＋Ｈ）  ＝  ４９４．０１，  ｏｂｓｅｒｖｅｄ  ４９３．９８。
【０１２６】
リン酸モノ−｛２−｛Ｎ−［１，２−ビス（メチルスルフォニル）−２−（２−クロロエチル）−ヒドラジニル・カルボニル］−Ｎ−メチルアミノメチル｝−フェニル｝エステル（２０ａ）。一般的手順に続いて、１６ａ（１６．４ｇ、６０．５ｍｍｏｌ）と９０ＣＥ（１５．１ｇ、１．０当量）とによりリン酸２−｛Ｎ−［１，２−ビス（メチルスルフォニル）−２−（２−クロロエチル）−ヒドラジニル・カルボニル］−Ｎ−メチルアミノメチル｝−フェニルエステル・ジエチルエステル（１８ａ、２９．７ｇ、８９％）を得た。化合物１８ａ（１０．５ｇ、１９．２ｍｍｏｌ）により白色粉状の２０ａ（２．６ｇ、２７％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  Ｄ2Ｏ）  δ  ７．１  −  ７．２  （ｍ，  ３Ｈ，  Ｃ３−Ｈ，  Ｃ５−Ｈ  ａｎｄ  Ｃ６−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ６．９４  （ｍ，  １Ｈ，  Ｃ４−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ４．４５  （ｍ，  ２Ｈ，  ＰｈＣＨ2），  ３．８４  （ｍ，  ２Ｈ，  ＣｌＣＨ2），  ３．６４  （ｍ，  ２Ｈ，  ＮＣＨ2），  ３．２０  （ｓ，  ３Ｈ，  ＮＣＨ3），  ２．９３  （ｓ，  ３Ｈ，  ＳＣＨ3）  ａｎｄ  ２．９２  （ｓ，  ３Ｈ，  ＳＣＨ3）。13Ｃ  ＮＭＲ  （７５  ＭＨｚ，  Ｄ2Ｏ）  δ  １５６．８，  １５２．５  （ｄ），  １３１．８，  １３１．７，  １２８．７  （ｄ），  １２６．７，  １２２．５，  ５７．２，  ５１．４，  ４３．５，  ４２．１，  ４０．５  ａｎｄ  ３９．９。31Ｐ  ＮＭＲ  （１２１  ＭＨｚ，  Ｄ2Ｏ）  δ  ９．８。ＴＯＦ  ＥＳＭＳ  ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｆｏｒ  （Ｍ＋Ｈ）  ＝  ４９４．０１，  ｏｂｓｅｒｖｅｄ  ４９４．００。
【０１２７】
実験例１６−１９。ジソジウム（Ｄｉｓｏｄｉｕｍ）塩（２１、２２ａ−ｃ）の形成。一般的手順。対応する未精製リン酸（１９または２０ａ−ｃ、１０ｍｍｏｌ）を水性飽和炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ3）溶液（１００ｍＬ）で中和した。懸濁液を室温で２時間攪拌し、最少量の水に添加して均質化した。水性溶液を非イオン化水含有ＲＰＣＣで精製し、分留を３１Ｐ  ＮＭＲでモニターし組み合わせた。凍結乾燥後、対応するジソジウム塩（２１または２２ａ−ｃ）を白色粉状で得た。
【０１２８】
リン酸４−｛Ｎ−［１，２−ビス（メチルスルホニル）−２−（２−クロロエチル）−ヒドラジニルカルボニル］−Ｎ−メチルアミノメチル｝−フェニルエステルジソジウム塩（２１）。一般的手順に続いて未精製１９（９．５ｇ、１９．３ｍｍｏｌ）により白色粉状の２１（５．６ｇ、５４％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  Ｄ2Ｏ）  δ  ７．０８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ，  ２Ｈ，  Ｃ３−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ６．９７  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．１  Ｈｚ，  ２Ｈ，  Ｃ２−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ４．  ３８  （ｍ，  ２Ｈ，  ＰｈＣＨ2），  ３．９２  （ｍ，  ２Ｈ，  ＣｌＣＨ2），  ３．７１  （ｍ，  ２Ｈ，  ＮＣＨ2），  ３．２６  （ｓ，  ３Ｈ，  ＮＣＨ3），  ２．９５  （ｓ，  ３Ｈ，  ＳＣＨ3）  ａｎｄ  ２．８９  （ｓ，  ３Ｈ，  ＳＣＨ3）。13Ｃ  ＮＭＲ  （７５  ＭＨｚ，  Ｄ2Ｏ）  δ  １５６．５，  １５６．１  （ｄ），  １３１．７，  １３１．４，  １２２．９  （ｄ），  ５７．４，  ５５．８，  ４３．７，  ４２．０，  ４０．５  ａｎｄ  ３９．０。31Ｐ  ＮＭＲ  （１２１  ＭＨｚ，  Ｄ2Ｏ）  δ  １４．２。ＴＯＦ  ＥＳＭＳ  ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｆｏｒ  （Ｍ−Ｈ）  ＝  ４９２．０１，  ｏｂｓｅｒｖｅｄ  ４９２．１０。
