(57)【要約】  環状ソマトスタチンアナログの製造法およびその方法において使用する直鎖中間体が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2007526899.tif 000023
〔式中、
Ｒ１は−Ｃ２−６アルキレン−ＮＲ３Ｒ４、−Ｃ２−６アルキレン−グアニジンまたは−Ｃ２−６アルキレン−ＣＯＯＨであり、ここで、Ｒ３およびＲ４の各々は独立してＨ、Ｃ１−４アルキル、ω−ヒドロキシ−Ｃ２−４アルキレンまたはアシルであるか、またはＲ３およびＲ４は、それらが結合している窒素原子と一体となって、さらなるヘテロ原子を含み得るヘテロ環式基を形成し、そして
Ｒ２はＺ１−ＣＨ２−Ｒ５、−ＣＨ２−ＣＯ−Ｏ−ＣＨ２−Ｒ５、
【化２】
2007526899.tif 000024
(式中、Ｚ１はＯまたはＳであり、そしてＲ５は所望により置換されているフェニルである)
である。〕
の化合物、またはその塩の製造法であり、
式II
【化３】
2007526899.tif 000025
の、または式III
【化４】
2007526899.tif 000026
の、または式IV
【化５】
2007526899.tif 000027
〔式中、Ｒ１およびＲ２は上記で定義の通りであり、
Ｒ１１およびＲ１２の各々は独立してアミノ保護基であり、
それにより、Ｒ１が末端ＮＨ２を有するとき、この末端ＮＨ２もまたアミノ保護基で保護される。〕
の直鎖状ソマトスタチンアナログを環化し、そして
必要であれば、保護基(複数もある)を除去し、そして
このようにして得た遊離形または塩形の式Ｉの化合物を回収することを含む、方法。
【請求項２】
式II
【化６】
2007526899.tif 000028
〔式中、Ｒ１が−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＲ３Ｒ４であり、Ｒ２が４−ベンジルオキシ−フェニルであり、そしてＲ３、Ｒ４、Ｒ１１およびＲ１２が請求項１で定義の通りであり、
それにより、Ｒ１が末端ＮＨ２を有するとき、この末端ＮＨ２もまたアミノ保護基で保護される。〕
の直鎖状ソマトスタチンアナログを環化し、そして
必要であれば保護基(複数もある)を除去し、そして
このようにして遊離形または塩形で得たＲ１が−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＲ３Ｒ４であり、そしてＲ２が４−ベンジルオキシ−フェニルである式Ｉの化合物を回収することを含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
式II
【化７】
2007526899.tif 000029
の、または式III
【化８】
2007526899.tif 000030
の、または式IV
【化９】
2007526899.tif 000031
〔式中、Ｒ１およびＲ２は請求項１で定義の通りであり、
Ｒ１１およびＲ１２の各々は独立してアミノ保護基であり、
それにより、Ｒ１が末端ＮＨ２を有するとき、この末端ＮＨ２もまたアミノ保護基で保護される。〕
の化合物、またはその塩。
【請求項４】
Ｒ１が−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＲ３Ｒ４であり、Ｒ２が４−ベンジルオキシ−フェニルであり、そしてＲ１１およびＲ１２の各々が独立してアミノ保護基であり、
それにより、Ｒ１が末端ＮＨ２を有するとき、この末端ＮＨ２もまたアミノ保護基で保護されるものである、請求項３記載の式IIの化合物、またはその塩。
【請求項５】
Ｈ−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−ＤＰｈｇ−ＤＴｒｐ(Ｂｏｃ)−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−ＯＨ、
Ｈ−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−ＤＴｒｐ−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−ＯＨおよび
Ｈ−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ(Ｂｏｃ)Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−ＯＨから選択される、請求項３記載の式IIの化合物、またはその塩。
【請求項６】
請求項３記載の式II、IIIまたはIVの化合物の製造法であり、各々が少なくとも１個のアミノ酸を保護されたまたは保護されていない形で含む２個のペプチド単位をアミド結合により連結させ、ここで、アミド結合は、式II、IIIまたはIVで定義の所望のアミノ酸配列が得られるこのような結合であり、そして
必要であれば少なくとも１個の保護基を除去し、そして
このようにして得た遊離形または塩形の式II、IIIまたはIVの化合物を回収することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、環状ソマトスタチンアナログの製造法およびその方法において使用する中間体に関する。
【０００２】
より具体的に、本発明は、式Ｉ
【化１】
2007526899.tif 000002
〔式中、
Ｒ１は−Ｃ２−６アルキレン−ＮＲ３Ｒ４、−Ｃ２−６アルキレン−グアニジンまたは−Ｃ２−６アルキレン−ＣＯＯＨであり、ここで、Ｒ３およびＲ４の各々は独立してＨ、Ｃ１−４アルキル、ω−ヒドロキシ−Ｃ２−４アルキレンまたはアシルであるか、またはＲ３およびＲ４は、それらが結合している窒素原子と一体となって、さらなるヘテロ原子を含み得るヘテロ環式基を形成し、そして
Ｒ２はＺ１−ＣＨ２−Ｒ５、−ＣＨ２−ＣＯ−Ｏ−ＣＨ２−Ｒ５
【化２】
2007526899.tif 000003
(式中、Ｚ１はＯまたはＳであり、そしてＲ５は所望により置換されているフェニルである)
である。〕
の環状ソマトスタチンアナログ、またはその塩の製造法を提供する。
【０００３】
