(57)【要約】変異レセプターチロシンキナーゼの存在により特徴付けられる細胞増殖性疾患に罹患する被験体を処置するための医薬の製造におけるＣＤＫ４インヒビターの使用が提供される。ＣＤＫ４インヒビターは、単独でか、または、変異レセプターチロシンキナーゼのインヒビターおよびＭＥＫインヒビターのうちの少なくとも１種と組み合わせて投与するためのものである。上記のインヒビターを含有する、組成物（その薬学的処方物およびキットを含む）がまた提供される。
2007513967.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
変異レセプターチロシンキナーゼの存在により特徴付けられる細胞増殖性疾患に罹患する被験体の処置のための医薬の製造における、ＣＤＫ４インヒビターの使用。
【請求項２】
変異レセプターチロシンキナーゼの存在により特徴付けられる細胞増殖性疾患に罹患する被験体の処置のための、変異レセプターチロシンキナーゼインヒビターおよびＭＥＫインヒビターのうちの少なくとも１種と組み合わせて投与するための医薬の製造における、ＣＤＫ４インヒビターの使用。
【請求項３】
前記細胞増殖性疾患が白血病である、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
前記細胞増殖性疾患が、固形腫瘍の存在により特徴付けられる、請求項１または２に記載の使用。
【請求項５】
前記変異レセプターチロシンキナーゼが、ＰＤＧＦＲチロシンキナーゼスーパーファミリーのメンバーである、請求項１または２に記載の使用。
【請求項６】
前記変異レセプターチロシンキナーゼが、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、Ｆｌｔ３、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ３、Ｒｅｔ、ＡＬＫおよびＥＧＦＲからなる群より選択される、請求項１または２に記載の使用。
【請求項７】
前記医薬が、変異レセプターチロシンキナーゼインヒビターと組み合わせて投与するためのものである、請求項２に記載の使用。
【請求項８】
前記医薬が、ＭＥＫインヒビターと組み合わせて投与するためのものである、請求項２に記載の使用。
【請求項９】
前記医薬が、変異レセプターチロシンキナーゼインヒビターおよびＭＥＫインヒビターと組み合わせて投与するためのものである、請求項２に記載の使用。
【請求項１０】
前記被験体が、変異レセプターチロシンキナーゼの存在を同定するためにスクリーニングされる、請求項１または２に記載の使用。
【請求項１１】
前記被験体が、ヒトである、請求項１または２に記載の使用。
【請求項１２】
組成物であって、以下：
ａ）ＣＤＫ４インヒビター；
ｂ）ｉ）変異レセプターチロシンキナーゼインヒビター；および
ｉｉ）ＭＥＫインヒビター
のうちの少なくとも１種；ならびに
ｃ）薬学的に受容可能なキャリア
を含有する、組成物。
【請求項１３】
前記組成物が、変異レセプターチロシンキナーゼインヒビターを含有する、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物が、ＭＥＫインヒビターを含有する、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１５】
前記組成物が、変異レセプターチロシンキナーゼインヒビターおよびＭＥＫインヒビターを含有する、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１６】
キットであって、以下：
ａ）ＣＤＫ４インヒビター；および
ｂ）変異レセプターチロシンキナーゼの存在により特徴付けられる細胞増殖性疾患に罹患する被験体を処置するために該ＣＤＫ４インヒビターを使用するための指示書
を備える、キット。
【請求項１７】
前記キットが、さらに、以下：
ｉ）変異レセプターチロシンキナーゼのインヒビター；および
ｉｉ）ＭＥＫインヒビター
から選択される少なくとも１種のさらなるインヒビターを含む、請求項１６に記載のキット。
【請求項１８】
前記キットが、変異レセプターチロシンキナーゼのインヒビターを含む、請求項１７に記載のキット。
【請求項１９】
前記キットが、ＭＥＫインヒビターを含む、請求項１７に記載のキット。
【請求項２０】
前記キットが、変異レセプターチロシンキナーゼインヒビターおよびＭＥＫインヒビターを含む、請求項１７に記載のキット。
【請求項２１】
前記ＣＤＫ４インヒビターおよび少なくとも１種のさらなるインヒビターが、単一の処方物中に存在する、請求項１７〜２０のいずれか１項に記載のキット。
【請求項２２】
前記ＣＤＫ４インヒビターおよび少なくとも１種のさらなるインヒビターが、別個の処方物として存在する、請求項１７〜２０のいずれか１項に記載のキット。
【請求項２３】
システムであって、以下：
ａ）ＣＤＫ４インヒビター；ならびに
ｂ）ｉ）変異レセプターチロシンキナーゼインヒビター；および
ｉｉ）ＭＥＫインヒビター
のうちの少なくとも１種
を含む、システム。
【請求項２４】
前記システムが、変異レセプターチロシンキナーゼインヒビターを含む、請求項２３に記載のシステム。
【請求項２５】
前記システムが、ＭＥＫインヒビターを含む、請求項２３に記載のシステム。
【請求項２６】
前記システムが、変異レセプターチロシンキナーゼインヒビターおよびＭＥＫインヒビターを含む、請求項２３に記載のシステム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、変異レセプターチロシンキナーゼの存在により特徴付けられる細胞増殖性障害を処置する方法に関する。本発明はまた、このような処置方法において有用な、組成物、キットおよびシステムに関する。
【背景技術】
【０００２】
（当該分野の状況）
遺伝的変化の蓄積は、過剰増殖性障害（例えば、癌）の発症および進行の根底にあり、その挙動、生化学、遺伝子、および顕微鏡での外見が正常細胞と異なる細胞を生じる。重要なタンパク質の発現レベル、または、タンパク質の構造および生物学的活性における変化を引き起こすＤＮＡの変異は、癌の核心にあると考えられる。例えば、癌は、細胞の増殖および生存の調節において重要な役割を果たす遺伝子が、変異を受けるか、または過剰発現された場合に、誘発され得る。このような「癌遺伝子」は、癌において生じる増殖の調節不全に関与している。
【０００３】
キナーゼは、リン酸化に関与する酵素であり、多くの細胞の活動（特に、細胞を細胞周期に入れるため、および他の機能を制御するための、細胞膜から核へのシグナル伝達）の調節を助ける。例えば、リン酸化は、細胞外の生物学的シグナル（例えば、増殖因子またはホルモン）を介してレセプターにより媒介されるシグナル伝達において重要である。多くの癌遺伝子は、キナーゼ、すなわち、タンパク質のリン酸化反応を触媒する酵素である。
【０００４】
近年、チロシンキナーゼ、特に、活性型の変異に起因して恒常的に活性であるキナーゼが、癌における有望な薬物標的として浮上している。突出した変異的に活性化されたチロシンキナーゼは、ｂｃｒ−ａｂｌであり、これは、第９染色体と第２２染色体との間の相互転座から生じる融合キナーゼである。結果として得られる、ｂｃｒ−ａｂｌと呼ばれる融合遺伝子は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）を起こすのに十分である。ｃ−ＫｉｔならびにＰＤＧＦＲαおよびβのような他のチロシンキナーゼは、多数の癌において変異的に活性化されており、そして、これらのキナーゼの変異は、発癌性の形質転換に関連している。ｃ−Ｋｉｔの小さな活性型欠失または点変異が、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）および全身性肥満細胞疾患（ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｍａｓｔ  ｃｅｌｌ  ｄｉｓｅａｓｅ）（ＳＭＣＤ）において見られる。ｃ−Ｋｉｔと同様に、ＰＤＧＦＲαは、ＧＩＳＴにおいて、そしてまた、好酸球増多症候群（ＨＥＳ）においても変異的に活性化されているのが見られる。慢性骨髄性白血病（ＣＭＭＬ）において、ＰＤＧＦＲβは、染色体転座の結果としての融合キナーゼ、Ｔｅｌ−ＰＤＧＦＲβとして発現される。
【０００５】
（関連する文献）
特許文献１；非特許文献１；非特許文献２；および非特許文献３。
【０００６】
ＣＤＫ４インヒビターの説明は、以下に見出され得る：（１）特許文献２、特許文献３、特許文献４、特許文献５、特許文献６、特許文献７、特許文献８、特許文献９、特許文献１０、特許文献１１、特許文献１２、および特許文献１３；（２）特許文献１４、特許文献１５、特許文献１６、特許文献１７、特許文献１８、および特許文献１９；（３）特許文献２０、特許文献２１、特許文献２２、特許文献２３、特許文献２４、および特許文献２５；ならびに（４）特許文献２６および特許文献２７；ならびに非特許文献４および非特許文献５。
【０００７】
ＭＥＫインヒビターの説明は、以下に見出され得る：（１）特許文献２８、特許文献２９、特許文献３０、特許文献３１、特許文献３２、特許文献３３、特許文献３４、特許文献３５、特許文献３６、特許文献３７、および特許文献３８；（２）特許文献３９、特許文献４０、特許文献４１、特許文献４２、特許文献４３、特許文献４４、および特許文献４５；（３）特許文献４６；特許文献４７；特許文献４８；特許文献４９；特許文献５０；特許文献５１；特許文献５２、特許文献５３、特許文献５４、および特許文献５５；ならびに（４）特許文献５６；ならびに非特許文献６；非特許文献７；非特許文献８；非特許文献９；非特許文献１０；非特許文献１１；非特許文献１２；および非特許文献１３。さらなる関心のある米国特許としては、特許文献５７；特許文献５８；および特許文献５９が挙げられる。
【特許文献１】米国特許第５，５２１，１８４号明細書
【特許文献２】米国特許第４，９００，７２７号明細書
【特許文献３】米国特許第５，７３３，９２０号明細書
【特許文献４】米国特許第５，８４９，７３３号明細書
【特許文献５】米国特許第６，０４０，３２１号明細書
【特許文献６】米国特許第６，１５０，３５９号明細書
【特許文献７】米国特許第６，２６２，０９６号明細書
【特許文献８】米国特許第６，４９８，１６３号明細書
【特許文献９】米国特許第６，５６９，８７８号明細書
【特許文献１０】米国特許第６，５９３，３２６号明細書
【特許文献１１】米国特許第６，６３０，４６４号明細書
【特許文献１２】米国特許第６，７２０，３３２号明細書
【特許文献１３】米国特許第６，７５６，３７４号明細書
【特許文献１４】米国特許出願公開第２００２／０１５１５５４号明細書
【特許文献１５】米国特許出願公開第２００３／０１４９００１号明細書
【特許文献１６】米国特許出願公開第２００３／００８７９２３号明細書
【特許文献１７】米国特許出願公開第２００３／０２０３９０７号明細書
【特許文献１８】米国特許出願公開第２００３／０２２９０２６号明細書
【特許文献１９】米国特許出願公開第２００４／００４８９１５号明細書
【特許文献２０】国際公開第９８／４９１４６号パンフレット
【特許文献２１】国際公開第００／１２４８５号パンフレット
【特許文献２２】国際公開第０１／１４３７５号パンフレット
【特許文献２３】国際公開第０１／４４１４７号パンフレット
【特許文献２４】国際公開第０２／２０５２４号パンフレット
【特許文献２５】国際公開第０２／２８８６１号パンフレット
【特許文献２６】欧州特許出願公開第１１９９３０６号明細書
【特許文献２７】欧州特許出願公開第１２９５８７８号明細書
【特許文献２８】米国特許第５，５２５，６２５号明細書
【特許文献２９】米国特許第６，２５１，９４３号明細書
【特許文献３０】米国特許第６，３１０，０６０号明細書
【特許文献３１】米国特許第６，６３８，９４５号明細書
【特許文献３２】米国特許第６，４４０，９６６号明細書
【特許文献３３】米国特許第６，４５５，５８２号明細書
【特許文献３４】米国特許第６，４９６，００４号明細書
【特許文献３５】米国特許第６，５０６，７９８号明細書
【特許文献３６】米国特許第６，６３８，９４５号明細書
【特許文献３７】米国特許第６，７７０，７７８号明細書
【特許文献３８】米国特許第６，８０９，１０６号明細書
【特許文献３９】米国特許出願公開第２００３／００７８４２８号明細書
【特許文献４０】米国特許出願公開第２００３／０１２５３５９号明細書
【特許文献４１】米国特許出願公開第２００３／０２１６４６０号明細書
【特許文献４２】米国特許出願公開第２００３／０２２５０７６号明細書
【特許文献４３】米国特許出願公開第２００４／０２３２８６９号明細書
【特許文献４４】米国特許出願公開第２００４／００５４１７２号明細書
【特許文献４５】米国特許出願公開第２００４／０００６２４５号明細書
【特許文献４６】国際公開第００／６８２０１号パンフレット
【特許文献４７】国際公開第００／６８２００号パンフレット
【特許文献４８】国際公開第００／６８１９９号パンフレット
【特許文献４９】国際公開第０１／６８６１９号パンフレット
【特許文献５０】国際公開第０２／０７６４９６号パンフレット
【特許文献５１】国際公開第０３／０４７５８５号パンフレット
【特許文献５２】国際公開第０３／０５３９６０号パンフレット
【特許文献５３】国際公開第０３／０６２１８９号パンフレット
【特許文献５４】国際公開第０３／０６２１９１号パンフレット
【特許文献５５】国際公開第０３／０７７９１４号パンフレット
