(57)【要約】  本発明により、循環器疾患および脳血管疾患の処置のための薬学的組成物が開示される。これには、丹参葉（タンサン、Radix  Salviae  Miltiorrhizae）抽出物が5.0％〜70.0％、参三七（サンシチ、Radix  Notoginseng）抽出物が10.0％〜85.0％、黄耆（オウギ、Radix  Astragali）抽出物が5.0％〜70.0％、そして、ボルネオール（Borneol）または降真香（コウシンコウ、Lignum  Dalbergiae  Odoriferae）の油が1.0％〜15.0％含まれる。この組成物は、脳虚血および心筋虚血に対して活性がある。この作用は、丹参葉の全石炭酸、または参三七の全サポニンのそれぞれ、あるいはそれらの組み合わせよりも優れている。本発明の組成物は、種々の補助成分の添加により種々な種類の調製物を提供することができる。したがって、本発明により、TCM有効部分およびその調製物のより有効で便利な組成物が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下を含む薬学的組成物：
丹参葉（タンジン、Radix  Salviae  Miltiorrhizae）抽出物；
参三七（サンシチ、Radix  Notoginseng）抽出物；
黄耆（オウギ、Radix  Astragali）抽出物；および
ボルネオール（Borneol）または降真香（コウシンコウ、Lignum  Dalbergiae  Odoriferae）の油。
【請求項２】
以下を含む請求項1に記載の組成物：
5.0％〜70.0％の丹参葉抽出物；
10.0％〜85.0％の参三七抽出物；
5.0％〜70.0％の黄耆抽出物；および
1.0％〜15.0％のボルネオールまたは降真香の油。
【請求項３】
以下を含む請求項2に記載の組成物： 
15.0％〜50.0％の丹参葉抽出物；
25.0％〜65.0％の参三七抽出物；
15.0％〜50.0％の黄耆抽出物；および
2.0％〜12.0％のボルネオールまたは降真香の油。
【請求項４】
以下を含む請求項3に記載の組成物：
20.0％〜30.0％の丹参葉抽出物；
30.0％〜55.0％の参三七抽出物；
20.0％〜30.0％の黄耆抽出物；および
4.0〜10.0％のボルネオールまたは降真香の油。
【請求項５】
以下を含む請求項4に記載の組成物：
23％の丹参葉抽出物；
45.0％の参三七抽出物；
23％の黄耆抽出物；および
9％のボルネオールまたは降真香の油。
【請求項６】
前記丹参葉抽出物には、45％〜70％のサルビアノール酸B、2〜10％のサルビアノール酸E、4〜20％のロスマリン酸、1〜10％のリトスペルミン酸、および70％を上回るサルビアノール酸が含まれ；前記参三七抽出物には、2％〜10％のノトジンセノサイドR1、2％〜6％のジンセノサイドRe、15％〜40％のジンセノサイドRg1、15％〜40％のジンセノサイドRb1、5％〜12％のジンセノサイドRd、および70％を上回る参三七サポニンが含まれ；前記黄耆抽出物には、5％〜15％のアストラガロシドI、および70％を上回る黄耆サポニンが含まれる、請求項1、2、3、4、または5に記載の組成物。
【請求項７】
前記丹参葉抽出物には80％を上回るサルビアノール酸が含まれ；前記参三七抽出物には、80％を上回る参三七サポニンが含まれ；そして前記黄耆抽出物には、80％を上回る黄耆サポニンが含まれる、請求項6に記載の組成物。
【請求項８】
注射液、錠剤、徐放性錠剤、ドロップ剤、顆粒剤、注射用粉末剤、カプセル剤、および微粒剤である、請求項1、2、3、4、または5に記載の組成物。
【請求項９】
注射液または注射用粉末剤である、請求項8に記載の組成物。
【請求項１０】
循環器疾患および脳血管疾患の処置のための、請求項1から9のいずれか1項に記載の組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は薬剤組成物に関する。具体的には、本発明は、循環器疾患および脳血管疾患の処置のための薬学的組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
統計により、中国における循環器疾患および脳血管疾患の発病および死亡が、最近の50年間で増大していることが示されている。1950年代から1960年代の間には、循環器疾患および脳血管疾患は、全ての死亡原因疾患の第5位と第6位にランクされていた。しかし、1975年から、これらはそれぞれ、第2位と第3位に上がり、循環器疾患と脳血管疾患による死亡は、疾患による死亡全体の第1位となった。実際のところ、中国での循環器疾患と脳血管疾患の死亡率は、1975年の12.07％から2001年には、死亡全体の42.6％を占めた。現在は、これらによって毎年200万人が死亡している。一部の患者は生存しているが、生存患者のほとんどは身体障害者であり、彼らの日常生活を一人で管理することはできず、患者の家族や社会にとって重い負担となっている。
【０００３】
循環器疾患および脳血管疾患はまた、西側諸国においても死亡原因の第1位である。現在の疫学データによれば、たとえ人の疾患が原因である死亡原因の順序が大幅に変化したとしても、2020年までは、冠状動脈疾患と脳内出血が人の死亡原因の第1位と第2位であり続けると予想される。その時までには、冠状動脈疾患による全世界における死亡は、1990年の630万人から1100万人にまで増大し、脳内出血による死亡は、440万人から770万人にまで増大すると予想される。これらの30年間の間に、循環器系の疾患による死亡は59.6％に増大するであろう。冠状動脈疾患と脳卒中による死亡は、それぞれ、74.6％と75％に増大するであろう。これらのデータの全ては、循環器疾患と脳血管疾患は、人の健康に害を及ぼす主な疾患であるだけではなく、これらはまた、現在、死亡または身体障害を生じる「No.1の死因」であり、そしてそうであり続けるであろうことを示している。
【０００４】
循環器疾患および脳血管疾患を処置するための治療薬の中でも、伝統的な中国の特許薬と西洋医学が、種々の局面に焦点を合わせる効果を有して、投与される。伝統的な中国の特許薬は副作用が少なく、したがって、高い市場占有率を有している。循環器疾患および脳血管疾患の処置に利用することができる伝統的な中国の特許薬の中でも、主薬として、薬草の生物学的に有効な部分の活性成分、例えば、ノトジンセノサイド（notoginsenoside）、サルビアノール酸（salvianolic  acid）、葛根抽出（radix  puerarine）イソフラボン、およびギペノシド（gypenoside）を含む特許薬は、ますます注目を集めている。循環器疾患および脳血管疾患を処置するための伝統的な中国の特許薬草中の生物学的に有効な部分は、種々の局面に焦点をあてたそれぞれの機能と作用を有しているので、これらは、併用投与において広く使用される可能性が見出されると予想される。一方で、現在、薬草の1つの生物学的に有効な部分をベースとする伝統的な中国の特許薬は、特に注射液の形態（例えば、XUESAITONG、XUESHUANTONG（商品名））において、併用投与についての要件を満たしていない。さらに、中国国家食品薬品監督管理局による事前の承認を得ていない単純に混合したいくつかの伝統的な中国の特許薬の注射液は、急速な血圧の上昇、発熱、およびアレルギーのような予想外の有害な反応について高いリスクがある。したがって、臨床的応用のための、薬草の生物学的に活性な部分のより有効で便利な組成物を提供することは極めて重要である。
