(57)【要約】【課題】アンドロゲン受容体に対する非ステロイド性リガンドとしてのアンドロゲン活性及びタンパク同化作用を示す新規なアンドロゲン受容体標的物質を提供する。【解決手段】本発明に係るＳＡＲＭ化合物及び／又はその代謝物は、単独で使用しても医薬組成物として使用しても、次の（ａ）〜（ｈ）に役立つ。（ａ）男性の避妊。（ｂ）様々なホルモンに関連する病気（例えば、高齢男性におけるアンドロゲン減少に関連する病気の治療。（ｃ）女性におけるアンドロゲン減少に関連する病気の治療。（ｄ）急性及び/又は慢性の筋萎縮症の治療及び／又は予防。（ｅ）ドライアイの治療及び／又は予防。（ｆ）経口アンドロゲン代償療法。（ｇ）前立腺癌の発生率の減少、前立腺癌の進行抑制又は退行。（ｈ）癌細胞の。【選択図】図１２Ｂ
2007538094.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の化学構造式Ｉで表される選択的アンドロゲン受容体調節剤（ＳＡＲＭ）化合物の代謝物。
2007538094.tif 000070
ただし、
Ｇは、Ｏ又はＳであり、
Ｘは、Ｏであり、
Ｔは、ＯＨ、ＯＲ、−ＮＨＣＯＣＨ３又はＮＨＣＯＲであり、
Ｚは、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＯＯＨ、ＣＯＲ、ＮＨＣＯＲ又はＣＯＮＨＲであり、
Ｙは、Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルキルアルデヒド、ＣＦ３、Ｆ、Ｉ、Ｂｒ、Ｃｌ、ＣＮ、ＣＲ３又はＳｎＲ３であり、
Ｒは、アルキル、ハロアルキル、ジハロアルキル、トリハロアルキル、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、ＣＦ２ＣＦ３、アリル、フェニル、ハロゲン、アルケニル又はＯＨであり、
Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、ＣＨ２ＣＨ３又はＣＦ２ＣＦ３であり、
Ａは、
2007538094.tif 000071
であって、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６は、互いに独立して、Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、ＮＨＣＯＣＦ３、アセトアミド又はトリフルオロアセトアミドである。
【請求項２】
ＧがＯであることを特徴とする請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
【請求項３】
ＴがＯＨであることを特徴とする請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
【請求項４】
Ｒ１がＣＨ３であることを特徴とする請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
【請求項５】
ＺがＣＮであることを特徴とする請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
【請求項６】
ＹがＣＦ３であることを特徴とする請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
【請求項７】
Ｑがパラ位にあることを特徴とする請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
【請求項８】
Ｚがパラ位にあることを特徴とする請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
【請求項９】
Ｙがメタ位にあることを特徴とする請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
【請求項１０】
アンドロゲン受容体作動薬であることを特徴とする請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
【請求項１１】
アンドロゲン受容体拮抗薬であることを特徴とする請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
【請求項１２】
前記ＳＡＲＭ化合物が次の化学構造式ＩＩで表されることを特徴とする請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000072
ただし、Ｑはアセトアミド又はトリフロロアセトアミドである。
【請求項１３】
前記ＳＡＲＭ化合物が次の化学構造式ＶＩＩで表されることを特徴とする請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000073
ただし、Ｑはアセトアミド又はトリフロロアセトアミドである。
【請求項１４】
次の化学構造式で表されることを特徴とする請求項１３に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000074
ただし、Ｑはアセトアミド又はトリフロロアセトアミドである。
【請求項１５】
次の化学構造式で表されることを特徴とする請求項１３に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000075
ただし、Ｑはアセトアミド又はトリフロロアセトアミドであり、
ＮＲ２はＮＯ、ＮＨＯＨ、ＮＨＯＳＯ３、ＮＨＯ−グルコロナイドである。
【請求項１６】
前記ＳＡＲＭ化合物が次の化学構造式ＶＩＩＩで表されることを特徴とする請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000076
【請求項１７】
次の化学構造式で表されることを特徴とする請求項１６に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000077
【請求項１８】
前記した化学構造式Ｉで表されるＳＡＲＭ化合物の水酸化誘導体であることを特徴とする請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
【請求項１９】
次の化学構造式で表されることを特徴とする請求項１８に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000078
ただし、Ｑはアセトアミド又はトリフロロアセトアミドである。
【請求項２０】
次の化学構造式で表されることを特徴とする請求項１８に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000079
ただし、Ｑはアセトアミド又はトリフロロアセトアミドである。
【請求項２１】
前記した化学構造式Ｉで表わされるＳＡＲＭ化合物のＯ−グルコロナイド誘導体であることを特徴とする請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
【請求項２２】
次の化学構造式で表されることを特徴とする請求項２１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000080
ただし、Ｑはアセトアミド又はトリフロロアセトアミドである。
【請求項２３】
次の化学構造式で表されることを特徴とする請求項２１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000081
ただし、Ｑはアセトアミド又はトリフロロアセトアミドである。
【請求項２４】
前記した化学構造式Ｉで表わされるＳＡＲＭ化合物のメチル化誘導体であることを特徴とする請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
【請求項２５】
前記ＳＡＲＭ化合物が次の化学構造式ＩＩＩで表されることを特徴とする請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000082
【請求項２６】
次の化学構造式で表されることを特徴とする請求項２５に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000083
【請求項２７】
前記ＳＡＲＭ化合物が次の化学構造式ＩＶで表されることを特徴とする請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000084
【請求項２８】
次の化学構造式で表されることを特徴とする請求項２７に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000085
【請求項２９】
前記した化学構造式ＩＶで表わされるＳＡＲＭ化合物の水酸化誘導体であることを特徴とする請求項２７に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
【請求項３０】
次の化学構造式で表されることを特徴とする請求項２９に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000086
【請求項３１】
次の化学構造式で表されることを特徴とする請求項２９に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000087
【請求項３２】
前記した化学構造式Ｉで表わされるＳＡＲＭ化合物のＯ−グルコロナイド誘導体であることを特徴とする請求項２７に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
【請求項３３】
次の化学構造式で表されることを特徴とする請求項３２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000088
【請求項３４】
次の化学構造式で表されることを特徴とする請求項３２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000089
【請求項３５】
前記した化学構造式ＩＶで表わされるＳＡＲＭ化合物のメチル化誘導体であることを特徴とする請求項２７に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
【請求項３６】
請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物と、適切な担体又は希釈剤とを含む組成物。
【請求項３７】
有効な量の請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物と、薬学的に許容される担体又は希釈剤とを含む医薬組成物。
【請求項３８】
ＳＡＲＭ化合物をアンドロゲン受容体に結合させる方法であって、
前記ＳＡＲＭ化合物の代謝物を前記アンドロゲン受容体に結合させるのに有効な量の請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、前記アンドロゲン受容体に接触させるステップを含む方法。
【請求項３９】
精子形成を抑制する方法であって、
精子生成を抑制するのに有効な量の請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、患者のアンドロゲン受容体に接触させるステップを含む方法。
【請求項４０】
男性患者の避妊方法であって、
精子生成を抑制するのに有効な量の請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、前記患者に投与するステップを含み、それによって前記患者の避妊を効果的に行う方法。
【請求項４１】
ホルモン療法であって、
アンドロゲン依存状態を変化させるのに有効な量の請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、患者のアンドロゲン受容体に接触させるステップを含む方法。
【請求項４２】
ホルモン補充療法であって、
アンドロゲン依存状態を変化させるのに有効な量の請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、患者のアンドロゲン受容体に接触させるステップを含む方法。
【請求項４３】
ホルモンに関連する病気の患者を治療する方法であって、
アンドロゲン依存状態を変化させるのに有効な量の請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、前記患者に投与するステップを含む方法。
【請求項４４】
前立腺癌を治療する方法であって、
前立腺癌を治療するのに有効な量の請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、前立腺癌患者に投与するステップを含む方法。
【請求項４５】
前立腺癌を予防する方法であって、
前立腺癌を予防するのに有効な量の請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、前立腺癌患者に投与するステップを含む方法。
【請求項４６】
前立腺癌の進行を遅延させる方法であって、
前立腺癌の進行を遅延させるのに有効な量の請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、前立腺癌患者に投与するステップを含む方法。
【請求項４７】
前立腺癌の再発を防止する方法であって、
前立腺癌の再発を防止するのに有効な量の請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、前立腺癌患者に投与するステップを含む方法。
【請求項４８】
前立腺癌の再発を治療する方法であって、
前立腺癌の再発を治療するのに有効な量の請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、前立腺癌患者に投与するステップを含む方法。
【請求項４９】
ドライアイを治療する方法であって、
ドライアイを治療するのに有効な量の請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、ドライアイ患者に投与するステップを含む方法。
【請求項５０】
ドライアイを予防する方法であって、
ドライアイを予防するのに有効な量の請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、ドライアイ患者に投与するステップを含む方法。
【請求項５１】
癌細胞のアポトーシスを誘発させる方法であって、
アポトーシスを誘発させるのに有効な量の請求項１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、前記癌細胞に接触させるステップを含む方法。
【請求項５２】
次の化学構造式ＩＩで表される選択的アンドロゲン受容体調節剤（ＳＡＲＭ）化合物の代謝物。
2007538094.tif 000090
ただし、
Ｘは、Ｏであり、
Ｚは、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＯＯＨ、ＣＯＲ、ＮＨＣＯＲ又はＣＯＮＨＲであり、
Ｙは、ＣＦ３、Ｆ、Ｉ、Ｂｒ、Ｃｌ、ＣＮ、ＣＲ３又はＳｎＲ３であり、
Ｑは、アセトアミド又はトリフルオロアセトアミドであり、
Ｒは、アルキル、ハロアルキル、ジハロアルキル、トリハロアルキル、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、ＣＦ２ＣＦ３、アリル、フェニル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、アルケニル又はＯＨであり、
Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、ＣＨ２ＣＨ３又はＣＦ２ＣＦ３である。
【請求項５３】
ＺがＣＮであることを特徴とする請求項５２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
【請求項５４】
ＹがＣＦ３であることを特徴とする請求項５２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
【請求項５５】
アンドロゲン受容体作動薬であることを特徴とする請求項５２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
【請求項５６】
アンドロゲン受容体拮抗薬であることを特徴とする請求項５２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
【請求項５７】
前記ＳＡＲＭ化合物が次の化学構造式ＩＸで表されることを特徴とする請求項５２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000091
【請求項５８】
次の化学構造式で表されることを特徴とする請求項５７に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000092
【請求項５９】
次の化学構造式で表されることを特徴とする請求項５７に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000093
【請求項６０】
前記ＳＡＲＭ化合物が次の化学構造式Ｘで表されることを特徴とする請求項５２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000094
【請求項６１】
次の化学構造式で表されることを特徴とする請求項６０に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000095
【請求項６２】
前記した化学構造式ＩＩで表わされるＳＡＲＭ化合物の水酸化誘導体であることを特徴とする請求項５２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
【請求項６３】
次の化学構造式で表されることを特徴とする請求項６２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000096
【請求項６４】
次の化学構造式で表されることを特徴とする請求項６２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000097
【請求項６５】
前記した化学構造式ＩＩで表わされるＳＡＲＭ化合物のＯ−グルコロナイド誘導体であることを特徴とする請求項５２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
【請求項６６】
次の化学構造式で表されることを特徴とする請求項６５に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000098
【請求項６７】
次の化学構造式で表されることを特徴とする請求項６５に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000099
【請求項６８】
前記した化学構造式ＩＩで表わされるＳＡＲＭ化合物のメチル化誘導体であることを特徴とする請求項５２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
【請求項６９】
前記ＳＡＲＭ化合物が次の化学構造式ＩＩＩで表されることを特徴とする請求項５２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000100
【請求項７０】
次の化学構造式で表されることを特徴とする請求項６９に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000101
【請求項７１】
前記ＳＡＲＭ化合物が次の化学構造式ＩＶで表されることを特徴とする請求項５２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000102
【請求項７２】
次の化学構造式で表されることを特徴とする請求項７１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000103
【請求項７３】
化学構造式ＩＶで表わされるＳＡＲＭ化合物の水酸化誘導体であることを特徴とする請求項７１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
【請求項７４】
前記ＳＡＲＭ化合物が次の化学構造式で表されることを特徴とする請求項７３に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000104
【請求項７５】
次の化学構造式で表されることを特徴とする請求項７３に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000105
【請求項７６】
前記した化学構造式ＩＶで表わされるＳＡＲＭ化合物のＯ−グルコロナイド化誘導体であることを特徴とする請求項７１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
【請求項７７】
次の化学構造式で表されることを特徴とする請求項７６に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000106
【請求項７８】
次の化学構造式で表されることを特徴とする請求項７６に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
2007538094.tif 000107
【請求項７９】
前記した化学構造式ＩＶで表わされるＳＡＲＭ化合物のメチル化誘導体であることを特徴とする請求項７１に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物。
【請求項８０】
請求項５２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物と、適切な担体又は希釈剤とを含む組成物。
【請求項８１】
有効な量の請求項５２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物と、薬学的に許容される担体又は希釈剤とを含む医薬組成物。
【請求項８２】
ＳＡＲＭ化合物をアンドロゲン受容体に結合させる方法であって、
前記ＳＡＲＭ化合物の代謝物を前記アンドロゲン受容体に結合させるのに有効な量の請求項５２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、前記アンドロゲン受容体に接触させるステップを含む方法。
【請求項８３】
精子形成を抑制する方法であって、
精子生成を抑制するのに有効な量の請求項５２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、患者のアンドロゲン受容体に接触させるステップを含む方法。
【請求項８４】
男性患者の避妊方法であって、
精子生成を抑制するのに有効な量の請求項５２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、前記患者に投与するステップを含み、それによって前記患者の避妊を効果的に行う方法。
【請求項８５】
ホルモン療法であって、
アンドロゲン依存状態を変化させるのに有効な量の請求項５２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、患者のアンドロゲン受容体に接触させるステップを含む方法。
【請求項８６】
ホルモン補充療法であって、
アンドロゲン依存状態を変化させるのに有効な量の請求項５２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、患者のアンドロゲン受容体に接触させるステップを含む方法。
【請求項８７】
ホルモンに関連する病気の患者を治療する方法であって、
アンドロゲン依存状態を変化させるのに有効な量の請求項５２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、前記患者に投与するステップを含む方法。
【請求項８８】
前立腺癌を治療する方法であって、
前立腺癌を治療するのに有効な量の請求項５２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、前立腺癌患者に投与するステップを含む方法。
【請求項８９】
前立腺癌を予防する方法であって、
前立腺癌を予防するのに有効な量の請求項５２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、前立腺癌患者に投与するステップを含む方法。
【請求項９０】
前立腺癌の進行を遅延させる方法であって、
前立腺癌の進行を遅延させるのに有効な量の請求項５２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、前立腺癌患者に投与するステップを含む方法。
【請求項９１】
前立腺癌の再発を防止する方法であって、
前立腺癌の再発を防止するのに有効な量の請求項５２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、前立腺癌患者に投与するステップを含む方法。
【請求項９２】
前立腺癌の再発を治療する方法であって、
前立腺癌の再発を治療するのに有効な量の請求項５２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、前立腺癌患者に投与するステップを含む方法。
【請求項９３】
ドライアイを治療する方法であって、
ドライアイを治療するのに有効な量の請求項５２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、ドライアイ患者に投与するステップを含む方法。
【請求項９４】
ドライアイを予防する方法であって、
ドライアイを予防するのに有効な量の請求項５２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、ドライアイ患者に投与するステップを含む方法。
【請求項９５】
癌細胞のアポトーシスを誘発させる方法であって、
アポトーシスを誘発させるのに有効な量の請求項５２に記載のＳＡＲＭ化合物の代謝物を、前記癌細胞に接触させるステップを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な種類のアンドロゲン受容体標的物質（Androgen Receptor Targeting Agent：ARTA）に関するものであり、詳しくは、選択的アンドロゲン受容体調節剤（Selective Androgen Receptor Modulator：SARM）に関するものである。このＳＡＲＭ化合物及びその代謝物は、次の（ａ）〜（ｈ）に役立つ。（ａ）男性の避妊。（ｂ）様々なホルモンに関連する病気（例えば、高齢男性におけるアンドロゲン減少（Androgen Decline in Aging Male：ADAM）に関連する病気）の治療。ＡＤＡＭに関連する病気としては、例えば、疲労、うつ病、性欲減退、性的不全、勃起不全、性腺機能低下症、脱毛症、貧血、肥満、筋肉減少症、骨減少症、骨粗鬆症、良性前立腺肥大症、気分・認識力の変調、及び前立腺腺癌がある。（ｃ）女性におけるアンドロゲン減少（Androgen Decline in Female：ADIF）に関連する病気の治療。ＡＤＩＦに関連する病気としては、例えば、性的不全、性欲減退、性腺機能低下症、筋肉減少症、骨減少症、骨粗鬆症、気分・認識力の変調、うつ病、貧血、脱毛症、肥満、子宮内膜症、乳ガン、子宮癌、及び卵巣癌がある。（ｄ）急性及び/又は慢性の筋萎縮症の治療及び／又は予防。（ｅ）ドライアイの治療及び／又は予防。（ｆ）経口アンドロゲン代償療法。（ｇ）前立腺癌の発生率の減少、前立腺癌の進行抑制又は退行。（ｈ）癌細胞のアポトーシスの誘発。
【背景技術】
【０００２】
アンドロゲン受容体（Androgen Receptor：AR）は、自身の内因性アンドロゲンとの活性を介して男性の性的発育及び機能の誘導を仲立ちする、リガンド活性化転写調節タンパク質である。アンドロゲンは、一般に、男性ホルモンとして知られている。男性ホルモンは、体内で睾丸及び副腎の皮質により生成される、又は実験室で合成されるステロイドである。アンドロゲン性ステロイドは、男性の性的特徴（例えば筋肉や骨量など）の発達及び維持、前立腺の成長、精子形成、及び男性の髪状態などの数多くの生理学的過程において重要な役割を果たす（Matsumoto, Endocrinol. Met． Clin. N. Am. 23:857-75(1994)）。内因性のステロイド性アンドロゲンとしては、テストステロンやジヒドロテストステロン（dihydrotestosterone：DHT）がある。テストステロンは、睾丸から分泌される主要なステロイドである。また、テストステロンは、男性の血漿中に含まれている、主要な循環アンドロゲンである。テストステロンは、多くの末梢組織で、５αレダクターゼによってＤＨＴに変換される。したがって、ＤＨＴは、ほとんどのアンドロゲン作用において、細胞内媒介物としての機能を果たすと考えられている（Zhou, etal., Molec. Endocrinol. 9:208-18(1995)）。他のステロイド性アンドロゲンとしては、テストステロンのエステル類や、他の合成アンドロゲンがある。テストステロンのエステル類としては、例えば、シピオネート、プロピオン酸、フェニルプロピオン酸、シクロペンチルプロピオネート、イソカルポレート（isocarporate）、エナント酸、及びデカン酸エステルがある。合成アンドロゲンとしては、例えば、７−メチル−ノルテストステロン（7-Methyl-Nortestosterone：MENT）や、その酢酸エステルがある（Sundaram et al., "7 Alpha-Methyl-Nortestosterone(MENT): The Optimal Androgen For Male Contraception," Ann. Med., 25:199-205(1993)）。ＡＲは男性の性的発達及び機能に関与しているので、ＡＲは効果的な男性避妊や他のホルモン補充療法に有望である。
【０００３】
世界的な人口増加に伴って家族計画に対する社会意識が高まったことにより、避妊についての多くの調査が行われた。どのような場合でも、避妊は難しい問題である。それは、文化的及び社会的不名誉、宗教的な意味合い、そして、間違いなく、重大な健康上の懸念を伴っている。こうした状況は、男性避妊について焦点を当てた場合は、とても深刻である。適切な避妊具を利用できるのにもかかわらず、従来、社会は、避妊の決断とその結果についての責任は女性にあると見なしていた。また、性病への関心によって、男性は安全で責任のある性癖を向上させる必要性をより強く意識するようになったが、女性は依然として頻繁に避妊具の選択について矢面に立たされている。女性は、スポンジやペッサリー（diaphragm）などの一時的な機械的器具から、殺精子剤などの化学的器具まで、多くの選択肢を有している。また、女性は、例えば避妊リング（intrauterine device：IUD）や子宮頚管キャップなどの物理的器具という、より長時間持つ選択肢を有している。同様に、女性は、経口避妊薬や皮下植込錠などの化学的処置という、より長時間持つ選択肢を有している。しかしながら、今日まで、男性が利用できる選択肢は、コンドームとパイプカットだけであった。コンドームの使用は、性的感度の減少、性的な自然さの障害、及び破損や誤用により妊娠する可能性が高いことにより、多くの男性にとって好まれてはいない。また、パイプカットも好まれてはいない。もし、男性がより便利な避妊方法を利用できれば、特に、準備が不要で、性行為の直前に作用し、長時間持つ方法があれば、そのような方法は男性が避妊に対してより多くの責任を取るようになる可能性を著しく増大させるであろう。
【０００４】
この点について、男性ステロイド（例えば、テストステロン及びその派生物）の投与は、それらの化合物のゴナドトロピン抑制とアンドロゲン代用特性との組み合わせにより、特に有望である（Steinberger et al., "Effect of Chronic Administration of Testosterone Enanthate on Sperm Production and Plasma Testosterone, Follicle Stimulating Hormone, and Luteinizing Hormone Levels: A Preliminary Evaluation of a Possible Male Contraceptive, " Fertility and Sterility 28: 1320-28, 1977）。大量のテストステロンの長期投与は、精子増殖を完全に止める（無精子症）、又は精子増殖をとても低いレベルまで減少させる（精子減少）。不妊症を実現するために、ある程度の精子形成の抑制が必要であるということは、正確には知られていない。また、世界保健機関（World Health Organization：WHO）による最近の報告では、週１回のテストステロン・エナント酸の筋肉注射は、無精子又は重度の精子減少（例えば、精子は３百万個／ｍｌ未満となる）をもたらし、治療を受けた男性の９８％が不妊症となることが分っている（World Health Organization Task Force on Methods And Regulation of Male Fertility, "Contraceptive Efficacy of Testosterone-Induced Azoospermia and Oligospermia in Normal Men, " Fertility and Sterility 65: 21-29, 1996）。
【０００５】
筋肉注射後にゆっくりと吸収されて男性ホルモン作用を強める、様々な種類のテストステロン・エステルが開発されている。テストステロン・エナント酸は、それらのエステルの中で最も幅広く使用されている。テストステロン・エナント酸は、男性避妊用のホルモン剤を実現するという点で有益である。しかし、週１回の注射が必要であることや、筋肉注射の直後にテストステロンのピーク水準が生理的環境を超えることなどのいくつかの欠点を含んでいる（Wu, "Effects of Testosterone Enanthate in Normal Men: Experience From a Multicenter Contraceptive Efficacy Study," Fertility and Sterility 65: 626-36, 1996）。