【特許文献５６】英国特許出願公開第２３２３８４５号明細書
【特許文献５７】米国特許第５，８２１，０７２号明細書
【特許文献５８】米国特許第６，２４２，１９６号明細書
【特許文献５９】米国特許第６，３１６，４６２号明細書
【非特許文献１】Ｂａｘｔｅｒら、Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．２００２，第１１号，ｐ．１３９１−１３９７
【非特許文献２】Ｓｃｈａｌｌｅｒら、Ｍｅｄ．Ｇｅｎ．Ｍｅｄ．２００１，第３号、ｐ．９
【非特許文献３】Ｌａｎｃｅｔ，２００２，３５９，ｐ．１５７７−８
【非特許文献４】Ｗｅｂｓｔｅｒ，「Ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｏｆ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅ」，Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ  １９９８，第７号，ｐ．８６５−８８７
【非特許文献５】Ｔｏｏｇｏｏｄ，「Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  Ｔｏｗａｒｄ  Ｔｈｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｏｆ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｔｏ  Ｍｏｄｕｌａｔｅ  Ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅ」，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２００２，第６号，ｐ．４７２−４７８
【非特許文献６】Ｋｏｌｃｈ，「Ｒａｓ／Ｒａｆ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ａｎｄ  Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｔａｒｇｅｔｓ」，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ．２００２，第３号，ｐ．７０９−７１８
【非特許文献７】Ｄａｎｃｅｙ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｅｓｉｇｎ，２００２，第８号，ｐ．２２５９−２２６７
【非特許文献８】ＣｏｘおよびＤｅｒ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ＆  Ｔｈｅｒａｐｙ  ２００２，第１号  ｐ．５９９−６０６
【非特許文献９】Ｆａｖａｔａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９８，第２７２号，ｐ．１８６２３−１８６３２
【非特許文献１０】Ｚｈａｏら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  １９９９，第５２号，ｐ．１０８６−１０９４
【非特許文献１１】Ｗｉｌｌｉａｍｓら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９８，第３７号：ｐ．９５７９−９５８５
【非特許文献１２】Ｚｈａｎｇら、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００１，第１１号，ｐ．１４０７−１４１０
【非特許文献１３】Ｈｉｌｇｅｒら，Ｏｎｋｏｌｏｇｉｅ，２００２，第２５号，ｐ．５１１−５１８
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
細胞増殖性疾患に罹患する被験体を処置するための新規のプロトコールの開発について、当該分野で継続的な必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
（発明の要旨）
本発明は、変異レセプターチロシンキナーゼの存在により特徴付けられる細胞増殖性疾患に罹患する被験体を処置するための方法を提供し、この方法は、この被験体に、治療有効量のＣＤＫ４インヒビターを投与する工程を包含する。本発明はまた、このような細胞増殖性疾患に罹患する被験体を処置するための方法を提供し、この方法は、この被験体に、変異レセプターチロシンキナーゼのインヒビターおよびＭＥＫインヒビターのうちの少なくとも１種の治療有効量と組み合わせて、治療有効量のＣＤＫ４インヒビターを投与する工程を包含する。
【００１０】
本発明はまた、ＣＤＫ４インヒビター；変異レセプターチロシンキナーゼインヒビターおよびＭＥＫインヒビターのうちの少なくとも１種；ならびに薬学的に受容可能なキャリアを含有する組成物を提供する。別の局面において、本発明は、ＣＤＫ４インヒビター、および変異レセプターチロシンキナーゼの存在により特徴付けられる細胞増殖性疾患に罹患する被験体を処置するためにＣＤＫ４インヒビターを使用するための指示書を備えるキットを提供する。このようなキットは、さらに、変異レセプターチロシンキナーゼのインヒビターおよびＭＥＫインヒビターのうちの少なくとも１種を含み得る。
【００１１】
本発明はさらに、変異レセプターチロシンキナーゼの存在により特徴付けられる細胞増殖性疾患の処置のための医薬の製造における、ＣＤＫ４インヒビターの使用；ならびに、変異レセプターチロシンキナーゼの存在により特徴付けられる細胞増殖性疾患の処置のための、変異レセプターチロシンキナーゼのインヒビターおよびＭＥＫインヒビターのうちの少なくとも１種と組み合わせて投与するための医薬の製造における、ＣＤＫ４インヒビターの使用を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
（発明の詳細な説明）
変異レセプターチロシンキナーゼの存在により特徴付けられる細胞増殖性疾患に罹患する被験体を処置するための方法が提供される。本方法を実施する際に、治療有効量のＣＤＫ４インヒビターが、単独でか、または、変異レセプターチロシンキナーゼのインヒビターおよびＭＥＫインヒビターのうちの少なくとも１種の治療有効量と組み合わせてのいずれかで、この被験体に投与される。ＣＤＫ４インヒビターが、追加の薬剤と組み合わせて投与される場合、この薬剤は、同じ処方物または別個の処方物において、連続的または同時に投与され得る。本方法を実施するための、組成物（その薬学的処方物およびキットを含む）がまた提供される。
【００１３】
本発明がさらに説明される前に、本発明は、以下に記載される発明の特定の実施形態に限定されないことが理解されるべきである。なぜならば、特定の実施形態のバリエーションがなされ得、そして、これらは、添付の特許請求の範囲内であり得るからである。使用される用語法は、特定の実施形態を説明する目的のためのものであり、特定の実施形態に制限されることは意図されないことがまた理解されるべきである。その代わり、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲により確立される。
【００１４】
本明細書および添付の特許請求の範囲において、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈がそうでないと明確に示さない限り、複数の参照を含む。そうでないと規定されない限り、本明細書中で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者に通常理解される意味と同じ意味を有する。本明細書中に記載されるものと類似または等価な方法、デバイスおよび物質が、本発明の実施または試験において使用され得るが、特定の方法、デバイスおよび物質が、ここで記載される。
【００１５】
値の範囲が提供される場合、その範囲の上限と下限との間に介在する値（文脈がそうでないと明確に示さない限り、下限の１０分の１の単位まで）の各々、および、その明確に規定された範囲内の、任意の他の明確に規定された値または介在する値は、本発明に包含される。これらのより小さい範囲の上限および下限が、そのより小さい範囲内に独立的に包含され得、そしてまた、明確に規定された範囲内の任意の具体的に排除された限界を条件として本発明内に包含される。明確に規定された範囲が、制限の一方または両方を包含する場合、その包含される制限のいずれかまたは両方を排除する範囲もまた、本発明に包含される。
【００１６】
用語「処置」は、少なくとも宿主を苦しめる状態に関連する症状の緩和が達成されることを意味し、ここで、緩和とは、少なくとも処置される状態に関連するパラメータ（例えば、症状）の程度の減少を指すような広い意味で使用される。従って、処置はまた、病理学的状態、もしくは少なくともそれに関連する症状が、完全に阻害（例えば、発生を回避）されるか、または、停止（例えば、終結）され、その結果、宿主が、もはやその状態、もしくは、少なくともその状態を特徴付ける症状を罹患していない状況を含む。
【００１７】
用語「治療有効量」は、処置を必要とする被験体または患者に投与される場合に、処置を達成するために十分な量を意味する。治療有効量は、処置される被験体および疾患状態、苦痛の重篤度、投与様式、ならびに、薬剤が、単独で投与されるか、または、１種以上の他の薬剤と組み合わせて投与されるか、に依存して変動し得る。所定の薬剤について、治療有効量は、当業者により決定され得る。
【００１８】
本発明と組み合わせて使用され得る、本明細書中で言及される全ての刊行物は、本願において記載される要素を説明および開示する目的で、本明細書中に参考として援用される。
【００１９】
本発明のさらなる説明において、まず、方法がさらに詳細に記載され、その後、この方法が用途を見出す代表的な適用、ならびにこの方法を実施する際の用途を見出す、代表的な組成物（例えば、薬学的組成物）、キットおよびシステムが検討される。
【００２０】
（方法）
上でまとめたように、本発明は、細胞増殖性疾患に罹患する被験体を処置する方法を提供する。本発明の方法の対象となる、標的の細胞増殖性疾患は、変異レセプターチロシンキナーゼの存在により特徴付けられるものである。遺伝子の変異（例えば、点変異または染色体転座）の結果として、このような変異レセプターチロシンキナーゼは、恒常的に活性である。従って、変異レセプターチロシンキナーゼは、本発明に従って処置される被験体において検出可能である。特定の実施形態において、本発明の方法に従って処置される、被験体を苦しめる疾患は、少なくとも部分的に、変異レセプターチロシンキナーゼによって引き起こされる疾患として見られ得る。
【００２１】
その処置が本発明の方法の対象となる細胞増殖性疾患を特徴付ける、変異レセプターチロシンキナーゼは、多くの実施形態において、それらが存在する細胞上で、不死化され、そしてしばしば、過剰増殖性の表現型を与える変異チロシンキナーゼである。換言すれば、対象の変異チロシンキナーゼを発現する細胞は、不死化され、そしてしばしば、過剰増殖性の表現型を有する細胞である。「不死化される」とは、細胞が、Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．，２００２，８２，３２３−３３３に記載されるアッセイを用いて決定した場合に不死であることを意味する。「過剰増殖性」とは、細胞が、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ，２００２，１：４２１−４３２に記載されるアッセイを用いて決定した場合に、正常な速度を上回る速度で分裂することを意味する。多くの実施形態において、変異レセプターチロシンキナーゼは、恒常的にシグナル伝達する、すなわち、そのシグナル伝達が、野生型のレセプターチロシンキナーゼを制御する正常な調節に供されないように変異された遺伝子産物である。
【００２２】
レセプターチロシンキナーゼは、変異チロシンキナーゼであるので、野生型チロシンキナーゼ（レセプターチロシンキナーゼは、この何らかの様式でこの野生型チロシンキナーゼの変異体である）とは異なり、ここで、この差は、変異チロシンキナーゼを有する細胞に不死およびアポトーシス抵抗性の表現型をもたらす。「アポトーシス抵抗性」とは、細胞が、プログラムされた細胞死（アポトーシス）を促進する刺激に対してあまり感受性でないことを意味する。
【００２３】
変異チロシンキナーゼが融合タンパク質である特定の実施形態において、変異チロシンキナーゼは、置換変異体または欠失変異体であり得る。
【００２４】
変異チロシンキナーゼが融合タンパク質である場合、この融合タンパク質は、代表的に、異なるタンパク質に由来する（すなわち、Ｃ末端チロシンキナーゼが得られたタンパク質と同じタンパク質に由来しない）Ｎ末端ドメインに、直接、または、連結ドメインを介してのいずれかで融合された、Ｃ末端チロシンキナーゼドメインを有することによって特徴付けられる。特定の実施形態において、Ｎ末端ドメインのＣ末端チロシンキナーゼドメインへの融合は、恒常的に活性なキナーゼドメインともたらすか、または、このようなキナーゼドメインを提供し、この恒常的な活性が、細胞に不死の表現型を与える。このような融合タンパク質の例は、例えば、Ｇｒｉｆｆｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，２００３，１００，７８３０−７８３５，Ｃｏｏｌｓら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，２００３，３４８，１２０１−１２１４、およびＵＳ２００４／００４５０４４（公開第１０／６３７，３５６号）（このうち、後者は、本明細書中に参考として援用される）に記載される。
