(57)【要約】  ＭｅｔＡＰ結晶構造を開示する。細菌感染の治療に有用な細菌性メチオニンアミノペプチダーゼの阻害物質およびこのアミノペプチダーゼの阻害物質を同定する方法ならびに特定の構造および空間特性を有する阻害物質を用いるＭｅｔＡＰの阻害方法も開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
結晶形態の細菌性ＭｅｔＡＰを含む、組成物。
【請求項２】
該ＭｅｔＡＰがスタフィロコッカス・アウレウスＭｅｔＡＰである、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
結晶形態が表Ｉに示される三次元蛋白座標で特定される本質的に純粋な形態またはその相同的な形態の請求項２記載の組成物。
【請求項４】
該結晶形態が空間群１２３の立方晶を含む、請求項２記載の組成物。
【請求項５】
該立方晶がａ＝１２１．３６オングストローム（Å）の格子定数を含む、請求項４記載の組成物。
【請求項６】
該結晶形態が空間群Ｐ２１の単斜晶を含む、請求項２記載の組成物。
【請求項７】
該単斜晶がａ＝４１．１９Å、ｂ＝７６．７８Åおよびｃ＝４１．７１Åで、β＝１０４．１６５°を含む、請求項６記載の組成物。
【請求項８】
スタフィロコッカス・アウレウスＭｅｔＡＰとＭｅｔＡＰ阻害物質とを複合して含む、組成物。
【請求項９】
該ＭｅｔＡＰ阻害物質が１，２，３−トリアゾールである、請求項８記載の組成物。
【請求項１０】
ＭｅｔＡＰ阻害物質が５−（３−ヨード−フェニル）−１−Ｈ−［１，２，３］トリアゾールおよび５−ベンゾフラン−２−イル−１−Ｈ−［１，２，３］トリアゾールからなる群より選択される、請求項８記載の組成物。
【請求項１１】
該ＭｅｔＡＰがストレプトコッカス・ニューモニエＭｅｔＡＰである、請求項１記載の組成物。
【請求項１２】
結晶形態が表ＶＩＩＩに示される三次元蛋白座標で特定される本質的に純粋な形態またはその相同的な形態の請求項１１記載の組成物。
【請求項１３】
該結晶形態が結晶群Ｐ２１２１２１の斜方晶を含む、請求項１１記載の組成物。
【請求項１４】
該斜方晶がａ＝５６．７７Å、ｂ＝６９．１６Å、ｃ＝８０．５１Åの格子定数を含む、請求項１１記載の組成物。
【請求項１５】
ストレプトコッカス・ニューモニエＭｅｔＡＰとＭｅｔＡＰ阻害物質とを複合して含む、組成物。
【請求項１６】
該ＭｅｔＡＰ阻害物質が１，２，３−トリアゾールである、請求項１５記載の組成物。
【請求項１７】
スタフィロコッカス・アウレウスＭｅｔＡＰ結晶の構造座標またはその部分を用い、変異体、相同体の結晶構造、または分子置換により結合ポケットまたは活性部位の共同−複合体を決定することにより、細菌性ＭｅｔＡＰ結晶を測定する方法。
【請求項１８】
ストレプトコッカス・ニューモニエＭｅｔＡＰ結晶の構造座標またはその部分を用い、変異体、相同体の結晶構造、または分子置換により結合ポケットまたは活性部位の共同−複合体を決定することにより、細菌性ＭｅｔＡＰ結晶を測定する方法。
【請求項１９】
細菌性ＭｅｔＡＰと結合し、その酵素活性の阻害能を有する細菌性ＭｅｔＡＰ阻害物質を同定する方法であって、
（ａ）ＭｅｔＡＰ結晶座標により特定され、表ＩないしＸにて列挙されている立体構造を含むＭｅｔＡＰ分子の活性部位立体構造を特定する情報を適当なコンピュータープログラムに導入する：ここで、当該プログラムは三次元構造を表示し；
（ｂ）試験化合物の三次元構造を該コンピュータープログラムにて創作し；
（ｃ）該試験化合物のモデルを表示して該活性部位のモデルに重ね合わせ；
（ｄ）該試験化合物を該活性部位により特徴付けられるメチオニンアミノペプチダーゼについての生物学的メチオニンアミノペプチド活性アッセイに組み込み；
（ｅ）該試験化合物が該アッセイにおいて酵素活性を阻害するかどうかを測定する
ことを含む、方法
【請求項２０】
結晶形態のＭｅｔＡＰの原子座標を用いて、コンピューターによりＭｅｔＡＰ酵素の活性部位と関連する化合物を評価し、細菌性ＭｅｔＡＰ活性の阻害物質を設計する方法。
【請求項２１】
試験対象の細菌性試験ＭｅｔＡＰポリペプチドを修飾する方法であって、
修飾の標的とされる特性を有する試験対象の細菌性ＭｅｔＡＰポリペプチドの配列を準備し；
その試験対象の細菌性ＭｅｔＡＰポリペプチド配列を、Ｘ−線構造が利用可能である対照となる細菌性ＭｅｔＡＰポリペプチド配列と並べ、ここで対照となる細菌性ＭｅｔＡＰポリペプチド配列は試験対象の細菌性ＭｅｔＡＰポリペプチドに対して望ましい特性を有し；
対照となる細菌性ＭｅｔＡＰポリペプチドのＸ−線構造の三次元座標および試験対象の細菌性ＭｅｔＡＰポリペプチド配列との配列アライメントを用いて試験対象の細菌性ＭｅｔＡＰポリペプチドの三次元モデルを作製し；
試験対象の細菌性ＭｅｔＡＰポリペプチドの三次元モデルを、対照となる細菌性ＭｅｔＡＰポリペプチドと比較した場合のアミノ酸残基の違いについて試験し、ここで該残基は所望の特性と関連しており；および
工程（ｄ）にて同定された違いのある位置での試験対象の細菌性ＭｅｔＡＰポリペプチド配列のアミノ酸残基を所望の特性と関連する残基に変異させ、それにより試験対象となるＭｅｔＡＰポリペプチドを修飾する；
ことを含む、方法。
【請求項２２】
細菌性メチオニンアミノペプチダーゼを阻害する必要のある個体の処理方法であって、細菌性ＭｅｔＡＰ酵素の活性部位に結合するか、それを相互作用する医薬的に有効な量の化合物を該個体に投与することを含む、方法。
【請求項２３】
ＭｅｔＡＰ結晶の構造座標を用い、ＭｅｔＡＰの部位と結合する阻害物質に関連する化合物をコンピューターを用いて評価することを含む、薬剤の設計方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は新規な細菌性メチオニンアミノペプチダーゼ（以下、「ＭｅｔＡＰ」という）結晶構造の同定に関する。特に、結晶構造の新規なメチオニンアミノペプチダーゼ活性部位および阻害物質と複合した結晶構造の活性部位、ならびにこれら結晶形態およびその活性部位を用いてメチオニンアミノペプチダーゼ阻害物質の化合物を同定かつ改良する方法、とりわけ使用方法を提供する。これらの化合物は基質など−分子のＭｅｔＡＰ、アミノペプチダーゼファミリーのメンバーの活性部位との結合を競合的に阻害する能力により特徴付けられる。
【０００２】
（背景技術）
メチオニンアミノペプチダーゼはすべての生物において普遍的に分布する。該酵素は二価の金属イオンを共同因子として用い、新たに翻訳されたポリペプチドから開始物質のメチオニンを除去する触媒として作用する。２種類の関連のほとんどないＭｅｔＡＰ酵素、１型および２型が真核動物にて見つかっており、そのうち少なくとも酵母においては、共に正常な増殖に不可欠であるのに対して、これまでに一のＭｅｔＡＰが真正細菌（１型）および始原細菌（２型）にて知られている。Ｎ−末端伸長領域で、真核生物のＭｅｔＡＰは原核生物のＭｅｔＡＰと区別される。触媒性Ｃ−末端ドメインにおける６４−アミノ酸配列挿入部（ｈＭｅｔＡＰ２の残基３８１から４４４まで）でＭｅｔＡＰ−２ファミリーはＭｅｔＡＰ−１ファミリーと区別される。この遺伝子構造の違いにも拘わらず、ＭｅｔＡＰ酵素は金属共同因子の調整に関与する６個の厳格に保存されている残基を含有する「ピターブレッド（pita-bread）」ホールド（Bazanら、（１９９４）Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. ９１、２４７３）と称される高度に保存された触媒性骨格を共有するようである。
【０００３】
細菌におけるＮ−末端メチオニンの除去は、隣接するアミノ酸が小さい場合（例えば、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、ＣｙｓおよびＶａｌの場合）、まずポリペプチドデホルミラーゼでＮ−ホルミル基を除去し、つづいてＮ−末端メチオニンを切断する２工程のプロセスを必要とする。これらの工程は共に細胞の生存を要件とするようである。Ｎ−末端メチオニンを除去できないと、不活性な酵素（例えば、グルタミンホスホリボシルピロホスフェートアミドトランスフェラーゼおよびＮ−末端求核加水分解酵素）となりうる。したがって、ＭｅｔＡＰを阻害すること、または他に調整することは細胞プロセスの変更に関与する不可欠な酵素の作用を阻害あるいはまた調整する広範囲に及ぶ効果を有する可能性がある。
【０００４】
ＭｅｔＡＰはインビトロにおける細菌の増殖に不可欠であることが証明されており（Changら、（１９８９）J. Bacteriol. １７１、４０７１およびMillerら、（１９８９）J. Bacteriol. １７１、５２１５）、原核生物にて明らかに普遍的に保存されているため、当該酵素は魅力的な抗菌標的である。このことは当該標的に拮抗する阻害物質または他の調整剤が広域スペクトル薬剤であり、細菌を死滅させるであろうことを示すものである。さらには、この発明はこの遺伝子がスタフィロコッカス・アウレウスによる大腿部の病変にて、および腎盂腎炎の感染モデルにて、ならびにストレプトコッカス・ニューモニエによる初期および後期のネズミ気道感染にて転写されうることを提供する。これらの実験はこのプロセスの感染における重要性を示している。
【０００５】
（発明の開示）
一の態様において、本発明はメチオニンアミノペプチダーゼ（以下、「ＭｅｔＡＰ」という）結晶構造、例えば、エス・アウレウスまたはエス・ニューモニエから由来の結晶形態のＭｅｔＡＰに関する。
もう一つ別の態様において、本発明はＭｅｔＡＰ阻害物質または他の調節物質、例えばトリアゾール、例えば１，２，３−トリアゾールと複合したエス・アウレウスメチオニンアミノペプチダーゼの結晶形態を提供する。
もう一つ別の態様において、本発明は阻害物質または他の調節物質、５−ベンゾフラン−２−イル−１−Ｈ−［１，２，３］トリアゾールまたは５−（３−ヨード−フェニル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾールと複合したエス・アウレウスメチオニンアミノペプチダーゼの結晶形態を提供する。
【０００６】
さらにもう一つ別の態様において、本発明はアミノペプチダーゼ阻害物質またはＭｅｔＡＰを介する他の調節物質の結合に関与する活性部位における残基の決まりを提供する。
さらにもう一つ別の態様において、本発明はＭｅｔＡＰの活性部位中に空間的に嵌合する化合物をそれを必要とする哺乳動物に投与することを含む、細菌性ＭｅｔＡＰの活性を調節する方法を提供する。
さらにもう一つ別の態様において、本発明はアミノ酸残基の位置および阻害物質または他の調節物質に関するこれらの残基に結合する金属の位置を同定するための構造的基礎ならびにＭｅｔＡＰの阻害物質または他の調節物質を同定する方法を提供する。
【０００７】
本発明の他の態様は単独あるいは阻害物質または他の調節物質と複合したＭｅｔＡｐ結晶構造の三次元構造の座標を示すデータでコード化された機械読取可能媒体を含む。
本発明のさらなる態様は、表Ｉの三次元蛋白座標で定義される、実質的に純粋な形態のスタフィロコッカス・アウレウスＭｅｔＡＰまたはその相同体を提供する。
本発明のもう一つ別の態様は、その結晶形態が空間群１２３の立方体構造を含むところの、スタフィロコッカス・アウレウスＭｅｔＡＰを包含する。
さらにもう一つ別の態様において、本発明は、立方体結晶がａ＝約１２１．３６オングストローム（Å）の格子定数を含むところの、スタフィロコッカス・アウレウスＭｅｔＡＰを提供する。
本発明のもう一つ別の態様は、ＭｅｔＡＰ結晶形態が、空間群Ｐ２１で、ａ＝約４１．１９Å、ｂ＝約７６．７８Å、ｃ＝約４１．７１Å、β＝１０４．１６５°の格子定数の単斜結晶を含むところの、スタフィロコッカス・アウレウスＭｅｔＡＰを包含する。
本発明のもう一つ別の態様は、ＭｅｔＡＰ結晶形態が、ＭｅｔＡＰ阻害物質または他の調節物質、例えば、５−（３−ヨード−フェニル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾールまたは５−ベンゾフラン−２−イル−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾールと複合しているところの、スタフィロコッカス・アウレウスＭｅｔＡＰを包含する。
【０００８】
本発明のさらなる態様は、表ＶＩＩＩの三次元蛋白座標で定義される、実質的に純粋な形態のストレプトコッカス・ニューモニエＭｅｔＡＰまたはその相同体を提供する。
本発明のもう一つ別の態様は、結晶形態が空間群Ｐ２１２１２１の斜方晶を含むところの、ストレプトコッカス・ニューモニエＭｅｔＡＰであって、該斜方晶がａ＝約５６．７７Å、ｂ＝約６９．１６Åおよびｃ＝約８０．５１Åの格子定数を含む結晶を包含する。
さらにもう一つ別の態様において、本発明は、ＭｅｔＡＰ阻害物質または他の調節物質、例えば、１，２，３−トリアゾールなどのトリアゾールと複合している、ストレプトコッカス・ニューモニエＭｅｔＡＰを提供する。
【０００９】
本発明のもう一つ別の態様は、変異体、相同体または結合ポケットの共同複合体または分子置換による活性部位の結晶構造を決定するために、スタフィロコッカス・アウレウスＭｅｔＡＰ結晶またはその部分の構造座標を用いることで他の細菌または種の細菌性ＭｅｔＡＰ結晶形態を決定する方法を包含する。
本発明のもう一つ別の態様は、変異体、相同体または結合ポケットの共同複合体または分子置換による活性部位の結晶構造を決定するために、ストレプトコッカス・ニューモニエＭｅｔＡＰ結晶またはその部分の構造座標を用いることで他の細菌または種の細菌性ＭｅｔＡＰ結晶形態を決定する方法を包含する。
【００１０】
本発明のさらなる態様は、細菌性ＭｅｔＡＰと結合し、その酵素活性の阻害能を有するか、さもなければ該活性の調節能を有する細菌性ＭｅｔＡＰ阻害物質または他の調節物質を同定する方法であって、
結晶座標により特定され、表ＩないしＸにて列挙されている立体構造を含むＭｅｔＡＰ分子の活性部位立体構造を特定する情報を適当なコンピュータープログラムに導入する：ここで、当該プログラムは三次元構造を表示し；
試験化合物の三次元構造を該コンピュータープログラムにて創作し；
該試験化合物のモデルを表示して該活性部位のモデルに重ね合わせ；
該試験化合物を該活性部位により特徴付けられるメチオニンアミノペプチダーゼについての生物学的メチオニンアミノペプチド活性アッセイに組み込み；
該試験化合物が該アッセイにおいて酵素活性を阻害するかどうか、さもなければ調節するかどうかを測定する
ことを含む、方法を提供する。
【００１１】
本発明のもう一つ別の態様は、ＭｅｔＡＰ活性の阻害物質または他の調節物質を結晶形態の細菌性ＭｅｔＡＰの原子座標を用いて設計し、化学物質とＭｅｔＡＰ酵素の活性部位との結合をコンピューターで評価する方法を包含する。
【００１２】
もう一つ別の態様において、本発明は、試験対象の細菌性ＭｅｔＡＰポリペプチドを修飾する方法であって、
修飾の標的とされる特性を有する試験対象の細菌性ＭｅｔＡＰポリペプチドの配列を準備し；
その試験対象の細菌性ＭｅｔＡＰポリペプチド配列を、Ｘ−線構造が利用可能である対照となる細菌性ＭｅｔＡＰポリペプチド配列と並べ、ここで対照となる細菌性ＭｅｔＡＰポリペプチド配列は試験対象の細菌性ＭｅｔＡＰポリペプチドに対して望ましい特性を有し；
対照となる細菌性ＭｅｔＡＰポリペプチドのＸ−線構造の三次元座標および試験対象の細菌性ＭｅｔＡＰポリペプチド配列との配列アライメントを用いて試験対象の細菌性ＭｅｔＡＰポリペプチドの三次元モデルを作製し；
試験対象の細菌性ＭｅｔＡＰポリペプチドの三次元モデルを、対照となる細菌性ＭｅｔＡＰポリペプチドと比較した場合のアミノ酸残基の違いについて試験し、ここで該残基は所望の特性と関連しており；および
工程（ｄ）にて同定された違いのある位置での試験対象の細菌性ＭｅｔＡＰポリペプチド配列のアミノ酸残基を所望の特性と関連する残基に変異させ、それにより試験対象となるＭｅｔＡＰポリペプチドを修飾する；
ことを含む、方法を提供する。
【００１３】
本発明のもう一つ別の態様は、細菌性メチオニンアミノペプチダーゼを阻害するか、あるいは調節する必要のある個体を治療する方法であって、一定量の、例えば、治療的に有効な量の、細菌性ＭｅｔＡＰ酵素の活性部位に結合するか、その構造を改変するか、あるいは該活性部位と相互作用する化合物を個体に投与することを含む方法を提供する。さらなる実施形態において、一の化合物は５−（３−ヨード−フェニル）−１−Ｈ−［１，２，３］トリアゾールおよび５−ベンゾフラン−２−イル−１−Ｈ−［１，２，３］トリアゾールならびにその医薬上活性な塩または溶媒和物からなる群より選択される。
さらにもう一つ別の態様において、本発明は、ＭｅｔＡＰ結晶の構造座標を用い、ＭｅｔＡＰの結合部位と結合するか、または該部位を調節する物質と結合する化合物をコンピューターを用いて評価することを含む薬物の設計方法を提供する。
【００１４】
本発明のさらなる態様は、細菌性メチオニンアミノペプチダーゼの活性を調節する方法であって、メチオニンアミノペプチダーゼを、細菌性ＭｅｔＡＰ酵素の活性部位と結合するか、該活性部位の構造を改変するか、または該部位と相互作用する化合物と接触させることを含む方法を提供する。さらなる実施形態において、一の化合物は５−（３−ヨード−フェニル）−１−Ｈ−［１，２，３］トリアゾールおよび５−ベンゾフラン−２−イル−１−Ｈ−［１，２，３］トリアゾールならびにその医薬上活性な塩または溶媒和物からなる群より選択される。本発明のさらなる態様は、細菌性メチオニンアミノぺプチダーゼの活性を調節する方法であって、メチオニンアミノペプチダーゼを、表Iに示される蛋白座標（複数でも可）で特定されるアミノ酸残基（複数でも可）と結合し、複合体を形成し、調和し、および／または共同して結晶化する活性；空間群１２３を含む立方体結晶からなるスタフィロコッカス・アウレウスＭｅｔＡＰ結晶形態と結合し、複合体を形成し、調和し、および／または共同して結晶化する活性；ａ＝約１２１．３６オングストローム（Å）の格子定数からなるスタフィロコッカス・アウレウスＭｅｔＡＰ立方体結晶と結合し、複合体を形成し、調和し、および／または共同して結晶化する活性；空間群Ｐ２１で、ａ＝約４１．１９Å、ｂ＝約７６．７８Åおよびｃ＝約４１．７１Å、β＝１０４．１６５°の格子定数のモノクリニック結晶を含むスタフィロコッカス・アウレウスＭｅｔＡＰ結晶形態と結合し、複合体を形成し、調和し、および／または共同して結晶化する活性；表ＶＩＩＩに示される蛋白座標（複数でも可）で特定されるアミノ酸残基（複数でも可）と結合し、複合体を形成し、調和し、および／または共同して結晶化する活性；空間群Ｐ２１２１２１の斜方晶を含むストレプトコッカス・ニューモニエＭｅｔＡＰ結晶形態と結合し、複合体を形成し、調和し、および／または共同して結晶化する活性であって、該オルトロンビック結晶がａ＝約５６．７７Å、ｂ＝約６９．１６Åおよびｃ＝約８０．５１Åの格子定数を含むところの活性；ＭｅｔＡＰ阻害物質または他の調節物質と複合してストレプトコッカス・ニューモニエＭｅｔＡＰと結合し、複合体を形成し、調和し、および／または共同して結晶化する活性；および細菌性ＭｅｔＡＰ酵素と結合し、複合体を形成し、調和し、および／または共同して結晶化する活性からなる群より選択される活性を含む化合物と接触させることを含む方法を提供する。
【００１５】
本発明のさらなる実施形態は、細菌性メチオニンアミノペプチダーゼの活性を調節する化合物または該化合物を含む組成物であって、該活性が細菌性ＭｅｔＡＰ酵素の活性部位と結合するか、該活性部位の構造を改変するか、または該部位と相互作用することを含み、一の化合物が５−（３−ヨード−フェニル）−１−Ｈ−［１，２，３］トリアゾールおよび５−ベンゾフラン−２−イル−１−Ｈ−［１，２，３］トリアゾールならびにその医薬上活性な塩または溶媒和物からなる群より選択されるところの、化合物または組成物を提供する。
【００１６】
本発明のさらなる態様は、細菌性メチオニンアミノぺプチダーゼの活性を調節する化合物または該化合物を含む組成物であって、該活性が：表Iに示される蛋白座標（複数でも可）で特定されるアミノ酸残基（複数でも可）と結合し、複合体を形成し、調和し、および／または共同して結晶化する活性；空間群１２３を含む立方体結晶からなるスタフィロコッカス・アウレウスＭｅｔＡＰ結晶形態と結合し、複合体を形成し、調和し、および／または共同して結晶化する活性；ａ＝約１２１．３６オングストローム（Å）の格子定数からなるスタフィロコッカス・アウレウスＭｅｔＡＰ立方体結晶と結合し、複合体を形成し、調和し、および／または共同して結晶化する活性；空間群Ｐ２１で、ａ＝約４１．１９Å、ｂ＝約７６．７８Åおよびｃ＝約４１．７１Å、β＝１０４．１６５°の格子定数のモノクリニック結晶を含むスタフィロコッカス・アウレウスＭｅｔＡＰ結晶形態と結合し、複合体を形成し、調和し、および／または共同して結晶化する活性；表ＶＩＩＩに示される蛋白座標（複数でも可）で特定されるアミノ酸残基（複数でも可）と結合し、複合体を形成し、調和し、および／または共同して結晶化する活性；空間群Ｐ２１２１２１の斜方晶を含むストレプトコッカス・ニューモニエＭｅｔＡＰ結晶形態と結合し、複合体を形成し、調和し、および／または共同して結晶化する活性であって、該オルトロンビック結晶がａ＝約５６．７７Å、ｂ＝約６９．１６Åおよびｃ＝約８０．５１Åの格子定数を含むところの活性；ＭｅｔＡＰ阻害物質または他の調節物質と複合してストレプトコッカス・ニューモニエＭｅｔＡＰと結合し、複合体を形成し、調和し、および／または共同して結晶化する活性；および細菌性ＭｅｔＡＰ酵素と結合し、複合体を形成し、調和し、および／または共同して結晶化する活性からなる群より選択されるところの、化合物または組成物を提供する。
【００１７】
（図面の記載）
図１はスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼのリボン図である。アミノおよびカルボキシル末端をＮおよびＣで示す。図面はプログラムＭＯＬＳＣＲＩＰＴ［Kraulis, P., J. Appl. Crystallogr.、２４、９４６−９５０（１９９１）］を用いて作成した。
図２はスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの活性部位の説明図である。
図３はスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの活性部位の立体図である。明瞭に示すために、水素原子または水分子は図示していない。
図４はスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの阻害物質、５−（３−ヨード−フェニル）−１−Ｈ−［１，２，３］トリアゾールと複合したスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの活性部位の説明図である。この図面は、例えば、この阻害物質と、該阻害物質の５Å以内にあるスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの活性部位の残基の原子との相関関係を示す。明瞭性を考慮して、水素原子または水分子は図示しない。２個の活性部位の金属原子を球体として表示する。
図５はスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの阻害物質、５−（３−ヨード−フェニル）−１−Ｈ−［１，２，３］トリアゾールと複合したスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの活性部位の立体図である。この図面は、この阻害物質と、該阻害物質の５Å以内にあるスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの活性部位の残基の原子との相関関係を示す立体図である。水分子および２個の活性部位の金属原子を該図面において斜線で表示する。
【００１８】
図６はスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの阻害物質、５−ベンゾフラン−２−イル−１−Ｈ−［１，２，３］トリアゾールと複合したスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの活性部位の説明図である。この図面は、阻害物質と、該阻害物質の５Å以内にあるスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの活性部位の残基の原子との相関関係を示す。明瞭性を考慮して、水素原子または水分子は図示しない。２個の活性部位の金属原子を球体として表示する。
図７はスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの阻害物質、５−ベンゾフラン−２−イル−１−Ｈ−［１，２，３］トリアゾールと複合したスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの活性部位の立体図である。この図面は、この阻害物質と、該阻害物質の５Å以内にあるスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの活性部位の残基の原子との相関関係を示す立体図である。水分子および２個の活性部位の金属原子を該図面において斜線で表示する。
【００１９】
図８はストレプトコッカス・ニューモニエ・メチオニンアミノペプチダーゼのリボン図である。アミノおよびカルボキシル末端をＮおよびＣで示す。
図９はストレプトコッカス・ニューモニエ・メチオニンアミノペプチダーゼの活性部位の説明図である。
図１０はストレプトコッカス・ニューモニエ・メチオニンアミノペプチダーゼの活性部位の立体図である。明瞭に示すために、水素原子または金属原子と結合している水分子以外の水分子は図示していない。
【００２０】
（発明の詳細な記載）
本発明は、細菌性メチオニンアミノペプチダーゼの結合部位の阻害物質または調節物質の特定の残基と相互作用することが可能なある種の構造的、物理的および／または空間的特徴を有する化合物を投与することで細菌性メチオニンアミノペプチダーゼ（ＭｅｔＡＰ）を阻害する、あるいはまた調節する方法を提供する。この相互作用は細菌性ＭｅｔＡＰの活性を阻害するか、さもなければ調節し、かくして細菌の複製が病因である疾患を処理することとなる。
