(57)【要約】  本発明は、被験体の症状に基づく鑑別診断、予後、および治療計画を決定するための方法および組成物に関する。特に、本発明は、ＳＩＲＳを含めるか除外するか、または敗血症、重症の敗血症、および／または敗血症ショックを互いから、および／または非感染性ＳＩＲＳから区別するための方法および組成物に関する。
2007518062.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体のＳＩＲＳの原因を区別する方法であって、
前記被験体由来の試料について検定方法を実施し、前記検定方法は、血圧制御に関連したマーカー、炎症に関連したマーカー、並びに凝固および止血に関連したマーカーからなる群から独立して選択される被験体由来の複数のマーカーの存在または量に関連した複数の検出可能な信号を提供し、そして
前記検定方法から得られた信号を前記被験体における感染の有無と相関づけ、ここで、感染があるときは前記被験体が敗血症に罹患しているか、重症の敗血症に罹患しているか敗血症ショックに罹患しているのかが特定される、
の各工程を含む方法。
【請求項２】
前記方法が、さらに、前記検定方法から得られた信号を、敗血症と重症の敗血症または敗血症ショックとの区別に相関づけることを含む請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記方法が、さらに、前記検定方法から得られた信号を、敗血症または重症の敗血症と敗血症ショックとの区別に相関づけることを含む請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記相関づける工程が、被験体由来の前記複数のマーカーの各々の濃度を測定する工程、および敗血症、重症の敗血症または敗血症ショックの有無の指標である閾値レベルに対して各マーカー濃度を個別に比較する工程を含む請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記相関づける工程が、被験体由来の前記複数のマーカーの各々の濃度を測定する工程、被験体由来の前記複数のマーカーの各々の濃度に基づいて単一パネル応答値を計算する工程、および敗血症、重症の敗血症または敗血症ショックの有無の指標である閾値レベルに対して前記指標値を比較する工程を含む請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記複数のマーカーが、血圧制御に関連した少なくとも１つのマーカーおよび炎症に関連した少なくとも１つのマーカーを含む請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記複数のマーカーが、血圧調節に関連した少なくとも１つのマーカー、および凝固および止血に関連した少なくとも１つのマーカーを含む請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記複数のマーカーが、血圧調節に関連した少なくとも１つのマーカー、炎症に関連した少なくとも１つのマーカー、および凝固と止血とに関連した少なくとも１つのマーカーを含む請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記試料がヒトに由来する請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記試料が血液、血清および血漿からなる群から選択される請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記検定方法が免疫検定方法である請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
被験体由来の前記複数のマーカーが、心房性ナトリウム利尿因子、Ｂ型心房性ナトリウム利尿ペプチドからなる群から選択される血圧調節に関連した１つ以上のマーカー、Ｂ型心房性ナトリウム利尿ペプチド、Ｃ型心房性ナトリウム利尿ペプチド、ウロテンシンＩＩ、アルギニン  バソプレシン、アルドステロン、アンギオテンシンＩ、アンギオテンシンＩＩ、アンギオテンシンＩＩＩ、ブラジキニン、カルシトニン、プロカルシトニン、カルシトニン遺伝子関連ペプチド、アドレノメジュリン、カルシホシン、エンドセリン−２、エンドセリン−３、レニン、およびウロジラチンに関連したマーカー、またはこれらに関連したマーカーを含む請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
被験体由来の前記複数のマーカーが、急性期反応物、血管細胞接着分子、細胞間接着分子−１、細胞間接着分子−２、細胞間接着分子−３、Ｃ−反応性蛋白質、ＨＭＧ−１、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８、インターロイキン−１受容体作動薬、単球走化性蛋白質−１、カスパーゼ−３、リポカリン型プロスタグランジンＤ合成酵素、マスト細胞トリプターゼ、好酸球カチオン性蛋白質、ＫＬ−６、ハプトグロビン、腫瘍壊死因子α、腫瘍壊死因子β、フィブロネクチン、マクロファージ遊走阻止因子、および血管内皮増殖因子、からなる群から選択される炎症に関連した１つ以上のマーカー、またはこれらに関連したマーカーを含む請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
被験体由来の前記複数のマーカーが、ヘプシジン、ＨＳＰ−６０、ＨＳＰ−６５、ＨＳＰ−７０、Ｓ−ＦＡＳリガンド、不斉ジメチルアルギニン、マトリックス・メタロプロテイン１１，３および９、デフェンシンＨＢＤ１、デフェンシンＨＢＤ２、血清アミロイドＡ、酸化ＬＤＬ、インスリン様増殖因子、トランスフォーミング増殖因子β、インター−α−阻害剤、ｅ−セレクチン、グルタチオン−Ｓ−転移酵素、低酸素症誘導因子−１α、誘導酸化窒素合成酵素、細胞内接着分子、乳酸塩脱水素酵素、単球遊走ペプチド−１、ｎ−アセチルアスパルテート、プロスタグランジンＥ２、核因子リガンドの受容体アクチベータ、ＴＮＦ受容体スーパーファミリー・メンバー１Ａ、およびシスタチンＣからなる群から選択される１つ以上の急性期反応物、またはそれらに関連したマーカーを含む請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
被験体由来の前記複数のマーカーが、プラスミン、フィブリノーゲン、Ｄ−ダイマー、β−トロンボグロブリン、血小板因子４、フィブリノペプチドＡ、血小板誘導増殖因子、プロトロンビン・フラグメント１＋２、プラスミン−α２−アンチプラスミン複合体、トロンビン−アンチトロンビンＩＩＩ複合体、Ｐ−セレクチン、トロンビン、フォンビレブラント因子、組織因子、および血栓前駆体蛋白質からなる群から選択される凝固および止血に関連した１つ以上のマーカー、またはそれらに関連したマーカーを含む請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
被験体由来の前記複数のマーカーが、ＣＲＰ、ＨＭＧ−１、カスパーゼ−３、クレアチンキナーゼ−ＢＢ、ＭＭＰ−９、ＩＬ−１β、ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦα、ＭＩＦ、ＭＣＰ−１、ＢＮＰ、ＣＮＰ、ｐｒｏ−ＢＮＰ、ｐｒｏ−ＣＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏ−ＢＮＰ、組織因子、フォンビレブラント因子、ｖＷＦ−Ａ１、ｖＷＦ−インテグリン結合ドメイン、およびｖＷＦ−Ａ３からなる群から選択される１つ以上のマーカー、またはそれらに関連したマーカーを含む請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
被験体由来の前記複数のマーカーが、ＣＲＰ、ＨＭＧ−１、カスパーゼ−３、クレアチンキナーゼ−ＢＢ、ＭＭＰ−９、ＩＬ−１β、ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦα、ＭＩＦ、ＭＣＰ−１、ＢＮＰ、ＣＮＰ、ｐｒｏ−ＢＮＰ、ｐｒｏ−ＣＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏ−ＢＮＰ、組織因子、フォンビレブラント因子、ｖＷＦ−Ａ１、ｖＷＦ−インテグリン結合ドメイン、およびｖＷＦ−Ａ３、またはそれらに関連したマーカーからなる群から選択される請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
被験体由来の前記複数のマーカーが、ＢＮＰまたはＢＮＰに関連したマーカーを含む請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
被験体由来の前記複数のマーカーが、ＣＲＰ、ＨＭＧ−１、ＨＳＰ−６０、ＩＬ−１ｒａ、インターロイキン、組織因子、ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１からなる群から選択される１つ以上のマーカー、またはそれらに関連したマーカーを含む請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
被験体由来の前記複数のマーカーが、ＣＲＰまたは免疫学的に検出可能なそのフラグメントを含む請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
被験体由来の前記複数のマーカーが、ＩＬ−１ｒａまたは免疫学的に検出可能なそのフラグメントを含む請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
被験体由来の前記複数のマーカーが、インターロイキンまたは免疫学的に検出可能なそのフラグメントを含む請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
被験体由来の前記複数のマーカーが、組織因子または免疫学的に検出可能なそのフラグメントを含む請求項１８に記載の方法。
【請求項２４】
被験体由来の前記複数のマーカーが、ＴＮＦ−αまたは免疫学的に検出可能なそのフラグメントを含む請求項１８に記載の方法。
【請求項２５】
被験体由来の前記複数のマーカーが、ＭＣＰ−１または免疫学的に検出可能なそのフラグメントを含む請求項１８に記載の方法。
【請求項２６】
被験体由来の前記複数のマーカーが、ＨＭＧ−１または免疫学的に検出可能なそのフラグメントを含む請求項１８に記載の方法。
【請求項２７】
被験体の敗血症を診断する方法であって、
前記被験体由来の試料について検定方法を実施し、前記検定方法は、血圧制御に関連したマーカー、炎症に関連したマーカー、並びに凝固と止血とに関連したマーカーからなる群から独立して選択される被験体由来の複数のマーカーの存在または量に関連した複数の検出可能な信号を提供し、そして
前記検定方法から得られた信号を前記被験体における敗血症の有無と相関づける、
の各工程を含む方法。
【請求項２８】
ＳＩＲＳを罹患しているか、罹患していると考えられている被験体の転帰のリスクを判定する方法であって、
前記被験体由来の試料について検定方法を実施し、前記検定方法は、血圧調節に関連した１つ以上のマーカーの存在または量に関連した複数の検出可能な信号を提供し、そして
前記検定方法から得られた信号を前記被験体における前記転帰のリスクの有無と相関づける、
の各工程を含む方法。
【請求項２９】
ＳＩＲＳを罹患しているか、罹患していると考えられている前記被験体が、敗血症と診断されるか、敗血症の罹患が疑わしいとされる請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
ＳＩＲＳを罹患しているか、罹患していると考えられている前記被験体が、重症の敗血症および敗血症ショックと診断されるか、重症の敗血症および敗血症ショックの罹患が疑わしいとされる請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
ＳＩＲＳを罹患しているか、罹患していると考えられている前記被験体が、敗血症ショックと診断されるか、敗血症ショックの罹患が疑わしいとされる請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
前記相関づける工程が、血圧調節に関連した１つ以上の前記マーカーの濃度（単数または複数）を測定する工程、および前記濃度（単数または複数）を前記転帰のリスクの指標である閾値レベルと比較する工程を含む請求項２８に記載の方法。
【請求項３３】
血圧調節に関連した前記１つ以上のマーカーが、心房性ナトリウム利尿因子、Ｂ型心房性ナトリウム利尿ペプチドからなる群から選択される１つ以上のマーカー、Ｂ型心房性ナトリウム利尿ペプチド、Ｃ型心房性ナトリウム利尿ペプチド、ウロテンシンＩＩ、アルギニン  バソプレシン、アルドステロン、アンギオテンシンＩ、アンギオテンシンＩＩ、アンギオテンシンＩＩＩ、ブラジキニン、カルシトニン、プロカルシトニン、カルシトニン遺伝子関連ペプチド、アドレノメジュリン、カルシホシン、エンドセリン−２、エンドセリン−３、レニン、およびウロジラチンに関連したマーカー、またはこれらに関連したマーカーを含む請求項２８に記載の方法。
【請求項３４】
血圧調節に関連した前記１つ以上のマーカーが、ＢＮＰまたはそれに関連したマーカーを含む請求項２８に記載の方法。
【請求項３５】
血圧調節に関連した前記１つ以上のマーカーが、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰを含む請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
前記試料がヒトに由来する請求項２８に記載の方法。
【請求項３７】
前記試料が血液、血清および血漿からなる群から選択される請求項２８に記載の方法。
【請求項３８】
前記検定方法が免疫検定方法である請求項２８に記載の方法。
【請求項３９】
前記方法が、ＢＮＰまたはそれに関連したマーカーの濃度を前記転帰のリスクに相関づけることを含む請求項２８に記載の方法。
【請求項４０】
前記転帰のリスクが死亡のリスクである請求項２８に記載の方法。
【請求項４１】
前記転帰のリスクに基づく前記被験体の処置計画の選択をさらに含む請求項２８に記載の方法。
【請求項４２】
前記相関づける工程が、血圧調節に関連した１つ以上のマーカーの濃度および少なくとも１つの他の被験体由来のマーカーの濃度を前記転帰のリスクに相関づけることを含む請求項２８に記載の方法。
【請求項４３】
前記少なくとも１つの他の被験体由来のマーカーが、急性期反応物、血管細胞接着分子、細胞間接着分子−１、細胞間接着分子−２、細胞間接着分子−３、Ｃ−反応性蛋白質、ＨＭＧ−１、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８、インターロイキン−１受容体作動薬、単球走化性蛋白質−１、カスパーゼ−３、リポカリン型プロスタグランジンＤ合成酵素、マスト細胞トリプターゼ、好酸球カチオン性蛋白質、ＫＬ−６、ハプトグロビン、腫瘍壊死因子α、腫瘍壊死因子β、フィブロネクチン、マクロファージ遊走阻止因子、および血管内皮増殖因子前記少なくとも１つのからなる群から選択される炎症に関連した１つ以上のマーカー、またはこれらに関連したマーカーを含む請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記少なくとも１つの他の被験体由来のマーカーが、ヘプシジン、ＨＳＰ−６０、ＨＳＰ−６５、ＨＳＰ−７０、Ｓ−ＦＡＳリガンド、不斉ジメチルアルギニン、マトリックス・メタロプロテイン１１，３および９、デフェンシンＨＢＤ１、デフェンシンＨＢＤ２、血清アミロイドＡ、酸化ＬＤＬ、インスリン様増殖因子、トランスフォーミング増殖因子β、インター−α−阻害剤、ｅ−セレクチン、グルタチオン−Ｓ−転移酵素、低酸素症誘導因子−１α、誘導酸化窒素合成酵素、細胞内接着分子、乳酸塩脱水素酵素、単球遊走ペプチド−１、ｎ−アセチルアスパルテート、プロスタグランジンＥ２、核因子のリガンド受容体アクチベータ、ＴＮＦ受容体スーパーファミリー・メンバー１Ａ、およびシスタチンＣからなる群から選択される１つ以上の急性期反応物、またはそれらに関連したマーカーを含む請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記少なくとも１つの他の被験体由来のマーカーが、プラスミン、フィブリノーゲン、Ｄ−ダイマー、β−トロンボグロブリン、血小板因子４、フィブリノペプチドＡ、血小板誘導増殖因子、プロトロンビン・フラグメント１＋２、プラスミン−α２−アンチプラスミン複合体、トロンビン−アンチトロンビンＩＩＩ複合体、Ｐ−セレクチン、トロンビン、フォンビレブラント因子、組織因子、および血栓前駆体蛋白質からなる群から選択される凝固と止血とに関連した１つ以上のマーカー、またはそれらに関連したマーカーを含む請求項４２に記載の方法。
【請求項４６】
被験体由来の前記複数のマーカーが、ＣＲＰ、ＨＭＧ−１、カスパーゼ−３、クレアチンキナーゼ−ＢＢ、ＭＭＰ−９、ＩＬ−１β、ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦα、ＭＩＦ、ＭＣＰ−１、ＢＮＰ、ＣＮＰ、ｐｒｏ−ＢＮＰ、ｐｒｏ−ＣＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏ−ＢＮＰ、組織因子、フォンビレブラント因子、ｖＷＦ−Ａ１、ｖＷＦ−インテグリン結合ドメイン、およびｖＷＦ−Ａ３からなる群またはそれらに関連したマーカーから選択される請求項４２に記載の方法。
【請求項４７】
ＳＩＲＳと診断された被験体に予後を割り当てる方法であって、
前記被験体由来の試料について検定方法を実施し、前記検定方法は、血圧制御に関連したマーカー、炎症に関連したマーカー、および凝固と止血とに関連したマーカーからなる群から独立して選択される被験体由来の複数のマーカーの存在または量に関連した複数の検出可能な信号を提供し、そして
前記検定法から得られた信号を前記被験体における将来の転帰に対する傾向に相関づける、
の各工程を含む方法。
【請求項４８】
ＳＩＲＳと診断された前記被験体が、敗血症、重症の敗血症または敗血症ショックと診断される請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
ＳＩＲＳと診断された前記被験体が、敗血症と診断される請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記相関づける工程が、被験体由来の前記複数のマーカーの各々の濃度を測定する工程、および各マーカー濃度を前記被験体における将来の転帰に対する傾向の指標である閾値レベルと個別に比較する工程を含む請求項４７に記載の方法。
【請求項５１】
前記相関づける工程が、被験体由来の前記複数のマーカーの各々の濃度を測定する工程、被験体由来の前記複数のマーカーの各々の濃度に基づいて単一パネル応答値を計算する工程、および前記指標値を前記被験体における将来の転帰に対する傾向の指標である閾値レベルと比較する工程を含む請求項４７に記載の方法。
【請求項５２】
前記複数のマーカーが、血圧調節に関連した少なくとも１つのマーカー、および炎症に関連した少なくとも１つのマーカーを含む請求項４７に記載の方法。
【請求項５３】
前記複数のマーカーが、血圧調節に関連した少なくとも１つのマーカー、および凝固と止血とに関連した少なくとも１つのマーカーを含む請求項４７に記載の方法。
【請求項５４】
前記複数のマーカーが、炎症に関連した少なくとも２つのマーカーを含む請求項４７に記載の方法。
【請求項５５】
前記試料がヒトに由来する請求項４７に記載の方法。
【請求項５６】
前記試料が血液、血清および血漿からなる群から選択される請求項４７に記載の方法。
【請求項５７】
前記検定方法が免疫検定方法である請求項４７に記載の方法。
【請求項５８】
被験体由来の前記複数のマーカーが、心房性ナトリウム利尿因子、Ｂ型心房性ナトリウム利尿ペプチドからなる群から選択される血圧調節に関連した１つ以上のマーカー、Ｂ型心房性ナトリウム利尿ペプチド、Ｃ型心房性ナトリウム利尿ペプチド、ウロテンシンＩＩ、アルギニン、バソプレシン、アルドステロン、アンギオテンシンＩ、アンギオテンシンＩＩ、アンギオテンシンＩＩＩ、ブラジキニン、カルシトニン、プロカルシトニン、カルシトニン遺伝子関連ペプチド、アドレノメジュリン、カルシホシン、エンドセリン−２、エンドセリン−３、レニン、およびウロジラチンに関連したマーカー、またはこれらに関連したマーカーを含む請求項４７に記載の方法。
【請求項５９】
被験体由来の前記複数のマーカーが、急性期反応物、血管細胞接着分子、細胞間接着分子−１、細胞間接着分子−２、細胞間接着分子−３、Ｃ−反応性蛋白質、ＨＭＧ−１、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８、インターロイキン−１受容体作動薬、単球走化性蛋白質−１、カスパーゼ−３、リポカリン型プロスタグランジンＤ合成酵素、マスト細胞トリプターゼ、好酸球カチオン性蛋白質、ＫＬ−６、ハプトグロビン、腫瘍壊死因子α、腫瘍壊死因子β、フィブロネクチン、マクロファージ遊走阻止因子、および血管内皮増殖因子からなる群から選択される炎症に関連した１つ以上のマーカー、またはこれらに関連したマーカーを含む請求項４７に記載の方法。
【請求項６０】
被験体由来の前記複数のマーカーが、ヘプシジン、ＨＳＰ−６０、ＨＳＰ−６５、ＨＳＰ−７０、Ｓ−ＦＡＳリガンド、不斉ジメチルアルギニン、マトリックス・メタロプロテイン１１，３および９、デフェンシンＨＢＤ１、デフェンシンＨＢＤ２、血清アミロイドＡ、酸化ＬＤＬ、インスリン様増殖因子、トランスフォーミング増殖因子β、インター−α−阻害剤、ｅ−セレクチン、グルタチオン−Ｓ−転移酵素、低酸素症誘導因子−１α、誘導酸化窒素合成酵素、細胞内接着分子、乳酸塩脱水素酵素、単球遊走ペプチド−１、ｎ−アセチルアスパルテート、プロスタグランジンＥ２、核因子リガンドの受容体アクチベータ、ＴＮＦ受容体スーパーファミリー  メンバー１Ａ、およびシスタチンＣからなる群から選択される１つ以上の急性期反応物、またはそれらに関連したマーカーを含む請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
被験体由来の前記複数のマーカーが、プラスミン、フィブリノーゲン、Ｄ−ダイマー、β−トロンボグロブリン、血小板因子４、フィブリノペプチドＡ、血小板誘導増殖因子、プロトロンビン・フラグメント１＋２、プラスミン−α２−アンチプラスミン複合体、トロンビン−アンチトロンビンＩＩＩ複合体、Ｐ−セレクチン、トロンビン、フォンビレブラント因子、組織因子、および血栓前駆体蛋白質からなる群から選択される凝固と止血とに関連した１つ以上のマーカー、またはそれらに関連したマーカーを含む請求項４７に記載の方法。
【請求項６２】
被験体由来の前記複数のマーカーが、ＣＲＰ、ＨＭＧ−１、カスパーゼ−３、クレアチンキナーゼ−ＢＢ、ＭＭＰ−９、ＩＬ−１β、ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦα、ＭＩＦ、ＭＣＰ−１、ＢＮＰ、ＣＮＰ、ｐｒｏ−ＢＮＰ、ｐｒｏ−ＣＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏ−ＢＮＰ、組織因子、フォンビレブラント因子、ｖＷＦ−Ａ１、ｖＷＦ−インテグリン結合ドメイン、およびｖＷＦ−Ａ３からなる群から選択される１つ以上のマーカーまたはそれらに関連したマーカーを含む請求項４７に記載の方法。
【請求項６３】
被験体由来の前記複数のマーカーが、ＣＲＰ、ＨＭＧ−１、カスパーゼ−３、クレアチンキナーゼ−ＢＢ、ＭＭＰ−９、ＩＬ−１β、ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦα、ＭＩＦ、ＭＣＰ−１、ＢＮＰ、ＣＮＰ、ｐｒｏ−ＢＮＰ、ｐｒｏ−ＣＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏ−ＢＮＰ、組織因子、フォンビレブラント因子、ｖＷＦ−Ａ１、ｖＷＦ−インテグリン結合ドメイン、およびｖＷＦ−Ａ３、またはそれらに関連したマーカーからなる群から選択される、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
被験体由来の前記複数のマーカーが、ＢＮＰまたはＢＮＰに関連したマーカーを含む請求項４７に記載の方法。
【請求項６５】
被験体由来の前記複数のマーカーが、ＣＲＰ、ＨＭＧ−１、ＨＳＰ−６０、ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−１β、ＩＬ−８、組織因子、ＴＮＦ−α、およびＭＣＰ−１からなる群から選択される１つ以上のマーカー、またはそれらに関連したマーカーをさらに含む請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
被験体由来の前記複数のマーカーが、ＩＬ−８または免疫学的に検出可能なそのフラグメントを含む請求項４７に記載の方法。
【請求項６７】
被験体由来の前記複数のマーカーが、ＩＬ−１ｒａまたは免疫学的に検出可能なそのフラグメントを含む請求項４７に記載の方法。
【請求項６８】
被験体由来の前記複数のマーカーが、ＩＬ−１βまたは免疫学的に検出可能なそのフラグメントを含む請求項４７に記載の方法。
【請求項６９】
被験体由来の前記複数のマーカーが、組織因子または免疫学的に検出可能なそのフラグメントを含む請求項４７に記載の方法。
【請求項７０】
被験体由来の前記複数のマーカーが、ＴＮＦ−αまたは免疫学的に検出可能なそのフラグメントを含む請求項４７に記載の方法。
【請求項７１】
被験体由来の前記複数のマーカーが、ＭＣＰ−１または免疫学的に検出可能なそのフラグメントを含む請求項４７に記載の方法。
【請求項７２】
被験体由来の前記複数のマーカーが、ＨＭＧ−１または免疫学的に検出可能なそのフラグメントを含む請求項４７に記載の方法。
【請求項７３】
被験体由来の前記複数のマーカーが、カスパーゼ−３または免疫学的に検出可能なそのフラグメントを含む請求項４７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、敗血症に関連した診断マーカーの同定および利用に関する。種々の態様において、本発明は、敗血症の検出、その他の原因の全身性炎症反応症候群から敗血症の区別、および敗血症患者のリスクの層別化において使用する方法および組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明の背景に関する以下の説明は、単に読者が本発明を理解するのを助けるためのものであり、本発明に関する従来技術を説明したり構成するためのものではない。
【０００３】
用語「敗血症」は、感染によって生じる炎症の全身症状に関連した多様な臨床症状の説明に使われている。非感染的病因による二次的炎症反応に臨床上類似しているので、敗血症の識別は特に困難な診断課題であった。最近、「胸部内科医のアメリカン・カレッジ」（ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｃｈｅｓｔ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ）および「救急医学のアメリカン・ソサイアティー」（ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）が、「全身性炎症反応症候群（Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）」即ち「ＳＩＲＳ」について定義を公表した（ボーン［Ｂｏｎｅ］ら，チェスト［Ｃｈｅｓｔ］１０１：１６４４−１６５３，１９９２）。「ＳＩＲＳ」は、一般に、感染性または非感染性に対する重篤な全身反応、および関連症候群である「敗血症」、「重症の敗血症」および「敗血症ショック」に関する重篤な全身反応を意味する。これらの語句についての定義を以下説明するが、これは本出願用に定義されたものである。
【０００４】
「ＳＩＲＳ」は、次の項目の２つ以上を呈する症状を指している。
体温が３８℃超または３６℃未満、
脈拍が９０回／分を超えている（頻脈）、
呼吸数が２０回／分を超えている（頻呼吸）またはＰaＣＯ2＜４．３ｋＰａ、
白血球数＞１２，０００個／ｍｍ3、＜４，０００個／ｍｍ3、または＞１０％未熟（バンド）形式。
【０００５】
「敗血症」は、臨床的に明らかな感染または微生物的に確認された感染をさらに伴うＳＩＲＳを指している。この感染は、細菌、真菌、寄生虫、またはウイルスのいずれでもよい。
【０００６】
「重症の敗血症」は、低酸素血症、乏尿症、代謝性アシドーシス、または脳機能の変異などの少なくとも１つの臓器機能障害により明らかになった臓器潅流の低下をさらに伴う敗血症を指している。
【０００７】
「敗血症ショック」は、＜９０ｍｍＨｇの収縮期の血圧、または血圧を維持するために投薬が必要になったことから明らかになった血圧低下をさらに伴う重症の敗血症を指している。
【０００８】
ＳＩＲＳの診断に結びつく全身炎症反応は、関係づけられる病因として感染性および多数の非感染性の両方がある。非感染性病因には、火傷、膵臓炎、外傷、熱射病および腫瘍形成が含まれる。敗血症と非敗血症ＳＩＲＳとを区別することは、概念的には比較的単純であるが、これらの関連した症状を明確に区別する診断ツールについては何も知られていない。例えば、ルルウエリン（Ｌｌｅｗｅｌｙｎ）およびコーヘン（Ｃｏｈｅｎ），インテンシブ・ケア・メディシン（Ｉｎｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．），２７：Ｓ１０−Ｓ３２，２００１，を参照のこと。例えば、敗血症の症例の９０％以上は細菌による感染が関係しているので、感染を確認する「最も確実な方法」は、血液、尿、胸水、髄液、腹腔液、滑液、痰、またはその他の組織試料からの微生物増殖であった。しかし、このような培養は、敗血症の明確な臨床所見を呈する患者の５０％以上で確認できないと報告されている。例えば、２００３年６月２６日に電子情報として発表された、ジェイムス（Ｊａｉｍｅｓ）ら，インテンシブ・ケア・メディシン（Ｉｎｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．），２９：１３６８−１３７１，を参照のこと。
【０００９】
敗血症において全身炎症症状に結びつく生理学的反応は、明確にされないままである。免疫細胞の活性化は、グラム陰性菌のＬＰＳ内毒素およびグラム陽性菌の外毒素に反応して生じる。この活性化は、炎症促進サイトカイン、接着分子、血管活性介在物、および反応性酸素化学種により仲介された一連の現象を引き起こす。肝臓、肺、心臓および腎臓を含む種々の臓器が、直接的または間接的に、この一連の現象により影響を受ける。敗血症は、凝固のサイトカイン活性化により仲介されると考えられる散在性血管内凝固（「ＤＩＣ」）とも関連がある。流体と電解質とのバランスも、毛細管潅流の増加および組織の酸素添加の低減により影響を受ける。発生した炎症反応をチェックせず、抑制もしないと、心筋虚血になり、臓器の機能が失われ、死に至る。
【００１０】
敗血症と非敗血症ＳＩＲＳとを区別する能力は、治療法とその結果が劇的に異なるので、特に重要である。例えば、ある研究で、ＳＩＲＳ診断基準の内２つだけを有する非敗血症ＳＩＲＳの症例では死亡率は７％であったが、死亡率は、敗血症では１６％、重症の敗血症では２０％、そして敗血症ショックでは４６％に上がることが報告されている。ランゲル−フラウスト（Ｒａｎｇｅｌ−Ｆｒａｕｓｔｏ），ザ・ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・メディカル・アソシエーション（ＪＡＭＡ），２７３：１１１７−１１２３，１９９５。
【００１１】
その上、抗生物質および支持療法が利用できるにも関わらず、上の統計で示されたように、敗血症は罹患率および死亡率の大きな原因になっている。同様に、より最近の研究によると、米国で毎年７５１，０００の重症の敗血症が発生し、死亡率は３０−５０％であると推定されている。アンガス（Ａｎｇｕｓ）ら，クリティカル・ケア・メディシン（Ｃｒｉｔ．ｃａｒｅ  ｍｅｄ．），２９：１３０３−１３１０，２００１。
【００１２】
敗血症の診断に関し、被験体の完全な臨床検査と共に使用することについて、いくつかのラボテストで研究がなされている。例えば、米国特許第５，６３９，６１７号および第６，３０３，３２１号、およびジアマレロス−ブルブリス（Ｇｉａｍａｒｅｌｌｏｓ−Ｂｏｕｒｂｏｕｌｉｓ）ら，インテンシブ・ケア・メディシン（Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．），２８：１３５１−１３５６，２００２、ハルバース（Ｈａｒｂａｒｔｈ）ら，アメリカン・ジャーナル・オブ・レシピレートリー・クリティカル・アンド・ケア・メディシン（Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｉｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．），１６４：３９６−４０２，２００１、マーチン（Ｍａｒｔｉｎ）ら，ペディアトリックス（Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ），１０８：ＵＲＬ：http://www.pediatrics.org./cgi/content/full/108/4/e61，２００１、およびボシンク（Ｂｏｓｓｉｎｋ）ら，チェスト（Ｃｈｅｓｔ），１１３：１５３３−１５４１，１９９８、を参照のこと。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、敗血症を検出し、敗血症をＳＩＲＳのその他の原因から区別し、および敗血症患者のリスクを層別する場合のマーカーの識別および使用に関する。本明細書に記載された方法および組成物は、種々の形態のＳＩＲＳの診断および区別において使用される迅速で感度のよい特異的な診断検定法として当該分野で必要な要求を満たすことができる。その上、本発明の方法および組成物は、ＳＩＲＳ患者の処置および診断および／または予後上の指標をさらに開発することを容易にするためにも使用することができる。
【００１４】
種々の態様において、本発明は、患者のＳＩＲＳの診断、予後、または区別と関連しているマーカーを識別する物質および手順、患者の診断および処置へのこの種のマーカーの使用および／または処置計画の経過の監視、ＳＩＲＳに関連した１つ以上の有害転帰に関わるリスクにある患者の識別、このような症状を処置または予防する効果を与える可能性がある化合物および薬剤組成物を選別する物質および手順に関する。
【００１５】
第１の態様では、本発明は、ＳＩＲＳの症状を示す被験体の診断または予後を判定する方法、敗血症、重症の敗血症、および／または敗血症ショックを互いからおよび／または非感染性ＳＩＲＳから区別する方法を開示している。これらの方法は、血圧調節に関連した１つ以上のマーカーおよび／または炎症に関連した１つ以上のマーカーの存在または量について、被験体由来のテスト試料の分析を含んでいる。ある実施態様では、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、またはより多くのマーカーまたは個々のマーカーを含むこの種の複数のマーカーが、マーカーパネルの中に組み込まれる。ＳＩＲＳとＤＩＣとの間の関係のために、好ましくは、凝固および止血に関連した１つ以上のマーカーおよび／または反応性酸素化学種の存在に関連した１つ以上のマーカーを含む追加のマーカーがこのようなパネルに加えられる。このようなパネルに入れるのに適したマーカーについて、以下、詳細に説明される。
【００１６】
１つ以上のマーカーのレベルは、前記マーカーの予測レベルと比較され、前記患者は、前記予測レベルと同等以上の前記マーカーのレベルにより脳血管けいれんのリスクにあると診断される。別の方法では、複数のこの種のマーカーについてパネル応答値が測定される。さらに、１つ以上のこの種のマーカーレベルの変化は、本明細書に記述されたパネルにおいて独立マーカーとして使用される。
【００１７】
特定の実施形態では、個々のマーカーの濃度は、各々、ＳＩＲＳの診断、予後、または区別と関連があるレベル（「閾値」）と比較することができる。被験体の選択されたマーカーレベルの各々を、目的とする各マーカーの診断閾値に相関づけることにより、敗血症、重症の敗血症、および／または敗血症ショックの有無、その被験体がこれらの症状の１つに罹患する確率を決めることができる。同様に、被験体のマーカーレベルを各マーカーの予後閾値に相関づけることにより、この被験体が将来１つ以上の不都合な症状に罹患する確率が決められる。
【００１８】
別の実施形態において、パネル内の１つ以上のマーカーの特定の閾値は、被験体由来のマーカーレベルのプロファイルが特定の診断の指標であるかどうかを判定するための拠り所にされない。そうではなく、本発明は、マーカーのプロファイル全体の評価を利用することができる。例えば、種々のマーカーレベルにおけるパネルの１−（特異度）に対して、マーカーの個別パネルの感度のＲＯＣ曲線をプロットすることにより、被験体からのマーカー測定のプロファイルは共に全体的確率（「パネル応答」は数値スコアとしてまたはパーセンテージ・リスクとして表された）を与えると考えられる。即ち、個々に観察された症状は、根底にある特定の疾患に起因する。この種の実施形態では、特定のサブセットのマーカーが増加していれば、一人の患者に特定の診断を示すには十分であり、一方、異なるサブセットのマーカーが増加していれば、別の患者に同じ診断または異なる診断を示すのに十分である。この種の分析を行う方法については、後で説明する。
【００１９】
さらに別の実施形態では、１つ以上のマーカーを複数回測定することができ、マーカーの一時的な変化を用いて、観察された症状に対し１つ以上の特定の病因を含めるか、または除外することができる。例えば、１つ以上のマーカーを初回に測定し、次いで、２回目に再び測定すると、マーカーレベルの時間による変化（またはマーカーレベルの欠如）を測定することができる。このような実施形態において、初回より２回目にマーカーが増加すると、１つ以上の症状の基礎になる特定の疾患および特定の予後などについて診断することができる。同様に、初回より２回目にマーカーが低下すると、１つ以上の症状の基礎になる特定の疾患および特定の予後などを示すことができる。１つ以上のマーカーの一時的な変化は、単一時点のマーカーレベルと共に用いるとマーカーパネルの識別力を上げることもできる。さらに別の実施形態において、「パネル応答」をマーカーとして扱うと、パネル応答の一時的な変化は、１つ以上の症状の基礎になる特定の疾患および特定の予後などを示すことができる。
【００２０】
