(57)【要約】  本発明はニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸により制御される貯蔵からの細胞内カルシウム放出の調節；哺乳動物細胞におけるカルシウムスパイクの調節；脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療；ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸により制御される貯蔵からの細胞内カルシウム放出を調節することによる、脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療；哺乳動物細胞におけるカルシウムスパイクを調節することによる、脳、心臓、及びＴ細胞のうちの１又は複数における疾患の治療；の１又は複数において使用するための医薬品の製造における式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容できる塩の使用（式中、Ｒ１は、カルボニル基を有し、Ｒ２は、ヒドロカルビル基であり、場合によって、複素環は、さらに置換されている）に関する。2007516964.tif 000048          （Ｉ）
2007516964.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸により制御される貯蔵からの細胞内カルシウム放出の調節、
哺乳動物細胞におけるカルシウムスパイクの調節、
脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療、
ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸により制御される貯蔵からの細胞内カルシウム放出を調節することによる、脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療、
哺乳動物細胞におけるカルシウムスパイクを調節することによる、脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療
の１又は複数において使用するための医薬品の製造における式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容できる塩の使用
2007516964.tif 000038
（Ｉ）
［上式中、
Ｒ１は、カルボニル基を有し、
Ｒ２は、ヒドロカルビル基であり、
場合によって、複素環は、さらに置換されている］。
【請求項２】
化合物が、細胞透過性である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
化合物が、約５００未満の相対分子量（ＲＭＭ）を有する、請求項１又は２に記載の使用。
【請求項４】
Ｒ２が、カルボニル基を含むヒドロカルビル基である、請求項１から３のいずれかに記載の使用。
【請求項５】
Ｒ２が、アミド基を含むヒドロカルビル基である、請求項１から４のいずれかに記載の使用。
【請求項６】
Ｒ２が、ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２である、請求項１から５のいずれかに記載の使用。
【請求項７】
Ｒ１が、ＣＯＯＨである、請求項１から６のいずれかに記載の使用。
【請求項８】
化合物が、ＮＡＡＤＰのニコチン基の模倣物質であり、前記ＮＡＡＤＰが、式：
2007516964.tif 000039
（II）
を有する、請求項１から７のいずれかに記載の使用。
【請求項９】
請求項１から８のいずれかに記載の化合物又はその薬学的に許容できる塩を薬学的に許容できる担体、希釈剤又は賦形剤と混合された形態で含む薬剤組成物。
【請求項１０】
組成物が、１又は複数の付加的な薬剤活性化合物を含む、請求項９に記載の薬剤組成物。
【請求項１１】
医薬品において使用するための、請求項１から８のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容できる塩。
【請求項１２】
式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容できる塩。
【請求項１３】
請求項１から８までのいずれかに記載の化合物を含む医薬品。
【請求項１４】
細胞内カルシウム放出を調節する薬剤を同定するためのアッセイ法であって、
（ａ）薬剤を用意するステップと；
（ｂ）ＮＡＡＤＰ受容体を用意するステップと；
（ｃ）前記薬剤とＮＡＡＤＰ受容体とを接触させるステップと；
（ｄ）細胞内カルシウム放出のレベルを測定するステップとを含み、
（ｉ）薬剤の存在下での細胞内カルシウム放出のレベルと；（ii）薬剤不在下での細胞内カルシウム放出のレベルとの差が、細胞内カルシウム放出を調節し、
ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸により制御される貯蔵からの細胞内カルシウム放出の調節、
哺乳動物細胞におけるカルシウムスパイクの調節、
脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療、
ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸により制御される貯蔵からの細胞内カルシウム放出を調節することによる、脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療、
哺乳動物細胞におけるカルシウムスパイクを調節することによる、脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療
の１又は複数において使用することができる薬剤を示すアッセイ法。
【請求項１５】
薬剤が、細胞透過性である、請求項１４に記載のアッセイ法。
【請求項１６】
薬剤が、約５００未満の相対分子量（ＲＭＭ）を有する、請求項１４又は１５に記載のアッセイ法。
【請求項１７】
薬剤が、ＮＡＡＤＰのニコチン基の模倣物質であり、前記ＮＡＡＤＰが、式：
2007516964.tif 000040
（ＩＩ）
を有する、請求項１４から１６のいずれかに記載のアッセイ法。
【請求項１８】
（ａ）請求項１４から１７のいずれかに記載のアッセイ法を行うステップと；
（ｂ）細胞内カルシウム放出を調節しうる１又は複数の薬剤を同定するステップと；
（ｃ）１種又は複数の同定された薬剤を大量に調製するステップとを含むアッセイ法。
【請求項１９】
（ａ）請求項１４から１７のいずれかに記載のアッセイ法を行うステップと；
（ｂ）細胞内カルシウム放出を調節しうる１又は複数の薬剤を同定するステップと；
（ｃ）１又は複数の同定された薬剤を含む薬剤組成物を調製するステップとを含む方法。
【請求項２０】
請求項１４から１７のいずれかに記載のアッセイ法により同定可能、好ましくは同定された薬剤。
【請求項２１】
請求項１９に記載の方法により調製された薬剤組成物。
【請求項２２】
治療及び／又は予防が必要な患者に、請求項１から８又は１１から１２のいずれかに記載の化合物、請求項９又は１０に記載の組成物或いは請求項１３に記載の医薬品の有効量を投与することを含む、ヒト又は動物患者における疾患を治療及び／又は予防する方法。
【請求項２３】
請求項１から８又は１１から１２のいずれかに記載の１種又は複数の化合物を薬学的に許容できる希釈剤、賦形剤又は担体と混合することを含む、薬剤組成物を調製する方法。
【請求項２４】
少なくとも１個のコンパートメントが、請求項１から８又は１１から１２のいずれかに記載の１又は複数の化合物、請求項９又は１０に記載の組成物或いは請求項１３に記載の医薬品を含む、１又は複数のコンパートメントを含む薬剤パック。
【請求項２５】
請求項１から８又は１１から１２のいずれかに記載の化合物、請求項９又は１０に記載の組成物或いは請求項１３に記載の医薬品を含む容器で、
ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸により制御される貯蔵からの細胞内カルシウム放出の調節、
哺乳動物細胞におけるカルシウムスパイクの調節、
脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療、
ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸により制御される貯蔵からの細胞内カルシウム放出を調節することによる、脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療、
哺乳動物細胞におけるカルシウムスパイクを調節することによる、脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療
の１又は複数において使用するためにラベルが付されている、容器。
【請求項２６】
ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸により制御される貯蔵からの細胞内カルシウム放出の調節、
哺乳動物細胞におけるカルシウムスパイクの調節、
脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療、
ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸により制御される貯蔵からの細胞内カルシウム放出を調節することによる、脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療、
哺乳動物細胞におけるカルシウムスパイクを調節することによる、脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞）及びＴ細胞のうちの１又は複数における疾患の治療
の１又は複数において使用するための医薬品の製造における式（Ｉ）の化合物の使用であって、
前記化合物が、細胞透過性であり；
前記化合物が、約５００未満の相対分子量を有し；
前記化合物が、ＮＡＡＤＰのニコチン基の模倣物質であり、前記ＮＡＡＤＰが、式：
2007516964.tif 000041
（II）
を有する使用。
【請求項２７】
ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸により制御される貯蔵からの細胞内カルシウム放出の調節、
哺乳動物細胞におけるカルシウムスパイクの調節、
脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療、
ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸により制御される貯蔵からの細胞内カルシウム放出を調節することによる、脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療、
哺乳動物細胞におけるカルシウムスパイクを調節することによる、脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞）及びＴ細胞のうちの１又は複数における疾患の治療
の１又は複数において使用するための医薬品の製造における化合物の使用であって、
前記化合物が、細胞透過性であり；
前記化合物が、約５００未満の相対分子量を有し；
前記化合物が、ＮＡＡＤＰのニコチン基の模倣物質であり、前記ＮＡＡＤＰが、式：
2007516964.tif 000042
（II）
を有し、
前記化合物が、式（Ａ）：
2007516964.tif 000043
（Ａ）
［上式中、
Ｒ１及びＲ２は、環置換基であり；
Ｒ１及びＲ２は、式（Ｉ）の化合物と同様に定義され；
Ｒ３は、１又は複数の置換基を表し、置換基はそれぞれ独立して、Ｈ、置換又は非置換のアリール、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＹ、ＮＹｎ（ｎ＝１、２又は３）、ＳＹ、ＣＯＹ、ＣＯＮＹｚ（ｚ＝２）、Ｃ（Ｏ）ＯＹ（Ｙはそれぞれ独立して、Ｈ、置換又は非置換のアリール及びＣ１〜Ｃ２０アルキル基から選択される）から選択される］
を有する、使用。
【請求項２８】
化合物が、細胞透過性であり；
化合物が、約５００未満の相対分子量を有し；
化合物が、ＮＡＡＤＰのニコチン基の模倣物質であり、前記ＮＡＡＤＰが、式：
2007516964.tif 000044
（II）
を有し、
前記化合物が、式（Ａ）：
2007516964.tif 000045
（Ａ）
［上式中、
Ｒ１及びＲ２は、環置換基であり；
Ｒ１及びＲ２は、式（Ｉ）の化合物と同様に定義され；
Ｒ３は、１又は複数の置換基を表し、置換基はそれぞれ独立して、Ｈ、置換又は非置換のアリール、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＹ、ＮＹｎ（ｎ＝１、２又は３）、ＳＹ、ＣＯＹ、ＣＯＮＹｚ（ｚ＝２）、Ｃ（Ｏ）ＯＹ（Ｙはそれぞれ独立して、Ｈ、置換又は非置換のアリール及びＣ１〜Ｃ２０アルキル基から選択される）から選択される］
を有する、医薬品において使用するための化合物。
【請求項２９】
化合物が、細胞透過性であり；
化合物が、約５００未満の相対分子量を有し；
化合物が、ＮＡＡＤＰのニコチン基の模倣物質であり、前記ＮＡＡＤＰが、式：
2007516964.tif 000046
（II）
を有し、
前記化合物が、式（Ａ）：
2007516964.tif 000047
（Ａ）
［上式中、
Ｒ１及びＲ２は、環置換基であり；
Ｒ１及びＲ２は、式（Ｉ）の化合物と同様に定義され；
Ｒ３は、１個又は複数の置換基を表し、置換基はそれぞれ独立して、Ｈ、置換又は非置換のアリール、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＹ、ＮＹｎ（ｎ＝１、２又は３）、ＳＹ、ＣＯＹ、ＣＯＮＹｚ（ｚ＝２）、Ｃ（Ｏ）ＯＹ（Ｙはそれぞれ独立して、Ｈ、置換又は非置換のアリール及びＣ１〜Ｃ２０アルキル基から選択される）から選択される］
を有する、化合物又はそれを含む薬剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、治療薬に関する。
【０００２】
排他的ではないが、本発明は特に、ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸（nicotinic acid adenine dinucleotide phosphate）により制御される、貯蔵からの細胞内カルシウムの放出の調節；哺乳動物細胞でのカルシウムスパイク（spike）の調節；脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療；ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸により制御される貯蔵からの細胞内カルシウムの放出を調節することによる、脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療；及び／又は哺乳動物細胞でのカルシウムスパイクを調節することによる、脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療のための化合物及び組成物などの治療薬に関する。
【背景技術】
【０００３】
カルシウムは、卵子の最初の受精に始まり、毎日の機能を経て、細胞死まで、細胞内で重要な役割を果たす。カルシウムがこのような顕著な特異性を正確にはどのように発揮するかについては、集中的な研究の対象である。
【０００４】
イノシトール１，４，５−トリスリン酸（ＩＰ３）及びｃＡＤＰ−リボース（ｃＡＤＰｒ）は、細胞内貯蔵からのＣａ２＋放出のメディエイターとして十分に認められている。しかしながら、第３の推定上のＣａ２＋可動化物質であるニコチン酸−アデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＡＤＰ）の役割のほうが最近まで、より議論の対象であった。
【０００５】
細胞内メッセンジャーとして考えられるすべてのＣａ２＋可動化分子の内、ＮＡＡＤＰは最も強力である。通常、細胞質でのナノモル濃度が、細胞内貯蔵からのＣａ２＋の放出をもたらす。例えば、ウニの卵子において、主要なＮＡＡＤＰ感受性Ｃａ２＋プールは、本質的に、非小胞体性（non-endoplasmic reticular）であることを示す証拠が得られた。
【０００６】
ＮＡＡＤＰは初め、ウニの卵子ミクロソームでＣａ２＋放出活性を示すＮＡＤＰ中の汚染物質として発見された。ＮＡＡＤＰの合成は、酵素反応の調節を必要とし、ＮＡＤＰの非リン酸化リボース環上で、ニコチンアミドのニコチン酸への交換が生じる。後者のメカニズムは、細胞表面からリサイクルされる間にＣＤ３８が存在しうるエンドソームコンパートメントに適しているような低いｐＨで促進される。ＮＡＤＰ中の非荷電アミドがＮＡＡＤＰ中の負に荷電されているカルボキシル官能基に交換されることにより、Ｃａ２＋を応答性の貯蔵から可動化する有力な（ナノモル親和性）能力がＮＡＡＤＰにもたらされる。
【０００７】
ＮＡＡＤＰは、複数の細胞タイプで、細胞内Ｃａ２＋貯蔵を可動化する。例えば、ＮＡＡＤＰは、哺乳動物のＴリンパ球、膵臓、腎臓及び心臓細胞を含む高等生物からの多くの系のＣａ２＋を可動化する。膵臓腺房細胞が初めに報告されたが、ＮＡＡＤＰは、コレシストキニン誘発Ｃａ２＋シグナルを開始させることが判明した。同様に、膵臓β細胞でも、ＮＡＡＤＰ感受性Ｃａ２＋貯蔵は、インスリン及びグルコースにより活性化されるＣａ２＋シグナリングを仲介する際に重要な役割を果たす。
【０００８】
ＮＡＡＤＰ＋は特異的及び用量依存的に、ヒトＴ細胞におけるＣａ２＋シグナリングを刺激することも知られている（国際公開第０２／１１７３６号パンフレット）。
【０００９】
証拠は、ＮＡＡＤＰが、イノシトールトリスリン酸及びリアノジン／環状ＡＤＰリボースに感受性を有するものとは別の細胞内Ｃａ２＋チャネルを活性化することを示唆している。無損傷細胞での最近の研究によって、ＮＡＡＤＰ、イノシトールトリスリン酸及び環式ＡＤＰリボースにより仲介されるＣａ２＋放出経路の間の機能性カップリングが証明された。したがって、ＮＡＡＤＰは、細胞質Ｃａ２＋シグナルを形作る際の重要な決定子である。
【００１０】
ＮＡＡＤＰのための特異的結合位置は、ウニの卵子標本で同定され（J. Biol. Chem (1996) 271 8531-8516; Biochem J. (2000) 352, 725-729）、この結合位置がＮＡＡＤＰ誘発Ｃａ２＋可動化に関している証拠も得られている。
【００１１】
カルシウムシグナリングの協調におけるＮＡＡＤＰ受容体の役割は、Trends Biochem Sci. (2001) 26 (8): 482-9及びCell Calcium (2002) 32 (5-6): 343-54に総説されている。
【特許文献１】国際公開第０２／１１７３６号パンフレット
【非特許文献１】J. Biol. Chem (1996) 271 8531-8516; Biochem J. (2000) 352, 725-729
【非特許文献２】Trends Biochem Sci. (2001) 26 (8): 482-9
【非特許文献３】Cell Calcium (2002) 32 (5-6): 343-54
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
Ｃａ２＋可動化分子としてのＮＡＡＤＰの重要性にもかかわらず、ＮＡＡＤＰ結合部位に選択的に影響を及ぼす小分子は現在存在しない。したがって、治療薬としてこのような活性を利用するいかなる化合物の例も存在しない。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は一部では、ＮＡＡＤＰにより制御される特定貯蔵からの細胞内カルシウム放出を調節する化学実体の開発をベースとする。通常、これらの分子は、＜５００のＲＭＭを有する小分子であり、細胞透過性である。有利なことに、これら及び関連化合物は、新規の薬剤として、バイオアッセイのためのプローブとして使用することができる。
【００１４】
これらの分子は、容易に利用可能な小さい化学的ツールを提供することにより、この生体経路のさらなる特徴付けに伴う技術的問題を解決するために役立つ。現在まで、該分野に従事している科学者は、細胞透過性分子を利用することができず、このことが、生物学的研究を妨害してきた。
【００１５】
本発明の態様及び実施形態を、添付の請求項並びに以下の記載及び検討に示す。これらの態様は、別の章見出しで示す。しかしながら、各章見出しでの教示は、特定の章見出しに必ずしも限定されないことは理解されたい。
【００１６】
本発明の態様には、
ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸により制御される貯蔵からの細胞内カルシウム放出の調節、
哺乳動物細胞におけるカルシウムスパイクの調節、
脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療、
ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸により制御される貯蔵からの細胞内カルシウム放出を調節することによる、脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療、
哺乳動物細胞におけるカルシウムスパイクを調節することによる、脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療
の１又は複数において使用するための医薬品の製造における式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容できる塩の使用：
【００１７】
2007516964.tif 000003
（Ｉ）
［上式中、
Ｒ１は、カルボニル基を有し、
Ｒ２は、ヒドロカルビル基であり、
場合によって、複素環、さらに置換されている］。
【００１８】
任意選択の環置換基（Ｒ３とも称される）の例には、１又は複数のＨ、置換又は非置換のアリール（例えばＣ１〜Ｃ１５アリール）、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｘ（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、ＯＹ、ＮＹｎ（ｎ＝１、２又は３）、ＳＹ、ＣＯＹ（Ｙは、Ｈ、置換又は非置換のアリール（例えばＣ１〜Ｃ１５アリール）、Ｃ１〜Ｃ２０アルキルである）が含まれる。したがって、請求項に示されている式中、Ｒ３は、１又は複数の置換基を示し、置換基はそれぞれ独立して、Ｈ、置換又は非置換アリール、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＹ、ＮＹ（ｎ＝１、２又は３）、ＳＹ、ＣＯＹ、ＣＯＮＹｚ（ｚ＝２）、Ｃ（Ｏ）ＯＹ（Ｙは独立して、Ｈ、置換又は非置換のアリール及びＣ１〜Ｃ２０アルキルから選択される）を表す。Ｒ３は、１又は複数のＨ、Ｃ１〜Ｃ１５アリール、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｘ（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、ＯＹ、ＮＹｎ（ｎ＝１、２又は３）、ＳＹ、ＣＯＹ（Ｙは、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１５アリール、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル）から選択することができる。
【００１９】
任意選択の環置換基Ｒ３は、置換又は非置換アリール基を含んでもよい。置換アリール基は、１又は複数の独立して選択される置換基をアリール環系上に含む。特に、置換アリール基は、１又は複数のヒドロキシ；アルキル、特に低級（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル（例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル及び他のペンチル異性体並びにｎ−ヘキシル及び他のヘキシル異性体）；アルコキシ、特に低級（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ（例えばメトキシ、エトキシ、プロポキシなど）；アルキニル（例えばエチニル）；又はハロゲン（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード）置換基を含んでもよい。好ましくは、アリール環系は、Ｃ３〜Ｃ１５アリール環系である。好ましくは、アリール環系は、Ｃ６〜Ｃ１５アリール環系である。
【００２０】
本明細書中に定義されている化合物又はその薬学的に許容できる塩を薬学的に許容できる担体、希釈剤又は賦形剤と混合された形態で含む薬剤組成物。