【発明の開示】
【０００５】
したがって、本発明の目的は、循環器疾患および脳血管疾患の処置のための、薬草の生理活性部分のより有効で便利な組成物を提供することである。これにより、併用投与についての臨床上の要件を満たすことができない薬草の1つの生物学的に活性な部分をベースとする伝統的な中国の特許薬の欠点を克服し、そして単純に一緒に混合した複数の薬剤に付随して起こり得る副反応を回避することができる。
【０００６】
本発明は、以下の実施形態に概要をまとめられるように実施することができる。
【０００７】
本発明の薬学的組成物には、以下が含まれる：
丹参葉（タンジン、Radix  Salviae  Miltiorrhizae）抽出物；
参三七（サンシチ、Radix  Notoginseng）抽出物；
黄耆（オウギ、Radix  Astragali）抽出物；および
ボルネオール（Borneol）または降真香（コウシンコウ、Lignum  Dalbergiae  Odoriferae）の油。
【０００８】
本発明の好ましい実施形態においては、本発明の組成物には5.0％〜70.0％の丹参葉抽出物、10.0％〜85.0％の参三七抽出物、5.0％〜70.0％の黄耆抽出物、および1.0％〜15.0％のボルネオールまたは降真香の油が含まれる。
【０００９】
本発明のさらに好ましい実施形態においては、本発明の組成物には15.0％〜50.0％の丹参葉抽出物、25.0％〜65.0％の参三七抽出物、15.0％〜50.0％の黄耆抽出物、および2.0％〜12.0％のボルネオールまたは降真香の油が含まれる。
【００１０】
本発明のなおさらに好ましい実施形態においては、本発明の組成物には20.0％〜30.0％の丹参葉抽出物、30.0％〜55.0％の参三七抽出物、20.0％〜30.0％の黄耆抽出物、および4.0〜10.0％のボルネオールまたは降真香の油が含まれる。
【００１１】
本発明のなおさらに好ましい実施形態においては、本発明の組成物には23％の丹参葉抽出物、45.0％の参三七抽出物、23％の黄耆抽出物、および9％のボルネオールまたは降真香の油が含まれる。
【００１２】
本発明の組成物のなおさらに好ましい実施形態においては、上記丹参葉抽出物には、45％〜70％のサルビアノール酸（salvianolic  acid）B、2〜10％のサルビアノール酸E、4〜20％のロスマリン酸、1〜10％のリトスペルミン酸（lithospermic  acid）、および70％を上回るサルビアノール酸（salvinolic  acid）が含まれる。
【００１３】
本発明の組成物のなおさらに好ましい実施態様においては、上記参三七抽出物には、2％〜10％のノトジンセノサイドR1、2％〜6％のジンセノサイドRe、15％〜40％のジンセノサイドRg1、15％〜40％のジンセノサイドRb1、5％〜12％のジンセノサイドRd、および70％を上回る、好ましくは80％を上回る参三七サポニンが含まれる。
【００１４】
本発明の組成物のなおさらに好ましい実施態様においては、上記黄耆抽出物には、5％〜15％のアストラガロシドI、および70％を上回る黄耆サポニンが含まれる。
【００１５】
本発明の組成物のなおさらに好ましい実施態様においては、上記丹参葉抽出物には80％を上回るサルビアノール酸が含まれ；上記参三七抽出物には、80％を上回る参三七サポニンが含まれ；そして上記黄耆抽出物には、80％を上回る黄耆サポニンが含まれる。
【００１６】
本発明の組成物のなおさらに好ましい実施態様においては、これは、注射液、錠剤、徐放性錠剤、ドロップ剤、顆粒剤、注射用粉末剤、カプセル剤、および微粒剤である。
【００１７】
本発明の組成物のなおさらに好ましい実施態様においては、これは、注射液または注射用粉末剤である。
【００１８】
本発明の組成物は、循環器疾患および脳血管疾患の処置に使用される。
【００１９】
上記薬学的組成物の丹参葉抽出物は、先行技術のプロセスによって、例えば、特許出願CN1352985A、CN1247855A、CN1242364A、CN1384090A、CN1459448A、ならびに、Guo  Ying  et  al.，The  Journal  of  Yunnan  University  of  Traditional  Chinese  Medicine，2001，24（4）：6に開示されているプロセスによって調製することができる。これはまた、適切な修正を加えた上記と同様のプロセスによっても得ることができる。
【００２０】
本発明の上記丹参葉抽出物には、45％〜70％のサルビアノール酸B、2〜10％のサルビアノール酸E、4〜20％のロスマリン酸、1〜10％のリトスペルミン酸、および70％を上回る、好ましくは80％を上回るサルビアノール酸が含まれる。丹参葉抽出物の調製プロセスとは無関係に、表現「丹参葉抽出物」は、本明細書中で使用される場合には、抽出物の含有量が列挙した範囲内にあることを意味し、そしてその目的のためには、粗抽出物はさらに、例えば濃度によって、成分の含有量に関する要件を満たすようにさらに精製することができる。成分およびそれらの含有量は、それぞれ以下のように特徴付け、そして定量することができる。
【００２１】
1.丹参葉抽出物中のサルビアノール酸B、サルビアノール酸E、ロスマリン酸、およびリトスペルミン酸の含有量の定量（HPLC）
a.クロマトグラフィー条件
充填物：オクタデシルシリル−シリカゲル；移動相：アセトニトリル−水−リン酸（23.5：76.5：0.02）；検出波長：288nm。
理論的プレートは、5，000以上である。サルビアノール酸Bのピークに基づいて計算した。
【００２２】
b.対照溶液の調製：
0.2mg／mlのサルビアノール酸B対照溶液を、対照試料を移動相と混合することによって調製し、同様にまた、0.02mg／mlのサルビアノール酸E対照溶液、0.05mg／mlのロスマリン酸対照溶液、および0.010mg／mlのリトスペルミン酸対照溶液も調製する。
【００２３】
c.試料溶液の調製：
35mgの丹参葉抽出物を、25mlの計量用ビンに正確に量りとる。ビンに移動相を添加し、試料を溶解させる。得られた溶液を、さらに、移動相を用いて25mlとなるように、振りながら同時に希釈する。5mlの試料溶液を25mlの計量用ビンにとり、ビンに移動相を添加して25mlとし、得られた溶液を振り、均質に混合する。
【００２４】
d.分析手順
10μlの各対照溶液と試料溶液を、それぞれ液体クロマトグラフィーで分析する。
