(57)【要約】  本発明はオキシトシン拮抗性を有している物質の使用、及び、医薬有効量の該物質の投与を含む治療方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
オキシトシン誘発血管収縮性に関係する疾患の治療用医薬を製造するためのオキシトシン拮抗性を有している物質の使用。
【請求項２】
前記物質がペプチドである請求項１に記載の物質の使用。
【請求項３】
前記ペプチドが、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、オクタペプチド、ノナペプチド及びデカペプチドから成るグループから選択される請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記ペプチドが、アトシバン、バルシバン及び医薬的に許容されるそれらの塩から成るグループから選択される請求項３に記載の使用。
【請求項５】
前記医薬が高血圧治療用である請求項１から４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
前記医薬が妊娠に関係する高血圧の治療用である請求項５に記載の使用。
【請求項７】
前記オキシトシン誘発血管収縮性が子宮血管、胎盤または胎児の血管に存在する請求項１から６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
前記オキシトシン誘発血管収縮性が、心臓、腎臓、脳、胸腺、膵臓の血管またはその他のいずれかの血管に存在する請求項１から５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
前記医薬が、子癇前症、子宮内発育遅延（ＩＵＧＲ）、胎児の低循環、妊娠誘発高血圧（ＰＩＨ）、妊娠中毒症、ＨＥＬＬＰ症候群または子癇症の治療用である請求項１から７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０】
オキシトシン誘発血管収縮性に関係する疾患に罹患している患者にオキシトシン拮抗性を有している物質を医薬有効量で投与する治療方法。
【請求項１１】
前記物質がペプチドである請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ペプチドが、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、オクタペプチド、ノナペプチド及びデカペプチドから成るグループから選択される請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ペプチドが、アトシバン、バルシバン及び医薬的に許容されるそれらの塩から成るグループから選択される請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記疾患が高血圧である請求項１０から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記高血圧が妊娠に関係する請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記オキシトシン誘発血管収縮性が子宮血管、胎盤または胎児の血管に存在する請求項１０から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記オキシトシン誘発血管収縮性が、心臓、腎臓、脳、胸腺、膵臓の血管またはその他のいずれかの血管に存在する請求項１０から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記疾患が、子癇前症、子宮内発育遅延（ＩＵＧＲ）、胎児の低循環、妊娠誘発高血圧（ＰＩＨ）、妊娠中毒症、ＨＥＬＬＰ症候群または子癇症である請求項１０から１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記患者がヒトである請求項１０から１８のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、オキシトシン拮抗性を有している物質の使用、及び、医薬有効量の該物質の投与を含む治療方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