【００２１】
医薬品中において使用するための、本明細書中に定義されている式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容できる塩。
【００２２】
式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容できる塩。
【００２３】
本明細書中に定義されている化合物を含む医薬品。
【００２４】
細胞内カルシウム放出を調節する薬剤を同定するためのアッセイ法であって、
（ａ）薬剤を用意するステップと；
（ｂ）ＮＡＡＤＰ受容体を用意するステップと；
（ｃ）前記薬剤とＮＡＡＤＰ受容体とを接触させるステップと；
（ｄ）細胞内カルシウム放出のレベルを測定するステップとを含み、
（ｉ）薬剤の存在下での細胞内カルシウム放出のレベルと；（ii）薬剤不在下での細胞内カルシウム放出のレベルとの差が、細胞内カルシウム放出を調節し、
ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸により制御される貯蔵からの細胞内カルシウム放出の調節、
哺乳動物細胞におけるカルシウムスパイクの調節、
脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療、
ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸により制御される貯蔵からの細胞内カルシウム放出を調節することによる、脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療、
哺乳動物細胞におけるカルシウムスパイクを調節することによる、脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療
の１又は複数において使用することができる薬剤を示すアッセイ法。
【００２５】
（ａ）本明細書中に定義されているアッセイ法を行うステップと；
（ｂ）細胞内カルシウム放出を調節しうる１又は複数の薬剤を同定するステップと；
（ｃ）１又は複数の同定された薬剤を大量に調製するステップとを含むアッセイ法。
【００２６】
（ａ）本明細書中に定義されているアッセイ法を行うステップと；
（ｂ）細胞内カルシウム放出を調節しうる１又は複数の薬剤を同定するステップと；
（ｃ）１又は複数の同定された薬剤含む薬剤組成物を調製するステップとを含む方法。
【００２７】
本明細書に定義されているアッセイ方法により同定可能な、好ましくは同定された薬剤。
【００２８】
本明細書に定義されている方法により調製された薬剤組成物。
【００２９】
治療及び／又は予防が必要な患者に、本明細書に定義されている化合物、本明細書に定義されている組成物或いは本明細書に定義されている医薬品の有効量で患者に投与することを含む、ヒト又は動物患者における疾患を治療及び／又は予防する方法。
【００３０】
本明細書に定義されている１又は複数の化合物と薬学的に許容できる希釈剤、賦形剤又は担体と混合することを含む、薬剤組成物を調製する方法。
【００３１】
少なくとも１個のコンパートメントが、本明細書に定義されている１又は複数の化合物、本明細書に定義されている組成物或いは本明細書に定義されている医薬品を含有する、１又は複数のコンパートメントを含む薬剤パック。
【００３２】
本明細書に定義されている化合物、本明細書に定義されている組成物或いは本明細書に定義されている医薬品を含む容器で、
ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸により制御される貯蔵からの細胞内カルシウム放出の調節、
哺乳動物細胞におけるカルシウムスパイクの調節、
脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療、
ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸により制御される貯蔵からの細胞内カルシウム放出を調節することによる、脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療、
哺乳動物細胞におけるカルシウムスパイクを調節することによる、脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療
の１又は複数において使用するためにラベルが付されている容器。
【００３３】
ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸により制御される貯蔵からの細胞内カルシウム放出の調節、
哺乳動物細胞におけるカルシウムスパイクの調節、
脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療、
ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸により制御される貯蔵からの細胞内カルシウム放出を調節することによる、脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療、
哺乳動物細胞におけるカルシウムスパイクを調節することによる、脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞）及びＴ細胞のうちの１又は複数における疾患の治療
の１又は複数において使用するための医薬品の製造における式（Ｉ）の化合物の使用であって、
前記化合物は、細胞透過性であり；
前記化合物は、約５００未満の相対分子量（relative molecular mass）を有し；
前記化合物は、ＮＡＡＤＰのニコチン基の模倣物質であり、前記ＮＡＡＤＰは、式（II）：
【００３４】
2007516964.tif 000004
（II）
を有する使用が含まれる。
【００３５】
他の態様では、ＮＡＡＤＰのニコチン基の模倣物質である前記化合物は、式（Ａ）：
【００３６】
2007516964.tif 000005
（Ａ）
［上式中、
Ｒ１及びＲ２は、環置換基であり；
Ｒ１及びＲ２は、式（Ｉ）の化合物と同様に定義され；
Ｒ３は、本明細書中と同様に定義される］を有する。
【００３７】
式（Ａ）の化合物に加えて、本発明は、その薬学的に許容できる塩にも関する。
【００３８】
本発明の化合物のいくつかの好ましい態様
好ましくは、前記化合物は、細胞透過性である。
【００３９】
好ましくは、前記化合物は、約５００未満の相対分子量（ＲＭＭ）を有する。
【００４０】
好ましくは、Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、−ＯＨ、−Ｏ−ヒドロカルビル又は−Ｏ−Ｎ（Ｒ５）（Ｒ６）であり、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ独立して、Ｈ又はヒドロカルビルから選択される。
【００４１】
好ましくは、Ｒ１は、カルボニル基を含むヒドロカルビル基又はＣＯＯＨである。
【００４２】
好ましくは、Ｒ２は、ヒドロカルビル、ヒドロカルビル−Ｎ、ヒドロカルビル−Ｎ（Ｒ７）（Ｒ８）又はヒドロカルビル−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ９）（Ｒ１０）であり、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０はそれぞれ独立して、Ｈ又はヒドロカルビルから選択される。
【００４３】
好ましくは、Ｒ２は、カルボニル基を含むヒドロカルビル基である。
【００４４】
好ましくは、Ｒ２は、アミド基を含むヒドロカルビル基である。
【００４５】
好ましくは、Ｒ２は、−ヒドロカルビル−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ又はヒドロカルビル）（Ｈ又はヒドロカルビルを含む基である。
【００４６】
好ましくは、Ｒ２は、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｏ）Ｎ（Ｈ又はヒドロカルビル）（Ｈ又はヒドロカルビル）を含む基である。
【００４７】
好ましくは、Ｒ２は、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２を含む基である。
【００４８】
好ましくは、前記化合物は、ＮＡＡＤＰのニコチン基の模倣物質であり、前記ＮＡＡＤＰは、式（II）を有する：
【００４９】
2007516964.tif 000006
（II）
【００５０】
好ましくは、本発明は、自己免疫疾患（甲状腺炎、膵島炎、多発性硬化症、インベクティティス（invectitis）、睾丸炎、重症筋無力症、関節リウマチ又はエリテマトーデスなど）又は移植拒絶或いはII型糖尿病、或いは心不整脈の治療；又はヒト又は動物での免疫障害を治療又は予防のうちの１又は複数において使用するための医薬品の製造における前記化合物の使用に関する。
【００５１】
好ましくは、本発明は、甲状腺炎、膵島炎、多発性硬化症、インベクティティス、睾丸炎、重症筋無力症、関節リウマチ、エリテマトーデス、移植拒絶、II型糖尿病又は心不整脈の治療のうちの１又は複数において使用するための医薬品の製造における前記化合物の使用に関する。
【００５２】
本発明の化合物のいくつかの追加の態様
式（Ｉ）の化合物の環構造は、他のヒドロカルビル基などでさらに置換されていてもよい。例えば、このような置換基は、ハロ基及び／又はヒドロカルビル基であってよい。
【００５３】
本発明のいくつかの例示的化合物
本発明の例示的化合物には、次のものが含まれる（これらは塩の形態として示すが、非塩形態も、他の塩形態と同様に含まれる）。
【００５４】
2007516964.tif 000007
2007516964.tif 000008
2007516964.tif 000009
【００５５】
利点
本発明は、いくつかの利点を有する。これらの利点は、次の記載により明らかになるであろう。
【００５６】
例えば、商業的に有用な化合物、組成物及び方法を提供するので、本発明は有利である。
【００５７】
例えば、ＮＡＡＤＰ結合部位に選択的に影響を及ぼす商業的に有用な化合物、組成物及び方法を提供するので、本発明は有利である。
【００５８】
例えば、治療薬として使用することができる商業的に有用な化合物、組成物及び方法を提供するので、本発明は有利である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５９】
置換基
本発明の化合物は、本明細書に示されている環系の置換基以外の置換基を有することができる。さらに、本明細書の環系は一般式として示されているが、そのまま解釈されるべきである。所定の環員に特に示されている置換基が存在しないことは、環員が、Ｈがその唯一の例である何らかの成分で置換されていてもよいことを示している。環系は、１又は複数の不飽和を含有してもよく、例えば、いくつかの態様では、環系の１又は複数の環は、芳香族である。環系は、炭素環であってもよいし、１又は複数のヘテロ原子を含有してもよい。
【００６０】
好ましくは、本発明の化合物は、本明細書に示されている構造を有する。
【００６１】
本発明の化合物、特に、本発明の環系化合物は、本明細書に示されているもの以外の置換基を含有してもよい。例えば、これらの他の置換基は、１又は複数のハロ基、１又は複数のＯ基、１又は複数のヒドロキシ基、１又は複数のアミノ基、１又は複数のイオウ含有基、１又は複数のオキシヒドロカルビル基などのヒドロカルビル基のうちの１又は複数であってよい。
【００６２】
通常、本化合物の環系は、様々な非干渉置換基を含有してもよい。特に、環系は、１又は複数のヒドロキシ、アルキル、特に低級（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル及び他のペンチル異性体並びにｎ−ヘキシル及び他のヘキシル異性体、アルコキシ、特に、低級（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシなど、アルキニル、例えば、エチニル或いはハロゲン、例えば、フルオロ置換基を含有してもよい。
【００６３】
化合物
「化合物」との用語は、その化合物の異性体形（立体異性体及び／又は幾何及び／又は光学異性体並びにこれらの混合物）、化学的誘導体、模倣物質、溶媒和物及び塩を包含するものを意味する。
【００６４】
ヒドロカルビル
本発明の文脈では、本明細書において使用される「ヒドロカルビル基」との用語は、少なくともＣ及びＨを含み、場合によって、１又は複数の他の適切な置換基を含んでもよい基を意味する。このような置換基の例には、ハロ、アルコキシ、ニトロ、アルキル基、環式基などが含まれうる。置換基が環式基であってよいことに加えて、置換基の組合せが環式基を形成してもよい。ヒドロカルビル基が１個を上回るＣを含む場合には、これらの炭素は、相互に必ずしも結合していなくてもよい。例えば、少なくとも２個の炭素が、適切な元素又は基を介して結合していてもよい。したがって、ヒドロカルビル基は、ヘテロ原子を含有してもよい。適切なヘテロ原子は、当技術分野の専門家には明らかであり、例えば、イオウ、窒素及び酸素を含む。ヒドロカルビル基の非限定的例は、アシル基である。
【００６５】
典型的なヒドロカルビル基は、炭化水素基である。この場合、「炭化水素」との用語は、直鎖、分枝鎖又は環式であってよいアルキル基、アルケニル基、アルキニル基又はアリール基のいずれか１つを意味する。炭化水素との用語にはさらに、場合によって置換されている基も含まれる。炭化水素が、置換基を有する分枝鎖構造である場合、その置換は、炭化水素主鎖か、分枝鎖の上であってよいか；或いは、置換は、炭化水素主鎖と分枝鎖との上であってよい。
【００６６】
本発明のいくつかの態様では、１又は複数のヒドロカルビル基は独立して、場合によって置換されているアルキル基、場合によって置換されているハロアルキル基、アリール基、アルキルアリール基、アルキルアリールアルキル基及びアルケン基から選択される。
【００６７】
本発明のいくつかの態様では、１又は複数のヒドロカルビル基は独立して、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基及びＣ１〜Ｃ３アルキル基などのＣ１〜Ｃ１０アルキル基から選択される。典型的なアルキル基には、Ｃ１アルキル、Ｃ２アルキル、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、Ｃ５アルキル、Ｃ７アルキル及びＣ８アルキルが含まれる。
【００６８】
いくつかの態様では、好ましくは、ヒドロカルビル基は、カルボニル基を含む。さらに好ましくは、カルボニル基は、式ＣＯＯＨを有する。
【００６９】
いくつかの態様では、好ましくは、ヒドロカルビル基は、アミド基を含む。さらに好ましくは、アミド基は、式ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２を有する。
【００７０】
さらに好ましくは、式（Ｉ）の化合物のＲ２基は、アミド基を含むヒドロカルビル基である。
【００７１】
さらに好ましくは、式（Ｉ）の化合物のＲ１基は、カルボニル基を含むヒドロカルビル基である。
【００７２】
最も好ましくは、式（Ｉ）の化合物のＲ２基は、式ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２のアミド基を含むヒドロカルビル基である。
【００７３】
最も好ましくは、式（Ｉ）の化合物のＲ１基は、式ＣＯＯＨのカルボニル基を含むヒドロカルビル基である。
【００７４】
本発明のいくつかの態様では、１又は複数のヒドロカルビル基は独立して、１又は複数のオキシヒドロカルビル基から選択することができる。
【００７５】
オキシヒドロカルビル
本明細書において使用される「オキシヒドロカルビル」基との用語は、少なくともＣ、Ｈ及びＯを含み、場合によって１又は複数の他の適切な置換基を含んでもよい基を意味する。このような置換基の例には、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、アルキル基、環式基などが含まれうる。置換基が環式基であってよいことに加えて、置換基の組合せが、環式基を形成してもよい。オキシヒドロカルビル基が１個を上回るＣを含む場合には、これらの炭素は相互に必ずしも結合していなくてもよい。例えば、少なくとも２個の炭素が、適切な元素又は基を介して結合していてもよい。したがって、オキシヒドロカルビル基は、ヘテロ原子を含有してもよい。適切なヘテロ原子は、当技術分野の専門家には明らかであり、例えば、イオウ及び窒素を含む。
【００７６】
本発明の一実施形態では、オキシヒドロカルビル基は、オキシ炭化水素基である。
【００７７】
この場合、「オキシ炭化水素」との用語は、直鎖、分枝鎖又は環式であってよいアルコキシ基、オキシアルケニル基、オキシアルキニル基又はオキシアリール基のいずれか１つを意味する。オキシ炭化水素との用語にはさらに、場合によって置換されている基も含まれる。オキシ炭化水素が、置換基を有する分枝鎖構造である場合、その置換は、炭化水素主鎖か、分枝鎖の上であってよいか；或いは、置換は、炭化水素主鎖と分枝鎖との上であってよい。
【００７８】
立体及び幾何異性体
本発明の化合物／薬剤のうちの数種は、立体異性体及び／又は幾何異性体として存在しうる。例えば、これらは、１又は複数の不斉及び／又は幾何中心を有することがあり、したがって、２種又はそれ以上の立体異性体及び／又は幾何形態で存在しうる。本発明は、これらの化合物の個々の立体異性体及び幾何異性体並びにこれらの混合物すべての使用を考えている。請求項中において使用されている用語は、前記形態が適切な機能活性を保持しているならば（同じ程度である必要はないが）、これらの形態を包含する。
【００７９】
溶媒和物
さらに本発明は、本発明の化合物／薬剤の溶媒和物形態の使用を含む。請求項中において使用されている用語は、これらの形態を包含する。
【００８０】
プロドラッグ
前記のように、さらに本発明は、本発明の化合物／薬剤のプロドラッグ形態の使用を含む。請求項中において使用されている用語は、これらの形態を包含する。プロドラッグの例には、一定の保護基を有し、そのままでは薬理学的活性を有しなくてもよいが、一定の条件下では、投与（経口又は非経口など）された後に、体内で代謝されて、薬理学的に活性な本発明の化合物を生じる実体が含まれる。
【００８１】
例えば、"Design of Prodrugs", H. Bundgaard, Elsevier, 1985（この開示は、参照により本明細書に援用される）に記載されているような「プロ成分（pro-moiety）」として知られている一定の成分を、本発明の化合物の適切な官能基に置くこともできることは認められるであろう。このようなプロドラッグも、本発明の範囲内に含まれる。
【００８２】
本発明によるプロドラッグの例は次のものである：
【００８３】
2007516964.tif 000010
【００８４】
このプロドラッグは、活性化のために光を必要とする。
【００８５】
模倣物質
本発明の一実施形態では、化合物／薬剤は、模倣物質であってよい。
【００８６】
本明細書において使用する場合、「模倣物質」との用語は、これらに限られないが、参照薬剤と同じ質的活性又は作用を有するペプチド、ポリペプチド、抗体又は他の有機化学物質を含む化学物質に関する。
【００８７】
好ましい実施形態では、化合物は、ＮＡＡＤＰのニコチン基の模倣物質であり、前記ＮＡＡＤＰは、式（II）を有する。
【００８８】
化学誘導体
本発明の一実施形態では、化合物／薬剤は、誘導体であってよい。
【００８９】
本明細書において使用する「誘導体」との用語には、化合物／薬剤の化学的修飾が含まれる。このような化学修飾の例は、ハロ基、アルキル基、アシル基又はアミノ基による水素の置換であろう。
【００９０】
化学修飾
本発明の一実施形態では、化合物／薬剤は、化学的に修飾された化合物／薬剤であってよい。
【００９１】
化合物／薬剤の化学的修飾により、薬剤とターゲットとの水素結合相互作用、電荷相互作用、疎水相互作用、ファンデルワールス相互作用又は双極子相互作用を増強又は低減することができる。
【００９２】
一般的なアッセイ技術
一態様では、本発明により同定された化合物／薬剤は、他の化合物を開発するためのモデル（例えば、テンプレート）として作用しうる。このような試験において使用される化合物／薬剤は、溶液中で遊離であってよいか、固体支持体に付着させることができるか、細胞表面に担持させることができるか、細胞内に位置してよい。試験される化合物と薬剤との結合複合体の活性喪失又は形成を、測定することができる。
【００９３】
本発明のアッセイはスクリーニングであってもよく、それによって多くの薬剤が試験される。一態様では、本発明のアッセイ方法は、高処理量スクリーニングである。
【００９４】
薬物スクリーニングに関する技術は、１９８４年９月１３日に刊行されたGeysenの欧州特許第８４／０３５６４号明細書に記載されている方法をベースとすることができる。まとめると、数多くの様々な小ペプチド試験化合物を、プラスチック製のピン又はいくつかの他の表面などの固体支持体上で合成する。ペプチド試験化合物を、適切な化合物又はその断片と反応させ、洗浄する。次いで、結合した実体を、当技術分野でよく知られている適切に適合された方法などにより検出する。精製された化合物を、薬物スクリーニング技術において使用するためのプレートに直接コーティングすることができる。或いは、非中和抗体を使用して、ペプチドを捕捉し、固体支持体の上にそれを固定化することができる。
【００９５】
さらに本発明は、競合薬物スクリーニングアッセイの使用も意図しており、化合物／薬剤と結合しうる中和抗体は特に、本発明による化合物との結合に関して、試験化合物と特異的に競合する。
【００９６】
スクリーニングのための他の技術は、その物質に対して適切な結合親和性を有する化合物／薬剤の高処理量スクリーニング（ＨＴＳ）を可能にし、国際公開第８４／０３５６４号パンフレットに詳述されている方法をベースとしている。
【００９７】
本発明のアッセイ方法は、試験化合物の小規模及び大規模スクリーニングの両方に、さらには定量アッセイに適していると考えられる。
【００９８】
宿主細胞
本発明に関して、「宿主細胞」との用語には、ＮＡＡＤＰ受容体などのターゲットを本発明の化合物／薬剤のために含んでもよい細胞が含まれる。
【００９９】
したがって、宿主細胞を、本発明のターゲットであるか、それを発現するポリヌクレオチドで形質転換するか、トランスフェクションすることができる。好ましくは、前記ポリヌクレオチドは、ターゲットであるか、ターゲットを発現しうるポリヌクレオチドを複製及び発現するためのベクターに担持される。前記ベクターと相容性であるように、細胞を選択するが、これは例えば、前核細胞（例えば、細菌）、真菌、酵母又は植物細胞であってよい。
【０１００】
グラム陰性菌大腸菌は、異種遺伝子発現のための宿主として広く使用されている。しかしながら、大量の異種タンパク質は、細胞内部に蓄積する傾向がある。大腸菌細胞内タンパク質のバルクから所望のタンパク質を後で精製することは場合によっては、困難である。
【０１０１】
大腸菌とは異なり、バチルス族からの細菌は、培地へとタンパク質を分泌することができるので、異種宿主として非常に適している。宿主として適している他の細菌は、ストレプトマイセス及びシュードモナス属からのものである。
【０１０２】
本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの性質及び／又は発現されるタンパク質のさらなる処理に関する要望に応じて、酵母又は他のカビなどの真核宿主が好ましいこともある。通常、酵母細胞のほうが、カビ細胞よりも好ましい。それというのも、これらは、操作が容易であるためである。しかしながら、数種のタンパク質は、酵母細胞からはわずかしか分泌されないか、場合によっては、適正に処理されない（例えば、酵母中での高グリコシル化）。これらの例では、異なるカビ宿主生物を選択すべきである。
【０１０３】
本発明の範囲内の適切な発現宿主の例は、アスペルギルス種（欧州特許出願公開第０１８４４３８号明細書及び欧州特許出願公開第０２８４６０３号明細書に記載されているものなど）及びトリコデルマ種などのカビ；バチルス種（欧州特許出願公開第０１３４０４８号明細書及び欧州特許出願公開第０２５３４５５号明細書に記載されているものなど）、ストレプトミセス種及びシュードモナス種などの細菌；並びにクルイベロミセス種（欧州特許出願公開第００９６４３０号明細書及び欧州特許出願公開第０３０１６７０号明細書）及びサッカロミセス種などの酵母である。例えば、典型的な発現宿主は、アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）、アスペルギルス・ニガー  バー・ツベニシス（Aspergillus niger var. tubigenis）、アスペルギルス・ニガー  バー・アワモリ（Aspergillus niger var. awamori）、アスペルギルス・アクレアチス（Aspergillus aculeatis）、アスペルギルス・ニズランス（Aspergillus nidulans）、アスペルギルス・オルザエ（Aspergillus orvzae）、トリコデルマ・リーセイ（Trichoderma reesei）、枯草菌（Bacillus subtilis）、バチルス・リケニフォルミス（Bacillus licheniformis）、バチルス・アミロリクエファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）、クロヴェロミセス・ラクチス（Kluyveromyces lactis）及びサッカロマイセス・セレビシエから選択することができる。
