(57)【要約】タンパク質の非酵素的糖化及び架橋は、年齢とともに増加する長命なタンパク質の糖化最終産物及び架橋を伴う加齢プロセスの一部である。このプロセスは、糖尿病とともに発生するような血中及び細胞内環境における還元糖の濃度上昇で増加する。影響される分子の構造及び機能の完全な状態は、これらの修飾によって崩壊するようになり、深刻な結果に帰着し得る。本発明の化合物は、非酵素的な糖化のこのプロセスを阻害し、従って、糖尿病又は加齢によって引き起こされるいくつかの病的影響を阻害するために使用することができる。該化合物は、早発な加齢、食品中のタンパク質の損傷を妨げることに有用でもあり、歯の変色を予防することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物における糖化最終産物又はタンパク質架橋の形成を阻害する方法であって、当該方法が有効量の化合物又はその化合物の薬学的に許容可能な塩を前記生物に投与することを含み、前記化合物が：
ＬＲ１０３：  １−［（４−クロロベンジル）−３−（３，４−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０４：  ４−（４−フルオロ−３−クロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミドフェニル−２−カルボン酸、
ＬＲ１０５：  １［（２−フルオロ−６−クロロベンジル）−３−（３，４−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０６：  ４−（４−クロロベンジルアミノフェノキシイソブチル）酸、
ＬＲ１０７：  ２−クロロベンゼン−１，４−ビス（４−ウレイドフェノキシイソブチル酸）、
ＬＲ１０８：  １−［（４−クロロベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０９：  １−［（２−フルオロ−６−クロロベンジル）−３−（２−フルオロ−６−クロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸
ＬＲ１１０：  ４−（１，２，３，４−テトラヒドロアクリジン−９−カルボキサミドフェノキシイソブチル）酸、
ＬＲ１１１：  ８−キノリノキシ酢酸、
ＬＲ１１２：  ４，４’−ビス［（メチレンオキシエチレンアミノ）フェノキシ］イソブチル酸、
ＬＲ１１３：  Ｌ−８−キノリノリル（アセチルヒスチジン）、
ＬＲ１１４：  ４−［（３，５−ジクロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミド］−２−ヒドロキシベンゼン−４−カルボン酸、及び
ＬＲ１１５：  Ｌ，α−４−［（３，５−ジクロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミド］フェニルアラニン
からなる群から選択される、前記方法。
【請求項２】
生物における加齢の有害な効果を遅らせる方法であって、前記効果が糖化した最終産物又はタンパク質架橋の形成であり、前記方法が有効量の化合物又はその化合物の薬学的に許容可能な塩を前記生物に投与することを含み、前記化合物が：
ＬＲ１０３：  １−［（４−クロロベンジル）−３−（３，４−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０４：  ４−（４−フルオロ−３−クロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミドフェニル−２−カルボン酸、
ＬＲ１０５：  １［（２−フルオロ−６−クロロベンジル）−３−（３，４−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０６：  ４−（４−クロロベンジルアミノフェノキシイソブチル）酸、
ＬＲ１０７：  ２−クロロベンゼン−１，４−ビス（４−ウレイドフェノキシイソブチル酸）、
ＬＲ１０８：  １−［（４−クロロベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０９：  １−［（２−フルオロ−６−クロロベンジル）−３−（２−フルオロ−６−クロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸
ＬＲ１１０：  ４−（１，２，３，４−テトラヒドロアクリジン−９−カルボキサミドフェノキシイソブチル）酸、
ＬＲ１１１：  ８−キノリノキシ酢酸、
ＬＲ１１２：  ４，４’−ビス［（メチレンオキシエチレンアミノ）フェノキシ］イソブチル酸、
ＬＲ１１３：  Ｌ−８−キノリノリル（アセチルヒスチジン）、
ＬＲ１１４：  ４−［（３，５−ジクロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミド］−２−ヒドロキシベンゼン−４−カルボン酸、及び
ＬＲ１１５：  Ｌ，α−４−［（３，５−ジクロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミド］フェニルアラニン
からなる群から選択される、前記方法。
【請求項３】
糖尿病に起因する合併症の患者の進行を遅らせる方法であって、前記合併症が糖化最終産物又はタンパク質架橋の形成に起因し、前記方法が有効量の化合物又はその化合物の薬学的に許容可能な塩を前記患者に投与することを含み、前記化合物が：
ＬＲ１０３：  １−［（４−クロロベンジル）−３−（３，４−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０４：  ４−（４−フルオロ−３−クロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミドフェニル−２−カルボン酸、
ＬＲ１０５：  １［（２−フルオロ−６−クロロベンジル）−３−（３，４−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０６：  ４−（４−クロロベンジルアミノフェノキシイソブチル）酸、
ＬＲ１０７：  ２−クロロベンゼン−１，４−ビス（４−ウレイドフェノキシイソブチル酸）、
ＬＲ１０８：  １−［（４−クロロベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０９：  １−［（２−フルオロ−６−クロロベンジル）−３−（２−フルオロ−６−クロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸
ＬＲ１１０：  ４−（１，２，３，４−テトラヒドロアクリジン−９−カルボキサミドフェノキシイソブチル）酸、
ＬＲ１１１：  ８−キノリノキシ酢酸、
ＬＲ１１２：  ４，４’−ビス［（メチレンオキシエチレンアミノ）フェノキシ］イソブチル酸、
ＬＲ１１３：  Ｌ−８−キノリノリル（アセチルヒスチジン）、
ＬＲ１１４：  ４−［（３，５−ジクロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミド］−２−ヒドロキシベンゼン−４−カルボン酸、及び
ＬＲ１１５：  Ｌ，α−４−［（３，５−ジクロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミド］フェニルアラニン
からなる群から選択される、前記方法。
【請求項４】
慢性関節リウマチ、アルツハイマー症、尿毒症、神経毒症、又はアテローム性動脈硬化症の患者の進行を遅らせる方法であって、前記方法が有効量の化合物又はその化合物の薬学的に許容可能な塩を前記患者に投与することを含み、前記化合物が：
ＬＲ１０３：  １−［（４−クロロベンジル）−３−（３，４−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０４：  ４−（４−フルオロ−３−クロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミドフェニル−２−カルボン酸、
ＬＲ１０５：  １［（２−フルオロ−６−クロロベンジル）−３−（３，４−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０６：  ４−（４−クロロベンジルアミノフェノキシイソブチル）酸、
ＬＲ１０７：  ２−クロロベンゼン−１，４−ビス（４−ウレイドフェノキシイソブチル酸）、
ＬＲ１０８：  １−［（４−クロロベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０９：  １−［（２−フルオロ−６−クロロベンジル）−３−（２−フルオロ−６−クロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸
ＬＲ１１０：  ４−（１，２，３，４−テトラヒドロアクリジン−９−カルボキサミドフェノキシイソブチル）酸、
ＬＲ１１１：  ８−キノリノキシ酢酸、
ＬＲ１１２：  ４，４’−ビス［（メチレンオキシエチレンアミノ）フェノキシ］イソブチル酸、
ＬＲ１１３：  Ｌ−８−キノリノリル（アセチルヒスチジン）、
ＬＲ１１４：  ４−［（３，５−ジクロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミド］−２−ヒドロキシベンゼン−４−カルボン酸、及び
ＬＲ１１５：  Ｌ，α−４−［（３，５−ジクロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミド］フェニルアラニン
からなる群から選択される、前記方法。
【請求項５】
食料品におけるタンパク質の損傷を防ぐ方法であって、前記方法が有効量の化合物又はその化合物の薬学的に許容可能な塩と前記食料品とを混合することを含み、前記有効量が糖化最終産物又はタンパク質架橋の形成を阻害し、前記化合物が：
ＬＲ１０３：  １−［（４−クロロベンジル）−３−（３，４−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０４：  ４−（４−フルオロ−３−クロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミドフェニル−２−カルボン酸、
ＬＲ１０５：  １［（２−フルオロ−６−クロロベンジル）−３−（３，４−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０６：  ４−（４−クロロベンジルアミノフェノキシイソブチル）酸、
ＬＲ１０７：  ２−クロロベンゼン−１，４−ビス（４−ウレイドフェノキシイソブチル酸）、
ＬＲ１０８：  １−［（４−クロロベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０９：  １−［（２−フルオロ−６−クロロベンジル）−３−（２−フルオロ−６−クロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸
ＬＲ１１０：  ４−（１，２，３，４−テトラヒドロアクリジン−９−カルボキサミドフェノキシイソブチル）酸、
ＬＲ１１１：  ８−キノリノキシ酢酸、
ＬＲ１１２：  ４，４’−ビス［（メチレンオキシエチレンアミノ）フェノキシ］イソブチル酸、
ＬＲ１１３：  Ｌ−８−キノリノリル（アセチルヒスチジン）、