特に好ましい実施形態において、血圧調節に関連した１つ以上のマーカーの試料中の存在または量を予後的に用いて、ＳＩＲＳ、敗血症、重症の敗血症、および／または敗血症ショックに関連した将来の合併症のリスクを判定する。これらの実施形態において、血圧調節に関連した好ましいマーカーは、ＢＮＰまたはＮＴ−ｐｒｏＢＮＰまたはこれらに関連したマーカーである。後で記述するように、この種の方法を用いて被験体の転帰のリスクを判定し、このリスクを被験体の処置方法の指針として用いることができる。
【００２１】
本明細書で記述されたマーカーは個別に使用されうるが、試料中で測定される複数のマーカーを含むマーカー「パネル」のメンバーとして使われるのが好ましい。この種のパネルは、当業者には周知の多数の様式で分析される。例えば、パネルの各メンバーは、「正常」値、即ち特定の疾患の有無の指標であるとして識別された値と比較される。特定の診断は、この値に対する各マーカーの比較に依存し、一方、マーカーの１つのサブセットのみが正常範囲を外れているならば、このサブセットは個々の診断の指標になる。
【００２２】
したがって、複数のマーカーを併用して、個別にマーカーから得られた値と比較する予測分析値の数を増やすのが好ましい。この種のパネルは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、またはより多くのマーカーまたは個々のマーカーを含むことができる。当業者は、単一の検定またはデバイスにおいて、診断マーカー、鑑別診断マーカー、予後マーカー、開始時間マーカーなどを併用できることも理解するであろう。例えば、デバイスまたは機器により測定された特定のマーカーは敗血症の診断に使え、デバイスまたは機器により測定された別のマーカーセットは重症の敗血症の診断を下し、デバイスまたは機器により測定された第３のマーカーセットは敗血症ショックの診断を下し、これらのマーカーセットの各々はユニークなマーカーを含むこともあり、その他のセットの１つまたは両方と重なり合うマーカーを含むこともできる。マーカーは、例えば、いろいろな目的のマーカーに別の分析パラメータ・セット（例えば、閾値または別の加重因子）を適用することにより、多数の目的にも普通に使える。例えば、１つの濃度または加重のマーカーは、敗血症の診断を下すために、単独またはより大きなパネルの部分として使え、別の濃度または加重の同じマーカーが、重症の敗血症の診断を下すために、単独またはより大きなパネルの部分として使える。
【００２３】
特定の実施形態では、１つ以上の診断または予後の両指標は、単に指標の有無により、症状または疾患に相関づけられる。別の実施形態では、診断または予後の両指標の閾値レベルは確定することができ、患者からの試料の指標のレベルは閾値レベルと単純に比較することができる。診断および／または予後テストの感度および特異度は、まさに、テストの分析「品質」に依存し、これらは異常な結果を構成するものの定義にも依存する。実際には、受診者動作特性曲線、即ち「ＲＯＣ」曲線は、通常、変数値を、「正常」および「疾患」の両集団におけるその相対的頻度に対してプロットすることにより計算される。あらゆる特定のマーカーでは、疾患の有無に関わらず、被験体のマーカーレベルの分布は互いに重なり合うようである。このような条件下では、１つのテストでは、正常と疾患を１００％の精度で絶対的に区別することはできず、重なり合いの領域はテストが正常と疾患とを区別できない領域を示している。閾値は、その値より上では（または疾患によるマーカーの変わり方によってはその値未満）そのテストは異常であり、その値未満ではそのテストが正常であると考えられるような値が選択される。ＲＯＣ曲線の下の面積は、感知された測定が症状を正しく識別することを可能にする確率の尺度である。ＲＯＣ曲線は、テスト結果が必ずしも正確な数値を与えないときでも使える。結果をランク付けできる限り、ＲＯＣ曲線を作ることができる。例えば、「疾患」試料に関するテストの結果が、度合い（即ち、１＝低い，２＝普通，３＝高い）によりランク付けされる。このランキングは、「正常」な集団における結果に相関づけることができ、ＲＯＣ曲線が作られる。これらの方法は、当該分野では周知である。例えば、ハンリー（Ｈａｎｌｅｙ）ら，ラジオロジー（Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ）１４３：２９−３６（１９８２）。
【００２４】
好ましい実施形態では、マーカーおよび／またはマーカーパネルは、下に示す値の特異度と組み合わせられた下に示す値の感度を有するように選択される。即ち、感度は、少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、より一層好ましくは少なくとも８５％、さらにより一層好ましくは少なくとも９０％、および最も好ましくは少なくとも９５％である。また、特異度は、少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、より一層好ましくは少なくとも８５％、さらにより一層好ましくは少なくとも９０％、および最も好ましくは少なくとも９５％である。特に好ましい実施形態では、感度と特異度の両方が、少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、より一層好ましくは少なくとも８５％、さらにより一層好ましくは少なくとも９０％、および最も好ましくは少なくとも９５％である。
【００２５】
１つ以上のマーカーは、単独で考える場合は予測的価値がないかもしれないが、パネルの一部として使われる場合はこの種のマーカーは特定の診断／予後を判定する上で大きな価値がある。加重因子はパネル内の１つ以上のマーカーにも加えることができ、例えば、特定の診断／予後を下す場合に１つのマーカーの有効性が特に高い場合は、このマーカーは重みを加えられているので、任意のレベルにおいて単独で有望な結果を十分示すことができる。同様に、加重因子は、個々のマーカーが正の結果を示すのに十分な任意のレベルはないが、別のマーカーも分析に寄与する場合のみ結果を示すと定めることができる。
【００２６】
本明細書において代表的なパネルについて記述するが、これらの代表的なパネルから１つ以上のマーカーを、置換、追加、または排除することができ、その状態でも臨床的に有用な結果が得られる。これらのパネルは、疾患の特異的なマーカー（例えば、細菌感染において増加または減少するが、その他の疾患では増加または減少しないマーカー）および／または非特異的なマーカー（例えば、原因に関係なく炎症により増加または減少するマーカー、原因に関係なく止血の変化により増加または減少するマーカー、など）の両方を含むことができる。非特異的な（および／または特異的な）マーカーは、個別には、敗血症を診断できないが、特定の「指紋」パターンの変化は、事実上、疾患の特異な指標として作用することができる。上で述べたように、このパターンの変化は、単一試料から得られるか、または、随意に、パネルの１つ以上のメンバーにおける一時的な変化と考えることができる（またはパネル応答値の一時的な変化）。
【００２７】
特に好ましいマーカーパネルは、例えば、心房性ナトリウム利尿因子（「ＡＮＰ」）、ｐｒｏ−ＡＮＰ、Ｂ型心房性ナトリウム利尿ペプチド（「ＢＮＰ」）、ＮＴ−ｐｒｏ  ＢＮＰ、ｐｒｏ−ＢＮＰ  Ｃ型心房性ナトリウム利尿ペプチド、ウロテンシンＩＩ、アルギニン  バソプレシン、アルドステロン、アンギオテンシンＩ、アンギオテンシンＩＩ、アンギオテンシンＩＩＩ、ブラジキニン、カルシトニン、プロカルシトニン、カルシトニン遺伝子関連ペプチド、アドレノメジュリン、カルシホシン、エンドセリン−２、エンドセリン−３、レニン、およびウロジラチン、またはこれらに関連したマーカー（集合的に「血圧調節に関連したマーカー」と呼ぶ）からなる群から選択される１つ以上の第１のマーカー、および急性期反応物、血管細胞接着分子（「ＶＣＡＭ」）などの細胞接着分子、細胞間接着分子−１（「ＩＣＡＭ−１」）、細胞間接着分子−２（「ＩＣＡＭ−２」）、および細胞間接着分子−３（「ＩＣＡＭ−３」）、Ｃ−反応性蛋白質、ＨＭＧ−１（ＨＭＧＢ１としても知られている）、ＩＬ−１β，ＩＬ−６，ＩＬ−８などのインターロイキン、インターロイキン−１受容体作動薬、単球走化性蛋白質−１、カスパーゼ−３、リポカリン型プロスタグランジンＤ合成酵素、マスト細胞トリプターゼ、好酸球カチオン性蛋白質、ＫＬ−６、ハプトグロビン、腫瘍壊死因子α、腫瘍壊死因子β、Ｆａｓリガンド、可溶性Ｆａｓ（Ａｐｏ−１）、ＴＲＡＩＬ、ＴＷＥＡＫ、フィブロネクチン、マクロファージ遊走阻害因子（ＭＩＦ）、および血管内皮増殖因子（「ＶＥＧＦ」）、またはこれらに関連したマーカー（集合的に「炎症に関連したマーカー」と呼ぶ）からなる群から選択される１つ以上の第２のマーカーを含む。
【００２８】
プラスミン、フィブリノーゲン、Ｄ−ダイマー、ベータ−トロンボグロブリン、血小板因子４、フィブリノペプチドＡ、血小板誘導成長因子、プロトロンビン・フラグメント１＋２、プラスミン−α２−アンチプラスミン複合体、トロンビン−アンチトロンビンＩＩＩ複合体、Ｐ−セレクチン、トロンビン、フォンビレブラント因子、組織因子、および血栓前駆体蛋白質またはそれらに関連したマーカー（集合的に「凝固および止血に関連したマーカー」と呼ぶ）からなる群から選択される１つ以上の追加のマーカーは、本発明のパネルに含まれる。
【００２９】
「炎症に関連したマーカー」として上に挙げたこれらの急性期反応物に加えて、炎症に関連した１つ以上のマーカーは、ヘプシジン、ＨＳＰ−６０、ＨＳＰ−６５、ＨＳＰ−７０、不斉ジメチルアルギニン（酸化窒素合成酵素の内因性阻害剤）、マトリックス・メタロプロテイン１１，３および９、デフェンシンＨＢＤ１、デフェンシンＨＢＤ２、血清アミロイドＡ、酸化ＬＤＬ、インスリン様増殖因子、トランスフォーミング増殖因子β、インター−α−阻害剤、ｅ−セレクチン、グルタチオン−Ｓ−転移酵素、低酸素症誘導因子−１α、誘導酸化窒素合成酵素（「１−ＮＯＳ」）、細胞内接着分子、乳酸塩脱水素酵素、マトリックス・メタロプロテイン分解酵素−９、単球遊走ペプチド−１（「ＭＣＰ−１」）、ｎ−アセチルアスパルテート、プロスタグランジンＥ２、核因子の受容体アクチベータ（「ＲＡＮＫ」）リガンド、ＴＮＦ受容体スーパーファミリー・メンバー１Ａ、およびシスタチンＣまたはそれらに関連したマーカーからなる群から選択することができる。
【００３０】
同様に、反応性酸素化学種に関連した１つ以上のマーカーを、この種のパネルの一部として測定することができる。これらのマーカーは、スーパーオキサイドジスムターゼ、グルタチオン、α−トコフェロール、アスコルベート、誘導酸化窒素合成酵素、脂質過酸化製品、酸化窒素、ミエロペロオキシダーゼ、および呼吸炭化水素（好ましくはエタン）、またはこれらに関連したマーカーからなる群から選択される。
【００３１】
追加のマーカーおよび／またはマーカークラスをこの種のパネルに追加して、疾患を区別する能力をさらに与えることができる。例えば、炎症反応および毛細管に対して得られる作用および組織の酸化作用の低減は、急性期反応に関連した１つ以上のマーカー、血管組織に関連した１つ以上のマーカー、および１つ以上の組織特異的（例えば、神経特異的）マーカーと関係しており、それらのマーカーのレベルは虚血性症状において増加する。したがって、α−２アクチン、塩基性カルポニン１、β−１インテグリン、酸性カルポニン、カルデスモン、システィンに富む蛋白質−２（「ＣＲＰ２」または「ＣＲＳＰ２」）、エラスチン、フィブリリン１、潜在トランスフォーミング増殖因子ベータ結合蛋白質４（「ＬＴＢＰ４」）、平滑筋ミオシン・ヘビーチェイン、およびトランスゲリン、またはそれらに関連したマーカー（集合的に「血管組織に関連したマーカー」と呼ぶ）からなる群から選択される１つ以上のマーカーは、この種のパネルに含めることができる。追加のマーカーおよびマーカークラスについては本明細書で後に記述する。
【００３２】
これらのマーカーは、多様な組み合わせで併用することができる。例えば、好ましいパネルは、ＣＲＰ、カスパーゼ−３、ＣＫ−ＢＢ、ＩＬ−１β、ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＨＭＧ−１、ＴＮＦα、ＭＩＦ、ＭＣＰ−１、ＭＭＰ−９、Ｆａｓリガンド、可溶性Ｆａｓ（Ａｐｏ−１）、ＴＲＡＩＬ、ＴＷＥＡＫ、ＡＮＰ、ｐｒｏ−ＡＮＰ、ＢＮＰ、ＣＮＰ、ｐｒｏ−ＢＮＰ、ｐｒｏ−ＣＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏ−ＢＮＰ、組織因子、フォンビレブラント因子、ｖＷＦ−Ａ１、ｖＷＦ−インテグリン結合ドメイン、およびｖＷＦ−Ａ３からなる群から選択される、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはより多くのマーカー、またはそれらに関連したマーカーを含むことができる。本明細書で述べたように、これらのマーカーは、単一時点で測定され、および／または時間によるマーカーレベルの変化を計算する場合は、複数の時点で測定される。
【００３３】
関連した態様では、本発明は、前述の方法で使用するマーカーパネルを識別する方法に関連する。診断および／または予後で使用するマーカーのパネルを開発する場合、特定のマーカーの存在またはレベルをテストすることにより、一群の被験体から可能性がある多数のマーカーのデータが得られる。この被験体群は、次いで、複数のセットに分割される。例えば、第１のセットは、疾患を有すると識別されるか、または、より一般的には、第１の症状にあると識別された被験体を含む。この症状の識別は、敗血症の細菌の組織試料の培養などのより過酷および／または費用のかかるテストを通してなされる。以後、この第１セットの被験体は、「疾患している」と呼ばれる。第２セットの被験体は、第１セットに入らない被験体から選択される。第２セットの被験体は、以後、「疾患していない」と呼ばれる。
【００３４】
これらのセットの被験体由来のデータには、複数のマーカーのレベルが含まれている。好ましくは、同じセットのマーカーのデータは、各患者に対して利用できる。代表的なマーカーは、本明細書に記載されている。目的とする疾患に対するこのマーカーの関連性は、実際に周知である必要はない。１つ以上のマーカーの関連性についてこれらの被験体セットを比較する方法は、後で記述される。本明細書に記述された方法およびシステムの実施形態は、候補マーカーのいずれが、この疾患の診断または任意の予後の症状にとって最も関連があるかを決定するために使われる。
【００３５】
別の態様では、本発明は、ＳＩＲＳ、敗血症、重症の敗血症、および／または敗血症ショックを示す被験体で使用するための治療計画を決定する方法に関連する。これらの方法は、ＳＩＲＳを含めるか除外するか、敗血症、重症の敗血症、および／または敗血症ショックを互いから、および／または非感染性ＳＩＲＳから区別するために本明細書で記述した方法を行うことを含むのが好ましい。次いで、この被験体の疾患の型および病期を治療するために１つ以上の治療計画を選択することができる。
【００３６】
さらに別の態様では、本発明は、ＳＩＲＳを含めるか除外するためのキット、または敗血症、重症の敗血症、および／または敗血症ショックを互いから、および／または非感染性ＳＩＲＳから区別するためのキットに関連する。これらのキットは、患者からの試料について１つ以上のマーカーレベルを測定するデバイスおよび試薬、並びにこの検定を行う説明書を含むのが好ましい。随意に、これらのキットは、ＳＩＲＳを含めるか除外するため、または敗血症、重症の敗血症、および／または敗血症ショックを互いから、および／または非感染性ＳＩＲＳから区別するために、マーカーレベルを相関づける１つ以上の手段を含むことができる。この種のキットは、１つ以上のこの種の測定を行うのに十分な試薬、および／または米国食品医薬品局（ＦＤＡ）が承認したラベリングを含むのが好ましい。
【００３７】
さらに別の態様では、本発明は、ＳＩＲＳを含めるか除外するためのデバイス、または敗血症、重症の敗血症、および／または敗血症ショックを互いから、および／または非感染性ＳＩＲＳから区別するためのデバイスに関連する。この種のデバイスは、複数の診断ゾーンを含むのが好ましく、これらのゾーンの各々は目的とする特定のマーカーと関係づけられる。この種のデバイスは、「アレイ」または「マイクロアレイ」と呼ばれる。これらのデバイスと試料との反応に従って、この診断ゾーンから信号が発生し、次いで、信号を目的とするマーカーの存在または量と相関づける。当業者には多数の適切なデバイスが知られている。
【００３８】
後で記述されるように、本明細書に記述されたマーカーは、パネル内のその他のマーカーの状態（例えば、存在または量）に依存する複数の疾患の指標になりうる。例えば、パネル内の特定のマーカーは、一般に、種々の原因から生じる炎症があると上昇する。１つ以上のこの種のマーカーの時間による変化、および／またはパネルの一部としてのこの種のマーカーの１つのセットの「指紋」は、単離された状態にある単一のマーカーでは診断できないという事実にも関わらず、重要な診断および／または予後情報を与えることができる。マーカーの一時的な変化を測定する好ましい時間は、１０分から２４時間、より好ましくは３０分から１０時間、より一層好ましくは１時間から５時間の間にある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３９】
本発明は、被験体の症状をベースとする鑑別診断、予後、および治療計画を決定するための方法および組成物に関する。特に、本発明は、ＳＩＲＳを含めるか除外し、または敗血症、重症の敗血症、および／または敗血症ショックを互いから、および／または非感染性ＳＩＲＳから区別するために選択された方法および組成物に関連する。
【００４０】
鑑別診断は、被験体から観察されうる特徴を、可能性のある疾患の特徴と比較して、個々の被験体の症状の基礎にある個々の疾患を診断する方法を指している。鑑別診断において考慮されねばならない疾患の幅によって、臨床医が指示するテストの型および数は膨大なものになりうる。臨床医は、次いで、一連のテストから得られた情報を統合し、被験体由来の症状の範囲および／または診断テストの結果を最もぴったり表す臨床診断を下さねばならない。
【００４１】
医学的処置を必要とする患者は、肉体的な特徴または機能において、疾患の指標である一つまたはいくつかの観察可能な主な変化を呈することが多い。しばしば、これらの「症状」は、可能性のある多数の疾患が観察可能な１つまたは複数の同じ症状を呈するという意味で非特異的である。ＳＩＲＳの場合、次のような症状の内２つ以上が存在する時はいつも、定義によりその条件が存在する：
体温が３８℃超または３６℃未満、
脈拍が９０回／分を超えている（頻脈）、
呼吸数が２０回／分を超えている（頻呼吸）またはＰaＣＯ2＜４．３ｋＰａ、
白血球数＞１２，０００個／ｍｍ3、＜４，０００個／ｍｍ3、または＞１０％未熟（バンド）形式。
【００４２】
本発明は、観察された症状に関する可能性のある病因１つおよび複数の病因を含めるか除外するようにデザインされている診断マーカーを提供することにより、１つ以上の非特異的な症状の鑑別診断に役立つことができる方法および組成物について記述している。本明細書に記述された症状をベースにした鑑別診断は、ある患者について観察された非特異的症状の基礎にある可能性のある疾患を区別するようにデザインされた診断マーカーのパネルを用いて達成されうる。
【００４３】
定義
本明細書で使われる用語「マーカー」は、蛋白質、ポリペプチド、糖蛋白質、プロテオグリカン、脂質、リポ蛋白質、核酸、炭水化物、など、または被験体由来のテスト試料を選別する標的として使われる小分子を意味している。本発明においてマーカーとして使われる「蛋白質またはポリペプチド」は、これらの物質のフラグメント、特に免疫学的に検出できるフラグメントを含むものと考えられる。
【００４４】
本明細書で使われる用語「関連マーカー」は、個々のマーカー、またはマーカー自身の代替物としてまたは独立マーカーとして検出されるマーカーのバイオ合成の親の１つ以上のフラグメントを意味している。例えば、ヒトＢＮＰは、１０８個のアミノ酸前駆体分子の蛋白質分解により導かれ、以後ＢＮＰ1-108と呼ばれる。成熟したＢＮＰ、または「ＢＮＰナトリウム排出性ペプチド」または「ＢＮＰ−３２」は、この前駆体の７７−１０８のアミノ酸を表す、３２個のアミノ酸からなり、ＢＮＰ77-108と呼ばれる。さらに、関連マーカーは、例えば、メチオニン残基の酸化、ユビキチン化などによる親マーカーの共有結合修飾の結果である。
【００４５】
１０８個のアミノ酸ＢＮＰ前駆体ｐｒｏ−ＢＮＰ（ＢＮＰ1-108）の配列は次の通りであり、成熟ＢＮＰ（ＢＮＰ77-108）の部分は下線を引いている。：
HPLGSPGSAS DLETSGLQEQ RNHLQGKLSE LQVEOTSLEP LQESPRPTGV 50
WKSREVATEG IRGHRKMVLY TLRAPRSPKM VQGSGCFGRK MDRISSSSGL 100
GCKVLRRH 108
（配列番号１）
【００４６】
ＢＮＰ1-108は下記配列を有するより大きな前駆体ｐｒｅ−ｐｒｏ−ＢＮＰとして合成される（下線で示された「ｐｒｅ」配列を有する）：
MDPQTAPSRA LLLLLFLHLA FLGGRSHPLG SPGSASDLET SGLQEQRNHL 50
QGKLSELQVE OTSLEPLQES PRPTGVWKSR EVATEGIRGH RKMVLYTLRA 100
PRSPKMVQGS GCFGRKMDRI SSSSGLGCKV LRRH 134
（配列番号２）
【００４７】
成熟ＢＮＰ自身は、本発明においてマーカーとして使用されうるが、ｐｒｅｐｒｏ−ＢＮＰ、ＢＮＰ1-108およびＢＮＰ1-76分子は、成熟ＢＮＰの代替物またはそれら自身におけるおよびそれら自身のマーカーとして測定されるＢＮＰ関連マーカーを表す。さらに、ＢＮＰ77-106、ＢＮＰ79-106、ＢＮＰ76-107、ＢＮＰ69-108、ＢＮＰ79-108、ＢＮＰ80-108、ＢＮＰ81-108、ＢＮＰ83-108、ＢＮＰ39-86、ＢＮＰ53-85、ＢＮＰ66-98、ＢＮＰ30-103、ＢＮＰ11-107、ＢＮＰ9-106、およびＢＮＰ3-108からなる群から選択されるＢＮＰ関連ポリペプチドを含むこれらの分子の１つ以上のフラグメントは、循環系中にも存在することができる。さらに、ＢＮＰフラグメントを含むナトリウム排出性ペプチドフラグメントは、１つ以上の酸化可能なメチオニンを含み、メチオニンスルホキサイドまたはメチオニンスルホンへのメチオニンの酸化は、追加のＢＮＰ関連マーカーを生じる。例えば、２００３年４月１７日に出願された米国特許第１０／４１９，０５９号を参照のこと。すべての表、図およびクレームを含むこの特許の全体が、引用により本明細書中に組み入れられている。
【００４８】
マーカーフラグメントの製造は、１つの事象を引き起こすマーカーを組織内へ放出する時間と試料が取得されるか分析される時間との間の経過時間、即ち試料取得と試料が分析される時間との間の経過時間、問題の組織試料の型、貯蔵条件、存在する蛋白質分解酵素の量、などの関数である、継続プロセスであるので、１つ以上のマーカーの検定をデザインし、このような検定を行う場合には、正確な予後または診断の結果を得るためにはこの分解を考慮する必要がある。さらに、種々のフラグメントの存在または量を別々に検出するためには複数のマーカーフラグメントを区別する個々の抗体が個別に用いられる。この個別の検出は、単一検定で複数のフラグメントを検出するよりも、より正確な予後または診断の結果を与える。例えば、異なる加重因子を種々のフラグメント測定に適用すると、試料中に初めから存在するナトリウム排出性ペプチドの量をより正確に推定することができる。
【００４９】
類似の様式で、本明細書で記述された多くのマーカーが比較的大きな前駆体分子として合成され、次いで、これらのマーカーは処理されて成熟し、および／またはマーカーのフラグメントの形で循環系中に存在する。このようにして、本明細書で記述されたマーカーの各々について「関連マーカー」が識別され、ＢＮＰについて上で記述した様式に類似した様式で使われる。
【００５０】
循環系からのポリペプチドの除去は、分解経路を含むことが多い。その上、この種の分解経路の阻害剤は、特定の疾患を処置する場合に役割を果たすことができる。例えば、トリンダード（Ｔｒｉｎｄａｄｅ）およびルロー（Ｒｏｕｌｅａｕ），ハート・フェリュアー・モニター（Ｈｅａｒｔ  Ｆａｉｌ．Ｍｏｎｉｔ．）２：２−７，２００１。しかし、ポリペプチドマーカーの測定は、一般に、分子の分解状態を考慮せずに、無傷の形態の測定に焦点を当てている。試料中の特定のポリペプチドマーカーの生物学的に活性な形を正確に測定するために、これらのポリペプチドマーカーの分解経路およびこの分解から形成された生成物を理解して検定法がデザインされる。目的とする生物学的に活性なポリペプチドマーカーおよびこれらのマーカーから導かれた不活性なフラグメントの両方の計画外の測定は、試料中の生物学的に活性な形態の濃度を過大に評価する結果になる。
【００５１】
臨床試料に存在する分解フラグメントを考えないと、診断または予後の方法の精度について重大な結果をもたらすおそれがある。例えば、ＢＮＰについてサンドイッチ型免疫検定が行われる単純なケースについて考えると、存在していた生物学的に活性なＢＮＰのかなりの量（例えば、５０％）が不活性な形態に分解されている。生物学的に活性なＢＮＰと不活性なフラグメントとに共通した領域を結合する抗体を用いてつくられた免疫検定は、試料中に存在する生物学的に活性なＢＮＰの量を２倍に過大評価し、結果を「擬陽性」と判定するおそれがある。試料中に存在する生物学的に活性なＢＮＰを過大に評価すると、患者の治療についても重大な結果をもたらすおそれがある。再びＢＮＰの例を考えると、ＢＮＰ濃度は、治療が有効であるかどうかを決めるのに使われる（例えば、上昇したレベルが治療により正常に戻るかどうかを知るためにＢＮＰを監視することにより）。上で述べた同じ「擬陽性」ＢＮＰの結果は、現在の療法が無効であるという誤った印象があるために、臨床医が治療を継続したり、増加させたり、または修正する結果になるおそれがある。
【００５２】
同様に、本明細書で記述された１つ以上のマーカーの複合体形成状態を考慮する必要がある。例えば、トロポニンは、３つのトロポニンポリペプチド（Ｔ，ＩおよびＣ）を含む「３成分系複合体」として主として筋肉に存在する。しかし、トロポニンＩおよびトロポニンＴは、Ｉ／Ｔ／Ｃ三元複合体以外の形態で血液中を循環する。むしろ、（ｉ）遊離の心特異的トロポニンＩ、（ｉｉ）二元複合体（例えば、トロポニンＩ／Ｃ複合体）、および（ｉｉｉ）三元複合体の各々は、すべて、血液中を循環する。さらに、トロポニンＩおよびＴの「複合体状態」は、例えば、遊離のトロポニン・ポリペプチドのその他の循環トロポニンポリペプチドへの結合により患者の体内で時間により変化する。トロポニンの「複合体状態」を考慮しない免疫検定は、目的とする心特異的アイソフォームのすべてを検出できない。
【００５３】
後で記述される方法は、被験体から導かれる１つ以上のマーカーを利用するのが好ましい。本明細書で使われる「被験体から導かれるマーカー」という用語は、蛋白質、ポリペプチド、りん脂質、核酸、プリオン、糖蛋白質、プロテオグリカン、糖脂質、脂質、リポ蛋白質、炭水化物、または被験体の１つ以上の細胞により表されるか、または作られる小分子マーカーを意味している。１つ以上のマーカーの有無、量、または量の変化は、特定の疾患が存在しているか、存在していないことを示している。被験体から導かれたものではない追加のマーカーを使用してもよいが、これは、特定の疾患と相関づけられる病原性または感染性細菌により表される。この種のマーカーは、上で記述された感染性疾患を識別する蛋白質、ポリペプチド、りん脂質、核酸、プリオン、または小分子マーカーが好ましい。
【００５４】
本明細書で使われる用語「テスト試料」は、患者などの目的とする被験体の診断、予後、または評価のために得られた体液の試料を意味している。特定の実施形態では、この種の試料は、進行中の症状の転帰またはある症状に対する治療計画の効果を判定するために得られる。好ましいテスト試料には、血液、血清、血漿、脳脊髄液、尿、だ液、痰、および胸水がある。さらに、当業者は、一部のテスト試料は、分別または精製操作、例えば、全血の血清または血漿成分への分離後に、より簡単に分析できることを知っている。
【００５５】
本明細書で使われているように、本明細書で使われた「複数」は、少なくとも２を意味している。好ましくは、複数は、少なくとも３を、より好ましくは少なくとも５を、より一層好ましくは少なくとも１０を、より一層好ましくは少なくとも１５を、および最も好ましくは少なくとも２０を意味している。特に好ましい実施形態では、複数は大きな数、即ち少なくとも１００である。
【００５６】
本明細書で使われる用語「被験体」は、ヒトまたはヒト以外の生物を意味している。したがって、本明細書に記述された方法および組成物は、ヒトおよび動物両方の疾患に適用できる。さらに、被験体は生きている生物が好ましいが、本明細書で記述された発明は、死後の分析にも同様に使われる。好ましい被験体は、「患者」、即ち医学的ケアを受けて生きているヒトである。これには、病理学の徴候について調べられている特定の病気をもたないヒトが含まれている。
【００５７】
本明細書で使われる用語「診断」は、ある患者が任意の疾患または症状に罹患しているか、いないかを推定および／または決定することができる方法を意味している。当業者は、１つ以上の診断指標、即ちマーカー、その症状の有無または重篤さの指標であるマーカーの有無、量、または量の変化に基づいて診断を下すことが多い。
【００５８】
同様に、予後は、１つ以上の「予後指標」を調べることにより決められることが多い。これらは、マーカー、患者（または患者から得られた試料）において、任意の経過または転帰が生じる確率を知らせるマーカーの存在または量である。例えば、１つ以上の予後指標は、このような患者から得られた試料において十分高いレベルに到達する場合、このレベルは、比較的低いマーカーレベルを示す類似の患者に比べて、この患者は将来脳卒中を経験する確率が高いことを知らせることができる。予後指標のレベルまたはレベルの変化は、一方では、罹患率または死亡の確率の上昇と関係があり、患者における「逆の転帰が増加する傾向と関係がある」と呼ばれている。好ましい予後マーカーは、脳卒中後の患者の遅延した神経欠陥の発症または将来の脳卒中の機会を予測することができる。
【００５９】
診断およびマーカーの使用に関連して本明細書で使われる用語「相関づける」は、ある患者におけるマーカーの存在または量を、任意の症状に罹患していることが知られているか、リスクにあることが知られているヒト、または任意の症状がないことが知られているヒトのそのマーカーの存在または量と比較することを意味している。上で述べたように、ある患者の試料のマーカーレベルは、特異的な診断と関係があることが知られているレベルと比較することができる。この試料のマーカーレベルは、診断と相関づけられたと言われる。即ち、当業者はその患者が特異的な型の診断に罹患しているかどうかを判定し、適当に対応するためにそのマーカーレベルを使うことができる。一方、この試料のマーカーレベルは良好な結果（例えば、疾患がない、など）と関連していることが知られているマーカーレベルと比較することができる。好ましい実施形態で、マーカーレベルのプロファイルは、全体的な確率またはＲＯＣ曲線を用いた特定の転帰に相関づけられる。
【００６０】
本明細書で使われている「診断を下す」というフレーズは、当業者がある患者において特定の疾患の有無を判定することができる方法を意味している。用語「診断」は、１００％の精度で特定の疾患の有無を決定する能力を意味せず、または任意の経過または転帰がかなり起きるらしいということを決定する能力さえも意味しない。そうではなく、当業者は、用語「診断」は特定の疾患がその被験体に存在する確率の上昇を意味していることを理解するであろう。好ましい実施形態では、ある診断は、ある疾患が存在する機会が約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７５％、約９０％、約９５％上昇することを示している。この文脈における用語「約」は＋／−２％を意味している。
【００６１】
本明細書で使われる用語「不連続な」は、非連続的である表面の領域を意味している。即ち、いずれかの領域の一部ではない１つの境界が２つの領域の各々を完全に囲んでいるならば、２つの領域は互いに不連続である。
【００６２】
本明細書で使われる用語「独立してアドレス可能な」は、特異的な信号が得られる表面の不連続な領域を意味している。
【００６３】
本明細書で使われる用語「抗体」は、抗原またはエピトープを特異的に結合しうる、免疫グロブリンによりつくられるか、または実質的にコード化された遺伝子または免疫グロブリン遺伝子、またはそれらのフラグメントから導かれたペプチドまたはポリペプチドを意味している。例えば、免疫学の基礎（Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ），第３版，Ｗ．Ｅ．ポール（Ｐａｕｌ）編，ラーベンプレス（Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ）発行，ニューヨーク（Ｎ．Ｙ．）（１９９３）、ウイルソン（１９９４），ジャーナル・オブ・イムノロジカル・メソード（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ），１７５：２６７−２７３、ヤームッシュ（１９９２），ジャーナル・オブ・バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・メソード（Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ），２５：８５−９７、を参照のこと。用語抗体には、抗原結合部分、即ち、（ｉ）Ｆａｂフラグメント、即ち、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインを含む１価フラグメント、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、即ち、ちょうつがい領域においてジサルファイド・ブリッジにより連結された２つのＦａｂフラグメントを含む２価フラグメント、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント、（ｉｖ）単一アームの抗体のＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（ウォード（Ｗａｒｄ）ら，（１９８９），ネーチャー（Ｎａｔｕｒｅ），３４１：５４４−５４６）、および（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、を含む抗原を結合する容量を保有する「抗原結合部位」（例えば、フラグメント，サブ配列，相補性決定領域（ＣＤＲ））が含まれている。単一鎖抗体も、用語「抗体」における引用により含まれる。
【００６４】
マーカーパネルの識別
本発明によると、ある被験体により示された１つ以上の非特異的症状の鑑別診断において、１つ以上のマーカーを識別する方法およびシステムが提供される。疾患状態の診断に有用なマーカーを識別する適切な方法は、２００２年１２月２４日に出願された米国特許仮出願第６０／４３６，３９２号、２００３年１２月２３日に出願されたＰＣＴ出願ＵＳ０３／４１４２６号、２００２年１２月２７日に出願された米国特許出願第１０／３３１，１２７号、およびＰＣＴ出願ＵＳ０３／４１４５３号に詳細に記述されており、これらの特許の各々は、すべての表、図およびクレームを含むこの特許の全体が、引用により本明細書中に組み入れられている。
【００６５】
当業者は、マーカーの一変量分析を行うことができ、複数のマーカーの一変量分析からのデータは組み合わせて種々の疾患症状を区別するためにマーカーパネルを形成することができる。この種の方法には、多重線形回帰分析、相互作用項の決定、段階的回帰分析などが含まれる。
【００６６】
鑑別診断に有用なマーカーパネルを開発する場合、可能性のある多数のマーカーのデータは、特定のマーカーの存在またはレベルに関するテストにより被験体群から得られる。被験体群は２つのセットに分割される。第１セットには、疾患を有すると確認されているか、またはより一般的には、第１の症状にあると確認されている被験体が含まれる。例えば、この第１セットの患者は、敗血症、重症の敗血症、および／または敗血症ショックと診断されている患者である。この症状の確認は、より過酷なテストおよび／または費用のかかるテストにより行われる。以後、この第１セットの被験体は「疾患している」と呼ばれる。
【００６７】
第２セットの患者は、単に第１セットに入らない被験体である。以後、この第２セットの被験体は「疾患していない」と呼ばれる。第１セットと第２セットとは、各々がほぼ同数の被験体を有するのが好ましい。このセットは、普通の患者、および／または別の原因のＳＩＲＳに罹患している患者でもよい。
【００６８】
これらのセットの患者から得られたデータには、複数のマーカーのレベルが含まれる。同じセットのマーカーのデータは、各患者について利用できるのが好ましい。このセットのマーカーには、特定の疾患または症状の検出に関係があると疑われる候補マーカーがすべて含まれる。実際に周知の関連性は必要ではない。本明細書で記述された方法およびシステムの実施形態は、候補マーカーのいずれが疾患または症状の診断に最も関係が深いかを決めるために使われる。２つのセットの被験体における各マーカーのレベルは、例えば、ガウス分布のように広範囲に分布することができる。しかし、分布の適合性は必要ではない。
【００６９】
上で示されたように、１つのマーカーは、ある患者が疾患しているか否かを明確に識別することができないことが多い。例えば、ある患者が互いに重なり合う領域に入るマーカーレベルを有すると評価されるならば、テスト結果はその患者の診断において役に立たない。疾患または症状の検出のために、陽性と陰性とのテスト結果を区別するために人為的なカットオフが使われる。どこでカットオフが選択されるかは関係なく、診断ツールとしての単一マーカーの有効性は影響を受けない。カットオフの変更は、単一マーカーの使用から生じる擬陽性の数と擬陰性の数との間で単に相殺するだけである。このような重なり合いを有するテストの効果は、ＲＯＣ（受診者動作特性）曲線を用いて表されることが多い。ＲＯＣ曲線は当業者には周知である。
【００７０】
ＲＯＣ曲線の水平軸は、擬陽性の割合と共に増加する（１−特異度）を表している。この曲線の垂直軸は、真の陽性の割合と共に増加する感度を表している。したがって、選択された特定のカットオフでは、（１−特異度）の値が決められ、対応する感度が得られる。ＲＯＣ曲線の下の面積は、測定されたマーカーレベルが疾患または症状の正確な識別を可能にする確率の尺度である。したがって、ＲＯＣ曲線の下の面積は、テストの有効性を判定するために用いることができる。
【００７１】