【０１０４】
本発明の組換え発現産物に最適な生物学的活性を与えることが必要な場合には、酵母、カビ及び植物宿主細胞などの適切な宿主細胞を使用することにより、翻訳後修飾（例えば、ミリストイル化、グリコシル化、短縮、ラピデーション（lapidation）及びチロシン、セリン又はトレオニンリン酸化）することができる。
【０１０５】
生物
本発明に関して、「生物」との用語には、本発明によるターゲット及び／又はそれから得られる産物を有しうる生物が含まれる。生物の例には、カビ、酵母又は植物が含まれうる。
【０１０６】
本発明に関して、「トランスジェニック生物」との用語には、発明によるターゲット及び／又はそれから得られる産物を含む生物が含まれる。
【０１０７】
宿主細胞／宿主生物の形質転換
前記したように、宿主生物は、前核生物でも真核生物でもよい。適切な前核宿主の例には、大腸菌及び枯草菌が含まれる。前核宿主の形質転換に関する教示は、当技術分野でよく記録されており、例えば、Sambrook et al (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd edition, 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press)及びAusubel et al., Current Protocols in Molecular Biology (1995), John Wiley & Sons. Inc.参照。
【０１０８】
前核細胞宿主を使用する場合には、ヌクレオチド配列を適切に修飾した後に、イントロンの除去などによる形質転換が必要であることもある。
【０１０９】
他の実施形態では、トランスジェニック生物は、酵母であってもよい。これに関連して、酵母はさらに、異種遺伝子発現のためのビヒクルとしても幅広く使用されている。サッカロマイセス・セレビシエ種は、異種遺伝子発現に関するその使用を含む工業使用において長い歴史を有する。サッカロマイセス・セレビシエでの異種遺伝子の発現は、Goodey et al (1987, Yeast Biotechnology, D R Berry et al, eds, pp401-429, Allen and Unwin, London）及びKing et al (1989, Molecular and Cell Biology of Yeasts, E F Walton and G T Yarronton, eds, pp107-133, Blackie, Glasgow）により総説されている。
【０１１０】
いくつかの理由により、サッカロマイセス・セレビシエは、異種遺伝子発現に介して十分に適している。第１に、これは、ヒトに対して非病原体であり、特定の内毒素を産生することはない。第２に、これは、市場利用の数百年にわたって様々な目的のために安全に使用された長い歴史を有する。このことは、幅広い一般容認性をもたらしている。第３に、この生物に関する広い市場用途及び研究により、遺伝学及び生理学に関して、さらに、サッカロマイセス・セレビシエの大規模発酵特性に関して豊富な知識が得られている。
【０１１１】
サッカロマイセス・セレビシエにおける異種遺伝子発現の原理及び遺伝子産物の分泌の総説は、E Hinchcliffe E Kenny (1993, "Yeast as a vehicle for the expression of heterologous genes", Yeasts, Vol 5, Anthony H Rose and J Stuart Harrison, eds, 2nd edition, Academic Press Ltd）により得られる。
【０１１２】
その維持のために宿主ゲノムとの組換えを必要とする組み込みベクター及び自律複製プラスミドベクターを含む、酵母ベクターのうちのいくつかのタイプを利用することができる。
【０１１３】
トランスジェニックサッカロミセスを調製するためには、ヌクレオチド配列を、酵母中での発現のために設計されたコントラクトに挿入することにより、発現コントラクトを調製する。異種発現のために使用されるコントラクトのうちのいくつかのタイプが開発されている。それらのコントラクトは、ヌクレオチド配列に融合された酵母中で活性なプロモーターが含まれ、通常は、ＧＡＬ１プロモーターなどの酵母由来のプロモーターが使用される。通常、ＳＵＣ２シグナルペプチドをコードする配列などの酵母由来のシグナル配列が使用される。酵母中で活性なターミネーターが発現系を終了させる。
【０１１４】
酵母を形質転換するために、いくつかの形質転換プロトコルが開発されている。例えば、Hinnen et al (1978, Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA 75, 1929); Beggs, JD (1978, Nature, London, 275, 104)及びIto, H et al (1983, J Bacteriology 153, 163-168)の教示に従うと、本発明によるトランスジェニックサッカロミセスを調製することができる。
【０１１５】
様々な選択マーカーを使用して、形質転換された酵母細胞を選択する。形質転換のために使用されるマーカーには、いくつかのＬＥＵ２、ＨＩＳ４及びＴＲＰ１などの栄養素要求性マーカー並びにアミノグリコシド抗生物質マーカー、例えばＧ４１８などの優性抗生物質抵抗性マーカーがある。
【０１１６】
他の宿主生物は、植物である。遺伝子修飾された植物の構築における基本的な原理は、遺伝情報を植物ゲノムに挿入して、挿入された遺伝物質の安定な維持を得ることである。遺伝情報を挿入することに関して、いくつかの技術が存在し、その際、２つの主要な原理は、遺伝情報の直接的な導入及びベクター系を使用することによる遺伝情報の導入である。一般的な技術の総説は、Potrykus (Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol [1991] 42: 205-225）及びChristou (Agro-Food-Industry Hi-Tech March/April 1994 17-27）による論文に見ることができる。植物形質転換に関するさらなる教示を、欧州特許出願公開第０４４９３７５号明細書に見ることができる。
【０１１７】
したがって、さらに本発明は、ターゲットであるか、ターゲットを発現しうるヌクレオチド配列で宿主細胞を形質転換する方法を提供する。ヌクレオチド配列で形質転換された宿主細胞を、コードされるタンパク質の発現に適した条件下で培養することができる。組換え細胞により生じたタンパク質は、細胞表面で示されうる。望ましい場合には、当技術分野の専門家には理解されるであろうが、コード配列を含む発現ベクターを、特定の前核細胞又は真核細胞膜を介してコード配列の分泌を指示するシグナル配列と共に設計することができる。他の組換え構成は、コード配列を、可溶性タンパク質の精製を容易にするポリペプチドドメインをコードするヌクレオチド配列につなぐことができる（Kroll DJ et al (1993) DNA Cell Biol 12: 441-53）。
【０１１８】
発現ベクター
ターゲットとして使用するか、ターゲットを発現するためのヌクレオチド配列を、複製可能な組換えベクターに導入することができる。
【０１１９】
ベクターを使用して、相容性の宿主細胞中で、及び／又はそこから、ヌクレオチド配列を複製及び発現させることができる。プロモーター／エンハンサー及び他の発現調節シグナルを含む対照配列を使用して、発現を制御することができる。前核プロモーター及び真核細胞で機能するプロモーターを使用することもできる。組織特異的又は刺激特異的プロモーターを使用することもできる。前記２個又はそれ以上の異なるプロモーターからの配列要素を含むキメラプロモーターを使用することもできる。
【０１２０】
使用される配列及び／又はベクターに応じて、ヌクレオチド配列の発現により宿主組換え細胞により産生されるタンパク質は、分泌されるか、細胞内に保持されうる。コード配列を、特定の前核細胞又は真核細胞膜を介しての配列コード物質の分泌を指示するシグナル配列と共に設計することもできる。
【０１２１】
融合タンパク質
例えば、抽出及び精製を容易にするために、ターゲットアミノ酸配列は、融合タンパク質として生じさせることができる。融合タンパク質パートナーの例には、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、６ｘＨｉｓ、ＧＡＬ４（ＤＮＡ結合及び／又は転写活性ドメイン）及び（−ガラクトシダーゼが含まれる。融合タンパク質配列の除去を可能にするために、融合タンパク質パートナーと、該当するタンパク質配列の間に、前核細胞分離部位が含まれていると、便利である。好ましくは、融合タンパク質は、ターゲットの活性を妨害しない。
【０１２２】
融合タンパク質は、本発明の物質に融合する抗原又は抗原決定基を含んでもよい。この実施形態では、融合タンパク質は、免疫系の全身刺激をもたらすという意味においてアジュバントとして作用しうる物質を含む、天然には生じない融合タンパク質であってもよい。抗原又は抗原決定基は、物質のアミノ又はカルボキシ末端に結合しうる。
【０１２３】
本発明の他の実施形態では、アミノ酸配列を、融合タンパク質をコードする異種配列に結合させることもできる。例えば、物質活性に影響を及ぼしうる薬剤に関してペプチドライブラリをスクリーニングするために、市販の抗体により認識される異種エピトープを発現するキメラ物質をコードすることは、有用である。
【０１２４】
リポーター
幅広いリポーターを、簡便に検出可能なシグナル（例えば分光学）をもたらす好ましいリポーターと共に、本発明のアッセイ方法（さらにスクリーニング）において使用することができる。例えば、Pharmacia Biotech (Piscataway、ＮＪ）、Promega (Madison、ＷＩ）及びUS Biochemical Corp (Cleveland、ＯＨ)などのいくつかの会社が、アッセイ手順のための市販キット及びプロトコルを供給している。適切なリポーター分子又は標識には、放射性核種、酵素、蛍光剤、化学発酵剤又は発色剤、さらに、基質、補因子、阻害剤、磁気粒子などが含まれる。このような標識の使用を教示している特許には、米国特許Ａ第３８１７８３７号明細書；米国特許Ａ第３８５０７５２号明細書；米国特許Ａ第３９３９３５０号明細書；米国特許Ａ第３９９６３４５号明細書；米国特許Ａ第４２７７４３７号明細書；米国特許Ａ第４２７５１４９号明細書；及び米国特許Ａ第４３６６２４１号明細書が含まれる。
【０１２５】
アッセイ方法
さらなる態様では、本発明は、細胞内カルシウム放出を調節する薬剤を同定するためのアッセイ法に関し、この方法は、（ａ）薬剤を用意するステップと；（ｂ）ＮＡＡＤＰ受容体を用意するステップと；（ｃ）前記薬剤とＮＡＡＤＰ受容体とを接触させるステップと；（ｄ）細胞内カルシウム放出のレベルを測定するステップとを含み、（ｉ）薬剤の存在下での細胞内カルシウム放出のレベルと；（ii）薬剤不在下での細胞内カルシウム放出のレベルとの差が、細胞内カルシウム放出を調節し、ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸により制御される貯蔵からの細胞内カルシウム放出の調節；哺乳動物細胞におけるカルシウムスパイクの調節；脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療；ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸により制御される貯蔵からの細胞内カルシウム放出を調節することによる、脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療；哺乳動物細胞におけるカルシウムスパイクを調節することによる、脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療の１又は複数において使用することができる薬剤を示す。
【０１２６】
薬剤
前記のように、本発明のアッセイ法を使用して、細胞内カルシウム放出を調節する１又は複数の薬剤を同定することができる。
【０１２７】
前記のように、「薬剤」との用語は、単一の実体又は実体の組合せに関してよい。
【０１２８】
薬剤は、有機化合物又は他の化学物質であってよい。薬剤は、天然でも人工でもよいが、適切な源から得られるか、産生される化合物であってよい。
【０１２９】
薬剤は、アミノ酸分子、ポリペプチド又はその化学誘導体或いはこれらの組合せであってよい。
【０１３０】
薬剤は、センス又はアンチセンス分子であってもよいポリヌクレオチド分子であってもよい。
【０１３１】
薬剤は、抗体でも、その一部であってもよい。
【０１３２】
薬剤は、ペプチド、さらに有機小分子などの他の化合物を含んでもよい化合物ライブラリから設計されるか、得られる。
【０１３３】
例えば、薬剤は、天然物質、例えば細菌、カビ又は動物（特に哺乳動物）細胞又は組織など生物学的材料から製造された生体高分子又は抽出物、有機又は無機分子、合成薬、半合成薬、構造的又は機能的模倣物質、ペプチド、ペプチド模倣物質、誘導化剤、全タンパク質から分離されたペプチド、合成により合成されたペプチド（例えばペプチドシンセサイザを使用して、又は組換え技術などにより）又はこれらの組合せ、組換え剤、抗体、天然又は非天然薬剤、融合タンパク質又はその同等物並びにその突然変異、誘導体又は組合せであってよい。
【０１３４】
薬剤は、有機化合物であってよい。通常、有機化合物は、２つ又はそれ以上のヒドロカルビル基を含んでもよい。この場合、「ヒドロカルビル基」との用語は、少なくともＣ及びＨを含み、場合によって、１又は複数の他の適切な置換基を含んでもよい基を意味する。このような置換基の例には、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、アルキル基、環式基などが含まれる。置換基が環式基であってよいことに加えて、置換基の組合せが、環式基を形成してもよい。ヒドロカルビル基が１個を超えるＣを含む場合、これらの炭素は、必ずしも相互に結合していなくてもよい。例えば、少なくとも２個の炭素が、適切な元素又は基を介して結合していてもよい。したがって、ヒドロカルビル基は、ヘテロ原子を含んでもよい。適切なヘテロ原子は、当技術分野の専門家には明らかであろうが、例えば、イオウ、窒素及び酸素である。薬剤は、少なくとも１個の環式基を含んでもよい。環式基は、非縮合多環式基などの多環式基であってもよい。薬剤は、他のヒドロカルビル基に結合している少なくとも１個の前記環式基を含んでもよい。
【０１３５】
薬剤は、ハロ基を含んでもよい。
【０１３６】
薬剤は、１又は複数のアルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキレン及びアルケニレン基を含んでもよく、これらは、非分枝鎖でも分枝鎖でもよい。
【０１３７】
薬剤は、酸付加塩又は塩基塩などの薬学的に許容できる塩或いはその水和物を含む溶媒和物の形態であってもよい。適切な塩に関する総説に関しては、Berge et al, J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19参照。
【０１３８】
薬剤は、他の治療特性を示すこともある。
【０１３９】
薬剤を、１又は複数の他の薬学的に活性な薬剤と組み合わせて使用することもできる。
【０１４０】
特に好ましい態様では、薬剤は、細胞透過性であり、約５００未満の相対分子量を有し；ＮＡＡＤＰのニコチン基の模倣物質であり、前記ＮＡＡＤＰは、下式を有する：
【０１４１】
2007516964.tif 000011
（II）
【０１４２】
活性成分の組合せを投与する場合には、これらを、同時に、別々に、連続して投与することができる。
【０１４３】
薬学的塩
本発明の化合物及び／又は薬剤は、薬学的に許容できる塩として投与することができる。通常、薬学的に許容できる塩は、適切に所望の酸又は塩基を使用して容易に調製することができる。この塩は、溶液から沈殿させることができ、濾過により集めるか、溶媒の蒸発により回収することができる。
【０１４４】
薬学的に許容できる塩は、当技術分野の専門家にはよく知られており、例えば、Berge et al, J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19（1977）に挙げられているものが含まれる。適切な酸付加塩は、非毒性塩を形成する酸から生じ、それには、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、リン酸水素塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、グルコン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩及びｐ−トルエンスルホン酸塩が含まれる。
【０１４５】
１又は複数の酸性部分が存在する場合には、適切な薬学的に許容できる塩基付加塩を、非毒性塩を形成する塩基から生じさせることができ、これらには、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、亜鉛及びジエタノールアミンなどの薬学的に活性なアミンの塩が含まれる。
【０１４６】
本発明の化合物及び／又は薬剤は、多形で存在しうる。
【０１４７】
加えて、本発明の化合物及び／又は薬剤は、１又は複数の不斉炭素原子を含有することがあり、したがって、２種又はそれ以上の立体異性形で存在する。化合物及び／又は薬剤がアルケニル又はアルケニレン基を含む場合には、シス（Ｅ）及びトランス（Ｚ）異性が生じることもある。本発明は、化合物及び／又は薬剤の個々の立体異性体並びに適切な場合には、その個々の互変異性形をそれらの混合物と共に含む。
【０１４８】
ジアステレオ異性体或いはシス及びトランス異性体の分離は、慣用の技術により、例えば、薬物又はその適切な塩又は誘導体の立体異性体混合物の分別結晶化、クロマトグラフィー又はＨＰＬＣにより達成することができる。化合物及び／又は薬剤の個々の鏡像異性体を、対応する光学的に純粋な中間体からか、適切なキラル支持体を使用して対応するラセミ化合物をＨＰＬＣ処理することによるか、対応するラセミ化合物と適切な光学活性な酸又は塩基とを適切に反応させることにより生じるジアステレオ異性体塩を分別結晶化することなどによる分離により調製することもできる。
【０１４９】
本発明はさらに、化合物及び／又は薬剤或いはその薬学的に許容できる塩の適切な同位体バリエーションのすべてを含む。本発明の化合物及び／又は薬剤或いはその薬学的に許容できる塩の同位体バリエーションは、その中の少なくとも１個の原子が、同じ原子番号を有するが、自然界に通常は見いだされる原子質量とは別の原子質量を有する原子で置換されているものと定義される。本発明の化合物及び／又は薬剤或いはその薬学的に許容できる塩に導入することができる同位体の例には、それぞれ２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１７Ｏ、１８Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ及び３６Ｃｌなどの水素、炭素、窒素、酸素、リン、イオウ、フッ素及び塩素の同位体が含まれる。化合物及び／又は薬剤或いはその薬学的に許容できる塩の一定の同位体バリエーション、例えば、３Ｈ又は１４Ｃなどの放射性同位体がその中に導入されているものは、薬物及び基質組織分布研究で役立つ。調製及び検出可能性の簡単さにおいて、トリチウム化、即ち３Ｈ及び炭素−１４、即ち１４Ｃ同位体が特に好ましい。さらに、ジュウテリウム、即ち２Ｈなどの同位体での置換は、より高い代謝安定性から生じる一定の治療的利点をもたらし、例えば、in vivo半減期を高めるか、用量必要量を減らすので、場合によっては、好ましいことがある。本発明の化合物及び／又は薬剤並びにそれらの薬学的に許容できる塩の同位体バリエーションは通常、適切な試薬の適切な同位体バリエーションを使用する慣用の手順により調製することができる。
【０１５０】
本発明は、本発明の化合物及び／又は薬剤の良性イオン形の使用も含む（適切な場合に）。
【０１５１】
請求項中において使用される用語は、前記形態を１又は複数包含する。
【０１５２】
処方物
当技術分野で知られている技術を使用して１又は複数の適切な担体、希釈剤又は賦形剤と混合することなどにより、本発明の成分を薬剤組成物に処方することができる。
【０１５３】
薬剤組成物
本発明は、治療的有効量の１又は複数の本発明の化合物及び／又は薬剤並びに薬学的に許容できる担体、希釈剤又は賦形剤（これらの組合せを含む）を含む薬剤組成物を提供する。
【０１５４】
薬剤組成物は、ヒト医学及び獣医学におけるヒト又は動物で利用するためであってよく、通常、１又は複数の薬学的に許容できる希釈剤、担体又は賦形剤のいずれかを含有する。治療用途のために許容できる担体又は希釈剤は、薬学分野でよく知られており、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A. R. Gennaro edit. 1985）に記載されている。薬学的担体、賦形剤又は希釈剤の選択は、所定の投与経路及び標準的な薬学的実施に関して選択することができる。薬剤組成物は、担体、賦形剤又は希釈剤として、又はそれらに加えて、適切な結合剤、滑剤、懸濁剤、コーティング剤、可溶化剤を含有してもよい。
【０１５５】
適切な担体の例には、ラクトース、デンプン、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、ソルビトールなどが含まれる。適切な希釈剤の例には、エタノール、グリセロール及び水が含まれる。
【０１５６】
適切な結合剤の例には、デンプン、ゼラチン、グルコースなどの天然の糖、無水ラクトース、フリーフローラクトース、ベータラクトース、トウモロコシ甘味料、アラビアゴム、トラガカント又はアルギン酸ナトリウムなどの天然及び合成ゴム、カルボキシメチルセルロース及びポリエチレングリコールが含まれる。
【０１５７】
適切な滑剤の例には、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが含まれる。
【０１５８】
防腐剤、安定剤、染料、さらに香料を薬剤組成物に加えることもできる。防腐剤の例には、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸及びｐ−ヒドロキシ安息香酸のエステルが含まれる。抗酸化剤及び懸濁剤を使用することもできる。
【０１５９】
様々な輸送系に応じて、様々な組成物／処方物要求が存在しうる。例えば、本発明の薬剤組成物は、ミニポンプを使用して、又は粘膜経路により、例えば、鼻スプレー又は吸入のためのエアロゾル又は摂取可能な溶液として、又は輸送のために、組成物を注射可能な形態により処方する非経口で、例えば、静脈内、筋肉内、皮下経路により投与されるように処方することができる。或いは、処方物を、いくつかの経路により投与するように設計することもできる。
【０１６０】
組成物を胃腸粘膜を介して粘膜投与すべき場合には、胃腸管を通過する間に安定なままでなければならない；例えば、タンパク分解に対して耐性を有し、酸性ｐＨで安定であり、胆汁の界面活性作用に対して耐性を有さなければならない。
【０１６１】