【００２１】
本発明は、細菌性ＭｅｔＡＰ結晶構造、および細菌性ＭｅｔＡＰ酵素の活性部位と結合するか、または相互作用するＭｅｔＡＰの阻害物質または調節物質の同定方法を提供する。加えて、本発明は、阻害物質または他の調節物質と複合するＭｅｔＡＰの結晶構造の活性部位、ならびにペプチド、ペプチド模倣物または合成組成物などのＭｅｔＡＰ阻害物質または他の調節物質の化合物を同定および改良するためにこれらの結晶形態およびその活性部位を使用する方法を提供する。これらの化合物は、基質などの分子のＭｅｔＡＰの活性部位への結合を競合して阻害する能力により特徴付けることができる。
【００２２】
ストレプトコッカス・ニューモニエ・メチオニンアミノペプチダーゼの結晶化および構造解明
ストレプトコッカス・ニューモニエ・メチオニンアミノペプチダーゼの典型的な結晶は、一夜で約０．２ｍｍ３の大きさにまで成長した。この場合、結晶化に用いたストレプトコッカス・ニューモニエ・メチオニンアミノペプチダーゼの濃度は約１５ｍｇ／ｍｌであった。滴剤を静置する蒸気拡散法を用いてストレプトコッカス・ニューモニエ・メチオニンアミノペプチダーゼの溶液から結晶を成長させた。２０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ緩衝液（ｐＨ７．４、０．１０Ｍ  ＮａＣｌ、０．５ｍＭ  ＣｏＣｌ２含有）中１０％のグリセロール溶液中に蛋白を含有する滴剤より室温で結晶を成長させた。この溶液を１０％イソプロパノール、２０％ＰＥＧ４０００および１００ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．５）のリザバー溶液と等容量にて混合した。結晶は単位定数がａ＝５６．７７、ｂ＝６９．１６、ｃ＝８０．５１オングストロームで空間群Ｐ２１２１２１の斜方晶系である。これらの結晶は、典型的には、一分子を不斉単位にて含有し、約５７％の溶媒を含有し、Ｖｍ値は２．９３Ａ３／ダルトンであった。Advanced Photon Source、Argonne National Laboratoryのビームライン１７−ＩＤで得られるシンクロトロン放射を用いて、Ｘ−線回折データを単結晶から測定した。ＣＮＸ（Molecular Simulations Inc.）を用いる分子置換により構造を決定した。出発モデルは下記のように測定したスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの構造のすべての蛋白原子から構成された。この代表的なモデルを剛体リファインメントにより精緻化し、得られたフェーズを用いて係数｜Ｆｏ−Ｆｃ｜および｜２Ｆｏ−Ｆｃ｜のフーリエマップを算定し、分子グラフィックシステム、ＸｔａｌＶｉｅｗ（Molecular Simulations Inc）を用いてストレプトコッカス・ニューモニエ・メチオニンアミノペプチダーゼの原子モデルを組み立てた。ＣＮＸを用いて蛋白モデルを組み立てる間に、１．０オングストロームの解像度でＲｃ−終値を０．２２とする、通常の位置精緻化を行った。
【００２３】
スタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの結晶化および構造解明
スタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの典型的な結晶を２種の異なる条件で成長させた。例えば、Ｉ型結晶は約２日で約０．２ｍｍ３の大きさにまで成長した。この典型的な結晶化にて用いたスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの濃度は約１２ｍｇ／ｍｌであった。滴剤を静置する蒸気拡散法を用いてスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの溶液から結晶を成長させた。１０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ緩衝液（ｐＨ７．４、０．２０Ｍ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＣｏＣｌ２含有）中１０％のグリセロール溶液中に蛋白を含有する滴剤より室温で結晶を成長させた。この溶液を３０％ＰＥＧ４００、０．２Ｍ  ＮａＣｌおよび０．１Ｍ  Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．５）のリザバー溶液と等容量にて混合した。典型的なＩ型結晶は単位定数がａ＝１２１．３６オングストロームの、空間群１２３の立方晶を含む。典型的な結晶は、一分子を不斉単位にて含有し、約５３％の溶媒を含有し、Ｖｍ値は２．７１Ａ３／ダルトンであった。Advance Photon Source、Argonne National Laboratoryのビームライン１７−ＩＤで得られるシンクロトロン放射を用いて、Ｘ−線回折データを単結晶から測定した。ＣＮＸ（Molecular Simulations Inc.）を用いる分子置換により構造を決定した。出発モデルは、RoderickおよびMatthewsにより公開されたエシェリヒア・コリ・メチオニンアミノペプチダーゼの公開されている構造のすべての蛋白原子から構成された［S.L.Roderick, B.W.Matthews. Structure of the Cobalt−dependent Methionine Aminopeptidase from Escherichia coli: a New Type of Proteolytic Enzyme, Biochemistry ３２、３９０７（１９９３）］。このモデルを剛体リファインメントにより精緻化し、得られたフェーズを用いて係数｜Ｆｏ−Ｆｃ｜および｜２Ｆｏ−Ｆｃ｜のフーリエマップを算定し、分子グラフィックシステム、ＸｔａｌＶｉｅｗ（Molecular Simulations Inc）を用いてスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの原子モデルを組み立てた。ＣＮＸを用いて蛋白モデルを組み立てる間に、２．５オングストロームの解像度でＲｃ−終値を０．２５とする、通常の位置精緻化を行った。
【００２４】
典型的なＩＩ型結晶は約２日、室温で約０．２ｍｍ３の大きさにまで成長した。結晶化にて用いたスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの濃度は約１２ｍｇ／ｍｌであった。滴剤を静置する蒸気拡散法を用いてスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの溶液から結晶を成長させた。１０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ緩衝液（ｐＨ７．４、０．２０Ｍ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＣｏＣｌ２含有）中１０％のグリセロール溶液中に蛋白を含有する滴剤より典型的な結晶を成長させた。この溶液を１８％ＰＥＧ８０００、０．１２Ｍ  酢酸ナトリウム、０．０６Ｍ  カコジル酸酢酸ナトリウム（ｐＨ６．５）の溶液と等容量にて混合し、１５％ＰＥＧ８０００、０．１０Ｍ  酢酸ナトリウム、０．０５Ｍ  カコジル酸酢酸ナトリウム（ｐＨ６．５）含有のリザバーと平衡状態にした。これらＩＩ型の結晶は、単位定数がａ＝４１．１９、ｂ＝７６．７８、ｃ＝４１．７１オングストローム、β＝１０４．１６５°の、空間群Ｐ２１の単斜晶を含む。結晶は、一分子を不斉単位にて含有し、約４６％の溶媒を含有し、Ｖｍ値は２．３３Ａ３／ダルトンであった。Advance Photon Source、Argonne National Laboratoryのビームライン１７−ＩＤで得られるシンクロトロン放射を用いて、Ｘ−線回折データを単結晶から測定した。上記のように分子置換により構造を決定した。ＣＮＸを用いて１．８オングストロームの解像度でＲｃ−終値を０．２２とする、通常の位置精緻化を行った。
【００２５】
スタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの阻害物質の複合体の構造解明
結晶を形成した後の結晶の母液に阻害物質固体を導入し、２４ないし４８時間インキュベートすることで典型的な複合体を調製した。ＩＩ型結晶を用いてスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの阻害物質の複合体の構造を決定した。構造は１．８オングストロームの解像度で上記したように精緻化した。
【００２６】
略語
ｍＭ：ミリモル
Ｒｃ：Σ｜（Ｆｏ−Ｆｃ）｜／Ｆｏ
Ｆｏ：構造振幅の測定値
Ｆｃ：構造振幅の計算値
【００２７】
本発明はまた、阻害物質と複合した細菌性ＭｅｔＡＰ結晶構造を提供し、これらの結晶形態を用いて細菌性ＭｅｔＡＰ阻害物質の化合物を同定かつ改良する方法を提供する。かかる化合物はＭｅｔＡＰ活性を阻害する能力で特徴付けられる。
【００２８】
この度、置換トリアゾール、例えば、式（Ｉ）および式（ＩＡ）の置換１，２，３−トリアゾールが細菌性ＭｅｔＡＰの阻害物質であることが見出された。さらに、この度、式（Ｉ）および式（ＩＡ）の阻害物質またはその医薬上許容される塩で処理してＭｅｔＡＰ酵素の作用機構を選択的に阻害することで、限定されるものではないが、細菌複製が病因である疾患を含め、種々の病態を治療するための新規な治療的および予防的解決手段が得られることが見出された。
【００２９】
「Ｐｈ」なる語はフェニル環をいう。本願明細書にて用いる「Ｈｅｔ」または「複素環」なる語は、互換的に、飽和または不飽和のいずれかで、炭素原子と、Ｎ、ＯおよびＳからなる群より選択される１個ないし３個のヘテロ原子からなる安定した複素環式環をいい、ここで窒素は所望により酸化されていても、四級化されていてもよく、上記したいずれかの複素環式環がベンゼン環に縮合しているいずれの二環基をも含む。ＰｈおよびＨｅｔは５個までのＣ２−６アルキル−、Ｃ１−６アルコキシ−、Ｒ４Ｒ５Ｎ（ＣＨ２）１−６−、Ｒ４Ｒ５Ｎ（ＣＨ２）２−６Ｏ−、−ＣＯ２Ｒ６、−ＣＦ３またはハロゲンで置換されていてもよい。
【００３０】
本願明細書にて用いる「Ｃ１−６アルキル」なる語は、鎖長がそこで限定されない限り、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチルおよびｔ−ブチル、ペンチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチルおよびヘキシルならびにその単純な脂肪族異性体を包含するが、これに限定されない、炭素数１−６の置換および非置換の、直鎖または分岐鎖基を意味する。いずれのＣ１−６アルキル基も所望により１個またはそれ以上のＯＲ４、Ｒ４、ＮＲ４Ｒ５で独立して置換されていてもよい。
本願明細書にて用いる「Ｃ３−７シクロアルキル」なる語は、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチル基を包含するが、これに限定されない、炭素数３−７の置換または非置換の環状基を意味する。
【００３１】
本願明細書にて用いる「Ｃ２−６アルケニル」なる語は炭素数２−６のアルキル基であり、炭素−炭素の単結合が炭素−炭素の二重結合で置換されている基を意味する。Ｃ２−６アルケニルとして、エチレン、１−プロペン、２−プロペン、１−ブテン、２−ブテン、イソブテンおよび異性体としてのペンテンおよびヘキセンが挙げられる。シスおよびトランス異性体は共に本発明の範囲内に含まれる。いずれのＣ２−６アルケニル基も所望により１個またはそれ以上のＰｈ−Ｃ０−６アルキル−、Ｈｅｔ−Ｃ０−６アルキル−、Ｃ１−６アルキル−、Ｃ１−６アルコキシ−、Ｃ１−６メルカプチル−、Ｐｈ−Ｃ０−６アルコキシ−、Ｈｅｔ−Ｃ０−６アルコキシ−、ＨＯ−、Ｒ４Ｒ５Ｎ−、Ｈｅｔ−Ｓ−Ｃ０−６アルキル−、Ｐｈ−Ｓ−Ｃ０−６アルキル−、ＨＯ（ＣＨ２）１−６−、Ｒ４Ｒ５Ｎ（ＣＨ２）２−６−、Ｒ４Ｒ５Ｎ（ＣＨ２）２−６Ｏ−、Ｒ６ＣＯ２（ＣＨ２）０−６−、Ｒ６ＣＯ２（ＣＨ２）１−６Ｏ−、Ｒ６ＳＯ２（ＣＨ２）１−６−、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３またはハロゲンで独立して置換されていてもよい。
【００３２】
本願明細書にて用いる「Ｃ２−６アルキニル」なる語は炭素数２−６のアルキル基であって、一の炭素−炭素の単結合が一の炭素−炭素の三重結合で置換されている基を意味する。Ｃ２−６アルキニルとして、アセチレン、１−プロピン、２−プロピン、１−ブチン、２−ブチン、３−ブチンならびにペンチンおよびヘキシンの単純な異性体が挙げられる。
本願明細書にて用いる「アルコキシ」なる語は、そこで鎖長を限定しない限り、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシなどを含むが、これに限定されない、酸素原子に結合した、炭素数１−６の直鎖または分岐鎖のアルキル基を意味する。
本願明細書にて用いる「メルカプチル」なる語は、そこで鎖長を限定しない限り、メチルチオ、エチルチオ、ｎ− プロピルチオ、イソプロピルチオなどを含むが、これに限定されない、硫黄原子に結合した炭素数１−６の直鎖または分岐鎖基を意味する。
【００３３】
本願明細書にて用いる「ヘテロ」または「ヘテロ原子」なる語は、酸素、窒素または硫黄を意味する。
本願明細書にて用いる「ハロ」または「ハロゲン」なる語は、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを意味する。
本明細書における「Ｃ０」なる語は、直後に置換基の存在しないこと；例えば、ＰｈＣ０−６アルキル基において、Ｃが０の場合、置換基はフェニルであることを意味する。
【００３４】
式（Ｉ）および式（ＩＡ）の化合物では、トリアゾール環は構造式１で示されるように２種の互変異性体の形態のいずれかで存在しうることが理解されよう。トリアゾール環の水素はＮ１またはＮ３のいずれかに存在することができ、かくして構造式１の化合物の命名は次のいずれかとすることができる：４−（Ｑ）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール、５−（Ｑ）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール、４−（Ｑ）−３Ｈ−１,２,３−トリアゾール、５−（Ｑ）−３Ｈ−１,２,３−トリアゾール。これらの化合物は均等であり、本明細書中、一の構造および一の名称（４−（Ｑ）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール）で示される。
【００３５】
【化１】
2007525947.tif 000002
【００３６】
「Ｑ」なる語は、本明細書において、Ｎ、ＯまたはＳより選択される２個までのヘテロ原子を含有してもよい５−または６−員の単環式環、またはＮ、ＯまたはＳより選択される４個までのヘテロ原子を含有してもよい８−ないし１１−員の縮合二環式環をいう。二環式環は２つの環が２個の隣接する原子で一緒に縮合されている環として定義される。適当には、該環は飽和であっても不飽和であってもよく、その中の窒素は酸化されていても四級化されていてもよい。Ｑが複素環式環である場合、安定した構造の形成が得られるように、それはＱのヘテロ原子または炭素原子を介してトリアゾールに結合してもよいことが理解されよう。
【００３７】
Ｑは、例えば、フェニル、ナフチル、ピペリジニル、ピペラジニル、２−オキソピペラジニル、２−オキソピペリジニル、２−オキソピロロジニル、２−オキソアゼピニル、アゼピニル、ピロロリル、４−ピペリドニル、ピロリジニル、ピラゾリル、ピラゾリジニル、イミダゾリル、ピリジニル、ピラジニル、オキサゾリジニル、オキサゾリニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、モルホリニル、チアゾリジニル、チアゾリニル、チアゾリル、キヌクリジニル、インドリル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾピラニル、ベンズオキサゾリル、フリル、ピラニル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロピラニル、チエニル、ベンズオキサゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、チアモルホリニルスルホキシド、チアモルホリニルスルホン、オキサジアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、イソキサゾリル、イソチアゾリル、イミダゾリル、ピリダジニル、ピリミジニルおよびトリアジニルを包含するが、これらに限定されるものではなく、かかる基は商業上入手可能であるか、または慣用的化学合成により製造することができ、かつ安定している。
【００３８】
適当には、Ｑは５−または６−員の不飽和環または９−員の二環式環である。例えば、Ｑはチオフェン、フェニル、ピリジン、ベンゾフランまたはベンゾ［１，３］ジオキソールである。
式（Ｉ）の化合物では、Ｑが８個までのＲ１で置換されており、ＱがＰｈである場合、Ｑがさらに１個またはそれ以上のＲ２で置換されていることが理解されよう。
本発明の化合物では、ＱがＲ１およびＲ２から独立して選択される８個までの置換基で置換されていることが理解されよう。
【００３９】
適当には、Ｒ１はＨ−、Ｐｈ−Ｃ０−６アルキル−、Ｈｅｔ−Ｃ０−６アルキル−、Ｃ１−６アルキル−、Ｃ１−６アルコキシ−、Ｃ１−６メルカプチル−、Ｐｈ−Ｃ０−６アルコキシ−、Ｈｅｔ−Ｃ０−６アルコキシ−、ＨＯ−、Ｒ４Ｒ５Ｎ−、Ｈｅｔ−Ｓ−Ｃ０−６アルキル−、Ｐｈ−Ｓ−Ｃ０−６アルキル−、ＨＯ（ＣＨ２）１−６−、Ｒ４Ｒ５Ｎ（ＣＨ２）２−６−、Ｒ４Ｒ５Ｎ（ＣＨ２）２−６Ｏ−、Ｒ６ＣＯ２（ＣＨ２）０−６−、Ｒ６ＣＯ２（ＣＨ２）１−６Ｏ−、Ｒ６ＳＯ２（ＣＨ２）１−６−、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３またはハロゲンであり、ＰｈまたはＨｅｔは５個までのＣ２−６アルキル−、Ｃ１−６アルコキシ−、Ｒ４Ｒ５Ｎ（ＣＨ２）１−６−、Ｒ４Ｒ５Ｎ（ＣＨ２）２−６Ｏ−、−ＣＯ２Ｒ６、−ＣＦ３またはハロゲンで置換されている。例えば、Ｒ１はハロゲン、Ｃ１−６アルキル−、Ｃ１−６アルコキシ−または−ＯＨである。例えば、Ｒ１は臭素、塩素、メチル、エチル、メトキシルまたはヒドロキシルである。
【００４０】
適当には、Ｒ２はＰｈ−Ｃ０−６アルキル−、Ｈｅｔ−Ｃ０−６アルキル−、Ｃ５−６アルキル−、Ｃ２−６アルコキシ−、Ｃ１−６メルカプチル−、Ｐｈ−Ｃ０−６アルコキシ−、Ｈｅｔ−Ｃ０−６アルコキシ−、ＨＯ−、Ｒ４Ｒ５Ｎ−、Ｈｅｔ−Ｓ−Ｃ０−６アルキル−、Ｐｈ−Ｓ−Ｃ０−６アルキル−、ＨＯ（ＣＨ２）１−６−、Ｒ４Ｒ５Ｎ（ＣＨ２）２−６−、Ｒ４Ｒ５Ｎ（ＣＨ２）２−６Ｏ−、Ｒ６ＣＯ２（ＣＨ２）０−６−、Ｒ６ＣＯ２（ＣＨ２）１−６Ｏ−、Ｒ６ＳＯ２（ＣＨ２）１−６−、−ＣＦ３または−ＯＣＦ３であり、ＰｈまたはＨｅｔは５個までのＣ２−６アルキル−、Ｃ１−６アルコキシ−、Ｒ４Ｒ５Ｎ（ＣＨ２）１−６−、Ｒ４Ｒ５Ｎ（ＣＨ２）２−６Ｏ−、−ＣＯ２Ｒ６、−ＣＦ３またはハロゲンで置換されており；ここでＲ４、Ｒ５およびＲ６は独立してＨ、Ｃ２−６アルキル、Ｃ３−６アルケニル、Ｃ３−６アルキニル、Ｐｈ−Ｃ０−６アルキル、Ｈｅｔ−Ｃ０−６アルキルまたはＣ３−７シクロアルキル−Ｃ０−６アルキルから選択される。例えば、Ｒ２は−ＮＲ４Ｒ５、−ＣＦ３、Ｐｈ−Ｓ−Ｃ０−６アルキル−、Ｐｈ−Ｃ０−６アルコキシ−である。例えば、Ｒ２はベンジルアミン、プロピルアミン、フラン−３−イルメチルアミン、フラン−２−イルメチルアミン、−ＣＦ３、Ｐｈ−ＣＨ２−Ｏ−、（４−Ｃｌ）Ｐｈ−Ｓ−である。
【００４１】
式ＩＡの化合物では、Ｒ３は、適当には、Ｈ−、ハロゲンであるか、あるいはＲ３とＱが一緒になって縮合二環式または三環式の飽和または不飽和の環系を形成し、ここでＲ３は−Ｃ−または−Ｃ＝Ｃ−である。例えば、Ｒ３は水素、臭素であるか、または−Ｃ−でＱに縮合してジヒドロ−インデノトリアゾールを形成するか、あるいは−Ｃ＝Ｃ−で縮合してナフトトリアゾールまたはアセトナフトトリアゾールを形成する。
適当には、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、独立して、Ｈ−、Ｃ２−６アルキル−、Ｃ３−６アルケニル−、Ｃ３−６アルキニル−、Ｐｈ−Ｃ０−６アルキル−、Ｈｅｔ−Ｃ０−６アルキル−またはＣ３−７シクロアルキル−Ｃ０−６アルキル−から選択される。例えば、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は独立して水素、ベンジル、フラニルおよびプロピルから選択される。
さらには、部分が「置換されていてもよい」場合には、その部分は１個またはそれ以上の任意の置換基を有していてもよく、任意の置換基は各々独立して選択されることが認識されよう。
【００４２】
適当には、式（Ｉ）の化合物の医薬上許容される塩として、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、二リン酸塩、臭化水素酸塩および硝酸塩などの無機酸との塩、あるいはリンゴ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、クエン酸、酢酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、パルミチン酸塩、サリチル酸塩およびステアリン酸塩などの有機酸との塩が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明の化合物は１個またはそれ以上の不斉炭素原子を含有してもよく、ラセミ体および光学活性な形態にて存在してもよい。立体中心は（Ｒ）、（Ｓ）またはＲとＳ配置のいずれの組み合わせ、例えば、（Ｒ,Ｒ）、（Ｒ,Ｓ）、（Ｓ,Ｓ）または（Ｓ,Ｒ）であってもよい。これらの化合物はすべて本発明の範囲内にある。
【００４３】
本発明の化合物の製造に有用な新規な中間体は以下の化合物である：
４−エチニル−ベンゾ［１,３］ジオキソール；
１−（４−クロロ−フェニルスルファニル）−２−エチニルベンゼン；
（３−フェニル−プロピル）−（３−エチニルフェニル）アミン；
フェネチル−（３−エチニルフェニル）−アミン；
フラン−２−イルメチル−（３−エチニルフェニル）−アミン；
フラン−３−イルメチル−（３−エチニルフェニル）−アミン；
ナフタレン−１−イルメチル−（３−エチニルフェニル）−アミン；および
ナフタレン−２−イルメチル−（３−エチニルフェニル）−アミン。
【００４４】
本発明において有用な中間体は本願明細書中のスキームに従って製造された。
とりわけ、式（ＩＡ）の化合物は以下の化合物である：
３−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−フェノール；
４−（３−ヨードフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
４−（２−フルオロフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
４−（４−ｎ−ブチルフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
４−（２−クロロフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
Ｎ−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）ベンズアミド；
３−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−フェニルアミン；
Ｎ−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）アセトアミド；
４−（４−トリフルオロメチルフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
４−（３−トリフルオロメチルフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
４−（４−ｎ−プロピルフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
４−（４−メトキシフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
４−（３−メチルフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
【００４５】
２−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−ピリジン；
４−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
４−（４−エチルフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
４−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−フェニルアミン；
４−（４−メチルフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
２−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−５−メチルピリジン；
２−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−４−メチル−ピリジン；
１−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）シクロヘキサノール；
