(57)【要約】  ３個の異なるタイプの結合を使用してＣ１位で付加された芳香族置換基を有するジベンゾフラン−４，６−ジカルボン酸核構造が本発明で開示されており、そしてこれがリード化合物１と比較して、上昇した親和性と他の全ての血漿タンパク質よりもＴＴＲに対する顕著に上昇した結合選択性を示す異常なアミロイド生成阻害剤であることを示す。本発明はさらに、これらの化合物がＴＴＲテトラマーに動的安定化を課すことによって機能することを示す。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2007538103.tif 000009
〔式中、
Ｘは存在しないかまたは−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択されるジラジカルであり；そして
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は−Ｈ、ＯＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＣＦ３および−ＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択される基である〕
により示される化合物。
【請求項２】
式ＩＩ
【化２】
2007538103.tif 000010
により示される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ２が−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌおよび−ＣＦ３からなる群から選択される基である、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ４が−Ｈ、−Ｃｌおよび−ＣＯ２Ｈからなる群から選択される基である、請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ５が−Ｈ、−Ｆおよび−Ｃｌからなる群から選択される基である、請求項２に記載の化合物。
【請求項６】
下記構造：
【化３】
2007538103.tif 000011
によって示される群から選択される、請求項２に記載の化合物。
【請求項７】
下記構造：
【化４】
2007538103.tif 000012
によって示される、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ３が−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒおよび−ＣＦ３からなる群から選択される基である、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ５が−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌおよび−Ｂｒからなる群から選択される基である、請求項７に記載の化合物。
【請求項１０】
下記構造：
【化５】
2007538103.tif 000013
によって示される群から選択される、請求項７に記載の化合物。
【請求項１１】
下記構造：
【化６】
2007538103.tif 000014
によって示される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ２が−Ｈ、−Ｆおよび−Ｃｌからなる群から選択される基である、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ３が−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＦ３および−ＣＯ２Ｈからなる群から選択される基である、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ４が−Ｈおよび−ＣＯ２Ｈからなる群から選択される基である、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ５が−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌ、および−ＣＦ３からなる群から選択される基である、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１６】
下記構造：
【化７】
2007538103.tif 000015
によって示される群から選択される、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１７】
トランスサイレチンをアミロイドフィブリル形成を阻害するために十分な濃度の請求項１〜１６から選択される化合物と接触させる工程を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
技術分野の記載：
本発明は、トランスサイレチンアミロイドフィブリル形成の阻害剤に関する。より具体的には、本発明はトランスサイレチンアミロイドフィブリル形成の阻害剤としての、誘導体化されたジベンゾフランに関する。
【背景技術】
【０００２】
背景技術：
小分子トランスサイレチン（ＴＴＲ）安定化剤の複数の構造的に異なるクラスが発見されており、ジベンゾフラン−４，６−ジカルボン酸（１）がとりわけ興味深い；図１（Hammarstrom, P.; et al. Science 2003, 299, 713-716; Klabunde, T.; et al. Nature Struct. Biol. 2000, 7, 312-321; Razavi, H.; et al. Angew Chem 2003, 42, 2758-2761; Miroy, G. J.; et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996, 93, 15051-15056; Peterson, S. A.; et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1998, 95, 12956-12960; Baures, P. W.; et al. Bioorg. Med. Chem. 1998,6, 1389-1401; Baures, P. W.; et al. Bioorg. Med. Chem. 1999, 7, 1339-1347; Petrassi, H. M. ; et al. J.Am. Chem. Soc. 2000, 122, 2178-2192; McCammon, M. G.; et al. Structure 2002, 10, 851-863; Oza, V. B.; et al. J. Med. Chem. 2002, 45, 321-332; Sacchettini, J. C. ; et al. Nature Rev. Drug Disc. 2002, 1, 267-275; Green, N. S. ; et al. J. Am. Chem. Soc. 2003, 125, 13404-13414; Adamski- Werner, S. L.; et al. J. Med. Chem. 2004, 47, 355-374; Miller Sean, R. ; et al. Lab. Inv. 2004, 84, 545-552）。この阻害剤（１；７．２μＭ）はＷＴ−ＴＴＲ（３．６μＭ）アミロイド形成（ｐＨ４．４）の程度を、７２時間の時間経過にわたって９０％減少させる。
【０００３】
ＴＴＲ・１２のＸ線共結晶構造は、各チロキシン結合部位の外側部分と独占的に結合することによってその顕著な活性を発揮することを示している（Klabunde, T.; et al. Nature Struct. Biol. 2000, 7, 312-321）。必要なことは、それらの親和性およびヒト血液中のＴＴＲへの結合選択性を上昇させるために、チロキシン結合ポケットの内側孔へと突き出る部分構造で１を修飾することである。
【０００４】
要約：
３種の異なるタイプの結合を使用してジベンゾフラン環のＣ１位で付加された芳香族置換基を有するジベンゾフラン−４，６−ジカルボン酸核構造が本発明で開示されており、そしてこれがリード化合物１と比較して、上昇した親和性と他の全ての血漿タンパク質よりもＴＴＲに対する顕著に上昇した結合選択性を示す異常なアミロイド生成阻害剤であることを示す（Purkey, H. E.; et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2001, 98, 5566-5571）。さらに、これらの化合物がＴＴＲテトラマーに動的安定化を課すことによって機能することを示す。
【０００５】
トランスサイレチン（ＴＴＲ）アミロイド生成は、結合力あるスペシスの誤った組合わせを起こすための速度制限的テトラマー解離および部分的モノマー変性を必要とする。このプロセスは、次いでジベンゾフラン−４，６−ジカルボン酸（１）を含むトランスサイレチンアミロイド生成阻害剤を同定するための濁度試験に付される。ＴＴＲ・１２のＸ線共結晶構造は、結合し、ＴＴＲアミロイド生成を阻害するための２個のチロキシン結合ポケットの外側部分のみが利用されていることを示す。本発明においては、使用されていない内側部分のチロキシン結合ポケットに当て嵌めるために、ジベンゾフラン環のＣ１で３種の異なる化学結合を使用してアリール置換基を結合させる構造的分子設計を採用した。
【０００６】
