(57)【要約】  １００μｍ以下の中央粒径を有するマイクロ粒子は、エタノール等の溶媒相における生物活性物質およびベヒクルを流動パラフィン等の非溶媒相において乳化させ、次に溶媒を蒸発させる溶媒蒸発方法によって作られる。乳化は、８以下の親水性／親油性バランスを有する界面活性剤の混合物を用いて安定化させる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物活性物質を分散ないし溶解させ、かつ媒体を溶解させた溶媒を準備し、乳化を非溶媒相で実施して、溶媒相に生物活性物質と媒体を含むエマルジョンを作り、溶媒を蒸発させてマイクロ粒子を残すことを含むマイクロ粒子の製造方法において、少なくとも２種類の界面活性剤の混合物が該エマルジョンを安定化させるために用いられ、マイクロ粒子の中位径を１００μｍ以下とするために該混合物のＨＬＢ（親水性／親油性バランス）が８以下であることを特徴とする生物活性物質と媒体を含むマイクロ粒子の製造方法。
【請求項２】
前記ＨＬＢが２〜７である請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記ＨＬＢが３〜５である請求項１または２記載の方法。
【請求項４】
前記ＨＬＢが３〜４である先行するいずれかの請求項記載の方法。
【請求項５】
前記混合物がソルビタンモノオレエートとソルビタンジオレエートを含む先行するいずれかの請求項記載の方法。
【請求項６】
前記混合物が２種類の界面活性剤の等モル混合物である先行するいずれかの請求項記載の方法。
【請求項７】
前記媒体が、胃腸管において生物活性物質のｐＨ依存性および／またはｐＨ非依存性の放出を可能にするポリマーである先行するいずれかの請求項記載の方法。
【請求項８】
前記媒体が、胃腸管において生物活性物質のｐＨ依存性の放出を可能にするポリマーである請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記媒体がアクリル系ポリマー、セルロース系ポリマーまたはポリビニル系ポリマーである先行するいずれかの請求項記載の方法。
【請求項１０】
前記媒体がメタクリレートポリマーである請求項９記載の方法。
【請求項１１】
前記媒体が、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ１００−５５、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｓ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｐ４１３５、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＲＳ１００またはエチルセルロースを含む先行するいずれかの請求項記載の方法。
【請求項１２】
前記媒体がＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＲＳ単独でない請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
前記生物活性物質が、プレドニゾロン、ベンドロフルアジドまたはブデゾニドである先行するいずれかの請求項記載の方法。
【請求項１４】
前記溶媒がエタノールであるか、またはアセトンとエタノールかメタノールとの混合物である先行するいずれかの請求項記載の方法。
【請求項１５】
前記混合物中の界面活性剤が両方ともに溶媒相に加えられるか、両方ともに非溶媒相に加えられるか、または一つが各相に加えられる先行するいずれかの請求項記載の方法。
【請求項１６】
前記非溶媒相が流動パラフィンである先行するいずれかの請求項記載の方法。
【請求項１７】
前記乳化が１０〜３０℃の温度で実施される先行するいずれかの請求項記載の方法。
【請求項１８】
先行するいずれかの請求項記載の方法により得ることのできるマイクロ粒子の組成物。
【請求項１９】
効果的な量の請求項１８記載のマイクロ粒子を患者に投与することを含む医学治療の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、マイクロ粒子、特に胃腸管で遅延および／または持続の医薬放出を可能とするポリマーによってカプセル化した医薬のマイクロ粒子の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
胃腸（ＧＩ）管の部位特異的領域を医薬の標的とさせるｐＨ感受性ポリマーを使用するという概念は新しいものではない。胃腸刺激剤または不安定な医薬は日常的に腸溶性被覆錠剤またはペレットシステムとして投与され、適度に高い溶解限界ｐＨを有するポリマーを選択することによって、末端回腸／結腸領域に特異的な炎症性腸疾患の治療のために、この領域を標的とすることが試みられてきた。
【０００３】
しかし、これらの方法はそれらの制限がないというわけではない。これらシステムの大きなサイズは通常、特に食後に投与されると、胃が空になるのが遅れて、医薬作用の遅れた予測不能な開始がもたらされるだろう。大きな一体構造システムのＧＩの移動時間は多粒子システムのものよりさらに変化を受けやすく、このことは生物学的利用の変化を導きうる。
【０００４】
マイクロ粒子はそれらの小さいサイズのために胃内容物中に浮遊するために、食事をした状態と絶食した状態の両方で幽門を通って急速に空になると予想されよう。小腸の通過はさらに再現性があるはずで、結腸の通過はさらに遅いはずで、結腸を標的とする剤形がそのまま排出される可能性を低減する。また、ｐＨ閾値にいったん達すると、マイクロ粒子システムの高い表面積はより速い医薬の放出を可能とするに違いない。従って医薬の溶解はより急速であると期待され、これは、結腸領域の限られた液量を考慮すると、結腸領域を標的とする医薬にとって特別な利点である。タンパク質およびペプチド投与の部位として結腸の可能性に関して、マイクロカプセル化はそのような医薬を投与システムに入れる好ましい方法であろうし、これらの変化しやすい分子に対して、ペレットや錠剤調製物よりもはるかに小さい機械的応力を与えるだけである。
