(57)【要約】  構造（Ｉ）を有する化合物は、細胞死（アポトーシス）を誘導するために有用であり、そして免疫抑制において有用である。構造Ｉにおいて、ＣＲ１Ｒ２は、ＣＨＯＨ、Ｃ＝Ｏ、ＣＨＦ、ＣＦ２およびＣ（ＣＦ３）ＯＨより選択され；ＣＲ６およびＣＲ１３は、ＣＨ、ＣＯＨおよびＣＦより選択され；ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０およびＣＲ１１Ｒ１２は、ＣＨ２、ＣＨＯＨ、Ｃ＝Ｏ、ＣＨＦおよびＣＦ２より選択され；そしてＣＲ３Ｒ４Ｒ５は、ＣＨ３、ＣＨ２ＯＨ、Ｃ＝Ｏ、ＣＯＯＨ、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２およびＣＦ３より選択され；その結果：Ｒ１〜Ｒ１３のうちの少なくとも一つが、フッ素を含み；ＣＲ３Ｒ４Ｒ５、ＣＲ６、ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０、ＣＲ１１Ｒ１２、およびＣＲ１３のうちの２つ以下が、フッ素もしくは酸素を含み；そして、ＣＲ１Ｒ２がＣＨＯＨである場合、ＣＲ３Ｒ４Ｒ５は、ＣＨ２Ｆではない。【化１】2007524581.tif 000018
2007524581.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造Ｉ：
【化１】
2007524581.tif 000015
を有する化合物であって、ここで：
ＣＲ１Ｒ２は、ＣＨＯＨ、Ｃ＝Ｏ、ＣＨＦ、ＣＦ２およびＣ（ＣＦ３）ＯＨより選択され；
ＣＲ６およびＣＲ１３は、ＣＨ、ＣＯＨおよびＣＦより選択され；
ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０およびＣＲ１１Ｒ１２は、ＣＨ２、ＣＨＯＨ、Ｃ＝Ｏ、ＣＨＦおよびＣＦ２より選択され；そして
ＣＲ３Ｒ４Ｒ５は、ＣＨ３、ＣＨ２ＯＨ、Ｃ＝Ｏ、ＣＯＯＨ、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２およびＣＦ３より選択され；
その結果、Ｒ１〜Ｒ１３のうちの少なくとも一つは、フッ素を含み；
ＣＲ３Ｒ４Ｒ５、ＣＲ６、ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０、ＣＲ１１Ｒ１２、およびＣＲ１３のうちの２つ以下は、フッ素もしくは酸素を含み；
そして、ＣＲ１Ｒ２がＣＨＯＨである場合、ＣＲ３Ｒ４Ｒ５は、ＣＨ２Ｆではない、
化合物。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であって、ＣＲ７Ｒ８およびＣＲ９Ｒ１０の各々が、ＣＨ２、ＣＨＯＨ（β）、Ｃ＝Ｏ、ＣＨＦ（α）およびＣＦ２より独立して選択される、化合物。
【請求項３】
請求項２に記載の化合物であって、ＣＲ３Ｒ４Ｒ５、ＣＲ６、ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０、ＣＲ１１Ｒ１２、およびＣＲ１３のうちの一つ以下が、フッ素もしくは酸素を含む、化合物。
【請求項４】
請求項３に記載の化合物であって、ＣＲ１Ｒ２、ＣＲ３Ｒ４Ｒ５、ＣＲ６、ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０、およびＣＲ１１Ｒ１２のうちの正確に一つが、フッ素を含む、化合物。
【請求項５】
請求項４に記載の化合物であって、ＣＲ１Ｒ２、ＣＲ６、ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０、およびＣＲ１１Ｒ１２のうちの正確に一つが、フッ素を含む、化合物。
【請求項６】
請求項５に記載の化合物であって、ＣＲ１Ｒ２がフッ素を含む、化合物。
【請求項７】
請求項６に記載の化合物であって、ＣＲ１Ｒ２がＣＦ２である、化合物。
【請求項８】
請求項６に記載の化合物であって、ＣＲ１Ｒ２がＣＨＦ（α）である、化合物。
【請求項９】
請求項８に記載の化合物であって、Ｒ３〜Ｒ１３のうちの各々が、水素である、化合物。
【請求項１０】
免疫抑制をもたらす方法であって、該方法は、薬学的に受容可能なビヒクル中の有効量の化合物を、そのような処置を必要としている被験体に投与する工程を包含し、該化合物が、構造Ｉ：
【化２】
2007524581.tif 000016
を有し、ここで：
ＣＲ１Ｒ２は、ＣＨＯＨ、Ｃ＝Ｏ、ＣＨＦ、ＣＦ２およびＣ（ＣＦ３）ＯＨより選択され；
ＣＲ６およびＣＲ１３は、ＣＨ、ＣＯＨおよびＣＦより選択され；
ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０およびＣＲ１１Ｒ１２は、ＣＨ２、ＣＨＯＨ、Ｃ＝Ｏ、ＣＨＦおよびＣＦ２より選択され；そして
ＣＲ３Ｒ４Ｒ５は、ＣＨ３、ＣＨ２ＯＨ、Ｃ＝Ｏ、ＣＯＯＨ、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２およびＣＦ３より選択され；
その結果、Ｒ１〜Ｒ１３のうちの少なくとも一つは、フッ素を含み；
ＣＲ３Ｒ４Ｒ５、ＣＲ６、ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０、ＣＲ１１Ｒ１２、およびＣＲ１３のうちの２つ以下は、フッ素もしくは酸素を含み；
そして、ＣＲ１Ｒ２がＣＨＯＨである場合、ＣＲ３Ｒ４Ｒ５は、ＣＨ２Ｆではない、
方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法であって、ＣＲ７Ｒ８およびＣＲ９Ｒ１０の各々が、ＣＨ２、ＣＨＯＨ（β）、Ｃ＝Ｏ、ＣＨＦ（α）およびＣＦ２より独立して選択される、方法。
【請求項１２】
請求項１０に記載の方法であって、ＣＲ１Ｒ２、ＣＲ３Ｒ４Ｒ５、ＣＲ６、ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０、およびＣＲ１１Ｒ１２のうちの正確に一つが、フッ素を含む、方法。
【請求項１３】
請求項１２に記載の方法であって、ＣＲ１Ｒ２がフッ素を含む、方法。
【請求項１４】
請求項１３に記載の方法であって、ＣＲ１Ｒ２がＣＦ２である、方法。
【請求項１５】
請求項１３に記載の方法であって、ＣＲ１Ｒ２がＣＨＦ（α）である、方法。
【請求項１６】
請求項１５に記載の方法であって、Ｒ３〜Ｒ１３のうちの各々が、水素である、方法。
【請求項１７】
細胞においてアポトーシスを誘導する方法であって、該方法が、有効量の化合物と該細胞とを接触させる工程を包含し、該化合物が、構造Ｉ：
【化３】
2007524581.tif 000017
を有し、ここで：
ＣＲ１Ｒ２は、ＣＨＯＨ、Ｃ＝Ｏ、ＣＨＦ、ＣＦ２およびＣ（ＣＦ３）ＯＨより選択され；
ＣＲ６およびＣＲ１３は、ＣＨ、ＣＯＨおよびＣＦより選択され；
ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０およびＣＲ１１Ｒ１２は、ＣＨ２、ＣＨＯＨ、Ｃ＝Ｏ、ＣＨＦおよびＣＦ２より選択され；そして
ＣＲ３Ｒ４Ｒ５は、ＣＨ３、ＣＨ２ＯＨ、Ｃ＝Ｏ、ＣＯＯＨ、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２およびＣＦ３より選択され；
その結果、Ｒ１〜Ｒ１３のうちの少なくとも一つは、フッ素を含み；
ＣＲ３Ｒ４Ｒ５、ＣＲ６、ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０、ＣＲ１１Ｒ１２、およびＣＲ１３のうちの２つ以下は、フッ素もしくは酸素を含み；
そして、ＣＲ１Ｒ２がＣＨＯＨである場合、ＣＲ３Ｒ４Ｒ５は、ＣＨ２Ｆではない、
方法。
【請求項１８】
請求項１７に記載の方法であって、ＣＲ７Ｒ８およびＣＲ９Ｒ１０の各々が、ＣＨ２、ＣＨＯＨ（β）、Ｃ＝Ｏ、ＣＨＦ（α）およびＣＦ２より独立して選択される、方法。
【請求項１９】
請求項１８に記載の方法であって、ＣＲ１Ｒ２、ＣＲ３Ｒ４Ｒ５、ＣＲ６、ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０、およびＣＲ１１Ｒ１２のうちの正確に一つが、フッ素を含む、方法。
【請求項２０】
請求項１９に記載の方法であって、ＣＲ１Ｒ２がフッ素を含む、方法。
【請求項２１】
請求項２０に記載の方法であって、ＣＲ１Ｒ２がＣＦ２である、方法。
【請求項２２】
請求項２０に記載の方法であって、ＣＲ１Ｒ２がＣＨＦ（α）である、方法。
【請求項２３】
請求項２２に記載の方法であって、Ｒ３〜Ｒ１３のうちの各々が、水素である、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、免疫抑制剤、抗炎症剤および抗癌剤として有用な化合物に関する。
【０００２】
（参考文献）
Ｇｌｅｉｃｈｍａｎｎ，Ｅ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  ５：３２４（１９８４）。
【０００３】
Ｈｅ，Ｑ．ら、Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｄａ  Ｘｕｅ  Ｘｕｅ  Ｂａｏ  ３５：２５２−５（２００３年６月）。
【０００４】
Ｊｕｎｇ，Ｍ．Ｊ．ら、ＵＳ  ５，９７２，９９８（１９９９）。
【０００５】
Ｊｕｎｇ，Ｍ．Ｊ．ら、ＵＳ  ６，００４，９９９（１９９９）。
【０００６】
Ｋｏｒｎｇｏｌｄ，Ｒ．およびＳｐｒｅｎｔ，Ｊ．、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１４８：１６８７（１９７８）。
【０００７】
Ｋｒｉｓｈｎａ，Ｇ．ら、Ａｍ．Ｊ．ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  １５８（３）：９９７−１００４（２００１年３月）。
【０００８】
Ｋｕｐｃｈａｎ，Ｓ．Ｍ．ら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．９４：７１９４（１９７２）。
【０００９】
Ｋｕｐｃｈａｎ，Ｓ．Ｍ．ら、米国特許第４，００５，１０８号（１９７７）。
【００１０】
Ｌｉｐｓｋｙら、米国特許第５，２９４，４４３号（１９９４）。
【００１１】
Ｍａら、Ｊ．Ｃｈｉｎ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１：１２（１９９２）。
