(57)【要約】構造式Ｉで示される化合物と、その製造法を提示する。2007501272.tif 000051  構造式Ｉ上記式中の変数Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、およびＡｒは本件に定義する。このような化合物は、 in vivo または in vitroにおけるＧＡＢＡＡレセプタへのリガンド結合性を調節するために使用でき、特に、ヒト、飼い慣らされたコンパニオンアニマル、および家畜動物における様々な中枢神経系（ＣＮＳ）疾患の治療に有用である。本件に提示の化合物は単独で、または、他の(１つ以上の)ＣＮＳ剤の効果を高めるため１つ以上の他のＣＮＳ剤と組み合わせて投与する。薬剤組成物と、このような疾患の治療法を提示する。また、ＧＡＢＡＡレセプタを検出するための（例えば、レセプタの位置測定の研究）これらのリガンドの使用法も提示する。
2007501272.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の構造式で示される化合物またはその薬学的許容体であって、
【化１】
2007501272.tif 000048
式中、
Ｚ１は窒素またはＣＲ１であり、Ｚ２は窒素またはＣＲ２であり、Ｚ３は窒素またはＣＲ３であって、Ｚ１とＺ２とＺ３の１つ以上、２つ以下は窒素であり、
Ａｒは、フェニル、ナフチル、または５〜１０員のヘテロアリールを示すものであって、そのそれぞれは、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルケニル、Ｃ１〜Ｃ８アルキニル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、（Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル）Ｃ０〜Ｃ４アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル）Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ８アルキルエーテル、Ｃ１〜Ｃ８アルカノン、Ｃ１〜Ｃ８アルカノイル、３〜７員のヘテロシクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルコキシ、オキソ、Ｃ１〜Ｃ８ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アミノアルキル、および、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）アミノ（Ｃ０〜Ｃ８アルキル）より独立して選ばれる、０〜４個の置換基で置換されており、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４はそれぞれ、（ａ）および（ｂ）より独立して選ばれ、
（ａ）は、水素、ハロゲン、ニトロ、およびシアノであり、
（ｂ）は、次の構造式で示される基であって、
【化２】
2007501272.tif 000049
式中、
Ｌは、共有単結合またはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
Ｇは、共有単結合、−Ｎ（ＲＢ）−、−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＢ）−、−Ｎ（ＲＢ）Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）ｍ−、−ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）ｍＮ（ＲＢ）−、または−Ｎ（ＲＢ）Ｓ（Ｏ）ｍ−であって、ｍは、０、１、または２であり、
ＲＡおよび各ＲＢは、（ｉ）および（ｉｉ）より独立して選ばれ、
（ｉ）は水素であり、
（ｉｉ）は、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、（Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル）Ｃ０〜Ｃ４アルキル、（３〜６員のヘテロシクロアルキル）Ｃ０〜Ｃ４アルキル、（アリール）Ｃ０〜Ｃ２アルキル、または（ヘテロアリール）Ｃ０〜Ｃ２アルキルであって、そのそれぞれは、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイル、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、およびＣ１〜Ｃ４ハロアルコキシより独立して選ばれる、０〜４個の置換基で置換されており、
Ｒ５は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、あるいはモノまたはジ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）アミノであって、そのそれぞれは、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ２ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ２ハロアルコキシ、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）アミノ、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、フェニルＣ０〜Ｃ４アルキル、およびフェニルＣ１〜Ｃ４アルコキシより独立して選ばれる、０〜５個の置換基で置換されており、
Ｒ６およびＲ７は独立して、水素、ハロゲン、メチル、またはエチルであり、
Ｒ８は、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）アミノ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ２ハロアルキル、およびＣ１〜Ｃ２ハロアルコキシより独立して選ばれる、０、１、または２個の置換基を示す、
ことを特徴とする化合物またはその薬学的許容体。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物またはその薬学的許容体であって、Ｒ８は、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ２アルキル、およびＣ１〜Ｃ２アルコキシより選ばれる、０または１個の置換基を示すことを特徴とする化合物またはその薬学的許容体。
【請求項３】
請求項１または請求項２に記載の化合物またはその薬学的許容体であって、Ａｒは、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、モノまたはジ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）アミノ、Ｃ２〜Ｃ４アルカノイル、（Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル）Ｃ０〜Ｃ２アルキル、Ｃ１〜Ｃ２ハロアルキル、およびＣ１〜Ｃ２ハロアルコキシより独立して選ばれる、０、１、２、または３個の置換基で置換されていることを特徴とする化合物またはその薬学的許容体。
【請求項４】
請求項１または請求項２に記載の化合物またはその薬学的許容体であって、Ａｒは、フェニル、ピリジル、チアゾリル、チエニル、トリアゾロピリジル、ピリジジニル（pyridizinyl）、またはピリミジニルを示すものであって、そのそれぞれは０〜４個の置換基で置換されていることを特徴とする化合物またはその薬学的許容体。
【請求項５】
請求項４に記載の化合物またはその薬学的許容体であって、Ａｒは、フェニル、ピリジル、チアゾリル、チエニル、トリアゾロピリジル、またはピリジジニルを示すものであって、そのそれぞれは、塩素、フッ素、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ２アルキルアミノ、Ｃ１〜Ｃ２ハロアルキル、およびＣ１〜Ｃ２ハロアルコキシより独立して選ばれる、０〜３個の置換基で置換されていることを特徴とする化合物またはその薬学的許容体。
【請求項６】
請求項５に記載の化合物またはその薬学的許容体であって、Ａｒは、フェニル、２−ピリジル、１，３−チアゾール−２−イル、２−チエニル、［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−５−イル、または３−ピリジジニルを示すものであって、そのそれぞれは、フッ素、塩素、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ２アルキル、シアノ、およびＣ１〜Ｃ２アルコキシより独立して選ばれる、０〜３個の置換基で置換されていることを特徴とする化合物またはその薬学的許容体。
【請求項７】
請求項５に記載の化合物またはその薬学的許容体であって、Ａｒは、ピリジン−２−イル、２，６−ジフルオロフェニル、２，５−ジフルオロフェニル、３−フルオロフェニル、３−メチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−５−イル、３−フルオロピリジン−２−イル、または６−フルオロピリジン−２−イルを示すことを特徴とする化合物またはその薬学的許容体。
【請求項８】
請求項１から請求項７のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的許容体であって、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、（ａ）および（ｂ）より独立して選ばれ、
（ａ）は、水素、ハロゲン、またはシアノであり、
（ｂ）は、次の構造式で示される基であって、
【化３】
2007501272.tif 000050
式中、
（ｉ）Ｌは、共有単結合、メチレン、またはエチレンであり、
（ｉｉ）Ｇは、共有単結合、ＮＨ、Ｎ（ＲＢ）、Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、またはＣ（＝Ｏ）であり、
（ｉｉｉ）ＲＡおよびＲＢは、（１）および（２）より独立して選ばれ、（１）は水素であり、（２）は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、４〜７員のヘテロシクロアルキル、フェニル、チエニル、ピリジル、ピリミジニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリダジニル、およびピラジニルであって、そのそれぞれは、ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ２アルキル、およびＣ１〜Ｃ２アルコキシより独立して選ばれる、０〜４個の置換基で置換されている
ことを特徴とする化合物またはその薬学的許容体。
【請求項９】
請求項８に記載の化合物またはその薬学的許容体であって、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ２アルコキシＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜Ｃ２ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ２ハロアルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４カルボキシラート、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）アミノ、フェニルＣ０〜Ｃ１アルキル、ピリジルＣ０〜Ｃ１アルキル、および（４〜７員のヘテロシクロアルキル）Ｃ０〜Ｃ１アルキルより独立して選ばれることを特徴とする化合物またはその薬学的許容体。
【請求項１０】
請求項９に記載の化合物またはその薬学的許容体であって、Ｒ１およびＲ４は、水素、メチル、およびエチルより独立して選ばれることを特徴とする化合物またはその薬学的許容体。
【請求項１１】
請求項９に記載の化合物またはその薬学的許容体であって、Ｚ１は窒素であり、Ｚ２はＣＲ２であり、Ｚ３はＣＲ３であることを特徴とする化合物またはその薬学的許容体。
【請求項１２】
請求項１１に記載の化合物またはその薬学的許容体であって、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ２アルコキシＣ１〜Ｃ２アルキル、Ｃ１〜Ｃ２ヒドロキシアルキル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、フェニルＣ０〜Ｃ１アルキル、ピリジルＣ０〜Ｃ１アルキル、および（４〜７員のヘテロシクロアルキル）Ｃ０〜Ｃ１アルキルより独立して選ばれることを特徴とする化合物またはその薬学的許容体。
【請求項１３】
請求項９に記載の化合物またはその薬学的許容体であって、Ｚ１はＣＲ１であり、Ｚ２は窒素であり、Ｚ３はＣＲ３であることを特徴とする化合物またはその薬学的許容体。
【請求項１４】
請求項１３に記載の化合物またはその薬学的許容体であって、Ｒ１、Ｒ３、およびＲ４は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ２アルコキシＣ１〜Ｃ２アルキル、Ｃ１〜Ｃ２ヒドロキシアルキル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、フェニルＣ０〜Ｃ１アルキル、ピリジルＣ０〜Ｃ１アルキル、および（４〜７員のヘテロシクロアルキル）Ｃ０〜Ｃ１アルキルより独立して選ばれることを特徴とする化合物またはその薬学的許容体。
【請求項１５】
請求項９に記載の化合物またはその薬学的許容体であって、Ｚ１およびＺ２は窒素であり、Ｚ３はＣＲ３であることを特徴とする化合物またはその薬学的許容体。
【請求項１６】
請求項１５に記載の化合物またはその薬学的許容体であって、Ｒ３およびＲ４は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ２アルコキシＣ１〜Ｃ２アルキル、Ｃ１〜Ｃ２ヒドロキシアルキル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、フェニルＣ０〜Ｃ１アルキル、ピリジルＣ０〜Ｃ１アルキル、および（４〜７員のヘテロシクロアルキル）Ｃ０〜Ｃ１アルキルより独立して選ばれることを特徴とする化合物またはその薬学的許容体。
【請求項１７】
請求項９に記載の化合物またはその薬学的許容体であって、Ｚ１およびＺ３は窒素であり、Ｚ２はＣＲ２であることを特徴とする化合物またはその薬学的許容体。
【請求項１８】
請求項１７に記載の化合物またはその薬学的許容体であって、Ｒ２およびＲ４は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ２アルコキシＣ１〜Ｃ２アルキル、Ｃ１〜Ｃ２ヒドロキシアルキル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、フェニルＣ０〜Ｃ１アルキル、ピリジルＣ０〜Ｃ１アルキル、および（４〜７員のヘテロシクロアルキル）Ｃ０〜Ｃ１アルキルより独立して選ばれることを特徴とする化合物またはその薬学的許容体。
【請求項１９】
請求項１から請求項１８のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的許容体であって、Ｒ６およびＲ７はいずれも水素であることを特徴とする化合物またはその薬学的許容体。
【請求項２０】
請求項１から請求項１９のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的許容体であって、Ｒ５は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、あるいはモノまたはジ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）アミノであって、そのそれぞれは、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ２アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、フェニルＣ０〜Ｃ２アルキル、およびフェニルＣ１〜Ｃ２アルコキシより独立して選ばれる、０〜２個の置換基で置換されていることを特徴とする化合物またはその薬学的許容体。
【請求項２１】
請求項２０に記載の化合物またはその薬学的許容体であって、Ｒ５は、エチル、プロピル、ブチル、エトキシ、またはメトキシメチルであることを特徴とする化合物またはその薬学的許容体。
【請求項２２】
請求項１に記載の化合物またはその薬学的許容体であって、前記化合物は、
６−［２−（６−フルオロピリジン−２−イル）イミダゾール−１−イルメチル］−５−プロピルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン、
５−プロピル−６−（２−ピリジン−２−イルイミダゾール−１−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン、
６−［２−（３−フルオロピリジン−２−イル）イミダゾール−１−イルメチル］−５−プロピルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン、
６−［２−（６−フルオロピリジン−２−イル）イミダゾール−１−イルメチル］−１−メチル−５−プロピルイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン、
６−［２−（３−フルオロピリジン−２−イル）イミダゾール−１−イルメチル］−１−メチル−５−プロピルイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン、
５−プロピル−６−（２−ピリジン−２−イルイミダゾール−１−イルメチル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン、
３−メチル−５−プロピル−６−（２−ピリジン−２−イルイミダゾール−１−イルメチル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン、
３−メチル−６−［２−（３−メチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−５−イル）イミダゾール−１−イルメチル］−５−プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン、
６−｛［２−（３−フルオロピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−１−イル］メチル｝−５−プロピル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピラジン、および
６−｛［２−（３−フルオロピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−１−イル］メチル｝−２−メチル−５−プロピル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピラジン
より選ばれることを特徴とする化合物またはその薬学的許容体。
【請求項２３】
請求項１に記載の化合物またはその薬学的許容体であって、ＧＡＢＡＡレセプタ結合性試験において、前記化合物は１マイクロモル以下のＫｉを示すことを特徴とする化合物またはその薬学的許容体。
【請求項２４】
請求項１に記載の化合物またはその薬学的許容体であって、ＧＡＢＡＡレセプタ結合性試験において、前記化合物は１００ナノモル以下のＫｉを示すことを特徴とする化合物またはその薬学的許容体。
【請求項２５】
請求項１に記載の化合物またはその薬学的許容体であって、ＧＡＢＡＡレセプタ結合性試験において、前記化合物は１０ナノモル以下のＫｉを示すことを特徴とする化合物またはその薬学的許容体。
【請求項２６】
薬学的に許容可能なキャリヤまたは賦形剤と組み合わせた、請求項１に記載の化合物またはその薬学的許容体を含むことを特徴とする薬剤組成物。
【請求項２７】
請求項２６に記載の薬剤組成物であって、前記薬剤組成物は、注射液、エーロゾル、クリーム、ゲル、丸剤、カプセル、シロップ、または経皮吸収パッチとして調剤されることを特徴とする薬剤組成物。
【請求項２８】
不安、うつ病、睡眠障害、注意欠陥障害、またはアルツハイマー痴呆の治療を必要とする患者に、ＧＡＢＡＡレセプタを調節する量の、請求項１から請求項１９のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的許容体を投与する工程を含むことを特徴とする、不安、うつ病、睡眠障害、注意欠陥障害、またはアルツハイマー痴呆の治療法。
【請求項２９】
患者に、ＣＮＳ剤と、請求項１から請求項１９のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的許容体とを投与する工程を含むことを特徴とする、ＣＮＳ剤の治療的効果を高める方法。
【請求項３０】
患者に、ＧＡＢＡＡレセプタを調節する量の、請求項１から請求項１９のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的許容体を投与する工程を含むことを特徴とする、患者の短期記憶を向上させる方法。
【請求項３１】
ＧＡＢＡＡレセプタ発現細胞を、細胞の電気生理学的性質を検出可能なほどに変えるのに十分な量の、請求項１から請求項１９のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的許容体と接触させ、これによりＧＡＢＡＡレセプタのシグナル変換活性を変える工程を含むことを特徴とする、ＧＡＢＡＡレセプタのシグナル変換活性を変える方法。
【請求項３２】
請求項３１に記載の方法であって、細胞は、組み換えによって異種由来のＧＡＢＡＡレセプタを発現し、細胞の電気生理学的変化は、細胞内記録（intracellular recording）またはパッチクランプ記録（patch clamp recording）で検出することを特徴とする方法。
