(57)【要約】本発明は、グリコシダーゼ阻害剤を使用して、変形性関節炎、関節リウマチ、滑膜炎、軟骨下骨層水腫、および軟骨退化からなる群より選択される症状を治療、予防、および軽減する方法に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
充分な量の少なくとも１種類のグリコシダーゼ阻害剤を投与するステップを含む、変性軟骨症の治療方法。
【請求項２】
前記治療は、前記変性軟骨症の治癒、治療、予防、および軽減からなる群より選択される請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記変性軟骨症は、変形性関節症、関節リウマチ、滑膜炎、軟骨下骨層水腫、および軟骨退化からなる群より選択される請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記変性軟骨症の治療は、治療効果のある量のカクテルを投与することによる請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記カクテルは、治療効果のある量の少なくとも１種類のグリコシダーゼ阻害剤と、治療効果のある量の治療用分子添加物と、を含む請求項４記載の方法。
【請求項６】
前記治療用分子添加物は、抗炎症剤およびアミノ糖からなる群より選択される請求項５記載の方法。
【請求項７】
前記カクテルは、治療効果のある量の抗炎症剤と、治療効果のある量のアミノ糖と、をさらに含む請求項４記載の方法。
【請求項８】
前記グリコシダーゼ阻害剤は、イミノシクリトール系グリコシダーゼ阻害剤および非イミノシクリトール系グリコシダーゼ阻害剤からなる群より選択される請求項１記載の方法。
【請求項９】
前記非イミノシクリトール系グリコシダーゼ阻害剤は、ヘキソサミニダーゼ阻害剤およびグルクロニダーゼ阻害剤からなる群より選択される請求項８記載の方法。
【請求項１０】
前記グリコシダーゼ阻害剤は、グリコシダーゼに対する特異的活性を有する請求項１記載の方法。
【請求項１１】
前記グリコシダーゼは、ヘキソサミニダーゼ、グルクロニダーゼ、エンドグリコシダーゼ、およびエキソグリコシダーゼからなる群より選択される請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
前記変性軟骨症は、さらなる症状をもたらす請求項１記載の方法。
【請求項１３】
前記さらなる症状は、関節炎、変形性関節炎、関節リウマチ、炎症性関節症、および外傷性関節症からなる群より選択される請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
前記投与は、経口投与、血管内投与、関節内投与、筋肉内投与、および局所投与からなる群より選択される経路で行われる請求項１記載の方法。
【請求項１５】
前記グリコシダーゼ阻害剤は、徐放性製剤または制御放出製剤に調製される請求項１記載の方法。
【請求項１６】
前記グリコシダーゼ阻害剤は、送達装置を用いて投与される請求項１記載の方法。
【請求項１７】
前記送達装置は、アルゼットポンプである請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
充分な量の少なくとも１種類のグリコシダーゼ阻害剤を、投与を必要とする被検者に投与して炎症を治療するステップを含む、炎症の治療方法。
【請求項１９】
前記治療は、前記炎症の治癒、治療、予防、および軽減からなる群より選択される請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
前記投与は、経口投与、血管内投与、関節内投与、筋肉内投与、および局所投与からなる群より選択される経路で行われる請求項１８記載の方法。
【請求項２１】
前記グリコシダーゼ阻害剤は、徐放性製剤または制御放出製剤に調製される請求項１８記載の方法。
【請求項２２】
前記グリコシダーゼ阻害剤は、送達装置を用いて投与される請求項１８記載の方法。
【請求項２３】
前記送達装置は、アルゼットポンプである請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
治療効果のある量の少なくとも１種類のグリコシダーゼ阻害剤と、治療効果のある量の治療用分子添加物と、を含む、変性軟骨症を治療するための医薬組成物。
【請求項２５】
前記治療用分子添加物は、抗炎症剤およびアミノ糖からなる群より選択される請求項２４記載の医薬組成物。
【請求項２６】
前記医薬組成物は、治療効果のある量の少なくとも１種類のグリコシダーゼ阻害剤と、治療効果のある量の抗炎症剤と、治療効果のある量のアミノ糖と、を含む請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項２７】
前記医薬組成物は、治療効果のある量の少なくとも１種類のグリコシダーゼ阻害剤と、治療効果のある量の抗炎症剤と、を含む請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項２７】
前記医薬組成物は、治療効果のある量の少なくとも１種類のグリコシダーゼ阻害剤と、治療効果のある量のアミノ糖と、を含む請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項２８】
前記治療は、変性軟骨症の治癒、処置、予防、および軽減からなる群から選択される請求項２４の医薬組成物。
【請求項２９】
前記変性軟骨症は、変形性関節炎、関節リウマチ、滑膜炎、軟骨下骨層水腫、および軟骨退化からなる群より選択される請求項２４記載の医薬組成物。
【請求項３０】
前記グリコシダーゼ阻害剤は、イミノシクリトール系グリコシダーゼ阻害剤および非イミノシクリトール系グリコシダーゼ阻害剤からなる群より選択される請求項２４記載の医薬組成物。
【請求項３１】
前記非イミノシクリトール系グリコシダーゼ阻害剤は、ヘキソサミニダーゼ阻害剤およびグルクロニダーゼ阻害剤からなる群より選択される請求項２４記載の医薬組成物。
【請求項３２】
前記グリコシダーゼ阻害剤は、グリコシダーゼに対する特異的活性を有する請求項２４記載の医薬組成物。
【請求項３３】
前記グリコシダーゼは、ヘキソサミニダーゼ、グルクロニダーゼ、エンドグリコシダーゼ、およびエキソグリコシダーゼからなる群より選択される請求項２４記載の医薬組成物。
【請求項３４】
前記グリコシダーゼ阻害剤は、徐放性製剤または制御放出製剤に調製される請求項２４記載の医薬組成物。
【請求項３５】
前記グリコシダーゼ阻害剤は、送達装置を用いて投与される請求項２４記載の医薬組成物。
【請求項３６】
前記送達装置は、アルゼットポンプである請求項３５記載の医薬組成物。
【請求項３７】
（ａ）炎症を治療するために充分な量の少なくとも１種類のグリコシダーゼ阻害剤と、
（ｂ）薬理学的に許容できる担体と、を含む、炎症を治療するための医薬組成物。
【請求項３８】
前記治療は、前記炎症の治癒、治療、予防、および軽減からなる群より選択される請求項３７記載の医薬組成物。
【請求項３９】
前記グリコシダーゼ阻害剤は、徐放性製剤または制御放出製剤に調製される請求項３７記載の医薬組成物。
【請求項４０】
前記グリコシダーゼ阻害剤は、送達装置によって投与される請求項３７記載の医薬組成物。
【請求項４１】
前記送達装置は、アルゼットポンプである請求項４０記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この出願は、２００４年１月２０日付出願の米国仮出願第６０／５３１，１６８号の優先権を主張するもので、この出願を全体として本明細書に援用する。
本発明は、変形性関節炎、関節リウマチ、滑膜炎、軟骨下骨層水腫、および軟骨退化からなる群より選択される症状を、グリコシダーゼ阻害剤の投与によって治療、予防、および軽減することに関する。
【背景技術】
【０００２】
滑膜炎、軟骨下骨層水腫、進行性軟骨退化、および他の類似の症状は、とりわけ、肉体的傷害に起因する関節の個々の異なった症状である。これらの症状は、変形性関節炎（ＯＡ）または関節リウマチ（ＲＡ）に関係している場合もある(Ayra et al., Rheumatology, Vol. 35, 14-17; McAlindon, Best Pract Res Clin Rheumatol. 1999; 13(2): 329-344）。例えば、これらの症状は、ＯＡもしくはＲＡに対する二次的症状として、あるいは他の傷害に起因してそのまま現れる場合もある。変形性関節症は、最も頻度の高い関節疾患であり、現在、約４，０００万人の米国人を冒している。この数は、今後２０年間に６，０００万人まで増加すると思われる。多様な危険因子がＯＡの多因子性病因に関与している。ＯＡの主発症機序は、軟骨細胞および軟骨基質の損失による異常な軟骨基質再形成過程であり、生体力学的な関節障害および炎症をもたらす。
【０００３】
