(57)【要約】本発明は、細胞内への薬物送達促進化合物、組成物および方法を提供する。薬剤には、遺伝子およびアンチセンス核酸などのポリペプチド、ポリヌクレオチドおよびその他の分子などを含有させることが可能である。実施形態のなかには、その薬剤が調製剤であるものもあり、その調製剤は、細胞内に導入する場合、細胞活性または細胞機能を調節することが可能である。この化合物、組成物および方法は、遺伝子などの薬剤を、組織または器官として存在する細胞と同様に個別細胞内に導入するのに有用である。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2007526219.tif 000012
の化合物であって、ここで、
Ｒ１およびＲ２は、各々独立して水素およびヒドロキシル基からなる群より選択されるメンバーであり、
ｍおよびｎは、各々独立して約０〜２から選択され；
Ｒ３は−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され、ここでＲ４およびＲ５は、各々独立して水素、糖残基、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアシル、必要に応じて置換されているアシルオキシ、および第四級アンモニウム塩−ＮＲ６Ｒ７Ｒ８Ｘからなる群より選択されるメンバーであり、ここでＲ６、Ｒ７およびＲ８は独立して水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルからなる群より選択されるメンバーであり、そしてＸはハロゲンおよび必要に応じて置換されているカルボキシレートからなる群より選択される負に帯電したイオン結合する対イオンである、化合物。
【請求項２】
Ｒ１およびＲ２がいずれもヒドロキシル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ｍおよびｎがそれぞれ１である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
前記化合物が、式ＩＩ：
【化２】
2007526219.tif 000013
を有する、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ４は水素であり；そして
Ｒ５は水素、糖残基、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアシル、および必要に応じて置換されているアシルオキシからなる群より選択されるメンバーである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
前記化合物が式ＩＩＩ：
【化３】
2007526219.tif 000014
を有する、請求項３に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ５がスクシニルである、請求項５に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ５がアシルオキシである、請求項５に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ３がトリメチルアンモニウム塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ３がトリエチルアンモニウム塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
薬剤を細胞に送達するための組成物であって、該組成物は該薬剤および式Ｉ：
【化４】
2007526219.tif 000015
の送達促進化合物を含み、ここで、
Ｒ１およびＲ２は、各々独立して水素およびヒドロキシル基からなる群より選択されるメンバーであり；
ｍおよびｎは、各々独立して約０〜２から選択され；
Ｒ３は−ＮＲ４Ｒ５からなる群から選択され、ここでＲ４およびＲ５は、各々独立して水素、糖残基、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアシル、必要に応じて置換されているアシルオキシ、および第四級アンモニウム塩−ＮＲ６Ｒ７Ｒ８Ｘからなる群より選択されるメンバーであり、ここでＲ６、Ｒ７およびＲ８は独立して水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルからなる群より選択されるメンバーであり、そしてＸはハロゲンおよび必要に応じて置換されているカルボキシレートからなる群より選択される負に帯電したイオン結合する対イオンである、組成物。
【請求項１２】
Ｒ１およびＲ２がいずれもヒドロキシル基である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
ｍおよびｎがそれぞれ１である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物が式ＩＩ：
【化５】
2007526219.tif 000016
を有する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
Ｒ４が水素であり；そして
Ｒ５が水素、糖残基、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアシル、および必要に応じて置換されているアシルオキシからなる群より選択されるメンバーである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１６】
前記組成物が式ＩＩＩ：
【化６】
2007526219.tif 000017
を有する、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
Ｒ５がスクシニルである、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１８】
Ｒ５がアシルオキシである、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１９】
Ｒ３がトリメチルアンモニウム塩である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項２０】
Ｒ３がトリエチルアンモニウム塩である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項２１】
前記薬剤が診断薬である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項２２】
前記薬剤が前記細胞内に存在する場合、該薬剤が細胞内の生物学的プロセスを調節する、請求項１１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記生物学的プロセスが、細胞成長、細胞分化，細胞増殖、代謝経路または生合成経路、遺伝子発現、疾患に関連するプロセス、および免疫応答からなる群より選択される、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記薬剤が、ポリヌクレオチドまたはタンパク質を含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項２５】
前記ポリヌクレオチドが、アンチセンス核酸、三重鎖形成核酸、および生物学的プロセスを調節するポリペプチドをコードする遺伝子を含む核酸からなる群より選択される、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記遺伝子が、腫瘍抑制遺伝子である、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記腫瘍抑制遺伝子が、網膜芽細胞腫遺伝子およびｐ５３遺伝子からなる群より選択される、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記組成物が、高分子マトリクスをさらに含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項２９】
前記組成物が、粘膜付着剤をさらに含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項３０】
前記薬剤が、タンパク質を含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項３１】
前記タンパク質が、インターフェロンである、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記インターフェロンが、インターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−δ、およびインターフェロン−γ、ならびにこれらの融合インターフェロンからなる群より選択される、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記インターフェロンが、インターフェロンα−２β、融合インターフェロンα−／２α−１およびインターフェロンα−２ｅからなる群より選択される、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３４】
前記インターフェロンが、ヒトα１インターフェロンまたはヒトα２インターフェロンである、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３５】
前記タンパク質が、抗体である、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３６】
前記抗体が、抗インターフェロン−α、抗インターフェロン−β、抗インターフェロン−δ、抗インターフェロン−γ、抗インターロイキン、抗ＩＬ−１、抗ＩＬ−２、抗ＩＬ−４、抗Ｉｌ−６、抗ＩＬ−７および抗ＩＬ−１０からなる群から選択される、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
薬剤を細胞に送達する方法であって、該方法は、式Ｉ：
【化７】
2007526219.tif 000018
の化合物を含む組成物中で該細胞に該薬剤を投与する工程を包含し、ここで、
Ｒ１およびＲ２は、各々独立して水素、およびヒドロキシル基からなる群より選択されるメンバーであり；
ｍおよびｎは各々独立して約０〜２から選択され；
Ｒ３は−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され、ここでＲ４およびＲ５は各々独立して、水素、糖残基、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアシル、必要に応じて置換されているアシルオキシ、および第四級アンモニウム塩−ＮＲ６Ｒ７Ｒ８Ｘからなる群より選択されるメンバーであり、ここでＲ６、Ｒ７およびＲ８は独立して水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルからなる群より選択されるメンバーであり、そしてＸはハロゲンおよび必要に応じて置換されているカルボキシレートからなる群より選択される負に帯電したイオン結合する対イオンである、方法。
【請求項３８】
細胞増殖抑制遺伝子または腫瘍抑制遺伝子をコードする組換えウイルスベクターを式Ｉ：
【化８】
2007526219.tif 000019
の化合物と組み合わせて投与することにより、膀胱癌を処置する方法であって、ここで、
Ｒ１およびＲ２は、各々独立して水素およびヒドロキシル基からなる群より選択されるメンバーであり；
ｍおよびｎは、各々独立して約０〜２から選択され；
Ｒ３は−ＮＲ４Ｒ５からなる群から選択され、ここでＲ４およびＲ５は、各々独立して水素、糖残基、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアシル、必要に応じて置換されているアシルオキシ、および第四級アンモニウム塩−ＮＲ６Ｒ７Ｒ８Ｘからなる群より選択されるメンバーであり、ここでＲ６、Ｒ７およびＲ８は独立して水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルからなる群より選択されるメンバーであり、そしてＸはハロゲンおよび必要に応じて置換されているカルボキシレートからなる群より選択される負に帯電したイオン結合する対イオンである、方法。
【請求項３９】
前記腫瘍抑制遺伝子が、ＲＢ５６、ＲＢ１１０、ＲＢ９４、Ｐ５３、およびＰ５３δ１３〜１９からなる群より選択される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記細胞増殖抑制遺伝子が、インターフェロンの遺伝子である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
前記インターフェロンが、インターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−δ、およびインターフェロン−γ、ならびにこれらの融合インターフェロンからなる群より選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記インターフェロンが、インターフェロンα−２β、融合インターフェロンα−／２α−１およびインターフェロンα−２ｅからなる群より選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記インターフェロンが、ヒトα１インターフェロンまたはヒトα２インターフェロンである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