【０１２９】
リン酸２−｛Ｎ−［１，２−ビス（メチルスルホニル）−２−（２−クロロエチル）−ヒドラジニルカルボニル］−Ｎ−メチルアミノメチル｝−フェニルエステルジソジウム塩（２２ａ）。一般的手順に続いて、未精製２０ａ（８．８ｇ、１７．８ｍｍｏｌ）により２２ａ（５．７ｇ、５９％）を白色粉状で得た。1Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  Ｄ2Ｏ）  δ  ７．２１  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ３−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ７．０  −  ７．２  （ｍ，  ２Ｈ，  Ｃ５−Ｈ  ａｎｄ  Ｃ６−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ６．８６  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ４−Ｈ  （Ｐｈ）），  ４．５２  （ｍ，  ２Ｈ，  ＰｈＣＨ2），  ３．９０  （ｍ，  ２Ｈ，  ＣｌＣＨ2），  ３．６８  （ｍ，  ２Ｈ，  ＮＣＨ2），  ３．２７  （ｓ，  ３Ｈ，  ＮＣＨ3），  ２．９７  （ｓ，  ３Ｈ，  ＳＣＨ3）  ａｎｄ  ２．９３  （ｓ，  ３Ｈ，  ＳＣＨ3）。13Ｃ  ＮＭＲ  （７５  ＭＨｚ，  Ｄ2Ｏ）  δ  １５６．７，  １５４．６  （ｄ），  １３１．３，  １３０．９，  １２８．３  （ｄ），  １２４．７，  １２２．４，  ５７．３，  ５１．４，  ４３．６，  ４２．０，  ４０．５  ａｎｄ  ３９．９。31Ｐ  ＮＭＲ  （１２１  ＭＨｚ，  Ｄ2Ｏ）  δ  １４．１。ＴＯＦ  ＥＳＭＳ  ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｆｏｒ  （Ｍ−Ｈ）  ＝  ４９２．０１，  ｏｂｓｅｒｖｅｄ  ４９２．０５。
【０１３０】
リン酸−２−｛Ｎ−［１，２−ビス（メチルスルホニル）−２−（２−クロロエチル）−ヒドラジニルカルボニル］−Ｎ−メチルアミノメチル｝−４−クロロ−フェニルエステルジソジウム塩（２２ｂ）。一般的手順に続いて、未精製２０ｂ（１４．５ｇ、２７．６ｍｍｏｌ）により白色粉状の２２ｂ（８．３ｇ、５３％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  Ｄ2Ｏ）  δ  ７．２６  （ｓ，  １Ｈ，  Ｃ３−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ７．１７  （ｍ，  １Ｈ，  Ｃ５−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ７．０８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ６−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ４．４８  （ｍ，  ２Ｈ，  ＰｈＣＨ2），  ３．９３  （ｍ，  ２Ｈ，  ＣｌＣＨ2），  ３．７２  （ｍ，  ２Ｈ，  ＮＣＨ2），  ３．３０  （ｓ，  ３Ｈ，  ＮＣＨ3），  ３．０３  （ｓ，  ３Ｈ，  ＳＣＨ3）  ａｎｄ  ３．０１  （ｓ，  ３Ｈ，  ＳＣＨ3）。13Ｃ  ＮＭＲ  （７５  ＭＨｚ，  Ｄ2Ｏ）  δ  １５６．８，  １５３．３  （ｄ），  １３４．６，  １３０．８，  １２８．９，  １２６．７，  １２３．６，  ５７．３，  ５１．３，  ４３．６，  ４２．１，  ４０．６  ａｎｄ  ４０．１。31Ｐ  ＮＭＲ  （１２１  ＭＨｚ，  Ｄ2Ｏ）  δ  １４．２。ＴＯＦ  ＥＳＭＳ  ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｆｏｒ  （Ｍ−Ｈ）  ＝  ５２５．９６，  ｏｂｓｅｒｖｅｄ  ５２５．９３。