これらの症状に共通していることは、軟骨の侵食である。軟骨侵食は、軟骨組織の大半を含むプロテオグリカン（ＰＧ）・ヒアルロン酸複合体のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）の過剰な異化代謝から生ずる。この軟骨侵食は、グリコシダーゼおよびヘキソサミニダーゼによって触媒される。例えば、関節炎患者が滑液中のβ−Ｎ−アセチルヘキソサミニダーゼ活性の異常増加を呈することが知られている(O. Kida, J. Japan Orthop. Assoc. 168, 42 (6), 4010; R. W. Stephen, et al., Biochim.  Biophys. Acta 1975, 399 (1), 101; およびJ. J. Steinberg, et al., Biochim. Biophys. Acta 1983, 757 (1), 47)。例えば、関節リウマチでは主要なグリコシダーゼがヘキソサミニダーゼ、例えばβ−Ｄ−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼおよびβ−Ｄ−Ｎ−アセチル−ガラクトサミニダーゼである。単独またはＤ−グルクロニダーゼ等の他のグリコシダーゼとともに作用するこれらのヘキソサミニダーゼは、軟骨からＧＡＧを減少させることに直接関与していることが示された(Z. Ortutay, et al., Arthritis Rheum. 2003, 48(8), 2163)。単独またはβ−Ｄ−グルクロニダーゼ等の他のグリコシダーゼとともに作用するこれらのヘキソサミニダーゼが、軟骨のＧＡＧを減少させることに直接関与していることが示された(Z. Ortutay, et al., Arthritis Rheum. 2003, 48(8), 2163)。
【０００４】
出願人は、ヘキソミニダーゼに対するＫｉ値が２４ｎＭであり、それによってサイトカインにより誘導される培養軟骨細胞中のＧＡＧ損失を防ぐ、非常に強力なヘキソミニダーゼ特異的阻害剤の設計および合成をおこなった(J. Liu, et al., Chem. Biol. 2001, 8 (7), 701; 米国特許出願第２００４／０１９８７７２号公報（Ａ１））。さらなる研究によって、この阻害剤が変形性関節炎動物モデル（下記参照）で軟骨の保護という恩恵をもたらすことが明らかになった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
残念なことに、先行技術は、滑膜炎、軟骨下骨層水腫、および軟骨退化を治療、予防、および軽減する有効な手段を提供しなかった。したがって、これらの症状を治療、予防、および軽減するための方法に対する必要性が依然として高く、それによって先行技術の欠点が解決される。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
出願人は、軟骨退化に関連する疾患を治療する際に、滑液中のグリコシダーゼを阻害することが新たな軟骨保護として有用性が高いことを解明した。これらの標的に対する上記阻害剤の投与は、滑膜炎、軟骨下骨層水腫、軟骨退化、および他の同様な症状を治療するための有用な治療的介入である。したがって、滑液中のグリコシダーゼの阻害は、軟骨保護のための新規な取り組みとして有用性が高い。
【０００７】
本発明の一実施形態は、グリコシダーゼ阻害を用いて関節疾患の炎症性および軟骨退化症状に対処することに関する。上記関節疾患として、限定されるものではないが、変形性関節炎、関節リウマチ、滑膜炎、軟骨下骨層水腫、軟骨退化、および他の同様な症状が挙げられる。この実施形態によれば、関節の軟骨組織が破壊されるのを妨げる軟骨保護剤として、ヘキソサミニダーゼまたはグルクロニダーゼ等のグリコシダーゼの阻害剤を使用することができる。
【０００８】
本発明の別の好ましい実施形態によれば、ヘキソサミニダーゼの阻害剤は、ほ乳類で予想外の軟骨保護作用を示した。これらの軟骨保護特性は、変形性関節炎（ＯＡ）または関節リウマチ（ＲＡ）等の治療手段としてグリコシダーゼ阻害剤を利用することに、正当性を与える。
【０００９】
本発明の別の好ましい実施形態は、関節炎を治療するために、別のグリコシダーゼ阻害剤および／または別の抗炎症剤もしくはアミノ糖と併用して一種類のグリコシダーゼ阻害剤を使用することを意図している。
【００１０】
本発明の好ましい別の実施形態は、治療効果のある量のグリコシダーゼ阻害剤（例えば、ヘキソサミニダーゼ阻害剤またはグルクニダーゼ阻害剤あるいはそれらの組み合わせ）を患者に対して投与することによって、滑膜炎、軟骨下骨層水腫、および軟骨退化を治療、予防、および軽減する方法に関する。当該技術分野で周知の任意の手段によって、治療効果のある量の阻害剤を患者に対して投与することができ、該投与として、限定されるものではないが、経口投与、血管内投与、筋肉内投与、局所投与、または関節内投与が挙げられる。治療効果のある量のそのような阻害剤を、放出制御または徐放性製剤としてマトリックス内に関節内投与することも可能である。
【００１１】
本発明の別の好ましい実施形態は、単独で、または既存の抗炎症剤もしくは他の治療分子と併用して、治療効果のある量のグリコシダーゼ阻害剤（例えば、ヘキソサミニダーゼ阻害剤またはグルクロニダーゼ阻害剤あるいはそれらの組み合わせ）を含む組成物を患者に対して投与することを含む。本発明の製剤を投与する方法として、限定されるものではないが、血管内、関節内、局所、および筋肉内法が挙げられる。
【００１２】
この方法の一実施形態では、ヘキソサミニダーゼ、グルクロニダーゼ、または他のエンドおよびエキソグリコシダーゼに対する特異的活性または種々の活性を有するグリコシダーゼ阻害剤の組み合わせもまた、関節での軟骨保護を達成することも可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
（省略形および定義）
本発明にもとづいて、また本明細書中で使用されるように、以下の用語および省略形は、他に明確に述べられていない限り、以下の意味で定義される。これらの説明は、例示のみを目的とする。また、これらの説明は、明細書全体にわたって説明または言及されたとおりに用語が限定されることを意図したものではない。むしろ、それらの説明は、本明細書中に記述またはクレームされたように用語のさらなる態様および／または例の一切を含むことを意図したものである。本明細書では、以下の省略形を用いる。すなわち、
ＡＣＬ＝膝前十字靱帯、
ＡＣＬＴ＝膝前十字靱帯トランサクション、
ＧＡＧ＝グリコサミノグリカン、
ＨＡ＝ヒアルロン酸、
ＩＬ−１β＝インターロイキン１β
ＩＬ−６＝インターロイキン６
ＯＡ＝変形性関節炎、
ＲＡ＝関節リウマチ、および
ｓＧＡＧ＝硫酸化グリコサミノグリカン
である。
【００１４】
用語「アミノ糖」とは、炭素原子の１つ以上がアミノ基（−ＮＲ1Ｒ2）によって置換されている任意の合成または天然の糖のことをいう。そのような置換は、糖に存在する任意の不斉炭素の配向または構成を無視して起こる場合もある。別段の記述がない限り、用語「アミノ糖」は環式または開鎖アミノ糖のアノマー（αまたはβ）のことをいう。アミノ糖をアルキル基またはアシル基によってＮ置換してもよく、ペンダントアミノ基の水素原子１つがアルキルまたはアシル部分（−ＣＯＲ、式中Ｒ＝アルキルまたはアリール）で置換される。アミノ糖の例として、限定されるものではないが、グルコサミン、Ｎ−アセチル−グルコサミン、およびＮ−アセチル−ガラクトサミンが挙げられる。
【００１５】
用語「関節炎」は、関節の炎症によって特徴づけられる任意の個々の疾患のことをいうけれども、炎症の病因はさまざまな状況で異なると考えられる。比較的よく見られる関節疾患として、関節リウマチ、若年性関節炎、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、外傷性関節炎、および変形性関節症が挙げられる。変形性関節炎は、「変性関節疾患」ともいう。
【００１６】
用語「関節軟骨」または「軟骨」とは、骨端部を覆い、かつ関節面を形成する物質のことをいう。軟骨は、圧縮力に耐えることができ、また関節が滑動するように低摩擦面を形成する。関節軟骨は、軟骨細胞と、タンパク質およびグリコサミノグリカン多糖類から構成される基質とを含む。
【００１７】
用語「抗炎症薬」とは、抗炎症性を有する化合物のことをいい、限定されるものではないが、ステロイド類（例えば、限定されるものではないが、コーチゾン、デキサメタゾン、およびプレドニゾン）ならびに非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）（例えば、限定されるものではないが、イブプロフェンおよびナプロキセン）が挙げられる。
【００１８】
用語「軟骨退化」とは、軟骨を含む組織での退化のことをいう。
【００１９】
用語「軟骨細胞」とは、関節軟骨中に見いだされる細胞のことをいう。軟骨は、コラーゲン、ゼラチン状のタンパク質、およびプロテオグリカンを産生する。ここで、プロテオグリカンは、タンパク質に結合したグリコサミノグリカンである（ムコ多糖類とも呼ばれる）。
【００２０】
用語「軟骨保護」とは、軟骨修復の改善および関節再形成の促進をおこなうように設計された治療のことをいう。
【００２１】
用語「カクテル」とは、ある症状を治療するための薬物の混合物のことをいう。多くの場合、カクテルに含まれる薬物の複合効果は、個々に使用した薬物のいずれかの効果よりも強力である。
【００２２】
