(57)【要約】  本発明は、壊死性腸炎（ＮＥＣ）の治療のための組成物及び方法を提供する。上皮増殖因子（ＥＧＦ）受容体アゴニスト及びＬ−アルギニン、その生物学的等価物又はＮＯ供与体による治療は、ＮＥＣに対して効果を示した。本発明はまた、ＮＥＣの治療のための、上皮増殖因子（ＥＧＦ）受容体アゴニスト及びＬ−アルギニン、その生物学的等価物、又はＮＯ供与体を含むキット、投与単位及び使用を提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＥＧＦ受容体アゴニスト及びＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物、又はＮＯ供与体を含有し、前記アゴニストとＬ−アルギニン、その生物学的等価物、又はＮＯ供与体との比率が１：４５，０００，０００から１：４，５００（モル：モル）、又は１：２０，０００，０００から１：１００，０００、又は１：１０，０００，０００から１：１，０００，０００、又は１：４，７００，０００から１：４７，０００の間にある組成物。
【請求項２】
固体形態の、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
凍結乾燥形態の、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
溶液形態の、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記溶液がヒトへの経口送達に適している、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記溶液がヒトへの腸内送達に適している、請求項４に記載の組成物。
【請求項７】
前記ＥＧＦ受容体アゴニストがＥＧＦである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記ＥＧＦ受容体アゴニストが、場合により化学合成又は遺伝子組換えによって製造される合成であるか、又は天然ソースに由来する、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
壊死性腸炎の治療のための、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
製薬上許容される液体による溶解後に動物への経口投与に適した、Ｌ−アルギニン、その生物学的等価物又はＮＯ供与体及びＥＧＦ受容体アゴニストを含有する投与単位。
【請求項１１】
前記の製薬上許容される液体が、水、食塩水、乳児用特殊調製乳、緩衝液、搾乳した母乳、他の適切な担体、及びそれらの組合せから成る群より選択される、請求項１０に記載の投与単位。
【請求項１２】
約２００ｍｇ／ｋｇ／日（０．９ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）から約５００ｍｇ／ｋｇ／日（２．４ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）まで、又はより好ましくは約２５０ｍｇ／ｋｇ／日（１．２ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）から約４００ｍｇ／ｋｇ／日（１．９ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）まで、又はより好ましくは約３００ｍｇ／ｋｇ／日（１．４ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）から約３５０ｍｇ／ｋｇ／日（１．６ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）までの量のＬ−アルギニンを含有する、請求項１０又は１１に記載の投与単位。
【請求項１３】
前記ＥＧＦ受容体アゴニストが、０．０３２ｎｍｏｌ／ｋｇ／日から約０．３２μｍｏｌ／ｋｇ／日まで、又はより好ましくは約０．１６ｎｍｏｌ／ｋｇ／日から約０．１６ｍｍｏｌ／ｋｇ／日まで、又はより好ましくは約０．３２ｎｍｏｌ／ｋｇ／日から約３２ｎｍｏｌ／ｋｇ／日までの量で服用される、請求項１０、１１又は１２に記載の投与単位。
【請求項１４】
前記ＥＧＦ受容体アゴニストがＥＧＦである、請求項１０、１１、１２又は１３のいずれかに記載の投与単位。
【請求項１５】
前記動物がヒト乳児である、請求項１０、１１、１２、１３又は１４のいずれかに記載の投与単位。
【請求項１６】
前記ヒト乳児が未熟児である、請求項１５に記載の投与単位。
【請求項１７】
場合により製薬上適切な溶液による溶解後に、ヒト乳児への静脈内投与に適している、Ｌ−アルギニン、その生物学的等価物、又はＮＯ供与体及びＥＧＦ受容体アゴニストを含有する投与単位。
【請求項１８】
前記の製薬上許容される溶液が、食塩水又は緩衝液である、請求項１７に記載の投与単位。
【請求項１９】
前記アゴニストとＬ−アルギニン、その生物学的等価物、又はＮＯ供与体との比率が、１：４５，０００，０００から１：４，５００（モル：モル）、又は１：２０，０００，０００から１：１００，０００、又は１：１０，０００，０００から１：１，０００，０００、又は１：４，７００，０００から１：４７，０００の間にある、請求項１７又は１８に記載の投与単位。
【請求項２０】
前記ＥＧＦ受容体アゴニストがＥＧＦである、請求項１７、１８又は１９のいずれかに記載の投与単位。
【請求項２１】
前記動物がヒト乳児である、請求項１７、１８、１９又は２０のいずれかに記載の投与単位。
【請求項２２】
前記ヒト乳児が未熟児である、請求項２１に記載の投与単位。
【請求項２３】
ＥＧＦ受容体アゴニスト及びＬ−アルギニン、その生物学的等価物又はＮＯ供与体を動物に投与することを含む、動物において壊死性腸炎を治療する方法。
【請求項２４】
壊死性腸炎の危険度が高い動物に、ＥＧＦ受容体アゴニスト及びＬ−アルギニン、その生物学的等価物又はＮＯ供与体を投与することを含む、動物における壊死性腸炎の予防の方法。
【請求項２５】
前記動物が乳児、特に心臓血管障害に罹患している乳児又は正常満期前出生の未熟児である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記動物が、約１７００ｇ又はそれ未満、又は約１４００ｇ未満、より好ましくは約１３００ｇ未満、より好ましくは約１２００ｇ未満、より好ましくは約１１００ｇ未満、より好ましくは約１０００ｇ未満、より好ましくは約９００ｇ未満、より好ましくは約８００ｇ未満、より好ましくは約７５０ｇ未満の体重を有するヒト乳児である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
ＥＧＦ受容体アゴニスト及びＬ−アルギニン、その生物学的等価物、又はＮＯ供与体を乳児に腸内投与することを含む、未熟児において壊死性腸炎を治療する、又は壊死性腸炎を予防する方法。
【請求項２８】
ＥＧＦ受容体アゴニスト及びＬ−アルギニン、その生物学的等価物又はＮＯ供与体を混合物として一緒に投与する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記混合物を少なくとも１日１回投与する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＥＧＦ受容体アゴニストがＥＧＦである、請求項２７〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記ＥＧＦが遺伝子組換えにより合成される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
治療量のＥＧＦ受容体アゴニスト及びＬ−アルギニン、その生物学的等価物、又はＮＯ供与体、及び医学的疾患の治療における使用のための指示書を含むキット。
【請求項３３】
前記医学的疾患が壊死性腸炎である、請求項３２に記載のキット。
【請求項３４】
前記アゴニスト及びＬ−アルギニン、その生物学的等価物、又はＮＯ供与体が、固体形態に配合されて供給される、請求項３２に記載のキット。
【請求項３５】
前記指示書が、前記固体形態を経口投与に適する溶液中に溶解する工程を含む、請求項３４に記載のキット。
【請求項３６】
前記指示書が、前記固体形態を静脈内投与に適する溶液中に溶解する工程を含む、請求項３４に記載のキット。
【請求項３７】
前記アゴニスト及びＬ−アルギニン、その生物学的等価物、又はＮＯ供与体が別々に供給される、請求項３４に記載のキット。
【請求項３８】
前記アゴニスト及びＬ−アルギニン、その生物学的等価物、又はＮＯ供与体の少なくとも１つが固体形態である、請求項３７に記載のキット。
【請求項３９】
前記アゴニスト及びＬ−アルギニン、その生物学的等価物、又はＮＯ供与体の少なくとも１つが溶液である、請求項３７に記載のキット。
【請求項４０】
前記指示書が、投与前に前記アゴニスト及びＬ−アルギニン、その生物学的等価物又はＮＯ供与体を混合する工程を含む、請求項３７〜３９のいずれか１項に記載のキット。
【請求項４１】
ＥＧＦ受容体アゴニストを動物の腸管に送達すること、及び動物の腸管内でＮＯのインビボ生成を増加させることを含む、動物においてＮＥＣを治療する方法。
【請求項４２】
ＮＯのインビボ生成を増大させることが、酸化窒素シンターゼの基質又は前記基質の生物学的等価物を動物に投与することを含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
ＮＯのインビボ生成を増大させることが、ＮＯ供与体を投与することを含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
ＥＧＦ受容体アゴニストを患者の腸管に送達すること、及びその患者の腸管内でＮＯのインビボ生成を増大させることを含む、ＮＥＣの危険度の高い個人、場合により乳児を治療する方法。
【請求項４５】
ＮＯのインビボ生成を増加させることが、酸化窒素シンターゼの基質又は前記基質の生物学的等価物を前記個人に投与することを含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
ＮＯのインビボ生成を増加させることが、ＮＯ供与体を投与することを含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
動物において壊死性腸炎を治療するための、ＥＧＦ受容体アゴニスト及びＬ−アルギニン、その生物学的等価物、又はＮＯ供与体の使用。
【請求項４８】
前記動物が乳児、特に心臓血管障害に罹患している乳児又は正常満期前出生の未熟児である、請求項４７に記載の使用。
【請求項４９】
前記動物が、約１７００ｇ又はそれ未満、又は約１４００ｇ未満、より好ましくは約１３００ｇ未満、より好ましくは約１２００ｇ未満、より好ましくは約１１００ｇ未満、より好ましくは約１０００ｇ未満、より好ましくは約９００ｇ未満、より好ましくは約８００ｇ未満、より好ましくは約７５０ｇ未満の体重を有するヒト乳児である、請求項４８に記載の使用。
【請求項５０】
未熟児において壊死性腸炎を治療するため又は壊死性腸炎の予防のための、ＥＧＦ受容体アゴニスト及びＬ−アルギニン、その生物学的等価物、又はＮＯ供与体の使用。
【請求項５１】
ＥＧＦ受容体アゴニスト及びＬ−アルギニン、その生物学的等価物、又はＮＯ供与体を混合物として一緒に投与する、請求項４７〜５０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５２】
前記混合物を少なくとも１日１回投与する、請求項５７に記載の使用。
【請求項５３】
前記ＥＧＦ受容体アゴニストがＥＧＦである、請求項４７〜５２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５４】
前記ＥＧＦが遺伝子組換えによって合成される、請求項５３に記載の使用。
【請求項５５】
動物においてＮＥＣを治療するための、ＥＧＦ受容体アゴニスト及び動物の腸管内でＮＯのインビボ生成を増加させることができる第二成分の使用。
【請求項５６】
前記第二成分が、酸化窒素シンターゼの基質又は前記基質の生物学的等価物である、請求項５５に記載の使用。
【請求項５７】
前記第二成分がＮＯ供与体である、請求項５５に記載の使用。
【請求項５８】
個人、場合によりＮＥＣの危険度が高い乳児を治療するための、ＥＧＦ受容体アゴニスト及び個人の腸管内でＮＯのインビボ生成を増加させることができる第二成分の使用。
【請求項５９】
前記第二成分が、酸化窒素シンターゼの基質又は前記基質の生物学的等価物である、請求項５８に記載の使用。
【請求項６０】