【０００６】
ＡＲと結合し、アンドロゲン（例えば、テストステロン・エナント酸）又は抗アンドロゲン（例えば、酢酸シプロテロン）としての機能を果たすステロイド性のリガンドは、長年知られており臨床的に使用されている（Wu 1988）。また、非ステロイド系の抗アンドロゲンはホルモン依存性前立腺癌の臨床に用いられるが、非ステロイド系のアンドロゲンについては報告されていない。そのため、男性の避妊及びホルモン補充におけるアンドロゲンの有用性に関する研究は、もっぱらステロイド系合成物に集中している。
【０００７】
前立腺癌は、アメリカ合衆国の男性に最も頻繁に発生する癌の１つであり、毎年、数十万人もの新しい患者が診断されている。残念なことに、新しく診断された患者の６０％以上が病理的に進行しており、不治であり予後は思わしくないことが分っている。この問題に対する１つの方法は、検診によって前立腺癌を早期に発見し、それによって進行性の前立腺癌患者の数を減少させることである。また、他の方法は、前立腺癌を予防する薬剤を開発することである。５０歳以上の全男性の３分の１は、生命にかかわる臨床的な前立腺癌の形態を活性化させる潜在性の前立腺癌を有している。潜在性の前立腺腫瘍の発生頻度は、５０代（５．３〜１４％）から９０代（４０〜８０％）までの間で、１０年間毎に大幅に増加することが知られている。全ての文化、民族及び人種の間で潜在性の前立腺癌を有している人が同じように増えているが、臨床的に悪性な癌の発生頻度は著しく異なっている。これは、潜在性の前立腺癌を活性化させる上で、環境の要因が重要な役割を果たしていることを示唆している。したがって、前立腺癌の治療方法及び予防方法の開発は、前立腺癌について医学的及び経済的に大きな全体的な影響を与えるであろう。
【０００８】
骨粗鬆症は全身性の骨疾患であり、骨量の低下及び骨組織の劣化という特徴がある。そのため、骨粗鬆症にかかると、骨が脆くなって骨折しやすくなる。アメリカ合衆国では、毎年、２５００万人以上がこの病気にかかっており、１３０万人以上が骨折している（５０万人が背骨を、２５万人が股関節を、２４万人が手首を骨折している）。股関節の骨折は骨粗鬆症における最も深刻な問題であり、患者の５〜２０％は骨折後１年以内に死に至る。また、死に至らなかったとしても、その５０％以上は再起不能となる。高齢者は骨粗鬆症にかかる危険性が非常に高いため、高齢化社会が進むにつれてこの問題が一層深刻化することが懸念されている。全世界での骨折の発生率は、次の６０年間で３倍になると予測される。また、ある調査によれば、２０５０年には全世界で４５０万人が股関節骨折すると推測される。
【０００９】
女性は、骨粗鬆症に対して、男性よりも大きな危険性にさらされている。女性は、閉経後の５年間で、骨量が急激に減少する。前記危険性を高める他の要因としては、喫煙、アルコール過剰摂取、座りがちな生活、及びカルシウム摂取不足がある。また、骨粗鬆症は、男性にも高い頻度で発生する。男性の骨ミネラル濃度が年を取ると共に減少することはよく知られている。骨塩量及び濃度の減少は骨強度の減少と相関しており、骨塩量及び濃度が減少すると骨折しやすくなる。非再生組織における性ホルモンの多面発現効果の基礎をなす分子構造は、まだ理解され始めたばかりであるが、アンドロゲン及びエストロゲンの生理学的濃度が、生涯を通じて骨の恒常性において重要な役割を果たすことは明らかである。したがって、アンドロゲン又はエストロゲンが欠乏すると、骨再形成の割合が増加し、吸収と形成のバランスが吸収の方に傾く。その結果、総体的な骨量は減少する。男性では、壮年時における性ホルモンの自然的な減少（アンドロゲンは、アンドロゲンの末梢組織の芳香化に由来するエストロゲンと同様の低いレベルまで減少する）は、骨のもろさと関連する。このことは、去勢された男性にも見られる。
【００１０】
アンドロゲン生成の進行性の減少が原因である高齢男性におけるアンドロゲンの減少（Androgen Decline In The Aging Male：ADAM）は、中年以降の男性によく見られる。この症候群は、アンドロゲン環境と相関関係にある身体的領域及び知的領域の変質に特徴があり、アンドロゲン環境の操作により修正することができる。ＡＤＡＭは、生化学的に、血清アンドロゲンの減少だけではなく、他のホルモン（例えば、成長ホルモン、メラトニン、及びデヒドロエピアンドロステロン）の減少を特徴とする。臨床的な徴候としては、疲労、うつ病、性欲減退、性的不全、勃起不全、性腺機能低下症、骨粗鬆症、脱毛症、肥満、筋肉減少症、骨減少症、貧血、及び気分・認識力の変調がある。
【００１１】
様々なホルモン関連の病気が原因である女性におけるアンドロゲンの欠乏（Androgen Deficiency In Female：ADIF）は、中年以降の女性によく見られる。この症候群は、性的不全、性欲減退、性腺機能低下症、筋肉減少症、骨減少症、骨粗鬆症、気分・認識力の変調、うつ病、貧血、脱毛症、肥満、及び子宮内膜症を特徴とする。また、他のホルモン関連の病気としては、女性生殖器の癌（例えば、乳ガン、子宮癌、及び卵巣癌）がある。
【００１２】
筋肉疲労は、進行性の筋量の減少、及び／又は進行性の筋肉の弱体化及び退化が原因で起こる。前記筋肉としては、運動を司る骨格筋又は随意筋、心拍制御を行う心筋、及び平滑筋がある。慢性の筋肉疲労は、進行性の筋量の減少、筋肉の弱体化及び退化を特徴とする慢性症状（長期に渡って持続する）である。筋肉疲労中に起こる筋量の減少は、筋肉タンパクを破壊又は分解するという性質を持っている。タンパク分解は、異常に高い率のタンパク質分解、異常に低い率のタンパク質合成、又はそれらの組み合わせにより起こる。タンパク質分解は、高度のタンパク質分解に起因する場合でも、低度のタンパク質合成に起因する場合でも、筋量の減少と筋肉疲労をもたらす。筋肉疲労は、慢性、神経性、遺伝性又は伝染性の、病状、疾病、疾患又は状態と関連している。それらの病状としては、筋ジストロフィー（例えば、デュシェンヌ型筋ジストロフィーや、筋強直緊張性ジストロフィー）、筋萎縮（例えば、ポリオ後筋萎縮。Post-Polio Muscle Atrophy：PPMA）、悪液質（例えば、心臓悪液質や、エイズ悪液質及び癌悪液質）、栄養失調、ハンセン病、糖尿病、腎臓病、慢性閉塞性肺疾患（Chronic Obstructive Pulmonary Disease：COPD）、癌、末期腎不全、気腫、骨軟化症、ＨＩＶ感染、エイズ、及び心筋症がある。さらに、他の環境や状況が筋肉疲労と関係あり、筋肉疲労の原因となる。それらは、慢性的な腰痛、老化、中枢神経系の損傷、末梢神経の損傷、脊髄の損傷、化学的損傷、中枢神経系の傷害、末梢神経の傷害、脊髄の傷害、化学的傷害、熱傷、手足が固定化されたときに生じる廃用症、病気又は負傷のための長期間の入院、及びアルコール依存症などがある。筋肉疲労を治療しないまま放置すると、悲惨な健康状態となる。例えば、筋肉疲労の間に起こる変化は、健康状態を悪化させ個人の健康に害を及ぼす。その結果、感染症にかかりやすくなり、一般状態不良をもたらし、負傷しやすくなる。
【００１３】
以上の理由により、次の（ａ）〜（ｇ）に役立つ化合物を開発するための、基礎科学と臨床レベルの両方において新規で革新的なアプローチが緊急に必要とされている。（ａ）男性の避妊。（ｂ）様々なホルモンに関連する病気（例えば、高齢男性におけるアンドロゲン減少（Androgen Decline in Aging Male：ADAM）に関連する病気）の治療。ＡＤＡＭに関連する病気としては、例えば、疲労、うつ病、性欲減退、性的不全、勃起不全、性腺機能低下症、脱毛症、貧血、肥満、筋肉減少症、骨減少症、骨粗鬆症、良性前立腺肥大症、気分・認識力の変調、及び前立腺腺癌がある。（ｃ）女性におけるアンドロゲン減少（Androgen Decline in Female：ADIF）に関連する病気の治療。ＡＤＩＦに関連する病気としては、例えば、性的不全、性欲減退、性腺機能低下症、筋肉減少症、骨減少症、骨粗鬆症、気分・認識力の変調、うつ病、貧血、脱毛症、肥満、子宮内膜症、乳ガン、子宮癌、及び卵巣癌がある。（ｄ）急性及び/又は慢性の筋萎縮症の治療及び／又は予防。（ｅ）ドライアイの治療及び／又は予防。（ｆ）経口アンドロゲン代償療法。（ｇ）前立腺癌の発生率の減少、前立腺癌の進行抑制又は退行。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、アンドロゲン受容体標的物質（Androgen Receptor Targeting Agent：ARTA）の一種である代謝物を提供する。この物質は、選択的アンドロゲン受容体調節剤（Selective Androgen Receptor Modulator：SARM）化合物の新しいサブクラスを定義する。このＳＡＲＭ化合物及びその代謝物は、単独で使用しても医薬組成物として使用しても、次の（ａ）〜（ｈ）に役立つ。（ａ）男性の避妊。（ｂ）様々なホルモンに関連する病気（例えば、高齢男性におけるアンドロゲン減少（Androgen Decline in Aging Male：ADAM）に関連する病気）の治療。ＡＤＡＭに関連する病気としては、例えば、疲労、うつ病、性欲減退、性的不全、勃起不全、性腺機能低下症、脱毛症、貧血、肥満、筋肉減少症、骨減少症、骨粗鬆症、良性前立腺肥大症、気分・認識力の変調、及び前立腺腺癌がある。（ｃ）女性におけるアンドロゲン減少（Androgen Decline in Female：ADIF）に関連する病気の治療。ＡＤＩＦに関連する病気としては、例えば、性的不全、性欲減退、性腺機能低下症、筋肉減少症、骨減少症、骨粗鬆症、気分・認識力の変調、うつ病、貧血、脱毛症、肥満、子宮内膜症、乳ガン、子宮癌、及び卵巣癌がある。（ｄ）急性及び/又は慢性の筋萎縮症の治療及び／又は予防。（ｅ）ドライアイの治療及び／又は予防。（ｆ）経口アンドロゲン代償療法。（ｇ）前立腺癌の発生率の減少、前立腺癌の進行抑制又は退行。（ｈ）癌細胞のアポトーシスの誘発。
【００１５】
ある実施形態では、本発明は、次の化学構造式Ｉで表される選択的アンドロゲン受容体調節剤（ＳＡＲＭ）化合物の代謝物を提供する。
2007538094.tif 000003
ただし、
Ｇは、Ｏ又はＳであり、
Ｘは、Ｏであり、
Ｔは、ＯＨ、ＯＲ、−ＮＨＣＯＣＨ３又はＮＨＣＯＲであり、
Ｚは、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＯＯＨ、ＣＯＲ、ＮＨＣＯＲ又はＣＯＮＨＲであり、
Ｙは、Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルキルアルデヒド、ＣＦ３、Ｆ、Ｉ、Ｂｒ、Ｃｌ、ＣＮ、ＣＲ３又はＳｎＲ３であり、
Ｒは、アルキル、ハロアルキル、ジハロアルキル、トリハロアルキル、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、ＣＦ２ＣＦ３、アリル、フェニル、ハロゲン、アルケニル又はＯＨであり、
Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、ＣＨ２ＣＨ３又はＣＦ２ＣＦ３であり、
Ａは、
2007538094.tif 000004
であって、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６は、互いに独立して、Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、ＮＨＣＯＣＦ３、アセトアミド又はトリフルオロアセトアミドである。
【００１６】
ある実施形態では、化合物ＩにおけるＧはＯである。他の実施形態では、化合物ＩにおけるＴはＯＨである。他の実施形態では、化合物ＩにおけるＲ１はＣＨ３である。他の実施形態では、化合物ＩにおけるＺはＮＯ２である。他の実施形態では、化合物ＩにおけるＺはＣＮである。他の実施形態では、化合物ＩにおけるＹはＣＦ３である。他の実施形態では、化合物ＩにおけるＱはＮＨＣＯＣＨ３である。他の実施形態では、化合物ＩにおけるＱはパラ位にある。他の実施形態では、化合物ＩにおけるＺはパラ位にある。他の実施形態では、化合物ＩにおけるＹはメタ位にある。他の実施形態では、化合物ＩにおけるＧはＯであり、ＴはＯＨであり、Ｒ１はＣＨ３であり、ＺはＮＯ２であり、ＹはＣＦ３であり、ＱはＮＨＣＯＣＨ３である。他の実施形態では、化合物ＩにおけるＧはＯであり、ＴはＯＨであり、ＺはＣＮであり、ＹはＣＦ３であり、ＱはＮＨＣＯＣＨ３である。
【００１７】
ある実施形態では、前記した化学構造式ＩのＳＡＲＭ化合物は、次の化学構造式ＶＩＩで表される。
2007538094.tif 000005
ただし、Ｑはアセトアミド又はトリフルオロアセトアミドである。
【００１８】
ある実施形態では、上記した化学構造式ＶＩＩのＳＡＲＭ化合物の代謝物は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000006
ただし、Ｑはアセトアミド又はトリフルオロアセトアミドである。
【００１９】
ある実施形態では、上記した化学構造式ＶＩＩのＳＡＲＭ化合物の代謝物は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000007
ただし、Ｑは、アセトアミド又はトリフルオロアセトアミドであり、ＮＲ２は、ＮＯ、ＮＨＯＨ、ＮＨＯＳＯ３又はＮＨＯ−グルコロナイドである。
【００２０】
ある実施形態では、前記した化学構造式ＩのＳＡＲＭ化合物は、次の化学構造式ＶＩＩＩで表される。
2007538094.tif 000008
【００２１】
ある実施形態では、上記した化学構造式ＶＩＩＩのＳＡＲＭ化合物の代謝物は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000009
【００２２】
ある実施形態では、本発明に係るＳＡＲＭ化合物の代謝物は、前記した化学構造式ＩのＳＡＲＭ化合物の水酸化誘導体である。この実施形態では、前記代謝物（水酸化誘導体）は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000010
ただし、Ｑは、アセトアミド又はトリフロロアセトアミドである。
【００２３】
ある実施形態では、前記代謝物（水酸化誘導体）は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000011
ただし、Ｑは、アセトアミド又はトリフロロアセトアミドである。
【００２４】
他の実施形態では、前記ＳＡＲＭ代謝物は、前記した化学構造式ＩのＳＡＲＭ化合物のＯ−グルコロナイド誘導体である。この実施形態では、前記代謝物（Ｏ−グルコロナイド誘導体）は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000012
ただし、Ｑは、アセトアミド又はトリフロロアセトアミドである。
【００２５】
他の実施形態では、前記代謝物（Ｏ−グルコロナイド誘導体）は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000013
ただし、Ｑは、アセトアミド又はトリフロロアセトアミドである。
【００２６】
他の実施形態では、前記ＳＡＲＭ代謝物は、前記した化学構造式ＩのＳＡＲＭ化合物のメチル化誘導体である。
【００２７】
他の実施形態では、本発明は、次の化学構造式ＩＩで表される選択的アンドロゲン受容体調節剤（ＳＡＲＭ）化合物の代謝物を提供する。
2007538094.tif 000014
ただし、
Ｘは、Ｏであり、
Ｚは、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＯＯＨ、ＣＯＲ、ＮＨＣＯＲ又はＣＯＮＨＲであり、
Ｙは、ＣＦ３、Ｆ、Ｉ、Ｂｒ、Ｃｌ、ＣＮ、ＣＲ３又はＳｎＲ３であり、
Ｑは、アセトアミド又はトリフルオロアセトアミドであり、
Ｒは、アルキル、ハロアルキル、ジハロアルキル、トリハロアルキル、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、ＣＦ２ＣＦ３、アリル、フェニル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、アルケニル又はＯＨであり、
Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、ＣＨ２ＣＨ３又はＣＦ２ＣＦ３である。
【００２８】
ある実施形態では、化合物ＩＩにおけるＺはＮＯ２である。他の実施形態では、化合物ＩＩにおけるＺはＣＮである。他の実施形態では、化合物ＩＩにおけるＹはＣＦ３である。他の実施形態では、化合物ＩＩにおけるＱはＮＨＣＯＣＨ３である。他の実施形態では、化合物ＩＩにおけるＺはＮＯ２であり、ＹはＣＦ３であり、ＱはＮＨＣＯＣＨ３である。他の実施形態では、化合物ＩＩにおけるＺはＣＮであり、ＹはＣＦ３であり、ＱはＮＨＣＯＣＨ３である。
【００２９】
他の実施形態では、前記した化学構造式ＩＩのＳＡＲＭ化合物は、次の化学構造式ＩＸで表される。
2007538094.tif 000015
【００３０】
ある実施形態では、上記した化学構造式ＩＸのＳＡＲＭ化合物の代謝物は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000016
【００３１】
ある実施形態では、上記した化学構造式ＩＸのＳＡＲＭ化合物の代謝物は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000017
ただし、ＮＲ２は、ＮＯ、ＮＨＯＨ、ＮＨＯＳＯ３又はＮＨＯ−グルコロナイドである。
【００３２】
ある実施形態では、前記した化学構造式ＩＩのＳＡＲＭ化合物は、次の化学構造式Ｘで表される。
2007538094.tif 000018
【００３３】
ある実施形態では、上記した化学構造式ＸのＳＡＲＭ化合物の代謝物は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000019
【００３４】
ある実施形態では、本発明に係るＳＡＲＭ化合物の代謝物は、前記した化学構造式ＩＩのＳＡＲＭ化合物の水酸化誘導体である。この実施形態では、前記代謝物（水酸化誘導体）は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000020
【００３５】
他の実施形態では、前記代謝物（水酸化誘導体）は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000021
【００３６】
ある実施形態では、前記ＳＡＲＭ代謝物は、前記した化学構造式ＩＩのＳＡＲＭ化合物のＯ−グルコロナイド誘導体である。この実施形態では、前記代謝物（Ｏ−グルコロナイド誘導体）は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000022
【００３７】
他の実施形態では、前記代謝物（Ｏ−グルコロナイド誘導体）は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000023
【００３８】
他の実施形態では、前記ＳＡＲＭ代謝物は、前記した化学構造式ＩＩのＳＡＲＭ化合物のメチル化誘導体である。
【００３９】
ある実施形態では、本発明は、次の化学構造式ＩＩＩで表される選択的アンドロゲン受容体調節剤（ＳＡＲＭ）化合物の代謝物を提供する。
2007538094.tif 000024
【００４０】
ある実施形態では、上記した化学構造式ＩＩＩで表されるＳＡＲＭ化合物の代謝物は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000025
【００４１】
ある実施形態では、本発明は、次の化学構造式ＩＶで表される選択的アンドロゲン受容体調節剤（ＳＡＲＭ）化合物の代謝物を提供する。
2007538094.tif 000026
【００４２】
ある実施形態では、上記した化学構造式ＩＶで表されるＳＡＲＭ化合物の代謝物は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000027
【００４３】
ある実施形態では、前記ＳＡＲＭ代謝物は、化学構造式ＩＶのＳＡＲＭ化合物の水酸化誘導体である。この実施形態では、前記代謝物（水酸化誘導体）は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000028
【００４４】
ある実施形態では、前記代謝物（水酸化誘導体）は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000029
【００４５】
ある実施形態では、前記ＳＡＲＭ代謝物は、上記した化学構造式ＩＶのＳＡＲＭ化合物のＯ−グルコロナイド化誘導体である。この実施形態では、前記代謝物（Ｏ−グルコロナイド誘導体）は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000030
【００４６】
他の実施形態では、前記代謝物（Ｏ−グルコロナイド誘導体）は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000031
【００４７】
他の実施形態では、前記ＳＡＲＭ代謝物は、上記した化学構造式ＩＶのＳＡＲＭ化合物のメチル化誘導体である。
【００４８】
ある実施形態では、前記ＳＡＲＭ代謝物は、アンドロゲン受容体作動薬である。他の実施形態では、前記ＳＡＲＭ代謝物は、アンドロゲン受容体拮抗薬である。
【００４９】
ある実施形態では、本発明は、本発明に係るＳＡＲＭ代謝物と、適切な担体又は希釈剤とを含む組成物を提供する。
【００５０】
他の実施形態では、本発明は、本発明に係るＳＡＲＭ代謝物と、薬学的に許容される担体又は希釈剤とを含む医薬組成物を提供する。
【００５１】
他の実施形態では、本発明は、ＳＡＲＭ化合物をアンドロゲン受容体に結合させる方法であって、前記アンドロゲン受容体に、本発明に係るＳＡＲＭ代謝物を、当該ＳＡＲＭ化合物を前記アンドロゲン受容体に結合させるのに有効な量で接触させるステップを含む方法を提供する。
【００５２】
他の実施形態では、本発明は、精子形成を抑制する方法であって、精子生成を抑制するのに有効な量の本発明に係るＳＡＲＭ代謝物を、患者のアンドロゲン受容体に接触させるステップを含む方法を提供する。
【００５３】
他の実施形態では、本発明は、男性患者の避妊方法であって、精子生成を抑制するのに有効な量の本発明に係るＳＡＲＭ代謝物を、前記患者に投与するステップを含み、それによって前記患者の避妊を効果的に行う方法を提供する。
【００５４】
他の実施形態では、本発明は、ホルモン療法であって、アンドロゲン依存状態を変化させるのに有効な量の本発明に係るＳＡＲＭ代謝物を、患者のアンドロゲン受容体に接触させるステップを含む方法を提供する。
【００５５】
他の実施形態では、本発明は、ホルモン補充療法であって、アンドロゲン依存状態を変化させるのに有効な量の本発明に係るＳＡＲＭ代謝物を、患者のアンドロゲン受容体に接触させるステップを含む方法を提供する。
【００５６】
他の実施形態では、本発明は、ホルモンに関連する病気の患者を治療する方法であって、アンドロゲン依存状態を変化させるのに有効な量の本発明に係るＳＡＲＭ代謝物を、前記患者に投与するステップを含む方法を提供する。
【００５７】
他の実施形態では、本発明は、前立腺癌を治療する方法であって、前立腺癌を治療するのに有効な量の本発明に係るＳＡＲＭ代謝物を、前立腺癌患者に投与するステップを含む方法を提供する。
【００５８】
他の実施形態では、本発明は、前立腺癌を予防する方法であって、前立腺癌を予防するのに有効な量の本発明に係るＳＡＲＭ代謝物を、前立腺癌患者に投与するステップを含む方法を提供する。
【００５９】
他の実施形態では、本発明は、前立腺癌の進行を遅延させる方法であって、前立腺癌の進行を遅延させるのに有効な量の本発明に係るＳＡＲＭ代謝物を、前立腺癌患者に投与するステップを含む方法を提供する。
【００６０】
他の実施形態では、本発明は、前立腺癌の再発を防止する方法であって、前立腺癌の再発を防止するのに有効な量の本発明に係るＳＡＲＭ代謝物を、前立腺癌患者に投与するステップを含む方法を提供する。
【００６１】
他の実施形態では、本発明は、前立腺癌の再発を治療する方法であって、前立腺癌の再発を治療するのに有効な量の本発明に係るＳＡＲＭ代謝物を、前立腺癌患者に投与するステップを含む方法を提供する。
【００６２】
他の実施形態では、本発明は、ドライアイを治療する方法であって、ドライアイを治療するのに有効な量の本発明に係るＳＡＲＭ代謝物を、ドライアイ患者に投与するステップを含む方法を提供する。
【００６３】
他の実施形態では、本発明は、ドライアイを予防する方法であって、ドライアイを予防するのに有効な量の本発明に係るＳＡＲＭ代謝物を、ドライアイ患者に投与するステップを含む方法を提供する。
【００６４】
他の実施形態では、本発明は、癌細胞のアポトーシスを誘発させる方法であって、アポトーシスを誘発させるのに有効な量の本発明に係るＳＡＲＭ代謝物を、前記癌細胞に接触させるステップを含む方法を提供する。
【００６５】
本発明に係る新規なＳＡＲＭ代謝物は、単独で使用しても医薬組成物として使用しても、次の（ａ）〜（ｈ）に役立つ。（ａ）男性の避妊。（ｂ）様々なホルモンに関連する病気（例えば、高齢男性におけるアンドロゲン減少（Androgen Decline in Aging Male：ADAM）に関連する病気）の治療。ＡＤＡＭに関連する病気としては、例えば、疲労、うつ病、性欲減退、性的不全、勃起不全、性腺機能低下症、脱毛症、貧血、肥満、筋肉減少症、骨減少症、骨粗鬆症、良性前立腺肥大症、気分・認識力の変調、及び前立腺腺癌がある。（ｃ）女性におけるアンドロゲン減少（Androgen Decline in Female：ADIF）に関連する病気の治療。ＡＤＩＦに関連する病気としては、例えば、性的不全、性欲減退、性腺機能低下症、筋肉減少症、骨減少症、骨粗鬆症、気分・認識力の変調、うつ病、貧血、脱毛症、肥満、子宮内膜症、乳ガン、子宮癌、及び卵巣癌がある。（ｄ）急性及び/又は慢性の筋萎縮症の治療及び／又は予防。（ｅ）ドライアイの治療及び／又は予防。（ｆ）経口アンドロゲン代償療法。（ｇ）前立腺癌の発生率の減少、前立腺癌の進行抑制又は退行。（ｈ）癌細胞のアポトーシスの誘発。
【００６６】
本発明に係るＳＡＲＭ代謝物は、ステロイド性アンドロゲン治療における著しい進歩を提供する。本発明に係るＳＡＲＭ化合物のいくつかは、アンドロゲン受容体に対する非ステロイド性リガンドとしての、予期しないアンドロゲン活性及びタンパク同化作用を有している。その他の本発明に係るＳＡＲＭ化合物には、アンドロゲン受容体に対する非ステロイド性リガンドとしての、予期しない抗アンドロゲン活性を有している。したがって、本発明に係るＳＡＲＭ化合物による治療は、副作用、投与の不便さ、コスト高を伴うことがない。また、経口バイオアベイラビリティ、他のステロイド受容体との交叉反応の欠如、生物学的半減期が長いという利点も有したままである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００６７】
ある実施形態では、本発明は、アンドロゲン受容体標的物質（Androgen Receptor Targeting Agent：ARTA）の一種である代謝物を提供する。この物質は、選択的アンドロゲン受容体調節剤（Selective Androgen Receptor Modulator：SARM）化合物の新しいサブクラスを定義する。このＳＡＲＭ化合物のいくつかには、予期せぬことに、アンドロゲン受容体に対する非ステロイド性リガンドとしてのアンドロゲン活性及びタンパク同化作用を有することが見いだされた。このＳＡＲＭ化合物は、単独で使用しても医薬組成物として使用しても、次の（ａ）〜（ｈ）に役立つ。（ａ）男性の避妊。（ｂ）様々なホルモンに関連する病気（例えば、高齢男性におけるアンドロゲン減少（Androgen Decline in Aging Male：ADAM）に関連する病気）の治療。ＡＤＡＭに関連する病気としては、例えば、疲労、うつ病、性欲減退、性的不全、勃起不全、性腺機能低下症、脱毛症、貧血、肥満、筋肉減少症、骨減少症、骨粗鬆症、良性前立腺肥大症、気分・認識力の変調、及び前立腺腺癌がある。（ｃ）女性におけるアンドロゲン減少（Androgen Decline in Female：ADIF）に関連する病気の治療。ＡＤＩＦに関連する病気としては、例えば、性的不全、性欲減退、性腺機能低下症、筋肉減少症、骨減少症、骨粗鬆症、気分・認識力の変調、うつ病、貧血、脱毛症、肥満、子宮内膜症、乳ガン、子宮癌、及び卵巣癌がある。（ｄ）急性及び/又は慢性の筋萎縮症の治療及び／又は予防。（ｅ）ドライアイの治療及び／又は予防。（ｆ）経口アンドロゲン代償療法。（ｇ）前立腺癌の発生率の減少、前立腺癌の進行抑制又は退行。（ｈ）癌細胞のアポトーシスの誘発。
【００６８】
ある実施形態では、本発明は、次の化学構造式Ｉで表される選択的アンドロゲン受容体調節剤（ＳＡＲＭ）化合物の代謝物を提供する。
2007538094.tif 000032
ただし、
Ｇは、Ｏ又はＳであり、
Ｘは、Ｏであり、
Ｔは、ＯＨ、ＯＲ、−ＮＨＣＯＣＨ３又はＮＨＣＯＲであり、
Ｚは、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＯＯＨ、ＣＯＲ、ＮＨＣＯＲ又はＣＯＮＨＲであり、
Ｙは、Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルキルアルデヒド、ＣＦ３、Ｆ、Ｉ、Ｂｒ、Ｃｌ、ＣＮ、ＣＲ３又はＳｎＲ３であり、
Ｒは、アルキル、ハロアルキル、ジハロアルキル、トリハロアルキル、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、ＣＦ２ＣＦ３、アリル、フェニル、ハロゲン、アルケニル又はＯＨであり、
Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、ＣＨ２ＣＨ３又はＣＦ２ＣＦ３であり、
Ａは、
2007538094.tif 000033
であって、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６は、互いに独立して、Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、ＮＨＣＯＣＦ３、アセトアミド又はトリフルオロアセトアミドである。
【００６９】
本発明は、上記した化学構造式ＩのＳＡＲＭの代謝物を提供する。本発明は、化学構造式Ｉの化合物の類似体、異性体、代謝物、誘導体、薬学的に許容される塩、医薬品、水和物、Ｎ酸化物、不純物、多形体、結晶、又はそれらの組み合わせを含む。
【００７０】
ある実施形態では、本発明は、化学構造式Ｉの化合物の類似体を提供する。ある実施形態では、本発明は、化学構造式Ｉの化合物の誘導体を提供する。ある実施形態では、本発明は、化学構造式Ｉの化合物の異性体を提供する。ある実施形態では、本発明は、化学構造式Ｉの化合物の代謝物を提供する。ある実施形態では、本発明は、化学構造式Ｉの化合物の薬学的に許容される塩を提供する。ある実施形態では、本発明は、化学構造式Ｉの化合物の医薬品を提供する。ある実施形態では、本発明は、化学構造式Ｉの化合物の水和物を提供する。ある実施形態では、本発明は、化学構造式Ｉの化合物のＮ酸化物を提供する。ある実施形態では、本発明は、化学構造式Ｉの化合物の不純物を提供する。ある実施形態では、本発明は、化学構造式Ｉの化合物の多形体を提供する。ある実施形態では、本発明は、化学構造式Ｉの化合物の結晶を提供する。
【００７１】
他の実施形態では、本発明は、上記した化学構造式Ｉの化合物の類似体、誘導体、代謝物、異性体、薬学的に許容される塩、医薬品、水和物、Ｎ酸化物、不純物、多形体、又は結晶の任意の組み合わせを提供する。
【００７２】
ある実施形態では、化合物ＩにおけるＧはＯである。他の実施形態では、化合物ＩにおけるＴはＯＨである。他の実施形態では、化合物ＩにおけるＲ１はＣＨ３である。他の実施形態では、化合物ＩにおけるＺはＮＯ２である。他の実施形態では、化合物ＩにおけるＺはＣＮである。他の実施形態では、化合物ＩにおけるＹはＣＦ３である。他の実施形態では、化合物ＩにおけるＱはＮＨＣＯＣＨ３である。他の実施形態では、化合物ＩにおけるＱはパラ位にある。他の実施形態では、化合物ＩにおけるＺはパラ位にある。他の実施形態では、化合物ＩにおけるＹはメタ位にある。他の実施形態では、化合物ＩにおけるＧはＯであり、ＴはＯＨであり、Ｒ１はＣＨ３であり、ＺはＮＯ２であり、ＹはＣＦ３であり、ＱはＮＨＣＯＣＨ３である。他の実施形態では、化合物ＩにおけるＧはＯであり、ＴはＯＨであり、ＺはＣＮであり、ＹはＣＦ３であり、ＱはＮＨＣＯＣＨ３である。
【００７３】
置換基Ｚ及びＹは、それらの置換基を保持する環（以降は「Ａ環」という）の任意の位置に位置することができる。ある実施形態では、置換基ＺはＡ環のパラ位にある。他の実施形態では、置換基ＹはＡ環のメタ位にある。他の実施形態では、置換基ＺはＡ環のパラ位にあり、置換基ＹはＡ環のメタ位にある。
【００７４】
置換基Ｑは、その置換基を保持する環（以降は「Ｂ環」という）の任意の位置に位置することができる。ある実施形態では、置換基ＱはＢ環のパラ位にある。他の実施形態では、置換基ＱはＮＨＣＯＣＨ３にあり、Ｂ環のパラ位にある。他の実施形態では、置換基ＱはＦであり、Ｂ環のパラ位にある。
【００７５】
ある実施形態では、前記した化学構造式ＩのＳＡＲＭ化合物は、次の化学構造式ＶＩＩで表される。
2007538094.tif 000034
【００７６】
ある実施形態では、上記した化学構造式ＶＩＩのＳＡＲＭ化合物の代謝物は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000035
【００７７】
ある実施形態では、上記した化学構造式ＶＩＩのＳＡＲＭ化合物の代謝物は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000036
ただし、ＮＲ２は、ＮＯ、ＮＨＯＨ、ＮＨＯＳＯ３又はＮＨＯ−グルコロナイドである。
【００７８】
ある実施形態では、前記した化学構造式Ｉの前記ＳＡＲＭ化合物は、次の化学構造式ＶＩＩＩで表される。
2007538094.tif 000037
【００７９】
