(57)【要約】  本発明は、ヒトのカゼインキナーゼＩεの阻害剤としての置換１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボキシアミド、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボキシアミド、及び１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボキシアミド（式（Ｉ）の化合物）、並びに、気分障害や睡眠障害などの中枢神経系の疾病と障害を治療するための式（Ｉ）の化合物の使用方法を開示し、クレイムする。式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物と式（Ｉ）の化合物の製造方法もまた開示し、クレイムする。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2007513950.tif 000013
〔式中、
Ｒ1は、Ｈ又はＣ1-6アルキルであり、
Ｒ2は、ＮＲ5Ｒ6であり、
Ｒ3は、アリール又は複素環であり、
Ｒ4は、Ｈ、Ｃ1-6アルキル、Ｃ2-6アルケニル、Ｃ2-6アルキニル、Ｃ1-6アルコキシ、ＣＦ3、ハロゲン、ＳＨ、Ｓ−Ｃ1-6アルキル、ＮＯ2、ＮＨ2、又はＮＲ5Ｒ6であり、
Ｒ5は、Ｈ又はＣ1-6アルキルであり、
Ｒ6は、Ｈ又はＣ1-6アルキルであり、
Ｘは、Ｓ又はＳ（Ｏ）nであり、
Ｋ、Ｌ、又はＭの１つはＮであり、Ｋ、Ｌ、又はＭの他の２つはそれぞれＣであり、Ｒ4は、Ｋ、Ｌ、Ｍ、又はＣである他の環原子にのみ結合し、
ｍは、１、２、又は３であり、そして
ｎは、１又は２である〕
の化合物、又はその医薬的に許容される塩もしくは立体異性体。
【請求項２】
ＬがＮであり、ＫとＭがそれぞれＣである請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ1、Ｒ4、Ｒ5、及びＲ6がそれぞれＨであり、Ｒ3がアリールである請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（３−フルオロ−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、及び
３−（４−クロロ−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド
からなる群より選択される請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
ＭがＮであり、ＫとＬがそれぞれＣである請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ1、Ｒ4、Ｒ5、及びＲ6がそれぞれＨであり、Ｒ3がアリール又は複素環である請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（３−フルオロ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（３−メトキシ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド
３−（３−クロロ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（２−トリフルオロメチル−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（２−トリフルオロメトキシ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（２−メトキシ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、及び
３−（ピリジン−２−スルファニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド
からなる群より選択される請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
ＫがＮであり、ＬとＭがそれぞれＣである請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ1がＣ1-6アルキルであり、Ｒ5がＨであり、Ｒ6がＨ又はＣ1-6アルキルであり、そしてＲ3がアリールである請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
１−メチル−３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド、
１−メチル−３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、及び
３−フェニルスルファニル−１−プロピル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド
からなる群より選択される請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ1、Ｒ4、及びＲ5がそれぞれＨであり、Ｒ3がアリールであり、そしてＲ6がＣ1-6アルキルである請求項８に記載の化合物。
【請求項１２】
３−（３−トリフルオロメトキシフェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド、
３−（３−クロロフェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド、
３−（３−フルオロフェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド、及び
３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド
からなる群より選択される請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ1、Ｒ4、Ｒ5、及びＲ6がそれぞれＨであり、Ｒ3が複素環である請求項８に記載の化合物。
【請求項１４】
３−（キノリン−８−イルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（ピリジン−２−スルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（ピリジン−４−スルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、及び
３−（チオフェン−２−イルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド
からなる群より選択される請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ1、Ｒ5、及びＲ6がそれぞれＨであり、Ｒ3がアリールである請求項８に記載の化合物。
【請求項１６】
３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（３−フルオロフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（３−クロロフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（３−ブロモフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（２−クロロフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（４−クロロフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（２，４−ジクロロフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（２−フルオロフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（２，３−ジクロロフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（２−トリフルオロメチルフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（３−トリフルオロメチル−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（２−アミノフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（２，５−ジクロロ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（２−メトキシ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（３−メトキシ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（３−アミノ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（４−ニトロ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（３−ニトロ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−ｏ−トリルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−ｐ−トリルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（３，５−ジメチル−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−ｍ−トリルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（２−エチル−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（３−トリフルオロメトキシ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（３−フルオロ−フェニルスルファニル）−５−メトキシ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、及び
３−（３−メトキシ−フェニルスルファニル）−５−メトキシ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド
からなる群より選択される請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
医薬担体、及び式（Ｉ）：
【化２】
2007513950.tif 000014
〔式中、
Ｒ1は、Ｈ又はＣ1-6アルキルであり、
Ｒ2は、ＮＲ5Ｒ6であり、
Ｒ3は、アリール又は複素環であり、
Ｒ4は、Ｈ、Ｃ1-6アルキル、Ｃ2-6アルケニル、Ｃ2-6アルキニル、Ｃ1-6アルコキシ、ＣＦ3、ハロゲン、ＳＨ、Ｓ−Ｃ1-6アルキル、ＮＯ2、ＮＨ2、又はＮＲ5Ｒ6であり、
Ｒ5は、Ｈ又はＣ1-6アルキルであり、
Ｒ6は、Ｈ又はＣ1-6アルキルであり、
Ｘは、Ｓ又はＳ（Ｏ）nであり、
Ｋ、Ｌ、又はＭの１つはＮであり、Ｋ、Ｌ、又はＭの他の２つはそれぞれＣであり、ここでＲ4は、Ｋ、Ｌ、Ｍ、又はＣである他の環原子にのみ結合し、
ｍは、１、２、又は３であり、そして
ｎは、１又は２である〕
の化合物、又はその医薬的に許容される塩もしくは立体異性体の治療的有効量を含む医薬組成物。
【請求項１８】
式（Ｉ）：
【化３】
2007513950.tif 000015
〔式中、
Ｒ1は、Ｈ又はＣ1-6アルキルであり、
Ｒ2は、ＮＲ5Ｒ6であり、
Ｒ3は、アリール又は複素環であり、
Ｒ4は、Ｈ、Ｃ1-6アルキル、Ｃ2-6アルケニル、Ｃ2-6アルキニル、Ｃ1-6アルコキシ、
ＣＦ3、ハロゲン、ＳＨ、Ｓ−Ｃ1-6アルキル、ＮＯ2、ＮＨ2、又はＮＲ5Ｒ6であり、
Ｒ5は、Ｈ又はＣ1-6アルキルであり、
Ｒ6は、Ｈ又はＣ1-6アルキルであり、
Ｘは、Ｓ又はＳ（Ｏ）nであり、
Ｋ、Ｌ、又はＭの１つはＮであり、Ｋ、Ｌ、又はＭの他の２つはそれぞれＣであり、ここでＲ4は、Ｋ、Ｌ、Ｍ、又はＣである他の環原子にのみ結合し、
ｍは、１、２、又は３であり、そして
ｎは、１又は２である〕
の化合物、又はその医薬的に許容される塩もしくは立体異性体の治療的有効量を患者に投与することを含む、患者のカゼインキナーゼＩε活性を阻害する方法。
【請求項１９】
式（Ｉ）：
【化４】
2007513950.tif 000016
〔式中、
Ｒ1は、Ｈ又はＣ1-6アルキルであり、
Ｒ2は、ＮＲ5Ｒ6であり、
Ｒ3は、アリール又は複素環であり、
Ｒ4は、Ｈ、Ｃ1-6アルキル、Ｃ2-6アルケニル、Ｃ2-6アルキニル、Ｃ1-6アルコキシ、ＣＦ3、ハロゲン、ＳＨ、Ｓ−Ｃ1-6アルキル、ＮＯ2、ＮＨ2、又はＮＲ5Ｒ6であり、
Ｒ5は、Ｈ又はＣ1-6アルキルであり、
Ｒ6は、Ｈ又はＣ1-6アルキルであり、
Ｘは、Ｓ又はＳ（Ｏ）nであり、
Ｋ、Ｌ、又はＭの１つはＮであり、Ｋ、Ｌ、又はＭの他の２つはそれぞれＣであり、ここでＲ4は、Ｋ、Ｌ、Ｍ、又はＣである他の環原子にのみ結合し、
ｍは、１、２、又は３であり、そして
ｎは、１又は２である〕
の化合物、又はその医薬的に許容される塩もしくは立体異性体の治療的有効量を患者に投与することを含む、カゼインキナーゼＩεの阻害によって改善される疾病又は障害のある患者を治療する方法。
【請求項２０】
疾病又は障害が気分障害又は睡眠障害である請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
障害が気分障害である請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
気分障害が、うつ病性障害又は双極性障害から選択される請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
うつ病性障害が大うつ病性障害である請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
双極性障害が、双極性Ｉ障害と双極性II障害からなる群より選択される請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
障害が睡眠障害である請求項２０に記載の方法。
【請求項２６】
睡眠障害が概日リズム睡眠障害である請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
概日リズム睡眠障害が、交代勤務睡眠障害、時差ボケ症候群、睡眠相前進症候群、及び睡眠相後退症候群からなる群より選択される請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
式（１）：
【化５】
2007513950.tif 000017
〔式中、
ここに、
Ｒ1は、Ｈであり、
Ｒ2は、ＮＨ2であり、
Ｒ3は、アリール又は複素環であり、
Ｒ4は、Ｈ、Ｃ1-6アルキル、Ｃ2-6アルケニル、Ｃ2-6アルキニル、Ｃ1-6アルコキシ、ＣＦ3、ハロゲン、ＳＨ、Ｓ−Ｃ1-6アルキル、ＮＯ2、ＮＨ2、又はＮＲ5Ｒ6であり、
Ｒ5は、Ｈ又はＣ1-6アルキルであり、
Ｒ6は、Ｈ又はＣ1-6アルキルであり、
Ｘは、Ｓであり、
Ｋ、Ｌ、又はＭの１つはＮであり、Ｋ、Ｌ、又はＭの他の２つはそれぞれＣであり、ここでＲ4は、Ｋ、Ｌ、Ｍ、又はＣである他の環原子にのみ結合し、そして
ｍは、１、２、又は３である〕
の化合物の製造方法であって、
マロン酸ジエステルを適切な溶媒中の適切な塩基で処理し、非置換又は置換２−クロロ−３−ニトロピリジン、３−クロロ−４−ニトロピリジン、又は４−クロロ−３−ニトロピリジンを添加し、その反応混合物を反応が完了するまで加熱し、その反応混合物を鉱酸で処理し、その反応混合物を脱炭酸反応が完了するまで加熱し、非置換又は置換２−メチル−３−ニトロピリジン、３−メチル−４−ニトロピリジン、又は４−メチル−３−ニトロピリジを生成させる工程を含む、上記の製造方法。
【請求項２９】
マロン酸ジエステルがマロン酸ジエチルであり、塩基がナトリウムｔ−ブトキシドであり、溶媒がＮ−メチル−２−ピロリジノンであり、鉱酸が硫酸である請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
２−メチル−３−ニトロピリジンが製造される請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
非置換又は置換２−メチル−３−ニトロピリジン、３−メチル−４−ニトロピリジン、又は４−メチル−３−ニトロピリジを適切な溶媒、適切な塩基、及びシュウ酸ジエステルの混合物に添加し、非置換又は置換２−ヒドロキシ−３−（３−ニトロ−ピリジン−２−イル）−アクリル酸エステル、２−ヒドロキシ−３−（４−ニトロ−ピリジン−３−イル）−アクリル酸エステル、もしくは２−ヒドロキシ−３−（３−ニトロ−ピリジン−４−イル）−アクリル酸エステル、又はその対応する互変異性ケトンを生成させる工程をさらに含む請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
シュウ酸ジエステルがシュウ酸ジエチルであり、溶媒がテトラヒドロフランであり、塩基がナトリウムエトキシドである請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
２−ヒドロキシ−３−（３−ニトロ−ピリジン−２−イル）−アクリル酸エチルエステルが製造される請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
非置換又は置換２−ヒドロキシ−３−（３−ニトロ−ピリジン−２−イル）−アクリル酸エステル、２−ヒドロキシ−３−（４−ニトロ−ピリジン−３−イル）−アクリル酸エステル、又は２−ヒドロキシ−３−（３−ニトロ−ピリジン−４−イル）−アクリル酸エステルを適切な溶媒中で適切な触媒を用いて還元し、非置換又は置換１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸エステル、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸エステル、又は１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸エステルを生成させる工程をさらに含む請求項２８に記載の方法。
【請求項３５】
溶媒が無水エタノールであり、触媒が炭素上のパラジウムである請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸エチルエステルが製造される請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
非置換又は置換１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸エステル、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸エステル、又は１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸エステルを適切な溶媒中のアンモニアに添加し、非置換又は置換１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、又は１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミドを生成させる工程をさらに含む請求項２８に記載の方法。
【請求項３８】
溶媒がメタノールである請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミドが製造される請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
非置換又は置換１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、又は１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、過剰量の適切な塩基、及びジアリールジスルフィド又はジ複素環ジスルフィドを適切な溶媒に添加し、加熱し、Ｒ1が水素である式（Ｉ）の化合物を得る工程をさらに含む請求項２８に記載の方法。
【請求項４１】
過剰量の塩基が約２.０〜約２.５当量であり、塩基が炭酸セシウムであり、ジアリールジスルフィドがジフェニルジスルフィド又はビス（３−フルオロフェニル）ジスルフィドである請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミドが製造される請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
３−（３−フルオロフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミドが製造される請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
ａ）マロン酸ジエステルを適切な溶媒中の適切な塩基で処理し、非置換又は置換２−クロロ−３−ニトロピリジン、３−クロロ−４−ニトロピリジン、又は４−クロロ−３−ニトロピリジンを添加し、その反応混合物を反応が完了するまで加熱し、その反応混合物を鉱酸で処理し、その反応混合物を脱炭酸反応が完了するまで加熱し、非置換又は置換２−メチル−３−ニトロピリジン、３−メチル−４−ニトロピリジン、又は４−メチル−３−ニトロピリジを生成させ、
ｂ）非置換又は置換２−メチル−３−ニトロピリジン、３−メチル−４−ニトロピリジン、又は４−メチル−３−ニトロピリジを適切な溶媒、適切な塩基、及びシュウ酸ジエステルの混合物に添加し、非置換又は置換２−ヒドロキシ−３−（３−ニトロ−ピリジン−２−イル）−アクリル酸エステル、２−ヒドロキシ−３−（４−ニトロ−ピリジン−３−イル）−アクリル酸エステル、もしくは２−ヒドロキシ−３−（３−ニトロ−ピリジン−４−イル）−アクリル酸エステル、又はその対応する互変異性ケトンを生成させ、
ｃ）非置換又は置換２−ヒドロキシ−３−（３−ニトロ−ピリジン−２−イル）−アクリル酸エステル、２−ヒドロキシ−３−（４−ニトロ−ピリジン−３−イル）−アクリル酸エステル、又は２−ヒドロキシ−３−（３−ニトロ−ピリジン−４−イル）−アクリル酸エステルを適切な溶媒中で適切な触媒を用いて還元し、非置換又は置換１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸エステル、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸エステル、又は１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸エステルを生成させ、
ｄ）非置換又は置換１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸エステル、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸エステル、又は１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸エステルを適切な溶媒中のアンモニアに添加し、非置換又は置換１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、又は１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミドを生成させ、そして
ｅ）非置換又は置換１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、又は１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、過剰量の適切な塩基、及びジアリールジスルフィド又はジ複素環ジスルフィドを適切な溶媒に添加し、式（Ｉ）の化合物を得る、
各工程を含む方法によって製造された式（Ｉ）：
【化６】
2007513950.tif 000018
〔式中、
Ｒ1はＨであり、
Ｒ2はＮＨ2であり、
Ｒ3は、アリール又は複素環であり、
Ｒ4は、Ｈ、Ｃ1-6アルキル、Ｃ2-6アルケニル、Ｃ2-6アルキニル、Ｃ1-6アルコキシ、ＣＦ3、ハロゲン、ＳＨ、Ｓ−Ｃ1-6アルキル、ＮＯ2、ＮＨ2、又はＮＲ5Ｒ6であり、
Ｒ5は、Ｈ又はＣ1-6アルキルであり、
Ｒ6は、Ｈ又はＣ1-6アルキルであり、
Ｘは、Ｓ又はＳ（Ｏ）nであり、
Ｋ、Ｌ、又はＭの１つはＮであり、Ｋ、Ｌ、又はＭの他の２つはそれぞれＣであり、ここでＲ4は、Ｋ、Ｌ、Ｍ、又はＣである他の環原子にのみ結合し、そして
ｍは、１、２、又は３である〕
の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一連の置換された１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボキシアミド、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボキシアミド、及び１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボキシアミドに関する。より詳しくは、本発明は、３−アリールチオ−置換と３−複素環チオ−置換の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボキシアミド、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボキシアミド及び１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボキシアミド、並びに関連の類似物に関する。また、本発明は、これらの化合物の製造方法に関する。本発明の化合物は、ヒトのカゼインキナーゼＩεリン酸化活性の阻害剤であり、したがって、とりわけ中枢神経系に関連する疾病と障害の治療及び／又は予防における医薬品として有用である。
【背景技術】
【０００２】
リズミカルな挙動変化は、単細胞から人間までの数多くの生命体で演じられている。リズムが一定条件下で持続し、約１日の周期を有し、温度に殆ど依存しないと、そのリズムは「概日」と称される（Konopka, R. J. and Benzer, S. (1971) Proc. Nat. Acad. Sci.