前記第二成分がＮＯ供与体である、請求項５８に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般に壊死性腸炎（ＮＥＣ）を治療する、又は予防するための組成物及び方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
壊死性腸炎は未熟児における重篤な疾病である。ＮＥＣの病因は、粘膜損傷と腸の壊死に帰着する素因の組合せを含む。腸虚血、経腸栄養、細菌定着及び腸の未熟さが全てＮＥＣの病因に関係付けられてきた（１７；２０）。ＮＥＣは、極めてまれに、子宮において認められ、ＮＥＣを有する乳児の９０％は早期産児であり（２０）、早産をヒトにおけるこの状態についての最も一般的な危険因子にしている。羊水は、腸成熟及び出生後の経腸栄養のための準備において役割を果たすホルモンとペプチドを含む。早産は、腸の正常な成熟をさせない可能性がある。さらに、母乳で育てられた乳児と比較して、特殊調製乳で育てられた乳児では、ＮＥＣの発生率の６〜１０倍の増加が報告されている（２０）。
【０００３】
最近の試験は、ＮＥＣを有する乳児における唾液及び循環上皮増殖因子（ＥＧＦ）の有意の低下を報告し、低レベルのＥＧＦとＮＥＣの発症との関係を示唆した（４４）。ＥＧＦは母乳中に存在し、試験は、特殊調製乳で育てられた乳児と比較して母乳で育てられた未熟児ではＮＥＣの発生率がより低いことを示した（４３）。しかし、臨床環境では、これらの患者は挿管される。１５００ｇ未満の未熟児における母乳の供給はより低い成長率と栄養不足に結びついてきたため（４３）、前記未熟児の栄養必要量の大部分は、正中線を通して投与される完全非経口栄養法によって満たされる。さらに、母乳の収集、保存及び未熟児への送達に関連する技術的因子はヒト母乳の使用を困難にし、さらにこの臨床状況下では殆ど見込みがない。
【０００４】
様々な病原体に対するＥＧＦの抗感染特性が以前に明らかにされた（６−１２；２９）。ＮＥＣの発症における必須条件として細菌定着が特定された（１７）。ＮＥＣは集中して存在することがあり（１７）、院内感染を想起させる疫学を示すが（３；３０）、ＮＥＣの病因に結びつく特定の病原体は存在しなかった。これらの所見は、ＮＥＣが直接感染ではなく、定着微生物に対する二次炎症応答の結果であると考えられることを示唆する。壊死性腸炎の発症における細菌定着の役割は、経口抗生物質が低体重出生児においてＮＥＣの発生率を低下させることを示す証拠によって裏付けられる（１３）。ＥＧＦは粘膜創傷修復を増強する。
【０００５】
この作用は、粘膜創傷修復を促進するＥＧＦの直接作用（２７；４１）及びペプチドの抗感染特性によるものと思われる。実験的胃潰瘍は様々な細菌によって速やかに集落形成され、治癒の遅延を生じさせる。抗生物質及びＥＧＦ治療の両方が、細菌定着の減少と平行して潰瘍治癒を促進した（２５；２６）。加えて、ＥＧＦは新生児において腸成熟を促進することが示された（３８；３９）。上皮増殖因子はまた、無水エタノール及びアスピリンなどの壊死因子によって誘導される胃粘膜損傷を予防することが示された。胃においてＥＧＦによって与えられるこの粘膜保護は、胃血流の増加を伴う（３３）。
【０００６】
腸虚血はＮＥＣの発症における危険因子として関係付けられてきた。酸化窒素（ＮＯ）は、アミノ酸Ｌ−アルギニンに対する酸化窒素シンターゼ酵素の作用に産生される生物学的メディエイタである。胃腸系では、ＮＯは粘膜血流の重要な調節因子である。損傷又は炎症に直面したとき、ＮＯは粘膜の完全性及び腸バリア機能の維持のために決定的に重要である。腸障害の多様な動物モデルにおけるＮＯ合成の阻害は、腸損傷の増大に結びつく（１６；３６）。これらのモデルにおけるＮＯの外因性ソースの適用は損傷を軽減する。ＮＥＣの新生子ブタモデルにおいて、Ｌ−アルギニンの注入は腸損傷を著明に低下させた（２２）。さらに、ＮＥＣを有すると診断された未熟児では血漿中のＬ−アルギニン濃度が低く、因果関係を示唆する（４７）。１５２名の乳児（出生時体重≦１２５０ｇ及び在胎齢≦３２週）の母集団に関して実施された最近の二重盲検プラセボ対象試験では、食事Ｌ−アルギニンの補給は、高危険度新生児におけるＮＥＣの発生率を２７％から７％に有意に低下させ（２）、明らかに治療効果を示した。
【０００７】
他の因子、例えば：母乳（２３；３７）；Ｌ−カルニチン（１）、血小板活性化因子受容体アンタゴニスト（１５）、腸内乳酸杆菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）及びビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）の補充（１４；３２）；インターロイキン１０（４０）、ＩｇＡ補充（２４）、腸内抗生物質予防（４５）、生後早期のデキサメタゾン治療（２８）、及び卵リン脂質を補充した新生児調整乳（１９）も、ＮＥＣに対して有益な作用を有することが認められた。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
多くの物質がＮＥＣの治療において潜在性を有することが知られているにもかかわらず、臨床環境では、ＮＥＣのための最も一般的な治療は依然として抗生物質による治療のままである。耐性表皮ブドウ球菌が疑われない限り、アンピシリン及びゲンタマイシンの全身抗生物質療法が典型的に行われ、耐性表皮ブドウ球菌が疑われる場合はアンピシリンの代わりにバンコマイシンが使用される。穿孔が疑われる又は穿孔が起こった場合は、嫌気的感染を治療するためにクリナマイシン、メトロニダゾール又は他の嫌気的療法がしばしば使用される（３５）。しかし、ＮＥＣを予防する又は治療するために十分な予防的又は治療的処置は存在しない。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の１つの態様は、ＥＧＦ受容体アゴニスト及びＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物、又はＮＯ供与体を含有し、前記アゴニストとＬ−アルギニン、その生物学的等価物、又はＮＯ供与体との比率が１：４５，０００，０００から１：４，５００まで（モル：モル）、又は１：２０，０００，０００から１：１００，０００、又は１：１０，０００，０００から１：１，０００，０００、又は１：４，７００，０００から１：４７，０００の間である組成物を提供することである。前記組成物は、固体、凍結乾燥又は溶液形態であり得る。前記組成物は、経口的又は経腸的に送達することができる。ＥＧＦ受容体アゴニストはＥＧＦであり得る。前記組成物は壊死性腸炎の治療のために使用することができる。
【００１０】
本発明の別の態様は、製薬上許容される液体による溶解後に動物への経口投与に適する、Ｌ−アルギニン、その生物学的等価物、又はＮＯ供与体及びＥＧＦ受容体アゴニストを含有する投与単位を提供することである。製薬上許容される液体は、水、食塩水、乳児用特殊調製乳、緩衝液、搾乳した母乳、他の適切な担体、及びそれらの組合せから成る群より選択される。前記投与単位は、約２００ｍｇ／ｋｇ／日（０．９ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）から約５００ｍｇ／ｋｇ／日（２．４ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）、又はより好ましくは約２５０ｍｇ／ｋｇ／日（１．２ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）から約４００ｍｇ／ｋｇ／日（１．９ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）、又はより好ましくは約３００ｍｇ／ｋｇ／日（１．４ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）から約３５０ｍｇ／ｋｇ／日（１．６ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）の量のＬ−アルギニンを含有し得る。前記ＥＧＦ受容体アゴニストは、０．０３２ｎｍｏｌ／ｋｇ／日から約０．３２μｍｏｌ／ｋｇ／日、又はより好ましくは約０．１６ｎｍｏｌ／ｋｇ／日から約０．１６ｍｍｏｌ／ｋｇ／日、又はより好ましくは約０．３２ｎｍｏｌ／ｋｇ／日から約３２ｎｍｏｌ／ｋｇ／日の量で供給され得る。
【００１１】
本発明のもう１つの態様は、場合により製薬上適切な溶液による溶解後に、ヒト乳児への静脈内投与に適する、Ｌ−アルギニン、その生物学的等価物、又はＮＯ供与体及びＥＧＦ受容体アゴニストを含有する投与単位を提供することである。前記アゴニストとＬ−アルギニン、その生物学的等価物、又はＮＯ供与体との比率は、１：４５，０００，０００から１：４，５００（モル：モル）、又は１：２０，０００，０００から１：１００，０００、又は１：１０，０００，０００から１：１，０００，０００、又は１：４，７００，０００から１：４７，０００とすることができる。
【００１２】
本発明のもう１つの態様は、ＥＧＦ受容体アゴニスト及びＬ−アルギニン、その生物学的等価物、又はＮＯ供与体を動物に投与することを含む、動物における壊死性腸炎を治療する方法及び動物における壊死性腸炎を予防する方法を提供することにある。前記方法は、乳児、特に心臓血管障害に罹患している乳児又は正常満期前出生の未熟児を治療するために使用することができる。例えば、ヒト乳児は、約１７００ｇ又はそれ未満、又は約１４００ｇ未満、より好ましくは約１３００ｇ未満、より好ましくは約１２００ｇ未満、より好ましくは約１１００ｇ未満、より好ましくは約１０００ｇ未満、より好ましくは約９００ｇ未満、より好ましくは約８００ｇ未満、より好ましくは約７５０ｇ未満の体重を有する。
【００１３】
本発明のもう１つの態様は、ＥＧＦ受容体アゴニスト及びＬ−アルギニン、その生物学的等価物、又はＮＯ供与体を乳児に腸内投与することを含む、未熟児における壊死性腸炎を治療する、又は壊死性腸炎を予防する方法を提供することである。ＥＧＦ受容体アゴニスト及びＬ−アルギニン、その生物学的等価物、又はＮＯ供与体は、混合物として一緒に投与することができる。前記混合物は少なくとも１日１回投与される。
【００１４】
本発明のもう１つの態様は、治療量のＥＧＦ受容体アゴニスト及びＬ−アルギニン、その生物学的等価物、又はＮＯ供与体、及び医学的疾患、例えば壊死性腸炎の治療における使用のための指示書を含むキットを提供することである。前記アゴニスト及びＬ−アルギニン、その生物学的等価物、又はＮＯ供与体は、固体形態中に配合して供給され得る。前記指示書は、前記固体形態を経口投与又は静脈内投与に適する溶液中に溶解する工程を含んでよい。前記アゴニスト及びＬ−アルギニン、その生物学的等価物、又はＮＯ供与体は別々に供給されてもよい。指示書は、投与前に前記アゴニスト及びＬ−アルギニン、その生物学的等価物、又はＮＯ供与体を混合する工程を含むことができる。
【００１５】
本発明のもう１つの態様は、ＥＧＦ受容体アゴニストを動物の腸管に送達すること及び動物の腸管内でＮＯのインビボ生成を増大させることを含む、動物においてＮＥＣを治療する方法を提供することである。これは、酸化窒素シンターゼの基質、前記基質の生物学的等価物、又はＮＯ供与体を動物に投与することによって実施できる。
【００１６】
本発明のもう１つの態様は、ＥＧＦ受容体アゴニストを患者の腸管に送達すること及びその患者の腸管内でＮＯのインビボ生成を増大させることを含む、ＮＥＣの危険度の高い個人、場合により乳児を治療する方法を提供することである。これは、酸化窒素シンターゼの基質、前記基質の生物学的等価物、又はＮＯ供与体を前記動物に投与することによって実施できる。
【００１７】
本発明のもう１つの態様は、動物における壊死性腸炎を治療するための、ＥＧＦ受容体アゴニスト及びＬ−アルギニン、その生物学的等価物、又はＮＯ供与体の使用を提供することである。前記動物は、乳児、特に心臓血管障害に罹患している乳児又は正常満期前出生の未熟児であってもよい。例えば、前記乳児は、約１７００ｇ又はそれ未満、又は約１４００ｇ未満、より好ましくは約１３００ｇ未満、より好ましくは約１２００ｇ未満、より好ましくは約１１００ｇ未満、より好ましくは約１０００ｇ未満、より好ましくは約９００ｇ未満、より好ましくは約８００ｇ未満、より好ましくは約７５０ｇ未満の体重を有する。前記使用は、未熟児における壊死性腸炎の予防のためとすることができる。ＥＧＦ受容体アゴニスト及びＬ−アルギニン、その生物学的等価物、又はＮＯ供与体は、混合物として一緒に投与し得る。例えば前記混合物は、少なくとも１日１回投与することができる。
【００１８】
本発明のもう１つの態様は、動物においてＮＥＣを治療するための、ＥＧＦ受容体アゴニスト及び動物の腸管内でＮＯのインビボ生成を増大させることができる第二成分の使用を提供することである。例えば、前記第二成分は、酸化窒素シンターゼの基質又は前記基質の生物学的等価物、又はＮＯ供与体であり得る。
