(57)【要約】  本発明は、新規なジャスモーネート誘導体化合物、それらの製造方法、そのような化合物を含む製薬組成物、そして癌、特に哺乳動物の癌の治療のための、特に化学療法薬として、これらの化合物及び組成物を使用する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2007514663.tif 000010
〔式中、ｎは０、１又は２であり；
Ｒ１は、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２置換アルコキシ、アリールオキシ、Ｏ−グルコシル又はイミノであり；
Ｒ２は、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２置換アルコキシ、Ｏ−グルコシル、オキソ、アルキル又はイミノであり；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥは各々独立して、Ｈ、ハロゲン、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２置換アルコキシ、アリールオキシ、Ｏ−グルコシル、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル又はＣ１〜Ｃ１２置換アルキルであり；
しかも、Ｒ１とＲ２、又はＲ１とＲ４は、一緒になって、随意に置換されているラクトンを形成することができ；
Ｃ３：Ｃ７間、Ｃ４：Ｃ５間、及びＣ９：Ｃ１０間、の結合は独立して二重結合又は単結合であることができ；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥの少なくとも１つはハロゲンであることを条件とし；そして
Ａが化合物中の唯一のハロゲンである場合は、Ａはフルオロではないことを条件とする〕の化合物、あるいは前記式の誘導体（但し、この誘導体は、塩、水和物、溶媒和物、多形体（ｐｏｌｙｍｏｒｇｈｓ）、光学異性体、鏡像異性体、ジアステレオ異性体、及びそれらの混合物を包含する、
Ｃ３での低級アシル側鎖（遊離酸又はエステル又は共役体）、Ｃ６炭素でのケト又はヒドロキシ（遊離ヒドロキシ又はエステル）部分又はＣ７でのｎ−ペンテニル又はｎ−ペンチル側鎖；
の少なくとも１つを有する）。
【請求項２】
Ｃ９とＣ１０との間の結合が単結合である、請求項１の化合物。
【請求項３】
Ｒ２がオキソである、請求項１の化合物。
【請求項４】
Ｒ６及びＲ７の少なくとも１つがブロモ、ヨード、フルオロ及びクロロから選ばれる、請求項１の化合物。
【請求項５】
Ｒ６及びＲ７の両方がブロモ、ヨード、フルオロ及びクロロから選ばれる、請求項１の化合物。
【請求項６】
Ｒ６及びＲ７の両方がブロモである、請求項１の化合物。
【請求項７】
Ａ、Ｂ、Ｒ６及びＲ７がブロモ、ヨード、フルオロ及びクロロである、請求項１の化合物。
【請求項８】
Ａ、Ｂ、Ｒ６及びＲ７が、各々ブロモである、請求項１の化合物。
【請求項９】
Ｒ１がアルコキシである、請求項１の化合物。
【請求項１０】
Ｒ３、Ｒ４及びＲ５が、各々Ｈである、請求項１の化合物。
【請求項１１】
Ｃ、Ｄ及びＥが、各々Ｈである、請求項１の化合物。
【請求項１２】
ｎが０であり；Ｃ３：Ｃ７間、Ｃ４：Ｃ５間及びＣ９：Ｃ１０間の結合が単結合であり；Ｒ１がメトキシであり；Ｒ２がオキソであり；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥが各々Ｈであり；そしてＲ６及びＲ７が各々ブロモである、請求項１の化合物。
【請求項１３】
ｎが０であり；Ｃ３：Ｃ７間、Ｃ４：Ｃ５間及びＣ９：Ｃ１０間の結合が単結合であり；Ｒ１がメトキシであり；Ｒ２が位置６における炭素への二重結合を介して結合されたＯであって、それによりカルボニル基を形成し；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｃ、Ｄ及びＥは各々Ｈであり；そしてＡ、Ｂ、Ｒ６及びＲ７が各々ブロモである、請求項１の化合物。
【請求項１４】
製薬的に許容できる担体及び請求項１の化合物を活性成分として含む、製薬組成物。
【請求項１５】
製薬的に許容できる担体及び請求項１２の化合物を活性成分として含む、製薬組成物。
【請求項１６】
製薬的に許容できる担体及び請求項１３の化合物を活性成分として含む、製薬組成物。
【請求項１７】
活性成分が製薬的に許容出来る脂質担体中に溶解されている、請求項１４の製薬組成物。
【請求項１８】
治療的に有効な量の請求項１の化合物に癌細胞をさらすことを含む、癌細胞の増殖を減少させる方法。
【請求項１９】
癌が哺乳動物の癌である、請求項１８の方法。
【請求項２０】
哺乳動物がヒトである、請求項１９の方法。
【請求項２１】
化合物が請求項４の化合物である、請求項１８の方法。
【請求項２２】
化合物が請求項１２の化合物である、請求項１８の方法。
【請求項２３】
化合物が請求項１３の化合物である、請求項１８の方法。
【請求項２４】
癌が、癌腫、肉腫、腺腫、肝臓細胞癌、胚芽細胞腫、横紋筋肉腫、食道癌、甲状腺癌、神経節芽細胞腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、背索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、骨膜腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、ラブドテリオ肉腫（ｒｈａｂｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、結腸肉腫、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、黒色腫、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、頸部癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、神経膠星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、脳室上皮細胞腫、松果体腫、網膜芽細胞腫、直腸癌、甲状腺の癌、頭及び頸部癌、脳癌、末梢神経系の癌、中枢神経系の癌、神経芽細胞腫、子宮内膜の癌；急性骨髄性白血病、急性骨髄球白血病、急性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球白血病、肥満細胞性白血病、多発性骨髄腫、骨髄球性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫を包含するすべてのタイプの白血病及びリンパ腫を包含するリンパ球増殖性疾患及び造血性悪性疾患からなる群から選ばれる、請求項１８の方法。
【請求項２５】
癌が前立腺癌、乳癌、皮膚癌、結腸癌、肺癌、膵臓癌、リンパ腫、白血病、頭及び頸部癌、腎臓癌、卵巣癌、骨癌、肝臓癌及び甲状腺癌からなる群から選ばれる、請求項１８の方法。
【請求項２６】
癌が白血病、肺癌、黒色腫及び結腸癌から選ばれる、請求項１８の方法。
【請求項２７】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物の治療的に有効な量を活性成分として含有する製薬組成物を、治療を必要としている患者に投与することを含む、癌の治療方法。
【請求項２８】
癌の治療のための医薬の製造のための請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項２９】
癌が、癌腫、肉腫、腺腫、肝臓細胞癌、胚芽細胞腫、横紋筋肉腫、食道癌、甲状腺癌、神経節芽細胞腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、背索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、骨膜腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、ラブドテリオ肉腫（ｒｈａｂｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、結腸肉腫、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、黒色腫、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、頸部癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、神経膠星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、脳室上皮細胞腫、松果体腫、網膜芽細胞腫、直腸癌、甲状腺の癌、頭及び頸部癌、脳癌、末梢神経系の癌、中枢神経系の癌、神経芽細胞腫、子宮内膜の癌；急性骨髄性白血病、急性骨髄球白血病、急性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球白血病、肥満細胞性白血病、多発性骨髄腫、骨髄球性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、を包含するすべてのタイプの白血病及びリンパ腫を包含するリンパ球増殖性疾患及び造血性悪性疾患、ならびに上記のすべての転移からなる群から選ばれる、請求項２８に記載の使用。
【請求項３０】
癌が前立腺癌、乳癌、皮膚癌、結腸癌、肺癌、膵臓癌、リンパ腫、白血病、頭及び頸部癌、腎臓癌、卵巣癌、骨癌、肝臓癌及び甲状腺癌からなる群から選ばれる、請求項２８に記載の使用。
【請求項３１】
癌が、白血病、肺癌、黒色腫及び結腸癌から選ばれる、請求項２８に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ジャスモネート（ｊａｓｍｏｎａｔｅ）誘導体化合物、それらの製造方法、そのような化合物を含む製薬組成物、及び癌、特に哺乳動物における癌の治療のための、特に化学療法薬としてこれらの化合物及び組成物を使用する方法の分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
ジャスモネート類（ｊａｓｍｏｎｔｅｓ）は、オクタデカノイド経路によるリノレン酸から誘導された植物ストレスホルモン類の一族であり、そして多くの食用植物において微小量で見い出される。ジャスモネート族のようなストレスホルモンは植物において生成し、そして極度の紫外線照射、浸透圧ショック、熱ショック、及び病原体侵襲のようなストレスの時に放出されて、適当な応答に終わる種々の一連の作用（ｃａｓｃａｄｅｓ）を開始する。ジャスモネート族の部員の例は、傷に応答しての細胞間信号送りにとって極めて重要なジャスモン酸、及び創傷又は病原体侵襲に応答して低い濃度で蓄積する蛋白分解酵素（プロティナーゼ）阻害薬の誘発を起こすジャスモン酸メチルである。ジャスモーネート類は、植物成長及び農産物改良における種々の用途のために特許されてきたが、しかし医薬における使用については以前には知られていなかった。哺乳動物の癌の治療のためのジャスモネート類の使用は米国特許第６，４６９，０６１号（この特許を参照することによりその全体において本明細書に組み入れる）に開示された。米国特許第６，４６９，０６１号において、乳癌、前立腺癌、皮膚癌及び血液癌から誘導された種々のタイプのヒト癌細胞に対して直接に細胞毒性であったことが示された。ジャスモネート類は、ヒト白血病Ｍｏｌｔ−４細胞の死を誘発したけれども、それらは正常なリンパ球を損傷しなかった。
【０００３】
集められた続くデータは、ジャスモネート類が健康な赤血球を損傷しなかったことを同様に示した（ＷＯ  ０２／０８０８９０参照）。米国特許第６，４６９，０６１号において、１種のジャスモネート化合物、特にジャスモン酸メチルは、ネズミにおけるリンパ腫の発生を防止するのに有効であることが示された。Ｌｅｕｋｅｍｉａ：１６第６０８頁〜第６１６頁（２００２年）のＦｉｎｇｒｕｔ，Ｏ．及びＥ．Ｆｌｅｓｈｅｒの“植物ストレスホルモンはヒト癌細胞における増殖を抑制し、そして細胞消滅を誘発する”を参照。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ジャスモネート化合物の薬理学的活性は癌の治療のための治療薬として、これらを魅力的な候補物にする。ほんの僅かなジャスモネート誘導体のみが報告された（例えば、Ｌｅｕｋｅｍｉａ  １−７（２００４年），Ｉｓｈｉｉ等を参照）だけであるので、悪性細胞に対して高度の特異性を有する強力な化学療法薬であるジャスモネート誘導体化合物を開発することの必要性が、当業界に存在する。
本発明は、この必要性に取り組みそして同様に他の利点を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
発明の概要