向上した効力および劇的に向上した血漿ＴＴＲ結合選択性を有する２８個のアミロイド生成阻害剤が、ＴＴＲの天然テトラマー構造に対して動態学的安定性を付与して、生理学的条件下では乗り越えることのできない障壁を生み出し、該機能を形成した。遺伝子間トランス抑制によるＴＴＲ天然状態の動態学的安定化が疾患を改善すると知られているため、ジベンゾフランを基本構造とする阻害剤も同じであろうという楽観できる理由が存在する。ＴＴＲの誤った組立の中間体のどれが毒性であるかということが明確でないため、アミロイド生成開始を阻害することが臨床に係わるための最も保守的な戦略である。この格別の結合選択性が、これらの阻害剤が血漿のような複雑な体液中において、ヒトのアミロイド形成の阻害に必要なチロキシン結合部位に結合することを、可能にする。本発明により、ジベンゾフランを基本構造とするアミロイド生成阻害剤が高い選択性、親和性および効果を有することが確立された。
【０００７】
本発明の第１の局面は、式Ｉ
【化１】
2007538103.tif 000002
により示される化合物を対象とする。
式Ｉにおいて、Ｘは存在しないかまたは−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択されるジラジカルであり；そしてＲ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は−Ｈ、−ＯＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＣＦ３および−ＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択される基である。
【０００８】
本発明のこの第１の局面の第１の亜種において、化合物は式ＩＩ
【化２】
2007538103.tif 000003
により示される。
【０００９】
式ＩＩの亜種のうち、好ましい態様にはＲ２が−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌおよび−ＣＦ３からなる群から選択される基である種が含まれ得；さらなる好ましい態様にはＲ４が−Ｈ、−Ｃｌおよび−ＣＯ２Ｈからなる群から選択される基である種が含まれ得；さらなる好ましい態様にはＲ５が−Ｈ、−Ｆおよび−Ｃｌからなる群から選択される基である種が含まれ得る。式ＩＩの亜種の好ましい種には、下記構造：
【化３】
2007538103.tif 000004
により示される群から選択される化合物が含まれる。
【００１０】
本発明のこの第１の局面の第２の亜種において、化合物は式ＩＩＩ
【化４】
2007538103.tif 000005
である。
【００１１】
式ＩＩＩの亜種のうち、好ましい態様にはＲ３が−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒおよび−ＣＦ３からなる群から選択される基である種が含まれ得；さらなる好ましい態様にはＲ５が−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌおよび−Ｂｒからなる群から選択される基である種が含まれ得る。式ＩＩＩの亜種の好ましい種には、下記構造：
【化５】
2007538103.tif 000006
により示される群から選択される化合物が含まれる。
【００１２】
本発明のこの第１の局面の第３の亜種において、化合物は式ＩＶ
【化６】
2007538103.tif 000007
により示される。
【００１３】
式ＩＶの亜種のうち、好ましい態様にはＲ２が−Ｈ、−Ｆおよび−Ｃｌからなる群から選択される基である種が含まれ得；さらなる好ましい態様にはＲ３が−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＦ３および−ＣＯ２Ｈからなる群から選択される基である種が含まれ得；さらなる好ましい態様にはＲ４が−Ｈおよび−ＣＯ２Ｈからなる群から選択される基である種が含まれ得；さらなる好ましい態様にはＲ５が−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌおよび−ＣＦ３からなる群から選択される基である種が含まれ得る。
【００１４】
式ＩＶの亜種の好ましい種には、下記構造：
【化７】
2007538103.tif 000008
により示される群から選択される化合物が含まれる。
【００１５】
本発明のさらなる局面はトランスサイレチンをアミロイドフィブリル形成を阻害するために十分な濃度の上記式Ｉ〜ＩＶから選択される化合物と接触させる工程を含む方法を対象とする。
【００１６】
図面の簡単な説明：
図１ＡはＴＴＲ・１２のＸ線結晶学的構造を示す（Klabunde, T.; et al. Nature Struct. Biol. 2000, 7, 312-321）。
図１Ｂはチロキシン結合ポケットに位置する１−置換−ジベンゾフラン−４，６−ジカルボン酸のデザインの線図表現を示す。ここで、ＸはＮＨ、Ｏまたは直接Ｃアリール−Ｃアリール結合を示す。ＲはＴＴＲの内側結合孔に当て嵌まるように設計されたアリール環の置換基を示す。
【００１７】
図２はｐＨ４．４（７２時間）でのＷＴ−ＴＴＲ（３．６μＭ）アミロイドフィブリル形成（ｆ．ｆ．）に対する濃度依存性酸置換ジベンゾフラン活性を集約した表を示す。
図３はＷＴ−ＴＴＲ（３．６μＭ）フィブリル形成（ｐＨ４．４、７２時間）に対するジベンゾフランを基本構造とするアミロイド阻害活性（３．６μＭ）およびヒト血漿中のＴＴＲについての結合化学量を示すチャートである。
【００１８】
図４は１−ヒドロキシ−ジベンゾフラン−４，６−ジカルボキシレートジメチルエステルおよび対応するトリフレートの合成スキームを示す。
図５は１−フェニル−、フェノキシ−およびフェニルアミン−ジベンゾフラン−４，６−ジカルボキシレートジメチルエステルおよび対応するジカルボキシレートの合成スキームを示す。
【００１９】
図６はｐＨ４．４（７２時間）でのＷＴ−ＴＴＲ（３．６μＭ）アミロイドフィブリル形成（ｆ．ｆ．）に対するジベンゾフランを基本構造とする阻害剤活性（７．２μＭ）を示すチャートを示す。
図７はフィブリル形成阻害効果に対してプロットしたジベンゾフラン血漿ＴＴＲ結合化学量を示す表を示す。
【００２０】
図８は２７（７．２μＭ）でプレインキュベートした後、そしてｐＨを４．４に下げ、７２時間（阻害剤非存在下で最大アミロイド形成となる時間）でのさらなるインキュベーション期間の後、ＴＴＲ（３．６μＭ）の沈降速度試験における中心からの距離に対する２８０ｎｍの吸収プロットを示す。
図９は２７（７．２μＭ）でプレインキュベートした後、そしてｐＨを４．４に下げ、７２時間（阻害剤非存在下で最大アミロイド形成となる時間）でのさらなるインキュベーション期間の後、ＴＴＲ（３．６μＭ）の平衡超遠心分離試験における中心からの距離に対する２８０ｎｍの吸収プロットを示す。
【００２１】
図１０は阻害剤の非存在下（▲）ならびに阻害剤２５、４７および６４の７．２μＭ（◇）および３．６μＭ（○）での存在下における、部分的酸変性によるＷＴ−ＴＴＲ（３．６μＭ）フィブリル形成の、５００ｎｍの濁度によって測定した経時分析のプロットを示す（各阻害剤を区別するためのマークの陰付け方式参照）。
図１１は阻害剤の非存在下（▲）ならびに阻害剤２５、４７および６４の７．２μＭ（◇）および３．６μＭ（○）での存在下における、ＷＴ−ＴＴＲ（３．６μＭ）テトラマー解離（６．０Ｍ尿素）の経時分析のプロットを示す（各阻害剤を区別するためのマークの色つけ方式参照）。
【００２２】
詳細な説明：
Ｃ１−アリール置換ジベンゾフラン（７．２μＭ）の１個を除く全てが、非置換アリール環を有しているにもかかわらず、インビトロ（ｐＨ４．４、３７℃）でのＷＴ−ＴＴＲ（３．６μＭ）酸性条件フィブリル形成の優れた阻害剤である（図６）。ＴＴＲアミロイド生成に対して有効でない唯一のジベンゾフランを基本構造とする阻害剤は、４個の負電荷を有し得る３４であった。全ての化合物がＴＴＲフィブリル形成を完全に阻害した（±５％の実験誤差）ため、構造活性相関（ＳＡＲ）は７．２μＭ阻害データから演繹できない。しかし、図３および７は、ＴＴＲ（３．６μＭ）と等しい阻害剤濃度での阻害効果の範囲を示しており、製造された３１個のアナログおよび実験誤差による限界はあるが、ある種のＳＡＲを導くことを可能にしている。注目すべきは、阻害剤の全て（３４を除く）が親化合物（１）と比較して３．６μＭで増強された効力を示す（図３）。最も重要なことは、増強された効果を示した３０個の阻害剤が、２個（３１と３５）を除き、その全てがヒト血漿中のＴＴＲへの劇的に強化された結合選択性を示すことである。Ｃ１−置換阻害剤によって示された顕著な結合選択性は複雑な生物学的系におけるＴＴＲアミロイド生成を阻害するのに理想的である。
【００２３】
全３個の阻害剤シリーズにおいて見出される４種のＣ１−アリール置換パターン（Ｈ、３−ＣＦ３、３，５−Ｆ２および３，５−Ｃｌ２）を比較すると、ジベンゾフラン骨格のＣ１と直接結合したアリール環（以後ビアリールと称する）を有する阻害剤が、それらのビアリールアミンおよびビアリールエーテル対応化合物と比較してわずかに増強された阻害能を示すことが分かる（図３）。これは内側結合孔中で環が異なって位置することができるようにする構造的差異のためであり得る；しかし、本発明者らはこの優位性が極めて大きなアナログシリーズにおいて保持され得ないことを忠告する。他の２個のシリーズが血漿中で最も選択的なＴＴＲ阻害剤を生産することを同じ評価者の間で意見が分かれた；しかし、ここではＳＡＲは１００個ものタンパク質がそれらの阻害剤と競合するという事実によって混乱させられる。チロキシン結合部位におけるハロゲン結合ポケットを選択するるように、最も強力な阻害剤が２−Ｆまたは３，５−Ｃｌ２置換基（３６、６３および６７）を有することは驚くべきことではないが、３−ＣＯ２Ｈ置換アリール阻害剤である３３および６９がその中でも最も強力である（しかし、それらのＴＴＲへの血漿結合選択性は中程度である）ことは幾分驚きである。本発明以前の単純なビフェニルおよびビフェニルアミン阻害剤の結晶学的結果は、内側結合孔にカルボキシルを有するアリール環を有することが好ましい（Ｓ１１７およびＴ１１９へのＨ結合を可能とする）かもしれないと示している（Klabunde, T.; et al. Nature Struct. Biol. 2000, 7, 312-321; Oza, V. B.; et al. J. Med. Chem. 2002, 45, 321-332; Adamski-Werner, S. L.; et al. J. Med. Chem. 2004, 47, 355-374）。