【００２５】
2.上記丹参葉抽出物中のサルビアノール酸の定量（分光光度測定法）
a.対照溶液の調製：
20μg/mlのサルビアノール酸B溶液を、試料をアセトニトリル−水−リン酸（23.5：76.5：0.02）の混合液と混合することによって調製する。
【００２６】
b.試料溶液の調製：
25mgの丹参葉抽出物を、50mlの計量用ビンに正確に量りとる。ビンにアセトニトリル−水−リン酸（23.5：76.5：0.02）の混合液を添加する。得られた溶液を、さらに、上記の混合液を用いて25mlとなるように、振りながら同時に希釈する。2mlの試料溶液を50mlの計量用ビンに正確に量りとる。上記混合液を添加して25mlとし、得られた溶液を振り、それを均質に混合する。
【００２７】
c.分析手順
ブランクとして、アセトニトリル−水−リン酸（23.5：76.5：0.02）をとり、対照溶液と試料溶液の吸光度を、288nmの波長のもとで、分光光度計（China  Pharmacopoeia、1995年版、第1巻、別表VA）を使用して別々に定量する。計算は、以下の式に基づく。
サルビアノール酸（％）＝f（A−B）＋B
式中、fは0.626であり、これは校正係数であり；Aは、サルビアノール酸Bに対して分光光度測定によって定量したサルビアノール酸の含有量であり、Bは、HPLCによって定量したサルビアノール酸Bの含有量である。
【００２８】
3.上記丹参葉抽出物のHPLCフィンガープリントスペクトル
定量方法については、上記（1）のサルビアノール酸BおよびE、ロスマリン酸、リトスペルミン酸の定量に関する記述を参照のこと。記録時間は60分である。
【００２９】
全ての共通するフィンガープリントのピークのうち、比較的大きく安定したピーク面積を呈する共通するピークであるサルビアノール酸Bのピークが、参照ピークとして選択される。相対的な保持時間と相対的なピーク面積が、参照ピークの保持時間とピーク面積に対して計算される。上記の丹参葉抽出物のフィンガープリントには5〜7個の共通するピークが存在し、通常は6個の共通するピークが存在する。6個の共通するピークの相対的な保持時間は、順に、0.55〜0.65（サルビアノール酸Eのピーク）、0.66〜0.70（ロスマリン酸のピーク）、0.71〜0.79（リトスペルミン酸のピーク）、1（サルビアノール酸Bのピーク）、1.03〜1.12、1.21〜1.30である。全ての共通するピークのうち、参照ピークであるサルビアノール酸Bのピークだけが、20％よりも大きい、全ピーク面積に対する単一ピーク面積の割合を有する。サルビアノール酸Bのピーク面積は全ピーク面積の57％〜87％を占め、その相対的なピーク面積は1である。0.66〜0.70の相対的な保持時間を有する、ロスマリン酸の共通するピークのピーク面積は、全ピーク面積の3％〜18％を占め、そして相対的なピーク面積は0.03〜0.25である。共通しないピークのピーク面積の合計は、全ピーク面積の10％未満である。
【００３０】
上記薬学的組成物の参三七抽出物は、先行技術のプロセスによって、例えば、中国特許第ZL1095363C号、中国特許出願番号CN1352985A、Qian  Tianxiang  et  al.，Foreign  Medical  Sciences，Plant  Medicine  Section，1997，12（4），Tang  Diguang，The  Journal  of  Chinese  Traditional  Patent  Medicine，1990，12（8）：5  the  Standard  of  Public  Health  Ministry  of  China  WS3−B−3590−2001（z）に開示されているプロセスによって調製することができる。これはまた、適切な修正を加えた上記と同様のプロセスによっても得ることができる。これはまた、例えば、95％（UVによって定量した）参三七サポニン（Rb1≧30％、Rg1≧20％、R1≧15％、HPLCによって定量した）を含む抽出物の形態で、市販によって入手することもできる。
【００３１】
本発明の参三七抽出物には、2％〜10％のノトジンセノサイドR1、2％〜6％のジンセノサイドRe、15％〜40％のジンセノサイドRg1、15％〜40％のジンセノサイドRb1、5％〜12％のジンセノサイドRd、および70％を上回る、好ましくは80％を上回る参三七サポニンが含まれる。参三七抽出物の調製プロセスとは無関係に、表現「参三七抽出物」は、本明細書中で使用される場合には、抽出物の含有量が列挙した範囲内にあることを意味し、そしてその目的のためには、粗抽出物はさらに、例えば濃度によって、成分の含有量に関する要件を満たすようにさらに精製することができる。成分およびそれらの含有量は、それぞれ以下のように特徴付け、そして定量することができる。
【００３２】
1.参三七抽出物中のジンセノサイドRe、ジンセノサイドRd、ノトジンセノサイドR1、ジンセノサイドRg1、およびジンセノサイドRb1の含有量の定量（HPLC）
a.クロマトグラフィー条件およびシステムの適合性試験
充填物：オクタデシルシリル−シリカゲル；カラム温度：40℃；流速：0.7ml／分；検出波長：203nm；以下のような移動相の割合：
【表１ａ】
2007505936.tif 000002
【００３３】
b.対照溶液の調製：
0.2mg／mlのジンセノサイドRe対照溶液を、対照試料をメタノールと混合することによって調製し、同様に、0.4mg／mlのジンセノサイドRd対照溶液、0.2mg／mlのジンセノサイドR1対照溶液、0.4mg／mlのノトジンセノサイドRg1溶液、および0.4 mg／mlのジンセノサイドRb1対照溶液もまたそれぞれ調製する。
【００３４】
c.試料溶液の調製：
20mgの参三七抽出物を50mlの計量用ビンに正確に量りとる。ビンに移動相を添加し、試料を溶解させる。得られた溶液を、さらに、移動相を用いて50mlとなるように、振りながら同時に希釈する。
【００３５】
d.分析手順
10μlの各標準溶液と試料溶液をHPLCシステムに注入し、分析する。その結果、本発明の参三七抽出物のHPLCスペクトルが得られる。
【００３６】
（1）上記参三七抽出物中の参三七サポニンの定量（分光光度測定法）
【００３７】
（2）参三七抽出物のHPLCフィンガープリントスペクトル
定量方法については、HPLCによる上記（1）のジンセノサイドRe、ジンセノサイドRd、ジンセノサイドR1、ノトジンセノサイドRg1、およびジンセノサイドRb1に関する記述を参照のこと。記録時間は30分である。
【００３８】
