(57)【要約】  本発明は中間体段階で3−ヒドロキシ−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−オン誘導体または3−(2−カルバモイルフェニル)アクリル酸エステル誘導体を使用して式(Ｉ)の(3−オキソ−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル)アセチルグアニジン誘導体を製造する方法、ラセミ体の分割法、さらに本発明の方法の中間体生成物に関する。  【化１】2007516243.tif 000051
2007516243.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2007516243.tif 000038
［式中、R1およびR2はそれぞれ独立して水素、Ｆ、Ｃｌ、トリフルオロメトキシ、2,2,2−トリフルオロメトキシ、トリフルオロメチル、2,2,2−トリフルオロエチル、あるいは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R3はAlk−R4またはトリフルオロメチルであり；
Alkは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R4は水素、トリフルオロメチル、あるいは３、４、５、６または７個の炭素原子を有するシクロアルキルである］の化合物およびそれらの塩の製造法であって、
【化２】
2007516243.tif 000039
ａ）式IVのアミドをホルミル化し、次に環化して式VIの化合物にし、
ｂ）式VIの化合物をアルコキシカルボニルメチレントリフェニルホスホランと、1−アルコキシ−1−トリメチルシロキシエチレンと、またはトリアルキルホスホノアセテートと反応させて式VIIの化合物を得、そして
ｃ）式VIIの化合物をグアニジンと反応させて式Ｉの化合物およびそれらの塩を得る
ことからなり、ここで式IV、VIおよびVIIの化合物においてR1〜R3はそれぞれ式Ｉで定義された通りであり、R5は１、２、３または４個の炭素原子を有するアルコキシである、上記方法。
【請求項２】
R1およびR2はそれぞれ独立して水素、Ｆ、Ｃｌ、トリフルオロメトキシ、2,2,2−トリフルオロエトキシ、トリフルオロメチル、2,2,2−トリフルオロエチル、あるいは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R3はAlk−R4またはトリフルオロメチルであり；
Alkは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R4は水素、トリフルオロメチル、あるいは３、４、５、６または７個の炭素原子を有するシクロアルキルである
請求項１記載の式Ｉの化合物およびそれらの塩の製造法であって、
【化３】
2007516243.tif 000040
ａ）式IIの化合物を式IIIのアミンと反応させて式IVのアミドを得、
ｂ）式IVのアミドをアミド基のオルト位でホルミル化して式Ｖのホルミルアミドを得、
ｃ）式Ｖのホルミルアミドを環化して式VIの化合物にし、
ｄ）式VIの化合物をアルコキシカルボニルメチレントリフェニルホスホランと、1−アルコキシ−1−トリメチルシロキシエチレンと、またはトリアルキルホスホノアセテートと反応させて式VIIの化合物を得、そして
ｅ）式VIIの化合物をグアニジンと反応させて式Ｉの化合物およびそれらの塩を得る
ことからなり、ここで式II、III、IV、Ｖ、VIおよびVIIの化合物においてR1〜R3はそれぞれ式Ｉで定義された通りであり、R5は１、２、３または４個の炭素原子を有するアルコキシであり、そしてＸはCl、Br、OH、あるいは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルコキシである、上記方法。
【請求項３】
工程段階はそれぞれ独立して、連続的にまたはバッチ式で行なわれる請求項１または２記載の方法。
【請求項４】
式Ｉの化合物はN−｛2−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]アセチル｝グアニジンおよび薬学的に許容しうるその塩として定義される請求項１〜３の何れか一項に記載の方法。
【請求項５】
式Ｉ
【化４】
2007516243.tif 000041
［式中、R1およびR2はそれぞれ独立して水素、Ｆ、Ｃｌ、トリフルオロメトキシ、2,2,2−トリフルオロエトキシ、トリフルオロメチル、2,2,2−トリフルオロエチル、あるいは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R3はAlk−R4またはトリフルオロメチルであり；
Alkは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R4は水素、トリフルオロメチル、あるいは３、４、５、６または７個の炭素原子を有するシクロアルキルである］の化合物およびそれらの塩の製造法であって、
【化５】
2007516243.tif 000042
ａ）式IXのアミンをジアゾニウム塩を経てアクリル酸アルキルと反応させて式XIのケイ皮酸誘導体を得、そして
ｂ）式XIの化合物を式IIIのアミンおよびグアニジンと反応させて式Ｉのアシルグアニジンおよびそれらの塩を得る
ことからなり、ここで式III、IXおよびXIの化合物においてR1〜R3はそれぞれ式Ｉで定義された通りであり、R6は１、２、３または４個の炭素原子を有するアルコキシである、上記方法。
【請求項６】
R1およびR2はそれぞれ独立して水素、Ｆ、Ｃｌ、トリフルオロメトキシ、2,2,2−トリフルオロエトキシ、トリフルオロメチル、2,2,2−トリフルオロエチル、あるいは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R3はAlk−R4またはトリフルオロメチルであり；
Alkは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R4は水素、トリフルオロメチル、あるいは３、４、５、６または７個の炭素原子を有するシクロアルキルである、
請求項５記載の式Ｉの化合物およびそれらの塩の製造法であって、
【化６】
2007516243.tif 000043
ａ）式VIIIのニトロ化合物を式IXのアミンに変換し、
ｂ）式IXのアミンを式Ｘのジアゾニウム塩に変換し、
ｃ）式Ｘのジアゾニウム塩をアクリル酸アルキルと反応させて式XIのケイ皮酸誘導体を得、
ｄ）式XIの化合物を式XIIのアミドに変換し、そして
ｅ）式XIIの化合物を塩基の存在下で式XIIIのイソインドロン誘導体に変換し、次に活性化しながらグアニジンと反応させて式Ｉのアシルグアニジンを得ることにより(別法Ａ)、または式XIIの化合物から塩基の存在下で式XIIIのイソインドロン誘導体を生成した後、式XIIIの化合物を式XIVのエステルに変換し、次にグアニジンと反応させて式Ｉのアシルグアニジンを得ることにより(別法Ｂ)、または式XIIの化合物を強塩基の存在下で式XIVのエステルに変換し、次にグアニジンと反応させて式Ｉのアシルグアニジンにすることにより(別法Ｃ)、または式XIIの化合物を塩基の存在下でグアニジンと直接反応させて同時にグアニル化および環化を行なって式Ｉのイソインドロンを得ることにより(別法Ｄ)、式XIIの化合物を式Ｉのアシルグアニジンおよびそれらの塩に変換する
ことからなり、ここで式VIII、IX、Ｘ、XI、XII、XIIIおよびXIVの化合物においてR1〜R3は それぞれ式Ｉで定義された通りであり、R6およびR7はそれぞれ独立して１、２、３または４個の炭素原子を有するアルコキシである、上記方法。
【請求項７】
工程段階ｅ）において別法Ｄが使用される請求項６記載の方法。
【請求項８】
工程段階ｄ）およびｅ）はワンポットプロセスで行なわれる請求項６または７記載の方法。
【請求項９】
工程段階はそれぞれ独立して、連続的にまたはバッチ式で行なわれる請求項５または６記載の方法。
【請求項１０】
式Ｉの化合物はN−｛2−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]アセチル｝グアニジンおよび薬学的に許容しうるその塩として定義される請求項５〜９の何れか一項に記載の方法。
【請求項１１】
式XII
【化７】
2007516243.tif 000044
［式中、R1およびR2はそれぞれ独立して水素、Ｆ、Ｃｌ、トリフルオロメトキシ、2,2,2−トリフルオロエトキシ、トリフルオロメチル、2,2,2−トリフルオロエチル、あるいは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R3はAlk−R4またはトリフルオロメチルであり；
Alkは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R4は水素、トリフルオロメチル、あるいは３、４、５、６または７個の炭素原子を有するシクロアルキルであり；
R6は１、２、３または４個の炭素原子を有するアルコキシである］の化合物およびそれらの塩。
【請求項１２】
合成中間体として使用される請求項１１記載の式XIIの化合物。
【請求項１３】
式IaおよびIb
【化８】
2007516243.tif 000045
［式中、R1およびR2はそれぞれ独立して水素、Ｆ、Ｃｌ、トリフルオロメトキシ、2,2,2−トリフルオロエトキシ、トリフルオロメチル、2,2,2−トリフルオロエチル、あるいは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R3はAlk−R4またはトリフルオロメチルであり；
Alkは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R4は水素、トリフルオロメチル、あるいは３、４、５、６または７個の炭素原子を有するシクロアルキルである］の化合物およびそれらの塩を単離する方法であって、
【化９】
2007516243.tif 000046
ａ）式Ｉの化合物を2,3−O−アシル化Ｄ−またはＬ−酒石酸の塩に変換し、２種の式XVaおよびXVbの塩を結晶化により別々に得、そして
ｂ）２種の式XVaおよびXVbの塩からそれぞれ式IaおよびIbの遊離塩基を放出する
ことからなり、ここで式Ｉ、XVaおよびXVbの化合物においてR1〜R3はそれぞれ式IaおよびIbで定義された通りであり、R*は
【化１０】
2007516243.tif 000047
であり、R8は１、２、３、４、５または６個の炭素原子を有するアルキル、あるいは未置換のまたはＦ、Ｃｌ、Br、I、１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルおよび１、２、３または４個の炭素原子を有するアルコキシからなる群より選択される１、２または３個の置換基により置換されるフェニルである、上記方法。
【請求項１４】
式IaまたはIbの不要なエナンチオマーは再びラセミ化される請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
式IaおよびIbの化合物は(R)−N−｛2−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]アセチル｝グアニジンおよび(S)−N−｛2−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]アセチル｝グアニジンである請求項１３または１４記載の方法。
【請求項１６】
式XVaおよび／またはXVb
【化１１】
2007516243.tif 000048
［式中、R1およびR2はそれぞれ独立して水素、Ｆ、Ｃｌ、トリフルオロメトキシ、2,2,2−トリフルオロエトキシ、トリフルオロメチル、2,2,2−トリフルオロエチル、あるいは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R3はAlk−R4またはトリフルオロメチルであり；
Alkは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R4は水素、トリフルオロメチル、あるいは３、４、５、６または７個の炭素原子を有するシクロアルキルであり；
R*は
【化１２】
2007516243.tif 000049
であり；
R8は１、２、３、４、５または６個の炭素原子を有するアルキル、あるいは未置換のまたはＦ、Ｃｌ、Br、I、１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルおよび１、２、３または４個の炭素原子を有するアルコキシからなる群より選択される１、２または３個の置換基により置換されるフェニルである］の化合物。
【請求項１７】
式XVI
【化１３】
2007516243.tif 000050
の(S)−N−｛2−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]アセチル｝グアニジン水素フマル酸塩水和物。
【請求項１８】
医薬として使用される請求項１６記載の式XVaまたはXVbの化合物、あるいは請求項１７記載の式XVIの化合物。
【請求項１９】
虚血または再潅流イベントにより生じる臓器および組織の急性または慢性の損傷、疾患または間接的な後遺症を治療または予防するための医薬の製造；不整脈、生命を脅かす心臓の心室細動、心筋梗塞、狭心症の治療または予防；心臓の虚血状態、末梢および中枢神経系の虚血状態、卒中、または末梢器官および組織の虚血状態の治療または予防；ショック状態、細胞増殖が主因または副因である疾患、ガン、転移、前立腺肥大および前立腺過形成、アテローム性動脈硬化症または脂質代謝障害、高血圧症、本態性高血圧症、中枢神経系疾患、CNSの過剰興奮から生じる疾患、癲癇または中枢性痙攣、中枢神経系疾患、特に不安神経症、鬱病または精神病の治療または予防；インシュリン非依存型糖尿病(NIDDM)または糖尿病合併症、血栓症、内皮機能障害から生じる疾患、間欠性跛行の治療または予防；内臓の線維症障害、肝臓の線維症障害、腎臓の線維症障害、血管の線維症障害および心臓の線維症障害の治療または予防；心不全または鬱血性心不全、急性または慢性の炎症性疾患、原虫が惹き起こす疾患、マラリアまたは鶏コクシジウム症の治療または予防；外科手術および臓器移植；外科手術用移植組織の貯蔵および保存；バイパス手術での使用；心停止後の蘇生での使用；加齢による組織変化の予防；加齢に対する医薬の製造または寿命の延長；甲状腺中毒症の心臓毒性作用の治療および軽減；または診断補助剤の製造における、単独の、あるいは他の医薬または活性成分と組合せた請求項１６記載の式XVaおよび／またはXVbの化合物、あるいは請求項１７記載の式XVIの化合物の使用。