【００２４】
アリール基をＣ１位に付与することは、阻害能の増強だけでなく、おそらく他の血漿タンパク質よりもＴＴＲに対して結合親和性を増強させることによって、ＴＴＲへの血漿結合選択性をより重大かつ顕著に向上させる。Ｃｌ−アリール置換ベンゾフランを基本構造とする阻害剤の血漿中のＴＴＲに対する優れた結合選択性は、合成される化合物の〜２／が１より多いＴＴＲ結合化学量を示すという事実により証明される。これは、結合のためにＴＴＲの外側孔のみを利用するスクリーニングヒット１が血漿中のＴＴＲに測定可能な結合選択性を示さないので、極めて興味深いことである。多様な化学構造のアミロイド生成阻害剤についての既知の実験は、極めて少ないメンバーが１を越える結合化学量を示すことを明らかにしている（Hammarstrom, P. ; et al. Science 2003,299, 713-716; Klabunde, T. ; et al. Nature Struct. Biol. 2000,7, 312-321; Razavi, H. ; et al.Angew. Chem. 2003, 42, 2758-2761; Miroy, G. J.; et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996,93, 15051-15056; Peterson, S. A. ; et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1998, 95, 12956-12960; Baures, P. W.; Peterson, S. A. ; Kelly, J. W. Bioorg. Med. Chem. 1998, 6, 1389-1401; Baures, P. W. ; et al. Bioorg. Med. Chem. 1999, 7, 1339-1347; Petrassi, H. M. ; et al. J. Am. Chem. Soc. 2000, 122, 2178-2192; McCammon, M. G. ; et al. Structure 2002, 10, 851-863; Oza, V. B. ; et al. J. Med. Chem. 2002,45, 321-332; Sacchettini, J. C. ; Kelly, J. W. Nature Rev. Drug Disc. 2002, 1, 267-275; Green, N. S. ; et al. J. Am. Chem. Soc. 2003, 125, 13404-13414; Adamski- Werner, S. L. ; et al. J. Med. Chem. 2004,47, 355-374; Miller S. R. ; et al. Lab. Inv. 2004,84, 545-552）。図７の灰色に影を付した領域は、高度インビトロ活性（＜４０％フィブリル形成）および高度結合選択性（血漿中ＴＴＲに均等に＞１で結合する）に対する基準を満たすジベンゾフランを基本構造とする化合物を含んでいる。最も重要な点は、それらが所望の経口バイオアベイラビリティー、薬物動態、および毒性プロファイルを示すならば、ほぼ全てのジベンゾフラン、とりわけ灰色の箱（図７）の中のものの活性および結合選択性が、血漿中のＴＴＲを動態学的に安定化するのに十分であるという点である。
【００２５】
インビトロ阻害効果（３．６μＭ）と血漿中ＴＴＲに対する阻害剤の結合選択性（１０．８μＭ）が相関していないことは驚くことではない（図７）。他の全ての血漿タンパク質よりもＴＴＲに対して優れた結合選択性を示す化合物は、フィブリル形成の優れた阻害剤でなければならない。しかし、その逆は必ずしも正しくない：優れた阻害剤が高いＴＴＲ血漿結合選択性を示すとは限らない。高いＴＴＲ血漿結合選択性を示す優れた阻害剤は、解離遷移状態を通じてＴＴＲの天然状態を選択的に安定化することができ、そしてタンパク質の豊富な生物学的液体中のＴＴＲの動態学的安定化を起すことができるため、ヒトにおいて最も有用な化合物である。動態学的安定化の程度は結合定数に比例するため、ＴＴＲに対する結合定数は重要である。しかし、結合定数およびインビトロでの効力に注目することは、化合物がインビトロで優れたＴＴＲアミロイド生成阻害であり得ても、他の血漿タンパク質と結合し、したがってヒトに無用となるため、誤った方向へ導き得る（Purkey, H. E.; et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2001,98, 5566-5571）。ＴＴＲに良好な結合選択性を示さない、強力なインビトロ阻害剤は、他の血漿タンパク質、例えばアルブミンと相互作用する傾向がある（Purkey, H. E. ; et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2001, 98, 5566-5571）。ジベンゾフラン阻害剤が、本発明で特徴付けられる阻害剤の群として前例のない結合選択性および阻害効力を示すので（Hammarstrom, P.; et al. Science 2003, 299, 713-716; Klabunde, T.; et al. Nature Struct. Biol. 2000, 7, 312-321; Razavi, H.; et al. Angew. Chem. 2003, 42, 2758-2761; Miroy, G. J.; et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996, 93, 15051-15056; Peterson, S. A.; et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1998, 95, 12956-12960; Baures, P. W.; Peterson, S. A.; Kelly, J. W. Bioorg. Med. Chem. 1998, 6, 1389-1401; Baures, P. W.; et al. Bioorg. Med. Chem. 1999, 7, 1339-1347; Petrassi, H. M.; et al. J. Am. Chem. Soc. 2000, 122, 2178-2192; McCammon, M. G.; et al. Structure 2002, 10, 851-863; Oza, V. B.; et al. J. Med. Chem. 2002, 45, 321-332; Sacchettini, J. C.; Kelly, J. W. Nature Rev. Drug Disc. 2002, 1, 267-275; Green, N. S.; et al. J. Am. Chem. Soc. 2003, 125, 13404-13414; Adamski- Werner, S. L.; et al. J. Med. Chem. 2004, 47, 355-374; Miller S. R.; et al. Lab. Inv. 2004, 84, 545-552）、これらはさらなる薬理学的評価に理想的である。ＴＴＲがＴ４の３次担体（tertiary carrier）であるため、その結合部位の９９％以上が非結合である；したがって、ＴＴＲと結合する阻害剤がＴ４ホメオスタシスを混乱させることはない。
【００２６】
Ｃ１−置換ジベンゾフランを基本構造とするＴＴＲアミロイド生成阻害剤は、インビトロでのアミロイド生成阻害効力、血漿中でのＴＴＲに対する優れた結合選択性、遅いＴＴＲ解離速度（ここで利用する方法による高い血漿選択性を見る場合になければならない）、ＴＴＲテトラマーに対して動態学的安定化を与える効力、血漿中でのそれらの化学的安定性、および低ｐＨでのそれらの化学的安定性（経口投与のための優れた候補となる）のため、期待できる。これらの阻害剤は、ＴＴＲの動態学的安定化がＦＡＰを改善することが知られているため（Hammarstrom, P.; et al. Science 2003, 299, 713-716; Coelho, T.; et al. J. Rheumatol. 1993, 20, 179-179; Coelho, T.; et al. Neuromuscular Disord. 1996, 6, 27-27）、ＳＳＡ、ＦＡＰおよびＦＡＣを含むＴＴＲアミロイド疾患の処置に有用である。
【００２７】
設計および合成：
図１Ａは、１個のＴＴＲチロキシン結合部位中の、１に対する２個の対称等価結合モード（緑および黄色）を示し、その表面を灰色で輪郭を描いている（Klabunde, T.; et al. Nature Struct. Biol. 2000, 7, 312-321 ）。４および６位でのカルボキシレートが、チロキシン結合部位の入り口でε−ＮＨ３＋基のＬｙｓ１５および１５’との静電相互作用を起こす。カルボキシレートの１個を除去すると、ほとんどの場合芳香環からのカルボキシレート距離を変化させるので、ジベンゾフランの活性が著しく低下する（図２）。さらに、ジベンゾフラン環はチロキシン結合孔の外側部分の形および疎水性と優れて相補的である。図１ＡのＴＴＲ・１２結晶構造の検討により、１と結合したチロキシン結合部位の内側部分に大きな非結合空間が存在することが明らかとなる。この構造に基づいて、アリール環のような置換基を、１のジベンゾフラン環のＣ１位にそれを結合させることにより、結合部位の内側部分に突き出させ得ることは明らかである。図１Ｂに示すとおり、かかる置換基はジベンゾフラン骨格と、ヘテロ原子（ＮまたはＯ）を介して、またはＣアリール−Ｃアリール結合を介して直接（示さず）結合することができた。