上で述べたように、単一マーカーのレベルの測定は用途を限定するおそれがあり、例えば、この測定は炎症により非特異的に増加する。追加のマーカーの測定により追加の情報が得られるが、２つの無関係な測定のレベルを適切に組み合わせることが困難である。本発明の実施形態による方法およびシステムにおいて、疾患患者のセットおよび非疾患患者のセットの種々のマーカーのレベルに関連したデータは、マーカーのパネルを開発し、有用なパネル応答を得るために使われる。データは、マイクロソフト・アクセス（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ａｃｃｅｓｓ）、オラクル（Ｏｒａｃｌｅ）、その他のＳＱＬデータベースまたは単にデータファイルにおいて得られる。データベースまたはデータファィルは、例えば、名称または番号、存在する種々のマーカーのレベル、などの患者識別子、および患者に疾患があるか、または非疾患であるかを含む。
【００７２】
次に、人為的なカットオフ領域は、初めは各マーカーについて選択される。カットオフ領域の位置は、初めはあらゆる点で選択されうるが、選択は下に記述された最適化プロセスに影響を及ぼす。これに鑑みて、最適と考えられる位置の近くの選択は、オプティマイザーの迅速な集合を助長する。好ましい方法では、カットオフ領域は、初めは、２セットの患者の重なり合う領域の中心付近に集まる。１つの実施形態では、カットオフ領域は単にカットオフ点でよい。別の実施形態では、カットオフ領域はゼロより大きい長さを有する。これに鑑みて、カットオフ領域は、中央値および長さにより規定される。実際に、カットオフ領域の限界の最初の選択は、各被験体セットの予め選択された百分位数により決められる。例えば、疾患のある患者の予め選択された百分位数が測定される上の点は、カットオフ範囲の右（上）の端部として使われる。
【００７３】
各患者の各マーカー値は、次いで、指標に対してマップされる。指標は、カットオフ領域の下に１つの値が割り当てられ、カットオフ領域の上に別の値が割り当てられる。例えば、マーカーが一般に非疾患患者に対して低い値を有し、疾患患者に対して高い値を有するならば、特定のマーカーの低い値に、ゼロ指標が割り当てられ、これは陽性の診断の可能性が低いことを示す。別の実施形態では、指標は多項式に基づいて計算される。多項式の係数は、疾患のある被験体および疾患のない被験体の間のマーカー値の分布に基づいて決められる。
【００７４】
種々のマーカーの相対的な重要性は、加重因子により示すことができる。加重因子は、初めは、各マーカーの係数として割り当てられる。カットオフ領域の場合と同様に、加重因子の初めの選択は、あらゆる受け入れ可能な値において選択されるが、この選択は最適化プロセスに影響を及ぼすおそれがある。これに鑑みて、最適と考えられる位置の近くの選択は、オプティマイザーの迅速な集合を助長する。好ましい方法では、受け入れ可能な加重係数はゼロと１との間の範囲にあり、各マーカーの初めの加重係数は０．５として割り当てられる。好ましい実施形態では、各マーカーの初めの加重係数はマーカー自身によるそのマーカーの有効性と関係がある。例えば、ＲＯＣ曲線は単一マーカーについて作られ、ＲＯＣ曲線の下の面積はそのマーカーの初めの加重係数として使われる。
【００７５】
次に、２つのセットの各々における各被験体についてパネル応答を計算することができる。パネル応答は、各マーカーレベルがマップされる指標および各マーカーの加重係数の関数である。好ましい実施形態では、各被験体（ｊ）のパネル応答（Ｒ）は次式で表され、
Ｒj＝ΣｗiＩi,j,
ここで、ｉはマーカー指数であり、Ｉはマーカーｉのマーカーレベルが被験体ｊについてマップされる指標値であり、Σは候補マーカーｉすべての和である。このパネル応答値は「パネル指数」と呼ばれる。
【００７６】
マーカー値ではなく指標値を用いる１つの利点は、異常に高いか低いマーカーレベルは、その個別のマーカーについて疾患または非疾患の診断の確率を変えないことである。通常、特定のレベルより上のマーカー値は、一般に、特定の状態を示す。このレベルより高いマーカー値は、同じ確からしさでその状態を示す。したがって、異常に高いマーカー値はその状態の確率が異常に高いことを示さない。カットオフ領域の片側で一定である指標を使用すると、この懸念がなくなる。
【００７７】
パネル応答は、また、マーカーレベルおよび、例えば、患者の人種および性別を含むその他の因子を含むいくつかのパラメータの一般的な関数である。パネル応答に寄与するその他の因子には、個々のマーカー値の時間による勾配を含めることができる。例えば、ある患者は、病院に到着するとまず個々のマーカーについて測定される。同じマーカーが１時間後に再び測定され、レベルの変化はパネル応答において反映される。さらに、追加のマーカーは、その他のマーカーから導かれ、パネル応答の値に寄与できる。例えば、２つのマーカー値の比は、パネル応答を計算する場合の１つの因子である。
【００７８】
被験体の各セットにおいて各被験体のパネル応答が得られると、各セットのパネル応答の分布を分析することができる。目的関数は、有効なパネルの選択を助長するように規定される。目的関数は、例えば、疾患した被験体のセットのパネル応答の重なり合い、および疾患していない被験体のセットのパネル応答により表されるパネルの有効性の指標になるべきものである。このようにして、目的関数は、例えば、重なり合いを最小にすることによりパネルの有効性を最大化するように最適化される。
【００７９】
好ましい実施形態では、２セットの被験体のパネル応答を表すＲＯＣ曲線が、目的関数を規定するために使われる。例えば、目的関数は、ＲＯＣ曲線の下の面積を表すことができる。この曲線の下の面積を最大化することにより、マーカーのパネルの有効性を最大化することができる。別の実施形態では、ＲＯＣ曲線のその他の特徴を用いて目的関数を規定することができる。例えば、ＲＯＣ曲線の勾配が１に等しくなる点は有用な特徴である。別の実施形態では、感度と特異度との積が最大になる点は、「膝（knee）」と呼ばれて使われることがある。ある実施形態では、膝における感度が最大化される。別の実施形態では、所定の特異度のレベルにおける感度は目的関数を規定するために使われる。別の実施形態は、使われる所定の感度レベルにおいて特異度を用いることができる。さらに別の実施形態では、これらのＲＯＣ曲線の２つ以上の特徴の組み合わせが使われる。
【００８０】
パネル内のマーカーの１つが、その疾患または診断されている症状に対して特異的であることはありうる。この種のマーカーが、特定の閾値より上または下にある場合は、パネル応答は「陽性」のテスト結果に戻るように設定することができる。しかし、閾値が満たされない場合は、マーカーのレベルは目的関数に対して寄与する可能性があるものとして使われる。
【００８１】
最適化アルゴリズムが、目的関数を最大化または最小化するために使われる。最適化アルゴリズムは、当業者には周知であり、シンプレックス（Ｓｉｍｐｌｅｘ）法およびその他の条件つき最適化技法を含む普通に利用できる最小化または最大化関数を含む。一部の最小化関数は、局所最小値よりむしろ全体的最小値を求める場合に、その他の最小化関数よりも優れていることが、当業者には理解されている。最適化プロセスにおいて、各マーカーのカットオフ領域の位置およびサイズは、マーカーあたり少なくとも２度の自由度を与えるように変わることが許される。この種の変数パラメータは、本明細書では独立変数と呼ばれる。好ましい実施形態では、各マーカーの加重係数は、最適化アルゴリズムを繰り返す度に変わることも許される。種々の実施形態では、これらのパラメータの変更はすべて独立変数として使われる。
【００８２】
上に記述されたパラメータに加えて、各マーカーの方向も、独立変数として使われる。例えば、多くの場合、特定のマーカーの比較的高いレベルが、一般に、疾患状態の指標であるか、非疾患状態の指標であるかが分からない。このような場合、最適化プロセスが両サイドで探すことを認めることは、有用であるかもしれない。実際に、これはいくつかの方法で実行することができる。例えば、１つの実施形態では、方向は、最適化プロセスにより正負の間を飛び移れる真に別の独立変数である。一方、方向は、加重係数が負になることを認めることにより実行される。
【００８３】
最適化アルゴリズムは、やはり、特定の制約条件を具備している。例えば、得られるＲＯＣ曲線は、特定の値よりも大きな曲線下面積を得られるように条件づけられている。曲線下の面積０．５を有するＲＯＣ曲線は、完全な無作為を示しているが、１．０の曲線下の面積は、２つのセットが完全に分離していることを意味している。したがって、０．７５などの受け入れ可能な最小値は、特に目的関数が曲線下の面積を組み込まないときは、制約条件として使われる。その他の制約条件には、特定のマーカーの加重係数への制約が含まれる。追加の制約条件は、加重係数すべての和を１．０などの特定の値に制約する。
【００８４】
最適化アルゴリズムを繰り返し行うと、目的関数を最小化するか、最大化しながら、一般に、制約条件を満たすために独立パラメータを変える。繰り返しの回数は、最適化プロセスにおいて制約される。さらに、２つの逐次的繰り返しの間の目的関数の差が所定の閾値未満になれば、最適化アルゴリズムは局所的最小値または最大値の領域に到達したことを示し、最適化プロセスは終結される。
【００８５】
したがって、最適化プロセスは、各マーカーの加重係数および指標へのマーカー値のマッピングのカットオフ領域を含むマーカーパネルを与える。次いで、特定のマーカーが変えられるか、またはパネルからの排除さえ行われ、満足な結果が得られるまでこのプロセスが反復された。パネルにおける各マーカーの効率的寄与は、これらのマーカーの相対的重要性を識別するために決められる。１つの実施形態では、最適化プロセスから生じる加重係数は、各マーカーの相対的重要性を決めるために使われる。最低の係数を有するマーカーは排除されるか置換される。
【００８６】
特定の場合、比較的低い加重係数は、重要性の低い指標にはならない。同様に、比較的高い加重係数は、重要性の高い指標にはならない。例えば、関連マーカーが診断と無関係であれば、最適化プロセスは高い係数を生じる。この場合、その係数を下げるという利点は何もない。この係数を変えても、目的関数の値には影響しない。
【００８７】
テスト精度を決めるために、前述の方法により比較するために、被験体を２つ以上の群に選択することが可能な「ゴールドスタンダード」テスト基準が選択される。敗血症の場合、このゴールドスタンダードは、血液、尿、胸水、脳脊髄液、腹腔液、滑液、痰、またはその他の組織試料、の培養からの細菌の回収である。これは、ゴールドスタンダードについて陰性の被験体は敗血症ではないことを意味するが、しかし、上で述べたように、敗血症の強い臨床所見を示す患者の５０％以上は培養について陰性である。この場合、敗血症の臨床所見を示すが、ゴールドスタンダードについて陰性の結果を示す患者は、比較群から排除される。一方、敗血症と確認された被験体は、まず、正常で健康な対照被験体と比較される。
【００８８】
テスト精度の測定は、フィッシャー（Ｆｉｓｃｈｅｒ）ら，インテンシブ・ケア・メディシン（Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．），２９：１０４３−１０５１，２００３、に記載されたように得られ、任意のマーカーまたはマーカーパネルの有効性を決めるために使われる。これらの測定には、感度および特異度、予測値、尤度比、診断オッズ比、およびＲＯＣ曲線面積が含まれる。上で述べたように、適切なテストは、これら種々の測定に関する次のような結果の内１つ以上を示す。
少なくとも７５％の特異度と組み合わせられた少なくとも７５％の感度、
少なくとも０．７、より好ましくは少なくとも０．８、より一層好ましくは少なくとも０．９、および最も好ましくは少なくとも０．９５のＲＯＣ曲線面積、および／または
少なくとも５、より好ましくは少なくとも１０、および最も好ましくは少なくとも２０の正の尤度比（感度／（１−特異度）として計算された）、および０．３未満、より好ましくは０．２未満、および最も好ましくは０．１未満の負の尤度比（（１−感度）／特異度、として計算された）。
【００８９】
代表的なマーカーパネル
好ましい実施形態では、以下の論議は、ＳＩＲＳの鑑別診断に含まれる、血圧調節に関連した１つ以上のマーカーの代表であるＢＮＰ、および炎症に関連した１つ以上のマーカーの代表であるＣ−反応性蛋白質について考える。追加のマーカーは、凝固および止血に関連した１つ以上のマーカー、および／または血管組織に関連した１つ以上のマーカー、および／または１つ以上の急性期反応物である。追加の適切なマーカー種は、後で記述される。
【００９０】
ＢＮＰ
脳型ナトリウム排出性ペプチドとも呼ばれる、Ｂ−型ナトリウム排出性ペプチド（ＢＮＰ）は、血圧および液体収支を調節するためにナトリウム利尿システムに含まれる、３２個のアミノ酸からなる、４ｋＤａペプチドである。ボノウ（Ｂｏｎｏｗ），Ｒ．Ｏ．，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ），９３：１９４６−１９５０（１９９６）。ＢＮＰの前駆体は、「ｐｒｅ  ｐｒｏ  ＢＮＰ」と呼ばれる、１０８個のアミノ酸分子として合成される。この前駆体は、「ＮＴ  ｐｒｏ  ＢＮＰ」と呼ばれる７６個のアミノ酸からなるＮ−末端ペプチド（アミノ酸１−７６）およびＢＮＰまたはＢＮＰ３２と呼ばれる３２個のアミノ酸からなる成熟ホルモン（アミノ酸７７−１０８）に蛋白質分解処理される。これらの化学種−ＮＴ  ｐｒｏ  ＢＮＰ、ＢＮＰ−３２、およびｐｒｅ  ｐｒｏ  ＢＮＰ−は、ヒトの血漿内で循環することができると示唆されている。タテヤマ（Ｔａｔｅｙａｍａ）ら，バイオケミカル・バイオフィジカル・リサーチ・コミニュケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．）１８５：７６０−７６７（１９９２）、ハント（Ｈｕｎｔ）ら，バイオケミカル・バイオフィジカル・リサーチ・コミニュケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．）２１４：１１７５−１１８３（１９９５）。ｐｒｅ  ｐｒｏ  ＢＮＰおよびＮＴ  ｐｒｏ  ＢＮＰの２つの形、およびＢＮＰ、ｐｒｅ  ｐｒｏ  ＢＮＰおよびＮＴ  ｐｒｏ  ＢＮＰから導かれ、およびＢＮＰ、ＮＴ  ｐｒｏ  ＢＮＰおよびｐｒｅ  ｐｒｏ  ＢＮＰの蛋白質分解の結果として血液中に存在するペプチドは、ＢＮＰと関連または結合するマーカーとして集合的に記述される。
【００９１】
本明細書で使われる用語「ＢＮＰ」は、３２個のアミノ酸からなる成熟ＢＮＰ分子を意味する。しかし、当業者が認めているように、ＢＮＰに対する関係のために、ＮＴ  ｐｒｏ  ＢＮＰ分子の濃度は、患者の診断または予後の情報も与えることができる。「ＢＮＰに関連したマーカー」または「ＢＮＰ関連ペプチド」というフレーズは、３２個のアミノ酸からなるＢＮＰ分子自身以外のｐｒｅ  ｐｒｏ  ＢＮＰ分子に由来するポリペプチドを意味している。ＢＮＰおよびＢＮＰに関連したペプチドの蛋白質分解は、文献にも記述されており、これらの蛋白質分解フラグメントも用語「ＢＮＰ関連ペプチド」に包含されている。
【００９２】
ＢＮＰおよびＢＮＰ関連ペプチドは、心心室の分泌顆粒において主として存在し、心室の容積膨張および圧力過負荷の両方に応えて心臓から放出される。ウイルキンス（Ｗｉｌｋｉｎｓ），Ｍ．ら，ランセット（Ｌａｎｃｅｔ），３４９：１３０７−１３１０（１９９７）。ＢＮＰの上昇は、心房性および肺動脈けつ入圧の上昇、心室の収縮期および拡張期の機能の低減、左心室肥大、および心筋梗塞と関連づけられる。サグネラ（Ｓａｇｎｅｌｌａ），Ｇ．Ａ．，クリニカル・サイエンス（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）９５：５１９−５２９（１９９８）。さらに、うっ血性心不全および腎不全に関連したＢＮＰ濃度の上昇については多数の報告がある。したがって、患者のＢＮＰレベルは、呼吸困難の可能性のあるいくつかの基礎的な原因の指標になりうる。
【００９３】
Ｃ−反応性蛋白質
Ｃ−反応性蛋白質（ＣＰＲ）は、宿主防御に関与している２１ｋＤａのサブユニットを有するホモペンタマーＣａ2+−結合急性期蛋白質である。ＣＰＲは、微生物膜の普通の成分であるホスホリルコリンに結合するのが好ましい。ホスホリルコリンは、哺乳類の細胞膜にも存在するが、ＣＰＲと反応できる形では存在しない。ホスホリルコリンとＣＰＲの反応は、細菌の凝集およびオプソニン作用、並びに補体カスケードの活性化を促進し、これらのすべては細菌排除に含まれる。さらに、ＣＰＲはＤＮＡおよびヒストンと反応することができ、ＣＰＲは、損傷した細胞から循環系に放出された核物質の捕捉剤であると示唆されている（ロビイ（Ｒｏｂｅｙ），Ｆ．Ａ．ら，ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）２５９：７３１１−７３１６，１９８４）。ＣＰＲの合成は、Ｉｌ−６、および間接的にはＩＬ−１により誘導される。これは、ＩＬ−１は肝臓洞様血管においてクッパー細胞によりＩＬ−６の合成を開始することができるからである。ＣＰＲの正常な血漿濃度は、健常な集団の９０％において＜３μｇ／ｍｌ（３０ｎＭ）、および健常な個人の９９％において＜１０μｇ／ｍｌ（１００ｎＭ）である。血漿ＣＰＲ濃度は、比濁分析またはＥＬＩＳＡにより測定される。ＣＰＲ濃度は、感染、手術、外傷、心筋梗塞、および脳卒中などの急性期反応を起こす症状を有する患者からの血漿において上がる。ＣＰＲは、合成後直ぐに血流中に放出される分泌された蛋白質である。ＣＰＲの合成は、ＩＬ−６により上の方へ調節され、血漿ＣＰＲ濃度は、刺激作用の後６時間以内にかなり上昇する（ビアスッチ（Ｂｉａｓｕｃｃｉ），Ｌ．Ｍ．，アメリカン・ジャーナル・オブ・カーディオロジー（Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）７７：８５−８７，１９９６）。血漿ＣＰＲ濃度は、血流中で、刺激作用の後約５０時間でピークに達し、その後低下し、約１９時間の半減期を有する（ビアスッチ（Ｂｉａｓｕｃｃｉ），Ｌ．Ｍ．，アメリカン・ジャーナル・オブ・カーディオロジー（Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）７７：８５−８７，１９９６）。
【００９４】
この代表的なマーカーパネルの詳細な分析は、次の実施例に提供されている。本明細書で記述された診断マーカーの識別および使用するための方法によりＳＩＲＳの原因をさらに区別するために、その他のマーカーがこのマーカーパネルにおいて置換または加えられることを、当業者は容易に認めるであろう。追加の適切なマーカーは、次のセクションにおいて記述される。
【００９５】
本明細書で引用されたマーカーからなるパネルは、目的とする鑑別診断に関連した重要な情報を提供するために作られる。この種のパネルは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０の個別マーカーを用いて作られる。比較的大きなマーカーパネルを含む単一マーカーまたはマーカーのサブセットの分析は、種々の臨床状態における臨床感度または特異度を最適化するために当業者により行われる。これらには、外来、緊急治療、救命救急治療、集中治療、監視装置、入院患者、外来患者、医師オフィス、医療クリニック、および健康選別状態があるが、これらに限定されない。さらに、臨床感度および特異度を最適化するために後述の状態の各々における診断閾値の調整と組み合わせられたマーカーの比較的大きなパネルを含む単一マーカーまたはマーカーのサブセットを、当業者は使用することができる。以下、本明細書で記述された方法により適切なマーカーパネルを識別する場合に使用する追加の代表的マーカーについて簡潔に説明する。
【００９６】
（ｉ）血圧調節に関連した代表的マーカー
Ａ型ナトリウム排出性ペプチド（ＡＮＰ）（心房ナトリウム排出性ペプチドまたはカーディオジラチンとも呼ばれる）（フォースマン（Ｆｏｒｓｓｍａｎｎ）ら，ヒストケミストリー・アンド・セル・バイオロジー（Ｈｉｓｔｃｈｅｍ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．）１１０：３３５−３５７，１９９８）は、２８個のアミノ酸ペプチドであり、このペプチドは合成され、貯蔵され、心房拡張、アンギオテンシンＩＩ、エンドセリン、および交感神経刺激（ベータアドレナリン受容体媒介による）に答えて心房筋細胞が放出される。ＡＮＰは前駆体分子（ｐｒｏ−ＡＮＰ）として合成され、この前駆体分子は蛋白質分割により活性形ＡＮＰに変換され、Ｎ−末端ＡＮＰ（１−９８）も形成し、Ｎ−末端ＡＮＰおよびＡＮＰは、心房細動および心不全を示す患者において増加していると報告されている（ロッシ（Ｒｏｓｓｉ）ら，ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・カレッジ・オブ・カーディオロジー（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｃａｒｄｉｏｌ．ｏｇｙ）３５：１２５６−１２６２，２０００）。心房ナトリウム排出性ペプチド（ＡＮＰ９９−１２６）自身に加えて、そのＮ末端プロホルモン・セグメントからの線状ペプチドフラグメントも、生物活性を有することが報告されている。しかし、当業者が認識しているように、ＡＮＰに対する関係のために、Ｎ末端ＡＮＰ分子の濃度は、患者の診断または予後の情報も与えることができる。フレーズ「ＡＮＰ関連マーカーまたはＡＮＰ関連ペプチド」は、２８個のアミノ酸からなるＡＮＰ分子自身以外のｐｒｏ−ＡＮＰ分子（１−１２６）に由来するポリペプチドを意味している。ＡＮＰおよびＡＮＰに関連したペプチドの蛋白質分解は、文献にも記述され、これらの蛋白質分解フラグメントも用語「ＡＮＰ関連ペプチド」に含まれる。
【００９７】
ＡＮＰレベルの上昇は、血液量過多、心房細動およびうっ血性心不全の間に見られる。ＡＮＰは、長期にわたるナトリウムと水とのバランス、血液容積および動脈圧の調節に関与する。このホルモンは、副腎皮質によるアルドステロンの放出を低下させ、糸球体ろ過速度（ＧＦＲ）を増加させ、ナトリウム利尿および利尿（カリウム保持性）をつくり、レニン放出を低下させて、それによりアンギオテンシンＩＩを低下させる。これらの作用は、血液容積の低下、したがって、中心静脈圧（ＣＶＰ）、心拍出量、および動脈血圧に寄与する。ＡＮＰのいくつかのアイソフォームが識別され、脳卒中発生率とのこれらの関係が研究されている。例えば、ルバツ（Ｒｕｂａｔｕ）ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）１００：１７２２−１７２６，１９９９、エストラーダ（Ｅｓｔｒａｄａ）ら，アメリカン・ジャーナル・オブ・ハイパーテンション（Ａｍ．Ｊ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．）７：１０８５−１０８９，１９９４、を参照のこと。
【００９８】
ＡＮＰの持続的な上昇は、主として、全身の血管抵抗を下げることにより、動脈血圧を下げるように思われる。全身の血管拡張のメカニズムは、ＡＮＰ受容体が媒介し、並びに交感神経血管緊張の減衰による血管平滑筋のｃＧＭＰの上昇を含む。後者のメカニズムは、中枢神経システム内の部位に対する、並びに全身の神経末端によるノルエピネフリンの阻害によるＡＮＰの作用を含む。ＡＮＰは、レニン−アンギオテンシン・システムの逆調節システムと見なされる。
【００９９】
Ｃ型ナトリウム排出性ペプチド（ＣＮＰ）は、２２個のアミノ酸からなるペプチドであり、これはヒトの脳における主要な活性ナトリウム排出性ペプチドであり、ＣＮＰは内皮性弛緩因子であるとも考えられ、これは酸化窒素（ＮＯ）と同様に作用する（ダビッドソン（Ｄａｖｉｄｓｏｎ）ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９３：１１５５−１１５９，１９９６）。ＣＮＰは、構造的には、心房ナトリウム排出性ペプチド（ＡＮＰ）およびＢ型ナトリウム排出性ペプチド（ＢＮＰ）と関係があるが、ＡＮＰおよびＢＮＰは主として心筋中で合成され、ＣＮＰは血管内皮中で前駆体（ｐｒｏ−ＣＮＰ）として合成される（プリケット（Ｐｒｉｃｋｅｔ）ら，バイオケミカル・バイオフィジカル・リサーチ・コミニュケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．）２８６：５１３−５１７，２００１）。ＣＮＰは、動脈および静脈の両方に対して血管拡張作用があり、血管平滑筋細胞における細胞間ｃＧＭＰ濃度を上げることにより主として静脈で作用すると報告されている。
【０１００】
ウロテンシンＩＩは、配列Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｖａｌを有し、Ｃｙｓ６とＣｙｓ１１との間にジサルファイド・ブリッジがあるペプチドである。ヒトのウロテンシン２（ＵＴＮ）は、ｐｒｅｐｒｏ形にて合成される。処理されたウロテンシン２は、Ｇ蛋白質連結受容体ＧＰＲ１４に作用する、強力な血管活性効果および心刺激効果を有する。
【０１０１】
バソプレシン（アルギニン・バソプレシン，ＡＶＰ、抗利尿ホルモン，ＡＤＨ）は、下垂体後葉部から放出されたペプチド・ホルモンである。体内におけるバソプレシンの主な機能は、水の腎臓処理に影響を及ぼすことにより細胞外の液体容積を調節することである。ＡＶＰの放出を調節するメカニズムはいくつかある。出血中に起きる血液量減少は心房圧の低下をもたらす。心房壁内の特別に緊張した受容体および心房に入る大きな静脈（心肺の圧受容体）は、心房圧力が低下するとこれらの受容体の発射速度を低下させる。視床下部内のこれらの受容体シナプスから求心的に、心房受容体の発射は、通常、下垂体後葉部によりＡＶＰの放出を阻害する。血液量が減少したり、中央静脈の圧力が低下すると、心房緊張受容体の発射の低下により、ＡＶＰの放出が増加する。視床下部浸透圧受容体が、細胞外の容積モル浸透圧濃度を感知し、脱水の場合に起きるように、容積モル浸透圧濃度が上がるとＡＶＰの放出を刺激する。最後に、視床下部の領域に配置されたアンギオテンシンＩＩ受容体は、ＡＶＰの放出を制御する。即ち、アンギオテンシンＩＩが増加すると、ＡＶＰの放出を刺激する。
【０１０２】
ＡＶＰは作用の２つの主要部位、即ち腎臓および血管を有する。ＡＶＰの最も重要な生理学的作用は、ＡＶＰが収集ダクトにおける水の浸透性を大きくすることにより腎臓による水の再吸収を増加させ、それにより一層濃縮された尿の形成を可能にすることである。これはＡＶＰの抗利尿作用である。このホルモンも、動脈血管を圧迫するが、ＡＶＰの普通の生理学的濃度はその血管活性範囲未満である。
【０１０３】
カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）は、前駆体ｍＲＮＡの選択的スプライシングにより導かれたカルシトニン遺伝子の生成物である３７個のアミノ酸からなるポリペプチドである。カルシトニン遺伝子（ＣＡＬＣ−Ｉ）一次ＲＮＡ転写産物は、一次転写物の一部として異なるエキソンを含めたりまたは排除することにより異なるｍＲＮＡに処理される。カルシトニンコード化ｍＲＮＡは、甲状腺のＣ細胞におけるＣＡＬＣ−Ｉ転写の主要な生成物であり、一方、ＣＧＲＰ−Ｉ（ＣＧＲＰ＝カルシトニン遺伝子関連ペプチド）は中枢および末梢神経系の神経組織で作られる（図２．２．１）（９）。第３のｍＲＮＡ配列では、カルシトニン配列は失われ、一方、ＣＧＲＰの配列はｍＲＮＡにコード化される。ＣＧＲＰは、血管拡張特性を有する著しく目立つ血管活性ペプチドである。ＣＧＲＰは、カルシウムおよびホスフェート代謝に対する作用はなく、血管の平滑筋細胞に関連した神経細胞で主として合成される（１４９）。ｐｒｏＣＧＲＰ、即ちＣＧＲＰの前駆体、およびＰＣＴは、部分的に一致するＮ−末端アミノ酸配列を有する。
【０１０４】
プロカルシトニンは、染色体１１ｐ１５．４に配置されたＣａｌｃ−１遺伝子によりコード化された１１６個のアミノ酸（１４．５ｋＤａ）蛋白質である。Ｃａｌｃ−１遺伝子は、選択的スプライシングの結果である２つの転写物を生じる。プレ−プロカルシトニンは、甲状腺においてＣ細胞により、５７個のアミノ酸Ｎ末端フラグメント、３２個のアミノ酸カルシトニン・フラグメント、および２１個のアミノ酸カタカルシン・フラグメントに処理される２５個のアミノ酸ペプチド信号を含む。プロカルシトニンは、その他の体細胞によりグリコシル化された生成物として無傷の状態で分泌される。ウイッチヤー（Ｗｈｉｃｈｅｒ）ら，アナルス・オブ・クリニカル・バイオケミストリー（Ａｎｎ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）３８：４８３−４９３（２００１）。血漿プロカルシウムは、敗血症および敗血症の重症度のマーカーとして識別され（ユキオカ（Ｙｕｋｉｏｋａ）ら，アナルス・オブ・ジ・アカデミー・オブ・メディシン・シンガポール（Ａｎｎ．Ａｃａｄ．Ｍｅｄ．Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ）３０：５２８−５３１（２００１））、日に２のプロカルシトニンレベルは死亡を予測する（ペッティラ（Ｐｔｔｉｌａ）ら，インテンシブ・ケア・メディシン（Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．）２８：１２２０−１２２５（２００２））。
【０１０５】
アンギオテンシンＩＩは、循環基質、即ちアンギオテンシノーゲンに対するレニンの作用により形成されたオクタペプチド・ホルモンであり、蛋白質分解を受けてデカペプチドであるアンギオテンシンＩを形成する。特に肺における血管内皮は、酵素、即ちアンギオテンシン転換酵素（ＡＣＥ）を有し、この酵素は２つのアミノ酸に分割してオクタペプチド、即ちアンギオテンシンＩＩ（ＡＩＩ）を形成する。
【０１０６】
ＡＩＩは、いくつかの非常に重要な機能を有する。即ち、ＡＩＩは、抵抗血管を圧迫し（ＡＩＩ受容体により）全身の血管抵抗および動脈圧を上げ、副腎皮質に作用してアルドステロンを放出し、続いて腎臓に作用しナトリウムおよび液体の保持量を増加させ、腎臓に作用して液体保持量を増加させる下垂体後葉部からバソプレシン（抗利尿性ホルモン，ＡＤＨ）の放出を刺激し、脳内の渇き中枢を刺激し、交感神経終末からのノルエピネフリンの放出を助長し、神経終末によるノルエピネフリンの再取り込みを阻害し、それにより交感神経のアドレナリン作動を高め、心臓肥大および血管肥大を刺激する。
【０１０７】
アドレノメジュリン（ＡＭ）は、副腎髄質、肺、腎臓および心臓を含む多くの組織で作られる５２個のアミノ酸からなるペプチドである（ヨシトミ（Ｙｏｓｈｉｔｏｍｉ）ら，クリニカル・サイエンス（Ｃｌｉｎ．Ｓｃｉ．（Ｃｏｌｃｈ））９４：１３５−１３９，１９９８）。ＡＭを静脈内に注入すると、永続的な血圧低下作用を生じ、実験動物では心拍出量の増加を伴う。ＡＭは、右心房からのＡＮＰの緊張誘導放出を高めると報告されているが、血管のＢＮＰ発現には影響しない。ＡＭは、前駆体分子（ｐｒｏ−ＡＭ）として合成される。ＡＭ前駆体から処理されたＮ−末端ペプチドは、血圧低下ペプチドとして作用することも報告されている（クワサコ（Ｋｕｗａｓａｋｏ）ら，アナルス・オブ・クリニカル・バイオケミストリー（Ａｎｎ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）３６：６２２−６２８，１９９９。
【０１０８】
エンドセリンは、血管内皮により作られる別々の遺伝子によりコード化された３つの関連ペプチド（エンドセリン−１，エンドセリン−２、およびエンドセリン−３）であり、各エンドセリンは強力な血管圧迫活性を示す。エンドセリン−１（ＥＴ−１）は、２１２個の残基前駆体（ｐｒｅｐｒｏＥＴ−１）として合成された２１個のアミノ酸残基ペプチドであり、これは大きなＥＴ−１として知られたペプチドを与えるために除去される１７個の残基信号配列を含む。この分子は、エンドセリン転換酵素によりｔｒｐ２１とｖａｌ２２との間で加水分解によりさらに処理される。大きなＥＴ−１およびＥＴ−１の両方は、生物活性を示すが、成熟形のＥＴ−１はより大きな血管圧迫活性を示す（ブルックス（Ｂｒｏｏｋｓ）とエルガル（Ｅｒｇｕｌ），ジャーナル・オブ・モレキュラー・エンドクリノロジー（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．）２１：３０７−３１５，１９９８）。同様に、エンドセリン−２およびエンドセリン−３も、２１個のアミノ酸残基の長さがあり、それぞれ、大きなエンドセリン−２および大きなエンドセリン−３の加水分解により作られる（ヤップ（Ｙａｐ）ら，ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー（Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．）１２９：１７０−１７６，２０００、リー（Ｌｅｅ）ら，ブラッド（Ｂｌｏｏｄ）９４：１４４０−１４５０，１９９９）。
【０１０９】
（ｉｉ）凝固および止血に関連した代表的マーカー
Ｄ−ダイマーは、約２００ｋＤａの分子量を有する架橋繊維素分解生成物である。Ｄ−ダイマーの正常な血漿濃度は、＜１５０ｎｇ／ｍｌ（７５０ｐＭ）である。Ｄ−ダイマーの血漿濃度は、急性心筋梗塞および不安定な狭心症の患者では上がるが、安定な狭心症の患者では上がらない。ホフマイスター（Ｈｏｆｆｍｅｉｓｔｅｒ），Ｈ．Ｍ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９１：２５２０−２５２７（１９９５）、バイエスージェニス（Ｂａｙｅｓ−Ｇｅｎｉｓ），Ａ．ら，トロンボシス・アンド・ヘモスタシス（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．）８１：８６５−８６８（１９９９）、ガーフィンケル（Ｇｕｒｆｉｎｋｅｌ），Ｅ．ら，ブリティッシュ・ハート・ジャーナル（Ｂｒ．Ｈｅａｒｔ  Ｊ．）７１：１５１−１５５（１９９４）、クルスカル（Ｋｒｕｓｋａｌ），Ｊ．Ｂ．ら，ザ・ニューイングランド・ジャーナル・オブ・メディシン（Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．）３１７：１３６１−１３６５（１９８７）、タナカ（Ｔａｎａｋａ），Ｍ．とスズキ（Ｓｕｚｕｋｉ），Ａ．，トロンボシス・リサーチ（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．）７６：２８９−２９８（１９９４）。
【０１１０】
Ｄ−ダイマーの血漿濃度は、敗血症、脳卒中、手術、アテローム動脈硬化症、外傷、および血栓性血小板減少性紫斑病を含む凝固および繊維素溶解活性化に関連した症状の間にも上昇する。Ｄ−ダイマーは、プラスミンによる蛋白質分解による凝血の溶解の後、直ぐに血流中に放出される。Ｄ−ダイマーの血漿濃度は、不安定な狭心症の患者では、２μｇ／ｍｌを超える。ガーフィンケル（Ｇｕｒｆｉｎｋｅｌ），Ｅ．ら，ブリティッシュ・ハート・ジャーナル（Ｂｒ．Ｈｅａｒｔ  Ｊ．）７１：１５１−１５５（１９９４）。血漿Ｄ−ダイマーは、繊維素分解の特異的マーカーであり、急性心筋梗塞および不安定な狭心症に関連したプロトロンボティック症状の存在を示している。Ｄ−ダイマーの血漿濃度は、急性肺塞栓症の患者ではほとんど常に上昇する。したがって、Ｄ−ダイマーのレベルが正常であれば、肺塞栓症を排除することができる。エーゲルマイヤー（Ｅｇｅｒｍａｙｒ）ら，ソラックス（Ｔｈｏｒａｘ）５３：８３０−８３４（１９９８）。
【０１１１】
プラスミンは７８ｋＤａのセリン蛋白質分解酵素であり、この酵素は架橋フィブリンを蛋白質分解により消化し、凝血を溶解する結果になる。７０ｋＤａのセリン蛋白質分解酵素阻害剤であるα２アンチプラスミン（α２ＡＰ）は、プラスミンと共有結合性の１：１化学量論的複合体を形成することによりプラスミン活性を調節する。得られる約１５０ｋＤａのプラスミン−α２ＡＰ複合体（ＰＡＰ）は、プラスミン阻害性複合体（ＰＩＣ）とも呼ばれ、繊維素分解中に活性化されるプラスミンとα２ＡＰが接触すると直ぐに形成される。ＰＡＰの正常な血清濃度は、＜１μｇ／ｍｌ（６．９ｎＭ）である。ＰＡＰの血清濃度の上昇は、繊維素分解を活性化するためである。ＰＡＰの血清濃度の上昇は、凝血の存在、または繊維素分解の活性化を生じるか、または繊維素分解の活性化の結果である何らかの症状と関係がある。これらの症状には、アテローム動脈硬化症、散在性血管内凝固、急性心筋梗塞、手術、外傷、不安定な狭心症、脳卒中、および血栓性血小板減少性紫斑病が含まれる。ＰＡＰは、プラスミンの蛋白質分解活性化の後、直ぐに形成される。ＰＡＰは、繊維素分解の活性化、および最近の連続的凝固亢進症状の存在に関わる特異的マーカーである。
【０１１２】
β−トロンボグロブリン（βＴＧ）は、血小板を活性化すると放出される、３６ｋＤａの血小板α顆粒成分である。βＴＧの正常な血漿濃度は、＜４０μｇ／ｍｌ（１．１ｎＭ）である。βＴＧの血漿レベルは、不安定な狭心症の患者や急性心筋梗塞の患者では上がるようであるが、安定した狭心症の患者では上がらない（ド・カテリーナ（Ｄｅ  Ｃａｔｅｒｉｎａ），Ｒ．ら，ユーローピアン・ハート・ジャーナル（Ｅｕｒ．Ｈｅａｒｔ  Ｊ．）９：９１３−９２２，１９８８、バザン（Ｂａｚｚａｎ），Ｍ．ら，カーディオロギア（Ｃａｒｄｉｏｌ．ｏｇｉａ）３４：２１７−２２０，１９８９）。血漿βＴＧの上昇も、不安定な狭心症の患者の虚血症の発作と相関関係があるように思われる（ソーベル（Ｓｏｂｅｌ），Ｍ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）６３：３００−３０６，１９８１）。βＴＧの血漿濃度の上昇は、凝血の存在、または血小板を活性化させる何らかの症状と関係がありうる。これらの症状には、アテローム動脈硬化症、散在性血管内凝固、手術、外傷、血栓性血小板減少性紫斑病および脳卒中が含まれる（ランディ（Ｌａｎｄｉ），Ｇ．ら，ニューロロジー（Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ）３７：１６６７−１６７１，１９８７）。βＴＧは、血小板が活性化され、凝集したら直ぐに循環系に放出される。βＴＧは二相性の半減期、即ち、１０分間の半減期とそれに続く血漿内で延長された１時間の半減期とを有する（スウイタルスカ（Ｓｗｉｔａｌｓｋａ），Ｈ．Ｉ．ら，ザ・ジャーナル・オブ・ラボラトリー・アンド・クリニカル・メディシン（Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．）１０６：６９０−７００，１９８５）。血漿βＴＧ濃度は、不安定な狭心症および急性心筋梗塞の間に上がると言われている。血液試料採取中は、血小板の活性化を回避するために特別注意する必要がある。血液試料採取中に、血小板の活性化が起きるのは普通のことであり、血漿βＴＧ濃度を人為的に上げることができる。さらに、血流中に放出されたβＴＧの量は、かなりの変動がある個人の血小板数に依存している。ＡＣＳに関連したβＴＧの血漿濃度は、約７０ｎｇ／ｍｌ（２ｎｍ）であるが、この値は試料採取操作中の血小板の活性化により影響を受ける。
【０１１３】
血小板因子４（ＰＦ４）は、血小板を活性化すると放出される、４０ｋＤａの血小板α顆粒成分である。ＰＦ４は、血小板活性化のマーカーであり、ヘパリンを結合し、中和する能力がある。ＰＦ４の正常な血漿濃度は、＜７ｎｇ／ｍｌ（１７５ｐＭ）である。ＰＦ４の血漿濃度は、不安定な狭心症の患者や急性心筋梗塞の患者では上がるようであるが、安定した狭心症の患者では上がらない（ガリノ（Ｇａｌｌｉｎｏ），Ｒ．ら，アメリカン・ハート・ジャーナル（Ａｍ．Ｈｅａｒｔ  Ｊ．）１１２：２８５−２９０，１９８６、
