(57)【要約】  本発明は、限外濾過によって、少なくとも１種の抗ＥＧＦＲ抗体ならびに／あるいはその変異体および／またはフラグメントの１つ、特にＥＧＦ受容体に対するモノクローナル抗体、特に好ましくはＭａｂ  Ｃ２２５（セツキシマブ）およびＭａｂ  ｈ４２５（ＥＭＤ  ７２０００）を含む高濃縮液体製剤を調製する方法に関する。本発明はさらに、高濃縮液体製剤が１０〜２５０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは５０〜１８０ｍｇ／ｍｌ、特に好ましくは１００〜１５０ｍｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ抗体含量を有することを特徴とする抗ＥＧＦＲ抗体、特にＥＧＦ受容体に対するモノクローナル抗体、特に好ましくはＭａｂ  Ｃ２２５（セツキシマブ）およびＭａｂ  ｈ４２５（ＥＭＤ  ７２０００）ならびに／あるいはその変異体および／またはフラグメントの高濃縮液体製剤、ならびにその使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
限外濾過によって、少なくとも１種の抗ＥＧＦＲ抗体ならびに／あるいはその変異体および／またはフラグメントの１つを含む高濃縮液体製剤を調製する方法。
【請求項２】
得られる高濃縮液体製剤が、１０〜２５０ｍｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ抗体含量を有することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
得られる高濃縮液体製剤が、５０〜１８０ｍｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ抗体含量を有することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４】
得られる高濃縮液体製剤が、１００〜１５０ｍｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ抗体含量を有することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項５】
抗ＥＧＦＲ抗体が、モノクローナルであり、かつマウスまたはヒト由来であることを特徴とする請求項１から４の一項または複数項に記載の方法。
【請求項６】
抗ＥＧＦＲ抗体が、マウス由来であり、かつキメラであるか若しくはヒト化されていることを特徴とする請求項１から５の一項または複数項に記載の方法。
【請求項７】
抗ＥＧＦＲ抗体が、Ｍａｂ  Ｃ２２５（セツキシマブ）またはＭａｂ  ｈ４２５（ＥＭＤ  ７２０００）であることを特徴とする請求項１から６の一項または複数項に記載の方法。
【請求項８】
少なくとも１種の抗ＥＧＦＲ抗体ならびに／あるいはその変異体および／またはフラグメントの１つを含む高濃縮液体製剤。
【請求項９】
高濃縮液体製剤が、１０〜２５０ｍｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ抗体含量を有することを特徴とする請求項８に記載の高濃縮液体製剤。
【請求項１０】
高濃縮液体製剤が、５０〜１８０ｍｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ抗体含量を有することを特徴とする請求項８に記載の高濃縮液体製剤。
【請求項１１】
高濃縮液体製剤が、１００〜１５０ｍｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ抗体含量を有することを特徴とする請求項８に記載の高濃縮液体製剤。
【請求項１２】
抗ＥＧＦＲ抗体が、モノクローナルであり、かつマウスもしくはヒト由来であることを特徴とする請求項８から１１の一項または複数項に記載の高濃縮液体製剤。
【請求項１３】
抗ＥＧＦＲ抗体が、マウス由来であり、かつキメラであるか若しくはヒト化されていることを特徴とする請求項８から１２の一項または複数項に記載の高濃縮液体製剤。
【請求項１４】
抗ＥＧＦＲ抗体が、Ｍａｂ  Ｃ２２５（セツキシマブ）またはＭａｂ  ｈ４２５（ＥＭＤ  ７２０００）であることを特徴とする請求項８から１３の一項または複数項に記載の高濃縮液体製剤。
【請求項１５】
請求項１から７の一項または複数項に記載の方法によって得ることのできる少なくとも１種の抗ＥＧＦＲ抗体ならびに／あるいはその変異体および／またはフラグメントの１つを含む高濃縮液体製剤。
【請求項１６】
貯蔵安定性薬剤としての請求項８から１５の一項または複数項に記載の高濃縮液体製剤。
【請求項１７】
場合によって賦形剤および／またはアジュバントおよび／またはさらなる薬剤活性成分を含むことを特徴とする請求項８から１６の一項または複数項に記載の高濃縮液体製剤。
【請求項１８】
薬剤を調製するための請求項８から１７の一項または複数項に記載の高濃縮液体製剤の使用。
【請求項１９】
腫瘍および／または腫瘍転移を治療および／または予防する薬剤を調製するための請求項８から１７の一項または複数項に記載の高濃縮液体製剤の使用。
【請求項２０】
腫瘍が、脳腫瘍、尿生殖路の腫瘍、リンパ系の腫瘍、胃腫瘍、喉頭腫瘍、単球性白血病、肺腺癌、小細胞肺癌、膵臓癌、膠芽細胞腫、および乳癌からなる群から選択される請求項１９に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、限外濾過によって、少なくとも１種の抗ＥＧＦＲ抗体ならびに／あるいはその変異体および／またはフラグメントの１つ、特にＥＧＦ受容体に対するモノクローナル抗体、特に好ましくはＭａｂ  Ｃ２２５（セツキシマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ））およびＭａｂ  ｈ４２５（ＥＭＤ  ７２０００）を含む高濃縮液体製剤を調製する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
本発明は、限外濾過によって、少なくとも１種の抗ＥＧＦＲ抗体ならびに／あるいはその変異体および／またはフラグメントの１つ、特にＥＧＦ受容体に対するモノクローナル抗体、特に好ましくはＭａｂ  Ｃ２２５（セツキシマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ））およびＭａｂ  ｈ４２５（ＥＭＤ  ７２０００）を含む高濃縮液体製剤を調製する方法に関する。本発明はさらに、高濃縮液体製剤が１０〜２５０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは５０〜１８０ｍｇ／ｍｌ、特に好ましくは１００〜１５０ｍｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ抗体含量を有することを特徴とする抗ＥＧＦＲ抗体、特にＥＧＦ受容体に対するモノクローナル抗体、特に好ましくはＭａｂ  Ｃ２２５（セツキシマブ）およびＭａｂ  ｈ４２５（ＥＭＤ  ７２０００）ならびに／あるいはその変異体および／またはフラグメントの高濃縮液体製剤、ならびにその使用に関する。
【０００３】
バイオテクノロジー分野の進歩は、この１０年の間に、組換えＤＮＡ技法によって薬剤として応用するための一連のタンパク質を調製することを可能にした。モノクローナル抗体などのタンパク質薬剤は、たとえば腫瘍治療において、たとえば特異的免疫療法または腫瘍ワクチンに用いられている。治療用タンパク質は、通常の有機および無機活性成分より大きく複雑であり、タンパク質の生物活性をもたらすか、あるいは望ましくない作用を引き起こし得る複雑な三次元構造および多数の官能基を有する。調製、貯蔵、および輸送中、タンパク質薬剤は、タンパク質活性成分に対する安定性低下作用を有し得る多数の外的影響力に暴露される。したがって、たとえばある種の安定化アジュバントを添加することによって、タンパク質を安定化させることができるように、特定の分解反応の原因および機序を正確に研究する必要がある（たとえば、Ｍａｎｎｉｎｇ  Ｍ．Ｃ．、Ｐａｔｅｌ  Ｋ．，＆  Ｂｏｒｃｈａｒｄｔ  Ｒ．Ｔ．（１９８９）Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．６、９０３〜９１８を参照のこと）。
【０００４】
この文献は、治療用タンパク質の多数の製剤を開示している。しかしながら、タンパク質活性成分の薬剤製剤の組成の要件は非常に異なる可能性があり、一般に、異なるタンパク質の特定の物理化学的特性および分解反応によって、すでに確立されているタンパク質製剤を新規なタンパク質活性成分に適用することはできない。したがって、これらの新規な活性成分の適切な薬剤製剤は依然として大きな課題である。
【０００５】
限外濾過は、組換えタンパク質の精製における後処理工程の標準的な方法として今日まで文献に記載されているが（Ｔａｙｌｏｒ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｃｉｓ（２０００）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、Ｌｏｎｄｏｎ、１〜２１２頁；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ  Ａ．（１９８９）Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｒｙｓｔａｌｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｒｏｂｅｒｔ  Ｅ．Ｋｒｉｅｇｅｒ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｉｎｃ．、１〜５１頁）、有利に高い濃度は後処理工程において達成されていない。さらに、その後の精製およびクロマトグラフィー段階のため、得られた工程溶液の希釈が再び起こり得る。
【０００６】
米国特許第６，２５２，０５５号は、限外濾過による高濃縮抗体製剤の調製を記載しているが、この方法で調製された抗体製剤は、調製直後であっても、≧４％という高い割合の可溶性凝集物を有する。さらに、得られる抗体製剤は、天然の構造および安定性に関して特徴が明らかにされておらず、これはたとえば抗体製剤の免疫原性および有効性に関して非常に重要であるとみなされなければならない。
【０００７】
タンパク質製剤の免疫原性の増大、および有効性の低減、ならびにバイオアベイラビリティの低減に及ぼす凝集物の悪影響は、すでに文献から知られている（Ｓ．Ａ．Ｍａｒｓｈａｌｌ、Ｇ．Ａ．Ｌａｚａｒ、Ａ．Ｊ．Ｃｈｉｒｉｎｏ、およびＪ．Ｒ．Ｄｅｓｊａｒｌａｉｓ、Ｒａｔｉｏｎａｌ  ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ、Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ  ８（５）：２１２〜２２１、２００３；Ｓｃｈｅｌｌｅｋｅｎｓ  Ｈ．、Ｂｉｏｅｑｕｉｖａｌｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  １（６）：４５７〜４６２、２００２）。