【００２８】
芳香族性置換基（図３）は、内側結合孔のフェニル環の想定方向およびそれらのアリール環が同様に位置させると思われる他の一連の化合物で既知のＳＡＲデータに基づいて、ハロゲン結合ポケットまたは内側孔の水素結合部分構造と相互作用させるように選択された。（Hammarstrom, P.; et al. Science 2003, 299, 713-716; Klabunde, T.; et al. Nature Struct. Biol. 2000, 7, 312-321; Razavi, H.; et al. Angew Chem 2003, 42, 2758-2761; Miroy, G. J.; et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996, 93, 15051-15056; Peterson, S. A.; et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1998, 95, 12956-12960; Baures, P. W.; et al. Bioorg. Med. Chem. 1998, 6, 1389-1401; Baures, P. W.; et al. Bioorg. Med. Chem. 1999, 7, 1339-1347; Petrassi, H. M.; et al. J. Am. Chem. Soc. 2000, 122, 2178- 2192; McCammon, M. G.; et al. Structure 2002, 10, 851-863; Oza, V. B.; et al. J. Med. Chem. 2002, 45, 321-332; Sacchettini, J. C.; et al. Nature Rev. Drug Disc. 2002, 1, 267-275; Green, N. S.; et al. J. Am. Chem. Soc. 2003, 125, 13404-13414; Adamski-Werner, S. L.; et al. J. Med. Chem. 2004, 47, 355-374; Miller Sean, R.; et al. Lab. Inv. 2004, 84, 545-552）。
【００２９】
Ｃ１−置換ジベンゾフランを基本構造とする阻害剤の合成を、商業的に入手可能な２，４−ジｔｅｒｔブチル−６−ブロモフェノール（２）のラディカルフェノール性ホモカップリングで開始して、ヘキサシアノ鉄酸カリウム（ＩＩＩ）を使用して、既報告のように（Tashiro, M. Y. , et al. Synthesis 1980, 6, 495-496）、ジベンゾフラン誘導体３を得る（図４）。このテトラ−ｔ−ブチルジベンゾフラン誘導体をトルエン中のトランスアルキル化に供し、１−ヒドロキシジベンゾフラン（４）を、２から３３％の通算収率で、形成させる（この中間体の合成のための他の戦略が報告された）（Labiad, B.; Villemin, D. Synthesis 1989, 143-144; Lee, Y. R.; et al. Org. Lett. 2000, 2, 1387-1389）。フェノールを保護した後、シリルエーテル５を、４−および６−位で、ｓｅｃ−ブチルリチウム（１−酸素のトリイソプロピルシリル基は、それが金属化剤として作用することから除外する）で選択的に、オルト金属化した（Snieckus, V. Chem. Rev. 1990,90, 879-933）。ジアニオンをＣＯ２ガスでクエンチし、エステル化して６を得て、これを次いでＴＢＡＦで脱保護し、そしてトリフレート８へと高通算収率で変換する。
【００３０】
選択されたアニリンをＢｕｃｈｗａｌｄおよびＨａｒｔｗｉｇにより開発されたパラジウム触媒Ｎ−アリール化反応を使用して、トリフレート８へとカップリングさせて、ジベンゾフランを基本構造とするビアリールアミンアナログ９〜２３を得た（図５）（Louie, J. D. , et al. J. Org. Chem. 1997, 62, 1268-1273; Wolfe, J. P. B. , Stephen L. Tetrahedron Lett. 1997, 38, 6359-6362）。アリールエーテルをジベンゾフランのＣ１位に結合させるために、フェノール７および複数のフェニルボロン酸をＣｈａｎおよびＥｖａｎｓの銅触媒ビアリールエーテルカップリング法を使用してクロスカップリングさせて、化合物３９〜４３を得た（Chan, D. M. T.; et al. Tetrahedron Lett. 1998, 39, 2933-2936; Evans, D. A. et al. Tetrahedron Lett. 1998, 39, 2933）。化合物８をまた、複数のフェニルボロン酸の存在下で鈴木カップリング条件に供し、ジベンゾフランを基本構造とするビアリールアナログ４９〜５９を得た（Suzuki, A. Modern Arene Chemistry 2002, 53-106）。これらの前駆体のメチルエステルの鹸化により、所望のジベンゾフラン−４，６−ジカルボン酸アミン（２４〜３８）、エーテル（４４〜４８）およびビアリール（６０〜７０）を得て、強力なＴＴＲアミロイド生成阻害剤として評価した。
【００３１】
結果：
有効な小分子アミロイド生成阻害剤の２個の最も重要な特徴は、それらが高い親和性と選択性で血液中のＴＴＲと結合できること、そしてその天然テトラマーの４級構造を安定化することができなければならないことである（Hammarstrom, P. ; et al. Science 2003,299, 713-716; Razavi, H.; et al. Angew Chem 2003,42, 2758-2761; Purkey, H. E. ; et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2001,98, 5566-5571）。阻害効果（化合物２４〜３８、４４〜４８および６０、７０）を、組み換えＴＴＲを使用して、アミロイド生成を促進する部分変性バッファー（ｐＨ４．４、３７℃）中で、先ず評価した。続いて、ヒト血漿中の全ての他のタンパク質を超えて選択的にＴＴＲに結合する有効な阻害剤の能力を評価した。
【００３２】
アミロイド生成阻害剤としてのジベンゾフランを基本構造とする化合物の評価。
ＴＴＲアミロイド阻害効果を、部分変性を酸性化（ｐＨ４．４、３７℃）によって引き起こした既知の制御フィブリル形成アッセイを使用して証明した（Colon, W.; Kelly, J. . Biochemistry 1992, 31, 8654-8660）。簡潔に述べると、試験化合物（７．２または３．６μＭ）をＴＴＲ（３．６μＭ）と、３０分間、ｐＨ７のバッファー中でインキュベートする。次いで、アミロイド生成をｐＨ４．４に低下させて開始させ、最大フィブリル形成をＷＴ−ＴＴＲで、７２時間後（３７℃）に観察する。タンパク質阻害剤（Ｔ試験）の存在下での濁度を試験化合物を含まない溶液（Ｔ対照）と比較する。優れた阻害剤は０％フィブリル形成を示すが、阻害剤として機能しない化合物は１００％フィブリル形成を示す。本発明者らの経験によれば、優れた阻害剤は＜１０％フィブリル形成を７．２μＭの小分子濃度で、そして＜４０％フィブリル形成をＷＴ−ＴＴＲ（３．６μＭ）と等しい濃度で、それぞれ示す（Hammarstrom, P.; et al. Science 2003, 299, 713- 716; Klabunde, T.; et al. Nature Struct. Biol. 2000, 7, 312-321; Razavi, H.; et al. Angew Chem 2003, 42, 2758-2761; Miroy, G. J.; et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996, 93, 15051-15056; Peterson, S. A.; et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1998, 95, 12956-12960; Baures, P. W.; et al. Bioorg. Med. Chem. 1998, 6, 1389-1401; Baures, P. W.; et al. Bioorg. Med. Chem. 1999,7, 1339- 1347; Petrassi, H. M.; et al. J. Am. Chem. Soc. 2000, 122, 2178-2192; McCammon, M. G.; et al. Structure 2002, 10, 851-863; Oza, V. B.; et al. J. Med. Chem. 2002, 45, 321-332; Sacchettini, J. C.; et al. Nature Rev. Drug Disc. 2002, 1, 267-275; Green, N. S.; et al. J. Am. Chem. Soc. 2003, 125, 13404-13414; Adamski-Werner, S. L.; et al. J. Med. Chem. 2004, 47, 355- 374; Miller Sean, R.; et al. Lab. Inv. 2004, 84, 545-552）。
【００３３】
