(57)【要約】Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ（ヒッポファエ）の葉、液果および種子の抽出物の治療的に有効な量を使用する癌の予防および治療のための方法ならびに組成物が、提供される。癌治療の種々の段階におけるこれらの組成物の新規な使用が、開示される。ＣＯＸ−１よりもＣＯＸ−２を優先的に阻害するＨｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ抽出物を含む新規な組成物が、提供される。Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓに加えて、少なくとも１種の化学療法剤の治療的に有効な量を含む組成物が、提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトの癌状態を軽減するための方法であって、該方法は、
癌を発症する危険がある個体に、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの抽出物を含む組成物を、予防的に有効な量投与する工程
を包含する、方法。
【請求項２】
前記組成物が、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの葉の抽出物を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記組成物が、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの液果の抽出物を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓが、抽出前に乾燥される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓが、（ａ）凍結乾燥する工程、または（ｂ）６０℃で、オーブン乾燥する工程により、乾燥される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ＣＯＸ−２酵素活性を阻害するための方法であって、該方法は、
ＣＯＸ−２を阻害するために、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの抽出物を含む組成物を有効量投与する工程
を包含する、方法。
【請求項７】
前記組成物によるＣＯＸ−２活性の阻害が、ＣＯＸ−１活性の阻害より有意に高い、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
さらに、前記組成物によるＣＯＸ−２活性の阻害が、ＣＯＸ−１活性の阻害より１．５倍高い、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ＣＯＸ−２活性が、阻害され、ＣＯＸ−１活性が増加する、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
前記組成物が、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの複数の液果の抽出物、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの液果の抽出物またはＨｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ種子の抽出物のうちの１以上を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項１１】
Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓが、抽出前に乾燥される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記抽出物が、有機抽出物の水性画分である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記抽出物が、有機抽出物の溶媒画分である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記抽出物が、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ液果のエタノール抽出物または熱水抽出物である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ（緑茶）の抽出物をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍの抽出物、Ｓａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａの抽出物およびＳｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｂａｒｂａｔａの抽出物のうちの１以上をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
ヒトの癌状態を軽減するための方法であって、
癌の早期段階で、個体に
（ａ）Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの抽出物を含む、治療的に有効な量の組成物；および
（ｂ）Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍの抽出物、Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｂａｒｂａｔａの抽出物およびＳａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａの抽出物のうちの１以上
を投与する工程
を包含する、方法。
【請求項１８】
前記組成物が、（ｃ）治療的に有効な量の少なくとも１種の化学療法剤をさらに含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記組成物が、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの葉の抽出物を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記組成物が、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの液果の抽出物を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓが、抽出前に乾燥される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
前記Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓが、（ａ）凍結乾燥する工程、または（ｂ）６０℃で、オーブン乾燥する工程により乾燥される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記抽出物が、熱水抽出物である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
前記抽出物が、アルコール抽出物である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２５】
前記抽出物が、有機抽出物である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２６】
前記抽出物が、前記有機抽出物の脂質画分である。請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記抽出物が、前記有機抽出物の水性画分である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
放射線療法、化学療法、外科療法、免疫療法、光線力学療法およびそれらの組合わせからなる群より選択される、治療的に有効な量の１以上の抗癌処置を、前記個体に投与する工程をさらに包含する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２９】
前記癌が、肺癌、乳癌、子宮頸癌および前立腺癌からなる群より選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項３０】
前記化学療法剤が、微小管重合を乱す、請求項１８に記載の方法。
【請求項３１】
前記化学療法剤が、パクリタキセル、ドセタキセル、エトポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチンおよびビノレルビンからなる群より選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記化学療法剤が、シクロホスファミド、４−ヒドロペルオキシシクロホスファミド、チオテパ、タキソール、ドキソルビシン、ダウノルビシンおよびネオカルチノスタチンからなる群より選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項３３】
抗癌組成物であって、
Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍの抽出物、Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｂａｒｂａｔａの抽出物、およびＳａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａの抽出物のうちの１以上；ならびに
治療的に有効な量のＨｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの抽出物
を含む、抗癌組成物。
【請求項３４】
治療的に有効な量の少なくとも１種の化学療法剤をさらに含む、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
前記化学療法剤が、微小管重合を乱す、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
前記化学療法剤が、パクリタキセル、ドセタキセル、エトポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチンおよびビノレルビンからなる群より選択される、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３７】
前記化学療法剤が、シクロホスファミド、４−ヒドロペルオキシシクロホスファミド、チオテパ、タキソール、ドキソルビシン、ダウノルビシンおよびネオカルチノスタチンからなる群より選択される、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３８】
前記組成物が、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの葉の抽出物、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの液果の抽出物およびＨｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの種子の抽出物のうちの１以上を含む、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３９】
前記Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓが、抽出前に乾燥される、請求項３３に記載の組成物。
【請求項４０】
ＣＯＸ−２酵素活性を阻害するための組成物であって、
ＣＯＸ−２を阻害するのに有効な量のＨｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ抽出物
を含む、組成物。
【請求項４１】
さらに、前記組成物によるＣＯＸ−２活性の阻害が、ＣＯＸ−１活性の阻害よりも有意に高い、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
前記組成物によるＣＯＸ−２活性の阻害が、ＣＯＸ−１活性の阻害よりも１．５倍高い、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４３】
ＣＯＸ−２活性が阻害され、そしてＣＯＸ−１活性が増加する、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４４】
前記抽出物が、有機抽出物の水性画分である、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４５】
前記抽出物が、有機抽出物の溶媒画分である、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４６】
前記抽出物が、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの液果のエタノール抽出物または熱水抽出物である、請求項４０に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明者）
Ｊａｍｅｓ  ＤＡＯ、Ｔｏｍ  Ｃ．Ｓ．ＤＡＯおよびＤａｖｉｄ  Ｄ．ＴＯＮＧ
（関連出願の援用）
本出願は、２００３年９月２２日に出願した米国特許仮出願番号６０／５０５，０５３（その内容は本明細書に全体が、参考として援用される）の優先権の利益を主張する。本出願はまた、２００４年９月８日に出願した米国特許出願番号 （代理人整理番号５４４３０２０００１００）に関連し、それは本明細書に全体として明確に援用される。
【背景技術】
【０００２】
（発明の技術分野）
本発明は、全般に疾患状態の処置の間ヒッポファエ（ｓｅａ  ｂｕｃｋｔｈｏｒｎ）抽出物を使用する分野に関する。より詳細には、本発明は、癌を含む疾患状態の予防および治療のためのヒッポファエ液果抽出物およびヒッポファエ葉抽出物の方法および組成物を提供する。
【０００３】
（発明の背景）
癌細胞は、ＤＮＡへの損傷のために発生する。ＤＮＡが損傷される場合のほとんどは、細胞が死ぬか、またはそのＤＮＡを修復することができるかのいずれかである。癌細胞において、その損傷したＤＮＡは、修復されない。ヒトは、損傷したＤＮＡを遺伝し、それがいくつかの遺伝癌の原因になる。しばしばヒトのＤＮＡは、環境中の何か、例えば喫煙または放射線のようなバイオハザードに暴露されることにより損傷する。
【０００４】
癌は、通常腫瘍として形成する。白血病のようなある種の癌は、腫瘍を形成しない。代わりに、これらの癌細胞は、血液および血液形成組織を含み、そしてそれらが増殖する他の組織を通して循環する。癌細胞は、しばしばそれらが増殖を始め、そして正常組織と置換わる身体の他の部分に移動する。このプロセスは、転移と呼ばれ、その癌細胞が我々の体の血流またはリンパ管に入った時に起こる。乳癌のような癌由来の細胞が肝臓のような別の組織に伝播する場合、その癌はまだ乳癌であって、肝癌ではない。全ての腫瘍が、癌性とは限らない。良性（非癌性）腫瘍は、身体の他の部分に伝播（転移）せず、非常に稀な例外を除いて、生命を脅かすものではない。