【請求項２０】
有効量の請求項１６記載の式XVaまたはXVbの化合物を薬学的に許容しうる賦形剤および添加剤と一緒に含有する人間、動物および／または植物保護に使用される薬剤。
【請求項２１】
有効量の請求項１６記載の式XVaまたはXVbの化合物を薬学的に許容しうる賦形剤および添加剤と一緒に含有し、他の薬理学的に活性な成分または医薬と組合せた人間、動物または植物保護に使用される薬剤。
【請求項２２】
有効量の請求項１７記載の式XVIの化合物を薬学的に許容しうる賦形剤および添加剤と一緒に含有する人間、動物および／または植物保護に使用される薬剤。
【請求項２３】
有効量の請求項１７記載の式XVIの化合物を薬学的に許容しうる賦形剤および添加剤と一緒に含有し、他の薬理学的に活性な成分または医薬と組合せた人間、動物または植物保護に使用される薬剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は中間体として3−ヒドロキシ−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−オン誘導体または3−(2−カルバモイルフェニル)アクリル酸エステル誘導体を経て(3−オキソ−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル)アセチルグアニジン誘導体を製造する方法、光学分割法、さらに本発明の方法の中間体に関する。
【背景技術】
【０００２】
式Ｉ
【化１】
2007516243.tif 000003
の(3−オキソ−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル)アセチルグアニジン誘導体はNHE1阻害剤であり、PCT／EP03／05279に開示されている。しかしながら、そこに記載されている合成法は位置異性体のラセミ混合物をもたらし、それは費用のかかる不都合な分離法を伴ない、所望の化合物の収率を低下させる。これまでは、キラルな支持体上で費用のかかる不都合なクロマトグラフィー分離を行なって異性体を得ることができただけである。しかしながら、クロマトグラフィー分離では処理する物質の量が制限される。
【０００３】
したがって、(3−オキソ−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル)アセチルグアニジン誘導体の位置選択的な製造法およびそのエナンチオマーを回収する方法を見い出すことに大きな関心がある。ラセミの(3−オキソ−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル)アセチルグアニジン誘導体の改善された位置選択的な製造法はスキーム１およびスキーム３に示されるような２つの独立した経路により行われる。ラセミ体の分割はスキーム５に示されるように2,3−O−アシル化Ｄ−またはＬ−酒石酸の塩として結晶させることにより行なわれる。何れの場合にも穏やかな塩基が触媒する不要なエナンチオマーのラセミ化はラセミ体の所望のエナンチオマーへの実質的な変換を可能にする。これらの方法はエナンチオマー的に濃縮された、またはエナンチオマー的に純粋な(3−オキソ−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル)アセチルグアニジン誘導体の簡単な製造を可能にする。今般、新規な方法は工業規模での多量の式Ｉの化合物の簡単な製造を可能にする。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
したがって、本発明は式Ｉ
【化２】
2007516243.tif 000004
［式中、R1およびR2はそれぞれ独立して水素、Ｆ、Ｃｌ、トリフルオロメトキシ、2,2,2−トリフルオロメトキシ、トリフルオロメチル、2,2,2−トリフルオロエチル、あるいは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R3はAlk−R4またはトリフルオロメチルであり；
Alkは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R4は水素、トリフルオロメチル、あるいは３、４、５、６または７個の炭素原子を有するシクロアルキルである］の化合物およびそれらの塩の製造法であって、スキーム１
【化３】
2007516243.tif 000005
に示されるように
ａ）式IVのアミドをホルミル化し、次に環化して式VIの化合物にし、
ｂ）式VIの化合物をアルコキシカルボニルメチレントリフェニルホスホラン、1−アルコキシ−1−トリメチルシロキシエチレンまたはトリアルキルホスホノアセテートと反応させて式VIIの化合物を得、そして
ｃ）式VIIの化合物をグアニジンと反応させて式Ｉの化合物およびそれらの塩を得ることからなり、ここで式IV、VIおよびVIIの化合物においてR1〜R3はそれぞれ式Ｉで定義された通りであり、R5は１、２、３または４個の炭素原子を有するアルコキシである前記方法に関する。
【０００５】
本発明はまた、R1およびR2はそれぞれ独立して水素、Ｆ、Ｃｌ、トリフルオロメトキシ、2,2,2−トリフルオロエトキシ、トリフルオロメチル、2,2,2−トリフルオロエチル、あるいは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R3はAlk−R4またはトリフルオロメチルであり；
Alkは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R4は水素、トリフルオロメチル、あるいは３、４、５、６または７個の炭素原子を有するシクロアルキルである式Ｉの化合物およびそれらの塩の製造法であって、スキーム２
【化４】
2007516243.tif 000006
に示されるように
ａ）式IIの化合物を式IIIのアミンと反応させて式IVのアミドを得、
ｂ）式IVのアミドをアミド基のオルト位でホルミル化して式Ｖのホルミルアミドを得、
ｃ）式Ｖのホルミルアミドを環化して式VIの化合物にし、
ｄ）式VIの化合物をアルコキシカルボニルメチレントリフェニルホスホラン、1−アルコキシ−1−トリメチルシロキシエチレンまたはトリアルキルホスホノアセテートと反応させて式VIIの化合物を得、そして
ｅ）式VIIの化合物をグアニジンと反応させて式Ｉの化合物およびそれらの塩を得ることからなり、ここで式II、III、IV、Ｖ、VIおよびVIIの化合物においてR1〜R3はそれぞれ式Ｉで定義された通りであり、R5は１、２、３または４個の炭素原子を有するアルコキシであり、そしてＸはCl、Br、OH、あるいは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルコキシである前記方法に関する。
【０００６】
典型的には、式IIの化合物を−30℃〜溶媒の沸点の温度、好ましくはRTにおいてエーテル、炭化水素またはハロゲン化炭化水素、例えばジクロロメタンのような不活性溶媒中で式IIIのアミンと適当ならば活性化剤の存在下で反応させて式IVのアミドを得る。
【０００７】
オルト−ホルミル化は例えば最初にアルキル−金属化合物、例えばアルキルリチウム化合物、好ましくはt−BuLiを−100℃〜０℃、好ましくは−80℃〜−50℃の温度においてエーテルまたは炭化水素、例えばTHFのような不活性溶媒中に錯体リガンド、好ましくはTMEDAと一緒に導入することにより行なわれる。次に、式IVのアミドを加え、脱プロトン化を−100℃〜０℃、好ましくは−80℃〜−50℃の温度において10分間〜10時間、好ましくは10分間〜60分間行なう。その後、ホルミル化剤、好ましくはDMFを加え、アニオンとの反応を−100℃〜40℃の温度、好ましくは−80℃〜室温で行なった。好ましくは、DMFを10分間〜３時間、例えば30分以内で加えた後、その溶液を放置してRTにする。中間体として生成した式Ｖのアミドは一般に直接環化して式VIのイソインドロンにされる。
【０００８】
式VIのイソインドロンを０℃〜溶媒の沸点、好ましくは20℃〜溶媒の沸点の温度においてエーテル、炭化水素またはハロゲン化炭化水素、例えばトルエンのような不活性溶媒中で(C1−C4)−アルコキシカルボニルメチレントリフェニルホスホランと、あるいは０℃〜溶媒の沸点、好ましくは20℃〜溶媒の沸点の温度においてエーテル、炭化水素またはハロゲン化炭化水素、例えば1,2−ジメトキシエタンのような不活性溶媒中、塩基、例えば水素化ナトリウムの存在下でトリ(C1−C4)−アルキルホスホノアセテートと反応させる。別法として、式VIのイソインドロンを−80℃〜溶媒の沸点、好ましくは−80℃〜20℃の温度においてエーテル、炭化水素またはハロゲン化炭化水素、例えばジクロロメタンのような不活性溶媒中、ルイス酸、例えば塩化チタン(IV)またはトリメチルシリルトリフレートの存在下で1−(C1−C4)−アルキルオキシ−1−トリメチルシロキシエチレンと反応させる(Synth. Commun., 17, 1(1987年))。
【０００９】
式VIIのエステルを慣用の既知方法によりグアニジンと反応させて式Ｉのアシルグアニジンを得ることができる。反応は好ましくは当業者に知られている方法でプロトンまたは非プロトン性の、極性であるが不活性の有機溶媒中で行なわれる。例えば、メチルエステル(式VII；R5＝OCH3)とグアニジンの反応において、有用な溶媒は20℃〜溶媒の沸点の温度でメタノール、イソプロパノールまたはTHFであることがわかっている。式VIIの化合物と無塩グアニジンの反応の殆んどにおいて、反応は例えば非プロトン性の不活性溶媒、例えばTHF、ジメトキシエタンまたはジオキサンのようなエーテル中で行なわれる。しかしながら、式VIIの化合物とグアニジンの反応で溶媒として塩基、例えばNaOHが使用される場合には水を使用することもできる。式VIIの化合物とグアニジンの塩、例えばグアニジン塩酸塩の反応において、反応は典型的には20℃〜溶媒の沸点の温度においてジメチルホルムアミド、NMP、2−プロパノールのような不活性溶媒中、塩基、例えばカリウムｔ−ブトキシド、ナトリウムメトキシドまたはナトリウムエトキシドの存在下で行なわれる。
【００１０】
グアニジンとの反応では式VIIのカルボン酸エステルの他に、さらに活性化酸誘導体、例えば塩化カルボニル、カルボン酸チオエステルまたは無水カルボン酸を使用することもできる。例えばDCCでカルボン酸を活性化することもできる。活性化酸誘導体は当業者に知られている方法で直接式VIIの親カルボン酸エステルから、または慣用の加水分解法によりエステルから得られる相当するカルボン酸から製造することができる。一連の適当な活性化カルボン酸誘導体の製造法はJ. Marchの「Advanced Organic Chemistry」, 第3版(John Wiley & Sons, 第350頁(1985年))に典拠文献を引用して記載されている。
【００１１】
スキーム１および２に示した工程段階はそれぞれ独立して連続的に、またはバッチ式で行なうことができる。反応混合物の後処理は何れかの工程段階で行なうことができる。生成物の後処理および必要ならば精製は抽出、pH分離、クロマトグラフィーまたは結晶化のような慣用の方法および慣用の乾燥により行なわれる。
【００１２】
式IIおよびIIIの出発化合物は商業的に入手できるか、または文献に記載の方法や当業者に知られている方法に従って、またはそれらと同様にして製造することができる。
【００１３】
式Ｉ
【化５】
2007516243.tif 000007
［式中、R1およびR2はそれぞれ独立して水素、Ｆ、Ｃｌ、トリフルオロメトキシ、2,2,2−トリフルオロエトキシ、トリフルオロメチル、2,2,2−トリフルオロエチル、あるいは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R3はAlk−R4またはトリフルオロメチルであり；
Alkは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R4は水素、トリフルオロメチル、あるいは３、４、５、６または７個の炭素原子を有するシクロアルキルである］の化合物およびそれらの塩の製造法であって、スキーム３
【化６】
2007516243.tif 000008
に示されるように
ａ）式IXのアミンをジアゾニウム塩を経てアクリル酸アルキルと反応させて式XIのケイ皮酸誘導体を得、そして
ｂ）式XIの化合物を式IIIのアミンおよびグアニジンと反応させて式Ｉのアシルグアニジンおよびそれらの塩を得ることからなり、ここで式III、IXおよびXIの化合物においてR1〜R3はそれぞれ式Ｉで定義された通りであり、R6は１、２、３または４個の炭素原子を有するアルコキシである前記方法もまた特許請求される。
【００１４】
本発明はまた、式Ｉ
【化７】
2007516243.tif 000009
［式中、R1およびR2はそれぞれ独立して水素、Ｆ、Ｃｌ、トリフルオロメトキシ、2,2,2−トリフルオロエトキシ、トリフルオロメチル、2,2,2−トリフルオロエチル、あるいは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R3はAlk−R4またはトリフルオロメチルであり；
Alkは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R4は水素、トリフルオロメチル、あるいは３、４、５、６または７個の炭素原子を有するシクロアルキルである］の化合物およびそれらの塩の製造法であって、スキーム４