評価した３１個の化合物の１個（３４）を除く全てが、ＴＴＲの２倍の濃度（７．２μＭの阻害剤）で、完全にフィブリル形成を阻害する、図６（解離定数がｐＨ４．４においていずれも低いｎＭ範囲であるとすれば、７．２μＭでは、ＴＴＲ（ＴＴＲ・１２）の両方の結合部位を占めるのに十分な化合物が加えられている。）。小分子は典型的にはＴＴＲに負の協同性（negative cooperativity)で結合し、したがってＫｄ１およびＫｄ２はしばしば１または２オーダーの幅で分かれる。したがって、リガンドとＴＴＲの両方が等しい濃度であるとき、解離定数によって決される、ＴＴＲ・１、ＴＴＲ・１２および非リガンドＴＴＲの数を観察する。他の研究によって、２個のＴＴＲ結合部位の一方のみを阻害剤が占めることで、テトラマー全体をアミロイド生成に対して十分に安定化することが今や確立されている（Wiseman, R. L.; et al. J. Am. Chem. Soc. 2005, in press）。これはさらに、これらのジベンゾフランの２６個が、ＴＴＲと等しい濃度で（各３．６μＭ、図３）優れたＴＴＲアミロイド生成阻害剤（＜４０％フィブリル形成）であるという本発明の観察によって裏付けられる。全３つのシリーズから代表的な小分子（２５、２６、２７、３０、４５、４７、６２；３．６μＭ）を酸によるアミロイド生成条件（ｐＨ４．４、３７℃、７２時間）にＴＴＲの非存在下で供したところ、測定可能な沈殿は現れなかった。
【００３４】
ジベンゾフランを基本構造とする阻害剤の血漿ＴＴＲ結合選択性評価。
ヒト血漿中のＴＴＲに対する阻害剤結合選択性を、過去に確立された抗体捕捉法を使用して評価した（Purkey, H. E.; et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2001, 98, 5566-5571）。この評価において、阻害剤（１０．８μＭ、〜２−３×ＴＴＲの天然濃度）をヒト血漿中で２４時間、３７℃でインキュベートする。クエンチしたセファロース樹脂を、次いで血漿に加えて、樹脂に結合したすべての小分子を、結合しないＴＴＲから除去する。ＴＴＲおよびすべてのＴＴＲ結合小分子を、次いで、セファロース樹脂に共有結合させたポリクローナルＴＴＲ抗体を使用して、免疫捕捉する。樹脂を洗浄後（５×１０分洗浄）、抗体−ＴＴＲ複合体を高ｐＨで解離させ、そしてＲＰ−ＨＰＬＣで分析する。ＴＴＲと阻害剤の相対的な化学量を、それらのＨＰＬＣピーク領域から標準曲線を使用して計算する。洗浄に伴う損失は、高解離速度を有する阻害剤には一般的に観察され；したがってこの分析はそれらの真の結合化学量を低く見積もり得るが、低い解離定数および解離速度を有する化合物については忠実な結果を得る。２１個の阻害剤は１を越える結合化学量を示し（２が最大結合化学量である）、その１９個が＜４０％フィブリル形成を３．６μＭの濃度で示す（図７、影付き部分）。観察される高い血漿ＴＴＲ結合選択性は、親ジベンゾフラン−４，６−ジカルボン酸（１）がＴＴＲに対する結合選択性を示さないことを考慮すると、顕著である。他の血漿タンパク質よりもＴＴＲに対する結合選択性を付与するという点でＣ１アリール置換基の重要性が示される。
【００３５】
アミロイド生成条件下でのテトラマー４級構造の安定化。
これらのＣ１−アリール化ジベンゾフランがＴＴＲフィブリル形成を天然状態での安定化（すなわち、テトラマー安定化）により阻害することを確認するため、本発明者らはＴＴＲ４級構造をアミロイド生成条件（ｐＨ４．４、３７℃）下で７２時間のプレインキュベーション期間の後、超遠心分離分析によって検討した。２７（７．２μＭ）の存在下で、ＴＴＲ（３．６μｍＭ）が、テトラマーＴＴＲ（５５．０ｋＤａ）の予測される分子量と同程度である５７．１±０．３および５５．１±０．４ｋＤａの流体力学的分子量を有することを沈降速度（図８）および平衡分析的超遠心分離（図９）によりそれぞれ見出した。２７なしでは、ＴＴＲは超遠心分離実験において急速に沈殿した極めて大きな分子量のオリゴマーへと凝集した（データ提示なし）。
【００３６】
ジベンゾフラン基本構造とする阻害剤はＴＴＲに動態学的安定化をもたらすのか。
これらの阻害剤がテトラマーＴＴＲの動態学的安定化をもたらす能力は、ＴＴＲテトラマー解離の速度を評価することによって最も良く評価される（Hammarstrom, P.; et al. Science 2003, 299, 713-716; Hammarstrom, P.; et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2002, 99, 16427-16432）。酸性条件下では、テトラマー解離がアミロイド生成をもたらすが、カオトロープ（chaotropes）（６Ｍ尿素）の存在下では、テトラマー解離がモノマー脱フォルデイングを起こす。ジベンゾフランを基本構造とする阻害剤の３種の構造群を代表する阻害剤２５、４７および６４の酸および尿素による在変性条件下でのテトラマー解離速度に対する影響が証明された。部分的酸性化によるＴＴＲアミロイド生成は、対照（阻害剤なし）と比較して、２５、４７および６４により用量依存的に劇的に鈍化する（図４Ａ）。６Ｍ尿素中でのＴＴＲテトラマー解離速度は、分光光学的方法により容易に観察される遅い４級構造変化を速い３級構造変化と結合することによって容易に観察される（Hammarstrom, P.; et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2002, 99, 16427-16432）。遠ＵＶ  ＣＤにより観察されたＴＴＲテトラマー（３．６μＭ）解離速度は、６Ｍ尿素中で、２５、４７および６４により用量依存的に顕著に鈍化される。これらの結果は２５、４７および６４の結合による基底状態対解離遷移状態の差別的安定化と一致する。
【実施例】
【００３７】
実験：
ＴＴＲの細菌での発現に使用する方法（Lai, Z.; et al. Biochemistry 1996, 35, 6470-6482）、制御フィブリル形成アッセイ（Colon, W.; Kelly, J. W. Biochemistry 1992, 31, 8654-8660; Lai, Z.; et al. Biochemistry 1996, 35, 6470-6482）、血漿結合選択性アッセイ（Purkey, H. E.; et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2001, 98, 5566-5571）および超遠心分離分析法（Lashuel, H. A.; et al. Biochemistry 1998, 37, 17851-17864）は全て既知である。
【００３８】
化合物２５、４７および６４によるＷＴ−ＴＴＲフィブリル形成阻害の経時分析。
化合物２５、４７および６４をＤＭＳＯ中に溶解し、７．２ｍＭの１次原液を得て（１０×原液）、これから５および１０倍ＤＭＳＯ希釈により１．４４ｍＭ（２×）および０．７２ｍＭ（１×）の２次原液をそれぞれ得る。４９５Ｌの０．４ｍｇ／ｍＬ（７．２μＭ）ＷＴ−ＴＴＲ溶液（１０ｍＭのリン酸ナトリウム、１００ｍＭのＫＣｌおよび１ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．２）および５Ｌの１．４４または０．７２ｍＭの阻害剤２次原液を使い捨てのＵＶキュベットに加え、簡単にボルテックス撹拌し、次いで３０分間２５℃でインキュベートした。次いで、ｐＨを５００μＬの酸性バッファー（１００ｍＭのアセテート、１００ｍＭのＫＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ４．２）を加えて４．４に調節し、最終１ｍＬ溶液を再びボルテックス撹拌し、そして暗所で３７℃で、無撹拌下にインキュベートした。酸性化の０、４、８、１２、２５、４９、７４、１００、１２２、１４５および１６９時間の時点で、溶液をボルテックス撹拌し、そして５００ｎｍでの濁度を測定した。５μＬの純粋なＤＭＳＯを含む対照試料を製造し、そして比較のために上記のとおり分析した。インキュベーション中のキュベット間変動を防ぐため、小分子およびＴＴＲ対照試料を１０のグループで調製した。それらの濁度を測定した後、試料を廃棄した。
【００３９】
化合物２５、４７および６４によるＷＴ−ＴＴＲテトラマー解離阻害の経時分析を尿素中の結合モノマー非フォルデイングにより評価した。
化合物２５、４７および６４をＤＭＳＯ中に溶解し、１０ｍＭの１次原液を得て、これから１０倍のＥｔＯＨ希釈により１ｍＭの２次原液を得た。２００μＬの１．０ｍｇ／ｍＬ（１８μＭ）ＷＴ−ＴＴＲ溶液（５０ｍＭのリン酸ナトリウム、１００ｍＭのＫＣｌおよび１ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．２）および７．２または３．６μＬ（それぞれ２×および１×）の１ｍＭの阻害剤２次原液を２ｍＬのエッペンドルフチューブに加え、簡単にボルテックス撹拌し、そして１５分間２５℃でインキュベートした。１００μＬのＴＴＲ・阻害剤溶液を９００μＬの尿素バッファー（６．６７Ｍ尿素、５０ｍＭのリン酸ナトリウム、１００ｍＭのＫＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．２）へと加え、そして最終１ｍＬ溶液を再びボルテックス撹拌し、そして暗所で２５℃で、無攪拌下にインキュベートした。尿素との撹拌後、０、４、１１、２４、４９、７３、９７、１２２、１４６、および１７０時間の時点で円２色性スペクトルを２１８および２１５ｎｍ間で、０．５ｎｍ毎にスキャンして測定し、５秒で平均して測定した。測定後、試料をそれぞれのエッペンドルフチューブに戻し、インキュベーションを続けた。７．２μＬのＥｔＯＨ中１０％ＤＭＳＯを含む対照試料を製造し、そして比較のために上記のとおり分析した。ＣＤ幅値を２１５および２１８ｎｍ間で平均して、実験中のβシート損失の程度を測定した。ＴＴＲテトラマー解離を、このβシート損失について測定した速い（〜５００，０００×速い）モノマー変性と関係している（Hammarstrom, P.; et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2002, 99, 16427-16432）。
【００４０】
阻害剤合成：