【０００８】
上述の理由により、充分に長い期間安定である液体高濃縮抗体製剤の調製は、当業者にとって極めて困難であることが示されているのは明らかである。さらに、低濃度範囲においても、タンパク質、特に抗体の非常に顕著な凝集傾向が充分に知られているため、高濃縮液体製剤の調製は当業者にとって魅力のないものであった（Ｓ．Ａ．Ｍａｒｓｈａｌｌ、Ｇ．Ａ．Ｌａｚａｒ、Ａ．Ｊ．Ｃｈｉｒｉｎｏ、およびＪ．Ｒ．Ｄｅｓｊａｒｌａｉｓ、Ｒａｔｉｏｎａｌ  ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ、Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ  ８（５）：２１２〜２２１、２００３）。このように、タンパク質の凝集は、もっとも一般的な物理的不安定反応として文献に記載されている（Ｗ．Ｗａｎｇ、Ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ，ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ，ａｎｄ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｉｑｕｉｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．１８５（２）：１２９〜１８８、１９９９）。
【０００９】
Ｍａｂ  Ｃ２２５（セツキシマブ）またはＭａｂ  ｈ４２５（ＥＭＤ  ７２０００）を含む製剤はＷＯ０３０５３４６５およびＷＯ０３００７９８８に開示されているが、しかしながらＷＯ０３０５３４６５に開示されている製剤は、比較的低いタンパク質濃度を有し、室温において長期的には安定でない。ＷＯ０３００７９８８に開示されている製剤も、同様に比較的低いタンパク質濃度を有し、この調剤（凍結乾燥物）は使用前に再構成しなければならない。
【００１０】
タンパク質製剤を安定化するための凍結乾燥方法は、たとえばＷＯ９３００８０７またはＷＯ９８２２１３６に開示されているが、凍結乾燥調剤の重大な欠点は、使用者が使用前に凍結乾燥物を再構成しなければならないことにあり、これは使用前の調剤における少なからぬ誤りの原因となる。液体製剤に比べてさらなる調製工程が加わるため、この方法は、方法開発の追加的な作業（凍結乾燥中の安定性を確保）、調製（調製コストおよび期間）、ならびにたとえば検証に関して好ましくない。
【００１１】
現在まで知られている低濃度タンパク質製剤の場合、静脈内投与には高量の注入が必要とされる。したがって、本発明の目的は、投与する量を低減することにより、皮下投与も考慮できるような、本発明にかかる抗体の濃度であった。皮下投与する製剤は、量が１．０〜１．５ｍｌを超えてはならず、さらに正常体水分性（ｅｕｈｙｄｒｉｃ）（ｐＨ７．２またはｐＨ４．０〜９．０）および等張（約２９０ｍＯｓｍ）でなければならない。皮下製剤のさらなる利点は、患者による自己投与の可能性にある。しかしながら、タンパク質の安定性は濃縮中に損なわれるべきではなく、すなわち分解および凝集生成物の増加は仕様の範囲内で許容されるべきである。さらに、そのような製剤は、毒物学的に許容されない物質を含むべきではなく、または生理的に許容される濃度でのみその物質を含むべきである。
【００１２】
困難が予期されることにより、すでに確立されているタンパク質製剤は一般に新規なタンパク質活性成分に適用できないため、本発明の目的は、それらの有効性が調製、貯蔵、輸送、および投与中に保持されるように、高温、大気湿度、および／または剪断力などのストレス条件に対して増大した安定性を有し、それらの製剤は毒物学的に許容されないアジュバントを含まない、治療用タンパク質、特にＥＧＦ受容体に対するモノクローナル抗体、たとえばＭａｂ  Ｃ２２５（セツキシマブ）およびＭａｂ  ｈ４２５（ＥＭＤ  ７２０００）のための新規な安定高濃縮液体製剤を見出すことであった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
発明の概要
驚いたことに、液体製剤において１０〜２５０ｍｇ／ｍｌ、特に好ましくは５０〜１８０ｍｇ／ｍｌ、特に好ましくは１００〜１５０ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度を容易にする高濃縮薬剤抗ＥＧＦＲ抗体調剤は、限外濾過法を用いて得ることができる。
【００１４】
限外濾過法によって得られた製剤は、好ましくは長期間にわたって安定であるか、あるいは必要であれば、適切な安定化アジュバントと混合するか、またはその後の凍結乾燥によって安定化することができる。
【００１５】
本発明にかかる製剤は、生理的に充分に忍容性であり、容易に調製することができ、正確に分配することができ、貯蔵期間を通じて、機械的ストレス下、たとえば複数の凍結および解凍工程で安定である。
【００１６】
驚いたことに、本発明にかかる方法によって調製された高濃縮抗ＥＧＦＲ抗体製剤は、＞９９％の割合のモノマーを含むことが見出された。１０〜２５０ｍｇ／ｍｌ、特に好ましくは５０〜１８０ｍｇ／ｍｌ、特に好ましくは１００〜１５０ｍｇ／ｍｌの濃度を有する、本発明によって得られる高濃縮液体製剤は、物理的および化学的に安定であり、すなわち付随する可溶性凝集物の増加によってモノマー含量の変化を生じず、これは有効性および免疫原性副作用に関して非常に重要であるとみなされる（Ｓｃｈｅｌｌｅｋｅｎｓ  Ｈ．（２００２）Ｂｉｏｅｑｕｉｖａｌｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．、ｖ．１、４５７〜４６２頁）。用いられる限外濾過法も、タンパク質の一次構造に変化をもたらすことはない。さらに、低濃度のタンパク質製剤と比べて、機械的安定性および熱安定性に関して明らかな欠点はない。特に、特徴的な凝集生成物も、本発明にかかる高濃縮液体抗体製剤の規定された仕様の範囲内である。
【００１７】
希釈タンパク質製剤に比べて、高濃縮タンパク質製剤において不安定となる傾向がはるかに高いため、これは予想外のことであった（Ｆｉｅｌｄｓ，Ｇ．、Ａｌｏｎｓｏ，Ｄ．、Ｓｔｉｇｅｒ，Ｄ．、Ｄｉｌｌ，Ｋ．（１９９２）「Ｔｈｅｏｒｙ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｎｄ  ｃｏｐｏｌｙｍｅｒｓ」Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．９６、３９７４〜３９８１）。高タンパク質濃度において、タンパク質分子の「パッキング密度」が増大する。それに応じて衝突数の増加が想定され、時折タンパク質会合が起こる可能性がある。この工程は一般に、核形成および成長機序によって起こり、ここで臨界核は多くの場合可溶性付着タンパク質であるが、これらは速やかに不溶性タンパク質沈殿物（変性タンパク質）に変換することが可能である（Ｒｅｉｔｈｅｌ，Ｊ．Ｆ．（１９６２）「Ｔｈｅ  ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ」Ａｄｖ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｈｅｍ．１８、１２３）。β−ラクトグロブリンに関してすでに示されているように、タンパク質凝集物の大きさは、タンパク質濃度の上昇に伴って増大する（Ｒｏｅｆｓ，Ｓ．Ｐ．Ｆ．Ｍ．、Ｄｅ  Ｋｒｕｉｆ，Ｋ．Ｇ．（１９９４）「Ａ  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｅｎａｔｕｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  β＋−ｌａｃｔｏｇｌｏｂｕｌｉｎ」Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２６、８８３〜８８９）。
【００１８】
以下に記載する本発明にかかる抗ＥＧＦＲ抗体製剤は、驚いたことに、高タンパク質濃度、高い安定性、低い凝集傾向、低粘性、高純度、薬剤として許容されない剤を含まず、安全性が高いこと、充分に忍容性であるという事実、および直接使用の可能性から選択される１つまたは複数の利点によって際立っている。
【００１９】
以下に記載する本発明にかかる調製方法は、驚いたことに、簡易性、時間およびコストの節約、薬剤として許容される剤の使用、高収率から選択される１つまたは複数の利点によって際立っている。したがって、驚いたことに、上述の利点を有する安定な高濃縮液体抗ＥＧＦＲ抗体製剤を限外濾過によって得ることができるため、本発明にかかる方法は、好ましくは文献に記載されている技法に比べて、著しく簡単に行うことができ、時間を節約することができ、コスト効率がよい。
【００２０】
したがって、本発明は、限外濾過によって、少なくとも１種の抗ＥＧＦＲ抗体ならびに／あるいはその変異体および／またはフラグメントの１つを含む高濃縮液体製剤を調製する方法に関する。本発明にかかる方法は、特に、得られる高濃縮液体製剤が、１０〜２５０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは５０〜１８０ｍｇ／ｍｌ、特に好ましくは１００〜１５０ｍｇ／ｍｌの少なくとも１種の抗ＥＧＦＲ抗体の含量を有することを特徴とする。
【００２１】
本発明にかかる方法はさらに、抗ＥＧＦＲ抗体がモノクローナルであり、かつマウスもしくはヒト由来であり、好ましくはマウス由来であり、かつキメラであるか若しくはヒト化されていることを特徴とする。特に好ましくは、抗ＥＧＦＲ抗体Ｍａｂ  Ｃ２２５（セツキシマブ）またはＭａｂ  ｈ４２５（ＥＭＤ  ７２０００）ならびに／あるいはその変異体および／またはフラグメントである。
【００２２】
本発明にかかる限外濾過法は、攪拌限外濾過および平行流濾過（ｔａｎｇｅｎｔｉａｌ  ｆｌｏｗ  ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）（ＴＦＦ）などの限外濾過法である。
【００２３】