ある実施形態では、上記した化学構造式ＶＩＩＩのＳＡＲＭ化合物の代謝物は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000038
【００８０】
ある実施形態では、本発明に係るＳＡＲＭ化合物の代謝物は、前記した化学構造式ＩのＳＡＲＭ化合物の水酸化誘導体である。この実施形態では、前記代謝物（水酸化誘導体）は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000039
【００８１】
他の実施形態では、前記代謝物（水酸化誘導体）は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000040
【００８２】
ある実施形態では、前記ＳＡＲＭ代謝物は、前記した化学構造式ＩのＳＡＲＭ化合物のＯ−グルコロナイド誘導体である。この実施形態では、前記代謝物（Ｏ−グルコロナイド誘導体）は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000041
【００８３】
他の実施形態では、前記代謝物（Ｏ−グルコロナイド誘導体）は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000042
【００８４】
他の実施形態では、前記ＳＡＲＭ代謝物は、前記した化学構造式ＩのＳＡＲＭ化合物のメチル化誘導体である。
【００８５】
他の実施形態では、本発明は、次の化学構造式ＩＩで表される選択的アンドロゲン受容体調節剤（ＳＡＲＭ）化合物の代謝物を提供する。
2007538094.tif 000043
ただし、
Ｘは、Ｏであり、
Ｚは、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＯＯＨ、ＣＯＲ、ＮＨＣＯＲ又はＣＯＮＨＲであり、
Ｙは、ＣＦ３、Ｆ、Ｉ、Ｂｒ、Ｃｌ、ＣＮ、ＣＲ３又はＳｎＲ３であり、
Ｑは、アセトアミド又はトリフルオロアセトアミドであり、
Ｒは、アルキル、ハロアルキル、ジハロアルキル、トリハロアルキル、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、ＣＦ２ＣＦ３、アリル、フェニル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、アルケニル又はＯＨであり、
Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、ＣＨ２ＣＨ３又はＣＦ２ＣＦ３である。
【００８６】
本発明は、上記した化学構造式ＩＩのＳＡＲＭの代謝物を提供する。本発明は、化学構造式ＩＩの化合物の類似体、異性体、代謝物、誘導体、薬学的に許容される塩、医薬品、水和物、Ｎ酸化物、不純物、多形体、結晶、又はそれらの組み合わせを含む。
【００８７】
ある実施形態では、本発明は、化学構造式ＩＩの化合物の類似体を提供する。ある実施形態では、本発明は、化学構造式ＩＩの化合物の誘導体を提供する。ある実施形態では、本発明は、化学構造式ＩＩの化合物の異性体を提供する。ある実施形態では、本発明は、化学構造式ＩＩの化合物の代謝物を提供する。ある実施形態では、本発明は、化学構造式ＩＩの化合物の薬学的に許容される塩を提供する。ある実施形態では、本発明は、化学構造式ＩＩの化合物の医薬品を提供する。ある実施形態では、本発明は、化学構造式ＩＩの化合物の水和物を提供する。ある実施形態では、本発明は、化学構造式ＩＩの化合物のＮ酸化物を提供する。ある実施形態では、本発明は、化学構造式ＩＩの化合物の不純物を提供する。ある実施形態では、本発明は、化学構造式ＩＩの化合物の多形体を提供する。ある実施形態では、本発明は、化学構造式ＩＩの化合物の結晶を提供する。
【００８８】
他の実施形態では、本発明は、上記した化学構造式ＩＩの化合物の類似体、誘導体、代謝物、異性体、薬学的に許容される塩、医薬品、水和物、Ｎ酸化物、不純物、多形体、又は結晶の任意の組み合わせを提供する。
【００８９】
ある実施形態では、化合物ＩＩにおけるＺはＮＯ２である。他の実施形態では、化合物ＩＩにおけるＺはＣＮである。他の実施形態では、化合物ＩＩにおけるＹはＣＦ３である。他の実施形態では、化合物ＩＩにおけるＱはＮＨＣＯＣＨ３である。
【００９０】
他の実施形態では、前記した化学構造式ＩのＳＡＲＭ化合物は、次の化学構造式ＩＸで表される。
2007538094.tif 000044
【００９１】
ある実施形態では、上記した化学構造式ＩＸのＳＡＲＭ化合物の代謝物は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000045
【００９２】
他の実施形態では、上記した化学構造式ＩＸのＳＡＲＭ化合物の代謝物は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000046
ただし、ＮＲ２は、ＮＯ、ＮＨＯＨ、ＮＨＯＳＯ３又はＮＨＯ−グルコロナイドである。
【００９３】
ある実施形態では、前記した化学構造式ＩＩのＳＡＲＭ化合物は、次の化学構造式Ｘで表される。
2007538094.tif 000047
【００９４】
ある実施形態では、上記した化学構造式ＸのＳＡＲＭ化合物の代謝物は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000048
【００９５】
ある実施形態では、本発明に係るＳＡＲＭ化合物の代謝物は、前記した化学構造式ＩＩのＳＡＲＭ化合物の水酸化誘導体である。この実施形態では、前記代謝物（水酸化誘導体）は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000049
【００９６】
他の実施形態では、前記代謝物（水酸化代謝物）は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000050
【００９７】
ある実施形態では、前記ＳＡＲＭ代謝物は、前記した化学構造式ＩＩのＳＡＲＭ化合物のＯ−グルコロナイド誘導体である。この実施形態では、前記代謝物（Ｏ−グルコロナイド誘導体）は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000051
【００９８】
他の実施形態では、前記代謝物（Ｏ−グルコロナイド誘導体）は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000052
【００９９】
他の実施形態では、前記ＳＡＲＭ代謝物は、前記した化学構造式ＩＩのＳＡＲＭ化合物のメチル化誘導体である。
【０１００】
ある実施形態では、本発明は、次の化学構造式ＩＩＩで表される選択的アンドロゲン受容体調節剤（ＳＡＲＭ）化合物の代謝物を提供する。
2007538094.tif 000053
【０１０１】
ある実施形態では、上記した化学構造式ＩＩＩのＳＡＲＭ化合物の代謝物は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000054
【０１０２】
ある実施形態では、本発明は、次の化学構造式ＩＶで表される選択的アンドロゲン受容体調節剤（ＳＡＲＭ）化合物の代謝物を提供する。
2007538094.tif 000055
【０１０３】
ある実施形態では、上記した化学構造式ＩＶのＳＡＲＭ化合物の代謝物は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000056
【０１０４】
ある実施形態では、本発明に係るＳＡＲＭ化合物の代謝物は、上記した化学構造式ＩＶのＳＡＲＭ化合物の水酸化誘導体である。この実施形態では、前記代謝物（水酸化誘導体）は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000057
【０１０５】
ある実施形態では、前記代謝物（水酸化誘導体）は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000058
【０１０６】
ある実施形態では、前記ＳＡＲＭ代謝物は、上記した化学構造式ＩＶのＳＡＲＭ化合物のＯ−グルコロナイド化誘導体である。この実施形態では、前記代謝物（Ｏ−グルコロナイド化誘導体）は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000059
【０１０７】
他の実施形態では、前記代謝物（Ｏ−グルコロナイド化誘導体）は、次の化学構造式で表される。
2007538094.tif 000060
【０１０８】
他の実施形態では、前記ＳＡＲＭ代謝物は、上記した化学構造式ＩＶのＳＡＲＭ化合物のメチル化誘導体である。
【０１０９】
ある実施形態では、前記ＳＡＲＭ代謝物は、アンドロゲン受容体作動薬である。他の実施形態では、前記ＳＡＲＭ代謝物は、アンドロゲン受容体拮抗薬である。
【０１１０】
ある実施形態では、前記ＳＡＲＭ代謝物は、異なる肝臓酵素製剤を使して識別することができる。
【０１１１】
ある実施形態では、本発明に係るＳＡＲＭの代謝物は、アセチル基が取り除かれた誘導体、加水分解された誘導体、又は酸化された誘導体を含む。他の実施形態では、本発明に係るＳＡＲＭの代謝物は、ニトロ基が還元された、又は芳香環が還元された誘導体を含む。
【０１１２】
ある実施形態では、本発明に係るＳＡＲＭの代謝物は、代謝的に不安定な部位の変更を含む。前記変更は、ある実施形態では前記化合物の代謝安定性を向上させ、他の実施形態ではアゴニスト作用を維持する。
【０１１３】
ある実施形態では、アセチル基が取り除かれた代謝物はＡＲと結合し、他の実施形態ではインビボでの前記化合物のＳ４薬理活性の一因となる、インビボにおける転写活性を開始させる。
【０１１４】
アミド結合加水分解及びアセトアミド脱アセチル化は、ここで例示したように、ヒト肝臓製剤の細胞質及びミクロソーム分画の両方で生じる。ミクロソーム酵素は主に脱アセチル化反応を触媒するのに対して、細胞質内酵素は主に加水分解反応を触媒する。このことは、ミクロソームＣＹＰ酵素は、分子の加水分解及び脱アセチル化に関与し得ることを示唆する。ＣＹＰ３Ａ４は市販薬物の７０％以上の代謝作用に関与し、最も一般的な代謝反応である酸化を有する。同様に、ＣＹＰ３Ａ４は、インビボにおけるＳ４の酸化に関与し、ヒトにおけるビカルタミド（bicalutamide）酸化にも関与する。しかしながら、驚くべきことに、ヒトＣＹＰ３Ａ４は、主要なミクロソームＣＹＰ酵素の１つに見えるが、その上に加水分解反応を触媒することができる。
【０１１５】
ある実施形態では、インビトロでの代謝産物の同定は、代謝産物のＨＰＬＣ分離及びＭＳ分析により行われる。ある実施形態では、そのような分子内のカルボキシル及びアミン基の両方の存在により、親水性が極めて高くなる。分子が酸性又は塩基性条件下で容易に溶媒先端から分離しないので、ここに例示したように、そのような分析は困難である。サンプル作成及び／又は分離に厳密な条件を用いることなく、そのような分離を容易にするためには、アミノ酸分析でよく使用される誘導体化法が用いられる（たとえば、第１級アミン基を就職するのに使用されるＮＨＳ−ビオチン）。芳香族アミン基は、同様の修飾で基質とすて作用する。大きいビオチン分子を加えると、ここに例示するように、ＭＳ分析中における、分子のカラム保持時間及びイオン化効率が増加する。穏和な反応条件（室温、中性ｐＨ）は、人為的な作用（例えば、強力な酸性条件）によって、あり得る加水分解を除外する。このデザインは、他の実施形態では、第１級アミン基を含む高親水性の代謝産物の分析方法を提示する。
【０１１６】
≪定義≫
【０１１７】
本明細書中では、置換基Ｒは、アルキル、ハロアルキル、ジハロアルキル、トリハロアルキル、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、ＣＦ２ＣＦ３、アリル、フェニル、ハロゲン、アルケニル、又は水酸基（ＯＨ）と定義される。
【０１１８】
“アルキル”基は、ある実施形態では、直鎖型、分枝型又は環状の飽和脂肪族炭化水素である。ある実施形態では、アルキル基は、１〜１２個の炭素を有する。他の実施形態では、アルキル基は、１〜７個の炭素を有する。ある実施形態では、アルキル基は、１〜６個の炭素を有する。ある実施形態では、アルキル基は、１〜４個の炭素を有する。アルキル基は、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、水酸基、アルコキシ・カルボニル基、アミド基、アルキルアミド基、ジアルキルアミド基、ニトロ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、カルボニル基、チオ基及びチオアルキル基から成る群より選択される１つ又は複数の基と置換される又は置換されない。
【０１１９】
“ハロアルキル”基は、上記に定義したアルキル基を１つ又は複数のハロゲン原子（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩ）で置換したものである。“ハロゲン”は、周期表ＶＩＩ族の元素（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩ）である。
【０１２０】
“アリル”基は、ハロゲン基（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩ）、ハロアルキル基、水酸基、アルコキシ・カルボニル基、アミド基、アルキルアミド基、ジアルキルアミド基、ニトロ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、カルボニル基、チオ基、及びチオアルキル基から成る群より選択される１つ又は複数の基と置換される又は置換されない、少なくとも１つの炭素環式芳香族基又は複素環式芳香族基を有する芳香族基である。アリル環としては、例えば、フェニル、ナフチル、ピラニル、ピロリル、ピラジニル、ピリミジニル、ピラゾリル、ピリジニル、フラニル、チオフェニル、チアゾリル、イミダゾリル、イソオキサゾリルなどがある（ただし、これらに限定されるものではない）。
【０１２１】
“ヒドロキシル”基は、ＯＨ基である。“アルケニル”基は、少なくとも１つの炭素間二重結合を有する基である。
【０１２２】
“アリルアルキル”基は、アリル基と結合したアルキル基である。なお、アルキル基とアリル基は、上記に定義したとおりである。アリルアルキル基としては、例えば、ベンジル基がある。
【０１２３】
本発明は、本発明に係るＳＡＲＭ化合物の代謝物の使用も含む。また、本発明に係るＳＡＲＭ化合物の類似体、異性体、代謝物、誘導体、薬学的に許容される塩、医薬品、水和物、Ｎ酸化物、不純物、多形体、結晶、又はそれらの組み合わせも本発明の範囲に含まれる。
【０１２４】
ある実施形態では、本発明は、本発明に係るＳＡＲＭ化合物の類似体の使用に関する。他の実施形態では、本発明は、本発明に係るＳＡＲＭ化合物の異性体の使用に関する。他の実施形態では、本発明は、本発明に係るＳＡＲＭ化合物の代謝物の使用に関する。他の実施形態では、本発明は、本発明に係るＳＡＲＭ化合物の誘導体の使用に関する。他の実施形態では、本発明は、本発明に係るＳＡＲＭ化合物の薬学的に許容される塩の使用に関する。他の実施形態では、本発明は、本発明に係るＳＡＲＭ化合物の医薬品の使用に関する。他の実施形態では、本発明は、本発明に係るＳＡＲＭ化合物の水和物の使用に関する。他の実施形態では、本発明は、本発明に係るＳＡＲＭ化合物のＮ酸化物の使用に関する。他の実施形態では、本発明は、本発明に係るＳＡＲＭ化合物の類似体の使用に関する。他の実施形態では、本発明は、本発明に係るＳＡＲＭ化合物の不純物の使用に関する。他の実施形態では、本発明は、本発明に係るＳＡＲＭ化合物の多形体の使用に関する。他の実施形態では、本発明は、本発明に係るＳＡＲＭ化合物の結晶の使用に関する。
【０１２５】
他の実施形態では、本発明は、本発明に係るＳＡＲＭ化合物の類似体、誘導体、代謝物、異性体、薬学的に許容される塩、医薬品、水和物、Ｎ酸化物、不純物、多形体、又は結晶を任意に組み合わせた使用に関する。
【０１２６】
“代謝物”は、例えば、加水分解、エステル化、脱エステル化、活性化、塩生成などの反応によって、インビボで生理活性物質に変換することができる物質を意味する。
【０１２７】
ここで定義される“異性体”という用語は、光学異性体とその類似体、構造異性体とその類似体、及び配座異性体とその類似体などを含む（ただし、これらに限定されるものではない）。
【０１２８】
ある実施形態では、本発明は、本発明に係るＳＡＲＭ化合物の様々な光学異性体の使用を含む。本発明に係るＳＡＲＭ化合物が少なくとも１つのキラル中心を有していることは、当業者には周知である。したがって、本発明に係る方法で使用されるＳＡＲＭ化合物は、光学的活性体又はラセミ体で存在している、及び単離される。また、いくつかの化合物は、多形性を示す。当然のことながら、本発明は、前述した方法に有用な特性を有する、任意のラセミ体、光学活性体、多形体、立体異性体、又はそれらの混合物を含む。ある実施形態では、本発明に係るＳＡＲＭ化合物は、純粋な（Ｒ）異性体である。他の実施形態では、本発明に係るＳＡＲＭ化合物は、純粋な（Ｓ）異性体である。他の実施形態では、本発明に係るＳＡＲＭ化合物は、（Ｒ）異性体と（Ｓ）異性体との混合物である。他の実施形態では、本発明に係るＳＡＲＭ化合物は、同量の（Ｒ）異性体と（Ｓ）異性体とを含むラセミ混合物である。当該技術分野では、光学活性体を生成する方法は公知である（例えば、再結晶法によるラセミ体の分解、光学体活体開始物質の合成、キラル合成、又はキラル固定相を使用したクロマトグラフ分離など）。
【０１２９】
本発明は、有機酸又は無機酸（例えばクエン酸や塩酸など）を有するアミノ置換化合物の薬学的に許容される塩を含む。また、本発明は、ここに記載した化合物のアミノ置換基のＮ酸化物を提供する。薬学的に許容される塩は無機塩基（例えば水酸化ナトリウムなど）を処理することにより、フェノール化合物から生成することもできる。また、フェノール化合物のエステルは、脂肪族カルボン酸や芳香族カルボン酸（例えば酢酸エステルと安息香酸エステルなど）から生成することもできる。
【０１３０】
本発明は、さらに、本発明に係るＳＡＲＭ化合物の誘導体を含む。“誘導体”という用語は、エーテル誘導体、酸誘導体、アミノ誘導体、エステル誘導体などを含む（ただし、これらに限定されるものではない）。さらに、本発明は、本発明に係るＳＡＲＭ化合物の水和物を含む。“水和物”という用語は、半水和物、一水和物、二水和物、三水和物などを含む（ただし、これらに限定されるものではない）。
【０１３１】
本発明は、さらに、本発明に係るＳＡＲＭ化合物の代謝産物を含む。“代謝産物”という用語は、代謝作用又は代謝過程によって、別の物質から生成された物質を意味する。
【０１３２】
本発明は、さらに、本発明に係るＳＡＲＭ化合物の医薬品を含む。“医薬品”という用語は、医薬品としての使用（医薬組成物）に適した組成物を意味する。
【０１３３】
本発明は、さらに、本発明に係るＳＡＲＭ化合物の結晶を含む。さらに、本発明は、本発明に係るＳＡＲＭ化合物の多形体を含む。“結晶”という用語は、結晶状態の物質を意味する。“多形体”という用語は、特別な物理的性質（例えば、Ｘ線回折、ＩＲスペクトル、融点など）を有する、物質の特別な結晶状態を意味する。
【０１３４】
《選択的アンドロゲン受容体調節剤の生物活性》
【０１３５】
選択的アンドロゲン受容体調節剤（Selective Androgen Receptor Modulator：SARM）化合物は、アンドロゲン受容体標的物質（Androgen Receptor Targeting Agent：ARTA）の新しい種類であり、次の（ａ）〜（ｈ）に役立つことが以前より知られている。（ａ）男性の避妊。（ｂ）様々なホルモンに関連する病気（例えば、高齢男性におけるアンドロゲン減少（Androgen Decline in Aging Male：ADAM）に関連する病気）の治療。ＡＤＡＭに関連する病気としては、例えば、疲労、うつ病、性欲減退、性的不全、勃起不全、性腺機能低下症、脱毛症、貧血、肥満、筋肉減少症、骨減少症、骨粗鬆症、良性前立腺肥大症、気分・認識力の変調、及び前立腺腺癌がある。（ｃ）女性におけるアンドロゲン減少（Androgen Decline in Female：ADIF）に関連する病気の治療。ＡＤＩＦに関連する病気としては、例えば、性的不全、性欲減退、性腺機能低下症、筋肉減少症、骨減少症、骨粗鬆症、気分・認識力の変調、うつ病、貧血、脱毛症、肥満、子宮内膜症、乳ガン、子宮癌、及び卵巣癌がある。（ｄ）急性及び慢性の筋萎縮症の治療及び／又は予防。（ｅ）ドライアイの治療及び／又は予防。（ｆ）経口アンドロゲン代償療法。（ｇ）前立腺癌の発生率の減少、前立腺癌の停止、又は前立腺癌を退行させる。（ｈ）癌細胞のアポトーシスの誘発。
【０１３６】
本明細書中における“細胞外シグナル伝達分子の受容体”は、まとめて“細胞シグナル伝達受容体”と呼ばれている。多くの細胞シグナル伝達受容体は、細胞表面上の膜貫通タンパク質である。それらの受容体は、細胞外シグナル伝達分子（すなわちリガンド）と結合すると活性化し、細胞の行動を変える細胞内シグナル伝達のカスケードを生成する。一方で、ある場合では、前記受容体は細胞の内部にあり、それらの受容体を活性化するためには、シグナル伝達リガンドは細胞内に進入しなければならない。そのため、それらのシグナル伝達分子は、細胞の血漿膜を透過して拡散できるように、十分に小さく、疎水性である必要がある。
【０１３７】
ステロイドホルモンは、小さな疎水性分子の一例であって、標的細胞の血漿膜を透過して直接的に拡散し、細胞内の細胞シグナル伝達受容体と結合する。この受容体は、構造的に関連しており、細胞内受容体スーパーファミリー（又はステロイドホルモン受容体スーパーファミリー）を構成する。ステロイドホルモン受容体としては、プロゲステロン受容体、エストロゲン受容体、アンドロゲン受容体、及び鉱質コルチノイド受容体がある。本発明は、特に、アンドロゲン受容体を対象としている。
【０１３８】
リガンドが容体に結合することに加えて、リガンド結合を妨げるべく受容体をブロックすることもできる。物質が受容体に結合するとき、前記物質の３次元構造は、前記受容体の３次元受容体によって作成された空間に適合する（ボール及びソケット立体配置において）。ボールがソケットにより良く適合すればするほど、堅固に保持される。この現象は、親和性と呼ばれる。物質の親和性がオリジナルのホルモンと比較して高ければ高いほど、ホルモンと競争し、より頻繁に結合部位と結合する。一度結合すると、信号は受容体を介して細胞内へと送信され、何らかの方法で細胞に反応を生じさせる。このことを活性化と呼ぶ。活性化すると、活性化された受容体は、その後、特定遺伝子の転写を直接的に調節する。ただし、物質及び受容体は、親和性以外の、細胞を活性化するための特性をいくつか有し得る。物質の原子と受容体の原子との間には、化学結合が生じる。ある場合では、前記化学結合は、活性化プロセス（シグナル伝達と呼ばれる）を開始するのに十分な受容体の立体配置の変化をもたらす。
【０１３９】
ある実施形態では、本発明は、アゴニスト化合物であるＳＡＲＭ化合物を対象とする。受容体アゴニストは、受容体と結合して、その受容体を活性化させる物質である。したがって、ある実施形態では、本発明に係るＳＡＲＭ化合物は、ステロイド性ホルモン受容体と結合して活性化するのに有用である。ある実施形態では、本発明に係るアゴニスト化合物は、アンドロゲン受容体と結合するアゴニスト（作動薬）である。他の実施形態では、アゴニスト化合物は、アンドロゲン受容体に対して高い親和性を有する。また、他の実施形態では、アゴニスト化合物は、タンパク同化作用を有する。他の実施形態では、本発明は、アンドロゲン受容体に対する非ステロイド性リガンドとしてのアゴニスト作用及びタンパク同化作用を有するＳＡＲＭ化合物を提供する。
【０１４０】
他の実施形態では、本発明は、アンタゴニスト化合物であるＳＡＲＭ化合物を対象とする。受容体アゴニストは、受容体と結合して、その受容体を不活性化させる物質である。したがって、ある実施形態では、本発明に係るＳＡＲＭ化合物は、ステロイドホルモン受容体と結合し不活性するのに有用である。ある実施形態では、本発明に係るアンタゴニスト化合物は、アンドロゲン受容体と結合するアンタゴニスト（拮抗薬）である。他の実施形態では、アンタゴニスト化合物は、アンドロゲン受容体に対して高い親和性を有する。
【０１４１】
別の実施形態では、本発明に係るＳＡＲＭ化合物は、部分的ＡＲアゴニスト／アンタゴニストとして分類することもできる。本発明に係るＳＡＲＭ化合物は、ある組織内ではＡＲアゴニストであり、ＡＲ反応遺伝子の転写を増加させる（例えば、筋肉同化効果）。また、本発明に係るＳＡＲＭ化合物は、他の組織内では、ＡＲで阻止因子して作用し、天然アンドロゲンのアゴニスト作用を防止する。
【０１４２】
本発明に係るＳＡＲＭ化合物がＡＲに対するアゴニストであるかアンタゴニストであるかを判断するための分析方法は、当該技術分野では公知である。例えば、ＡＲアゴニスト作用は、ＳＡＲＭ化合物における、ＡＲ含有組織（例えば前立腺や精嚢）の成長を維持及び／又は促進する能力を、重量測定によってモニタリングすることで判断できる。ＡＲアンタゴニスト活性は、ＳＡＲＭ化合物における、ＡＲ含有組織の成長を阻害する能力をモニタリングすることで判断できる。
【０１４３】
本発明に係る化合物は、アンドロゲン受容体（ＡＲ）と、可逆的又は不可逆的に結合する。ある実施形態では、前記アンドロゲン受容体は、哺乳類のアンドロゲン受容体である。他の実施形態では、前記アンドロゲン受容体は、ヒトのアンドロゲン受容体はである。ある実施形態では、本発明に係るＳＡＲＭ化合物は、哺乳類（例えばヒト）のアンドロゲン受容体と可逆的に結合する。化合物が受容体と可逆的に結合することは、結合後に前記受容体から化合物が脱離できることを意味する。
【０１４４】
他の実施形態では、本発明に係るＳＡＲＭ化合物は、哺乳類（例えばヒト）のアンドロゲン受容体と不可逆的に結合する。したがって、ある実施形態では、本発明に係るＳＡＲＭ化合物は、アンドロゲン受容体（すなわち共有結合構造）をアルキル化することが可能な、官能基（例えば親和性標識）を有している。そのため、この場合は、ＳＡＲＭ化合物は、受容体と不可逆的に結合するアルキル化因子である（したがって、内在性リガンドＤＨＴやテストステロンなどのステロイドによって置換されない）。ここでは、“アルキル化因子”という用語は、ＤＮＡ、ＲＮＡ及び酵素などの細胞成分をアルキル化する（共有結合を形成する）因子と定義する。アルキル化因子は高反応性の化学物質であり、アルキル・ラジカルを生物学的に活性な分子内に取り込み、そのことによりその正常な機能を阻害する。アルキル化成分は、細胞成分の求核性成分と相互作用する親電子基である。
【０１４５】
本発明のある実施形態では、本発明に係るＳＡＲＭ化合物を、アンドロゲン受容体に結合させる方法を提供する。この方法は、ＳＡＲＭ化合物をアンドロゲン受容体に結合させるのに有効な条件下で、Ｓ本発明に係るＳＡＲＭ化合物及び／又はその類似体、異性体、代謝産物、誘導体、薬学的に許容される塩、医薬品、Ｎ酸化物或いはそれらの任意の組み合わせを、アンドロゲン受容体に接触させるステップを含んでいる。本発明に係るＳＡＲＭ化合物をアンドロゲン受容体に結合させることによって、本発明に係るＳＡＲＭ化合物を男性避妊及び多くのホルモン療法に使用することができる。アゴニスト化合物はアンドロゲン受容体と結合して、そのアンドロゲン受容体を活性化する。アンタゴニスト化合物はアンドロゲン受容体と結合して、そのアンドロゲン受容体を不活性化する。アゴニスト又はアンタゴニスト化合物の結合は、可逆的又は不可逆的である。
【０１４６】
本発明のある実施形態では、精子生成を抑制する方法を提供する。この方法は、精子生成を抑制するのに有効な量の本発明に係るＳＡＲＭ化合物及び／又はその類似体、異性体、代謝産物、誘導体、薬学的に許容される塩、医薬品、Ｎ酸化物或いはそれらの任意の組み合わせを、患者のアンドロゲン受容体に接触させるステップを含んでいる。
【０１４７】
本発明の他の実施形態では、男性患者の避妊方法を提供する。この方法は、精子生成を抑制するのに有効な量の本発明に係るＳＡＲＭ化合物及び／又はその類似体、異性体、代謝産物、誘導体、薬学的に許容される塩、医薬品、Ｎ酸化物或いはそれらの任意の組み合わせを、患者のアンドロゲン受容体に接触させるステップを含んでおり、それによって前記患者の避妊を効果的に行う方法を提供する。
【０１４８】
本発明の他の実施形態では、ホルモン療法を提供する。この方法は、アンドロゲン依存状態を変化させるのに有効な量の本発明に係るＳＡＲＭ化合物及び／又はその類似体、異性体、代謝産物、誘導体、薬学的に許容される塩、医薬品、Ｎ酸化物或いはそれらの任意の組み合わせを、患者（アンドロゲンに関連する病気の患者）のアンドロゲン受容体に接触させるステップを含んでいる。
【０１４９】
本発明の他の実施形態では、ホルモン補充療法を提供する。この方法は、アンドロゲン依存状態を変化させるのに有効な量の本発明に係るＳＡＲＭ化合物及び／又はその類似体、異性体、代謝産物、誘導体、薬学的に許容される塩、医薬品、Ｎ酸化物或いはそれらの任意の組み合わせを、患者のアンドロゲン受容体に接触させるステップを含んでいる。
【０１５０】
本発明の他の実施形態では、ホルモンに関連する病気の患者を治療する方法を提供する。この方法は、アンドロゲン依存状態を変化させるのに有効な量の本発明に係るＳＡＲＭ化合物及び／又はその類似体、異性体、代謝産物、誘導体、薬学的に許容される塩、医薬品、Ｎ酸化物或いはそれらの任意の組み合わせを、患者に投与するステップを含んでいる。
【０１５１】
本発明によって治療することができるアンドロゲン依存症としては、例えば、性腺機能低下症、筋肉減少症、赤血球生成、骨粗鬆症、アンドロゲン（例えば、テストステロン）のレベルが低いことに起因する他の病気などの高齢に関連する病気が挙げられる。
【０１５２】
本発明の他の実施形態では、前立腺癌を治療する方法を提供する。この方法は、前立腺癌を治療するのに有効な量の本発明に係るＳＡＲＭ化合物及び／又はその類似体、異性体、代謝産物、誘導体、薬学的に許容される塩、医薬品、Ｎ酸化物或いはそれらの任意の組み合わせを、前立腺癌患者に投与するステップを含んでいる。
【０１５３】
本発明の他の実施形態では、前立腺癌を予防する方法を提供する。この方法は、前立腺癌を予防するのに有効な量の本発明に係るＳＡＲＭ化合物及び／又はその類似体、異性体、代謝産物、誘導体、薬学的に許容される塩、医薬品、Ｎ酸化物或いはそれらの任意の組み合わせを、前立腺癌患者に投与するステップを含んでいる。
【０１５４】
本発明の他の実施形態では、前立腺癌の進行を遅延させる方法を提供する。この方法は、前立腺癌の進行を遅延させるのに有効な量の本発明に係るＳＡＲＭ化合物及び／又はその類似体、異性体、代謝産物、誘導体、薬学的に許容される塩、医薬品、Ｎ酸化物或いはそれらの任意の組み合わせを、前立腺癌患者に投与するステップを含んでいる。
【０１５５】
本発明の他の実施形態では、前立腺癌の再発を防止する方法を提供する。この方法は、前立腺癌の再発を防止するのに有効な量の本発明に係るＳＡＲＭ化合物及び／又はその類似体、異性体、代謝産物、誘導体、薬学的に許容される塩、医薬品、Ｎ酸化物或いはそれらの任意の組み合わせを、前立腺癌患者に投与するステップを含んでいる。
【０１５６】
本発明の他の実施形態では、前立腺癌の再発を治療する方法を提供する。この方法は、前立腺癌の再発を治療するのに有効な量の本発明に係るＳＡＲＭ化合物及び／又はその類似体、異性体、代謝産物、誘導体、薬学的に許容される塩、医薬品、Ｎ酸化物或いはそれらの任意の組み合わせを、前立腺癌患者に投与するステップを含んでいる。
【０１５７】
さらには、アンドロゲン受容体を刺激することによって涙の生成が促進されるので、本発明に係るＳＡＲＭ化合物はドライアイの治療に使用することができる。そのため、本発明の他の実施形態では、ドライアイを治療する方法を提供する。この方法は、ドライアイを治療するのに有効な量の本発明に係るＳＡＲＭ化合物及び／又はその類似体、異性体、代謝産物、誘導体、薬学的に許容される塩、医薬品、Ｎ酸化物、水和物、プロドラッグ、結晶、多形体或いはそれらの任意の組み合わせを、ドライアイ患者に投与するステップを含んでいる。
【０１５８】
本発明の他の実施形態では、ドライアイを予防する方法を提供する。この方法は、ドライアイを予防するのに有効な量の本発明に係るＳＡＲＭ化合物及び／又はその類似体、異性体、代謝産物、誘導体、薬学的に許容される塩、医薬品、Ｎ酸化物或いはそれらの任意の組み合わせを、ドライアイ患者に投与するステップを含んでいる。
【０１５９】
本発明の他の実施形態では、癌細胞のアポトーシスを誘発させる方法を提供する。この方法は、アポトーシスを誘発させるのに有効な量の本発明に係るＳＡＲＭ化合物及び／又はその類似体、異性体、代謝産物、誘導体、薬学的に許容される塩、医薬品、Ｎ酸化物或いはそれらの任意の組み合わせを、癌細胞に接触させる過程を含んでいる。
【０１６０】
ここで定義されている“接触”という用語は、本発明に係るＳＡＲＭ代謝物が、試験管、フラスコ、組織培養、チップ、アレイ、プレート、マイクロプレート、毛細管などの内部の、酵素を含んでいるサンプル内に導入され、ＳＡＲＭを酵素に結合可能な温度又は時間で培養することを意味する。ＳＡＲＭ又は他の特異結合成分をサンプルに接触させる方法は、当業者には周知であり、実施する分析方法の種類に応じて選択できる。また培養方法は標準的なものであり、当業者には周知である。
【０１６１】
他の実施形態では、“接触”という用語は、本発明に係るＳＡＲＭ代謝物が治療を受ける患者に投与され、インビボにおいて、ＳＡＲＭ化合物がアンドロゲン受容体と接触可能であることを意味する。
【０１６２】
本明細書中で使用される“性欲”という用語は、性的衝動を意味する。
【０１６３】
本明細書中で使用される“勃起”という用語は、勃起可能であることを意味する。勃起組織は、大きく拡張可能であり、多くの血管が膨張することにより硬直する組織のことである。
【０１６４】
“性腺機能低下症”は、生殖腺の機能活性の異常低下により生じる又は特徴付けられる病気であり、性的な成長及び発育の遅滞を伴う。“骨減少症”は、石灰化が減少する又は骨密度が減少する病気である。これは、そのような病気が顕著である骨格系すべてを含む用語である。
【０１６５】
“骨粗鬆症”は、カルシウムや骨タンパク質の不足に起因して骨質量が減少し、骨が薄くなる病気である。骨粗鬆症にかかると、骨折しやすくなる。また、骨折した際に、治るのが遅くなったり、うまく治らなかったりする。骨粗鬆症を放置すると、姿勢の変化、身体の異常、可動域の減少をもたらす。