全ての共通するフィンガープリントのピークのうち、比較的大きく安定したピーク面積を呈するジンセノサイドRg1のピークが、参照ピークとして選択される。相対的な保持時間と相対的なピーク面積が、参照ピークの保持時間とピーク面積に対して計算される。上記参三七抽出物のフィンガープリントには9〜12個の共通するピークが存在し、通常は11個の共通するピークが存在する。11個の共通するピークの相対的な保持時間は、順に、0.77〜0.85（ノトジンセノサイドR1のピーク）、0.87〜0.97（ジンセノサイドReのピーク）、1（ジンセノサイドRg1のピーク、すなわち、参照ピーク）、2.58〜2.67、2.68〜2.76、2.77〜2.81、2.82〜2.91（ジンセノサイドRb1のピーク）、2.95〜3.03、3.05〜3.13、3.15〜3.22（ジンセノサイドRdのピーク）、3.24〜3.91である。全ての共通するピークのうち、ジンセノサイドRg1のピークとジンセノサイドRb1のピークだけが、全ピーク面積に対する単一ピーク面積の20％よりも大きい割合を有する。参照ピークであるジンセノサイドRg1のピーク面積は、全ピーク面積の20％〜35％を占め、その相対的なピーク面積は1である。ジンセノサイドRb1のピーク面積は、全ピーク面積の30％〜50％を占め、その相対的なピーク面積は、0.85〜2.50である。ノトジンセノサイドR1のピーク面積は、全ピーク面積の2％〜8％を占め、その相対的なピーク面積は0.06〜0.40である。ジンセノサイドRdのピーク面積は全ピーク面積の5％〜14％を占め、その相対的なピーク面積は0.14〜0.70である。共通ではないピークのピーク面積の合計は、全ピーク面積の10％未満である。
【００３９】
上記薬学的組成物の黄耆抽出物は、先行技術によって、例えば、中国特許第CN1096269C号、Yu  Hao  et  al.，West  China  Journal  of  Pharmaceutical  Sciences，1993，8（3）：163、Teng  Xinglong  et  al.，Hei  Long  Jiang  Medical  Journal，2002，15（5）：340，Wang  Zhijie  et  al.，Journal  of  Zhejiang  College  of  Traditional  Chinese  Medicine，2001，25（5）：43の開示によって調製することができる。これはまた、適切な修正を加えた上記と同様のプロセスによっても得ることができる。これはまた、例えば、80％〜98％（UVによって定量した）の黄耆抽出物を含む抽出物の形態で、市販されている。
【００４０】
本発明の黄耆抽出物には、5％〜15％のアストラガロシドI、および70％を上回る黄耆サポニン、または好ましくは、80％を上回る黄耆サポニンが含まれる。黄耆抽出物の調製プロセスとは無関係に、表現「黄耆抽出物」は、本明細書中で使用される場合には、抽出物の含有量が列挙した範囲内にあることを意味し、そしてその目的のためには、粗抽出物はさらに、成分の含有量に関する要件を満たすようにさらに精製することができる。
【００４１】
上記組成物において使用されるボルネオールは、自然界に存在しているものであっても、また合成されたものであってもよい。
【００４２】
上記組成物において使用される降真香の油は、降真香を蒸留することによって得ることができる。
【００４３】
本発明の組成物は、1つ以上の薬学的に許容されるアジュバントと組み合わせることによって、種々の投与量形態に処方され得る。上記アジュバントとしては、デンプン、デキストリン、乳糖、微結晶セルロース（アビセル）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（HPMC）、ポリエチレングリコール、ステアリン酸マグネシウム、マイクロシリコンゲル、キシリトール、ラクチトール、グルコース、グリシン、D−マンニトールなどが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の薬学的組成物は、注射液、錠剤、徐放性錠剤、ドロップ剤、顆粒剤、注射用粉末剤、カプセル剤、微粒剤などの形態であり得る。錠剤、ドロップ剤、注射用粉末剤、およびカプセル剤が好ましい。サルビアノール酸、参三七サポニン、および黄耆サポニンの含有量の合計は、本発明の組成物が注射液または注射用粉末剤に処方される場合には、80％を超えることが好ましい。
【００４４】
本発明の組成物の原材料は容易に入手することができ、したがって、本発明の組成物の商業的生産は容易である。本発明の組成物は、所望される種々の形態に処方され得、臨床的応用のためより便利で、有効、かつ高品質の管理された現代中国の伝統的特許薬を提供する。
【００４５】
本発明では、本発明の組成物、サルビアノール酸＋参三七サポニン＋ボルネオール（broneol）または降真香の油、サルビアノール酸＋参三七サポニン、サルビアノール酸、および参三七サポニンの抗脳虚血に対する効果を、中大脳動脈に局所的に塩化鉄（III）6水和物を適用することによって引き起こされた局所的な脳虚血のモデルを使用し、そして神経症状と脳梗塞の場所の決定によって、比較する。結果は、本発明の組成物が抗脳虚血に対する有意な効果を有していることを示す。その治療効果は、サルビアノール酸のみ、または参三七サポニンのみの効果よりも有意であり、サルビアノール酸＋参三七サポニンよりも有意であり、そして、サルビアノール酸＋参三七サポニン＋ボルネオールまたは降真香の油よりもさらに有意であることを示す。結果は、本発明の薬学的組成物、すなわち、丹参葉抽出物＋参三七抽出物＋黄耆抽出物＋ボルネオール、または丹参葉抽出物＋参三七抽出物＋黄耆抽出物＋降真香の油の組み合わせが、有意な相乗効果を有していることを示す。
【００４６】
本発明の記載においては、全ての割合（％）は、特に明記されない限りは重量である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４７】
本発明は、以下の実施例を参照してさらに理解されるであろう。以下の実施例は、説明の目的のためであり、本発明の範囲を限定するようには意図されない。
【実施例１】
【００４８】
丹参葉抽出物：
丹参葉抽出物を、中国特許出願番号CN1459448Aに開示されている方法によって調製した。したがって、5kgの丹参葉を挽いて粗い粉末とし、その後、100℃の穏やかな沸騰条件下で脱イオン水を用いて3回抽出した。最初の抽出において、27.5kgの水を加え、1時間加熱した。2回目および3回目の抽出において、それぞれ15kgの水を加え、0.5時間加熱した。抽出物の酸性度を、10％のHClを用いてpH2に調節し、その後、濾過した。濾液をポリアミド樹脂カラム（乾燥樹脂量は、粗抽出物の3分の2の量）に充填した。カラムを、カラムの5倍容量の脱イオン水、続いて、カラムの5倍容量の0.1％のNaHCO3溶液で溶出した。溶離液を回収した。10％のHClでpHを2に調節し、溶離液を、D101マクロ多孔性吸着性樹脂上に充填した。樹脂を溶離液が中性になるまで脱イオン水で溶出した。その後、カラムを95％のエタノールで溶出し、色のついたバンドを回収した。回収した溶液を、乾燥するまで減圧下で濃縮した。乾燥した材料を水に溶解させ、その後、一晩冷蔵庫内で保存した。0.3μmの混合セルロース微小孔フィルターフィルムを通して濾過した後に、サルビアノール酸抽出物が得られた。これを、2％のNaOH溶液でpH6.0に調節し、すぐに凍結乾燥し、221gの丹参葉抽出物質の凍結乾燥粉末が得られた。収率は、粗材料の丹参葉の4.4％であった。