本発明にかかる抗体の限外濾過は、好ましくは、適切な緩衝系で行われ、すなわち、たとえば洗浄剤による安定化など、反応溶液の安定化は必要でない。非経口で用いるための調剤における洗浄剤の使用は、少なからぬ毒性および免疫原性の可能性をもたらし（Ｓｗｅｅｔａｎａ  Ｓ．＆  Ａｋｅｒｓ  Ｍ．Ｊ．（１９９６）Ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ  ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  ｐｒａｃｔｉｃｅｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｄｒｕｇ  ｄｏｓａｇｅ  ｆｏｒｍ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、ＰＤＡ  Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．５０、３３０〜３４２）、タンパク質の二次構造にも変化をもたらし得るため（Ｖｅｒｍｅｅｒ  Ａ．Ｗ．Ｐ．＆  Ｎｏｒｄｅ  Ｗ．（２０００）Ｔｈｅ  ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  ｌｏｗ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｗｅｉｇｈｔ  ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｔｈｅｒｍａｌ  ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ＩｇＧ、Ｃｏｌｌｏｉｄｓ  ａｎｄ  Ｓｕｒｆａｃｅｓ  Ａ：Ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ａｓｐｅｃｔｓ  １６１、１３９〜１５０）、一般に回避されるか、または最小限度に抑えられるべきである。さらに、洗浄剤の起こり得るミセル形成のために、生成物において不都合でありかつ制御できない洗浄剤の濃縮が生じ得るため、洗浄剤含有製剤を限外濾過する方法の実施は困難であることがわかる。
【００２４】
本発明にかかる抗ＥＧＦＲ抗体に関して、および本発明の目的において、「生物活性」、「ネイティブ（ｎａｔｉｖｅ）」、および「有効」という用語は、本発明にかかる抗ＥＧＦＲ抗体が、本発明にかかる製剤に変換された後でも、生物作用、特にＥＧＦＲへの結合、リガンドであって特にＥＧＦのＥＧＦＲへの結合の阻害や、ＥＧＦＲが媒介するシグナル伝達の調整であって特に阻害、およびＥＧＦＲが媒介する疾患の予防または治療作用を発揮できることを意味する。
【００２５】
抗ＥＧＦＲ抗体：本発明にかかる抗ＥＧＦＲ抗体は、好ましくはモノクローナルであり、かつマウスもしくはヒト由来であり、特に好ましくはマウス由来であり、かつキメラであるか若しくはヒト化されていることである。上皮増殖因子の受容体（ＥＧＦＲ）に対する抗体は、特に好ましくは、Ｍａｂ  Ｃ２２５（セツキシマブ）もしくはＭａｂ  ｈ４２５（ＥＭＤ  ７２０００）および／またはその変異体もしくはフラグメントである。ＥＧＦＲに対するさらなる抗体は、たとえば欧州特許第０５８６００２号、およびＪ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．１９９３、８５：２７〜３３に記載されている（Ｍａｂ  ５２８）。
【００２６】
Ｍａｂ  Ｃ２２５（セツキシマブ、Ｅｒｂｉｔｕｘ（商標））：Ｍａｂ  Ｃ２２５（セツキシマブ）は、ＥＧＦ受容体に結合する臨床的に証明された抗体である。Ｍａｂ  Ｃ２２５（セツキシマブ）は、その可変領域がマウス由来であり、定常領域がヒト由来であるキメラ抗体である。これはＮａｒａｍｕｒａ等、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  １９９３、３７：３４３〜３４９、およびＷＯ９６／４０２１０Ａ１に初めて記載された。
【００２７】
Ｍａｂ  ｈ４２５（ＥＭＤ  ７２０００）：Ｍａｂ  ｈ４２５（ＥＭＤ  ７２０００）は、マウス抗ＥＧＦＲ抗体４２５（Ｍａｂ  ４２５）から得られたヒト化モノクローナル抗体（Ｍａｂ）である（欧州特許第０５３１４７２号）。マウスモノクローナル抗体Ｍａｂ  ４２５は、そこで上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外エピトープに結合するため、ヒト癌細胞系Ａ４３１において開発された。マウスモノクローナル抗体Ｍａｂ  ４２５は、ＥＧＦの結合を阻害することが見出されている（Ｍｕｒｔｈｙ等、１９８７）。ＥＧＦＲの発現の増加が種々の供給源由来の悪性組織で見出されており、したがってＭａｂ  ４２５は、ヒト腫瘍の診断および治療処置の可能性のある活性成分である。このように、Ｍａｂ  ４２５は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて腫瘍細胞毒性を媒介し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて類表皮癌および結腸直腸癌の細胞系の腫瘍増殖を抑制することが見出されている（Ｒｏｄｅｃｋ等、１９８７）。さらに、Ｍａｂ  ４２５は、マウスにおいてヒト悪性神経膠腫の異種移植片に結合することが示されている（Ｔａｋａｈａｓｈｉ等、１９８７）。そのヒト化およびキメラ形態は、たとえば欧州特許第０５３１４７２号、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ等、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  １９９１、４：７７３〜７８３；Ｂｉｅｒ等、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００１、４７：５１９〜５２４；Ｂｉｅｒ等、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．１９９８、４６：１６７〜１７３に開示されている。Ｍａｂ  ｈ４２５（ＥＭＤ  ７２０００）は、臨床第Ｉ／ＩＩ相にあり、その定常領域がκおよびヒトγ１−鎖を含むヒト化抗体（ｈ４２５）である（欧州特許第０５３１４７２号）。
【００２８】
ヒト抗ＥＧＦＲ抗体は、ＷＯ９１１０７４１、ＷＯ９４０２６０２、ＷＯ９６３３７３５に記載されているように、ゼノマウス（ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ）技法によって調製することができる。この技法によって調製された臨床試験中の抗体には、たとえばＡＢＸ−ＥＧＦもある（Ａｂｇｅｎｉｘ、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｏｎｃｏｌ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２００１、３８：１７〜２３；Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９９９、５９：１２３６〜４３）。
【００２９】
抗体：抗体または免疫グロブリンは、本発明の目的では、もっとも広い意味で用いられ、特にポリクローナル抗体および多特異性抗体（たとえば二重特異性抗体）、特に好ましくは生物活性のある無傷モノクローナル抗体（Ｍａｂ）、ならびにそれらの変異体およびフラグメントに関する。この用語はまた、２種以上の抗体またはそれらの断片からなり、および／あるいは異なる結合特異性を有し、互いに結合している異種抗体も包含する。定常領域のアミノ酸配列に応じて、抗体を種々の抗体（免疫グロブリン）クラス、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭに割り当てることができる。これらのいくつかは、さらにサブクラス（アイソタイプ）、たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２に再分類することができる。抗体は通常、約１５０ｋＤａの分子量を有し、２つの同一の軽鎖（Ｌ）および２つの同一の重鎖（Ｈ）からなる。モノクローナル抗体は、均一細胞の集団から得られる。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一のエピトープに対するが、ポリクローナル抗体は、種々のエピトープに対する種々の抗体を包含する。モノクローナル抗体を調製する方法には、たとえばＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（Ｎａｔｕｒｅ  ２５６、４９５（１９７５））、ならびにＢｕｒｄｏｎ等編（１９８５）「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｔｈｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｏｄｅｎｔ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ」Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌｕｍｅ  １３、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍに記載されているハイブリドーマ法が含まれる。モノクローナル抗体は、特に、既知の組換えＤＮＡ技法によって調製することができる（たとえば米国特許第４８１６５６７号を参照のこと）。モノクローナル抗体は、たとえばＣｌａｃｋｓｏｎ等（Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４〜６２８（１９９１））およびＭａｒｋｓ等（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８、１〜５９７（１９９１））に記載の技法を用いて、ファージ抗体ライブラリーから単離することもできる。
【００３０】
変異体およびフラグメント：抗体の変異体（ムテイン）は、構造的に関連するタンパク質であって、たとえば一次配列（アミノ酸配列）の改変、糖鎖工学的処理（グリコシル化部位または構造の変異体、ならびに脱グリコシル化タンパク質）、ペグ化、改変宿主細胞での調製、または他の技法によって得ることのできるものである。本発明にかかる変異体は、上述の例に限定されるものではなく、当業者に知られている本発明にかかる抗体のすべての変異体を含む。
【００３１】
抗体のフラグメント（部分セグメント）は、たとえばパパイン、ペプシン、およびプラスミンを用いる限定された酵素の消化によって、または遺伝子工学による部分セグメントの調製によって得られる抗体の分解産物である。典型的な部分セグメントは、たとえば２価Ｆ（ａｂ’）2フラグメント、１価Ｆａｂフラグメント、およびＦｃフラグメントである（Ｌｏｔｔｓｐｅｉｃｈ  Ｆ．、Ｈ．Ｚｏｒｂａｓ（編）、Ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｋ（生物分析）、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、Ｂｅｒｌｉｎ：Ｓｐｅｋｔｒｕｍ  Ａｋａｄｅｍｉｓｃｈｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ  ＧｍｂＨ、（１９９８）１０３５頁）。本発明にかかるフラグメントは上述の例に限定されるものではなく、当業者に知られている本発明にかかる抗体のすべてのフラグメントを含む。
【００３２】
医薬調剤：医薬製剤（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）と医薬調剤（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）という用語は、本発明では同義に用いられる。