【０１６６】
“前立腺肥大症（benign prostatic hyperplasia：BPH）”は、良性の前立腺肥大であり、任意の臓器に見られる最も一般的な悪性でない増殖異常であり、成人男性における疾病率の主たる原因である。ＢＰＨは、５０歳以上の男性では７５％以上に発生し、９０歳代迄には有病率は８８％にも達する。ＢＰＨは、しばしば、前立腺を横切る尿道（尿道前立腺部）の一部を段階的に圧迫する。このことにより膀胱は完全に空にならないので、患者に頻繁に尿意を覚えさせる。尿流の妨げは、排尿の制御不能（所望時に排尿開始することの障害を含む）や、残留尿による失禁防止の困難をもたらす。溢流性尿失禁は、尿路閉塞と排尿の失敗をもたらす。
【０１６７】
“認識”という用語は、知るプロセス、特に、気づく、知る、考える、学ぶ、及び判断するなどのプロセスを意味する。認識という用語は、心理学、言語学、コンピュータサイエンス、神経科学、数学、動物行動学、及び哲学の分野に関連している。“気分”という用語は、精神の性質又は状態である。変調は、認識力及び／又は気分のポジティブ又はネガティブな変化を意味する。
【０１６８】
“うつ病”という用語は、肉体、気分及び意識を含む病気のことであり、その人の食事、睡眠、自己についての感じ方、及び物事についての感じ方に影響を与える。うつ病の兆候及び症候としては、活動に対する興味の消失、過食又は拒食、感情の消失、無気力、絶望感、悲観、罪悪感又は孤独感、社会逃避、疲労、睡眠障害、集中力低下、記憶障害、決断障害、情動不安、頭痛、消化不良、又は慢性的痛みがある。
【０１６９】
“脱毛症”という用語は、医学的には脱毛（alopecia）として知られており、とても一般的なタイプの男性型脱毛症のことである。はげは、一般的には、頭皮の部分的な脱毛から始まる。そして、場合によっては、その後、完全なはげ頭になることや、体毛脱毛を伴うこともある。脱毛症は、男性及び女性の両方で生じる。
【０１７０】
“貧血”という用語は、血液中で、赤血球数が通常よりも少ない状態、又はヘモグロビン含有量が通常よりも少ない状態を意味する。貧血のとき、血液の酸素運搬量は減少する。貧血の人は、すぐに疲労感を覚え、蒼白となり、動悸を覚え、息切れする。貧血は次の４つの主要な原因（ａ〜ｄ）によって引き起こされる。（ａ）出血（失血）、（ｂ）溶血（赤血球の過剰破壊）、（ｃ）赤血球の生成不足、及び（ｄ）通常ヘモグロビンの不足。貧血には様々なタイプがあり、再生不良性貧血、ベンゼン中毒、ファンコーニ貧血、新生児溶血性疾患遺伝性球状赤血球症、鉄欠乏性貧血、大理石骨病、悪性貧血、鎌状細胞貧血、地中海貧血症、脊髄形成異常症候群、及び様々な骨髄疾患などがある。ここに定義するように、本発明に係るＳＡＲＭ化合物は、上記した貧血の１つ又は複数のタイプの貧血を、予防及び／又は治療するのに役立つ。
【０１７１】
“肥満”という用語は、その人の正常な体重を大きく超過した状態を意味する。従来、理想的な体重を２０％超過すると肥満であると見なされる。肥満とは肥満度指数（Body to Mass Index：BMI）が３０以上であると、国立衛生研究所（National Institute of Health：NIH）によってより正確に定義されている。多くの場合、肥満は多因子性であり、遺伝的要素及び行動的要素の双方に起因する。肥満による体重超過は、健康に大きく影響し、次のような様々な病気を発症するリスクを増大させる。２型（成人）糖尿病、高血圧、脳卒中（脳血管障害、ＣＶＡ：cerebrovascular accident）、心臓麻痺（心筋梗塞、ＭＩ：myocardial infarction）、心不全（うっ血性心不全）、癌（前立腺、大腸、直腸癌など）、胆石及び胆嚢の病気（胆嚢炎）、痛風及び痛風関節炎、膝、臀部及び下背の骨関節炎（変性性関節炎）、睡眠時無呼吸（睡眠時の呼吸不全、血中酸素濃度の低下）、及びピックウィック症候群（肥満、赤面、呼吸低下、及び傾眠）など。ここに定義するように、“肥満”という用語は、上記した肥満に関連する病気のいずれか１つを含む。したがって、本発明に係るＳＡＲＭ化合物は、肥満及び上記した肥満に関連する病気のいずれか１つ又は複数を、予防及び／又は治療するのに役立つ。
【０１７２】
“前立腺癌”という用語は、米国の男性に最も頻繁に発生する癌の１つであり、毎年、数百から数千人の新規患者が前立腺癌であると診断されている。前立腺癌であると診断された新規患者の６０％以上が病理的に進行しており、不治であり、予後は思わしくないと認められる。５０歳以上の全男性の３分の１は、生命にかかわる臨床的な前立腺癌の形態を活性化させる潜在性の前立腺癌を有している。潜在性の前立腺腫瘍の発生頻度は、５０代（５．３〜１４％）から９０代（４０〜８０％）までの間で、１０年間毎に大幅に増加することが知られている。全ての文化、民族及び人種の間で、潜在性の前立腺癌を有している人が同じように増えているが、臨床的に悪性な癌の発生頻度は著しく異なる。このことは、潜在性の前立腺癌を活性化させる上で、環境の要因が重要な役割を果たしていることを示唆している。
【０１７３】
《医薬組成物》
【０１７４】
ある実施形態では、本発明に係る治療方法は、ＳＡＲＭ化合物（例えば、本発明に係るＳＡＲＭ代謝物）を含んでいる医薬組成物を投与するステップを含んでいる。他の実施形態では、本発明に係る治療方法は、ＳＡＲＭ化合物（例えば、本発明に係るＳＡＲＭ代謝物）の類似体、誘導体、異性体、代謝産物、薬学的に許容される塩、医薬品、水和物、Ｎ酸化物、多形体、結晶、又はこれらの任意の組み合わせと、薬学的に許容される担体とを含んでいる医薬組成物を投与するステップを含んでいる。
【０１７５】
本明細書中における“医薬組成物”は、薬学的に許容される担体又は希釈液と共に、“有効な量”の活性成分（すなわちＳＡＲＭ化合物）を含んでいる組成物である。
【０１７６】
本明細書中における“有効な量”は、与条件及び投薬計画に治療効果を与える量を意味する。本明細書中におけるＳＡＲＭ化合物の“有効な量”は、１〜５００ｍｇ／日の範囲である。ある実施形態では、投与量は１〜１００ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態では、投与量は１００〜５００ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態では、投与量は４５〜６０ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態では、投与量は１５〜２５ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態では、投与量は５５〜６５ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態では、投与量は４５〜６０ｍｇ／日の範囲である。ＳＡＲＭ化合物は、１日１回の投与でもよいし（その場合は、１回で１日分を投与する）、１日２回、１日３回などの１日に複数回に分けての投与でもよい。また、ＳＡＲＭ化合物は、１日おき、週に３日、週に４日、週に５日など断続的に投与することもできる。
【０１７７】
本明細書中における“治療”という用語は、病気を軽減する治療は勿論のこと、予防も含んでいる。ここで使用される“減少”、“抑止”及び“抑制”という用語は、一般的な解釈では、「低下」又は「減少」の意味である。ここで使用される“促進（facilitating）”という用語は、一般的な解釈では、割合の増加を意味する。ここで使用される“助長（promoting）”という用語は、一般的な解釈では、増加を意味する。ここで使用される“進行”という用語は、範囲や重傷度の増大、進行、成長、又は悪化を意味する。
【０１７８】
ここで使用される“投与”という用語は、本発明に係るＳＡＲＭ化合物を患者に接触させることを意味する。ここで使用される“投与”という用語は、インビトロ（すなわち試験管内）又はインビボ（すなわち、例えばヒトなどの生体の細胞又は組織内）で実施される。ある実施形態では、本発明は、本発明に係る化合物を患者に投与することを含んでいる。ある実施形態では、患者は哺乳類である。他の実施形態では、患者はヒトである。
【０１７９】
本発明に係るＳＡＲＭ物質を含んでいる医薬組成物は、例えば、非経口、側癌的（paracanceraly）、経粘膜、経皮、筋肉内、静脈内、皮内、皮下、腹膜内、脳室内、脳内、膣内又は腫瘍内投与などの当業者に周知の方法によって患者に投与される。
【０１８０】
ある実施形態では、本発明に係る医薬組成物は経口投与される。そのため、本発明に係る医薬組成物は、経口投与に適した形態（すなわち、固形又は液体製剤）に製剤化される。適切な経口用固形製剤としては、錠剤、カプセル、ピル、顆粒、ペレットなどがある。また、適切な経口用液体製剤としては、溶液、懸濁液、分散液、乳濁液、油などがある。本発明のある実施形態では、ＳＡＲＭ化合物はカプセル状に製剤化される。この実施形態では、本発明に係る組成物は、ＳＡＲＭ活性化合物及び不活性担体（又は希釈液）に加えて、硬ゲル化カプセルを含む。
【０１８１】
さらに、他の実施形態では、本発明に係る医薬組成物は、液体製剤の静脈内注射、動脈内注射又は筋肉内注射によって投与される。適切な液体製剤としては、溶液、懸濁液、分散液、乳濁液、油などがある。ある実施形態では、本発明に係る医薬組成物は、静脈内投与に適した形態に製剤化され、静脈内に投与される。他の実施形態では、本発明に係る医薬組成物は、動脈内投与に適した形態に製剤化され、動脈内に投与される。他の実施形態では、本発明に係る医薬組成物は、筋肉内投与に適した形態に製剤化され、筋肉内に投与される。
【０１８２】
さらに、他の実施形態では、本発明に係る医薬組成物は、局所投与に適した形態に製剤化され、体の表面に局所的に投与される。適切な局所性製剤としては、ゲル、軟膏、クリーム、ローション、液滴などがある。局所的に投与するために、ＳＡＲＭ物質又はその誘導体であって生理学的に耐容性を示すもの（例えば塩、エステル、Ｎ酸化物）を作成し、薬品担体を用いて又は用いることなく、生理学的に認容される希釈液と共に、水溶液、懸濁液、又は乳状液として投与される。
【０１８３】
さらに、他の実施形態では、本発明に係る医薬組成物は、直腸座薬や尿道座薬などの座薬として投与される。さらに、他の実施形態では、本発明に係る医薬組成物は、ペレットの皮下埋め込みによって投与される。さらなる実施形態では、ペレットは、長期間に渡ってＳＡＲＭ物質を制御放出する。
【０１８４】
他の実施形態では、活性化合物は、小胞（特にリポソーム）に送達される。詳細については、Langer, Science 249: 1527-1533, 1990; Treat et al., in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez-Berestein and Fidler (eds.), Liss, New York, 353-365, 1989; Lopez-Berestein, ibid, 317-327を参照されたい（主にibidを参照されたい）。
【０１８５】
本明細書中における“薬学的に許容される担体又は希釈液”は、当業者に周知である。担体又は希釈液としては、固形製剤用の固形担体又は希釈液、液体製剤用の液体担体又は希釈液、又はこれらの混合物がある。
【０１８６】
固形製剤／希釈液としては、ガム、デンプン（例えばコーンのデンプン、予めゲル化されたデンプン）、糖（例えば乳糖、マンニトール、ショ糖、ブドウ糖）、セルロース系材料（例えば微結晶性セルロース）、アクリル酸塩（例えばポリメチルアクリレート）、炭酸カルシウム、酸化マグネシウム、滑石、又はこれらの混合物がある（ただし、これらに限定されるものではない）。
【０１８７】
液体製剤の場合、薬学的に許容される担体としては、水溶性或いは非水性の溶液、懸濁液、乳濁液、又は油がある。非水溶媒の例としては、プロピレン・グリコール、ポリエチレン・グリコールや、注射用有機エステル（例えばオレイン酸エチル）がある。水溶性担体としては、水、アルコール性／水溶性の溶液、乳濁液又は懸濁液（生理食塩水及び緩衝培地を含む）がある。油の例としては、石油、動物性、植物性、又は合成されたものがある（例えばラッカセイ油、大豆油、鉱油、オリーブ油、ひまわり油、魚肝油）。
【０１８８】
非経口媒体（皮下注射、静脈内注射、動脈内注射、又は筋肉内注射用）としては、塩化ナトリウム溶液、リンガー・デキストロース、デキストロース及び塩化ナトリウム、乳酸加リンガーオイル及び固定油がある。経静脈媒体としては、液体及び栄養補充薬、電解質補充薬（例えばリンガー・デキストロースに基づくもの）などがある。一例としては、界面活性剤及び他の薬学的に許容されるアジュバントを添加した又は添加しない、水や油などの無菌液がある。一般的に、水、生理食塩水、水溶性デキストロースや関連糖液、及びグリコール（例えばプロピレン・グリコールやポリエチレン・グリコール）は、液体担体として適している（特に、注射用溶液に適している）。油の例としては、石油、動物性、植物性又は合成されたものがある（例えばラッカセイ油、大豆油、鉱油、オリーブ油、ひまわり油、魚肝油）。
【０１８９】
また、本発明に係る医薬組成物は、さらに、結合剤（例えば、アカシア、コーンスターチ、ゼラチン、カルボマー、エチルセルロース、グアールガム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポビドン）、崩壊剤（例えば、コーンスターチ、ジャガイモデンプン、アルギン酸、二酸化ケイ素、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、グアールガム、澱粉グリコール酸エステルナトリウム）、様々なｐＨ及びイオン強度の緩衝液（例えば、トリス−ＨＣＩ、アセテート、リン酸塩）、界面に対する吸収を防止するための添加物（例えば、アルブミン又はゼラチン）、洗剤（例えば、トウィーン２０、トウィーン８０、プルロニックＦ６８、胆汁酸塩）、プロテアーゼインヒビター、界面活性剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）、浸透エンハンサー、可溶化剤（例えば、グリセロール、ポリエチレングリセロール）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム、ブチルヒドロキシアニソール）、安定剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、粘度上昇剤（例えば、カルボマー、コロイド状二酸化ケイ素、エチルセルロース、グアールガム）、甘味料（例えば、アスパルテーム、クエン酸）、防腐剤（例えば、チメロサール、ベンジルアルコール、パラオキシ安息香酸エステル類）、潤滑剤（例えば、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレン・グリコール、ラウリル硫酸ナトリウム）、流動助剤（例えば、コロイド状二酸化ケイ素）、可塑剤（例えば、フタル酸ジエチル、クエン酸トリエチル）、乳化剤（例えば、カルボマー、ヒドロキシプロピルセルロース、ラウリル硫酸ナトリウム）、ポリマーコーティング（例えば、ポロキサマー、ポロキサミン）、被覆及び膜形成剤（例えば、エチルセルロース、アクリル酸塩、ポリメタクリル酸塩）、及び／又は、アジュバントを含むことができる。
【０１９０】
ある実施形態では、本発明に係る医薬組成物は、投与後にＳＡＲＭ化合物を長期間に渡って放出する制御放出組成物である。制御又は持続放出組成物としては、脂溶性の持続性製剤（例えば、脂肪酸、ワックス、オイル）がある。他の実施形態では、本発明に係る医薬組成物は、投与後に全てのＳＡＲＭ化合物を直ちに放出する即放組成物である。
【０１９１】
さらに他の実施形態では、本発明に係る医薬組成物は、制御放出システムによって送達される。例えば、前記製剤は、静脈内注入、植込型浸透圧ポンプ、経皮パッチ、リポソーム、又は他の投与形態により投与される。ある実施形態では、ポンプを使用することができる（例えば、Langer, supra; Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201, 1987; Buchwald et al., Surgery 88:507, 1980; Saudek et al., N. Engl. J. Med. 321:574, 1989を参照されたい）。他の実施形態では、高分子材料を使用することができる。さらに他の実施形態では、制御放出システムは、治療標的すなわち脳の近くに設けることができる。その場合、必要とされる投与量は、全身投与量と比べるとほんの少量である（例えば、Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp.115-138, 1984を参照されたい）。他の制御放出システムは、Langer（Science 249:1527-1533, 1990）によるレビューに記載されている。
【０１９２】
本発明に係る医薬組成物は、活性物質を、ポリマー化合物（例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ヒドロゲルなど）の粒子状製剤や、リポソーム、マイクロエマルション、ミセル、単層或いは多層状の小胞、赤血球ゴースト、又はスフェロプラストなどの活性物質と結合させることを含む。そのような組成物は、物理的状態、溶解度、安定性、インビボでの放出速度、及びインビボでの排出速度に影響を与える。
【０１９３】
ポリマー（例えば、ポロキサマー又はポロキサミン）でコートされた粒子状組成物も本発明に含まれる。また、組織特異性受容体、リガンド又は抗原に対する抗体と結合した化合物や、組織特異性受容体のリガンドと結合した化合物も本発明に含まれる。
【０１９４】
また、水溶性ポリマーの共有結合によって修飾された化合物も本発明に含まれる。前記水溶性ポリマーとしては、例えば、ポリエチレン・グリコール、ポリエチレン・グリコールとポリプロピレン・グリコールのコポリマー、カルボキシメチル・セルロース、デキストラン、ポリビニル・アルコール、ポリビニルピロリドン、及びポリプロリンがある。これらの修飾された化合物は、対応する修飾されていない化合物と比較すると、静脈注射後に血液中で著しく長い半減期を示すことが知られている（詳しくは、Abuchowski et al., 1981; Newmark et al., 1982; 及び Katre et al., 1987を参照されたい）。また、そのような修飾は、化合物の水溶液中での溶解度を高め、凝集を防止し、化合物の物理的及び化学的安定性を向上させ、化合物の免疫原性及び反応性を著しく低下させる。そのため、前記ポリマー化合物を、修飾されていない化合物よりも低い頻度で又は少ない用量で投与することにより、インビボでの望ましい生物学的活性を得ることができる。
【０１９５】
活性成分を含有する医薬組成物の作成は、当該技術分野で公知である（例えば、混合、顆粒化、又は錠剤製剤化によって作成する）。活性治療成分は、多くの場合は、薬学的に許容されるかつ活性化成分と適合する媒体と混合される。経口投与の場合は、ＳＡＲＭ物質又はその誘導体であって生理学的に耐容性を示すもの（例えば、塩、エステル、Ｎ酸化物）は、この目的に通常使用される添加物（例えば、媒体、安定剤、不活性希釈液）と混合され、通常の方法によって投与に適した形態（例えば、錠剤、コート錠、硬ゼラチンカプセル、軟ゼラチンカプセル、水溶性、アルコール性溶液、油性溶液）に変換される。非経口投与の場合は、ＳＡＲＭ物質又はその誘導体であって生理学的に耐容性を示すもの（例えば、塩、エステル、Ｎ酸化物）は、必要に応じて、この目的に通常使用される適切な物質（例えば可溶化剤）によって、溶液、懸濁液又は乳濁液に変換される。
【０１９６】
活性成分は、中和された薬学的に許容される塩の形態で、医薬組成物内に配合することができる。薬学的に許容される塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸）や有機酸（例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸）により生成された酸付加塩（ポリペプチド又は抗体分子の遊離アミノ基により生成される）がある。遊離カルボキシル基から生成される塩は、例えば、無機塩（例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄）や、有機塩基（例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカイン）からも生成できる。
【０１９７】
医学的に使用するために、本発明に係るＳＡＲＭの塩を、薬学的に許容される塩として使用することができる。また、本発明に係る化合物又はその薬学的に許容される塩の作成に、他の塩を使用することができる。本発明に係る化合物の適切な薬学的に許容される塩としては、例えば、本発明に係る化合物の溶液と、薬学的に許容される酸（例えば、塩酸、硫酸、メタンスルホン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、安息香酸、シュウ酸、クエン酸、酒石酸、炭酸、リン酸）の溶液とを混合することによって作成した酸付加塩がある。
【０１９８】
ある実施形態では、本発明に係る方法は、ＳＡＲＭ化合物を唯一の活性化成分として投与するステップを含む。また一方、ＳＡＲＭ化合物を１つ又は複数の治療物質と組み合わせて投与するステップを含む、次の（ａ）〜（ｈ）の方法も本発明の範囲に含まれる。（ａ）男性の避妊。（ｂ）様々なホルモンに関連する病気（例えば、高齢男性におけるアンドロゲン減少（Androgen Decline in Aging Male：ADAM）に関連する病気）の治療。（ｃ）女性におけるアンドロゲン減少（Androgen Decline in Female：ADIF）に関連する病気の治療。（ｄ）急性及び/又は慢性の筋萎縮症の治療及び／又は予防。（ｅ）ドライアイの治療及び／又は予防。（ｆ）経口アンドロゲン補充療法。（ｇ）前立腺癌の発生率の減少、前立腺癌の進行抑制又は退行。（ｈ）癌細胞のアポトーシスの誘発。前記治療物質としては、ＬＨＲＨ類似体、可逆的抗アンドロゲン、抗エストロゲン、抗癌剤、５−αレダクターゼ阻害剤、アロマターゼ阻害剤、プロゲスチン、又は他の核ホルモン受容体を介して作用する物質がある（ただし、これらに限定されるものではない）。
【０１９９】
したがって、ある実施形態では、本発明は、ＬＨＲＨ類似体と組み合わせて投与される、ＳＡＲＭ代謝物を含んでいる組成物及び医薬組成物を提供する。他の実施形態では、本発明は、可逆的抗アンドロゲンと組み合わせて投与される、ＳＡＲＭ化合物を含んでいる組成物及び医薬組成物を提供する。他の実施形態では、本発明は、抗エストロゲンと組み合わせて投与される、ＳＡＲＭ化合物を含んでいる組成物及び医薬組成物を提供する。他の実施形態では、本発明は、抗癌剤と組み合わせて投与される、ＳＡＲＭ化合物を含んでいる組成物及び医薬組成物を提供する。他の実施形態では、本発明は、５−αレダクターゼ阻害剤と組み合わせて投与される、ＳＡＲＭ化合物を含んでいる組成物及び医薬組成物を提供する。他の実施形態では、本発明は、アロマターゼ阻害剤と組み合わせて投与される、ＳＡＲＭ化合物を含んでいる組成物及び医薬組成物を提供する。他の実施形態では、本発明は、プロゲスチンと組み合わせて投与される、ＳＡＲＭ化合物を含んでいる組成物及び医薬組成物を提供する。他の実施形態では、本発明は、他の核ホルモン受容体を介して作用する物質と組み合わせて投与される、ＳＡＲＭ化合物を含んでいる組成物及び医薬組成物を提供する。
【０２００】
以下の実施例は、本発明の実施形態をより詳細に説明するためのものである。ただし、これらの実施例は、本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【０２０１】
≪実施例１：アンドロゲン活性及びタンパク同化作用を有する非ステロイド性リガンド》
【０２０２】
ここに示したいくつかのＳＡＲＭ化合物を、デザイン及び合成し、インビトロ及びインビボでの薬理学的活性を評価した。去勢動物における、インビトロでのアンドロゲン受容体の結合親和性と、アンドロゲン依存性組織成長を維持する能力とを実験した。重量によって測定される、ＳＡＲＭ化合物が前立腺及び精嚢の成長を維持及び／又は刺激する能力として、アンドロゲン活性をモニタした。また、重量によって測定される、ＳＡＲＭ化合物が肛門挙筋の成長を維持及び／又は刺激するの能力として、タンパク同化作用をモニタした。
【０２０３】
＜合成方法＞
【０２０４】
（２Ｒ）−１−メタクリロイルピロリジン−２−カルボン酸（Ｒ−１２９）。Ｄ−プロリン（Ｒ−１２８、１４．９３ｇ、０．１３ｍｏｌ）を２ＮのＮａＯＨ（７１ｍＬ）に溶解させ、氷浴で冷却し、得られたアルカリ溶液をアセトン（７１ｍＬ）で希釈した。氷浴で、Ｄ−プロリンの水溶液に、塩化メタクリロイル１２７（１３．５６ｇ、０．１３ｍｏｌ）のアセトン溶液（７１ｍＬ）と２ＮのＮａＯＨ溶液（７１ｍＬ）とを同時に加えた（４０分間以上）。塩化メタクリロイルを加える間は、１０〜１１℃で混合物のｐＨを維持した。撹拌後（３時間、室温）、３５〜４５℃の温度で混合物を真空蒸発させて、アセトンを除去した。得られた溶液をエチルエーテルで洗浄し、濃縮ＨＣｌによってｐＨ＝２まで酸性化した。酸性混合物をＮａＣｌで飽和させ、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×３）で抽出した。複合抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、セライト（Clite）でろ過し、真空蒸発させ、粗生成物である無色油を得た。エチルエーテル及びヘキサンからの油の再結晶により、１６．２（６８％）の所望の化合物である無色結晶が得られた。ｍｐ１０２−１０３℃（ｌｉｔ．［２１４］ｍｐ１０２．５−１０３．５℃）；この化合物のＮＭＲスペクトルは、標記の化合物に２つの回転異性体が存在することを証明した。第１の回転異性体については、１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ５．２８（ｓ）及び５．１５（ｓ）であり、第２の回転異性体については５．１５（ｓ）及び５．０３（ｓ）である（両方の回転異性体の合計は２Ｈ、ビニルＣＨ２）、第１の回転異性体については４．４８−４．４４（ｍ）、第２の回転異性体については４．２４−４．２０（ｍ）であり、（両方の回転異性体の合計は１Ｈ、ＣＨ、キラル中心で）、３．５７−３．３８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、２．２７−２．１２（１Ｈ，ＣＨ），１．９７−１．７２（ｍ，６Ｈ，ＣＨ２，ＣＨ，Ｍｅ）；１３ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δは、主要な回転異性体については１７３．３，１６９．１，１４０．９，１１６．４，５８．３，４８．７，２８．９，２４．７，１９．５であり、他方の回転異性体については１７４．０，１７０．０，１４１．６，１１５．２，６０．３，４５．９，３１．０，２２．３，１９．７である。ＩＲ（ＫＢｒ）３４３７（ＯＨ），１７３７（Ｃ＝Ｏ），１６４７（ＣＯ，ＣＯＯＨ），１５８４，１５０８，１４５９，１３６９，１３４８，１１７８ｃｍ−１；［α］Ｄ２６＋８０．８°（ｃ＝１，ＭｅＯＨ）；Ｃ９Ｈ１３ＮＯ３に対するＡｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．；Ｃ：５９．００，Ｈ：７．１５，Ｎ：７．６５．Ｆｏｕｎｄ；Ｃ：５９．１３，Ｈ：７．１９，Ｎ：７．６１。
【０２０５】
（３Ｒ，８ａＲ）−３−ブロモメチル−３−メチル−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］  ［１，４］オキサジン−１，４−ジオン（Ｒ、Ｒ−１３０）。室温、アルゴン下で、ＮＢＳ（２３．５ｇ、０．１３２ｍｏｌ）を溶解させたＤＭＦ（１００ｍＬ）を、７０ｍＬのＤＭＦに化合物Ｒ−１２９（１６．１ｇ、８８ｍｍｏｌ）を溶解させた撹拌溶液に滴下し、得られた混合物を３日間撹拌した。真空蒸発により溶媒を除去し、黄色固体を沈殿させた。固体を水中で懸濁させ、室温で一晩撹拌して、ろ過し、乾燥し、黄色固体として１８．６（８１％）（乾燥時には重量が小さくなる〜３４％）の標記の化合物を得た。ｍｐ１５２−１５４℃（ｌｉｔ．［２１４］ｍｐ１０７−１０９℃、Ｓ−異性体については）；１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ４．６９（ｄｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ、キラル中心で），４．０２（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨＨａ），３．８６（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨＨｂ），３．５３−３．２４（ｍ，４Ｈ，ＣＨ２），２．３０−２．２０（ｍ，１Ｈ，ＣＨ），２．０４−１．７２（ｍ，３Ｈ，ＣＨ２及びＣＨ），１．５６（ｓ，２Ｈ，Ｍｅ）；１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１６７．３，１６３．１，８３．９，５７．２，４５．４，３７．８，２９．０，２２．９，２１．６；ＩＲ（ＫＢｒ）３４７４，１７４５（Ｃ＝Ｏ），１６８７（Ｃ＝Ｏ），１４４８，１３７７，１３６０，１３０８，１２２７，１１５９，１０６２ｃｍ−１；［α］Ｄ２６＋１２４．５°（ｃ＝１．３，クロロホルム），Ｃ９Ｈ１２ＢｒＮＯ３に対するＡｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．Ｃ：４１．２４，Ｈ：４．６１，Ｎ：５．３４．Ｆｏｕｎｄ；Ｃ：４１．４６、Ｈ：４．６４、Ｎ：５．３２。
【０２０６】
（２Ｒ）−３−ブロモ−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピオン酸（Ｒ−１３１）。３００ｍＬの２４％ＨＢｒに、ブロモラクトン（bromolactone）Ｒ−１３０（１８．５ｇ、７１ｍｍｏｌ）を溶解させた混合物を１時間還流加熱した。得られた溶液を塩水（２００ｍＬ）で希釈し、エチルアセテート（１００ｍＬ×４）で抽出した。複合抽出物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１００ｍＬ×４）で洗浄した。水溶液を濃縮ＨＣｌでｐＨ＝１まで酸性化した後、エチルアセテート（１００ｍＬ×４）で抽出した。複合有機溶液をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、セライトでろ過し、真空で蒸発乾固させた。トルエンから再結晶することにより、１０．２ｇ（８６％）の所望の化合物が無色結晶として産出された。mp 107-109℃ (lit. [214] mp 109-113℃ for the S-isomer); 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ3.63 (d, J = 10.1 Hz, 1H, CHHa), 3.52 (d, J = 10.1 Hz, 1H, CHHb), 1.35 (s, 3H, Me); IR (KBr) 3434 (OH), 3300-2500 (COOH), 1730 (C=O), 1449, 1421, 1380, 1292, 1193, 1085 cm-1; [α]D26+10.5°(c = 2.6, MeOH); Anal. Calcd. for C4H7BrO3: C 26.25, H 3.86. Found: C 26.28, H 3.75.
【０２０７】
Ｎ−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−（２Ｒ）−３−ブロモ−２−ヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（Ｒ−１３２）。塩化チオニル（８．６ｇ、７１ｍｍｏｌ）を、７０ｍＬのＤＭＡにブロモ酸Ｒ−１３１（１１．０ｇ、６０ｍｍｏｌ）を溶解させた溶液に、５〜−１０℃、アルゴン下で滴下した。得られた混合物を同一条件下で２時間撹拌した。上記溶液に、８０ｍＬのＤＭＡに４−ニトロ−３−（トリメチル−アニリン（１２．４ｇ、６０ｍｍｏｌ）が溶解した溶液を滴下し、得られた混合物を室温で一晩撹拌した。高真空オイルポンプを用いて、回転エバポレータ（Rotavapor）上で溶媒を除去した。残余を飽和ＮａＨＣＯ３溶液で希釈し、エチルエーテル（１００ｍＬ×３）で抽出した。複合抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、セライトでろ過し、溶離液として塩化メチレンを使用してフラッシュクロマトグラフィーによってシリカゲルで精製し、１８．０ｇ（８０％）の所望の化合物を得た。mp 98-100℃ (Rf= 0.2, シリカゲル, CH2C12); 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ10.54 (s, 1H, NH), 8.54 (d, J = 2.1 Hz, 1H, ArH), 8.34 (dd, J = 9.0 Hz, J = 2.1 Hz, 1H, ArH), 8.18 (d, J = 9.0 Hz, 1H ArH), 6.37 (s, 1H, OH), 3.82 (d, J = 10.4 Hz, 1H, CHHa), 3.58 (d, J = 10.4 Hz, 1H, CHHb), 1.48 (s, 3H, Me), 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ173.6 (C=O), 143.0, 127.2, 123.2, 122.6 (q, J = 33.0 Hz), 122.0 (q, J = 271.5 Hz), 118.3 (q, J = 6.0 Hz), 74.4, 41.4, 24.9; IR (KBr) 3344 (OH), 1680 (C=O), 1599, 1548 (C=C, Ar), 1427, 1363, 1161 cm-1; MS (ESI): m/z 370. 8 (M)+; Anal. Calcd. for C11H10BrN2O4: C 35.60, H 2.72, N 7.55. Found: C 35.68, H 2.72, N 7.49.