オキシトシンが心血管ホルモン及びパラクリン伝達物質であること、及び、オキシトシンまたはオキシトシン受容体が例えば心臓、血管の内皮や平滑筋、腎臓（上皮）で発現されることは公知である。
【０００３】
高血圧は、身体中の細動脈が収縮状態となり、より大きい血管の圧力を上げるので血圧が異常に高い値（１４０／９０ｍｍＨｇ以上の値）となる全世界共通の障害である。そのため、血液は正常よりも高い圧力で血管を流れる。高血圧は心臓を酷使し、動脈を損傷し、心臓発作、卒中及び腎臓病の危険性を増す。
【０００４】
子癇前症は、妊娠中に限って生じる心血管障害であり、母体及び生まれる前の胎児の双方に影響を及ぼす。これは、全妊娠女性の少なくとも５％が罹患し、高血圧、むくみ（浮腫）、蛋白尿の排泄及び胎児発育制限を特徴とする進行の速い状態である。急激な体重増加、頭痛及び視力変化が重要な症状である。しかしながら、疾患が急速に進んでいるのに症状をほとんど訴えることがない女性もいる。子癇前症は、典型的には妊娠第２期または第３期（妊娠期間の中期から後期）に発生するが、もっと早い時期に症状が見られることもある。更に、母親に子癇前症がある場合、子供の発育阻害の危険性は高くなる。子癇前症を診断し管理するためには適切な産前ケアが必須である。子癇前症、妊娠誘発高血圧（ＰＩＨ）及び妊娠中毒症の状態には密接な関係がある。ＨＥＬＬＰ症候群及び子癇はもっと重篤な形態である。
【０００５】
ＨＥＬＬＰ症候群は子癇前症（妊娠中毒症）の珍しい変異型であり、Ｈ（溶血、即ち、赤血球の破壊）、ＥＬ（肝臓酵素の増加）及びＬＰ（血小板数の減少）を意味する。この症候群は母子双方の命にかかわる。ＨＥＬＬＰ症候群は子癇前症に相前後して生じる。ＨＥＬＬＰ症候群の症状が子癇前症の３つの所見（高血圧、蛋白尿排泄及びむくみ（浮腫））よりも前に生じることもあり得るので、その場合には胃炎、播種性血管内凝固（ＤＩＣ）、急性肝炎、胆嚢病の症状及びその他の状態などと誤診されるかもしれない。その結果として母親が正しい治療を受けることができないので、母子双方が危険な状態に放置される。
【０００６】
子癇前症及びその他の高血圧性妊娠障害は、地球上の母子の病気及び死亡の筆頭原因である。控え目に見積もっても、これらの障害を原因とする死者の数は全世界で毎年ほぼ５０，０００−７６，０００に達する。わかっている唯一の有効な治療方法は胎児の分娩である。重篤な子癇前症の対症治療及び治療は通常はＭｇＳＯ４またはその他の降圧薬によって行われている。
【０００７】
在胎月齢に基づく胎児の予測体重の１０パーセント未満と定義される子宮内発育遅延（ＩＵＧＲ）は、適正に診断されないならば胎児の著しい罹病率及び死亡率に帰着するであろう。この状態の最多の原因は適正な母体−胎児の循環が行われないことであり、その結果として胎児の発育及び発達が低下または阻害される。より少ない原因は、サイトメガロウイルス及び風疹などの子宮内感染症、並びに、トリソミー２１及びトリソミー１８のような先天性異常である。ＩＵＧＲの原因となる状態は出産前治療が可能でない場合が多いが、ＩＵＧＲが認められたときには、取り返しがつく原因を除去する努力は重要である。通常は胎児を厳重に監視し、在胎３８週前に分娩させる処置が勧告されている。ＩＵＧＲを伴って誕生した子供は器官の発達、及び、誕生前の胎内感染即ち先天性感染症などのような認識上及び医学上の問題を示す場合もあるが、ほとんどの子供は長期予後が良好である。子癇前症にＩＵＧＲの所見は普通である。
【０００８】
