(57)【要約】  一般式Ｚ−（Ｌ）ｎ−Ｖの医薬品。式中、Ｖは、アミノ酸配列Ｘ１−Ｘ２−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０を表し、Ｌは、結合又はリンカーを表し、Ｚは、適宜イメージング部分Ｍを担持することができる基を表し、Ｘ１はアミノ酸を表し、Ｘ２はＡｒｇ又はＮ−アルキル化Ａｒｇ又はＡｒｇ類似体を表し、Ｘ８とＸ９とＸ１０とが一緒にＡＣＥ切断部位をなし、Ｚは適宜リンカーＬを介してアミノ酸Ｘ１と結合を形成し、Ｍは、画像診断法で直接又は間接的に検出し得る造影性基を表す。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の一般式（Ｉ）で特徴付けられる医薬品。
Ｚ−Ｌ−Ｖ  （Ｉ）
式中、
Ｖは、結合配列−Ｘ１−Ｘ２−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０を有するペプチドを表し、
Ｌは結合又はリンカーを表し、
Ｚは、造影基Ｍを適宜担持し得る基を表し、
ｎは０又は１であり、
Ｘ１はアミノ酸を表し、
Ｘ２はＡｒｇ又はＮ−アルキル化Ａｒｇ又はＡｒｇ類似体を表し、
Ｘ８はＧｌｙ又はＰｈｅ又は芳香族もしくは脂肪族側鎖を有するアミノ酸を表し、
Ｘ９及びＸ１０は各々独立に、Ｐｒｏ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｔｒｐ、Ａｓｐ又はＬｙｓを表し、Ｘ８とＸ９とＸ１０は一緒にＡＣＥ切断部位をなし、
それぞれ３位及び５位のＶａｌ残基及びＩｌｅ残基は架橋形成し得るアミノ酸で適宜置き換えられていてもよく、
Ｚは適宜リンカーＬを介してアミノ酸Ｘ１と結合を形成し、
Ｍが存在する場合は画像診断法で直接又は間接的に検出し得る造影性基を表す。
【請求項２】
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ８、Ｘ９、Ｘ１０のアミノ酸が各々独立に
Ｇｌｙを表すＸ１、
Ａｒｇ又はＮ−メチル−Ａｒｇを表すＸ２、
Ｐｈｅを表すＸ８、
Ｐｒｏ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｔｒｐ、Ａｓｐ又はＬｙｓを表すＸ９、及び
Ｐｒｏ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｔｒｐ、Ａｓｐ又はＬｙｓを表すＸ１０
から選択される、請求項１記載の医薬品。
【請求項３】
式（Ｉ）のＶ基及びＬ基のいずれかの位置に結合した１以上のバイオモディファイヤー基をさらに有する、請求項１又は請求項２記載の医薬品。
【請求項４】
Ｚがキレート剤を表す、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載の医薬品。
【請求項５】
Ｚが次の式（ＶＩＩ）のキレート剤を表す、請求項４記載の医薬品。
【化１】
2007526300.tif 000015
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は各々独立にＨ又はＣ１〜１０アルキル、Ｃ３〜１０アルキルアリール、Ｃ２〜１０アルコキシアルキル、Ｃ１〜１０ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜１０アルキルアミン、Ｃ１〜１０フルオロアルキルであるか、或いは２以上のＲ基がそれらに結合した原子と共に炭素環、複素環、飽和又は不飽和環を形成するものである。
【請求項６】
Ｍが、検出可能な放射線を放射する成分もしくは放射を誘起する成分、局所電磁場に影響を与える成分、放射エネルギーを吸収又は散乱する成分、重金属及びその化合物、及び検出可能な物質を生成する成分を含む、診断、特にインビボ診断用の造影性基を表す、請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載の医薬品。
【請求項７】
Ｍが、６７Ｇａ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、８１ｍＫｒ、９９Ｍｏ、９９ｍＴｃ、２０１Ｔｌ及び１３３Ｘｅを含む、放射線又はＳＰＥＣＴイメージング用のγ放射性成分を表す、請求項６記載の医薬品。
【請求項８】
Ｍが、１１Ｃ、１８Ｆ、６８Ｇａ、１３Ｎ、１５Ｏ及び８２Ｒｂを含む、ＰＥＴイメージング用の陽電子放出性をもつ放射体を表す、請求項６記載の医薬品。
【請求項９】
請求項１記載の式（Ｉ）の医薬品を、薬学的に許容される１種以上の添加剤及び／又は賦形剤と共に含んでなる医薬組成物。
【請求項１０】
ペプチド−キレートコンジュゲート及び還元剤を含む、式（Ｉ）の放射性医薬組成物の調製用キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、心不全、心不整脈その他繊維化の顕著な疾患の治療、並びに心不全その他線維化の顕著な疾患の診断での使用に適した新規医薬品に関する。具体的には、本発明は、アンジオテンシンＩＩ受容体ＡＴ１の上方制御及びアンジオテンシン変換酵素ＡＣＥに関連する疾患の治療及び診断に有用な医薬品に関する。本発明の医薬品は、インビボでのＡＣＥによる切断によって活性型（すなわちＡＴ１ターゲティング型）に変換される。
【０００２】
ＡＴ１受容体をターゲティングする造影剤の使用によって検出し得る疾患は、鬱血性心不全（ＣＨＦ）、動脈硬化症その他線維形成過程の顕著な疾患及び病態である。
【０００３】
本医薬品は、ＡＣＥ切断部位を有するアンジオテンシンＩ（ＡｎｇＩ）類似ペプチドを含んでおり、さらに、診断用造影性基を担持し得る基及び任意要素としてのリンカーを含む。ＡＣＥでの切断後、アンジオテンシンＩＩ（ＡｎｇＩＩ）類似体と診断用造影性基を担持し得る基と適宜リンカーを含む活性医薬品が形成される。本造影剤は、アンジオテンシン受容体、特にアンジオテンシンＩＩタイプ１（ＡＴ１）受容体に親和性を有する。
【背景技術】
【０００４】