USA 68, 2112-2116）。
【０００３】
概日リズムは、内在性の生物学的ペースメーカー（概日時計）によって生じ、ヒト、菌類、昆虫、及びバクテリアなどの殆どの生物体に存在する（「Dunlap, J. C. (1999) Cell 96, 271-290」、「Hastings, J. W. et al. Circadian Rhythms, The Physiology of Biological Timing. In: Prosser, C. L. ed. Neural and Integrative Animal Physiology, New York: Wiley-Liss (1991) 435-546」、「Allada, R. et al. (1998) Cell 93, 791-804」、「Kondo et al. (1994) Science 266, 1233-1236」、「Crosthwaite, S. K. et al. (1997) Science 276, 763-769」、「Shearman, L. P. et al. (1997) Neuron, 19, 1261-1269」）。概日リズムは、それ自身で持続性であり、真っ暗闇の条件下であっても不変であるが、光と温度のサイクルのような環境の信号により、新たな昼／夜の体制に同調（同期）することができる。（「Pittendrigh, C.S. (1993) Annu. Rev. Physiol., 55, 16-54」、「Takahashi, J. S. (1995) Annu. Rev. Neurosci. 18, 531-553」、「Albrecht, U. et al. (1997) Cell, 91, 1055-1064」）。概日時計は、生物学的リズムを維持するのに不可欠であり、挙動、食物摂取、及び睡眠／覚醒サイクルにおける日々の変動のような種々の概日挙動と同時に、ホルモン分泌や体温変動のような生理的変化を規制する（「Hastings, M. (1997) Trends Neurosci. 20, 459-464」、「Reppert, S. M. and Weaver, D. R. (1997) Cell 89, 487-490」）。
【０００４】
クダモノミバエのキイロショウジョウバエにおける遺伝と分子の研究は、概日リズム性に関わるいくつかの遺伝子の説明をもたらした。これらの研究は、綿密に自動規制され、転写／翻訳に基づく負のフィードバックループからなる経路の認識に導いた（「Dunlap, J. C. (1999) Cell, 96, 271-290」、「Dunlap, J. C. (1996) Annu. Rev. Genet. 30, 579-601」、「Hall, J. C. (1996) Neuron, 17, 799-802」）。キイロショウジョウバエにおける概日振動子のコアエレメントは、２つの刺激性タンパク質ｄＣＬＯＣＫ／ｄＢＭＡＬ（ＣＹＣＬＥ）及び２つの抑制性タンパク質ｄＰＥＲＩＯＤ（ｄＰＥＲ）並びにｄＴＩＭＥＬＥＳＳ（ｄＴＩＭ）からなる。ｄＣＬＯＣＫとｄＢＭＡＬは、ヘテロ二量体化して転写制御因子ｄＣＬＯＣＫ／ｄＢＭＡＬを形成し、これがＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ  Ｐｅｒｉｏｄ（ｄｐｅｒ）とＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ  Ｔｉｍｅｌｅｓｓ（ｄｔｉｍ）と称される２つの遺伝子の発現を促進する。最終的に、これらの遺伝子からのｍＲＮＡは転写され、それぞれ、タンパク質ｄＰＥＲとｄＴＩＭを生成する。数時間で、タンパク質生成物ｄＰＥＲとｄＴＩＭが合成され、細胞質の中でリン酸化され、臨界レベルに達し、核内に転位されるヘテロ二量体を形成する。核内でｄＰＥＲとｄＴＩＭが、それら自身の転写の負の制御因子として作用すると、ｄＰＥＲとｄＴＩＭの蓄積が減少し、ｄＣＬＯＣＫ／ｄＢＭＡＬによるｄｐｅｒとｄｔｉｍの活性化が再び開始する（「Zylka, M.J. et al. (1998) Neuron 20, 1103-1110」、「Lowrey, P. L. et al, (2000) 288, 483-491」）。ｄｐｅｒ遺伝子は、羽化（蛹からの成虫ハエの出現）の挙動と自発運動活性における概日リズムをコントロールするのに必要な要素であることが示されている（Konopka, R.J., & Benzer, S. (1971) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 68, 2112-2116）。ｐｅｒ遺伝子のミスセンス変異は、概日リズムの時間を短くする（ｐｅｒS）又は長くする（ｐｅｒL）ことができ、一方、ナンセンス変異（ｐｅｒO）は、それらの挙動に不整脈性を引き起こす（Hall, J. C. (1995) Trends Neurosci. 18, 230-240）。
【０００５】
哺乳類において、視床下部前部の視交叉上核（ＳＣＮ）は、マスター生体時計の場所である（概説として「Panda et al, (2002) Nature 417, 329-335」、「Reppert, S. M. and Weaver, D. R. (1997) Cell, 89, 487-490」参照）。ＳＣＮ時計は、毎日の明暗サイクルによって２４時間の１日に同調し、光は、直接と間接の双方の網膜からＳＣＮへの経路を通して作用する（Klein, D. C. et al. (1991) Suprachiasmatic Nuclei: The Mind's Clock, Oxford Univeristy Press, New York）。齧歯類のＳＣＮにおいて、３つのＰｅｒ遺伝子が確認され、クローン化されており、マウスＰｅｒｌ（ｍＰｅｒｌ）、ｍＰｅｒ２、及びｍＰｅｒ３として表示される。これらの哺乳類遺伝子（ｍＰＥＲ１、ｍＰＥＲ２、ｍＰＥＲ３）のタンパク質生成物は、互いに相同するいくつかの領域を共有し、各々の哺乳類Ｐｅｒ遺伝子は、昆虫ＰＥＲのＰＡＳドメインに高度に相同するＰＡＳとして表示されるタンパク質二量体化ドメインによってタンパク質をコード化する（ＰＡＳは、この機能的に重要な二量体化ドメインを共有することが見出された最初の３つのタンパク質ＰＥＲ、ＡＲＮＴ、及びＳＩＭの頭文字である）。全てのＰｅｒメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）とタンパク質レベルは、日周性の１日の間に変動し、生体時計の正と負の規制に親密に関与するが、ｍＰＥＲ１とｍＰＥＲ２のみは、光に応答して変動する（「Zylka, M. J. et al. (1998) Neuron 20, 1103-1110.」、「Albrecht, U. et al., (1997) Cell 91, 1055-1064」、「Shearman, L. P. et al. (1997) Neuron 19, 1261-1269」）。ショウジョウバエｔｉｍ遺伝子の哺乳類相同体は、クローン化され、ｍＴｉｍとして表示される。しかしながら、ショウジョウバエにおいて観察されるものに似たｍＰＥＲ−ｍＴＩＭ相互作用についての証拠がなく、哺乳類の概日時計の分子作用において、ＰＥＲ−ＰＥＲ相互作用がＰＥＲ−ＴＩＭ二量体の作用に置き換わったかと示唆された（Zylka, M. J. et al., (1998) Neuron 21, 1115-1122）。もう１つの可能性は、ＰＥＲ１とＰＥＲ２におけるリズムが、時計タンパク質の転写活性を規制する負のフィードバックループを形成し（それらのＰＡＳドメインによる）、今度はこれが、一方又は双方のＰｅｒ遺伝子の発現を推進することである（Shearman, L. P. et al. (1997) Neuron 19, 1261-1269）。
【０００６】
哺乳類の時計仕掛けにおける３つのｍＰｅｒ遺伝子の役割を理解することが、多くの研究の主題であった。ｄＰＥＲに対するｍＰＥＲタンパク質の構造的相同性は、ｍＰＥＲタンパク質が、哺乳類のフィードバックループにおける負の要素として機能するであろうとの期待をもたらした。ＰＥＲ１は、フィードバックループにおけるそれ自身の転写の負の規制に関わると考えられるが、最近の証拠は、それがインプット経路に関わっていると指摘している（Hastings, M. H. et al. (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 26, 15211-15216）。ＰＥＲ２は、最もうまくキャラクタライズされたタンパク質であり、ＰＡＳ二量体化ドメインのカルボキシル部分で８７残基を欠損するｍＰＥＲ２変異マウス（ｍＰｅｒ２Brdml）は、通常の明暗設定において短縮した概日サイクルを有するが、真っ暗闇の中で不整脈性を有する。また、変異は、ＳＣＮにおけるｍＰｅｒ１とｍＰｅｒ２の双方の変動性発現を減少させ、ｍＰｅｒ２がインビボにおいてｍＰｅｒ１を規制し得ることを示唆する（Zheng, B. et al. (1999) Nature 400, 169-173）。ＰＥＲ２は、中心時計の「歯車」の規制において二重の作用を有することが示されている（Shearman, L. P. et al. (2000) Science 288, 1013-1018）。その研究において、ＰＥＲ２は、クリプトクロム（ＣＲＹ）タンパク質に結合して核に位置を変え、そこでＣＲＹは、ＣＬＯＣＫとＢＭＡＬ１の正の転写複合体によって駆動される転写を負に規制することが示された。核の入口で、ＰＥＲ２は、未だ確認されてないメカニズムによりＢＭＡＬ１転写を正に規制することにより、時計の正のアームを起動した。ＰＥＲ３の作用は殆ど理解されなく、しかしながら、ｍＰｅｒ３欠損マウスにおいて、概日活動に及ぼす微妙な効果が観察され、したがって、概日コントロールの出力経路においてＰＥＲ３が関与することが示唆された（Shearman, L. P. et al. (2000) Mol. Cell. Biol. 17, 6269-6275）。ｍＰＥＲタンパク質は互いに相互作用をし、ｍＰＥＲ３は、ｍＰＥＲ１とｍＰＥＲ２のキャリヤーとして機能してそれらを核内に運ぶことができ、このことは、ＳＣＮにおける概日信号の発生にとって重要であると報告されている（「Kume, K. et al. (1999) Cell 98, 193-205」、「Takano, A. et al. (2000), FEBS Letters, 477, 106-112」）。
【０００７】
概日時計の成分のリン酸化は、サイクル期間を規制することを前提としている。特定のタンパク質キナーゼが、ショウジョウバエの概日リズムを規制することの最初の遺伝子的証拠は、タンパク質セリン／スレオニンキナーゼをコードする新規な遺伝子ｄｏｕｂｌｅｔｉｍｅ（ｄｂｔ）の発見であった（「Price J. L. et al. (1998) Cell 94, 83-95」、「Kloss B. et al. (1998) Cell 94, 97-107」）。ｄｂｔにおけるミスセンス変異は、変更された概日リズムに帰着する。ｄｂｔの欠損アレル（null alleles）は、ｄＰＥＲの低リン酸化と不整脈性に帰着する。
【０００８】
ＤＢＴに最も密接に関係する哺乳類のキナーゼは、カゼインキナーゼＩε（ＣＫＩε）とカゼインキナーゼＩδ（ＣＫＩδ）である。双方のキナーゼとも、ｍＰＥＲ１に結合することが示されており、いくつかの研究は、ＣＫＩεがマウスとヒトの双方のＰＥＲ１をリン酸化することを示している（「Price J. L. et al. (1998) Cell 94, 83-95」、「Kloss B. et al. (1998) Cell 94, 97-107」）。野生型ｈＣＫＩεを同時形質移入されたヒト胎児由来腎臓２９３Ｔ細胞を用いた研究において、ｈＰＥＲ１は、リン酸化において大きな増加を示した（分子質量のシフトによって証明）。この研究において、リン酸化されたｈＰＥＲ１は、約１２時間の半減期を有した一方で、リン酸化されていないｈＰＥＲ１は、２４時間を超えて細胞の安定を維持し、ｈＰＥＲ１のリン酸化がタンパク質安定性の減少をもたらすことを示唆した（Kessler, G. A. et al. (2000) NeuroReport, 11, 951-955）。また、もう１つの研究は、ｈＣＫＩεによるＰＥＲ１リン酸化の結果が、双方の細胞質の保持、核の転座、及びタンパク質の不安定性を含むことを示した（「Vielhaber, E. et al. (2000) Mol. Cell. Biol. 13, 4888-4899」、「Takano, A. et al. (2000) FEBS Letters 477, 106-112」）。
【０００９】
ロウェリーらが［(2000) Science 288, 483-491］、シリアンゴールデンハムスターにおいて、ＣＫＩεにおける半優性変異が（tau mutation, Ralph, M. R. and Menaker, M.
(1988) Science 241, 1225-1227）、ヘテロ接合性動物（２２時間）とホモ接合性動物（２０時間）の双方において短縮された概日日を引き起こすことを見出すまで、哺乳類における可能性のある制御因子としてＣＫＩε又はＣＫＩδを選択する生化学的理由は存在しなかった。この場合において、ＣＫＩε活性の低下したレベルは、より少ないＰＥＲリン酸化をもたらし、恐らくより高いレベルの細胞質ＰＥＲタンパク質は、促進された核侵入と変動した概日サイクルに導いた。最近になって、ＣＫＩδもまた、哺乳類の時計クタンパク質ｈＰＥＲ１とｈＰＥＲ２の翻訳後修飾により、概日リズムの規制に関与し得ることが示唆された（Camacho, F. et al., (2001) FEBS Letters 489 (2,3), 159-165）。即ち、ＣＫＩε及び／又はＣＫＩδの小分子の阻害剤は、概日リズムを変動させる新しい手段を提供する。下述するように、概日リズムの変動は、睡眠又は気分障害の治療のための有用性を見出す可能性がある。
【００１０】
米国特許６５５５３２８Ｂ１は、ヒトの時計タンパク質ｈＰＥＲ１、ｈＰＥＲ２、及びｈＰＥＲ３をリン酸化するヒトのカゼインキナーゼＩε及び／又はヒトのカゼインキナーゼＩδの能力を変化させるテスト化合物に基づき、概日リズムを変動させる化合物を特定するための、細胞内でのスクリーニング法を開示している。例えば、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞は、ｈＣＫＩεとＰｅｒ１又はＰｅｒ２を同時形質移入される。ＣＫＩε阻害とＣＫＩε阻害剤の概日バイオロジーに対する関連性を評価する目的で、概日リズムを日常的方法でモニターすることができる高処理能力の細胞アッセイ（33rd Annual Meeting, Soc. for Neurosci., November 8-12,2003, Abstract numbers 284.1, 284.2, and 284.3）を開発した。このアッセイは、Ｍｐｅｒ１−ｌｕｃ作成物を安定して発現するＲａｔ−１線維芽細胞からなり、したがって、数日にわたる光出力のモニターによりルシフェラーゼ活性を反復して見積もることにより、生細胞におけるＭｐｅｒ１促進剤のリズム活性化の測定を可能にする。このアッセイの繰返しの測定フォーマットは、概日リズムに及ぼすＣＫＩε阻害剤の濃度依存効果の正確で再現性のある評価を可能にし、概日期間の変動に対する関連するＣＫＩε阻害についてのネクサスを提供する。
【００１１】
睡眠障害は、４つの主なカテゴリーに分類されており、第１睡眠障害（睡眠異常と睡眠時随伴症）、医療的／精神的障害に伴う睡眠障害、及び不十分なデータにより分類できない睡眠障害についての提案された睡眠障害のカテゴリーが含まれる。第１睡眠障害は、睡眠・覚醒の発生（恒常性システム）又はタイミング（概日システム）に関与する内因性システムの異常に由来すると考えられる。睡眠異常は、睡眠の開始又は維持における障害であり、一次性不眠、睡眠過剰（過剰の眠気）、睡眠発作、呼吸関連の睡眠障害、概日リズムの睡眠障害、及びその他の特定されない睡眠障害が含まれる。一次性不眠は、睡眠の開始・維持が困難なこと又は体力が回復しない睡眠が持続する（１箇月を超える）によって特徴付けられる。一次性不眠に伴う睡眠の困難さは、昼間の短気、注意力と集中力の喪失、疲労と倦怠感、及び気分とモチベーションの低下などの著しい苦悩又は機能障害をもたらす。概日リズムの睡眠障害には、時差ボケ症候群、交代勤務睡眠障害、睡眠相前進症候群、及び睡眠相後退症候群が含まれる（J. Wagner, M. L. Wagner and W. A. Hening, Annals of Pharmacotherapy (1998) 32, 680-691）。強制睡眠パラダイムにおける個々人は、概日日の特定の期間で、睡眠時間の割合としてより高い覚醒状態を実証している（Dijk and Lockley, J. Appl. Physiol. (2002) 92, 852-862）。年齢とともに、我々の睡眠についての概日日リズムに進歩があり、多くはより低い質の睡眠に帰着することが一般に受け入れられている（Am J Physiol Endocrinol Metab. (2002) 282, E297-E303）。このように、概日相から生じる睡眠は、交代勤務や時差ボケに伴う睡眠の変化によってさらに例示されるように、質的・量的な事項において問題があることがある。ヒトの概日時計の撹乱は、睡眠障害を引き起こすことがあり、ＣＫＩε及び／又はＣＫＩδの阻害剤のような概日周期性を調節する薬剤が、睡眠障害、とりわけ概日リズムの睡眠障害の治療に有用なことがある。
【００１２】
気分障害は、うつ病性障害（単極性うつ病）、双極性障害、及び一般的な病状と物質誘因の気分障害による気分障害を含む病因に基づく２つの障害に分けられる。うつ病性障害は、大うつ病性障害、気分変調性障害、及び他に特定されないうつ病性障害に下位分類される。双極性障害は、双極性Ｉ障害と双極性II障害に下位分類される。再発性の大うつ病性障害と、双極性Ｉ障害と双極性II障害における大うつ病エピソードのパターンに、指示子「季節パターン」が適用可能なことが観察されてきた。際立ったアネルギー、睡眠過剰、過食、体重増加、及び炭水化物への渇望は、季節パターンで生じる大うつ病エピソードを特徴づけることが多い。季節パターンが、再発性の大うつ病性障害又は双極性障害でより起こり得るかどうかは不明である。しかしながら、双極性障害の中では、季節パターンは、双極性Ｉ障害よりも双極性II障害における方がより起こり得るように見える。一部の個人において、躁又は軽躁エピソードの開始が、特定の季節と結びつくこともある。冬型の季節パターンは、緯度、年齢、及び性別とともに異なるように見える。有病率は、緯度が高くなると増加し、年下の人々は冬型うつ病エピソードに対する危険性がより高く、女性は、季節パターンを有する人々の６０％〜９０％を構成する。文献で一般に使用される用語の季節性情動障害（ＳＡＤ）は、双極性Ｉ障害、双極性II障害、又は再発性の大うつ病性障害における大うつ病エピソードの季節パターンを記載するときに、Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders IV (DSM-IV) (American Psychiatric Association：“Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders”, Fourth Edition, Text Revision. Washington, DC, American Psychiatric Association, 2000)の中で用語「季節パターンで」によって表される気分障害のサブタイプである（E. M. Tam et al., Can. J. Psychiatry (1995) 40,457-466）。うつ病性障害、大うつ病性障害、大うつ病エピソード、双極性Ｉ障害、双極性II障害、及び季節的影響の特徴と診断は、ＤＳＭ−ＩＶに記載されている。
【００１３】
典型的に冬における再発性うつ病エピソードによって特徴づけられるＳＡＤなどの大うつ病性障害に悩む患者は、光線療法に積極的に応答することが示されている（Kripke, Journal of Affective Disorders (1998) 49 (2), 109-117）。ＳＡＤと大うつ病を有する患者に対する明るい光による治療の成功は、光の治療効果についての作用の基礎的メカニズムを説明するいくつかの仮説の提唱をもたらした。これらの仮説には、明るい光の抗うつ効果が、睡眠に対する概日ペースメーカーの位相シフトを伴うことができることを提言する「概日リズム説」が挙げられた（E. M. Tam et al., Can. J. Psychiatry (1995) 40,457-466）。光治療と概日リズムの間の関連を支持して、大うつ病性障害における臨床的に有効な光治療は、概日位相における付随的シフトを引き起こし、光治療の臨床的有効性は、光治療における位相シフト能力に依存するように思われる（「Czeisler et al., The Journal of Physiology (2000) 526 (Part 3), 683-694」、「Terman et al., Arch. Gen. Psychiatry (2001) 58, 69-75」）。さらに、光治療は、大うつ病性障害の薬理治療の有効性を促進・増大することが示されている（Benedetti et al., J. Clin. Psychiatry (2003) 64, 648-653）。このように、カゼインキナーゼＩε及び／又はカゼインキナーゼＩδの阻害は、概日位相シフトを引き起こし、こうした阻害が、気分障害に対する可能性のある臨床的に有効な単一又は併用療法を提示するものと期待される。
【００１４】
睡眠障害は、多くの精神疾患にとって判断基準の症状であることを認識するべきである（W. V. McCall, J. Clin. Psychiatry (2001) 62 (suppl 10), 27-32）。睡眠障害は、うつ病性障害の一般的特徴であり、不眠は、うつ状態の患者に９０％を超えて生じる、うつ病において頻繁に報告される睡眠障害である（M. E. Thase, J. Clin. Psychiatry (1999) 60 (suppl 17), 28-31）。蓄積した証拠は、一次性不眠と大うつ病性障害についての一般的病気原因を支持する。コルチコトロピン放出因子（ＣＲＦ）の機能亢進（遺伝的素因又は恐らく幼児期ストレスによる）とストレスは、誇張され長期化した睡眠障害をもたらすプロセスと、ひいては一次性不眠を誘発すると仮定されている。ストレスのない条件下でのＣＲＦ分泌における概日リズム性は、通常の睡眠・覚醒の発現においてある役割を果たすことができる（G. S. Richardson and T. Roth, J. Clin Psychiatry (2001) 62 (suppl 10), 39-45）。このように、例えば、カゼインキナーゼＩε及び／又はカゼインキナーゼＩδの阻害により概日リズム性を調節する薬剤は、ＣＲＦ分泌に及ぼす効果によるうつ病性障害の治療に有用であることができる。
【００１５】
上述に引用した参考文献はいずれも、全体として本明細書に加入する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
このように、本発明の目的は、カゼインキナーゼＩεの阻害剤である一連の置換された１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボキシアミド、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボキシアミド、及び１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボキシアミドを提供することである。本発明のこの目的及びこの他の目的は、以下の本発明の詳細な説明から明らかになる。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明は、ヒトのカゼインキナーゼＩεリン酸化活性の阻害剤としての式（Ｉ）の置換された１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボキシアミド、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボキシアミド、１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボキシアミド、及び関連の類似物、並びに、その医薬的に許容される塩又は立体異性体を提供し、並びに、中枢神経系の疾病と障害、例えば、大うつ病性障害、双極性Ｉ障害、及び双極性II障害などの気分障害、並びに例えば、交代勤務睡眠障害、時差ボケ症候群、睡眠相前進症候群、及び睡眠相後退症候群のような概日リズムの睡眠障害などの睡眠障害の治療のための式（Ｉ）の化合物の使用方法を提供する。
【００１８】
したがって、本発明の広範囲な実施態様は、式（Ｉ）の化合物に関し、
【化１】
2007513950.tif 000002
ここに、
Ｒ1は、Ｈ又はＣ1-6アルキルであり、
Ｒ2は、ＮＲ5Ｒ6であり、
Ｒ3は、アリール又は複素環であり、
Ｒ4は、Ｈ、Ｃ1-6アルキル、Ｃ2-6アルケニル、Ｃ2-6アルキニル、Ｃ1-6アルコキシ、ＣＦ3、ハロゲン、ＳＨ、Ｓ−Ｃ1-6アルキル、ＮＯ2、ＮＨ2、又はＮＲ5Ｒ6であり、
Ｒ5は、Ｈ又はＣ1-6アルキルであり、
Ｒ6は、Ｈ又はＣ1-6アルキルであり、
Ｘは、Ｓ又はＳ（Ｏ）nであり、
Ｋ、Ｌ、又はＭの１つはＮであり、Ｋ、Ｌ、又はＭの他の２つは、それぞれＣであり、Ｒ4は、Ｋ、Ｌ、Ｍ、又はＣである他の環原子にのみ結合し、
ｍは、１、２、又は３であり、及び
ｎは、１又は２である、
又は、その医薬的に許容される塩もしくは立体異性体である。
【００１９】
本発明の１つの実施態様は、医薬担体、及び式（Ｉ）の化合物又はその医薬的に許容される塩もしくは立体異性体の治療的有効量を含んでなる医薬組成物に関する。
【００２０】
本発明のもう１つの実施態様は、式（Ｉ）の化合物の治療的有効量を患者に投与することによってカゼインキナーゼＩεを阻害する方法に関する。
【００２１】
本発明のもう１つの実施態様は、カゼインキナーゼＩεの阻害によって改善される疾病又は障害に悩む患者を治療する方法に関し、この方法は、その患者に式（Ｉ）の化合物の治療的有効量を投与することを含む。
【００２２】
本発明のもう１つの実施態様は、式（Ｉ）の化合物の製造方法に関する。
【００２３】
本発明のさらなる実施態様は、本願で開示される本発明の方法によって製造される式（Ｉ）の化合物に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
本願における用語「立体異性体」は、空間内でそれらの原子の配向のみが相違する個々の分子のあらゆる異性体について使用される一般的用語である。用語「立体異性体」には、鏡像異性体（エナンチオマー）、鏡像異性体の混合物（ラセミ化合物、ラセミ混合物）、幾何（シス／トランス又はＥ／Ｚ）異性体、及び互いに鏡像ではない１つを超えるキラル中心を有する化合物の異性体（ジアステレオ異性体）が含まれる。
【００２５】
本願における用語「Ｒ」と「Ｓ」は、キラル中心の特定の配置を表示するために有機化学において一般的に使用される用語である。用語「Ｒ」（rectus）は、結合にそって最も低い優先順位の基の方向を見たとき、時計回りの基の優先順位の関係（最も高いから２番目に低い）を有するキラル中心の構造を言う。用語「Ｓ」（sinister）は、結合にそって最も低い優先順位の基の方向を見たとき、反時計回りの基の優先順位の関係（最も高いから２番目に低い）を有するキラル中心の構造を言う。基の優先順位は、優先順位付けが最初に原子番号によるといった順位付け規則による（原子番号が低下する順序）。優先順位のリストと議論は、Stereochemistry of Organic Compounds, Ernest L. Eliel, Samuel H. Wilen and Lewis N. Mander, editors, Wiley-Interscience, John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994に収められている。
【００２６】
（Ｒ）−（Ｓ）系に加え、特にアミノ酸に関して絶対配置を表示するため、旧来のＤ−Ｌ系もまた本願で用いることがある。この系において、フィッシャー投影式が、主鎖のＮｏ．１炭素が頂点にあるようにして適応される。接頭辞「Ｄ」は、キラル中心の炭素の右側に官能（測定）基がある異性体の絶対配置を、「Ｌ」はそれが左にある異性体のそれを表すために用いられる。
