(57)【要約】  本発明は、新規クラスの化合物、このような化合物を含む医薬組成物、ならびに異常なまたは脱制御されたキナーゼ活性が関連する疾患または障害、特にＦＡＫ、Ａｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＰＤＧＦ−Ｒ、ｃ−Ｋｉｔ、ＮＰＭ−ＡＬＫ、Ｆｌｔ−３、ＪＡＫ２およびｃ−Ｍｅｔキナーゼの異常な活性化が関与する疾患または障害の処置のためにこのような化合物を使用する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、ＩｄおよびＩｅ：
【化１】
2007522241.tif 000035
〔式中：
ｎは０、１および２から選択され；ｍは０、１、２および３から選択され；
Ｗは−ＮＲ４−、−Ｓ−、−Ｏ−、−Ｓ(Ｏ)−および−Ｓ(Ｏ)２−から選択され；ここで、Ｒ４は水素およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ１はＣ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここで、Ｒ１の任意のアリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルアルキルまたはヘテロシクロアルキルアルキルは、所望によりハロ、ニトロ、シアノ、Ｃ６−１０アリール、Ｃ５−１０ヘテロアリール、Ｃ３−１２シクロアルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、ハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシ、−ＸＮＲ５Ｒ５、−ＸＮＲ５ＸＮＲ５Ｒ５、−ＸＮＲ５ＸＯＲ５、−ＸＯＲ５、−ＸＳＲ５、−ＸＳ(Ｏ)Ｒ５、−ＸＳ(Ｏ)２Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５Ｒ５、−ＸＯＸＲ６および−ＸＣ(Ｏ)Ｒ６から独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよく；ここで、Ｘは結合またはＣ１−６アルキレンであり；Ｒ５は水素、Ｃ１−６アルキルおよびＣ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；そしてＲ６は、所望によりＣ１−６アルキルおよび−Ｃ(Ｏ)ＯＨから選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよいＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここで、Ｒ１の任意のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル置換基は、さらにＣ１−６アルキルおよびＣ１−６アルコキシから独立して選択される１個から５個のラジカルで置換されていてよく；
Ｒ２はＣ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここで、Ｒ２の任意のアリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルアルキルまたはヘテロシクロアルキルアルキルは、所望によりハロ、ニトロ、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルケニル、Ｃ１−６アルキニル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、ハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ３−８ヘテロアリールＣ０−４アルキル、−ＸＮＲ５Ｒ５、−ＸＯＲ５、−ＸＳＲ５、−ＸＳ(Ｏ)Ｒ５、−ＸＳ(Ｏ)２Ｒ５、−ＸＳＮＲ５Ｒ５、−ＸＳ(Ｏ)ＮＲ５Ｒ５、−ＸＳ(Ｏ)２ＮＲ５Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)ＯＲ５、−ＸＯＣ(Ｏ)Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５ＸＮＲ５Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５ＸＣ(Ｏ)ＯＲ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５ＸＮＲ５Ｃ(Ｏ)Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５ＸＮＲ５Ｃ(Ｏ)ＯＲ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５ＸＯＲ５、−ＸＣ(Ｏ)Ｎ(ＸＯＲ５)２、−ＸＮＲ５Ｃ(Ｏ)Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５Ｒ６、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ６、−ＸＲ７、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ７、−ＸＲ６および−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５ＸＲ７から独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよく；ここで、Ｘは結合またはＣ１−６アルキレンであり；そしてＲ５は水素、Ｃ１−６アルキルおよびＣ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；Ｒ６は、所望によりＣ１−６アルキルおよび−Ｃ(Ｏ)ＯＨから選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよいＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキルから選択され；そしてＲ７はハロおよびシアノから選択され；
Ｒ３はハロ、ヒドロキシ、−ＸＳＲ５、−ＸＳ(Ｏ)Ｒ５、−ＸＳ(Ｏ)２Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ５および−ＸＣ(Ｏ)ＯＲ５から選択され；ここで、Ｘは結合またはＣ１−６アルキレンであり；そしてＲ５は水素、Ｃ１−６アルキルおよびＣ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択される。〕
の化合物およびその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、異性体およびプロドラッグから選択される、化合物。
【請求項２】
Ｗが−ＮＲ４−および−Ｏ−から選択され；ここで、Ｒ４は水素およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ１がＣ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキルおよびＣ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここで、Ｒ１の任意のアリールアルキルおよびヘテロアリールアルキルは、所望によりハロ、ニトロ、Ｃ５−１０ヘテロアリール、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、−ＸＮＲ５Ｒ５、−ＸＯＲ５、−ＸＳＲ５、−ＸＮＲ５ＸＮＲ５Ｒ５、−ＸＮＲ５ＸＯＲ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５Ｒ５、−ＸＯＸＲ６および−ＸＣ(Ｏ)Ｒ６から独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよく；ここで、Ｘは結合またはＣ１−６アルキレンであり；Ｒ５は水素、Ｃ１−６アルキルおよびＣ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；そしてＲ６は、所望によりＣ１−６アルキルおよび−Ｃ(Ｏ)ＯＨから選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよいＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここで、Ｒ１の任意のヘテロアリール置換基は、所望によりさらに１個から５個のＣ１−６アルキルラジカルで置換されていてよく；
Ｒ２がＣ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキルおよびＣ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここで、Ｒ２の任意のアリールアルキルまたはヘテロアリールアルキルは、所望によりハロ、ニトロ、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルケニル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−８ヘテロアリールＣ０−４アルキル、−ＸＮＲ５Ｒ５、−ＸＯＲ５、−ＸＳＲ５、−ＸＳ(Ｏ)２ＮＲ５Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)ＯＲ５、−ＸＯＣ(Ｏ)Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５ＸＮＲ５Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５ＸＣ(Ｏ)ＯＲ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５ＸＮＲ５Ｃ(Ｏ)Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５ＸＮＲ５Ｃ(Ｏ)ＯＲ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５ＸＯＲ５、−ＸＣ(Ｏ)Ｎ(ＸＯＲ５)２、−ＸＮＲ５Ｃ(Ｏ)Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５Ｒ６、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ６、−ＸＲ７、−ＸＲ６および−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５ＸＲ７から独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよく；ここで、Ｘは結合またはＣ１−６アルキレンであり；そしてＲ５は水素、Ｃ１−６アルキルおよびＣ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；Ｒ６は、所望によりＣ１−６アルキルおよび−Ｃ(Ｏ)ＯＨから選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよいＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキルから選択され；そしてＲ７はシアノであり；そして
Ｒ３がハロ、ヒドロキシ、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ５および−ＸＣ(Ｏ)ＯＲ５から選択され；ここで、Ｘは結合またはＣ１−６アルキレンであり；そしてＲ５は水素、Ｃ１−６アルキルおよびＣ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択される、
請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｗが−ＮＨ−および−Ｏ−から選択され；そしてＲ１がフェニル、ベンジル、５,６,７,８−テトラヒドロ−ナフタレニル、ベンゾ[１,３]ジオキソリル、１Ｈ−インダゾル−７−イル、インダン−４−イルおよび１Ｈ−インドリルから選択され；ここで、Ｒ１の任意のアリールアルキルおよびヘテロアリールアルキルは、所望によりメトキシ、メチル、アミノ、ハロ、ヒドロキシメチル、ヒドロキシ、キノキサリニル、エチル、ピリジニル、メトキシ−フェニル、ピペラジニル−カルボニル、エチル−(２−ヒドロキシ−エチル)−アミノ  ２−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−エトキシ、ホルムアミル(formamyl)、イソプロピル、メチル−スルファニル、トリ−フルオロ−メチル、エトキシ、３−イソプロピルアミノ−プロピルアミノ、ジメチル−アミノ、モルホリノ、シクロプロピル−メトキシ、ブトキシ、シクロヘプチル−オキシおよび１,４,５,７−テトラメチル−ピロロ[３,４−ｄ]ピリダジニルから独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよい、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２がピリジニル、フェニル、チアゾリル、ピリジニル−メチル、ピリジニル−エチル、チオフェニル、ベンジル、キノリニル、７−オキソ−５,６,７,８−テトラヒドロ−ナフタレニル、ナフチルおよびピリミジニルから選択され；ここで、Ｒ２の任意のアリールアルキルまたはヘテロアリールアルキルは、所望によりハロ、ニトロ、シアノ、メチル、プロピル−スルファモイル、メチル−スルファモイル、メトキシ、メチル−カルボキシ、２−ジメチルアミノ−エチル−ホルムアミル、カルボキシ、アミノ、シアノ−エチル、シアノ−メチル、エテニル、トリ−フルオロ−メチル、ヒドロキシ−メチル、エチル、メチル−スルファニル、ブチル、イソブチル、カルボキシ−メチル−ホルムアミジル、１−カルボキシ−エチル−ホルムアミジル、カルボキシ−エチル、アミノ−エチル−ホルムアミジル、アミノ−プロピル−ホルムアミジル、ジメチル−アミノ−エチル−ホルムアミジル、ジメチル−アミノ−プロピル−ホルムアミジル、ジメチル−アミノ−ブチル−ホルムアミジル、メチル−ホルムアミジル、エチル−ホルムアミジル、エチル−ホルムアミジル−メチル、２−(２−ジメチルアミノ−エチルカルバモイル)−エチル、２−(２−ジメチルアミノ−ホルムアミジル)−エチル、２−(アミノ−エチル−ホルムアミジル)−エチル、２−(アミノ−プロピル−ホルムアミジル)−エチル、２−(プロピル−ホルムアミジル)−エチル、アミノ−プロピル−ホルムアミジル−メチル、２−(メチル−アミノ−カルバモイル)−エチル、２−(エチル−アミノ−カルバモイル)−エチル、モルホリノ−エチル−ホルムアミジル、モルホリノ−カルボニル−メチル、アミノ−エチル−ホルムアミジル−メチル、シクロブチル−ホルムアミジル、メチル−ホルムアミジル−メチル、ジメチル−ホルムアミジル−メチル、ヒドロキシ−エチル−ホルムアミジル−メチル、ヒドロキシ−プロピル−ホルムアミジル−メチル、Ｎ,Ｎ−ビス−(３−ヒドロキシ−プロピル)−ホルムアミジル、シクロペンチル−ホルムアミジル、イソブチル−ホルムアミジル、イソブチル−ホルムアミジル−メチル、シクロペンチル−ホルムアミジル−メチル、シアノ−エチル−ホルムアミジル、シアノ−メチル−ホルムアミジル、ピロリジニル−エチル−ホルムアミジル、２−(イソブチル−ホルムアミジル)−エチル、１Ｈ−テトラゾリル、２−(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)−エチル、２−(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)−メチル、２−(１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル)−メチル、アセチル−アミノ、シクロプロピル−ホルムアミジル−メチル、ヒドロキシ−エチル−ホルムアミジル、ヒドロキシ−プロピル−ホルムアミジル、プロピル−ホルムアミジル−メチル、エトキシ−プロピル−ホルムアミジル、アセチル−アミノ−エチル−ホルムアミジル、１−メチル−ピペリジン−４−イル−ホルムアミジル、モルホリノ−カルボニル−エチル、メトキシ−カルボニル−メチル、メトキシ−カルボニル−エチル−ホルムアミジル、メトキシ−カルボニル−エチル−ホルムアミジル−メチル、メトキシ−カルボニル−メチル−ホルムアミジル−メチル、メトキシ−カルボニル−メチル−ホルムアミジル、４−アミノ−シクロヘキシル−ホルムアミジル、４−アミノ��シクロヘキシル−ホルムアミジル−メチル、アセチル−アミノ−エチル−ホルムアミジル−メチル、エトキシ−プロピル−ホルムアミジル−メチル、メトキシ−カルボニル−エチル、１−ホルミル−ピロリジン−２−イル−カルボン酸、(１−カルボキシ−３−メチル−ブチル)−ホルムアミジル、２−(メトキシ−カルボニル−メチル−ホルムアミジル)−エチル、１−カルボキシ−(２,２−ジメチル−プロピル)−ホルムアミジル、３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−アミノ−プロピル−ホルムアミジル、アセトキシ−メチルおよび１−カルボキシ−エチル−ホルムアミジルから独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよい、請求項１記載の化合物。
【請求項５】
ｎが０または１であり；ｍが０または１であり；そしてＲ３がハロ、ヒドロキシ、−Ｃ(Ｏ)ＯＨおよび−Ｃ(Ｏ)ＯＣＨ３から選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項６】
式Ｉｇ：
【化２】
2007522241.tif 000036
〔式中、Ｒ２はピリジニル、フェニル、チアゾリル、ピリジニル−メチル、ピリジニル−エチル、チオフェニル、ベンジル、キノリニル、７−オキソ−５,６,７,８−テトラヒドロ−ナフタレニル、ナフチルおよびピリミジニルから選択され；ここで、Ｒ２の任意のアリールアルキルまたはヘテロアリールアルキルは、所望によりハロ、ニトロ、シアノ、メチル、プロピル−スルファモイル、メチル−スルファモイル、メトキシ、メチル−カルボキシ、２−ジメチルアミノ−エチル−ホルムアミル、カルボキシ、アミノ、シアノ−エチル、シアノ−メチル、エテニル、トリ−フルオロ−メチル、ヒドロキシ−メチル、エチル、メチル−スルファニル、ブチル、イソブチル、カルボキシ−メチル−ホルムアミジル、１−カルボキシ−エチル−ホルムアミジル、カルボキシ−エチル、アミノ−エチル−ホルムアミジル、アミノ−プロピル−ホルムアミジル、ジメチル−アミノ−エチル−ホルムアミジル、ジメチル−アミノ−プロピル−ホルムアミジル、ジメチル−アミノ−ブチル−ホルムアミジル、メチル−ホルムアミジル、エチル−ホルムアミジル、エチル−ホルムアミジル−メチル、２−(２−ジメチルアミノ−エチルカルバモイル)−エチル、２−(２−ジメチルアミノ−ホルムアミジル)−エチル、２−(アミノ−エチル−ホルムアミジル)−エチル、２−(アミノ−プロピル−ホルムアミジル)−エチル、２−(プロピル−ホルムアミジル)−エチル、アミノ−プロピル−ホルムアミジル−メチル、２−(メチル−アミノ−カルバモイル)−エチル、２−(エチル−アミノ−カルバモイル)−エチル、モルホリノ−エチル−ホルムアミジル、モルホリノ−カルボニル−メチル、アミノ−エチル−ホルムアミジル−メチル、シクロブチル−ホルムアミジル、メチル−ホルムアミジル−メチル、ジメチル−ホルムアミジル−メチル、ヒドロキシ−エチル−ホルムアミジル−メチル、ヒドロキシ−プロピル−ホルムアミジル−メチル、Ｎ,Ｎ−ビス−(３−ヒドロキシ−プロピル)−ホルムアミジル、シクロペンチル−ホルムアミジル、イソブチル−ホルムアミジル、イソブチル−ホルムアミジル−メチル、シクロペンチル−ホルムアミジル−メチル、シアノ−エチル−ホルムアミジル、シアノ−メチル−ホルムアミジル、ピロリジニル−エチル−ホルムアミジル、２−(イソブチル−ホルムアミジル)−エチル、１Ｈ−テトラゾリル、２−(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)−エチル、２−(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)−メチル、２−(１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル)−メチル、アセチル−アミノ、シクロプロピル−ホルムアミジル−メチル、ヒドロキシ−エチル−ホルムアミジル、ヒドロキシ−プロピル−ホルムアミジル、プロピル−ホルムアミジル−メチル、エトキシ−プロピル−ホルムアミジル、アセチル−アミノ−エチル−ホルムアミジル、１−メチル−ピペリジン−４−イル−ホルムアミジル、モルホリノ−カルボニル−エチル、メトキシ−カルボニル−メチル、メトキシ−カルボニル−エチル−ホルムアミジル、メトキシ−カルボニル−エチル−ホルムアミジル−メチル、メトキシ−カルボニル−メチル−ホルムアミジル−メチル、メトキシ−カルボニル−メチル−ホルムアミジル、４−アミノ−シクロヘキシル−ホルムアミジル、４��アミノ−シクロヘキシル−ホルムアミジル−メチル、アセチル−アミノ−エチル−ホルムアミジル−メチル、エトキシ−プロピル−ホルムアミジル−メチル、メトキシ−カルボニル−エチル、１−ホルミル−ピロリジン−２−イル−カルボン酸、(１−カルボキシ−３−メチル−ブチル)−ホルムアミジル、２−(メトキシ−カルボニル−メチル−ホルムアミジル)−エチル、１−カルボキシ−(２,２−ジメチル−プロピル)−ホルムアミジル、３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−アミノ−プロピル−ホルムアミジル、アセトキシ−メチルおよび１−カルボキシ−エチル−ホルムアミジルから独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよい。〕
である、請求項１記載の化合物。
【請求項７】
治療的有効量の請求項１記載の化合物を薬学的に許容される賦形剤と共に含む、医薬組成物。
【請求項８】
動物におけるキナーゼ活性の阻害により、疾患の病状および／または総体的症状を予防、阻止または軽減できるものである疾患の処置法であって、該動物に治療的有効量の請求項１記載の化合物を投与することを含む、方法。
【請求項９】
キナーゼがＦＡＫ、Ａｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＰＤＧＦ−Ｒ、ｃ−Ｋｉｔ、ＮＰＭ−ＡＬＫ、Ｆｌｔ−３、ＪＡＫ２およびｃ−Ｍｅｔから選択される、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
動物におけるＦＡＫ、Ａｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＰＤＧＦ−Ｒ、ｃ−Ｋｉｔ、ＮＰＭ−ＡＬＫ、Ｆｌｔ−３、ＪＡＫ２および／またはｃ−Ｍｅｔのキナーゼ活性が疾患の病状および／または総体的症状に関与する疾患の処置用医薬の製造における、請求項１記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
関連出願との相互参照
本発明は、２００４年２月１４日出願の米国特許仮出願６０／５４４,９４４に対する優先権の利益を主張する。この出願の全部の記載は、引用により、その全体として、かつ全ての目的に関して、本出願に包含される。
【０００２】
発明の背景
発明の分野
本発明は、新規クラスの化合物、このような化合物を含む医薬組成物、ならびに異常なまたは脱制御されたキナーゼ活性が関連する疾患または障害、特にＦＡＫ、Ａｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＰＤＧＦ−Ｒ、ｃ−Ｋｉｔ、ＮＰＭ−ＡＬＫ、Ｆｌｔ−３、ＪＡＫ２およびｃ−Ｍｅｔキナーゼの異常な活性化が関与する疾患または障害の処置のためにこのような化合物を使用する方法を提供する。
【０００３】
背景
タンパク質キナーゼは、広範囲の細胞過程の制御に中心的役割を有し、そして細胞機能の制御を維持する、タンパク質の大ファミリーを示す。これらのキナーゼの部分的、非限定的リストは下記を含む：血小板由来増殖因子受容体キナーゼ(ＰＤＧＦ−Ｒ)、幹細胞因子のための受容体キナーゼ、ｃ−ｋｉｔ、神経増殖因子受容体、ｔｒｋＢ、ｃ−Ｍｅｔ、および繊維芽細胞増殖因子受容体、ＦＧＦＲ３のような受容体チロシンキナーゼ；Ａｂｌおよび融合キナーゼＢＣＲ−Ａｂｌ、局所接着キナーゼ(ＦＡＫ)、Ｆｅｓ、ＬｃｋおよびＳｙｋのような非受容体チロシンキナーゼ；ならびにｂ−ＲＡＦ、ＭＡＰキナーゼ(例えば、ＭＫＫ６)およびＳＡＰＫ２βのようなセリン／スレオニンキナーゼ。異常なキナーゼ活性が良性および悪性増殖性疾患ならびに免疫系および神経系の不適切な活性化に起因する疾患を含む多くの疾患状態で観察されている。
【０００４】
本発明の新規化合物は、１個以上のタンパク質キナーゼの活性を阻害し、従って、キナーゼ関連疾患の処置に有用であるであることが予測される。
【０００５】
発明の概要
第一の局面において、本発明は、式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、ＩｄおよびＩｅ：
【化１】
2007522241.tif 000002
〔式中：
ｎは０、１および２から選択され；ｍは０、１、２および３から選択され；
ｗは−ＮＲ４−、−Ｓ−、−Ｏ−、−Ｓ(Ｏ)−および−Ｓ(Ｏ)２−から選択され；ここで、Ｒ４は水素およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ１はＣ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここで、Ｒ１の任意のアリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルアルキルまたはヘテロシクロアルキルアルキルは、所望によりハロ、ニトロ、シアノ、Ｃ６−１０アリール、Ｃ５−１０ヘテロアリール、Ｃ３−１２シクロアルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、ハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシ、−ＸＮＲ５Ｒ５、−ＸＮＲ５ＸＮＲ５Ｒ５、−ＸＮＲ５ＸＯＲ５、−ＸＯＲ５、−ＸＳＲ５、−ＸＳ(Ｏ)Ｒ５、−ＸＳ(Ｏ)２Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５Ｒ５、−ＸＯＸＲ６および−ＸＣ(Ｏ)Ｒ６から独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよく；ここで、Ｘは結合またはＣ１−６アルキレンであり；Ｒ５は水素、Ｃ１−６アルキルおよびＣ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；そしてＲ６は、所望によりＣ１−６アルキルおよび−Ｃ(Ｏ)ＯＨから選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよいＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここで、Ｒ１の任意のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル置換基は、さらにＣ１−６アルキルおよびＣ１−６アルコキシから独立して選択される１個から５個のラジカルで置換されていてよく；
【０００６】