すべてのアシルは、例えばＲａＣＯ−(ここで、ＲａはＨ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ３−６シクロアルキルまたはベンジルである)であり得る。ＮＲ３Ｒ４がヘテロ環式基を形成するとき、このような基は芳香族性または飽和であり得て、そして１個の窒素または１個の窒素と、窒素および酸素から選択される第２のヘテロ原子を含み得る。好ましくは該ヘテロ環式基は、例えばピリジルまたはモルホリノである。Ｃ２−６アルキレンは、好ましくは−ＣＨ２−ＣＨ２−である。Ｒ５が置換されているフェニルであるとき、該フェニル環はハロゲン、メチル、エチル、メトキシまたはエトキシで、例えばオルトおよび／またはパラで置換されていてよい。好ましくはＲ５は非置換フェニルである。
【０００４】
２位および／または５位のアミノ酸は、ＤまたはＬ立体配置を有し得る。好ましくはそれらの各々はＬ立体配置である。
【０００５】
式Ｉの化合物は、例えば遊離形または塩形で存在できる。塩は、例えば有機酸、重合酸または無機酸との、例えば塩酸、酢酸、乳酸、アスパラギン酸、安息香酸、コハク酸またはパモン酸との酸付加塩、またはＲ１がＣＯＯＨ基を含むとき、例えばアルカリ金属塩である。酸付加塩は、１価または２価塩として、例えば１または２酸当量のいずれを遊離塩基形の式Ｉの化合物に添加したかに依存して、存在できる。好ましい塩は、二アスパラギン酸塩または一パモン酸塩である。
【０００６】
本発明の製造法は、保護されている形の対応する直鎖状ペプチドを環化する工程を含む。本発明により、この環化工程が、対応する直鎖状ペプチドの２個の末端アミノ酸の選択に特に依存することが、驚くべきことに判明した。可能な６個の環化のうち、アミノ酸３と４、または４と５、または６と１の間の環化が、著しく興味深い結果を提供することが、驚くべきことに判明した。アミノ酸４と５の間の環化が特に好ましい。アミノ酸３と４、または４と５、または６と１の間の、本発明に従った環化は、キラル部位での異性体化が少なく、収率の改善に至る。さらに、これらの環化工程は、あまり厳しくない条件および反応物で行うことができる：例えば環化アジドの使用による環化を避けることができる。
【０００７】
本発明の第一の態様において、上記の式Ｉの化合物のまたはその塩の製造法であり、式II
【化３】
2007526899.tif 000004
の、または式III
【化４】
2007526899.tif 000005
の、または式IV
【化５】
2007526899.tif 000006
〔式中、Ｒ１およびＲ２は上記で定義の通りであり、
Ｒ１１およびＲ１２の各々は独立してアミノ保護基であり、
それにより、Ｒ１が末端ＮＨ２を有するとき、この末端ＮＨ２もまたアミノ保護基で保護される。〕
の直鎖状ソマトスタチンアナログを環化し、そして
必要であれば、保護基(複数もある)を除去し、そして
このようにして得た遊離形または塩形の式Ｉの化合物を回収することを含む、方法を提供する。
【０００８】
適当なアミノ保護基は、例えば、“Protective Groups in Organic Synthesis”, T. W. Greene et al., John Wiley & Sons Inc., Second Edition 1991に、例えば、記載されている通りである。このようなアミノ保護基の例は、例えばペプチド合成で使用されるアセチルまたはアミノ基、例えばｔｅｒｔ.−ブトキシ−カルボニル、カルボベンズオキシ、フルオレニルメトキシカルボニル、アロキシカルボニル、１−(４,４−ジメチル−２,６−ジオキソシクロヘキシリデン)エチル、１−(４,４−ジメチル−２,６−ジオキソシクロヘキシリデン)−３−メチルブチル、４−メチルトリチルである。(W.C. Chan and P.D. White, Fmoc solid Phase Peptide Synthesis, Oxford University Press, 2000)。
【０００９】
環化は、簡便には、インサイチュカルボキシ活性化のためのアミニウム−またはホスホニウム−ベースの誘導体、例えばＯ−(ベンゾトリアゾール−１−イル)Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス(ピロリジノ)ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート、Ｎ−[(１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル)(ジメチルアミノ)メチレン]−Ｎ−メチルメタンアミニウムテトラフルオロボレートＮ−オキシド、Ｎ−[(ジメチルアミノ)−１Ｈ−１,２,３−トリアゾロ[４,５−ｂ]ピリジン−１−イルメチレン]−Ｎ−メチルメタンアミニウム、７−アザベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス(ピロリジノ)−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェートの存在下で行い得る。好ましくは本反応は、塩基、例えば有機アミン、例えばＮ−エチルジイソプロピルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、トリエチルアミン、またはトリベンジルアミンの存在下、および補助的求核試薬、例えば１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、３−ヒドロキシ−３,４−ジヒドロ−１,２,３−ベンゾトリアジン−４−オンまたは１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾールの存在下で行い得る。
【００１０】
式II、IIIまたはIVの化合物の環化は、保護された形の式Ｉの化合物、すなわち分子中に存在する１個もしくはそれ以上またはすべてのアミノ基がアミノ保護基で保護されている、式Ｉの化合物をもたらす。このような化合物の例は、例えばシクロ[(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ(Ｂｏｃ)−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−]、シクロ[(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−]およびシクロ[(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−ＤＰｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−]である。