【０００５】
広い範囲の改良放出ポリマーは、持続放出および遅延放出の処方物のために医薬工業によって錠剤、ペレットおよびカプセルの被覆として用いられている。持続放出ポリマーの例はセルロース誘導体であるエチルセルロースと酢酸セルロール、アンモニオメタクリレート共重合体（例えばＥｕｄｒａｇｉｔ  ＲＳおよびＲＬ）、およびポリ酢酸ビニルである。遅延放出のために、ポリマーは胃腸管内のある領域のｐＨに相当する限界ｐＨ以上で一般的に可溶性である（例えば、腸を標的とするＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００−５５（ｐＨ  ５．５）およびＬ１００（６．０）および結腸を標的とするＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｓ１００（７．０）およびＰ４１３５（７．０〜７．４））。特に、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００およびＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｓ１００のマイクロ粒子を作り出すこれまでの試みはこれまで成功せず、不十分な形態と医薬放出の不十分な制御の粒子がもたされ、均質化、（良好なエマルジョンの生産および／または溶媒除去のための）温度の注意深い調節または界面活性剤の添加速度を伴う複雑な生産方法を伴った（Ｇｏｔｏら（１９８６年）、Ｍｏｒｉｓｈｉｔａら（１９９１年）、Ｓｑｕｉｌｌａｎｔｅら（２００３年））。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
慣用の剤形を超えるマイクロ粒子システムの理論的な利点を鑑みて、本出願人は、不十分な形態と医薬放出の不十分な制御のマイクロ粒子の生産をもたらした問題を克服することを試みることにした。Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ／Ｓ１００のマイクロ粒子の生産のために
マイクロカプセル化の一般的に用いられる方法である乳化／溶媒蒸発法を最適化し、この最適化された方法を他の改良放出ポリマーに適用することにした。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
この乳化／溶媒蒸発法は概念的には単純な３工程法である。
工程１では、（医薬が分散するか、または優先的に溶解する）適当な溶媒にポリマーを溶解する。この溶媒は「内部相」としても知られる。次に、医薬とポリマーの溶液を、エマルジョンの安定性を向上させる界面活性剤を通常含む非溶媒（または「外部」）相中に乳化させる。
【０００８】
工程２では、通常、撹拌下で溶媒を蒸発させる。
（工程２が達成されたら）工程３では、粒子を凝固し、ろ過により分離して、きれいにすることができる。
【０００９】
初期段階の安定的なエマルジョンの形成は、分離したマイクロ粒子を単離するべき場合に重要である。溶媒の選択は、それがポリマー溶液から非溶媒相に移動し、蒸発により除去される速度に依存してマイクロ粒子の形態に影響を及ぼすことも見出された。選択された溶媒中のポリマーの溶解度および沸点は、粒子がどの程度に速く凝固するかに影響を与える因子である。この製法中、形成する「粒子」は、液体エマルジョン小滴から、半固体の「粘着性」粒子へ、さらに凝固した別々の粒子へと進展するだろう。粒子が半固体の形態にある時間は形成粒子の凝結および最終生成物の全体的な形態に影響を及ぼすと予想される。
【００１０】
Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００およびＳ１００をマイクロカプセル化するこれまでの試みは不十分な形態の粒子をもたらした（ＧｏｔｏらおよびＭｏｒｉｓｈｉｔａらを参照）。
【００１１】
Ａｃｔａ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉａｅ  ｅｔ  Ｌｅｇｉｓ  Ｍｅｄｉｃａｍｅｎｔｉ，２００３，１４（１），５３−６６（Ｍａｔｅｏｖｉｃ）は、界面活性剤（ステアリン酸マグネシウム、スパン（Ｓｐａｎ）  ２０およびステアリン酸マグネシウムとスパン２０の組合せ）を使用する溶媒蒸発方法によって、Ｅｕｄｒａｇｒｉｔ（登録商標）ＲＳの微小球の調製を開示する。得られた微小球は篩い分けされ、医薬含量と溶解とが３１５〜４００μｍの画分に関して決定された。しかし、この方法により作られた粒子は意図されたように機能しない。生物接着ポリマー含量に関してでさえ、非水溶性のＥｕｄｒａｇｉｔ
ＲＳは粒子から医薬の放出を延長するように明らかに意図されているが、実際は医薬の１００％が１時間以内に放出される。従って、この処方物は即時放出処方物（この定義は４５分以内に７０％放出である）として挙動する。
【００１２】
本発明の第１の態様にしたがえば、生物活性物質を分散ないし溶解させ、かつ媒体（Ｖｅｈｉｃｌｅ）を溶解させた溶媒を準備し、乳化を非溶媒相で実施して、溶媒相に該生物活性物質と媒体を含むエマルジョンを作り、溶媒を蒸発させてマイクロ粒子を残すことを含むマイクロ粒子の製造方法において、少なくとも２種類の界面活性剤の混合物が該エマルジョンを安定化するために用いられ、該混合物のＨＬＢ（親水性／親油性バランス）が１０以下であることを特徴とする生物活性物質と媒体を含むマイクロ粒子の製造方法が提供される。
【００１３】
現在まで、ｐＨ依存性放出ポリマーを用いる場合、医薬放出を制御する問題が存在する。この問題を解決するために、充填された医薬を生体内で効果的に運ぶために、マイクロ粒子は比較的大きくなければならない（ミリメートルのオーダーでおそらく中位径を有する）と考えられている。なぜなら、比較的大きい表面積を有する小さい粒子は酸性条件下で非常に速く医薬を放出すると考えられているためである。本発明者らは、さらに小さい