Ｒ２はＣ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここで、Ｒ２の任意のアリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルアルキルまたはヘテロシクロアルキルアルキルは、所望によりハロ、ニトロ、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルケニル、Ｃ１−６アルキニル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、ハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ３−８ヘテロアリールＣ０−４アルキル、−ＸＮＲ５Ｒ５、−ＸＯＲ５、−ＸＳＲ５、−ＸＳ(Ｏ)Ｒ５、−ＸＳ(Ｏ)２Ｒ５、−ＸＳＮＲ５Ｒ５、−ＸＳ(Ｏ)ＮＲ５Ｒ５、−ＸＳ(Ｏ)２ＮＲ５Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)ＯＲ５、−ＸＯＣ(Ｏ)Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５ＸＮＲ５Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５ＸＣ(Ｏ)ＯＲ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５ＸＮＲ５Ｃ(Ｏ)Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５ＸＮＲ５Ｃ(Ｏ)ＯＲ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５ＸＯＲ５、−ＸＣ(Ｏ)Ｎ(ＸＯＲ５)２、−ＸＮＲ５Ｃ(Ｏ)Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５Ｒ６、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ６、−ＸＲ７、−ＸＲ６および−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５ＸＲ７から独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよく；ここで、Ｘは結合またはＣ１−６アルキレンであり；そしてＲ５は水素、Ｃ１−６アルキルおよびＣ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；Ｒ６は、所望によりＣ１−６アルキルおよび−Ｃ(Ｏ)ＯＨから選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよいＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキルから選択され；そしてＲ７はシアノであり；
【０００７】
Ｒ３はハロ、ヒドロキシ、−ＸＳＲ５、−ＸＳ(Ｏ)Ｒ５、−ＸＳ(Ｏ)２Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ５および−ＸＣ(Ｏ)ＯＲ５から選択され；ここで、Ｘは結合またはＣ１−６アルキレンであり；そしてＲ５は水素、Ｃ１−６アルキルおよびＣ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択される。〕
の化合物およびそのＮ−オキシド誘導体、プロドラッグ誘導体、被保護誘導体、個々の異性体および異性体混合物；およびこのような化合物の薬学的に許容される塩および溶媒和物(例えば水和物)から選択される化合物を提供する。
【０００８】
第二の局面において、本発明は、式Ｉの化合物またはそのＮ−オキシド誘導体、個々の異性体および異性体混合物；またはその薬学的に許容される塩を、１個以上の適当な賦形剤と共に含む、医薬組成物を提供する。
【０００９】
第三の局面において、本発明は、動物におけるキナーゼ活性、特にＦＡＫ、Ａｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＰＤＧＦ−Ｒ、ｃ−Ｋｉｔ、ＮＰＭ−ＡＬＫ、Ｆｌｔ−３、ＪＡＫ２および／またはｃ−Ｍｅｔ活性の阻害により、疾患の病状および／または総体的症状を予防、阻止または軽減できるものである疾患の処置法であって、該動物に治療的有効量の式Ｉの化合物またはそのＮ−オキシド誘導体、個々の異性体および異性体混合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。
【００１０】
第四の局面において、本発明は、動物におけるキナーゼ活性、特にＦＡＫ、Ａｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＰＤＧＦ−Ｒ、ｃ−Ｋｉｔ、ＮＰＭ−ＡＬＫ、Ｆｌｔ−３、ＪＡＫ２および／またはｃ−Ｍｅｔ活性、が疾患の病状および／または総体的症状に関与する疾患の処置用医薬の製造における、式Ｉの化合物の使用を提供する。
【００１１】
第五の局面において、本発明は、式Ｉの化合物およびそのＮ−オキシド誘導体、プロドラッグ誘導体、被保護誘導体、個々の異性体および異性体混合物、ならびにその薬学的に許容される塩の製造法を提供する。
【００１２】
発明の詳細な記載
定義
基ならびに他の基、例えばハロ−置換−アルキルおよびアルコキシの構成要素としての“アルキル”は、直鎖または分枝鎖のいずれかであり得る。Ｃ１−４−アルコキシは、メトキシ、エトキシなどを含む。ハロ−置換アルキルは、トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチルなどを含む。
【００１３】
“アリール”は、６個から１０個の環炭素原子を含む、単環式または縮合二環式芳香環集合体を意味する。例えば、アリールは、フェニルまたはナフチルであってよく、好ましくはフェニルである。“アリーレン”は、アリール基由来の２価ラジカルを意味する。“ヘテロアリール”は、アリールについて定義の通りであり、ここで、環員の１個以上がヘテロ原子である。例えばヘテロアリールは、ピリジル、インドリル、インダゾリル、キノキサリニル、キノリニル、ベンゾフラニル、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、ベンゾ[１,３]ジオキソール、イミダゾリル、ベンゾ−イミダゾリル、ピリミジニル、フラニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピラゾリル、チエニルなどを含む。
【００１４】
“シクロアルキル”は、示す環原子数を含む、飽和または部分的不飽和、単環式、縮合二環式または架橋多環式環集合体である。例えば、Ｃ３−１０シクロアルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどを意味する。“ヘテロシクロアルキル”は、示す環炭素の１個以上が−Ｏ−、−Ｎ＝、−ＮＲ−、−Ｃ(Ｏ)−、−Ｓ−、−Ｓ(Ｏ)−または−Ｓ(Ｏ)２−(ここで、Ｒは水素、Ｃ１−４アルキルまたは窒素保護基である)から選択される部分で置換されている以外、本明細書で定義の通りのシクロアルキルである。例えば、本発明の化合物を記載するために本明細書で使用するＣ３−８ヘテロシクロアルキルは、モルホリノ、ピロリジニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピペリジニロン、１,４−ジオキサ−８−アザ−スピロ[４.５]デク−８−イル、１,１−ジオキソ−１ｌ６−チオモルホリン−４−イルなど。
【００１５】
“ハロゲン”(またはハロ)は、好ましくはクロロまたはフルオロを意味するが、ブロモまたはヨードであってもよい。
【００１６】
“処置”、“処置する”および“処置し”は、疾患および／またはその随伴症状の軽減もしくは減退法を意味する。
【００１７】
好ましい態様の記載
本発明の化合物は、キナーゼの阻害に有用であり、発明の概要に詳述の通り式Ｉの化合物により説明される。一つの態様において、式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、ＩｄおよびＩｅの化合物に関して、Ｗは−ＮＲ４−および−Ｏ−から選択され；ここで、Ｒ４は水素およびＣ１−６アルキルから選択される。
【００１８】
さらなる態様において、Ｒ１はＣ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキルおよびＣ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここで、Ｒ１の任意のアリールアルキルおよびヘテロアリールアルキルは、所望によりハロ、ニトロ、Ｃ５−１０ヘテロアリール、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、−ＸＮＲ５Ｒ５、−ＸＯＲ５、−ＸＳＲ５、−ＸＮＲ５ＸＮＲ５Ｒ５、−ＸＮＲ５ＸＯＲ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５Ｒ５、−ＸＯＸＲ６および−ＸＣ(Ｏ)Ｒ６から独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよく；ここで、Ｘは結合またはＣ１−６アルキレンであり；Ｒ５は水素、Ｃ１−６アルキルおよびＣ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；そしてＲ６は、所望によりＣ１−６アルキルおよび−Ｃ(Ｏ)ＯＨから選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよいＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここで、Ｒ１の任意のヘテロアリール置換基は、さらに所望により１個から５個のＣ１−６アルキルラジカルで置換されていてよい。
【００１９】
さらなる態様において、Ｒ２がＣ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキルおよびＣ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここで、Ｒ２の任意のアリールアルキルまたはヘテロアリールアルキルは、所望によりハロ、ニトロ、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルケニル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−８ヘテロアリールＣ０−４アルキル、−ＸＮＲ５Ｒ５、−ＸＯＲ５、−ＸＳＲ５、−ＸＳ(Ｏ)２ＮＲ５Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)ＯＲ５、−ＸＯＣ(Ｏ)Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５ＸＮＲ５Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５ＸＣ(Ｏ)ＯＲ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５ＸＮＲ５Ｃ(Ｏ)Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５ＸＮＲ５Ｃ(Ｏ)ＯＲ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５ＸＯＲ５、−ＸＣ(Ｏ)Ｎ(ＸＯＲ５)２、−ＸＮＲ５Ｃ(Ｏ)Ｒ５、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５Ｒ６、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ６、−ＸＲ７、−ＸＲ６および−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ５ＸＲ７から独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよく；ここで、Ｘは結合またはＣ１−６アルキレンであり；そしてＲ５は水素、Ｃ１−６アルキルおよびＣ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；Ｒ６は、所望によりＣ１−６アルキルおよび−Ｃ(Ｏ)ＯＨから選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよいＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキルから選択され；そしてＲ７はシアノである。
【００２０】
さらなる態様において、Ｒ３はハロ、ヒドロキシ、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ５および−ＸＣ(Ｏ)ＯＲ５から選択され；ここで、Ｘは結合またはＣ１−６アルキレンであり；そしてＲ５は水素、Ｃ１−６アルキルおよびＣ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択される。
【００２１】
さらなる態様において、Ｗは−ＮＨ−および−Ｏ−から選択され；そしてＲ１はフェニル、ベンジル、５,６,７,８−テトラヒドロ−ナフタレニル、ベンゾ[１,３]ジオキソリル、１Ｈ−インダゾル−７−イル、インダン−４−イルおよび１Ｈ−インドリルから選択され；ここで、Ｒ１の任意のアリールアルキルおよびヘテロアリールアルキルは、所望によりメトキシ、メチル、アミノ、ハロ、ヒドロキシメチル、ヒドロキシ、キノキサリニル、エチル、ピリジニル、メトキシ−フェニル、ピペラジニル−カルボニル、エチル−(２−ヒドロキシ−エチル)−アミノ２−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−エトキシ、ホルムアミル(formamyl)、イソプロピル、メチル−スルファニル、トリ−フルオロ−メチル、エトキシ、３−イソプロピルアミノ−プロピルアミノ、ジメチル−アミノ、モルホリノ、シクロプロピル−メトキシ、ブトキシ、シクロヘプチル−オキシおよび１,４,５,７−テトラメチル−ピロロ[３,４−ｄ]ピリダジニルから独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよい。
【００２２】