オクタペプチド（Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ）であるアンジオテンシンＩＩ（ＡｎｇＩＩ）は、２種類の異なる受容体：ＡｎｇＩＩタイプ１（ＡＴ１）及びタイプ２（ＡＴ２）受容体に結合する多面的な血管作用性ペプチドである。レニン−アンジオテンシン−アルドステロン系（ＲＡＡＳ）の活性化は、血管肥厚、血管収縮、塩分・水分の保持及び高血圧を生じる。これらの作用は主にＡＴ１受容体によって媒介される。細胞死、血管拡張及びナトリウム利尿を始めとするその他のＡｎｇＩＩ媒介作用はＡＴ２受容体の活性化によって媒介される。ＡｎｇＩＩ情報伝達メカニズムは未だ充分に解明されていない。ＡＴ１受容体の活性化は、チロシンキナーゼ誘導タンパク質リン酸化、アラキドン酸代謝物の産生、反応性酸化性種の活性変化及び細胞内Ｃａ２＋濃度の流動など様々な細胞内系を引き起こす。ＡＴ２受容体の活性化はブラジキニンの刺激、一酸化窒素産生及びプロスタグランジン代謝を促進するが、これらの大部分はＡＴ１受容体の作用とは逆である（Ｂｅｒｒｙ  Ｃ，  Ｔｏｕｙｚ  Ｒ，  Ｄｏｍｉｎｉｃｚａｋ  ＡＦ，  Ｗｅｂｂ  ＲＣ，  Ｊｏｈｎｓ  ＤＧ．：  Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ２００１  Ｄｅｃ；２８１（６）：Ｈ２３３７−６５．  Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ，  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｗｉｔｈ  ｃｅｒａｍｉｄｅ参照）。
【０００５】
ＡｎｇＩＩはレニン−アンジオテンシン−アルドステロン系（ＲＡＡＳ）の活性成分であり、血圧、血漿量、交感神経系及び口渇反応の調節に重要な生理学的役割を果たす。ＡｎｇＩＩは、心肥大、心筋梗塞、高血圧、慢性閉塞性肺疾患、肝線維症及びアテローム性動脈硬化症における病態生理学的役割も有する。ＡｎｇＩＩは、体系的には古典的ＲＡＡＳを介して産生され、局所的には組織ＲＡＡＳを介して産生される。古典的ＲＡＡＳでは、循環系中の腎由来のレニンが肝由来のアンジオテンシノーゲンを切断してデカペプチドのＡｎｇＩを生じ、ＡｎｇＩは肺でＡＣＥによって活性型ＡｎｇＩＩへと変換される。ＡｎｇＩは組織エンドペプチダーゼによってヘプタペプチドＡｎｇ−（１−７）へと分解されることもある。
【０００６】
ＲＡＡＳ系を本明細書の図１に図解するが、この図はＦｏｏｔｅ他の報文Ａｎｎ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ．  ２７：  １４９５−１５０３  （１９９３）の図１に基づくものである。
【０００７】
ＲＡＡＳが正常な心血管ホメオスタシスに重要な役割を果たすことに加えて、ＲＡＡＳの過剰活性は高血圧、鬱血性心不全、冠動脈虚血及び腎不全などの様々な循環器疾患の発症に関与している。心筋梗塞（ＭＩ）後、ＲＡＡＳは活性化される。具体的には、ＭＩ後及び左心室機能障害においてＡＴ１受容体の発現が増大するので、ＡＴ１受容体は心筋梗塞後のリモデリングに重要な役割を果たしているらしい。したがって、ＡＣＥ阻害剤やＡＴ１受容体拮抗剤のようなＲＡＡＳを阻害する薬剤は、かかる循環器疾患の処置に多大な治療効果をもつことが示されている。
【０００８】
ＡＣＥ及びＡＴ１受容体の発現とコラーゲン形成の正常及び病的発現とが解剖学的に同時に認められる。高密度のＡＣＥ及びＡｎｇＩＩ受容体の結合は活性コラーゲン代謝回転の指標である。弁尖、外膜及び様々な線維組織形成部位にみられるα−ＳＭＡ含有線維芽細胞様細胞は、ＡＣＥ、ＡＴ１受容体及び線維性コラーゲンをコードする遺伝子を発現する。したがって、筋線維芽細胞（ＭｙｏＦｂ）を、それ自体のコラーゲン代謝回転を調節する「代謝体」とみなすことができる。
【０００９】
ＡＣＥ結合密度は主にＭｙｏＦｂの存在に関係する。ＡＣＥ陽性細胞の消失又はその絶対数の減少は線維化部位でのＡＣＥ結合密度を減少させる。陳旧性サルコイド肉芽腫の場合がそうである。ラットの梗塞心臓におけるＡＣＥ及びＡｎｇＩＩ受容体の結合密度はいずれもＭＩ後何カ月も高いままであり、ＡＣＥ活性についても同様である。各々、梗塞部位でのＭｙｏＦｂの持続と一致する（Ｗｅｂｅｒ，  Ｋ．Ｔ．：  Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｍａｔｒｉｘ  Ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ  ｉｎ  Ｈｅａｒｔ  Ｆａｉｌｕｒｅ：  Ａ  Ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  Ｄｅ  Ｎｏｖｏ  Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ＩＩ  Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，  Ｖｏｌｕｍｅ  ９６（１１），  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２，  １９９７，  ４０６５−４０８２）。
【００１０】
心臓、腎臓、肺及び肝臓などでは、線維症がそれらの臓器不全に共通した経路である。そこで、臓器の線維症に関与する病態生理学的機序を理解することは、特に予防薬理学的戦略の可能性を前提とすると、極めて重要である。組織修復には、組織修復の開始に不可欠な単球／マクロファージ系の細胞、コラーゲン代謝及び線維組織形成を担う筋線維芽細胞、表現型形質転換間質性線維芽細胞を始めとする炎症細胞が関与する。修復のミクロ環境下におけるこれらの細胞での各事象は、ＡｎｇＩＩの新規産生を促す分子事象を伴う。このペプチドは、自己分泌／傍分泌により、アンジオテンシン（ＡＴ１）受容体−リガンド結合を介してトランスフォーミング増殖因子β１（ＴＧＦ−β１）の発現を調節する。線維芽細胞から筋線維芽細胞（ｍｙｏＦｂ）への表現型の変化に寄与し、筋線維芽細胞でのコラーゲン代謝回転を調節するのはこのサイトカインである。ＡＣＥ阻害又はＡＴ１受容体拮抗作用は各々、線維症を生ずるこれらの分子及び細胞応答の多くを阻害し、予防処置となることが判明している（Ｗｅｂｅｒ  ＫＴ．  Ｆｉｂｒｏｓｉｓ，  ａ  ｃｏｍｍｏｎ  ｐａｔｈｗａｙ  ｔｏ  ｏｒｇａｎ  ｆａｉｌｕｒｅ：  ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ＩＩ  ａｎｄ  ｔｉｓｓｕｅ  ｒｅｐａｉｒ．  Ｓｅｍｉｎ  Ｎｅｐｈｒｏｌ．  １９９７  Ｓｅｐ；１７（５）：４６７−９１及びその引用文献参照）。
【００１１】