【００１２】
Ｍｕｒａｓｅ，Ｎ．ら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５５：７０１（１９９３）。
【００１３】
ＯｎｏおよびＬｉｎｄｓｅｙ、Ｊ．Ｔｈｏｒ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｓｕｒｇ．５７（２）：２２５−２９（１９６９）。
【００１４】
Ｐａｎｃｈａｇｎｕｌａ，Ｒ．およびＴｈｏｍａｓ，Ｎ．Ｓ．、Ｉｎｔｌ  Ｊ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ２０１（２）：１３１−１５０（２０００）。
【００１５】
Ｐｕ，Ｌら、Ｚｈｏｎｇｇｕｏ  Ｙａｏｌｉ  Ｘｕｅｂａｏ  １１：７６（１９９０）。
【００１６】
Ｑｉ，Ｙ．ら、米国特許第５，６６３，３３５号（１９９７）。
【００１７】
Ｑｉ，Ｙ．ら、米国特許第５，９６２，５１６号（１９９９）。
【００１８】
Ｑｉａｎ，Ｓ．ら、米国特許第５，４３０，０５４号（１９９５）。
【００１９】
Ｗａｎｇ，Ｊ．およびＭｏｒｒｉｓ，Ｒ．Ｅ．、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃ．２３：６９９（１９９１）。
【００２０】
Ｗａｎｇ，Ｘ．ら、ＰＣＴ公開番号  ＷＯ  ２００２／１７９３１（２００２）。
【００２１】
Ｗｉｅｄｍａｎｎ，Ｔ．ら、米国特許第５，８４３，４５２号（１９９８）。
【００２２】
Ｚｈｏｕ，Ｙ．Ｘ．ら、Ａｉ  Ｚｈｅｎｇ  ２１（１０）：１１０８−８（２００２年１０月）。
【背景技術】
【００２３】
（発明の背景）
免疫抑制剤は、自己免疫疾患の処置および移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の処置を含む移植拒絶反応の処置もしくは予防において広く使用されている。一般的な免疫抑制剤としては、アザチオプリン、コルチコステロイド、シクロホスファミド、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、ビンクリスチン、およびシクロスポリンＡが挙げられる。一般的に、これらの薬物は、完全に効果的であるものではなく、そしてほとんどの薬物は、深刻な毒性により制限される。例えば、シクロスポリンＡは、広く使用される薬物であるが、腎臓に対して非常に有毒である。さらに、有効な処置のために必要とされる用量は、種々の日和見感染性侵入による感染に対する患者の感受性を上昇させ得る。
【００２４】
中国薬用植物Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ  ｗｉｌｆｏｒｄｉｉ（ＴＷ）由来の多くの化合物が、例えば、自己免疫疾患の処置において、ならびに移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の処置を含む移植拒絶反応の処置および予防において、免疫抑制活性を有するものとして同定されている。トリプトライド（Ｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅ）ならびにその特定の誘導体およびプロドラッグはまた、抗癌活性を示すことが報告されている。例えば、Ｋｕｐｃｈａｎら、１９７２、１９７７、ならびに共通に係る米国特許第６，６２０，８４３（２００３年９月）を参照のこと（これらは、本明細書により参考として援用される）。
【００２５】
一般的に、トリプトライド誘導体の生物活性自体は、ネイティブトリプトライドの生物活性よりも低いことが見出されている。しかし、これらの化合物は、薬物動態もしくは生体分布のような分野において、それらのプロドラッグとしての活性ならびに／または脂溶性もしくは水溶性の差異により、しばしば、ネイティブトリプトライドに比べて他の利益を提供する。例えば、Ｊｕｎｇら、米国特許第５，９７２，９９８号および同第６，００４，９９９号、Ｋｕｐｃｈａｎら、米国特許第４，００５，１０８号、Ｌｉｐｓｋｙら、米国特許第５，２９４，４４３号ならびにＱｉａｎら、米国特許第５，４３０，０５４号、ならびに共通に係る米国特許第６，１５０，５３９号（高い水溶性を有するトリプトライドプロドラッグ）、同第５，９６２，５１６号（免疫抑制化合物および免疫抑制方法）、同第５，８４３，４５２号（免疫治療組成物および免疫療法）、同第５，７５９，５５０号（異種移植片拒絶反応を抑制するための方法）、同第５，６６３，３３５号（免疫良抑制化合物および免疫抑制方法）、ならびに同第５，６４８，３７６号（免疫抑制剤ジテルペン化合物）、ならびにそこに引用される参照を参照のこと。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００２６】
（発明の要旨）
一つの局面において、本発明は、免疫抑制治療、抗炎症治療および抗癌治療のために有用な化合物を提供する。この化合物は、構造Ｉ：
【００２７】
【化４】
2007524581.tif 000003
により表わされるトリプトライド誘導体であり、ここで：
ＣＲ１Ｒ２は、ＣＨＯＨ、Ｃ＝Ｏ、ＣＨＦ、ＣＦ２およびＣ（ＣＦ３）ＯＨより選択され；
ＣＲ６およびＣＲ１３は、ＣＨ、ＣＯＨおよびＣＦより選択され；
ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０およびＣＲ１１Ｒ１２は、ＣＨ２、ＣＨＯＨ、Ｃ＝Ｏ、ＣＨＦおよびＣＦ２より選択され；そして
ＣＲ３Ｒ４Ｒ５は、ＣＨ３、ＣＨ２ＯＨ、Ｃ＝Ｏ、ＣＯＯＨ、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２およびＣＦ３より選択され；
その結果、Ｒ１〜Ｒ１３のうちの少なくとも一つは、フッ素を含み；
ＣＲ３Ｒ４Ｒ５、ＣＲ６、ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０、ＣＲ１１Ｒ１２、およびＣＲ１３のうちの２つ以下は、フッ素もしくは酸素を含み、そして好ましくは、ＣＲ３Ｒ４Ｒ５、ＣＲ６、ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０、ＣＲ１１Ｒ１２、およびＣＲ１３のうちの１つ以下は、フッ素もしくは酸素を含み；
そして、ＣＲ１Ｒ２がＣＨＯＨである場合、ＣＲ３Ｒ４Ｒ５は、ＣＨ２Ｆではない。
【００２８】
好ましくは、ＣＲ７Ｒ８の立体化学は、以下のようである：ＣＲ７Ｒ８がＣＨＯＨである場合、それは、β−ヒドロキシ立体配置を有し、そして、ＣＲ７Ｒ８がＣＨＦである場合、それは、α−フルオロ立体配置を有する。同様に、ＣＲ９Ｒ１０の立体化学は、好ましくは、以下のようである：ＣＲ９Ｒ１０がＣＨＯＨである場合、それは、β−ヒドロキシ立体配置を有し、そして、ＣＲ９Ｒ１０がＣＨＦである場合、それは、α−フルオロ立体配置を有する。
【００２９】
構造Ｉの好ましい実施形態において、ＣＲ１Ｒ２はＣＨＦであり、α−フルオロ立体配置を有する。
【００３０】
好ましい実施形態はまた、ＣＲ１Ｒ２、ＣＲ３Ｒ４Ｒ５、ＣＲ６、ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０、およびＣＲ１１Ｒ１２より選択される正確に一つの炭素中心がフッ素を含む化合物も含む。より好ましくは、ＣＲ１Ｒ２、ＣＲ６、ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０、およびＣＲ１１Ｒ１２のうちの正確に一つが、フッ素を含む。
【００３１】
選択される実施形態において、ＣＲ１Ｒ２のみが、フッ素を含む。従って、これらの実施形態において、ＣＲ１Ｒ２は、ＣＦ２、ＣＨＦ、およびＣ（ＣＦ３）ＯＨより選択される。ＣＲ１Ｒ２の立体化学は、好ましくは、以下のようである：ＣＲ１Ｒ２がＣ（ＣＦ３）ＯＨである場合、それは、β−ヒドロキシ立体配置を有し、そして、ＣＲ１Ｒ２がＣＨＦである場合、それは、α−フルオロ立体配置を有する。
【００３２】
構造Ｉの選択される他の実施形態において、ＣＲ９Ｒ１０またはＣＲ３Ｒ４Ｒ５のいずれかがフッ素を含み、そしてＣＲ１Ｒ２が酸素を含み；好ましくは、ＣＲ１Ｒ２はＣ＝Ｏであるか、より好ましくは、ＣＨＯＨ（β−ヒドロキシ）である。これらの実施形態において、例えば、ＣＲ９Ｒ１０は、ＣＦ２およびＣＨＦ（好ましくは、α−フルオロ）より選択されるか、またはＣＲ３Ｒ４Ｒ５は、ＣＨＦ２もしくはＣＦ３より選択される。
【００３３】
構造Ｉの選択されるさらなる実施形態において、ＣＲ７Ｒ８またはＣＲ１１Ｒ１２のいずれかがフッ素を含み、そしてＣＲ１Ｒ２が酸素を含み；好ましくは、ＣＲ１Ｒ２はＣ＝Ｏであるか、もしくはより好ましくは、ＣＨＯＨ（β−ヒドロキシ）である。これらの実施形態において、例えば、ＣＲ７Ｒ８は、ＣＦ２およびＣＨＦ（好ましくは、α−フルオロ）より選択されるか、もしくはＣＲ１１Ｒ１２は、ＣＦ２およびＣＨＦより選択される。
【００３４】
他の局面において、本発明は、免疫抑制をもたらす方法および細胞においてアポトーシスを誘導する方法を提供する。本発明は、抗増殖性治療（特に抗癌治療）において有用である。これらの方法は、本明細書中に記載されるような構造Ｉを有する有効量の化合物を、それぞれ、そのような処置を必要としている被験体に投与する工程、または上記細胞に接触させる工程を包含する。あるいは、本発明は、免疫抑制をもたらす薬剤もしくは細胞においてアポトーシスを誘導する薬剤の調製のための構造Ｉの化合物の使用を含む。この化合物は、代表的に、薬学的に受容可能なキャリア中で提供される。これらの方法およびこれらの使用の特定の実施形態は、本明細書中に記載される構造Ｉの任意の特定の実施形態を用い得る。
【００３５】
本発明のこれらおよび他の目的および特徴は、以下の本発明の詳細な説明を添付の図面を合わせて読む場合に、より完全に明らかとなる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３６】
（発明の詳細な説明）
（Ｉ．トリプトライド誘導体）
本開示の目的のために、トリプトライドおよびトリプトライド誘導体に関して以下の番号スキームを使用した。
【００３７】
【化５】
2007524581.tif 000004
