(57)【要約】  ＢＯＣ−Ｌ−バリンにおけるＢＯＣ−Ｌ−アラニンおよび塩酸バラシクロビルにおけるアラニンアナログを分析するためのＨＰＬＣ法、ならびにバラシクロビル組成物を選択するための方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
約０．２面積％未満のアラニンアナログを含む塩酸バラシクロビル組成物を調製するための方法であって、
ａ）ＢＯＣ−Ｌ−バリンの１つ以上のバッチの１つ以上のサンプルを得る工程；
ｂ）工程（ａ）の前記サンプルの各々におけるＢＯＣ−Ｌ−アラニンのレベルを測定する工程；
ｃ）（ｂ）において行なわれた測定に基づいて約０．２面積％未満のＢＯＣ−Ｌアラニンのレベルを有するＢＯＣ−Ｌ−バリンのバッチを選択する工程；そして
ｄ）工程（ｃ）において選択されたバッチを用いて、塩酸バラシクロビル組成物を合成する工程；
を含んで成る方法。
【請求項２】
約０．２面積％未満のアラニンアナログを含む塩酸バラシクロビル組成物を調製するための方法であって、
ａ）ＢＯＣ−Ｌ−バリンのサンプルにおいてＢＯＣ−Ｌ−アラニンを測定する工程であって、ここで前記サンプルがＢＯＣ−Ｌ−バリンの１つ以上のバッチから選択される工程；
ｂ）約０．２面積％未満のＢＯＣ−Ｌ−アラニンを含むバッチを選択する工程；
ｃ）前記選択されたＢＯＣ−Ｌ−バリンとアシクロビルとを有機溶媒中で反応させて、混合物を得る工程；
ｄ）工程ｃ）の混合物と４−ジメチルアミノピリジン、次いで水とを合わせて、沈殿物を得る工程；
ｅ）工程ｄ）の前記沈殿物を除去する工程および得られた濾液を濃縮する工程；
ｆ）工程ｅ）の前記濃縮された濾液に対して還流下で低級アルコールを添加して、保護されたバラシクロビルを得る工程；
ｇ）工程ｆ）の保護されたバラシクロビルをギ酸、水およびＨＣｌ中で脱保護して、粗塩酸バラシクロビルを得る工程；そして
ｈ）工程ｇ）の塩酸バラシクロビルを水およびイソプロピルアルコール中で再結晶化して、約０．２面積％未満のアラニンアナログを有する組成物を得る工程；
を含んで成る方法。
【請求項３】
前記選択されたＢＯＣ−Ｌ−バリンバッチが、約０．１面積％未満のＢＯＣ−Ｌ−アラニンを含み、かつ得られた前記塩酸バラシクロビル組成物が、約０．１面積％未満のアラニンアナログを含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記選択されたＢＯＣ−Ｌ−バリンバッチが、約０．０５面積％のＢＯＣ−Ｌ−アラニンを含み、かつ得られた前記塩酸バラシクロビル組成物が、非検出可能なレベルのアラニンアナログを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
工程（ｃ）における前記有機溶媒が、ジシクロヘキシルカルボジイミドおよびジメチルホルムアミドの混合物である、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
工程（ｆ）における低級アルコールがイソプロピルアルコールである、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
ＢＯＣ−Ｌ−バリンサンプルを測定する工程がＢＯＣ−Ｌ−バリンのサンプルにおけるＢＯＣ−Ｌ−アラニンの量を決定するための液相−固相クロマトグラフィー方法によって行なわれる方法であって、以下の工程：
ａ）液相−固相クロマトグラフィーカラムに前記サンプルをロードする工程；
ｂ）約２７％のアセトニトリルおよび約７３％の０．０５％リン酸含有水を含む溶出剤を、約１ｍＬ／分以下の一定の流速で前記カラムにて溶出する工程；
ｃ）前記カラム溶出剤に対する、ＵＶ検出器の応答をモニタリングする工程であって、前記ＵＶ検出器が２００〜６００ｎｍの範囲で作動する工程；そして
ｄ）前記検出応答に基づいてＢＯＣ−Ｌ−バリン中のＢＯＣ−Ｌ−アラニンの量を面積パーセンテージとして算出する工程
を含んで成る、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項８】
塩酸バラシクロビルのサンプルにおけるアラニン誘導体の面積％が、液相−固相クロマトグラフィー方法によって測定される方法であって、以下の工程：
ａ）液相−固相クロマトグラフィーカラムに前記サンプルをロードする工程；
ｂ）第一および第二の溶出剤を含む勾配溶出剤であって、前記第一の溶出剤が０．０１Ｍリン酸二水素カリウム含有水（９８％）およびアセトニトリル（２％）を含み、そして第二の溶出剤がアセトニトリルを含む勾配溶出剤を、約１．５ｍＬ／分の一定流速で前記カラムにて勾配溶出する工程；