【０２０８】
Ｎ−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−（２Ｓ）−３−［４−（アセチルアミノ）フェノキシ］−２−ヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（Ｓ−１４７、化合物２１）。標記の化合物を、化合物Ｒ−１３２（０．３７ｇ、１．０ｍｍｏｌ）と、４−アセトアミドフェノール（０．２３ｇ、１．５ｍｍｏｌ）と、Ｋ２ＣＯ３（０．２８ｇ、２．０ｍｍｏｌ）と、相間移動触媒としての１０％の塩化ベンジルトリブチルアンモニウムを２０ｍＬのメチルエチルケトンに溶解させたものから作成し、アルゴン下で一晩還流加熱した。ＴＬＣ後に反応が行われ、得られた混合物をセライトでろ過し、真空で濃縮して乾燥させた。フラッシュカラムクロマトグラフィーによるシリカゲル（ヘキサン−エチルアセテート，３：１）での精製は、０．３８ｇ（８６％）（Ｒｆ＝０．１８ヘキサン−エチルアセテート，３：１）の所望の化合物を淡黄色粉末として算出した。mp 70-74℃, 固体はエチルアセテート及びヘキサンから再結晶化可能; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ10.62 (s, 1H, NH), 9.75 (s, 1H, NH), 8.56 (d, J = 1.9 Hz, 1H, ArH), 8.36 (dd, J = 9.1 Hz, J= 1.9 Hz, 1H, ArH), 8.18 (d, J= 9.1 Hz, 1H, ArH), 7.45-7.42 (m, 2H, ArH), 6.85-6.82 (m, 2H, ArH), 6.25 (s, 1H, OH), 4.17 (d, J= 9.5 Hz, 1H, CHHa), 3.94 (d, J = 9.5 Hz, 1H, CHHb), 1.98 (s, 3H, Me), 1.43.(s, 3H, Me); 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ174.6 (C=O), 167.7, 154.2, 143.3, 141.6, 132.8, 127.4, 123.0, 122.7 (q, J= 33.0 Hz), 122.1 (q, J = 271.5 Hz), 120.1, 118.3 (q, J = 6.0 Hz), 114.6, 74.9, 73.8, 23.8, 23.0; IR (KBr) 3364 (OH), 1668 (C=O), 1599, 1512 (C=C, Ar), 1457, 1415, 1351, 1323, 1239, 1150 1046 cm-1; MS (ESI): m/z 464.1 (M+Na)+, Anal. Calcd. for C19H18F3N3O6: C 51.71, H 4.11, N 9 52. Found: C 52.33, H 4.40, N 9.01.
【０２０９】
様々な化合物の合成は、最終反応段階である共通中間体を利用する。様々なフェノール化合物の臭化物を置換して所望のエーテル生成物を生成する臭素中間体が用いられる。ブロモヒドリン（Bromohydrin）はエポキシドに変換され、エポキシドを開裂させて同一の所望のエーテル生成物を生成する。
【０２１０】
ＳＡＲＭ化合物（特に化合物ＩＶ）のインビトロ活性は、高いアンドロゲン受容体結合親和性（Ｋｉ＝７．５ｎＭ）を示した。ＳＡＲＭ化合物（特に化合物ＩＶ）を使用した動物実験は、当該化合物が強力な非ステロイド性のアンドロゲン薬（男性ホルモン薬）及びアナボリック薬（タンパク同化薬）であることを実証した。これらの実験には４つのラット群、すなわち、（１）無傷対照、（２）去勢対照、（３）プロピオン酸テストステロン（１００μｇ／日）で処置した去勢動物、（４）化合物ＩＶ（１０００μｇ／日）で処置した去勢動物を用いた。テストステロン及び化合物ＩＶの送達は、皮下浸透圧ポンプによって、一定の速度で１４日間行われた。
【０２１１】
これらの実験の結果を図１に示す。去勢は、アンドロゲン組織（例えば前立腺や精嚢）及びタンパク同化組織（例えば肛門挙筋）の重量を著しく減少させたが、動物の体重（Body Weight：BW）にはほとんど影響しなかった。去勢動物をプロピオン酸テストステロンまたは化合物ＩＶにより処置すると、アンドロゲン組織の重量は同程度に維持された。
化合物ＩＶは、プロピオン酸テストステロンと同様のアンドロゲン活性を有する（すなわち、前立腺重量と精嚢重量は同じである）が、タンパク同化剤としての有効性はより高かった。化合物ＩＶは、検査した用量でプロピオン酸テストステロンよりも高いタンパク同化作用を示した（すなわち肛門挙筋は無傷対照動物と同じ重量に維持され、テストステロンで観察されたものよりも大きかった）。これらの発見は、アンドロゲン受容体に対する非ステロイド性リガンドの組織選択的なアンドロゲン活性及びタンパク同化作用（すなわち、異なるアンドロゲン及びタンパク同化効能）を示す最初のインビボでの結果である。
【０２１２】
《実施例２：アンドロゲン活性及びタンパク同化作用を有する非ステロイド性リガンド》
【０２１３】
４つの非ステロイド性アンドロゲン（化合物ＩＩＩ、ＩＶ、ＶＩ及びＶＩＩ）の、インビボでのラットに対する有効性及び急性毒性を実験した。インビトロでの分析は、これらの化合物が非常に高い親和力でアンドロゲン受容体と結合することを実証している。４つの化合物の構造及び名称を以下に示す。
2007538094.tif 000061
化合物ＩＩＩ    Ｒ＝Ｆ
化合物ＩＶ      Ｒ＝ＮＨＣＯＣＨ３
化合物ＶＩ      Ｒ＝ＣＯＣＨ３
化合物ＶＩＩ    Ｒ＝ＣＯＣ２Ｈ５
【０２１４】
〈実験方法〉
【０２１５】
材料について。化合物ＩＩＩ、ＩＶ、ＶＩ及びＶＩのＳ異性体と、化合物ＩＩＩのＲ異性体は、図９に示したスキームに従って合成された。プロピオン酸テストステロン（Testosterone propionate：TP）、ポリエチレングリコール３００（ＰＥＧ３００、試薬等級）及び中性緩衝ホルマリン（１０％ｗ／ｖ）は、シグマケミカル社（Sigma Chemical Company; St Louis, MO）から購入した。アルゼット浸透圧ポンプ（２００２年モデル）は、アルザ社（Alza Corp; Palo Alto, CA）から購入した。
【０２１６】
動物について。体重９０〜１００ｇの未成熟なオスのＳＤ（Sprague-Dawley）ラットをハーラン・バイオサイエンス社から購入した。動物は、適宜食料及び水を与えながら１２時間の明暗サイクルで飼育した。動物実験計画書は、研究機関内の動物の管理および使用に関する委員会によって審査及び承認されたものである。
【０２１７】
研究デザインについて。ラットを、各群に５匹ずつ、２９の群に無作為に分けた。処置群については表１に示す。薬物処置開始の前日に、群２〜２９の動物を、個々に檻から出して、重量を測定し、ケタミン／キシラジン（８７／１３ｍｇ／ｋｇ；１ｋｇ当たり約１ｍＬ）の腹腔内投与で麻酔した。適切に麻酔された後（つま先をつまんでも反応がない状態）、動物の耳に識別のための印を付けた。動物は、その後無菌パッド上に置き、腹部及び陰嚢をベータダイン液及び７０％アルコールで洗浄した。精巣は、正中陰嚢切開によって取り出した。各精巣の外科的除去に先立って、上精巣組織は無菌縫合を使用して縫合した。外科的創傷部位を、無菌ステンレス鋼創傷クリップで閉じ、その部位はベータダイン液で洗浄した。動物は、無菌パッド上で（立つことができるまで）回復させた後、檻に戻した。
【０２１８】
２４時間後、群２〜２９の動物をケタミン／キシラジンで再び麻酔し、肩甲部の皮下にアルゼット浸透圧ポンプ（２００２年モデル）を埋め込んだ。この場合は、肩甲部を剪毛及び洗浄し（ベータダイン液及びアルコールで）、無菌メスを用いて小さく（１ｃｍ）切開した。浸透圧ポンプを挿入し、創傷は無菌ステンレス鋼創傷クリップで閉じた。動物は回復させた後、檻に戻した。浸透圧ポンプに、ポリエチレングリコール３００（ＰＥＧ３００）に溶解させた適切な処理剤（表１に指定されている）を充填した。移植の前日に、浸透圧ポンプに適切な溶液を充填した。動物の、薬物処理に対する急性毒性の兆候（例えば嗜眠、粗い外皮）の有無をモニタした。
【０２１９】
薬物処置の１４日後、ラットをケタミン／キシラジンで麻酔した。動物を、麻酔下で放血安楽死させた。全血細胞分析のために、腹大動脈の静脈穿刺によって血液サンプルを回収した。血液の一部を分離チューブに入れ、１２，０００ｇで１分間遠心分離して血漿層を除去した後、−２０℃で冷凍した。腹側の前立腺、精嚢、肛門挙筋、肝臓、腎臓、脾臓、肺及び心臓を除去し、外来性組織を取り除き、重量測定し、１０％中性緩衝ホルマリン入りのバイアルに入れた。保存された組織は、組織病理学的分析のためにＧＴｘ社に送った。
【０２２０】
データ分析のために、全ての器官の重量は体重に規準化され、単一因子ＡＮＯＶＡ（分散分析）により統計学的な有意差を分析した。前立腺及び精嚢重量はアンドロゲン作用の評価に対する指標として用いられ、肛門挙筋の重量はタンパク同化作用を評価するために用いられた。
【０２２１】
〈結果〉
【０２２２】
去勢ラットモデルにおける、投与１４日後の化合物ＩＩＩ、ＩＶ、ＶＩ及びＶＩＩのＳ異性体、並びに、化合物ＩＩＩのＲ異性体のアンドロゲン活性及びタンパク同化作用を実験した。投与量を増やしながら投与したプロピオン酸テストステロンを、アンドロゲン活性及びタンパク同化作用効果の陽性対照として用いた。
【０２２３】
図２及び３に示すように、去勢され媒体処置されたラットの前立腺、精嚢及び肛門挙筋の重量は、内因性アンドロゲン生成物の切除によって、著しく減少した。プロピオン酸テストステロン、アンドロゲン、及びタンパク同化ステロイドの外来投与によって、去勢ラットの前立腺、精嚢及び肛門挙筋の重量は、投与量依存的に増加した。化合物ＩＩＩのＲ異性体と化合物ＶＩ及びＶＩＩのＳ異性体は、去勢動物の前立腺、精嚢及び肛門挙筋の重量における効果は示さなかった（データは示さず）。化合物ＩＶのＳ異性体（図２：Ｖ）及び化合物ＩＩＩ（図３：ＩＩＩ）は、前立腺、精嚢及び肛門挙筋の重量の投与量依存的な増加を示した。プロピオン酸テストステロンと比較して、化合物ＩＶは、前立腺及び精嚢の重量増加については低い有効性及び固有活性を示したが、肛門挙筋重量の重量増加については高い有効性及び固有活性を示した。特に、化合物ＩＶは、０．３ｍｇ／日の投与量で、去勢動物における肛門挙筋重量の重量を、無傷動物における肛門挙筋重量の重量と同じレベルに保つことができた。したがって、化合物ＩＶは、アンドロゲン活性に乏しく、タンパク同化作用がプロピオン酸テストステロンよりも高い、強力な非ステロイド性のアナボリック薬（タンパク同化薬）である。この化合物が、前立腺及び精嚢に作用することなく、筋肉の成長及び他の同化作用を選択的に刺激することは、従来と比べると、大きな改善である。このことは、前立腺癌を患っている高齢者において特に顕著である。
【０２２４】
化合物ＩＩＩは化合物ＩＶより能力が弱いが、高い高い組織選択性を示した（図２及び３における前立腺及び精嚢への効果と比べて）。化合物ＩＩＩは、肛門挙筋の重量を著しく増加させたが、前立腺及び精嚢の成長を刺激する能力をほとんど又は全く示さなかった（すなわち、前立腺及び精嚢の重量は、無処置動物又はプロピオン酸テストステロンで処置した動物のものと比べて２０％以下であった）。
【０２２５】
この結果は、試験した化合物はどれも、体重又は他の器官（すなわち、肝臓、腎臓、脾臓、肺及び心臓）の重量に対して著しい影響を及ぼさなかったことを示す。また、どの化合物にも、処置を受けた動物の診断血液学試験及び視覚的検査によって測定されるような急性毒性の兆候は認められなかった。重要なことに、化合物ＩＶは、０．３ｍｇ／日の投与量（すなわち極大タンパク同化効果を示した投与量）では、黄体形成ホルモン（Luteinizing Hormone：LH）又は卵胞刺激ホルモン（Follicle Stimulating Hormone：FSH）の生成を抑制しなかった。
【０２２６】
要約すれば、化合物ＩＶは、内部アンドロゲンの除去後に肛門挙筋の重量を維持することにより、動物において例外的なタンパク同化作用を示す。この発見は、治療に使用可能な非ステロイド性アンドロゲンの開発において、大幅な進展を示す。また、このクラスの薬物において大幅な向上（すなわち、組織選択性及び有効性）を示す。化合物ＩＩＩ及びＩＶは、アンドロゲン性及びタンパク同化ステロイドであるプロピオン酸テストステロンと比較すると、選択的なタンパク同化作用を示す。組織選択的活性は、代謝関連用途の点から見ると、実際に、非ステロイド性アンドロゲンの利点の１つである。
【０２２７】
構造及びインビトロでの機能活性が類似しているのにも関わらず、化合物ＩＩＩ〜ＩＶ及びＶＩ〜ＶＩＩのＳ異性体は、インビボ活性の点では、大きな違いを示す。化合物ＩＶは動物に対するもっとも有効なアンドロゲン活性及び同化作用を示し、同化作用はプロピオン酸テストステロンよりも高い。化合物ＩＩＩは、わずかなアンドロゲン活性を示すが、プロピオン酸テストステロンと同程度の同化作用を示す。対照的に、化合物ＶＩ及びＶＩＩは、インビボでは、アンドロゲン及び同化活性を生成することができなかった。
【０２２８】
これらの研究は、強力なタンパク同化効果（例えば筋肉成長）かつ低いアンドロゲン活性（例えば前立腺成長）を示す、新規な選択的アンドロゲン受容体調節剤化合物（ＳＡＲＭ）の２つのメンバー（ＩＩＩ及びＩＶ）の発見を示す。この新規なクラスの薬剤は、男性及び女性の受精能の調節、赤血球形成、骨粗鬆症、性欲に関する潜在的な治療的使用及び前立腺癌の男性又は前立腺癌になる可能性が高い男性への潜在的な治療的使用などの、非選択的アンドロゲンに対する様々な利点を有している。
【０２２９】
さらに、図７及び図８は、ラットのＬＨレベル及びＦＳＨレベルに対する化合物ＩＩＩ及び化合物ＩＶの効果を示す。これらの結果は、前記ＳＡＲＭの生殖ホルモンに対する異なる効果に起因する前記ＳＡＲＭの新規性をさらに実証し、したがって組織特異薬理活性を実証する。図７では、ＴＰ及び化合物ＩＩＩで処置された去勢動物のＬＨレベルは、０．３ｍｇ／日に等しいかそれ以上の投与量で、無処置動物（すなわち去勢対照）のＬＨレベルより著しく低かった。しかし、ＬＨレベルの著しい低下が観察される前には、高投与量（すなわち、０．５ｍｇ／日又はそれ以上）の化合物ＩＶが必要とされた。したがって、化合物ＩＶは、肛門挙筋成長の最大刺激を誘発可能な投与量ではＬＨレベルを抑制しない。図８では、化合物ＩＩＩで処置した去勢動物のＦＳＨレベルは、０．５ｍｇ／日又はそれ以上の投与量で、無処置動物（すなわち去勢対照）のＦＳＨレベルより著しく低かった。同様に、ＴＰで処置した動物において、低いＦＳＨレベルが観察された。しかし、この差は、０．７５ｍｇ／日の投与量でのみ著しかった。化合物ＩＶで処置した動物のＦＳＨレベルは、試験したどの投与量レベルでも無処置動物のＦＳＨレベルとほとんど差がなかった。したがって、肛門挙筋成長の最大刺激を誘発可能な投与量では、化合物ＩＶはＦＳＨレベルを抑制しない。
（表１：動物群及び実験デザイン）
2007538094.tif 000062
【０２３０】
《実施例３：イヌにおける化合物ＩＶの薬物動態》
【０２３１】
新規な新規な選択的アンドロゲン受容体調節剤化合物（ＳＡＲＭ）である、Ｓ−化合物ＩＶの薬物動態を、ビーグル犬において特徴付けた。調査には、オスメス各３匹、全部で６匹のビーグル犬を含む、４つの治療と４つに期間のクロスオーバ・デザインを用いた。各動物には、溶液での３ｍｇ／ｋｇのＩＶ投与、１０ｍｇ／ｋｇのＩＶ投与、１０ｍｇ／ｋｇのＰＯ投与と、カプセルでの１０ｍｇ／ｋｇのＰＯ投与を順不同で行った。治療と治療の間には１週間のウォッシュアウト（休薬）期間を設けた。薬剤投与から７２時間までの間、血漿サンプルを採取した。有効なＨＰＬＣ法によって血漿化合物ＩＶ濃度を分析した。クリアランス（ＣＬ）、分布容積（Ｖｓｓ）、半減期（Ｔ１／２）、及び他の薬物動態パラメータは、非コンパートメント解析法により決定した。結果は、ＩＶ投与後、化合物ＩＶがイヌの血漿から消えるまでに、Ｔ１／２が約４時間、ＣＬが４．４ｍｌ／分／ｋｇであったことを示している。溶液の静脈内投与及び経口投与、並びに、カプセルの経口投与を行った後の化合物ＩＶの血漿濃度−時間プロフィールをそれぞれ図４、図５及び図６に示す。薬物動態は、用量にも性にも非依存であった。化合物ＩＶの経口的バイオアベイラビリティは剤形によって異なり、平均すると溶液で３８％、カプセルで１９％であった。従って、化合物ＩＶはビーグル犬において緩やかな半減期、ゆっくりとしたクリアランス、中程度の生体利用性を示したが、これにより、経口的に生体利用可能な組織選択的アンドロゲン受容体調節剤の新たなクラスの第１のものとして特定される。
【０２３２】
《実施例４：ＨＰＬＣによる化合物ＩＶの分析》
【０２３３】
逆相高圧液体クロマトグラフ（Reversed Phase High Pressure Liquid Chromatograph：HPLC）分析を実施し、イヌの血漿中の化合物ＩＶ濃度を定量した。静脈穿刺によって得たイヌの血液サンプルを１０００ｇで１５分間遠心分離した。サンプルは分析まで−２０℃で保存した。個々のサンプルを急速解凍し、一定分量（０．５ｍｏｌ）に内部標準物質（２００μｇ／ｍｌのＣＭ−ＩＩ−８７水溶液を２０μｌ）を加えた。１ｍｌのアセトニトリルの一定分量をサンプルに加えて血漿タンパク質を沈殿させた。サンプルをボルテックスし、その後１０００ｇで１５分間遠心分離した。上清をガラス抽出管に静かに移し、７．５ｍｌの酢酸エチルを加えた。抽出混合物を室温で２０分間放置し、この間に数回ボルテックスした。サンプルを１０００ｇで１０分間遠心分離し、有機相を除いて円錐底のガラス管の中に入れた。有機相を窒素下で蒸発させた。サンプルを２００μｌの移動相（アセトニトリル：水の比が３５：６５）中で再構成し、ＨＰＬＣインジェクションのためのオートサンプラーバイアル（ウォーターズ社（Waters Corp., Milord, MA）製のウォーターズ７１７プラス・オートサンプラー）に移した。水に溶解した３５％（ｖ／ｖ）のアセトニトリルの定組成移動相を１ｍｌ／分の流速でポンピングした（ウォーターズ社製のモデル５１０）。固定相は、ＣＩＳ逆相カラム（ノバパックＣ１８、３．９×１５０ｍｍ）であった。検体を、ＵＶ検出器（ウォーターズ社製のモデル４８６吸収度検出器）によって２７０ｎｍでモニタした。化合物ＩＶ、ＣＭ−ＩＩ−８７に対する保持時間は、それぞれ１１．１分間、１６．９分間であった。クロマトグラフィーデータを採取し、ミレニアム（Millenium）ソフトウェアを用いて解析した。各サンプルにおける化合物ＩＶの血漿濃度は、校正曲線との比較によって決定した。校正曲線は、既知量の化合物ＩＶをイヌの血漿に加えることによって作製した。校正曲線中で用いられるイヌの血漿サンプル中の最終的な化合物ＩＶ濃度は、０．０８μｇ／ｍｌ、０．２μｇ／ｍｌ、０．４μｇ／ｍｌ、２μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌであった。校正曲線はこの濃度範囲では線形であり、０．９９３５以上の相関係（ｒ２）を示した。基準に対する日内及び日間の変動係数は、０．０８μｇ／ｍｌについて６．４％から、２０μｇ／ｍｌについて７．９％までに及んでいた。
【０２３４】
融点の決定にはトーマス・フーバー毛管融点装置（Thomas-Hoover Capillary Melting Point Apparatus）を用いたが、補正は行わなかった。パーキンエルマー（Perkin Elmer）社製のシステム２０００型ＦＴ−ＩＲ（フーリエ変換赤外分光光度計）で赤外線スペクトルを記録した。旋光度の決定には、オートポール（Autopol，登録商標）自動旋光計（フェアフィールド社（Fairfield（New Jersey））製のルドルフリサーチモデルＩＩＩ−５８９−１０）を用いた。タンパク質及び炭素１３の磁気共鳴スペクトルは、ブルカー（Bruker）ＡＸ３００スペクトロメータにより求めた（１Ｈ、１３Ｃに対してそれぞれ３００ＭＨｚ、７５ＭＨｚ）。化学シフト値は、テトラメチルシラン（ＴＭＳ）に対してｐｐｍ（pert per million）（δ）として報告されている。スペクトルのデータは、与えられた構造と一致した。質量スペクトルの決定には、ブルカーＨＰ社製のエスクァイアＬＣシステム（Bruker-HP Esquire LC System）を用いた。元素分析はアトランティック・マイクロラボ社（Atlantic Microlab Inc.（Norcross, GA））が実施したが、得られた値は理論値の０．４％以内であった。ルーチンの薄層クロマトグラフィー（Thin Layer Chromatography：TLC）は、アルミニウムプレート上でシリカゲルによって行った（アルドリッチケミカル社（Aldrich Chemical Company Inc., Milwaukee, WI）のシリカゲル６０Ｆ２５４、２０×２０ｃｍ）。シリカゲル（メルク社製のシリカゲル６０：２３０〜４００メッシュ）上でフラッシュクロマトグラフィーを実施した。蒸留によってテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を金属ナトリウムで乾燥させた。Ｐ２Ｏ５から蒸留によってアセトニトリル（ＭｅＣＮ）及び塩化メチレン（ＣＨ２Ｃｌ２）を乾燥させた。
【０２３５】
《実施例５：ラット及び犬における化合物ＩＶの代謝》
2007538094.tif 000063
【０２３６】
〈目的〉
【０２３７】
化合物ＩＶは、強力で有効な選択的アンドロゲン受容体調節剤（ＳＡＲＭ）である。これらの研究は、ラット及び犬における化合物ＩＶの尿糞中における代謝プロフィールを評価した。
【０２３８】
〈方法〉
【０２３９】
代謝研究：ラットに３００ｍｇ／ｋｇの化合物ＩＶを経口投与し、ビーグル犬には１００ｍｇ／ｋｇの化合物ＩＶを静脈内（intravenous：IV）投与した。尿及び糞は、投与前と、投与が行われた８及び２４時間後に採取した。糞のサンプルは、６ｇの糞当たり１０ｍＬの水で均質化された。全てのサンプルは分析まで−２０℃で保存した。試料は、代謝構造を決定するために、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳによって分析した。
【０２４０】
放射性末端動態研究：Ｃ−１４標識化化合物ＩＶを使用した個別の研究が、全体投与量及び静脈内投与後の化合物ＩＶの物質収支を定量化するために、ラットで実施された。カテーテルがＳＤラットの頚静脈に埋め込まれ、その動物は２４時間で正常な状態に戻された。動物は次にプラスチックのナルゲン（Nalgene）（登録商標）代謝ケージに収容された。適切な量の［１４Ｃ］化合物ＩＶがエタノールで溶解され、ＰＥＧ３００で希釈された。エタノールの最終濃度は、投与溶液の５%未満であった。１００μＣｉの［１４Ｃ］化合物ＩＶの静脈内注射は、頚静脈カテーテルを介して５分間に渡って行われた。糞及び尿のサンプルは、投与前及び投与が行われた８、２４及び４８時間後に採取された。動物は投与後２４及び４８時間後に犠牲にされ、肝臓、脾臓、心臓、腎臓、腸（小及び大）、肛門挙筋、膵臓、胃壁、腹部脂肪及び前立腺が摘出された。
【０２４１】
サンプル準備及びＬＣ／ＭＳ分析：血漿及び糞のサンプルが液液抽出法を使用して準備された。臓器サンプルは、重量を量り、メスによって細分化された。各臓器サンプルの一定分量が、１ｍＬのシンチゲスト（ScintiGest）（登録商標）組織可溶化剤（フィッシャーサイエンティフィック社（Fisher Scientific Company）、フェアローン、ニュージャージー州）に浸され、次にＰｒｏ２００ホモゲナイザー（プロサイエンティフィック社（Pro Scientific）、モンロー、コネチカット州）を使用して均質化された。サンプルは組織が溶解するまで、６０℃で培養された。組織、尿及び糞のサンプルの総放射能量は、ベックマンＬＳ６０００ＩＣ 液体シンチレーションカウンタ（ベックマンコールター社（Beckman-Coulter）、フラートン、カリフォルニア州）を使用して決定された。放射性の尿及び糞のサンプルは、親薬物及び代謝産物の分留物を確認するために逆相カラムを使用して分離も行われた。ＨＰＬＣからの溶離液分留物は、２分間隔で採取され、上述の通り測定された。非放射性の尿及び糞のサンプルは、ＬＣ／ＭＳｎによって濾過及び分析された。ＬＣ／ＭＳシステムはサーベイヤ（Surveyor）ＭＳポンプ、サーベイヤ（Surveyor）自動試料採取装置及びＬＣＱ Ｄｅｃａ ＭＳ（サーモフィニガン社（Thermo-Finnigan）、サンノゼ、カリフォルニア州）から構成されていた。未使用の糞及び尿のサンプルは、薬物関連ピークを確認するために使用済サンプルのバックグラウンドスペクトルから未使用の糞及び尿のサンプルのバックグラウンドスペクトルを引き去るために使用された。代謝産物識別ソフトは、代謝産物スペクトルのＭＳ及びＭＳ２を真正化合物ＩＶのＭＳ及びＭＳ２と比較することによって、代謝産物ピークを確認するために使用された。
【０２４２】
〈結果〉
【０２４３】
化合物ＩＶ及びそのアミン代謝産物のＭＳ２スペクトル。化合物ＩＶの断片化（ｍ／ｚ４４０）は、３つの主な娘イオンを生成した（ｍ／ｚ１５０、２６１及び２８９）（図１０Ａ）。代謝変換部位は、化合物ＩＶの断片化パターンをそのアミン代謝産物（ｍ／ｚ４１０）と比較することによって確認された（図１０Ｂ）。加えて、各代謝産物及び化合物ＩＶの主要な娘イオンの構造を更に検証するために、ＭＳ３スペクトルが採取された（図示せず）。
【０２４４】
ラット及び犬における提示された化合物ＩＶ断片化パターン及び代謝産物。代謝産物の構造は、代謝産物のピークのＬＣ／ＭＳ及びＬＣ／ＭＳ２断片化を使用して決定された。代謝産物の断片化パターンは、代謝変更部位を決定するために親化合物と比較された。その結果は表２に表示されている。各行の最後にある構造は、ＬＣ／ＭＳ２断片化によって集められた構造情報を示している。
（表２）
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2007538094.tif 000065
【０２４５】
〈放射性末端動態〉
【０２４６】
２４時間に渡るラットの尿及び糞のサンプルの放射線写真。
Ａ．尿（図１１Ａ）：２つの主要なピークが５及び４７分に見られる。５分時のピーク（加水分解生成物）は、注入投与量の２５％に相当し、４７分時の小さい方のピーク（アミン代謝産物）は、注入投与量の１１%に相当する。
Ｂ．糞（図１１Ｂ）：２つの主要なピークが４３及び５１分に見られ、３つの小さなピークが７、１５及び２７分に見られる。５１分時のピーク（親化合物）は、注入投与量の１８．５％に相当する。３つの小さなピーク（第２相代謝産物）は、注入投与量の０．８％に相当する。
【０２４７】
犬及びラットにおける提示された代謝プロフィール。化合物ＩＶの主要な代謝産物は、ラットの尿中に見られる加水分解生成物である。Ｎ−ディアクティレイテッド（N-deactylated）代謝産物（ｍ／ｚ３６８）は、犬に特有であった。全ての第２相代謝産物は、糞中に見られた。化合物ＩＶの代謝プロフィールは、図１２にまとめられている。
【０２４８】
〈結論〉
【０２４９】
化合物ＩＶは、選択的アンドロゲン受容体調節剤（ＳＡＲＭ）のためのインビトロスクリーニング中に確認された複数の新規非ステロイド性アンドロゲン剤のうち、最初のものであった。化合物ＩＶは、線形薬物動態及び経口バイオアベイラビリティに依存する投与量を明らかにした。これらの研究におけるデータは、ラット及び犬の尿中に見られる１％未満の不変の親薬物により、化合物ＩＶが頻繁に代謝されることを示している。尿及び糞の代謝プロフィールは、化合物ＩＶが第１相及び第２相代謝酵素の両方によって代謝されることを示した。