サカタ（Ｓａｋａｔａ），Ｋ．ら，ジャパニーズ・サーキュレーション・ジャーナル（Ｊｐｎ．Ｃｉｒｃ．Ｊ．）６０：２７７−２８４，１９８６、バザン（Ｂａｚｚａｎ），Ｍ．ら，カーディオロギア（Ｃａｒｄｉｏｌ．ｏｇｉａ）３４：２１７−２２０，１９８９）。血漿ＰＦ４の上昇も、不安定な狭心症の患者の虚血症の発作と相関関係があるように思われる（ソーベル（Ｓｏｂｅｌ），Ｍ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）６３：３００−３０６，１９８１）。ＰＦ４の血漿濃度の上昇は、凝血の存在、または血小板を活性化させる何らかの症状と関係がありそうである。これらの症状には、アテローム動脈硬化症、散在性血管内凝固、手術、外傷、血栓性血小板減少性紫斑病および急性脳卒中が含まれる（カーター（Ｃａｒｔｅｒ），Ａ．Ｍ．ら，アーテリオスクレロシス・スロンボシス・アンド・バスキュラー・バイオロジー（Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．）１８：１１２４−１１３１，１９９８）。ＰＦ４は、血小板が活性化され、凝集したら直ぐに循環系に放出される。ＰＦ４は二相性の半減期、即ち、１分間の半減期、およびそれに続く血漿内で延長された２０分間の半減期を有する（ルシンスキ（Ｒｕｃｉｎｓｋｉ），Ｂ．ら，ジ・アメリカン・ジャーナル・オブ・フィジオロジー（Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．）２５１：Ｈ８００−Ｈ８０７，１９８６）。血漿ＰＦ４濃度は、不安定な狭心症および急性心筋梗塞の間に上がると言われているが、これらの研究は完全に信頼できるものではない。血液試料採取中に、血小板の活性化を回避するために特別に注意する必要がある。血液試料採取中に、血小板の活性化が起きるのは普通のことであり、血漿ＰＦ４濃度を人為的に上げることができる。さらに、血流中に放出されたＰＦ４の量は、かなりの変動がある患者の血小板数に依存している。疾患に関連したＰＦ４の血漿濃度は、１００ｎｇ／ｍｌ（２．５ｎｍ）を超えることができるが、この値は試料採取操作中の血小板の活性化により影響を受ける。
【０１１４】
フィブリノペプチドＡ（ＦＰＡ）は、トロンビンの作用によりフィブリノーゲンのアミノ末端から遊離される１６個のアミノ酸からなる１．５ｋＤａのペプチドである。フィブリノーゲンは、肝臓により合成され、分泌される。ＦＰＡの正常な血漿濃度は、＜５ｎｇ／ｍｌ（３．３ｎＭ）である。血漿ＦＰＡ濃度は、急性心筋梗塞、不安定な狭心症、および異型狭心症の患者では上がるようであるが、安定した狭心症の患者では上がらない（ゲンシーニ（Ｇｅｎｓｉｎｉ），トロンボシス・リサーチ（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．）５０：５１７−５２５，１９８８、ガリノ（Ｇａｌｌｉｎｏ），Ｒ．ら，アメリカン・ハート・ジャーナル（Ａｍ．Ｈｅａｒｔ  Ｊ．）１１２：２８５−２９０，１９８６、サカタ（Ｓａｋａｔａ），Ｋ．ら，ジャパニーズ・サーキュレーション・ジャーナル（Ｊｐｎ．Ｃｉｒｃ．Ｊ．）６０：２７７−２８４，１９８６、セルー（Ｔｈｅｒｏｕｘ），Ｐ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）７５：１５６−１６２，１９８７、メルリーニ（Ｍｅｒｌｉｎｉ），Ｐ．Ａ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９０：６１−６８，１９９４、マンテン（Ｍａｎｔｅｎ），Ａ．ら，カーディオバスキュラー・リサーチ（Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．）４０：３８９−３９５，１９９８。さらに、血漿ＦＰＡは、狭心症の重症度を示している（ゲンシーニ（Ｇｅｎｓｉｎｉ），トロンボシス・リサーチ（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．）５０：５１７−５２５，１９８８）。ＦＰＡの血漿濃度の上昇は、発作、手術、癌、散在性血管内凝固、ネフローゼ、敗血症、および血栓性血小板減少性紫斑病を含む凝固経路の活性化を含む何らかの症状と関係している。ＦＰＡは、トロンビンの活性化およびフィブリノーゲンの分割後循環系に放出される。ＦＰＡは小さなポリペプチドであるので、血流から迅速に除去されるようである。ＦＰＡは、凝血形成後１ヶ月以上上昇し、最大血漿ＦＰＡ濃度は活動性狭心症において４０ｎｇ／ｍｌを超えることができる（ゲンシーニ（Ｇｅｎｓｉｎｉ），トロンボシス・リサーチ（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．）５０：５１７−５２５，１９８８、トーギ（Ｔｏｈｇｉ），Ｈ．ら，ストローク（Ｓｔｒｏｋｅ）２１：１６６３−１６６７，１９９０）。
【０１１５】
血小板誘導成長因子（ＰＤＧＦ）は、同類のサブユニットＡおよび／またはＢから構成された２８ｋＤａの分泌されたホモまたはヘテロの二量体蛋白質である（マハデバン（Ｍａｈａｄｅｖａｎ），Ｄ．ら，ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）２７０：２７５９５−２７６００，１９９５）。ＰＤＧＦは、間充織細胞の強力な分裂促進因子であり、アテローム動脈硬化症の病因に関係している。ＰＤＧＦは、血管損傷部位の近くで凝集血小板および単球により放出される。ＰＤＧＦの正常な血漿濃度は、＜０．４ｎｇ／ｍｌ（１５ｐＭ）である。血漿ＰＤＧＦ濃度は、健康な対照または安定した狭心症の患者よりも急性心筋梗塞および不安定な狭心症の患者の方が高い（オガワ（Ｏｇａｗａ），Ｈ．ら，アメリカン・ジャーナル・オブ・カーディオロジー（Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）６９：４５３−４５６，１９９２、ウオーレス（Ｗａｌｌａｃｅ），Ｊ．Ｍ．ら，アナルス・オブ・クリニカル・バイオケミストリー（Ａｎｎ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）３５：２３６−２４１，１９９８、オガワ（Ｏｇａｗａ），Ｈ．ら，コロナリー・アーテリー・ディジーズ（Ｃｏｒｏｎ．Ａｒｔｅｒｙ  Ｄｉｓ．）４：４３７−４４２，１９９３）。これらの患者における血漿ＰＤＧＦ濃度の変化は、増加した血小板および単球の活性化によるとの説が有力である。血漿ＰＤＧＦは、脳腫瘍、肺癌、および高血圧の患者で上がる（クリモト（Ｋｕｒｉｍｏｔｏ），Ｍ．ら，アクタ・ニューロシルルジカ（Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｃｈｉｒ．（Ｗｉｅｎ））１３７：１８２−１８７，１９９５、セイムール（Ｓｅｙｍｏｕｒ），Ｌ．ら，ブレスト・キャンサー・リサーチ・アンド・トリートメント（Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．Ｔｒｅａｔ．）２６：２４７−２５２，１９９３、ロッシ（Ｒｏｓｓｉ），Ｅ．ら，アメリカン・ジャーナル・オブ・ハイパーテンション（Ａｍ．Ｊ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．）１１：１２３９−１２４３，１９９８）。血漿ＰＤＧＦは、炎症促進症状または手術、外傷、敗血症、散在性血管内凝固、および血栓性血小板減少性紫斑病を含む血小板の活性化の原因になる何らかの症状においても上昇する。ＰＤＧＦは、活性化した血小板および単球の分泌顆粒から放出される。ＰＤＧＦは、動物では約５分間と１時間の二相半減期を有する（コーエン（Ｃｏｈｅｎ），Ａ．Ｍ．ら，ザ・ジャーナル・オブ・サージカル・リサーチ（Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｒｅｓ．）４９；４４７−４５２，１９９０、ボーエンポープ（Ｂｏｗｅｎ−Ｐｏｐｅ），Ｄ．Ｆ．ら，ブラッド（Ｂｌｏｏｄ）６４：４５８−４６９，１９８４）。ＡＣＳにおける血漿ＰＤＧＦ濃度は、０．６ｎｇ／ｍｌ（２２ｐＭ）を超えることがある（オガワ（Ｏｇａｗａ），Ｈ．ら，アメリカン・ジャーナル・オブ・カーディオロジー（Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）６９：４５３−４５６，１９９２。ＰＤＧＦは、血小板活性化の感度のよい、特異的マーカーである。さらに、ＰＤＧＦは、血管損傷、および付随する単球および血小板活性化の感度のよいマーカーである。
【０１１６】
プロトロンビン・フラグメント１＋２は、トロンビン活性化の間にトロンビンのアミノ末端から遊離する３２ｋＤａのポリペプチドである。Ｆ１+２の正常な血漿濃度は、＜３２ｎｇ／ｍｌ（１ｎＭ）である。Ｆ１＋２の血漿濃度は、急性心筋梗塞および不安定な狭心症の患者では上昇し、安定な狭心症では上がらないと言われているが、この症状は完全なものではなかった（メルリーニ（Ｍｅｒｌｉｎｉ），Ｐ．Ａ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９０：６１−６８，１９９４）。その他の報告は、心血管疾患における血漿Ｆ１＋２濃度の有意な変化はないことを示した（ビアスッチ（Ｂｉａｓｕｃｃｉ），Ｌ．Ｍ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９３：２１２１−２１２７，１９９６、マンテン（Ｍａｎｔｅｎ），Ａ．ら，カーディオバスキュラー・リサーチ（Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．）４０：３８９−３９５，１９９８）。血漿中のＦ１＋２の濃度は、脳卒中、手術、外傷、血栓性血小板減少性紫斑病、および散在性血管内凝固、を含む凝固活性化に関連した何らかの症状の間に上昇しうる。Ｆ１＋２は、トロンビンが活性化すると直ぐに血流中に放出される。Ｆ１＋２の半減期は血漿中で約９０分であるが、この長い半減期がトロンビン形成のバーストを隠していると示唆されている（ビアスッチ（Ｂｉａｓｕｃｃｉ），Ｌ．Ｍ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９３：２１２１−２１２７，１９９６）。
【０１１７】
顆粒膜蛋白質−１４０、ＧＭＰ−１４０、ＰＡＤＧＥＭ、およびＣＤ−６２Ｐとも呼ばれる、Ｐ−セレクチンは、血小板および内皮細胞に発現された１４０ｋＤａの接着分子である。Ｐ−セレクチンは、血小板のアルファ顆粒および内皮細胞のワイベル−パレード（Ｗｉｂｅｌ−Ｐａｌａｄｅ）体の中に貯蔵される。活性化すると、Ｐ−セレクチンは、内皮細胞および血小板の表面に迅速に移行し、好中球および単球と「回転」細胞表面との反応を助長する。Ｐ−セレクチンの膜結合形および可溶形が識別されている。可溶性Ｐ−セレクチンは、細胞外Ｐ−セレクチン分子の蛋白質分解、または表面結合したＰ−セレクチン分子に近接した細胞内細胞骨格の成分の蛋白質分解により、膜結合したＰ−セレクチン分子を流し出すことにより作られる（フォックス（Ｆｏｘ），Ｊ．Ｅ．，ブラッド・コアギュレーション・アンド・フィブリノリシス（Ｂｌｏｏｄ  Ｃｏａｇｕｌ．Ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｓｉｓ）５：２９１−３０４，１９９４）。さらに、可溶性Ｐ−セレクチンは、Ｎ−末端膜貫通ドメインをコード化しないｍＲＮＡから翻訳される（ダンロップ（Ｄｕｎｌｏｐ），Ｌ．Ｃ．ら，ジャーナル・オブ・イクスペリメンタル・メディシン（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．）１７５：１１４７−１１５０，１９９２、ジョンストン（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ），Ｇ．Ｉ．ら，ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）２６５：２１３８１−２１３８５，１９９０）。
【０１１８】
活性化された血小板は、膜に結合したＰ−セレクチンを流し出し、循環系に留まり、Ｐ−セレクチンの洗い出しは、血漿Ｐ−セレクチン濃度を約７０ｎｇ／ｍｌだけ上げることができる（マイケルソン（Ｍｉｃｈｅｌｓｏｎ），Ａ．Ｄ，ら，プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・オブ・ユナイテッド・ステート・オブ・アメリカ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．）９３：１１８７７−１１８８２，１９９６）。可溶性Ｐ−セレクチンは、膜結合したＰ−セレクチンとは異なる立体配座をとることもできる。可溶性Ｐ−セレクチンは、１つの端部に球状ドメインを備えたモノマー性棒状構造を有し、膜結合した分子は、外側に向いた球状ドメインを備えたロゼット構造を形成する（ウシヤマ（Ｕｓｈｉｙａｍａ），Ｓ，ら，ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）２６８：１５２２９−１５２３７，１９９３）。可溶性Ｐ−セレクチンは、白血球と活性化された血小板および内皮細胞との間の反応を妨害することにより炎症および血栓症を調節する重要な役割を果たすことができる（ガンブル（Ｇａｍｂｌｅ），Ｊ．Ｒ．ら，サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）２４９：４１４−４１７，１９９０）。可溶性Ｐ−セレクチンの正常な血漿濃度は、＜２００ｎｇ／ｍｌである。血液は、普通、抗凝血剤としてクエン酸を用いて集められるが、血小板の活性化を防止するためにプロスタグランジンＥなどの添加剤と共にＥＤＴＡ血漿を用いた研究もいくつか行われている。ＥＤＴＡは、クエン酸塩を用いて得られた結果と比肩できる結果を得られる適切な抗凝血剤である。さらに、可溶性Ｐ−セレクチンの血漿濃度は、試料採取操作中に起こりうる血小板の活性化による影響を受けない。血漿可溶性Ｐ−セレクチン濃度は、急性心筋梗塞および不安定な狭心症の患者ではかなり上昇したが、安定な狭心症の患者では、運動ストレステストの後でも上がらなかった（イケダ（Ｉｋｅｄａ），Ｈ．，ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９２：１６９３−１６９６，１９９５、トモダ（Ｔｏｍｏｄａ），Ｈ．とアオキ（Ａｏｋｉ），Ｎ．，アンギオロジー（Ａｎｇｉｏｌｏｇｙ）４９：８０７−８１３，１９９８、ホランダー（Ｈｏｌｌａｎｄｅｒ），Ｊ．Ｅ．ら，ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・カレッジ・オブ・カーディオロジー（Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）３４：９５−１０５，１９９９、カイキタ（Ｋａｉｋｉｔａ），Ｋ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９２：１７２６−１７３０，１９９５、イケダ（Ｉｋｅｄａ），Ｈ．，ら，コロナリー・アーテリー・ディジーズ（Ｃｏｒｏｎ．Ａｒｔｅｒｙ  Ｄｉｓ．）５：５１５−５１８，１９９４）。急性心筋梗塞の場合の膜結合Ｐ−セレクチン対可溶性Ｐ−セレクチンの感度および特異度は、７１％対７６％、および３２％対４５％である（ホランダー（Ｈｏｌｌａｎｄｅｒ），Ｊ．Ｅ．ら，ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・カレッジ・オブ・カーディオロジー（Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）３４：９５−１０５，１９９９）。不安定な狭心症＋急性心筋梗塞の場合の膜結合Ｐ−セレクチン対可溶性Ｐ−セレク���ンの感度および特異度は、７１％対７９％、および３０％対３５％である（ホランダー（Ｈｏｌｌａｎｄｅｒ），Ｊ．Ｅ．ら，ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・カレッジ・オブ・カーディオロジー（Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）３４：９５−１０５，１９９９）。安定な狭心症よりも不安定な狭心症の患者からの冠状動脈内じゅく腫切除試料において、Ｐ−セレクチン発現は大きい（テナグリア（Ｔｅｎａｇｌｉａ），Ａ．Ｎ．ら，ジ・アメリカン・ジャーナル・オブ・カーディオロジー（Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）７９：７４２−７４７，１９９７）。さらに、血漿可溶性Ｐ−セレクチンは、不安定な狭心症の患者より、急性心筋梗塞の患者の方が、上昇の度合いが大きい。血漿可溶性および膜結合Ｐ−セレクチンは、非インスリン依存性糖尿病およびうっ血性心不全の患者でも上昇する（ノムラ（Ｎｏｍｕｒａ），Ｓ．ら，トロンボシス・アンド・ヘモスタシス（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．）８０：３８８−３９２，１９９８、オコナー（Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ），Ｃ．Ｍ．ら，ジ・アメリカン・ジャーナル・オブ・カーディオロジー（Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）８３：１３４５−１３４９，１９９９）。可溶性Ｐ−セレクチン濃度は、突発性血栓性血小板減少性紫斑病、リウマチ性関節炎、高コレステロール血症、急性脳卒中、アテローム動脈硬化症、高血圧、急性肺炎、結合組織疾患、血栓性血小板減少性紫斑病、溶血性尿毒素症候群、散在性血管内凝固、および慢性腎不全の患者の血漿中で上昇する（カタヤマ（Ｋａｔａｙａｍａ），Ｍ．ら，ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・ヘマトロジー（Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．）８４：７０２−７１０，１９９３、ハツネダログル（Ｈａｚｎｅｄａｒｏｇｌｕ），Ｉ．Ｃ．ら，アクタ・ヘマトロジカ（Ａｃｔａ  Ｈａｅｍａｔｏｌ．）１０１：１６−２０，１９９９、エルテンリ（Ｅｒｔｅｎｌｉ），Ｉ．ら，ザ・ジャーナル・オブ・リューマトロジー（Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．）２５：１０５４−１０５８，１９９８、ダビ（Ｄａｖｉ），Ｇ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９７：９５３−９５７，１９９８、フリンズ（Ｆｒｉｎｓ），Ｃ．Ｊ．ら，ストローク（Ｓｔｒｏｋｅ）２８：２２１４−２２１８，１９９７、ブラン（Ｂｌａｎｎ），Ａ．Ｄ．ら，トロンボシス・アンド・ヘモスタシス（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．）７７：１０７７−１０８０，１９９７、ブラン（Ｂｌａｎｎ），Ａ．Ｄ．ら，ジャーナル・オブ・ヒューマン・ハイパーテンション（Ｊ．Ｈｕｍ．Ｈｙｐｒｔｅｎｓ．）１１：６０７−６０９，１９９７、サカマキ（Ｓａｋａｍａｋｉ），Ｆ．ら，アメリカン・ジャーナル・オブ・レスピラトリー・アンド・クリティカル・ケア・メディシン（Ａ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．）１５１：１８２１−１８２６，１９９５、タケダ（Ｔａｋｅｄａ），Ｉ．ら，インターナショナル・アーカイブス・オブ・アレルギー・イムノロジー（Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．）１０５：１２８−１３４，１９９４、チョン（Ｃｈｏｎｇ），Ｂ．Ｈ．ら，ブラッド（Ｂｌｏｏｄ）８３：１５３５−１５４１，１９９４、ボノミニ（Ｂｏｎｏｍｉｎｉ），Ｍ���ら，ネフロン（Ｎｅｐｈｒｏｎ）７９：３９９−４０７，１９９８）。さらに、血小板活性化を含む何らかの症状は、Ｐ−セレクチンの血漿上昇の原因になりうる。Ｐ−セレクチンは、血小板の内皮細胞活性化の後、細胞表面に迅速に提供される。膜貫通ドメインを欠いている代替ｍＲＮＡから翻訳された可溶性Ｐ−セレクチンは、この活性化の後細胞外空間に放出される。可溶性Ｐ−セレクチンは、直接または間接に、膜結合Ｐ−セレクチンを含む蛋白質分解によっても形成される。
【０１１９】
血漿可溶性Ｐ−セレクチンは、開始後４時間に起きるピーク上昇を有するｔＰＡまたは冠状血管形成による治療を受けた急性心筋梗塞の患者の入院時に上がる（シモムラ（Ｓｈｉｍｏｍｕｒａ），Ｈ．ら，ジ・アメリカン・ジャーナル・オブ・カーディオロジー（Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）８１：３９７−４００，１９９８）。血漿可溶性Ｐ−セレクチンは、不安定な狭心症の患者の狭心症発作の後１時間未満に上昇し、濃度は時間と共に低下し、発作開始後５時間以上かけてベースラインに近づいた（イケダ（Ｉｋｅｄａ），Ｈ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９２：１６９３−１６９６，１９９５）。可溶性Ｐ−セレクチンの血漿濃度は、ＡＣＳにおいて１μｇ／ｍｌに近づくことができる（イケダ（Ｉｋｅｄａ），Ｈ．，ら，コロナリー・アーテリー・ディジーズ（Ｃｏｒｏｎ．Ａｒｔｅｒｙ  Ｄｉｓ．）５：５１５−５１８，１９９４）。可溶性Ｐ−セレクチンの血流内への放出および血流からＰ−セレクチンの除去についてさらに研究する必要がある。Ｐ−セレクチンは、血小板および内皮細胞活性化、血栓および炎症を支える症状の感度のよい、特異的マーカーである。しかし、Ｐ−セレクチンは、ＡＣＳの特異的マーカーではない。心組織損傷に対して特異的な別のマーカーと併用すると、Ｐ−セレクチンは、安定な狭心症から不安定な狭心症および急性心筋梗塞を区別する場合に有用である。さらに、可溶性Ｐ−セレクチンは、不安定な狭心症より急性心筋梗塞において大幅に上昇する。発表された研究は、可溶性形のＰ−セレクチンが、血小板および内皮細胞により、次いで、膜結合Ｐ−セレクチンを洗い出すことにより作られることを強調している。これは、蛋白質分解メカニズムにより可能になる。可溶性Ｐ−セレクチンは、その血漿濃度が、ＰＦ４およびβＴＧなどの血小板活性化のその他のマーカーと同じ程度に血液試料採取操作による影響を受けないので、現在識別された血小板活性化の最も有用なマーカーであることが判明している。
【０１２０】
トロンビンは、フィブリノーゲンを蛋白質分解してフィブリンを形成し、フィブリンは、最終的には、凝血形成中に架橋したネットワークに統合される。アンチトロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）は、トロンビン、因子ＸＩａ、因子ＸＩＩａ、および因子ＩＸａ蛋白質分解活性の生理学的調節剤である６５ｋＤａのセリン蛋白質分解酵素阻害剤である。ＡＴＩＩＩの阻害活性は、ヘパリンの結合に依存する。ヘパリンは、ＡＴＩＩＩの阻害活性を２桁から３桁だけ高め、ＡＴＩＩＩにより阻害された蛋白質分解酵素をほとんど瞬間的に不活性化する。ＡＴＩＩＩは、共有結合性の１：１化学量論的複合体の形成によりＡＴＩＩＩの標的蛋白質分解酵素を阻害する。約１００ｋＤａのトロンビン−ＡＴＩＩＩ複合体（ＴＡＴ）の正常血漿濃度は、＜５ｎｇ／ｍｌ（５０ｐＭ）である。ＴＡＴ濃度は、急性心筋梗塞および不安定な狭心症の患者で、特に突発虚血発作の間に上昇する（ビアスッチ（Ｂｉａｓｕｃｃｉ），Ｌ．Ｍ．ら，ジ・アメリカン・ジャーナル・オブ・カーディオロジー（Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）７７：８５−８７，１９９６、キーナスト（Ｋｉｅｎａｓｔ），Ｊ．ら，トロンボシス・アンド・ヘモスタシス（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．）７０：５５０−５５３，１９９３）。さらに、ＴＡＴは、安定狭心症の患者の血漿中で上がるマンテン（Ｍａｎｔｅｎ），Ａ．ら，カーディオバスキュラー・リサーチ（Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．）４０：３８９−３９５，１９９８）。その他の発表された報告書では、ＡＣＳの患者の血漿中のＴＡＴ濃度の有意な差は見出されていない（マンテン（Ｍａｎｔｅｎ），Ａ．ら，カーディオバスキュラー・リサーチ（Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．）４０：３８９−３９５，１９９８、ホフマイスター（Ｈｏｆｆｍｅｉｓｔｅｒ），Ｈ．Ｍ．ら，アセロスクレーロシス（Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）１４４：１５１−１５７，１９９９）。ＡＣＳに関連した血漿ＴＡＴ濃度の変化を決めるためにには、さらなる研究が必要である。血漿ＴＡＴ濃度の上昇は、脳卒中、手術、外傷、散在性血管内凝固、および血栓性血小板減少性紫斑病を含む凝固活性化に関連した何らかの症状と関係がある。ＴＡＴは、ヘパリンの存在下トロンビンの活性化後直ぐに形成される。なお、ヘパリンは、この反応の制限因子である。ＴＡＴの半減期は、血流中で約５分である（ビアスッチ（Ｂｉａｓｕｃｃｉ），Ｌ．Ｍ．ら，ジ・アメリカン・ジャーナル・オブ・カーディオロジー（Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）７７：８５−８７，１９９６）。ＴＡＴ濃度は、上昇し、１５分後に急低下し、凝固活性化後１時間以内にベースラインに戻る。ＴＡＴの血漿濃度は、約５０ｎｇ／ｍｌである（ビアスッチ（Ｂｉａｓｕｃｃｉ），Ｌ．Ｍ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９３：２１２１−２１２７，１９９６）。ＴＡＴは、凝固活性化、特にトロンビン活性化の特異的マーカーである。
【０１２１】
フォンビレブラント因子（ｖＷＦ）は、血小板、巨核細胞、および内皮細胞により作られる血漿蛋白質である。内皮細胞は、２２０ｋＤａのモノマーから構成され、これらのモノマーは結合して一連の高分子量マルチマーを形成する。これらのマルチマーは、通常、６００−２０，０００ｋＤａの範囲の分子量を有する。ｖＷＦは、循環凝固因子ＶＩＩＩを安定化することにより、露出サブ内皮、並びにその他の血小板への血小板の接着を媒介することにより、凝固プロセスに関与している。ｖＷＦのＡ１ドメインは、血小板糖蛋白質Ｉｂ−ＩＸ−Ｖ複合体に結合し、非繊維状コラーゲンのタイプＶＩおよびＡ３ドメインは、繊維状コラーゲンのタイプＩおよびＩＩＩに結合する（エムスリー（Ｅｍｓｌｅｙ），Ｊ．ら，ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）２７３：１０３９６−１０４０１，１９９８）。ｖＷＦ分子に存在するその他のドメインには、血小板と血小板との反応を媒介するインテグリン結合ドメイン、タイプ１１Ａフォンビレブラント疾患の病因と関係があるように思われる蛋白質分解酵素分解ドメインがある。血小板とｖＷＦの反応は、正常な生理学的条件において血小板とｖＷＦとの間の反応を回避するために厳密に調節される。ｖＷＦは、通常、球状にて存在し、普通、血管損傷の部位で見られる、高い剪断応力の条件下で拡大された鎖構造の立体配座の転移を受ける。この立体配座の変化は、この分子の分子内ドメインを露出させ、ｖＷＦが血小板と反応することを認める。さらに、剪断応力によりｖＷＦが内皮細胞から放出され、血小板との反応に利用できる多数のｖＷＦ分子を作る。ｖＷＦの立体配座の変化は、リストセチンおよびボツロセチンのような非生理学的修飾物質の添加により試験管中で誘起されうる（ミヤタ（Ｍｉｙａｔａ），Ｓ．ら，ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）２７１：９０４６−９０５３，１９９６）。血管損傷部位において、ｖＷＦは、サブ内皮マトリックスにおいてコラーゲンと速やかに結合し、および血小板とほぼ不可逆的に結合し、損傷部位において血管サブ内皮細胞と血小板との間でブリッジを効果的に形成する。事実は、ｖＷＦにおける立体配座の変化は、サブ内皮マトリックスとのｖＷＦの反応には必要ではないことも示唆している（シクスマ（Ｓｉｘｍａ），Ｊ．Ｊ．およびド・グルート（ｄｅ  Ｇｒｏｏｔ），Ｐ．Ｇ．，マヨ・クリニック・プロシーディングス（Ｍａｙｏ  Ｃｌｉｎ．  Ｐｒｏｃ．）６６：６２８−６３３，１９９１）。これは、ｖＷＦが、血管損傷部位で露出されたサブ内皮マトリックスに結合し、非常に局在的な剪断応力のために立体配座の変化を受け、新たに形成された血栓内に統合される循環血小板に迅速に結合することを示唆している。
【０１２２】
ｖＷＦの総量の測定は、当業者が、総ｖＷＦ濃度の変化を識別することを認めることになる。この測定は、種々の形のｖＷＦ分子の測定により行われる。Ａ１ドメインの測定は、Ａ１ドメインが血小板結合に接近できるので、代替凝固剤状態が存在することを示している、循環系における活性ｖＷＦの測定を認めることになる。これに鑑みて、露出Ａ１ドメインおよびインテグリン結合ドメインかＡ３ドメインのいずれかを有するｖＷＦ分子を特異的に測定する検定法が、血小板と血小板との反応を媒介する場合に利用できるか、または血管サブ内皮細胞への血小板の架橋を媒介する活性ｖＷＦの識別を可能にする。これらｖＷＦ形のいずれかの測定が、蛋白質分解構造分解ドメインに対して特異的な抗体を用いる検定法で使われる場合は、フォンビレブラント病の存在とは無関係に、患者の種々のｖＷＦ形の循環濃度を測定するために検定法が使われることが許される。ｖＷＦの正常な血漿濃度は、５−１０μｇ／ｍｌであり、または血小板の凝集により測定した活性は６０−１１０％である。特異的な形のｖＷＦの測定は、脳卒中および心血管疾患を含むあらゆる型の血管疾患において重要である。血漿ｖＷＦ濃度は、急性心筋梗塞および不安定な狭心症の患者の場合上昇するが、安定な狭心症の場合は上がらないと言われている（ゴト（Ｇｏｔｏ），Ｓ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９９：６０８−６１３，１９９９、トーソーリス（Ｔｏｕｓｏｕｌｉｓ），Ｄ．ら，インターナショナル・ジャーナル・オブ・カーディオロジー（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）５６：２５９−２６２，１９９６、ヤズダニ（Ｙａｚｄａｎｉ），Ｓ．ら，ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・カレッジ・オブ・カーディオロジー（Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）３０：１２８４−１２８７，１９９７、モンタレスコット（Ｍｏｎｔａｌｅｓｃｏｔ），Ｇ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９８：２９４−２９９）。
【０１２３】
ｖＷＦの血漿濃度は、内皮細胞の損傷または血小板の活性化と関連しているあらゆる所見と共に上昇する。ｖＷＦは、血流に高濃度で存在し、活性化した血小板および内皮細胞から放出される。ｖＷＦは、血小板活性化、または血小板活性化および血管損傷部位への接着を支持する症状のマーカーとして最も有効性が大きいようである。ｖＷＦの立体配座は、部分的に狭められた血管と関係がある高い剪断応力により変えられることも知られている。血液が狭められた血管を流れる時に、血液は、疾患していないヒトにおいて遭遇する剪断応力よりもかなり高い剪断応力にさらされる。
【０１２４】
組織因子（ＴＦ）は、脳、腎臓、および心臓において、且つ血管周囲の細胞および単球上で転写により調節される様式において発現される４５ｋＤａの細胞表面蛋白質である。ＴＦは、Ｃａ2+の存在下で因子ＶＩＩａと複合体を形成し、ＴＦが膜に結合している場合は生理学的に活性である。この複合体は、蛋白質分解により因子Ｘを分割し、因子Ｘａを形成する。ＴＦは、通常、血流から排除される。組織因子は、因子ＶＩＩａに結合した可溶形として、または因子ＶＩＩａとの複合体として、および因子Ｘａを含むこともできる組織因子経路阻害剤として血流中で検出される。ＴＦは、マクロファージの表面でも発現され、通常、動脈硬化性斑の中に見られる。ＴＦの正常な血清濃度は、＜０．２ｎｇ／ｍｌ（４．５ｐＭ）である。虚血性心不全の患者では、血漿ＴＦ濃度が高い（ファルシアニ（Ｆａｌｃｉａｎｉ），Ｍ．ら，トロンボシス・アンド・ヘモスタシス（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．）７９：４９５−４９９，１９９８）。ＴＦは、不安定な狭心症および急性心筋梗塞の患者では高いが、安定な狭心症の患者では高くない（ファルシアニ（Ｆａｌｃｉａｎｉ），Ｍ．ら，トロンボシス・アンド・ヘモスタシス（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．）７９：４９５−４９９，１９９８、スエフジ（Ｓｕｅｆｕｊｉ），Ｈ．ら，アメリカン・ハート・ジャーナル（Ａｍ．Ｈｅａｒｔ  Ｊ．）１３４：２５３−２５９，１９９７、ミスミ（Ｍｉｓｕｍｉ），Ｋ．ら，ジ・アメリカン・ジャーナル・オブ・カーディオロジー（Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）８１：２２−２６，１９９８）。さらに、マクロファージ上のＴＦ発現および動脈硬化性斑におけるＴＦ活性は、安定な狭心症よりも不安定な狭心症においてより普通に見られる（ソエジマ（Ｓｏｅｊｉｍａ），Ｈ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９９：２９０８−２９１３，１９９９、カイキタ（Ｋａｉｋｉｔａ），Ｋ．ら，アーテリオスクレーロシス・トロンボシス・アンド・バスキュラー・バイオロジー（Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．）１７：２２３２−２２３７，１９９７、アルディッシノ（Ａｒｄｉｓｓｉｎｏ），Ｄ．ら，ランセット（Ｌａｎｃｅｔ）３４９：７６９−７７１，１９９７）。
【０１２５】
安定狭心症対不安定狭心症における血漿ＴＦ濃度の差は、統計学的意味はなさそうである。ＴＦの血清濃度の上昇は、外因経路による凝固活性化を生じるか、またはその活性化の結果である何らかの症状と関係がある。これらの症状には、くも膜下の出血、散在性血管内凝固、腎不全、血管炎、および鎌状赤血球疾患が含まれる（ヒラシマ（Ｈｉｒａｓｈｉｍａ），Ｙ．ら，ストローク（Ｓｔｒｏｋｅ）２８：１６６６−１６７０，１９９７、タカハシ（Ｔａｋａｈａｓｈｉ），Ｈ．ら，アメリカン・ジャーナル・オブ・ヘマトロジー（Ａｍ．Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｌ．）４６：３３３−３３７，１９９４、コヤマ（Ｋｏｙａｍａ），Ｔ．ら，ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・ヘマトロジー（Ｂｒ．Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｌ．）８７：３４３−３４７，１９９４）。ＴＦは、血管損傷が血管外細胞損傷と結びつくと、直ぐに放出される。虚血性心不全の患者のＴＦレベルは、発症後２日以内に８００ｐｇ／ｍｌを超えることがある（ファルシアニ（Ｆａｌｃｉａｎｉ），Ｍ．ら，トロンボシス・アンド・ヘモスタシス（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．）７９：４９５−４９９，１９９８）。ＴＦレベルは、慢性期に比べて、急性心筋梗塞の慢性期において低下した（スエフジ（Ｓｕｅｆｕｊｉ），Ｈ．ら，アメリカン・ハート・ジャーナル（Ａｍ．Ｈｅａｒｔ  Ｊ．）１３４：２５３−２５９，１９９７）。ＴＦは、外因凝固経路および一般的な凝固亢進症状の活性化に対して特異的なマーカーである。ＴＦは、斑の破裂により生じる血管損傷の感度のよいマーカーである。
【０１２６】
凝固カスケードは、外因性か内因性経路のいずれかにより活性化される。これらの酵素の経路は、１つの最終共通経路を共有する。共通経路の第１のステップは、因子Ｘａ／因子Ｖａプロトロンビナーゼ複合体によるプロトロンビンの蛋白質分解分割を含み、活性トロンビンを生じる。トロンビンは、蛋白質分解によりフィブリノーゲンを分割するセリン蛋白質分解酵素である。トロンビンは、まず、フィブリノーゲンからフィブリノペプチドＡを除去し、ｄｅｓＡＡフィブリンモノマーを生じ、このモノマーは、フィブリン分解生成物、フィブリノーゲン分解生成物、ｄｅｓＡＡフィブリン、およびフィブリノーゲンを含むその他のすべてのフィブリノーゲン誘導蛋白質と複合体を形成することができる。ｄｅｓＡＡフィブリンモノマーは、フィブリノーゲン分割の第１の生成物であるので、一般的には可溶性フィブリンと呼ばれるが、因子ＸＩＩＩａを介した不溶性フィブリン凝血への架橋はなされていない。ｄｅｓＡＡフィブリンモノマーは、さらに、トロンビンによる蛋白質分解による分割を受けて、フィブリノペプチドＢを除去して、ｄｅｓＡＡＢＢフィブリンモノマーを生じることもできる。このモノマーは、その他のｄｅｓＡＡＢＢフィブリンモノマーと重合して、可溶性フィブリンまたはトロンバス前駆体蛋白質（ＴｐPTM）とも呼ばれる、可溶性ｄｅｓＡＡＢＢフィブリンポリマーを形成することができる。ＴｐPTMは不溶性フィブリンの直接の前駆体であり、「網状」構造を形成しており、新たに形成されたトロンバスに構造的剛さを与える。これに鑑みて、血漿中のＴｐPTMの測定は、活性凝血形成の直接測定である。
【０１２７】