【請求項３３】
試料中のＧＡＢＡＡレセプタの存在または不在の決定法であって、
前記方法は、
（ａ）試料を、請求項１に記載の化合物またはその薬学的許容体と、前記化合物がＧＡＢＡＡレセプタに結合するような条件下で接触させる工程と、
（ｂ）ＧＡＢＡＡレセプタに結合していない前記化合物またはその薬学的許容体を除去する工程と、
（ｃ）ＧＡＢＡＡレセプタに結合した前記化合物またはその薬学的許容体の量を検出する工程と、
を含み、これにより試料中のＧＡＢＡＡレセプタの存在または不在を決定することを特徴とする、試料中のＧＡＢＡＡレセプタの存在または不在の決定法。
【請求項３４】
請求項３３に記載の方法であって、結合した化合物の存在または不在をオートラジオグラフィを用いて検出することを特徴とする方法。
【請求項３５】
試料中のＧＡＢＡＡレセプタの存在または不在の決定法であって、
前記方法は、
バックグラウンド結合を求める工程と、
ＧＡＢＡＡ結合を求める工程と、
を含み、
バックグラウンド結合を求める工程は、順に、
（ａ）第１の試料を、ＧＡＢＡＡレセプタ類に結合しないことが既知の、測定済みモル濃度の標識化化合物と、化合物がＧＡＢＡＡレセプタ類に結合するような条件下で接触させる工程と、
（ｂ）ＧＡＢＡＡレセプタ類に結合していない化合物を除去するような条件下で、第１試料を洗浄する工程と、
（ｃ）バックグラウンド結合量として、洗浄後に残留する標識の量を検出する工程と、
を含み、
ＧＡＢＡＡ結合を求める工程は、順に、
（ｄ）請求項１に記載の標識化化合物またはその薬学的許容体を、第１試料と比較するための第２試料と接触させる工程であって、前記化合物またはその薬学的許容体の濃度は、（ａ）の測定済みモル濃度であり、前記接触を、（ａ）で用いた条件下で行う工程と、
（ｅ）第２試料を、（ｂ）で用いた条件下で洗浄する工程と、
（ｆ）洗浄後に第２試料中に残留する標識の量を検出する工程と、
（ｇ）（ｆ）で求めた第２試料中に残留する標識の量から、（ｃ）で求めたバックグラウンド結合量を差し引く工程と、
を含み、
（ｇ）の差し引き後の量が正であることが、第２試料中でのＧＡＢＡＡレセプタの存在を示すことを特徴とする、試料中のＧＡＢＡＡレセプタの存在または不在の決定法。
【請求項３６】
請求項３５に記載の方法であって、第１試料および第２試料の洗浄後に残留する標識の量は、オートラジオグラフィを用いて検出することを特徴とする方法。
【請求項３７】
容器に入れた請求項２６に記載の薬剤組成物と、この組成物を、不安、うつ病、睡眠障害、注意欠陥障害、アルツハイマー痴呆、または短期記憶損失を罹患した患者の治療に使用するための使用説明書と、を含むことを特徴とする包装済み医薬製剤。
【請求項３８】
不安、うつ病、睡眠障害、注意欠陥障害、アルツハイマー痴呆、および短期記憶損失より選ばれる症状の治療用薬剤の製造における、請求項１に記載の化合物またはその薬学的許容体の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は一般に、有用な薬学的性質を持つイミダゾロピラジン類（imidazolopyrazines）およびトリアゾロピラジン類（triazolopyrazines）に関する。本発明は更に、これらの化合物を含む薬剤組成物と、中枢神経系（ＣＮＳ）疾患の治療におけるこれらの化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＧＡＢＡＡレセプタスーパーファミリーは、それを通して主な抑制性神経伝達物質のγ−アミノブチル酸（ＧＡＢＡ）が作用する、レセプタ類の１つの種類を示すものである。ＧＡＢＡは哺乳動物の脳全体に広く分布し（但し一様ではない）、ＧＡＢＡＡレセプタと呼ばれるタンパク複合体を通してその作用の多くを伝え、塩化物伝導性を変えて膜分極を引き起こす。抗不安薬および鎮静薬であるベンゾジアゼピン類など、多くの薬物もこのレセプタに結合する。ＧＡＢＡＡレセプタは塩化物チャネルを持ち、このチャネルは通常（必ずしもではないが）ＧＡＢＡに応じて開き、塩化物を細胞内に取り込ませる。これは更に細胞膜電位を過分極させて神経活性を遅くする効果を持つ。
【０００３】
ＧＡＢＡＡレセプタ類は５個のタンパクサブユニットから成る。これらのＧＡＢＡＡレセプタサブユニットに関わる多くのｃＤＮＡがクローン化され、その一次構造が決定されている。これらのサブユニットには４膜間隔らせん（4 membrane-spanning helices）の基本モチーフが共通しているが、十分なシーケンスの相違があるためいくつかのグループに分けられる。現在、少なくとも６α、３β、３γ、１ε、１δ、および２ρサブユニットが同定されている。天然由来のＧＡＢＡＡレセプタ類は一般に、２個のαサブユニットと、２個のβサブユニットと、１個のγサブユニットとから成る。様々な方面からの証拠（メッセージ分布、ゲノム局在性、および生化学的試験の結果などから）は、主な自然発生的なレセプタの組み合わせが、α１β２γ２、α２β３γ２、α３β３γ２、およびα５β３γ２であることを示唆している。
【０００４】
ＧＡＢＡ（レセプタ複合体に対し２個）に対するＧＡＢＡＡレセプタ結合部位は、αおよびβサブユニットからのアミノ酸によって形成される。αおよびγサブユニットからのアミノ酸は共に、レセプタ当たり１個のベンゾジアゼピン部位を形成し、この部位でベンゾジアゼピンはその薬理活性を発揮する。更に、ＧＡＢＡＡレセプタは他の数種類の薬物との相互作用部位を含んでいる。これとしては、ステロイド結合部位、ピクロトキシン部位、およびバルビツレート部位が挙げられる。ＧＡＢＡＡレセプタのベンゾジアゼピン部位はレセプタ複合体上の明瞭な部位であって、他の種類の薬物またはＧＡＢＡとの相互作用部位とは重複しない。
【０００５】
典型的なアロステリック機構では、ベンゾジアゼピン部位に薬物が結合すると、ＧＡＢＡに対するＧＡＢＡレセプタの親和力が変化する。ＧＡＢＡの性能を高めてＧＡＢＡＡレセプタチャネルを開くベンゾジアゼピン類とその関連薬物は、ＧＡＢＡを強める程度に応じて作用薬または部分的作用薬として知られる。同じ部位を占めてＧＡＢＡの作用を低下させる、β−カルボリン（carboline）誘導体など別の種類の薬物は、逆作用薬と呼ばれる。同じ部位を占め、更にＧＡＢＡ活性への影響の少ない、または影響しない化合物は、作用薬または逆作用薬の働きを妨げることができるため、ＧＡＢＡＡレセプタ拮抗薬と呼ばれる。
【０００６】
ベンゾジアゼピン部位で作用する薬物の重要なアロステリック調節効果は早くから認められ、異なるレセプタサブタイプでの活性の分布は、多くの薬理学的発見がなされている分野である。ベンゾジアゼピン部位に働く作用薬は、抗不安、鎮静、鎮痙、および催眠効果を示すものとして知られる一方、この部位で逆作用薬として働く化合物は、不安発生、認識力増強、および前痙攣発生効果を誘発する。
【０００７】
ベンゾジアゼピン類は抗不安剤として長い間親しまれてきた薬剤であるが、この化合物は、認知障害、鎮静作用、運動失調、エタノールの影響の相乗作用など、多くの好ましくない副作用を示すことがあり、また耐性や薬物依存を起こし易い。従って当該技術においては、ＧＡＢＡＡレセプタの活性化および／または活性を調節する治療薬が更に求められている。本発明はこの要求を満たし、更にまたこれに関連した利点を提示するものである。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、ＧＡＢＡＡレセプタの活性化および／またはＧＡＢＡＡレセプタの関与するシグナル変換を調節する化合物を提示する。このようなＧＡＢＡＡレセプタモジュレータは、望ましくは親和力が高く、および／または選択性の高いＧＡＢＡＡレセプタリガンドであり、ヒトＧＡＢＡＡレセプタなどのＧＡＢＡＡレセプタの、作用薬、逆作用薬、または拮抗薬として作用する。このためこれらは様々なＣＮＳ疾患の治療に有用である。
【０００９】
ある態様においては、本件に提示のＧＡＢＡＡレセプタモジュレータは、構造式Ｉで示される置換イミダゾロピラジン類およびトリアゾロピラジン類またはその薬学的許容体である。
【化１】
2007501272.tif 000003
構造式Ｉ
式中、Ｚ１は窒素またはＣＲ１であり、Ｚ２は窒素またはＣＲ２であり、Ｚ３は窒素またはＣＲ３であって、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３の１つ以上、２つ以下は窒素である。
Ａｒは、フェニル、ナフチル、または５〜１０員のヘテロアリールを示すものであって、そのそれぞれは必要に応じて置換基されており、望ましくは、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルケニル、Ｃ１〜Ｃ８アルキニル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、（Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル）Ｃ０〜Ｃ４アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル）Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ８アルキルエーテル、Ｃ１〜Ｃ８アルカノン、Ｃ１〜Ｃ８アルカノイル、３〜７員のヘテロシクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルコキシ、オキソ、Ｃ１〜Ｃ８ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アミノアルキル、および、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）アミノ（Ｃ０〜Ｃ８アルキル）より独立して選ばれる、０〜４個の置換基で置換されている。
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４はそれぞれ、（ａ）および（ｂ）より独立して選ばれ、
（ａ）は、水素、ハロゲン、ニトロ、およびシアノであり、
（ｂ）は、次の構造式で示される基である。
【化２】
2007501272.tif 000004
式中、
Ｌは、共有単結合またはＣ１〜Ｃ８アルキルである。
Ｇは、共有単結合、Ｎ（ＲＢ）、Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＢ）、Ｎ（ＲＢ）Ｃ（＝Ｏ）、Ｓ（Ｏ）ｍ、ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）、Ｓ（Ｏ）ｍＮ（ＲＢ）、またはＮ（ＲＢ）Ｓ（Ｏ）ｍであって、ｍは、０、１、または２である。
ＲＡおよび各ＲＢは、（ｉ）および（ｉｉ）より独立して選ばれ、
（ｉ）は、水素であり
（ｉｉ）は、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、（Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル）Ｃ０〜Ｃ４アルキル、（３〜６員のヘテロシクロアルキル）Ｃ０〜Ｃ４アルキル、（アリール）Ｃ０〜Ｃ２アルキル、または（ヘテロアリール）Ｃ０〜Ｃ２アルキルであって、そのそれぞれは必要に応じて置換されており、望ましくは、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイル、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、およびＣ１〜Ｃ４ハロアルコキシより独立して選ばれる、０〜４個の置換基で置換されている。
Ｒ５は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、あるいはモノまたはジ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）アミノであって、そのそれぞれは、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ２ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ２ハロアルコキシ、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）アミノ、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、フェニルＣ０〜Ｃ４アルキル、およびフェニルＣ１〜Ｃ４アルコキシより独立して選ばれる、０〜５個の置換基で置換されている。
Ｒ６およびＲ７は独立して、水素、ハロゲン、メチル、またはエチルである。
Ｒ８は、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）アミノ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ２ハロアルキル、およびＣ１〜Ｃ２ハロアルコキシより独立して選ばれる、０、１、または２個の置換基を示す。
【００１０】
別の態様では、本発明は、薬学的に許容可能なキャリヤ、賦形薬（diluent）、または賦形剤（excipient）と組み合わせた、上記の化合物またはその薬学的許容体の１つ以上を含む薬剤組成物を提示する。容器に入れたこれらの薬剤組成物と、この組成物を、不安、うつ病、睡眠障害、注意欠陥障害、またはアルツハイマー痴呆などのＣＮＳ疾患を罹患した患者の治療に使用するための使用説明書と、を含む包装済み医薬製剤も提示する。
【００１１】
本発明は更に別の態様において、特定のＣＮＳ疾患、例えば、不安、うつ病、睡眠障害、注意欠陥障害、精神分裂病、またはアルツハイマー痴呆などを罹患した患者の治療法を提示する。この方法は、このような疾患の治療を必要とする患者に、ＧＡＢＡＡレセプタを調節する量の前述の化合物またはその薬学的許容体を投与する工程を含む。患者の短期記憶を向上させる方法も提示する。この方法は、このような疾患の治療を必要とする患者に、ＧＡＢＡＡレセプタを調節する量の前述の化合物またはその薬学的許容体を投与する工程を含む。特定のＣＮＳ疾患を罹患した、ヒト、飼い慣らされたコンパニオンアニマル（ペット）、または家畜動物の、効果的な量の本発明の化合物を用いた治療も本発明に含まれる。
【００１２】
別の態様では、本発明は、他のＣＮＳ活性化合物の作用を相乗的に強める方法を提示する。この方法は、他のＣＮＳ活性化合物の投与と共に、ＧＡＢＡＡレセプタを調節する量の構造式Ｉの化合物またはその薬学的許容体を投与する工程を含む。
【００１３】
本発明は更に、試料（例えば、組織片）中におけるＧＡＢＡＡレセプタ類の位置測定用プローブとしての構造式Ｉの化合物の使用に関する。ある実施の形態では、オートラジオグラフィを用いてＧＡＢＡＡレセプタ類を検出する。更に、本発明は、試料中におけるＧＡＢＡＡレセプタの存在または不在の決定法を提示する。この方法は、（ａ）化合物がＧＡＢＡＡレセプタに結合するような条件下で、試料を前述の化合物と接触させる工程と、（ｂ）ＧＡＢＡＡレセプタに結合していない化合物を除去する工程と、（ｃ）ＧＡＢＡＡレセプタに結合した化合物の量を検出する工程と、を含む。
【００１４】
更に別の態様では、本発明は、中間体を含む、本件に開示の化合物の製造法を提示する。
【００１５】
本発明のこれらの、またその他の態様は、以下の詳細な記述を参照することにより明らかとなろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
前述のように、本発明は、構造式Ｉで示される、イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン類、イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン類、［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン類、および［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピラジン類などの、置換イミダゾロピラジン類およびトリアゾロピラジン類を提示する。ある望ましい化合物は、望ましくは高い選択性でＧＡＢＡＡレセプタと結合する。ある望ましい化合物は更に、脳機能を改善する。特定の作動理論に限定しようとするものではないが、このような化合物とＧＡＢＡＡレセプタのベンゾジアゼピン部位との相互作用によりこれらの化合物の薬理効果が生じると考えられる。このような化合物は、 in vitro または in vivo において、ＧＡＢＡＡレセプタ類の位置測定、または様々な状況におけるＧＡＢＡＡレセプタ活性の調節に使用できる。
【００１７】
＜化学的記述および用語＞
本件に提示の化合物は一般的に標準命名法を用いて記述する。不斉中心を持つ化合物については、（特に明記されない限り）全ての光学異性体とその混合物が含まれると理解されたい。特定の立体化学または異性体形が明確に示されていない限り、全てのキラル（エナンチオマーとジアステレオマー）およびラセミ形、また構造式の全ての幾何異性体形も含まれる。オレフィン類、Ｃ＝Ｎ二重結合、等の多くの幾何異性体も、本件に示す化合物に含むことができ、またこれら安定な異性体は全て本発明内に意図するものである。本発明の化合物のシスおよびトランス幾何異性体を示し、更に異性体混合物としてまたは別々の異性体形として単離しても良い。挙げられた化合物には更に、１つ以上の原子を同位体（すなわち、同じ原子番号を持つが質量数の異なる原子）で置き換えた化合物も含まれる。一般的な例として（限定するものではない）、水素の同位体としてはトリチウムとジュウテリウムが挙げられ、炭素の同位体としては１１Ｃ、１３Ｃ、および１４Ｃが挙げられる。
【００１８】
本件では、ある化合物を、変数を含む一般構造式を用いて示す。特に明記のない限り、この式中の各変数は、他の変数とは独立して定義され、式中に１度以上現われた変数はいずれも各表記毎に独立して定義される。このため、例えば、ある基が０〜２個のＲ＊で置換されていると示された場合、この基は置換されていないか、または２個までのＲ＊基で置換されており、また表記毎のＲ＊は、Ｒ＊の定義の中から独立して選ばれる。更に、置換基および／または変数の組み合わせは、このような組み合わせが安定な化合物となる場合にのみ可能であることは明らかであろう。
【００１９】
本件で用いる“置換イミダゾロピラジン類およびトリアゾロピラジン類”とは、構造式Ｉの化合物と、更にその薬学的許容体を指す。
【００２０】
本件に挙げた化合物の“薬学的許容体”には、このような化合物の薬学的に許容可能な塩類、エステル類、水和物類、包接化合物類、およびプロドラッグ類、また、全ての結晶形が含まれる。ここで用いる薬学的許容塩とは、ヒトまたは動物の組織と接触させて用いるのに適していると当該技術で一般的に考えられる、酸または塩基塩であって、強い毒性、刺激性、アレルギー反応、または他の問題あるいは合併症がなく、妥当な利益／リスク比に収まっているものである。このような塩類としては、アミン類などの塩基性残基の無機および有機酸塩類、またカルボン酸類などの酸性残基のアルカリまたは有機塩類が挙げられる。具体的な薬物塩としては、塩酸、リン酸、臭化水素酸、リンゴ酸、グリコール酸、フマル酸、硫酸、スルファミン酸、スルファニル酸、ギ酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、エタンジスルホン酸、２−ヒドロキシエチルスルホン酸、硝酸、安息香酸、２−アセトキシ安息香酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、ステアリン酸、サリチル酸、グルタミン酸、アスコルビン酸、パモイック酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、プロピオン酸、ヒドロキシマレイン酸、ヨウ化水素酸、フェニル酢酸、酢酸などのアルカン酸、ＨＯＯＣ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ  （式中、ｎは０〜４）、等の酸類の塩が挙げられる（これらに限定するものではない）。同様に、薬学的に許容可能なカチオンとしては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アルミニウム、リチウム、およびアンモニウムが挙げられる（これらに限定するものではない）。一般的な当業者ならば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, p. 1418 (1985)に挙げられているものなど、本件に提示の化合物に対する薬学的許容塩を更に挙げることができよう。一般に薬学的許容塩は、塩基性または酸性部分を持つ親化合物から、一般的な化学的方法のいずれかにより、例えば、本化合物の遊離酸または塩基体を化学量論量の適当な塩基または酸と、水、有機溶媒、または２つの混合物（一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルなどの非水性媒体が望ましい）中で反応させることにより合成可能である。
【００２１】
“プロドラッグ”とは、構造式Ｉの構造条件を完全に満たしてはいないが、患者に投与後、生体内（in vivo）で変化して構造式Ｉの化合物を生じる化合物である。例えばプロドラッグは本件で提示の化合物のアクリル酸エステル誘導体である。プロドラッグ類には、ヒドロキシ、アミン、またはメルカプト基に何らかの基が結合していて、ほ乳類である患者（畜）に投与すると、開裂してそれぞれ遊離ヒドロキシル、アミノ、またはメルカプト基を生じるような化合物が含まれる。プロドラッグ類の例としては、本件に提示の化合物中のアルコールおよびアミン官能基の、酢酸、ギ酸、および安息香酸誘導体が挙げられる（これらに限定するものではない）。構造式Ｉの化合物のプロドラッグ類は、例えば、修飾したものが in vivo で開裂して構造式Ｉの化合物を生成するよう、化合物中にある官能基を修飾して調製する。
【００２２】