【００２５】
特定の実施形態において、変異レセプターチロシンキナーゼは、チロシンキナーゼのＰＤＧＦＲスーパーファミリーのメンバーであるレセプターキナーゼの群に入る。ＰＤＧＦＲスーパーファミリーの代表的な特定のチロシンキナーゼとしては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：Ｆｌｔ３、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ｃ−ＫｉｔおよびＶＥＧＦＲ−２。特定の実施形態において、変異チロシンキナーゼは、第４染色体のチロシンキナーゼの変異体であり、「第４染色体のチロシンキナーゼ」により、ゲノムコード配列が、人に局在化された、チロシンキナーゼを意味する。関心のある代表的な特定の第４染色体のチロシンキナーゼとしては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：ＰＤＧＦＲα、ｃ−ＫｉｔおよびＶＥＧＦＲ−２。なお別の実施形態において、変異レセプターチロシンキナーゼは、チロシンキナーゼのＰＤＧＦＲスーパーファミリーのメンバーではなく、ここで、関心のある代表的な非ＰＤＧＦＲスーパーファミリーチロシンキナーゼとしては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ３、Ｒｅｔ、ＡＬＫなど。関心のある非ＰＤＧＦＲスーパーファミリーチロシンキナーゼの別の例は、ＥＧＦＲである。
【００２６】
（ＣＤＫ４インヒビター）
関心のあるＣＤＫ４（サイクリン依存性キナーゼ４）インヒビターは、最も広い意味において、ＣＤＫ４の活性を阻害し得るあらゆる化合物であり得る。従って、２種以上の異なるＣＤＫ（例えば、ＣＤＫ１、ＣＤＫ２およびＣＤＫ４）の活性を阻害し得る全般的なＣＤＫインヒビターに関心がある。また、ＣＤＫ４選択的なインヒビターにも関心がある。ＣＤＫ４およびＣＤＫ６は、実質的に識別不能な生化学特性を有する、密接に関連するキナーゼであることが、現在理解されている。ヒトＣＤＫ４およびＣＤＫ６をコードするアミノ酸および核酸の配列は、それぞれ、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＭ＿００００７５およびＮＭ＿００１２５９で見られ得る。Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号Ｕ３７０２２がまた、ＣＤＫ４を指す。本明細書中で使用される場合、ＣＤＫ４インヒビターとは、ＣＤＫ４またはＣＤＫ６の活性を阻害することが実証され得る化合物を指す。所定のインヒビターは、その決定されたＣＤＫ４に対する阻害活性が、その決定されたＣＤＫ４およびＣＤＫ６以外のＣＤＫ（例えば、ＣＤＫ１、ＣＤＫ２など）に対する阻害活性よりも、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、または少なくとも２５倍以上強力である場合に、ＣＤＫ４選択的であると考えられる。
【００２７】
化合物のＣＤＫ４阻害活性を決定するための多数のアッセイが公知であり、代表的なこのようなアッセイは、米国特許第６，０４０，３２１号；同第６，５６９，８７８号などに記載されており、ここで、用途を見出す代表的なインビトロアッセイは、所定の化合物が、ＣＤＫ４のタンパク質基質へと放射標識したリン供与基を取り込む能力を阻害する能力を、時間依存性の様式で評価する。
【００２８】
代表的な特異的なＣＤＫ４インヒビターとしては、以下の化合物が挙げられるがこれらに限定されない。特定の実施形態において、関心があるのは、天然に存在するインドロカルバゾールアルシリアフラビン（ａｒｃｙｒｉａｆｌａｖｉｎ）Ａ（１）
【００２９】
【化１】
2007513967.tif 000003
、ならびに、置換インドロカルバゾール（例えば、Ｚｈｕら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００３，４６，２０２７−２０３０を参照のこと）（例えば、上記１において、１および２と標識された位置に、フルオロ置換基およびメチル置換基を有する、置換インドロカルバゾール）である。他の関心のある誘導体としては、米国特許出願公開第２００３／０２２９０２６号および同第２００４／００４８９１５号（すなわち、それぞれ、ＷＯ  ０１／４４２４７およびＷＯ  ０２／２８８６１と同等）に記載されるものであり、これらは、インドロ［６，７−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−６，８−ジオンを強力なＣＤＫ４インヒビターとして開示する。
【００３０】
特定の実施形態において、関心があるのは、米国特許第４，９００，７２７号に開示される、半合成フラボピリドール（２）（アルボシジブ（ａｌｖｏｃｉｄｉｂ）としても公知）
【００３１】
【化２】
2007513967.tif 000004
；ならびに、米国特許第５，７３３，９２０号および同第５，８４９，７３３号に報告されたような、フラボピリドールのアナログである。しかし、特定の実施形態において、フラボピリドールまたはその誘導体が使用され得ない。
【００３２】
また、特定の実施形態において、関心があるのは、ジアリール尿素誘導体であり、その一例は、化合物３
【００３３】
【化３】
2007513967.tif 000005
であり、このような化合物は、ＥＰ１１９９３０６  Ａ１に開示される。さらに、米国特許出願公開第２００３／０２０３９０７号（すなわち、ＥＰ１２９５８７８  Ａ１と同等）は、ＣＤＫ４活性およびＣＤＫ６活性を有する構造的に関連する２（１Ｈ）−ピラジノン縮合した芳香族または複素環式の誘導体を記載し、これらの化合物もまた関心がある。
【００３４】
また、関心があるのは、例えば、米国特許出願公開第２００２／０１５１５５４号（現在は、米国特許第６，７５６，３７４号）に報告されたようなジアミノチアゾールであり、このような化合物の具体的な例は、研究コードＲｏ−０５０６２２０で示される化合物（４）：
【００３５】
【化４】
2007513967.tif 000006
である。
【００３６】
また、特定の実施形態において、関心があるのは、米国特許第６，１５０，３５９号に開示されるような、一般構造５のナフチリジノン
【００３７】
【化５】
2007513967.tif 000007
米国特許第６，４９８，１６３号に開示されるような、一般構造６のピリド［２，３−ｄ］ピリミジン
【００３８】
【化６】
2007513967.tif 000008
および米国特許出願公開第２００３／０１４９００１号に開示されるような、一般構造７の２−（ピリジン−２−イルアミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−オン
【００３９】
【化７】
2007513967.tif 000009
であり、上記式において、点線は、任意の結合を表し、置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８、Ｒ９、Ｘ、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＷは、それぞれの公報において規定される。特に、米国特許出願公開第２００３／０１４９００１号は、研究コードＰＤ−３３２９９１で示される、６−アセチル−８−シクロペンチル−５−メチル−２−［５−（１−ピペラジニル）ピリジン−２−イルアミノ］ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（７ａ）
【００４０】
【化８】
2007513967.tif 000010
を開示する。
【００４１】
ＣＤＫ４活性を阻害し、それゆえ関心のある化合物のさらなる例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：ＷＯ００／１２４８５および米国特許第６，５９３，３２６号に開示されるピリミジン誘導体、ＷＯ０１／１４３７５に開示されるイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン誘導体およびピラゾロ［２，３−ａ］ピリジン誘導体、米国特許出願公開第２００３／００８７９２３号に開示される４−アミノ−５−シアノ−２−アニロ−ピリミジン誘導体、米国特許第６，０４０，３２１号、同第６，２６２，０９６号、および同第６，５６９，８７８号に開示されるアミノチアゾール化合物；米国特許第６，６３０，４６４号（すなわち、ＷＯ９８／４９１４６と同等）に開示されるアクリドン誘導体およびベンゾチアジアジン誘導体；ならびに、米国特許第６，７２０，３３２号（すなわち、ＷＯ０２／２０５２４と同等）に開示されるオキシインドール誘導体。ＣＤＫ４インヒビターのなおさらなる例は、Ｔｏｏｇｏｏｄ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２００２，６，４７２−４７８，Ｔｏｏｇｏｏｄ，Ｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．，２００１，２１，４８７−４９８およびＣａｒｉｎｉら、Ｂｉｏｏｒｇａｎ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，２００１，１１，２２０９−２２１１に記載される。
【００４２】
さらなるＣＤＫ４阻害性化合物は、公知のＣＤＫ４阻害アッセイ（例えば、上記のような代表的なアッセイ）を用いて、当業者により容易に同定され得、このようにして同定されえた化合物もまた、本発明の方法における用途について関心がある。
【００４３】
上に示したように、本発明を実施する際に、ＣＤＫ４インヒビターの投与を必要とする被験体に投与されるＣＤＫ４インヒビターの量は、以下のより詳細に記載されるように、被験体を苦しめる状態を処置するための有効量であり、所定の方法において使用されるＣＤＫ４インヒビターの量は、少なくとも部分的に、そのインヒビターが、単独で投与されるか、または、１種以上のさらなる化合物と組み合わせて投与されるかに依存し得る。
【００４４】
（さらなるインヒビター）
特定の実施形態において、ＣＤＫ４インヒビターは、１種以上のさらなるタンパク質活性の１種以上のさらなるインヒビター（例えば、変異レセプターチロシンキナーゼのインヒビター（すなわち、変異レセプターチロシンキナーゼインヒビター）；ＭＥＫインヒビターなど）と組み合せて被験体に投与される。「〜と組み合わせて」とは、ある量のＣＤＫ４インヒビター薬剤が、ある量の１種以上のさらなるインヒビターと一緒に投与され、その結果、２種以上の異なるインヒビター（このうち、一方がＣＤＫ４インヒビターである）が、被験体に投与されることを意味する。特定の実施形態において、インヒビター薬剤は、別個に投与される（例えば、この場合、ＣＤＫ４インヒビターは、他のインヒビターの前または後に投与される）。なお他の実施形態において、インヒビター薬剤は、同時に投与される（例えば、この場合、インヒビターは、２種以上の別個の処方物として同時に投与されるか、または、被験体に投与される単一の組成物内に組み合わされる）。インヒビター薬剤が、別個に投与されるか、同時に投与されるかに関わらず、上で説明したように、薬剤は、本発明の目的のために、一緒に、または組み合わせて投与されると考えられる。２つの薬剤の投与経路は変化し得、代表的な投与経路は、以下により詳細に記載される。
【００４５】
ＣＤＫ４インヒビターと組み合わせて投与され得る２つの特定の代表的なインヒビターは、以下である：（１）変異レセプターチロシンキナーゼに対するインヒビター；および（２）ＭＥＫインヒビター。従って、特定の実施形態において、ＣＤＫ４インヒビターは、変異チロシンキナーゼインヒビターと組み合わせて投与される。なお他の実施形態において、ＣＤＫ４インヒビターは、ＭＥＫインヒビターと組み合わせて投与される。なお他の実施形態において、ＣＤＫ４インヒビターは、変異チロシンキナーゼインヒビターおよびＭＥＫインヒビターの両方と組み合わせて投与される。
【００４６】
（変異レセプターチロシンキナーゼインヒビター）
関心のあるレセプターチロシンキナーゼインヒビターは、最も広い意味において、処置される疾患状態を特徴付ける変異レセプターチロシンキナーゼの活性を阻害し得る任意の化合物であり得る。従って、２種以上の異なるチロシンキナーゼの活性を阻害し得る、全般的なチロシンキナーゼインヒビター、および、主に疾患状態を特徴付ける特定のレセプターチロシンキナーゼに対する特異的な阻害活性を示す選択的なインヒビターに、関心がある。種々の異なる型の薬剤が、チロシンキナーゼインヒビターとして使用され得、これらとしては、例えば、低分子薬剤、核酸薬剤（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉ）、ポリペプチド薬剤、モノクローナル抗体などが挙げられるがこれらに限定されない。
【００４７】
特定の実施形態において、薬剤は、米国特許第５，５２１，１８４号に記載されるピリミジン誘導体であり、その開示は、本明細書中に参考として援用される。これらの実施形態において、関心があるのは、式（Ｉ）のＮ−フェニル−２−ピリミジン−アミン：
【００４８】
【化９】