【化８】
2007516243.tif 000010
に示されるように
【００１５】
ａ）式VIIIのニトロ化合物を式IXのアミンに変換し、
ｂ）式IXのアミンを式Ｘのジアゾニウム塩に変換し、
ｃ）式Ｘのジアゾニウム塩をアクリル酸アルキルと反応させて式XIのケイ皮酸誘導体を得、
ｄ）式XIの化合物を式XIIのアミドに変換し、そして
ｅ）式XIIの化合物を塩基の存在下で式XIIIのイソインドロン誘導体に変換し、次に活性化しながらグアニジンと反応させて式Ｉのアシルグアニジンを得ることにより(別法Ａ)、または式XIIの化合物から塩基の存在下で式XIIIのイソインドロン誘導体を生成した後、式XIIIの化合物を式XIVのエステルに変換し、次にグアニジンと反応させて式Ｉのアシルグアニジンを得ることにより(別法Ｂ)、または式XIIの化合物を強塩基の存在下で式XIVのエステルに変換し、次にグアニジンと反応させて式Ｉのアシルグアニジンにすることにより(別法Ｃ)、または式XIIの化合物を塩基の存在下でグアニジンと直接反応させて同時にグアニル化および環化を行なって式Ｉのイソインドロンを得ることにより(別法Ｄ)、式XIIの化合物を式Ｉのアシルグアニジンおよびそれらの塩に変換することからなり、ここで式VIII、IX、Ｘ、XI、XII、XIIIおよびXIVの化合物においてR1〜R3は それぞれ式Ｉで定義された通りであり、R6およびR7はそれぞれ独立して１、２、３または４個の炭素原子を有するアルコキシである前記方法に関する。
【００１６】
式VIIIのニトロ化合物は(例えば“Houben−Weyl, Methoden der organischen Chemie",
第XI／1巻, Nitrogen compounds II, Georg Thieme Verlag Stuttgart, 第360頁以降(1957年)に記載の)既知方法により還元して式IXのアニリンにすることができる。好ましくは、１バール〜200バールの圧力、好ましくは１バール〜10バールの圧力の水素雰囲気下で溶媒、例えばアルコール、好ましくはエタノール中、例えばPd／C、例えば５％Pd／Cまたは10％Pd／Cを使用して接触水素化が行なわれる。
【００１７】
次に、式IXのアニリンのジアゾ化は−30℃〜溶媒の沸点の温度、好ましくは０℃〜30℃において不活性溶媒、好ましくはエタノール中、そのアニオンがジアゾニウムイオンそれ自体を置換しない酸、例えばHBF4またはHPF6、好ましくはHBF4、あるいは例えばH2SO4の存在下、また亜硝酸塩、好ましくはNaNO2の存在下で行なわれる。好ましくは、式Ｘのジアゾニウム塩を０℃〜溶媒の沸点の温度、好ましくは45℃〜55℃においてパラジウム触媒、Pd(OAc)2の存在下でアクリル酸(C1−C4)−アルキル、好ましくはアクリル酸エチルと直接反応させて式XIのケイ皮酸誘導体を得る。
【００１８】
式XIの化合物の安息香酸官能基は当業者に知られている方法により、好ましくは酸塩化物を経て、またはDCCを使用して式XIIのアミドに変換することができる。この反応は式XIIのアミドを反応混合物中で直接環化して式XIVのエステルにすることにより行なうこともできる；すなわち式XIVのエステルを得るための式XIの化合物の反応は一段階で行なわれる。これはアミド生成の塩基性反応条件下で行なうことができ、または環化は塩基、例えばトリエチルアミン、Huenig塩基またはカリウムt−ブトキシドを加えることにより行なうことができる。別法として、同じ反応容器で連続的にアミド生成、環化およびグアニジン化を行なうことにより式XIの化合物を式Ｉの化合物に直接変換することができ、その場合に反応は中間体を単離することなく行なうことができる。
【００１９】
式XIIの化合物を式Ｉのアシルグアニジンに変換する方法には他に４つある：
別法Ａ：式XIIのアミドの変換は−30℃〜溶媒の沸点の温度、好ましくは室温においてアルコールのような溶媒、好ましくはメタノールまたはエタノール中、好ましくはアルカリ水溶液、好ましくはNaOH水溶液を使用して行なわれる。エステル官能基の加水分解および式XIIIのイソインドロン誘導体への環化が共に起こる。式XIIIの化合物を一般に知られている方法により（またスキーム１に記載のようにして）、例えば酸塩化物を使用して、またはDCCで活性化し、アシル化して式Ｉのアシルグアニジンを得る。
別法Ｂ：別法Ａのようにして式XIIIのカルボン酸を合成する。次に、好ましくはメタノールまたはエタノールのようなアルコール中でSOCl2を使用する、エステル製造の一般法を使用して例えば式XIVのメチルまたはエチルエステルを製造する。その後、式XIVのエステルをスキーム1に記載のようにして式Ｉのアシルグアニジンに変換する。
別法Ｃ：式XIIのアミドの変換はメタノールまたはエタノールのようなアルコール中における強塩基、好ましくはメトキシドまたはt−ブトキシドの溶液中で行なわれ、式XIVのメチルまたはエチルエステルが得られる。スキーム１に記載のようにして式XIVのエステルを式Ｉのアシルグアニジンに変換する。
別法Ｄ：式XIIのアミドはグアニジンのアシル化で慣用の条件下で変換される。使用される溶媒はエーテル、炭化水素またはハロゲン化炭化水素のような不活性溶媒、好ましくはDMFである。典型的には、グアニジニウム塩は最初に遊離グアニジンを放出する強塩基、好ましくはKOtBuと反応させる。混合物をアルコール、エーテル、炭化水素またはハロゲン化炭化水素のような溶媒、例えばDMF、NMPまたは2−プロパノール中における式XIIの化合物の溶液に加える。添加の間に、グアニジン化および式Ｉのイソインドロンへの環化は同時に起こる。別の態様では、時間内に連続して溶媒、例えばDMF、NMPまたは2−プロパノール中で触媒量の強塩基、例えばカリウムｔ−ブトキシド、ナトリウムメトキシドまたはナトリウムエトキシドを使用して式XIの化合物を環化して式XIVの化合物にし、その場で式Ｉの化合物に変換する。
【００２０】
好ましくは、式Ｉのアシルグアニジンを得るための式XIの安息香酸誘導体の変換がワンポットプロセスで行なわれる別法Ｄである。
【００２１】
スキーム２に示した工程段階は連続的に、またはバッチ式で行なうことができる。反応混合物の後処理は何れかの工程段階の後で行なうことができる。生成物の後処理および必要ならば精製は抽出、pH分離、クロマトグラフィーまたは結晶化のような慣用の方法および慣用の乾燥により行なわれる。
【００２２】
式IIIおよびVIIIの出発化合物は商業的に入手できるか、または文献に記載の方法や当業者に知られている方法に従って、またはそれらと同様にして製造することができる。
【００２３】
本発明はまた、式XII
【化９】
2007516243.tif 000011
［式中、R1およびR2はそれぞれ独立して水素、Ｆ、Ｃｌ、トリフルオロメトキシ、2,2,2−トリフルオロエトキシ、トリフルオロメチル、2,2,2−トリフルオロエチル、あるいは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R3はAlk−R4またはトリフルオロメチルであり；
Alkは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R4は水素、トリフルオロメチル、あるいは３、４、５、６または７個の炭素原子を有するシクロアルキルであり；
R6は１、２、３または４個の炭素原子を有するアルコキシである］の化合物およびそれらの塩に関する。
【００２４】
式XIIの化合物の合成中間体としての使用もまた特許請求される。
【００２５】
エナンチオマー的に富化された、またはエナンチオマー的に純粋な形態の式Ｉの化合物は同様に本発明の内容の一部を構成する新規な光学分割法により有利に製造することができる。このために、式Ｉの化合物のラセミ体は2,3−O−アシル化Ｄ−またはＬ−酒石酸の塩として結晶化され、その過程でエナンチオマーが結晶または母液中で濃縮される。その後、遊離塩基は塩から再び放出される。
【００２６】
したがって、本発明はまた、式IaおよびIb
【化１０】
2007516243.tif 000012
［式中、R1およびR2はそれぞれ独立して水素、Ｆ、Ｃｌ、トリフルオロメトキシ、2,2,2−トリフルオロエトキシ、トリフルオロメチル、2,2,2−トリフルオロエチル、あるいは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R3はAlk−R4またはトリフルオロメチルであり；
Alkは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R4は水素、トリフルオロメチル、あるいは３、４、５、６または７個の炭素原子を有するシクロアルキルである］の化合物およびそれらの塩を単離する方法であって、スキーム５
【化１１】
2007516243.tif 000013
に示されるように
ａ）式Ｉの化合物を2,3−O−アシル化Ｄ−またはＬ−酒石酸の塩に変換し、２種の式XVaおよびXVbの塩を結晶化により別々に得、そして
ｂ）２種の式XVaおよびXVbの塩からそれぞれ式IaおよびIbの遊離塩基を放出することからなり、ここで式Ｉ、XVaおよびXVbの化合物においてR1〜R3はそれぞれ式IaおよびIbで定義された通りであり、
【００２７】
R*は
【化１２】
2007516243.tif 000014
であり、R8は１、２、３、４、５または６個の炭素原子を有するアルキル、あるいは未置換のまたはＦ、Ｃｌ、Br、I、１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルおよび１、２、３または４個の炭素原子を有するアルコキシからなる群より選択される１、２または３個の置換基により置換されるフェニルである前記方法に関する。
【００２８】
式IaまたはIbの不要なエナンチオマーは再びラセミ化される上記方法もまた特許請求される。
【００２９】
式Ｉの化合物のラセミ体は−10℃〜溶媒の沸点の温度、好ましくは０℃〜40℃において適当な溶媒、例えばジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジメトキシエタン、テトラヒドロフランまたはジオキサンのようなエーテル；ジクロロメタン、トリクロロメタン、テトラクロロメタン、1,2−ジクロロメタンまたはトリクロロエチレンのようなハロゲン化炭化水素；メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、2−プロパノール、ブタノールのようなアルコール；酢酸エチルまたは酢酸ブチルのようなエステル；水；あるいは溶媒、好ましくは2−プロパノール、ジメトキシエタンまたは酢酸エチルの混合物中で酒石酸誘導体R*、例えばO,O'−ジベンゾイル−D−酒石酸、O,O'−ジベンゾイル−L−酒石酸、O,O'−ジ(4−メチルベンゾイル)−L−酒石酸、O,O'−ジ(4−メチルベンゾイル)−D−酒石酸、O,O'−ジ(4−メトキシベンゾイル)−L−酒石酸またはO,O'−ジ(4−メトキシベンゾイル)−D−酒石酸、好ましくはO,O'−ジベンゾイル−L−酒石酸またはO,O'−ジベンゾイル−D−酒石酸を使用して結晶化される。別法として、異なるアシル基を有する同じ配置の２種またはそれ以上の2,3−O−アシル化Ｄ−またはＬ−酒石酸の混合物を使用して分離される。
【００３０】
式Ｉの化合物および酒石酸誘導体R*からの塩形成は式Ｉの化合物１モルあたり使用可能な２個のカルボン酸基を含有する当量、すなわち0.5モルの酒石酸誘導体R*を使用して行なうことができる。しかしながら、式Ｉの化合物は0.5モル当量未満の2,3−O−アシル化Ｄ−またはＬ−酒石酸、例えば式Ｉの化合物１モルあたり0.25モル〜0.5モルの酒石酸誘導体R*、特に式Ｉの化合物１モルあたり0.25モル〜0.3モルの酒石酸誘導体R*を使用して結晶させることもできる。所望のエナンチオマーは式XVaまたはXVbの塩形態で結晶化し、大部分の不必要なエナンチオマーは式XVaまたはXVbの塩形態ではなく式IbまたはIaのエナンチオマー形態で母液中に存在する。式XVaおよびXVbの塩のエナンチオマー純度は繰り返し結晶させることにより、または最初の結晶を高温で新しい溶媒と共に撹拌し、次に冷却することにより増大させることができる。
【００３１】
次に、式XVaおよびXVbの２種の塩の分離と不必要なエナンチオマーIbまたはIaからの式XVaまたはXVbの塩の分離の後、エナンチオマー的に富化された式IaおよびIbの化合物は典型的には補助塩基、例えばトリエチルアミンのようなアミン、無機塩基、例えばNaHCO3、Na2CO3またはその水溶液を加えることにより塩から放出される。通常は−10℃〜溶媒の沸点の温度、好ましくは０℃〜40℃において適当な溶媒、例えばジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジメトキシエタン、テトラヒドロフランまたはジオキサンのようなエーテル；ジクロロメタン、トリクロロメタン、テトラクロロメタン、1,2−ジクロロメタンまたはトリクロロエチレンのようなハロゲン化炭化水素；メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、2−プロパノールまたはブタノールのようなアルコール；酢酸エチルまたは酢酸ブチルのようなエステル；あるいは水または溶媒混合物、好ましくは酢酸エチル、2−プロパノール、ジクロロメタンまたは水、またはこれらの混合物中で行なわれ、その場合、反応混合物は１つまたはそれ以上の相を有する。これは例えば塩をNaHCO3水溶液中に溶解し、次に有機溶媒、例えば酢酸エチルを使用して式IaまたはIbのエナンチオマーを抽出するように行なうことができる。
【００３２】
不必要なエナンチオマーIaまたはIbはそれぞれラセミ化法により元の式Ｉのラセミ体に変換することができ、したがって他の光学分割工程に使用可能である。この場合、不必要なエナンチオマーは好ましくは−10℃〜溶媒の沸点の温度、好ましくは０℃〜40℃においてアルコール、例えば2−プロパノールのような溶媒中、少量の塩基、例えばKOHで処理し、反応混合物を中和し、水性抽出により後処理してラセミ体を単離する。この工程はほぼ独占的にラセミ化が起こり、物質の化学的変化が起こらないように塩基の量および反応温度を適当に選択して行なわれる。
