(57)【要約】ＣＤ２００またはＣＤ２００Ｒのアゴニストまたはアンタゴニストを使用する免疫系の活性を調節するための方法を提供する。免疫障害、特に毛包障害に関連する障害を処置および診断する方法もまた、提供する。本発明は、ＣＤ２００またはＣＤ２００Ｒのアゴニストの有効量を被験体に投与する工程を包含する、毛包に関連する状態または障害を処置する方法を提供する。このアゴニストは、ＣＤ２００またはＣＤ２００Ｒに特異的に結合する抗体の抗原結合部位由来である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下：
ａ）ＣＤ２００；または
ｂ）ＣＤ２００Ｒ
のアゴニストの有効量を被験体に投与する工程を包含する、毛包に関連する状態または障害を処置する方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、前記アゴニストは、以下：
ａ）ＣＤ２００；または
ｂ）ＣＤ２００Ｒ
に特異的に結合する抗体の抗原結合部位由来である、方法。
【請求項３】
請求項１に記載の方法であって、前記アゴニストは、以下：
ａ）ポリクローナル抗体；
ｂ）モノクローナル抗体；
ｃ）ヒト化抗体、またはそのフラグメント；
ｄ）Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはＦｖフラグメント；
ｅ）二重特異性抗体；
ｆ）抗体のペプチド模倣物；あるいは
ｇ）低分子
を含む、方法。
【請求項４】
請求項３に記載の方法であって、前記二重特異性抗体は、ＣＤ２００Ｒおよび活性化レセプターに特異的に結合する、方法。
【請求項５】
請求項１に記載の方法であって、前記アゴニストは、以下：
ａ）ＣＤ２００の細胞外領域に由来する可溶性ポリペプチドであって、該可溶性ポリペプチドは、ＣＤ２００Ｒに特異的に結合する、可溶性ポリペプチド；または
ｂ）ＣＤ２００Ｒの細胞外領域に由来する可溶性ポリペプチドであって、該可溶性ポリペプチドは、ＣＤ２００に特異的に結合する、可溶性ポリペプチド
を含む、方法。
【請求項６】
請求項１に記載の方法であって、前記アゴニストは、核酸を含む、方法。
【請求項７】
請求項６に記載の方法であって、前記核酸は、以下：
ａ）ＣＤ２００またはＣＤ２００Ｒ；あるいは
ｂ）ＣＤ２００の細胞外領域またはＣＤ２００Ｒの細胞外領域に由来する可溶性ポリペプチド
をコードする、方法。
【請求項８】
請求項１に記載の方法であって、前記状態または障害は、脱毛症を含み、前記アゴニストは、該脱毛症を改善するか、または毛髪の成長を増加させる、方法。
【請求項９】
請求項８に記載の方法であって、前記脱毛症は、以下：
ａ）瘢痕性脱毛症；または
ｂ）非瘢痕性脱毛症
ｃ）男性ホルモン脱毛症（ＡＧＡ）；
ｄ）円形脱毛症（ＡＡ）；
ｅ）萎縮性脱毛症（ＰＢ）；
ｆ）毛孔性扁平苔癬（ＬＰＰ）；または
ｇ）線維化脱毛症（ＦＡ）
を含む、方法。
【請求項１０】
請求項１に記載の方法であって、前記状態または障害は、以下：
ａ）抜け毛または禿頭症
ｂ）毛包の皮層における線維症
ｃ）濾胞内水腫；
ｄ）毛包の細胞のアポトーシス；
ｅ）免疫細胞による毛包の浸潤；
ｆ）毛包色素脱失；あるいは
ｇ）過剰毛
を含む、方法。
【請求項１１】
請求項１に記載の方法であって、前記アゴニストは、以下：
ａ）インスリン様増殖因子−１；または
ｂ）インターフェロン−γ
の増加した発現を生じる、方法。
【請求項１２】
請求項１に記載の方法であって、前記ＣＤ２００は、以下：
ａ）外毛根鞘；
ｂ）ケラチノサイト；
ｃ）ランゲルハンス細胞；
ｄ）ケラチン−１４発現細胞；あるいは
ｅ）毛包幹細胞または遷移増幅細胞
によって発現される、方法。
【請求項１３】
ＣＤ２００またはＣＤ２００Ｒのアンタゴニストの投与を包含する、過剰毛髪の成長に関連する障害または状態を処置する方法。
【請求項１４】
結合組成物と生物学的サンプルとを接触させる工程であって、該結合組成物は、以下：
ａ）ＣＤ２００；または
ｂ）ＣＤ２００Ｒ
に特異的に結合する工程、および該結合組成物と該生物学的サンプルとの特異的結合を測定または決定する工程を包含する、毛包の状態または障害を診断する方法。
【請求項１５】
請求項１４に記載の方法であって、前記生物学的サンプルは、以下：
ａ）毛包の状態または障害を罹患した組織；あるいは
ｂ）コントロールの被験体または罹患していない組織
の毛包由来である、方法。
【請求項１６】
区画および以下：
ａ）ＣＤ２００またはＣＤ２００Ｒのアゴニスト；あるいは
ｂ）ＣＤ２００またはＣＤ２００Ｒをコードするポリヌクレオチドに特異的にハイブリダイズする核酸を含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００４年２月２日に出願された米国仮特許出願番号第６０／５４１，０８２号の利益を主張し、その出願は、その全体が本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、免疫系機能を含む、哺乳動物の生理機能を調節するための方法および組成物に関する。特に、本発明は、ＣＤ２００およびＣＤ２００Ｒに依存する活性を調節するための方法を提供する。診断的使用および治療的使用が、開示される。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
免疫系は、感染性因子（例えば、細菌、多細胞生物およびウイルス）ならびに癌から個体を保護するために機能する。この系は、数種のリンパ系細胞および骨髄性細胞（例えば、単球、マクロファージ、樹状細胞（ＤＣ）、好酸球、Ｔ細胞、Ｂ細胞、および好中球）を含む。これらのリンパ系細胞および骨髄性細胞は、多くの場合、サイトカインとして公知の可溶性のシグナルタンパク質を産生する。免疫応答としては、炎症（すなわち、全身的な免疫細胞の蓄積または身体の特定の部位における免疫細胞の蓄積）が挙げられる。感染性因子または異物に対する応答、あるいは自己免疫応答において、免疫細胞は、サイトカインを分泌し、次いで、そのサイトカインは、免疫細胞の増殖、発達、分化、または移動を調節する。膜結合タンパク質もまた、免疫応答においてシグナル伝達を媒介する。例えば、Ｔ細胞レセプター、ＣＤ４、Ｂ細胞レセプター、ＣＤ２０、およびＦｃγＲＩＩＩは、活性化シグナルを伝達する膜結合タンパク質であるが、ＣＤ２００（別名ＯＸ２）およびその対応するレセプターＣＤ２００Ｒ（ＯＸ２Ｒとしてもまた公知である）、ならびにＣＴＬＡ−４、ＣＤ９４、ＳＩＲＰおよびＦＣγＲＩＩｂは、細胞へ抑制性のシグナルを伝達する（例えば、非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５を参照のこと）。
【０００４】
本発明は、脱毛症（例えば、非瘢痕性脱毛症および瘢痕性脱毛症）を処置するための方法を提供する。瘢痕性脱毛症は、永久的な毛包の減少に関係する傾向があるが、非瘢痕性脱毛症は、可逆性の濾胞の減少に関係し得る。非瘢痕性脱毛症としては、男性ホルモン脱毛症（ＡＧＡ）、円形脱毛症（ＡＡ）、牽引性脱毛症（ＴＡ）、および前頭の線維化性脱毛症が挙げられる。円形脱毛症（ＡＡ）、非瘢痕性の炎症性抜け毛障害、炎症性の抜け毛障害は、米国における皮膚科学患者の約２％の原因である抜け毛の一般的形態であり、そして、成人および子供において禿頭症を生じる。男性ホルモン脱毛症は、男性における最も一般的な型の抜け毛であるが、アンドロゲン代謝の変化はまた、女性の抜け毛の型の原因となり得る。これらの障害は、非瘢痕性であるが、永久的な濾胞の減少は、ＡＧＡ、ＡＡおよびＴＡの後期に生じ得る。言い換えれば、障害ＡＧＡ、ＡＡおよびＴＡは、二相のパターンを示し得る。
【０００５】
瘢痕性脱毛症、毛の破壊が疾患の過程の初期に生じる脱毛症は、数種の形態（例えば、萎縮性脱毛症（ＰＢ）、慢性皮膚エリテマトーデス（ＣＣＬＥ）、毛孔性扁平苔癬（ＬＰＰ）、解離性蜂巣炎、ざ瘡ケロイド症、中枢神経性で遠心性の瘢痕性脱毛症（ＣＣＳＡ）、および線維化脱毛症）をとる。より大きく、不規則な斑に癒着する頭皮における多数の斑を含むＰＢは、ＬＰＰまたは円板状エリテマトーデス（ＤＬＥ）の段階として生じ得る。頭皮の最上部に集中する抜け毛を含むＣＣＳＡは、濾胞変性症候群、萎縮性脱毛症、脱毛性毛包炎、および房状毛包炎を包含する。毛孔性扁平苔癬（ｌｉｃｈｅｎ  ｐｌａｎｕｓ  ｐｉｌａｒｉｓ）（ＬＰＰ）としてもまた公知である毛孔性扁平苔癬（Ｌｉｃｈｅｎ  ｐｌａｎｏｐｉｌａｒｉｓ）は、抜け毛の数個の散在した病巣を含み、そして、Ｇｒａｈａｍ−Ｌｉｔｔｌｅ症候群および前頭の線維化脱毛症を包含する。ＣＣＬＥは、鱗状の班を含み、そして、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の徴候であり得る。
【０００６】
瘢痕性脱毛症は、炎症性プロセスによって毛包が特異的に破壊される障害を含むが、毛包が、近くの炎症の副作用として破壊される障害も含み、ここで、それらの後者の障害としては、例えば、皮膚サルコイド、限局性強皮症、リポイド類壊死症、尋常性狼瘡などが挙げられる（例えば、非特許文献６；非特許文献７；非特許文献８；非特許文献９；非特許文献１０；非特許文献１１；非特許文献１２を参照のこと）。
【０００７】
多くの観察によって、脱毛症（例えば、ＡＡ、ＡＧＡ、ＰＢ、ＬＰＰ、およびＣＣＳＡ）における免疫成分が実証された。脱毛症は、浸潤または免疫細胞（例えば、マクロファージ、Ｔ細胞、肥満細胞、好中球、ランゲルハンス細胞、または好酸球）の活性化によって特徴付けられる。円形脱毛症の研究によって、これらの浸潤する免疫細胞のほとんどが、毛包周囲および毛鞘に存在すると実証された。毛包上皮細胞（例えば、ケラチノサイト）の活性化状態の変化はまた、例えば、細胞接着分子の増加した発現および濾胞の自己抗原の増加した発現によって、免疫応答を促進する。
【０００８】
免疫細胞浸潤に加えて、サイトカイン発現は、例えば、ＩＬ−１β、インターフェロン−γ（ＩＦＮγ）、ＩＬ−２、ＩＬ−６およびＩＬ−１０の研究によって示されるように、脱毛症の病理学に寄与する。さらに、炎症誘発性神経伝達物質、サブスタンスＰの増加した発現が、円形脱毛症において見出されている（例えば、非特許文献１３、非特許文献１４、非特許文献１５、非特許文献１６、非特許文献１７、非特許文献１８、非特許文献１９、非特許文献２０、非特許文献２１、非特許文献２２、非特許文献２３、非特許文献２４、非特許文献２５、非特許文献１０を参照のこと）。
【０００９】
介入研究によって、円形脱毛症の免疫成分もまた実証された。ＣＤ８＋Ｔ細胞の枯渇は、脱毛症の改善をもたらすが、ＣＤ８＋Ｔ細胞の注入は、脱毛症の獲得をもたらす。別のアプローチにおいて、免疫細胞の特異的活性化レセプター（ＣＤ４４）のブロックは、脱毛症の効果的な処置であることが示された（非特許文献２６、非特許文献２７、非特許文献２８、非特許文献２９）。
【非特許文献１】Ａｂｂａｓら（編）、「Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、２０００年、Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏ．、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ
【非特許文献２】ＯｐｐｅｎｈｅｉｍおよびＦｅｌｄｍａｎｎ（編）、「Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ」、２００１年、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ
【非特許文献３】ｖｏｎ  ＡｎｄｒｉａｎおよびＭａｃｋａｙ、「Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．」、２０００年、第３４３巻、ｐ．１０２０−１０３４
【非特許文献４】ＤａｖｉｄｓｏｎおよびＤｉａｍｏｎｄ、「Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．」、２００１年、第３４５巻、ｐ．３４０−３５０
【非特許文献５】ＮａｔｈａｎおよびＭｕｌｌｅｒ、「Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、２００１年、第２巻、ｐ．１７−１９
【非特許文献６】ＭｃＥｌｗｅｅおよびＨｏｆｆｍａｎｎ、「Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．」、２００２年、第２７巻、ｐ．４１０−４１７
【非特許文献７】Ｓｐｅｒｌｉｎｇ、「Ｊ．Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｐａｔｈｏｌ．」、２００１年、第２８巻、ｐ．３３３−３４２
【非特許文献８】Ｓｐｅｒｌｉｎｇら、「Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．」、２０００年、第１３６巻、ｐ．２３５−２４２
【非特許文献９】Ｚｉｎｋｅｒｎａｇｅｌら、「Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．」、２０００年、第１３６巻、ｐ．２０５−２１１
【非特許文献１０】Ａｍａｔｏら、「Ｉｎｔ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．」、２００２年、第４１巻、ｐ．８−１５
【非特許文献１１】Ｈｏｆｆｍａｎ、「Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．」、２００２年、第２７巻、ｐ．３７３−３８２
【非特許文献１２】Ｂｉｒｃｈら、「Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．」、２００２年、第２７巻、ｐ．３８３−３８８
【非特許文献１３】Ｅｌｓｔｏｎら、「Ｊ．Ａｍ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．」、２０００年、第３７巻、ｐ．１０１−１０６
【非特許文献１４】Ｅｌ  Ｄａｒｏｕｔｉら、「Ｊ．Ａｍ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．」、２０００年、第４２巻、ｐ．３０５−３０７
【非特許文献１５】Ｂｏｄｅｍｅｒら、「Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．」、２０００年、第１１４巻、ｐ．１１２−１１６
【非特許文献１６】Ｇｉｌｈａｒら、「Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．」、１９９８年、第１０１巻、ｐ．６２−６７
【非特許文献１７】ＭｃＥｌｗｅｅら、「Ｂｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．」、１９９６年、第１３５巻、ｐ．２１１−２１７
【非特許文献１８】Ｔｏｙｏｄａら、「Ｂｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．」、２００１年、第１４４巻、ｐ．４６−５４
【非特許文献１９】ＳｕｌｌｉｖａｎおよびＫｏｓｓａｒｄ、「Ａｕｓｔｒａｌａｓ  Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．」、１９９８年、第３９巻、ｐ．２０７−２１８
【非特許文献２０】Ｈｏｆｆｍａｎｎら、「Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．」、１９９４年、第１０３巻、ｐ．５３０−５３３
【非特許文献２１】Ｐｒｉｃｅ、「Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｓｙｍｐ．Ｐｒｏｃ．」、２００３年、第８巻、ｐ．２０７−２１１
【非特許文献２２】Ｓｐｅｒｌｉｎｇら、「Ｊ．Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｐａｔｈｏｌ．」、２００１年、第２８巻、ｐ．３３３−３４２
【非特許文献２３】Ｍｉｌｌｉｋａｎ、「Ｉｎｔ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．」、２００１年、第４０巻、ｐ．４７５−４７６
【非特許文献２４】Ｍａｈｅら、「Ｉｎｔ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．」、２０００年、第３９巻、ｐ．５７６−５８４
【非特許文献２５】Ｙｏｕｎｇら、「Ｊ．Ａｍ．Ｏｓｔｅｏｐａｔｈ．Ａｓｓｏｃ．」、１９９１年、第９１巻、ｐ．７６５−７７１
【非特許文献２６】Ｈｏｆｆｍａｎｎ、「Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｓｙｍｐ．Ｐｒｏｃ．」、１９９９年、第４巻、ｐ．２３５−２３８
【非特許文献２７】ＫａｌｉｓｈおよびＧｉｌｈａｒ、「Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｓｙｍｐ．Ｐｒｏｃ．」、２００３年、第８巻、ｐ．１６４−１６７
【非特許文献２８】Ｔｓｕｂｏｉら、「Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．」、１９９９年、第２６巻、ｐ．７９７−８０２
【非特許文献２９】Ｚｏｌｌｅｒら、「Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．」、２００２年、第１１８巻、ｐ．９８３−９９２
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
脱毛症は、ほとんど理解されていない障害であり、利用可能な処置は、十分に効果的ではない。本発明は、例えば、ＣＤ２００のアゴニストおよびアンタゴニストを使用して、処置および診断する方法を提供することによって、この必要性を満たす。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
（発明の要旨）
本発明は、ＣＤ２００が、脱毛症を阻害し得る発見に一部基づく。
【００１２】
本発明は、ＣＤ２００またはＣＤ２００Ｒのアゴニストの有効量を被験体に投与する工程を包含する、毛包に関連する状態または障害を処置する方法を提供する。また、上記の方法が提供され、ここで、そのアゴニストは、ＣＤ２００またはＣＤ２００Ｒに特異的に結合する抗体の抗原結合部位由来である。別の局面において、本発明は、上記の方法を提供し、ここで、そのアゴニストは、ポリクローナル抗体；モノクローナル抗体；ヒト化抗体、またはそのフラグメント；Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはＦｖフラグメント；二重特異性抗体；抗体のペプチド模倣物；あるいは低分子を含む。また、上記の方法が提供され、ここで、その二重特異性抗体は、ＣＤ２００Ｒおよび活性化レセプターに特異的に結合し；そして、上記の方法におけるアゴニストは、ＣＤ２００の細胞外領域に由来する可溶性ポリペプチドであって、ＣＤ２００Ｒに特異的に結合する可溶性ポリペプチド；またはＣＤ２００Ｒの細胞外領域に由来する可溶性ポリペプチドであって、ＣＤ２００に特異的に結合する可溶性ポリペプチドを含む。