用語「持続的放出」は、単相に見える薬物放出プロファイルを説明することのみに用いられ、滑らかな曲線の放出時間プロファイルを持つ。放出プロファイルが実際に指数的または対数的な徐放性プロファイルに一致すると考えられることを、当業者は正しく理解する。
【００２３】
用語「変性軟骨症」として、限定されるものではないが、変形性関節炎、関節リウマチ、滑膜炎、軟骨下骨層水腫、および進行性軟骨退化が挙げられる。
【００２４】
用語「グルクロン酸」とは、ＧＡＧの主成分であるＣ５位にＣＯ2Ｈ基を持つＤ−グルコースの誘導体のことをいう。
【００２５】
用語「グルクルコニダーゼ」とは、ＧＡＧ等の基質からグルクロン酸残基を放出する酵素のことをいう。
【００２６】
用語「グルクロニダーゼ阻害剤」とは、グルクロニダーゼの活性を阻害する化合物のことをいう。グルクロニダーゼ阻害剤の例として、限定されるものではないが、以下のものが挙げられる。
【００２７】
【化１】
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【００２８】
【化２】
2007518814.tif 000003
【００２９】
用語「グリコサミノグリカン」とは、反復二糖類単位を含む多糖類分子のことをいう。二糖類単位は、修飾アミノ糖、すなわちＤ−Ｎ−アセチルガラクトサミンまたはＤ−Ｎ−アセチルグルコサミンとＤ−グルクロネートもしくはＬ−イズロネート等のウロン酸とを含む。他の機能のなかで、ＧＡＧは、関節内の潤滑液として働く。生理学的に重要性を持つ特定のＧＡＧは、ヒアルロン酸、デルマタン硫酸、コンドロイチン硫酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸、およびケラタン硫酸である。
【００３０】
用語「グリコシダーゼ」は、種々の生物学的認識プロセスにとって必須である複合炭水化物の処理および合成に関与する酵素群である。これらは、加水分解反応で一般酸および一般塩として用いられる２つのカルボキシル基を概して用いる。この酵素群は、限定されるものではないが、ヘキソサミニダーゼおよびグルクロニダーゼを含み、これらはプロテオグリカン（ＰＧ）−ヒアルロン酸複合体のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）の異化作用をもたらす。
【００３１】
用語「グリコシダーゼ阻害剤」は、グリコシダーゼの活性を阻害する化合物のことをいう。この阻害は、グリコシダーゼの酵素反応の遷移状態を模倣することによって起こると考えられる。グリコシダーゼ阻害剤として、限定されるものではないが、イミノシクリトール系阻害剤または非イミノシクリトール系阻害剤が挙げられる。標的グリコシダーゼとして、限定されるものではないが、ヘキソサミニダーゼおよびグルクロニダーゼが挙げられる。
【００３２】
用語「ヘキソサミニダーゼ」とは、ヘキソサミン単位、例えばＧｌｃＮＡｃおよびＧｌｃＮを放出する酵素のことをいう。典型的な酵素として、エキソ型β−Ｄ−グルコサミニダーゼ、β−Ｎ−アセチルヘキソサミニダーゼ、キトンサナーゼ、キチナーゼ、およびリゾチームが挙げられる。
【００３３】
用語「ヘキソサミニダーゼ阻害剤」は、ヘキサミニダーゼの活性を阻害する化合物のことをいう。ヘキソサミニダーゼ阻害剤の例として、限定されるものではないが、以下のものが挙げられる。
【００３４】
【化３】
2007518814.tif 000004
【００３５】
【化４】
2007518814.tif 000005
【００３６】
【化５】
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【００３７】
【化６】
2007518814.tif 000007
【００３８】
【化７】
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【００３９】
【化８】
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【００４０】
【化９】
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【００４１】
【化１０】
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【００４２】
【化１１】
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【００４３】
【化１２】
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【００４４】
【化１３】
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【００４５】
【化１４】
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【００４６】
【化１５】
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【００４７】
【化１６】
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【００４８】
【化１７】
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【００４９】
【化１８】
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【００５０】
【化１９】
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【００５１】
【化２０】
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【００５２】
【化２１】
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【００５３】
【化２２】
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【００５４】
【化２３】
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【００５５】
用語「ヒアルロン酸」とは、β（１−４）グリコシド結合によって結合したＤ−グルクロン酸β（１−３）Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンからなる二糖類単位が反復することによって形成された天然の直鎖状多糖類のことをいう。
【００５６】
用語「イミノシクリトール」とは、環員としての窒素（Ｎ）と環炭素（Ｃ）に結合した少なくとも１つのヒドロキシル（ＯＨ）基とを有する環状構造のことをいう。
用語「イミノシクリトール系グリコシダーゼ阻害剤」とは、グリコシダーゼ酵素の活性を阻害するイミノシクリトール化合物のことをいう。イミノシクリトール系グリコシダーゼ阻害剤として、限定されるものでないが、以下の５員環、６員環、および７員環イミノシクリトールが挙げられる。
【００５７】
【化２４】
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【００５８】
【化２５】
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【００５９】
【化２６】
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【００６０】
【化２７】
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【００６１】
【化２８】
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【００６２】
【化２９】
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【００６３】
【化３０】
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【００６４】
【化３１】
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【００６５】
【化３２】
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【００６６】
【化３３】
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【００６７】
【化３４】
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【００６８】
【化３５】
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【００６９】
【化３６】
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【００７０】
【化３７】
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【００７１】
【化３８】
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【００７２】