適切な場合には、薬剤組成物を吸入により、座薬又はペッサリーの形態で、局所的にローション、溶液、クリーム、軟膏又は散布剤の形態で、皮膚パッチの使用により、経口でデンプン又はラクトースなどの賦形剤を含有する錠剤の形態で、又は単独か、賦形剤と混合されているカプセル又は膣座剤で、又は、香料又は着色剤を含有するエリキシル、溶液又は懸濁液の形態で投与することができるか、これらは、非経口で、例えば、静脈内又は筋肉内又は皮下注射することができる。非経口投与では、組成物を、他の物質、例えば、血液と等張性の溶液をもたらすために十分な塩又は単糖を含有してもよい無菌の水溶液の形態において使用することが最良である。頬又は舌下投与では、組成物を、慣用の方法で処方することができる錠剤又はロゼンジの形態で投与することができる。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、１又は複数の化合物及び／又は薬剤を、シクロデキストリンと組み合わせて使用することもできる。シクロデキストリンは、薬物分子と包接複合体及び非包接複合体を形成することが知られている。薬物−シクロデキストリン複合体の形成により、薬物分子の可溶性、溶解速度、生物学的利用率及び／又は安定特性が調節されうる。薬物−シクロデキストリン複合体は通常、多くの剤形及び投与経路において使用することができる。薬物との直接的な複合化の代わりに、シクロデキストリンを、補助添加物として、例えば、担体、希釈剤又は可溶化剤として使用することもできる。α−、β−及びγ−シクロデキストリンが、最も一般に使用されており、適切な例は、国際公開Ａ第９１／１１１７２号パンフレット、国際公開Ａ第９４／０２５１８号パンフレット及び国際公開Ａ第９８／５５１４８号パンフレットに記載されている。
【０１６３】
薬剤組成物は、１又は複数の付加的な薬学的に活性な化合物及び／又は薬剤を含有してもよい。
【０１６４】
化学的合成方法
本発明の化合物及び／又は薬剤を、化学的合成技術により調製することができる。
【０１６５】
本発明の化合物及び／又は薬剤を合成する間、不安定な官能基を保護及び脱保護する必要があることは、当技術分野の専門家には明らかであろう。このことは、例えば、"Protective Groups in Organic Synthesis", T W Greene and P G M Wuts, John Wiley and Sons Inc. (1991)及びP. J. Kocienskiによる"Protecting Groups", Georg Thieme Velag (1994)に記載されている慣用の技術により達成することができる。
【０１６６】
いくつかの反応の間、一定の条件下では、例えば、塩基反応性基を含む光学中心を有する基質との反応で、塩基を使用すると、存在する立体中心をエピマー化されうる。当技術分野でよく知られている反応順序、条件、試薬、保護／脱保護レジームなどを選択することにより、このような起こりうる問題を回避することができるはずである。
【０１６７】
本発明の化合物／薬剤及び塩を、慣用の方法により分離及び精製することができる。
【０１６８】
治療
「治療」との用語と同様に、「療法」との用語には、治癒効果、緩和効果及び予防効果が含まれる。
【０１６９】
好ましくは、治療との用語には、少なくとも治癒的治療及び／又は待機的治療が含まれる。
【０１７０】
治療は、ヒト又は動物に施すことができる。
【０１７１】
一態様では、本発明は、疾患を治療するための医薬品の製造における式（Ｉ）の化合物（式中、Ｒ１は、カルボニル基を有し；Ｒ２はヒドロカルビル基であり；場合によって、前記環は、さらに置換されている）又はその薬学的に許容できる塩の使用に関する。
【０１７２】
組合せ薬剤
本発明の化合物／薬剤を、１又は複数の他の薬学的に活性な薬物などの１又は複数の他の活性な薬剤と組み合わせて使用することもできる。
【０１７３】
投与
本発明の成分を単独で投与することもできるが、通常は、例えば、成分が、所定の投与経路及び標準的な薬学的実施に関して選択された適切な薬学的賦形剤、希釈剤又は担体と混合されている場合には、薬剤組成物として投与することができる。
【０１７４】
例えば、即時、遅延、調節、持続、パルス性又は制御放出適用のための、香料又は着色剤を含有してもよい錠剤、カプセル、膣座剤、エリキシル、溶液又は懸濁液の形態で、組成物を投与することができる（例えば経口又は局所で）。
【０１７５】
薬剤組成物が錠剤である場合、錠剤は、微結晶性セルロース、ラクトース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、第二リン酸カルシウム及びグリシンなどの賦形剤、デンプン（好ましくは、トウモロコシ、馬鈴薯又はタピオカデンプン）、グリコール酸ナトリウムデンプン、クロスカルメロースナトリウムなどの崩壊剤及び一定の複合体ケイ酸塩及びポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、スクロース、ゼラチン及びアラビアゴムなどの顆粒結合剤を含有してもよい。付加的に、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ベヘン酸グリセリル及びタルクなどの滑剤が含まれていてもよい。
【０１７６】
同様のタイプの固体組成物を、ゼラチンカプセル中の充填剤として使用することもできる。これに関して好ましい賦形剤には、ラクトース、デンプン、セルロース、乳糖、又は高分子量ポリエチレングリコールが含まれる。水性懸濁液及び／又はエリキシルでは、化合物／薬剤を様々な甘味料又は着香剤、着色料又は染料と、乳化剤及び／又は懸濁剤と、水、エタノール、プロピレングリコール及びグリセリンなどの希釈剤、並びにこれらの組合せと組み合わせることができる。
【０１７７】
投与（輸送）経路には、これらに限られないが、経口（例えば、錠剤、カプセル又は摂取可能な溶液として）、局所、粘膜（例えば、鼻スプレー又は吸入用のエアロゾルとして）、鼻、非経口（例えば、注射形態により）、胃腸管、脊髄内、腹腔内、筋肉内、静脈内、子宮内、眼内、真皮内、頭蓋内、気管内、膣内、脳室内、大脳内、皮下、眼（硝子体内又は房内を含む）、経皮、直腸、頬、膣、硬膜外、舌下のうちの１又は複数が含まれる。
【０１７８】
組成物が１種を上回る化合物／薬剤を含有する場合、薬剤のすべての成分を、同じ経路で投与する必要はないことは理解されるであろう。同様に組成物が１種を上回る活性成分を含有する場合、これらを、異なる経路で投与することができる。
【０１７９】
本発明の成分を非経口で投与する場合、このような投与の例には、成分の静脈内、動脈内、腹腔内、くも膜下、心室内、尿道内、胸骨内、頭蓋内、筋肉内又は皮下投与及び／又は注入技術の１又は複数の使用が含まれる。
【０１８０】
非経口投与では、他の物質、例えば、溶液を血液と等張性にするために十分な塩又はグルコースを含有してもよい無菌水溶液の形態で、成分を使用するとよい。水溶液は、必要な場合には、適切に緩衝されるべきである（好ましくは、３から９のｐＨに）。当技術分野の専門家によく知られている標準的な薬学的技術により、無菌条件下での適切な非経口処方物の調製を容易に行うことができる。
【０１８１】
前記のように、本発明の成分を鼻腔内又は吸入により投与することができ、簡便には、適切な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＨＦＡ１３４Ａ（商標））又は１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン（ＨＦＡ２２７ＥＡ（商標））などのヒドロフルオロアルカン、二酸化炭素又は他の最適なガスを使用する加圧容器、ポンプ、スプレー又はネブライザーから、乾燥粉末吸入器又はエアロゾルスプレー形態で輸送する。加圧エアロゾルの場合には、計測された量を輸送するバルブを用意することにより、用量単位を決定することができる。加圧容器、ポンプ、スプレー又はネブライザーは、活性化合物の溶液又は懸濁液を含有してよく、例えば、付加的に滑剤、例えばトリオレイン酸ソルビタンを含有してもよい溶媒としてのエタノールと噴射剤との混合物を使用する。吸入器又は注入器において使用するためのカプセル及びカートリッジ（例えばゼラチン製）を、薬剤とラクトース又はデンプンなどの適切な粉末基剤との粉末混合物を含有するように処方することができる。
【０１８２】
或いは、本発明の成分を、座薬又はペッサリーの形態で投与することもできるし、ゲル、ヒドロゲル、ローション、溶液、クリーム、軟膏又は散布剤の形態で局所施与することもできる。本発明の成分を、例えば、皮膚パッチを使用することにより、真皮又は経皮投与することもできる。これらを、肺又は直腸経路により投与することもできる。さらにこれらを、眼経路により投与することもできる。眼用途では、化合物／薬剤を、等張性でｐＨ調節されている無菌生理食塩水中の超微粉砕懸濁液として、又は好ましくは、場合によっては塩化ベンジルアルコニウムなどの防腐剤と組み合わされた等張性でｐＨ調節されている無菌生理食塩水中の溶液として処方することができる。或いは、これらを、ワセリンなどの軟膏中に処方することもできる。
【０１８３】
皮膚への局所投与では、本発明の成分を、例えば、１又は複数の次のもの：鉱油、流動パラフィン、白色パラフィン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン化合物、乳化ろう及び水との混合物中に懸濁又は溶解されている１又は複数の活性化合物／薬剤を含有する適切な軟膏として処方することができる。或いは、これは、例えば１又は複数の次のもの：鉱油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリエチレングリコール、流動パラフィン、ポリソルベート６０、セチルエステルろう、ケテアリールアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール及び水の混合物に懸濁又は溶解されている適切なローション又はクリームとして処方することができる。
【０１８４】
本発明の好ましい実施形態では、薬剤組成物を経口投与する。
【０１８５】
用量レベル
通常、医師が、個々の対象に最も適しているであろう実際の用量を決定する。特定の患者に特異的な用量レベル及び投与頻度は変動し、使用される１又は複数の特異的化合物／薬剤の活性、その化合物／薬剤の代謝安定性及び作用期間、年齢、体重、全身健康、性別、食事、投与方法及び時間、排泄速度、薬物の組合せ、特定の状態の重度並びに個々に受ける治療を含む様々な因子に左右される。
【０１８６】
熟練した医師であれば、例えば、患者の年齢、体重及び状態に応じて、特定の患者に最適な投与経路及び用量を容易に決定することができるので、記載の投与経路及び用量は、単なるガイドとする。
【０１８７】
他の療法
本発明の化合物／薬剤すら組成物は、他の重要な医学的意味を有することもあることは理解されるであろう。
【０１８８】
例えば、本発明の化合物、組成物又は薬剤は、国際公開Ａ第９９／５２８９０号パンフレットに挙げられている障害を治療する際に役立ちうる。
【０１８９】
加えて、又は或いは、本発明の化合物、組成物又は薬剤は、国際公開第Ａ９８／０５６３５号パンフレットに挙げられている障害を治療する際に役立ちうる。参照を容易にするために、そのリストの一部をここに示す。II型糖尿病を含む糖尿病、肥満、がん、炎症又は炎症性疾患、皮膚障害、熱、心臓血管作用、出血、凝固及び急性相応答、悪液質、食欲不振、急性感染、ＨＩＶ感染、ショック状態、移植片対宿主反応、自己免疫疾患、再灌流障害、髄膜炎、偏頭痛及びアスピリン依存性抗血栓症；腫瘍成長、浸潤及び展開、血管形成、転位、悪性腫瘍、腹水及び悪性胸水；脳虚血、虚血性心疾患、変形性関節症、関節リウマチ、骨粗鬆症、喘息、多発性硬化症、神経変性、アルツハイマー病、アテローム硬化症、脳卒中、脈管炎、クローン病及び潰瘍性大腸炎；歯周炎、歯肉炎；乾癬、アトピー性皮膚炎、慢性潰瘍、表皮水疱症；角膜潰瘍、網膜疾患及び外科手術創傷治癒；鼻炎、アレルギー性結膜炎、湿疹、アナフィラキシー；再狭窄、うっ血性心不全、子宮内膜症、アテローム硬化症又は内硬化症（endosclerosis）。
【０１９０】
加えて、又は或いは、本発明の化合物、組成物又は薬剤は、国際公開Ａ第９８／０７８５９号パンフレットに挙げられている障害を治療する際に役立ちうる。参照を容易にするために、そのリストの一部をここに示す：サイトカイン及び細胞増殖／分化活性；免疫抑制又は免疫刺激活性（例えば、ヒト免疫不全ウイルス感染を含む免疫不全の治療；リンパ球成長の調節；がん及び多くの免疫疾患の治療及び移植拒絶を予防又は腫瘍免疫を誘発するために）；血液新生の調節、例えば、骨髄又はリンパ球疾患の治療；骨、軟骨、腱、靱帯及び神経組織の成長の促進、例えば、創傷治癒、火傷、潰瘍及び歯周疾患及び神経変性の治療で；卵胞刺激ホルモンの阻害又は活性化（受精能の調節）；走化性／ケモキネティック活性（例えば、損傷又は感染部位への特定細胞種の固定）；止血及び血栓活性（例えば、血友病及び脳卒中を治療するために）；抗炎症活性（例えば、敗血症ショック又はクローン病を治療するために）；抗菌剤として；例えば代謝又は行動の調節剤；鎮痛薬として；特定の欠乏障害の治療；例えば乾癬の治療で、ヒト医学又は獣医学医薬品において。
【０１９１】
加えて、又は或いは、本発明の組成物は、国際公開Ａ第９８／０９９８５号パンフレットに挙げられている障害を治療する際に役立ちうる。参照を容易にするために、そのリストの一部をここに示す：マクロファージ阻害及び／又はＴ細胞阻害活性、したがって抗炎症活性；抗免疫活性、即ち、炎症を伴わない応答を含む、細胞及び／又は体液性免疫応答に対する阻害作用；細胞外マトリックス成分及びフィブロネクチンに付着するマクロファージ及びＴ細胞の能力の阻害、さらに、Ｔ細胞でのｆａｓ受容体発現のアップレギュレーション；関節リウマチを含む関節炎、高過敏性を伴う炎症、アレルギー反応、喘息、全身エリテマトーデス、コラーゲン疾患及び他の免疫疾患、アテローム硬化症に随伴する炎症、動脈硬化、アテローム硬化性心疾患、再灌流障害、心拍停止、心筋梗塞、血管炎症障害、呼吸窮迫症候群又は他の心肺疾患、消化性潰瘍に随伴する炎症、潰瘍性大腸炎及び他の胃腸管疾患、肝線維症、肝硬変又は他の肝臓疾患、甲状腺炎又は他の腺疾患、腎炎又は他の腎及び泌尿器疾患、耳炎又は他の耳鼻咽喉疾患、皮膚炎又は他の皮膚疾患、歯周疾患又は他の歯科疾患、精巣炎又は睾丸副睾丸炎、不妊、睾丸（orchidal）外傷又は他の免疫関連精巣疾患、胎盤機能不全、胎盤不全、習慣性流産、子癇、子癇前症及び他の免疫及び／又は炎症関連婦人科学的疾患、後部ブドウ膜炎、中間ブドウ膜炎、前部ブドウ膜炎、結膜炎、脈絡網膜炎、ブドウ膜網膜炎、視神経炎、眼内炎症、例えば、網膜炎又は類嚢胞黄斑浮腫、交感性眼炎、強膜炎、色素性網膜炎、変性フォンダス（fondus）疾患の免疫及び炎症成分、眼外傷の炎症成分、感染により誘発された眼炎症、増殖性硝子体網膜症、急性虚血性視神経症、例えば緑内障濾過手術後の過剰瘢痕化、眼移植片に対する免疫及び／又は炎症反応及び他の免疫及び炎症関連眼疾患、自己免疫疾患に随伴する炎症、中枢神経系（ＣＮＳ）又は他の臓器の両方において、免疫及び／又は炎症抑制が有効である状態又は疾患、パーキンソン病、パーキンソン病の治療からの合併症及び／又は副作用、ＡＩＤＳ関連認知症、複合ＨＩＶ関連脳疾患、ドヴィック病、シデナム舞踏病、アルツハイマー病及び他の変性疾患、ＣＮＳの状態又は障害、脳卒中の炎症成分、小児麻痺後症候群、精神医学的障害の免疫及び炎症成分、脊髄炎、脳炎、亜急性硬化性全脳炎、脳心筋炎、急性ニューロパシー、亜急性ニューロパシー、慢性ニューロパシー、ギヤン−バレー症候群、シデナム舞踏病、重症筋無力症、偽脳腫瘍、ダウン症候群、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、ＣＮＳ圧迫又はＣＮＳ外傷の炎症性成分又はＣＮＳ感染、筋萎縮及びジストロフィーの炎症性成分並びに免疫及び炎症関連疾患、中枢及び辺縁神経系の状態又は障害、外傷後炎症、敗血症ショック、感染病、手術、脊髄移植又は他の移植合併症の炎症性合併症又は副作用及び／又は例えば、ウイルス担体の感染による遺伝子治療の副作用、炎症性及び／又は免疫合併症及び副作用或いは、ＡＩＤＳに随伴する炎症を含む望ましくない免疫反応及び炎症の阻害、体液性及び／又は細胞免疫応答の抑制又は阻害、単球又はリンパ球の量を減らすことによる単球又は白血球増殖性疾患、例えば白血病の治療又は緩和、角膜、骨髄、臓器、水晶���、ペースメーカー、天然又は人工皮膚組織などの天然又は人工細胞、組織及び臓器の移植の際の移植片拒絶の予防及び／又は治療。
【０１９２】
好ましい態様では、状態又は疾患は、
ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸により制御される貯蔵からの細胞内カルシウム放出の調節、
哺乳動物細胞におけるカルシウムスパイクの調節、
脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療、
ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸により制御される貯蔵からの細胞内カルシウム放出を調節することによる、脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療、
哺乳動物細胞におけるカルシウムスパイクを調節することによる、脳、心臓、膵臓細胞（例えば、膵臓腺房細胞及び膵臓β細胞）、免疫細胞、Ｔ細胞、食細胞を含む造血細胞のうちの１又は複数における疾患の治療
からなるリストから選択される。
【０１９３】
好ましい態様では、状態又は疾患は、
ヒト又は動物での自己免疫疾患（甲状腺炎、膵島炎、多発性硬化症、インベクティティス、睾丸炎、重症筋無力症、関節リウマチ又はエリテマトーデス）又は移植片拒絶又はII型糖尿病又は心不整脈の治療或いは免疫障害の治療又は予防
からなるリストから選択される。
【０１９４】
一般的な組換えＤＮＡ方法技術
他に記載のない限り、本発明は当技術分野の通常の専門家の能力の範囲内である化学、分子生物学、微生物学、組換えＤＮＡ及び免疫学の慣用の技術を使用する。このような技術は文献に説明されている。例えば、J. Sambrook, E. F. Fritsch, and T. Maniatis, 1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Books 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Ausubel, F. M. et al. (1995 and periodic supplements; Current Protocols in Molecular Biology, ch. 9, 13, and 16, John Wiley & Sons, New York, N. Y.); B. Roe, J. Crabtree, and A. Kahn, 1996, DNA Isolation and Sequencing: Essential Techniques, John Wiley & Sons; J. M. Polak and James O'D. McGee, 1990, In Situ Hybridization: Principles and Practice; Oxford University Press; M. J. Gait (Editor), 1984, Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, Irl Press; 及びD. M. J. Lilley and J. E. Dahlberg, 1992, Methods of Enzymology; DNA Structure Part A: Synthesis and Physical Analysis of DNA Methods in Enzymology, Academic Press参照。これらの全般的なテキストの各々は本明細書に参照として援用される。
【０１９５】
次で、本発明を実施例を用いてさらに記載するが、これは、本発明を実施する際に、当技術分野の通常の専門家の助けとなることを意図したものであって、本発明の範囲を制限することを意図したものではまったくない。
【実施例】
【０１９６】
材料及び方法
薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を、記載されている溶媒を用いてプレコーティングされているプレート（Merck TLC aluminum sheets silica 60 F254）で行った。ＵＶランプを２５４ｎｍにおいて使用して、化合物を検出した。Sorbisil c60シリカゲルを使用して、フラッシュクロマトグラフィーを実施した。
【０１９７】
１Ｈ及び１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルをＪＥＯＬ  ＧＸ２７０又は４００分光計のいずれかで記録した。他に記載のない限り、化学シフトを残留プロトン化溶媒に対するｐｐｍで測定した。
【０１９８】
Reichert Jung Thermo Galen Koflerブロックを使用して、融点を決定し、修正しなかった。質量スペクトルを、マトリックス単体として３−ニトロベンジルアルコール（ＮＢＡ）を用いる陽性及び陰性高速原子衝撃（ＦＡＢ）を使用して、University of Bath Mass Spectrometry Serviceで記録した。
【０１９９】
細胞内カルシウムの測定
亜細胞フラクション：生理学的温度で、細胞ホモジネート又は亜細胞フラクションを蛍光計（Perkin-Elmer LS-50B）で５０６ｎｍ励起及び５２６ｎｍ発光において使用して、fluo-3（３μＭ）を用いて、カルシウム濃度を測定した。
【０２００】
無損傷細胞：カルシウム反応性染料の注射又は加水分解エステル誘導体を、無損傷細胞中でレーザー走査共焦点顕微鏡（ＴＣＳ  ＮＴ、Leica）によりイメージングし、イメージを、ソフトウェアＮＩＨ  Imageで処理して、各イメージ（Ｆ）を刺激前に得られたイメージ（Ｆｏ）で割ることにより自己比を生じさせた。
【０２０１】
一般的な反応スキーム
【０２０２】
2007516964.tif 000012
［上式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、前記と同様に定義される］。
【０２０３】
Ｉ  ニコチン酸誘導体の調製
ニコチン酸メチルエステル
【０２０４】
2007516964.tif 000013
メタノール（８５ｍＬ）中のニコチン酸（５ｇ、４０．６ｍｍｏｌ）及び濃硫酸（１７ｍＬ）を１４時間環流させた。次いで、水（５０ｍＬ）を加え、この水溶液を飽和ＮａＨＣＯ３（約３００ｍｌ）で中和し、クロロホルム（３×５０ｍＬ）で抽出し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、減圧下に蒸発させると、淡黄色の液体が得られ、これを放置すると、白書の固体（４．８ｇ、８８％）として結晶化し（融点３４〜３６℃）、これは、δＨ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）９．２３（１Ｈ，ｄ，Ｊ  １．６，Ｈ２）、９．７８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ  ４．９及び１．６，Ｈ４）、８．２９（１Ｈ，ｍ，Ｈ６）、７．４０（１Ｈ，ｍ，Ｈ５）及び３．９６（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）を示した。
【０２０５】
５−ブロモ−ニコチン酸メチルエステル（実施例１）
【０２０６】
2007516964.tif 000014
５−ブロモ−ニコチン酸（３００ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）をメタノール（６ｍｌ）及び濃Ｈ２ＳＯ４（１．１ｍｌ）に加えた。次いで、この反応混合物を環流まで一晩加熱した。冷却した後に、濃ＮａＨＣＯ３溶液約５ｍｌを加えて、ｐＨを７〜８に調節した。次いで、生成物をＤＣＭ（２０ｍｌ）で抽出した。溶媒を除去すると、生成物が白色の固体として収率８１％で得られた。
ＩＲ：３４５０、３０４７、１７２２、１５７７、１４１９、１３１１、１１０７、１０１６、９５５、７６４、６８８；１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：９．１２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−２）、８．８５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６）、８．４４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４）、３．９９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００．４ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：１６４．４（ＣＯ）、１５４．４（Ｃ２）、１４８．７（Ｃ６）、１３９．６（Ｃ４）、１２７．４（Ｃ３）、１２０．７（Ｃ５）、５２．９（ＣＨ３）；ＭＳ：ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）２１６．２（Ｍ＋）。
【０２０７】
ニコチン酸１−（２−ニトロ−フェニル）−エーテルエステル
【０２０８】
2007516964.tif 000015
