(57)【要約】  約２℃から約４０℃の間の温度で貯蔵され、取り扱われる、食料、食品添加物、化学薬品、生体物質、医薬品、化粧品などのような熱に敏感な生成物をモニターするために使用される時間温度インジケーター（ＴＴＩ）システム／デバイスを提供する。本発明のＴＴＩシステムは、プラスチックフィルム上に印刷された水性ビヒクル中の微生物、たとえば酵母を含む反応性インキ層と、他のプラスチックフィルム上に印刷された、該微生物に特定の活性剤を含む接着剤層とを接触させることにより活性化される。モニターされる生成物に添付された活性化されたＴＴＩは、微生物による糖類の発酵により引き起こされる、ＴＴＩシステム内に含まれる変色指示薬の変色により生成物の時間温度履歴を示す。
2007525664.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）  微生物を含む第１の部分；
（ｂ）  活性剤を含む第２の部分；および
（ｃ）  ｐＨ−感受性の変色指示薬、を含む時間−温度インジケーター（ＴＴＩ）システムであって、
ここでｐＨ−感受性の変色指示薬は（ａ）と（ｂ）の部分の少なくとも１つに含まれているＴＴＩシステム。
【請求項２】
ｐＨ−感受性の変色指示薬の最終の色と一致する対照色を有するパーマネントインキをさらに含む、請求項１記載のＴＴＩシステム。
【請求項３】
さらに水性のビヒクルを含む、請求項１記載のＴＴＩシステム。
【請求項４】
水性のビヒクルが、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロ−ゲル、アラビアゴム、ロジン、寒天、アカシアゴム、アルギナート、カラギーナン、グアーゴム、キサンタン、ポリアミド類、ポリビニルエステル類、ポリビニルアセタール類、ポリビニルエーテル類、エポキシ樹脂類、ポリアクリル酸エステル類、ポリメタクリル酸エステル類、ポリエステル類、アルキド樹脂、ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコール、ポリエチレンオキシド、ポリジメチルアクリルアミド、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメチルアセトアミド、ポリウレタン、ポリスチレン樹脂、スチレン−無水マレイン酸共重合体、スチレン−（メタ）アクリレートエステル共重合体、スチレン共役ジエン共重合体、ブチラール樹脂、キシレン樹脂、クマロン−インデン樹脂、並びに上記の混合物またはコポリマーを含む、請求項３記載のＴＴＩシステム。
【請求項５】
第２の部分が更に接着剤を含む、請求項１記載のＴＴＩシステム。
【請求項６】
接着剤がアクリル接着剤である、請求項５記載のＴＴＩシステム。
【請求項７】
活性剤は炭素源を含む、請求項１記載のＴＴＩシステム。
【請求項８】
炭素源はグルコースである、請求項７記載のＴＴＩシステム。
【請求項９】
活性剤の量は第１の部分の少なくとも約１０重量％である、請求項１記載のＴＴＩシステム。
【請求項１０】
微生物は酵母である、請求項１記載のＴＴＩシステム。
【請求項１１】
酵母がインスタントドライイーストまたはアクティブドライイーストである、請求項１０記載のＴＴＩシステム。
【請求項１２】
酵母の濃度は第１の部分の少なくとも約１０８ＣＦＵ／ｍｌである、請求項１０記載のＴＴＩシステム。
【請求項１３】
ｐＨ−感受性の変色指示薬は約３．０と約８．５の間のｐＨ範囲で反応性である、請求項１記載のＴＴＩシステム。
【請求項１４】
第１の部分はさらに透明フィルムを含む、請求項１記載のＴＴＩシステム。
【請求項１５】
第２の部分はさらに透明フィルムを含む、請求項１記載のＴＴＩシステム。
【請求項１６】
第１の部分は感圧性自己−接着剤を含む、請求項１記載のＴＴＩシステム。
【請求項１７】
第２の部分は感圧性自己−接着剤を含む、請求項１記載のＴＴＩシステム。
【請求項１８】
第１の部分または第２の部分のいずれかが、生成物のパッケージングまたはコンテナの部分である、請求項１記載のＴＴＩシステム。
【請求項１９】
（ｉ）第１の部分（ａ）と第２の部分（ｂ）とを接触させることにより、請求項１記載のＴＴＩシステムを活性化すること；
（ｉｉ）生成物上に、活性化されたＴＴＩシステムを添付すること；および
（ｉｉｉ）ｐＨ−感受性の変色指示薬の色の変化に基づいて、生成物の時間−温度履歴を評価することを含む、
熱感受性の生成物をモニタする方法。
【請求項２０】
（ｉ）微生物を含む第１の部分を印刷する工程；
（ｉｉ）活性剤を含む第２の部分を印刷する工程；および
（ｉｉｉ）第１の部分と第２の部分とを互いに接触させる工程を含み、
第１および第２の部分のどちらか、または両方がｐＨ−感受性の変色指示薬を含む、
ＴＴＩシステムを調製する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の技術分野
本発明は、熱に敏感な生成物の時間および温度曝露の累積的な履歴を視覚的に不可逆的に示すためのシステムに関する。より具体的には、本発明は時間温度インジケーター／積算計（ＴＴＩｓ）に関する。本発明のＴＴＩシステムは微生物による無気呼吸を介する生化学反応に基づいて作動する。本発明は、約２℃から約４０℃の間の温度で貯蔵され、取り扱われる、食料、食品添加物、化学薬品、生体物質、医薬品、化粧品などのような熱に敏感な生成物の使用に適応される。
【０００２】
本発明の背景技術
熱に敏感な生成物は、一般に、図１の中で描かれるように、メーカー／生産者からスタートし、消費者で終了するライフサイクルを通る。それらのライフサイクルの各段階では、正確な熱制御が、特定の特質、たとえば微生物学的、生物学的、器官感覚受容性、物理的、化学的、そして栄養価などを保存するために、しばしば生成物が消費者によって消費されるまで適切に行われる。したがって、ＴＴＩは、政府機関によって強化された危険分析および重要管理点（ＨＡＣＣＰ）システムを完了する。
【０００３】
時間−温度インジケーターまたは積算計（ＴＴＩ）は、それが添付される熱に敏感な生成物の、全体または部分的な温度履歴を反映する、容易に判読可能な、時間−温度に依存する変化を示すことができるデバイスとして定義することができる。言いかえれば、ＴＴＩは、単一のパラメータ（すなわち時間）だけを計算する賞味期限（ＥＤ）および消費期限（ＢＣＢＤ）と異なり、生成物への温度と時間の組み合わせ作用の不可逆的な視覚的表示を許可する積分システムである。ＴＴＩは、ＥＤとＢＣＢＤによって提供される利益に加えて、生成物の熱サイクルおよび貯蔵条件を評価しコントロールするための手段を提示する。
【０００４】
ＴＴＩは、消費者が生成物が販売時に、および家庭においてまだ新鮮かどうか確かめるのを助けるため、熱に敏感な生成物の製造時に、適切に配置される。したがって、ＴＴＩは、それらが生成物の新鮮さを正確に反映するために、配置された生成物とともに変化しなければならない。したがって、ＴＴＩは生成物と同じライフサイクルを持っていなければならない。ライフサイクル（あるいは「コールドチェイン」）の終わりに、ＥＤおよび／またはＢＣＢＤに関してのＴＴＩの時間温度履歴だけではなく、コールドチェーンを破っていない必然性を知らせる。
【０００５】
製造後に製品が輸送され、おそらく冷却されていない条件下で長距離を輸送され、良好に作動していない冷蔵庫内に保存される場合がしばしばある。図２は、理想的な条件（Ａ：ＥＤにマッチした変色）、および生成物が熱衝撃（Ｂ：変色はより速い。それは生成物が許容限度を超えた温度に暴露されたことを示す。）を経験した時のＴＴＩの変化を示す。
【０００６】
ＴＴＩの作動原理は、機械的な変形、発色現像または変色の形での、可視的なレスポンスとして通常示される機械的、化学的、電気化学的、酵素的、または微生物学的な不可逆変化であることができる。変化率は温度依存性であり、ほとんどの物理化学的な反応と同様、高温で増加する。したがって、可視的なレスポンスは、ＴＴＩが暴露された貯蔵条件の累積的な表示を与える。このレスポンスが実際の時間−温度履歴に対応する程度は、インジケーターのタイプおよびその作動の物理化学的な原理に依存する。最近の十年間で、様々なタイプのＴＴＩが開発され、様々な生成物の時間および温度履歴を追跡するために商業上使用されている。
【０００７】