【００３３】
本明細書では、「薬学的に忍容性がある」は、吐気、めまい、消化不良などの望ましくない生理的副作用なしに、それから得られる医薬調剤の哺乳動物への投与を容易にする薬剤、賦形剤、アジュバント、安定剤、溶媒、および他の物質に関する。
【００３４】
非経口投与用の医薬調剤では、製剤（低毒性）、用いられるアジュバントおよび一次包装の安全性、等張性、正常体水分性、および忍容性が要求される。驚いたことに、この調剤には生理的に許容される剤が用いられるため、本発明にかかる高濃縮液体抗ＥＧＦＲ抗体製剤は、好ましくは直接使用が可能であるという利点を有する。好ましくは高純度のネイティブかつ薬剤として許容されるタンパク質の高収率を同時に有する、本発明にかかる高濃縮液体抗ＥＧＦＲ抗体製剤の調製は、したがって好ましくは簡便であり、時間が節約でき、安価である。
【００３５】
限外濾過は、溶解および懸濁材料を分離するための圧力駆動半透膜法である。この分離原理は、分子の大きさおよび寸法に基づいており、すなわち膜孔より小さい物質は濾液に入り（透過物）、膜孔より大きい物質は未透過物に残る（濃縮物）。分離を行うために必要な力は、たとえば遠心力、ガス圧源（たとえば窒素）、または膜ポンプによって加えることができる。
【００３６】
本発明にかかる高濃縮液体抗ＥＧＦＲ抗体製剤は、限外濾過法を用いて、本発明にかかる抗ＥＧＦＲ抗体含有溶液を濃縮することによって、好ましくは調製することができる。この目的を達するために、その調製において得られるように、定義された濃度の本発明にかかる抗ＥＧＦＲ抗体を有する溶液を（たとえばＣ２２５の場合、０．０１から１５０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは２から１００ｍｇ／ｍｌ、特に好ましくは約２０ｍｇ／ｍｌ、ＥＭＤ  ７２０００の場合、０．０１から１５０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは５から１００ｍｇ／ｍｌ、特に好ましくは約２０ｍｇ／ｍｌ）、有利には限外濾過装置に導入し、定義された制御圧力条件下で濃縮工程に供する。抗体が固体形態、たとえば凍結乾燥物である場合、本発明にかかる高濃縮液体製剤は、まず本発明にかかる抗ＥＧＦＲ抗体を、１種または複数の他の成分を含む水溶液または水に溶解し、その後、その溶液を限外濾過法に供することによって調製することができる。
【００３７】
限外濾過法によって得られた生成物は、続いて以下に挙げるアジュバントを添加することによって安定化することができる。それぞれの抗体を含む得られた溶液は、ｐＨ４から１０、好ましくはｐＨ５から９に調整し、滅菌濾過し、必要であれば、それに続く安定化のための凍結乾燥段階によって固体形態に場合により変換する。種々のアジュバントまたは本発明にかかる抗体の一連の添加は、調製方法から実質的に独立しており、当業者の裁量による。
【００３８】
抗ＥＧＦＲ抗体は、好ましくは本発明にかかる高濃縮液体製剤に生物活性形態で存在し、抗体の変性は、好ましくは本発明にかかる方法の間には起こらない。したがって、タンパク質の生物学的有効性は、好ましくは保持される。
【００３９】
たとえば、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）または再生セルロースを、本発明にかかる方法において限外濾過膜として用いることができ、理論上考えられるカットオフ（ｃｕｔ−ｏｆｆ）値は、５から５００ｋＤａ、好ましくは１０から１００ｋＤａ、特に好ましくは３０から５０ｋＤａの範囲内である。
【００４０】
Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ遠心分離管（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に用いる遠心力は、１〜２０，０００*ｇの範囲、好ましくは１０００〜１２，０００*ｇの範囲、特に好ましくは２０００*ｇである。Ａｍｉｃｏｎ攪拌セル（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に用いるガス圧は、０．１〜５ｐｓｉの範囲、好ましくは４ｐｓｉである。Ｌａｂｓｃａｌｅ  ＴＦＦ装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に用いる入圧は、０．１〜８５ｐｓｉの範囲、好ましくは１０〜３０ｐｓｉの範囲、特に好ましくは２０ｐｓｉである。Ｌａｂｓｃａｌｅ  ＴＦＦ装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に用いる出圧は、０．１〜８５ｐｓｉの範囲、好ましくは５〜２０ｐｓｉの範囲、特に好ましくは１０ｐｓｉである。
【００４１】
たとえば、以下の緩衝液を本発明にかかる方法に用いることができる。リン酸塩緩衝液：リン酸Ｎａ（またはＫ）、可能なｐＨ約６．０〜８．２、クエン酸塩緩衝液：クエン酸Ｎａまたはクエン酸、可能なｐＨ約２．２〜６．５、コハク酸塩緩衝液：ｐＨ４．８〜６．３、酢酸塩緩衝液：たとえば酢酸ナトリウム、ｐＨ約２．５〜６．０、ヒスチジン緩衝液：ｐＨ約６．０〜７．８、グルタミン酸：ｐＨ８．０〜１０．２、グリシン（Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン）：ｐＨ約８．６〜１０．６、グリシン酸塩緩衝液：ｐＨ約６．５〜７．５、イミダゾール：ｐＨ６．２〜７．８、塩化カリウム：ｐＨ約１．０〜２．２、乳酸塩緩衝液：ｐＨ約３．０〜６．０、マレイン酸塩緩衝液：ｐＨ約２．５〜５．０、酒石酸塩緩衝液：ｐＨ約３．０〜５．０、Ｔｒｉｓ：ｐＨ約６．８〜７．７、リン酸塩−クエン酸塩緩衝液。等張にするための等張剤の添加も考えられる（たとえば、ＮａＣｌ（またはＫＣｌ）または他の塩）。
【００４２】
上述の緩衝液は、本発明にかかる方法において、たとえば以下の濃度で用いることができる。１ｍＭから２００ｍＭ、好ましくは２〜２０ｍＭ、特に好ましくは約１０ｍＭ。
【００４３】
好ましくは、以下のｐＨ範囲を用いることができる。ｐＨ４〜１０、好ましくはｐＨ＝ＩＥＰ±２ｐＨ単位（タンパク質等電点の２ｐＨ単位前後）。
【００４４】
好ましくは、以下の等張剤を用いることができる（通常の濃度）。塩化ナトリウム５ｍＭ〜３０５ｍＭ、塩化カリウム、グルコース、グリセロール、デキストロース４〜５．５ｍＭ、硫酸ナトリウム１〜１．６ｍＭ。
【００４５】
粘度を低減するために、好ましくは以下の物質を用いることができる。塩化ナトリウム、塩酸アルギニン、チオシアン酸ナトリウム、チオシアン酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、塩化カルシウム、塩化亜鉛、酢酸ナトリウム。
【００４６】
好ましくは以下の安定剤を用いることができる。
１）アミノ酸
（塩酸塩として、約１〜１００ｍｇ／ｍｌ、特に好ましくは３〜１０ｍｇ／ｍｌ）アルギニン、オルニチン、リジン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、イソロイシン、ロイシン、アラニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、メチオニン、セリン、プロリン
２）糖および糖アルコール
（約１〜２００ｍｇ／ｍｌ、特に好ましくは３０〜６５ｍｇ／ｍｌ）スクロース、ラクトース、グルコース、マンノース、マルトース、ガラクトース、フルクトース、ソルボース、ラフィノース、トレハロース、グルコサミン、Ｎ−メチルグルコサミン、ガラクトサミン、ノイラミン酸
３）抗酸化剤
アセトン重亜硫酸ナトリウム０．２％、アスコルビン酸０．０１％、アスコルビン酸エステル０．０１５％、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）０．０２％、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）０．０２％、システイン０．５％、ノルジヒドログアヤレチック酸（ＮＤＧＡ）０．０１％、モノチオグリセロール０．５％、重亜硫酸ナトリウム０．１５％、メタ重亜硫酸ナトリウム０．２％、トコフェロール０．５％、グルタチオン０．１％
４）保存剤
ｍ−クレゾール約０．１〜０．３％、クロロクレゾール約０．１〜０．３％、フェノール約０．５％、ベンジルアルコール約１．０〜２．０％、メチルパラベン約０．２％、プロピルパラベン約０．０２％、ブチルパラベン約０．０１５％、クロロブタノール約０．２５〜０．５％、硝酸フェニル水銀  約０．００２％、酢酸フェニル水銀約０．００２％、チメロサール約０．０１〜０．０２％、塩化ベンザルコニウム約０．０１％、塩化ベンゼトニウム約０．０１％
５）シクロデキストリン
たとえば、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエチル−β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン
６）アルブミン
ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）
７）多価アルコール
グリセロール、エタノール、マンニトール
８）塩
酢酸塩（たとえば、酢酸ナトリウム）、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、トロメタミン、ＥＤＴＡ（たとえば、ＮａＥＤＴＡ）
本発明はまた、当業者に知られており、当業者が考えられる、上述した剤のすべての水和物、塩、および誘導体を包含する。
【００４７】
本発明はさらに、少なくとも１種の抗ＥＧＦＲ抗体ならびに／あるいはその変異体および／またはフラグメントの１つを含む高濃縮液体製剤に関する。これらの高濃縮液体抗ＥＧＦＲ抗体製剤は、上述の限外濾過法によって調製することができる。さらに考えられる濃縮法は、クロマトグラフ法、たとえばサイズ排除クロマトグラフィー（たとえば、ゲル濾過）、アフィニティクロマトグラフィー（たとえば、プロテインＡクロマトグラフィー）またはイオン交換クロマトグラフィーなどであり、膜分離法、たとえば透析、電気透析、精密濾過、逆浸透、電気泳動法などであり、あるいは乾燥法、たとえば窒素ガス乾燥、真空炉乾燥、凍結乾燥、有機溶媒での洗浄とそれに続く風乾、液床乾燥、流動床乾燥、噴霧乾燥、回転乾燥、層乾燥、室温での風乾とそれに続く少量の溶媒での再構成などである。
【００４８】
本発明にかかる高濃縮液体抗ＥＧＦＲ抗体製剤は、特にそれらが、少なくとも１種の抗ＥＧＦＲについて１０〜２５０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは５０〜１８０ｍｇ／ｍｌ、特に好ましくは１００〜１５０ｍｇ／ｍｌの含量を有することを特徴とする。
【００４９】