米国特許ＵＳ５，９６２，４１３は、雌哺乳動物の月経障害、不正子宮出血、早期分娩及び予定日超過分娩を子宮収縮性の阻害によって治療しており、このために、これらの哺乳動物に、一酸化窒素シンターゼ基質、一酸化窒素供与体または双方を、プロスタグランジンインヒビター、プロスタサイクリン模擬体、プロゲスチン、オキシトシンアンタゴニストまたはベータ−アゴニストの１種以上と共に、その症状の改善に有効な量で投与する。また、妊娠した雌動物の不正月経、流産誘発または分娩刺激を子宮収縮性刺激によって生じさせるために、これらの動物に、酸化窒素インヒビターを単独でまたはプロゲステロンアンタゴニスト、オキシトシンもしくはオキシトシンアナローグまたはプロスタグランジンと組合せて投与している。即ち、米国特許ＵＳ５，９６２，４１３の目的は、雌哺乳動物の子宮筋肉の一酸化窒素依存収縮性の調整方法である。
【０００９】
本発明は、ＮＯ経路に影響を及ぼす化合物によって収縮障害を治療することを根拠にしない点で米国特許ＵＳ５，９６２，４１３とは違っている。
【００１０】
上記に挙げた疾患の治療方法が欠如しているため、特に、これらの疾患のいくつかについては使用できる特異療法／原因療法が現状では全く存在しないので、高血圧及び高血圧が関与している疾患の治療方法を提供することが要望されている。
【発明の開示】
【００１１】
本発明の１つの目的は、オキシトシン誘発血管収縮性に関係する疾患の治療用医薬を製造するためにオキシトシン拮抗性を有している物質を使用することに関する。
【００１２】
本発明の別の目的は、オキシトシン誘発血管収縮性に関係する疾患に罹患している患者にオキシトシン拮抗性を有している物質を医薬有効量で投与する治療方法に関する。
図面の簡単な説明
【００１３】
図１は妊娠ラットの血圧に対するオキシトシンアンタゴニストの効果を示す。Ｘ軸は妊娠期間（懐胎日齢）を表し、Ｙ軸は収縮期血圧（ｍｍＨｇ）を表す。バルシバン（２００μｇ／日）、アトシバン（２００μｇ／日）及び対照（生理的塩類溶液）（２００μｇ／日）を懐胎１９−２２日及びｐｐ１−ｐｐ７（ｐｐ＝分娩後）日の妊娠ラットに投与した。特にバルシバンの場合に、出産前後に収縮期血圧の好ましい降下が見られる。
図２はオキシトシン感受性を比較するために非妊娠、妊娠中期及び妊娠後期のラットから単離したｉｎ  ｖｉｔｒｏラット子宮動脈へのオキシトシンの投与及び収縮性に対する効果を示す。Ｘ軸はオキシトシン濃度［ｌｏｇＭ］を表し、Ｙ軸はフェニレフリン誘発収縮に対する％を表す。非妊娠ラットの子宮動脈は妊娠中期または後期の動物に比較して高いオキシトシン感受性を示した。以下のｐＤ２値が得られた；非妊娠（９．３２±０．４１，ｎ＝７）、妊娠中期（７．４６±０．１３，ｎ＝６）及び妊娠後期（７．８７±０．３９，ｎ＝６）。妊娠期間中の子宮血管の感受性が全般的に低下していることは局部オキシトシン濃度が最終的に増加することに関係があると推測できる。
図３は非妊娠の特発性高血圧（ＳＨＲ）ラットから単離した子宮動脈、大腿動脈、頚動脈及び大動脈の収縮用量／応答関係及びオキシトシン感受性を示す。子宮動脈が最も高い感受性を示す。
図４は非妊娠のＷｉｓｔａｒ（ＷＫＹ）ラットから単離した子宮動脈、大腿動脈、頚動脈及び大動脈の収縮用量／応答関係及びオキシトシン感受性を示す。子宮動脈は他の動脈に比較して顕著に高い感受性を示す。
図５は非妊娠のＷＫＹラット及びＳＨＲラットから単離した子宮動脈の収縮用量／応答関係及びオキシトシン感受性を示す。Ｗｉｓｔａｒ（ＷＫＹ）ラットのほうが高い感受性を示す。
【００１４】
子宮血管は他の血管に比べて顕著に高いオキシトシン感受性を有しており、子宮血管の血管緊張に対して内因性（及び外因性）オキシトシンが極めて重要な役割を有することが証明される。これらの血管の収縮及び拡張は胎児、胎盤及び子宮の潅流（循環）に直接的な影響力を有している。子宮血管の収縮及び胎児の低循環は、ＩＵＧＲまたは子癇前症のような疾患に直接結びつく。本発明によるオキシトシンアンタゴニストの新規な使用は直接的な子宮の血管拡張、母体及び胎児の疾患関連症状の改善を期待させ、新生児の行末も好転するであろう。
【００１５】