さらなる態様において、Ｒ２はピリジニル、フェニル、チアゾリル、ピリジニル−メチル、ピリジニル−エチル、チオフェニル、ベンジル、キノリニル、７−オキソ−５,６,７,８−テトラヒドロ−ナフタレニル、ナフチルおよびピリミジニルから選択され；ここで、Ｒ２の任意のアリールアルキルまたはヘテロアリールアルキルは、所望によりハロ、ニトロ、シアノ、メチル、プロピル−スルファモイル、メチル−スルファモイル、メトキシ、メチル−カルボキシ、２−ジメチルアミノ−エチル−ホルムアミル、カルボキシ、アミノ、シアノ−エチル、シアノ−メチル、エテニル、トリ−フルオロ−メチル、ヒドロキシ−メチル、エチル、メチル−スルファニル、ブチル、イソブチル、カルボキシ−メチル−ホルムアミジル、１−カルボキシ−エチル−ホルムアミジル、カルボキシ−エチル、アミノ−エチル−ホルムアミジル、アミノ−プロピル−ホルムアミジル、ジメチル−アミノ−エチル−ホルムアミジル、ジメチル−アミノ−プロピル−ホルムアミジル、ジメチル−アミノ−ブチル−ホルムアミジル、メチル−ホルムアミジル、エチル−ホルムアミジル、エチル−ホルムアミジル−メチル、２−(２−ジメチルアミノ−エチルカルバモイル)−エチル、２−(２−ジメチルアミノ−ホルムアミジル)−エチル、２−(アミノ−エチル−ホルムアミジル)−エチル、２−(アミノ−プロピル−ホルムアミジル)−エチル、２−(プロピル−ホルムアミジル)−エチル、アミノ−プロピル−ホルムアミジル−メチル、２−(メチル−アミノ−カルバモイル)−エチル、２−(エチル−アミノ−カルバモイル)−エチル、モルホリノ−エチル−ホルムアミジル、モルホリノ−カルボニル−メチル、アミノ−エチル−ホルムアミジル−メチル、シクロブチル−ホルムアミジル、メチル−ホルムアミジル−メチル、ジメチル−ホルムアミジル−メチル、ヒドロキシ−エチル−ホルムアミジル−メチル、ヒドロキシ−プロピル−ホルムアミジル−メチル、Ｎ,Ｎ−ビス−(３−ヒドロキシ−プロピル)−ホルムアミジル、シクロペンチル−ホルムアミジル、イソブチル−ホルムアミジル、イソブチル−ホルムアミジル−メチル、シクロペンチル−ホルムアミジル−メチル、シアノ−エチル−ホルムアミジル、シアノ−メチル−ホルムアミジル、ピロリジニル−エチル−ホルムアミジル、２−(イソブチル−ホルムアミジル)−エチル、１Ｈ−テトラゾリル、２−(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)−エチル、２−(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)−メチル、２−(１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル)−メチル、アセチル−アミノ、シクロプロピル−ホルムアミジル−メチル、ヒドロキシ−エチル−ホルムアミジル、ヒドロキシ−プロピル−ホルムアミジル、プロピル−ホルムアミジル−メチル、エトキシ−プロピル−ホルムアミジル、アセチル−アミノ−エチル−ホルムアミジル、１−メチル−ピペリジン−４−イル−ホルムアミジル、モルホリノ−カルボニル−エチル、メトキシ−カルボニル−メチル、メトキシ−カルボニル−エチル−ホルムアミジル、メトキシ−カルボニル−エチル−ホルムアミジル−メチル、メトキシ−カルボニル−メチル−ホルムアミジル−メチル、メトキシ−カルボニル−メチル−ホルムアミジル、４−アミノ−シクロヘキシル−ホル��アミジル、４−アミノ−シクロヘキシル−ホルムアミジル−メチル、アセチル−アミノ−エチル−ホルムアミジル−メチル、エトキシ−プロピル−ホルムアミジル−メチル、メトキシ−カルボニル−エチル、１−ホルミル−ピロリジン−２−イル−カルボン酸、(１−カルボキシ−３−メチル−ブチル)−ホルムアミジル、２−(メトキシ−カルボニル−メチル−ホルムアミジル)−エチル、１−カルボキシ−(２,２−ジメチル−プロピル)−ホルムアミジル、３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−アミノ−プロピル−ホルムアミジル、アセトキシ−メチルおよび１−カルボキシ−エチル−ホルムアミジルから独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよい。
【００２３】
さらなる態様において、ｎが０または１であり；ｍが０または１であり；そしてＲ３がハロ、ヒドロキシ、−Ｃ(Ｏ)ＯＨおよび−Ｃ(Ｏ)ＯＣＨ３から選択される。
他の態様は、式Ｉｇ：
【化２】
2007522241.tif 000003
〔式中、
Ｒ２はピリジニル、フェニル、チアゾリル、ピリジニル−メチル、ピリジニル−エチル、チオフェニル、ベンジル、キノリニル、７−オキソ−５,６,７,８−テトラヒドロ−ナフタレニル、ナフチルおよびピリミジニルから選択され；ここで、Ｒ２の任意のアリールアルキルまたはヘテロアリールアルキルは、所望によりハロ、ニトロ、シアノ、メチル、プロピル−スルファモイル、メチル−スルファモイル、メトキシ、メチル−カルボキシ、２−ジメチルアミノ−エチル−ホルムアミル、カルボキシ、アミノ、シアノ−エチル、シアノ−メチル、エテニル、トリ−フルオロ−メチル、ヒドロキシ−メチル、エチル、メチル−スルファニル、ブチル、イソブチル、カルボキシ−メチル−ホルムアミジル、１−カルボキシ−エチル−ホルムアミジル、カルボキシ−エチル、アミノ−エチル−ホルムアミジル、アミノ−プロピル−ホルムアミジル、ジメチル−アミノ−エチル−ホルムアミジル、ジメチル−アミノ−プロピル−ホルムアミジル、ジメチル−アミノ−ブチル−ホルムアミジル、メチル−ホルムアミジル、エチル−ホルムアミジル、エチル−ホルムアミジル−メチル、２−(２−ジメチルアミノ−エチルカルバモイル)−エチル、２−(２−ジメチルアミノ−ホルムアミジル)−エチル、２−(アミノ−エチル−ホルムアミジル)−エチル、２−(アミノ−プロピル−ホルムアミジル)−エチル、２−(プロピル−ホルムアミジル)−エチル、アミノ−プロピル−ホルムアミジル−メチル、２−(メチル−アミノ−カルバモイル)−エチル、２−(エチル−アミノ−カルバモイル)−エチル、モルホリノ−エチル−ホルムアミジル、モルホリノ−カルボニル−メチル、アミノ−エチル−ホルムアミジル−メチル、シクロブチル−ホルムアミジル、メチル−ホルムアミジル−メチル、ジメチル−ホルムアミジル−メチル、ヒドロキシ−エチル−ホルムアミジル−メチル、ヒドロキシ−プロピル−ホルムアミジル−メチル、Ｎ,Ｎ−ビス−(３−ヒドロキシ−プロピル)−ホルムアミジル、シクロペンチル−ホルムアミジル、イソブチル−ホルムアミジル、イソブチル−ホルムアミジル−メチル、シクロペンチル−ホルムアミジル−メチル、シアノ−エチル−ホルムアミジル、シアノ−メチル−ホルムアミジル、ピロリジニル−エチル−ホルムアミジル、２−(イソブチル−ホルムアミジル)−エチル、１Ｈ−テトラゾリル、２−(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)−エチル、２−(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)−メチル、２−(１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル)−メチル、アセチル−アミノ、シクロプロピル−ホルムアミジル−メチル、ヒドロキシ−エチル−ホルムアミジル、ヒドロキシ−プロピル−ホルムアミジル、プロピル−ホルムアミジル−メチル、エトキシ−プロピル−ホルムアミジル、アセチル−アミノ−エチル−ホルムアミジル、１−メチル−ピペリジン−４−イル−ホルムアミジル、モルホリノ−カルボニル−エチル、メトキシ−カルボニル−メチル、メトキシ−カルボニル−エチル−ホルムアミジル、メトキシ−カルボニル−エチル−ホルムアミジル−メチル、メトキシ−カルボニル−メチル−ホルムアミジル−メチル、メトキシ−カルボニル−メチル−ホルムアミジル、４−アミノ−シクロヘキシル−ホルムアミジル、４−アミノ��シクロヘキシル−ホルムアミジル−メチル、アセチル−アミノ−エチル−ホルムアミジル−メチル、エトキシ−プロピル−ホルムアミジル−メチル、メトキシ−カルボニル−エチル、１−ホルミル−ピロリジン−２−イル−カルボン酸、(１−カルボキシ−３−メチル−ブチル)−ホルムアミジル、２−(メトキシ−カルボニル−メチル−ホルムアミジル)−エチル、１−カルボキシ−(２,２−ジメチル−プロピル)−ホルムアミジル、３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−アミノ−プロピル−ホルムアミジル、アセトキシ−メチルおよび１−カルボキシ−エチル−ホルムアミジルから独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよい。〕
の化合物である。
【００２４】
好ましい式Ｉの化合物は、下記実施例および表Ｉに詳述する。
【００２５】
薬理学および有用性
本発明の化合物は、タンパク質チロシンキナーゼの活性を調節し、それ自体、タンパク質チロシンキナーゼ、特にＦＡＫ、Ａｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＰＤＧＦ−Ｒ、ｃ−Ｋｉｔ、ＮＰＭ−ＡＬＫ、Ｆｌｔ−３、ＪＡＫ２およびｃ−Ｍｅｔキナーゼが疾患の病状および／または総体的症状に関与する疾患または状態の処置に有用である。
【００２６】
非受容体タンパク質−チロシンキナーゼである局所接着キナーゼ(ＦＡＫ)は、シグナル伝達タンパク質の細胞骨格関連ネットワークの一部として機能する、細胞基層−細胞外マトリックス(ＥＣＭ)接触部位に局在する(Schlaepfer, et al., Prog. Diophys., Mol., 1999, 71, 435-478)。接着細胞において、ＦＡＫは、しばしば接着斑でインテグリンと結合する(Schlaepfer, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1992, 89, 5192-5196)。ＦＡＫのリン酸化は、マイトージェン−活性タンパク質キナーゼ経路の活性化をもたらす。ＦＡＫの過剰発現は、癌進行に関与する。高レベルのＦＡＫは、結腸腫瘍(Weiner, T.M., et al., Lancet, 1993, 342, 1024-1025)、乳房腫瘍(Owens, L.V., et al., Cancer Res., 1995, 55, 2752-2755)および口腔癌(Kornberg, L. J., Head Neck, 1998, 20, 634-639)の侵襲性および転移能と相関する。細胞移動におけるＦＡＫの役割は、胚発生機能障害および血管新生疾患のような他の疾患と関連している可能性があるとの推測に至っている(Kornberg, L. J., Head Neck, 1998, 20, 634-639)。
【００２７】
Abelsonチロシンキナーゼ(すなわちＡｂｌ、ｃ−Ａｂｌ)は、細胞サイクルの制御、遺伝毒性ストレスに対する細胞応答、およびインテグリンシグナル伝達を介した細胞環境に関する情報の伝達に関与する。全体として、Ａｂｌタンパク質は、様々な細胞外および細胞内供給源からのシグナルを統合する、そして細胞サイクルおよびアポトーシスに関する決定に影響する細胞モジュールとしての複合的役割を果たす。Abelsonチロシンキナーゼは、脱制御されたチロシンキナーゼ活性を有するキメラ融合体(腫瘍性タンパク質)ＢＣＲ−Ａｂｌまたはｖ−Ａｂｌのようなサブタイプ誘導体を含む。ＢＣＲ−Ａｂｌは、９５％の慢性骨髄性白血病(ＣＭＬ)および１０％の急性リンパ性白血病で決定的である。ＳＴＩ−５７１(Gleevec)は、発癌性ＢＣＲ−Ａｂｌチロシンキナーゼの阻害剤であり、慢性骨髄性白血病(ＣＭＬ)の処置に使用されている。しかしながら、ＣＭＬの急性転化期のある患者は、ＢＣＲ−Ａｂｌキナーゼにおける変異のために、ＳＴＩ−５７１に耐性である。２２を超える変異が今日まで報告されており、最も一般的なものはＧ２５０Ｅ、Ｅ２５５Ｖ、Ｔ３１５Ｉ、Ｆ３１７ＬおよびＭ３５１Ｔである。
【００２８】
本発明の化合物は、ａｂｌキナーゼ、とりわけｖ−ａｂｌキナーゼを阻害する。本発明の化合物はまた野生型ＢＣＲ−ＡｂｌキナーゼおよびＢＣＲ−Ａｂｌキナーゼの変異体も阻害し、故に白血病(とりわけアポトーシス機構の作用が見られる、とりわけ慢性骨髄性白血病および急性リンパ芽球性白血病)のようなＢｃｒ−ａｂｌ−陽性癌および腫瘍疾患の処置に適し、また白血病幹細胞のサブグループに対する効果を示し、そして、該細胞の除去(例えば、骨髄除去)後のこれらの細胞の精製および癌細胞から浄化された後の該再簿の再移植(例えば、精製骨髄細胞)の可能性を示す。
【００２９】
ＰＤＧＦ(血小板由来増殖因子)は、正常増殖およびまた、発癌および血管平滑筋細胞の疾患、例えばアテローム性動脈硬化症および血栓症において見られるような病的細胞増殖の両方に重要な役割を有する、非常に一般手金依存剤する増殖因子である。本発明の化合物は、ＰＤＧＦ受容体(ＰＤＧＦＲ)活性を阻害でき、従って、神経膠腫、肉腫、前立腺腫瘍、ならびに結腸、乳房および卵巣の腫瘍のような腫瘍疾患の処置に適している。
【００３０】
本発明の化合物は、例えば小細胞肺癌において、腫瘍阻害物質として使用できるだけでなく、アテローム性動脈硬化症、血栓症、乾癬、強皮症および線維症のような非悪性増殖性疾患の処置のための、ならびに、例えば５−フルオロウラシルのような化学療法剤の血液毒性と戦うための幹細胞の保護のための、および喘息における薬剤として使用できる。本発明の化合物は、とりわけＰＤＧＦ受容体キナーゼの阻害に応答する疾患の処置に使用できる。
【００３１】
本発明の化合物は移植、例えば、同種移植の結果として発生する疾患、とりわけ閉塞性細気管支炎(ＯＢ)、すなわち同種肺移植の慢性拒絶反応のような、とりわけ組織拒絶反応の処置に用得様な効果を示す。ＯＢを有さない患者と比較して、ＯＢを有する者は、しばしば気管支肺胞洗浄液中のＰＤＧＦ濃度の上昇を示す。
【００３２】
本発明の化合物はまた、再狭窄およびアテローム性動脈硬化症のような、血管平滑筋細胞遊走および増殖(ＰＤＧＦおよびＰＤＧＦ−Ｒがまたしばしば役割を有する)と関連する疾患に有効である。血管平滑筋細胞のインビトロおよびインビボでの増殖または遊走に対するこれらの効果およびその結果は、本発明の化合物の投与により、およびまたインビボでの機械的傷害後の血管内膜の肥厚に対するその効果の研究により、証明できる。