普及しているＴＴＩの１つの種類は拡散に基づくインジケーター（ＴＴＩタイプＩ）である。この種のＴＴＩは、貯蔵場所から芯までの有色の化学薬品（たとえば、脂肪酸エステル、フタル酸塩、ある種のポリマー）の拡散に基いて生成物の温度履歴を示す。この種類としては、４つのタイプのＴＴＩが知られている。その内の３つの種類は商業的に使用可能である（Ｆｒｅｅｚｅ  Ｗａｔｃｈ，  Ｓｔｏｐ  ！  Ｗａｔｃｈ  ａｎｄ  ＭｏｎｉｔｏｒＭａｒｋ（登録商標），３Ｍ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）（米国特許３，９５４，０１１；５，１２０，１３７；５，６６７，３０３；６，２４４，２０８；６，４３５，１２８；米国特許出願公開２００３／００５３３７７；および国際特許出願公開番号ＷＯ９４／１２８５９；ＷＯ９６／２８７１４；およびＷＯ９９／５６０９８を参照）。
タイプＩ  ＴＴＩの第１の顕著な用途の１つは、冷却されたワクチン生成物のモニターのための世界保健機構（ＷＨＯ）による使用だった。
【０００８】
既知のＴＴＩの別の種類は酵素のインジケーター（ＴＴＩタイプＩＩ）を利用する。例えば、ＶＩＴＳＡＢ（登録商標）時間温度インジケーター（ＶＩＴＳＡＢ  ＡＢ、Ｍａｌｍｏ、エウェーデン）は、脂質基体の制御された酵素加水分解の結果としてのｐＨ数値の減少によって引き起こされた変色に基づく（米国特許５，８５７，７７６；４，０４３，８７１；４，２８４，７１９；および３，９７７，９４５参照）。この種のＴＴＩは、活性化の前にチルドされておかれなければならない。
【０００９】
第３のタイプのインジケーター（ＴＴＩタイプＩＩＩ）は、２個の置換基を有するジアセチレン結晶（Ｒ−Ｃ＝Ｃ−Ｃ＝Ｃ−Ｒ）の重合のような、非常に有色のポリマーを与える化学的重合反応に基づく。商業上利用可能なＴＴＩは、食品用のＦｒｅｓｈＣｈｅｃｋ（登録商標）、およびワクチン用のＨＥＡＴｍａｒｋｅｒ（登録商標）である；（米国特許３，９９９，９４６；４，２０８，１８６；４，２２８，１２６；４，２７６，１９０；４，７３５，７４５；４，７３７，４６３；４，８１２，０５３；４，８９２，６７７；４，９１７，５０３；５，０５７，４３４；５，７０９，４７２；６，０４２，２６４；および６，５４４，９２５、並びにＥＰ特許、ＥＰＯ  ９３０４８７  ＡｌおよびＥＰ  １３３３２６２参照）。反応が他の条件下で自然に生じるので、これらのＴＴＩは使用の前に凍結状態（すなわち−２４℃）中で維持されなければならない。これは、ＴＴＩのハンドリングおよび適用の点から重要な欠点である。
【００１０】
食品の微生物腐敗のためのインジケーターとして微生物を使用するＴＴＩシステムは、米国特許２，９５０，２０２に記載されている。微生物学の技術も、ある種のバーコードの視認性によって測定される、微生物の増殖に基づいて、腐敗しやすい生成物のためのコールドチェーン崩壊についてのインジケーターとして使用された（国際特許公開ＷＯ  ０／０２５５２９参照）。これらのシステムでは、微生物は通常乾燥させられ、乾燥された栄養素と一緒に気密バッグに含まれている。システムは水を含んでいる内部の小袋を壊し、システムに水分を補給することにより活性化される。したがって、このシステムは例えば公知の印刷工程により、その場で便利に製造することができない。
【００１１】
最後に、最後のタイプのＴＴＩは、生成物の熱サイクルをモニタするために生化学（すなわち酵素の反応）およびエレクトロニクスの組み合わせを利用する（米国特許６，６４２，０１６およびＥＰ１２１８５３３を参照；商業的にＴｉｍｅ  Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ（登録商標）として知られる）。この技術は特殊な装置を要求し、これは高価で、ユーザフレンドリーではない。
【００１２】
ほとんどの商業上利用可能なＴＴＩは、活性化の前にチルドまたは冷凍での貯蔵を要求し、時々は化学線から遠ざけられることを要求し、または活性化のための特定の条件、特別な製造プロセス、たとえばパッケージへの添付に先立ち、あらかじめ所定温度でコンディショニングされることを要求する。更に、結果を決定するために、各インジケーターに手で圧力を加えるか、またはインジケーターから活性化ストリップを取り除くことが時々さらに必要とされる。これらの余分の物工程は多くの場合退屈で、さらなるコストを要する。
【００１３】
したがって、使用されるサイト（つまり生産の時および生成物のパッケージングの際に）で、活性化することができ、パッケージにそれらを使用する前に特殊な条件下で貯蔵する必要を回避できるＴＴＩシステムへの必要性が存在する。更に、余分な工程なしで、パッケージ上のインジケーターの簡単な目視観測によって生成物の時間−温度履歴を与えるＴＴＩシステムへの必要性が存在する。そのようなシステムは、ＴＴＩシステムにともなうモニタリングプロセスを著しく単純化し、コストを低くするだろう。
【００１４】
発明の要約
本発明は、本発明の発明者による、微生物を使用した、ＴＴＩの調製と、生成物のパッケージングの製造工程とのオンサイトでの一体化により、従来使用されていたＴＴＩ技術によってもたらされていた損失を回避することができるという発見に一部基づいている。従って、オペレーションが単純で、費用対効果の優れた、改善されたＴＴＩシステム／デバイスを提供することが本発明の目的である。すなわち、モニタされる生成物の製造工程に容易に組み入れることができるＴＴＩシステムを提供することが本発明の目的である。標準状態の下で、製造、貯蔵、活性化、および取り扱いが簡単であり、すなわちシステムの活性化に先立ち、凍結または冷凍を必要とせず、およびあふれ出し、飛び散り、あるいは汚れがなく、正確に生成物の累積的な被曝熱量の視覚的な表示を与えるＴＴＩデバイスを提供することが本発明の別の目的である。食料、医薬品、化粧品などでの使用において安全なＴＴＩデバイスを提供することは本発明の別の目的である。冷凍貯蔵、室温貯蔵、ある温度範囲内の非冷凍および非冷蔵の貯蔵（たとえば、チョコレート、ブドウ酒、シャンペンなど）に適応された生成物に使用するためのＴＴＩデバイスを提供することは本発明の別の目的である。種々様々のパッケージの構成への添付を許容するために比較的薄く、柔軟なＴＴＩデバイスを提供することは本発明のさらなる別の目的である。
【００１５】
従って、本発明は：
（ａ）  微生物を含む第１の一部分；
（ｂ）  活性剤を含む第２の一部分；および
（ｃ）  ｐＨ−感受性の変色指示薬を含み、ここで、ｐＨ−感受性の変色指示薬は、部分（ａ）および（ｂ）の少なくとも１つに含まれている、
ＴＴＩシステムを提供する。
ここに使用される用語「活性剤」は、第１の部分に含まれている微生物のための栄養素で、微生物の増殖を促進し、酸の生成に導くすべての物質をいう。好ましい実施態様では、活性剤は、糖類のような炭素源を含む。
【００１６】
特定の実施態様では、本発明は、２つの部分の自己−粘着性ラベルを含むＴＴＩシステムを提供する。それは、反応性薬剤、すなわち微生物、および透明なプラスティックフィルム上に印刷された適切な水性のインキビヒクル中の変色指示薬を含む第１の部分、および公知の感圧性の自己−接着性の支持フィルム上に印刷された、反応性薬剤に特定の、活性剤成分を含んでいる水性の接着剤層を含む第２の部分を含み、この２つの部分は活性化まで別々に保持される。したがって、本発明のＴＴＩシステムは不活性な状態で構成され、モニタされる生成物ユニットと一緒にされたときにのみ、第１の部分の反応性薬剤表面と、第２の部分の活性剤表面が接触させることにより、活性化される。好ましい実施態様では、第１の部分は、指示薬の最終的な色と一致し、微生物に基づいたインキの周囲の、透明プラスティックフィルム上に印刷される公知のパーマネントインキをさらに含む。別の好ましい実施態様では、自己接着性の支持フィルム上に特定の活性剤をコーティングするために使用される水性の接着剤は、アクリルベースであり、約７．５から約８．０の間の範囲のｐＨを有する。別の好ましい実施態様では、第２の部分は、２枚のシリコーン剥離ライナーで両側が保護される。シリコーン剥離ライナーシートは、ＴＴＩを活性化し、生成物のパッケージング上にそれをマウントする時に除去される。
【００１７】
別の特定の実施態様では、反応性薬剤および活性剤の印刷は切り替えられる。すなわち、反応性薬剤は自己接着性の支持フィルム上に印刷され、活性剤は透明なシート上に印刷される。この場合、本発明は、活性剤を含む水性のコンタクト接着剤で印刷された透明フィルム基体を含む第１の部分、および微生物および変色指示薬を含む反応性インキで印刷された公知の感圧性接着ラベルを含む第２の部分を含む、２つの部分の自己−接着性ラベルを含むＴＴＩシステムを提供する。好ましい実施態様では、第２の部分は、指示薬の最終の色と一致する公知のパーマネントインキをさらに含む。
【００１８】
上に記載された特定の実施態様のいずれかにおいて、これらの２つの部分の少なくとも１つに含まれている限りでは、ｐＨ変色指示薬は第１の部分または第２の部分、または両方と混合することができる。
【００１９】