ＴｐPTMの正常な血漿濃度は、＜６ｎｇ／ｍｌである（ラウリノ（Ｌａｕｒｉｎｏ），Ｊ．Ｐ．ら，アニュアルス・オブ・クリニカル・アンド・ラボラトリー・サイエンス（Ａｎｎ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｓｃｉ．）２７：３３８−３４５，１９９７）。アメリカン・バイオジェネティック・サイエンシズ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｂｉｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）は、ＴｐPTMの検定法を開発（米国特許第５４５３３５９号および第５８４３６９０号）し、そのＴｐPTM検定法は急性心筋梗塞の早期診断、胸痛患者における急性心筋梗塞の除外、および急性心筋梗塞に進行する可能性がある不安定な狭心症の患者の識別に役立つと述べている。その他の研究は、ＴｐPTMが急性心筋梗塞の患者で、大抵が発症後６時間以内に上昇することを確認した（ラウリノ（Ｌａｕｒｉｎｏ），Ｊ．Ｐ．ら，アニュアルス・オブ・クリニカル・アンド・ラボラトリー・サイエンス（Ａｎｎ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｓｃｉ．）２７：３３８−３４５，１９９７、カービル（Ｃａｒｖｉｌｌｅ），Ｄ．Ｇ．ら，クリニカル・ケミストリー（Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．）４２：１５３７−１５４１，１９９６）。ＴｐPTMの血漿濃度は、不安定な狭心症の患者でも上がるが、これらの上昇は、狭心症の重症度および急性心筋梗塞への最終的な進行の指標になるようである（ラウリノ（Ｌａｕｒｉｎｏ），Ｊ．Ｐ．ら，アニュアルス・オブ・クリニカル・アンド・ラボラトリー・サイエンス（Ａｎｎ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｓｃｉ．）２７：３３８−３４５，１９９７）。血漿中のＴｐPTMの濃度は、理論的には、凝固活性化を生じるか、凝固活性化の結果である、散在性血管内凝固、深部静脈血栓症、うっ血性心不全、手術、癌、胃腸炎、およびコカイン過量投与を含む何らかの症状の間に上がる（ラウリノ（Ｌａｕｒｉｎｏ），Ｊ．Ｐ．ら，アニュアルス・オブ・クリニカル・アンド・ラボラトリー・サイエンス（Ａｎｎ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｓｃｉ．）２７：３３８−３４５，１９９７）。ＴｐPTMは、トロンビン活性化後直ぐに血流中に放出される。ＴｐPTMは、凝血形成部位において不溶性のフィブリンに迅速に転換されるので、血流中の半減期は短いようである。血漿中のＴｐPTMの濃度は、急性心筋梗塞発症後３時間以内にピークに達し、発症１２時間後には正常値に戻る。ＴｐPTMの血漿濃度は、ＣＶＤにおいて３０ｎｇ／ｍｌを超えることができる（ラウリノ（Ｌａｕｒｉｎｏ），Ｊ．Ｐ．ら，アニュアルス・オブ・クリニカル・アンド・ラボラトリー・サイエンス（Ａｎｎ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｓｃｉ．）２７：３３８−３４５，１９９７）。ＴｐPTMは、凝固活性化の感度のよい、特異的なマーカーである。ＴｐPTMは、心組織損傷の特異的なマーカーと共に用いられる場合のみ、急性心筋梗塞の診断に有用であることが証明されている。
【０１２８】
（ｉｉｉ）急性期反応に関連した代表的なマーカー
ヒト好中球エラスターゼ（ＨＮＥ）は、通常、好中球のアズール親和性顆粒内に含まれる３０ｋＤａのセリン蛋白質分解酵素である。ＨＮＥは、好中球が活性化されると放出され、その活性は、循環しているα1−蛋白質分解酵素阻害剤により調節される。活性化された好中球は、普通、アテローム動脈硬化症の斑において見られ、これらの斑が破裂するとＨＮＥを放出することになる。血漿ＨＮＥ濃度は、通常、ＨＮＥ−α1−ＰＩ複合体を検出することにより測定される。これらの複合体の正常な濃度は、５０ｎｇ／ｍｌであり、これはＨＮＥの正常な濃度は約２５ｎｇ／ｍｌ（０．８ｎＭ）であることを示している。ＨＮＥの放出も、特異的なＨＮＥ誘導フィブリノペプチドである、フィブリノペプチドＢβ30-43の、血漿における特異的検出により測定することができる。血漿ＨＮＥは、冠動脈狭窄症の患者で上がり、その上昇は、単純な斑の患者よりも複雑な斑の患者の方が大きい（コサー（Ｋｏｓａｒ），Ｆ．ら，アンギオロジー（Ａｎｇｉｏｌｏｇｙ）４９：１９３−２０１，１９９８、アマロ（Ａｍａｒｏ），Ａ．ら，ユーローピアン・ハート・ジャーナル（Ｅｕｒ．Ｈｅａｒｔ  Ｊ．）１６：６１５−６２２，１９９５）。血漿ＨＮＥは安定狭心症の患者では目だった上昇はないが、不安定な狭心症および急性心筋梗塞の入院患者では上がる。即ち、フィブリノペプチドＢβ30-43を測定すると、急性心筋梗塞の場合よりも、不安定な狭心症の場合の方が濃度が２．５倍高い（ディナーマン（Ｄｉｎｅｒｍａｎ），Ｊ．Ｌ．ら，ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・カレッジ・オブ・カーディオロジー（Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）１５：１５５９−１５６３，１９９０、メーラ（Ｍｅｈｒａ），Ｊ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）７９：５４９−５５６，１９８９）。血清ＨＮＥは、心臓手術、運動誘発筋損傷、巨細胞動脈炎、急性呼吸窮迫症候群、虫垂炎、膵炎、敗血症、喫煙関連肺気腫、およびのう胞性線維症で上昇する（ジェネロー（Ｇｅｎｅｒｅａｕ），Ｔ．ら，ザ・ジャーナル・リューマトロジー（Ｊ．Ｒｈｕｍａｔｏｌ．）２５：７１０−７１３，１９９８、ムーサー（Ｍｏｏｓｅｒ），Ｖ．ら，アーテリオスクレロシス，トロンボシス，アンド・バスキュラー・バイオロジー（Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．）１９：１０６０−１０６５，１９９９、グリーソン（Ｇｌｅｅｓｏｎ），Ｍ．ら，ユーローピアン・ジャーナル・オブ・アプライド・フィジオロジー（Ｅｕｒ．Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．）７７：５４３−５４６，１９９８、ガンド（Ｇａｎｄｏ），Ｓ．ら，ザ・ジャーナル・オブ・トラウマ（Ｊ．Ｔｒａｕｍａ）４２：１０６８−１０７２，１９９７、エリクソン（Ｅｒｉｋｓｓｏｎ），Ｓ．ら，ザ・ユーローピアン・ジャーナル・オブ・サージェリー（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．）１６１：９０１−９０５，１９９５、リラス（Ｌｉｒａｓ），Ｇ．ら，レビスタ・エスパニョーラ・エンフェルムダード・ダイジェスティバ（Ｒｅｖ．ｓｐ．Ｅｎｆｅｒｍ．Ｄｉｇ．）８７：６４１−６５２，１９９５）、エンド（Ｅｎｄｏ），Ｓ．ら，ジャーナル・オブ・インフラメーション（Ｊ．Ｉｎｆａｌａｍｍ．）４５：１３６−��４２，１９９５、ジャノフ（Ｊａｎｏｆｆ），Ａ．，アニュアル・レビュー・オブ・メディシン（Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．）３６：２０７−２１６，１９８５）。ＨＮＥは、血液凝固中にも放出される（プロウ（Ｐｌｏｗ），Ｅ．Ｆ．およびプレスシア（Ｐｌｅｓｃｉａ），Ｊ．，ジャーナル・オブ・トロンボシス・アンド・ヘモスタシス（Ｊ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．）５９：３６０−３６３，１９８８、プロウ（Ｐｌｏｗ），Ｅ．Ｆ．，ザ・ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．）６９：５６４−５７２，１９８２）。ＨＮＥの血清上昇も、好中球の補充および活性化を含む何らかの非特異的感染または炎症症状と関係がありそうである。活性化された好中球がアテローム動脈硬化症の斑に存在するので、斑の破裂による放出が最もありそうである。ＨＮＥは、α1−ＰＩと複合体を形成した後、おそらく、肝臓により排除される。
【０１２９】
誘導酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）は、内皮細胞マクロファージ中の１３０ｋＤａの細胞質ゾルの蛋白質であり、その発現は、インターフェロン−γ、インターロイキン−１β、インターフェロン−６、および腫瘍壊死因子α、およびリポ多糖体を含むサイトカインにより調節される。ｉＮＯＳは、Ｌ−アルギニンからの酸化窒素（ＮＯ）の合成を触媒し、酸化窒素の誘導は、ＮＯの大量生産を持続させ、ＮＯは抗菌活性を有し、種々の生理学的所見および炎症所見の媒介物である。ｉＮＯＳによるＮＯの産生は、本質的に発現されたＮＯＳにより産生された量の約１００倍である（デプレ（Ｄｅｐｒｅ），Ｃ．ら，カーディオバスキュラー・リサーチ（Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．）４１：４６５−４７２，１９９９）。ＡＣＳに関連した血漿ｉＮＯＳ濃度の変化について発表された研究はない。ｉＮＯＳは、冠状アテローム動脈硬化症の斑において発現され、ｉＮＯＳはパーオキシナイトレートを産生することにより斑の安定性を妨害し、このパーオキシナイトレートは、ＮＯとスーパーオキサイドとの生成物であり、血小板の接着と凝集とを高める（デプレ（Ｄｅｐｒｅ），Ｃ．ら，カーディオバスキュラー・リサーチ（Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．）４１：４６５−４７２，１９９９）。心筋虚血症の間のｉＮＯＳの発現は上がらず、急性心筋梗塞と狭心症を区別する場合にｉＮＯＳが役立つことを示唆している（ハンマーマン（Ｈａｍｍｅｒｍａｎ），Ｓ．Ｉ．ら，ジ・アメリカン・ジャーナル・オブ・フィジオロジー（Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．）２７７：Ｈ１５７９−Ｈ１５９２，１９９９、カエ（Ｋａｙｅ），Ｄ．Ｍ．ら，ライフ・サイエンシズ（Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．）６２：８８３−８８７，１９９８）。血清ｉＮＯＳ濃度の上昇は、肝硬変、鉄欠乏による貧血、または細菌感染を含むマクロファージを活性化させるその他の何らかの症状に関連があるかもしれない（ジメネッツ（Ｊｉｍｅｎｅｚ）３０：６７０−６７６，１９９９、ニ（Ｎｉ），Ｚ．ら，キドニー・インターナショナル（Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．）５２：１９５−２０１，１９９７）。ｉＮＯＳは、アテローム動脈硬化症の斑の破裂の結果として血流中に放出され、血流中に増量したｉＮＯＳが存在することは、斑の破裂が起きたことだけでなく、血小板の接着を促進するために理想的な環境が創られたことも示している。しかし、ｉＮＯＳはアテローム動脈硬化症の斑の破裂に対して特異的ではなく、ｉＮＯＳの発現は非特異的な炎症を発症する間に誘起されうる。
【０１３０】
リゾホスファチジン（ＬＰＡ）は、ホスホグリセリドおよびトリアシルグリセロールの合成中に形成されたリゾりん脂質中間体である。ＬＰＡは、アシル補酵素Ａによるグリセロール−３ホスフェートのアシル化により、低密度リポ蛋白質（ＬＤＬ）の軽い酸化の間に形成される。ＬＰＡは、血管作動特性を有する脂質第２メッセンジャーであり、血小板アクチベータとして作用することができる。ＬＰＡは、アテローム動脈硬化症の病変の１つの成分であり、特に最も破裂しがちなコアの中にある（シース（Ｓｉｅｓｓ），Ｗ．，プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・オブ・ユナイテッド・ステート・オブ・アメリカ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．）９６，６９３１−６９３６，１９９９）。正常な血漿ＬＰＡ濃度は、５４０ｎＭである。血清ＬＰＡは、腎不全、卵巣癌およびその他の婦人科の癌で上昇する（ササガワ（Ｓａｓａｇａｗａ），Ｔ．ら，ジャーナル・オブ・ニュトリショナル・サイエンス・アンド・ビタミノロジー（Ｊ．Ｎｕｔｒ．Ｓｃｉ．Ｖｉｔａｍｉｎｏｌ．（Ｔｏｋｙｏ））４４：８０９−８１８，１９９８、ジュ（Ｘｕ），Ｙ．ら，ザ・ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・メディカル・アソシエーション（ＪＡＭＡ）２８０：７１９−７２３，１９９８）。不安定な狭心症の場合、ＬＰＡは、斑の破裂の直接的結果として最も放出されやすいようである。血漿ＬＰＡ濃度は、婦人科系癌の患者の場合６０μＭを超えることがある（ジュ（Ｘｕ），Ｙ．ら，ザ・ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・メディカル・アソシエーション（ＪＡＭＡ）２８０：７１９−７２３，１９９８）。血清ＬＰＡは、アテローム動脈硬化症の斑の破裂の有用なマーカーである。
【０１３１】
マロンジアルデヒド−修飾低密度リポ蛋白質（ＭＤＡ修飾ＬＤＬ）は、ホスホリパーゼ活性、プロスタグランジン合成、または血小板活性化の結果として、ＬＤＬのａｐｏＢ−１００部分の酸化中に形成される。ＬＤＬのＭＤＡ修飾は、脂質過酸化がない場合に起きるので、ＭＤＡ修飾ＬＤＬは、酸化されたＬＤＬから区別することができる（ホルベット（Ｈｏｌｖｏｅｔ），Ｐ．，アクタ・カーディオロジー（Ａｃｔａ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）５３：２５３−２６０，１９９８）。ＭＤＡ修飾ＬＤＬの正常な血漿濃度は、４μｇ／ｍｌ（〜１０μＭ）未満である。酸化されたＬＤＬの血漿濃度は、安定な狭心症、不安定な狭心症、および急性心筋梗塞で上昇し、このＬＤＬがアテローム動脈硬化症のマーカーであることを示している（ホルベット（Ｈｏｌｖｏｅｔ），Ｐ．，アクタ・カーディオロジー（Ａｃｔａ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）５３：２５３−２６０，１９９８、ホルベット（Ｈｏｌｖｏｅｔ），Ｐ．，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９８：１４８７−１４９４，１９９８）。血漿ＭＤＡ修飾ＬＤＬは、安定な狭心症では上がらないが、不安定な狭心症および急性心筋梗塞ではかなり上昇する（ホルベット（Ｈｏｌｖｏｅｔ），Ｐ．，アクタ・カーディオロジー（Ａｃｔａ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）５３：２５３−２６０，１９９８、ホルベット（Ｈｏｌｖｏｅｔ），Ｐ．，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９８：１４８７−１４９４，１９９８、ホルベット（Ｈｏｌｖｏｅｔ），Ｐ．，ザ・ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・メディカル・アソシエーション（ＪＡＭＡ）２８１：１７１８−１７２１，１９９９）。血漿ＭＤＡ修飾ＬＤＬは、ベータ地中海貧血の患者および腎移植患者で上昇する（リブレア，Ｍ．Ａ．ら，ブラッド（Ｂｌｏｏｄ）９２：３９３６−３９４２，１９９８、ガネム（Ｇｈａｎｅｍ），Ｈ．ら，キドニー・インターナショナル（Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．）４９：４８８−４９３，１９９６、ファンデンドルペル（ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｄｏｒｐｅｌ），Ｍ．Ａ．ら，トランスプラント・インターナショナル・９サプリメント（Ｔｒａｎｓｐｌ．Ｉｎｔ．９  Ｓｕｐｐｌ．）１：Ｓ５４−Ｓ５７，１９９６）。さらに、血清ＭＤＡ修飾ＬＤＬは、低酸素症の間に上昇する（バラゴパラクリシュナ（Ｂａｌａｇｏｐａｌａｋｒｉｓｈｎａ），Ｃ．ら，アドバンシス・イン・イクスペリメンタル・メディシン・アンド・バイオロジー（Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．）４１１：３３７−３４５，１９９７）。ＭＤＡ修飾ＬＤＬの血漿濃度は、胸痛の発症から６−８時間以内に上昇する。ＭＤＡ修飾ＬＤＬ血漿濃度は、急性心筋梗塞の患者では２０μｇ／ｍｌ（〜５０μＭ）に、不安定な狭心症の患者では１５μｇ／ｍｌ（〜４０μＭ）に近づくことができる（ホルベット（Ｈｏｌｖｏｅｔ），Ｐ．，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９８：１４８７−１４９４，１９９８）。血漿ＭＤＡ修飾ＬＤＬは、マウスにおいて５分未満の半減期を有する（リング（Ｌｉｎｇ），Ｗ．ら，ザ・ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．）１００：２４４−２５２，１９９７）。ＭＤＡ修飾ＬＤＬは、急性冠動脈症におけるアテ���ーム動脈硬化症の斑の破裂の特異的マーカーであるように思われる。しかし、それは、ＭＤＡ修飾ＬＤＬの血漿濃度の上昇が、斑の破裂または血小板の活性化の結果であるならば、不明確である。最も納得のいく説明は、増量したＭＤＡ修飾ＬＤＬの存在が、両現象の徴候であることである。ＭＤＡ修飾ＬＤＬは、不安定な狭心症および急性心筋梗塞を安定な狭心症から区別するのに役立つ。
【０１３２】
コラーゲナーゼ−１とも呼ばれるマトリックス・メタロプロテイン分解酵素−１（ＭＭＰ−１）は、４１／４４ｋＤａの亜鉛およびカルシウム血流蛋白質分解酵素であり、この酵素は、主として、タイプＩコラーゲンを分割するが、コラーゲンタイプＩＩ、ＩＩＩ、ＶＩＩおよびＸも分割することができる。活性な４１／４４ｋＤａの酵素は、なおも活性な２２／２７ｋＤａ形に自己分解することができる。ＭＭＰ−１は、平滑筋細胞、マスト細胞、マクロファージ誘導泡沫細胞、Ｔリンパ球、および内皮細胞を含む種々の細胞により合成される（ジョンソン（Ｊｏｈｎｓｏｎ），Ｊ．Ｌ．ら，アーテリオスクレロシス，トロンボシス，アンド・バスキュラー・バイオロジー（Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．）１８：１７０７−１７１５，１９９８）。その他のＭＭＰと同様に、ＭＭＰ−１は、損傷後または血管の間の細胞移動の間に起こりうる細胞外マトリックスのリモデリングに含まれる。ＭＭＰ−１は、自由形またはＭＭＰ−１の天然の阻害剤である、ＴＩＭＰ−１との複合体として血流中に存在しうる。ＭＭＰ−１は、通常、血漿中に＜２５ｎｇ／ｍｌの濃度で存在する。ＭＭＰ−１は、最も破裂しやすい領域であるアテローム動脈硬化症の斑の肩の領域で検出される（ジョンソン（Ｊｏｈｎｓｏｎ），Ｊ．Ｌ．ら，アーテリオスクレロシス，トロンボシス，アンド・バスキュラー・バイオロジー（Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．）１８：１７０７−１７１５，１９９８）。さらに、ＭＭＰ−１は、心筋再潅流損傷の病因に含まれている（シバタ（Ｓｈｉｂａｔａ），Ｍ．ら，アンギオロジー（Ａｎｇｉｏｌｏｇｙ）５０：５７３−５８２，１９９９）。血清ＭＭＰ−１は、マスト細胞の脱顆粒を誘発する炎症症状により上げられる。血清ＭＭＰ−１濃度は、関節炎および全身紅斑性狼瘡の患者で上がる（カイスツァー（Ｋｅｙｓｚｅｒ），Ｇ．ら，ツァイトシュリフト・フュール・リューマトロジー（Ｚ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．）５７：３９２−３９８，１９９８、カイスツァー（Ｋｅｙｓｚｅｒ），Ｇ．ら，ザ・ジャーナル・オブ・リューマトロジー（Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．）２６：２５１−２５８，１９９９）。血清ＭＭＰ−１も、前立腺癌の場合に上昇し、上昇の度合いは、腫瘍の転移可能性に対応する（ベーカー（Ｂａｋｅｒ），Ｔ．ら，ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・キャンサー（Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ）７０：５０６−５１２，１９９４）。ＭＭＰ−１の血清濃度は、その他の型の癌の患者でも上昇する。血清ＭＭＰ−１は、血色素症の患者および慢性ウイルス性肝炎の患者でも低下し、その濃度は重症度とは逆の関係がある（ジョージ（Ｇｅｏｒｇｅ），Ｄ．Ｋ．ら，ガッツ（Ｇｕｔ）４２：７１５−７２０，１９９８、ムラワキ（Ｍｕｒａｗａｋｉ），Ｙ．ら，ジャーナル・オブ・ガストロエンテロロジー・アンド・ヘパトロジー（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．）１４：１３８−１４５，１９９９）。血清ＭＭＰ−１は、急性心筋梗塞の後最初の４日は低下し、その後増加に転じ、急性心筋梗塞の発症後２週間でピークに到達する（ジョージ（Ｇｅｏｒｇｅ），Ｄ．Ｋ．ら，ガッツ（Ｇｕｔ）４２：７１５−７２０，１９９８）。
【０１３３】
ゼラチナーゼＡとも呼ばれる、マトリックス・メタロプロテイン分解酵素−２（ＭＭＰ−２）は、不活性な７２ｋＤａの前駆体として合成される亜鉛およびカルシウム結合蛋白質分解酵素である。成熟ＭＭＰ−３は、タイプＩゼラチンおよびタイプＩＶ、Ｖ、ＶＩＩ、およびＸのコラーゲンを分割する。ＭＭＰ−２は、血管平滑筋細胞、マスト細胞、マクロファージ誘導泡沫細胞、Ｔリンパ球、および内皮細胞を含む種々の細胞により合成される（ジョンソン（Ｊｏｈｎｓｏｎ），Ｊ．Ｌ．ら，アーテリオスクレロシス，トロンボシス，アンド・バスキュラー・バイオロジー（Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．）１８：１７０７−１７１５，１９９８）。ＭＭＰ−２は、通常、その生理学的調節剤である、ＴＩＭＰ−２との複合体として血漿中に存在する（ムラカワ（Ｍｕｒａｋａｗａ），Ｙ．ら，ジャーナル・オブ・ヘパトロジー（Ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌ．）３０：１０９０−１０９８，１９９９）。ＭＭＰ−２の正常な血漿濃度は、＜〜５５０ｎｇ／ｍｌ（８ｎＭ）である。ＭＭＰ−２の発現は、アテローム動脈硬化症の病変内の血管平滑筋において上昇し、ＭＭＰ−２は斑が不安定な場合に血流中に放出される（カイ（Ｋａｉ），Ｈ．ら，ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・カレッジ・オブ・カーディオロジー（Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）３２：３６８−３７２，１９９８）。さらに、ＭＭＰ−２は斑の不安定性および破裂への寄与者として関係していた（シャー（Ｓｈａｈ），Ｐ．Ｋ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９２：１５６５−１５６９，１９９５）。血管ＭＭＰ−２濃度は、安定な狭心症、不安定な狭心症、および急性心筋梗塞の患者で上昇し、安定な狭心症よりも不安定な狭心症および急性心筋梗塞の方が、大幅に上昇した（カイ（Ｋａｉ），Ｈ．ら，ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・カレッジ・オブ・カーディオロジー（Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）３２：３６８−３７２，１９９８）。安定な狭心症の患者の場合、トレッドミル運動テスト後の血清ＭＭＰ−２濃度の変化はなかった。血清および血漿のＭＭＰ−２は、胃癌、肝細胞癌、肝硬変、ウロセリアルな癌、リウマチ様関節炎、および肺癌の患者で上昇した（ムラカワ（Ｍｕｒａｋａｗａ），Ｙ．ら，ジャーナル・オブ・ヘパトロジー（Ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌ．）３０：１０９０−１０９８，１９９９、エンド（Ｅｎｄｏ），Ｋ．ら，アンチキャンサー・リサーチ（Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．）１７：２２５３−２２５８，１９９７、ゴージ（Ｇｏｈｊｉ），Ｋ．ら，キャンサー（Ｃａｎｃｅｒ）７８：１６１−１７１，１９９６、グルーバー（Ｇｒｕｂｅｒ），Ｂ．Ｌ．ら，クリニカル・イムノロジー・アンド・イムノパソロジー（Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．）７８：１６１−１７１，１９９６、ガルビサ（Ｇａｒｂｉｓａ），Ｂ．Ｌ．ら，キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．）５２：４５４８−４５４９，１９９２）。さらに、ＭＭＰ−２は、血小板から細胞分可溶成分を、血小板凝集中に、細胞外空間に移行させることもできる（サウィッキ（Ｓａｗｉｃｋｉ），Ｇ．ら，トロンボシス・アンド・ヘモスタシス��Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．）８０：８３６−８３９，１９９８）。ＭＭＰ−２は、不安定な狭心症および急性心筋梗塞の患者の血清が入院時に上昇し、最高レベルは１．５μｇ／ｍｌ（２５ｎＭ）近くになった（カイ（Ｋａｉ），Ｈ．ら，ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・カレッジ・オブ・カーディオロジー（Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）３２：３６８−３７２，１９９８）。血清ＭＭＰ−２濃度は、不安定な狭心症および急性心筋梗塞の両方が発症後１−３日でピークに達し、１週間後に正常値に戻り始めた（カイ（Ｋａｉ），Ｈ．ら，ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・カレッジ・オブ・カーディオロジー（Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）３２：３６８−３７２，１９９８）。
【０１３４】
ストロメリシン−１とも呼ばれる、マトリックス・メタロプロテイン分解酵素−３（ＭＭＰ−３）は、不活性な６０ｋＤａの前駆体として合成される４５ｋＤａの亜鉛およびカルシウム結合蛋白質分解酵素である。成熟ＭＭＰ−３は、プロテオグリカン、フィブリネクチン、ラミニン、およびタイプＩＶコラーゲンを分割するが、タイプＩコラーゲンは分割しない。ＭＭＰ−３は、平滑筋細胞、マスト細胞、マクロファージ誘導泡沫細胞、Ｔリンパ球、および内皮細胞を含む多様な細胞により合成される（ジョンソン（Ｊｏｈｎｓｏｎ），Ｊ．Ｌ．ら，アーテリオスクレロシス，トロンボシス，アンド・バスキュラー・バイオロジー（Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．）１８：１７０７−１７１５，１９９８）。その他のＭＭＰと同様に、ＭＭＰ−３は、損傷後または血管間の細胞移動の間に起きる細胞外のマトリックスのリモデリングに含まれる。ＭＭＰ−３は、通常、血漿中に＜１２５ｎｇ／ｍｌの濃度で存在する。血清ＭＭＰ−３濃度は、年齢と共に上がり、女性よりも男性の方が約２倍高い（マニコート（Ｍａｎｉｃｏｕｒｔ），Ｄ．Ｈ．ら，アースリチス・アンド・リュウマチズム（Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｒｈｅｕｍ．）３７：１７７４−１７８３，１９９４）。ＭＭＰ−３は、最も破裂しやすい領域であるアテローム動脈硬化症の肩の領域に存在し、アテローム動脈硬化症の斑の不安定化に含まれる（ジョンソン（Ｊｏｈｎｓｏｎ），Ｊ．Ｌ．ら，アーテリオスクレロシス，トロンボシス，アンド・バスキュラー・バイオロジー（Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．）１８：１７０７−１７１５，１９９８）。したがって、ＭＭＰ−３の濃度は、不安定な狭心症におけるアテローム動脈硬化症の斑の破裂の結果として上昇する。血清ＭＭＰ−３は、マスト細胞の脱顆粒を誘起する炎症症状を上昇させる。血清ＭＭＰ−３の濃度は、関節炎および全身性紅斑性狼瘡の患者で上昇する（ツッカー（Ｚｕｃｋｅｒ），Ｓ．ら，ザ・ジャーナル・オブ・リューマトロジー（Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．）２６：７８−８０，１９９９、カイスツァー（Ｋｅｙｓｚｅｒ），Ｇ．ら，ツァイトシュリフト・フュール・リューマトロジー（Ｚ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．）５７：３９２−３９８，１９９８、カイスツァー（Ｋｅｙｓｚｅｒ），Ｇ．ら，ザ・ジャーナル・オブ・リューマトロジー（Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．）２６：２５１−２５８，１９９９）。血清ＭＭＰ−３は、前立腺癌およびウロセリアルな癌、および糸球体腎炎の患者でも上昇する（ライン（Ｌｅｉｎ），Ｍ．ら，ウロローゲ（Ｕｒｏｌｏｇｅ）Ａ３７：３７７−３８１，１９９８、ゴージ（Ｇｏｈｊｉ），Ｋ．ら，キャンサー（Ｃａｎｃｅｒ）７８：２３７９−２３８７，１９９６、アキヤマ（Ａｋｉｙａｍａ），Ｋ．ら，リサーチ・コミュニケーション・イン・モレキュラー・パソロジー・アンド・ファーマコロジー（Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．Ｍｏｌ．Ｐａｔｈｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．）９５：１１５−１２８，１９９７）。ＭＭＰ−３の血清濃度は、その他の型の癌の患者でも上昇する。血清ＭＭＰ−３は、血色素症の患者の場合低下する（ジョージ（Ｇｅｏｒｇｅ），Ｄ．Ｋ．ら，��ッツ（Ｇｕｔ）４２：７１５−７２０，１９９８）。
【０１３５】
ゼラチナーゼとも呼ばれる、マトリックス・メタロプロテイン分解酵素−９（ＭＭＰ−９）は、不活性な９２ｋＤａの前駆体として合成される８４ｋＤａの亜鉛およびカルシウム結合蛋白質分解酵素である。成熟ＭＭＰ−９は、タイプＩおよびＶのゼラチン、およびタイプＩＶおよびＶのコラーゲンを分割する。ＭＭＰ−９は、モノマー、ホモダイマー、および２５ｋＤａのα2−マクログロブリン関連蛋白質を有するヘテロダイマーとして存在する（トリーベル（Ｔｒｉｅｂｅｌ），Ｓ．ら，ＦＥＢＳレターズ（Ｌｅｔｔ．）３１４：３８６−３８８，１９９２）。ＭＭＰ−９は、多様な型の細胞、特に好中球により合成される。ＭＭＰ−９の正常な血漿濃度は、＜３５ｎｇ／ｍｌ（４００ｐＭ）である。ＭＭＰ−９の発現は、アテローム動脈硬化症の病変内の血管平滑筋細胞で上昇し、ＭＭＰ−９は斑が不安定な場合に血流に放出される（カイ（Ｋａｉ），Ｈ．ら，ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・カレッジ・オブ・カーディオロジー（Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）３２：３６８−３７２，１９９８）。さらに、ＭＭＰ−９は、ＡＣＳの発症における病原の役割を有する（ブラウン（Ｂｒｏｗｎ），Ｄ．Ｌ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９１：２１２５−２１３１，１９９５）。血漿ＭＭＰ−９濃度は、不安定な狭心症および急性心筋梗塞の患者ではかなり上がるが、安定な狭心症の患者では上がらない（カイ（Ｋａｉ），Ｈ．ら，ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・カレッジ・オブ・カーディオロジー（Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）３２：３６８−３７２，１９９８）。急性心筋梗塞の患者における上昇は、これらの患者が不安定な狭心症を罹患した患者であることを示している。ＭＭＰ−９の血漿濃度の上昇も、急性心筋梗塞よりも不安定な狭心症の方が大きい。安定な狭心症の患者では、トレッドミル運動テスト後の血漿ＭＭＰ−９のレベルの有意な変化はなかった（カイ（Ｋａｉ），Ｈ．ら，ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・カレッジ・オブ・カーディオロジー（Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）３２：３６８−３７２，１９９８）。血漿ＭＭＰ−９は、リューマチ様関節炎、敗血症ショック、巨細胞動脈炎および種々の癌の患者で上昇する（グルーバー（Ｇｒｕｂｅｒ），Ｂ．Ｌ．ら，クリニカル・イムノロジー・アンド・イムノパソロジー（Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．）７８：１６１−１７１，１９９６、ナカムラ（Ｎａｋａｍｕｒａ），Ｔ．ら，ジ・アメリカン・ジャーナル・オブ・ザ・メディカル・サイエンシズ（Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．）３１６：３５５−３６０，１９９８、ブランカート（Ｂｌａｎｋａｅｒｔ），Ｄ．ら，ジャーナル・オブ・アクアイアード・イミューン・デフィシェンシー・シンドローム・アンド・ヒューマン・レトロビロロジー（Ｊ．Ａｃｑｕｉｒ．Ｉｍｍｕｎｅ  Ｄｅｆｉｃ．Ｓｙｎｄｒ．Ｈｕｍ．Ｒｅｔｒｏｖｉｒｏｌ．）１８：２０３−２０９，１９９８、エンド（Ｅｎｄｏ），Ｋ．ら，アンチキャンサー・リサーチ（Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．）１７：２２５３−２２５８，１９９７、ハヤサカ（Ｈａｙａｓａｋａ）Ａ．ら，ヘパトロジー（Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ）��４：１０５８−１０６２，１９９６、ムーア（Ｍｏｏｒ），Ｄ．Ｈ．ら，ジャインコロジック・オンコロジー（Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．）６５：７８−８２，１９９７、ソルビ（Ｓｏｒｂｉ），Ｄ．ら，アースリチス・アンド・リューマチズム（Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．）３９：１７４７−１７５３，１９９６、イイザサ（Ｉｉｚａｓａ），Ｔ．ら，クリニカル・キャンサー・リサーチ（Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．）５：１４９−１５３，１９９９）。さらに、血漿ＭＭＰ−９濃度は、脳卒中および脳出血の場合に上昇する（マンブライス（Ｍｕｎ−Ｂｒｙｃｅ），Ｓ．およびローゼンバーグ（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ），Ｇ．Ａ．，ジャーナル・オブ・セレブラル・ブラッド・フロー・アンド・メタボリズム（Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  Ｍｔａｂ．）１８：１１６３−１１７２，１９９８、ロマニック（Ｒｏｍａｎｉｃ），Ａ．Ｍ．ら，ストローク（Ｓｔｒｏｋｅ）２９：１０２０−１０３０，１９９８、ローゼンバーグ（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ），Ｇ．Ａ．，ジャーナル・オブ・ニューロトラウマ（Ｊ．Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ）１２：８３３−８４２，１９９５）。ＭＭＰ−９は、不安定な狭心症および急性心筋梗塞の患者の血清で入院中に上昇し、最高レベルは１５０ｎｇ／ｍｌ（１．７ｎＭ）に近い（カイ（Ｋａｉ），Ｈ．ら，ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・カレッジ・オブ・カーディオロジー（Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）３２：３６８−３７２，１９９８）。血清ＭＭＰ−９の濃度は、不安定な狭心症の患者が入院時に最高になり、濃度は治療後次第に低下し、発症後１週間以上してベースラインに近づいた（カイ（Ｋａｉ），Ｈ．ら，ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・カレッジ・オブ・カーディオロジー（Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）３２：３６８−３７２，１９９８）。
【０１３６】
マトリックス・メタロプロテイン分解酵素とそれらの阻害剤との間のバランスは、腫瘍の侵入および転移に影響を及ぼす重要な要因である。ＴＩＭＰファミリーは、メタロプロテイン分解酵素を阻害する１種の小さな（２１−２８ｋＤａ）関連蛋白質である。メタロプロテイン分解酵素１（ＴＩＭＰ１）は、ヒトの骨の正常な発達における骨のモデリングおよびリモデリングの調節に含まれると言われており、多形性Ｘ染色体不活性化を実証している急性骨髄性白血病の侵入表現型に含まれる。ＴＩＭＰ１は、ｍｍｐ−１、ｍｍｐ−２、ｍｍｐ−３、ｍｍｐ−７、ｍｍｐ−８、ｍｍｐ−９、ｍｍｐ−１０、ｍｍｐ−１１、ｍｍｐ−１２、ｍｍｐ−１３およびｍｍｐ−１６に作用することが知られている。メタロプロテイン分解酵素２（ＴＩＭＰ２）の組織阻害剤は、メタロプロテイン分解酵素（コラーゲナーゼなど）と複合体を形成し、不可逆的にそれらを不活性化する。ＴＩＭＰ２は、ｍｍｐ−１、ｍｍｐ−２、ｍｍｐ−３、ｍｍｐ−７、ｍｍｐ−８、ｍｍｐ−９、ｍｍｐ−１０、ｍｍｐ−１３、ｍｍｐ−１４、ｍｍｐ−１５、ｍｍｐ−１６およびｍｍｐ−１９に作用することが知られている。２つの交互に接合した形態は、ＳＹＮ−４と結合し、急性骨髄性白血病の侵入表現型に含まれる。その他一部のＴＩＭＰ遺伝子ファミリー・メンバーの誘導的発現と異なり、この遺伝子の発現は大いに構成的である。メタロプロテイン分解酵素（ＴＩＭＰ３）の組織阻害剤は、マトリックス・メタロプロテイン分解酵素活性を抑制し、腫瘍の増殖、血管形成、侵入、および転移を抑制することができる。ＴＩＭＰ−３の喪失は、腫瘍形成に関連づけられる。
【０１３７】
インター−アルファ−阻害剤（Ｉ−α−Ｉ）ファミリーは、４つの血漿蛋白質（フリービクニン，Ｉ−α−Ｉ（またはインター−α−トリプシン阻害剤）、）プレ−アルファ−阻害剤（Ｐ−α−Ｉ）およびインター−α−様阻害剤（Ｉ−α−ＬＩ）を包含する。最後の３つの蛋白質の各々は、Ｈ１、Ｈ２およびＨ３と呼ばれる１つ以上のユニークな重い（Ｈ）鎖を有する１つのビクニン鎖の別の集合である。３つのＨ鎖およびビクニン鎖は、４つの別のｍＲＮＡによりコード化される。これらの分子および鎖、並びに対応するｍＲＮＡは、軽症または重症の急性感染症有無の両患者からの血清において定量化された。急性炎症では、Ｈ２およびビクニン鎖は、下方に調節されると報告されており、関連分子（Ｉ−α−ＩおよびＩ−α−ＬＩ）は負の急性期蛋白質として挙動し、一方、Ｈ３鎖は上の方に調節され、対応する（Ｐ−α−Ｉ）分子は正の急性期蛋白質である。Ｈ１遺伝子は、炎症症状により影響を受けないようである。例えば、サライアー（Ｓａｌｉｅｒ）ら，ザ・バイオケミカル・ジャーナル（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ）３１５：１−９，１９９６、を参照のこと、国際公開第０１／６３２８０号も参照のこと。
【０１３８】
（ｉｖ）炎症に関連した代表的マーカー