【００１３】
本発明の別の実施形態は、有効量のＣＤ２００またはＣＤ２００Ｒのアゴニストを被験体に投与する工程を包含する、毛包の状態または障害を処置する方法を提供し、ここで、そのアゴニストまたはアンタゴニストは核酸を含み；その核酸は、ＣＤ２００またはＣＤ２００Ｒ；あるいはＣＤ２００の細胞外領域またはＣＤ２００Ｒの細胞外領域に由来する可溶性ポリペプチドをコードする。
【００１４】
本発明のさらに別の局面は、ＣＤ２００またはＣＤ２００Ｒのアゴニストの有効量を被験体に投与する工程を包含する、毛包の状態または障害を処置する方法を提供し；ここで、その状態または障害は脱毛症を含み、そして、そのアゴニストは、脱毛症を改善するか、または毛髪の成長を増加させ；ここで、その脱毛症は、瘢痕性脱毛症または非瘢痕性脱毛症を含み；上記方法における脱毛症は、男性ホルモン脱毛症（ＡＧＡ）；円形脱毛症（ＡＡ）；萎縮性脱毛症（ＰＢ）；毛孔性扁平苔癬（ＬＰＰ）；または線維化脱毛症（ＦＡ）を含み；および上記方法における状態または疾患は、抜け毛または禿頭症；毛包の皮層における線維症；濾胞内水腫；毛包の細胞のアポトーシス；免疫細胞による毛包の浸潤；毛包色素脱失；あるいは過剰毛を含む。
【００１５】
さらに、本発明は、ＣＤ２００またはＣＤ２００Ｒのアゴニストの有効量を被験体に投与する工程を包含する、毛包の状態または障害を処置する方法を提供し、ここで、そのアゴニストは、インスリン様増殖因子−１またはインターフェロン−γの増加した発現を生じ；上記方法におけるＣＤ２００は、外毛根鞘；ケラチノサイト；ランゲルハンス細胞；ケラチン−１４発現細胞；あるいは毛包幹細胞または遷移増幅細胞（ｔｒａｎｓｉｔ  ａｍｐｌｉｆｙｉｎｇ  ｃｅｌｌ）によって発現され；ならびに、上記方法における障害は脱毛症であり、そして、そのアゴニストは、脱毛症を改善するか、または毛髪の成長を増加させる。
【００１６】
本発明は、毛髪の成長を減少または阻害するために、ＣＤ２００またはＣＤ２００Ｒのアンタゴニストを投与する工程を包含する、過剰毛髪の成長に関連する障害または状態の処置を提供する。
【００１７】
別の実施形態において、本発明は、結合組成物と生物学的サンプルとを接触させる工程を包含する、毛包の状態または障害を診断する方法を提供し、ここで、その結合組成物は、ＣＤ２００またはＣＤ２００Ｒに特異的に結合する工程、およびその結合組成物と生物学的サンプルとの特異的結合を測定または決定する工程ならびに上記の方法における生物学的サンプルは、毛包の状態または障害を罹患した組織；あるいはコントロールの被験体または罹患していない組織の毛包に由来する。区画およびＣＤ２００またはＣＤ２００ＲのアゴニストあるいはＣＤ２００またはＣＤ２００Ｒをコードするポリヌクレオチドに特異的にハイブリダイズする核酸を含むキットもまた提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
（詳細な説明）
添付の特許請求の範囲を含む、本明細書中で使用される場合、「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」のような語の単数形は、文脈が、他に明確に指示しない限り、それらの対応する複数形の参照を包含する。本明細書中に引用した全ての参考文献は、各々の個々の刊行物、特許出願、または特許が、参考として援用されるように具体的かつ個々に示したような同様の範囲に対して参考として援用される。
【００１９】
（Ｉ．定義）
分子の「活性」とは、リガンドまたはレセプターへの分子の結合、触媒活性、遺伝子発現を刺激する能力、抗原活性、他の分子の活性の調節などを記載するか、またはいい得る。分子の「活性」とはまた、細胞−細胞間相互作用（例えば、付着）を調節または維持する際の活性、あるいは細胞の構造（例えば、細胞膜または細胞骨格）を維持する際の活性をいい得る。「活性」とはまた、比活性（例えば、［触媒活性］／［ｍｇタンパク質］、または［免疫学的活性］／［ｍｇタンパク質］など）を意味し得る。
【００２０】
動物、ヒト、実験上の被験体、細胞、組織、器官、または生物学的流体に適用される場合、「投与」および「処置」とは、外因性の医薬、治療薬、診断薬または組成物と、その動物、ヒト、被験体、細胞、組織、器官、または生物学的流体との接触をいう。「投与」および「処置」とは、例えば、治療方法、薬物動態学方法、診断方法、研究方法、および実験的方法をいい得る。細胞の処置は、試薬と細胞との接触、および流体が細胞と接触する試薬と流体との接触を包含する。「投与」および「処置」とはまた、例えば、試薬、診断組成物、結合組成物または別の細胞による、細胞のインビトロおよびエキソビボでの処置を意味する。処置は、例えば、混合された細胞反応において、あるいは研究被験体、動物被験体、またはヒト被験体に対する投与のために、精製された免疫細胞を使用する方法を包含する。本発明は、細胞、精製された細胞、刺激された細胞、特定の細胞および精製された細胞において濃縮された細胞集団を用いる処置を企図する。処置はさらに、投与された試薬または投与された細胞が、代謝、分解、または保存状態によって改変される状況を包含する。
【００２１】
「アミノ酸」とは、天然に存在するアミノ酸および合成アミノ酸、ならびに天然に存在するアミノ酸と同様の様式において機能するアミノ酸類似物およびアミノ酸模倣物をいう。天然に存在するアミノ酸は、セレノメチオニンを含む、遺伝暗号によってコードされるものであり、そして、それらのアミノ酸は、ポリペプチド（例えば、ヒドロキシプロリン、Ｏ−ホスホセリン、Ｏ−ホスホチロシン、γ−カルボキシグルタメート、およびシスチン）の中へ組み込んだ後に改変されるものである。アミノ酸類似物とは、天然に存在するアミノ酸と同様の基本的な化学構造（すなわち、水素に結合するα−炭素、カルボキシル基、アミノ基、およびＲ基）を有する化合物（例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウム）をいう。そのような類似物は、Ｒ基（例えば、ノルロイシン）を改変されるか、またはペプチド骨格を改変されるが、天然に存在するアミノ酸と同様の基本的な化学構造を保持する。アミノ酸模倣物とは、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と同様の様式において機能する化学的化合物をいう。アミノ酸は、それらの一般的に公知の３文字表記またはそれらの１文字表記のいずれかによって、本明細書中で言及され得る。
【００２２】
「結合組成物」とは、標的に結合し得る分子、低分子、高分子、抗体、それらのフラグメントもしくは類似物、または可溶性レセプターをいい得る。「結合組成物」とはまた、標的に結合し得る、分子の複合体（例えば、非共有結合複合体）、イオン化された分子、および共有結合的または非共有結合的に改変された分子（例えば、リン酸化、アシル化、架橋、環化、または制限された開裂によって改変された分子）をいう。「結合組成物」とはまた、標的に結合し得る、安定剤、賦形剤、塩、緩衝剤、溶媒、または添加物と組み合わせた分子をいい得る。「結合」とは、結合組成物と標的との会合として定義され得、ここで、その会合は、結合組成物が溶液に溶解または懸濁され得る場合、結合組成物の通常のブラウン運動の減少を生じる。
【００２３】
「二重特異性抗体」とは一般に、共有結合複合体をいうが、２つの異なる抗体からの結合フラグメント、２つの異なる抗体からのヒト化結合フラグメント、または２つの異なる抗体からの結合フラグメント由来のペプチド模倣物の安定な非共有結合複合体をいい得る。各結合フラグメントは、異なる標識またはエピトープ（例えば、異なるレセプター（例えば、阻害レセプターと活性化レセプター））を認識する。二重特異性抗体は、通常、２つの異なる抗原に対する特異的結合を示す。
【００２４】
「保存的に改変された改変体」は、アミノ酸配列および核酸配列の両方に適用する。特定の核酸配列について、保存的に改変された改変体とは、同一または実質的に同一のアミノ酸配列をコードする核酸をいう。保存的置換の例は、以下の群の１つにおけるアミノ酸の、同じ群の別のアミノ酸への交換である（Ｌｅｅらによって発行された米国特許第５，７６７，０６３号；ＫｙｔｅおよびＤｏｏｌｉｔｔｌｅ（１９８２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１３２）。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖の配向性に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ；および
（７）小アミノ酸：Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ。
【００２５】
ＣＤ２００またはＣＤ２００Ｒと実質的に同じアミノ酸配列を有するが、機能的局面に実質的に影響しない、少数のアミノ酸置換、切断、または欠失を保有するポリペプチド分子に関する方法は、企図される本発明の定義内である。娘ポリペプチドが互いに会合したままである、１種以上のペプチド結合切断を含む改変体は、企図される本発明の定義内である。
【００２６】
活性または阻害における終点は、以下のようにモニタリングされ得る。例えば、細胞、毛包、ケラチノサイト、生理学的流体、組織、器官、および動物被験体またはヒト被験体の処置に対する活性、阻害、および応答は、終点によってモニタリングされ得る。この終点は、例えば、炎症、発癌性、または細胞脱顆粒もしくは分泌（例えば、サイトカイン、毒性酸素、またはプロテアーゼの放出）の徴候の所定の量または割合を含み得る。この終点は、例えば、イオン流出またはイオン輸送；細胞移動；細胞付着；細胞増殖；転移の可能性；細胞分化；および表現型の変化（例えば、炎症、アポトーシス、形質転換、細胞周期、または転移に関する遺伝子の発現の変化）の所定の量を含み得る（例えば、Ｋｎｉｇｈｔ（２０００）Ａｎｎ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｓｃｉ．３０：１４５−１５８；ＨｏｏｄおよびＣｈｅｒｅｓｈ（２００２）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ  ２：９１−１００；Ｔｉｍｍｅら、（２００３）Ｃｕｒｒ．Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ４：２５１−２６１；ＲｏｂｂｉｎｓおよびＩｔｚｋｏｗｉｔｚ（２００２）Ｍｅｄ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．８６：１４６７−１４９５；ＧｒａｄｙおよびＭａｒｋｏｗｉｔｚ（２００２）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．３：１０１−１２８；Ｂａｕｅｒら（２００１）Ｇｌｉａ  ３６：２３５−２４３；ＳｔａｎｉｍｉｒｏｖｉｃおよびＳａｔｏｈ（２０００）Ｂｒａｉｎ  Ｐａｔｈｏｌ．１０：１１３−１２６を参照のこと）。
【００２７】
阻害の程度を調べるために、例えば、所定のタンパク質、遺伝子、細胞、または生物を含むサンプルあるいはアッセイを、潜在的なアクチベーターまたはインヒビターで処理し、そのインヒビターを含まないコントロールサンプルと比較する。コントロールサンプル（すなわち、アンタゴニストで処理されない）は、１００％の相対活性値と設定される。コントロールに対する活性値が、約９０％以下、代表的には８５％以下、より代表的には８０％以下、最も代表的には７５％以下、一般的には７０％以下、より一般的には６５％以下、最も一般的には６０％以下、代表的には５５％以下、通常は５０％以下、より通常は４５％以下、最も通常は４０％以下、好ましくは３５％以下、より好ましくは３０％以下、さらにより好ましくは２５％以下、および最も好ましくは２５％未満である場合、阻害が達成される。コントロールに対する活性値が、約１１０％、一般的には少なくとも１２０％、より一般的には少なくとも１４０％、より一般的には少なくとも１６０％、多くの場合少なくとも１８０％、より多くの場合少なくとも２倍、最も多くの場合少なくとも２．５倍、通常は少なくとも５倍、より通常は少なくとも１０倍、好ましくは少なくとも２０倍、より好ましくは少なくとも４０倍、および最も好ましくは４０倍より高い場合、活性化が達成される。
【００２８】
「外因性」とは、状況に応じて生物、細胞、またはヒトの身体の外側で産生される物質をいう。「内因性」とは、状況に応じて細胞、生物、またはヒトの身体の内部に産生される物質をいう。
【００２９】
「マーカー」は、細胞、組織、器官、動物またはヒトの被験体の表現型に関する。マーカーは、例えば、細胞の精製、細胞の定量化、細胞の移動、細胞の活性化、細胞の成熟、または細胞の発達の間の細胞を検出するために使用され、そのマーカーは、インビトロおよびインビボでの研究の両方に使用され得る。活性化マーカーは、細胞活性化に関連するマーカーである。
【００３０】
「単機能性試薬」とは、例えば、標的の単一の型に特異的に結合する、抗体、抗体の結合部位由来の結合組成物、抗体模倣物、可溶性レセプター、操作された組換え体、または化学的に改変されたそれらの誘導体をいう。例えば、単機能性試薬は、ＣＤ２００レセプターに関する１種以上の機能性結合部位を含み得る。「単機能性試薬」とはまた、例えば、ＣＤ２００レセプターのための１種以上の機能性結合部位および別の型のレセプターのための１種以上の非機能性結合部位を含むポリペプチド、抗体、または他の試薬をいう。例えば、単機能性試薬は、ＣＤ２００レセプター、さらにＦｃフラグメントが、Ｆｃレセプターに特異的に結合しないように操作されたＦｃフラグメントのための抗体結合部位を含み得る。
【００３１】
「核酸」とは、一本鎖の形態または二本鎖の形態のいずれかにおけるデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドおよびそれらのポリマーをいう。用語、核酸は、遺伝子、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、およびポリヌクレオチドと交換可能に使用され得る。特定の核酸配列はまた、「対立遺伝子改変体」および「スプライス改変体」を暗黙のうちに包含する。
【００３２】
毛包の「状態」は、障害を包含するが、障害として必ずしも分類されない毛包の状態（例えば、表面的な状態または正常な生理学的な状態）もまた、包含する。毛包の障害は、細胞の障害を包含し、ここで、その細胞は、毛包細胞（例えば、前駆物質がケラチノサイトになるように決まっている毛包ケラチノサイトの前駆細胞）の同じ遺伝的系統に存在する。
【００３３】
「サンプル」とは、ヒト、動物由来のサンプル、または研究サンプル（例えば、細胞、組織、器官、流体、ガス、エアロゾル、スラリー、コロイドまたは凝固物質）をいう。この「サンプル」は、例えば、ヒトまたは動物から除去せずに、インビボにおいて試験され得るか、あるいはインビトロで試験され得る。このサンプルは、例えば、組織学的方法による処理後に試験され得る。「サンプル」とはまた、例えば、流体サンプルまたは組織サンプルを含む細胞あるいは流体サンプルまたは組織サンプルから分離された細胞をいう。「サンプル」とはまた、ヒトまたは動物から新しく得られる細胞、組織、器官、または流体、あるいは処理または貯蔵される細胞、組織、器官、または流体をいう。
【００３４】
低分子が、毛包の生理機能および障害の処置のために提供される。「低分子」は、１０ｋＤ未満、代表的には２ｋＤ未満、および好ましくは１ｋＤ未満の分子量を有する分子として定義される。低分子としては、無機分子、有機分子、無機成分を含む有機分子、放射性原子を含む分子、合成分子、ペプチド模倣物、および抗体模倣物が挙げられるが、これらに限定されない。治療上として、低分子は、細胞に、より浸透可能であり得、分解の影響を受けにくく、そして高分子より免疫応答を誘発しにくい。低分子毒素は、記載されている（例えば、Ｓｔｅｗａｒｔらによって発行された米国特許第６，３２６，４８２号を参照のこと）。
【００３５】
リガンド／レセプター、抗体／抗原、または他の結合対に関する場合、「特異的」または「選択的」結合とは、タンパク質および他の生物学的製剤の異種の集団におけるタンパク質の存在下での限定的な結合反応を示す。本発明者らの指定された条件下において、特定されたリガンドは、特定のレセプターに結合し、サンプル中に存在する他のタンパク質と有意な量で結合しない。企図された方法の抗体または抗体の抗原結合部位に由来する結合成分は、他の任意の抗体、またはそれらに由来する結合組成物との親和性より、少なくとも２倍より高い、好ましくは少なくとも１０倍より高い、より好ましくは少なくとも２０倍より高い、そして最も好ましくは少なくとも１００倍より高い、親和性または結合定数を有して、その抗原、またはそれらの改変体もしくはムテインに結合する。好ましい実施形態において、抗体は、例えば、スキャッチャード分析によって測定される場合、約１０９リットル／モルより高い親和性を有する（Ｍｕｎｓｅｎら、（１９８０）Ａｎａｌｙｔ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０７：２２０−２３９）。
【００３６】
「許容」とは、抗体に対する応答を高めるための免疫系の失敗を含む。「免疫学的寛容（ｉｍｍｕｎｅ  ｐｒｉｖｉｌｅｇｅ）」とは、許容の形態であり、例えば、抗原が、免疫細胞に近づくことができない部位に存在するので、許容が生じる（ＫａｍｒａｄｔおよびＭｉｔｃｈｉｓｏｎ（２００１）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：６５５−６６４；ＷａｌｄｍａｎｎおよびＣｏｂｂｏｌｄ（１９９８）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６：６１９−６４４；ＯｈａｓｈｉおよびＤｅＦｒａｎｃｏ（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：７４４−７５９；Ｌｉｕ（１９９７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８６：６２５−６２９；ＷｏｏｄおよびＳａｋａｇｕｃｈｉ（２００３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ３：１９９−２１０；Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈら（２０００）Ｂｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１４２：８６２−８７３；Ｐａｕｓら（２００３）Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｓｙｍｐ．Ｐｒｏｃ．８：１８８−１９４；Ｔａｙｌｏｒ（２００３）Ｏｃｕｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｎｆｌａｍｍ．１１：２３１−２４１；Ｆｅｒｆｕｓｏｎら（２００２）Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：１５３−１７２；Ｓｔｅｉｎｍａｎら（２００３）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：６８５−７１１；ＳｔｒｅｉｌｅｉｎおよびＳｔｅｉｎ−Ｓｔｒｅｉｌｅｉｎ（２０００）Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌ．６７：４７９−４８７）。