【００１１】
該アミノ保護基は、当分野で既知の方法により、例えばトリフルオロ酢酸；３Ｍ  ＨＣｌ、ＥｔＯＡｃ；Ｍｅ３ＣＣｌ、フェノール、ＣＨ２Ｃｌ２；１０％Ｈ２ＳＯ４、ジオキサン；ブロモカテコールボランでの、例えば開裂により、除去し得る。
【００１２】
式II、IIIおよびIVの化合物またはそれらの塩は新規であり、本発明の一部を構成する。これらの化合物は、各々が少なくとも１個のアミノ酸を保護されたまたは保護されていない形で含む２個のペプチド単位をアミド結合により連結させることにより得ることができ、ここで、アミド結合は、式II、IIIまたはIVで定義の所望のアミノ酸配列が得られる結合である。
【００１３】
合成は、当分野で既知の方法に従って、例えば溶液中または固相合成により、第一アミノ酸から出発して行い得る。固相合成において、第一アミノ酸は樹脂、例えば市販のポリスチレン−ベースの樹脂に、所望により適当なリンカー、例えば、側鎖保護をそのままにするための緩和な条件下で開裂できるリンカー、例えば所望により置換されているトリチルベースのリンカー、例えば４−(ヒドロキシル−ジフェニル−メチル)−安息香酸(ここで、フェニル基は、所望により、例えばＣｌで置換されていてよい)を介して、結合している。所望のペプチド鎖の構築は、溶液中であれ、固相合成であれ、慣用法で、例えば末端アミノ基がＦｍｏｃ−保護されており、存在するとき、側鎖アミノ基が異なるアミノ保護基、例えばＢｏｃまたはＣＢＯで保護されているアミノ酸を使用して、行い得る。
【００１４】
合成を固相合成で行うとき、構築したペプチドを、次いで、当分野で既知の方法に従って、樹脂から、例えば酢酸；トリフルオロ酢酸；酢酸−トリフルオロエタノール−ジクロロメタン；ヘキサフルオロイソプロパノールのジクロロメタン溶液で除去する。構築したペプチドを固相から除去するための好ましい方法は、例えば塩素化されていないトリチルベースのリンカーを使用するとき、例えばメタノール／ジクロロメタンでの、好ましくは室温での処置、またはケトン、例えばエチルメチルケトンでの、好ましくは約５０℃での処置である。
【００１５】
式II、IIIおよびIVの化合物の例は、例えば
Ｈ−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−Ｄ−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ(Ｂｏｃ)−ＯＨ
Ｈ−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−Ｄ−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−ＯＨ
Ｈ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ(Ｂｏｃ)−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−ＯＨ
Ｈ−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−ＤＰｈｇ−ＤＴｒｐ(Ｂｏｃ)−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−ＯＨ
Ｈ−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−ＤＴｒｐ−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−ＯＨ
Ｈ−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ(Ｂｏｃ)Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−ＯＨ
である。
【００１６】
式II、IIIまたはIVの化合物は、上記で式Ｉの化合物について記載した通り、塩形でも存在できる。
【００１７】
式Ｉの化合物は価値のあるソマトスタチンアゴニストであり、例えばＷＯ９７／０１５７９またはＷＯ０２／１０１９２(それらの薬理学的特性を記載する内容を、引用により本明細書に包含する)に記載のような薬理学的特性を有する。好ましい化合物はシクロ[｛(４−ＮＨ２−Ｃ２Ｈ４−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ｝−Ｐｈｇ−ＤＴｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ(４−ベンジル)−Ｐｈｅ]、またはその塩である。好ましい塩はアスパラギン酸塩(一−または二−アスパラギン酸塩)またはパモン酸塩である。
【００１８】
本発明の方法を使用するとき、式II、IIIまたはIVａの対応する直鎖状ペプチドの７０％より高い環化収率を得ることができる。
【００１９】
下記実施例は本発明を説明する。すべての温度は℃である。
下記略語を使用する：
【表１】
2007526899.tif 000007
【００２０】
実施例１：[Ｈ−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−ＯＨ]
【化６】
2007526899.tif 000008
１０,４ｇ(ＦＭＯＣ−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−[(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)]−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ(ＢＯＣ)−ＯＨ)を１００ml  ＤＭＦに溶解する。ＲＴで、２,０ml  ジエチルアミンを添加し、撹拌を４時間、ＲＴで続ける。透明な黄色溶液を４０°で蒸発させる。残渣に１５０ml  酢酸イソプロピルを添加する。種晶を添加し、１８時間、ＲＴで撹拌し、濾過し、２０ml  酢酸イソプロピルで洗浄する。４０°で乾燥させる。ＨＰＬＣ  ８７,５％ｂ.ａ.(１７,６分)。ESI-MS :1287,5(M+Na)+;1H-NMR(DMSO)(δ, DMSO):1.14(2H, m), 1.33 (2H, m), 1.37(18H, m), 1.53(1H, m), 1.64(1H, m), 2.06(1H, m), 2.22(1H, m), 2.78-3.15(12H, m), 3.38(1H, m), 3.79(2H, br), 4.12(1H, m), 4.55-4.75(3H, m), 5.06(2H, s), 5.15(1H, d), 5.54(1H, d), 6.75(1H, br), 6.83(1H, br), 6.89(2H, d), 6.94(1H, t), 6.99(1H, s), 7.43(2H, d), 7.10-7.50(arom.H), 7.59(1H, d), 8.14(1H, d), 8.45-8.55(2H, m), 8.60(1H, d), 10.71(1H, br)。