ＬＲ１１４：  ４−［（３，５−ジクロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミド］−２−ヒドロキシベンゼン−４−カルボン酸、及び
ＬＲ１１５：  Ｌ，α−４−［（３，５−ジクロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミド］フェニルアラニン
からなる群から選択される、前記方法。
【請求項６】
ＬＲ１０３：  １−［（４−クロロベンジル）−３−（３，４−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０４：  ４−（４−フルオロ−３−クロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミドフェニル−２−カルボン酸、
ＬＲ１０５：  １［（２−フルオロ−６−クロロベンジル）−３−（３，４−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０６：  ４−（４−クロロベンジルアミノフェノキシイソブチル）酸、
ＬＲ１０７：  ２−クロロベンゼン−１，４−ビス（４−ウレイドフェノキシイソブチル酸）、
ＬＲ１０８：  １−［（４−クロロベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０９：  １−［（２−フルオロ−６−クロロベンジル）−３−（２−フルオロ−６−クロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸
ＬＲ１１０：  ４−（１，２，３，４−テトラヒドロアクリジン−９−カルボキサミドフェノキシイソブチル）酸、
ＬＲ１１１：  ８−キノリノキシ酢酸、
ＬＲ１１２：  ４，４’−ビス［（メチレンオキシエチレンアミノ）フェノキシ］イソブチル酸、
ＬＲ１１３：  Ｌ−８−キノリノリル（アセチルヒスチジン）、
ＬＲ１１４：  ４−［（３，５−ジクロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミド］−２−ヒドロキシベンゼン−４−カルボン酸、及び
ＬＲ１１５：  Ｌ，α−４−［（３，５−ジクロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミド］フェニルアラニン
からなる群から選択される化合物、又はその化合物の薬学的に許容可能な塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願へのクロスリファレンス
［０００１］本出願は、１９９９年４月５日出願の仮出願第６０／１２７，８３５号に関連し、２０００年４月５日出願の出願第０９／５４３，７０３（現、米国特許第６，３３７，３５０号）の一部継続出願である、２００１年３月８日出願の出願第０９／８００，９７６号（現、米国特許第６，６０５、６４２号）の一部継続出願であり、これら全ては参照により本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
［０００２］本発明は、一般的に、グルコース及び他の還元糖、例えばフルクトース又はリボースとの反応を通じてタンパク質の修飾や老化に関し、より具体的には先進的糖化最終産物や架橋の形成にしばしば帰着するタンパク質の非酵素的糖化の阻害に関する。
【０００３】
［０００３］血中及び細胞内環境における還元糖の濃度上昇は、先進的糖化最終産物（ＡＧＥ）として知られる糖化及び脱水縮合複合体の非酵素的形成に至る。非酵素的糖化は、還元糖と、タンパク質、脂質、ＤＮＡのアミノ基との複雑な反応系列である。これらの複雑な産物は、タンパク質、脂質、及びＤＮＡの遊離アミノ基上に形成する（Ｂｕｃａｌａ  ａｎｄ  Ｃｅｒａｍｉ，１９９２；  Ｂｕｃａｌａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３；  Ｂｕｃａｌａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４）。この現象は、「褐変」又は「メイラード」反応と呼ばれ、食品産業によって今世紀初頭に発見された（Ｍａｉｌｌａｒｄ，１９１６）。この反応は、転位を受けるシッフ塩基の可逆的な形成で開始され、安定なアマドリ（Ａｍａｄｏｒｉ）産物を形成する。シッフ塩基とアマドリ産物との両者は、さらにジカルボニル中間体を通して一連の反応を受け、ＡＧＥを形成する。糖付加したヘモグロビンの発見と糖尿病患者においてそれらの存在が増加しているという発見によってはじめて生物学において同様のプロセスの重要性が明らかになった（Ｒａｈｂａｒ，１９６８；  Ｒａｈｂａｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９６９）。ヒト糖尿病患者と動物の糖尿病モデルにおいて、これらの非酵素的反応が加速され、ＡＧＥ形成の増加、並びにヘモグロビン及びアルブミンに加えて、コラーゲン、フィブロネクチン、チューブリン、レンズクリスタリン、ミエリン、ラミニン及びアクチンのような長命のタンパク質の糖化の増加の原因となり、同様にＬＤＬ関連脂質及びアポタンパク質の糖化の増加原因となる。さらに、後期のメイラード産物に類似したスペクトルと蛍光の特性をもつ茶色の色素はまた、老齢者由来のレンズクリスタリンとコラーゲンのようないくつかの長命なタンパク質との関係でインビボに見出されている。年齢に関連した色素の直線的増加は、２０−９０歳の間のヒト硬膜のコラーゲンにおいて観察された。ＡＧＥ修飾タンパク質は年齢とともにゆっくり増加し、正常組織の再構築に寄与すると考えられる。それらのレベルは、血糖の高レベルが維持された結果として、糖尿病患者において顕著に増加し、組織タンパク質の構造及び機能の変化、ＡＧＥ特異的受容体を介した細胞応答の刺激、又は活性酸素種（ＲＯＳ）の発生を含む様々なメカニズムを通じて組織損傷へと導く（最近の概要のためにＢｏｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５を参照）。細胞機能において主要な役割をしばしば有する影響を受けた分子の構造及び機能の完全な状態が、これらの修飾によって妨害されるようになり、影響を受けた臓器、例えば、腎臓、目、神経、及び微小血管機能に重篤な結果をもたらす（Ｓｉｌｂｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３；  Ｂｒｏｗｎｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５）。
【０００４】
［０００４］ＡＧＥによる巨大分子の構造変化は、年齢の増加とともに正常な環境下で蓄積されることが知られている。この蓄積は、糖尿病によって激しく加速され、高血糖症と強く関連している。例えば、亜内皮基底膜中のタンパク質におけるＡＧＥ形成は、血管壁でのタンパク質／タンパク質及びタンパク質／細胞相互作用における激しい構造及び機能変化へと導く広範囲な架橋形成の原因となる（Ｈａｉｔｏｇｌｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２；  Ａｉｒａｋｓｉｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３）。
【０００５】
［０００５］先進的糖化最終産物（ＡＧＥ）の形成及び蓄積の増加は、糖尿病の合併症、正常な加齢、アテローム性動脈硬化症、及びアルツハイマー症へと導く主な病因のプロセスとして関連付けられている。このプロセスは、糖尿病によって加速され、腎障害（Ｎｉｃｈｏｌｌｓ  ａｎｄ  Ｍａｎｄｅｌ，１９８９）、網膜症（Ｈａｍｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１）、及び神経障害（Ｃａｍｅｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２）を含む各種の糖尿病の合併症の発症に寄与すると仮定されている。具体的には、ＡＧＥによる腎臓への組織損傷は、腎機能における進行性減退、末期の腎疾患（ＥＳＲＤ）（Ｍａｋｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４）、及びＥＳＲＤを患う患者の血清中の低分子量（ＬＭＷ）のＡＧＥペプチド（グリコトキシン（ｇｌｙｃｏｔｏｘｉｎ））（Ｋｏｓｃｈｉｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）の蓄積へと導く（Ｍａｋｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１）。これらの低分子量（ＬＭＷ）−ＡＧＥは、血漿又は組織成分、例えば、低密度リポプロテイン（ＬＤＬ）（Ｂｕｃａｌａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４）又はコラーゲン（Ｍｉｙａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３）と容易に新しい架橋を形成することができ、糖尿病患者における組織損傷及び罹病の進行を加速する。
【０００６】
［０００６］腎臓やラットのレンズの異なる損傷及びアテローム性動脈硬化症での糖尿病の合併症の進行におけるＡＧＥの寄与を直接指示する証拠が報告されている（Ｖｌａｓｓａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４；  Ｖｌａｓｓａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５；  Ｈｏｒｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７；  Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７；  Ｓｏｕｌｉｓ−Ｌｉｐａｒｏｔａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１；  Ｂｕｃａｌａ  ａｎｄ  Ｖｌａｓｓａｒａ，１９９７；  Ｂｕｃａｌａ  ａｎｄ  Ｒａｈｂａｒ，１９９８；  Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。確かに、健常なラットへの予備形成したＡＧＥの注入は、腎糸球体肥大及びメサンギウム硬化症、マトリックスタンパク質の遺伝子発現、並びに増殖因子の産生を誘導する（Ｂｒｏｓｎｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１；  Ｖｌａｓｓａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５）。証拠のいくつかの方向は、反応性のカルボニル中間体（メチルグリオキサル、グリコールアルデヒド、グリオキサル、３−デオキシグルコソン、マロンジアルデヒド及びヒドロキシノネナール）における増加が糖尿病の高血糖症の帰結であることを示す。「カルボニルストレス」は、タンパク質及び脂質の修飾の増加へと導き、オキシダントストレス及び組織損傷へと続く（Ｂａｙｎｅｓ  ａｎｄ  Ｔｈｏｒｐｅ，１９９９；  Ｏｎｏｒａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８；  ＭｃＬｅｌｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４）。さらなる研究により、アミノグアニジン（ＡＧ）はＡＧＥ形成の阻害剤であるが、これは糸球体の組織障害を改善し、誘導した糖尿病ラットにおけるアルブミン尿症を減少することが示されている（Ｓｏｕｌｉｓ−Ｌｉｐａｒｏｔａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１；  Ｉｔａｋｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１）。ヒトでは、糖尿病患者におけるアミノグアニジン治療の結果として、腎機能の向上と同時に生じるヘモグロビン（Ｈｂ）−ＡＧＥレベルの減少（Ｍａｋｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２）は、糖尿病の合併症の病因におけるＡＧＥの重要性についての多くの証拠を提供する（Ｂｕｃａｌａ  ａｎｄ  Ｖｌａｓｓａｒａ，１９９７）。