【００３７】
ヒト被検体、家畜被検体、研究被検体に適用する場合、「処置」とは、適用を研究および診断するための、治療的処置、予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）手段または予防（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）手段をいう。ヒト被検体、家畜被検体、もしくは研究被検体、または細胞、組織、もしくは器官に適用する場合、「処置」とは、ＣＤ２００アゴニスト（例えば、ＣＤ２００の可溶性の型またはＣＤ２００Ｒとアゴニストの抗体）またはＣＤ２００のアンタゴニストと、ヒト被検体または動物被検体、あるいは細胞、組織、生理学的区画、または生理学的流体との接触を包含する。「細胞、組織、器官、または被検体の処置」とは、ＣＤ２００のアゴニストまたはアンタゴニストが、ＣＤ２００Ｒと接触したことを示されていない状態、あるいはＣＤ２００のアゴニストまたはアンタゴニストが、ＣＤ２００Ｒを発現する細胞と接触したことを示されていない状態を包含する。
【００３８】
治療薬の「治療的有効量」とは、意味のある患者の利益を示す（すなわち、処置される状態の症状の減少または改善を引き起こす）のに十分である薬学的処方物の各活性成分の量として定義される。薬学的処方物が、診断薬を含む場合、「治療的有効量」とは、診断を容易にする信号、画像、または他の診断パラメーターを作製するのに十分である量として定義される。薬学的処方物の有効量は、要因（例えば、個体の感受性の程度、個体の年齢、個体の性別、および個体の体重、ならびに個体の特有の応答）に従って、変動する（例えば、米国特許第５，８８８，５３０号を参照のこと）。
【００３９】
（ＩＩ．概略）
哺乳動物の皮膚は、真皮（内部）層および表皮（外部）層からなる。表皮は、ランゲルハンス細胞およびメラニン細胞を含む、他の細胞の型を有するほとんど完全にケラチノサイト（９５％）からなる。表皮は、マウスにおいて急速に成長し、７日ごとに、入れ替わる。皮膚における幹細胞は、「遷移増幅細胞」を産生するために分裂し、次いで、それは、３〜５回以上分裂し、最終的に分化された細胞の最終産物となる。
【００４０】
皮膚の表面は、２つの領域である毛包および毛包の間の領域（すなわち、毛包内表皮）を含む。毛包は、内毛根鞘および外毛根鞘を形成する上皮細胞の層によって取り囲まれる毛幹を含む。各毛包について、増殖および脱毛の３つの循環的な段階：増殖（成長期）；退行（退行期）；および静止（休止期）が、永久に繰り返される。退行において、例えば、濾胞のより下位の領域におけるケラチノサイトは破壊され、破壊は、アポトーシスによって媒介される。
【００４１】
表皮の幹細胞は、「バルジ（ｂｕｌｇｅ）」と呼ばれる毛包の構造に集団形成するか、または位置する。バルジにおける幹細胞は分裂し、そして毛包の種々の部分、および濾胞間の表皮に新しい細胞を供給する。「バルジ」は、毛包の非循環部分に生じる。多くのマーカーは、分化の過程の間に、表皮細胞と会合される。例えば、表皮細胞が、最終的な分化に関係する場合、それらは、ケラチン−５およびケラチン−１４の発現からケラチン−１およびケラチン−１０の発現に転換する。毛包において、ケラチン−５およびケラチン−１４は、外毛根鞘と会合される傾向があるが、ケラチン−１およびケラチン−１０は、内毛根鞘に存在する（例えば、Ｊａｎｅｓら（２００２）Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１９７：４７９−４９１；ＡｌｏｎｓｏおよびＦｕｃｈｓ（２００３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１００：１１８３０−１１８３５；Ｂｒａｕｎら（２００３）Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １３０：５２４１−５２５５；Ｍｕｌｌｅｒ−Ｒｏｖｅｒら（２００１）Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１１７：３−１５；ＮｉｅｍａｎｎおよびＷａｔｔ（２００２）ＴＲＥＮＤＳ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１２：１８５−１９２；Ｂｙｒｎｅら（１９９４）Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １２０：２３６９−２３８３；Ｖａｓｉｏｕｋｈｉｎら（１９９９）Ｐｒｏｃ．Ａｃａｄ．Ｎａｔｌ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９６：８５５１−８５５６を参照のこと）。
【００４２】
脱毛症は、抜け毛または禿頭症を包含する。脱毛症は、非瘢痕性脱毛症および瘢痕性脱毛症と分類されており、脱毛症の各形態は、特定の組織学的特徴、抜け毛の外観（すなわち、はげた点の形状および位置）、ならびに影響を受ける人種、性別および年齢の群によって、特徴付けられる。脱毛症の両方の型は、免疫学的成分（例えば、本発明において実証された炎症と一致する炎症）を有する。瘢痕性脱毛症および非瘢痕性脱毛症は、本発明の観察において見出される真皮層の線維症と一致した線維症を含む（例えば、Ｚｉｎｋｅｒｎａｇｅｌら（２０００）Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１３６：２０５−２１１；ＺｉｎｋｅｒｎａｇｅｌおよびＴｒｕｅｂ（２０００）Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１３６：２０５−２１１；Ｋｏｓｓａｒｄ（１９９４）Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１３０：７７０−７７４；Ｗｈｉｔｉｎｇ（２００３）Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１３９：１５５５−１５５９；Ｃｈｉｅｒｅｇａｔｏら（２００３）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．４２：３４２−３４５を参照のこと）。
【００４３】
以下の実験は、毛包に関連するケラチノサイトのアポトーシスを示す。アポトーシスは、瘢痕性脱毛症および非瘢痕性脱毛症において実証されている。例えば、円形脱毛症は、アポトーシス、ならびに「暗細胞」形質転換、および壊死を含む、細胞変性に関連する。この障害はまた、毛包の数の減少、線維症の減少、および活動的な増殖期（成長期）における毛包の数の減少を生じる。アポトーシスまた、例えば、男性ホルモン性脱毛症、萎縮性脱毛症、および前部線維化脱毛症において実証されている（例えば、Ｔｏｂｉｎ（１９９７）Ｍｉｃｒｏｓｃ．Ｒｅｓ．Ｔｅｃｈ．１５：４４３−４５１；Ｔｏｂｉｎら（１９９１）Ａｍ  Ｊ  Ｄｅｒｍａｔｏｐａｔｈｏｌ．１３：２４８−５６；Ｂｅｒｇｆｅｌｄ（１９８９）Ａｄｖ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．４：３０１−３２０；ＴｒｕｅｂおよびＴｏｒｒｉｃｅｌｌｉ（１９９８）Ｈａｕｔａｒｚｔ  ４９：３８８−３９１；ＭｏｒｇａｎおよびＲｏｓｅ（２００３）Ａｎｎ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ  Ｓｃｉ．３３：１０７−１１２；Ｐｉｅｒａｒｄ−ＦｒａｎｃｈｉｍｏｎｔおよびＰｉｅｒａｒｄ（１９８６）Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  １７２：２５４−２５７を参照のこと）。
【００４４】
本発明は、毛包の免疫学的寛容における変化または崩壊から生じる障害を処置するための方法を提供する。例えば、円形脱毛症は、毛包の免疫学的寛容における崩壊に関与する（例えば、Ｐｅｒｒｅｔら（１９８４）Ａｃｔａ  Ｄｅｒｍ．Ｖｅｎｅｒｅｏｌ．６４：２６−３０；Ｒａｎｋｉら（１９８４）Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．８３：７−１１；Ｂｉｌｌｉｎｇｈａｍ（１９７１）Ａｄｖ．Ｂｉｏｌ．Ｓｋｉｎ  １１：１８３−１９８；ＢｉｌｌｉｎｇｈａｍおよびＳｉｌｖｅｒｓ（１９７１）Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．５７：２２７−２４０；ＣｌａｅｓｓｏｎおよびＨａｒｄｔ（１９７０）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  １０：３４９−３５１；Ｐａｕｓら（２００３）Ｂｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１３１：１７７−１８３；Ｈａｒｒｉｓｔら（１９８３）Ｂｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１０９：６２３−６３３；Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈら（２０００）Ｂｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１４２：８６２−８７３；Ｗｅｌｋｅｒら（１９９７）Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｒｅｓ．２８９：５５４−５５７；Ｓｌｏｍｉｎｓｋｉら（１９９８）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １４４８：１４７−１５２；Ｂｏｔｃｈｋａｒｅｒら（１９９９）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８８５：４３３−４３９；Ｆｕｚｚｉら（２００２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：３１１−３１５；Ｓａｆａｖｉら（１９９５）Ｍａｙｏ  Ｃｌｉｎ．Ｐｒｏｃ．７０：６２８−６３３；Ｅｉｃｈｍｕｌｌｅｒら（１９９８）Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．４６：３６１−３７０を参照のこと）。
【００４５】
（ＩＩＩ．結合組成物）
本発明の方法によって提供される結合組成物は、試薬（例えば、ＣＤ２００、ＣＤ２００レセプター（別名ＣＤ２００Ｒ））、可溶性レセプター、および抗体、ならびにこれらの試薬をコードする核酸を含有する。ＣＤ２００およびＣＤ２００レセプターは、膜結合タンパク質である。ＣＤ２００は、広範な組織分布を有するが、ＣＤ２００Ｒは、例えば、骨髄性細胞で発現される。ＣＤ２００およびＣＤ２００Ｒによって媒介される細胞シグナル伝達は、免疫細胞活性の阻害を生じる。例えば、ＣＤ２００の可溶性の型またはアゴニストの抗ＣＤ２００Ｒ抗体を有するＣＤ２００／ＣＤ２００Ｒシグナル伝達経路の刺激は、種々の炎症性障害の動物モデルを処置する際に効果的である。これと一致するのは、例えば、遮断抗ＣＤ−２００抗体で処置することによる、またはＣＤ２００ノックアウト（ＣＤ２００ＫＯ）技術によるＣＤ２００／ＣＤ２００Ｒシグナル伝達経路の阻害が、炎症性障害に対する感受性を促進または増加することである。これらの炎症性障害としては、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）、小神経膠細胞媒介性神経損傷、コラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）、移植拒絶（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ）、および移植片拒絶（ｇｒａｆｔ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ）が挙げられる。さらに、ＣＤ２００／ＣＤ２００Ｒシグナル伝達のアンタゴニストを有する処置は、腫瘍細胞に対する免疫応答の増加を生じる（例えば、Ｈｏｅｋら（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９０：１７６８−１７７１；Ｇｏｒｃｚｙｎｓｋｉら（２００２）Ｃｌｉｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０４：２５６−２６４；Ｇｏｒｃｚｙｎｓｋｉ（２００１）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：２３３１−２３３７；Ｇｏｒｃｚｙｎｓｋｉら（２００１）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２６：２２０−２２９；Ｂａｒｃｌａｙら（２００２）ＴＲＥＮＤＳ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：２８５−２９０を参照のこと）。
【００４６】
ＣＤ２００は広範に分布し、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、ニューロン、血管内皮、腎糸球体、黄体、栄養膜、および平滑筋によって発現される。ＣＤ２００Ｒは、より狭く分布し、例えば、顆粒球上、単球上、Ｔ細胞上、Ｂ細胞上、ＮＫ細胞上、ＮＫＴ細胞上、好中球上、好塩基球上、および単球上に見出される。白血病の細胞もまた、ＣＤ２００を発現することを示されている（例えば、Ｇｏｒｃｚｙｎｓｋｉら（２００１）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２６：２２０−２２９を参照のこと）。ＣＤ２００Ｒは、げっ歯類およびヒトの両方における遺伝子のファミリーとして存在する。マウスのＣＤ２００Ｒは、ｍＣＤ２００Ｒとして存在するが、また、関連するＣＤ２００Ｒ様タンパク質（ＣＤ２００ＲＬ）の群としても存在し、ｍＣＤ２００ＲＬａ、ｍＣＤ２００ＲＬｂ、ｍＣＤ２００ＲＬｃ、およびｍＣＤ２００ＲＬｄと命名される。ｍＣＤ２００ＲＬａおよびｍＣＤ２００ＲＬｂの各対はＤＡＰ１２を有し、そして活性化シグナルを送達し、阻害シグナルを送達しない。ｍＣＤ２００ＲＬａおよびｍＣＤ２００ＲＬｂは、ＣＤ２００に結合しないようである。ヒトＣＤ２００Ｒは、ｈＣＤ２００ＲおよびｈＣＤ２００ＲＬａとして存在するが、ｈＣＤ２００ＲＬａは発現されないようである（Ｗｒｉｇｈｔら（２００１）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １０２：１７３−１７９；Ｗｒｉｇｈｔら（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７１：３０３４−３０４６；ＬａｎｉｅｒおよびＢａｋｋｅｒ（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  ２１：６１１−６１４）。
【００４７】
本発明の方法は、ＣＤ２００に対する遮断抗体、ＣＤ２００Ｒに対する遮断抗体、ＣＤ２００Ｒに対するアゴニストの抗体、（例えば、可溶性レセプターの形態における）ＣＤ２００またはＣＤ２００Ｒの細胞外ドメインに由来するポリペプチド、（例えば、可溶性レセプターの形態における）ＣＤ２００Ｒの細胞外ドメインに由来するポリペプチド、およびこれらの細胞外ドメインの融合タンパク質を提供する。ＣＤ２００およびＦｃフラグメントの２つの細胞外ドメインを含む融合タンパク質は、「ＣＤ２００Ｆｃ融合タンパク質」、「ＣＤ２００Ｆｃ」、「ＣＤ２００−Ｉｇ」、「ＣＤ２００  Ｉｇ融合タンパク質」および「イムノアドヘシン」として公知である。Ｉｇ融合タンパク質は、Ｆｃレセプター（ＦｃＲ）および相補体への結合を防止するために、変異（Ｆｃの定常領域におけるＤ２６５Ａ）を含み得る（例えば、Ｉｄｕｓｏｇｉｅら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４；Ｗｒｉｇｈｔら（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７１：３０３４−３０４６；Ｇｏｒｃｚｙｎｓｋｉら（２００２）Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０４：２５６−２６４；Ｃｈｅｎら（１９９７）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｓ．Ａｃｔａ  １３６２：６−１０を参照のこと）。
【００４８】
成熟したヒトＣＤ２００の細胞外領域は、ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００５９３５（ｇｉ：１５４５１９０４）のおよそアミノ酸３１〜２３２に相当すると予想される（また、Ｃｈｅｎら（１９９７）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １３６２：６−１０を参照のこと）。成熟したヒトＣＤ２００Ｒの細胞外領域は、ＧｅｎＢａｎｋ  Ｑ８ＴＤ４６（ｇｉ：２６００６８２３）のおよそアミノ酸２７〜２４２に相当すると予想される（Ｗｒｉｇｈｔら（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７１：３０３４−３０４６もまた参照のこと）。可溶性レセプターに関する一般的な方法が、利用可能である（例えば、Ｍｏｎａｈａｎら（１９９７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５９：４０２４−４０３４；Ｍｏｒｅｌａｎｄら（１９９７）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３７：１４１−１４７；Ｂｏｒｉｓｈら（１９９９）Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．１６０：１８１６−１８２３；Ｕｃｈｉｂａｙａｓｈｉら（１９８９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４２：３９０１−３９０８を参照のこと）。例えば、ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００５９３５のアミノ酸３１〜２３０；アミノ酸３１〜２３１；アミノ酸３１〜２３２；アミノ酸３１〜２３３；アミノ酸３１〜２３４；およびアミノ酸３１〜２３５を含むＣＤ２００の可溶性ポリペプチドが提供される。例えば、ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿Ｑ８ＴＤ４６のアミノ酸２７〜２６２；アミノ酸２７〜２６３；アミノ酸２７〜２６４；アミノ酸２７〜２６５；アミノ酸２７〜２６６；およびアミノ酸２７〜２６７を含むＣＤ２００Ｒの可溶性ポリペプチドが提供される。
