(57)【要約】  本発明は、インターロイキン−１βの生物学的利用能を低下または遮断する少なくとも１種の作用物質の治療的有効量を炎症の部位に投与することによる、自己炎症、例えば全身発症若年性特発性関節炎を患う患者に見られる関節炎関節を処置する組成物および方法を含む。
2007525524.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
インターロイキン−１βの生物学的利用能を低下させる１種もしくはそれ以上の活性作用物質の治療的有効量を含んでなる組成物を関節に投与することを含んでなる、若年性特発性関節炎の全身発症を伴う関節を処置する方法。
【請求項２】
活性作用物質がインターロイキン−１β遺伝子の転写を改変する、請求項１の方法。
【請求項３】
活性作用物質がインターロイキン−１β遺伝子の翻訳を改変する、請求項１の方法。
【請求項４】
活性作用物質が、インターロイキン−１βの発現を低下させるように設計された一本鎖ＲＮＡ分子、二本鎖ＲＮＡ分子、アンチセンスＲＮＡ分子、低分子量阻害ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子、または阻害ＲＮＡ分子（ＲＮＡｉ）を含んでなる、請求項１の方法。
【請求項５】
活性作用物質がＩＬ−１β受容体を遮断する、請求項１の方法。
【請求項６】
活性作用物質が、ＩＬ−１βとＩＬ−１β受容体との間の相互作用を遮断するインターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質を含んでなる、請求項１の方法。
【請求項７】
活性作用物質が、ＩＬ−１βとＩＬ−１β受容体との間の相互作用を遮断するインターロイキン−１受容体アンタゴニストペプチドを含んでなる、請求項１の方法。
【請求項８】
活性作用物質が、ＩＬ−１βの放出を改変する、請求項１の方法。
【請求項９】
活性作用物質が、ＩＬ−１βを低下または中和するためにＩＬ−１βに対する抗体を含んでなる、請求項１の方法。
【請求項１０】
活性作用物質が、ＩＬ−１β受容体を遮断する抗体を含んでなる、請求項１の方法。
【請求項１１】
活性作用物質が、約１〜２５０ｍｇ／日で供与される天然に存在するＩＬ−１受容体アンタゴニストの組換え形態を含んでなる、請求項１の方法。
【請求項１２】
活性作用物質が、インターロイキン−１β受容体の発現を低下させるように設計された一本鎖ＲＮＡ分子、二本鎖ＲＮＡ分子、アンチセンスＲＮＡ分子、低分子量阻害ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子、または阻害ＲＮＡ分子（ＲＮＡｉ）を含んでなる、請求項１の方法。
【請求項１３】
活性作用物質が、ＩＬ−１βの放出を阻害する陰イオン輸送阻害因子、リポキシン、およびアルファ−トコフェロールを含んでなる、請求項１の方法。
【請求項１４】
活性作用物質が、不活性ＩＬ−１β前駆体をその成熟した活性形態に変換するタンパク質分解酵素を阻害するオピオイドを含んでなる、請求項１の方法。
【請求項１５】
活性作用物質が、ＩＬ−１βの生物学的機能を中和する抗体を含んでなる、請求項１の方法。
【請求項１６】
インターロイキン−１βの生物学的利用能を低下または遮断できる少なくとも１種の作用物質の有効量を含んでなる組成物を患者に投与することを含んでなる、若年性特発性関節炎の全身発症を患う患者を処置する方法。
【請求項１７】
インターロイキン−１β受容体の生物学的利用能を低下または遮断できる少なくとも１種の作用物質の有効量を含んでなる組成物を患者に投与することを含んでなる、若年性特発性関節炎の全身発症を患う患者を処置する方法。
【請求項１８】
ＳＯＪＩＡを罹患した関節の炎症を低下させる、関節に投与するように適応された１種もしくはそれ以上の活性作用物質の治療的有効量を含んでなる、ＳＯＪＩＡを処置するための組成物。
【請求項１９】
組成物が、ＳＯＪＩＡ患者の発熱、発疹、関節炎および白血球数を低下させる、請求項１８の組成物。
【請求項２０】
１種もしくはそれ以上の活性作用物質が、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）遺伝子転写の１種もしくはそれ以上のモディファイアー；ＩＬ−１β遺伝子翻訳の１種もしくはそれ以上のモディファイアー；ＩＬ−１βの発現を標的とする１種もしくはそれ以上のｓｉＲＭＡ；１種もしくはそれ以上のＩＬ−１β受容体遮断因子；１種もしくはそれ以上のインターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質；１種もしくはそれ以上のインターロイキン−１受容体アンタゴニストペプチド；ＩＬ−１βの放出を改変する１種もしくはそれ以上の活性作用物質；ＩＬ−１βを中和する１種もしくはそれ以上の抗体；ＩＬ−１β受容体を遮断する１種もしくはそれ以上の抗体；１種もしくはそれ以上の組換え、天然に存在するＩＬ−１β受容体アンタゴニスト；ＩＬ−１βの放出を阻害する１種もしくはそれ以上の陰イオン輸送阻害因子、リポキシンおよびアルファ−トコフェロール；不活性ＩＬ−１β前駆体をその成熟した活性形態に変換するタンパク質分解酵素を阻害する１種もしくはそれ以上のオピオイド；ＩＬ−１βの生物学的機能を中和する１種もしくはそれ以上の抗体、それらの混合物および組合わせから選択される、請求項１８の組成物。
【請求項２１】
１種もしくはそれ以上の活性作用物質が、関節自己炎症の処置に適合された、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）遺伝子転写の１種もしくはそれ以上のモディファイアー；ＩＬ−１β遺伝子翻訳の１種もしくはそれ以上のモディファイアー；ＩＬ−１βの発現を標的とする１種もしくはそれ以上のｓｉＲＭＡ；１種もしくはそれ以上のＩＬ−１β受容体遮断因子；１種もしくはそれ以上のインターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質；１種もしくはそれ以上のインターロイキン−１受容体アンタゴニストペプチド；ＩＬ−１βの放出を改変する１種もしくはそれ以上の活性作用物質；ＩＬ−１βを中和する１種もしくはそれ以上の抗体；ＩＬ−１β受容体を遮断する１種もしくはそれ以上の抗体；１種もしくはそれ以上の組換え、天然に存在するＩＬ−１β受容体アンタゴニスト；ＩＬ−１βの放出を阻害する１種もしくはそれ以上の陰イオン輸送阻害因子、リポキシンおよびアルファ−トコフェロール；不活性ＩＬ−１β前駆体をその成熟した活性形態に変換するタンパク質分解酵素を阻害する１種もしくはそれ以上のオピオイド；ＩＬ−１βの生物学的機能を中和する１種もしくはそれ以上の抗体、それらの混合物および組合わせから選択されることを含んでなる製薬学的製剤。
【請求項２２】
請求項１の方法を用いる処置の後に、発熱、発疹、関節炎、白血球数および白血球の沈降速度を監視する段階を含んでなる、ＳＯＪＩＡの治療反応を監視する方法。
【請求項２３】
請求項１８の組成物を用いる処置の後に、発熱、発疹、関節炎、白血球数および白血球の沈降速度を監視する段階を含んでなる、ＳＯＪＩＡの治療反応を監視する方法。
【請求項２４】