従って、図に示した実験は、ｉｎ  ｖｉｖｏのラット及び単離動脈で本発明の着想が正しいことを証明した。
発明の実施態様
【００１６】
本発明の使用の１つの実施態様では、当該物質がペプチドである。
【００１７】
本発明の使用の別の実施態様では、当該ペプチドが、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、オクタペプチド、ノナペプチド及びデカペプチドから成るグループから選択される。
【００１８】
本発明の使用の別の実施態様では、当該ペプチドが、アトシバン、（［Ｍｐａ１，Ｄ−Ｔｙｒ（Ｅｔ）２，Ｔｈｒ４，Ｏｒｎ８］−オキシトシン、バルシバン、Ｃ４，６，Ｓ１−シクロ［Ｎ−（３−スルファニルプロパノイル）−Ｄ−トリプトフィル−Ｌ−イソロイシル−Ｌ−アロイソロイシル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−２−アミノブタノイル−Ｎ−メチル−Ｌ−オルニチノール］及び医薬的に許容されるそれらの塩から成るグループから選択される。
【００１９】
本発明の使用の別の実施態様では、拮抗性を有している当該物質が、オキシトシンアンタゴニスト活性を有しておりヘキサペプチド部分Ｓと、アミド結合によって部分Ｓに結合されたＣ−末端のβ−アミノアルコール残基Ｚとから成るヘプタペプチドアナローグまたは医薬として許容されるその塩である。β−アミノアルコールは、式
【００２０】
【化１】
2007518739.tif 000002
によって表され、式中の、Ｑは（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ−Ａ、ｎは１−６、ＡはＨまたは−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、ＲはＣＨ３またはＣ２Ｈ５である。部分Ｓは、式
【００２１】
【化２】
2007518739.tif 000003
によって表され、式中の、Ｍｐａ、Ｉｌｅ、Ａｓｎ及びＡｂｕはそれぞれ、
Ｍｐａ  ３−メルカプトプロピオン酸残基
Ｉｌｅ  イソロイシン残基
Ａｓｎ  アスパラギン残基
Ａｂｕ  α−アミノ酪酸残基
を表し、
ＸはＤ−芳香族α−アミノ酸を表し、
Ｙは脂肪族酸残基を表す。
【００２２】
上記のヘプタペプチドアナローグは欧州特許ＥＰ０９３８４９６Ｂ１に開示されている。
【００２３】
本発明の使用の別の実施態様では、拮抗性を有している当該物質がバソトシン誘導体であり、この誘導体の特徴は、式
【００２４】
【化３】
2007518739.tif 000004
を有していることであり、式中の、
Ｍｐａは３−メルカプトプロピオノイル残基（−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−）であり、
ＡはＬ−もしくはＤ−チロシン−Ｏ−エチルエーテル（Ｌ−またはＤ−Ｔｙｒ（Ｅｔ））または疎水性Ｄ−アミノ酸のペプチド残基であり、
Ｉｌｅはイソロイシンのペプチド残基であり、
Ｂはグルタミン（Ｇｌｎ）、トレオニン（Ｔｈｒ）またはバリン（Ｖａｌ）のペプチド残基であり、
Ａｓｎはアスパラギンのペプチド残基であり、
Ｃｙｓはシステインのペプチド残基であり、
Ｐｒｏはプロリンのペプチド残基であり、
ＣはＬ−もしくはＤ−アルギニン（Ａｒｇ）、オルニチン（Ｏｒｎ）またはシトルリン（Ｃｉｔ）のペプチド残基であり、
Ｇｌｙ−ＮＨ２はグリシンアミドのペプチド残基である。
【００２５】
上記のバソトシン誘導体は欧州特許ＥＰ０１１２８０９Ｂ１に開示されている。
【００２６】
本発明の使用の別の実施態様では、当該医薬が高血圧治療用及び妊娠関連高血圧の治療用の医薬である。
【００２７】
本発明のまた別の実施態様では、当該オキシトシン誘発血管収縮性が子宮血管、胎盤及び胎児の血管に存在する。
【００２８】