【００４９】
ヒトＣＤ２００の増加した抗原性の領域は、Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩ  Ｓｕｉｔｅ７（登録商標）（Ａｃｃｅｌｒｙｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用するＰａｒｋｅｒプロット分析に従って、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００５９３５のアミノ酸３６〜４２；アミノ酸５４〜５９；アミノ酸６５〜７４；アミノ酸７９〜８３；アミノ酸８７〜９３；アミノ酸１１１〜１１８；アミノ酸１５９〜１６８；アミノ酸１７５〜１９７；アミノ酸２０２〜２１１；および２６０〜２６８に存在するが、ヒトＣＤ２００Ｒの増加した抗原性の領域は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ  Ｑ８ＴＤ４６のアミノ酸２９〜４０；アミノ酸７９〜１０４；アミノ酸１０９〜１１６；アミノ酸１３６〜１４０；アミノ酸１５９〜１７８；アミノ酸１８２〜１９１；アミノ酸１９４〜２０４；アミノ酸２３５〜２４２；アミノ酸２６６〜２８１；アミノ酸２８４〜３００；およびアミノ酸３０３〜３１３；において存在する。インタクトなタンパク質、変性したタンパク質、またはタンパク質の遊離ペプチドフラグメントもしくは結合ペプチドフラグメントが、免疫のために使用され得る（例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ、ｐｐ．１３９−２４３を参照のこと）。
【００５０】
モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、およびヒト化抗体が、調製され得る（例えば、ＳｈｅｐｅｒｄおよびＤｅａｎ（編）（２０００）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ；ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＤｕｂｅｌ（編）（２００１）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ、ｐｐ．１３９−２４３；Ｃａｒｐｅｎｔｅｒら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：６２０５；Ｈｅら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：１０２９；Ｔａｎｇら（１９９９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：２７３７１−２７３７８；Ｂａｃａら（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３；ＦｏｏｔｅおよびＷｉｎｔｅｒ（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４；４８７−４９９；Ｖａｓｑｕｅｚらの発行された米国特許第６，３２９，５１１号を参照のこと）。
【００５１】
ヒト化の代替は、ファージ提上に示されたヒト抗体ライブラリーまたはトランスジェニックマウスにおけるヒト抗体ライブラリーを使用することである（Ｖａｕｇｈａｎら（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：３０９−３１４；Ｂａｒｂａｓ（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １：８３７−８３９；Ｍｅｎｄｅｚら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６−１５６；ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＣｈａｍｅｓ（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  ２１：３７１−３７７；Ｂａｒｂａｓら（２００１）Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｋａｙら（１９９６）Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ；ｄｅ  Ｂｒｕｉｎら（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：３９７−３９９）。
【００５２】
単鎖抗体および二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）が、記載されている（例えば、Ｍａｌｅｃｋｉら（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９９：２１３−２１８；Ｃｏｎｒａｔｈら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：７３４６−７３５０；Ｄｅｓｍｙｔｅｒら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：２６２８５−２６２９０；ＨｕｄｓｏｎおよびＫｏｒｔｔ（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：１７７−１８９；および米国特許第４，９４６，７７８号を参照のこと）。二官能性抗体が提供される（例えば、Ｍａｃｋら（１９９５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９２：７０２１−７０２５；Ｃａｒｔｅｒ（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４８：７−１５；Ｖｏｌｋｅｌら（２００１）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  １４：８１５−８２３；Ｓｅｇａｌら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４８：１−６；Ｂｒｅｎｎａｎら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１−８３；Ｒａｓｏら（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：２７６２３；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２−１２０７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら（１９９１）ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５−３６５９；ならびに米国特許第５，９３２，４４８号、同第５，５３２，２１０号、および同第６，１２９，９１４号を参照のこと）。
【００５３】
本発明は、ＣＤ２００Ｒ（阻害レセプター）、およびＩＴＡＭ含有レセプターである活性化レセプターを含む活性化レセプターに特異的に結合し得る二重特異性抗体を提供する。ＣＤ２００Ｒおよび活性化レセプターへの二官能性抗体の同時結合は、ＣＤ２００Ｒと活性化レセプターとの交差結合を生じる。例えば、本発明は、ＣＤ２００ＲおよびＴ細胞レセプターのポリペプチドに結合する二重特異性抗体；ＣＤ２００ＲおよびＦｃεＲＩに結合する二重特異性抗体；ならびにＣＤ２００ＲおよびＦｃγＲＩＩＡに結合する二重特異性抗体を提供する。コンセンサスＩＴＡＭ配列は、ＹｘｘＬ／Ｉｘ６−８ＹｘｘＬ／Ｉであり、ここで、（Ｙ）はリン酸化され得、活性化レセプターおよび／または副タンパク質（ａｃｃｅｓｓｏｒｙ  ｐｒｏｔｅｉｎ）のシグナル伝達特性における変化を生じる。ＩＴＡＭモチーフは、活性化レセプターそれ自体の内部または活性化レセプターに結合する副タンパク質の内部に存在し得、それによって、活性化レセプターに活性化特性を与える。ＩＴＡＭモチーフ含有レセプターを含む活性化レセプターとしては、例えば、ＣＤ３、ＣＤ２、ＣＤ１０、ＣＤ１６１、ＤＡＰ−１２、ＫＡＲ、ＫＡＲＡＰ、ＦｃεＲ１、ＦｃεＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＣ、ＦｃγＲＩＩＩ／ＣＤ１６、Ｔｒｅｍ−１、Ｔｒｅｍ−２、ＣＤ２８、ｐ４４、ｐ４６、Ｂ細胞レセプター、ＬＭＰ２Ａ、ＳＴＡＭ、ＳＴＡＭ−２、ＧＰＶＩ、およびＣＤ４０が挙げられる（例えば、Ａｚｚｏｎｉら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：３４９３；Ｋｉｔａら（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：６９０１；Ｍｅｒｃｈａｎｔら（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．７４：９１１５；Ｐａｎｄｅｙら（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：３８６３３；Ｚｈｅｎｇら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７６：１２９９９；Ｐｒｏｐｓｔら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：２２１４；Ｌｏｎｇ（１９９９）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：８７５を参照のこと）。
【００５４】
抗原の精製は、抗体の作製のために必ずしも必要ではない。動物は、目的の抗原を有する細胞で免疫され得る。次いで、脾細胞が免疫された動物から単離され得、この脾細胞は、骨髄腫細胞株と融合され得、ハイブリドーマを産生し得る（例えば、Ｍｅｙａａｒｄら（１９９７）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ７：２８３−２９０；Ｗｒｉｇｈｔら（２０００）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：２３３−２４２；Ｐｒｅｓｔｏｎら前出；Ｋａｉｔｈａｍａｎａら（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３：５１５７−５１６４を参照のこと）。
【００５５】
抗体は、通常少なくとも約１０−３ＭのＫＤ、より通常は少なくとも１０−６ＭのＫＤ、代表的には少なくとも１０−７ＭのＫＤ、より代表的には少なくとも１０−８ＭのＫＤ、好ましくは少なくとも約１０−９ＭのＫＤ、より好ましくは少なくとも１０−１０ＭのＫＤ、および最も好ましくは少なくとも１０−１１ＭのＫＤで結合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａら（２００１）Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．８５：３７９−３８９；Ｙａｎｇら（２００１）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｏｎｃｏｌ．Ｈｅｍａｔｏｌ．３８：１７−２３；Ｃａｒｎａｈａｎら（２００３）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（補遺）９：３９８２ｓ−３９９０ｓを参照のこと）。
【００５６】
ポリペプチド、抗体、および核酸は、例えば、小さい薬物分子、酵素、リポソーム、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、または融合タンパク質である抗体と結合体化され得る。抗体は、診断目的またはキットの目的に有用であり、そしてこの抗体は、例えば、色素、放射性同位体、酵素、または金属（例えば、金コロイド）と結合された抗体を含む（例えば、Ｌｅ  Ｄｏｕｓｓａｌら、（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：１６９−１７５；Ｇｉｂｅｌｌｉｎｉら、（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：３８９１−３８９８；ＨｓｉｎｇおよびＢｉｓｈｏｐ（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：２８０４−２８１１；Ｅｖｅｒｔｓら、（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８：８８３−８８９を参照のこと）。
【００５７】
本発明はまた、アンチセンス核酸として使用するためか、または低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）のための結合組成物を提供する（例えば、ＡｒｅｎｚおよびＳｃｈｅｐｅｒｓ（２００３）Ｎａｔｕｒｗｉｓｓｅｎｓｃｈａｆｔｅｎ  ９０：３４５−３５９；ＳａｚａｎｉおよびＫｏｌｅ（２００３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１２：４８１−４８６；Ｐｉｒｏｌｌｏら、（２００３）Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ９９：５５−７７；Ｗａｎｇら、（２００３）Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌ．１３：１６９−１８９；Ｃｈｅｎｇら、（２００３）Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．Ｍｅｔａｂ．８０：１２１−１２８；ＫｉｔｔｌｅｒおよびＢｕｃｈｈｏｌｚ  （２００３）Ｓｅｍｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．１３：２５９−２６５を参照のこと）。
【００５８】
本発明は、ＣＤ２００の発現またはＣＤ２００Ｒの発現を増加させる試薬を使用する方法を包含する。細胞表面上のレセプターの発現を増加させる因子は、細胞表面上の標的レセプターの有効濃度を増加させ、したがってそのレセプターに特異的な結合組成物の活性を増加させるために有用である（例えば、ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌら、（１９９１）Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌ．４９：５１１−５２４；ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌら、（１９９３）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  １４：２１５−２２１；Ｈｅｉｊｎｅｎら、（１９９７）Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６：２９−５５；ＦｒｉｄｍａｎおよびＳａｕｔｅｓ（１９９６）Ｃｅｌｌ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｌｍｍｕｎｏｇｌｏｂｉｎｓ，ＣｈａｐｍａｎおよびＨａｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ，ｐｐ．３９−４０を参照のこと）。
【００５９】
（ＩＶ．ポリペプチドおよび核酸の精製ならびに修飾）
企図される方法に使用するためのポリペプチド（例えば、抗原、抗体、および抗体フラグメント）、および核酸は、当該分野において確立される方法によって精製され得る。精製は、細胞または組織の均質化、免疫沈降およびクロマトグラフィーを包含し得る。精製または保存の間の安定性は、例えば、抗プロテアーゼ因子、抗酸化剤、イオン性界面活性剤および非イオン性界面活性剤、ならびに溶媒（例えば、グリセロールまたはジメチルスルホキシド）によって向上され得る。
【００６０】
例えば、ペプチド、ポリペプチド、および核酸の修飾としては、エピトープタグ、蛍光基または放射活性基、単糖類または少糖類、硫酸基またはリン酸基、Ｃ末端アミド、アセチル化Ｎ−基およびエステル化Ｎ−基、アシル化（例えば、脂肪酸）、鎖内部の開裂したペプチド結合，ならびに脱アミド生成物が挙げられる（例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎら、（１９８９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１４２６２−１４２７１；Ｙｏｕｎｇら、（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：３７１６１−３７１６５を参照のこと）。グリコシル化は、用いられる組換え宿主生物の性質または生理学的状態に依存する（例えば、Ｊｅｆｆｅｒｉｓ（２００１）ＢｉｏＰｈａｒｍ  １４：１９−２７；Ｍｉｍｕｒａら、（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：４５５３９−４５５４７；Ａｘｆｏｒｄ（１９９９）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １：２１９−２２９；Ｍａｌｈｏｔｒａら、（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １：２３７−２４３を参照のこと）。
【００６１】
（Ｖ．治療用組成物および治療的方法）
ＣＤ２００もしくはＣＤ２００Ｒの、アゴニストまたはアンタゴニストを含む薬学的組成物または滅菌した組成物を調製するために、試薬は薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤と混合される。治療用因子および診断用因子の処方物は、例えば、凍結乾燥粉末、スラリー、水溶液、ローション、または懸濁物の形態において、生理学的に受容可能なキャリア、賦形剤、または安定化剤と混合することによって調製され得る（例えば、Ｈａｒｄｍａｎら、（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，ＷｉｌｌｉａｍｓおよびＷｉｌｋｉｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ａｖｉｓら、（編）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら、（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら、（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ．Ｄｉｓｐｅｒｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；ＷｅｉｎｅｒおよびＫｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照のこと）。