【化３９】
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【００７３】
【化４０】
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【００７４】
【化４１】
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【００７５】
【化４２】
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【００７６】
【化４３】
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【００７７】
【化４４】
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【００７８】
【化４５】
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【００７９】
【化４６】
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【００８０】
【化４７】
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【００８１】
【化４８】
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【００８２】
【化４９】
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【００８３】
【化５０】
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【００８４】
【化５１】
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【００８５】
【化５２】
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【００８６】
【化５３】
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【化６２】
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【００９６】
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【化６５】
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【００９９】
【化６６】
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【０１００】
【化６７】
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【０１０１】
【化６８】
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【０１０２】
【化６９】
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【０１０３】
用語「ＩＬ−１β」とは、Ｂ細胞およびＴ細胞等の活性化を含む広範囲の免疫性および炎症性応答の媒介となる免疫調節物質であるインターロイキン１βのことをいう。
【０１０４】
用語「関節内（intra-articular）」とは、関節に対して薬物を直接送達する方法のことをいう。従来の薬物送達経路（例えば、経口、血管内、または筋肉内投与）は、滑膜の血管かん流に依存して関節へ薬物を運ぶ。このことは効率的ではない。なぜなら、滑膜毛細管から関節空間への低分子の滑膜を介した輸送が受動的拡散によって生じ、この受動拡散の効率性は標的分子が大きくなるにしたがって低くなる。したがって、グルコサミン等の分子を関節空間に導くための接近手段は、実質的に制限される。薬物の関節内注射または灌流は、そのような制限を回避する。
【０１０５】
用語「比較的軽度」とは、患者の軟骨退化の特定の病変度をいう。好ましくは比較的軽度の病変度は、グレード１ないしグレード３の範囲内である。より好ましくは、比較的軽度の病変は、グレード１およびグレード２の範囲内である。
【０１０６】
用語「非イミノシクリトール系グリコシダーゼ阻害剤」とは、イミノシクリトールを含まず、グリコシダーゼの活性を阻害する化合物のことをいう。非イミノシクリトール系グリコシダーゼ阻害剤の例として、限定されるものではないが、以下のものが挙げられる。
【０１０７】
【化７０】
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【０１０８】
【化７１】
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【０１０９】
【化７２】
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【０１１０】
【化７３】
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【０１１１】
【化７４】
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【０１１２】
【化７５】
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【０１１３】
【化７６】
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【０１１４】
【化７７】
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【０１１５】
用語「ＯＰＴ−６６」とは、化合物（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−Ｎ−メチル−（２−アセトアミドメチル−３，４−ジヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル）ピロリジンのことをいう。ＯＰＴ−６６の構造は以下のとおりである。
【０１１６】
【化７８】
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【０１１７】
用語「プロトグリカン」とは、細胞外基質に対して強度を与えるかなりＯ−グリコシル化されたタンパク質のことをいう。
【０１１８】
用語「徐放」とは、薬物が有効性のために、さもなければ生理的取り込みに薬物が利用可能となる時間のことに言及している。徐放の期間は、薬物がほとんど放出されない誘導期間が先行してもよく、あるいは薬物が多少放出される最初の期間と追加の薬物が放出される第２の期間とを含む二相性であってもよい。
【０１１９】
用語「滑膜炎」は、関節内壁（滑膜）の炎症を意味する。滑膜炎は、種々の関節関連症状でみられ、該症状として、限定されるものではないが、変形性関節炎、物理的または外傷性の損傷、関節リウマチ、および他の自己免疫不全が挙げられる。
【０１２０】
用語「治療効果のある量」とは、所望の薬理効果を誘発するのに必要な生理活性物質の量のことをいう。この量は、特定の活性物質の有効性と、個人の年齢、体重、および反応と、同様に個人の症状の性質および度合いにもとづいて、大きく変動し得る。したがって、活性物質の量に関して、臨界的な上限および下限は存在しない。当業者は、本発明で用いられる治療効果のある量を容易に決定することができる。
【０１２１】
出願人は、滑液中のグリコシダーゼの阻害が、軟骨退化に関連した疾患の治療で新規な軟骨保護手段として、高い有用性を持つことを決定した。これらの標的に対する上記阻害剤の投与は、変形性関節炎、関節リウマチ、滑膜炎、軟骨下骨層水腫、軟骨退化、および他の同様な症状を治療するための有用な治療的介入である。したがって、滑液でのグリコシダーゼの阻害は、軟骨保護に対する新規の手段として高い有用性を持つ。
【０１２２】
例えば、プロテオグリカンおよびグリコサミノグリカンが加速的に失われることは、骨関節炎の軟骨の特質である。プロテオグリカンおよびグリコサミノグリカンの異化作用の増大は、軟骨組織の機能的および構造的完全性を危うくし、関節運動の際にかかる圧縮荷重に対して、最終的に組織が抵抗することができなくなる(Inerot, S., et al., Biochem. J., 1978, 169(1), 143)。時間とともに、この過程は、不可逆性の軟骨退化をもたらす。確定された関節疾患での関節プロテオグリカンの損失は、コラーゲン損失よりもより重要であった(Mankin, H.J. et al., 1970 J. Bone Joint Surg. Am, 52 (3), 424)。定量的変化に加えて、影響を受けた軟骨も、特定の質的変化を被る。このような変化の例として、コンドロイチン６−硫酸塩に対するコンドロイチン４−硫酸塩の比率が不相応に増加すること、コンドロイチン硫酸塩に対するケラタン硫酸塩の比率が減少すること(Mankin, H.J., et al., 1971, J. Clin. Invest. 50 (8: 1712)、ならびにコンドロイチンおよびデルマタン硫酸塩鎖の末端残基の硫酸化が減少すること(Plaas, A.H., et al., 1998, J. Biol. Chem. 273 (20), 12642)が挙げられる。