本発明の化合物は、本明細書中にさらに記載されるような、ハロゲン原子（好ましくは塩素もしくはフッ素、そして最も好ましくはフッ素）によるＣ１、Ｃ２、Ｃ５、Ｃ１４、Ｃ１５、Ｃ１６および／もしくはＣ１９（好ましくはＣ２、Ｃ１４、もしくはＣ１６）の一つ以上のヒドロキシルもしくは水素原子の置換により生じるトリプトライド誘導体である。より詳細には、本発明の化合物は、以下の構造Ｉ：
【００３８】
【化６】
2007524581.tif 000005
により表わされ、ここで：
ＣＲ１Ｒ２は、ＣＨＯＨ、Ｃ＝Ｏ、ＣＨＦ、ＣＦ２およびＣ（ＣＦ３）ＯＨより選択され；
ＣＲ６およびＣＲ１３は、ＣＨ、ＣＯＨおよびＣＦより選択され；
ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０およびＣＲ１１Ｒ１２は、ＣＨ２、ＣＨＯＨ、Ｃ＝Ｏ、ＣＨＦおよびＣＦ２より選択され；そして
ＣＲ３Ｒ４Ｒ５は、ＣＨ３、ＣＨ２ＯＨ、Ｃ＝Ｏ、ＣＯＯＨ、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２およびＣＦ３より選択され；
そのため、Ｒ１〜Ｒ１３のうちの少なくとも一つは、フッ素を含み；
ＣＲ３Ｒ４Ｒ５、ＣＲ６、ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０、ＣＲ１１Ｒ１２、およびＣＲ１３のうちの２つ以下、そして好ましくは１つ以下は、フッ素もしくは酸素を含み；
そして、ＣＲ１Ｒ２がＣＨＯＨである場合、ＣＲ３Ｒ４Ｒ５は、ＣＨ２Ｆではない。
【００３９】
好ましくは、ＣＲ７Ｒ８およびＣＲ９Ｒ１０の各々の立体化学は、ＣＨＯＨが、β−ヒドロキシ立体配置を有し、そしてＣＨＦが、α−フルオロ立体配置を有するようなものである。
【００４０】
構造Ｉの好ましい実施形態において、ＣＲ１Ｒ２は、ＣＨＦ（α）である。（本明細書中で使用される場合、「ＣＨＸ（α）」もしくは「ＣＨＸ（β）」との告示は、非水素置換基であるＸが、それぞれ、α立体配置もしくはβ立体配置を有することを示す。）より好ましくは、これらの実施形態において、ＣＲ１Ｒ２のみが、フッ素を含む。さらにより好ましくは、これらの実施形態において、ＣＲ９Ｒ１０および／もしくはＣＲ３Ｒ４Ｒ５のみが、酸素を含む；例えば、ＣＲ９Ｒ１０および／もしくはＣＲ３Ｒ４Ｒ５のうちの一方もしくは両方（好ましくは一方）が、ＣＨＯＨ（好ましくは、ＣＲ９Ｒ１０に関してＣＨＯＨ（β））である。あるいは、これらの実施形態において、ＣＲ３Ｒ４Ｒ５、ＣＲ６、ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０、ＣＲ１１Ｒ１２、およびＣＲ１３のうちのいずれも、酸素を含まない。
【００４１】
構造Ｉの好ましい実施形態はまた、ＣＲ１Ｒ２、ＣＲ３Ｒ４Ｒ５、ＣＲ６、ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０、およびＣＲ１１Ｒ１２より選択される正確に一つの炭素中心がフッ素を含む化合物も含む。より好ましくは、ＣＲ１Ｒ２、ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０、およびＣＲ１１Ｒ１２のうちの正確に一つは、フッ素を含む。好ましくは、これらの実施形態において、ＣＲ９Ｒ１０および／もしくはＣＲ３Ｒ４Ｒ５のみが、酸素を含む；例えば、ＣＲ９Ｒ１０および／もしくはＣＲ３Ｒ４Ｒ５のうちの一方もしくは両方（好ましくは、一方）が、ＣＨＯＨ（好ましくは、ＣＲ９Ｒ１０に関してＣＨＯＨ（β））である。あるいは、これらの実施形態において、ＣＲ３Ｒ４Ｒ５、ＣＲ６、ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０、ＣＲ１１Ｒ１２、およびＣＲ１３のうちのいずれも、酸素を含まない。
【００４２】
構造Ｉの選択される実施形態において、ＣＲ１Ｒ２のみが、フッ素を含む。従って、ＣＲ１Ｒ２は、ＣＦ２、ＣＨＦ、およびＣ（ＣＦ３）ＯＨより選択される。ＣＲ１Ｒ２の立体化学は、好ましくはＣ（ＣＦ３）ＯＨがＣ（α−ＣＦ３）β−ＯＨであるか、もしくはＣＨＦがＣＨ（α−Ｆ）であるようなものである。
【００４３】
構造Ｉの他の選択される実施形態において、ＣＲ９Ｒ１０かＣＲ３Ｒ４Ｒ５かのいずれかが、フッ素を含み、そしてＣＲ１Ｒ２が酸素を含む；好ましくは、ＣＲ１Ｒ２は、Ｃ＝Ｏであるか、もしくは、より好ましくは、ＣＨＯＨ（β−ヒドロキシ）である。これらの実施形態において、ＣＲ９Ｒ１０は、ＣＦ２もしくはＣＨＦ（好ましくは、α−フルオロ）であり、そしてＣＲ３Ｒ４Ｒ５は、好ましくはＣＨＦ２もしくはＣＦ３である。
【００４４】
構造Ｉのさらなる選択される実施形態において、ＣＲ７Ｒ８かＣＲ１１Ｒ１２かのいずれかがフッ素を含み、そしてＣＲ１Ｒ２が酸素を含む；好ましくは、ＣＲ１Ｒ２が、Ｃ＝Ｏであるか、もしくは、より好ましくは、ＣＨＯＨ（β−ヒドロキシ）である。これらの実施形態において、ＣＲ７Ｒ８は、ＣＦ２もしくはＣＨＦ（好ましくは、α−フルオロ）であり、そしてＣＲ１１Ｒ１２は、ＣＦ２もしくはＣＨＦである。
【００４５】
本発明はまた、構造Ｉの化合物に対する類似化合物も含み、ここで、フッ素は、異なるハロゲン原子（すなわち、塩素、臭素、もしくはヨウ素（特に、塩素））により置き換えられる；例えば、１４−デオキシ−１４α−クロロトリプトライド。選択され、かつ好ましいこのような化合物の他の実施形態は、上の構造Ｉのフッ化化合物について記載される化合物に対応する。
【００４６】
（Ａ．調製）
本発明の化合物は、トリプトライドもしくはその水酸化誘導体から調製され得る。後者の化合物は、トリプジオライド（ｔｒｉｐｄｉｏｌｉｄｅ）（２−ヒドロキシトリプトライド）もしくは１６−ヒドロキシトリプトライドを含み、これらの化合物は、トリプトライドとともに中国薬用植物Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ  ｗｉｌｆｏｒｄｉｉ（ＴＷ）の根の木部もしくは他の公知の供給源より得られ得る。ＴＷ植物は、中国の福建省および他の南の省において見出される；ＴＷ植物材料は、一般的に、中国において得られ得るか、もしくは米国において商業的供給源から得られ得る。トリプトライド、トリプジオライドおよび１６−ヒドロキシトリプリプトライドを得るための方法は、当該分野において公知であり、そして例えば、Ｋｕｐｃｈａｎら（１９７２、１９７７）；Ｌｉｐｓｋｙら（１９９４）；Ｐｕら（１９９０）；およびＭａら（１９９２）に記載されている。
【００４７】
トリプトライドの５−ヒドロキシ誘導体は、共有に係る米国仮出願番号６０／５３２，７０２に記載されているようなトリプトライドの二酸化セレン酸化により調製され得る。簡単に言えば、代表的な調製物において、トリプトライドおよび約２．２当量の二酸化セレンのジオキサン中溶液は、Ｎ２存在下で７２時間、約９０℃で攪拌される。
【００４８】
Ｌ．Ｎｉｎｇら（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ５９（２３）：４２０９−４２１３、２００３）に記載されているように、トリプトライドとＣｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ  ｂｌａｋｅｓｌｅａｎａとのインキュベーションにより、上の水酸化誘導体ならびに１β−ヒドロキシトリプトライド、トリプトリデノール（ｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅｎｏｌ）（１５−ヒドロキシトリプトライド）、１９α−ヒドロキシトリプトライド、および１９β−ヒドロキシトリプトライドが生成される。これらの生成物は、標準的な手順（すなわち、酢酸エチルによる濾過培養液の抽出、濃縮、およびこの残査のシリカゲルクロマトグラフィー）により単離される。
【００４９】
構造Ｉの化合物は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ５、Ｃ１４、Ｃ１５、Ｃ１６および／もしくはＣ１９のヒドロキシル基もしくはオキソ基と、フッ化剤との反応により、トリプトライド、その水酸化誘導体、もしくはその酸化誘導体から調製されて、それぞれ、上記炭素にＣＨＦ基もしくはＣＦ２基を形成し得る。
【００５０】
このようなフッ化試薬の説明は、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｆｌｕｏｒｉｎｅ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ＩＩ（Ｍ．ＨｕｄｌｉｃｋｙおよびＡ．Ｅ．Ｐａｖｌａｔｈ編；ＡＣＳ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈ  １８７、１９９５）ならびにＯｒｇａｎｏｆｌｕｏｒｉｎｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｉｎｓ（Ｒ．Ｅ．Ｂａｎｋｓ、Ｂ．Ｅ．ＳｍａｒｔおよびＪ．Ｃ．Ｔａｔｌｏｗ編；Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ、１９９４）のような参考文献において提供される。例えば、ヒドロキシル基（Ｃ−ＯＨ）からＣ−Ｆへの変換のために適切な試薬としては、ＨＦ−ピリジン（Ｏｌａｈ’ｓ試薬）もしくはＨＦ−２，４，６−コリジンのようなＨＦ−アミン錯体、四フッ化硫黄（ＳＦ４）ならびに種々のＳＦ４誘導体（（ジエチルアミノ）三フッ化硫黄（ＤＡＳＴ）、（ジメチルアミノ）三フッ化硫黄（メチル−ＤＡＳＴ）、モルフォリノ三フッ化硫黄（ｍｏｒｐｈ−ＤＡＳＴ）、および［ビス（２−メトキシエチル）アミノ］三フッ化硫黄（Ｄｅｏｘｏ−ＦｌｕｏｒＴＭ）を含む）が挙げられる。このヒドロキシル基は、まず、トリフレートのような脱離基に変換され得、次に、トリス（ジメチルアミノ）硫黄（トリメチルシリル）二フッ化物（ＴＡＳ−Ｆ）、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムジフルオロトリフェニルケイ酸、または無機塩（例えば、ＫＦ、ＣｓＦおよびＢｕ４ＮＦ）のような求核性フッ化物試薬により置き換えられる。これらの反応は、一般的に、以下に示すように立体化学の反転を伴って進行する。
【００５１】