【００４９】
このようにして得た丹参葉抽出物は、サルビアノール酸A、サルビアノール酸B、サルビアノール酸C、サルビアノール酸D、サルビアノール酸E、サルビアノール酸G、ミルチオノン（miltionone）I、ロスマリン酸、リトスペルミン酸、丹参素（danshensu）などを含んでいた。上記サルビアノール酸Bは53.73％であり、サルビアノール酸Eは3.7％であり、ロスマリン酸は5.2％であり、リトスペルミン酸は1.7％であり、サルビアノール酸は83.94％であった。6個の共通するピークが、丹参葉抽出物のHPLCフィンガープリントスペクトルにおいて示された（10個のバッチの平均）。これらの6個の共通するピークの相対的な保持時間の平均は、順に、0.60（サルビアノール酸Eのピーク）、0.68（ロスマリン酸のピーク）、0.73（リトスペルミン酸のピーク）、1（サルビアノール酸Bのピーク）、1.08、1.26であった。共通するピークのうち、参照ピークであるサルビアノール酸Bのピークだけが、全ピーク面積に対する単一ピーク面積の20％よりも大きい割合を有していた。サルビアノール酸Bのピーク面積は全ピーク面積の72％（平均）を占め、その相対的なピーク面積は1であった。ロスマリン酸のピーク面積は、全ピーク面積の10％（平均）を占め、そして相対的なピーク面積は0.14（平均）であった。共通していないピークのピーク面積の合計は、全ピーク面積の10％未満であった。丹参葉のHPLCフィンガープリントのスペクトルを図1に示す。
【００５０】
参三七抽出物
市販されている参三七サポニンを、所望される参三七抽出物を生産するために、さらに精製した。得られた抽出物には、ジンセノサイドRb1、ジンセノサイドRd、ジンセノサイドRe、ジンセノサイドRg1、ジンセノサイドRg2、およびジンセノサイドRg3、ジンセノサイドRh1、ジンセノサイドRh2、パナキシトリオール、ノトジンセノサイドR1、ノトジンセノサイドR2、ノトジンセノサイドR3、20−グルコージンセノサイドRfが含まれていた。ここでは、ジンセノサイドReは3.9％、ジンセノサイドRg1は34.3％、ジンセノサイドRb1は31.0％、そしてジンセノサイドRdは8.8％、ノトジンセノサイドR1は6.8％であり、参三七サポニンは94％であった。11個の共通するピークが、参三七抽出物のHPLCフィンガープリント中に示された（10個のバッチの平均）。これらの共通する11個のピークの相対的な保持時間の平均は、順に、0.82（ノトジンセノサイドR1のピーク）、0.94（ジンセノサイドReのピーク）、1（ジンセノサイドRg1のピーク、参照ピーク）、2.63、2.74、2.79、2.85（ジンセノサイドRb1のピーク）、2.99、3.08、3.18（ジンセノサイドRdのピーク）、および3.28であった。全ての共通するピークのうち、ジンセノサイドRg1のピークとジンセノサイドRb1のピークは、全ピーク面積に対する単一ピーク面積の20％よりも大きい割合を有していた。ジンセノサイドRg1のピーク（すなわち、参照ピーク）は、全ピーク面積の28％（平均）を占め、その相対的なピーク面積は1であった。ジンセノサイドRb1のピーク面積は、全ピーク面積の39％（平均）を占め、その相対的なピーク面積は、1.36（平均）であった。ノトジンセノサイドR1のピーク面積は、全ピーク面積の6％（平均）を占め、その相対的なピーク面積は0.20であった。ジンセノサイドRdのピーク面積は全ピーク面積の10％（平均）を占め、その相対的なピーク面積は0.37（平均）であった。共通していないピークのピーク面積の合計は、全ピーク面積の10％未満であった。参三七のHPLCフィンガープリントのスペクトルを図2に示す。
【００５１】
黄耆抽出物：
市販されている黄耆抽出物をさらに精製した。得られた抽出物は、アセチルアストラガロシド、アストラガロシドI、アストラガロシドII、アストラガロシドIII、アストラガロシドIV、イソアストラガロシドI、イソアストラガロシドII、アストラメンブラニンII、シクロアストラゲノール、ソヤサポニンI、ルペオード（lupeod）、β−シトステロール、ダウコステリン（daucosterin）を含んでいた。ここでは、アストラガロシドIは9.5％であり、黄耆抽出物の含有量は88.9％であった。
【００５２】
75mgの丹参葉抽出物、150mgの参三七抽出物、75mgの黄耆抽出物（全て、上記によって得た）と、30mgのボルネオールを十分に混合した。その後、この混合物を凍結乾燥させて、本発明の組成物を得た。
【実施例２】
【００５３】
実施例1で得た、100mgの丹参葉抽出物、200mgの参三七抽出物、75mgの黄耆抽出物と、30mgの降真香の油を、400mgのポリエチレングリコール−6000と混合し、融解させて混合物とした。次いで、混合物を冷却して、本発明の組成物を得た。
【実施例３】
【００５４】
実施例1で得た、96mgの丹参葉抽出物、136mgの参三七抽出物、70mgの黄耆抽出物と、28mgのボルネオールを十分に混合した。その後、この混合物を凍結乾燥させて、本発明の組成物を得た。
【実施例４】
【００５５】
実施例1で得た、70mgの丹参葉抽出物、150mgの参三七抽出物、90mgの黄耆抽出物と、20mgのボルネオールを十分に混合した。次いで、この混合物を凍結乾燥させて、本発明の組成物を得た。
【実施例５】
【００５６】
実施例1で得た、165mgの丹参葉抽出物、80mgの参三七抽出物、60mgの黄耆抽出物と、25mgのボルネオールを十分に混合した。次いで、この混合物を凍結乾燥させて、本発明の組成物を得た。
【実施例６】
【００５７】
実施例1で得た、75mgの丹参葉抽出物、135mgの参三七抽出物、82mgの黄耆抽出物と、38mgのボルネオールを十分に混合した。次いで、この混合物を凍結乾燥させて、本発明の組成物を得た。
【実施例７】
【００５８】
実施例1で得た、230mgの丹参葉抽出物、75mgの参三七抽出物、17mgの黄耆抽出物と、8mgのボルネオールを十分に混合した。次いで、この混合物を凍結乾燥させて、本発明の組成物を得た。
【実施例８】
【００５９】
実施例1で得た、17mgの丹参葉抽出物、70mgの参三七抽出物、230mgの黄耆抽出物と、13mgのボルネオールを十分に混合した。次いで、この混合物を凍結乾燥させて、本発明の組成物を得た。
【実施例９】
【００６０】
実施例1で得た、55mgの丹参葉抽出物、160mgの参三七抽出物、63mgの黄耆抽出物と、48mgのボルネオールを十分に混合した。次いで、この混合物を凍結乾燥させて、本発明の組成物を得た。
【実施例１０】
【００６１】
実施例1で得た、96mgの丹参葉抽出物、136mgの参三七抽出物、70mgの黄耆抽出物と、28mgの降真香の油を、400mgのポリエチレングリコール−6000とともに十分に混合し、溶融させた。次いで、この混合物を冷却して、本発明の組成物を得た。