【００３３】
本発明はまた、式XVaおよびXVb
【化１３】
2007516243.tif 000015
［式中、R1およびR2はそれぞれ独立して水素、Ｆ、Ｃｌ、トリフルオロメトキシ、2,2,2−トリフルオロエトキシ、トリフルオロメチル、2,2,2−トリフルオロエチル、あるいは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R3はAlk−R4またはトリフルオロメチルであり；
Alkは１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
R4は水素、トリフルオロメチル、あるいは３、４、５、６または７個の炭素原子を有するシクロアルキルであり；
【００３４】
R*は
【化１４】
2007516243.tif 000016
であり；
R8は１、２、３、４、５または６個の炭素原子を有するアルキル、あるいは未置換のまたはＦ、Ｃｌ、Br、I、１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルおよび１、２、３または４個の炭素原子を有するアルコキシからなる群より選択される１、２または３個の置換基により置換されるフェニルである］の化合物に関する。
【００３５】
上記化合物、例えば式Ｉ、Ia、Ib、VII、XIII、XIV、XVaまたはXVbの化合物が１個またはそれ以上の不斉中心を含有する場合、特に断りがなければこれらはそれぞれ独立してＳまたはＲ配置を有する。本化合物はより正確に定義されていなければ光学異性体、ジアステレオマー、ラセミ体またはこれらの混合物の形態で存在する。特に断りがなければ、二重結合ではＥまたはＺ配置が存在する。本発明は上記化合物、例えば式Ｉ、Ia、Ib、XVaおよびXVbの化合物のすべての互変異性体を包含する。
【００３６】
アルキル基は直鎖状または分枝状である。これはそれらが置換基を有する、または他の基の置換基として存在する場合、例えばフルオロアルキル基またはアルコキシ基にもあてはまる。アルキル基の例はメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル(＝1−メチルエチル)、ｎ−ブチル、イソブチル(＝2−メチルプロピル)、sec−ブチル(＝1−メチルプロピル)、ｔ−ブチル(＝1,1−ジメチルエチル)、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ｔ−ペンチル、ネオペンチルおよびヘキシルである。好ましいアルキル基はメチル、エチル、ｎ−プロピルおよびイソプロピル、より好ましくはメチルまたはエチルである。アルキル基の１個またはそれ以上、例えば１、２、３、４または５個の水素原子はフッ素原子により置換されてもよい。このようなフルオロアルキル基の例はトリフルオロメチル、2,2,2−トリフルオロエチルおよびペンタフルオロエチル、好ましくはトリフルオロメチルまたは2,2,2−トリフルオロエチルである。置換アルキル基はどの位置で置換されてもよい。
【００３７】
シクロアルキル基の例はシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルまたはシクロヘプチルである。
【００３８】
フェニル基は未置換であるか、あるいは同一または異なる基により一置換または多置換、例えば一置換、二置換または多置換される。フェニル基が置換される場合、それは好ましくは１個または２個の同一または異なる置換基を有する。一置換フェニル基の置換基は２位、３位または４位に存在する。二置換フェニルは2,3−位、2,4−位、2,5−位、2,6−位、3,4−位または3,5−位で置換される。三置換フェニル基の置換基は2,3,4−位、2,3,5−位、2,4,5−位、2,4,6−位、2,3,6−位または3,4,5−位に存在する。
【００３９】
本発明の方法において上記化合物、例えば式Ｉ、IaおよびIbの化合物はそれらの塩形態で使用し、そして／またはそれらの塩形態で単離することができる。塩は慣用の方法により、例えば溶媒中で酸または塩基と反応させることにより、あるいは他の塩からアニオン交換またはカチオン交換により得られる。例えば式Ｉ、IaおよびIbの化合物の有用な酸付加塩は例えばハロゲン化物、特に塩酸塩、臭化水素酸塩、乳酸塩、硫酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、酢酸塩、リン酸塩、メチルスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、アジピン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリセロールリン酸塩、マレイン酸塩、安息香酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩およびトリフルオロ酢酸塩である。活性成分を製造する場合、好ましくは生理学的に許容される塩および薬学的に許容しうる塩である。例えば式Ｉ、IaおよびIbの化合物とフマル酸の塩、特に式Ｉ、IaまたはIbの化合物１モルあたり１モルのフマル酸を含有する塩、すなわち水素フマル酸塩または半フマル酸塩である。結晶化度、安定性、特に低い吸湿性、低いラセミ化傾向および良好な溶解度のような有利な特性はとりわけ例えば同様にすべての互変異性体として本発明の化合物の内容の一部を構成する式XVI
【化１５】
2007516243.tif 000017
の(S)−N−｛2−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]アセチル｝グアニジン水素フマル酸塩水和物の特徴である。
【００４０】
本化合物が酸性基を含有する場合、これらは塩基との塩、例えばアルカリ金属塩、好ましくはナトリウム塩またはカリウム塩、あるいはアンモニウム塩、例えばアンモニア、有機アミンまたはアミノ酸との塩を形成することができる。塩基性基および酸性基を含有する化合物は両性イオンの形態で存在することもできる。
【００４１】
本発明の一態様はR1およびR2が共に水素ではない化合物、特にR1が水素であり、R2がフッ素、塩素またはトリフルオロメチル、とりわけトリフルオロメチルである化合物に関する。R1が水素である化合物において、R2置換基は好ましくはイソインドロン系のＣ＝Ｏ基に関してベンゼン環のパラ−位に存在する。
【００４２】
Alk基は好ましくは１、２または３個の炭素原子を有する、特に１または２個の炭素原子を有する、とりわけ1個の炭素原子を有するアルキルである。R4は好ましくはトリフルオロメチル、あるいは３、５または６個の炭素原子、特に３個の炭素原子を有するシクロアルキル、より好ましくはトリフルオロメチルである。本発明の一態様はR3がトリフルオロメチルまたは2,2,2−トリフルオロエチル、特に2,2,2−トリフルオロエチルである化合物に関する。
【００４３】
本発明の特定の態様はN−｛2−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]アセチル｝グアニジン、そのエナンチオマーおよびそれらの塩の製造に関する。
【００４４】
Ｘは好ましくは塩素またはメトキシ、特に塩素である。R5は好ましくはメトキシまたはエトキシ、特にエトキシである。R6は好ましくはメトキシまたはエトキシ、特にエトキシである。R7は好ましくはメトキシまたはエトキシ、特にエトキシである。
【００４５】
本発明の一態様において、R8は未置換のまたはＦ、Ｃｌ、１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルおよび１、２、３または４個の炭素原子を有するアルコキシからなる群より選択される１、２または３個の置換基により置換されるフェニルである、特に未置換フェニル である。
【００４６】
式Ｉ、Ia、Ib、XVaおよびXVbの化合物、並びにそれらの薬学的に許容される塩は置換されたアシルグアニジンであり、細胞のナトリウム−プロトン対向輸送体(Na+／H+交換輸送体、NHE)、特にNHE−１サブタイプを阻害する。
【００４７】
NHE−阻害特性を有するため、式Ｉ、Ia、Ib、XVa、XVbおよびXVIの化合物、並びに／またはそれらの薬学的に許容しうる塩はNHEの活性化または活性化したNHEにより引き起こされる疾患、さらにNHEが関与する損傷により二次的に引き起こされる疾患の予防および治療に適している。
【００４８】
式Ｉ、Ia、Ib、XVaおよびXVbの化合物は例えば少ない投与量を使用することによりNHEが部分的にだけ阻害される疾患の治療および予防に使用することもできる。
【００４９】
NHE阻害剤は主に細胞のpH調整に対して作用するため、一般に細胞内のpHを調整する他の化合物と有利に組合せることができる。有用な組合せの相手は炭酸脱水酵素グループの阻害剤、重炭酸イオンを輸送する系、例えば重炭酸ナトリウム共輸送体(NBC)またはナトリウム依存性塩素−重炭酸交換体(NCBE)の阻害剤、さらに他のNHEサブタイプに対する阻害効果を有するNHE阻害剤であり、これらを通して本明細書で開示したNHE阻害剤の薬理学的に関連したpHを調整する効果を高める、または調節することができる。
【００５０】
式Ｉ、Ia、Ib、XVa、XVbまたはXVIの化合物の使用は獣医学および人間医学における急性および慢性の疾患の予防および治療に関する。例えば、本発明のNHE阻害剤は虚血および再潅流により引き起こされる疾患の治療に適している。
【００５１】
本明細書で開示した化合物はそれらの薬理学的特性のため抗不整脈薬として適している。それらの心臓保護成分のため、NHE阻害剤は梗塞の予防および治療、さらに狭心症の治療に著しく適しており、その場合は虚血により誘発される損傷の発生、特に虚血により誘発される心不整脈の引き金と関係がある病態生理学的過程を予防的に阻害し、または大きく軽減する。病的な低酸素および虚血状態に対する保護作用のため、本発明で使用される式Ｉ、Ia、Ib、XVa、XVbおよびXVIの化合物、並びに／またはそれらの薬学的に許容しうる塩は細胞のＮa+／Ｈ+交換機構を阻害することにより全ての急性または慢性の虚血により誘発される損傷、あるいはそれにより一次的または二次的に誘発される疾患を治療するための薬剤として使用することができる。
【００５２】
これはまた、外科的介入における薬剤としての使用に関する。したがって、本化合物は臓器移植で使用することができ、その場合は本化合物をドナーからの摘出前および摘出時における臓器の保護、また例えば生理的浴液中でのその処置または保存時、さらにレシピエントの生体への移植時における摘出した臓器の保護のために使用することができる。
【００５３】
同様に、本発明の化合物は例えば心臓、さらに末梢器官および血管において血管形成外科手術を行なう場合に保護作用を示す有用な薬剤である。
【００５４】
本発明の化合物はバイパス手術、例えば冠状血管のバイパス手術および冠動脈バイパス手術(CABG)を行なう場合に使用することもできる。
【００５５】
それらの虚血により誘発される損傷に対する作用に応じて、本発明の式Ｉの化合物はさらに心停止後の蘇生に使用することができる。
【００５６】
本発明の化合物は生命を脅かす不整脈の薬剤として非常に重要である。心室細動が停止され、心臓の生理的洞調律が戻る。
【００５７】
ヒトの組織および臓器、特に心臓のNHE1阻害剤は虚血および再潅流により引き起こされる損傷に対してだけでなく、特にガン治療および自己免疫疾患の治療で使用されるもののような薬剤の細胞毒性作用に対しても有効に保護するため、NHE阻害剤と組合せた投与は前記化合物の細胞毒性、特に心臓毒性の副作用を抑制するのに適している。NHE1阻害剤と共に投薬することによる細胞毒性作用、特に心臓毒性の低下はさらに細胞毒性の治療剤の投与量を増加させることができ、そして／またはこのような薬剤の投薬を延長することができる。このような細胞毒性治療の治療上の利点はNHE阻害剤と併用することにより大幅に増加させることができる。
【００５８】
さらに、NHE1阻害剤は心臓に損傷を与える甲状腺ホルモンの産生過剰、甲状腺中毒症、または甲状腺ホルモンの外部供給がある場合に使用することができる。したがって、式Ｉ、Ia、Ib、XVa、XVbおよびXVIの化合物、並びに／またはそれらの薬学的に許容しうる塩は心臓毒性の薬剤による治療を改善するのに適している。
【００５９】
虚血により誘発される損傷に対するこれらの保護作用を踏まえて、本発明の化合物は神経系、特に中枢神経系の虚血を治療するための薬剤としても適しており、例えば卒中または脳浮腫の治療に適している。
【００６０】
NHE阻害剤はまた、中枢神経系の過剰興奮により誘発される疾患および障害の治療および予防、特に癲癇性障害、中枢神経により誘発される間代性および緊張性痙攣、精神的な鬱状態、不安症および精神病の治療に適している。これらの症例において、本明細書で開示したNHE阻害剤を単独で、あるいは抗癲癇活性を有する他の物質、抗精神病性の活性成分、または炭酸脱水酵素阻害剤、例えばアセタゾラミド、および他のNHE阻害剤またはナトリウム依存性塩素−重炭酸交換体(NCBE)の阻害剤と組合せて使用することができる。
【００６１】
さらに、NHE阻害剤は例えばアレルギー性ショック、心臓性ショック、血液量減少性ショックおよび細菌性ショックのようなタイプのショックを治療するのにも適している。
【００６２】
式Ｉ、Ia、Ib、XVa、XVbおよびXVIの化合物、並びに／またはそれらの薬学的に許容しうる塩はNHE阻害剤として血小板凝集を阻害することができるため、血栓性疾患の予防および治療にも使用することができる。さらに、これらは虚血および再潅流後に生じる炎症および凝固の媒介物質、特にフォン・ビルブラント因子および血栓形成性セレクチンタンパク質の過剰放出を阻害または予防することができる。すなわち、有意な血栓形成因子の病原作用を軽減および排除することができる。したがって、本発明のNHE阻害剤は他の抗凝血剤および／または血栓溶解活性成分、例えば遺伝子組み換え型または天然型組織プラスミノーゲン活性化因子、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、アセチルサリチル酸、トロンビンアンタゴニスト、Xa因子アンタゴニスト、線維素溶解活性を有する薬物、トロンボキサン受容体アンタゴニスト、ホスホジエステラーゼ阻害剤、VIIa因子アンタゴニスト、クロピドグレル、チクロピジンなどと組合せることができる。本発明のNHE阻害剤をNCBE阻害剤および／または炭酸脱水酵素阻害剤、例えばアセタゾラミドと組合せた使用が特に有益である。