【０００５】
どのような一個体でも、癌を発症する危険がある。癌の発生は、生涯を通して加齢と共に増加する（生涯危険）。例えば、米国において、男性は、癌の発生について２生涯危険における１を有し、女性は３危険における１を有する。他の危険因子としては、遺伝、食事および環境曝露（例えば、変異原性化学品、放射線、形質転換ウイルスなど）が挙げられると考えられる。世界保健機構により、約１０００万の新しい癌症例が、世界中で年毎に発生していると推定されている。その数値は、２０１５年までに、１５００万に到達することが予測されており、これらの新しい症例の３分の２は、開発途上国において発生している（非特許文献１）。例えば、世界中において１年当たり約６００，０００の肺癌の新症例がある；１年当たり乳癌の新症例が１００万に近づいている；頭頸癌（世界中で６番目に多く発生する癌）が、年毎に５００，０００の新症例の発生と推定されている。国立癌研究所は、癌について全体的な年間のコストは、１兆７００億ドルと推定する。処置コストは約４０００億ドルを占める。
【０００６】
新しい治療法が開発され、腫瘍に対する有効性が試験されているが、現在利用可能な癌処置の多くは、比較的有効ではない。化学療法は、処置された患者の４％のみが持続的な応答で、進行癌を有する患者のさらに３％のみが、実質的に寿命を延長させることが報告されている（非特許文献２）。現在の抗癌薬は、コストが高く、かつ重大な毒性を示す。後者に関しては、使用される薬物または薬物の組み合わせに依存して、全身性化学療法は、血液、血管、神経、消化管、腎臓、肺、耳および致命的なものを含む１以上の毒性の原因となり得る。例えば、タモキシフェンは２５年間女性に使用されてきたが、乳癌再発に限られた。１９９２年に始められた試験は、タモキシフェンが、治療剤として有効であるのみならず癌の予防（乳癌予防薬）にも非常に実質的な利点を有することを示した。しかしその研究では、タモキシフェンの使用は、健康な女性に有害な効果；即ち、子宮ガンの発症または呼吸器系血液凝固の危険を増加することを示した（非特許文献３）。
【０００７】
植物は、癌を処置する新規な、天然由来の薬剤の発見および開発に価値ある資源である。癌治療に現在使用されている薬物は、微小管の短縮（脱重合）または伸長（重合）を乱す（ｐｅｒｔｕｒｂ）よう企図された（非特許文献４）。中心体は、細胞の主要な微小管形成中心（ＭＴＯＣ）であり、いわゆる中心粒外周物質（ＰＣＭ）により囲まれる２つの中心粒から構成される。そのＰＣＭは、複雑な薄い線維状ネットワークおよび２連の付属物から構成される（非特許文献５）。中心体の主要な機能は、微小管の核形成および２極紡錘体の形成である（非特許文献６）。中心体およびそれらと関連する微小管は、分裂期の間、事象を指揮し、間期の間は、動物細胞構造の形成および運動を調節する。悪性腫瘍は、一般に異常な中心体プロフィールを示し、正常組織の中心体として比較して、中心体の大きさおよび数の増加、不規則な分布、異常な構造、異常なタンパク質リン酸化ならびに微小管核形成能力の増加により、特徴づけられる（非特許文献７；非特許文献８；非特許文献９；非特許文献１０；非特許文献１１；非特許文献１２；非特許文献１３；非特許文献１４）。多くの異常の中で、中心体の過増幅が、種々の腫瘍において、より高い頻度で見出される（非特許文献１５；非特許文献１６；非特許文献１７；非特許文献１８）。
【０００８】
癌治療において現在使用される種々の薬物は、微小管重合を乱す（ｐｅｒｔｕｒｂ）（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、エトポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチンおよびビノレルビン）よう企図された。それらは、微小管が構成される分子である、チューブリンへの結合という共通の作用機序を、共有する。（非特許文献１９）。少なくとも６種の植物由来の抗癌剤が、ＦＤＡ承認（タキソール、ビンブラスチン、ビンクリスチン、トポテカン、エトポシド、テニポシド）を受けている。他の薬剤（例えばカンプトテシン、９ＡＣ、イリノテカン）は臨床試験で評価されている。
【０００９】
例えば、タキソールは、最初にＰａｃｉｆｉｃ  ｙｅｗ（Ｔａｘｕｓ  ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ）の樹皮から単離されたジテルペノイド（ｄｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄ）であるが、チューブリン集合体を安定な凝集構造へ促進することによる強力な有糸分裂インヒビターである（非特許文献２０；非特許文献２１の総説を参考のこと）。タキソールは、抗癌化合物として極めて強力であることを示した。実に、それは、今、抵抗性卵巣癌の処置に使用され、そして臨床試験が、乳癌、肺癌および頭頸癌について有望である。（非特許文献２２；非特許文献２３；非特許文献２４）
喫煙者および喫煙経験者の肺における前癌性細胞の量を減少させる能力が調査されている化学防御薬剤としては、数世紀の間、中国で疾患の予防に使用されてきたＡＣＡＰＨＡ、６種の植物（Ｓｏｐｈｏｒａ  ｔｏｎｋｉｎｅｎｓｉｓ、Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ  ｂｉｓｔｏｒｔａ、Ｐｒｕｎｅｌｌａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｓｏｎｃｈｕｓ  ｂｒａｃｈｙｏｔｕｓ、Ｄｉｃｔａｍｎｕｓ  ｄａｓｙｃａｒｐｕｓおよびＤｉｏｓｃｏｒｅａ  ｂｕｌｉｆｅｒａ）の組み合わせが挙げられる。米国国立癌研究所の助成金の基で、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｃｏｌｕｍｂｉａ  Ｃａｎｃｅｒ  Ａｇｅｎｃｙ（カナダ）が、ＡＣＡＰＨＡの第ＩＩ相臨床試験を実施している国際コンソーシアムを先導している。
【００１０】
一般的に全身性化学療法および放射線治療に付随する毒性をさらに改善する、腫瘍を予防するための比較的対費用効果的および効率的な方法の必要性が存在する。
【００１１】
ヒッポファエ（ｓｅａ  ｈｕｃｋｔｈｏｒｎ）（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ）抽出物は、種々の目的に使用されてきた。例えば、血中脂質を調節するヒッポファエの種子油の不飽和脂肪酸の使用は、血管硬化症および放射線に抵抗性があり、腫瘍細胞を抑制し、免疫力を強化し、皮膚に栄養分を与え（特許文献１、Ｚｏｕ（１９９９））；ヒッポファエ果実からの油が、化粧品、薬学的製品および食品に有用であった（特許文献２、ＬｏｒｂｅｒおよびＨｅｉｌｓｃｈｅｒ（１９９６））；スキンケア製品のためのヒッポファエの油抽出物（特許文献３、Ｓｅｎｊａｖｉｎａら（１９９８））；化粧クリーム中のヒッポファエ油（特許文献４、Ｂｅｎｎｃｈａｒｏｖ（１９９９））；炎症性およびアレルギー性皮膚損傷を有する患者のカラゲニン誘発性水腫および受身皮膚アナフィラキシーを抑制するためのヒッポファエ（０．５〜１．５％）含有軟膏（特許文献５、Ｐｒｏｋｏｆら（１９９９））；火傷および感染傷害の処置のためのヒッポファエ油含有軟膏（特許文献６、Ｆｒｏｌｏｖ（１９９９））；冬の顔面皮膚を保護するヒッポファエ油含有化粧クリーム（特許文献７、ＤｅｓｔｉｎａおよびＳｅｌｉｖａｎｏｖ（１９９８））；抗アレルギー性、殺細菌性、抗炎症性および再生活性を示すヒッポファエ油含有クリーム（特許文献８、Ｃｈｉｓｔｊａｋｏｖ（１９９８））。
【特許文献１】中国特許第１２０７９２０号明細書
【特許文献２】ドイツ国特許第４４３１３９３号明細書
【特許文献３】ロシア国特許第２１０６８５９号明細書
【特許文献４】ロシア国特許第２１３４５７０号明細書
【特許文献５】ロシア国特許第２１３２１８３号明細書
【特許文献６】ロシア国特許第２１２９４２３号明細書
【特許文献７】ロシア国特許第２１２０２７２号明細書
【特許文献８】ロシア国特許第２１２３３２０号明細書
【非特許文献１】Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ（１９９５）４８：２２
【非特許文献２】Ｓｍｉｔｈら、１９９３、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ．Ｉｎｓｔ  ８５：１４６０−１４７４
【非特許文献３】Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｎｅｗｓ、１９９８、１５３：２２８
【非特許文献４】Ｃｏｍｐｔｏｎ、Ｄ．Ａ．ら、（１９９９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８６：９１３〜９１４
【非特許文献５】Ｐａｉｎｔｒａｎｄ、Ｍ．（１９９２）Ｊ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｂｉｏｌ  １０８：１０７〜１２８
【非特許文献６】Ｔａｎａｋａ、Ｔ．ら、（１９９９）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５８（１７）：３９７４〜８５
【非特許文献７】Ｌｉｎｇｌｅ、Ｗ．Ｌ．ら、（１９９８）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ９５（６）：２９５０〜５
【非特許文献８】Ｓａｔｏ  Ｎ．ら、（１９９９）Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ、Ｒｅｓ  ５（５）：９６３〜７０
【非特許文献９】Ｐｉｈａｎ、Ｇ．Ａ．ら、（１９９８）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５８（１７）：３９７４〜８５
【非特許文献１０】Ｃａｒｒｏｌｌ、Ｐ．Ｅ．ら、（１９９９）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １８（１１）：１９３５〜４４
【非特許文献１１】Ｘｕ、Ｘ．ら、（１９９９）Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  ３（３）：３８９〜９５
【非特許文献１２】Ｂｒｉｎｋｌｅｙ、Ｂ．Ｒ．ら（１９９８）Ｃｅｌｌ  Ｍｏｔｉｌ  Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ  ４１（４）：２８１〜８
【非特許文献１３】Ｄｏｘｓｅｙ、Ｓ．（１９９８）Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ  ２０（２）１０４〜６
【非特許文献１４】Ｋｕｏ、Ｋ．Ｋ．ら、（２０００）Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ３１（１）：５９〜６４
【非特許文献１５】Ｃａｒｒｏｌｌ、Ｐ．Ｅ．ら（１９９９）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １８；１８（１１）：１９３５〜４４
【非特許文献１６】Ｈｉｎｃｈｃｌｉｆｆｅ、Ｅ．Ｈ．ら、（１９９９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８３（５４０３）：８５１〜４
【非特許文献１７】Ｘｕ、Ｘ．ら、（１９９９）Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  ３（３）：３８９〜９５
【非特許文献１８】Ｗｅｂｅｒ、Ｒ．Ｇ．ら、（１９９８）Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ  Ｃｅｌｌ  Ｇｅｎｅｔ  ８３：２６６〜２６９
【非特許文献１９】Ｃｏｍｐｔｏｎ、Ｄ．Ａ．ら、（１９９９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８６：９１３〜９１４
【非特許文献２０】Ｋｉｎｇｓｔｏｎ、Ｄ．Ｇ．Ｉ．Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９４、１２、２２２
【非特許文献２１】Ｓｃｈｉｆｆ、Ｐ．Ｂ．；Ｆａｎｔ、Ｊ．；Ｈｏｒｗｉｔｚ、Ｓ．Ｂ．Ｎａｔｕｒｅ、１９７９、２７７，６６５
【非特許文献２２】Ｒｏｗｉｎｓｋｙ、Ｅ．Ｋ．；Ｃａｚｅｎａｖｅ、Ｌ．Ａ．；Ｄｏｎｅｈｏｗｅｒ、Ｒ．Ｃ．Ｊ．Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．１９９０、８２、１２４７
【非特許文献２３】ＭｃＧｕｉｒｅ、Ｗ．Ｐ．；Ｒｏｗｉｎｓｋｙ、Ｅ．Ｋ．；Ｒｏｓｅｎｓｈｅｉｎ、Ｎ．Ｂ．；Ｇｒｕｍｂｉｎｅ、Ｆ．Ｃ．；Ｅｔｔｉｎｇｅｒ、Ｄ．Ｓ．；Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ、Ｄ．Ｋ．：Ｄｏｎｅｈｏｗｅｒ、Ｒ．Ｃ．Ａｎｎ．Ｉｎｔ．Ｍｅｄ．１９８９、１１、２７３
【非特許文献２４】Ｆｏｒａｓｔｉｅｒｅ、Ａ．Ａ．、Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．Ｓｕｐｐｌ．３．１９９３、２０、５６
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
（発明の要旨）
本発明は、ヒッポファエ（ｓｅａ  ｂｕｃｋｔｈｏｒｎ）（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ）の抽出物を含む新規な組成物、抽出物および化合物ならびにそれらの製造方法および調製方法を提供する。疾患状態（例えば、癌）の予防および治療中のそのような化合物の使用はまた、上記組成物の調製および処方の方法ならびに本発明の組成物を使用する処置方法が、提供される。いくつかの実施形態では、少なくとも１種の化学療法剤の治療的に有効な量とヒッポファエをさらに含有する。
【００１３】
一般的なヒッポファエ（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ）の抗酸化的性質および免疫調節的性質は以前に例証されている。本発明は、癌治療において化学療法および放射線療法の毒性効果を軽減するヒッポファエの、抗酸化的性質、追加免疫的性質および他の性質の使用に関連する。本発明はまた、著しく高い抗酸化活性を示す、ヒッポファエの資源の同定に関する。本発明はまた、葉および液果のようなヒッポファエの形態の間の差を同定する。予想以上に高品質のヒッポファエ組成物を生じる抽出および乾燥の方法がまた、開示される。これらの方法は、一般にヒッポファエの抽出物を調製することおよび調製物が請求されている。
【００１４】
