(57)【要約】本発明は、哺乳動物被験体における急性冠状動脈症候群（ＡＣＳ）のスクリーニング、診断もしくは予後のため、哺乳動物被験体においてＡＣＳのステージもしくは重篤度を決定するため、ＡＣＳを発症する危険のある哺乳動物被験体を同定するため、または、ＡＣＳを有する哺乳動物被験体に対して行なわれる治療の効果をモニターするための、方法を提供する。この方法は、哺乳動物被験体に由来する体液のサンプル中のウロテンシンＩＩ（ＵＴＮ）のレベルを測定する工程を包含する。本発明はまた、上記方法を実施するためのキット、イムノアッセイまたはデバイスも提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物被験体における急性冠状動脈症候群（ＡＣＳ）のスクリーニング、診断もしくは予後のため、哺乳動物被験体においてＡＣＳのステージもしくは重篤度を決定するため、ＡＣＳを発症する危険のある哺乳動物被験体を同定するため、または、ＡＣＳを有する哺乳動物被験体に対して行なわれる治療の効果をモニターするための方法であって、該方法は、
該哺乳動物被験体に由来する体液のサンプル中の第１のマーカーのレベルを測定する工程
を包含し、該第１のマーカーは、ウロテンシンＩＩ（ＵＴＮ）である、方法。
【請求項２】
前記体液が血漿である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＡＣＳを示す第２のマーカーのレベルを測定する工程をさらに包含する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記第２のマーカーが、脳ナトリウム利尿ペプチド、トロポニン、クレアチンキナーゼＭＢアイソフォームおよびミオグロビンのうちの１種以上である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記哺乳動物被験体が、ヒトである、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記測定されたマーカーのレベルが、ＡＣＳの非存在を示すマーカーのレベルと比較される、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記ＡＣＳの非存在を示すマーカーのレベルが、ＡＣＳを有さない１以上の哺乳動物被験体からのマーカーのレベルであるか、または、ＡＣＳを有さない哺乳動物被験体におけるマーカーの以前に決定された参照範囲である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記マーカーのレベルが、前記サンプルを該マーカーに対して免疫特異的な抗体に接触させて、かつ、該サンプル中で該抗体と少なくとも１つの種との間に生じる、あらゆる結合を測定することによって測定される、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記急性冠状動脈症候群が、心筋梗塞または不安定狭心症である、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれかに記載の方法を実施するための、キット、イムノアッセイ、またはデバイス。
【請求項１２】
哺乳動物被験体における急性冠状動脈症候群（ＡＣＳ）のスクリーニング、診断もしくは予後のため、哺乳動物被験体においてＡＣＳのステージもしくは重篤度を決定するため、ＡＣＳを発症する危険のある哺乳動物被験体を同定するため、または、ＡＣＳを有する哺乳動物被験体に対して行なわれる治療の効果をモニターするための、キット、イムノアッセイ、またはデバイスであって、該キット、イムノアッセイまたはデバイスは、以下：
該哺乳動物被験体から体液のサンプルを採取するための指示書；および
該サンプル中の第１のマーカーのレベルを測定するための１種以上の試薬
を含み、該第１のマーカーは、ウロテンシンＩＩ（ＵＴＮ）である、キット、イムノアッセイ、またはデバイス。
【請求項１３】
前記体液が血漿である、請求項１２に記載のキット、イムノアッセイまたはデバイス。
【請求項１４】
前記第１のマーカーのレベルを測定するための１種以上の試薬が、ウロテンシンに特異的に結合する抗体を含む、請求項１２または１３に記載のキット、イムノアッセイまたはデバイス。
【請求項１５】
ＡＣＳを示す第２のマーカーのレベルを測定するための１種以上の試薬をさらに含む、請求項１２、１３または１４に記載のキット、イムノアッセイまたはデバイス。
【請求項１６】
前記第２のマーカーのレベルを測定するための１種以上の試薬が、前記第２のマーカーに対して特異的に結合する抗体を含む、請求項１５に記載のキット、イムノアッセイまたはデバイス。
【請求項１７】
前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１４または１６に記載のキット、イムノアッセイまたはデバイス。
【請求項１８】
前記第２のマーカーが、脳ナトリウム利尿ペプチド、トロポニン、クレアチンキナーゼＭＢアイソフォームおよびミオグロビンのうちの１種以上である、請求項１５、１６または１７に記載のキット、イムノアッセイまたはデバイス。
【請求項１９】
前記哺乳動物被験体がヒトである、請求項１２〜１８のいずれか１項に記載のキット、イムノアッセイまたはデバイス。
【請求項２０】
前記急性冠状動脈症候群が、心筋梗塞または不安定狭心症である、請求項１２〜１９のいずれか１項に記載のキット、イムノアッセイまたはデバイス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、とりわけ、哺乳動物被験体（例えば、ヒト）における、急性冠状動脈症候群（ＡＣＳ）の診断のための方法に関する。特に、本発明は、サンプル中のウロテンシンＩＩ（ＵＴＮ）のレベルが測定されるような方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