【００６３】
さらに、NHE阻害剤は細胞の増殖、例えば線維芽細胞の増殖および血管平滑筋細胞の増殖に対する強い阻害作用により特徴づけられる。したがって、式Ｉ、Ia、Ib、XVa、XVbおよびXVIの化合物、並びに／またはそれらの薬学的に許容しうる塩は細胞増殖が一次的または二次的な原因である疾患の有用な治療剤として適しており、そのため抗アテローム性動脈硬化症剤、慢性の腎不全、ガンの治療剤として使用することができる。
【００６４】
細胞移動がNHE阻害剤により阻害されることを証明できた。したがって、式Ｉ、Ia、Ib、XVa、XVbおよびXVIの化合物、並びに／またはそれらの薬学的に許容しうる塩は細胞移動が一次的または二次的な原因である疾患、例えば顕著な転移傾向を示すガンの有用な治療剤として適している。
【００６５】
NHE阻害剤はさらに線維症の遅延または予防により特徴づけられる。すなわち、これらは心臓線維症、肺線維症、肝線維症、腎線維症および他の線維症を治療するための優れた薬剤として適している。さらに、これらは心臓および前立腺のような臓器の肥大および過形成を治療するのに使用することができる。したがって、これらは心不全(鬱血性心不全＝CHF)の予防および治療、並びに前立腺肥大または前立腺過形成の予防および治療に適している。
【００６６】
本態性高血圧症では有意なNHEの上昇があるため、式Ｉ、Ia、Ib、XVa、XVbおよびXVIの化合物、並びに／またはそれらの薬学的に許容しうる塩は高血圧の予防および治療、並びに心臓血管疾患の治療に適している。これらの症例において、これらは単独で、または高血圧および心臓血管疾患の治療に適した組合せの配合相手と一緒に使用することができる。例えば、チアジド様作用を有する１種またはそれ以上の利尿剤、ループ利尿剤、アルドステロンおよび疑似アルドステロン拮抗薬、例えばヒドロクロロチアジド、インダパミド、ポリチアジド、フロセミド、ピレタニド、トラセミド、ブメタニド、アミロリド、トリアムテレン、スピロノラクトンまたはエプレロンを組合せることができる。本発明のNHE阻害剤はさらにベラパミル、ジルチアゼム、アムロジピンまたはニフェジピンのようなカルシウム拮抗薬および例えばラミプリル、エナラプリル、リシノプリル、フォシノプリルまたはカプトプリルのようなACE阻害剤と組合せて使用することができる。他の有益な組合せの相手はメトプロロール、アルブテロールなどのようなβ遮断薬、アンギオテンシン受容体およびそのサブタイプの受容体の拮抗薬、例えばロサルタン、イルべサルタン、バルサルタン、オマパトリラート、ゲモパトリラート、エンドセリン拮抗薬、レニン阻害剤、アデノシン受容体作動薬、並びにグリベンクラミド、グリメピリド、ジアゾキサイド、クロマカリム、ミノキシジルおよびその誘導体のようなカリウムチャンネルの阻害剤および活性剤、ミトコンドリアATP感受性カリウムチャンネル(mitoK(ATP)チャンネル)の活性剤、Kv1.5阻害剤などである。
【００６７】
NHE1阻害剤は有意な抗炎症作用を有し、そのため抗炎症薬として使用できることがわかった。これに関して、炎症の媒介物質の放出を阻害することは注目に値する。したがって、本化合物は慢性および急性の炎症性疾患の予防または治療において単独で、あるいは抗炎症薬と組合せて使用することができる。有利に使用される組合せの相手はステロイド系および非ステロイド系抗炎症薬である。本発明の化合物はまた、原虫により引き起こされる疾患、例えばマラリアまたは家きんコクシジウム症の予防または治療に使用することができる。
【００６８】
さらに、NHE阻害剤は血清リポタンパク質に対して有益な作用を示すことがわかった。一般に、高リポタンパク血症として知られている高過ぎる血中脂肪レベルは動脈硬化性血管病変、特に冠動脈性心疾患の発症の重要な危険因子であると認知されている。したがって、上昇した血清リポタンパク質の低下は動脈硬化性病変の予防および退縮において非常に重要である。総血清コレステロールの低下に加えて、この総コレステロールの特定のアテローム発生脂質フラクション、特に低密度リポタンパク質(LDL)および超低密度リポタンパク質(VLDL)の割合を減少させることはこれらの脂質フラクションがアテローム発生の危険因子であるため特に重要である。一方、高密度リポタンパク質は冠動脈性心疾患に対して保護機能を有するとされている。したがって、脂質低下剤は総コレステロールだけでなく、特にVLDLおよびLDL血清コレステロールフラクションもまた低下させることができるものでなければならない。今般、NHE1阻害剤は血清脂質レベルに影響を与えることに関して治療的に利用できる有用な特性を示すことが見い出された。例えば、これらはコレステロールまたは脂質に富んだ食事の過剰摂取により、あるいは病的な代謝変化、例えば遺伝的に関係がある高脂血症の場合に観察されるように、LDLおよびVLDLの上昇した血清濃度を有意に低下させる。したがって、これらは病因の危険因子を排除して動脈硬化性病変を予防し、また退縮させるために使用することができる。これらには一次性高脂血症だけでなく、例えば糖尿病で併発する特定の二次性高脂血症もまた包含される。さらに、NHE阻害剤は代謝異常により誘発される梗塞を著しく減少させ、特に誘発された梗塞の大きさやその重症度を有意に軽減する。
【００６９】
したがって、本発明の式Ｉ、Ia、Ib、XVa、XVbおよびXVIの化合物は高コレステロール血症を治療するための薬剤の製造；アテローム発生を予防するための薬剤の製造；アテローム性動脈硬化症を予防および治療するための薬剤の製造；上昇したコレステロールレベルにより誘発される疾患を予防および治療するための薬剤の製造；内皮機能障害により誘発される疾患を予防および治療するための薬剤の製造；アテローム性動脈硬化症が誘発する高血圧症を予防および治療するための薬剤の製造；アテローム性動脈硬化症が誘発する血栓症を予防および治療するための薬剤の製造；高コレステロール血症が誘発するおよび内皮機能障害が誘発する虚血性障害および虚血後再潅流障害を予防および治療するための薬剤の製造；高コレステロール血症が誘発するおよび内皮機能障害が誘発する心肥大および心筋症、並びに鬱血性心不全(CHF)を予防および治療するための薬剤の製造；高コレステロール血症が誘発するおよび内皮機能障害が誘発する冠攣縮性狭心症および心筋梗塞を予防および治療するための薬剤の製造；血圧降下剤、好ましくはアンギオテンシン変換酵素(ACE)阻害剤およびアンギオテンシン受容体拮抗薬と組合せた前記疾患を治療するための薬剤の製造に有利に使用される。NHE阻害剤と血中脂肪レベルを低下させる活性成分、好ましくはHMG−CoA還元酵素阻害剤(例えばロバスタチンまたはプラバスタチン)の組合せは効果が増強され、活性成分の使用が削減された有利な組合せであり、後者の成分は脂質低下作用を引き起こし、それによりNHE阻害剤の脂質低下特性を増大させる。
【００７０】
例えば、NHE阻害剤は様々な原因の内皮損傷に対して有効な保護をもたらす。この内皮機能障害症候群に対する血管の保護は式Ｉ、Ia、Ib、XVa、XVbおよびXVIの化合物、並びに／またはそれらの薬学的に許容しうる塩を冠攣縮性狭心症、末梢血管疾患、特に間欠性跛行、アテローム発生およびアテローム性動脈硬化症、左室肥大および拡張型心筋症、並びに血栓性疾患を予防および治療するための有用な薬剤にする。
【００７１】
さらに、NHE阻害剤はインシュリン抵抗が抑制された非インシュリン依存型糖尿病(NIDDM)の治療に適していることがわかった。この症例では、本発明の化合物の抗糖尿病活性および作用の特性を向上させるために、これらをメトホルミンのようなビグアニド；グリブリド、グリメプリド、トルブタミドなどのような抗糖尿病性スルホニル尿素；グルコシダーゼ阻害剤；ロシグリタゾン、ピオグリタゾンなどのようなPPAR作動薬；異なる投与形態のインシュリン製剤；DB4阻害剤；インシュリン増感剤；またはメグリチニドと組合せることが有利である。
【００７２】
急性抗糖尿病性作用の他に、NHE阻害剤は糖尿病後期合併症の発症に拮抗し、そのため糖尿病後期損傷、例えば糖尿病性腎症、糖尿病性神経障害、糖尿病性網膜症、糖尿病性心筋症および他の糖尿病由来の疾患を予防および治療するための薬剤として使用することができる。これに関して、これらは上記のNIDDM治療で挙げた抗糖尿病性薬剤と有利に組合せることができる。これに関して、有効な投与形態のインシュリンとの組合せが特に重要である。
【００７３】
NHE阻害剤は急性の虚血イベントおよび続いて起こる同様に急性のストレスを加える再潅流イベントに対する保護作用の他に、慢性的に進行する老化過程の徴候と関係があり、急性血流低下状態とは無関係に正常な非虚血状態下で発生する全哺乳動物の疾患および障害に対して直接治療的に利用できる作用を示す。長い加齢期間にわたって誘発され、NHE阻害剤による治療の影響を受けやすくすることができるこれらの加齢に伴う病的な徴候、例えば病気、病弱および死亡は本質的に重要な臓器の加齢に伴う変化およびその機能により引き起こされる疾患および障害であり、老化する生命体においてますます重要になる。
【００７４】
加齢に伴う機能障害または加齢に伴う臓器の損耗と関係がある障害は例えば収縮および弛緩反応に対する血管の不十分な応答および反応性である。心臓血管系、すなわち生命および健康の重要な過程である収縮および弛緩の刺激に対する血管の加齢に伴う反応性低下はNHE阻害剤により有意に排除または軽減することができる。血管の反応性の維持に関する１つの重要な機能および尺度は内皮機能障害の加齢に伴う進行の遮断または遅延であり、それはNHE阻害剤により極めて有意に排除することができる。したがって、NHE阻害剤は内皮機能障害、特に間欠性跛行の加齢に伴う進行の治療および予防に極めて適している。
【００７５】
老化過程を特徴づける他の変数の例は心臓の収縮性低下および必要な心臓の拍出量への心臓の適応低下である。この老化過程による心臓の減退した能率は大抵の場合、とりわけ心筋組織における結合組織の沈着により引き起こされる心臓の機能障害と関係がある。この結合組織の沈着は心臓の重量増加、心臓の拡大および制限された心臓機能により特徴づけられる。驚くべきことに、このような心臓器官の老化をほぼ完全に阻害できることがわかった。したがって、NHE阻害剤は心不全、鬱血性心不全(CHF)の治療および予防に極めて適している。
【００７６】
細胞増殖の阻害によりすでに発生したガンを治癒できるだけでなく、NHE阻害剤により加齢に伴うガン発生を減らし、極めて有意に遅らせることもできることがわかった。特に注目すべきことは特定のタイプのガンだけでなくすべての臓器の老化により発生する障害が抑制され、または極めて有意に遅れて発生することである。したがって、NHE阻害剤は加齢に伴うガンの治療、特に予防に極めて適している。
【００７７】
NHE阻害剤を使用して心臓、血管、肝臓などを含む調べたすべての臓器の加齢に伴う障害の発生において正常範囲を超えて極めて有意に時間を遅らせるだけでなく、高齢者のガンもまた極めて有意に遅らせることがわかった。さらに、驚くべきことに、これまで他にない類の薬剤または何れかの天然物により達成可能であった程度まで寿命が延長される。このNHE阻害剤の特異な効果により、ヒトおよび動物に対して活性成分を単独で使用できる他に、これらのNHE阻害剤を老人病学で使用され、異なる作用機構に基づく他の活性原理、手段、物質および天然物と組合せることができる。老人治療で使用されるこのような類の活性成分は特に抗酸化活性を有するビタミンおよび物質である。カロリー負荷または食糧摂取と老化過程の間に相関関係があるため、食餌療法と組合せることができ、例えば食欲抑制剤を併用することができる。ACE阻害剤、アンギオテンシン受容体拮抗薬、利尿剤、Ca+2拮抗薬などのような血圧降下剤、またはコレステロール降下剤のような代謝を正常化する薬剤との組合せもまた考慮することができる。したがって、NHE阻害剤は加齢に伴う組織変化を予防するのに、また高い生活の質を維持しながら寿命を延長させるのに極めて適している。
【００７８】
本発明の化合物は多数の疾患(本態性高血圧症、アテローム性動脈硬化症、糖尿病など)において容易に測定できる細胞、例えば赤血球、血小板または白血球でも上昇する細胞のナトリウム−プロトン交互逆輸送系(Na／H交換輸送体)の有効な阻害剤である。そのため、本発明で使用される化合物は例えば様々なタイプの高血圧症、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、糖尿病後期合併症、増殖性疾患などを測定および区別するための診断剤としての使用において優れた簡便な科学的ツールとして適している。
【００７９】
有効量の１種またはそれ以上の式XVa、XVbおよびXVIの化合物、並びに／またはそれらの薬学的に許容しうる塩を単独で、あるいは他の薬理学的に活性な成分または薬剤と組合せて薬学的に許容しうる担体および賦形剤と一緒に含有し、人間、動物または植物保護に使用される薬剤もまた特許請求される。式Ｉ、Ia、Ib、XVa、XVbおよびXVIの化合物、並びに／またはそれらの薬学的に許容しうる塩を含有する薬剤は例えば経口、非経口、静脈内、経腸、経皮で、または吸入により投与することができ、好ましい投与経路はその疾患の特有の性質に依存する。式Ｉ、Ia、Ib、XVa、XVbおよびXVIの化合物は動物用薬剤およ
び人間用薬剤の両方において単独で、または薬用賦形剤と一緒に使用することができる。薬剤は一般に式Ｉ、Ia、Ib、XVa、XVbおよびXVIの活性成分、並びに／またはそれらの薬学的に許容しうる塩を投与単位あたり0.01mg〜１ｇの量で含有する。
【００８０】