2007513967.tif 000011
または、少なくとも１個の塩形成基を有するこのような化合物の塩であり、ここで、
Ｒ１は、４−ピラジニル、１−メチル−１Ｈ−ピロリル、アミノ−もしくはアミノ−低級アルキル置換フェニルであって、ここで、各場合におけるアミノ基は、５員環の炭素原子に結合した、遊離、アルキル化、もしくはアシル化された、１Ｈ−インドリルもしくは１Ｈ−イミダゾリルであるか、または、環の炭素原子に結合した非置換もしくは低級アルキル置換ピリジルであり、そして、水素原子が、酸素によって置換されていないか、もしくは置換されており、
Ｒ２’およびＲ３’は、各々、独立して、他の水素もしくは低級アルキルであり、
１または２のラジカルＲ４’、Ｒ５’、Ｒ６’、Ｒ７’およびＲ８’は、各々、窒素、フッ素置換低級アルコキシもしくは式（ＩＩ）のラジカル：
-Ｎ（Ｒ９’）-Ｃ（＝Ｘ）-（Ｙ）ｋ-Ｒ１０  （ＩＩ）
であり、ここで、
Ｒ９’は、水素または低級アルキルであり、
Ｘは、オキソ、チオ、イミノ、Ｎ−低級アルキル−イミノ、ヒドロキシイミノ、またはＯ−低級アルキル−ヒドロキシイミノであり、
Ｙは、酸素または基ＮＨであり、
ｋは、０または１であり、そして
Ｒ１０は、少なくとも５の炭素原子を有する脂肪族ラジカル、または、芳香族ラジカル、芳香族−脂肪族ラジカル、環式脂肪族ラジカル、環式脂肪族−脂肪族ラジカル、複素環式ラジカル、もしくは複素環式−脂肪族ラジカルであり、
そして、残りのラジカルＲ４’、Ｒ５’、Ｒ６’、Ｒ７’およびＲ８’は、各々、独立して、他の水素、低級アルキル、または低級アルカノイル、トリフルオロメチル、遊離、エーテル化もしくはエステル化されたヒドロキシ、遊離、アルキル化もしくはアシル化されたアミノ、または、遊離もしくはエステル化されたカルボキシであり、上記低級アルキルは、非置換であるか、もしくは遊離もしくはアルキル化されたアミノ、ピペラジニル、ピペリジニル、ピロリジニルによって、もしくは、モルホリニルによって置換されている。
【００４９】
これらの実施形態において：
１−メチル−１Ｈ−ピロリルは、好ましくは、１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イルまたは１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イルである。
【００５０】
アミノ−もしくはアミノ−低級アルキル置換フェニルＲ１（各場合におけるアミノ基は、遊離であるか、アルキル化されているか、またはアシル化されている）は、任意の位置（オルト、メタまたはパラ）でフェニル置換されており、ここで、アルキル化されたアミノ基は、好ましくは、モノ−、もしくはジ−低級アルキルアミノ（例えば、ジメチルアミノ）であり、そして、アミノ低級アルキルの低級アルキル部分は、好ましくは、直鎖Ｃ-１〜Ｃ３アルキル（例えば、特に、メチルまたはエチル）である。
【００５１】
５員環の炭素原子に結合した１Ｈ−インドリルは、１Ｈ−インドール−２−イルまたは１Ｈ−インドール−３−イルである。
【００５２】
環の炭素原子に結合した、非置換もしくは低級アルキル置換されたピリジルは、低級アルキル−置換、または好ましくは非置換の、２−、または好ましくは３−もしくは４−ピリジル（例えば、３−ピリジル、２−メチル−３−ピリジル、４−メチル−３−ピリジルまたは４−ピリジル）である。窒素原子が酸素で置換されたピリジルは、ピリジンＮ−オキシド（すなわち、Ｎ−オキシド−ピリジル、例えば、Ｎ−オキシド−４−ピリジル）に由来するラジカルである。
【００５３】
フルオロ置換低級アルコキシは、少なくとも１個であるが、好ましくは、数個のフルオロ置換基を有する低級アルコキシ（特に、トリフルオロメトキシ、または、好ましくは、１，１，２，２−テトラフルオロ−エトキシ）である。
【００５４】
Ｘがオキソ、チオ、イミノ、Ｎ−低級アルキル−イミノ、ヒドロキシイミノまたはＯ−低級アルキル−ヒドロキシイミノである場合、基Ｃ＝Ｘは、それぞれ、上記の順序で、ラジカルＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、Ｃ＝Ｎ−Ｈ、Ｃ＝Ｎ−低級アルキル、Ｃ＝Ｎ−ＯＨまたはＣＮ−Ｏ−低級アルキルである。Ｘは、好ましくは、オキソである。
【００５５】
ｋは、好ましくは、０である。すなわち、基Ｙは存在しない。
【００５６】
Ｙは、存在する場合、好ましくは、基ＮＨである。
【００５７】
本文の範囲における用語「低級」とは、７個まで（７を含む）、好ましくは、４個まで（４を含む）の炭素原子を有するラジカルを示す。
【００５８】
低級アルキルＲ１’、Ｒ２’、Ｒ３’およびＲ９’は、好ましくは、メチルまたはエチルである。
【００５９】
少なくとも５個の炭素原子を有する脂肪族ラジカルＲ１０は、好ましくは、２２個以下の炭素原子、一般には、１０個以下の炭素原子を有し、そして、当該の置換もしくは好ましくは非置換の脂肪族炭化水素ラジカル、すなわち、当該の置換もしくは好ましくは非置換のアルキニル、アルケニル、または好ましくは、アルキルラジカル（例えば、Ｃ５〜Ｃ７アルキル（例えば、ｎ−ペンチル）である。芳香族ラジカルＲ１０は、２０個までの炭素原子を有し、そして、非置換であるか、または置換であり、例えば、各場合において、非置換もしくは置換ナフチル（例えば、特に、２−ナフチル、または好ましくは、フェニル）であり、この置換基は、好ましくは、シアノ、非置換もしくはヒドロキシ−、アミノ−もしくは４−メチル−ピペラジニル−置換の低級アルキル（例えば、特に、メチル）、トリフルオロメチル、遊離、エーテル化もしくはエステル化されたヒドロキシ、遊離、アルキル化もしくはアシル化されたアミノ、および遊離もしくはエステル化されたカルボキシからなる群より選択される。芳香族−脂肪族ラジカルＲ１０において、芳香族部分は、上で定義されたとおりであり、そして、脂肪族部分は、好ましくは、低級アルキル（例えば、特に、置換もしくは好ましくは非置換のＣ１〜Ｃ２アルキル（例えば、ベンジル））である。環式脂肪族ラジカルＲ１０は、特に、３０個まで、より特に、２０個まで、そして、最も特に、１０個までの炭素原子を有し、そして、単環式もしくは多環式であり、そして、置換もしくは好ましくは非置換である（例えば、シクロアルキルラジカル、特に、当該の５員もしくは６員のシクロアルキル  ラジカル（例えば、好ましくは、シクロヘキシル））。環式脂肪族−脂肪族ラジカルＲ１０において、環式脂肪族部分は、上で定義されたとおりであり、そして、脂肪族部分は、好ましくは、低級アルキル（例えば、特に、置換もしくは好ましくは非置換のＣ１〜Ｃ２アルキル）である。複素環式ラジカルＲ１０は、特に、２０個までの炭素原子を含み、そして好ましくは、５個もしくは６個の環員、および１〜３個の好ましくは窒素、酸素および硫黄から選択されるヘテロ原子を有する、飽和もしくは不飽和単環式のラジカル（特に、例えば、チエニルまたは２−、３−もしくは４−ピリジル、または二環式もしくは三環式ラジカルであって、この環式ラジカルにおいて、例えば、１または２のベンゼンラジカルが記載される単環式ラジカルへと環状化（ａｎｎｅｌｌａｔｅ）（縮合）している）である。複素環式−脂肪族ラジカルＲ１０において、複素環式部分は、上で定義されたとおりであり、そして、脂肪族部分は、好ましくは、低級アルキル（例えば、特に、置換もしくは好ましくは非置換のＣ１〜Ｃ２アルキル）である。
【００６０】
エーテル化ヒドロキシは、好ましくは、低級アルコキシである。エステル化ヒドロキシは、好ましくは、有機カルボン酸によりエステル化されたヒドロキシ（例えば、低級アルカン酸）、またはハロゲン化水素酸のような無機酸（例えば、低級アルカノイルオキシ）、または、特にハロゲン（例えば、ヨウ素、臭素、または特に、フッ素または塩素）である。
【００６１】
アルキル化されたアミノは、例えば、メチルアミノのような低級アルキルアミノ、または、ジメチルアミノのようなジ低級アルキルアミノである。アシル化アミノは、例えば、低級アルカノイルアミノまたはベンゾイルアミノである。
【００６２】
エステル化カルボキシは、例えば、メトキシカルボニルのような低級アルコキシカルボニルである。
【００６３】
置換フェニルラジカルは、５個までの置換基（例えば、フッ素）を有し得るが、特に、比較的大きな置換基の場合には、一般に、１〜３個の置換基のみで置換される。特に述べられ得る置換フェニルの例は、４−クロロ−フェニル、ペンタフルオロ−フェニル、２−カルボキシ−フェニル、２−メトキシ−フェニル、４−フルオロフェニル、４−シアノ−フェニル、および４−メチル−フェニルである。
【００６４】
式（Ｉ）の化合物における塩形成基は、塩基性または酸性の特性を有する基またはラジカルである。少なくとも１個の塩基性基または少なくとも１個の塩基性ラジカル（例えば、遊離アミノ基、ピラジニルラジカル、またはピリジルラジカル）を有する化合物は、例えば、無機酸（例えば、塩酸、硫酸またはリン酸）と、または、適切な有機カルボン酸もしくはスルホン酸（例えば、脂肪族モノ−もしくはジ−カルボン酸（例えば、トリフルオロ酢酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、ヒドロキシマレイン酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸またはシュウ酸）、またはアミノ酸（例えば、アルギニンまたはリジン）、芳香族カルボン酸（例えば、安息香酸、２−フェノキシ−安息香酸、２−アセトキシ安息香酸、サリチル酸、４−アミノサリチル酸）、芳香族−脂肪族カルボン酸（例えば、マンデル酸または桂皮酸）、複素芳香族カルボン酸（例えば、ニコチン酸またはイソニコチン酸）、脂肪族スルホン酸（例えば、メタン−、エタン−または２−ヒドロキシエタン−スルホン酸）、あるいは芳香族スルホン酸（例えば、ベンゼン−、ｐ−トルエン−またはナフタレン−２−スルホン酸））と、酸付加塩を形成し得る。数個の塩基性基が存在する場合、モノ−もしくはポリ−酸付加塩が、形成され得る。
【００６５】
ラジカルＲ１０内に酸性基（例えば、遊離カルボキシ基）を有する式（Ｉ）の化合物は、金属塩もしくはアンモニウム塩（例えば、アルカリ金属塩もしくはアルカリ土類金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩もしくはカルシウム塩、または、アンモニアもしくは第三級モノアミンのような適切な有機アミン（例えば、トリエチルアミンまたはトリ−（２−ヒドロキシエチル）−アミン）、または、複素環式塩基（例えば、Ｎ−エチルピペリジン、またはＮ，Ｎ’−ジメチル−ピペラジン）とのアンモニウム塩）を形成し得る。
【００６６】
酸性基および塩基性基の両方を有する式（Ｉ）の化合物は、内部塩を形成し得る。
【００６７】
これらの実施形態において、特に関心があるのは、本特許において記載したピリミジン誘導体であり、ここでは、Ｒ１’は、３−ピリジルであり、Ｒ２’、Ｒ３’、Ｒ５’、Ｒ６’およびＲ８’は、各々、水素であり、Ｒ４’は、メチルであり、そして、Ｒ７’は、式（ＩＩ）の基であり、この基において、Ｒ９’は、水素であり、Ｘはオキソであり、ｋは０であり、そして、Ｒ１０は、４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル］フェニルである。化学名４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル］−Ｎ−［４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］アミノ−フェニル］ベンズアミドメタンスルホネートを有するこの化合物のメシル酸塩は、現在、一般にメシル酸イマチニブとして公知であり、商標Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）の下で販売されている。
【００６８】
関心のあるなお他の実施形態において、薬剤は、メシル酸イマチニブではない。
【００６９】
また、関心があるのは、式（ＩＩＩ）のフタラジン化合物
【００７０】
【化１０】
2007513967.tif 000012
またはその塩であって、ここで、ｒは０〜２であり、ｎは０〜２であり；ｍは０〜４であり；Ｒ１１およびＲ１２は、（ｉ）各場合において低級アルキルであるか、または（ｉｉ）一緒になって、部分式（ＩＩＩ＊）：
【００７１】
【化１１】
2007513967.tif 000013
内のブリッジを形成するか、または（ｉｉｉ）一緒になって、部分式（ＩＩＩ＊＊）：
【００７２】
【化１２】
2007513967.tif 000014
内のブリッジを形成し、