【００２１】
出発物質として使用する化合物を、下記の通り製造する：
ａ)Ｚ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ(ＢＯＣ)−ＯＭｅ
【化７】
2007526899.tif 000009
２３,７ｇ  Ｚ−Ｄ−Ｔｒｐ−ＯＨの２３０ml  ＴＨＦ溶液に、９,５ｇ  ＨＯＢｔをＲＴで添加する。透明無色溶液が形成される。次いで、２０,８ｇ  Ｈ−Ｌｙｓ(ＢＯＣ)−ＯＭｅ.ＨＣｌをＲＴで添加し、続いて７,７ml  Ｎ−メチルモルホリンを添加する。細かい懸濁液を０°に冷却し、１１,４ml  ジイソプロピルカルボジイミドを添加する。１時間、０°で、次いで３時間、ＲＴで撹拌する。７,０ｇ  濃硫酸の１２０ml  水溶液を懸濁液に添加する。１５０ml  酢酸エチルで抽出し、相を分離し、有機相を連続して１００ml  飽和塩水、１００ml  ２５％塩水、５％炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄する。次いで、有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発させる。残渣を２５０ml  酢酸イソプロピルに取り込み、２時間、ＲＴで撹拌する。濾過し、４０°で乾燥させて、４０,９ｇＺ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ(ＢＯＣ)−ＯＭｅ、白色物質を得る。ＨＰＬＣ−条件：MN Nucleosil 100 A/C18；５ミクロン；２５０×４mm；相Ａ：０,２４％リン酸、相Ｂ  アセトニトリル；勾配：２０から８０％Ｂに３０分かけて；波長２２０nm；流速１,３ml／分；温度３５°：純度９７,８％ｂ.ａ.(２４,２分)。
【００２２】
ｂ)Ｈ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ(ＢＯＣ)−ＯＭｅ
【化８】
2007526899.tif 000010
１９,８ｇ(３４,１mmol)Ｚ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ(ＢＯＣ)−ＯＭｅを２２０ml  メタノールに溶解し、２,２ｇ触媒ＰｄＣ  １０％を添加し、ＲＴで水素化する。水素化を１時間、ＲＴ後に終了させ、触媒を濾取し、濾液を３０°で蒸発させる：白色固体。ＨＰＬＣ：９８,１％ｂ.ａ.(１６,２分)。
【００２３】
ｃ)Ｚ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ(ＢＯＣ)−ＯＭｅ
【化９】
2007526899.tif 000011
１７,０ｇ  Ｈ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ(ＢＯＣ)−ＯＭｅを８０ml  ＴＨＦと混合する。９,２ｇ  Ｚ−Ｐｈｇ−ＯＨを、灰色懸濁液にＲＴで添加する。４,４ｇ  ＨＯＢｔを添加し、２０ml  ＴＨＦで濯ぐ。濁った黄色溶液を０°に冷却し、５,３ml  ＤＩＣＩの１５ml  ＴＨＦ溶液を１０分以内に添加する。２時間、０°で、次いで２時間、ＲＴで撹拌する。次いで、３,６  硫酸の５７ml  水溶液を添加し、７０ml  酢酸エチルで抽出し、水、飽和塩水、５％炭酸水素ナトリウム、２５％塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発させる。白色残渣を１２５ml  酢酸イソプロピル中、２時間、４０°で撹拌し、懸濁液を濾過する。残渣を４０°で乾燥させる：わずかに黄色の物質。ＨＰＬＣ：９６,３％ｂ.ａ.(２５,３分)。
【００２４】
ｄ)Ｈ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ(ＢＯＣ)−ＯＭｅ
【化１０】
2007526899.tif 000012
２３,４ｇ(２３,８mmol)(Ｚ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ(ＢＯＣ)−ＯＭｅ)を２６０ml  メタノールに溶解し、２,６ｇ  Ｐｄ／Ｃ  １０％を添加し、ＲＴかつ常圧で水素化する。３時間後、触媒を濾取し、濾液を３０°で蒸発させる：白色固体。ＨＰＬＣ  ９５,９％ｂ.ａ.(１７,６分)。
【００２５】
ｅ)Ｚ−[(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)]−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ(ＢＯＣ)−ＯＭｅ
【化１１】
2007526899.tif 000013
１１,１ｇ(２Ｓ,４Ｒ)−４−(２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチルカルバモイルオキシ)−ピロリジン−１−カルボン酸ベンジルエステル−２−カルボン酸および１９,０ｇ  Ｈ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ(ＢＯＣ)−ＯＭｅを２９０ml  ＴＨＦにＲＴで溶解する。３,３２ｇ  ＨＯＢｔを添加し、濁った溶液を０°に冷却する。４,５６ml  ＤＩＣＩの９０ml  ＴＨＦ溶液を添加する。２４時間、０°で撹拌する。次いで、２,２ｇ硫酸の２２ml  水溶液をＲＴで添加し、わずかにオパール色の溶液を１５分撹拌し、次いで５００ml  水に滴下する。白色懸濁液を５０°で、ＴＨＦが蒸留しなくなるまで蒸発させる。懸濁液を濾過し、残渣を４回、各々８０ml  水で、次いで２５０mlメタノールおよび次いで２回、合計８０ml  メタノールで洗浄する。一晩、５０°で乾燥させる。ＨＰＬＣ  ９１,０％ｂ.ａ.(１９,５分)。