前記膀胱癌が、表在性膀胱癌である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４５】
前記式Ｉの化合物が、可溶化剤をさらに含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４６】
前記薬剤が、治療薬である、請求項３７に記載の方法。
【請求項４７】
前記薬剤が、診断薬である、請求項３７に記載の方法。
【請求項４８】
前記送達促進化合物の濃度が、約０．００２ｍｇ／ｍｌ〜約２ｍｇ／ｍｌである、請求項３７に記載の方法。
【請求項４９】
前記送達促進化合物の濃度が、約０．０２ｍｇ／ｍｌ〜約２ｍｇ／ｍｌである、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記送達促進化合物の濃度が、約０．２ｍｇ／ｍｌ〜約２ｍｇ／ｍｌである、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記送達促進化合物以外の洗浄剤の非存在下において、該送達促進化合物が水溶液中に可溶である、請求項３７に記載の方法。
【請求項５２】
前記送達促進化合物以外の洗浄剤の非存在下において、水溶液中の該送達促進化合物の溶解度が、少なくとも約１ｍｇ／ｍｌである、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記薬剤が、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）層を通過して送達される、請求項３７に記載の方法。
【請求項５４】
前記ＧＡＧ層が、器官を含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記ＧＡＧ層が、上皮組織を含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】
前記上皮組織が、胃腸管、皮膚、肺、および粘膜からなる群より選択される、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記投与が、膀胱内投与によって行われる、請求項３７に記載の方法。
【請求項５８】
前記薬剤が、タンパク質である、請求項３７に記載の方法。
【請求項５９】
前記薬剤が、遺伝子である、請求項３７に記載の方法。
【請求項６０】
前記遺伝子が、ベクターにおいて投与される、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記ベクターが、ウイルスベクターである、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記ウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、およびアデノ随伴ウイルスベクターからなる群より選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項６３】
前記ウイルスベクターが、１×１０８粒子／ｍｌ〜５×１０１１粒子／ｍｌのウイルスベクター濃度を有する懸濁液として投与される、請求項３７に記載の方法。
【請求項６４】
前記懸濁液中のウイルスベクター濃度が、１×１０９粒子／ｍｌ〜１×１０１１粒子／ｍｌである、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記遺伝子が、治療遺伝子である、請求項５９に記載の方法。
【請求項６６】
前記治療遺伝子が、腫瘍抑制遺伝子である、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記腫瘍抑制遺伝子が、ｐ５３である、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記腫瘍抑制遺伝子が、網膜芽細胞腫遺伝子である、請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
前記網膜芽細胞腫腫瘍抑制遺伝子が、全長ＲＢタンパク質をコードする、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記網膜芽細胞腫腫瘍抑制遺伝子が、ｐ５６ＲＢをコードする、請求項６８に記載の方法。
【請求項７１】
前記細胞が、癌細胞である、請求項６５に記載の方法。
【請求項７２】
前記癌細胞が、膀胱癌細胞である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記癌細胞が、組織として提供される、請求項７１に記載の方法。
【請求項７４】
前記送達促進化合物が、前記薬剤を投与する前に投与される、請求項３８に記載の方法。
【請求項７５】
前記送達促進化合物が、前記薬剤と共に投与される、請求項３８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２００３年６月４日に出願された米国特許出願第６０／４７５，９２６号および米国特許出願第１０／４５５，２１５号の優先権、および本明細書とともに同日付で出願されたＰＣＴ出願第＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿号、代理人整理番号０１６９３０−０００８５１の優先権を主張するものであり、これらに開示されているものは、すべての目的に対して完全に参照によって援用される。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、治療薬およびそれ以外の薬剤を細胞へ送達するための新規化合物、新規組成物、およびその方法に関する。本発明の化合物類および方法類を用いて、送達させることができる薬剤としては、遺伝子、ポリペプチド、タンパク質、その他の分子がある。その細胞は、個別細胞としてまたは生物組織もしくは生物器官として存在することが可能である。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
ある化合物を細胞内に送達することは、多くの診療方法および治療方法のための最初の重要な工程である。たとえば、遺伝子療法は、治療およびその他の目的での使用に非常に有望なツールであり、そのツールでは、核酸を細胞へと送達する必要がある。たとえば、遺伝子を移送する方法を用いて新生物類を治療する様々な方法が開発されている。悪性形質転換および悪性化を引き起こす特定の遺伝子座の特定の損傷を修正するための方法が開発されている（Ｓｐａｎｄｉｄｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１０：１５４３１５５４（１９９０）；Ｂａｎｅｒｊｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２：６２９７−６３０４（１９９２））。遺伝子または遺伝子産物の形質転換を抑制する技術類を用いれば、優性の発癌遺伝子の過剰発現に対処することができる。腫瘍抑制遺伝子の機能が失われている場合、このような方法を用いて対処すれば、野生型腫瘍抑制遺伝子の機能を再構成させることができる可能性がある（Ｇｏｏｄｒｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２：１９６８−１９７３（１９９２））。
突然変異の修正を実現させるこのような方法のほかに、特異的および選択的に腫瘍細胞を根絶するために、複数の遺伝子技術が開発されている。このような分子化学療法による方法は、腫瘍細胞中における毒素遺伝子の特異的発現に依存する（Ａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｓｏｃ  Ｅｘｐ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ．２０３：３５４−３５９（１９９３））。さらに、遺伝子を移送する方法によって抗腫瘍免疫化を獲得する方法も用いられてきた。遺伝子免疫を強化するこれらの方法では、遺伝子免疫拒絶反応技術を用いて腫瘍の免疫認識を高める。このため、癌の遺伝子療法を完成させようと様々な方法が開発されている。
【０００４】
膀胱癌では、ｐ５３およびＲＢなど複数の腫瘍抑制遺伝子に突然変異が多発していることが観察されている（Ｆｕｊｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２：１３９３−１３９８（１９９２））；Ｃａｉｒｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ６：２３０５−２３０９（１９９１）。このような腫瘍抑制遺伝子の遺伝子損傷の場合、野生型の当該腫瘍抑制遺伝子を復帰させることによって、悪性表現型の復帰突然変異の発生が明らかになる（Ｓｐａｎｄｉｄｏｓ，Ｉｄ．；Ｂａｎｅｒｊｅｅ，Ｉｄ．）。
【０００５】
膀胱癌は、癌の罹病率および致死率の重要な要因の一つである。癌による致死率では、膀胱癌は、成人男子が１０位であり、成人女性は１２位である。（Ｃａｎｃｅｒ  Ｆａｃｔｓ  ａｎｄ  Ｆｉｇｕｒｅｓ、Ａｍｅｒ．Ｃａｎ．Ｓｏｃ．５：１１（１９９５））。膀胱癌の治療には、全身化学療法と併用することが多い補助化学療法または補助免疫療法、表在性膀胱腫瘍の経尿道的切除術、膀胱部分切除術、放射線療法などがあり、複数の治療法が有効である。このように治療に選択肢があるにもかかわらず、全体的な生存率には明確な変化はみられない（同文献）。このため、膀胱癌の治療のために新しい治療モダリティを開発する必要がある。
【０００６】
選択的治療法として、複数の遺伝子療法戦略が開発されている。（Ｂｒｅｗｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｕｒｏｌ  ２５：１７７−１８２（１９９４）；  Ｔａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８８：５２５７−５２６１（１９９１）；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ、ＳＡ、Ｊ．Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．１０：１８０−１９９（１９９２）など参照）。ヒトまたはヒト以外の動物の癌治療および癌以外の病気の治療が成果をあげるかどうかは、細胞に侵入する治療薬の量が適切であるかどうか、また、治療薬を吸収する標的細胞の比率が十分であるかどうかによる。
【０００７】
その他の治療薬およびその他の調製剤などの多くは、たとえば、ポリペプチド類または低分子などである。また、ある標的細胞集団に到達する薬剤量は、治療効果に多大な影響を与えることもある。このため、細胞または細胞集団に送達する薬剤量を高めることができる化合物および方法などが必要である。本発明は、この必要性およびこれ以外の必要性を満たす。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（発明の簡単な要旨）
本発明は、細胞への薬剤の送達を促進させることができる化合物、組成物および方法を提供する。一実施形態において、本発明は、式Ｉの送達を促進させる化合物を提供する。
【０００９】
【化９】
2007526219.tif 000003
式中、
Ｒ１およびＲ２は、各々独立して水素およびヒドロキシル基からなる群から選択されるメンバーであり；
ｍおよびｎは、各々独立して約０〜２から選択され；
Ｒ３は−ＮＲ４Ｒ５からなる群から選択され、式中のＲ４およびＲ５は、各々独立して水素、糖残基、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアシル、必要に応じて置換されているアシルオキシ、および第四級アンモニウム塩−ＮＲ６Ｒ７Ｒ８Ｘからなる群より選択されるメンバーであり、式中のＲ６、Ｒ７およびＲ８は独立して水素およびＣ１〜Ｃ４のアルキルからなる群より選択されるメンバーであり、Ｘはハロゲンおよび必要に応じて置換されているカルボキシレートからなる群より選択される負に帯電したイオン結合する対イオンである。また、製剤を投与することによって、細胞に薬剤を送達する方法を提供し、その製剤には式Ｉの送達促進化合物を含有する。
【００１０】
好ましい実施形態は、式Ｉの送達促進化合物が式ＩＩを含むことである。
【００１１】
【化１０】
2007526219.tif 000004
さらに別の実施形態では、本発明は、薬剤を細胞に送達するための組成物を提供する。その組成物には、送達させる薬剤および式Ｉの送達促進化合物を含有する。
【００１２】
本発明のさらに別の態様は、癌をある治療薬の治療上有効な量を細胞へ投与することによる膀胱癌などの癌の治療法であり、この治療薬は、式Ｉの化合物からなる緩衝液中で製剤化される。
【００１３】
上記目的、その他の目的ならびに複数の態様および利点が、以下の詳細な説明および図面を読み進めるうちに、さらに明らかになるであろう。
【００１４】
（発明の詳細な説明）
（Ｉ．定義）