【００３３】
本発明の化合物はまた、幹細胞因子(ＳＣＦ、ｃ−ｋｉｔリガンドまたはスチール因子としても既知)を含む細胞過程を阻害し、例えば、ＳＣＦ受容体(ｋｉｔ)自己リン酸化およびＭＡＰＫキナーゼ(マイトージェン−活性タンパク質キナーゼ)のＳＣＦ刺激活性化を阻害する。ＭＯ７ｅ細胞は、増殖をＳＣＦに依存するヒト前巨核球白血病細胞系である。本発明の化合物は、ＳＣＦ受容体の自己リン酸化を阻害できる。
【００３４】
Ｒａｓ−Ｒａｆ−ＭＥＫ−ＥＲＫシグナル伝達経路は、増殖シグナルに対する細胞応答を介在する。Ｒａｓは、ヒト癌の〜１５％で発癌性形態に変異している。Ｒａｆファミリーは、セリン／スレオニンタンパク質キナーゼに属し、３個のメンバー、Ａ−Ｒａｆ、Ｂ−Ｒａｆおよびｃ−Ｒａｆ(またはＲａｆ−１)を含む。薬剤標的としてのＲａｆに対する焦点は、Ｒａｓの下流エフェクターとしてのＲａｆの関係に絞られている。しかしながら、最近のデータは、Ｂ−Ｒａｆが活性化Ｒａｓ対立遺伝子の必要性なしに腫瘍形成において顕著な役割を有し得ることを示唆する(Nature 417, 949-954(01 Jul 2002))。特に、Ｂ−Ｒａｆ変異は、悪性黒色腫の大部分で検出されている。
【００３５】
黒色腫に対する既存の薬剤はその効果が、とりわけ後期黒色腫に対しては限定的である。本発明の化合物はまた、ｂ−Ｒａｆキナーゼが関与する細胞過程を阻害し、ヒト癌、とりわけ黒色腫の処置のための新しい治療の機会を提供する。
【００３６】
本発明の化合物はまた、未分化リンパ腫キナーゼ(ＡＬＫ)およびＮＰＭ−ＡＬＫの融合タンパク質のチロシンキナーゼ活性の強力な阻害を示す。このタンパク質チロシンキナーゼは、ヌクレオフォスミン(ＮＰＭ)と未分化リンパ腫キナーゼ(ＡＬＫ)の遺伝子の融合に起因し、タンパク質チロシンキナーゼ活性をＡＬＫリガンド非依存的とする。ＮＰＭ−ＡＬＫは、多くの造血および他のヒト細胞におけるシグナル伝達において重要な役割を有し、血液学的および新生物疾患、例えば未分化大細胞リンパ腫(ＡＬＣＬ)および非ホジキンリンパ腫(ＮＨＬ)、特にＡＬＫ＋ＮＨＬまたはAlkoma、炎症性筋線維芽細胞腫瘍(ＩＭＴ)および神経芽腫に至る(Duyster, J. et al., 2001, Oncogene 20, 5623-5637)。ＮＰＭ−ＡＬＫに加えて、他の遺伝子融合がヒト血液学的および新生物疾患で同定されている；主にＴＰＭ３−ＡＬＫ(非筋肉トロポミオシンとＡＬＫの融合)である。ＡＬＫチロシンキナーゼ活性の阻害は、既知の方法を使用して、例えばJ. Wood et al. Cancer Res. 60, 2178-2189(2000)に記載のＶＥＧＦ−Ｒキナーゼアッセイに準じて、ＡＬＫの組み換えキナーゼドメインを使用して、証明できる。
【００３７】
Ｆｌｔ３は、タイプIII受容体チロシンキナーゼ(ＲＴＫ)ファミリーのメンバーである。Ｆｌｔ３(ｆｍｓ様チロシンキナーゼ)はまたＦＬｋ−２(胎児肝臓キナーゼ２)としても既知である。Ｆｌｔ３遺伝子の異常な発現が、急性骨髄性白血病(ＡＭＬ)、３血球系骨髄異形成を伴うＡＭＬ(ＡＭＬ／ＴＭＤＳ)、急性リンパ芽球性白血病(ＡＬＬ)、および骨髄異形成症候群(ＭＤＳ)を含む成人および小児白血病の両方で証明されている。Ｆｌｔ３受容体の活性化変異は、急性骨髄芽球性白血病(ＡＭＬ)の患者の約３５％で見られており、悪い予後と関連する。最も一般的な変異は、膜近傍ドメイン内のフレーム内二量体化を含み、さらに５−１０％の患者がアスパラギン８３５の変異も有する。これらの変異の両方とも、Ｆｌｔ３のチロシンキナーゼ活性の構成的活性化に関連し、リガンド非存在下での増殖およびバイアビリティーシグナルをもたらす。該受容体の変異形態を発現する患者は、治癒の機会が少ないことが示されている。故に、ヒト白血病および骨髄異形成症候群における過活性化(変異)Ｆｌｔ３キナーゼ活性の役割の証拠が蓄積してきている。これは、出願人に、現在の薬剤治療がほとんど有用性がない、および、既存の薬剤治療および／または幹細胞移植治療に以前失敗している、これらの患者における可能性のある治療的アプローチとしてＦｌｔ３受容体の阻害剤を探索することを促す。
【００３８】
白血病は、一般に、骨髄、リンパ節、脾臓、または血液系および免疫液の他の臓器における未成熟造血細胞のＤＮＡの後天的(遺伝的ではない)遺伝子傷害に由来する。その影響は：加速された増殖および細胞成熟の遮断であり、正常血液細胞として機能しない“白血病性芽球”と呼ばれる細胞の蓄積をもたらす；そして正常骨髄細胞の産生ができず、赤血球細胞(貧血)、血小板および正常白血球細胞の欠損に至る。芽球細胞は通常骨髄により産生され、通常成熟血液細胞へと発育し、全骨髄細胞の約１％を構成する。白血病において、芽球は適切に成熟せず、骨髄中に蓄積する。急性骨髄性白血病(ＡＭＬ)において、これらは、骨髄芽球と呼ばれ、一方で急性リンパ芽球性白血病(ＡＬＬ)において、それらはリンパ芽球として知られている。他の白血病は、混合系統白血病(ＭＬＬ)である。
【００３９】
“３血球系骨髄異形成を伴うＡＭＬ(ＡＭＬ／ＴＭＤＳ)”なる用語は、急性白血病に附随する造血不全性像、導入された化学療法に対する乏しい応答、および純粋骨髄異形成症候群で再発する傾向により特徴付けられる白血病の稀な形態に関する。
【００４０】
“骨髄異形成症候群(ＭＤＳ)”なる用語は、骨髄が正常に機能することを止め、健康な血液細胞の数が不足する、血液疾患のグループに関する。一つの型の血液細胞が大量に産生される白血病と比較して、ＭＤＳでは、何れかのおよびときどき全て型の血液細胞が影響を受ける。米国では少なくとも毎年新しく１０,０００症例が起こっている。ＭＤＳと診断された患者の１／３までが、急性骨髄性白血病を発症するようになる。この理由のために、本疾患はしばしば前白血病と呼ばれる。骨髄異形成症候群はまた、ときどき、骨髄異形成骨髄形成不全(dysmyelopoiesis)または乏芽球性(oligoblastic)白血病と呼ばれる。ＭＤＳはまた、多数の芽球細胞が骨髄に残っているとき、くすぶり型(smoldering)白血病とも呼ばれる。
【００４１】
骨髄異形成症候群は、白血病と同様、骨髄における単一細胞のＤＮＡの遺伝的傷害に由来する。ある種の染色体異常がＭＤＳ患者に存在する。これらの異常は、１個の染色体が破壊され、異なる染色体の破壊された部分に結合するようになるときに起こる、いわゆる転座である。同じ欠陥が、急性骨髄性白血病での頻繁に見られる。しかしながら、ＭＤＳは、患者の血液細胞の全てが異常であり、全て同じ傷害された幹細胞に由来するため、白血病と異なる。白血病患者において、骨髄は、疾患および健常血液細胞の混合物を含む。
【００４２】
ＡＭＬおよび進行した骨髄異形成症候群は、現在、シトシンアラビノシドおよびダウノルビシンのような高用量の細胞毒性化学療法剤で処置されている。このタイプの処置は、約７０％の患者に血液学的緩解をもたらす。しかしながら、緩解した患者の半分以上が、長時間にわたる化学療法剤の投与にもかかわらず、後に再発する。最初に緩解しなかったか、緩解後に再発した患者のほとんど全てが、最終的に白血病のために死亡する。骨髄移植は、該処置を受けた患者の５０−６０％までを治癒できるが、ＡＭＬまたはＭＤＳの患者の約１／３しか移植に適格でない。新規のおよび有効な薬剤が、標準治療での緩解に失敗した患者、後に再発した患者および幹細胞移植に適格ではない患者を処置するために、緊急に必要である。さらに、有効な新規薬剤を、全患者について導入された化学療法の改善をもたらすであろうとの合理的な期待を持って、標準療法に加え得る。
【００４３】
前記によって、本発明はさらに、このような処置を必要とする対象における、上記の疾患または傷害の何れかを予防または処置する方法であって、該対象に治療的有効量(下記“投与および医薬組成物”参照)の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。上記の使用の全てについて、必要な投与量は投与の形態、処置すべき具体的状態および所望の効果に依存して変化するであろう。
【００４４】
投与および医薬組成物
一般に、本発明の化合物は、治療的有効量で、当分野で既知の通常のおよび許容される形態を介して、単独でまたは１個以上の治療剤と組み合わせて投与されるであろう。治療的有効量は、疾患の重症度、対象の年齢および相対的健康状態、使用する化合物の効力および他の因子に依存して、広範囲に変化し得る。一般に、一般に、十分な結果が、約０.０３から２.５mg／体重kgの１日の投与量で全身的に得られることが示される。大型哺乳類、例えばヒトにおける指示される１日量は、約０.５mgから約１００mであり、簡便には、例えば、１日４回までの分割量で、または持続形態で投与する。経口投与用の適当な単位投与形態は、約１から５０mg活性成分を含む。
【００４５】
本発明の化合物は、医薬組成物として任意の慣用の経路で、特に経腸的に、例えば、経口で、例えば、錠剤またはカプセルの形で、または非経腸的に、例えば、注射用溶液または懸濁液の形で、局所的に、例えば、ローション、ゲル、軟膏またはクリームの形で、または鼻腔内にまたは坐薬形態で投与できる。遊離形または薬学的に許容される塩形の本発明の化合物を少なくとも１個の薬学的に許容される担体または希釈剤と共に含む医薬組成物は、混合、造粒またはコーティング法による、慣用の方法で製造できる。例えば、経口組成物は、活性成分をａ)希釈剤、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロースおよび／またはグリシン；ｂ)滑剤、例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸、そのマグネシウムまたはカルシウム塩および／またはポリエチレングリコール；錠剤についてはまたｃ)結合剤、例えば、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、デンプンペースト、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースおよび／またはポリビニルピロリドン；所望によりｄ)崩壊剤、例えば、デンプン、寒天、アルギン酸またはそのナトリウム塩、または起沸性混合物；および／またはｅ)吸収剤、着色剤、香味剤および甘味剤と共に含む、錠剤またはゼラチンカプセルであり得る。注射用組成物は、水性等張性溶液または懸濁液であり得て、坐薬は脂肪エマルジョンまたは懸濁液から製造できる。該組成物は滅菌してよくおよび／またはアジュバント、例えば防腐剤、安定化剤、湿潤剤または乳化剤、溶解促進剤、浸透圧調整用塩および／または緩衝剤を含んでよい。加えて、それらはまた他の治療的に価値ある物質を含み得る。経皮適用のための適当な製剤は、有効量の本発明の化合物と担体を含む。担体は、宿主の皮膚を介した通過を助けるための、吸収可能な薬理学的に許容される溶媒を含む。例えば、経皮デバイスは、裏打ち部材、化合物を所望により担体と共に含む貯蔵部、所望により、化合物を宿主の皮膚に長時間にわたる制御されかつ予定された速度で送達するための速度制御バリア、および該デバイスを皮膚に固定するための手段を含むバンデージの形である。マトリックス経皮製剤も使用できる。例えば、皮膚および眼への、適当な局所投与用製剤は、好ましくは当分野で既知の水性溶液、軟膏、クリームまたはゲルである。これらは可溶化剤、安定化剤、張性促進剤、緩衝剤および防腐剤を含み得る。
【００４６】
本発明の化合物は、治療的有効量で１個以上の治療剤と組み合わせて投与できる(医薬組み合わせ剤)。例えば、他の免疫調節性物質、抗炎症性物質または上記疾患の処置に使用される全ての物質と組み合わせたときに、例えばシクロスポリン、ラパマイシン、またはアスコマイシン、またはそれらの免疫抑制性類似体、例えばシクロスポリンＡ(ＣｓＡ)、シクロスポリンＧ、ＦＫ−５０６、ラパマイシン、または同等な化合物、コルチコステロイド、シクロホスファミド、アザチオプリン、メトトレキサート、ブレキナール、レフルノミド、ミゾルビン、ミコフェノール酸、ミコフェノール酸モフェチル、１５−デオキシスペルグアリン、免疫抑制抗体、とりわけ白血球受容体、例えばＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ２５、ＣＤ２８、Ｂ７、ＣＤ４５、ＣＤ５８またはそれらのリガンドに対するモノクローナル抗体、またはＣＴＬＡ４１ｇのような他の免疫抑制性化合物と組み合わせて使用したとき、相乗効果が発生し得る。本発明の化合物を他の治療剤と組み合わせて投与するとき、併用投与する化合物の投与量は、もちろん、用いる併用剤のタイプ、用いる具体的薬剤、処置すべき状態などに依存して変化するであろう。
【００４７】
本発明はまた、ａ)遊離形または薬学的に許容される塩形の本発明の化合物である、第一剤、およびｂ)少なくとも１個の併用剤を含む、医薬組み合わせ剤、例えばキットを提供する。該キットはその投与のための指示書を含んでよい。
【００４８】
本明細書で使用されている“併用投与”または“組み合わせ”などの用語は、選択した治療剤の単独の患者への投与を包含することを意味し、薬剤を必ずしも同じ投与経路でまたは同時に投与するものではない処置レジメンを包含することを意図する。
【００４９】
本明細書で使用する“医薬組み合わせ剤”は、１個を超える活性成分の混合または組み合わせに由来する製品を意味し、活性成分の固定されたおよび固定されてない組み合わせの両方を含む。“固定された組み合わせ”なる用語は、活性成分、例えば式Ｉの化合物および併用剤を、両方とも患者に同時に一つの物または投薬の形態で投与することを意味する。“固定されていない組み合わせ”は、活性成分、例えば式Ｉの化合物および併用剤を、両方とも、患者に別々の物として、同時に、一緒にまたは具体的な時間制限なしに連続的に投与することを意味し、ここで、このような投与は患者体内で２個の化合物治療的に有効なレベルを提供する。後者はまたカクテル療法、例えば、３種以上の活性成分の投与に適用される。
【００５０】
本発明の化合物の製造法