【０１３１】
リン酸２−｛Ｎ−［１，２−ビス（メチルスルホニル）−２−（２−クロロエチル）−ヒドラジニルカルボニル］−Ｎ−メチルアミノメチル｝−５−クロロ−フェニルエステルジソジウム塩（２２ｃ）。一般的手順に続いて、未精製２０ｃ（１６．２ｇ、３０．８ｍｍｏｌ）により白色粉状の２２ｃ（８．９ｇ、５１％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  Ｄ2Ｏ）  δ７．２８  （ｓ，  １Ｈ，  Ｃ６−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ７．０３  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ３−Ｈ  （Ｐｈ）），  ６．８７  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．２  Ｈｚ，  １Ｈ，  Ｃ４−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ４．４７  （ｍ，  ２Ｈ，  ＰｈＣＨ2），  ３．９１  （ｍ，  ２Ｈ，  ＣｌＣＨ2），  ３．７０  （ｍ，  ２Ｈ，  ＮＣＨ2），  ３．２６  （ｓ，  ３Ｈ，  ＮＣＨ3），  ３．００  （ｓ，  ３Ｈ，  ＳＣＨ3）  ａｎｄ  ２．９６  （ｓ，  ３Ｈ，  ＳＣＨ3）。13Ｃ  ＮＭＲ  （７５  ＭＨｚ，  Ｄ2Ｏ）  δ  １５６．７，  １５５．３  （ｄ），  １３５．６，  １３２．０，  １２７．０  （ｄ），  １２４．５，  １２２．４，  ５７．３，  ５１．０，  ４３．７，  ４２．０，  ４０．５  ａｎｄ  ４０．０。31Ｐ  ＮＭＲ  （１２１  ＭＨｚ，  Ｄ2Ｏ）  δ  １４．１。ＴＯＦ  ＥＳＭＳ  ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｆｏｒ  （Ｍ−Ｈ）  ＝  ５２５．９６，  ｏｂｓｅｒｖｅｄ  ５２６．０１。
【０１３２】
実験例２０。カルバメート（４０）の形成。４−ホルミルフェニル・オキシカルボニル（Ｆｏｒｍｙｌｐｈｅｎｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）−グルタミン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４０）。アセトニトリル（５０ｍＬ）およびジクロロメタン（５０ｍＬ）中の４−ヒドロキシベンジルアルコール（２．０ｇ、１６．９ｍｍｏｌ）の冷攪拌溶液にホスゲン（トルエン中に２０％、１．０当量）およびＤＩＥＡ（１．０当量）を添加した。反応溶液を０℃で３０分保った。ついで上記した溶液にＤＩＥＡ（２．０当量）含有ジクロロメタン（５０ｍＬ）中のグルタミン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル３９（１．０当量）の溶液を添加した。反応混合物を０℃で終夜保った。ついで混合物を０．５ＮＫＨＳＯ4溶液（５０ｍＬ）で処理した。分離後、有機相をブライン（８０ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ4上で乾燥し、回転蒸発して真空中で乾燥した。未精製カルバメート４０（６．７ｇ、９７％）を浅黄色半固体状で得た。1Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ3）  δ  ９．９７  （ｓ，  １Ｈ，  ＣＨＯ），  ７．８９  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．１  Ｈｚ，  ２Ｈ，  Ｃ３−Ｈ  （Ｐｈ）），  ７．３２  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．７  Ｈｚ，  ２Ｈ，  Ｃ２−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ５．９１  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．