ｃ）前記カラム溶出剤に対する、ＵＶ検出器の応答をモニタリングする工程であって、前記ＵＶ検出器が２００〜６００ｎｍの範囲で作動する工程；そして
ｄ）前記検出応答に基づいて塩酸バラシクロビル中のアラニンアナログの量を面積パーセンテージとして算出する工程を
含んで成る、請求項２に記載の方法。
【請求項９】
前記カラムがシリカゲルカラムである、請求項７又は８に記載の方法。
【請求項１０】
前記第一の溶出剤のｐＨが約３．５である、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記カラム温度が約３０℃である、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
塩酸バラシクロビルにおけるアラニンアナログの量を測定する液相−固相クロマトグラフィー方法であって、以下の工程：
ａ）液相−固相クロマトグラフィーカラムに前記サンプルをロードする工程；
ｂ）第一および第二の溶出剤を含む勾配溶出剤であって、前記第一の溶出剤が０．０１Ｍリン酸二水素カリウム含有水（９８％）およびアセトニトリル（２％）を含み、そして第二の溶出剤がアセトニトリルを含む勾配溶出剤を、約１．５ｍＬ／分の一定流速で前記カラムにて勾配溶出する工程；
ｃ）前記カラム溶出剤に対する、ＵＶ検出器の応答をモニタリングする工程であって、前記ＵＶ検出器が２００〜６００ｎｍの範囲で作動する工程；そして
ｄ）前記検出応答に基づいて塩酸バラシクロビル中のアラニンアナログの量を面積パーセンテージとして算出する工程
を含んで成る方法。
【請求項１３】
塩酸バラシクロビルの固体投与形態のための品質管理流通方法であって、
ａ）乾燥ブレンドバッチの塩酸バラシクロビルおよび少なくとも１つの賦形剤を形成する工程、
ｂ）工程ａ）のバッチを塩酸バラシクロビルの固体投与形態の生産ロット中で処理する工程、
ｃ）請求項１２に記載の方法に従って、工程ｂ）の生産ロットからサンプル中のアラニンアナログの量を測定する工程、そして
ｄ）工程ｃ）において測定した検出可能なアラニンアナログの量が約０．２面積％未満である場合、工程ｂ）の生産ロットを商業上の流通にのせる工程、
を含んで成る方法。
【請求項１４】
塩酸バラシクロビルの固体投与形態のための品質管理流通方法であって、
ａ）請求項１２に記載の方法に従って、塩酸バラシクロビルのサンプルにおけるアラニンアナログの量を測定する工程、
ｂ）工程ａ）の検出可能なアラニンアナログの量が約０．２面積％未満である場合、工程ａ）の乾燥ブレンドバッチの塩酸バラシクロビルおよび少なくとも１つの賦形剤を形成する工程、
ｃ）工程ｂ）のバッチを塩酸バラシクロビルの固体投与形態の生産ロット中で処理する工程、そして
ｄ）工程ｃ）の生産ロットを商業上の流通にのせる工程、
を含んで成る方法。
【請求項１５】
塩酸バラシクロビルの医薬製剤を調製する方法であって、以下の工程：
ａ）塩酸バラシクロビルのバッチからサンプルを取り出す工程；
ｂ）請求項１２に記載の方法によって、前記サンプルにおけるアラニンアナログの量を算出する工程、そして
ｃ）前記サンプルが約０．２面積％未満の検出可能なアラニンアナログを含むバッチを用いて、塩酸バラシクロビルの医薬製剤を調製する工程、
を含んで成る方法。
【請求項１６】
前記工程ｃ）のバッチおよびサンプルが、約０．１面積％未満のアラニンアナログを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記工程ｃ）のバッチおよびサンプルが、約０．０５面積％未満のアラニンアナログを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
塩酸バラシクロビルを調製するための方法であって、約０．２面積％未満の検出可能なＢＯＣ−Ｌ−アラニンを含有するＢＯＣ−Ｌ−バリンで出発して、塩酸バラシクロビルを調製する工程を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、液相−固相クロマトグラフィーによって決定した場合、低濃度のＢＯＣ−アラニンを含有する出発材料ＢＯＣ−Ｌ−バリンからの、低濃度のアラニンアナログを含有する塩酸バラシクロビル組成物の合成に関する。
【背景技術】
【０００２】