自己炎症を罹患する動物に治療作用物質を投与することを含んでなり、ここで作用物質が製薬学的に許容できる担体内のインターロイキン−１β機能のアンタゴニストを含んでなり、ここでアンタゴニストは自己炎症を抑制する、自己炎症を罹患する動物を処置する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生物学的作用性および全身処置組成物の治療的使用、そしてさらに具体的には関節の炎症の全身処置のための組成物および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
若年性リウマチ様関節炎（“ＪＲＡ”）または若年性慢性関節炎（“ＪＣＡ”）とも呼ばれる若年性特発性関節炎（“ＪＩＡ”）は、小児期で最も一般的なリウマチ疾患および短期および長期双方の障害の重要な原因である。「ＪＩＡ」の用語は、それぞれが種々の原因を有しそして種々の宿主反応を起こす疾患の異種群を含む。しかし、すべてが、外部抗原との接触により誘発されるらしい免疫−炎症病理に依存すると考えられる特発性周辺関節炎の伸展を特性とする。ＪＩＡは、三種の主要な疾患症候型に分類される：（１）少数関節炎（ｏｌｉｇｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ）；（２）多発性関節炎；（３）全身発症若年性多発性関節炎（以後「ＳＯＪＩＡ」と称する）。それら三群それぞれは、疾患の最初の六ヵ月間の臨床症候および症状の型により定義される。
【０００３】
既知のＪＩＡの中で、発症の一次様式に基づくすべての三種の主要群は以下のように考えられる：（１）「自己免疫病因」を有し、そして（２）複雑、非メンデル性の遺伝子形質に従う。基となる自己免疫の証拠は、患者の血清中の自己抗体および／または免疫複合体の存在から主として導かれる。抗核抗体は、高い割合で少数関節炎、そして低い程度で多発性関節炎発症を患う小児中に存在し、そしてそれらの抗体はブドウ膜炎の進展の高い危険をもたらす。細胞質および細胞外成分、例えばコラーゲンに対するその他の自己抗体も記載されている。リウマチ様因子（ＲＦ）は、ＪＩＡを患う小児の約３％で検出され、そしてそれらの自己抗体の存在は、疾患が成人発症リウマチ様関節炎から区別できない多発性関節炎発症患者の下位群を規定する（非特許文献１）。
【０００４】
各種のＴ細胞改変が少数関節炎を罹患する主として小児の血液および滑液内に記載されているが、サイトカイン産生の一貫したパターンは発見されていない。少数関節炎および多発性関節炎患者の双方において、可溶性ＩＬ−２ＲおよびＩＬ−１βの増加が血液中で見られた。ＪＩＡのすべて三形態の中で、ＴＮＦ−αおよび可溶性ＴＮＦαＲ（ｐ５５／７５）は、血清および／または滑液（ＳＦ）内で上昇することが見出された。ＳＯＪＩＡ患者では、特に体温の急上昇の前の血中にＩＬ−６の異常な発現が記載され、そしてＩＬ−６レベルは疾患の全身的活性と、関節炎の展開と、そして急性相反応因子の増加と関連する（非特許文献２）。ＩＬ−６分解はＳＯＪＩＡ患者内で見られる線型増殖遅延、血小板増加症および貧血症を媒介すると提案されている（非特許文献３、非特許文献４、非特許文献５、非特許文献６、非特許文献７、非特許文献８、非特許文献９、および非特許文献１０）。
【０００５】
ＨＬＡ分離に関するデータは、少数関節炎および多発性関節炎発症ＪＩＡの場合に疾患の複合した病原病因論への遺伝的基礎を示唆する。しかし、ＳＯＪＩＡの研究は、一貫しない結果となった。最後に、ウイルスおよび細菌の両者が、小児における慢性関節炎と関連すると記載されている。風疹およびパルボウイルスＢ１９は、生物体の持続に従属して、または免疫反応の引き金を引いて慢性関節炎を起こすことができ、それはワクチン接種後関節炎に場合にも同様に記載されている。
【０００６】
ＳＯＪＩＡは、すべてのＪＩＡの場合の約１０％を占める。ＳＯＪＩＡの経過および予後は種々であり。患者の５０％は病状の緩解を伴って単一相経過を取り、他方で残りの５０％は、長期の再発および鎮静過程ならびに多発性慢性関節炎の非常に重い形態に展開する。ＳＯＪＩＡの患者は、致命的合併症となり得る食血細胞症候群に展開する高い危険も示す（非特許文献１）。
【０００７】
ＳＯＪＩＡを患う小児は、通常数週間から数年間で関節炎への展開が続く重い全身症候（発熱および発疹）を示す。本疾患の目立つ特質である高い急上昇発熱には、通常１〜２回上昇／日の毎日のパターンが続く。発熱がないと患者はいかにも軽快したように見えるが、発熱急上昇と共に非常に不調となる。多くの患者で、発熱はサーモン・ピンクの発疹を伴い、それは発熱と同時に目立つようになる。それに加えて、ＳＯＪＩＡを患う小児は、肝脾腫大、リンパ節障害、心膜炎およびその他の漿膜炎を発現を有することがある。それらの全身発現は、数週間から数カ月間継続しそして結局は慢性関節炎の発現に落ち込む。患者の約５０％は少数関節炎の関与を示しそして最後には回復する。別の半分は、多発性パターンに進展し、その予後はその疾患経過の六ヵ月で罹患した関節の数と相関する。ＳＯＪＩＡを罹患した小児の４８％までが診断以後１０年間で活性関節炎となる（非特許文献１、および非特許文献１１）。
【０００８】
ＳＯＪＩＡの診断を確定するために利用できる特定の試験も、その臨床経過を確認するための既知の診断的指標もない。発熱、貧血、白血球増加症および上昇した赤血球沈降速度（ＥＳＲ）が、この疾患の主要な初期特徴であり、時には診断が確定できるまで数カ月も継続する。それらの症状は非特異性でありそして感染症、悪性腫瘍およびその他の疾患と類似することがあるので、患者は、一連の非常に経費がかかる診断試験および長期の入院を受けることになる。
【０００９】
ＳＯＪＩＡを患う患者での最も重い合併症の一つは、マクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）としても知られる食血細胞症候群の展開である（非特許文献１）。感染および腫瘍性疾患の範囲内でも同様に起こり得る食血細胞症候群は、重大な病的状態および／または死亡と関連する。特にＳＯＪＩＡの範囲内でのその病因は未知である。ＭＡＳの家族性の場合は、パーフォリン（標的細胞への細胞毒性Ｔ細胞／天然キラー細胞によるグランザイムの放出に関与する）またはＲａｂ２７（グランザイム小胞顆粒消失の制御に関与する）のような遺伝子内の変異によるウイルスキリングの欠失の結果として起きる。
【非特許文献１】Ｃａｓｓｉｄｙ，ＪＴ  ａｎｄ  Ｒｏｓｓ，Ｅ．２００１，Ｔｅｘｔ  Ｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ，第４版，Ｂｏｏｋｓ  ｏｎ  Ｄｅｍａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｖｉｓｂｙ，Ｓｗｅｄｅｎ；２１８−３２１ページ
【非特許文献２】Ｙｏｋａｔａ，Ｓ．２００３，“Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  ａｓ  ａ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔ  ｉｎ  ｓｙｔｅｍｉｃ−ｏｎｓｅｔ  ｊｕｖｅｎｉｌｅ  ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ”，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  １５：５８１−５８６
【非特許文献３】ｄｅ  Ｂｅｎｅｄｅｔｔｉ  Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ  ３４：１１５８−１１６３