ＡｎｇＩＩは、間葉細胞の活性化により組織線維症を制御し得る。例えば、ＡｎｇＩＩは、インビトロでＡＴ１の活性化を介して心線維芽細胞の増殖を刺激する。ＡＴ１受容体の存在はインビトロで心線維芽細胞でも示されている。ＡｎｇＩＩの線維化促進作用の多くはこの受容体で媒介されると思われるが、心線維芽細胞でのＡＴ２の発現増大がヒトの肥大心臓で検出されており、これらの２つのサブタイプの発現のバランスがＡｎｇＩＩに対する応答を決定する上で重要となろう（Ａｍ．  Ｊ．  Ｒｅｓｐｉｒ．  Ｃｒｉｔ．  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．，  Ｖｏｌｕｍｅ  １６１，  Ｎｕｍｂｅｒ  ６，  Ｊｕｎｅ  ２０００，  １９９９−２００４：  Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ＩＩ  Ｉｓ  Ｍｉｔｏｇｅｎｉｃ  ｆｏｒ  Ｈｕｍａｎ  Ｌｕｎｇ  Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ  ｖｉａ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｔｙｐｅ  １  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｐ．  Ｍａｒｓｈａｌｌ，  Ｒｏｂｉｎ  Ｊ．  ＭｃＡｎｕｌｔｙ，  ａｎｄ  Ｇｅｏｆｆｒｅｙ  Ｊ．  Ｌａｕｒｅｎｔ及びその引用文献参照）。
【００１２】
ＡｎｇＩＩ受容体は、特異的拮抗剤による阻害によって識別することができる。ＡＴ１受容体は、ロサルタンのようなビフェニルイミダゾールによる選択的な拮抗作用を受けるのに対して、テトラヒドロイミダゾピリジンはＡＴ２受容体を特異的に阻害する。また、ＡＴ２受容体はＣＧＰ−４２１１２Ａによって選択的に活性化し得る。これはＡｎｇＩＩのヘキサペプチドアナログであり、濃度に応じてＡＴ２受容体を阻害し得る。その他ＡＴ３及びＡＴ４サブタイプという２種類のアンジオテンシン受容体が報告されている。
【００１３】
齧歯類では、ＡＴ１受容体には機能的に異なる２つのサブタイプＡＴ１Ａ及びＡＴ１Ｂがあり、これらは９５％を超えるアミノ酸配列相同性を有する。
【００１４】
アンジオテンシン受容体の第二の主要なアイソフォームはＡＴ２受容体である。これはＡＴ１Ａ及びＡＴ１Ｂ受容体とのアミノ酸配列相同性が低い（約３４％）。ＡＴ２受容体の正確な情報伝達経路及び機能的役割は不明であるが、これらの受容体は生理的条件下で、細胞増殖を阻害し、アポトーシス及び血管拡張を誘発することによってＡＴ１媒介作用と拮抗し得る。循環器疾患におけるＡＴ２受容体の正確な役割は未だ解明されていない。
【００１５】
ＡＴ１及びＡＴ２以外にも、ＡｎｇＩＩの受容体が知られており、一般にＡＴａｔｙｐｉｃａｌと呼ばれる（Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｈｅａｒｔ  Ｊ．  １２７：  １３８８−１４０１  （１９９４）参照）。
【００１６】
ＡｎｇＩＩの作用の抑制は、例えば高血圧及び心不全の管理などの治療に利用されている。これは、アンジオテンシノーゲンからＡｎｇＩ（ＡｎｇＩＩの前駆体）への変換を遮断するレニン阻害剤の使用、ＡｎｇＩからＡｎｇＩＩへの変換を遮断するアンジオテンシン変換酵素阻害剤（ＡＣＥ−Ｉ）（これはブラジキニン及びプロスタグランジンの生物変換も遮断する）の使用、抗ＡｎｇＩＩ抗体の使用、並びにＡｎｇＩＩ受容体拮抗剤の使用などの幾つかの方法で達成されている。
【００１７】
不整脈の治療にはβ遮断薬が最も一般的に用いられている。抗不整脈薬は全体として限られた成功しか得られておらず、カルシウムチャネル遮断薬は不整脈を誘発することがある。卓越した薬剤は一つとしてなく、唯一例外があるとすればアミオダロンであろう。抗不整脈薬の短期的効果は、薬剤の種類にもよるが、死亡率に対する中立的又は負の効果によって相殺されることが判明している（Ｓａｎｇｕｉｎｅｔｔｉ  ＭＣ  ａｎｄ  Ｂｅｎｎｅｔｔ，  ＰＢ：  Ａｎｔｉ−ａｒｒｈｙｔｈｍｉｃ  ｄｒｕｇ  ｔａｒｇｅｔ  ｃｈｏｉｃｅｓ  ａｎｄ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ．  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００３，  ９３（６）：  ４９１−９２５７−２６３）。優れた抗不整脈薬が必要とされていることは明らかである。
【００１８】
Ｌａｎｃｅｔの報文（Ｌｉｎｄｈｏｌｍ，  ＬＨ  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｌｏｓａｒｔａｎ  ｏｎ  ｓｕｄｄｅｎ  ｃａｒｄｉａｃ  ｄｅａｔｈ  ｉｎ  ｐｅｏｐｌｅ  ｗｉｔｈ  ｄｉａｂｅｔｅｓ：  ｄａｔａ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ＬＩＦＥ  ｓｔｕｄｙ．  Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ，  ２００３，  ３６２：  ６１９−６２０）では、ＡＴ１受容体拮抗剤が、ＣＨＦ罹患者に概して有効であるだけでなく、心臓突然死の発生率も低減することが明らかにされている。心筋梗塞に起因する不整脈又はＬＡＤ結紮後の再潅流における不整脈に関してＡＴ１拮抗剤が抗不整脈作用をもつことを示す研究が幾つか存在する（Ｈａｒａｄａ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ＩＩ  Ｔｙｐｅ  １ａ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｓ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ  ｏｆ  ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  ａｒｒｈｙｔｈｍｉａｓ．  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．  １９９８，９７：  ３１５−３１７、Ｏｚｅｒ  ＭＫ  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｃａｐｔｏｐｒｉｌ  ａｎｄ  Ｌｏｓａｒｔａｎ  ｏｎ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｉｓｃｈｅｍｉａ−ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｒｒｈｙｔｈｍｉａｓ  ａｎｄ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ２００２，  ４５  （４），  ２５７−２６３、Ｌｙｎｃｈ  ＪＪ  ｅｔ  ａｌ．  