バラシクロビル（式Ｉ）は、天然のヌクレオシドの非環式アナログである、アシクロビル（式ＩＩ）のＬ−バリルエステルプロドラッグである。アシクロビルは、高い抗ウイルス性活性を有することが報告されており、そしてヒトにおけるウイルス感染、特にヘルペスウイルスによって生じる感染の処置および予防において広範に用いられている。Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ，ＴＨＥ  ＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＢＡＳＩＳ  ＯＦ  ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ  １１９３〜１１９８（第９版、１９９６）を参照。
【化１】
2007522130.tif 000002
【化２】
2007522130.tif 000003
【０００３】
塩酸バラシクロビルを合成するための方法は、ｔ−ブトキシカルボニル基（ｔ−ＢＯＣ）のようなアミン保護基を有するバリンを使用し得る。例えば、米国特許出願第２００３０１５３７５７号は、出発材料としてアミン保護バリンを用いて塩酸バラシクロビルを合成する方法を開示する。バラシクロビルの合成のための出発材料として有用なＢＯＣ−Ｌ−バリンは、ＢＯＣ−アラニンのような不純物を含有し得る。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
出発材料中のこのような不純物は、望ましくない。なぜなら、このような出発材料から得られる最終合成生成物は、バラシクロビルのアラニンアナログによって汚染され得るからである。
【０００５】
不純物は、ＨＰＬＣによって検出および定量され得る。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
１の観点では、本発明は、約０．２エリア％未満のＢＯＣ−Ｌ−アラニンを有するＢＯＣ−Ｌ−バリンを出発材料として使用することによって、約０．２エリア％未満のアラニンアナログを含む塩酸バラシクロビル組成物を合成するための方法を提供する。好ましくは、使用されるこの出発材料は、約０．１エリア％未満のＢＯＣ−Ｌ−アラニンを含み、そしてこの塩酸バラシクロビル組成物は、約０．１エリア％未満のアラニンを含む。最も好ましくは使用されるこの出発材料は、約０．０５エリア％未満のＢＯＣ−Ｌ−アラニンを含み、そして塩酸バラシクロビル組成物は、検出可能な量のアラニン誘導体を含まない。
【０００７】
別の観点では、本発明はまた、ＢＯＣ−Ｌ−バリン中のＢＯＣアラニンの濃度、粗塩酸バラシクロビル中のアラニンアナログの濃度、および最終生成物、ならびに結晶性塩酸バラシクロビルを決定するための液相−固相クロマトグラフィー方法を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本明細書で使用される、「勾配溶出」は、第１の溶出液のパーセンテージが低下し、同時に第２の溶出液のパーセンテージが上昇するように、段階的に、または一定の変化速度での、固定期間に渡る勾配溶出液の組成の変化を指す。
【０００９】
本明細書で使用される、「勾配溶出液」は、可変濃度の第１および第２の溶出液からなる溶出液を指す。
【００１０】
本明細書で使用される、「サンプル」は、大量またはバッチの特徴を評価するために分析される、大量またはバッチから採取した、ＢＯＬ−Ｌ−バリンまたは塩酸バラシクロビルの少量または分割量を指す。
【００１１】
本明細書で使用される、ＢＯＬ−Ｌ−バリンまたは塩酸バラシクロビルの量と関連して、「バッチ」という用語は、サンプルが採取される分量を指す。バッチは、ユニット方法またはユニット操作から得られた量である。量の大きさの規模は特に、使用した機器によって変わるであろう。
【００１２】
本明細書で使用される、「固体経口投与形態」という用語は、カプセル剤および錠剤を指す。
【００１３】
本明細書で使用される、「乾燥ブレンド」という用語は、塩酸バラシクロビルおよび少なくとも１つの賦形剤の混合物を指す。
【００１４】
本明細書で使用される、「検出可能」という用語は、０．０１面積％の検出限界を有するＨＰＬＣ法を使用して測定された測定可能量を指す。
【００１５】
本明細書で使用される、塩酸バラシクロビル中のアラニンアナログの量と関連して、「検出できない」という用語は、０．０１面積％のアラニンアナログ検出限界を有する本明細書で述べるＨＰＬＣ法によって検出されないことを意味する。
【００１６】
本明細書で使用される、「アラニンアナログ」という用語は、ヒドロキシエトキシメチル基に結合した部分がアラニンであり、バリンではない、バラシクロビル様分子を含む。