所望の医薬製剤に適した賦形剤は専門的な知識に基づく当業者によく知られている。溶剤、ゲル生成剤、坐剤用基剤、錠剤用賦形剤および他の活性成分担体に加えて、例えば抗酸化剤、分散剤、乳化剤、消泡剤、芳香剤、保存剤、可溶化剤または着色剤を使用することもできる。
【００８１】
経口投与用形態において、活性化合物はこの目的に適した添加剤、例えば担体、安定剤または不活性希釈剤と混合され、慣用の方法により適当な投与形態、例えば錠剤、被覆錠剤、硬ゼラチンカプセル剤、水溶液、アルコール溶液または油性溶液に変換される。使用できる不活性担体の例はアラビアゴム、マグネシア、炭酸マグネシウム、リン酸カリウム、ラクトース、グルコースまたはスターチ、特にコーンスターチである。乾式顆粒剤または湿式顆粒剤の形態で製剤することができる。適当な油性担体または溶剤の例はヒマワリ油または魚肝油のような植物油または動物油である。
【００８２】
皮下、筋肉内または静脈内投与用として、使用される活性化合物は所望によりこの目的で慣用の物質、例えば可溶化剤、乳化剤または他の賦形剤と一緒に溶液、懸濁液または乳濁液に変換される。有用な溶剤の例は水、生理食塩水またはアルコール、例えばエタノール、プロパノール、グリセロール、並びにグルコースまたはマンニトール溶液のような糖溶液、さらにこれらの様々な溶剤の混合物である。
【００８３】
エアロゾル剤または噴霧剤の形態で投与するのに適した医薬製剤は例えば薬学的に許容しうる溶剤、特にエタノール、水またはこのような溶剤の混合物中における式Ｉ、Ia、Ib、XVa、XVbおよびXVIの活性成分、並びに／またはそれらの薬学的に許容しうる塩の溶液、懸濁液または乳濁液である。必要に応じて、製剤は他の薬用賦形剤、例えば界面活性剤、乳化剤、安定剤および噴射ガスを含有してもよい。このような製剤は通常、活性成分を約0.1〜10重量％、特に約0.3〜３重量％の濃度で含有する。
【００８４】
投与される式Ｉ、Ia、Ib、XVa、XVbおよびXVIの活性成分の投与量および投与回数は使用する化合物の効力および作用持続時間、さらに治療する疾患の性質および重症度、並びに治療する哺乳動物の性別、年齢、体重および個々の反応性に依存する。
【００８５】
平均して、体重が約75kgの患者の場合、式Ｉ、Ia、Ib、XVa、XVbおよびXVIの活性成分、並びに／またはそれらの薬学的に許容しうる塩の１日量は体重１kgあたり少なくとも0.001mg／kg、好ましくは0.01mg／kg、最大10mg／kg、好ましくは１mg／kgまでである。急性の疾患、例えば心筋梗塞を起こした直後の場合にはその量を高めにし、特に投与回数を増やして、例えば１日に１回量を最大４回まで投与する必要がある。特に静脈内投与の場合、例えば集中治療室にいる梗塞患者に対して１日に最大700mg必要であり、また本発明の化合物を注入により投与することができる。
【００８６】
略語表：
DCC        ジシクロヘキシルカルボジイミド
DIP        ジイソプロピルエーテル
TLC        薄層クロマトグラフィー
DMF        N,N−ジメチルホルムアミド
EA         酢酸エチル
eq.        当量
Et3N       トリエチルアミン
Et2O       ジエチルエーテル
EtOH       エタノール
ｈ         時間
HEP        ｎ−ヘプタン
HOAc       酢酸
KOtBu      カリウム2−メチル−2−プロポキシド
MeOH       メタノール
min        分
mp         融点
MTB        ｔ−ブチルメチルエーテル
Pd(OAc)2   酢酸パラジウム(II)
RT         室温
rt         保持時間
tBu        t−ブチル
THF        テトラヒドロフラン
TMEDA      N,N,N',N'−テトラメチルエタン−1,2−ジアミン
【００８７】
下記に示した保持時間(rt)は次のパラメーターを有するHPLC分析に関係がある：
方法Ａ：
固定相：Waters Symmetry C8(５μ)3.9×150mm
移動相：イソクラチックCH3CN／0.1％CF3CO2H水溶液(35：65)；λ＝220nm；１ml／分。方法Ｂ：
固定相：Waters Symmetry C8(５μ)3.9×150mm
移動相：イソクラチックCH3CN／0.1％CF3CO2H水溶液(40：60)；λ＝230nm；１ml／分。方法Ｃ：
固定相：Waters Symmetry C8(５μ)3.9×150mm
移動相：イソクラチックCH3CN／0.1％CF3CO2H水溶液(50：50)；λ＝220nm；１ml／分。
【実施例】
【００８８】
実施例１
ａ）N−(2,2,2−トリフルオロエチル)−4−トリフルオロメチルベンズアミド
【化１６】
2007516243.tif 000018
5.0ｇ(24ミリモル)の塩化4−トリフルオロメチルベンゾイルおよび5.0ml(36ミリモル)のトリエチルアミンを50mlのCH2Cl2に溶解し、2.4ｇ(24ミリモル)の2,2,2−トリフルオロエチルアミンをRTでゆっくりと滴加した。混合物をRTで４時間攪拌し、揮発性成分を減圧下で除去した。100mlのMTBを使用して残留物を溶解し、最初に30mlの飽和Na2CO3水溶液、次に30mlの飽和NaHSO4水溶液で洗浄した。MgSO4上で乾燥し、6.1ｇ(94％)の無色の樹脂を得、それを放置して結晶させた；融点：117℃
Rf(DIP)＝0.50、MS(EI)：271(M+1)+
【００８９】
ｂ）(R,S)−3−ヒドロキシ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−5−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロイソインドール−1−オン
【化１７】
2007516243.tif 000019
0.37ml(2.4ミリモル)のTMEDAおよびｎ−ペンタン中における1.4ml(2.3ミリモル)のｔ−BuLiの1.5Ｍ溶液を−75℃で２mlのTHF(無水)に溶解し、２mlのTHF中における0.30ｇ(1.1ミリモル)のN−(2,2,2−トリフルオロエチル)−4−トリフルオロメチルベンズアミドの溶液を−75℃で滴加した。混合物を−75℃で３時間攪拌し、0.43ml(5.5ミリモル)のDMFを滴加し、混合物をRTまで30分間加温した。反応混合物を100mlの飽和NaHCO3水溶液に注ぎ、それぞれ30mlのEAで３回抽出した。MgSO4上で乾燥し、溶媒を減圧下で除去した。DIPを使用するシリカゲル上のクロマトグラフィーにより処理して80mgの(R,S)−3−ヒドロキシ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−5−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロイソインドール−1−オンの他に出発物質を含む110mgの混合物を得た。この混合物を逆相HPLC(下記の条件を参照)により再び分離し、さらに40mgの(R,S)−3−ヒドロキシ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−5−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロイソインドール−1−オンを得た；全収率30％。
【００９０】
HPLC：グラジエント、実行時間：20分
溶離剤：0.1％CF3CO2H水溶液、アセトニトリル(Chromasolv)；流量：30ml／分
カラム：Waters XterraTM  MS C18(５μm)、30×100mm
グラジエント：
０〜2.5分       10％アセトニトリル
3.0分           25％アセトニトリル
14.0分          75％アセトニトリル
15.0分          95％アセトニトリル
17.5分          10％アセトニトリル
Rf(DIP)＝0.50、MS(EI)：299(M＋1)+
【００９１】
ｃ）エチル(RS)−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]アセテート
【化１８】
2007516243.tif 000020
アルゴン下でエチル(ジエトキシホスホリル)アセテート(135mg、0.6ミリモル)を無水ジメトキシエタン(10ml)に溶解した。17.6mgのNaH(60％、油中)をRTでこの溶液に加え、それをRTで10分間攪拌した。その後、無水ジメトキシエタン(５ml)中における120mg(0.04ミリモル)の(RS)−3−ヒドロキシ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−5−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロイソインドール−1−オンの溶液を加え、次に混合物を還流下で２時間撹拌した。反応溶液を放置して冷却した；次に、反応溶液を50mlの５％炭酸水素ナトリウム溶液に注ぎ、それぞれ20mlの酢酸エチルで２回抽出した；有機相をMgSO4上で乾燥し、減圧下で濃縮し、残留物を溶離剤としてDIPを使用するシリカゲル上のクロマトグラフィーにより精製した。90mg(61％)のエチル(RS)−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]アセテートを無色の油状物として得、それをヘプタンからベージュ色の固体として結晶させた。Rf(DIP)＝0.31
NMRスペクトルは実施例４で製造した物質と同一であった。
【００９２】
ｄ）(R,S)−N−｛2−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−H−イソインドール−1−イル]アセチル｝グアニジン
【化１９】
2007516243.tif 000021
実施例２ｇ）に記載のようにして、エチル(RS)−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]アセテートをグアニジンと反応させることができる。
【００９３】
実施例２
ａ）2−ニトロ−4−トリフルオロメチル安息香酸
【化２０】
2007516243.tif 000022
11.97ｇの4−トリフルオロメチル安息香酸(63ミリモル)をRTで48mlのHNO3(100％)にゆっくりと少しずつ加えた。次に、混合物を１時間加熱還流し、RTまで冷却し、約600ｇの氷に注いだ。混合物を１時間攪拌し、沈殿物をろ過し、１Ｌの水で洗浄した。ろ液を300mlのCH2Cl2で抽出し、有機相を沈殿物と合一し、Na2SO4上で乾燥した。溶媒を減圧下で除去し、残留物を68℃で１ＬのDIPに溶解し、この温度で２ＬのHEPを加え、最後に溶液をゆっくりとRTまで冷却することにより結晶させた。結晶化した生成物を１ＬのHEPで洗浄し、減圧下で乾燥して7.1ｇ(48％)を得た。融点136℃〜138℃。
【００９４】
ｂ）2−アミノ−4−トリフルオロメチル安息香酸
【化２１】
2007516243.tif 000023
250ｇの2−ニトロ−4−トリフルオロメチル安息香酸(1.06モル)を１ＬのEtOHに溶解し、7.5ｇのPd／C(５％)を加えた。混合物を１〜2.5バールの水素圧下で水素化した。水素を取り込んでいる間、温度は一時的に10℃から104℃まで上昇した。２時間後、水素の取り込みは完了した。次に、触媒をろ去し、溶媒を減圧下で除去して215ｇ(99％)の薄黄色の固体を得た。融点174〜176℃。
【００９５】
ｃ）2−((E)−2−エトキシカルボニルビニル)−4−トリフルオロメチル安息香酸
【化２２】
2007516243.tif 000024
520mgのNaNO2(7.6ミリモル)を２mlの水に溶解し、０℃で2.6mlの48％HBF4水溶液および30mlのエタノール中における1.3ｇの2−アミノ−4−トリフルオロメチル安息香酸(6.5ミリモル)の溶液に滴加した。次に、混合物を０℃で10分間攪拌し、RTまで加温した。さらに0.3mlの48％HBF4水溶液、30mlのエタノール、0.9ｇのアクリル酸エチル(9.0ミリモル)および26.9mgのPd(OAc)2(0.12ミリモル)を加えた。次に、混合物を50〜60℃で１時間攪拌した。次に、溶媒を減圧下で除去し、残留物を25mlのEAに取り、最初に25mlの１NHCl水溶液、次に25mlの飽和NaCl水溶液で洗浄した。有機相をNa2SO4上で乾燥し、溶媒を減圧下で除去した。残留物を25mlのヘプタン中で懸濁し、沈殿した生成物をろ過した。収量：1.3ｇ(69％)の薄茶色がかった固体。分析試料をヘプタン／酢酸エチルから結晶させることにより精製した。
NMRスペクトルは実施例３ａで製造した物質と同一であった。
【００９６】
ｄ） エチル(E)−3−[2−(2,2,2−トリフルオロエチルカルバモイル)−5−トリフルオロメチルフェニル]アクリレート
【化２３】
2007516243.tif 000025
1.3ｇの2−(2−エトキシカルボニルビニル)−4−トリフルオロメチル安息香酸(4.5ミリモル)および453mgの2,2,2−トリフルオロエチルアミン(4.5ミリモル)を５mlのDMFに溶解し、0.93ｇのDCCを加えた。混合物をRTで４時間攪拌した。尿素副生成物をろ過により除去し、溶媒を減圧下で除去した。残留物をDIPから再結晶して1.6ｇ(96％)の白色の結晶を得た。
NMRスペクトルは実施例３ｂで製造した物質と同一であった。
【００９７】
ｅ） (RS)−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]酢酸
【化２４】
2007516243.tif 000026
2.2ｇのエチル(E)−3−[2−(2,2,2−トリフルオロエチルカルバモイル)−5−トリフルオロメチルフェニル]アクリレート(5.9ミリモル)を10mlのメタノールに溶解し、1.5mlの５Ｍ NaOH水溶液(7.5ミリモル)を加えた。混合物をRTで18時間攪拌し、HCl水溶液を使用してpH＝７に設定した。溶媒を減圧下で除去し、残留物を10mlの水中で懸濁した。この懸濁液を２Ｎ HCl水溶液を使用してpH＝２に設定し、それぞれ10mlのEAで３回抽出した。Na2SO4上で乾燥し、溶媒を減圧下で除去した。残留物をジエチルエーテル／DIPで結晶させた。融点：202〜204℃。収量：1.8ｇ(89％)。