虚血性心疾患は、先進国における主要な健康上の負荷であり、その主要な病因論は、アテローム性動脈硬化症である。マクロファージおよび他の細胞を伴う、脂質（特に、酸化ＬＤＬまたは修飾ＬＤＬ）の蓄積は、プラークの増大および不安定性につながる。これらのプラークの破裂は、血栓症につながり、そして、結果として生じる冠状動脈管腔の閉塞は、急性冠状動脈症候群（ＡＣＳ）としての症状を招く。急性冠状動脈症候群としては、心筋梗塞（ＭＩ）および不安定狭心症が挙げられる。
【０００３】
急性冠状動脈症候群は、世界中で主要な健康上の問題であるが、現在のところ、患者の有効な診断およびリスク層化（ｒｉｓｋ  ｓｔｒａｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ）のための手段は限定されている。種々の血液分析物の測定を含む、生化学的技術が、これらの目的を達成するために現在利用されている。例えば、脳ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）またはそのＮ末端前駆体、Ｎ末端脳ナトリウム利尿ペプチド前駆体（Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｐｒｏＢｒａｉｎ  ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ）（Ｎ−ＢＮＰ）は、急性心虚血の間に分泌され、患者についての予後の情報を提供し得る（非特許文献１；非特許文献２）。
【非特許文献１】Ｏｍｌａｎｄら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００２年，第１０６号：ｐ．２９１３−８
【非特許文献２】Ｒｉｃｈａｒｄｓら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００３年，第１０７号：ｐ．２７８６−９２
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
第１の局面において、本発明は、哺乳動物被験体における急性冠状動脈症候群（ＡＣＳ）のスクリーニング、診断もしくは予後のため、哺乳動物被験体においてＡＣＳのステージもしくは重篤度を決定するため、ＡＣＳを発症する危険のある哺乳動物被験体を同定するため、または、ＡＣＳを有する哺乳動物被験体に対して行なわれる治療の効果をモニターするための方法を提供し、上記方法は、
哺乳動物被験体に由来する体液のサンプル中の第１のマーカーのレベルを測定する工程
を包含し、この前記第１のマーカーは、ウロテンシンＩＩ（ＵＴＮ）である。
【０００５】
第２の局面において、本発明は、第１の局面の方法を実施するためのイムノアッセイ、キットまたはデバイスを提供する。
【０００６】
第３の局面において、本発明は、哺乳動物被験体における急性冠状動脈症候群（ＡＣＳ）のスクリーニング、診断もしくは予後のため、哺乳動物被験体においてＡＣＳのステージもしくは重篤度を決定するため、ＡＣＳを発症する危険のある哺乳動物被験体を同定するため、または、ＡＣＳを有する哺乳動物被験体に対して行なわれる治療の効果をモニターするための、キット、イムノアッセイ、またはデバイスを提供し、上記イムノアッセイ、キットまたはデバイスは、以下：
上記哺乳動物被験体から体液のサンプルを採取するための指示書；および
サンプル中の第１のマーカーのレベルを測定するための１種以上の試薬
を含み、上記第１のマーカーは、ウロテンシンＩＩ（ＵＴＮ）である。
【０００７】
本発明は、体液サンプル中のウロテンシンＩＩのレベルを、単独で、または、別のマーカーと組み合わせて検出することによって、被験体（すなわち、ヒトまたは非ヒト哺乳動物）におけるＡＣＳの増加したリスクを検出するためのアッセイおよびキットを提供し、それによって、正常なレベルに対して上昇したウロテンシンＩＩのレベルが、ＡＣＳのリスクの増加を示す。
【０００８】
用語「ウロテンシン」または「ＵＴＮ」は、本明細書中で使用される場合、ウロテンシンＩＩ（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＭ＿０２１９９５およびＮＭ＿００６７８６を参照のこと）およびそのフラグメントおよび改変体（例えば、対立遺伝子改変体）を指す。ウロテンシンは、プロホルモン前駆体であるプロ−ウロテンシン（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｏ９５３９９）から誘導され、これは、成熟なウロテンシンおよびＮ末端ペプチドへとプロセシングされる。用語「ウロテンシン」は、本明細書中で使用される場合、さらに、プロ−ウロテンシン、成熟なウロテンシン、そのＮ末端由来のペプチド、そのシグナルペプチド、およびＣ末端ペプチド（Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ（Ｃｙｓ５とＣｙｓ１０との間にジスルフィド結合）、ならびにそのフラグメントを含む。用語ウロテンシンはまた、ウロテンシン関連ペプチド（ＵＲＰ）（Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ（Ｃｙｓ２とＣｙｓ７との間にジスルフィド結合）、ならびにウロテンシン関連ペプチドのプレフォーム（ｐｒｅｆｏｒｍ）（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＭ＿１９８１５２）も指す。
【０００９】