本発明にかかる高濃縮液体製剤は、特に抗ＥＧＦＲ抗体がモノクローナルであり、かつマウスもしくはヒト由来であり、好ましくはマウス由来であり、かつキメラであるか若しくはヒト化されていることを特徴とする。抗ＥＧＦＲ抗体は、特に好ましくは、Ｍａｂ  Ｃ２２５（セツキシマブ）またはＭａｂ  ｈ４２５（ＥＭＤ  ７２０００）ならびに／あるいはその変異体および／またはフラグメントである。
【００５０】
本発明はさらに、本発明にかかる方法、すなわち上述の限外濾過法によって得られる、少なくとも１種の抗ＥＧＦＲ抗体ならびに／あるいはその変異体および／またはフラグメントの１つを含む高濃縮液体製剤に関する。
【００５１】
本発明はさらに、貯蔵安定性薬剤としての本発明にかかる高濃縮液体抗ＥＧＦＲ抗体製剤に関する。
【００５２】
本発明にかかる高濃縮液体抗ＥＧＦＲ抗体製剤は、本発明にかかる抗体に加えて、場合によって賦形剤および／またはアジュバントおよび／またはさらなる薬剤活性成分を含んでもよい。
【００５３】
本発明にかかる方法によって、好ましくは、本発明にかかる抗体の不利で望ましくない凝集を起こすことなく高濃縮製剤を調製することができる。したがって、高い活性成分含量を有するそのまま投与できる（ｒｅａｄｙ−ｔｏ−ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒ）溶液を、本発明にかかる方法を用いて調製することができる。タンパク質活性成分の非常に高濃縮の製剤は近年ますます必要とされている。治療に用いられるほとんどの抗体は、ｍｇ／ｋｇ範囲の用量で投与される。高用量かつ少量の投与は（たとえば皮下投与の場合、約１から１．５ｍｌ）、１００ｍｇ／ｍｌを超える濃度を有する高濃縮タンパク質調剤の必要性を示している。さらに、高濃縮タンパク質製剤は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ（動物モデル）において受容性および有効性を調べる前臨床試験、ヒトにおいて受容性および有効性を調べる臨床試験、ならびに製品の臨床使用（特に皮下投与の場合）で相当の利点を有する可能性がある。それらの利点は、特に少量の調剤が用いられることにある。したがって、比較的低濃度のタンパク質製剤の注入または注射とは対照的に、たとえばタンパク質製剤の皮下投与が患者にとって可能となる。タンパク質製剤の皮下投与は様々な根拠を有し得る。たとえば、特異的ターゲッティングは「治療域（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｗｉｎｄｏｗ）」に関連して望ましい可能性がある。さらに、皮下投与は、患者が医療従事者に依存する必要なく患者自身で投与を行えるという利点を有する。インスリンの例は、これらの利点を明らかに示している。しかしながら、皮下投与の注射は最大１〜１．５ｍｌであり得るから、１００ｍｇ／ｍｌ超を含む高濃縮タンパク質製剤がしばしば必要とされる。
【００５４】
驚いたことに、１０〜２５０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは５０〜１８０ｍｇ／ｍｌ、特に好ましくは１００〜１５０ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度において上述の欠点を持たない高濃縮液体抗ＥＧＦＲ抗体製剤を、本発明にかかる方法を用いて得ることができる。
【００５５】
既知の高濃縮免疫グロブリン製剤の場合における限界は、そのまま使用できる（ｒｅａｄｙ−ｔｏ−ｕｓｅ）液体抗体製剤（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））の場合、通常２〜５０ｍｇ／ｍｌである。
【００５６】
しかしながら、本発明にかかる方法を用いることによって、著しく高濃縮でありながら安定である製剤を調製することができ、これは予期されないことであった。したがって、本発明の方法によって、既知の高濃縮液体抗体製剤に比べて低減された粘度および凝集傾向を有し、それにより非経口投与の場合の取扱いが簡易化される、安定な高濃縮抗体製剤を得ることができる。
【００５７】
本発明にかかる製剤は、有利には、ｐＨ４から１０を有し、好ましくはｐＨ５から９、重量オスモル濃度２５０から３５０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇを有する抗体含有溶液を調製するために用いることができる。したがって、本発明にかかる製剤は、実質的に痛みなしに、静脈内、動脈内、および皮下にも直接投与することができる。さらに、この調剤は、比較的大量の活性成分も投与できるように、さらなる有効成分を含むこともでき、たとえばグルコース溶液、等張食塩溶液、またはリンガー溶液などの注入溶液に添加することもできる。
【００５８】
本発明にかかる製剤は、生理的に充分に忍容性であり、容易に調製することができ、正確に分配することができ、好ましくは貯蔵および輸送期間を通じて、ならびに複数の凍結および解凍工程の間、含量、分解生成物、および凝集物に関して安定である。本発明にかかる製剤は、好ましくは、冷蔵庫温度（２〜８℃）および室温（２３〜２７℃）、相対大気湿度（ＲＨ）６０％において、長期間にわたって安定して貯蔵することができる。本発明にかかる製剤はまた、好ましくは、高い温度および大気湿度においても比較的安定である。
「有効量」という用語は、組織、系、動物、またはヒトにおいて、たとえば研究者または医師から求められるまたは望まれる生物学的または医学的応答を引き起こす薬剤または薬剤活性成分の量を意味する。
【００５９】
さらに、「治療上有効量」という用語は、この量を与えられていない相当する対象と比較して、以下の結果を有する量を意味する。疾患、症候群、疾患状態、状態、障害についての治療、治癒、予防または除去の改善、あるいは副作用の予防、あるいは疾患、状態または障害における進行の低減である。「治療上有効量」という用語はまた、正常な生理機能を増大するのに有効な量も包含する。
【００６０】
薬剤は、投与単位当たり所定量の活性成分を含む投与単位の形態で投与することができる。このような単位は、治療される疾患状態、投与方法、患者の年齢、体重、および健康状態に応じて、たとえば０．５ｍｇから１ｇ、好ましくは１ｍｇから８００ｍｇの本発明にかかる活性成分を含むことができる。好ましい投与単位製剤は、上述のとおり、活性成分の日用量または部分用量、あるいはその相当する画分を含むものである。さらに、この種の薬剤は、薬剤分野で一般に知られている方法を用いて調製することができる。
【００６１】
薬剤は、任意の所望の適切な経路、たとえば経口（口腔または舌下を含む）、直腸、肺、鼻、局所（口腔、舌下、または経皮を含む）、膣内、あるいは非経口（皮下、筋内、静脈内、または皮内を含む）経路によって投与するために適応させることができる。この種の製剤は、薬剤分野で知られているあらゆる方法を用いて、たとえば活性成分を賦形剤またはアジュバントと組み合わせることによって調製することができる。
【００６２】
非経口投与は、好ましくは、本発明にかかる薬剤の投与に適している。非経口投与の場合、静脈内、皮下、または皮内投与が特に好ましい。静脈内投与の場合、注射は直接行うことができ、あるいは注入溶液に添加することもできる。
【００６３】
皮下または皮内投与用の本発明にかかる薬剤は、本発明にかかる高濃縮液体製剤を用いて、皮下投与に必要とされる少量の投与を達成することができるため特に適している。
【００６４】
皮下投与は、患者が専門家による医療援助なしに患者自身で薬剤を投与できる利点を有する。本発明にかかる抗ＥＧＦＲ抗体製剤は、活性成分を徐放、持続放出、および／または制御放出する、非経口で投与される薬剤の調製、たとえば遅延放出製剤の調製にも適しており、これらの製剤は比較的長い時間間隔で投与すればよいため、患者にとって好都合である。本発明にかかる薬剤調剤は、腫瘍に直接注射することもでき、したがって意図したとおりに直接作用部位において作用を生じることができる。
【００６５】
非経口投与用に適応された薬剤には、それによって製剤が治療される受容者の血液と等張となる溶質、抗酸化剤、緩衝剤、および静菌剤を含む水性または非水性滅菌注射液、ならびに懸濁媒質および増粘剤を含むことのできる水性または非水性滅菌懸濁液が含まれる。これらの製剤は、単回用量または多回用量容器、たとえば密封アンプルおよびバイアルで供給することができ、使用直前に滅菌担体液体、たとえば注射用水の添加のみが必要であるように、凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｉｅｄ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｓｅｄ））状態で保存することができる。この製法に従って調製される注射溶液および懸濁液は、滅菌粉末、顆粒、および錠剤から調製することができる。
【００６６】
本発明にかかる抗ＥＧＦＲ抗体製剤は、たとえば小さい単層小胞、大きい単層小胞、および多層小胞などのリポソーム送達系の形態で投与することもできる。リポソームは、種々のリン脂質、たとえばコレステロール、ステアリルアミン、またはホスファチジルコリンなどから形成することができる。
【００６７】
局所投与用に適応された薬剤は、軟膏剤、クリーム、懸濁剤、ローション剤、液剤、ペースト、ゲル、スプレー、エアロゾル、または油として製剤化された本発明にかかる製剤に導入することができる。
【００６８】
眼または他の外部組織、たとえば口および皮膚の治療の場合、製剤は、好ましくは局所軟膏剤またはクリームに導入し、適用される。軟膏を提供する製剤の場合、本発明にかかる製剤は、パラフィン系または水混和性クリームベースに導入することができる。あるいは、本発明にかかる製剤は、水中油型クリームベースまたは油中水型ベースを用いてクリームを提供するように製剤化することができる。
【００６９】
眼への局所投与に適応された薬剤には、点眼液が含まれる。
【００７０】
直腸投与用に適応された薬剤は、坐剤または浣腸の形態で送達することができる。
【００７１】
吸引による投与に適応された薬剤には、微細粒状ダストまたはミストが含まれ、これらは、エアロゾルを生じさせ、噴霧器、または注入器を備えた様々な型の加圧式ディスペンサによって発生させることができる。
【００７２】
膣内投与用に適応された薬剤は、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、オペースト、泡、またはスプレー製剤として送達することができる。
【００７３】
特に上に述べた成分に加えて、本発明にかかる薬剤は、その特定の種類の薬剤製剤に関して当分野で通例である他の剤も含むことができるのは言うまでもない。
【００７４】
本発明はさらに、
（ａ）有効量の抗ＥＧＦＲ抗体、好ましくはモノクローナル抗ＥＧＦＲ抗体、特に好ましくはＭａｂ  Ｃ２２５（セツキシマブ）もしくはＭａｂ  ｈ４２５（ＥＭＤ  ７２０００）および／またはその変異体もしくはその変異体またはフラグメントを含む本発明にかかる製剤と、
（ｂ）有効量のさらなる薬剤活性成分を含む製剤と、
の別個のパックからなるセット（キット）に関する。
【００７５】