本件で用いる“置換基”とは、当該分子の中の原子に共有結合する分子部分を指す。例えば、“環置換基”は、環員である原子（望ましくは炭素または窒素原子）に共有結合した、ハロゲン、アルキル基、ハロアルキル基、または本件に述べるその他の置換基などの部分である。本件で用いる“置換した”とは、指定された原子上のどれか１つまたはそれ以上の水素を、指定された原子の通常の原子価を超えないように、表示の置換基から選んだもので置き換え、置換によって安定な化合物（すなわち、単離、特定、および生物活性試験に供試可能な化合物）が生成することを意味する。置換基がオキソ（すなわち、＝Ｏ）である場合、原子上の２つの水素が置き換わる。芳香族部分をオキソ基で置換すると、芳香環はそれに対応する部分不飽和環に置き換わる。例えば、オキソで置換されたピリジル基はピリドンである。
【００２３】
“必要に応じて置換された”とは、基が置換されていないか、あるいは置換可能な位置、一般に、１、２、３、４、または５の位置のいずれか１つ以上が、本件に開示のものなどの１つ以上の適当な置換基で置換されていることを示す。必要に応じた置換は、“０〜Ｘ個の置換基で置換”（Ｘは置換基の最大数）という句でも示される。適当な置換基としては、例えば、ハロゲン、シアノ、アミノ、ヒドロキシ、ニトロ、アジド、カルボキサミド、−ＣＯＯＨ、ＳＯ２ＮＨ２、アルキル（例えば、Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、アルケニル（例えば、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル）、アルキニル（例えば、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル）、アルコキシ（例えば、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ）、アルキルエーテル（例えば、Ｃ２〜Ｃ８アルキルエーテル）、アルキルチオ（例えば、Ｃ１〜Ｃ８アルキルチオ）、ハロアルキル（例えば、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル）、ヒドロキシアルキル（例えば、Ｃ１〜Ｃ８ヒドロキシアルキル）、アミノアルキル（例えば、Ｃ１〜Ｃ８アミノアルキル）、ハロアルコキシ（例えば、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルコキシ）、アルカノイル（例えば、Ｃ１〜Ｃ８アルカノイル）、アルカノン（例えば、Ｃ１〜Ｃ８アルカノン）、アルカノイルオキシ（例えば、Ｃ１〜Ｃ８アルカノイルオキシ）、アルコキシカルボニル（例えば、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシカルボニル）、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）アミノ、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）アミノＣ１〜Ｃ８アルキル、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）カルボキサミド、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）スルホンアミド、アルキルスルフィニル（例えば、Ｃ１〜Ｃ８アルキルスルフィニル）、アルキルスルホニル（例えば、Ｃ１〜Ｃ８アルキルスルホニル）、アリール（例えば、フェニル）、アリールアルキル（例えば、ベンジルやフェネチルなどの（Ｃ６〜Ｃ１８アリール）Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、アリールオキシ（例えば、フェノキシなどのＣ６〜Ｃ１８アリールオキシ）、アリールアルコキシ（例えば、（Ｃ６〜Ｃ１８アリール）Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ）、および／または３〜８員の複素環基（例えば、クマリニル、キノリニル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジル、フリル、ピロリル、チエニル、チアゾリル、オキサゾリル、イミダゾリル、インドリル、ベンゾフラニル、ベンゾチアゾリル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ピペリジニル、モルホリノ、またはピロリジニル）が挙げられる。本件に提示の構造式中の基は、必要に応じて、１〜３、１〜４、または１〜５個の、独立して選ばれる置換基で置換されている。
【００２４】
２つの文字または記号に挟まれていないダッシュ（“−”）は、置換基の結合位置を示すために用いる。例えば、−ＣＯＮＨ２は炭素原子を経て結合している。
【００２５】
本件で用いる“アルキル”は、分枝および直鎖両方の飽和脂肪族炭化水素基を含むもので、明記されている場合には示された数の炭素原子を含んでいる。つまり、本件で用いるＣ１〜Ｃ６アルキルとは、１〜６個の炭素原子を含むアルキル基を指す。本件で用いる“Ｃ０”は共有単結合を示し、例えば“Ｃ０〜Ｃ４アルキル”とは、共有単結合またはＣ１〜Ｃ４アルキル基を指す。アルキル基としては、１〜８個の炭素原子を含む基（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、１〜６個の炭素原子を含む基（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、および１〜４個の炭素原子を含む基（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）が挙げられ、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、２−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、２−ヘキシル、３−ヘキシル、および３−メチルペンチルである。ある実施の形態では、望ましいアルキル基は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、および３−ペンチルである。“アミノアルキル”は、本件で定義したアルキル基を１つ以上の−ＮＨ２置換基で置換したものである。“ヒドロキシアルキル”は、本件で定義したアルキル基を１つ以上の−ＯＨ置換基で置換したものである。
【００２６】
“アルケニル”とは、１つ以上の不飽和炭素−炭素結合を含む直鎖または分枝炭化水素鎖、例えばエテニルおよびプロペニルを指す。アルケニル基としては、それぞれ２〜８、２〜６、または２〜４個の炭素原子を含む、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、およびＣ２〜Ｃ４アルケニル基、例えば、エテニル、アリル、またはイソプロペニルが挙げられる。
【００２７】
“アルキニル”とは、１つ以上の炭素−炭素三重結合を含む直鎖または分枝炭化水素鎖を指す。アルキニル基としては、それぞれ２〜８、２〜６、または２〜４個の炭素原子を含む、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、およびＣ２〜Ｃ４アルキニル基が挙げられる。アルキニル基としては、例えばエチニルおよびプロピニルなどの基が挙げられる。
【００２８】
“シクロアルキル”は、全ての環員が炭素である飽和環状基、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルである。このような基は一般に、３〜約８個の環炭素原子を含み、ある実施の形態においては、このような基は３〜７個の環炭素原子を持つ。シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、またはシクロヘキシル、更に、ノルボルナンまたはアダマンタンなどの架橋またはかご形飽和環基、等が挙げられる。置換されている場合、ハロゲン、シアノ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、またはＣ２〜Ｃ８アルカノイルなどの示された置換基は、どの環炭素原子に結合しても良い。
【００２９】
“（シクロアルキル）アルキル”においては、“シクロアルキル”および“アルキル”は先に定義したとおりであり、結合位置はアルキル基上にある。この用語は、シクロプロピルメチル、シクロヘキシルメチル、およびシクロヘキシルエチルを含む（これらに限定するものではない）。“（Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル）Ｃ０〜Ｃ４アルキル”とは、共有単結合またはＣ１〜Ｃ４アルキル基を経て結合した３〜７員のシクロアルキル基を指す。同様に、“（Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル）Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ”とは、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ基を経て結合した３〜７員のシクロアルキル基を指す。
【００３０】
本件で用いる“アルコキシ”とは、酸素を介して結合した前述のアルキル、アルケニル、またはアルキニル基を意味する。アルコキシ基としては、それぞれ１〜６または１〜４個の炭素原子を持つ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシおよびＣ１〜Ｃ４アルコキシ基が挙げられる。具体的なアルコキシ基は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、２−ペントキシ、３−ペントキシ、イソペントキシ、ネオペントキシ、ヘキソキシ、２−ヘキソキシ、３−ヘキソキシ、および３−メチルペントキシである。同様に、“アルキルチオ”とは、硫黄を介して結合した前述のアルキル、アルケニル、またはアルキニル基を指す。
【００３１】
本件で用いる“アルキルスルフィニル”とは、構造式  −（ＳＯ）−アルキル  で示され、硫黄原子が結合点である基を指す。アルキルスルフィニル基としては、それぞれ１〜６、または１〜４個の炭素原子を含む、Ｃ１〜Ｃ６アルキルスルフィニルおよびＣ１〜Ｃ４アルキルスルフィニル基が挙げられる。
【００３２】
“アルキルスルホニル”とは、構造式  −（ＳＯ２）−アルキル  で示され、硫黄原子が結合点である基を指す。アルキルスルホニル基としては、それぞれ１〜６または１〜４個の炭素原子を含む、Ｃ１〜Ｃ６アルキルスルホニルおよびＣ１〜Ｃ４アルキルスルホニル基が挙げられる。メチルスルホニルがアルキルスルホニル基の一例である。
【００３３】
“アルキルスルホンアミド”とは、構造式  −（ＳＯ２）−ＮＲ２  で示され、硫黄原子が結合点であり、各Ｒが独立して水素またはアルキルである基を指す。“モノまたはジ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）スルホンアミド”とは、１つのＲがＣ１〜Ｃ６アルキルで他のＲが水素、あるいは独立して選ばれたＣ１〜Ｃ６アルキルである基を指す。
【００３４】
“アルカノイル”とは、カルボニルを介して結合した先に定義のアルキル基を指す。アルカノイル基としては、それぞれ２〜８、２〜６、または２〜４個の炭素原子を含む、Ｃ２〜Ｃ８アルカノイル、Ｃ２〜Ｃ６アルカノイル、およびＣ２〜Ｃ４アルカノイル基が挙げられる。“Ｃ１アルカノイル”とは、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｈ  を指し、これは（Ｃ２〜Ｃ８アルカノイルと共に）“Ｃ１〜Ｃ８アルカノイル”に含まれる。エタノイルはＣ２アルカノイルである。
【００３５】
本件で用いる“オキソ”とは、ケト基（Ｃ＝Ｏ）を指す。非芳香環の置換基がオキソ基であると、−ＣＨ２−  が  −Ｃ（＝Ｏ）−  に変わる。芳香環にオキソ置換基を導入すると芳香族性が失われることは明らかである。
【００３６】
“アルカノン”は、示された数の炭素原子を含む先に定義のアルキル基の少なくとも１つの位置をオキソ基で置換したものである。“Ｃ３〜Ｃ８アルカノン”、“Ｃ３〜Ｃ６アルカノン”、および“Ｃ３〜Ｃ４アルカノン”とは、それぞれ３〜８、６、または４個の炭素原子を含むアルカノンを指す。例えば、Ｃ３アルカノン基は、−ＣＨ２−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ３の構造を持つ。
【００３７】
同様に、“アルキルエーテル”は、炭素−炭素結合を介して結合した直鎖または分枝エーテル置換基を指す。アルキルエーテル基としては、それぞれ２〜８、６、または４個の炭素原子を含む、Ｃ２〜Ｃ８アルキルエーテル、Ｃ２〜Ｃ６アルキルエーテル、およびＣ２〜Ｃ４アルキルエーテル基が挙げられる。例えば、Ｃ２アルキルエーテル基は、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３の構造を持つ。
【００３８】
“アルコキシカルボニル”とは、カルボニルを介して結合したアルコキシ基（すなわち、一般構造式  −Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−アルキル  を持つ基）を指す。アルコキシカルボニル基としては、それぞれ２〜８、６、または４個の炭素原子を含む、Ｃ２〜Ｃ８、Ｃ２〜Ｃ６、およびＣ２〜Ｃ４アルコキシカルボニル基が挙げられる。“Ｃ１アルコキシカルボニル”とは、−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＨを指し、これは“Ｃ１〜Ｃ８アルコキシカルボニル”に含まれる。これらの基はアルキルカルボキシラート基とも呼ばれる。例えば、メチルカルボキシラートは、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ＣＨ３であり、エチルカルボキシラートは、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ３である。
【００３９】
“アルキルアミノ”とは、一般構造式  −ＮＨ−アルキル、または  −Ｎ（アルキル）（アルキル）を持ち、それぞれのアルキルが同じまたは異なる、２級または３級アミンを指す。このような基としては、例えば、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）アミノ基（それぞれのアルキルは同じまたは異なるもので、１〜８個の炭素原子を含む）、また、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）アミノ基、およびモノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）アミノ基が挙げられる。
【００４０】
“アルキルアミノアルキル”とは、アルキル基を介して結合したアルキルアミノ基（すなわち、一般構造式  −アルキル−ＮＨ−アルキル、または  −アルキル−Ｎ（アルキル）（アルキル）  を持つ基であって、各アルキルは独立して選ばれる）を指す。このような基としては、例えば、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）アミノＣ１〜Ｃ８アルキル、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）アミノＣ１〜Ｃ６アルキル、および、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）アミノＣ１〜Ｃ４アルキル（それぞれのアルキルは同じまたは異なる）が挙げられる。“モノまたはジ（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）アミノＣ０〜Ｃ８アルキル”とは、共有単結合またはＣ１〜Ｃ８アルキル基を経て結合したモノまたはジ（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）アミノ基を指す。このような基の例としては、メチルアミノメチル、およびジエチルアミノメチル、また次の構造式で示されるものが挙げられる。
【化３】
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【００４１】
“カルボキサミド”とは、アミド基（すなわち、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）を指す。
【００４２】
“ハロゲン”とは、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を指す。
【００４３】
“ハロアルキル”は、１つ以上のハロゲン原子で置換された分枝または直鎖アルキル基（例えば、“ハロＣ１〜Ｃ８アルキル”基は１〜８個の炭素原子を含み、“ハロＣ１〜Ｃ６アルキル”基は１〜６個の炭素原子を含む）である。ハロアルキル基の例としては、モノ、ジ、またはトリフルオロメチル；モノ、ジ、またはトリクロロメチル；モノ、ジ、トリ、テトラ、またはペンタフルオロエチル；および、モノ、ジ、トリ、テトラ、またはペンタクロロエチルが挙げられる（これらに限定するものではない）。典型的なハロアルキル基は、トリフルオロメチルとジフルオロメチルである。本件に提示のある化合物は、５または３個以下のハロアルキル基を含む。“ハロアルコキシ”とは、酸素を介して結合した、先に定義のハロアルキル基を指す。“ハロＣ１〜Ｃ８アルコキシ”基は１〜８個の炭素原子を含む。
【００４４】
本件で用いる“炭素環”または“炭素環基”とは、単環または２環縮合環、側鎖の環、あるいはスピロ環を持ち、それぞれの環が３〜８個の原子から成り、全ての環原子が炭素である、飽和、部分不飽和、または芳香族基を示す。炭素環基は、安定した構造となるようないずれかの炭素原子を介して結合し、また生成する化合物が安定ならば、炭素原子のいずれかを置換しても良い。炭素環基としては、シクロアルキル、シクロアルケニル、およびアリール基が挙げられる。二環式炭素環基は、１個のシクロアルキル環と、１個の部分不飽和環または芳香環を持つもの（例えば、テトラヒドロナフチル基）でも良い。
【００４５】
本件で用いる“アリール”とは、(１つ以上の)芳香環中に炭素のみを含む芳香族基を示す。このような芳香族基は更に炭素または非炭素原子または基で置換されていても良い。典型的なアリール基は、１〜３個の、単環、縮合環、スピロ環、または側鎖の環を含み、環構成原子は６〜約１８個であるが、環員としてヘテロ原子を含まないものである。代表的なアリール基としては、フェニル、ナフチル（１−ナフチルと２−ナフチルを含む）、およびビフェニルが挙げられる。“（アリール）Ｃ０〜Ｃ２アルキル”とは、共有単結合、メチル、またはエチルを介して結合したアリール基（望ましくは、Ｃ６〜Ｃ１０アリール基）を指す。“フェニルＣ０〜Ｃ４アルキル”とは、共有単結合またはＣ１〜Ｃ４アルキル基を介して結合したフェニル基を指す。同様に、“フェニルＣ１〜Ｃ４アルコキシ”とは、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ基を経て結合したフェニル基を指す。
【００４６】
“ヘテロ原子”は炭素以外の原子であって、例えば、酸素、硫黄、または窒素などである。
【００４７】
“複素環”または“複素環基”は、それぞれの環が３〜８個の原子から成る１または２個の環を持つ、飽和、部分不飽和、または芳香族基であって、そのうちの少なくとも１つの環に、Ｎ、Ｏ、およびＳより独立して選ばれる１〜４個のヘテロ原子を含むものを示すために用いられる。複素環は、安定な構造となるならばどのヘテロ原子または炭素原子で結合しても良く、また生成する化合物が安定ならば、（１つ以上の）炭素および／または窒素原子上に置換基を持つものでも良い。窒素および／または硫黄ヘテロ原子はいずれも必要に応じて酸化し、また窒素はいずれも必要に応じて４級化できる。二環式複素環基は、（必ずしもではないが）１個の飽和環と１個の部分不飽和または芳香環を含むもの（例えば、テトラヒドロキノリニル基）でも良い。
【００４８】
ある複素環は、“ヘテロアリール”（すなわち、１〜４個のヘテロ原子を含む少なくとも１つの芳香環を含む基）、例えば、５〜１０員のヘテロアリール基（例えば、５〜７員の単環基、または７〜１０員の二環基）である。ヘテロアリール基中のＳとＯ原子の総数が１を超える場合、これらのヘテロ原子は互いに隣接せず、ヘテロアリール中のＳとＯ原子の総数は、１、２、または３以下が望ましく、より望ましくは１または２、最も望ましくは１以下である。ヘテロアリール基の例としては、ピリジル、フラニル、インドリル、ピリミジニル、ピリジジニル、ピラジニル、イミダゾリル、オキサゾリル、チエニル、チアゾリル、トリアゾリル、イソキサゾリル、キノリニル、ピロリル、ピラゾリル、および５，６，７，８−テトラヒドロイソキノリンが挙げられる。“５または６員のヘテロアリール”は、５または６個の環員を含む単環ヘテロアリールである。“（ヘテロアリール）Ｃ０〜Ｃ２アルキル”とは、共有単結合、メチル、またはエチルを介して結合したヘテロアリール基（望ましくは５〜１０員のヘテロアリール基）を指す。
【００４９】
その他の複素環は、本件では“ヘテロシクロアルキル”（すなわち、飽和複素環）と呼ぶ。ヘテロシクロアルキル基は、３〜約８個の環原子、より一般的には３〜７個、または５〜７個の環原子を含む。ヘテロシクロアルキル基の例としては、モルホリニル、ピペラジニル、およびピロリジニルが挙げられる。“（３〜６員のヘテロシクロアルキル）Ｃ０〜Ｃ４アルキル”とは、共有単結合、またはＣ１〜Ｃ４アルキル基を介して結合した、３〜６個の環原子を含むヘテロシクロアルキル基を指す。
【００５０】