８  Ｈｚ，  １Ｈ，  ＮＨ），  ４．３２  （ｍ，  １Ｈ，  Ｃ1Ｈ），  ２．３５  （ｍ，  ２Ｈ，  Ｃ2Ｈ），  ２．００  （ｍ，  ２Ｈ，  Ｃ3Ｈ），  １．５０  ａｎｄ  １．４６  （ｓ，  ２  ｘ  ９Ｈ，  ＣＨ3）。13Ｃ  ＮＭＲ  （７５  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  １９１．０，  １７２．１，  １７０．６，  １５５．６，  １５３．１，  １３３．４，  １３１．１，  １２１．９，  ８２．７，  ８０．９，  ５４．１，  ３１．４，  ２８．０，  ２７．９  ａｎｄ  ２７．５。ＴＯＦ  ＥＳＭＳ  ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｆｏｒ  （Ｍ＋Ｈ）  ＝  ４０８．２０，  ｏｂｓｅｒｖｅｄ  ４０８．１９。
【０１３３】
実験例２１。Ｎ−ベンジル―Ｎ−メチルアミン（４１）の形成。４−（メチルアミノメチル）フェニルオキシカルボニル−グルタミン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４１）。ジクロロメタン（５０ｍＬ）中の４０（６．１ｇ、１４．９ｍｍｏｌ）の攪拌溶液を２Ｎメチルアミン−ＴＨＦ溶液（１０ｍＬ）で０℃で終夜処理した。溶媒の除いた後、残留油をメタノール（８０ｍＬ）中で溶解し、氷浴中に配置した。上記した溶液に少量の水素化ホウ素ナトリウムを３０分添加した。反応溶液を０℃で１時間保ち、溶媒を蒸発した。残留物をブラインとジクロロメタンで加工した。分離後、有機相を無水ＭｇＳＯ4上で乾燥し、回転蒸発し真空中で乾燥した。未精製アミン４１（５．４ｇ、７８％）を浅黄色ガラス固体状で得た。1Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  ７．０４  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ，  ２Ｈ，  Ｃ３−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ６．７８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．１  Ｈｚ，  ２Ｈ，  Ｃ２−Ｈ  （Ｐｈ）），  ５．３６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ，  １Ｈ，  ＣＯＮＨ），  ４．３９  （ｍ，  １Ｈ，  Ｃ1Ｈ），  ２．８６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ４．６  Ｈｚ，  ３Ｈ，  ＮＣＨ3），  ２．７４  （ｄ，  Ｊ  ＝  ４．８  Ｈｚ，  ２Ｈ，  ＮＣＨ2），  ２．３４  （ｍ，  ２Ｈ，  Ｃ2Ｈ），  １．９２  （ｍ，  ２Ｈ，  Ｃ3Ｈ），  １．４９  ａｎｄ  １．４２  （ｓ，  ２  ｘ  ９Ｈ，  ＣＨ3）。13Ｃ  ＮＭＲ  （７５  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  １７２．６，  １７２．４，  １５７．９，  １５６．１，  １２８．６，  １２８．３，  １１５．６，  ８２．０，  ８０．７，  ５３．９，  ５１．５，  ３３．８，  ３１．６，  ２８．０，  ２７．９  ａｎｄ  ２７．６。ＴＯＦ  ＥＳＭＳ  ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｆｏｒ  （Ｍ＋Ｈ）  ＝  ４２３．２５，  ｏｂｓｅｒｖｅｄ  ４２３．２４。
【０１３４】