本発明は、（ｉ）微生物を含む第１の部分を印刷する工程；および（ｉｉ）活性剤を含む第２の部分を印刷する工程、を含むＴＴＩシステムを調製する方法であって、第１および第２の部分の少なくとも１つにｐＨ−感受性の指示薬が含まれ、第１の部分および第２の部分はＴＴＩシステムを活性化するまで別々に保持される方法を提供する。その後、ＴＴＩシステムは（ｉｉｉ）第１の部分と第２の部分とを互いに接触することにより活性化される。その後、活性化されたＴＴＩシステムは、生成物パッケージまたはコンテナにマウントされる。好ましい実施態様では、第１の部分は透明フィルム上に印刷される。別の好ましい実施態様では、第２の部分は透明フィルム上に印刷される。別の好ましい実施態様では、第１の部分は自己−接着性ラベル上に印刷される。別の好ましい実施態様では、第２の部分は自己−接着性ラベル上に印刷される。
【００２０】
本発明は、生成物の時間−温度履歴をモニタする方法であって：
（ｉ）第１の部分と第２の部分とを接触させることにより本発明のＴＴＩシステムを活性化すること；
（ｉｉ）モニタされる生成物上に、ＴＴＩシステムを添付すること；および
（ｉｉｉ）変色指示薬の最終の色と対照の色とを比較することにより、生成物の時間−温度履歴を評価することを含む方法を提供する。
特定の実施態様では、生成物は冷蔵貯蔵に適応される。別の特定の実施態様では、生成物は室温貯蔵に適応される。別の特定の実施態様では、生成物は非冷凍・非冷蔵に適応されるが、貯蔵のためのある温度範囲を要求する（たとえば、チョコレート、ブドウ酒、シャンペンなど）。
【００２１】
発明の詳細な説明
Ａ．  本発明のＴＴＩシステム／デバイス
本発明のＴＴＩシステムの基礎的な構成が、添付の図面を参照しつつ説明される。
本発明は以下を含むＴＴＩシステムを提供する：
（ａ）  微生物を含む第１の部分；
（ｂ）  活性剤を含む第２の部分；および
（ｃ）  ｐＨ−感受性の変色指示薬、ここでｐＨ−感受性の変色指示薬は（ａ）と（ｂ）の部分の少なくとも１つに含まれている。
【００２２】
図３に示される１つの特定の実施態様において、インディケーターデバイス１０は第１の部分２０および第２の部分３０を含み、不活性化状態では互いに接触していない。第１の部分２０は、好ましくはプラスチックである、透明で柔軟な印刷可能なフィルム２１で作られるカバー層を含む。フィルム２１としての適当な物質としては、ポリエステル類、ポリカーボネート類、ポリエチレン、ポリプロピレン、二軸延伸ポリプロピレン、二軸延伸ポリエチレンテレフタレート、ポリアミド、ポリウレタン類、ポリ塩化ビニルなどのような高分子材料があげられる。好ましい実施態様では、物質２１は透明なポリプロピレンフィルムである。フィルム層２１は非処理であることができ、または印刷適性を増加させために、１または両方の表面を、たとえば、ポリ塩化ビニリデンコポリマーまたはアクリルポリマーで処理することができる。更に、フィルム層２１は、帯電防止、接着受容性コーティングなどで処理されることができる。フィルム層２１は様々なプラスチックとの共押出によって調製されることができる。
【００２３】
フィルム層２１の下側においては、公知のパーマネントインキ２２が、反応性インキ２４の周囲のまわりに印刷される。反応性インキ２４および公知のインキ２２はプラスチックフィルム上に、同時にまたは任意の順序で印刷されることができる。しかしながら、より容易なハンドリングおよび貯蔵のために、公知のインキが最初に印刷され、後で印刷される反応性インキのためのスペースを残すことが望ましい。優先されることは、パーマネントインキ２２が、反応性インキ２４の配合物中に含まれる酸−塩基指示薬（すなわち変色指示薬；以下）の最終の色にマッチすることである。デバイスの使用のための指示を含む凡例のような他の情報、特別のメッセージまたはデバイスの適切な説明のための表示のような他の情報も印刷することができる。この場合、文字が逆向きで印刷され、フィルムの反対側から読むことができるように、注意しなければならない。公知のインキ２２に適当な印刷法は、オフセット、インクジェット、フレキソ印刷、シルクスクリーン、グラビア、フォリオまたはスプレー印刷である。好ましくは、メッセージはオフセット印刷され、インキ２２はシルクスクリーンによって印刷される。
【００２４】
反応性インキ２４は、水性のビヒクル、ｐＨ染料指示薬（すなわち変色指示薬または酸塩基指示薬；以下を参照）および微生物の集団からなることができる。水性のビヒクルは、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースおよびヒドロキシプロピルセルロースのようなセルロース誘導体、ヒドロ−ゲル、アラビアゴムまたは当該技術分野において公知の任意の水性の樹脂から選ばれることができ、たとえば、ロジンベースの樹脂、寒天、アカシアゴム、アルギナート、カラギーナン、グアーゴムおよびキサンタンのような天然高分子、およびポリアミド類、ポリビニルエステル類、ポリビニルアセタール類、ポリビニルエーテル類、エポキシ樹脂類、ポリアクリル酸エステル類、ポリメタクリル酸エステル類、ポリエステル類、アルキド樹脂、ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコール、ポリエチレンオキシド、ポリジメチルアクリルアミド、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメチルアセトアミド、ポリウレタン、ポリスチレン樹脂、スチレン−無水マレイン酸共重合体（ＳＭＡ）、スチレン−（メタ）アクリレートエステル共重合体樹脂、またはスチレン共役ジエン共重合体樹脂、ブチラール樹脂、キシレン樹脂、クマロン−インデン樹脂、並びに上記の混合物またはコポリマーのような合成高分子があげられるが、これらに制限されるものではない。適当な溶剤としては水、トリス−塩酸のようなアルカリのバッファ、重炭酸ナトリウムなどがあげられるが、これらに制限されるものではない。好ましい実施態様では、水性のビヒクルはヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）である。別の好ましい実施態様では、水性のビヒクルは、Ｐｒｉｎｔｃｏｌｏｒ  Ｓｃｒｅｅｎ社、Ｂｅｒｉｋｏｎ、スイスから利用可能なスクリーン印刷混合ペーストＳＥＲＩＥＳ  ４２０−０４、および他の水性のワニスから選択することができる。インキのｐＨは、水酸化ナトリウムでｐＨ７．８からｐＨ８．５の間に調節される。インキ２４のｐＨの調節は、使用される変色指示薬の反応性ｐＨ範囲との関係で非常に重要である。たとえば、そのｐＨ―反応性範囲が７．８（青）と６（黄色）の間の変色指示薬のためには、反応性インキ２４のｐＨは約７．８またはそれ以上で、微生物に有害なｐＨレベルより低くあるべきである。
【００２５】
反応性インキ２４の反応性要素は微生物の集団である。使用される微生物の種は、好ましくは食中毒を引き起こすことができないもの、つまり非病原性のものである。たとえ微生物が、食料生成物または薬生成物と直接接触しなくても、食物または医薬品を汚染するすべての危険を回避するために非病原性の微生物を使用することが望ましい。微生物の選択における別の重要な基準は、腐敗を助成する温度範囲においてそれが成長可能でなければならないということである。この点に関し、微生物が適当な栄養素に接している場合、約５℃から約４０℃の温度範囲で増殖する酸生成種であることが望ましい。その増殖の結果、インキ２４内の酸塩基指示薬の色を変化させる量まで、生成された酸の濃度が大きくなる。病原性でなく、上記の示された温度範囲で増殖し発酵することができる任意の微生物が、本発明のＴＴＩのために使用されることができる。そのような微生物としては以下のものが挙げられるが、これらに限定されるものではない。非病原性の菌類、たとえば、ベーカリ、醸造所および葡萄酒研究の中でしばしば使用される酵母類、および乳酸桿菌種のような、乳製品、シリアルおよび肉製品の中でしばしば使用される非病原性のバクテリア、たとえば、乳酸桿菌種（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．）（たとえば、ブルガリア菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、乳酸桿菌種ヘレベチカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｈｅｌｅｖｅｔｉｃｕｓ）、カセイ菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ）など）、プロピオンバクテリウム種（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｐ．）