大きさのマイクロ粒子を形成することにより向上した医薬溶解速度を得ることができるという驚くべき発見をした。特に、１００μｍ以下、好ましくは２０〜６０μｍ、最も好ましくは３０〜５０μｍの中位径を有するマイクロ粒子が本発明の方法により作ることができることを見出した。
【００１４】
本方法等の乳化方法が多様な大きさの広範なマイクロ粒子をもたらすことが理解されるだろう。特に、粒子の直径は、ごく少数の粒子が極端な直径を有し、大部分が平均直径を有するいわゆる「正規分布」を採用するように思われる。従って、一部の先行技術の方法は１００μｍ以下の直径を有する一部のマイクロ粒子をもたらすだろう。しかし、中位径が１００μｍ以下のマイクロ粒子の分布をもたらす先行技術の方法は存在しないと考えられる。
【００１５】
界面活性剤の混合物のＨＬＢは好ましくは８以下、さらに好ましくは２〜７（もしくは２〜５）、最も好ましくは３〜５（もしくは３〜４）である。
【００１６】
「界面活性剤」とは、炭化水素鎖である疎水性部分と、付属のイオン性基または極性基等の親水性部分とを有する分子を意味する。例えば、水中油または油中水のエマルジョン製法を実施する場合、炭化水素（または「脂肪」）部分が油相と相互作用し、極性／イオン（「非脂肪」）部分が水相と相互作用することによりエマルジョンを安定化させるように界面活性剤分子は配向した状態になることができる。そのような分子は（極性と非極性の両方の分子と相互作用するので）「両性」と称され、ここでいう「界面活性剤」は「両性界面活性剤」を意味する。それは消泡剤等の非両性界面活性剤を包含しない。
【００１７】
簡単に言えば、ＨＬＢは５で割ることによって求められる界面活性剤分子の親水性部分のモルパーセントである。したがって、完全に親水性の分子は２０のＨＬＢ値を有し、完全に疎水性の分子はゼロのＨＬＢ値を有するだろう。ほとんどの界面活性剤は両性であり、０〜２０のＨＬＢ値を有し、それら界面活性剤をエマルジョンの２相間の界面で配向させることができるために、該エマルジョンを上記のように安定化させる。
【００１８】
界面活性剤の混合物は好ましくは２種類だけの界面活性剤の等モル混合物であり、ソルビタンモノオレエートとソルビタンジオレエートからなってよい。他の界面活性剤の組合せとして、ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）  ８０とスパン  ８５；スパン  ８０とスパン  ８５；スパン  ８５とスパン  ２０；スパン  ８０とスパン  ２０；またはそれらいずれかの２つの組合せが挙げられる。
【００１９】
特に好ましい実施形態において、ソルビタンセスキオレエートを界面活性剤として使用して該エマルジョンを安定化させている。ソルビタンセスキオレエートはアラセル  ８３の商品名でユニケマ（Ｕｎｉｑｕｅｍａ）から入手可能で、ソルビタンモノオレエートとソルビタンジオレエートの等モル混合物である。
【００２０】
理論に拘束されたくない１つの考えられる解釈は、エマルジョンを安定させるために分子レベルで機能しているのは２種類以上の界面活性剤の組合せ（アラセル（Ａｒｌａｃｅｌ）  ８３の場合、ソルビタンモノオレエートとソルビタンジオレエートの等モルの組合せ）だということである。しかし、この複合界面活性剤は適切な範囲のＨＬＢをさらに有するべきだと考えられる。
【００２１】
別の実施形態では、少なくとも２種類の界面活性剤の該混合物はスパン  ２０とスパン
８０の組み合わせを含まない。
【００２２】
媒体は、胃腸管において生物活性物質の（好ましくは）ｐＨ依存性および／またはｐＨ
非依存性の放出を可能とするポリマーであってよい。ポリマーの好ましい種類の具体例はアクリル系ポリマー（メタクリレート等）、セルロース系ポリマーまたはポリビニル系ポリマーである。「系」とは、ポリマー鎖の一部（好ましくは実質的な部分）が当該基を含むことを意味する。
【００２３】
特に好ましいポリマーはＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ１００−５５、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｓ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｐ４１３５、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＲＳ１００またはエチルセルロースを含む。しかし、一実施形態の媒体はＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＲＳ単独でない。
【００２４】
本方法は、広い範囲の医薬のマイクロ粒子を形成するのに用いることができると考えられる。
【００２５】
溶媒（内部相）は好ましくは純粋なエタノールであるが、医薬およびポリマーの溶解性によって有機溶媒の多様な混合物を利用してもよい。非溶媒（外部相）は好ましくは流動パラフィンである。
【００２６】
本発明者らは新規な乳化／溶媒蒸発法を開発し、とりわけＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００−５５、Ｌ１００、Ｓ１００およびＰ４１３５ならびにこれらポリマーの混合物の医薬充填のｐＨ応答性ポリマー粒子の製造を可能にしたと考える。本発明者らは、非水溶性ポリマーであるＥｕｄｒａｇｉｔ  ＲＳ１００とエチルセルロースの成功したマイクロカプセル化を示した。
【００２７】
本発明者らは特にＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００およびＳ１００の粒子の生産のためにアラセル  ８３（ソルビタンセスキオレエート）の有用性を示し、本発明者らの方法が将来のスケールアップのためにその単純化と可能性ならびに最終製品の品質という点において、他の文献の方法よりも優れていると考える。
【００２８】
粒子は経口投与に理想的なサイズ（３０〜５０μｍのサイズ範囲）であり、その優れた形態は良好な流動性を付与し、効率的で再現性のあるカプセル充填を可能とするに違いない。粒子はまた緩衝性懸濁液を用いる投与にも適するだろう。