化学合成のための試薬を商業的な供給業者から購入し、そして特に記載がない限りさらに精製することなく使用する。アルミニウムプレートで被覆したシリカゲル６０  Ｆ２５４薄層クロマトグラフィー（ＥＭ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）または分析逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用して反応の進行を追跡する。ＨＰＬＣは、Ｗａｔｅｒｓ  ４８６調節可能吸収検出器およびＷａｔｅｒｓ  ７１７と自動サンプラーを使用して、Ｗａｔｅｒｓ  ６００Ｅ多溶媒送達系を使用して行った。Ｃ１８  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌカラム（モデル０３３−７１５、孔径１５０Å、粒子３μＭ）を、全ての逆相ＨＰＬＣ分析で使用した。それぞれ４．８％、９５％および０．２％の割合のアセトニトリル／水／トリフルオロ酢酸溶媒系；溶媒Ａを使用し、一方溶媒Ｂはそれぞれ９５％、４．８％および０．２％であった。１００％Ａでの定組成フローを２分間、その後８分にわたって１〜１００％Ｂの直線グラジエントを、１．５ｍＬ／分で行った。全フラッシュクロマトグラフィーを２３０〜４００メッシュのシリカゲル６０（ＥＭ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して完了する。Ｈ−およびＣ−ＮＭＲスペクトルを３００、４００、５００または６００ＭＨｚで、Ｂｒｕｋｅｒスペクトルメーターで記録した。ケミカルシフトを、内部標準から低磁場側でｐｐｍ値で記載する（Ｍｅ４Ｓｉ、０．０ｐｐｍ）。
【００４１】
（ジベンゾフラン−１−イルオキシ）−トリイソプロピル−シラン（５）
乾燥２５０ｍＬ丸底フラスコにフェノール４（Tashiro, M. Y., et al. Synthesis 1980, 6, 495-496）（４９２ｍｇ、２．６７ｍｍｏｌ）および撹拌バーを加え、フラスコをセプタムで密封した。ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）、その後ＤＭＡＰ（３９１ｍｇ、３．２ｍｍｏｌ）および塩化トリイソプロピルシリル（８００Ｌ、３．７３ｍｍｏｌ）を加えた。得られた無色な溶液は一夜で白色懸濁液となった。反応物を２５０ｍＬの分液漏斗に移し、Ｈ２Ｏ（３×１０ｍＬ）で洗浄した。水層を合併し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×３０ｍＬ）で抽出した。有機層を合併し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、淡黄色油状物を得た。油状物をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（１００％ヘキサン）で精製して、０．７０ｇ（７７％）の５を無色の油状物として得た。MALDI-FTMS 341.1932 m/z(M+H)+、 C21H29O2Siに対する計算値341.1931
【００４２】
１−トリイソプロピルシラニルオキシ−ジベンゾフラン−４，６−ジカルボン酸ジメチルエステル（６）。
シリルエーテル５（６５４ｍｇ、１．９２ｍｍｏｌ）を乾燥５０ｍＬ丸底フラスコに加え、続いてＥｔ２Ｏ（７．４ｍＬ）およびＴＭＥＤＡ（０．８７ｍＬ、５．７７ｍｍｏｌ）を加えた。フラスコをアセトン／ＣＯ２（ｓ）バス中で１０分間、−７８℃に冷却し、その後ｓｅｃ−ブチルリチウム（４．４４ｍＬのシクロヘキサン中１．３Ｍ溶液、５．７７ｍｍｏｌ）を１０分にわたって加えた。得られた橙色懸濁液を室温に温め、２４時間撹拌した。フラスコを再び上記のように−７８℃に冷却し、１５ｐｓｉ流量のＣＯ２（ｇ）を反応懸濁液に通した（ＣＯ２を活性化シリカを含む乾燥チューブを通過させて乾燥させた）。ＣＯ２（ｇ）の最初の通気後、冷却槽を外し、反応物を３０分撹拌した。反応混合物を氷水（５０ｍＬ）を含む１Ｌビーカーに注いだ。溶液を、０．０５ＭのＫＯＨをゆっくりと加えてｐＨ９．０とし、次いで氷／Ｈ２Ｏバスで０℃に冷却した。溶液を０．５ＭのＨＣｌでｐＨ２に酸性化すると、白色固体が沈殿した。水性懸濁液（ｐＨ２）を１Ｌ分液漏斗に移し、ＥｔＯＡｃ（５×５０ｍＬ）で抽出した。合併した抽出物をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧条件下で濃縮して、油状物として粗二塩基酸を得た。粗二塩基酸を含む１００ｍＬフラスコに撹拌バーを取り付け、セプタムで密封し、そして脱気した。次いで、フラスコをアルゴンで再充填した。無水ＭｅＯＨ（２ｍＬ）およびＡＣＳ試薬等級のベンゼン（８ｍＬ）をシリンジで加えた。トリメチルシリルジアゾメタン（ＴＭＳＣＨＮ２；２．５ｍＬのヘキサン中２Ｍ溶液、５ｍｍｏｌ）を、セプタムを通してシリンジでゆっくりと加えた。ＴＭＳＣＨＮ２を加え終わると、反応物を１０分間撹拌し、溶媒を減圧条件下で除去して赤色油状物を得た。残さをシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中１５％のＥｔＯＡｃ）で精製して、０．３６ｇ（４３％）の６を白色固体として得た。MALDI-FTMS 479.1874 m/z(M+Na)+、C25H32O6SiNaに対する計算値479.1860
【００４３】
１−ヒドロキシ−ジベンゾフラン−４，６−ジカルボン酸ジメチルエステル（７）。
撹拌バーを備えた乾燥１００ｍＬ丸底フラスコに、６（３６３ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）を加え、セプタムで密封し、脱気し、アルゴンを再充填した。無水ＴＨＦ（６．３ｍＬ）およびフッ化テトラ−ブチルアンモニウム（ＴＨＦ中１Ｍ、１．２ｍＬ、１．１９ｍｍｏｌ）をシリンジで反応物に加えた。反応物を１時間、室温で撹拌し、次いで２５０ｍＬの分液漏斗中の３０ｍＬのＨ２Ｏに注いだ。水層をＣＨＣｌ３（４×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を合併し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下に濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中３０％のＥｔＯＡｃ）で精製して、０．２３ｇ（９７％）の７を白色固体として得た。LC-MS m/z 301、C16H12O6 に対する計算値301
【００４４】
１−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−ジベンゾフラン−４，６−ジカルボン酸ジメチルエステル（８）。
Ｓｔｉｌｌｅのトリフレート化方法を使用して８を合成した（Echavarren, A. M.; et al. J. Am. Chem. Soc. 1987, 109, 5478-5486）。フェノール７（１２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を乾燥１０ｍＬ丸底フラスコに加え、次いでこれをセプタムで密封した。溶媒、無水ピリジン（２ｍＬ）をセプタムを通してシリンジで加えた。反応混合物を氷／Ｈ２Ｏバスで０℃に冷却した。反応を開始させるために、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（８１μＬ、１２ｍｍｏｌ）を、セプタムを通してシリンジで加えた。氷バスを外し、反応物を室温に温め、一夜撹拌した。反応混合物を３０ｍＬの氷／Ｈ２Ｏスラリーを含む２５０ｍＬビーカーに加え、１２５ｍＬの分液漏斗に移した。水層をＥｔ２Ｏ（４×４０ｍＬ）で抽出した。有機層を合併し、飽和ＣｕＳＯ４（４×２０ｍＬ）および塩水（２×２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、次いでＥｔ２Ｏを減圧条件下で除去して、淡黄色固体を得た。固体をシリカのフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中３０％ＥｔＯＡｃ）で精製して、１５９ｍｇ（９２％）の８を白色固体として得た。FAB-MS (NBA/Nal) m/z 433.0215 (M+H)+、C17H12F3O8Sに対する計算値433.0205
【００４５】
８と置換アニリンのパラジウム触媒クロスカップリングの代表的方法。
ＢｕｃｈｗａｌｄとＨａｒｔｗｉｇのアニールカップリング法を使用して化合物９〜２３を製造した。炎で乾燥させ、撹拌バーを備え、セプタムで密封した１０ｍｍ×１３ｃｍのホウケイ酸塩試験管に８（１４０ｍｇ、０．３２４ｍｍｏｌ）を加え、パラジウムジベンジリデンアセトン、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（１５ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）、（±）−ビナフ（１５ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（１４７ｍｇ、０．４５６ｍｍｏｌ）、およびアニリン（３２μＬ、０．３５６ｍｍｏｌ）を加えた。全試薬を加え、試験管をアルゴンで１０分間パージした。無水トルエン（２．４ｍＬ）、次いでセプタムを通して加え、反応混合物を１００℃で３６時間、オイルバス中で加熱した。反応混合物をセライト層で濾過し、溶媒を濾液から減圧下で除去した。得られた黒色油状物をシリカのフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中３０％ＥｔＯＡｃ）で精製して、ビアリールアミンを白色固体として得た（０．１２ｇ、６８％）。下記９と同様に、化合物１０〜２３の具体的な合成の詳細および特徴的なデータを支持情報として記載する。
【００４６】