“ＧＡＢＡＡレセプタ”および“ベンゾジアゼピンレセプタ”とは、検出可能な程度にＧＡＢＡと結合し、投与量に応じて塩化物伝導性と膜分極を変えるタンパク複合体を指す。天然由来の哺乳動物（特に、ヒトまたはラット）ＧＡＢＡＡレセプタサブユニットを含むレセプタが一般に望ましいが、レセプタのＧＡＢＡへの結合性を著しく阻害しない（すなわち、レセプタのＧＡＢＡに対する結合親和性が５０％以上保たれる）程度にサブユニットを修飾しても良い。ＧＡＢＡに対してＧＡＢＡＡレセプタとなり得るものの結合親和性は、本件に提示の標準リガンド結合性試験法を用いて評価できる。“ＧＡＢＡＡレセプタ”の範疇に入るものには、様々なＧＡＢＡＡレセプタサブタイプがあることは明らかである。このようなサブタイプとしては、α２β３γ２、α３β３γ２、α５β３γ２、およびα１β２γ２レセプタサブタイプが挙げられる（これらに限定するものではない）。ＧＡＢＡＡレセプタは、様々な由来源、例えばラット皮質の調製物から、またはクローン化ヒトＧＡＢＡＡレセプタ発現細胞から得られる。特定のサブタイプは、標準的手法（例えば、本件に示すように、所望のサブユニットをエンコードしたｍＲＮＡをホスト細胞に組み込むことにより）を用いて容易に調製できる。
【００５１】
ＧＡＢＡＡレセプタの“作用薬”は、ＧＡＢＡＡレセプタでのＧＡＢＡの活性を高める化合物である。作用薬は、ＧＡＢＡのＧＡＢＡＡレセプタへの結合性を高めるものでも良い（必ずしもその必要はない）。化合物がＧＡＢＡＡ作用薬として働く力は、実施例１１に提示の試験法などの電気生理学的試験法を用いて求めることができる。
【００５２】
ＧＡＢＡＡレセプタの“逆作用薬”は、ＧＡＢＡＡレセプタでのＧＡＢＡの活性を弱める化合物である。逆作用薬は、ＧＡＢＡのＧＡＢＡＡレセプタへの結合性を阻害するものでも良い（必ずしもその必要はない）。ＧＡＢＡが引き起こすＧＡＢＡＡレセプタ活性の低下は、実施例１１の試験法などの電気生理学的試験法で求めることができる。
【００５３】
ここで用いるＧＡＢＡＡレセプタの“拮抗薬”とは、ＧＡＢＡＡレセプタのベンゾジアゼピン部位を占めるが、ＧＡＢＡＡレセプタでのＧＡＢＡ活性に対する影響の認められない化合物である。このような化合物は、作用薬または逆作用薬の働きを阻害することができる。ＧＡＢＡＡレセプタ拮抗薬の活性は、本件の実施例１０に提示の方法などの適当なＧＡＢＡＡレセプタ結合性試験法と、実施例１１に提示の電気生理学的試験法などの適当な官能性試験法とを組み合わせて用いて求めることができる。
【００５４】
“ＧＡＢＡＡレセプタモジュレータ”は、ＧＡＢＡＡレセプタ作用薬、逆作用薬、または拮抗薬として働く全ての化合物である。ある実施の形態において、このようなモジュレータは、標準ＧＡＢＡＡレセプタ放射性リガンド結合性試験において１マイクロモル(μＭ)以下の親和定数（affinity constant）を示し、または実施例１１に提示の電気生理学的試験において１μＭ以下のＥＣ５０を示す。別の実施の形態では、ＧＡＢＡＡレセプタモジュレータは、５００ナノモル（ｎＭ）、２００ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、２５ｎＭ、１０ｎＭ、または５ｎＭ以下の親和定数またはＥＣ５０を示す。
【００５５】
“ＧＡＢＡＡレセプタ調節量”は、標的ＧＡＢＡＡレセプタにおいてモジュレータが効果的な濃度となるようなＧＡＢＡＡレセプタモジュレータの量である。効果的な濃度とは、実施例１０に示す試験において、３Ｈ−フルマゼニル（Flumazenil）の全特異的結合性の阻害が統計的に有意（すなわち、ｐ≦０．０５とし、スチューデントのｔ検定などの一般的なパラメータ統計分析法を使用して求めた）となるのに十分な濃度である。
【００５６】
ＧＡＢＡＡレセプタにおけるＫｉが１μＭ、望ましくは１００ｎＭ以下、または１０ｎＭ以下ならば、ＧＡＢＡＡレセプタモジュレータは“高い親和性”を持つと言える。ＧＡＢＡＡレセプタにおけるＫｉの代表的な決定法を、本件の実施例１０に示す。Ｋｉは、試験に用いるレセプタサブタイプに応じて変わることは明らかである。つまり、親和性の高い化合物は、“サブタイプ特異的”（すなわち、あるサブタイプに対するＫｉが他のサブタイプより１０倍以上も大きい）である。このような化合物は、少なくとも１つのＧＡＢＡＡレセプタサブタイプに対するＫｉが上記の基準に合致するならば、ＧＡＢＡＡレセプタに対して高い親和性を持つと言える。
【００５７】
他の膜結合レセプタ類への結合におけるＫｉの１０分の１以下、望ましくは１００分の１以下の低いＫｉでＧＡＢＡＡレセプタへ結合するならば、ＧＡＢＡＡレセプタモジュレータは“高い選択性”を持つと言える。詳細には、このような化合物は、以下のレセプタ類、セロトニン、ドパミン、ガラニン、ＶＲ１、Ｃ５ａ、ＭＣＨ、ＮＰＹ、ＣＲＦ、ブラジキニン、およびタキキニンにおいて、ＧＡＢＡＡレセプタより１０倍以上大きいＫｉを持つものである。他のレセプタ類でのＫｉを求めるための試験は、市販の膜レセプタ結合性試験法（例えば、カナダ国トロント、ＭＤＳ  ＰＨＡＲＭＡ  ＳＥＲＶＩＣＥＳ、およびワシントン州レドモンド、ＣＥＲＥＰより入手可能な結合性試験法）などの標準的な結合性試験プロトコルを用いて行うことができる。
【００５８】
“患者（畜）”とは、本件に提示の化合物で治療する全ての個体である。患者（畜）には、ヒトおよび他の動物、例えばコンパニオンアニマルや家畜が含まれる。患者（畜）は、ＣＮＳ疾患を罹患したもの、またはこのような症状のないもの（すなわち、予防的処置）である。
【００５９】
“ＣＮＳ疾患”は、患者のＧＡＢＡＡレセプタの変調による中枢神経系の病気または好ましくない健康状態である。このような障害としては、不安障害（例えば、恐慌性障害、脅迫性障害、広場恐怖症、社会恐怖症、特定的恐怖症、気分変調、適応障害、分離不安、循環気質、および全般性不安障害）、ストレス障害（例えば、心的外傷後ストレス障害、予期不安急性ストレス障害、および急性ストレス障害）、抑うつ性障害（例えば、うつ病、非定型うつ病、双極性障害、および双極性障害の抑うつ相）、睡眠障害（例えば、原発性不眠症、日周期睡眠障害、睡眠異常ＮＯＳ、悪夢障害などの錯眠、夜驚症、またうつ病、不安、および／または他の精神障害から派生した睡眠障害、および物質誘発性睡眠障害）、認知障害（例えば、認知欠陥、軽度認知欠陥（ＭＣＩ）、加齢関連認知低下（ＡＲＣＤ）、精神分裂病、外傷性脳障害、ダウン症候群、アルツハイマー症およびパーキンソン病などの神経変性疾患、および発作）、ＡＩＤＳ関連痴呆、うつ病や不安または精神病に伴う痴呆、注意欠陥障害（例えば、注意欠陥障害および注意欠陥多動障害）、痙攣性障害（例えば、てんかん）、ベンゾジアゼピン過量、薬物およびアルコール嗜癖が挙げられる。
【００６０】
“ＣＮＳ剤”は、ＣＮＳ疾患の治療または予防に用いられる薬物である。ＣＮＳ剤としては、例えば、セロトニンレセプタ（例えば、５−ＨＴ１Ａ）作用薬および拮抗薬と、選択的セロトニン再取り込み阻害剤（ＳＳＲＩ）；ニューロキニンレセプタ拮抗薬；副腎皮質刺激ホルモン放出因子レセプタ（ＣＲＦ１）拮抗薬；メラトニンレセプタ作用薬；ニコチン様作用薬；ムスカリン様試剤；アセチルコリンエステラーゼ阻害剤、およびドパミンレセプタ作用薬が挙げられる。
【００６１】
＜置換イミダゾロピラジンおよびトリアゾロピラジン誘導体＞
前述のように、本発明は、先に述べたような変数を含む構造式Ｉの化合物と、そのような化合物の薬学的許容体とを提示する。
【化４】
2007501272.tif 000008
構造式Ｉ
【００６２】
ある実施の形態において、Ａｒは、フェニル、ピリジル、チアゾリル、チエニル、トリアゾロピリジル、ピリジジニル、またはピリミジニルであって、そのそれぞれが、０〜４個の前述の置換基（例えば、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）アミノ、Ｃ２〜Ｃ４アルカノイル、（Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル）Ｃ０〜Ｃ２アルキル、Ｃ１〜Ｃ２ハロアルキル、およびＣ１〜Ｃ２ハロアルコキシより独立して選ばれる、０、１、２、または３個の置換基）で置換されているものを示している。代表的なＡｒ部分としては、例えば、フェニル、ピリジル（例えば、ピリジン−２−イル）、チアゾリル（例えば、１，３−チアゾール−２−イル）、チエニル（例えば、２−チエニル）、ピリジジニル（例えば、ピリジジン−３−イル）、およびトリアゾロピリジル（例えば、［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−５−イル）が挙げられ、そのそれぞれは、クロロ、フルオロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ２アルキルアミノ、Ｃ１〜Ｃ２ハロアルキル、およびＣ１〜Ｃ２ハロアルコキシより独立して選ばれる、０〜３個の置換基で置換されている。ある実施の形態では、Ａｒは、ピリジン−２−イル、３−フルオロピリジン−２−イル、６−フルオロピリジン−２−イル、２，６−ジフルオロフェニル、２，５−ジフルオロフェニル、３−フルオロフェニル、または３−メチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−５−イルを表す。
【００６３】
Ｒ８は、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）アミノ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ２ハロアルキル、およびＣ１〜Ｃ２ハロアルコキシより独立して選ばれる、０、１、または２個の置換基を示す。ある実施の形態では、Ｒ８は、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ２アルキル、およびＣ１〜Ｃ２アルコキシより選ばれる、０または１個の置換基を示す。
【００６４】
上記のように、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４はそれぞれ、（ａ）および（ｂ）より独立して選ばれ、（ａ）は、水素、ハロゲン、ニトロ、およびシアノであり、（ｂ）は、次の構造式で示される基である。
【化５】
2007501272.tif 000009
式中、Ｌは、共有単結合（すなわち、Ｌはない）またはＣ１〜Ｃ８アルキルを示し、Ｇは、共有単結合（すなわち、Ｌは単結合を介して直接ＲＡに結合している）、Ｎ（ＲＢ）、すなわち、
【化６】
2007501272.tif 000010
、Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）、すなわち、
【化７】
2007501272.tif 000011
、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、すなわち、
【化８】
2007501272.tif 000012
、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＢ）、すなわち、
【化９】
2007501272.tif 000013
、Ｎ（ＲＢ）Ｃ（＝Ｏ）、すなわち、
【化１０】
2007501272.tif 000014
、Ｓ（Ｏ）ｍ、すなわち、−Ｓ−、
【化１１】
2007501272.tif 000015
、または
【化１２】
2007501272.tif 000016
、ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）、すなわち、
【化１３】
2007501272.tif 000017
、Ｓ（Ｏ）ｍＮ（ＲＢ）、例えば、
【化１４】
2007501272.tif 000018
、または、Ｎ（ＲＢ）Ｓ（Ｏ）ｍ、例えば、
【化１５】
2007501272.tif 000019
であって、式中、ｍは、０、１、または２であり、ＲＡおよび各ＲＢは前述のとおりである。
【００６５】
ある実施の形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４はそれぞれ、（ａ）および（ｂ）より独立して選ばれ、（ａ）は、水素、ハロゲン、およびシアノであり、（ｂ）は、次の構造式で示される基である。
【化１６】
2007501272.tif 000020
式中、（ｉ）Ｌは、共有単結合、メチレン、またはエチレンであり、（ｉｉ）Ｇは、共有単結合、ＮＨ、Ｎ（ＲＢ）、Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、またはＣ（＝Ｏ）であり、（ｉｉｉ）ＲＡおよびＲＢ（存在する場合）は、（１）および（２）より独立して選ばれ、（１）は水素であり、（２）は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、４〜７員のヘテロシクロアルキル、フェニル、チエニル、ピリジル、ピリミジニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリダジニル、およびピラジニルであって、そのそれぞれは、ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ２アルキル、およびＣ１〜Ｃ２アルコキシより独立して選ばれる、０〜４個の置換基で置換されている。代表的なＲ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４基としては、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ２アルコキシＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜Ｃ２ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ２ハロアルコキシ、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）アミノ、フェニル、およびピリジルが挙げられる。ある実施の形態では、Ｒ１およびＲ４はそれぞれ、水素、メチル、またはエチルである。ある実施の形態では、Ｒ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ２アルコキシＣ１〜Ｃ２アルキル、Ｃ１〜Ｃ２ヒドロキシアルキル、トリフルオロメチル、フェニル、およびピリジルより選ばれる。
【００６６】
ある実施の形態において、ＡｒおよびＲ８は前記のとおりであり、Ｚ１は窒素であり、Ｚ２はＣＲ２である。このような化合物における代表的なＲ２、Ｒ３、およびＲ４基としては、例えば、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、およびＣ１〜Ｃ４アルコキシが挙げられる。他の実施の形態では、ＡｒおよびＲ８は前記のとおりであり、Ｚ１はＣＲ１であり、Ｚ２は窒素である。このような化合物における代表的なＲ１、Ｒ３、およびＲ４としては、例えば、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、およびＣ１〜Ｃ４アルコキシが挙げられる。更に別の実施の形態では、ＡｒおよびＲ８は前記のとおりであり、Ｚ１およびＺ２は窒素である。このような化合物における代表的なＲ３およびＲ４基としては、例えば、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、およびＣ１〜Ｃ４アルコキシが挙げられる。
【００６７】
本件に提示のある化合物においては、Ｒ５は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、あるいは、モノまたはジ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）アミノ（望ましくは、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはＣ２〜Ｃ６アルケニル）であって、そのそれぞれは、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ２アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、フェニルＣ０〜Ｃ２アルキル、およびフェニルＣ１〜Ｃ２アルコキシより独立して選ばれる、０〜２個の置換基で置換されている。Ｒ５基としては、例えば、エチル、プロピル、ブチル、エトキシ、およびメトキシメチルが挙げられる。
【００６８】
Ｒ６およびＲ７は一般に、水素、ハロゲン、または低級アルキルであり、ある実施の形態においては両方とも水素である。
【００６９】
ある化合物において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、（ａ）および（ｂ）より独立して選ばれ、
（ａ）は、水素、ハロゲン、およびシアノであり、
（ｂ）は、次の構造式で示される基である。
【化１７】
2007501272.tif 000021
式中、
（ｉ）Ｌは共有単結合であり、
（ｉｉ）Ｇは、共有単結合、ＮＨ、Ｎ（ＲＢ）、Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、またはＣ（＝Ｏ）であり、
（ｉｉｉ）ＲＡおよびＲＢは、（１）および（２）より独立して選ばれ、（１）は水素であり、（２）は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、（Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル）Ｃ０〜Ｃ２アルキル、フェニル、チエニル、ピリジル、ピリミジニル、チアゾリル、およびピラジニルであって、そのそれぞれは、ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ２アルキル、およびＣ１〜Ｃ２アルコキシより独立して選ばれる、０〜４個の置換基で置換されている。
【００７０】
このような化合物のあるものにおいては、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ２アルコキシＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜Ｃ２ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ２ハロアルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４カルボキシラート、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）アミノ、フェニルＣ０〜Ｃ１アルキル、ピリジルＣ０〜Ｃ１アルキル、および（４〜７員のヘテロシクロアルキル）Ｃ０〜Ｃ１アルキルより独立して選ばれる。このような化合物のひとつのカテゴリーにおいては、Ｒ１およびＲ４は、水素、メチル、およびエチルより独立して選ばれる。
【００７１】
前述のように、Ｚ１は窒素またはＣＲ１であり、Ｚ２は窒素またはＣＲ２であり、Ｚ３は窒素またはＣＲ３である。ある化合物においては、Ｚ１は窒素であり、Ｚ２はＣＲ２であり、Ｚ３はＣＲ３である。このような化合物としては、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４が、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ２アルコキシＣ１〜Ｃ２アルキル、Ｃ１〜Ｃ２ヒドロキシアルキル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、フェニル、およびピリジルより独立して選ばれるものが挙げられる。その他の化合物では、Ｚ１はＣＲ１であり、Ｚ２は窒素であり、Ｚ３はＣＲ３である。このような化合物としては、Ｒ１、Ｒ３、およびＲ４が、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ２アルコキシＣ１〜Ｃ２アルキル、Ｃ１〜Ｃ２ヒドロキシアルキル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、フェニル、およびピリジルより独立して選ばれるものが挙げられる。更に別の化合物では、Ｚ１およびＺ２は窒素であり、Ｚ３はＣＲ３である。このような化合物としては、Ｒ３およびＲ４が、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ２アルコキシＣ１〜Ｃ２アルキル、Ｃ１〜Ｃ２ヒドロキシアルキル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、フェニル、およびピリジルより独立して選ばれるものが挙げられる。その他の化合物においては、Ｚ１およびＺ３は窒素であり、Ｚ２はＣＲ２である。このような化合物としては、Ｒ２およびＲ４が、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ２アルコキシＣ１〜Ｃ２アルキル、Ｃ１〜Ｃ２ヒドロキシアルキル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、フェニル、およびピリジルより独立して選ばれるものが挙げられる。
【００７２】
本件に提示の化合物は、標準的な in vitro レセプタ結合性試験による測定で検出可能なほどに、ＧＡＢＡＡレセプタへのリガンド結合性を変える（調節する）。ここでいう“ＧＡＢＡＡレセプタリガンド結合性試験”とは、実施例１０に提示の標準的な in vitro レセプタ結合性試験を指すものである。つまり、比較試験は、ＧＡＢＡＡレセプタ調製物を、フルマゼニル（Flumazenil）などの標識化（例えば、３Ｈ）リガンドと、非標識の供試化合物と共に培養して行う。検出可能なほどにＧＡＢＡＡレセプタへのリガンド結合性を変える化合物を加えて培養を行うと、化合物の無い状態で結合した標識の量と比較して、ＧＡＢＡＡレセプタ調製物に結合した標識の量が増減すると考えられる。望ましくは、このような化合物は、１μＭ以下、より望ましくは５００ｎＭ、１００ｎＭ、２０ｎＭ、または１０ｎＭ以下のＧＡＢＡＡレセプタでのＫｉを示す。in vitro での結合性の測定に用いるＧＡＢＡＡレセプタは、様々な由来源、例えばラット皮質の調製物から、またはクローン化ヒトＧＡＢＡＡレセプタ発現細胞から得られる。
【００７３】