【００２９】
本発明者らはインビトロにおけるＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００−５５、Ｌ１００およびＳ１００のｐＨ応答性の放出プロフィールを示した。胃ｐＨでは、すべてのｐＨ応答性マイクロ粒子からの医薬放出は最小値であるが、ポリマーの閾値以上では急速である。Ｌ１００およびＳ１００マイクロ粒子からの医薬放出を特徴付けるためにｐＨ変化法が用いられている。Ｌ１００およびＳ１００のそれぞれのマイクロ粒子に関して、酸中では１０％未満の放出が２時間後に起こり、ｐＨが腸／結腸レベルにいったん上がると、１００％の医薬放出の時間が５分以内となるように医薬充填を操作することができる。
【００３０】
本発明の第２の態様において、上記方法により得ることのできるマイクロ粒子の組成物が提供される。
【００３１】
本発明の第３の態様において、効果的な量の前記マイクロ粒子を患者に投与することを含む医学治療法が提供される。
【００３２】
本発明の第４の態様において、生物活性物質を分散ないし溶解させ、かつ媒体を溶解させた溶媒を準備し、乳化を実施して、溶媒相に生物活性物質と媒体を含むマイクロ粒子のエマルジョンを作り、溶媒を蒸発させてマイクロ粒子を残すことを含むマイクロ粒子の製
造方法において、ソルビタンジオレエートが前記エマルジョンを安定化させるために用いられることを特徴とする生物活性物質と媒体を含むマイクロ粒子の製造方法が提供される。
【００３３】
本発明者らは、異なる物理化学的性質を有する多数のモデル医薬を良好な効率で封入したが、本方法は広い範囲の薬剤をマイクロカプセル化できると考える。タンパク質医薬やペプチド医薬のカプセル化も可能であろうし、これらの変化しやすい医薬は、従来の錠剤化や造粒法よりも本調合方法により不活化されることほとんどないと思われる。
【００３４】
本製法で使用される薬品はすべて広く利用でき、比較的安価で安全である。本発明者らは、有機溶媒の混合物および好ましくはエタノールのみを用いてさらに有毒な溶媒を用いることを避けてマイクロカプセル化が可能であることを示した。本製法に用いられる装置も広く利用可能である。
【００３５】
現在、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００とＳ１００粒子の大規模生産のための方法は存在しない。噴霧乾燥は、ポリマーの熱可塑的性質および紐状の凝集物を形成する傾向から成功しないことが証明されている。これにより、本発明者らが開発した方法が最も実行可能な別法となる。
参考文献
Ｇｏｔｏ，  Ｓ．，  Ｋａｗａｔａ，  Ｍ．，  Ｎａｋａｍｕｒａ，  Ｍ．，  Ｍａｅｋａｗａ，  Ｋ．，  Ａｏｙａｍａ，  Ｔ．（１９８６）Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｅ，  Ｌ  ａｎｄ  Ｓ（ａｃｒｙｌｉｃ  ｒｅｓｉｎｓ）ｍｉｃｒｏｃａｐｓｕｌｅｓ  ａｓ  ｐＨ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｋｅｔｏｐｒｏｆｅｎ．  Ｊ．  Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  ３  （４），  ３０５−３１６．
Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ，  Ｉ．，  Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ，  Ｍ．，  Ｍａｃｈｉｄａ，  Ｙ．，  Ｎａｇａｉ，  Ｔ．（１９９１）Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００  ｆｏｒ  ｔｈｅ
ｏｒａｌ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉｎ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ７，３０９−３１９．
Ｓｑｕｉｌｌａｎｔｅ，  Ｅ．，  Ｍｏｒｓｈｅｄ，  Ｇ．，  Ｂａｇｃｈｉ，  Ｓ．，
Ｍｅｈｔａ，  Ｋ．Ａ．（２００３）Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  β−ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ  ｗｉｔｈ  Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００．  Ｊ．  Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  ２０（２），  １５３−１６７．
【発明を実施するための最良の形態】
【００３６】
以下、本発明の多くの好適な実施形態が以下の図面を参照して開示する。
スパン  ８５を界面活性剤として使用する予備実験を実施して溶媒混合物の選択を最適化した。アセトンとエタノールまたはメタノールとの異なる比率の３０ｍＬ混合物が試みられ、おそらく低い沸点およびポリマーＥｕｄｒａｇｉｔ    Ｓ１００に対する低い親和性によるメタノールの速い蒸発のために、アセトン／メタノール混合物がアセトン／エタノールよりもよく働くことがわかった。メタノールを単独で使用した場合、大きく、中空で時々割れた粒子が作られた。アセトン単独ではマイクロ粒子が作られなかった。アセトンの比率を高めると大きさが減少したが、凝集度を高めるように思われた。２０ｍＬアセトン／１０ｍＬメタノールは、ＳＥＭ分析により判断して最適の溶媒混合物であり、これを将来の実験に用い、界面活性剤を変えることとした。
【００３７】
本発明者らは、１〜１０の範囲のＨＬＢを有する界面活性剤を調べることにした。したがって、この範囲内の界面活性剤とこの範囲に近い界面活性剤を得て、流動パラフィンを非溶媒として用いる単純な系を、１０００ｒｐｍとしたＨｅｉｄｏｌｐｈ  ＲＺＲ１スタ