本発明は、ジャスモネート（ｊａｓｍｏｎａｔｅ）誘導体化合物、特にハロゲン化されているジャスモネート誘導体化合物に向けられている。そのような化合物は、“ジャスモン酸メチルジブロマイド”（又は“ＭＪＤＢ”）、及び“ジャスモン酸メチルテトラブロマイド”（又は“ＭＪＴＢ”）である。これらの化合物は、米国特許第６，４６９，０６１号において開示された最も有効なジャスモネート、即ちジャスモン酸メチルよりも、有意義にいっそう効能がある。以下に示す様に、ＭＪＤＢ及びＭＪＴＢのようなジャスモネート誘導体は、患者から取り出された癌性リンパ球に選択的に細胞毒性を発揮し、その一方では正常なリンパ球に対してはとてもひかえめである。
【０００６】
本発明はまた、本発明の化合物、特にＭＪＤＢ及びＭＪＴＢの、塩、水和物、溶媒和物、多形体（ｐｏｌｙｍｏｒｐｈ）、光学異性体、ジアステレオ異性体、及びそれらの混合物を包含する。
【０００７】
本発明の化合物は、式Ｉ
【化１】
2007514663.tif 000002
〔式中、ｎは０、１又は２であり；
Ｒ１は、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２置換アルコキシ、アリールオキシ、Ｏ−グルコシル又はイミノであり；
Ｒ２は、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２置換アルコキシ、Ｏ−グルコシル、オキソ、アルキル又はイミノであり；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥは各々独立して、Ｈ、ハロゲン、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２置換アルコキシ、アリールオキシ、Ｏ−グルコシル、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル又はＣ１〜Ｃ１２置換アルキルであり；しかも、Ｒ１とＲ２、又はＲ１とＲ４は、一緒になって、随意に置換されているラクトンを形成することができ；
Ｃ３：Ｃ７間、Ｃ４：Ｃ５間、及びＣ９：Ｃ１０間、の結合は独立して二重結合又は単結合であることができ；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥの少なくとも１つはハロゲンであることを条件とし；そして
Ａが化合物中の唯一のハロゲンである場合は、Ａはフルオロではないことを条件とする〕の化合物、あるいは前記式の誘導体（但し、この誘導体は、
塩、水和物、溶媒和物、多形体（ｐｏｌｙｍｏｒｇｈｓ）、光学異性体、鏡像異性体、ジアステレオ異性体、及びそれらの混合物を包含する、
Ｃ３での低級アシル側鎖（遊離酸又はエステル又は共役体）、Ｃ６炭素でのケト又はヒドロキシ（遊離ヒドロキシ又はエステル）部分又はＣ７でのｎ−ペンテニル又はｎ−ペンチル側鎖；
の少なくとも１つを有する）を有する。
【０００８】
さらに特定的には、本発明（式Ｉ）の好ましい化合物は、Ｃ９とＣ１０との間の結合が単結合である。他の好ましい化合物は、Ｒ２がオキソである化合物である。その上の他の好ましい化合物はＲ６及びＲ７の少なくとも１つがブロモ、ヨード、フルオロ又はクロロである化合物である。Ｒ６及びＲ７の両方がブロモ、ヨード、フルオロ又はクロロから選ばれる化合物がなおいっそう好ましい。Ｒ６及びＲ７の両方がブロモである化合物はその上にさらに好ましい。
【０００９】
本発明のさらに好ましい面は、Ａ、Ｂ、Ｒ６及びＲ７がブロモ、ヨード、フルオロ又はクロロである化合物である。Ａ、Ｂ、Ｒ６及びＲ７が、各々ブロモである化合物がなおいっそう好ましい。
【００１０】
本発明の他の好ましい化合物はＲ１がアルコキシである化合物である。なお他の面において、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５が、各々Ｈ（水素）である。その上の他の面においてＣ、Ｄ及びＥが各々Ｈである。
【００１１】
本発明の最も好ましい化合物の一方はジャスモン酸メチルジブロマイド（ＭＪＤＢ）である。式Ｉによれば、ＭＪＤＢは、ｎが０であり；Ｃ３：Ｃ７間、Ｃ４：Ｃ５間及びＣ９：Ｃ１０間の結合が単結合であり；Ｒ１がメトキシであり；Ｒ２がオキソであり；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥが各々Ｈであり；そしてＲ６及びＲ７が各々ブロモである化合物である。
【００１２】
本発明の最も好ましい化合物の他方はジャスモン酸メチルテトラブロマイド（ＭＪＴＢ）である。式Ｉによれば、ＭＪＴＢは、ｎが０であり；Ｃ３：Ｃ７間、Ｃ４：Ｃ５間及びＣ９：Ｃ１０間の結合が単結合であり；Ｒ１がメトキシであり；Ｒ２がオキソであり；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｃ、Ｄ及びＥは各々Ｈであり；そしてＡ、Ｂ、Ｒ６及びＲ７が各々ブロモである化合物である。
【００１３】
本発明の他の好ましい化合物において、ｎは０であり；Ｃ３：Ｃ７間、Ｃ４：Ｃ５間及びＣ９：Ｃ１０間の結合が単結合であり；Ｒ１がメトキシであり；Ｒ２がオキソであり；Ｒ３，Ｒ４、Ｒ５、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥが各々Ｈであり；そして：
（ｅ）Ｒ６及びＲ７が各々フルオロである（化合物“ＭＪＳ９９”と称する）か；
（ｂ）Ｒ６及びＲ７が各々ヨードである（化合物“ＭＪＳ８５ｆ１４”と称する）か；
（ｃ）Ｒ６及びＲ７が各々クロロである（化合物“ＭＪＳ８１ｆ１３”と称する）か；
（ｄ）Ｒ６及びＲ７の一方がブロモであり、そして他方がヒドロキシである（化合物“ＮＪ−６３”と称する）か；又は
（ｅ）Ｒ６及びＲ７の一方がヨードであり、他方がメトキシである（化合物“ＭＪＳ７２ｆ５”と称する）；
のいずれかである。
【００１４】
本発明はまた、製薬的に許容できる担体、及び活性成分として、上記のような本発明の化合物を含む製薬組成物を意図している。好ましい組成物は活性成分としてＭＪＤＢ又はＭＪＴＢを有する。好ましくは、製薬組成物において、活性成分を任意の許容できる脂質担体に溶解する。さらに、本発明の好ましい態様に従って、その組成物は少なくとも１種の他の化学療法薬をさらに含む。
【００１５】
本発明はさらに、本明細書に記載されたような本発明の化合物の治療的に有効な量に、癌細胞をさらすことを含む、癌細胞の増殖を減少させる方法を提供する。
【００１６】
さらに本発明は、本明細書に記載されたような本発明の化合物の治療的に有効な量を、活性成分として含有する製薬組成物を患者に投与することを含む、癌の治療方法を提供する。好ましい態様に従えば、癌は、温血脊椎動物、さらに好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトの癌である。
【００１７】
癌は、癌腫、肉腫、腺腫、肝臓細胞癌、胚芽細胞腫、横紋筋肉腫、食道癌、甲状腺癌、神経節芽細胞腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、背索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、骨膜腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、ラブドテリオ肉腫（ｒｈａｂｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、結腸肉腫、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、黒色腫、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、頸部癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、神経膠星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、脳室上皮細胞腫、松果体腫、網膜芽細胞腫、直腸癌、甲状腺の癌、頭及び頸部癌、脳癌、末梢神経系の癌、中枢神経系の癌、神経芽細胞腫、子宮内膜の癌；急性骨髄性白血病、急性骨髄球白血病、急性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球白血病、肥満細胞性白血病、多発性骨髄腫、骨髄球性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫を包含するすべてのタイプの白血病及びリンパ腫を包含するリンパ球増殖性疾患及び造血性悪性疾、ならびに上記のすべての転移を包含する。
【００１８】
本発明のこれらの及び追加の特徴は、以下の、図面、詳細な説明及び特許請求の範囲に関連しての記載から、よりよく理解されるだろう。
【００１９】
本発明は、添付図面に関して例のためにだけ、本明細書に記載される。
図面において、図１は、ａ）ヒトＣＬＬリンパ球（“患者１”、“患者２”及び“患者３”と標識化）；ｂ）健康な供与者からのリンパ球（“正常”と標識化）に対するＭＪＤＢの細胞毒性活性を示す。
【００２０】
図面において、図２は、４種のヒト悪性細胞系、即ちリンパ芽球白血病（Ｍｏｌｔ−４）、肺癌（３ＬＬ）、黒色腫（Ｂ１６）及び結腸癌（ＨＣＴ１１６）に対してのＭＪＤＢ及びジャスモン酸メチル（ＭＪ）により作用された毒性の水準の比較を示す。
【００２１】
図面において、図３は、野性型又は突然変異体ｐ５３のいずれかを発現する細胞に対するＭＪＤＢの細胞毒性活性を示す。
図面において、図４は、Ｍｏｌｔ−４白血病細胞におけるＡＴＰ水準上へのＭＪＤＢ及びＭＪの効果の比較を示す。
【００２２】
図面において、図５は、異なる細胞系、即ちＭｏｌｔ−４（白血病）、Ｄ１２２（肺癌）、Ｂ１６（黒色腫）及びＢ１６ＭＤＲ（多重薬耐性を示す黒色腫）に対するＭＪＴＢの細胞毒性活性を示す。
【００２３】
図面において、図６は、ＭＪＤＢ及びＭＪの細胞毒性を比較する。細胞毒性は対照非処理培養物の％として示される（平均±ＳＥ．ｎ＝３）。＊＊＊はＭＪ及びＭＪＴＢの効果を比較するＰ＜０．００１を示す。
【００２４】
図面において、図７は、白血病細胞に対する正常なリンパ球上へのＭＪＴＢの効果を比較する。正常なリンパ球に対する白血病細胞上へのＭＪＴＢの効果を比較する、＊はＰ＜０．０５を示し、＊＊はＰ＜０．０１を示し、そして＊＊＊はＰ＜０．００１を示す。細胞毒性は対照非処理培養物の％として示された（平均±ＳＥ．ｎ＝３）。
【００２５】
図面において、図８は、白血病細胞に対する本発明の他のＭＪ誘導体の細胞毒性を示す。
【００２６】
発明の詳細な記載
本発明は、新規なジャスモネート（ｊａｓｍｏｎａｔｅ）誘導体、これらの化合物を含む組成物及び癌の治療において該組成物を使用する方法を提供する。
【００２７】
本発明の化合物は式：
【化２】
2007514663.tif 000003
〔式中、ｎは０、１又は２であり；
Ｒ１は、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２置換アルコキシ、アリールオキシ、Ｏ−グルコシル又はイミノであり；
Ｒ２は、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２置換アルコキシ、Ｏ−グルコシル、オキソ、アルキル又はイミノであり；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥは各々独立して、Ｈ、ハロゲン、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２置換アルコキシ、アリールオキシ、Ｏ−グルコシル、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル又はＣ１〜Ｃ１２置換アルキルであり；しかも、Ｒ１とＲ２、又はＲ１とＲ４は、一緒になって、随意に置換されているラクトンを形成することができ；
Ｃ３：Ｃ７間、Ｃ４：Ｃ５間、及びＣ９：Ｃ１０間、の結合は独立して二重結合又は単結合であることができ；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥの少なくとも１つはハロゲンであることを条件とし；そして
Ａが化合物中の唯一のハロゲンである場合は、Ａはフルオロではないことを条件とする〕の化合物、あるいは前記式の誘導体（但し、この誘導体は、
塩、水和物、溶媒和物、多形体（ｐｏｌｙｍｏｒｇｈｓ）、光学異性体、鏡像異性体、ジアステレオ異性体、及びそれらの混合物を包含する、
Ｃ３での低級アシル側鎖（遊離酸又はエステル又は共役体）、Ｃ６炭素でのケト又はヒドロキシ（遊離ヒドロキシ又はエステル）部分又はＣ７でのｎ−ペンテニル又はｎ−ペンチル側鎖；
の少なくとも１つを有する）を有する。
【００２８】
さらに特定的には、本発明（式Ｉ）の好ましい化合物は、Ｃ９とＣ１０との間の結合が単結合である化合物である。他の好ましい化合物は、Ｒ２がオキソである化合物である。その上の他の好ましい化合物は、Ｒ６及びＲ７の少なくとも１つがブロモ、ヨード、フルオロ又はクロロである化合物である。Ｒ６及びＲ７の両方がブロモ、ヨード、フルオロ又はクロロから選ばれる化合物がなおいっそう好ましい。Ｒ６及びＲ７の両方がブロモである化合物がその上にさらに好ましい。
【００２９】