ウロテンシン−ＩＩは、近年クローニングされた、硬骨類ホルモンの同族の心血管ペプチドである（Ａｍｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ  １９９９，４０１：２８２−２８６）。この環状のウンデカペプチドは、オーファン（ｏｒｐｈａｎ）Ｇタンパク質レセプター（ＧＰＲ１４）に対するリガンドであり、そして、ペプチドおよびレセプターの両方が、心血管内および神経系内に分布している（Ａｍｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ  １９９９，４０１：２８２−２８６）。ラットおよびサルにおいては、特定の脈管床（ｖａｓｃｕｌａｒ  ｂｅｄ）に対する強力な血管収縮薬（ｖａｓｏｃｏｎｓｔｒｉｃｔｏｒ）であり得る（Ａｍｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ  １９９９，４０１：２８２−２８６；Ｄｏｕｇｌａｓら、Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ２０００，３６：Ｓ１６３−６）が、これは、腸間膜抵抗性脈管（ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｃ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｖｅｓｓｅｌ）においては血管拡張薬（ｖａｓｏｄｉｌａｔｏｒ）であり得る（Ｂｏｔｔｒｉｌｌら、Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  ２０００，１３０：１８６５−１８７０）。ＵＴＮに対する種々の脈管の反応性には、重要な種差が存在する。例えば、ＵＴＮは、サルの血管を収縮させるが、ヒトの肺脈管構造および腸間膜抵抗性脈管を拡張させ（Ｓｔｉｒｒａｔら、Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２００１，２８０：Ｈ９２５−９２８）、そして、ヒトの皮下抵抗性脈管には影響を与えない（Ｈｉｌｌｉｅｒら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００１，１０３：１３７８−１３８１）。ＵＴＮはまた、脈管平滑筋肥大を生じる（Ｗａｔａｎａｂｅら、Ｊ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ  ２００１，１９：２１９１−２１９６）。サルの心筋に対する直接的な作用としては、心筋抑制（Ａｍｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ  １９９９，４０１：２８２−２８６）が挙げられるが、ヒトの心筋においては、陽性変力作用がまた実証されている（Ｒｕｓｓｅｌｌら、Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  ２００１，１３２：５−９）。さらに、肥大効果および心室再構築において果たし得る役割が、記載されている（Ｚｏｕら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  ２００１，５０８：５７−６０；Ｔｚａｎｉｄｉｓら、Ｅｕｒ  Ｈｅａｒｔ  Ｊ  ２０００，２１：７２）。従って、その分泌は、心臓の減圧、再構築および肥大の効果に起因して、心機能に対して有害であり得る。
【００１０】
ＵＴＮが、心不全についてのマーカーであるということが確立されている。近年の研究は、心不全患者の心筋におけるＵＴＮの増加およびＧＰＲ１４の発現を実証している（Ｄｏｕｇｌａｓら、Ｌａｎｃｅｔ  ２００２，３５９：１９９０−１９９７）。心不全患者における、ＵＴＮの血漿中への分泌はまた、特に、初期疾患の軽度の場合でさえも、実証されている（Ｎｇら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００２，１０６：２８７７−２８８０）。
【００１１】
ＵＴＮは、ＡＣＳにおいて、結晶中に分泌され、そして、必要に応じて、急性冠状動脈症候群の他のマーカー（例えば、トロポニン、クレアチンキナーゼＭＢアイソフォーム、ミオグロビンまたはナトリウム利尿ペプチド（例えば、Ｎ−ＢＮＰおよびＢＮＰ））と組み合わせて、急性冠状動脈症候群のマーカーとして使用され得る。ＵＴＮはまた、バルーン血管形成術後の心筋損傷のマーカーとして使用され得、そして、トロポニンのアッセイを補完し得る。
【００１２】
測定されたウロテンシンのレベルが、ＡＣＳの非存在を示すウロテンシンのレベルと比較され得る。このレベルは、ＡＣＳを有さない１以上の哺乳動物被験体からのウロテンシンのレベル、または、このようなＡＣＳを有さない哺乳動物被験体におけるウロテンシンについての以前に決定された参照範囲もしくは参照値であり得る。このようにして、診断または予後を提供するために、測定されたレベルが、問題となっている状態を有さない被験体の集団研究から決定された参照レベルと比較され得る。このような被験体は、年齢および／または性別についてマッチさせ得る。１つの実施形態において、ＡＣＳの非存在を示す、体液のサンプル中に代表的に見られるウロテンシンのレベルの参照値または正常値は、３〜１０ｆｍｏｌ／ｍｌの範囲であり得る。ＡＣＳのリスクの増加を示すウロテンシンのレベルは、１０〜１５ｆｍｏｌ／ｍｌ、１５〜２０ｆｍｏｌ／ｍｌ、２０〜２５ｆｍｏｌ／ｍｌ、２５〜３０ｆｍｏｌ／ｍｌ、またはそれより多い範囲であり得る。本発明が、ＡＣＳを有する哺乳動物被験体に対して行われる治療の効果のモニタリングに関する場合、測定されたウロテンシンのレベルは、その被験体についてのベースレベルと比較され得る。ベースレベルは、治療の開始前に決定され得る。このベースレベルからの偏差が、ＡＣＳの増加または減少が存在するかどうか、そして、それゆえ、その治療が効果的であるかどうかを示す。ウロテンシンのレベルの増加は、ＡＣＳを示し、その逆も同じである。
【００１３】
本発明において、用語「体液」は、哺乳動物の身体から得られ得るあらゆる流体を含み、例えば、血液、血漿、尿、リンパ液、胃液、胆汁、血清、唾液、汗および脳脊髄液が挙げられる。さらに、体液は、処理されるか（例えば、血清）、または未処理であるかのいずれかであり得る。被験体から体液サンプルを得る方法は、当業者に公知である。
【００１４】
ＡＣＳを示す第２のマーカーまたはさらなるマーカーが測定され得る。これらのマーカーは、脳ナトリウム利尿ペプチド、トロポニン、クレアチンキナーゼＭＢアイソフォームおよびミオグロビン、ならびに、そのフラグメントおよび前駆体のうち１種以上であり得る。