【０１２３】
軟骨基質の退化は、グリコシダーゼによるグリコサミノグリカンの退化を伴い、またいくつかのメタロプロテアーゼ（例えば、コラゲナーゼ、ストロメライシン、およびアグレカナーゼ）ならびにシステインプロテアーゼ（例えば、カテプシン）の作用を伴う多因子性のプロセスである(Winchester, B.G., 1996 Subcell. Biochem. 27, 191; Kresse, H., et al. 1987, Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol., 60, 217)。
【０１２４】
グリコシダーゼは、軟骨細胞によって作られ、いくつかのグリコサミノグリカンに対して酵素活性を有する。ヘキサミニダーゼは、グリコサミノグリカン分解酵素に関係しており、軟骨細胞によって細胞外コンパートメントに放出される。それは、変形性関節症患者の滑液中にある主要なグリコシダーゼである(Shikhman, A. et al., 2000 Arthritis Rheum. 43, 1307)。
【０１２５】
ヘキソサミニダーゼは、リソソーム加水分解酵素群に属する。ヘキソサミニダーゼは、糖タンパク質、ＧM2−ガングリオシド、およびグリコサミノグリカン（コンドロイチン４−硫酸塩、コンドロイチン６−硫酸塩、ヒアルロン酸、ケラタン硫酸、およびデルマタン硫酸が挙げられる）に含まれる非還元末端Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミンおよびＮ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトサミン残基の加水分解を触媒する(Winchester, B. G., 1996、前掲）。
【０１２６】
本発明の一実施形態は、関節疾患の炎症性および軟骨退化症状に対処するためにグリコシダーゼ阻害を用いることに関する。上記関節疾患として、限定されるものではないが、変形性関節炎、関節リウマチ、滑膜炎、軟骨下骨層水腫、軟骨退化、および他の同様な症状が挙げられる。この実施形態によれば、グリコシダーゼの阻害剤（例えば、ヘキソサミニダーゼまたはグルクロニダーゼ）を、関節の軟骨起案の分解を妨げる軟骨保護剤として使うことができる。
【０１２７】
グリコシダーゼ阻害剤の合成は、米国特許第６，４６２，１９３号公報（Ｂ１）、米国特許出願第２００４／０１９８７７２号公報（Ａ１）、  Igarashi et al., Tetrahedron Letters 1996, 37 (16), 2707、Horsch et al., Pharmacol. Ther. 1997, 76 (1-3), 187、およびIchikawa et al., JACS2000, 120 (13), 3007（これらの文献の内容を本明細書で援用する）の方法にもとづいて、おこなわれる。グリコシダーゼ阻害剤の例として、限定されるものではないが、上記定義の欄にリストした例が挙げられる。これらの例の置換基もまた修飾可能である。そのような修飾の一例は、窒素原子上の置換基として水素の代わりにメチルまたはエチル基の置換であってもよい。
【０１２８】
本発明の別の好ましい実施形態では、ヘキソサミニダーゼの阻害剤がほ乳類で、予想外の軟骨保護作用を示した。これらの軟骨保護特性によって、変形性関節炎（ＯＡ）または関節リウマチ（ＲＡ）等を治療するための治療手段としてグリコシダーゼ阻害剤を利用することに、正当性が得られる。
【０１２９】
本発明の別の好ましい実施形態は、関節炎を治療するための別のグリコシダーゼ阻害剤および／または別の抗炎症薬もしくはアミノ糖と併用して一種類のグリコシダーゼ阻害剤を使用することを意図する。
【０１３０】
本発明の好ましい別の実施形態は、治療効果のある量のグリコシダーゼ阻害剤（例えば、ヘキソサミニダーゼ阻害剤またはグルクニダーゼ阻害剤あるいはそれらの組み合わせ）を患者に対して投与することによって、滑膜炎、軟骨下骨層水腫、および軟骨退化を治療、予防、および軽減する方法に関する。当該技術分野で周知の任意の手段によって、治療効果のある量の阻害剤を患者に対して投与することができ、該投与として、限定されるものではないが、経口投与、血管内投与、筋肉内投与、局所投与、または関節内投与が挙げられる。治療効果のある量のそのような阻害剤を、放出制御または徐放性製剤としてマトリックス内に関節内投与することも可能である。
【０１３１】
本発明の別の好ましい実施形態は、単独で、または既存の抗炎症剤もしくは他の治療分子と併用して、治療効果のある量のグリコシダーゼ阻害剤（例えば、ヘキソサミニダーゼ阻害剤またはグルクロニダーゼ阻害剤あるいはそれらの組み合わせ）を含む組成物を患者に対して投与することを含む。本発明の製剤を投与する方法として、限定されるものではないが、血管内、関節内、局所、および筋肉内法が挙げられる。
【０１３２】
この方法の一実施形態では、ヘキソサミニダーゼ、グルクロニダーゼ、または他のエンドグリコシダーゼもしくはエキソグリコシダーゼに対する特異的活性または種々の活性を有するグリコシダーゼ阻害剤の組み合わせもまた、関節での軟骨保護を達成することも可能である。
【０１３３】
本発明は、実施例を提供することで、変形性関節炎、関節リウマチ、滑膜炎、軟骨下骨層水腫、および軟骨退化等の病態で、グリコシダーゼ阻害剤（例えば、ヘキソサミニダーゼ阻害剤）の使用がどのようにして所望の軟骨保護作用を生じ得るかを教示する。この取り組み方は、軟骨基質グリコサミノグリカン退化を防ぐ新規の手段と、変形性関節炎、関節リウマチ、炎症性関節疾患、外傷性関節疾患、および関連の病態を治療するための戦略を示す。
【０１３４】
（医薬製剤および投与）
グリコシダーゼ阻害剤を、例えば本明細書で援用されるRemington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed., Mack Publishing Co., Easton, PA (1990)に記載された薬理学的に許容できる製剤に、活性成分として入れることができ、また健康な組織に対してほとんど作用することなく疾患および病態の特異的治療に使用することができる。
溶解または分散された活性成分を含む医薬組成物の調製は、その調製にもとづいて制限される必要はない。そのような組成物を、注射可能な溶液または懸濁液として調製することが可能である。しかし、使用に先立って液体に溶解または懸濁させるのに適した固形も、調製することができる。製剤を乳状にすることもできる。
【０１３５】
好ましい実施形態では、上記組成物は容器に保管され、該容器は米国ＦＤＡに承認されているという趣旨が述べられた標識（または他の国々の相当する他の標識）を有する。そのような容器は、宿主に投与される治療効果のある量の活性成分を提供する。
【０１３６】
目的の症状に影響を及ぼす特定のグリコシダーゼ阻害剤を、単独で、または適当な担体もしくは賦形剤と混合される医薬組成物の状態で、ほ乳類に対して投与することができる。目的とする症状を示しているほ乳類を治療する際に、治療効果のある量のグリコシダーゼ阻害剤を投与する。活性成分を賦形剤と混合することができ、該賦形剤は医薬的に許容され、かつこの活性成分と適合性があり、さらに本明細書中に記載された治療方法での使用に適した量になっている。
【０１３７】
薬理学的に許容できる塩類を標準的技術によって調製することができる。例えば、化合物の遊離塩基形態を最初に適当な溶媒（例えば、適当な酸を含む水溶液またはアルコール水溶液）に溶解する。次に、その溶液を蒸発させることで、塩を単離する。別の実施形態では、有機溶媒中で遊離の塩基および酸と反応させることで、塩を調製する。
【０１３８】
化合物の投与を容易に、例えば化合物の溶解度を高めたりするために、担体または賦形剤を使用することができる。担体および賦形剤の例として、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖類または種々のタイプのデンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油、ポリエチレングリコール類、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール、および生理学的適合性のある溶媒が挙げられる。
【０１３９】
本明細書の方法で使用される組成物は、成分の薬理学的に許容できる塩類を含むことができる。薬理学的に許容できる塩類として、例えば塩酸またはリン酸、硫酸等の無機酸、あるいは酢酸、酒石酸、マンデル酸等の有機酸によって形成される酸付加塩類が挙げられる。遊離のカルボキシル基で形成される塩類は、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄等の無機塩基、さらにイソプロピルアミン、トリメチルアミン、２−アミノエタノール、ヒスチジン、プロカイン等の有機塩基から誘導することもできる。
【０１４０】