例えば、天然トリプトライドは、Ｃ１４にβ−ヒドロキシルを有し、実施例１に記載されるように、ＤＡＳＴとの反応により１４−デオキシ−１４−α−フルオロトリプトライド（本明細書中でＰＧ７６３と称される）に変換され得る。あるいは、エピトリプトライド（１４−α−トリプトライド、本明細書中で比較化合物ＰＧ５２４と称される）は、１４−デオキシ−１４−β−フルオロトリプトライドを調製するために使用され得る。
【００５２】
（Ｃ１４およびＣ２にβ−ヒドロキシルを有する）トリプトライドは、１４−デオキシ−２α，１４α−ジフルオロトリプトライドへと同様に変換され得る。フッ化試薬の限定量が使用される場合、この化合物は、２α−フルオロトリプトライドとの混合物として得られ得る（以下を参照のこと）。
【００５３】
【化７】
2007524581.tif 000006
以下に示されるように、１６−ヒドロキシトリプトライドと化学量論量もしくは過剰量のフッ化剤との反応は、１４−デオキシ−１４α，１６−ジフルオロトリプトライドを提供する。
【００５４】
【化８】
2007524581.tif 000007
四フッ化硫黄およびその誘導体（例えば、上に列挙される誘導体）はまた、オキソ基（例えば、アルデヒドもしくはケトン）をｇｅｍ−二フッ化物に変換するために用いられる最も頻繁に使用されるフッ化剤でもある。また、２，２−ジフルオロ−１，３−ジメチルイミダゾリジン（ＤＦＩ）も適切である。
【００５５】
トリプトライドのＣ２、Ｃ１４および／もしくはＣ１６のオキソ基は、ケト基もしくはアルデヒド基への１つ以上のヒドロキシル基の酸化により形成され得る。アルコールの選択的酸化のために適切な酸化試薬および酸化プロセスの説明は、Ｍ．Ｈｕｄｌｉｃｋｙ、Ｏｘｉｄａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（ＡＣＳ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈ  Ｓｅｒｉｅｓ  １８６、１９９０）、Ｒ．Ｃ．Ｌａｒｏｃｋ、Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ（第２版、Ｗｉｌｅｙ、１９９９）、もしくはＪ．Ｍａｒｃｈ、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（第４版、Ｗｉｌｅｙ、１９９２）のような参考文献において提供される。強酸条件もしくは強塩基条件は、避けるべきである。必要な場合、所望される生成物は、例えば、ＨＰＬＣを用いて、任意の副生成物から単離される。
【００５６】
例えば、三酸化クロム−ピリジン錯体、ＣｒＯ２Ｃｌ２／アルミナ、もしくは類似の酸化試薬を用いることにより、例えば、トリプトライドのＣ１４の二級アルコールは、ケトンへと酸化され得る（トリプトニド（ｔｒｉｐｔｏｎｉｄｅ）として公知の化合物を生じる）。例えば、ＤＡＳＴとの反応は、以下に示されるように、１４−デオキシ−１４，１４−ジフルオロトリプトライドを生じる。
【００５７】
【化９】
2007524581.tif 000008
トリプトライド（２−ヒドロキシトリプトライド）の両方の二級アルコールはまた、このような酸化剤を用いてケトンに酸化され得る。ＤＡＳＴもしくは別の適切な試薬との反応は、以下に示される四フッ化化合物を生じる。この試薬が限定量で使用される場合、示されるように、２，２−ジフルオロ化合物もまた得られ得る。
【００５８】
【化１０】
2007524581.tif 000009
あるいは、化学量論量の酸化試薬（例えば、上に示される試薬）を用いて、緩和な条件下で、トリプトライドの立体障害の小さいＣ２のアルコールが、ケトンへと選択的に酸化され得る。
【００５９】
１６−ヒドロキシトリプトライドの二級アルコールと一級アルコールの両方の酸化に関して、好ましくは、アルデヒド生成物をさらに酸化しない試薬（例えば、ＤＭＳＯ、塩化クロム酸ピリジニウム（Ｃｏｒｅｙ’ｓ試薬）、もしくは硝酸セリウムアンモニウム）を用いて、ケト−アルデヒド中間体を生じる。ケトアルデヒドとＤＡＳＴもしくは別の適切な試薬との反応は、以下に示される四フッ化化合物を与える。同様に、フッ化試薬が限定量で使用される場合、示されるように、１４−オキソ−１６，１６−ジフルオロ化合物もまた得られ得る。
【００６０】
【化１１】
2007524581.tif 000010
１６−ヒドロキシトリプトライドの一級アルコールもまた、例えば、ＲｕＣｌ２（ＰＰｈ３）３；（ＭｅＳｉＯ）２／触媒量のＲｕＣｌ２（ＰＰｈ３）３；ＤＭＳＯ／ＣｌＣＯＣＯＣｌ／Ｅｔ３Ｎ；もしくはＤＭＳＯ／ピリミジン・ＳＯ３／ｉ−Ｐｒ２ＮＥｔのような試薬を用いて選択的に酸化され得る（上に引用されるＬａｒｏｃｋを参照のこと）。次に、このアルデヒドは、以下に示されるように１６，１６−ジフルオロトリプトライドへと変換され得る。
【００６１】
【化１２】
2007524581.tif 000011
Ｃ１６の一級ヒドロキシメチル（−ＣＨ２ＯＨ）基もまた、以下のスキームに示されるように、カルボン酸への酸化、その後のＳＦ４との反応を介してトリフルオロメチルに変換され得る。
【００６２】
【化１３】
2007524581.tif 000012
トリフルオロメチル基は、以下のスキームにおいて示されるように、ケトンへの酸化、その後のトリフルオロメチルトリメチルシランとの反応により、Ｃ１４に導入され得るか、または二級ヒドロキシルもしくは一級ヒドロキシルを有する別の中心（例えば、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ１６、もしくはＣ１９）に導入され得る。
【００６３】
【化１４】
2007524581.tif 000013
異なるハロゲン原子によりフッ素が置き換えられる類似化合物の調製は、一般的に、類似の方法により調製され得る。ＸがＣｌ、Ｂｒ、もしくはＩであるＣ−ＸへとＣ−ＯＨを変換するための方法は、当該分野において周知である。塩化物の調製のための試薬としては、例えば、ＳＯＣｌ２もしくはＰＣｌ５、ＰＯＣｌ３などが挙げられる。同様に、脱離基（例えば、トシレートもしくはトリフレート）へのヒドロキシル基の変換、その後のハロゲン化試薬との反応が、推奨される経路である。例えば、Ｌａｒｏｃｋ、Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ（ＶＣＨ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８９）、３６０頁を参照のこと。ＰＣｌ５もまた、ＳＦ４と類似の様式で使用され、アルデヒドもしくはケトンからｇｅｍ−二フッ化物を形成し得る。
【００６４】
（Ｂ．生物学的活性）
上記のように、トリプトライドの種々の誘導体およびアナログが当該分野で公知であり、そして、その多くが治療上有用である。これらの化合物は、しばしば、薬物動態学または生体分布のような領域において、プロドラッグとしてのその活性および／または脂溶性もしくは水溶性の変化によって、ネイティブなトリプトライドに関して利益を提供する。しかし、一般に、このような誘導体およびアナログの生物学的活性自体は、ネイティブなトリプトライドよりも劣ることが見出されている。
【００６５】
特に、当該分野において、１４位（好ましくは１４β位）の水素供与基の存在が、トリプトライド誘導体において生物活性を維持するために重要であると一般に考えられている。例えば、本明細書中の図３Ａ〜Ｂおよび４Ａ〜Ｂの比較データを参照のこと。図３Ａおよび４Ａに示されるように、Ｃ１４にα−ヒドロキシ立体化学を有する一方で、免疫抑制活性およびアポトーシス活性を有するエピトリプトライドが、トリプトライドよりも有意に活性が劣っていた（免疫抑制アッセイにおいて、約３０倍低く、アポトーシスアッセイにおいて２５倍低かった）。Ｃ１４において、１４β立体化学および電気陰性基を有するが、水素供与基を有さない化合物（すなわち、１４β−（メチルチオ）メチルトリプトライド）において、トリプトライドと比較して、生物活性の大きな減少が見られた（図３および４Ｂ）（免疫抑制アッセイにおいてトリプトライドの約６０倍の効力の低下、アポトーシスアッセイにおいて４０倍の効力の低下）。
【００６６】
従って、本発明の１４−デオキシ−１４α−フルオロ化合物（ＰＧ７６３）の非常に高い生物活性は、当該分野の水準からは意外である。なぜなら、この化合物は、１４位に水素供与基を欠くからである。図１〜２に示されるように、細胞毒性およびＩＬ−２阻害を評価するアッセイにおけるＰＧ７６３の活性は、トリプトライドのものとほぼ等価であった。
【００６７】
従って、１４−デオキシ−１４α−フルオロ化合物は、本明細書中に開示される構造Ｉの特に好ましい実施形態である。特定の実施形態において、この化合物は、ＰＧ７６３である。
【００６８】
（ＩＩ．治療用組成物）
本発明のトリプトライド誘導体を含有する処方物は、錠剤、カプセル、散剤、徐放性処方物、溶液、懸濁液、エマルジョン、軟膏、ローションまたはエアロゾルのような、固形、半固形、凍結乾燥粉末または液体投薬形態の形態を取り得、好ましくは、正確な投薬量の単純な投与に適切な単位投与形態であり得る。この組成物は、代表的には、従来の薬学的キャリアまたは賦形剤を含み、そして、さらに、他の薬剤、キャリアまたはアジュバントを含み得る。
【００６９】
好ましくは、この組成物は、約０．５重量％〜７５重量％の本発明の化合物であり、残りは、適切な薬学的賦形剤から構成される。経口投与について、このような賦形剤としては、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、滑石、セルロース、グルコース、ゼラチン、スクロース、炭酸マグネシウムなどの製薬等級が挙げられる。所望される場合、この組成物はまた、湿潤剤、乳化剤または緩衝剤のような、微量の非毒性の補助物質を含み得る。
【００７０】
組成物は、例えば、静脈内注射、皮下注射、腹腔内注射または筋肉内注射によって、経口的に、経皮的に、または非経口的に被験体に投与され得る。経口用液体調製物における用途について、組成物は、溶液、懸濁液、エマルジョンまたはシロップとして調製され得、液体形態、または水もしくは通常の生理食塩水中での水和に適切な乾燥形態のいずれかで供給される。非経口投与について、非経口投与のための注射可能組成物は、代表的には、滅菌生理学的塩溶液のような適切な静脈内溶液内にトリプトライド誘導体を含む。
【００７１】