４−（チオフェン−２−イル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
４−（チオフェン−３−イル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
４−（２−メチルフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
４−（１,３−ジメチルフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
【００４６】
４−（４−ブロモフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
４−（１,３−ジクロロフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
４−（１−ビフェニル−２−イル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
４−（２−ベンジルオキシ−フェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
２−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−６−メチルピリジン；
３−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−ピリジン；
４−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−ピリジン；
４−（２−メトキシフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
４−（２−ブロモフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
４−ベンゾ［１,３］ジオキソール−５−イル−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
２−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−ベンゾフラン；
４−ベンゾ［１,３］ジオキソール−４−イル−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
４−（２−［４−クロロ−フェニルスルファニル］−フェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
【００４７】
（３−フェニル−プロピル）−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）アミン；
フェネチル−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）アミン；
フラン−２−イルメチル−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）アミン；
フラン−３−イルメチル−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）アミン；
ナフタレン−１−イルメチル−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）アミン；
ナフタレン−２−イルメチル−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）アミン；
４−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−フェノール；
ベンジル−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）アミン；
４−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
２−ブロモ−５−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−フェノール；
２,６−ジブロモ−５−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−フェノール；
２,４−ジブロモ−５−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−フェノール；
２−（５−ブロモ−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−４−メチル−ピリジン；
１Ｈ−ナフト［１,２−ｄ］−１,２,３−トリアゾール；
２,８−ジヒドロ−インデノ［１,２−ｄ］−１,２,３−トリアゾール；
４−フェニル−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；および
５,５ａ,６,８−テトラヒドロ−４Ｈ−アセナフト［４,５−ｄ］−１,２,３−トリアゾール。
【００４８】
とりわけ、式（ＩＡ）の最も好ましい化合物は以下の化合物である：
４−（３−ヨードフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
４−（２−フルオロフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
４−（２−クロロフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
４−（３−メチルフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
４−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
４−（４−エチルフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
４−（４−メチルフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
２−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−５−メチルピリジン；
２−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−４−メチル−ピリジン；
４−（チオフェン−３−イル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
【００４９】
４−（４−ブロモフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
４−（１,３−ジクロロフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
２−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−ベンゾフラン；
フラン−２−イルメチル−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）アミン；
フラン−３−イルメチル−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）アミン；
ベンジル−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）アミン；
４−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール；
２−ブロモ−５−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−フェノール；
２,４−ジブロモ−５−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−フェノール；および
２−（５−ブロモ−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−４−メチル−ピリジン。
【００５０】
調製方法
式（Ｉ）または（ＩＡ）の化合物はスキーム１に記載の方法と同様の方法により調製された。
【化２】
2007525947.tif 000003
ａ）Ｐ（Ｏ）（ＯＭｅ）２Ｃ（Ｎ２）Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、Ｋ２ＣＯ３、ＭｅＯＨ    ｂ）１．Ｍｅ３ＳｉＮ３、ＰｈＣＨ３、１１０℃；２．Ｈ２Ｏ
【００５１】
アルデヒド（例えば、２−チオフェンカルボキシアルデヒド）（１−スキーム１）を、乾燥メタノール中、１−ジアゾ−２−オキソプロピルホスホナートおよび炭酸カリウムと反応させて２−スキーム１を得た。そのアセチレン（例えば、２−エチニルチオフェン）（２−スキーム１）を、還流トルエン中、アジドトリメチルシランと反応させ、つづいて水を添加して３−スキーム１を得た。
【００５２】
式（Ｉ）または（ＩＡ）の化合物（Ｒ２がＮＨＲ４である）は、スキーム２に記載の方法と同様の方法にて調製された。
【化３】
2007525947.tif 000004
ａ）Ｒ４−Ｃ（Ｏ）Ｈ、Ｎａ（ＯＡｃ）３ＢＨ、ＣｌＣＨ２ＣＨ２Ｃｌ、ＡｃＯＨ  ｂ）１．Ｍｅ３ＳｉＮ３、ＰｈＣＨ３、１１０℃；２．Ｈ２Ｏ
【００５３】
アルキニルアニリン（例えば、３−エチニルフェニルアミン）をアルデヒドとの還元アミノ化反応に付して置換させ５−スキーム２を得た。そのアセチレン（５−スキーム２）をアジドトリメチルシランと還流トルエン中で反応させ、つづいて水を添加して６−スキーム２を得た。
【００５４】
医薬組成物の処方
本発明の医薬的に有効な化合物（およびその医薬上許容される塩）は、例えば、細菌の複製が病因である疾患（「ＭｅｔＡＰ介在病態」）の治療にて十分な量の本発明の式（Ｉ）または（ＩＡ）の化合物（「活性成分」）を、標準的な医薬担体または希釈体と、当該分野にて周知の一般的操作に従って合することで調製される通常の剤形にて投与される。これらの操作は、適宜、成分を混合し、造粒し、圧縮し、あるいは溶解して所望の製剤とすることを包含する。
利用される医薬担体は、例えば、固体または液体のいずれであってもよい。固体担体の例が、ラクトース、白土、シュークロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカシア、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸等である。液体担体の例が、シロップ、落花生油、オリーブ油、水などである。同様に、担体または希釈体は、一ステアリン酸グリセリルまたは二ステアリン酸グリセリルを単独でまたはワックスと一緒にした当該分野にて周知の遅延性材料を包含してもよい。
【００５５】
多種に及ぶ医薬形態を利用することができる。すなわち、固体担体を用いる場合、製剤を錠剤化してもよく、散剤またはペレットの形態にてハードゼラチンカプセルに入れてもよく、トローチまたはロゼンジの形態であってもよい。固体担体の量は広範囲にわたって変化してもよいが、約２５ｍｇから約１０００ｍｇまでとすることができる。液体担体を用いる場合、製剤はシロップ、エマルジョン、ソフトゼラチンカプセル、アンプルなどの滅菌した注射可能な液体、または非水性液体懸濁液の形態であってもよい。
有効成分はまた、ＭｅｔＡＰ介在病態の治療または予防を必要とする哺乳動物に局所的に投与してもよい。局所投与で治療的効果を得るのに必要な有効成分の量は、選択される化合物、治療すべき病態の特性および重篤度、治療を受ける哺乳動物で変化し、最終的には医者が判断する。有効成分の適量は局所投与で１．５ｍｇないし５００ｍｇであり、１ｍｇないし１００ｍｇ、例えば５ないし２５ｍｇの典型的な用量を一日に２回または３回投与する。
【００５６】
局所投与とは、全身投与でないことを意味し、有効成分を外部にて表皮に、口腔に塗布すること、かかる化合物を耳、眼または鼻に滴下すること、あるいは化合物が有意に血流に入らない場合を包含する。全身投与とは、とりわけ、経口、静脈内、腹腔内および筋肉内投与を意味する。
有効成分を単独で化学原料として投与することが可能であるならば、それを医薬処方として服用してもよい。有効成分は、局所投与の場合、処方の０．００１％ないし１０％ｗ／ｗ、例えば、１０％ｗ／ｗのように高濃度であってもよいが、１重量％ないし２重量％を含む。ただし、特定の場合には、５％ｗ／ｗを越えることはなく、別の実施形態においては処方の０．１％ないし１％ｗ／ｗの範囲にあるであろう。
【００５７】
獣医療およびヒト医療用の本発明の局所用処方は、一の有効成分と、そのための１種またはそれ以上の許容される担体を、所望により別の治療用成分を含んでいてもよい。典型的な担体は、処方中の他の成分と適合し、受容者に有害でない、という意味で「許容される」されるものである。
局所処方に適する処方は、とりわけ、皮膚を介して炎症部位に浸透するのに適する液体または半液体製剤、例えば、塗布薬、ローション、クリーム、軟膏またはペースト、および眼、耳または鼻への投与に適する滴剤を包含するが、これらに限定されるものではない。
【００５８】
本発明の滴剤は、滅菌処理した水性または油性溶液または懸濁液を含み、有効成分を抗菌および／または抗真菌剤および／または他の適当な保存剤の適当な水性またはアルコール性溶液に溶解させることで調製されてもよく、例えば、界面活性剤を含んでいてもよい。ついで、得られた溶液を濾過で浄化し、適当な容器に移し、ついでそれを密封してオートクレーブまたはとりわけ９８−１００℃で半時間維持することにより滅菌処理に付してもよい。別法として、濾過し、無菌技法により容器に移すことで溶液を滅菌処理してもよい。滴剤に配合するのに適する抗菌および抗真菌剤として、例えば、硝酸または酢酸フェニル水銀（０．００２％）、塩化ベンズアルコニウム（０．０１％）および酢酸クロルヘキシジン（０．０１％）を挙げることができる。油性溶液の調製に適する溶媒として、グリセロール、希釈アルコールおよびプロピレングリコールを挙げることができる。
【００５９】
本発明のローションは、皮膚または眼への塗布に適するものを包含するが、これに限定されない。眼用ローションは所望により抗菌剤を含有してもよい滅菌水性溶液を含んでいてもよく、滴剤の調製と同様の方法により調製することができる。皮膚への塗布に適するローションまたは塗布剤はまた、皮膚の乾燥および冷却を促進する物質、例えば、アルコールまたはアセトン、および／またはグリセロールなどの保湿剤あるいはヒマシ油または落花生油などの油を含んでいてもよい。
【００６０】
本発明のクリーム、軟膏またはペーストは、外服用の有効成分の半固体処方であってもよい。該処方は、微細化または微粉末形態の有効成分を単独で、または水性または非水性流体の溶液または懸濁液の有効成分を、適当な装置の助けを借りて、グリース状または非グリース状の基剤と混合することで製造される。基剤は、炭化水素、例えば、固形、流動または液体パラフィン、グリセロール、蜜蝋、金属石けん；粘液；天然源の油、例えば、アーモンド、コーン、落花生、ヒマシまたはオリーブ油；プロピレングリコールなどのアルコールと一緒にした羊毛脂またはその誘導体、あるいはステアリン酸またはオレイン酸などの脂肪酸からなっていてもよい。処方はアニオン性、カチオン性または非イオン性界面活性剤、例えばエステルまたはそのポリオキシエチレン誘導体などの適当な界面活性剤を配合していてもよい。沈殿防止剤、例えば天然ガム、セルロースまたは無機材料、例えばシリカ、および他の成分、例えばラノリンもまた含まれていてもよい。
【００６１】
有効成分はまた吸入により投与されてもよい。「吸入」とは鼻腔内または口腔内投与を意味する。エアロゾル処方または用量の計量した吸入器などのかかる投与に適する剤形は通常の技法により調製することもできる。有効成分の一日の投与量は一日当たり約０．１ｍｇないし約１００ｍｇ、例えば、一日当たり約１ｍｇないし約１０ｍｇである。
【００６２】
「処理」なる語は予防的または治療的療法のいずれをも意味する。かかる化合物は、既知の技法に従って本発明の化合物を一般的な医薬上許容される担体または希釈体と合することにより調製した通常の剤形にてかかる哺乳動物に投与することができる。医薬上許容される担体または希釈体の形態および特性は、合する有効成分の配合量、投与形路および他の周知の可変要素で影響を受けることは当業者に明らかであろう。該化合物は、細菌の複製が病因である疾患の治療を必要とする哺乳動物に、これらの病態に付随する徴候を減少または排除するのに十分な量にて投与される。投与形路はとりわけ経口または非経口投与であってもよい。
【００６３】
本明細書中で用いる非経口なる語は、静脈内、筋肉内、皮下、直腸内、膣内または腹腔内投与を包含するが、これらに限定されない。一日の非経口用投与量は、例えば、有効成分が一日当たり約３０ｍｇないし約３００ｍｇである。一日の経口用投与量は、例えば、有効成分が一日当たり約１００ｍｇないし約２０００ｍｇである。
本発明の化合物の個々の投与の用量および間隔は、処理すべき症状の性質および程度、投与の形態、経路および部位、および処理される哺乳動物により決定されうること、ならびにかかる用量および間隔は通常の技法により決定されうることが当業者であれば認識されよう。また、典型的な治療コース、すなわち、所定の日数の間、一日に服用される化合物の投与の回数は、当業者が通常の治療コース決定試験を用いて確定しうることは明らかであろう。
【００６４】
（定義）
特許請求の範囲を含め、明細書中に使用される、「一」または「一つ」なる語は、「一またはそれ以上」を意味する。
本発明はさらに、本発明のＭｅｔＡＰ結晶構造の相同体、共複合体、変異体および誘導体を提供する。
「共複合体」および「共結晶」なる語は、各々、化学物質または化合物と共有結合または非共有結合しているＭｅｔＡＰあるいはＭｅｔＡＰの変異体または相同体を意味する。
本明細書で用いられる「アンタゴニスト」および「阻害物質」なる語は、（ｉ）ＭｅｔＡＰ遺伝子または蛋白の活性を減少または阻害する物質、または（ｉｉ）ＭｅｔＡＰポリペプチドによりアップ−またはダウン−レギュレートされる遺伝子または遺伝子によりコードされるポリペプチドの活性を減少または阻害する物質を意味する。
【００６５】
本明細書で用いられる「活性部位」なる語は、分子が結合して触媒反応が生じる、ＭｅｔＡＰ結合ポケットの領域をいう。該部位は、基質と接触するか、あるいは基質としないが、水分子またはアミノ酸を介して基質と相互に作用し、接触するアミノ酸の特定の位置付けを可能とし、相互作用しえないであろう特定の位置に位置付けすることなく、基質との触媒反応を誘導する、アミノ酸残基を含み、該残基と結合してもよい。アミノ酸と基質との相互作用は、基質とＭｅｔＡＰとの結合に、触媒反応および反応中間体の安定性における基質の特定の位置付けに、および生成物の活性部位との結合または活性部位からの放出に関与してもよい。活性部位はまた、触媒作用に関与するアミノ酸を含んでいてもよい。これらのアミノ酸は、水素結合を介して、あるいは基質の電子供与体または電子受容体の中心と近接近することにより基質と相互作用する。これらのアミノ酸それ自身が電子供与体または電子受容体の中心として作用し、触媒反応を起こしてもよい。
【００６６】
本明細書で用いられる「生物学的活性」または「活性」なる語は、（ｉ）酵素またはポリペプチドと調節物質の間の相互作用から生じるいずれか観察可能な効果、（ｉｉ）転写調節、調節物質の結合およびポリペプチド結合、（ｉｉｉ）（１）化合物と酵素、例えば細菌性メチオニンアミノペプチダーゼ、または（２）化合物を含む複合体の成分と酵素、例えば細菌性メチオニンアミノペプチダーゼ、または（３）化合物と酵素、例えば細菌性メチオニンアミノペプチダーゼのサブユニットまたは共因子、の間の相互作用または結合、（ｉｖ）酵素、例えば細菌性メチオニンアミノペプチダーゼの活性部位の触媒反応、または（ｖｉ）酵素、例えば細菌性メチオニンアミノペプチダーゼによりなされる、あるいは相関関係にある化学反応、を意味する。
【００６７】
本明細書で用いられる「候補物質」および「候補化合物」なる語は互換的に使用され、もう一つ別の部分と相互作用すると考えられる物質、例えば、ＭｅｔＡＰポリペプチドなどの酵素の完全体またはフラグメントと相互作用すると考えられ、かかる相互作用について評価することのできる調節物質をいう。代表的な候補物質または化合物として、薬物または他の治療薬などの生体異物、発癌物質および環境汚染物質、天然物質および抽出物、ならびにグルココルチコステロイド、ステロイド、脂肪酸およびプロスタグランジンなどの体内物質が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の方法を用いて検査することのできる候補化合物の別の例として、ＭｅｔＡＰポリペプチドのアゴニストおよびアンタゴニスト、毒素および毒液、ウイルスエピトープ、ホルモン（例えば、グルココルチコステロイド、オピオイドペプチド、ステロイドなど）、ホルモン受容体、ペプチド、酵素、酵素基質、共同因子、レクチン、ショ糖、オリゴヌクレオチドまたは核酸、オリゴ糖、蛋白、小分子およびモノクローナル抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６８】
本明細書で用いられる「細胞」または「宿主生物」なる語は互換的に使用され、特定の対象となる細胞だけでなく、かかる細胞の子孫または可能性のある子孫をも意味する。ある種の修飾が突然変異または環境の影響により後世にて生じうるため、かかる子孫は、実際には、親細胞と同じでない可能性があるが、それでも本明細書にて用いられる語の範囲内に含まれる。
【００６９】
「細菌」とは、（ｉ）Streptococcus、Staphylococcus、Bordetella、Corynebacterium、Mycobacterium、Neisseria、Haemophilus、Actinomycetes、Streptomycetes、Nocardia、Enterobacter、Yersinia、Fancisella、Pasturella、Moraxella、Acinetobacter、Erysipelothrix、Branhamella、Actinobacillus、Streptobacillus、Listeria、Calymmatobacterium、Brucella、Bacillus、Clostridium、Treponema、Escherichia、Salmonella、Kleibsiella、Vibrio、Proteus、Erwinia、Borrelia、Leptospira、Spirillum、Campylobacter、Shigella、Legionella、Pseudomonas、Aeromonas、Rickettsia、Chlamydia、BorreliaおよびMycoplasma属のメンバー（これに限定されるものではない）を含め、さらにGroup A Streptococcus、Group B Streptococcus、Group C Streptococcus、Group D Streptococcus、Group G Streptococcus、Streptococcus pneumoniae、Streptococcus pyogenes、Streptococcus agalactiae、Streptococcus faecalis、Streptococcus faecium、Streptococcus durans、Neisseria gonorrheae、Neisseria meningitidis、Staphylococcus aureus、Staphylococcus epidermidis、Corynebacterium diptheriae、Gardnerella vaginalis、Mycobacterium tuberculosis、Mycobacterium bovis、Mycobacterium ulcerans、Mycobacterium leprae、Actinomyctes israelii、Listeria monocytogenes、Bordetella pertusis、Bordatella parapertusis、Bordetella bronchiseptica、Escherichia coli、Shigella dysenteriae、Haemophilus influenzae、Haemophilus aegyptius、Haemophilus parainfluenzae、Haemophilus ducreyi、Bordetella、Salmonella typhi、Citrobacter freundii、Proteus mirabilis、Proteus vulgaris、Yersinia pestis、Kleibsiella pneumoniae、Serratia marcessens、Serratia liquefaciens、Vibrio cholera、Shigella dysenterii、Shigella flexneri、Pseudomonas aeruginosa、Franscisella tularensis、Brucella abortis、Bacillus anthracis、Bacillus cereus、Clostridium perfringens、Clostridium tetani、Clostridium botulinum、Treponema pallidum、Rickettsia rickettsiiおよびChlamydia trachomitis種または群のメンバー（これに限定されるものではない）を含む原核生物、および（ｉｉ）Archaebacter（これに限定されない）を含む始原細菌を意味する。
【００７０】
本明細書で用いられる「検出」なる語は、標的物質の存在で独占的に現れるであろう放射線または分光学的シグナルなどの検出可能なシグナルの発生を観察することで標的物質の存在を確認することを意味する。
本明細書で用いられる「発現」なる語は、一般に、生物学的に活性なポリペプチドが産生される細胞工程をいう。