【０００７】
［０００７］真性糖尿病の世界的な流行は、特に米国において、罹患率と致死率の重大な増加を伴って数百万人を悩まし、並びに米国において糖尿病の合併症治療のために非常な財務上の重責となり、該疾患の合併症を予防し及び治療する可能性を有する薬物の探索と開発への主な動機付けとなる。これまで、糖尿病における高血糖に誘導される組織損傷のメカニズムについては、十分に理解されていない。しかしながら、４つの発病のメカニズムが提案され、ポリオール経路の活性の増大、特異的プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）異性体の活性化、先進的糖化最終産物の形成と蓄積、及び活性酸素種（ＲＯＳ）の発生の増加を含む（Ｋｅｎｎｅｄｙ  ａｎｄ  Ｌｙｏｎｓ，１９９７）。ＥＳＲＤ患者（Ｈｏｒｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）及び糖尿病ラットのレンズ（Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）から得た腎臓由来の異なる組織におけるごく最近の免疫組織化学的研究は、カルボキシルメチルリジン（ＣＭＬ）、ペントシジン、２つの既知の糖化産物、及びピラリンに対する特異的抗体を用いることによって、腎臓とラットレンズの異なる障害におけるこれらＡＧＥ成分の局在を突き止め、そして、組織タンパク質の永久的及び不可逆的修飾の原因となる主な因子となるＲＯＳの発生と密接に関連して、タンパク質−ＡＧＥ形成のための多くの証拠を提供してきた。したがって、ＡＧＥ形成と抗オキシダントの阻害は、糖尿病の合併症の予防及び治療の有効な手段として約束を保持する。
【０００８】
［０００８］糖尿病制御及び合併症試験（Ｔｈｅ  Ｄｉａｂｅｔｉｃ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｔｒｉａｌ）（ＤＣＣＴ）は、糖尿病の合併症の発生に対する主要なリスク因子として高血糖であることを明らかにしている（Ｔｈｅ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｔｒｉａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｇｒｏｕｐ，１９９３）。説得力のある証拠が、高血糖と長期間の糖尿病の合併症との間の主要な発病の連結として先進的糖化最終産物の形成を同定している（Ｍａｋｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４；  Ｋｏｓｃｈｉｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７；  Ｍａｋｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３；  Ｂｕｃａｌａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４；  Ｂａｉｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。
【０００９】
［０００９］還元糖と、タンパク質、脂質及びＤＮＡのアミノ基との間の反応は、ジカルボニル中間体を介して一連の反応を受け、先進的糖化最終産物を生じる（Ｂｕｃａｌａ  ａｎｄ  Ｃｅｒａｍｉ，１９９２；  Ｂｕｃａｌａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３；  Ｂｕｃａｌａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４）。
【００１０】
［０００１０］ヒトの糖尿病患者と動物の糖尿病モデルにおいて、ＡＧＥ形成と長命の構造タンパク質とリポプロテインの蓄積が報告されている。ごく最近の報告は、糖化が代謝性酵素を不活性化することを示している（Ｙａｎ  ａｎｄ  Ｈａｒｄｉｎｇ，１９９９；  Ｋａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０００；  Ｖｅｒｂｅｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００；  Ｏ’Ｈａｒｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。糖化誘導による免疫グロブリンＧの変化は、非常に興味深い。糖尿病患者におけるＩｇＧのＦａｂ断片の糖化についての報告は、これらの患者において観察された免疫不全がこの現象によって説明されるかもしれないことを示唆する（Ｌａｐｏｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。さらに、糖化によって損傷を受けたＩｇＧに対するＩｇＭ応答と慢性関節リウマチにおける疾患の活性との間の関連性が報告されている（Ｌｕｃｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。また、糖化による高密度リポプロテインの減損が記載されている（Ｈｅｄｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。
【００１１】
［０００１１］最近、メチルグリオキサル（ＭＧ）は、共通の仲介人であり、ＡＧＥを形成する最も反応性のジカルボニルとして相当の注目を受けている（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ  ａｎｄ  Ｔｈｏｒｎａｌｌｅｙ，１９９３；  Ｂｅｉｓｓｗｅｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。それはまた、糖化反応過程での活性酸素種（ＲＯＳ）（フリーラジカル）発生の原因でもある（Ｙｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５）。
【００１２】
［０００１２］自然は、「カルボニルストレス」及びＡＧＥの蓄積の有害な効果から組織を保護するためのいくつかの体液性及び細胞性防御メカニズムを案出しており、例えば、グリオキシラーゼシステム（Ｉ及びＩＩ）及びアルドース還元酵素は、ＭＧのＤ−ラクトースへの無毒化を触媒する（ＭｃＬｅｌｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４）。アマドリ酵素（Ａｍａｄｏｒｉａｓｅ）はまた、アマドリ産物の脱糖化を触媒するコウジカビ属の菌（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）に見出された新規な酵素のクラスである（Ｔａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）。さらに、いくつかのＡＧＥ受容体は、単球の表面膜上、並びにマクロファージ、内皮細胞、メサンギウム細胞、及び肝細胞上に特徴付けられている。これらの受容体の１つであるＲＡＧＥは、免疫グロブリンスーパーファミリーの一員であるが、幅広い組織分布があることが見出されている（Ｓｃｈｍｉｄｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４；  Ｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）。糖化及びＡＧＥ形成に対する様々な天然の防御メカニズムの発見は、糖尿病の血管及び末梢神経の障害の病因におけるＡＧＥの重要な役割を示唆する。ＭＧは、タンパク質のアルギニン及びリジン残基に結合し、不可逆的に修飾する。ＭＧにより修飾されたタンパク質は、ＡＧＥ受容体に対するリガンドとなることが示されており（Ｗｅｓｔｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）、ＭＧにより修飾されたタンパク質がＡＧＥに見出されるタンパク質に類似している（Ｓｃｈａｌｋｗｉｊｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）ことを示している。さらに、グリコールアルデヒドは、ＡＧＥ形成における反応性中間体であり、マクロファージスカベンジャー受容体に対する活性リガンドを生じる（Ｎａｇａｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。ＬＤＬにおけるＭＧの効果は、インビボ及びインビトロで特徴付けられている（Ｂｕｃａｌａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３）。
【００１３】
［０００１３］アラキドン酸塩のような多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）の脂質の過酸化はまたカルボニル化合物を生じる；いくつかはＭＧやＧＯのような炭水化物から形成されるものと同一であり（Ａｌ−Ａｂｅｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）、そして、他はマロンジアルデヒド（ＭＤＡ）や４−ヒドロキシノネナール（ＨＮＥ）のような脂質の特性を示す（Ｒｅｑｕｅｎａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）。後者の２つのカルボニル化合物は、脂質過酸化（ｌｉｐｏｘｉｄａｔｉｏｎ）産物を生産する（Ａｌ−Ａｂｅｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６；  Ｒｅｑｕｅｎａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）。最近の報告では、修飾されたコラーゲンの架橋及び真性糖尿病における脂質誘導のＭＤＡの重要性を強調する（Ｓｌａｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。いくつかのＡＧＥ、フルオロフォア（ｆｌｕｏｒｏｐｈｏｒｅ）でもあり非蛍光性でもあり、架橋しているタンパク質に関係し、特徴付けられている（Ｂａｙｎｅｓ  ａｎｄ  Ｔｈｏｒｐｅ，１９９９）。グルコース誘導のＡＧＥ−タンパク質架橋に加えて、ＡＧＥ架橋はまた、組織タンパク質と、ＡＧＥ−タンパク質消化や代謝回転から形成したＡＧＥ含有ペプチド断片との間にも発生する。これらの反応性ＡＧＥ−ペプチドは、現在、グリコトキシン（ｇｌｙｃｏｔｏｘｉｎ）と呼ばれ、正常は腎臓によって消化される。糖尿病患者では、これらグリコトキンは血清タンパク質と反応し、幅広い組織損傷の原因となる（Ｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）。しかしながら、架橋構造の化学的性質に関する詳細な情報は不明のままである。現在までに特徴付けられている架橋構造は、化学的及びスペクトル分析に基づき、今でも未知な主要な架橋構造とともに、インビボで発生するＡＧＥ架橋の小さな断片だけから構成される。ごく最近、新規な酸に不安定なＡＧＥ構造であるＮ−オメガ−カルボキシメチルアルギニン（ＣＭＡ）が、コラーゲンの酵素的加水分解によって同定されている。その濃度は、ペントシジンの濃度よりも１００倍大きいことが見出され（Ｉｉｊｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）、主要なＡＧＥ架橋構造であると仮定される。