ここで、上記式において、１個または２個の環員Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３およびＴ４は、窒素であり、そして、その残りは、各場合において、ＣＨであり；Ａ、Ｂ、ＤおよびＥは、ＮまたはＣＨであり、ここで、２個以下のこれらのラジカルは、Ｎであり；Ｇは、低級アルキレン、アシルオキシ−もしくはヒドロキシ−低級アルキレン、−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２−ＮＨ−、オキサ、チア、またはイミノであり；Ｑは、低級アルキル、特に、メチルであり；Ｒは、Ｈまたは低級アルキルであり；Ｘは、イミノ、オキサ、またはチアであり；Ｙは、アリール、ピリジル、または（非）置換のシクロアルキルであり；そして、Ｚは、独立して、一置換もしくは二置換のアミノ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、ヒドロキシ、エーテル化もしくはエステル化ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、エステル化カルボキシ、アルカノイル、カルバモイル、Ｎ−一置換−、もしくはＮ，Ｎ−二置換カルバモイル、アミジノ、グアニジノ、メルカプト、スルホ、フェニルチオ、フェニル−低級アルキルチオ、アルキルフェニルチオ、フェニルスルフィニル、フェニル−低級アルキルスルフィニル、アルキルフェニルスルフィニル、フェニルスルホニル、フェニル−低級アルキルスルホニル、またはアルキルフェニルスルホニルである；そしてここで、波線により特徴付けられる結合は、単結合または二重結合のいずれかである、化合物；あるいは、Ｙがピリジルもしくはシクロアルキルであり、Ｘがイミノであり、そして残りのラジカルが規定される場合に、Ｇが、低級アルキレン、−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＨ２−Ｓ−、オキサおよびチアを含む基から選択されるという条件で、上記化合物のＮ−オキシドである。このような化合物（例えば、ＰＴＫ７８７（Ｖａｔａｌａｎｉｂとしても公知）は、さらに、関連する文献、ＷＯ９８／３５９５８、米国特許出願番号０９／８５９８５８（現在、米国特許第６，５１４，９７４号）、および米国特許第６，２５８，８１２号に記載され、後者の文献の開示は、本明細書中に参考として援用される。
【００７３】
また、特定の実施形態において関心があるのは、式（ＩＶ）のプロテインチロシンキナーゼインヒビター：
【００７４】
【化１３】
2007513967.tif 000015
またはその薬学的に受容可能な塩であり、ここで：
（ｉ）Ｒ１３は、水素原子またはＣ１−４アルキル基を表し；そして、Ｒ１４は、式−Ａ１−ＮＲ１７Ｒ１８の基を表し、この式において、Ｒ１７およびＲ１８の各々は、独立して、水素原子またはＣ１−４アルキル基を表し、そして、Ａ１は、（ＣＨ２）ｍ’、（ＣＨ２）ｎ’−Ａ２−（ＣＨ２）ｐ’または（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｑ’ＣＨ２ＣＨ２を表し、ここで、ｍ’は、２〜１０の整数であり、ｎ’およびｐ’の各々は、１〜６の整数であり、Ａ２は、ＣＨ＝ＣＨ、フェニレン、ビフェニレン、シクロヘキシレンまたはピペラジニレンであり、そして、ｑ’は、１、２または３である；
（ｉｉ）Ｒ１３およびＲ１４は、一緒になって、−Ａ３−ＮＲ１９−Ａ４−を表し、この式において、Ａ３およびＡ４の各々は、独立して、（ＣＨ２）ｒ’または（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ’ＣＨ２ＣＨ２を表し、ここで、ｒ’は、２〜６の整数であり、ｓ’は、１、２または３であり、そしてＲ１９は、水素原子またはＣ１−４アルキル基を表す；
（ｉｉｉ）Ｒ１３およびＲ１４は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、ピペリジニル基を表し、このピペリジニル基は、４位に式−Ａ５−Ｒ２０の置換基を有し、この式において、Ａ５は、Ｃ１−４アルキレンを表し、そしてＲ２０は、ピペリジン−４−イルを表すか；あるいは
（ｉｖ）Ｒ１３およびＲ１４は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、ピロリジニル、ピペリジニルまたはモルホリノ基を表し；そして
Ｒ１５およびＲ１６は、各々独立して、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルコキシ基、非置換であるか、もしくは１個または２個の置換基で置換されたフェニル基を表し、ここで、この置換基は、独立して、ハロゲン原子、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルコキシ基、式Ｒ２１Ｓ（Ｏ）２ＮＲ２２−の基、式Ｒ２３Ｎ（Ｒ２４）Ｓ（Ｏ）２−の基、式Ｒ２５Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２６）−の基、または式Ｒ２７Ｎ（Ｒ２８）Ｃ（Ｏ）−の基から選択され、ここで、Ｒ２１、Ｒ２３、Ｒ２５およびＲ２７の各々は、独立して、Ｃ１−４アルキル基、または非置換であるか、もしくは１個または２個の置換基で置換されたフェニル基を表し、ここで、この置換基は、独立して、ハロゲン原子、Ｃ１−４アルキル基およびＣ１−４アルコキシ基から選択され、そして、Ｒ２２、Ｒ２４、Ｒ２６およびＲ２８の各々は、独立して、水素原子またはＣ１−４アルキル基を表す。
【００７５】
ＴＨＲＸ−１６５７２４として同定される、特に関心がある式（ＩＶ）のインヒビターは、Ｒ１３およびＲ１４およびそれらが結合している窒素が、ピペラジニル環を形成し、そして、Ｒ１５およびＲ１６が、両方とも水素であるものである。式（ＩＶ）の化合物は、米国特許出願第６０／３４３，７４６号、同第６０／３４３，８１３号および米国特許出願公開第２００３／０１７１３７８号（現在、米国特許第６，６８６，３６２号）に記載され、これらの文献の開示は、本明細書中に参考として援用される。
【００７６】
特定の実施形態において、関心がある化合物の別の群は、式（Ｖ）の化合物：
【００７７】
【化１４】
2007513967.tif 000016
ならびに、その薬学的に受容可能な異性体、塩、水和物、溶媒和物およびプロドラッグであり、ここで：
Ｒ２９は、−ＣＮ、−Ｘ、−ＣＸ３、−Ｒ３３、−ＣＯ２Ｒ３３、−ＳＯ２Ｒ３３、直鎖もしくは分枝鎖の−Ｏ−Ｃ１−８アルキル、−Ｏ−フェニル、−Ｏ−ナフチル、−Ｏ−インドリルおよび−Ｏ−イソキノリニルからなる群より選択され、ここで、Ｘは、ハロゲンであり、そして、は水素、または直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルキルであり、
Ｒ３０およびＲ３２は、各々、独立して、−Ｏ−ＣＨ３、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ３、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｏ−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ、−Ｏ（ＣＨ２）−ＳＯ２−Ｒ３３、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ（Ｒ３４）ＣＨ２−Ｒ３１および−Ｏ（−ＣＨ２）ｎ”−Ｒ３１からなる群より選択され、ここで、Ｒ３４は、−ＯＨ、−Ｘ、または直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルキルであり、ｎ”は、２または３であり、そして
Ｒ３１は、−ＯＨ、−Ｏ−ＣＨ３、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＮＨ２、−Ｎ（−ＣＨ３）２、−ＮＨ−ＣＨ２−フェニル、−ＮＨ−フェニル、−ＣＮ、−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２、チアゾリル、オキサゾリル、ピロリジニル、４，４−ジフルオロピペリジニル、３，３，−ジフルオロピペリジニル、３，３−ジフルオロピロリジニル、モルホリニル、ピペリジニル、イミダゾリル、１，２，３，−トリアゾリル、メチルピペリジニル、チオモルホリニル  １，１−ジオキシド−チオモルホリニル、−Ｏ−４−ピリジニル、１Ｈ−テトラゾリル、ピペラジニルおよび４−メチルピペラジニルからなる群より選択される。
【００７８】
式（Ｖ）の化合物の中でも、特に関心があるのは、ＭＬＮ５１８として同定される化合物であり、ここで、Ｒ２９は、−Ｏ−イソプロピルであり、Ｒ３０は、−Ｏ−（ＣＨ２）３−４−モルホリニルであり、そして、Ｒ３２は、−ＯＣＨ３である。式（Ｖ）の化合物は、さらに、ＷＯ０２／１６３５１（本明細書中に参考として援用される）に記載される。
【００７９】
特定の実施形態において、関心のある化合物のなお別の群は、式（ＶＩ）の化合物：
【００８０】
【化１５】
2007513967.tif 000017
またはその薬学的に受容可能な塩であり、ここで：
Ｒ３５は、水素、ハロ、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、複素脂環式、ヒドロキシ、アルコキシ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４８、−ＮＲ４６Ｒ４７、−（ＣＨ２）ｒ＊Ｒ４９および−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４２Ｒ４３からなる群より選択され；
Ｒ３６は、水素、ハロ、アルキル、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、シアノ、−ＮＲ４６Ｒ４７、−ＮＲ４６Ｃ（Ｏ）Ｒ４７、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４８、アリール、ヘテロアリールおよび−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ４６Ｒ４７からなる群より選択され；
Ｒ３７は、水素、ハロ、アルキル、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４８、−ＮＲ４６Ｒ４７、アリール、ヘテロアリール、−ＮＲ４６Ｓ（Ｏ）２Ｒ４７、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ４６Ｒ４７、−ＮＲ４６Ｃ（Ｏ）Ｒ４７、−ＮＲ４６Ｃ（Ｏ）ＯＲ４７および−Ｓ（Ｏ）２Ｒ５３からなる群より選択され、ここで、Ｒ５３は、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアラルキルであり；
Ｒ３８は、水素、ハロ、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシおよび−ＮＲ４６Ｒ４７からなる群より選択され；
Ｒ３９は、水素、アルキルおよび−Ｃ（Ｏ）Ｒ４０からなる群より選択され；
Ｒ４１は水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ５０および−Ｃ（Ｏ）Ｒ４０からなる群より選択され；
Ｒ４２およびＲ４３は、水素、アルキルおよびアリールからなる群より独立して選択され；
Ｒ４０は、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、−Ｎ（Ｒ４４）（ＣＨ２）ｎ＊Ｒ４５および−ＮＲ４６Ｒ４７からなる群より選択され；
Ｒ４４は、水素およびアルキルからなる群より選択され；
Ｒ４５は、−ＮＲ４６Ｒ４７、ヒドロキシ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４８、アリール、ヘテロアリール、−Ｎ＋（Ｏ−）Ｒ４６Ｒ４７、−Ｎ（ＯＨ）Ｒ４６および−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒａからなる群より選択され、ここで、Ｒａは、非置換のアルキル、ハロアルキルもしくはアラルキルであり；
Ｒ４６およびＲ４７は、水素、アルキル、ヒドロキシアルキルアミノで置換された低級アルキル、シアノアルキル、シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より独立して選択されるか；または
Ｒ４６およびＲ４７は、組み合わさって複素環式基を形成し得；
Ｒ４８は、水素、ヒドロキシ、アルコキシおよびアリールオキシからなる群より選択され；
Ｒ４９は、ヒドロキシ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４８、−ＮＲ４６Ｒ４７および−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４６Ｒ４７からなる群より選択され；
Ｒ５０は、アルキル、シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され；そして
ｎ＊およびｒ＊は、独立して、１、２、３または４である。
【００８１】
ＳＵ１１２４８として同定される、特に関心のある式（ＶＩ）の化合物は、Ｒ３６がフルオロであり、Ｒ３５、Ｒ３７およびＲ３８が各々水素であり、Ｒ３９およびＲ４１が各々メチルであり、そしてＲ４０が−Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２）２Ｎ（Ｃ２Ｈ５）２である、化合物である。式（ＶＩ）の化合物は、米国特許第６，５７３，２９３号（すなわち、ＷＯ０１／６０８１４と同等）に記載され、この開示は、本明細書中に参考として援用される。
【００８２】
また関心があるのは、他のプロテインチロシンキナーゼインヒビターである。このようなインヒビターとしては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：スタウロスポリン（ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ）誘導体（研究コードＰＫＣ−４１２または一般名ミドスタウリン（ｍｉｄｏｓｔａｕｒｉｎｅ）で示され、ＷＯ０３／０３７３４７において、脱レギュレートされたＦｌｔ３レセプターチロシンキナーゼ活性が関与する疾患の処置に有用であると記載される化合物を含む）、および２００２年８月９日に出願された、米国仮特許出願番号６０／４０２，３３０および２００３年１月１６日に出願された、米国仮特許出願番号６０／４４０，４９１（これらの開示は、本明細書中に参考として援用される）の付録Ａに見られるチロシンキナーゼインヒビター。