本明細書で用いられる「遺伝子」なる語は、簡単には、機能性蛋白、ポリペプチドまたはペプチドをコード化する単位をいうのに使用される。この機能的な用語がゲノム配列およびｃＤＮＡ配列の両方を含むことが理解されるであろう。
本明細書で用いられる「結晶格子」なる語は、充填された単位格子の頂点により定められる点の配置を意味する。
【００７１】
本明細書で用いられる「六方単位格子」なる語は、ａ＝ｂ≠ｃで、α＝β＝９０で、γ＝１２０°であるところの単位格子を意味する。ベクターａ、ｂおよびｃは単位格子の辺を示し、角度α、βおよびγは単位格子の角度を示す。本発明の実施形態、例えば、スタフィロコッカス・ニューモニエにおいて、単位格子はａ＝５６.７７、ｂ＝６９.１６、ｃ＝８０.５１オングストロームの格子定数を有する。特定の格子定数が得られるとしても、本発明の結晶性ポリペプチドはまた、特定の格子定数からの偏差（約１ないし約２％の範囲内）を含む。
本明細書で用いられる「ハイブリッド形成」なる語は、プローブ分子、検出可能な部分が結合した分子の、標的サンプルへの結合を意味する。
【００７２】
本明細書で用いられる「相互作用」なる語は、酵母２−ハイブリッド法を用いて検出できる、分子間の検出可能な相互作用を意味する。「相互作用」なる語はまた、分子間の相互作用として「結合」をも含むことを意図とする。相互作用は、例えば、事実上、蛋白−蛋白または蛋白−核酸でありうる。
本明細書で用いられる「単離した」なる語は、オリゴヌクレオチドが細胞物質、あるいは合成媒体のいずれかにて結合しうる他の核酸、蛋白、脂質、炭水化物または他の材料が実質的にないことを意味する。該用語はまたポリペプチドに適用することもでき、その場合、ポリペプチドは実質的に核酸、炭水化物、脂質および他の望ましくないポリペプチドを含まないであろう。
【００７３】
本明細書で用いられる「標識した」なる語は、分光学、放射線学または他の方法により検出可能な部分の、プローブ分子への結合を意味する。
本明細書で用いられる「修飾された」なる語は、物質が通常の存在する状態から変化していることを意味する。物質は、別個の化学単位を取り除くことで、または別個の化学単位を付加することで修飾することができる。「修飾された」なる語は、精製における補助物質として付加された検出可能な標識ならびに物質を包含する。
【００７４】
「修飾」、「修飾している」ないし「修飾する」なる語は、本明細書において、作用機構、活性、酵素活性、酵素、ポリヌクレオチド、結晶または座標に関連して、（ｉ）酵素、例えば細菌性メチオニンアミノペプチダーゼの活性を改変、調節、向上、強化、亢進、低下、減退、防止または停止させること、または（ｉｉ）（１）化合物と酵素、例えば細菌性メチオニンアミノペプチダーゼ、または（２）化合物を含む複合体の成分と酵素、例えば細菌性メチオニンアミノペプチダーゼ、または（３）化合物と酵素、例えば細菌性メチオニンアミノペプチダーゼのサブユニットまたは共因子、の間の相互作用または結合を亢進、改良または安定化させること、または（ｉｉｉ）酵素、例えば細菌性メチオニンアミノペプチダーゼの活性部位の活性を改変、調節、低下、減退、防止または停止させること、または（ｉｖ）酵素、例えば細菌性メチオニンアミノペプチダーゼの活性のアップレギュレーション（すなわち、活性化または刺激）およびダウンレギュレーション（すなわち、阻害または抑制）を意味する。
【００７５】
「調節物質」なる語は、調節、調節作用を惹起する、に影響を及ぼす、またはと相関関係にある、あるいは惹起、影響または相関を介して調節することのできる、化合物または組成物を意味する。
本明細書で用いられる「分子置換」なる語は、未知の結晶の観察された回折パターンを最もうまく説明するために、構造座標が既知の分子またはモデルを未知の結晶の単位格子内で配向させ、かつ位置付けることにより、構造座標が未知の野生型ＭｅｔＡＰリガンド結合ドメインまたはＭｅｔＡＰ変異体結晶の予備的モデルを生成することを含む方法を意味する。ついで、フェーズをこのモデルから計算し、観察された振幅と合わせ、座標が未知の構造の近似的フーリエ合成を得ることができる。この操作を、順次、数種の形態のリファインメントに供し、未知の結晶の最終の正確な構造を得ることができる。例えば、Lattman、（１９８５）Method Enzymol.、１１５：５５−７７；Rossmann編（１９７２）The Molecular Replacement Method、Gordon & Breach、New Yorkを参照のこと。本発明で得られたＭｅｔＡＰの活性部位の構造座標を用いた場合、分子置換法を使用して、ＭｅｔＡＰ活性部位の、またはＭｅｔＡＰ活性部位の異なる結晶形態の、結晶変異体または相同体の構造座標を決定することができる。
【００７６】
本明細書で用いられる「ポリペプチド」なる語は、大きさに関係なく、２０種のいずれかの蛋白のアミノ酸を含むポリマーを意味する。「蛋白」は相対的に大きなポリペプチドに対して用いられることが多く、「ペプチド」は小さなポリペプチドに対して用いられることが多いが、当該分野におけるこれら用語の使用は重複しており、かつ一定していない。本明細書で用いられる「ポリペプチド」なる語は、特記しない限り、ペプチド、ポリペプチドおよび蛋白をいう。本明細書で用いられる「蛋白」、「ポリペプチド」および「ペプチド」なる語は、遺伝子産物に言及する場合、互換的に用いられる。
本明細書で用いられる「構造座標」および「構造的座標」なる語は、結晶形態の分子の原子（散乱中心）でのＸ−線の単色ビームの回折で得られたパターンと関連付けられる方程式より誘導される数学的または空間的座標を意味する。その回折データを用いて結晶の繰返し単位の電子密度図を予測することができる。電子密度図を用いて結晶の単位格子内にある個々の原子の位置を確立することができる。
【００７７】
当業者はＸ−線結晶学で決定された一連の座標が標準誤差のないわけではないことを理解している。解像度を上げると、より多くのモデルフィッティングおよびリファインメントについての実験回折データが利用可能であるため、割り当てられた座標における誤差は減少するようになる。かくして、例えば、３．５オングストロームなどのより低い解像度で回折する結晶よりも２．８オングストロームの解像度で回折する結晶から、より多くの回折データが集めることができる。その結果、より高い解像度で回折する結晶からのデータを用いて当て嵌めおよびリファインを行うと、精緻化された構造座標はより正確となりうる。ＭｅｔＡＰのアゴニスト、アンタゴニストおよび調節物質の設計は構造座標の正確性に依存する。座標があまり正確でないならば、その場合、設計工程は効果のない可能性がある。あるケースにおいては、結晶が３．５オングストロームの解像度またはそれよりも低い解像度で回折すると、原子座標を正確に特定するのに十分な回折データを集めることが困難または不可能であるかもしれない。かくして、あるケースにおいては、Ｘ−線構造が３．５オングストロームの解像度またはそれよりも低い解像度で回折する結晶を基礎とする場合、構造を基礎とするアゴニストおよびアンタゴニストの設計においてＸ−線構造を用いることは困難であるかもしれない。しかしながら、２．８オングストロームまたはより高度で回折する結晶は、構造を基礎とする薬物設計を可能とする精度のＸ−線構造を生じさせる可能性がある。解像度のさらなる改良は、構造を基礎とする設計をさらに容易にする可能性があるが、２．８オングストロームの解像度で得られた座標は一定の目的には適切である。
【００７８】
また、当業者は、ＭｅｔＡＰ蛋白が異なるアゴニスト、アンタゴニストおよび調節物質と結合すると、該蛋白が異なる立体構造を採用しうることを理解するであろう。異なるアゴニストと結合し、そして異なるアンタゴニストと結合すると、さらに立体構造において微妙な変化が生じる可能性がある。構造を基礎とするＭｅｔＡＰ調節物質の設計はアゴニストおよびアンタゴニストが結合した場合に生じる立体構造における違いの認識にいくらか依存しているかもしれない。すなわち、構造を基礎とする調節物質の設計は、アゴニストならびにアンタゴニストとの複合体とのＸ−線構造を利用することで容易となりうる。
本明細書で用いられる「実質的に純粋な」なる語は、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドが、天然の状態で、または合成した状態で、結合する、または結合していてもよい配列または分子が実質的になく、これらの分子が単離操作にて用いられることを意味する。「実質的に不含」なる語は、サンプルが、天然において結合する、結合していてもよい物質または化合物を少なくとも５０％、または少なくとも７０％であってもよく、または少なくとも８０％であってもよく、あるいは少なくとも９０％不含であることを意味する。
【００７９】
本明細書で用いられる「転写」なる語は、ＲＮＡポリメラーゼと、ＲＮＡの発現を指令する遺伝子との相互作用を含む工程を意味する。該工程は、以下の工程：（ａ）転写開始、（ｂ）転写物の伸長、（ｃ）転写物のスプライシング、（ｄ）転写物のキャッピング、（ｅ）転写終了、（ｆ）転写物のポリアデニル化、（ｇ）転写物の核輸送、（ｈ）転写物のエディティングおよび（ｉ）転写物の安定化を包含するが、これに限定されない。
本明細書で用いられる「単位格子」なる語は、基本となる平行六面体の形状のブロックを意味する。各単位格子が一のパターンの単位の全体表記を含んでもよく、その繰り返しが結晶を構築する。かくして、「単位格子」なる語は、三次元に翻訳することで、無限に繰り返される結晶構造の基本的部分を意味する。単位格子は、平面にて同じ場所に配置されず、平行六面体の辺を形成する、３つのベクター、ａ、ｂおよびｃで特徴付けることができる。α、βおよびγの角度は該ベクターの間の角度を定義する：角度αはベクターｂとｃの間の角度であり；角度βはベクターａとｃの間の角度であり；および角度γはベクターａとｂの間の角度である。大きな結晶は単位格子を規則正しく組み立てることで構築することができ；各単位格子は一のパターンの単位の全体表記を含み、その繰り返しが結晶を構築する。
【００８０】
本明細書で用いられる「変異体」または「変異」なる語はその伝統的な意義を有しており、核酸またはポリペプチド配列における変化、遺伝し、天然に起こるか、または導入されることを意味し、当業者に一般に使用されるその意義にて用いられる。例えば、ＭｅｔＡＰポリペプチド、すなわち、野生型ＭｅｔＡＰ活性の生物学的活性を提示するポリペプチドは野生型プレニルトランスフェラーゼ配列からの活性部位の配列を置き換えることで特徴付けられる。
ＭｅｔＡＰ変異体はまた、とりわけ、C. J. Norenら、Science、２４４：１８２−１８８（１９８９）の生合成法を用いてＭｅｔＡＰ蛋白に天然に存在しないアミノ酸を部位特異的に組み込むことにより生成することもできる。この方法において、野生型ＭｅｔＡＰ中の目的とするアミノ酸をコード化するコドンは、オリゴヌクレオチド特異的変異誘発法を用いて「ブランク」ナンセンスコドン、ＴＡＧと置き換えられる。ついで、このコドンに拮抗する抑制物質を、所望の天然に存在しないアミノ酸を用いてインビトロにて化学的にアミノアシル化する。ついで、アミノアシル化残基をインビトロにて翻訳系に加え、部位特異的に組み込まれた天然に存在しないアミノ酸を有する変異体のＭｅｔＡＰを得る。
【００８１】
栄養要求性イー・コリ株（W. A. Hendricksonら、EMBO J.、９（５）：１６６５−１６７２（１９９０））またはメチオニンの内因合成を防止するであろう適当な栄養素を補足した培地にて増殖させた通常の菌株にてＭｅｔＡＰコード化ｃＤＮＡを発現させることで、セレノシステインまたはセレノメチオニンを野生型または変異体のメタロＭｅｔＡＰに組み込んでもよい。これらの方法のいずれにおいても、野生型または変異型ＭｅｔＡＰ  ｃＤＮＡは、天然のシステインまたはメチオニンのいずれか（または両方）が涸渇しているが、セレノシステインまたはセレノメチオニン（または両方）に富んでいる成長培地上の宿主生物にて発現されうる。
【００８２】
「重原子誘導体」なる語はＭｅｔＡＰの結晶を化学的に修飾することで産生されるＭｅｔＡＰの誘導体をいう。固有の結晶を所望の金属塩または有機金属化合物、例えば、塩化鉛、チオリンゴ酸金、チメロサールまたは酢酸ウラニルを含有する溶液に浸すことで該結晶を処理し、蛋白結晶中に拡散させてから、蛋白に結合させてもよい。結合した重金属原子の部位の位置決定は、処理した結晶をＸ−線解析に付すことで決定することができる。この情報を用いて三次元の電子密度図を構築するのに必要なフェーズ角情報を得、それから酵素の原子構造のモデルを誘導することができる（T. L. BlundelおよびN. L. Johnson、Protein Crystallography、Academic Press（１９７６））。
「空間群」なる語は結晶全体を通して対称な要素（すなわち、分子）の配置をいう。１３２種の配置が可能であり、一つずつ符号で同定されている。空間群の符号は文字（Ｐ、Ｆ、Ｉ、Ｃ）および下付き文字と共にまたはなしで番号、例えば、Ｐ２１、Ｉ２２２、Ｃ２１２１２１などで示される。
【００８３】
ストレプトコッカス・ニューモニエの結晶構造からのＭｅｔＡＰの阻害物質を同定する方法
本発明の一の態様は、本明細書に記載の結晶構造および活性部位により特徴付けられるＭｅｔＡＰの阻害物質を同定する方法、ならびにその基質との複合体の結晶構造を包含する。本発明の典型的な結晶構造はメチオニンアミノペプチダーゼ活性の阻害物質の同定を可能とする。かかる阻害物質は、ＭｅｔＡＰの活性部位のすべてまたは一部と競合的に結合してもよく；あるいは別の化学物質と結合してもしなくても、非競合的にメチオニンアミノペプチダーゼと結合し、それを阻害してもよい。
一の設計方法は、本発明のＭｅｔＡＰ結晶を種々の異なる化学物質からなる分子を用いてプローブし、候補ＭｅｔＡＰ阻害物質と酵素の間で相互作用する部位を決定することである。例えば、溶媒飽和の結晶より集めた高解像度のＸ−線回折データを用いて、各タイプの溶媒分子が結合している部位を決定することができる。ついで、これらの部位に強固に結合する小分子を設計して合成し、ＭｅｔＡＰ阻害物質活性について試験してもよい（J. Travis、Science、２６２：１３７４（１９９３））。
【００８４】
本発明はまた、典型的なＭｅｔＡＰに結合するかまたは該ＭｅｔＡＰと結合する基質または他の化合物の化学反応にて短命な反応中間体に異性体化することのできる化合物を開発することもできる。かくして、他の分子との相互作用の間のＭｅｔＡＰにおける構造変化の時間−依存性分析が可能となる。ＭｅｔＡＰの反応中間体はまた、ＭｅｔＡＰとの共同−複合体における反応生成物から推定することもできる。かかる情報は既知のＭｅｔＡＰ阻害物質の改良されたアナログを設計するのに、またはＭｅｔＡＰ酵素とＭｅｔＡＰ阻害物質の共同−複合体の反応中間体に基づいて新規な一連の阻害物質を設計するのに有用である。このことは特異性と安定性の両方を有するＭｅｔＡＰ阻害物質を設計するための経路を提供する。
【００８５】
本発明により可能となるもう一つ別の方法は、全体的にまたは部分的にＭｅｔＡＰ酵素と結合しうる要素または化合物についての小分子データベースをコンピューターを用いてスクリーンすることである。このスクリーニングにおいては、このような物質または化合物のその結合部位への適合特性を形状相補性により、あるいは推定相互作用エネルギーのいずれかにより判断することができる（E.C.Mengら、J.Comp.Chem.、１３：５０５−５２４（１９９２））。
ＭｅｔＡＰは２以上の結晶形態にて結晶化しうるため、本発明で示されるＭｅｔＡＰまたはその部分の構造座標は、これらのｔＲＮＡシンセターゼの他の結晶形態の構造を解明するのに特に有用である。これらはまた、ＭｅｔＡＰ変異体の共同−複合体の構造、またはＭｅｔＡＰの機能的ドメインと有意なアミノ酸相同性を有する別の蛋白の結晶形態の構造を解明するのに用いることができる。
【００８６】
この目的に用いることのできる一の方法は分子置換法である。この方法においては、未知の結晶構造物がＭｅｔＡＰの別の結晶形態であるか、ＭｅｔＡＰ変異体であるか、ＭｅｔＡＰの共同−複合体であるか、あるいはＭｅｔＡＰの機能的ドメインと有意なアミノ酸相同性を有する別の蛋白の結晶であるかどうかを、図１−１０および表Ｉ−Ｘに示されるような、本発明のＭｅｔＡＰ構造座標を用いて決定することができる。この方法は未知の結晶について正確な構造形態を提供しうる。
【００８７】
かくして、本明細書に示されるＭｅｔＡＰ構造は、コンピューターによる評価システムを用いて、既知の分子のスクリーニング、および／または特に結合ポケットまたは活性部位で構造に結合する新規な分子を設計することを可能とする。例えば、ＭｅｔＡＰの配列およびＭｅｔＡＰ構造（すなわち、例えば、本明細書の表Ｉ−Ｘに示されるような、原子座標、活性部位領域にある原子間の結合距離など）が入力されている、コンピューターモデル化システムを利用することができる。かくして、機械読取可能な媒体は表Ｉ−Ｘの座標を示すデータでコード化されうる。その場合、コンピューターは試験化合物が結合する可能性のある部位の構造的細部を作成し、それにより該試験化合物の相補的な構造的細部を決定することができる。
【００８８】
さらに詳しくは、本発明に係るＭｅｔＡＰと結合し、または阻害する化合物の設計には、一般に、２つのファクターを考慮する必要がある。第一に、化合物はＭｅｔＡＰと物理的かつ構造的に結合する能力を有していなければならない。ＭｅｔＡＰとその基質との結合に重要な共有結合以外の分子相互作用としては、水素結合、ファンデアワールスおよび疎水性相互作用が挙げられる。
【００８９】
第二に、化合物はその化合物がＭｅｔＡＰと結合できる立体構造を取ることができなければならない。化合物の特定の部分はこのＭｅｔＡＰとの結合と直接関与しないが、かかる部分はなおも分子全体の立体構造に影響を及ぼしてもよい。このことは、次には、効能において有意な衝撃を与える可能性がある。かかる立体構造の要件は、結合部位全体のまたは部分との関係で、例えば、ＭｅｔＡＰの結合ポケット、活性部位または基質結合部位、あるいはＭｅｔＡＰと直接相互作用するいくつかの化学物質を含む化合物の官能基間の間隔に関係して、化学物質または化合物の全体としての三次元構造および配向を包含する。
【００９０】
本発明により可能となるもう一つ別の方法は、ＭｅｔＡＰ酵素と、全体的にまたは部分的に結合しうる化学物質又は化合物について小分子データベースをコンピュータを用いてスクリーニングすることである。この方法についての詳説およびこの方法が提供しうる結果が、現在、当該分野にて開示されている。この種の技術については、１９９７年５月９日公開のＰＣＴ出願ＷＯ９７／１６１７７を参照のこと。その中のコンピューターモデリングについての技法を出典明示により本明細書の一部とする。
モデリング法により同定されれば、標準的技法を用いてＭｅｔＡＰを生物活性について試験することができる。例えば、本発明の構造を酵素活性アッセイに用いて化合物の阻害活性を測定してもよく、あるいは一般的フォーマットを用いる結合アッセイに用いて阻害物質をスクリーニングしてもよい。一の特に適するフォーマットとして、酵素連結免疫吸着アッセイ（本明細書中、「エライザ」という）が挙げられる。他のアッセイフォーマットを用いてもよく、これらのアッセイフォーマットは本発明を限定するものではない。
【００９１】
化合物のＭｅｔＡＰに対する阻害または結合作用の可能性は、それを実際に合成し、試験する前に、コンピューターモデリング法を用いることにより分析することができる。所定の化合物の理論構造がその化合物とＭｅｔＡＰの間に十分な相互作用および結合を示唆しない場合には、その化合物の合成および試験は排除される。しかしながら、コンピューターモデリング法が強い相互作用を示すとしても、分子を合成し、適当なアッセイを用いてＭｅｔＡＰに結合し、それを阻害するその能力について試験してもよい。この場合、効き目のない化合物の合成は回避することができる。
ＭｅｔＡＰの阻害物質または他の結合化合物は、コンピューターにより、ＭｅｔＡＰの個々の結合ポケットまたは他の領域と結合するその能力について化学物質またはフラグメントをスクリーニングして選択する一連の工程によって、評価し、設計することができる。
【００９２】
当業者であれば、ＭｅｔＡＰと、さらに詳細には、ＭｅｔＡＰの活性部位または補助的な結合部位の個々の結合ポケットと結合する能力について、化学物質またはフラグメントをスクリーニングする数種の方法のうちの一の方法を用いることができる。この方法は、例えば、表Ｉ−Ｘに示されるＭｅｔＡＰ座標に基づいて、活性部位をコンピューターのスクリーン上で視覚検査することにより始められる。その場合、選択されたフラグメントまたは化学物質を種々の方向に位置付けるか、またはＭｅｔＡＰの結合ポケット内または活性部位にドッキングさせる。ドッキングは、CHARMMおよびAMBERなどの標準的分子機構応力場でのエネルギー最小化および分子力学によりなされる、QuantaおよびSybylなどのソフトウェアを用いて行うことができる。
【００９３】
専門的コンピュータープログラムを用いて、フラグメントまたは化学物質の選択工程を補足してもよい。これらは以下のものを包含するが、それに限定されない。
１．ＧＲＩＤ（P.J.Goodford、"A Computational Procedure for Determining Energetically Favorable Binding Sites on Biologically Important Macromolecules"、J.Med.Chem.、２８：８４９−８５７（１９８５））。ＧＲＩＤは、ＵＫ、オックスフォード、Oxford Universityより入手可能である。
２．ＭＣＳＳ（A.MirankerおよびM.Karplus、"Functionality Maps of Binding Sites：A Multiple Copy Simultaneous Search Method"、Proteins：Structure、Function and Genetics、１１：２９−３４（１９９１））。ＭＣＳＳは、ＭＡ、バーリントン、Molecular Simulationsより入手可能である。
３．ＡＵＴＯＤＯＣＫ（D.S.GoodsellおよびA.J.Olsen、"Automated Docking of Substrates to Proteins by Simulated Annealing"、Proteins：Structure, Function, and Genetics、８：１９５−２０２（１９９０））。ＡＵＴＯＤＯＣＫは、ＣＡ、ラ・ジョラ、Scripps Research Instituteより入手可能である。
４．ＤＯＣＫ（I.D.Kuntzら、"A Geometric Approach to Macromolecule-Ligand Interactions"、J.Mol.Biol.、１６１：２６９−２８８（１９８２））。ＤＯＣＫは、ＣＡ、サンフランシスコ、University of Californiaより入手可能である。
【００９４】
加えて、小分子の化合物について市販されている他のコンピューターデータベースは、Cambridge Structural Database、Fine Chemical Database、およびCONCORDを包含し、報文として、Rusinko, A.、Chem. Des. Auto. News ８、４４−４７（１９９３）を参照こと。
一旦適当な化学物質またはフラグメントが選択されたならば、それらを一の化合物または阻害物質に組み立てることができる。組み立てはＭｅｔＡＰの構造座標に関連してコンピュータースクリーン上に表示された三次元イメージにてそのフラグメント相互の関係を視覚観察することにより行うことができる。これはQuantaまたはSybylなどのソフトウェアを用いるマニュアルモデルビルディングによりなされるであろう。
【００９５】
個々の化学物質またはフラグメントを関連付ける手助けとなる有用なプログラムとしては、以下のものが挙げられるが、限定されるものではない：
１．ＣＡＶＥＡＴ（P.A.Bartlettら、"CAVEAT：A Program to Facilitate the Structure-Derived Design of Biologically Active Molecules"、Molecular Recognition in Chemical and Biological Problems、Special Pub.、Royal Chem. Soc. ７８、１８２−１９６頁（１９８９））。ＣＡＶＥＡＴは、ＣＡ、バークレー、University of Californiaから入手可能である。
２．ＭＳＣＣＳ−３Ｄなどの３Ｄデータベースシステム（MDL Information Systems、San Leandro、CA）。このシステムは、Y.C.Martin、"3D Database Searching in Drug Design"、J.Med.Chem.、３５：２１４５−２１５４（１９９２）に報告されている。
３．ＨＯＯＫ（ＭＡ、バーリントン、Molecular Simulationsから入手可能）。
【００９６】
段階的にＭｅｔＡＰ調節物質を構築する操作の代わりに、上記したように一度に一のフラグメントまたは化学物質、阻害物質、調節物質または他のＭｅｔＡＰ結合化合物を、全体として、あるいは空のまたは既知のリガンドのある部分を含んでいてもよい活性部位を用いて「新たなもの」として設計することができる。これらの方法は、次のものを包含するが、限定されるものではない。
１．ＬＵＤＩ（H.-J.Bohm、"The Computer Program LUDI: A New Method for the De Novo Design of Enzyme Inhibitors"、J.Comp.Aid.Molec.Design、６：６１−７８（１９９２））。ＬＵＤＩは、ＣＡ、サンディエゴ、Biosym Technologiesより入手可能である。
２．ＬＥＧＥＮＤ（Y.NishibataおよびA.Itai、Tetrahedron、４７：８９８５（１９９１））。ＬＥＧＥＮＤは、ＭＡ、バーリントン、Molecular Simulationsから入手可能である。