１−（２−ニトロフェニル）エタノール（６１８ｍｇ、３．７ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（１８ｍＬ）溶液に、ニコチン酸（５００ｍｇ、４．１ｍｍｏｌ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（８３８ｍｇ、４．１ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（４５ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）を加えた。反応を室温で一晩攪拌し、この後、尿素を濾過した。濾液をクロロホルム（２０ｍｌ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（１５ｍｌ）及びブライン（１５ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、減圧下に蒸発させた。残留物をシリカゲル（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ７：３）で精製すると、所望のエステルが淡黄色のオイル（９１０ｍｇ、８１％）として得られ、これは、δＨ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）９．１６（１Ｈ，ｄ，Ｊ  １．５，Ｈ２）、８．７０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ  ４．８及び１．８，Ｈ６）、８．２１（１Ｈ，ｍ，Ｈ）、７．８８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ  ８．４及び１．１，ＣＨ）、７．６５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ  ８．１及び１．８，Ｈ４）、７．５６（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ  ７．５及び１．１，ＣＨ）、７．４０〜７．３０（２Ｈ，ｍ，２×ＣＨ）、６．５１（１Ｈ，ｑ，Ｊ  ６．４，ＣＨ）及び１．７１（３Ｈ，ｔ，Ｊ  ６．４，ＣＨ３）。δＣ（６５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１６４．３（Ｃ＝Ｏ）、１５３．２、１５０．７（両ＣＨ）、１３７．３（Ｃ）、１３７．０、１３３．６、１２８．５、１２６．９（全ＣＨ）、１２５．６（Ｃ）、１２４．４、１２３．３（両ＣＨ）、６９．２（ＣＨ）及び２１．９（ＣＨ３）。１  Ｃ隠蔽。ｍ／ｚ［ＦＡＢ＋］２７３．１（Ｍ＋＋Ｈ，１００％）［実測値２７３．０８７１  Ｍ＋＋Ｈ。Ｃ１４Ｈ１３Ｎ２Ｏ４の計算値２７３．０８７３］を示した。
【０２０９】
５−（４−メトキシ−フェニル）−ニコチン酸メチルエステル
【０２１０】
2007516964.tif 000016
５−ブロモ−ニコチン酸メチルエステル（１５３ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）にトルエン（１．４ｍｌ）及び２ＭのＮａ２ＣＯ３（０．７ｍｌ）を加え、この懸濁液に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（２４ｍｇ）をＮ２下に加えた。次いで、ｐ−メトキシフェニルボロン酸（１２７．６ｍｇ）のメタノール（０．３５ｍｌ）溶液を加えた。この反応混合物を激しく攪拌し、８０℃に６時間加熱した。冷却した後に、粗製生成物をＤＣＭ（７ｍｌ）及び２ＭのＮａ２ＣＯ３（３．５ｍｌ＋ＮＨ３０．３５ｍｌ）に分配した。有機層を除去すると、淡黄色の粗製生成物が得られ、次いでこれを、シリカゲルカラムで精製し、ＤＣＭで溶離した。白色の固体が収率４１％で得られた。
ＩＲ：３０３６、２９５６、２８４４、１７１６、１６０９、１５１８、１４４３、１４２７、１３０９、１１１１、１０２６、８４１；１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：９．１３（ｄ，Ｊ＝１．９，１Ｈ，Ｈ−２）、８．９５（ｄ，Ｊ＝２．４，１Ｈ，Ｈ−６）、８．４３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４）、７．５５（ｄ，Ｊ＝５．４，２Ｈ，ＡｒＨ−２及び６）、７．０３（ｄ，Ｊ＝５．４，２Ｈ，ＡｒＨ−３及び５）、３．９７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、３．８６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００．４ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：１６５．６（ＣＯ）、１６０．１（ＡｒＣ４）、１５１．４（Ｃ６）、１４８．７（Ｃ２）、１３６．１（Ｃ４）、１３４．７（Ｃ５）、１２９．０（ＡｒＣ１）、１２８．３（ＡｒＣ２及びＣ６）、１２５．９（Ｃ３）、１１４．７（ＡｒＣ３及びＣ５）、５５．６（ＯＣＨ３）、５２．７（ＣＨ３−ＣＯ）；ＭＳ：ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）２４４．３（Ｍ＋＋１）。
【０２１１】
ニコチン酸（１００ｍｇ、０．８１２ｍｍｏｌ）及び有機ハロゲン化物（０．８１２ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（１．５ｍｌ）中で混合し、暗所で５０℃で一晩攪拌し、その後、ＤＭＦを減圧下に蒸発させた。次いで、生じた生成物を再結晶化させると、対応するピリジニウム塩が得られた。
【０２１２】
II  （ブロモアセチルアミド）アルキル化剤の調製
温度が０℃を上回らないように、−１０℃で、アミン（３ｍｌ、２４ｍｍｏｌ）を、臭化２−ブロモアセチル（１０ｍｌ、１２ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に滴加した。反応が完了したら、冷水を加えて、沈殿した塩を溶かした。有機層を分離し、酢酸水溶液（２０ｍｌ、１Ｍ）、ＮａＯＨ水溶液（２０ｍｌ、１Ｍ）及び最後に飽和ブラインで順次洗浄した。エーテルを除去した後に、粗製生成物をさらに精製することなく、そのままアルキル化のために使用した。再結晶化又はフラッシュクロマトグラフィーにより、分析データを得た。
【０２１３】
２−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジエチル−アセトアミド（２）
後処理の後に、無色のオイルが得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ３．７３（ｓ，２Ｈ，−ＣＨ２ＣＯ）３．２５（ｑ，４Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，−ＣＨ２  ＣＨ３）、１．２４（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，−ＣＨ３）、１．０３（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，−ＣＨ３）。収率６０％。データは、文献［１］と一致する。
【０２１４】
２−ブロモ−Ｎ−ブチル−アセトアミド（３）
この生成物は、室温で固体である。融点３０℃。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ６．６５（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ）、３．８１（ｓ，２Ｈ，−ＣＨ２ＣＯ）、３．１９（ｍ，２Ｈ，Ｎ−ＣＨ２）、１．４１（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ２  ＣＨ２）、１．２５（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ２  ＣＨ３）、０．７８（ｔ，３Ｈ，−ＣＨ３）。収率７６％、データは、文献［１］と一致する。
【０２１５】
２−ブロモ−Ｎ−フェニル−アセトアミド（４）
この生成物は、黄色の固体である。融点１２８〜１３１。ＩＲ：３２９６、３２０３、３１４６、３０９９、１６５７、１６１８、１５５５、１４８６、１４４５、１３３５、１１１１；１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：８．１３（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ）７．５２（ｄ，２ｈ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，ＡｒＨ２，６）、７．３４（ｍ，２Ｈ，ＡｒＨ３，５）、７．１７（ｍ，１Ｈ，ＡｒＨ４）、４．００（ｓ，２Ｈ，−ＣＨ２ＣＯ）。ＭＳ：ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）２１３．９（Ｍ＋＋１）。
【０２１６】
２−ブロモ−Ｎ−シクロヘキシル−アセトアミド（５）
この生成物は、白色の微細粉末である。収率９０％。融点：１０６〜１０８。ＩＲ：３２８４、３０７２、２９３７、２９１９、２８５３、１６４５、１５５１、１４４６、１３２８、１２１０、１１５５、１０８９；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：６．３３（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ）、３．８４（ｓ，２Ｈ，−ＣＨ２ＣＯ）、３．７４（ｍ，１Ｈ，Ｎ−ＣＨ）、１．１０〜１．９２（ｍ，１０Ｈ，環−Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１６４．７（ＣＯ）、４９．６（ＣＨ）、３３．４（２ＣＨ２）、３０．２（ＣＨ２−Ｂｒ）、２６．１（２ＣＨ２）、２５．３（ＣＨ２）。ＭＳ：ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）２２０（Ｍ＋＋１）。
【０２１７】
２−ブロモ−Ｎ−（４−エチル−フェニル）−アセトアミド（６）
この生成物は、黄色の固体である。融点１３１〜１３２。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：８．０７（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、７．４０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，ＡｒＨ）、７．１５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，ＡｒＨ）、４．００（ｓ，２Ｈ，−ＣＨ２ＣＯ）、２．５９（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７．６７Ｈｚ，−ＣＨ２  ＣＨ３）、１．１８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．６７Ｈｚ，−ＣＨ３）。ＭＳ：ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）２４２．０（Ｍ＋＋１）。
【０２１８】
２−ブロモ−Ｎ−（２−ブロモフェニル）−アセトアミド（７）
粗製生成物を、シリカゲルカラムに掛け、ＤＣＭ：ヘキサン  １０：１で溶離した。黄色の固体が収率５２％で得られた。
融点９６〜９８。ＩＲ：３１８４、３１０７、１６５３、１６０９、１５９１、１５４２、１４７２、１４２２、１３１５、７００；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：８．１５（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、７．７７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、７．４３（ｄ，Ｊ＝７．８３，１Ｈ，Ｈ−５）、７．２３（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２，３）、４．００（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１６４．３（Ｃ＝Ｏ）、１３８．１（Ｃ−１）、１３０．３（Ｃ−３）、１２８．２（Ｃ−５）、１２３．０（Ｃ−４）、１２２．６（Ｃ−２）、１１８．５（Ｃ−６）；ＭＳ（ＦＡＢ＋）：ｍ／ｚ  ２９３（Ｍ＋＋１）。
【０２１９】
２−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジブチルアセトアミド（８）
融点：オイル。ＩＲ：２９５９、２９３２、２８７２、１６４８、１４６０、１３７６、１２０９、１０９８；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：３．７７（ｓ，２Ｈ，ＣＯ−ＣＨ２）、３．２３（ｍ，４Ｈ，２ＮＣＨ２）、１．４８（ｍ，４Ｈ，２ＣＨ２）、１．２５（ｍ，４Ｈ，２ＣＨ２）、０．８６（ｍ，６Ｈ，２ＣＨ３）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１６６．３（ＣＯ）、４８．８（ＣＨ２）、４６．２（ＣＨ２）、３１．５（ＣＨ２−Ｂｒ）、２９．７（ＣＨ２）、２７．０（ＣＨ２）、２０．５（２ＣＨ２）、１４．２７（ＣＨ３）、１４．１９（ＣＨ３）；ＭＳ  ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）２５０（Ｍ＋＋１）、１７０（Ｍ＋−Ｂｒ）、１２８（Ｍ＋−ＢｒＣＯＣＨ２）。
【０２２０】
２−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルアセトアミド（９）
粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ヘキサン  １２：１）により精製した。白色の固体が収率４０％で得られた。分析データを、ＤＣＭからの結晶化により得た。
融点１２２〜１２４、ＩＲ：３４６６、２９３３、２８６９、２８５７、１６３７、１４６７、１３７１、１１１３、１０００；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：３．８０（ｓ，２Ｈ，ＣＯ−ＣＨ２）、２．４１（ｍ，２Ｈ，２ＣＨ）、１．１７〜１．８６（ｍ，２０Ｈ，環−Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１６２．６（ＣＯ）、５６．３（Ｎ−Ｃ）、３１．０（ＣＨ２）、２９．４（ＣＨ２）、２９．１（Ｂｒ−ＣＨ２）、２６．５〜２５．２（環−Ｃ）。ＭＳ：ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）３０２．０（Ｍ＋）。
【０２２１】
２−ブロモ−Ｎ−デシルアセトアミド（１０）
フラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ヘキサン  １０：１）により精製すると、無色のオイルが得られた。収率８１％。
融点：オイル、ＩＲ：３２８２、２９２０、２８５２、１６４０、１５６０、１４７１、１４３６、１２１４；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：６．４９（ｓ，ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ）、３．８６（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｂｒ）、３．２５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、２．１５（ｓ，アセトンピーク）、１．５２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、１．２４（ｍ，１４Ｈ，７ＣＨ２）、０．８６（ｍ，３Ｈ，ＣＨ３）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１６５．４（ＣＯ）、４０．７（ＣＨ２−Ｂｒ）、３２．３（ＣＨ２−Ｎ）、２９．７〜２９．９（６ＣＨ２）、２７．２（ＣＨ２）、２３．１（ＣＨ２）、１４．６（ＣＨ３）；
【０２２２】
２−ブロモ−Ｎ−メチル−Ｎ−フェニルアセトアミド（１１）
後処理の後に、黄色の固体が得られた。収率８０％、融点：４３〜４５。ＩＲ：１６４６、１５９５、１４９８、１３８５、１２９８、１１２０、１０４３、８８２、７７１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：７．２８（ｍ，５Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、３．８７（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）、３．２９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。ＭＳ：ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）２２８（Ｍ＋＋１）。
【０２２３】
２−ブロモ−Ｎ−（３−メトキシベンジル）アセトアミド（１２）
粗製生成物をシリカゲルカラムに掛け、ＤＣＭ：ヘキサン  １０：１で溶離した。黄色の固体が収率７２％で得られた。
融点７９〜８０。ＩＲ：３２８９、３０４８、１６４１、１５４３、１４８９、１４４１、１２９６、１２００、１１５８、１０４９、９９９、８９０、７８４、６９７；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：７．２４〜６．８３（ｍ，４Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、４．４０（ｓ，２Ｈ，Ｂｒ−ＣＨ２）、３．８６（ｓ，２Ｈ，ＣＯ−ＣＨ２）、３．７７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１６５．８（ＣＯ）、１５９．９（Ｃ−Ｏ）、１３９．１（Ｃ）、１３０．０（Ｃ５）、１２０．０（Ｃ６）、１１３．６（Ｃ２）、１１３．３（Ｃ４）、５５．６（ＯＣＨ３）、４４．４（ＣＯＣＨ２）、２９．４（Ｂｒ−ＣＨ２）；ＭＳ  ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）２５７．９（Ｍ＋＋１）、１７８．０（Ｍ＋−Ｂｒ）。
【０２２４】
２−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジプロピルアセトアミド（１３）
後処理の後に、黄色のオイルが収率６５％で得られた。
ＩＲ：３４５１、２９６６、２８７６、１６４５、１４５６、１３８１、１３０２、１２０７、１０９８、８９６、７４４；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：３．８１（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｂｒ）、３．２４（ｍ，４Ｈ，２ＣＨ２）、１．５５（ｍ，４Ｈ，２ＣＨ２）、０．８６（ｍ，６Ｈ，２ＣＨ３）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１６６．５（ＣＯ）、５０．３（ＣＨ２）、４７．７（ＣＨ２）、２６．２（ＣＨ２−Ｂｒ）、２２．２（ＣＨ２）、２０．４（ＣＨ２）、１１．２（２ＣＨ３）。ＭＳ  ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）２２２（Ｍ＋＋１）。
【０２２５】
２−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジオクチルアセトアミド（１４）
フラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ヘキサン  ９：１）により、粗製生成物を精製した。黄色のオイルが収率８１％で得られた。
ＩＲ：２９２５、２８５５、１６４９、１４６０、１３７６、及び１１０１。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：３．８０（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｂｒ）、３．２６（ｍ，４Ｈ，２ＣＨ２）、１．５４（ｍ，４Ｈ，２ＣＨ２）、１．２５（ｍ，２０Ｈ，ＣＨ２）、０．８４（ｍ，６Ｈ，２ＣＨ３）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１６６．３（ＣＯ）、４９．１（ＣＨ２）、４６．５（ＣＨ２）、２７．６（ＣＨ２−Ｂｒ）、３２．２〜２３．０（ＣＨ２）、１４．６（２ＣＨ３）。Ｍｓ  ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）３６２（Ｍ＋＋１）。
【０２２６】
［Ｃ］ニコチン酸メチルエステルのＮ−アルキル化（実施例２）
ニコチン酸メチルエステル（５００ｍｇ、３．６５ｍｍｏｌ）、ハロゲン化物（３．６５ｍｍｏｌ）及びヨウ化ナトリウム（３．６５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ又はアセトニトリル中、暗所で、５０℃で２４時間攪拌した。次いで、溶媒を減圧下に蒸発させ、メタノール／エーテルから結晶化させた。
【０２２７】
１−［（２−ブロモ−フェニルカルバモイル）−メチル］−３−メトキシカルボニル−ピリジニウム（２５）
融点：１７１〜１７２、ＩＲ：３２２５、３１７３、３０５７、３０１５、１７４３、１６８７、１５９６、１５４９、１３０７、７８０、７４０；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：１０．９７（ｓ，ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ）、９．６８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−２）、９．２６（ｄ，Ｊ＝６．２，１Ｈ，Ｈ−６）、９．１１（ｄ，Ｊ＝８．１，１Ｈ，Ｈ−４）、８．３８（ｄｄ，Ｊ＝６．２及び８．１，１Ｈ，Ｈ−５）、７．９２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−３’）、７．３２〜７．５０（ｍ，３Ｈ，ＡｒＨ）、５．７８（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）、３．９９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：１６４．１（ＣＯＯＭｅ）、１６２．６（ＣＯ−Ｎ）、１５０．４（Ｃ−２）、１４８．１（Ｃ−６）、１４６．６（Ｃ−４）、１３１．７（Ｃ−Ｎ）、１２９．８（Ｃ−３’）、１２８．５（Ｃ−５’）、１２７．３（Ｃ−２’）、１２２．３（Ｃ−５）、１２２．２（Ｃ−６’）、６３．２（ＣＨ２−ＣＯ）、５４．４（ＣＨ３）；ＭＳ：ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）３５１．１（Ｍ＋＋１）。
【０２２８】
ヨウ化ジエチルカルバモイルメチル−３−メトキシカルボニル−ピリジニウム（実施例３）
【０２２９】
2007516964.tif 000017
ニコチン酸メチルエステル及び２−クロロ−Ｎ，Ｎ’−ジエチルアセトアミドをＤＭＦ中で、標準プロトコル下に反応させると、鮮明な黄色の固体（３６３ｍｇ、２６％）（融点１６３〜１６５℃）が得られ、これは、δＨ（２７０ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）９．３０（１Ｈ，ｓ，Ｈ２）、９．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ８．２，Ｈ６）、８．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ６．２，Ｈ４）、８．１９（１Ｈ，ｍ，Ｈ５）、５．７５（２Ｈ，ｓ，ｐｙ−ＣＨ２）、３．９６（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３）、３．４１（２Ｈ，ｑ，Ｊ  ７．２，ＣＨ２）、３．８４（２Ｈ，ｑ，Ｊ  ７．２，ＣＨ２）、１．２３（３Ｈ，ｔ，Ｊ  ７．２，ＣＨ３）及び１．０５（３Ｈ，ｔ，Ｊ  ７．２，ＣＨ３）。δＣ（６５ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）１６４．３（Ｃ＝Ｏ）、１４９．２，１４７．６，１４６．８（全ＣＨ）、１３０．６（Ｃ）、１２８．３（ＣＨ）、６２．１（ｐｙ−ＣＨ２）、５４．１（ＯＣＨ３）、４２．３，４１．９（両ＣＨ２）、１３．２及び１２．１（両ＣＨ３）。ｍ／ｚ［ＦＡＢ＋］２５１．１（Ｍ＋，１００％）［実測値２５１．１４０５  Ｍ＋。Ｃ１３Ｈ１９Ｎ２Ｏ３Ｉの計算値２５１．１３９５］。ＩＲ（ＫＢｒ）１７３１（Ｃ＝Ｏエステル）及び１６５３（Ｃ＝Ｏアミド）を示した。