本発明の使用の別の実施態様では、当該オキシトシン誘発血管収縮性が、心臓、腎臓、脳、胸腺、膵臓の血管またはその他のいずれかの血管に存在する。本発明によるオキシトシンアンタゴニスト使用の効果は、哺乳動物、好ましくはヒトの体内のオキシトシン受容体が存在するいかなる血管でも観察されると期待できる。
【００２９】
本発明の使用の別の実施態様では、当該医薬が、子癇前症、子宮内発育遅延（ＩＵＧＲ）、胎児の低循環、妊娠誘発高血圧（ＰＩＨ）、妊娠中毒症、ＨＥＬＬＰ症候群または子癇症の治療用である。
【００３０】
本発明の方法に関しては、当該物質が好ましくはペプチドである。
【００３１】
本発明の方法の別の実施態様では、当該ペプチドが、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、オクタペプチド、ノナペプチド及びデカペプチドから成るグループから選択される。
【００３２】
本発明の方法の別の実施態様では、当該ペプチドが、アトシバン、バルシバン及び医薬的に許容されるそれらの塩から成るグループから選択される。
【００３３】
本発明の方法の別の実施態様では、当該医薬が高血圧治療用または妊娠関連高血圧治療用である。
【００３４】
本発明の方法の別の実施態様では、当該オキシトシン誘発血管収縮性が子宮血管、胎盤または胎児の血管に存在する。
【００３５】
本発明の方法の別の実施態様では、当該オキシトシン誘発血管収縮性が、心臓、腎臓、脳、胸腺、膵臓の血管またはその他のいずれかの血管に存在する。
【００３６】
本発明の方法の別の実施態様では、当該医薬が、子癇前症、子宮内発育遅延（ＩＵＧＲ）、胎児の低循環、妊娠誘発高血圧（ＰＩＨ）、妊娠中毒症、ＨＥＬＬＰ症候群または子癇症の治療用である。
【００３７】
本発明の方法の別の実施態様では、オキシトシンアンタゴニストによって治療される当該患者が哺乳動物、好ましくはヒトである。
【００３８】
本文中に使用した“医薬有効量の物質”という用語は、一回投与または多数回投与で、１日に患者あたり約０．０５ｍｇ−約５００ｍｇ、好ましくは約１−約３５０ｍｇの範囲の量の物質を含意する。用量は、マイナスの副作用を全く生じることなく体内の血管のオキシトシン誘発血管収縮性に弛緩効果を与えるために十分な量でなければならない。
【００３９】
本文中に使用した“物質”という用語は、オキシトシン拮抗性を有している小分子、ペプチド、非ペプチド、ペプチド模擬体、またはその他の分子を含意する。
【００４０】
本文中に使用した“ペンタペプチド”という用語は、少なくとも５個のペプチド結合を含む化合物を意味する。ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、オクタペプチド、ノナペプチド及びデカペプチドにも同様の定義が通用する。
【００４１】
オキシトシンアンタゴニストは患者に投与するための適当な注射用溶液中に存在させるとよい。注射用溶液はオキシトシンアンタゴニストに加えて、注射用溶液の分野で慣用の任意の賦形剤、例えば、マンニトール、１Ｍの塩酸及び注射用水を含む。オキシトシンアンタゴニストはまた、注入溶液用濃縮物に存在させるとよい。しかしながら、オキシトシンアンタゴニストを、患者に投与するための適当な他の任意の配合物例えば鼻腔スプレーに存在させてもよい。
【００４２】
物質、例えばアトシバンまたはバルシバンは、注射用溶液１ｍｌあたり７．５ｍｇ／ｍｌの濃度で患者に投与し得る。即ち、１ｍｌの溶液が７．５ｍｇの物質遊離塩基を例えば酢酸アトバシンまたは酢酸バルシバンの形態で含有している。投与は、先ずボーラス注射、次いで注入を行う。例えば、１人の患者の１回の治療レジメン毎に０．９ｍｌの静脈内ボーラス注射（６．７５ｍｇのアトシバン投与）を約１分間、その後、１人の患者の１回のレジメン毎に２４ｍｌ／時の静脈内負荷注入（合計１８ｍｇ／時のアトシバン投与量）を３時間、引き続いて、１人の患者の１回のレジメン毎に８ｍｌ／時の静脈内注入（合計６ｍｇ／時のアトシバン投与量）を行う。上記投与量は特定の医療状態に応じて調整し得る。
【００４３】