【００２７】
本願における用語「互変異性体」又は「互変異性」は、１つ（又はそれ以上）の可動原子の位置と電子分布のみが互いに相違する２つ（又はそれ以上）の化合物の共存を指称し、例えば、ケト−エノール互変異性体又は互変異性が挙げられる。
【００２８】
本願における用語「アルキル」は、１〜６の炭素原子を有する飽和した直鎖又は分枝鎖の脂肪族炭化水素基を意味し、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチルなどの基が挙げられる。
【００２９】
本願における用語「アルケニル」は、２〜６の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖の一価の不飽和脂肪族鎖を意味し、エテニル（ビニルとしても知られる）、１−メチルエテニル、１−メチル−１−プロペニル、１−ブテニル、１−ヘキセニル、２−メチル−２−プロペニル、２，４−ヘキサジエニル、１−プロペニル、２−プロペニル、２−ブテニル、２−ペンテニルなどの基が挙げられる。
【００３０】
本願における用語「アルキニル」は、２〜６の炭素原子とともに少なくとも１つの三重結合を有する直鎖又は分枝鎖の一価の不飽和脂肪族を意味し、エチニル、１−プロピニル、１−ブチニル、１−ヘキシニル、２−プロピニル、２−ブチニル、２−ペンチニルなどの基が挙げられる。
【００３１】
本願における用語「アルコキシ」は、エーテル酸素原子を介して連結した１〜６の炭素原子を有し、エーテル酸素からのその自由原子価結合を有する直鎖又は分枝鎖のアルキル鎖からなる一価の置換基を意味し、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｓ−ブトキシ、ｔ−ブトキシなどの基が挙げられる。
【００３２】
本願における用語Ｃ3〜Ｃ8シクロアルキルは、３〜８の炭素原子を含む飽和炭化水素の環構造を意味し、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルなどが挙げられる。
【００３３】
本願における用語「アリール」又は「Ａｒ」は、各環が７員以下の任意の安定な単環、二環、又は三環の炭素環を意味し、少なくとも１つの環は、非置換、又はメチレンジオキシ、ヒドロキシ、Ｃ1-6−アルコキシ、ハロゲン、Ｃ1-6−アルキル、Ｃ2-6−アルケニル、Ｃ2-6−アルキニル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、−ＮＯ2、−ＮＨ2、−ＮＨ（Ｃ1-6−アルキル）、−Ｎ（Ｃ1-6−アルキル）2、−ＮＨ−アシル、及び−Ｎ（Ｃ1-6−アルキル）アシルからなる群より選択された１〜３の置換基で置換された芳香族である。「アリール」又は「Ａｒ」の例には、フェニル、２−クロロフェニル、３−クロロフェニル、４−クロロフェニル、２−フルオロフェニル、３−フルオロフェニル、４−フルオロフェニル、２−ブロモフェニル、３−ブロモフェニル、４−ブロモフェニル、２−トリフルオロメチルフェニル、３−トリフルオロメチルフェニル、４−トリフルオロメチルフェニル、２−メトキシフェニル、３−メトキシフェニル、４−メトキシフェニル、２−アミノフェニル、３−アミノフェニル、４−アミノフェニル、２−メチルフェニル、３−メチルフェニル、４−メチルフェニル、２−ニトロフェニル、３−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、２，４−ジクロロフェニル、２，３−ジクロロフェニル、３，５−ジメチルフェニル、２−トリフルオロメトキシフェニル、３−トリフルオロメトキシフェニル、４−トリフルオロメトキシフェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、及びビフェニルが挙げられる。用語「アリール−（Ｃ1〜Ｃ6−アルキル）」には、２−メチルフェニル、３−メチルフェニル、４−メチルフェニル、フェニルメチル（ベンジル）、フェニルエチル、ｐ−メトキシベンジル、ｐ−フルオロベンジル、及びｐ−クロロベンジルが挙げられる。
【００３４】
本願における用語「アシル」は、カルボニル部分構造に結合した１〜６の炭素原子を有する分枝鎖と直鎖の双方の飽和脂肪族炭化水素基を意味し、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリルなどが挙げられる。
【００３５】
本願における用語「複素環」又は「複素環式」は、安定な５〜７員の単環式又は安定な８〜１１員の二環式の複素環を意味し、飽和又は不飽和のいずれかであり、炭素原子と、Ｎ、Ｏ、及びＳからなる群より選択された１〜３のヘテロ原子からなり、窒素と硫黄のヘテロ原子は、場合により酸化されてよく、窒素のヘテロ原子は、場合により四級化されてよく、上記に規定した任意の複素環がベンゼン環に縮合した任意の二環式基が含まれる。複素環は、安定な構造の生成をもたらす任意のヘテロ原子又は炭素原子で結合することができる。複素環は、非置換、又はＣ1-6−アルコキシ、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ1-6−アルキル、Ｃ2-6−アルケニル、Ｃ2-6−アルキニル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、−ＮＯ2、−ＮＨ2、−ＮＨ（Ｃ1-6−アルキル）、−Ｎ（Ｃ1-6−アルキル）2、−ＮＨ−アシル、及び−Ｎ（Ｃ1-6−アルキル）アシルからなる群より選択された１〜３の置換基で置換されることができる。このような複素環要素の例には、ピペリジニル、ピペラジニル、２−オキソピペラジニル、２−オキソピペリジニル、２−オキソピロリジニル、２−オキソアゼピニル、アゼピニル、ピロリル、ピロリジニル、ピラゾリル、ピラゾリジニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、オキサゾリル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリル、イソオキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリル、チアゾリジニル、イソチアゾリル、キヌクリジニル、イソチアゾリジニル、インドリル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、チアジアゾリル、ベンゾピラニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、フリル、テトラヒドロフリル、ベンゾフラニル、テトラヒドロピラニル、チエニル、ベンゾチエニル、チアモルホリニル、及びオキサジアゾリルが挙げられる。
【００３６】
本願における用語「ハロゲン」、「ハル」、又は「ハロ」は、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素の族の一員を意味する。
【００３７】
本発明の何らかの成分又は式（Ｉ）の化合物において、何らかの変数（例、アリール、複素環、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4等）が１回を超えて生じるとき、各場合におけるその定義は、あらゆる別な場合でのその定義と独立する。また、置換基及び／又は変数の組み合わせは、そのような組み合わせが安定な化合物をもたらす場合のみ許容される。
【００３８】
本願における用語「治療する」、「治療すること」又は「治療」は、下記の意味である。
（１）疾病、障害、及び／又は状態に罹る可能性があるが、未だ罹ったと診断されていない患者において、その疾病、障害、又は状態の発生を防止し、
（２）疾病、障害、又は状態を抑制し、即ち、その進行を抑止し、
（３）疾病、障害、又は状態を軽減し、即ち、疾病、障害、及び／又は状態の退行を生じさせる。
【００３９】
本願における用語「患者」は、特定の疾病、障害、又は状態に苦しむ哺乳類のような温血動物を意味する。モルモット、イヌ、ネコ、ラット、マウス、ウマ、ウシ、ヒツジ、及びヒトは、この用語の意味の範囲内にある動物の例であることが明確に理解される。
【００４０】
本願における用語「疾病」は、疾患、病気、又は体の機能、システム、もしくは臓器の断絶、停止、もしくは障害を意味する。
【００４１】
本願における用語「障害」は、発生における遺伝的もしくは発生学的故障、又は毒物、負傷、もしくは疾病のような外因性の要因から生じる機能、構造、又は双方の混乱を意味する。
【００４２】
本願における用語「状態」は、存在、健康、又は物理的適合性の状態を言う。
本願における用語「予防」は、疾病の防止を意味する。
本願における用語「睡眠障害」、「睡眠撹乱」、又は「睡眠混乱」は、不眠を意味する。
【００４３】
本願における用語「不眠」は、睡眠が通常は生じる時間の中で、騒音や眩しい光などのような外的妨害が存在しない中で眠れないことを意味し、その睡眠できないことは、不穏状態又はうたた寝から、通常長さの睡眠の短縮又は絶対的覚醒状態まで、程度が異なることがある。用語「不眠」には、一次性不眠、精神障害に関連する不眠、薬物誘因の不眠、及び通常の睡眠・覚醒スケジュールの変化による不眠である概日リズム不眠（交代変化、交代勤務睡眠障害、時差ボケ又は時差ボケ症候群など）が含まれる。
【００４４】
本願における用語「一次性不眠」は、精神障害又は特定薬物の摂取もしくは禁断の生理的影響（薬物誘因の不眠）によるものではない、睡眠を開始する、睡眠を持続する、又は回復性睡眠を取ることの困難性を意味する。
【００４５】
本願における用語「概日リズムの睡眠障害」には、時差ボケ、時差ボケ症候群、交代勤務睡眠障害、睡眠相前進症候群、及び睡眠相後退症候群が挙げられる。
【００４６】
本願における用語「化合物の有効な阻害量」又は「化合物の有効なカゼインキナーゼＩεの阻害量」は、こうした治療を受け入れられる疾病、障害、又は状態に悩む患者を治療するため、適切なルートの投与によって生物が利用可能になる十分な化合物を意味する。
【００４７】
本願における用語「治療的に有効な量」は、指名された疾病、障害、又は状態を治療するのに有効な化合物の量を意味する。
【００４８】
本願における用語「医薬的に許容される塩」は、既に公知である又は将来見出されるかによらず、医薬品として使用するのに適切な非毒性の有機又は無機付加塩であって、当業者に使用されるあらゆる塩に適用することを意図したものである。適切な塩を形成する例示としての塩基には、ナトリウム、カリウム、カルシウム、又はマグネシウム水酸化物のようなアルカリ金属又はアルカリ土類金属の水酸化物、アンモニア、及び脂肪族、環状、又は芳香族アミン、例えばメチルアミン、ジメチルアミン、トリエチルアミン、ジエチルアミン、イソプロピルジエチルアミン、ピリジン、及びピコリンが挙げられる。適切な塩を形成する例示としての酸には、例えば、塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸などの無機酸、及び、例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸及びジヒドロキシマレイン酸、安息香酸、フェニル酢酸、４−アミノ安息香酸、４−ヒドロキシ安息香酸、アントラニル酸、桂皮酸、サリチル酸、４−アミノサリチル酸、２−フェノキシ安息香酸、２−アセトキシ安息香酸、マンデル酸などの有機カルボン酸、並びにメタンスルホン酸やｐ−トルエンスルホン酸のような有機スルホン酸が挙げられる。
【００４９】
本願における用語「医薬担体」は、投与のための医薬的に活性な化合物を製剤する際に用いられ、使用条件下において実質的に非毒性で非感作性である公知の医薬賦形剤を指称する。これらの賦形剤の正確な割合は、活性化合物の溶解性と化学的特性、選択される投与ルート、及び標準的薬務によって定められる。本発明の方法を実施するにおいて、化合物は、それ自身で有効で、それ自身を投与することもできるが、活性成分は、好ましくは、医薬担体を含む組成物の中に含められる。ここで、活性成分の割合は、約１質量％から約９０質量％まで変更することができる。
【００５０】
なお、本明細書で現れる略語は、以下の意味を有する。
Ｍｅ（メチル）、Ｅｔ（エチル）、Ｐｈ（フェニル）、Ｅｔ3Ｎ（トリエチルアミン）、ｐ−ＴｓＯＨ（パラ−トルエンスルホン酸）、ＴｓＣｌ（パラトルエンスルホニルクロリド）、ｈｅｐｔ（ヘプタン）、ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）、ＮＭＰ（１−メチル−２−ピロリジノン又はＮ−メチル−２−ピロリジノン）、ＩＰＡ（イソプロパノール又はイソプロピルアルコール）、ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）、ＤＢＵ（１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン）、ＤＢＮ（１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン）、ｒｔ又はｒ．ｔ．（室温又は周囲温度）、ｍｉｎ又はｍｉｎ．（分）、ｈ（時間）、ＵＶ（紫外線）、ＬＣＭＳ（液体クロマトグラフィ質量分光分析）、ｔ−Ｂｏｃ又はＢｏｃ（ｔ−ブトキシカルボニル）、Ｂｎ（ベンジル）、ｔ−Ｂｕ（第三級ブチル）、ｉ−Ｐｒ（イソプロピル）、ＨＯＡｃ（酢酸）、ＥｔＯＡｃ（酢酸エチル）、Ｅｔ2Ｏ（ジエチルエーテル）、ＥｔＯＨ（エタノール）、ｇ（グラム）、ｍｇ（ミリグラム）、μｇ（マイクログラム）、ｎｇ（ナノグラム）、ｍＬ（ミリリットル）、μＬ（マイクロリットル）、Ｌ（リットル）、ＨＰＬＣ（高性能液体クロマトグラフィ）、ＴＬＣ、ｔｌｃ、又はＴｌｃ（薄層クロマトグラフィ）、ｇ／Ｌ（リットルあたりのグラム）、ＳｉＯ2（シリカゲル）、Ｌ／ｍｉｎ（分あたりのリットル）、ｍＬ／ｍｉｎ（分あたりのミリリットル）、ｍｍｏｌ（ミリモル）、Ｍ（モル濃度）、ｍＭ（ミリモル濃度）、μＭ（マイクロモル濃度）、ｎＭ（ナノモル濃度）、μＣｉ（マイクロキューリー）、ＣＰＭ（分あたりのカウント）、ｒｐｍ（分あたりの回転）、ｍｍ（ミリメートル）、μｍ（マイクロメートル）、μ（ミクロン）、ｎｍ（ナノメートル）、ｐｐｍ（百万あたりの部分）、ｐｓｉ（平方インチあたりのポンド）、ｅｑ．又はｅｑｕｉｖ．（当量）、ＲT（保持時間）、℃（摂氏温度）、及びＫ（ケルビン）。
【００５１】
したがって、本発明の広範囲な実施態様は、式（Ｉ）の化合物に関し、
【化２】
2007513950.tif 000003
ここに、Ｒ1は、Ｈ又はＣ1-6アルキルであり、Ｒ2は、ＮＲ5Ｒ6であり、Ｒ3は、アリール又は複素環であり、Ｒ4は、Ｈ、Ｃ1-6アルキル、Ｃ2-6アルケニル、Ｃ2-6アルキニル、Ｃ1-6アルコキシ、ＣＦ3、ハロゲン、ＳＨ、Ｓ−Ｃ1-6アルキル、ＮＯ2、ＮＨ2
、又はＮＲ5Ｒ6であり、Ｒ5は、Ｈ又はＣ1-6アルキルであり、Ｒ6は、Ｈ又はＣ1-6アルキルであり、Ｘは、Ｓ又はＳ（Ｏ）nであり、Ｋ、Ｌ、又はＭの１つはＮであり、Ｋ、Ｌ、又はＭの他の２つは、それぞれＣであり、Ｒ4は、Ｋ、Ｌ、Ｍ、又はＣである他の環原子にのみ結合し、ｍは、１、２、又は３であり、及びｎは、１又は２である。
【００５２】
本発明の１つの実施態様は、ＬがＮであり、ＫとＭがそれぞれＣである化合物に関する。
【００５３】
本発明のさらなる実施態様は、ＬがＮであり、ＫとＭがそれぞれＣであり、Ｒ1、Ｒ4、Ｒ5、及びＲ6がそれぞれＨであり、Ｒ3がアリールである化合物に関する。以下の化合物は、この実施態様の範囲内にある代表的な例である：
３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（３−フルオロ−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、及び
３−（４−クロロ−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド。
【００５４】
本発明のもう１つの実施態様は、ＭがＮであり、ＫとＬがそれぞれＣである化合物に関する。
【００５５】
本発明のさらなる実施態様は、ＭがＮであり、ＫとＬがそれぞれＣであり、Ｒ1、Ｒ4、Ｒ5、及びＲ6がそれぞれＨであり、Ｒ3がアリール又は複素環である化合物に関する。以下の化合物は、この実施態様の範囲内にある代表的な例である：
３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（３−フルオロ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（３−メトキシ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド
３−（３−クロロ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（２−トリフルオロメチル−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（２−トリフルオロメトキシ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（２−メトキシ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、及び
３−（ピリジン−２−スルファニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド。
【００５６】
本発明のもう１つの実施態様は、ＫがＮであり、ＬとＭがそれぞれＣである化合物に関する。
【００５７】
本発明のさらなる実施態様は、ＫがＮであり、ＬとＭがそれぞれＣであり、Ｒ1がＣ1-6アルキルであり、Ｒ5がＨであり、Ｒ6がＨ又はＣ1-6アルキルであり、及びＲ3がアリールである化合物に関する。以下の化合物は、この実施態様の範囲内にある代表的な例である：
１−メチル−３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド、
１−メチル−３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、及び
３−フェニルスルファニル−１−プロピル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド。
【００５８】
本発明のさらなる実施態様は、ＫがＮであり、ＬとＭがそれぞれＣであり、Ｒ1、Ｒ4、及びＲ5がそれぞれＨであり、Ｒ3がアリールであり、及びＲ6がＣ1-6アルキルである化合物に関する。以下の化合物は、この実施態様の範囲内にある代表的な例である：
３−（３−トリフルオロメトキシフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド、
３−（３−クロロフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド、
３−（３−フルオロフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド、及び
３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド。
【００５９】
本発明のさらなる実施態様は、ＫがＮであり、ＬとＭがそれぞれＣであり、Ｒ1、Ｒ4、Ｒ5、及びＲ6がそれぞれＨであり、Ｒ3が複素環である化合物に関する。以下の化合物は、この実施態様の範囲内にある代表的な例である：
３−（キノリン−８−イルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（ピリジン−２−スルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（ピリジン−４−スルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、及び
３−（チオフェン−２−イルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド。
【００６０】
本発明のさらなる実施態様は、ＫがＮであり、ＬとＭがそれぞれＣであり、Ｒ1、Ｒ5、及びＲ6がそれぞれＨであり、Ｒ3がアリールである化合物に関する。以下の化合物は、この実施態様の範囲内にある代表的な例である：
３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（３−フルオロフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（３−クロロフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（３−ブロモフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（２−クロロフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（４−クロロフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（２，４−ジクロロフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（２−フルオロフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（２，３−ジクロロフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（２−トリフルオロメチルフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（３−トリフルオロメチル−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（２−アミノフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
【００６１】
３−（２，５−ジクロロ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（２−メトキシ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（３−メトキシ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（３−アミノ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（４−ニトロ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（３−ニトロ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−ｏ−トリルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−ｐ−トリルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（３，５−ジメチル−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−ｍ−トリルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（２−エチル−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（３−トリフルオロメトキシ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、
３−（３−フルオロ−フェニルスルファニル）−５−メトキシ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、及び
３−（３−メトキシ−フェニルスルファニル）−５−メトキシ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド。
【００６２】
本発明の化合物は、当該分野で公知のものに類似する方法によって製造することができる。反応スキーム１、２、３、及び対応する説明文は、本発明の種々の化合物の製造を記載する。開示した本発明の方法と実施例は、説明のために用意したものであって、本発明の範囲を限定するものではない。個々の化合物に到達するための、本明細書で記載したものに代わる試薬、反応条件、及び工程の別な組み合わせと置換は当業者には明らかである。表１、２、及び３は、実施例の化合物の要約を提供し、本発明の実施例の化合物についての生物学データは、表４に要約している。
【００６３】
化学的合成
【化３】
2007513950.tif 000004
【００６４】
スキーム１は、市販の２−クロロ−３−ニトロピリジン（１ａ−１、ここに、ＫはＮであり、ＬとＭはそれぞれＣである）、３−クロロ−４−ニトロピリジン（１ｂ−１、ここに、ＬはＮであり、ＫとＭはそれぞれＣである）、もしくは４−クロロ−３−ニトロピリジン（１ｃ−１、ここに、ＭはＮであり、ＫとＬはそれぞれＣである）、又は随意に置換されたクロロ−ニトロピリジン１からの本発明の化合物の合成を開示する。化合物番号の最初の数字は、スキーム１〜３のいずれでも示すように、対応する化合物又は構造の番号に関連し、例えば、１ａ−１における最初の数字１は、スキーム１における化合物又は構造１に関連する。その後の文字表示「ａ」、「ｂ」、又は「ｃ」は、それぞれ、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボキシアミドのシリーズ（「ａ」、４−アザインドールのシリーズとしても知られる）、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボキシアミドのシリーズ（「ｂ」、５−アザインドールのシリーズとしても知られる）、及び１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボキシアミドのシリーズ（「ｃ」、６−アザインドールのシリーズとしても知られる）の前駆体として、又はメンバーとしての化合物を特定する。化合物番号において、ダッシュの後の最後の１つ以上の数字は、その構造シリーズにおける特定の化合物を特定する。化合物が番号によってのみ特定される場合、その番号は、スキーム１〜３のいずれかにおいて示された対応する化合物又は構造に言及し、その説明は、上述のように、「ａ」、「ｂ」、及び「ｃ」で特定される３つの構造的シリーズを一般的に含むものと理解される。
【００６５】
スキーム１の工程ａにおいて、クロロ−ニトロピリジン１が、約５０℃〜約７０℃の温度で、例えば、マロン酸ジエチル又はマロン酸ジメチルのようなマロン酸ジエステルの過剰な中の、例えば、マロン酸ジエステルのナトリウム、カリウム、又はリチウム塩のような過剰のマロン酸ジエステル中のマロン酸ジエステルのアルカリ金属塩に、少しずつ添加される。マロン酸ジエステルのアルカリ金属塩は、例えば、当業者によく知られているように、過剰のマロン酸ジエステルに、例えば、ナトリウム金属のようなアルカリ金属を添加することによって製造することができる。約５０℃〜約７０℃で約３時間の後、混合物を約１２〜約２４時間にわたって周囲温度に置いておく。反応が不十分な場合、混合物を約８０℃に約２時間〜約４時間にわたって加熱した後、濃縮して過剰なマロン酸ジエステルを除去し、次いで、例えば、塩化水素酸又は硫酸のような濃厚な鉱酸と水で処理する。混合物を約１００℃〜約１１０℃で約５時間〜約９時間にわたって加熱し、脱炭酸反応を生じさせる。周囲温度に約１２〜約２４時間にわたって置いた後、混合物を、例えば、エチルエーテルや酢酸エチルのような適切な溶媒で洗浄し、例えば、水酸化ナトリウム又は水酸化カリウムのようなアルカリ金属水酸化物を用いて約ｐＨ８〜約ｐＨ９の塩基性にし、例えば、酢酸エチルのような適切な有機溶媒を用いて抽出する。有機抽出物を濾過し、減圧下で濃縮し、所望のメチル−ニトロピリジン２を得る。この「工程ａ」の手順による２の製造は、「２工程、ワンポット合成」と称される。
【００６６】
あるいは、スキーム１の工程ａにおいて、メチル−ニトロピリジン２は、メチルボロン酸を用いた１のスズキカップリングによって製造することもできる。即ち、例えば、ジオキサンのような適切な非プロトン性溶媒中のクロロ−ニトロピリジン１、メチルボロン酸、炭酸カリウム、及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）［Ｐｄ（ＰＰｈ3）4］の混合物を、約１１０℃〜約１２０℃で約１２時間〜約１６時間にわたって加熱する。この反応混合物を室温まで冷やし、濃縮し、クロマトグラフィによって精製して、メチル−ニトロピリジン２を生成させる。