【００１４】
［０００１４］加齢及び糖尿病に加えて、ＡＧＥの形成は、いくつか他の病理学的な状態と関連している。ＩｇＭ  抗ＩｇＧ−ＡＧＥは慢性関節リウマチ活性の臨床測定に関連付けられるようである（Ｌｕｃｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。ＡＧＥと慢性関節リウマチとの間の対比が、北アメリカンインディアンにおいてなされた（Ｎｅｗｋｉｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。ＡＧＥは、アルツハイマー症における脳プラークに存在し、そして、ＡＧＥの存在は、アルツハイマー症の発生を補助し、促進するかもしれない（Ｄｕｒａｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９；  Ｍｕｎｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８；  Ｍｕｎｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）。尿毒症患者は、年齢に見合った制御に比べて血清ＡＧＥのレベルが上昇している（Ｏｄａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９；  Ｄａｗｎａｙ  ａｎｄ  Ｍｉｌｌａｒ，１９９８）。ＡＧＥはまた、神経毒症状と相関している（Ｋｉｋｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）。ＡＧＥタンパク質は、マウスにおけるアテローム性動脈硬化症と関連し（Ｓａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）、そして、血液透析を受けている患者におけるアテローム性動脈硬化症と関連している（Ｔａｋａｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。アミノグアニジンをウサギに与えた研究は、アミノグアニジン量の増加が大動脈のプラーク形成の減少へと導くことが示され、先進的糖化が粥腫（ａｔｈｅｒｏｇｅｎｅｓｉｓ）に関係するかもしれないことを示唆し、先進的糖化の阻害物がそのプロセスを遅らせるかもしれない可能性を挙げている（Ｐａｎａｇｉｏｔｏｐｏｕｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。先進的糖化最終産物のＮ（イプシロン）−カルボキシメチルリジン（ＣＭＬ）のかなり堆積は、家族性筋萎縮性側索硬化症を患う患者における星状細胞の透明な封入体中に見られるが、正常の対照サンプルでは見られない（Ｋａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９；  Ｓｈｉｂａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）。喫煙はまた、血漿の低密度リポプロテイン、血管壁の構造タンパク質、及び目のレンズタンパク質上のＡＧＥ堆積の増加、並びにアテローム性動脈硬化症の原因に導く可能性のある何らかのこれらの効果と、タバコの常用と関連する他の疾患に結び付けられる（Ｎｉｃｈｏｌｌ  ａｎｄ  Ｂｕｃａｌａ，１９９８）。最後に、アミノグアニジンをラットに与えた研究は、その処置が進行性の心血管と腎臓の減退に対して保護することを示した（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）。
【００１５】
［０００１５］糖付加（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）現象のカスケードにおけるアミノグアニジンの阻害効果のメカニズムが調査されている。これまで、ＡＧＥ形成のＡＧ仲介による阻害の正確なメカニズムは、完全には知られていない。インビトロの実験のいくつかの系統は、結論に対照をなしているという結果であった。簡単には、還元糖の濃度上昇は、炭水化物のカルボニル基とタンパク質のアミノ基との間の反応を引き起こし、下記：
１．シッフ塩基の可逆的形成、それに続く
２．アマドリ凝縮／脱水産物、例えば、３−デオキシグルカソン（３−ＤＧ）、高反応性ジカルボニル化合物（Ｋａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０）。
３．不可逆性であり高反応性の先進的糖付加最終産物。初期のアマドリ産物の例は、さらに後期のＡＧＥを形成する凝縮反応を受けるケトアミンである。いくつかのＡＧＥ産物は、最近、精製され特徴付けられている。各々はインビボで生じたＡＧＥの主要な断片のみから構成されている。例は、ピラリン、ペントシジン、カルボキシメチル−リジン（ＣＭＬ）、カルボキシエチル−リジン（ＣＥＬ）、クロスリン、ピロロピリジニウム、メチルグリオキサルリジン二量体（ＭＯＬＤ）、Ａｒｇ−Ｌｙｓイミダゾール、アルギニン、ピリジニウム、サイペントジン（ｃｙｐｅｎｔｏｄｉｎｅ）、ピペリジンジオンエノール及びアルキル、ホルミル、ジグリコシル−ピロールである（Ｖｌａｓｓａｒａ，１９９４）
に導く。
【００１６】
［０００１６］合成ペプチドにおけるインビトロで形成した糖化産物の解析は、アミノグアニジンが初期のアマドリ産物の形成を阻害しないことを示している（Ｅｄｅｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｂｒｏｗｎｌｅｅ，１９９２）。ＢＳＡに形成した糖化産物の解析によって同様の結論に達した（Ｒｅｑｕｅｎａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３）。両実験では、ＡＧＥ形成は、蛍光測定及び質量スペクトル分析によって解析されるように、ＡＧによって強力に阻害された。質量スペクトル分析では、複合体へのＡＧの導入に対応する分子量を有するペプチド複合体は検出されなかった。ＮＭＲ、質量分析、及びＸ線回折を用いた詳細な機械論的研究は、アミノグアニジンがＡＧＥの前駆体である３−ＤＧと反応し、３−アミノ−５−及び３−アミノ−６−置換トリアジンを形成することを示している（Ｈｉｒｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２）。対照的に、標識した１４Ｃ−ＡＧを用いたレンズタンパク質の他の実験は、ＡＧが該タンパク質に結合するようになり、同時に遊離糖の活性なアルドース形態と反応することを示唆する（Ｈａｒｄｉｎｇ，１９９０）。
【００１７】
［０００１７］ＡＧＥ阻害剤としていくつかの他の潜在的な薬物候補が報告されている。これらの研究は、インビトロ及びインビボの評価を通じて、アミノグアニジン（ＡＧ）と比較したＡＧＥ形成及びＡＧＥ−タンパク質架橋を阻害する試薬の能力を評価した（Ｎａｋａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７；  Ｋｏｃｈａｋｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）。この分野における最近の進展は、インビトロ及びインビボにおけるＡＧＥ誘導のタンパク質の架橋を選択的に切断する化合物、Ｎ−フェンアクリルチアゾリウムブロミド（ＰＴＢ）の発見である（Ｖａｓａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６；  Ｕｌｒｉｃｈ  ａｎｄ  Ｚｈａｎｇ，１９９７）。不可逆的なＡＧＥ仲介タンパク質架橋を壊す薬理学的な能力は、潜在的な治療用途を提供する。
【００１８】
［０００１８］高血糖症誘導による架橋の長期の結果に対する初期の薬学的な介入は、糖尿病の深刻な後期の合併症の発症を妨げることが十分に示されている。組織及び体液におけるグルコースを介した架橋を完全に止める無毒であり高効果的な薬物の開発は、非常に期待される目標である。タンパク質上のＡＧＥの形成を邪魔するためのインビトロ及びインビボの両方において調査された薬学的な化合物のプロトタイプは、アミノグアニジン（ＡＧ）、小ヒドラジン様化合物である（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６）。しかしながら、いくつかの他の化合物は、そのようなＡＧＥ形成における阻害効果を有することが見出された。例えば、アミノグアニジンに構造的類似性を有しないＤ−リジン（Ｓｅｎｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３）、デスフェリオキサミン（Ｔａｋａｇｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５）、Ｄ−ペニシラミン（ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８）、チアミンピロホスフェート及びピリドキサミン（Ｂｏｏｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）である。
【００１９】
［０００１９］ＡＧＥ形成を阻害することが意図される第一の薬物候補としてのＡＧの臨床試験は、進行中である（Ｃｏｒｂｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２）。いくつかのヒドラジン様及び非ヒドラジン化合物が調査されている。これまで、ＡＧは、先行技術の他の試験した化合物よりも副作用がより少なく最も有用であることが見出されている。ＡＧはまた一酸化窒素（ＮＯ）の周知な選択的阻害剤であり、抗酸化効果をも有することができる（Ｔｉｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３）。
【００２０】
［０００２０］ＡＧ阻害剤として使用されるいくつかの他の潜在的な薬物候補が最近発見され、インビトロ及びインビボの両方で評価されている（Ｎａｋａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７；  Ｓｏｕｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）。アミノグアニジン及び類似化合物を用いた研究の成功が将来有望である一方、ＡＧＥの追加阻害剤を開発する必要性があり、それはこの活性と治療用途の利用可能性と範囲を広げるためである。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２１】
発明の概要