培養細胞または実験動物で、そのような化合物の毒性および治療効力を、例えばＬＤ５０（個体群の５０％に対して致死的な用量）およびＥＤ５０（個体群の５０％で治療的に有効な用量）を測定するために、標準的な医薬的手順によって決定することができる。毒性効果と治療効果との用量比は治療指数であり、ＬＤ５０とＥＤ５０との比として表すことができる。大きな治療指数を示す化合物が好ましい。これらの細胞培養アッセイおよび動物研究から得たデータを用いて、ヒトで用いる用量範囲を明確に表すことができる。そのような化合物の用量は、好ましくは毒性がほとんどないＥＤ５０を包含する循環濃度の範囲内である。投薬量は、用いた投薬形態と利用した投薬経路とに応じて、この範囲内で変化可能である。
【０１４１】
本発明の方法で使用される任意のグリコシダーゼ阻害剤に関して、治療的に有効な用量を細胞培養アッセイから最初に推定することができる。例えば、１回の用量を動物モデルに処方して、培養細胞で測定されたようにＩＣ５０を含む循環血漿濃度範囲を達成することができる（すなわち、タンパク質複合体の最大半減崩壊(half-maximal disruption)、または複合体成分の細胞濃度および／または活性の最大半減阻害(half-maximal inhibition)を達成する試験化合物の濃度）。そのような情報を用いることで、ヒトで有用な用量をより正確に測定することができる。血漿中での濃度を、例えばＨＰＬＣで測定してもよい。
【０１４２】
本発明の別の好ましい実施形態は、グリコシダーゼ阻害剤をリポソームまたは他の封入剤にカプセル化または封入することに関し、関節内に注射された場合にその薬物動態プロファイルを修飾する。好ましくは、グリコシダーゼ阻害剤をマトリックスに封入する。より好ましくは、グリコシダーゼ阻害剤を、粒子、インプラント、およびゲルからなる群より選択されるマトリックス中に封入する。
【０１４３】
正確な処方、投与経路、および投薬量は、ほ乳類の症状を鑑みて個々の医師によって選択される（例えば、Fingl et al., The Pharmacological Basis of Therapeutics, 1975, Ch. 1, p. 1を参照せよ）。注目すべきことは、毒性を理由として、あるいは器官の機能障害を理由にして、どのようにまたはいつに投与を終了、中断、または調整するかを、主治医にとって公知である。逆に言えば、主治医には、臨床効果が不充分である（毒性を排除する）場合、より高いレベルに治療を制限することは公知である。目的とする疾患を管理する上で投与された用量の大きさは、治療すべき症状および投与経路に応じて変動する。症状は、例えば、標準的な予後評価法によって、部分的に評価することも可能である。さらに、用量および場合によっては投薬頻度もまた、個々のほ乳類の齢、体重、および反応によって変動する。上記に述べたものと同等のプログラムを獣医学で用いてもよい。
【０１４４】
治療している特定の症状に依存して、そのような薬剤を調製して全身または局所的に投与することも可能である。薬剤の調製および投与の技術は、本明細書中に援用されるRemington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed., Mack Publishing Co., Easton, PA (1990)に見いだすことができる。
【０１４５】
注射に関しては、本発明の薬剤を水溶液、好ましくはハンクス液、リンゲル液、または生理食塩水緩衝液等の生理学的に適合性のある緩衝液中に調製することが可能である。
【０１４６】
本発明を実施するために本明細書に開示された方法で使用されるグリコシダーゼ阻害剤を全身投与に適した投薬量に調製するために薬理学的に許容できる担体を使用することは、本発明の範囲内である。担体と適当な製造プラクティスとを適切に選択することで、本発明の方法で使用されるグリコシダーゼ阻害剤、特に溶液として調製されたものを、非経口的に、例えば静脈内注射によって、投与することが可能である。
【０１４７】
本発明での使用に適した医薬組成物として、その意図する目的を達成するのに有効な量で活性成分が含まれる組成物が挙げられる。有効量の測定は、特に本明細書中に提供される詳細な開示を考慮すれば、充分に当業者の能力の範囲内である。活性成分に加えて、それらの医薬組成物は、医薬的に使用し得る製剤の中への活性成分の処理を促進する賦形剤および助剤を含む薬理学的に許容できる適当な担体を含むものであってもよい。本発明の医薬組成物を、例えば、従来の混合、溶解、造粒、糖衣錠製造、レビテーション、封入、または凍結乾燥によって、それ自体が知られている方法で、製造することが可能である。
【０１４８】
非経口投与のための製剤調製は、水溶性型活性化合物の水溶液を含む。また、活性化合物の懸濁液を、適当な油性注射懸濁液として調製することができる。適当な親油性溶媒またはビヒクルとしては、ゴマ油等の脂肪油またはオレイン酸エチルもしくはトリグリセリド等の合成脂肪酸エステル、あるいはリポゾームが挙げられる。注射用水性懸濁液は、懸濁液の粘度を高める物質、例えばナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトール、またはデキストランを含むものであってもよい。任意に、懸濁液もまた、適当な安定化剤または化合物の溶解度を高めて高濃度溶液の調製を可能とする化合物の安定性を増加させる適当な安定化剤または試薬を含むものであってもよい。
【０１４９】
糖衣錠のコアに適当な被膜を設ける。この目的には、濃縮糖溶液を使用することができ、この溶液は任意に、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポルゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタニウム、ラッカー溶液、ならびに適当な有機溶媒または溶媒混合物を、任意に含むことが可能である。活性成分用量の異なる組み合わせを識別または特徴づけするために、染料または色素を錠剤または糖衣錠コーティングに添加してもよい。
【０１５０】
以下に提供する実施例は、本発明の具体的な実施形態を説明することを目的とするものであり、これらはいかなるかたちであっても本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【実施例１】
【０１５１】
（骨関節炎動物モデルへのヘキソサミニダーゼ阻害剤持続注入の効果）
この研究に用いたモデルは、ウサギの膝前十字靱帯（ＡＣＬ）の横断である。ＡＣＬ横断（ＡＣＬＴ）は、関節不安定性と、それに続く退化性および変形性関節症様の変化を生ずる。
【０１５２】
メスのニュージーランド白ウサギ（３．０〜３．５ｋｇ）を用い、各群８匹ずつになるように無作為に分けた。Ａ群は生理食塩水処理群であり、Ｂ群はＯＰＴ−６６としても知られている３０ｍＭのヘキソサミニダーゼ阻害剤（２Ｒ、３Ｒ、４Ｒ、５Ｒ）−Ｎ−メチル−（２−アセトアミドメチル−３，４−ジヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル）−ピロリジンで処理した。全ての化合物を、２ｍｌのアルゼット（Ａｌｚｅｔ）浸透圧ポンプ（Ａｌｚｅｔ  ２ＭＬ４、Ａｌｚａ、ＵＳＡ）によって送達した。ポンプからの送達率は、２．５リットル（ｌ）／時間（ｈｒ）であった。すべてのウサギに対して、右膝にＡＣＬＴ術を施した。
【０１５３】
ケタミン（３５ｍｇ／ｋｇ）およびアセプロマジン（２．５ｍｇ／ｋｇ）の筋肉内注射で、全てのウサギを麻酔した。膝を剃り、アンチベックス（Ａｎｔｉｂｅｘ）（Ｖｅｔｏｑｕｉｎｏｌ  Ｓ．Ａ．）溶液で消毒した。内側膝蓋骨近傍皮膚切開をおこない、内側関節切開術を実施した。膝蓋骨を側方に外して、膝を完全に屈曲させた。ＡＣＬを視覚化し、Ｎｏ．１５替刃で横切した。横断が完全になされたかは、手動の前方引き出し試験によって確認された。関節を滅菌生理食塩水で潅注して閉じた。膝関節を閉じる前に、化合物（生理食塩水または（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−Ｎ−メチル−（２−アセトアミドメチル−３，４−ジヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル）ピロリジン（ＯＰＴ−６６としても知られている））で事前に満たされたアルゼット（Ａｌｚｅｔ）ポンプをウサギの右下腹部に皮下移植した。このポンプをポリエチレン管（内径：０．５８ｍｍ）に接続した。このポリエチレン管は右膝関節に挿入され、その先端が滑膜腔に静置されている。関節包を連続縫合で閉じ、ポンプが接続されている管もその組織に固定した。断続縫合で皮膚を閉じた。手術後４週間目の終わりに、アルゼット（Ａｌｚｅｔ）ポンプを新しいユニットに交換した。
【０１５４】
ＡＣＬＴ後８週目に動物を犠牲にした。両膝（関節腫脹および滑液を含む）の全体的な形態学的変化を評価した。以下の規準を用いて、解剖顕微鏡下での観察中に、大腿骨および脛骨表面上の病変の発生、部位、および症状を観察した。グレード１（無傷の面）、表面の外観は正常であり、インディアンインクを保持していなかった。グレード２（最小のフィブリル化）、表面は細長いしみまたは薄い灰色のパッチとしてインディアンインクを保持。グレード３（明白なフィブリル化）、外観上はビロード状で真っ黒なパッチとしてインディアンインクが保持される領域。グレード４（侵食）、軟骨の損失によって下にある骨の露出。