【００６７】
現在、スキーム１の工程ａにしたがって２工程を伴うワンポットにおいて、化合物２もまた製造できることが有利に見出されている。したがって、例えば、ジメチルホルムアミド又はＮ−メチル−２−ピロリジノンのような極性溶媒に、例えば、カリウムｔ−ブトキシド、ナトリウムエトキシド、水素化ナトリウム、ナトリウムｔ−ブトキシド、又はナトリウムヘキサメチルジシラジドのような塩基の約２〜約２.５当量を約１６℃の温度で添加し、約３０分間にわたって撹拌する。次いで、この混合物が、約２０℃〜約３５℃の温度で、例えば、マロン酸ジエチルのようなマロン酸ジエステルの約１〜約４当量を用いて処理される。約２０分間の後、この混合物が、約１当量の化合物１と、例えば、ジメチルホルムアミド又はＮ−メチルピロリドンのような極性溶媒との溶液を用い、約２９℃〜約４４℃で処理される。この混合物は、ＨＰＬＣ分析又は当業者によく知られる別なクロマトグラフィ分析によって表示される反応の完了まで、約５０℃に加熱される。最も有利には、化合物１は、約２.０当量のマロン酸ジエチルとともに縮合され、ここに、Ｎ−メチ
ル−２−ピロリジノンが好ましい溶媒であり、約２.２〜約２.５当量のナトリウムｔ−ブトキシドが好ましい塩基であり、上述の添加順序、反応温度と時間が、化合物２のより有利な「ワンポット、２工程」（工程ａ）の合成のこの部分に採用される。反応が完了すると、混合物は、鉱酸と水、好ましくは、約４.２当量の６Ｍの硫酸を用い、約１００℃で約１２時間にわたって処理され、脱炭酸反応を生じさせる。この反応は、氷水でクエンチされ、トルエンのような適切な溶媒を用いて抽出され、化合物２を得る。この有利な「工程ａ」の手順による化合物２ａ−１（２−メチル−３−ニトロ−ピリジン）の合成は、マロン酸ジエチルを用いた１ａ−１の縮合について反応時間の驚くべき顕著な短縮をもたらし（約３日間に対して約２時間）、顕著に改良された全収率の２ａ−１と（３０〜６８％に対して約８０％）、クロマトグラフィ精製の必要なしに、顕著に改良された分離収率（＞９６％）を提供した。この方法は、収率と分離純度に関し、有利に再現性がある。また、この手順は、上記に開示した別な方法により、ナトリウム金属と、例えば、化合物２の製造に必要とされるテトラキス（トリフェニル−ホスフィン）パラジウム（０）のような比較的高価な試薬の使用を有益に回避する。
【００６８】
スキーム１の工程ｂに示すように、２−ヒドロキシ−３−（ニトロ−ピリジニル）−アクリル酸エチルエステル３は、例えば、エタノール又はｔ−ブタノールのような適切な溶媒中で、例えば、ナトリウムエトキシド、リチウムエトキシド、リチウムｔ−ブトキシド、ナトリウムｔ−ブトキシド、カリウムｔ−ブトキシド、又はリチウムヘキサメチルジシラジドのような適切な塩基を用いて、メチル−ニトロピリジン２を処理し、次いで、この反応混合物を、周囲温度で、例えば、シュウ酸ジメチル又はシュウ酸ジエチルのようなシュウ酸ジエステルで処理し、この反応混合物を周囲温度に約１２時間〜約４８時間にわたって置くことにより製造することができる。次いで、この反応混合物を、例えば、塩化水素酸又は硫酸のような鉱酸で処理し、約ｐＨ１にする。沈殿物を濾過によって収集し、例えば、エタノールとジイソプロピルエーテルのような適切な溶媒を用いて順次に洗浄し、各々、２−ヒドロキシ−３−（ニトロ−ピリジニル）−アクリル酸エチルエステル３又はその互変異性のケトエステルを得る。
【００６９】
有利には、混合物３はまた、スキーム１の工程ｂにしたがう別な方法により、適切な溶媒中のシュウ酸ジエチルと適切な塩基の予め混合された溶液に、約２℃〜約周囲温度で、化合物２をゆっくり添加することによって合成できることが見出されている。それに応じて、例えば、ナトリウムエトキシド、リチウムエトキシド、リチウムｔ−ブトキシド、ナトリウムｔ−ブトキシド、カリウムｔ−ブトキシド、又はリチウムヘキサメチルジシラジドのような適切な塩基が、約２℃で、例えば、テトラヒドロフランのような適切な溶媒に添加される。この混合物を約２０分間にわたって撹拌した後、約−０.３℃〜約４℃で、約３当量のシュウ酸ジエチルを添加する。約１０分間の後、約１当量の化合物２と、例えば、テトラヒドロフランのような適切な溶媒の溶液を、約４℃〜約９℃で添加する。この混合物を周囲温度まで温める。ＨＰＬＣ分析又は当業者によく知られる別なクロマトグラフィ分析による表示で反応が完了したとき、反応混合物を約１℃まで冷やし、約１℃〜約９℃にて飽和塩化アンモニウム溶液を用いて処理する。化合物３を、水及び／又は、例えば、イソプロパノールのような共溶媒を用いてさらに希釈することにより分離する。最も有利には、化合物２を、シュウ酸ジエチルを用いて縮合し、ここに、ナトリウムエトキシドが好ましい塩基であり、テトラヒドロフランが好ましい溶媒であり、上述の添加順序及び反応時間と条件にしたがう。このより有益な「工程ｂ」の手順による化合物３ａ−１（２−ヒドロキシ−３−（３−ニトロ−ピリジン−２−イル）−アクリル酸エチルエステル）の合成は、反応時間の驚くべき顕著な短縮をもたらし（約２〜３日間に対して約２時間）、化合物３ａ−１の顕著に改良された収率を提供した（３２〜６８％に対して約８８％）。
【００７０】
スキーム１の工程ｃに示すように、所望の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸エステル、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボキン酸エステル、又は１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸エステルの中間体４は、適切に置換された２−ヒドロキシ−３−（ニトロ−ピリジニル）−アクリル酸エステル３、又はその互変異性ケトエステルのニトロ基の触媒的又は化学的還元と、随伴のピロール環形成により化合物４を生成させることにより製造することができる。即ち、例えば、エタノール又はメタノールのような適切な溶媒中の化合物３と、例えば、炭素上のパラジウムのような適切な触媒の混合物が、当業者によく知られた方法で、約４５ｐｓｉ〜約１２００ｐｓｉの圧力下で約１〜約３時間にわたって水素化され、精製の後、中間体化合物４を生成する。有利には、化合物４は、この手順によって製造され、ここに、無水エタノールが好ましい溶媒であり、炭素上のパラジウムが好ましい触媒である。これらの条件下で、１０質量％の有利な低い触媒負荷が達成される。
【００７１】
あるいは、２−ヒドロキシ−３−（ニトロ−ピリジニル）−アクリル酸エチルエステル３又はその互変異性ケトエステルは、化学的に還元され、中間体化合物４を提供することができる。例えば、エタノールのような適切な溶媒中の例えば、化合物３、ＳｎＣｌ2、及びＴｉＣｌ4の混合物が、約４時間にわたって還流・加熱され、当業者によく知られた方法による精製の後、中間体化合物４を生成する。
【００７２】
シュウ酸ジエチルが、化合物３の製造に使用される場合、引き続く化合物３の還元により、エチルエステルとしての中間体化合物４を与える。中間体エチルエステル４は、場合により、当業者によく知られるエステル交換の手順によって、他の適切なエステルに転化させることもできる。スキーム１の工程ｄに示すように、メチルエステル５は、例えば、炭酸カリウム又は炭酸ナトリウムのような塩基の存在下で、エチルエステル４のメタノール溶液を処理し、約５０℃〜約８０℃で約１時間にわたって、あるいは、薄層クロマトグラフィ又は当業者によく知られる他の適切なクロマトグラフィ分析によって決定される反応が完了するまで混合物を加熱することにより、製造することができる。水を用いた反応物の希釈と、当業者によく知られる濾過又は抽出法によるメチルエステル５の分離により、メチルエステル５を得る。
【００７３】
スキーム１の工程ｅに示すように、中間体エステル４又は５は、当業者によく知られる方法により、アミド６に転化させることができる。即ち、例えば、メタノール又はエタノールのような適切な極性溶媒中のエステル４又は５の溶液の、周囲温度での約１日〜約３日にわたる約５Ｎ〜約７Ｎの水酸化アンモニウム溶液を用いた処理により、あるいは、その溶液を約５５℃に約１０時間にわたって加熱することにより、当業者によく知られる方法による分離の後、第一級アミド６を生成する。あるいは、エステル４又は５を、周囲温度にて、濃厚な水酸化アンモニウム溶液と塩化リチウムの混合物中に、薄層クロマトグラフィ分析又は当業者によく知られる他の適切なクロマトグラフィ分析が反応は実質的に完了したと表示するまで、約３〜約５日間にわたって懸濁させることもできる。アミド６を、当業者によく知られた方法により、反応混合物から分離する。中間体のアザインドールエステル４又は５を、当業者によく知られる方法によりＣ1-6−アルキルアミンで処理することによって、Ｎ−Ｃ1-6−アルキル置換アミド６が製造される。例えば、中間体のアザインドールエステル４又は５は、Ｃ1-6−アルキルアミンで、例えば、Ｃ1-6−アルキルアミンを過剰にして濃厚な水溶液又は純物質としてのメチルアミンで処理し、薄層クロマトグラフィ分析又は当業者によく知られる他のクロマトグラフィ法により、反応の完了についてモニターする。反応物を水で希釈した後、又は当業者によく知られた抽出方法によって、所望のＮ−Ｃ1-6−アルキルアミド６を収集する。Ｃ1-6−ジアルキルアミンを用いた中間体アザインドールエステル４又は５の同様な処理により、対応するＮ−Ｃ1-6−ジアルキルアミド６を得る。
【００７４】
有利には、第一級アミド６は、スキーム１の工程ｅにしたがい、メタノール中のアンモニア溶液にアザインドールエチルエステル４を添加し、反応が完了するまで加圧下で加熱することによって製造される。溶媒としてのメタノールの使用は、出発物質の顕著に高い溶解性と顕著に迅速な反応時間を提供する。また、アザインドールエチルエステル４は、これらの条件下で、対応するアザインドールメチルエステル５にエステル交換するが、エステル４と５の双方は、この反応条件下で、所望の第一級アミド６に転化する。好ましくは、この反応は、メタノール中の７Ｎのアンモニア、約５０℃の反応温度、及び約３５ｐｓｉの初期圧力を用い、約４９時間にわたって行われる。この時間の中で、反応容器内の圧力は、約１６ｐｓｉに低下する。反応の完了は、ＨＰＬＣクロマトグラフィ分析又は当業者によく知られる別なクロマトグラフィ分析によって決定される。
【００７５】
スキーム１の工程ｆに示すように、中間体アミド６は、当業者によく知られた方法によって、ピロール環の３位でチオアリール化される。例えば、ジメチルホルムアミド又はＮＭＰのような適切な溶媒中の中間体アミド６のサスペンジョンが、周囲温度で、例えば、水素化ナトリウム又は水素化リチウムのような適切な塩基で処理された後、適切なジアリールジスルフィドで処理され、次いで、その混合物を約９０℃〜約１００℃で約１２時間〜約２０時間にわたって加熱する。この反応過程は、薄層クロマトグラフィ分析又は当業者によく知られる他のクロマトグラフィ法により追跡される。次いで、反応物が濃縮され、水で希釈され、所望の式（Ｉ）の化合物が分離され、当業者によく知られた方法によって、クロマトグラフィにより精製される。
【００７６】
あるいは、例えば、ジメチルホルムアミド又はＮＭＰのような適切な溶媒中の中間体アミド６と約１.５当量の炭酸セシウムとの混合物を、適切なジアリールジスルフィド（約１.１当量）で処理した後、この混合物を約９０℃〜約１００℃で約１２時間〜約２０時間にわたって加熱する。この反応は、薄層クロマトグラフィ又は当業者によく知られる他のクロマトグラフィ法によりモニターする。式（Ｉ）の化合物を分離し、当業者によく知られる方法によって、クロマトグラフィにより精製する。Ｒ3−Ｘが複素環−Ｓである式（Ｉ）の化合物は、適切に置換されたジ複素環ジスルフィドを用い、同様な方法で製造する。
【００７７】
有利には、式（Ｉ）の化合物は、スキーム１の工程ｆにしたがい、１つの部分としての好ましい溶媒ＮＭＰに、約１.５当量のジアリールジスルフィド、約２当量の炭酸セシウム、及び約１当量のアミド６を添加することにより合成される。この混合物は、約１２０℃に約２１時間にわたって加熱され、反応は、ＨＰＬＣ又は他の当業者によく知られたクロマトグラフィ法によってモニターされる。反応の促進が必要な場合、約０.５当量の炭酸セシウムが場合により添加され、約４時間にわたって加熱が続けられる。クロマトグラフィ分析によって完了と決定されると、反応物が冷却され、水の注入によってクエンチされ、式（Ｉ）の所望の化合物が分離され、当業者によく知られた方法によって精製される。この方法で式（Ｉ）の化合物が製造されると、反応時間は、驚くほど顕著に短縮され、式（Ｉ）の化合物は、より高い収率（５９％に対して８５％）と、生成物のさらなるクロマトグラフィ精製が不要である十分な純度で有利に得られる。
【００７８】
スキーム１の工程ｇに示すように、式（Ｉ）の化合物のピロール環の窒素は、Ｒ1がＨである式（Ｉ）の化合物と適切な溶媒の溶液、例えば、１，３−ジメチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２（１Ｈ）−ピリミジノンを、Ｃ1-6−ジアルキルスルフェートと適切な塩基、例えば炭酸セシウムで、周囲温度で約１２時間〜約２０時間にわたって処理することにより、Ｎ−アルキル化することができる。反応の完了は、薄層クロマトグラフィ分析又は当業者によく知られる他の適切なクロマトグラフィ法によって決定される。完了すると、反応混合物は水で希釈され、Ｒ1がＣ1-6−アルキルである式（Ｉ）の化合物が分離され、当業者によく知られる方法によって精製される。また、式（Ｉ）の化合物のピロール環の窒素は、Ｒ1がＨである式（Ｉ）の化合物のピリジン溶液を、例えば、炭酸セシウムのような適切な塩基の存在下で、Ｃ1-6−アルキルハライドで処理し、約０.２５時間〜約３時間にわたって加熱することにより、アルキル化することができる。反応混合物を冷却し、水で希釈し又は濃縮して乾燥させ、酢酸エチルで抽出する。当業者によく知られるようなクロマトグラフィ法による濃縮と精製により、Ｒ1がＣ1〜Ｃ6−アルキルである式（Ｉ）の化合物を得る。Ｒ1がＨである式（Ｉ）の化合物のピロール環窒素のＮ−アルキル化のための、当業者によく知られる、他の方法としては、例えば、ジメチルホルムアミド又はＮＭＰのような適切な極性溶媒中で、Ｒ1がＨである式（Ｉ）の化合物を、例えば、水素化ナトリウム又はカリウムｔ−ブトキシドのような適切な塩基で処理し、次いで、例えば、ヨウ化プロピルのようなＣ1-6−アルキルハライドを添加することによる方法が採用できる。反応の完了は、薄層クロマトグラフィ分析又は当業者によく知られる他のクロマトグラフィ法により決定される。完了すると、反応混合物は水で希釈され、Ｒ1がＣ1-6−アルキルである式（Ｉ）の化合物が、当業者によく知られる方法によって分離され、精製される。
【００７９】
【化４】
2007513950.tif 000005
【００８０】
スキーム２に示すように、ジアリールジスルフィドは、例えば、メタノールのような適切な有機溶媒中の適切なアリールスルフィドの溶液を、過ホウ酸ナトリウムの水溶液で処理し、この混合物を周囲温度に約１２〜約２４時間にわたって置くことにより製造される。このジアリールジスルフィドは、当業者によく知られた方法により、分離され、精製される。例えば、ビス（２−チエニル）ジスルフィドのようなジ複素環ジスルフィドは、同様な方法で製造される。
【００８１】
【化５】
2007513950.tif 000006
【００８２】
スキーム３は、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸メチルエステル５ｂ−１の合成を開示する。スキーム３の工程ｈにおいて、（３−ヨード−ピリジン−４−イル）カルバミン酸１，１−ジメチルエチルエステル（７ｂ−１）、３，３−ジエトキシ−１−プロピン、例えばトリエチルアミン又はヒューニッヒ塩基（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）のような塩基、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（II）、及びヨウ化銅の混合物を、例えば、不活性雰囲気下のドライＤＭＦのような適切な溶媒中で、約９０℃で約３時間にわたって加熱する。反応混合物は、約７０℃まで冷やされ、例えば、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）又は１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン（ＤＢＮ）のような適切な塩基で処理され、続いて、約７０℃で約３時間にわたって撹拌した後、室温で約１２時間にわたって撹拌する。反応混合物を酢酸エチルに注ぎ入れ、水とブラインで洗浄し、有機相を乾燥し、濾過し、濃縮し、２−（ジエトキシメチル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−１−カルボン酸１，１−ジメチルエチルエステル（８ｂ−１）を生成させ、これをクロマトグラフィ又は当業者によく知られる方法によって精製する。スキーム３の工程ｉに示すように、酸性条件下で化合物８ｂ−１の加水分解がもたらされ、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボキシアルデヒドを生成する。例えば、塩化水素酸のような鉱酸を用いた、室温での約２０時間のような適切な時間での８ｂ−１の処理は、当業者によく知られる方法による生成混合物の単離とクロマトグラフィ分離の後、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボキシアルデヒド（９ｂ−１）と２−ホルミル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−１−カルボン酸１，１−ジメチルエチルエステルとの混合物を生成する。例えば、トリフルオロ酢酸のような適切な酸と、例えば、ジクロロメタンのような適切な溶媒を用いた還流による２−ホルミル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−１−カルボン酸１，１−ジメチルエチルエステルの酸性加水分解は、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボキシアルデヒド９ｂ−１を生成する。スキーム３の工程ｊに示すように、メタノールのような適切な溶媒中の、約５時間にわたる攪拌と約０℃の冷却での、シアン化ナトリウムと二酸化マンガンを用いた１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボキシアルデヒド（９ｂ−１）の処理は、当業者によく知られる方法による濾過、水洗、及び単離の後、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸メチルエステル５ｂ−１を与える。
【００８３】
本明細書で開示した本発明の方法で使用される化合物の種々の実施態様はいずれも、本明細書に記載の種々の疾病と障害を治療する方法に使用することができる。本明細書で述べたように、本発明の方法に使用される化合物は、カゼインキナーゼＩεの作用を阻害することができる。本発明の１つの実施態様は、気分障害と睡眠障害を治療する方法を提供する。本発明のもう１つの実施態様において、気分障害は、うつ病性障害又は双極性障害であることができる。本発明のさらなる実施態様は、うつ病性障害の治療に関し、このうつ病性障害は、大うつ病性障害である。本発明のもう１つの実施態様は、双極性障害の治療に関し、この双極性障害は、双極性Ｉ障害又は双極性II障害である。本発明のもう１つの実施態様は、睡眠障害の治療に関する。本発明のさらなる実施態様は、睡眠障害の治療に関し、この睡眠障害は、概日リズム睡眠障害である。本発明のさらなる実施態様は、概日リズム睡眠障害の治療に関し、この概日リズム睡眠障害は、交代勤務睡眠障害、時差ボケ症候群、睡眠相前進症候群、及び睡眠相後退症候群である。当業者は、本明細書で明示する疾病と傷害が、本発明を限定するものではなく、本発明の化合物の有効性を例示するものであることを容易に認識する。即ち、本発明の化合物は、カゼインキナーゼＩεの抑制によって改善される全ての疾病又は障害の治療に使用され得ると理解すべきである。
【００８４】
本発明のもう１つの実施態様において、本発明の式（Ｉ）の化合物の医薬組成物が、医薬分野における当業者によく知られた方法で製造される。担体又は賦形剤は、活性成分の媒体又は媒介物としての役目を果たすことができる固体、半固体、又は液体であることができる。適切な担体又は賦形剤は、当該分野でよく知られている。医薬組成物は、経口、吸入、非経口、又は局所の使用に適することができ、錠剤、カプセル、サスペンジョン、シロップ、エアロゾル、吸入薬、坐薬、軟膏、粉末、溶液などの形態で患者に投与することができる。本明細書における用語「医薬担体」は、１つまたはそれ以上の賦形剤を意味する。本明細書で記載のように、本明細書の医薬組成物は、カゼインキナーゼＩεの抑制を提供し、したがって、カゼインキナーゼＩεの抑制によって改善される疾病又は障害の治療に有用である。
【００８５】
本発明の化合物の製剤を製造することにおいて、経口、非経口、皮下ルートなどの選択されたルートにより、有効量の１つ又はそれ以上の活性化合物の生体利用度を確保するように注意すべきである。例えば、効果的な投与ルートには、皮下、静脈内、経皮、鼻腔内、直腸、膣などが挙げられ、植込錠からの放出、及び活性成分及び／又は組成物の組織への直接の注入もまた挙げられる。
【００８６】
経口投与のため、本化合物は、不活性希釈剤又は食用担体を含む又は含まずに、カプセル、ピル、錠剤、トローチ、粉末、溶液、サスペンジョン、又はエマルジョンのような固体又は液体の製剤に処方されることができる。カプセル、ピル、錠剤、トローチなどは、微結晶性セルロース、トラガカントガムのようなバインダー、スターチ又はラクトースのような賦形剤、アルギン酸、コーンスターチなどの崩壊剤、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、又はＳｔｅｒｏｔｅｘ（登録商標）（Stokely-Van Camp Inc., Indinapolis, Indiana）のような滑沢剤、コロイダル二酸化ケイ素のような流動促進剤、蔗糖又はサッカリンのような甘味料、ペパーミント、メチルサリチル酸、又は果実香味料のような香味料などの１つ又はそれ以上の補助剤もまた含むことができる。単位投与形態がカプセルの場合、ポリエチレングリコール又は脂肪油のような液体担体もまた含むことができる。使用される材料は、医薬的に純粋であり、使用される量において非毒性でなければならない。あるいは、本医薬組成物は、徐放に適する形態で製造することもでき、当業者によく知られる方法を用い、適切な１日に１回、1週間に１回、又は１月に１回の形態で、本発明の式（Ｉ）の化合物の治療量を提供する。例えば、活性成分を含む徐々に分解されるポリマーが想定される。
【００８７】
非経口投与に関し、本化合物は、油中水滴のような無菌液体であることができる医薬担体を用い、又は界面活性剤及び他の医薬的に許容される賦形剤を添加せずに、生理的に許容される希釈剤の中の化合物の溶液又はサスペンジョンの注射可能な剤形として投与することができる。この製剤に採用可能な実例としてのオイルは、石油、動物、植物、又は合成由来のものであり、例えば、ピーナッツオイル、大豆油、及び鉱油である。一般に、水、生理食塩水、水性ブドウ糖と関連の糖溶液、エタノール、及びプロピレングリコールのようなグリコール類は、とりわけ注射可能な溶液にとって好ましい担体である。非経口の剤形は、アンプル、使い捨ての注射器、又は不活性プラスチック又はガラスからなる複数回投与バイアル中に封入することができる。
【００８８】
上記の溶液又はサスペンジョンは、注射用水、生理食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、又は他の合成溶媒のような無菌希釈剤、アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウムのような抗菌剤、エチレンジアミンテトラ酢酸のようなキレート剤、酢酸塩、クエン酸塩、又はリン酸塩のような緩衝剤、及び塩化ナトリウム又はブドウ糖のような緊張度調節用の薬剤の１つ又はそれ以上をさらに含むこともできる。
【００８９】
本化合物は、皮膚パッチ、蓄積注射、又はインプラント製剤の形態で投与することもでき、これらは、活性成分の徐放を可能にするような方法で製剤化することができる。活性成分は、ペレット又は小円柱形に圧縮され、蓄積注射又はインプラントとして皮下に又は筋肉内に移植されることができる。インプラントは、生分解性ポリマー又は合成シリコーンのような不活性材料を採用することができる。適切な医薬担体と製剤技術は、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, l9th edition, Volumes 1 and 2, 1995, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania, U.S.A.のような標準的教本に見出され、参照によって本明細書に加入する。
【００９０】
本明細書に記載のような種々の疾病状態の治療において、適切な投与レベルは、約０.０１ｍｇ／ｋｇ・日〜約２５０ｍｇ／ｋｇ・日、好ましくは、約０.０５ｍｇ／ｋｇ・日〜約１００ｍｇ／ｋｇ・日、とりわけ、約０.０５ｍｇ／ｋｇ・日〜約４０ｍｇ／ｋｇ・日である。本化合物は、治療すべき疾病又は障害の性質によって指示されるように、１日あたり１〜４回の投与計画で投与されることができる。
【実施例】
【００９１】
以下の実施例は、本発明をより詳細に説明するために役立つものであり、如何なる方法においても、本発明の範囲を限定するものではない。表１、２、３は、本明細書で製造される例示の化合物の集約を提供する。本明細書に記載のニトロ化合物は、こうした化合物の考えられる潜在的な爆発障害のため、注意深く取り扱った。
【００９２】
特段の記載がない限り、全ての出発物質は、試薬、及び溶媒は、商業用の供給業者から入手し、さらなる生成なしに使用した。全ての反応は、不活性雰囲気下でドライな試薬と溶媒を用いて行った。フラッシュクロマトグラフィは、「Still, W. C.; Kahn, M.; Mitra, A. Rapid Chromatographic Technique for Preparative Separations with Moderate Resolution. J. Org. Chem., 1978, 43, 2923-2925」に記載のような溶媒系を用い、文献にしたがい、ＥＭサイエンスのシリカゲル６０（４０〜６３ｍｍ）を用いて実施した。薄層クロマトグラフィは、０.２５ｍｍのシリカゲルコートの６０Ｆ−２５４プレート（ＥＭ）を用いて行い、ヨウ素蒸気、紫外線、又はＫＭＯ4溶液のような染色剤を用いて視覚化した（他の染色溶液が言及された場合、「“Thin-Layer Chromatography, A Laboratory Handbook", Egon Stahl, Ed.」、「Springer-Verlag Berlin-Heidelberg-New York, 1969」に記載のようにして製造した。）。
【００９３】
赤外（ＩＲ）スペクトルは、記載のようにして製造したサンプルを用い、Ｎｅｘｕｓ６７０ＦＴＩＲ（Nicolet）スペクトロメータに記録し、波数で報告した（ｃｍ-1）。1ＨＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ  Ｇｅｍｉｎｉ及び／又はｍｅｒｃｕｒｙ３００、Ｕｎｉｔｙ４００、又はＵｎｉｔｙ  ｐｌｕｓ及び／又はＩｎｏｖａ５００ＭＨｚに記録し、化学シフト（δ）は、参照としてのテトラメチルシラン（０.０ｐｐｍ）又はクロロホルム（ＣＤＣｌ3、７.２６ｐｐｍ）に対するｐｐｍで報告した。13ＣＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ  Ｕｎｉｔｙ装置に記録し（１００.５７ＭＨｚ、１３Ｃ周波数）、化学シフト（δ）は、特に記載がなければ、ＣＤＣｌ3（７７.０ｐｐｍ）に対するｐｐｍで報告した。質量スペクトル（ＭＳ）は、メタンを用いる１２０ｅＶでの化学イオン化（ＣＩ、１２０ｅＶ）によって、Ｆｉｎｎｉｇａｎ  ＭＡＴ  Ｍｏｄｅｌ  ＴＳＱ７００質量スペクトロメータシステムで得た。液体クロマトグラフィ質量分析（ＬＣＭＳ）は、Ｇｉｌｓｏｎ２１５液体ハンドラーに接続したＭｉｃｒｏｍａｓｓＬＣＴで行った。高分解能の質量分光分析（正確な質量スペクトル）は、Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＱＴＯＦ質量スペクトロメータを用い、１００００の質量分解能で、ＥＳＩモードで行った。正確な質量値は、プロトン化した分子イオン（Ｍ＋１）について測定し、ここに、Ｍは分子イオンを示す。