［０００２１］フェノキシイソブチル酸誘導体及び安息香酸誘導体は、アリール及び複素環式ウレイド誘導体並びにアリール及び複素環式カルボキサミド誘導体を含み、しばしば先進的糖化最終産物及び架橋の形成に帰着するタンパク質の非酵素的糖化を阻害することが見出されている。多くの他のフェノキシイソブチル酸誘導体並びに下記に詳述するようなある種の他の化合物はまた、タンパク質の非酵素的糖化を阻害することが見出されている。タンパク質の非酵素的糖化及び架橋は、年齢とともに増加する長命なタンパク質の糖化最終産物及び架橋を伴う加齢プロセスの一部である。このプロセスは、糖尿病とともに発生するように血中及び細胞内環境における還元糖の上昇した濃度で増加する。影響される分子の構造的及び機能的な完全な状態は、これらの修飾によって妨害され、深刻な結果に至る可能性がある。本発明の化合物は、非酵素的な糖化及び架橋のこのプロセスを阻害し、したがって、糖尿病又は加齢によって引き起こされるいくつかの病的影響を阻害するために使用され得る。化合物はまた、早発の加齢、慢性関節リウマチ、アルツハイマー症、尿毒症、神経毒症、アテローム性動脈硬化症、及び食物中のタンパク質の損傷を妨げるのに有用であり、歯の変色を妨げることができる。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
発明の詳細な説明
［０００３８］本出願人は、糖化及びＡＧＥ形成の阻害剤として、アリール（及び複素環式）ウレイド及びアリール（及び複素環式）カルボキシアミドフェノキシイソブチル酸、並びに安息香酸誘導体及び関連する化合物である新クラスの化合物を以前に報告している（Ｒａｈｂａｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９；  Ｒａｈｂａｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０００；  Ｒａｈｂａｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。先進的糖化最終産物（ＡＧＥ）への可能な阻害効果の調査に関する有機化合物の異なるクラスをスクリーニングするに際して、本出願人は、試験した大部分のフェニルウレイド置換フェノキシプロピオン酸誘導体が阻害効果を有し、これらのいくつかの化合物は、アミノグアニジンの等しい阻害濃度よりも非常に低い濃度のＡＧＥ形成の強力な阻害剤であった。本研究の目的は、糖化、ＡＧＥ形成及びＡＧＥ架橋の新規な阻害剤のクラスを開発することであり、インビトロの化学的及び免疫化学的アッセイを通じてそれらの効果を調査することであった。全１１５個の化合物を設計し、合成した。最初の１０２個の化合物は、他の場所で報告されている。本明細書で報告される１３個の新規な化合物は、以前に報告された最も強力な阻害剤の１つである以前に報告されたＬＲ２３（４−（３，５−ジクロロフェニルウレイド）−フェノキシイソブチル−１−アミノシクロヘキサン−１−カルボン酸）に基づいて設計し、開発した（Ｒａｈｂａｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９；  米国特許第６，３３７，３５０Ｂ１号、参照により本明細書に援用される）。これらの化合物は、ＬＲ３に基づいており（図２０参照）、その合成は、Ｌａｌｅｚａｒｉ  ａｎｄ  Ｌａｌｅｚａｒｉ（１９８９）に報告され、本明細書に援用される。特にＡＧＥ−タンパク質−架橋の阻害における阻害潜在性のかなりの増加は、プロトタイプのＬＲ２３と比較される化合物中に見出され、２０−３０倍の大きな効果である（Ｋｈａｌｉｆａｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）。
【００２３】
［０００３９］このクラスの化合物が糖化、ＡＧＥ形成、及び架橋を阻害するメカニズムは、さらに詳細に知られるべきである。２つの主要なメカニズム、銅と鉄のような一時的な金属キレート化、及び反応性カルボニル中間体の回収又は捕捉は、既知のＡＧＥ阻害剤のＡＧＥ阻害機能に原因があると提案されている。本研究は、これらの化合物が糖化及びＡＧＥ形成の複数の工程、即ち、δ−Ｇｌｕアッセイ、糖化の初期の段階（タイプＡ又はＢ阻害剤）に対する特異的なアッセイにおけるＨｂＡｌｃレベルを低下させることによって証明される初期の段階で作用する強力な阻害剤であることを示している。大部分のこれらの化合物は、ＢＳＡ−グルコース及びＧ．Ｋ．−リボースアッセイによって示されるようなアマドリ転移後（ｐｏｓｔ−Ａｍａｄｏｒｉ）の糖化を強力に阻害し（タイプＤ阻害剤）、それらの非常に多くは、特異的なＥＬＩＳＡアッセイによって証明されるＡＧＥタンパク質架橋の強力な阻害剤である（Ｂａｙｎｅｓ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎにより記載されるようなタイプＥ阻害剤）（Ｋｈａｌｉｆａｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）。
【００２４】
［０００４０］２つの既知の糖化の阻害剤（アミノグアニジン及びメトホルミン）のようなグアニジノ化合物阻害剤の阻害活性のメカニズムは、それらがＭＧ及び他の糖化のα−ジカルボニル中間体を捕捉することを要求することである。ごく最近の研究は、この考えをさらに支持するグアニジノ−ジカルボニル付加物を形成する、メトホルミンと、ＭＧ及びグリオキサール（ＧＯ）の反応を証明している（Ｒｕｇｇｉｅｒｏ−Ｌｏｐｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）。
【００２５】
［０００４１］糖化の初期段階（アマドリ）及び後期段階（アマドリ転移後）に特異的な新規アッセイ方法を用いて、糖化の初期段階においてより大きな効果を有し、後期段階において幾分の効果を有するいくつかの阻害剤を明らかにした。しかしながら、本出願人が調査した大部分の阻害化合物は、多段階の阻害剤である。還元糖とタンパク質のα−及びε−アミノ基との反応は、無作為プロセスではなく、むしろこれらの化学基の性質や近辺に依存する部位特異的な反応である。将来の課題は、ＡＧＥ形成及び架橋に導く、複雑に連続した反応及び中間の基質における阻害化合物の相互作用の部位及び／又はその部位を特異的に定義することである。
【００２６】
［０００４２］糖化、ＡＧＥ形成、及びＡＧＥ−タンパク質架橋の新規阻害剤の開発は、糖尿病の合併症を予防する治療応用、並びにタンパク質又は脂質の糖化の増加と関連する他の疾患を予防する治療応用を見出すことができる糖化反応の阻害剤の既存の蓄積を拡張する。さらに、これらの化合物の利用可能性は、ＡＧＥ形成とＡＧＥ−タンパク質架橋のプロセスにおける反応のカスケード及び中間体の基質を研究するツールとして有用であることを証明できる。
【００２７】
［０００４３］本発明に利用される化合物及びそれらの有効な組成物は、初期の糖化産物の非常に活性なカルボニル中間体と反応することが可能な試薬を含み、それによってタンパク質の架橋及びタンパク質の老化へと導く先進的糖化最終産物を後に形成することから初期産物を妨害する。
【００２８】
［０００４４］本発明について想到される他の有用性は、早発の加齢の予防、及び食品におけるタンパク質の損傷の予防である（米国特許第５，６６１，１３９号）。本発明の試薬はまた、歯の変色を予防するような口腔衛生の分野において有用でもある。
【００２９】
化合物
［０００４５］本発明の化合物は、ＬＲ１０３−ＬＲ１１５のように図７−１９に示され、タンパク質糖化及びＡＧＥ形成における阻害効果についてスクリーニングした。開示の目的で、これらの構造に割り当てられた名称は、下記の通りである：
ＬＲ１０３：  １−［（４−クロロベンジル）−３−（３，４−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０４：  ４−（４−フルオロ−３−クロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミドフェニル−２−カルボン酸、
ＬＲ１０５：  １［（２−フルオロ−６−クロロベンジル）−３−（３，４−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０６：  ４−（４−クロロベンジルアミノフェノキシイソブチル）酸、
ＬＲ１０７：  ２−クロロベンゼン−１，４−ビス（４−ウレイドフェノキシイソブチル酸）、
ＬＲ１０８：  １−［（４−クロロベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０９：  １−［（２−フルオロ−６−クロロベンジル）−３−（２−フルオロ−６−クロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸
ＬＲ１１０：  ４−（１，２，３，４−テトラヒドロアクリジン−９−カルボキサミドフェノキシイソブチル）酸、
ＬＲ１１１：  ８−キノリノキシ酢酸、
ＬＲ１１２：  ４，４’−ビス［（メチレンオキシエチレンアミノ）フェノキシ］イソブチル酸、
ＬＲ１１３：  Ｌ−８−キノリノリル（アセチルヒスチジン）、
ＬＲ１１４：  ４−［（３，５−ジクロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミド］−２−ヒドロキシベンゼン−４−カルボン酸、及び
ＬＲ１１５：  Ｌ，α−４−［（３，５−ジクロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミド］フェニルアラニン。
【００３０】
［０００４６］上記の化合物は、標的タンパク質及び結果として生じるタンパク質架橋における先進的糖化最終産物を阻害することが可能である。本発明においては、以前に報告された糖化及びＡＧＥ形成の阻害剤の誘導である１３個の新規な化合物を調査し、それらが多段階の糖化、ＡＧＥ形成及びＡＧＥ−タンパク質−架橋の阻害剤であることも見出されている。理想の試薬は、発色団やその関連したタンパク質の架橋の形成を妨げ、動脈や腎臓に発生するような他のタンパク質におけるタンパク質の捕捉を妨げるものであろう。本発明の化合物は、ヒトを含む動物に投与することができ、タンパク質の糖化及び架橋（タンパク質の老化）を阻害又は低下する。該化合物は、各試薬の活性に応じて、１回又は個別の量で変化可能な服用量で経口的に投与することができる。加えて、該化合物は、非経口又は直腸に投与することができる。本発明の化合物、本発明の合理的な異なるアッセイ方法、及びそれらの使用は、下記の実施例によって例証される。
【００３１】
実施例１
ヘモグロビン−δ−グルコノラクトン（δ−Ｇｌｕ）アッセイ
［０００４７］δ−Ｇｌｕアッセイは、糖化の初期段階の阻害剤を調査するための特異的な方法である。ヘモグロビン（ＨｂＡｌＣ）上の初期の糖化産物（アマドリ）形成の評価は、阻害化合物の存在及び不存在におけるグルコースの酸化形態とともに赤血球細胞を培養し、試験対対照におけるＨｂＡｌＣの決定によって実行される（Ｒａｈｏｂａｒ  ａｎｄ  Ｎａｄｌｅｒ，１９９９）。本試験は、Ｌｉｎｄｓａｙら（１９９７）による報告に基づいている。δ−Ｇｌｕ、グルコースの酸化類似体は、赤血球細胞内のヘモグロビンと即座に反応することができ、インキュベーションの数時間以内にＨｂＡｌＣレベルを有意に増加させる。対照的に、グルコースは生じるために等しい反応について数週間を要する。本出願人は、ヘモグロビンの初期段階の糖化（アマドリ産物）の能力を測定するためのアッセイ、及びＨｂＡｌＣ形成を阻害する阻害剤の能力を評価するためのアッセイを考案するためにこの発見を使用した。簡単には、新鮮な血液をカリウム−ＥＤＴＡ中に吸出し、２００μＬの血液と４０μＬのリン酸緩衝液（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４単独、５０ミリモル／Ｌのδ−Ｇｌｕ（Ｓｉｇｍａ）含有ＰＢＳ、又は５０ミリモル／Ｌのδ−Ｇｌｕ＋１ミリモル／Ｌの阻害剤含有ＰＢＳの何れかと混合することにより、回収３０分以内にインキュベーション用に調製した。３７℃で１６時間インキュベーション後、糖化したヘモグロビン存在のパーセントを決定した。糖化したＨｂ（ＨｂＡｌＣ）のパーセントは、専用のイオン交換ＨＰＬＣシステム（ＢＩＯＲＡＤ  ＤＩＡＭＡＴ）を用いて決定した。血液サンプルは３回の試験で分析した。該化合物によるＨｂＡｌＣ形成の阻害％は、下記の式：