【００１９】
本発明のもう１つの態様は、個人、場合によりＮＥＣの危険度の高い乳児を治療するための、ＥＧＦ受容体アゴニスト及び個人の腸管内でＮＯのインビボ生成を増大させることができる第二成分の使用を提供することである。例えば、前記第二成分は、酸化窒素シンターゼの基質又は前記基質の生物学的等価物、又はＮＯ供与体であり得る。
【００２０】
以下の詳細な説明及び付属の図面を参照することにより、本発明のこれらや他の態様が明らかになる。加えて、ある種の手順、装置又は組成物をより詳細に説明する様々な参考文献を、１３〜１８頁の「参考文献のリスト」において後記する。１３〜１８ページの参考文献は全て、各々の書類がここで完全に再現されるかのごとく、引用してここに組み込まれる。本出願人は、その裁量により、本出願の係属中、１３〜１８頁のいずれか又は全ての参考文献を直接組み込む権利を留保する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
本発明を説明する前に、以下で使用するある種の用語の定義を示すことは、その理解に役立つと考えられる。
【００２２】
ここで使用する「壊死性腸炎」（ＮＥＣ）は、無呼吸、徐脈及び体温不安定性から汎発性血管内凝固及び敗血症性ショックに及ぶ全身症状、腹部拡張及び血便などの腸症状、及び腸壁気腫及び門脈内のガスなどの放射線所見によって特徴付けられる胃腸疾患を意味する。
【００２３】
ここで使用する「ＥＧＦ受容体アゴニスト」は、ｅｒｂＢ（１−４）受容体のいずれか、特にｅｒｂＢ１受容体に結合したとき、以下の作用のいずれか又は全部が起こるように、生化学的作用を生じさせる分子を意味する：腸グルコース輸送が上昇する、腸細胞（小腸の管腔をライニングする細胞）の先端表面を変化させる、粘膜表面を横切る病原生物の定着とトランスロケーションを阻止し、そして腸成熟が誘発される。前記分子は、好ましくは上皮増殖因子である。前記分子は、さもなければ、抗体、小分子、タンパク質、ペプチド、ペプチド類似体又はペプチドミメティックであり得る。
【００２４】
ここで使用する「上皮増殖因子」又はＥＧＦは、健常人の十二指腸及び唾液腺で合成され、ヒト母乳中で発現されることが知られている５３アミノ酸のタンパク質である。ヒトＥＧＦのアミノ酸配列は：
【００２５】
2007513983.tif 000003
【００２６】
ここで述べる実験で使用したタンパク質は前記配列を有していた。ヒトにおいてＥＧＦとして働く非ヒトＥＧＦ配列も考慮される。米国特許出願第２００３００５９８０２号で引用されているマウス、ラット及びブタ（４９〜５２）、又はウシＥＧＦについて述べられているような、ＥＧＦの種変異体、又は異なるＥＧＦ受容体リガンドのいわゆる超アゴニスト（ｓｕｐｒａ−ａｇｏｎｉｓｔｉｃ）キメラ（５３）も、それ故、包含される。この定義はまた、精製天然上皮増殖因子と実質的に同じ配列及び活性を有するポリペプチドをも意味する。これは、遺伝子組換えによって、及び化学的に合成されたペプチド又はタンパク質を包含する。この用語はまた、ＥＧＦの生物活性が実質的に保持されている限り、他のアミノ酸による置換又は１又はそれ以上のアミノ酸の欠失によって天然配列から変化したタンパク質をも意味する。この定義はまた、ＥＧＦの生物活性が実質的に保持されている限り、ＥＧＦのフラグメント、ペプチド類似体及びペプチドミメティックも包含する。ＥＧＦの生物活性は、受容体結合アッセイによってスクリーニングし、受容体アゴニストに関する上記で示した方法のいずれかを用いて確認することができる。従って、例えば２１位のメチオニン（Ｍｅｔ）がイソロイシン（Ｉｌｅ）で置換されているヒトＥＧＦタンパク質は、「ＥＧＦ」の範囲内に含まれる。そのようなタンパク質は、一般にｈＥＧＦ−Ｉ２１と表わされ、組換えによって作製された場合は一般にｒｈＥＧＦ−Ｉ２１と表わされる（化学合成されたｈＥＧＦは「ｈＥＧＦ」の語に含まれる）。同様に、１１位のＡｓｐがＧｌｕで置換されたｈＥＧＦは、一般にｈＥＧＦ−Ｅ１１と表わされる。カルボキシ末端の近くで端を切り取られた一部のＥＧＦタンパク質はそれらの生物活性を保持し、一般に保持される最後のペプチド残基を示す下付き数字で表わされる。それ故、その正常な５３ペプチドの最後の２個を欠くＥＧＦは、一般にＥＧＦ５１と示される。アミノ酸欠失を有する、例えばＴｒｐ４９が存在しないタンパク質は、残りのアミノ酸の番号は変えずに、一般に「ｄｅｌ」（又は．ＤＥＬＴＡ．）の語とその位置を示す下付き数字で表わされる。それ故、Ｔｒｐ４９が欠失した場合、生じるタンパク質はＥＧＦ−．ＤＥＬＴＡ．４９と示される。鎖の長さを延長させる挿入は、一般に１個のアミノ酸を２個又はそれ以上のアミノ酸で置き換える置換として示され、例えばｒｈＥＧＦ−Ｌ／Ｇ１５は、天然Ｌｅｕ１５の後のＧｌｙの挿入を示す。最後に、他の修飾を伴って又は伴わずに、Ｈｉｓ１６がもう１つ別のアミノ酸によって置換された本発明のＥＧＦは、一般にＥＧＦ−Ｘ１６によって表わされる。例えば２００１年２月２０日発行の米国特許第６，１９１，１０６号（Ｍｕｌｌｅｎｂａｃｈら）に述べられているように、ＥＧＦの突然変異タンパク質も、それらが必要なＥＧＦ活性を有することを条件として、この定義に包含される。
【００２７】
ここで使用する「Ｌ−アルギニン」は、半必須アミノ酸（２−アミノ−５−グアニジノ吉草酸）及びその塩、例えば哺乳動物への投与に適する酸付加塩を意味する。Ｌ−アルギニンの生物学的等価物は、Ｌ−アルギニンのように、インビボでＮＯを生成する酸化窒素シンターゼの基質である、又はアルギニン−シトルリン回路経由のＬ−シトルリン又は尿素回路の酵素などの、酸化窒素シンターゼの基質に変換され得る化合物である。内因性Ｌ−アルギニン産生における律速酵素はアルギニノコハク酸シンターゼである。内因性Ｌ−アルギニン産生の主要部位は、Ｌ−シトルリンをＬ−アルギニンに変換する腎臓である（５９）。グルタミンは小腸においてＬ−シトルリンに変換され（６３）、オルニチンα―ケトグルタレートはグルタミンの前駆物質である（６１）。インビボで投与したときＮＯ分子を与えることができる化合物、「ＮＯ供与体」、典型的には低分子量有機分子も投与し得る。そのような化合物は、Ｓ−ニトロソ−Ｎ−アセチル−ペニシラミン（ＳＮＡＰ）、３−モルホリノシドノニミン（ＳＩＮ−１）、ニトプルシドナトリウム（ＳＮＰ）４−フェニル−３−フロキサンカルボニトリル（ＰＦＣ）、グリセロール三硝酸エステル（ＧＴＮ）、及びイソソルビドジニトレート（ＩＳＤＮ）（６０、６１、６２）を含むが、これらに限定されない。ＮＯ産生は、Ｇｒｉｅｓｓアッセイによって（５４）、又は化学発光検出によって（５５、５６）インビトロで、又はマノメトリーと酸化窒素電子センサーの使用によってインビボで（５７、５８）測定することができる。ＮＯのインビトロ検出のための市販のアッセイは、Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ，Ｍｉｃｈｉｇａｎ）から入手できる。
【００２８】
本発明は壊死性腸炎のための治療を含む。治療の被験者は、以下の症状：腹部拡張及び圧痛、腸壁気腫、門脈内の気体、便中の潜血又は明白な血便、腸壊死、腸穿孔、無呼吸、徐脈及び体温不安定性、汎発性血管内凝固、敗血症及びショック、のいずれか１つ又はそれ以上によって示される状態に既に罹患していてもよい（３５）。被験者は、前記状態に関する危険度が高くてもよい。そのような被験者は、チアノーゼ性心臓病、腸炎赤血球増加症（ｅｎｔｅｒｉｔｉｓ  ｐｏｌｙｃｙｔｈｅｍｉａ）又は仮死出生などの他の理由のために新生児集中治療室に収容されることがある満期産新生児、未熟児、すなわち妊娠３７週以前に生まれた乳児、又は非常に低い出生時体重の乳児、すなわち７５０ｇ又はそれ未満に及ぶ、約１５００ｇ未満の乳児（１５００ｇ未満の乳児では発生率は約１０％に上る（１７））、さらには託児所におけるそれまでは健常な満期産新生児（４；４６）を含む。
【００２９】
ＮＥＣの治療又は予防
ＮＥＣの治療又は予防は、ＥＧＦ受容体アゴニスト、及びＬ−アルギニン又はその生物学的等価物を含む。本発明の治療は一般に腸内投与される。この経路が禁忌である場合は、静脈内投与で治療することができる。
【００３０】
好ましい実施形態では、本発明は、ＮＥＣを治療するための経口製品、おそらく薬剤である。前記製品は食料品であり得るか、又は有効成分が、食料品、例えば乳、水、食塩水、緩衝液、乳児用特殊調製乳、及び搾乳された母乳、他の適切な担体、又はそれらの組合せへの添加に適する形態で供給され得る。有効成分は、その後、投与の直前に食料品に混合することができる。
【００３１】
好ましい実施形態では、本発明は、乳児における壊死性腸炎の予防及び／又は治療のための治療薬として、ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニンの両方を含む製品である。有効な治療として、そのような薬剤のこうした組合せの実現可能性を確立している、実施した実験を以下に述べる。
【００３２】
実験材料及び方法
疾患の動物モデル
これらの試験では、壊死性腸炎について広く有効性が確認された新生児ラットモデルを使用した（１４）。簡単に述べると、新生児Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）を、出生直後、母乳を哺乳する前に母親から収集した。動物を計量し、体温を管理するために乳児保育器に入れた。その後、ラットに、治療用補助食品を添加し又は添加することなく調製した乳児用特殊調整乳（Ｅｓｂｉｌａｃ  ｆｏｒｍｕｌａ，Ｐｅｔ−Ａｇ，Ｎｅｗ  Ｈａｍｐｓｈｉｒｅ，ＩＬ．）〜成るラット代用乳（ＲＭＳ）０．１ｍＬを経口胃経路によって３時間ごとに手で給餌した。ＥＧＦ（Ａｕｓｔｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｓａｎ  Ｒａｍｏｎ，ＣＡ）は、遺伝子操作した酵母によって生産し、連続クロマトグラフィー及び逆相高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって精製して、Ｎ−末端アミノ酸配列決定、アミノ酸組成、ＨＰＬＣ分析及びＳＤＳゲル電気泳動によって＞９７％純粋であると判定された。アルギニン（塩酸Ｌ−アルギニン、結晶性、ＩＣＮ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ，Ａｕｒｏｒａ，ＯＨ）は、特許された合成法によって生産した。Ｌ−アルギニンの１．５ｍｍｏｌ／ｋｇ／日の用量を達成するために１日食餌摂取量に基づいて、ＥＧＦ（１００ｎｇ／ｍＬ）及びＬ−アルギニン（１．３５−２．７ｍｇ／ｍＬ）を投与した（標準化単位でこれらの用量は、約１：４７２，５００モル／モルの比率について、〜２０μｇ  ＥＧＦ／ｋｇ／日及び〜３１６ｍｇ  Ｌ−アルギニン／ｋｇ／日と算定される）。ＥＧＦ及びＬ−アルギニンを静かに渦動し、Ｅｓｂｉｌａｃ乳児用調製乳中に十分に混合した。４８時間の給餌後、耐容されるときは容量を緩やかに０．３ｍＬに高めた。臨床疾患を誘導するため、ラットに、出生後１時間目から開始して、１００％窒素ガスを６０秒間呼吸させることによる仮死、次いで４℃で１０分間の低温ストレスにより、１日２回ストレスを与えた。
【００３３】
実験計画
６つの別々の実験群を試験した。ＥＧＦ不含ラット代用乳（ＲＭＳ）で人為的に給餌した非ストレスラット（対照、ｎ＝１０）；母親が給餌したストレスラット（対照、ｎ＝７）；ＥＧＦ不含ＲＭＳで人為的に給餌したストレスラット（ＮＥＣ、ｎ＝１０）；１００ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＥＧＦを添加したＲＭＳで人為的に給餌したストレスラット（ＥＧＦ−ＮＥＣ、ｎ＝６）；１．５ｍｍｏｌ  Ｌ−アルギニン／ｋｇ／日を添加したＲＭＳで人為的に給餌したストレスラット（ＡＲＧ−ＮＥＣ、ｎ＝６）；及び１００ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＥＧＦ＋１．５ｍｍｏｌ  Ｌ−アルギニン／ｋｇ／日を添加したＲＭＳで人為的に給餌したストレスラット（ＥＧＦ／ＡＲＧ−ＮＥＣ、ｎ＝８）。９６時間の実験経過中に腹部拡張、呼吸急迫又は嗜眠を発現した動物は実験を終了させた。９６時間後、全ての生存動物を断頭によって死亡させ、さらなる分析のために小腸を切除した。
【００３４】
測定