【００２６】
ｆ)Ｈ−[(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)]−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ(ＢＯＣ)−ＯＭｅ
【化１２】
2007526899.tif 000014
２２,０ｇ(１２,７mmol)Ｚ−[(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)]−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ(ＢＯＣ)−ＯＭｅを２２０ml  ＤＭＦに溶解し、４,４ｇ  Ｐｄ／Ｃ  １０％を添加する。４時間、ＲＴで水素化する。次いで、触媒を濾取し、濾液を６００ｇ  氷および４００ml  水の混合物に添加する。生成した沈殿を濾取し、水で洗浄する。３０°で乾燥させて、灰色固体を得る。ＨＰＬＣ：９７,０％ｂ.ａ.(１２,３分)。
【００２７】
ｇ)Ｚ−Ｐｈｅ−[(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)]−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ(ＢＯＣ)−ＯＭｅ
【化１３】
2007526899.tif 000015
５,１ｇ  Ｚ−Ｐｈｅ−ＯＨおよび１６,５ｇ  Ｈ−[(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)]−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ(ＢＯＣ)−ＯＭｅを２５０ml  ＴＨＦに溶解し、２,２９ｇ  ＨＯＢＴを添加し、暗色溶液を０°に冷却する。３,１ml  ＤＩＣＩを８０ml  ＴＨＦに溶解し、反応混合物に０°で添加する。２４時間、０°で撹拌する。反応混合物を２００ml  １０％硫酸に添加し、沈殿した固体を濾取し、水で洗浄(ished)する。濾過後、残渣を２００ml  メタノールと混合し、懸濁液を濾取する。４０°で乾燥させる。ＨＰＬＣ：９７,２％ｂ.ａ.(２１,１分)。
【００２８】
ｈ)(Ｈ−Ｐｈｅ−[(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)]−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ(ＢＯＣ)−ＯＭｅ)
【化１４】
2007526899.tif 000016
８,５ｇ  Ｚ−Ｐｈｅ−[(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)]−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ(ＢＯＣ)−ＯＭｅを１８０ml  ＤＭＦに溶解し、４,２５ｇ  Ｐｄ／Ｃ  １０％を添加し、混合物をＲＴで６時間水素化する。次いで、触媒を濾取し、濾液を４０°で蒸発させる。残渣に(３０ｇ)６００ml  ｔ−ブチルメチルエーテルをＲＴで滴下し、懸濁液を濾過し、残渣を３００ml  ＴＢＭＥで洗浄する。４０°で乾燥させる。ＨＰＬＣ  ９３,１％ｂ.ａ.(１６,６分)。
【００２９】
ｉ)ＦＭＯＣ−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−[(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)]−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ(ＢＯＣ)−ＯＭｅ
【化１５】
2007526899.tif 000017
６,５ｇ  Ｈ−Ｐｈｅ−[(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)]−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ(ＢＯＣ)−ＯＭｅおよび３,１ｇ  ＦＭＯＣ−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−ＯＨおよび０,８６ｇ  ＨＯＢＴを１８０ml  ＴＨＦに懸濁し、０°に冷却する。５,５ｇ  ＬｉＢｒ、次いで２０ml  ＴＨＦを添加する。次いで、５０ml  ＴＨＦに溶解した１,１８ml  ＤＩＣＩを添加し、暗色懸濁液を０°で２時間撹拌する。冷却浴を除去し、撹拌を２４時間続ける。次いで、０,６５ｇ硫酸の６,５ml  水溶液、次いで１６０ml  水を添加する。４０°で蒸発させ、残渣を濾過し、水で、最後の洗浄した水(ish-water)が４,０のｐＨとなるまで洗浄する。フィルターケーキを３０ml  メタノールで撹拌し、懸濁液を濾過し、残渣を１０ml  メタノールで洗浄する。３５°で乾燥させて、灰色物質を得る。ＨＰＬＣ  ９５,４％ｂ.ａ.(２６,０分)。
【００３０】
１０)ＦＭＯＣ−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−[(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)]−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ(ＢＯＣ)−ＯＨ
【化１６】
2007526899.tif 000018
１３,０ｇ  ＦＭＯＣ−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−[(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)]−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ(ＢＯＣ)−ＯＭｅを２５０ml  ＴＨＦに懸濁させる。７,３ｇ  ＬｉＢｒおよび７５ml  ＴＨＦを添加する。次いで、８,７ml  ＮａＯＨ  １モル濃度を、ＲＴでゆっくり２０分以内に添加する。ＲＴでの撹拌を３時間続け、次いでさらに５ml  ＮａＯＨ  １モル濃度を次の１５時間以内に添加する。最終反応溶液を、１,７ｇ硫酸の３４ml  水溶液に添加する。得られた２相混合物を５０ml  酢酸エチルに添加する。相分離後、有機相を３回塩水で洗浄し、次いで蒸発させる。残渣に２５ml  ＤＩＦを添加する。得られた透明ＤＩＦ−溶液を２６０ml  水に添加する。得られた懸濁液を濾過し、フィルターケーキを３回水で洗浄し、一晩４０°で乾燥させる。ＨＰＬＣ  ７１,９％ｂ.ａ.(２８,６分)。