【００９４】
ピロロ［３，２−ｂ］インドール類（４−アザインドール類）の製造
２−メチル−３−ニトロ−ピリジン、２ａ−１（スキーム１、工程ａ）
ナトリウム金属（３.５ｇ）を少しずつ１時間かけて、窒素下で９０℃に加熱したマロン酸ジエチル７９ｍＬを入れた三つ口フラスコに添加した。温度を６０℃に下げ、２−クロロ−３−ニトロピリジン（１ａ−１、２５.０ｇ）を少しずつ１５分間かけて添加した。反応物の色が暗赤色に変化した。溶液を６０℃に３時間にわたって保持した後、室温に終夜にわたって静置した。Ｔｌｃは出発物質が残存していることを示した。溶液を８０℃にさらに３時間にわたって加熱した（反応の完了）。減圧下でマロン酸ジエチルを除去し、暗褐色の残留物を濃Ｈ2ＳＯ4（１８ｍＬ）とＨ2Ｏ（３２ｍＬ）との混合物の中に取った。この混合物を１０５℃で７時間にわたって加熱（脱炭酸反応）した後、室温に終夜にわたって静置した。この混合物を３×１５０ｍＬのＥｔ2Ｏと２×２００ｍＬのＥｔＯＡｃで洗浄し、洗液を廃棄した。水相をＮａＯＨを用いてｐＨ８〜９の塩基性にし、３×２００ｍＬのＥｔＯＡｃを用いて抽出した。合一した有機抽出物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）（珪藻土）（Celite Corporation, 137 West Central Avenue, Lompor, California 93436）上で濾過し、減圧下で溶媒を除去した。残留物を結晶化させ、２ａ−１（１５.０ｇ、６８％）融点２９〜３１℃を得た。
【００９５】
２−メチル−３−ニトロ−ピリジン、２ａ−１（スキーム１、工程ａ）
２−クロロ−３−ニトロ−ピリジン（１ａ−１、７.９ｇ、４９.８ミリモル）、メチルボロン酸（１.１０当量、５４.８ミリモル、３.３０ｇ）、Ｋ2ＣＯ3（３.０当量、１５０ミリモル、２０.７ｇ）、及びＰｄ（ＰＰｈ3）4（１.２ｇ、１.２ミリモル）の混合物をジオキサン（２５０ｍＬ）中で１１０℃に１６時間にわたって加熱した。この反応物を室温まで放冷し、暗色オイルまで濃縮し、ＳｉＯ2上のフラッシュクロマトグラフィにかけ（ヘプタン／Ｅｔ2Ｏ＝３：１、オイルを限られた量のＣＨ2Ｃｌ2で希釈し、カラムに適用）、化合物２ａ−１を得た（Niu, C.; Li, J.; Doyle, T. W.; Chen, S-H. Tetrahedron, 1998, 6311-6318）。
【００９６】
２−メチル−３−ニトロピリジン、２ａ−１（スキーム１、工程ａ）
撹拌機、温度プローブ、及びＮ2用のガスアダプターを装着した還流コンデンサーを備え、１６℃に冷やした１２Ｌの三つ口フラスコに、ＮＭＰ（２.０Ｌ）を添加した。ナトリウムｔ−ブトキシド（０.６７５ｋｇ、６.８１モル、２.２当量、９７％純度に修正）を１回で添加し、直ちに、２９℃までの迅速な発熱が観察された。この混合物を３０分間にわたって撹拌し、ＮａＯｔ−Ｂｕを部分的に溶解させた後、連続的に冷却しながら、２０℃〜３５℃において７０分間かけてマロン酸ジエチル（０.９４３Ｌ、６.１９モル、２.０当量）を添加し、するとすぐに均一な溶液が形成した。２０分間にわたって撹拌し、２−クロロ−３−ニトロピリジン（１ａ−１、０.４９１ｋｇ、３.０９モル、１.０当量）とＮＭＰ（１.０Ｌ）の溶液を２９℃〜４４℃で、反応混合物に７０分間かけて添加した。この反応混合物を５０℃に加熱した。反応の進行をＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔシリーズ１１００；Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｙｍｍｅｔｒｙ  Ｃ８（５μ）カラム（３.９×１５０ｍｍ）、流速１.０ｍＬ／分、Ｉｓｏｃｒａｔｉｃ：ＣＨ3ＣＮ／０.１％ａｑ．ＴＦＡ、５０／５０；λ＝２２０ｍｍ、ＲT：マロン酸ジエチル＝２.６分、２−クロロ−３−ニトロピリジン＝２.７分、２−（３−ニトロ−ピリジン−２−イル）−マロン酸ジエチルエステル＝３.９分）によってモニターした。典型的に、９９％を超える転換率が１〜２時間以内に生じた。加熱を停止し、５０℃〜５９℃で４５分間かけて６ＭのＨ2ＳＯ4（２.１７Ｌ）を添加した。この添加の間に濃い固体沈殿物が生成した。混合物を１００℃に加熱した。ガスの発生が起きた。先に記載したようにして、反応の進行をＨＰＬＣによりモニターした（ＲT：２−メチル−３−ニトロピリジン２ａ−１＝２.０分、２−（３−ニトロ−ピリジン−２−イル）−マロン酸ジエチルエステル＝３.９分）。典型的に、９９％を超える転換率が１２時間以内に観察された。この混合物を４０℃まで冷やし、氷水の中に注ぎ入れた（２０ｋｇ、ｐＨ１.５）。２５％ＮａＯＨ水溶液（２.６５Ｌ）を−１１℃〜−６℃にて２０分間かけて添加し、ｐＨ１１にした。トルエン（４.０Ｌ）を添加し、この混合物を１０分間にわたって撹拌した。この混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）を通して濾過し、無機固形物を除去し、フィルタケーキをトルエン（６.０Ｌ）で洗浄した。相を分離させ、水相をトルエンで２回抽出した（６.０Ｌと４.０Ｌ）。合一したトルエン相をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）を通して濾過し、フィルタケーキをトルエン（１.０Ｌ）で洗浄した。トルエン濾液を合一し、水で洗浄した（２×３.０Ｌ）。トルエン相を乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過・濃縮し、オイルとして２−メチル−３−ニトロピリジン２ａ−１を得た（０.３４ｋｇ、収率８０％、残留のＮＭＰとトルエンについて修正）。ＨＰＬＣ分析は、この物質が純度９６％であることを示した。1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ２.８７（ｓ，３Ｈ），７.３５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.８，８.１Ｈｚ），８.２７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.４，８.１Ｈｚ），δ８.７２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.４，４.８Ｈｚ）
【００９７】
２−ヒドロキシ−３−（３−ニトロ−ピリジン−２−イル）−アクリル酸エチルエステル、３ａ−１（スキーム１、工程ｂ）
無水エタノール５００ｍＬを入れた三つ口フラスコに、Ｎ2下で、ナトリウム２.２ｇ（０.０９５６ｇ原子）を添加した。全てのナトリウムが反応した後、シュウ酸ジエチル（９８ｍＬ）を滴加し、次いで化合物２ａ−１（１当量）を添加した。添加の後、色が淡黄色から茶色に変化した。得られた溶液を室温に２日間にわたって静置した。オレンジ色の混合物を５ＮのＨＣｌで処理し（ｐＨ＝１）、濾過によって沈殿物を収集し、ＥｔＯＨ１００ｍＬとジイソプロピルエーテル２００ｍＬを用いてフィルタケーキを洗浄し、２−ヒドロキシ−３−（３−ニトロ−ピリジン−２−イル）−アクリル酸エチルエステル（Ｒ4＝Ｈ、２０ｇ、８６％）もしくはその互変異性ケトエステルとして、又はケト−エノールの互変異性体の混合物として、３ａ−１を得た。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ８.８３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.１，５.０Ｈｚ），８.６５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，８.４Ｈｚ），７.５６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５.０，８.４Ｈｚ），７.１１（ｓ，１Ｈ），３.４７（ｂｓ，１Ｈ），４.２８（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７.１Ｈｚ），１.３０（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７.０Ｈｚ）
【００９８】
２−ヒドロキシ−３−（３−ニトロ−ピリジン−２−イル）−アクリル酸エチルエステル、３ａ−１（スキーム１、工程ｂ）
撹拌機、温度プローブ、及びＮ2用のガス入口アダプターを装着した添加漏斗を備えた２２Ｌの三つ口フラスコに、テトラヒドロフラン（２.７Ｌ）を添加し、約２℃に冷やした。ナトリウムエトキシド（０.４０９ｋｇ、６.０２モル、２.０当量）を１回で添加した。２.７℃への僅かな発熱が観察された。この混合物を２０分間にわたって撹拌し、シュウ酸ジエチル（１.２２Ｌ、９.０３モル、３.０当量）を−０.３〜４℃で５０分間かけて添加した後（僅かな発熱）、この混合物を１０分間にわたって撹拌した。２−メチル−３−ニトロピリジン（２ａ−１、０.４１５ｋｇ、３.０１モル、１.０当量）とＴＨＦ（０.６２５Ｌ）の溶液を４〜９℃で２２分間かけて冷却せずに添加した。この混合物を室温まで１時間かけて暖めた。反応の進行をＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔシリーズ１１００、以下の条件を使用：Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｙｍｍｅｔｒｙ  Ｃ８（５μ）カラム（３.９×１５０ｍｍ）、流速１.０ｍＬ／分；ＣＨ3ＣＮ／０.１％ａｑ．ＴＦＡ、５５／４５；λ＝２１０ｍｍ、ＲT：２−メチル−３−ニトロピリジン２ａ−１＝１.８分、３ａ−１＝２.７分）によってモニターした。典型的に、９９％を超える生成物への転換率が２〜３時間以内に観察された。反応の間、濃赤色の沈殿物が生成した。この反応混合物を約１℃に冷やし、１℃〜９℃で飽和ＮＨ4Ｃｌ溶液（２.０Ｌ）を添加した。水を添加し（５.９Ｌ）（ｐＨ７.４）、次いでＩＰＡ（３.５Ｌ）を添加した。混合物を１時間にわたって撹拌し、濾過によって赤色の固形物を収集した。フィルタケーキをＩＰＡ／Ｈ2Ｏ（１：４、８.０Ｌ）、Ｈ2Ｏ（１５Ｌ）で洗浄し、風乾した。フィルタケーキを乾燥し（４０℃／０.１インチＨｇ）、３ａ−１を得た（０.６３５ｋｇ、８９％）。1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１.４０（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ），４.３８（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ），７.３６（ｍ，２Ｈ），８.４２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，８.４Ｈｚ），８.６６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，４.８Ｈｚ），１４.５２（２，１Ｈ，ＯＨ）
【００９９】
１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸エチルエステル、４ａ−１（スキーム１、工程ｃ）
３ａ−１（２０ｇ）を、ＥｔＯＨ（３５０ｍＬ）中の炭素上の１０％パラジウム（５.５ｇ）の上で、室温にて３時間にわたり１２００ｐｓｉで水素化した。この反応混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）を通して濾過し、濾液を濃縮し、収率３９％でエステル４ａ−１（Ｒ4＝Ｈ）を得た。
あるいは、３ａ−１をＥｔＯＨ中のＳｎＣｌ2（５.０当量）、ＴｉＣｌ4（２.５当量）を用い、還流下で４時間にわたって還元し、周囲温度まで冷やし、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィによって精製し、収率８１％でエステル４ａ−１（Ｒ4＝Ｈ）を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３.４８（ｂｓ，１Ｈ），８.８０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝０.７，５.４Ｈｚ），８.５６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝０.７，８.４Ｈｚ），７.８０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５.５，８.４Ｈｚ），７.３７（ｓ，１Ｈ），４.４０（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７.０Ｈｚ），１.３８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７.０Ｈｚ）
【０１００】
１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸エチルエステル、４ａ−１（スキーム１、工程ｃ）
２Ｌの厚肉のＰａｒｒリアクターに、化合物３ａ−１（５６.８ｇ、０.２４モル）、エタノール（アルコール度数２００、８５０ｍＬ、１５部）、及び１０％Ｐｄ／Ｃ（５.７ｇ、１０質量％）を加えた。反応容器をＰａｒｒ水素化装置に接続し、水素を勢いよく流し、オレンジ色のスラリーを４５ｐｓｉに加圧した。室温で１時間にわたって振盪し、その間に温度が５７℃まで上昇した。反応混合物の温度が３５℃で安定したとき、反応物をゆっくりと加熱し、３時間にわたって４０℃にした。ＴＬＣ（シリカゲル、ＣＨ2Ｃｌ2中の１％ＭｅＯＨ）による測定で反応が完了したとき、反応混合物を室温まで冷やし、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）を通してスラリーを濾過し、フィルタケーキをＥｔＯＨ（４×２００ｍＬ）で洗浄した。黄色の濾液を濃縮して固形物（４１.６ｇ）が生成し、酢酸エチル（３０２ｍＬ）を加え、スチームバス上で加熱した。この混合物を室温まで冷やし、ヘプタン（６００ｍＬ）を添加し、生成物を沈殿させた。この混合物を氷浴中で１時間にわたって撹拌し、濾過し、ヘプタン（１００ｍＬ）を用いてフィルタケーキを洗浄した。フィルタケーキを２４時間にわたって乾燥し（５０℃／０.１インチＨｇ）、明るい灰色の固体として４ａ−１を得た（３６.６ｇ、収率８１％）。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）１.３６（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７.０Ｈｚ），４.３６（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７.０Ｈｚ），７.１９（ｓ，１Ｈ），７.２５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.５，８.１Ｈｚ），７.８２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８.１Ｈｚ），８.４４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.５Ｈｚ），δ１２.１１（ｓ，１Ｈ）
【０１０１】
１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、６ａ−１（スキーム１、工程ｅ）
ＭｅＯＨ中の５Ｎのアンモニア溶液にエステル４ａ−１を溶かし、５５℃に１０時間にわたって加熱し、後処理の後、収率４４％で融点３３２℃（dec.）のアミド６ａ−１（Ｒ2＝ＮＨ2、Ｒ4＝Ｈ）を得た。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１.７２（ｂｓ，１Ｈ），８.３６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，４.５Ｈｚ），８.１０（ｂｓ，１Ｈ），７.７６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２.２，８.２Ｈｚ），７.５２（ｂｓ，１Ｈ），７.２４（ｓ，１Ｈ），７.１７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.５，８.２Ｈｚ）
【０１０２】
１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、６ａ−１（スキーム１、工程ｅ）
ＭｅＯＨ中の７Ｎのアンモニア溶液にエステル４ａ−１を溶かし、ＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）によってモニターしながら、室温で数日間にわたって撹拌した。完了したとき、反応物を最少限の体積まで濃縮し、過剰のＨ2Ｏで希釈し、濾過によって沈殿物を収集し、乾燥し、ほぼ定量収率でアミド６ａ−１（Ｒ2＝ＮＨ2、Ｒ4＝Ｈ）を得た。
【０１０３】
１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、６ａ−１（スキーム１、工程ｅ）
濃ＮＨ4ＯＨの中にエステル４ａ−１を懸濁させ、ＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）によってモニターしながら、室温で数日間にわたって撹拌した。完了したとき、反応物を最少限の体積まで濃縮し、過剰のＨ2Ｏで希釈し、濾過によって沈殿物を収集し、乾燥し、ほぼ定量収率でアミド６ａ−１（Ｒ2＝ＮＨ2、Ｒ4＝Ｈ）を得た。
【０１０４】
１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、６ａ−１（スキーム１、工程ｅ）
ＭｅＯＨ（１.５Ｌ、１０.５モル、２０当量）中の７ＮのＮＨ3の溶液を、室温で３Ｌ圧力反応器に加え、次いで、固体としてアザインドールエステル４ａ−１（１００ｇ、０.５３モル）を添加した。このスラリーを５０℃までゆっくりと加熱し、透明な溶液を得た。最初の圧力３５ｐｓｉから１６ｐｓｉへの４時間をかけた圧力低下が観察された。反応物を５０℃に４９時間にわたって保持した。１０ｐｓｉの最終的圧力が観察された。反応の進行をＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔシリーズ１１００、以下の条件を使用：Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｙｍｍｅｔｒｙ  Ｃ８（５μ）カラム（３.９×１５０ｍｍ）、流速１.０ｍＬ／分、傾斜溶出条件：時間（分）、水：アセトニトリル−メタノールの比（１：１溶液としてアセトニトリル−メタノールを使用）０分、７０：３０；１０分、２０：８０；１５分、７０：３０；２０分、７０：３０；λ1＝２１０ｎｍ、λ2＝２２０ｎｍ、流速１.０ｍＬ／分、ＲT：エチルエステル４ａ−１＝５.６分、メチルエステル５ａ−１＝４.２分、アミド６ａ−１＝２.２分）によってモニターした。この反応で対応するメチルエステル５ａ−１が生成することが観察され、５ａ−１は反応における中間体としての役目もまたした。反応物を４℃まで冷やし、得られた沈殿物を真空濾過によって分離した。フィルタケーキをメチルｔ−ブチルエステル（２×１００ｍＬ）で洗浄し、２０時間にわたって乾燥し（４０℃／０.１インチＨｇ）、灰色の固体として６ａ−１を得た（７８.６ｇ、９３％）。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ７.１７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.５，８.４Ｈｚ），７.５３，８.１１（２ｓ，２Ｈ，ＮＨ2），７.７６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８.１Ｈｚ），８.３７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５Ｈｚ），１１.７２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）。
【０１０５】
１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド、６ａ−２
メチルアミン（Ｈ2Ｏ中の４０質量％溶液）中で、４−アザインドールエステル４ａ−１（Ｒ＝Ｅｔ、Ｒ4＝Ｈ）そのものを、ＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）によってモニターしながら、室温で１６時間にわたって撹拌した。完了したとき、反応物を過剰のＨ2Ｏで希釈し、濾過によって沈殿物を収集し、乾燥し、象牙色の固体として６ａ−２（Ｒ2＝ＮＨＣＨ3、Ｒ4＝Ｈ）を生成した（一般的合成手順ＶI参照）。ＭＳ測定値１７６.０７（Ｍ＋１）。
【０１０６】
ジアリールジスルフィドとジ複素環ジスルフィド出発物質の一般的製造（スキーム２）
非置換又は適切に置換されたフェニルチオール（１７.２ミリモル、１.０当量）とＭｅＯＨ（３０ｍＬ）の溶液に、過ホウ酸ナトリウム（２２ミリモル）と水（２０ｍＬ）の溶液を撹拌しながら添加し、次いで、反応物を室温に終夜にわたって静置した。固形物を濾過によって収集し、メタノールで洗浄し、所望のジアリールジスルフィドを得た。ジ複素環ジスルフィドなどの他のジスルフィド（例、ビス（２−チエニル）ジスルフィド）は、この所望のジアリールジスルフィドの製造について記載したのと同様な方法で製造することができる。
【０１０７】
一般的合成手順Ｉ（エステル交換、スキーム１、工程ｄ）
ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中のエチル４−アザインドール−２−カルボキシレート４ａ（４２.３ミリモル）にＫ2ＣＯ3（１.２０当量、５０.７ミリモル）を添加し、このサスペンジョンを５５℃に加熱しながら１時間にわたって撹拌した。反応はＴＬＣ（Ｅｔ2Ｏ／ヘプタン）によってモニターした。完了したとき、反応物を真空下で濃縮し、Ｈ2Ｏで希釈し、１５分間にわたって撹拌した。濾過によって固形物を収集し、６５℃の真空オーブン内で３時間にわたって乾燥し、約９０％〜約１００％の所望のメチル４−アザインドール−２−カルボキシレート５ａを得た。
【０１０８】
一般的合成手順II（ＮＨ4ＯＨを用いるアミド化、スキーム１、工程ｅ）
４−アザインドールカルボキシレートエステル４ａ又は５ａ（４０.０ミリモル）を、濃縮されたＮＨ4ＯＨ（１００ｍＬ）とＬｉＯＨ（１.０当量）の中のサスペンジョンとして、室温で１６時間にわたって撹拌した。象牙色の固形物を濾過によって収集し、Ｈ2Ｏで洗浄し、風乾し、第一級アミド６ａ（６０〜７５％）を得た。
【０１０９】
一般的合成手順III（ＮＨ3／ＭｅＯＨを用いるアミド化、スキーム１、工程ｅ）
７ＮのＮＨ3／ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中でエチル４−アザ−２−インドールカルボキシレート４ａ（４.６７ミリモル）を撹拌し、ＬｉＣｌ（１.０当量、４.６７ミリモル）を添加した。この反応物を、ＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）によってモニターしながら、室温で５日間にわたって撹拌し、この間に沈殿物が生成した。この混合物を最少限の体積まで濃縮し、Ｈ2Ｏで希釈し、濾過によって固形物を収集した。Ｈ2Ｏでフィルタケーキを洗浄し、６０℃の真空下で乾燥し、第一級アミド６ａ（＞９０％）を得た。
【０１１０】
一般的合成手順ＩＶａ（塩基としてＮａＨを用いる３−チオアリール化、スキーム１、工程ｆ）
ＤＭＦ（７５ｍＬ）中のＮａＨ（６０％オイルディスパージョン、１.２当量、９.８ミリモル）の撹拌されたサスペンジョンに、室温のＮ2下で、ＤＭＦ（５ｍＬ）中の溶液と
して、４−アザ−インドール−２−カルボキシアミド６ａ（８.１８ミリモル）を添加した。５分後、ジアリールジスルフィド（１.０当量、８.１８ミリモル）を１回で添加し、次いで、この反応物を撹拌しながら９５℃に１６時間にわたって加熱した。この反応混合物のアリコートを、ＥｔＯＡｃ／Ｈ2Ｏの間で分割し、ＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）によってモニターして、反応を追跡した。完了すると、反応混合物を真空中で濃縮し、Ｈ2Ｏで希釈し、３０分間にわたって撹拌し、濾過し、フィルタケーキを風乾した。粗固形物を９：１＝ＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨを用いて溶出させるＳｉＯ2上のクロマトグラフィにかけ、３−アリールチオエーテルＩａ（Ｒ1＝Ｈ）を生成した。
【０１１１】
一般的合成手順ＩＶｂ（Ｃｓ2ＣＯ3を用いる３−チオアリール化、スキーム１、工程ｆ）
乾燥ＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶かした４−アザ−インドール−２−カルボキシアミド６ａ（０.４２ミリモル）にＣｓ2ＣＯ3（１００ｍｇ、０.３１ミリモル）を添加し、次いで、ジアリールジスルフィド（１.１当量、０.４６ミリモル）を添加した。この反応物をＮ2下で９５℃に１６時間にわたって加熱した（完了はＴＬＣ／ＬＣＭＳによってモニター）。反応物を室温まで放冷した後、撹拌しながら、氷冷したＨ2Ｏの中に注ぎ入れた。濾過によって沈殿物を収集し、４０℃の真空オーブン内で乾燥し、黄褐色の結晶性固体として粗生成物を得た。ＳｉＯ2上のクロマトグラフィによる精製により、３−アリールチオエーテルＩａ（Ｒ1＝Ｈ）を得た。
【０１１２】
一般的合成手順Ｖ（ピロール環Ｎ−メチル化、スキーム１、工程ｇ）
３−置換−４−アザインドール−２−カルボン酸アミドＩａ（Ｒ1＝Ｈ、０.２４ミリモル）と１，３−ジメチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２（１Ｈ）−ピリミジノン（５.０ｍＬ）に、撹拌しながら、ジメチルスルフェート（１.５当量、０.３６ミリモル）とＣｓ2ＣＯ3（２.０当量、０.４８ミリモル）を添加した。ＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）によってモニターしながら、反応物を室温で１６時間にわたって撹拌した。完了したとき、反応混合物を最少限の体積まで濃縮し、Ｈ2Ｏで希釈し、濾過によって沈殿物を収集した。フィルタケーキを追加のＨ2Ｏで洗浄し、４０℃の真空下で乾燥し、１−メチル−３−置換−４−アザインドール−２−カルボン酸アミドＩａ（Ｒ1＝ＣＨ3、６５％）を得た。
【０１１３】
式（Ｉ）の化合物のピロール環窒素をＮ−アルキル化するための、当業者によく知られる他の方法もまた採用することができる。例えば、ジメチルホルムアミド又はＮＭＰのような適切な極性溶媒中で、Ｒ1がＨである式（Ｉ）の化合物を、例えば、水素化ナトリウム又はカリウムｔ−ブトキシドのような適切な塩基で処理した後、例えば、ヨウ化プロピルのようなアルキルハライドを添加することにより、Ｒ1がプロピルである式（Ｉ）の化合物を生成した。
【０１１４】
一般的合成手順ＶI：インドール−２−メチルアミドと他の第二級アミドの一般的製造（スキーム１、工程ｅ）
４−アザインドールエステル４又は５をＣ1-6アルキルアミン（例、Ｈ2Ｏ中のメチルアミンの４０質量％溶液又は無希釈）とともに、室温で１６時間にわたって撹拌し、ＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）によってモニターする。完了したとき、反応物を過剰のＨ2Ｏで希釈し、濾過によって固体沈殿物を収集し、乾燥し、ほぼ定量収率で第二級アミド６（Ｒ2＝ＮＨ−Ｃ1-6アルキル）を得た。
【０１１５】
３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−１
ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド（６ａ−１、Ｒ4＝Ｈ、１.０当量）に、一般的合成手順ＩＶｂに記載したようにしてジフェニルジスルフィド（１.０当量）を添加し、黄褐色の結晶性固体として（８１％）、融点２５１℃、ｔｌｃＲf＝０.４９のＩａ−１を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.４８（ｂｓ，１Ｈ），８.４５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，４.４Ｈｚ），８.１１（ｂｓ，１Ｈ），７.８９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，４.０Ｈｚ、ｂｓと重複，１Ｈ），７.３１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.４，４.５Ｈｚ），７.２８（ｄｄ，Ｊ＝１.５，４.５Ｈｚ，１Ｈ）７.２１（ｍ，２Ｈ），７.１３〜７.０５（ｍ，３Ｈ）；ｍ／ｚ＝２７０.０６（Ｍ＋Ｈ）  分析：Ｃ14Ｈ11Ｎ3ＳＯとしての計算値：Ｃ６２.４４、Ｈ４.１２、Ｎ１５.６  実測値：Ｃ６２.３１、Ｈ４.０８、Ｎ１５.３９。
【０１１６】
３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−１、過剰のＣｓ2ＣＯ3を使用
機械撹拌機、温度プローブ、及び還流コンデンサーを装着した３Ｌの三つ口フラスコに、窒素下で、ＮＭＰ（１.２０Ｌ）を添加した。ジフェニルジスルフィド（１７７.８ｇ、１.５当量）、Ｃｓ2ＣＯ3（３５１.９ｇ、２.０当量）、及びアミド６ａ−１（８７.５ｇ、０.５４モル）を１回で添加した。この反応混合物を１２０℃で２１時間にわたって加熱した。反応の進行をＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔシリーズ１１００、以下の条件を使用：Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｙｍｍｅｔｒｙ  Ｃ８（５μ）カラム（３.９×１５０ｍｍ）、流速１.０ｍＬ／分、傾斜溶出条件：時間（分）、水：アセトニトリル−メタノールの比（１：１溶液としてアセトニトリル−メタノールを使用）０分、７０：３０；１０分、３０：７０；１５分、３０：７０；２０分、７０：３０；２５分、７０：３０；λ1＝２１０ｎｍ、λ2＝３００ｎｍ、流速１.０ｍＬ／分、ＲT：アミド６ａ−１＝２.１分、生成物Ｉａ−１＝５.７分、ＰｈＳＳＰｈ＝１４.０分、ＮＭＰ＝１.９分）によってモニターした。反応が完了していない場合、追加のＣｓ2ＣＯ3（８７.９７ｇ、０.５当量）を添加し、反応物を１２０℃にさらに４時間維持した。この反応混合物を室温まで冷やし、氷水の中に注ぎ入れ、１時間にわたって撹拌した。濾過によって褐色の固体を収集し、フィルタケーキを水で２回洗浄し、６時間にわたって風乾した。この固形物を２０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタンを用いて室温で２回にわたってスラリーにし、ＰｈＳＳＰｈを除去した。活性炭を含むＴＨＦ中で１時間にわたって還流し、粗生成物を脱色し、濾過、後処理をして、明るい茶色の固体としてＩａ−１を得た。Ｉａ−１をエタノール（１２部）中でスラリーにし、１時間にわたって還流し、氷浴中で撹拌しながら冷却した。濾過によって固形物を回収し、冷ＥｔＯＨで洗浄し、乾燥し（４０℃／０.１インチＨｇ）、Ｉａ−１を得た。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ７.０５〜７.３２（ｍ，６Ｈ），７.９１（ｍ，２Ｈ），８.１２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ2），８.４５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.５，０.９Ｈｚ），１２.５０（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）  分析：Ｃ12Ｈ11Ｎ3ＯＳとしての計算値：６２.４４％Ｃ，４.１２％Ｈ，１５.６０％Ｎ、実測値：６２.３１％Ｃ，４.０８％Ｈ，１５.３９％Ｎ。
【０１１７】
３−（３−フルオロフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−２
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（３−フルオロフェニル）ジスルフィド（１.９０ｇ、１.０当量）を用いて、ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ａ−１（１.２０ｇ、７４.４ミリモル）を処理し、象牙色の固体として、融点２３５〜２３７℃、ｔｌｃＲf＝０.４９のＩａ−２（１.７３ｇ、８０.８％）を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.５２（ｂｓ，１Ｈ），８.４５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.２，４.５Ｈｚ），８.１０（ｂｓ，１Ｈ），７.９０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.２，８.２Ｈｚ），７.８３（ｂｓ，１Ｈ），７.２７（重複ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.５，８.２Ｈｚ，及びｄｄ，Ｊ＝７.８，１４.０Ｈｚ，１Ｈ），６.９７〜６.８２（ｍ，３Ｈ）；ＭＳ測定値２８８（Ｍ＋１）；ＬＣ／ＭＳ：ａ＝１００％  分析：Ｃ14Ｈ10ＦＮ3ＳＯとしての計算値：Ｃ５８.５３，Ｈ３.５１，Ｎ１４.６２、実測値：Ｃ５７.９５，Ｈ３.５４，Ｎ１４.２５。
【０１１８】
３−（３−クロロフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−３
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（３−クロロフェニル）ジスルフィド（２.１３ｇ、１.０当量）を用いて、ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ａ−１（１.２０ｇ、７４.４ミリモル）を処理し、象牙色の固体として、融点２４６.５〜２４８℃、ｔｌｃＲf＝０.４９のＩａ−３（１.９５ｇ、８６.３％）を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.５４（ｂｓ，１Ｈ），８.４５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.２，４.５Ｈｚ），８.１１（ｂｓ，１Ｈ），７.９０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.３，８.３Ｈｚ），７.８４（ｂｓ，１Ｈ）と重複，７.３１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.５，８.２Ｈｚ）７.２２（ｍ，２Ｈ），７.０６〜６.９９（ｍ，２Ｈ）  分析：Ｃ14Ｈ10ＣｌＮ3ＳＯとしての計算値：Ｃ５５.３６，Ｈ３.３２，Ｎ１３.８３、実測値：Ｃ５４.９４，Ｈ３.２６，Ｎ１３.６２。
【０１１９】
３−（３−ブロモフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−４
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（３−ブロモフェニル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ａ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体としてＩａ−４を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.５５（ｂｓ，１Ｈ），８.４６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.２，４.５Ｈｚ），８.１０（ｂｓ，１Ｈ），７.９１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.２，８.２Ｈｚ），７.８５（ｂｓ，１Ｈ）と重複，７.３３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.７，８.５Ｈｚ），７.２０（ｍ，２Ｈ），７.０５〜７.００（ｍ，２Ｈ）  ＭＳ測定値３４８.１（Ｍ＋１）
【０１２０】
３−（２−クロロフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−５
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（２−クロロフェニル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ａ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体としてＩａ−５を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.６１（ｂｓ，１Ｈ），８.４６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.０，４.５Ｈｚ），８.０９（ｂｓ，１Ｈ），７.９５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８.０Ｈｚ），７.７６（ｂｓ，１Ｈ），７.４９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，７.５Ｈｚ），７.３４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.５，８.０Ｈｚ），７.１４（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，７.５Ｈｚ），７.０８（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，７.５Ｈｚ），６.４９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，７.５Ｈｚ）  ＭＳ測定値３０４.７（Ｍ＋１）
【０１２１】
３−（４−クロロフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−６
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（４−クロロフェニル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ａ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体として、融点２６６℃、ＭＳ測定値３０４.７（Ｍ＋１）のＩａ−６を生成した。
【０１２２】
３−（２，４−ジクロロフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−７
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（２，４−ジクロロフェニル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ａ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体として、融点２６６℃、ＭＳ測定値３３９.２（Ｍ＋１）のＩａ−７を生成した。
【０１２３】
３−（２−フルオロフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−８
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（２−フルオロフェニル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ａ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体としてＩａ−８を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.５７（ｂｓ，１Ｈ），８.４５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.２，４.２Ｈｚ），８.１５（ｂｓ，１Ｈ），７.９０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.２，８.１Ｈｚ）７.８４（ｂｓ，１Ｈ）と重複，７.３１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.５，８.２Ｈｚ），７.２０（ｍ，２Ｈ），６.９８（ｍ，１Ｈ），６.６９（ｍ，１Ｈ）  ＭＳ測定値２８８.２（Ｍ＋１）
【０１２４】
３−（２，３−ジクロロフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−９
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（２，３−ジクロロフェニル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ａ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体としてＩａ−９を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.６２（ｂｓ，１Ｈ），８.４４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.２，４.５Ｈｚ），８.１０（ｂｓ，１Ｈ），７.９３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.２，８.３Ｈｚ），７.７５（ｂｓ，１Ｈ），７.３５（ｍ，２Ｈ），７.０７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８.１Ｈｚ），６.４０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.４，８.１Ｈｚ）  ＭＳ測定値３３８.１（Ｍ＋１）
【０１２５】
３−（２−トリフルオロメチルフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−１０
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（２−トリフルオロメチルフェニル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ａ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体としてＩａ−１０を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.６５（ｂｓ，１Ｈ），８.４７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，４.５Ｈｚ），８.１５（ｂｓ，１Ｈ），７.９２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.２，８.２Ｈｚ），７.７５（ｂｓ，重複ｄｄ，２Ｈ），７.３４（ｍ，３Ｈ），６.７５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７.８Ｈｚ）；ＭＳ測定値３３８.２（Ｍ＋１）
【０１２６】
３−（３−トリフルオロメチル−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−１１
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（３−トリフルオロメチルフェニル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ａ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体としてＩａ−１１を生成した。ＭＳ測定値３３８.０６（Ｍ＋１）
【０１２７】
３−（２−アミノフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−１２
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（２−アミノフェニル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ａ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体としてＩａ−１２を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.２９（ｂｓ，１Ｈ），８.４９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.３，４.５Ｈｚ），８.１８と８.１５（重複ｂｓ，２Ｈ），７.８３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.４，８.２Ｈｚ），７.２８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.５，８.３Ｈｚ），７.１５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.４，７.８Ｈｚ），６.９３（ｍ，１Ｈ），６.６２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６.９Ｈｚ），６.３９（ｍ，１Ｈ），５.７４（重複ｂｓ，２Ｈ）；ＭＳ測定値２８８.２（Ｍ＋１）
【０１２８】
３−（２，５−ジクロロ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−１３
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（２，５−ジクロロフェニル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ａ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体としてＩａ−１３を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.６８（ｂｓ，１Ｈ），８.４６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.３，４.５Ｈｚ），８.１０（ｂｓ，１Ｈ），７.９４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.２，８.２Ｈｚ），７.７７（ｂｓ，１Ｈ），７.５２（見かけ上ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８.５Ｈｚ），７.３５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.５，８.４Ｈｚ），７.２０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２.５，８.５Ｈｚ），６.３７（見かけ上ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２.５Ｈｚ）；ＭＳ測定値３３８.１（Ｍ＋１）
【０１２９】
３−（２−メトキシ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−１４
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（２−メトキシフェニル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ａ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体としてＩａ−１４を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.４８（ｂｓ，１Ｈ），８.４４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，４.５Ｈｚ），８.１０（ｂｓ，１Ｈ），７.９０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.２，８.０Ｈｚ），７.６０（ｂｓ，１Ｈ），７.３０（ｍ，３Ｈ），６.７１（見かけ上ｔ，１Ｈ），６.５０（見かけ上ｄ，１Ｈ），３.９１（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ測定値３００.３（Ｍ＋１）
【０１３０】
３−（３−メトキシ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−１５
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（３−メトキシフェニル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ａ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体としてＩａ−１５を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.５１（ｂｓ，１Ｈ），８.４６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，４.５Ｈｚ），８.１０（ｂｓ，１Ｈ），７.８９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，８.３Ｈｚ，ｂｓと重複，１Ｈ），７.３２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.５，８.２Ｈｚ），７.１３（見かけ上ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８.０Ｈｚ）６.６２（ｍ，３Ｈ），３.６４（ｓ，３Ｈ）；ＭＳＮ実測値３００.３（Ｍ＋１）
【０１３１】
３−（３−アミノ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−１６
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（３−アミノフェニル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ａ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体としてＩａ−１６を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.４０（ｂｓ，１Ｈ），８.４４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，４.５Ｈｚ），８.１０（ｂｓ，１Ｈ），７.８６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，８.３Ｈｚ，ｂｓと重複，１Ｈ），７.２８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.５，８.２Ｈｚ），７.１３（見かけ上ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７.８Ｈｚ）６.２８（ｍ，３Ｈ），５.０８（ｂｓ，２Ｈ）；ＭＳ測定値２８８.０８（Ｍ＋１）
【０１３２】
３−（４−ニトロ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−１７
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（４−ニトロフェニル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ａ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体としてＩａ−１７を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.６３（ｂｓ，１Ｈ），８.４３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，４.５Ｈｚ），８.０５（ｍ，３Ｈ），７.９１（ｍ，１Ｈ），７.５０（ｂｓ，１Ｈ），７.３２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.５，８.１Ｈｚ），７.１８（見かけ上ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９.０Ｈｚ）；ＭＳ測定値３１５.０５（Ｍ＋１）
【０１３３】
３−（３−ニトロ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−１８
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（３−ニトロフェニル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ａ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体としてＩａ−１８を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.５９（ｂｓ，１Ｈ），８.４５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，４.６Ｈｚ），８.１１（ｂｓ，１Ｈ），７.９６〜７.８１（ｍ，４Ｈ），７.５０（ｍ，２Ｈ），７.３３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.５，８.４Ｈｚ）；実測値３１５.１（Ｍ＋１）
【０１３４】
３−ｏ−トリスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−１９
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（ｏ−トリル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ａ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体としてＩａ−１９を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.５（ｂｓ，１Ｈ），８.４１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，４.５Ｈｚ），８.０５（ｂｓ，１Ｈ），７.９０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，８.３Ｈｚ），７.８７（ｂｓ，１Ｈ）と重複，７.３１（ｍ，１Ｈ），７.２９（ｍ，１Ｈ），７.００（ｍ，２Ｈ），６.４（ｍ，１Ｈ），３.３（ｓ，３Ｈ）  ＭＳ測定値２８４.３（Ｍ＋１）
【０１３５】
３−ｐ−トリスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−２０
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（ｐ−トリル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ａ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体としてＩａ−２０を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.４２（ｂｓ，１Ｈ），８.４４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，４.５Ｈｚ），８.１０（ｂｓ，１Ｈ），７.９１（ｂｓ，１Ｈ），７.８６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，７.９Ｈｚ）と重複，７.２８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３.７，８.３Ｈｚ），７.００（重複ｄｓ，４Ｈ，Ｊ＝１２.５Ｈｚ），３.３１（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ測定値２８４（Ｍ＋１）