本明細書では、用語「アルキル」は、分枝鎖、非分枝または環状の炭化水素置換基、もしくはそれらの組み合わせを意味し、完全飽和、モノ不飽和−またはポリ不飽和である可能性があり、また二価置換基および多価置換基を含むことができ、指定された炭素原子の数を含有する（たとえば、Ｃ１〜Ｃ１０は、炭素数１〜１０の炭素を意味する）。飽和炭化水素置換基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉｓｏ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｉｓｏ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、オクタ−デシル、２−メチルペンチル、シクロヘキシル、（シクロヘキシル）メチル、シクロペンチルメチルなどの基があるが、これに限定されるものではない。このような置換基を、鎖に通常結合する１個または複数の官能基によって任意に置換することもできる。この官能基は、ヒドロキシル、ブロモ、フルオロ、クロロ、ヨード、メルカプトまたはチオ、シアノ、アルキルチオ、アリール、ヘテロアリール、カルボキシル、ニトロ、アミノ、アルコキシル、アミドなどがあり、カルボキシメチル、トリフルオロメチル、３−ヒドロキシヘキシル、２−カルボキシプロピルなどのアルキル置換基を形成するものである。不飽和アルキル置換基は、１個または複数の二重結合または三重結合を含有するものである。不飽和アルキル基の例には、ビニル、２−プロペニル、クロチル、２−イソペンテニル、２−（ブタジエニル）、２，４−ペンタジエニル、３−（１，４−ペンタジエニル）、エチニル、１−プロピニル、３−プロピニル、３−ブチニルのほか、高級同族および異性体などがあるが、これに限定されるものではない。この置換基も、飽和炭化水素についての説明と同じく、当該鎖に通常結合する１個または複数の官能基で置換することができる。
【００１５】
用語「アリール」は、ポリ不飽和炭化水素、一般的に芳香族炭化水素の置換基を意味し、この置換基は、単環式または多環式（最高三環）である可能性があり、縮合するかまたは共有結合している。用語「ヘテロアリール」は、Ｎ，ＯならびにＳから選択された０〜４個のヘテロ原子を含むアリール基（またはアリール環）を指し、ここで窒素原子および硫黄原子は、任意に酸化され、また窒素原子（１個または複数）は任意に四級化される。ヘテロアリール基は、ヘテロ原子を介して分子の残部に結合させることが可能である。アリール基およびヘテロアリール基の例には、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、４−ビフェニル、１−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロリル、３−ピラゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル、ピラジニル、２−オキサゾリル、４−オキサゾリル、２−フェニル−４−オキサゾリル、５−オキサゾリル、３−イソオキサゾリル、４−イソオキサゾリル、５−イソオキサゾリル、２−チアゾリル、４−チアゾリル、５−チアゾリル、２−フリル、３−フリル、２−チエニル、３−チエニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−ピリミジル、４−ピリミジル、５−ベンゾチアゾリル、プリニル、２−ベンズイミダゾリル、５−インドリル、１−イソキノリル、５−イソキノリル、２−キノキサリニル、５−キノキサリニル、３−キノリル、６−キノリルなどがあるが、これに限定するものではない。上記アリールおよびヘテロアリールの環構造では、該環構造に通常結合する１個または複数の官能基とさらに置換することが可能であり、この官能基は、ヒドロキシル、ブロモ、フルオロ、クロロ、ヨード、メルカプト、チオ、シアノ、アルキルチオ、カルボキシル、ニトロ、アミノ、アルコキシルまたはアミドなどがある。
【００１６】
用語「アシル」は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ−置換基を意味し、以下に限定されるものではないが、ベンゾイル、スクシニル、アセチル、プロピオニルまたはブチリルなどがあり、式中、Ｒは、上記に定義したとおりアルキルまたはアリールである。
【００１７】
用語「ヒドロキシル」は置換基−ＯＨ−を意味する。
【００１８】
用語「アルコキシ」は、置換基−ＯＲ−を意味し、式中、Ｒはアルキルである。
【００１９】
用語「アミノ」は、アミン結合（−ＮＲＲ’）を意味し、式中、ＲおよびＲ’は独立して水素置換基、アルキル置換基またはアリール置換基である。
【００２０】
用語「カルボキシレート」は置換基−ＯＣ（Ｏ）Ｒ−を意味し、式中、Ｒは必要に応じて置換されているアルキルまたはアリールである。
【００２１】
用語「アシルオキシ」は、置換基−（ＣＲＲ’）ｍＣ（Ｏ）ＯＲ”−を意味し、式中、ＲおよびＲ’は独立してアルキル置換基、アリール置換基または水素置換基からなる群から選択され、Ｒ’’は水素置換基もしくはアルキル置換基であり、ｍは１〜８までの整数である。
【００２２】
用語「ハロゲン」または「ハロ」は置換基がＦ，Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩであることを指す。
【００２３】
用語「糖残基」は単糖置換基を指し、その単糖置換基には、ホモ−オリゴ糖置換基（１種の単糖からなるオリゴ糖）として、またはヘテロ−オリゴ糖置換基（２種以上の単糖からなるオリゴ糖）として結合している二つ以上の単糖置換基を含有する。好ましい実施形態では、ホモ−オリゴ糖置換基およびヘテロ−オリゴ糖置換基は、２〜１０個の単糖ユニットからなる。単糖類には、ペントースまたはヘキソースの残基などがあり、その残基は、環状または非環状（開鎖）形式として存在することができる。単糖が開鎖式である場合、水素基（アルドース中において）またはヒドロキシメチル基（ケトース中において）を除去することによってつなぎ、結合を形成させる。さらに、カルボニル炭素の酸素原子は、任意にＲＲ’−に置換することが可能であり、式中、ＲおよびＲ’は独立して結合、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、水素、アミノ置換基およびアルコキシ置換基から選択される。オリゴ糖類には、ペントース−ペントース二糖基、ヘキソース−ヘキソース二糖基、ペントース−ヘキソース二糖基、およびヘキソースペントース二糖基などを含有することが好ましい。単糖は、リボース、アラビノース、キシロースおよびリキソース、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトース、またはタロースからなる群から選択することが可能であり、これにより単糖上の１つ以上のヒドロキシル基は、水素、アルキル置換基、アルコキシ置換基、アミノ置換基、またはアシル置換基に置換することが可能である。
【００２４】
（ＩＩ．一般的な合成）
本発明は、上皮組織内に存在する細胞など、薬剤の細胞内への運搬を向上させる、送達促進化合物および製剤を提供する。本発明の化合物および製剤により、増殖または病状などに関係のある細胞過程を調節することが可能な薬剤、細胞へ侵入するか、および／または薬剤を吸収する組織または器官内の細胞集団を増加させる薬剤などの薬剤の量を増加させることが可能である。本発明の送達促進化合物を用いて、薬剤を細胞へ送達する方法も複数、提供する。
【００２５】
一部の態様では、本発明の化合物は、式Ｉによって表わされる。
【００２６】
【化１１】
2007526219.tif 000005
式中、
Ｒ１およびＲ２は各々独立して水素およびヒドロキシル基の群から選ばれたメンバーであり；
ｍおよびｎは各々独立しておおよそ０〜２から選択され；
Ｒ３は−ＮＲ４Ｒ５からなる群から選択され、式中、Ｒ４およびＲ５は各々独立して水素、糖残基、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアシル、必要に応じて置換されているアシルオキシ、第四級アンモニウム塩−ＮＲ６Ｒ７Ｒ８Ｘの群から選ばれたメンバーであり、式中、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は独立して水素およびＣ１〜Ｃ４のアルキル群から選ばれたメンバーであり、Ｘは、ハロゲンおよび必要に応じて置換されているカルボキシレートからなる群から選択され、負電荷イオンにより結合した対イオンである。式Ｉの好ましい化合物を表１に示す。
【００２７】
１つの具体的な実施形態では、式Ｉの化合物は、図１および図２に示すとおり、一般的な方法を用いて合成することが可能である。図１および図２には、本発明の１つの特定の実施形態を例示しているが、これらは一例にすぎず、本明細書の請求項の範囲に限定されるべきではない。当業者であれば、図１および図２に例示する反応スキームに対して行うことのある変形、代替、変更がこれ以外にも数多くあることがわかるであろう。図１では、コール酸２が、トリエチルアミンなどアミン塩基の存在下でクロロギ酸エステルと反応し、混合無水物の中間体を形成する。この中間体は、その後、モノ保護トリアミン１と反応し、コーリックアミド化合物３を産生する。メタノール溶媒中、塩酸による酸性条件下でコーリックアミド３を処理することによって、この場合はｔ−ブトキシカルボニルである保護基を失うことになり、第一級アミン４が生成される。図２には、還元的アミノ化条件下で第一級アミン４と２当量のラクトースを結合させ、粗残基４を提供するところを示す。この残基は、シリカゲルクロマトグラフィーで精製される。別法として、図１および図２に明示していないが、第一級アミン４は、ヨウ化メチルまたはヨウ化エチルなどのアルキルハロゲン化物とアルキル化させるか、または塩酸若しくは酢酸などの酸とプロトン化させることが可能であり、これによって本発明の第四級アンモニウム塩を得られる。本発明の化合物を生成するこのような方法により、本発明の一部の態様を示す。
【００２８】
別の具体的な実施形態では、図３および図４に示すとおり、一般的な方法を用いて式Ｉの化合物を合成することが可能である。図３および図４は、本発明の１つの特定の実施形態を説明するための一例にすぎず、本明細書の請求項の範囲に限定するべきではない。当業者であれば、ここで示した反応スキームに対して行われる別の変形、代替、変更などが数多くあることがわかるであろう。図３に示すとおり、たとえば、結合試薬としてジシクロヘキシルカルボジミドを使用することによって、二糖類の酸６をトリアミンに結合させ、ラクトビオニックージアミン７を提供する。図４は、アミン塩基の存在下でクロロギ酸エステルでコール酸２を処理してコール酸の混合無水物の形成を示す。アシル化剤としてコール酸の混合無水物を用いてラクトビオニックージアミン７を脱アシル化させ、粗製物８を得る。その粗製物８を、ジクロロメタンで粉砕することによって精製する。本発明の化合物を生成するこのような方法により、本発明の一部の態様を示す。
【００２９】
（ＩＩＩ．送達促進化合物）
本発明は、ある目的の薬剤を製剤化する場合、その薬剤の細胞への送達促進ための送達促進化合物を提供する。一部の実施形態では、細胞が組織または器官中に存在する場合もある。本明細書では、送達促進化合物は、薬剤の細胞、組織または器官への送達促進化合物を指す。好ましい化合物を表１に示す。
【００３０】
【化１２】
2007526219.tif 000006
表１には、コール酸置換基を含む化合物を示すが、当業者は、化合物の送達促進性質を損なわずに、コール酸を他のステロイド性置換基と置換することができることは容易にわかるであろう。本発明を実施するにあたって、送達が向上されるメカニズムを必ず理解する必要はないが、様々なメカニズムのいずれかによって送達が向上されることを記載する。このようなメカニズムの１つに、組織または器官の上皮表面にある保護的グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）層が、送達促進化合物によって失われることが挙げられる。特に好ましい化合物は、以下に示す式ＩＩおよび式ＩＩＩの化合物である。
【００３１】
【化１３】
2007526219.tif 000007
本発明の送達促進化合物および方法は、ある分子を細胞に送達する必要がある場合に多くの用途で有用である。たとえば、多くの病態を診断および／または治療するには、ある薬剤を疾病過程に関連のある細胞内へ侵入させる必要があることが多い。他の実施例では、組換えＤＮＡ技術を用いて、細胞培養物内または組換え生物内のいずれかにおいて、目的のタンパク質類を生成する。ある化合物を細胞内に導入することが望ましい状況の例がさらに数多くあることは、当業者には周知であろう。本発明の化合物および方法を用いれば、標的細胞または標的組織へ目的の薬剤を多く送達させることができるので、上記のような用途のそれぞれの有効性を改善することができる。
【００３２】
送達促進化合物を含有しない製剤を投与した場合に細胞に送達される薬剤量と比較すると、送達促進化合物を含有する製剤では、薬剤を細胞に投与すると、細胞に送達される薬剤量が増加することになる。本明細書の「送達促進」とは、各細胞に侵入する薬剤の複個数が増加するか、または、たとえば薬剤を吸収する組織または器官内の細胞集団が増加するかのいずれか一方または両方であることを指す。ある薬剤を細胞または細胞集団に送達させる場合、好ましい実施形態では、送達促進化合物が少なくともおおよそ２０％増加し、さらに好ましいのは、少なくともおおよそ５０％増加し、特に好ましいのは、少なくともおおよそ１００％増加することである。これは、送達促進化合物を含有せずに細胞に投与した場合の送達された薬剤量と比較したものである。