【非特許文献４】Ｍａｎｇｇｅ，Ｈ，ｅｔ  ａｌ．，１９９９．Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ  １９：１００５−１０１０
【非特許文献５】Ｏｚｅｎ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．，１９９７．Ｃｌｉｎ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  １６：１７３−１７８
【非特許文献６】ｄｅ  Ｂｅｎｅｄｅｔｔｉ  Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，１９９９．Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  ２６：４２５−４３１
【非特許文献７】Ｍｕｌｌｅｒ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．１９９８．Ｂｒ  Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  ３７：５６２−５６９
【非特許文献８】Ｓｈａｈｉｎ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，２００２．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  Ｉｎｔ  ２２：８４−８８
【非特許文献９】ｄｅ  Ｂｅｎｅｄｅｔｔｉ  Ｆ，ｅｔ  ａｌ．，１９９２．Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  １０：４９３−４９８
【非特許文献１０】Ｍｕｚａｆｆｅｒ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，２００２．Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  ２９：１０７１−１０７８
【非特許文献１１】Ｌｏｍａｔｅｒ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｒｈｅｕｎｍａｔｏｌ  ２７：４９１−４９６
【発明の開示】
【００１０】
発明の要旨
従って、ＳＯＪＩＡは特定の処置が決定されていない未知病因の慢性炎症性疾患のままである。広範な研究にもかかわらず、ＳＯＪＩＡを患う患者の複数薬による処置は、少数関節炎及び多発性関節炎のものと同様であり、それは疾患の相（全身相に対する関節炎相）および関与の範囲に依存する。少数の患者は、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）で軽快するが、大部分の小児は症状を制御するために経口および／または非経口ステロイドならびにメトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）の使用を必要とする。静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）は、治療に不応性の場合に使用されている。最近では、抗ＴＮＦ治療（例えばエタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）およびインフリキシマブ（ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）がそれらの治療法に加えられた。それにもかかわらず、それらの医薬に関連するいくつかの限界および危険がある。例えば、免疫抑制性医薬、例えばメトトレキセートおよびステロイドを用いるそれら患者の長期処置は、ウイルス感染を排除する患者の能力の障害と関連があると報告されている。静脈内免疫グロブリン処置は、血液誘導製品の輸液と関連する危険を伴う。本発明は、ＳＯＪＩＡ患者が同様に反応せずそして症状を制御するためにＪＩＡの他の型よりも高い抗ＴＮＦ作用物質の投与を必要とすることを発見した。従って、ＳＯＪＩＡ疾患に対する効果的な薬剤効果の検証に対する継続的な要求がある。
【００１１】
ＩＬ−１遮断は、自己免疫疾患を伴う炎症性関節炎を患う患者を処置するための効果的な作用物質として報告されている。臨床試験は、リウマチ様関節炎を患う成人および若年性関節炎の種々の型を患う小児に関して行われた。組換えヒトＩＬ−１受容体アンタゴニストであるアナキンラ（Ａｎａｋｉｎｒａ）（Ｋｉｎｅｒｅｔ(R)、Ａｍａｇｅｎ製造）は、ＩＬ−１とその受容体との相互作用を遮断する能力を有し、従ってＩＬ−１の細胞反応を遮断する。アナキンラを用いる臨床試験は、重いリウマチ様関節炎を患う患者で行われた。一日あたり１５０ｍｇで、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ指数に基づいて４３％の反応率が得られ、これに比較して偽薬群では２７％であった。しかし、ＩＬ−１アンタゴニストを用いる臨床試験は、関節炎を患うかまたは患っていない場合に発熱および／もしくは発疹の存在により定義される、疾患の全身相の間に全身発症関節炎を患う小児または成人では行われなかった。さらに、ＩＬ−１は、ＳＯＪＩＡ疾患では意味のある役割を持たないと報告されている（ｄｅ  Ｂｅｎｅｄｅｔｔｉ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，“Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １  ｂｅｔａ  ａｎｄ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ｉｎ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｊｕｖｅｎｉｌｅ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，”Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  １３：７７９−７８４）。
【００１２】
自己炎症性疾患は、先天的免疫系の改変と関連する疾患である。先天的免疫系の細胞、例えば好中球、単球、マクロファージおよびＮＫ細胞は、体内生成受容体の欠失、抗原特異性細胞のクローン増殖および「免疫学的記憶」を与える能力がそれらにないことを特性とする。
【００１３】
自己炎症性疾患は、臨床的には自己免疫疾患と類似するが、自己炎症を患う患者は、多数の自己免疫疾患の明確な特徴である自己抗体を決して生成しない。反対に、大部分の自己炎症性疾患は、通常断続的または周期的な様式で発熱を起こし、そして皮膚および関節がしばしば炎症の標的となる。過去５年間に、少なくとも９種の家族性自己炎症性疾患に関連する遺伝子が報告されている。それらは、家族性地中海熱（ＦＭＦ）、腫瘍壊死因子関連周期性発熱症候群（ＴＲＡＰＳ）、高ＩｇＧ、周期性好中球減少、家族性寒冷蕁麻疹（ＦＣＵ）、マックル−ウエルズ（Ｍｕｃｋｌｅ−Ｗｅｌｌｓ）症候群、慢性炎症性神経性および関節性症候群（ＣＩＮＣＡ）、家族性肉芽腫疾患（ブラウ（Ｂｌａｕ）症候群）、およびクローン病を含む（Ｈｕｌｌ，ＫＭ．ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｃｕｒｒ４．Ｏｐｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  １５：６１−６９に総説）。大部分の自己炎症性疾患は単一の遺伝子変異の結果であるが、複合遺伝子形質、例えば潰瘍性大腸炎およびクローン病のある種の型、およびさらに原因が遺伝子的ではないであろうベーチェット病に続くものがいくつかある。