【０１３６】
３−（３，５−ジメチル−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−２１
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（３，５−ジメチルフェニル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ａ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体としてＩａ−２１を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.４５（ｂｓ，１Ｈ），８.４５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.２，４.５Ｈｚ），８.１２（ｂｓ，１Ｈ），７.９０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.２，８.０Ｈｚ），（ｂｓ，１Ｈ）と重複，７.３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.５，８.２Ｈｚ），６.７６（ｓ，１Ｈ），６.７（ｓ，２Ｈ），２.０５（ｓ，６Ｈ）  ＭＳ測定値２９８.３（Ｍ＋１）
【０１３７】
３−ｍ−トリスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−２２
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（ｍ−トリル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ａ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体としてＩａ−２２を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０.２（ｂｓ，１Ｈ），８.６２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.０，４.４Ｈｚ），８.１９（ｂｓ，１Ｈ），７.８５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.３，８.４Ｈｚ），７.２８（重複ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.５，８.３Ｈｚ及び７.２４（ｓ，１Ｈ），７.１〜６.９（ｍ，４Ｈ），２.２２（ｓ，３Ｈ）  ＭＳ測定値２８４（Ｍ＋１）
【０１３８】
３−（２−エチル−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−２３
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（２−エチルフェニル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ａ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体としてＩａ−２３を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.５（ｂｓ，１Ｈ），８.４２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，４.４Ｈｚ），８.１（ｂｓ，１Ｈ），７.９１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，８.１Ｈｚ），７.８２（ｂｓ，１Ｈ），７.３０（ｍ，１Ｈ），７.２（ｍ，１Ｈ），７.０５（ｍ，１Ｈ），６.９５（ｍ，１Ｈ），６.５（ｍ，１Ｈ），２.９（ｑ，２Ｈ），１.３（ｔ，３Ｈ）  ＭＳ測定値２９８.３（Ｍ＋１）
【０１３９】
３−（３−トリフルオロメトキシ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−２４
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（３−トリフルオロメトキシフェニル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ａ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体としてＩａ−２４を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.５６（ｂｓ，１Ｈ），８.４５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，４.５Ｈｚ），８.１２（ｂｓ，１Ｈ），７.９２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，８.３Ｈｚ），７.８５（ｂｓ，１Ｈ），７.３３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.４，８.３Ｈｚ），７.３２（ｍ，１Ｈ）と重複，７.１（ｍ，１Ｈ），７.０３（ｍ，２Ｈ）と重複  ＭＳ測定値３５４.１（Ｍ＋１）
【０１４０】
３−（キノリン−８−イルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−２５
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（８−キノリル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ａ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体として、ＭＳ測定値３２１.１（Ｍ＋１）のＩａ−２５を生成した。
【０１４１】
３−（ピリジン−２−スルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−２６
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、２，２’−ジピリジルジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ａ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体としてＩａ−２６を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.５１（ｂｓ，１Ｈ），８.４２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.４，４.５Ｈｚ），８.３４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１，４Ｈｚ）８.０６（ｂｓ，１Ｈ），７.８９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.４，８.３Ｈｚ），７.８２（ｂｓ，１Ｈ）と重複，７.５３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.８，７.５Ｈｚ），７.３０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.３，８.２Ｈｚ），７.１０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.９，７.４Ｈｚ），６.７４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８.１Ｈｚ）  ＭＳ測定値２７１.１（Ｍ＋１）
【０１４２】
３−（ピリジン−４−スルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−２７
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、４，４’−ジピリジルジスルフィド（Aldrithiol 4）（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ａ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体としてＩａ−２７を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.５（ｂｓ，１Ｈ），８.４４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，４.５Ｈｚ），８.２７（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１.５，４.５Ｈｚ），８.０７（ｂｓ，１Ｈ），７.９３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.４，８.３Ｈｚ），７.７３（ｂｓ，１Ｈ），７.３３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.５，８.２Ｈｚ），６.９４（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１.５，４.５Ｈｚ）  ＭＳ測定値２７１.０７（Ｍ＋１）
【０１４３】
３−（チオフェン−２−イルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−２８
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、２，２’−ビス（チエニル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ａ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体としてＩａ−２８を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.３４（ｂｓ，１Ｈ），８.５０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.４Ｈｚ），８.２１（ｂｓ，１Ｈ），８.００（ｂｓ，１Ｈ），７.８３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８.３Ｈｚ），７.４２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５.３Ｈｚ），７.２６（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝４.５，８.２Ｈｚ），６.９２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３.６，５.２Ｈｚ）  ＭＳ測定値２７６.０１（Ｍ＋１）
【０１４４】
１−メチル−３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド、Ｉａ−２９
一般的合成手順Ｖに記載のようにして、ジメチルスルフェート（１.５当量）を用いて、ＤＭＦ中の３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドＩａ−３３（１.０当量）を処理し、象牙色の固体として、ＭＳ測定値２９８.０９（Ｍ＋１）のＩａ−２９を生成した。
【０１４５】
１−メチル−３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド、Ｉａ−２９
３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド（Ｉａ−３３、４７ｍｇ、０.１６６ミリモル）、Ｃｓ2ＣＯ3（６５ｍｇ、０.２ミリモル）、及びピリジン（１.５ｍｌ）の混合物に、室温でヨウ化メチル（２０ｍｇ、０.１６４ミリモル）を添加した。この反応物をシールした容器の中で、３時間にわたって６０℃に加熱した。追加のヨウ化メチル（２０ｍｇ）を添加し、反応の進行をクロマトグラフィによってモニターした。完了したとき、混合物を冷却し、濃縮して乾燥させ、ブラインから酢酸エチルに抽出した。有機相を分離し、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィによって残留物を２回精製し（ＳｉＯ2３グラム、ＤＣＭ中のＭｅＯＨ０〜４％で溶出、及びＳｉＯ2１グラム、ヘプタン：ＤＣＭ＝１：１で溶出）、白色の固体として表題の化合物を生成し（１０ｍｇ）、1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）とＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｅ＝２９７）は、表題の化合物の構造と一致した。
【０１４６】
３−（３−トリフルオロメトキシフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド、Ｉａ−３０
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド６ａ−２（１.０当量）を処理し、象牙色の固体として、ＭＳ測定値３６８.０３（Ｍ＋１）のＩａ−３０を生成した。
【０１４７】
３−（３−クロロフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド、Ｉａ−３１
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（３−クロロフェニル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド６ａ−２（１.０当量）を処理し、象牙色の固体として、ＭＳ測定値３１８.０３（Ｍ＋１）のＩａ−３１を生成した。
【０１４８】
３−（３−フルオロフェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド、Ｉａ−３２
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（３−フルオロフェニル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド６ａ−２（１.０当量）を処理し、象牙色の固体として、ＭＳ測定値３０５.０５（Ｍ＋１）のＩａ−３２を生成した。
【０１４９】
３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド、Ｉａ−３３
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（フェニル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド６ａ−２（１.０当量）を処理し、象牙色の固体として、Ｉａ−３３を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.４８（ｂｓ，１Ｈ），８.４５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，４.４Ｈｚ），８.１１（ｂｓ，１Ｈ），７.８９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.５，４.０Ｈｚ，ｂｓと重複，１Ｈ），７.３１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.４，４.５Ｈｚ），７.２８（ｄｄ，Ｊ＝１.５，４.５Ｈｚ，１Ｈ）７.２１（ｍ，２Ｈ），７.１３〜７.０５（ｍ，３Ｈ），２.９（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝４.２Ｈｚ）  ＭＳ測定値２８４.０６（Ｍ＋１）
【０１５０】
１−メチル−３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−３４
一般的合成手順Ｖに記載のようにして、ジメチルスルフェート（１.５当量）を用いて、ＤＭＦ中の３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミドＩａ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体として、ＭＳ測定値２８４.０６（Ｍ＋１）のＩａ−３４を生成した。
【０１５１】
１−メチル−３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−３４（スキームＩ、工程ｇ）
ピリジン（０.５ｍｌ）中の３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド（Ｉａ−１、２７ｍｇ、０.１ミリモル）、Ｃｓ2ＣＯ3（４３ｍｇ、０.１３ミリモル）の混合物に、室温でヨウ化メチル（２０ｍｇ、０.１４ミリモル）を添加した。この反応物をシールした容器の中で、１５分間にわたって８０℃に加熱した。混合物を冷却し、水から酢酸エチルに抽出した。有機溶液を分離し、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル３グラム、ジクロロメタン中のＭｅＯＨ０〜４％で溶出）によって残留物（３３ｍｇ）を精製し、白色の固体として表題の化合物を生成し（１１ｍｇ）、1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）とＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｅ＝２８３）は、表題の化合物の構造と一致した。
【０１５２】
３−（３−フルオロ−フェニルスルファニル）−５−メトキシ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−３５
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（３−フルオロフェニル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の５−メトキシ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド（１.０当量、対応するエチルエステルから製造、Frydman, B.; Reil, S.J.; Boned, J.; Rapoport, H. J. Org. Chem. 1968, 33, 3762-6）を処理し、象牙色の固体として、ＭＳ測定値３１８.０３（Ｍ＋１）のＩａ−３５を生成した。
【０１５３】
３−（３−メトキシ−フェニルスルファニル）−５−メトキシ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−３６
一般的合成手順ＩＶｂに記載のようにして、ビス−（３−メトキシフェニル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ中の５−メトキシ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド（１.０当量、対応するエチルエステルから製造、Frydman, B.; Reil, S.J.; Boned, J.; Rapoport, H. J. Org. Chem. 1968, 33, 3762-6）を処理し、象牙色の固体として、ＭＳ測定値３３０.０１（Ｍ＋１）のＩａ−３６を生成した。
【０１５４】
３−フェニルスルファニル−１−プロピル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−３７
一般的手順Ｖにしたがい、Ｃｓ2ＣＯ3（１.５当量）の存在下でヨウ化プロピル（１.５当量）を用い、ＤＭＦ中の３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミドＩａ−１（１.０当量）を処理し、クロマトグラフィの後、象牙色の固体として、ＭＳ測定値３１２.０６（Ｍ＋１）のＩａ−３７を生成した。
【０１５５】
３−フェニルスルファニル−１−プロピル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉａ−３７（スキームＩ、工程ｇ）
ピリジン（０.５ｍｌ）中の３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド（Ｉａ−１、３１.５ｍｇ、０.１２ミリモル）、Ｃｓ2ＣＯ3（６０ｍｇ、０.１８５ミリモル）の混合物に、室温で１−ブロモプロパン（１９ｍｇ、０.１５４ミリモル）を添加した。この反応物をシールした容器の中で、１時間にわたって８０℃に加熱した。混合物を冷却し、水から酢酸エチルに抽出した。有機相を分離し、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィ（ＳｉＯ2２グラム、ヘプタン：ＤＣＭと続いてＤＣＭ中のＭｅＯＨ０〜４％で溶出）によって残留物（３３ｍｇ）を精製し、白色の固体として表題の化合物を生成し（１１.５ｍｇ）、1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）とＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｅ＝３１１）は、表題の化合物の構造と一致した。
【０１５６】
ピロロ［３，２−ｃ］インドール類（５−アザインドール類）の製造
２−（ジエトキシメチル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−１−カルボン酸１，１−ジメチルエチルエステル、８ｂ−１（スキーム３、工程ｈ）
ドライＤＭＦ中の（３−ヨード−ピリジン−４−イル）カルバミン酸１，１−ジメチルエチルエステル（１３.３ｇ、４１.５６ミリモル、Darnbrough, Shelley; Mervic, Miljenko; Condon, Stephen M.; Burns, Christopher J. Synthetic Communications (2001) 31(21), 3273-3280）、３，３−ジエトキシ−１−プロピン（５.９６ｍｌ、４１.５６ミリモル）、トリエチルアミン（２３ｍｌ、１６６ミリモル）、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（II）（１.４６ｇ、２.０８ミリモル）、及びヨウ化銅（２３７ｍｇ、１.２５ミリモル）の溶液をアルゴン下で９０℃に３時間にわたって加熱した。反応混合物を７０℃まで冷やし、ＤＢＵ（１２.５ｍｌ、８３.１２ミリモル）を添加した。反応物を７０℃で３時間にわたって撹拌した後、室温で終夜にわたって撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃの中に注ぎ入れ、水（２×）とブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過・濃縮し、オイルとして表題の化合物を得た。このオイルをフラッシュクロマトグラフィによって精製し（シリカ、１０〜２０％ＥｔＯＡｃ／ｎ−ヘキサンで溶出）、透明なオイルとして、ＴＬＣ（シリカ、３０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン、Ｒf＝０.３０）、表題の化合物９.８ｇを生成した。
【０１５７】
１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボキシアルデヒド、９ｂ−１（スキーム３、工程ｉ）
ＴＨＦ１００ｍｌ中の２−（ジエトキシメチル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−１−カルボン酸１，１−ジメチルエチルエステル（８ｂ−１、９.８ｇ、３０.６ミリモル）の溶液に濃ＨＣｌ  ６ｍｌを添加した。この反応混合物を室温で２０時間にわたって撹拌し、飽和重炭酸ナトリウム溶液を用いて塩基性にし、ＥｔＯＡｃに注ぎ入れ、飽和重炭酸ナトリウムとブラインで洗浄し、有機相をＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過・濃縮し、固形物として、２−ホルミル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−１−カルボン酸１，１−ジメチルエチルエステルと１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボキシアルデヒド９ｂ−１の混合物を得た。フラッシュクロマトグラフィ（シリカ、１〜３％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）によってこの混合物を分離し、オイルとして２−ホルミル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−１−カルボン酸１，１−ジメチルエチルエステル（５.０ｇ）を、黄褐色の固体として１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボキシアルデヒド９ｂ−１（１.０ｇ）を得た。ジクロロメタン２５０ｍｌ中の２−ホルミル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−１−カルボン酸１，１−ジメチルエチルエステル（５.０ｇ、２０.３ミリモル）の溶液にＴＦＡ（５.０ｍＬ）を滴加した。この反応混合物を還流下で３時間にわたって加熱し、濃縮し、ＥｔＯＡｃ３００ｍｌで残留物を希釈し、飽和重炭酸ナトリウム溶液（３×）とブラインを用いて洗浄し、有機相を乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過・濃縮し、純粋な固体として、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボキシアルデヒド９ｂ−１（２.２４ｇ）を生成した。
【０１５８】
１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸メチルエステル、５ｂ−１（スキーム３、工程ｊ）
メタノール中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボキシアルデヒド（９ｂ−１、３.２４ｇ、２２.１９ミリモル）の０℃の溶液に、アルゴン下で、シアン化ナトリウム（５.４４ｇ、１１１ミリモル）と二酸化マンガン（９.６５ｇ、１１１ミリモル）を添加した。この反応混合物を５時間にわたって撹拌し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）を通して濾過し、ＥｔＯＡｃ５００ｍｌで希釈した。有機相を水（×２）とブラインで洗浄し、炭酸ナトリウム上で乾燥し、濾過・濃縮し、純粋な黄褐色の固体として表題の化合物（３.２７ｇ）を生成した。５ｂ−１からの１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ｂ−１は、エチルエステル４ａ−１からの化合物６ａ−１の合成についての上記手順の任意のものから製造する。
【０１５９】
１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、６ｂ−１（Ｒ4＝Ｈ、スキーム１、工程ａ〜ｃ、ｅ）
３−メチル−４−ニトロ−ピリジン（２ｂ−１）は、３−クロロ−４−ニトロ−ピリジン１ｂ−１より、化合物１ａ−１からの異性体の２−メチル−３−ニトロ−ピリジン類似体２ａ−１の合成について上述したようにして製造する。２−ヒドロキシ−３−（４−ニトロ−ピリジン−３−イル）−アクリル酸エステル（３ｂ−１）は、化合物２ｂ−１より、化合物２ａ−１からの化合物３ａ−１の製造について上記に説明した任意の手順によって製造する。１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸エチルエステル４ｂ−１は、化合物３ｂ−１より、化合物３ａ−１からの化合物４ａ−１の製造について上記に説明した任意の手順によって製造する。１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ｂ−１は、化合物４ｂ−１より、化合物４ａ−１からの化合物６ａ−１の合成について上記に説明した任意の手順によって製造する。