【００３３】
治療薬または診断薬などの薬剤の細胞への送達の向上に、ある特定の化合物または製剤が有効であるかどうかを当業者に周知の様々な方法で、測定することが可能である。たとえば、ある検出試薬は、標的細胞に投与される送達向上製剤に含有させることが可能である。送達向上型製剤で処置した細胞内の検出試薬の量と、送達促進化合物を含まない製剤で処置した細胞内で検出された試薬とを比較する。一例として、目的の薬剤が遺伝子または遺伝子を含有するベクターであれば、製剤中にレポーター遺伝子を含有させることが可能であり、その発現を直ちに検出することができる。調製剤がポリペプチドである場合、一例として、送達促進製剤中に存在するポリペプチドにラベルを付け、製剤投与後標的細胞中に発見されるラベルの存在および数を検出することによって送達促進化合物の試験を行うことが可能である。同様に、ポリペプチド類およびポリヌクレオチド以外の分子を調製剤として使用する場合は、分子にラベルを付け、標的細胞集団に侵入するラベルの数を検出することができる。
【００３４】
本発明の送達促進化合物に使用することのできる糖質は、単糖類であるか、または、ホモオリゴ糖若しくはヘテロオリゴ糖中で結合している２つ以上の単糖を含有しているものとすることができる。ペントースおよび／またはヘキソース残基などの単糖類が好ましい。たとえば、糖基はペントース単糖基、ヘキソース単糖基、ペントース−ペントース二糖基、ヘキソース−ヘキソース二糖基、ペントース−ヘキソース二糖基、およびヘキソース−ペントース二糖基の群から選ぶことができる。
【００３５】
実施形態のなかには、送達促進化合物の式Ｉに３個以上の単糖類からなる糖残基としてＲ３を含有するものもある。好ましいのは、糖類には１〜１０個までの単糖を含有することであり、さらに好ましいのは、１〜４個の単糖類であり、もっとも好ましいのは、おおよそ２〜３個の単糖類であることである。たとえば、三糖を使用すると、溶解度の高い化合物を提供することが可能である．
ある用途では、他の化合物に比して、水溶性が高いおよび／または送達向上の活性が高い送達促進化合物を使用することが望ましい。このような化合物は、本発明によって提供される。たとえば、本発明は、式Ｉの化合物を提供するものであり、式中のＲ３はカチオン基である。適切なカチオン基は、たとえばテトラメチル成分、アンモニウム成分、およびそれらの塩類を含む。このような化合物の実施例は、表１に示すとおりＡ−ＴＭＡおよびＡ−ＨＣＩである。その他の化合物は三糖以上であり、式Ｉの化合物中の糖基若しくは糖基類内にある水溶性および／または送達向上の活性が改善されている。
【００３６】
一部の態様では、本発明は、細胞に送達される薬剤を含む製剤および送達促進化合物を提供する。製剤中の送達促進化合物の濃度は、使用される送達促進特定の化合物、緩衝液、ｐＨ、標的組織もしくは標的器官および投与量などの複数の因子に依存する。送達促進化合物の濃度は１％〜５０％（ｖ／ｖ）の範囲内にあることが多く、好ましい範囲は１０％〜４０％（ｖ／ｖ）であり、特に好ましい範囲は１５％〜３０％（ｖ／ｖ）である。本発明の製剤中では、本発明の送達促進化合物は、おおよそ０．００２〜２ｍｇ／ｍｌの範囲内で使用することが好ましい。さらに好ましい範囲は、おおよそ０．０２〜２ｍｇ／ｍｌであり、特に好ましい範囲は、おおよそ０．１〜１ｍｇ／ｍｌである。
【００３７】
本発明の送達促進複数の化合物は、一般に、化合物を溶解することができる溶媒中で製剤化されるが、化合物の一部のみ可溶化された製剤でも適用することができる。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）は、このような化合物に対する適切な可溶化剤の一例であり、またその他の例は、当業者に周知である。様々な医薬製剤用に対してこのような薬剤の溶解性を得るためには、さらに特定の賦形剤および添加剤が望ましいであろうということは、当業者はわかるであろう。たとえば、公知の洗浄剤、脂肪酸エステル、界面活性剤などの可溶化剤は、適切な濃度で添加することが可能であり、使用している様々な溶媒中の化合物の可溶化を促進することが可能である。製剤が洗浄剤を含む場合、患者に投与される最終製剤の洗浄剤濃度は、臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）のおおよそ０．５〜２倍であることが好ましい。適切な洗浄剤としては、既に示したものが挙げられる。
【００３８】
（ＩＶ．調整剤）
本発明の送達促進化合物は、タンパク質、抗体核酸、アンチセンスＲＮＡ、低分子などの調整剤を細胞へ送達するのを向上させるために有用である。たとえば、送達促進化合物は、薬剤を細胞へ送達するために有用であり、その細胞は、上皮膜を有する組織または器官など、あらゆる組織または器官の一部である。
【００３９】
送達促進化合物（たとえば、浸透を向上させる化合物）を用いる送達に適している薬剤のなかには、本明細書生物学的プロセスを調節することのできる薬剤を指す「調整剤」であるものがある。このようなプロセスに示されているように、たとえば、細胞成長、細胞分化、細胞増殖（癌などの新生物疾患を含む）、細胞調節、代謝経路または生合成経路、遺伝子発現などがある。調整剤は、免疫応答（自己免疫疾患など）、細菌性病原体および真菌性病原体による感染のほか、調整剤を導入することによって調整することができるその他のあらゆる生物学的プロセスなどにも影響を与えることが可能である。
【００４０】
治療薬は、調整剤の一例であり、送達促進薬剤を用いて送達することが可能である。このような薬剤は、疾病を引き起こす細胞過程を調整するのに有用である。本明細書では用語「治療薬」には、以下に限定されるものではないが、治療用タンパク質、抗体、治療用遺伝子、ベクター（プラスミドベクターまたはウイルスベクター）などがあり、治療用遺伝子、アンチセンス核酸またはその他の治療用核酸配列を含有する（三重鎖核酸など）。本発明では、用語「治療用遺伝子」を細胞内に導入され治療効果を達成する核酸配列を指すものとする。このような治療用遺伝子の例としては、以下に限定されるものではないが、腫瘍抑制遺伝子、自殺遺伝子、アンチセンス核酸分子、三重鎖形成核酸分子、サイトカインをコードする遺伝子、インターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−δ、その他のインターフェロンなどＩ型インターフェロンおよびＩＩ型インターフェロンをコードする遺伝子、インターロイキン（たとえば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、Ｉｌ−６、ＩＬ−７およびＩＬ−１０）をコードする遺伝子のほか、ＧＭ−ＣＳＦなどのコロニー刺激因子がある。治療用遺伝子は、天然または遺伝子組換えのウイルス内に存在することもある。上記遺伝子のほか、これら遺伝子の治療用タンパク質、すなわち該遺伝子によってコードするタンパク質およびまたはポリペプチド類も本発明の範囲内である。このような治療用タンパク質の例には、以下に限定されるものではないが、サイトカイン、インターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−δ、インターフェロン−γ、インターロイキン（たとえば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、Ｉｌ−６、ＩＬ−７およびＩＬ−１０）などのＩ型およびＩＩ型インターフェロンのほか、ＧＭ−ＣＳＦなどのコロニー刺激因子がある。このほかの例では、上記タンパク質の抗体などの抗体が、本発明の調整剤となる。以下に限定されるものではないが、抗インターフェロン−α、抗インターフェロン−β、抗インターフェロン−δ、抗インターフェロン−γなどのＩ型およびＩＩ型インターフェロンに対する抗体のほか、抗−インターロイキン（たとえば、抗ＩＬ−１、抗ＩＬ−２、抗ＩＬ−４、抗Ｉｌ−６、抗ＩＬ−７および抗ＩＬ−１０）がある。
【００４１】
一部の実施形態では、インターフェロンポリペプチドまたは抗体は、Ｉ型またはＩＩ型インターフェロンであり、これらは一般にアルファ−インターフェロン、ベータ−インターフェロン、ガンマ−インターフェロンならびにオメガ−インターフェロン（α−インターフェロン、β−インターフェロン、γ−インターフェロンならびにω−インターフェロンなど）およびその組み合わせとして指定され、アルファ−インターフェロンのコンセンサス配列を含有する。実施形態のなかには、アルファ−インターフェロンが、アルファ１またはアルファ２インターフェロンであるものがある。実施形態のなかには、タンパク質がインターフェロンα−２βまたは抗インターフェロンα−２ｂであるものがある。その他のインターフェロンには、インターフェロンα−２β、融合インターフェロンα−／２α−１、インターフェロンα−２ｅ、ヒトα１またはヒトα２インターフェロンなどがある。
【００４２】
実施形態のなかには、インターフェロンがハイブリッドインターフェロンであるものがある。インターフェロンの異なるサブタイプ配列の組み合わせを含むハイブリッドアルファ−インターフェロン遺伝子の構造（たとえば、αとΔ、αとβおよびαとＦ）は、米国特許第４，４１４，１５０号、米国特許第４，４５６，７４８号、および米国特許第４，６７８，７５１号に開示されている。米国特許第４，６９５，６２３号、米国特許第４，８９７，４７１号および米国特許第５，８３１，０６２号には、新規なヒト白血球インターフェロンポリペプチド類が開示されており、コンセンサスヒト白血球インターフェロンと呼ばれている。このポリペプチド類には、天然アルファインターフェロンのサブタイプであるポリペプチド類の各位置に見られる共通または優性のアミノ酸を含むアミノ酸配列がある。本発明の一実施形態では、ハイブリッドインターフェロンは、インターフェロンα２α１である。
【００４３】
一実施形態では、インターフェロンは、インターフェロン−アルファである。組換えインターフェロンαは、たとえば、クローン化させて、大腸菌内に発現させたものがある（たとえば、Ｗｅｉｓｓｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０９：１３４３−１３４９（１９８０）；Ｓｒｅｕｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０９：１３４３−１３４７（１９８０）；Ｇｏｅｄｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ、２９０：２０−２６（１９８１）；Ｈｅｎｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ、１８５：２２７−２６０（１９８５））。インターフェロンがヒトインターフェロンアルファである実施形態もある。インターフェロンアルファが、インターフェロンアルファ２ａまたはインターフェロンアルファ２ｂである実施形態もある。
【００４４】
本明細書では、用語「インターフェロン」は、インターフェロンのクラスおよびサブクラスをすべて、欠失、挿入、または置換による変異のほか、タンパク質類、ポリペプチド類および抗体類なども含むものとする。一実施形態では、インターフェロン遺伝子／タンパク質は、インターフェロン−α遺伝子／タンパク質である。組換えインターフェロンαは、たとえば、クローン化されており、いくつかの基によって大腸菌内に発現している（たとえば、Ｗｅｉｓｓｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０９：１３４３−１３４９（１９８０）；Ｓｒｅｕｌｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０９：１３４３−１３４７（１９８０）；Ｇｏｅｄｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ、２９０：２０−２６（１９８１）；Ｈｅｎｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ、１８５：２２７−２６０（１９８５））。ある実施形態のなかには、系のインターフェロン遺伝子がヒトヌクレオチドまたはポリペプチド配列に由来するものがある。ヒトインターフェロンアルファは、たとえば、少なくとも２４亜種を含むタンパク質ファミリーである（Ｚｏｏｎ、Ｋ．Ｃ．，Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ、９：１（１９８７）、Ｇｒｅｓｓｅｒ、Ｉ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ）。インターフェロンアルファは、本来、細胞内の抗ウイルス状態を誘発することができる薬剤として説明されてきたが、現在では、多面発現性のあるリンフォカインとして知られており、多くの免疫系の機能に影響を及ぼす（Ｏｐｅｎａｋｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｉａ、４５：５１３）１９８９））。ある実施形態では、インターフェロンアルファが、インターフェロンアルファ２ａまたはインターフェロンアルファ２ｂ（たとえば、国際公開公報９１／１８９２７号参照）である場合もあるが、いずれのインターフェロンアルファを使用してもよい。
【００４５】