、（たとえば、プロピオンバクテリウム  アシジプロピオニエイ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｉｄｉｐｒｏｐｉｏｎｉｅｉ）、プロピオニバクテリウム  フレウデンレイチー（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ）など）、ビフィドバクテリウム種（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｐ．）（たとえば、ビフィドバクテリウム−ロングム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ）、ビフィドバクテリウム−ビフィダム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｉｆｉｄｕｍ）、ビフィドバクテリウム−インファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｆａｎｔｉｓなど）、ロイコノストック種（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｓｐｐ．）、（たとえば、ロイコノストック  メセンテロイデ（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）、ロイコノストック  カルノサム（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｃａｒｎｏｓｕｍなど）など）、ステプトコッカス種（Ｓｔｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｓｐ．）、（たとえば、ステプトコッカスサーモフィラス（Ｓｔｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）など）、および４連球菌種（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．）、（たとえば、ペディオコカス  アシディラクティシ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ）、ペディオコカス  ペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）、ペディオコカス  セレビジアエ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）など）があげられる。
【００２６】
好ましい実施態様では、本発明に使用される微生物は酵母である。適当な酵母菌株は葡萄酒研究、醸造所またはベーカリにおいて一般に使用されるもので、サッカロミケス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属に属するものである。いくつかの例としては、サッカロミケス  ケレウィシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サッカロミケス  ウバルム（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｕｖａｒｕｍ）、サッカロミケス  パストリアヌス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐａｓｔｏｒｉａｎｕｓ）およびサッカロミケス  バヤナス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｂａｙａｎｕｓ）があげられるが、これらに制限されない。これらの微生物の異なる菌株は、様々な商品名の下で多くのサプライヤによって商業上利用可能である。好ましい実施態様では、本発明のＴＴＩのために使用される酵母のタイプは、アクティブドライイースト（ＡＤＹ）またはインスタントドライイースト（ＩＤＹ）である。ＡＤＹは酵母の貯蔵安定性を延長するために、ＩＤＹのように、乾燥させた酵母である。しかしながら、ＡＤＹとＩＤＹは、ＡＤＹはそれを活性化するために微温湯中で水分を補給する必要があるという点で異なる。ＩＤＹは、活性化するために糖を含む水中にあらかじめつけられる必要のあるＡＤＹを、代替えするために３０年前に開発された。ＩＤＹは、ベーカリの中でしばしば使用され、先立つ再水和を要求しない。本発明のための反応性インキ中の微生物の適当な濃度は、１ｍｌのインキ当たり少なくとも約１０８のコロニーフォーミングユニット（すなわち１０８ＣＦＵ／ｍｌ）、および好ましくは少なくとも１０９ＣＦＵ／ｍｌである。
【００２７】
微生物を使用する本発明のＴＴＩシステムの反応は、そのグルコース発酵の生成物として酸を生産する酵母の嫌気性呼吸に基づく。ＴＴＩシステムの第１および第２の部分が、接着剤／グルコースの接触によって互いに接触された場合にのみ、反応が生じる。ＴＴＩシステムの貯蔵温度、したがってＴＴＩシステムが添付される生成物の貯蔵温度に依存する速度で酸が生産される。従って、本発明のＴＴＩシステムは、その貯蔵寿命が固定した温度で知られているタイプの生成物において最も役立つ。貯蔵中のどんな温度変動も、ｐＨの低下の結果として、期待されたよりも速い（またはより遅い）変色を引き起こすだろう。本発明の反応性システム（すなわち、反応性インキを含む部分）は、第１および第２の部分を一緒にしてパッケージングに取り付けることにより活性化されるまで、無水の状態で好ましくは維持される。微生物が殺されてしまうので、６０℃以上と成らないように十分注意しながら、水性の反応性インキ２４は完全に乾燥され、トレースの残留水も除去しなければならない。
【００２８】
インキ２４はさらにｐＨ染料指示薬（あるいは変色指示薬または酸塩基指示薬）を含む。本発明のＴＴＩシステムにふさわしい酸塩基指示薬は、約３．０から約８．５、好ましくは約３．５から約８．０、最も好ましくは約４．０から約７．５のｐＨ範囲を示すことができるべきである。その非制限的な例としては、ブロモクレゾールグリーン、メチルレッド、アリザリンレッド、クロロフェノールレッド、ブロモクレゾールパープル、ブロモチモールブルー、ブリリアントイエローなどがあげられる。好ましい実施態様では、変色指示薬はブロモチモールブルーであり、これは青（約ｐＨ  ７．８）から黄色（約ｐＨ  ６．０）の明瞭な色遷移を呈する。別の好ましい実施態様では、酸塩基指示薬はクロロフェノールレッドであり、これは４．８（黄色）から６．０（スミレ色）の間のｐＨ範囲で変化する。本発明のＴＴＩにふさわしい種々様々の染料は「Ｔｈｅ  Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｓｔｒａｉｎｓ，Ｄｙｅｓ  ａｎｄ  Ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ」、１９９１年、第２版、シグマ−アルドリッチ、ミウォーキー、ウィスコンシン州から利用可能、に見出される。ｐＨ−感受性の変色指示薬は、反応性インキ２４または接着剤層３１（以下）のいずれか、または両方に組み入れることができる。好ましくは、変色指示薬の量は、反応性インキまたは接着剤層の重量に基づいて、少なくとも約０．０５％、少なくとも約０．１％、少なくとも約０．２％、少なくとも約０．５％、少なくとも約１％または少なくとも約２％である。
【００２９】
図３において、第２の部分３０は、平面の支持フィルム３２、感圧接着剤層３３およびシリコーン剥離ライナ３４ａを含む公知の自己−接着性ラベルを含んでいる。接着剤層３１は活性剤を含んでおりフィルム３２上に印刷される。また、剥離ライナ３４ｂは接着剤層３１をカバーする。フィルム３２にふさわしい支持材の非制限的な例としては、ポリエステル類、ポリカーボネート類、ポリエチレン、ポリプロピレン、二軸延伸ポリプロピレン、二軸延伸ポリエチレンテレフタレート、ポリアミド類、ポリウレタン類、ポリ塩化ビニルなどのような高分子材料があげられる。好ましい実施態様では、平面の支持フィルム３２は白色のポリプロピレンフィルムである。フィルム層３２は非処理であることができ、または印刷適性を増加させために、１または両方の表面を、たとえば、ポリ塩化ビニリデンコポリマーまたはアクリルポリマーで処理することができる。更に、フィルム層３２は、帯電防止、接着剤受容性コーティングなどで処理されることができる。フィルム層３２は様々なプラスチックとの共押出によって調製されることができる。
【００３０】
接着剤層３３は溶剤性または水性の自己−接着性接着剤、ＵＶまたは他の放射線硬化可能な接着剤または、感圧接着剤であることができる。好ましい実施態様では、感圧接着剤が最も好ましい。接着剤層３３は、生成物のコンテナまたはパッケージングへのＴＴＩシステム／デバイスの付着を許容する。