ーラーの頭上式のプロペラー攪拌を用いて試した。
【００３８】
３０ｍＬアセトン／メタノール（２：１）の混合物を用いて、３ｇのＥｕｄｒａｇｉｔ
Ｓ１００ポリマーを溶解した。これらの実験ではマイクロ粒子の形成のみを調べることを意図したので、医薬は加えなかった。攪拌と溶媒蒸発を一晩進行させて、翌日、生成物をガラスろ過器を用いる減圧ろ過で集め、３回それぞれ５０ｍｌのヘキサンで洗浄して残留する流動パラフィンを除去し、真空オーブンで２４時間乾燥した。
【００３９】
すべての実験はトリプリケートで実施し、最適化プロセスで使用されたポリマーは常にＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｓ１００だった。
【００４０】
以下の界面活性剤を最初に１％の濃度で、必要ならば２％および３％で用いた；  スパン  ８５（ＨＬＢ  １．８）、スパン  ８０（ＨＬＢ  ４．３）、スパン  ２０（ＨＬＢ
８．６）、ブリジ（Ｂｒｉｊ）  ９２（ＨＬＢ  ４．９）、ブリジ  ５２（ＨＬＢ  ５．３）およびソルビタンセスキオレエート（アラセル  ８３）（ＨＬＢ  ３．７）。
【００４１】
粒子は最初に光学顕微鏡（ニコン  マイクロフォト  ＦＸＡ）により４倍と１０倍の対物倍率で調べ、イメージを、ＪＶＣビデオカメラを使用して取り込んだ。全体的な形態と凝集度を示すことは可能であったが、マイクロ粒子の表面特性を詳しく観察するために、有望な粒子のＳＥＭを取った。マイクロ粒子をＳＥＭの接着パッドに固定し、高真空蒸発器（エミテク（Ｅｍｉｔｅｃｈ）  Ｋ５５０）で金スパッターモジュールを使用して金で被覆した。
【００４２】
１０ｋＶで走査電子顕微鏡（フィリップス  ＸＬ３０  ＴＭＰ）を用いて試料を調べた。
【００４３】
［結果］
＜比較例１：スパン界面活性剤の使用＞
スパン  ８５を界面活性剤として使用した場合、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｓ１００は光学顕微鏡で見たときに凝集粒子を作るように思われた。ＳＥＭの分析により、おそらく溶媒蒸発中の粒子の凝集に由来する半形成の凝集粒子の存在が確認された（図１を参照）。スパン  ８５は分離マイクロ粒子の形成を可能にするように十分にエマルジョンを安定化しないと結論付けることができる。
【００４４】
スパン  ８０は直径１ｍｍを超えるポリマーの大きな非粒子状の塊りを作り、この生成物のさらなる分析は必要とされなかった。
【００４５】
スパン  ２０は、細い紡錘様のポリマー繊維（データは示さず）を作り、この生成物さらなる分析も必要とされなかった。
【００４６】
スパン  ６５は室温でクリーム／黄色の固体であり、加熱後は流動パラフィンと非混和性であった。さらに、それはアセトン／メタノールの混合物に溶解しないため、エマルジョンを安定させてマイクロ粒子を作ることはできなかった。
【００４７】
＜比較例２：ブリジ界面活性剤の使用＞
次に、適当なＨＬＢ値を有する２種類のブリジ（ＨＬＢ  ５．３を有するブリジ  ５２およびＨＬＢ  ４．９を有するブリジ  ９２）を試みた。ブリジ  ５２は室温でロウ状の固体で、ブリジ  ９２は液体である。ブリジ  ５２および９２は１％、２％および３％の濃度で試みた。
【００４８】
１％のブリジ  ９２の濃度で、本発明者らは半形成の球形粒子の凝集を再び見る。濃度を２％および３％まで高めることにマイクロ粒子の形態の肯定的な影響がなく、３％試料の形態は３試料のうち最も悪いように思える（図２Ａ、２Ｂおよび２Ｃを参照）。
【００４９】
室温で、ブリジ  ５２は固体であり、流動パラフィンと混和性がないが、加熱すると、１％のブリジ  ５２は流動パラフィンに溶解でき、冷却すると沈殿しなかった。それはアセトン／メタノールの混合物に可溶であった。これらの処方法の両方とも図２Ｄおよび２Ｅで見られるように凝集粒子を作った。
【００５０】
流動パラフィン相にブリジ  ５２を取り込ませる加熱は図２Ｄと２Ｅからわかるように界面活性剤を内部相に溶解するために好ましいように思える。前の処方方法を使用して作られる粒子は外見がさらに球形で、多分散性が低く、小さなサイズを有する。しかし、該粒子はそれでも凝集している。
【００５１】
＜例３：ソルビタンセスキオレエート（アラセル  ８３）の界面活性剤としての使用＞
界面活性剤（アラセル  ８３）をシステムに１％、２％および３％の濃度で導入した（図３Ａ、３Ｂおよび３Ｃを参照）。アラセル  ８３は、スパンと類似する、３．７のＨＬＢ値を有するソルビタン脂肪酸エステルであり、ソルビタンモノオレエートとソルビタンジオレエートの等モル混合物である。すべての濃度において、それはマイクロ粒子の外見に劇的な効果を有し、球形で、非凝集で、非多孔性の粒子を必要とされるサイズ範囲で作った。また、試料は単分散であるように見えた。
【００５２】
＜例４＞
目的：  約３．７の共同ＨＬＢを有する多様な界面活性剤を用いるマイクロ粒子の形成を調べる。
方法：  １４．４％のツイーン  ８０と８５．６％のスパン  ８５との混合物および５６．５％のスパン  ８０と４３．５％のスパン  ８５との混合物を流動パラフィンに１％の濃度で加えた。両混合物ともアラセル  ８３と同じ３．７のＨＬＢ値を有する。乳化／溶媒蒸発法は前と同じように実施した。
結果：  粒子のＳＥＭを以下の図４Ａおよび４Ｂに示す。
結論：  ３．７の共同ＨＬＢを有する２種類の界面活性剤の混合物はエマルジョンを安定化して、許容される形態のマイクロ粒子の生産を容易にできるように思われる。
【００５３】
＜例５＞
提案されたマイクロカプセル化法はＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００、およびＬ１００とＳ１００との混合物にも使用することができる。
目的：  アラセル  ８３を使用してＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００および混合Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ／Ｓ１００のマイクロ粒子を作る。