液体組成物は、薬学的に受容可能なキャリア（例えば、生理食塩水溶液、デキストロース水溶液、グリセロールまたはエタノール）中にトリプトライド誘導体（約０．５％〜約２０％）および任意の薬学的アジュバントを溶解または分散させて、液体または懸濁液を形成することによって調製され得る。
【００７２】
化合物はまた、固体または液体のいずれかの、好ましくは吸入可能なサイズのエアロゾル粒子の形態で、吸入により投与され得る。このような粒子は、吸入されると口および咽頭を通り、気管支および肺の肺胞へと通過するのに十分小さい。一般に、約１〜１０ミクロンのサイズ、好ましくは、約５ミクロン未満のサイズの範囲の粒子が、吸入可能である。吸入用の液体組成物は、水性キャリア（例えば、滅菌の発熱物質を含まない生理食塩水溶液または滅菌の発熱物質を含まない水）中に分散された活性因子を含む。所望される場合、この組成物は、組成物を噴霧し、エアロゾルを形成することを補助するための噴霧剤と混合され得る。
【００７３】
このような投薬形態を調製するための方法は、当業者に公知であるか、または、当業者に明らかである；例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１９版、Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，１９９５）を参照のこと。投与される組成物は、被験体において免疫抑制、または、標的化した細胞におけるアポトーシスに影響を及ぼすための有効量で、選択された化合物の量を含む。
【００７４】
例えば、Ｐａｎｃｈａｇｎｕｌａら（２０００）に記載されるように、経口バイオアベイラビリティを含む、薬剤の分配係数またはｌｏｇＰは、種々の投薬経路についてのその適合性に影響を及ぼし得る。１つ以上のヒドロキシル基のフッ素での置換によって、本明細書中に記載される化合物は、親化合物であるトリプトライドよりも高い理論上のｌｏｇＰ値を有し、これらの化合物を経口のアベイラビリティについてのより良い候補にすることが期待される。
【００７５】
（ＩＩＩ．免疫調節処置および抗炎症処置）
図２に示されるように、構造Ｉの化合物１４−デオキシ−１４−α−フルオロ−トリプトライド（ＰＧ７６３と命名）は、用量依存性の様式で、トリプトライドを使用する同様のアッセイにおける濃度と匹敵する濃度において、Ｊｕｒｋａｔ細胞におけるＩＬ−２産生を阻害した（実施例４を参照のこと）。従って、本発明は、例えば、移植手順または自己免疫疾患の処置の補助として、免疫抑制剤としての本発明の化合物の使用を含む。
【００７６】
免疫調節の異常は、広範種々の自己免疫性疾患および慢性炎症性疾患（全身性エリテマトーデス、慢性関節リウマチ、Ｉ型およびＩＩ型糖尿病、炎症性腸疾患、胆汁性肝硬変、ブドウ膜炎、多発性硬化症、ならびにクローン病、潰瘍性大腸炎、水疱性類天疱瘡、サルコイドーシス、乾癬、魚鱗癬、グレーブス眼症および喘息のような他の障害を含む）において存在することが示されている。これらの状態の各々の根底にある病理は極めて異なり得るが、これらは共通して、種々の自己抗原、および自己反応性のリンパ球の出現を有する。このような自己反応性は、部分的に、正常な免疫系が機能する恒常性制御の喪失に起因し得る。
【００７７】
同様に、骨髄移植、または、成熟なリンパ球を含むドナー組織源に由来する造血幹細胞の他の移植後に、その移されたリンパ球が、宿主組織抗原を外来であると認識する。これらの細胞は、活性型になり、生命を脅かし得る攻撃を宿主に与える（対宿主性移植片応答）。さらに、臓器移植の後、宿主のリンパ球は、臓器移植片の外来組織抗原を認識し、移植片の損傷および拒絶を引き起こす、細胞媒介性免疫応答および抗体媒介性免疫応答（対移植片性宿主応答）を起こす。
【００７８】
自己免疫または拒絶反応の１つの結果は、炎症性細胞により引き起こされる組織の破壊であり、これらの放出するメディエーターである。ＮＳＡＩＤのような抗炎症剤は、主に、これらのメディエーターの効果または分泌をブロックすることによって機能するが、疾患の免疫の基礎は変更しない。一方で、シクロホスファミドのような細胞傷害性剤は、正常な応答および自己免疫応答の両方を遮断する、非特異的な様式で機能する。実際、このような非特異的な免疫抑制剤で処置された患者は、自己免疫疾患に由来するような感染に屈する傾向がある。
【００７９】
本発明の組成物は、自己免疫疾患を処置するか、移植拒絶を防止するか、または、対宿主性移植片病（ＧＶＨＤ）を防止することにおいてのように、トリプトライドおよびそのプロドラッグ、ならびに他の誘導体が、証明された効果を有する用途（例えば、免疫抑制療法）において有用である。例えば、共有に係る、米国特許第６，１５０，５３９号（本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。トリプトライドおよび本発明の誘導体はまた、外傷性炎症および男性の受精能の減少のような他の炎症性状態の処置に有用である。
【００８０】
この組成物は、不適合性のヒトドナーからの固形臓器移植、組織移植片、または細胞移植の拒絶を阻害し、従って、移植片の生存および機能、ならびにレシピエントの生存を延長するのに有用である。この用途としては、固形臓器移植（例えば、心臓、腎臓および肝臓）、組織移植片（例えば、皮膚、腸、膵臓、性腺、骨および軟骨）、および細胞移植（例えば、膵臓、脳および神経組織、筋肉、皮膚、骨、軟骨および肝臓に由来する細胞）が挙げられるがこれらに限定されない。
【００８１】
この組成物はまた、異種移植片（種族間）の拒絶の阻害、すなわち、天然の状態でも、ヒトの遺伝子、ＲＮＡ、タンパク質、ペプチドもしくは他の非天然の異種分子を発現するように生体工学的操作（一般に遺伝子操作）されていても、その動物の天然の遺伝子、ＲＮＡ、タンパク質、ペプチドもしくは他の通常発現される分子の発現を欠くように生物工学的操作されていても、非ヒト動物に由来する固形臓器移植、組織移植片または細胞移植の拒絶の防止に有用である。本発明はまた、このような非ヒト動物に由来する固形臓器移植、組織移植片または細胞移植の生存を延長するための、上記のような組成物の使用を包含する。
【００８２】
また、自己免疫疾患、あるいはアジソン病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性甲状腺炎、クローン病、糖尿病（Ｉ型）、グレーブス病、ギランバレー症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ループス腎炎、多発性硬化症、重症筋無力症、乾癬、原発性胆汁性肝硬変、慢性関節リウマチおよびブドウ膜炎、喘息、アテローム性動脈硬化症、橋本甲状腺炎、アレルギー性脳脊髄炎、子宮体腎炎および種々のアレルギーのような自己免疫性の徴候を有する疾患の処置の方法が含まれる。
【００８３】
さらなる用途としては、以下の疾患の処置および予防が挙げられ得る：炎症性皮膚疾患および過剰増殖性皮膚疾患、ならびに、免疫媒介性疾病の皮膚徴候（例えば、乾癬、アトピー性皮膚炎、天疱瘡、蕁麻疹、皮膚好酸球増加症、座瘡、および円形脱毛症）；種々の眼疾患（例えば、結膜炎、ブドウ膜炎、角膜炎およびサルコイドーシス）；粘膜および血管の炎症（例えば、胃潰瘍、虚血性疾患および血栓症により生じる脈管損傷、虚血性腸疾患、炎症性腸疾患および壊死性腸炎）；腸の炎症／アレルギー（例えば、セリアック病および潰瘍性大腸炎）；腎疾患（例えば、間質性腎炎、グッドパスチャー症候群、溶血性尿毒症症候群および糖尿病性腎症）；造血性疾患（例えば、特発性血小板減少性紫斑病および自己免疫性溶血性貧血）；皮膚疾患（例えば、皮膚筋炎および皮膚Ｔ細胞リンパ腫）；循環疾患（例えば、動脈硬化症およびアテローム性動脈硬化症）；腎疾患（例えば、虚血性急性腎不全および慢性腎不全）；ならびにベーチェット病。
【００８４】
本発明の組成物および方法はまた、例えば、気管支喘息、アレルギー性喘息、内因性喘息、外因性喘息および塵埃喘息（特に、慢性もしくは難知性喘息（例えば、遅発性喘息および気道応答性亢進））のような、内因性および外因性の両方の徴候の喘息のような炎症性状態の処置に有用である。この組成物および方法はまた、他の炎症性状態（外傷性炎症、ライム病における炎症、慢性気管支炎（慢性感染性肺疾患）、慢性副鼻腔炎、敗血症関連の急性呼吸困難症候群、および肺サルコイドーシスが挙げられる）の処置にも有用であり得る。喘息のような呼吸器の状態の処置について、この組成物は、好ましくは、吸入を介して投与されるが、任意の従来の投与経路が有用であり得る。
【００８５】
自己免疫状態の処置において、患者は、定期的な基礎（例えば、１週あたり１〜２回）に基づいて、症状を軽減し、患者の快適さを改善するのに十分な投薬レベルで組成物を与えられる。慢性関節リウマチの処置について、特に、この組成物は、静脈内注射によってか、または、冒された関節内への直接注射によって投与され得る。患者は、患者における疾患の症状の発症後、少なくとも２４時間の繰り返し間隔で、数週間にわたって処置され得る。投与される用量は、好ましくは、１日あたり、患者の体重１ｋｇあたり、１〜２５ｍｇの範囲であり、より低い量が、非経口投与には好ましく、より高い量が、経口投与に好ましい。最適な投薬量は、当該分野で公知の方法に従って、慣用的な実験により決定され得る。
【００８６】
移植拒絶の治療について、この方法は、心臓、腎臓、肝臓、細胞および骨髄の移植の拒絶の処置について特に意図され、そしてまた、ＧＶＨＤの処置においても使用され得る。この処置は代表的には、外科的移植手順の直前または直後のいずれかに、手術に際して開始され、急性の移植拒絶の処置のために、少なくとも数週間の期間にわたって、毎日投薬のレジメンで継続される。処置期間の間に、患者は、例えば、アレルギー性リンパ球の関与する混合型リンパ球反応によってか、または、移植された組織の生検を採取することによって、免疫抑制レベルについて定期的に試験され得る。
【００８７】
さらに、この組成物は、移植片拒絶の予防、または、遅発性移植片拒絶の急性発症の処置に対して慢性的に投与され得る。上記のように、投与される用量は、好ましくは、１日当たり、患者の体重１ｋｇあたり１〜２５ｍｇであり、より低い量が非経口投与に好ましく、より高い量が、経口投与に好ましい。この用量は、患者の応答、処置の期間、患者の感染に抵抗する能力に依存して、適切に増加または減少され得る。
【００８８】