【００３１】
実施例２：
４−(クロロ(ジフェニル)メチル)ベンゾイルアミノメチルポリスチレン樹脂の製造
【化１７】
2007526899.tif 000019
本合成を、窒素下で、焼結ガラスフリットを備えた、手動操作する１Ｌ  撹拌回分反応器(stirred batch reactor)で行う。ＤＭＦで前処理した市販のアミノメチルポリスチレン樹脂(３０.４ｇ、４１.０７mmol)を、ＲＴで一晩４−(ヒドロキシル−ジフェニル−メチル)安息香酸(１５.０ｇ、４９.２８mmol、１.２当量)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(ＨＯＢＴ)(７.５４ｇ、４９.２８mmol、１.２当量)およびＤＩＣＩ(１２.４３ｇ、９８.５７mmol、２.４当量)とＤＭＦ(１４０ml)中で反応させる。溶媒を、減圧下フリットを通すことにより除去し、樹脂を、回転により５回ＤＭＦで、および５回メタノールで洗浄する。真空で４０°での乾燥により４４.６９ｇ樹脂を得る。この樹脂を、ヘキサペプチドの続く合成のための出発物質として使用する。
【００３２】
保護された直鎖状ペプチドの製造
樹脂に結合した直鎖状ヘキサペプチドを、窒素下、焼結ガラスフリットを備えた撹拌回分反応器中での反復カップリング反応により、手動でＣ−からＮ方向で組み立てる。４−(クロロ(ジフェニル)メチル)ベンゾイルアミノメチルポリスチレン樹脂を出発物質として使用し、Ｎα−脱保護(２０％ｖ／ｖ  ジエチルアミン(ＤＡＥＭ)のＤＭＦ溶液)、ＤＭＦおよびＩＰＫ交互の反復洗浄、およびカップリング(ＤＩＰＣＩ／ＨＯＢＴ、ＤＩＥＰＡおよびＤＭＦ)のＲＴでの反復サイクルから成る標準プロトコールを行う。このカップリングの微細な修飾として、このアミノ酸のカップリングを０°で行うことにより、フェニルグリシンのラセミ化を最小にすることを特に注意する。完全に組み立てられた保護された直鎖状ペプチドのその樹脂支持体からの開裂前に、Ｎα−Ｆｍｏｃ保護を除去する。
【００３３】
Ｆｍｏｃ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−ＯＨをＷＯ０２／１０１１９２に記載のように合成する。すべての他のアミノ酸は市販されている。
【００３４】
Ｈ−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ(Ｂｏｃ)Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−ＯＨの合成
ａ)Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−Ｏ−樹脂の合成
【化１８】
2007526899.tif 000020
トルエンで前処理した４−(クロロ(ジフェニル)メチル)ベンゾイルアミノメチルポリスチレン樹脂(２０ｇ、１９.４mmol)を４時間、塩化アセチル(７.６ｇ、９７mmol)のトルエン溶液で、ＲＴで処理する。濾過後、この工程を一晩繰り返し、その後、樹脂を濾過し、トルエンおよびジクロロメタンで洗浄する。カップリングを、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−ＯＨ(１８.２ｇ、３８.８mmol；２当量)およびＮ−メチルモルホリン(３.９４ｇ、３８.８mmol、２当量)の混合物で４時間、ＲＴで行う。濾過後、樹脂をＤＭＦおよびＩＰＡで交互に３回洗浄し、真空で乾燥させて、０.５６６mmol／ｇ(Ｆｍｏｃ−法で測定)のキャパシティーの２６.５ｇの黄色がかったＦｍｏｃ−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−Ｏ−樹脂を得る。(文献Ｆｍｏｃ−法：Meienhofer, J.;Waki, M;Heimer, E.P.;Lambros, T.J.;Makofske, R.C.;Chang, C. D. Int. J. Pep. Prot. Res. 1979, 13, 35)
【００３５】
ｂ)樹脂−Ｏ−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−Ｄ−Ｔｒｐ(Ｂｏｃ)−Ｐｈｇ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｈ
Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−Ｏ−樹脂(２８.０ｇ、１９.９６mmol)をＤＭＦに懸濁し、ＤＡＥＭのＤＭＦ溶液(２０％ｖ／ｖ)で１０分、ＲＴで処理する。濾過した後、この工程を繰り返し、次いでＤＭＦおよびＩＰＡで交互に３回洗浄し、続いてＤＭＦで３回洗浄する。このＮα−Ｆｍｏｃ−脱保護および洗浄の工程を、各カップリング段階の後に繰り返す。
【００３６】
カップリングを、アミノ酸、ＨＯＢＴおよびＤＩＣＩの混合物で行い、それを３０分、ＲＴで撹拌し、次いで一度に樹脂に添加する。カップリングを完了するまで、すなわち残存アミノ基の完全な消失が“Kaiser”ニンヒドリン試験の陰性により追跡されるまで、続ける。結合させた後、樹脂を５回ＤＭＦで洗浄し、次いでＦｍｏｃ−保護の準備ができる。
【００３７】
以下のアミノ酸−誘導体を続いて結合させる：
Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｔｒｐ(Ｂｏｃ)−ＯＨ(１６.８１ｇ、３１.９２mmol、２当量)、ＤＩＦ(１００ml)、ＨＯＢＴ(４.９３ｇ、３２.２４mmol、２.０２当量)、ＤＩＣＩ(５.３５ｇ、４２.４５mmol、２.６６当量)。