ある実施の形態において、経口的バイオアベイラビリティ（致死量以下、または好ましくは薬学的に許容可能な経口投与量、望ましく２ｇ以下、より望ましくは１ｇまたは２００ｍｇ、あるいはそれ以下で、検出可能な in vivo 効果を生じることができる）、低毒性（ＧＡＢＡＡレセプタ調節量を患者（畜）に投与しても毒性を示さない化合物が望ましい）、最小限の副作用（ＧＡＢＡＡレセプタ調節量の化合物を患者（畜）に投与した場合に生じる副作用が、プラセボと同程度の化合物が望ましい）、血清タンパク結合性が小さい、適当な in vitro および in vivo 半減期（Ｑ．Ｉ．Ｄ．投与、望ましくはＴ．Ｉ．Ｄ．投与、より望ましくはＢ．Ｉ．Ｄ．投与、最も望ましくは１日１回投与が可能となる in vivo 半減期に等しい、in vitro 半減期を示す化合物が望ましい）などの好ましい薬学的性質を備えた化合物が望ましい。補体活性部位への体内分布も望ましい（例えば、ＣＮＳ疾患の治療に用いる化合物は、望ましくは血液脳関門を通過するが、末梢性疾患の治療に使用する化合物の脳内濃度は一般に低い方が望ましい）。
【００７４】
これらの特性の評価と、特定の用途に優れた化合物の同定には、当該技術で公知のごく一般的な試験法を用いる。例えば、バイオアベイラビリティの予測に用いる試験法としては、Ｃａｃｏ−２細胞単一層などのヒト腸管細胞単一層通過輸送性が挙げられる。ヒトにおける化合物の血液脳関門の通過性は、化合物を投与した（例えば、静脈内に）実験動物における化合物の脳内濃度から予測できる。血清タンパク結合性は、Oravcovaら,(1996) Journal of Chromatography B 677:1-27 に記載のアルブミン結合性試験などから予測できる。化合物の半減期は、効果的な量とするために必要な化合物の投薬頻度に反比例する。化合物の in vitro 半減期は、クーンツ（Kuhnz)およびギーシェン（Gieschen）(1998) Drug Metabolism and Disposition 26:1120-27に記載のミクロソーム半減期の測定から予測できる。
【００７５】
前述のように、本件で提示の望ましい化合物は無毒である。一般的に、本件で用いる“無毒”とは、相対的な意味と理解されるべきもので、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）により哺乳動物（望ましくはヒト）への投与が承認された、あるいは、制定された基準に適い、ＦＤＡにより哺乳動物（望ましくはヒト）への投与が承認され得る物質を指すものである。更に、より望ましい無毒性化合物は一般に次の基準の１つ以上を満たす。（１）細胞のＡＴＰ生産を著しく阻害しない。（２）心臓ＱＴ間隔を有意に延長しない。（３）著しい肝臓腫脹を起こさない。（４）肝酵素の著しい放出を起こさない。
【００７６】
本件で用いる“細胞のＡＴＰ生産を著しく阻害しない”化合物とは、実施例１２に記載の方法で試験した場合に、細胞ＡＴＰ濃度を５０％以上減少させない化合物である。望ましくは、実施例１２に記載の方法で処理した細胞が、未処理細胞で測定されたＡＴＰ濃度の８０％以上のＡＴＰ濃度を示すものである。この試験に用いるモジュレータ濃度は一般に、実施例１１の試験におけるモジュレータのＥＣ５０またはＩＣ５０の、１０倍、１００倍、または１０００倍以上である。
【００７７】
“心臓ＱＴ間隔を有意に延長しない”化合物とは、治療的効果を生じる in vivo 濃度とする最小用量の２倍量を投与したモルモット、ミニブタ、またはイヌにおいて、心臓ＱＴ間隔（心電図記録検査法により測定）に統計的に有意な延長を生じない化合物である。ある望ましい実施の形態では、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１、５、１０、４０、または５０ｍｇ／ｋｇの用量を非経口的または経口的に投与しても、心臓ＱＴ間隔に統計的に有意な延長が生じない。“統計的に有意”とは、スチューデントのｔ検定などの統計的有意性の標準パラメトリック評価を用いた測定で、ｐ＜０．１、より望ましくはｐ＜０．０５の有意水準において対照と差が生じることを意味する。
【００７８】
“著しい肝臓腫脹を起こさない”化合物は、治療的効果を生じる in vivo 濃度とする最小用量の２倍量を、５〜１０日間、実験用齧歯類（例えば、マウスまたはラット）に毎日投与した場合に、肝臓／体重比の増加が、比較対照を１００％以上超えない。より望ましい実施の形態では、この用量で、比較対照の７５％または５０％以上の肝臓の腫脹を起こさない。齧歯類以外のほ乳類（例えば、イヌ）を用いた場合、この用量で、比較用未処理対照の５０％以上、望ましくは２５％以上、更に望ましくは１０％以上の肝臓／体重比の増加を起こしてはならない。このような試験に好ましい用量としては、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１、５、１０、４０、または５０ｍｇ／ｋｇの非経口的または経口的投与が挙げられる。
【００７９】
同様に、“肝酵素の著しい放出を促進しない”化合物は、治療的効果を生じる in vivo 濃度とする最小用量の２倍量を投与した場合に、実験用齧歯類の、ＡＬＴ、ＬＤＨ、またはＡＳＴの血清濃度を、比較用の模擬治療対照の３倍以上（望ましくは２倍以上）には上げない。より望ましい実施の形態では、この用量で、比較対照の７５％または５０％以上、これらの血清濃度を上げない。あるいは、“肝酵素の著しい放出を促進しない”化合物は、in vitro 肝細胞試験において、化合物の最小 in vivo 治療濃度の２倍に等しい濃度（in vitroで肝細胞と接触および培養する培地またはその他同様の溶液中での）で、比較用模擬処理対照細胞の培地で測定されたベースライン濃度を超えて、これら全ての肝酵素の培地への検出可能な放出を引き起こさない。より望ましい実施の形態では、これらの化合物の濃度が化合物の最小 in vivo 治療濃度の５倍、望ましくは１０倍であっても、ベースライン濃度を超えるこれら全ての肝酵素の培地への放出は検出されない。
【００８０】
別の実施の形態では、ある望ましい化合物は、治療的効果を生じる最低 in vivo 濃度に等しい濃度で、ＣＹＰ１Ａ２活性、ＣＹＰ２Ａ６活性、ＣＹＰ２Ｃ９活性、ＣＹＰ２Ｃ１９活性、ＣＹＰ２Ｄ６活性、ＣＹＰ２Ｅ１活性、またはＣＹＰ３Ａ４活性などのミクロソームシトクロムＰ４５０酵素活性を、阻害または誘発しない。
【００８１】
ある望ましい化合物は、治療的効果を生じる最低 in vivo 濃度に等しい濃度で、染色体異常誘発性または突然変異促進性（例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞を用いた vitro 小核試験、マウスリンパ腫試験、ヒトリンパ球染色体異常試験、齧歯類骨髄小核試験、エイムス試験、等の標準試験法を用いて求めた場合）を持たないものである。他の実施の形態では、ある望ましい化合物は、この濃度で姉妹染色分体交換（例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞での）を誘発しない。
【００８２】
検出のため、以下により詳細に述べるように、本件に提示の化合物を同位体によって標識化または放射性標識化する。このような化合物は、前述の化合物と同一であるが、実際には１個以上の原子が、天然に通常見られる原子量または質量数とは異なる原子量または質量数を持つ原子により置き換わったものである。本件に提示の化合物に組み込むことのできる同位体の例としては、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素、および塩素の同位体、例えば、２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、および３６Ｃｌが挙げられる。更に、ジュウテリウム（すなわち、２Ｈ）などの重い同位体で置換すると代謝安定性が高まって、in vivo での半減期が大きくなり、または所要投与量が減少し、治療に有利となるため場合によっては好ましい。
【００８３】
上記のように、ラセミ化合物および光学活性体などの異なる立体異性体も本発明に含まれる。ある実施の形態では、単一の鏡像異性体（すなわち、光学活性体）とすることが好ましい。単一鏡像異性体の標準的製造法としては、不斉合成およびラセミ化合物の分割が挙げられる。ラセミ化合物の分割は、分割剤存在下での結晶化、または、例えばキラルＨＰＬＣカラムを用いたクロマトグラフィなど、一般的な方法で行うことができる。
【００８４】
＜薬剤組成物＞
本発明はまた、少なくとも１つの本件に提示のＧＡＢＡＡレセプタモジュレータを、少なくとも１つの生理学的に許容できるキャリヤまたは賦形剤と組み合わせて含む薬剤組成物を提示する。このような化合物は、ＧＡＢＡＡレセプタの調節が望まれる患者（例えば、苦痛を伴う処置のため健忘症を起こすことが有益な患者、あるいは、不安、うつ病、睡眠障害、または認知障害の患者）の治療に用いられる。薬剤組成物は、例えば、水、緩衝液（例えば、中性緩衝食塩水またはリン酸緩衝食塩水）、エタノール、鉱油、植物油、ジメチルスルホキシド、炭水化物（例えば、グルコース、マンノース、ショ糖、またはデキストラン）、マンニトール、タンパク質、アジュバント、ポリペプチド、または、グリシンなどのアミノ酸、抗酸化剤、ＥＤＴＡなどのキレート化剤、またはグルタチオン、および／または防腐剤を含む。望ましい薬剤組成物は、ヒトまたは他の動物（例えば、犬や猫などのコンパニオンアニマル）への経口投与用に配合したものである。所望ならば、追加のＣＮＳ活性剤など他の活性成分も加えて良い。
【００８５】
薬剤組成物は、例えば、局所、経口、経鼻、直腸、または非経口投与など適当な投与法に応じて配合する。ここで用いる“非経口”には、皮下、皮内、脈管内（例えば、静脈内）、筋肉内、脊髄内、頭蓋内、クモ膜下腔または硬膜下腔内、および腹腔内注射、また同様な注射または注入方法が含まれる。ある実施の形態では、経口使用に適した形の組成物が好ましい。このような形態としては、例えば、錠剤、トローチ、ロゼンジ、水溶液または油状懸濁液、分散可能な粉剤または顆粒、エマルション、硬または軟カプセル、あるいはシロップまたはエリキシルが挙げられる。更に別の実施の形態では、本発明の組成物を凍結乾燥物として調剤する。
【００８６】
経口使用のための組成物は、飲み易い製剤とするために、甘味剤、着香剤、着色剤、または保存料などの１つ以上の成分を更に加える。錠剤は、錠剤の製造に適した生理学的に許容可能な賦形剤と混ぜ合わせた活性成分を含む。このような賦形剤としては、例えば、不活性希釈剤（例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム、またはリン酸ナトリウム）、造粒剤および崩壊剤（例えば、コーンスターチまたはアルギン酸）、結合剤（例えば、澱粉、ゼラチン、またはアラビアゴム）、および滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、またはタルク）が挙げられる。錠剤はコーティングしなくても良く、あるいは、胃腸管での崩壊と吸収を遅らせてより長時間作用を持続させるため、公知の手法でコーティングしても良い。例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延材料を用いることができる。
【００８７】
経口使用用の製剤は、活性成分を不活性固体希釈剤（例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、またはカオリン）と混合した硬ゼラチンカプセルとして、あるいは、活性成分を水または油性媒質（例えば、ピーナツ油、流動パラフィン、またはオリーブ油）と混合した軟ゼラチンカプセルとしても良い。
【００８８】
水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に適した１つ以上の賦形剤と混合した活性材料を含む。このような賦形剤としては、懸濁剤（例えば、ナトリウム＝カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴム、およびアラビアゴム）；および分散または湿潤剤（例えば、レシチンなどの天然由来リン脂質、ポリオキシエチレンステアラートなどのアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物、ヘプタデカエチレンオキシセタノールなどのエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレアートなどの、エチレンオキシドと、脂肪酸とヘキシトールから誘導した部分エステル化物との縮合生成物、あるいは、ポリエチレンソルビタンモノオレアートなどの、エチレンオキシドと、脂肪酸とヘキシトール無水物から誘導した部分エステル化物との縮合生成物）が挙げられる。水性懸濁液には更に、１つ以上の保存料、例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルまたはｎ−プロピル、１つ以上の着色剤、１つ以上の着香剤、および／または１つ以上の甘味剤、例えばショ糖またはサッカリンなどを加えても良い。
【００８９】
油状懸濁液は、活性成分を植物油（例えば、落花生油、オリーブ油、ごま油、またはココナッツオイル）または流動パラフィンなどの鉱油中に懸濁して調製する。油状懸濁液には、みつろう、硬パラフィン、またはセチルアルコールなどの増粘剤を加えても良い。１つ以上の甘味剤および／または着香剤を加えて、飲み易い経口製剤としても良い。このような懸濁液には、アスコルビン酸などの酸化防止剤を加えて保存性を良くすることができる。
【００９０】
水を加えて水性懸濁液を調製するのに適した分散可能な粉および顆粒は、活性成分を分散または湿潤剤、懸濁剤、および１つ以上の保存料と混合して製造する。適当な分散または湿潤剤および懸濁剤の例は既に先に挙げた。甘味剤、着香剤、および着色剤などの追加の賦形剤を加えても良い。
【００９１】
薬剤組成物は水中油エマルションの形としても良い。油相は、植物油（例えば、オリーブ油または落花生油）または鉱油（例えば、流動パラフィン）、あるいはそれらの混合物である。適当な乳化剤は、天然ゴム（例えば、アラビアゴムまたはトラガカントゴム）、天然リン脂質類（例えば、大豆、レシチン、および、脂肪酸とヘキシトールから誘導したエステル化物類または部分エステル化物類）、無水物類（例えば、ソルビタンモノオレアート）、および、脂肪酸とヘキシトールから誘導した部分エステル化物とエチレンオキシドとの縮合生成物（例えば、ポリオキシエチンソルビタンモノオレアート）である。エマルションには更に、甘味剤および／または着香剤を加えても良い。
【００９２】
シロップおよびエリキシルは、グリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール、またはショ糖などの甘味剤を加えて調剤する。この製剤には、１つ以上の粘滑剤、防腐剤、着香剤および／または着色剤を更に加えても良い。
【００９３】
薬剤組成物は、無菌で注入可能な水性または油性懸濁液として調製しても良い。化合物は、使用するビヒクルと濃度に応じて、ビヒクル中へ懸濁させ、または溶解させることができる。このような組成物は、先に示したような適当な分散剤、湿潤剤および／または懸濁化剤を用いた公知の技術に従って調剤する。条件に適ったビヒクルおよび溶媒の中でもよく使われるのは、水、１，３−ブタンジオール、リンゲル液、および等張性塩化ナトリウム溶液である。更に、溶媒または懸濁媒質として、無菌の固定油を用いても良い。これには、合成モノまたはジグリセリドなどの低刺激性固定油が用いられる。更に、注射用組成物の調剤には、オレイン酸などの脂肪酸が使えることもわかった。また、局所麻酔薬、防腐剤、および／または緩衝剤などのアジュバントもビヒクルに溶解可能である。
【００９４】
薬剤組成物は、座薬（例えば、直腸投与用）の形にすることもできる。このような組成物は、常温で固体であるが直腸温では液体となる、つまり直腸内で溶けて薬物を放出する適当な非刺激性の賦形剤と薬物とを混合して調製することができる。適当な賦形剤としては、例えば、カカオ脂およびポリエチレングリコールが挙げられる。
【００９５】
ヒト以外の動物への投与には、組成物を動物の餌または飲料水に加えても良い。動物がその食餌と共に適量の組成物を摂取するよう、動物の餌および飲料水組成物に配合すると便利である。組成物を、餌または飲料水添加用のプレミックスとしても便利である。
【００９６】
薬剤組成物を、徐放性製剤（すなわち、投与後に化合物をゆっくりと放出させるカプセルなどの製剤）として調剤しても良い。このような製剤は一般に公知の技術を用いて調製し、例えば、経口、直腸、または皮下埋め込みにより、あるいは所望の標的部位への埋め込みにより投与する。このような製剤に用いられるキャリヤは生体適合性であり、更に生分解性である。比較的一定した濃度で活性化合物を放出する製剤が望ましい。徐放性製剤に含まれる化合物の量は、埋め込み部位、放出の速度と期待される持続時間、また治療または予防すべき状態の性質に応じて変わる。
【００９７】
本件に提示の化合物は一般に、薬剤組成物に治療的有効量で含まれている。治療的有効量とは、ＣＮＳ疾患の症状が軽減するなど、患者の利益が認められる量である。望ましい濃度は、 in vitro においてＧＡＢＡＡレセプタリガンドのＧＡＢＡＡレセプタへの結合を十分に阻害する濃度である。投薬量が、体重当たり１日約０．１〜約１４０ｍｇ／ｋｇ（ヒトの患者に対して１日約０．５ｍｇ〜約７ｇ）の範囲となる組成物が好ましい。キャリヤ材料と組み合わせて１回分の投与体とする活性成分の量は、治療を受ける主体（host）と具体的な投与法に応じて変わる。投薬単位体は一般に約１〜約５００ｍｇの活性成分を含む。しかし、特定の患者に対する最適用量は、使用する特定の化合物の活性；患者の年齢、体重、全身的健康状態、性別、および食事；投与の時間および経路；排出速度；薬の組み合わせなど同時に行われている全ての治療；治療を受ける特定の疾患の種類と重症度など、様々な要因によって決まることは理解されよう。最適用量は、当該技術で公知の通常の試験および手法を用いて定められる。
【００９８】
薬剤組成物を、不安、うつ病、睡眠障害、注意欠陥障害、またはアルツハイマー痴呆などのＣＮＳ疾患の治療用として包装する。包装済み医薬製剤は、治療的有効量の少なくとも１つの本件に示す化合物を納めた容器と、納められた組成物がＣＮＳ疾患の治療に用いられることを示す使用説明書（例えば、ラベル）とを含む。
【００９９】
＜使用法＞
ある態様において、本発明は、ＣＮＳ疾患の進行を抑える方法を提示する。つまり、本件に提示の治療法を、現在ある疾患の治療に用い、あるいは、ＣＮＳ疾患の認められない患者におけるこのような疾患の予防、軽症化、または発症を遅らせるために用いる。ＣＮＳ疾患については以下に更に詳しく述べる。またＣＮＳ疾患は、当該技術において確立された基準を用いて診断および観察する。あるいは、または更に、本件に提示の化合物は、短期記憶の向上のため患者に投与しても良い。患者には、ヒト、飼い慣らされたコンパニオンアニマル（イヌなどのペット）、および家畜動物が含まれ、投与量および治療法は前述のとおりである。
【０１００】
投薬の頻度は、使用する化合物および治療または予防すべき特定の疾病によって変わる。一般に、多くの疾患の治療には、１日４回以下の投薬計画が好ましい。睡眠障害の治療には、速やかに有効濃度に達する１回の投与が望ましい。患者は一般に、治療または予防すべき症状に適した本技術の通常の技術者によく知られた評価法を用いて、治療的効果を観察する。
【０１０１】
望ましい実施の形態では、本件に提示の化合物を、このような疾患の治療を必要とする患者の治療に用いる。一般に、このような患者は、ＧＡＢＡＡレセプタを調節する量、望ましくはＣＮＳ疾患の１つ以上の症状を変えるのに十分な量の、構造式Ｉの化合物（またはその薬学的許容体）を用いて治療する。α２β３γ２およびα３β３γ２レセプタサブタイプでの作用薬として働く化合物は、恐慌性障害、強迫性障害、および全般性不安障害などの不安障害や、心的外傷後ストレスおよび急性ストレス障害などのストレス障害の治療に特に有用である。α２β３γ２およびα３β３γ２レセプタサブタイプでの作用薬として働く化合物は更に、抑うつ性または双極性障害、精神分裂病、および睡眠障害の治療に有用であり、また加齢関連認知低下およびアルツハイマー病の治療にも使用できる。α５β３γ２レセプタサブタイプまたはα１β２γ２およびα５β３γ２レセプタサブタイプでの逆作用薬として働く化合物は、ダウン症候群、アルツハイマー病やパーキンソン病などの神経変性疾患、および発作関連痴呆などによって生じる認知障害の治療に特に有用である。α５β３γ２レセプタサブタイプでの逆作用薬として働く化合物は、記憶障害患者における記憶、特に短期記憶の向上による認知障害の治療に特に有用であり、一方、α５β３γ２レセプタサブタイプでの作用薬として働くものは、健忘症の誘導に特に有用である。α１β２γ２レセプタサブタイプでの作用薬として働く化合物は、てんかんなどの痙攣性障害の治療に有用である。ベンゾジアゼピン部位での拮抗薬として働く化合物は、ベンゾジアゼピン過量の効果を抑えるのに有効であり、また薬物およびアルコール嗜癖の治療に有用である。
【０１０２】
本件に提示の化合物および組成物を用いて治療可能なＣＮＳ疾患としては以下のものが挙げられる。
うつ病：例えば、うつ病、非定型うつ病、双極性障害、双極性障害の抑うつ相
不安：例えば、全般性不安障害（ＧＡＤ）、広場恐怖症、恐慌性障害＋／−広場恐怖症、社会恐怖症、特定的恐怖症、心的外傷後ストレス障害、強迫性障害（ＯＣＤ）、気分変調、動揺と不安を伴う適応障害、分離不安障害、予期不安急性ストレス障害、適応障害、循環気質
睡眠障害：例えば、原発性不眠症、日周期睡眠障害、睡眠異常ＮＯＳ、悪夢障害などの錯眠、夜驚症、うつ病および／または不安あるいは他の精神障害から派生した睡眠障害、物質誘発性睡眠障害などの睡眠障害
認知欠陥：例えば、認知欠陥、アルツハイマー病、パーキンソン病、軽度認知欠陥（ＭＣＩ）、加齢関連認知低下（ＡＲＣＤ）、発作、外傷性脳障害、ＡＩＤＳ関連痴呆、および、うつ病、不安、および精神病（精神分裂病および幻覚障害など）に伴う痴呆
注意欠陥障害：例えば、注意欠陥障害（ＡＤＤ）および注意欠陥過活動性障害（ＡＤＨＤ）
発語障害：例えば、運動性チック、間代性構音障害、失流暢（dysfluency）、発語途絶（speech blockage）、構語障害、ツレット症候群、および痙攣性言語
【０１０３】