【００１５】
本明細書中で使用される場合、用語「脳ナトリウム利尿ペプチド」は、ネイティブな脳ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）、Ｎ末端プロ−ＢＮＰ（Ｎ−ＢＮＰ）、ならびに、その部分、その改変体、およびそのキメラ体を含む。
【００１６】
心筋の伸展（ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｓｔｒｅｔｃｈ）、心筋の張力、および心筋の傷害は、左心室の心筋細胞からのプロＢＮＰ産生の増加を誘発する。プロＢＮＰは、２つの循環形態であるＢＮＰ（活性ペプチド）およびＮ末端プロＢＮＰ（Ｎ−ＢＮＰ−不活性ペプチド）に対するインタクトな前駆体である。Ｎ−ＢＮＰおよび／またはＢＮＰのレベルが測定され得る。
【００１７】
トロポニンは、心筋の損傷を反映し、そして、その上昇は、ＡＣＳのリスク層化において有用である。近年の報告において、Ｎ−ＢＮＰ（＞６６９ｎｇ／Ｌ、または約７９ｆｍｏｌ／ｍｌ）およびトロポニンＴレベル（＞０．０１μｇ／Ｌ）は、死亡率の間接的な予測値であり、トロポニンＴレベル（＞０．０１μｇ／Ｌ）は、さらに、症状発症（ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）の３０日後の心筋梗塞事象を予測した（Ｊａｍｅｓら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００３，１０８：２７５−８１）。クレアチンキナーゼＭＢアイソフォーム（ＣＫＭＢ）およびミオグロビンは、両方ともトロポニンよりも迅速に上昇するので、現在、心筋梗塞の診断に使用されている。
【００１８】
第２のマーカーのレベルを測定する場合、診断の精度を高めるために、年齢および性別についての補正が必要であり得る。
【００１９】
ウロテンシンは、急性冠状動脈症候群を有する患者の予後を評価する際に、脳ナトリウム利尿ペプチド（または任意の他の第２のマーカー）と組み合わせて有用であり得；心筋梗塞後には、このペプチドの組み合わせは、死亡率に関しての患者のリスク層化に有用である。
【００２０】
第１のマーカーであるウロテンシンと類似の様式で、第２のマーカーまたはその各々のレベルは、ＡＣＳの非存在を示す第２のマーカーまたはその各々のレベルと比較され得る。このレベルは、ＡＣＳを有さない１以上の哺乳動物被験体からの第２のマーカーまたはその各々のレベル、または、ＡＣＳを有さない哺乳動物被験体における第２のマーカーまたはその各々についての、以前に決定された参照範囲と比較され得る。測定される場合、ＡＣＳの非存在を示すＮ−ＢＮＰの正常値は、１０〜５０ｆｍｏｌ／ｍｌの範囲であり得る。ＡＣＳのリスクの増加を示すＮ−ＢＮＰのレベルは、１００〜３００ｆｍｏｌ／ｍｌ、３００〜６００ｆｍｏｌ／ｍｌ、６００〜１２００ｆｍｏｌ／ｍｌ、１２００〜１８００ｆｍｏｌ／ｍｌ、１８００〜２４００ｆｍｏｌ／ｍｌ、２４００〜３０００ｆｍｏｌ／ｍｌ、３０００〜３６００ｆｍｏｌ／ｍｌ、またはそれより多い範囲であり得る。ＡＣＳの非存在を示すミオグロビンの正常レベルは、そのレベルを測定するために使用されるデバイスによって変動し得る（Ｌｅ  Ｍｏｉｇｎｅら、Ｃｌｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２００２，３５（４）：２５５−６２）。従って、この正常レベルは、Ｏｌｙｍｐｕｓによって測定される場合、男性について９２μｇ／Ｌまでおよび女性について７６μｇ／Ｌまでであり得るか、Ｖｉｄａｓにより測定される場合、４６μｇ／Ｌまでであるか、または、Ｉｍｍｕｌｉｔｅ  Ｔｕｒｂｏにより測定される場合、７０μｇ／Ｌまでであり得る。別の研究は、正常レベルが、男性について６５μｇ／Ｌまで、および女性について５５μｇ／Ｌまでであり得ると示唆する（Ｐｅｎｔｔｉｌａら、Ｃｌｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００２，３５（８）：６４７−５３）。上述のレベルを超えるミオグロビンのレベルは、ＡＣＳを示し得る。トロポニンＴについて、ＡＭＩのためのカットオフは、０．０５μｇ／Ｌであり得る（Ｃｏｌｌｉｎｓｏｎら、Ｈｅａｒｔ．２００３  ８９（３）：２８０−６）。Ｊａｍｅｓら、Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ．２００３，４１（６）：９１６−２４の開示は、この点について援用される。トロポニンＩについて、ＡＣＳ（ＭＩを含む）の診断のためのレベルは、０．６μｇ／Ｌ以上であり得る（Ａｐｐｌｅら、Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ．２０００，４６（４）：５７２−４）。ＣＫＭＢについて、ＡＣＳ（ＭＩを含む）の診断のためのレベルは、５μｇ／Ｌ以上であり得る（Ｆａｌａｈａｔｉら、Ａｍ  Ｈｅａｒｔ  Ｊ．１９９９，１３７（２）：３３２−７）。これらのそれぞれの値より下の値は、ＡＣＳの非存在を示し得る。
【００２１】
マーカーのレベルは、濃度、質量、モル、容量、濃度、またはサンプル中に存在するマーカーの量を示す他の尺度の単位で提供され得る。
【００２２】