体重と尾の長さを毎日記録し、１日２回、肛門性器領域の穏やかな刺激によって排尿と排便を誘導し、以後の分析のために糞便を収集した。小腸を、腸の出血と変色、及び回腸の拡張と狭窄などのＮＥＣの臨床徴候に関して視覚的に評価した。次に小腸を半分ずつ２つに分け、遠位セグメント（回腸）から２〜３ｃｍの組織を固定し、パラフィンに包埋して、ＮＥＣの組織学的評価のためにヘマトキシリンとエオシンで対比染色した（１４）。組織学的検査を盲検方式で評価し、以下のように等級付けた：損傷を示さない正常（０）；わずかな粘膜下層及び／又は粘膜固有層の分離（＋２）を示す軽度（＋１）；粘膜下層及び／又は粘膜固有層の中等度の分離、及び／又は粘膜下層及び筋層における浮腫を示す中等度（＋２）；粘膜下層及び／又は粘膜固有層の重度の分離、及び／又は粘膜下層及び筋層における重度の浮腫、及び局所絨毛脱落を示す重度（＋３）；絨毛の喪失及び壊死を示す壊死（＋４）（１４）。残りの回腸の長さを測定し、組織を２．５ｍＭエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）中で均質化して、液体窒素で瞬間凍結し、ラクターゼ活性（２１）及び回腸タンパク質（５）及びＤＮＡ（３１）含量の後日の分析のために７０℃で保存した。
【００３５】
統計分析
データは平均±ＳＥで示している。データ分析は、分散分析（ＡＮＯＶＡ）、次いでＴｕｋｅｙのポストホック多重比較検定によって実施した。有意性レベルは０．０５に設定した。
【００３６】
結果
臨床評価
対照、未処置、Ａｒｇ、ＥＧＦ及びＡｒｇ＋ＥＧＦ動物から得た小腸の代表的顕微鏡写真を図１に示す。剖検での胃腸管の顕微鏡検査は、ストレスを与えた未処置群においてヒト新生児ＮＥＣで見られるのと同様の腸損傷の明らかな証拠を示した。炎症と出血の証拠が認められ、回腸は著明な拡張と狭窄を伴って変色していた。処置を受け、疾患のより穏やかな進行を示した動物では、小腸の病理学的変化は一様でなく、拡張、狭窄及び出血の領域が散在した。各動物の全体的臨床像を評価した（図２）。未処置動物は、対照で見られたものに比べて有意の組織病変を示した。損傷の重症度は、未処置群又はＡｒｇ処置群の間で差がなかった。これに対し、ＥＧＦ及びＥＧＦ＋Ａｒｇ処置群の両方が有意に少ない病変を示し、これらの群における損傷スコアは、まだ対照動物よりは有意に高かったが、未処置（ＮＥＣ）群で認められたものよりも有意に低かった。臨床評価において検討した別々のパラメータを図３に要約する。管腔血液の視覚的評価である変色は、対照と比較して未処置、Ａｒｇ及びＥＧＦ処置群では有意に高かった。変色は、対照動物とＥＧＦ＋Ａｒｇ処置群の間で差がなかった。Ａｒｇ及びＥＧＦ＋Ａｒｇ処置群両方が、未処置群で認められたよりも有意に低い変色を示した。回腸拡張は、対照と比較して全ての群において高かったが、いずれの数値も統計的有意性には達しなかった。管腔気体は、対照と比較して全ての群において上昇していた。管腔気体は処置群のいずれかと未処置（ＮＥＣ）群の間で差がなかった。未処置、Ａｒｇ、ＥＧＦ及びＥＧＦ＋Ａｒｇ処置群は全て、対照と比較したとき有意の狭窄を示した。ＥＧＦ＋Ａｒｇ処置群における狭窄は、未処置（ＮＥＣ）群で見られたものよりも有意に低かった。
【００３７】
組織学的検査
対照、未処置、Ａｒｇ、ＥＧＦ及びＥＧＦ＋Ａｒｇ処置動物からの回腸組織切片の代表的顕微鏡写真を図４に示す。広汎な浮腫、上皮剥離及び粘膜下層分離は、全て未処置群から得た組織の著明な特徴であった。有意の損傷はＡｒｇ及びＥＧＦ処置群でも認められたが、ＥＧＦ＋Ａｒｇ併用処置を受けた動物から得た組織は対照と大きく異ならないと思われた。回腸組織の組織学的分析を実施し、表５に示している。未処置（ＮＥＣ）群では、顕微鏡検査により回腸の形態と構造に有意の病理学的変化が特定された。組織学的損傷スコアは、ＮＥＣ動物とＥＧＦ又はＬ−アルギニンのいずれか単独で処置した動物との間で差がなかった。ＥＧＦ／Ｌ−アルギニン併用処置は疾患を伴う組織学的損傷を低下させ、組織学的スコアは対照と差がなかった。ＥＧＦ＋Ａｒｇ群における組織学的損傷は、Ａｒｇ又はＥＧＦ処置群で測定されたものよりも有意に低かった。
【００３８】
ラクターゼ活性
付加的な測定は、消化酵素ラクターゼの活性を検定することによって小腸の機能的完全性を評価した（図６）。総ラクターゼ活性は、対照と比較してＮＥＣラットにおいて有意に低かった。ＥＧＦ又はＬ−アルギニンの単独処置はラクターゼ活性の低下を変化させなかった。ＥＧＦ／Ｌ−アルギニン併用療法で処置したストレス動物において、総ラクターゼ活性は未処置群及びＡｒｇ又はＥＧＦ処置動物よりも高かったが、この効果の統計的有意差はなかった。
【００３９】
結論
前記結果は、従って、ＥＧＦ−Ｌ−アルギニン併用処置が、これまでに知られているそれらの個々の投与効果から期待されるものを上回る臨床的恩恵と有効性を提供できることを確認するものである。ＥＧＦは単独で、腸への物理的損傷に対してある程度の保護を与えることを示し、またＬ−アルギニンは単独で疾患動物の管腔における血液の出現を低下させたが、ＥＧＦ−Ｌ−アルギニン併用処置だけが両方の測定値を改善した。ＥＧＦ−Ｌ−アルギニンの併用処置は、壊死性腸炎の確立されたモデルにおいて全体的障害と損傷のレベルを低下させた。
【００４０】
ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニンの相対量は、モルベースで好都合に決定される。Ｌ−アルギニンの生物学的等価物は、モルベースで、酸化窒素シンターゼの基質としてＬ−アルギニンよりも多量のＮＯを生産できる場合、その生物学的等価物が生産できるＮＯの量のモル当量ベースで決定される。同様に、ＮＯ供与体によって放出されるＮＯの量はモル当量ベースで決定される。
【００４１】
乳児への投与のための、本発明の治療は、適切な経路による投与を必要とする。本発明の薬剤は、好ましくは腸の上皮細胞の自由な管腔側の面に対して生物学的に利用可能なように投与すべきであるので、経口投与が最も好ましい。２剤の投与単位は、それ自体、容易な開封と食料品への送達及び食料品との混合のために適切な容器中で提供される。本発明の成分の適切な量は、それ故、乳又は乳児によって消費される他の食品に直接添加するために粉末又は顆粒形態で提供され得る。あるいは、成分は、乳児によって直ちに消費される又は適切な溶液による希釈後に消費されるのに適した溶液形態で提供され得る。前記溶液は、経鼻胃又は経口胃経路によって乳児に投与してもよい。
【００４２】
適切な食料品の例は、水、食塩水、乳児用特殊調製乳、緩衝液、搾乳した母乳、他の適切な担体、又はそれらの組合せを含む。経口投与に適するいかなる溶液も使用し得る。ＥＧＦを膵プロテアーゼによる酵素分解から保護する、バイスタンダータンパク質（すなわち非活性タンパク質「充填剤」）として働く添加物を添加してもよい（４２）。例えばカゼイン（ミルクタンパク質）がこのために実験的に使用されている（４２）。他のアプローチは、ＥＧＦ構造と活性を保持するためにプロテアーゼ阻害因子と共に投与することが挙げられる。
【００４３】
あるいは、本発明の処置は、経口的、経腸的、非経口的、経静脈的、経皮的、経鼻的に又は注腸的に投与することができる。例えば最初にＮＥＣを治療するとき、この期間には一部の患者は経口投与治療を受けることができないので、初期治療期間中は静脈内経路を選択することも可能である。そのような時期には、患者は典型的にイレウスを有する。イレウスは、典型的には正常な腸音の欠如及び食物不耐性と嘔吐によって理学的検査で診断される。典型的な時間経過は１〜２週間である。典型的には、経口栄養はイレウスの診断後１０日目から開始され、必要と考えられる場合は、正常な腸音の回復と食物耐性の回復を確認することができる。ひとたびイレウスが消散すれば、治療を経口的に投与する第二期間を通じて治療を継続し得る。組成物は、スプレー、溶液、懸濁液、コロイド、濃縮液、粉末、顆粒、錠剤、圧縮錠剤、カプセル剤（被覆及び非被覆錠剤又はカプセル剤を含む）、坐薬等として製剤化できる。徐放性又は放出制御製剤も含まれる。
【００４４】
前記製剤は、必要に応じて粘度調整剤、浸透圧調整剤、緩衝剤、ｐＨ調整剤、着香料、安定剤、着色料、防腐剤等のような添加物を含むことができる。
【００４５】
投与単位は、単回投与、すなわち乳児の単回給食における投与に適する用量である。投与単位は、それ故、約２００ｍｇ／ｋｇ／日（０．９ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）から約５００ｍｇ／ｋｇ／日（２．４ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）までのＬ−アルギニン、又はより好ましくは約２５０ｍｇ／ｋｇ／日（１．２ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）から約４００ｍｇ／ｋｇ／日（１．９ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）まで、又はより好ましくは約３００ｍｇ／ｋｇ／日（１．４ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）から約３５０ｍｇ／ｋｇ／日（１．６ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）までのＬ−アルギニン、及び約０．２μｇ／ｋｇ／日（０．０３２ｎｍｏｌ／ｋｇ／日）から約２ｍｇ／ｋｇ／日（０．３２μｍｏｌ／ｋｇ／日）まで、又はより好ましくは約１μｇ／ｋｇ／日（０．１６ｎｍｏｌ／ｋｇ／日）から約１ｍｇ／ｋｇ／日（０．１６ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）まで、又はより好ましくは約２μｇ／ｋｇ／日（０．３２ｎｍｏｌ／ｋｇ／日）から約０．２ｍｇ／ｋｇ／日（３２ｎｍｏｌ／ｋｇ／日）までのＥＧＦ受容体アゴニストを含む。本明細書において、「μｇ」はマイクログラムを意味し、「μｍｏｌ」はマイクロモルを意味する、等々。典型的には、Ｌ−アルギニン−ＥＧＦ受容体アゴニストの比率は、１：４５４０００００  ｍｏｌ  ＥＧＦ受容体アゴニスト／ｍｏｌ  Ｌ−アルギニン及び約１：４５００  ｍｏｌ  ＥＧＦ受容体アゴニスト／ｍｏｌ  Ｌ−アルギニン、より可能性が高いのは１：４５４００００  ｍｏｌ  ＥＧＦ受容体アゴニスト／ｍｏｌ  Ｌ−アルギニン及び１：４５０００  ｍｏｌ  ＥＧＦ受容体アゴニスト／ｍｏｌ  Ｌ−アルギニンである。治療には、おそらく少なくとも１日１回、１日３又は４回、さらには持続的に投与することが考えられる。間欠投与は、何らかの都合のよい経路、例えばボーラス注入、本明細書の別の箇所で述べた経口製剤等、皮下的に、又は持続的静脈内滴注によって投与することができる。より持続的な投与は、より典型的には静脈内滴注又は制御放出インプラントである。
【００４６】
一般的にいえば、ＥＧＦは合成的に製造され、従来のバイオテクノロジー手法又は化学的手法によって製造される。言うまでもなく、ＥＧＦは天然ソースから入手し得る。
【００４７】
好ましくは、本発明の因子の組合せは、単一混合物として提供され、一緒に投与されるが、別々に仕切られたキットとして提供され、投与のために混合されるか又は別々に投与することができる。好ましくは、両方が腸の上皮細胞の管腔面に対して生物学的利用が可能である。
【００４８】
水又は乳児用特殊調製乳による送達の場合のように、液体との混合用に製剤されるとき、前記投与単位は、溶解促進剤をその中に組み込むことができる。
【００４９】
被覆組成物の使用、すなわち腸に達するまで溶解しない組成物の使用によって、投与量の有効性が上昇するのはあり得ることである。Ｇｅｎｎａｒｏ編集の“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，第１９版、１９９５）が参照できる。活性物質の製薬上許容される塩（例えばＬ−アルギニンの酸付加塩）は、合成有機化学の当業者に公知の標準手法を用いて調製し得る（３４）。同様に、希釈剤、賦形剤等のような、ペプチドベースの薬剤に関して慣例的に使用されるもののような適切な製薬上許容される担体を含有することも望ましいと考えられる。
【００５０】
本発明の製品は、言うまでもなく、密封無菌包装で提供される。典型的には、ＥＧＦ又は等価ポリペプチドは凍結乾燥物質として提供される。
【００５１】
ＥＧＦとＬ−アルギニンの同時投与は、ＮＥＣの治療及び予防において相乗作用的効果を生じる。Ｄｖｏｒａｋら（４８）による試験において、ＥＧＦを１００ｎｇ／ｍＬの生理的濃度で投与したとき、有意の臨床的効果は報告されなかった。これらの試験では、保護作用を明らかにするために、５００ｎｇ／ｍＬの濃度のＥＧＦが使用された。本発明に関する試験の結果は、２．７ｍｇ／ｍＬのＬ−アルギニンと併用投与した１００ｎｇ／ｍＬのＥＧＦが、ＮＥＣの予防及び治療において有意の臨床的効果を与えることを示した。さらに、ＥＧＦとＬ−アルギニンの組合せは、１００ｎｇ／ｍＬ  ＥＧＦ又は２．７ｍｇ／ｍＬ  Ｌ−アルギニンを個別に投与したときに認められるものを上回る有意の恩恵を与えた。