【００８３】
（ＭＥＫインヒビター）
関心のあるＭＥＫインヒビターは、最も広い意味において、ＭＥＫの活性を阻害し得る任意の化合物であり得る。２つの異なる遺伝子によりコードされる、２つのＭＥＫプロテインキナーゼ異性体が同定されている：ＭＥＫ１（ＭＡＰＫ／ＥＲＫキナーゼ１；プロテインキナーゼ、マイトジェン活性型、キナーゼ１；ＰＲＫＭＫ１  ＭＫＫ１；またはＭＡＰＫＫ１としても命名されている）およびＭＥＫ２（ＭＡＰＫ／ＥＲＫキナーゼ２；プロテインキナーゼ、マイトジェン活性型、キナーゼ２；ＰＲＫＭＫ２  ＭＫＫ２；またはＭＡＰＫＫ２としても命名されている）。ヒトＭＥＫ１およびＭＥＫ２をコードするアミノ酸配列および核酸配列は、それぞれ、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号Ｌ０５６２４およびＬ１１２８５において見出され得る。本明細書中で使用される場合、ＭＥＫインヒビターとは、ＭＥＫ１またはＥＭＫ２の活性を阻害することが実証され得る化合物を指す。
【００８４】
１つの代表的なＭＥＫインヒビターは、２−（２−アミノ−３−メトキシフェニル）−４−オキソ−４Ｈ−［１］ベンゾピラン（８）
【００８５】
【化１６】
2007513967.tif 000018
であり、これは、研究コードＰＤ−０９８０５９で示され、そして、米国特許第５，５２５，６２５号に記載されている。
【００８６】
別の関心のあるＭＥＫインヒビターは、Ｆａｖａｔａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９８，２７３，１８６２３−１８６３２に記載されるような、Ｕ−０１２６、（１，４−ジアミノ−２，３−ジシアノ−１，４−ビス［２−アミノフェニルチオ］ブタジエン（９）
【００８７】
【化１７】
2007513967.tif 000019
である。
【００８８】
Ｌ−７８３２７７（１０）（Ｚｈａｏら、Ｊ．ｏｆ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，１９９９，５２，１０８６−１０９４およびＧＢ２３２３８４５）およびＲｏ−０９−２２１０（１１）（Ｗｉｌｌｉａｍｓら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９８，３７，９５７９−９５８５）により例示される、天然に存在するレソリシル酸（ｒｅｓｏｒｃｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）ラクトンもまたＭＥＫインヒビターとして関心がある：
【００８９】
【化１８】
2007513967.tif 000020
。
【００９０】
また、ＭＥＫインヒビターとして関心があるのは、４−アニリノ−３−シアノ−６，７−ジアルコキシキノリノンであり、Ｚｈａｎｇら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，２００１，１１，１４０７−１４１０により報告された、化合物（１２）
【００９１】
【化１９】
2007513967.tif 000021
は、その強力な例である。
【００９２】
また、ＭＥＫインヒビターとして関心があるのは、米国特許出願公開第２００３／００７８４２８号に開示されるような、ブロモ−またはヨードフェニルアミノベンズヒドロキサム酸誘導体（例えば、化合物１３（ＰＤ−１８４３５２またはＣＩ−１０４０として示される）：
【００９３】
【化２０】
2007513967.tif 000022
である。
【００９４】
１３におけるようなジアリールアミンコアを有する関心のあるＭＥＫインヒビターのさらなる構造的に関連する例としては、以下が挙げられる：米国特許第６，２５１，９４３号および同第６，３１０，０６０号に開示されるフェニルアミノ安息香酸、ベンズアミドおよびベンジルアルコール誘導体；米国特許第６，４４０，９６６号に開示されるベンゼンスルホンアミド誘導体；米国特許第６，４５５，５８２号に開示されるスルホヒドロキサム酸ジアリールアミン誘導体；米国特許第６，５０６，７９８号に開示される、４−アリールアミノ、４−アリールオキシ、および４−アリールチオジアリールアミン誘導体；米国特許出願公開第２００３／０２２５０７６号（すなわち、ＷＯ０１／６８６１９と同等）に開示される５−アミド置換誘導体；ならびに米国特許第６，７７０，７７８号および米国特許出願公開第２００４／０００６２４５号（すなわち、それぞれ、ＷＯ０３／０６２１８９およびＷＯ０３／０６２１９１と同等）に開示される、Ｎ−４置換フェニル−アントラニル酸ヒドロキサム酸エステル誘導体。他の例としては、米国特許出願公開第２００３／０２１６４６０号および米国特許出願公開第２００３／０２３２８６９号（すなわち、ＷＯ０３／０７７９１４と同等）に開示される、Ｎ３アルキル化ベンゾイミダゾール誘導体が挙げられる。なお別の関連する例は、米国特許出願公開第２００４／００５４１７２号に開示される、ＰＤ−３２５９０１と示される化合物である。
【００９５】
他のＭＥＫインヒビターの例としては、米国特許第６，４６９，００４号に開示されるベンゾ複素環誘導体が挙げられる。ＭＥＫインヒビターであることが分かっている化合物のさらなる例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：それぞれ、ＷＯ００／６８２０１、米国特許第６，８０９，１０６号（すなわち、ＷＯ００／６８２００と同等）および米国特許第６，６３８，９４５号（すなわち、ＷＯ００／６８１９９と同等）に開示される、一般構造式１４、１５および１６のキノリノン誘導体
【００９６】
【化２１】
2007513967.tif 000023
そして、ＷＯ０３／０４７５８５に開示される、一般式１７のベンゾフラニル置換３−シアノキノリン誘導体、ならびに、ＷＯ０３／０５３９６０に開示される、一般式１８の関連する３−シアノキノリン誘導体
【００９７】
【化２２】
2007513967.tif 000024
。ここで、変数の全ては、それぞれの刊行物において定義される。関心のあるなお他のＭＥＫインヒビターとしては、Ｋｏｌｃｈ，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ．，２００２，３，７０９−７１８に記載されるものが挙げられる。
【００９８】
さらなるＭＥＫ阻害性化合物は、公知のＭＥＫ阻害アッセイを用いて当業者により容易に同定され得る。化合物のＭＥＫ阻害活性を決定するための多くのアッセイが当該分野で公知であり、代表的なこのようなアッセイは、米国特許第６，２５１，９４３号；同第６，３１０，０６０号；同第６，４４０，９６６号；同第６，４５５，５８２号；同第６，４６９，００４号；および同第６，５０６，７９８号など（これらの開示は、本明細書中に参考として援用される）に記載される。
【００９９】
（投薬量（ｄｏｓａｇｅ））
任意の所定の投薬において、被験体に投与される各薬剤の量は、薬剤の性質、処置される状態の性質、処置される宿主の性質などに依存して変化し得る。当業者は、用量レベルが、特定の化合物の機能、送達ビヒクルの性質などに依存して変化し得ることを容易に理解する。所定の化合物および処置プロトコールについての特異的な投薬量は、種々の手段によって、当業者により容易に決定される。
【０１００】
被験体に投与されるＣＤＫ４インヒビターの量は、被験体を苦しめる状態（例えば、被験体を苦しめる細胞増殖性疾患）について、実施されるプロトコールを鑑みて、被験体を処置するために有効な量である。特定の代表的な実施形態において、宿主に投与されるＣＤＫ４インヒビターの量は、１日あたり、約０．０１ｍｇ〜約５０００ｍｇの範囲にわたる。
【０１０１】
使用される、すなわち、被験体に投与される場合の変異レセプターチロシンキナーゼインヒビターの量は、被験体を苦しめる状態（例えば、被験体を苦しめる細胞増殖性疾患）について、実施されるプロトコールを鑑みて、被験体を処置するために有効な量である。特定の代表的な実施形態において、宿主に投与されるチロシンキナーゼインヒビターの量は、１日あたり、約０．０１ｍｇ〜約５０００ｍｇの範囲にわたる。
【０１０２】
被験体に投与されるＭＥＫインヒビターの量は、被験体を苦しめる状態（例えば、被験体を苦しめる細胞増殖性疾患）について、実施されるプロトコールを鑑みて、被験体を処置するために有効な量である。特定の代表的な実施形態において、宿主に投与されるＭＥＫインヒビターの量は、１日あたり、約０．０１ｍｇ〜約５０００ｍｇの範囲にわたる。
【０１０３】
（投与経路）
本発明の方法を実施する際に、活性な薬剤は、単一の日用量で、または、１日あたり複数の用量で投与され得る。処置レジメンは、長期間にわたって、例えば、数日、または１〜６週間にわたって、または、より長い期間（無期限を含む）にわたっての投与を必要とし得る。投与される用量あたりの量、または投与される総量は、感染の性質および重篤度、患者の年齢および全身の健康状態のような要因に依存し、代表的な量が、上に提供される。
【０１０４】
本発明の方法において、活性な薬剤は、融合タンパク質の活性の所望される変調を達成し得る任意の従来の手段を用いて、標的化した細胞に投与され得る。従って、この薬剤は、治療的な投与のための種々の処方物中に組み込まれ得る。より具体的には、本発明の薬剤は、適切な、薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤と組み合わせることによって、薬学的組成物中に処方され得、そして、固形、半固形、液体または気体の形態の調製物（例えば、錠剤、カプセル、散剤、顆粒、軟膏、溶液、坐剤、注射剤、吸入剤およびエアロゾル）に処方され得る。従って、薬剤の投与は、種々の経路（経口、舌下、直腸、非経口、腹腔内、皮内、腔内（ｉｎｔｒａｃｈｅａｌ）を含む）の投与で達成され得る。
【０１０５】
種々の宿主が、本発明の方法に従って処置可能である。一般に、このような宿主は、「哺乳動物（ｍａｍｍａｌｓ）」または「哺乳動物（ｍａｍｍａｌｉａｎ）」であり、これらの用語は、哺乳動物の分類に入る生物を説明するために広く用いられ、肉食動物目（例えば、イヌおよびネコ）、げっ歯類目（例えば、マウス、モルモットおよびラット）、霊長類目（例えば、ヒト、チンパンジーおよびサル）を含む。多くの実施形態において、宿主はヒトである。
【０１０６】
（有用性）
本発明の方法は、種々の異なる状態の処置において用途を見出す。上に示したように、処置によって、宿主を苦しめる状態に関連する症状の少なくとも緩和が達成されることを意味し、緩和とは、広い意味において、少なくとも、処置される状態に関連するパラメータ（例えば、症状）の程度の減少を指すために使用される。従って、処置はまた、病理学的状態、もしくは少なくともそれに関連する症状が、完全に阻害（例えば、発生を回避）されるか、または、停止（例えば、終結）され、その結果、宿主が、もはやその状態、もしくは、少なくともその状態を特徴付ける症状を罹患していない状況を含む。
【０１０７】
多くの実施形態において、状態は、上にまとめたように、変異レセプターチロシンキナーゼの存在により特徴付けられる細胞増殖性疾患の状態である。細胞増殖の調節不全に関連する多くの障害（すなわち、細胞過剰増殖性障害）が存在する。関心のある状態としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：白血病（例えば、ＰＤＧＦＲレセプターファミリーに属する変異レセプターチロシンキナーゼの存在により特徴付けられる白血病（例えば、ＡＭＬ（変異Ｆｌｔ３）、ＨＥＳ（変異ＰＤＧＦＲα）、好酸球増加を伴う全身性肥満細胞病（変異ｃ−Ｋｉｔおよび変異ＰＤＧＦＲα）、慢性骨髄球性白血病（ＣＭＭＬ）（変異ＰＤＧＦＲβ）など）；変異非ＰＤＧＦＲレセプターキナーゼの存在により特徴付けられる白血病および骨髄増殖性障害（例えば、多発性骨髄腫（変異ＦＧＦＲ３）および８ｐ１１骨髄増殖性症候群（変異ＦＧＦＲ１）など）；固形腫瘍癌（例えば、変異ＰＤＧＦＲレセプターキナーゼの存在により特徴付けられるもの）（例えば、消化管間質腫瘍（変異ｃ−Ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲα）など）；変異非ＰＤＧＦＲレセプターキナーゼの存在により特徴付けられるもの（例えば、膀胱癌（ＦＧＦＲ３）、甲状腺癌腫（Ｒｅｔ）および未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＫ）など）、ならびに変異レセプターチロシンキナーゼの存在により特徴付けられる他の型の癌。
【０１０８】
（薬学的組成物）
本発明の１つの実施形態において、ＣＤＫ４インヒビター；変異レセプターチロシンキナーゼインヒビターおよびＭＥＫインヒビターのうちの少なくとも１種；および薬学的に受容可能なキャリアを含有する薬学的組成物が提供される。例えば、薬学的に受容可能な塩の形態の活性な薬剤が、上に記載されたように、本発明の方法において使用するための、経口投与用または非経口投与用に処方され得る。これらの実施形態において、活性な薬剤の全てを含む単一の処方物（すなわち、２種以上の活性な薬剤を含む１つの組成物）が提供される。例えば、化合物が、別個の処方物と組み合わせて投与される他の実施形態において、各々が、異なる活性な薬剤を含有する別個または異なる薬学的組成物が提供される。