本発明のさらに好ましい面は、Ａ、Ｂ、Ｒ６及びＲ７がブロモ、ヨード、フルオロ又はクロロである化合物である。Ａ、Ｂ、Ｒ６及びＲ７が、各々ブロモである化合物がなおいっそう好ましい。
【００３０】
本発明の他の好ましい化合物はＲ１がアルコキシである化合物である。なお他の面において、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５が、各々Ｈ（水素）である。その上の他の面において、Ｃ、Ｄ及びＥが、各々Ｈである。
【００３１】
本発明の最も好ましい化合物の一方はジャスモン酸メチルジブロマイド（ＭＪＤＢ）である。式Ｉによれば、ＭＪＤＢは、ｎが０であり；Ｃ３：Ｃ７間、Ｃ４：Ｃ５間及びＣ９：Ｃ１０間の結合が単結合であり；Ｒ１がメトキシであり；Ｒ２がオキソであり；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥが各々Ｈであり；そしてＲ６及びＲ７が各々ブロモである化合物である。
【００３２】
本発明の最も好ましい化合物の他方はジャスモン酸メチルテトラブロマイド（ＭＪＴＢ）である。式Ｉによれば、ＭＪＴＢは、ｎが０であり；Ｃ３：Ｃ７間、Ｃ４：Ｃ５間及びＣ９：Ｃ１０間の結合が単結合であり；Ｒ１がメトキシであり；Ｒ２がオキソであり；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｃ、Ｄ及びＥは各々Ｈであり；そしてＡ、Ｂ、Ｒ６及びＲ７が各々ブロモである化合物である。
【００３３】
本発明の他の好ましい化合物において、ｎは０であり；Ｃ３：Ｃ７間、Ｃ４：Ｃ５間及びＣ９：Ｃ１０間の結合が単結合であり；Ｒ１がメトキシであり；Ｒ２がオキソであり；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥが各々Ｈであり；そして；
ａ）Ｒ６及びＲ７が、各々フルオロである（化合物“ＭＪＳ９９”と称する）か；
ｂ）Ｒ６及びＲ７が、各々ヨードである（化合物“ＭＪＳ８５ｆ１４”と称する）か；
ｃ）Ｒ６及びＲ７が、各々クロロである（化合物“ＭＪＳ８１ｆ１３”と称する）か；
ｄ）Ｒ６及びＲ７の一方がブロモであり、そして他方がヒドロキシである（化合物“ＮＪ−６３”と称する）か；又は
ｅ）Ｒ６及びＲ７の一方がヨードであり、そして他方がメトキシである（化合物“ＭＪＳ７２ｆ５”と称する；
のいずれかである。
【００３４】
本発明はまた、製薬的に許容できる担体、及び活性成分として上記のような本発明の化合物を含む製薬組成物を意図している。好ましい組成物は活性成分としてＭＪＤＢ又はＭＪＴＢを有する。好ましくは、製薬組成物において、活性成分を任意の許容できる脂質担体に溶解する。さらに、本発明の好ましい態様に従って、その組成物は少なくとも１種の他の化学療法薬をさらに含む。
【００３５】
本発明は、本明細書において記載されたような本発明の化合物の治療的に有効な量を癌細胞に適用とすることを含む哺乳動物癌細胞の増殖を減少する方法をさらに提供する。
【００３６】
さらに、本発明は、本明細書において記載されたような本発明の化合物の治療的な有効な量を活性成分として含有する製薬組成物を患者に投与することを含む、温血脊椎動物における癌、特に哺乳動物における癌の治療のための方法を提供する。“哺乳動物”と言う用語は、ヒトでない哺乳動物及びヒトを包含する。
【００３７】
“悪性細胞増殖性疾患又は障害を治療する又は抑制する”、“非固体性（非中実性：ｎｏｎ−ｓｏｌｉｄ）癌を治療する又は抑制する”、“腫瘍を治療する又は抑制する”と言う用語が記載において及び請求項においての本明細書において使用される場合においてはいつでも、それらは腫瘍形成、原発性腫瘍、腫瘍進行又は腫瘍転移を包含することが意図される。
【００３８】
本発明に関連しての、癌細胞に関する“増殖の減少”と言う用語は、以下の少なくとも１つにおける減少を称する：対照と比較しての（細胞の死の壊死タイプ、細胞消滅タイプ又は任意の他のタイプ、あるいはそれらの組み合わせである細胞死に起因しての）細胞の数の減少；細胞の増殖速度における減少、即ち細胞の合計数が増加している可能性があるがしかし対照における増加よりも低い水準での又は低い速度での増加；たとえそれらの合計数が変化していなくても対照に比較して（例えば軟寒天定量により測定されるような）細胞の侵襲性における減少；より多く分化した細胞タイプから、より少なく分化した細胞タイプへの進行；新生物形成進行における減速化；又は別の方法として、１つの段階から次の段階への癌細胞の進行の遅延化。
【００３９】
癌細胞の増殖の減少は、癌の治療を必要としている個人に、本明細書において記載されたような本発明の化合物の治療的に有効な量を投与することによる癌の治療のために利用することができる。
【００４０】
好ましい態様において本発明の方法は、Ｒ６及びＲ７の少なくとも１つがＢｒである式１の化合物の使用を含む。さらに好ましい態様において、その化合物はＭＪＤＢ又はＭＪＴＢである。
【００４１】
本発明は、哺乳動物における癌の治療のための医薬を調製するために、上記のような式Ｉの組成物の使用をさらに開示する。
【００４２】
本発明に関連して、“癌の治療”と言う用語は、以下の少なくとも１つを包含する：癌の増殖の速度における減少（即ち癌は依然として増殖しているが、しかしより遅い速度での増殖）；癌増殖の停止、即ち腫瘍成長の静止、そして好ましい場合において腫瘍が小さくなるか、又は寸法において減少する。その用語はまた、転移の数における減少、形成された新しい転移の数における減少、１つの段階から他の段階への癌の進行の遅延化及び癌により誘導される血管形成における減少を包含する。最も好ましい場合において、腫瘍を全体的に除去する。さらに、治療を受けている患者の生存期間の延長化がこの用語に包含される。この用語はまた、予防的状態のための、そして腫瘍罹患に感受性である個人のための予防手段をまた包含する。本発明の化合物の投与は個人のその病気にかかる恐れを減少させるだろう。好ましい状態において、その化合物を投与されている個人はその病気にかからない。
【００４３】
本発明に関連して“癌”と言う用語は、すべての起点からの、固体性（ｓｏｌｉｄ）腫瘍の形であれ、又は非固体性（ｎｏｎ−ｓｏｌｉｄ）腫瘍の形であれ、すべてのタイプの新生物を包含し、そして悪性症状及び前悪性（前癌性）症状の両方ならびにそれらの転移を包含する。特にこの用語は、癌腫、肉腫、腺腫、肝臓細胞癌、胚芽細胞腫、横紋筋肉腫、食道癌、甲状腺癌、神経節芽細胞腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、背索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、骨膜腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、ラブドテリオ肉腫（ｒｈａｂｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、結腸肉腫、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、黒色腫、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、頸部癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、神経膠星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、脳室上皮細胞腫、松果体腫、網膜芽細胞腫、直腸癌、甲状腺の癌、頭及び頸部癌、脳癌、末梢神経系の癌、中枢神経系の癌、神経芽細胞腫、子宮内膜の癌；急性骨髄性白血病、急性骨髄球白血病、急性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球白血病、肥満細胞性白血病、多発性骨髄腫、骨髄球性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、を包含するすべてのタイプの白血病及びリンパ腫を包含するリンパ球増殖性疾患及び造血性悪性疾患、ならびに上記のすべての転移を表す。
【００４４】
さらに好ましくは、癌は、前立腺癌、乳癌、皮膚癌、結腸癌、肺癌、膵臓癌、リンパ腫、白血病、頭及び頸部癌、腎臓癌、卵巣癌、骨癌、肝臓癌及び甲状腺癌からなる群から選ばれる。なおさらに好ましくは、癌は、リンパ芽球白血病を含む白血病、肺癌、黒色種及び結腸癌から選ばれる。さらに本発明の方法の好ましい態様において、本化合物は、１μｇ／ｋｇ体重〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重から選ばれた投与量で投与される。
【００４５】
医薬調製使用の他の態様において、医薬は式Ｉの化合物以外に少なくとも１種の活性な化学療法薬をさらに含む。或る態様において、本新規な化合物は、有効であるがしかしかなりの副作用を有する伝統的な化学療法薬と一緒に投与されることができる。本発明の化合物と、伝統薬との組み合わせは、伝統薬のより少ない量の投与を可能にすることができ、したがって、それにもかかわらず、十分な化学療法効果を達成させながら、患者が受ける副作用を有意義に低下させることができる。
【００４６】
本発明は、上記のような本発明の化合物を活性成分として含む製薬組成物の治療的に有効な量を、哺乳動物に投与することを含む、癌の治療を必要としている患者における癌の治療方法をさらに開示する。
【００４７】
上記のような本発明の化合物の治療的に有効な量を活性成分として含む、哺乳動物における癌の治療のための製薬組成物がまた本発明において提供される。
【００４８】
本発明はまた、本明細書において記載されたような、癌細胞の増殖を減少させるための医薬の製造において、本発明の化合物の使用を提供する。
【００４９】
本発明はさらに、
ｉ）ＣＣｌ４中のジャスモン酸メチルの溶液に臭素を添加し；そして
ｉｉ）ＣＣｌ４を蒸発させる；
ことを含む、ＭＪＤＢ
【化３】
2007514663.tif 000004
又はＭＪＴＢ
【化４】
2007514663.tif 000005
の製造方法を開示する。
【００５０】
下記の例において記載されているようにして、本発明の他のジャスモネート誘導体を調製することができる。追加の例示として、例えば低い温度でグリニャール試薬を用いることにより、Ｒ２位置にアルキル部分を加えることができる。
【００５１】
さらに、ペルオキシ酸を用いてジャスモン酸メチルから、９，１０−エポキシドを得ることができる。このエポキシドは、式ＲＭｇＸの化合物と反応して９及び１０位置（Ｒ６及びＲ７それぞれ）でヒドロキシル及びアルキルを生ずることができる。同様な様式で、置換アルキルを加えることができる。
【００５２】
さらに、このエポキシドを、酸性又は塩基性条件下に、ＲＯＨ（但しＲはアルキルである）又はＡｒＯＨ（但しＡｒはアリールである）の化合物と反応させて、９及び１０位置（Ｒ６及びＲ７それぞれ）でヒドロキシ、及びアルキルオキシ又はアリールオキシを生ずることができる。さらに、ジャスモン酸メチルの、５，６−エナミンを調製することは、Ｃ５位置（位置Ｂ）でのアルキルを可能にする。同様な様式で置換アルキルを加えることができる。
【００５３】
活性成分として、本明細書に記載されているような本発明の化合物の治療的に有効な量、及び製薬的に許容できる担体を含む、哺乳動物における癌の治療のための製薬組成物がまた、本発明において提供される。
【００５４】
“製薬的に許容できる”と言う用語は、連邦政府又は州政府の取り締まり機関により認可されており、又は米国薬局方に挙げられているか、又は動物において及びさらに特定的にはヒトにおいて使用するための他の一般的に認められた薬局方に挙げられていることを意味する。
【００５５】
“担体”と言う用語は、治療化合物と共に投与される希釈剤、補助薬（アジュバント）、賦形剤又はビヒクルを表す。そのような製薬担体は、水、そしてピーナッツ油、大豆油、ミネラル油、ごま油、等のような、石油、動物、植物又は合成由来の油を包含する油類、ポリエチレングリコール類、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶媒のような滅菌液体類であることができる。製薬組成物が、静脈内に投与される場合に水は好ましい担体である。食塩水溶液、及びデキストロース及びグリセロール水溶液はまた、特に注射用溶液のための液体担体として使用されることができる。適当な製薬賦形剤はでんぷん、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽（モルト）、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセリンモノステアラート、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール、等を包含する。
【００５６】
所望に応じて、組成物はまた、湿潤剤、乳化剤、あるいは酢酸塩、くえん酸塩又は燐酸塩のよなｐＨ緩衝剤の少量を含有することができる。ベンジルアルコール又はメチルパラベンのような抗菌剤；アルコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウムのような酸化防止剤；エチレンジアミン四酢酸のようなキレート化剤；そして塩化ナトリウム又はデキストロースのような張性の調節のための薬剤をまた考慮することができる。