第１のマーカーおよび第２のマーカーのそれぞれのレベルは、イムノアッセイ（すなわち、マーカーに特異的に結合する抗体を利用するアッセイ）を用いて測定され得る。このようなアッセイは、競合的イムノアッセイまたは非競合的イムノアッセイであり得る。抗体、または一般に任意の分子は、抗体が、抗原に対して優先的に結合し、そして、例えば、任意の他の分子と約３０％未満（好ましくは、２０％未満、１０％未満、または１％未満）の交差反応性を有する場合に、抗原または他の分子に対して「特異的に結合する」。用語「抗体」は、本明細書中で使用される場合、免疫グロブリン分子、および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分（すなわち、抗原に特異的に結合する抗原結合部位を含む分子）を指す。本発明において有用な免疫グロブリン分子は、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤおよびＩｇＡ）またはサブクラスであり得る。抗体としては、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、二重特異的（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）抗体、ヒト化抗体およびキメラ抗体、単鎖抗体、ＦａｂフラグメントおよびＦ（ａｂ’）２フラグメント抗体、Ｆａｂ発現ライブラリーにより産生されるフラグメント、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、ならびに上述のいずれかのエピトープ結合フラグメントが挙げられるがこれらに限定されない。抗体の部分としては、Ｆｖ部分およびＦｖ’部分が挙げられる。抗体は、天然に存在する抗体（例えば、ＫｏｅｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎの方法により得られるモノクローナル抗体）、ならびに、例えば、動物への抗原の注射により得られるポリクローナル抗体であり得る。抗体はまた、部分的にヒト化されていても、完全にヒト化されていてもよい。
【００２３】
ウロテンシンに結合する抗体は、購入可能である。ウロテンシンに結合する市販の抗体の例としては、抗ウロテンシン（Ｐｈｏｅｎｉｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ウサギ抗ウロテンシン（Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、ウサギ抗ヒトウロテンシン（Ｉｍｍｕｎｄｉａｇｎｏｓｔｉｋ）が挙げられる。
【００２４】
ＢＮＰに結合する抗体は、購入可能である。ＢＮＰに結合する市販の抗体の例は、ウサギ抗ヒトＢＮＰポリクローナル抗体（Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、ウサギ抗−ＢＮＰアミノ酸１−２０ポリクローナル抗体（Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、抗ヒトＢＮＰモノクローナル抗体（Ｉｍｍｕｎｄｉａｇｎｏｓｔｉｋ）、およびウサギ抗ヒトＢＮＰアミノ酸１−１０ポリクローナル抗体（Ｉｍｍｕｎｄｉａｇｎｏｓｔｉｋ）である。
【００２５】
トロポニン、クレアチンキナーゼＭＢアイソフォーム、およびミオグロビンに結合する抗体は、例えば、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｉｎｃから入手可能である。
【００２６】
ＡＣＳを診断するために使用されるアッセイ（以下を参照のこと）に依存して、ＡＣＳのマーカーに特異的な抗体は、さらに、標識（例えば、蛍光標識または磁気標識、ラテックスまたは金粒子、蛍光部分、酵素、電気化学的に活性な種など）を含み得る。標識が抗体に結合している実施形態において、抗体は、「直接標識されている」といわれる。抗体はまた、「間接的に標識」され得、すなわち、標識は、１種以上の他の分子（例えば、ビオチン−ストレプトアビジン）を介して抗体に結合される。あるいは、抗体は、標識されていないが、抗体が、ＡＣＳの特異的マーカーに結合した後に、結合試薬と接触させられる。例えば、「一次抗体」および二次抗体が存在し得るか、または、一次抗体のＦｃ部分に結合する「二次抗体」が存在し得る。標識は、当該分野で公知の方法に従って、好ましくは共有結合的に、抗体に連結され得る。イムノアッセイにおいて、存在する分析物（またはマーカー）の存在、または存在量は、標識の存在または濃度の検出によって決定される。
【００２７】
さらに、ＡＣＳを診断するために使用されるアッセイに依存して、抗体は、固体表面に連結され得る。固体表面は、プラスチックチューブ、ビーズ、マイクロタイタープレート、ラテックス粒子、磁気粒子、セルロースビーズ、アガロースビーズ、紙、ディップスティック（ｄｉｐｓｔｉｃｋ）などを含む、当該分野で公知も種々のものから選択され得る。細胞表面への抗体の直接的な化学カップリングのための方法は、当該分野で公知であり、そして、例えば、グルタルアルデヒド活性化抗体またはマレイミド活性化抗体を使用するカップリングが挙げられ得る。複数の段階手順を使用する化学カップリングのための方法としては、ビオチン化、トリニトロフェノール（ＴＮＰ）のカップリング、または、例えば、これらの化合物のスクシンイミドエステルを使用するジゴキシゲニンが挙げられる。ビオチン化は、例えば、Ｄ−ビオチニル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドの使用により達成され得る。スクシンイミド基は、約７を超えるｐＨで、および、約ｐＨ８．０と約ｐＨ８．５との間で優先的にアミノ基と効率的に反応する。ビオチン化は、例えば、ビオチンマレイミドを添加した後に抗体をジチオスレイトールで処理することによって達成され得る。
【００２８】
本発明の特定の実施形態において、抗体は、少なくとも、ＡＣＳの診断に使用されるマーカーに、その抗体が結合するのに十分な時間、哺乳動物被験体から得た体液のサンプルに接触される。例えば、抗体は、少なくとも約１０分間、約３０分間、約１時間、約３時間、約５時間、約７時間、約１０時間、約１５時間、または約１日の間、体液のサンプルと接触され得る。
【００２９】