方法：  ３ｇのＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００、およびＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００とＳ１００の１：１の３ｇの混合物を前と同じように３０ｍＬのアセトン／メタノール１：１に溶解し、１％のアラセル  ８３を含有する２００ｍｌの流動パラフィンに乳化した。
結果：  両方の場合で、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｓ１００粒子に匹敵する優れた形態の粒子が形成された（図５を参照）。ｐＨ６．０〜６．８で医薬を放出するマイクロ粒子を作り出すことはこれで可能にちがいない。
【００５４】
＜例６＞
次のステップにおいて、スパン  ８５が界面活性剤として使用された場合に最もよく働いた溶媒混合物を試みた。
目的：  乳化／溶媒蒸発法により作られたＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｓ１００マイクロ粒子の形態に対する内部相溶媒の効果を研究する。
方法：
３ｇのＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｓ１００をアセトンとメタノールかエタノールとの異なる混合物に溶解すること以外は以前と同じように実験を行なった。２００ｍＬ流動パラフィン中の１％のアラセル  ８３を外部相として使用した。使用される溶媒組成を下記の表に示すが、これらの組成はスパン  ８５を流動パラフィンに使用した予備実験から決定され、ここで本発明者らは１：１〜５：１の範囲のアルコール／アセトンの溶媒組成が最適であって、マイクロ粒子の形態に影響を与えうること、アセトン／メタノール混合物がアセトン／エタノールよりも効果的であることを発見した。
【００５５】
【表１】
2007518780.tif 000002
【００５６】
結果：  上記実験からのＳＥＭを図６Ａ〜６Ｅに示す。
結論：  上記実験の結果から、アセトンとメタノールかエタノールとの多様な組合せが優れた形態を有するＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｓ１００マイクロ粒子の形成を可能とした。溶媒の選択はマイクロ粒子の形態にほとんど影響を持たない。これは、界面活性剤の選択がポリマー溶媒の選択よりも重大であるという証拠を提供する。すべての粒子は凝集せず、非多孔性で、所望の大きさの範囲に存在する。
【００５７】
＜例７＞
Ｌ１００、Ｓ１００およびＬ１００−５５のマイクロ粒子の生産のための単独溶媒としてのエタノールの使用
生産方法を単純化し、かつマイクロ粒子中の残留溶媒による毒性の懸念を減らすために、アセトンやメタノールよりも毒性の低いエタノールだけを分散相溶媒として用いて粒子をつくることは望ましいであろう。したがって、３ｇのＬ１００−５５、Ｌ１００およびＳ１００を溶解するために３０ｍｌのエタノールをそれぞれ用いた。１％（ｗ／ｗ）のアラセル  ８３を界面活性剤として含有する２００ｍｌの流動パラフィンを用いて、乳化／溶媒蒸発を前と同じように用いた。マイクロ粒子のＳＥＭを図７Ａ〜７Ｃに示す。
結論
ＳＥＭは、Ｌ１００−５５、Ｌ１００およびＳ１００に関して、単一の比較的無毒な溶媒を使用して優れた形態の粒子を使用できることを示す。
【００５８】
＜例８：Ｅｕｄｒａｇｉｔ  ＲＳ１００、およびＬ１００とＳ１００とのＲＳ１００の混合物の使用＞
非水溶性ポリマーであるＥｕｄｒａｇｉｔ  ＲＳ１００のマイクロカプセル化を単独で、およびＬ１００とＳ１００との組合せで試みた。ＲＳ１００単独は徐放の用途に用いることができ、ｐＨ依存性のＥｕｄｒａｇｉｔと併用されたＲＳ１００は、これらポリマーからの放出を変えるだろう。３ｇのＲＳ１００は３０ｍＬアセトンと３０ｍｌアセトン／エタノール（１：１）とに可溶であったが、３０ｍＬエタノールには可溶でなかった。ＲＳ１００／Ｌ１００とＲＳ１００／Ｓ１００のそれぞれの１：１混合物は３種類すべての
溶媒混合物に可溶であった。得られた生成物のＳＥＭを表８Ａ〜８Ｈに示す。
結論
ＲＳ１００を単独またはＬ１００またはＳ１００との組合せで使用する場合に本方法は良好な粒子を作ることをＳＥＭは示す。ＲＳ１００はｐＨ応答性マイクロ粒子システムからの医薬の放出を遅らせることが予想される。ＲＳ／Ｓの組合せは、純粋にｐＨ応答性のシステムから起こる可能性のある投薬物の一括放出とは対照的に、結腸領域での医薬の持続的な放出を可能とするだろう。そのようなシステムは、炎症性腸疾患の局所的治療に利点があり、医薬の全体的な早期放出と全身的な吸収を防止するだろうが、小微粒子システムの長期の結腸での保持のために、顕著な医薬放出が生じる前に排泄されることはないであろう。
【００５９】
同様に、ＲＳ／Ｌの混合物は小腸の全長にわたって調節された放出を可能とするだろう。ＲＳ１００から形成された粒子は、持続的な放出の用途を有するだろうし、特にＥｕｄｒａｇｉｔ範囲のポリマーに関して本発明者らのマイクロカプセル化法の多様性をも示す。
【００６０】
［概念の実証：  インビトロの医薬放出のプロフィール］
＜例９〜１５＞
図９〜１４は、異なるｐＨ媒質中のマイクロ粒子に関して、ＵＳＰＩＩパドル装置を使用した場合の下記のインビトロの医薬放出のプロフィールを示す。すべてのマイクロ粒子は界面活性剤としてアラセル  ８３を用いて形成させた。
【００６１】
図９は、ｐＨ１．２〜６．８におけるＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００（１０：１）粒子からのプレドニゾロンの放出を示す。これは一連の異なる６例の平均化プロフィールである。
【００６２】
図１０は、ｐＨ１．２〜７．４におけるＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｓ１００マイクロ粒子および同等のＳ１００被覆錠剤システムからのプレドニゾロン放出の比較を示す。