本件に提示の化合物および組成物は、患者の短期記憶（ワーキングメモリー）の向上にも使用できる。短期記憶損失を向上させるための化合物の治療的有効量は、数字暗記検査（forward digit span）および連続機械的暗記（serial rote learning）などの短期記憶機能の標準的試験において統計的に有意な向上が認められるのに十分な量である。例えば、このような試験は、患者の単語または文字を思い出す力を評価するよう設計されたものである。あるいは、短期記憶機能を評価するため、より徹底的な神経物理学的試験法を用いても良い。短期記憶向上のための治療を受ける患者は、記憶障害と診断された、またはそのような障害が進行し易いと認められた（必要条件ではない）者である。
【０１０４】
別の態様では、本発明は、他の（１つ以上の）ＣＮＳ剤の作用（または治療的効果）を高める方法を提示する。この方法は、ＧＡＢＡＡレセプタ調節量の本件に提示の化合物を、他のＣＮＳ剤と共に投与する工程を含む。このようなＣＮＳ剤としては、不安のための、セロトニンレセプタ（例えば、５−ＨＴ１Ａ）作用薬および拮抗薬；不安およびうつ病のための、ニューロキニンレセプタ拮抗薬または副腎皮質刺激ホルモン放出因子レセプタ（ＣＲＦ１）拮抗薬；睡眠障害のための、メラトニンレセプタ作用薬；アルツハイマー痴呆などの神経変性障害のための、ニコチン様作用薬、ムスカリン様試剤、アセチルコリンエステラーゼ阻害薬、およびドパミンレセプタ作用薬、などが挙げられる（これらに限定するものではない）。ある実施の形態においては、本発明は、有効量の本件に提示のＧＡＢＡ作用薬化合物を選択的セロトニン再取込み阻害薬（ＳＳＲＩ）と共に投与することで、ＳＳＲＩの抗うつ活性を相乗的に高める方法を提示する。化合物の有効量とは、他のＣＮＳ剤単独で治療した患者と比較して、患者の症状に変化が認められるのに十分な量である。併用投与は、公知の手法、例えば、ダ・ロッカ（Da-Rocha）ら,(1997) J. Psychopharmacology 11(3):211-218；スミスら, (1998) Am. J. Psychiatry 155(10):1339-45；および、リー（Le）ら, (1996) Alcohol and alcoholism 31(suppl.):127-132に記述の方法を用いて行うことができる。更に、ＰＣＴ国際公開番号第ＷＯ９９／４７１４２号、第ＷＯ９９／４７１７１号、第ＷＯ９９／４７１３１号、および第ＷＯ９９／３７３０３号を参照のこと。
【０１０５】
本発明は、ＲＯ１５−１７８８またはＧＡＢＡなどの、ベンゾジアゼピン化合物（すなわち、ベンゾジアゼピン環構造を含む化合物）の、ＧＡＢＡＡレセプタへの結合を抑制する方法にも適している。この方法は、ＧＡＢＡＡレセプタ調節量の本件に提示の化合物と、ＧＡＢＡＡレセプタ発現細胞とを接触させる工程を含む。この方法は、 in vivoでの（例えば、 in vitroにおいてベンゾジアゼピン化合物またはＧＡＢＡのＧＡＢＡＡレセプタへの結合を阻害するのに十分な量の、本件に提示のＧＡＢＡＡレセプタモジュレータを投与した患者において）ベンゾジアゼピン化合物のＧＡＢＡＡレセプタへの結合を阻害する工程を含む（但し、これに限定するものではない）。ある実施の形態では、この方法はベンゾジアゼピン薬過量の治療に有効である。ベンゾジアゼピン化合物のＧＡＢＡＡレセプタへの結合を阻害するのに十分なＧＡＢＡＡレセプタモジュレータの量は、実施例１０に記載のＧＡＢＡＡレセプタ結合性試験により容易に求められる。
【０１０６】
別の態様では、本発明は、本件に提示のＧＡＢＡＡレセプタモジュレータの in vitroでの様々な使用法を提示する。例えば、このような化合物は、組織片などの試料中におけるＧＡＢＡＡレセプタの検出および位置測定用プローブとして、レセプタ活性試験での陽性対照として、ＧＡＢＡＡレセプタへの結合能が期待される候補試剤の判定のための標準および試薬として、あるいは、陽電子射出断層撮影法（ＰＥＴ）画像化のための、または単光子射出コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）のための放射線トレーサとして使用できる。これらの試験法は、生体内におけるＧＡＢＡＡレセプタの特定に用いることができる。これらの化合物は更に、ＧＡＢＡＡレセプタへの結合能が期待される候補医薬の判定における標準および試薬としても有用である。
【０１０７】
試料中のＧＡＢＡＡレセプタの存在または不在を決定する方法においては、ＧＡＢＡＡレセプタモジュレータをＧＡＢＡＡレセプタに結合させるような条件下で、試料を、本件に提示のＧＡＢＡＡレセプタモジュレータと共に培養する。次に、試料中のＧＡＢＡＡレセプタに結合したＧＡＢＡＡレセプタモジュレータの量を測定する。例えば、ＧＡＢＡＡレセプタモジュレータを様々な公知の手法（例えば、本件に示すように、トリチウムなどの放射性核種で放射線標識化）のいずれかを用いて標識化し、試料（例えば、培養細胞調製物、組織調製物、またはその一部など）と共に培養する。適当な培養時間は一般に、試験期間の間に起こる結合の程度の分析から求める。培養後、結合しなかった化合物を除き、使用した標識に合った方法（例えば、放射線標識化化合物ではオートラジオグラフィまたはシンチレーション計数、発光基および蛍光基の検出には分光法を用いる）で結合した化合物を測定する。対照として、比較用試料を、放射線標識化化合物と、大量の非標識化化合物とに同時に接触させる。次に、結合しなかった標識化および非標識化化合物を同様に除いて、結合した標識を測定する。対照より供試試料中で多く標識が検出されれば、試料中にＧＡＢＡＡレセプタがあることがわかる。検出定量法、例えば、培養細胞または組織試料中のＧＡＢＡＡレセプタ類のレセプタオートラジオグラフィ（レセプタマッピング）は、“Current Protocols in Pharmacology” (1998) John Wiley & Sons, New York の８.１.１〜８.１.９節でクハー（Kuhar）の述べた方法で行う。
【０１０８】
例えば、本件に提示のＧＡＢＡＡレセプタモジュレータは、細胞または組織試料中のＧＡＢＡＡレセプタの検出に用いられる。これは、複数の比較用細胞または組織試料を調製し、そのうちの少なくとも１つを実験用試料として調製し、少なくとも１つを対照用試料として調製して行う。実験用試料は、本件に提示のＧＡＢＡＡレセプタモジュレータのいずれとも以前接触したことのない、少なくとも１つの比較用細胞または組織試料を、選定したＧＡＢＡＡレセプタモジュレータの検出できるよう標識化した調製物を最初の測定済みモル濃度で含む実験用溶液と接触（細胞および組織試料中で、ＲＯ１５−１７８８をＧＡＢＡＡレセプタに結合させるような条件下で）させて調製する。対照試料は、実験用試料と同様に調製し、更に同化合物の非標識化調製物をより高いモル濃度で含むものである。
【０１０９】
次に、実験用および対照用試料を洗って、結合しなかった可検出標識化化合物を除く。次に、残留する結合した可検出標識化化合物の量を測定し、実験用および対照用試料中の可検出標識化化合物の量を比較する。洗浄した（１つ以上の）実験用試料で、（１つ以上の）対照用試料より多い可検出標識が検出されれば、実験用試料中にＧＡＢＡＡレセプタが存在することがわかる。
【０１１０】
この操作に用いられる可検出標識化ＧＡＢＡＡレセプタモジュレータは、放射性標識、あるいは直接または間接発光性標識で標識化する。この操作で組織片を用い、標識が放射性標識ならば、結合した標識化化合物はオートラジオグラフィで検出する。
【０１１１】
本件に提示の化合物は、様々な公知の細胞培養または細胞分離法にも使用できる。例えば、スクリーニング、評価、および培地中で成長させるための固定化ＧＡＢＡＡレセプタ発現細胞に用いるため、化合物を組織培養プレートまたは他の細胞培養支持体の内面に結合させても良い。この結合は、前記の方法など適当な手法で、またその他の標準的な手法で行うことができる。化合物はまた、in vitroでの細胞の同定と分類を容易にし、ＧＡＢＡＡレセプタ発現細胞の選定を行うために使用できる。望ましくは、この方法に用いる（１つ以上の）化合物は、本件に示すように標識化する。ある望ましい実施の形態では、フルオレセインなどの蛍光マーカに結合させた化合物を細胞と接触させ、次にこれを蛍光活性化細胞分類法（ＦＡＣＳ）で分析する。
【０１１２】
他の態様では、 in vitro または in vivo でのリガンドのＧＡＢＡＡレセプタへの結合性を調節する方法を提示する。この方法は、リガンドのレセプタへの結合に適した条件下で、ＧＡＢＡＡレセプタを十分な量の本件に提示のＧＡＢＡＡレセプタモジュレータと接触する工程を含む。ＧＡＢＡＡレセプタは、溶液中に、培養または単離された細胞調製物中に、または患者の体内に存在する。望ましくは、ＧＡＢＡＡレセプタは、ほ乳類の脳中に存在する。一般に、レセプタと接触させる化合物の量は、例えば実施例１０に記載の結合性試験で in vitro でのリガンドのＧＡＢＡＡレセプタへの結合性を変えるのに十分でなければならない。
【０１１３】
本件では更に、フルマゼニルのレセプタへの結合に適した条件下で、 in vitro または in vivo の両方において、前記のように十分量の化合物とＧＡＢＡＡレセプタとを接触させることにより、細胞性ＧＡＢＡＡレセプタのシグナル変換活性（特に、塩化物イオン伝導性）を変える方法を提示する。ＧＡＢＡＡレセプタは、溶液中に、培養または単離された細胞または細胞膜調製物中に、あるいは患者の体内に存在し、化合物の量は、in vitroにおいてＧＡＢＡＡレセプタのシグナル変換活性を変えるのに十分な量である。ある実施の形態では、レセプタと接触させる化合物の量は、例えば実施例１０に記載の結合性試験で in vitro でのフルマゼニルのＧＡＢＡＡレセプタへの結合性を変えるのに十分でなければならない。シグナル変換活性に対する効果は、標準的な手法を用いた細胞の電気生理学的変化として測定する。ＧＡＢＡＡレセプタのシグナル変換活性を変えるのに十分な化合物の量は、実施例１１に記載の試験法などのＧＡＢＡＡレセプタシグナル変換試験より求められる。in vivo でのＧＡＢＡレセプタ発現細胞は、神経細胞または脳細胞である（これに制限するものではない）。このような細胞は、本発明の化合物を含む体液との接触、例えば脳脊髄液との接触を通じて本化合物と接触する。in vitro における細胞内のＧＡＢＡＡレセプタのシグナル変換活性の変化は、ＧＡＢＡＡレセプタ発現細胞をＧＡＢＡの存在下で本発明の化合物と接触させた際の、このような細胞の検出可能な電気生理学的変化から求められる。
【０１１４】
細胞の電気生理学的変化の定量には、細胞内記録またはパッチクランプ記録が用いられる。本発明の化合物を投与された動物の挙動における再現性のある変化もまた、動物のＧＡＢＡＡレセプタ発現細胞の電気生理学的変化が起きたことを示すと解釈できる。
【０１１５】
＜化合物の調製＞
本件に提示の化合物は一般に、標準的な合成法を用いて調製する。開始物質は一般に、ミズーリ州セントルイス、シグマ−アルドリッチ・コーポレーション（Sigma-Aldrich Corp.）などメーカーから容易に入手でき、あるいは本件に示すように調製する。構造式Ｉの化合物の調製に適した代表的な手法は、次のスキームに概要を示したものであるが、これは本発明の範囲または意図をここに示す特定の試薬および条件に制限するものではない。当業者ならば、本発明に包含される化合物の製造のため、試薬および条件を変え、また追加の工程を用いても良いことは理解されよう。所望の変換を行うため、反応性官能基を保護する必要がある場合もある。一般に、このような保護基の必要性、更にこれらの基の付加と脱離に必要な条件は、有機合成の技術に精通した者には明らかであろう。以下のスキームでは特に指示のない限り変数は構造式Ｉに定義したとおりである。
【０１１６】
以下のスキームおよびそれに伴う実施例で用いる略語は次のとおりである。
Ａｃ          酢酸エステル
Ａｃ２Ｏ      酢酸無水物
ＢＩＮＡＰ    ２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル
ＣＤＣｌ３    重水素化クロロホルム
δ            化学シフト
ＤＣＭ        ジクロロメタン
ＤＭＦ        Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＥｔＯＡｃ    酢酸エチル
ＥｔＯＨ      エタノール
ＨＰＬＣ      高速液体クロマトグラフィ
１Ｈ  ＮＭＲ    プロトン核磁気共鳴
Ｈｚ          ヘルツ
ＬＣ／ＭＳ    液体クロマトグラフィ／質量分光測定
ｍＣＰＢＡ    ｍ−クロロペルオキシ安息香酸
ＭｅＯＨ      メタノール
ＭＳ          質量分光測定
Ｍ＋１        質量＋１
ｍＣＰＢＡ    ｍ−クロロペルオキシ安息香酸
Ｐｈ          フェニル
Ｐｄ（ＰＰｈ３）４      テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）
Ｐｄ（Ｐｈ３Ｐ）２Ｃｌ２    ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）
ＰＴＬＣ      予備薄層クロマトグラフィ
ＴＨＦ        テトラヒドロフラン
ＴＬＣ        薄層クロマトグラフィ
＜反応スキーム＞
【化１８】
2007501272.tif 000022
【０１１７】
スキーム１に、イミダゾール融合ピラジン類（８）の合成を示す。ヒドロキシピラジン（１）を、J. Am. Chem. Soc. 74:1580 (1952) に基本的に従って調製し、ＰＯＣｌ３で処理してクロロピラジン（２）に変換する。（２）をｍＣＰＢＡで処理すると、塩素に対してメタ位の窒素が選択的に酸化されて（３）が生じる。（３）はＰＯＣｌ３と反応してクロロメチル誘導体（４）を生じ、これをアリール置換イミダゾールとカップリングさせて（５）とする。Ｐｄカップリング条件下で（５）をアミノ化し、次に酸開裂により（７）を生じる。これをα−ハロアルデヒドまたはケトンと縮合すると生成物（８）が生じる。なお、上記および以下、スキーム中の化合物の数字を文章中では括弧書きで記載することとする。
【化１９】
2007501272.tif 000023
【０１１８】
スキーム２に、トリアゾール融合ピラジン類（１１）の合成を示す。クロロピラジン（９）をヒドラジンで処理すると（１０）が生じる。これをカルボン酸と共に還流して（１１）とする。
【化２０】
2007501272.tif 000024
【０１１９】
スキーム３に、イミダゾール融合ピラジン類（１４）の合成を示す。Ｐｄ（ＰＰｈ３）４の存在下で、（１２）をトリブチルスズビニルエチルエーテルと反応させる。続く酸加水分解によりケトン（１３）が生じる。（１３）をホルムアミドおよびギ酸と反応させ、次にＰＯＣｌ３と反応させて生成物（１４）とする。
【化２１】
2007501272.tif 000025
【０１２０】
スキーム４に、トリアゾール融合ピラジン類（１７）の合成を示す。（７）をＮ−（１，１−ジメトキシアルキル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミンと反応させ、次にヒドロキシルアミンで処理して、中間体（１５）を生じる。（１５）を無水酢酸を用いてアセチル化し、次に酢酸中で環化して生成物（１７）とする。
【０１２１】
放射性同位体である原子を少なくとも１つの含む前駆物質を用いてその合成を行うことにより、化合物を放射線標識化する。それぞれの同位体は、望ましくは炭素（例えば、１４Ｃ）、水素（例えば、３Ｈ）、硫黄（例えば、３５Ｓ）、またはヨウ素（例えば、１２５Ｉ）である。トリチウム標識化化合物は、基質としてこの化合物を用いた、トリチウム化酢酸中での白金触媒交換、トリチウム化トリフルオロ酢酸中での酸触媒交換、または、トリチウムガスとの不均一触媒交換により、触媒を用いて調製することもできる。更に、前駆物質のあるものに、適宜、トリチウムガスとのトリチウム−ハロゲン交換、不飽和結合のトリチウムガス還元、またはホウトリチウム化ナトリウムを用いた還元を行っても良い。放射線標識化化合物の調製は、放射線標識化プローブ化合物のカスタム合成に長けた放射性同位体供給業者によって簡便に行っても良い。
【０１２２】
次の実施例は説明の手段として示すものであって、制限のためではない。特に明示されない限り、全ての試薬および溶媒は標準的な市販グレードのものであり、更に精製を行うことなく用いる。本件に示す開始物質および中間体は一般に、業者より入手し、市販の有機化合物より調製し、または公知の合成法を用いて調製する。
【実施例】
【０１２３】
次の実施例に述べる開始物質および様々な中間体は、業者より入手し、市販の有機化合物より調製し、または公知の合成法を用いて調製する。本発明の中間体の調製に適した方法の代表的な例も以下に示す。
【０１２４】
以下の実施例において、本件の化合物の特定に用いるＬＣ／ＭＳ条件は以下のとおりである。
【０１２５】
１．分析用ＨＰＬＣ／ＭＳ装置：分析は、ウォーターズ（Waters）６００シリーズポンプ（マサチューセッツ州ミルフォード、ウォーターズ・コーポレーション（Waters Corporation）製）、ウォーターズ９９６ダイオードアレイ検出器およびギルソン（Gilson）２１５オートサンプラー（ウィスコンシン州ミドルトン、ギルソン・インク（Gilson Inc.）製）、 Micromass（登録商標）ＬＣＴタイム・オブ・フライト・エレクトロスプレイ（time-of-flight electrospray）イオン化質量分析器を用いて行った。データは、OpenLynx Global Server（登録商標）、OpenLynx（登録商標）および AutoLynx（登録商標）処理を備えた、MassLynx（登録商標）４．０ソフトウェアを用いて得た。
【０１２６】
２．分析用ＨＰＬＣ条件：４．６×５０ｍｍ、 Chromolith（登録商標） SpeedROD RP-18e カラム（ドイツ国ダルムシュタット、メルク社（Merck KGaA）製）；ＵＶ  １０スペクトル／秒、測定範囲２２０〜３４０ｎｍ；流速６．０ｍｌ／分；注入量１μｌ
勾配条件  −  移動相Ａは、水９５％、ＭｅＯＨ５％で０．０５％ＴＦＡ添加；移動相Ｂは、ＭｅＯＨ９５％、水５％で０．０２５％ＴＦＡ添加；勾配  ０〜０．５分の間１０〜１００％Ｂ、１．２分まで１００％Ｂで保ち、１．２１分で１０％Ｂに戻す；注入間隔２．１５分
【０１２７】
３．分析用ＭＳ条件：キャピラリ電圧３．５ｋＶ；コーン電圧３０Ｖ；脱溶媒およびソース温度はそれぞれ３５０℃および１２０℃；スキャン時間０．２２秒間、スキャン間遅延０．０５分として質量範囲１８１〜７５０
【０１２８】
＜実施例１＞
６−［２−（６−フルオロピリジン−２−イル）イミダゾール−１−イルメチル］−５−プロピルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジンの合成
【化２２】
2007501272.tif 000026
【０１２９】
１）５−メチル−６−プロピルピラジン−２−オール
この化合物は基本的に、J. Am. Chem. Soc. 74:1580 (1952)に記載の方法で調製した。得られた２つの異性体の混合物は、更に精製を行うことなく次の工程に用いた。（ＬＣ−ＭＳ（Ｍ＋１）１５３．１０）
【０１３０】
２）５−クロロ−２−メチル−３−プロピルピラジン
工程１で得られた５−メチル−６−プロピルピラジン−２−オールを含む異性体混合物（５ｇ）とＰＯＣｌ３（１０ｍｌ）とを、８５℃で２時間加熱した。減圧下で過剰のＰＯＣｌ３を除き、残分に氷水を加えた。飽和ＮａＨＣＯ３を用いて混合物をアルカリ性とし、ＤＣＭで抽出した。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥後、溶媒を除いた。粗生成物をヘキサン：酢酸エチル（１０：１）を用いたシリカゲルカラムに通して精製し、２つの異性体の混合物を無色の油として得た。
【０１３１】
３）５−クロロ−２−メチル−３−プロピルピラジン−１−オール
工程２で得られた５−クロロ−２−メチル−３−プロピルピラジンを含む混合物（０．９ｇ）と、ｍＣＰＢＡ（１．７ｇ）とを、１，２−ジクロロエタン（２０ｍｌ）に加えて６５℃で一晩加熱した。混合物を室温まで放冷し、飽和ＮａＨＣＯ３で洗い、ＭｇＳＯ４で乾燥後、溶媒を除いた。残分を、ヘキサン：酢酸エチル（５：２）を用いたシリカゲルカラムで精製し、５−クロロ−２−メチル−３−プロピルピラジン−１−オール（１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．０１（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），１．７３（ｐ，２Ｈ、Ｊ＝７．５Ｈｚ），２．４４（ｓ，３Ｈ），２．７８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），８．０９（ｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（Ｍ＋１）１８７．０６）を得た。
【０１３２】
４）５−クロロ−２−クロロメチル−３−プロピルピラジン
５−クロロ−２−メチル−３−プロピルピラジン−１−オール（０．３ｇ）とＰＯＣｌ３（０．５ｍｌ）との混合物を１時間加熱還流した。減圧下で過剰のＰＯＣｌ３を除いた。残分をＤＣＭに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３で洗い、ＭｇＳＯ４で乾燥後、溶媒を除いて油状物とし、これをヘキサン：エーテル（５０：１）を用いたシリカゲルカラムで精製して、５−クロロ−２−クロロメチル−３−プロピルピラジン（１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．０３（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），１．８１（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．８６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），４．７０（ｓ，２Ｈ），８．３８（ｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（Ｍ＋１）２０５．０４）を無色の油として得た。
【０１３３】
５）２−フルオロ−６−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ピリジン
【化２３】
2007501272.tif 000027
ａ）２−フルオロピリジン−６−カルボキシアルデヒドの調製
【０１３４】
ジイソプロピルアミン（６．５４ｍｌ、１．２当量）を３０ｍｌのＴＨＦに溶解した溶液に、ｎ−ブチルリチウム溶液（１７．１ｍｌ、２．５Ｍヘキサン溶液）を０℃で滴下して加えた。０℃で１５分間撹拌を続けた後、反応物を−７８℃まで冷却した。冷たくなった溶液に、２−フルオロ−６−メチルピリジン（４．００ｍｌ、３８．９ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。反応混合物を−７８℃で１時間撹拌後、ＤＭＦ（４．５２ｍｌ、１．５当量）を加えて反応を止めた。反応物を−７８℃で３０分間保った後、０℃まで暖めた。この冷溶液を、過ヨウ素酸ナトリウム（２４．９ｇ）を１２０ｍｌの水に加えた混合物に０℃で加えた。反応混合物を１時間かけてゆっくりと室温まで暖めた後、室温で２４時間撹拌した。反応混合物をセライト（celite）の栓に通して濾過し、沈殿物を除いて、栓をエーテルで洗った。有機層を分け、重炭酸ナトリウム水溶液（１×４０ｍｌ）で洗い、次に０．２５ＭのＫＨ２ＰＯ４（１×４０ｍｌ）で、更にブライン（１×４０ｍｌ）で洗った。有機溶液を乾燥し（ＮａＳＯ４）、減圧下で濃縮した。
【０１３５】
ｂ）２−フルオロ−６−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ピリジンの調製
工程ａで得られた粗アルデヒドの溶液に、メタノール（１２ｍｌ）水性グリオキサール（６．２１ｍｌ、４０重量％水溶液）を滴下して加えた。この溶液を０℃に冷やし、水酸化アンモニウム水溶液（６．０ｍｌ、２８重量％水溶液）を加えた。反応物を約１時間かけてゆっくりと室温まで暖めた後、更に室温で３時間撹拌した。減圧して大部分のメタノールを除き、反応混合物を水（１０ｍｌ）で希釈して酢酸エチル（３０ｍｌ）で抽出した。有機層をブライン（２０ｍｌ）で洗い、ヘキサン（１５ｍｌ）で希釈し、シリカゲルの栓（高さ０．２５インチ（６．３５ｍｍ）×直径１．２５インチ（３１．７５ｍｍ））に通し、栓を余分の酢酸エチル：ヘキサン（２：１）（２０ｍｌ）で洗った。溶離液を合わせて減圧下で濃縮し、粗製２−フルオロ−６−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ピリジンを得た。
【０１３６】
６）５−クロロ−２−［２−（６−フルオロピリジン−２−イル）イミダゾール−１−イルメチル］−３−プロピルピラジン
５−クロロ−２−クロロメチル−３−プロピルピラジン（０．１０８ｇ）と、２−フルオロ−６−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ピリジン（０．０８６ｇ）と、Ｋ２ＣＯ３（０．０９５ｇ）とを、ＤＭＦ（１ｍｌ）に加えた混合物を室温で一晩撹拌した。水（５ｍｌ）を加えた。この混合物を酢酸エチルで抽出し（１５ｍｌ×３）、乾燥し、溶媒を留去して粗生成物とした。これを、５％メタノール／ＤＣＭ を用いたシリカカラムで精製して、標記の生成物（１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．９９（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），１．７６（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１．９１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），６．０４（ｓ，２Ｈ），６．８０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．７，０．６Ｈｚ），７．０９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．２Ｈｚ），７．２１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．２Ｈｚ），７．８２（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），８．１４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．７，０．６Ｈｚ），８．２４（ｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（Ｍ＋１）３３２．０７）とした。
【０１３７】
７）ベンズヒドリリデン−｛５−［２−（６−フルオロピリジン−２−イル）イミダゾール−１−イルメチル］−６−プロピルピラジン−２−イル｝アミン
【化２４】
2007501272.tif 000028
密閉した丸底の試験管を窒素でパージし、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（１４ｍｇ、５％）と、ＢＩＮＡＰ（４３ｍｇ、５％）と、乾燥ＴＨＦを入れた。この混合物にＮ２を約５分間フラッシュした。撹拌しながら、５−クロロ−２−［２−（６−フルオロピリジン−２−イル）イミダゾール−１−イルメチル］−３−プロピルピラジン（０．２１ｇ）と、ベンゾフェノンイミン（０．１３ｇ）と、Ｃｓ２ＣＯ３（０．４２ｇ）とを加え、開始物質が無くなるまでこの混合物を９０℃に加熱した。混合物を室温まで放冷した。ＴＨＦを除いて酢酸エチル（４０ｍｌ）を加えた。この混合物を、水（１０ｍｌ）と、ブライン（１０ｍｌ）とで洗い、乾燥し、溶媒を除いて粗生成物を得た。粗生成物を、酢酸エチル：ヘキサン（２：１）を用いたシリカカラムで精製して、標記の化合物（１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．７９（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），１．５２（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．７４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），５．９３（ｓ，２Ｈ），６．８０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．７，０．６Ｈｚ），６．９１（ｓ，１Ｈ），７．０５−７．３０（ｍ，６Ｈ），７．３４−７．４９（ｍ，３Ｈ），７．６３（ｓ，１Ｈ），７．７５−７．８５（ｍ，３Ｈ），８．０７−８．１１（ｍ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（Ｍ＋１）４７７．１５）を得た。
【０１３８】
８）５−［２−（６−フルオロピリジン−２−イル）イミダゾール−１−イルメチル］−６−プロピルピラジン−２−イルアミン
【化２５】
2007501272.tif 000029
室温で、ベンズヒドリリデン−｛５−［２−（６−フルオロピリジン−２−イル）イミダゾール−１−イルメチル］−６−プロピルピラジン−２−イル｝アミン（０．１ｇ）をＴＨＦ（１５ｍｌ）に溶解した。１０ｍｌの５％ＨＣｌ水溶液を加え、混合物を室温で３０分間撹拌した。ＴＨＦを除き、混合物を飽和ＮａＨＣＯ３で中和した。混合物をクロロホルムで抽出（３０ｍｌ×３）した。有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥した。溶媒を除いて白色固体とし、これをエーテルで洗浄して標記の生成物（ＬＣ−ＭＳ（Ｍ＋１）３１３.１４）を得た。
【０１３９】
９）６−［２−（６−フルオロピリジン−２−イル）イミダゾール−１−イルメチル］−５−プロピルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン
【化２６】
2007501272.tif 000030
５−［２−（６−フルオロピリジン−２−イル）イミダゾール−１−イルメチル］−６−プロピルピラジン−２−イルアミン（２０ｍｇ）と、５０％クロロアセトアルデヒド水溶液（０．２ｍｌ）とをＤＭＦ（５ｍｌ）に加えた混合物を、７０℃で一晩加熱した。酢酸エチル（２０ｍｌ）を加えた。この混合物を飽和ＮａＨＣＯ３で洗い、乾燥した。５％メタノール／ＤＣＭを用いたＰＴＬＣ分離により標記の生成物（１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．９７（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），１．６３（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），３．１７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），６．１４（ｓ，２Ｈ），６．８７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．７，０．６Ｈｚ），７．１３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．２Ｈｚ），７．２８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．２Ｈｚ），７．６６（ｓ，１Ｈ），７．８３（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），８．１５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．７，０．６Ｈｚ），８．９８（ｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（Ｍ＋１）３３７．１４）を得た。
【０１４０】
＜実施例２＞
５−プロピル−６−（２−ピリジン−２−イルイミダゾール−１−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジンの合成
【化２７】
2007501272.tif 000031
この化合物は、実施例１に記載の方法に容易かつ明白な変更を行って調製した。（１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．９１（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），１．５４（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），３．０８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），６．２４（ｓ，２Ｈ），７．１１（ｓ，１Ｈ），７．２４−７．２８（ｍ，２Ｈ），７．６２（ｓ，１Ｈ），７．７０−７．８５（ｍ，２Ｈ），８．２６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），８．５９（ｓ，１Ｈ），８．９９（ｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（Ｍ＋１）３１９．１５）
【０１４１】
＜実施例３＞
６−［２−（３−フルオロピリジン−２−イル）イミダゾール−１−イルメチル］−５−プロピルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジンの合成
【化２８】
2007501272.tif 000032
この化合物は、実施例１に記載の方法に容易かつ明白な変更を行って調製した。（１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．９２（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），１．５４（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．９７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），５．８７（ｓ，２Ｈ），７．１８−７．３３（ｍ，２Ｈ），７．３５−７．４０（ｍ，１Ｈ），７．５４−７．６４（ｍ，２Ｈ），７．８５（ｓ，１Ｈ），８．５０（ｓ，１Ｈ），８．９８（ｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（Ｍ＋１）３３７．１１）
【０１４２】
＜実施例４＞
６−［２−（６−フルオロピリジン−２−イル）イミダゾール−１−イルメチル］−１−メチル−５−プロピルイミダゾ［１，５−ａ］ピラジンの合成
【化２９】
2007501272.tif 000033
【０１４３】
１）１−｛５−［２−（６−フルオロピリジン−２−イル）イミダゾール−１−イルメチル］−６−プロピルピラジン−２−イル｝エタノン
【化３０】
2007501272.tif 000034
５−クロロ−２−［２−（６−フルオロピリジン−２−イル）イミダゾール−１−イルメチル］−３−プロピルピラジン（０．２４ｇ）をトルエン（３０ｍｌ）に加えた溶液に、トリブチルスズビニルエチルエーテル（０．４０ｇ）とＰｄ（Ｐｈ３Ｐ）２Ｃｌ２（４０ｍｇ）とを加えた。この混合物を１０分間脱気後、１３０℃で一晩加熱した。減圧下で溶媒を除き、残分をメタノール（１５ｍｌ）に溶解した。６ＮのＨＣｌ（２０ｍｌ）を加え、混合物を室温で５時間撹拌した。溶媒を除き、飽和ＮａＨＣＯ３で中和し、酢酸エチルで抽出した。有機層を乾燥し、溶媒を留去して粗生成物を得た。これを５％メタノール／ＤＣＭを用いたＰＴＬＣで精製して、標記の生成物（１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．０４（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），１．８８（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．６９（ｓ，３Ｈ），３．００（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），６．０８（ｓ，２Ｈ），６．７６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８，２．７Ｈｚ），７．１０（ｓ，１Ｈ），７．２３（ｓ，１Ｈ），７．８０（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），８．１３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８，２．１Ｈｚ），８．８４（ｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（Ｍ＋１）３８６．２０）を得た。
【０１４４】
２）Ｎ−（１−｛５−［２−（６−フルオロピリジン−２−イル）イミダゾール−１−イルメチル］−６−プロピルピラジン−２−イル｝エチル）ホルムアミド
【化３１】
2007501272.tif 000035
０．５ｇのホルムアミドに加えた、１−｛５−［２−（６−フルオロピリジン−２−イル）イミダゾール−１−イルメチル］−６−プロピルピラジン−２−イル｝エタノン（０．１２ｇ）とギ酸（０．０５０ｇ）とを、１６０〜１８０℃とした０．６ｇのホルムアミドに加えた。この混合物を、１６０〜１８０℃で更に１.５時間加熱した。この間に、ギ酸（０．０５０ｇ）を加えた。混合物を室温まで放冷して水（１０ｍｌ）に注ぎ込み、濃水酸化ナトリウムを用いて溶液をｐＨ１１以上のアルカリ性とした。溶液を酢酸エチルで抽出した。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥し、溶媒を留去して粗生成物とした。これを酢酸エチルを用いたＴＬＣで精製し、標記の生成物（１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．９８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），１．４５（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），１．７２（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．９０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），５．２５（ｐ，１Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），６．０５（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ），６．７６−６．８３（ｍ，２Ｈ），７．０８（ｓ，１Ｈ），７．１９（ｓ，１Ｈ），７．８１（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），８．１５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８，２．１Ｈｚ），８．１９（ｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（Ｍ＋１）３６９．１６）を得た。
【０１４５】
３）６−［２−（６−フルオロピリジン−２−イル）イミダゾール−１−イルメチル］−１−メチル−５−プロピルイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン
【化３２】
2007501272.tif 000036
Ｎ−（１−｛５−［２−（６−フルオロピリジン−２−イル）イミダゾール−１−イルメチル］−６−プロピルピラジン−２−イル｝エチル）ホルムアミド（７０ｍｇ）とＰＯＣｌ３（３ｍｌ）との混合物を３時間加熱還流した。過剰のＰＯＣｌ３を除き、酢酸エチル（１０ｍｌ）を加え、混合物を飽和ＮａＨＣＯ３（５ｍｌ）と、ブライン（５ｍｌ）とで洗い、ＭｇＳＯ４上で乾燥させた。溶媒を留去後、残分を７％メタノール／ＤＣＭを用いたＰＴＬＣで精製して、標記の生成物（１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．９７（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），１．２６（ｓ，３Ｈ），１．６５（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．６１（ｓ，３Ｈ），３．０９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），６．０３（ｓ，２Ｈ），６．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．７Ｈｚ），７．２０（ｓ，１Ｈ），７．３６（ｓ，１Ｈ），７．９２（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），８．０７（ｓ，１Ｈ），８．３０（ｓ，１Ｈ），８．７５（ｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（Ｍ＋１）３５１．１４）を得た。
【０１４６】
＜実施例５＞
６−［２−（３−フルオロピリジン−２−イル）イミダゾール−１−イルメチル］−１−メチル−５−プロピルイミダゾ［１，５−ａ］ピラジンの合成
【化３３】
2007501272.tif 000037
この化合物は、実施例４に記載の方法に容易かつ明白な変更を行って調製した。（１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．９１（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），１．５５（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．６０（ｓ，３Ｈ），２．８７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），５．７４（ｓ，２Ｈ），７．２１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．７Ｈｚ），７．２０（ｓ，１Ｈ），７．３６（ｍ，１Ｈ），７．５７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ），８．０１（ｓ，１Ｈ），８．４８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．５Ｈｚ），８．７５（ｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（Ｍ＋１）３５１．１４）
【０１４７】
＜実施例６＞
５−プロピル−６−（２−ピリジン−２−イルイミダゾール−１−イルメチル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジンの合成
【化３４】
2007501272.tif 000038
【０１４８】
１）５−クロロ−３−プロピル−２−（２−ピリジン−２−イルイミダゾール−１−イルメチル）ピラジン
【化３５】
2007501272.tif 000039