【００５２】
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４．  Ｎｇ，Ｓ。  Ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｆｕｌｌ  ｔｅｒｍ  ｉｎｆａｎｔ（満期産乳児における壊死性腸炎）。Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｃｈｉｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  ３７：１−４，２００１。
５．  Ｂｒａｄｆｏｒｄ，Ｍ．Ｍ。  Ａ  ｒａｐｉｄ  ａｎｄ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｉｃｒｏｇｒａｍ  ｑｕａｎｔｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ  ｔｈｅ  ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｄｙｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ（タンパク質−染料結合の原理を利用したマイクログラム量のタンパク質の定量のための迅速で感受性の高い方法）。Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．７２：２４８−２５４，１９７６。
６．  Ｂｕｒｅｔ，Ａ．，Ｇａｌｌ，Ｄ．Ｇ．，Ｏｌｓｏｎ，Ｍ．Ｅ．，及びＨａｒｄｉｎ，Ｊ．Ａ。  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  （ＥＧＦ）  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  Ｃｏｌｉ  ｅｎｔｅｒｉｔｉｓ  ｉｎ  ｒａｂｂｉｔｓ  ａｎｄ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ（上皮増殖因子（ＥＧＦ）はウサギにおける大腸菌腸炎及びインビトロでの細菌のトランスロケーションを予防する）。第７回国際感染症会議、１９９６。
７．  Ｂｕｒｅｔ，Ａ．，Ｇａｌｌ，Ｄ．Ｇ．，Ｏｌｓｏｎ，Ｍ．Ｅ．，及びＨａｒｄｉｎ，Ｊ．Ａ。  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｎｔｅｒｉｃ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ  ｂｙ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  （ＥＧＦ）（上皮増殖因子（ＥＧＦ）による腸内感染の予防）。３６ｔｈ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  ｏｎ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｎｅｗ  Ｏｒｌｅａｎｓ，Ｌｏｕｉｓｉａｎａ，１９９６。
８．  Ｂｕｒｅｔ，Ａ．，Ｇａｌｌ，Ｄ．Ｇ．，Ｏｌｓｏｎ，Ｍ．Ｅ．，及びＨａｒｄｉｎ，Ｊ．Ａ。  Ａｎｔｉ−ｉｎｆｅｃｔｉｖｅ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ａ  ｍｕｃｏｓａｌ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ：  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  （ＥＧＦ），  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｆｉｌｍ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ（粘膜サイトカインの抗感染特性：上皮増殖因子（ＥＧＦ）。国際バイオフィルムシンポジウム議事録。Ｃａｎｍｏｒｅ，Ａｌｂｅｒｔａ，１９９７。
９．  Ｂｕｒｅｔ，Ａ．，Ｈａｒｄｉｎ，Ｊ．Ａ．，Ｏｌｓｏｎ，Ｍ．Ｅ．，Ｃｈｉｎ，Ａ．，及びＧａｌｌ，Ｄ．Ｇ。  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｏｒａｌｌｙ  ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  （ＥＧＦ）  ｄｕｒｉｎｇ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒａｂｂｉｔｓ（ウサギにおける大腸菌感染中に経口投与された上皮増殖因子（ＥＧＦ）の作用）。Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １１０，Ａ７９３，１９９６。
１０．  Ｂｕｒｅｔ，Ａ．，Ｋａｍｉｅｎｉｅｃｋｙ，Ｄ．，Ｏｌｓｏｎ，Ｍ．Ｅ．，Ｇａｌｌ，Ｄ．Ｇ．，及びＨａｒｄｉｎ，Ｊ．Ａ。  Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ  ａｎｄ  ｔｒａｎｓ−ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ：  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ（ＥＧＦ）（クリプトスポリジウムによる上皮定着と経上皮電気抵抗：上皮増殖因子（ＥＧＦ）の作用。Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １１６，Ａ８６５，１９９９。
１１．  Ｂｕｒｅｔ，Ａ．，Ｍ．Ｅ．Ｏｌｓｏｎ，Ｄ．Ｇ．Ｇａｌｌ，及びＪ．Ａ．Ｈａｒｄｉｎ。  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｏｒａｌｌｙ  ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｏｎ  ｅｎｔｅｒｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒａｂｂｉｔｓ（ウサギにおける腸病原性大腸菌感染に対して経口投与した上皮増殖因子の作用）。Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６６：４９１７−４９２３，１９９８。
１２．  Ｂｕｒｅｔ，Ａ．，Ｏｌｓｏｎ，Ｍ．Ｅ．，Ｇａｌｌ，Ｄ．Ｇ．，Ｈａｒｄｉｎ，Ｊ．Ａ．，Ｋａｍｉｅｎｉｅｃｋｙ，Ｄ．，及びＬｕｐｕｌ，Ｓ。  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  （ＥＧＦ）  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ  ｐａｒｖｕｍ（上皮増殖因子（ＥＧＦ）はクリプトスポリジウムパルバムによる腸内定着を阻止する）。Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３５８（Ｓｕｐｐｌ．１），８３５９，１９９８。
１３．  Ｂｕｒｙ，Ｒ．Ｇ．及びＴｕｄｅｈｏｐｅ，Ｄ。  Ｅｎｔｅｒａｌ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ｆｏｒ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ  ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ  ｉｎ  ｌｏｗ  ｂｉｒｔｈｗｅｉｇｈｔ  ｏｒ  ｐｒｅｔｅｒｍ  ｉｎｆａｎｔｓ  （Ｃｏｃｈｒａｎｅ  Ｒｅｖｉｅｗ）（出生時低体重乳児又は未熟児における壊死性腸炎を予防するための腸内抗生物質）。Ｔｈｅ  Ｃｏｃｈｒａｎｅ  Ｌｉｂｒａｒｙ  Ｉｓｓｕｅ  １．２００１．Ｏｘｆｏｒｄ：Ｕｐｄａｔｅ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ。
１４．  Ｃａｐｌａｎ  Ｍ．Ｓ．，Ｍｉｌｌｅｒ−Ｃａｔｃｈｐｏｌｅ，Ｒ．，Ｋａｕｐ，Ｓ．，Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｔ．，Ｌｉｃｋｅｒｍａｎ，Ｍ．，Ａｍｅｒ，Ｍ．，Ｘｉａｏ，Ｙ．，Ｔｈｏｍｓｏｎ，Ｒ．，Ｊｒ。  Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｔｈｅ  ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ  ｏｆ  ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ  ｉｎ  ａ  ｎｅｏｎａｔａｌ  ｒａｔ  ｍｏｄｅｌ（ビフィドバクテリウム補充は新生児ラットモデルにおける壊死性腸炎の発生率を低下させる）。Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １１７：５７７−８３，１９９９。
１５．  Ｃａｐｌａｎ，Ｍ．Ｓ．，Ｈｅｄｌｕｎｄ，Ｅ．，Ａｄｌｅｒ，Ｌ．，Ｌｉｃｋｅｒｍａｎ，Ｍ．，Ｈｓｕｅｈ，Ｗ。  Ｔｈｅ  ｐｌａｔｅｌｅｔ−ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ＷＥＢ  ２１７０  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ｎｅｏｎａｔａｌ  ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ（血小板活性化因子受容体アンタゴニストＷＥＢ  ２１７０はラットにおける新生児壊死性腸炎を予防する）。Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｎｕｔｒ．２４：２９６−３０１，１９９７。
１６．  Ｃａｐｌａｎ，Ｍ．Ｓ．，Ｂ．Ｈｅｄｌｕｎｄ，Ｎ．Ｈｉｌｌ，及びＷ．ＭａｃＫｅｎｄｒｉｃｋ。  Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ａｎｄ  ｐｌａｔｅｌｅｔ−ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｈｙｐｏｘｉａ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｉｎｊｕｒｙ  ｉｎ  ｒａｔｓ（ラットでの低酸素症誘導性腸損傷における内因性酸化窒素及び血小板活性化因子の役割）。Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １０６：３４６−３５２，１９９４。
１７．  Ｃａｐｌａｎ，Ｍ．Ｓ．及びＴ．Ｊｉｌｌｉｎｇ。  Ｎｅｗ  ｃｏｎｃｅｐｔｓ  ｉｎ  ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ（壊死性腸炎における新しい概念）。Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｅｄｉａｔｒ．１３：１１１−１１５，２００１。
１８．  Ｃａｐｌａｎ，Ｍ．Ｓ．，Ｒ．Ｍｉｌｌｅｒ−Ｃａｔｃｈｐｏｌｅ，Ｓ．Ｋａｕｐ，Ｔ．Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍ．Ｌｉｃｋｅｒｍａｎ，Ｍ．Ａｍｅｒ，Ｙ．Ｘｉａｏ，Ｒ．Ｔｈｏｍｓｏｎ，Ｊｒ。  Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｔｈｅ  ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ  ｏｆ  ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ  ｉｎ  ａ  ｎｅｏｎａｔａｌ  ｒａｔ  ｍｏｄｅｌ（ビフィドバクテリウム補充は新生児ラットモデルにおける壊死性腸炎の発生率を低下させる）。Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １１７：５７７−５８３，１９９９。