インターフェロンＩＦＮ−α（アルファインターフェロンまたはインターフェロンアルファなど）遺伝子、タンパク質または抗体などの薬剤組成物には、治療効果のある適応症が数多くあり、その適応症とは、ヘアリーセル白血病、カポジ肉腫、腎細胞癌、非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞白血病、多発性および慢性骨髄性白血病、悪性黒色腫、膀胱細胞癌、大腸癌（５−ＦＵを用いる）、尖圭コンジローム、ライノウイルス、およびＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、非Ａ非Ｂウイルス（ＮＡＮＢ）肝炎、または肝炎δウイルス（ＨＤＶ）感染などの結果生じる様々な慢性ウイルス性肝炎（Ｐｅｓｔｋａ、ＡＩＤＡ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＆  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ、８（５）：７７６−７８６（１９９２））などである。ＩＦＮ−αはまた、骨髄増殖症候群を伴う患者の巨核球形成および血小板増多症のコントロールに対して有効性が高いことがわかった（Ｔａｌｐａｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  Ｉｎｔ．Ｍｅｄ．，９９：７８９−７９２（１９８３）；Ｇｉｓｓｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，、Ｌａｎｃｅｔ、ｉ：６３４−６３７（１９８９）；Ｇａｎｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ、７０：１１７３−１１７９（１９８７））。
【００４６】
実施形態のなかには、本発明の組成物が、送達促進化合物を含む緩衝液中に含まれる「治療効果のある」量の治療薬を含むものもある。本明細書では「治療効果のある」とは、病状に伴う症状の予防、軽減、治癒を指す。
【００４７】
送達促進薬剤およびこのような薬剤を含有する製剤を使用すると、目的の遺伝子、タンパク質または抗体を器官および組織の特定の細胞内にある細胞へ送達させることを促進することも可能である。このような遺伝子は、たとえば、商用目的であるタンパク質をコードすることが可能である。一例として、薬剤および製剤を使用し、哺乳類から産出された乳汁中に分泌される栄養上重要なタンパク質をコードする遺伝子を哺乳類の乳房組織に送達することが可能である。このような薬剤および製剤のこのほかの使用法は、当業者には明らかである。
【００４８】
送達促進薬剤およびこのような薬剤を含有する製剤は、また、診断薬を細胞、器官および組織へ送達するのに有用である。診断薬の例には、細胞内に発現すると容易に検出することができるタンパク質をコードする標識遺伝子（β−ガラクトシダーゼ、緑色蛍光タンパク質、ルシフェラーゼなどがあるが、これに限定されるものではない）および標識核酸プローブ（放射性標識プローブなど）がある。
【００４９】
（Ｖ．遺伝子送達用ベクター）
細胞へ送達させる薬剤が遺伝子である場合、遺伝子をベクター内へ組み入れることが可能である。このような目的で使用するベクターの例には、標的細胞内の目的遺伝子の発現を指示することができる発現プラスミドがある。このほかの例には、ベクターがウイルスベクター系であるものがあり、その系では、標的細胞を形質移入できるウイルスゲノム内に目的遺伝子を取り込ませる。標的細胞内で発現するように目的遺伝子を設計する場合、所望の標的宿主細胞内において遺伝子の発現を導くことができる発現遺伝子配列および制御配列に遺伝子を結合させることが可能である。このため、標的細胞内に適切な状態で遺伝子を発現させることができる。
【００５０】
本願発明を実施するのに有用なウイルスベクター系には、たとえば、天然ウイルスベクター系または組換えウイルスベクター系などがある。特定の用途によって、適切なウイルスベクターには、複製型ウイルスベクター、複製欠損型ウイルスベクター、および条件的に複製するウイルスベクターなどがある。たとえば、ウイルスベクターは、ゲノム由来とすればよく、そのゲノムには、ヒトアデノウイルスまたはウシアデノウイルス、ワクチニアウイルス、ヘルペスウイルス、アデノ随伴ウイルス、マウス微小ウイルス（ＭＶＭ）、ＨＩＶ、シンドビスウイルスのほかレトロウイルス（ラウス肉腫ウイルスを含むが限定するものではない）、およびＭｏＭＬＶ（モロニーマウス白血病ウイルス）がある。一般に、目的の遺伝子をこのようなベクターに挿入し、遺伝子構成を通常ウイルスＤＮＡとともにまとめ、感受性の高い宿主細胞に感染させ、目的遺伝子を発現させる。組換えウイルスベクターは、タンパク質ＩＸ遺伝子が欠失しているアデノウイルスベクター送達系が好ましい（国際公開公報９５／１１９８４号を参照。この公報を、すべての目的に対して完全に参照することよって本明細書に援用する）。
【００５１】
本明細書では、「組換え」は核酸およびタンパク質によってエンコード化された核酸およびタンパク質を指し、ここで、核酸は、組換えＤＮＡ技術法によって構築される。また、「遺伝子工学」ともいう。
【００５２】
ｐ５３遺伝子または網膜芽細胞腫腫瘍抑制遺伝子などの調節遺伝子を含む薬剤組成物を、薬剤組成物の治療的に有効な量の送達促進薬剤を含有する緩衝液中で製剤化された組換えウイルスベクターの送達系に含ませ、本発明の教示に従って投与することができる。たとえば、製剤化された組換えアデノウイルスベクターの送達系中に含まれる治療用遺伝子の治療的有効量の範囲は、おおよそ１×１０８〜１×１０１２粒子／ｍｌであり、さらに一般的な範囲はおおよそ１×１０８〜５×１０１１粒子／ｍｌであり、最も一般的な範囲は１×１０９〜１×１０１１粒子／ｍｌ（ＰＮ／ｍｌ）である。
【００５３】
（ＶＩ．遺伝子送達系）
本明細書では、「遺伝子送達系」は、ある細胞に薬剤を送達するためのあらゆる方法を指す。本薬剤は、遺伝子送達系に組み込んだ後、送達促進化合物を含有する製剤を用いて細胞へ送達させる。
【００５４】
本発明の実施形態のなかには、取り込まれやすいように（被覆ピットの陥入およびエンドソーム内部への取込みなど）、遺伝子構成またはその他の薬剤を、ＤＮＡ結合部（Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：１４６２１−１４６２４（１９８８）；国際公開公報９２／０６１８０号）など適切な結合部を介して細胞受容体リガンドに抱合させたものもある。たとえば、遺伝子の構成は、ポリリジン成分を介して肝細胞のアシアロ糖タンパク質受容体のリガンドであるアシアロ−ｏｒｏｍｕｃｏｃｉｄに結合させることが可能である。
【００５５】
同様に、遺伝子構成を含むために使用するウイルスエンベロープは、  受容体に対して特異的な受容体リガンドまたは抗体を添加することによって修飾することが可能であり、受容体をエンドサイトーシスを介して特異的細胞内に取込ませることができる（国際公開公報９３／２０２２１号、国際公開公報９３／１４１８８号、国際公開公報９４／０６９２３号などを参照）。本発明の実施形態のなかには、本発明のＤＮＡ構成をアデノウイルス粒子などのウイルスタンパク質に結合させて、エンドサイトーシスが促進される（Ｃｕｒｉｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ  ８８：８８５０−８８５４（１９９１））ようにしたものもある。他の実施形態では、本願発明の分子抱合体に、微小管阻害剤（国際公開公報／９４０６９２２号）、インフルエンザウイルスの赤血球凝集素を模倣する合成ペプチド（Ｐｌａｎｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：１２９１８−１２９２４（１９９４））、およびＳＶ４０Ｔ抗原などの核移行シグナル（国際公開公報９３／１９７６８号）などがある。
【００５６】
本発明の実施形態のなかには、調製剤がアンチセンス核酸であるものもある。アンチセンス核酸は、アンチセンスオリゴヌクレオチドとして提供されることが可能である（たとえば、Ｍｕｒａｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ．７：１０９−１１４（１９９７）を参照）。アンチセンス核酸をコードする遺伝子も提供することが可能であり、このような遺伝子は、送達促進化合物を用いて製剤化することが可能であり、また、当業者に周知の方法で細胞内に導入することが可能である。たとえば、ウイルスベクター内にあるアンチセンス核酸をコードする遺伝子を導入することができるそのウイルスは、たとえば、Ｂ型肝炎ウイルス（Ｊｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒａｌ  Ｈｅｐａｔ．４：１６７−１７３  （１９９７）などを参照）、アデノ随伴ウイルス（Ｘｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．７５６：７６−８３（１９９７）などを参照）がある。また、その他の系には、ＨＶＪリポソーム法による遺伝子送達系（Ｋａｎｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１１−２００−３０８（１９９７）などを参照）；「ペプチドベクター」（Ｖｉｄａｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＣＲ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＩＩＩ  ３２：２７９−２８７（１９９７）などを参照）；エピソームベクターまたはプラスミドベクター内の遺伝子など（Ｃｏｏｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９４：６４５０−６４５５（１９９７）、Ｙｅｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．８：５７５−５８４（１９９７）などを参照）；  ペプチドＤＮＡ凝集体内の遺伝子など（たとえば、Ｎｉｉｄｏｍｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１５３０７−１５３１２（１９９７）を参照）；脂質ベクターシステム（Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｔｈｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ．１４：１７３−２０６（１９９７）を参照）内の「ｎａｋｅｄ  ＤＮＡ」など（たとえば、米国特許第５，５８０，８５９号および米国特許第５，５８９，４６６号参照）、高分子を被膜したリポソーム（１９９３年５月２５日にＭａｒｉｎらによって出願された米国特許第５，２１３，８０４号；１９９１年５月７日にＷｏｏｄｌｅらによって出願された米国特許第５，０１３，５５６号）；カチオン性リポソーム（１９９４年２月１日にＥｐａｎｄらによって出願された米国特許第５，２８３，１８５号；１９９６年１１月２６日にＪｅｓｓｅｅ、Ｊ．Ａによって出願された米国特許第５，５７８，４７５号；１９９４年１月１８日にＲｏｓｅらによって出願された米国特許第５，２７９，８３３号、１９９４年８月２日にＧｅｂｅｙｅｈｕらによって出願された米国特許第５，３３４，７６１号；）、ガス封入微粒子、（１９９６年８月６日にＵｎｇｅｒらによって出願された米国特許第５，５４２，９３５号）、リガンドを対象とした封入巨大分子（１９９２年４月２８日発行のＬｏｗらによる米国特許第５，１０８，９２１号、１９９６年５月１８日に発行のＣｕｒｉｅｌらによる米国特許第５，５２１，２９１号；１９９６年９月１０日発行のＧｒｏｍａｎらによる米国特許第５，５５４，３８６号、１���９２年１１月２４日に発行のＷｕらによる米国特許第５，１６６，３２０号）などがあるが、これに限定されるものではない。
【００５７】
（ＶＩＩ．タンパク質送達系）
本明細書では、「タンパク質送達系」は、ある細胞に薬剤を送達するあらゆる方法を指す。薬剤は、送達促進化合物を含有する製剤を用いて細胞へ送達させるタンパク質送達系に使用することが可能である。タンパク質および送達促進化合物の送達は、同時にすることもできるし、最初にタンパク質を投与してから送達促進薬剤を投与したり、最初に送達促進薬剤を送達してからタンパク質を送達したりするなど組み合わせることもできる。
【００５８】
様々な系があり、たとえば、リポソーム送達系、直接注入または接触、高分子被膜されたリポソーム、カチオン性リポソーム、ガス封入微粒子、リガンドを対象とした封入巨大分子、パッチ、およびその他の従来のタンパク質送達のプラットフォームなどがある。
【００５９】
（ＶＩＩＩ．医薬製剤）
医薬目的で使用する場合、本発明の製剤には送達促進化合物を含有する緩衝液が含まれる。本緩衝液は、医薬的に受容可能であれば、リン酸緩衝生理食塩水またはリン酸ナトリウム／硫酸ナトリウム、トリス緩衝液、グリシン緩衝液、グリシン緩衝液、滅菌水など、いずれの緩衝液でも構わない。これ以外の緩衝液は、ＧｏｏｄらによってＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ５：４６７（１９６６）に記載されている緩衝液などがあり、当業者には周知である。アデノウイルスベクターの送達系にある調節遺伝子からなる薬剤組成物中の本緩衝液のｐＨは、たとえば、一般的な範囲は６．４〜８．４であり、好ましい範囲は７〜７．５であり、特に好ましい範囲は７．２  〜７．４である。
【００６０】