【００５７】
組成物は、溶液、懸濁液、エマルション、錠剤、丸薬、カプセル、粉末、持続放出性配合物、等の形をとることができる。組成物は、トリグリセリド類、微結晶セルロース、トラガカントガム又はゼラチンのような伝統的な結合剤及び担体を用いて、坐薬として配合されることができる。経口処方物は、製薬級のマンニトール、ラクトース、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム、等のような標準の担体を含むことができる。適当な製薬担体の例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”に記載されている。そのような組成物は、患者への適当な投与のための形を提供するように適当な量の担体と一緒に好ましくは実質的に純粋な形で本発明の化合物の治療的に有効な量を含有するだろう。
【００５８】
担体は、折々、所望の形の処方に基づいて選ばれることができる。担体はまた、医薬の安定性を改良するために、クリアランス速度を遅延化させるために、ゆっくりとした放出性を与えるために、望ましくない副作用を減少させるために、等々のため、標的組織への活性成分の送り出し又は浸透を改良することの効果を、折々有するだろう。担体はまた、食用香味料、等を有する配合物を提供するために、その配合物を安定化させる物質（例えば保存料）であることができる。
【００５９】
担体は、慣用的に使用される任意の担体であることができ、そして溶解性及び本発明の化合物との反応性がないような化学−物理的考慮によって、そして投与の経路によってのみ限定される。担体の選択は、製薬組成物を投与するために使用される特定の方法によって決定されるだろう。したがって、担体は、添加剤、着色剤、希釈剤、緩衝剤、崩壊剤、湿潤剤、保存料、香味料及び薬理学的に和合性の担体を包含することができる。さらに担体は、定義により、予測可能な方法で活性成分の作用に影響する物質である補助剤（アジュバント）であることができる。
【００６０】
本発明の化合物を含む製薬組成物の導入方法は、局所、皮膚内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、眼及び経口経路を包含するが、しかしそれらに限定されない。本化合物を、任意の都合のよい経路により、例えば注入又はボーラス注射により、上皮内張膜（例えば口腔粘膜及び腸管粘膜、等）を介しての吸収により、投与することができ、そして他の治療的に活性な薬剤と一緒に投与することができる。投与は局所的であるのが好ましいが、しかしそれは全身的であることができる。さらに脳室内及びくも膜下内注射を包含する、任意の適当な経路により、中枢神経系中に、本発明の製薬組成物を導入することが望ましいだろう；脳室内注射は、例えば液貯め（ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ）に結合された、脳室内カテーテルにより容易にされることができる。例えば吸入器またはネブライザーの使用、及びエアゾール剤を有する配合物の使用により、肺投与をまた使用することができる。
【００６１】
治療を必要としている領域に本発明の製薬組成物を局所的に投与することが望ましいだろう；このことは、例えば限定的な方法によりそして限定的でない方法により、外科手術中の局所注入、例えば外科手術後の創傷包帯巻と協同しての局所的適用のより、注射により、カテーテルの手段により、坐薬の手段により、又は移植片の手段により達成させることができ、この移植片は、多孔質、非多孔質又はゼラチン質の材料である。或る好ましい態様に従えば、投与は、腫瘍又は新生物又は非新生物の組織の部位で、例えば注射器を介して、直接注射によるものであることができる。
【００６２】
経口投与のために適当な製薬組成物は、ａ）水、食塩水、天然ジュース類、アルコール類、シロップ類、等のような希釈液に有効な量の活性物質を溶解している液体溶液；（ｂ）各々が固体として又は顆粒として活性成分の所定量を含有する、カプセル（例えば、界面活性剤、滑沢剤及び不活性充てん剤を含有する通常の硬質−又は軟質−外皮ゼラチンタイプ）、錠剤、舐剤（活性物質がスクロース及びアカシア又はトラガカントを用いてのような香味付けされているか、又は活性物質が、ゼラチン及びグリセリンのような不活性基剤中に存在する）、及びトローチ；（ｃ）粉末類；（ｄ）適当な液体中の懸濁液；（ｅ）適当なエマルション；（ｆ）リポソーム配合物；その他、からなることができる。
【００６３】
なお他の態様において、組成物は、局所投与、例えば軟膏、ゲル、滴下液又はクリーム用に調製される。例えばクリーム、ゲル、滴下液、軟膏、等を用いて身体表面に局所適用するために、本発明の化合物は、製薬担体を有するか又は有することなしの生理学的に許容できる希釈剤中で調製され且つ適用されることができる。癌、例えば黒色腫を治療するために、本発明を局所的にまたは経皮的に使用することができる。局所又はゲル基剤形のためのアジュバントは例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ポリアクリレート類、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体、ポリエチレングリコール及び木ろうアルコール類を包含することができる。
【００６４】
統制された内部局所適用のために、以下の任意の成分又は同様な性質の化合物、即ち微結晶セルロース、トラガカントガム又はゼラチンのような結合剤；澱粉又はラクトースのような賦形剤；アルギン酸、プリモゲル（Ｐｒｉｍｏｇｅｌ）又はとうもろこし澱粉のような崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム又はステロテス（Ｓｔｅｒｏｔｅｓ）のような滑沢剤；又はコロイド状二酸化珪素のようなグリダント（ｇｌｉｄａｎｔ）、を含有することができる、錠剤又はカプセルの形にあることができる。投与量単位形がカプセルである場合、上記タイプの材料に加えて、脂肪油のような液体担体を含有することができる。さらに、投与量単位形は、投与量単位の物理的形態を修正する種々の他の材料、例えば、糖、シェラック（ｓｈｅｌｌａｃ）又は他の腸溶性剤のコーティングを含有することができる。
【００６５】
本発明の化合物は、制御された放出システムで送り出されることができる。１つの態様において、特定の内蔵器官又は腫瘍に化学療法剤を送り出すために使用されるような注入ポンプを、本発明の化合物を投与するために使用することができる（Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８（１９８０年）第５０７頁のＢｕｃｈｗａｒｄ，等；Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１（１９８９年）第５７４頁のＳａｕｄｅｋ，等を参照）。好ましい形において、選ばれた部位で制御された時間期間にわたって化合物を放出する、生分解性生体適合性重合体移植片と組み合わせて、本発明の化合物が投与される。好ましい重合体材料の例は、ポリ無水物類（ｐｏｌｙａｎｈｙｄｒｉｄｅｓ）、ポリオルトエステル類、ポリグリコール酸、ポリ酢酸、ポリエチレンビニルアセテート、それらの共重合体類及びブレンド類を包含する（フロリダ州、Ｂｏｃａ  ＲａｔｏｎのＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．発行（１９７４年）Ｌａｎｇｅｒ及びＷｉｓｅ（編集）のＭｅｄｉｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅを参照）。なお他の態様において、治療標的の近くに制御された放出システムを置き、このようにして全身投与の１区画のみを必要とすることができる。
【００６６】
折々、活性化合物は、吸入を介して投与されるべきエアゾール配合物に形成されることができる。これらのエアゾール配合物は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素、等のような加圧化された許容できる噴射剤中に入れられることができる。それらはまた、ネブライザー又はアトマイザーにおけるような非加圧化製剤のための製薬剤として配合されることができる。
【００６７】
さらに、時により、製薬組成物は、非経口投与（皮下、静脈内、動脈内又は筋肉内注射）のために配合されることができ、そして酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、及び配合物を意図された受容体の血液と等張にする溶質、を含有することができる水性及び非水性等張滅菌注射用溶液、及び懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤及び保存料を含む水性及び非水性滅菌懸濁液を含むことができる。石油、動物油、植物油又は合成油のような油類、脂肪のアルカリ金属、アンモニウム及びトリエタノールアミンの塩のような石けん及び適当な洗浄剤をまた、非経口投与のために使用できる。上記配合物をまた、直接に腫瘍内注射のために使用できる。さらに、注射の部位での刺激を少なくするか又はなくすために、本組成物は１種以上の非イオン性界面活性剤を含有することができる。適当な界面活性剤は、ソルビタンモノオレイン酸エステルのようなポリエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、及びプロピレングリコールとのプロピレンオキシドの縮合により形成される疎水性基剤とのエチレンオキシドの高分子量付加物を包含する。
【００６８】
アンプル及びバイアル（小びん）のような単位投与量又は多投与量の密封容器中で非経口処方物を提供することができ、そして使用の直前に注射のために滅菌液担体、例えば水の添加のみを必要とする凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｉｅｄ（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ））状態で貯蔵することができる。その場で必要に応じての注射用溶液及び懸濁液を、以前に記載されそして当業界において知られている種類の、滅菌粉末、顆粒及び錠剤から調製することができる。
【００６９】
癌を包含する、特定の病気又は症状の治療において有効である本発明の化合物の量は、その病気又は症状の種類により左右され、そして標準の臨床技術により決定されることができる。また、インビトロアッセイは、最適な投与量範囲を確認するのを助けるために随意に使用できる。処方物において使用されるべき正確な投与量はまた、投与の経路及び病気又は障害の重症度により左右され、そして開業医の判断及び各々の患者の状態によって決定されるべきである。好ましい投与量は、０．０１〜１０００ｍｇ／体重のｋｇ、さらに好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、なおさらに好ましくは１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であろう。インビトロ又は動物モデル試験の生物学的検定法又はシステムから誘導された投与量−応答曲線から有効な投与量を、補外推定することができる。
【００７０】
“治療的”療法は、病理学的徴候を減少させるか又は排除させる目的のために、病理学的徴候を示す患者に施される療法である。本発明の化合物の“治療的に有効な量”は、化合物が投与される患者に有益な結果を与えるのに十分である化合物の量である。
【００７１】
治療を必要としている患者は、癌のような病気を患っている可能性があるか、又はそのような病気に、より大きな感受性を有すると決定されるている可能性がある。したがって、本発明に従う治療の方法は、治療的利用及び予防的利用の両方を包含する。
【００７２】
本発明の化合物は、所望の治療的又は予防的活性について、ならびに治療的に有効な投与量の決定のために、インビボ試験されることができる。例えば、そのような化合物は、ヒトにおける試験の前に、ラット、マウス、にわとり、雌牛、さる、うさぎ、等を包含するが、しかしそれらに限定されない適当な動物モデルシステムにおいて試験されることができる。ヒトへの投与の前の、インビボ試験のために、当業界に知られている任意の動物モデルシステムを使用することができる。
【００７３】
上記化合物が、１つ以上のキラル中心を含む場合、そのようなキラル中心の立体化学は独立してＲ又はＳ配置又はその両方の混合であることができる。キラル中心は、Ｒ又はＳ、あるいはＲ，Ｓあるいは、ｄ，Ｄ、ｌ，Ｌあるいはｄ，ｌ、Ｄ，Ｌとさらに明示されることができる。
【００７４】