【００３１】
最下層３４ａは、接着剤層３３の下に置かれる剥離ライナであり、それはモニタされる生成物のパッケージングへ、ＴＴＩデバイスを付着するに先立って取り除かれる。
【００３２】
接着剤層３１は、第１の部分の反応性インキ２４中の微生物の栄養素として使用される、活性剤成分と配合される。本発明のＴＴＩのために使用される栄養素は微生物の増殖を促進し、それによって酸の生産を導くものであるべきである。非常に基礎的な配合物では、活性剤として要求される最低限のメディアは炭素源である。本発明にふさわしい炭素源としては、例えば、グルコース、レブロース、マンノースおよびガラクトースのような単糖類；スクロース、ラクトースおよびマルトースのような二糖類；およびでんぷん、イヌリンおよびデキストリンのような多糖類があげられる。
【００３３】
好ましい実施態様では、グルコースが微生物のための炭素源として使用される。微生物の代謝経路が好気的呼吸の代わりに、発酵工程に向けられ、それによって酸の生産に結びつくように、接着剤層３１に含まれるグルコースの量が調節されるべきである。
【００３４】
特定の実施態様では、活性剤の量は接着剤層３１の重量に基づいて、好ましくは少なくとも約１０％、より好ましくは少なくとも約１５％、最も好ましくは少なくとも約２０％である。接着剤層３１中の接着剤は水性で、好ましくはＦｏｒｂｏ  ＳｗｉｆｔまたはＫｉｗｏ（Ｋｉｓｓｅｌ＆Ｗｏｌｆ）から利用可能なアクリルベースのものである。好ましくは、層３１の中の接着剤のｐＨは、約７．５と約８．５の間、より好ましくは約７．８と約８．３の間、最も好ましくは約８．０に調節されるべきである。あるレベルの水が保持されるように、この接着剤も注意深く乾燥されなければならない。接着剤層の望ましい含水量は１０％と約５０％の間、より好ましくは約１５％と約４０％の間、そして最も好ましくは約２０％と約３０％の間である。第１および第２の成分が互いに接触させられる場合、これは微生物の活性化にとって重要である。接着剤層はさらにある種の添加剤を含むことができ、たとえば、κ−カラギーナンを層の保水性を増加させるために含むことができる。κ−カラギーナンは親水コロイドの特性を有し、水溶性の直鎖状のアニオン性の多糖類ガムである。カラギーナンは紅ソウのある種に生じて、１、３−結合β−Ｄ−ガラクトピラノシルと１，４結合α−Ｄ−ガラクトピラノシル単位を交互に有する直鎖の多糖類である構造を有する。接着剤層の保水性を増加させるために、水を含んでいるマイクロカプセル並びに他の親水コロイド物質も活性剤に加えられることができる。
【００３５】
第２の成分の最上層３４ｂは接着剤層３１上に適用される剥離ライナであり、第１の部分２０と第２の部分３０を互いに接触させ、ＴＴＩを活性化する前に除去される。剥離ライナ３４ｂは、システムの活性化の前の接着剤層３１の、最適の保護と剥離のため、接着剤層３１のタック特性に匹敵するタック特性を有するべきである。
【００３６】
結合されていない状態で表わされた、本発明の別の好ましい実施態様の累積的なＴＴＩの断面図が図４に示される。この異なる実施態様では、反応性成分と活性剤成分の位置が変わっている。すなわち、反応性インキ２５は自己−接着性ラベル３１０上に印刷され、活性剤を含んでいる接着剤３１は、透明フィルム２１上に印刷される。インディケータデバイス１００は第１の部分２００および第２の部分３００を含んでいる。それは不活性化された状態で互いに接していない。第１の部分２００は、透明で柔軟な、印刷不能なプラスチックフィルム２１で作られていた、カバー層を含んでいる。フィルム２１としての適当な支持材は図３のために記載されたものと同じ物である。好ましい実施態様では、支持材は透明なポリプロピレンフィルムである。フィルム層２１は非処理であることができ、または印刷適性を増加させために、１または両方の表面を処理することができる。フィルム層２１は様々なプラスチックとの共押出によって調製されることができる。
【００３７】
接着剤層３１は、反応性インキ２５中の微生物によって栄養素として使用される活性剤成分と配合される。好ましい実施態様では、グルコースは微生物のための炭素源として使用される。微生物の代謝経路が好気的呼吸の代わりに、発酵工程に向けられ、それによって酸の生産に結びつくように、接着剤層３１に含まれるグルコースの量が調節されるべきである。接着剤層３１中の接着剤は水性で、好ましくはＦｏｒｂｏ  ＳｗｉｆｔまたはＫｉｗｏ（Ｋｉｓｓｅｌ＆Ｗｏｌｆ）から利用可能なアクリルベースのものである。第１の部分（すなわち、活性剤部分）の最下層３４ｂは、接着剤層３１上に適用された剥離ライナであり、部分２００と部分３００を接触させることにより、ＴＴＩを活性化する前に除去される。剥離ライナ３４ｂは、システムの活性化の前の接着剤層３１の、最適の保護と剥離のため、接着剤層３１のタック特性に匹敵するタック特性を有するべきである。
【００３８】
第２の部分３００は、下から順にシリコーン剥離ライナ３４ａ、感圧接着剤層３３、および平面支持フィルム３２を有する、公知の自己−接着性ラベル３１０を含む。公知のパーマネントインキ２２は、反応性インキ２５の周囲に、フィルム層３２上に印刷される。反応性インキ２５および公知のインキ２２はプラスチックフィルム上に、同時にまたは任意の順序で印刷されることができる。しかしながら、より容易なハンドリングおよび貯蔵のために、公知のインキが最初に印刷され、後で印刷される反応性インキのためのスペースを残すことが望ましい。優先されることは、パーマネントインキ２２が、反応性インキ２５の配合物中に含まれる指示薬（すなわち変色指示薬；以下）の最終の色にマッチすることである。デバイスの使用のための指示を含む凡例のような他の情報、特別のメッセージまたはデバイスの適切な説明のための表示のような他の情報も印刷することができる。公知のインキ２２に適当な印刷法は、オフセット、インクジェット、フレキソ印刷、シルクスクリーン、グラビア、フォリオまたはスプレー印刷である。好ましくは、メッセージはオフセット印刷され、インキ２２はシルクスクリーンによって印刷される。
【００３９】
反応性インキ２５は、図３の反応性インキ２４について記載されたものと同じ物で、水性のビヒクル、ｐＨ染料インディケータ、および微生物の集団からなる。好ましい実施態様では、水性のビヒクルはヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）である。別の好ましい実施態様では、水性のビヒクルは、ＰＲＩＮＴＣＯＬＯＲ  Ｓｃｒｅｅｎ社、Ｂｅｒｉｋｏｎ、スイスから利用可能なスクリーン印刷混合ペーストＳＥＲＩＥＳ  ４２０−０４から選択することができる。インキのｐＨは、水酸化ナトリウムでｐＨ７．８からｐＨ８．５の間に調節される。図３の反応性インキ２４について記載されているように、反応性インキ２５の反応性要素は、微生物の集団である。インキ２５は、インキ２４について記載されているようにｐＨ染料インディケータも含む。好ましい実施態様では、変色指示薬はブロモチモールブルーであり、これは青（約ｐＨ  ７．８）から黄色（約ｐＨ  ６．０）の明瞭な色遷移を呈する。別の好ましい実施態様では、酸塩基指示薬はクロロフェノールレッドであり、これは４．８（黄色）から６．０（スミレ色）の間のｐＨ範囲で変化する。図３について記載されたように、ｐＨ−感受性の変色指示薬は、反応性インキ２５または接着剤層３１（上記）のいずれか、または両方に組み入れることができる。好ましくは、変色指示薬の量は、反応性インキまたは接着剤層の重量に基づいて、少なくとも約０．０５％、少なくとも約０．１％、少なくとも約０．２％、少なくとも約０．５％、少なくとも約１％または少なくとも約２％である。
【００４０】
本発明の別の実施態様では、図３および４における自己−接着性ラベルは、任意の好適な支持基体、たとえば非制限的な例としては、ポリエステル類、ポリカーボネート類、ポリエチレン、ポリプロピレン、二軸延伸ポリプロピレン、二軸延伸ポリエチレンテレフタレート、ポリアミド類、ポリウレタン類、ポリ塩化ビニルなどのような高分子材料があげられる。図３での部分３０および図４での部分３００、並びに図３での部分２０および図４での部分２００は、ＴＴＩシステムが活性化される時まで、ロールで、または折られた状態で格納されることができる。ＴＴＩデバイスは、部分３０または３００と、ＴＴＩシステムを活性化し、モニタリングを始める時に部分３０または３００の上に付けられる部分２０または２００の、２つの別個のロールまたは折りたたまれたものとして最終エンドユーザに供給されることができる。
【００４１】