３．ＬｅａｐＦｒｏｇ（ＭＯ、セントルイス、Tripos Associatesから入手可能である）。
【００９７】
別の分子モデリング法もまた本発明に従って使用することができる。例えば、N.C.Cohenら、"Molecular Modeling Software and Methods for Medicinal Chemistry"、J.Med.Chem.、３３：８８３−８９４（１９９０）を参照のこと。さらに、M.A.NaviaおよびM.A.Murcko、"The Use of Structural Information in Drug Design"、Current Opinions in Structural Biology、２：２０２−２１０（１９９２）を参照のこと。例えば、試験化合物の構造がわかっている場合、試験化合物のモデルを本発明の構造のモデルと重ね合わせてもよい。この工程を行うのに多くの方法および方法が当該分野にて知られており、そのいずれを用いることもできる。例えば、P.S.Farmer、Drug Design、Ariens,E.J.編、第１０巻、１１９−１４３頁（Academic Press、New York、１９８０）；米国特許第５３３１５７３号；米国特許第５５００８０７号；C.Verlinde、Curr.Biol.、２：５７７−５８７（１９９４）；およびI.D.Kuntz、Science、２５７：１０７８−１０８２（１９９２）を参照のこと。本明細書に記載のモデルビルディング法およびコンピューター評価システムは本発明を限定するものではない。
【００９８】
このように、これらのコンピューター評価システムを用いると、多数の化合物を試験することができる。その上、多くの化合物を実際に合成する必要性が効果的に排除される。
他の態様において、本発明の細菌性メチオニンアミノペプチダーゼ構造は、本発明の細菌性メチオニンアミノペプチダーゼの立体構造により特徴付けられる合成化合物および／または他の分子の設計および同定を可能とする。既知のコンピューターシステムを用いた場合、本発明の細菌性メチオニンアミノペプチダーゼ構造の座標は機器読み取り可能な形態にて得られ、試験化合物を設計および／またはスクリーニングし、その立体構造を本発明のメチオニンアミノペプチダーゼの構造と重ね合わせることができる。その後、上記のように同定した適当な候補物を所望のメチオニンアミノペプチダーゼ阻害物質の生物活性、安定性などについてスクリーニングすることができる。
【００９９】
一旦、活性について同定かつスクリーニングされると、これらの阻害物質を治療または予防に使用し、メチオニンアミノぺプチダーゼ活性を遮断し、かくして、例えば、ベータ−ラクタム種、例えばイミペネム、ペニシリン、セファロスポリンなど、細菌感染により惹起される疾患にて細菌を攻撃する別の機構を用いることにより、抗生物質に対する細菌耐性を克服することができる。
本願明細書にて引用されている特許および特許出願を含め、すべての刊行物（これに限定されない）を出典明示により本明細書の一部とする。
【０１００】
表
表Ｉは本発明のスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの結晶構造の三次元蛋白座標を提供する。
表ＩＩは本発明の特定の阻害物質、５−（３−ヨード−フェニル）−１−Ｈ−［１,２,３］トリアゾールとのスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの複合体についての三次元座標を提供する。
表ＩＩＩは本発明の特定の阻害物質、５−ベンゾフラン−２−イル−１−Ｈ−［１,２,３］トリアゾールとのスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの複合体についての三次元座標を提供する。
【０１０１】
表ＩＶは本発明の特定の阻害物質、５−（３−ヨード−フェニル）−１−Ｈ−［１,２,３］トリアゾールの阻害物質との複合体についてのスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの活性部位から５オングストロームの範囲内にある残基の原子相互間の距離を提供する。
表Ｖは本発明の特定の阻害物質、５−ベンゾフラン−２−イル−１−Ｈ−［１,２,３］トリアゾールの阻害物質との複合体についてのスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの活性部位から５オングストロームの範囲内にある残基の原子相互間の距離を提供する。
表ＶＩは本発明の特定の阻害物質、５−（３−ヨード−フェニル）−１−Ｈ−［１,２,３］トリアゾールの阻害物質との複合体についてのスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの活性部位から５オングストロームの範囲内にある残基の原子相互間の角度を提供する。
表ＶＩＩは本発明の特定の阻害物質、５−ベンゾフラン−２−イル−１−Ｈ−［１,２,３］トリアゾールの阻害物質との複合体についてのスタフィロコッカス・アウレウス・メチオニンアミノペプチダーゼの活性部位から５オングストロームの範囲内にある残基の原子相互間の角度を提供する。
【０１０２】
表ＶＩＩＩは本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ・メチオニンアミノペプチダーゼの結晶構造の三次元蛋白座標を提供する。
表ＩＸは本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ・メチオニンアミノペプチダーゼの活性部位から５オングストロームの範囲内にある残基の原子相互間の距離を提供する。
表Ｘは本発明のストレプトコッカス・ニューモニエの活性部位から５オングストロームの範囲内にある残基の原子相互間の角度を提供する。
【０１０３】
表の凡例
１．項目の下の原子は「原子の番号」（例えば、１、２、３、４など）および「原子の名称」（例えば、ＣＡ、ＣＢ、Ｎなど）を示し、「原子の番号」が座標リストの「原子の名称」の各々に相当する。
２．項目の下の残基は「残基の名称」（例えば、ＴＨＲ、ＡＳＰなど）、頭文字（例えば、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄなど）で示される「鎖識別子」および「残基の番号」を示し、それを識別する名称、アミノ酸配列に沿ったその位置に対応する番号および鎖の名称が構造中の個々の蛋白のアミノ酸配列のおける各残基（またはアミノ酸）に相当する。鎖の名称は結晶構造の個々の分子を識別する。例えば、単位を形成する１以上の分子が結晶格子を通して繰り返される場合、各単位は分子Ａまたは分子Ｂまたは分子Ｃなどと識別される。
３．項目の下のＸ、ＹまたはＺは構造中の原子のデカルト座標を示す。
４．項目の下のＢは、「Ｂ因子」または主としていずれかの数値を適用することのできる、「温度因子」を示す。その位置の周りの原子置換を表示することを意図とする。
【０１０４】
実施例
以下の実施例を用いて本発明を説明する。かかる実施例は単なる例示であって、本発明の範囲を特定するものと解釈されるべきではない。実施例において、プロトンＮＭＲスペクトルは、特記しない限り、Bruker 400 MHz分光計を用いて測定した。
【０１０５】
実施例１
３−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−フェノールの調製
不活性雰囲気下、３−エチニルフェノール（０.５５ｇ、４.０ミリモル）のトルエン（４ｍｌ）中攪拌溶液に、トリメチルシリルアジド（１ｍｌ、８ミリモル）を添加した。得られた溶液を３日間加熱還流した。この混合物に水（１ｍｌ）を添加し、蒸発させた後に得られた残渣を分取ＨＰＬＣで精製し、標記化合物を白色固体（０.１２ｇ、１８％）として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.０９（ｓ，１Ｈ）、７.２７（ｍ，３Ｈ）、６.８１（ｍ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１６２.２（Ｍ＋Ｈ）＋。（この操作はTanaka, Y.；Velen, S. R.；Miller, S. I.   Tetrahedron、１９７３、２９、３２７１より適応させた）。
【０１０６】
実施例２
４−（３−ヨードフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾールの調製
３−エチニルフェノールの代わりに１−エチニル−３−ヨードベンゼンを用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を白色固体（２０％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ８.２１（ｓ，１Ｈ）、７.９８（ｓ，１Ｈ）、７.８１（ｄ，Ｊ＝７.８Ｈｚ，１Ｈ）、７.７３（ｄ，Ｊ＝８.１Ｈｚ，１Ｈ）、７.２１（ｔ，Ｊ＝７.８Ｈｚ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）２７２.０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１０７】
実施例３
４−（２−フルオロフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾールの調製
３−エチニルフェノールの代わりに１−エチニル−２−フルオロベンゼンを用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を白色固体（２１％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１１.５４（ｂｒｓ，１Ｈ）、８.１９（ｓ，１Ｈ）、８.１１（ｔ，Ｊ＝７.５Ｈｚ，１Ｈ）、７.１８−７.４０（ｍ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１６４.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１０８】
実施例４
４−（４−ｎ−ブチルフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾールの調製
３−エチニルフェノールの代わりに１−エチニル−４−ｎ−ブチルベンゼンを用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を白色固体（１６％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.１１（ｓ，１Ｈ）、７.７４（ｄ，Ｊ＝７.８Ｈｚ，２Ｈ）、７.２８（ｄ，Ｊ＝８.０Ｈｚ，２Ｈ）、２.６７（ｔ，Ｊ＝７.６Ｈｚ，２Ｈ）、１.６１−１.６９（ｍ，２Ｈ）、１.３７−１.４３（ｍ，２Ｈ）、０.９７（ｔ，Ｊ＝７.３Ｈｚ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）２０２.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１０９】
実施例５
４−（２−クロロフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾールの調製
３−エチニルフェノールの代わりに１−クロロ−２−エチニルベンゼンを用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を白色固体（３５％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.２９（ｓ，１Ｈ）、７.９０（ｄ，Ｊ＝７.０Ｈｚ，１Ｈ）、７.５３−７.５６（ｍ，１Ｈ）、７３７−７.４４（ｍ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１８０.０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１０】
実施例６
Ｎ−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）ベンズアミドの調製
３−エチニルフェノールの代わりにＮ−（３−エチニルフェニル）ベンズアミドを用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を白色固体（１２％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.１８−８.２０（ｍ，２Ｈ）、７.９３−８.００（ｍ，２Ｈ）、７.４５−７.７６（ｍ，６Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）２６５.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１１】
実施例７
３−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−フェニルアミンの調製
３−エチニルフェノールの代わりに３−エチニル−フェニルアミンを用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を黄褐色固体（１９％）として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.０５（ｓ，１Ｈ）、７.１２−７.２０（ｍ，３Ｈ）、６.７３−６.７５（ｍ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１６１.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１２】
実施例８
Ｎ−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）アセトアミドの調製
３−エチニルフェノールの代わりにＮ−（３−エチニルフェニル）アセトアミドを用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を黄褐色固体（４９％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１０.０４（ｓ，１Ｈ）、８.１１−８.５０（ｍ，２Ｈ）、７.３５−７.５８（ｍ，３Ｈ）、２.０６（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）２０３.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１３】
実施例９
４−（４−トリフルオロメチルフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾールの調製
３−エチニルフェノールの代わりに１−エチニル−４−トリフルオロメチルフェニルを用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を白色固体（５０％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.３０（ｓ，１Ｈ）、８.０６（ｄ，Ｊ＝８.２Ｈｚ，２Ｈ）、７.７６（ｄ，Ｊ＝８.２Ｈｚ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）２１４.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１４】
実施例１０
４−（３−トリフルオロメチルフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾールの調製
３−エチニルフェノールの代わりに１−エチニル−３−トリフルオロメチルフェニルを用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を白色固体（１６％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.３２、（ｓ，１Ｈ）、８.１０−８.１８（ｍ，２Ｈ）、７.６４−７.６８（ｍ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）２１４.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１５】
実施例１１
４−（４−ｎ−プロピルフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾールの調製
３−エチニルフェノールの代わりに１−エチニル−４−ｎ−プロピルベンゼンを用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を白色固体（２６％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.１１（ｓ，１Ｈ）、７.７４（ｄ，Ｊ＝７.５Ｈｚ，２Ｈ）、７.２８（ｄ，Ｊ＝８.０Ｈｚ，２Ｈ）、２.６４（ｔ，Ｊ＝７.６Ｈｚ，２Ｈ）、１.６４−１.７３（ｍ，２Ｈ）、０.９７（ｔ，Ｊ＝７.３Ｈｚ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１８８.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１６】
実施例１２
４−（４−メトキシフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾールの調製
３−エチニルフェノールの代わりに１−エチニル−４−メトキシベンゼンを用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を白色固体（３４％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７.９２（ｓ，１Ｈ）、７.７６（ｄ，Ｊ＝８.８Ｈｚ，２Ｈ）、７.０１（ｄ，Ｊ＝８.８Ｈｚ，２Ｈ）、３.８８（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１７６.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１７】
実施例１３
４−（３−メチルフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾールの調製
３−エチニルフェノールの代わりに３−エチニルトルエンを用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を白色固体（２３％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.１４（ｓ，１Ｈ）、７.６７（ｓ，１Ｈ）、７.６２（ｄ，Ｊ＝７.７Ｈｚ，１Ｈ）、７.３４（ｔ，Ｊ＝７.６Ｈｚ，１Ｈ）、７.２０（ｄ，Ｊ＝７.６Ｈｚ，１Ｈ）、２.４１（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１６０.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１８】
実施例１４
２−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−ピリジンの調製
３−エチニルフェノールの代わりに２−エチニルピリジンを用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を白色固体（１６％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.６０−８.６１（ｍ，１Ｈ）、８.３２（ｓ，１Ｈ）、８.０６（ｄ，Ｊ＝８.０Ｈｚ，１Ｈ）、７.９０−７.９５（ｍ，１Ｈ）、７.３８−７.４１（ｍ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１４７.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１９】
実施例１５
４−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾールの調製
３−エチニルフェノールの代わりに１−クロロ−４−エチニルベンゼンを用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を白色固体（３５％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.１８（ｓ，１Ｈ）、７.８５（ｄ，Ｊ＝８.６Ｈｚ，２Ｈ）、７.４７（ｄ，Ｊ＝８.７Ｈｚ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１８０.０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１２０】
実施例１６
４−（４−エチルフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾールの調製
３−エチニルフェノールの代わりに１−エチル−４−エチニルベンゼンを用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を白色固体（１１％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.１１（ｓ，１Ｈ）、７.７４（ｄ，Ｊ＝８.２Ｈｚ，２Ｈ）、７.３０（ｄ，Ｊ＝８.２Ｈｚ，２Ｈ）、２.６９（ｑ，Ｊ＝７.６、２Ｈ）、１.２７（ｔ，Ｊ＝７.６Ｈｚ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１７４.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１２１】
実施例１７
４−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−フェニルアミンの調製
３−エチニルフェノールの代わりに４−エチニルフェニルアミンを用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を橙色固体（９％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７.９４（ｓ，１Ｈ）、７.５４（ｄ，Ｊ＝８.６Ｈｚ，２Ｈ）、６.７８（ｄ，Ｊ＝８.６Ｈｚ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１６１.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１２２】
実施例１８
４−（４−メチルフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾールの調製
３−エチニルフェノールの代わりに４−エチニルトルエンを用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を白色固体（１４％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７.９６（ｓ，１Ｈ）、７.７３（ｄ，Ｊ＝８.０Ｈｚ，２Ｈ）、７.２８−７.３０（ｍ，２Ｈ）、１.５７（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１６０.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１２３】
実施例１９
２−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−５−メチルピリジンの調製
３−エチニルフェノールの代わりに２−エチニル−５−メチルピリジン（Sakamoto, T.；Nagata, H.；Kondo, Y.；Sato, K.；Yamanaka, H.  Chem. Pharm. Bull. １９８４、３２、４８６６）を用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を白色固体（２８％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.４５（ｓ，１Ｈ）、８.２７（ｓ，１Ｈ）、７.９５（ｄ，Ｊ＝８.１Ｈｚ，１Ｈ）、７.７６（ｄ，Ｊ＝８.１Ｈｚ，１Ｈ）、２.４１（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１６１.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１２４】
実施例２０
２−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−４−メチル−ピリジンの調製
３−エチニルフェノールの代わりに２−エチニル−４−メチルピリジン（Sakamoto, T.；Nagata, H.；Kondo, Y.；Sato, K.；Yamanaka, H.  Chem. Pharm. Bull. １９８４、３２、４８６６）を用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を白色固体（５４％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.４５（ｄ，Ｊ＝５.１Ｈｚ，１Ｈ）、８.２９（ｓ，１Ｈ）、７.９１（ｓ，１Ｈ）、７.２３（ｄ，Ｊ＝５.１Ｈｚ，１Ｈ）、２.４６（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１６１.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１２５】
実施例２１
１−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）シクロヘキサノールの調製