このセットは、適切な容器、たとえば箱またはカートン、個別ボトル、袋、あるいはアンプルなどを含む。このセットは、たとえば、それぞれ溶解または凍結乾燥形態である有効量の本発明にかかる抗ＥＧＦＲ抗体を含む本発明にかかる製剤、およびさらなる薬剤活性成分の製剤を含有する別個のアンプルを含んでもよい。
【００７６】
本発明にかかる抗ＥＧＦＲ抗体の治療上有効量は、たとえば患者の年齢および体重、治療を要する正確な疾患状態、およびその重症度、製剤の性質、ならびに投与方法を含むいくつかの要因によって決まり、最終的には治療を行う医師または獣医師によって決定される。しかしながら、腫瘍性増殖、たとえば腸癌または乳癌を治療するための、本発明にかかる抗ＥＦＧＲ抗体の有効量は、一般に１日当たり、受容者（哺乳動物）の体重１ｋｇ当たり、０．１から１００ｍｇの範囲、特に典型的には１日当たり、体重１ｋｇ当たり、１から１０ｍｇの範囲である。したがって、体重７０ｋｇである成体哺乳動物の１日当たりの実際量は、通常７０から７００ｍｇであり、この量を、総日用量が同一となるように、１日当たりの単回用量として、または通常１日当たり一連（たとえば、２、３、４、５、または６回など）の部分用量で投与することができる。適切な抗体力価は、当業者に知られている方法によって決定される。投与のために提案される用量は、一般に所望の腫瘍阻害作用を達成するのに充分な量である。しかしながら、用量はまた、望ましくない交差反応、アナフィラキシー反応などの副作用が起こらないように、できるだけ低量に選択されるべきである。
【００７７】
本発明にかかる薬剤は、特に、疾患および疾患状態を予防および／または治療するために用いることができる。
【００７８】
したがって、本発明はさらに、腫瘍および／または腫瘍転移を治療および／または予防する薬剤を調製するための、本発明にかかる高濃縮液体抗ＥＧＦＲ抗体製剤の使用に関し、腫瘍は、脳腫瘍、尿生殖路の腫瘍、リンパ系の腫瘍、胃腫瘍、喉頭腫瘍、単球性白血病、肺腺癌、小細胞肺癌、膵臓癌、膠芽細胞腫、および乳癌からなる群から選択される。
【００７９】
抗体によるＥＧＦＲの遮断は、たとえば癌細胞の増殖を阻害する、腫瘍媒介血管新生を低減する、癌細胞アポトーシスを誘発する、放射線療法および従来の化学療法の毒性作用を増大することによって、様々なレベルで腫瘍に対抗することが種々のｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの研究で示されている。
【００８０】
本発明にかかる製剤を含む薬剤は、有効にＥＧＦＲを調節（ｒｅｇｕｌａｔｅ）、調整（ｍｏｄｕｌａｔｅ）、または阻害することができ、したがって調節されていないまたは障害のあるＥＧＦＲ活性に関連する疾患を予防および／または治療するために用いることができる。したがって、特に本発明にかかる抗ＥＧＦＲ抗体製剤は、ある種の形態の癌、および糖尿病性網膜症または炎症などの病的血管新生に起因する疾患の治療に用いることができる。
【００８１】
したがって、本発明はさらに、ＥＧＦＲならびに／あるいはＥＧＦＲ媒介シグナル伝達によって発生、媒介および／または伝播される疾患を治療ならびに／あるいは予防する薬剤を調製するための、本発明にかかる製剤の使用に関する。
【００８２】
本発明にかかる薬剤は、例えば癌腫（たとえば、肺癌、膵臓癌、甲状腺癌、膀胱癌、または結腸癌）、骨髄疾患（たとえば、骨髄性白血病）、または腺腫（たとえば、絨毛状結腸腺腫）などの固形癌を含む癌、病的血管新生、ならびに転移性細胞遊走の治療および／もしくは予防に適している。これらの薬剤はさらに、補体活性化依存性慢性炎症（Ｎｉｃｕｌｅｓｃｕ等（２００２）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．、２４：１９１〜１９９）、およびＨＩＶ−１（ヒト免疫不全ウイルス１型）誘発性免疫不全（Ｐｏｐｉｋ等（１９９８）Ｊ  Ｖｉｒｏｌ、７２：６４０６〜６４１３）の治療に有用である。
【００８３】
さらに、本発明の薬剤は、ＥＧＦＲ誘発性疾患の治療における、哺乳動物、特にヒトに対する薬剤活性成分として適している。「ＥＧＦＲ誘発性疾患」という用語は、ＥＧＦＲ活性に依存する病的状態を指す。ＥＧＦＲは、増殖、接着、遊走、および分化を含む種々の細胞活動のシグナル伝達経路に直接または間接的に関与する。ＥＧＦＲ活性に関連する疾患には、腫瘍細胞の増殖、固形腫瘍の増殖を促進する病的新生血管形成、眼の新生血管形成（糖尿病性網膜症、加齢性黄斑変性など）、および炎症（乾癬、関節リウマチなど）が含まれる。
【００８４】
本明細書に論じた疾患は、通常２つのグループ、過剰増殖性疾患および非過剰増殖性疾患に分類される。これに関して、乾癬、関節炎、炎症、子宮内膜症、瘢痕、良性前立腺肥大、免疫疾患、自己免疫疾患、および免疫不全疾患は、非癌性疾患とみなされ、その中で関節炎、炎症、免疫疾患、自己免疫疾患、および免疫不全疾患は、通常、非過剰増殖性疾患とみなされる。
【００８５】
これに関して、脳腫瘍、肺癌、扁平上皮癌、膀胱癌、胃癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、結腸直腸癌、乳癌、頭部癌、頸部癌、食道癌、婦人科癌、甲状腺癌、リンパ腫、慢性白血病、および急性白血病は、癌性疾患とみなされ、そのすべてが、通常、過剰増殖性疾患のグループであるとみなされる。特に、癌細胞増殖、特にＥＧＦＲに直接または間接的に媒介される癌細胞増殖は、本発明の標的となる疾患である。
【００８６】
本発明にかかる薬剤は、異種移植腫瘍モデルにおいて、ｉｎ  ｖｉｖｏで抗増殖作用を有することを示すことができる。本発明にかかる薬剤は、たとえば腫瘍増殖の阻害、リンパ増殖性疾患に伴う炎症の低減、移植拒絶または組織修復による神経損傷の抑制などのために、過剰増殖性疾患を有する患者に投与される。本発明の薬剤は、予防または治療目的に有用である。本明細書では、「治療」という用語は、疾患の予防および既存状態の治療の両方を指すために用いられる。増殖の予防は、たとえば腫瘍の増殖の予防、転移増殖の予防、心臓血管手術に伴う再狭窄の低減などのために、顕性疾患の発症に先立って本発明にかかる薬剤を投与することによって達成される。あるいは、薬剤は、患者の臨床症状を安定または改善することによって慢性疾患を治療するために用いられる。
【００８７】
宿主または患者は、任意の哺乳動物種、たとえば霊長類種、特にヒト、ならびにマウス、ラット、およびハムスターを含む齧歯動物、ウサギ、ウマ、ウシ、イヌ、ネコなどに属することができる。動物モデルは、実験的研究に重要であり、ヒトの疾患治療のモデルを提供する。
【００８８】
本発明の薬剤による治療に対するある細胞の感受性は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験によって判定することができる。典型的には、細胞の培養を、活性成分が細胞死を誘発する、または遊走を抑制するのに充分な期間、通常は約１時間から１週間、様々な濃度の本発明にかかる薬剤と共にインキュベートする。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験は、生検試料由来の培養細胞を用いて行うことができる。次いで、処置後に残存する生存細胞を計数する。
【００８９】
用量は、用いられる特定の薬剤、特定の疾患、患者の状態などに応じて異なる。典型的に、治療用量は、患者の生存性を維持しながら、標的組織において望ましくない細胞集団を大幅に減少させるのに充分な量である。治療は、一般的に、大幅な低減が生じるまで、たとえば特定の細胞のカウントが少なくとも約５０％低減するまで継続され、望ましくない細胞が体内で基本的に検出されなくなるまで継続することができる。
【００９０】
ＥＧＦＲ阻害剤を同定するために、種々のアッセイ系が利用可能である。シンチレーション近接アッセイ（Ｓｏｒｇ等、Ｊ．ｏｆ．Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ、２００２、７、１１〜１９）、およびフラッシュプレートアッセイでは、γＡＴＰを用いて基質としてのタンパク質またはペプチドの放射性リン酸化を測定する。阻害化合物の存在下では、検出される放射性シグナルが低減するか、まったく検出されない。さらに、ホモジニアス時間分解蛍光共鳴エネルギー転移（ＨＴＲ−ＦＲＥＴ）、および蛍光偏光（ＦＰ）技法は、アッセイ法として有用である（Ｓｉｌｌｓ等、Ｊ．ｏｆ  Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ、２００２、１９１〜２１４）。
【００９１】
他の非放射性ＥＬＩＳＡアッセイ法では、特異的リン酸化抗体（リン酸化ＡＢ）を用いる。このリン酸化ＡＢは、リン酸化基質にのみ結合する。この結合は、二次ペルオキシダーゼ複合抗ヒツジ抗体を用いて、化学発光によって検出することができる（Ｒｏｓｓ等、２００２、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．、まもなく発行、原稿ＢＪ２００２０７８６）。
【００９２】
細胞増殖および細胞死（アポトーシス）の脱制御に関連する多くの疾患および疾患状態がある。本発明にかかる薬剤で治療、予防、または緩和することのできる疾患および疾患状態には、以下に挙げる疾患および疾患状態が含まれるが、これに限定されるものではない。本発明にかかる薬剤は、平滑筋細胞および／または炎症細胞の脈管内膜層への増殖および／または遊走が関与し、その結果、たとえば新生内膜閉塞病変の場合など、脈管の血流が制限されるいくつかの異なる疾患および疾患状態の治療および／または予防に有用である。対象となる閉塞性移植血管疾患には、アテローム性動脈硬化症、移植後の冠血管疾患、静脈移植血管狭窄、吻合部周囲プロテーゼ再狭窄、血管形成またはステント留置術後の再狭窄などが含まれる。
【００９３】
本発明は、癌を治療または予防するための、本発明にかかる薬剤の使用を包含する。したがって本発明は、特に好ましくは、腫瘍および／または腫瘍転移を治療および／または予防する薬剤を調製するための、本発明にかかる液体抗ＥＧＦＲ抗体製剤の使用に関し、腫瘍は、特に好ましくは脳腫瘍、尿生殖路の腫瘍、リンパ系の腫瘍、胃腫瘍、喉頭腫瘍、単球性白血病、肺腺癌、小細胞肺癌、膵臓癌、膠芽細胞腫、および乳癌からなる群から選択されるが、これに限定されるものではない。
【００９４】
本発明はさらに、扁平上皮癌、膀胱癌、胃癌、肝臓癌、腎臓癌、結腸直腸癌、乳癌、頭部癌、頸部癌、食道癌、婦人科癌、甲状腺癌、リンパ腫、慢性白血病、および急性白血病からなる癌性疾患のグループから選択された疾患を治療する薬剤を調製するための、本発明にかかる薬剤の使用に関する。
【００９５】
本発明にかかる薬剤は、癌を治療するために患者に投与することができる。本発明の薬剤は、腫瘍の血管新生を抑制し、したがって腫瘍の増殖に影響を及ぼす（Ｊ．Ｒａｋ等、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｈ、５５：４５７５〜４５８０、１９９５）。本発明にかかる薬剤の血管新生阻害特性は、網膜新生血管形成に関連するある種の形態の失明の治療にも適している。
【００９６】