実験例２２。Ｎ−ベンジル−Ｎ−メチルアミノカルボニル−ヒドラジン（４２）の形成。４−｛Ｎ−（１，２−ビス（メチルスルホニル）−１−（２−クロロエチル）ヒドラジン−２−ｙｌ−カルボナイル（ｃａｒｂｏｎａｙｌ））−Ｎ−メチルアミノメチル｝フェニルオキシ・カルボニル−グルタミン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４２）。アセトニトリル（３０ｍＬ）中の９０ＣＥ（１．５ｇ、５．９ｍｍｏｌ）の冷攪拌溶液にホスゲン（トルエン中に２０％、１．０当量）とＤＩＥＡ（１．０当量）とを添加した。反応溶液を０℃で３０分保った。ついで上記した溶液にＤＩＥＡ（１．０当量）含有アセトニトリル（３０ｍＬ）中の４１（１．０当量）を添加した。反応混合物を０℃で終夜保った。溶媒の蒸発後、残留物を水とジクロロメタンで加工した。分離後、有機相を無水ＭｇＳＯ4上で乾燥し、回転蒸発と真空乾燥した。未精製（ｃｒｕｄｅ）Ｎ−ベンジル−Ｎ−メチルアミノカルボニル−ヒドラジン４２（３．６ｇ、８７％）を浅黄色ガラス固体状で得た。1Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ3）  δ  ７．３１  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ，  ２Ｈ，  Ｃ３−Ｈ  （Ｐｈ）  ），  ７．２１  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．２  Ｈｚ，  ２Ｈ，  Ｃ２−Ｈ  （Ｐｈ）），  ５．３８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  １Ｈ，  ＣＯＮＨ），  ４．５２  （ｂｓ，  １Ｈ，  Ｃ1Ｈ），  ３．８２  （ｍ，  ２Ｈ，  ＣｌＣＨ2），  ３．６７  （ｍ，  ２Ｈ，  ＮＣＨ2），  ３．５５  （ｓ，  ３Ｈ，  ＮＣＨ3），  ３．２３  ａｎｄ  ３．１４  （ｓ，  ２  ｘ  ３Ｈ，  ＳＯ2ＣＨ3），  ２．８７  （ｓ，  ２Ｈ，  ＮＣＨ2Ｐｈ），  ２．３５  （ｍ，  ２Ｈ，  Ｃ2Ｈ），  １．  ９８  （ｍ，  ２Ｈ，  Ｃ3Ｈ），  １．４７  ａｎｄ  １．４３  （ｓ，  ２  ｘ  ９Ｈ，  ＣＨ3）。13Ｃ  ＮＭＲ  （７５  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１3）  δ  １７２．７，  １７２．１，  １５７．６，  １４８．８，  １３７．０，  １２８．９，  １２８．７，  １２１．０，  ８１．７，  ８０．５，  ５３．８，  ５３．４，  ５１．２，  ４１．９，  ４１．７，  ４１．３，  ４０．４，  ３１．５，  ２７．９，  ２７．８  ａｎｄ  ２７．４。ＴＯＦ  ＥＳＭＳ  ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｆｏｒ  （Ｍ＋Ｈ）  ＝  ６９９．２１，  ｏｂｓｅｒｖｅｄ  ６９９．１８。
【０１３５】
実験例２３。グルタミン酸（４３）とそのジソジウム塩（４４）の形成。４−｛Ｎ−（１，２−ビス（メチルスルホニル）−１−（２−クロロエチル）ヒドラジン−２−ｙｌ−カルボナイル）−Ｎ−メチルアミノメチル｝フェニルオキシ・カルボニル−グルタミン酸（４２）とそのジソジウム塩（４４）。未精製ガラス状固体４２（４．４ｇ、６．４ｍｍｏｌ）を蟻酸（２００ｍＬ）で５℃で終夜処理した。−７８℃で凍結後、凍結乾燥により所望のグルタミン酸４３を粘性白色固体状で得た。さらなる精製なしで、未精製４３を飽和ＮａＨＣＯ3溶液（２００ｍＬ）で室温で２時間処理した。得られたミルク状混合物を非イオン化水を使いＲＰＦＣＣで精製した。分留をＨＰＬＣでモニターして結合した。凍結乾燥後、ジソジウム塩４４（０．７８ｇ、２０％）を白色粉状で得た。1Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  Ｄ2Ｏ）  δ  ７．１５  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ，  ２Ｈ，  Ｃ３−Ｈ  （Ｐｈ）），  ７．０８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．８  Ｈｚ，  ２Ｈ，  Ｃ２−Ｈ  （Ｐｈ）），  ４．３１  （ｂｓ，  １Ｈ，  Ｃ1Ｈ），  ３．８３  （ｍ，  ２Ｈ，  ＣｌＣＨ2），  ３．６７  （ｍ，  ２Ｈ，  ＮＣＨ2），  ３．４６  （ｓ，  ３Ｈ，  ＮＣＨ3），  ３．１６  （ｓ，  ３Ｈ，  ＳＯ2ＣＨ3），  ２．９５  （ｍ，  ２Ｈ，  ＮＣＨ2Ｐｈ），  ２．７０  （ｓ，  ３Ｈ，  ＳＯ2ＣＨ3），  １．９９  （ｍ，  ２Ｈ，  Ｃ2Ｈ）  ａｎｄ  １．７５  （ｍ，  ２Ｈ，  Ｃ3Ｈ）。