肺表面活性物質蛋白質Ｄ（ＳＰ−Ｄ）は、４３ｋＤａの蛋白質として合成され、呼吸上皮により肺の空気空間中に分泌される。肺胞のレベルにおいて、ＳＰ−Ｄは構成的に合成され、タイプＩＩ肺胞細胞により分泌される。コラーゲンのカルシウム依存性レクチン（またはコレクチン）であるＳＰ−Ｄは、多種多様な微生物により発現された表面複合糖質および種々の複合有機抗原の表面に結びついたオリゴ糖に結合する。ＳＰ−Ｄは、特に、マクロファージ、好中球、およびリンパ球の表面で発現された糖複合体、およびその他の分子とも反応する。さらに、ＳＰ−Ｄは、特異的に界面アクチベータと結合した脂質と結合し、試験管でホスファチジルイノシトールを含む、脂質混合物の組織に影響を及ぼすことができる。ＳＰ−Ｄ欠陥トランスジェニック・マウスは、界面アクチベータ脂質の異常な蓄積を示し、呼吸ウイルスおよび細菌リポ多糖類を用いた挑戦に対して異常に反応するという観察は、これら多様な試験管活性と一致する。ＳＰ−Ｄ欠陥マウスの肺から単離されたマクロファージの表現型は変更され、異常なオキシダント代謝および／または増加したメタロプロテイン分解酵素の発現が、肺気腫の発症に寄与する。ＳＰ−Ｄの発現は、多くの形の肺損傷に反応して増加し、適切にオリゴマー化されたＳＰ−Ｄの欠陥蓄積は多様なヒト肺疾患の病因に寄与する（クラウチ（Ｃｒｏｕｃｈ）１：９３−１０８，２０００）。
【０１３９】
インターロイキン（ＩＬ）は、サイトカインとして知られた比較的大きな種類のポリペプチドである。これらは、免疫系の種々の細胞間で信号を伝えるメッセンジャー分子である。これらの分子は、大抵、マクロファージおよびリンパ球により分泌され、これらの産生は損傷または感染に応じて誘導される。これらの作用は、免疫系並びにその他の組織および肝臓と脳とを含む臓器のその他の細胞に影響する。記述された少なくとも１８のＩＬがある。本発明においてマーカーとして使用するのに好ましいのは、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１８、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、およびＩＬ−２５である。下記表には、代表的なインターロイキンの選択された機能を示す。
【０１４０】
【表１】
2007518062.tif 000003
【０１４１】
インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）は１７ｋＤａの分泌された炎症促進サイトカインであり、このサイトカインは、急性期反応に含まれ、多くの疾患の病因媒介体である。ＩＬ−１βは、通常、マクロファージおよび上皮細胞により産生される。ＩＬ−１βは、アポトーシスを受けている細胞からも放出される。ＩＬ−１βの正常な血清濃度は、＜３０ｐｇ／ｍｌ（１．８ｐＭ）である。理論的には、ＩＬ−１βは不安定な狭心症および急性心筋梗塞におけるＣＲＰなどのその他の急性期蛋白質よりも早く上昇する。これは、ＩＬ−１βは急性期反応に早くから関与しているためである。さらに、ＩＬ−１βは虚血症の初期段階において活性化されるアポトーシスを受けている細胞から放出される。これに鑑みて、ＡＣＳと関連した血漿ＩＬ−１β濃度の上昇は、高感度の検定法を用いた研究をさらに行う必要がある。血漿ＩＬ−１β濃度の上昇は、外傷および感染などの炎症促進症状における急性期の反応と関連がある。ＩＬ−１βは、５分と４時間からなる生理学的に二相の半減期を有する（クド（Ｋｕｄｏ），ら，キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．）５０：５７５１−５７５５，１９９０）。ＩＬ−１βは、炎症反応の活性化またはアポトーシスにより細胞外の環境に放出される。
【０１４２】
インターロイキン−１受容体阻害剤（ＩＬ−１ｒａ）は、主として、肝細胞、上皮細胞、単球、マクロファージ、および好中球において発現されたＩＬ−１ファミリーの１７ｋＤａのメンバーである。ＩＬ−１ｒａは、交互スプライシングにより作られた、細胞内と細胞外との両方の形態を有する。ＩＬ−１ｒａは、生理学的ＩＬ−１活性の調節に関与していると考えられる。ＩＬ−１ｒａは、ＩＬ−１の様な生理学的活性は有しないが、ＩＬ−１αとＩＬ−１βとの結合を遮断し、これらの生物活性を阻害し、ＩＬ−１βの親和性に類似した親和性を有するＴ細胞および線維芽細胞上にＩＬ−１受容体を結合することができる（ストックマン（Ｓｔｏｃｋｍａｎ），Ｂ．Ｊ．ら，バイオケミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）３１：５２３７−５２４５，１９９２、アイゼンベルク（Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ），Ｓ．Ｐ．ら，プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・オブ・ユナイテッド・ステート・オブ・アメリカ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．）８８：５２３２−５２３６，１９９１、カーター（Ｃａｒｔｅｒ），Ｄ．Ｂ．ら，ネーチャー（Ｎａｔｕｒｅ）３４４：６３３−６３８，１９９０）。ＩＬ−１ｒａは、通常、血漿中でＩＬ−１よりも高濃度で存在し、ＩＬ−１ｒａのレベルは、ＩＬ−１よりも疾患重症度との相関が良好であることが示唆されている（ビアスッチ（Ｂｉａｓｕｃｃｉ），Ｌ．Ｍ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９９：２０７９−２０８４，１９９９）。さらに、ＩＬ−１ｒａは、急性期蛋白質であるという所見がある（ガベイ（Ｇａｂａｙ），Ｃ．ら，ザ・ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．）９９：２９３０−２９４０，１９９７）。ＩＬ−１ｒａの正常な血漿濃度は、＜２００ｐｇ／ｍｌ（１２ｐＭ）である。ＩＬ−１ｒａの血漿濃度は、急性心筋梗塞の患者および急性心筋梗塞、死亡または難治性狭心症に進行する不安定な狭心症の患者では上昇する（ビアスッチ（Ｂｉａｓｕｃｃｉ），Ｌ．Ｍ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９９：２０７９−２０８４，１９９９、ラチーニ（Ｌａｔｉｎｉ），Ｒ．ら，ジャーナル・オブ・カーディオバスキュラー・ファーマコロジー（Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．）２３：１−６，１９９４）。さらに、ＩＬ−１ｒａは、合併症のない急性心筋梗塞に比べて重症の急性心筋梗塞でかなり上昇した（ラチーニ（Ｌａｔｉｎｉ），Ｒ．ら，ジャーナル・オブ・カーディオバスキュラー・ファーマコロジー（Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．）２３：１−６，１９９４）。ＩＬ−１ｒａの血漿濃度の上昇は、感染、外傷および関節炎を含む炎症または急性期の反応の活性化を含む何らかの症状と関連がある。ＩＬ−１ｒａは、炎症促進症状において血流中に放出され、ＩＬ−１ｒａは、急性期の反応に関与する時も放出される。ＩＬ−１ｒａの血流からの排除は、主に、腎臓および肝臓で行われるようである（キム（Ｋｉｍ），Ｄ．Ｃ．ら，ジャーナル・オブ・ファーマシューティカル・サイエンシズ（Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．）８４：５７５−５８０，１９９５）。ＩＬ−１ｒａの濃度は、不安定な狭心症の患者の血漿中で発症後２４時間以内に上昇し、これらの上昇は発症後２時間以内に明らかになることさえある（ビアスッチ（Ｂｉａｓｕｃｃｉ），Ｌ．Ｍ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９９：２０７９−２０８４，１９９９）。不安定な狭心症が重篤に進行した患者では、ＩＬ−１ｒａの血漿濃度は、入院時のレベルよりも発症後４８時間頃が比較的高く、経過が順調な患者ではこの濃度は低下した（ビアスッチ（Ｂｉａｓｕｃｃｉ），Ｌ．Ｍ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９９：２０７９−２０８４，１９９９）。さらに、不安定な狭心症と関連したＩＬ−１ｒａの血漿濃度は、約１．４ｎｇ／ｍｌ（８０ｐＭ）である。ＩＬ−１ｒａの血漿濃度の変化は、疾患の重症度と関係があるように思われる。さらに、ＩＬ−１ｒａは、炎症促進症状におけるＩＬ−１の放出と共にまたはＩＬ−１の放出後直ぐに放出されるようであり、ＩＬ−１ｒａは、ＩＬ−１よりも高い濃度で存在する。これは、ＩＬ−１ｒａは、ＩＬ−６の産生を検出するＩＬ−１活性の有用な間接的マーカーであることを示している。
【０１４３】
インターロイキン−６（ＩＬ−６）は、造血ファミリー炎症促進サイトカインである２０ｋＤａの分泌蛋白質である。ＩＬ−６は、急性期の反応物であり、接着分子を含む種々の蛋白質の合成を刺激する。ＩＬ−６の主要な機能は、血液蛋白質の急性期の産生を媒介することであり、その合成はサイトカインＩＬ−１により誘導される。ＩＬ−６は、通常、マクロファージおよびＴリンパ球により産生される。ＩＬ−６の正常な血清濃度は、＜３ｐｇ／ｍｌ（０．１５ｐＭ）である。ＩＬ−６の血漿濃度は、急性心筋梗塞および不安定な狭心症の患者で上昇し、急性心筋梗塞の方が上がりかたが激しい（ビアスッチ（Ｂｉａｓｕｃｃｉ），Ｌ．Ｍ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９４：８７４−８７７，１９９４、マンテン（Ｍａｎｔｅｎ），Ａ．ら，カーディオバスキュラー・リサーチ（Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．）４０：３８９−３９５，１９９８、ビアスッチ（Ｂｉａｓｕｃｃｉ），Ｌ．Ｍ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９９：２０７９−２０８４，１９９９）。ＩＬ−６は、安定な狭心症の患者では、血漿中で顕著に上がることはない（ビアスッチ（Ｂｉａｓｕｃｃｉ），Ｌ．Ｍ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９４：８７４−８７７，１９９４、マンテン（Ｍａｎｔｅｎ），Ａ．ら，カーディオバスキュラー・リサーチ（Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．）４０：３８９−３９５，１９９８）。さらに、ＩＬ−６の濃度は、重症化する不安定な狭心症の患者の血漿中で発症から４８時間にわたり増加するが、経過が順調な場合は低下する（ビアスッチ（Ｂｉａｓｕｃｃｉ），Ｌ．Ｍ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９９：２０７９−２０８４，１９９９）。これは、ＩＬ−６が、疾患の進行の有用な指標になることを示している。ＩＬ−６の血漿上昇は、外傷、感染、または急性期の反応を検出するその他の疾患などの非特異的な炎症促進症状に関連している。ＩＬ−６の半減期は、血流中で４．２時間であり、急性心筋梗塞および不安定な狭心症の後では延びる（マンテン（Ｍａｎｔｅｎ），Ａ．ら，カーディオバスキュラー・リサーチ（Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．）４０：３８９−３９５，１９９８）。ＩＬ−６の血漿濃度は、急性心筋梗塞発症後９−１２時間以内に上昇し、１００ｐｇ／ｍｌに近づくことができる。不安定な狭心症の患者のＩＬ−６の血漿濃度は、おそらく、傷害の重症度により、発症後７２時間でピークレベルに上昇した（ビアスッチ（Ｂｉａｓｕｃｃｉ），Ｌ．Ｍ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９４：８７４−８７７，１９９６）。
【０１４４】
インターロイキン−８（ＩＬ−８）は、単球により産生された６．５ｋＤａのケモカインである。ＩＬ−８は、走化性および好中球およびＴ細胞の活性化を誘起する。
【０１４５】
腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）は、急性期反応に関与し、多くの疾患の病因媒介体である分泌された１７ｋＤａの炎症促進サイトカインである。ＴＮＦαは、通常、マクロファージおよび天然キラー細胞により産生される。ＴＮＦαは、７３および１７２の位置でグリコシル化された１８５個のアミノ酸からなる蛋白質である。ＴＮＦαは、２１２個のアミノ酸からなる前駆体蛋白質として合成される。単球は、２１．５−２８ｋＤａの分子量を有するＴＮＦαの少なくとも５種類の分子形を発現する。これらは、主として、グリコシル化およびホスホリル化などの翻訳後の変化による違いがある。ＴＮＦαの正常な血清濃度は、＜４０ｐｇ／ｍｌ（２ｐＭ）である。ＴＮＦαの血漿濃度は、急性心筋梗塞の患者で上がり、不安定な狭心症の患者でわずかに上がる（リ（Ｌｉ），Ｄ．ら，アメリカン・ハート・ジャーナル（Ａｍ．Ｈｅａｒｔ  Ｊ．）１３７：１１４５−１１５２，１９９９、スクアドリト（Ｓｑｕａｄｒｉｔｏ），Ｆ．ら，インフラメーション・リサーチ（Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｒｅｓ．）４５：１４−１９，１９９６、ラチーニ（Ｌａｔｉｎｉ），Ｒ．ら，ジャーナル・オブ・カーディオバスキュラー・ファーマコロジー（Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．）２３：１−６，１９９４、カールシュテット（Ｃａｒｌｓｔｅｄｔ），Ｆ．ら，ジャーナル・オブ・インターナル・メディシン（Ｊ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．）２４２：３６１−３６５，１９９７）。ＴＮＦαの血漿濃度の上昇は、外傷、脳卒中、および感染を含む何らかの炎症促進症状と関係がある。ＴＮＦαの半減期は、血流中で約１時間であり、ＴＮＦαは発症後直ぐに循環系から除去されることを示している。急性心筋梗塞の患者では、ＴＮＦαは、胸痛発症後４時間上昇し、発症後４８時間以内に正常レベルまで次第に低下した（リ（Ｌｉ），Ｄ．ら，アメリカン・ハート・ジャーナル（Ａｍ．Ｈｅａｒｔ  Ｊ．）１３７：１１４５−１１５２，１９９９）。急性心筋梗塞患者の血漿中のＴＮＦαの濃度は、３００ｐｇ／ｍｌ（１５ｐＭ）を超えた（スクアドリト（Ｓｑｕａｄｒｉｔｏ），Ｆ．ら，インフラメーション・リサーチ（Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｒｅｓ．）４５：１４−１９，１９９６）。単球によるＴＮＦαの放出は、石炭労働者の塵肺症の悪化にも関係していた（シン（Ｓｃｈｉｎｓ）およびボルム（Ｂｏｒｍ），オキュペーショナル・アンド・エンバイロンメンタル・メディシン（Ｏｃｃｕｐ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｅｄ．）５２：４４１−４５０（１９９５））。
【０１４６】
ＣＤ５４とも呼ばれる、可溶性細胞間接着分子（ｓＩＣＡＭ−１）は、８５−１１０ｋＤａの細胞表面結合免疫グロブリン様インテグリン・リガンドであり、これは白血球の補充と移動の間に抗原提示細胞および内皮細胞への白血球の結合を促進する作用がある。ｓＩＣＡＭ−１は、通常、血管内皮細胞、造血幹細胞および非造血幹細胞により産生され、これらの細胞は腸および表皮に存在している。ｓＩＣＡＭ−１は、細胞死または蛋白質分解活性の結果として細胞表面から放出されうる。ｓＩＣＡＭ−１の正常な血漿濃度は、約２５０ｎｇ／ｍｌ（２．９ｎＭ）である。ｓＩＣＡＭ−１の血漿濃度は、急性心筋梗塞および不安定な狭心症の患者ではかなり上昇するが、安定な狭心症では上昇しない（ペレガッタ（Ｐｅｌｌｅｇａｔｔａ），Ｆ．ら，ジャーナル・オブ・カーディオバスキュラー・ファーマコロジー（Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．）３０：４５５−４６０，１９９７、ミワ（Ｍｉｗａ），Ｋ．ら，カーディオバスキュラー・リサーチ（Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．）３６：３７−４４，１９９７、ガイサス（Ｇｈａｉｓａｓ），Ｎ．Ｋ．ら，ジ・アメリカン・ジャーナル・オブ・カーディオロジー（Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）８０：６１７−６１９，１９９７、オガワ（Ｏｇａｗａ），Ｈ．ら，ジ・アメリカン・ジャーナル・オブ・カーディオロジー（Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）８３：３８−４２，１９９９）。さらに、ＩＣＡＭ−１は、アテローム動脈硬化症の斑および病変を形成しやすい領域において発現され、ＩＣＡＭ−１は斑が破裂した時に血流中に放出される（イイヤマ（Ｉｉｙａｍａ），Ｋ．ら，サーキュレーション・リサーチ（Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．）８５：１９９−２０７，１９９９、テナグリア（Ｔｅｎａｇｌｉａ），Ａ．Ｎ．ら，ジ・アメリカン・ジャーナル・オブ・カーディオロジー（Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）７９：７４２−７４７，１９９７）。ｓＩＣＡＭ−１の血漿濃度の上昇は、虚血発作、頭部外傷、アテローム動脈硬化症、癌、子癇前症、多発性硬化症、のう胞性線維症、およびその他の非特異的炎症病状と関係がある（キム（Ｋｉｍ），Ｊ．Ｓ．，ジャーナル・オブ・ザ・ニューロロジカル・サイエンシズ（Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．）１３７：６９−７８，１９９６、ラスコビッチ（Ｌａｓｋｏｗｉｔｚ），Ｄ．Ｔ．ら，ジャーナル・オブ・ストローク・セレブロバスキュラー・ディジージズ（Ｊ．Ｓｔｒｏｋｅ  Ｃｒｅｂｒｏｖａｓｃ．Ｄｉｓ．）７：２３４−２４１，１９９８）。ｓＩＣＡＭ−１の血漿濃度は、急性心筋梗塞および不安定な狭心症の急性段階の間に上昇する。血漿ｓＩＣＡＭ−１の上昇は、急性心筋梗塞が発症してから９−１２時間の間にそのピークに達し、２４時間以内に正常なレベルに戻る（ペレガッタ（Ｐｅｌｌｅｇａｔｔａ），Ｆ．ら，ジャーナル・オブ・カーディオバスキュラー・ファーマコロジー（Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．）３０：４５５−４６０，１９９７）。ｓＩＣＡＭ−１の血漿濃度は、急性心筋梗塞の患者において、７００ｎｇ／ｍｌ（８ｎＭ）に近づくことができる（ペレガッタ（Ｐｅｌｌｅｇａｔｔａ），Ｆ．ら，ジャーナル・オブ・カーディオバスキュラー・ファーマコロ���ー（Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．）３０：４５５−４６０，１９９７）。ｓＩＣＡＭ−１は、心筋梗塞および不安定な狭心症の血漿中で上昇するが、ｓＩＣＡＭ−１はこれらの疾患に対して特異的ではない。しかし、血漿上昇は安定な狭心症とは関係がないので、ｓＩＣＡＭ−１は、安定な狭心症から急性心筋梗塞および不安定な狭心症を区別する場合に有用なマーカーである。興味深いことに、ＩＣＡＭ−１は、アテローム動脈硬化症の斑の中に存在し、斑が破裂すると血流中に放出される。追加のＩＣＡＭ分子は、血液中にも存在するＩＣＡＭ−２（ＣＤ１０２とも呼ばれる）およびＩＣＡＭ−３（ＣＤ５０とも呼ばれる）を含めて、当該分野で周知である。
【０１４７】
ＣＤ１０６とも呼ばれる血管細胞接着分子（ＶＣＡＭ）は、１００−１１０ｋＤａ細胞表面結合免疫グロブリン様インテグリン・リガンドであり、これは、リンパ球補充中に、抗原提示細胞へのＢリンパ球および発達中のＴリンパ球の結合を促進する。ＶＣＡＭは、通常、血管およびリンパ管、心臓、およびその他の体腔を裏打ちする内皮細胞により産生される。ＶＣＡＭ−１は、細胞死の間に、または蛋白質分解活性の結果として、細胞表面から放出されうる。ｓＶＣＡＭの正常な血清濃度は、約６５０ｎｇ／ｍｌ（６．５ｎＭ）である。ｓＶＣＡＭの血漿濃度は、急性心筋梗塞、不安定な狭心症、および安定な狭心症の患者でわずかに上がる（ムルビヒル（Ｍｕｌｖｉｈｉｌｌ），Ｎ．ら，ジ・アメリカン・ジャーナル・オブ・カーディオロジー（Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）８３：１２６５−１２６７，１９９７、ガイサス（Ｇｈａｉｓａｓ），Ｎ．Ｋ．ら，ジ・アメリカン・ジャーナル・オブ・カーディオロジー（Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）８０：６１７−６１９，１９９７）。しかし、ｓＶＣＡＭ−１は、アテローム動脈硬化病変において発現され、その血漿濃度はアテローム動脈硬化症の程度と相関づけることができる（イイヤマ（Ｉｉｙａｍａ），Ｋ．ら，サーキュレーション・リサーチ（Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．）８５：１９９−２０７，１９９９、ピーター（Ｐｅｔｅｒ），Ｋ．ら，アーテリオスクレロシス，トロンボシス，アンド・バスキュラー・バイオロジー（Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．１７：５０５−５１２，１９９７）。ｓＶＣＡＭ−１の血漿濃度の上昇は、虚血発作、糖尿病、血管損傷、およびその他の非特異的炎症病状と関係がある（ビッチ（Ｂｉｔｓｃｈ），Ａ．ら，ストローク（Ｓｔｒｏｋｅ）２９：２１２９−２１３５，１９９８、オツキ（Ｏｔｓｕｋｉ），Ｍ．ら，ダイアビーツ（Ｄｉａｂｅｔｅｓ）４６：２０９６−２１０１，１９９７、バンクス（Ｂａｎｋｓ），Ｒ．Ｅ．ら，ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・キャンサー（Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ）６８：１２２−１２４，１９９３、スタイナー（Ｓｔｅｉｎｅｒ），Ｍ．ら，トロンボシス・アンド・ヘモスタシス（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．）７２：９７９−９８４，１９９４、アウストグレン（Ａｕｓｔｇｕｌｅｎ），Ｒ．ら，ユーローピアン・ジャーナル・オブ・オブステトリックス・ガイニコロジー・アンド・レプロダクティブ・バイオロジー（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｂｓｔｅｔ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｂｉｏｌ．）７１：５３−５８，１９９７）。
【０１４８】
単球走化性蛋白質−１（ＭＣＰ−１）は、単球および好塩基球を引き付けるが、好中球または好酸球を引き付けない、１０ｋＤａの走化性因子である。ＭＣＰ−１は、通常、モノマー形とホモダイマー形との間で平衡状態にあり、単球および血管内皮細胞により産生され、分泌される（ヨシムラ（Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ），Ｔ．ら，ＦＥＢＳレターズ（Ｌｅｔｔｅｒｓ）２４４：４８７−４９３，１９８９、リ（Ｌｉ），Ｙ．Ｓ．ら，モレキュラー・アンド・セルラー・バイオケミストリー（Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）１２６：６１−６８，１９９３）。ＭＣＰ−１は、乾せん、リウマチ様関節炎、およびアテローム動脈硬化症を含む単球浸潤を含む種々の疾患の病因に関係していた。血漿中のＭＣＰ−１の正常な濃度は、＜０．１ｎｇ／ｍｌである。ＭＣＰ−１の血漿濃度は、急性心筋梗塞の患者で上昇し、不安定な狭心症の患者の血漿において上昇し、安定な狭心症の場合は上昇しない（ソエジマ（Ｓｏｅｊｉｍａ），Ｈ．ら，ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・カレッジ・オブ・カーディオロジー（Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）３４：９８３−９８８，１９９９、ニシヤマ（Ｎｉｓｈｉｙａｍａ），Ｋ．ら，ジャパニーズ・サーキュレーション・ジャーナル（Ｊｐｎ．Ｃｉｒｃ．Ｊ．）６２：７１０−７１２，１９９８、マツモリ（Ｍａｔｓｕｍｏｒｉ），Ａ．ら，ジャーナル・オブ・モレキュラー・アンド・セルラー・カーディオロジー（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）２９：４１９−４２３，１９９７）。興味深いことに、ＭＣＰ−１は、アテローム動脈硬化症の間動脈壁内への単球の補充にも関与している。ＭＣＰ−１の血清濃度の上昇は、アルコール性肝疾患、間質肺疾患、敗血症、および全身性紅斑性狼瘡を含む炎症関連の種々の症状と関係している（フッシャー（Ｆｉｓｈｅｒ），Ｎ．Ｃ．ら，ガッツ（Ｇｕｔ）４５：４１６−４２０，１９９９、スガ（Ｓｕｇａ），Ｍ．ら，ユーローピアン・レスピラトリー・ジャーナル（Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．）１４：３７６−３８２，１９９９、ボシンク（Ｂｏｓｓｉｎｋ），Ａ．Ｗ．ら，ブラッド（Ｂｌｏｏｄ）８６：３８４１−３８４７，１９９５、カネコ（Ｋａｎｅｋｏ），Ｈ．ら，ジャーナル・オブ・リウマトロジー（Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．）２６：５６８−５７３，１９９９）。ＭＣＰ−１は、単球および内皮細胞を活性化すると血流中に放出される。急性心筋梗塞の患者からの血漿のＭＣＰ−１の濃度は、ほぼ１ｎｇ／ｍｌ（１００ｐＭ）であると報告されており、１ヶ月間上昇した状態を続ける（ソエジマ（Ｓｏｅｊｉｍａ），Ｈ．ら，ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・カレッジ・オブ・カーディオロジー（Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．）３４：９８３−９８８，１９９９）。ＭＣＰ−１は、単球の移動を含む炎症促進症状の存在に関する特異的マーカーである。
【０１４９】
マクロファージ移動阻害因子（ＭＩＦ）は、細胞媒介性免疫、免疫調節、および炎症に関与したリンホカインである。ＭＩＦは、糖質コルチコイドの抗炎症作用を抑制することにより、患者の防御においてマクロファージ機能を調節する役割を果たしている。単球およびマクロファージは、内毒素（リポ多糖類、即ちＬＰＳ）またはサイトカイン腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）およびインターフェロン−γ（ＩＦＮγ）による刺激の後ＭＩＦの有意な供給源になると報告されている。ＭＩＦは、ＩＦＮγ（８，９）と併用された場合ＴＮＦαおよび酸化窒素を産生するためにマクロファージを刺激して、特定の炎症促進作用を媒介することも記述されている。ＴＮＦαおよびＩＬ−１βと同様に、ＭＩＦは内毒素血症に対する患者の反応において中心的な役割を果たしている。組み換えＭＩＦとＬＰＳを共注入すると、ＬＰＳ死亡率を悪化させ、一方、アンチＭＩＦ抗体を中和すると、内毒素ショックからマウスを十分保護する。
【０１５０】
ヘモグロビン（Ｈｂ）は、赤血球中に存在する酸素を運搬する鉄含有球状蛋白質である。ヘモグロビンは、２つのグロビン・サブユニットのヘテロダイマーである。α2γ2は、胎児Ｈｂと呼ばれ、α2β2は成人ＨｂＡと呼ばれ、α2δ2は成人ＨｂＡ2と呼ばれる。ヘモグロビンの９０−９５％はＨｂＡであり、α2グロビン鎖はすべてのＨｂ型に存在し、鎖状細胞ヘモグロビンさえもそうである。Ｈｂは、体中の細胞に酸素を運ぶ責任がある。Ｈｂα2は、通常、血清中には検出されない。
【０１５１】
β−トレースとも呼ばれる、ヒトリポカリン型プロスタグランジンＤ合成酵素（ｈＰＤＧＳ）は、プロスタグランジンＨからプロスタグランジンＤ２の形成を触媒する３０ｋＤａの糖蛋白質である。健康に見える患者のｈＰＤＧＳ濃度の上限は、約４２０ｎｇ／ｍｌであると報告されている（欧州特許出願公開第０９９９４４７号）。ｈＰＤＧＳの上昇は、不安定な狭心症および脳梗塞の患者からの血液中で確認された（欧州特許出願公開第０９９９４４７号）。さらに、ｈＰＤＧＳは、虚血発作の有用なマーカーになるように思われ、ｈＰＤＧＳの濃度は、経皮的冠動脈拡張術（ＰＴＣＡ）の後、狭心症の患者では時間の経過と共に低下することが分かり、これは、ｈＰＤＧＳ濃度は虚血が解決されると低下することを示唆している（欧州特許出願公開第０９９９４４７号）。
【０１５２】
αトリプターゼとも呼ばれる、マスト細胞トリプターゼは、２７５個のアミノ酸（３０．７ｋＤａ）からなる蛋白質であり、この蛋白質はマスト細胞中に存在する主要な中性蛋白質分解酵素である。マスト細胞トリプターゼは、マスト細胞活性化の特異的マーカーであり、喘息および多様なアレルゲン・セットに対するアレルギー反応におけるアレルギー性気道炎症のマーカーである。例えば、タイラ（Ｔａｉｒａ）ら，ザ・ジャーナル・オブ・アスマ（Ｊ．Ａｓｔｈｍａ）３９：３１５−３２２（２００２）、シュバルツ（Ｓｃｈｗａｒｔｚ）ら，ザ・ニュー・イングランド・ジャーナル・オブ・メディシン（Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．）３１６：１６２２−１６２６（１９８７）を参照のこと。発生後１乃至６時間の間に上昇した血清トリプターゼ・レベルは、マスト細胞脱顆粒の特異的な徴候を与える。
【０１５３】
好酸球カチオン性蛋白質（ＥＣＰ）は、１６−２４ｋＤａの範囲の分子量およびｐＨ１０．８のｐＩを有する不均一性蛋白質である。ＥＣＰは細胞毒性が強く、活性化された好酸球により放出される。ベンゲ（Ｖｅｎｇｅ），クリニカル・アンド・イクスペリメンタル・アレルギー（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｌｌｅｒｇｙ），２３（Ｓｕｐｐｌ．２）３−７（１９９３）。喘息患者の気管支肺胞洗浄検査液（ＢＡＬＦ）におけるＥＣＰの濃度は、これらの疾患の重症度により変わり、痰の中のＥＣＰ濃度は、その疾患の病態生理を反映していることも示された。ブスケット（Ｂｏｕｓｑｕｅｔ）ら，ザ・ニュー・イングランド・ジャーナル・オブ・メディシン（Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．）３２３：１０３３−１０３９（１９９０）。ビルチョウ（Ｖｉｒｃｈｏｗ）ら，ジ・アメリカン・レビュー・オブ・レスピラトリー・ディジーズ（Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．）１４６：６０４−６０６（１９９２）。血清ＥＣＰの評価は、気管支喘息における肺の炎症を示しているように思われる。コラー（Ｋｏｌｌｅｒ）ら，アーカイブス・オブ・ディジーズ・イン・チャイルドフッド（Ａｒｃｈ．Ｄｉｓ．Ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ）７３：４１３−４１７（１９９５）、ソークネス（Ｓｏｒｋｎｅｓｓ）ら，クリニカル・アンド・イクスペリメンタル・アレルギー（Ｃｌｉｍ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇｙ）３２：１３５５−１３５９（２００２）、バドル−エルディン（Ｂａｄｒ−ｅｌＤｉｎ）ら，イースタン・メディタレーニァン・ヘルス・ジャーナル（Ｅａｓｔ．Ｍｅｄｉｔｅｒｒ．Ｈｅａｌｔｈ  Ｊ．）５：６６４−６７５（１９９９）も参照のこと。
【０１５４】
ＫＬ−６（ＭＵＣＩとも呼ばれる）は、肺単球上に発現された高分子量（＞３００ｋＤａ）の粘液性糖蛋白質である。ＫＬ−６の血清レベルは、労作性呼吸困難により特徴づけられる間質性肺疾患において上がると言われている。ＫＬ−６は、肺線維症、間質性肺炎、サルコイド症、および間質性肺実質炎を含む種々の間質性肺疾患のマーカーであることが証明されている。例えば、コバヤシ（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ）およびキタムラ（Ｋｉｔａｍｕｒａ），チェスト（Ｃｈｅｓｔ）１０８：３１１−３１５（１９９５）、コオノ（Ｋｏｈｎｏ），ザ・ジャーナル・メディカル・インベスティゲーション（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｉｎｖｅｓｔ．）４６：１５１−１５８（１９９９）、バンドン（Ｂａｎｄｏｎ）ら，アニュアルズ・オブ・リウマチック・ディジージズ（Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．）５９：２５７−２６２（２０００）、およびヤマネ（Ｙａｍａｎｅ）ら，ザ・ジャーナル・オブ・ザ・リウマトロジー（Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．）２７：９３０−９３４（２０００）を参照のこと。
【０１５５】
インターロイキン１０（「ＩＬ−１０」）は、１６０個のアミノ酸（予想質量１８．５ｋＤａ）サイトカインであり、このサイトカインはサイトカインの４つのα−らせん状の束からなるファミリーのメンバーである。溶液中では、ＩＬ−１０は、３９ｋＤａの見かけの分子量を有するホモダイマーを形成する。ヒトのＩＬ−１０遺伝子は、染色体１に配置されている。ビエラ（Ｖｉｒａ）ら，プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・オブ・ユナイテッド・ステート・オブ・アメリカ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．）８８：１１７２−１１７６（１９９１）、キム（Ｋｉｍ）ら，ジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．）１４８：３６１８−３６２３（１９９２）。ＩＬ−１０の過剰産生が、敗血症においてマーカーとして確認され、これは、重症度および死亡率を予測している。ゴゴス（Ｇｏｇｏｓ）ら，ザ・ジャーナル・オブ・インフェクシャス・ディジージズ（Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．）１８１：１７６−１８０（２０００）。
【０１５６】
（ｖ）神経組織の損傷に関する代表的な特異的マーカー
アデニレート・キナーゼ（ＡＫ）は、ＡＴＰおよびＡＭＰのＡＤＰへの相互転換を触媒する２２ｋＤａの偏在性細胞分可溶成分の酵素である。アデニレート・キナーゼの４つのアイソフォームが、哺乳類において確認されている（ヨネダ（Ｙｏｎｅｄａ），Ｔ．ら，ブレインリサーチ、モレキュラー・ブレインリサーチ（Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．Ｍｏｌ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．）６２：１８７−１９５，１９９８）。ＡＫ１アイソフォームは、脳、骨格筋、心臓、および大動脈に存在する。ＡＫ１の正常な血清質量濃度は、総ＡＫ濃度の測定には、通常、官能基検定法が使われるので、現在不明である。正常な血清ＡＫ濃度は、＜５ユニット／リッターであり、ＡＫの上昇はＣＳＦを用いてなされた（ボレンセン（Ｂｏｌｌｅｎｓｅｎ），Ｅ．ら，アクタ・ニューロロジカ・スカンジナビカ（Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃａｎｄ．）７９：５３−５８２，１９８９）。血清ＡＫ１は、脳の損傷のマーカーとしてＡＫアイソフォームの中で最大の特異性を持っていると思われる。ＡＫは、脳虚血の脳脊髄液マーカーとして最も適しており、ＡＫの主なソースは神経組織である。
【０１５７】
ニューロトロフィンは、哺乳類の神経系において発現された増殖因子のファミリーである。実施例には、神経増殖因子（ＮＧＦ）、脳誘導ニューロトロフィン因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）およびニューロトロフィン−４／５（ＮＴ−４／５）がある。ニューロトロフィンは、それらの作用を、主として、標的誘導パラクリンまたはオートクリン・ニューロトロフィン因子として発揮する。存続しているニューロトロフィンの役割、即ち、神経細胞の区別および保持は周知である。これらの神経細胞は、発現の別のパターンおよび細胞の標的を除いて、一部重なり合いを示す。中枢神経系における効果に加えて、ニューロトロフィンは末梢求心性および遠心性の神経細胞にも影響を及ぼす。
【０１５８】
ＢＤＮＦは、神経細胞および／またはグリア細胞の増殖と存続性を支持する効能のあるニューロトロフィン因子である。ＢＤＮＦは、成熟ＢＤＮＦ形に分割される３２ｋＤａの前駆体「ｐｒｏ−ＢＤＮＦ」分子として発現される。モーラ（Ｍｏｗｌａ）ら，ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）２７６：１２６６０−１２６６６（２００１）。ヒトＢＤＮＦの最も豊富で活性な形は、２つの同一の１１９個のアミノ酸サブユニットにより形成された２７ｋＤａのホモダイマーであり、サブユニットは強い親水性反応により一緒に保持される。しかし、ｐｒｏ−ＢＤＮＦは、細胞外にも放出され、生物学的に活性である。ＢＤＮＦは、ＣＮＳ全体に広く分布しており、試験管では、海馬神経、小脳の神経および皮質神経を含む広範囲の神経細胞に対して栄養作用を示す。生体では、ＢＤＮＦは、外傷および毒性脳損傷から神経細胞を救出することが判明している。例えば、複数の研究で、一時的な中大脳動脈閉塞の後、ＢＤＮＦ  ｍＲＮＡが皮質神経において上の方に調節されることが示された（シャビルツ（Ｓｃｈａｂｉｌｔｚ）ら，ジャーナル・オブ・セレブラル・ブラッドフロー・メタボリズム（Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  Ｍｅｔａｂ．）１４：５００−５０６，１９９７）。実験的に誘導された片側に集中した血栓性の脳卒中では、ＢＤＮＦ  ｍＲＮＡが、発作後２から１８時間に増加した。このような結果は、ＢＤＮＦは、集中的脳虚血において神経を保護する役割を果たしている可能性があることを示唆している。
【０１５９】
ＮＴ−３も、２つの１１９個のアミノ酸サブユニットからなる２７ｋＤａのホモダイマーである。一次皮質細胞培養へのＮＴ−３の添加は、酸素フリーラジカル・メカニズムを介して可能な、酸素−グルコース奪取により生じた神経死を悪化させることが証明された（ベーツ（Ｂａｔｅｓ）ら，ニューロバイオロジー・オブ・ディジーズ（Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ｄｉｓ．）９：２４−３７，２００２）。ＮＴ−３は、不活性なｐｒｏ−ＮＴ−３分子として発現され、この分子は成熟した生物学的に活性な形に分割される。
【０１６０】