ＥＸＰ３１７４，  ｔｈｅ  Ａｌｌ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ｈｕｍａｎ  ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ  ｏｆ  Ｌｏｓａｒｔａｎ，  ｂｕｔ  ｎｏｔ  Ｌｏｓａｒｔａｎ  ｎｏｒ  ｔｈｅ  Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ−ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ  ｅｎｚｙｍｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｃａｐｔｏｐｒｉｌ，  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｌｅｔｈａｌ  ｉｓｃｈｅｍｉｃ  ａｒｒｈｙｔｈｍｉａｓ  ｉｎ  ａ  ｃａｎｉｎｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｒｅｃｅｎｔ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ．  ＪＡＣＣ，  １９９９，  ３４  ８７６−８８４）。
【００１９】
ＡｎｇＩＩをそのアミノ酸組成の変更によって強力な拮抗薬又は部分拮抗薬に変えることができる。例えば８位のフェニルアラニンをイソロイシンで置換し、１位のアスパラギン酸をサルコシンで置換すると、ペプチドは強力な拮抗剤に変化する。
【００２０】
４位及び６位のアミノ酸の環化又は架橋によって、ＡＴ１受容体に対する特異性を高めることができる。同様に、１位にサルコシンを導入し、８位にグリシンを導入すると、ペプチドはＡＴ１選択的拮抗剤になる（ＲＣ  Ｓｐｅｔｈ．  Ｓａｒｃｏｓｉｎｅ１１，  ｇｌｙｃｉｎｅ８  ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ＩＩ  ｉｓ  ａｎ  ＡＴ１  ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ＩＩ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｂｔｙｐｅ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ａｎａｔａｇｏｎｉｓｔ）．  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  １１５  （２００３）  ２０３−２０９参照）。
【００２１】
前述の通り、ＡＴ１受容体の本来のリガンドは、オクタペプチドＡｎｇＩＩ（Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ）であり、ナノモル範囲でＡＴ１受容体に結合する
ある受容体の本来の結合リガンドを、ある基、特に比較的に大きく比較的嵩高い基の結合によって修飾すると、ペプチドベクターの親和性が損なわれることが多い。
【００２２】
関連する従来技術
国際公開第９８／１８４９６号（Ｎｙｃｏｍｅｄ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ＡＳ）には、ベクター−リンカー−リポーター構造を含む造影剤が開示されており、該ベクターはアンジオテンシン又はペプチド系アンジオテンシン誘導体を含む。
【００２３】
米国特許第４４１１８８１号（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）には、放射性標識化合物の安定化について記載されている。放射性標識化合物の例として、例えばアンジオテンシンＩＩ（５−Ｌ−イソロイシン）［チロシル−１２５Ｉ］−（モノヨウ化物）が挙げられている。
【特許文献１】国際公開第９８／１８４９６号パンフレット
【特許文献２】米国特許第４４１１８８１号明細書
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００２４】
本発明は、心不全、心不整脈その他の繊維化の顕著な疾患、例えばＣＯＰＤ、肝線維症及びアテローム性動脈硬化症の治療に有用な医薬品であって、ＡＣＥによって、ＡＴ１受容体に対して天然オクタペプチドＡｎｇＩＩよりも高い結合親和性を示すターゲティング造影剤及び治療用ターゲティング医薬品へと変換される、ＡｎｇＩ又はその誘導体からなるペプチド部分を含む医薬品を提供する。この医薬品は拮抗活性を示すべきである。
【００２５】
本発明は、さらに、心不全その他の繊維化の顕著な疾患（例えばＣＯＰＤ、肝線維症及び動脈硬化症）の診断に有用な医薬品であって、ターゲティング部分に造影性基が導入された医薬品を提供する。造影性基は、患者に投与したときに患者の少なくともその造影剤が分布した部分の画像を、例えば放射線イメージング、ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ、ＭＲＩ、Ｘ線、光学イメージング（ＯＩ）、超音波（ＵＳ）、電気インピーダンス又は磁気的イメージングモダリティで生成することができる造影性基であればよい。本発明の医薬品のペプチド部分はＡｎｇＩ又はその誘導体であり、インビボでＡＣＥによってＡｎｇＩＩ又はその誘導体へと変換される。ＡＣＥで切断されると、医薬品はターゲティング造影剤及び／又は疾患治療用のターゲティング医薬品になる。造影性基が導入されたターゲティング部分は、ＡＴ１受容体に対してＡｎｇＩＩよりも高い結合親和性を示すべきであり、好ましくは拮抗剤として作用すべきであるが、作用活性の弱いものでも許容し得る。
【００２６】
本新規医薬品は、画像診断用に適した造影性基を有しているときには、当該医薬品を治療薬として逐次又は同時に使用できる。
【００２７】
本発明のその他の実施形態として、高血圧、線維症、ＣＯＰＤ及び関連疾患の治療法、心不全及び線維症のイメージング法、かかる疾患及び障害並びに関連血管疾患及び障害の治療経過のモニタリング法の提供が挙げられる。本発明はさらに、新規医薬組成物及び診断薬調製用の前駆体を提供する。診断薬のキット、特に放射性診断薬の調製用キットも提供される。
【００２８】
本発明の医薬品はペプチドＶと任意要素たるリンカーＬとＺ基とを含んでおり、次の式（Ｉ）で表すことができる。