Ｆｍｏｃ−Ｐｈｇ−ＯＨ(１１.９２ｇ、３１.９２mmol、２当量)、ＴＨＦ(７０ml)、ＨＯＢＴ(４.９３ｇ、３２.２４mmol、２.０２当量)、ＤＩＣＩ(５.３５ｇ、４２.４５mmol、２.６６当量)。のアミノ酸のカップリングを０℃で行うことにより、フェニルグリシンのラセミ化を最小にすることを特に注意する。
Ｆｍｏｃ−(２Ｓ,４Ｒ)４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−ＯＨ(１７.２６ｇ、３１.９２mmol、２当量)、ＤＩＦ(１００ml)、ＨＯＢＴ(４.９３ｇ、３２.２４mmol、２.０２当量)、ＤＩＣＩ(５.３５ｇ、４２.４５mmol、２.６６当量)。
Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ(１２.３６ｇ、３１.９２mmol、２当量)、ＤＩＦ(１００ml)、ＨＯＢＴ(４.９３ｇ、３２.２４mmol、２.０２当量)、ＤＩＣＩ(５.３５ｇ、４２.４５mmol、２.６６当量)。
Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−ＯＨ(１５.７５ｇ、３１.９２mmol、２当量)、ＤＩＦ(１００ml)、ＨＯＢＴ(４.９３ｇ、３２.２４mmol、２.０２当量)、ＤＩＣＩ(５.３５ｇ、４２.４５mmol、２.６６当量)。
【００３８】
完全に組み立てられた保護された直鎖状ペプチドのその樹脂支持体からの開裂前に、樹脂をＤＡＥＭのＤＭＦ溶液(２０％ｖ／ｖ)で１０分、ＲＴ処理することにより、Ｎα−Ｆｍｏｃ保護を除去する。濾過した後、この工程を繰り返し、ＤＭＦおよびＩＰＡで交互に３回洗浄し、続いて３回ＤＭＦで洗浄する。
(本樹脂の真空で４０℃の乾燥により、黄色がかった樹脂を得る)。
【００３９】
ｃ)直鎖状ペプチドのその樹脂支持体からの開裂：
Ｈ−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ(Ｂｏｃ)Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−ＯＨ
Ｃａ)ＡｃＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２／Ｈ２Ｏ  ４５／４５／５ｖ／ｖ／ｖでの方法
完全に組み立てられた保護された直鎖状ペプチド樹脂−Ｏ−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−Ｄ−Ｔｒｐ(Ｂｏｃ)−Ｐｈｇ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｈ(２４.５ｇ)をＡｃＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２／Ｈ２Ｏ  ４５／４５／５ｖ／ｖ／ｖ(１５０ml)の混合物に懸濁し、１時間、ＲＴで撹拌し、濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗浄する。濾液を蒸発乾固し、残渣を１時間ＴＢＭＥおよびヘプタン７／３ｖ／ｖの混合物と撹拌し、濾過し、真空で乾燥させる。黄色がかった固体を得る；含有量：９３.５％ＨＰＬＣ  ｇ／ｇ；純度９１.６％(Ｆ)−ＨＰＬＣおよび２.５％(Ｆ)−ＨＰＬＣ  Ｄ−Ｐｈｇ−エピマー。
本樹脂(４−(クロロ(ジフェニル)メチル)ベンゾイルアミノメチルポリスチレン樹脂)を３回メタノールで洗浄し、乾燥させ、再使用できるであろう。
【００４０】
Ｃｂ)ＣＨ２Ｃｌ２およびＭｅＯＨの方法
完全に組み立てられた保護された直鎖状ペプチド樹脂−Ｏ−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−Ｄ−Ｔｒｐ(Ｂｏｃ)−Ｐｈｇ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｈ(６.２ｇ)をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  １／１ｖ／ｖ(１１５ml)の混合物に懸濁し、３日間、ＲＴで撹拌し、濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗浄する。濾液を蒸発乾固し、残渣を１時間ＴＢＭＥおよびヘプタン７／３ｖ／ｖ(６０ml)の混合物と撹拌し、濾過し、真空で乾燥させる。含有量：９３.５％ＨＰＬＣ  ｇ／ｇ；純度９２.６％(Ｆ)−ＨＰＬＣおよび１.１％(Ｆ)−ＨＰＬＣ  Ｄ−Ｐｈｇ−エピマー。
本樹脂(４−(クロロ(ジフェニル)メチル)ベンゾイルアミノメチルポリスチレン樹脂)を３回メタノールで洗浄し、乾燥させ、再使用できるであろう。
【００４１】
Ｃｃ)エチルメチルケトン／ＭｅＯＨでの方法
完全に組み立てられた保護された直鎖状ペプチド樹脂−Ｏ−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−Ｄ−Ｔｒｐ(Ｂｏｃ)−Ｐｈｇ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｈ(４.０ｇ)をジエチルメチルケトン１／１ｖ／ｖ(２４ml)の混合物に撹拌し、１５時間、５０℃で撹拌し、濾過し、ＭｅＯＨで洗浄する。濾液を蒸発乾固し、残渣を１時間ＴＢＭＥおよびヘプタン７／３ｖ／ｖ(６０ml)の混合物と撹拌し、濾過し、真空で乾燥させる。含有量：８８.１％ＨＰＬＣ  ｇ／ｇ；純度９５.２％(Ｆ)−ＨＰＬＣおよび１.８％(Ｆ)−ＨＰＬＣ  Ｄ−Ｐｈｇ−エピマー。
本樹脂(４−(クロロ(ジフェニル)メチル)ベンゾイルアミノメチルポリスチレン樹脂)を３回メタノールで洗浄し、乾燥させ、再使用できるであろう。
【００４２】
精製
分析目的で、直鎖状ペプチドをＲＰクロマトグラフィーで精製した。
【００４３】
特徴付け
ＲＰクロマトグラフィーで精製した分析サンプルの構造を、ＦＡＢ−ＭＳ、ＬＣ−ＭＳおよびＮＭＲ−データで確認する(ＤＭＳＯでppm, 1.16, 1.34, 1.55, 1.61(3H), 1.66, 2.05, 2.20, 2.51, 2.83(2H),2.91, 2.96, 2.98, 3.02, 3.41, 3.78, 4.13, 4.61, 5.13, 5.51, 6.74, 6.83, 6.88(2H), 7.01(2H), 7.11(2H), 7.38, 7.42(2H), 7.49, 7.72, 8.01, 8.29, 8.48, 8.62, 8.75.)