【００１７】
本明細書で使用される、測定した量と関連して、「約」という用語は、測定を実施し、測定の目的および使用した測定機器の正確性に釣り合ったレベルの配慮を行使する当業者によって予想されるような、測定した量における変化を指す。
【００１８】
本明細書で使用される、「面積％」という用語は、液相−固相クロマトグラフィー分析中に、例えばクロマトグラム用の検出器によって測定された各検体のピーク下面積（以下「ＡＵＰ」）の比較を指す。ＡＵＰは、適切な積分器によって決定できる。クロマトグラムの各ピークは、液相−固相クロマトグラフィーカラムに装填された混合物中の各種の成分に相当し、検出可能な成分のそれぞれのＡＵＰとサンプル成分すべての総ＡＵＰとの比は、面積パーセンテージを与える。面積パーセントは数学的に：
面積i％＝１００×（ＡＵＰi）／（Σ総ＡＵＰ）
として表される。
【００１９】
塩酸バラシクロビル組成物は、本質的に塩酸バラシクロビルからなる。
【００２０】
塩酸バラシクロビルは、ＢＯＬ−Ｌ−バリンを開始物質として使用して、参照により本明細書に組み入れられている米国公開No.２００３／０１５３７５７に述べられているような方法によって調製できる。ＢＯＬ−Ｌ−バリンは、ＢＯＣ−アラニンによって汚染されることがある。中間粗生成物および結晶性最終生成物中に存在するアラニンアナログの量は、特に低レベルのＢＯＣ−アラニン、特に低レベルのＢＯＣ−Ｌ−アラニンを有する開始物質を使用して操作できる。ＢＯＣ−アラニンのレベルは、液相−固相クロマトグラフィーによって決定できる。
【００２１】
液相−固相クロマトグラフィー、特に高速液体クロマトグラフィー（以下「ＨＰＬＣ」）としても既知である高圧液体クロマトグラフィーは、化合物中の不純物の検出および定量に利用されてきた。ＨＰＬＣでは、検体として一般に知られ、検体と呼ばれる分離・測定される成分を溶出液として同じである希釈剤（溶媒）に、またはカラムを通じて移動液に相溶解させる。移動液相および溶解した検体は、一般に固定相と呼ばれるカラム内のパッキングと相互作用する。各種の検体は固定相とは別に相互作用するため、各検体は、異なる速度でカラムを通過するであろう。１３  ＪＡＭＥＳ  Ｄ．ＷＩＮＥＦＯＲＤＮＥＲ，ＴＲＥＡＴＩＳＥ  ＯＮ  ＡＮＡＬＹＴＩＣＡＬ  ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ，ｐｔ．Ｉ（２ｄ  ｅｄ．１９９３）を参照。
【００２２】
逆相ＨＰＬＣは、非極性固定相および極性溶出液を利用する。勾配溶出は、経時的に移動相の組成、すなわち勾配溶出液を変化させることによって、サンプル成分の分離を改善する。検出器は溶出液の特定の物理特性を測定することによって、分離を監視するのに使用される。例えば分光光度計は移動相の放射線吸収を測定することによって、検出器として使用できる。
【００２３】
出願人は特に開始物質ＢＯＬ−Ｌ−バリン中のＢＯＣ−アラニンの濃度を制御することによって、最終バラシクロビルまたは塩酸バラシクロビル生成物中のアラニンアナログの濃度を操作できることを発見した。塩酸バラシクロビル合成における開始物質、中間体、および最終生成物中のアラニンアナログを検出する方法に対する要求がある。低い濃度のアラニンアナログを含有する塩酸バラシクロビルに対する要求もある。
【００２４】
１つの態様において、本発明は、ＢＯＬ−Ｌ−バリン中のＢＯＣ−アラニン濃度を決定するための液相−固相クロマトグラフィー法を提供する。ＢＯＬ−Ｌ−バリン中のＢＯＣ−アラニン汚染物質の濃度は、液相−固相クロマトグラフィーによって、好ましくはＨＰＬＣを通じて、特に本明細書で以下に述べるＨＰＬＣ法によって測定できる。ＨＰＬＣは、適切なクロマトグラフィーカラム、例えば逆相カラムＩｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−３Ｖ  ５μｍ  １５０×４．６ｍｍ（ＧＬ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃａｔ．Ｎｏ．５０２０−０１７３１）を使用する。
【００２５】