【００６２】
治療剤のために投与レジメンを選択する工程は、数種の因子に依存し、この因子としては、血清または組織の実体の代謝回転速度、症状のレベル、実体の免疫原性、および生物学的マトリックス中の標的細胞の到達性が挙げられる。好ましくは、投与レジメンは、その患者に送達される治療剤の量を最大化し、この量は、副作用の受容可能なレベルと一致する。したがって、この生物学的に送達される量は、特定の実体および処置される状態の重症度に、一部依存する。抗体、サイトカイン、および低分子の適切な用量を選択する工程における指針が利用可能である（例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ（１９９６）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ（編）（１９９１）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｃｈ（編）（１９９３）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｅｒｔら、（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１−６０８；Ｍｉｌｇｒｏｍら、（１９９９）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６−１９７３；Ｓｌａｍｏｎら、（２００１）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３−７９２；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚら、（２０００）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３−６１９；Ｇｈｏｓｈら、（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｕｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４−３２；Ｌｉｐｓｋｙら、（２０００）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４−１６０２を参照のこと）。
【００６３】
抗体、抗体フラグメント、およびサイトカインは、持続的注入によって提供されても、例えば、１日、１週間または１週間あたり１〜７回の間隔の投薬によって提供されてもよい。投薬は、静脈内、皮下、局所的、経口的、経鼻的、経直腸的、筋肉内、脳内に提供されても、吸入によって提供されてもよい。好ましい投薬プロトコルは、顕著な望ましくない副作用を回避する最大限の用量または用量の頻度を含むものである。一般的に、１週間の総用量は、少なくとも０．０５μｇ／ｋｇ体重であり、より一般的には少なくとも０．２μｇ／ｋｇ体重であり、最も一般的には少なくとも０．５μｇ／ｋｇ体重であり、代表的には少なくとも１μｇ／ｋｇ体重であり、より代表的には少なくとも１０μｇ／ｋｇ体重であり、最も代表的には少なくとも１００μｇ／ｋｇ体重であり、好ましくは少なくとも０．２ｍｇ／ｋｇ体重であり、より好ましくは少なくとも１．０ｍｇ／ｋｇ体重であり、最も好ましくは少なくとも２．０ｍｇ／ｋｇ体重であり、最適には少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ体重であり、より最適には少なくとも２５ｍｇ／ｋｇ体重であり、そして最も適切には少なくとも５０ｍｇ／ｋｇ体重である（例えば、Ｙａｎｇら、（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４９：４２７−４３４；Ｈｅｒｏｌｄら、（２００２）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４６：１６９２−１６９８；Ｌｉｕら、（１９９９）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｎｕｒｏｓｕｒｇ．Ｐｓｙｃｈ．６７：４５１−４５６；Ｐｏｒｔｉｅｌｊｉら、（２００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：１３３−１４４を参照のこと）。低分子治療剤（例えば、ペプチド模倣物（ｍｉｍｅｔｉｃ）、天然の産物、または有機的化学物質）の望ましい用量は、モル／ｋｇ体重基準において、抗体またはペプチドに対するものとほぼ同じである。低分子治療剤の望ましい血漿中濃度は、モル／ｋｇ体重基準において、抗体に対するものとほぼ同じである。
【００６４】
特定の患者のための有効量は、処置される状態、患者の全健康状態、投与経路および投与用量に関する方法、および副作用の重症度のような因子に依存して変化し得る（例えば、Ｍａｙｎａｒｄら、（１９９６）Ａ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  ＳＯＰｓ  ｆｏｒ  Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，ＦＬ；Ｄｅｎｔ（２００１）Ｇｏｏｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ａｎｄ  Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｕｒｃｈ  Ｐｕｂｌ．，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫを参照のこと）。
【００６５】
代表的な獣医学上の被験体、実験用の被験体、または調査用の被験体としては、サル、イヌ、ネコ、ラット、マウス、ウサギ、モルモット、ウマおよびヒトが挙げられる。
【００６６】
適切な用量の決定は、例えば、処置に影響することが当該分野において公知であるかもしくは推測されるパラメーターまたは因子、あるいは処置に影響することが予測されるパラメーターまたは因子を使用して、臨床医によってなされる。一般的に、この用量は、至適用量より若干少ない量を用いて開始し、その後それは、望まれる効果または最適な効果が任意の負の副作用に対して達成されるまで、小さい増量によって増加される。重要な診断的測定としては、例えば、炎症の症状、または産生された炎症性サイトカインのレベルの測定が挙げられる。好ましくは、使用される生物製剤は、処置のために標的化された動物と同じ種に由来し、したがってその試薬に対する体液性の応答を最小化する。
【００６７】
第２の治療因子（例えば、サイトカイン、ステロイド、化学療法剤、抗生物質または放射線）を伴う同時投与または処置のための方法は、当該分野において周知である（例えば、Ｈａｒｄｍａｎら、（編）（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，第１０版．、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ；Ｐｏｏｌｅ  ａｎｄ  Ｐｅｔｅｒｓｏｎ（編）（２００１）Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｆｏｒ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａ．，ＰＡ；Ｃｈａｂｎｅｒ  ａｎｄ  Ｌｏｎｇｏ（編）（２００１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａ．，ＰＡを参照のこと）。治療剤の有効量は、その症状を、代表的には少なくとも１０％；通常は少なくとも２０％；好ましくは少なくとも約３０％；より好ましくは少なくとも４０％、そして最も好ましくは少なくとも５０％軽減する。
【００６８】
投与の経路は、例えば、局所適用もしくは皮膚適用、静脈内経路、腹腔内経路、脳内経路、筋肉内経路、眼内経路、動脈内経路、脳脊髄内経路、病巣内経路または肺の経路による注射もしくは注入、または徐放システムもしくは移植によるものである（例えば、Ｓｉｄｍａｎら、（１９８３）Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  ２２：５４７−５５６；Ｌａｎｇｅｒら、（１９８１）Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７−２７７；Ｌａｎｇｅｒ（１９８２）Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８−１０５；Ｅｐｓｔｅｉｎら、（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：３６８８−３６９２；Ｈｗａｎｇら、（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４０３０−４０３４；米国特許第６，３５０，４６６号および同第６，３１６，０２４号を参照のこと）。
【００６９】
（ＶＩ．キット）
本発明は、診断キット中のＣＤ２００のアゴニストおよびアンタゴニスト（例えば、タンパク質、そのフラグメント、抗体に由来する結合組成物、核酸、およびそのフラグメント）を使用する方法を提供する。ＣＤ２００またはＣＤ２００Ｒの検出のための結合組成物（抗体または抗体フラグメントが挙げられる）、およびその代謝産物およびその分解産物（脱アミド、限定されたタンパク質分解または加水分解による開裂、またはジスルフィド結合の酸化もしくは形成から生じる生成物が挙げられる）もまた提供される。代表的に、このキットは、ＣＤ２００ポリペプチドもしくはＣＤ２００Ｒポリペプチドのいずれか、またはその抗原フラグメント、それに対する結合組成物、あるいはストリンジェントな条件下でＣＤ２００もしくはＣＤ２００Ｒをコードする核酸にハイブリダイズし得る核酸（例えば、核酸プローブまたは核酸プライマー）を含む区画を有する。
【００７０】
このキットは、例えば、試薬および区画、試薬および使用のための説明書、または区画を伴う試薬および使用のための説明書を備え得る。この試薬は、ＣＤ２００、ＣＤ２００Ｒ、もしくは細胞外領域に由来する可溶性の変形、またはそれらの抗原性フラグメント、結合組成物、あるいは核酸を含み得る。試験化合物（例えば、生物学的試料または化学物質のライブラリーから得られた）の結合を決定するためのキットは、コントロール化合物、標識された化合物、および遊離の標識された化合物と結合型の標識された化合物とを分離するための方法を備え得る。
【００７１】
核酸プローブまたは核酸プライマーのストリンジェントなハイブリダイゼーションを可能にする条件が、利用可能である（例えば、Ｆｒｅｅｍａｎら、（２０００）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２９：１０４２−１０５５；ｄｅ  ＳｉｌｖａおよびＷｉｔｔｗｅｒ  （２０００）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｓｃｉ．Ａｐｐｌ．７４１：３−１３；Ｌｏｎｇ（１９９８）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．４２：１０１−１０９；Ｍｕｓｉａｎｉら、（１９９８）Ｈｉｓｔｏｌ．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ．１３：２４３−２４８；Ｇｉｌｌｅｓｐｉｅ（１９９０）Ｖｅｔ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２４：２１７−２３３；Ｇｉｕｌｉｅｔｔｉら、（２００１）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２５：３８６−４０１；ＳｃｈｗｅｉｔｚｅｒおよびＫｉｎｇｓｍｏｒｅ（２００１）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１２：２１−２７；Ｓｐｅｅｌら、（１９９９）Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．４７：２８１−２８８；ＴｓｕｒｕｏｋａおよびＫａｒｕｂｅ（２００３）Ｃｏｍｂ．Ｃｈｅｍ．Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎ．６：２２５−２３４；Ｒｏｓｅら、（２００２）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ３３：５４−５６を参照のこと）。
【００７２】
診断的アッセイは、生物学的マトリックス（例えば、生細胞、細胞抽出物、細胞溶解物、固定された細胞、細胞培養物、体液、または法医学的試料）と共に使用され得る。診断目的またはキットの目的のために有用な結合体化された抗体としては、色素、同位体、酵素および金属と結合された抗体が挙げられる（例えば、Ｌｅ  Ｄｏｕｓｓａｌら、（１９９１）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．１４６：１６９−１７５；Ｇｉｂｅｌｌｉｎｉら、（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：３８９１−３８９８；ＨｓｉｎｇおよびＢｉｓｈｏｐ  （１９９９）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．１６２：２８０４−２８１１；Ｅｖｅｒｔｓら、（２００２）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．１６８：８８３−８８９を参照のこと）。種々のアッセイ形式（例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ＥＬＩＳＡおよびラボオンチップ（ｌａｂ  ｏｎ  ａ  ｃｈｉｐ）が存在する（米国特許第６，１７６、９６２号および同第６，５１７、２３４号）。
【００７３】
この診断方法は、試験被験体から得た試料と、ＣＤ２００  もしくはＣＤ２００Ｒのポリペプチドまたは核酸に対して特異的に結合する結合組成物とを接触させる工程を包含し得る。さらに、この診断方法は、コントロール被験体またはコントロール試料に由来する試料にこの結合組成物を接触させる工程、およびこの試験被験体に見出される結合と、このコントロール被験体またはコントロール試料に見出される結合とを比較する工程を、さらに包含する。「試験試料」は、脱毛症を経験する被験体から得た皮膚試料に由来し得、一方で「コントロール試料」は、正常な被験体から得た皮膚試料に由来し得るか、または脱毛症を経験する被験体から得た影響を受けていない皮膚試料に由来し得る。被験体は、例えば、ヒト、獣医学上の被験体、実験上の被験体、または農業上の被験体であり得る。由来されるものは、生検、試料、抽出物、あるいは加工されたか、精製されたか、もしくは半精製された（ｓｅｍｉ−ｐｕｒｉｆｉｅｄ）試料または抽出物を包含する。
【００７４】
（ＶＩＩ．使用）
本発明は、毛包の障害の診断、処置、または防止のための方法を提供し、この障害としては、毛包の増殖障害および炎症性障害（例えば、瘢痕性脱毛症および非瘢痕性脱毛症）が挙げられる。男性ホルモン性脱毛症（ＡＧＡ）、円形脱毛症（ＡＡ）、および牽引性脱毛症を処置するための方法が、提供される。萎縮性脱毛症（ＰＢ）、慢性の皮膚エリテマトーデス（ＣＣＬＥ）、毛孔性扁平苔癬（ＬＰＰ）、解離性蜂巣炎、ざ瘡ケロイド症、中枢神経性で遠心性の瘢痕性脱毛症（ＣＣＳＡ）、および線維化脱毛症を処置するための方法もまた、提供される。さらに、本発明は、不正確な成長期症候群（ｌｏｏｓｅ  ａｎａｇｅｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、慢性休止期脱毛症および毛孔性扁平苔癬の、前頭の線維化脱毛症改変体の処置および診断のための方法を提供する。抜け毛および禿頭症の処置ならびに診断の方法が提供され、抜け毛および禿頭症としては、薬物誘導性の抜け毛が挙げられる（例えば、Ｔｏｓｉら、（１９９４）Ｄｒｕｇ  Ｓａｆ．１０：３１０−３１７；ＳｕｌｌｉｖａｎおよびＫｏｓｓａｒｄ（１９９８）Ａｕｓｔｒａｌａｓ  Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．３９：２０７−２１８を参照のこと）。
【００７５】
身体の免疫学的寛容領域の炎症性障害または自己免疫障害を、処置または診断するための方法もまた、提供される。身体の免疫学的寛容領域としては、毛包、眼、中枢神経系、脳、および生殖系が挙げられる（Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈら、（２０００）Ｂｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１４２：８６２−８７３；ＳｔｒｅｉｌｅｉｎおよびＳｔｅｉｎ−Ｓｔｒｅｉｌｅｉｎ（２０００）Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌ．６７：４７９−４８７；Ｆｅｒｇｕｓｏｎら、（２００２）Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：１５３−１７２；Ｐａｕｓら、（２００３）Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｓｙｍｐ．Ｐｒｏｃ．８：１８８−１９４）。
【００７６】
さらに、本発明は、脱毛薬を使用する方法を提供する。この脱毛薬は、例えば、ＣＤ２００のアンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ２００抗体、抗ＣＤ２００Ｒ遮断抗体、ＣＤ２００Ｒの細胞外領域の可溶性の変形、またはそのペプチド模倣物を含む。本方法の毛の除去は、完全に十分ではなく、そして副作用を生じる（例えば、色素脱失および色素沈着過剰）（Ｔｏｐｐｉｎｇら、（２０００）Ａｎｎ．Ｐｌａｓｔ．Ｓｕｒｇ．４４：６６８−６７４；Ｌｉｅｗ（１９９９）Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｓｕｒｇ．２５：４３１−４３９；Ｏｌｓｅｎ（１９９９）Ｊ．Ａｍ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．４０：１４３−１５５；ｄｅ  Ｂｅｒｋｅｒ  （１９９９）Ｐｒａｃｔｉｔｉｏｎｅｒ  ２４３：４９３−４９８；Ｌａｎｉｇａｎ（２００１）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２６：６４４−６４７；Ｌｉｅｗ（２００２）Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．３：１０７−１１５；Ｔｒｕｅｂ（２００２）Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．３：６１７−６２７）。
【００７７】