５−クロロ−２−クロロメチル−３−プロピルピラジン（０．３５ｇ）と、２−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ピリジン（０．２５ｇ）と、Ｋ２ＣＯ３（０．２８ｇ）とをＤＭＦ（１０ｍｌ）に加えた混合物を室温で一晩撹拌した。水（１５ｍｌ）を加えた。混合物をＤＣＭ（１５ｍｌ×３）で抽出した。有機層を乾燥し、溶媒を留去して残分とし、これを７．５％メタノール／ＤＣＭを用いたシリカゲルカラムで精製して標記の生成物（１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．９５（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），１．７０（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１．８５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），６．１１（ｓ，２Ｈ），７．０７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．２Ｈｚ），７．１４−７．２１（ｍ，２Ｈ），７．７０−７．７７（ｍ，１Ｈ），８．２３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），８．２７（ｓ，１Ｈ），８．３９−８．４３（ｍ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（Ｍ＋１）３１４．１０）を得た。
【０１４９】
２）６−プロピル−５−（２−ピリジン−２−イル−イミダゾール−１−イルメチル）ピラジン−２−イル］ヒドラジン
【化３６】
2007501272.tif 000040
５−クロロ−３−プロピル−２−（２−ピリジン−２−イルイミダゾール−１−イルメチル）ピラジン（０．１０３ｇ）とヒドラジン水和物（０．２ｍｌ）とをエタノール（１０ｍｌ）に加えた混合物を、密閉した試験管中、１１０℃で一晩加熱した。溶媒を減圧下で除いて固体とし、これを酢酸エチルで洗い、乾燥して、標記の生成物（１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．５９（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），１．２８（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．３４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），３．３１（ｍ，３Ｈ），５．７４（ｓ，２Ｈ），６．８３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．５Ｈｚ），７．０５−７．２８（ｍ，１Ｈ），７．２６（ｓ，１Ｈ），７．６３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝４．５Ｈｚ），７．７２（ｓ，１Ｈ），７．８１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），８．４０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ）；ＬＣ−ＭＳ（Ｍ＋１）３１０．１３）を得た。
【０１５０】
３）５−プロピル−６−（２−ピリジン−２−イルイミダゾール−１−イルメチル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン
【化３７】
2007501272.tif 000041
６−プロピル−５−（２−ピリジン−２−イルイミダゾール−１−イルメチル）ピラジン−２−イル］ヒドラジン（２６ｍｇ）とギ酸（２ｍｇ）との混合物を、１１０℃で一晩加熱した。過剰のギ酸を除き、ジクロロメタン（１０ｍｌ）を加えた。混合物を飽和ＮａＨＣＯ３で洗い、乾燥し、溶媒を留去して残分とし、これを５％メタノール／ジクロロメタンを用いたＰＴＬＣで精製して、標記の生成物（１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．９５（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），１．６１（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），３．１８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），６．２４（ｓ，２Ｈ），７．１４（ｓ，１Ｈ），７．２３−７．２８（ｍ，２Ｈ），７．７８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．７Ｈｚ），８．２５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），８．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），８．８６（ｓ，１Ｈ），９．２４（ｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（Ｍ＋１）３２０．１２）を得た。
【０１５１】
＜実施例７＞
３−メチル−５−プロピル−６−（２−ピリジン−２−イルイミダゾール−１−イルメチル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジンの合成
【化３８】
2007501272.tif 000042
この化合物は、実施例６に記載の方法に容易かつ明白な変更を行って調製した。（１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．９５（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），１．５４（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．９８（ｓ，３Ｈ），３．２２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），６．２３（ｓ，２Ｈ），７．１４（ｓ，１Ｈ），７．２４−７．２８（ｍ，２Ｈ），７．７９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．７Ｈｚ），８．２６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），８．５７（ｓ，１Ｈ），９．１３（ｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（Ｍ＋１）３３４．１３）
【０１５２】
＜実施例８＞
６−｛［２−（３−フルオロピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−１−イル］メチル｝−５−プロピル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピラジンの合成
【化３９】
2007501272.tif 000043
【０１５３】
１）５−｛［２−（３−フルオロピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−１−イル］メチル｝−６−プロピルピラジン−２−アミン
【化４０】
2007501272.tif 000044
この化合物は、実施例１の工程１〜８に記載の方法に容易かつ明白な変更を行って調製した。
【０１５４】
２）Ｎ−５−｛［２−（３−フルオロピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−１−イル］メチル｝−６−プロピルピラジン−２−イル−Ｎ’−ヒドロキシイミドホルムアミド
【化４１】
2007501272.tif 000045
５−｛［２−（３−フルオロピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−１−イル］メチル｝−６−プロピルピラジン−２−アミン（２１０ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）とＮ−（ジメトキシメチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミン（０．６７ｍｍｏｌ）とをトルエン（３ｍｌ）に加えた溶液を３時間還流した。減圧下で溶媒を除き、得られた黄色の油をＥｔＯＨ（６ｍｌ）に溶解し、これにＮＨ２ＯＨ−ＨＣｌ（７６ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌した。減圧下で溶媒を除き、残分をＮａＨＣＯ３飽和水溶液（５ｍｌ）とＥｔＯＡｃ（１０ｍｌ）との間で分配させた。層を分け、水層をＥｔＯＡｃ（２×１０ｍｌ）で抽出した。抽出液を合わせてブライン（８ｍｌ）で洗い、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、乾固した。残分を５％ＭｅＯＨ／ＣＨ２ＣＨ２を用いたＰＴＬＣ分離にかけ、標記の化合物を黄色固体として得た。
【０１５５】
Ｎ−５−｛［２−（３−フルオロピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−１−イル］メチル｝−６−プロピルピラジン−２−イル−Ｎ’−ヒドロキシイミドホルムアミド＝ヒドロキシエタンイミドアミド（０．７ｍｍｏｌ）と無水酢酸（２ｍｌ）との混合物を、室温で４時間撹拌した。溶媒を減圧下で除き、残分をＮａＨＣＯ３飽和水溶液（１０ｍｌ）とＥｔＯＡｃ（２０ｍｌ）との間で分配させた。層を分け、水層をＥｔＯＡｃ（３×２０ｍｌ）で抽出した。合わせた抽出液をブライン（１５ｍｌ）で洗い、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、乾固した。黄色油状残分は、更に精製することなく次の工程に用いた。
【０１５６】
３）６−｛［２−（３−フルオロピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−１−イル］メチル｝−５−プロピル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピラジン
【化４２】
2007501272.tif 000046
Ｎ−５−｛［２−（３−フルオロピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−１−イル］メチル｝−６−プロピルピラジン−２−イル−Ｎ’−ヒドロキシイミドホルムアミド＝ヒドロキシエタンイミドアミン（０．７ｍｍｏｌ）と無水酢酸（２ｍｌ）との混合物を、室温で４時間撹拌した。減圧下で溶媒を除き、残分をＮａＨＣＯ３飽和水溶液（１０ｍｌ）とＥｔＯＡｃ（２０ｍｌ）との間で分配させた。層を分け、水層をＥｔＯＡｃ（３×２０ｍｌ）で抽出した。合わせた抽出液をブライン（１５ｍｌ）で洗い、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、乾固した。得られた黄色油状の残分をＨＯＡｃ（６ｍｌ）に溶解し、混合物を１１０℃で一晩加熱した。減圧下で溶媒を除き、残分をＮａＨＣＯ３飽和水溶液（５ｍｌ）とＥｔＯＡｃ（１０ｍｌ）との間で分配させた。層を分け、水層をＥｔＯＡｃ（２×１０ｍｌ）で抽出した。合わせた抽出液をブライン（８ｍｌ）で洗い、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、乾固した。残分を５％ＭｅＯＨ／ＣＨ２ＣＨ２を用いたＰＴＬＣ分離にかけ、標記の化合物（１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ９．１３（ｓ，１Ｈ），８．４５−８．４７（ｍ，１Ｈ），８．４６（ｓ，１Ｈ），７．５５−７．６０（ｍ，１Ｈ），７．３２−７．３６（ｍ，１Ｈ），７．２４（ｓ，１Ｈ），７．２２（ｓ，１Ｈ），５．９６（ｓ，２Ｈ），３．１８−３．２２（ｍ，２Ｈ），１．５９−１．６８（ｍ，２Ｈ），０．９４（ｔ，３Ｈ））を淡黄色固体として得た。
【０１５７】
＜実施例９＞
６−｛［２−（３−フルオロピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−１−イル］メチル｝−２−メチル−５−プロピル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピラジンの合成
【化４３】
2007501272.tif 000047
この化合物は、実施例８に記載の方法に容易かつ明白な変更を行って調製した。（１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．９９（ｓ，１Ｈ），８．４７−８．４８（ｍ，１Ｈ），７．５６−７．６１（ｍ，１Ｈ），７．３３−７．３７（ｍ，１Ｈ），７．２４（ｓ，１Ｈ），７．２１（ｓ，１Ｈ），５．９３（ｓ，２Ｈ），３．１３−３．１７（ｍ，２Ｈ），２．６５（ｓ，３Ｈ），１．６０−１．６６（ｍ，２Ｈ），０．９３（ｔ，３Ｈ））
【０１５８】
＜実施例１０＞
リガンド結合性試験
本発明の望ましい化合物の、ＧＡＢＡＡレセプタのベンゾジアゼピン部位に対する高い親和性を、トーマス（Thomas）およびトールマン（Tallman）（J. Bio. Chem. (1981) 156:9838-9842、 および J. Neurosci. (1983) 3:433-440）に本質的に記述されている結合性試験法を用いて確認した。
【０１５９】
ラットの皮質組織を切り取り、２５容量（ｗ／ｖ）の緩衝液Ａ（０．０５Ｍのトリス（Tris）ＨＣｌ緩衝液、４℃でｐＨ７．４）に入れてホモジナイズした。組織ホモジネートを、冷却しながら（４℃）２０，０００×ｇで２０分間遠心分離にかけた。上清を傾瀉し、沈殿物を同じ容量の緩衝液で再度ホモジナイズし、もう一度２０，０００×ｇで遠心分離にかけた。この遠心分離工程の上清を傾瀉し、沈殿物を−２０℃で一晩保存した。次に沈殿物を解凍し、２５容量の緩衝液Ａ（最初の重量／容量）に再び懸濁させ、２０，０００×ｇで遠心分離して上清を傾瀉した。この洗浄工程をもう一度繰り返した。最後に沈殿物を５０容量の緩衝液Ａに再懸濁した。
【０１６０】
１００μｌの組織ホモジネートと、１００μｌの放射リガンド（０．５ｎＭの３Ｈ−ＲＯ１５−１７８８［３Ｈ−フルマゼニル］、比放射能８０Ｃｉ／ｍｍｏｌ）と、供試化合物または対照（以下参照）とを含む培養液に緩衝液Ａを加えて全量を５００μｌとした。４℃で３０分間培養後、速やかにワットマンＧＦＢフィルタに通して濾過し、遊離しているリガンドと結合したリガンドとを分けた。フィルタを新しい緩衝液Ａで２回洗い、液体シンチレーションカウンタで計数した。非特異的結合（対照）は、３Ｈ−ＲＯ１５−１７８８を１０μＭのジアゼパム（Diazepam）（マサチューセッツ州ナティック、リサーチ・バイオケミカルズ・インターナショナル（Research Biochemicals International）製）で置き換えて求めた。データは３連とし、平均し、各化合物についての全特異的結合性の阻害率（全特異的結合性＝合計−非特異的）を算出した。
【０１６１】
阻害率を求めるため、前述の方法により、曲線あたり１０−１２〜１０−５Ｍの化合物の濃度範囲に亘って１１個の測定を行い、競合結合性曲線を作成した。Ｋｉ値は、Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｓｏｆ式に従って算出した。本発明の望ましい化合物は１００ｎＭ以下のＫｉ値を示し、本発明のより望ましい化合物は１０ｎＭ以下のＫｉ値を示す。
【０１６２】
＜実施例１１＞
電気生理学
以下の試験を行って、本発明の化合物が細胞の電気生理学的性質を変えるか、また、ＧＡＢＡＡレセプタのベンゾジアゼピン部位における作用薬、拮抗薬、または逆作用薬として働くかを求めた。
【０１６３】
試験は、本質的に、ホワイト（White）およびガーレイ（Gurley）（NeuroReport 6:1313-1316, 1995）、および、ホワイト、ガーレイ、ハートネット（Hartnett）、スターリング（Stirling）、およびグレゴリー（Gregory）（Receptors and Channels 3:1-5, 1995）に記述の方法に変更を加えて行った。電気生理学的記録は、−７０ｍＶの膜保持電位における二電極電圧クランプ法を用いて行った。 Xenopus laevis 卵母細胞を酵素によって単離し、α、β、およびγサブユニットをそれぞれ４：１：４の比で混合した非ポリアデニル化ｃＲＮＡを注入した。ホワイトらの文献に記載の９個の、α、β、およびγサブユニットの組み合わせのうち、望ましい組み合わせは、α１β２γ２、α２β３γ２、α３β３γ２、および、α５β３γ２である。望ましくは、各組み合わせの全てのサブユニットｃＲＮＡはヒトクローン、あるいは全てラットクローンである。これらのクローン化サブユニットはそれぞれＧＥＮＢＡＮＫに、例えば、ヒトα１、ＧＥＮＢＡＮＫ受け入れ番号Ｘ１４７６６；ヒトα２、ＧＥＮＢＡＮＫ受け入れ番号Ａ２８１００；ヒトα３、ＧＥＮＢＡＮＫ受け入れ番号Ａ２８１０２；ヒトα５、ＧＥＮＢＡＮＫ受け入れ番号Ａ２８１０４；ヒトβ２、ＧＥＮＢＡＮＫ受け入れ番号Ｍ８２９１９；ヒトβ３、ＧＥＮＢＡＮＫ受け入れ番号Ｚ２０１３６；ヒトγ２、ＧＥＮＢＡＮＫ受け入れ番号Ｘ１５３７６；ラットα１、ＧＥＮＢＡＮＫ受け入れ番号Ｌ０８４９０；ラットα２、ＧＥＮＢＡＮＫ受け入れ番号Ｌ０８４９１；ラットα３、ＧＥＮＢＡＮＫ受け入れ番号Ｌ０８４９２；ラットα５、ＧＥＮＢＡＮＫ受け入れ番号Ｌ０８４９４；ラットβ２、ＧＥＮＢＡＮＫ受け入れ番号Ｘ１５４６７；ラットβ３、ＧＥＮＢＡＮＫ受け入れ番号Ｘ１５４６８；ラットγ２、ＧＥＮＢＡＮＫ受け入れ番号Ｌ０８４９７と示されている。サブユニットの組み合わせについてはそれぞれ、１μＭのＧＡＢＡを用いた場合に１０ｎＡ以上の大きさの電流が生じるよう、各構成サブユニットに関する十分なメッセージを注入する。
【０１６４】
化合物は、誘発可能な最大ＧＡＢＡ電流（例えば、１〜９μＭ）の１０％以下を誘発する、ＧＡＢＡ濃度に対して評価する。濃度／効果の関係を調べるため、評価すべき化合物（供試化合物）の濃度を次第に上げながら、各卵母細胞に曝露する。供試化合物の効力は、電流の大きさの変化率（１００＊（（Ｉｃ／Ｉ）−１）  式中、Ｉｃは、供試化合物の存在下で観測されたＧＡＢＡ誘発電流の大きさであり、Ｉは、供試化合物の不在下で観測されたＧＡＢＡ誘発電流の大きさである）として計算する。
【０１６５】
供試化合物のベンゾジアゼピン部位に対する特異性は、次の濃度／効果曲線を完成させて求めた。予め加えた供試化合物を取り除くため十分に洗浄した卵母細胞を、ＧＡＢＡ＋１μＭのＲＯ１５−１７８８に曝露し、次に、ＧＡＢＡ＋１μＭのＲＯ１５−１７８８＋供試化合物に曝露した。化合物の添加による変化率を前述のように算出した。ＲＯ１５−１７８８存在下で観測された全ての変化率を、１μＭのＲＯ１５−１７８８不在下で観測された電流の大きさでの変化率から差し引いた。この正味の値を、標準法による平均効力およびＥＣ５０値の計算に用いた。平均効力およびＥＣ５０値の算出のため、濃度／効果データを細胞間で平均し、理論式に当てはめた。
【０１６６】
＜実施例１２＞
ＭＤＣＫ毒性試験
この実施例では、Madin Darby イヌ腎臓（ＭＤＣＫ）細胞を用いた細胞毒性試験法による、化合物の毒性評価について述べる。
【０１６７】
底の透明な９６穴プレート（コネチカット州メリデン、パッカード（PACKARD）製）のそれぞれの穴に１μＬの供試化合物を加え、試験における化合物の最終濃度を、１０μＭ、１００μＭ、または２００μＭとした。供試化合物を含まない溶媒を対照穴に加えた。
【０１６８】
ＭＤＣＫ細胞、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−３４（バージニア州マナッサス、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（American Type Culture Collection）製）を、ＡＴＣＣ製品情報シートの使用説明書に従って無菌状態に保った。融合性ＭＤＣＫ細胞をトリプシン処理し、採取し、温（３７℃）培地（ＶＩＴＡＣＥＬＬ最小必須培地イーグル（Eagle）、ＡＴＣＣカタログ番号３０−２００３）を用いて、０．１×１０６細胞／ｍｌの濃度に希釈した。細胞を含まない１００μｌの温培地を入れた５個の標準曲線対照穴を除き、各穴に１００μｌの希釈細胞を加えた。次に、プレートを、一定に振とうしながら、９５％Ｏ２、５％ＣＯ２の条件下、３７℃で２時間培養した。培養後、それぞれの穴に５０μｌの哺乳動物細胞溶解溶液を加え、穴をＰＡＣＫＡＲＤ  ＴＯＰＳＥＡＬステッカーで覆い、プレートを適当な振とう器上、約７００ｒｐｍで２分間振とうした。
【０１６９】
毒性を持つ化合物ならば、未処理細胞に比べてＡＴＰ生産を減少させると考えられる。一般に、ＰＡＣＫＡＲＤ（コネチカット州メリデン）ＡＴＰ−ＬＩＴＥ−ＭルミネッセントＡＴＰ検出用キット（製品番号６０１６９４１）を製造者の使用説明書に従って使用し、処理および未処理ＭＤＣＫ細胞でのＡＴＰ生産を測定する。ＰＡＣＫＡＲＤ  ＡＴＰ  ＬＩＴＥ−Ｍ試薬を平衡となるまで室温に置いた。平衡後、凍結乾燥した基質溶液を５．５ｍｌの基質緩衝液（キットから）中で還元した。凍結乾燥ＡＴＰ標準溶液を脱イオン水中で還元して１０ｍＭの原液とした。５個の対照穴として、１０μｌの連続的に希釈したＰＡＣＫＡＲＤ標準を各標準曲線対照穴に加え、各穴の最終濃度を、順次、２００ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、２５ｎＭ、および１２．５ｎＭとした。ＰＡＣＫＡＲＤ基質溶液（５０μｌ）を全ての穴に加え、次にこれを覆い、プレートを適当な振とう器上、約７００ｒｐｍで２分間振とうした。白色のＰＡＣＫＡＲＤステッカーを各プレートの底に貼り付け、試料をホイルで巻き暗所に１０分間置いて試料を暗馴化した。次に、ルミネッセンスカウンタ（例えば、ＰＡＣＫＡＲＤ  ＴＯＰＣＯＵＮＴマイクロプレートシンチレーションおよびルミネッセンスカウンタ、またはＴＥＣＡＮ  ＳＰＥＣＴＲＡＦＬＵＯＲ  ＰＬＵＳ）を用い、２２℃でルミネッセンスを測定した。またＡＴＰ濃度は、標準曲線から算出した。(１つ以上の)供試化合物で処理した細胞中におけるＡＴＰ濃度を、未処理細胞で求めた濃度と比較した。１０μＭの望ましい供試化合物で処理した細胞は、未処理細胞の８０％以上、望ましくは９０％以上のＡＴＰ濃度を示した。１００μＭ濃度の供試化合物を用いた場合、望ましい供試化合物で処理した細胞は、未処理細胞において検出されたＡＴＰ濃度の５０％以上、望ましくは８０％以上のＡＴＰ濃度を示した。
【国際調査報告】
2007501272.tif 000052