【実施例１１】
【００６２】
実施例1で得た、70mgの丹参葉抽出物、150mgの参三七抽出物、90mgの黄耆抽出物と、20mgの降真香の油を、400mgのポリエチレングリコール−6000とともに十分に混合し、溶融させた。次いで、この混合物を冷却して、本発明の組成物を得た。
【実施例１２】
【００６３】
実施例1で得た、165mgの丹参葉抽出物、80mgの参三七抽出物、60mgの黄耆抽出物と、25mgの降真香の油を、400mgのポリエチレングリコール−6000とともに十分に混合し、溶融させた。次いで、この混合物を冷却して、本発明の組成物を得た。
【実施例１３】
【００６４】
実施例1で得た、75mgの丹参葉抽出物、135mgの参三七抽出物、82mgの黄耆抽出物と、38mgの降真香の油を、400mgのポリエチレングリコール−6000とともに十分に混合し、溶融させた。次いで、この混合物を冷却して、本発明の組成物を得た。
【実施例１４】
【００６５】
実施例1で得た、230mgの丹参葉抽出物、75mgの参三七抽出物、17mgの黄耆抽出物と、8mgの降真香の油を、400mgのポリエチレングリコール−6000とともに十分に混合し、溶融させた。次いで、この混合物を冷却して、本発明の組成物を得た。
【実施例１５】
【００６６】
実施例1で得た、17mgの丹参葉抽出物、70mgの参三七抽出物、230mgの黄耆抽出物と、13mgの降真香の油を、400mgのポリエチレングリコール−6000とともに十分に混合し、溶融させた。次いで、この混合物を冷却して、本発明の組成物を得た。
【実施例１６】
【００６７】
実施例1で得た、55mgの丹参葉抽出物、160mgの参三七抽出物、63mgの黄耆抽出物と、48mgの降真香の油を、400mgのポリエチレングリコール−6000とともに十分に混合し、溶融させた。次いで、この混合物を冷却して、本発明の組成物を得た。
【実施例１７】
【００６８】
実施例1で得た、75gの丹参葉抽出物、135gの参三七抽出物、96gの黄耆抽出物と、25gのボルネオール、90gのマンニトール、15gのエデト酸カルシウム2ナトリウム（calcium  disodium  edate）、および15mlの蒸留水を十分に混合た。次いで、この混合物を凍結乾燥させて、1000個のアリコートに分けた。
【実施例１８】
【００６９】
67gの丹参葉抽出物（中国特許出願番号CN1352985A、実施例1）、180gの参三七抽出物（本発明の実施例1）、67gの黄耆抽出物（本発明の実施例1）と、16gのボルネオールを、40gの微結晶性セルロースとともに十分に混合した。3％のポビドン−エタノール溶液を添加して、混合物を柔らかくした。次いで、この混合物を、18＃の篩にかけ、顆粒を形成させ、60℃で30〜45分間乾燥させた。次いで、このようにして得られた顆粒を整え、4gのタルクを添加し、十分に混合した。形成した顆粒をカプセルに充填した。
【実施例１９】
【００７０】
50gの丹参葉抽出物（水抽出およびアルコール沈殿法、Guo  Ying  et  al.，The  Journal  of  Yunnan  University  of  Traditional  Chinese  Medicine，2001，24（4）：6によって調製した）、210gの参三七抽出物（Qian  Tian  Xiang  et  al.，Foreign  Medical  Sciences，Plant  Medicine  Section，1997，12（4））、50gの黄耆抽出物（本発明の実施例1）と、20gのボルネオールを、少量の生理食塩水で、別々に溶解させた。次いで、適量のTween  80を添加した。それぞれの混合物を細かく砕き、生理食塩水を添加した後に脱色した。溶液を、それが澄んだ透明になるまで減圧下で濾過した。濾液を、生理食塩水を含む容器中に回収した。容器を密閉し、沸騰している水で滅菌した。その後、3種類の透明な溶液を混合し、酸性度が5になるように調整した。適切な容量の生理食塩水を添加した。濾過プロセスを繰り返して、澄んだ透明な溶液を得た。所望される注射液が得られた。
【実施例２０】
【００７１】
60gの丹参葉抽出物（中国特許出願番号CN1384090A、実施例1）、80gの参三七抽出物（Tang  Di  Guang，The  Journal  of  Chinese  Traditional  Patent  Medicine，1990，12（8）：5）、165gの黄耆抽出物（本発明の実施例1）と、25gのボルネオールを、40gの微結晶性セルロースと十分に混合した。3％のポビドン−エタノール溶液を添加して、混合物をやわらかくした。その後、混合物を18＃の篩にかけ、60℃で30〜45分間乾燥させて顆粒を得た。4gのタルクを添加し、十分に混合した。形成された顆粒を圧縮して錠剤にした。
【実施例２１】
【００７２】
90gの丹参葉抽出物（中国特許出願番号CN1384090A、実施例1）、150gの参三七抽出物（本発明の実施例1）、82gの黄耆抽出物（本発明の実施例1）と、8gのボルネオールを、40gの微結晶性セルロースと十分に混合した。3％のポビドン−エタノール溶液を添加して、混合物をやわらかくした。混合物を18＃の篩にかけ、顆粒を形成させ、60℃で30〜45分間乾燥させた。このようにして得られた顆粒を整え、次いで、4gのタルクを添加し、十分に混合した。
【実施例２２】
【００７３】
85gの丹参葉抽出物（中国特許出願番号CN1384090A、実施例1）、135gの参三七抽出物（本発明の実施例1）、80gの黄耆抽出物（Teng  Xing  Long  et  al.，Hei  Long  Jiang  Medical  Journal，2002，15（5）：340）と、30gのボルネオールを、700gのポリエチレングリコール−6000と十分に混合し、溶融させた。その後、低温の液体パラフィン中に一滴ずつ落とし、丸薬を選択し、低温の液体パラフィンを除去した。
【実施例２３】
【００７４】
17gの丹参葉抽出物（中国特許出願番号CN1384090A、実施例1）、280gの参三七抽出物（本発明の実施例1）、17gの黄耆抽出物（本発明の実施例1（抽出：Yu  Hao  et  al.，West  China  Journal  of  Pharmaceutical  Sciences，1993，8（3）：163）；精製：Teng  Xing  Long  et  al.，Hei  Long  Jiang  Medical  Journal，2002，15（5）：340）と、16gのボルネオールを、700gのポリエチレングリコール−6000と十分に混合し、溶融させた。その後、低温の液体パラフィン中に一滴ずつ落とし、丸薬を選択し、低温の液体パラフィンを除去した。
【実施例２４】
【００７５】