【０１５５】
関節腫脹の病変度は、以下の通りである。０（正常）；１（軽度）、関節包の炎症および／または増殖；２（中等度）、関節包の肥厚および／または滑膜の炎症；３（重度）、滑膜の著しい炎症、半月板または靭帯（前方または後方十字靭帯）の膨潤。
【０１５６】
滑液量は、以下の通りである。０（正常）；１（軽度）、流体が正常よりも多いが、膝関節を満たしていない；２（中等度）、液体が膝関節を満たしているけれども、骨包が開らいても骨包から溢れ出ない；３（重度）、流体が膝関節を膨張させ、骨包が開いていることから骨包から溢れ出る。
【０１５７】
膝組織の観察によって、ヘキソサミニダーゼ阻害剤である（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−Ｎ−メチル−（２−アセトアミドメチル−３，４−ジヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル）ピロリジン（ＯＰＴ−６６としても知られている）による治療では、生理食塩水処理動物と比較して、膝関節に一貫して軟骨退行性病変が生じることがわかった。
【０１５８】
図１および図２は、生理食塩水処理動物と比較して、ヘキソサミニダーゼ阻害剤である（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−Ｎ−メチル−（２−アセトアミドメチル−３，４−ジヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル）ピロリジン（ＯＰＴ−６６としても知られている）による治療が、大腿骨および脛骨病変スコアを統計学的に有意に減少させたことを示す。
【０１５９】
図３は、生理食塩水処理動物と比較して、ヘキソサミニダーゼ阻害剤である（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−Ｎ−メチル−（２−アセトアミドメチル−３，４−ジヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル）ピロリジン（ＯＰＴ−６６としても知られている）による処理によって関節腫脹の減少に向かう傾向が生じることを示す。
【０１６０】
図４は、ヘキソサミニダーゼ阻害剤である（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−Ｎ−メチル−（２−アセトアミドメチル−３，４−ジヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル）ピロリジン（ＯＰＴ−６６としても知られている）による処理によって、膝関節の液体が正常なレベルになることを示す。対照的に、生理食塩水処理動物の膝で流出が増加した。（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−Ｎ−メチル−（２−アセトアミドメチル−３，４−ジヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル）ピロリジン群と生理食塩水処置群との採点上の違いは、統計学的に有意であった。
【実施例２】
【０１６１】
（ヘキソサミニダーゼの持続注入によるｓＧＡＧ損失の減少）
メスのニュージーランド白ウサギ（３．０〜３．５ｋｇ）を用い、各群８匹ずつになるように無作為に分けた。無菌状態下で、２ｍｌアルゼット（Ａｌｚｅｔ）浸透圧ポンプ（送達流速：１０μｌ／ｈ（Ａｌｚｅｔ  ２ＭＬ１，  Ａｌｚａ，  ＵＳＡ）をＩＬ−１β（１０００Ｕ／ｍｌ；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  ＵＳＡ）で満たした。別の２ｍｌアルゼット（Ａｌｚｅｔ）ポンプを３０ｍＭのヘキソサミニダーゼ阻害剤である（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−Ｎ−メチル−（２−アセトアミドメチル−３，４−ジヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル）ピロリジン（ＯＰＴ−６６としても知られている）または生理食塩水で満たした。アルゼット（Ａｌｚｅｔ）ポンプをウサギの右下腹部に皮下移植し、さらにポリエチレン管（内径：０．０２５インチ）に接続した。このポリエチレン管は左膝関節に皮下縫合されており、その先端が滑膜腔に静置されている。全ての動物の未治療の反対側の膝を、負の対照群として用いた。ＩＬ−１βおよび（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−Ｎ−メチル−（２−アセトアミドメチル−３，４−ジヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル）ピロリジンを７日間にわたって関節内注入した。手術直前に、またその後の連続３日間にわたって、感染予防のためにマルボシル（Ｍａｒｂｏｃｙｌ）（６ｍｇ／ｋｇ／日）を投与した（筋肉注射）。動物を７日目に捕獲した。
【０１６２】
ペントバルビタールの静脈の注入によってウサギを犠牲にした。両方の膝関節を除去し、解剖顕微鏡で観察しながら外科用メスを用いて外側脛骨プラトーの関節軟骨を収集した。軟骨の重量を測定し、−８０℃で保存した。分析のために、アッセイ直前に試料の解凍をおこなった。新たに調製したパパイン（パパイン１ｍｇを含有する２ｍｌの５０ｍＭリン酸緩衝液、（ｐＨ６．８（ＰＢＳ）、１．０ＭＮａＣｌ、５ｍＭシステインＨＣｌ、および１ｍＭ  ＥＤＴＡを含む））を用いて、試料からｓＧＡＧを抽出した。６０℃で２４時間撹拌しながら、１ｍｇの軟骨を２０μｌのＰＢＳ−パパイン溶液で消化した。消化後、試料を１０，０００ｒｐｍで、１０分間遠心分離機で分離し、次に上清をＰＢＳ−パパイン緩衝液で７５倍希釈した後、以下のアッセイに用いた。
【０１６３】
ブリスカン（Ｂｌｙｓｃａｎ）染料（Ｂｉｏｃｏｌｏｒ、ＵＳＡ）を各々の管に添加してボルテックスした。溶液を、メカニカル・シェーカーを用いて９０ｒｐｍで３０分間混合した後、２０，０００×ｇで遠心した。ペレットを４５０μｌのブリスカン（Ｂｌｙｓｃａｎ）解離試薬で再構成し、少なくとも３分間にわたってボルテックスすることで、このペレットを完全に溶解させた。次に、試料の吸光度を、分光光度計を用いて６５６ｎｍで観察した。ブランクとして超純水を用いた。ブランクの吸光度を、各々の試料から差し引いた。結果は、軟骨組織１ミリグラム湿重量あたりの回収ｓＧＡＧのマイクログラムとして、表される。
【０１６４】
未治療の膝の左脛骨プラトーの軟骨の回収可能なｓＧＡＧ含有量は、組織１ミリグラム湿重量あたり約４６マイクログラムであった（図５）。注入後、生理食塩水処理された膝の回収可能なｓＧＡＧ量は、非ＩＬ−１β処理対照左膝に比べて約２８％少なかった（４６μｇ／ｍｇに対して、左脛骨プラトー軟骨湿重３３μｇ／ｍｇ）。（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−Ｎ−メチル−（２−アセトアミドメチル−３，４−ジヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル）ピロリジン（ＯＰＴ−６６としても知られている）で治療した膝では、回収可能なｓＧＡＧの量は、約４１μｇ／ｍｇであり、生理食塩水処理の膝に対して２４％増加であった。
【０１６５】
上で述べられた全ての参考文献は、全ての目的のためにそれらの内容全体を本明細書に援用する。この発明を具体的に示し、かつその好ましい実施形態を参照しながら説明した一方で、添付した特許請求の範囲によって定義される本発明の精神および範囲から逸脱することなく形態および詳細に種々の変更を加えることが可能であることが、当業者によって理解される。
【図面の簡単な説明】
【０１６６】
【図１】生理食塩水または特異的ヘキソサミニダーゼ阻害剤（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−Ｎ−メチル−（２−アセトアミドメチル−３，４−ジヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル）ピロリジン）（これもまたＯＰＴ−６６として知られている）による治療を受けた動物に対する膝前十字靱帯横断（ＡＣＬＴ）術後８週目に測定した大腿骨の病変度を示す。誤差バーは、１つの標準偏差を表す。
【図２】生理食塩水または特異的ヘキソサミニダーゼ阻害剤（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−Ｎ−メチル−（２−アセトアミドメチル−３，４−ジヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル）ピロリジン）（これもまたＯＰＴ−６６として知られている）による治療を受けた動物に対するＡＣＬＴ術後８週目に測定した脛骨の病変度を示す。誤差バーは、１つの標準偏差を表す。