【００２９】
Ｚ−Ｌ−Ｖ  （Ｉ）
式中、
Ｖは、結合配列−Ｘ１−Ｘ２−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０を有するペプチドを表し、
Ｌは結合又はリンカーを表し、
Ｚは、造影基Ｍを適宜担持し得る基を表し、
Ｘ１はアミノ酸を表し、
Ｘ２はＡｒｇ又はＮ−アルキル化Ａｒｇ又はＡｒｇ類似体を表し、
Ｘ８はＧｌｙ又はＰｈｅ又は芳香族もしくは脂肪族側鎖を有するアミノ酸を表し、
Ｘ９及びＸ１０は各々独立に、Ｐｒｏ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｔｒｐ、Ａｓｐ又はＬｙｓを表し、Ｘ８とＸ９とＸ１０は一緒にＡＣＥ切断部位をなし、
それぞれ３位及び５位のＶａｌ残基及びＩｌｅ残基は架橋形成し得るアミノ酸で適宜置き換えられていてもよく、
Ｚは適宜リンカーＬを介してアミノ酸Ｘ１と結合を形成し、
Ｍが存在する場合は画像診断法で直接又は間接的に検出し得る造影性基を表す。
【００３０】
コラーゲン形成領域では、正常及び病的コラーゲン形成のいずれにおいても、ＡＣＥ及びＡＴ１受容体の発現が増大する。本発明の医薬品は、ＡＣＥ切断部位を有するＡｎｇＩ又はその誘導体のペプチド部分を有する。このＡｎｇＩは、インビボでＡＣＥによって切断され、ＡｎｇＩＩへと変換される。今回、本発明者らは、このようなＡｎｇＩのＡＣＥによる切断で得られるＡｎｇＩＩで、そのペプチドの特定の位置が置換されたものが、その結合能力を保持したまま、ＡｎｇＩＩ受容体、特にＡＴ１受容体に対する親和性が驚異的に増大するという予想外の知見を得た。
【００３１】
本発明の医薬品は、ＡＴ１受容体の密度が上昇した部位でＡＣＥによって、その活性型（そのペプチド部分がＡｎｇＩＩ類似体であるもの）に変換される。
繊維組織形成部位において増大した密度のＡＣＥ及びＡＴ１受容体が同時に局在化することから、本発明の医薬品は、ＡＴ１受容体密度の高い部位で活性ターゲティング型が形成されるという利点をもたらす。こうして、活性ＡｎｇＩＩ類似体はその形成部位においてＡＴ１受容体に結合し、循環しないので、身体の他の部分での望ましくない全身作用が防止される。
【００３２】
本発明の医薬品は、イメージングにおける信号対雑音比つまり心肝比に優れる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３３】
本発明は特許請求の範囲に記載されている。本発明の具体的な特徴については、以下の詳細な説明及び実施例で概説する。
【００３４】
式（Ｉ）のターゲティング部分において、Ｖはペプチド配列−Ｘ１−Ｘ２−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０を表す。
【００３５】
式（Ｉ）のペプチドＶにおいて、特記しない限り、アミノ酸は天然ＡｎｇＩＩと同様にＬ−アミノ酸である。
【００３６】
アミノ酸について用いる３文字略号は以下の意味を有する。
Ａｒｇ＝アルギニン
Ａｓｐ＝アスパラギン酸
Ｃｙｓ＝システイン
Ｈｃｙ＝ホモシステイン
Ｇｌｙ＝グリシン
Ｓａｒ＝サルコシン
Ｖａｌ＝バリン
Ｔｙｒ＝チロシン
Ｉｌｅ＝イソロイシン
Ｇｌｕ＝グルタミン酸
Ｌｙｓ＝リジン
Ｈｉｓ＝ヒスチジン
Ａｌａ＝アラニン
Ｌｅｕ＝ロイシン
Ｉｌｅ＝イソロイシン
Ｍｅｔ＝メチオニン
Ｔｒｐ＝トリプトファン
Ｐｒｏ＝プロリン
Ｐｈｅ＝フェニルアラニン
Ａｂｕ＝２−アミノ酪酸
Ｎｖａ＝２−アミノペンタン酸
Ｎｌｅ＝２−アミノヘキサン酸
Ｐｈｇ＝２−アミノ−２−フェニル酢酸
Ｈｐｈ＝２−アミノ−４−フェニルブタン酸
Ｂｉｐ＝２−アミノ−３−ビフェニルプロピオン酸
Ｎａｌ＝２−アミノ−３−ナフチルプロピオン酸
Ｃｈａ＝２−アミノ−３−シクロヘキシルプロピオン酸。
【００３７】
Ｖのアミノ酸は好ましくは以下の通り独立に選択される。
Ｘ１は−ＮＹ１−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯ−（式中、ｍは１〜１０の整数であり、Ｙ１はＨ又はアルキルもしくはアリール含有置換基である。）を表し、最も好ましくはＧｌｙであり、
Ｘ２はＡｒｇ又はＮ−メチル−Ａｒｇ或いはＡｒｇ類似体のＰｈｅ［４−グアニジノ］及びＧｌｙ−４−ピペリジル［Ｎ−アミジノ］を表し、
Ｘ８は芳香族又は脂肪族側鎖を有するアミノ酸、好ましくはＰｈｅ、Ｐｈｇ、Ｈｐｈ、Ｂｉｐ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ｔｒｐ又はＮａｌ、最も好ましくはＰｈｅを表し、
Ｘ９及びＸ１０は各々独立にＰｒｏ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｔｒｐ、Ａｓｐ又はＬｙｓを表す。
【００３８】
さらに好ましいのは、Ｘ１がＧｌｙを表し、Ｘ２がＡｒｇを表し、Ｘ８がＰｈｅを表し、Ｘ９がＰｈｅ、Ｌｅｕ又はＡｌａを表し、Ｘ１０が、Ｐｈｅ、Ａｌａ又はＨｉｓを表す医薬品である。
【００３９】
３位及び５位のアミノ酸が架橋単位を形成するように選択される場合、架橋は好ましくは−ＣＨ２−ＣＨ２−、−Ｓ−ＣＨ２−、−Ｓ−ＣＨ２−Ｓ−、ラクタム又は−Ｓ−Ｓ−単位を含む。さらに好ましくは、共有結合は２つのシステイン又はホモシステイン対の酸化によって形成されるジスルフィド結合である。
【００４０】
適当なリンカーＬの例は、国際公開第９８／１８４９６号及び国際公開第０１／７７１４５号（２３〜２７頁）に記載されており、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。Ｌは、好ましくは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）のようなポリアルキレングリコール単位、炭水化物、デキストラン又は１〜１０個のアミノ酸又は１〜５個のアミノ酸を表すものでもよい。リンカーは、例えば国際公開第０３／００６４９１号に記載されているようなバイオモディファイヤーとして作用するものでもよい。
【００４１】
リンカーＬはアルキルアミン又はアリールアミン、好ましくは式ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−の化合物（適宜−ＣＯ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯ−と結合したものでもよい。）から誘導されるものでもよい。式中、ｍは１〜１０の正の整数を表す。
【００４２】
リンカーは、後記の式ＩＶで定義される１以上のＰＥＧ単位を含んでもよい。式中、ｎは１〜１０の整数である。