【０２５０】
化合物ＩＶの代謝及び最終動態研究は、以下のことを示した。
１．尿及び糞の代謝産物の両方が、アミド結合の開裂から形成される加水分解生成物となる主要な代謝産物を有している。
２．注入投与量の大部分が、親化合物として糞中に見られた。これは、親化合物又はグルクロネート代謝産物の胆汁中排泄に起因し得る。
３．犬の尿中に見られるＮ−ディアクティレイテッド代謝産物は、インビトロ転写活性化研究において、アンドロゲン受容体アンタゴニストになることが示された。しかしながら、ラットの放射性動態研究では、この代謝産物は有意な水準で発見されなかった。これはラットがＮ−アセチルトランフェラーゼを有する一方で、犬は有していないからである。
【０２５１】
つまり、化合物ＩＶの代謝は、ビカルタミドとは大きく異なっていた。化合物ＩＶのニトロ還元生成物は、ラット及び犬における主要な代謝産物であると確認された。ラット及び犬は同様な代謝プロフィールを示したが、犬に見られた化合物ＩＶのＮ−ディアクティレイテッド代謝産物は、ラットでは確認されなかった。このＮ−ディアクティレイテッド生成物は、インビトロ研究においてアンドロゲンアンタゴニストになることが示された。
【０２５２】
《実施例６：選択的アンドロゲン受容体調節剤（ＳＡＲＭ）の第１相代謝研究−化合物ＩＩＩ及びＩＶとヒト肝ミクロソーム》
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【０２５３】
〈目的〉
【０２５４】
化合物ＩＩＩ及びＩＶは、強力で有効な選択的アンドロゲン受容体調節剤（ＳＡＲＭ）である。このインビトロ研究の目的は、プールヒト肝ミクロソーム（ＨＬＭ）及び組み換え型ＣＹＰを使用して、主要な第１相代謝産物、及び化合物ＩＩＩ及びＩＶの第１相代謝に関与するシトクロムＰ４５０を確認することである。
【０２５５】
〈方法〉
【０２５６】
ヒト組み換え型ＣＹＰ スーパーサムス（Supersomes）（登録商標）による化合物ＩＩＩ及び化合物ＩＶのインビトロ代謝。ヒト組み換え型ＣＹＰスーパーサムス（Supersomes）（登録商標）は、ＢＤジェンテスト社（BD Gentest）（ウォバーン、マサチューセッツ州）から購入した。全ての試料は３７℃で解凍され、培養は反応バッファ内において、２μＭの化合物ＩＶに４０ｐｍｏｌｅの酵素を使用して、３７℃で２時間に渡って繰返し実施された。比較参照データは、酵素調製品が加えられなかったことを除いて、同じ方法で準備された。反応は、ＨＰＬＣ分析の内標準を含んだ冷えたアセトニトリル（１：１、ｖ：ｖ）の追加によって停止された。各培養における化合物ＩＩＩ及び化合物ＩＶの濃度は、ＨＰＬＣによって測定された。化合物ＩＩＩ及びＩＶの両方が、紫外吸光度２３０ｎｍにおいて検出された。
【０２５７】
ＨＬＭによる化合物ＩＩＩ及びＩＶのインビトロ代謝産物の確認。ヒト肝ミクロソームは、２μＭの化合物ＩＩＩ又は化合物ＩＶと共に、１００ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）及び１ｍＭのＮＡＤＰＨの中で、３７℃で２時間に渡り培養された。反応は冷えたアセトニトリル（１：１、ｖ：ｖ）の追加によって停止された。タンパク質の沈澱後、その上清は、培養中の主要な代謝産物を確認するためにＬＣ−ＭＳで分析された。
【０２５８】
ＨＬＭ及びヒト組み換え型ＣＹＰによるＭ１形成のための動態パラメータの測定。ＨＬＭ（０．２ｍｇ／ｍｌ）又は組み換え型ＣＹＰ（各反応当たり１０ｐｍｏｌｅ）が、ＮＡＤＰＨ（１ｍＭ）及び化合物ＩＶ（０．２μＭから１５０μＭ）と共に培養された。培養は、３７℃で１０分間維持され、反応はＨＰＬＣ分析の内標準を含んだ冷えたアセトニトリル（１：１、ｖ：ｖ）の追加によって停止された。各培養におけるＭ１の濃度は、ＨＰＬＣによって測定された。初期反応速度は、Ｍ１の出現に基づいて計算され、基質の初濃度と対比して示された。標準基質である、フェナセチン、ジクロフェナク、メフェニトイン、ブフラロール及びテストステロンも、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６及びＣＹＰ３Ａ４の活動を、それぞれ検査するため含まれていた。動態パラメータのＫｍ及びＶｍａｘは、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（バージョン４．０、ファーサイト社（Pharsight Corporation）、マウンテンビュー、カリフォルニア州）及びシグモイドＥｍａｘモデルを使用して、非線形回帰分析によって決定された。
【０２５９】
〈結果〉
【０２６０】
ヒト組み換え型ＣＹＰスーパーサムス（Supersomes）（登録商標）による化合物ＩＶのインビトロ代謝（ｎ＝２）。化合物ＩＶ（２μＭ）は、３７℃で２時間に渡って、ヒト組み換え型ＣＹＰスーパーサムス（Supersomes）（登録商標）（４０ｐｍｏｌｅ）と共に培養された。化合物ＩＶの消失が測定された。図１３に表されているように、培養後、化合物ＩＶの９５%超がヒトＣＹＰ３Ａ４によって代謝された。
【０２６１】
ヒト組み換え型ＣＹＰスーパーサムス（Supersomes）（登録商標）による化合物ＩＩＩのインビトロ代謝（ｎ＝２）。化合物ＩＩＩ（２μＭ）は、３７℃で２時間に渡って、ヒト組み換え型ＣＹＰスーパーサムス（Supersomes）（登録商標）（４０ｐｍｏｌｅ）と共に培養された。化合物ＩＩＩの消失が測定された。図１４に表されているように、培養後、化合物ＩＩＩの２０％がヒトＣＹＰ３Ａ４によって代謝された。
【０２６２】
ＨＬＭにおける化合物ＩＶのインビトロ代謝。図１５に示されているように、化合物の主要な第１相代謝は、アミノ基の脱アセチル化（Ｍ１）、アミド結合及び酸化の加水分解を含んでいる。
【０２６３】
ＨＬＭにおける化合物ＩＩＩのインビトロ代謝。図１６に示されているように、ＨＬＭにおける化合物ＩＩＩの主要なインビトロ代謝経路は酸化である。
【０２６４】
ＣＹＰによる化合物ＩＶからＭ１へのインビトロ代謝。３通りのＭ１の出現が測定された。ＣＹＰ３Ａ４の動態パラメータは、Ｋｍ（１．６５μＭ）及びＶｍａｘ（１９．７ｎｍｏｌｅ／（ｐｍｏｌｅ  ＣＹＰ＊分））であり、ＣＹＰを伴う化合物ＩＶ（０．２μＭから１００μＭ）の培養後に決定された。低濃度の化合物ＩＶが、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６及びＣＹＰ１Ａ２と共に培養された時、Ｍ１は検出されなかった。検査された濃度において、化合物ＩＶがＣＹＰ２Ｃ９と共に培養された時、Ｍ１は形成されなかった。その結果は図１７に示されている。
【０２６５】
ＨＬＭによる化合物ＩＶからＭ１へのインビトロ代謝（０．２ｍｇ／ｍｌ）。３通りのＭ１の出現が測定された。動態パラメータのＫｍ（５８．４μＭ）及びＶｍａｘ（３４８．６ｐｍｏｌｅ／（ｍｇ  タンパク質＊分））は、ＨＬＭを伴う化合物ＩＶ（２μＭから１５０μＭ）の培養後に決定された。その結果は、図１８に示されている。
【０２６６】
〈結論〉
【０２６７】
シトクロムＰ４５０媒介酸化は、ＨＬＭ中の化合物ＩＩＩの代謝の主要な経路である。ＣＹＰ３Ａ４媒介脱アセチル化は、ＨＬＭ中の化合物ＩＶの代謝の主要な経路である。酸化及び加水分解も発生するが、それほどではない。
【０２６８】
組み換え型ＣＹＰ３Ａ４を伴う化合物ＩＶの推定Ｋｍ  １．６５μＭは、ＨＬＭ中のＭ１形成のための推定Ｋｍよりも低い（５８．４μＭ、図１８）。これは高濃度の化合物ＩＶにおいて、Ｍ１形成に寄与するＣＹＰ２Ｃ１９，２Ｄ６及び１Ａ２が存在することに起因する。
【０２６９】
ＣＹＰ３Ａ４は、臨床的に関連する濃度において、化合物ＩＶの代謝に寄与する主要な第１相酵素になることがある。
【０２７０】
つまり、化合物ＩＩＩ及びＩＶは、組織選択的な男性ホルモン作用及び同化作用を実証する非ステロイド系ＳＡＲＭである（JPET 304(3):1334-1340, 2003）。ヒト肝ミクロソームによる以前のインビトロ第１相代謝研究は、化合物ＩＩＩ（２μＭ）及び化合物ＩＶ（２μＭ）の両方が、主にＣＹＰ３Ａ４によって代謝されることを示した。
【０２７１】
《実施例７：人、ラット及び犬における選択的アンドロゲン受容体調節剤（ＳＡＲＭ）》
【０２７２】
〈物質及び方法〉
【０２７３】
物質：化合物Ｓ４及びＭ１、及び１４Ｃ−Ｓ４は、我々の研究室で合成された。組み換え型ヒトＣＹＰ酵素（スーパーサム（Supersome）（登録商標））、プールヒト、ラット及び犬肝ミクロソーム、シトソル及びＳ９調製品は、ＢＤジェンテスト社（ウォバーン、マサチューセッツ州）から購入した。４’−ヒドロキシジクロフェナク、４’−ヒドロキシメフェニトイン、メフェニトイン、１’−ヒドロキシブフラロール及びブフラロールも、ＢＤジェンテスト社から購入した。エコライト（EcoLite）（登録商標）（＋）シンチレーションカクテルは、ＩＣＮリサーチプロダクツディビジョン社（ICN Research Products Division）（コスタメサ、カリフォルニア州）から購入した。それ以外の全ての薬品及び試薬は、シグマケミカル社（Sigma Chemical Company）（セントルイス、ミズーリ州）から購入した。全ての分析カラムは、ウォーターズ社（Waters Corporation）（ミルフォード、マサチューセッツ州）から購入した。ＮＨＳビオチンは、ピアース社（PIERCE）（ロックフォード、イリノイ州）から購入した。
【０２７４】
インビトロ代謝反応：インビトロ酵素反応は、ＢＤジェンテスト社によって提供された説明書に従って実施された。全ての第１相反応は、１００ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中に１ｍＭのＮＡＤＰＨ（ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸、還元型）が存在する中で、３７℃で何回も実施された。肝ミクロソーム、シトソル又は肝臓Ｓ９調製品には、２ｍｇ／ｍｌの総タンパク質濃度が反応に使用され、組み換え型ＣＹＰ酵素は、２００ｐｍｏｌｅ／ｍｌの終末濃度で使用された。一般に、代謝産物確認のための培養時間は２時間だったが、酵素の動態パラメータを決定するための培養時間は１０分だった。動態パラメータのＫｍ及びＶｍａｘは、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（バージョン４．０、ファーサイト社（Pharsight Corporation）、マウンテンビュー、カリフォルニア州）及びシグモイドＥｍａｘモデルを使用して、非線形回帰分析によって決定された。反応は、ＨＰＬＣ分析の内標準（ＣＭ−ＩＩ−８７、Ｓ４の構造的類似体）を含んだ冷えたアセトニトリル（ｖ：ｖ／１：１）を追加することによって停止された。反応混合物中に含まれるタンパク質は、遠心分離（＞１６，０００ｇ、４℃で３０分）によって沈澱され、その上清は適切な移動相で希釈されるか、或いはＨＰＬＣ分析に直接使用される。Ｓ４は、４５％アセトニトリルの移動相及び脱イオン水中の５０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ４．８）により、１．０ｍｌ／分の流速にて、逆相カラム（シンメトリー（Symmetry）（登録商標）、Ｃ８、３．９ｘ１５０ｍｍ）で分離され、紫外吸光度２３０ｎｍにおいて検出された。
【０２７５】
Ｓ４の第１相代謝産物の確認：１４Ｃ−Ｓ４（２μＭ）は、ヒト、ラット及び犬肝調製品によって、３７℃で２時間に渡って培養された。アセトニトリル（ｖ：ｖ／１：１）を伴ったタンパク質の沈澱後、その上清に残された有機相は、ニトロゲン存在下で気化し、結果的に濃縮されたサンプルがＨＰＬＣ分析に使用された。１４Ｃ−Ｓ４及びその代謝産物は、脱イオン水中のアセトニトリルの移動相と共に、１．０ｍｌ／ｍｉｎの流速にて、逆相カラム（ＮｏｖａＰａｋ、Ｃ１８、３．０ｘ３００ｍｍ）を使用して分離された。初期移動相は０％のアセトニトリルを含んでおり、この組成は３分間維持された。アセトニトリルの割合は、次の７分に渡って直線的に５%まで増加し、更にその後の５分間で３０%まで増加した。アセトニトリルの割合は、更に次の１５分に渡って徐々に３５%まで増加し、そしてその後の５分間で急速に９５%まで変化し、この組成が５分間維持された。最終的に、アセトニトリルの割合は、最後の５分で０％に戻った。ＨＰＬＣから溶出された分留物（分留物当たり３０秒）が採取され、各分留物における総放射能（ＤＰＭ）は、エコライト（EcoLite）（登録商標）（＋）シンチレーションカクテルで計測された。
【０２７６】
同様な実験が非放射性標識化されたＳ４を使用して実施された。この場合、見込代謝産物を含む溶出分留物は、既に説明されているような（Wu et al., 2004）、負イオンエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ−）質量分析を用いて分析された（サーモフィニガン社（ThermoFinnigan）、ＬＣＱ  ＤＥＣＡイオントラップ質量分析計、サンノゼ、カリフォルニア州）。ＭＳシステムは、加熱毛細血管温度が２００℃、スプレー電圧が３．５ｋＶ、シースガス及び補助ガス流速が、それぞれ６０及び２０ｍｌ／ｍｉｎに設定された。これら以外の全てのパラメータは、Ｓ４のイオン化及び検出のための最適な条件に設定された。データ取得は、Ｘｃａｌｉｂｕｒソフトウェア（修正版Ｂ、サーモクエスト社（ThermoQuest Corp）、サンノゼ、カリフォルニア州）によって制御された。ＭＳ２分析のため、Ｓ４又は代謝産物イオンは１．５ｍ／ｚの幅で単離され、１５から５０%までの範囲のフラグメンテーションエネルギを使用して断片化された。
【０２７７】
加水分解代謝産物のビオチニレーション：勾配法実行の最初の３分間からのＨＰＬＣ溶出液は、上述の通り、ニトロゲン存在下で採取され、濃縮された。ＮＨＳ−ビオチンはＤＭＳＯで溶解され、２０ｍＭの終末濃度にするために濃縮ＨＰＬＣ溶出液（１：１０／ｖ：ｖ）に加えられた。ビオチニレーション反応は、室温で１時間実施された。反応混合物は、次に遠心分離機にかけられ、その上清は、上述の説明と同条件を使用してＨＰＬＣ分析された。
【０２７８】
アンドロゲン受容体結合分析：アセチル基を取除いた代謝産物のＭ１の結合親和力は、既に説明されているような（Mukherjee et al., 1996）、去勢されたオスのＳＤラット（約２５０ｇ）の腹側前立腺から作られる細胞質ＡＲを用いて決定された。
【０２７９】
転写活性化分析：ＡＲ媒介転写活性化に影響を与える化合物の能力は、既に説明されているような（Yin et. al., 2003b）、共トランスフェクションシステムを用いて検査された。Ｍ１による転写活性化は、０．１から１０００ｎＭの範囲の複合濃度で測定され、０．１ｎＭのＤＨＴで観察される転写活性化の割合として報告された。
【０２８０】
〈結果〉
【０２８１】
Ｓ４の第１相代謝産物の確認：１４Ｃ−Ｓ４（２μＭ）は、肝Ｓ９と共に、３７℃で２時間培養され、１４Ｃ−代謝産物はＨＰＬＣで分離された。濃度は、ラットの全身オートラジオグラフィーによって決定されるとして、薬理学的に関連した投与量におけるＳ４の肝臓の濃度に従って選択された（データは示さず）。同様の実験が、非放射性標識化されたＳ４を使用して繰り返され、１４Ｃ−代謝産物に対応する分留物が採取され、ＭＳ分析された。
【０２８２】
４通りの主要な経路が確認された（図１９Ａ）。（１）Ｂ環アセトアミド基の脱アセチル化、（２）アミド結合の加水分解、（３）Ａ環リングニトロ基の還元、及び（４）Ｂ芳香環の酸化。確認された代謝産物に対応するラジオクロマトグラフは、図９Ｂに図示されている。ＭＳ２スペクトル、Ｓ４及びその代謝産物の提示された断片化パターンは、図２０、２１及び２３に示されている。脱アセチル化生成物のＭ１、加水分解生成物のＭ２、Ｍ２−ＯＨ及びＭ３、及び還元生成物のＭ４は、肝Ｓ９におけるＳ４の主要なインビトロ代謝産物であった。Ｓ４及びＭ１は、Ｂ環アセトアミド基の脱アセチル化のため、１５０ｍ／ｚにてフラグメントイオンがＭ１  ＭＳ２スペクトルに存在しないことを除けば、よく似た断片化パターンを有していた（図２０）。同様なパターンは、Ｍ４及びＭ５においても観察された。
【０２８３】
これらの主要な代謝産物の他に、対応酸化生成物のＳ４−ＯＨ、Ｍ１−ＯＨ及びＭ４−ＯＨも観察された。図１９Ａ及び図２１ＡからＣに示されているように、Ｂ環上の水酸化位置の違いに起因し得る、Ｓ４の複合酸化生成物が確認された。Ｓ４のＡ環水酸化生成物は観察されなかった。しかしながら、Ｓ４とは異なって、Ｍ１及びＭ４の酸化はＡ環のみに観察され、Ｂ環では観察されなかった。図２１Ｄ及びＥに示されているように、Ｍ１−ＯＨ及びＭ４−ＯＨの断片化パターンも劇的に変化した。また、２つの異なるＭ１酸化生成物が、ＨＰＬＣで分離されることによって観察された（図１９Ｂ）。しかしながら、２つの生成物は、図２１Ｄに示されているような同じ断片化パターンを有していた。
【０２８４】
確認された全ての代謝産物の中で、加水分解生成物は、カルボキシル基が存在し、そのほとんどが溶媒先端と共溶出されるため、最も親水性があった（図１９Ｂ）。特に、Ｍ３はＢ環にアミノ酸の組成を擬態するアミン基を含むため、代謝産物の分析をより困難にする。分子の分離及び検出を促進するため、我々は対応ＨＰＬＣ溶出液を採取及び濃縮し、芳香アミン基を変更した。ＮＨＳビオチンは、明確に第１級アミン基を変更する一般的なタンパク質標識試薬である（図２２Ａ）。Ｂ環アミン基のビオチニレーションは、図２２Ｂのクロマトグラムに示されているように、芳香アミン基が含まれた加水分解代謝産物のＨＰＬＣ分離を大いに促進した。一方で、Ｂ環に無傷のアセトアミド基を伴う加水分解生成物のＭ３は変更されず、溶媒先端と共溶出したままであった。Ｍ３、Ｍ３−ＯＨ及びＭ２のビオチニレーションされた代謝産物のＭＳ２断片化パターンは、図２３に示されている。
【０２８５】
Ｍ３は変更されなかったが、酸性状態は、カルボキシル基のイオン化を減少し、カラムでのその保持時間を増加し得る一方で、アミン基を伴う加水分解生成物は高度にイオン化され、溶媒先端と共に溶出され得る。Ｍ３を含んだＨＰＬＣ溶出（最初の３分間）は、（上述されているように）中性のｐＨの下で分離されるので、ニトロゲン存在下で採取され、濃縮された。Ｍ３は、ｐＨ４．０（０．２％酢酸）にて同様なＨＰＬＣ条件を使用して、溶媒先端から更に分離され、１５分で溶出された（データは示さず）。
【０２８６】
異種における第１相代謝産物の特性：異種におけるＳ４の代謝プロフィールは、ヒト、ラット及び犬肝Ｓ９を使用して特徴付けられ、比較された。同様な総タンパク濃度（２ｍｇ／ｍｌ）が、全ての反応に使用された。異なる反応混合物における各分留物の相対存在量は、代謝された１４Ｃ−Ｓ４の割合として図２４Ａに表示されている。同様に、４通りの代謝経路の全てが、検査された種の中に観察された。優勢代謝産物のＭ１は、ヒト、ラット及び犬Ｓ９において、代謝されたＳ４の６１％、４４％及び５８％をそれぞれ占めていた。しかしながら、他の経路の相対的寄与率は、これら３種では全く異なっていた。
【０２８７】
ヒトＳ９において、脱アセチル化を除く、他の３通りの代謝経路は、Ｓ４の代謝に対してほぼ同様に寄与しており、加水分解、還元及び酸化において、代謝されたＳ４の１１％、１６％及び１２％をそれぞれ占めていた。しかしながら、ラット（７％）及び犬（２％）と比較して、Ｓ４の還元は、Ｓ４代謝において比較的大きな範囲に寄与していた（１６％）。
【０２８８】
一方で、加水分解はラットＳ９によるＳ４代謝において、より大きな役割を果たし、代謝されたＳ４の２７％を占めた。これに対するヒト及び犬Ｓ９は、１１％及び１４％であった。更に興味深いことに、Ｍ３はラットＳ９においてのみ観察された加水分解生成物である一方で、ヒト及び犬Ｓ９による加水分解生成物は、Ｍ２、Ｍ３及びそれらの酸化生成物を含んでおり、ラットＳ９における加水分解は、脱アセチル化または酸化よりも迅速なプロセスであることが示された。
【０２８９】
また、Ｓ４及びＭ１の酸化は、ラット及び犬Ｓ９により代謝されたＳ４の２０％超を占めたが、ヒトＳ９により代謝されたＳ４では１２％のみであった。酸化加水分解代謝産物が、ラットＳ９に比較して犬Ｓ９の培養でより多く観察される事実を考慮すると、犬Ｓ９では、酸化はＳ４代謝に対してより顕著に寄与し得る。
【０２９０】
一般に、検査された３種で観察された主要な代謝経路は同様であった。脱アセチル化生成物のＭ１は、Ｓ４の主要な第１相代謝産物であり、加水分解、還元及び酸化生成物も、３種全てにおいて観察された。
【０２９１】
異なる細胞内分留物におけるＳ４の第１相代謝の特性：Ｓ４の第１相代謝は、プールヒト肝ミクロソーム（ＨＬＭ）及びヒト肝シトソルを含む、ヒト肝調製品の異なる細胞内分留物を伴う培養で更に特徴付けられた。ＨＬＭ及びヒト肝シトソル分留物を伴った培養後のＳ４の代謝プロフィールは、劇的に異なった（図２４Ｂ）。第１相酵素の大部分がＨＬＭに収容されているので、ＨＬＭを伴った反応において観察された代謝プロフィールは、上述されたような、ヒト肝Ｓ９で観察されたものとほぼ同様であった（図２４Ａ）。しかしながら、ヒト肝シトソルの存在下では、脱アセチル生成物のＭ１は、代謝されたＳ４のわずか１６％を占めるのみであり、これに対してＨＬＭ培養での観察では５３％だったので、もはや主要な代謝産物として観察されなかった。それとは逆に、還元生成物のＭ４は、ヒト肝シトソルにより代謝されたＳ４の５０％超を占めており、これに対してＨＬＭ培養での観察では１１％であった。これらの結果は、Ｓ４がミクロソーム酵素によって主としてアセチル基を取除き得る一方で、ヒト肝ではシトソル酵素によって主に還元され得ることを示唆している。
【０２９２】
アミド結合加水分解反応は、シトソル分留物に含まれるエステラーゼによって触媒されると一般に考えられていたが、Ｓ４の加水分解は、ＨＬＭによるＳ４代謝に２０％寄与しており、シトソル分留物による９％の寄与と比較して、より大きな範囲に寄与していた。また、脱アセチル化反応はミクロソーム分留物で行われるのが好ましいので、Ｍ３はヒト肝シトソル培養における主要な加水分解生成物となる。その一方で、同様な量のアセチル化（Ｍ３）及び脱アセチル化加水分解生成物（Ｍ２及びＭ２−ＯＨ）が、ＨＬＭ培養で観察された。従って、ミクロソーム分留物中のシトクロムＰ４５０酵素は、Ｓ４の加水分解に寄与し得ると推測することは妥当である。
【０２９３】
Ｓ４の第１相代謝に関与する主要なＣＹＰ酵素を更に確認するため、ＣＹＰ１Ａ２、２Ｃ９、２Ｃ１９、２Ｄ６及び３Ａ４を含む５つの主要なヒトＣＹＰ酵素は、Ｓ４（２μＭ）と３７℃で２時間培養した後、Ｓ４の消失を測定することによって検査された。
検査された５つの酵素の中で、ＣＹＰ３Ａ４が、２μＭでＳ４代謝に関与した主要なＣＹＰ酵素であると確認された（データは示さず）。１４Ｃ−Ｓ４（２μＭ）と培養された時、ＣＹＰ３Ａ４によるＳ４の代謝プロフィールは、ＨＬＭとの培養後に観察されたものと同様であった（図２４Ｂ）。組み換え型ヒトＣＹＰ３Ａ４は、主に脱アセチル化、加水分解及び酸化反応を触媒し、代謝されたＳ４の４３％、３０％及び２４％をそれぞれ占めていた。
【０２９４】
組み換え型ヒトＣＹＰ３Ａ４によるＳ４代謝の動態：Ｓ４の消失は、ＣＹＰ３Ａ４の酵素動態パラメータを推定するための当初測定として決定された（図２４）。Ｓ４はＣＹＰ３Ａ４（１６．１μＭ）に対して、テストステロン（１３μＭ）と同様な親和性を示したが、テストステロン（７．６ｐｍｏｌｅ／（ｐｍｏｌｅ＊分）、データは示さず）と比較して低いＶｍａｘ（１．６ｐｍｏｌｅ／（ｐｍｏｌｅ＊分））であった。
【０２９５】
Ｓ４の活性代謝産物としてのＭ１の特性：Ｓ４脱アセチル化生成物のＭ１は、活性基のコア構造であると支持したが、ＡＲと相互作用することによって、活性代謝産物として機能し得ることも示唆している。インビトロ受容体結合分析は、Ｍ１がＳ４（Ｋｉ、４．０ｎＭ）と比較して比較的低い親和性（Ｋｉ、２４．６ｎＭ）でＡＲを結合することを示した（図２５）。更に、それがインビトロ転写活性化分析において、０．１ｎＭのＤＨＴと比較して、１μＭで４２％の相対アゴニスト活性を伴って部分的アゴニストとして機能した（図２６）。これらの結果は、Ｍ１がＡＲを活性化し、生体内Ｓ４の薬理活性に寄与し得ることも示唆している。
【０２９６】
≪実施例８：プロパンアミド選択的アンドロゲン受容体モジュレータ（ＳＡＲＭ）の代謝≫
【０２９７】
＜材料及び方法＞
【０２９８】
＜化学薬品及び試薬＞
【０２９９】
Ｓ−１即ち３−（４−フルオロフェノキシ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−プロパンアミドは、前述の方法（Marhefka et al., 2004）を用いて合成した。２つの内標準物質、Ｓ−１の４−クロロ類似体及び４−ブロモ類似体も、これらの手順を用いて入手した。３−（４−フルオロフェノキシ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピオン酸は類似の手順を用いて合成した。化学純度は、元素分析、質量分析法、及びプロトン磁気共鳴スペクトル法を用いて確認した。ＨＰＬＣグレードのアセトニトリル、水及び酢酸はフィッシャー・サイエンティフィック社（Fisher Scientific (Fair Lawn, NJ)）から購入した。ポリエチレングリコール−３００（ＰＥＧ−３００）及びジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）はシグマ・ケミカル社（Sigma Chemical Company (St. Louis, MO)）から入手した。エタノールはファーマコ・ロダクツ社（Pharmaco Products Inc. (Brookfield,CT)）から購入した。
【０３００】
＜動物及び手順＞
【０３０１】
オハイオ州立大学の実験動物管理使用委員会（Institutional Laboratory Animal Care and Use Committee）が承認した動物実験計画に基づいて、ハーラン・バイオサイエンス社（Harlan Bioscience (Indianapolis,IN)）から購入した体重約２５０ｇのオスＳＤラット群を維持した。動物は、自由に食料及び水を摂取させ、１２時間の明／暗サイクルで維持した。投薬の２０時間前に各ラットの右頚静脈にカテーテルを入れ、血液（Harlan Teklad 22/5 rodent diet）を除いた。ラットには自由に水を摂取させ、用量投与の直後に体重を計測した。食料は、投薬の１２時間後に戻した。４０匹のオスＳＤラットを無作為に処置群に割り振り、０．１、１、１０、または３０ｍｇ／ｋｇの用量レベルで静脈内または経口投与のいずれかをされた。投薬溶液はＰＥＧ−３００（ｖ／ｖ）に５％のＤＭＳＯを溶かしたものを投薬の１２時間前に調整し、−２０℃で保存した。頚静脈カテーテルは、静脈内用量の投与直後にヘパリン生理食塩水（１００Ｕ／ｍＬ、投薬溶液と等量）の水溶液により洗い流した。静脈内経路での投与から５分、１０分、２０分、３０分、６０分、１２０分、２４０分、４８０分、７２０分、１４４０分後に連続血液サンプルを収集したのに対し、経口胃管栄養法による投薬から３０分、６０分、９０分、１８０分、２４０分、３６０分、４８０分、７２０分、１４４０分、１８００分、２１６０分後に血液サンプルを採取した。直ちに血漿を遠心（８００ｇで１０分間、４℃で）により分離し、分析までサンプルを−２０℃で保存した。ＰＥＧ−３００（ｖ／ｖ）に溶解した５％のＤＭＳＯ及びＰＥＧ−３００に溶解した５または１０％のエタノールからなる経口投薬溶液を１０ｍｇ／ｋｇの用量レベルで静脈内経路及び経口経路を経て用い、Ｓ−１の経口吸収またはクリアランスへの溶解度または賦形剤の効果を調べた。代謝プロファイリングのために、Ｓ−１の静脈内用量（５０ｍｇ／ｋｇ）をオスＳＤラット（ｎ＝２）に投与した。代謝ケージを用いて尿及び糞便標本を６〜１２時間間隔で最大４８時間収集し、分析のための十分な量の尿及び代謝産物濃度を与えかつ室温で劣化から保護するために分析前に尿及び糞便標本を組み合わせた。尿及び糞便標本は全て分析まで−８０℃で保存した。ＨＰＬＣ法のための抽出手順。ラット血漿の一定分量（１００μＬ）を内標準物質（３０μＬ、Ｓ−１の４−ブロモ類似体をＩｓｔｄとして用いた）に混ぜ、１ｍＬのアセトニトリルと混合した。サンプルを１６，１００ｇで１０分間遠心した。上清を取り除き、清潔な遠心管において窒素中で蒸発乾固した。残分を１５０μＬのＨＰＬＣ移動相で再構成し、１６，１００ｇで５分間遠心し、１００μＬの一定分量をＨＰＬＣに注入した。