本発明はまた本発明の化合物の製造法を含む。記載の反応において、反応性官能基、例えばヒドロキシ、アミノ、イミノ、チオまたはカルボキシ基を、これらが最終生成物において望まれるとき、反応への望まない参加を避けるために、保護する必要があるかもしれない。慣用の保護基を標準実務に従い使用でき、例えば、T.W. Greene and P. G. M. Wuts in “Protective Groups in Organic Chemistry”, John Wiley and Sons, 1991を参照のこと。
【００５１】
Ｗが−ＮＲ４−である式Ｉの化合物は、下記反応スキームＩにおける通りに進行して、製造できる：
【化３】
2007522241.tif 000004
【００５２】
〔式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびｎは、式Ｉについて発明の概要で定義した通りであり、そしてＹはハロゲン(例えばクロロなど)のような脱離基である。〕。式Ｉａの化合物は、式２の化合物と式３の化合物を、適当な塩基(例えば、カリウム３級ブトキシドおよびジイソプロピルエチルアミンなど)、適当な溶媒(例えば、１,４−ジオキサンおよびブタノールなど)の存在下反応させることにより製造できる。本反応は５０から１３０℃で行い、完了まで４時間までかかり得る。同様に、適当な出発物質を使用して、式３の化合物との反応は、式Ｉｂ、Ｉｃ、ＩｄおよびＩｅの化合物をもたらす。
【００５３】
Ｗが−Ｏ−である式Ｉの化合物は、下記反応スキームIIにおける通りに進行して、製造できる：
【化４】
2007522241.tif 000005
【００５４】
〔式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびｎは、について発明の概要で定義した通りである。〕。式Ｉａの化合物は、式４の化合物と式５の化合物を適当な溶媒(例えば、ＤＭＳＯなど)および適当な塩基(例えば、カリウム３級ブトキシドなど)の存在下反応させることにより製造できる。本反応は５０から１３０℃で行い、完了まで４時間までかかり得る。
【００５５】
式Ｉの化合物の合成の詳述は、下記実施例に見ることができる。
【００５６】
本発明の化合物の製造のための付加的工程
本発明の化合物は、薬学的に許容される酸付加塩として、遊離塩基の形の化合物と、薬学的に許容される無機または有機酸を反応させることにより製造できる。あるいは、本発明の化合物の薬学的に許容される塩基付加塩は、化合物の遊離酸形と、薬学的に許容される無機または有機塩基を反応させることにより製造できる。あるいは、本発明の化合物の塩形態は、出発物質または中間体の塩を使用して製造できる。
【００５７】
本発明の化合物の遊離酸または遊離塩基形態は、対応する塩基付加塩または酸付加塩形態から各々製造できる。例えば酸付加塩形態の本発明の化合物を、適当な塩基(例えば、アンモニウムヒドロキシド溶液、水酸化ナトリウムなど)で処理することにより対応する遊離塩基に変換できる。塩基付加塩形態の本発明の化合物を、適当な酸(例えば、塩酸など)で処理することにより対応する遊離酸に変換できる。
【００５８】
酸化されていない形の本発明の化合物を、本発明の化合物のＮ−オキシドから、適当な不活性有機溶媒(例えばアセトニトリル、エタノール、水性ジオキサンなど)中、０から８０℃で、還元剤(例えば、硫黄、二酸化硫黄、トリフェニルホスフィン、リチウムボロハイドライド、水素化ホウ素ナトリウム、リン三塩化物、三臭化物など)で処理することにより製造できる。
【００５９】
本発明の化合物のプロドラッグ誘導体は、当業者に既知の方法により製造できる(例えば、さらなる詳細は、Saulnier et al., (1994), Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Vol. 4, p. 1985参照)。例えば、適当なプロドラッグを、誘導体化されていない本発明の化合物と、適当なカルバミル化剤(例えば、１,１−アシルオキシアルキルカルバノクロリデート、パラ−ニトロフェニルカーボネートなど)と反応させることにより製造できる。
【００６０】
本発明の化合物の被保護誘導体を、当業者に既知の手段により製造できる。保護基の創成およびそれらの除去に適用できる技術の詳述は、T. W. Greene, “Protecting Groups in Organic Chemistry”, 3rd edition, John Wiley and Sons, Inc., 1999に見ることができる。
【００６１】
本発明の化合物は、簡便には溶媒和物(例えば、水和物)として製造でき、または本発明の工程中に形成される。本発明の化合物の水和物は、簡便には、水性／有機溶媒混合物からの、ジオキシン、テトラヒドロフランまたはメタノールのような有機溶媒を使用した再結晶により製造できる。
【００６２】
本発明の化合物は、それらの個々の立体異性体として、本化合物のラセミ混合物と光学活性分割剤を反応させ、ジアステレオ異性体混合物の対を形成させ、ジアステレオマーを分離し、光学的に純粋なエナンチオマーを回収することにより製造できる。エナンチオマーの分割は電子対を共有した本発明の化合物のジアステレレオマー誘導体を使用して行うことができるが、解離可能な複合体が好ましい(例えば、結晶ジアステレオマー塩)。ジアステレオマーは、異なる物理的特性(例えば、融点、沸点、溶解性、反応性など)を有し、これらの差異を利用して容易に分離できる。ジアステレオマーは、クロマトグラフィーにより、または好ましくは、溶解性の差異に基づいた分離／分割技術により分離できる。光学的に純粋なエナンチオマーを、次いで、ラセミ化をもたらさない任意の実際的手段により、分割剤と共に回収する。化合物の立体異性体のそれらのラセミ混合物からの分離に適用可能な技術のさらなる詳細は、Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, “Enantiomers, Racemates and Resolution”, John Wiley and Sons, Inc., 1981に見ることができる。
【００６３】
要約すると、式Ｉの化合物は下記を含む過程により製造できる：
(ａ)反応スキームＩまたはIIのもの；および
(ｂ)所望により本発明の化合物の薬学的に許容される塩への変換；
(ｃ)所望により塩形態の本発明の化合物の塩ではない形態への変換；
(ｄ)所望により酸化されていない形態の本発明の化合物の薬学的に許容されるＮ−オキシドへの変換；
(ｅ)所望によりＮ−オキシド形態の本発明の化合物のその酸化されていない形態への変換；
(ｆ)所望により本発明の化合物の個々の異性体の異性体混合物からの分割；
(ｇ)所望により誘導体化されていない本発明の化合物の薬学的に許容されるプロドラッグ誘導体への変換；および
(ｈ)所望によりプロドラッグ誘導体の本発明の化合物のその誘導体化されていない形態への変換。
【００６４】
出発物質の製造が具体的に記載されていない限り、該化合物は既知であるか、当分野で既知の方法に準じて、または後記実施例に記載の通りに製造できる。
【００６５】
当業者は、上記の変換が本発明の化合物の製造のための単に代表的な方法であって、他の既知の方法を同様に使用できることを認識しよう。
【００６６】
実施例
本発明を、本発明の式Ｉの化合物(実施例)および中間体(参考例)の製造を説明する下記実施例によりさらに例示するが、限定しない。
【００６７】
実施例１
【化５】
2007522241.tif 000006
５−ブロモ−２−クロロピリミジン−４−イルアミン(１)の合成：５−ブロモ−２,４−ジクロロピリミジン(２５ｇ、１１０mmol)の２００mL  ＴＨＦ溶液を４７mLのアンモニア(３３０mmol、メタノール中７.０Ｍ溶液)で処理する。１５時間撹拌後、溶液を減圧下濃縮し、短濾過(ＳｉＯ２、ヘキサン：酢酸エチル／１：１)により精製し、２１ｇ(９２％)の１を白色固体として得る。
【００６８】
２−クロロ−５−(２−エトキシビニル)−ピリミジン−４−イルアミン(２)の合成：５００mL丸底フラスコに５−ブロモ−２−クロロピリミジン−４−イルアミン(１)(１０ｇ、４８mmol)、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(０)(２.８ｇ、２.５mmol)、およびトルエン(２００mL)を添加する。トリブチル−(２−エトキシビニル)−スタンナン(２２ｇ、６０mmol)を添加し、反応物を１１０℃で撹拌しながら約１５時間撹拌する。室温に冷却後、溶液を１００mL  酢酸エチルで希釈し、水および塩水で洗浄する。有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下濃縮する。カラムクロマトグラフィー(ＳｉＯ２、ヘキサン：酢酸エチル／５：１)による精製により、２(４.４ｇ、４６％)を黄色固体として得る。
【００６９】
２−クロロ−７Ｈ−ピロロ−[２,３−ｄ]ピリミジン(３)の合成：５００mL丸底フラスコに２−クロロ−５−(２−エトキシビニル)−ピリミジン−４−イルアミン２(４.４ｇ、２０mmol)を入れた。イソプロパノール(２００mL)、続いて２５mLの濃塩酸を添加する。溶液を９０℃に温め、２時間撹拌する。室温に冷却後、溶液を減圧下濃縮し、次いで飽和水性ＮａＨＣＯ３でｐＨ９に塩基性化する。水性層を酢酸エチルで抽出し、そして有機抽出物を合わせ、飽和水性ＮａＨＣＯ３および塩水で洗浄する。有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下濃縮する。短濾過(ＳｉＯ２、ヘキサン：酢酸エチル／１：１)による精製により、３(３.１ｇ、９２％)を白色固体として得る。
【００７０】
２−クロロ−７−ピリジン−２−イル−７Ｈ−ピロロ−[２,３−ｄ]ピリミジン(４)の合成：２−クロロ−７Ｈ−ピロロ−[２,３−ｄ]ピリミジン３(０.５３ｇ、３.５mmol)、２−ブロモピリジン(０.６６mL、１.１ｇ、６.９mmol)、ヨウ化銅(Ｉ)(０.２０ｇ、１.０mmol)、ｔｒａｎｓ−１,２−ジアミノシクロヘキサン(０.１２mL、０.１１ｇ、１.０mmol)、およびリン酸カリウム(２.２ｇ、１０mmol)の１０mL  １,４−ジオキサン中の懸濁液を１００℃に温め、４時間撹拌する。反応混合物を室温に冷却し、酢酸エチルで希釈し、水および塩水で洗浄する。有機抽出物をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下濃縮した。カラムクロマトグラフィー(ＳｉＯ２、ヘキサン：酢酸エチル／５：１)による精製により、４(０.６９ｇ、８７％)を白色固体として得る。
【００７１】
(７−ピリジン−２−イル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２−イル)−(３,４,５−トリメトキシ−フェニル)−アミン(５)の合成：
方法１. ２−クロロ−７−ピリジン−２−イル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジンの１,４−ジオキサン溶液を、３,４,５−トリメトキシアニリン(３当量)添加し、続いてカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド溶液(テトラヒドロフラン中１.０Ｍ、３当量)を滴下する。添加後、反応混合物を８０℃で２時間加熱する。溶媒を室温に冷却後に除去する。逆相ＨＰＬＣによる精製により、(７−ピリジン−２−イル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２−イル)−(３,４,５−トリメトキシ−フェニル)−アミンを白色固体として得る。
【００７２】
方法２. ２−クロロ−７−ピリジン−２−イル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン、０.１当量のトリ(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(０)、０.２当量のビフェニル−２−イル−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ホスファン、３当量のリン酸カリウムおよび１.５当量の３,４,５−トリメトキシアニリンを入れた丸底フラスコに窒素を通気し、その後１,４−ジオキサンを添加する。懸濁液を１１０℃で１８時間加熱する。セライトを通した濾過により固体を除去する。濾液を酢酸エチルで希釈し、水および塩水で洗浄する。硫酸マグネシウムで乾燥後、生成物を濃縮し、クロマトグラフィー(酢酸エチル：ヘキサン１：１)により精製して、７−ピリジン−２−イル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２−イル)−(３,４,５−トリメトキシ−フェニル)−アミンを白色固体として得る。
【００７３】
実施例２
３−[２−(３,４,５−トリメトキシ−フェニルアミノ)−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−７−イル]−安息香酸
【化６】
2007522241.tif 000007
３−[２−(３,４,５−トリメトキシ−フェニルアミノ)−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−７−イル]−安息香酸メチルエステルの１Ｎ  水酸化ナトリウム(メタノール：水１：１)溶液を室温で１５時間撹拌する。１Ｎ  塩酸でのｐＨ６までの酸性化により、沈殿を得る。濾過および水での洗浄により、３−[２−(３,４,５−トリメトキシ−フェニルアミノ)−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−７−イル]−安息香酸を白色固体として得る。
【００７４】
実施例３
３−[２−(３,４,５−トリメトキシ−フェニルアミノ)−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−７−イル]−ベンゾイルクロライド
【化７】