13Ｃ  ＮＭＲ  （７５  ＭＨｚ，  Ｄ2Ｏ）  δ  １８５．０，  １８２．７，  １６２．０，  １５４．４，  １５０．８，  １４０．０，  １３１．０，  １２３．６，  ５９．１，  ５５．１，  ５３．５，  ４３．７，  ４２．９，  ３６．７，  ３６．４  ａｎｄ  ３１．２。ＴＯＦ  ＥＳＭＳ  ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｆｏｒ  （Ｍ＋Ｈ）  ＝  ６３１．０５，  ｏｂｓｅｒｖｅｄ  ６３１．０４，  ａｎｄ  ｆｏｒ  （Ｍ＋Ｎａ）  ＝  ６５３．０３，  ｏｂｓｅｒｖｅｄ  ６５３．０３。
【０１３６】
実験例２４。水性溶液中における溶解度と安定性の測定。水中におけるＶＮＰ４０１０１Ｍの溶解度は室温で０．６６ｍｇ／ｍＬである（Ｋｒｉｓｈｎａ他、ＡＡＰＳ  ＰｈａｒｍｓｃｉＴｅｃｈ  ２００１、２：１４巻）。新たに合成されたＳＨＰ（１９、２０ａ、２１、２２ａ）の溶解度は表１に示すようにＶＮＰ４０１０１Ｍより遥かに高い。
【非特許文献２９】Ｋｒｉｓｈｎａ他、ＡＡＰＳ  ＰｈａｒｍｓｃｉＴｅｃｈ  ２００１、２：１４巻
【０１３７】
遊離リン酸１９、２０ａについては、過剰量の薬剤を２．０ｍＬの水を含んだガラス容器中に入れた。容器をＧｌａｓ  Ｃｏｌ回転装置中で室温で２４時間振った。溶けてない薬剤を含んだ懸濁液を遠心分離した。浮遊物を注意深く分離し、薬剤濃度についてＨＰＬＣにより分析した。１９と２０ａの溶解度はそれぞれ２９３と４６ｍｇ／ｍＬであった。１９、２０ａの水性溶液は無色であった。
【０１３８】
同様に、ガラス容器中の２．０ｍＬの水に増分量の薬剤を添加して、ナトリウム塩２１、２２ａの溶解度を視覚的に測定した。容器を室温下でＧｌａｓ  Ｃｏｌ回転装置中で薬剤が完全に溶けるまで振った。追加の固定量の薬剤を追加し、容器を完全溶解まで振った。このプロセスをそれ以上薬剤が溶けない迄続けた。化合物２１、２２ａは水溶性が高い。限られた薬剤供給の故に平衡状態における溶解度の測定は得られなかった。２１、２２ａについての溶解度は＞０．９８と＞１．３５ｇ／ｍＬであった。
【表１】
2007516228.tif 000006
【０１３９】
ｐＨ３、５、７、９および室温（２２−２５℃）でリン酸カリウム緩衝液（５０ｍＭ）中でＰＡＰ−１０１Ｍ（１９）、ＯＡＰ−１０１Ｍ（２０ａ）、ＶＮＰ４０１０１Ｍの溶解度を検査した。各ｐＨおよび各薬剤において１個の試料を用意して、各試料の初期薬剤濃度は５０μｇ／ｍＬであった。各試料を種々の時点においてＨＰＬＣで分析して、各薬剤の濃度を測定した。各薬剤の第１位動的半減期（ｆｉｒｓｔ−ｏｒｄｅｒ  ｋｉｎｅｔｉｃ  ｈａｌｆ−ｌｉｖｅｓ）を計算した。表２に示すように、リン酸基プロドラッグ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ−ｂｅａｒｉｎｇ  ｐｒｏｄｒｕｇｓ）（１９、２０ａ）はＶＮＰ４０１０１Ｍに比べて全く安定であった。
【表２】
2007516228.tif 000007
【０１４０】
実験例２５。生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）のバイオ変換と安定性の測定。表３にＡＰ（牛科腸内粘膜から、シグマ）または人間プラズマ存在下の化合物１９、２０ａのバイオ変換を示す。最終濃度約５μｇ／ｍＬの各薬剤を約０．０５５ｕｎｉｔ／ｍＬのホスファターゼ酵素含有５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ緩衝生理的食塩水（ｐＨ７．６）中で３７℃で培養した。
【表３】
2007516228.tif 000008
【０１４１】
ＡＰなしの５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ緩衝生理的食塩水（ｐＨ７．６）中の最終濃度における各薬剤の標準試料５０μｇ／ｍＬを３７℃で培養した。各水性溶液を周期的に採取して、ＨＰＬＣによりテストされた薬剤の消失を測定した。
【０１４２】