本発明の組成物は、さらに安定剤、展色剤のほか医薬的に受容可能な担体または媒体を含有することができる。医薬的に受容可能な担体は、生理学的に受容可能な化合物を含むことができ、その化合物は、たとえば、腫瘍抑制遺伝子からなる組換えアデノウイルスベクター送達系を安定化させるために作用する。生理学的に受容可能な化合物には、たとえば、グルコース、スクロースまたはデキストランなどの炭水化物、アスコルビン酸またはグルタチオンなどの酸化防止剤、キレート剤、低分子量のタンパク質またはその他の安定剤、賦形剤などがある。このほか、生理学的に受容可能な化合物には、湿潤剤、乳化剤、分散剤または防腐剤などがあり、これらは、微生物の成長または作用を阻止するのに特に有用である。各種防腐剤は、たとえば、フェノールおよびアスコルビン酸などがよく知られている。医薬的に受容可能な担体は、投与ルートおよび本明細書に記載の組換えアデノウイルスベクター送達系および特定の腫瘍抑制遺伝子の特定の生理化学的性質に依存して選択することは、当業者には周知である。担体、安定剤または補助の例は、Ｍａｒｔｉｎ、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，１５ｔｈ  Ｅｄ．（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ  １９７５）に記載されており、参照によって援用される。
【００６１】
（ＩＸ．製剤の投与）
実施形態のなかには、送達促進化合物が調製剤を製剤化するときの緩衝液中に含まれるものもある。送達促進化合物は、調製剤の前または調製剤とともに投与することが可能である。実施形態のなかには、送達促進化合物に、患者へ投与する直前に送達促進化合物の製剤と混合することによって調節した調製剤を備えるものもある。別の実施形態では、送達促進化合物および調製剤をバイアルに入れ、投与の担当者に提供する。
【００６２】
薬剤組成物が、送達促進薬剤も含有する組換えアデノウイルスベクター送達系に含有される腫瘍抑制遺伝子を含む場合、緩衝液中で製剤化された約５分〜３時間の範囲内で、薬剤組成物を投与することが可能である。好ましいのは、おおよそ１０〜１２０分であり、特に好ましいのは、おおよそ１５〜９０分である。別の実施形態では、腫瘍抑制遺伝子を含む組換えアデノウイルスベクター送達系を投与する前に、送達促進薬剤を投与してもよい。腫瘍抑制を含む組換えアデノウイルスベクター送達系を投与する前に、送達促進薬剤を投与する場合には、おおよそ３０秒〜１時間の範囲であればよい。好ましいのはおおよそ１〜１０分であり、特に好ましいのは、おおよそ１〜５分である。
【００６３】
調製剤を送達促進薬剤を含む緩衝液中で製剤化した場合、その調製剤は、たとえば、腫瘍内投与または膀胱内投与など当業者に周知のあらゆる送達方法を用いて、癌組織などの新生物組織を含むあらゆる組織または器官へ送達することができる。組織および器官には、あらゆる組織または器官があり、胃腸管、膀胱、気道、肺などの上皮膜がある。以下に限定されるものではないが、膀胱癌および上部気道癌、外陰部癌、頚部癌、膣癌または気管支癌などがあり、局所の転移性腹膜腫瘍、細気管支肺胞上皮癌、転移性胸膜癌；口腔癌および扁桃癌、上咽頭腫瘍、鼻腫瘍、喉頭腫瘍、食道腫瘍、胃腫瘍、大腸および直腸腫瘍、胆嚢腫瘍または皮膚若しくは黒色腫などがある。
【００６４】
本発明の実施形態のなかには、治療薬が、特に粘膜用のゲル製剤および局所ゲル製剤など、粘膜剤、局所製剤および／またはバッカル剤に製剤化されるものもある。典型的な浸透向上組成物には、ポリマーマトリクス、経皮的送達用の粘膜付着性のゲル調製などがあり、米国特許第５，３４６，７０１号に開示されている。このような製剤は、特に癌の治療に有用である。対象となる癌は、口腔癌、頭部癌、頸部癌（気管気管支の上皮癌など）皮膚癌（黒色腫、基底細胞腫、扁平上皮癌など）、腸粘膜および膣粘膜の癌、子宮頸癌などである。
【００６５】
本発明の実施形態のなかには、眼に投与するための眼科用剤に製剤化される治療薬もある。このような製剤は、任意のｐ５３遺伝子の送達とともに、網膜芽細胞腫（ＲＢ）遺伝子を眼へ送達する場合に有用である。
【００６６】
（Ｘ．処理方法）
本発明の製剤は、一般に、細胞への薬剤送達促進のために投与する。細胞は、上皮膜または組織培養内などの分離細胞の組織の一部として提供することが可能である。細胞は、インビボ、エクスビボまたはインビトロで得ることが可能である。
【００６７】
送達促進化合物および調製剤を含有する製剤は、インビボまたはエクスビボなど様々な方法によって、目的組織内へ導入することができる。本発明の実施形態のなかには、微量注入法、リン酸カルシウム沈殿法、リポソーム融合法、または微粒子銃などの方法によって、調製剤を細胞へ導入するものもある。さらに別の実施形態では、治療薬は、目的の組織によって直接吸収される．
本発明の実施形態のなかには、本発明の組成物をエクスビボにて患者から外植された細胞または器官へ投与し、その後患者へ戻すものもある。治療用遺伝子の構成をエクスビボにて投与する例は、Ａｒｔｅａｇａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｔｃｈ  ５６（５）；１０９８−１１０３（１９９６）；Ｎｏｌｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３（６）：  ２４１４−９（１９９６）；Ｋｏｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２３（１）：４６−６５（１９９６）；Ｒａｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｓｕｒｇｅｒｙ  ２２３（２）：１１６−２６（１９９６）；Ｄａｌｅｓａｎｄｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｔｈｏｒａｃ  Ｃａｒｄｉ．Ｓｕｒｇ．，１１（２）：４１６−２２（１９９６）；およびＭａｋａｒｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３（１）：４０２−６（１９９６）などに記載されている。一実施形態では、本発明がタンパク質、抗体などの調整剤をＳＹＮ−３と組み合わせて投与することによって、膀胱癌を治療する方法を提供する。
【実施例】
【００６８】
下記の実施例は、説明を目的としたのもであって、本発明の範囲を限定するものではない。下記の実施例では、「ｇ」はグラムを意味し、「ｍｌ」はミリリットル、「ｍｏｌ」はモル、「Ｃ」は  摂氏温度、「ｍｉｎ．」は分、「ＤＭＦ」はジメチルホルムアミドを意味する。ほかに規定がない限り、温度はすべて摂氏温度である。
【００６９】
（実施例１：化合物Ａ−ＤＬの合成（図１および図２参照））
下記は、Ａ−ＤＬとしても知られている化合物５を合成する場合に利用する方法体系に関するものであり、下記に化合物１および３〜５の合成の詳細および精製に用いる工程を示す。
【００７０】
（Ａ．使用する材料および試薬）
ｔ−ブチルオキシカルボニル無水物
Ｎ−（３−アミノプロピル）−１，３−ジアミンプロパン
コール酸
クロロギ酸イソブチル
トリエチルアミン
シアノボロ水素化ナトリウム
ラクトース
５％塩酸
酢酸
（Ｂ．実験手順）
化合物１；Ｎ−（３−アミノプロピル）−１，３−ジアミンプロパン（５０−ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１５０ｍＬ）溶液を十分に撹拌しながら、その中にｔ−ブチルオキシカルボニル無水物（１０．０ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）溶液を５℃で２０分かけて滴下した。この混合物を２時間撹拌し、その後溶媒を除去し、その残留物を再びＨ２Ｏ（２００ｍＬ）中に溶解させた。この水溶液をその後、ＣＨ２Ｃｌ２（８＊５０ｍＬ）で抽出した。ＭｅＣＮ：ＡｃＯＨ：Ｈ２Ｏ（４：１：１）を用いてＲＦ値０．３５の該生成物と共に薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）にかけ、検出するためにリンモリブデン酸を用いた。無極性不純物を含有する初期の抽出液は廃棄した。所望の有機抽出液を貯留し、ＮａＳＯ４で乾燥させた上で濃縮することによって所望のＮ−ＢＯＣアミン１（ＢＯＣＯに対して５．５３ｍｍｏｌ、５５％）得た。
【００７１】
化合物３：ＤＭＦ（８０ｍＬ）に溶かしたコール酸２（８．９４ｍｍｏｌ）を５℃で１０分間、クロロギ酸イソブチル（９．２５ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（１４．３ｍｍｏｌ）とで処理した。その後、化合物１（３．５７ｍｍｏｌ）を添加して、混合物を７２時間、常温で撹拌させた。ＲＦ値が０．３５である所望の生成物と共にＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（３：１）を用いて、ＴＬＣでその反応を監視した。本溶媒を蒸発させ、その後シリカカラム上において精製し（シリカ１００ｇ、ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（５：１）で）化合物２（１．９０ｍｍｏｌ、５３％）を得た。
【００７２】
化合物４：化合物３（１．９０ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５０ｍＬ）に溶かしたＨＣＩの５％溶液中に溶解させ、常温で１５時間撹拌させた。ＲＦ値０．５の所望の生成物を用いて、その反応をＴＬＣ（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（３：１））で監視した。この溶媒をトルエンとともに同時蒸発させ、ＭｅＯＨ中に再び溶解した。溶液を塩基性樹脂（ＩＲＡ−４００、ＯＨ−）で処理し、ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ：Ｅｔ３Ｎ；Ｈ２０（６０：３０：５：５）を用いてシリカゲル上で精製し、化合物３（０．７２ｍｍｏｌ、３８％）を得た。
【００７３】
化合物５（Ａ−ＤＬ）：化合物４（２．４８ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（２００ｍＬ）に溶解させ、酢酸（４ｍＬ）およびラクトース（６．０ｍｍｏｌ）を添加した（図２参照）。この溶液を加熱し、還流させ、続いてシアノボロ水素化ナトリウム（６．０ｍｍｏｌ）を添加した。３時間後、さらにシアノボロ水素化ナトリウム（６．０ｍｍｏｌ）を添加し、さらに１２時間還流させてその反応物を撹拌した。４：１：１のＡｃＣＮ；ＡｃＯＨ：Ｈ２０の溶媒系を用いてＴＬＣでこの反応を監視した。ＲＦ値の低い２種の新規主要化合物が観察され（約０．１および０．０５）、その後化合物４およびラクトースを得た。この２種がＡ−ＲＬＢおよびＡ−ＤＬ（ＲＦ値の低いＡ−ＤＬを伴う）に相当する。溶媒を蒸発させ、その残留物をＩ：１のＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏの溶液で溶解させ、逆相シリカゲルカラム上で精製した。徐々にメタノールの割合を増加させることによって、未反応の化合物３およびラクトースが得られ、その後Ａ−ＤＬおよびＡ−ＲＬＢが溶離した。Ａ−ＤＬおよびＡ−ＲＬＢを含有するフラクションを貯留し、濃縮した。ＣＨ２Ｃｌ２；ＭｅＯＨ；Ｈ２Ｏ；Ｅｔ３Ｎ（６０：３０：３：５）を溶媒として用いて、その残留物をシリカゲルカラム上（シリカ１５０ｇ）で精製した。所望の化合物５（Ａ−ＤＬ、０．６１ｍｍｏｌ２５％）と共に、Ａ−ＲＬＢ０．２６ｍｍｏｌを回収した。
【００７４】
（実施例２：化合物Ａ−ＬＢ（Ｓｙｎ３）の合成（図３および図４を参照））
下記は、化合物８の合成に活用する方法体系に関するものであり、Ａ−ＬＢとしても知られている。下記に、化合物５〜６の合成の詳細および精製に必要な工程を記載する。
【００７５】
（Ａ．使用する材料および試薬）
Ｎ−（３−アミノプロピル）−１，３−ジアミノプロパン
コール酸
ジシクロヘキシルカルボジミド
クロロギ酸イソブチル
トリエチルアミン
ラクトビオン酸
（Ｂ．実験）
化合物７：ラクトビオン酸６のメタノール（６０ｍＬ）溶液（７１６ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を加熱し、還流した。本溶液に、ＤＣＣ（５００ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）を添加し、生成された溶液を還流時に撹拌した。２時間後、Ｎ−（３−アミノプロピル）−１，３−ジアミンプロパン（８００ｍＬ、５．７ｍｍｏｌ）を添加し、生成された溶液をさらに１時間撹拌した。反応溶液を常温まで低下させ、濃縮し、粗製物７を得た。粗製アミド７をジクロロメタンと粉砕させ精製し、７（２．７２ｇ、５．７ｍｍｏｌ）を粘着性のある吸湿性固体として得た。
【００７６】
化合物８：ＤＭＦ（６０ｍＬ）中のコール酸２（４．１ｇ、１０ｍｍｏｌ）の溶液を０℃まで冷却した。この溶液にクロロギ酸イソブチル（１．２ｍＬ、１０．２ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（１．４ｍＬ、１０．４ｍｍｏｌ）を添加し、生成された溶液を１０分間撹拌後、ＤＭＦ（４０ｍＬ）中に５（２．５ｇ、５．３ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液を７２時間撹拌後、濃縮し、粗製物８を得た。粗製物をカラムクロマトグラフィーで精製し、純物質８（Ａ−ＬＢ）を得た。