脱毛薬は、炎症性因子または免疫活性化因子（例えば、炎症性サイトカイン、ＴＨ１型サイトカイン、ＴＨ２型サイトカイン、皮膚の刺激原、または接触過敏症もしくは皮膚炎を刺激する因子）との結合体化に使用され得る（例えば、ＣｈｅｗおよびＭａｉｂａｃｈ（２００３）Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ｏｃｃｕｐ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｈｅａｌｔｈ  ７６：３３９−３４６；ＡｎｔｅｘａｎａおよびＰａｒｋｅｒ（２００３）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．２３：２６９−２９０；Ｗｉｌｌｉｓ（２００２）Ｃｏｎｔａｃｔ  Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ  ４７：２６７−２７１；Ｓｍｉｔｈら、（２００２）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２７：１３８−１４６；ＷｏｌｌｅｎｂｅｒｇおよびＢｉｅｂｅｒ（２００１）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｐｒｏｃ．３３：２２１２−２２１６を参照のこと）。
【００７８】
本発明の幅広い範囲は、以下の実施例を参照することによって最もよく理解され、この実施例は、本発明を特定の実施形態に限定することを意図されない。
【実施例】
【００７９】
（Ｉ．一般的方法）
動物およびヒトにおける皮膚の炎症状態の診断および処置のための方法が記載されている（例えば、Ａｃｋｅｒｍａｎ（１９９７）Ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｓｋｉｎ  Ｄｉｓｅａｓｅ，第２版，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｇａｌｌｉｎら、（１９９９）Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：Ｂａｓｉｃ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ，第３版，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｐａｒｎｈａｍら、（１９９１）Ｄｒｕｇｓ  ｉｎ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ（Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ａｃｔｉｏｎｓ  補遺，第３２巻），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｃｈａｎ（編）（２００３）Ａｎｉｍａｌ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｓｋｉｎ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，ＦＬ；ＫｏｗｎａｔｚｋｉおよびＮｏｒｇａｕｅｒ（編）（１９９８）Ｃｈｅｍｉｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ｓｋｉｎ，Ｂｉｒｋｈａｕｓｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ；Ｋａｎｉｔａｋｉｓら（編）（１９９９）Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｋｉｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照のこと）。
【００８０】
脱毛症の動物モデルおよび関連する方法が利用可能である。これらの方法は、皮膚移植片の使用、免疫細胞を注射された皮膚移植片の使用、免疫細胞の皮下注射、およびＤｕｎｄｅｅの実験的ボールドラット（ｂａｌｄ  ｒａｔ）（例えば、Ｚｏｌｌｅｒら、（２００２）Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１１８：９８３−９９２；Ｓｕｎｄｂｅｒｇら、（２００１）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１１：３２１−３２５；Ｓｕｎｄｂｅｒｇら、（２０００）Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５６：２０６７−２０７５；ＭｃＥｌｗｅｅおよびＨｏｆｆｍａｎｎ（２００２）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２７：４１０−４１７；ＭｃＥｌｗｅｅら、（１９９６）Ｂｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１３５：２１１−２１７；ＭｃＥｌｗｅｅら、（１９９６）Ｂｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１３５：２１１−２１７を参照のこと）などの動物の使用を包含する。
【００８１】
ヒトの毛包および動物の毛包を分類するための方法が利用可能である（例えば、Ｍｕｌｌｅｒ−Ｒｏｖｅｒら、（２００１）Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１１７：３−１５；Ｍｉｌｌａｒ（２００２）Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１１８：２１６−２２５を参照のこと）。皮膚の病理学および皮膚科学に関する一般的な方法が利用可能である（例えば、Ｂｏｓ（編）（１９９７）Ｔｈｅ  Ｓｋｉｎ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，ＦＬ；Ｗｅｅｄｏｎ（２００２）Ｓｋｉｎ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，第２版，Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ，Ｐｈｉｌａ．，ＰＡ；Ｈｏｂｉｆら、（編）（２００１）Ｓｋｉｎ  Ｄｉｓｅａｓｅ：Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，Ｍｏｓｂｙ，Ｐｈｉｌａ．，ＰＡ；ＨａｂｉｆおよびＨａｂｉｅ（１９９６）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，第４版．，Ｍｏｓｂｙ，Ｐｈｉｌａ．，ＰＡ；Ｍｕｌｌｅｒら、（２０００）Ｍｕｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｋｉｒｋ’ｓ  Ｓｍａｌｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ、第６版，Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ、Ｐｈｉｌａ．，ＰＡ；Ｗｅｓｔｏｎら、（２００２）Ｃｏｌｏｒ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，第３版，Ｍｏｓｂｙ、Ｐｈｉｌａ．，ＰＡを参照のこと）。
【００８２】
分子生物学における標準的な方法が記載されている（Ｍａｎｉａｔｉｓら、（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，第３版，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ｗｕ（１９９３）Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ，第２１７巻，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）。標準的な方法はまた、Ａｕｓｂｅｌら、（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１巻〜第４巻，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ（これは、細菌細胞におけるクローニングおよびＤＮＡ変異誘発（第１巻）、哺乳動物細胞および酵母におけるクローニング（第２巻）、複合糖質の発現およびタンパク質の発現（第３巻）、およびバイオインフォマティクス（第４巻）を記載する）に示される。
【００８３】
タンパク質精製のための方法（免疫沈降、クロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離、および結晶化が挙げられる）が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎら、（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，第１巻，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。化学的分析、化学修飾、翻訳後修飾、融合タンパク質の産生、タンパク質のグリコシル化が記載されている（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら、（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，第２巻，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ａｕｓｕｂｅｌら、（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，第３巻，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ，ｐｐ．１６．０．５−１６．２２．１７；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃｏ．（２００１）Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｆｏｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｉｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ；ｐｐ．４５−８９；Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（２００１）ＢｉｏＤｉｒｅｃｔｏｒｙ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．，ｐｐ．３８４−３９１を参照のこと）。ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の産生、精製および断片化が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎら、（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第１巻、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９９９）Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，前出）。リガンド／レセプター相互作用を特徴付けるための標準的な技術が利用可能である（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら、（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第４巻，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照のこと）。
【００８４】
細胞培養および組織培養における標準的な技術が記載されている（例えば、Ｆｒｅｓｈｎｅｙ（２０００）Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ：Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，第４版．，Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｍａｓｔｅｒｓ（編）（２０００）Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，第３版．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ；Ｄｏｙｌｅら（編）（１９９４）Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，ＮＹ；Ｍｅｌａｍｅｄら、（１９９０）Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  ａｎｄ  Ｓｏｒｔｉｎｇ  Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｓｈａｐｉｒｏ（１９８８）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、（１９９３）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照のこと）。
【００８５】
例えば、抗原性フラグメント、シグナル配列およびリーダー配列、タンパク質の折り畳みおよび機能性ドメインを決定するためのソフトウェアパッケージが利用可能である。例えば、Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩ（登録商標）Ｓｕｉｔｅ（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｉｎｃ．，Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ）；ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇｅ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、およびＤｅＣｙｐｈｅｒ（登録商標）（ＴｉｍｅＬｏｇｉｃ  Ｃｏｒｐ．，Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｂａｙ、Ｎｅｖａｄａ）；Ｍｅｎｎｅら、（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  １６：７４１−７４２を参照のこと。公開された配列データベース（例えば、ＧｅｎＢａｎｋおよびその他からの）をまた、使用した。
【００８６】
（ＩＩ．ケラチノサイトの培養、組織学、および皮膚移植のための方法）
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｂ６）をＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）から入手した。ＣＤ２００ＫＯマウスは、Ｂ６バックグラウンド（ＤＮＡＸ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｉｎｃ．，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）に由来した。年齢／性別を合わせたマウスを、全ての実験において使用した。マウスのＫＣ細胞株、ＰＡＭ２１２、ＳＰ−１、および３０８を、Ｓｔｕａｒｔ  Ｙｕｓｐａ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ）から得た。
【００８７】
細胞株を、１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補充したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）で培養した。ヒトケラチノサイトを、新生児のヒト包皮から誘導し、そしてケラチノサイトＳＦＭ（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ，Ｒｈｅｉｎｗａｌｄ  ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎ  Ｃｅｌｌ−６：３１７−３３０）中で培養した。新生仔の体幹の皮膚または成体の耳の皮膚を、Ｂ６マウスおよび表皮細胞（ＥＣ）（Ｔａｍａｋｉら、（１９７９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２３：７８４−７８７）から切除した。皮膚を、軟骨の平面に沿って穏やかに裂くことによって分離し、そして３７℃にて４５分間、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の０．５％のトリプシン（ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ）上に浮かべた。表皮のシートを、その真皮から剥がし、１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含むＰＢＳ中の０．０５％  ＤＮＡａｓｅ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）に再懸濁した。単一細胞の懸濁物を、シリンジによる勢いのある通過によって得た。逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）分析のために、細胞を、ケラチノサイトＳＦＭ中で培養した。
【００８８】
フローサイトメトリーのために、新しく単離した表皮細胞を、冷リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）中で１回洗浄し、そして４×１０５個の細胞を、以下の試薬のいずれかによって、４℃にて３０分間染色した：抗ｍＣＤ２００抗体（ＯＸ−９０）を結合体化したＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ−６４７（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）；ラットＩｇＧアイソタイプのコントロール（Ｒ３５−９５）を結合体化したＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ−６４７；ＰＥ抗ｈＣＤ２００（ＭＲＣ  ＯＸ−１０４）；ＦＩＴＣ抗Ｉ−Ａｂ（ＫＨ７４）；ＰＥ抗ＣＤ３（１４５−２Ｃ１１）；７ＡＡＤ（ＣａｌＢｉｏｃｈｅｍ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）。抗体をＰｈａｒｍｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から得た。ＯＸ−９０およびＲ３５−９５  ｍＡｂを、製造業者のプロトコルに従ってＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７に結合体化した。細胞を、冷ＰＢＳ中で２回洗浄し、そしてＢｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ  ＦＡＣＳｃａｎ（登録商標）フローサイトメーター（Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）におけるフローサイトメトリーによって分析した。