【００４３】
最も好ましいのは、式（Ｘ）及び（ＶＩ）で定義されるリンカーである。
【００４４】
【化１】
2007526300.tif 000002
部分Ｚは、分子量５０Ｄ（ダルトン）超、さらに好ましくは１００〜１０００Ｄ、さらに一段と好ましくは３００〜７００Ｄの非ペプチド部分を含む。ＡＣＥによる切断後に得られる式（Ｉ）のターゲティング部分がＡＴ１受容体に対して天然リガンドＡｎｇＩＩよりも高い結合親和性を示すものであれば、部分Ｚは薬学的に許容されるどんな化学種でもよい。具体的には、Ｚは、リンカーＬと反応又は直接ペプチドＶと反応して安定な共有結合を形成し得る適当な官能基を有する有機基を表す。
【００４５】
Ｚは直鎖又は枝分れヒドロカルビル基であってもよく、適宜１以上の二重結合又は三重結合を含んでいてもよいし、適宜ハロゲン、酸素、硫黄又はリン原子で置換されていてもよいし、適宜酸素、窒素又は硫黄のようなヘテロ原子を含んでいてもよい。具体的には、ヒドロカルビル基は、分子量５０Ｄ以上の置換又は非置換アルキル、アルケニル、アルキニル基であってもよい。
【００４６】
Ｚは、単環式、二環式又は三環式環系を含む１以上の結合炭素環基であってもよく、かかる環系は飽和、部分不飽和又は芳香環のいずれでもよいし、置換又は非置換のいずれでもよく、分子量は５０Ｄ以上である。かかる環系の例は、アリール、アラルキル、シクロヘキシル、アダマンチル及びナフチルである。
【００４７】
Ｚは五、六、七、八、九、十員環系のような１以上の結合複素環化合物であってもよく、かかる環系は単環式、二環式又は三環式環系のいずれでもよいし、１以上のＮ、Ｏ、Ｓ及びＰをヘテロ原子として含んでいてもよい。かかる環系はさらに、前記のヒドロカルビル基及び炭素環基と結合していてもよいし、炭素環基と縮合していてもよい。かかる基の例は、アクリジニル、ベンゾフラニル、インドリル、ピリジル、ピペリジニル、モルホリジニル及びチエニルである。
【００４８】
Ｚはさらに、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及びポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）のようなポリアルキレングリコール、単糖、多糖のような炭水化物であってもよく、これらはすべて５０Ｄ超の分子量を有する。ポリアルキレングリコールはバイオモディファイヤーとして作用するものでもよい。
【００４９】
具体的には、Ｚは、例えば米国特許第４６４７４４７号（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧ）及び国際公開第８６／０２８４１号（Ｎｙｃｏｍｅｄ  Ｓａｌｕｔａｒ，Ｉｎｃ．）に記載の非環式又は環式ポリアミノカルボキシレート（例えばＤＴＰＡ、ＤＴＰＡ−ＢＭＡ、ＤＯＴＡ及びＤＯ３Ａ）のようなキレート剤を表し、これらの開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。その他のキレート剤として、国際公開第０１／７７１４５号（この文献の表Ｉ参照）に記載のジアミンジチオールのようなアミンチオール、アミンオキシム、ヒドラジン及び関連試薬を含んでいてもよく、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。以下に示す式ＶＩＩＩのキレート剤ｃＰＮ２１６が特に好ましい。
【００５０】
治療に有用な医薬品では、Ｚは上述のいずれであってもよい。
【００５１】
診断、特にインビボ診断に有用な医薬については、部分Ｚは、Ｍで表す造影性基を担持できるものでなければならない。担持とは、化学結合（例えば共有結合、電気原子価結合又はイオン結合）又は吸着その他の種類の会合など、成分ＺとＭとのあらゆる形態の結合を意味する。
【００５２】
好ましい一実施形態では、Ｚ基はＸ１と直接共有結合してＮ−アルキルグリシン単位を形成する。
【００５３】
後記の式（ＶＩＩ）及び（ＶＩＩＩ）のキレート剤も特に好ましい。
【００５４】
Ｍはどのような造影性基であってもよい。Ｍの性状は、診断に利用されるイメージングモダリティに依存する。Ｍはインビボ画像診断で直接又は間接的に検出できるものでなければならず、例えば、検出可能な放射線を（放射性崩壊、蛍光励起、スピン共鳴励起などによって）放射する成分もしくは放射を誘起する成分、局所的電磁場に影響を与える成分（例えば、常磁性、超常磁性、フェリ磁性もしくは強磁性種）、放射線エネルギーを吸収又は散乱する成分（例えば、発色団、粒子（気体又は液体含有ベシクルを含む）、重元素及びその化合物など）、並びに検出可能な物質を生成する成分（例えば、気体マイクロバブル発生剤）などである。
【００５５】
多種多様な適当な造影性基が知られており、例えば国際公開第９８／１８４９６号に記載されており、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。
【００５６】
以下、イメージングモダリティ及び造影性基Ｍに関してさらに詳しく説明する。
【００５７】
第一の実施形態では、式（Ｉ）の医薬品は、放射線及びＳＰＥＣＴイメージングモダリティに有用な１以上の造影性基Ｍを担持する部分Ｚを含む。好ましくは、Ｍはα線及びβ線をほとんど或いは全く放射しない半減期１時間以上のγ放射体である。好ましいＭ基は、放射性核種６７Ｇａ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、８１ｍＫｒ、９９Ｍｏ、９９ｍＴｃ、２０１Ｔｌ及び１３３Ｘｅである。最も好ましいのは９９ｍＴｃである。
【００５８】
Ｍが金属放射性核種を表す場合、Ｚは、Ｍとの安定キレートの形成に適したキレート剤を表す。かかるキレート剤は当技術分野で周知であり、かかるキレート剤の典型例は国際公開第０１／７７１４５号の表Ｉに記載されている。
【００５９】
特に好ましいのは、次の式（ＶＩＩ）のキレート剤である。
【００６０】
【化２】
2007526300.tif 000003
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は各々独立にＨ又はＣ１〜１０アルキル、Ｃ３〜１０アルキルアリール、Ｃ２〜１０アルコキシアルキル、Ｃ１〜１０ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜１０アルキルアミン、Ｃ１〜１０フルオロアルキルであるか、或いは２以上のＲ基がそれらに結合した原子と共に炭素環、複素環、飽和又は不飽和環を形成するものである。