１９．  Ｃａｒｌｓｏｎ，Ｓ．Ｅ．，Ｍｏｎｔａｌｔｏ，Ｍ．Ｂ．，Ｐｏｎｄｅｒ，Ｄ．Ｌ．，Ｗｅｒｋｍａｎ，Ｓ．Ｈ．，Ｋｏｒｏｎｅｓ，Ｓ．Ｂ。  Ｌｏｗｅｒ  ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ  ｏｆ  ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ  ｉｎ  ｉｎｆａｎｔｓ  ｆｅｄ  ａ  ｐｒｅｔｅｒｍ  ｆｏｒｍｕｌａ  ｗｉｔｈ  ｅｇｇ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ（卵リン脂質を含む未熟児用特殊調製乳で育てられた乳児における壊死性腸炎のより低い発生率）。Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｒｅｓ．４４：４９１−９８，１９９８。
２０．  Ｃｌａｕｄ，Ｅ．Ｃ．及びＷａｌｋｅｒ，Ｗ．Ａ。  Ｈｙｐｏｔｈｅｓｉｓ：  ｉｎａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ  ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｅｍａｔｕｒｅ  ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ  ｃａｎ  ｃａｕｓｅ  ｎｅｏｎａｔａｌ  ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ（仮説：未熟な腸の不適切なコロニー形成は新生児壊死性腸炎を引き起こす）。ＦＡＳＥＢ  Ｊ．１５，１３９８−１４０３．２００１。
２１．  Ｄａｈｌｑｕｉｓｔ，Ａ．  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ａｓｓａｙ  ｏｆ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｄｉｓｓａｃｈａｒｉｄａｓｅｓ（腸ニ糖類のアッセイ方法）。Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．７：１８２５，１９６４。
２２．  Ｄｉ  Ｌｏｒｅｎｚｏ，Ｍ．，Ｊ．Ｂａｓｓ，及びＡ．Ｋｒａｎｔｉｓ。  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌ−ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ（実験的壊死性腸炎の治療におけるＬ−アルギニンの使用）。Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｓｕｒｇ．３０：２３５−２４１，１９９５。
２３．  Ｄｖｏｒａｋ，Ｂ．，Ｈａｌｐｅｒｎ，Ｍ．Ｄ．，Ｈｏｌｕｂｅｃ，Ｈ．，Ｄｖｏｒａｋｏｖａ，Ｋ．，Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ，Ｊ．Ａ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｃ．Ｓ．，Ｍｅｚａ，Ｙ．Ｇ．，Ｋｏｚａｋｏｖａ，Ｈ．，ＭｃＣｌｕｓｋｅｙ，Ｒ．Ｓ。  Ｍａｔｅｒｎａｌ  ｍｉｌｋ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｔｈｅ  ｓｅｖｅｒｉｔｙ  ｏｆ  ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ  ａｎｄ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ＩＬ−１０  ｉｎ  ａ  ｎｅｏｎａｔａｌ  ｒａｔ  ｍｏｄｅｌ（新生児ラットモデルにおいて母乳は壊死性腸炎の重症度を低下させ、腸ＩＬ−１０を上昇させる）。Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｒｅｓ．５３：４２６−３３，２００３。
２４．  Ｅｉｂｌ，Ｍ．Ｍ．，Ｗｏｌｆ，Ｈ．Ｍ．，Ｆｕｒｎｋｒａｎｚ，Ｈ．，Ｒｏｓｅｎｋｒａｎｚ，Ａ。  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ  ｉｎ  ｌｏｗ−ｂｉｒｔｈ−ｗｅｉｇｈｔ  ｉｎｆａｎｔｓ  ｂｙ  ＩｇＡ−ＩｇＧ  ｆｅｅｄｉｎｇ（ＩｇＡ−ＩｇＧ栄養補給による出生時低体重乳児における壊死性腸炎の予防）。Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３１９：１−７，１９８８。
２５．  Ｅｌｌｉｏｔｔ，Ｓ．Ｎ．，ＭｃＫｎｉｇｈｔ，Ｗ．，Ｇａｌｌ，Ｄ．Ｇ．，Ｈａｒｄｉｎ，Ｊ．Ａ．，Ｏｌｓｏｎ，Ｍ．Ｅ．，Ｗａｌｌａｃｅ，Ｊ．Ｌ．，及びＢｕｒｅｔ，Ａ。  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  （ＥＧＦ）  −ｉｎｄｕｃｅｄ  ｇａｓｔｒｉｃ  ｕｌｃｅｒ  ｈｅａｌｉｎｇ  ｉｓ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｏｆ  ａ  ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ  ａｃｔｉｏｎ（上皮増殖因子（ＥＧＦ）誘導性胃潰瘍治癒は殺菌作用とは無関係である）。Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  ｏｆ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ８（Ｓｕｐｐｌ．１）：Ｓ８１，１９９９。
２６．  Ｅｌｌｉｏｔｔ，Ｓ．Ｎ．，Ｊ．Ｌ．Ｗａｌｌａｃｅ，Ｗ．ＭｃＫｎｉｇｈｔ，Ｄ．Ｇ．Ｇａｌｌ，Ｊ．Ａ．Ｈａｒｄｉｎ，Ｍ．Ｏｌｓｏｎ，及びＡ．Ｂｕｒｅｔ。  Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｈｅａｌｉｎｇ  ｏｆ  ｇａｓｔｒｉｃ  ｕｌｃｅｒｓ：  ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ（細菌定着と胃潰瘍の治癒：上皮増殖因子の効果）。Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ．Ｌｉｖｅｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２７８：６１０５−６１１２，２０００。
２７．  Ｇｉｂｂｓ，Ｓ．，Ａ．Ｎ．Ｓｉｌｖａ  Ｐｉｎｔｏ，Ｓ．Ｍｕｒｌｉ，Ｍ．Ｈｕｂｅｒ，Ｄ．Ｈｏｈｌ，及びＭ．Ｐｏｎｅｃ。  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ａｎｄ  ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ｒｅｇｕｌａｔｅ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ，  ｇｒｏｗｔｈ，  ａｎｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ（上皮増殖因子と角質細胞増殖因子は上皮移動、増殖及び分化を区別して調節する）。Ｗｏｕｎｄ  Ｒｅｐａｉｒ  Ｒｅｇｅｎ．８：１９２−２０３，２０００。
２８．  Ｈａｌａｃ，Ｅ．，Ｈａｌａｃ，Ｊ．，Ｂｅｇｕｅ，Ｅ．Ｆ．，Ｃａｓａｎａｓ，Ｊ．Ｍ．，Ｉｎｄｉｖｅｒｉ，Ｄ．Ｒ．，Ｐｅｔｉｔ，Ｊ．Ｆ．，Ｆｉｇｕｅｒｏａ，Ｍ．Ｊ．，Ｏｌｍａｓ，Ｊ．Ｍ．，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ，Ｌ．Ａ．，Ｏｂｒｅｇｏｎ，Ｒ．Ｊ。  Ｐｒｅｎａｔａｌ  ａｎｄ  ｐｏｓｔｎａｔａｌ  ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｔｏ  ｐｒｅｖｅｎｔ  ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ：  ａ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｔｒｉａｌ（壊死性腸炎を予防するための出生前及び出生後のコルチコステロイド療法：対照試験）。Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．１１７：１３２−８，１９９０。
２９．  Ｈａｒｄｉｎ，Ｊ．Ａ．，Ｏｌｓｏｎ，Ｍ．Ｅ．，Ｂｕｒｅｔ，Ａ．Ｇ．，及びＧａｌｌ，Ｄ．Ｇ。  Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｏｒａｌ  ＥＧＦ  ｏｎ  Ｇｉａｒｄｉａｓｉｓ  ｉｎ  ｇｅｒｂｉｌｓ（アレチネズミ（ジャービル）におけるジアルジア症への経口ＥＧＦの効果）。Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １１２，Ａ９９２，１９９７。
３０．  Ｈｅｎｔｓｃｈｅｌ，Ｊ．，ｄｅ  Ｖｅｅｒ，Ｉ．，Ｇａｓｔｍｅｉｅｒ，Ｐ．，Ｒｕｄｅｎ，Ｈ．，及びＯｂｌａｄｅｎ，Ｍ。  Ｎｅｏｎａｔａｌ  ｎｏｓｏｃｏｍｉａｌ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ：  ｉｎｃｉｄｅｎｃｅｓ  ｂｙ  ｓｉｔｅ  ａｎｄ  ａ  ｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ（新生児院内感染サーベイランス：部位及び壊死性腸炎のクラスターによる発生率）。Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ２７：２３４−２３８，１９９９．
３１．  Ｈｉｎｅｇａｒｄｎｅｒ，Ｒ。  Ａｎ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ＤＮＡ（ＤＮＡに関する改善された蛍光アッセイ）。Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３９：１９７２０１，１９７１。
３２．  Ｈｏｙｏｓ，Ａ．Ｂ。  Ｒｅｄｕｃｅｄ  ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ  ｏｆ  ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｅｎｔｅｒａｌ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ａｎｄ  Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｆａｎｔｉｓ  ｔｏ  ｎｅｏｎａｔｅｓ  ｉｎ  ａｎ  ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  ｃａｒｅ  ｕｎｉｔ（集中治療室の新生児へのアシドフィルス菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）及びＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｆａｎｔｉｓの腸投与に関連する壊死性腸炎の発生率低下）。Ｉｎｔ．Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．３：１９７−２０２，１９９９。
３３．  Ｈｕｉ，Ｗ．Ｍ．，Ｂ．Ｗ．Ｃｈｅｎ，Ａ．Ｗ．Ｃ．Ｋｕｎｇ，Ｃ．Ｈ．Ｃｈｏ，Ｃ．Ｔ．Ｌｕｋ，及びＳ．Ｋ．Ｌａｍ。  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｏｎ  ｇａｓｔｒｉｃ  ｂｌｏｏｄ  ｆｌｏｗ  ｉｎ  ｒａｔｓ：  ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｍｕｃｏｓａｌ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ（ラットにおける胃血流への上皮増殖因子の効果：粘膜保護における役割の可能性）。Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １０４：１６０５−１６１０，１９９３．
３４．  Ｍａｒｃｈ，Ｊ。  “Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ”，「先端有機化学：反応、機序及び構造」、第４版（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ）１９９２。