図５は、結合された状態（活性化された状態）で表わされたＴＴＩデバイスを示し、モニタされる目的物４０（生成物）に添付される。グルコースを含んでいる接着剤３１を含む部分２００、および反応性インキ２５を含んでいる部分３００を互いに接触して置き、インディケータデバイス１００を活性化する。好ましい実施態様では、生成物４０は、コンテナ（たとえば、薬ボトル）内に、またはパッケージング（たとえば、食物パッケージング）内にある。また、本発明のＴＴＩデバイスは、直接生成物自体の上にではなく、コンテナまたはパッケージングに添付される。
【００４２】
別の実施態様では、生成物のための包装材料はそれ自身、図３および図４の中で示される実施態様中の平面の支持フィルム３２として役立つことができる。この場合、感圧接着剤層３３およびシリコーン剥離ライナ３３は必要ではない。活性剤を含んでいる接着剤層３１（図３構成の場合）、または反応性インキ２５および公知のパーマネントインキ２２を有する層（図４構成の場合）のいずれかは、この目的のために特に用意された包装材料の表面上に直接印刷することができる。その後、部分２０（図３構成中）または２００（図４構成中）は、部分３０または３００の上にそれぞれ置かれる。その結果、活性剤表面および反応性インキ表面は互いに接触し、ＴＴＩが活性化される。
【００４３】
Ｂ．  ＴＴＩを調製する方法
本発明は、本発明のＴＴＩシステム／デバイスを調製する方法をさらに包含する。
従って、本発明は、以下の工程を含むＴＴＩシステムを調製する方法を提供する：
（ｉ）  微生物を含む第１の部分の印刷する工程；
（ｉｉ）  活性剤を含む第２の部分の印刷する工程；および
（ｉｉｉ）第１の部分と第２を互いに接触させる工程、ここで、第１の部分または第２の部分のいずれか、あるいは両方は、ｐＨ−感受性の変色指示薬を含んでいる。
【００４４】
図３、４および５に記載された好ましい実施態様は、図６−８に概略的に例証される装置５０、６０、６２および６３によって有利に構築されることができる。図６の中で示される装置５０は、既に公知のインキ２２で印刷された、部分２１または３１０上に、それぞれ反応性インキ２４または２５の層を堆積させるコーティングプリンターである。コーティング印刷プロセスは、ポンピィング、ブレンディング、インジェクティング、および反応性インキ２４または２５用の成分を最後に印刷することを含んでいる。当業者は、所定の反応性インキの印刷のために適当な、コーティングプリンターのための種種のパラメータ、たとえば、速度、温度、熱風フラックス、坪量などをセットアップする方法を、それらのスペック（たとえば、組成、粘度など）にしたがって、知るだろう。その後、得られた部分２０または３００は、ロールにされるかまたは折られ、生成物上へのＴＴＩデバイス１００の添付および活性化の時に、部分３０または２００とそれぞれ結合されて使用されるまで、格納される。
【００４５】
本発明のインディケータを提供するための装置の第２の実施態様は、図７に概略的に例証される。装置６０は、図４および５に関して記載された実施態様に従って作られるＴＴＩの提供に特に適している。装置６０は、部分２００を印刷するためのロータリーＵＶスクリーン印刷装置である。シリコーン剥離ライナ３４ｂのロールは解かれ、グルコース活性剤が配合された接着剤３１の層を堆積させるロータリーＵＶスクリーン印刷装置６０を通過する。無色透明で、柔軟で、印刷可能なプラスチックフィルム２１のロールは、同時に巻き解かれる。フィルム２１および剥離ライナ３４ｂは、機械の一部である積層ツールを通過する間に接着剤３１で結合される。このようにして形成された部分２００は、紫外線照射器６１の下を通過する。部分２００はついでラミネート装置６２へ導かれる。得られた部分２００は、図７に示されるように、部分２００のいくつかのストリップの長さへ型抜きされ、後で分離されるためにその間に穿孔されることができる。あるいは、図８に示すように、インディケータの部分２００は長いテープとして調製され、ロールに巻かれることができる。これらのプロセスは、図３の部分３０を作るために同様に適用可能である。
【００４６】
したがって、本発明のＴＴＩデバイスはそれぞれ部分２０または２００、および３０または３００の２つのロールとして製造し、エンドユーザに供給することができる。
【００４７】
１つの好ましいマウント法（図示されない）では、部分２０または２００は、巻きほどきアセンブリーによって最初に巻き解かれる。また、剥離ライナ３４ｂは部分３０または２００からそれぞれ取り除かれる。その後、部分２０または２００は部分３０または３００の上に置かれる。第２の工程では、得られた活性化デバイス１０または１００は、モニタされる目的物（生成物）４０に添付される。これは第２の巻きほどきアセンブリーによって部分３０または３００から、剥離ライナ３４ａをピーリングし、ＴＴＩデバイス用に予約された場所に、生成物４０に部分３０または３００を添付することにより行われる。別の好ましいマウント法（図示されない）では、部分３０または３００は、モニタされる目的物４０に、最初に添付される。その後、部分２０または２００は巻きほどきアセンブリーで巻き解かれ、剥離ライナ３４ｂが除去される。その後、部分２０または２００は、部分３０または３００の上に正確にそれぞれ置かれ、生成物４０に添付される。
【００４８】
当業者は、製造工程の費用効果および便宜を考えて、部分２０／２００と３０／３００を製造し、生成物への活性化されたＴＴＩをマウントすることへの適切な改良を行うことができるであろう。
【００４９】
Ｃ．  生成物をモニタする方法
本発明は、以下を含む、熱に敏感な生成物をモニタする方法を提供する：
（ｉ）ＴＴＩシステムの第１の部分と第２の部分とを接触されることにより、本発明のＴＴＩシステムを活性化すること；
（ｉｉ）生成物に活性化されたＴＴＩシステムを添付すること；および
（ｉｉｉ）ｐＨ−感受性の変色指示薬の変色に基づいて生成物の時間−温度履歴を評価すること。
好ましい実施態様では、本発明のＴＴＩシステムは、さらに変色指示薬の最終の色と一致する公知のパーマネントインキを含む。パーマネントインキ（上記参照；さらに図３および図４の２２を参照）は、インディケータの変色を評価するための対照の色として役立つ。
【００５０】
実施例
次の例は、本発明のＴＴＩシステムを例証する。これらの例は制限として解釈されるべきでない。特記のない限り、すべてのパーセンテージは重量により、温度は摂氏である。
【００５１】
実施例  １−３
図３に記載された第１の好ましい実施態様に従い、ＴＴＩデバイス１０は以下のように調製された：部分２０は両方ともフィルム２１上に印刷された反応性インキ２４および公知のインキ２２を含む。Ｐａｎｔｏｎｅ  １２９Ｃ参照に相当するＴＴＩデバイスの最終の色と一致するため、公知の参照インキ２２はＶＦＰ  ＭＰＩ  Ｙｅｌｌｏｗ（ＶＦＰ  Ｓｃｒｅｅｎ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｉｎｋｓ，Ｓａｉｎｔ−Ｃｈｒｉｓｔｏｌ−ｌｅｚ−Ａｌｅｓ，フランス）からなる。それは、ＫＡＩＲＯＳ  Ｓ２０（ＫＡＩＲＯＳ、パリ、フランス）で９０のメッシュステンシルで印刷された。１ｃｍ２のスペースが、反応性インキが印刷されるために取っておかれた。使用されたフィルム２１は、透明な、二軸延伸されたポリプロピレン（ＢＯＰＰ）である、Ｌａｂｅｌ−Ｌｙｔｅ  ＬＬ５３６  フィルム（ＥｘｘｏｎＭｏｂｉｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｆｉｌｍｓ，Ｒｕｅｉｌ−Ｍａｌｍａｉｓｏｎ，フランス）であった。
【００５２】
反応性インキ２４は、ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）４％で作られたビヒクルと、酵母株の混合物、および酸塩基指示薬を混合することにより調製された。ヒドロキシエチルセルロースの溶液は、８ｇのＨＥＣ（ＦＬＵＫＡ  Ｃｈｅｍｉｅ  ＧｍｂＨ、Ｂｕｃｈｓ、スイス）を、０．１ＭのＮａＯＨの４ｍｌ、および０．２μｍのＮａｌｇｅｎｅフィルター（Ｎａｌｇｅ社、Ｈｅｒｅｆｏｒｄ、英国）でろ過された脱イオン水１８８ｍｌとを混合することにより調製され、２００ｍｌの透明な、本質的にバクテリアを含まない、最終ｐＨが９の４％のＨＥＣ溶液を提供した。酵母に基づいた反応性インキ２４は、１ｇのブロモチモールブルーインディケータ（Ａｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ  Ｆｒａｎｃｅ，Ｎｏｉｓｙ  Ｌｅ  Ｇｒａｎｄ，フランス）、１０ｇの乾燥酵母株ＬＡＰ  Ｆ（Ｌａｆｆｏｒｔ  Ｏｅｎｏｌｏｇｉｅ，Ｂｏｒｄｅａｕｘ，フランス）、および４％のＨＥＣ１００ｇを混合して調製された。すべての成分を、４０ｍｌの炭酸塩バッファｐＨ  ９（０．７１ＭのＮａＨＣＯ３およびＮａ２ＣＯ３を１００ｍｌまで脱イオン水で希釈した）と混合した。その後、反応性インキ２４は、指定された領域のフィルム２１上に印刷され、空気乾燥された。