１つの実施形態において、イムノアッセイは、試験される被験体からのサンプルを、マーカーが存在する場合に結合が生じ得るような条件下で、適切な抗体と接触させ、そして、抗体によるあらゆる免疫特異的な結合の量を検出または測定することによって行なわれる。任意の適切なイムノアッセイが使用され得、これらとしては、ウェスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素連結免疫吸着アッセイ）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降素反応、ゲル拡散沈降素反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ−ｆｉｘａｔｉｏｎ  ａｓｓａｙ）、免疫放射線アッセイ、蛍光イムノアッセイおよびプロテインＡイムノアッセイのような技術を使用する、競合的および非競合的なアッセイ系が挙げられるがこれらに限定されない。
【００３０】
例えば、マーカーは、２段階サンドイッチアッセイによって、流体サンプル中で検出され得る。第１段階において、捕捉試薬（例えば、抗マーカー抗体）が、マーカーを捕捉するために使用される。この捕捉試薬は、必要に応じて固相上に固定化され得る。第２段階において、捕捉されたマーカーを検出するために、直接標識もしくは間接標識の検出試薬が使用される。１つの実施形態において、検出試薬は、抗体である。別の実施形態において、検出試薬は、レクチンである。
【００３１】
１つの実施形態において、側方流れイムノアッセイデバイス（ｌａｔｅｒａｌ  ｆｌｏｗ  ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  ｄｅｖｉｃｅ）は、「サンドイッチ」形式で使用され得、この形式では、体液サンプル中に十分なマーカーが存在すると、側方流れアッセイにおいて捕捉ゾーン（ｃａｐｔｕｒｅ  ｚｏｎｅ）の形成を生じる。本明細書中で使用される場合、捕捉ゾーンとは、抗体分子、抗原、核酸、レクチン、およびウロテンシンを捕捉するために適切な酵素、ならびに本明細書中に記載される他のマーカーのような捕捉試薬を含み得る。このデバイスはまた、捕捉ゾーン内の捕捉に適した１種以上の発光標識を組み込み得、捕捉の程度が、分析物の存在によって決定される。適切な標識としては、ポリスチレン（ｐｏｌｙｓｔｅｒｅｎｅ）ミクロスフェア中で固定化された蛍光標識が挙げられる。ミクロスフェアは、捕捉ゾーン内での捕捉を可能にするために、免疫グロブリンでコーティングされ得る。このようなアッセイは、ＥＰ２９１１９４に記載される側方流れイムノアッセイを使用して実施され得る。
【００３２】
本発明の方法において使用され得る他のアッセイとしては、フロースルー（ｆｌｏｗ−ｔｈｒｏｕｇｈ）デバイスが挙げられるがこれらに限定されない。フロースルーアッセイにおいて、１つの試薬（通常は抗体）は、膜表面上の規定された領域の固定化される。次いで、この膜が、デバイスを通してサンプルの容量を押し上げるための、レザバとして機能する吸着層上に重ねられる。固定化の後、膜上のタンパク質結合部位の残りは、非特異的な相互反応を最小限にするためにブロッキングされる。アッセイが使用されるとき、体液サンプルが膜およびマトリクスが通るフィルタに加えられ、サンプル中の抗体に特異的な任意のマーカーが、固定化した抗体に結合することを可能にする。任意の第２段階において（第１の反応物質が抗体である実施形態において）、タグ化した二次抗体（酵素結合体、有色ラテックス粒子に結合した抗体、または、有色コロイドに組み込まれた抗体）が、添加または解放され、これらが、捕捉されたマーカーと反応してサンドイッチを完成させる。あるいは、二次抗体は、１段階で、サンプルと混合され、添加され得る。マーカーが存在する場合、有色スポットが、膜の表面上で発色する。
【００３３】
本発明はまた、ウロテンシンの検出のためのイムノアッセイ、キットまたはデバイスを提供し、これらは、本発明の第１の局面の方法を組み込み得る。このようなイムノアッセイ、キットまたはデバイスは、ウロテンシンに特異的に結合する抗体、および、必要に応じて、二次マーカーに結合する抗体を含み得る。さらに、このようなイムノアッセイ、キット、またはデバイスは、必要に応じて、以下のうちの１つ以上を含み得る：（１）ＡＣＳの診断または予後のためにイムノアッセイ、キットまたはデバイスを使用するための指示書；（２）抗体に対する標識化された結合パートナー；（３）その抗体または各抗体が固定化される、固相（例えば、試薬ストリップ）；および（４）診断的、予後的、もしくは治療的な用途、または、その組み合わせについての監督官庁の認可を示す、ラベルまたは挿入物。その抗体または各抗体に対する標識化された結合パートナーが提供されない場合、その抗体または各抗体自体が、検出可能なマーカー（例えば、化学発光部分、酵素部分、蛍光部分、または放射活性部分）で標識され得る。ＡＣＳの他のマーカーに対するさらなる抗体が、含められ得る。
【００３４】
本明細書中で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が明確にそうでないと示さない限り、複数の参照を包含し、そして、「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」および「含むこと、包含すること（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、包括的で、開いた意味で使用され、さらなる要素が含められ得ることを意味する。
【００３５】
本発明の各局面の好ましい特徴は、必要な変更を加えて、他の局面の各々についても同様である。本明細書中で言及された先行技術文献は、法律が許す限り完全に援用される。
【実施例】
【００３６】
本発明は、ここで、以下の非限定的な実施例においてさらに説明される。
【００３７】
（実施例１）
（調査集団）
Ｌｅｉｃｅｓｔｅｒ  Ｒｏｙａｌ  Ｉｎｆｉｒｍａｒｙに入院した、急性冠状動脈症候群を有する４８６人の患者を調査した。急性心筋梗塞（ＭＩ）を、３つの標準的な基準（すなわち、適切な症状、梗塞の急性的なＥＣＧ変化（ＳＴ上昇、新ＬＢＢＢ）、および正常値の上限（すなわち、＞４００ＩＵ／Ｌ）の少なくとも２倍までのクレアチンキナーゼ（ＣＫ）の上昇）のうち少なくとも２つの提示として規定した。不安定狭心症（ＵＡ）患者を、そのＥＣＧにおいて急性のＳＴ上昇を有さないものとして規定し、ＣＫは、正常値の上限の２倍よりも少なかった。３７２人の患者がＭＩを有し、１１４人がＵＡを有した。これらの患者を、同じ年齢および性別の、これまでに心臓の病歴のない１３０人の正常なコントロールと比較した。