本発明は、高血圧及び高血圧が関与する疾患を治療するためのオキシトシンアンタゴニストの新規な使用を記載している。本文中に提供したデータは、オキシトシンが血管収縮性を調節でき、収縮を刺激または血圧を上昇させることを示す。本発明で行った試験によれば血管収縮性及び血圧の双方がオキシトシンアンタゴニストによって阻害される。
【００４４】
従ってこれらの試験は、オキシトシンアンタゴニストが高血圧を下げるために使用できること、及び、妊娠女性に見られるこのような状態及び高血圧関連状態、特に子癇前症及びＩＵＧＲにつながる高血圧に罹患した個体の高血圧の症例の治療に使用できることを示唆する。
【００４５】
更に、本発明によれば、関係のある血管（例えば、子宮血管、胎盤及び胎児の血管）を弛緩させることによって母体と胎児との間の潅流を改善するためにオキシトシンアンタゴニストを使用することが提案されている。子宮動脈の直接拡張が胎児の潅流を改善する。本発明によるオキシトシンアンタゴニストの新規な使用は、胎児の潅流、栄養、発育及び発達を必然的に改善し、母子双方の健康を改善すると期待される。
【００４６】
本発明によれば、子供を分娩する以外に使用できる有効な治療方法が現状では存在しない例えば子癇前症のような症例で、本発明によるオキシトシンアンタゴニストの新規な使用によって有効な原因療法が提供される。
【００４７】
更に、オキシトシンアンタゴニストであるバルシバン及びバルシバンの変種によって高い選択性、高い力価及び効能を得ることを期待できる。しかも、本発明のオキシトシンアンタゴニストの新規な使用による実質的な副作用は全く予測されない。
【実施例】
【００４８】
ラットの血圧測定（図１）
動物。成熟した未経産の妊娠ラット（体重３００−３２５ｇ）をＨａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｃ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，Ｉｎｄ）から購入し、懐胎１６日目に動物施設に受容した（陽性の精子スミア結果を懐胎１日目とする）。すべての動物が餌と水を自由に摂取できるようにした。
【００４９】
血圧測定。懐胎１９日目に収縮期血圧の測定を開始した。ニューマチックテールカフデバイス（ＮＡＲＣＯ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ，Ｉｎｃ，Ａｕｓｔｉｎ，Ｔｅｘ）を使用し、約３０℃に維持した金属室に温置した動物の測定を毎日または１日おきに行った。連続３回の測定から得られた血圧の値の平均を所与のラットの各時点の血圧として記録した。全部の動物について分娩まで及び分娩後７日間（ｐｐ７）の収縮期血圧を測定した。全部の動物が分娩予定日の懐胎２２日目に出産した。３つの動物グループを試験した。グループ１の対照グループは生理的塩類溶液で処置した。グループ２はバルシバンで処置した（２００μｇ／日）。グループ３はアトシバンで処置した（２００μｇ／日）。
【００５０】
統計解析。妊娠中及び分娩後の毎日の血圧レベルの平均±標準偏差値を計算した。統計解析には一元配置分散分析を用い、次いで、フィッシャーの最小有意差標準によって多重比較を行った。Ｐ＜．０５を有意水準とした。
【００５１】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ収縮性測定方法（図２−５）
非妊娠またはタイミングよく妊娠したＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（妊娠期間２２日、精子栓が観察された日を１日目とする）をＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｈｏｕｓｔｏｎ，Ｔｅｘａｓ）から入手した。いくつかの試験では、特発性高血圧ラット（ＳＨＲ）及びそれぞれの正常血圧対照（ＷＫＹ）を使用した。１４日目（妊娠中期）または２２日目（出産予定日）の分娩前または発情期サイクル（非妊娠）中に二酸化炭素吸入によってラットを死亡させた。