“Ｃ１〜Ｃ１２アルキル”と言う用語は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、アミル、ｔｅｒｔ−アミル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、等のような基を示す。好ましい“Ｃ１〜Ｃ１２アルキル”基は、メチル、エチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル及びイソプロピルである。同様に、“Ｃ１〜Ｃ１２アルキレン”と言う用語は化合物における２つの他の部分に結合された１〜１２個の炭素の基を示す。
【００７５】
“Ｃ１〜Ｃ１２置換アルキル”と言う用語は、ハロゲン、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシ、オキソ、保護されたオキソ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、フェニル、置換フェニル、ナフチル、アミノ、保護されたアミノ、（モノ置換）アミノ、保護された（モノ置換）アミノ、（ジ置換）アミノ、グアニジノ、保護されたグアニジノ、複素環式環、置換された複素環式環、イミダゾリル、インドリル、ピロリジニル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アシル、Ｃ１〜Ｃ１２アシルオキシ、ニトロ、カルボキシ、保護されたカルボキシ、カルバモイル、カルボキサミド、保護されたカルボキサミド、Ｎ−（Ｃ１〜Ｃ１２アルキル）カルボキサミド、保護されたＮ−（Ｃ１〜Ｃ１２アルキル）カルボキサミド、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１〜Ｃ１２アルキル）カルボキサミド、シアノ、メチルスルホニルアミノ、チオール、Ｃ１〜Ｃ１０アルキルチオ又はＣ１〜Ｃ１０アルキルスルホニル基、から選ばれた１つ以上、好ましくは１つ又は２つの置換基により置換されている基を示す。置換アルキル基は同じ置換基又は異なる置換基で一回以上、好ましくは１回又は２回置換されていてもよい。好ましい置換はハロである。
【００７６】
“保護されたオキソ”と言う用語は、炭素原子が２つのアルコキシ基に結合され、それにより非環式又は環式アセタール又はケタール部分を形成していることを示す。本明細書において使用されるものとして“Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ”と言う用語は、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ、等の基のような基を示す。好ましいアルコキシはメトキシである。“Ｃ１〜Ｃ１２置換アルコキシ”と言う用語は、アルコキシのアルキル部分がＣ１〜Ｃ１２置換アルキルに関連してと同じ様式で置換されていることができることを意味する。好ましい置換はハロである。同様に本明細書において使用されるものとして“Ｃ１〜Ｃ１２フェニルアルコキシ”と言う用語は、フェニル基に結合された“Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ”を意味する。
【００７７】
“Ｃ１〜Ｃ１２アシルオキシ”と言う用語は、本明細書において、ホルミルオキシ、アセトキシ、プロピオニルオキシ、ブチリルオキシ、ピバロイルオキシ、ペンタノイルオキシ，ヘキサノイルオキシ、ヘプタノイルオキシ、オクタノイルオキシ、ノナノイルオキシ、デカノイルオキシ、ウンデカノイルオキシ、ドデカノイルオキシ、等のような基を示す。
【００７８】
同様に、“Ｃ１〜Ｃ１２アシル”と言う用語は、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、ペンタノイル、ピバロイル、ヘキサノイル、ヘプタノイル、オクタノイル、ノナノイル、デカノイル、ウンデカノイル、ドデカノイル、ベンゾイル、等のような基を包含する。好ましいアシル基はアセチル及びベンゾイルである。
【００７９】
“Ｃ１〜Ｃ１２置換アシル”と言う用語は、アルキル基について上に定義された置換基の１つ以上、好ましくは１つ又は２つにより置換されたアシル基を示す。“Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル”と言う置換基用語は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル又はシクロヘプチル環を包含する。同様に“Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル”であることができる置換基はまた、シクロペンチル、シロクヘキシル又はシクロヘプチル環を包含する“Ｃ５〜Ｃ７シクロアルキル”であることができる。
【００８０】
“Ｃ３〜Ｃ７置換シクロアルキル”又は“Ｃ５〜Ｃ７置換シクロアルキル”と言う置換基用語は、アルキルについて上に定義された置換基の１つ又は２つにより置換された上記シクロアルキル環を示す。“シクロアルキレン”と言う用語は、シクロアルキル基が２つの部分に結合されて２つの別々の追加の基に一緒に結合している、上に定義されたようなシクロアルキルを意味する。同様に、“置換シクロアルキレン”と言う用語は、シクロアルキル基が２つの位置に結合されて２つの別々の追加の基に一緒に結合しており、そしてさらに少なくとも１つの追加の置換基を保持するシクロアルキレンを意味する。
【００８１】
同様に、“置換Ｃ５〜Ｃ７シクロアルケニレン”と言う用語は、ハロゲン、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ１０アルキルチオ、Ｃ１〜Ｃ１０アルキルスルホキシド、Ｃ１〜Ｃ１０アルキルスルホニル、Ｃ１〜Ｃ１０置換アルキルチオ、Ｃ１〜Ｃ１０置換アルキルスルホキシド、Ｃ１〜Ｃ１０置換アルキルスルホニル、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２置換アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、オキソ、保護されたオキソ、（モノ置換）アミノ、（ジ置換）アミノ、トリフルオロメチル、カルボキシ、保護されたカルボキシ、フェニル、置換フェニル、フェニルチオ、フェニルスルホキシド、フェニルスルホニル、アミノ、又は保護されたアミノ基によりさらに置換されたシクロアルケニレンを意味する。
【００８２】
“複素環”又は“複素環式環”と言う用語は、酸素、硫黄及び／又は窒素、特に単独であるいは硫黄又は酸素環原子と一緒に窒素、のような１〜４個のヘテロ原子を有する随意に置換された５員〜８員の環を示す。これらの５員〜８員の環は、飽和であるか、完全に不飽和であるか又は部分的に不飽和であることができ、完全に飽和された環が好ましい。好ましい複素環式環は、モルホリノ、ピペリジノ、ピペラジニル、２−アミノ−イミダゾリル、テトラヒドロフラノ、ピロロ、テトラヒドロチオフェン−イル、ヘキシルメチレンイミノ及びヘプチルメチレンイミノを包含する。
【００８３】
“置換複素環”又は“置換複素環式環”と言う用語は、上記複素環式環が、例えばアルキルについて上に定義された置換基の１つ以上、好ましくは１つ又は２つで置換されていることを意味する。“ヘテロアリール”と言う用語は、酸素、硫黄及び／又は窒素、特に単独であるいは硫黄又は酸素環原子と一緒に窒素、のような１〜４個のヘテロ原子を有する５員又は６員の環システムである、複素環式芳香族誘導体を意味する。ヘテロアリール類の例は、ピリジニル、ピリミジニル及びピラジニル、ピリダジニル、ピロロ、フラノ、オキサゾロ、イソキサゾロ、フタルイミド、チアゾロ、等を包含する。
【００８４】
“置換ヘテロアリール”と言う用語は、上記ヘテロアリールが、例えばアルキルについて上に定義された置換基の、同じであるか又は異なる１つ以上、好ましくは１つ又は２つの置換基で置換されていることを意味する。“置換フェニル”と言う用語は、アルキルについて上に定義された置換基から選ばれた１つ以上、好ましくは１つ又は２つの部分で置換されたフェニル基を特定する。
【００８５】
“フェノキシ”と言う用語は、分子の残りへの結合が酸素原子を介している、酸素原子に結合されたフェニルを示す。“置換フェノキシ”と言う用語は、アルキルについて上に定義された置換基から選ばれた１つ以上、好ましくは１つ又は２つの部分で置換されたフェノキシ基を特定する。
【００８６】
“アリール”と言う用語は、置換されていないかあるいはハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシカルボニル、アミド、アルキルアミド、ジアルキルアミド、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、カルボキシあるいはチオ又はチオアルキルから選ばれた１つ以上の基で置換されていることができる、少なくとも１つの炭素環式芳香族基又は複素環式芳香族基を有する芳香族基を称する。アリール環の非限定的例は、フェニル、ナフチル、ピラニル、ピロリル、ピラジニル、ピリミジニル、ピラゾリル、ピリジニル、フラニル、チオフェニル、チアゾリル、イミダゾリル、イソキサゾリル、等である。“アリールオキシ”と言う用語は、分子の残りへの結合が酸素原子を介している、酸素原子に結合された“アリール”基を称する。
【００８７】
“ハロ”及び“ハロゲン”と言う用語は、フルオロ、クロロ、ブロモ又はヨード原子を称する。同じであるか又は異なる、１つ以上のハロゲンが存在することができる。
“（モノ置換）アミノ”と言う用語は、フェニル、置換フェニル、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２置換アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アシル、Ｃ１〜Ｃ１２置換アシル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２置換アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ２〜Ｃ１２置換アルキニル、Ｃ７〜Ｃ１８フエニルアルキル、Ｃ７〜Ｃ１８置換フェニルアルキル、複素環式環、置換複素環式環、Ｃ１〜Ｃ１２ヘテロシクロアルキル及びＣ１〜Ｃ１２置換ヘテロシクロアルキル基からなる群から選ばれた１つの置換基を有するアミノ基を称する。（モノ置換）アミノは、“保護された（モノ置換）アミノ基”と言う用語により包含されるものとして、アミノ保護基をさらに有することができる。
【００８８】
“（ジ置換）アミノ”と言う用語は、フェニル、置換フェニル、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２置換アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アシル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ７〜Ｃ１８フェニルアルキル、Ｃ７〜Ｃ１８置換フェニルアルキル、Ｃ１〜Ｃ１２ヘテロシクロアルキル及びＣ１〜Ｃ１２置換ヘテロシクロアルキルからなる群から選ばれた２つの置換基を有するアミノ基を称する。２つの置換基は同じであることも又は異なることもできる。
【００８９】
本明細書において使用されるものとして“アミノ保護基”と言う用語は、一方ではその分子の他の官能基を反応させながら、そのアミノ基を遮断又は保護するために通常使用される、アミノ基の置換基を称する。“保護された（モノ置換）アミノ基”と言う用語は、モノ置換されたアミノ窒素原子上にアミノ保護基が存在することを意味する。また、“保護されたカルボキサミド”と言う用語は、カルボキサミド窒素上にアミノ保護基が存在することを意味する。同様に、“保護されたＮ−（Ｃ１〜Ｃ１２アルキル）カルボキサミド”と言う用語は、カルボキサミド窒素上にアミノ保護基が存在することを意味する。
【００９０】
誘導されたアミノ基が、後での（１つ又は複数の）反応の条件で安定であり、そしてその化合物の残りを分断することなしに適当な点で除去されることができる限り、使用されるアミノ保護基の種は重要ではない。好ましいアミノ保護基はＢｏｃ、Ｃｂｚ及びＦｍｏｃである。上記の用語に包含されるアミノ保護基の追加の例は、有機合成及びペプチド業界において周知であり、そして例えば１９９１年のニューヨーク州、ニューヨークのＪｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ発行の“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”第２版第７章におけるＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ及びＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓにより；１９８４年及び１９９３年の、ニューヨーク州、ニューヨークのＳｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ発行“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”第１及び第２改定版におけるＭ．Ｂｏｄａｎｚｓｋｙにより；そして１９８４年イリノイ州、ロックフォードのＰｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．発行“Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”のＳｔｅｗａｒｔ及びＹｏｕｎｇにより記載されている（これらの文献の各々を参照することにより本明細書に組み入れる）。“保護されたアミノ”と言う関連用語は、上に記載されたアミノ保護基で置換されているアミノ基と定義される。