したがって、本発明はさらに、血管新生によって発生、媒介および／または伝播される疾患を治療および／または予防する薬剤を調製するための、本発明にかかる抗ＥＧＦＲ抗体製剤の使用に関する。
【００９７】
血管新生が関与するこの種の疾患は、眼疾患、たとえば網膜血管形成、糖尿病性網膜症、加齢性黄斑変性などである。
【００９８】
したがって、本発明はまた、網膜血管形成、糖尿病性網膜症、加齢性黄斑変性および／または炎症性疾患からなる群から選択された疾患を治療および／または予防する薬剤を調製するための、本発明にかかる抗ＥＧＦＲ抗体製剤の使用に関する。
【００９９】
本発明はさらに、乾癬、関節リウマチ、接触皮膚炎、遅延型過敏反応、炎症、子宮内膜症、瘢痕、良性前立腺肥大、免疫疾患、自己免疫疾患、および免疫不全疾患からなる群から選択された疾患を治療および／または予防するための、本発明にかかる抗ＥＧＦＲ抗体製剤の使用に関する。
【０１００】
本発明はまた、骨肉腫、変形性関節症、およびくる病からなる群から選択された骨の病変を治療および／または予防するための、本発明にかかる抗ＥＧＦＲ抗体製剤の使用に関する。
【０１０１】
本発明にかかる薬剤はさらに、ある種の既存の癌化学療法および放射線療法において相加作用または相乗的効果を提供するために用いることができ、かつ／またはある種の既存の癌化学療法および放射線療法の効力を回復させるために用いることができる。
【０１０２】
したがって、本発明はまた、疾患を治療および／または予防する薬剤を調製するための、本発明にかかる抗ＥＧＦＲ抗体製剤の使用であって、治療上有効量の本発明にかかる抗ＥＧＦＲ抗体が、１）エストロゲン受容体モジュレータ、２）アンドロゲン受容体モジュレータ、３）レチノイド受容体モジュレータ、４）細胞毒性剤、５）抗増殖剤、６）プレニルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、７）ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、８）ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、９）逆転写酵素阻害剤、１０）増殖因子受容体阻害剤、および１１）血管新生阻害剤のグループの化合物と組み合わせて投与される使用に関する。
【０１０３】
したがって、本発明はまた、疾患を治療および／または予防する薬剤を調製するための、本発明にかかる抗ＥＧＦＲ抗体製剤の使用であって、治療上有効量の本発明にかかる抗ＥＧＦＲ抗体が、放射線療法と、１）エストロゲン受容体モジュレータ、２）アンドロゲン受容体モジュレータ、３）レチノイド受容体モジュレータ、４）細胞毒性剤、５）抗増殖剤、６）プレニルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、７）ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、８）ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、９）逆転写酵素阻害剤、１０）増殖因子受容体阻害剤、および１１）血管新生阻害剤のグループの化合物とを組み合わせて投与される使用に関する。
【０１０４】
本発明にかかる薬剤は、したがって治療される状態に対して特に有用であるように選択される他の周知の治療剤と共に投与することもできる。したがって、たとえば骨疾患の場合、好ましい組み合わせには、アレンドロネートおよびリセドロネートなどの骨吸収抑制ビスホスホネート、αｖβ３アンタゴニストなどのインテグリン遮断薬（以下にさらに定義する）；Ｐｒｅｍｐｒｏ（登録商標）、Ｐｒｅｍａｒｉｎ（登録商標）およびＥｎｄｏｍｅｔｒｉｏｎ（登録商標）などのホルモン置換療法に用いられる結合型エストロゲン；ラロキシフェン、ドロロキシフェン、ＣＰ−３３６，１５６（Ｐｆｉｚｅｒ）およびラソフォキシフェンなどの選択的エストロゲン受容体モジュレータ（ＳＥＲＭ）、カテプシンＫ阻害剤、ならびにＡＴＰプロトンポンプ阻害剤との組み合せを含む。
【０１０５】
本発明の薬剤はまた、既知の抗癌剤との併用にも適している。これらの既知の抗癌剤には、以下のものが含まれる。エストロゲン受容体モジュレータ、アンドロゲン受容体モジュレータ、レチノイド受容体モジュレータ、細胞毒性剤、抗増殖剤、プレニルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、逆転写酵素阻害剤、増殖因子阻害剤、および血管新生阻害剤である。本化合物は、特に放射線療法と同時に投与するのに適している。
「エストロゲン受容体モジュレータ」とは、機序にかかわらず、エストロゲンの受容体への結合を妨害または阻害する化合物を指す。エストロゲン受容体モジュレータの例には、これに限定されるものではないが、タモキシフェン、ラロキシフェン、イドキシフェン、ＬＹ３５３３８１、ＬＹ１１７０８１、トレミフェン、フルベストラント、４−［７−２，２−ジメチル−１−オキソプロポキシ−４−メチル−２−［４−［２−（１−ピペリジニル）エトキシ］フェニル］−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル］−フェニル２，２−ジメチルプロパノエート、４，４’−ジヒドロキシベンゾフェノン−２，４−ジニトロフェニルヒドラゾン、およびＳＨ６４６が含まれる。
「アンドロゲン受容体モジュレータ」とは、機序にかかわらず、アンドロゲンの受容体への結合を妨害または阻害する化合物を指す。アンドロゲン受容体モジュレータの例には、フィナステリド、および他の５α−レダクターゼ阻害剤、ニルタミド、フルタミド、ビカルタミド、リアロゾール、および酢酸アビラテロンが含まれる。
「レチノイド受容体モジュレータ」とは、機序にかかわらず、レチノイドの受容体への結合を妨害または阻害する化合物を指す。そのようなレチノイド受容体モジュレータの例には、ベキサロテン、トレチノイン、１３−シス−レチノイン酸、９−シス−レチノイン酸、α−ジフルオロメチルオルニチン、ＩＬＸ２３−７５５３、トランス−Ｎ−（４’−ヒドロキシフェニル）レチンアミド、およびＮ−４−カルボキシフェニルレチンアミドが含まれる。
「細胞毒性剤」とは、主として細胞機能に対する直接作用によって細胞死を引き起こすか、あるいは細胞ミオーシス（ｍｙｏｓｉｓ）を阻害または妨害する化合物を指し、アルキル化剤、腫瘍壊死因子、インターカレータ、ミクロチューブリン阻害剤、およびトポイソメラーゼ阻害剤が含まれる。
【０１０６】
細胞毒性剤の例には、これに限定されるものではないが、チラパジミン（ｔｉｒａｐａｚｉｍｉｎｅ）、セルテネフ、カケクチン、イホスファミド、タソネルミン、ロニダミン、カルボプラチン、アルトレタミン、プレドニムスチン（ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、ジブロモダルシトール（ｄｉｂｒｏｍｏｄｕｌｃｉｔｏｌ）、ラニムスチン、フォテムスチン、ネダプラチン、オキサリプラチン、テモゾロミド、ヘプタプラチン（ｈｅｐｔａｐｌａｔｉｎ）、エストラムスチン、トシル酸インプロスルファン、トロフォスファミド、ニムスチン、塩化ジブロスピジウム、プミテパ、ロバプラチン、サトラプラチン、プロフィロマイシン（ｐｒｏｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、シスプラチン、イロフルベン、デキシフォスファミド（ｄｅｘｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、シス−アミンジクロロ（２−メチルピリジン）白金、ベンジルグアニン、グルフォスファミド（ｇｌｕｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ＧＰＸ１００、（トランス，トランス，トランス）−ビス−μ−（ヘキサン−１，６−ジアミン）−μ−［ジアミン−白金（ＩＩ）］ビス［ジアミン（クロロ）白金（ＩＩ）］テトラクロリド、ジアリジジニルスペルミン（ｄｉａｒｉｚｉｄｉｎｙｌ  ｓｐｅｒｍｉｎｅ）、三酸化ヒ素、１−（１１−ドデシルアミノ−１０−ヒドロキシウンデシル）−３，７−ジメチルキサンチン、ゾルビシン（ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ、イダルビシン、ダウノルビシン、ビスアントレン、ミトキサントロン、ピラルビシン、ピナフィド、バルルビシン、アムルビシン、アンチネオプラストン、３’−デアミノ−３’−モルホリノ−１３−デオキソ−１０−ヒドロキシカルミノマイシン、アナマイシン、ガラルビシン（ｇａｌａｒｕｂｉｃｉｎ）、エリナフィド、ＭＥＮ１０７５５、および４−デメトキシ−３−デアミノ−３−アジリジニル−４−メチルスルホニルダウノルビシンが含まれる（ＷＯ００／５００３２を参照のこと）。
【０１０７】
ミクロチューブリン阻害剤の例には、パクリタキセル、硫酸ビンデシン、３’，４’−ジデヒドロ−４’−デオキシ−８’−ノルビンカロイコブラスチン、ドセタキソール（ｄｏｃｅｔａｘｏｌ）、リゾキシン、ドラスタチン、イセチオン酸ミボブリン、アウリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）、セマドチン（ｃｅｍａｄｏｔｉｎ）、ＲＰＲ１０９８８１、ＢＭＳ１８４４７６、ビンフルニン、クリプトフィシン（ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ）、２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−Ｎ−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）ベンゼンスルホンアミド、アンヒドロビンブラスチン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｌ−バリル−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリル−Ｌ−プロリン−ｔ−ブチルアミド、ＴＤＸ２５８、およびＢＭＳ１８８７９７が含まれる。
【０１０８】