1H NMR (400 MHz, CDCl3)：δ= 3.07(dd, J1=17Hz, J2=6Hz, 1H), 3.23(dd, J1=17Hz, J2=5Hz, 1H), 4.27 (m, 1H), 4.58(m, 1H), 5.08(t, J=5Hz, 1H), 7.91(d, J=8Hz, 1H), 7.96(d, J=8Hz, 1H), 8.12(s, 1H), 12.50(bs, 1H)ppm。
燃焼分析：C13H9F6NO3(341.2)：計算値 C 45.76 H 2.66 N4.10；実測値 C45.71 H 2.43 N 4.11。
【００９８】
ｆ）エチル(RS)−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]アセテート
【化２５】
2007516243.tif 000027
2.6mlのSOCl2(35ミリモル)を20mlのエタノールに溶解し、3.4ｇの(R,S)−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]酢酸(10ミリモル)を−10℃で加えた。混合物をRTで18時間攪拌し、次に揮発性成分を減圧下で除去した。残留物を３：１のHEP／EAを使用するシリカゲル上のクロマトグラフィーにより処理した。収量：3.0ｇ(81％)の無色の油状物であり、それをヘプタンからベージュ色の固体として結晶させた。
NMRスペクトルは実施例４で製造した物質と同一であった。
【００９９】
ｇ）(RS)−N−｛2−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−H−イソインドール−1−イル]アセチル｝グアニジン
【化２６】
2007516243.tif 000028
グアニジン塩酸塩(11.5ｇ、120ミリモル)をNMP(45ml)に溶解し、KOtBu(11.2ｇ、100ミリモル)を攪拌しながら加え、混合物をRTで1.5時間攪拌し、ろ過した。ろ液をRTで攪拌しながらNMP(12ml)中におけるエチル(RS)−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]アセテート(7.38ｇ、20ミリモル)の溶液に滴加し、RTでさらに60分間攪拌した。次に、氷−水(270ml)を加え、混合物を２Ｎ HClを使用してpH７に設定し、酢酸エチル(60ml)を加え、次にNaHCO3溶液を加えることによりpHを８〜8.5に調整した。混合物をRTで１時間激しく攪拌し、生成した沈殿物を吸引ろ過し、水で洗浄した。7.06ｇ(83％)の(R,S)−N−｛2−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−H−イソインドール−1−イル]アセチル｝グアニジン、すなわち0.5当量の酢酸エチルとの包接化合物を淡黄色の結晶として得た。融点160〜161℃。徐々に加熱すると約90℃から酢酸エチルが抜ける。
Rf(酢酸エチル／メタノール)＝0.45。1H NMR(400MHz, CDCl3)：δ= 2.54 (dd, J1=8Hz, J2=16Hz, 1H), 3.09(dd, J1=4Hz, J2=16Hz, 1H), 4.25(m, 1H), 4.64(m, 1H), 5.18(m, 1H), 6,65(bs, 2H), 7.75(bs,2H), 7.88(d, J=8Hz, 1H), 7.95(d, J=8Hz, 1H), 8.02(s, 1H)ppm。
C14H12F6N4O2・1/2 C4H8O2 426.33)：計算値 C 45.08, H 3.78, N 13.14；実測値 C 45.07, H 3.79, N 13.01。
【０１００】
実施例３
ａ）2−((E)−2−エトキシカルボニルビニル)−4−トリフルオロメチル安息香酸(実施例２ｃの別法)
【化２７】
2007516243.tif 000029
658mlの48〜50％HBF4水溶液をRTで6.8ＬのEtOH(無水)中における339ｇの2−アミノ−4−トリフルオロメチル安息香酸(1.65モル)に加えた。温度は21℃から26℃まで上昇した。次に、混合物を０℃まで冷却し、500mlの水中における125ｇのNaNO2の溶液を０℃〜５℃で17分間滴加した。薄黄色の溶液は最初にオレンジ色−赤色の懸濁液、最後に淡黄色の懸濁液になった。反応の進行をHPLCにより監視した(方法Ｂ；2−アミノ−4−トリフルオロメチル安息香酸rt＝6.4分；2−カルボキシ−5−トリフルオロメチルベンゼンジアゾニウム塩中間体＝1.1分)。30分以内に、2−カルボキシ−5−トリフルオロメチルベンゼンジアゾニウム塩への変換が＞99％完了した。次に、混合物を231ｇのアクリル酸エチル(2.31モル)、11.1ｇのPd(OAc)2(49ミリモル)および6.8Ｌのエタノール(無水)に加え、その反応混合物を49〜51℃まで加熱した。温度が上昇するにつれて一様な窒素発生の増加が観察された。反応をHPLCにより監視した(方法Ｂ；2−((E)−2−エトキシカルボニルビニル)−4−トリフルオロメチル安息香酸rt＝16.4分)。45分後、変換率は99％以上であった。次に、混合物をRTまで冷却し、溶媒を減圧下で除去した。残留物を３ＬのEAに取り、ろ過した。次に、ろ液を最初にそれぞれ2.1ＬのHCl水溶液で３回、次に１Ｌの飽和NaCl水溶液で洗浄した。Na2SO4上で乾燥し、溶媒を減圧下で除去して449ｇの淡褐色の固体を得た。不純物(4−トリフルオロメチル安息香酸；6.3％)および溶媒残留物(EA；４％)を考慮して、83％の収率であった。ヘプタン／酢酸エチルから結晶させることにより分析試料を精製した。融点：132〜133℃
1H NMR(400MHz, CDCl3)：δ= 1.36(t, J=7Hz, 3H), 4.31(q, J=7Hz, 2H), 6.41(d, J=16Hz, 1H), 7.72(d, J=8Hz, 1H), 7.86(s, 1H), 8.21(d, J=8Hz, 1H), 8.51(d, J=16Hz, 1H), 8.5〜9.5(bs, 1H)ppm。
燃焼分析：C13H11F3O4(288.23)：計算値 C 54.17, H 3.85；実測値 C 54.24, H 3.74。
【０１０１】
ｂ）エチル(E)−3−[2−(2,2,2−トリフルオロエチルカルバモイル)−5−トリフルオロメチルフェニル]アクリレート
【化２８】
2007516243.tif 000030
315ｇの塩化オキサリル(2.48モル)を15〜18℃の温度で24分間、650ｇの2−((E)−2−エトキシカルボニルビニル)−4−トリフルオロメチル安息香酸(2.25モル)、33mlのDMFおよび7.8ＬのCH2Cl2の混合物に加えた。添加の間、気体発生が観察された。混合物をRTで１時間攪拌し、５℃まで冷却し、次に285ｇのEt3N(2.81モル)を５℃〜10℃の温度で27分間加えた。混合物を５℃でさらに10分間攪拌し、279ｇの2,2,2−トリフルオロエチルアミン(2.81モル)を９℃〜20℃の温度で27分間加えた。混合物をRTで10分間攪拌し、その間に濃厚な沈殿物が沈殿し、混合物の撹拌性を改善するために、さらに１ＬのCH2Cl2を加えた。反応をHPLCにより監視した(方法Ｃ；2−((E)−2−エトキシカルボニルビニル)−4−トリフルオロメチル安息香酸rt＝5.9分；エチル(E)−3−[2−(2,2,2−トリフルオロエチルカルバモイル)−5−トリフルオロメチルフェニル]アクリレートrt＝13.2分)。RTでさらに50分間攪拌した後、反応が完了した。次に、反応混合物の揮発性成分を減圧下で除去し、残留物を12ＬのEAで取り、それぞれ2.5Ｌの水で３回、それぞれ2.5Ｌの飽和NaHCO3水溶液で２回、最後に1.5Ｌの飽和NaCl水溶液で洗浄した。MgSO4上で乾燥し、溶媒を減圧下で除去して802ｇのエチル(E)−3−[2−(2,2,2−トリフルオロエチルカルバモイル)−5−トリフルオロメチルフェニル]アクリレートを褐色の固体として得た。この粗製物質を別のバッチの粗生成物(177ｇ)と合一し、60〜70℃で３ＬのEAに溶解し、14ＬのHEPをこの温度で１Ｌずつ加えた。次に、混合物を80℃まで加熱し、この温度で1.5時間攪拌した。この混合物を70℃で5.6ＬのHEPに加え、攪拌しながら混合物を５時間RTまで冷却した。生成物をろ過し、３ＬのHEPで洗浄し、自然乾燥して689ｇのエチル(E)−3−[2−(2,2,2−トリフルオロエチルカルバモイル)−5−トリフルオロメチルフェニル]アクリレート(67％)を淡褐色の固体として得た。融点：161.5〜162℃。
1H NMR(400MHz, CDCl3)：δ= 1.33(t, J=7Hz, 3H), 4.05(m, 2H), 4.26(q, J=7Hz, 2H), 6.19(bs, 1H), 6.46(d, J=16Hz, 1H), 7.63(d, J=8Hz, 1H), 7.68(d, J=8Hz, 1H), 7.87(s, 1H), 7.90(d, J=16Hz, 1H)ppm。
燃焼分析：C15H13F6NO3(369.27)：計算値 C 48.79, H 3.55, N 3.79；実測値 C 48.93, H
3.51, N 3.92。
【０１０２】
ｃ）(R,S)−N−｛2−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−H−イソインドール−1−イル]アセチル｝グアニジン
【化２９】
2007516243.tif 000031
386ｇのエチル(E)−3−[2−(2,2,2−トリフルオロエチルカルバモイル)−5−トリフルオロメチルフェニル]アクリレート(1.05モル)を600mlのDMF中で懸濁し、５℃〜15℃の温度でゆっくりと4.7ｇのKOtBu (42ミリモル)に少しずつ加えた。イソインドロンへの環化をTLC(HEP／EA＝２：１；アクリル酸エチル：Rf＝0.32；イソインドロン：Rf＝0.41)により監視した。１時間後、反応は完了した。その間に、587ｇのKOtBuを2.2ＬのDMF中で懸濁し、600ｇの塩化グアニジニウムを20℃〜25℃の温度で加えた。混合物を25℃で１時間攪拌し、KClをろ去した。次に、放出されたグアニジンを含有するろ液をイソインドロンの反応混合物に加え、RTで２時間攪拌した。アシルグアニジンへの変換をHPLC(方法Ｂ；波長230nmおよび254nm；イソインドロン：rt＝15.1分；アシルグアニジン：rt＝2.9分)により監視した。次に、反応混合物を14Ｌの氷−水に注ぎ、HCl水溶液を使用してpH8.5〜9.0に設定し、それぞれ３ＬのEAで４回抽出した。次に、混合物をそれぞれ３Ｌの飽和NaCl水溶液で３回洗浄し、Na2SO4上で乾燥し、溶媒を減圧下で除去した。329ｇ(82％)の褐色の固体を得た。生成物を同じ製造工程で得られた他の３つのバッチと合一した；全量842ｇ。これらの842ｇ(2.2モル)を２ＬのEAおよび５ＬのEt2O中に30℃で２時間溶解した。次に、固体をろ過し、それぞれ２ＬのEt2Oで２回洗浄し、減圧下で乾燥した。693ｇ(82％回収)のほぼ白色の固体を得た。化合物を0.5当量の2−プロパノールとの包接化合物として2−プロパノールから結晶させた。
NMRスペクトルは実施例５ｂで製造したS−エナンチオマーと同一であった。
【０１０３】
実施例４
2−((E)−2−エトキシカルボニルビニル)−4−トリフルオロメチル安息香酸から出発するワンポット反応によるエチル(RS)−(2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−3−オキソ−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル)アセテート
【化３０】
2007516243.tif 000032
SOCl2(1.98ｇ、27.2ミリモル)を室温でトルエン(30ml)中における2−((E)−2−エトキシカルボニルビニル)−4−トリフルオロメチル安息香酸(2.9ｇ、10.1ミリモル)の懸濁液に加えた。混合物を室温で５分間攪拌し、30分以内に105℃(浴温度)まで加熱した。約70℃で気体発生が開始した。混合物を105℃で３時間攪拌し、室温まで冷却し、珪藻土層(2.5×0.5cm)を通して吸引ろ過し、トルエンで洗浄し、ろ液を減圧下で蒸発させて濃縮した。酸塩化物を赤色−褐色の油状物(3.34ｇ)として得た。2,2,2−トリフルオロエチルアミン(1.2ｇ、12.1ミリモル)およびトリエチルアミン(2.58ｇ、25.3ミリモル)を５℃でジクロロメタン(15ml)に溶解し、温度を５℃〜10℃に維持するように氷冷しながらジクロロメタン(20ml)に溶解した酸塩化物を滴加した。次に、氷浴を取り除き、過剰のトリフルオロエチルアミンおよび一部のジクロロメタンを穏やかな真空下で留去した。次に、混合物を加熱して還流下で10時間沸騰させた。それを冷却した後、混合物をジクロロメタン(50ml)で希釈し、２Ｎ HCl水溶液で２回(それぞれ50ml)抽出し、合一した有機相を水(100ml)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥し、減圧下で濃縮した。エチル(RS)−(2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−3−オキソ−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル)アセテート(3.51ｇ、94％)を暗褐色の油状物として得、それをｎ−ヘプタンから結晶させることにより精製した。融点：54.5〜55.5℃。
1H NMR(400MHz, CDCl3)：δ= 1.15(t, J=7Hz, 3H), 2.85(dd, J1=6Hz, J2=16Hz, 1H), 3.01(dd, J1=5Hz, J2=16Hz, 1H), 3.83(m, 1H), 4.12 (q, J=7Hz, 2H), 4.73(m, 1H), 5.17(t, J=6Hz, 1H), 7.80(m, 2H), 8.01(d, J=8Hz, 1H)ppm。