【００９１】
本明細書において使用されるものとして“保護されたグアニジノ”と言う用語は、グアニジノ窒素原子の１つ又は２つの上に“アミノ保護基”が存在することを意味する。“保護されたグアニジノ”基の例は、上に記載されたＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ及びＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓにより；Ｍ．Ｂｏｄａｎｚｓｋｙにより；そしてＳｔｅｗａｒｔ及びＹｏｕｎｇにより記載されている。
【００９２】
“チオ”と言う用語は、−ＳＨ、あるいは２つの他の基の間の場合は−Ｓ−を称する。“Ｃ１〜Ｃ１０アルキレンチオ”と言う用語は、アルキレン鎖に沿って任意の点でチオを有する１〜１０個の炭素のアルキレン鎖を称する。“Ｃ１〜Ｃ１０置換アルキレンチオ”と言う用語は（上記した“置換アルキレン”と同じ様式で）アルキレンの１つ以上の位置で置換されているＣ１〜Ｃ１０アルキレンチオ基を称する。
【００９３】
“スルホニル”と言う用語は、−Ｓ（Ｏ）２−を称する。“Ｃ１〜Ｃ１０アルキレンスルホニル”と言う用語は、アルキレン鎖に沿っての任意の点でスルホニルを有する１〜１０個の炭素のアルキレン鎖を称する。“Ｃ１〜Ｃ１０置換アルキレンスルホニル”と言う用語は、（上記した“置換アルキレン”と同じ様式で）アルキレンの１つ以上の位置で置換されているＣ１〜Ｃ１０アルキレンスルホニル基を称する。
【００９４】
“スルフィニル”と言う用語は、−Ｓ（Ｏ）−を称する。“Ｃ１〜Ｃ１０アルキレンスルフィニル”と言う用語は、アルキレン鎖に沿っての任意の点でスルフィニルを有する１〜１０個の炭素のアルキレン鎖を称する。“Ｃ１〜Ｃ１０置換アルキレンスルフィニル”と言う用語は、（上記した“置換アルキレン”と同じ様式で）アルキレンの１つ以上の位置で置換されているＣ１〜Ｃ１０アルキレンスルフィニルを称する。
【００９５】
“オキシ”と言う用語は−Ｏ−を称する。“Ｃ１〜Ｃ１０アルキレンオキシ”、“Ｃ１〜Ｃ１０アルキレンジオキシ”及び“Ｃ１〜Ｃ１０アルキレントリオキシ”と言う用語は、２つの酸素原子が連続していないと言う条件で、どの２つの酸素原子も少なくとも２つの炭素により分離されていると言う条件で、アルキレン鎖の任意の点で、それぞれ１つ、２つ又は３つの−Ｏ−を有する１〜１０個の炭素のアルキレン鎖を称する。“Ｃ１〜Ｃ１０置換アルキレンオキシ”、“Ｃ１〜Ｃ１０置換アルキレンジオキシ”及び“Ｃ１〜Ｃ１０置換アルキレントリオキシ”と言う用語は（上記された“置換アルキレン”と同じ様式で）アルキレンの１つ以上位置で置換されている、それぞれ“Ｃ１〜Ｃ１０アルキレンオキシ”、“Ｃ１〜Ｃ１０アルキレンジオキシ”及び“Ｃ１〜Ｃ１０アルキレントリオキシ”を称する。
【００９６】
本明細書において使用されるものとして、“カルボキシ保護基”と言う用語は、反応が化合物上の他の官能基上で行われる一方で、カルボン酸基を遮断するか又は保護するために通常使用される、カルボン酸基のエステル誘導体の１種を言う。これらの基の例は、１９７３年のニューヨーク州ニューヨークのＰｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ発行Ｊ．Ｇ．Ｗ．ＭｃＯｍｉｅ編集の“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”第５章のＥ．Ｈａｓｌａｍにおいてそして１９９１年ニューヨーク州、ニューヨークのＪｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ発行の“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”第２版の第５章のＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ及びＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓにおいて見い出される（これらの文献の各々を参照することにより本明細書に組み入れる）。関連用語は、上記カルボキシ保護基の１つで置換されたカルボキシ基を称する“保護されたカルボキシ”である。
【００９７】
“ヒドロキシ保護基”と言う用語はヒドロキシ基に結合された容易に開裂することができる基を称する。誘導されたヒドロキシ基が後での（１つ又は複数の）反応の条件に対して安定であり、そして分子の残りを分断することなしに適当な点で除去されることができる限り、ヒドロキシ保護基の種は重要ではない。ヒドロキシ保護基の例は、１９７３年ニューヨーク州ニューヨークのＰｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ発行、Ｊ．Ｇ．Ｗ．ＭｃＯｍｉｅ編集“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”第３章及び第４章それぞれの、Ｃ．Ｂ．Ｒｅｅｓｅ及びＥ．Ｈａｓｌａｍにより；そして１９９１年、ニューヨーク州ニューヨークのＪｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ発行の“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”第２版の第２章及び第３章のＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ及びＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓにより記載されている。関連用語は上記ヒドロキシ保護基の１つで置換されたヒドロキシを称する“保護されたヒドロキシ”であり、そして上記ヒドロキシ保護基の１つで置換されたヒドロキシメチルを称する“保護されたヒドロキシメチル”である。
【００９８】
“Ｃ１〜Ｃ１０アルキルチオ”と言う用語は、メチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオ、イソプロピルチオ、ｎ−ブチルチオ、ｔ−ブチルチオ、等のようなスルフィド基を称する。
“Ｃ１〜Ｃ１０アルキルスルホキシド”と言う用語は、メチルスルホキシド、エチルスルホキシド、ｎ−プロピルスルホキシド、イソプロピルスルホキシド、ｎ−ブチルスルホキシド、ｓｅｃ−ブチルスルホキシド、等のようなスルホキシド基を示す。“Ｃ１〜Ｃ１０アルキルスルホニル”と言う用語は、メチルスルホニル、エチルスルホニル、ｎ−プロピルスルホニル、イソプロピルスルホニル、ｎ−ブチルスルホニル、ｔ−ブチルスルホニル、等のような基を包含する。上記チオ、スルホキシド又はスルホニル基は、アルキル鎖の任意の点にあることができる（例えば、２−メチルメルカプトエチル）ことがまた理解されるべきである。
【００９９】
“Ｃ１〜Ｃ１０置換アルキルチオ”、“Ｃ１〜Ｃ１０置換アルキルスルホキシド”及び“Ｃ１〜Ｃ１０置換アルキルスルホニル”と言う用語は、これらの基のＣ１〜Ｃ１０アルキル部分が“置換アルキル”に関連して上に記載されたように置換されていることができることを示す。
【０１００】
“フェニルチオ”、“フェニルスルホキシド”及び“フェニルスルホニル”と言う用語は、フェニル基を含有する、チオール、スルホキシド又はスルホンそれぞれを特定する。“置換フェニルチオ”、“置換フェニルスルホキシド”及び“置換フェニルスルホニル”と言う用語は、これらの基のフェニルが“置換フェニル基”に関連して上に記載されたように置換されていることができることを意味する。
【０１０１】
“Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアミノカルボニル”と言う用語は、アミノカルボニル基の窒素にＣ１〜Ｃ１２アルキルが結合していることを意味する。“Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアミノカルボニルの例は、メチルアミノカルボニル、エチルアミノカルボニル、プロピルアミノカルボニル及びブチルアミノカルボニルを包含する。“Ｃ１〜Ｃ１２置換アルキルアミノカルボニル”と言う用語は、アルキルがＣ１〜Ｃ１２置換アルキルに関連して上記したように置換されていることができる、アミノカルボニル基の窒素に置換アルキルが結合していることを示す。
【０１０２】
“Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシカルボニル”と言う用語は、カルボニル基に“Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ”基が結合されていることを意味する。“Ｃ１〜Ｃ１２置換アルコキシカルボニル”と言う用語は、アルコキシが“Ｃ１〜Ｃ１２置換アルキル”に関連して上記したように置換されていることができる、カルボニル基に置換アルコキシ基が結合されていることを示す。
【０１０３】
“フェニルアミノカルボニル”と言う用語は、フェニル基がアミノカルボニル基の窒素に結合されていることを意味する。“置換フェニルアミノカルボニル”と言う用語は、フェニルが置換フェニルに関連して上記したように置換されていることができる、アミノカルボニル基の窒素に置換フェニル基が結合されていることを意味する。
“Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアミノチオカルボニル”と言う用語は、アルキルが上に定義されたと同じ意味を有する、アミノチオカルボニル基にＣ１〜Ｃ１２アルキル基が結合されていることを意味する。
【０１０４】
“Ｃ１〜Ｃ１２置換アルキルアミノチオカルボニル”と言う用語は、アルキルがＣ１〜Ｃ１２置換アルキルに関連して上記したように置換されていることができる、アミノチオカルボニル基に置換アルキル基が結合されていることを意味する。
“フェニルアミノチオカルボニル”と言う用語は、フェニルが上に定義されたと同じ意味を有する、アミノチオカルボニル基にフェニル基が結合されていることを意味する。
【０１０５】
“置換フェニルアミノチオカルボニル”と言う用語は、フェニルが置換フェニルに関連して上に記載されているように置換されていることができる、アミノチオカルボニル基に置換フェニル基が結合されていることを意味する。
【０１０６】
“置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキレン”と言う用語は、アルキル基が２つの位置で結合されて２つの別々の追加の基と一緒に接続しており、そして追加の置換基をさらに有する、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基を意味する。
【０１０７】
“環式Ｃ２〜Ｃ７アルキレン”、“置換環式Ｃ２〜Ｃ７アルキレン”、“環式Ｃ２〜Ｃ７ヘテロアルキレン”及び“置換環式Ｃ２〜Ｃ７ヘテロアルキレン”と言う用語は、フェニル基に結合されて（縮合されて）二環式環系を生ずる、そのような環式基と定義する。環式基は、飽和されていてもよく、あるいは１つ又は２つの二重結合を含有してもよい。さらに、環式基は、環式Ｃ２〜Ｃ７ヘテロアルキレンである、１つ又は２つの酸素、窒素又は硫黄原子により置き換えられた１つ又は２つのメチレン基又はメチン基を有することができる。
【０１０８】
環式アルキレン又はヘテロアルキレン基は、適当な場合に以下の部分、即ちヒドロキシ、保護されたヒドロキシ、カルボキシ、保護されたカルボキシ、オキソ、保護されたオキソ、Ｃ１〜Ｃ４アシルオキシ、ホルミル、Ｃ１〜Ｃ１２アシル、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ７アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１０アルキルチオ、Ｃ１〜Ｃ１０アルキルスルホキシド、Ｃ１〜Ｃ１０アルキルスルホニル、ハロ、アミノ、保護されたアミノ、（モノ置換）アミノ、保護された（モノ置換）アミノ、（ジ置換）アミノ、ヒドロキシメチル又は保護されたヒドロキシメチルからなる群から選ばれた、化合物（例えばアルキレン）の他の部分に結合されていることができる、同じ又は異なる置換基により１回又は２回置換されていることができる。
【０１０９】