他の植物抽出物にヒッポファエを添加する相乗効果が、２００３年９月８日に出願された米国特許仮出願第６０／５０１，４５６号に開示され、本明細書には参考として援用される。癌治療におけるヒッポファエ含有組成物の使用は、本発明において提供され、化学療法剤の毒性を減少させる工程においてヒッポファエの開示された能力に基づいている。
【００１５】
一つの実施形態では、本発明の組成物は、予め存在していた癌細胞のさらなる増殖を阻害するのに使用すると細胞増殖抑制効果を示す、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍ抽出物、Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｂａｒｂａｔａ抽出物、Ｓａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ抽出物およびＨｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ（ヒッポファエ）抽出物の治療有効量を含み、その効果は、（ｉ）免疫系を追加免疫すること、（ｉｉ）細胞および組織への酸化的損傷を減少すること、（ｉｉｉ）炎症を減少すること、（ｉｖ）細胞周期の特定の段階において細胞の増殖を停止すること（ａｒｒｅｓｉｎｇ）、（ｖ）抗酸化活性ならびに（ｖｉ）発がん物質および変異原性物質へのさらなる曝露に対する抗変異原生効果の内の１以上の性質を示すことによる。
【００１６】
本発明の組成物は、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ（ヒッポファエ）葉抽出物、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ液果抽出物および／またはＨｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ種子抽出物の有効量を含み、それら単独または組合わせは、好ましくはＣＯＸ−１活性よりＣＯＸ−２酵素活性を阻害する。好ましい実施形態では、Ｈ．ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ抽出物の有効量は、ＣＯＸ−１より１．５ｘ、２ｘ、３ｘ、５ｘ、または１０ｘ、より効果的にＣＯＸ−２を、阻害する。いくつかの実施形態では、Ｈ．ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ抽出物の有効量は、ＣＯＸ−２活性を阻害し、そしてＣＯＸ−１活性を昂進する。
【００１７】
本発明および本発明の他の目的、特徴および優位性は、以下の本発明の詳細な説明および付随する図面および実施形態の中で、さらに明白になる。
【００１８】
（発明の詳細な説明）
本発明は、個体における癌の予防および処置について、抗癌剤としての使用のための新規な方法および組成物を提供する。本発明は、植物抽出ベースの組成物が、個体に投与される場合、有効に腫瘍増殖を阻害し得、実質的に非毒性であり得る新規な発見に関する。上記組成物としては、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍ、Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｂａｒｂａｔａ、Ｓａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａおよび必要に応じてＨｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ（ヒッポファ）の２以上の抽出物を含む。
【００１９】
一つの実施形態では、この方法は、担癌固体（哺乳動物；および好ましい実施形態では、ヒト）へ、上記組成物を、治療的に有効量投与する工程を包含する。別の実施形態では、本方法は、腫瘍発症を予防するために個体（例えば、腫瘍発症の危険の高い個体；または寛解しているが、再発の危険がある個体）に上記組成物を、予防的に有効量投与する工程を包含する。
【００２０】
従って、本発明の主要な目的は、担癌個体の処置のための方法を提供することであって、その方法は、上記担癌個体に投与される場合、腫瘍増殖を阻害する性質を有する組成物を、治療的に有効量投与する、方法である。
【００２１】
本発明の別の目的は、腫瘍発症の危険が高い個体に腫瘍発症の予防のための方法を提供することであって、その方法は、上記個体に投与される場合、腫瘍増殖の発生を予防または阻害する組成物を予防的有効量、投与する方法である。
【００２２】
本発明の別の目的は、担癌個体、腫瘍発症の危険が高い個体を処置する方法を提供することであって、その方法は、上記個体に投与される場合、腫瘍増殖を阻害し、かつ実質的に非毒性である両方の性質を有する組成物を治療有効量で処置する、方法である。実質的に「非毒性」とは、上記組成物が、全身性化学療法に一般的に付随する毒性がない；すなわち血液、血管、神経、消化管、腎臓、呼吸器、耳および免疫抑制（致死的感染につながり得る）の検出可能な毒性がない。
【００２３】
本発明のさらなる目的は、実質的に腫瘍の負荷が減少したが、まだ再発の危険がある個体を処置する方法を提供することであって、その方法は、上記個体に投与される場合、腫瘍増殖を阻害し、かつ実質的に非毒性である両方の性質を有する組成物を予防的に有効量投与する工程を包含する。
【００２４】
（定義）
本明細書で使用される場合「腫瘍」とは、明細書および特許請求の範囲の目的のために、導管系上皮細胞起源の固体非リンパ性原発腫瘍を意味し、限定されないが、乳、前立腺、結腸、肺、膵臓、肝臓、胃、膀胱または生殖路（子宮頸、卵巣、子宮内膜など）、脳、および骨髄；黒色腫；またはリンパ腫を含む。
【００２５】
本明細書で使用される場合、「腫瘍増殖を阻害する」とは、明細書および特許請求の範囲の目的のために、腫瘍の増殖を遅延すること、腫瘍の増殖を停止すること、腫瘍の減少または退行を引き起こすこと、腫瘍浸潤を阻害すること、腫瘍細胞死を引き起こすこと、転移の減少と退行を引き起こすことのうちの１以上を意味する。
【００２６】
本明細書で使用される場合、「腫瘍発症の予防」とは、明細書と特許請求の範囲の目的ために、腫瘍の増殖を阻害すること；およびより詳細には、腫瘍塊形成を予防するのに腫瘍細胞死を引き起こすことを意味する。
【００２７】
本明細書で使用される場合、用語「植物」とは、記載されている目的に有用な種子、葉、幹、鼻、液果、樹皮または他の植物部分をいう。特定の使用のために、根および根茎のような地下部分が使用されることは好ましい。上記葉、幹、種子、花、液果、樹皮または他の植物部分はまた、医薬品的効果を有し、そして茶および他の飲料、クリームを調製するため、ならびに食品調製に使用され得る。
【００２８】
「相乗作用」とは、組合わせインデックス（ＣＩ）により測定され得る。その組合わせインデックスは、ＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙにより記載された。（Ｃｈｏｕ、Ｔ．−Ｃ．Ｔｈｅ  ｍｅｄｉａｎ−ｅｆｆｅｃｔ  ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ  ｆｏｒ  ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ  ａｎｄ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ、ｐ６１〜１０２．Ｉｎ  Ｔ．−Ｃ．ＣｈｏｕおよびＤ．Ｃ．Ｒｉｄｅｏｕｔ（編）、Ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ  ａｎｄ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ  ｉｎ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒｐｙ．Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．（１９９１）；Ｃｈｏｕ、Ｔ．−Ｃ．、およびＰ．Ｔａｌａｌａｙ．  Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｄｏｓｅ−ｅｆｆｅｃｔ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ：ｔｈｅ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｄｒｕｇｓ  ｏｎ  ｅｎｚｙｍｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ．２２：２７〜５５（１９８４））ＣＩ値が０．９以下は、相乗的と考えられ、値が０．８５で中程度相乗的で、０．７より低い値は、顕著に相乗的と考えられる。ＣＩ値が０．９〜１．１０は、ほとんど相加的で、それより高いと拮抗的と考えられる。
【００２９】
【表１】
2007505934.tif 000002
相乗作用の決定は、生物学的可変性、用量、実験条件（温度、ｐＨ、酸素ストレス）、処置スケジュールおよび組合わせ比により影響され得ることは留意されるべきことである。
【００３０】
（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ（ヒッポファエ（ｓｅａ  ｂｕｃｋｔｈｏｒｎ）））
ヒッポファエ（ｓｅａ  ｂｕｃｋｔｈｏｒｎ）油は、健康オイルまたはロシアおよび中国の医療において薬剤として広く使用される（Ｌｉ、Ｔ．Ｃ．；Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ、Ｗ．Ｒ．Ｓｅａ  ｂｕｃｋｔｈｏｒｎ（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ  Ｌ．）：Ａ  ｍｕｌｔｉｐｕｒｐｏｓｅ  ｐｌａｎｔ．Ｈｏｒ  Ｔｅｃｈ．１９９６、６、３７０〜３８０）。それは、肝障害、急性肝炎および慢性肝炎を予防する（Ｘｉａｏｐｉｎｇ、Ｔ．；Ｑｉａｏｈｏｎｇ、Ｓ．；Ｘｉａｏｌａｎ、Ｃ．；Ｊｕｎ、Ｃ．；Ｙｕｌａｎ、Ｌ．；Ｑｉｎｇｎｉｎｇ、Ｌ．Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｓｅａ  ｂｕｃｋｔｈｏｒｎ  ｆｒｕｉｔ  ｏｉｌ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ｈｅａｌｔｈ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ．Ｗｏｒｋｓｈｏｐ  ｏｎ  Ｓｅａ  ｂｕｃｋｔｈｏｒｎ、１９９５、Ｂｅｉｊｉｎｇ、Ｃｈｉｎａ、（発行された）１９９６、ｐｐ１６１〜１６４）；化学的火傷に対する治療的効果を有する（Ｎｉｋｕｌｉｎ、Ａ．Ａ．；Ｉａｋｕｓｈｅｖａ、Ｅ．Ｎ；Ｚａｋｈａｒｏｖａ、Ｎ．Ｍ．Ａ  ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅａ  ｂｕｃｋｔｈｏｒｎ、ｒｏｓｅ  ａｎｄ  ｐｌａｎｔａｉｎ  ｏｉｌｓ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｅｎｔａｌ  ｅｙｅ  ｂｕｒｎｓ．Ｅｋｓｐ．Ｋｌｉｎ．Ｆａｒｍａｋｏｌ．１９９２、５５、６４〜６６．）；ならびに抗変異原性的性質を有する（Ｎｅｒｓｅｓｉａｎ、Ａ．Ｋ．；Ｚｉｌ’ｆｉａｎ、Ｖ．Ｎ．；Ｋｕｍｋｕｍａｄｚｈｉａｎ，Ｖ．Ａ．；Ｐｒｏｓｈｉａｎ、Ｖ．Ｖ．Ａｎｔｉｍｕｔａｇｅｎｉｃ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｓｅａ  ｂｕｃｋｔｈｏｒｎ  ｏｉｌ．Ｇｅｎｅｔｉｋａ  １９９０、２６、３７８〜３８０）ことが報告されている。
【００３１】
ヒッポファエ種子油は、２つの必須脂肪酸、リノール酸およびα−リノレン酸の高含量を含み、それらは、アラキドン酸およびエイコサペンタノン酸のような不飽和脂肪酸の前駆体である。ヒッポファエ液果の果肉／皮由来の油は、パルミトレイン酸およびオレイン酸が豊富である（Ｃｈｅｎら「Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｉｓｔｉｃ  ｏｆ  ｓｅａ  ｂｕｃｋｔｈｏｒｎ  ｆｒｕｉｔ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｏｉｌ」Ｃｈｅｍ．Ｉｎｄ．Ｆｏｒｅｓｔ  Ｐｒｏｄ．（Ｃｈｉｎｅｓｅ）１０（３）１６３〜１７５）。血漿脂質中のαリノレン酸レベルの増加は、アトピー性皮膚炎症状に対する明らかな改善効果を示す（Ｙａｎｇ、Ｂ．ら「Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｄｉｅｔａｒｙ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｓｅａ  ｂｕｃｋｔｈｏｒｎ（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ）  ｓｅｅｄ  ａｎｄ  ｐｕｌｐ  ｏｉｌｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｋｉｎ  ｇｌｙｃｅｒｏｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｔｏｐｉｃ  ｄｅｒｍａｔｉｓｉｓ」Ｊ  Ｎｕｔｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．２０００  Ｊｕｎ  １；１１（６）：３３８〜３４０）。αリノレン酸のこれらの効果は、エイコサノイド組成物の変化およびエイコサノイド合成とは独立した他の機序の両方に起因し得る（Ｋｅｌｌｙ  １９９２、α−ｌｉｎｏｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ．Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ、８（３）、２１５〜２）。
【００３２】
ヒッポファエ（ｓｅａ  ｂｕｃｋｔｈｏｒｎ）（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ  Ｌ．）は、水性および脂溶性の両方の抗酸化剤ならびにポリ不飽和脂肪酸に富んだ資源である。抗酸化剤に富んだジュース（ヒッポファエ）のヒトにおける冠状心疾患の危険因子に対する効果が、報告されている。（Ｅｃｃｌｅｓｔｏｎら、Ｊ  Ｎｕｔｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００２  Ｊｕｎ；１３（６）：３４６〜３５４）ヒッポファエ（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ）の硬変患者に対する効果が、調査され、アミノトランスフェラーゼの正常化までの期間を短縮することが報告された。（Ｇａｏ  ＺＬ．ら、Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．２００３  Ｊｕｌ；９（７）：１６１５〜１６１７）。ＲＨ−３（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの液果全体のアルコール抽出物）は、全身致死照射に対するマウスの生存期間に関する放射線防御活性を提供することが例証されている。（Ｇｏｅｌ  ＨＣら、Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒ  Ｒｅｓ．２００３  Ｍａｒ；１７（３９：２２２〜２２６）。