【００６３】
図１１は、異なる医薬充填量を有するＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｓ１００マイクロ粒子からのプレドニゾロン放出の比較である。
【００６４】
図１２は、非水溶性のＥｕｄｒａｇｉｔ  ＲＳが結腸ｐＨでＳ１００粒子からの放出を持続させることを実証する、ｐＨ１．２〜７．４におけるＥｕｄｒａｇｉｔ  ＲＳ／Ｓマイクロ粒子（１：１）からのプレドニゾロンの放出を示す。
【００６５】
図１３は、バッチ毎の再現性を示す、ｐＨ１．２〜７．４におけるＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｓ１００／プレドニゾロン（５：１）マイクロ粒子の６バッチに関する放出プロフィールを示す。
【００６６】
図１４は、胃のｐＨで２時間、近位腸のｐＨで１時間、および結腸のｐＨで２時間おいたＥｕｄｒａｇｉｔ  ＲＳ／Ｓ（１：１）マイクロ粒子からのプレドニゾロン放出を示すプロフィールである。プレドニゾロンの放出は最初の３時間ほとんど見られないが、ｐＨが７．４に変わるとき、医薬の大部分が約１時間にわたって放出される。これは４種類の異なる試料の平均プロフィールである。
【００６７】
図１５は、ｐＨ１．２〜７．４でのＲＳ／Ｓ１００（５０：５０）をエチルセルロース／Ｓ１００（５０：５０）と比較した放出プロフィールである。これは、それぞれＳ１００と組み合わせた２種類の非水溶性ポリマーの持続的な放出のプロフィールを達成する能力を基本的に比較している。エチルセルロースはよく機能するように思えるが、いずれか
の非水溶性ポリマーを異なる比率で混合すると、目的に応じた異なる放出プロフィールが得られるだろう。
【００６８】
＜例１６＞
ここでは、界面活性剤を混合し、２種類の界面活性剤がともに働きエマルジョンを安定させて、許容されるマイクロ粒子を作るＨＬＢ範囲を特定した：
（ａ）５０％のスパン  ８０／５０％のスパン  ８５（ＨＬＢ  ３）
（ｂ）５３％のスパン  ８５／４７％のスパン  ２０（ＨＬＢ  ５）
（ｃ）６０％のスパン  ８０／４０％のスパン  ２０（ＨＬＢ  ６）
（ｄ）３５％のスパン  ８０／６５％のスパン  ２０（ＨＬＢ  ７）
（上記のＨＬＢ値は１桁の有効数字で表されている）。
【００６９】
すべてが１％ｗ／ｗ濃度で前と同じように用いられた。マイクロ粒子は顕微鏡で調べて、許容される形態学を持つと判断された。医薬を充填した粒子を調製し（５：１  Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｓ／プレドニゾロン）、インビトロの医薬放出を評価した（ｐＨ１．２で２時間、次にｐＨ７．４に上げた）。
【００７０】
すべての粒子がポリマーの溶解限界ｐＨによって指示されるように挙動した（すなわち、酸中の２時間インキュベーション後、医薬の放出はほとんどなく、ｐＨ変化後は迅速かつ完全に医薬が放出した）（図１６を参照）。
【００７１】
＜例１７＞
図１７は、ｐＨ１．２〜７．４におけるＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｓ１００マイクロ粒子からのベンドロフルメタジン、プレドニゾロンおよびブデゾニド放出の比較を示す。これは、３種類すべての医薬に関して、ｐＨが胃ｐＨから結腸ｐＨに変化するにしたがって、充填された医薬のほとんどすべてが急速に放出されることを示す。
【００７２】
＜例１８＞
図１８Ａ、１８Ｂおよび１８Ｃは、１％のアラセル  ８３を界面活性剤として用い、エチルセルローズＮ１００、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ５０）およびポリビニルアセテートフタレート（ＰＶＡＰ）をそれぞれの場合でポリマーとして用いて作られたマイクロ粒子のＳＥＭを示す。医薬溶解の働きはこれらのマイクロ粒子によってはなされず、実際、ＰＶＡＰマイクロ粒子が本発明の条件に入るには大きすぎるようである。それにもかかわらず、セルロース系およびポリビニール系のポリマーでマイクロ粒子を形成できることを示すためにこれらの結果を付け加える。
【図面の簡単な説明】
【００７３】
【図１】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図２Ａ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図２Ｂ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図２Ｃ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図２Ｄ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図２Ｅ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図３Ａ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図３Ｂ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図３Ｃ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図４Ａ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図４Ｂ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図５】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図６Ａ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図６Ｂ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図６Ｃ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図６Ｄ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図６Ｅ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図７Ａ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図７Ｂ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図７Ｃ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図８Ａ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図８Ｂ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図８Ｃ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図８Ｄ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図８Ｅ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図８Ｆ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図８Ｇ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図８Ｈ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図９】本発明にしたがって作られる多様なマイクロ粒子からの医薬放出のプロフィールを示す。
【図１０】本発明にしたがって作られる多様なマイクロ粒子からの医薬放出のプロフィールを示す。
【図１１】本発明にしたがって作られる多様なマイクロ粒子からの医薬放出のプロフィールを示す。
【図１２】本発明にしたがって作られる多様なマイクロ粒子からの医薬放出のプロフィールを示す。
【図１３】本発明にしたがって作られる多様なマイクロ粒子からの医薬放出のプロフィールを示す。
【図１４】本発明にしたがって作られる多様なマイクロ粒子からの医薬放出のプロフィールを示す。
【図１５】本発明にしたがって作られる多様なマイクロ粒子からの医薬放出のプロフィールを示す。
【図１６】本発明にしたがって作られる多様なマイクロ粒子からの医薬放出のプロフィールを示す。
【図１７】本発明にしたがって作られる多様なマイクロ粒子からの医薬放出のプロフィールを示す。
【図１８Ａ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図１８Ｂ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図１８Ｃ】医薬／ポリマー混合物のマイクロ粒子の実施例と比較例の多様な走査電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【図１】
2007518780.tif 000003
【図２Ａ】
2007518780.tif 000004
【図２Ｂ】
2007518780.tif 000005
【図２Ｃ】
2007518780.tif 000006
【図２Ｄ】
2007518780.tif 000007
【図２Ｅ】
2007518780.tif 000008
【図３Ａ】
2007518780.tif 000009
【図３Ｂ】
2007518780.tif 000010
【図３Ｃ】
2007518780.tif 000011
【図４Ａ】
2007518780.tif 000012
【図４Ｂ】
2007518780.tif 000013
【図５】
2007518780.tif 000014
【図６Ａ】
2007518780.tif 000015
【図６Ｂ】
2007518780.tif 000016
【図６Ｃ】
2007518780.tif 000017
【図６Ｄ】
2007518780.tif 000018
【図６Ｅ】
2007518780.tif 000019
【図７Ａ】
2007518780.tif 000020
【図７Ｂ】
2007518780.tif 000021
【図７Ｃ】
2007518780.tif 000022
【図８Ａ】
2007518780.tif 000023
【図８Ｂ】
2007518780.tif 000024
【図８Ｃ】
2007518780.tif 000025
【図８Ｄ】
2007518780.tif 000026
【図８Ｅ】
2007518780.tif 000027
【図８Ｆ】
2007518780.tif 000028
【図８Ｇ】
2007518780.tif 000029
【図８Ｈ】
2007518780.tif 000030
【図９】
2007518780.tif 000031
【図１０】
2007518780.tif 000032
【図１１】
2007518780.tif 000033
【図１２】
2007518780.tif 000034
【図１３】
2007518780.tif 000035
【図１４】
2007518780.tif 000036
【図１５】
2007518780.tif 000037
【図１６】
2007518780.tif 000038
【図１７】
2007518780.tif 000039
【図１８Ａ】
2007518780.tif 000040
【図１８Ｂ】
2007518780.tif 000041
【図１８Ｃ】
2007518780.tif 000042
【国際調査報告】
2007518780.tif 000043
2007518780.tif 000044
2007518780.tif 000045
2007518780.tif 000046