ベンゼンラジカル上に縮合された環式アルキレン又はヘテロアルキレン基は、２〜１０の環員を含有することができるが、しかし３〜６員を含有するのが好ましい。そのような飽和環式基の例は、得られた二環式環系が２，３−ジヒドロインダニル及びテトラリン環である場合である。環式基が不飽和である場合、その例は、得られた二環式環系がナフチル環又はインドリルである場合に生ずる。各々が１つの窒素原子及び１つ以上の二重結合、好ましくは１つ又は２つの二重結合を含有する縮合環式基の例は、ベンゼンラジカルがピリジノ、ピラノ、ピロロ、ピリジニル、ジヒドロピロロ又はジヒドロピリジニル環に縮合されている場合である。各々が１つの酸素原子及び１つ又は２つの二重結合を含有する縮合環式基の例は、ベンゼンラジカル環が、フロ（ｆｕｒｏ）、ピラノ、ジヒドロフラノ又はジヒドロピラノ環に縮合されている場合である。
【０１１０】
各々が１つの硫黄原子及び１つ又は２つの二重結合を含有する縮合環式基の例は、ベンゼンラジカル環がチエノ（ｔｈｉｅｎｏ）、チオピラノ、ジヒドロチエノ（ｄｉｈｙｄｒｏｔｈｉｅｎｏ）又はジヒドロチオピラノ環に縮合されている場合である。硫黄及び窒素から選ばれた２つのヘテロ原子及び１つ又は２つの二重結合を含有する環式基の例は、ベンゼンラジカル環がチアゾロ、イソチアゾロ、ジヒドロチアゾロ又はジヒドロイソチアゾロ環上に縮合されている場合である。酸素及び窒素から選ばれた２つのヘテロ原子及び１つ又は２つの二重結合を含有する環式基の例は、ベンゼン環がオキサゾロ、イソキザゾロ、ジヒドロオキサゾロ又はジヒドロイソキサゾロ環に縮合されている場合である。２つの窒素ヘテロ原子及び１つ又は２つの二重結合を含有する環式基の例は、ベンゼン環がピラゾロ、イミダゾロ、ジヒドロピラゾロ又はジヒドロイミダゾロ環又はピラジニルに縮合されている場合に生ずる。
【０１１１】
“カルバモイル”と言う用語は、その基が２つの位置で結合されて２つの別々の追加の基を接続している−ＮＣ（Ｏ）−基を意味する。
本発明の１種以上の化合物は塩として存在することができる。“塩”と言う用語は、カルボキシレート陰イオンとアミン窒素とで形成する塩を包含し、そして下記に記載される有機及び無機の、陰イオンと陽イオンとで形成する塩を包含する。
【０１１２】
さらに、その用語は、（アミノ基のような）塩基性基と、有機又は無機酸との標準の酸−塩基反応により形成される塩を包含する。そのような酸は、塩酸、フッ化水素酸、トリフルオロ酢酸、硫酸、燐酸、酢酸、琥珀酸、クエン酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、パルミチン酸、コール酸、パモン酸（ｐａｍｏｉｃ  ａｃｉｄ）、ムチン酸、Ｄ−グルタミン酸、Ｄ−カンホル酸、グルタル酸、フタル酸、酒石酸、ラウリン酸、ステアリン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ソルビン酸、ピクリン酸、安息香酸、けい皮酸、等の酸を包含する。
【０１１３】
“有機又は無機陽イオン”と言う用語は、カルボキシレート塩のカルボキシレート陰イオンに対する対イオンを称する。その対イオンは、（リチウム、ナトリウム、カリウム、バリウム、アルミニウム及びカルシウムのような）アルカリ金属及びアルカリ土類金属；アンモニウム、及びトリメチルアミンのようなモノ−、ジ−及びトリ−アルキルアミン、シクロヘキシルアミン；及びジベンジルアンモニウム、ベンジルアンモニウム、２−ヒドロキシエチルアンモニウム、ビス（２−ヒドロキシエチル）アンモニウム、フェニルエチルベンジルアンモニウム、ジベンジルエチレンジアンモニウム、等の陽イオンから選ばれる。例えばＪ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，６６：第１頁〜第１９頁（１９７７年）のＢｅｒｇｅ，等の“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ”を参照（この文献を参照することにより本明細書に組み入れる）。
【０１１４】
上記用語に包含される他の陽イオンは、プロカイン、キニーネ及びＮ−メチルグルコサミンのプロトン化形及びグリシン、オルニチン、ヒスチジン、フェニルグリシン、リシン及びアルギニンのような塩基性アミノ酸のプロトン化形を包含する。さらにカルボン酸とアミノ基とにより形成される本化合物の任意の双性イオン形はこの用語により言及される。例えばカルボキシレート陰イオンに対する陽イオンは、１つの位置が（四級アンモニウム）メチル基で置換される場合に存在するだろう。カルボキシレート陰イオンに対する好ましい陽イオンはナトリウム陽イオンである。
【０１１５】
本発明の化合物はまた、溶媒和物及び水和物として存在することができる。したがって、これらの化合物は、例えば水和の水、あるいは母液溶媒の分子の１つ又は多数、又はその任意の一部分で結晶化されることができる。そのような化合物の溶媒和物又は水和物は、この発明の範囲内に包含される。
【０１１６】
ライブラリー（ｌｉｂｒａｒｙ）におけるときでさえ、本発明の１種以上の化合物は非毒性、代謝的に変化しやすいエステル形のような、生物学的に活性なエステルの形にあることができる。そのようなエステル形は、増大された血液水準を誘導し、そして化合物の対応する非エステル形の効能を延長する。用いることができるエステル基は、低級アルコキシメチル基、例えばメトキシメチル、エトキシメチル、イソプロポキシメチル、等；−（Ｃ１〜Ｃ１２）アルコキシエチル基、例えばメトキシエチル、エトキシエチル、プロポキシエチル、イソプロポキシエチル、等；５−メチル−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イルメチル、５−フェニル−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イルメチル、等のような２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イルメチル基；Ｃ１〜Ｃ１０アルキルチオメチル基、例えばメチルチオメチル、エチルチオメチル、イソプロピルチオメチル、等；アシルオキシメチル基、例えばピバロイルオキシメチル、ピバロイルオキシエチル、−アセトキシメチル、等；エトキシカルボニル−１−メチル基；１−（エトキシカルボニルオキシ）エチル基；１−（メチルアミノカルボニルオキシ）エチル基のような１−（Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアミノカルボニルオキシ）エチル基を包含する。
【０１１７】
本発明の任意の位置は、３連続までの“置換”を有することが理解されるべきである。例えば“置換アルキル”で置換されている“置換フェニル”で置換されている、ここでの“置換アルキル”は、この場合に、さらにもう１つの基により置換されることができ、そしてそれ以上にはもはや置換されることができない。しかしながら、本発明は、適切な場合に、３つの平行置換以上の置換を意図することがまた理解されるべきである。例えば、適切な場合に、アルキル部分上の３つより多くの水素は、ハロ及びヒドロキシを包含する任意の１種以上の基で置換されていることができる。
【実施例】
【０１１８】
実験的方法
ＭＪＤＢの合成
黄色い色が５分間維持されるまで、−２０℃でＣＣｌ４中のジャスモン酸メチルの溶液を臭素で処理した。次に溶媒を蒸発させ、黄色を帯びた残留物を、ＭｅＯＨで洗浄したシリカゲルカラム（ＶＬＣ）上でクロマトグラフィにかけ、そしてヘキサン／５〜１０％ＥｔＯＡｃで溶離した。
２つの可能性あるラセミ化合物の１：１の混合物が得られた。
質量スペクトル：ｍ／ｚ３８４（Ｂｒ２）、Ｒｆ＝ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１：１）で溶離されて、シリカゲル上０．８。
Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣ１３）：（Ｃ−１〜Ｃ−１３）：１７２．１／１７２．３；３７．１／３７．３；３８．０／３８．３；２９．５／２９．６；３８．８／３９．１；２１８．４／２１９．１；（両方について）５１．７；２７．０／２７．２；５７．８／５５．８；６０．７／６０．２；３５．７／３６．１；（両方について）１２．４；５１．１／５１．３ｐｐｍ．
Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：２．３９−２．４１（Ｈ−２及び３）；１．９４−２．１４（Ｈ−４，Ｈ−７及びＨ−１１）；２．７４−２．７５（Ｈ−５）；
１．６１（Ｈ−８）；４．６２及び４．８９（Ｈ−９）；４．１４（Ｈ−１０）；１．１２（Ｈ−１２）；３．７５（ＯＭｅ）ｐｐｍ．
【０１１９】
【化５】
2007514663.tif 000006
【０１２０】
ＭＪＴＢの合成
ＣＣｌ４中のＭＪを一夜、１０当量の臭素で処理した。溶媒及び過剰の臭素を真空下に蒸発させた。ｉＰｒＯＨから再結晶させて１種のテトラ臭素異性体を得、そしてＥｔＯＨから再結晶化して第２の異性体を得た。ＮＭＲ、ＭＳによりそれらの化合物を同定確認し、そしてＸ線回折分析により１種の異性体を同定確認した。
【０１２１】
ＭＪＳ７２ｆ５の合成
０℃でメタノール（５ｍＬ）中の（±）−ＭＪ（１１１ｍｇ、０．４９ミリモル）のかき混ぜた溶液に、メタノール（１５ｍＬ）中のＩ２（５８０ｍｇ、２．２８ミリモル）の溶液を滴下して加えた。暗所で０℃で０．５時間その混合物をかき混ぜ、放置して室温にまで温め、次にさらに４８時間かき混ぜた。次に溶媒を蒸発させ、残留物に飽和水性Ｎａ２ＳＯ３（１０ｍＬ）を加え、そしてエーテル（２ｘ１０ｍＬ）で抽出した。合併した有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、そして真空濃縮した。残留物をＶＬＣ（ＥｔＯＡｃ／石油エーテル（１：４））により精製して、無色油状物として生成物（４２ｍｇ、２２％）を得た。
【０１２２】
ＭＪＳ９９ｆ７の合成
ＣＦＣｌ３の２５０ｍＬ、ＣＨＣｌ３の２００ｍＬ及びエタノールの５０ｍＬ中に溶解された基質（±）−ＭＪ（２．１ｇ、９．３７ミリモル）の冷たい（−７５℃）且つ激しくかき混ぜられた溶液中に、ゆっくりとした流れとしてＮ２中３％の濃度でフッ素を通過させた。その反応を３時間行い、次に、その混合物を５００ｍＬの水中に注入し、飽和水性ＮａＨＣＯ３で洗浄しそしてＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。合併した有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、そして真空濃縮した。残留物をＶＬＣ（ＥｔＯＡｃ／石油エーテル（１：９））により精製して、赤色油状物としてジアステレオ異性体の混合物（９５０ｍｇ、３９％）を得た。
【０１２３】
ＭＪＳ８５ｆ４の合成
０℃で乾燥ＴＨＦ（６ｍＬ）中の（±）−ＭＪ（２４６ｍｇ、１．１０ミリモル）のかき混ぜられた溶液に、ＴＨＦ（１５ｍＬ）中のＩ２（１．９７ｇ、４．６ミリモル）の溶液を滴下して加えた。その混合物を暗所で０℃で混合物を３時間かき混ぜ、放置して室温にまで温め、次にさらに４８時間かき混ぜた。完了後に、飽和水性Ｎａ２ＳＯ３（１０ｍＬ）を残留物に加え、エーテル（２ｘ１０ｍＬ）で抽出した。合併した有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、そして真空濃縮した。残留物をＶＬＣ（ＥｔＯＡｃ／石油エーテル（１：４））により精製してヨウ素化生成物を得た。
【０１２４】
ＭＪＳ８１ｆ３の合成
−１０℃でＣＣｌ４（５ｍＬ）中の（±）−ＭＪ（７８ｍｇ、０．３４８ミリモル）のかき混ぜられた溶液中に、濃ＨＣｌ（５ｍＬ）とＫＭｎＯ４（８００ｍｇ）とからその場で形成されたＣｌ２を吹き込んで泡立てた。混合物を２時間、−１０℃でかき混ぜた。次に溶媒を蒸発させ、そして残留物をＶＬＣ（ＥｔＯＡｃ／石油エーテル（１：９））により精製して塩素化生成物を得た。
【０１２５】
例において使用された細胞毒性アッセイ
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６水性非放射性細胞増殖アッセイ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｎｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ）（ウィスコンシン州マディソンのＰｒｏｍｅｇａ）により生存細胞の数における減少の測定を行った。一定の実験の完了の際、３３３μｇ／ｍｌでのＭＴＳ（テトラゾリウム化合物）＋（２５μＭでの）フェナジンメトサルフェートを、３７℃で１時間、９６−ウェルプレートの各々のウェルに加えた。これは、デヒドロゲナーゼが代謝的に活性な細胞におけるＭＴＳを減少させる呈色反応の発現を可能にした。細胞はＭＴＳの添加前に洗浄されていなかったので、問題的である可能性があった潜在的にゆるく粘着性がある細胞も、非粘着性細胞も存在しなかった。ＣＥＲＥＳ  ９００  ＨＤＩ  ＥＬＩＳＡ読取装置（バーモント州ハイランドパークのＢｉｏ−Ｔｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．製）を用いて４９０ｎｍの波長で可溶性ＮＴＳホルマザン生成物を測定した。光学濃度は培養における生存細胞の数に正比例している。以下の方法で細胞毒性（％）を計算した：
〔（対照細胞のＯＤ−薬剤処理細胞のＯＤ）／対照細胞のＯＤ〕ｘ１００