レシピエントへの、適合したか、または非適合の骨髄、脾臓細胞、胎児組織、臍帯血、または、動員されたかもしくは他の方法で回収された幹細胞への移植から生じた、対宿主移植片病の処置または予防において、用量は、好ましくは、１日あたり、体重１ｋｇあたり、０．２５〜２ｍｇの範囲であり、好ましくは、０．５〜１ｍｇ／ｋｇ／日で、経口または非経口で与えられる。
【００８９】
また、構造Ｉの化合物および１つ以上の従来の免疫抑制剤を含む併用療法も、本発明の範囲内である。本発明の範囲内のこれらの免疫抑制剤としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：ＩＭＵＲＥＫＴＭ（アザチオプリンナトリウム）、ブレキナルナトリウム（ｂｒｅｑｕｉｎａｒ  ｓｏｄｉｕｍ）、ＳＰＡＮＩＤＩＮＴＭ（ガスペリマス三塩酸塩（ｇｕｓｐｅｒｉｍｕｓ  ｔｒｉｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、デオキシスペルグアリン（ｄｅｏｘｙｓｐｅｒｇｕａｌｉｎ）としてもまた公知）、ミゾリビン（ｍｉｚｏｒｉｂｉｎｅ）（ブレジニン（ｂｒｅｄｉｎｉｎ）としてもまた公知）、ＣＥＬＬＣＥＰＴＴＭ（ミコフェノール酸モフェチル）、ＮＥＯＲＡＬＴＭ（Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ  Ａ；商標ＳＡＮＤＩＭＭＵＮＥＴＭの下で、異なる処方物としても市販されている）、ＰＲＯＧＲＡＦＴＭ（タクロリムス、ＦＫ−５０６としても公知）、ＲＡＰＩＭＭＵＮＥＴＭ（シロリムス、ラパマイシンとしても公知）、レフルノミド（ＨＷＡ−４８６としても公知）、ＺＥＮＡＰＡＸＴＭ、糖質コルチコイド（例えば、プレドニゾロンおよびその誘導体）、抗体（例えば、オルトクローン（ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ）（ＯＫＴ３））、ならびに抗胸腺細胞グロブリン（例えば、胸腺グロブリン）。この化合物は、上記のように免疫抑制治療のための別の免疫抑制薬と同時に投与される場合、増強剤として有用である。上記のような従来の免疫抑制薬は、従って、その化合物が単独で投与される場合よりも実質的に少ない量（例えば、標準的な用量の２０％〜５０％）で投与され得る。あるいは、本発明の化合物および免疫抑制薬は、得られる免疫抑制が、薬物と本発明の化合物を単独で使用した場合に得られる効果の合計から予測または得られるものよりも大きくなるような量で投与される。代表的には、免疫抑制薬および増強剤は、少なくとも２週間の期間にわたって、一定間隔で投与される。
【００９０】
本発明の組成物はまた、従来の抗炎症性薬物と組合せて投与され得、ここで、この薬物、または投与される薬物の量は、それ自体では、炎症の適切な抑制または阻害を誘導するのに効果がない。
【００９１】
インビボにおける化合物の免疫抑制活性は、当該分野で公知の確立された動物モデルの使用により評価され得る。このようなアッセイは、免疫抑制化合物の相対効率を評価し、そして、免疫抑制治療についての適切な投薬量を見積もるために使用され得る。これらのアッセイとしては、例えば、ＯｎｏおよびＬｉｎｄｓｅｙ（１９６９）により記載された同種移植のための十分に特徴付けられたラットモデル（このモデルにおいて、移植された心臓が、同種のレシピエント動物の腹部の大きな血管に付着し、この移植された心臓の生存度は、レシピエント動物において拍動する心臓の能力により測定される）が挙げられる。レシピエント動物が、異なる種である、異種移植モデルは、Ｗａｎｇ（１９９１）およびＭｕｒａｓｅ（１９９３）により記載される。ＧＶＨＤに対する効率を評価するためのモデルは、親の脾臓細胞を用いた正常なＦ１マウスの注射を含み；このマウスは、脾腫および免疫抑制により特徴付けられるＧＶＨＤ症候群を発症する（Ｋｏｒｎｇｏｌｄ，１９７８；Ｇｌｅｉｃｈｍａｎｎ，１９８４）。単一細胞の懸濁物は、個々の脾臓から調製され、そして、マイクロウェルの培養物が、コンカナバリンＡの存在下および非存在下で確立されて、マイトジェンの応答性の程度を評価する。
【００９２】
（ＩＶ．抗癌処置）
図１に示されるように、構造Ｉの化合物、１４−デオキシ−１４−α−フルオロ−トリプトライド（ＰＧ７６３と命名）は、トリプトライドを使用する同様のアッセイにおける濃度に匹敵する濃度において、Ｊｕｒｋａｔ細胞に対して用量依存性の様式で細胞傷害性であった（実施例２を参照のこと）。従って、本発明は、特に癌を処置するための、細胞傷害剤としての本発明の化合物の用途を含む。本明細書中で使用される場合、「癌」とは、哺乳動物（特にヒト）において見出される、あらゆる型の癌もしくは新生物もしくは悪性腫瘍（白血病、肉腫、癌腫および黒色腫を含む）をいう。
【００９３】
用語「白血病」とは、広く、血液形成器官の進行性かつ悪性の疾患をいい、そして一般には、血液および骨髄における白血球およびその前駆体の変形した増殖および発生により特徴付けられる。用語「肉腫」は一般に、胚性結合組織様の物質から構成され、そして一般には、原線維内に埋め込まれた密に詰まった細胞または均質な物質から構成される腫瘍をいう。用語「黒色腫」は、皮膚および他の器官のメラニン細胞系から生じる腫瘍を意味するために用いられる。用語「癌腫」は、周囲組織に浸潤し、そして、転移を生じる傾向がある上皮細胞から構成される、悪性新生物をいう。
【００９４】
例えば、生殖組織（例えば、セルトリ細胞、生殖細胞、発生途上もしくはより成熟した精原細胞、精子細胞または精母細胞、ならびに栄養細胞、卵巣の生殖細胞および他の細胞）、リンパ系もしくは免疫系（例えば、ホジキン病および非ホジキンリンパ腫）、造血系および上皮（例えば、皮膚、悪性黒色腫および消化管を含む）、固形器官、神経系（例えば、神経膠腫（Ｙ．Ｘ．Ｚｈｏｕら、２００２を参照のこと））、ならびに骨格筋組織に由来する細胞を含む癌が含まれる。化合物は、種々の癌細胞型の処置に使用され得、これらの癌細胞型としては以下が挙げられるがこれらに限定されない：脳腫瘍（髄芽細胞腫を含む）、頭頸部腫瘍、胸部腫瘍、結腸腫瘍、小細胞肺腫瘍、大細胞肺腫瘍、甲状腺腫瘍、精巣腫瘍、膀胱腫瘍、前立腺腫瘍、肝臓腫瘍、腎臓腫瘍、膵臓腫瘍、食道（ｅｓｏｐｈｏｇｅａｌ）腫瘍、胃腫瘍、卵巣腫瘍、子宮頸部腫瘍、またはリンパ腫の腫瘍。胸部腫瘍、結腸腫瘍、肺腫瘍および前立腺腫瘍の処置が、特に意図される。
【００９５】
この組成物は、上記のような、任意の従来の投与経路によって、癌および／または白血病に冒された患者に投与され得る。この方法は、腫瘍の増殖を遅延し、腫瘍の増殖を予防し、腫瘍の部分的な退行を誘導し、そして、完全な消失の時点まで腫瘍の完全な退行を誘導することに有用である。この方法はまた、固形腫瘍に由来する転移の増殖の予防に有用である。
【００９６】
本発明の組成物は、単独の治療として、または、被験体において抗癌効果を有するようには設計されていない他の支持的もしくは治療的処置と共に投与され得る。この方法はまた、１つ以上の従来の抗癌薬物または生物タンパク質製剤と組合せて、被験体において所望の抗癌効果を有するのに十分な量で、本発明の組成物を投与する工程を包含し、この方法において、その薬物または製剤の量は、それ自体では、癌の増殖の適切な抑制を誘導する効果がない。このような抗癌薬としては、アクチノマイシンＤ、カンプトテシン、カルボプラチン、シスプラチン、シクロホスファミド、シトシンアラビノシド、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エトポシド、フルダラビン、５−フルオロウラシル、ヒドロキシウレア、ゲムシタビン、イリノテカン、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、パクリタキセル、タキソテール、テニポシド、トポテカン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびビノレルビンが挙げられる。抗癌生物タンパク質製剤としては、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、他のＴＮＦ関連もしくはＴＲＡＩＬ関連リガンドおよび因子、インターフェロン、インターロイキン−２、他のインターロイキン、他のサイトカイン、ケモカインおよび因子、腫瘍関連分子もしくはレセプターに対する抗体（例えば、抗ＨＥＲ２抗体）、ならびにこれらの因子と反応するか、またはこれらの因子に結合する因子（例えば、レセプターのＴＮＦスーパーファミリーのメンバー、他のレセプター、レセプターアンタゴニスト、およびこれらの因子に対する特異性を有する抗体）が挙げられる。
【００９７】
特定の組成物のインビボにおける抗腫瘍活性は、例えば、Ｆｉｄｌｅｒら、米国特許第６，６２０，８４３号に記載されるような確立された動物モデルを使用することによって評価され得る。臨床的な用量およびレジメンは、疾患の重篤度、および患者の全身状態のような因子に基づいて、医師に公知の方法に従って決定される。
【００９８】
（Ｖ．他の適応症）
本発明の化合物はまた、特定のＣＮＳ疾患の処置においても使用され得る。グルタミン酸は、種々の神経疾患および精神疾患の病理における重要な役割を含む、多数の生理学的機能を果たす。グルタミン酸の興奮毒性および神経毒性は、低酸素症、虚血および外傷、ならびに、慢性の神経変性疾患もしくは神経代謝疾患、アルツハイマー病、ハンチントン病およびパーキンソン病に関与している。トリプトライドの報告された神経保護作用（特に、グルタミン酸誘導性の細胞死からの保護（Ｑ．Ｈｅら、２００３；Ｘ．Ｗａｎｇら、２００３））の点から、本発明の化合物は、グルタミン酸の神経毒性作用に拮抗すると考えられ、従って、このような疾患のための新規治療であり得る。
【００９９】
再発におけるＭＳ患者からの最近の証拠により、脳におけるグルタミン酸恒常性の変更が示唆される。ＭＳ患者において生じる神経毒性事象は、希突起神経膠細胞および神経細胞の死の原因であり得る。本発明の化合物を用いる処置により、グルタミン酸レセプター媒介性の興奮毒性に拮抗することは、ＭＳ患者における治療適応を有し得る。他のＣＮＳ疾患（例えば、ギランバレー症候群、メニエール病、多発性神経炎（ｐｏｌｙｎｅｕｒｉｔｉｓ）、多発性神経炎（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｎｅｕｒｉｔｉｓ）、単発神経炎および神経根障害）がまた、本発明の化合物を用いて処置され得る。