【００１４】
反対の報告にもかかわらず、本発明者は、ＳＯＪＩＡが自己炎症性疾患でありそしてインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）の生物学的利用能を低下または遮断することがＳＯＪＩＡ患者に対する効果的な治療的処置であることを発見した。一つの局面では、本発明は、インターロイキン−１βの生物学的利用能を低下または遮断できる少なくとも１種の作用物質の有効量を含む組成物を患者に投与することによる、全身発症した若年性特発性関節炎を患う患者を処置する方法である。
【００１５】
さらに特定すると、本発明は、インターロイキン−１βの生物学的利用能を低下する１種もしくはそれ以上の活性作用物質の治療的有効量を含む組成物を関節に投与することによる、自己炎症、例えば全身発症した若年性特発性関節炎を有する関節を処置する組成物および方法を含む。該活性作用物質は、インターロイキン−１β遺伝子の転写またはインターロイキン−１β遺伝子の翻訳を改変できる。あるいは、活性作用物質は、インターロイキン−１βの発現を低下するように設計された一本鎖ＲＮＡ分子、二本鎖ＲＮＡ分子、アンチセンスＲＮＡ分子、低分子量阻害ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子、または阻害ＲＮＡ分子（ＲＮＡｉ）であってもよい。別の活性作用物質は、ＩＬ−１β受容体を遮断、例えばＩＬ−１βとＩＬ−１受容体との間の相互作用を遮断するインターロイキン−１β受容体アンタゴニストタンパク質またはペプチドであってもよい。
【００１６】
さらに別の活性作用物質は、ＩＬ−１βまたはＩＬ−１βの抗体を放出を改変してＩＬ−１βまたはＩＬ−１β受容体をも低下または中和する。一つの特定の例では、活性作用物質は、一日あたりに約１、１０、１５、２０、２５、５０、１００、１２５、１５０、１７５、２００およびさらには２５０ｍｇの間を提供される天然に存在するＩＬ−１β受容体アンタゴニストであってもよい。小児科患者には投与量をしばしば半分としてもよい。活性作用物質は、インターロイキン−１β受容体の発現を標的としそして低下するように設計された一本鎖ＲＮＡ分子、二本鎖ＲＮＡ分子、アンチセンスＲＮＡ分子、低分子量阻害ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子、または阻害ＲＮＡ分子（ＲＮＡｉ）であってもよい。ＩＬ−１βの放出に影響またはそれを抑制する活性作用物質の例は、陰イオン輸送阻害因子、例えばリポキシンおよびアルファ−トコフェロールを含む。別の例は、不活性ＩＬ−１β前駆体をその成熟した活性形態に変換するタンパク質分解酵素を阻害するオピオイドを含む。さらに別の例は、ＩＬ−１βの生物学的機能を中和する抗体を含む。
【００１７】
本発明のさらに別の例は、インターロイキン−１βの生物学的利用能を低下または遮断できる少なくとも１種の作用物質の有効量を含む組成物を患者に投与することによる全身発症した若年性特発性関節炎を患う患者の治療のための方法である。該組成物は、インターロイキン−１β受容体の生物学的利用能を低下または遮断できる少なくとも１種の作用物質の有効量を含んでもよい。例えば、ＳＯＪＩＡで処置するための組成物は、ＳＯＪＩＡの影響を受けた関節の炎症を低下させる、関節への送達のために適合された１種もしくはそれ以上の活性作用物質の治療的有効量を含む。該組成物はＳＯＪＩＡ患者の下記の症状：発熱、発疹、関節炎および白血球数の１種もしくはそれ以上を低下することを援助する。該組成物は、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）遺伝子転写のモディファイアー；ＩＬ−１β遺伝子翻訳のモディファイアー；ＩＬ−１βの発現を標的とするｓｉＲＮＡ；ＩＬ−１β受容体遮断因子；インターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質；インターロイキン−１受容体アンタゴニストペプチド；ＩＬ−１βの放出を改変する活性作用物質；ＩＬ−１βを中和する抗体；ＩＬ−１β受容体を遮断する抗体；組換え、天然存在ＩＬ−１β受容体アンタゴニスト；ＩＬ−１βの放出を阻害する陰イオン輸送阻害因子、リポキシンおよびアルファ−トコフェロール；不活性ＩＬ−１β前駆体をその成熟した活性形態に転換するタンパク質分解酵素を阻害するオピオイド；ＩＬ−１βの生物学的機能を中和する抗体、およびそれらの混合物または組み合わせである１種もしくはそれ以上の活性作用物質を含んでもよい。製薬学的組成物製剤は、関節自己炎症を処置するように適合されてもよくそして、静脈内、筋肉内、経口、経鼻、直腸、腹腔、皮下、皮内（例えば貼付剤）、などを含む各種の投与剤型で利用されてもよい。
【００１８】
本発明は、本明細書中で教示および開示された方法および組成物を用いる処置後の発熱、発疹、関節炎、白血球数および／または白血球沈降速度を監視して、自己炎症性疾患、例えばＳＯＪＩＡに対する治療反応を監視する方法も含む。本発明は、広範な種々の範囲、例えば、自己炎症を患う動物に治療作用物質を投与することにより自己炎症を患う動物の処置で利用を見だすであろうし、ここで該作用物質は、アンタゴニストが自己炎症を抑制する、製薬学的に許容できる担体内のインターロイキン−１β機能のアンタゴニストを含む。
【００１９】
発明の詳細な説明
本発明の各種の態様の構成および使用は以下に詳細に考察されるが、本発明は、各種の特定範囲のなかで実現できる多数の適用可能な発明性概念を提供することが認められなければならない。本明細書中で考察する特定の態様は、本発明の構成および使用のための特定の方向を単に説明するものであって、本発明の範囲を制限するものではない。
【００２０】
本発明の理解を容易にするために、多数の用語を以下に定義する。本明細書中に定義した用語は、本発明に関連する分野における通常の技術者に一般的に理解される意味を有する。「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」のような用語は、単一の物のみを指すことを意図しないで、特定の例が説明のために使用される一般的な分類を含む。特許請求項内に使用される場合に、「含んでなる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」の用語と関連して、「ａ」または「ａｎ」の語は、一つまたは一つ以上を意味してもよい。本明細書中に使用される場合に「もう一つ（ａｎｏｔｈｅｒ）」は、ある項目の少なくとも少なくとも二つ目または一つを越えることを意味してもよい。本明細書中の用語は、本発明の特定の態様を記述するために使用されるが、しかしそれらの使用は特許請求項内で輪郭を述べたものを除いて、本発明を限定しない。
【００２１】
本明細書中に使用される場合に、「治療的有効」の用語は、自己炎症性疾患、例えばＳＯＪＩＡと関連するいくつかの症状を改善するために必要な化合物の量を定義するために使用される。例えば、自己炎症の治療において、本発明は、いずれかの程度まで健康または関節の動きを改善するかまたは関節疾患のいずれかの症候を阻止する１種もしくはそれ以上の活性作用物質が治療的に有効であることを含む。化合物の治療的有効量は、疾患を治療するために必要ではないが、しかし疾患の処置を提供する。