【００３８】
（心筋梗塞患者および不安定狭心症患者におけるエンドポイント（ｅｎｄ  ｐｏｉｎｔ））
エンドポイントを、最初の入院（ｉｎｄｅｘ  ｈｏｓｐｉｔａｌｉｚａｔｉｏｎ）からの退院後の、心血管の罹患率（心筋梗塞または不安定狭心症のさらなる発症による再入院）として規定した。
【００３９】
（血液サンプリングおよび血漿抽出）
全ての被験体において、１５分間ベッドの上で休ませた後、５００ＩＵ／ｍｌのアプロチニンを含む予め冷却したＮａ−ＥＤＴＡ（１．５ｍｇ／ｍｌ血液）チューブ中に、２０ｍｌの末梢静脈血を引いた（ｄｒａｗ）。ＭＩおよびＵＡの患者において、症状の発症の７２時間後と９６時間後との間に、１回の血液サンプルを採取した。４℃にて１５分間、３０００ｒｐｍで遠心分離した後、血漿を分離し、アッセイまで−７０℃で保存した。アッセイ前に、血漿をＣ１８Ｓｅｐ−Ｐａｋ（Ｗａｔｅｒｓ）カラム上で抽出し、そして、遠心エバポレーターにて乾燥させた。
【００４０】
（ＵＴＮのアッセイ）
ＵＴＮのアッセイを、以前にＮｇら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００２，１０６：２８７７−２８８０に記載されていたように行なった。簡単に述べると、ＵＴＮに特異的な抗体を、Ｐｅｎｉｎｓｕｌａｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＣＡから入手した。逆相ＨＰＬＣ上で精製したビオチン化ＵＴＮを、トレーサとして用いた。血漿のＣ１８抽出物を用いる競合アッセイを利用した。このアッセイは、ＮａＨ２ＰＯ４  １．５ｍｍｏｌ／ｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４  ８ｍｍｏｌ／ｌ、ＮａＣｌ  １４０ｍｍｏｌ／ｌ、ＥＤＴＡ  １ｍｍｏｌ／ｌ、およびウシ血清アルブミン１ｇ／ｌ、アジド０．１ｇ／ｌから構成されるイムノアッセイ緩衝液中で、抽出物または標準物質と共に５０ｎｇの抗体をインキュベートする。４℃にて２４時間のインキュベーション後、ビオチン化ＵＴＮトレーサを添加した（２５０ｆｍｏｌ／ウェル）。抗ウサギＩｇＧコーティングしたＥＬＩＳＡプレートにて、免疫沈降を回収した。洗浄およびストレプトアビジン−ＭＡＥとのインキュベーションの後、Ｎｇら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００２，１０６：２８７７−２８８０およびＮｇら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２００２，１０２：４１１−４１６に記載されたように、化学発光を誘発させた。
【００４１】
（アッセイＢＮＰおよびＮ−ＢＮＰ）
ＢＮＰに特異的な抗体を、Ｐｅｎｉｎｓｕｌａｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＣＡから入手した。逆相ＨＰＬＣ上で精製したビオチン化ＢＮＰを、トレーサとして用いた。血漿のＣ１８抽出物を用いる競合アッセイを利用した。このアッセイは、ＵＴＮについてのアッセイについて詳述されたようなイムノアッセイ緩衝液中で、抽出物または標準物質と共に２５ｎｇの抗体をインキュベートする。Ｎ−ＢＮＰについてのアッセイは、Ｎｇら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００２，１０６：２８７７−２８８０およびＯｍｌａｎｄら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００２，１０６：２９１３−８に記載されるような、ヒトＮ−ＢＮＰのＮ末端およびＣ末端に対する抗体を用いる、２部位非競合アッセイであった。
【００４２】
（統計学的分析）
ＳＰＳＳ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  １１．０（ＳＰＳＳ  Ｉｎｃ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＭＩ）を用いて、統計学的分析を行なった。データは、非ガウス分布によるデータについての平均±ＳＥＭ、または、メジアン（範囲）として表し、これらは、分析前に対数変換した。連続型変数について、分散の一方向分析（ＡＮＯＶＡ）を用いて、この後に、ボンフェローニ検定により比較を求めた。多重独立変数の相互関係を、一変量のＧｅｎｅｒａｌ  Ｌｉｎｅａｒ  Ｍｏｄｅｌ手順を用いて求めた（最小の有意差Ｐ値を報告する）。スピアマンの相関分析を行い（ｒｓを報告する）、そして、メジアン、四分位範囲を表すボックス、および２．５番目〜９７．５番目の１００分位点を表す僅差（ｗｈｉｓｋｅｒ）から構成されるボックスプロットを構築した。受信者動作特性曲線（ＲＯＣ）を、正常な被験体と比較したＡＣＳの検出について構築した。０．０５未満のＰ値を、有意とみなした。
【００４３】
（結果および考察）
（正常な患者およびＡＣＳ患者の血漿中のＵＴＮ）
ＵＴＮは、ほぼ全ての被験体の血漿抽出物において検出可能であった。本発明者らのアッセイの検出限界を下回る（＜３．１ｆｍｏｌ／ｍｌ）抽出物もあった。ＡＣＳ患者（ＭＩおよびＵＡの両方）の血漿中ＵＴＮのレベルは、正常なコントロールのレベルよりも極めて有意に高かった（図１、ＡＮＯＶＡ  Ｐ＜０．０００５）。ボンフェローニ検定により確認した、ＵＡ（Ｐ＜０．０００５）またはＭＩ（Ｐ＜０．０００５）におけるＵＴＮレベルは、正常なコントロールよりも有意に高かった。ＡＣＳ患者（ＭＩおよびＵＡの両方）の血漿中Ｎ−ＢＮＰのレベルは、正常なコントロールのレベルよりも極めて有意に高かった（図１、ＡＮＯＶＡ  Ｐ＜０．０００５）。ボンフェローニ検定により確認した、ＵＡ（Ｐ＜０．０００５）またはＭＩ（Ｐ＜０．０００５）におけるＮ−ＢＮＰレベルは、正常なコントロールよりも有意に高かった。さらに、ＭＩにおけるＮ−ＢＮＰレベルは、ＵＡにおけるＮ−ＢＮＰレベルよりも高かった（Ｐ＜０．０００５）。ＵＴＮのレベルおよびＮ−ＢＮＰのレベルは、相関した（ｒｓ＝０．３５４、Ｐ＜０．０００５）。