【００３３】
粉末化葉および全液果からのヒッポファエ（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ）抽出物を使用する抗酸化的性質および免疫調節的性質を、モデル系としてリンパ球を使用することが例証された。（Ｇｅｅｔｈら、Ｊ  Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ  ２０００  Ｍａｒ；７９（３）：３７３〜８）。ヒッポファエ油の細胞防御的活性はまた、報告されている（Ｇｅｅｔｈａら、Ｂｉｏｍｅｄ．Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ．２００２、５６：４６３〜４６７）。Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ由来のヘキサン抽出物の抗潰瘍性効果が、例証されている。（Ｓｕｌｅｙｍａｎ  Ｈら、Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒ  Ｒｅｓ  ２００１  Ｎｏｖ；１５（７）：６２５〜７）。マウスにおける全身致死的照射に対するＨｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ液果の生薬的調製物（３０ｍｇ／マウス体重１ｋｇ）による放射線防御は、フリーラジカルを捕捉し、幹細胞の増殖の促進および免疫刺激的性質を示唆する。（Ｇｏｅｌ  ＨＣら、Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００２  Ｊａｎ；９（１）：１５〜２５）。ヒッポファエ由来の全フラボンによる血小板凝集の阻害が、報告されている。（Ｃｈｅｎｇら、Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２００３、７２：２２６３〜２２７１）。Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ全液果の有機抽出物の、ラット血液におけるニコチン誘導酸化ストレスに対する有益な効果が、ビタミンＥと比較された（Ｓｕｌｅｍａｎ  Ｈら、Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２５：１１３３〜１１３６；２００２）。
【００３４】
ある研究によって、ヒッポファエジュースの主要な抗酸化剤（約７５％）は、アスコルビン酸であることが見出された。（Ｒｏｓｃｈ  Ｄ．ら、Ｊ  Ａｇｒｉｃ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．２００３  Ｊｕｌ  １６；５１（１５）：４２３３〜４２３９）。Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ  Ｌ．Ｃｖ．Ｉｎｄｉａｎ  Ｓｕｍｍｅｒ由来のヒッポファエジュースの組成物に対する加工効果が報告されている。（Ｂｅｖｅｒｉｄｇｅ  Ｔ．ら、Ｊ  Ａｇｒｉｃ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．２００２  Ｊａｎ  ２；５０（１）：１１３〜１１６）。
【００３５】
Ｈ．ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ抽出物のアポトーシスおよび細胞増殖に対する効果は、明確ではなく、おそらく使用された抽出物と量に依存すると思われる。マウス体重１ｋｇあたり３０ｍｇのヒッポファエ液果抽出物での処置は、リンパ球、多形核白血球および単球の増殖を増加した。（Ｇｏｅｌ  ＨＣら、Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ９：１５〜２５；２００２）。照射前にマウスへのＨ．ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ液果抽出物の投与は、空腸の細胞性陰窩および絨毛の損失を減少させ、これらの細胞におけるアポトーシスの頻度を減少させた。（Ｇｏｅｌ  ＨＣら、Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １７：２２２〜２２６；２００３）。しかしながら、同じ研究者らはまた、Ｈ．ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ抽出物が単純化学系において反応性酸素種を生成し得、かつ処置された胸腺細胞においてＤＮＡ−タンパク質架橋を生成し得ることを見出した。彼等の研究は、Ｈ．ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの特異的な効果を示した；高濃度の抽出物で処置された細胞は、照射により生成したフリーラジカルを捕捉することができたが、酸素フリーラジカルが、照射なしで低濃度の抽出物で処置された細胞により産生された。（Ｇｏｅｌ  ＨＣら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２４５：５７〜６７；２００３）。濃度依存的な様式で、Ｈ．ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ液果抽出物は、１００μｇ／ｍｌまでのエクスビボ条件で胸腺細胞においてアポトーシスを誘導した。しかしながらこの用量を超えては、アポトーシスの誘導は阻害された。体重当たり３０ｍｇ／ｋｇのヒッポファエ液果抽出物の放射防御的用量はまた、胸腺細胞において有意なＤＮＡ断片化を誘導した。（Ｇｏｅｌ  ＨＣら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｎｖｉｒｏｍｅｎｔａｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２３：１２３〜１３７；２００４）。
【００３６】
本発明は、癌の予防におけるＨｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ抽出物の使用に関する。Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの抗酸化的性質は、染色体および遺伝子への環境的損傷から細胞を防御するのに有用であり、従って癌関連遺伝子において変異の可能性を減少する。
【００３７】
本発明はまた、癌治療におけるＨｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ抽出物の使用に関する。Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの抗酸化的性質は、化学療法剤との共投与により使用される。Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓは、そのような薬剤の副作用を減少させ（ｉ）化学療法剤の用量を増加すること、および／または（ｉｉ）化学療法剤投与の症状を減少させることができる。
【００３８】
ヒッポファエは、放射線療法および化学療法に対するその防御的効果により、癌の処置に有益であり得る。一方、ヒッポファエ強力な抗酸化的性質は、癌細胞の増殖を予防する薬剤の細胞傷害的な効果を、相殺する。本発明の組成物は、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ抽出物の濃度を調整することにより有益な効果を最適化するように調製される。
【００３９】
（組成物）
本発明の組成物は、有効であればいかなる形態でもあり得、限定されないが、乾燥粉末、グランド、エマルジョン、抽出物および他の従来の組成物が、挙げられる。上記組成物の有効な成分を抽出または濃縮するために、代表的には植物部分を適切な溶媒（例えば、水、アルコール、メタノールもしくは他の溶媒または混合溶媒）に接触させる。上記溶媒の選択は、日常的になされ得る。例えば、それは溶媒により抽出される、または濃縮される活性成分の性質に基づく。上記組成物の好ましい活性成分としては、限定されないが、ビタミンＣおよびビタミンＥ、αリノレン酸、フェノロック（ｐｈｅｎｏｌｏｃ）、フェノールエステル、フラボノール、アントシアニン、タンパク質、クエルセチンなどが挙げられる。これらの成分は、例えばアルコール性溶媒を使用して、同じ工程で抽出され得る、または個別に抽出され得、毎回植物から特定の標的成分を抽出するのに特に効果的な溶媒を使用する。特定の実施形態では、抽出は以下のプロセスにより実施され得る：選択された部分、好ましくは葉を粉末に製粉する工程。その粉末は、上記組成物から活性因子を抽出するのに効果的な十分な時間、所望の溶媒に浸漬され得る。その溶液をろ過しそして濃縮してその溶媒により抽出された高濃度の構成成分を含んだペーストを産生し得る。いくつかのケースでは、上記ペーストは、その組成物の粉末抽出物を産生するために乾燥され得る。上記抽出物の中の活性成分の含量は、ＨＰＬＣ，ＵＶおよび他の分光測定法を使用して測定され得る。
【００４０】
本発明の組成物は、如何なる有効経路により、如何なる形態でも投与され得るが、経口、非経口（ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ）、経腸、腹腔内、局所（ｔｏｐｉｃａｌ）、経皮（例えば任意の標準的なパッチを使用して）、眼、鼻、局所（ｌｏｃａｌ）、非経口（ｎｏｎ−ｏｒａｌ）例えばエアゾール、吸入、皮下、筋肉内、バッカル、舌下、膣、動脈内および鞘内などが挙げられる。それは、単独または任意の成分との組み合わせで投与され得、その成分は活性もしくは不活性で、医薬品の形態、または食品または飲料添加物として含む。
【００４１】
本発明の好ましい実施形態では、上記組成物は任意の適切な形態で経口的に投与される。その形態は、例えば植物全体、粉末化もしくは微粉砕化植物物質、抽出物、丸剤、カプセル、顆粒、錠剤または懸濁液が挙げられる。
【００４２】
上記組成物は、任意の薬学的に受容可能なキャリアと組合され得る。句「薬学的に受容可能なキャリア」とは、任意の薬学的キャリアで、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、第１８版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  ｃｏｍｐａｎｙ、１９９０などに記載されている標準的なキャリアを意味する。当該分野で周知の適切なキャリアの例として、例えばリン酸緩衝生理食塩水、Ｐｏｌｙｓｏｒｂ  ８０を含有するリン酸緩衝生理食塩水、水、水中油エマルジョンおよび種々の型の湿潤剤など標準的な薬学的キャリアが挙げられるが、これらに限定されない。他のキャリアはまた、滅菌溶液、錠剤、コートされた錠剤薬剤およびカプセルが挙げられる。代表的には、そのようなキャリアは、例えばデンプン、ミルク、糖、特定の型の粘土、ゼラチン、ステアリン酸もしくはその塩、ステアリン酸マグネシウムもしくはステアリン酸カルシウム、タルク、植物脂肪もしくは植物油、ガムおよびグリコールのような賦形剤を含む。そのようなキャリアとしてはまた、香料および着色剤または他の成分を含み得る。そのようなキャリアを含む組成物は、周知の従来の方法により処方される。一般に上記組成物で処方される賦形剤は、経口投与に適切で、それまたは他の活性成分と有害に反応しない。
【００４３】
適切な薬学的に受容可能なキャリアとしては、水、塩溶液、アルコール、アラビアゴム、植物油、ベンジルアルコール、ゼラチン、ラクトース、アミロースもしくはデンプンのような炭化水素、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、香料油、脂肪酸モノグリセリドおよび脂肪酸ジグリセリド、ペンタエリトリトール脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロースエステルなどが挙げられるが、これらに限定されない。他の添加剤としては、例えば、抗酸化剤、保存剤、着色剤、香味剤および希釈剤、乳化剤および懸濁剤（例えば、アカシア、寒天、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、ベントナイト、カルボマー（ｃａｒｂｏｍｅｒ）、カラゲナン、カルボキシメチルセルロース、セルロース、コレステロール、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース（ｈｙｄｒｏｐｐｒｏｐｙｌ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、オクトキシノール９、オレイルアルコール、ポビドン、プロピレングリコールモノステアレート、ラウリル硫酸ナトリウム、ソルビタンエステル、ステアリルアルコール、トラガカント、キサンタンガムおよびそれらの誘導体、溶媒ならびに結晶セルロース、クエン酸、デキストリン、デキストロース、液体グルコース、乳酸、ラクトース、塩化マグネシウム、メタリン酸カリウム、デンプンなどの種々の成分が挙げられる。
【００４４】
上記組成物はまた、他の活性成分（例えば抗酸化剤、ビタミン（Ａ、Ｃ（アスコルビン酸）、Ｂ類（例えば、Ｂ１、チアミン、Ｂ６、ピリドキシン、Ｂ複合体、ビオチン、コリン、ニコチン酸、パントテイン酸、Ｂ１２、シアノコバラミンおよび／またはＢ２）、Ｄ、Ｄ２、Ｄ３、カルシフェロール、Ｅ（例えば、トコフェロール）、リボフラビン、Ｋ、Ｋ１、Ｋ２））と共に処方され得る。好ましい化合物としては、例えば、クレアチン一水和物、ピルビン酸、Ｌカルニチン、αリポ酸、フィチン、フィチン酸、コエンチームＱ１０、ＮＡＤＨ、ＮＡＤ、Ｄリボース、アミノ酸（例えば、Ｌグルタミン、リジン）、クリシン；プレホルモン（例えば、４−アンドロステンジオン、５−アンドロステンジオン、４（もしくは５−）アンドロステンジオール、１９−ノル−４（もしくは５−）−アンドロステンジオン、１９−ノル−４（もしくは５−）−アンドロステンジオオール、ベータエクジステロン、および５−メチル−７−メトキシイソフラボンが挙げられる。好ましい活性成分としては、松花粉、クコの実、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ、Ｌｉｇｕｓｔｉｃｕｍ、Ａｃａｎｔｈｐａｎａｘ、Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ、Ｅｐｈｅｄｒａ、ツルニンジン、イトヒエハギ  Ｗｉｌｌｄ、Ｌｉｌｉｕｍ、Ｓｐａｒｇａｎｉｕｍ、ニンジン、高麗ニンジン、Ｇａｒｃｎｉａ、Ｇｕｇｇｌｅ、ブドウ種子抽出物、もしくは粉末および／またはＧｉｎｋｏ  Ｂｉｌｏｖａが挙げられる。