ＢＯＬ−Ｌ−バリン中のＢＯＣ−Ｌ−アラニンの量を測定するための、本発明のＨＰＬＣ法の第１工程は、ＢＯＬ−Ｌ−バリンサンプルの液相−固相クロマトグラフィーカラムへの装填を含む。装填は、サンプル溶液をカラムへ注入することによって実施できる。カラム注入のための物質の適切な体積は、約５０μＬである。注入のためのサンプル溶液を作成するために使用される希釈剤は例えば、溶出液でありうる。カラムは周囲温度、好ましくは約２５℃でありうる。カラム固定相は、修飾シリカゲル、好ましくは１５％炭素装填によってエンドキャップされたオクタデシル基と結合した５μｍ球状シリカゲルであり、好ましくはＩｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−３Ｖである。サンプルをカラムに装填した後、次にカラムを、溶出液を用いて定組成溶出する。好ましい溶出液は、約１ｍＬ／分を超えない一定流量での、０．０５％リン酸（０．５ｇ、８５％、Ｈ3ＰＯ4／１Ｌ  Ｈ2Ｏ）（７３％）を含有するアセトニトリル（２７％）および水の溶液である。ＵＶ検出器のカラム溶出液に対する反応を監視し、ここでＵＶ検出器は、２００〜６００ｎｍの範囲で、好ましくは２１０ｎｍで動作する分光光度計でありうる。溶出成分に対する検出器の反応に基づいて、ＢＯＬ−Ｌ−バリン中のＢＯＣ−アラニンの量を面積％として計算する。
【００２６】
ＨＰＬＣシステムの適合性は、希釈剤中にＢＯＣ−アラニン（０．１５ｍｇ／ｍＬ）およびＢＯＬ−Ｌ−バリン（１５ｍｇ／ｍＬ）の混合物を含む、システム適合性溶液を用いて点検できる。
【００２７】
別の態様において、本発明は、塩酸バラシクロビルサンプル中に存在するアラニンアナログの量を決定するための液相−固相クロマトグラフィー法を提供する。液相−固相クロマトグラフィーによって、特にＨＰＬＣによって、アラニンアナログの濃度を測定できる。そのような測定に適切なクロマトグラフィーカラムは、逆相カラムＩｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−３Ｖ  ５μｍまたは同等品である。好ましくは、該方法は勾配溶出を利用する。この方法は、サンプル成分のさらに有効な分離を可能にする。
【００２８】
塩酸バラシクロビル中のアラニンアナログの量を測定するための、本発明のＨＰＬＣ法の第１工程は、塩酸バラシクロビルのサンプルを液相−固相クロマトグラフィーカラムに装填することを含む。装填はサンプルの溶液をカラムに注入することによって実施できる。装填が注入による場合、注入体積は約２０μＬである。さらに、注入用のサンプル溶液を作成するために使用される希釈液は例えば、第１の溶出液と同じでもよい。カラム温度は、室温より高くてもよい。好ましくは、カラム温度は約３０℃である。カラム固定相は、修飾シリカゲル、好ましくは１５％炭素装填によってエンドキャップされたオクタデシル基と結合した５μｍ球状シリカゲルであり、好ましくはＩｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−３Ｖ１である。次にカラムを約１．５ｍＬ／分以下の勾配溶出液流量で勾配溶出させ、勾配溶出液は、第１および第２の溶出液を有する。
【００２９】
適切な第１の溶出液は、水（９８％）およびアセトニトリル（２％）中のリン酸二水素カリウム０．０１Ｍ溶液である。第１の溶出液のｐＨは酸性であり、好ましくは約３．５のｐＨを有する。ｐＨは、１０％リン酸を使用して調整できる。適切な第２の溶出液はアセトニトリルである。通常、約７分間の平衡時間が適切である。ＵＶ検出器のカラム溶出液に対する反応を監視し、ここでＵＶ検出器は、２００〜６００ｎｍの範囲で、好ましくは２５４ｎｍで動作する分光光度計でありうる。検出器反応に基づいて、塩酸バラシクロビル中のアラニンアナログの量を面積％として計算する。
【００３０】
システム適合性溶液は、バラシクロビルをグアニン溶液およびアシクロビル溶液に溶解させることによって調製できる。サンプル溶液は、希釈剤中０．８ｍｇ／ｍＬのバラシクロビル濃度でありうる。サンプル溶液はカラム上に注入でき、次に各混合物成分の面積％を決定するために、適切な積分器を使用して任意の不純物濃度を測定できる。
【００３１】
別の態様において、本発明は、約０．２面積％より少ないが、約０．０１面積％以上の量のアラニンアナログを含む塩酸バラシクロビル組成物を合成する方法を提供し、該方法は、
ａ）１つ以上のＢＯＬ−Ｌ−バリンバッチの、１つ以上のサンプルを採取する工程と；
ｂ）工程（ａ）の各サンプル中のＢＯＬ−Ｌ−アラニンのレベルを測定する工程と；
ｃ）（ｂ）で実施した１回以上の測定に基づいて約０．２面積％のＢＯＬ−Ｌ−アラニンを含む、１つ以上のＢＯＬ−Ｌ−バリンバッチを選択する工程と：
ｄ）前記塩酸バラシクロビル組成物を合成するために、（ｃ）で選択したバッチを使用する工程と；