【０２３０】
ヨウ化１−（２−カルバモイル−エチル）−３−メトキシカルボニル−ピリジニウム（実施例４）
【０２３１】
2007516964.tif 000018
ニコチン酸メチルエステル及び３−クロロプロピオンアミドをアセトニトリル中、標準プロトコル下に反応させると、淡黄色の固体（２６６ｍｇ、２２％）が得られ（融点９８〜１００℃）、これは、δＨ（２７０ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）９．４８（１Ｈ，ｓ，Ｈ２）、９．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ６．２，Ｈ６）、９．０３〜８．９９（１Ｈ，ｍ，Ｈ４）、８．２１〜８．１６（１Ｈ，ｍ，Ｈ５）、４．９４（２Ｈ，ｔ，Ｊ  ６．４，ｐｙ−ＣＨ２）、４．０１（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３）及び３．０９（２Ｈ，ｔ，Ｊ  ６．４，ＣＨ２−ＣＯ）。δＣ（６５ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）１７３．７、１６８．５（両Ｃ＝Ｏ）、１４８．１、１４６．２（両ＣＨ）、１３１．０（Ｃ）、１３０．９、１２８．６（両ＣＨ）、５８．２（ｐｙ−ＣＨ２）、５４．３（ＯＣＨ３）及び３５．４（ＣＨ２）。ｍ／ｚ［ＦＡＢ＋］２０９．１（Ｍ＋，１００％）［実測値２０９．０９３５  Ｍ＋。Ｃ１０Ｈ１３Ｎ２Ｏ３Ｉの計算値２０９．０９２６］。ＩＲ（ＫＢｒ）１７３６（Ｃ＝Ｏエステル）及び１６７４（Ｃ＝Ｏアミド）を示した。
【０２３２】
ヨウ化１−（３−シアノ−プロピル）−３−メトキシカルボニル−ピリジニウム（実施例５）
【０２３３】
2007516964.tif 000019
ニコチン酸メチルエステル及び４−クロロブチロニトリルをＤＭＦ中、標準プロトコル下に反応させると、淡黄色の固体（２１９ｍｇ、１８％）（融点１６７〜１７０℃）が得られ、これは、δＨ（２７０ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）９．４８（１Ｈ，ｓ，Ｈ２）、９．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ６．４，Ｈ６）、９．０１（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ  ８．２及び１．５，Ｈ４）、８．２０〜８．１７（１Ｈ，ｍ，Ｈ５）、４．７９（２Ｈ，ｔ，Ｊ  ７．４，ｐｙ−ＣＨ２）、３．９８（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３）、２．６４（２Ｈ，ｔ，Ｊ  ７．４，ＣＨ２−ＣＮ）及び２．４０（２Ｈ，ｑ，Ｊ  ７．４，ＣＨ２）。１６３．４（Ｃ＝Ｏ）、１４７．９，１４６．４，１４６．２（全ＣＨ）、１３１．３（Ｃ）、１２９．１（ＣＨ）、６０．９（ｐｙ−ＣＨ２）、５４．２（ＯＣＨ３）、２６．３及び１４．１（両ＣＨ２）。ｍ／ｚ［ＦＡＢ＋］２０５．０（Ｍ＋，１００％）［実測値２０５．０９７７  Ｍ＋。Ｃ１１Ｈ１４Ｎ２Ｏ２Ｉの計算値２０５．０９７２］を示した。
【０２３４】
ヨウ化１−（２−ジエチルアミノ−エチル）−３−メトキシカルボニル−ピリジニウム（実施例６）
【０２３５】
2007516964.tif 000020
ニコチン酸メチルエステル及び塩化ジエチルアミノエチル塩酸塩をＤＭＦ中、標準的なプロトコル下に反応させると、淡黄色の固体（６０ｍｇ、５％）が得られ（融点１７２〜１７４℃）、これは、δＨ（２７０ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）９．５３（１Ｈ，ｓ，Ｈ２）、９．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ６．２，Ｈ６）、９．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ８．２，Ｈ４）、８．２５〜８．２５（１Ｈ，ｍ，Ｈ５）、５．１２（２Ｈ，ｔ，Ｊ  ７．７，ｐｙ−ＣＨ２）、３．９５（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３）、３．８２（２Ｈ，ｔ，Ｊ  ７．７，ＣＨ２−Ｎ）、３．３０（４Ｈ，ｑ，Ｊ  ７．４，２×ＣＨ２−Ｍｅ）及び１．２５（６Ｈ，ｔ，Ｊ  ７．４，２×ＣＨ３）。ｍ／ｚ［ＦＡＢ＋］２３７．２（Ｍ＋，１００％）［実測値２３７．１６０１  Ｍ＋。Ｃ１３Ｈ２１Ｎ２Ｏ２Ｉの計算値２３７．１６０３］を示した。
【０２３６】
ヨウ化１−（２−シアノ−エチル）−３−メトキシカルボニル−ピリジニウム（実施例７）
【０２３７】
2007516964.tif 000021
ニコチン酸メチルエステル及び３−クロロプロピオニトリルをＤＭＦ中、標準的なプロトコル下に反応させると、淡黄色の固体（８８ｍｇ、８％）が得られ、これは、δＨ（２７０ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）９．５４（１Ｈ，ｓ，Ｈ２）、９．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ６．２，Ｈ６）、９．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ８．２，Ｈ４）、８．２５〜８．２０（１Ｈ，ｍ，Ｈ５）、４．９９（２Ｈ，ｔ，Ｊ  ６．４，ｐｙ−ＣＨ２）、３．９７（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３）及び３．２９（２Ｈ，ｔ，Ｊ  ６．４，ＣＨ２−ＣＮ）。ｍ／ｚ［ＦＡＢ＋］１９１．０（Ｍ＋，１００％）［実測値１９１．０８２０  Ｍ＋。Ｃ１０Ｈ１１Ｎ２Ｏ２Ｉの計算値１９１．０８２１］を示した。
【０２３８】
ヨウ化１−（１−カルバモイル−エチル）−３−メトキシカルボニル−ピリジニウム（実施例８）
【０２３９】
2007516964.tif 000022
ニコチン酸メチルエステル及び２−クロロプロピオンアミドをＤＭＦ中、標準的なプロトコル下に反応させると、黄色の固体（３６３ｍｇ、２６％）が得られ、これは、δＨ（２７０ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）９．３４（１Ｈ，ｓ，Ｈ２）、９．０３〜８．９６（２Ｈ，ｍ，Ｈ６及びＨ４）、８．１６〜８．１１（１Ｈ，ｍ，Ｈ５）、５．６６（１Ｈ，ｑ，Ｊ  ７．２，ｐｙ−ＣＨ）、３．９１（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３）及び１．８８（３Ｈ，ｄ，Ｊ  ７．２，ＣＨ３）。δＣ（６５ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）１６３．１（Ｃ＝Ｏ）、１４７．５，１４７．０，１４５．８（全ＣＨ）、１３０．７（Ｃ）、１２８．５（ＣＨ）、６９．２（ｐｙ−ＣＨ）、５４．２（ＯＣＨ３）及び１８．２（ＣＨ３）。ｍ／ｚ［ＦＡＢ＋］２０９．０（Ｍ＋，１００％）［実測値２０９．０９２９  Ｍ＋。Ｃ１０Ｈ１３Ｎ２Ｏ３Ｉの計算値２０９．０９２７］を示した。
【０２４０】
１−シクロヘキシル−３−メトキシカルボニル−５−（４−メトキシ−フェニル）−ピリジニウム
【０２４１】
2007516964.tif 000023
５−（４−メトキシ−フェニル）−ニコチン酸メチルエステル（４０）（５０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）に２−ブロモ−Ｎ−シクロヘキシルアセトアミド（１１５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物に、ＤＭＦ（１ｍｌ）をＮ２下に加え、次いで、６０℃で一晩加熱した。溶媒を除去した後に、残留物をメタノール（０．５ｍｌ）に溶かし、次いで、エーテル（２０ｍｌ）を加えて、生成物を結晶化させた。黄色のオイルが得られた（４０ｍｇ）。
ＩＲ：３４３６、２９２９、１７３８、１６５２、１５５７、１４５０、１３４６、１２６０；１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：９．６６（ｓ，１Ｈ，Ｈ−２）、９．４６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６）、９．１５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４）、８．６２（ｍ，１Ｈ，ＮＨ）、７．９３（ｍ，２Ｈ，ＡｒＨ−２及び６）、７．１６（ｍ，２Ｈ，ＡｒＨ−３及び５）、５．５８（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２−ＣＯ）、４．０１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、３．８５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−ＣＯ）、１．７９〜１．２２（ｍ，１１Ｈ，環−Ｈ）
【０２４２】
Ｎ−アルキル化ニコチン酸メチルエステルの加水分解（実施例９）
対応するニコチン酸メチルエステル（０．４ｍｍｏｌ）を４８％ＨＢｒ水溶液（０．２ｍＬ）に溶かし、６０℃で一晩攪拌し、次いでこれを、減圧下に蒸発させた。茶色の残留物に、アセトニトリルを加えた。沈殿物を濾過し、アセトニトリルで洗浄すると、所望のＮ−アルキル化ニコチン酸が残った。
【０２４３】
ヨウ化３−カルボキシ−１−ジエチルカルバモイルメチル−ピリジニウム（実施例１０）
【０２４４】
2007516964.tif 000024
ヨウ化ジエチルカルバモイルメチル−３−メトキシカルボニル−ピリジニウムを標準的なプロトコル下に反応させると、所望の生成物が白色の固体（１０４ｍｇ、７４％）（融点９７〜１００℃）として得られ、これは、δＨ（２７０ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）９．１９（１Ｈ，ｓ，Ｈ２）、８．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ８．２，Ｈ６）、８．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ６．２，Ｈ４）、８．１３（１Ｈ，ｍ，Ｈ５）、５．７１（２Ｈ，ｓ，ｐｙ−ＣＨ２）、３．３７（２Ｈ，ｑ，Ｊ  ７．２，ＣＨ２）、３．３２（２Ｈ，ｑ，Ｊ  ７．２，ＣＨ２）、１．２０（３Ｈ，ｔ，Ｊ  ７．２，ＣＨ３）及び１．０２（３Ｈ，ｔ，Ｊ  ７．２，ＣＨ３）。δＣ（６５ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）１６４．４（Ｃ＝Ｏ）、１４８．９、１４７．７、１４７．１（全ＣＨ）、１３１．７（Ｃ）、１２８．３（ＣＨ）、６２．１（ｐｙ−ＣＨ２）、４２．３、４１．９（両ＣＨ２）、１３．１及び１２．１（両ＣＨ３）。ｍ／ｚ［ＦＡＢ＋］２３７．１（Ｍ＋，１００％）［実測値２３７．１２５０  Ｍ＋。Ｃ１２Ｈ１７Ｎ２Ｏ３Ｉの計算値２３７．１２３９］。ＩＲ（ＫＢｒ）３１５０（ＯＨ）及び１６５２（Ｃ＝Ｏアミド）を示した。
【０２４５】
ヨウ化１−（２−カルバモイル−エチル）−３−カルボキシ−ピリジニウム（実施例１１）
【０２４６】
2007516964.tif 000025
ヨウ化１−（２−カルバモイル−エチル）−３−メトキシカルボニル−ピリジニウムを標準的なプロトコル下に反応させると、所望の生成物が白色の固体（１２０ｍｇ、８４％）（融点１７０〜１７３℃）として得られ、これは、δＨ（２７０ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）９．３８（１Ｈ，ｓ，Ｈ２）、９．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ６．２，Ｈ６）、８．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ７．９，Ｈ４）、８．１２〜８．０６（１Ｈ，ｍ，Ｈ５）、４．８７（２Ｈ，ｔ，Ｊ  ６．２，ｐｙ−ＣＨ２）及び３．１３（２Ｈ，ｔ，Ｊ  ６．２，ＣＨ２−ＣＯ）。δＣ（６５ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）１７３．７、１６４．８（両Ｃ＝Ｏ）、１４７．８、１４６．６、１４６．４（全ＣＨ）、１３２．４（Ｃ）、１２８．５（ＣＨ）、５７．５（ｐｙ−ＣＨ２）及び３４．５（ＣＨ２）。ｍ／ｚ［ＦＡＢ＋］１９６．１（Ｍ＋，１００％）［実測値１９６．０６１１  Ｍ＋。Ｃ９Ｈ１１Ｎ２Ｏ３Ｉの計算値１９６．０６０９］。ＩＲ（ＫＢｒ）３１５４（ＯＨ）及び１６４８（Ｃ＝Ｏアミド）を示した。
【０２４７】
ヨウ化３−カルボキシ−１−（２−ジエチルアミノ−エチル）−ピリジニウム（実施例１２）
【０２４８】
2007516964.tif 000026
ヨウ化１−（２−ジエチルアミノ−エチル）−３−メトキシカルボニル−ピリジニウムを標準的なプロトコル下に反応させると、所望の生成物が白色の固体（４１ｍｇ、８４％）（融点２１０〜２１２℃）として得られ、これは、δＨ（２７０ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）９．６０（１Ｈ，ｓ，Ｈ２）、９．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ６．２，Ｈ６）、８．９７（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ８．２，Ｈ４）、８．２０〜８．１５（１Ｈ，ｍ，Ｈ５）、５．１１（２Ｈ，ｔ，Ｊ  ７．７，ｐｙ−ＣＨ２）、３．８３（２Ｈ，ｔ，Ｊ  ７．７，ＣＨ２−Ｎ）、３．３３（４Ｈ，ｑ，Ｊ  ７．４，２×ＣＨ２−Ｍｅ）及び１．２６（６Ｈ，ｔ，Ｊ  ７．４，２×ＣＨ３）。δＣ（６５ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）１６４．８（Ｃ＝Ｏ）、１４７．３、１４６．４、１４６．４（全ＣＨ）、１３２．４（Ｃ）、１２９．２（ＣＨ）、５５．６（ｐｙ−ＣＨ２）、５０．３、４８．２（両ＣＨ２）及び３４．５（ＣＨ３）を示した。
【０２４９】
［Ｄ］ニコチン酸のアルキル化（実施例１３）
ニコチン酸（１００ｍｇ、０．８１２ｍｍｏｌ）及び有機ハロゲン化物（０．８１２ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中で混合し、５０℃で、暗所で一晩攪拌し、その後、ＤＭＦを減圧下に蒸発させた。次いで、生じた生成物を再結晶化させると、対応するピリジニウム塩が得られた。
【０２５０】
３−カルボキシ−１−ジエチルカルバモイルメチル−ピリジニウム（１５）
メタノール／エーテルから結晶化させた後に、黄色のオイルが得られた。収率２１％。
ＩＲ（ＫＢｒ）νｍａｘ  ３４２９、３０７２、２９８１、２９３４、１７２９、１６５９、１２１９、１１３５、１０３６、８１１、７４８ｃｍ−１ １Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：９．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｈ２）、８．８７（ｍ，１Ｈ，Ｈ６）、８．７４（ｍ，１Ｈ，Ｈ４）、８．０３（ｍ，１Ｈ，Ｈ５）、５．６８（ｓ，２Ｈ，−ＣＨ２ＣＯ）、３．３３（ｑ，４Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，−ＣＨ２  ＣＨ３）、１．１９（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，−ＣＨ３）、１．００（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，−ＣＨ３）。ＭＳ：ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）２３７（Ｍ＋＋１）。
【０２５１】
１−ブチルカルバモイルメチル−３−カルボキシ−ピリジニウム（１６）
融点１９０〜１９４。ＩＲ（ＫＢｒ）νｍａｘ：３２３５、３０７８、２９５８、２９３１、２８７３、２７５０、２４９４、１７２７、１６７２、１５５８、１３９４、１３５１、１１３１、８４８ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：９．２５（ｓ，１Ｈ，Ｈ２）、８．９６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，Ｈ６）、８．８５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，Ｈ４）、８．１３（ｍ，１Ｈ，Ｈ５）、５．４３（ｓ，２Ｈ，−ＣＨ２ＣＯ）、３．１６（ｍ，２Ｈ，Ｎ−ＣＨ２）、１．４０（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ２  ＣＨ２）、１．２０（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ２  ＣＨ３）、０．７７（ｔ，３Ｈ，−ＣＨ３）。１３Ｃ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：１６７．９（ＣＯ−Ｏ）、１６５．２（ＣＯ−Ｎ）、１４８．１（Ｃ３）、１４７．０（Ｃ６）、１４６．７（Ｃ２及びＣ４）、１２８．１（Ｃ５）、６２．２（ＣＨ２−Ｎ＋）、３９．９（ＣＨ２）、３０．５（ＣＨ２）、１９．７（ＣＨ２）、１３．２（ＣＨ３）；ＭＳ：ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）２３７．０（Ｍ＋＋１）。
【０２５２】
３−カルボキシ−１−フェニルカルバモイルメチル−ピリジニウム（１７）
融点１４８〜１４９。ＩＲ（ＫＢｒ）νｍａｘ  ３３９３、３２７７、３０８０、３０１９、１６９９、１６３７、１５９９、１５５８、１４９８、１４４６、１３５０、１３１１、１２５８、７３７、６９０ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：９．１８（ｓ，１Ｈ，Ｈ２）、８．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，Ｈ６）、８．８３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，Ｈ４）、８．０７（ｍ，１Ｈ，Ｈ５）、７．２５（ｍ，５Ｈ，ＡｒＨ）、５．５９（ｓ，２Ｈ，−ＣＨ２ＣＯ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：１６３．８（ＣＯ−Ｏ）、１６３．５（ＣＯ−Ｎ）、１４８．２（Ｃ６）、１４７．９（Ｃ２及びＣ４）、１４６．２（Ｃ３）、１２７．８（Ｃ５）、１３８．９（ＡｒＣ１）、１２９．６（ＡｒＣ３及びＣ５）、１１９．８（ＡｒＣ２及びＣ６）、１２４．６（ＡｒＣ４）；ＭＳ：ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）２５７．１（Ｍ＋＋１）。
【０２５３】
３−カルボキシ−１−シクロヘキシルカルバモイルメチル−ピリジニウム（１８）
融点１８８〜１９２。ＩＲ（ＫＢｒ）νｍａｘ：３２４４、３０７３、２９３１、１７０９、１６７９、１５３０、１３８９、１２４０、１２１０、１１２０、８３７ｃｍ−１ １Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）９．３２（ｓ，１Ｈ，Ｈ２）、９．００（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，Ｈ６）、８．８４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，Ｈ４）、８．２３（ｍ，１Ｈ，Ｈ５）、５．５０（ｓ，２Ｈ，−ＣＨ２ＣＯ）、３．６５（ｍ，１Ｈ，Ｎ−ＣＨ）、１．８７〜１．２５（ｍ，１１Ｈ，環−Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：１６３．６（ＣＯ−Ｏ）、１６３．５（ＣＯ−Ｎ）、１４９．７（Ｃ６）、１４７．９（Ｃ２）、１４６．４（Ｃ４）、１３１．０（Ｃ３）、１２８．３（Ｃ５）、６２．５（ＣＨ２−ＣＯ）、３９．７（ＣＨ）、３３．１（２ＣＨ２）、２５．９（ＣＨ２）、２５．２（２ＣＨ２）。ＭＳ：ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）２６３．３（Ｍ＋＋１）。
【０２５４】
３−カルボキシ−１−［（４−エチル−フェニルカルバモイル）−メチル］−ピリジニウム（１９）
融点２１０〜２１４。ＩＲ（ＫＢｒ）νｍａｘ：３４２４、３２４３、３１９０、３０６３、２９６２、２９３０、１７１７、１６９７、１６０８、１５４３、１３９２、１２５７、１１２５、８３４、６７０ｃｍ−１。１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：９．２９（ｓ，３．５２，Ｈ２）、８．９８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．７，Ｈ６）、８．９１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．５，Ｈ４）、８．１４（ｍ，１Ｈ，Ｈ５）、７．２８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，ＡｒＨ２，６）、７．１８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，ＡｒＨ３，５）、５．６０（ｓ，２Ｈ，−ＣＨ２ＣＯ）、２．４９（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７．６７Ｈｚ，−ＣＨ２  ＣＨ３）、１．０６（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．６７Ｈｚ，−ＣＨ３）。１３Ｃ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：１６３．６（ＣＯ−Ｏ）、１６３．４（ＣＯ−Ｎ）、１４９．９（Ｃ６）、１４８．３（Ｃ２）、１４６．７（Ｃ４）、１４０．０（Ｃ３）、１３６．５（ＡｒＣ１）、１３１．１（ＡｒＣ４）、１２８．４（Ｃ５）、１２８．８（ＡｒＣ３及びＣ５）、１１９．８（ＡｒＣ２及びＣ６）、６３．１（ＣＨ２−ＣＯ）、２８．５（ＣＨ２）、１６．５（ＣＨ３）。ＭＳ：ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）２８５．１（Ｍ＋＋１）。
【０２５５】
３−カルボキシ−１−［（２−ブロモ−フェニルカルバモイル）−メチル］−ピリジニウム（２０）
融点２１６〜２１８。ＩＲ：３１７７、３０５５、２７４３、１７２７、１６８７、１６０８、１５８８、１４７７、１２５３、１１３０、８５０；１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：９．３６（ｓ，１Ｈ，Ｈ−２）、９．０４（ｄ，Ｊ＝８．１，１Ｈ，Ｈ−６）、８．９９（ｄ，Ｊ＝５．６，１Ｈ，Ｈ−４）、８．２３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、７．６８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−３’）、７．３１（ｍ，３Ｈ，Ｈ−４’，５’，６’）、５．７０（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２−ＣＯ）、１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）１６３．５（ＣＯ−ＯＨ）、１６３．０（ＣＯ−ＮＨ）、１４７．５（Ｃ−２）、１４５（Ｃ−６）、１３９．３（Ｃ−３）、１３１．１（Ｃ−４）、１３０．０（ＡｒＣ１）、１２７．８（Ｃ−５）、１２６．６（ＡｒＣ３）、１２１．６（ＡｒＣ２）、１２０．９（ＡｒＣ４）、１１６．０（ＡｒＣ６）；ＭＳ  ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）３３５．１（Ｍ＋＋１）。
【０２５６】
３−カルボキシ−１−ジブチルカルバモイルメチル−ピリジニウム（２１）