【０１２６】
例  １
ＭＪＤＢは白血病細胞に対して高度に細胞毒性であり、そして健康なリンパ球に対して非毒性である
ヒト白血病細胞に対するＭＪＤＢの毒性を試験するために、慢性リンパ球白血病（ＣＬＬ）から、末梢の血液リンパ球を採取した。これらの細胞は、細胞表面上のＣＤ５及びＣＤ１９標識（マーカ）の流動細胞光度測定法的分析により測定したときに事実上１００％の癌細胞を含有することが示された。健康な供与者から末梢の血液リンパ球を同様に採取した。９６−ウェルプレートにおける１．５ｘ１０４／ウェルで細胞を接種し、そして図１において示される幾つかの濃度で１時間ＭＪＤＢを加えた。生存可能な細胞を表す光学濃度をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６水性非放射性細胞増殖アッセイ（ウイスコンシン州、マディソンのＰｒｏｍｅｇａ）（即ち、生存可能な細胞が、上に記載したように着色生成物を生成するアッセイ）により測定した。このアッセイは生成された色の量がＥＬＩＳＡ読取装置を用いて読み取られるので、定量的である。細胞毒性を対照の非処理培養物の％として計算した（平均±ＳＤ；ｎ＝３）。
【０１２７】
ＣＬＬ患者からの末梢の血液リンパ球に関してのＭＪＤＢの細胞毒性を、（ダイヤモンド形で示される）健康な供与者からの末梢の血液リンパ球に関してのその細胞毒性に対してプロットした。図１参照。ＭＪＤＢは、健康な供与者からの末梢の血液リンパ球に対してよりも、慢性リンパ球白血病（ＣＬＬ）患者からの末梢の血液リンパ球に対して明らかに且つ極めて細胞毒性であった（Ｐ＜０．０５）。ＭＪＤＢはＣＬＬ患者からの癌細胞に対して高度に且つ選択的に細胞毒性である一方、健康な供与者からのリンパ球に対して細胞毒性は最小である。
【０１２８】
例  ２
ＭＪＤＢは４種の異なるヒト悪性細胞系に対して示されるように、以前に研究されたジャスモネート類よりもはるかにいっそう細胞毒性である
ＭＪＤＢの細胞毒性を、米国特許第６，４６９，０６１号に開示された最も有効なジャスモネートであった以前に研究されたジャスモネートであるジャスモン酸メチル（ＭＪ）の細胞毒性と比較した。各々が、リンパ芽球白血病、肺癌、黒色腫又は結腸癌に由来する４種のヒト悪性細胞系に適用されたときに分かるように比較された。
【０１２９】
（１．５ｘ１０４／ウェルでの）Ｍｏｌｔ−４リンパ芽球白血病細胞、（４ｘ１０３／ウェルでの）３ＬＬ肺癌細胞、（４ｘ１０３／ウェルでの）Ｂ１６黒色腫細胞又は（４ｘ１０３／ウェルでの）ＨＣＴ１１６結腸癌細胞を、９６−ウェルプレート中に接種し、そして０．５ｍＭでジャスモン酸メチル（ＭＪ）又はＭＪＤＢを１日間加えた。生存可能な細胞を表す光学濃度を、（上記した）ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６水性非放射性細胞増殖アッセイにより測定した。細胞毒性を、対照非処理培養物の％として計算した（平均±ＳＤ．ｎ＝３）。
【０１３０】
ジャスモン酸メチル（ＭＪ、中白柱）又はＭＪＤＭ（中黒柱）の細胞毒性のパーセンテージを例示する。図２は、以前に研究されたジャスモン酸メチルと比較したときに、新しく合成された化合物ＭＪＤＢが種々の癌細胞系へのその細胞毒性効果において非常に優れていることを明らかに示している（統計的研究は、これらの研究についてＰ＜０．０５を示した）。
【０１３１】
例  ３
ＭＪＤＢは野性タイプ又は突然変異体ｐ５３を発現するいずれの細胞に対しても効果がある
前細胞消滅性癌抑制遺伝子の突然変異型、ｐ５３を発現する細胞に対してのＭＪＤＢの効果が示された。異型体ｐ５３発現は、ヒト癌の約５０％において起こり、そして医薬耐性の一因となり、そして癌患者における化学療法及び放射線治療法においての結果として起こる欠陥の一因となる。したがって、突然変異体ｐ５３−発現細胞を殺す能力は、臨床的に高い意義ある能力である。
【０１３２】
同じ細胞系（２９Ｍ４．１）から由来する２種のＢリンパ腫クローンのシステムを用いた。これらのクローン類は、野性タイプ対突然変異体ｐ５３の発現において全く異なっている。さらに特定的には、２９Ｍ４．１細胞を９６ウェルプレートにおいて２．５ｘ１０４／ウェルで接種し、そしてＭＪＤＢを幾つかの濃度で１日間加えた。生存可能である細胞を表す光学濃度をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６水性非放射性細胞増殖アッセイ（ウィスコンシン州マディソンのＰｒｏｍｅｇａ）により測定した。細胞毒性を対照非処理培養物のパーセンテージとして計算した（平均±ＳＤ．ｎ＝３）。ＭＪＤＢは、野性タイプ又は突然変異体ｐ５３を発現するいずれのＢリンパ腫細胞に対しても等しく細胞毒性であることを示し、医薬耐性腫瘍に対するＭＪＤＢの有力な臨床的使用を示唆している。図３参照。
【０１３３】
例  ４
ＭＪＤＢは癌細胞におけるＡＴＰ水準を低下させる
癌細胞におけるＡＴＰ水準上へのＭＪＤＢの効果を評価するために、ＡＴＰ測定アッセイを使用した。さらに特定的には、９６−ウェル不透明壁プレートにおいて（１ｘ１０４／ウェルで）Ｍｏｌｔ−４細胞を接種し、そして３ｍＭでＭＪ又は１ｍＭでＭＪＤＢを、３７℃で１０分、３０分又は６０分間加えた。培地でインキュベートされた非処理細胞を対照として使用した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−ＧｌｏＴＭ冷光細胞生存能力アッセイ（細胞が細胞中のＡＴＰ濃度に等価である冷光シグナルを生成するアッセイ）によりＡＴＰ水準を測定した。ＡＴＰ減少を対照非処理培養物の％として計算される（平均±ＳＤ．ｎ＝３）。
【０１３４】
図４において見ることができるように、ＭＪＤＢは、ジャスモン酸メチルにより誘導されるＡＴＰ減少よりも、いっそう大きな程度までにＭｏｌｔ−４白血病細胞における迅速且つ強いＡＴＰ減少を誘導した。ＭＪＤＢは、ジャスモン酸メチルよりも３倍も低い濃度で投与されたことを認識することが重要である。したがって、（ジャスモン酸メチルと比較しての）ＭＪＤＢの優れた細胞毒性効果と、細胞質ＡＴＰ水準を減少させるその能力との間に、相互関係が存在する。
【０１３５】
例  ５
ＭＪＴＢは４種の異なるヒト悪性細胞系に対して細胞毒性である
Ｍｏｌｔ−４（白血病；２．５ｘ１０４／ｍｌで）、Ｄ１２２（肺癌；５ｘ  １０３／ｍｌで）、Ｂ１６（黒色腫；２ｘ１０３／ｍｌで）及びＢ１６ＭＤＲ（多重薬耐性を示す黒色腫；２ｘ１０３／ｍｌで）の細胞を、異なる濃度でのＭＪＴＢの存在下に、９６ウェルプレートにおいて１日間インキュベートした。生存可能細胞を表す光学濃度を、上に記載したように、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６水性非放射性細胞増殖アッセイ（ウィスコンシン州マディソンのＰｒｏｍｅｇａ）により測定した。対照非処理培養物の％として細胞毒性を計算した（平均±ＳＥ．ｎ＝３）。これらの細胞系に対するＭＪＴＢのＩＣ５０水準を下記表に示す：
【０１３６】
【表１】
2007514663.tif 000007
【０１３７】
これらの表及び図５から分かるように、ＭＪＴＢは白血病細胞ならびに種々の固形性（中実性：ｓｏｌｉｄ）腫瘍から由来する癌細胞の両方に対して有効であった。また、ＭＪＴＢは、多重薬耐性を示す細胞を殺すことができ、このことは、首尾の良い化学療法に対して医薬耐性が主要な邪魔となる臨床状態においてＭＪＴＢを潜在的に有用なものにする。
【０１３８】
例  ６
ＭＪとＭＪＴＢとの比較
上記テトラブロモ異性体の１：１の混合物を用いて生物学的アッセイを行なった。より特定的には（２．５ｘ１０４／ｍｌでの）Ｍｏｌｔ−４白血病細胞を、ＭＪ又はＭＪＴＢのいずれかの異なる濃度の存在下に、９６ウェルプレート中で１日間インキュベートした。生存可能である細胞を表す光学濃度を、上記したようにＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６水性非放射性細胞増殖アッセイ（ウィスコンシン州、マディソンのＰｒｏｍｅｇａ）により測定した。細胞毒性を対照非処理培養物の％として計算した（平均±ＳＥ．ｎ＝３）。ＭＪＴＢ及びＭＪのＩＣ５０水準を下記表に示す：
【０１３９】
【表２】
2007514663.tif 000008
【０１４０】
この表及び図５において見ることができるように、ＭＪＴＢはＭＪ（今までの最も有力なジャスモネート誘導体）のＩＣ５０よりも約６０倍も小さいＩＣ５０（５０％細胞毒性を示す濃度）を有する。したがってＭＪＴＢはその単位の１０倍（ｏｒｄｅｒ  ｏｆ  ｍａｇｎｉｔｕｄｅ）より大きい範囲でＭＪよりいっそう有効である。
【０１４１】
例  ７
ＭＪＴＢは癌細胞に対して選択性である
（２．５ｘ１０４／ｍｌで）Ｍｏｌｔ−４（白血病）細胞及び正常な末梢血リンパ球（ＰＢＬ、２ｘ１０５／ｍｌ）を、異なる濃度のＭＪＴＢの存在下に１日間９６−ウェルプレートにインキュベートした。ＰＢＬは、細胞周期に入るのを誘発するために、４８時間０．８μｇ／ｍｌの植物性血球凝集素（フィトヘマグルチニン）＋５ｎｇ／ｍｌのＴＰＡを用いて予備インキュベートされていた。これらの細胞は増殖し、そしてそれ故、癌細胞に関する増殖に類似していて、いっそう正当に比較させる。生存可能である細胞を表す光学濃度を、上記したようにＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６水性非放射性細胞増殖アッセイ（ウィスコンシン州、マディソンのＰｒｏｍｅｇａ）により測定した。ＩＣ５０水準を下記表に示す：
【０１４２】
【表３】
2007514663.tif 000009
【０１４３】
この表及び図７において見ることができるように、正常なリンパ球に実質的に影響を及ぼすことなしに、白血病細胞を殺すことをＭＪＴＢに可能にさせる満足でき且つ安心できる治療濃度域が存在する。事実、正常な末梢の血液リンパ球についてのＩＣ５０は、その単位の１０倍の範囲（ａｎ  ｏｒｄｅｒ  ｏｆ  ｍａｇｎｉｔｕｄｅ）より多くだけ白血病細胞に対するＩＣ５０よりも大きい。ＰＢＬのＩＣ５０は図７には表れないいっそう高いＭＪＴＢ濃度を用いて測定したことが留意されるべきである。
【０１４４】
例  ８
本発明の他の化合物の細胞毒性
（１．５ｘ１０４／ｍｌでの）Ｍｏｌｔ−４白血病細胞で、異なる濃度のＭＪのハロゲン化誘導体の存在下に１日間インキュベートした。特定的に、これらの誘導体はＭＪＳ７２ｆ５（Ｒ６及びＲ７の１つがヨードであり、そして他がメトキシである）、ＭＪＳ９９（Ｒ６及びＲ７の各々がフルオロである）及びＮＪ−６３（Ｒ６及びＲ７の１つがブロモであり、そして他がヒドロキシである）であった。生存可能である細胞を表す光学濃度を、上記したようにＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６水性非放射性細胞増殖アッセイ（ウィスコンシン州、マディソンのＰｒｏｍｅｇａ）により測定した。図８において示されるように、これらの誘導体のすべてはＭＪよりも大きい細胞毒性を示した。他の誘導体ＭＪＳ８１ｆ３はまた、細胞毒性活性を有した。
【０１４５】
本明細書において引用された参考文献のすべてを、それらの全体において本明細書に組み入れる。本明細書において上記の詳細な記載は、本発明の或る好ましい態様を例示するためにだけ意図される。それらは、特許請求の範囲に示されたような本発明の範囲が限定されることがけっして意図されるものではない。
【図面の簡単な説明】
【０１４６】
【図１】ａ）ヒトＣＬＬリンパ球（“患者１”、“患者２”及び“患者３”と標識した）；及びｂ）健康な供与者からのリンパ球（“正常”と標識した）に対するＭＪＤＢの細胞毒性活性を示す。
【図２】４種のヒト悪性細胞系、即ち、リンパ芽球白血病（Ｍｏｌｔ−４）、肺癌（３ＬＬ）、黒色腫（Ｂ１６）及び結腸癌（ＨＣＴ１１６）に対してＭＪＤＢ及びジャスモン酸メチル（ＭＪ）により作用された毒性の水準の比較を示す。
【図３】野性型又は突然変異体ｐ５３のいずれかを発現する細胞に対するＭＪＤＢの細胞毒性活性を示す。
【図４】Ｍｏｌｔ−４白血病細胞におけるＡＴＰ水準上へのＭＪＤＢ及びＭＪの効果の比較を示す。
【図５】異なる細胞系、即ちＭｏｌｔ−４（白血病）、Ｄ１２２（肺癌）、Ｂ１６（黒色腫）及びＢ１６ＭＤＲ（多重薬耐性を示す黒色腫）に対するＭＪＴＢの細胞毒性活性を示す。
【図６】ＭＪＴＢ及びＭＪの細胞毒性活性を比較する。細胞毒性は対照非処理培養物の％として計算される（平均±ＳＥ．ｎ＝３）。＊＊＊はＭＪ及びＭＪＴＢの効果を比較するＰ＜０．００１を示す。
【図７】白血病細胞に対する正常なリンパ球上へのＭＪＴＢの作用を比較する。正常なリンパ球に対する白血病細胞上へのＭＪＴＢの効果を比較する＊はＰ＜０．０５を示し、＊＊はＰ＜０．０１を示し、＊＊＊はＰ＜０．００１を示す。細胞毒性は、対照非処理培養物の％として計算された（平均±ＳＥ．ｎ＝３）。
【図８】白血病細胞に対する本発明の他のＭＪ誘導体の細胞毒性を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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