【図３】生理食塩水または特異的ヘキソサミニダーゼ阻害剤（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−Ｎ−メチル−（２−アセトアミドメチル−３，４−ジヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル）ピロリジン）（これもまたＯＰＴ−６６として知られている）による治療を受けた動物に対するＡＣＬＴ術後８週目に測定した関節腫脹度（Joint Swelling Grading)を示す。誤差バーは、１つの標準偏差を表す。
【図４】生理食塩水または特異的ヘキソサミニダーゼ阻害剤（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−Ｎ−メチル−（２−アセトアミドメチル−３，４−ジヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル）ピロリジン）（これもまたＯＰＴ−６６として知られている）による治療を受けた動物に対するＡＣＬＴ術後８週目に測定した滑液量を示す。誤差バーは、１つの標準偏差を表す。
【図５】ＩＬ−１β誘導ｓＧＡＧ損失の予防に対する特異的ヘキソサミニダーゼ阻害剤（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−Ｎ−メチル−（２−アセトアミドメチル−３，４−ジヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル）ピロリジン）（これもまたＯＰＴ−６６として知られている）の効果を示す。誤差バーは、１つの標準偏差を表す。
【図１】
2007518814.tif 000080
【図２】
2007518814.tif 000081
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【手続補正書】
【提出日】平成19年1月30日(2007.1.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
充分な量の少なくとも１種類のグリコシダーゼ阻害剤を投与するステップを含む、変性軟骨症の治療方法。
【請求項２】
前記治療は、前記変性軟骨症の治癒、治療、予防、および軽減からなる群より選択される請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記変性軟骨症は、変形性関節症、関節リウマチ、滑膜炎、軟骨下骨層水腫、および軟骨退化からなる群より選択される請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記変性軟骨症の治療は、治療効果のある量のカクテルを投与することによる請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記カクテルは、治療効果のある量の少なくとも１種類のグリコシダーゼ阻害剤と、治療効果のある量の治療用分子添加物と、を含む請求項４記載の方法。
【請求項６】
前記治療用分子添加物は、抗炎症剤およびアミノ糖からなる群より選択される請求項５記載の方法。
【請求項７】
前記カクテルは、治療効果のある量の抗炎症剤と、治療効果のある量のアミノ糖と、をさらに含む請求項４記載の方法。
【請求項８】
前記グリコシダーゼ阻害剤は、イミノシクリトール系グリコシダーゼ阻害剤および非イミノシクリトール系グリコシダーゼ阻害剤からなる群より選択される請求項１記載の方法。
【請求項９】
前記非イミノシクリトール系グリコシダーゼ阻害剤は、ヘキソサミニダーゼ阻害剤およびグルクロニダーゼ阻害剤からなる群より選択される請求項８記載の方法。
【請求項１０】
前記グリコシダーゼ阻害剤は、グリコシダーゼに対する特異的活性を有する請求項１記載の方法。
【請求項１１】
前記グリコシダーゼは、ヘキソサミニダーゼ、グルクロニダーゼ、エンドグリコシダーゼ、およびエキソグリコシダーゼからなる群より選択される請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
前記変性軟骨症は、さらなる症状をもたらす請求項１記載の方法。
【請求項１３】
前記さらなる症状は、関節炎、変形性関節炎、関節リウマチ、炎症性関節症、および外傷性関節症からなる群より選択される請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
前記投与は、経口投与、血管内投与、関節内投与、筋肉内投与、および局所投与からなる群より選択される経路で行われる請求項１記載の方法。
【請求項１５】
前記グリコシダーゼ阻害剤は、徐放性製剤または制御放出製剤に調製される請求項１記載の方法。
【請求項１６】
前記グリコシダーゼ阻害剤は、送達装置を用いて投与される請求項１記載の方法。
【請求項１７】
前記送達装置は、アルゼットポンプである請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
充分な量の少なくとも１種類のグリコシダーゼ阻害剤を、投与を必要とする被検者に投与して炎症を治療するステップを含む、炎症の治療方法。
【請求項１９】
前記治療は、前記炎症の治癒、治療、予防、および軽減からなる群より選択される請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
前記投与は、経口投与、血管内投与、関節内投与、筋肉内投与、および局所投与からなる群より選択される経路で行われる請求項１８記載の方法。
【請求項２１】
前記グリコシダーゼ阻害剤は、徐放性製剤または制御放出製剤に調製される請求項１８記載の方法。
【請求項２２】
前記グリコシダーゼ阻害剤は、送達装置を用いて投与される請求項１８記載の方法。
【請求項２３】
前記送達装置は、アルゼットポンプである請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
治療効果のある量の少なくとも１種類のグリコシダーゼ阻害剤と、治療効果のある量の治療用分子添加物と、を含む、変性軟骨症を治療するための医薬組成物。
【請求項２５】
前記治療用分子添加物は、抗炎症剤およびアミノ糖からなる群より選択される請求項２４記載の医薬組成物。
【請求項２６】
前記医薬組成物は、治療効果のある量の少なくとも１種類のグリコシダーゼ阻害剤と、治療効果のある量の抗炎症剤と、治療効果のある量のアミノ糖と、を含む請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項２７】
前記医薬組成物は、治療効果のある量の少なくとも１種類のグリコシダーゼ阻害剤と、治療効果のある量の抗炎症剤と、を含む請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項２８】
前記医薬組成物は、治療効果のある量の少なくとも１種類のグリコシダーゼ阻害剤と、治療効果のある量のアミノ糖と、を含む請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項２９】
前記治療は、変性軟骨症の治癒、処置、予防、および軽減からなる群から選択される請求項２４の医薬組成物。
【請求項３０】
前記変性軟骨症は、変形性関節炎、関節リウマチ、滑膜炎、軟骨下骨層水腫、および軟骨退化からなる群より選択される請求項２４記載の医薬組成物。
【請求項３１】
前記グリコシダーゼ阻害剤は、イミノシクリトール系グリコシダーゼ阻害剤および非イミノシクリトール系グリコシダーゼ阻害剤からなる群より選択される請求項２４記載の医薬組成物。
【請求項３２】
前記非イミノシクリトール系グリコシダーゼ阻害剤は、ヘキソサミニダーゼ阻害剤およびグルクロニダーゼ阻害剤からなる群より選択される請求項２４記載の医薬組成物。
【請求項３３】
前記グリコシダーゼ阻害剤は、グリコシダーゼに対する特異的活性を有する請求項２４記載の医薬組成物。
【請求項３４】
前記グリコシダーゼは、ヘキソサミニダーゼ、グルクロニダーゼ、エンドグリコシダーゼ、およびエキソグリコシダーゼからなる群より選択される請求項２４記載の医薬組成物。
【請求項３５】
前記グリコシダーゼ阻害剤は、徐放性製剤または制御放出製剤に調製される請求項２４記載の医薬組成物。
【請求項３６】
前記グリコシダーゼ阻害剤は、送達装置を用いて投与される請求項２４記載の医薬組成物。
【請求項３７】
前記送達装置は、アルゼットポンプである請求項３６記載の医薬組成物。
【請求項３８】
（ａ）炎症を治療するために充分な量の少なくとも１種類のグリコシダーゼ阻害剤と、
（ｂ）薬理学的に許容できる担体と、を含む、炎症を治療するための医薬組成物。
【請求項３９】
前記治療は、前記炎症の治癒、治療、予防、および軽減からなる群より選択される請求項３８記載の医薬組成物。
【請求項４０】
前記グリコシダーゼ阻害剤は、徐放性製剤または制御放出製剤に調製される請求項３８記載の医薬組成物。
【請求項４１】
前記グリコシダーゼ阻害剤は、送達装置によって投与される請求項３８記載の医薬組成物。
【請求項４２】
前記送達装置は、アルゼットポンプである請求項４１記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
2007518814.tif 000085