【０１００】
本発明の化合物はまた、特定の肺疾患の処置において使用され得る。特発性肺線維症（ＰＦ）は、病因が不明な進行性の間質性肺疾患である。ＰＦは、肺の間質における細胞内マトリクスおよびコラーゲンの過度の堆積、ならびに、炎症および線維症の結果としての瘢痕組織による肺胞の漸進的な置換により特徴付けられる。疾患が進行するにつれ、瘢痕組織の増加が、肺から血流へと酸素を運ぶ能力に干渉する。トリプトライドの１４−スクシンイミドエステルは、ブレオマイシン誘導性のＰＦをブロックすると報告されている（Ｇ．Ｋｒｉｓｈｎａら、２００１）。従って、本発明の化合物は、ＰＦの処置に有用であり得る。他の呼吸器疾患（例えば、サルコイドーシス、肺線維症および特発性間質性肺炎）の処置がまた考えられる。
【０１０１】
肺に関し、本発明の化合物により処置可能であると考えられる他の疾患としては、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）および急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）が挙げられる。特に、ＳＡＲＳに関して、疾患の進行のピークより前のウイルス含量（ＳＡＲＳ−ＣｏＶ）の減少、および鉱質コルチコイド処置の有用性は、以下に示されるように、ＳＡＲＳによる多くの重症かつ生命を脅かす効果の発症が、ウイルス自体の効果ではなく、感染に対する身体の過剰な反応（免疫機能亢進）から生じ得ることを示唆する。（同時継続中であり、共有に係る米国仮特許出願番号６０／４８３，３３５（本明細書中に参考として援用される）をまた参照のこと）。コルチコステロイドによる処置は、ＳＡＲＳ患者において、免疫機能亢進段階を特徴付け得るサイトカインの大量放出を抑制するために、次の段階において肺疾患の進行を停止することを期待して、使用されている。コルチコステロイドによる処置は、ＳＡＲＳのいくつかの主要な症状の減少において、良好な臨床結果を生じている。しかし、いくつかの処置に関連する副作用が存在し、そして、より選択的な免疫抑制剤および／または抗炎症剤に対する明らかな必要性が存在する。
【実施例】
【０１０２】
以下の実施例は、本発明を例示することが意図されるが、決して、本発明を限定しない。
【０１０３】
（実施例１．１４−デオキシ−１４α−フルオロトリプトライドの調製）
【０１０４】
【化１５】
2007524581.tif 000014
０℃において、ジクロロメタン（１．０ｍｌ）中のＰＧ４９０（トリプトライド、１７．３ｍｇ、０．０４８ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ２下で、（ジエチルアミノ）三フッ化硫黄（ＤＡＳＴ、１００μｌ、０．７６３ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を０℃にて２時間撹拌し、次いで、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（０．８ｍｌ）を添加した。この反応混合物を２ｍｌのジクロロメタンで３回抽出した。合わせた有機層を無水ＮａＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。所望の生成物（ＰＧ７６３）を定量的な収率で得た。
分析用ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．７８（酢酸エチル／ヘキサン／メタノール  １：１：０．１）。ＩＲ（ＫＢｒ）：３０３１．０，２９６１．２，２９４２．４，２８７３．８，１７６４．６，１６８０．９，１４４９．３，１４３８．３，１１７２．２，１０９８．１，１０７４．５，１０５７．０，１０４７．１，１０３４．２，１０１８．２，１００５．６，９８７．３，９７２．３，９２３．９，９０９．０，７４３．６，５８６．０，５６６．０，５３９．８，５２７．６ｃｍ−１．１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝５．１６（ｄ，１Ｈ，１４−ＣＨ），４．７０（ｑ，２Ｈ，１９−ＣＨ２），３．８０（ｄ，１Ｈ，１１−ＣＨ），３．７３（ｄ，１Ｈ，７−ＣＨ），３．５０（ｔ，１Ｈ，１２−ＣＨ），２．７０（ｍ，１Ｈ，５−ＣＨ），２．３４（ｄ，１Ｈ，２−ＣＨｂ），２．２７−２．０２（ｍ，３Ｈ，６−ＣＨｂ，２−ＣＨａおよび１５−ＣＨ），１．９５（ｍ，１Ｈ，６−ＣＨａ），１．５６（ｄｄ，１Ｈ，１−ＣＨｂ），１．２４（ｍ，１Ｈ，１−ＣＨａ），１．１１（ｓ，３Ｈ，２０−ＣＨ３），１．１０（ｄ，３Ｈ，１７−ＣＨ３），０．９１（ｄ，３Ｈ，１６−ＣＨ３）ｐｐｍ。
【０１０５】
（実施例２．細胞傷害性（ＭＴＴ）アッセイ）
試験化合物を、２０ｍＭの濃度でＤＭＳＯ中に溶解した。１０％ウシ胎仔血清（ＨｙＣｌｏｎｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｌｏｇａｎ，ＵＴ）を補充したＲＰＭＩ１６４０培地（ＧＩＢＣＯ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）中でさらに希釈した。
【０１０６】
化合物の細胞傷害性を、Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ  Ｉ（＃１  ４６５  ００７，Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、標準的なＭＴＴアッセイにおいて決定した。簡単に述べると、ヒトＴ細胞リンパ腫（Ｊｕｒｋａｔ）細胞（４×１０５細胞／ウェル）を、試験化合物の連続３倍希釈の存在下、もしくは、各希釈点における試験サンプルの希釈と同じ濃度のＤＭＳＯを含む培地中、９６ウェル組織培養プレート内で、２４時間培養した。次いで、培養物に、１０μｌ／ウェルのＭＴＴ試薬を４時間補充し、次いで、さらに１６時間、０．１ｍｌ／ウェルの可溶化試薬を補充した。５７０ｎｍにおける吸光度（ＯＤ５７０）を、ＴｈｅｒｍｏＳｃａｎマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，ＣＡ）にて測定した。このデータは、化合物の濃度に対するＯＤ５７０値として表される。ＰＧ４９０（トリプトライド）および培地コントロールと比較した、ＰＧ７６３（１４−デオキシ−１４−α−フルオロ−トリプトライド）についての結果を図１に示す。
【０１０７】
（実施例３：アネキシンＶのアポトーシスアッセイ）
試験サンプルを、完全組織培養培地（ＲＰＭＩ１６４０培地＋５％  熱不活性化ウシ胎仔血清、１％  ＨＥＰＥＳ、１％  ペニシリン／ストレプトマイシン、１％  グルタミン）中、１ｍＭに希釈した。アリコートを、マイクロ培養プレートに入れ、最終濃度が、半対数増分で２〜６，０００ｎＭの範囲に入るように、連続希釈を調製した。ＪｕｒｋａｔヒトＴリンパ腫細胞株（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡから入手した＃ＴＩＢ−１５２）の指数関数的に増殖させた培養物から細胞を回収し、遠心分離により１回洗浄し、完全組織培養培地中に再懸濁し、そしてさらに、１×１０６細胞／ｍｌの濃度まで希釈した。１００μｌ容量の細胞（１×１０５細胞）を１００μｌの希釈した化合物を含むウェルに添加し、このプレートを５％  ＣＯ２インキュベーター内で３７℃にてインキュベートした。
【０１０８】
２４時間後、このプレートを遠心分離して細胞をペレット化し、そして、この細胞を、ＰＢＳ中２％  熱不活性化ウシ胎仔血清で２回洗浄した。アネキシンＶアッセイ手順（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ，Ｉｎｃ．，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）に従って、各ウェルに、５００μｌの結合緩衝液を添加した。続いて、５μｌのアネキシンＶのフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）結合体（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ，Ｉｎｃ．）を各ウェルに添加し、その後、暗所にて５分間インキュベートした。いくつかのアッセイにおいて、ヨウ化プロピジウム（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ，Ｉｎｃ．）をこの段階で添加して、壊死細胞を確認した。ウェルの内容物を、試験管に別個に移し、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（ＢＤ  Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を使用してアポトーシスを分析した。アネキシンＶ結合に対してポジティブな細胞をアポトーシスであるとみなし、このデータを、アポトーシス細胞の百分率として計算した。
【０１０９】
データを、アポトーシス細胞の百分率に対する化合物の濃度としてプロットした。ＰＧ４９０（トリプトライド）と比較した、２つの１４置換トリプトライド、１４−α−ヒドロキシトリプトライド（エピトリプトライドとも呼ばれる；ＰＧ５２４と命名）および１４−β−（メチルチオ）メチルトリプトライド（ＰＧ６９１と命名）についての比較データを、図３Ａ〜Ｂに示す。
【０１１０】
（実施例４：ＩＬ−２産生アッセイ）
試験サンプルを、完全組織培養培地中１ｍＭに希釈した。アリコートを、抗ＣＤ３抗体（Ｊｕｒｋａｔ細胞によるＩＬ−２の産生を刺激するために使用される）でコーティングしたマイクロ培養プレートに入れ、最終濃度が、対数増分で０．００１〜１０，０００ｎＭの範囲に入るように、連続希釈を調製した。ＪｕｒｋａｔヒトＴ細胞株（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡから入手した＃ＴＩＢ−１５２）の指数関数的に増殖させた培養物から細胞を回収し、遠心分離により１回洗浄し、完全組織培養培地中に再懸濁し、そして、２×１０６細胞／ｍｌの濃度まで希釈した。５０μｌ容量のＪｕｒｋａｔ細胞（１×１０５細胞）を１００μｌの希釈した化合物を含むウェルに添加し、各ウェルに５０μｌのＰＭＡ（１０ｎｇ／ｍｌ）を添加し、このプレートを５％  ＣＯ２インキュベーター内で３７℃にてインキュベートした。２４時間後、プレートを遠心分離して細胞をペレット化し、１５０μｌの上清を各ウェルから回収し、そしてこのサンプルを−２０℃にて保存した。保存した上清を、Ｌｕｍｉｎｅｘ  １００（Ｌｕｍｉｎｅｘ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）、抗ＩＬ−２捕捉抗体に結合したＬｕｍｉｎｅｘミクロスフェア、および蛍光色素が結合した抗ＩＬ−２検出抗体を用いて、ヒトＩＬ−２濃度について分析した。データを、ＩＬ−２のｐｇ／ｍｌとして表した。