【０１０９】
例示の目的で、活性な化合物は、従来の薬学的キャリアおよび賦形剤（すなわち、ビヒクル）と混合され得、そして、水溶液、錠剤、カプセル、エリキシル、懸濁剤、シロップ、ウェハーなどの形態で使用され得る。特定の実施形態において、このような薬学的組成物は、約０．１重量％〜約９０重量％の活性な化合物、より一般的には、約１重量％〜約３０重量％の活性な化合物を含有する。薬学的組成物は、一般的なキャリアおよび賦形剤（例えば、トウモロコシデンプンまたはゼラチン、ラクトース、デキストロース、スクロース、微結晶性セルロース、カオリン、マンニトール、リン酸二カルシウム、塩化ナトリウムおよびアルギン酸）を含み得る。本発明の処方物において一般的に使用される崩壊剤としては、クロスカルメロース、微結晶性セルロース、グリコール酸トウモロコシデンプンおよびアルギン酸が挙げられる。
【０１１０】
液体組成物は、一般に、懸濁剤、保存剤、界面活性剤、湿潤剤、矯味矯臭剤もしくは着色剤と共に、適切な液体キャリア（例えば、エタノール）中の、化合物または薬学的に受容可能な塩の懸濁液または溶液、グリセリン、ソルビトール、非水性溶媒（例えば、ポリエチレングリコール）、油または水から構成される。あるいは、液体処方物は、再構成可能な粉末から調製され得る。
【０１１１】
例えば、活性な化合物、懸濁剤、スクロースおよび甘味料を含有する粉末は、水を用いて再構成されて、懸濁液を形成し得る；そして、シロップは、活性成分、スクロースおよび甘味料を含有する粉末から調製され得る。
【０１１２】
錠剤の形態の組成物は、固形組成物を調製するために慣用的に使用される任意の適切な薬学的キャリアを使用して調製され得る。このようなキャリアの例としては、ステアリン酸マグネシウム、デンプン、ラクトース、スクロース、微結晶性セルロースおよび結合剤（例えば、ポリビニルピロリドン）が挙げられる。錠剤はまた、カラーフィルムコーティング、またはキャリアの一部として含められる色（ｃｏｌｏｒ）が提供され得る。さらに、活性な化合物は、親水性基材または疎水性基材を含有する錠剤としての、制御放出投薬形態で処方され得る。
【０１１３】
カプセルの形態の組成物は、例えば、活性な化合物および賦形剤を、硬性ゼラチンカプセル内に組み込むことによって、慣用的なカプセル化手順を用いて調製され得る。あるいは、活性な化合物および高分子量ポリエチレングリコールの半固形基材が調製され、硬性ゼラチンカプセルに充填され得るか；または、ポリエチレングリコール中の活性な化合物の溶液、もしくは食用油（例えば、液体パラフィンまたはヤシ油）中の懸濁液が、調製され、軟性ゼラチンカプセルに充填され得る。
【０１１４】
含まれ得る錠剤の結合剤は、アカシア、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ポリ−ビニルピロリドン（Ｐｏｖｉｄｏｎｅ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、スクロース、デンプンおよびエチルセルロースである。使用され得る潤滑剤としては、ステアリン酸マグネシウムまたは他の金属ステアリン酸塩、ステアリン酸、シリコーン流体、滑石、蝋、油およびコロイド状ケイ素が挙げられる。
【０１１５】
ペパーミント、ウィンターグリーン油、チェリーフレーバー（ｃｈｅｒｒｙ  ｆｌａｖｏｒｉｎｇ）などのような矯味矯臭剤がまた使用され得る。さらに、投薬形態の外見をより魅力的にし、製品の識別を補助するために、着色剤を添加することが望ましくあり得る。
【０１１６】
非経口投与された場合に活性な、本発明の化合物、およびその薬学的に受容可能な塩は、筋肉内、くも膜下腔内、または静脈内の投与のために処方され得る。
【０１１７】
筋肉内もしくはくも膜下腔内の投与のための代表的な組成物は、油（例えば、ラッカセイ油またはゴマ油）中の活性成分の懸濁液または溶液である。静脈内またはくも膜下腔内の投与のための代表的な組成物は、例えば、活性成分およびデキストロースもしくは塩化ナトリウム、または、デキストロースおよび塩化ナトリウムの混合物を含有する、滅菌の等張性溶液である。他の例は、乳酸リンガー注射液、乳酸リンガー＋デキストロース注射液、Ｎｏｒｍｏｓｏｌ−Ｍおよびデキストロース、Ｉｓｏｌｙｔｅ  Ｅ、アシル化リンガー注射液などである。必要に応じて、共溶媒（例えば、ポリエチレングリコール）、キレート化剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸）および抗酸化剤（例えば、メタ重亜硫酸ナトリウム）が、処方物中に含まれ得る。あるいは、溶液は、凍結乾燥されて、投与の直前に、適切な溶媒を用いて再構成され得る。
【０１１８】
直腸投与において活性な本発明の化合物およびその薬学的に受容可能な塩は、坐剤として処方され得る。代表的な坐剤処方物は、一般に、結合剤および／もしくは潤滑剤（例えば、ゼラチンまたはカカオバター、または低融点食物性もしくは合成ワックスまたは油脂）と共に、活性成分から構成される。
【０１１９】
局所投与において活性な本発明の化合物およびその薬学的に受容可能な塩は、経皮組成物または経皮送達デバイス（「パッチ」）として処方され得る。このような組成物としては、例えば、裏装（ｂａｃｋｉｎｇ）、活性な化合物のレザバ、制御膜（ｃｏｎｔｒｏｌ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）、ライナー（ｌｉｎｅｒ）およびコンタクト接着剤（ｃｏｎｔａｃｔ  ａｄｈｅｓｉｖｅ）が挙げられる。このような経皮パッチは、本発明の化合物の、制御された量での連続的または断続的な注入を提供するために使用され得る。医薬品の送達のための経皮パッチの構築および使用は、当該分野で周知である。例えば、１９９１年６月１１日に発行された、米国特許第５，０２３，２５２号（その全体が本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。このようなパッチは、医薬品の連続的、拍動性、または応需型の送達のために構築され得る。
【０１２０】
必要に応じて、薬学的組成物は、他の薬学的に受容可能な成分（例えば、緩衝液、界面活性剤、抗酸化剤、粘性調節剤、保存料など）を含有し得る。これらの成分の各々は、当該分野で周知である。例えば、米国特許第５，９８５，３１０号（この開示は、本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。
【０１２１】
本発明の処方物において使用するために適切な他の成分は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．，第１７版（１９８５）に見出され得る。
【０１２２】
（キットおよびシステム）
また、上述のように、本発明の方法を実施する際に用途を見出す、キットおよびシステムも提供される。例えば、本発明の方法を実施するためのキットおよびシステムは、少なくともＣＤＫ４インヒビターを含み、そして、特定の実施形態において、１種以上のさらなるインヒビター化合物、特に、ＭＥＫインヒビター、変異レセプターチロシンキナーゼインヒビター、またはＭＥＫインヒビターおよび変異レセプターチロシンキナーゼインヒビターの両方を含む、１種以上の薬学的処方物を含み得る。従って、特定の実施形態において、キットは、１つ以上の単位投薬量として存在する、単一の薬学的組成物を含み得、この組成物は、１種以上のインヒビター化合物を含み得る。なお他の実施形態において、キットは、各々が異なるインヒビター化合物を含有する２つ以上の別個の薬学的組成物を含み得る。
【０１２３】
上述の成分に加え、本発明のキットは、さらに、本発明の方法を実施するための指示書を備え得る。これらの指示書は、種々の形態で、本発明のキット内に存在し得る（１つ以上の指示書が、キット内に存在し得る）。これらの指示書の１つの形態は、安定な媒体または基材（例えば、情報が印刷された紙片）上の、キットの包装の、添付文書内などの印刷された情報として存在し得る。なお別の手段は、情報が記録されたコンピュータ読み取り可能な媒体（例えば、フロッピー（登録商標）ディスク、ＣＤなど）である。存在し得るなお別の手段は、インターネットを介して、離れたサイトにある情報にアクセスするために使用され得るウェブサイトのアドレスである。任意の従来の手段が、キット内に存在し得る。
【０１２４】
用語「システム」とは、本明細書中で使用される場合、本発明の方法を実施する目的で一緒にされた、単一または別個の組成物中に存在する、２種以上の異なる活性な薬剤の集合を指す。例えば、本発明に従って、一緒にされ、被験体に同時に投与される、別々に得られたＣＤＫ４インヒビターおよびＭＥＫインヒビターの投薬形態が、本発明に従うシステムである。
【０１２５】
以下の実施例は、制限する目的ではなく、例示の目的で提供される。
【実施例】
【０１２６】
（実施例Ｉ：Ｆｌｔ３が、ＭＶ４−１１細胞株におけるサイクリンＤ／ＣＤＫ４シグナル伝達を活性化することの証明）
ＭＶ４−１１細胞株は、変異的に活性化されたＦｌｔ３を発現する、急性骨髄性白血病細胞株である（Ｌｅｕｋｅｍｉａ，２００３，１７，１２０−１２４）。上述の変異レセプターチロシンキナーゼインヒビターＴＨＲＸ−１６５７２４は、米国特許出願公開第２００３／０１７１３７８号に記載されるように、公知のＦｌｔ３インヒビターである。ＭＶ４−１１細胞における遺伝子発現に対するＴＨＲＸ−１６５７２４の効果を、以下のように評価した。
【０１２７】
リボヌクレアーゼ保護アッセイ（ＲＰＡ）を、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）により提供される指示書に従って行なった。このアッセイにおいて、関心の有る遺伝子の放射標識されたプローブを、溶液中で標的のＲＮＡにハイブリダイズさせ、その後、遊離プローブおよび他の単鎖ＲＮＡをＲＮＡｓｅで消化した。反応を、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）により分離し、保護されたプローブフラグメントを、オートラジオグラフィーにより明確なバンドとして可視化した。関心のある遺伝子の発現レベルが高ければ高いほど、放射性プローブがより保護され、かつ、得られるバンドがより強かった。
【０１２８】
ＴＨＲＸ−１６５７２４に曝露したＭＶ４−１１細胞（３００ｎＭで３時間のインキュベーション）およびＴＨＲＸ−１６５７２４に曝露していない細胞を、ＲＰＡにより評価した。結果を図１Ａ〜１Ｃに示す。各ゲルの３つのレーンの各々のバンドは、１つの遺伝子を表す。「Ｐ」とラベルを付けた、各ゲルの左のレーンは、未消化のプローブを含み、各ゲルの中央のレーンは、インヒビターに曝露しなかった細胞についての結果であり、一方で、右のレーンは、ＴＨＲＸ−１６５７２４に３時間曝露した細胞についての結果である。ハイブリダイゼーションおよびＲＮＡｓｅ消化の後に、プローブはサイズが減ることに注意されたい。これは、未消化のプローブに対応するレーンにおける関心のあるバンドの位置と、他のレーンにおける関心のあるバンドの位置との間のシフトを説明する。ＣＤＫ４特異的プローブを含むプローブを用いたアッセイの結果を、図１Ａに示す。（標識していない他の遺伝子の中で）Ｐ１６およびＰ１５の発現についてのアッセイの結果を、図１Ｂに示し、一方で、サイクリンＡ、サイクリンＢ、サイクリンＤ１、サイクリンＤ２およびサイクリンＤ３（ならびに標識していない他の遺伝子）の発現を、図１Ｃに示す。
【０１２９】
以下のことが、ＲＰＡの結果から得られ得る：
・大半の遺伝子は、ＴＨＲＸ−１６５７２４を用いた細胞の処理によって、その発現レッベルに影響を受けない。これは、ＴＨＲＸ−１６５７２４に曝露した細胞と曝露していない細胞（すなわち、０および３と印を付けたレーン）から生じたバンドのパターンの類似性により証明された。
・図１Ｃに示すように、３つの遺伝子が、影響を受け、ダウンレギュレートされる：サイクリンＤ１、Ｄ２、Ｄ３。これらの３つの遺伝子についてのバンドは、ＴＨＲＸ−１６５７２４に曝露した細胞よりもかなり微かである。
【０１３０】
図１ＡのＣＤＫ４プローブの保護が実証するように、サイクリンＤ１、Ｄ２、Ｄ３は、ＣＤＫ４の正の調節因子であること、そして、ＣＤＫ４は、ＭＶ４−１１細胞において発現されることが公知である。ＣＤＫ４のバンドの強度は、ＴＨＲＸ−１６５７２４で処理しなかった細胞に由来するサンプルと、ＴＨＲＸ−１６５７２４で処理した細胞に由来するサンプルとで同じであった。このことは、ＣＤＫ４遺伝子の発現は、Ｆｌｔ３インヒビターでのＭＶ４−１１細胞の処理に応答して影響を受けないことを示す。さらに、Ｐ１５およびＰ１６は、サイクリンＤ／ＣＤＫ４複合体の負の調節因子であることが公知である（Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．，２００１，５８，１９０７−１９２２．Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ，１９９６，２３，５０５−５２０）。ＲＰＡ分析はまた、図１Ｂに示すように、Ｐ１６は、ＭＶ４−１１細胞において発現されるが、Ｐ１５は発現されないことを実証する。サイクリンＤ／ＣＤＫ４複合体は、細胞周期のＧ１期からＳ期への移行を調節することもまた公知である（Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，２０００，１２，：６７６−８４）。