【００７７】
（実施例３：ＳＹＮ３製剤内の膀胱内投与後、ＩＦＮタンパク質の膀胱内への取込み）
本例では、ＳＹＮ３を製剤で投与した場合、ＳＹＮ３はインターフェロンタンパク質の組織レベルが上昇することによってインターフェロンタンパク質の吸収を向上させることを示す。
【００７８】
方法。ハイブリッドＩＦＮタンパク質およびＩＦＮα２ｂタンパク質（イントロンＡ）を用いた。比較するために、時刻ｔ＝０の時点でのハイブリッドタンパク質も用いた。イソフルランを用いて非近交系ＨＳＤラットに麻酔をかけた。処理前の尿を採取した。膀胱には、カテーテルおよび潤滑剤を用いて、経尿道的にカテーテルを埋め込んだ。被験物質を膀胱に投与し、カテーテルを埋め込んだまま尿道を２．０Ｇで縫合した。４５分後（０時間）、被験物質を除去し、被験動物をホームゲージに戻した。屠殺直前にラットから尿サンプルを採取した。膀胱は、尿採集後、その日のうちにラットから収集した。その組織を凍結し、ＩＦＮ応答性遺伝子のアップレギュレーションを測定した。
【００７９】
【化１４】
2007526219.tif 000008
（材料）
Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ雌ラット３８匹
ＩＡＣＢ：トリス−グリセロール製剤  ７．５７×１０１１Ｐ／ｍｌ
ＩＨＣＢ：ｖＰＢＳ製剤       １．１０×１０１２Ｐ／ｍｌ
ＳＹＮ３：６×原液（６ｍｇ／ｍｌ）
イントロンＡ：使用した参照バイアル：１ｍｌの滅菌したｎａｎｏｐｕｒｅ中でｄＨ２ｏ（１０ＭＩＵ／ｍｌ）で中和させた。９５０μｌのイントロンＡを３，００８μｌのＰＢＳ（２．４ＭＩＵ／ｍｌ）で希釈した。
希釈させたイントロンＡ６２５μｌをＰＢＳまたはＳＹＮ３（６ｍｇ／ｍｌ）のいずれか１２５μｌに添加した。
ＩＦＮα２α１タンパク質：１０５μｇ／ｍｌ＝１０５×１０６ｐｇ／ｍｌ
１．３４×１０７ＩＵ／ｍｌ
１．２８×１０８ＩＵ／ｍｇ。
【００８０】
ＩＡＣＢは、インターフェロンα２ｂ用の組換えアデノウイルスベクターであり、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモータおよびＥ１領域欠損がある。ＩＨＣＢは、ハイブリッドインターフェロンα２α１用の組換えアデノウイルスベクターであり、ＣＭＶプロモータおよびＥ１領域の欠損を含む。
【００８１】
（被験物質の調製）
最終濃度２．４  ＭＩＵ／ｍのＩＦＮα２ｂを調製する（注射用滅菌水１ｍｌ中、１個の参照用バイアルを溶解する）
イントロンＡ濃縮  ９５０μｌ
ＰＢＳ  ３，００８μｌ
ＩＦＮα２ｂをＰＢＳ中で調整する：
イントロンＡ  ＠２．４  ＭＩＵ／ｍｌ  ６２５μｌ
ＰＢＳ  １２５μｌ
ＳＹＮ３中のＩＦＮα２ｂを調製する：
イントロンＡ  ＠２．４  ＭＩＵ／ｍｌ  ６２５  μｌ
ＳＹＮ３  １２５μｌ
ＳＹＮ３中のｒＡｄ−ＩＦＮα２ｂ  （ＩＡＣＢ）を調製する：
ＩＡＣＢ  ６６μｌ
ＳＹＮ３  ２５０μｌ
トリス−グリセロール緩衝液１１８４μｌ
ＩＦＮα２α１タンパク質（２．２ｍｌ）の濃度を調製する：
ＩＦＮα２α１タンパク質  ２４３μｌ
ＰＢＳ  １９５７μｌ
ＩＦＮα２α１／ＰＢＳ：
ＩＦＮα２α１タンパク質  ６２５μｌ
ＰＢＳ  １２５μｌ
ＩＦＮα２α１／ＳＹＮ３：
ＩＦＮα２α１タンパク質  ６２５μｌ
ＳＹＮ３  １２５μｌ
【００８２】
【化１５】
2007526219.tif 000009
（賦形剤の最終濃度）
ＳＹＮ３：（１２０ｍｇ／２０ｍｌ）／６＝１ｍｇ／ｍｌ
クエン酸水和物：（１．６ｍｇ／２０ｍｌ）／６＝０．０１３３３ｍｇ／ｍｌ
クエン酸二水和物：（５．１ｍｇ／２０ｍｌ）／６＝０．０４２５ｍｇ／ｍｌ
ヒドロキシ−シクロデキストリン：（１０００ｍｇ／２０ｍｌ）６＝８．３３ｍｇ／ｍｌ
ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ−８０）：（６０ｍｇ／２０ｍｌ）／６＝０．５ｍｇ／ｍｌ。
【００８３】
組織ホモジネート内に存在するＩＦＮα２ｂの量は、ＥＬＩＳＡアッセイ（ＰＢＬ）によって決定した。Ｂｒａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイによってタンパク質の濃度を測定した。組織内のＩＦＮレベルは、ｐｇ  ＩＦＮ／ｍｇ組織と表した。図５に示すとおり、ＳＹＮ３製剤中のＩＦＮα２ｂが送達されると、検出できるＩＦＮα２ｂのタンパク質の量が、治療後最長２４時間までに約１５倍増加することになる。図６は、特定の時点を示す。さらに、ハイブリッドＩＦＮタンパク質（ＩＦＮα２α１）の送達も、ＳＹＮ３製剤中での送達によって向上された。ＩＦＮα２ｂタンパク質とおおよそ同じレベルの組織濃度で検出された。
【００８４】
（実施例４：ＳＹＮ３（図４化合物８）製剤中のＩＦＮタンパク質を投与後の膀胱の尿路上皮におけるインターフェロンの生物学的効果を分析）
本例では、ＩＦＮの組織濃度が上昇することによって、生物応答が測定可能になる場合を検討した。生物活性を評価するために、ＲＴ−ＰＣＲによって、ＩＦＮタンパク質（イントロンＡおよび「一般的な」インターフェロン（ＩＦＮＡ／Ｄ；ＩＦＮα２α１）のいずれも）を用いて処理した後のラットの膀胱ホモジネート内のＩＦＮ応答性遺伝子の発現を監視した。測定を行ったラット遺伝子は下記の通りである。２’，５’−オリゴアデニル酸合成酵素（２’，５’−ＯＡＳ）、インターフェロン−によるｐ７８タンパク質（ＭｘＡＭＸ１）（ＭＸ１）をエンコード化した遺伝子、インターフェロン制御因子１（ＩＲＦ−１）およびインターフェロンγＩＦＮγ（ＩＦＮγは通常、ＩＦＮ応答性遺伝子とはみなされないが、ＢＣＧなどの病原体に曝露後発現することがあり、また組換えアデノウイルスによって生じることもある）。その方法は、主に上記実施例３に記載した。１時間後、被験物質を取り除き、被験動物をホームケージに戻した。ラットは、指示された時間に（０時間＝処理直後）屠殺し、そのサンプルを液体Ｎ２で瞬間冷凍し、ＦＴ−ＰＣＲ法に用いるために提出した。
【００８５】
【化１６】
2007526219.tif 000010
【００８６】
【化１７】
2007526219.tif 000011
（必要材料）
Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ雌ラット３８匹；プロトコール０４−６３４から転用
ＬＡＣＢ：トリス−グリセロール製剤  ７．５７ｘ１０１１Ｐ／ｍｌ
ＩＨＣＢ：ｖＰＢＳ製剤  １．１０ｘ１０１２Ｐ／ｍｌ
ＳＹＮ３：６ｘ原液（６ｍｇ／ｍｌ）
Ｄ−ＰＢＳ
トリス−グリセロール緩衝液：
無菌ＷＦＩ
ＩＦＮα２α１タンパク質：１０５μｇ／ｍｌ＝１０５ｘ１０６ｐｇ／ｍｌ
１．３４ｘ１０７ＩＵ／ｍｌ
１．２８ｘ１０８ＩＵ／ｍｇ
（被験物質の調製）
（（１）ＩＦＮα２ｂ／ＰＢＳ：５ｍｌ＠２  ＭＩＵ／ｍｌ最終濃度）
・注射用滅菌水１ｍｌ中に１個の参照バイアル（１０  ＭＩＵ／ｖｉａｌ）を中和させる
イントロンＡ濃度  １，０００μｌ
ＰＢＳ            ４，０００μｌ
（（２）ＩＦＮα２ｂ／ＳＹＮ３：１０  ｍｌ＠２ＭＩＶ／ｍｌ最終濃度）
・注射用滅菌水２ｍｌで２個の参照バイアルを中和させる
イントロンＡ濃度  ２，０００μｌ
ＰＢＳ            ６，３３４μｌ
ＳＹＮ３  １，６６６μｌ
（ＩＡＣＢ／ＳＹＮ３：４．５ｍｌ＠１．０ｘ１０１１Ｐ／ｍｌ  ＳＹＮ３）
ＩＡＣＢ                    ６６０μｌ
ＳＹＮ３                    ７５０μｌ
トリス−グリセロール緩衝液  ３，０９０μｌ
（ＩＦＮα２α／ＰＢＳ：４ｍｌ＠１ＭＩＵ／ｍｌ最終濃度）
ＩＦＮα２α１タンパク質  ２９８μｌ
ＰＢＳ                    ３，７０２μｌ
（ＩＦＮα２α１／ＳＹＮ３：６ｍｌ＠１ＭＩＵ／ｍｌ最終濃度）
ＩＦＮα２α１タンパク質  ４４４μｌ
ＰＢＳ                    ４，５５６μｌ
ＳＹＮ３                  １，０００μｌ
（ＩＨＣＢ／ＳＹＮ３  ４．０ｍｌ＠１．０ｘ１０１１  Ｐ／ｍｌ  ＳＹＮ３）
ＩＨＣＢ                    ３６４μｌ
ＳＹＮ３                    ６６７μ
トリス−グリセロール緩衝液  ２，９６９μｌ。
【００８７】
被験動物を屠殺し、ＲＴ−ＰＣＲ法用に液体窒素を用いて膀胱を採集した。主要解析は、上記遺伝子のｍＲＮＡレベルと、イントロンＡ／ＰＢＳを送達後観察されるレベルとを比較するために行った。遺伝子活性化のレベルをイントロンＡ／ＰＢＳグループ（１．０）に合わせて標準化した。
【００８８】
この結果から、ＳＹＮ３を添加すると、ＰＢＳ製剤中のタンパク質が同量送達された場合と比較して、周知である下流でのＩＦＮ−活性化遺伝子（２’−５’ＯＡＳ，ＭＸ１）の発現が増加したことがわかった。２ＭＩＵ／ｍｌのＩＦＮα２ｂの代わりに、１ＭＩＵ／ｍｌを投与したが、ＳＹＮ３中のハイブリッドタンパク質（ＢＳ：ＩＦＮα２α１／ＳＹＮ３）が発現し、さらに十分な生物応答が得られた。ＳＹＮ３の製剤中に投与した場合、イントロンＡ（ＩＦＮα２ｂ）とハイブリッドＩＦＮ（ＩＦＮα２α１）のいずれもラットＯＡＳおよびＭＸ１遺伝子の発現が増加したが、いずれも、ｒＡｄ−ＩＦＮα２ｂまたはｒＡｄ−ＩＦＮα２α１を投与後に得られたレベルより若干劣っていた。
【００８９】
本明細書に記載した実施例および実施形態は、説明のみを目的としているものであり、この点を考慮して数多くの修正および変更は、当業者に提案するものであり、また、本出願の精神および視野の範囲内、また特許請求の範囲内に含まれるものであることは、当業者にはわかるであろう。本明細書に挙げられている刊行物、特許、および特許出願はいずれも、すべての目的に対して完全に参照によって援用される。
【図面の簡単な説明】
【００９０】
【図１】図１は、式Ｉの特定の化合物の合成に有用な中間化合物の合成を示す。
【図２】図２は、本発明の化合物を形成するために糖残基を中間体へ結合させることを示す。
【図３】図３は、式Ｉの特定化合物の合成に有用な中間体化合物の合成を示す。
【図４】図４は、本発明の化合物を形成するために、コール酸残基を中間体へ結合させることを示す。
【図５】図５は、ＥＬＩＳＡアッセイ（ＰＢＬ）を用いて決定した組織ホモジネートに存在するＩＦＮα２ｂの量を示す。タンパク質の濃度は、Ｂｒａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイを用いて測定した。組織内に存在するＩＦＮのレベルは  ｐｇ  ＩＦＮ／ｍｇ組織と示す。
【図６】図６は、ＥＬＩＳＡアッセイ（ＰＢＬ）を用いて決定した組織ホモジネート内に存在するＩＦＮα２ｂの量を示す。
【図１】
2007526219.tif 000020
【図２】
2007526219.tif 000021
【図３】
2007526219.tif 000022
【図４】
2007526219.tif 000023
【図５】
2007526219.tif 000024
【図６】
2007526219.tif 000025
【手続補正書】
【提出日】平成19年5月30日(2007.5.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2007526219.tif 000026
の化合物であって、ここで、
Ｒ１およびＲ２は、各々独立して水素およびヒドロキシル基からなる群より選択されるメンバーであり、
ｍおよびｎは、各々独立して約０〜２から選択され；
Ｒ３は−ＮＲ４Ｒ５であり、ここでＲ４およびＲ５は、各々独立して、糖残基、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアシル、必要に応じて置換されているアシルオキシからなる群より選択されるメンバーである、化合物。
【請求項２】
Ｒ１およびＲ２がいずれもヒドロキシル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ｍおよびｎがそれぞれ１である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
前記化合物が、式ＩＩ：
【化２】
2007526219.tif 000027
を有する、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ４およびＲ５が、独立して、糖残基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ４およびＲ５が、独立して、必要に応じて置換されているアシルである、請求項３に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ５がスクシニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ５がアシルオキシである、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ４およびＲ５が、独立して、必要に応じて置換されているアルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ４およびＲ５が、独立して、必要に応じて置換されているアシルオキシである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
薬剤を細胞に送達するための組成物であって、該組成物は該薬剤および式Ｉ：