１００％人間プラズマ（プールされた混合性別、ＢｉｏＣｈｅｍｅｄ）中の最終濃度５０μｇ／ｍＬでの化合物１９、２０ａおよびＶＮＰ４０１０１Ｍの安定性を評価した。各薬剤（１９、２０ａ）を人間プラズマ中で３７℃で最長２時間培養した。培養混合物のアリコートを種々の時点で採取しアセトニトリルで抽出した。抽出物を遠心分離しＨＰＬＣで直接分析した。同様の方法でＶＮＰ４０１０１Ｍを人間プラズマ中で３７℃で最大１時間培養した。種々の時点で培養混合物のアリコートを除き、アセトニトリル中の０．５％Ｈ3ＰＯ4で抽出した。抽出物を遠心分離し、ＨＰＬＣで直接分析した。比較のために１００％人間プラズマに代えて５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ緩衝生理的食塩水（ｐＨ７．６）中で培養された各薬剤の安定性も測定した。
【０１４３】
（ａ）対象としたプロドラッグ１９、２０ａはＶＮＰ４０１０１Ｍよりも緩衝生理的食塩水と人間プラズマ中でより安定なこと、（ｂ）それらはアルカリホスファターゼにより迅速に活性化されることが明らかに示された。ＯＡＰ−１０１Ｍ（２０ａ）はＰＡＰ−１０１Ｍ（１９）より半減期が長いことが示された。
【０１４４】
実験例２６。ラットにおける薬物動態学的検討。プロドラッグ１９、２０ａの薬物動態学的プロファイルの予備検討が雌のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（年齢１０週、２５０ｇ、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）中で行われた。各プロドラッグを体重ｋｇ（ｍｐｋ）当り５０ｍｇの投薬量で頸静脈を介して単一適量静脈内（ｉｖ）注射で投与した。
【０１４５】
血液試料を以下の時点で投薬日に採取した。投薬前、約２、１０、３０分、１、２、２４時間、投薬後。各時点において、約０．２ｍＬの血液を抗凝固剤（ヘパリン）含有管中に採取して、２．０Ｍクエン酸溶液０．００５ｍＬを添加してすぐに酸性化した。ついで管を４〜６回反転して、即座に氷上に載置した。血液試料を血液採取後３０分以内に３０００ｒｐｍで１０〜２０分間２〜８℃で遠心処理して、プラズマ分留をラベル付きＮｕｎｃ  Ｃｒｙｏｖｉａｌに移した。プラズマ試料を即座にドライアイス上で凍結させ、ＨＰＬＣ−ＵＶ分析まで−２０℃で保った。実験後動物はＣＯ2吸引により安楽死させた。
【０１４６】
バイオ分析方法を開発してＨＰＬＣ−ＵＶを使って２２０ｎｍまたは２３０ｎｍでラットプラズマ中のそれらのプロドラッグを定量化した。各プラズマ試料（０．１ｍＬ）を０．２ｍＬアセトニトリルで抽出した。抽出物を遠心分離し、ＨＰＬＣ−ＵＶで直接分析した。ＨＰＬＣ検定標準を標準ラットプラズマ中に用意して、上記のように処理した。標準曲線は１．０〜５０μｇ／ｍＬの線型範囲を有していた。
【０１４７】
ラットの循環からの化合物の迅速な変換または除去の故に１９の測定はできなかった。表４に示すように、薬物動態学的パラメータ（濃度−時間曲線−ＡＵＣ下の領域、総身体除去−Ｃｌ、分布の安定状態体積−Ｖｓｓ、最大濃度−Ｃｍａｘ、および最終半減期−Ｔ1/2）が計算された。２０ａについてのプラズマ半減期は約１４分であり、１９より長い。２つの研究における投薬量の相違の故にＶＮＰ１０１Ｍ（１０ｍｐｋの放射線ＶＮＰ１０１Ｍを前の実験で使った）との比較は困難であった。
【表４】
2007516228.tif 000009
【０１４８】
［14Ｃ］−ＶＮＰ４０１０１Ｍの投与後２分でプラズマＶＮＰ４０１０１Ｍレベル（〜１０μｇ／ｍＬ）はピークであった。ＶＮＰ４０１０１Ｍレベルは下降し、半減期は〜２０分であった。最初の２時間後、ＶＮＰ４０１０１Ｍはプラズマ中に検知できなかった（Ａｌｍａｓｓｉａｎ他、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ＡＡＣＲ、２００１、４２：３２６、１７５６巻）。
【非特許文献３０】Ａｌｍａｓｓｉａｎ他、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ＡＡＣＲ、２００１、４２：３２６、１７５６巻
【０１４９】
実験例２７。生体内の抗腫瘍活性の評価。ＰＡＰ−１０１Ｍ（１９）、ＯＡＰ−１０１Ｍ（２０ａ）、ＰＡＰ−Ｎａー１０１Ｍ（２１）、ＯＡＰ−Ｎａ−１０１Ｍ（２２ａ）含有ＶＮＰ４０１０１Ｍおよびプロドラッグの抗腫瘍効果をＢ１６−Ｆ１０ラット黒腫およびＨＴＢ１７７人間肺癌モデルの両方について評価した。Ｂ１６−Ｆ１０黒腫細胞はＣ５７ＢＬ／６ラットに皮下移植し（５Ｘ１０5細胞）、腫瘍細胞移植の直後に１０グループに無作為抽出した（０日目）。
【０１５０】