を含む。
【００３２】
好ましくは、得られたＢＯＬ−Ｌ−バリンサンプルおよび塩酸バラシクロビルはそれぞれ、ＢＯＬ−Ｌ−アラニンおよびアラニンアナログを約０．１面積％未満の量で含有する。最適には、ＢＯＬ−Ｌ−バリンサンプルが０．０５面積％未満のＢＯＬ−Ｌ−アラニンを含有するとき、塩酸バラシクロビル組成物は検出できない量のアラニンを含有する。
【００３３】
ＢＯＬ−Ｌ−バリンサンプル中のＢＯＬ−Ｌ−アラニンのレベルは、上述した液相−固相クロマトグラフィー法によって、または同等の方法によって決定される。
【００３４】
特に本発明は、約０．２面積％未満のアラニンアナログを含む塩酸バラシクロビル組成物を合成する方法を提供する。この合成方法の第１の工程は、１つ以上のＢＯＬ−Ｌ−バリンバッチの、ＢＯＬ−Ｌ−バリンの少なくとも１つのサンプルを不純物としてのそのアラニンアナログの存在について分析することと、約０．２面積％未満のアラニンアナログを含有するバッチを選択することとを含む。選択したＢＯＬ−Ｌ−バリンを、有機溶媒中で、好ましくはジシクロヘキシルカルボジイミド（以下「ＤＣＣ」と呼ぶ）のジメチルホルムアミド（以下「ＤＭＦ」）溶液中でアシクロビルと反応させて、混合物を得る。次に混合物を４−ジメチルアミノピリジン（以下「ＤＭＡＰ」）と、次に水と組合わせて、懸濁物を得る。沈殿物のジシクロヘキシル尿素を濾過によって除去し、得られた濾液を次に濃縮する。次に濾液を還流下の低級アルコール、特にイソプロピルアルコール中にて再構成または溶解させて、保護バラシクロビルを得る。次にこれを脱保護して、水およびイソプロピルアルコールから再結晶させて、結晶性塩酸バラシクロビルを得る。塩酸バラシクロビルの合成は、すべての反応物質について重量体積比が維持されるという条件で、各種のスケールで実現できる。
【００３５】
本発明によって得られた塩酸バラシクロビルは、医薬組成物に製剤化され得る。本発明の医薬製剤は、活性成分に加えて１つ以上の賦形剤を含有可能であり、典型的に含有する。製剤は典型的にバッチ方式で調製され、固体経口投与形態、例えば錠剤またはカプセル剤に処理される。流通網への固体経口投与形態の投入は、特に塩酸バラシクロビル中の、乾燥ブレンド中の、または固体投与形態中のアラニンアナログのレベルに基づくことが可能である。
【００３６】
賦形剤は多種多様の目的で製剤に添加される。希釈剤は、固体医薬組成物のかさを増大させ、患者および介護者がより取扱し易い、組成物を含有する医薬投与形態を作成する。固体組成物用の希釈剤は、数例のみを挙げれば、例えば微結晶性セルロース（例えばＡｖｉｃｅｌ（商標））、微細セルロース、ラクトース、デンプン、アルファ化デンプン、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム、糖、デキストレート、デキストリン、デキストロース、リン酸カルシウム二塩基性二水和物、リン酸カルシウム三塩基性、カオリン、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、マルトデキストリン、マンニトール、ポリメタクリレート（例えばＥｕｄｒａｇｉｔ（商標））、塩化カリウム、粉末セルロース、塩化ナトリウム、ソルビトールおよびタルクを含む。
【００３７】
錠剤のような投与形態に圧縮された、固体医薬組成物は、圧縮後に活性成分とその他賦形剤との結合を補助することをその機能に含む賦形剤を含有してもよい。固体医薬組成物のための結合剤としては、アカシア、アルギン酸、カルボマー（例えばカルボポール）、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デキストリン、エチルセルロース、ゼラチン、グアーガム、水素化植物油、ヒドロキシルエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース（例えば、Ｋｌｕｃｅｌ（商標））、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（例えばＭｅｔｈｏｃｅｌ（商標））、グルコース液、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、マルトデキストリン、メチルセルロース、ポリメタクリレート、ポビドン（例えばＫｏｌｌｉｄｏｎ（商標）、Ｐｌａｓｄｏｎｅ（商標））、アルファ化デンプン、アルギン酸ナトリウムおよびデンプンが挙げられる。
【００３８】