３−エチニルフェノールの代わりに１−エチニルシクロヘキサノールを用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を白色固体（１０％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７.７０（ｓ，１Ｈ）、１.３９−１.９９（ｍ，１０Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１６８.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１２６】
実施例２２
４−（チオフェン−２−イル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾールの調製
ａ）２−エチニルチオフェン
２−チオフェンカルボキシアルデヒド（０.３３ｇ、３.０ミリモル）の乾燥メタノール（３０ｍｌ）中攪拌溶液に、炭酸カリウム（０.８７ｇ、６.３ミリモル）および１−ジアゾ−２−オキソプロピルホスホナート（０.７８ｇ、４.１ミリモル、Calant, P.；D'Haenens, L.；Vandewalle, M.  Synth. Commun. １９８４、１４、１５５）を添加した。室温で４時間攪拌した後、水性二炭酸ナトリウム（５％、５０ｍｌ）およびヘキサン（５０ｍｌ）を添加した。有機層を集めて乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、ショートシリカプラグを介して濾過した。蒸発を介して標記化合物を透明油として得た。（この操作はMuller, S.；Liepold, B.；Roth, G. J.；Bestmann, H. J.  Synlett １９９６、５２１より適応させた。）
ｂ）４−（チオフェン−２−イル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール
３−エチニルフェノールの代わりに２−エチニルチオフェンを用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を白色固体（２工程、７％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.０５（ｓ，１Ｈ）、７.４３−７.４７（ｍ，２Ｈ）、７.１０−７.１３（ｍ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１５２.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１２７】
実施例２３
４−（チオフェン−３−イル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾールの調製
工程ａ）における２−チオフェンカルボキシアルデヒドの代わりに３−チオフェンカルボキシアルデヒドを用いることを除き、実施例２２の操作に従って、標記化合物を白色固体（２工程、８％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.０７（ｓ，１Ｈ）、７.７９（ｓ，１Ｈ）、７.５３（ｓ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１５２.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１２８】
実施例２４
４−（２−メチルフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾールの調製
工程ａ）における２−チオフェンカルボキシアルデヒドの代わりにｏ−トルアルデヒドを用いることを除き、実施例２２の操作に従って、標記化合物を白色固体（２工程、３％）を調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７.９７（ｓ，１Ｈ）、７.５５−７.５８（ｍ，１Ｈ）、７.２６−７.３３（ｍ，３Ｈ）、２.４４（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１６０.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１２９】
実施例２５
４−（１,３−ジメチルフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾールの調製
工程ａ）における２−チオフェンカルボキシアルデヒドの代わりに２,４−ジメチルベンズアルデヒドを用いることを除き、実施例２２の操作に従って、標記化合物を白色固体（２工程、３％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７.９２（ｓ，１Ｈ）、７.４４（ｄ，Ｊ＝７.８Ｈｚ，１Ｈ）、７.１４（ｓ，１Ｈ）、７.１０（ｄ，Ｊ＝７.３Ｈｚ，１Ｈ）、２.４０（ｓ，３Ｈ）、２.３６（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１７４.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１３０】
実施例２６
４−（４−ブロモフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾールの調製
工程ａ）における２−チオフェンカルボキシアルデヒドの代わりに４−ブロモベンズアルデヒドを用いることを除き、実施例２２の操作に従って、標記化合物を白色固体（２工程、７％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.１９（ｓ，１Ｈ）、７.７７（ｄ，Ｊ＝８.６Ｈｚ，２Ｈ）、７.６１（ｄ，Ｊ＝８.６、２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）２２４.０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１３１】
実施例２７
４−（１,３−ジクロロフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾールの調製
工程ａ）における２−チオフェンカルボキシアルデヒドの代わりに２,４−ジクロロベンズアルデヒドを用いることを除き、実施例２２の操作に従って、標記化合物を白色固体（２工程、６％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ（ｓ，１Ｈ）、７.９１−７.９４（ｍ，１Ｈ）、７.６１−７.６２（ｍ，１Ｈ）、７.４４−７.４８（ｍ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）２１４.０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１３２】
実施例２８
４−（１−ビフェニル−２−イル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾールの調製
工程ａ）における２−チオフェンカルボキシアルデヒドの代わりに２−ビフェニルカルボキシアルデヒドを用いることを除き、実施例２２の操作に従って、標記化合物を透明油（２工程、２７％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７.８０（ｓ，１Ｈ）、７.４７−７.４９（ｍ，２Ｈ）、７.３６−７.４０（ｍ，４Ｈ）、７.２０−７.２２（ｍ，２Ｈ）、６.８８（ｓ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）２２２.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１３３】
実施例２９
４−（２−ベンジルオキシ−フェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾールの調製
工程ａ）における２−チオフェンカルボキシアルデヒドの代わりに２−ベンジルオキシベンズアルデヒドを用いることを除き、実施例２２の操作に従って、標記化合物を白色固体（２工程、２５％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.０９（ｓ，１Ｈ）、８.００（ｄ，Ｊ＝７.７Ｈｚ，１Ｈ）、７.３３−７.４３（ｍ，６Ｈ）、７.２０（ｄ，Ｊ＝８.３Ｈｚ，１Ｈ）、７.０７（ｔ，Ｊ＝７.５、１Ｈ）、５.２５（ｓ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）２５２.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１３４】
実施例３０
２−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−６−メチルピリジンの調製
工程ａ）における２−チオフェンカルボキシアルデヒドの代わりに６−メチル−２−ピリジンカルボキシアルデヒドを用いることを除き、実施例２２の操作に従って、標記化合物を透明油（２工程、３９％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.３３（ｓ，１Ｈ）、７.７７−７.８５（ｍ，２Ｈ）、７.２６（ｄ，Ｊ＝７.４Ｈｚ，１Ｈ）、２.６０（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１６１.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１３５】
実施例３１
３−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−ピリジンの調製
工程ａ）における２−チオフェンカルボキシアルデヒドの代わりに３−ピリジンカルボキシアルデヒドを用いることを除き、実施例２２の操作に従って、標記化合物を白色固体（２工程、２５％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ９.０６（ｓ，１Ｈ）、８.５４（ｄ，Ｊ＝３.４Ｈｚ，１Ｈ）、８.３１−８.３３（ｍ，２Ｈ）、７.５４（ｍ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１４７.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１３６】
実施例３２
４−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−ピリジンの調製
工程ａ）における２−チオフェンカルボキシアルデヒドの代わりに４−ピリジンカルボキシアルデヒドを用いることを除き、実施例２２の操作に従って、標記化合物を白色固体（２工程、１５％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.６１−８.６２（ｍ，２Ｈ）、８.４２（ｓ，１Ｈ）、７.９１−７.９３（ｍ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１４７.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１３７】
実施例３３
４−（２−メトキシフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾールの調製
工程ａ）における２−チオフェンカルボキシアルデヒドの代わりにｏ−アニサルデヒドを用いることを除き、実施例２２の操作に従って、標記化合物を白色固体（２工程、６％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.１９（ｓ，１Ｈ）、７.９５（ｄ，Ｊ＝６.８Ｈｚ，１Ｈ）、７.３５−７.４０（ｍ，１Ｈ）、７.１４（ｄ，Ｊ＝８.３Ｈｚ，１Ｈ）、７.０４−７.０８（ｍ，１Ｈ）、４.９０（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１７６.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１３８】
実施例３４
４−（２−ブロモフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾールの調製
工程ａ）における２−チオフェンカルボキシアルデヒドの代わりに２−ブロモベンズアルデヒドを用いることを除き、実施例２２の操作に従って、標記化合物を白色固体（２工程、１５％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.２７（ｓ，１Ｈ）、７.７３−７.７９（ｍ，２Ｈ）、７.４５−７.７９（ｍ，１Ｈ）、７.３０−７.３４（ｍ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）２２４.０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１３９】
実施例３５
４−ベンゾ［１,３］ジオキソール−５−イル−１Ｈ−１,２,３−トリアゾールの調製
工程ａ）における２−チオフェンカルボキシアルデヒドの代わりにピペロナールを用いることを除き、実施例２２の操作に従って、標記化合物を白色固体（２工程、１０％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.０５（ｓ，１Ｈ）、７.３２−７.３４（ｍ，２Ｈ）、６.８９−６.９１（ｍ，１Ｈ）、６.００（ｓ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１９０.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４０】
実施例３６
２−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−ベンゾフランの調製
工程ａ）における２−チオフェンカルボキシアルデヒドの代わりにベンゾフラン−２−カルボキシアルデヒドを用いることを除き、実施例２２の操作に従って、標記化合物を白色固体（２工程、２５％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.２５（ｓ，１Ｈ）、７.６５（ｄ，Ｊ＝７.６Ｈｚ，１Ｈ）、７.５６（ｄ，Ｊ＝８.０Ｈｚ，１Ｈ）、７.２３−７.３６（ｍ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１８６.０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４１】
実施例３７
４−ベンゾ［１,３］ジオキソール−４−イル−１Ｈ−１,２,３−トリアゾールの調製
ａ）４−エチニル−ベンゾ［１,３］ジオキソール
工程ａ）における２−チオフェンカルボキシアルデヒドの代わりにベンゾ［１,３］ジオキソール−４−カルボアルデヒドを用いることを除き、実施例２２の操作に従って、標記化合物を油（９８％）として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ６.９４−６.９６（ｍ，１Ｈ）、６.８０−６.８５（ｍ，２Ｈ）、６.０５（ｓ，２Ｈ）、３.３０（ｓ，１Ｈ）。
ｂ）４−ベンゾ［１,３］ジオキソール−４−イル−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール
３−エチニルフェノールの代わりに４−エチニル−ベンゾ［１,３］ジオキソールを用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を白色固体（２４％）として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.１３（ｓ，１Ｈ）、７.４５（ｄ，Ｊ＝８.０Ｈｚ，１Ｈ）、６.９４−６.９７（ｍ，１Ｈ）、６.８１−６.８３（ｍ，１Ｈ）、６.０８（ｓ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１９０.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４２】
実施例３８
４−（２−［４−クロロ−フェニルスルファニル］−フェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾールの調製
ａ）１−（４−クロロ−フェニルスルファニル）−２−エチニルベンゼン
工程ａ）における２−チオフェンカルボキシアルデヒドの代わりに２−（４−クロロフェニルチオ）ベンズアルデヒドを用いることを除き、実施例２２の操作に従って、標記化合物を油（９１％）として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７.５３−７.５５（ｍ，１Ｈ）、７.１７−７.４０（ｍ，６Ｈ）、７.０３−７.０５（ｍ，１Ｈ）、３.４３（ｓ，１Ｈ）。
ｂ）４−（２−［４−クロロ−フェニルスルファニル］−フェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール
３−エチニルフェノールの代わりに１−（４−クロロ−フェニルスルファニル）−２−エチニルベンゼンを用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を白色固体（２１％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.１０（ｓ，１Ｈ）、７.７７−７.７９（ｍ，１Ｈ）、７.３９−７.４６（ｍ，３Ｈ）、７.２８−７.３０（ｍ，２Ｈ）、７.１５−７.１７（ｍ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）２８８.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４３】
実施例３９
（３−フェニル−プロピル）−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）アミンの調製
ａ）（３−フェニル−プロピル）−（３−エチニルフェニル）アミン
３−エチニルフェニルアミン（０.５９ｇ、５.０ミリモル）および３−フェニルプロピオンアルデヒド（０.６６ｇ、５.０ミリモル）の１,２−ジクロロエタン（１５ｍｌ）中攪拌溶液に、酢酸（０.２９ｍｌ、５.０ミリモル）およびトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１.６ｇ、７.５ミリモル）を添加した。室温で７２時間攪拌した後、水性二炭酸ナトリウム（飽和）およびジエチルエーテルを添加した。有機層をさらなる二炭酸ナトリウムで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、蒸発させた。シリカゲルクロマトグラフィーを介して精製し、標記化合物を透明油（４２％）として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）２３６.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
ｂ）（３−フェニル−プロピル）−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）アミン
３−エチニルフェノールの代わりに（３−フェニル−プロピル）−（３−エチニルフェニル）アミンを用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を透明油（１６％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.０３（ｓ，１Ｈ）、７.６.６２−７.３０（ｍ，９Ｈ）、３.１７（ｔ，Ｊ＝７.０Ｈｚ，２Ｈ）、２.７７（ｔ，Ｊ＝７.４Ｈｚ，２Ｈ）、１.９７（ｔ，Ｊ＝７.７Ｈｚ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）２７９.４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４４】
実施例４０
フェネチル−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）アミンの調製
ａ）フェネチル−（３−エチニルフェニル）−アミン
工程ａ）における３−フェニルプロピオンアルデヒドの代わりにフェニルアセトアルデヒドを用いることを除き、実施例３９の操作に従って、標記化合物を透明油（４７％）として調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）２２２.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
ｂ）フェネチル−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）アミン
３−エチニルフェノールの代わりにフェネチル−（３−エチニルフェニル）−アミンを用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を透明油（１９％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.０７（ｓ，１Ｈ）、７.０６−７.３１（ｍ，８Ｈ）、６.６７（ｄ，Ｊ＝８.１Ｈｚ，１Ｈ）、３.４１（ｔ，Ｊ＝７.２Ｈｚ，２Ｈ）、２.９４（ｔ，Ｊ＝７.１Ｈｚ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）２６５.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４５】
実施例４１
フラン−２−イルメチル−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）アミンの調製
ａ）フラン−２−イルメチル−（３−エチニルフェニル）−アミン
工程ａ）における３−フェニルプロピオンアルデヒドの代わりにフルフラルを用いることを除き、実施例３９の操作に従って、標記化合物を透明油（７５％）として調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）１９８.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
ｂ）フラン−２−イルメチル−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）アミン
３−エチニルフェノールの代わりにフラン−２−イルメチル−（３−エチニルフェニル）−アミンを用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を白色固体（１８％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.０６（ｓ，１Ｈ）、７.４３（ｄ，Ｊ＝１.０Ｈｚ，１Ｈ）、７.０９−７.２２（ｍ，３Ｈ）、６.７２（ｄ，Ｊ＝８.１Ｈｚ，１Ｈ）、６.３４−６.３５（ｍ，１Ｈ）、６.２８（ｄ，Ｊ＝３.２Ｈｚ，１Ｈ）、４.３６（ｓ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）２４１.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４６】
実施例４２
フラン−３−イルメチル−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）アミンの調製
ａ）フラン−３−イルメチル−（３−エチニルフェニル）−アミン
工程ａ）における３−フェニルプロピオンアルデヒドの代わりに３−フルアルデヒドを用いることを除き、実施例３９の操作に従って、標記化合物を透明油（７０％）として調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）１９８.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
ｂ）フラン−３−イルメチル−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）アミン
３−エチニルフェノールの代わりにフラン−３−イルメチル−（３−エチニルフェニル）−アミンを用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を白色固体（２０％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.０６（ｓ，１Ｈ）、７.４９（ｓ，１Ｈ）、７.４５−７.４６（ｍ，１Ｈ）、７.０８−７.２２（ｍ，３Ｈ）、６.７１（ｄｄ，Ｊ＝６.５、１.５Ｈｚ，１Ｈ）、６.４７（ｓ，１Ｈ）、４.２２（ｓ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）２４１.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４７】
実施例４３
ナフタレン−１−イルメチル−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）アミンの調製
ａ）ナフタレン−１−イルメチル−（３−エチニルフェニル）−アミン
工程ａ）における３−フェニルプロピオンアルデヒドの代わりに１−ナフトアルデヒドを用いることを除き、実施例３９の操作に従って、標記化合物を透明油（８０％）として調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）２５８.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
ｂ）ナフタレン−１−イルメチル−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）アミン