2007522241.tif 000008
３−[２−(３,４,５−トリメトキシ−フェニルアミノ)−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−７−イル]−安息香酸を入れた乾燥丸底フラスコに窒素で通気し、ジクロロメタンおよび数滴のＮ,Ｎ’−ジメチルホルムアミドを添加する。塩化オキサリル溶液(ジクロロメタン中２.０Ｍ)を滴下する。反応混合物を室温で３０分撹拌し、溶液の３−[２−(３,４,５−トリメトキシ−フェニルアミノ)−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−７−イル]−ベンゾイルクロライドを得る。
【００７５】
実施例４
Ｎ−メチル−３−[２−(３,４,５−トリメトキシ−フェニルアミノ)−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−７−イル]−ベンズアミド
【化８】
2007522241.tif 000009
３−[２−(３,４,５−トリメトキシ−フェニルアミノ)−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−７−イル]−ベンゾイルクロライドのジクロロメタン溶液に、５当量のメチルアミン溶液(テトラヒドロフラン中２.０Ｍ)を添加する。室温で１時間撹拌後、反応を水でクエンチする。溶媒の除去、続く逆相ＨＰＬＣでの精製により、Ｎ−メチル−３−[２−(３,４,５−トリメトキシ−フェニルアミノ)−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−７−イル]−ベンズアミドを白色固体として得る。
【００７６】
適当な出発物質を使用して、上記実施例の方法を繰り返すことにより、表１に同定する下記式Ｉの化合物を得る。
【表１】
2007522241.tif 000010
【表２】
2007522241.tif 000011
【００７７】
【表３】
2007522241.tif 000012
【表４】
2007522241.tif 000013
【００７８】
【表５】
2007522241.tif 000014
【表６】
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【００７９】
【表７】
2007522241.tif 000016
【表８】
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【００８０】
【表９】
2007522241.tif 000018
【表１０】
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【００８１】
【表１１】
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【表１２】
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【００８２】
【表１３】
2007522241.tif 000022
【表１４】
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【００８３】
【表１５】
2007522241.tif 000024
【表１６】
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【００８４】
【表１７】
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【表１８】
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【００８５】
【表１９】
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【表２０】
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【００８６】
【表２１】
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【表２２】
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【００８７】
【表２３】
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【表２４】
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【００８８】
【表２５】
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【００８９】
アッセイ
本発明の化合物を、ＢＣＲ−Ａｂｌを発現する３２Ｄ細胞(３２Ｄ−ｐ２１０)の細胞増殖を、親３２Ｄ細胞と比較して選択的に阻害するそれらの能力を測定するためにアッセイする。これらのＢＣＲ−Ａｂｌ形質転換細胞の増殖を選択的に阻害する化合物を、Ｂｃｒ−ａｂｌの野生型または変異体型の何れかを発現するＢａ／Ｆ３細胞に対する抗増殖性活性について試験する。加えて、化合物を、ＦＡＫ、Ｆｌｔ−３、ＡＬＫおよびｂ−Ｒａｆを阻害するそれらの能力についてアッセイする。
【００９０】
細胞性ＢＣＲ−Ａｂｌ依存性増殖の阻害(ハイ・スループット法)
使用するマウス細胞系は、ＢＣＲ−Ａｂｌ  ｃＤＮＡで形質転換された３２Ｄ造血前駆細胞系(３２Ｄ−ｐ２１０)である。これらの細胞を、ペニシリン５０μg／mL、ストレプトマイシン５０μg／mLおよびＬ−グルタミン２００mMを添加したＲＰＭＩ／１０％ウシ胎児血清(ＲＰＭＩ／ＦＣＳ)で維持する。非形質転換３２Ｄ細胞を、同様に、ＩＬ３の供給源として１５％のＷＥＨＩ馴化培地を添加して維持する。
【００９１】
５０μlの３２Ｄまたは３２Ｄ−ｐ２１０細胞懸濁液をGreiner  ３８４ウェルマイクロプレート(黒色)に、５０００細胞／ウェルの密度で蒔く。５０nlの試験化合物(ＤＭＳＯ貯蔵溶液中１mM)を各ウェルに添加する(ＳＴＩ５７１をポジティブコントロールとして含む)。細胞を、７２時間、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートする。１０μlの６０％Alamar Blue溶液(Tek diagnostics)を各ウェルに添加し、細胞をさらに２４時間インキュベートする。蛍光強度(励起５３０nm、発光５８０nm)を、AcquestTM system(Molecular Devices)を使用して定量する。
【００９２】
細胞ＢＣＲ−Ａｂｌ依存性増殖の阻害
３２Ｄ−ｐ２１０細胞を、９６ウェルＴＣプレートに１５,０００細胞／ウェルの密度で蒔く。５０μLの２倍連続希釈の試験化合物(Ｃｍａｘは４０μM)を各ウェルに添加する(ＳＴＩ５７１をポジティブコントロールとして含む)。細胞を４８時間、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベーション後、１５μLのＭＴＴ(Promega)を各ウェルに添加し、細胞をさらに５時間インキュベートする。５７０nmでの光学密度を分光光度的に定量し、ＩＣ５０値、５０％阻害に必要な化合物の濃度を用量応答曲線から決定する。
【００９３】
細胞サイクル分布に対する効果
３２Ｄおよび３２Ｄ−ｐ２１０細胞を、６ウェルＴＣプレートに５mlの培地中２.５×１０６細胞／ウェルで蒔き、１または１０μMの試験化合物を添加する(ＳＴＩ５７１をコントロールとして含む)。細胞を次いで２４時間または４８時間、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートする。２mlの細胞懸濁液をＰＢＳで洗浄し、７０％ＥｔＯＨ中に１時間固定し、ＰＢＳ／ＥＤＴＡ／ＲＮａｓｅ  Ａで３０分処置する。ヨウ化プロピジウム(Ｃｆ＝１０μg／ml)を添加し、蛍光強度をFACScaliburTM system(BD Biosciences)のフローサイトメトリーで定量する。本発明の試験化合物は、３２Ｄ−ｐ２１０細胞に対するアポトーシスを示すが、３２Ｄ親細胞においてアポトーシスは誘導しない。
【００９４】
細胞性ＢＣＲ−Ａｂｌ自己リン酸化に対する効果
ＢＣＲ−Ａｂｌ自己リン酸化を、ｃ−ａｂｌ特異的捕捉抗体および抗ホスホチロシン抗体を使用して捕捉Ｅｌｉｓａで定量する。３２Ｄ−ｐ２１０細胞を、９６ウェルＴＣプレートに５０μLの培地中２×１０５細胞／ウェルで蒔く。５０μLの２倍連続希釈の試験化合物(Ｃｍａｘは１０μM)を各ウェルに添加する(ＳＴＩ５７１をポジティブコントロールとして含む)。細胞を９０分、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートする。細胞を、次いで１時間、氷上で、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を含む、１５０μLの溶解緩衝液(５０mM  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７.４、１５０mM  ＮａＣｌ、５mM  ＥＤＴＡ、１mM  ＥＧＴＡおよび１％ＮＰ−４０)で処理する。５０μLの細胞溶解物を、予め抗ａｂｌ特異的抗体で被覆した９６ウェルoptiplateに添加し、ブロックする。プレートを４時間、４℃でインキュベートする。ＴＢＳ−Ｔｗｅｅｎ  ２０緩衝液で洗浄後、５０μLのアルカリホスファターゼ接合抗ホスホチロシン抗体を添加し、プレートを、さらに一晩、４℃でインキュベートする。ＴＢＳ−Ｔｗｅｅｎ  ２０緩衝液で洗浄後、９０μLの発光基質を添加し、発光をAcquestTM system(Molecular Devices)を使用して定量する。ＢＣＲ−Ａｂｌ発現細胞の増殖を阻害する試験本発明の化合物は、細胞ＢＣＲ−Ａｂｌ自己リン酸化を用量依存的方法で阻害する。
【００９５】
細胞性ＢＣＲ−Ａｂｌ自己リン酸化に対する効果
Ｂｃｒ−ａｂｌの変異体型を発現する細胞の増殖に対する効果
本発明の化合物を、ＢＣＲ−Ａｂｌの野生型または、ＳＴＩ５７１に対する耐性または減少した感受性を与える変異体型(Ｇ２５０Ｅ、Ｅ２５５Ｖ、Ｔ３１５Ｉ、Ｆ３１７Ｌ、Ｍ３５１Ｔ)の何れかを発現するＢａ／Ｆ３細胞に対する抗増殖性効果について試験する。これらの化合物の変異体−ＢＣＲ−Ａｂｌ発現細胞および非形質転換細胞に対する抗増殖性効果を、１０、３.３、１.１および０.３７μMで上記の通り試験した(ＩＬ３欠損培地中)。非形質転換細胞に対する毒性がない化合物のＩＣ５０値を、上記の通りに得た用量応答曲線から決定した。
【００９６】
Ｆｌｔ−３阻害
一般的技術は、増殖を変異体Ｆｌｔ３に依存する細胞系対増殖を変異体Ｆｌｔ３に依存しない細胞系に対する、可能性のある阻害剤の効果を比較することを含む。異なる活性(Ｆｌｔ３＋細胞系およびＦｌｔ３細胞系の間の感受性の差が１０倍または以上)を有する化合物をさらなる試験のために選択する。
【００９７】
最初のスクリーニングに使用する細胞系は、適当なＦｌｔ３  ｃＤＮＡを発現するレトロウイルスでの感染後に、変異体または野生型(非変異)Ｆｌｔ３を過剰発現するように操作したＢａ／Ｆ３細胞の亜系統である。親細胞系、Ｂａ／Ｆ３は、増殖をインターロイキン−３に依存し、ＩＬ−３が乏しいとき、該細胞は急速に増殖を止め、死ぬ。レトロウイルスは、レトロウイルスＬＴＲからのＦｌｔ３およびＩＲＥＳ部位からのｎｅｏ遺伝子を発現する。Ｂａ／Ｆ３細胞は、Ｇ４１８が選択され、Ｆｌｔ３発現を蛍光標示式細胞分取(ＦＡＣＳ)により分析する。２個の異なるＦｌｔ３変異を有する細胞系を使用する。一方の変異体は、エクソン１１によりコードされる膜近傍ドメインにおける１４アミノ酸二量体を有するＦｌｔ−３を発現し、具体的二量体は.....ＶＤＦＲＥＹＥＹＤＬＫＷＥＦ....(命名Ｂａ／Ｆ３−Ｆｌｔ３−ＩＴＤ)である。第二の変異体は、８３５位のアスパラギンをチロシンに変える点変異を有する(命名Ｂａ／Ｆ３−Ｆｌｔ３−Ｄ８３５Ｙ)。両方の変異とも、Ｆｌｔ−３キナーゼ活性化をもたらし、それをＩＬ−３に非依存性とし、それを発現する細胞はＩＬ−３非存在下で増殖する。野生型Ｆｌｔ３を発現するＢａ／Ｆ３細胞を同様に産生し、“コントロール”細胞系として使用する。親(非感染)細胞系、および該野生型“コントロール”細胞系は、増殖をＩＬ−３に依存したままである。
【００９８】
Ｂａ／Ｆ３細胞(−コントロール、−Ｆｌｔ３−ＩＴＤ、または−Ｆｌｔ３−Ｄ８３５Ｙ)を、培養培地として１０％ウシ胎児血清添加ＲＰＭＩ  １６４０を有する、３０mL培養中、５００,０００細胞／mLまで培養する。コントロール細胞用培地(しかし変異体−Ｆｌｔ３細胞用ではない)は、ＩＬ−３の供給源としてＷＥＨＩ−３Ｂ細胞系からの１０％馴化培地を含む。各化合物の１０mM“貯蔵”溶液を、ジメチルスルフォキシド(ＤＭＳＯ)中に作製する。次いで１０％ウシ胎児血清添加ＲＰＭＩ  １６４０中に希釈し、典型的に、１nMから１０μMの範囲の最終薬剤濃度を作製する。同様の希釈は、媒体コントロールとして役立つために、ＤＭＳＯ製である。化合物添加４８時間後、細胞を増殖速度および細胞毒性についてアッセイする。
【００９９】
Ｙｏ−Ｐｒｏ−１アイオダイド(Molecular Probes)を、細胞にＮａＣｌ／Ｎａ−クエン酸緩衝液中２.５μMの最終濃度で添加する。細胞をＹｏ−Ｐｒｏと共に１０分、室温でインキュベートし、細胞毒性の測定のために蛍光計で読む。次に、細胞をＮＰ４０／ＥＤＴＡ／ＥＧＴＡ緩衝液で溶解し、室温で９０分インキュベートし、増殖の測定のために読む。
【０１００】
Ｂａ／Ｆ３−Ｆｌｔ３−ＩＴＤ細胞に対して野生型コントロールＢａ／Ｆ３細胞よりも選択的により毒性である化合物を、さらに、Ｆｌｔ３−Ｄ８３５Ｙ発現細胞に対して試験する。
【０１０１】
さらに、α−Ｆｌｔ３抗体を、様々な濃度の活性化合物に暴露する前および後のＦｌｔ３タンパク質を免疫沈降するために使用する。免疫沈降したタンパク質をナトリウムドデシル硫酸ポリアクリルアミドゲルにより分離し、ＰＶＤＦ膜に電気泳動的に移し、α−ホスホ−５９１Ｙ−Ｆｌｔ３抗体と免疫ブロットする。このアッセイは、化合物が、該レセプターの変異体型の特徴であるＦｌｔ３の“自己リン酸化”レベルを低下させるか否か測定する。