【００５３】
実施例１−３において、ＴＴＩデバイスは本発明に従って調製された。部分３０の接着剤３１は、表１に示されたように配合された。ここで使用された成分以下の通りである：Ｓｙｎｃｏｌ  ５３４接着剤（ＦＯＲＢＯ  Ｓｗｉｆｔ  Ａｄｈｅｓｉｖｅｓ，  Ｂｌｏｉｓ，フランス），Ｋｉｗｏｐｒｉｎｔ  Ｄ１５８接着剤（Ｋｉｓｓｅｌ＋Ｗｏｌｆ  ＧｍｂＨ，Ｗｉｅｓｌｏｃｈ，ドイツ），Ｄ（＋）−グルコース（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｉｍｉｅ  Ｓ．ａ．ｒ．ｌ．，リヨン，フランス）、およびＴｅｇｏ  Ｆｏａｍｅｘ  １４９５（Ｔｅｇｏ  Ｇｏｌｄｓｃｈｍｉｄｔ  Ｆｒａｎｃｅ，Ｓｔ．−Ｑｕｅｎｔｉｎ−ｅｎ−Ｙｖｅｌｉｎｅｓ，フランス）。
【００５４】
【表１】
2007525664.tif 000003
【００５５】
部分３０の接着剤３１は、自己接着剤ラベルＭＡＣｓｃｒｅｅｎ（ＭＡＣｔａｃ、Ｍｏｒａｎｇｉｓ、フランス）上に印刷された。
【００５６】
その後、ＴＴＩデバイスの２つの得られた部分は一緒に貼り付けられ、そのデバイスは、１２℃で維持された、Ｆｒｉｏｃｅｌｌ  ５５インキュベーター（ＭＭＭ  Ｍｅｄｃｅｎｔｅｒ  ＧｍｂＨ、Ｇｒａｆｅｌｆｉｎｇ、ドイツ）に移され（実施例１および３）、または４０℃で維持されたＢＥ４００  Ｍｅｍｍｅｒｔインキュベーター（ＭＥＭＭＥＲＴ、ＧｍｂＨ、Ｓｃｈｗａｂａｃｈ、ドイツ）に移された（実施例２）。分光光度計Ｍｉｎｏｌｔａ  ＣＭ−５０３ｉ（Ｋｏｎｉｃａ  Ｍｉｎｏｌｔａ  Ｐｈｏｔｏ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｆｒａｎｃｅ  Ｓ．Ａ．，Ｒｏｉｓｓｙ  Ｃ．Ｄ．Ｇ．，フランス）を使用して、Ｌ＊ａ＊ｂ＊スペースの測色値を得た。２つの部分が一緒にされた、ＴＴＩシステムの最初の活性化から、酸塩基変色指示薬の変色が生じるまでの時間が測定された。これらの条件の下では、実施例１−３のインディケータ組成物は、表２に示される時間内で、青い色から緑がかった黄色に変わった。
【００５７】
【表２】
2007525664.tif 000004
【００５８】
実施例４
次の例は、２つの反応成分の順序を逆にし、インキビヒクルおよびｐＨ染料インディケータを置き換えて得られた第２の好ましい実施態様を例証する。図４に記載された第２の好ましい実施態様により、新しい時間温度指示デバイス１００は以下のように調製された：部分３００は、公知の自己−接着性ラベル３１０（例えばＭＡＣｓｃｒｅｅｎ）（ＭＡＣｔａｃ、Ｍｏｒａｎｇｉｓ、フランス）上に印刷された反応性インキ２５を含む；また、部分２００は、たとえば、二軸延伸ポリプロピレンフィルム（ＢＯＰＰ）のようなフィルム上に印刷された、活性剤を含む接着剤の層３１を含む。
【００５９】
実施例４では、反応性インキ２５は、水性のビヒクル、ｐＨ染料インディケータおよび微生物の集団を混合することにより調製された。この実施態様において選択された水性のビヒクルは、ＰＲＩＮＴＣＯＬＯＲ  Ｓｃｒｅｅｎ社（Ｂｅｒｉｋｏｎ、スイス）から利用可能な、水性のスクリーン印刷ブレンディングペースト、ＳＥＲＩＥＳ  ４２０−０４である。反応性インキ２５の反応要素は微生物、好ましくは酵母菌株の集団である。インディケータデバイスに使用された商業上利用可能な酵母菌株は、表３に示され、およびそれらの量は酵母の乾燥重量１ｇ当たりのコロニー形成単位（ＣＦＵ）として記載されている。インキ２５はさらにｐＨ染料インディケータを含む。酸塩基指示薬は、好ましくはクロロフェノールレッドであり、４．８（黄色）から６．０（スミレ色）の間のｐＨ変化範囲で変化する。
【００６０】
【表３】
2007525664.tif 000005
【００６１】
インディケータ溶液は、１Ｍ  ＮａＯＨの１０ｍｌ中にクロロフェノールレッド（ＦＬＵＫＡ  Ｃｈｅｍｉｅ  ＧｍｂＨ、Ｂｕｃｈｓ、スイス）を０．２ｇ混合することにより調製された。酵母溶液は、１ｇのＬＡＰ  Ｇ酵母株（Ｌａｆｆｏｒｔ  Ｏｅｎｏｌｏｇｉｅ、ボルドー、フランス）を、２μｍのＮａｌｇｅｎｅフィルタ（Ｎａｌｇｅ社、Ｈｅｒｅｆｏｒｄ、英国）でろ過された９ｍｌの脱イオン水中に溶解し、インキ１ｇ当たり、１０８ＣＦＵ／ｇの最終濃度とすることにより調製した。酵母に基づいた反応性インキ２５は、クロロフェノールレッドインディケータ溶液の３ｍｌ、および水性のスクリーン印刷ブレンディングペースト、ＳＥＲＩＥＳ  ４２０−０４（ＰＲＩＮＴＣＯＬＯＲ  Ｓｃｒｅｅｎ社、Ｂｅｒｉｋｏｎ、スイス）中の０．３ｍｌの酵母溶液を混合し、最終全重量を３０ｇとすることにより調製された。その後、反応性インキ２５は、スーパーホワイトの不透明、高光沢、気泡含有の二軸延伸ポリプロピレン（ＢＯＰＰ）である、Ｌａｂｅｌ−Ｌｙｔｅ  Ｌｉｔｈｏｒ  ＬＴＬ２４７フィルム（ＥｘｘｏｎＭｏｂｉｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｆｉｌｍｓ、Ｒｕｅｉｌ−Ｍａｌｍａｉｓｏｎ、フランス）上に印刷された。
【００６２】
配合された部分２００の接着剤３１は、１０％（ｗ／ｗ）のＤ（＋）−グルコース（シグマ−アルドリッチ  Ｃｈｉｍｉｅ  Ｓ．ａ．ｒ．ｌ、リヨン、フランス）および２％の  Ｔｅｇｏ  Ｄｉｓｐｅｒｓ  ７５０Ｗ（Ｔｅｇｏ  Ｇｏｌｄｓｃｈｍｉｄｔ  Ｆｒａｎｃｅ、Ｓｔ―Ｑｕｅｎｔｉｎｅｎ−Ｙｖｅｌｉｎｅｓ、フランス）を含むＳｗｉｆｔ  Ｅ３１１接着剤（ＦＯＲＢＯ  Ｓｗｉｆｔ  Ａｄｈｅｓｉｖｅｓ，Ｂｌｏｉｓ，フランス）であった。その後、それは、両側をポリ塩化ビニリデン（ＰＶｄＣ）共重合体の水性分散液でコーティングされた二軸延伸されたポリプロピレン（ＢＯＰＰ）フィルムである、透明なＰｒｏｐａｆｉｌｍ（登録商標）ＲＨ５０（ＵＣＢ  Ｓｕｒｆａｃｅ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ，Ｄｉｊｏｎ，フランス）上にスクリーン印刷された。
【００６３】
このようにして調製された部分２００および部分３００は図５に示されるように一緒に貼り付けられ、３０℃で維持されたＢＥ４００  Ｍｅｍｍｅｒｔインキュベーター（ＭＥＭＭＥＲＴ、ＧｍｂＨ、Ｓｃｈｗａｂａｃｈ、ドイツ）に移された。Ｌ＊ａ＊ｂ＊スペースの測色値が、分光光度計Ｍｉｎｏｌｔａ  ＣＭ−５０３ｉ（Ｋｏｎｉｃａ  Ｍｉｎｏｌｔａ  Ｐｈｏｔｏ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｆｒａｎｃｅ  Ｓ．Ａ．Ｓ．、Ｒｏｉｓｓｙ  Ｃ．Ｄ．Ｇ．、フランス）を使用して得られた。これらの条件の下では、実施例４のインディケータ組成物は、３３６時間以内に、スミレ色からベージュイエローまで変色した。
【００６４】
実施例５
次の例において、異なる酵母菌株を使用する実現可能性がテストされた。また、呈色反応に必要なセルの最少数が液体培地中で決定された。３つのパラメータが評価された：７つの酵母菌株、２つの酵母の濃度および２つのグルコースの濃度。増殖培地は、変色指示薬ＣＰＲ（クロロフェノールレッド）が追加された、水中のグルコースだけの溶液であった（最低限の培地）。用語「酵母−」は酵母のないグルコースの溶液を示す。用語「ＧＬＵ−」は酵母株ＬＳ２が接種された水を示す。チューブはすべて、表面に無菌のパラフィン油（ＧＩＦＲＥＲ  ＢＡＲＢＥＺＡＴ、Ｄｅｃｉｎｅｓ、フランス）の３滴を加えることにより、無気的条件に置かれ、ＢＥ４００  Ｍｅｍｍｅｒｔインキュベーター（ＭＥＭＭＥＲＴ、ＧｍｂＨ、Ｓｃｈｗａｂａｃｈ、ドイツ）中、３０℃でインキュベートされた。結果は表４に示される。
【００６５】
【表４】
2007525664.tif 000006
【００６６】
グルコース溶液の１０ｍｌ当たり１０６の酵母菌を含む接種原（すなわち１０５ＣＦＵ／ｍｌ）は、明瞭な変色を与えるのには十分ではなかった。この濃度では、２０％のグルコース溶液でも、３５％のグルコース溶液でも、酵母の増殖はみられなかった。グルコース溶液の１０ｍｌ当たり１０９の酵母菌を含む接種原（すなわち１０８ＣＦＵ／ｍｌ）では、グルコースの消費、培地の酸性化およびしたがってスミレ色から深い黄色への変色が見られた。対照試験の「ＧＬＵ−」および「酵母−」では、色はスミレ色のままであった。これは、変色が酵母によるグルコースの発酵によるためであり、水中に他の有機体（対照酵母−を参照）による汚染も、酵母増殖もなかったことを実証した（対照ＧＬＵ−を参照）。菌株はすべて、嫌気性条件の下でグルコースを発酵させ（非常に高濃度の場合でさえ）、１ｍｌ当たり１０８個のセルの最低量で、変色指示薬の変色を引き起こすことができた。これらの結果に基づいて、我々は、システムが使用されたすべての酵母で、液体の構成において利用可能なことを示した。また、酵母濃度の最低水準は１ｍｌ当たり１０８個セルであるとわかった。