１−フェニルアミノ−ジベンゾフラン−４，６−ジカルボン酸ジメチルエステル（９）。
MALDI-FTMS 375.1094 m/z(M・)+、 C22H17NO5に対する計算値375.1106
【００４７】
フェノール７と置換フェニルボロン酸の銅介在クロスカップリングの代表的な方法により、１−フェノキシジベンゾフラン３９〜４３を得る。
ビアリールエーテルカップリングをＣｈａｎおよびＥｖａｎｓの方法を直接採用した。磁気撹拌バーを備えた２０ｍＬのシンチレーションバイアルにフェノール７（１５０ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）、酢酸銅（ＩＩ）（９１ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、新鮮で活性な４Åモレキュラー・シーブ（〜２５０ｍｇ）、およびフェニルボロン酸（１８０ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を加えた。ジクロロメタン（５ｍＬ）、次いでピリジン（２０１μＬ、２．５ｍｍｏｌ）を加え、着色した懸濁液を得た。懸濁液が部分的に外気に触れるように、フタを極めてゆったりとした。反応物をＴＬＣで追跡した。完了後、シリカゲルを反応混合物に加えて反応混合物を〜６ｇのシリカゲルに吸着させ、次いで溶媒を減圧下で除去した。反応混合物をシリカのクロマトグラフィー（ヘキサン３０％ＥｔＯＡｃ）に付し、ビアリールエーテル３９を白色固体として得た（２９ｍｇ、１５％）。下記３９同様に、化合物４０〜４３の具体的な合成の詳細および特徴的なデータを支持情報として記載する。
【００４８】
１−フェノキシ−ジベンゾフラン−４，６−ジカルボン酸ジメチルエステル（３９）。
MALDI-FTMS 399.0825 m/z(M+Na)+、C22H16O6Na に対する計算値399.0839
【００４９】
トリフレート８と置換フェニルボロン酸のパラジウム触媒クロスカップリングの代表的方法。
炎で乾燥させ、撹拌バーを備え、セプタムで密封した１０ｍｍ×１３ｃｍの試験管に８（１００ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１４ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）、ＬｉＣｌ（２９ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（３００μＬの２Ｍ水溶液）およびトルエン（３ｍＬ）を加えた。フェニルボロン酸（４３ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（０．５ｍＬ）中に溶解させ、そして反応混合物に加えた。トランスエステル化が観察されるため、他の全ての化合物ではこの方法においてＥｔＯＨをＭｅＯＨで置き換える；したがって化合物４９をジエチルエステルとして単離し、そして他の全ての化合物をジメチルエステルとして単離した。試薬を加えた後、試験管をアルゴンでパージし、そして反応混合物を１００℃で１２時間、オイルバス中で加熱した。反応混合物をセライト層で濾過した。濾液から溶媒を減圧下で除去し、そして得られた黒色残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、ビアリール４９を白色固体として得た（５２ｍｇ、６３％）。下記４９と同様に、化合物５０〜５９の具体的な合成の詳細および特徴的なデータを支持情報として記載する。
【００５０】
１−フェニル−ジベンゾフラン−４，６−ジカルボン酸ジエチルエステル（４９）。
MALDI- FTMS 411.1197 m/z (M+Na)+、C24H20O5Na に対する計算値 411.1203
【００５１】
エステル加水分解の代表的な方法により、最終阻害剤２４〜３８、４４〜４８、および６０〜７０を得た。
メチルエステル９（２５ｍｇ、０．０６７ｍｍｏｌ）を、撹拌バーを備えた２０ｍＬのシンチレーションバイアル中のＴＨＦ：ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ（３：１：１、１ｍＬ）中で、鹸化した。ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（２２ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）を懸濁液に加え、そして反応物をＴＬＣまたは分析的逆相ＨＰＬＣ追跡により完了が確認されるまで（典型的には４時間）撹拌した。反応混合物を塩水（２ｍＬ）で希釈し、１ＭのＨＣｌ（ｐＨ紙）でｐＨ２に酸性化し、２相溶液を得た。上層（ＴＨＦ）を除去し、水層をＴＨＦ（３×３ｍＬ）で抽出した。合併した有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、次いで、減圧下で濃縮して、二塩基酸２４を白色固体として得た（２１ｍｇ、９２％）。下記２４と同様に、化合物２５〜３８、４４〜４８および６０〜７０の具体的な合成の詳細および特徴的なデータを支持情報として記載する。
【００５２】
１−フェニルアミノ−ジベンゾフラン−４，６−ジカルボン酸（２４）。
MALDI-FTMS 347.0794 m/z (M・)+、 C20H13NO5に対する計算値347.0788
【００５３】
図１ＡはＴＴＲ・１２のＸ線結晶学的構造を示す（Klabunde, T.; et al. Nature Struct. Biol. 2000, 7, 312-321）。結合部位に並んでいる残渣は棒モデル（酸素を赤、窒素を青、そして炭素を灰色）で、タンパク質のＣｏｎｎｏｌｌｙ表面を灰色で示す。化合物１はそのＣ２対称均等結合モデル（黄および緑）の両方で示されている。結合チャネルは、チロキシンのヨウ素と相互作用するため、３セットの凹部（ハロゲン結合ポケット（ＨＢＰ）と称する）を有する。化合物１は結合ポケットの外側部分のみを占め、ＨＢＰ１および１’の両方を満たす。１のカルボン酸はＫ１５およびＫ１５’のｅ−ＮＨ３＋と近位である。
【００５４】
図１Ｂはチロキシン結合ポケットに位置する１−置換−ジベンゾフラン−４，６−ジカルボン酸のデザインの線図描写を示す。ここで、ＸはＮＨ、Ｏまたは直接Ｃアリール−Ｃアリール結合を示す。ＲはＴＴＲの内側結合孔に当て嵌まるように設計したアリール環の置換基を示す。
【００５５】
図２はｐＨ４．４（７２時間）でのＷＴ−ＴＴＲ（３．６μＭ）アミロイドフィブリル形成（ｆ．ｆ．）に対する濃度依存性酸置換ジベンゾフラン活性を集約した表を示す。値はｆ．ｆ．の程度、したがって阻害剤なしでのＷＴ−ＴＴＲフィブリル形成（１００％とする）に対する阻害効果を示す：完全阻害は０％ｆ．ｆ．に相当する。
【００５６】
図３はＷＴ−ＴＴＲ（３．６μＭ）フィブリル形成（ｐＨ４．４、７２時間）に対するジベンゾフランを基本構造とするアミロイド阻害活性（３．６μＭ）およびヒト血漿中のＴＴＲについての結合化学量を示すチャートである。真ん中の列の％フィブリル形成（ｆ．ｆ．）値は、ｆ．ｆ．の程度、したがって阻害剤非存在下でのＷＴ−ＴＴＲフィブリル形成（１００％とする）に対する阻害効果を示す。完全阻害は０％ｆ．ｆ．に相当する。右の列は、抗体捕捉法を使用して測定された血漿中のＴＴＲと結合している阻害剤の観察された化学量（１０．８ｍＭの用量で、〜２−３×濃度の血漿ＴＴＲ）を示す。
【００５７】
図４は１−ヒドロキシ−ジベンゾフラン−４，６−ジカルボキシレートジメチルエステルおよび対応するトリフレートの合成スキームを示す：ａ）Ｋ３［Ｆｅ（ＣＮ）６］、ＫＯＨ、  Ｈ２Ｏ、ベンゼン；ｂ）ＡｌＣｌ３、トルエン、両工程について３３％；ｃ）ＴＩＰＳＣＩ、ＤＭＡＰ、ＣＨ２Ｃｌ２、７７％；ｄ）ｓｅｃ−ＢｕＬｉ、Ｅｔ２Ｏ、−７８℃、気体のＣＯ２、ＴＭＳＣＨＮ２、４３％；ｅ）ＴＢＡＦ、ＴＨＦ、９７％；ｆ）Ｔｆ２Ｏ、ピリジン、９２％。
【００５８】
図５は１−フェニル−、フェノキシ−およびフェニルアミン−ジベンゾフラン−４，６−ジカルボキシレートジメチルエステルおよび対応するジカルボキシレートの合成スキームを示す：ａ）Ｐｄ２（ＤＢＡ）３、（±）ビナフ、Ｃｓ２ＣＯ３、トルエン１００℃；ｂ）ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ、ＴＨＦ／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（３：１：１）；ｃ）ＣｕＩＩ（ＯＡｃ）２、４ÅのＭＳ、ＣＨ２Ｃｌ２；ｄ）Ｐｄ（ＰＰｈ３）４、ＬｉＣｌ、Ｎａ２ＣＯ３水溶液、トルエン、ＭｅＯＨ、８０℃。
【００５９】
図６はｐＨ４．４（７２時間）でのＷＴ−ＴＴＲ（３．６μＭ）アミロイドフィブリル形成（ｆ．ｆ．）に対するジベンゾフランを基本構造とする阻害剤活性（７．２μＭ）を示すチャートを示す。値はｆ．ｆ．の程度、したがって阻害剤なしでのＷＴ−ＴＴＲフィブリル形成（１００％とする）に対する阻害効果を示す：完全阻害は０％ｆ．ｆ．に相当する。
【００６０】
図７はフィブリル形成阻害効果に対してプロットしたジベンゾフラン血漿ＴＴＲ結合化学量を示す表を示す。わずかに影を付した領域は高い活性と高い選択性の定義（＜４０％フィブリル形成および結合化学量＞１）と対応するが、濃い影を付した領域は優れた化合物（＜３０％フィブリル形成および結合化学量＞１．２５）に対応する。データの点は、３種の異なるリンカー：ＮＨ（▲）、Ｏ（）、および直接Ｃアリール−Ｃアリール結合（●）を示す。ジベンゾフラン−４，６−ジカルボン酸（１）のデータポイント（●）を比較のために示す。
【００６１】
図８は２７（７．２ｍＭ）でプレインキュベートした後、そしてｐＨを４．４に下げ、７２時間（阻害剤なしで最大アミロイド形成となる時間）でのさらなるインキュベーション期間の後、ＴＴＲ（３．６ｍＭ）の沈降速度試験における中心からの距離に対する２８０ｎｍの吸収プロットを示す。速度分析−データの重合わせ（overlay）は５０，０００ｒｐｍで、１５分間隔でとる。データ（記号）はＭＷ５７．１±０．２ｋＤａを有する１個の理想種モデル（実線）と一致する。