【０１０２】
本発明の化合物は、典型的に、ナノモル範囲でＦｌｔ３−ＩＴＤに対する抗増殖性活性を示すが、一方コントロール−Ｆｌｔ３に対して１０μMまで非毒性である。本発明の化合物はまた、ナノモル範囲で細胞性Ｆｌｔ−３の自己リン酸化活性を低下させる。
【０１０３】
局所接着キナーゼ(ＦＡＫ)阻害
本発明の化合物を、ＦＡＫを阻害するそれらの能力について試験する。ＦＡＫキナーゼ活性を、時間分解蛍光共鳴エネルギー移動(ＴＲ−ＦＲＥＴ)ベースのアッセイ法を使用して、３８４ウェルプレートで測定する。全長ヒトＦＡＫを、大腸菌中で、ＧＳＴ標識タンパク質として発現させ、固定化グルタチオンカラムにより精製する。ヒトＦＡＫの自己リン酸化部位配列に対応する、ビオチニル化ペプチド、ビオチン−SETDDYAEIID(Synthesized by SynPep Corp.)を、本アッセイにおける基質として使用する。大腸菌発現ＦＡＫキナーゼ(２.４μg／ml)を、ＦＡＫペプチド(１３３nM)と、１５μlのアッセイ緩衝液(２０mM  Ｈｅｐｅｓ、ｐＨ７.４、５mM  ＭｇＣｌ２、２mM  ＭｎＣｌ２、０.５mM  Ｎａ３ＶＯ４、０.１％ＢＳＡ、０.１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００)中で混合する。本発明の化合物(０.５μl−ＤＭＳＯ中に溶解)を次いで該酵素／ペプチド溶液に添加する。室温で１０分インキュベーション後、５μlのアッセイ緩衝液中４０μM  ＡＴＰを添加し、反応を開始させる。反応混合物を室温で２時間インキュベートする。検出緩衝液(１０mM  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７.４、６mM  ＥＤＴＡ、０.１％ＢＳＡ、０.１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００)中に０.１５nMのＥｕ標識抗ホスホチロシン抗体(ＰＴ６６−Ｅｕ、PerkinElmer)および１.５μg／mlのＳＡ−ＡＰＣ(PerkinElmer)を含む５０μlの検出試薬を、次いで添加する。混合物を室温で３０分インキュベートし、ＴＲ−ＦＲＥＴシグナルを、Acquest plate reader(Molecular Device)を使用して測定する。
【０１０４】
ＡＬＫ阻害
ＡＬＫチロシンキナーゼ活性の阻害は、既知法を使用して、例えばJ. Wood et al. Cancer Res. 60, 2178-2189(2000)に記載のＶＥＧＦ−Ｒキナーゼアッセイに準じて、ＡＬＫの組み換えキナーゼドメインを使用して証明できる。ＧＳＴ−ＡＬＫタンパク質チロシンキナーゼを使用するインビトロ酵素アッセイを、９６ウェルプレート中、フィルター結合アッセイとして、２０mM  Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ、ｐＨ＝７.５、３mM  ＭｇＣｌ２、１０mM  ＭｎＣｌ２、１mM  ＤＴＴ、０.１μCi／アッセイ(＝３０μl)[γ−３３Ｐ]−ＡＴＰ、２μM  ＡＴＰ、３μg／ml  ポリ(Ｇｌｕ、Ｔｙｒ  ４：１)Poly-EY(Sigma P-0275)、１％ＤＭＳＯ、２５ng  ＡＬＫ酵素中で行う。アッセイを、１０分、環境温度でインキュベートする。反応を、５０μlの１２５mM  ＥＤＴＡの添加により停止させ、反応混合物を予めメタノールで湿らせたMAIP Multiscreen plate(Millipore, Bedford, MA, USA)上に移し、および５分、Ｈ２Ｏで再水和する。洗浄(０.５％Ｈ３ＰＯ４)に続き、プレートを液体シンチレーションカウンター中で計数する。ＩＣ５０値を、阻害パーセントの直線回帰分析により計算する。阻害剤なしのコントロールと比較して、式Ｉの化合物は、例えば０.００１から０.５μM、とりわけ０.０１から０.１μMの濃度で酵素活性を５０％阻害する(ＩＣ５０)。
【０１０５】
式Ｉの化合物は、ヒトＮＰＭ−ＡＬＫ過剰発現マウスＢａＦ３細胞の増殖を強力に阻害する(DSMZ Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Germany)。ＮＰＭ−ＡＬＫの発現は、ＢａＦ３細胞系を、ＮＰＭ−ＡＬＫをコードする発現ベクターｐＣＩｎｅｏTM(Promega Corp., Madison WI, USA)でトランスフェクトし、続いてＧ４１８耐性細胞を選択することにより達成する。非トランスフェクトＢａＦ３細胞は、細胞生存をＩＬ−３に依存する。対照的に、ＮＰＭ−ＡＬＫ発現ＢａＦ３細胞(以後、命名ＢａＦ３−ＮＰＭ−ＡＬＫ)は、それらがＮＰＭ−ＡＬＫキナーゼを介して増殖性シグナルを得るため、ＩＬ−３非存在下で増殖できる。従って、ＮＰＭ−ＡＬＫキナーゼの推定阻害剤は増殖シグナルをなくし、抗増殖性活性をもたらす。ＮＰＭ−ＡＬＫキナーゼの推定阻害剤の抗増殖性活性は、しかしながら、ＮＰＭ−ＡＬＫ非依存性機構を介して増殖シグナルを提供するＩＬ−３の添加により打ち消され得る。[ＦＬＴ３キナーゼを使用した類似の細胞系について、E Weisberg et al. 癌 Cell;1, 433-443(2002)参照]。式Ｉの化合物の阻害活性は、簡単に言うと、下記の通り測定できる：ＢａＦ３−ＮＰＭ−ＡＬＫ細胞(１５,０００／マイクロタイタープレートウェル)を、９６ウェルマイクロタイタープレートに移す。試験化合物[ジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)に溶解]を、ＤＭＳＯの最終濃度が１％(ｖ／ｖ)を超えないような方法での一連の濃度(希釈シリーズ)で添加する。添加後、プレートを２日間インキュベートし、その間、試験化合物なしのコントロール培養は、２回の細胞分割サイクルを経験する。ＢａＦ３−ＮＰＭ−ＡＬＫ細胞の増殖を、YoproTM染色の手段により測定する[T Idziorek et al. J. Immunol. Methods;185:249-258(1995)]：２０mM  クエン酸ナトリウム、ｐＨ４.０、２６.８mM  塩化ナトリウム、０.４％ＮＰ４０、２０mM  ＥＤＴＡおよび２０mMから成る２５μlの溶解緩衝液を各ウェルに添加する。細胞溶解が室温で６０分以内に完了し、ＤＮＡに結合したYoproの総量を、Cytofluor II 96 well reader(PerSeptive Biosystems)で下記設定を使用して測定する：励起(nm)４８５／２０および発光(nm)５３０／２５。
【０１０６】
ＩＣ５０値を式：
ＩＣ５０＝[(ＡＢＳ試験−ＡＢＳ開始)／(ＡＢＳコントロール−ＡＢＳ開始)]×１００。
(ＡＢＳ＝吸収)
を使用したコンピュータを利用したシステムにより決定する。
【０１０７】
これらの実験におけるＩＣ５０値を、阻害剤なしのコントロールを使用したときに得られるよりも５０％低い細胞数をもたらす、当該試験化合物の濃度として提供する。式Ｉの化合物は、約０.０１から１μMの範囲のＩＣ５０で阻害活性を示す。
【０１０８】
式Ｉの化合物の抗増殖性作用はまたヒトＫＡＲＰＡＳ−２９９リンパ腫細胞系(DSMZ Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Germany)[described in WG Dirks et al. Int. J. Cancer 100, 49-56(2002)]において、ＢａＦ３−ＮＰＭ−ＡＬＫ細胞系について上記のものと同じ方法を使用して測定できる。式Ｉの化合物は、約０.０１から１μMの範囲のＩＣ５０で阻害活性を示す。
【０１０９】
ＡＬＫの自己リン酸化に対する式Ｉの化合物の作用を、ヒトＫＡＲＰＡＳ−２９９リンパ腫細胞系において、WG Dirks et al. Int. J. Cancer 100, 49-56(2002)に記載の通りの免疫ブロットの手段により測定できる。その試験において、式Ｉの化合物は、約０.００１から１μMのＩＣ５０を示す。
【０１１０】
Upstate Kinase ProfilerTM−放射酵素フィルター結合アッセイ
本発明の化合物を、一群のキナーゼ(キナーゼの部分的、非限定的リストは下記を含む：ＦＡＫ、Ａｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＰＤＧＦ−Ｒ、ｃ−Ｋｉｔ、ＮＰＭ−ＡＬＫ、Ｆｌｔ−３、ＪＡＫ２およびｃ−Ｍｅｔ)の個々のメンバーを阻害するそれらの能力について評価する。化合物を、デュプリケートで１０μMの最終濃度で、この一般的プロトコールに従い試験する。キナーゼ緩衝剤組成および基質は、“Upstate Kinase ProfilerＴＭ”パネルに含まれるキナーゼの異なるキナーゼに関して変化する化合物を、デュプリケートで１０μMの最終濃度で、この一般的プロトコールに従い試験する。キナーゼ緩衝剤組成および基質は、“Upstate Kinase ProfilerＴＭ”パネルに含まれるキナーゼの異なるキナーゼに関して変化する。キナーゼ緩衝液(２.５μL、１０×−必要時ＭｎＣｌ２含有)、活性キナーゼ(０.００１−０.０１単位；２.５μL)、キナーゼ緩衝液中の特異的またはポリ(Ｇｌｕ４−Ｔｙｒ)ペプチド(５−５００μMまたは.０１mg／ml)およびキナーゼ緩衝液(５０μM；５μL)を氷上、エッペンドルフ中で混合する。Ｍｇ／ＡＴＰ混合物(１０μL；６７.５(または３３.７５)mM  ＭｇＣｌ２、４５０(または２２５)μM  ＡＴＰおよび１μCi／μl  [γ−３２Ｐ]−ＡＴＰ(３０００Ci／mmol))を添加し、反応物を約３０℃で約１０分インキュベートする。反応混合物を２cm×２cm  Ｐ８１(ホスホセルロース、正に荷電したペプチド基質のために)またはWhatman No. 1(ポリ(Ｇｌｕ４−Ｔｙｒ)ペプチド基質のために)紙片上にスポット(２０μL)する。アッセイ紙片を４回、各５分、０.７５％リン酸で洗浄し、１回アセトンで５分洗浄する。アッセイ紙片をシンチレーションバイアルに移し、５ml  シンチレーションカクテルを添加し、ペプチド基質への３２Ｐ取り込み(cpm)をBeckmanシンチレーションカウンターで計数する。阻害パーセントを各反応について計算する。式Ｉの化合物は、１０μMの濃度で、好ましくは５０％を超える、好ましくは６０％を超える、より好ましくは７０％を超える阻害パーセントを、ＦＡＫ、Ａｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＰＤＧＦ−Ｒ、ｃ−Ｋｉｔ、ＮＰＭ−ＡＬＫ、Ｆｌｔ−３、ＪＡＫ２および／またはｃ−Ｍｅｔキナーゼに対して示す。
【０１１１】
遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物は、例えば、本明細書に記載のインビトロ試験により示される通り、価値ある薬理学的特性を示す。例えば、式Ｉの化合物は、好ましくは１×１０−１０から１×１０−５Ｍの範囲、より好ましくは５００nM未満のＩＣ５０を、下記キナーゼの少なくとも１個に対して示す：ＦＡＫ、Ａｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＰＤＧＦ−Ｒ、ｃ−Ｋｉｔ、ＮＰＭ−ＡＬＫ、Ｆｌｔ−３、ＪＡＫ２およびｃ−Ｍｅｔキナーゼ。例えば：
【０１１２】
(ｉ)Ｎ−(２−ジメチルアミノ−エチル)−３−[２−(３,４,５−トリメトキシ−フェニルアミノ)−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−７−イル]−ベンズアミド(実施例７３)はＦＡＫに３８nMのＩＣ５０を有する。
【０１１３】
(ii)｛３−[２−(３,４,５−トリメトキシ−フェニルアミノ)−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−７−イル]−フェニル｝−アセトニトリル(実施例１０４)は、ＦＬＴ３−ＩＴＤ、ＦＧＦＲ３、ＪＡＫ２、ＰＤＧＦＲ−ベータ、およびＴｅｌ−ＴＲＫＣの各々に、２９nM、２８２nM、３４２nM、３３nM、および４７９nMのＩＣ５０を示す。
【０１１４】
(iii)｛７−[３−(１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イルメチル)−フェニル]−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２−イル｝−(３,４,５−トリメトキシ−フェニル)−アミン(実施例１２０)は、ＢａＦ３／ＰＤＧＦＲ−ベータに２９nMのＩＣ５０を示す。
【０１１５】
(iv)３−｛３−[２−(３,４,５−トリメトキシ−フェニルアミノ)−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−７−イル]−フェニル｝−プロピオニトリル(実施例８５)は、ＦＬＴ３−ＩＴＤに１６nMのＩＣ５０を示す。
【０１１６】
(ｖ)(７−ピリジン−２−イル−６,７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２−イル)−(３,４,５−トリメトキシ−フェニル)−アミン(実施例６１)は、ＦＧＦＲ３に２８４nMのＩＣ５０を示す。
【０１１７】
(vi)[７−(２−クロロ−ピリジン−４−イル)−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２−イル]−(４−メトキシ−２−メチル−フェニル)−アミン(実施例４７)は、ＢＣＲ−Ａｂｌに４０８nMのＩＣ５０を示す。
【０１１８】
本明細書に記載の実施例および態様は説明の目的のためのみであり、それに照らして当業者には様々な修飾または変化が示唆され、そしてそれらは、本明細書の精神および範囲内および添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれるべきであることが、理解されるべきである。本明細書に記載の全ての刊行物、特許および特許出願は、本明細書に、全ての目的について引用により包含させる。
【国際調査報告】
2007522241.tif 000037