【０１６０】
３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉｂ−１
一般的手順ＩＶｂに上述したようにして、ジフェニルジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ｂ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体として、Ｉｂ−１を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.４８（ｂｓ，１Ｈ），８.７０（ｓ，１Ｈ），８.２９（ｄ，Ｊ＝５.８Ｈｚ，１Ｈ），８.０４（ｂｓ，１Ｈ），７.７６（ｂｓ，１Ｈ），７.４４（ｄｄ，Ｊ＝１.１，５.７Ｈｚ，１Ｈ），７.２６（ｍ，２Ｈ），７.１４（ｍ，３Ｈ）；ｍ／ｚ＝２７０.１（Ｍ＋Ｈ）
【０１６１】
３−（３−フルオロ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉｂ−２
一般的手順ＩＶｂに上述したようにして、ビス−（３−フルオロフェニル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ｂ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体として、Ｉｂ−２を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.６３（ｂｓ，１Ｈ），８.７１（ｓ，１Ｈ），８.３１（ｄ，Ｊ＝５.８Ｈｚ，１Ｈ），８.０６（ｂｓ，１Ｈ），７.７４（ｂｓ，１Ｈ），７.４６（ｄ，Ｊ＝５.８Ｈｚ，１Ｈ），７.３（ｍ，１Ｈ），６.９９〜６.８９（重複ｍ，３Ｈ）；ｍ／ｚ＝２８８.０６（Ｍ＋１）
【０１６２】
３−（４−クロロ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉｂ−３
一般的手順ＩＶｂに上述したようにして、ビス−（４−クロロフェニル）ジスルフィド（１.１当量）を用いて、ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ｂ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体として、Ｉｂ−３を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.６１（ｂｓ，１Ｈ），８.７１（ｂｓ，１Ｈ），８.３０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.５Ｈｚ），８.０７（ｂｓ，１Ｈ），７.７６（ｂｓ，１Ｈ），７.４５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５.７Ｈｚ），７.３２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８.７Ｈｚ），７.１２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８.５Ｈｚ），ｍ／ｚ＝３０４（Ｍ＋１）
【０１６３】
ピロロ［２，３−ｃ］インドール類（６−アザインドール類）の製造
１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、６ｃ−１（Ｒ4＝Ｈ、スキーム１、工程ａ〜ｃ、ｅ）
４−メチル−３−ニトロ−ピリジン（２ｃ−１）は、４−クロロ−３−ニトロ−ピリジン１ｃ−１より、化合物１ａ−１からの異性体２−メチル−３−ニトロ−ピリジン類似体２ａ−１の合成について上述したようにして製造する。２−ヒドロキシ−３−（３−ニトロ−ピリジン−４−イル）−アクリル酸エステル（３ｃ−１）は、化合物２ｃ−１より、化合物２ａ−１からの化合物３ａ−１の製造について上記に説明した任意の手順によって製造する。１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸エチルエステル（４ｃ−１）は、化合物３ｃ−１より、化合物３ａ−１からの化合物４ａ−１の製造について上記に説明した任意の手順によって製造する。１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ｃ−１は、化合物４ｃ−１より、化合物４ａ−１からの化合物６ａ−１の合成について上記に説明した任意の手順によって製造する。
【０１６４】
３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉｃ−１
一般的手順ＩＶｂに上述したようにして、ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ｃ−１（１.０当量）に、（ジフェニル）ジスルフィド（１.０当量）を添加し、黄褐色の結晶性固体として、Ｉｃ−１を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.４（ｂｓ，１Ｈ），８.８６（ｓ，１Ｈ），８.１８（ｍ，２Ｈ），７.８４（ｂｓ，１Ｈ），７.４２（ｄ，Ｊ＝５.５Ｈｚ，１Ｈ），７.２４（ｍ，２Ｈ），７.１４（ｍ，１Ｈ），７.０３（ｄ，８.３Ｈｚ，２Ｈ）；ｍ／ｚ＝２７０.１（Ｍ＋Ｈ）
【０１６５】
３−ベンゼンスルホニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉｃ−２
Ｈ2Ｏ2（３０％ｗ／ｖ、１３１μＬ、２.５ミリモル）とＮａ2ＣＯ3（２１２ｍｇ、２.０ミリモル）を用いて、３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ｃ−１（１.０ミリモル）を処理した。室温で１６時間にわたって撹拌し、反応をＨ2Ｏでクエンチし、ＥｔＯＡｃを用いて抽出した。抽出物をブラインで洗浄し、有機相を乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濃縮し、象牙色の固体としてＩｃ−２を得た。ＭＳ測定値３０３（Ｍ＋１）
【０１６６】
３−（３−フルオロ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉｃ−３
一般的手順ＩＶｂに上述したようにして、ビス−（３−フルオロフェニル）ジスルフィド（１.０当量）を用いて、ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ｃ−１（１.０当量）を処理し、黄褐色の固体として、Ｉｃ−３を得た。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.７７（ｂｓ，１Ｈ），８.８７（ｓ，１Ｈ），８.２（ｄ，Ｊ＝５.２Ｈｚ，１Ｈ），８.１３（ｂｓ，１Ｈ）と部分的に重複，７.８１（ｂｓ，１Ｈ），７.４２（ｄ，Ｊ＝５.５Ｈｚ，１Ｈ），７.２６（ｍ，１Ｈ），６.９６（ｍ，１Ｈ），６.８４（ｍ，２Ｈ）；ｍ／ｚ＝２８８.０４（Ｍ＋Ｈ）
【０１６７】
３−（３−メトキシ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉｃ−４
一般的手順ＩＶｂに上述したようにして、ビス−（３−メトキシフェニル）ジスルフィド（１.０当量）を用いて、ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ｃ−１（１.０当量）を処理し、黄褐色の固体として、Ｉｃ−４を得た。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.８（ｂｓ，１Ｈ），８.８９（ｓ，１Ｈ），８.２（ｄ，Ｊ＝５.３Ｈｚ，１Ｈ），８.１９（ｂｓ，１Ｈ）と重複，７.８１（ｂｓ，１Ｈ），７.４１（ｄ，Ｊ＝５.４Ｈｚ，１Ｈ），７.１９（ｍ，１Ｈ），６.６１（ｓ，１Ｈ），６.５６（ｍ，２Ｈ）と部分的に重複，３.６５（ｓ，３Ｈ）；ｍ／ｚ＝３００.１（Ｍ＋Ｈ）
【０１６８】
３−（３−クロロ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉｃ−５
一般的手順ＩＶｂに上述したようにして、ビス−（３−クロロフェニル）ジスルフィド（１.０当量）を用いて、ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ｃ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体として、Ｉｃ−５を得た。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.８（ｂｓ，１Ｈ），８.８７（ｓ，１Ｈ），８.２（ｄ，Ｊ＝５.３Ｈｚ，１Ｈ），８.１７（ｂｓ，１Ｈ）と重複，７.８２（ｂｓ，１Ｈ），７.４１（ｄ，Ｊ＝５.４Ｈｚ，１Ｈ），７.２（ｍ，２Ｈ），７.０５（ｓ，１Ｈ），６.９５（ｄ，Ｊ＝７.３Ｈｚ，１Ｈ）；ｍ／ｚ＝３０４（Ｍ＋Ｈ）
【０１６９】
３−（２−トリフルオロメチル−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉｃ−６
一般的手順ＩＶｂに上述したようにして、ビス−（２−トリフルオロメチルジフェニル）ジスルフィド（１.０当量）を用いて、ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ｃ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体として、Ｉｃ−６を得た。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.９（ｂｓ，１Ｈ），８.９（ｂｓ，１Ｈ），８.１９（ｍ，２Ｈ），７.７９（ｍ，１Ｈ），７.３３（ｍ，２Ｈ），７.４６（ｄ，Ｊ＝５.５Ｈｚ，１Ｈ），７.１４（ｍ，１Ｈ），６.７５（ｄｄ，Ｊ＝１.３，７.５Ｈｚ，１Ｈ）；ｍ／ｚ＝３３８（Ｍ＋Ｈ）
【０１７０】
３−（２−トリフルオロメトキシ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉｃ−７
一般的手順ＩＶｂに上述したようにして、ビス−（２−トリフルオロメトキシフェニル）ジスルフィド（１.０当量）を用いて、ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ｃ−１（１.０当量）を処理し、黄褐色の固体として、Ｉｃ−７を得た。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.８（ｂｓ，１Ｈ），８.８９（ｓ，１Ｈ），８.２（ｄ，Ｊ＝５.３Ｈｚ，１Ｈ），８.１４（ｂｓ，１Ｈ）と重複，７.８（ｂｓ，１Ｈ），７.３６（ｍ，２Ｈ），７.１（ｄｄ，Ｊ＝１.０，８.３Ｈｚ，１Ｈ），６.９８（ｍ，２Ｈ）；ｍ／ｚ＝３５４（Ｍ＋Ｈ）
【０１７１】
３−（２−メトキシ−フェニルスルファニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉｃ−８
一般的手順ＩＶｂに上述したようにして、（２−メトキシ−ジフェニル）ジスルフィド（１.０当量）を用いて、ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド６ｃ−１（１.０当量）を処理し、象牙色の固体として、Ｉｃ−８を得た。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.４０（ｂｓ，１Ｈ），８.８９（ｂｓ，１Ｈ），８.３〜８.１６（ｍ，１Ｈ），７.８６（ｓ，１Ｈ），７.７７（ｍ，１Ｈ）と重複，７.４６（ｄ，Ｊ＝５.５Ｈｚ，１Ｈ），７.１４（ｍ，１Ｈ），７.０３（ｄｄ，Ｊ＝１.０，８.３Ｈｚ，１Ｈ），６.７５（ｄｄ，Ｊ＝１.３，７.５Ｈｚ，１Ｈ），６.５０（ｄｄ，Ｊ＝１.５，７.８Ｈｚ，１Ｈ），３.８９（ｓ，３Ｈ）；ｍ／ｚ＝３００.１（Ｍ＋Ｈ）
【０１７２】
３−（ピリジン−２−スルファニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド、Ｉｃ−９
一般的手順ＩＶｂに記載したようにして、ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸アミド（１.０当量）に２，２’−ジピリジルジスルフィド（Aldrithiol 2、１.１当量）を添加し、象牙色の固体として、Ｉｃ−９を生成した。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２.７５（ｂｓ，１Ｈ），８.８６（ｓ，１Ｈ），８.３５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４，４.５Ｈｚ），８.１９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１，４Ｈｚ），８.１（ｂｓ，１Ｈ），７.８５（ｂｓ，１Ｈ），７.５４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.８，７.５Ｈｚ），７.４２（ｄ，Ｊ＝５.５Ｈｚ，１Ｈ），７.１０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.９，７.４Ｈｚ），６.７４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８.１Ｈｚ），ｍ／ｚ＝２７１.１（Ｍ＋Ｈ）
【０１７３】
【表１】
2007513950.tif 000007
【０１７４】
【表２】
2007513950.tif 000008
【０１７５】
【表３】
2007513950.tif 000009
【０１７６】
【表４】
2007513950.tif 000010
【０１７７】
生物学的実施例
ＣＫＩε阻害剤をスクリーニングするためのカゼインキナーゼε33Ｐ−ＡＴＰフィルタプレートアッセイ
−目的−
このアッセイは、インビボ33Ｐ−ＡＴＰ濾過アッセイを用い、酵素カゼインキナーゼＩεによる基質カゼインのリン酸化反応を阻害する化合物の効果を測定する。化合物は、ＩＣ50値又は１０μモル濃度での阻害％を発生させるため、５つの濃度について二重にテストし、これらは表４にまとめて示す。
【０１７８】
−材料−
［装置］
ベックマンＢｉｏｍｅｋ２０００液体ハンドリングロボット
ベックマンＭｕｌｔｉｍｅｋ９６自動式９６チャンネルピペッター
ミリポア真空マニホールドＢａｓｉｃ  Ｋｉｔ  ＃ＭＡＶＭ０９６０Ｒ
Ｔｉｔｅｒｔｅｋ  Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ液体ディスペンサー
パッカードＴｏｐＣｏｕｎｔ  ＮＸＴ液体シンチレーションカウンター
［プレート］
Ｃｏｓｔａｒ  ＥＩＡ／ＲＩＡプレート＃９０１８
Ｆａｌｃｏｎ９６ウェルＵ底ポリスチレンプレート＃３５３９１０
ミリポアマルチスクリーン９６ウェル濾過プレート＃ＭＡＰＨＮＯＢ５０
ミリポアマルチスクリーンＴｏｐＣｏｕｎｔアダプタープレート＃ＳＥ３Ｍ２０３Ｖ６［薬品］
ＥＧＴＡ、ＳＩＧＭＡ＃Ｅ−３８８９より
カゼイン（脱リン酸化）、ＳＩＧＭＡ＃Ｃ−４０３２より
ＡＴＰ、ＳＩＧＭＡ＃Ａ−７６９９より
ＤＴＴ、Ｆｉｓｈｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ＃ＢＰ１７２５より
トリクロロ酢酸、ＳＩＧＭＡ＃Ｔ−６３９９より
γ−33Ｐ−ＡＴＰ１ｍＣｉ／３７ＭＢｑ、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ＃ＮＥＧ−６０２Ｈより
［酵素］
最終濃度０.５８ｍｇ／ｍｌのカゼインキナーゼＩεは、Ａｖｅｎｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社（フランス）により行われる発酵・精製プロセスから得た。上記のものは、−８０℃において１００μＬアリコートとして保存した。
［化合物］
テスト用化合物は、１００％ＤＭＳＯに溶かした冷凍の１０ｍＭ化合物原液として供給した。
【０１７９】
−アッセイ条件−
１ウェルあたりの最終的な合計アッセイ体積は、以下のようにしてなる５０μＬに等しい。
希釈した化合物原液（１０、１、０.１、０.０１、又は０.００１μＭ）の５μＬ
脱リン酸化カゼイン最終濃度０.２μｇ／μＬの５μＬ
ＣＫＩε最終濃度３ｎｇ／μＬの２０μＬ、及び
低温ＡＴＰ（１０μＭ最終）と混合したγ−33Ｐ−ＡＴＰ最終濃度０.０２μＣｉ／μＬの２０μＬ
【０１８０】
−方法論−
１．新たなアッセイ緩衝剤５００ｍＬを調製する：５０ｍＬのトリス（ｐＨ７.５）、１０ｍＭのＭｇＣｌ2、２ｍＭのＤＴＴ、及び１ｍＭのＥＧＴＡ
２．評価すべき化合物を、１００％ＤＭＳＯに溶かした１０ｍＭ原液の１０μＬとして得る。Ｂｉｏｍｅｋ２０００液体ハンドリングロボットを用い、連続的な希釈を行い、ＦａｌｃｏｎのＵ底プレートに５μＬ添加物として加えた１０、１、０.１、０.０１、及び０.００１μＭの最終的な化合物希釈物を調製する。典型的に、９６ウェルのプレートあたり８つの化合物をテストし、カラム１〜１２は対照ウェルとして使用する。ルーチンのスクリーニングアッセイは３２化合物からなり、これは４つのアッセイプレートに相当する。
３．アッセイプレートのマップは、次のＣＫ１ｅＰｌａｔｅＭａｐ．ｘｌｓにしたがって設定する（図１参照）。
４．指示のようにして化合物５μＬを添加した後、脱リン酸化カゼイン（蒸留水に溶解）（０.２μｇ／μＬ）５μＬとＣＫＩε（３ｎｇ／μＬ）２０μＬを適切なウェルに添加する。
５．最終的に、γ−33Ｐ−ＡＴＰ（０.０２μＣｉ／μＬ）／１０μＭ低温ＡＴＰ２０μＬを添加する（約２×１０6ＣＰＭ／ウェルに等しい）。
６．反応体積５０μＬ超を含むＦａｌｃｏｎＵ底アッセイプレートをボルテックスした後、室温で２時間にわたってインキュベートする。
７．２時間の終了の時、ベックマンＭｕｌｔｉｍｅｋを用い、アッセイプレートに、氷冷２ｍＭ低温ＡＴＰ（アッセイ緩衝液の中に調製）６５μＬを添加して反応を停止させる。
８．同時に、蒸留水中に調製した１００％氷冷ＴＣＡ２５μＬを、一致する数のミリポアＭＡＰＨフィルタプレートに添加する。
９．ハンドヘルドの８チャンネルピペッターを用い、反応混合物１００μＬをＦａｌｃｏｎＵ底プレートから、ＴＣＡに浸しておいたミリポアＭＡＰＨフィルタプレートに移す。
１０．ミリポアＭＡＰＨフィルタプレートを穏やかに混合し、室温で少なくとも３０分間置き、タンパク質を沈降させる。
１１．３０分後、フィルタプレートをミリポア真空マニホールドの上に置き、ＭＡＰＨフィルタは高めの真空設定では「エアーロック」する傾向にあるため、８ｍｍＨｇ以下で濾過する。
１２．フィルタプレートを、２０％ＴＣＡ２×１５０μＬ、１０％ＴＣＡ２×１５０μＬ、及び５％ＴＣＡ２×１５０μＬを用いて順次に洗浄し、濾過する（１つのプレートあたり合計で６回洗浄／１つのウェルあたり９００μＬ）。
１３．プレートを室温で終夜にわたって乾燥する。翌日、１つのウェルあたり、４０μＬのパッカードＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ−２０シンチレーション流体を、Ｔｉｔｅｒｔｅｋマルチドロップディスペンサーを用いて添加し、プレートをシールし、パッカードトップカウントＮＸＴシンチレーションカウンターで１ウェルあたり２分間カウントする（ＣＰＭ値／ウェルを取得する）。
【０１８１】
−計算−
１．１分間あたりのカウント（ＣＰＭ）のデータを取得し、専用データ計算とファイル保存データベースの中に取り込む（ＩＤＢＳバージョン５.０による活性ベース）。
２．各プレートについてのカラム１は、阻害性化合物が全く存在しない酵素の全体リン酸化活性を反映し、したがって１００％を表す。カラム１２は、阻害性化合物と酵素が存在しない中での、何らかの非特異的なリン酸化／保有放射能活性を反映する。典型的に、「非特異的」である全ＣＭＰの約１％が見られる。
３．各プレートについて「全体」と「非特異的」ＣＰＭを決定することにより、テスト化合物の各濃度について基質をリン酸化する酵素能力の阻害％を求めることができる。この阻害％のデータは、活性ベース計算プロトコル（DG0027-CK1-D-BL）（検討：RESR0290）とともにに含まれる非線形曲線適合プログラムを用い、化合物についてＩＣ50値（化合物が酵素活性を５０％阻害することができる濃度）を計算するために用いられる。
４．動力学的検討により、このアッセイ系におけるＡＴＰについてのＫmが２１μＭであることが求められた。
【０１８２】
ＣＫＩδ阻害剤についてのカゼインキナーゼＩδストレプトアビジン親和性膜プレートアッセイ
−目的−
ストレプトアビジン親和性膜（ＳＡＭ）ビオチン捕獲プレート（Promega V7542）におけるＣＫＩδ活性についてテスト化合物を評価する。
［供給と試薬］
ＨＥＰＥＳシグマ＃Ｈ３３７５ＭＷ＝２３８.３；β−グリセロールホスフェートシグマ＃Ｇ−９８９１ＭＷ＝２１６.０；ＥＤＴＡ０.５Ｍ，ｐＨ８.０ＧｉｂｃｏＢＲＬ；オルトバナジン酸ナトリウムＡＣＲＯＳ＃２０５３３０５００ＭＷ＝１８３.９；ＤＴＴ（ＤＬ−ジチオスレイトール）シグマ＃Ｄ−５５４５ＭＷ＝１５４.２；塩化マグネシウムＡＣＲＯＳ＃４１３４１−５０００ＭＷ＝２０３.３；ＡＴＰシグマ＃Ａ−７６９９ＭＷ＝５５１.１；γ33ＰＡＴＰＮＥＮ＃ＮＥＧ６０２Ｈ；カゼインキナーゼＩδシグマ＃Ｃ４４５５；カゼインキナーゼＩ基質ニューイングランドペプチドビオチン−ＲＲＫＤＬＨＤＤＥＥＤＥＡＭＳＩＴＡ  ＭＷ＝２４７０
【０１８３】
キナーゼ緩衝剤（ＫＢ、１００ｍＬ）は次のようにして製造する。
ＨＥＰＥＳ  ５０ｍＭ、ｐＨ８.０         １Ｍ原液５ｍＬ
ＭｇＣｌ  １０ｍＭ                      １Ｍ原液１ｍＬ
β−グリセロホスフェート  １０ｍＭ      １Ｍ原液１ｍＬ
ＥＤＴＡ  ２５ｍＭ                      ５００ｍＭ原液５００μＬ
オルトバナジン酸ナトリウム  １ｍＭ      １Ｍ原液１００μＬ
ＤＴＴ  １ｍＭ                          １Ｍ原液１００μＬ
水                                      ９２.３ｍＬ
【０１８４】
ＡＴＰマスター混合物は次のようにして製造する。
水中の１ＭのＡＴＰ溶液１ｍＬを製造する（１ＭのＡＴＰ原液）
ＫＢ１２ｍＬに、１ＭのＡＴＰ溶液１２μＬを添加し、次いで、33ＰＡＴＰ（１０μＣｉ／μＬ）、ＮＥＧ６０２Ｈ、パーキンエルマー１２μＬを添加する。
【０１８５】
反応プレートを製造し、アッセイを次のようにして行う。
１．反応プレートのウェルに、テスト化合物の阻害剤を含める又は含めずに、１ウェルあたりＫＢ１０μＬを添加する。
２．１ウェルあたりＫＢ６０μＬを添加する。
３．１ウェルあたり５００μＭのペプチド基質１０μＬを添加する。
４．プレートを３７℃に昇温する。
５．１ウェルあたり０.４２μｇ又は０.６８ユニットで、ＣＫＩδの１：１０希釈液１０μＬを添加する。
６．１ウェルあたりＡＴＰマスター混合物１０μＬを用い、反応を開始させる。
７．反応プレートを３７℃のインキュベーターに１０分間入れる。
８．１ＭのＡＴＰ１０μＬを用いて反応を停止させる。２０μＬをＳＡＭプレートに移し、室温に１０分間置く。
９．２ＭのＮａＣｌ溶液１００μＬで３回、次に２ＭのＮａＣｌと１％のＨ3ＰＯ4の溶液１００μＬで３回、次に水１００μＬで３回にわたって真空マニホールド上で洗浄する。
１０．フィルタプレートをランプ下で３０分間乾燥する。
１１．プレートの底をシールし、ＭｉｃｒｏＳｃｉｎｔ２０  ２０μＬを添加する。
１２．ＴＯＰＣＯＵＮＴにインプットする。
【０１８６】
細胞の概日アッセイの実験手順
−細胞培養−
ｍｐｅｒｌ−ｌｕｃＲａｔ−１線維芽細胞（Ｐ２Ｃ４）培養物を３〜４日ごとに、１５０ｃｍ2のベント式ポリスチレン組織培養フラスコ（Falcon#35-5001）の上に分割し（約１０〜２０％集密）、３７℃と５％ＣＯ2で、成長培地（EMEM（Cellgro#10-010-CV）;１０％ウシ胎児血清（FBS; Gibco#16000-044）；及び５０Ｉ．Ｕ．／ｍＬのペニシリン−ストレプトマイシン（Cellgro#30-001-C1）の中に維持した。
【０１８７】
−安定な形質移入−
３０〜５０％集密のＲａｔ−１線維芽細胞培養物を、安定な形質移入のためのＺｅｏｃｉｎ抵抗選択性マーカーとｍＰｅｒ−１プロモーター駆動ルシフェラーゼレポーター遺伝子を含むベクターを同時形質移入した。２４〜４８時間後、培養物を９６ウェルプレート上に分割し、１０〜１４日間にわたり、５０〜１００μｇ／ｍＬのＺｅｏｃｉｎ（Invitrogen#45-0430）でサプリメントされた成長培地の中に維持した。成長培地に１００μＭのルシフェリン（Promega#E1603）をサプリメントし、ＴｏｐＣｏｕｎｔシンチレーションカウンター（パッカードモデル#C384V00型）でルシフェラーゼ活性を検査することによって、レポーター発現についてＺｅｏｃｉｎ抵抗安定性形質移入体を評価した。Ｚｅｏｃｉｎ抵抗とｍＰｅｒｌ駆動ルシフェラーゼ活性の双方を発現するＲａｔ−１クローンを、５０％ウマ血清（HS(Gibco #16050-122)）の血清ショックによって同期化し、概日レポーター活性について評価した。ｍｐｅｒｌ−ｌｕｃＲａｔ−１線維芽細胞クローンＰ２Ｃ４を化合物テストのために選択した。
【０１８８】
−同期化プロトコル−
ｍｐｅｒｌ−ｌｕｃＲａｔ−１線維芽細胞（Ｐ２Ｃ４）を、不透明９６ウェル組織培養プレート（PerkinElmer#6005680）の上に蒔き（４０〜５０％集密）、培養物が１００％集密（４８〜７２時間）に達するまで、１００μｇ／ｍＬのＺｅｏｃｉｎ（Invitrogen#45-0430）でサプリメントされた成長培地に維持した。１００μＬの同期化培地（EMEM(Cellgro#10-010-CV)；100I.U.／mLペニシリン−ストレプトマイシン(Cellgro#30-001-C1)；50％HS(Gibco#16050-122)）を用い、３７℃と５％ＣＯ2で２時間にわたり、培養物を同期化した。同期化の後、室温で１０分間にわたり、培養物を１００μＬのＥＭＥＭ（Cellgro#10-010-CV）でリンスした。リンスの後、培地を３００μＬのＣＯ2非依存性培地（ＣＯ2Ｉ(Gibco#18045-088)；２ｍＭのＬ−グルタミン(Cellgro#25-005-C1)；100I.U./mLのペニシリン−ストレプトマイシン(Cellgro#30-001-C1)；１００μＭのルシフェリン(Promega#E1603)）に置き換えた。概日効果をテストした化合物を０.３％ＤＭＳＯ（最終濃度）中のＣＯ2非依存性培地に添加した。培養物を直ちにＴｏｐＳｅａｌ−Ａフィルム（パッカード#6005185）でシールし、ルシフェラーゼ活性測定のために移した。
【０１８９】
−自動化概日レポーター測定−
同期化の後、アッセイプレートを組織培養インキュベーター（Forma Scientific Model #3914）の中で３７℃に維持した。インビボのルシフェラーゼ活性は、ＴｏｐＣｏｕｎｔシンチレーションカウンター（パッカードモデル#C384V00型）で相対的な光出力を測定することによって見積もった。ＯＲＣＡロボットアーム（Beckman Instruments）とＳＡＭＩ−ＮＴ自動化スケジューリングソフトウエア（Version 3.3; SAGIAN/Beckman Instruments）を用い、プレートをインキュベーターから読取器に移した。
【０１９０】
−データ解析−
マイクロソフトＥｘｃｅｌとＸＬフィット（Version 2.0.9; IDBS）を用い、データを取り込み、処理し、グラフにした。期間分析は、数日間かけて相対的な光出力の最小値の間の間隔を測定することにより、又はフーリエ変換により行った。両方の方法とも、概日期間の範囲の中で、ほぼ同じ期間の見積りを与えた。作用強度は、期間の１時間延長を引き起こすのに有効なマイクロモル濃度として表されるＥＣΔt+1hとして報告する。データは、ＸＬフィットにおけるテスト化合物の濃度（ｘ軸）に対する期間変化（ｙ軸）として表されたデータに、双曲線を適合させることによって解析し、ＥＣΔt+1hはこの曲線から内挿した。
【０１９１】
【表５】
2007513950.tif 000011
【０１９２】
【表６】
2007513950.tif 000012
【図面の簡単な説明】
【０１９３】
【図１】ＣＫＩε濾過アッセイプレートマップを示す。
【図１】
2007513950.tif 000019
【国際調査報告】
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