【化４】
2007526219.tif 000028
の送達促進化合物を含み、ここで、
Ｒ１およびＲ２は、各々独立して水素およびヒドロキシル基からなる群より選択されるメンバーであり；
ｍおよびｎは、各々独立して約０〜２から選択され；
Ｒ３は−ＮＲ４Ｒ５であり、ここでＲ４およびＲ５は、各々独立して、糖残基、置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアシル、必要に応じて置換されているアシルオキシからなる群より選択されるメンバーである、組成物。
【請求項１２】
Ｒ１およびＲ２がいずれもヒドロキシル基である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
ｍおよびｎがそれぞれ１である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物が式ＩＩ：
【化５】
2007526219.tif 000029
を有する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
Ｒ４およびＲ５が、独立して、糖残基である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１６】
Ｒ４およびＲ５が、独立して、必要に応じて置換されているアシルである、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
Ｒ５がスクシニルである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１８】
Ｒ５がアシルオキシである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１９】
Ｒ４およびＲ５が、独立して、必要に応じて置換されているアルキルである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項２０】
Ｒ４およびＲ５が、独立して、必要に応じて置換されているアシルオキシである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項２１】
前記薬剤が診断薬である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項２２】
前記薬剤が前記細胞内に存在する場合、該薬剤が細胞内の生物学的プロセスを調節する、請求項１１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記生物学的プロセスが、細胞成長、細胞分化，細胞増殖、代謝経路または生合成経路、遺伝子発現、疾患に関連するプロセス、および免疫応答からなる群より選択される、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記薬剤が、ポリヌクレオチドまたはタンパク質を含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項２５】
前記ポリヌクレオチドが、アンチセンス核酸、三重鎖形成核酸、および生物学的プロセスを調節するポリペプチドをコードする遺伝子を含む核酸からなる群より選択される、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記遺伝子が、腫瘍抑制遺伝子である、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記腫瘍抑制遺伝子が、網膜芽細胞腫遺伝子およびｐ５３遺伝子からなる群より選択される、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記組成物が、高分子マトリクスをさらに含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項２９】
前記組成物が、粘膜付着剤をさらに含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項３０】
前記薬剤が、タンパク質を含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項３１】
前記タンパク質が、インターフェロンである、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記インターフェロンが、インターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−δ、およびインターフェロン−γ、ならびにこれらの融合インターフェロンからなる群より選択される、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記インターフェロンが、インターフェロンα−２β、融合インターフェロンα−／２α−１およびインターフェロンα−２ｅからなる群より選択される、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３４】
前記インターフェロンが、ヒトα１インターフェロンまたはヒトα２インターフェロンである、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３５】
前記タンパク質が、抗体である、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３６】
前記抗体が、抗インターフェロン−α、抗インターフェロン−β、抗インターフェロン−δ、抗インターフェロン−γ、抗インターロイキン、抗ＩＬ−１、抗ＩＬ−２、抗ＩＬ−４、抗Ｉｌ−６、抗ＩＬ−７および抗ＩＬ−１０からなる群から選択される、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
薬剤を細胞に送達するための医薬の製造における、式Ｉの化合物および薬剤を含む組成物の使用であって、該式Ｉの化合物は、以下：
【化７】
2007526219.tif 000030
であり、ここで、
Ｒ１およびＲ２は、各々独立して水素、およびヒドロキシル基からなる群より選択されるメンバーであり；
ｍおよびｎは各々独立して約０〜２から選択され；
Ｒ３は−ＮＲ４Ｒ５であり、ここでＲ４およびＲ５は各々独立して、糖残基、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアシル、必要に応じて置換されているアシルオキシからなる群より選択されるメンバーである、使用。
【請求項３８】
細胞増殖抑制遺伝子または腫瘍抑制遺伝子をコードする組換えウイルスベクターを式Ｉ：
【化８】
2007526219.tif 000031
の化合物と組み合わせて含む、膀胱癌を処置するための組成物であって、ここで、
Ｒ１およびＲ２は、各々独立して水素およびヒドロキシル基からなる群より選択されるメンバーであり；
ｍおよびｎは、各々独立して約０〜２から選択され；
Ｒ３は−ＮＲ４Ｒ５であり、ここでＲ４およびＲ５は、各々独立して、糖残基、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアシル、必要に応じて置換されているアシルオキシからなる群より選択されるメンバーである、組成物。
【請求項３９】
前記腫瘍抑制遺伝子が、ＲＢ５６、ＲＢ１１０、ＲＢ９４、Ｐ５３、およびＰ５３δ１３〜１９からなる群より選択される、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
前記細胞増殖抑制遺伝子が、インターフェロンの遺伝子である、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４１】
前記インターフェロンが、インターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−δ、およびインターフェロン−γ、ならびにこれらの融合インターフェロンからなる群より選択される、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
前記インターフェロンが、インターフェロンα−２β、融合インターフェロンα−／２α−１およびインターフェロンα−２ｅからなる群より選択される、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４３】
前記インターフェロンが、ヒトα１インターフェロンまたはヒトα２インターフェロンである、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４４】
前記膀胱癌が、表在性膀胱癌である、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４５】
前記式Ｉの化合物が、可溶化剤をさらに含む、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４６】
前記薬剤が、治療薬である、請求項３７に記載の使用。
【請求項４７】
前記薬剤が、診断薬である、請求項３７に記載の使用。
【請求項４８】
前記送達促進化合物の濃度が、約０．００２ｍｇ／ｍｌ〜約２ｍｇ／ｍｌである、請求項３７に記載の使用。
【請求項４９】
前記送達促進化合物の濃度が、約０．０２ｍｇ／ｍｌ〜約２ｍｇ／ｍｌである、請求項４８に記載の使用。
【請求項５０】
前記送達促進化合物の濃度が、約０．２ｍｇ／ｍｌ〜約２ｍｇ／ｍｌである、請求項４９に記載の使用。
【請求項５１】
前記送達促進化合物以外の洗浄剤の非存在下において、該送達促進化合物が水溶液中に可溶である、請求項３７に記載の使用。
【請求項５２】
前記送達促進化合物以外の洗浄剤の非存在下において、水溶液中の該送達促進化合物の溶解度が、少なくとも約１ｍｇ／ｍｌである、請求項５１に記載の使用。
【請求項５３】
前記薬剤が、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）層を通過して送達される、請求項３７に記載の使用。
【請求項５４】
前記ＧＡＧ層が、器官を含む、請求項５３に記載の使用。
【請求項５５】
前記ＧＡＧ層が、上皮組織を含む、請求項５３に記載の使用。
【請求項５６】
前記上皮組織が、胃腸管、皮膚、肺、および粘膜からなる群より選択される、請求項５５に記載の使用。
【請求項５７】
前記医薬が、膀胱内投与に適している、請求項３７に記載の使用。
【請求項５８】
前記薬剤が、タンパク質である、請求項３７に記載の使用。
【請求項５９】
前記薬剤が、遺伝子である、請求項３７に記載の使用。
【請求項６０】
前記遺伝子が、ベクターにおいて投与されるのに適している、請求項５９に記載の使用。
【請求項６１】
前記ベクターが、ウイルスベクターである、請求項６０に記載の使用。
【請求項６２】
前記ウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、およびアデノ随伴ウイルスベクターからなる群より選択される、請求項６１に記載の使用。
【請求項６３】
前記ウイルスベクターが、１×１０８粒子／ｍｌ〜５×１０１１粒子／ｍｌのウイルスベクター濃度を有する懸濁液として投与されるのに適している、請求項６１に記載の使用。
【請求項６４】
前記懸濁液中のウイルスベクター濃度が、１×１０９粒子／ｍｌ〜１×１０１１粒子／ｍｌである、請求項６３に記載の使用。
【請求項６５】
前記遺伝子が、治療遺伝子である、請求項５９に記載の使用。
【請求項６６】
前記治療遺伝子が、腫瘍抑制遺伝子である、請求項６５に記載の使用。
【請求項６７】
前記腫瘍抑制遺伝子が、ｐ５３である、請求項６６に記載の使用。
【請求項６８】
前記腫瘍抑制遺伝子が、網膜芽細胞腫遺伝子である、請求項６６に記載の使用。
【請求項６９】
前記網膜芽細胞腫腫瘍抑制遺伝子が、全長ＲＢタンパク質をコードする、請求項６８に記載の使用。
【請求項７０】
前記網膜芽細胞腫腫瘍抑制遺伝子が、ｐ５６ＲＢをコードする、請求項６８に記載の使用。
【請求項７１】
前記細胞が、癌細胞である、請求項６５に記載の使用。
【請求項７２】
前記癌細胞が、膀胱癌細胞である、請求項７１に記載の使用。
【請求項７３】
前記癌細胞が、組織として提供される、請求項７１に記載の使用。
【請求項７４】
前記送達促進化合物が、前記薬剤を投与する前の投与に適している、請求項３８に記載の組成物。
【請求項７５】
前記送達促進化合物が、前記薬剤との投与に適している、請求項３８に記載の組成物。
【請求項７６】
膀胱癌を処置するための医薬の製造における、式Ｉの化合物と組み合わせての、細胞増殖抑制遺伝子または腫瘍抑制遺伝子をコードする組換えウイルスベクターの使用であって、該式（Ｉ）の化合物は、以下：
【化８】
2007526219.tif 000032
であり、ここで、
Ｒ１およびＲ２は、各々独立して水素およびヒドロキシル基からなる群より選択されるメンバーであり；
ｍおよびｎは、各々独立して約０〜２から選択され；
Ｒ３は−ＮＲ４Ｒ５であり、ここでＲ４およびＲ５は、各々独立して、糖残基、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアシル、および必要に応じて置換されているアシルオキシからなる群より選択されるメンバーである、使用。
【国際調査報告】
2007526219.tif 000033
2007526219.tif 000034
2007526219.tif 000035