融点；非結晶。ＩＲ：２９２４、２８５４、１７２０、１４５９、１３７７、１２１５；１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）９．２６（ｓ，１Ｈ，Ｈ−２）、９．１０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６）、８．９０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４）、８．２４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、５．８２（ｓ，２Ｈ，ＣＯＣＨ２）、３．４４（ｍ，４Ｈ，２ＣＨ２）、１．７２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、１．５４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、１．４０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、１．３０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、０．９２（ｍ，６Ｈ，２ＣＨ３）；１３Ｃ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：１６４．３（ＣＯ−Ｏ）、１６３．６（ＣＯ−Ｎ）、１４９．９（Ｃ−６）、１４８．２（Ｃ−２）、１４６．５（Ｃ−４）、１３１．０（Ｃ−３）、１２７．８（Ｃ−５）、６２．０（ＣＨ２−ＣＯ）、４７．３（ＣＨ）、４６．６（ＣＨ）、３０．９（ＣＨ２）、３０．１（ＣＨ２）、２０．５（ＣＨ２）、２０．４（ＣＨ２）、１４．７（ＣＨ３）、１４．６（ＣＨ３）；ＭＳ：ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）２９３（Ｍ＋＋１）。
【０２５７】
３−カルボキシ−１−［（３−メトキシ−ベンジルカルバモイル）−メチル］−ピリジニウム（２２）
融点１９４〜１９６。ＩＲ（ＫＢｒ）：３２１７、１７２２、１６７５、１５８８、１５５６、１３９７、１２５９、１１２９、７１３．３；１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：９．３３（ｓ，１Ｈ，Ｈ−２）、９．０７（ｄ，Ｊ＝７．８，１Ｈ，Ｈ−６）、８．９６（ｄ，Ｊ＝６．２，１Ｈ，Ｈ−４）、８．２４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、７．３７（ｍ，１Ｈ，ＡｒＨ−２）、６．９８（ｍ，３Ｈ，ＡｒＨ−４，５，６）、５．６２（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２−ＣＯ）、４．４７（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｎ）、３．８４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）；１３Ｃ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：１６４．２（ＣＯ−Ｏ）、１６３．１（ＣＯ−Ｎ）、１５８．２（ＡｒＣ３）、１４８．９（Ｃ６）、１４７．４（Ｃ２）、１４５．９（Ｃ４）、１３９．０（Ｃ３）、１３０．４（ＡｒＣ１）、１２９．４（ＡｒＣ５）、１２７．７（Ｃ５）、１１９．５（ＡｒＣ６）、１１３．２（ＡｒＣ４）、１１２．３（ＡｒＣ２）；ＭＳ：ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）３０１．０（Ｍ＋＋１）。
【０２５８】
３−カルボキシ−１−ジプロピルカルバモイルメチル−ピリジニウム（２３）
メタノール及びエーテルからの結晶化の後に、黄色のオイルが得られた。
融点：オイル。ＩＲ：３３９２、２９６４、２８７５、１７２９、１６４９、１４５８、１４３０、１３８５、１２４３、１２０７；１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：９．２３（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、９．０４（ｄ，Ｊ＝８．１，１Ｈ，Ｈ−２）、８．８７（ｄ，Ｊ＝５．１，１Ｈ，Ｈ−４）、８．２０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、５．８０（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２−ＣＯ）、３．３４（ｍ，４Ｈ，２ＣＨ２）、１．７１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、１．５４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、０．９２（ｔ，Ｊ＝７．４，ＣＨ３）、０．８２（ｔ，Ｊ＝７．４，ＣＨ３）。１３Ｃ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：１６４．７（ＣＯ−Ｏ）、１６４．６（ＣＯ−Ｎ）、１４８．６（Ｃ６）、１４７．４（Ｃ２）、１４６．８（Ｃ４）、１３２．１（Ｃ３）、１２８．１（Ｃ５）、６２．１（ＣＨ２−ＣＯ）、４９．４（ＣＨ２）、４８．９（ＣＨ２）、２１．４（ＣＨ２）、２０．４（ＣＨ２）、１０．９（ＣＨ３）、１０．７（ＣＨ３）；ＭＳ：ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）２６６．３（Ｍ＋＋１）。
【０２５９】
３−カルボキシ−１−デシルカルバモイルメチル−ピリジニウム（２４）
融点１８５〜１８６。ＩＲ：３２２９、３０７９、２９２４、１７２６、１６７９、１５５４、１３９４、１２２５、１１３０、８４６、７２３；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：９．５３（ｓ，１Ｈ，Ｈ−２）、９．１９（ｄ，Ｊ＝５．４，１Ｈ，Ｈ−６）、９．０３（ｄ，Ｊ＝８．１，１Ｈ，Ｈ−４）、８．７０（ｓ，ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．３１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、５．５７（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２−ＣＯ）、３．１３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｎ）、１．２４〜１．６１（ｍ，１６Ｈ，８ＣＨ２）、０．８３（ｍ，３Ｈ，ＣＨ３）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：１６４．５（ＣＯ−Ｏ）、１６３．６（ＣＯ−Ｎ）、１４９．７（Ｃ−６）、１４７．９（Ｃ−２）、１４６．４（Ｃ−４）、１３１．１（Ｃ−３）、１２８．８（Ｃ−５）、６２．４（ＣＨ２−ＣＯ）、３２．２（ＣＨ２−Ｎ）、２９．９（ＣＨ２）、２９．８（ＣＨ２）、２９．７（ＣＨ２）、２９．６（２ＣＨ２）、２７．２（ＣＨ２）、２３．０（ＣＨ２）、１４．９（ＣＨ３）；ＭＳ  ｍ／ｚ
【０２６０】
臭化１−アリル−３−カルボキシ−ピリジニウム（実施例１４）
【０２６１】
2007516964.tif 000027
ニコチン酸（１００ｍｇ、０．８１２ｍｍｏｌ）及び臭化アリル（７０μＬ、０．８１２ｍｍｏｌ）を通常のプロトコル下に反応させると、黄色の固体が得られ、これをメタノールから再結晶化させると、所望の４級化生成物が白色の固体 (１６５ｍｇ、８３％）として得られ、これは、δＨ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）９．２０（１Ｈ，ｓ，Ｈ２）、８．８１（２Ｈ，ｄ，Ｊ  ５．８，２×ＣＨ）、８．０（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ８．２，Ｈ５）、５．９１〜６．０１（１Ｈ，ｍ，：ＣＨ）、５．３７（２Ｈ，ａｐｐ  ｔ，Ｊ  １０．５，：ＣＨ２）及び５．１１（２Ｈ，ｄ，Ｊ  ６．２，ＣＨ２−Ｎ）。δＣ（１００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）１６１．０（Ｃ＝Ｏ）、１４２．７，１４１．９，１４１．６（全ＣＨ）、１２８．８（Ｃ−ＣＯ２Ｈ）、１２５．５，１２４．２（両ＣＨ）、１１９．４（：ＣＨ２）及び５９．７（ＣＨ２）。ｍ／ｚ［ＥＳ］１６４．０（Ｍ＋，５５％）を示した。
【０２６２】
ヨウ化１−プロピル−３−カルボキシ−ピリジニウム（実施例１５）
【０２６３】
2007516964.tif 000028
ニコチン酸（１００ｍｇ、０．８１２ｍｍｏｌ）及び２−ヨードプロパン（８０μＬ、０．８１２ｍｍｏｌ）を通常のプロトコル下に反応させると、黄色の固体が得られ、これをメタノールから再結晶化させると、所望の４級化生成物が白色の固体 (１８１ｍｇ、７６％）（融点１６２〜１６５℃）として得られ、これは、δＨ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）９．３０（１Ｈ，ｓ，Ｈ２）、８．９１〜８．９６（２Ｈ，ｍ，２×ＣＨ）、８．１０〜８．１７（１Ｈ，ｍ，Ｈ５）、４．６１（２Ｈ，ｔ，Ｊ  ７．４，ＣＨ２−Ｎ）、２．０３（２Ｈ，六重線，Ｊ  ７．４，ＣＨ２）及び０．９２（３Ｈ，ｔ，Ｊ  ７．４，ＣＨ３）。δＣ（１００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）１６５．１（Ｃ＝Ｏ）、１４６．２、１４４．８、１４２．９（全ＣＨ）、１３３．１（Ｃ−ＣＯ２Ｈ）、１２７．７（ＣＨ）、６３．０（ＣＨ２−Ｎ）、２３．５（ＣＨ２）及び８．９（ＣＨ３）。νｍａｘ／ｃｍ−１  ３３９６（ＣＯ２Ｈ）及び１６３６（Ｃ＝Ｏ）。ｍ／ｚ［ＥＳ］１６７（Ｍ＋，８０％）を示した。
【０２６４】
臭化１−ベンジル−３−カルボキシ−ピリジニウム（実施例１６）
【０２６５】
2007516964.tif 000029
ニコチン酸（１００ｍｇ、０．８１２ｍｍｏｌ）及び臭化ベンジル（０．１ｍＬ、０．８１２ｍｍｏｌ）を通常のプロトコル下に反応させると、黄色の固体が得られ、これを水から再結晶化させると、所望の４級化生成物が白色の固体 (２１９ｍｇ、９２％）（融点２０３〜２０５℃）として得られ、これは、δＨ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）９．３０（１Ｈ，ｓ，Ｈ２）、８．８０（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ５．９，Ｈ４）、８．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ８．２，Ｈ６）、８．０１（１Ｈ，ｍ，Ｈ５）、７．４３（５Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）及び５．８２（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２）。δＣ（１００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）１６６．１（Ｃ＝Ｏ）、１４６．３、１４５．９、１４５．５（全ＣＨ）、１３２．６（Ｃ−ＣＯ２Ｈ）、１３０．２、１２９．８、１２９．３、１２８．５（全ＣＨ）及び６５．０（ＣＨ２）。νｍａｘ／ｃｍ−１  ３４１６（ＣＯ２Ｈ）及び１６６８（Ｃ＝Ｏ）。ｍ／ｚ［ＦＡＢ＋］２１４．２（Ｍ＋＋Ｈ，１００％）を示した。
【０２６６】
ヨウ化１−カルバモイルメチル−３−カルボキシ−ピリジニウム（実施例１７）
【０２６７】
2007516964.tif 000030
ニコチン酸（１００ｍｇ、０．８１２ｍｍｏｌ）及び２−ヨードアセトアミド（１５０ｍｇ、０．８１２ｍｍｏｌ）を通常のプロトコル下に反応させると、黄色のオイルが得られ、これをジクロロメタンから再結晶化させると、所望の４級化生成物が黄色の固体 (１７５ｍｇ、７０％）（融点２２３〜２２５℃）として得られ、これは、δＨ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）９．２４（１Ｈ，ｓ，Ｈ２）、９．０（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ８．２，Ｈ６）、８．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ４．８，Ｈ４）、８．１４〜８．２０（１Ｈ，ｍ，Ｈ５）及び５．５６（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２）。δＣ（１００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）１６９．５、１６７．３（両Ｃ＝Ｏ）、１４９．３、１４８．６、１４８．１（全ＣＨ）、１３５．６（Ｃ−ＣＯ２Ｈ）、１２９．５（ＣＨ）及び６３．２（ＣＨ２）。νｍａｘ／ｃｍ−１  ３３７９（ＣＯ２Ｈ）、１７０１（ＣＯ−ＮＨ２）及び１６６５（Ｃ＝Ｏ）。ｍ／ｚ［ＦＡＢ＋］１８１．２（Ｍ＋＋Ｈ，１００％）を示した。
【０２６８】
ヨウ化３−カルバモイル−１−カルバモイルメチル−ピリジニウム（実施例１８）
【０２６９】
2007516964.tif 000031
ニコチンアミド（５００ｍｇ、４．０６ｍｍｏｌ）及びヨードアセトアミド（７６４ｍｇ、４．０６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ中、５０℃で一晩攪拌した。次いで、溶媒を蒸発させ、残留物をメタノール／エーテルから結晶化させると、黄色の固体が得られ、これは、δＨ（２７０ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）９．２４（１Ｈ，ｓ，Ｈ２）、８．９５〜８．９３（２Ｈ，ｍ，Ｈ４及びＨ６）、８．２３〜８．１７（１Ｈ，ｍ，Ｈ５）及び５．５６（２Ｈ，ｓ，ｐｙ−ＣＨ２）。δＣ（６５ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）１６７．３（Ｃ＝Ｏ）、１４８．２、１４６．１、１４５．２（全ＣＨ）、１３３．９（Ｃ）、１２８．３（ＣＨ）及び６２．０（ＣＨ２）。ｍ／ｚ［ＦＡＢ＋］１８０．０（Ｍ＋，１００％）［実測値１８０．０７８０  Ｍ＋。Ｃ６Ｈ１０Ｎ２Ｏ３Ｉの計算値１８０．０７８１］を示した。
【０２７０】
ヨウ化５−ブロモ−１−カルバモイルメチル−３−カルボキシ−ピリジニウム（実施例１９）
【０２７１】
2007516964.tif 000032
５−ブロモニコチン酸（５０ｍｇ、０．２４７ｍｍｏｌ）及びヨードアセトアミド（４５ｍｇ、０．２４７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍＬ）中、暗所で、５０℃で一晩攪拌した。溶媒を減圧下に蒸発させ、残留物をＭｅＯＨ／Ｅｔ２Ｏから結晶化させると、所望の生成物が茶色のガム状物（４８ｍｇ、５１％）として得られ、これは、δＨ（２７０ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）９．６６（１Ｈ，ｓ，Ｈ２）、９．４６（１Ｈ，ｍ，Ｈ６）、９．１５（１Ｈ，ｍ，Ｈ４）及び５．５８（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２）。ｍ／ｚ［ＦＡＢ＋］２６０．０（Ｍ＋，６０％）［実測値２６０．０６３４  Ｍ＋。Ｃ８Ｈ８７９ＢｒＮ２Ｏ３の計算値２６０．０６４８］を示した。
【０２７２】
ヨウ化１−カルバモイルメチル−３−［１−（２−ニトロフェニル）−エトキシカルボニル］−ピリジニウム（実施例２０）
【０２７３】
2007516964.tif 000033
ニコチン酸１−（２−ニトロ−フェニル）−エーテルエステル（３００ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）及びヨードアセトアミド（２０４ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を暗所で５０℃で一晩攪拌した。次いで、溶媒を減圧下に蒸発させ、残留物をＭｅＯＨ／エーテルから再結晶化させると、所望の生成物が黄色の固体として得られ、これは、δＨ（２７０ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）９．４６（１Ｈ，ｓ，Ｈ２）、９．１４（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ８．１，ＣＨ）、９．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ５．９，ＣＨ）、８．３１〜８．２６（１Ｈ，ｍ，ＣＨ）、８．０（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ８．１，ＣＨ）、７．８５（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ８．１，ＣＨ）、７．７６〜７．７０（１Ｈ，ｍ，Ｈ４）、７．５７〜７．５２（１Ｈ，ｍ，ＣＨ）、６．５６（１Ｈ，ｑ，Ｊ  ６．３，ＣＨ−Ｍｅ）５．６４（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２）及び１．８２（３Ｈ，ｔ，Ｊ  ６．３，ＣＨ３）。δＣ（６５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１６１．８（Ｃ＝Ｏ）、１４９．２、１４７．３、１４６．８（全ＣＨ）、１３７．３（Ｃ）、１３５．７（Ｃ）、１３４．５、１２９．５、１２８．３、１２７．６、１２４．７（全ＣＨ）、７２．１、６１．９及び２０．９（ＣＨ３）。ｍ／ｚ［ＦＡＢ＋］２７３．１（Ｍ＋＋Ｈ，１００％）［実測値２７３．０８７１  Ｍ＋＋Ｈ。Ｃ１４Ｈ１３Ｎ２Ｏ４の計算値２７３．０８７３］を示した。
【０２７４】
［Ｅ］Zincke反応によるピリジニウムの合成
塩化３−カルバモイル−１−（２，４−ジニトロ−フェニル）−ピリジニウム（Zincke塩）
ニコチンアミド（０．５ｇ、４．０ｍｍｏｌ）を２，４−ジニトロクロロベンゼン（２．５ｇ、１２ｍｍｏｌ）と混合した。次いで、この混合物を９０℃で２時間加熱した。冷却した後に、残留物をメタノール（３ｍｌ）に溶かし、次いで、エーテル（４０ｍｌ）を加えた。得られた固体を濾過し、再び、メタノール（３ｍｌ）に、次いでエーテル（４０ｍｌ）に再び溶かし、この手順を４回繰り返した。固体を濾過し、真空中で乾燥させた。オレンジ色のフォームが収率７６％で得られた。
ＩＲ：１６９０、１６１６、１５４３、１３４７、１２０２、７０４；１Ｈ  ＮＭＲ（２７０  ＭＨＺ，ＣＤ３ＯＤ）：９．７４（ｓ，１Ｈ，Ｈ２）、９．３９（ｄｄ，Ｊ  ６．２及び１．３，１Ｈ，Ｈ４）、９．２５（ｄｄ，Ｊ  ８．４及び１．３，１Ｈ，Ｈ６）、９．２２（ｄ，Ｊ  ２．６，１Ｈ，ＡｒＨ）、８．８６（ｄｄ，Ｊ  ８．８及び２．６，１Ｈ，ＡｒＨ）、８．４２（ｄｄ，Ｊ  ８．４及び６．２，１Ｈ，Ｈ５）及び８．３０（ｄ，Ｊ  ８．８，１Ｈ，ＡｒＨ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００．４ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：１６５．０（ＣＯ）、１４９（Ｃ−２’）、１４７（Ｃ−４’）、１４７．５（Ｃ−４’）、１４５．７（Ｃ−６’）、１４２．９（Ｃ−２’）、１３８（Ｃ−３’）、１３４．２（Ｃ−１’）、１３１．４（Ｃ−５）、１３１．０（Ｃ−６’）、１２８（Ｃ−５’）、１２２．９（Ｃ−３’）；ＭＳ：ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）２８９（Ｍ＋＋１）、２７３（Ｍ＋−ＮＨ２）。
【０２７５】
Zincke反応の手順
アミン（１１８ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）を無水メタノール（２０ｍｌ）に溶かした。この溶液に、Zincke塩（２６）（２７０ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）を加えた。生じた暗赤色の溶液を室温で５時間攪拌した（色は暗赤色から黄色へ）。溶媒を除去すると、粗製生成物が得られ、次いでこれを、フラッシュクロマトグラフィー又は結晶化により精製した。
【０２７６】
１−ブチル−３−カルバモイル−ピリジニウム
粗製生成物をメタノール／エーテルから結晶化させた。黄色の固体が収率７５％で得られた。融点：２０５〜２０７℃（メタノール／エーテルから結晶化させた）；ＩＲ：１６６９、１６４７．８、１４５７、１４０３、１２０４；１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：９．３０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−２）、９．００（ｄ，Ｊ＝８．１，１Ｈ，Ｈ−６）、８．８７（ｄ，Ｊ＝８．２，１Ｈ，Ｈ−４）、８．１７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、４．６６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、２．０１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、１．３８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、０．９３（ｍ，３Ｈ，ＣＨ３）；ＭＳ：ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）１７９．０（Ｍ＋＋１）。Ｍ／ｚ  Ｃ１０Ｈ１５Ｎ２Ｏの計算値１７９．１１８４  実測値１７９．１１７８。
【０２７７】
３−カルバモイル−１−シクロヘキシル−ピリジニウム
粗製生成物を、メタノール及びエーテルから結晶化させた。黄色の固体は収率６７％で得られた。融点：２７５〜２７６℃（メタノール／エーテルから結晶化させた）；ＩＲ：３２７８、３１３７、２８５７、１６９５、１６４４、１５９０、１５１２、１４５３、１４０７、１１４２、６７９；１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：９．１２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−２）、８．９５（ｄ，Ｊ＝８．１，１Ｈ，Ｈ−６）、８．７７（ｄ，Ｊ＝８．２，１Ｈ，Ｈ−４）、８．０１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、１．１３〜２．０５（ｍ，１１Ｈ，環−Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００．４ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：１６３．３（ＣＯ）、１４５．６（Ｃ−４）、１４４．６（Ｃ−６）、１４３．９（Ｃ−２）、１３４．５（Ｃ−３）、１２８．６（Ｃ−５）、７２．０（Ｃ−１’）、３３．１（Ｃ−２’及びＣ−６’）、２５．８（Ｃ−３’及びＣ−５’）、２４．９（Ｃ−４’）；ＭＳ：ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）２０５．０（Ｍ＋＋１）。Ｍ／ｚ  Ｃ１２Ｈ１７Ｎ２Ｏの計算値２０５．１３４１  実測値２０５．１３３９。
【０２７８】
３−カルボキシ−１−フェニル−ピリジニウム
ＤＣＭ：メタノール  ５：２で溶離するフラッシュクロマトグラフィーにより、粗製生成物を精製した。黄色の固体が収率８３％で得られた。分析データを、メタノール及びエーテルからの結晶化により得た。
融点：２３５〜２３７℃（メタノール／エーテルから結晶化させた）、ＩＲ：３３７０、３１４０、１６８７、１４９１、１３９８、１２５６、７６６、６８０；１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：９．５５（ｓ，１Ｈ，Ｈ−２）、９．２７（ｄ，Ｊ＝５．５，１Ｈ，Ｈ−６）、９．０６（ｄ，Ｊ＝８．１，１Ｈ，Ｈ−４）、８．３４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、７．７５（ｓ，５Ｈ，ＡｒＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００．４ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：１６５．７（ＣＯ）、１４６．７（Ｃ−４）、１４４．９（Ｃ−６）、１４４．５（Ｃ−２）、１３４．０（ＡｒＣ１）、１３２．０（Ｃ−５）、１３０．６（ＡｒＣ２及びＣ６）、１２８．５（ＡｒＣ４）、１２４．２（ＡｒＣ３及びＡｒＣ５）；ＭＳ：ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）１９９．１（Ｍ＋＋１）。Ｃ１２Ｈ１１Ｎ２Ｏ  １９９．０８７１  実測値１９９．０８７１。