【００６２】
図９は２７（７．２ｍＭ）でプレインキュベートした後、そしてｐＨを４．４に下げ、７２時間（阻害剤非存在下に最大アミロイド形成となる時間）でのさらなるインキュベーション期間の後、ＴＴＲ（３．６ｍＭ）の平衡超遠心分離試験における中心からの距離に対する２８０ｎｍの吸収プロットを示す。均衡分析−近郊濃度グラジエントを、使用する試料に１７，０００ｒｐｍの速度で遠心分離を２４時間施した後、観察した。データ（○）はＭＷ５５．０±０．２ｋＤａを有する１個の理想種モデル（実線）と一致する。実験および近似データの残差、差異は、差し込み図に示す。
【００６３】
図１０は阻害剤２５、４７および６４なし（▲）ならびに７．２μＭ（◇）および３．６μＭ（○）における部分的酸変性によって介在されるＷＴ−ＴＴＲ（３．６μＭ）フィブリル形成の、５００ｎｍの濁度によって測定した経時分析のプロットを示す（異なる阻害剤に対するマーク中の色つけ方式参照）。黒および白プロット中で、どの化合物が最も効果があるかを識別することは難しい。プロットの終了時、または１６９時間経過後、化合物４７が、次いで化合物６４が、そして次いで化合物２５が、最大フィブリル形成を示す。
【００６４】
図１１は阻害剤２５、４７および６４なし（▲）ならびに７．２μＭ（◇）および３．６μＭ（○）におけるＷＴ−ＴＴＲ（３．６μＭ）テトラマー解離（６．０Ｍ尿素）の時間経過分析のプロットを示す（異なる阻害剤に対するマーク中の色つけ方式参照）。遅いテトラマー解離は遠ＵＶ  ＣＤ分光法では検出することができないが、この方法をβ−シート用量の喪失により容易に、次いで円２色性スペクトルにより観察されるような速い（〜５００，０００×速い）モノマー変性と関連づける。黒および白プロット中で、どの化合物が最も効果があるかを識別することは難しい。プロットの終了時、または１６９時間経過後、化合物４７が、次いで化合物６４が、そして次いで化合物２５が、テトラマー解離に最も有効である。
【図面の簡単な説明】
【００６５】
【図１Ａ】ＴＴＲ・１２のＸ線結晶学的構造を示す（Klabunde, T.; et al. Nature Struct. Biol. 2000, 7, 312-321）。
【図１Ｂ】チロキシン結合ポケットに位置する１−置換−ジベンゾフラン−４，６−ジカルボン酸のデザインの線図表現を示す。ここで、ＸはＮＨ、Ｏまたは直接Ｃアリール−Ｃアリール結合を示す。ＲはＴＴＲの内側結合孔に当て嵌まるように設計されたアリール環の置換基を示す。
【図２】ｐＨ４．４（７２時間）でのＷＴ−ＴＴＲ（３．６μＭ）アミロイドフィブリル形成（ｆ．ｆ．）に対する濃度依存性酸置換ジベンゾフラン活性を集約した表を示す。
【図３】ＷＴ−ＴＴＲ（３．６μＭ）フィブリル形成（ｐＨ４．４、７２時間）に対するジベンゾフランを基本構造とするアミロイド阻害活性（３．６μＭ）およびヒト血漿中のＴＴＲについての結合化学量を示すチャートである。
【図４】１−ヒドロキシ−ジベンゾフラン−４，６−ジカルボキシレートジメチルエステルおよび対応するトリフレートの合成スキームを示す。
【図５】１−フェニル−、フェノキシ−およびフェニルアミン−ジベンゾフラン−４，６−ジカルボキシレートジメチルエステルおよび対応するジカルボキシレートの合成スキームを示す。
【図６】ｐＨ４．４（７２時間）でのＷＴ−ＴＴＲ（３．６μＭ）アミロイドフィブリル形成（ｆ．ｆ．）に対するジベンゾフランを基本構造とする阻害剤活性（７．２μＭ）を示すチャートを示す。
【図７】フィブリル形成阻害効果に対してプロットしたジベンゾフラン血漿ＴＴＲ結合化学量を示す表を示す。
【図８】２７（７．２μＭ）でプレインキュベートした後、そしてｐＨを４．４に下げ、７２時間（阻害剤非存在下で最大アミロイド形成となる時間）でのさらなるインキュベーション期間の後、ＴＴＲ（３．６μＭ）の沈降速度試験における中心からの距離に対する２８０ｎｍの吸収プロットを示す。
【図９】２７（７．２μＭ）でプレインキュベートした後、そしてｐＨを４．４に下げ、７２時間（阻害剤非存在下で最大アミロイド形成となる時間）でのさらなるインキュベーション期間の後、ＴＴＲ（３．６μＭ）の平衡超遠心分離試験における中心からの距離に対する２８０ｎｍの吸収プロットを示す。
【図１０】阻害剤の非存在下（▲）ならびに阻害剤２５、４７および６４の７．２μＭ（◇）および３．６μＭ（○）での存在下における、部分的酸変性によって介在されるＷＴ−ＴＴＲ（３．６μＭ）フィブリル形成の、５００ｎｍの濁度によって測定した時間経過分析のプロットを示す（各阻害剤を区別するためのマークの陰付け方式参照）。
【図１１】阻害剤の非存在下（▲）ならびに阻害剤２５、４７および６４の７．２μＭ（◇）および３．６μＭ（○）での存在下における、ＷＴ−ＴＴＲ（３．６μＭ）テトラマー解離（６．０Ｍ尿素）の経時過分析のプロットを示す（各阻害剤を区別するためのマークの色つけ方式参照）。
2007538103.tif 000016
【図２】
2007538103.tif 000017
【図３】
2007538103.tif 000018
【図４】
2007538103.tif 000019
【図５】
2007538103.tif 000020
【図６】
2007538103.tif 000021
【図７】
2007538103.tif 000022
【図８】
2007538103.tif 000023
【図９】
2007538103.tif 000024
【図１０】
2007538103.tif 000025
【図１１】
2007538103.tif 000026
【手続補正書】
【提出日】平成17年12月19日(2005.12.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2007538103.tif 000027
〔式中、
Ｘは存在しないかまたは−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択されるジラジカルであり；
Ｒ２およびＲ４は−Ｈ、ＯＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＣＦ３および−ＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択される基であり；そして
Ｒ３およびＲ５は−Ｈ、ＯＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒおよび−ＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択される基である〕
により示される化合物。
【請求項２】
式ＩＩ
【化２】
2007538103.tif 000028
により示される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ２が−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌおよび−ＣＦ３からなる群から選択される基である、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ４が−Ｈ、−Ｃｌおよび−ＣＯ２Ｈからなる群から選択される基である、請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ５が−Ｈ、−Ｆおよび−Ｃｌからなる群から選択される基である、請求項２に記載の化合物。
【請求項６】
下記構造：
【化３】
2007538103.tif 000029
によって示される群から選択される、請求項２に記載の化合物。
【請求項７】
下記構造：
【化４】
2007538103.tif 000030
によって示される、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ５が−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌおよび−Ｂｒからなる群から選択される基である、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
下記構造：
【化５】
2007538103.tif 000031
によって示される群から選択される、請求項７に記載の化合物。
【請求項１０】
下記構造：
【化６】
2007538103.tif 000032
によって示される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ２が−Ｈ、−Ｆおよび−Ｃｌからなる群から選択される基である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ３が−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌおよび−ＣＯ２Ｈからなる群から選択される基である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ４が−Ｈおよび−ＣＯ２Ｈからなる群から選択される基である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ５が−Ｈ、−Ｆおよび−Ｃｌからなる群から選択される基である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１５】
下記構造：
【化７】
2007538103.tif 000033
によって示される群から選択される、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１６】
トランスサイレチンをアミロイドフィブリル形成を阻害するために十分な濃度の請求項１〜１５から選択される化合物と接触させる工程を含む方法。
【国際調査報告】
2007538103.tif 000034