【００６１】
特に好ましいのは、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が水素又はメチル基であり、Ｒ４がアルキルアミン基である式（ＶＩＩ）のキレート剤であり、特に次の式（ＶＩＩＩ）の化合物（本明細書ではｃＰＮ２１６という。）である。
【００６２】
【化３】
2007526300.tif 000004
Ｚについは最も好ましいのは、キレートがｃＰＮ２１６であって、造影性基Ｍが９９ｍＴｃであるものである。
【００６３】
１２３Ｉ、１２５Ｉ及び１３１Ｉのような非金属放射性核種は、当技術分野で周知の置換又は付加反応によって、成分Ｚに共有結合させることができる。
【００６４】
第二の実施形態では、式（Ｉ）の医薬品は、ＰＥＴイメージングモダリティに有用な１以上の造影性基Ｍを担持する成分Ｚを含む。この場合、Ｍは陽電子放出性をもつ放射体を表す。好ましい基Ｍは、放射性核種１１Ｃ、１８Ｆ、６８Ｇａ、１３Ｎ、１５Ｏ及び８２Ｒｂである。１８Ｆが特に好ましい。
【００６５】
Ｍが金属放射性核種を表すとき、ＺはＭとの安定キレートの形成に適したキレート剤を表す。かかるキレート剤は当技術分野で周知であり、かかるキレート剤の代表例は国際公開第０１／７７１４５号の表Ｉ、さらに上述の放射線及びＳＰＥＣＴイメージングに関する説明に記載されている。
【００６６】
別の好ましい実施形態では、ＺはＤＯＴＡキレート剤であり、Ｍは６８Ｇａであってマイクロ波化学で容易にキレート剤に導入し得る。
【００６７】
１３Ｆのような非金属放射性核種は、当技術分野で周知で例えば国際公開第０３／０８０５４４（その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。）にも記載されている置換又は付加反応によって成分Ｚに共有結合させることができる。
【００６８】
第三の実施形態では、式（Ｉ）の医薬品は、ＭＲイメージングモダリティに有用な１以上の造影性基Ｍを担持した部分Ｚを含む。この場合、Ｍは米国特許第４６４７４４７号に記載されているような常磁性金属を表し、Ｇｄ３＋、Ｄｙ３＋、Ｆｅ３＋及びＭｎ２＋が特に好ましく、Ｚはキレート剤、特に米国特許第４６４７４４７号及び国際公開第８６／０２８４１号に記載されているような非環式又は環式ポリアミノカルボキシレートのようなキレート剤（例えばＤＴＰＡ、ＤＴＰＡ−ＢＭＡ、ＤＯＴＡ及びＤＯ３Ａ）を表す。また、Ｍは、超常磁性種、フェリ磁性種又は強磁性種のような金属酸化物であってもよく、これらは例えばＺが金属酸化物のコーティングとして機能するようにＺに吸着される。ＭＲ造影剤として用いられる金属酸化物は、例えば米国特許第６２３０７７７号に記載されており、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。
【００６９】
第四の実施形態では、式（Ｉ）の医薬品は、Ｘ線イメージングモダリティに有用な１以上の造影性基Ｍを担持する部分Ｚを含む。この場合、ＭはＷ、Ａｕ及びＢｉのような重金属であり、好ましくは酸化物の形態であってＺに吸着し得るものである。特に、ヨウ素化アリール誘導体が、例えばＩｏｐａｍｉｒｏｎ（商標）及びＯｍｎｉｐａｑｕｅ（商標）のようにＸ線造影剤として周知である。これらの造影剤は、それらのアミド又はアミン官能基を介してペプチドＶに結合させることができる。
【００７０】
ガス充填マイクロベシクルの形態の超音波造影剤は、例えば国際公開第９８／１８５００号のような従来技術に記載のように官能化してペプチドに結合させれば、受容体のイメージングに利用することができる。
【００７１】
生体ターゲットに親和性を有する光学イメージング用の造影剤の使用は、例えば国際公開第９６／１７６２８号（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧ、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。）のような当技術分野で公知の方法に従って行うことができる。
【００７２】
式（Ｉ）の医薬品は、ポリアルキレングリコール単位、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）などの１以上のバイオモディファイヤー基の結合によってさらに修飾し得る。バイオモディファイヤー基の具体例は、国際公開第０３／００６４９１号に記載されており、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。ＡＣＥによる切断又はターゲットとする受容体に対する切断化合物の結合能力に悪影響を与えない限り、バイオモディファイヤー基は、式（Ｉ）のＶ基及びＬ基の任意の位置に結合させることができる。
【００７３】
バイオモディファイヤーは、好ましくは単分散ＰＥＧ構成ブロックを１〜１０単位含むもので、医薬品の薬物動態及び血液クリアランス速度を変化させる機能をもつ。本発明の好ましい一実施形態では、以下の式ＩＶの化合物は、単分散ＰＥＧ様構造の重合で得られるバイオモディファイヤー単位１７−アミノ−５−オキソ−６−アザ−３，９，１２，１５−テトラオキサヘプタデカン酸を表す。
【００７４】
【化４】
2007526300.tif 000005
式中、ｎは１〜１０の整数に等しく、Ｃ末端の単位はアミド結合を形成する。
【００７５】
式（Ｉ）の医薬品の具体例としては以下のものが挙げられる。
【００７６】
次の式（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）の化合物：
Ｚ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−Ｘ１−Ｘ２−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０  （ＩＩ）
Ｚ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｍＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−Ｘ１−Ｘ２−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０  （ＩＩＩ）
式中、ｍは、１〜５の整数であり、Ｚ、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ８、Ｘ９及びＸ１０は上記で定義した通りである。
【００７７】
以下の式Ｘａ及びＶＩａで定義される化合物：