３−エチニルフェノールの代わりにナフタレン−１−イルメチル−（３−エチニルフェニル）−アミンを用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を白色固体（１８％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.１６（ｄ，Ｊ＝８.２Ｈｚ，１Ｈ）、７.９９（ｂｒｓ，１Ｈ）、７.９１（ｄ，Ｊ＝８.１Ｈｚ，１Ｈ）、７.８１（ｄ，Ｊ＝８.４Ｈｚ，１Ｈ）、７.４２−７.６０（ｍ，４Ｈ）、７.０９−７.２１（ｍ，３Ｈ）、６.７１（ｄ，Ｊ＝８.０Ｈｚ，１Ｈ）、４.８３（ｓ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）３０１.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４８】
実施例４４
ナフタレン−２−イルメチル−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）アミンの調製
ａ）ナフタレン−２−イルメチル−（３−エチニルフェニル）−アミン
工程ａ）における３−フェニルプロピオンアルデヒドの代わりに２−ナフトアルデヒドを用いることを除き、実施例３９の操作に従って、標記化合物を透明油（９０％）として調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）２５８.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
ｂ）ナフタレン−２−イルメチル−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）アミン
３−エチニルフェノールの代わりにナフタレン−２−イルメチル−（３−エチニルフェニル）−アミンを用いることを除き、実施例１の操作に従って、標記化合物を白色固体（１５％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.０１（ｓ，１Ｈ）、７.８０−７.８７（ｍ，４Ｈ）、７.４１−７.５６（ｍ，３Ｈ）、７.０５−７.１９（ｍ，３Ｈ）、６.７０（ｄ，Ｊ＝１.６Ｈｚ，１Ｈ）、４.５６（ｓ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）３０１.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４９】
実施例４５
４−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−フェノールの調製
４−（４−メトキシフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール（８３ｍｇ、０.５ミリモル、実施例１２）に、臭化水素酸（水中４８％、２ｍｌ）を添加し、該溶液を１００℃に加熱した。３時間経過後、水（１０ｍｌ）および酢酸エチル（１０ｍｌ）を添加した。水層を酢酸エチルで３回洗浄し、集めた有機層を乾燥させ、濾過し、蒸発させた。得られた残渣を分取用ＨＰＬＣで精製し、標記化合物を白色固体（４０％）として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.０１（ｓ，１Ｈ）、７.６５（ｄ，Ｊ＝８.７Ｈｚ，２Ｈ）、６.８７（ｄ，Ｊ＝８.７Ｈｚ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１６２.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５０】
実施例４６
ベンジル−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）アミンの調製
Ｎ−（３−［１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル］フェニル）ベンズアミド（５０ ｍｇ、０.１９ミリモル、実施例６）のＴＨＦ（０.５ｍｌ）およびジオキサン（０.５ｍｌ）中冷却（０℃）溶液に、水素化アルミニウムリチウム（ＴＨＦ中１.０Ｍ、０.２ｍｌ）を加え、該反応物を一夜室温にまで加温した。さらに、ジオキサン（１ｍｌ）および水素化アルミニウムリチウム（０.２ｍｌ）を５０℃に加熱しながら添加し、反応を強制的に完了させた。水およびＮａ２ＳＯ４を添加し、残渣を濾過した。濾液を蒸発させて分取用ＨＰＬＣで精製し、標記化合物を黄褐色油（６０％）として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７.９６（ｓ，１Ｈ）、７.４０−７.４３（ｍ，２Ｈ） ７.３０−７.３５（ｍ，２Ｈ）、７.０４−７.２５（ｍ，４Ｈ）、６.６３（ｄ，Ｊ＝８.０Ｈｚ，１Ｈ）、４.３８（ｓ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）２５１.２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５１】
実施例４７
４−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾールの調製
ａ）１−クロロエチニル−４−フルオロベンゼン
１−エチニル−４−フルオロベンゼン（１.３０ｇ、１０ミリモル）の四塩化炭素（５ｍｌ）中攪拌溶液に、炭酸カリウム（１.５６ｇ、１１ミリモル）およびＴＢＡＦ（０.２３ｇ、１.０ミリモル）を添加した。該反応物を室温で一時間攪拌した後、水（２０ｍｌ）を添加し、有機物質を抽出によりクロロホルムに集めた。合したクロロホルム抽出液を乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、蒸発させた。シリカゲルクロマトグラフィー（１００％ヘキサン）に付して精製し、標記化合物を透明油（６０％）として得た。（この操作はSasson, Y.；Webster, O. W.  J. Chem. Soc., Chem. Commun. １９９２、１２００より適応させた。）
ｂ）４−フルオロフェニルエチニルトリフェニルホスホニウムクロリド
エーテル（５０ｍｌ）中のトリフェニルホスフィン（１.７ｇ、６.３ミリモル）に１−クロロエチニル−４−フルオロベンゼン（１.０ｇ、６.３ミリモル）を添加した。室温で１０日間攪拌した後、濾過により白色のホスホニウム塩を集めた（１８％）。（この操作はTanaka, Y.；Miller, S. I.  J. Org. Chem. １９７３、３８、２７０８より適応させた。）
ｃ）４−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール
アジ化ナトリウム（７４ｍｇ、１.１ミリモル）のＤＭＦ（４ｍｌ）中加温（６０℃）溶液に、ＤＭＦ（４ｍｌ）中の４−フルオロフェニルエチニルトリフェニルホスホニウムクロリド（４７６ｍｇ、１.１ミリモル）を滴下した。該混合物を６０℃で３時間攪拌した後、ＤＭＦを蒸発により除去した。残渣をクロロホルムに溶かし、濾過し、濾液を蒸発させて黄色固体を得た。この固体をエタノール（５.５ｍｌ）に溶かし、水酸化ナトリウム溶液（０.２５Ｍ、１１ｍｌ）を添加した。攪拌し、９０℃で２時間加熱した後、水（２０ｍｌ）を添加して、水層をクロロホルム（１０ｍｌｘ２）で抽出した。（有機層を捨てた。）水層をＨＣｌ（６Ｎ）で中和し、再度、クロロホルム（１０ｍｌｘ３）で抽出した。有機層を合し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、蒸発させた。分取用ＨＰＬＣで精製して標記化合物を黄色固体（２０％）として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.１３（ｓ，１Ｈ）、７.８４−７.８８（ｍ，２Ｈ）、７.１６−７.２１（ｍ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１６４.２（Ｍ＋Ｈ）＋。（この操作はTanaka, Y.；Miller, S. I.  J. Org. Chem. １９７３、３８、２７０８より適応させた。）
【０１５２】
実施例４８
２−ブロモ−５−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−フェノール、２,６−ジブロモ−５−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−フェノールおよび２,４−ジブロモ−５−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−フェノールの調製
酢酸（１ｍｌ）中の３−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−フェノール（５４ｍｇ、０.３３ミリモル、実施例１）に、臭素（１８μＬ、０.３３ミリモル）を添加した。室温で１時間攪拌した後、水（１０ｍｌ）および酢酸エチル（１０ｍｌ）を添加した。水層を飽和ＮａＨＣＯ３で中和した。水層を酢酸エチルで３回洗浄し、集めた有機層を乾燥させ、濾過し、蒸発させた。得られた残渣を分取用ＨＰＬＣで精製し、３種の化合物を、各々、白色固体として得た。２−ブロモ−５−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−フェノール（１４％）：１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.１２（ｓ，１Ｈ）、７.５３（ｄ，Ｊ＝８.２Ｈｚ，１Ｈ）、７.４０（ｄ，Ｊ＝２.０Ｈｚ，１Ｈ）、７.２２（ｄｄ，Ｊ＝８.２、２.０Ｈｚ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）２４０.０（Ｍ＋Ｈ）＋。２,６−ジブロモ−５−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−フェノール（７％）：１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.２４（ｓ，１Ｈ）、７.５６（ｄ，Ｊ＝８.３Ｈｚ，１Ｈ）、７.１６（ｄ，Ｊ＝８.３Ｈｚ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）３１９.９（Ｍ＋Ｈ）＋。２,４−ジブロモ−５−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−フェノール（８％）：１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.２９（ｓ，１Ｈ）、７.８０（ｓ，１Ｈ）、７.３６（ｓ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）３１９.９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５３】
実施例４９
２−（５−ブロモ−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−４−メチル−ピリジンの調製
３−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−フェノールの代わりに２−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）−４−メチル−ピリジン（実施例２１）を用いることを除き、実施例４８の操作に従って、標記化合物を橙色固体（１６％）として調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８.５３（ｄ，Ｊ＝５.０Ｈｚ，１Ｈ）、７.９２（ｓ，１Ｈ）、７.３２（ｄ，Ｊ＝５.０Ｈｚ，１Ｈ）、２.４８（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）２３９.０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５４】
実施例５０
１Ｈ−ナフト［１,２−ｄ］−１,２,３−トリアゾールの調製
Morgan, G.；J. Chem. Soc. １９１０、９７、１７１９  ＭＳ（ＥＳＩ）１７０.０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５５】
実施例５１
２,８−ジヒドロ−インデノ［１,２−ｄ］−１,２,３−トリアゾールの調製
Rapoport, H.；Chen, H. H.  J. Org. Chem. １９６０、２５；３１３。ＭＳ（ＥＳＩ）１５８.０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５６】
実施例５２
４−フェニル−１Ｈ−１,２,３−トリアゾールの調製
Tanaka, Y.；Velen, S. R.；Miller, S. I.  Tetrahedron、１９７３、２９、３２７１。ＭＳ（ＥＳＩ）１４６.０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５７】
実施例５３
５,５ａ,６,８−テトラヒドロ−４Ｈ−アセナフト［４,５−ｄ］−１,２,３−トリアゾールの調製
Rapoport, H.；Nilsson, W.  J. Am. Chem. Soc. １９６１；８３、４２６２。ＭＳ（ＥＳＩ）１９８.０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５８】
【表１】
2007525947.tif 000005
【表２】
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【表３】
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【表４】
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【表５】
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【表６】
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【表７】
2007525947.tif 000011
【表８】
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【表９】
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【表１０】
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【表１１】
2007525947.tif 000015
【表１２】
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【表１３】
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【表１４】
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【表１５】
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【表１６】
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【表１７】
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【表１８】
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【表１９】
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【表２０】
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【表２１】
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【表２２】
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【表２３】
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【表２４】
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【表２５】
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【表２６】
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【表２７】
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【表２８】
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【表２９】
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【表３０】
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【表３１】
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【表３２】
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【表３３】
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【表３４】
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【表３５】
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【表３６】
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【表３７】
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【表３８】
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【表３９】
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【表４０】
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【表４１】
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【表４２】
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【表４３】
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【表４４】
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【表４５】
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【表４６】
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【表４７】
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【表４８】
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【表４９】
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【表５０】
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【表５１】
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【表５２】
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【表５３】
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【表５４】
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【表５５】
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【表５６】
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【表５７】
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【表５８】
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【表５９】
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【表６０】
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【表６１】
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【表６２】
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【表６３】
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【表６４】
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【表６５】
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【表６６】
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【表６７】
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【表６８】
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【表６９】
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【表７０】
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【表７１】
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【表７２】
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【表７３】
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【表７４】
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【表７５】
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【表７６】
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【表７７】
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【表７８】
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【表７９】
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【表８０】
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【表８１】
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【表８２】
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【表８３】
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【表８４】
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【表８５】
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【表８６】
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【表８７】
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【表８８】
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【表８９】
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【表９０】
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【表９１】
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【表９２】
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【表９３】
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【表９４】
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【表９５】
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【表９６】