【００８９】
ケラチノサイトを、上記のように単離し、そしてケラチノサイトＳＦＭ中で培養した。２回の継代の後、細胞を回収し、そして全ＲＮＡを、ＴＲＩｚｏｌ（登録商標）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）によって抽出した。ＲＮＡを定量し、そして等量（約１マイクログラム）を、Ｔｈｅｒｍｏｓｃｒｉｐｔ（登録商標）ＲＴ−ＰＣＲシステム（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）を使用し、オリゴ（ｄＴ）プライマーを用いてｃＤＮＡに逆転写した。ＲＴ−ＰＣＲを、マウスＣＤ２００の以下の領域にハイブリダイズするプライマーを使用して行った：ヌクレオチド１２３〜１４１にハイブリダイズする１つの２０塩基プライマー、およびＧｅｎＢａｎｋ  ＮＭ＿０１０８１８の核酸配列のヌクレオチド４４１〜４５８にハイブリダイズする第２の１９塩基プライマー。第２のプライマーセットを、β−アクチンの発現を評価するために使用した。
【００９０】
新生仔の体幹の皮膚を野生型（ＷＴ）マウスまたはＣＤ２００ＫＯマウスのいずれかから単離した。標本を直ちに、Ｔｉｓｓｕｅ−Ｔｅｋ  ＯＣＴ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄ（Ｍｉｌｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｅｌｋｈａｒｔ，ＩＮ）中に置き、ドライアイス上で凍結し、そして−７０℃で保存した。凍結切片（６マイクロメートル）を、免疫蛍光顕微鏡検査（Ｂａｓｓｅｔ−Ｓｅｇｕｉｎら、（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：１２７３−１２８０）のために染色した。抗ｍＣＤ２００（ＯＸ−９０）またはラットＩｇＧアイソタイプのコントロール（Ｒ３５−９５）を、１次抗体として使用し、そしてＦＩＴＣ結合体化ヤギＦ（ａｂ）２抗ラットＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）を、検出のために使用した。免疫組織化学を、記載される（Ｈｏｍｅｙら、（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：６６２１−６６３２）ように凍結切片上で行った。抗ｍＣＤ２００  ｍＡｂの結合またはラットＩｇＧアイソタイプのコントロールｍＡｂの結合を、ビオチン標識したウサギ抗ラットＩｇＧ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｂｉｏｓｙｓ，Ｃｏｍｐｉｅｇｎｅ，Ｆｒａｎｃｅ）を使用し、その後ストレプトアビジン−ペルオキシダーゼを使用して検出した。この試薬は、Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ  ＡＢＣ  ｋｉｔ，Ｖｅｃｔｏｒ  Ｂｉｏｓｙｓから入手した。ペルオキシダーゼ活性を、室温にて５〜１０分間、３−アミノ−９−エチルカルバゾール基質（ＳＫ−４２００、Ｖｅｃｔｏｒ）を使用して明らかにした。
【００９１】
尾の皮膚を、記載される（Ｃｏｌｉｇａｎら、（編）（１９９４）Ｓｋｉｎ  Ａｌｌｏｇｒａｆｔ  Ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）ように、背側の体幹に移植した。要約すると、尾の皮膚を、歳を合わせた野生型の雌Ｂ６マウスおよびＣＤ２００ＫＯの雌Ｂ６マウスから回収し、そして歳を合わせた野生型Ｂ６の雌の背部に移植した。いくつかの実験において、野生型の皮膚およびＣＤ２００ＫＯの皮膚を、同じ宿主に移植し、そして他の実験において、各宿主は、１つの移植片のみを受容した。皮膚を、毎日および移植後の種々の時間において観察し、パンチ生検を採取した。標本を、ＰＢＳ中の４％のホルマリン中に固定し、パラフィン中に包理し、５マイクロメートルの厚さにて切断し、そしてヘマトキシリン−エオシン（Ｈ＆Ｅ）によって染色した。
【００９２】
（ＩＩＩ．ケラチノサイトおよび毛包によるＣＤ２００の発現）
ＣＤ２００特異的なＲＴ−ＰＣＲを、以下のように、マウスおよびヒトの両方の１次ケラチノサイト細胞（ＫＣ）培養物に対して行った。表皮細胞（ＥＣ）を、仔マウスの皮膚およびヒト包皮の両方から単離し、そしてＫＣ規定培地中で培養した。ＣＤ２００のｍＲＮＡを、マウスおよびヒトの１次ＫＣ培養物の両方において検出した。コントロールとして、ＲＴ−ＰＣＲをまた、野生型マウスまたはＣＤ２００ＫＯのＢ６マウスから単離した脾細胞のｍＲＮＡに対して行った。野生型の脾細胞による発現はマウスケラチノサイトまたはヒトケラチノサイト由来の発現より、若干少なかったが、ＣＤ２００ＫＯマウス由来の脾細胞による発現は、存在しなかった。
【００９３】
ケラチノサイトが、それらの細胞表面上でＣＤ２００を発現する場合を決定するために、４色のフローサイトメトリーを、新しく単離した仔マウスの皮膚由来の表皮細胞に対して行った。野生型マウスおよびＣＤ２００ＫＯマウスからの単離後、表皮細胞を、ＦＡＣＳ分析によって３つの異なるＥＣ集団に分離した。これらの３つの細胞集団は：（１）Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＭＨＣ  ＩＩ−）：（２）ランゲルハンス細胞（ＣＤ３−、ＭＨＣ  ＩＩ＋）；および（３）ケラチノサイト（ＣＤ３−、ＭＨＣ  ＩＩ−）であった。この３つの細胞集団をＦＡＣＳ装置によって互いから分離した。野生型マウスから単離した細胞をＣＤ２００の発現について分析した、ＣＤ２００ＫＯマウスから得た３つの細胞集団をコントロールとして分析した（表１）。
【００９４】
（表１．仔マウスの皮膚から新しく単離した表皮細胞の部分集団によるＣＤ２００の発現）
【００９５】
【表１】
2007518827.tif 000002
野生型マウス由来のランゲルハンス細胞は、ＣＤ２００の発現を示し、発現を、この細胞の約４４％において見出した。野生型マウス由来のケラチノサイトは、２つの異なる集団である２相性の分布を示し、１５％は、ＣＤ２００の発現を示し、そして８５％は、ＣＤ２００のわずかな発現を示すか、または発現を示さなかった。野生型マウス由来のＴ細胞は、ＣＤ２００のわずかな発現を示すか、または発現（細胞の２％）を示さなかった（表１）。予想通り、ＣＤ２００ＫＯマウスから調製した細胞は、ＣＤ２００に対してわずかなシグナルを示すかまたは全くシグナルを示さなかった（ランゲルハンス細胞において５％、Ｔ細胞において２％、およびＫＣにおいて１％）。
【００９６】
成体マウスの耳の皮膚を表皮細胞の供給源として使用した場合、仔マウスの皮膚由来の細胞中に見出される割合（約１５％）に対してＣＤ３−ＭＨＣ  ＩＩ−細胞集団中の若干低い割合のＣＤ２００＋細胞を、見出した（５〜１５％の間）。
【００９７】
培養したケラチノサイト（ＭＨＣ  ＩＩ−；ＣＤ３−表現型）が、細胞表面のＣＤ２００を発現するか否かを決定するために、数種のマウスのケラチノサイト細胞株および１次ヒトケラチノサイト培養物を、フローサイトメトリーによって分析した。ヒトケラチノサイトの１次培養物およびマウスのケラチノサイト細胞株（ＰＡＭ２１２およびＳＰ−１）は、ＣＤ２００を発現しなかった。
【００９８】
マウスの表皮の共焦点スキャン顕微鏡検査は、ＭＨＣクラスＩＩ陰性であり、ＣＤ３陰性である細胞の部分集団が、ＣＤ２００だけではなくケラチン−１４も発現することを実証した。この染色は、毛包の外毛根鞘のケラチノサイトにおいて際立っていた。ケラチン−１４を伴う同時発現の表現型は、その細胞が幹細胞または遷移増幅細胞（ｔｒａｎｓｉｔ  ａｍｐｌｉｆｙｉｎｇ  ｃｅｌｌ）であることを示した。
【００９９】
表皮におけるＣＤ２００を発現する細胞の局在化を、新生仔の体幹の皮膚の生検を使用して決定した。細胞の位置を、仔マウスの皮膚の全身標本に対する、ＣＤ２００特異的な免疫蛍光検査およびＣＤ２００特異的な免疫組織化学によって決定した。ＣＤ２００の発現は、ほぼ毛包のみに、局在化した。ＣＤ２００特異的な染色は、毛包に関連しない表皮中に観察されなかった。ＣＤ２００＋細胞は、毛包の全長にわたる比較的均一な発現を伴って毛包の外毛根鞘に主として位置した。ＣＤ２００の発現を、球領域，峡領域、隆起領域および漏斗領域周辺に観察した。球マトリックス細胞、真皮乳頭状細胞、および毛幹の細胞は、ＣＤ２００を発現しないようであった。発現の同様のパターンを、成体の耳の皮膚に観察した。コントロールとして、ＣＤ２００の染色をまた、これまでに報告（Ｃｌａｒｋら、（１９８５）ＥＭＢＯ  Ｊ．４：１１３−１１８）されたように、血管内皮細胞において観察した。
【０１００】
（ＩＶ．ＣＤ２００は毛包関連性の自己免疫を抑制する）
ＣＤ２００の欠如は、雌マウスのレシピエントに対するドナーの皮膚の移植後に示されるような、皮膚移植物の拒絶、または毛包のみの拒絶を促進した。ドナーのマウスから得た尾の皮膚を、雌の野生型レシピエントマウスの体幹に移植した。移植後の種々の時間において、パンチ生検を作製し、切片を、ヘマトキシリン−エオシンによって染色した。雄の野生型もしくは雌の野生型（ＣＤ２００＋／＋）、またはＣＤ２００ＫＯのＢ６マウス（ＣＤ２００−／−Ｂ６マウス）のいずれかから得た尾の皮膚における同系の皮膚移植モデルを、野生型の雌Ｂ６レシピエントの背部に移植した。
【０１０１】
雌の移植片に対する雌を、研究した。増加した炎症性細胞の浸潤物を、早ければ移植後１０日目に、雌のＣＤ２００ＫＯ移植片の真皮中で、野生型のメスの移植片に対して観察した。この浸潤物は、多形核細胞ならびに単核細胞からなり、そして毛包周囲の領域および毛包内部の領域に局在化した。この浸潤は、野生型の移植片において観察されなかった。移植後４０日において、ＣＤ２００ＫＯ移植片中の正常な毛包の構造を、炎症性細胞で置換し、これは毛包内部の浮腫および毛包内部のアポトーシスを伴った。炎症性細胞を、毛包間の表皮および毛包に関連しない表皮において、例外的に観察した。移植後８０日までに、１１個のＣＤ２００ＫＯ雌の移植物のうち１１個において、その毛は完全に喪失したが、この移植片それ自体は、インタクトなままであった。
【０１０２】
雌の移植片に対する雌のさらなる詳細は、以下の通りであった。瘢痕および非瘢痕の両方の転帰を、見出した。組織学的な実験は、毛包の構造の完全な喪失を、支持した。いくつかのＣＤ２００ＫＯ移植片において、真皮の炎症は、真皮の瘢痕を経過して毛包の喪失の後に解消した。これらの移植片において、毛包に関連しない表皮は、概ね影響されないままであり、そして無毛の移植片は、長期間存続した。しかし、いくつかのＣＤ２００ＫＯ移植片の炎症は、毛包に関連しない表皮の関与に伴う毛包の排除後の真皮において持続し、最終的に、移植片の喪失を生じた。ＣＤ２００ＫＯ移植片とは対照的に、野生型の移植片は、移植後１０日の初期において、最小限の毛包に関連しない炎症のみを示し、この炎症は、４０日で完全に消失した。野生型の移植片において、毛包の喪失は観察されず、そして野生型の全ての移植片は、毛と共に長期間（１２０日以上）存続した。
【０１０３】
ＣＤ２００ＫＯマウスは、毛を有するが、以下に記載されるように、老化と共に抜け毛が起こる。雌のドナーから雌のレシピエントへのＣＤ２００ＫＯ皮膚の移植において見出された毛包の喪失（しかし、皮膚移植片は喪失しない）は、皮膚移植の外科的手順が、低レベルの炎症を生じる、炎症の引き金を提供し、この低レベルの炎症は、ＣＤ２００−／−の皮膚移植片の毛包を攻撃する。
【０１０４】
雌の移植片に対する雄の結果は、以下の通りである。雄の野生型の移植片は、約１ヶ月で拒絶された。雄ＣＤ２００ＫＯの移植片は、より迅速に拒絶され、それは、約２週間以内であり、雄の皮膚移植片の拒絶からの保護におけるＣＤ２００の役割を実証した。雌の移植片に対する雄は、雌の移植片に対する雌と比較した場合、Ｈ−Ｙ抗原への増大した応答に明らかに起因して、移植片の増加した拒絶に直面した。Ｈ−Ｙ抗原は、雄の（Ｙ）染色体上の遺伝子によってコードされる少量の組織適合性抗原の収集に言及する（例えば、Ｊａｍｅｓら、（２００２）Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：１３３３−１３４２を参照のこと）。
【０１０５】
ＣＤ２００ＫＯマウスにおける老化に関する影響にも、取り組んだ。老化したＣＤ２００ＫＯマウスは、脱毛症および毛包の色素脱失を示した。老いたＣＤ２００ＫＯマウスの試験は、以下のことを実証した。老いたＣＤ２００ＫＯマウスのいくつかは、約８ヶ月の月齢における脱毛症および毛幹の色素脱失によって証明されるような、毛包関連性の自己免疫の兆候を示した。これらの老化に関する影響は、野生型のＢ６マウスのいずれの歳においても観察されなかった。野生型のＣ５７ＢＬ／６Ｊは、正常に脱毛症を発症しない（例えば、Ｓｕｎｄｂｅｒｇら、（２００３）Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１２０：７７１−７７５を参照のこと）。
【０１０６】
本発明は、例えば、脱毛症を処置するために、Ｔ細胞の活性を調節する方法を提供する。ＣＤ２００のシグナル伝達およびＣＤ２００Ｒのシグナル伝達は、サイトカインのＴ細胞発現を制御する。水溶性ＣＤ２００は、ＣＤ２００Ｒ＋のＴ細胞に接触して、インスリン様増殖因子−１およびインターフェロン−γの発現の増加を生じた。これらの２つのサイトカインは、毛の成長を調節する（例えば、Ｓｉｇｎｏｒｅｌｌｏら、（１９９９）Ｊ．Ａｍ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．４０：２００−２０３；Ｈｉｒｏｔａら、（２００２）Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ．２２：９３５−９４５を参照のこと）。
【０１０７】
（Ｖ．ケラチノサイト由来の腫瘍細胞株によるＣＤ２００の発現）
本発明は、例えば、ＣＤ２００のアゴニストを提供することによって、ケラチノサイト由来の腫瘍および癌を処置するための方法を提供する。ケラチノサイトの腫瘍細胞株（３０８細胞株）は、７，１２−ジメチルベンズ（ａ）アントラセンによって、インビボでイニシエートし、高レベルのＣＤ２００を発現した。３０８細胞は、記載されている（例えば、Ｓｔｒｉｃｋｌａｎｄら、（１９８８）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４８：１６５−１６９を参照のこと）。したがって、ケラチノサイト由来の腫瘍は、ＣＤ２００の発現を利用して免疫系の細胞を不活性化し得、したがって抗腫瘍免疫を回避する。２つの他のマウスケラチノサイトの腫瘍細胞株（ＰＡＭ２１２およびＳＰ−１）は、ＣＤ２００を発現しないことを見出した。ＣＤ２００の発現をまた、以下の他の腫瘍細胞株中に見出した：Ｃ１４９８（マウスの白血病）；ＳＣＣ−７（マウスの扁平表皮癌）；およびＵ２ＯＳ（ヒトの骨肉種）。
【０１０８】
（ＶＩ．マウスの表皮におけるＣＤ２００Ｒの発現）
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｂ６）を、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）から購入した。ＣＤ２００−／−マウス（Ｂ６バックグラウンド由来（Ｈｏｅｋら、前出））は、Ｄｒ．Ｊｏｎａｔｈａｎ  Ｓｅｄｇｗｉｃｋ（ＤＮＡＸ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）によって提供された。全てのマウスをＡｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  によって認定される、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ’ｓ  Ａｎｉｍａｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒで飼育した。
【０１０９】
（ａ．表皮細胞の調製物）
成体の耳の皮膚を、Ｂ６マウスから切除し、そしてＥＣを、これまでに記載された（Ｔａｍａｋｉら、（１９７９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２３：７８４−７８７）ように単離した。要約すると、皮膚を、軟骨の板から分離し、そしてＰＢＳ中の０．５％のトリプシン（ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ）上に３７℃にて４５分間浮かべた。表皮のシートを、その真皮から剥がして、１０％のＦＢＳを含むＰＢＳ中の０．０５％のＤＮＡａｓｅ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）中に再懸濁した。単一細胞の懸濁物を、６０ｃｃのシリンジによる勢いのある通過によって得た。フローサイトメトリーのために、新しく単離したＥＣを、冷ＰＢＳで１回洗浄し、そして４×１０５個の細胞を、以下を用いて、４℃にて３０分間染色した：抗ｍＣＤ２００Ｒｌ抗体（ＯＸ−１１０）を結合体化したＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ−６４７（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）；ラットＩｇＧアイソトープのコントロール（Ｒ３５−９５）を結合体化したＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ−６４７；ＰＥ抗マウスγδＴＣＲ（ＧＬ３）；ＦＩＴＣ抗Ｉ−Ａｂ（ＫＨ７４）；７ＡＡＤ（ＣａｌＢｉｏｃｈｅｍ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）。ＯＸ−１１０を除く全ての抗体を、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から入手し、ＯＸ−１１０は、Ｎｅｉｌ  Ａ．Ｂａｒｃｌａｙ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ）によって寛大にも提供された。ＯＸ−１１０およびＲ３５−９５  ｍＡｂを、製造業者のプロトコルに従ってＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７に結合体化した。細胞を、冷ＰＢＳで２回洗浄し、そしてＢｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ（Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）ＦＡＣＳｃａｎフローサイトメーター上でフローサイトメトリーによって分析した。ＲＴ−ＰＣＲ分析のために、精製した表皮の白血球集団を、蛍光細胞分析分離（ＦＡＣＳ）によって得た。表皮細胞の懸濁物を、ＰＥ抗マウスγδ  ＴＣＲ、ＦＩＴＣ抗Ｉ−Ａｂおよび７ＡＡＤによって染色した。γδＴＣＲ＋／Ｉ−Ａ−／７ＡＡＤ−（ＤＥＴＣ）、γδＴＣＲ−／Ｉ−Ａ＋／７ＡＡＤ−（ＬＣ）、およびγδＴＣＲ−／Ｉ−Ａ−／７ＡＡＤ−（ＫＣ）細胞を、ＢＤ  ＴｕｒｂｏＳｏｒｔ  Ｐｌｕｓ付属物を伴うＢＤ  ＦＡＣＳ  ＤｉＶａによって９９％以上の純度まで選別した。活性化実験のために、精製したＤＥＴＣを、１０μｇ／ｍｌの抗ＣＤ３（１４５−２Ｃ１１；Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）でプレコート（ｐｒｅ−ｃｏａｔ）した９６ウェルプレート中で、５％  ＣＯ２下の３７℃にて７２時間まで培養した。培養培地は、５０μＭの２−メルカプトエタノール（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）、ＨＥＰＥＳ緩衝液（２５ｍＭ）、ピルビン酸ナトリウム（ｌｍＭ）、ペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）、Ｌ−グルタミン（２ｍＭ）、１００μＭの非必須アミノ酸、および２０Ｕ／ｍｌの組換えのヒトＩＬ−２を補充した、１０％の熱失活した胎仔ウシ血清を含むＲＰＭＩであった。全ての成分を、他に特定されない限りＧｉｂｃｏ  ＢＲＬ（Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）から入手した。