【００４４】
アミノ酸立体配置をアミノ酸分析により決定する：本化合物を酸性条件で加水分解し、誘導体に変換させ、各個々のアミノ酸の立体配置を、エナンチオ選択的ガスクロマトグラフィー／化学イオン化質量分析により割り当てる。
構造のさらなる証明は、充分に特徴付けられた環状ペプチドへの直鎖状ペプチドの変換である。
【００４５】
以下の化合物を上記の方法に従い合成した。
Ｈ−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ(Ｂｏｃ)−ＯＨ；
Ｈ−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−ＯＨ；
Ｈ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ(Ｂｏｃ)−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−ＯＨ；
Ｈ−Ｐｈｅ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ(Ｂｏｃ)−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−Ｔｒｙ(Ｂｚｌ)−ＯＨ；
Ｈ−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−ＤＰｈｇ−ＤＴｒｐ(Ｂｏｃ)−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−ＯＨ
【００４６】
実施例３：合成のための直鎖状の保護されたペプチドの環化
シクロ[(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ(Ｂｏｃ)−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−]
【化１９】
2007526899.tif 000021
Ｈ−Ｐｈｅ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ(Ｂｏｃ)−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−ＯＨの環化
アジド法
環化のために、直鎖状断片(２.５ｇ、１.８３mmol)をＤＭＦ(３９１ml)に溶解し、−５°に冷却し、ＥＤＩＰＡ(０.４７ｇ、３.６６mmol、２当量)およびＤＰＰＡ(０.７５ｇ、２.７５mmol、１.５当量)で処理し、その温度で終了まで撹拌する(約２０時間)。水(３９１ml)を反応混合物に滴下し、沈殿を濾過し、水でアジドが検出できなくなるまで洗浄する。４.９ｇの水で湿った白色固体(ＨＰＬＣのＲｆは参考物質と同じ)を得て、それを脱保護反応にさらに精製することなく使用する。本化合物を、ＨＰＬＣにより、参考化合物との直接比較により特徴付けする。
【００４７】
Ｈ−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ(Ｂｏｃ)Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−ＯＨの環化
ａ)ＨＢＴＵ方法ａ
環化のために、直鎖状断片(６.０ｇ、３.５mmol)をＤＭＦ(７８０ml)に溶解し、−５°に冷却し、ＥＤＩＰＡ(１.１３ｇ、８.７５mmol、２.５当量)、ＨＯＢＴ(１.１８ｇ、８.７５mmol、２.５当量)、ＨＢＴＵ(３.３ｇ、８.７８mmol、２.５当量)で処理し、その温度で終了まで撹拌する(約２時間)。水(３９１ml)を反応混合物にＲＴで滴下し、沈殿を濾過し、水およびヘプタンで洗浄し、一晩真空で乾燥させる。５.４ｇ白黄色固体を得る。本化合物を、ＨＰＬＣにより、参考化合物との直接比較により特徴付けする。含有量  ５５％ｗ／ｗ  ＨＰＬＣ、純度７８(Ａ％)−ＨＰＬＣ。
【００４８】
ｂ)ＨＢＴＵ方法ｂ
環化のために、直鎖状断片(６.０ｇ、４.１６mmol)をＤＭＦ(６０ml)に溶解し、ＨＯＢＴ(４.１５ｇ、１０.４mmol、２.５当量)、ＨＢＴＵ(４.１５ｇ、１０.４mmol、２.５当量)およびＥＤＩＰＡ(１.４１ｇ、１０.４mmol、２.５当量)の混合物のＤＭＦ(１３５ml)溶液に−５°で添加して、その温度で終了まで撹拌する(約２時間)。水(５５９ml)を反応混合物にＲＴで滴下し、沈殿を濾過し、水およびヘプタンで洗浄し、一晩真空で乾燥させる。白色、黄色固体が得られる。本化合物を、ＨＰＬＣにより、参考化合物との直接比較により特徴付けする。含有量  ７７％ｗ／ｗ  ＨＰＬＣ、純度８４(Ａ％)−ＨＰＬＣ。
【００４９】
以下の直鎖状ペプチドを、上記の方法により環化する：
Ｈ−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ(Ｂｏｃ)−ＯＨ
Ｈ−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−ＯＨ
Ｈ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ(Ｂｏｃ)−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−ＯＨ
Ｈ−Ｐｈｅ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ(Ｂｏｃ)−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−Ｔｒｙ(Ｂｚｌ)−ＯＨ
Ｈ−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−ＤＰｈｇ−ＤＴｒｐ(Ｂｏｃ)−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−ＯＨ
【００５０】
実施例４：シクロ[(２Ｓ,４Ｒ)−４−(Ｂｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ)−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)−Ｐｈｅ−]トリフルオロ酢酸塩の合成
【化２０】
2007526899.tif 000022
完全な脱保護のために、残渣(１.５ｇ、０.７９mmｏ)を０°でＴＦＡ／Ｈ２Ｏ  ９５：５(８.３ml)に溶解し、本混合物を冷やしながら３０分撹拌する。冷反応混合物をＴＢＭＥ(２９ml)およびヘプタン(１３ml)の混合物にＲＴで滴下し、２時間撹拌する。沈殿を濾過し、ＴＢＭＥ／ヘプタン１：１(ｖ／ｖ)で洗浄し、真空で乾燥させる。ベージュ色固体が得られる、含有量  ５３％ｗ／ｗ  ＨＰＬＣ、純度：７９(Ａ％)−ＨＰＬＣ。
【国際調査報告】
2007526899.tif 000032
2007526899.tif 000033
2007526899.tif 000034
2007526899.tif 000035