67gの丹参葉抽出物（中国特許出願番号CN1352985A、実施例1）、180gの参三七抽出物（本発明の実施例1）、67gの黄耆抽出物（本発明の実施例1）と、16gの降真香の油を、40gの微結晶性セルロースと十分に混合した。3％のポビドン−エタノール溶液を添加して、混合物をやわらかくした。混合物を18＃の篩にかけて顆粒を形成させ、60℃で30〜45分間乾燥させた。整えた後、4gのタルクを添加し、十分に混合した。形成した顆粒をカプセルに充填した。
【実施例２５】
【００７６】
60gの丹参葉抽出物（中国特許出願番号1384090A、実施例1）、80gの参三七抽出物（Tang  Di  Guang，The  Journal  of  Chinese  Traditional  Patent  Medicine，1990，12（8）：5）、165gの黄耆抽出物（本発明の実施例1）と、25gの降真香の油を、40gの微結晶性セルロースと十分に混合した。3％のポビドン−エタノール溶液を添加して、混合物をやわらかくした。混合物を18＃の篩にかけて顆粒を形成させ、60℃で30〜45分間乾燥させた。整えた後、4gのタルクを添加し、十分に混合した。形成した顆粒を圧縮して錠剤にした。
【実施例２６】
【００７７】
90gの丹参葉抽出物（中国特許出願番号CN1384090A、実施例1）、150gの参三七抽出物（本発明の実施例1）、82gの黄耆抽出物（本発明の実施例1）と、8gの降真香の油を、40gの微結晶性セルロースと十分に混合した。3％のポビドン−エタノール溶液を添加して、混合物をやわらかくした。混合物を18＃の篩にかけて顆粒を形成させ、60℃で30〜45分間乾燥させた。整えた後、4gのタルクを添加し、十分に混合した。このようにして得られた顆粒を整え、包装した。
【実施例２７】
【００７８】
85gの丹参葉抽出物（中国特許出願番号CN1384090A、実施例1）、135gの参三七抽出物（本発明の実施例1）、80gの黄耆抽出物（Teng  Xing  Long  et  al.，Hei  Long  Jiang  Medical  Journal，2002，15（5）：340）と、30gの降真香の油を、700gのポリエチレングリコール−6000と十分に混合し、溶融させた。その後、低温の液体パラフィン中に一滴ずつ落とし、丸薬を選択し、低温の液体パラフィンを除去した。
【実施例２８】
【００７９】
17gの丹参葉抽出物（中国特許出願番号CN1384090A、実施例1）、280gの参三七抽出物（本発明の実施例1）、17gの黄耆抽出物（本発明の実施例1（抽出：Yu  Hao  et  al.，West  China  Journal  of  Pharmaceutical  Sciences，1993，8（3）：163；精製：Teng  Xing  Long  et  al.，Hei  Long  Jiang  Medical  Journal，2002，15（5）：340））と、16gの降真香の油を、700gのポリエチレングリコール−6000と十分に混合し、溶融させた。その後、低温の液体パラフィン中に一滴ずつ落とし、丸薬を選択し、低温の液体パラフィンを除去した。
【００８０】
実験1  ラットにおける局所脳虚血に対する本発明の薬学的組成物の効果
1.材料
a.動物：雄のSprague−Dawley（SD）ラット、体重180〜200グラム、品質管理証明書番号SCXK（北京）2002−0003、Beijing  Weitong  Lihua  Experimental  Animal  Technology  Co.，Limitedより提供された。
b.試験した薬剤および化学物質：
試験した薬剤：本発明の実施例1および実施例2で得られた組成物；本発明の実施例1の丹参葉の抽出物、本発明の実施例1の参三七の抽出物、本発明の実施例1の黄耆の抽出物、降真香の油およびボルネオール。Qunming  Pharmaceutical  Co.，Limitedによって製造されたXUESAITONG（商品名）（ロット番号20020922.03）を市販により購入した。
【００８１】
化学物質：2，3，5−塩化トリフェニルテトラゾリウム（TTC）、淡黄色の粉末（Beijing  Mashi  Fine  Chemical  Co.，Limited（ロット番号011102）の製品）。
【００８２】
c.実験装置：XTT立体顕微鏡（Yunnan  Optical  Instrument  Factoryの製品）；Model  AEG−220  Electronic  Analytical  Scale（日本の島津製作所の製品）；307−6  Desktop  Dental  Instrument  Cart（Shanghai  Dental  Medical  Instrument  Factoryの製品）；HZQ−C  Air  Bath  Vibrator（Harbin  Dongming  Medical  Instrument  Factoryの製品）。
【００８３】
2.方法および結果
a.グループおよび治験薬の投与：動物を体重でランダムにグループ分けした。全てのグループの動物に、手術後30分で、舌下静脈から試験した治験薬を投与した。試験した治験薬は、また、手術後2時間、および23時間で、腹腔内注射によっても投与した。全ての治験薬は、所望される濃度になるように生理食塩水で希釈した。注射量は、体重100gあたり0.4mlとした。
【００８４】
b.中大脳動脈塞栓症のモデル：ラットに10％の抱水クロラール溶液（350mg／kg）を投与するによって、腹腔内から麻酔し、右側臥位に固定した。左眼の目尻と左の外耳道の間の中点から1.5cmの長さの曲線的な切開を、行った。側頭筋を切断して切除し、側頭骨を露出し、立体顕微鏡下で頬骨と側頭鱗頭骨の接合部であり、接合部の口側の末端からわずか1mmの位置に、2.5mmの直径の穴（window）を骨にあけた。破片を除去し、動脈中大脳（嗅索と下大脳静脈との間に位置する）を露出させた。血管の周辺の領域を保護するために、プラスチックフィルムの小片をおいた。10μlの50％塩化鉄（III）に浸した定量濾紙の小片を、中大脳動脈のこの部分を覆うように置き、30分後に、濾紙を除去して、生理食塩水で局所組織を洗浄し、層の切開を縫合した。ラットをケージに戻し、通常の生活環境で回復させた。室温は24℃に制御した。
【００８５】
c.神経症状のスコア基準
行動評価を、手術後24時間で行った。スコア基準は以下である：（1）尾からラットを持ち上げた後の前肢の収縮状態を観察した。これを、両方の前肢が前に対称に伸びていた場合には0点、肩が収縮、肘が収縮、および／または手術した側と反対側の前肢について肩が内方捻転していた場合には1点と記録した。（2）ラットを平坦な面に置き、両肩を反対側に向けて押して、抵抗力をチェックした。これを、抵抗力が両側で等しく、強い場合には0点、手術した側と反対側の抵抗力が小さい場合には1点と記録した。（3）金属の網の上にラットの前肢を置き、筋肉の緊張を観察した。これを、両側の筋肉の緊張が等しく、強い場合には0点、手術した側と反対側の前脚の筋肉の緊張が低い場合には、1点と記録した。（4）ラットを尾から持ち上げた後に、ラットが手術した側と反対側に向かって連続して回転していた場合には、1点として記録した。上記のスコア基準に基づくと、フルスコアは4点である。スコアが高ければ高いほど、より重度の行動能力障害が存在している。