【００２２】
本明細書中に使用される場合に、「インターロイキン−１βの生物学的利用能を低下する１種もしくはそれ以上の活性作用物質の治療的有効量」の語句は、自己炎症の範囲および程度を低下させるように、関節にもしくはその周囲に、または全身的もしくは局所的に動物に投与された場合に、ＩＬ−１β受容体から下流側において、ＩＬ−１β発現、翻訳、プロセシング、放出または活性の阻害因子；ＩＬ−１β受容体発現、翻訳、プロセシング、放出または活性の阻害因子；および／または二次メッセンジャー発現、翻訳、プロセシング、放出または活性の阻害因子の量である。
【００２３】
本明細書中に使用される場合に、「インターロイキン−１β受容体」は、インターロイキン−１βの同族の受容体を記述するために使用される。受容体の活性化を起こすと否とにかかわらす、特異的に結合する作用物質の非限定的な例は下記を含む：インターロイキン−１β、抗インターロイキン−１β受容体抗体またはそのフラグメント、ペプチド、タンパク質、糖タンパク質、脂タンパク質、エピトープ、脂質、レクチン、炭水化物、多分子構造体、および１個もしくはそれ以上の分子の特異性立体配位体。「受容体」は、標的器官、組織または細胞タイプ、例えば関節の細胞表面上に一般的に存在する天然に存在する分子または分子の複合体である。
【００２４】
本明細書中に使用される場合に、「改変」または「モディファイアー」の用語は、遺伝子または遺伝子産物の機能の上方または下方制御を含むと意図し、例えば遺伝子または遺伝子産物の転写、翻訳、プロセシング、放出または改変に影響する。活性作用物質は、インターロイキン−１β遺伝子の転写を改変してもよい。改変の例は、例えば転写または転写後サイレンシング、メッセージ安定性の変化などを含む。転写後改変の例は、遺伝子産物またはタンパク質の成熟、転写後改変（例えばグリコシル化、ジスルフィド結合、ミリスチル化、プロテアーゼ切断、他のタンパク質との結合、ユビキチン化等）を含む。タンパク質のプロセシング、輸送および放出は、例えば放出の前に蓄積性細胞内小器官内への配置により、放出に影響する他のタンパク質との結合により、などにより改変されてもよい。
【００２５】
本発明者は、ＳＯＪＩＡが自己免疫疾患というよりは自己炎症性疾患であることを認めた。従って、本発明の一つの局面は、適応免疫系というよりは、先天的免疫系の細胞（および細胞産物）を標的とするＳＯＪＩＡの処置である。
【００２６】
本発明に従って、ＩＬ−１βは、「自己炎症性」疾患における炎症の基本的媒介体であることをここに発見した。さらに、ＩＬ−１β改変は、ＳＯＪＩＡを含みそれに限定はされない自己炎症性疾患の処置に有効であり得る。
【００２７】
本発明の一つの態様において、製剤は、１種もしくはそれ以上のＩＬ−１β阻害因子、例えばＩ型およびＩＩ型ＩＬ−１受容体（例えばＩＩ型ＩＬ−１受容体のＩＬ−１結合フラグメント、例えば米国特許第５，３５０，６８３号明細書参照、関連する部分は引用することにより本明細書に編入される）；Ｉ型ＩＬ−１受容体のＩＬ−１結合およびＩＬ−１阻害フラグメント；ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、ＩＬ−１β変換酵素（ＩＣＥ）阻害因子、ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βおよびその他のＩＬ−１ファミリー物質を含むＩＬ−１に対する抗体、およびＩＬ−１捕そく剤および拮抗的Ｉ型ＩＬ−１受容体抗体として知られる治療物質の治療的有効量を含む。本発明に使用されるその他の特異性ＩＬ−１阻害因子は、ＩＬ−Ａ  ＲＡおよびその変種またはフラグメントを含む（例えば米国特許第５，９２２，５７３号明細書参照、関連する部分は引用することにより本明細書に編入される）。さらに別の活性作用物質は、ＩＬ−１β変換酵素（ＩＣＥ）阻害因子、例えばＰＣＴ特許出願ＷＯ９３／１６７１０号明細書中に記載のものを含むペプチジルおよび小分子ＩＣＥ阻害因子；および欧州特許出願０  ５４７  ６９９号明細書（関連する部分は引用することにより本明細書に編入される）である。非ペプチジル化合物（例えば米国特許第６，１２１，２６６号明細書参照、関連する部分は引用することにより本明細書に編入される）およびＩＣＥ（例えば米国特許第６，２０４，２６１号明細書参照、関連する部分は引用することにより本明細書に編入される）。その他のＩＬ−１アンタゴニストは、抗体分子およびＩＬ−１アンタゴニスト分子の双方の部分を含むキメラタンパク質、キメラおよびその多量体、およびＩＬ−１アンタゴニスト、例えばＩＬ−１シグナリング受容体、ＩＬ−Ｉ  ＲＩおよび／またはＩＬ−Ｉ  ＲＩに競合的に結合できるＩＬ−１から誘導されたペプチドを含む。
【００２８】
具体的には、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）の生物学的利用能を著しく低下または効果的に遮断する作用物質を投与することがＳＯＪＩＡ患者にとって治療的選択肢であることをここに発見した。本明細書中で使用される場合に、ＩＬ−１βの生物学的利用能の著しい低下は、ＳＯＪＩＡ患者内の症状および／または疾患進行の低下をもたらすために十分な生物学的利用可能なＩＬ−１βの低下として定義される。本発明において、ＩＬ−１βの生物学的利用能を著しく低下または効果的に遮断できる少なくとも１種の作用物質をＳＯＪＩＡと診断された患者に投与して、症状および疾患進行の低下をもたらす。（ＩＬ−１β）の生物学的利用能を低下または遮断できる１種を越える作用物質が同時にまたは連続してＳＯＪＩＡ患者に投与できることを意図する。（ＩＬ−１β）の生物学的利用能を低下または遮断できる１種を越える作用物質が、他の薬剤処置と組み合わされて、同時にまたは連続してＳＯＪＩＡ患者に投与できることもさらに意図する。
【００２９】
本発明を用いて有用な投与剤型を作製する技術および組成物は、下記に引用文献の１種もしくはそれ以上に記載されている：米国薬局方（ＵＳＰ＃２４ＮＦ１９）（Ｈａｒｄｃｏｖｅｒ  Ｔｅｘｔ  ｗ／３  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ）（米国薬局方２００２）。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（第２１版、以前はＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．２００５）；Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｄａｖｉｄ  Ｇａｎｄｅｒｔｏｎ，Ｔｒｅｖｏｒ  Ｊｏｎｅｓ，Ｅｄｓ．１９９２）など（関連する部分は引用することにより本明細書に編入される）。
【００３０】