【０３０２】
血漿中のＳ−１のＨＰＬＣ−ＵＶ測定：妥当性確認されたＨＰＬＣ法を用いて、１０及び３０ｍｇ／ｋｇの静脈内及び経口用量群に対する血漿濃度を決定した。５１５型ＨＰＬＣポンプ（ウォーターズ社（Waters）製）、７１７プラス型オートサンプラー（ウォーターズ社製）、４８６型吸光度検出器（ウォーターズ社製）を用いてＨＰＬＣ分析を行った。アセトニトリル／Ｈ２Ｏ（５４：４６ｖ／ｖ）の移動相を用いてウォーターズ社製ノバパック（Nova-pak）Ｃ１８カラム（３．９×１５０ｍｍ、４μｍ）（Milford, MA）上で１ｍＬ／分の流速でＨＰＬＣ分離を行った。検出波長は２９７ｎｍに設定した。ミレニアム（Millennium）ソフトウェア（ウォーターズ社製）によって分析データを取得した。ＨＰＬＣアッセイの定量化の限界は０．０５μｇ／ｍＬであった。０．０５〜１００μｇ／ｍＬの標準較正曲線を作成した。日内及び日間精密度は１．８ないし１８．２％の変動係数内にあり、正確さは名目上の濃度の９０．０ないし９２．４％であった。ラット血漿におけるＳ−１の相対回収率は、９０．５ないし９７．５％であった。
【０３０３】
ＬＣ／ＭＳアッセイのための抽出手順：ラット血漿の一定分量（１００μＬ）を内標準物質（Ｉｓｔｄ）（３０μＬ、Ｓ−１の４−クロロ類似体をＩｓｔｄとして用いた）に混ぜ、１ｍＬのアセトニトリルと混合した。サンプルを１６，１００ｇで１０分間遠心した。上清を取り除き、１ｍＬの水と混合し、それから１３ｍＬの抽出チューブにおいて酢酸エチル（７．５ｍＬ）で抽出した。サンプルを室温で１０分間振盪し、次に１，５４０ｇで１０分間遠心した。有機上清を取り除き、清潔な試験管において窒素中で蒸発乾固した。残分を１５０μＬの初期移動相で再構成し、１６，１００ｇで５分間遠心し、１００μＬの一定分量をＬＣ／ＭＳに注入した。
【０３０４】
血漿中のＳ−１のＬＣ／ＭＳ測定：妥当性確認されたＨＰＬＣ法を用いて１．０及び０．１ｍｇ／ｋｇの静脈内及び経口用量群に対する血漿濃度を決定した。ＥＳＩ源及び次の条件を用いてＬＣ／ＭＳ（アジレント（Agilent）１１００シリーズ, Palo Alto, CA）分析を行った。その条件とは、乾燥ガス流１２Ｌ／分、ネブライザ圧４５ｐｓｉ、乾燥ガス温度３５０℃、キャピラリー電圧１５００ｖ、フラグメンタ電圧１８０ｖである。他のＬＣ／ＭＳパラメータは全てデフォルトにセットした。Ｓ−１及びＩｓｔｄの検出のために負イオンモードでそれぞれｍ／ｚ４０１．１０及び４１７．１０での単一イオンモニタリング（ＳＩＭ）を用いた。個々のサンプルは、分析中２５℃で維持したモノリシックカラム（SpeedRod RP 18e, ４．６×５０ｍｍ，Merck KGaA, Darmstadt, Germany）上へ注入した。アセトニトリル（Ａ）及び０．１％酢酸水（Ｂ）から構成されるグラジエント移動相を用いて１ｍＬ／分の流速で所定の化合物を干渉から分離した。移動相の構成は、各クロマトグラフィ処理の最初の５分間は成分Ａ及びＢの５０：５０混合物であったが、５．１分から７．５分までは直線勾配でBを１００％に増やし、その後７．６分でＢを５０％に戻した。初期移動相とのカラムの平衡時間は１．５分であった。ケムステーション（ChemStation）ソフトウェアによって分析データを取得した。ＬＣ／ＭＳアッセイの定量化の限界は０．３ｎｇ／ｍＬであった。０．３〜３０ｎｇ／ｍＬの標準較正曲線を作成した。日内及び日間精密度は０．４ないし１２．４％の変動係数内にあり、正確さは名目上の濃度の８７．１ないし１０４．８％であった。ラット血漿におけるＳ−１の相対回収率は、９９．４ないし１０５．７％であった。
【０３０５】
薬物動態データ分析：ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ ４．０（Pharsight Corporation, Mountain View, CA）を用いて非コンパートメント解析により血漿濃度−時間データを解析した。時間０から無限大までの血漿濃度−時間曲線の曲線下面積（ＡＵＣ０−∞）を無限大まで補外して台形公式により計算した。消失半減期（ｔ１／２）を０．６９３／λｚとして計算した。ここで、λｚは消失半減期排出定数である。血漿クリアランス（ＣＬ）はＣＬ＝ｄｏｓｅｉ．ｖ．／ＡＵＣｉ．ｖ．，０−∞として計算した。ここで、ｄｏｓｅｉ．ｖ．、ＡＵＣｉ．ｖ．，０−∞はそれぞれ静脈内用量、時間０から無限大までの対応する曲線下面積である。血漿濃度−時間曲線の目視によって経口用量群における最高血漿濃度（Ｃｍａｘ）及び最高血漿濃度到達時間（Ｔｍａｘ）を求めた。平衡状態での見かけの分布容積（Ｖｄｓｓ）をＶｄｓｓ＝ＣＬ・ＭＲＴとして計算した。ここで、ＭＲＴは静脈内大量瞬時投与量後の平均滞留時間である。ＭＲＴはＭＲＴ＝（ＡＵＭＣｉ．ｖ．，０−∞）／（ＡＵＣｉ．ｖ．，０−∞）として計算した。ここで、ＡＵＭＣｉ．ｖ．，０−∞は、無限大まで補外された血漿濃度−時間曲線のファーストモーメント曲線下面積である。各用量に対する経口バイオアベイラビリティ（Ｆ）の計算はＦ＝（ＡＵＣｐ．ｏ．×ｄｏｓｅｉ．ｖ．）／（ＡＵＣｉ．ｖ．×ｄｏｓｅｐ．ｏ．）を用いて行った。ここで、ｄｏｓｅｐ．ｏ．、ｄｏｓｅｉ．ｖ．、ＡＵＣｉ．ｖ．、ＡＵＣｐ．ｏ．はそれぞれ、平均経口用量、平均静脈内用量、各用量での時間０から無限大までの対応する平均曲線下面積である。
【０３０６】
統計解析：１要因分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用いて統計解析を行った。ｐ＜０．０５は統計学的有意差と考えた。
【０３０７】
代謝産物の同定：尿標本を解凍し、尿サンプル量の５倍の量の酢酸エチルで抽出した。抽出操作を２回繰り返し、３５℃でロータリーエバポレータ上にて混合性有機相及び混合性水相を蒸発させた。糞便標本を解凍し、３０ｍＬのメタノールで抽出した。メタノールの画分を１，５４０ｇで１０分間遠心し、上清を窒素で蒸発乾固した。残分を３ｍＬのメタノール／Ｈ２Ｏ（５０：５０）で溶解させ、７．５ｍＬの酢酸エチルで抽出した。抽出操作を２回繰り返した。窒素を用いて混合性有機相及び混合性水相を蒸発乾固した。有機相及び水相からの残分は、それぞれＡＣＮ：Ｈ２Ｏ（５０：５０）及びＡＣＮ：Ｈ２Ｏ（１０：９０）を用いて溶解させた。各溶液をアクロディスク（Acrodisc）シリンジフィルタ（０．２ｍ，１３ｍｍ；Pall Corporation, East Hills, NY）を通して濾過した。負イオンエレクトロスプレーイオン化モードを用いて２０マイクロリットルの各画分をサーモフィニガン（Thermo Finnigan）ＬＣＱＤＥＣＡ四重極イオントラップ型質量分析計（Thermo Electron, Franklin, MA）に直接注入した。０．２ｍＬ／分の流速でＸＴｅｒｒａガードカラム（２．１×１５０ｍｍ，３．５μｍ）を有するウォーターズ社製ＸＴｅｒｒａＣ１８カラム（２．１×１５０ｍｍ，３．５μｍ）で、１ｍＬ／分の流速でアセトニトリル（Ａ）及び水（Ｂ）から構成されるグラジエント移動相を用いてＨＰＬＣ分離を行った。移動相は、各クロマトグラフィ処理の最初の１０分間は成分Ａ及びＢの９０：１０混合物から構成され、１０分から６０分までは直線勾配でＢを６０％に増やし、その後６０分から６５分まではＢを更に９５％に増やし、最後に７６分でＢを１０％に戻した。１０分間カラムを初期移動相と平衡した。いくつかの例では、Ａ及びＢの両方に０．１％の酢酸が含まれる第２の移動相系を用いた。両移動相系において同じ勾配プログラムを用いた。細管式（キャピラリー）ヒータを１８０℃または２２５℃に設定し、スプレー電圧を３．６ｋＶにした。毎秒ｍ／ｚ１００から９００までスキャンするようにフルスキャン分析をプログラムした。
【０３０８】
＜結果＞
【０３０９】
以下の構造
2007538094.tif 000067
を有するＳ−１の薬物動態をオスＳＤラットにおいて評価した。Ｓ−１の静脈内及び経口投与後の血漿濃度−時間曲線を図２７に示す。血漿濃度は、Ｓ−１の静脈内投与後に多指数関数的に減少した。Ｓ−１の全身クリアランス（ＣＬ）は、静脈内投与による０．１、１、１０、３０ｍｇ／ｋｇの用量レベルで、それぞれ５．２、４．４、４．０、３．６ｍＬ／分／ｋｇであった。より高用量ではＣＬ値が低くなる傾向があるが、統計分析は４つの用量レベルからのＣＬ値間に有意差がないことを明らかにし、Ｓ−１のＣＬが用量範囲（即ち０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ）にわたり用量依存的でないことを実証した。我々の実験室で行った以前のインビボ研究は、去勢ラットにおいて同化作用を示すかまたは無傷ラットにおいて前立腺重量を選択的に減少させることが要求される用量が、それぞれ皮下浸透圧ポンプまたは毎日の皮下注射により、２５ｍｇ／ｋｇ／日以下であることを示した。従って、Ｓ−１は、薬理学的投与量範囲内で直線的な薬物動態を示した。Ｓ−１の半減期（ｔ１／２）は、経口経路による対応する用量レベル０．１、１、１０、３０ｍｇ／ｋｇで２１７、２４１、２４８、３１５分間であった。ＡＵＣは用量に比例して増加した。Ｓ−１の定常状態分布容積（Ｖｓｓ）は、調べた４つの静脈内用量レベルで約１．５Ｌ／ｋｇであった。このことはＳ−１が程よく分布されたことを示唆している。尿排泄データは、当該用量の０．４％以下が変わらず排泄されたことを示し、Ｓ−１の腎クリアランスを無視してよいことを示している。Ｓ−１のＣＬ５．２ｍＬ／分／ｋｇ、ラットの肝血流量５５．２ｍＬ／分／ｋｇに基づけば、Ｓ−１の肝抽出率（hepaticextraction ratio）は０．１以下である。このことは、初回通過肝代謝が経口投与後Ｓ−１への曝露を著しくは制限しないことを示唆した。Ｓ−１のＴｍａｘは、経口投与後４．６時間から８．５時間の範囲にあった。このことは、Ｓ−１がゆっくり吸収されたことを示している。経口投与後のＳ−１の消失半減期を、対応する用量レベルでＳ−１の静脈内投与後に観察されたものと比較した。Ｓ−１の経口バイオアベイラビリティは約６０％であり、用量によって変わらなかった。
【０３１０】
１要因分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用いて統計解析を行った。ｐ＜０．０５は統計学的有意差と考えた。ＰＥＧ−３００とＤＭＳＯの代わりにエタノールを用いて１０ｍｇ／ｋｇの用量レベルでＳ−１の薬物動態パラメータに対する投与賦形剤の効果の比較を行った。血漿濃度対時間のプロフィールを図２８に示す。投薬溶液においてエタノールを用いてもＳ−１のＣＬまたはＶｓｓには影響がなかったが、Ｔｍａｘは４．８時間から１．７７時間に減少し、バイオアベイラビリティは５４．９％から９５．９％に増加した。このことは、溶解度がＳ−１の経口吸収を支配する重要な因子であることを示唆している。
【０３１１】
＜ラットの尿及び糞便におけるＳ−１の代謝産物の同定＞
【０３１２】
Ｓ−１の、特に化学反応代謝産物の主要な代謝経路及び代謝産物を同定し、更にＳ−１の臨床的可能性を評価するために代謝研究を行った。それに加えて、Ｓ−１の完全代謝プロフィールは、ＳＡＲＭとして機能するようなより強力かつ代謝的に安定なプロパンアミド化合物を得るためにプロパンアミド鋳型上の構造修飾を促進することになる。Ｓ−１断片化の質量スペクトルを図２８に示す。衝突誘発性解離の条件下でのＳ−１断片化経路を図２９に提唱する。Ｓ−１の代謝産物の同定は、親化合物の断片化経路の理解に基づいていた。ラットの尿及び糞便から同定したＳ−１の代謝産物を図３０に載せる。Ｓ−１は、両移動相系を用いて５８．３９分で溶出した。静脈内経路を経て５０ｍｇ／ｋｇのＳ−１を投与されたオスＳＤラットの尿及び糞便中に、合計４０のＳ−１のフェーズＩ（第１段階）及びフェーズＩＩ（第２段階）代謝産物が見られた。代謝産物は、２４〜４８時間から収集したラットの尿及び糞便サンプルから同定されたが、０〜２４時間から収集した尿及び糞便サンプル中に見られた。
【０３１３】
Ｓ−１の２つの主要な尿代謝産物は、Ｓ−１またはその代謝産物のアミド加水分解から生じた４−ニトロ−３−トリフルオロメチルフェニルアミンの硫酸抱合体及びカルボン酸であった。Ｍ１は、合成標体（図３１）のものと同じクロマトグラフィ（即ち滞留時間）及び質量（即ち分子質量及び断片化パターン）の挙動を示すことによって３−（４−フルオロフェノキシ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピオン酸と確認された。Ｍ１は、０〜２４時間及び２４〜４８時間から収集されたラットの尿サンプル中で観察された。断片化制限が四重極イオントラップ型質量分析計（即ちＬＣＱＤＥＣＡ）を用いておよそｍ／ｚ２００のイオンに当てはまることはよくあることである。従って、１環代謝産物の構造は、ＬＣＱＤＥＣＡを用いてＭＳまたはＭＳ２モードにより明らかにされかつ図２８及び図２９において提唱されているが、比較のための合成標体を用いるかまたは単離及び精製後の確認のためのＮＭＲデータを入手するかいずれかによって、更に確認される必要がある。しかし、これらの１環代謝産物は、Ｓ−１の投薬後、ラットの尿及び糞便サンプル中に、同じラットから収集したブランク（盲検）の尿と比較すると明らかに出現した。弱酸の存在下で負イオンエレクトロスプレーイオン化効率に関する我々の発見に基づき（Wu et al., 2004）、１環代謝産物は、特に１環代謝産物がより親油性であれば、２環代謝産物より低いイオン化効率を有する。同一のクロマトグラフィ及び質量条件（データ示さず）下で、入手可能な合成標体（Ｍ１）のイオン化効率を親化合物のイオン化効率と比較し、上記結論を確認した。ＬＣ／ＭＳを用いて標準物質なしで代謝産物を定量化することは不可能であるが、クロマトグラフィの分離及びイオン化効率の理解に基づき相対量を推定することは合理的である。１環代謝産物は、２環代謝産物と同じかまたは更に高いシグナル強度を示したが、このことは１環代謝産物が著しく高い濃度に存在することを示唆している。換言すれば、Ｍ１及びＭ６はＳ−１の２つの主要な代謝産物として推定された。
【０３１４】
Ａ環の芳香族アミンへのニトロ還元及びＢ環の水酸化から生じるフェーズＩ代謝産物もラットの尿及び糞便サンプル中で同定された。更に、硫酸化、グルクロン酸抱合、またはメチル化から生じた種々のフェーズＩＩ代謝産物も見られた。上記した加水分解代謝産物に加えて、Ａ環のニトロ還元及びＢ環の水酸化は、ヒドロキシルアミン中間体を含む２環代謝産物の大多数がニトロ還元及び／またはＢ環の水酸化を組み入れたので、Ｓ−１の生体内変換において重要な役割を果たす。要約すれば、Ｓ−１は、３つのフェーズＩ代謝経路−アミド結合の加水分解、Ａ環のニトロ還元、Ｂ環の水酸化の影響を受けやすかった。Ｓ−１のフェーズＩＩ代謝経路には、硫酸化、グルクロン酸抱合及びメチル化が含まれていた。
【０３１５】
Ｓ−１の主要な代謝経路の概略を図３１に示す。Ｓ−１代謝にありそうな酵素も示唆されている。Ｓ−１の代謝において３つの主要な代謝経路、即ち、ニトロ還元、Ｂ環の水酸化、アミド結合の加水分解がある。ゆっくりではあるが、アミド加水分解は、非特異的な血漿エステラーゼの作用によって起こることができる。それどころか、Ｓ−１のアミド結合は肝臓アミダーゼによって加水分解されることができるが、アミダーゼは各組織及び生理液において遍在性に発現されることが分かっていた。P４５０は、ニトロ基の還元を招くこともあり得るが、他の酵素（例えばキサンチンオキシダーゼ、ミクロソームＮＡＤＰＨ−チトクロムＣ）が関与することもある。その上、還元は、経口投与された薬物に対して腸内嫌気性菌中の還元酵素によって実行されることができる。
【０３１６】
非ステロイド性抗アンドロゲンであるビカルタミドは、Ｓ−１と類似の構造であって、Ａ環上のニトロ基に代えてシアノ基、Ｂ環へのエーテル結合に代えてスルホニル結合を有する構造を有している。ビカルタミドは、２つの主要な代謝経路即ちアミド結合の加水分解及びＢ環の水酸化を示した。ラットにおけるビカルタミドの薬物動態研究中に、ラセミ体のビカルタミドの半減期、ＣＬ、Ｖは０．５ｍｇ／ｋｇの用量レベルでそれぞれ１７．７時間、８０ｍＬ／分／ｋｇ、１．２３Ｌ／ｋｇであった。Ｓ−１はビカルタミドと類似のＶを有していたが、ＣＬは約６倍高く、半減期は５倍短かった。
【０３１７】
この現象は、２つの化合物の異なる代謝によって説明することができた。ラットにおいて数多くのＳ−１のニトロ還元代謝産物が観察されたが、このことはこの経路が化合物の迅速なＣＬに大いに寄与することがあることを示唆している。更に、Ａ環にニトロ置換が存在することは、アミド加水分解の速度に影響しかつ更にＳ−１のより迅速な代謝に寄与し得る。相対的に、ビカルタミドに存在するスルホニル結合は、おそらくＢ環を非活性化してより酸化されにくくするような強力な電子求引性基である。一方で、ビカルタミドのＡ環中のシアノ置換は、より酸化されにくい。よって、ビカルタミドは、Ｓ−１と類似の分布容積値でＳ−１よりもずっと長い半減期を示す。従って、Ｂ環のニトロ還元及び水酸化はおそらくＳ−１のインビボ代謝において加水分解よりも重要な役割を果たす。ここでは、０〜２４及び２４〜４８時間の時間間隔でＳ−１の代謝プロフィールを調べた。これら３つのフェーズＩ代謝経路及び付随するフェーズＩＩ反応が如何にＳ−１の代謝を定量的に支配するかを理解するために、近い将来に放射標識Ｓ−１を用いて酵素の動力学的研究が行われることになる。
【０３１８】
第一級アミン含有薬物は、通常、薬物特異体質反応の高発生率に関連する。アリールアミン化合物の反応性代謝産物は、酸素のより良好な脱離基（例えば酢酸塩または硫酸塩）との抱合に続くヒドロキシルアミンになる酸化に関与しているが、アリールアミン化合物は、より良好な脱離基を失う抱合体から生じるニトレニウムイオンを介して発癌反応に至る。しかし、アミン基にパラな電子求引性基を持つ第一級アリールアミンは、低速度でニトレニウムイオンを形成する。これらの代謝産物は、ニトロソ代謝産物を介した共有結合形成に至ることがある。スルフヒドリル基はニトロソ代謝産物と反応してスルフィンアミドを形成することができるが、スルフィンアミドは微弱酸または塩基条件下で容易にアミンに再び加水分解される。アリールアミンはまた、活性化された好中球によって塩素化され、無顆粒球症を引き起こす反応性代謝産物を形成することもできる。
【０３１９】
共有結合形成に加えて、アリールアミンの中間代謝産物は、メトヘモグロビン血症及び溶血性貧血へと導く広範な酸化還元サイクリングの影響を受けやすい。芳香族ニトロ薬物は、いくつかの化学反応代謝産物を形成する点でアリールアミンに類似している。というのも、アリールアミンの酸化によって形成されるものと同じヒドロキシルアミン及びニトロソ代謝産物がニトロ基の還元によって形成されるからである。従って、芳香族ニトロ薬物もまた薬物特異体質反応の高発生率に関連する。図２８及び図２９から、加水分解及びニトロ還元によって産出された代謝産物（例えばＭ６、１３、１４、１５など）は、化学反応代謝産物と考えられることができる。その上、観察されたＭ３４及びＭ４０により、尿サンプルにおいて別の化学反応代謝産物の産出がもたらされた。Ｍ４０は、インビボで酸化されてアルデヒドに、そしてその後カルボン酸になる可能性を有するジオールである。カルボン酸基及び水分子を失うと、マイケル受容体（ｍ／ｚ２５９）が形成されることができる。これは、スルフヒドリル基と容易に反応する弱い求電子であり、異なる種類の薬物特異体質反応を生じさせることができる。異なるマイケル受容体（ｍ／ｚ２８９）は、Ｍ３９において水分子を失うことによって産出されることができる。マイケル受容体は、スルフヒドリル基と容易に反応する弱い求電子であるので、ｍ／ｚ４５２（Ｍ３７）でこのマイケル受容体とのメルカプツール酸抱合であるグルタチオン捕捉から生じる安定的な産物が観察された。これらの発見は、メルカプツール酸抱合型しか観察されなかったがマイケル受容体（ｍ／ｚ２８９）がインビボに存在することを確認した。このマイケル受容体（ｍ／ｚ２８９）は、肝臓、腎臓、肺、腸におけるミクロソームの混合機能オキシダーゼ系によるＯ−脱アルキルによって形成された。Ｍ３７の低いシグナル強度は、インビボで低濃度のこのマイケル受容体（ｍ／ｚ２８９）及びそのグルタチオン抱合を示すことがあり、他方ではアミド結合加水分解から形成されたカルボン酸代謝産物が排泄物中、特に尿中で著しく高レベルを示した。
【０３２０】
Ｓ−１の前臨床代謝試験においてこれまで同定された化学反応代謝産物は３種類ある。その３種類とは、第一級アミン、ニトロ還元代謝産物、マイケル受容体である。
【０３２１】
化合物の物理化学的性質は、小分子薬物の吸収、分布、代謝、排泄及び毒性を決定する際に重要な役割を果たす。薬物の化学構造は、それらの物理化学的性質の機能である。Ｓ−１及びビカルタミドの薬物動態パラメータ、物理化学的性質及び構造情報間の比較は、２つの化学薬品間の代謝差を同定するのに役立つ。Ｓ−４は、ＳＡＲＭとして調べられるリード化合物であるが、Ｂ環のパラ位置でフルオロ基に代えてアセトアミド基が結合されていることを除いてＳ−１と同じ化学的部分及び主鎖を有するＳ−１の構造類似体である。Ｓ−４の薬物動態研究は、それがＳ−１よりも短い半減期、小さい分布容積、低いクリアランスを有することを示した。Ｓ−１のより高いｌｏｇＰ値及びより少ない血漿タンパク質結合は、Ｓ−４よりも高いＳ−１の容積分布を説明するであろう。フルオロ基と比べて低いアセトアミド置換の電気陰性度は、Ｓ−４のＢ環のより迅速な酸化をもたらすことがある。しかし、生体内変換中のアセトアミド置換の脱アセチル化及びアセチル化は、構造情報を用いてＳ−４の薬物動態を予想する際に複雑さを生じさせる。
【０３２２】
ハロゲン基は、多くの場合、代謝を遮断するかまたは環構造を潜在的に非活性化するために用いられる。ハロゲン原子の種類、数、位置は全て、ハロゲン化芳香族の物理的及び生化学的性質、特に代謝を調節する際に重要な役割を果たす。明らかに環構造の本質はまた、潜在的影響を有する。一般的に、酸化的代謝率はハロゲン化物置換の電気陰性度と共に減少する（電気陰性度，Ｆ，４．０；ＣＬ，３．０；Ｂｒ，２．８；Ｉ，２．５）。さらに、立体障害のために芳香族環中のハロゲンの数を増加させると代謝率は通常低下する。化合物の親油性は吸収及び分布に有利に働くが、隣接する非置換型炭素原子は代謝そして排泄に傾かせる。Ｃ−６は、Ｂ環のパラ及びメタ部位でクロロ基及びフルオロ基をそれぞれ有しかつＳ−１と同じ化学的主鎖及びその他の部分を共有するＳ−１の別の構造類似体である。Ｃ−６の薬物動態研究は、それがＳ−１よりも長い半減期、低い容積分布、低いクリアランスを有することを示した。Ｃ−６のクリアランスがより低いことは、その２つのハロゲン置換が代謝を立体的かつ電子的に阻止する能力によって説明されるかもしれない。驚くべきことに、Ｃ−６は、Ｓ−１より高いＬｏｇＰ（６．１７１）を有しているが、より低い分布容積を示した。この観察は、Ｃ−６のより高い血漿タンパク質結合によって説明されることができるかもしれない。Ｃ−６のＬｏｇＰ値がより高いことはおそらく、静脈内及び経口投与後に吸収がより良好でＡＵＣがより高いことに寄与する。Ｂ環上のハロゲン原子の異なる置換（即ち数及び位置）は、置換されたプロパンアミドが薬理学的に活性であれば更に酸化的代謝をかなり遮断することが期待されるであろう。
【０３２３】
まとめると、Ｓ−１は、動物モデルにおける高度な効力及び潜在能、前臨床種における許容される薬物動態、適切な物理化学的性質を有しており、臨床開発のための有望な薬物候補ＳＡＲＭである。
【０３２４】
≪実施例９：チトクロムＰ４５０酵素発現へのＳＡＲＭの効果≫
【０３２５】
＜材料及び方法＞
【０３２６】
＜材料＞
【０３２７】
組換えヒトＣＹＰ酵素（Supersome（登録商標））、肝ミクロソーム標本、新鮮なヒト肝細胞、Ｈｅｐａｔｏ−ＳＴＩＭ肝細胞培地及び補充物と、ヒトＣＹＰ１Ａ２、２Ｃ９、２Ｃ１９、２Ｄ６、３Ａ４のための一次抗体は、ＢＤ Ｇｅｎｔｅｓｔ社（Woburn, MA）から購入した。４’−ヒドロキシ−ジクロフェナク、４’−ヒドロキシ−メフェニトイン、メフェニトイン、1’−ヒドロキシ−ブフラロール（bufuralol）及びブフラロールもＢＤ Ｇｅｎｔｅｓｔ社から購入した。ウサギ抗アクチンＩｇＧ、ヤギ抗マウスＩｇＧ、ウサギ抗ヤギＩｇＧは、サンタクルズ社（Santa Cruz Biotechnologies (Santa Cruz, CA)）から購入した。６β−ヒドロキシ−テストステロンは、ステラロイズ社（Steraloids Inc. (Newport, RI)）から購入した。改良化学ルミネセンスキットは、アマシャム・バイオサイエンス社（Amersham Biosciences (Buckinghamshire, UK)）から購入した。トリゾール（Trizol）（登録商標）試薬及びスーパースクリプト（Superscript）（商標）第一鎖ｃＤＮＡ合成システム（First-strand Synthesis System）は、インビトロゲン社（Invitrogen Corp. (Carlsbad, California)）から購入した。ＰＣＲプライマはＩＤＴ社（IDT, Inc. (Coralville, IA)）により合成された。ＳＹＢＲ（登録商標）緑色核酸ゲル染色はモルキュラープローブ社（Molecular Probes (Eugene, OR)）から購入した。スマートサイクラー（SmartCycler）（登録商標）添加剤はセフィード社（Cepheid (Sunnyvale, CA)）から購入した。それ以外の化学薬品及び試薬は全てシグマケミカル社（Sigma Chemical Company (St Louis, MO)）から購入した。全ての分析カラムはウォーターズ社（Waters Corporation (Milford, MA)）から購入した。
【０３２８】
＜ＨｅｐＧ２細胞における細胞毒性＞
【０３２９】
ＨｅｐＧ２細胞を２４ウェルプレートに蒔き、溶媒（０．１％ＤＭＳＯ）または種々の濃度（１〜１００μＭ）のＳ−１またはＳ−４で７２時間処置した。各濃度に対し、３ウェルが含められた。培地は２４時間毎に交換した。処置の最後に、スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）による比色アッセイを用いて細胞数を測定し、対照サンプルにおいて観察された細胞数の割合（百分率）として報告した。
【０３３０】
＜ヒト肝細胞の初代培養物＞
【０３３１】