【００６７】
実施例６
次の例は、反応速度の変化が使用される酵母菌株に依存することを実証する。本発明の第２の好ましい実施態様において、使用された酵母が、Ｆｅｒｍｉｒｏｕｇｅ（登録商標），Ｆｅｒｍｉｃｒｕ（登録商標）ＬＳ２、およびＦｅｒｍｉｃｒｕ（登録商標）ＬＶＣＢ（ＤＳＭ  Ｆｏｏｄ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ  Ｂｅｖｅｒａｇｅ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ，Ｍｏｎｔｐｅｌｌｉｅｒ，フランス）であるという点を除いて、ＴＴＩデバイスが実施例４と同じ方法で調製された。
【００６８】
酵母溶液は、２ｇのそれぞれの酵母株と、０．２μｍのＮａｌｇｅｎｅフィルタ（Ｎａｌｇｅ社、Ｈｅｒｅｆｏｒｄ、英国）によってろ過された脱イオン水１０ｍｌを混合し、１グラムのインキ当たり５×１０８ＣＦＵの最終濃度として調製した。各々の酵母インキ２５は配合され、バーコーター（２４μｍ）で、不透明白色フィルムの二軸延伸ポリプロピレン（ＢＯＰＰ）Ｌａｂｅｌ−Ｌｙｔｅ  ＬＨ５３６（ＥｘｘｏｎＭｏｂｉｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｆｉｌｍｓ，Ｒｕｅｉｌ−Ｍａｌｍａｉｓｏｎ，フランス）上に印刷された。
【００６９】
１０％ではなく、２０％のグルコースを含むという点を除いて、接着剤３１は、実施例４と同じ方法で配合された。その後、ＴＴＩデバイスの２つの得られた部分は一緒に貼り付けられ、３０℃に維持されたＢＥ４００  Ｍｅｍｍｅｒｔインキュベーター（ＭＥＭＭＥＲＴ、ＧｍｂＨ、Ｓｃｈｗａｂａｃｈ、ドイツ）に移された。Ｌ＊ａ＊ｂスペースの測色値が分光光度計Ｍｉｎｏｌｔａ  ＣＭ−５０３ｉ（Ｋｏｎｉｃａ  Ｍｉｎｏｌｔａ  Ｐｈｏｔｏ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｆｒａｎｃｅ  Ｓ．Ａ．Ｓ．，Ｒｏｉｓｓｙ  Ｃ．Ｄ．Ｇ．，フランス）を使用して、測定された。
【００７０】
図９に示されるように、結果は３つの株について、ｂ＊の測色値対時間のプロットが、同様の一般的傾向を有することを示した。カーブは互いに重ね合わせることができた。
３つの菌株中のｂ＊数値の差は時間に沿って維持された。各カーブのスタート部分（最初の２４時間）は、ｂ＊数値の増加を示した。それは、反応成分の層と活性剤の層の間のｐＨの平衡に対応する。平衡の後、ｂ＊数値の直線的な増加が続く。これは培地の酸性化によるスミレ色からベージュイエローまでの変色を反映する。上記の例は、本発明が、長期間の、室温または高温での貯蔵に適応された生成物に使用するためのＴＴＩシステム／デバイスを提供するのに適当であることを実証する。
【００７１】
実施例７
次の例は、接着剤３１中の特別の添加剤の使用により、水の保持量が増大され、配合物を改善できることを実証する。本発明の第２の好ましい実施態様によれば、接着剤３１が１０％のグルコース（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｉｍｉｅ  Ｓ．ａ．ｒ．ｌ．，リヨン，フランス）、０．５％のκ−カラギーナン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｉｍｉｅ  Ｓ．ａ．ｒ．ｌ．，リヨン，フランス）、および添加剤としてＬａｍｉｎｅｌｌｅ  Ｓｃｒｅｅｎｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ａｄｈｅｓｉｖｅ  Ｊ０６７２（ＣＯＡＴＥＳ  ＳＣＲＥＥＮ，Ｏｒｐｉｎｇｔｏｎ，英国）から構成されることを除いて、実施例４と同じ方法でＴＴＩシステム／デバイスが調製された。接着剤は、ハンドコーター（２４μｍ）を使用して、透明なＰｒｏｐａｆｉｌｍ（登録商標）ＲＨ５０（ＵＣＢ  Ｓｕｒｆａｃｅ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ，Ｄｉｊｏｎ，フランス）上に印刷された。
【００７２】
反応性インキ２５は、Ｆｅｒｍｉｃｒｕ  ＬＳ２  酵母株  （ＤＳＭ  Ｆｏｏｄ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ  Ｂｅｖｅｒａｇｅ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ，Ｍｏｎｔｐｅｌｌｉｅｒ，フランス）を使用して、実施例４と同じ方法で調製された。その後、ＴＴＩデバイスの得られた２部分は、正確な配向で一緒に結合され、３０℃で維持されたＢＥ４００  Ｍｅｍｍｅｒｔインキュベーター（ＭＥＭＭＥＲＴ、ＧｍｂＨ、Ｓｃｈｗａｂａｃｈ、ドイツ）に移された。Ｌ＊ａ＊ｂ＊スペースの測色値が分光光度計Ｍｉｎｏｌｔａ  ＣＭ−５０３ｉ（Ｋｏｎｉｃａ  Ｍｉｎｏｌｔａ  Ｐｈｏｔｏ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｆｒａｎｃｅ  Ｓ．Ａ．Ｓ．，Ｒｏｉｓｓｙ  Ｃ．Ｄ．Ｇ．，フランス）を使用して、測定された。これらの条件の下で、実施例７のＴＴＩシステムは図１０の中で示されたようにスミレ色らベージュイエローまで、４２日以内に色を変化させた。
【００７３】
本明細書に記載された本発明の特定の実施態様との多くの等価物を、型通りの実験作業により当業者は認識するか、または確認することができるだろう。そのような等価物は、クレームによって包含されるように意図される。この詳述の中で言及された出版物および特許はすべて、それらの全体が参照され本明細書の一部として組み入れられる。
【図面の簡単な説明】
【００７４】
【図１】図１は、温度の累積的な履歴がモニタされるべき標準ハンドリングおよび輸送鎖内の生成物の様々な工程の概要図を示す。
【図２】図２は、ラベル自体、したがって生成物のそれの、時間および温度の両方の履歴を反映するＴＴＩラベルの最初および最終の状態の概要図を示す。図２Ａでは、温度は一定期間の間最適条件の中で維持された。しかし、図２Ｂでは、温度は変動し、それによって、ＴＴＩシステムおよびＴＴＩシステムを備える生成物は異なる期間、広範囲の温度へ暴露された。
【図３】図３は、結合されていない状態で表わされた、本発明の好ましい実施態様の累積的なＴＴＩの断面図を示す。
【図４】図４は、結合されていない状態で表わされた、別の好ましい実施態様の累積的なＴＴＩの断面図を示す。
【図５】図５は、結合された状態（すなわち、活性化された状態）で表わされた、図４のＴＴＩの断面図を示す。
【図６】図６は、本発明のインディケータを製造するためのコーティング装置の例についての概要図を示す。
【図７】図７は、本発明のインディケータを製造するためのロータリーＵＶクリーン印刷装置についての概要図を示す。
【図８】図８は、図７のラミネート装置６２とダイ６３の代替えの装置についての概要図を示す。
【図９】図９はＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属の３つの異なる菌株、すなわち、ＦＥＲＭＩＲＯＵＧＥ（登録商標）、ＦＥＲＭＩＣＲＵ（登録商標）ＬＳ２、およびＦＥＲＭＩＣＲＵ（登録商標）ＬＶＣＢの、本発明の１つの実施態様における色変化の速度への効果を示す図である。Ｙ軸は測色値ｂを表わす。また、Ｘ軸は時間を表わす。
【図１０】図１０は、親水コロイドの特性を有する直鎖状のアニオン性多糖ガムである添加剤（κ−カラギーナン）の、発色現像の速度に対する効果を示すグラフである。Ｙ軸は測色値ｂを表わす。また、Ｘ軸は時間を表わす。
【図１】
2007525664.tif 000007
【図２】
2007525664.tif 000008
【図３】
2007525664.tif 000009
【図４】
2007525664.tif 000010
【図５】
2007525664.tif 000011
【図６】
2007525664.tif 000012
【図７】
2007525664.tif 000013
【図８】
2007525664.tif 000014
【図９】
2007525664.tif 000015
【図１０】
2007525664.tif 000016
【国際調査報告】
2007525664.tif 000017
2007525664.tif 000018