正中腹側切開によって血管組織（子宮動脈、大腿動脈、頚動脈または大動脈）を摘出し、以下の組成の低温クレブスバッファに投入した：１１９．０ｍｍｏｌ／ｌの塩化ナトリウム；４．７ｍｍｏｌ／ｌの塩化カリウム；１．２ｍｍｏｌ／ｌのリン酸カリウム；２５ｍｍｏｌ／ｌの炭酸水素ナトリウム；１．２ｍｍｏｌ／ｌの硫酸マグネシウム；２．５ｍｍｏｌ／ｌの塩化カルシウム；０．０２６ｍｍｏｌ／ｌのエチレンジアミン四酢酸ナトリウム及び１１．５ｍｍｏｌ／ｌのグルコース。血管切片の中央から幅５ｍｍの環状標本を切り出し、器官室の２つのタングステンスティラップ間に配置し、アイソメトリック力変換器（Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ，Ｓｏｕｔｈ  Ｎａｔｒｉｃｋ，Ｍａｓｓ）で張力を記録した。３７℃に維持した１０ｍｌのクレブスバッファを収容し空気中に５％の二酸化炭素（ｐＨ約７．４０）を連続的に吹き込んでいる器官室内で２ｇの受動張力の環状標本を安定するまで平衡させた。（環状に切り出した）子宮血管組織の収縮を記録し、ＤＩ−２２０（ＤａｔａＱ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ，Ａｋｒｏｎ，Ｏｈｉｏ）データ取得システムをもつコンピューターに記憶させた。オキシトシンは１．０−ｌｏｇ  ｕｎｉｔの増加量で１０μｌ（１０−９−１０−５ｍｏｌ／ｌ）の量ずつ１０分毎に器官室に直接添加した。最終濃度のオキシトシンに１５分間接触させた後、器官室及び組織からオキシトシンとそれぞれのアンタゴニストを洗い落とし、３０分の静置後に、６０ｍｍｏｌ／ｌの塩化カリウムまたはフェニレフリンを塗布し、組織の生存能力及びこれらの血管収縮薬に対する最大誘発収縮を点検した。
【００５２】
Ｗｉｎｄａｑ／２００（ＤａｔａＱ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ）ソフトウェアを使用してデータを解析した。各濃度の物質の添加前（基底活性）及び添加後１０分間の血管収縮追跡図の下方面積として積分活性を計算し（１秒あたりのミリグラムとして表す）、基底活性に比較した（パーセンテージ変化として）。これらの実験と平行に時間−溶媒対照（溶媒は脱イオン水）を試験し、変化を減算した。最大効果の５０％を発揮するオキシトシン濃度を決定し、最大効果の半値の−ｌｏｇ５０及び収縮−応答曲線の下方面積を計算し、比較した。データを平均±標準偏差として表す。一元配置分散分析及びテューキー多重比較検定を適宜使用した。両側検定のＰ値＜０．０５を統計的有意水準とした。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】妊娠ラットの血圧に対するオキシトシンアンタゴニストの効果を示す。
【図２】オキシトシン感受性を比較するために非妊娠、妊娠中期及び妊娠後期のラットから単離したｉｎ  ｖｉｔｒｏラット子宮動脈へのオキシトシンの投与及び収縮性に対する効果を示す。
【図３】非妊娠の特発性高血圧（ＳＨＲ）ラットから単離した子宮動脈、大腿動脈、頚動脈及び大動脈の収縮用量／応答関係及びオキシトシン感受性を示す。
【図４】非妊娠のＷｉｓｔａｒ（ＷＫＹ）ラットから単離した子宮動脈、大腿動脈、頚動脈及び大動脈の収縮用量／応答関係及びオキシトシン感受性を示す。
【図５】非妊娠のＷＫＹラット及びＳＨＲラットから単離した子宮動脈の収縮用量／応答関係及びオキシトシン感受性を示す。
【図１】
2007518739.tif 000005
【図２】
2007518739.tif 000006
【図３】
2007518739.tif 000007
【図４】
2007518739.tif 000008
【図５】
2007518739.tif 000009
【国際調査報告】
2007518739.tif 000010
2007518739.tif 000011
2007518739.tif 000012
2007518739.tif 000013