【００４４】
図２は、血漿ＵＴＮレベルを用いた、ＡＣＳ（ＭＩおよびＵＡ）の診断についての受信者動作特性曲線を示す。曲線下のＲＯＣ面積（ＲＯＣ  ＡＵＣ）は、ＵＴＮについて０．８９であり、これは、対角線（０．５０のＡＵＣ）とは有意に異なる（Ｐ＜０．０００５）が、Ｎ−ＢＮＰの曲線下のＲＯＣ面積（ＲＯＣ  ＡＵＣ  ０．９３、図２）と類似していた。従って、両方のマーカーは、ＡＣＳを有する患者の同定において有用性を有する。９．１ｆｍｏｌ／ｍｌのＵＴＮレベルにおいて、ＡＣＳの診断については、９４％の感度、７４％の選択性があり、正の予測値が９３％、そして負の予測値が７７％であった。これらの図面は、ＡＣＳの診断の効率的な判定を可能にする。カットオフ値を適切に変更することにより、ＵＴＮの有用性を改善して、ＡＣＳ事象を除外することもまた可能である。
【００４５】
（血漿ＵＴＮおよびＡＣＳ事象の予後）
図３は、ＡＣＳによる最初の入院（ｉｎｄｅｘ  ａｄｍｉｓｓｉｏｎ）を経験したが、その後、ＭＩもしくはＵＡにより再入院した患者、または、良いままであって、再入院しなかった患者のいずれかにおけるＵＴＮのレベルを示す。データは、４４７人の患者について有効であった。ＵＴＮは、併発症のない臨床経過を有した３４９人の患者と比較して、ＭＩまたはＵＡで再入院した９８人の患者において上昇した（Ｐ＜０．００５）。対照的に、その後ＭＩまたはＵＡで再入院した患者の血漿Ｎ−ＢＮＰと比較して、併発症のない経過を有した患者の血漿Ｎ−ＢＮＰは差がなかった（図３）。ＵＴＮは、ＡＣＳにより入院した患者における将来的なＡＣＳ事象についての効率的なマーカーであり得、そして、このことは、このようなより高いリスクがある患者についてのリスク層化および治療戦略の計画を補助し得る。
【００４６】
（実施例２）
（研究集団および血液サンプリング）
血液サンプルを、冠状動脈造影を受けた、２３人の安定狭心症患者から得た。これらの患者のうち１３人は、造影に加え、バルーン血管形成術を受けていた。
【００４７】
血液サンプルを、造影の前（基底）、造影（または血管形成術）の２時間後、６時間後および２４時間後に採取した。サンプルを、Ｃ１８カラムにて抽出し、上記のように、ＵＴＮおよびＢＮＰについてアッセイした。
【００４８】
（結果および考察）
図４は、血管形成術を伴ったか、または伴わない、造影中のＵＴＮの血漿レベルを示す。レベルは、時間と共に有意に変化し（Ｐ＜０．０００５）、この手順の２時間後に最高に達し（全ての他の時点と比較して、Ｐ＜０．０００５）、そして、血管形成術を伴わなかった場合と、血管形成術を伴った場合との間は差があった（Ｐ＜０．０１１）。
【００４９】
ＢＮＰのレベルもまた、時間と共に有意に変化し（Ｐ＜０．０００５）、この手順の２時間後に最高に達し（全ての他の時点と比較して、Ｐ＜０．０００５）、そしてまた、血管形成術を伴わなかった場合と、血管形成術を伴った場合との間は差があった（Ｐ＜０．００８）。
【００５０】
両方のマーカーの高いレベルが、血管形成術の２時間後に認められるが、より高いレベルが、２時間より前、または２時間と６時間との間、そして、血液サンプルが決定されるべき最適なタイミングに、認められ得る。このレベルは、手順の、１０分後と６時間後の範囲に減少する可能性がある。
【００５１】
ＢＮＰは、心臓虚血の間に放出される、心臓損傷の確立されたマーカーである。しかし、心臓虚血の間（例えば、バルーン血管形成術の間）のＵＴＮの急性的な分泌は、予想外である。心臓虚血は、この手順の間に、一過性かつ軽いものであり得るが、ＵＴＮのメジアンの１０倍の上昇は、ＵＴＮが、心臓虚血の非常に敏感な指標であり得、かつ血管形成術の間に受けた心臓損傷の程度についての情報を提供し得ることを示唆する。このことは、他のペプチドアッセイ（例えば、トロポニンおよびＢＮＰ）から得られる情報を補完するはずである。
【００５２】
さらに、バルーン血管形成術に対するＵＴＮの急性的な応答は、ＵＴＮが、急性冠状動脈症候群の早期診断のためのマーカーであり得ることを示唆する。なぜならば、このレベルは、２時間以内に最高に達するからである。ＡＣＳ事象の間に心筋から急速に放出される、心筋虚血の現在のマーカー（例えば、ミオグロビン）は、心筋に対して非特異的であり得、そして、追加のマーカー（例えば、ＵＴＮおよびＢＮＰ）が、ミオグロビンの特異性を増加させ得る。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
添付の図面に対して参照がなされる。
【図１】図１ａおよび１ｂは、それぞれ、心筋梗塞［ＭＩ］または不安定狭心症［ＵＡ］を有する患者におけるウロテンシンおよびＮ−ＢＮＰの血漿レベルを、ＭＩもＵＡも有さない正常な被験体と比較して示す。
【図２】図２ａおよび２ｂは、それぞれ、血漿ウロテンシンおよび血漿Ｎ−ＢＮＰを使用した、急性冠状動脈症候群の診断のための受信者動作特性曲線（ＲＯＣ曲線）を示す。
【図３】図３ａおよび３ｂは、それぞれ、ＡＣＳを有する患者における、ウロテンシンおよびＮ−ＢＮＰの血漿レベルを示し、これらの患者は、合併症を伴わない臨床経過を有したか、または、さらなる事象（ＭＩまたはＵＡ）によりその後再入院したかのいずれかであった。
【図４】図４ａおよび４ｂは、それぞれ、安定狭心症を有する患者における、ウロテンシンおよびＮ−ＢＮＰの血漿レベルを示し、これらの患者は、冠状動脈造影を受け、そして、その冠状動脈に対してバルーン血管形成術を受けたか、またはインターベンションを受けていないかのいずれかである。バルーン血管形成術の２時間後の、両方のマーカーのピークレベル。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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