一般に、本発明の治療製剤は予防または治療介入の必要な人間に、水、適当な油、食塩水、デキストロース水溶液（例えばグルコース、ラクトースおよび関連糖類溶液）およびグリコール類（例えばプロピレングリコールまたはポリエチレングリコール）または静脈内または非経口投与のために適当な他の担体中で供与される。非経口投与のための溶液は、一般に活性成分の水溶性塩、適当な安定化剤、および必要な場合には緩衝塩を含む。クエン酸およびその塩および／またはＥＤＴＡナトリウムも安定性を増すために含まれてもよい。抗酸化剤、例えば単独または組み合わされた亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウムおよび／またはアスコルビン酸が適当な安定化剤である。さらに、溶液は製薬学的に許容できる保存剤、例えば塩化ベンザルコニウム、メチル−またはプロピル−パラベン、および／またはクロロブタノールを含んでもよい。適当な製薬学的担体は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ（上記）に記載されている。
【００３１】
一つの態様では、ＳＯＪＩＡの処置はインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）遺伝子の転写を著しく低下または効果的に遮断する少なくとも１種の作用物質の一定量を投与することを含む。インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）遺伝子の転写を遮断するために適する本発明の例示的な作用物質は、アンチセンスＲＮＡ化合物（Ｍｅｈｔａ  ｅｔ  ａｌ．２０００．“Ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ−１  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｓｋｉｎ  ｂｙ  ｔｏｐｉｃａｌ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ｓｅｎｓｅ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，”Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  １１５）：８０５−８１２；Ｆｒａｎｋｅｌ  ＡＥ  ｅｔ  ａｌ．２００１．“Ｎｏｖｅｌ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｆｏｒ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋａｅｍｉａ，”ＢｉｏＤｒｕｇｓ  １５：５５−５７；Ｌｏｒｅｎｚ  ＨＭ  ａｎｄ  Ｋａｌｄｅｎ  ＪＲ，２００１．“Ｎｅｗ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｅｔｉｓ，”Ｚ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  ６０：３２６−３２．；Ｉｄｅｏ  Ｇ  ａｎｄ  Ｂｅｌｌｏｂｕｏｎｏ  Ａ．２００２．“Ｎｅｗ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ．”Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｄｅｓ  ８：９５９−９６６；Ｓａｎｂｏｒｎ  ＷＪ  ａｎｄ  Ｔａｒｇａｎ  ＳＲ．２００２．“Ｂｉｏｌｏｇｉｃ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ，”Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １２２：１５９２−１６０８）を含むがそれらに限定はされない。
【００３２】
別の態様では、ＳＯＪＩＡの処置は、インターロイキン−１受容体アンチセンスタンパク質またはペプチドを含む、ＩＬ−１β受容体を著しく低下または効果的に遮断する少なくとも１種の作用物質の一定量を投与することを含む。ＩＬ−１β受容体を遮断するために適する本発明の例示的な作用物質は、単離された天然に存在するＩＬ−１受容体アンタゴニストを含むがそれらに限定はされない。かかる作用物質の一つは、天然に存在するＩＬ−１受容体アンタゴニストの組換え形態であり市場で入手できるアナキンラ（Ａｎａｋｉｎｒａ）（Ｋｉｎｅｒｅｔ(R)、Ａｍａｇｅｎ製造）である。
【００３３】
さらに別の態様では、ＳＯＪＩＡの処置は、ＩＬ−１βの放出を著しく低下または効果的に遮断する少なくとも１種の作用物質の有効量を投与することを含む。例示的な作用物質は、陰イオン輸送阻害因子、リポキシン、およびアルファ−トコフェロールを含む。さらに別の態様では、ＳＯＪＩＡの処置は、活性ＩＬ−１β前駆体をその成熟した活性形態に転換するタンパク質分解酵素であるＩＬ−１β変換酵素の活性を著しく低下または効果的に遮断する少なくとも１種の作用物質の有効量を投与することを含む。例示的な作用物質はモルホリンおよびその他のオピオイドを含む。
【００３４】
本発明は、ＩＬ−１βに対する抗体の投与を含むことをさらに意図する。ＩＬ−１βに対する抗体は、当該技術分野では公知のいずれかの手段により製造できる。例えば、モノクローナル抗体は、高度に抗原性と見なされるエピトープを含む組換えＩＬ−１βまたは１種もしくは数種の合成ペプチドを用いてマウスを免疫化して産生できる。あるいは、ポリクローナル抗体は、上記の抗原を用いてラビットを免疫化して産生できる。産生された抗体は、ＩＬ−１タンパク質と相互作用するその能力およびＩＬ−１媒介細胞反応を遮断するその能力を決定するために試験される。一旦ハイブリドーマ技術を用いて産生されると、モノクローナル抗体は次いでマウスおよびヒトフレームワークおよび定常領域を交換してヒト化される。本発明に従って、ＩＬ−１βの生物学的効果を遮断する抗体は、繊維芽細胞からのＩＬ−８のＩＬ−１誘導放出を遮断し、それはＫａｐｌａｎｓｋｉ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．１９９４．“Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−８  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ａ  ｊｕｘｔａｃｒｉｎｅ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ，”Ｂｌｏｏｄ  ８４：４２４２−４２４８に記載されている。次いで、ＩＬ−１β抗体はＩＬ−１βの生物学的機能を著しく低下または効果的に遮断するための有効量でＳＯＪＩＡ患者に静脈内または皮下に投与される。
【００３５】
本発明に従って、ＳＯＪＩＡ患者の治療反応は、患者の臨床的改善、すなわち発熱、発疹および関節炎の消失および／または改善、ならびに白血球数および沈降速度の正常化を評価して監視される。
【００３６】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの健康な血液単核細胞（ＰＢＭＣ）と一緒のＳＯＪＩＡ患者血清の培養がＩＬ−１ベータ（ＩＬ−１β）転写の著しい低下をもたらすという知見に基づいて（実施例１）、さらに慣用の攻撃的な処置にもかかわらず１年間以上継続した活性疾患を患う二人の患者を、ＩＬ−１の生物学的活性を中和するとして知られており市場で入手できる抗ＩＬ−１薬剤（アナキンラ、Ａｍｇｅｎ  Ｉｎｃ．，Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ，ＣＡ）を用いて処置した。実施例２および３に示すように、双方の患者は治療開始の翌日には無症状となり、そして３カ月の間無症状のままであった。