【００４５】
本発明の組成物と共に処方され得る他の植物および植物学的物としては、種々のテキストおよび刊行物（例えば、ＥＳ  Ａｙｅｎｓｕ、Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｐｌａｎｔｓ  ｏｆ  Ｗｅｓｔ  Ａｆｒｉｃａ、Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ａｌｇｏｎａｃ、Ｍｉｃｈ．（１９７８）；Ｌ．Ｂｏｕｌｏｓ、Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｐｌａｎｔｓ  ｏｆ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｆｒｉｃａ、Ｒｆｅｒｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｉｎｃ．、Ａｌｇｏｎａｃ、Ｍｉｃｈ（１９８３）；Ｎ．Ｃ．Ｓｈａｈ、Ｂｏｔａｎｉｃａｌ  Ｆｏｌｋ、Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ  ｉｎ  Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｉｎｄｉａ、Ｊ．Ｅｔｈｎｏｒｐｈａｒｍ、６：２９４〜２９５（１９８２）に記載される物を含む。
【００４６】
他の活性薬剤としては、抗酸化剤、抗癌原剤、抗炎症剤、ホルモンおよびホルモンアンタゴニスト、抗生物質（例えば、アモキシリン）および他の抗細菌剤ならびに他の医学的に有用な薬物、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、第１８版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  ｃｏｍｐａｎｙ、１９９０に同定されている薬物が挙げられる。本発明の好ましい組成物は、植物抽出物の約１％〜１００％、好ましくは、約２０〜７０％；および必要に応じて薬学的に受容可能な賦形剤を含む。
【００４７】
本発明は、上記組成物を投与する方法、例えば、抗酸化効果を提供すること、酸化に対して防御すること、抗癌効果を提供すること、ＤＮＡ修復を促進すること、抗放射線効果を提供すること、放射線に対して防御すること、炎症を減少すること、および他の状態ならびに本明細書で言及されている疾患に関する。
【００４８】
用語「投与する」とは、上記組成物が、所望の目的を達成できるような様式で、宿主に送達されることを意味する。記述したように、上記組成物は、例えば経口的に、局所的に、直腸のような有効な経路により投与され得る。上記組成物は、処置の必要な宿主に、例えばヒト、男性ヒト、女性ヒト、霊長類、ペット（例えばネコおよびイヌ）、家畜（例えばウシ、ウマ）のような哺乳動物、トリ、ニワトリのような脊椎動物に投与され得る。
【００４９】
上記組成物は、そのような宿主に投与される。有効量とは、所望の効果、好ましくは上述の有益な効果または治療的効果を達成するために有用な量である。そのような量は、日常的に、所望の結果を達成するのに効果的な量を決定するために、細胞、組織、動物モデルに投与される。量は、種々の因子（上記組成物が投与される環境（例えば、癌患者、動物モデル、組織培養など）、処置される細胞の部位、処置されるヒトまたは動物の年齢、健康、性別および体重）を基礎にして選択される。有用な量としては、上記組成物の異なる形態の用量当たり１〜１００、５〜５００、１０〜１０００μｇ／ｍｌ、１０ミリグラム〜１００グラム、好ましくは、例えば１００ミリグラム〜１０グラム、２５０ミリグラム〜２．５グラム、１ｇｍ、２ｇｍ、３ｇｍ、５００ｍグラム〜１．２５グラム、またはそれより高い量が含まれ、その形態としては、受容者の必要性および調製の方法に依存して、植物粉末、植物抽出物ペーストまたは粉末、上記組成物の有効成分を含むよう調製された茶および飲料、ならびに注入がある。
【００５０】
（治療的Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ組成物）
本発明は、「早期」癌および発癌前の状態に、（ｉ）免疫系を追加免疫する、（ｉｉ）細胞および組織に対する酸化的損傷を減少する、および（ｉｉｉ）ＣＯＸ−２のような抗炎症活性を示すことにより、有効なＨｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ（ヒッポファエ）抽出物含む組成物に関する。Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ（ヒッポファエ）組成物および化学療法剤のような他の抗癌化合物は、代表的な組成物の中に含まれる。
【００５１】
本発明の上記組成物および方法における使用に適切な化学療法剤としては、抗癌活性のための細胞性構造および／または代謝に、少なくとも部分的に干渉することに依存する任意の薬学的に受容可能な公知の薬剤であり得る。従来の化学療法剤の例としては、シスプラチン、カルボスタチンおよびそれらのアナログおよび誘導体のようなプラチナ化合物；クロラムブシル、ナイトロジェンマスタード、ニトロミン、シクロホスファミド、４−ヒドロペルオキシシクロホスファミドのようなアルキル化剤；アルドホスファミドの２−ヘキセノピラノシド、メルファラン、ＢＣＮＵ、ＣＣＮＵ、メチルＣＣＮＵ、ウラシルマスタード、マノムスチン、トリエチレンメラミン、クロロゾトシン、ＡＣＮＵ、ＧＡＮＵ、ＭＣＮＵ、ＴＡ−７７、ヘキサメチルメラニン、ジブロモマンニトール、ピポブロマン、エポキシプロピドン、エポキシピペラジン、エトグルシド、ピップスルファン、ジメチルミレラン、ブブルファン、インプロキュオン（ｉｎｐｒｏｃｕｏｎ）、トレニモン（ｔｈｒｅｎｉｍｏｎｅ）、チオ−ＴＥＰＡおよびアザ−ＴＥＰＡ；例えば、５−フルオロウラシル、葉酸、メトトレキセート（ＭＴＸ）、６−メルカプトプリン、アミノプテリン、８−アザグアニン、アザチオプリン、ウラシル、シタラビン、アアセリン、テガフル、ＢＨＡＣ、ＳＭ１０８、シトシンアラビノシド、シスプラカム（ｃｉｓｐｕｒａｃｈａｍ）、ジアザマイシン（ｄｉａｚａｍｙｃｉｎｅ）、ＨＣＦＵ、５’ＤＦＵＲ、ＴＫ−１７７およびシクロチジン（ｃｙｃｌｏｔｉｄｉｎｅ）のような代謝拮抗薬；例えばブレオマイシン、ダウノマイシン、シクロマイシン（ｃｙｃｌｏｍｙｃｉｎ）、アクチノマイシンＤ、マイトマイシンＣ、カルチノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｙｌｉｎ）、マクロチノマイシン（ｍａｃｒｏｃｉｎｏｍｙｃｉｎ）、ネオスラマイシン、マクロモマイシン（ｍａｃｒｏｍｏｍｙｃｉｎ）、ノガロマイシン（ｎｏｇａｒｏｍｙｃｉｎ）、クロモマイシン（ｃｒｏｍｏｍｙｃｉｎ）、７−ｏ−メチルノガロール−４’−エピアドリアマイシン（７−ｏ−ｍｅｔｈｙｌｎｏｇａｌｌｏｌ−４’−ｅｐｉａｄｒｉａｍｙｃｉｎ）、４−デメトキシダウノルビシン（４−ｄｅｍｅｔｈｏｘｙｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトゾトシンおよびミトザントロン（ｍｉｔｏｚａｎｔｈｒｏｎ）のような抗生物質；例えば、マホスファミド、ナイトロジェンマスタード、ノルナイトロジェンマスタード、メルファラン、クロラムブシルのようなビスクロロエチル化剤；例えばマイトマイシンＣのような生物還元剤および例えばミトキサントロン、プロカルバジン、ドキソルビシン、エルビシン、プレドニムスチン、Ｐ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）インヒビター（例えばタリブラスチン（Ｔｈａｌｉｂｌａｓｔｉｎｅ）およびプロテインキナーゼインヒビター（例えばプロテインキナーゼＣｓインヒビター（イルモホシン）。化学療法剤とは、特に以下のものをいう：例えば、エトポシド、ポドフィロトキシン（ｐｏｄｐｐｈｙｌｌｏｔｏｘｉｎｅ）、ビンクリスチンおよびビンブラスチンのようなビンかアルカロイドを含む抗微小管剤またはチューブリン標的薬剤；タキサン（パクリタキセル、ドセタキセルおよびタキサン前駆体（１０−デサセチルバカチンＩＩＩ（１０−ｄｅａｃｅｔｙｌｂａｃｃａｔｉｎ））、ヒ酸塩、コルヒチン（ｅ）、チオコルヒチン、コルヒセイン（ｃｏｉｃｈｉｃｅｉｎｅ）、コルヒサル（ｃｏｌｃｈｉｓａｌ）および他のコルヒクム塩；エピポドフィロトキシン（ｅｐｉｐｏｄｐｈｙｌｌｏｔｏｘｉｎｓ）（エトポシド）、サイトカラシン（例えばＡ〜Ｅ、Ｈ、Ｊ）、オカダ酸；カルバリルおよびその代謝物（例えば、ナフトール、またはナフチル化合物（１−ナフトール、２−ナフトール、１−ナフチルリン酸、マロン酸塩、ノコダゾール（メチル−（５−[２−チエニル−カルボニル]−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル）カルバメート）；クリプトフィシン（Ｃｐ）（ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ）およびそのアナログ（例えばＣＰ−５２）；ワートマニン、１２−０−テトラデカノイルホルボール−１３−アセテート（ＴＰＡ）、１４−３−３シグマおよびそのホモログ(例えばｒａｄ２４およびｒａｄ２５)、Ｕｓｔｉｌｏｘｉｎ  Ｆ；モノクロタリン（例えば、モノクロタリンピロール（ＭＣＴＰ）；エストラムスチンおよびアデノシンの阻害薬。これらの化学療法剤は単独または組合わせのいずれでも使用され得る。好ましくは、１種の代謝拮抗剤と１種の抗微小管剤とが組合わされて、そしてより好ましくは、異なる殺腫瘍メカニズムを有するタキソール、シスプラチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、ブレオマイシンまたは５−フロロウラシルが組合わされる。細胞骨格を干渉するヒ酸化合物、コルヒチン、コルヒチン、コルヒセイン、コルヒサル、コルヒクム塩、ビンブラスチン、パクリタキセルおよび関連化合物を含む組合わせは、最も好ましい。新しい化学療法剤および薬物が、同定されそして当該分野に入手可能になると、それらは本発明の実施に直接適用され得る。
【００５２】
好ましい実施形態では、全ての天然組成物は、植物成分（例えば、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍ抽出物、Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｂａｒｂａｔａ抽出物およびＳａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ抽出物のうちの１以上に加えて、シクロホスファミド、４−ヒドロキシペルオキシシクロホスファミド、チオテパ、タキソールおよび関連化合物、ドキソルビシン、ドセタキセル、ダウノルビシンおよびネオカルチノスタチン）との組合わせでＨ．ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ抽出物を含む。
【００５３】
癌治療に現在使用され、微小管短縮（脱重合）または微小管伸長（重合）を乱す（ｐｅｒｔｕｒｂ）するよう企図された薬物（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、エトポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチンおよびビノレルビン）は、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ組成物の成分である。これらの薬物は、微小管が構成される分子であるチューブリンに結合し、紡錘体の集合を阻害することにより有糸分裂中の細胞を停止する（Ｃｏｍｐｔｏｎ、Ｄ．Ａ．ら、（１９９９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８６：３１３〜３１４）。
【００５４】
Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ組成物による抗癌治療のための本発明に従った方法は、上記組成物の治療有効量を投与する工程に加えて、１以上の標準的抗癌処置（例えば、放射線療法、化学療法、外科療法、免疫療法、および光線力学療法のうちの１以上）を施す工程を、さらに包含する。この代替的な好ましい実施形態では、本方法は、上記組成物の治療有効量を投与する工程に加えて、１以上の標準的な化学療法剤の治療有効量を、投与する工程を包含する。１以上の化学療法剤の治療有効量と上記組成物の治療有効量の組合わせは、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓによる毒性の副作用の軽減のために、より大用量の化学療法剤の使用が可能になる。
【００５５】
本発明は、「進行」癌を処置するＨｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ（ヒッポファエ）抽出物含有組成物に関し、その処置は（ｉ）免疫系を追加免疫する性質、（ｉｉ）細胞および組織への損傷を減少させる性質、ならびに（ｉｉｉ）標準的な治療に対する耐性を増加させる性質のうちの１以上の性質を示すことによる。好ましい実施形態では、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ（ヒッポファエ）の熱水抽出物が、使用される。抽出物、特にＨｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの熱水抽出物は、顕著な抗酸化的性質を示し、そして標準的化学療法および放射線療法に対する耐性を増加させる。
【実施例】
【００５６】
さらなる労力なしで、当業者は、前述の説明を利用して、その全ての範囲まで本発明を使用し得る。以下の実施例は、単に例示的なものであって、本開示の残りの部分を、ともかく、少しの限定をもするものではない。
【００５７】
Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓに加えて、以下の植物抽出物が実施例の全体を通して使用した；Ｐａｎａｘ  Ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ（西洋ニンジン）、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍ、Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｂａｒｂａｔａ、Ｓａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａおよびＣａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ（緑茶）。
【００５８】