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【表９７】
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【表９８】
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【表９９】
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【表１００】
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【表１０１】
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【表１０２】
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【表１０３】
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【表１０４】
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【表１０５】
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【表１０６】
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【表１０７】
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【表１０８】
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【表１０９】
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【表１１０】
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【表１１１】
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【表１１２】
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【表１１３】
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【表１１４】
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【表１１５】
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【表１１６】
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【表１１７】
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【表１１８】
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【表１１９】
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【表１２０】
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【表１２１】
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【表１２２】
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【表１２３】
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【表１２４】
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【表１２５】
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【表１２６】
2007525947.tif 000130
【表１２７】
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【表１２８】
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【表１２９】
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【表１３０】
2007525947.tif 000134
【表１３１】
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【表１３２】
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【表１３３】
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【表１３４】
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【表１３５】
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【表１３６】
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【表１３７】
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【表１３８】
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【表１３９】
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【表１４０】
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【表１４１】
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【表１４２】
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【表１４３】
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【表１４４】
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【表１４５】
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【表１４６】
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【表１４７】
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【表１４８】
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【表１４９】
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【表１５０】
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【表１５１】
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【表１５２】
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【表１５３】
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【表１５４】
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【表１５６】
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【表１６０】
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【表１６１】
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【表１６４】
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【表１６５】
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【表１６６】
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【表１６８】
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【表１６９】
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【表１７０】
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【表１７１】
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【表１７２】
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【表１７３】
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【表１７４】
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【表１７５】
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【表１７６】
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【表１７７】
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【表１７８】
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【表１７９】
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【表１８０】
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【表１８１】
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【表１８２】
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【表１８３】
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【表１８４】
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【表１８５】
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【表１８６】
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【表１８７】
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【表１８８】
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【表１８９】
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【表１９０】
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【表１９１】
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【表１９２】
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【表１９３】
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【表１９４】
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【表１９５】
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【表１９６】
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【表１９７】
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【表１９８】
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【表１９９】
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【表２００】
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【表２０１】
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【表２０２】
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【表２０３】
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【表２０４】
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【表２０５】
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【表２０６】
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【表２０７】
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【表２０８】
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【表２０９】
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【表２１０】
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【表２１１】
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【表２１２】
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【表２１３】
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【表２１４】
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【表２１５】
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【表２１６】
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【表２１７】
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【表２１８】
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【表２１９】
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【表２２０】
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【表２２１】
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【表２２２】
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【表２２３】
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【表２２４】
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【表２２５】
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【表２２６】
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【表２２７】
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【表２２８】
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【表２２９】
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【表２３０】
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【表２３１】
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【表２３２】
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【表２３３】
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【表２３４】
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【表２３５】
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【表２３６】
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【表２３７】
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【表２３８】
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【表２３９】
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【表２４０】
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【表２４１】
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【表２４２】
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【表２４３】
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【表２４４】
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【表２４５】
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【表２４６】
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【表２４７】
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【表２４８】
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【表２４９】
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【表２５０】
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【表２５１】
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【表２５２】
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【表２５３】
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【表２５４】
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【表２５５】
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【表２５６】
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【表２５７】
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【表２５８】
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【表２５９】
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【表２６０】
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【表２６１】
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【表２６２】
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【表２６３】
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【表２６４】
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【表２６５】
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【表２６６】
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【表２６７】
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【表２６８】
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【表２６９】
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【表２７０】
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【表２７１】
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【表２７２】
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【表２７３】
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【表２７４】
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【表２７５】
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【表２７６】
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【表２７７】
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【表２７８】
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【表２７９】
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【表２８０】
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【表２８１】
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【表２８２】
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【表２８３】
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【表２８４】
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【表２８５】
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【表２８６】
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【表２８７】
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【表２８８】
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【表２８９】
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【表２９０】
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【０１５９】
本願明細書は、その特定の実施形態を含め、本発明を十分に開示する。本明細書に具体的に開示される実施形態の修飾および改良は特許請求の範囲内にある。当業者は、本願明細書の記載から、さらに工夫することなく、本発明を最大限利用することができると考える。したがって、実施例は、本発明の範囲を何ら特定するものではなく、単なる例示と解釈すべきである。独占的性質または特権を請求する発明の実施形態は添付した特許請求の範囲で定義される。
【図面の簡単な説明】
【０１６０】
（原文に記載なし）
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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