【実施例１】
【００３７】
ＳＯＪＩＡ血清を用いる健康なＰＢＭＣのインキュベーションはインターロイキン−１βの転写的上方制御を誘導する。遺伝子発現プロフィールは、自己の血清または２種の未処理および２種の処理ＳＯＪＩＡ患者からの血清を用いて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで６時間のインキュベーションの前後に健康なドナーＰＢＭＣについて分析した。血清を用いるインキュベーションの後に、ＲＮＡを抽出するためにＰＢＭＣを処理し、そしてＲＮＡをＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  Ｕ１３３ＡおよびＢマイクロアレイチップにハイブリダイズした。この方法で、転写がＳＯＪＩＡ血清で上方制御または下方制御される遺伝子の広範なアレイをスクリーニングした。
【００３８】
患者集団。ＳＯＪＩＡ患者２３人（女性１５人、男性８人、平均年齢７．１歳）からのＡＣＲ診断基準３４を満足するＰＢＭＣおよび血清を数回採取した。患者が全身症状（発熱および／または発疹）および／または活性関節炎（腫れおよび／または痛みおよび制約された関節）の場合に、患者を活性と分類した。対照集団は、小児１２人（平均１４歳）および成人７人（平均３５歳）から成っていた。健康な対照からの血清を、自己および異種ＰＢＭＣと共に数回培養した。患者および小児対照はＤａｌｌａｓのＴｅｘａｓ  Ｓｃｏｔｔｉｓｈ  Ｒｉｔｅ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  ｆｏｒ  Ｃｈｉｌｄｒｅｎから募集した。本研究は、ＵＴ  Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｔｅｘａｓ  Ｓｃｏｔｔｉｓｈ  Ｒｉｔｅ  ＨｏｓｐｉｔａｌおよびＢａｙｌｏｒ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｃａｒｅ  ＳｙｓｔｅｍのＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄｓにより承認され（ＩＲＢ＃０１９９０１７７，００７０１−５１３）そして両親または法的後見者からインフォームドコンセントを得た。
【００３９】
ＰＢＭＣ培養およびＲＮＡ抽出。ＰＢＭＣは血液２０ｍｌのＦｉｃｏｌｌ−Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ勾配遠心分離により得られた。ＰＢＭＣは、自己またはＳＯＪＩＡ患者の血清２０％を補足したＰＲＭＩ  １６４０中で６時間培養した（１０６／ｍｌ）。ＲＮＡはＲＮＡｅａｓｙキット（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）を用いて抽出しそしてＡｇｉｌｅｎｔ  ２１００  Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を用いて評価した。上清を−８０℃で冷凍した。ＰＢＭＣは、ＰＭＡ（５０ｎｇ／ｍｌ）−イオノマイシン（１μｇ／ｍｌ）を加えたＰＲＭＩ  １６４０および１０ウシ胎児血清を用いて２４時間培養した。細胞を採取しそしてＲＮＡを上記のようにして抽出した。上清を−８０℃で冷凍した。
【００４０】
マイクロアレイおよび実時間ＰＣＲ。マイクロアレイ分析のための試料は、記載１８の通りに処置しそして２２，２８３プローブ・セットを含むＨＧＵ１３３Ａ  Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  ＧｅｎｅＣｈｉｐアレイ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  Ｉｎｃ．，Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ，ＣＡ）に４５℃で１６時間ハイブリダイズした。ＧｅｎｅＣｈｉｐアレイは、ＧｅｎｅＣｈｉｐ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）中に記載のプロトコールに従って洗浄、染色および走査した。走査したＧｅｎｅＣｈｉｐを目視で異常または不規則に関して検査した。
【００４１】
図１は、サイトカイン−サイトカイン発現の遺伝子アレイの図である。自己血清（ＡＳ）または４人のＳＯＪＩＡ患者からの血清を用いた健康なＰＢＭＣのインキュベーションをｉｎ  ｖｉｔｒｏで６時間行った。ＳＯＪＩＡ血清はＩＬ−１ファミリーのメンバーの転写の上方制御を誘導したことが認められた。星印は、ＳＯＪＩＡ患者ＰＢＭＣ中で遺伝子転写がｉｎ  ｖｉｖｏで著しく上昇制御されたことを示す。
【００４２】
データ分析。ＭＡＳ５．０中のグローバルスケーリングを用いて強度値を５００にスケーリングしそして遺伝子発現分析のためにデータをＧｅｎｅＳｐｒｉｎｇソフトウエア（Ｓｉｌｉｃｏｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｒｅｄｗｏｏｄ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）中に入れるためにＭＳ  Ｅｘｃｅｌで送った。グローバルスケーリングがＭＡＳ５．０で適用されたので、「チップ毎」の正規化は行わなかった。グローバルスケーリングはハイブリダイゼーション強度におけるチップとチップ間の変動に関して調整した。小児の健康対照に対しおよび／またはすべての試料の中央値に関してその後の試料を正規化した。統計的比較は、パラメーター法（Ｗｅｌｃｈ’ｓ  ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅ  ｔ−ｔｅｓｔ）および非パラメーター法（Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ  Ｕ−ｔｅｓｔ）を用いてＧｅｎｅＳｐｒｉｎｇ中で行った。非管理（ｕｎｓｕｐｅｒｖｉｓｅｄ）階層クラスタリングは、５０以上のコントロールサイン（背景強度の上）を有しそしてＭＡＳ５．０に従ってすべての試料の１５％中で「存在」と同定された転写物を可視化するために行った。統計的比較は、パラメーター法（Ｗｅｌｃｈ’ｓ  ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅ  ｔ−ｔｅｓｔ）および非パラメーター法（Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ  Ｕ−ｔｅｓｔ）の双方を用いてＧｅｎｅＳｐｒｉｎｇ中で行った。非管理階層クラスタリングは、指定された場合に、標準相関、Ｐｅａｒｓｏｎ相関またはＥｕｃｌｉｄｉａｎ距離を用いて転写体／試料の関係を可視化するために行った。
【００４３】
二段ＲＴ−ＰＣＲは、要求されたプローブに関しおよび製造者の指示に基づくプライマーセットを用いてＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ＴａｑＭａｎアッセイそしてＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ７７００配列検出システム（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて行った。外因性ＧＡＰＤＨ遺伝子および／または１８Ｓ  ＲＮＡは、製造者により記載されたように相対的定量のための比較閾値サイクル（ＣＴ）法を用いて結果を相関するために使用した。