（（Ｂ−Ｃ）／（Ｂ−Ａ））×１００
［ここで、Ａは、δ−Ｇｌｕで未処理の基底の対照試験管におけるＨｂＡｌＣ濃度であり、Ｂは、δ−Ｇｌｕでインキュベートした血液のＨｂＡｌＣ濃度であり、Ｃは、δ−Ｇｌｕ及び阻害化合物の両方で処理した試験管ＨｂＡｌＣ内容物である］
により計算した。
【００３２】
［０００４８］１ミリモル／Ｌの化合物を使用した正常な志願者由来のδ−Ｇｌｕ処理の全血を用いて（ＨｂＡｌＣ）形成の量を計算した。結果は、ＨｂＡｌＣ形成の阻害パーセントとして計算し、表１に示す。各種の阻害剤（化合物ＬＲ１０３−ＬＲ１１５）は、それらの阻害の潜在能力に応じて異なるＨｂＡｌＣレベルを示す。１３個の化合物全てがインビトロアッセイ方法によって検出されるように阻害活性を示し、そして、９個の化合物は、全試験において中高程度の阻害パーセント（ＰＩ）を示し、アミノグアニジンより２０−３０倍強力であった。
【００３３】
【表１】
2007525418.tif 000002
【００３４】
［０００４９］上記の実験は、このタイプの薬物療法が初期の糖化産物、先進的糖化最終産物形成における予備段階と関連する病状を低下する点に利益があることを示唆する。
【００３５】
実施例２
ＢＳＡ−グルコースアッセイ
［０００５０］本試験は、グルコースを介したＢＳＡの蛍光の発生を阻害する阻害剤の能力を評価するために使用される（Ｉｋｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）。ＮａＮ３  ０．２ｇ／Ｌを含有する１．５Ｍのリン酸緩衝液  ｐＨ７．４中のＳｉｇｍａ  ５０ｍｇ／ｍＬ及び８００ｍＭ  グルコース（１４４ｍｇ／ｍＬ）由来のＢＳＡ（断片Ｖ、基本的には脂肪酸無し、低エンドトキシン）の３重のサンプルを、化合物の各種濃度の存在又は不存在で７日間３７℃で無菌状態でインキュベートした。インキュベーションの７日後、各サンプルを特異的な蛍光の発生について調べた（励起、３３０ｎｍ；放射、４１０ｎｍ）。試験サンプル対対照におけるＡＧＥ形成の阻害％は、各阻害化合物について計算した。アミノグアニジン（５０ｍＭ）を正の対照として使用した。結果を表２に示す。
【００３６】
［０００５１］この方法は、後期の糖化及びＡＧＥ形成（アマドリ転移後）の阻害物を分析する。結果は、試験した１３個の化合物の大部分がアマドリ転移後の糖化、ＡＧＥ形成及びＡＧＥ架橋を強力に阻害することを示す。
【００３７】
【表２】
2007525418.tif 000003
【００３８】
実施例３
Ｎ−アセチル−グリシル−リジンメチルエステル（Ｇ．Ｋ．ペプチド）−リボースアッセイ
［０００５２］後期の糖化産物（ＡＧＥ）、及び新規阻害化合物によるＡＧＥ阻害の評価は、試薬の存在又は不存在におけるリボースのＧ．Ｋ．ペプチドのインキュベーションによって試験し、それらの特異的な蛍光の測定を通した糖化及びＡＧＥ形成の過程において発生した蛍光団を決定した。リボースの存在下でＮ−アセチルグリシル−リジンメチルエステルの架橋を阻害する本発明の化合物の能力を評価するために使用したＮａｇａｒａｊら（１９９６）の方法は、下記：
保存液：
ＮａＮ３  ０．２ｇ／Ｌを含む０．５Ｍ  リン酸ナトリウム緩衝液  ｐＨ７．４
０．５Ｍ  リン酸ナトリウム緩衝液  ｐＨ７．４中のＧＫペプチド（Ｓｉｇｍａ）  ８０ｍｇ／ｍＬ
０．５Ｍ  リン酸緩衝液中のリボース８００ｍＭ（１２０ｍｇ／ｍＬ）
の通りであった。
【００３９】
［０００５３］３つの保存液の等しい体積（０．１ｍＬ）の３重のサンプルを一緒に混合し、０．２ミクロンフィルター（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を通してろ過し、３７℃で２４時間無菌状態でインキュベートした。阻害化合物を最終濃度１ミリモル／Ｌに加えた。インキュベーション時間の終わりに、サンプルをそれらの特異的な蛍光について分析した（励起、３３０ｎｍ；放出、４１５ｎｍ）。阻害剤の異なる濃度による阻害％は、上述のように評価した。アミノグアニジンは正の対照として５０ｍＭで使用した。
【００４０】
［０００５４］表３は、Ｇ．Ｋ．ペプチド−リボースアッセイを用いて、これら別個の決定においてタンパク質−ＡＧＥの特異的な蛍光を遮断する化合物の阻害効果を示す。このアッセイの結果は、調査した１３個の化合物の大部分が強力な阻害効果を有することを示す。
【００４１】
【表３】
2007525418.tif 000004
【００４２】
実施例４
アマドリ転移後のタンパク質アッセイ
［０００５５］糖としてのリボースを使用してＡＧＥを含まないアマドリが豊富なタンパク質を調製するための詳細なアプローチは、最近、報告されている（Ｋｈａｌｉｆａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）。タンパク質は、はじめに０．５Ｍのリボースとともに２４時間３７℃でインキュベートし、続いて、過剰の遊離リボースを除去し、４℃で透析によってシッフ塩基を除く。その後、ＡＧＥタンパク質への転換は、候補のアマドリ転移後の阻害剤の存在及び不存在で、３７℃まで温めることによって開始する。このアッセイは、推定の化合物に対する阻害効果の評価について使用した。簡単には、タンパク質としてのＢＳＡ及び糖化試薬としてのリボースを用いて、ＡＧＥを含まない、アマドリが豊富であるタンパク質をＫｈａｌｉｆａらに従って調製し、リン酸緩衝液に対して４℃で２４時間長期の透析を行った。その後、透析した調製物を希釈し、加温し、候補阻害剤の存在及び不存在下で７日間３７℃でインキュベートした。ＡＧＥ産物のＥＬＩＳＡ検出は、０．５−１（０．３の代わりに）μｇのタンパク質を各ポリスチレンウェルに被覆し、Ｓｕｐｅｒｂｌｏｔ緩衝液をウェルをブロックするために使用したことを除き、Ｋｈａｌｉｆａらによって記載したように実行した。ウサギのポリクローナル抗ＲＮａｓｅ−ＡＧＥを確立したプロトコール（Ｍａｋｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２）を用いて調製し、１：１０００に希釈して使用した。化合物ＬＲ１０３−ＬＲ１１５を用いた結果を図１及び２に示す。
【００４３】
実施例５
アスコルビン酸の銅触媒の自動酸化の阻害
［０００５６］本アッセイは、Ｐｒｉｃｅら（２００１）に従って実行した。２６５ｎｍの吸光度の減少の割合でアスコルビン酸（ＡＡ）の酸化の動力学を測定した。ＡＧＥ阻害剤の研究について、アスコルビン酸は反応を開始するために添加した。アリコートを０、１５、３０、４５、及び６０分で回収し、ＤＰＴＡを含有する自動注射バイアルに移動した。ＸｔｅｒｒａＴＭ  ＲＰ１８カラム（２５０×４．６ｍｍ、５μｍ）を用いて自動注入器を備えた逆相ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  ２６９０  Ｍｉｌｌｅｎｉｕｍ  ３２  Ｓｅｐａｒａｔｏｒ  Ｍｏｄｕｌｅ）によってサンプルを分析した。溶媒及び勾配はすべて、Ｐｒｉｃｅら（２００１）に記載されるように使用した。ＡＡ酸化の割合を５０％まで阻害した各阻害化合物の濃度は、Ｐｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ−Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）を用いて計算した。いくつかの新規化合物の銅をキレートする活性の実施例は、図３及び４に示される。
【００４４】
実施例６
ＡＧＥ形成のカルボニル中間体の回収
［０００５７］実験手法、インキュベーション条件、ＣＭＬ−ＢＳＡのＥＬＩＳＡ検出、反応性カルボニル及びジカルボニル基の決定は全てＶｏｚｉｙａｎら（２００２）に従って行った。図５及び６は、全化合物のジカルボニルの除去性質を示す。図５は、メチルグリオキサル（ＭＧＯ）捕捉のデータを示す。図６は、全ての化合物について、グリコールアルデヒド捕捉のデータを示す。データは、これらの化合物のクラスが一時的な金属キレート化及びジカルボニル回収の性質の両方を有することを示す。
【００４５】
［０００５８］本発明は、本発明の好ましい態様の詳細に参照することによって本特許出願に開示されているが、開示は限定的な意味においてというよりはむしろ例証的であると意図されることが理解されるべきである。これは、当業者にとって、発明の精神と添付した特許請求の範囲の範囲内において、修飾が容易に生じるであろうということが予期される。
【００４６】
参照文献のリスト
【００４７】
【化１】
2007525418.tif 000005
【００４８】
【化２】
2007525418.tif 000006
【００４９】
【化３】
2007525418.tif 000007
【００５０】
【化４】
2007525418.tif 000008
【００５１】
【化５】
2007525418.tif 000009
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】［０００２２］図１は、アマドリ転移後のタンパク質アッセイにおける化合物ＬＲ１０３−１１５についての結果を示す。図１は、０．０５、０．１０、１．００及び５．００ｍＭの濃度でのＬＲ１０３−１０８によるアモドリ転移後のＡＧＥ形成の阻害を示す。
【図２】［０００２２］図２は、アマドリ転移後のタンパク質アッセイにおける化合物ＬＲ１０３−１１５についての結果を示す。図２は、０．０５、０．１０、０．５０、１．００及び５．００ｍＭの濃度でのＬＲ１０９−１１５によるアモドリ転移後のＡＧＥ形成の阻害を示す。
【図３】［０００２３］図３は、ＬＲ１０３、ＬＲ１０４、ＬＲ１０５及びＬＲ１０６を含むいくつかの新規化合物の銅キレート化活性の例を示す。ＬＲ１０３のＩＣ５０は〜７５μＭであり、ＬＲ１０４のＩＣ５０は〜１００μＭであり、これらの化合物が銅の強力なキレート剤であることを示す。
【図４】図４は、ＬＲ１０３、ＬＲ１０４、ＬＲ１０５及びＬＲ１０６を含むいくつかの新規化合物の銅キレート化活性の例を示す。ＬＲ１０３のＩＣ５０は〜７５μＭであり、ＬＲ１０４のＩＣ５０は〜１００μＭであり、これらの化合物が銅の強力なキレート剤であることを示す。
【図５】［０００２４］図５は、化合物ＬＲ１０３−ＬＲ１１５についてのジカルボニルの回収の性質を示す。図５は、化合物のＭＧＯ捕捉活性のデータを示す。これらのクラスの化合物は、一時的な金属キレートとジカルボニル回収の性質との両方を有する。
【図６】図６は、化合物ＬＲ１０３−ＬＲ１１５についてのジカルボニル除去の性質を示す。図６は、化合物のグリコールアルデヒド捕捉活性のデータを示す。これらのクラスの化合物は、一時的な金属キレートとジカルボニル回収の性質との両方を有する。
【図７】［０００２５］図７は、化合物ＬＲ１０３の構造を示す。