品質管理の目的からは、医薬組成物は、低レベルのアラニンを有する塩酸バラシクロビルから作ることが好ましい。典型的に、医薬組成物は製造目的のバッチもしくはロットで作られる。製造ロットはチェックにかけられ、アラニンアナログのレベルが仕様内にあること、即ち品詞管理試験内にあることを確認する。製造ロットからのサンプル（例えば１０〜１００カプセルもしくは錠剤）を採取し、アラニンアナログの存在、および好ましくは同物質の含有量をアッセイする。一般的には、アラニンアナログのレベルが許容外であることが見出されない限り、任意の保存サンプルを差し引いた全製造ロットが製造元により販売、またはその他の形で出荷される。そのような場合は、製造ロットは販売もしくは出荷されない；即ち、商取引されず、また臨床試験で使用されることもない。塩酸バラシクロビル物質の製造ロットにも、同一の方針が適用できる。
【００３９】
次に、本発明のその態様の一部を、以下非限定的な実施例により説明する。
【実施例１】
【００４０】
本実施例は、ＢＯＣ−Ｌ−バリン中のＢＯＣ−アラニン濃度を測定するための液相−固相クロマトグラフィー法について説明する。
【００４１】
システムの適合性を検証するための溶液は、０．１５ｍｇ／ｍＬのＢＯＣ−アラニンおよび１５ｍｇ／ＬのＢＯＣ−Ｌ−バリンの希釈液を用いて調製した。用いた希釈液は、溶出液と同一であり、０．０５％のリン酸水溶液を７３％、そしてアセトニトリルを２７％含んだ。５０μＬのサンプル量をＩｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−３Ｖ  ５μｍ  １５０×４．６ｍｍのカラム、２５℃にかけた。検出器を２１０ｎｍに設定し、サンプルを流速１ｍＬ／分で溶出した。ＢＯＣ−アラニンおよびＢＯＣ−Ｌ−バリンの保持時間は、それぞれ６分および１４．５分であった。次にＡＵＰを、適した積算器を用いて比較し、ＢＯＣ−Ｌ−バリン中のＢＯＣ−アラニンの面積−％濃度を確認した。
【実施例２】
【００４２】
本実施例は、塩酸バラシクロビル中のアラニンアナログの濃度を測定するための液相−固相クロマトグラフィー法について説明する。
【００４３】
システムの適合性を検証するための溶液は、グアニン（５ｍｇ）を０．２ＮのＮａＯＨ（１０ｍＬ）に溶解することで調整した。次にこの溶液をさらに、１０％のリン酸および２％のアセトニトリルを用いてｐＨ＝３．５に調整した９８％の０．０１Ｍ二水素リン酸カリウムの水溶液で１００ｍＬまで希釈した。総容積１００ｍＬまで希釈したアシクロビル（５ｍｇ）の第二液も調製した。次にそれぞれの溶液２ｍＬを塩酸バラシクロビル（２０ｍｇ）に加えた。塩酸バラシクロビル溶液の総容積を、希釈液により２５ｍＬまでにした。この希釈液は、ＨＰＬＣ評価のための第一溶出液としても用いた。第二溶出液はアセトニトリルであった。塩酸バラシクロビル２０μＬ、グアニン、アシクロビル混合液をＩｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−３Ｖ  ５μｍ  ２５０×４．６ｍｍのカラムに注入した。カラムを０〜２０％の第二溶出液の勾配；流速１．５ｍＬ／分で３２分間、３０℃の温度で溶出した。検出器は２５４ｎｍに設定した。塩酸バラシクロビルの保持時間は１３分であった。グアニンとアシクロビルの分解能は、１５．０未満であってはならず、また塩酸バラシクロビルについて、４．０を超えないテーリング係数を達成した。
【実施例３】
【００４４】
実施例３ａ
本実施例は、アラニンアナログが約１．４面積％未満である塩酸バラシクロビルを製造する合成における保護型塩酸バラシクロビルの形成について説明する。
【００４５】
ＢＯＣ−アラニンの面積％が約１未満であるＢＯＣ−Ｌ−バリン（８７０ｇ）を、窒素下で撹拌しながらＤＭＦ（５８７４ｍＬ）に完全に溶解した。次に混合液を−５℃まで冷却した。ＤＣＣ（３３０ｇ）のＤＭＦ（６００ｇ）溶液を、２０分間かけて混合液に加え、得られた混合液を−５℃で、２０分間攪拌した。アシクロビル（６００ｇ）を混合液に加え、５分間攪拌した後にＤＭＡＰ（９８ｇ）を加えた。混合液を−５℃で、３時間攪拌した。ＤＣＣ（３３０ｇ）を２０分間かけてＤＭＦ（６００ｇ）に加え、得られた混合液を−５℃で３時間攪拌した。ＤＣＣ（４３８ｇ）を２０分間かけてＤＭＦ（７８０ｇ）に加え、得られた混合液を−５℃で３時間攪拌した。混合液を、２．５時間かけて２５℃まで加熱し、４時間攪拌した。水（２０４ｇ）を加え、混合液を２５℃で４時間攪拌した。生じた沈殿物、ジシクロヘキシル尿素を濾過して回収し、ＤＭＦ（１８００ｇ）で洗浄した。次に濾過物を減圧下（１０ｍｍＨｇ）で濃縮して残留物を得た。この残留物を、イソプロピルアルコール（以下「ＩＰＡ」と呼ぶ）（６１２０ｇ）内で還流して溶解し、再構成した。混合液を２５℃に冷却し、生じた沈殿物、保護型バラシクロビルを濾過して回収した。