これらの組み合わせまたは個別の抽出物で得られた結果を、ＡＣＡＰＨＡ、６種（Ｓｏｐｈｏｒａ  ｔｏｎｋｉｎｅｎｓｉｓ、Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ  ｂｉｓｔｏｒｔａ、Ｐｒｕｎｅｌｌａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｓｏｎｃｈｕｓ  ｂｒａｃｈｙｏｔｕｓ、Ｄｉｃｔａｍｎｕｓ  ｄａｓｙｃａｒｐｕｓおよびＤｉｏｓｃｏｒｅａ  ｂｕｌｂｉｆｅｒａ）の植物性薬品の組合わせと比較した。
【００５９】
（実施例１：植物抽出物の調製法）
本発明の組成物は、乾燥植物性薬品として投与され得る。植物性薬品調製物は、植物化学品を含み、そのいくつかは、水性媒体に溶解性であり、一方他のものは有機（アルコール、脂質）媒体に比較的より溶解性がある。異なる抽出方法を使用して、その植物性薬品由来の有効な成分を抽出する能力を試験した。抽出方法は以下が挙げられる：熱水抽出；有機（脂質画分または溶媒画分）抽出；有機（水性画分）抽出；およびエタノール抽出。
【００６０】
製品を、図１に示される一般的な抽出プラットフォームにより、異なる溶媒を使用して植物性薬品から調製する。植物性薬品および植物性薬品ブレンドを、還流下、３０〜６０分間、溶媒（熱水、８０％エタノールまたはクロロホルム／メタノール）で抽出し、濾過により分離して濾液を得、そしてさらなる分析のために風乾した。その濾液を、活性を決定する前に、組み合わせ、希釈または濃縮した。好ましくは、抽出を、１回以上繰り返したが、しかしながら３回目の抽出では回収率は低い傾向にあった。
【００６１】
熱水、８０％エタノールおよびクロロホルム／メタノールでの抽出操作を、それぞれ図２、図３および図４に概要を示す。一般に、植物性薬品の熱水抽出物は、最高濃度フェノール性化合物、フェノールエステル、フラボノールおよびアントアシアニンを有する。ヒッポファエ液果およびヒッポファエ葉が、高い濃度のこれらの成分を有する。一つの実施形態では、熱水（１ｘ）抽出後にエタノール抽出と連続的なフラボノイドの抽出のためには最も適切であった。
【００６２】
（実施例２：ヒッポファエの葉および果肉の抽出物の性質）
液果および種子の重量、サイズ、および収率はヒッポファエの栽培変種植物の間で著しく変化シ、そのような変化はまた明らかに季節的である。ヒッポファエの物理化学的性質は、１つの位置で栽培される場合でも栽培変種植物に依存する。栽培変種植物に依存して、ジュースの収率は、７３％〜９１％に変化し、可溶性固体の範囲は、７．７〜１５．２°Ｂｒｉｘである。同様にジュースの中のアスコルビン酸含量および全カロチノイド含量はまた、それぞれ３１〜７５４ｍｇ／１００ｇおよび７〜１９ｍｇ／１００ｇの果実に変動する。栽培変種植物の間で、９．５％〜８８％の範囲で変動するジュースの抗酸化効率（ＡＥ）について、顕著な差を観察した。
【００６３】
栽培変種植物に依存して、ヘキサンで抽出した種子油含量は、９．１％〜１５．５％の範囲で変動し、果実の果肉のオイル含量は２９％〜４９％の範囲で変動する。トコフェロール分析の結果、ビタミンＥ含量もまた、栽培変種植物に依存し、種子油中では１０６〜１６１ｍｇ／１００ｇの範囲で変動し、果実果肉油中では７６〜２２７ｍｇ／１００ｇの範囲で変動する。
【００６４】
全液果サンプルの水分含量を、１段階空気オーブン法（６０℃／２４ｈ）により測定した。十分に混合したジュースサンプルを５０００ｒｐｍで１５分間遠心分離をし、各サンプルの透明なジュース画分からのアリコートを、Ａｂｂｅデジタル屈折計（ＭａｒｋＩＩ型）を使用してジュースの可溶性の固体含量を決定した。
【００６５】
種子由来の油を、ヘキサンで３時間抽出し、ヘキサンを蒸発させ油含量を重量分析で測定した。ジュースを４℃、１５０００ｒｐｍで、１５分間遠心分離して、果肉を得た。上層は果肉として使用した；油を果肉とヘキサンと共に（１：１ｗ／ｖ）ホモジネートすることにより回収し、そして重量分析をした。
【００６６】
トコフェロールは、公知の方法を使用してＨＰＬＣにより決定した。（Ｂｏｕｒｇｅｏｉｓ、Ｃ．１９９２。Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｅ：Ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌｓ  ａｎｄ  Ｔｏｃｏｔｒｉｅｎｏｌｓ．Ｅｌｓｖｉｅｒ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｌｏｎｄｏｎ  ａｎｄ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。抗酸化効率（ＡＥ）（サンプルの相対的活性をブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）のそれと比較した％として規定される）を、ベータカロチン法により決定した。（Ｖｅｌｌｏｇｌｕ  ＹＳ、Ｍａｚｚａ  Ｇ、Ｇａｏ  Ｌ  および  Ｏｏｍａｈ  ＢＤ、Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｔｏｔａｌ  ｐｈｅｎｏｌｉｃｓ  ｉｎ  ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｆｒｕｉｔｓ、ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ  ａｎｄ  ｇｒａｉｎ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｊ  Ａｇｒｉｃ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ  ４６：４１１３〜４１１７（１９９８））
果実ジュース、種子油および果肉の全カロチノイド含量を、走査型ＵＶ−ｖｉｓ分光計（Ｂｅｃｋｍａｎ  ＤＵ−６００）を使用して決定した。
【００６７】
異なる栽培変種植物由来のジュースサンプルのアスコルビン酸含量を、ＡｃａｒおよびＧｏｋｍａｎ（１９９６）により記載される改変された方法に従って、ＨＰＬＣにより決定した。（Ｇｏｋｍａｎ、ＶおよびＡｃａｒ、ＪＡ  Ｓｉｍｐｌｅ  ＨＰＬＣ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｏｔａｌ  ｖｉｔａｍｉｎ  ｃ  ｉｎ  ｆｒｕｉｔ  ｊｕｉｃｅｓ  ａｎｄ  ｄｒｉｎｋｓ．Ｆｒｕｉｔ  Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ５：１９８〜２０１）。
【００６８】
抗酸化活性の決定は、ミクロプレートに適合するＡＢＴＳラジカルカチオン脱色アッセイを基礎にする。抽出サンプル溶液は、濃度が０〜１００ｍｇ／Ｌの範囲で、蒸留水で調製する。本方法は、フラボノイドおよびフェノール類を含む抽出物の、それらの電子またはプロトン供与剤としての性質による相対的ラジカル補足能力の測定を基礎にする。（Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉ、Ｎ；Ｒｅ、Ｒ．；Ｙａｎｇ、Ｍ．；Ｒｉｃｅ−Ｅｖａｎｓ、Ｃ．１９９９．Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．２９９、３７９〜３８９）。ＡＢＴＳ（２，２’−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）フリーラジカルとの抗酸化剤の相互作用時に、そのラジカルは、還元され、その緑色が時間スケールである程度抑制される。フリーラジカルの還元速度を、７３４ｎｍの吸光度の減少を測定する。相対的抗酸化能力を、Ｔｒｏｌｏｘまたはクエルセチン標準の存在下に測定し、植物薬品乾燥１グラムあたりに存在するｔｒｏｌｏｘ（またはクエルセチン）当量として表される。
【００６９】
一つの実施形態では、ＡＢＴＳストック溶液を、５ｍｌの７ｍＭ  ＡＢＴＳ［２，２’−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）］と８８μｌの１４０ｍＭ  Ｋ２Ｓ２Ｏ８とを混合して調製した。上記ストック溶液をエタノールで、７３４ｎｍの吸光度が０．７±０．０５になるよう希釈した（Ｐｅｌｌｅｇｉｒｉら、１９９９）。ヒッポファエ抽出物（２０ｍｇ／ｍｌの１００μｌ）を、１ｍｌのＡＢＴＳ試薬と混合し、そして室温で３０分後に７３４ｎｍで測定した。水性抽出物およびフェノール性（アスコルビン酸フリー）抽出物との吸光度の差が、アスコルビン酸に対応する。Ｔｒｏｌｏｘを、標準として使用し、フリーラジカル補足能力を抗酸化剤能力１ｇあたりのｔｒｏｌｏｘ当量ｍｇとして表現した。
【００７０】
ヒッポファエ葉抽出物およびヒッポファエ液果抽出物は、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ビタミンＫおよびパントテイン酸の重要な資源である；ビタミンＫは、インターロイキン１およびインターロイキン６の合成に影響する；ビタミンＣは、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉによる感染の流行を低下し、それにより胃潰瘍および胃癌の危険を減少させる。喫煙は、ビタミンＣの血清レベルを低下し、喫煙者は、ビタミンＣを補填するよう助言される。ビタミンＡ、ビタミンＣおよびビタミンＥは、ヒトの体を、癌、心疾患および老化につながる酸化損傷から防御する抗酸化剤である。
【００７１】
図５Ａおよび図５Ｂに示されるように、上記葉および液果は、抗酸化剤活性が著しく異なるプロフィールを有する。ベータカロチン、ビタミンＣ、およびビタミンＥ（トコフェロール）は、液果の抗酸化活性に重要に寄与し、一方フェノール類は余りたいした役割を果たさない。上記葉は、効果の小さいカロチノイドと高含量のフェノール類およびトコフェロールならびに中レベルのビタミンＣによる有意な（５ｘ以上）抗酸化剤活性を示す。
【００７２】
（実施例３：ヒッポファエおよび植物抽出物の活性における相乗作用）
Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍ、Ｓａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａおよびＳｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｂａｒｂａｔａ（３Ｈ）ならびに必要に応じてヒッポファエ液果および／またはヒッポファエ葉（４Ｈ）を含む植物抽出物のブレンドを、抗酸化的性質について試験した。抗酸化剤活性を、上述のようにｔｒｏｌｏｘおよびクエルセチン当量で測定した。さらに、フェノール性抗酸化剤インデックス（ＰＡＯＸＩ）は、抗酸化剤の質的および量的複合尺度であって、そのＥＤ５０の値で、全フェノール濃度を割ることにより測定した。（Ｖｉｎｓｏｎら、Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．  ４６：３６３０〜３６３４（１９９８））。抽出前に植物性薬品をブレンドする工程は、３Ｈおよび４Ｈ抽出物ＰＡＯＸＩ値を増加した。４Ｈブレンドの熱水（ＨＷ）抽出画分および脂質抽出／水画分（ＬＥ／ＷＦ）のＰＡＯＸＩ値は、３Ｈブレンドのそれらよりも高かった。
【００７３】
上記ｔｒｏｌｏｘ当量抗酸化剤能力（ＴＥＡＣ）アッセイは、Ｓａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａが、ＨＷおよびＬＥ．ＷＦ抽出物の抗酸化剤活性に主要な寄与をしていることを示した。脂質抽出／溶媒画分において、３Ｈ抽出物の抗酸化剤潜在力に対して、Ｓａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａは、寄与度が最も少なく、Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｂａｒｂａｔａ（５９％）およびＧａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍ（２７％）が著しく寄与していた。ヒッポファエは、上記４Ｈ抽出物の両方の系の測定下、ブレンド全体の抗酸化剤活性についてほぼ５０％の原因となったことを見出した。
【００７４】
異なる濃度の３Ｈおよび４Ｈ抽出物についての抗酸化剤活性データを、Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｔ−Ｃ  ＣｈｏｕおよびＰ．Ｔａｌａｌａｙ（Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．４、４５０〜４５４）のためのＣａｌｃｕＳｙｎを使用して、植物の組合わせが、加算的か、相乗的か、または拮抗的かを決定するために、統計的に分析した。用量低減インデックス（ＤＲＩ）を、単独で投与された各植物性薬品と比較して、相乗的な組合わせにおいて、所定の効果レベルで、どれだけ植物性薬品の用量を低減し得るかについて、評価する。組み合わせインデックス（ＣＩ）は、加算的効果（ＣＩ＝１）、相乗作用（ＣＩ＜１）または拮抗作用（ＣＩ＞１）に関して相互作用の程度の定量的な尺度である。
【００７５】
個別の植物性薬品および３Ｈおよび４Ｈの粉末ブレンドの異なる濃度の熱水抽出物のフリーラジカル補足活性（％阻害）を、測定した。単一の植物製薬費についてのプロットの勾配は、０．８５５〜１．５８４の範囲を変動し、これは図６に示すように同様な作用様式を有することを示唆する。図７は、４Ｈブレンド（ヒッポファエ含有）の効果が、特定の用量において３Ｈブレンドより有意に高いことを示す。
【００７６】
図８に示すように、ＥＤ５０またはより高い用量における３Ｈ粉末ブレンドおよび４Ｈ粉末ブレンドの両方は、０．３〜０．７の間のＣＩ値を有する相乗効果を示した。即ち抗酸化剤活性は、予想より高かった。
【００７７】
粉末ブレンドとは異なり、熱水抽出物の用量低減インデックスが、Ｇ．ｌｕｃｉｄｕｍが有効である組合わせに必要であることを示した。粉末ブレンドと同様に、３Ｈおよび４Ｈ熱水抽出物の両方は、０．２〜０．６の間のＣＩ値を有する相乗効果を示した（図９および図１０）。上記４Ｈ（ヒッポファエ含有）ブレンドは、図１０に示されるように３Ｈブレンドより高い相乗効果を有する。
【００７８】
（実施例４：ヒッポファエと他の液果との比較）
他の液果と比較されたヒッポファエにおける特定の生理活性因子のレベルが、図１１および図１２に示される。図１１Ａ−Ｂは、他の液果と比較してビタミンＣのレベルおよびビタミンＥのレベルが最高であることを示す。図１２Ａ−Ｂは、ヒッポファエ液果がかなりのレベルのクエルセチンおよびフラボノイドを有することを示す。
【００７９】
（実施例５：ヒッポファエ葉および液果の乾燥条件の最適化）
ヒッポファエ葉の全フェノール類、カルチノイド、ビタミンＥ、アスコルビン酸および抗酸化活性の含量は、異なる乾燥条件で変動する。全ての乾燥条件下で、雌性の木からの葉は、雄性の木からの葉より、より高いフェノール類含量に起因してより高い抗酸化剤活性を有する。６０℃でのオーブンにおける乾燥または凍結乾燥は、抗酸化剤活性を保持するためには最適である。凍結乾燥は、６０℃の高温ではそのような酵素を不活性化するが、酵素分解をさらに停止し得る。雄性および雌性の葉の間の抗酸化剤／フェノール類の比率は、同じ乾燥条件でも変動するということは、雄性の葉および雌性の葉におけるフェノール類に定性的な差があることを示唆する。