【０１３１】
上記のＲＰＡ実験は、Ｆｌｔ３が変異したＭＶ４−１１細胞は、サイクリンＤ１、そして特に、サイクリンＤ２およびＤ３の発現をアップレギュレートすることを示す。このことは、ＴＨＲＸ−１６５７２４（Ｆｌｔ３インヒビター）で処理したＭＶ４−１１細胞に由来するサンプルを表す、サイクリンＤ１、Ｄ２およびＤ３のバンドの強度の下降により実証される。細胞をＦｌｔ３インヒビターで処理した時間の間、変異したＦｌｔ３レセプターが不活性化され、その結果、その発現が、変異Ｆｌｔ３から駆動されるシグナルによって駆動されるあらゆる遺伝子がダウンレギュレートされ、このことは、その細胞において作製される、その特定の遺伝子のためのｍＲＮＡのより転写物／コピーがより少なくなることを意味する。Ｆｌｔ３シグナルの喪失は、サイクリンＤ１、Ｄ２およびＤ３の発現の減少をもたらすので、これらの遺伝子の転写物のレベルが下降する。結果として、より少ない量のプローブが、ＲＰＡ実験において保護され、そして、これは、強度の減少によりバンドに反映される。変異Ｆｌｔ３は、サイクリンＤ１、Ｄ２およびＤ３の発現をアップレギュレートするので、変異レセプターはまた、ＣＤＫ４を間接的に活性化する。なぜならば、ＣＤＫ４の活性は、存在するサイクリンＤ１、Ｄ２およびＤ３の量と結びついているからである。従って、変異Ｆｌｔ３は、サイクリンＤ／ＣＤＫ４シグナル伝達を活性化する。
【０１３２】
（実施例ＩＩ：変異レセプターチロシンキナーゼにより特徴付けられる細胞株の生存度に対するＣＤＫ４インヒビターの効果）
変異Ｆｌｔ３が、サイクリンＤ／ＣＤＫ４のシグナル伝達を活性化すると仮定すると、ＣＤＫ４インヒビターであるアルシリアフラビンの、ＭＶ４−１１細胞の生存度に対する影響を試験した。この実施例におけるコントロールとして、サイクリンＡ／ＣＤＫ２についてのインヒビターおよびサイクリンＥ／ＣＤＫ２についてのインヒビター（プルバラノール（ｐｕｒｖａｌａｎｏｌ））、ならびにサイクリンＢ／ＣＤＫ１についてのインヒビター（アルステルパウロン（ａｌｓｔｅｒｐａｕｌｌｏｎｅ））を含めた。この実施例におけるさらなるコントロール化合物は、Ｆｌｔ３インヒビターＴＨＲＸ−１６５７２４およびＰＤＧＦＲαインヒビター  メシル酸イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）、本明細書中、以後「イマチニブ」）であった。これらのインヒビターをまた、変異融合キナーゼＦｉｐ１Ｌ１−ＰＤＧＦＲαを発現するＥＯＬ−１細胞、ならびにＫ５６２細胞およびＢＶ１７３細胞（ＣＭＬ細胞株）ならびにＴＨＰ−１細胞およびＵ９３７細胞（ＡＭＬ細胞株）に対して試験した。インヒビターの希釈範囲は、２０μＭ〜１０ｎＭであった。
【０１３３】
細胞株の生存度を、ＭＴＴアッセイにより決定した。このアッセイは、テトラゾリウム塩：臭化３，［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウム（ＭＴＴ）の減少に基づく。代謝活性に関連するミトコンドリア酵素は、ＭＴＴをホルマザン色素に還元する（これは分光光度的に測定され得る）。アポトーシスを受けている細胞は、代謝活性の減少を示し、これは、ホルマザン色素の形成の減少をもたらす。結果を、未処理のコントロールとの比較により定量する。
【０１３４】
ＩＣ５０と示される量（すなわち、細胞の生存度が５５０％減少するインヒビターの濃度）の観点から表現される生存度の結果を、表１に示す。
【０１３５】
【表１】
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上記の結果から見られ得るように、アルシリアフラビンは、ＥＯＬ−１細胞およびＭＶ４−１１細胞の生存度を選択的に減少する。対照的に、変異的に活性化されたレセプターチロシンキナーゼを発現しない細胞は、アルシリアフラビンによるＣＤＫ４の阻害に感受性ではない。Ｋ５６２およびＢＶ１７３は、ｂｃｒ−ａｂｌ融合キナーゼを発現するＣＭＬ細胞株である。ＡＭＬ細胞株ＴＨＰ−１およびＵ９３７と同様に、Ｋ５６２およびＢＶ１７３は、アルシリアフラビンに対して感受性ではない。しかし、Ｋ５６２およびＢＶ１７３は、ｂｃｒ−ａｂｌのインヒビターであるイマチニブに対して感受性である。ａｂｌは、ＢＶ１７３およびＫ５６２において変異しているチロシンキナーゼであるが、ＥＯＬ−１における変異ＰＤＧＦＲα、およびＭＶ４−１１における変異Ｆｌｔ３と同様に、変異ａｂｌは、アルシリアフラビンに対してこれらの細胞を感作しない。変異レセプターチロシンキナーゼを有する細胞のみが、ＣＤＫ４の阻害に対して感受性である。
【０１３６】
上の実施例１に示されるように、変異Ｆｌｔ３は、ＭＶ４−１１細胞においてサイクリンＤ／ＣＤＫ４活性をアップレギュレートするので、ＣＤＫ４インヒビターであるアルシリアフラビンの、これらの細胞の生存度に対する影響は、サイクリンＤ／ＣＤＫ４のアップレギュレーションが、変異Ｆｌｔ３により活性化された生存および増殖経路の重要な段階であることを示す。
【０１３７】
ＥＯＬ−１細胞が、ＭＶ４−１１細胞と同様に、アルシリアフラビンに対して感受性であるという観察は、癌キナーゼＦｉｐ１Ｌ１−ＰＤＧＦＲαが、サイクリンＤ／ＣＤＫ４もまた活性化するということを示す。Ｆｌｔ３およびＰＤＧＦＲαは、ともに、レセプターチロシンキナーゼのＰＤＧＦＲαスーパーファミリーに属するので、これらの結果は、ＣＤＫ４インヒビターが、変異レセプターチロシンキナーゼの存在により特徴受けられる細胞の生存度を選択的に減少することを実証する。
【０１３８】
（実施例ＩＩＩ：サイトカインの存在下でのインヒビターの効果）
ＡＭＬ患者の処置のためのＦｌｔ３インヒビターの最近の臨床治験は、数人の患者において、末梢血ではなく、骨髄におけるＡＭＬ芽細胞のあまりはっきりとしない減少を示した。骨髄の環境は、多数のサイトカインを含むことが公知である。ＴＨＲＸ−１６５７２４のＭＶ４−１１細胞に対する活性、およびイマチニブのＥＯＬ−１細胞に対する活性についてのサイトカインの影響を調べた。これらの細胞株を、サイトカインＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３（各々１０ｎｇ／ｍＬ）の存在下および不在下で、適切なインヒビターと共にインキュベートした。イマチニブに対して感受性であるＣＭＬ細胞株ＢＶ１７３、ならびにイマチニブにもＴＨＲＸ−１６５７２４にも感受性でないＴＨＰ−１細胞株を、コントロールとして含めた。イマチニブ（１μＭ）と共にインキュベートしたＥＯＬ−１細胞株およびＢＶ１７３細胞株、ならびに、ＴＨＲＸ−１６５７２４（１μＭ）と共に４８時間インキュベートしたＭＶ４−１１細胞株およびＴＨＰ−１細胞株についてのＭＴＴ生存度アッセイの結果を、それぞれ、図２および３に示す。
【０１３９】
ＴＨＲＸ−１６５７２４およびイマチニブは、サイトカインの非存在下で、ＭＶ４−１１細胞およびＥＯＬ細胞の生存度を強く減少するが、サイトカインの存在下では、細胞の生存度は、あまり影響を受けないことを見出した。
【０１４０】
変異的に活性化されたチロシンキナーゼについての特異的なインヒビターと同様に、ＣＤＫ４インヒビターであるアルシリアフラビンは、ＭＶ４−１１細胞およびＥＯＬ−１細胞においてアポトーシスを誘導し得る（表１を参照のこと）。アルシリアフラビンの能力に対するサイトカインの影響を研究するために、ＭＶ４−１１細胞およびＥＯＬ−１細胞を、アルシリアフラビン（１μＭ）と共に４８時間、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の存在下および非存在下で、インキュベートし、そして、ＭＴＴアッセイにより決定した生存度を、図４に示す。これらのサイトカインの存在下ではＭＶ４−１１細胞およびＥＯＬ−１細胞の生存度に対するアルシリアフラビンの影響は、かなり減少し、これは、ＭＶ４−１１細胞およびＥＯＬ−１細胞をサイトカインの存在下でＴＨＲＸ−１６５７２４およびイマチニブに曝露したときに見られる減少と類似していた。
【０１４１】
（実施例ＩＶ：変異レセプターチロシンキナーゼにより特徴付けられる細胞株の生存度に対する、ＣＤＫ４インヒビターおよびＭＥＫインヒビターの組み合わせ）
造血細胞において、サイトカインＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３は、ＭＥＫの活性化により、生存および増殖のシグナル伝達を提供することが示されている。ＭＶ４−１１細胞およびＥＯＬ−１細胞の生存におけるＭＥＫの役割を試験するために、ＭＥＫ特異的インヒビターであるＵ０１２６（１０μＭ）を用いて、生存度アッセイ（４８時間インキュベーション）を行なった（図５を参照のこと）。それ自体で、Ｕ０１２６は、試験した細胞株の生存または増殖をわずかに変更する。
【０１４２】
ＭＶ４−１１細胞およびＥＯＬ−１細胞を、ＭＥＫ特異的インヒビターであるＵ０１２６（１０μＭ）、およびＣＤＫ４インヒビターであるアルシリアフラビン（１μＭ）の組み合わせと共に、４８時間インキュベートした。結果を図６に示す。図面に見られ得るように、ＭＥＫ特異的インヒビターおよびＣＤＫ４インヒビターの組み合わせは、ＭＶ４−１１細胞およびＥＯＬ−１細胞の生存度の減少に、相乗的に作用し、そして、サイトカインの存在下でさえも、生存度をかなり減少する。変異的に活性化されたチロシンキナーゼを発現しないコントロール細胞株であるＴＨＰ−１は、アルシリアフラビン単独でも、Ｕ０１２６との組み合わせでも影響を受けない。
【０１４３】
ＥＯＬ−１細胞、ＭＶ４−１１細胞、およびｂＴＨＰ−１細胞を、サイトカインＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の非存在下および存在下で、列挙した薬剤と共にインキュベートしたＭＴＴ生存度アッセイの独立したセットの結果を、表２にまとめる。
【０１４４】
【表２】
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また、表２から、ＭＥＫ特異的インヒビター（Ｕ０１２６）およびＣＤＫ４インヒビター（アルシリアフラビン）の組み合わせが、サイトカインの存在下でさえも、ＭＶ４−１１細胞およびＥＯＬ−１細胞（すなわち、変異レセプターチロシンキナーゼを発現する細胞株）の生存度を減少することは明らかである。
【０１４５】
上記の結果および考察から、本発明は、細胞増殖性疾患状態のための重要な新規処置方法を提供し、この方法は、医薬および関連分野に有意な利益を提供することが明らかである。従って、本発明は、当該分野に対する有意な寄与を表す。
【０１４６】
本明細書中に引用されるすべての刊行物および特許は、各個々の刊行物または特許が、具体的かつ個別に、参考として援用されるかのように、本明細書中に参考として援用される。任意の刊行物の引用は、出願日前のその開示のためであり、本発明に、先行技術の発明によってこのような刊行物に事前日付にする権利を与えるものではない。
【０１４７】
上記の本発明は、理解を明確にする目的で、実例および例示によりいくらか詳細に記載したが、特定の変更および改変が、添付の特許請求の範囲の精神または範囲から逸脱することなく、本発明に対してなされ得ることは、本発明の教示の観点から、当業者に容易に理解される。
【図面の簡単な説明】
【０１４８】
【図１】図１Ａ、１Ｂおよび１Ｃは、３００ｎＭの濃度のＴＨＲＸ−１６５７２４で処理したＭＶ４−１１細胞の遺伝子発現プロフィールを示す。
【図２】図２は、サイトカインＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の非存在下（白棒）および存在下（斜線の棒）での、イマチニブ（１μＭ）と共にインキュベートした、ＥＯＬ−１細胞およびＢＶ１７３細胞の生存度（％）を示す。
【図３】図３は、サイトカインＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の非存在下（白棒）および存在下（斜線の棒）での、ＴＨＲＸ−１６５７２４（１μＭ）と共にインキュベートした、ＭＶ４−１１細胞およびＴＨＰ−１細胞の生存度（％）を示す。
【図４】図４は、サイトカインＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の非存在下（白棒）および存在下（斜線の棒）での、アルシリアフラビン（１μＭ）と共にインキュベートした、ＥＯＬ−１細胞、ＭＶ４−１１細胞およびＴＨＰ−１細胞の生存度（％）を示す。
【図５】図５は、サイトカインＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の非存在下（白棒）および存在下（斜線の棒）での、Ｕ０１２６（１０μＭ）と共にインキュベートした、ＥＯＬ−１細胞、ＭＶ４−１１細胞およびＴＨＰ−１細胞の生存度（％）を示す。
【図６】図６は、サイトカインＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の非存在下（白棒）および存在下（斜線の棒）での、アルシリアフラビン（１μＭ）およびＵ０１２６（１０μＭ）と共にインキュベートした、ＥＯＬ−１細胞、ＭＶ４−１１細胞およびＴＨＰ−１細胞の生存度（％）を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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