【００４６】
実施例３ｂ
本実施例は、アラニンアナログが約１．４面積％未満である塩酸バラシクロビルを製造する合成における保護型塩酸バラシクロビルの脱保護ついて説明する。
【００４７】
保護型バラシクロビル（乾燥状態で５７８ｇ）をギ酸（１４４０ｍＬ）に２５℃で溶解した。混合液に水（１８６ｍＬ）を加え、次に３２％ＨＣｌ溶液（３１１ｇ）を１時間かけて加えた。混合液を２５℃で、１〜５時間、保護型バラシクロビルの濃度が０．５％以下に低下するまで攪拌した。ＩＰＡ（９２００ｍＬ）を３０分かけて混合液に加え、次に混合液を−５℃まで冷却した。生じた沈殿を濾過により回収し、アラニンアナログが約１．４重量％未満である粗塩酸バラシクロビルを得た。
【００４８】
実施例３ｃ
本実施例は、アラニンアナログが約１．４面積％未満である結晶性塩酸バラシクロビルの形成について説明する。
【００４９】
粗塩酸バラシクロビル（３８０ｇ）を水（１５２０ｍＬ）に４０℃で溶解した。混合液を濾過し、３５℃まで冷却した。ＩＰＡ（５７００ｍＬ）を、３時間かけて混合液に加えた。混合液を−５℃に冷却した。生じた沈殿物、結晶性塩酸バラシクロビルを濾過により回収した。湿潤沈殿物を真空下で乾燥させ、乾燥した沈殿物を粉砕した。結晶性塩酸バラシクロビルのアラニンアナログは約１．４面積％未満であった。
【実施例４】
【００５０】
実施例４ａ
本実施例は、アラニンアナログが約０．０３面積％未満である塩酸バラシクロビルを製造する合成における、保護型バラシクロビルの形成について説明する。
【００５１】
ＢＯＣ−アラニンを約０．０５％未満有するＢＯＣ−Ｌ−バリン（８７０ｇ）を、窒素下でＤＭＦ（５８７４ｍＬ）に溶解にし、２０〜２５℃で完全に溶解するまで攪拌した。次に混合液を−５℃まで冷却した。ＤＣＣ（３３０ｇ）のＤＭＦ（６００ｇ）溶液を、２０分間かけて混合液に加え、得られた混合液を−５℃で、２０分間攪拌した。アシクロビル（６００ｇ）を混合液に加え、５分間攪拌した後にＤＭＡＰ（９８ｇ）を加えた。混合液を−５℃で、３時間攪拌した。ＤＣＣ（３３０ｇ）を２０分間かけてＤＭＦ（６００ｇ）に加え、得られた混合液を−５℃で３時間攪拌した。ＤＣＣ（４３８ｇ）を２０分間かけてＤＭＦ（７８０ｇ）に加え、得られた混合液を−５℃で３時間攪拌した。混合液を、２．５時間かけて２５℃まで加熱し、４時間攪拌した。水（２０４ｇ）を加え、混合液を２５℃で４時間攪拌した。生じた沈殿物、ジシクロヘキシル尿素を濾過して回収し、ＤＭＦ（１８００ｇ）で洗浄した。次に濾過物を減圧下（１０ｍｍＨｇ）で濃縮して残留物を得た。この残留物をＩＰＡ（６１２０ｇ）内で還流して溶解した。混合液を２５℃に冷却し、生じた沈殿物、保護型バラシクロビルを濾過して回収した。
【００５２】
実施例４ｂ
本実施例は、アラニンアナログが約０．０３面積％未満である塩酸バラシクロビルを製造する合成における、粗塩酸バラシクロビルの形成について説明する。
【００５３】
実施例４ａに発表した方法から得た保護型バラシクロビル（乾燥状態で５７８ｇ）をギ酸（１４４０ｍＬ）中に２５℃で溶解した。混合液に水（１８６ｍＬ）を加え、次に３２％ＨＣｌ溶液（３１１ｇ）を１時間かけて加えた。混合液を２５℃で、１〜５時間、保護型バラシクロビルの濃度が０．５％以下に低下するまで攪拌した。ＩＰＡ（９２００ｍＬ）を３０分かけて混合液に加え、次に混合液を−５℃まで冷却した。生じた沈殿を濾過により回収し、アラニンアナログが約０．０３面積％未満である粗塩酸バラシクロビルを得た。
【００５４】
実施例４ｃ
本実施例は、アラニンアナログが約０．０３面積％未満である結晶性塩酸バラシクロビルの形成について記載する。
【００５５】
粗塩酸バラシクロビル（３８０ｇ）を水（１５２０ｍＬ）に４０℃で溶解した。混合液を濾過し、３５℃まで冷却した。ＩＰＡ（５７００ｍＬ）を、３時間かけて混合液に加えた。混合液を−５℃に冷却した。生じた沈殿物、結晶性塩酸バラシクロビルを濾過により回収した。湿潤沈殿物を真空下で乾燥させ、乾燥した沈殿物を粉砕し、アラニンアナログが検出されない結晶性塩酸バラシクロビルを得た。
【国際調査報告】
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