【図８】［０００２６］図８は、化合物ＬＲ１０４の構造を示す。
【図９】［０００２７］図９は、化合物ＬＲ１０５の構造を示す。
【図１０】［０００２８］図１０は、化合物ＬＲ１０６の構造を示す。
【図１１】［０００２９］図１１は、化合物ＬＲ１０７の構造を示す。
【図１２】［０００３０］図１２は、化合物ＬＲ１０８の構造を示す。
【図１３】［０００３１］図１３は、化合物ＬＲ１０９の構造を示す。
【図１４】［０００３２］図１４は、化合物ＬＲ１１０の構造を示す。
【図１５】［０００３３］図１５は、化合物ＬＲ１１１の構造を示す。
【図１６】［０００３４］図１６は、化合物ＬＲ１１２の構造を示す。
【図１７】［０００３５］図１７は、化合物ＬＲ１１３の構造を示す。
【図１８】［０００３６］図１８は、化合物ＬＲ１１４の構造を示す。
【図１９】［０００３７］図１９は、化合物ＬＲ１１５の構造を示す。
【図１】
2007525418.tif 000010
【図２】
2007525418.tif 000011
【図３】
2007525418.tif 000012
【図４】
2007525418.tif 000013
【図５】
2007525418.tif 000014
【図６】
2007525418.tif 000015
【図７】
2007525418.tif 000016
【図８】
2007525418.tif 000017
【図９】
2007525418.tif 000018
【図１０】
2007525418.tif 000019
【図１１】
2007525418.tif 000020
【図１２】
2007525418.tif 000021
【図１３】
2007525418.tif 000022
【図１４】
2007525418.tif 000023
【図１５】
2007525418.tif 000024
【図１６】
2007525418.tif 000025
【図１７】
2007525418.tif 000026
【図１８】
2007525418.tif 000027
【図１９】
2007525418.tif 000028
【手続補正書】
【提出日】平成19年2月2日(2007.2.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物における糖化最終産物又はタンパク質架橋の形成を阻害するための有効量の化合物又はその化合物の薬学的に許容可能な塩の使用であって、当該使用が有効量の化合物又はその化合物の薬学的に許容可能な塩を前記生物に投与することを含み、前記化合物が：
ＬＲ１０３：  １−［（４−クロロベンジル）−３−（３，４−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０４：  ４−（４−フルオロ−３−クロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミドフェニル−２−カルボン酸、
ＬＲ１０５：  １［（２−フルオロ−６−クロロベンジル）−３−（３，４−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０６：  ４−（４−クロロベンジルアミノフェノキシイソブチル）酸、
ＬＲ１０７：  ２−クロロベンゼン−１，４−ビス（４−ウレイドフェノキシイソブチル酸）、
ＬＲ１０８：  １−［（４−クロロベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０９：  １−［（２−フルオロ−６−クロロベンジル）−３−（２−フルオロ−６−クロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸
ＬＲ１１０：  ４−（１，２，３，４−テトラヒドロアクリジン−９−カルボキサミドフェノキシイソブチル）酸、
ＬＲ１１１：  ８−キノリノキシ酢酸、
ＬＲ１１２：  ４，４’−ビス［（メチレンオキシエチレンアミノ）フェノキシ］イソブチル酸、
ＬＲ１１３：  Ｌ−８−キノリノリル（アセチルヒスチジン）、
ＬＲ１１４：  ４−［（３，５−ジクロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミド］−２−ヒドロキシベンゼン−４−カルボン酸、及び
ＬＲ１１５：  Ｌ，α−４−［（３，５−ジクロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミド］フェニルアラニン
からなる群から選択される、前記使用。
【請求項２】
生物における加齢の有害な効果を遅らせるための有効量の化合物又はその化合物の薬学的に許容可能な塩の使用であって、前記効果が糖化した最終産物又はタンパク質架橋の形成であり、前記使用が有効量の化合物又はその化合物の薬学的に許容可能な塩を前記生物に投与することを含み、前記化合物が：
ＬＲ１０３：  １−［（４−クロロベンジル）−３−（３，４−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０４：  ４−（４−フルオロ−３−クロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミドフェニル−２−カルボン酸、
ＬＲ１０５：  １［（２−フルオロ−６−クロロベンジル）−３−（３，４−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０６：  ４−（４−クロロベンジルアミノフェノキシイソブチル）酸、
ＬＲ１０７：  ２−クロロベンゼン−１，４−ビス（４−ウレイドフェノキシイソブチル酸）、
ＬＲ１０８：  １−［（４−クロロベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０９：  １−［（２−フルオロ−６−クロロベンジル）−３−（２−フルオロ−６−クロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸
ＬＲ１１０：  ４−（１，２，３，４−テトラヒドロアクリジン−９−カルボキサミドフェノキシイソブチル）酸、
ＬＲ１１１：  ８−キノリノキシ酢酸、
ＬＲ１１２：  ４，４’−ビス［（メチレンオキシエチレンアミノ）フェノキシ］イソ
ブチル酸、
ＬＲ１１３：  Ｌ−８−キノリノリル（アセチルヒスチジン）、
ＬＲ１１４：  ４−［（３，５−ジクロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミド］−２−ヒドロキシベンゼン−４−カルボン酸、及び
ＬＲ１１５：  Ｌ，α−４−［（３，５−ジクロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミド］フェニルアラニン
からなる群から選択される、前記使用。
【請求項３】
糖尿病に起因する合併症の患者の進行を遅らせるための有効量の化合物又はその化合物の薬学的に許容可能な塩の使用であって、前記合併症が糖化最終産物又はタンパク質架橋の形成に起因し、前記使用が有効量の化合物又はその化合物の薬学的に許容可能な塩を前記患者に投与することを含み、前記化合物が：
ＬＲ１０３：  １−［（４−クロロベンジル）−３−（３，４−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０４：  ４−（４−フルオロ−３−クロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミドフェニル−２−カルボン酸、
ＬＲ１０５：  １［（２−フルオロ−６−クロロベンジル）−３−（３，４−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０６：  ４−（４−クロロベンジルアミノフェノキシイソブチル）酸、
ＬＲ１０７：  ２−クロロベンゼン−１，４−ビス（４−ウレイドフェノキシイソブチル酸）、
ＬＲ１０８：  １−［（４−クロロベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０９：  １−［（２−フルオロ−６−クロロベンジル）−３−（２−フルオロ−６−クロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸
ＬＲ１１０：  ４−（１，２，３，４−テトラヒドロアクリジン−９−カルボキサミドフェノキシイソブチル）酸、
ＬＲ１１１：  ８−キノリノキシ酢酸、
ＬＲ１１２：  ４，４’−ビス［（メチレンオキシエチレンアミノ）フェノキシ］イソブチル酸、
ＬＲ１１３：  Ｌ−８−キノリノリル（アセチルヒスチジン）、
ＬＲ１１４：  ４−［（３，５−ジクロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミド］−２−ヒドロキシベンゼン−４−カルボン酸、及び
ＬＲ１１５：  Ｌ，α−４−［（３，５−ジクロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミド］フェニルアラニン
からなる群から選択される、前記使用。
【請求項４】
慢性関節リウマチ、アルツハイマー症、尿毒症、神経毒症、又はアテローム性動脈硬化症の患者の進行を遅らせるための有効量の化合物又はその化合物の薬学的に許容可能な塩の使用であって、前記使用が有効量の化合物又はその化合物の薬学的に許容可能な塩を前記患者に投与することを含み、前記化合物が：
ＬＲ１０３：  １−［（４−クロロベンジル）−３−（３，４−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０４：  ４−（４−フルオロ−３−クロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミドフェニル−２−カルボン酸、
ＬＲ１０５：  １［（２−フルオロ−６−クロロベンジル）−３−（３，４−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０６：  ４−（４−クロロベンジルアミノフェノキシイソブチル）酸、
ＬＲ１０７：  ２−クロロベンゼン−１，４−ビス（４−ウレイドフェノキシイソブチル酸）、
ＬＲ１０８：  １−［（４−クロロベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０９：  １−［（２−フルオロ−６−クロロベンジル）−３−（２−フルオロ−６−クロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸
ＬＲ１１０：  ４−（１，２，３，４−テトラヒドロアクリジン−９−カルボキサミドフェノキシイソブチル）酸、
ＬＲ１１１：  ８−キノリノキシ酢酸、
ＬＲ１１２：  ４，４’−ビス［（メチレンオキシエチレンアミノ）フェノキシ］イソブチル酸、
ＬＲ１１３：  Ｌ−８−キノリノリル（アセチルヒスチジン）、
ＬＲ１１４：  ４−［（３，５−ジクロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミド］−２−ヒドロキシベンゼン−４−カルボン酸、及び
ＬＲ１１５：  Ｌ，α−４−［（３，５−ジクロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミド］フェニルアラニン
からなる群から選択される、前記使用。
【請求項５】
食料品の損傷を防ぐ方法であって、前記方法が有効量の化合物又はその化合物の薬学的に許容可能な塩と前記食料品とを混合することを含み、前記有効量が糖化最終産物又はタンパク質架橋の形成を阻害し、前記化合物が：