【００４４】
Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ分析（Ｌｕｍｉｎｅｘ）。製造者のプロトコールに従って、ＦｌｕｏｒｉｋｉｎｅＭＡＰサイトカインアッセイキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を用いて、培養上清を６サイトカインおよびケモカインについて分析した。
【００４５】
図２ＡはＳＯＪＩＡ血清と一緒にインキュベーションした健康なＰＢＭＣ中のインターロイキン−１β（ＩＬ−ｂ）タンパク質分泌の誘導を比較した図である。１２個のＳＯＪＩＡ血清と一緒の健康なＰＢＭＣおよび３個の健康な対照の６時間インキュベーションからの上清をＩＬ−１β産生に関してＬｕｍｉｎｅｘによりアッセイした。
【００４６】
図２Ｂは、全身症状を有するかまたは有していないＳＯＪＩＡ患者内でのＩＬ−１ｂタンパク質分泌の誘導を比較した図である。ＩＬ−１ｂタンパク質分泌は、活性関節炎のみを有する患者（ＳＯＪＩＡ２、ｎ＝７）よりも、全身症状を経験しているＳＯＪＩＡ患者（ＳＯＪＩＡ１、ｎ＝５）からの血清により多く誘導される。すべての結果は非パラメーター法（Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ）により解析された。
【００４７】
図３Ａ〜Ｆは、体温（図３Ａ）、活性関節（疾病の影響を受けた関節）数（図３Ｂ）、ＷＢＣ（図３Ｃ）、ヘモグロビン（図３Ｄ）、血小板数（図３Ｅ）、およびＳＯＪＩＡ患者９人内のＥＳＲ（図３Ｆ）の値を示した図である。Ｘ値は、アナキンラ処置開始（０）の前の月数（−２）および以後の２〜１２カ月追跡（平均６．６カ月）を表す。矢印は、処置開始の時点を示す。Ｐ値は時点０および追跡２カ月で値を算出した（ｐａｉｒｅｄ，ｔｗｏ−ｔａｉｌｅｄ  ｔ  ｔｅｓｔ）。
【実施例２】
【００４８】
ＳＯＪＩＡ患者のインターロイキン−１β処置。年齢１５でＳＯＪＩＡと診断された１７歳のスペイン系女性を本発明の方法に従って処置した。彼女は、継続（２カ月以上）した毎日の発熱、一般的な掻痒症発疹および関節痛を示していた。実験の際に、彼女は、腫れ、撓骨手根骨および手根骨−手中骨関節の制約があった。彼女の実験室試験は、高い白血球数（ＥＢＣ）、低いヘモグロビン（Ｈｇｂ）、高い血小板（Ｐｌｔｓ）および高い赤血球沈降速度（ＥＳＲ）を明らかにした。広範な感染症治療は不成功であった。患者は、経口およびＩＶで高投与量のメチルプレドニゾロンおよび最後にはメトトレキセートを投与された。彼女の症状は改善され、そして患者は数カ月間は無症状で、その間、ステロイド処置をゆっくりと減少された。数カ月後、症状が再発した。ステロイドを再度開始したが成功しなかった。抗ＴＮＦ  ＩＶ治療（インフレキシマブ）を５ｍｇ／ｋｇ投与で毎月、約６カ月間試したが目立った効果は得られなかった。患者は１年間症状が続いた後、ＩＬ−１アンタゴニストをアナキンラの形で１００ｍｇ（１ｃｃ）を皮下に毎日注射した。最初の注射の翌日に、患者は無症状となり、発熱、発疹および関節の腫れが消失した。２回の追跡診察は、彼女は治療開始の２〜３カ月後も無症状のままであることを確認した。試験室での試験も、ＷＢＣ、Ｈｇｂ、Ｐｌｔ数およびＥＳＲが正常値内にあり、この反応を反映していた。
【実施例３】
【００４９】
ＳＯＪＩＡ患者のインターロイキン−１β処置。スペイン系９歳の男性が、長期間にわたる毎日の急上昇する発熱、発疹、心膜炎および関節と筋肉の痛みを示して７歳でＳＯＪＩＡと診断された。試験室での試験は、高いＷＢＣ、低いＨｇｂ、高い血小板および上昇したＥＳＲを示した。骨髄分析および広範な感染症検出作業は、特定の診断を下せなかった。患者は、高投与量のＩＶメチルプレドニゾロンで処置され症状は改善された。その後２年間、患者は激発および鎮静を示した。最後の激発は高投与量のステロイドに反応せず、そして患者は両側の撓骨手根骨関節に腫れを起こした。ＩＬ−１アンタゴニスト・アナキンラを用いる治療は、皮下に毎日の注射として５０ｍｇ（０．５ｃｃ）の投与量で開始された。最初の皮下注射の翌日に、患者は無症状となり、同時に発熱、発疹、関節痛および腫れが消失し、そして彼は３カ月以上も無症状のままであった。
【００５０】
本明細書中に記載する特定の態様は説明のために示されそして本発明を制限するものではない。本発明の主要な原理は本発明の範囲から逸脱することなく種々の態様として使用できる。当該技術分野の熟練者は、慣用の実験の程度を越えることなく、本明細書中に記載の特定の手順に対して多数の等価なものを認めまたは確認できるであろう。かかる等価物は、本発明の範囲内でありそして特許請求範囲内に含まれると考えられる。
【００５１】
本明細書中に記載したすべての出版物および特許出願は、本発明が関係する当該技術分野の熟練者の技術のレベルの指標である。すべての出版物および特許出願は、それぞれの個別の出版物または特許出願が特定して個別に引用することにより編入されると指定されたと同様に同じ範囲内で引用することにより本明細書に編入される。
【００５２】
本明細書中に開示および特許請求されたすべての組成物および／または方法は、本開示を参照すれば不当な実験を行うことなく作製および実施できる。本発明の組成物および方法は、好ましい態様に関して記載されているが、当該技術分野の熟練者には、本発明の概念、精神および範囲から外れることなく、本明細書中に記載の組成物および／または方法および方法の工程または工程の連鎖中に変化が適用され得ることは明らかであろう。さらに特定すると、化学的および物理的に関連するある作用物質は、本明細書中に記載されている作用物質と置換されてもよく、同様または類似の結果が達成されるであろうことは明らかである。すべてのかかる類似物質よび変更は、当該技術分野の熟練者にとっては、添付の特許請求範囲により定義される本発明の精神、範囲および概念の範囲内と考えられるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
本発明の特徴および利点をさらに完全に理解するために、添付の図面を用いて本発明の詳細な説明に参考とする。
【図１】自己血清（ＡＳ）または３人のＳＯＪＩＡ患者からのいずれかの血清を用いて、４人の健康なボランティアからのＰＢＭＣをインキュベーションして、上方制御（赤）、下方制御（青）または不変（黄）となった遺伝子を描いた遺伝子アレイデータの図示である。
【図２Ａ】ＳＯＪＩＡ血清を用いてインキュベーションされた健康なＰＢＭＣ内のインターロイキン−１β（ＩＬ−ｂ）タンパク質分泌の誘導を比較した図である。
【図２Ｂ】全身症状を有するかまたは有していないＳＯＪＩＡ患者内のＩＬ−１ｂタンパク質分泌の誘導を比較した図である。そして
【図３Ａ−Ｆ】体温（図３Ａ）、活性関節数（図３Ｂ）、ＷＢＣ（図３Ｃ）、ヘモグロビン（図３Ｄ）、血小板数（図３Ｅ）、およびＳＯＪＩＡ患者９人内のＥＳＲ（図３Ｆ）の値を示した図である。
【図２Ａ−Ｂ】
2007525524.tif 000003
【図３Ａ−Ｂ】
2007525524.tif 000004
【図３Ｃ−Ｄ】
2007525524.tif 000005
【図３Ｅ−Ｆ】
2007525524.tif 000006
【図１】
2007525524.tif 000007
【国際調査報告】
2007525524.tif 000008