３５．  Ｎｅｕ，Ｊ。  Ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ：  ｔｈｅ  ｓｅａｒｃｈ  ｆｏｒ  ａ  ｕｎｉｆｙｉｎｇ  ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ  ｔｈｅｏｒｙ  ｌｅａｄｉｎｇ  ｔｏ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ（壊死性腸炎：予防に繋がる統一病原性理論の検索）。Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．４３：４０９−４３２，１９９６。
３６．  Ｋｕｂｅｓ，Ｐ。  Ｉｓｃｈｅｍｉａ−ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  ｉｎ  ｆｅｌｉｎｅ  ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ：  ａ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ（ネコ小腸における虚血−再灌流：酸化窒素の役割）。Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ．Ｌｉｖｅｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２６４：６１４３−６１４９，１９９３。
３７．  ＭｃＧｕｉｒｅ，Ｗ．，及びＡｎｔｈｏｎｙ，Ｍ．Ｙ．Ｄｏｎｏｒ  ｈｕｍａｎ  ｍｉｌｋ  ｖｅｒｓｕｓ  ｆｏｒｍｕｌａ  ｆｏｒ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ  ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ  ｉｎ  ｐｒｅｔｅｒｍ  ｉｎｆａｎｔｓ：  ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ｒｅｖｉｅｗ（未熟児における壊死性腸炎を予防するためのドナーヒトミルク対調整乳：体系的総説）。Ａｒｃｈ．Ｄｉｓ．Ｃｈｉｌｄ  Ｆｅｔａｌ  Ｎｅｏｎａｔａｌ  Ｅｄ．８８：Ｆ１１−４，２００３。
３８．  Ｏｐｌｅｔａ−Ｍａｄｓｅｎ，Ｋ．，Ｊ．Ｂ．Ｍｅｄｄｉｎｇｓ，及びＤ．Ｇ．Ｇａｌｌ。  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ａｎｄ  ｐｏｓｔｎａｔａｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ａｎｄ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（上皮増殖因子及び腸輸送と膜構造の出生後発達）。Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｒｅｓ．３０：３４２−３５０，１９９１．
３９．  Ｏｐｌｅｔａ，Ｋ．，Ｅ．Ｖ．Ｏ’Ｌｏｕｇｈｌｉｎ，Ｅ．Ａ．Ｓｈａｆｆｅｒ，Ｊ．Ｈａｙｄｅｎ，Ｍ．Ｄ．Ｈｏｌｌｅｎｂｅｒｇ，及びＤ．Ｇ．Ｇａｌｌ。  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｏｎ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  ｐｏｓｔｎａｔａｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒａｂｂｉｔ  ｌｉｖｅｒ（ウサギ肝臓の成長と出生後発達への上皮増殖因子の作用）。Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ．Ｌｉｖｅｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．２５３：６６２２−６６２６，１９８７。
４０．  Ｏｚｔｕｒｋ，Ｈ．，Ｄｏｋｕｃｕ，Ａ．Ｉ．，Ｏｇｕｎ，Ｃ．，Ｂｕｙｕｋｂａｙｒａｍ，Ｈ。  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１０  ｏｎ  ｉｎｔｅｓｔｉｎｅｓ  ｏｆ  ｈｙｐｏｘｉａ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ  ｉｎ  ｉｍｍａｔｕｒｅ  ｒａｔｓ（未熟ラットにおける低酸素症誘導の壊死性腸炎に対する腸への組換えヒトインターロイキン−１０の保護作用）。Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｓｕｒｇ．３７：１３３０−３，２００２。
４１．  Ｐｉａｚｕｅｌｏ，Ｅ．，Ｐ．Ｊｉｍｅｎｅｚ，Ａ．Ｌａｎａｓ，Ａ．Ｇａｒｃｉａ，Ｆ．Ｅｓｔｅｖａ，及びＲ．Ｓａｉｎｚ。Ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ａｎｄ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｐｌａｙ  ａ  ｍａｊｏｒ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｃｏｌｏｎｉｃ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｒｅｐａｉｒ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ（血小板由来増殖因子及び上皮増殖因子は、ヒト結腸線維芽細胞修復作用において主要な役割を果たす）。Ｅｕｒ．Ｓｕｒｇ．Ｒｅｓ．３２：１９１−１９６，２０００。
４２．  Ｐｌａｙｆｏｒｄ，Ｒ．Ｊ．，Ｗｏｏｄｍａｎ，Ａ．Ｃ．，Ｃｌａｒｋ，Ｐ．，Ｗａｔａｎａｐａ，Ｐ．，Ｖｅｓｅｙ，Ｄ．，Ｄｅｐｒｅｚ，Ｐ．Ｈ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ，Ｒ．Ｃ．Ｎ．，Ｃａｌａｍ，Ｊ。  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｌｕｍｉｎａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ  ｏｎ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｇｒｏｗｔｈ（腸成長への管腔増殖因子保存の影響）。Ｌａｎｃｅｔ  ３４１：８４３−８，１９９３。
４３．  Ｓｃｈａｎｌｅｒ，Ｒ．Ｊ。  Ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｍｉｌｋ  ｆｏｒ  ｐｒｅｍａｔｕｒｅ  ｉｎｆａｎｔｓ（未熟児のためのヒトミルクの使用）。Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．４８：２０７−２１９，２００１。
４４．  Ｓｈｉｎ，Ｃ．Ｅ．，Ｒ．Ａ．Ｆａｌｃｏｎｅ，Ｊｒ．，Ｌ．Ｓｔｕａｒｔ，Ｃ．Ｒ．Ｅｒｗｉｎ，及びＢ．Ｗ．Ｗａｒｎｅｒ。  Ｄｉｍｉｎｉｓｈｅｄ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｌｅｖｅｌｓ  ｉｎ  ｉｎｆａｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ（壊死性腸炎を有する乳児における低い上皮増殖因子レベル）。Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｓｕｒｇ．３５：１７３−１７６，２０００。
４５．  Ｓｉｕ，Ｙ．Ｋ．，Ｎｇ，Ｐ．Ｃ．，Ｆｕｎｇ，Ｓ．Ｃ．，Ｌｅｅ，Ｃ．Ｈ．，Ｗｏｎｇ，Ｍ．Ｙ．，Ｆｏｋ，Ｔ．Ｆ．，Ｓｏ，Ｋ．Ｗ．，Ｃｈｅｕｎｇ，Ｋ．Ｌ．，Ｗｏｎｇ，Ｗ．，Ｃｈｅｎｇ，Ａ。  Ｆ．Ｄｏｕｂｌｅ  ｂｌｉｎｄ，  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，  ｐｌａｃｅｂｏ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｏｒａｌ  ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ  ｉｎ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ  ｉｎ  ｐｒｅｔｅｒｍ，  ｖｅｒｙ  ｌｏｗ  ｂｉｒｔｈｗｅｉｇｈｔ  ｉｎｆａｎｔｓ（早期産の非常に低い出生時体重乳児での壊死性腸炎の予防における経口バンコマイシンの二重盲検無作為化プラセボ対照試験）。Ａｒｃｈ．Ｄｉｓ．Ｃｈｉｌｄ．Ｆｅｔａｌ  Ｎｅｏｎａｔａｌ  Ｅｄ．７９：Ｆ１０５−９，１９９８。
４６．  Ｗａｌｓｈ，Ｍ．Ｃ．，及びＫｌｉｅｇｍａｎ，Ｒ．Ｍ。  Ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ：  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｓｔａｇｉｎｇ  ｃｒｉｔｅｒｉａ（壊死性腸炎：病期分類判定基準に基づく治療）。Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．３３：１７９−２０１，１９８６。
４７．  Ｚａｍｏｒａ，Ｓ．Ａ．，Ａｍｉｎ，Ｈ．Ｊ．，ＭｃＭｉｌｌａｎ，Ｄ．Ｄ．，Ｋｕｂｅｓ，Ｐ．，Ｆｉｃｋ，Ｇ．Ｈ．，Ｂｕｔｚｎｅｒ，Ｊ．Ｄ．，Ｐａｒｓｏｎｓ，Ｈ．Ｇ．，及びＳｃｏｔｔ，Ｒ．Ｂ。  Ｐｌａｓｍａ  Ｌ−ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｐｒｅｍａｔｕｒｅ  ｉｎｆａｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ（壊死性腸炎を有する未熟児における血漿Ｌ−アルギニン濃度）。Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．１３１，２２６−２３２．１９９７。
４８．  Ｄｖｏｒａｋ，Ｂ．；Ｈａｌｐｅｒｎ，Ｍ．Ｄ．；Ｈｏｌｕｂｅｃ，Ｈ．；Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｃ．Ｓ．；ＭｃＷｉｌｌｉａｍ，Ｄ．Ｌ．；Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ，Ｊ．Ａ．；Ｓｔｅｐａｎｋｏｖａ，Ｒ．；Ｐａｙｎｅ，Ｃ．Ｍ．；ＭｃＣｕｓｋｅｙ，Ｒ．Ｓ。  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ  ｉｎ  ａ  ｎｅｏｎａｔａｌ  ｒａｔ  ｍｏｄｅｌ（上皮増殖因子は新生児ラットモデルにおける壊死性腸炎の発現を低下させる）。Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ．Ｌｉｖｅｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２８２：Ｇ１５６−Ｇ１６４，２００２。
４９．  Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ，Ｐ．Ｅ．，Ｌ．Ｇ．Ｊｅｎｓｅｎ，Ｂ．Ｓ．Ｓｏｒｅｎｓｅｎ，Ｓ．Ｓ．Ｐｏｕｌｓｅｎ，及びＥ．Ｎｅｘｏ。  Ｐｉｇ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｃｏｎｔａｉｎｓ  ｓｅｇｍｅｎｔｓ  ｔｈａｔ  ａｒｅ  ｈｉｇｈｌｙ  ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ  ａｍｏｎｇ  ｓｐｅｃｉｅｓ（ブタ上皮増殖因子前駆物質は種間で高度に保存されるセグメントを含む）。Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．５８：２８７−２９７，１９９８。
５０．  Ｎｅｘｏ，Ｅ．及びＨ．Ｆ．Ｈａｎｓｅｎ。  Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｆｒｏｍ  ｍａｎ，  ｒａｔ  ａｎｄ  ｍｏｕｓｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ヒト、ラット及びマウスからの上皮増殖因子のヒト上皮増殖因子受容体への結合）。Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  ８４３：１０１−１０６，１９８５。