ＬＲ１０３：  １−［（４−クロロベンジル）−３−（３，４−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０４：  ４−（４−フルオロ−３−クロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミドフェニル−２−カルボン酸、
ＬＲ１０５：  １［（２−フルオロ−６−クロロベンジル）−３−（３，４−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０６：  ４−（４−クロロベンジルアミノフェノキシイソブチル）酸、
ＬＲ１０７：  ２−クロロベンゼン−１，４−ビス（４−ウレイドフェノキシイソブチル酸）、
ＬＲ１０８：  １−［（４−クロロベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０９：  １−［（２−フルオロ−６−クロロベンジル）−３−（２−フルオロ−６−クロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸
ＬＲ１１０：  ４−（１，２，３，４−テトラヒドロアクリジン−９−カルボキサミドフェノキシイソブチル）酸、
ＬＲ１１１：  ８−キノリノキシ酢酸、
ＬＲ１１２：  ４，４’−ビス［（メチレンオキシエチレンアミノ）フェノキシ］イソブチル酸、
ＬＲ１１３：  Ｌ−８−キノリノリル（アセチルヒスチジン）、
ＬＲ１１４：  ４−［（３，５−ジクロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミド］−２−ヒドロキシベンゼン−４−カルボン酸、及び
ＬＲ１１５：  Ｌ，α−４−［（３，５−ジクロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミド］フェニルアラニン
からなる群から選択される、前記方法。
【請求項６】
ＬＲ１０３：  １−［（４−クロロベンジル）−３−（３，４−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０４：  ４−（４−フルオロ−３−クロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミドフェニル−２−カルボン酸、
ＬＲ１０５：  １［（２−フルオロ−６−クロロベンジル）−３−（３，４−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０６：  ４−（４−クロロベンジルアミノフェノキシイソブチル）酸、
ＬＲ１０７：  ２−クロロベンゼン−１，４−ビス（４−ウレイドフェノキシイソブチ
ル酸）、
ＬＲ１０８：  １−［（４−クロロベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸、
ＬＲ１０９：  １−［（２−フルオロ−６−クロロベンジル）−３−（２−フルオロ−６−クロロフェニルウレイド）］−４−フェノキシイソブチル酸
ＬＲ１１０：  ４−（１，２，３，４−テトラヒドロアクリジン−９−カルボキサミドフェノキシイソブチル）酸、
ＬＲ１１１：  ８−キノリノキシ酢酸、
ＬＲ１１２：  ４，４’−ビス［（メチレンオキシエチレンアミノ）フェノキシ］イソブチル酸、
ＬＲ１１３：  Ｌ−８−キノリノリル（アセチルヒスチジン）、
ＬＲ１１４：  ４−［（３，５−ジクロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミド］−２−ヒドロキシベンゼン−４−カルボン酸、及び
ＬＲ１１５：  Ｌ，α−４−［（３，５−ジクロロフェニルウレイド）フェノキシイソブチリルアミド］フェニルアラニン
からなる群から選択される、化合物又はその化合物の薬学的に許容可能な塩。
【請求項７】
i）化合物又はその化合物の薬学的に許容可能な塩、及び、ii)医薬的担体の有効量を含む、医薬組成物であって、前記化合物は請求項６記載の化合物である、前記医薬組成物。
【請求項８】
生物における糖化最終産物又はタンパク質架橋の形成を阻害するための、有効量の請求項６記載の化合物又はその化合物の薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物。
【請求項９】
生物における加齢の有害な効果を遅らせるための、有効量の請求項６記載の化合物又はその化合物の薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物であって、前記効果が糖化した最終産物又はタンパク質架橋の形成である、前記医薬組成物。
【請求項１０】
糖尿病に起因する合併症の患者の進行を遅らせるための、有効量の請求項６記載の化合物又はその化合物の薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物であって、前記合併症が糖化最終産物又はタンパク質架橋の形成に起因する、前記医薬組成物。
【請求項１１】
慢性関節リウマチ、アルツハイマー症、尿毒症、神経毒症、又はアテローム性動脈硬化症の患者の進行を遅らせるための、有効量の請求項６記載の化合物又はその化合物の薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
発明の詳細な説明
［０００３８］本出願人は、糖化及びＡＧＥ形成の阻害剤として、アリール（及び複素環式）ウレイド及びアリール（及び複素環式）カルボキシアミドフェノキシイソブチル酸、並びに安息香酸誘導体及び関連する化合物である新クラスの化合物を以前に報告している（Ｒａｈｂａｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９；  Ｒａｈｂａｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０００；  Ｒａｈｂａｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。先進的糖化最終産物（ＡＧＥ）への可能な阻害効果の調査に関する有機化合物の異なるクラスをスクリーニングするに際して、本出願人は、試験した大部分のフェニルウレイド置換フェノキシプロピオン酸誘導体が阻害効果を有し、これらの化合物のいくつかは、アミノグアニジンが同等に阻害する濃度よりも非常に低い濃度でＡＧＥ形成の強力な阻害剤であることを見出した。本研究の目的は、糖化、ＡＧＥ形成及びＡＧＥ架橋の新規な阻害剤のクラスを開発することであり、インビトロの化学的及び免疫化学的アッセイを通じてそれらの効果を調査することであった。全１１５個の化合物を設計し、合成した。最初の１０２個の化合物は、他の場所で報告されている。本明細書で報告される１３個の新規な化合物は、以前に報告された最も強力な阻害剤の１つである以前に報告されたＬＲ２３（４−（３，５−ジクロロフェニルウレイド）−フェノキシイソブチリル−１−アミドシクロヘキサン−１−カルボン酸）に基づいて設計し、開発した（Ｒａｈｂａｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９；  米国特許第６，３３７，３５０Ｂ１号、参照により本明細書に援用される）。これらの化合物は、ＬＲ３に基づいており（図２０参照）、その合成は、Ｌａｌｅｚａｒｉ  ａｎｄ  Ｌａｌｅｚａｒｉ（１９８９）に報告され、本明細書に援用される。特にＡＧＥ−タンパク質−架橋の阻害における阻害潜在性のかなりの増加は、プロトタイプのＬＲ２３と比較される化合物中に見出され、２０−３０倍の大きな効果である（Ｋｈａｌｉｆａｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】
［０００４６］上記の化合物は、標的タンパク質及び結果として生じるタンパク質架橋における先進的糖化最終産物を阻害することが可能である。本発明においては、以前に報告された糖化及びＡＧＥ形成の阻害剤の誘導体である１３個の新規な化合物を調査し、それらが多段階の糖化、ＡＧＥ形成及びＡＧＥ−タンパク質−架橋の阻害剤であることも見出されている。理想の試薬は、発色団やその関連したタンパク質の架橋の形成を妨げ、動脈や腎臓に発生するような他のタンパク質におけるタンパク質の捕捉を妨げるものであろう。本発明の化合物は、ヒトを含む動物に投与することができ、タンパク質の糖化及び架橋（タンパク質の老化）を阻害又は低下する。該化合物は、各試薬の活性に応じて、１回又は個別の量で変化可能な服用量で経口的に投与することができる。加えて、該化合物は、非経口又は直腸に投与することができる。本発明の化合物、本発明の合理的な異なるアッセイ方法、及びそれらの使用は、下記の実施例によって例証される。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
実施例１
ヘモグロビン−δ−グルコノラクトン（δ−Ｇｌｕ）アッセイ
［０００４７］δ−Ｇｌｕアッセイは、糖化の初期段階の阻害剤を調査するための特異的な方法である。ヘモグロビン（ＨｂＡｌＣ）上の初期の糖化産物（アマドリ）形成の評価は、阻害化合物の存在及び不存在におけるグルコースの酸化形態とともに赤血球細胞を培養し、試験対対照におけるＨｂＡｌＣの決定によって実行される（Ｒａｈｏｂａｒ  ａｎｄ  Ｎａｄｌｅｒ，１９９９）。本試験は、Ｌｉｎｄｓａｙら（１９９７）による報告に基づいている。δ−Ｇｌｕ、グルコースの酸化類似体は、赤血球細胞内のヘモグロビンと即座に反応することができ、インキュベーションの数時間以内にＨｂＡｌＣレベルを有意に増加させる。対照的に、グルコースでは同様の反応が起こるのに数週間を要する。本出願人は、ヘモグロビンの初期段階の糖化（アマドリ産物）測定するためのアッセイ、及びＨｂＡｌＣ形成を阻害する阻害剤の能力を評価するためのアッセイを考案するためにこの知見を用いた。簡単には、新鮮な血液をカリウム−ＥＤＴＡ中に吸出し、２００μＬの血液と４０μＬのリン酸緩衝液（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４単独、５０ミリモル／Ｌのδ−Ｇｌｕ（Ｓｉｇｍａ）含有ＰＢＳ、又は５０ミリモル／Ｌのδ−Ｇｌｕ＋１ミリモル／Ｌの阻害剤含有ＰＢＳの何れかと混合することにより、回収３０分以内にインキュベーション用に調製した。３７℃で１６時間インキュベーション後、糖化したヘモグロビン存在のパーセントを決定した。糖化したＨｂ（ＨｂＡｌＣ）のパーセントは、専用のイオン交換ＨＰＬＣシステム（ＢＩＯＲＡＤ  ＤＩＡＭＡＴ）を用いて決定した。血液サンプルは３回の試験で分析した。該化合物によるＨｂＡｌＣ形成の阻害％は、下記の式：
（（Ｂ−Ｃ）／（Ｂ−Ａ））×１００
［ここで、Ａは、δ−Ｇｌｕで未処理の基底の対照試験管におけるＨｂＡｌＣ濃度であり、Ｂは、δ−Ｇｌｕでインキュベートした血液のＨｂＡｌＣ濃度であり、Ｃは、δ−Ｇｌｕ及び阻害化合物の両方で処理した試験管ＨｂＡｌＣ内容物である］
により計算した。
【手続補正５】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１５】
2007525418.tif 000029
【手続補正６】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１７】
2007525418.tif 000030
【国際調査報告】
2007525418.tif 000031