【０１１１】
データをＩＬ−２濃度に対する化合物の濃度としてプロットした。ＰＧ４９０（トリプトライド）および溶媒コントロールと比較した、ＰＧ７６３（１４−デオキシ−１４−α−フルオロ−トリプトライド）についての結果を、図２に示す。ＰＧ４９０（トリプトライド）と比較した、他の１４−置換トリプトライドである１４−α−ヒドロキシトリプトライド（エピトリプトライドとも呼ばれる；ＰＧ５２４と命名）および１４−β−（メチルチオ）メチルトリプトライド（ＰＧ６９１と命名）についての比較データを、図４Ａ〜Ｂに示す。
【図面の簡単な説明】
【０１１２】
【図１】図１は、トリプトライド（ＰＧ４９０と称される）と比較した、本発明の化合物１４−デオキシ−１４−α−フルオロ−トリプトライド（ＰＧ７６３と称される）のＪｕｒｋａｔ細胞における細胞毒性効果を示す（実施例２）。
【図２】図２は、トリプトライドと比較した、本発明の化合物（ＰＧ７６３）によるＪｕｒｋａｔ細胞におけるＩＬ−２産生の阻害を示す（実施例４）。
【図３Ａ】図３Ａは、トリプトライドと比較した、比較化合物である１４−α−ヒドロキシトリプトライド（また、エピトリプトライドとも呼ばれる；ＰＧ５２４と称される）および１４−β−（メチルチオ）メチルトリプトライド（ＰＧ６９１と称される）によるＪｕｒｋａｔ細胞における用量依存的アポトーシス誘導を示す（実施例３）。
【図３Ｂ】図３Ｂは、トリプトライドと比較した、比較化合物である１４−α−ヒドロキシトリプトライド（また、エピトリプトライドとも呼ばれる；ＰＧ５２４と称される）および１４−β−（メチルチオ）メチルトリプトライド（ＰＧ６９１と称される）によるＪｕｒｋａｔ細胞における用量依存的アポトーシス誘導を示す（実施例３）。
【図４Ａ】図４Ａは、トリプトライドと比較した、比較化合物である１４−α−ヒドロキシトリプトライド（また、エピトリプトライドとも呼ばれる）および１４−β−（メチルチオ）メチルトリプトライドによるＪｕｒｋａｔ細胞におけるＩＬ−２産生の阻害を示す（実施例４）。
【図４Ｂ】図４Ｂは、トリプトライドと比較した、比較化合物である１４−α−ヒドロキシトリプトライド（また、エピトリプトライドとも呼ばれる）および１４−β−（メチルチオ）メチルトリプトライドによるＪｕｒｋａｔ細胞におけるＩＬ−２産生の阻害を示す（実施例４）。
【図１】
2007524581.tif 000019
【図２】
2007524581.tif 000020
2007524581.tif 000021
2007524581.tif 000022
【手続補正書】
【提出日】平成19年1月16日(2007.1.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造Ｉ：
【化１】
2007524581.tif 000023
を有する化合物であって、ここで：
ＣＲ１Ｒ２は、ＣＨＯＨ、Ｃ＝Ｏ、ＣＨＦ、ＣＦ２およびＣ（ＣＦ３）ＯＨより選択され；
ＣＲ６およびＣＲ１３は、ＣＨ、ＣＯＨおよびＣＦより選択され；
ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０およびＣＲ１１Ｒ１２は、ＣＨ２、ＣＨＯＨ、Ｃ＝Ｏ、ＣＨＦおよびＣＦ２より選択され；そして
ＣＲ３Ｒ４Ｒ５は、ＣＨ３、ＣＨ２ＯＨ、Ｃ＝Ｏ、ＣＯＯＨ、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２およびＣＦ３より選択され；
その結果、Ｒ１〜Ｒ１３のうちの少なくとも一つは、フッ素を含み；
ＣＲ３Ｒ４Ｒ５、ＣＲ６、ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０、ＣＲ１１Ｒ１２、およびＣＲ１３のうちの２つ以下は、フッ素もしくは酸素を含み；
そして、ＣＲ１Ｒ２がＣＨＯＨである場合、ＣＲ３Ｒ４Ｒ５は、ＣＨ２Ｆではない、
化合物。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であって、ＣＲ７Ｒ８およびＣＲ９Ｒ１０の各々が、ＣＨ２、ＣＨＯＨ（β）、Ｃ＝Ｏ、ＣＨＦ（α）およびＣＦ２より独立して選択される、化合物。
【請求項３】
請求項２に記載の化合物であって、ＣＲ３Ｒ４Ｒ５、ＣＲ６、ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０、ＣＲ１１Ｒ１２、およびＣＲ１３のうちの一つ以下が、フッ素もしくは酸素を含む、化合物。
【請求項４】
請求項３に記載の化合物であって、ＣＲ１Ｒ２、ＣＲ３Ｒ４Ｒ５、ＣＲ６、ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０、およびＣＲ１１Ｒ１２のうちの正確に一つが、フッ素を含む、化合物。
【請求項５】
請求項４に記載の化合物であって、ＣＲ１Ｒ２、ＣＲ６、ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０、およびＣＲ１１Ｒ１２のうちの正確に一つが、フッ素を含む、化合物。
【請求項６】
請求項５に記載の化合物であって、ＣＲ１Ｒ２がフッ素を含む、化合物。
【請求項７】
請求項６に記載の化合物であって、ＣＲ１Ｒ２がＣＦ２である、化合物。
【請求項８】
請求項６に記載の化合物であって、ＣＲ１Ｒ２がＣＨＦ（α）である、化合物。
【請求項９】
請求項８に記載の化合物であって、Ｒ３〜Ｒ１３のうちの各々が、水素である、化合物。
【請求項１０】
免疫抑制をもたらすための組成物であって、該組成物は、薬学的に受容可能なビヒクル中の有効量の化合物を含み、該化合物が、構造Ｉ：
【化２】
2007524581.tif 000024
を有し、ここで：
ＣＲ１Ｒ２は、ＣＨＯＨ、Ｃ＝Ｏ、ＣＨＦ、ＣＦ２およびＣ（ＣＦ３）ＯＨより選択され；
ＣＲ６およびＣＲ１３は、ＣＨ、ＣＯＨおよびＣＦより選択され；
ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０およびＣＲ１１Ｒ１２は、ＣＨ２、ＣＨＯＨ、Ｃ＝Ｏ、ＣＨＦおよびＣＦ２より選択され；そして
ＣＲ３Ｒ４Ｒ５は、ＣＨ３、ＣＨ２ＯＨ、Ｃ＝Ｏ、ＣＯＯＨ、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２およびＣＦ３より選択され；
その結果、Ｒ１〜Ｒ１３のうちの少なくとも一つは、フッ素を含み；
ＣＲ３Ｒ４Ｒ５、ＣＲ６、ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０、ＣＲ１１Ｒ１２、およびＣＲ１３のうちの２つ以下は、フッ素もしくは酸素を含み；
そして、ＣＲ１Ｒ２がＣＨＯＨである場合、ＣＲ３Ｒ４Ｒ５は、ＣＨ２Ｆではない、
組成物。
【請求項１１】
請求項１０に記載の組成物であって、ＣＲ７Ｒ８およびＣＲ９Ｒ１０の各々が、ＣＨ２、ＣＨＯＨ（β）、Ｃ＝Ｏ、ＣＨＦ（α）およびＣＦ２より独立して選択される、組成物。
【請求項１２】
請求項１０に記載の組成物であって、ＣＲ１Ｒ２、ＣＲ３Ｒ４Ｒ５、ＣＲ６、ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０、およびＣＲ１１Ｒ１２のうちの正確に一つが、フッ素を含む、組成物。
【請求項１３】
請求項１２に記載の組成物であって、ＣＲ１Ｒ２がフッ素を含む、組成物。
【請求項１４】
請求項１３に記載の組成物であって、ＣＲ１Ｒ２がＣＦ２である、組成物。
【請求項１５】
請求項１３に記載の組成物であって、ＣＲ１Ｒ２がＣＨＦ（α）である、組成物。
【請求項１６】
請求項１５に記載の組成物であって、Ｒ３〜Ｒ１３のうちの各々が、水素である、組成物。
【請求項１７】
細胞においてアポトーシスを誘導する方法であって、該方法が、有効量の化合物と該細胞とを接触させる工程を包含し、該化合物が、構造Ｉ：
【化３】
2007524581.tif 000025
を有し、ここで：
ＣＲ１Ｒ２は、ＣＨＯＨ、Ｃ＝Ｏ、ＣＨＦ、ＣＦ２およびＣ（ＣＦ３）ＯＨより選択され；
ＣＲ６およびＣＲ１３は、ＣＨ、ＣＯＨおよびＣＦより選択され；
ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０およびＣＲ１１Ｒ１２は、ＣＨ２、ＣＨＯＨ、Ｃ＝Ｏ、ＣＨＦおよびＣＦ２より選択され；そして
ＣＲ３Ｒ４Ｒ５は、ＣＨ３、ＣＨ２ＯＨ、Ｃ＝Ｏ、ＣＯＯＨ、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２およびＣＦ３より選択され；
その結果、Ｒ１〜Ｒ１３のうちの少なくとも一つは、フッ素を含み；
ＣＲ３Ｒ４Ｒ５、ＣＲ６、ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０、ＣＲ１１Ｒ１２、およびＣＲ１３のうちの２つ以下は、フッ素もしくは酸素を含み；
そして、ＣＲ１Ｒ２がＣＨＯＨである場合、ＣＲ３Ｒ４Ｒ５は、ＣＨ２Ｆではない、
方法。
【請求項１８】
請求項１７に記載の方法であって、ＣＲ７Ｒ８およびＣＲ９Ｒ１０の各々が、ＣＨ２、ＣＨＯＨ（β）、Ｃ＝Ｏ、ＣＨＦ（α）およびＣＦ２より独立して選択される、方法。
【請求項１９】
請求項１８に記載の方法であって、ＣＲ１Ｒ２、ＣＲ３Ｒ４Ｒ５、ＣＲ６、ＣＲ７Ｒ８、ＣＲ９Ｒ１０、およびＣＲ１１Ｒ１２のうちの正確に一つが、フッ素を含む、方法。
【請求項２０】
請求項１９に記載の方法であって、ＣＲ１Ｒ２がフッ素を含む、方法。
【請求項２１】
請求項２０に記載の方法であって、ＣＲ１Ｒ２がＣＦ２である、方法。
【請求項２２】
請求項２０に記載の方法であって、ＣＲ１Ｒ２がＣＨＦ（α）である、方法。
【請求項２３】
請求項２２に記載の方法であって、Ｒ３〜Ｒ１３のうちの各々が、水素である、方法。
【国際調査報告】
2007524581.tif 000026