カルビンジン−Ｄは、細胞内のカルシウムレベルを安定化させることにより細胞保護機能を発揮することができる、２８ｋＤａの細胞質ビタミンＤ依存性Ｃａ2+結合蛋白質である。カルビンジン−Ｄは、中枢神経系、主としてグリア細胞、および末端腎細管の細胞に存在する（ハセガワ（Ｈａｓｅｇａｗａ），Ｓ．ら，ザ・ジャーナル・オブ・ウロロジー（Ｊ．Ｕｒｏｌ．）１４９：１４１４−１４１８，１９９３）。カルビンジン−Ｄの正常な血清濃度は＜２０ｐｇ／ｍｌ（０．７ｐＭ）である。血清カルビンジン−Ｄ濃度は、心停止後上昇すると言われており、この上昇は脳虚血によるＣＮＳ損傷の結果であると考えられている（ウスイ（Ｕｓｕｉ），Ａ．ら，ジャーナル・オブ・ザ・ニューロロジカル・サイエンシズ（Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．）１２３：１３４−１３９，１９９４）。血清カルビンジン−Ｄは上昇するが、虚血後再潅流すると直ぐに平坦になる。最高血清カルビンジン−Ｄ濃度は、７００ｐｇ／ｍｌ（２５ｐＭ）程度にすることができる。
【０１６１】
クレアチン・キナーゼ（ＣＫ）は、ＡＴＰおよびクレアチンからＡＤＰおよびホスホクレアチンの可逆的形成を触媒する細胞質ゾル酵素である。脳特異的ＣＫアイソフォーム（ＣＫ−ＢＢ）は、脳の総ＣＫ活性の約９５％を占める８５ｋＤａの細胞質ゾル蛋白質である。ＣＫは、心組織、腸、前立腺、直腸、胃、平滑筋、甲状子宮、膀胱、および静脈にかなりの量が存在する（ジョンソン（Ｊｏｈｎｓｏｎ），Ｐ．Ｊ．，ジャーナル・オブ・カーディオソラシック・アンド・バスキュラー・アネセシア（Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｔｈｏｒａｃ．Ｖａｓｃ．Ａｎｅｔｈ．）１０：１２０−１２６，１９９６）。ＣＫ−ＢＢの正常血清濃度は、＜１０ｎｇ／ｍｌ（１２０ｐＭ）である。血清ＣＫ−ＢＢは、低酸素および虚血による脳損傷後上昇するが、特異なタイプの脳卒中における血清上昇を識別するためにはさらに研究する必要がある（ラスコビッチ（Ｌａｓｋｏｗｉｔｚ），Ｄ．Ｔ．ら，ジャーナル・オブ・ストローク・セレブロバスキュラー・ディジージズ（Ｊ．Ｓｔｒｏｋｅ  Ｃｅｒｅｂｒｏｖａｓｃ．Ｄｉｓ．）７：２３４−２４１，１９９８）。血清中のＣＫ−ＢＢの上昇は、血液脳関門の浸透性の増加と結びついた虚血による脳損傷に帰せられる。ＣＫ−ＢＢの血清濃度と損傷の程度（梗塞容積）との相関関係はなく、または神経学的転帰は確立されていない。ＣＫ−ＢＢの半減期は、血清中で１−５時間であり、通常、＜１０ｎｇ／ｍｌ（１２０ｐＭ）の濃度で血清中に検出される。いくつかの脳卒中では、血清濃度ＣＫ−ＢＢは、脳卒中の発症後上昇し、直ぐにピークになり（２４時間以内に）、３−７日後には次第に正常値に戻る（４）。頭部損傷患者の血清中のＣＫ−ＢＢ濃度は、損傷後直ぐにピークに達し、損傷の程度により、損傷の３．５−１２時間の間に正常値に戻る（スコグサイド（Ｓｋｏｇｓｅｉｄ），Ｉ．Ｍ．ら，アクタ・ニューロシルルジカ（Ａｃｔａ  Νｅｕｒｏｃｈｉｒ．（Ｗｉｅｎ））１１５：１０６−１１１，１９９２）。最高血清ＣＫ−ＢＢ濃度は、２５０ｎｇ／ｍｌ（３ｎＭ）を超えることができる。ＣＫ−ＢＢは、脳虚血のＣＳＦマーカーとして最高に適しており、ＣＫ−ＢＢの主要なソースは神経組織であろう。ＣＫ−ＢＢは、頭部損傷後ＣＮＳ損傷の血清マーカーとしてより適している。何故ならば、ＣＫ−ＢＢは、これらの患者では短時間で上昇し、ＣＫ−ＢＢの除去は見かけ上損傷の程度に依存しているからである。
【０１６２】
グリア細胞線維性酸性蛋白質（ＧＦＡＰ）は、５５ｋＤａの細胞質ゾル蛋白質であり、この蛋白質は星状グリア細胞フィラメントの主要構造成分であり、星状グリア細胞における主要な中間体フィラメント蛋白質である。ＧＦＡＰは、星状グリア細胞に対して特異的であり、星状グリア細胞はＣＮＳに配置された間質細胞であり、血液脳関門の近くに存在しうる。ＧＦＡＰは、通常、血清中には検出されない。血清ＧＦＡＰは、虚血発作後上昇する（ニーブロイ−ドボス（Ｎｉｅｂｒｏｊ−Ｄｏｂｏｓｚ），Ｌ．ら，フォリア・ニューロパソロジカ（Ｆｏｌｉａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．）３２：１２９−１３７，１９９４）。発作に関連して血清ＧＦＡＰの上昇を研究している最近の報告書は極めて少なく、すべてのタイプの発作に対する血清マーカーとしてＧＦＡＰを確立するためにはさらに多くの研究が必要である。発作マーカーとして、ＧＦＡＰを研究している大抵の研究は、脳脊髄液を用いてなされた。血清中のＧＦＡＰの上昇は、血液脳関門の浸透性の増加と結びついた、虚血による脳の損傷に帰せられる。ＧＦＡＰの血清濃度と損傷の程度（梗塞容積）との相関関係はなく、神経学的転帰は確立されていない。ＧＦＡＰは、ＣＮＳに影響する種々の神経障害を有する患者の脳脊髄液中で上昇しているが、発作以外の疾患を有する患者の血清中へのＧＦＡＰの放出を記述している報告書は現在全く利用できない（アルブレヒトセン（Ａｌｂｒｅｃｈｔｓｅｎ），Ｍ．およびボック（Ｂｏｃｋ），Ｅ．Ｊ．，ジャーナル・オブ・ニューロイムノロジー（Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．）８：３０１−３０９，１９８５）。血清濃度ＧＦＡＰは、脳卒中の発症後直ぐに上昇し、増加を続け、損傷の重症度と相関づけられる時間（複数週間）の間持続するように思われる。ＧＦＡＰは、重症のＣＮＳ損傷、具体的には、虚血または身体の損傷により生じた細胞死による星状グリア細胞に対する損傷の場合、非常に特異的マーカーであるように思われる。
【０１６３】
乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）は、至る所に存在する１３５ｋＤａの細胞質ゾルの酵素である。ＬＤＨは、ＡおよびＢ鎖のテトラマーであり、これは、ＮＡＤＨによるピルビン酸塩の乳酸塩への還元を触媒する。ＬＤＨの５つのアイソフォームは、哺乳類の組織において識別されており、組織特異的なアイソフォームは、ＡおよびＢ鎖の種々の組み合わせから作られる。ＬＤＨの正常な血漿質量濃度は、総ＬＤＨ濃度を測定するために官能基検定法が通常使われるので、現在は不明である。正常血清ＬＤＨ濃度は、＜６００ユニット／リッターである（レイ（Ｒａｙ），Ｐ．ら，キャンサー・ディテクション・アンド・プリベンション（Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔ．Ｐｒｅｖ．）２２：２９３−３０４，１９８８）。脳卒中の状態におけるＬＤＨの上昇に関する研究の大部分は、脳脊髄液を用いて行われ、上昇は損傷の重症度と相関がある。血清ＬＤＨ活性の上昇は、虚血と出血との両発作に従うと報告されているが、この観察を確認し、損傷の重症度および神経学的転帰との相関関係を決めるためににはさらに研究を行う必要がある（アガールワル（Ａｇｇａｒｗａｌ），Ｓ．Ｐ．ら，ジャーナル・オブ・ジ・インディアン・メディカル・アソシエーション（Ｊ．Ｉｎｄｉａｎ  Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃ．）９３：３３１−３３２，１９９５、マイウリ（Ｍａｉｕｒｉ），Ｆ．ら，ニューロロジカル・リサーチ（Νｅｕｒｏｌ．Ｒｅｓ．）１１：６−８，１９８９）。ＬＤＨは、脳虚血の脳脊髄液マーカーとして最も適しており、ＬＤＨの主なソースは神経組織である。
【０１６４】
ミエリン塩基性蛋白質（ＭＢＰ）は、実際には、単一ＭＢＰ遺伝子の選択的スプライシングにより作られた細胞質ゾルの蛋白質の１４−２１ｋＤａのファミリーである。単一ＭＢＰ遺伝子は、ミエリン形成プロセスの間に、軸索の周りでミエリンの肺細胞緊密化に関与しているようである。ＭＢＰは、ＣＮＳおよび末梢神経系（ＰＮＳ）のシュワン細胞における希突起グリア細胞に対して特異的である。ＭＢＰは、ＣＮＳにおける総ミエリン蛋白質の約３０％およびＰＮＳにおける総ミエリン蛋白質の約１０％を占める。ＭＢＰの正常な血清濃度は、＜７ｎｇ／ｍｌ（４００ｐＭ）である。血清ＭＢＰは、すべての型の重症脳卒中、具体的には、血栓性脳卒中、塞栓性脳卒中、脳内出血、およびくも膜下の出血の後に上昇し、一方、ＭＢＰ濃度の上昇は、小空洞性の梗塞または一過性の虚血発作を含む、低乃至中程度の重症度を有する患者の血清では報告されていない（パルフレブマン（Ｐａｌｆｒｅｖｍａｎ），Ｊ．Ｗ．ら，クリニカ・シミカ・アクタ（Ｃｌｉｎ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ）９２：４０３−４０９，１９７９）。血清中のＭＢＰの上昇は、身体的損傷による脳の損傷、梗塞による虚血または血液脳関門の透過性の増加に結びついた脳出血に帰せられる。ＭＢＰの血清濃度は、損傷の程度（梗塞容積）に相関づけられると報告されており、この血清濃度は、神経学的転帰とも相関づけられる。脳卒中と関係がある血清ＭＢＰの上昇について利用できる情報の量は限られている。何故ならば、大抵の研究は、脳脊髄液を用いて行われているからである。ＭＢＰは、通常、７ｎｇ／ｍｌ（４００ｐＭ）を上限にして血清中に検出され、重症の脳卒中および脳損傷の後上昇する。血清ＭＢＰは、発作開始後数時間内に上昇し、発症後２−５日以内に濃度が最高レベルに増加すると考えられている。血清濃度は、１２０ｎｇ／ｍｌ（６．９ｎＭ）を超えることができる、濃度の最高値に到達後、１週間かけて正常濃度まで次第に下げることができる。損傷の重症度は、ＭＢＰの放出に対して直接的作用を有するので、ＭＢＰが血清中で上昇する時間の長さを支配することにより放出の速度論に影響を及ぼすであろう。ＭＢＰは、損傷が重症であるほど、より長時間にわたり血清中に存在するであろう。頭部損傷の患者の血清中へのＭＢＰの放出は、血清ＭＢＰ濃度は頭部損傷の患者の神経学的転帰と相関関係があると言われていることを除いて、脳卒中について記述された速度論と類似な速度論に従うと考えられる（トーマス（Ｔｈｏｍａｓ），Ｄ．Ｇ．ら，アクタ・ニューロシルルジカ・サプリメント（Ａｃｔａ  Νｅｕｒｏｃｈｉｒ．Ｓｕｐｐｌ．（Ｗｉｅｎ））２８：９３−９５，１９７９）。頭骸内に腫瘍がある患者の血清内へのＭＢＰの放出は、持続すると考えられるがなおも研究する必要がある。最後に、血清ＭＢＰ濃度は、脱髄疾患の患者で上がることがあるが、結論を下しているような研究は報告されていない。複数の硬化症の患者で報告されているように、ＭＢＰは脳脊髄液において上昇することがあるが、これと一致した血清中の上昇はほとんど報告されていない（ジャック（Ｊａｃｑｕｅ），Ｃ．ら，アーカイブス・ニューロロジー（Ａｒｃｈ．Ｎｅｒｏｌ．）３９：５５７−５６０，１９８２）。これは��血清ＭＢＰの上昇をもたらすためには損傷は、血液脳関門の浸透性の増加を伴わねばならないことを示している。しかし、ＭＢＰは、頭蓋内腫瘍を有する患者集団においても上昇することがある。脳卒中に対するこのマーカーを用いる検定法の候補者になる比較的大きな患者集団に、このような患者が存在することは稀である。これらの患者は、脳神経外科の治療を受けている患者または脱髄患者と組み合わせて、脳損傷に対するＭＢＰの特異性を決定するインパクトを有する。さらに、血清ＭＢＰは、ｔＰＡ投与などの発作療法や処置が効かない患者を識別する能力がある、重篤な発作のマーカーとして有用である。
【０１６５】
ＣＤ５６とも呼ばれる、神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）は、１７０ｋＤａの細胞表面結合免疫グロブリン様インテグリン・リガンドであり、これは神経系における神経細胞とグリア細胞の反応の維持に関与しており、ＮＣＡＭは星状グリア細胞、希突起グリア細胞、シュワン細胞、神経細胞および軸索の表面で発現される。ＮＣＡＭは、骨格筋筋管を発達させるために局在化され、その発現は、発達、脱神経および再脈状化中に骨格筋において上の方に調節される。ＮＣＡＭの正常な血清質量濃度は報告されていない。ＮＣＡＭは、通常、官能基酵素免疫検定法により測定され、＜２０ユニット／ｍｌの正常血清濃度を有することが報告されている。脳卒中に特異的に関係づけられた血清ＮＣＡＭ濃度の変化は、報告されていない。ＮＣＡＭは、脳虚血のＣＳＦマーカーとして最高に適しており、ＮＣＡＭの主なソースは神経組織である。
【０１６６】
エノラーゼは、α、β、およびγサブユニットから作られた７８ｋＤａのホモまたはヘテロのダイマー性細胞質蛋白質である。エノラーゼは、糖分解経路において２−ホスホグリセレートとホスホエノールピルベートとの相互転換を触媒する。エノラーゼは、αα、ββ、αγおよびγγアイソフォームとして存在しうる。αサブユニットは、グリア細胞および大抵のその他の組織に存在し、βサブユニットは筋肉組織に存在し、γサブユニットは、存在するならば、主として神経細胞および神経内分泌細胞に存在する（クイン（Ｑｕｉｎｎ），Ｇ．Ｂ．ら，クリニカル・ケミストリー（Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．）４０：７９０−７９５，１９９４）。γγエノラーゼ・アイソフォームは、神経細胞に対して最も特異的であり、神経細胞特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）と呼ばれる。主として神経細胞および神経内分泌細胞に存在するＮＳＥは、血小板および赤血球にも存在する。ＮＳＥの正常血清濃度は、＜１２．５ｎｇ／ｍｌ（１６０ｐＭ）である。
【０１６７】
ＮＳＥは２つのサブユニットから作られ、したがって、ＮＳＥ濃度を検出するために使われた最も可能性のある免疫学的検定法は、サブユニットの１つに対して向けられた検定法である。この場合、γサブユニットが理想的な選択である。しかし、γサブユニット単独は、その測定がαγおよびγγアイソフォームの両方を検出するので、γγアイソフォームとして脳組織に対して特異的ではない。これに鑑みて、ＮＳＥの最高の免疫検定法は、γγアイソフォームを特異的に検出できる２部位検定法である。血清ＮＳＥは、脳に起源があり、ある患者が後により重篤な脳卒中を起こしやすいと考えられるＴＩＡを含むすべての型の脳卒中後上昇すると言われている（イスグロ（Ｉｓｇｌｏ），Ｆ．ら，ユーローピアン・ジャーナル・オブ・カーディオソラシック・サージェリー（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｔｈｏｒａｃ．Ｓｕｒｇ．）１１：６４０−６４４，１９９７）。血清中のＮＳＥの上昇は、身体的損傷または血液脳関門の浸透率の上昇と結びついた梗塞または脳出血により生じた虚血による脳損傷に帰せられ、ＮＳＥの血清濃度は損傷の程度（梗塞容積）および神経学的転帰と相関づけられると言われている（マルテンス（Ｍａｒｔｅｎｓ），Ｐ．ら，ストローク（Ｓｔｒｏｋｅ）２９：２３６３−２３６６，１９９８）。血清ＮＳＥ濃度の第２次の上昇は、脳血管けいれんから生じる遅延神経損傷を示すものである（ラスコビッチ（Ｌａｓｋｏｗｉｔｚ），Ｄ．Ｔ．ら，ジャーナル・オブ・ストローク・セレブロバスキュラー・ディジージズ（Ｊ．Ｓｔｒｏｋｅ  Ｃｅｒｅｂｒｏｖａｓｃ．Ｄｉｓ．）７：２３４−２４１，１９９８）。４８時間の生物学的半減期を有し、通常、１２．５ｎｇ／ｍｌ（１６０ｐＭ）の上限にて血清で検出されるＮＳＥは、脳卒中および脳損傷後上昇する。血清ＮＳＥは、脳卒中開始４時間後に上昇し、濃度は、発症後１−３日で最高値に達する（ミスラー（Ｍｉｓｓｌｅｒ），Ｕ．ら，ストローク（Ｓｔｒｏｋｅ）２８：１９５６−１９６０，１９９７）。３００ｎｇ／ｍｌ（３．９ｎＭ）を超えることができる、血清濃度がその最高値に到達後、血清濃度は約１週間で正常濃度へ次第に低下する。ＮＳＥの放出に対して直接的な作用を有するので、損傷の重症度は、ＮＳＥが血清中で上昇する時間の長さを支配することにより放出速度論に影響を及ぼす。ＮＳＥは、損傷が重篤なほど、長時間血清中に存在するであろう。
【０１６８】
頭部を損傷した患者の血清中へのＮＳＥの放出は、脳卒中の場合に見られる種々の速度論に従い、損傷後１−６時間以内に最高血清濃度に到達し、２４時間以内にベースラインに戻ることが多い（スコグサイド（Ｓｋｏｇｓｅｉｄ），Ｉ．Ｍ．ら，アクタ・ニューロシルルジカ（Ａｃｔａ  Νｅｕｒｏｃｈｉｒ．（Ｗｉｅｎ））１１５：１０６−１１１，１９９２）。ＮＳＥは、脳損傷、具体的には、虚血または身体損傷により生じた細胞死による神経細胞の損傷に対する特異的なマーカーである。脳内では、神経細胞はグリア細胞の約１／１０の数であるので、血液脳関門の増加した浸透性と結びついた何らかの脳損傷は、神経細胞のかなりの領域集団を有する領域で起き、血清ＮＳＥ濃度をかなり上げることになる。さらに、上昇したＮＳＥの血清濃度は、ＡＭＩおよび心臓手術後の脳損傷に関連した合併症を示すこともできる。ＮＳＥの血清濃度の上昇は、損傷の重症度および患者の神経学的転帰と相関関係がある。ＮＳＥは、ＴＩＡを含む、すべての型の脳卒中のマーカーとして使用することができる。
【０１６９】
プロテオリピド蛋白質（ＰＬＰ）は、ＣＮＳミエリンの主要な構造成分である、３０ｋＤａの内在性膜蛋白質である。ＰＬＰは、ＣＮＳにおける希突起グリア細胞に対して特異的であり、中央膜における総ＣＮＳミエリンの約５０％を占める。ただし、極端に低いレベル（＜１％）のＰＬＰが末梢神経系（ＰＮＳ）ミエリン中に存在している。ＰＬＰの正常な血清濃度は、＜９ｎｇ／ｍｌ（３００ｐＭ）である。血清ＰＬＰは、脳梗塞の後上昇するが、一過性の虚血発作の後は上がらない（トロッター（Ｔｒｏｔｔｅｒ），Ｊ．Ｌ．ら，アニュアルズ・オブ・ニューロロジー（Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．）１４：５５４−５５８，１９８３）。発作に関連した血清ＰＬＰを研究している最近の報告書はほとんどない。血清中のＰＬＰの上昇は、身体的損傷、あるいは梗塞または血液脳関門の増加した浸透性と結びついた脳出血により生じた虚血に帰せられる。ＰＬＰの血清濃度と損傷度合い（梗塞容積）または神経学的転帰との相関関係は確立されていない。血清中へのＰＬＰの放出速度論およびＰＬＰのその後の除去を調べた研究は報告されていないが、６０ｎｇ／ｍｌ（２ｎＭ）に近い最高濃度が脳炎の患者について報告されており、この値は脳卒中後に見出された濃度のほぼ２倍である。ＰＬＰは、重篤なＣＮＳ患者、特に希突起グリア細胞の損傷に対する非常に特異的なマーカーであると思われる。ＰＬＰ血清上昇および発作に関連して利用できる情報は非常に少ない。ＰＬＰは、ＣＮＳに影響する種々の神経障害の患者の血清中でも上昇する。発作に対してこのマーカーを用いる検定法の候補者になる患者の大集団におけるこれらの患者の内、診断未確定の存在は稀である。
【０１７０】
Ｓ−１００は、αおよびβサブユニットから作られた２１ｋＤａのホモまたはヘテロのダイマー性細胞質ゾルＣａ2+結合蛋白質である。Ｓ−１００は、Ｃａ2+依存性信号伝達経路に沿った細胞プロセスの活性化に関与していると考えられる（ボンフラー（Ｂｏｎｆｒｅｒ），Ｊ．Ｍ．ら，ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・キャンサー（Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ）７７：２２１０−２２１４，１９９８）。Ｓ−１００ａｏ（ααアイソフォーム）は、横紋筋、心臓および腎臓に存在し、Ｓ−１００ａ（αβアイソフォーム）はグリア細胞に存在するが、シュワン細胞には存在せず、Ｓ−１００ｂ（ββアイソフォーム）はグリア細胞およびシュワン細胞に存在する。なお、Ｓ−１００ｂは、主要な細胞質ゾル成分である。βサブユニットは、正常な生理学的条件下で、神経系、特にＣＮＳに対して特異的であり、実際に、脳に存在するＳ−１００蛋白質の総量の約９６％を占める（ジェンセン（Ｊｅｎｓｅｎ），Ｒ．ら，ジャーナル・オブ・ニューロケミストリー（Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．）４５：７００−７０５，１９８５）。さらに、Ｓ−１００βは、グリオーム、黒色腫、シュワン腫、神経線維腫、および神経節神経細胞芽腫および神経節神経腫の様な高度に分化された神経芽細胞腫などの神経内分泌から発生した腫瘍内に存在することができる（パーソン（Ｐｅｒｓｏｎ），Ｌ．ら，ストローク（Ｓｔｒｏｋｅ）１８：９１１−９１８，１９８７）。Ｓ−１００βの正常血清濃度は、＜０．２ｎｇ／ｍｌ（１９ｐＭ）であり、これは用いた免疫学的検出検定法の検出限界である。血清Ｓ−１００βは、ＴＩＡを含むすべての型の脳卒中後上昇する。血清中のＳ−１００βの上昇は、身体的損傷または血液脳関門の浸透率の上昇と結びついた梗塞または脳出血により生じた虚血による脳損傷に帰せられ、Ｓ−１００ｂの血清濃度は損傷の程度（梗塞容積）および神経学的転帰と相関づけられると言われている（マルテンス（Ｍａｒｔｅｎｓ），Ｐ．ら，ストローク（Ｓｔｒｏｋｅ）２９：２３６３−２３６６，１９９８、ミスラー（Ｍｉｓｓｌｅｒ），Ｕ．ら，ストローク（Ｓｔｒｏｋｅ）２８：１９５６−１９６０，１９９７）。
【０１７１】
Ｓ−１００ｂは、２時間の生物学的半減期を有し、通常、血清では検出されないが、脳卒中および脳損傷後上昇する。血清Ｓ−１００βは、脳卒中発症から４時間後に上昇し、濃度は、発症後２−３日で最高値に達する。２０ｎｇ／ｍｌ（１．９もＭ）に近づくことができる、血清濃度がその最高値に到達後、血清濃度は約１週間で正常濃度へ次第に低下する。損傷の重症度が、Ｓ−１００ｂの放出に対して直接的な作用を有するので、重症度はＳ−１００ｂが血清中で上昇する時間の長さを支配することにより放出速度論に影響を及ぼす。Ｓ−１００ｂは、損傷が重篤なほど、長時間血清中に存在するであろう。頭部損傷の患者の血清中へのＳ−１００ｂの放出は、脳卒中について報告された幾分類似した速度論に従うように思われる。唯一の例外は、血清Ｓ−１００βは発症後２．５時間以内に検出することができ、発症後約１日で最高血清濃度に到達することができることである（ベルトゲン（Ｗｏｅｒｔｇｅｎ），Ｃ．ら，アクタ・ニューロシルルジカ（Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｃｈｉｒ．（Ｗｉｅｎ））１３９：１１６１−１１６４，１９９７）。Ｓ−１００βは、脳の損傷、具体的には、虚血または身体的損傷により生じた細胞死によるグリア細胞の損傷の特異的マーカーである。グリア細胞は、脳内では、神経細胞よりも約１０倍多く、血液脳関門の増加した浸透性と結びついた何らかの脳の損傷は、血清Ｓ−１００βを増加させるようである。さらに、Ｓ−１００ｂの上昇した血清濃度は、ＡＭＩおよび心臓手術の後の脳の損傷に関連した合併症を明示することができる。Ｓ−１００ｂは、普通の患者ではほぼ検出不可能であり、Ｓ−１００ｂの血清濃度の上昇は損傷の７０および患者の神経学的転帰と相関づけられる。Ｓ−１００ｂは、ＴＩＡを含むすべての型の脳卒中のマーカーとして使うことができる。
【０１７２】
トロンボモジュリン（ＴＭ）は、血管内皮細胞の表面に存在する７０ｋＤａの単一鎖内在性膜糖蛋白質である。ＴＭは、トロンビンの基質特異性を変えることにより抗凝固性活性を示している。トロンビンとＴＭとの間の１：１の化学量論的複合体の形成は、トロンビンの機能を親凝固性から抗凝固性に変える。この変化は、トロンビンを蛋白質Ｃ（因子Ｖａおよび因子ＶＩＩＩａの不活性化剤）を活性化する原因になるトロンビン基質特異性の変化により促進されるが、フィブリノーゲンを分割したり、その他の凝固因子を活性化することはない（デービー（Ｄａｖｉｅ），Ｅ．Ｗ．ら，バイオケミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍ．）３０：１０３６３−１０３７０，１９９１）。ＴＭの正常血清濃度は、２５−６０ｎｇ／ｍｌ（３６５−８５０ｐＭ）である。血清ＴＭ濃度の変化を記述している最近の報告書は、変化しないという報告がある一方で、かなり増加するという報告もある（セキ（Ｓｅｋｉ），Ｙ．ら，ブラッド・コアギュレーション・アンド・フィブリノリシス（Ｂｌｏｏｄ  Ｃｏａｇｕｌ．Ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｓｉｓ）８：３９１−３９６，１９９７）。血清ＴＭ濃度の上昇は、内皮細胞の損傷を反映し、凝固または線維素溶解の活性化を意味していない。
【０１７３】
蛋白質キナーゼＣのガンマアイソフォーム（ＰＫＣｇ）は、ＣＮＳ組織に対して特異的であり、通常、循環系には存在しない。ＰＫＣｇは、脳虚血の間に活性化され、対側の組織におけるよりも２−２４倍高いレベルにおいて虚血半影に存在し、梗塞した組織では上がらない（クルピンスキー（Ｋｒｕｐｉｎｓｋｉ），Ｊ．ら，アクタ・ニューロバイオロジエ・イクスペリメンタリス（Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ｅｘｐ．（Ｗａｒｚ．））５８：１３−２１，１９９８）。さらに、動物モデルが、脳中動脈閉塞後ラットの末梢循環系におけるＰＫＣｇのレベルの増加を識別した（コーネル−ベル（Ｃｏｒｎｅｌｌ−Ｂｅｌｌ），Ａ．ら，国際公開第０１／１６５９９号）。ＰＫＣの追加のアイソフォーム、ベータＩおよびベータＩＩは、脳虚血の患者からの脳組織の梗塞したコアのレベルの増加において見出された（クルピンスキー（Ｋｒｕｐｉｎｓｋｉ），Ｊ．ら，アクタ・ニューロバイオロジエ・イクスペリメンタリス（Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ｅｘｐ．（Ｗａｒｚ．））５８：１３−２１，１９９８）。さらに、ＰＫＣのアルファおよびデルタアイソフォーム（それぞれ、ＰＫＣａおよびＰＫＣｄ）は、出血のカニンモデルを用いたくも膜下出血の後の血管けいれんの発症に関係していた。ＰＫＣｄの発現は、血管けいれんの初期段階の間に基底動脈においてかなり上昇し、ＰＫＣａは、血管けいれんが進行する時にかなり上昇した（ニシザワ（Ｎｉｓｈｉｚａｗａ），Ｓ．ら，ユーローピアン・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー（Ｅｕｒ，Ｊ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．）３９８：１１３−１１９，２０００）。したがって、種々のアイソフォームのＰＫＣを個別にまたはそれらの種々の組み合わせで測定することは、脳の損傷、虚血性半影の存在、並びにくも膜下の出血後の脳血管けいれんの発症および進行を識別する場合に効果がある。ＰＫＣｇおよびＰＫＣｂＩ、ＰＫＣｂＩＩまたは両方などのＰＫＣアイソフォームの比は、発作の進行を識別する上で効果があり、ここで、虚血けいれんは不可逆的に損傷し梗塞した組織に転換される。これに鑑みて、ＰＫＣｇは、虚血性けいれんの存在および容積の確認に使われ、ＰＫＣｂＩ、ＰＫＣｂＩＩまたは両方のいずれかが発作中に不可逆的に損傷した組織の梗塞したコアの存在および容積の確認に使われる。ＰＫＣｄ、ＰＫＣａ、およびＰＫＣｄとＰＫＣａとの比は、くも膜下の出血後の脳血管けいれんの存在および進行の確認に使える。
【０１７４】
（ｖｉ）細胞損傷のその他の非特異的なマーカー
ヒトの血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）はダイマー性蛋白質であり、報告されたＶＥＧＦの活性には、内皮細胞の増殖、血管新生、および毛細管浸透性がある。ＶＥＧＦは、種々の血管新生組織により分泌される。酸素欠乏環境では、血管内皮細胞は損傷を受け、最終的には存続できない。しかし、このような内皮の損傷は血管平滑筋細胞によるＶＥＧＦの産生を刺激する。血管内皮細胞は、ＶＥＧＦの存在下では生存を増加、即ちＢｃｌ−２の発現により媒介されたと考えられている作用を示す。ＶＥＧＦは、ＶＥＧＦ（１８９）、ＶＥＧＦ（１６５）、ＶＥＧＦ（１６４）、ＶＥＧＦＢ（１５５）、ＶＥＧＦ（１４８）、ＶＥＧＦ（１４５）、およびＶＥＧＦ（１２１）として周知の多様なスプライス変異体として存在しうる。
【０１７５】
インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）は、至る所に存在する７．５ｋＤａの分泌された蛋白質であり、これは発達中の増殖ホルモンのたんぱく同化作用および体因性作用を媒介する（１，２）。循環系において、ＩＧＦ−１は、通常、ＩＧＦ活性を調節するＩＧＦ結合蛋白質に結合されている。ＩＧＦ−１の正常な血清濃度は、虚血発作の患者でかなり低下すると言われており、低下の度合いは損傷の重症度と相関関係があるように思われる（シュワブ（Ｓｃｈｗａｂ），Ｓ．ら，ストローク（Ｓｔｒｏｋｅ）２８：１７４４−１７４８，１９９７）。外傷および免疫系の広範な活性化を有する患者では、ＩＧＦ−１血清濃度が低下すると報告されている。至る所に存在するＩＧＦ−１の発現により、血清ＩＧＦ−１濃度は、脳以外の虚血の場合にも低下することがある。興味深いことに、ＩＧＦ−１血清濃度は、たとえ、ＩＧＦ−１の細胞発現が梗塞ゾーンにおいて上の方に調節されるとしても、虚血発作の後低下する（リー（Ｌｅｅ），Ｗ．Ｈ．およびボンディー（Ｂｏｎｄｙ），Ｃ．，アニュアルズ・ニューヨーク・アカデミー・サイエンシズ（Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．）６７９：４１８−４２２，１９９３）。血清濃度の低下は、増殖因子の増加した要求または増加した代謝排除速度を反映している。血清レベルは、脳卒中発症２４時間後にかなり低下し、１０日間にわたり低下したままであった（シュワブ（Ｓｃｈｗａｂ），Ｓ．ら，ストローク（Ｓｔｒｏｋｅ）２８：１７４４−１７４８，１９９７）。血清ＩＧＦ−１は、脳損傷の感度のよい指標になりうる。しかし、至る所に存在するＩＧＦ−１の発現パターンは、すべての組織がＩＧＦ−１の血清濃度に影響する可能性があり、脳卒中のマーカーとしてＩＧＦ−１を用いる検定法の特異性を弱める。これに鑑みて、ＩＧＦ−１は脳虚血の脳脊髄液として最高に適しており、ＩＧＦ−１の主なソースは神経組織である。
【０１７６】
炎症反応に含まれる接着分子は、これらの分子の発現レベルは傷害の結果として変えられるので、急性期反応物としても考えられる。この種の接着分子の例には、Ｅ−セレクチン、細胞間接着分子−１、血管細胞接着分子などがある。
【０１７７】
ＥＬＡＭ−１およびＣＤ６２Ｅとも呼ばれる、Ｅ−セレクチンは、ＩＬ−１およびＴＮＦαに対して反応した内皮細胞上に発現された１４０ｋＤａの細胞表面Ｃ−型レクチンである。ＩＬ−１およびＴＮＦαは、好中球の補充の間に内皮細胞と好中球との「回転」反応を媒介する。Ｅ−セレクチンの正常血清濃度は、約５０ｎｇ／ｍｌ（ｎＭ）である。脳卒中後の血清Ｅ−セレクチン濃度の変化に関する研究は、様々な結果を報告している。虚血発作後血清Ｅ−セレクチン濃度が増加すると報告している研究があるが、一方では、変わらないと報告している研究もある（ビッチ（Ｂｉｔｓｃｈ），Ａ．ら，ストローク（Ｓｔｒｏｋｅ）２９：２１２９−２１３５，１９９８、キム（Ｋｉｍ），Ｊ．Ｓ．，ジャーナル・オブ・ザ・ニューロシルルジカ・サイエンシズ（Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．）１３７：６９−７８，１９９６、シュー（Ｓｈｙｕ），Ｋ．Ｇ．ら，ジャーナル・オブ・ニューロロジー（Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．）２４４：９０−９３，１９９７）。Ｅ−セレクチン濃度は、くも膜下出血の患者のＣＳＦにおいて上昇し、血管けいれんを予測することができる（ポーリン（Ｐｏｌｉｎ），Ｒ．Ｓ．ら，８９：５５９−５６７，１９９８）。Ｅ−セレクチンの血清濃度の上昇は、免疫系の活性化を示している。血清Ｅ−セレクチン濃度は、アテローム動脈硬化症、種々の形の癌、子癇前症、糖尿病、のう胞性線維症、ＡＭＩ、およびその他の非特異的炎症病状の患者で上昇する（ワン（Ｈｗａｎｇ），Ｓ．Ｊ．ら，サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）９６：４２１９−４２２５，１９９７、バンクス（Ｂａｎｋｓ），Ｒ．Ｅ．ら，ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・ザ・キャンサー（Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ）６８：１２２−１２４，１９９３、アウスツグレン（Ａｕｓｔｇｌｅｎ），Ｒ．ら，ユーローピアン・ジャーナル・オブ・オブステトリックス・ガイニコロジー・アンド・レプロダクチブ・バイオロジー（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｂｓｔｅｔ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｂｉｏｌ．）７１：５３−５８，１９９７、スタイナー（Ｓｔｅｉｎｅｒ），Ｍ．ら，トロンボシス・アンド・ヘモスタシス（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．）７２：９７９−９８４，１９９４、ド・ローズ（Ｄｅ  Ｒｏｓｅ），Ｖ．ら，アメリカン・ジャーナル・オブ・レスピラトリー・アンド・クリティカル・ケア・メディシン（Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．）１５７：１２３４−１２３９，１９９８）。Ｅ−セレクチンの血清濃度は、虚血発作後に上昇するが、これらの変化が一過性であるか、またはまだ確認されていないメカニズムにより調節されるならば、血清濃度は明確ではない。血清Ｅ−セレクチンは、内皮細胞損傷の特異的マーカーになるかもしれない。しかし、Ｅ−セレクチンは、炎症病状を発生させる種々の症状を有する患者の血清中で上昇するので、脳卒中または脳損傷の特異的マーカーではない。さらに、血清Ｅ−セレクチン濃度の上昇は、脳卒中に関連したリスク因子のいくつかと関係がある。
【０１７８】
頭部アクチベータ（ＨＡ）は、視床下部および腸内に存在する１１のアミノ酸からなる１．１ｋＤａの神経ペプチドである。ＨＡは本来淡水の腔腸動物ヒドラに存在し、頭部特異的増殖および分化因子として作用する。ヒトでは、脳が発達する間の成長調節剤であると考えられている。正常血清ＨＡ濃度は、＜０．１ｎｇ／ｍｌ（１００ｐＭ）である。血清ＨＡ濃度は、神経または神経内分泌に由来する腫瘍を有する患者において持続的に上昇する（シャラー（Ｓｃｈａｌｌｅｒ），Ｈ．Ｃ．ら，ジャーナル・オブ・ニューロオンコロジー（Ｊ．Ｎｅｕｒｏｏｎｃｏｌ．）６：２５１−２５８，１９８８、ウィニキス（Ｗｉｎｎｉｋｅｓ，Ｍ．ら，ユーローピアン・ジャーナル・オブ・キャンサー（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ）２８：４２１−４２４，１９９２）。脳卒中に付随して起きるＨＡ血清上昇に関する研究は報告されていない。ＨＡは、神経または神経内分泌に由来する腫瘍により連続的に分泌されると考えられ、腫瘍除去後血清濃度は正常値に戻る。神経内分泌に誘導された腫瘍を有する患者では、血清ＨＡ濃度は、６．８ｎｇ／ｍｌ（６．８ｎＭ）を超えることがある。脳卒中パネルの一部としてのＨＡの有用性は、神経または神経内分泌に由来する腫瘍を有する患者を識別することである。これらの患者は、脳卒中に関連した脳の損傷ではなく、癌の結果として脳損傷に付随するマーカーの血清上昇を有することができる。これらの患者は、脳損傷の迅速な診断から効果が得られる患者群の小さなサブセットかもしれないが、マーカーとしてＨＡを使用することは患者の識別に役立つであろう。最後に、アンギオテンシン転換酵素である、血清酵素は、ＨＡを分解する能力があり、血液試料は、この活性を阻害する抗凝固剤としてＥＤＴＡを用いて抽出されねばならない。
【０１７９】
グリケート化されたヘモグロビンＨｂＡ１ｃの測定により、血糖が延長時間において上昇する度合いの評価が得られ、したがって、この測定は糖尿病が患者においてコントロールされる程度に関連している。グルコースは、ヘモグロビンＡにゆっくり結合し、Ａ１ｃサブタイプを形成する。逆反応または分解は、比較的ゆっくり進むので、何らかの蓄積がほぼ４週間持続する。正常な血糖レベルの場合、グリケート化されたヘモグロビンは４．５％〜６．７％になると期待される。しかし、血糖濃度が上がると、より多くの結合が生じる。グリケート化されたヘモグロビンの測定が８．０％を超える場合は、経過時間による血糖のコントロールに欠陥があることが示唆されている。
【０１８０】
（ｖｉｉ）アポトーシスに関連したマーカー
ＣＰＰ−３２、ＹＡＭＡ、およびアポパインとも呼ばれる、カスパーゼ−３は、細胞アポトーシスの間に活性化される、インターロイキン−１β転換酵素（ＩＣＥ）様細胞内システィン蛋白質分解酵素である。カスパーゼ−３は、２０ｋＤａおよび１１ｋＤａのサブユニットのヘテロダイマーへのアポトーシス導入の間に蛋白質分解酵素により活性化される不活性な３２ｋＤａの前駆体として存在する（フェルナンデス−アルネムリ（Ｆｅｒｎａｎｄｅｓ−Ａｌｎｅｍｒｉ），Ｔ．ら，ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）２６９：３０７６１−３０７６４，１９９４）。カスパーゼ−３の細胞基質には、ポリ（ＡＤＰ−リボーズ）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）およびステロール調節エレメント結合蛋白質（ＳＰＥＢＰ）（リウ（Ｌｉｕ），Ｘ．ら，ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）２７１：１３３７１−１３３７６，１９９６）がある。カスパーゼ−３の正常血漿濃度は不明である。ＡＣＳに関連したカスパーゼ−３の血漿濃度の変化に関する研究は発表されていない。虚血および低酸素症に関連した心筋細胞へのアポトーシスの導入の仮説を支持する事実の数は増加している（サラステ（Ｓａｒａｓｔｅ），Ａ．，ヘルツ（Ｈｅｒｚ）２４：１８９−１９５，１９９９、オーツカ（Ｏｈｔｓｕｋａ），Ｔ．ら，コロナリー・アーテリー・ディジーズ（Ｃｏｒｏｎ．Ａｒｔｒｙ  Ｄｉｓ．）１０：２２１−２２５，１９９９、ジェームス（Ｊａｍｅｓ），Ｔ．Ｎ．，コロナリー・アーテリー・ディジーズ（Ｃｏｒｏｎ．Ａｒｔｒｙ  Ｄｉｓ．）９：２９１−３０７，１９９８、ビアリク（Ｂｉａｌｉｋ），Ｓ．ら，ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．）１００：１３６３−１３７２，１９９７、ロング（Ｌｏｎｇ），Ｘ．ら，ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．）９９：２６３５−２６４３，１９９７）。血漿カスパーゼ−３濃度の上昇は、アポトーシスを含む何らかの生理学的所見と関係がある。運動の間および運動後の骨格筋、および脳虚血においてアポトーシスが誘発されることを示唆する事実がある（キャラーロ（Ｃａｒｒａｒｏ），Ｕ．およびフランセスチ（Ｆｒａｎｃｅｓｃｈｉ），Ｃ．，エージング（Ａｇｉｎｇ（Ｍｉｌａｎｏ））９：１９−３４，１９９７、マックマナス（ＭａｃＭａｎｕｓ），Ｊ．Ｐ．ら，ジャーナル・オブ・セレブラル・ブラッドフロー・アンド・メタボリズム（Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  Ｍｅｔａｂ．）１９：５０２−５１０，１９９９）。