【００８０】
図１３は、異なる乾燥方法により得られたヒッポファエ果実の種々の抗酸化剤化合物のレベルを示す。ビタミンＣの例外を除いて、全ての抗酸化剤のレベルが乾燥により増加する。凍結乾燥条件は抗酸化剤活性を維持するのに最適のようである。
【００８１】
（実施例５：ヒッポファエの植物抽出物との組合わせにおける抗酸化剤活性）
ヒッポファエ葉、Ｐａｎａｘ  ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ（Ｐｑ）、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍ、Ｓａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａおよびＳｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｂａｒｂａｔａの内の２以上を含む植物抽出物のブレンドを、抗酸化剤活性について試験する。Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ（Ｈｒ）液果、Ｈｒは、Ｐｑ、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍ、Ｓａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａおよびＨｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの内の２以上を含む熱水抽出物のブレンドを、抗酸化剤的性質について試験した。
【００８２】
比較の標準は、Ｔｒｏｌｏｘ（ビタミンＥの水溶性アナログ）であり、そして抽出物の相対的抗酸化剤活性は、Ｔｒｏｌｏｘ当量（ＴＥ）として規定される。別の方法では、比較の標準はクエルセチン（フラボノイド）であり、そして相対的抗酸化剤活性はクエルセチン当量として規定される。
【００８３】
図１４は、異なる抽出操作での植物性薬品ブレンドの抗酸化剤活性を示す。３Ｈは、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍ、Ｓａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａおよびＳｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｂａｒｂａｔａを表し、そして４Ｈは、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓをさらに含む。Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓによる抗酸化剤レベルに対する顕著な寄与が、全ての抽出条件下で観察された。図１５に示されるように、両方の測定の系においてブレンド全体の抗酸化剤活性のほぼ５０％はヒッポファエ葉によるものである。
【００８４】
（実施例６：抗癌剤と投与された植物抽出物の相乗効果）
継続中の米国出願番号 （代理人整理番号５４４３０２０００１００；その全体が、本明細書に援用されている開示）は、Ｓａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ（１４）、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍ（９）およびＳｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｂａｒｂａｔａ（１５）の３種の植物抽出物の全ての組み合わせに関する。その組合わせは、ヒト癌細胞（例えば、肺癌細胞、乳癌細胞、前立腺癌細胞および結腸癌細胞）の増殖を阻害する。個別の植物性薬品Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍ、Ｓａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ、Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｂａｒｂａｔａ（「ＡｎｅｕｓｔａｔＴＭ」図１６中、項目９，１４、および１５）の抽出物の１：１：１の混合物を、癌細胞増殖を阻害する抗癌剤の有効性の相乗的な昂進について試験した。各植物抽出物、ヒッポファエ（３０５０）および抗癌薬ドキソルビシン、Ｅｐｏ  Ｂ、メトトレキセートおよびビノレルビンの個々の、および組合わせのＩＣ５０（ＡＣＡＰＨＡ）を、図１６の上のパネルに示すようにＨｅＬａ、およびＡ５４９肺癌細胞株において決定した。
【００８５】
相乗作用を、組み合わせインデックス（ＣＩ）として測定したが、その値が０．７未満の場合、顕著なレベルの相乗作用と考えられる。図１６の真中のパネルは、３種の植物抽出物の固定した濃度で、ドキソルビシン，Ｅｐｏ  Ｂ、メトトレキセートおよびビノレルビンの濃度を変えたときの結果の平均を示す。３種の植物抽出物と化学療法剤との組合わせは、ＡｎｅｕｔｏｘＴＭとして公知である。図１６の下のパネルは、３種の植物抽出物の濃度とドキソルビシン、Ｅｐｏ  Ｂ、メトトレキセートおよびビノレルビンの濃度について固定した比率による結果の平均を示す。上記混合物を、平均値を決定するために、順次２ｘ、４ｘ、８ｘ、などと希釈した。
【００８６】
一つの実施形態では、本発明の組成物は、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍ、Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｂａｒｂａｔａ、Ｓａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａおよびＨｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ（ヒッポファエ）を有効量含み、（ｉ）免疫系を追加免疫する、（ｉｉ）細胞および組織に対する酸化的損傷を減少させる，（ｉｉｉ）炎症を減少させる、（ｉｖ）細胞周期の特定の段階において細胞の増殖を静止させる、（ｖ）抗酸化剤活性、ならびに（ｖｉ）発癌性物質および変異原性物質に対するさらなる曝露に対して抗変異原性の内の１以上の性質を示して、それは前から存在する癌細胞の増殖を、阻害するのに使用され、細胞分裂抑制効果を示す。
【００８７】
（実施例７：ヒッポファエによるＣＯＸ−２／ＣＯＸ−１阻害）
シクロオキシゲナーゼ（Ｃｏｘ）は、我々の身体に存在する天然の酵素である。Ｃｏｘ−２は、痛みを誘導するのに必要な酵素である。非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）は、それらの鎮痛活性および抗炎症活性により、痛みの処置および関節炎の症状および徴候を処置するのに広く使用されている。プロスタグランジンＧ／Ｈシンターゼ（ＰＧＨＳ）としてもまた公知で、アラキドン酸をプロスタノイドに変換するシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）の活性を遮断することにより、通常のＮＡＳＡＩＤは効果があることは認められている。最近、ＣＯＸの２つの形態が同定され、恒常性アイソフォーム（ＣＯＸ−１）および誘導性アイソフォーム（ＣＯＸ−２）で、その発現は、炎症部位で情報制御されている（Ｖａｎｅ、Ｊ．Ｒ．；Ｍｉｔｃｈｅｌｌ、Ｊ．Ａ．；Ａｐｐｌｅｔｏｎ、Ｉ．；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ、Ａ．；Ｂｉｓｈｏｐ−Ｂａｉｌｅｙ、Ｄ．；Ｒｏｘｔｏｌｌ、Ｊ．；Ｗｉｌｌｏｕｇｈｂｙ、Ｄ．Ａ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｎｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９９４，９１，２０４６）。ＣＯＸ−１は、生理学的な役割を果たしそして消化管および腎臓の防御に責任があると考えられている。一方，ＣＯＸ−２は、病理学的役割を果たしそして炎症状態に存在する優勢なアイソフォームと考えられている。Ｃｏｘ２酵素は炎症に特異的でそしてＣｏｘ２インヒビター（Ｃｅｌｅｂｒｅｘ（登録商標）、Ｖｉｏｘｘ（登録商標））は最近ＦＤＡで認可された。
【００８８】
非常に多くの証拠がシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）は、消化管癌に重要であることを示唆する。ＣＯＸ−２ｍＲＮＡのレベルは、膵臓癌において隣接する非腫瘍組織と比較して６０倍より多く増加した。（Ｔｕｃｋｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９９  Ｍａｒ  １；５９（５）：９８７〜９９０）シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）は、頭頸扁平細胞癌（ＨＮＳＣＣ）で過剰発現されたが、健常な被験体からの正常な口内粘膜では検出されなかった。（Ｃｈａｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９９  Ｍａｒ  １；５９（５）：９９１〜９９４）。ＣＯＸ−２の恒常的発現が、悪性の上皮腫瘍の発症および進行の原因になるという証拠が現在増加している。（Ｄｅｎｋｅｒら  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００１  Ｊａｎ  １；６１（１）：３０３〜３０８）。あわせて考えると、これらの結果は、ＣＯＸ−２が癌の予防および処置の標的になり得るということを示唆する。
【００８９】
ＣＯＸ−２阻害活性の抗炎症性アッセイを、プロスタグランジンエンドペルオキシドＨシンターゼ−１アイソザイムおよびプロスタグランジンエンドペルオキシドＨシンターゼ−２アイソザイム（ＰＧＨＳ−１およびＰＧＨＳ−２）を使用して、アラキドン酸からプロスタグランジンへ変換するそれらの能力を基礎にして実施した。この実験でポジティブコントロールとしてアスピリンとセレブレックスを使用した。好ましいＣＯＸ−２インヒビターは、消化管および人の防御に責任のあるＣＯＸ−１より、ＣＯＸ−２に対してより大きな阻害を示す。
【００９０】
阻害を、ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２ＥＬＩＳＡアッセイキットにより測定した。（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ、ＭＩ）。市販されている抗炎症薬のアスピリンは、ＣＯＸ−１を５８％およびＣＯＸ−２を４２％阻害するが、セレブレックスは、ＣＯＸ−１を４６％およびＣＯＸ−２を８５％阻害する。図１７Ａは、ヒッポファエの葉および液果の異なる抽出物による２ｍｇ／ｍｌの濃度でのＣＯＸ−２阻害能力を示す。図１７Ｂは、ヒッポファエの葉および液果の異なる抽出物による２ｍｇ／ｍｌの濃度でのＣＯＸ−１阻害能力を示す。ヒッポファエの葉および液果の抽出物を、別々に測定した。ヒッポファエの８０％エタノール（ＥｔＯＨ）抽出物および熱水（ＨＷ）抽出物は、セレブレックス（ＣＯＸ−２）およびアスピリン（ＣＯＸ−１）と匹敵する強いＣＯＸ−２阻害活性およびＣＯＸ−１阻害活性を示した。ヒッポファエ液果の脂質抽出．／水画分（ＬＥ／ＷＦ）および脂質抽出／溶媒画分は、ＣＯＸ−１に対して弱い阻害活性を示すが、ＣＯＸ−２活性に対して顕著な阻害を示す。ヒッポファエのＬＥ／ＷＦ抽出物およびＥｔＯＨ抽出物は、ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２の両方に対して強力な阻害を示すが、ヒッポファエ葉のＨＷ抽出物およびＬＥ／ＷＦ抽出物は、それより弱いがＣＯＸ−１よりＣＯＸ−２に対して好ましい阻害を示す。葉および液果の両方のＬＥ／ＳＦ抽出物は、ＣＯＸ−２に対して低から中程度の阻害（３０％未満）を示すが、ＣＯＸ−１活性をいくらか活性化することを示す。
【００９１】
本明細書に引用される全ての刊行物および特許出願は、あたかも各個別の刊行物および特許出願が、詳細に及び個別的に参考として取り込まれるよう示されて、全体として本明細書に援用される
前述の本発明が理解を明確にする目的で説明および例により、ある程度、詳細に記載されているが、添付されている特許請求の趣旨および範囲から離れることなく特定の変化および改変がそれらに対してなされ得ることは本発明の教示の観点から当業者には容易に明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００９２】
【図１】図１は、植物抽出物のための抽出プラットフォームを示す。
【図２】図２は、熱水による抽出手順を示す。
【図３】図３は、８０％エタノールによる抽出手順を示す。
【図４】図４は、クロロホルム／メタノールによる抽出手順を示す。
【図５】図５Ａは、ヒッポファエ液果の抗酸化成分を示す。図５Ｂは、ヒッポファエ葉の抗酸化成分を示す。
【図６】図６は、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍ、Ｓａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａおよびＳｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｂａｒｂａｔａ（３Ｈ）粉末ブレンドの用量効果曲線を示す。
【図７】図７は、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍ、Ｓａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ、Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｂａｒｂａｔａ（３Ｈ）および３Ｈ＋Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ（４Ｈ）粉末ブレンドの用量効果曲線を示す。
【図８】３Ｈ粉末ブレンドおよび４Ｈ粉末ブレンドの組合わせインデックスのプロットを、示す。
【図９】図９は、３Ｈ熱水抽出ブレンドおよび４Ｈの熱水抽出物ブレンド用量効果曲線を示す。
【図１０】図１０は、３Ｈ熱水抽出物ブレンドおよび４Ｈ熱水抽出物ブレンドの組合わせインデックスのプロットである。
【図１１】図１１Ａは、ヒッポファエおよび他の液果のビタミンＣ含量を示す。図１１Ｂは、ヒッポファエおよび他の液果のビタミンＥ含量を示す。
【図１２】図１２Ａは、ヒッポファエおよび他の液果のクエルセチン含量を示す。図１２Ｂは、ヒッポファエおよび他の液果のフラボノール含量を示す。