【００８６】
d.脳梗塞の程度の決定
ラットを、行動評価が終了した後に首を切った。脳を回収した。嗅球、小脳、および下部脳幹を廃棄し、脳の残りを5個の薄片になるように矢状に切断した。TTC染料溶液（4％のTTC1.5ml、1MのK2HPO40.1mlを含むそれぞれ5mlの染料溶液、その後、蒸留水を印まで添加した）中に脳の5つの薄片を浸し、37℃で30分間、暗所でインキュベートし、脳の薄片を10％のホルムアルデヒド溶液に移動させ、暗所で24時間保存した。染色によって、虚血していない領域はローズレッドになったが、虚血の領域は白かった。脳の薄片から白い組織を注意深く切り取り、重さを測定した。脳全体における梗塞組織の重量パーセントと、脳の損傷した側における梗塞組織の重量パーセントを、脳梗塞の程度とみなした。
【００８７】
e.結果
【表１ｂ】
2007505936.tif 000003
【表２】
2007505936.tif 000004
【００８８】
表1および表2の結果は、全ての試験した薬剤が、有意な抗脳虚血効果を有していることを示している。全ての薬剤のうち、本発明の実施例1の組成物（丹参葉抽出物、参三七抽出物、黄耆抽出物、およびボルネオール）と、本発明の実施例2の組成物（丹参葉抽出物、参三七抽出物、黄耆抽出物、および降真香の油）は、有意な治療効果を生じた。サルビアノール酸のみ、または参三七サポニンのみの投与は、XUESAITONG（商品名、陽性対照の薬剤）の投与と同様の効果を有していた。サルビアノール酸＋参三七サポニン＋ボルネオールを組み合わせての投与の治療効果は、サルビアノール酸＋参三七サポニン、あるいはサルビアノール酸のみ、または参三七サポニンのみ、あるいはXUESAITONG（商品名）の治療効果よりも優れていたが、本発明の実施例1の薬学的組成物、および本発明の実施例2の薬学的組成物の治療効果よりも悪かった。
【００８９】
ラットの実験用心筋梗塞モデルと、体外還流法を使用することにより、本発明では、本発明の薬学的組成物、サルビアノール酸＋参三七サポニン＋ボルネオールまたは降真香の油、サルビアノール酸＋参三七サポニン、サルビアノール酸、および参三七サポニンの抗心筋虚血の効果を比較した。結果は、本発明の薬学的組成物が有意な抗心筋虚血効果を有していることを示す。その治療効果は、サルビアノール酸だけ、または参三七サポニンだけを適用した場合の効果よりも良好であり、サルビアノール酸＋参三七サポニンを投与した場合の効果よりも強く、そして、サルビアノール酸＋参三七サポニン＋ボルネオールまたは降真香の油を投与した場合の効果よりも良好であった。結果は、本発明の薬学的組成物、すなわち、丹参葉抽出物＋参三七抽出物＋黄耆抽出物＋ボルネオールと、丹参葉抽出物＋参三七抽出物＋黄耆抽出物＋降真香の油は、4つの成分が強い相乗効果を有していることを示している。
【００９０】
実験2  本発明の組成物の抗心筋虚血効果についての研究
1.グループおよび治験薬の投与：70匹の雄のWistarラット（体重250.8±24.6グラム）を、7つの薬剤のグループに、体重でランダムにグループ分けした：対照としての生理食塩水、XUESAITONG、サルビアノール酸、参三七サポニン、サルビアノール酸＋参三七サポニン、本発明の実施例1の薬学的組成物、および本発明の実施例2の薬学的組成物。全ての試験した薬剤を、所望される濃度になるように生理食塩水で希釈した。試験した薬剤は、尾静脈から4mg／kgで投与した。
【００９１】
2.方法
a.ラットの実験用心筋梗塞のモデル：ラットを、腹腔内注射によってペントバルビタールナトリウム（45mg／kg）で麻酔した。仰臥位で固定し、気管チューブを挿入し、胸骨の左側に沿って2cmの縦切開を行った。胸腔を開いた後、胸骨に向かって閉じるその軟骨部分上の3本目と4本目の胸骨を切断し、人工呼吸器で呼吸を維持した（通気量2ml／100g、50回／分）。心嚢を開き、心臓を露出させ、結紮のために心臓の左冠動脈前下降枝の下部に糸を結び、standard  IIで導いた心電図（standard  II  lead  electrocardiogram）を記録した。10分間安定させ、その後、心臓の左冠動脈前下降枝を結紮し、胸腔を閉じた。注射器で喉頭内の分泌物を吸い取り、ラットを自発呼吸に戻した。冠状動脈の結紮の15分後、試験した薬剤を静脈から投与した。冠状動脈の結紮の4時間後に心臓を取り出し、結紮糸の下の心臓の部分を切り出し、5つの薄片に切断し、心臓の薄片をニトロブルーテトラゾリウム（NBT）で染色した。心室の面積全体に対する心筋梗塞の面積の割合（％）、ならびに心臓全体に対する心筋梗塞の面積の割合（％）を計算し、統計学的方法（t検定）で分析した。
【００９２】
b.単離し、かん流させた（Langendorff）心臓の実験：「Expremental  Methodology  of  Pharmacology」（Shuyun  Xu  etc.編，People  Health  Press，第3版、2002年1月）を参照のこと。
【００９３】
3.結果
a.ラットの心筋梗塞の面積に対する効果、表3を参照のこと
【表３】
2007505936.tif 000005
【００９４】
b.モルモットの単離した心臓についての冠状動脈の流量および心拍数に対する効果、表4を参照のこと。
【表４】
2007505936.tif 000006
【００９５】
表3および4の結果は、全ての試験した薬剤が、有意な抗心筋虚血効果を有していることを示している。全ての薬剤のうち、本発明の実施例1の組成物（丹参葉抽出物、参三七抽出物、黄耆抽出物、およびボルネオール）と、本発明の実施例2の薬学的組成物（丹参葉抽出物、参三七抽出物、黄耆抽出物、および降真香の油）は、最良の治療効果を示した。サルビアノール酸のみ、または参三七サポニンのみの投与は、XUESAITONG（陽性対照の薬剤）の投与と同様の効果を有した。サルビアノール酸＋参三七サポニン＋ボルネオールを組み合わせての投与の治療効果は、サルビアノール酸＋参三七サポニン、あるいはサルビアノール酸のみ、または参三七サポニンのみ、あるいはXUESAITONGのみの治療効果よりも優れていたが、本発明の実施例1の薬学的組成物、および本発明の実施例2の薬学的組成物の治療効果より悪かった。
【図面の簡単な説明】
【００９６】
【図１】丹参葉抽出物のHPLCフィンガープリントスペクトル（0〜60分）
【図２】参三七抽出物のHPLCフィンガープリントスペクトル（0〜30分）
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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