【０１８１】
カテプシンＤ（Ｅ．Ｃ．３．４．２３，５．）は、可溶性リソソームのアスパラチン酸蛋白質分解酵素である。カテプシンＤは、プレプロカテプシンＤとして小胞体中で合成される。マンノース−６−ホスフェート・タグを有すると、カテプシンＤは、マンノース−６−ホスフェート受容体により承認される。酸性リポソームに入ると、単一鎖プロカテプシンＤ（５２ｋＤａ）は、カテプシンＤに活性化され、次いで、成熟２鎖カテプシンＤ（それぞれ、３１および１４ｋＤａ）に活性化される。カテプシンＤの標的に含まれる２つのマンノース−６−ホスフェート受容体は、細胞内および細胞外の膜の両方に発現される。グリコシル化は、細胞内で普通に行き交う場合は困難であると考えられている。カテプシンＤの基礎的な役割は、細胞内および内在化された蛋白質を分解することである。カテプシンＤは、抗原処理およびペプチドホルモンの酵素発生に参加していることが示唆されている。カテプシンＤの組織特異的機能は、プロラクチンの処理に連結しているように思われる。ラットの乳腺は、プロラクチンの生物学的に活性なフラグメントの形成にこの酵素を用いている。カテプシンＤは、多種多様な組織においてそれらのリモデリングまたは退行において、およびアポトーシスにおいて機能的である。
【０１８２】
脳αスペクチン（αフォドリンとも呼ばれる）は、約２８４ｋＤａの細胞骨格蛋白質であり、これはカルシウムに依存する様式においてカルモジュリンと反応する。エリスロイド・スペクチンのように、脳αスペクチンは、オリゴマーを形成する（特に、ダイマーおよびテトラマー）。脳αスペクチンには、２つのＥＦハンド・ドメインおよび２３のスペクチン反復体が含まれている。アポトーシス細胞死の間のαスペクチンのカセパーゼ３が媒介する分割は、膜安定性の変更およびアポトーシス体の形成において重要な役割を果たしている。
【０１８３】
その他の好ましいマーカー
次の表は、疾患または症状に関連した追加の好ましいマーカーのリストを提示しており、各マーカーは鑑別診断について有用な情報を提示することができる。当業者が理解し、本明細書で記述されているように、パネル内の追加のマーカーを用いて考えるとマーカーは異なる症状を示すかもしれない、一方、患者の臨床状態すべてについて考えると、マーカーは、異なる症状を示すかもしれない。
【０１８４】
【表２−１】
2007518062.tif 000004
【０１８５】
【表２−２】
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【０１８６】
【表２−３】
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【０１８７】
【表２−４】
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【０１８８】
【表２−５】
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【０１８９】
【表２−６】
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【０１９０】
ユビキチン化および敗血症
蛋白質のユビキノン媒介による分解は、細胞外物質が細胞に組み込まれる方法、細胞膜から生物化学的信号の移動などの多数のプロセスのコントロール、および転写オン−オフ・スイッチなどの細胞機能の調節において主な役割を果たす。ユビキチン系は、免疫反応および発症に関係している。ユビキチンは、７６個のアミノ酸からなるポリペプチドであり、これは分解の標的になっている蛋白質と結合している。ユビキチン−蛋白質の抱合体は、蛋白質からユビキチンを切り取り、次いで、この蛋白質は分解される２６Ｓ蛋白質分解複合体により認識されている。
【０１９１】
敗血症は、非リソソーム系エネルギー依存型蛋白質分解経路により骨格筋中の蛋白質分解を刺激し、ユビキチンｍＲＮＡの筋肉レベルも上昇したので、これらの結果は、敗血症誘起筋肉蛋白質の分解が、エネルギー−ユビキチン依存型蛋白質分解経路の上の方へ調節された活性により生じることを示すと、解釈された。同じ蛋白質分解経路が、神経支配除去、空腹、酸血症、癌、および火傷により生じた筋肉分解に関係していた。したがって、ユビキチン化された蛋白質、または特異的ユビキチン−蛋白質抱合体またはそれらのフラグメントのレベルは、本発明の追加のマーカーとして測定することができる。チアノ（Ｔｉａｎｏ）ら，ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．）９９：１６３−１６８，１９９７、を参照のこと。その上、ユビキチン自身の循環レベルは、本明細書で記述された方法における有用なマーカーになりうる。例えば、マジェチャック（Ｍａｊｅｔｓｃａｋ）ら，ブラッド（Ｂｌｏｏｄ）１０１：１８８２−１８９０，２００３、を参照のこと。
【０１９２】
興味深いことに、蛋白質または蛋白質フラグメントのユビキチン化は、敗血症の非特異的マーカーをより特異的なマーカーに転換することができる。例えば、筋肉損傷は、循環系内の筋肉蛋白質の濃度を上げることができる。しかし、ユビキチン化経路を特異的に上の方に調節することにより、敗血症は、ユビキチン化された筋肉蛋白質を増加させ、敗血症誘導筋肉損傷から非特異的筋肉損傷を区別できるようになる。
【０１９３】
当業者は、ユビキチン自身、ユビキチン−蛋白質抱合体、またはユビキチンとユビキチン−蛋白質抱合体との両方を認めるユビキチンの検定法がデザインされうることを承認するであろう。例えば、サンドイッチ型免疫検定法で使われる抗体は、固体相抗体およびラベルされた抗体の両方が、ユビキノンの一部が非抱合体ユビキチンとユビキチン抱合体の両方で結合に利用できることを認めるように選択される。一方、筋肉蛋白質トロポニンのユビキチン抱合体に対して特異的な検定法が、ユビキチンを認める１つの抗体（固体相またはラベル上で）、トロポニンを認める第２の抗体（固体相またはラベルのその他）を使用できる。
【０１９４】
本発明は、本明細書で記述された何らかのマーカーのユビキチン抱合体の測定を思料している。マーカーとして検出に好ましいユビキノン−筋肉蛋白質抱合体には、トロポニンＩ−ユビキチン、トロポニンＴ−ユビキチン、トロポニンＣ−ユビキチン、２成分および３成分トロポニン複合体−ユビキチン、アンチ−ユビキチン、ミオシン−ユビキチン、トロポミオシン−ユビキチン、およびα−アクチニン−ユビキチンがあるが、これらに限定されない。
【０１９５】
ＳＩＲＳの原因を区別するための代表的マーカーおよびマーカーパネル
代表的マーカーおよびマーカーパネルは、敗血症を診断し、ＳＩＲＳのその他の原因から敗血症、重症の敗血症、および／または敗血症ショックを区別し、敗血症患者のリスクの層別化に役立つようにデザインされるのが好ましい。特に好ましいマーカーは、ＣＲＰ、ＩＬ−１β、ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＨＭＧ−１、ＴＮＦα、ＭＩＦ、ＭＣＰ−１、ＢＮＰ、ＣＮＰ、ｐｒｏ−ＢＮＰ、ｐｒｏ−ＣＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏ−ＢＮＰ、組織因子、フォンビレブラント因子、ｖＷＦ−Ａ１、ｖＷＦ−インテグリン結合ドメイン、ｖＷＦ−Ａ３、またはこれらの免疫学的に検出できるフラグメントである。これらのフラグメントは、これらのマーカーの１つの代用として使えるか、組織内にマーカーの放出を開始する現象の開始と試料が取得または分析される時間との間の経過時間、試料の取得と試料が分析される時間の間の経過時間、問題の組織試料の型、貯蔵状態、存在する蛋白質分解酵素の量、などに関する追加の情報が得られるものである。
【０１９６】
これら個々のマーカーは、マーカーパネルの中でグループ分けすることもできる。好ましいパネルは、炎症に関連した１つ以上のマーカーおよび血圧調節に関連した１つ以上のマーカー、炎症に関連した１つ以上のマーカーおよび凝固および止血に関連した１つ以上のマーカー、または炎症に関連した１つ以上のマーカーおよび凝固および止血に関連した１つ以上のマーカーおよび血圧調節に関連した１つ以上のマーカーがある。
【０１９７】
特に好ましいマーカーパネルには、ＣＲＰ、ＩＬ−１β、ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＨＭＧ−１、ＴＮＦα、ＭＩＦ、ＭＣＰ−１、ＢＮＰ、ＣＮＰ、ｐｒｏ−ＢＮＰ、ｐｒｏ−ＣＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏ−ＢＮＰ、組織因子、フォンビレブラント因子、ｖＷＦ−Ａ１、ｖＷＦ−インテグリン結合ドメイン、ｖＷＦ−Ａ３、またはこれらの免疫学的に検出できるフラグメントから選択される複数のマーカーが含まれる。
【０１９８】
検定法測定ストラテジー
本発明のマーカーの検出および分析に関する方法および装置については、多くの方法および装置が当業者には周知である。患者テスト試料中のポリペプチドまたは蛋白質については、免疫検定法の装置および方法がよく使われる。例えば、米国特許第６，１４３，５７６号、第６，１１３，８５５号、第６，０１９，９４４号、第５，９８５，５７９号、第５，９４７，１２４号、第５，９３９，２７２号、第５，９２２，６１５号、第５，８８５，５２７号、第５，８５１，７７６号、第５，８２４，７９９号、第５，６７９，５２６号、第５，５２５，５２４号、および第５，４８０，７９２号を参照のこと。なお、これらの特許の各々は、すべての表、図およびクレームを含めて、その全体が引用により本明細書に組み込まれている。これらの装置および方法は、目的とする分析対象物質の存在または量に関連している信号を作るために種々のサンドイッチ型、競合、または非競合検定法フォーマットにおいてラベルを付けた分子を利用することができる。さらに、バイオセンサーおよび光学免疫検定法などの特定の方法および装置は、ラベル付けされた分子を必要とせずに、分析対象物質の存在または量を決めるために使うことができる。例えば、米国特許第５，６３１，１７１号および第５，９５５，３７７号を参照のこと。なお、これらの特許の各々は、すべての表、図およびクレームを含めて、その全体が引用により本明細書に組み込まれている。当業者は、ベックマンアクセス（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ａｃｃｅｓｓ）、アボットアクスシム（Ａｂｂｏｔｔ  ＡｘＳｙｍ）、ロッシュエレクシス（Ｒｏｃｈｅ  ＥｌｅｃＳｙｓ）、ダーデ・ベーリング・ストレータス・システムズ（Ｄａｄｅ  Ｂｅｈｒｉｎｇ  Ｓｔｒａｔｕｓ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を含むが、これらに限定されないロボット装置が本明細書で開示された免疫検定法を行いうる免疫検定法分析器であることも認めている。
【０１９９】
当業者にはその他の方法が周知であるが、マーカーは、免疫検定法を用いて分析するのが好ましい（例えば、マーカーＲＮＡレベルの測定）。マーカーの存在または量は、一般に、各マーカーに対して特異的な抗体を用い、特異的な結合を検出して測定される。例えば、酵素結合免疫検定法（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫検定法（ＲＩＡ）、競合結合検定法など、適切な免疫検定法が利用される。マーカーへの抗体の特異的免疫学的結合は、直接的または間接的に検出されうる。直接ラベルには、抗体に取り付けられた、蛍光または発光のタグ、金属、染料、放射性核種などがある。間接ラベルには、アルカリ性ホスファターゼ、セイヨウワサビ・ペルオキシダーゼなど当該分野で周知の種々の酵素がある。
【０２００】
マーカーに対して特異的な固定酵素を使用することも、本発明では思料されている。抗体は、磁性粒子またはクロマトグラフ・マトリックス粒子、分析場所（マイクロタイターウェルなど）の表面、固体基質物質の部片または膜（プラスチック、ナイロン、紙など）などの多様な固体支持体上に固定される。検定用帯材は、固体支持体上に１つまたは複数の抗体を配列するか、抗体をコーティングすることにより作られる。この帯材は、次いで、テスト試料に浸漬し、洗浄および検出の工程を経て迅速に処理されて、着色スポットなどの測定可能な信号を発生させる。
【０２０１】
複数のマーカーの分析は、１つのテスト試料を用いて別々または同時に行われる。マーカーの別々または逐次的検定に適した装置には、ＥｌｅｃＳｙｓ（Ｒｏｃｈｅ）、ＡｘＳｙｍ（Ａｂｂｏｔｔ）、Ａｃｃｅｓｓ（Ｂｅｃｋｍａｎ）、登録商標ＡＤＶＩＡおよび登録商標ＣＥＮＴＡＵＲ（Ｂａｙｅｒ）の免疫検定装置、登録商標ＮＩＣＨＯＬＳ  ＡＤＶＡＮＴＡＧＥ（Ｎｉｃｈｏｌｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）免疫検定装置、などの臨床検査分析器がある。好ましい装置または蛋白質チップは、単一表面上で複数のマーカーの同時検定を行う。特に有用な物理的フォーマットは、複数の異種分析対象物質を検出するための複数の個別のアクセス可能な位置を有する表面を含む。このようなフォーマットには、蛋白質マイクロ配列、または「蛋白質チップ」（例えば、ング（Ｎｇ）およびイラーグ（Ｉｌａｇ），ジャーナル・オブ・セルラー・アンド・モレキュラー・メディシン（Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．）６：３２９−３４０（２００２）を参照のこと）および特定の毛細管装置（例えば、米国特許第６，０１９，９４４号を参照のこと）が含まれる。これらの実施形態では、個別の各表面位置は、各位置における検出のために１つ以上の分析対象物質（例えば、マーカー）を固定するために抗体を含むことができる。一方、表面は、表面の個別の位置に固定された１つ以上の個別の粒子（例えば、マイクロ粒子またはナノ粒子）を含む。表面の個別の位置では、マイクロ粒子が、検出するための１つの分析対象物質（例えば、１つのマーカー）を固定するために抗体を含む。
【０２０２】
複数の試料を効率的に処理するために、１つのテストにいくつかのマーカーが組み込まれる。さらに、当業者は、同じ患者からの複数の試料（例えば、連続的な時点における）をテストする価値を認めるであろう。このような一連の試料のテストにより、時間によるマーカーレベルの変化を確認することができるようになる。マーカーレベルの増減、並びにマーカーレベルの変化の不在は、疾患の発症からの時間をほぼ確認すること、救助可能な組織の存在および量、薬物療法の適切さ、症状の再潅流または緩解により示された種々の療法の効果、種々の型のＡＣＳの層別化、疾患重症度の確認、および将来の疾患のリスクを含む患者の転帰の確認を含むがこれらに限定されない疾患の状態について有用な情報を与える。
【０２０３】
上で引用されたマーカーからなるパネルは、鑑別診断に関する重要な情報を与えるために作られる。この種のパネルは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、またはそれ以上のマーカーまたは個々のマーカーを用いて作られる。単一マーカーまたは比較的大きなマーカーパネルを含むマーカーのサブセットの分析は、種々の臨床条件における臨床感度および特異度を最適化するために当業者により行われる。これらには、外来、緊急治療、重要治療、集中治療、監視装置、入院患者、外来患者、医師オフィス、内科クリニック、および健康スクリーニング条件が含まれるが、これらに限定されない。さらに、当業者は、単一マーカーまたは臨床感度および特異度を最適化するために前述の条件の各々における診断閾値調節と組み合わせられた比較的大きなマーカーパネルを含むマーカーのサブセットを使用することができる。検定法の臨床感度は、その検定法が正確に予測する疾患を有する被験体のパーセンテージとして規定され、検定法の特異度は、その検定法が正確に予測する疾患を有しない被験体のパーセンテージとして規定される（臨床化学のティーツ（Ｔｉｅｔｚ）教科書，第２版，カール・バーチス（Ｃａｒｌ  Ｂｕｒｔｉｓ）およびエドワード・アッシュウッド（Ｅｄｗａｒｄ  Ａｓｈｗｏｏｄ）編集，Ｗ．Ｂ．サウンダース・アンド・カンパニー（Ｓａｕｎｄｅｒｓ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ）ｐ．４９６）。
【０２０４】
マーカーの分析は、やはり、種々の物理的フォーマットで行われる。例えば、マイクロタイター・プレートまたは自動化の使用は、多数のテスト試料の処理の促進に使える。一方、単一試料フォーマットは、タイムリーな様式、例えば、外来輸送または緊急ルーム条件における直接治療および診断を促進するために開発された。
【０２０５】
別の実施形態では、本発明はマーカー分析用のキットを提供している。この種のキットは、少なくとも１つのテスト試料の分析用装置および試薬、および検定を行うための説明書を含むのが好ましい。随意に、これらのキットは、特定の診断を含めるか、または排除するためにマーカーパネルについて行われた免疫検定法から得られた情報を用いる１つ以上の手段を含むことができる。
【０２０６】
抗体の選択
抗体の発生および選択は、いくつかの方法で達成される。例えば、１つの方法は、当該分野で周知の固体相ペプチド合成方法を用いて目的とするポリペプチドを合成し、精製する。例えば、蛋白質精製へのガイド（Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ），ドイッチャー（Ｄｅｕｔｃｈｅｒ），Ｍ．Ｐ．，編集，メソード・イン・エンチモロジー（Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．）Ｖｏｌ．１８２（１９９０）、固体相ペプチド合成（Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ），フィールズ（Ｆｉｅｌｄｓ），Ｇ．Ｂ．，編集，メソード・イン・エンチモロジー（Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．）Ｖｏｌ．２８９（１９９７）、キソ（Ｋｉｓｏ）ら，ケミストリー・アンド・ファーマシューティカル・ビュレティン（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．（Ｔｏｋｙｏ）３８：１１９２−１１９９，１９９０）、モスタファビ（Ｍｏｓｔａｆａｖｉ）ら，バイオメディカル・ペプチド・プロティンズ・アンド・ヌクレイック・アシッズ（Ｂｉｏｍｅｄ．Ｐｅｐｔ．Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ）１：２５５−２６０，１９９５、フジワラ（Ｆｕｊｉｗａｒａ）ら，ケミストリー・アンド・ファーマシューティカル・ビュレティン（ＣＨｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．（Ｔｏｋｙｏ）４４：１３２６−１３３１，１９９６）を参照のこと。次いで、選択されたポリペプチドは、例えば、マウスまたはうさぎに注入され、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を産生する。当業者は、例えば、（抗体、ラボラトリー・マニュアル（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ），ハーロウおよびデビッド・レーン（Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｌａｎｅ）編集，コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８）），コールド・スプリング・ハーバー（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ），ニューヨーク州（Ｎ．Ｙ．））に記載されているように、抗体の産生に多くの操作が利用できることを認めている。当業者は、抗体に似ている結合フラグメントまたはＦａｂフラグメントは、種々の操作により遺伝子情報から作られることも理解している（抗体エンジニアリング：実用的アプローチ（Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ）（ボレベック（Ｂｏｒｒｅｂａｃｋ），Ｃ．，）編集，１９９５，オックスフォード大学プレス（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ）、ジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．）１４９：３９１４−３９２０（１９９２））。
【０２０７】
さらに、多数の刊行物が、選択された標的に結合するポリペプチドのライブラリーを産生し、選別するためにファージ表示技術の使用を報告している。例えば、クワーラ（Ｃｗｉｒｌａ）ら，プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・オブ・ユナイテッド・ステート・オブ・アメリカ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．）８７，６３７８−６３８２，１９９０、デブリン（Ｄｅｖｌｉｎ）ら，サイエンス（Ｓｃｉｎｃｅ）２４９，４０４−４０６，１９９０、スコット（Ｓｃｏｔｔ）およびスミス（Ｓｍｉｔｈ），サイエンス（Ｓｃｉｎｃｅ）２４９，３８６−３８８，１９９０、およびラードナー（Ｌａｄｎｅｒ）ら，米国特許第５，５７１，６９８号を参照のこと。ファージ表示方法の基本的な概念は、選別されるべきポリペプチドコード化ＤＮＡとこのポリペプチドとの間の物理的会合の確立である。この物理的会合は、ファージ粒子により与えられ、この粒子はポリペプチドをコード化するファージゲノムを封入しているキャプシドの一部としてポリペプチドを表示する。ポリペプチドとそれらの遺伝物質の間の物理的会合の確立は、異なるポリペプチドを有する非常に大きな数のファージの同時質量選別を行うことを可能にする。標的に対して親和性を有するポリペプチドを表示しているファージは、この標的に結合し、これらのファージはこの標的に対して親和性選別により濃縮される。これらのファージから表示されたポリペプチドのアイデンティテイーは、これらそれぞれのゲノムから決めることができる。これらの方法を用いて所望の標的に対して結合親和性を有することが確認されたポリペプチドは、次いで、普通の方法により大量に合成される。例えば、米国特許第６，０５７，０９８号を参照のこと。なお、この特許は、すべての表、図およびクレームを含めて、その全体が引用により本明細書に組み込まれている。
【０２０８】
これらの方法により作られる抗体は、精製された目的とするポリペプチドとの親和性および特異性に関する第１の選別により選択され、もし必要であれば、この抗体の親和性および特異性に関する結果を、結合から排除されることが望ましいポリペプチドと比較する。この選別操作は、マイクロタイター・プレートの個々のウェルにおける精製されたポリペプチドの固定を含む。可能性のある抗体および抗体群を含む溶液は、次いで、それぞれのマイクロタイターウェルに入れられ、約３０分乃至２時間保温される。次いで、マイクロタイターウェルは洗浄され、ラベル付きの二次抗体（例えば、上昇した抗体がマウス抗体であれば、アルカリ性ホスフェートに結合したアンチマウス抗体）がウェルに添加され、約３０分間保温され、次いで、洗浄される。このウェルに基質が添加され、この固定ポリペプチドに対する抗体が存在するならば、着色反応が起きるであろう。
【０２０９】
そのようにして確認された抗体は、さらに、選択された検定デザインにおける親和性および特異性について分析される。標的蛋白質の免疫検定法を展開すると、精製された標的蛋白質は、選択された抗体を用いた免疫検定法の感度と特異度を判断するスタンダードとして作用する。種々の抗体の結合親和性は異なるので、特定の抗体ペア（例えば、サンドイッチ型検定において）は、互いに立体的に妨害し、抗体の絶対的な親和性および特異性よりも一層重要な尺度になる可能性がある。
【０２１０】
当業者は、抗体や結合フラグメントを産生したり、種々のポリペプチドに対する親和性と特異性についてスクリーニングおよび選択をするために多くのアプローチを取りうることを認めているが、これらのアプローチは本発明の範囲を変えるものではない。
【０２１１】
治療計画の選択
特定の非特異的な症状の潜在的原因の一例が、大きくて多様な１群の症状でありうるため、これらの潜在的原因に対する適切な治療は同様に大きくて多様でありうる。しかし、一旦診断が下されると、医師は、その診断に適合した処置方法を容易に選択することができる。当業者は、本明細書で記述された診断方法に関連して述べられた多数の疾患の適切な処置方法を知っている。例えば、（メルクの診断および治療法のマニュアル（Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ），第１７版，メルク・リサーチ・ラボラトリーズ（Ｍｅｒｃｋ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ），ホワイト・ステーション，ニュージャージー州，１９９９）を参照のこと。
【０２１２】
以下の実施例は、本発明の説明に役立てるものであり、本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例１】
【０２１３】
血液試料の採取
血液試料は、抗凝固剤としてＥＤＴＡを用いて熟練した検査員により採取され、１０分以上遠心分離される。血漿成分は、無菌の冷凍小瓶に移され、−２０℃以下の温度で冷凍される。検定データを統計学的に分析する場合に、これらの患者各々の臨床履歴が利用できる。
【実施例２】
【０２１４】
生化学分析
マーカーは、標準免疫検定技法を用いて測定される。これらの技法には、標的蛋白質を特異的に結合するための抗体の使用が含まれている。選択されたマーカーに対して向けられたモノクローナル抗体は、抗体あたり約５個のＮＨＳ−ビオチン部分の比率において、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド・ビオチン（ＮＨＳ−ビオチン）を用いてビオチニル化される。次いで、抗体−ビオチン抱合体は、標準アビジン３８４ウェルマイクロタイター・プレートのウェルに添加され、このプレートに結合しない抗体抱合体は除去される。これが、マイクロタイター・プレート内に「アンチマーカー」を形成する。同じマーカーに対して向けられた別のモノクローナル抗体は、サクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］−シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）およびＮ−サクシンイミジル３−［２−ピリジルジチオ］プロピオネート（ＳＰＤＰ）を用いてアルカリ性ホスフェートに対して結合される（ピアース，ロックフォード，イリノイ州）。
【０２１５】
免疫検定法はＴＥＣＡＮジェネシスＲＳＰ２００／８ワークステーションで行われる。ビオチニル化抗体は、予めアビジンを塗布されたマイクロタイター・プレートウェル内にピペットで注入され、６０分間保温される。非結合抗体を含む溶液は除去され、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１％アジ化ナトリウム、および０．０２％トゥイーン−２０を含む２０ｍＭボレート（ｐＨ７．４２）からなる洗浄緩衝液でウェルは洗浄された。血漿試料（１０μＬ）は、マイクロタイター・プレートウェル内にピペットで注入され、６０分間保温される。次いで、試料は除去され、洗浄緩衝液でウェルは洗浄された。次いで、抗体−アルカリ性ホスフェート抱合体は、ウェルに添加され、さらに６０分間保温され、その後抗体抱合体は除去され、洗浄緩衝液でウェルは洗浄された。基質（登録商標ＡｔｔｏＰｈｏｓ，プロメガ，マジソン，ウィスコンシン州）がウェルに添加され、蛍光生成物の形成速度は、その患者の試料のマーカー濃度に関係していた。
【実施例３】
【０２１６】
マーカー濃度
正常な被験体および菌血症について培養陽性である陽性ＳＩＲＳ患者から得られた試料は、次のようなマーカーについて分析される（測定単位は括弧内に示す）：ＣＲＰ（μｇ／ｍＬ）、ＨＳＰ−６０（ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ−１β（ｐｇ／ｍＬ）、ＩＬ１−ｒａ（ｐｇ／ｍＬ）、ＩＬ−６（ｐｇ／ｍＬ）、ＩＬ−８（ｐｇ／ｍＬ）、ＭＩＦ（ｎｇ／ｍＬ）、組織因子（ｐｇ／ｍＬ）、ＴＮＦα（ｐｇ／ｍＬ）、ＶＣＡＭ（ｎｇ／ｍＬ）、フォンビレブラント因子（ｎｇ／ｍＬ）、ＭＣＰ−１（ｐｇ／ｍＬ）、ＢＮＰ（ｐｇ／ｍＬ）、トロンビン−アンチトロンビンＩＩＩ（ｎｇ／ｍＬ）、ＩＣＡＭ（ｎｇ／ｍＬ）、およびＣＮＰ（ｐｇ／ｍＬ）。結果は、次の表に提示される。
【０２１７】
【表３】
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【０２１８】
【表４】
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【０２１９】
【表５】
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【０２２０】
【表６】
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【実施例４】
【０２２１】
ＳＩＲＳにおける予後指標としてのＢＮＰの使用
予測研究において、ＳＩＲＳの診断に関する４つの基準の内少なくとも２つを示す被験体は、救急部に提示した場合、およびその後のいろいろな機会に、血清ＢＮＰ濃度について評価された。患者の転帰は、一次端点を表す入院死亡率で評価された。合計２８８名の患者が評価された。ＢＮＰ四分位数は、最初、２４時間後、および４８時間後に採取された試料について測定された。各四分位数のＢＮＰ（ｐｇ／ｍＬとして）は次の通りである。
【０２２２】
【表７】
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【０２２３】
図１−３に示したように、各血液で観察された端点リスクは、各四分位数、特に四分位数３および４において増加している。約５０ｐｇ／ｍＬと５００ｐｇ／ｍＬとの間の閾値は、ＳＩＲＳにおけるリスクを層別化する場合に理に適っているように思われる。
【実施例５】
【０２２４】
ＳＩＲＳにおけるリスクを層別化するためのパネル
２００３年１２月２３日に出願された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ０３／４１４２６号に記述された方法を用いて、ＳＩＲＳにおけるリスクを層別化するための代表的パネルが確認された。可能性のある多数のマーカーからスタートして、反復操作が適用された。この操作において、マーカーの個々の閾値濃度は、それ自身はカットオフとして使われていないが、各患者の検定値が比較され、正規化される値として使われている。カットオフ上下の最小値および最大値を計算するためにウインドウ因子が使われた。最大値より上の検定値は、最大値に設定され、最小値より下の検定値は最小値に設定されている。個々のマーカーの加重絶対値に１まで加える。マーカーの負の加重は、対照群の検定値が、疾患群の検定値よりも高いことを意味している。
【０２２５】
「パネル応答」は、カットオフ、ウインドウ、および加重因子を用いて計算される。患者および対照の全集団のパネル応答は、個々のマーカーについて普通に行われるように、ＲＯＣ分析にかけられ、「パネル応答」カットオフは、パネルにとって望ましい感度および特異度を生じるように選択される。各セットについて反復を行った後、方程式への寄与が最も弱いものが削除され、低減した数のマーカーについて反復プロセスを再開する。このプロセスは、パネルの感度および特異度として受け入れ可能な最小数のマーカーが得られるまで続けられる。
【０２２６】
これらの実施例では、「疾患」データセットは、敗血症であると診断され、敗血症で死亡した被験体の集団を表し、「対照」データセットは、敗血症であると診断されたが、生存し、病院から退院した被験体の集団を表す。これらの被験体の試料は、可能であれば、０（入院時）、３時間、６時間、１２時間、および２４時間に得られた。層別化において、敗血症のリスクとして考えられたマーカーには、ＢＮＰ、ＩＬ−８、ＨＭＧ−１、ＩＬ−１β、ＩＬ−１ｒａが含まれた。各被験体は、各時点における試料をすべて用意できたわけではなく、また、各マーカーについてすべて測定できたわけではない。例えば、下に報告したＢＮＰのデータは、パネル１において、１６２名の「対照」被験体および８９名の「疾患」被験体を含み、１２時間で死亡した被験体は、２４時間の時点では含まれていない。
【０２２７】
次のパネルは、この種のパネルにおけるマーカー「勾配」（即ち、時間によるマーカーレベルの変化）の使用も例示している。次の代表的パネルの場合、この勾配は、時間０と比較した、３時間、６時間、１２時間、および２４時間（各被験体についてどの試料を利用できるかによる）におけるマーカー濃度の変化を考慮して計算される。
【０２２８】
下に報告されたオッズ比は、ＲＯＣ曲線プロットを用いて９２．５％特異度における報告された感度において計算される。
【０２２９】
【表８−１】
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【０２３０】
【表８−２】
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【０２３１】
【表８−３】
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【０２３２】
マーカー勾配を考慮するこれらのパネルに加えて、別々の時点に採取された単一試料のみを考慮しているマーカーパネルが作られる。例えば、次のパネルでは、「疾患」データセットは、敗血症であると診断され、敗血症で死亡した被験体の集団を表し、「対照」データセットは、臨床的に敗血症であると診断されたが、生存し、病院から退院した被験体の集団を表す。なお、強調されているように、考慮された試料は、臨床提示の時点で敗血症の各被験体から採取された「第１採血」の試料または提示３時間後に採取された試料である。下に報告されたオッズ比は、ＲＯＣ曲線プロットを用いて、９２．５％特異度において報告された感度において計算される。
【０２３３】
【表９−１】
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【０２３４】
【表９−２】
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【実施例６】
【０２３５】
ＳＩＲＳにおける診断および／またはリスクの層別化のためのパネル
上で詳細に述べたように、敗血症の９０％以上の症例は、細菌感染を含んでいる。ただし、敗血症の強い臨床所見を示す患者の内５０％以上は、細菌培養を確認できなかったと報告されている。例えば、２００３年６月２３日に電子版で発行されたジェイムス（Ｊａｉｍｅｓ）ら，インテンシブ・ケア・メディシン（Ｉｎｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．）２９：１３６８−１３７１、を参照のこと。したがって、この種の分析に使用する「対照」群の選択は、培養陰性被験体を分けるためにこの不能性により複雑になるかもしれない。この陰性被験体は、敗血症である培養陰性被験体から敗血症に罹患せず、したがって、アンチ細菌療法（例えば、抗生物質）の効果が期待できる。
【０２３６】
再び、２００３年１２月２３日に出願された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ０３／４１４２６号に記述された方法を用いて、敗血症を有すると臨床的に診断されたが、生存し、病院から退院した培養陰性被験体の「対照」集団を、敗血症を有すると診断され、敗血症で死亡した「疾患」集団と比較することにより次のような代表的パネルが確認された。この「疾患」集団は、培養陽性被験体と培養陰性被験体との両方を含み、培養状態とは無関係に、これらの被験体は死亡したので、この集団を識別できれば、より積極的な療法が許されたかもしれない。この種のパネルは、敗血症の診断において、陽性の細菌培養がない場合でも補助的な手段として使え、および／または予後のためにも使える。
【０２３７】
【表１０】
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【０２３８】
本発明が、これらの目的を行い、上で触れた目的および利益、並びに本発明が本来備えているものを取得するのに適合していることを、当業者は容易に理解するであろう。本明細書で提示された実施例は、好ましい実施形態を代表しており、本発明の範囲を限定するものではない。
【０２３９】
本発明の範囲および精神を逸脱することなく、本明細書で開示された発明を変更できることは、当業者には明らかであろう。
【０２４０】
本明細書で言及されたすべての特許および刊行物は、当業者のレベルの指標であろう。すべての特許および刊行物は、あたかも個々の刊行物が引用により組み込まれていることが具体的且つ個別に示されている程度と同じ程度に引用により本明細書に組み込まれている。
【０２４１】
本明細書で説明のために記述された本発明は、本明細書で具体的に開示されていない１つまたは複数のエレメント、１つまたは複数の限定が存在しない場合も適切に実行されうる。したがって、例えば、本明細書の各実施例において、用語「・・を含む」、「本質的に・・からなる」および「・・からなる」のいずれかは、他の２つの用語のどちらかで置換されうる。用いられた用語および表現は、説明のための用語として使われ、限定のための用語として使われるわけではなく、このような用語および表現を使用する場合は、記述された特徴または特徴の一部と等価なものを何か除外する意図はなく、本願発明の範囲内で種々の修正が可能であることは認められている。したがって、本発明は、好ましい実施形態および随意の特徴により具体的に開示されているが、本明細書で開示された概念の修正および変更は当業者により変更され、添付されたクレームにより規定された本発明の範囲内で考えられることは了解されるであろう。
【０２４２】
別の実施形態は、特許請求の範囲に記載される。
【図面の簡単な説明】
【０２４３】
【図１】ＢＮＰ濃度四分位値により層別されたＳＩＲＳに罹患している被験体の死亡率曲線を示している。
【図２】ＢＮＰ濃度四分位値により層別されたＳＩＲＳに罹患している被験体の死亡率曲線を示している。
【図３】ＢＮＰ濃度四分位値により層別されたＳＩＲＳに罹患している被験体の死亡率曲線を示している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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