１人のドナーから単離したヒト肝細胞の初代培養物（ＢＤ Ｇｅｎｔｅｓｔ、ロット＃５４、ドナー＃ＨＨ１２９、白人女性、４９才、脳卒中で死亡）を２４または４８ウェルプレートに蒔き、単離後２４時間輸送した。培養物はＨｅｐａｔｏ−ＳＴＩＭ培地中に３７℃で維持された。培地にはフェノールレッドが含まれていなかったが、上皮成長因子（ＥＧＦ，１ｍｇ／１００ｍｌ）及びデキサメタゾン（０．１Ｍ））が補充された。
【０３３２】
肝細胞は、輸送からの回復を可能にするために到着後Ｈｅｐａｔｏ−ＳＴＩＭ培地中に２日間維持し、その後、Ｓ−１（２Ｍ）、Ｓ−４（２Ｍ）、リファンピシン（ＲＩＦ）（１０Ｍ）、β−ナフトフラボン（ＢＮＦ）（５０Ｍ））または溶媒（０．１％ＤＭＳＯ）で７２時間インキュベートした。各処置に１５ウェルを含め、各活性アッセイに３ウェルを用いた。処置なしの細胞も対象として含めた。ＤＭＳＯで薬物含有溶液を毎日新たに調製し、培地中で所望の濃度まで希釈した。薬物を含む培地は２４時間毎に交換した。
【０３３３】
＜ＣＹＰ酵素機能アッセイ＞
【０３３４】
４８ウェルプレート中での３日間の処置後、無傷肝細胞をブランク培地で３回洗浄し、その後、酵素活性をテストするために、フェナセチン１００μＭ（ＣＹＰ１Ａ２）、ジクロフェナク１００μＭ（ＣＹＰ２Ｃ９）、メフェニトイン１００μＭ（ＣＹＰ２Ｃ１９）、ブフラロール１００μＭ（ＣＹＰ２Ｄ６）、テストステロン２００μＭ（ＣＹＰ３Ａ４）を含むＣＹＰ酵素特異基質と共に３７℃で１時間インキュベートした。各反応に３ウェルを用い、培地中の代謝産物の出現を適切な内標準物質（表３）の存在下でＨＰＬＣ分析によって評価した。
（表３  組換えヒトＣＹＰ酵素、ＮＡＴ１、ＮＡＴ２のための特異基質及びＨＰＬＣ分析に用いられる内標準物質）
2007538094.tif 000068
＊Ｓ−４の構造類似体
【０３３５】
機能アッセイ後に細胞を溶解し、ブラッドフォード法（バイオ・ラッド（Bio-Rad）タンパク質アッセイ）を用いて溶解産物中の総タンパク質含量を決定した。全ての酵素活性データは、各ウェルの総タンパク質含量によって規準化された。
【０３３６】
アセトアミドフェノール（ＣＹＰ１Ａ２代謝産物）を、１．５ｍｌ／分の流速で、移動相が１５％アセトニトリルと脱イオン水の混液である逆相カラム（ボンダパック（BondaPak）Ｃ１８，３．９×３００ｍｍ）で分離し、２４４ｎｍでのＵＶ吸収によって検出した。４’−ヒドロキシ−ジクロフェナク（ＣＹＰ２Ｃ９代謝産物）を、１ｍｌ／分の流速で、移動相が４０％アセトニトリル及び０．５％ギ酸（ｐＨ２．６５）と脱イオン水の混液である逆相カラム（ノバパックＣ１８，３．９×１５０ｍｍ）で分離し、２８０ｎｍでのＵＶ吸収によって検出した。４’−ヒドロキシ−メフェニトイン（ＣＹＰ２Ｃ１９代謝産物）を、１ｍｌ／分の流速で、移動相が２５％アセトニトリル及び２５ｍＭリン酸カリウム（ｐＨ７．４）と脱イオン水の混液である逆相カラム（ノバパックＣ１８，３．９×３００ｍｍ）で分離し、２１４ｎｍでのＵＶ吸収によって検出した。1’−ヒドロキシ−ブフラロール（ＣＹＰ２Ｄ６代謝産物）を、１ｍｌ／分の流速で、移動相が５０％アセトニトリル及び２ｍＭ過塩素酸と脱イオン水の混液である逆相カラム（ノバパックＣ１８，３．９×１５０ｍｍ）で分離し、２５２ｎｍの励起波長及び３０２ｎｍの発光波長で蛍光検出器を用いて検出した。６β−ヒドロキシ−テストステロン（ＣＹＰ３Ａ４代謝産物）を、１ｍｌ／分の流速で、移動相が４０％アセトニトリルと脱イオン水の混液である逆相カラム（ノバパックＣ１８，３．９×３００ｍｍ）で分離し、２５４ｎｍでのＵＶ吸収によって検出した。
【０３３７】
＜ウエスタン免疫ブロット分析＞
【０３３８】
機能アッセイ後に作成した細胞溶解産物をＣＹＰの免疫ブロット分析のために用いた。ローディングコントロールとしてβアクチンも分析した。アマシャム・バイオサイエンス社製の改良化学ルミネセンスキットを用いてシグナルを検出した。既知の酵素含量を有する組換えヒトＣＹＰSupersome（登録商標）を用いて各ＣＹＰアイソフォームに対する標準曲線を作成した。ＩｍａｇｅＪソフトウェア（http://rsb.info.nih.gov/ij）を用いてバンド密度を分析した。
【０３３９】
＜リアルタイムＰＣＲ分析＞
【０３４０】
肝細胞のセパレート２４ウェルプレートを上記と同様に処置し、各処置に４ウェルを含めた。７２時間の処置後、トリゾール（登録商標）試薬を用いてトータルＲＮＡを抽出した。スーパースクリプト（商標）第一鎖ｃＤＮＡ合成システム（First-strand Synthesis System）を用いてｃＤＮＡサンプルを単離されたトータルＲＮＡサンプルから調製し、その後当該ｃＤＮＡサンプルをリアルタイムＰＣＲ分析に用いた。プライマ３（Primer 3）プログラム（http: //www.genome.wi.mit.edu/genome~sohware/other/primer3.html.）を用いて、ＣＹＰ１Ａ１、２Ｃ９、２Ｃ１９、２Ｄ６、３Ａ４及びＧＡＰＤＨのために遺伝子特異的プライマをデザインした（表４）。
（表４  リアルタイムＰＣＲ分析のためのオリゴヌクレオチド配列）
2007538094.tif 000069
１発表されたＣＹＰ１Ａ２配列（ＮＭ＿０００７６１．２）に基づく
２発表されたＣＹＰ２Ｃ９配列（ＮＭ＿０００７７１）に基づく
３発表されたＣＹＰ２Ｃ１９配列（ＮＭ＿０００７６９）に基づく
４発表されたＣＹＰ２Ｄ６配列（ＮＭ＿０００１０６）に基づく
５発表されたＣＹＰ３Ａ４配列（ＮＭ＿０１７４６０）に基づく
６発表されたＧＡＰＤＨ配列（ＮＭ＿００２０４６）に基づく
７融解曲線解析から得られた単位複製配列融解温度（商標）
【０３４１】
スマートサイクラー（セフィード社製）を用いて次のように増幅を行った。９５℃で３００ｓ、９５℃で２０ｓの３５サイクル、５８℃で３０ｓ、７２℃で３０ｓ。７２℃で３００ｓの延長サイクルに続いて、６０℃で始まり９５℃まで０．２℃／ｓの速度で増加する融解分析を行った。負の一次導関数ピークは、ＰＣＲ産物融解温度の特性であるが、これを用いて特定のＰＣＲ産物を同定した。反応条件：１μｌ（５０〜１００ｎｇ）のｃＤＮＡ溶液、１４．６μｌのＤＥＰＣ水、ＰＣＲバッファ（１０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．３、５０ｍＭのＫＣｌ、１．５ｍＭのＭｇＣｌ２）、２００μＭのｄＮＴＰ、２００ｎＭのセンス及びアンチセンス両プライマ、ＤＭＳＯに１：１２５００希釈のＳＹＢＲ（登録商標）緑色核酸ゲル染色１０，０００Ｘ、１．０単位のＴａｑ ＤＮＡポリメラーゼ、１反応当たり２５μｌの全量に対して５μｌのスマートサイクラー（登録商標）添加剤。各ｃＤＮＡサンプルを、各ＣＹＰアイソフォーム及びＧＡＰＤＨに対する二重反復試験からなる反応にさらした。
【０３４２】
ｍＲＮＡ定量化のために比較Ｃｔ法（Livak KJ and Schmittgen TD (2001) Methods 25: 402-408）を用いた。この方法は、所定の遺伝子の相対発現をＧＡＰＤＨなどの参照遺伝子と比較する。任意の蛍光閾値（Ｃｔ）に到達するために必要なサイクル数を用いて、標的遺伝子のＣｔから参照遺伝子のＣｔを減算することによってデルタＣｔ（ΔＣｔ）を計算した。対照（培地中でインキュベーション）及び実験的に処置した細胞に対してΔＣｔを計算した。ΔΔＣｔをもたらした対照群のΔＣｔから実験的群のΔＣｔを減算する。公式２−ΔΔＣｔを用いて対照に対して何倍変化しているか（fold-change）を決定した。全てのパラメータの統計解析は、α値を先験的にｐ＜０．０５に設定して１要因ＡＮＯＶＡによって行った。
【０３４３】
≪結果≫
【０３４４】
ＨｅｐＧ２細胞におけるＳ−１及びＳ−４の細胞毒性：ヒト肝細胞を処置するために用いられることになる濃度を決定するために、肝細胞癌細胞系であるＨｅｐＧ２細胞においてＳ−１及びＳ−４の細胞毒性を評価した。Ｓ−１及びＳ−４は、１０Ｍ以上の濃度でＨｅｐＧ２細胞において毒性を示した（図３３）。しかし、より低濃度では毒性は観察されなかった。毒性に必要な濃度は、フェーズＩ臨床試験中に観察されたＳ−４の最高血漿濃度（約０．０３Ｍ）よりずっと高かった。細胞毒性を生じさせることなくＣＹＰ発現へのＳ−１及びＳ−４の効果を十分に評価するために、ヒト肝細胞研究に対して２Ｍの濃度が選択された。
【０３４５】
ＣＹＰ酵素機能、タンパク質発現、及びｍＲＮＡレベルに対するＳ−１及びＳ−４の効果：代謝産物へのプローブ基質の転換として測定された酵素活性、免疫ブロットによって決定されたＣＹＰ酵素タンパク質発現レベル、リアルタイムＰＣＲによって定量化された相対ｍＲＮＡレベルを含めた個々のＣＹＰ酵素に対する結果を図３４ないし図３８にまとめた。
【０３４６】
無処置の対照細胞におけるＣＹＰ１Ａ２活性（図３４）は、約５０ｐｍｏｌｅ／（ｍｇ＊min）であった。溶媒（０．１％ＤＭＳＯ）、Ｓ−１（２Ｍ）、Ｓ−４（２Ｍ）処置は、ＣＹＰ１Ａ２活性、タンパク質発現レベル、またはｍＲＮＡレベルの有意な変化を生じさせなかった。入手できる総ＲＮＡ量が限られていたので、溶媒処置サンプルにおけるｍＲＮＡシグナルは検出されなかった。既知のＣＹＰ１Ａ２誘導物質であるＢＮＦ（５０Ｍ）は、ＣＹＰ１Ａ２タンパク質発現の付随物増加と共にＣＹＰ１Ａ２活性を１０倍著しく増加させた。相応じて、ＢＮＦ処置後に酵素のｍＲＮＡレベルも７倍以上増加した。このことはＣＹＰ１Ａ２活性の増加はＢＮＦによる酵素発現の誘導に起因することを示している。
【０３４７】
ＣＹＰ２Ｃ９（図３５）及びＣＹＰ２Ｃ１９（図３６）両方の酵素活性及び発現は、異なる処置に対して非常に似た変化を示した。溶媒及びＢＮＦ処置は、ＣＹＰ２Ｃ９及び２Ｃ１９の酵素活性及び発現レベルへの効果をほとんど示さなかった。ＲＩＦ（１０μＭ）処置は、ＣＹＰ２Ｃ９及びＣＹＰ２Ｃ１９活性をそれぞれ２倍、６倍増加させ、タンパク質発現レベルをわずかに増加させたが、ｍＲＮＡレベルは有意には増加させなかった。Ｓ−１及びＳ−４は、ＣＹＰ２Ｃ９及び２Ｃ１９タンパク質発現またはｍＲＮＡレベルの有意な変化を生じさせなかった。しかし、両処置はそれらのプローブ基質に対する酵素活性を低下させた。Ｓ−４は、ＣＹＰ２Ｃ９及び２Ｃ１９活性をそれぞれ５７％及び７３％減少させ、Ｓ−１はＣＹＰ２Ｃ９及び２Ｃ１９活性をそれぞれ１６％及び４７％減少させた。酵素発現の有意な変化が観察されなかったので、またＳ−４がより高いＭ濃度でＣＹＰ２Ｃ１９に対する幾分かの親和性を有することを考慮すると（データ示さず）、Ｓ−１及びＳ−４処置されたサンプルにおける酵素活性の減少は、ＳＡＲＭ及び／またはその代謝産物による酵素活性の直接的な抑制に関係があると考えられる。
【０３４８】
ＣＹＰ２Ｄ６の発現（図３７）はＲＩＦ及びＢＮＦ処置によって僅かに増加し、ＣＹＰ２Ｄ６活性も同様に２倍以上増加した。Ｓ−１またはＳ−４による処置後にＣＹＰ２Ｄ６酵素、ｍＲＮＡまたは活性の有意な変化は見られなかった。
【０３４９】
Ｓ−４は、ＣＹＰ３Ａ４のための基質であるが、肝細胞における酵素発現または活性には影響しなかった（図３８）。似たような結果は、溶媒、Ｓ−１、ＢＮＦ処置されたサンプルにおいても同様に観察された。ＲＩＦは、ＣＹＰ３Ａ４のより強力な誘導物質であり、これは酵素活性（７倍）、ｍＲＮＡでの酵素発現（３．６９倍）及びタンパク質レベルでの酵素発現（１０倍以上）を著しく増加させるが、このことは酵素活性の増加が酵素発現の増加に起因することを示唆している。
【０３５０】
ＲＩＦ（１０μＭ）は、ＣＹＰ２Ｃ９、２Ｃ１９及び３Ａ４の酵素活性をそれぞれ２、６、７倍著しく増加させた。ＢＮＦ（５０μＭ）は、ＣＹＰ１Ａ２の酵素活性を１０倍著しく増加させた。これらの酵素活性の変化は、ＲＩＦ及びＢＮＦ処置後のタンパク質発現レベルにおいても同様の変化が観察されたので、酵素発現の変化に一層関連している。Ｓ−４で処置された肝細胞においては、ＣＹＰ２Ｃ９及び２Ｃ１９の酵素活性はそれぞれ５７％及び７３％低下した。Ｓ−１で処置された肝細胞においては、ＣＹＰ２Ｃ９及び２Ｃ１９の酵素活性はそれぞれ１６％及び４７％低下した。しかし、これらの酵素のいずれのタンパク質またはｍＲＮＡレベルの有意な変化もＳ−１及びＳ−４処置細胞では観察されず、このことは観察された酵素活性の減少がおそらくは酵素の直接的な抑制に起因することを示唆している。
【０３５１】
前述のように、ＮＲはＣＹＰ酵素発現を調節する際に非常に重要な役割を果たす。この研究に用いられた両モデルの誘導物質ＲＩＦ及びＢＮＦは、実際にＮＲリガンドである。ＢＮＦはアリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）を活性化することによってＣＹＰ１Ａ２発現を誘導するが、ＲＩＦはヒトＰＸＲ（プレグナンＸ受容体）を活性化することによってＣＹＰ２Ｃ９及び３Ａ４発現を誘導する。ＣＹＰ２Ｃ１９プロモータに関する最近の研究はまた、ＣＡＲ（constitutive androstane receptor）及びＧＲのための結合部位を同定した。ゲルシフトアッセイは、ヒトＰＸＲが同様にＣＡＲ応答要素に結合することを示し、このことはＣＹＰ２Ｃ１９発現はまたＰＸＲリガンド（即ちリファンピシン）によって直接調節されることができることを示唆した。第一次ヒト肝細胞を用いたＣＹＰ２Ｃ遺伝子誘導研究もまた、タンパク質レベル及びｍＲＮＡレベルの両方でのＣＹＰ２Ｃ９及び２Ｃ１９の発現をリファンピシンが誘導することを示した。この研究において観察された結果は、発見されたことと一致する。
【０３５２】
ヒトＣＹＰ２Ｄ６発現は、別のオーファン受容体ＨＮＦ４α（肝細胞核因子４α）によって調節される。ＲＩＦまたはＢＮＦがＨＮＦ４αリガンドであることを示す証拠はない。ＨＮＦ４αはＰＸＲ及びＣＡＲの遺伝子発現を直接調節するが、ＰＸＲ及びＣＡＲがＨＮＦ４α発現を調節するかどうかは明白ではない。ＲＩＦ及びＢＮＦによるＣＹＰ２D６発現の誘導は、ＰＸＲ、ＣＡＲ及びＨＮＦ４α間の「クロストーク」に関係していることもあり得る。
【０３５３】
ＳＡＲＭ処置は主要なＣＹＰ酵素発現の有意な変化を生じさせなかったが、このことはＡＲがこれらのＣＹＰ酵素の発現の直接的な調節に関与していないかもしれないことを示唆しており、ＣＹＰ酵素発現を直接調節するオーファン受容体とＳＡＲＭ間の相互作用が発生するとは考えにくい。
【０３５４】
Ｓ−１及びＳ−４は転写またはタンパク質発現レベルのいずれかでＣＹＰ酵素発現への調節作用を示さなかったが、Ｓ−１及びＳ−４処置は、ＣＹＰ２Ｃ９及び２Ｃ１９の酵素活性を低下させた。これは、肝細胞を用いる酵素誘導研究に観察される一般的な問題であるところの培養物に残された薬物または代謝産物の残存量による酵素の直接的な抑制の結果であり得た。それにも拘らず、ＳＡＲＭとＣＹＰ２Ｃ酵素間で観察される相互作用を考慮すれば、薬物間相互作用は起こり得る。
【０３５５】
全体として、Ｓ−１及びＳ−４は、ＣＹＰ２Ｃ９及び２Ｃ１９の酵素活性を直接抑制することができたが、第一次ヒト肝細胞における主要なＣＹＰ酵素の発現を誘導または抑止しない。しかし、この研究に用いられた薬物濃度（２μＭ）は、臨床的に妥当な用量で達成され得る血漿濃度より５０倍以上高かった。従って、ＣＹＰ２Ｃ９及び２Ｃ１９へのＳ−１及びＳ−４の抑制効果は、インビボで観察されないかもしれない。
【０３５６】
本発明が本明細書に特に図示及び記載されていることによって限定されるものではないことは、当業者に理解されよう。むしろ、発明の範囲は特許請求の範囲によって確定される。
【図面の簡単な説明】
【０３５７】
【図１】ラットにおける化合物ＩＶのアンドロゲン及びアナボリック活性である。ラットは、処置しないままにするか（無傷対照）、去勢するか（去勢対照）、プロピオン酸テストステロン（ＴＰ）で処置するか、或いは化合物ＩＶで処置し、アンドロゲン反応性組織（前立腺、精嚢及び肛門挙筋）の重量及び体重の増加を決定した。
【図２】ラットにおける化合物ＩＶのアンドロゲン及びアナボリック活性である。ラットは、処置しないままにするか（無傷対照）、去勢するか（去勢対照）、０．１ｍｇ／日、０．３ｍｇ／日、０．５ｍｇ／日、０．７５ｍｇ／日及び１．０ｍｇ／日のプロピオン酸テストステロン（ＴＰ）で処置するか、或いは０．１ｍｇ／日、０．３ｍｇ／日、０．５ｍｇ／日、０．７５ｍｇ／日及び１．０ｍｇ／日の化合物ＩＶで処置し、アンドロゲン反応性組織（前立腺、精嚢及び肛門挙筋）の重量を決定した。
【図３】ラットにおける化合物ＩＩＩのアンドロゲン及びアナボリック活性である。ラットは、処置しないままにするか（無傷対照）、去勢するか（去勢対照）、０．１ｍｇ／日、０．３ｍｇ／日、０．５ｍｇ／日、０．７５ｍｇ／日及び１．０ｍｇ／日のプロピオン酸テストステロン（ＴＰ）で処置するか、或いは０．１ｍｇ／日、０．３ｍｇ／日、０．５ｍｇ／日、０．７５ｍｇ／日及び１．０ｍｇ／日の化合物ＩＩＩで処置し、アンドロゲン反応性組織（前立腺、精嚢及び肛門挙筋）の重量を決定した。
【図４】ビーグル犬において３ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇを静脈内投与後の化合物ＩＶの平均血漿濃度−時間プロフィールである。
【図５】ビーグル犬において溶液で１０ｍｇ／ｋｇを経口投与後の化合物ＩＶの平均血漿濃度−時間プロフィールである。
【図６】ビーグル犬においてカプセルで静脈内投与後の化合物ＩＶの平均血漿濃度−時間プロフィールである。
【図７】化合物ＩＩＩ及び化合物ＩＶの効果に関するＬＨレベルである。
【図８】化合物ＩＩＩ及び化合物ＩＶの効果に関するＦＳＨレベルである。
【図９】化合物ＩＶの合成スキームである。
【図１０Ａ】化合物ＩＶ及びそのアミン代謝産物のＭＳ２スペクトルである。化合物ＩＶの断片化パターンである。
【図１０Ｂ】化合物ＩＶ及びそのアミン代謝産物のＭＳ２スペクトルである。アミン代謝産物の断片化パターンである。
【図１１Ａ】化合物ＩＶ投与後のラットの尿及び糞サンプルの２４時間の放射線写真である。ラットの尿サンプルについてである。
【図１１Ｂ】化合物ＩＶ投与後のラットの尿及び糞サンプルの２４時間の放射線写真である。ラットの糞サンプルについてである。
【図１２】ラット及び犬における化合物ＩＶの代謝プロフィールである。
【図１３】ヒト組み換え型ＣＹＰスーパーサムス（Supersomes）（登録商標）による化合物ＩＶのインビトロ代謝（ｎ＝２）である。化合物ＩＶ（２μＭ）は、ヒト組み換え型ＣＹＰスーパーサムス（Supersomes）（登録商標）（４０ｐｍｏｌｅ）と共に、３７℃で２時間培養された。化合物ＩＶの消失が測定された。
【図１４】ヒト組み換え型ＣＹＰスーパーサムス（Supersomes）（登録商標）による化合物ＩＩＩのインビトロ代謝（ｎ＝２）である。化合物ＩＩＩ（２μＭ）は、ヒト組み換え型ＣＹＰスーパーサムス（Supersomes）（登録商標）（４０ｐｍｏｌｅ）と共に、３７℃で２時間培養された。化合物ＩＩＩの消失が測定された。培養後、化合物ＩＩＩの２０％が、ヒトＣＹＰ３Ａ４によって代謝された。
【図１５】ヒト肝ミクロソーム（ＨＬＭ）中の化合物ＩＶのインビトロ代謝である。
【図１６】ヒト肝ミクロソーム（ＨＬＭ）中の化合物ＩＩＩのインビトロ代謝である。
【図１７】ＣＹＰによる化合物ＩＶからＭ１へのインビトロ代謝である。３通りのＭ１の出現が測定された。
【図１８】ＨＬＭ（０．２ｍｇ／ｍｌ）による化合物ＩＶからＭ１へのインビトロ代謝である。３通りのＭ１の出現が測定された。
【図１９】（Ａ）ヒト、ラット及び犬肝調製品で測定された１４Ｃ−Ｓ４の第１相代謝経路（均一に標識化されたＢ環）である。（Ｂ）プールヒト肝Ｓ９による１４Ｃ−Ｓ４の代謝を表示しているラジオクロマトグラムである。
【図２０】Ｓ４、還元生成物及び脱アセチル化生成物である、Ｍ１、Ｍ４及びＭ５のＭＳ２スペクトル（ＥＳＩ負イオンモード）である。
【図２１】酸化生成物である、Ｓ４−ＯＨ、Ｍ１−ＯＨ及びＭ４−ＯＨのＭＳ２スペクトル（ＥＳＩ負イオンモード）である。異なる断片化パターンを伴う３種の異なるＳ４酸化代謝産物（Ａ、Ｂ、Ｃ）が確認された。
【図２２】（Ａ）ＮＨＳビオチンによるＳ４のビオチニレーション反応である。（Ｂ）ビオチン化１４Ｃ−Ｍ２及び１４Ｃ−Ｍ２−ＯＨの１４Ｃ−Ｍ３からの分離を示すラジオクロマトグラムである。
【図２３】アミド結合加水分解生成物のＭ３、Ｍ３−ＯＨ及びビオチン化Ｍ２及びビオチン化Ｍ２−ＯＨのＭＳ２スペクトル（ＥＳＩ負イオンモード）（Ｂ、Ｃ）である。
【図２４】異なる肝酵素調製品を伴って培養した後の１４Ｃ−Ｓ４の主要なインビトロ代謝産物の相対存在量である。（Ａ）ヒト、ラット及び犬肝Ｓ９存在下の１４Ｃ−Ｓ４の代謝プロフィールである。（Ｂ）ヒト肝の異なる細胞内分留物存在下の１４Ｃ−Ｓ４の代謝プロフィールである。
【図２５】Ｓ４の消失の測定によって決定されるＣＹＰ３Ａ４によるＳ４代謝の酵素動態である。反応は、２００ｐｍｏｌｅ／Ｍ１のＣＹＰ３Ａ４存在下で、３７℃で１０分間実行された。
【図２６】共トランスフェクション分析を使用したＭ１によるインビトロＡＲ転写活性化である。Ｍ１による活性化は、０．１ｎＭのＤＨＴ存在下で得られた活性化の割合で示した。
【図２７】オスのＳＤラットにおける静脈内投与及び経口投与後のＳ−１の血漿濃度−時間プロフィール（ｎ＝５／投与グループ）である。黒記号は経口投与を示し、白記号は静脈内投与を示している。三角は３０ｍｇ／ｋｇ、四角は１０ｍｇ／ｋｇ、丸は１ｍｇ／ｋｇ、菱形は０．１ｍｇ／ｋｇ。
【図２８】Ｓ−１断片化質量スペクトルである。
【図２９】解離が引起される衝突が起こる状態下でのＳ−１の提示断片化経路である。
【図３０Ａ】ラット尿中で確認されたＳ−１の代謝産物である。
【図３０Ｂ】ラット尿中で確認されたＳ−１の代謝産物である。
【図３０Ｃ】ラット尿中で確認されたＳ−１の代謝産物である。
【図３０Ｄ】ラット尿中で確認されたＳ−１の代謝産物である。
【図３０Ｅ】ラット尿中で確認されたＳ−１の代謝産物である。
【図３０Ｆ】ラット尿中で確認されたＳ−１の代謝産物である。
【図３０Ｇ】ラット尿中で確認されたＳ−１の代謝産物である。
【図３０Ｈ】ラット尿中で確認されたＳ−１の代謝産物である。
【図３０Ｉ】ラット糞中で確認されたＳ−１の代謝産物である。
【図３０Ｊ】ラット糞中で確認されたＳ−１の代謝産物である。
【図３０Ｋ】ラット糞中で確認されたＳ−１の代謝産物である。
【図３１】Ｍ１及び合成基準３−（４−フルオロフェノキシ）−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピオン酸（移動相２使用）のクロマトグラフィー及び質量作用の比較である。（Ａ）０〜１２時間の間のラットの尿サンプルである。（Ｂ）合成基準である。
【図３２】オスのＳＤラットにおけるＳ−１の提示主要代謝経路である。
【図３３】処置の７２時間後にＳＲＢ分析で測定されたＨｅｐＧ２細胞におけるＳ−１及びＳ−４の細胞障害性（ｎ＝３）である。データを平均値±標準偏差で示す。
【図３４】ＣＹＰ１Ａ２活性及び発現でのＳ−４（２μＭ）、Ｓ−１（２μＭ）、リファンピシン（ＲＩＦ）（１０μＭ）及びβ−ナフトフラボン（ＢＮＦ）（５０μＭ）の効果である。３通りのＣＹＰ酵素活性が測定され、その結果を平均値±標準偏差で示す。酵素含有量は、スーパーサム（Supersome）（登録商標）調製品よって形成され、β−アクチン発現レベルによって正規化された標準曲線に対して結合密度を比較することによって測定された。ヒト肝ミクロソーム（ＨＬＭ）サンプルは、免疫ブロット法のための陽性対照として含まれていた。ｍＲＮＡレベルの折曲変化は、対照サンプルに対して正規化された。
【図３５】ＣＹＰ２Ｃ９活性及び発現でのＳ−４（２μＭ）、Ｓ−１（２μＭ）、リファンピシン（ＲＩＦ）（１０μＭ）及びβ−ナフトフラボン（ＢＮＦ）（５０μＭ）の効果である。３通りのＣＹＰ酵素活性が測定され、その結果を平均値±標準偏差で示す。酵素含有量は、スーパーサム（Supersome）（登録商標）調製品よって形成され、β−アクチン発現レベルによって正規化された標準曲線に対して結合密度を比較することによって測定された。ヒト肝ミクロソーム（ＨＬＭ）サンプルは、免疫ブロット法のための陽性対照として含まれていた。ｍＲＮＡレベルの折曲変化は、対照サンプルに対して正規化された。
【図３６】ＣＹＰ２Ｃ１９活性及び発現でのＳ−４（２μＭ）、Ｓ−１（２μＭ）、リファンピシン（ＲＩＦ）（１０μＭ）及びβ−ナフトフラボン（ＢＮＦ）（５０μＭ）の効果である。３通りのＣＹＰ酵素活性が測定され、その結果を平均値±標準偏差で示す。酵素含有量は、スーパーサム（Supersome）（登録商標）調製品よって形成され、β−アクチン発現レベルによって正規化された標準曲線に対して結合密度を比較することによって測定された。ヒト肝ミクロソーム（ＨＬＭ）サンプルは、免疫ブロット法のための陽性対照として含まれていた。ｍＲＮＡレベルの折曲変化は、対照サンプルに対して正規化された。
【図３７】ＣＹＰ２Ｄ６活性及び発現でのＳ−４（２μＭ）、Ｓ−１（２μＭ）、リファンピシン（ＲＩＦ）（１０μＭ）及びβ−ナフトフラボン（ＢＮＦ）（５０μＭ）の効果である。３通りのＣＹＰ酵素活性が測定され、その結果を平均値±標準偏差で示す。酵素含有量は、スーパーサム（Supersome）（登録商標）調製品よって形成され、β−アクチン発現レベルによって正規化された標準曲線に対して結合密度を比較することによって測定された。ヒト肝ミクロソーム（ＨＬＭ）サンプルは、免疫ブロット法のための陽性対照として含まれていた。ｍＲＮＡレベルの折曲変化は、対照サンプルに対して正規化された。
【図３８】ＣＹＰ３Ａ４活性及び発現でのＳ−４（２μＭ）、Ｓ−１（２μＭ）、リファンピシン（ＲＩＦ）（１０μＭ）及びβ−ナフトフラボン（ＢＮＦ）（５０μＭ）の効果である。３通りのＣＹＰ酵素活性が測定され、その結果を平均値±標準偏差で示す。酵素含有量は、スーパーサム（Supersome）（登録商標）調製品よって形成され、β−アクチン発現レベルによって正規化された標準曲線に対して結合密度を比較することによって測定された。ヒト肝ミクロソーム（ＨＬＭ）サンプルは、免疫ブロット法のための陽性対照として含まれていた。ｍＲＮＡレベルの折曲変化は、対照サンプルに対して正規化された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０Ａ】
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【図３０Ｂ】
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【図３０Ｃ】
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【図３０Ｄ】
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【図３０Ｅ】
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【図３０Ｆ】
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【図３０Ｇ】
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【図３０Ｈ】
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【図３０Ｉ】
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【図３０Ｊ】
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【図３０Ｋ】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【国際調査報告】
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