【０１１０】
（ｂ．定量的ＲＴ−ＰＣＲ）
表皮細胞の懸濁物を、上記されるような、精製したＤＥＴＣ（樹状表皮Ｔ細胞）集団、ＬＣ（ランゲルハンス細胞）集団、およびＫＣ（ケラチノサイト）集団に選別した。細胞を回収し、そして全ＲＮＡを、製造業者の説明書（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）に従って、ＴＲＩｚｏｌによって抽出した。ＲＮＡを定量し、そして等量（約１μｇ）を、製造業者の説明書に従ってＴｈｅｒｍｏｓｃｒｉｐｔＴＭ（登録商標）ＲＴ−ＰＣＲシステム（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）を使用し、オリゴ（ｄＴ）プライマーを用いてｃＤＮＡに逆転写した。実験における検出感度を上げるために、ＤＥＴＣを選別し、次いで活性化し、１０ｎｇの全ＲＮＡを、製造業者のプロトコルに従ってＯｖａｔｉｏｎＴＭ  ＲＮＡ増幅システム（ＮｕＧｅｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｓａｎ  Ｃａｒｌｏｓ，ＣＡ）を使用してｑＲＴ−ＰＣＲの前に増幅した。定量的リアルタイムＰＣＲを行った。コントロールとして、前処方１８Ｓ  ｒＲＮＡ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙシステムを、製造業者のプロトコル（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）に従って利用した。コントロールとして、β−アクチンの発現を、製造業者のプロトコル（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）に従ってＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ検出試薬を使用してＣＤ２００Ｒアイソフォームの発現と比較した。全てのｑＲＴ−ＰＣＲ反応を、Ｏｐｔｉｃｏｎ−２  Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ（ＭＪ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）において実行した。データを、比較Ｃｔ法（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して分析した。
【０１１１】
（ｃ．ＣＤ２００．ＦＬＡＧ融合タンパク質およびＢＡＰ．ＦＬＡＧ融合タンパク質の構築）
他に記載しない限り、全ての手順を、記載した製造業者によって提供された説明書に従って行った。全ＲＮＡを、ＴＲＩｚｏｌＴＭを使用してマウス脾細胞から抽出した。ＲＮＡを、ＴｈｅｒｍｏｓｃｒｉｐｔＴＭ  ＲＴ−ＰＣＲシステムを使用してオリゴ（ｄＴ）プライマーによって、ｃＤＮＡに逆転写した。Ｈｉｎｄ  ＩＩＩ制限酵素認識部位およびＢａｍ  Ｈｌ制限酵素認識部位を含むマウスＣＤ２００の細胞外ドメインに特異的な以下のプライマーを、合成した（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓａｌｎｄ，ＮＹ）。その後、増幅産物を、ｐＣＲ（登録商標）２．１−ＴＯＰＯクローニングベクターおよびＴＯＰＯＴＭＴＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇキット（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓａｌｎｄ，ＮＹ）を利用してクローニングし、そして配列決定した。挿入物を、Ｈｉｎｄ３制限酵素およびＢａｍＨ１制限酵素を利用してｐ３ＸＦＬＡＧ−ＣＭＶＴＭ−１３発現ベクター（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＩ）中にクローニングした。このベクターは、Ｃ末端連結型３ｘＦＬＡＧ融合タンパク質の安定した発現および分泌のために設計される。コントロールとして、ＦＬＡＧタグ化した細菌アルカリホスファターゼ（ＢＡＰ）融合タンパク質ベクター（ｐＦＬＡＧ−ＣＭＶ−３−ＢＡＰ）をＳｉｇｍａから購入した。チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）を、ＣＤ２００．ＦＬＡＧベクターまたはＢＡＰ．ＦＬＡＧベクター（Ａｍａｘａ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｋｏｅｌｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）のいずれかによってヌクレオフェクト（ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔ）した。ヌクレオフェクション（ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎ）を、Ａｍａｘａ’ｓ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ  Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ  Ｋｉｔを使用して最適化した。培養上清を、５−７日後に回収し、そしてＹＭ−１０  Ｃｅｎｔｒｉｐｌｕｓ（登録商標）遠心分離フィルターデバイス（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）を使用してフィルター濃縮した。濃縮した融合タンパク質を、抗ＦＬＡＧ（登録商標）Ｍ２抗体（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＩ）を使用するウェスタンブロットによって、純度についてアッセイした。融合タンパク質を、Ａｌｐｈａ  Ｉｍａｇｅｒ２２００上でＡｌｐｈａ  Ｉｍａｇｅｒ  ２２００  ｖ５．５ソフトウェア（Ａｌｐｈａ  Ｉｎｎｏｔｅｃｈ  Ｃｏｒｐ．，Ｓａｎ  Ｌｅａｎｄｒｏ，ＣＡ）を使用して、標準として３ｘＦＬＡＧ−ＢＡＰタンパク質（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＩ）の公知の濃度を用いたウェスタンブロット上のデンシトメトリーによって定量化した。
【０１１２】
（ｄ．ＤＥＴＣ機能アッセイ）
ＤＥＴＣ細胞株（７−１７）は、Ｄｒ．Ｗｅｎｄｙ  Ｈａｖｒａｎ（Ｔｈｅ  Ｓｃｒｉｐｐｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）によって快く提供された。これらの細胞は、ＡＫＲマウス由来の表皮細胞調製物のＦＡＣＳ（Ｋｕｚｉｅｌら、１９８７）によって最初に単離された。細胞を、完全ＲＰＭＩ（ＩＬ−２を伴う）中に維持し、そして２１日ごとに５μｇ／ｍｌのＣｏｎ  Ａによって刺激した。休止７−１７  ＤＥＴＣ（すなわち、前もって７日より後に、Ｃｏｎ  Ａによって刺激した細胞）だけを、機能アッセイに使用した。５×１０５個の細胞を、０．５μｇ／ｍｌ（予め決定された最適以下の濃度）の抗ＣＤ３  ｍＡｂ抗体または２μｇ／ｍｌ（予め決定された最適濃度）の抗ＣＤ３抗体および１０μｇ／ｍｌの抗ＦＬＡＧ（登録商標）Ｍ２抗体と結合した９６−ウェルプレート中で培養した。細胞を蒔く約３０分前、６５０ｎｇのＣＤ２００．ＦＬＡＧまたはＢＡＰ．ＦＬＡＧを、抗ＣＤ３、抗ＦＬＡＧでコーティングしたプレートに添加した。細胞を、完全ＲＰＭＩ（ＩＬ−２を伴わない）中で５％のＣＯ２において３７℃にて培養した。７２時間後、サイトカインのレベルを、製造業者のプロトコルに従ってサイトメトリービーズアレイ（ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  ｂｅａｄ  ａｒｒａｙｓ）（ＣＢＡ；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用して培養上清から測定した。増殖を測定するために、細胞を、７２時間において１μＣｉ／ｍｌ［３Ｈ］−チミジンによってパルスし、そして１６時間後にチミジンの取り込みについてアッセイした。
【０１１３】
（ｅ．結果）
ＣＤ２００Ｒアイソフォーム１〜４を、新しく単離した、最も高レベルの発現を有するＣＤ２００Ｒ１およびＣＤ２００Ｒ２を伴うＥＣ中に検出した。ＣＤ２００Ｒ１、ＣＤ２００Ｒ２、およびＣＤ２００Ｒ３についてのメッセンジャーＲＮＡを、アイソフォームＲ３に対して優位に発現した、アイソフォームＲｌおよびアイソフォームＲ２を有する精製したＤＥＴＣ中に検出した。ＣＤ２００Ｒ１の発現は、ＤＥＴＣと比較した場合、精製したＬＣにおいて増加した。ＣＤ２００Ｒ１、ＣＤ２００Ｒ２、およびＣＤ２００Ｒ３を、ＭＣＫＩＩ−／γδ  ＴＣＲ  ＬＣ中に検出した。おそらく、これは、真皮に由来するか、または表皮に存在することが知られる肥満細胞前駆体（Ｋｕｍａｍｏｔｏら、（２００３）Ｂｌｏｏｄ  １０２：１６５４−１６６０を参照のこと）に由来する肥満細胞および／または好塩基球（ｂａｓｏｆｐｈｉｌ）汚染に起因する。
【０１１４】
ＣＤ２００−／−マウスから調製したＥＣ懸濁物は、野生型のＣ５７Ｂ６マウスと比較した場合、ＣＤ１ｄ、Ｃｄ１１ｃ、ＣＤ８０、ＣＤ９５（ＦＡＳ）、ＣＤ１７８（ＦＡＳＬ）、ＧＲ−１、Ｆ４／８０、およびＯＸ−４０Ｌの有意に増加した発現を有する。また、野生型のコントロールと比較した場合、ＣＤ２００−／−マウス由来のＬＣにおけるＭＨＣクラスＩＩの、有意に高い発現が存在した。
【０１１５】
活性化によって、ＤＥＴＣが、ＣＤ２００Ｒの発現を増加する場合を決定した。Ｂ６マウス由来の表皮細胞を、ＩＬ−２の存在下で抗ＣＤ３  ｍＡｂでコーティングしたプレート上で培養した。種々の時点において、細胞を回収し、そしてγδ−ＴＣＲ＋ＤＥＴＣを、細胞表面のＣＤ２００Ｒ１について染色し、そしてフローサイトメトリーによって分析した。ＣＤ２００Ｒ１発現の目立った増加は、活性化後４８時間までで観察されたが、最大限の発現は、７２時間で観察された。他のＣＤ２００Ｒアイソフォームの発現を決定するために、ＤＥＴＣを、９９％以上の純度までＦＡＣＳによって精製し、ＩＬ−２の存在下で、抗ＣＤ３でコーティングしたプレート上で培養し、そしてＣＤ２００Ｒ特異的なｑＲＴ−ＰＣＲに供した。細胞表面の発現と一致して、ＤＥＴＣは、ＣＤ２００Ｒ１のｍＲＮＡの発現を、活性化後７２時間までに顕著に増加した。３つの実験の１つにおいて、活性化したＤＥＴＣはまた、ＣＤ２００Ｒ２およびＣＤ２００Ｒ３のｍＲＮＡ発現を増加したが；これらの増加は、ＣＤ２００Ｒ１の発現の増加に対して顕著に減少した（図４）。ＣＤ２００Ｒ４のｍＲＮＡは、新しいＤＥＴＣまたはエキソビボで活性化したＤＥＴＣのいずれにおいても検出されなかった。
【０１１６】
機能の研究のための十分な数のＤＥＴＣを入手することおける制限に起因して、ＤＥＴＣ細胞株７−１７を、ＣＤ２００−ＣＤ２００Ｒ相互作用の機能的役割を評価するために使用した。数種の細胞および分子の、基準７−１７細胞は、新しく単離したＤＥＴＣの特性を保持することが示されることによって、そしてＤＥＴＣの機能に取り組む研究において幅広く使用される（例えば、Ｈａｖｒａｎら、（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５２：１４３０−１４３２；Ｍａｔｓｕｅら、（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：６０１２−６０１９；Ｍａｔｓｕｅら、（１９９３）Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１０１：５４３−５４８；Ｍａｔｓｕｅら、（１９９３）Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１０１：５３７−５４２；Ｅｄｅｌｂａｕｍら、（１９９５）Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１０５：８３７−８４３；Ｓｃｈｕｈｍａｃｈｅｒｓら、（１９９５）Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１０５：２２５−２３０；Ｔａｋａｓｈｉｍａら、（１９９５）Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１０５：５０Ｓ−５３Ｓ；およびＯｎｏら、（１９９６）Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｓｃｉ．１１：８９−９６を参照のこと）。７−１７細胞がＣＤ２００Ｒ１を発現する場合を決定するために、休止細胞（Ｃｏｎ  Ａによる活性化後７日より後）を、ＩＬ−２の存在下で、抗ＣＤ３でコーティングしたプレート上で培養した。種々の時点において、細胞をＣＤ２００Ｒ１特異的に染色するために回収した。新しく単離したＤＥＴＣと同様に、７−１７  ＤＥＴＣは、活性化によってＣＤ２００Ｒ１の細胞表面での発現を増加した。しかし、新しく単離したＤＥＴＣと対照的に、ＣＤ２００Ｒ１の発現は、活性化後２４時間で早くも観察された。７２時間までに、おそらく活性化されなかった細胞の集団（減少した前方散乱光（ｆｏｒｗａｒｄ  ｌｉｇｈｔ  ｓｃａｔｔｅｒ））は、ＣＤ２００Ｒ１の発現に関してネガティブなままであった。全４種のＣＤ２００Ｒアイソフォームの発現パターンを決定するために、ｑＲＴ−ＰＣＲを、休止７−１７細胞および抗ＣＤ３活性化７−１７細胞の両方に対して行った。細胞表面の発現と一致して、７−１７細胞は、活性化によってＣＤ２００Ｒ１のｍＲＮＡの増加を示した。ＣＤ２００Ｒ１のｍＲＮＡレベルは、３つの実験の反復にわたって、活性化後７２時間までに平均８．８倍増加した。ＣＤ２００Ｒ２についてのｍＲＮＡは、７２時間までに１．８倍増加したが；この増加は、統計的に有意ではなかった。新しく単離したＤＥＴＣと対照的に、休止７−１７細胞は、低レベルのＣＤ２００Ｒ４のｍＲＮＡを発現し、そして活性化によって、ＣＤ２００Ｒ４のｍＲＮＡは、７２時間までに平均４．１倍増加した。また、新しく単離したＤＥＴＣと対照的に、ＣＤ２００Ｒ２についてのｍＲＮＡは、休止７−１７細胞中で優位に発現した。
【０１１７】
ＣＤ２００シグナル伝達が、インビトロでＤＥＴＣ機能に影響する場合を決定するために、７−１７細胞を、固定化ＣＤ２００．ＦＬＡＧ融合タンパク質の存在下で、最適以下の抗ＣＤ３  ｍＡｂによって活性化し、そして増殖およびサイトカインの分泌の両方を測定した。７−１７細胞を、ＩＬ−２の非存在下で、最適以下の量の抗ＣＤ３抗体（前もって決定された濃度）およびＣＤ２００．ＦＬＡＧ融合タンパク質でプレコーティングしたマイクロウェルプレート上で培養した。ネガティブコントロールとして、細胞を、最適以下の抗ＣＤ３．ＦＬＡＧ融合タンパク質および細菌アルカリホスファターゼ（ＢＡＰ）．ＦＬＡＧ融合タンパク質の両方によってプレコーティングしたプレート上で培養した。ＢＡＰ．ＦＬＡＧ（ＣＤ２００．ＦＬＡＧとほぼ同じ分子量）を、同じ様式で調製し、そしてこれは、ＤＥＴＣと結合しないはずである。ポジティブコントロールとして、７−１７細胞を、最適な量の固定化抗ＣＤ３抗体によって刺激した。固定化ＣＤ２００は、最適以下のＣＤ３刺激に対する７−１７細胞の増殖性の応答を顕著に阻害した。増殖における３倍と１１倍との間の減少は、７−１７  ＤＥＴＣを、３つの実験の反復にわたって、ＢＡＰコーティングしたプレートと比較してＣＤ２００コーティングしたプレート上で培養した場合に観察された。さらに、サイトカインの分泌は、７−１７細胞をＣＤ２００の存在下で活性化した場合に減少した。ＩＬ−２、ＴＮＦα、およびＩＦＮγの顕著な減少は、３つの実験の反復全てにおいて、ＢＡＰ処理した細胞に対してＣＤ２００処理した細胞中で観察された。ＩＬ−５およびＩＬ−１０についての結果は、一貫せず、そしてＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１２（ｐ７０）、およびＭＣＰ−１をアッセイしたが、一貫しては、検出されなかった。
【０１１８】
上記の結果は、ＣＤ２００−ＣＤ２００Ｒ相互作用が皮膚のランゲルハンス細胞集団およびγδ＋  Ｔ細胞集団の両方において調節性の役割を果たすという発見を支持する。
【０１１９】
本明細書中の全ての引用文献は、あたかも個々の刊行物、特許出願、または特許が、全ての図および図面を含む参考として援用されることを具体的かつ個別に示されるのと同程度に、本明細書中に参考として援用される。
【０１２０】
当業者にとって明らかであるような本発明の多くの改変および変形は、本発明の目的、精神および範囲を保護するために、特定の状況、材料、物質の組成、加工、加工工程または複数の加工工程に適合するようになされ得る。全てのこのような改変は、本発明の精神および範囲を逸脱することなく本明細書に添付される特許請求の範囲内であることを意図される。本明細書中に記載される特定の実施形態は、例示の手段としてのみ提供され、そして本発明は、このような特許請求の範囲が与えられる等価物の全範囲に従って、添付の特許請求の範囲の用語によって制限されるべきであり；そして本発明は、例示の手段として本明細書中に存在する特定の実施形態によって制限されるべきではない。
【国際調査報告】
2007518827.tif 000003
2007518827.tif 000004
2007518827.tif 000005
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