２日目、ラットに０．１ｍＬＰＢＳの適量注射または薬剤のいずれかを腹膜内に注入した。連続４週間に亘り毎週処置を行った。方式ＬｘＨｘＷ／２により三次元の腫瘍測定を週一回行った。ここでＬ、Ｈ、Ｗは長さ、高さ、幅を示す。図１１に示すように、ＰＢＳ標準グループ中のＢ１６−Ｆ１０腫瘍は指数的に成長して、２４日目に約４０００ｍｍ3に至った。ＶＮＰ４０１０１Ｍとテストしたプロドラッグは効果的にＢ１６−Ｆ１０黒色素細胞腫の成長を抑制した。
【０１５１】
２４日目、ＶＮＰ４０１０１Ｍ８０ｍｇ／ｋｇで処置したラットにおいては腫瘍成長は８１％、プロドラッグの同じ分子量投薬量で処置したラットでは７５〜９１％抑制された。全てのプロドラッグ中で、ＯＡＰ−１０１Ｍ（２０ａ）とＯＡＰ−Ｎａ−１０１Ｍ（２２ａ）は最も効果的であった。腫瘍成長抑制は９１％および８９．５％であった。他のグループにおけるよりも抑制は顕著に（ｐ＜０．０５）高かった。
【０１５２】
ＯＡＰ−１０１Ｍ（２０ａ）を受けた腫瘍罹病ラットは他の薬剤（図１２）を受けたものより長く生存した。体重減少と動物表情により測定されたようにラットにおけるそれら薬剤の毒性は温和であった（図１３）。これらプロドラッグの抗腫瘍効果もｎｕ／ｎｕＣＤ−１ラットに移植されたＨＴＢ１７７人間肺癌で図１４、１５に示すように検査され、ＯＡＰ−１０１Ｍ（２０ａ）とＯＡＰ−Ｎａ−１０１Ｍ（２２ａ）も同様に持続した。
【０１５３】
要約すると、水溶性ＳＨＰプロドラッグＯＡＰ−１０１Ｍ（２０ａ）とＯＡＰ−Ｎａ−１０１Ｍ（２２ａ）はＢ１６−Ｆ１０ラット黒腫およびＨＴＢ１７７人間肺癌に対して抗腫瘍活性を有しており、その効能はＶＮＰ４０１０１Ｍと同じかより良いものであった。
【０１５４】
結論。リン酸含有ＳＨＰ  ＯＡＰ−１０１Ｍ（２０ａ）およびＯＡＰ−Ｎａ−１０１Ｍ（２２ａ）は以下の特性を備えている。（ａ）高度に水溶性であり、ｐＨ３〜９において水性溶液中で安定である。（ｂ）アルカリホスファターゼ（ＡＰ）によりその変換は触媒作用できる。（ｃ）ＰＡＰ−１０１Ｍ（１９）およびＶＮＰ４０１０１Ｍよりも生理的食塩水および人間プラズマ中での半減期が長い。（ｄ）ＰＡＰ−１０１Ｍよりも生体中のＰＫプロファイルが良い。（ｅ）ＰＡＰ−１０１Ｍ（１９）、ＰＡＰ−Ｎａー１０１Ｍ（２１）およびＶＮＰ４０１０１Ｍに比べてＢ１６−Ｆ１０ラット黒腫およびＨＴＢ１７７人間肺癌に対する抗腫瘍活性が良い。（ｆ）そのナトリウム塩（２２ａ）は遊離酸２０ａに比べて水溶性が高く抗腫瘍活性が同じである。
【０１５５】
この発明は以上の記載に限定されるものではない。
【産業上の利用可能性】
【０１５６】
この発明は腫瘍や癌関係医療の分野において広く利用され得るものである。
【図面の簡単な説明】
【０１５７】
【図１】ＶＮＰ４０１０１Ｍの活性化の提案されたメカニズムを示す図である。
【図２】ある種の化学的実施例とこの発明による活性化の提案されたメカニズムとを示す図である。
【図３】ある種の化学的実施例とこの発明による活性化の提案されたメカニズムとを示す図である。
【図４】ある種の化学的実施例とこの発明による活性化の提案されたメカニズムとを示す図である。
【図５】ある化学的実施例とこの発明による活性化の提案されたメカニズムとを示す図である。
【図６】ある化学的実施例とこの発明による活性化の提案されたメカニズムとを示す図である。
【図７】ある化学的実施例とこの発明による活性化の提案されたメカニズムとを示す図である。
【図８】ある化学的実施例とこの発明による活性化の提案されたメカニズムとを示す図である。
【図９】ある化学的実施例とこの発明による活性化の提案されたメカニズムとを示す図である。
【図１０】この発明の好ましき実施例の効果と毒性とに関連する実験結果を示す図である。
【図１１】この発明の好ましき実施例の効果と毒性とに関連する実験結果を示す図である。
【図１２】この発明の好ましき実施例の効果と毒性とに関連する実験結果を示す図である。
【図１３】この発明の好ましき実施例の効果と毒性とに関連する実験結果を示す図である。
【図１４】この発明の好ましき実施例の効果と毒性とに関連する実験結果を示す図である。
【図１５】この発明の好ましき実施例の効果と毒性とに関連する実験結果を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【国際調査報告】
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