トポイソメラーゼ阻害剤のいくつかの例は、トポテカン、ヒカプタミン（ｈｙｃａｐｔａｍｉｎｅ）、イリノテカン、ルビテカン、６−エトキシプロピオニル−３’，４’−Ｏ−エキソベンジリデンシャールトルーシン（ｃｈａｒｔｒｅｕｓｉｎ）、９−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−５−ニトロピラゾロ［３，４，５−ｋｌ］アクリジン−２−（６Ｈ）プロパンアミン、１−アミノ−９−エチル−５−フルオロ−２，３−ジヒドロ−９−ヒドロキシ−４−メチル−１Ｈ，１２Ｈ−ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：ｂ，７］インドリジノ［１，２ｂ］キノリン−１０，１３（９Ｈ，１５Ｈ）ジオン、ルルトテカン（ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ）、７−［２−（Ｎ−イソプロピルアミノ）エチル］−（２０Ｓ）カンプトテシン、ＢＮＰ１３５０、ＢＮＰＩ１１００、ＢＮ８０９１５、ＢＮ８０９４２、リン酸エトポシド、テニポシド、ソブゾキサン、２’−ジメチルアミノ−２’−デオキシエトポシド、ＧＬ３３１、Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−９−ヒドロキシ−５，６−ジメチル−６Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］カルバゾール−１−カルボキサミド、アスラクリン（ａｓｕｌａｃｒｉｎｅ）、（５ａ，５ａＢ，８ａａ，９ｂ）−９−［２−［Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−Ｎ−メチルアミノ］エチル］−５−［４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシフェニル］−５，５ａ，６，８，８ａ，９−ヘキソヒドロフロ（３’，４’：６，７）ナフト（２，３−ｄ）−１，３−ジオキソール−６−オン、２，３−（メチレンジオキシ）−５−メチル−７−ヒドロキシ−８−メトキシベンゾ［ｃ］フェナンスリジニウム、６，９−ビス［（２−アミノエチル）アミノ］ベンゾ［ｇ］イソキノリン−５，１０−ジオン、５−（３−アミノプロピルアミノ）−７，１０−ジヒドロキシ−２−（２−ヒドロキシエチルアミノメチル）−６Ｈ−ピラゾロ［４，５，１−ｄｅ］アクリジン−６−オン、Ｎ−［１−［２（ジエチルアミノ）エチルアミノ］−７−メトキシ−９−オキソ−９Ｈ−チオキサンテン−４−イルメチル］ホルムアミド、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）アクリジン−４−カルボキサミド、６−［［２−（ジメチルアミノ）エチル］アミノ］−３−ヒドロキシ−７Ｈ−インデノ［２，１−ｃ］キノリン−７−オン、およびジメスナである。
「抗増殖剤」には、Ｇ３１３９、ＯＤＮ６９８、ＲＶＡＳＫＲＡＳ、ＧＥＭ２３１およびＩＮＸ３００１などのアンチセンスＲＮＡおよびＤＮＡオリゴヌクレオチド、ならびに、たとえばエノシタビン、カルモフール、テガフール、ペントスタチン、ドキシフルリジン、トリメトレキサート、フルダラビン、カペシタビン、ガロシタビン、シタラビンオクホスフェート、フォステアビン（ｆｏｓｔｅａｂｉｎｅ）ナトリウム水和物、ラルチトレキセド、パルチトレキシド（ｐａｌｔｉｔｒｅｘｉｄ）、エミテフール、チアゾフリン、デシタビン、ノラトレキセド、ペメトレキセド、ネルザラビン、２’−デオキシ−２’−メチリデンシチジン、２’−フルオロメチレン−２’−デオキシシチジン、Ｎ−［５−（２，３−ジヒドロベンゾフリル）スルホニル］−Ｎ’−（３，４−ジクロロフェニル）尿素、Ｎ６−［４−デオキシ−４−［Ｎ２−［２（Ｅ），４（Ｅ）−テトラデカジエノイル］グリシルアミノ］−Ｌ−グリセロ−Ｂ−Ｌ−マンノヘプトピラノシル］アデニン、アプリジン、エクテイナシディン（ｅｃｔｅｉｎａｓｃｉｄｉｎ）、トロキサシタビン（ｔｒｏｘａｃｉｔａｂｉｎｅ）、４−［２−アミノ−４−オキソ−４，６，７，８−テトラヒドロ−３Ｈ−ピリミジノ［５，４−ｂ］−１，４−チアジン−６−イル−（Ｓ）−エチル］−２，５−チエノイル−Ｌ−グルタミン酸、アミノプテリン、５−フルオロウラシル、アラノシン、１１−アセチル−８−（カルバモイルオキシメチル）−４−ホルミル−６−メトキシ−１４−オキサ−１、１１−ジアザテトラシクロ（７．４．１．０．０）テトラデカ−２，４，６−トリエン−９−イル酢酸エステル、スワインソニン、ロメトレキソール、デクスラゾキサン、メチオニナーゼ、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−Ｂ−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン、および３−アミノピリジン−２−カルボキシアルデヒドチオセミカルバゾンなどの代謝拮抗剤が含まれる。「抗増殖剤」にはさらに、トラスツズマブなど「血管新生阻害剤」の項に挙げたもの以外の増殖因子に対するモノクローナル抗体、および組換えウイルス媒介遺伝子転移を介して送達され得るｐ５３などの腫瘍抑制遺伝子が含まれる（たとえば、米国特許第６，０６９，１３４号を参照のこと）。本発明にかかる薬剤は、上述の疾患に関して適している、当業者に公知の他のすべての治療用抗体または薬剤活性成分と組み合わせて投与することもできる。
【０１０９】
さらに、本発明にかかる抗ＥＧＦＲ抗体製剤は、ＥＧＦＲの活性または発現の研究および単離のために用いることができる。さらに、本発明にかかる抗ＥＧＦＲ抗体製剤は特に、調節不能または障害のあるＥＧＦＲ活性に関連する疾患の診断方法において用いるのに適している。
【０１１０】
診断目的では、本発明にかかる抗体は、たとえば放射性標識することができる。好ましい標識方法は、ヨードゲン法である（Ｆｒａｋｅｒ等、１９７８）。診断目的では、抗体は、特に好ましくはＦ（ａｂ’）２フラグメントとして用いられる。それによって優れた結果が得られ、これはバックグラウンド除去が不要であることを意味する。この種のフラグメントは、既知の方法によって調製することができる（たとえば、Ｈｅｒｌｙｎ等、１９８３）。一般に、ペプシン消化は酸性ｐＨで行われ、フラグメントは、プロテインＡ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）クロマトグラフィーによって、未消化ＩｇＧおよび重鎖のフラグメントから分離される。
【０１１１】
本発明にかかる製剤の抗ＥＧＦＲ抗体は、好ましくは、実施例に記載のとおり酵素アッセイにおいて容易に判定され得る有利な生物活性を示す。この種の酵素に基づくアッセイにおいて、本発明にかかる抗体は、好ましくは、通常は適切な範囲、好ましくはマイクロモル範囲、より好ましくはナノモル範囲のＩＣ50値によって示される阻害作用を示し、そのような作用をもたらす。
【０１１２】
本発明にかかる製剤での本発明にかかる抗体のタンパク質の大きさ、構造的完全性、純度、または糖鎖付加パターンの判定には、これに限定されるものではないが、ＳＥ−ＨＰＬＣ、ペプチドマッピング（消化）、Ｎ末端配列決定、ＳＤＳ−Ｐａｇｅ、Ｔｒｉｓ／グリシン勾配ゲル（非還元）、ＦＴＩＲ（フーリエ変換赤外スペクトル）法、ＣＤ（円偏光二色性）、ＲＡＭＡＮ分光法、炭水化物染色（ＰＡＳ法）、オリゴ糖プロファイリング、単糖組成の決定、または等電点電気泳動が含まれる。
【０１１３】
本発明にかかる製剤の安定性は、たとえばこれに限定されるものではないが、安定性プログラムを援用して、たとえば２５℃および相対大気湿度６０％、ならびに４０℃および相対大気湿度７０％で長期間にわたって貯蔵し、たとえば上述の判定法（ＳＥ−ＨＰＬＣ、ＦＴ−ＩＲ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（還元または非還元））によって、一定の間隔でタンパク質の安定性または構造的保全性を求めることによって判定することができる。
【０１１４】
本発明にかかる製剤での本発明にかかる抗体の生物活性および有効性を判定する方法には、これに限定されるものではないが、たとえばＥＬＩＳＡ、生物細胞アッセイ、ＦＴＩＲ、またはＣＤが含まれる。
【０１１５】
本発明にかかる高濃縮製剤の凝集傾向の低減を判定する方法には、これに限定されるものではないが、たとえば目視検査、不可視粒子分析、比濁法または濁度測定、動的光散乱特性が含まれる。
【０１１６】
実施例１：平行流濾過（ＴＦＦ）による高濃縮液体抗ＥＧＦＲ抗体製剤の調製
３８０ｍｌのタンパク質（１７ｍｇ／ｍｌ、１０ｍＭ  リン酸塩＋１４５ｍＭ  ＮａＣｌ中、ｐＨ７．２）を、カットオフ値３０ｋＤａを有する内蔵ポリエーテルスルホン限外濾過膜を備えたＬａｂｓｃａｌｅ  ＴＦＦ装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて、入圧２０ｐｓｉおよび出圧１０ｐｓｉで２２６分間濃縮する。得られた未透過物は、約１３２ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度を有する。収率８５％。
または、
４７０ｍｌのタンパク質（１７ｍｇ／ｍｌ、１０ｍＭ  クエン酸塩中）を、カットオフ値３０ｋＤａを有する内蔵ポリエーテルスルホン限外濾過膜を備えたＬａｂｓｃａｌｅ  ＴＦＦ装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて、入圧２０ｐｓｉおよび出圧１０ｐｓｉで２２６分間濃縮する。得られた未透過物は、約１２３ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度を有する。収率９５％。
【０１１７】
実施例２：攪拌限外濾過による高濃縮液体抗ＥＧＦＲ抗体製剤の調製
２５ｍｌのタンパク質（１０ｍｇ／ｍｌ、１０ｍＭ  リン酸塩＋１４５ｍＭ  ＮａＣｌ中、ｐＨ７．２）を、カットオフ値３０ｋＤａを有する内蔵ポリエーテルスルホン限外濾過膜を備えたＡｍｉｃｏｎ攪拌セルを用いて、窒素ガス圧４ｂａｒで１４４分間濃縮する。得られた未透過物は、約９２ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度を有する。収率９５％。
または、
２５ｍｌのタンパク質（１０ｍｇ／ｍｌ、１０ｍＭ  クエン酸塩中、ｐＨ５．５）を、カットオフ値３０ｋＤａを有する内蔵ポリエーテルスルホン限外濾過膜を備えたＡｍｉｃｏｎ攪拌セルを用いて、窒素ガス圧４ｂａｒで１６８分間濃縮する。得られた未透過物は、約８２ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度を有する。収率９５％。
【０１１８】
実施例３：遠心力作用下での限外濾過による高濃縮液体抗ＥＧＦＲ抗体製剤の調製
１５ｍｌのタンパク質（２ｍｇ／ｍｌ、１０ｍＭ  リン酸塩＋１４５ｍＭ  ＮａＣｌ中、ｐＨ７．２）を、カットオフ値３０ｋＤａを有するポリエーテルスルホン限外濾過膜を備えたＵｌｔｒａｆｒｅｅ遠心分離管（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）において、９０分間２０００*ｇで遠心分離する。得られた未透過物は、約１１６ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度を有する。収率９５％。
【０１１９】
実施例４：高濃縮液体抗ＥＧＦＲ抗体製剤の可溶性凝集物の研究
実施例１から３で得られた未透過物を、ＳＥ−ＨＰＬＣを用いて、可溶性凝集物の含量に関して調べた。濃縮後のモノマーの割合は＞９９％であった。
【０１２０】
実施例５：高濃縮液体抗ＥＧＦＲ抗体製剤のネイティビティー（ｎａｔｉｖｉｔｙ）の研究
実施例１で得られた未透過物を、ＦＴ−ＩＲ分光法によって調べた。平行流濾過による濃縮前の出発原料と得られた未透過物のアミドＩ−２微分スペクトルは一致した。
【国際調査報告】
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