燃焼分析：C15H13F6NO3(369.27)：計算値 C 48.79, H 3.55, N 3.79；実測値 C 48.54, H 3.49, N 3.79。
【０１０４】
実施例５
ａ）(S)−N−｛2−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]アセチル｝グアニジン、O,O′−ジベンゾイル−L−酒石酸塩
【化３１】
2007516243.tif 000033
(RS)−N−｛2−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]アセチル｝グアニジン(酢酸エチルとの包接化合物、NMRによる含有量87.06％、44ｇ、100ミリモル)およびO,O'−ジベンゾイル−L−酒石酸(11.2ｇ、31ミリモル)を最初に固体として入れ、2−プロパノール(500ml)を攪拌しながら滴加した。固体は最初に完全に溶解し、白色の固体が沈殿した。30分後、混合物を70℃まで加熱した。これにより再びほぼ透明な溶液になった。これを放置して４時間以内で室温まで冷却し、続いてこの温度で一晩攪拌した。その後、混合物を10℃で４時間攪拌し、次に吸引ろ過した。残留物を2−プロパノールで２回(それぞれ100ml)洗浄し、自然乾燥した。28.05ｇの(S)−N−｛2−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]アセチル｝グアニジン、O,O'−ジベンゾイル−L−酒石酸塩((S)−エナンチオマーに基づく収率74％)をHPLC(Chiracel OD／21、250×4.6mm、50：５：２のｎ−ヘプタン／エタノール／メタノール、１ml／分、30℃)によるエナンチオマー純度82％eeで無色の結晶として得た。20ｇ(14.6ミリモル)のこれらの結晶を最初に入れ、2−プロパノール(400ml)を滴加した。混合物を攪拌しながら80℃まで加熱し、次に放置して徐々に室温まで冷却した。混合物をこの温度でさらに２時間攪拌し、吸引ろ過し、残留物を2−プロパノールで２回(それぞれ50ml)洗浄し、自然乾燥した。16.3ｇ((S)−エナンチオマーに基づく収率100％)の(S)−N−｛2−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]アセチル｝グアニジン、O,O'−ジベンゾイル−L−酒石酸塩を無色の結晶として得た。融点：192〜193℃。HPLC(上記のような条件)によるエナンチオマー純度＞97％ee。
燃焼分析：C14H12F6N4O2・1/2 C18H14O8(561.43)：計算値 C 49.21, H 3.41, N 9.98；実測値 C 49.17, H 3.30, N 9.97。
【０１０５】
ｂ）(S)−N−｛2−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]−アセチル｝グアニジン
【化３２】
2007516243.tif 000034
(S)−N−｛2−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]−アセチル｝グアニジン、O,O'−ジベンゾイル−L−酒石酸塩(113mg、0.20ミリモル)を水(１ml)および酢酸エチル(５ml)の混合物に溶解し、水(7.5ml)中におけるNaHCO3(50mg)の溶液を加えた。混合物を室温で16時間攪拌し、酢酸エチルで３回(それぞれ５ml)抽出した。合一した有機相を水(20ml)中におけるNaHCO3(50mg)の溶液、次に純水(20ml)と一緒に１回振盪し、Na2SO4上で乾燥し、減圧下で蒸発することにより濃縮した。75mg(97％)の(S)−N−｛2−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]−アセチル｝グアニジンを得た。生成物を0.5当量の2−プロパノールとの包接化合物として2−プロパノールから結晶させた。融点：80〜82℃。この物質は酢酸エチルから再結晶することができ、0.5当量の酢酸エチルで結晶化する。融点：121.5〜122℃。HPLC(Chiracel OD／21、250×4.6mm、４：１のｎ−ヘプタン／2−プロパノール、１ml／分、30℃)によるエナンチオマー純度＞97％。
1H NMR(400MHz, CDCl3)：δ= 2.54(dd, J1=8Hz, J2=16Hz, 1H), 3.09(dd, J1=4Hz, J2=16Hz, 1H), 4.25(m, 1H), 4.64(m, 1H), 5.18(m, 1H), 6.65(bs, 2H), 7.75(bs, 2H), 7.88(d, J=8Hz, 1H), 7.95(d, J=8Hz, 1H), 8.02(s, 1H)ppm。
燃焼分析(0.5当量の2−プロパノールとの包接化合物)：C14H12F6N4O2・1/2 C3H8O(412.32)：計算値 C 45.15, H 3.91, N 13.59；実測値 C45.23, H 4.27, N 13.10。
【０１０６】
実施例６
(R)−N−｛2−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]アセチル｝グアニジンのラセミ化による(RS)−N−｛2−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]アセチル｝グアニジン
【化３３】
2007516243.tif 000035
(R)−N−｛2−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]アセチル｝グアニジン(0.5当量の2−プロパノールとの包接化合物(Ｍ＝412.3)、43ｇ、104ミリモル；実施例５ａの(S)−N−｛2−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]アセチル｝グアニジン、O,O'−ジベンゾイル−L−酒石酸塩を濃縮し、実施例５ｂ)に記載のようにNaHCO3で処理して得られた母液を濃縮して得た）を2−プロパノール(1.8Ｌ)に溶解し、2−プロパノール(400ml)中におけるKOH(85％、660mg、10ミリモル)の溶液を攪拌しながら室温で加えた。混合物を室温で24時間攪拌し、次に氷酢酸(720mg、1.5ml)を使用して酸性にし、40℃の最大浴温度において減圧下で蒸発させることにより濃縮し、残留物を水(500ml)および酢酸エチル(400ml)に分配した。水相を酢酸エチルで２回(それぞれ300ml)抽出した。合一した有機相を水(500ml)中におけるNaHCO3(10ｇ)の溶液、次に再び純水と一緒に振盪した。有機相をNa2SO4上で乾燥し、40℃の最大浴温度において減圧下で蒸発させることにより濃縮した。39.8ｇの(RS)−N−｛2−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]アセチル｝グアニジン、すなわち0.5当量の酢酸エチルとの包接化合物をNMRによる含有量87％で淡黄色の結晶として得た。収率：87％。融点：164〜166℃。穏やかに加熱すると約100℃から酢酸エチルが抜ける。HPLC(Chiracel OD／21、250×4.6mm、４：１のｎ−ヘプタン／2−プロパノール、１mL／分、30℃)によるエナンチオマー比率49：51。
【０１０７】
実施例７
(S)−N−｛2−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]−アセチル｝グアニジン水素フマル酸塩水和物
【化３４】
2007516243.tif 000036
(S)−N−｛2−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]−アセチル｝グアニジン[0.5当量の2−プロパノールとの包接化合物(Ｍ＝412.3)、110ｇ、266ミリモル]をジメトキシエタン(２Ｌ)に溶解し、フマル酸溶液(0.5Ｍ、９：１のジメトキシエタン／水中、512ml)と混合し、生成した透明な溶液を減圧下で蒸発させることにより濃縮した。残留物をジクロロメタン(２Ｌ)で取り、混合物を減圧下で蒸発させることにより再び濃縮した。残留物を水(1.5Ｌ)中で懸濁し、室温で吸引ろ過し、室温で一晩自然乾燥した。125.9ｇ(95％)の(S)−N−｛2−[3−オキソ−2−(2,2,2−トリフルオロエチル)−6−トリフルオロメチル−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール−1−イル]アセチル｝グアニジン水素フマル酸塩水和物を無色の結晶として得た。融点：210℃。
【０１０８】
NHE阻害の定量
NHE−1阻害に関する阻害濃度IC50を次のようにして定量した：
NHE−1阻害IC50はFLIPRアッセイでヒトNHE−1を発現するトランスフェクションした細胞系におけるpHiの回復を測定することにより定量した。
【０１０９】
アッセイは透明な底部を持つ黒壁96−ウェルマイクロプレートを備えたFLIPR(蛍光イメージングプレートリーダー)で行なった。様々なNHEサブタイプを発現するトランスフェクションした細胞系(親細胞系LAP−1は突然変異誘発とその後の選択の結果として内因性のNHE活性を示さない)を前日に〜25000細胞／ウェルの密度で接種した。トランスフェクションした細胞の成長培地(Iscove＋10％ウシ胎仔血清)はさらにトランスフェクションしたシーケンスの存在を確実にするために選択的抗生物質としてG418を含有した。
【０１１０】
実際のアッセイは成長培地を除去し、100μl／ウェルのローディング緩衝液(20mMのNH4Cl、115mMの塩化コリン、１mMのMgCl2、1mMのCaCl2、５mMのKCl、20mMのHEPES、５mMのグルコース中における５μMのBCECF−AM[2',7'−ビス(カルボキシエチル)−5−(および−6−)カルボキシフルオレセイン,アセトキシメチルエステル]；pH7.4[KOHで調整した])を加えることにより開始した。次に、細胞を37℃で20分間インキュベートした。このインキュベーションはその蛍光強度がpHiに依存する蛍光染料、および細胞を僅かにアルカリ性にするNH4Clによる細胞への負荷をもたらした。
【０１１１】
非蛍光性の染料前駆体BCECF−AMはエステルとして膜透過性である。実際のBCECF染料は膜透過性ではないが、エステラーゼにより細胞内部で放出される。
【０１１２】
このインキュベーションを20分間行なった後、NH4Clおよび遊離のBCECF−AMを含有するローディング緩衝液を細胞洗浄器(Tecan Columbus)においてそれぞれ400μlの洗浄緩衝液(133.8mMの塩化コリン、4.7mMのKCl、1.25mMのMgCl2、1.25mMのCaCl2、0.97mMのK2HPO4、0.23mMのKH2PO4、５mMのHEPES、５mMのグルコース；pH7.4[KOHで調整した])で３回洗浄することにより除去した。各ウェルに残留する残存量は90μl(50〜125μlが可能)であった。この洗浄工程により遊離のBCECF−AMが除去され、外部のNH4+イオンの除去の結果として細胞内の酸性化が生じた(〜pHi 6.3〜6.4)。
【０１１３】
細胞内のNH4+とNH3およびH+の平衡は細胞外のNH4+の除去とその後のNH3の瞬間的な細胞膜通過により妨害されるため、洗浄工程によりH+が細胞の内部に残留し、それは細胞内の酸性化の原因となった。それが十分に長く持続する場合、結局は細胞死を引き起こす。この時点で、細胞外のナトリウムイオンはクローン化NHEイソフォームの活性によりpHiの瞬間的回復を引き起こすため、洗浄緩衝液がナトリウムを含まない(＜１mM)ことは重要であった。
【０１１４】
同様に、重炭酸塩の存在が親のLAP−1細胞系に存在し、干渉する重炭酸塩に依存するpHi調節系の活性化を引き起こすため、使用したすべての緩衝液(ローディング緩衝液、洗浄緩衝液、回復緩衝液)は何れのHCO3-イオンも含まないことが重要であった。
【０１１５】
その後(酸性化後20分以内)、酸性化細胞を含むマイクロプレートをFLIPRに移した。FLIPRにおいて、細胞内の蛍光染料はアルゴンレーザーにより発生した波長488nmの光により励起し、測定パラメーター(レーザー出力、照明時間およびFLIPRに組み込まれたCCDカメラの開口)は１ウェルあたりの平均蛍光信号が30000〜35000の相対蛍光単位であるように選択した。
【０１１６】
FLIPRによる実測はソフトウェア制御下、２秒毎にCCDカメラで写真を撮ることにより開始した。10秒後に、細胞内のpHの回復をFLIPRに組み込まれた96−ウェルピペッターにより90μlの回復緩衝液(133.8mMのNaCl、4.7mMのKCl、1.25mMのMgCl2、1.25mMのCaCl2、0.97mMのK2HPO4、0.23mMのKH2PO4、10mMのHEPES、5mMのグルコース；pH7.4[NaOHで調整した])を加えることにより開始した。
【０１１７】
使用した陽性の対照(100％NHE活性)はそれに純粋な回復緩衝液を加えたウェルであり、一方、陰性の対照(０％NHE活性)は洗浄緩衝液を加えたものである。試験物質の２倍の濃度である回復緩衝液を他のすべてのウェルに加えた。FLIPR測定は60回の測定(２分)後に終了した。
【０１１８】
生データをActivityBaseプログラムに送った。このプログラムは最初に各試験物質濃度に対するNHE活性を計算し、これらから各物質のIC50値を得た。pHi回復の進行は実験全体を通して線形ではなかったが、NHE活性の減少により高いpHi値で終わったので、測定の評価に陽性対照の蛍光増加が線形である部分を選択することは重要であった。
【０１１９】
【表１】
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【国際調査報告】
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