【０２７９】
３−カルバモイル−１−デシル−ピリジニウム
粗製生成物をメタノール及びエーテルから結晶化させた。黄色のオイルが得られ、これを、シリカカラム（ＤＣＭ：メタノール  ５：１）によりさらに精製した。収率６６％。
ＩＲ：３２５７、３０７５、２９２０、２８５２、１７０３、１５１２、１４５１、１４０７、１３３５、１１４４、８０５、６７９；１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：９．２９（ｓ，１Ｈ，Ｈ−２）、９．００（ｄ，Ｊ＝６．０，１Ｈ，Ｈ６）、８．８８（ｄ，Ｊ＝８．３，１Ｈ，Ｈ４）、８．１７（ｄｄ，Ｊ＝８．３，６．０，１Ｈ，Ｈ５）、４．７８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｎ）、３．３３（ＭｅＯＨ）、２．０５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、１．２３（ｍ，１４Ｈ，７ＣＨ２）、０．８３（ｍ，３Ｈ，ＣＨ３）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００．４ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：１６５．３（ＣＯ）、１４６．６（Ｃ４）、１４４．３（Ｃ２）、１４３．９（Ｃ６）、１３４．０（Ｃ３）、１２８．６（Ｃ５）、６２．７（ＣＨ２−ＣＯ）、３１．７（ＣＨ２）、３１．２（ＣＨ２）、２９．３（ＣＨ２）、２９．２（ＣＨ２）、２９．１（ＣＨ２）、２８．８（ＣＨ２）、２５．８（ＣＨ２）、２２．６（ＣＨ２）、１３．９（ＣＨ３）；ＭＳ：ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）２６３．０（Ｍ＋＋１）。Ｍ／ｚ  Ｃ１６Ｈ２７Ｎ２Ｏの計算値２６３．２１２３  実測値２６３．２１２６。
【０２８０】
３−カルバモイル−１−（２−ヒドロキシ−１−ヒドロキシメチル−２−フェニル−エチル）−ピリジニウム
フラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ：メタノール  ５：１）の後に、黄色のオイルが収率１００％で得られた。
ＩＲ：３３５０、３１５８、１７０２、１６４６、１４４８、１４０１、１２８９、１０１９、６７８；１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：９．２７（ｓ，１Ｈ，Ｈ２）、９．０４（ｄ，Ｊ＝６．２，１Ｈ，Ｈ−６）、８．９４（ｄ，Ｊ＝８．４，１Ｈ，Ｈ−４）、８．１８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、７．３５（ｍ，５Ｈ，ＡｒＨ）、５．４５（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−Ｎ）、５．１２（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−ＯＨ）、４．１４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２−ＯＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００．４ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：１６５．７（ＣＯ）、１４６．４（Ｃ４）、１４４．９（Ｃ２）、１４４．１（Ｃ６）、１３８．３（ＡｒＣ１）、１３３．７（Ｃ３）、１２９．２（ＡｒＣ３及びＣ５）、１２８．２（Ｃ５）、１２６．１（ＡｒＣ２及びＣ６）、１２６．７（ＡｒＣ４）；ＭＳ：ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）２７３．１（Ｍ＋＋１）。ＨＰＬＣ：１０．２０（ＲＰ−１８，ＷＬ  ２５４  アセトニトリル／水勾配５〜５％）。Ｍ／ｚ  Ｃ１５Ｈ１７Ｎ２Ｏ３の計算値２７３．１２３９  実測値２７３．１２３８。
【０２８１】
３−カルボキサミド加水分解のための手順
３−カルバモイル−１−（２−ヒドロキシ−１−ヒドロキシメチル−２−フェニル−エチル）−ピリジニウム（２００ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）に濃ＨＣｌ（３ｍｌ）を加えた。次いで、この反応混合物を環流まで２時間加熱し、次いで、室温に一晩維持した。溶媒を除去すると、粗製生成物が得られ、これをアセトンから結晶化させると、黄色の固体が８０％を上回る収率で得られた。
【０２８２】
３−カルボキシ−１−（２−ヒドロキシ−１−ヒドロキシメチル−２−フェニル−エチル）−ピリジニウム
ＩＲ：１７３１、１６３６、１４０２、１２９８、１１７３、１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：９．２７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−２）、９．０２（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６及び４）、８．１６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、７．５４〜７．３０（ｍ，５Ｈ，ＡｒＨ）、５．４８（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−Ｎ）、５．１２（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−ＯＨ）、４．１２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２−ＯＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００．４ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：１６５．６（ＣＯ）、１４６．６（Ｃ４）、１４６．５（Ｃ２）、１４５．３（Ｃ６）、１３８．３（ＡｒＣ１）、１２９．２（ＡｒＣ３及びＣ５）、１２８．１（Ｃ５）、１２６．１（ＡｒＣ２及びＣ６）７９．２（ＣＨ−Ｎ）、６９．８（ＣＨ２−ＯＨ）、６０．３（ＣＨ−ＯＨ）；ＭＳ：ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）２７４（Ｍ＋＋１）。ｍ／ｚ  Ｃ１５Ｈ１６ＮＯ４の計算値２７４．１０７４  実測値２７４．１０７７。ＨＰＬＣ：７．４５分（ＲＰ−１８，ＷＬ  ２５４  アセトンニトリル／水勾配５〜５０％）。
【０２８３】
３−カルボキシ−１−シクロヘキシル−ピリジニウム
アセトンからの結晶化の後に、黄色の固体が得られた。収率８０％。融点：２３５〜２３７、１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：９．５６（ｓ，１Ｈ，Ｈ−２）、９．４９（ｄ，Ｊ＝５．５，１Ｈ，Ｈ−６）、８．９４（ｄ，Ｊ＝８．１，１Ｈ，Ｈ−４）、８．２８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、４．８６（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−１’）、２．１４〜１．０７（ｍ，１１Ｈ，環−Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００．４ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：１６３．６（ＣＯ）、１４６．５（Ｃ−４）、１４５．９（Ｃ−６）、１４５．６（Ｃ−２）、１３１．８（Ｃ−３）、１２９．１（Ｃ−５）、７１．９（Ｃ−１’）、３３．１（Ｃ−２’及びＣ−６’）、２５．８（Ｃ−３’及びＣ−５’）、２４．８（Ｃ−４’）；ＭＳ：ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）２０６．１（Ｍ＋＋１）。
【０２８４】
溶媒系中でのピリジニウム塩の合成（実施例２１）
モデル化合物（III）。
【０２８５】
2007516964.tif 000034
（III）
【０２８６】
ピリジニウム塩の合成を、（ａ）に示した。
【０２８７】
2007516964.tif 000035
（ａ）溶媒系中でのピリジニウム塩の合成
【０２８８】
ブロモアセチルアミドをエーテル中、−１０℃で収率６０〜８０％で調製し［１］、次のアルキル化反応をＤＭＦ中、６０〜７０℃で暗所で実施した。
【０２８９】
2007516964.tif 000036
（ｂ）アミドのリスト
【０２９０】
2007516964.tif 000037
（ｂ）ピリジニウム塩のリスト
【０２９１】
ピリジニウム塩のＨＰＬＣ（実施例２２）
ＨＰＬＣ［２］（ＲＰ−１８；ＷＬ２５４、流速：１ｍｌ／分；アセトニトリル／水５〜５０％勾配）により、ピリジニウム塩の純度を決定した。結果のいくつかを、図５に示す。
【０２９２】
生物学的データ（実施例２３）
生物学的データを図１から４に示す。これらの実験を、前記の図の説明に記載されているように実施した。
【０２９３】
無損傷ウニ卵子におけるＮＰＥ−ＮＡＡＤＰの光分解に応答してのカルシウム放出に対する、外部施与されたＣＭＡ００８の効果（実施例２４）
LYtechinus pictusのウニ卵子を、人工海水（ｍＭで、ＮａＣｌ４３５、ＭｇＣｌ２４０、ＭｇＳＯ４  １５、ＣａＣｌ２１１、ＫＣｌ１０、ＮａＨＣＯ３２．５、ＥＤＴＡ  １）に０．５ＭのＫＣｌシェッド（shed）を体腔内注射することにより得て、９０ｍｍナイロンメッシュに通して脱ゼリー化（dejellied)し、次いで、遠心分離により２回洗浄した。微量注射及び顕微鏡検査のために、卵子をポリリシンコーティングされたカバーガラスに移した。オレゴングリーン４８８ＢＡＰＴＡ（１，２−ビス（２−アミノフェノキシ）エタン−Ｎ，Ｎ，Ｎ９，Ｎ９−テトラ酢酸デキストラン；Molecular Probes）を圧力微量注射した（Picospritzer; World Precision Instruments）。励起のためにアルゴンイオンレーザーの４８８ｎｍラインを使用して、カルシウム反応性染料をレーザー走査共焦点顕微鏡（Leica model ＴＣＳ  ＮＴ）によりイメージングし、発光をロングパスフィルタリング（long passfiltered）（５１５ｎｍ）し、光電子増倍管で検出した。ケージドＮＡＡＤＰ（２９Ｐ−（１−（２−ニトロフェニル）エチル）ＮＡＡＤＰ；分子プローブ）を高速液体クロマトグラフィーによりさらに精製して、少量の汚染性遊離ＮＡＡＤＰを除去した。ケージドＮＡＡＤＰを、石英ファイバー光学ケーブルにより走査ヘッドに向けられたアルゴンイオンレーザー（Enterprize model 651; Coherent）からの紫外線（３５１ｎｍ及び３６４ｎｍライン）で光分解した。光分解の空間的位置を、紫外線レーザーの光通路に置かれているシャッターを介して制御した。これにより、イメージにわたってＵＶバンドが生じ、バンドの位置及び幅は、制御可能であった。共焦点イメージを、ソフトウェアのＮＩＨ  Imageで処理すると、ピクセルベースによるピクセルでの各イメージの強度（Ｆ）を刺激前に必要なイメージ強度（Ｆ０）で割ることにより自己比が得られた。Ｆ／Ｆ０の時間経過を、時間に対してプロットする。結果は、光分解性ＮＰＥ−ＮＡＡＤＰの作用に対する、外部施与されたＣＭＡ００８の作用を示している。ＣＭＡ００８（１０ｍＭ）は、無損傷ウニ卵子におけるカルシウム放出に対するＮＰＥ−ＮＡＡＤＰ（１μＭ）の光分解の作用をブロックし、これは、ＣＭＡ００８の膜透過の観念を支持する。これらの実験のための生物学的データを、図６に示す（前記の図の説明も参照）。
【０２９４】
単一細胞イメージング測定からの、膵臓腺房細胞におけるＣａ２＋のＣＣＫ誘発振動に対する外部施与されたＣＭＡ００８（ヨウ化１−カルバモイルメチル−３−カルボキシ−ピリジニウム）の作用（実施例２５）
膵臓腺房細胞をポリリシンコーティングされた１番ガラスカバーに播種し、細胞を１〜５ｍＭのfura−２アセトキシメチルエステル（Molecular Probes; Leiden、Holland）と共に室温で６０分間インキュベーションすることによりカルシウムインジケーターを負荷した。負荷期間の後に、続けて、細胞を洗浄し、室温で緩衝液中に維持し、直ちに使用した。細胞を３４０ｎｍ及び３８０ｎｍ光で交互に励起させ（発光５１０ｎｍ）、１２ビットＣＣＤカメラ（MicroMax; Princeton Instruments、ＮＪ）を使用して、クラスター５の比イメージを４〜５秒毎に記録した。
【０２９５】
すべての実験は室温で行った。ＣＭＡ００８（ヨウ化１−カルバモイルメチル−３−カルボキシ−ピリジニウム）を５０％ＤＭＳＯに溶かした。ＤＭＳＯの最終濃度は、溶液中０．５％であった（ｍＭでの組成：ＮａＣｌ１４０、ＫＣｌ４．７、ＣａＣｌ２１、ＭｇＣｌ２１．１３、ＨＥＰＥＳ１０、グルコース１０、７．２にｐＨ調節）。ＣＣＫ誘発カルシウムスパイクの阻害は、ＣＣＫ（５ｐＭ）に関して前施与でも後施与でも、ＣＭＡ００８（１ｍＭ）によるＮＡＡＤＰ−誘発カルシウム放出の阻害と一致した。これらの実験のための生物学的データを、図７に示す（前記の図の説明も参照）。
【０２９６】
概要
新規のメカニズムにより、ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸により制御される特異的な貯蔵からの細胞内カルシウム放出を調節する新規化学実体が記載されている。これらの小分子は、細胞透過性であり、特に、哺乳動物β細胞でのカルシウムスパイクを調節することが判明した。ＮＡＡＤＰ仲介カルシウム貯蔵は、脳、心臓、膵臓腺房及びＴ細胞を含む幅広い哺乳動物細胞に存在する。したがって、これらの化合物及び関連化合物は、新規の治療薬、及びバイオアッセイのためのプローブとして適用することができる。
【０２９７】
関連生物学的補基質ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰ）が示すカルボキサミドと異なり、ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＡＤＰ）は、ピリジニウムの３位にカルボキシレートを示す。最近、低濃度のＮＡＡＤＰ（約１００ｎＭ）は、ｃＡＤＰＲ又は１，４，５−ＩｎｓＰ３などの他の第２の化学的メッセンジャーにより処理されない個々の細胞内貯蔵からのカルシウムの放出をもたらすことが明らかになった。近縁類似体であるにもかかわらず、ＮＡＤＰは、活性ではない。近縁関連ＮＡＡＤＰ類似体に関する研究により、ニコチン酸位置での著しい特異性が確認された。著しい特異性は往々にして、リガンドとの強い結合相互作用をもたらすサブサイトを伴い、本発明者らは、小分子類似体は、このようなサブサイトで結合し、天然リガンドと競合することにより、新規の生物学的メカニズムの調節剤として潜在的に作用することを論証した。
【０２９８】
ニコチン酸の単純なピリジニウム塩を調製したが、これは、ウニホモジネート、さらに哺乳動物膵臓細胞などのモデル系でカルシウム放出を調節することが判明した。本化合物を、細胞外に施与したが、強力な活性が証明され、これらが細胞透過性であることが確認された。
【０２９９】
これらの新規の分子は、リガンドのニコチン酸部位との結合をもたらすサブサイトでＮＡＡＤＰ受容体に結合することにより作用すると考えられている。
【０３００】
このような化合物は、受精能、インスリン産生、Ｔ細胞活性化、心筋収縮の頻度の制御及び脳細胞の活性化などの多くの重要な生物学的プロセスを制御するために重要なカルシウムシグナルを調節することにより作用する新規の治療薬を開発するための強力なベースをもたらす。
【０３０１】
本明細書に記載の化学実体は、アッセイのために使用することもできるし、それ自体を、この重要な生物学的経路を遮断及び制御する新規の薬剤へと開発することもできる。異常な細胞内カルシウムシグナリングを特徴とする疾患の例は多く、糖尿病が含まれるが、Ｔ細胞の活性化の際のカルシウムの役割により、免疫系を制御する展望が提供されている。ＮＡＡＤＰ受容体が、脳で活性であることが判明していることは、神経疾患を制御する有望な役割を示唆している。
【０３０２】
記載の化学実体は潜在的に、異常なＮＡＡＤＰ誘発カルシウム放出に基づく疾患を調節するために適用可能である。化合物の一般的な構造は、ニコチン酸／アミド誘導体に関して関連結合部位を特徴とする他の生物学的ターゲットに適用することもできる。
【０３０３】
参考文献
[1] T. Hamas, D. A. Culkin, J. F. Hartwig, J. Am. Chem. Soc., 2003, 125 (37), 11176-11177.
[2] M. A. Lago, T. T. Nguyen, P. Bhatnagar, Tetrahedron Lett. 1998, 39, 3885-3888.
【０３０４】
前記明細書に記載のすべての刊行物は、参照により本明細書に援用される。本発明の記載の方法及び系の様々な変更及びバリエーションが、本発明の範囲及び意図から逸脱することなく、当技術分野の専門家には明らかであろう。本発明を好ましい実施形態に関して記載したが、請求の発明を、このような特殊な実施形態に不当に制限すべきでないことを理解されたい。実際に、本発明を実施するために記載の方式を様々に変更することは、化学、分子生物学又は関連分野の専門家には明らかであり、添付の請求項の範囲内であることとする。
【図面の簡単な説明】
【０３０５】
【図１】０．５％ウニ卵子ホモジネートへの［３２Ｐ］ＮＡＡＤＰ結合を示すグラフである。  ［３２Ｐ］ＮＡＡＤＰ（０．２ｎＭ）の拮抗ＣＭＡ００８（ヨウ化１−カルバモイルメチル−３−カルボキシ-ピリジニウム）置換。試料をＧｌｕＩＭ（細胞内培地）中で希釈し、示されている濃度のＣＭＡ００８と共に１０分間予備インキュベーションし、次いで、０．２ｎＭの［３２Ｐ］ＮＡＡＤＰを加え、室温でさらに１５分間インキュベーションする。試料をWhatman ＧＦ／Ｂフィルターで濾過して、結合及び遊離［３２Ｐ］ＮＡＡＤＰリガンドに分離する。非特異的結合を、１０μＭのＮＡＡＤＰの存在下にホモジネートをインキュベーションすることにより定義する。ｎ＝２。データを、全結合に対するフラクションとして表す。図１中の挿入図は、ニコチン酸を加えても（１ｍＭまで）、［３２Ｐ］ＮＡＡＤＰと卵膜との結合に影響はないことを示している。
【図２】ＣＭＡ００８（ヨウ化１−カルバモイルメチル−３−カルボキシピリジニウム）は、ウニ卵子ホモジネートにおける、ＮＡＡＤＰ仲介カルシウム放出の阻害を示すグラフである。  試料を、再生系の存在下にＧｌｕＩＭ中で２．５％まで希釈し、３時間攪拌しながら、１７℃に維持して、貯蔵へのカルシウム取り込みを容易にする。カルシウム放出を、５２６ｎｍでのＦｌｕｏ−３蛍光の上昇を測定することにより決定した。データを、ＣＭＡ００８（ヨウ化１−カルバモイルメチル−３−カルボキシピリジニウム）の不在下での２５０ｎＭのＮＡＡＤＰカルシウム放出に対する％として表す。ＣＭＡ００８は、ＩＣ５０＝１５．１３μＭでＮＡＡＤＰカルシウム可動化を阻害する。ＣＭＡ００８は、ＩＰ３又はｃＡＤＰＲ（挿入）による全カルシウム可動化に対して作用を有さず、このことは、ＮＡＡＤＰ感受性放出メカニズムへのこの化合物の選択性を示している。
【図３】未標識ＮＡＡＤＰの上昇濃度の存在下での、［３２Ｐ］ＮＡＡＤＰの拮抗に対するＣＭＡ００８（ヨウ化１−カルバモイルメチル−３−カルボキシピリジニウム）の効果を示すグラフである。  ２．５％のウニ卵子ホモジネートをＧｌｕＩＭ中で希釈し、示されている濃度のＣＭＡ００８と共に室温で１０分間予備インキュベーションする（Ａ＝１００ｎＭ、Ｂ＝１ｎＭ、Ｃ＝１０μＭ）。続いて、［３２Ｐ］ＮＡＡＤＰを加え、試料をさらに室温で１５分間インキュベーションした。試料をWhatman GF/Bフィルターで濾過し、結合及び遊離［３２Ｐ］ＮＡＡＤＰリガンドに分離する。ＣＭＡ００８は、ＢｍａｘをＣＭＡ００８の不在下での全特異的結合６８．６５％±２．７から１０μＭのＣＭＡ００８の存在下での４６．２８％±２．６１まで低下させた。１ｎＭ及び１００ｎＭのＣＭＡ００８は、Ｂｍａｘに対して作用を有しなかった。いずれの試験濃度でも、ＮＡＡＤＰに関してＩＣ５０では効果はなかった。ｎは、各点で２から６である。
【図４】膵臓腺房細胞におけるＣａ２＋のＣＣＫ誘発振動に対するＣＭＡ００８（ヨウ化１−カルバモイルメチル−３−カルボキシピリジニウム）の効果を示すグラフである。  膵臓腺房細胞をポリ−リシンコーティングされているナンバー１カバーガラスに播種し、細胞を１〜５μＭのｆｕｒａ−２アセトキシメチルエステル（Molecular Proves; Leiden、Holland）と共に室温で６０分間インキュベーションすることにより負荷した。負荷期間の後に続いて、細胞を洗浄し、緩衝液中、室温で保持し、即座に使用した。３４０及び３８０ｎｍ光（発光５１０ｎｍ）で交互に細胞を励起させ、１２ビットＣＣＤカメラ（MicroMax; Princeton Instruments、ＮＪ）を使用して、クラスターの比画像を４〜５秒毎に記録した。すべての実験を室温で行った。ＣＭＡ００８（ヨウ化１−カルバモイルメチル−３−カルボキシピリジニウム）を５０％ＤＭＳＯに溶かす。ＤＭＳＯの最終濃度は、溶液中０．５％である（ｍＭでの組成：ＮａＣｌ１４０、ＫＣｌ４．７、ＣａＣ１２  １、ＭｇＣｌ２  １．１３、ＨＥＰＥＳ１０、グルコース１０、ｐＨを７．２に調整）。
【図５】ピリジニウム塩のＨＰＬＣを示すグラフである。
【図６】ＣＭＡ００８の外部施与を用いての、無損傷ウニ卵子（カルシウムリポーター染料のカルシウムグリーンデキストランを負荷されている）中にケージドＮＡＡＤＰの脱ケージングに応答してのカルシウム放出の全廃を示すグラフである。  ウニ卵子に、カルシウムリポーター染料のカルシウムグリーンデキストランを含有する溶液をケージドＮＡＡＤＰと共に微量注射した。次いで、４８８ｎｍの励起波長を使用して、Leica共焦点顕微鏡で、蛍光をイメージングした。対照卵子［図６Ａ参照］では、短時間のＵＶフラッシュが、一定割合のケージドＮＡＡＤＰを光分解し、多大なカルシウム過渡を誘発した。しかしながら、ＣＭＡ００８（１０ｍＭ）［図６Ｂ参照］を含有する海水と共に卵子をインキュベーションすると、光分解によるＮＡＡＤＰの遊離は、カルシウム放出を誘発することはできなかった。このことは、ＣＭＡ００８は、細胞膜を透過し、ＮＡＡＤＰ誘発カルシウム放出を阻害することを示している。
【図７】単離されたマウス膵臓細胞におけるコレシストキニン（ＣＣＫ）誘発カルシウム振動（ＮＡＡＤＰシグナリングに依存）の、ＣＭ００８の外部施与による阻害又は低減を示すグラフである。  痕跡は、Ｃａ２＋染料蛍光を示している。  膵臓腺房細胞をマウスから単離し、コラゲナーゼ処理により分散させる。細胞をｆｕｒａ−２ＡＭと共に３０分間インキュベーションし、洗浄し、その後、Metafluor系でイメージングした。細胞を３４０／３８０ｎｍで交互に励起させ、放射される光を約５１０ｎｍで集めた。２種の励起波長で放出された光の強度の比を算出し、遊離カルシウム濃度に変換し、時間に対してプロットした。  図７Ａでは、ペプチドコレシストキニン（ＣＣＫ；５ｐＭ）を細胞に加えると、アゴニストの継続存在下にカルシウムスパイクの確実な連続が生じる。しかしながら、ＣＭＡ００８（１ｍＭ）を浴溶液に加えると（即ち、ＣＣＫ付加後）、ＣＣＫ誘発カルシウムスパイクの阻害が生じる。図７Ｂでは、ＣＭＡ００８（１ｍＭ）を初めに、培地に加えると（即ち、ＣＣＫ付加前）、残りのカルシウムレベルに明らかな作用はない。しかしながら、ＣＣＫを適用すると、ＣＣＫに対してかなり小さい応答が見られ、その際、頻度はかなり低減される。ＮＡＡＤＰは、ＣＣＫ仲介カルシウムシグナリングのための重要なメッセンジャーであるので、ＣＭＡ００８は、膵臓腺房細胞に入ることができ、その際、ＮＡＡＤＰ誘発カルシウム放出をブロックしうるようである。
【図１】
2007516964.tif 000049
【図２】
2007516964.tif 000050
【図３】
2007516964.tif 000051
【図４】
2007516964.tif 000052
【図５】
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【図６】
2007516964.tif 000054
【図７】
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【国際調査報告】
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