【図１３】図１３は、異なる乾燥条件下でのヒッポファエおよび抗酸化剤含量を示す。
【図１４】図１４は、植物ブレンドの抗酸化活性を示す。
【図１５】図１５は、抗酸化活性に対する植物性薬品の相対的寄与度を示す（ＧＬ＝Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍ；ＳＢ＝Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｂａｒｂａｔａ；ＳＬ＝Ｓａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ；ＳＢＴＬ＝Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ葉）
【図１６】図１６は、抗癌剤とともに投与された植物抽出物の相乗効果を示す。
【図１７Ａ】図１７Ａは、ヒッポファエの葉およびヒッポファエの液果の異なる抽出物（脂質抽出物／溶媒画分（ＬＥ／ＳＦ））；脂質抽出物／水画分（ＬＥ／ＷＦ）；８０％エタノール；および熱水（ＨＷ）によるＣＯＸ−２酵素活性の阻害を示す。
【図１７Ｂ】図１７Ｂは、ヒッポファエの葉およびヒッポファエの液果の異なる抽出物によるＣＯＸ−１酵素活性の阻害を示す。
【図１】
2007505934.tif 000003
【図２】
2007505934.tif 000004
【図３】
2007505934.tif 000005
【図４】
2007505934.tif 000006
【図５】
2007505934.tif 000007
【図６】
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【図７】
2007505934.tif 000009
【図８】
2007505934.tif 000010
【図９】
2007505934.tif 000011
【図１０】
2007505934.tif 000012
【図１１】
2007505934.tif 000013
【図１２】
2007505934.tif 000014
【図１３】
2007505934.tif 000015
【図１４】
2007505934.tif 000016
【図１５】
2007505934.tif 000017
【図１６】
2007505934.tif 000018
【図１７Ａ】
2007505934.tif 000019
【図１７Ｂ】
2007505934.tif 000020
【手続補正書】
【提出日】平成18年9月21日(2006.9.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトの癌状態を軽減するための組成物であって、該組成物は、
Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの抽出物を含む組成物を、予防的に有効な量含む、
組成物。
【請求項２】
前記組成物が、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの葉の抽出物を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物が、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの液果の抽出物を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓが、抽出前に乾燥される、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓが、（ａ）凍結乾燥する工程、または（ｂ）６０℃で、オーブン乾燥する工程により、乾燥される、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
ＣＯＸ−２酵素活性を阻害するための組成物であって、該組成物は、
有効量のＨｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの抽出物を含む、
組成物。
【請求項７】
前記組成物によるＣＯＸ−２活性の阻害が、ＣＯＸ−１活性の阻害より有意に高い、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
さらに、前記組成物によるＣＯＸ−２活性の阻害が、ＣＯＸ−１活性の阻害より１．５倍高い、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
ＣＯＸ−２活性が、阻害され、ＣＯＸ−１活性が増加する、請求項６に記載の組成物。
【請求項１０】
前記組成物が、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの複数の液果の抽出物、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの液果の抽出物またはＨｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ種子の抽出物のうちの１以上を含む、請求項６に記載の組成物。
【請求項１１】
Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓが、抽出前に乾燥される、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記抽出物が、有機抽出物の水性画分である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１３】
前記抽出物が、有機抽出物の溶媒画分である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１４】
前記抽出物が、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ液果のエタノール抽出物または熱水抽出物である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１５】
Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ（緑茶）の抽出物をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍの抽出物、Ｓａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａの抽出物およびＳｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｂａｒｂａｔａの抽出物のうちの２以上をさらに含み、該２以上の抽出物が相乗的に機能する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
癌の早期段階の個体において、ヒトの癌状態を軽減するための組成物であって、
（ａ）治療的に有効な量のＨｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの抽出物；および
（ｂ）Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍの抽出物、Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｂａｒｂａｔａの抽出物およびＳａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａの抽出物のうちの１以上、
を含む、組成物。
【請求項１８】
前記組成物が、（ｃ）治療的に有効な量の少なくとも１種の化学療法剤をさらに含む、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記組成物が、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの葉の抽出物を含む、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２０】
前記組成物が、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの液果の抽出物を含む、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２１】
前記Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓが、抽出前に乾燥される、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２２】
前記Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓが、（ａ）凍結乾燥する工程、または（ｂ）６０℃で、オーブン乾燥する工程により乾燥される、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記抽出物が、熱水抽出物である、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２４】
前記抽出物が、アルコール抽出物である、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２５】
前記抽出物が、有機抽出物である、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２６】
前記抽出物が、前記有機抽出物の脂質画分である、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記抽出物が、前記有機抽出物の水性画分である、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２８】
放射線療法、化学療法、外科療法、免疫療法、光線力学療法およびそれらの組合わせからなる群より選択される、治療的に有効な量の１以上の抗癌処置と組み合わせて投与するのに適している、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２９】
前記癌が、肺癌、乳癌、子宮頸癌および前立腺癌からなる群より選択される、請求項１７に記載の組成物。
【請求項３０】
前記化学療法剤が、微小管重合を乱す、請求項１８に記載の組成物。
【請求項３１】
前記化学療法剤が、パクリタキセル、ドセタキセル、エトポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチンおよびビノレルビンからなる群より選択される、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記化学療法剤が、シクロホスファミド、４−ヒドロペルオキシシクロホスファミド、チオテパ、タキソール、ドキソルビシン、ダウノルビシンおよびネオカルチノスタチンからなる群より選択される、請求項１８に記載の組成物。
【請求項３３】
抗癌組成物であって、
Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍの抽出物、Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｂａｒｂａｔａの抽出物、およびＳａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａの抽出物のうちの２以上；ならびに
治療的に有効な量のＨｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの抽出物
を含み、該２以上の抽出物が相乗的に機能する、
抗癌組成物。
【請求項３４】
治療的に有効な量の少なくとも１種の化学療法剤をさらに含む、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
前記化学療法剤が、微小管重合を乱す、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
前記化学療法剤が、パクリタキセル、ドセタキセル、エトポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチンおよびビノレルビンからなる群より選択される、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３７】
前記化学療法剤が、シクロホスファミド、４−ヒドロペルオキシシクロホスファミド、チオテパ、タキソール、ドキソルビシン、ダウノルビシンおよびネオカルチノスタチンからなる群より選択される、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３８】
前記組成物が、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの葉の抽出物、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの液果の抽出物およびＨｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの種子の抽出物のうちの１以上を含む、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３９】
前記Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓが、抽出前に乾燥される、請求項３３に記載の組成物。
【請求項４０】
ＣＯＸ−２酵素活性を阻害するための組成物であって、
ＣＯＸ−２を阻害するのに有効な量のＨｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ抽出物
を含む、組成物。
【請求項４１】
さらに、前記組成物によるＣＯＸ−２活性の阻害が、ＣＯＸ−１活性の阻害よりも有意に高い、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
前記組成物によるＣＯＸ−２活性の阻害が、ＣＯＸ−１活性の阻害よりも１．５倍高い、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４３】
ＣＯＸ−２活性が阻害され、そしてＣＯＸ−１活性が増加する、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４４】
前記抽出物が、有機抽出物の水性画分である、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４５】
前記抽出物が、有機抽出物の溶媒画分である、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４６】
前記抽出物が、Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓの液果のエタノール抽出物または熱水抽出物である、請求項４０に記載の組成物。
【国際調査報告】
2007505934.tif 000021