５１．  Ｐａｓｃａｌｌ，Ｊ．Ｃ．，Ｄ．Ｓ．Ｃ．Ｊｏｎｅｓ，Ｓ．Ｍ．Ｄｏｅｌ，Ｊ．Ｍ．Ｃｌｅｍｅｎｔｓ，Ｍ．Ｈｕｎｔｅｒ，Ｔ．Ｆａｌｌｏｎ，Ｍ．Ｅｄｗａｒｄｓ，及びＫ．Ｄ．Ｂｒｏｗｎ。  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｇｅｎｅ  ｅｎｃｏｄｉｎｇ  ｐｉｇ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ（ブタ上皮増殖因子をコードする遺伝子のクローニングと特性決定）。Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．６：６３−７０，１９９１。
５２．  Ｓｉｍｐｓｏｎ，Ｒ．Ｊ．，Ｊ．Ａ．Ｓｍｉｔｈ，Ｒ．Ｌ．Ｍｏｒｉｔｚ，Ｍ．Ｊ．Ｏ’Ｈａｒｅ，Ｐ．Ｓ．Ｒｕｄｌａｎｄ，Ｊ．Ｒ．Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｃ．Ｊ．Ｌｌｏｙｄ，Ｂ．Ｇｒｅｇｏ，Ａ．Ｗ．Ｂｕｒｇｅｓｓ，及びＥ．Ｃ．Ｎｉｃｅ。  Ｒａｔ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ：  ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ（ラット上皮増殖因子：完全なアミノ酸配列）。Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１５３：６２９−６３７，１９８５。
５３．  Ｌｅｎｆｅｒｉｎｋ，Ａ．Ｅ．，Ｅ．Ｊ．Ｖａｎ  Ｚｏｅｌｅｎ，Ｍ．Ｊ．Ｖａｎ  Ｖｕｇｔ，Ｓ．Ｇｒｏｔｈｅ，Ｗ．ｖａｎ  Ｒｏｔｔｅｒｄａｍ，Ｍ．Ｌ．Ｖａｎ  ｄｅ  Ｐｏｌｌ，及びＭ．Ｄ．Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ−ＭｃＣｏｕｒｔ。  Ｓｕｐｅｒａｇｏｎｉｓｔｉｃ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＥｒｂＢ−１  ｂｙ  ＥＧＦ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｗｉｔｈ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｒａｔｅ  ｃｏｎｓｔａｎｔｓ（高い会合及び解離速度定数でのＥＧＦ関連増殖因子によるＥｒｂＢ−１のスーパーアゴニスト活性化）。Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：２６７４８−２６７５３，２０００。
５４．  Ｍａｒｉｏｎ，Ｒ．，Ｍ．Ｃｏｅｆｆｉｅｒ，Ａ．Ｌｅｐｌｉｎｇａｒｄ，Ｌ．Ｆａｖｅｎｎｅｃ，Ｐ．Ｄｕｃｒｏｔｔｅ，及びＰ．Ｄｅｃｈｅｌｏｔｔｅ。  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ＮＯ−ｓｙｎｔｈａｓｅ  ｍＲＮＡ  ｌｅｖｅｌ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｃｅｌｌｓ：  ｌａｃｋ  ｏｆ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｇｌｕｔａｍｉｎｅ（ヒト腸細胞におけるサイトカイン刺激性酸化窒素産生及び誘導的ＮＯシンターゼｍＲＮＡレベル：グルタミンによる調節の欠如）。Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．２２：５２３−５２８，２００３。
５５．  Ｋｉｋｕｃｈｉ，Ｋ．，Ｔ．Ｎａｇａｎｏ，Ｈ．Ｈａｙａｋａｗａ，Ｙ．Ｈｉｒａｔａ，及びＭ．Ｈｉｒｏｂｅ。  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ａ  ｐｅｒｆｕｓｅｄ  ｏｒｇａｎ  ｂｙ  ａ  ｌｕｍｉｎｏｌ−Ｈ２Ｏ２  ｓｙｓｔｅｍ（ルミノール−Ｈ２Ｏ２系による灌流器官からの酸化窒素産生の検出）。Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．６５：１７９４−１７９９，１９９３。
５６．  Ｋｏｊｉｍａ，Ｈ．，Ｎ．Ｎａｋａｔｓｕｂｏ，Ｋ．Ｋｉｋｕｃｈｉ，Ｓ．Ｋａｗａｈａｒａ，Ｙ．Ｋｉｒｉｎｏ，Ｈ．Ｎａｇｏｓｈｉ，Ｙ．Ｈｉｒａｔａ，及びＴ．Ｎａｇａｎｏ。  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｏｆ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｗｉｔｈ  ｎｏｖｅｌ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ：  ｄｉａｍｉｎｏｆｌｏｕｒｅｓｃｅｉｎｓ（新規蛍光指示薬：ジアミノフルオレセインによる酸化窒素の検出と画像化）。Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７０：２４４６−２４５３，１９９８。
５７．  Ｓｎｙｇｇ，Ｊ．，Ａ．Ａｎｅｍａｎ，Ａ．Ｐｅｔｔｅｒｓｓｏｎ，及びＬ．Ｆａｎｄｒｉｋｓ。  Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｏｕｔｐｕｔ  ｄｕｒｉｎｇ  ｒｅｄｕｃｅｄ  ｍｕｃｏｓａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｆｌｏｗ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈｙ  ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ（健常志願者における低い粘膜血流の間の腸酸化窒素排出量）。Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．３１：２１９８−２２０４，２００３。
５８．  Ｌｅｖｉｎｅ，Ｄ．Ｚ．，Ｍ．Ｉａｃｏｖｉｔｔｉ，Ｋ．Ｄ．Ｂｕｒｎｓ，及びＸ．Ｚｈａｎｇ。  Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  ｏｆ  ｋｉｄｎｅｙ  ｔｕｂｕｌａｒ  ｆｌｕｉｄ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ（インビボでの腎尿細管液の酸化窒素濃度のリアルタイムプロファイリング）。Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｎａｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．２８１：Ｆ１８９−Ｆ１９４，２００１。
５９．  Ｂｏｇｅｒ，Ｒ．Ｈ．及びＳ．Ｍ．Ｂｏｄｅ−Ｂｏｇｅｒ。  Ｔｈｅ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｌ−ａｒｇｉｎｉｎｅ（Ｌ−アルギニンの臨床薬理学）。Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．４１：７９−９９，２００１。
６０．  Ｆｅｅｌｉｓｃｈ，Ｍ。  Ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｄｏｎｏｒｓ  ｉｎ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ（薬理学的試験における酸化窒素供与体の使用）。Ｎａｕｎｙｎ  Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇｓ  Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３５８：１１３−１２２，１９９８。
６１．  Ｐａｃｈｅｒ，Ｐ．，Ｊ．Ｇ．Ｍａｂｌｅｙ，Ｌ．Ｌｉａｕｄｅｔ，Ｏ．Ｖ．Ｅｖｇｅｎｏｖ，Ｇ．Ｊ．Ｓｏｕｔｈａｎ，Ｇ．Ｅ．Ａｂｄｅｌｋａｒｉｍ，Ｃ．Ｓｚａｂｏ，及びＡ．Ｌ．Ｓａｌｚｍａｎ。  Ｔｏｐｉｃａｌ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｄｏｎｏｒ，  ｌｉｎｅａｒ  ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｉｍｉｎｅ−ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ／ｎｕｃｌｅｏｐｈｉｌｅ  ａｄｄｕｃｔ  （ＤＳ１），  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｖａｇｉｎａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｆｌｏｗ  ｉｎ  ａｎｅｓｔｈｅｔｉｚｅｄ  ｒａｔｓ（新規酸化窒素供与体、直鎖状ポリエチレンイミン−酸化窒素／求核試薬付加物（ＤＳ１）の局所投与は、麻酔ラットにおいて膣血量を選択的に上昇させる）。Ｉｎｔ．Ｊ．Ｉｍｐｏｔ．Ｒｅｓ．１５：４６１−４６４，２００３。
６２．  Ｚｅｌｌ，Ｒ．，Ｒ．Ｍａｒｋｇｒａｆ，Ｍ．Ｓｃｈｍｉｄｔｋｅ，Ｍ．Ｇｏｒｌａｃｈ，Ａ．Ｓｔｅｌｚｎｅｒ，Ａ．Ｈｅｎｋｅ，Ｈ．Ｈ．Ｓｉｇｕｓｃｈ，及びＢ．  Ｇｌｕｃｋ。  Ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｄｏｎｏｒｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｔｈｅ  ｃｏｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓ  Ｂ３  ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ  ２Ａ  ａｂｄ  ３Ｃ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ，  ｖｉｒｕｓ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃｅｌｌｓ，  ａｎｄ  ｓｉｇｎｓ  ｏｆ  ｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ  ｉｎ  ｖｉｒｕｓ−ｉｎｆｅｃｔｅｄ  ｍｉｃｅ（酸化窒素供与体は、インビトロでのコクサッキーウイルスＢ３プロテイナーゼ２Ａ  ａｂｄ  ３Ｃ、細胞におけるウイルス生産、及びウイルス感染マウスにおける心筋炎の徴候を抑制する）。Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９３：９１−１００，２００４。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】図１Ａ〜１Ｅは、（１Ａ）対照、（１Ｂ）未処置ＮＥＣ、（１Ｃ）Ｌ−アルギニン処置、（１Ｄ）ＥＧＦ処置、及び（１Ｅ）Ｌ−アルギニン＋ＥＧＦ処置動物からの小腸の代表的顕微鏡写真である。未処置対照パネルの矢印は、それぞれ変色と拡張（左の矢印）及び狭窄（右の矢印）の領域を示す。
【図２】図２は、対照（ｎ＝１０）、未処置（ＮＥＣ、ｎ＝１２）、Ｌ−アルギニン処置（ｎ＝１４）、ＥＧＦ処置（ｎ＝１５）、及びＥＧＦ＋Ｌ−アルギニン処置動物（ｎ＝１５）における剖検での臨床スコアを示す。
【図３】図３は、対照（ｎ＝１０）、未処置（ＮＥＣ、ｎ＝１２）、Ｌ−アルギニン処置（ｎ＝１４）、ＥＧＦ処置（ｎ＝１５）、及びＥＧＦ＋Ｌ−アルギニン処置動物（ｎ＝１５）における剖検後の臨床スコアで使用した個々のパラメータの内訳を示す。
【図４】図４Ａ〜４Ｅは、（４Ａ）対照、（４Ｂ）未処置ＮＥＣ、（４Ｃ）Ｌ−アルギニン処置、（４Ｄ）ＥＧＦ処置、及び（４Ｅ）Ｌ−アルギニン＋ＥＧＦ処置動物から得た遠位回腸組織切片の代表的顕微鏡写真である。
【図５】図５は、対照（ｎ＝１０）、未処置（ＮＥＣ、ｎ＝１５）、Ｌ−アルギニン処置（ｎ＝１１）、ＥＧＦ処置（ｎ＝１１）、及びＥＧＦ＋Ｌ−アルギニン処置動物（ｎ＝１４）から得た遠位回腸組織における損傷スコアを示す。
【図６】図６は、対照（ｎ＝１８）、未処置（ＮＥＣ、ｎ＝１１）、Ｌ−アルギニン処置（ｎ＝１１）、ＥＧＦ処置（ｎ＝１４）、及びＥＧＦ＋Ｌ−アルギニン処置動物（ｎ＝１０）から得た遠位回腸組織における総ラクターゼ活性を示す。
【図１】
2007513983.tif 000004
【図２】
2007513983.tif 000005
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
2007513983000001.app
【国際調査報告】
2007513983.tif 000010
2007513983.tif 000011
2007513983.tif 000012
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