【００７８】
【化５】
2007526300.tif 000006
式中、Ｚ及びＶは上記で定義した通りである。
【００７９】
次の式（ＩＸ）の化合物：
【００８０】
【化６】
2007526300.tif 000007
式中、Ｙ２はアルキル、アリール又は短鎖ＰＥＧ含有基であり、Ｙ２は好ましくは−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−であり、Ｘ８、Ｘ９及びＸ１０は上記で定義した通りである。
【００８１】
前述の通り、インビボ診断用には、これらの化合物と９９ｍＴｃ又は１８Ｆとのキレートが特に好ましい。
【００８２】
式（Ｉ）の医薬品は、好ましくは、式（Ｉ）の医薬品を、ヒトのような哺乳類への投与に適した形態で含む医薬組成物として投与される。投与は、好適には水溶液の製剤の注射又は点滴によって実施される。製剤は、薬学的に許容される１種以上の添加剤及び／又は賦形剤、例えば緩衝液、可溶化剤（例えば、シクロデキストリン、又はＰｌｕｒｏｎｉｃ、Ｔｗｅｅｎ、リン脂質などの界面活性剤）を含んでいてもよい。さらに、安定剤又は酸化防止剤（アスコルビン酸、ゲンチシン酸、パラアミノ安息香酸など）、又は凍結乾燥用構造形成剤（塩化ナトリウムやマンニトールなど）を添加してもよい。
【００８３】
式（Ｉ）の医薬品は、心不全、心不整脈その他の繊維化の顕著な疾患、例えばＣＯＰＤ、肝線維症及びアテローム性動脈硬化症の治療及び診断に有用である。これらの医薬品は治療のモニタリングにも有用である。
【００８４】
本発明の別の態様は、心不全、心不整脈その他の繊維化の顕著な疾患、例えばＣＯＰＤ、肝線維症及びアテローム性動脈硬化症の治療法並びにインビボ診断法である。
【００８５】
患者の心不全その他の繊維化の顕著な疾患、例えばＣＯＰＤ、肝線維症及びアテローム性動脈硬化症の治療法は、患者に式（Ｉ）の医薬品を投与することを含む。
【００８６】
患者の心不全その他の繊維化の顕著な疾患、例えばＣＯＰＤ、肝線維症及びアテローム性動脈硬化症のインビボ診断法は、患者に式（Ｉ）の医薬品を投与し、次いで患者の一部又は全体の画像を生成することを含む。
【００８７】
患者の心不全その他の繊維化の顕著な疾患、例えばＣＯＰＤ、肝線維症及びアテローム性動脈硬化症の治療経過をモニタリングする方法は、患者に式（Ｉ）の医薬品を投与し、次いで患者の一部又は全体の画像を生成することを含む。
【００８８】
さらに別の態様では、ペプチド−キレートコンジュゲート及び還元剤を含む式（Ｉ）の放射性医薬組成物の調製用キットが提供される。好ましくは、キットの還元剤は第一スズ塩である。キットはさらに、１種以上の安定剤、酸化防止剤、凍結乾燥用構造形成剤及び可溶化剤を含んでいてもよい。
【００８９】
医薬品及びその前駆体の調製のための一般手順
用いる略号は以下の意味を有する。
Ｆｍｏｃ：９−フルオレニルメトキシカルボニル
Ｂｏｃ：ｔ−ブチルオキシカルボニル
ｔＢｕ：ｔ−ブチル
Ｔｒｔ：トリチル
Ｐｍｃ：２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＨＢＴＵ：Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＮＭＰ：Ｎ−メチルピロリドン
ＴＩＳ：トリイソプロピルシラン
ＮＨＳ：Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル
ＮＭＭ：Ｎ−メチルモルホリン
ＲＰ−ＨＰＬＣ：逆相高速液体クロマトグラフィー
Ｗａｎｇ樹脂：ｐ−ベンジルオキシベンジルアルコール樹脂。
【００９０】
Ｖの合成：
本発明のペプチドＶは、あらゆる公知の化学合成法で合成できるが、特に有用な方法は自動ペプチド合成装置を用いたＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄの固相法である（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９（１９６４））。典型的には、所望の配列を固相ペプチド合成で構築する。本発明の実施例で用いた合成法の標準的手順は、Ｅ．Ａｔｈｅｒｔｏｎ  ＆  Ｒ．Ｃ．Ｓｈｅｐｐａｒｄ，  “Ｓｏｌｉｄ  ｐｈａｓｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：  ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ，  １９８９，  ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｏｘｆｏｒｄに記載されている。
【００９１】
例えば、酸不安定リンカー基を有する樹脂を用いて、これに、所望のアミノ保護Ｃ末端アミノ酸残基をエステル化させる。次いでアミノ保護基を除き、適当な縮合試薬を用いて配列の第２のアミノ酸をカップリングさせる。一時的なアミノ保護基と官能性側鎖のための永続的な保護基をもつアミノ酸を使用する。次にアミノ脱保護とカップリングのサイクルを目的配列が構築されるまで交互に繰り返す。
【００９２】
別法として、ペプチドＶは、全体的な又は最小限の保護策を用いて、当技術分野で公知の溶液ペプチド合成法によって、カルボキシル末端から段階的に及び／又はセグメント縮合もしくはライゲーション法を用いて合成することもできる。溶液−固相セグメント縮合法の組合せを利用することもできる。
【００９３】
一般に、反応性側鎖基（例えばアミノ、ヒドロキシル、グアニジノ及びカルボキシル基）は、上述の通り合成の全期間にわたって保護される。アミノ酸に対する保護基については幅広い選択肢が知られている（例えばＧｒｅｅｎｅ，  Ｔ．Ｗ．  ＆  Ｗｕｔｓ，  Ｐ．Ｇ．Ｍ．  （１９９１）  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ参照）。使用し得るアミノ保護基としては、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）及びｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）が挙げられる。使用し得る側鎖保護基としては、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、トリチル（Ｔｒｔ）、Ｂｏｃ及び２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル（Ｐｍｃ）が挙げられる。かかる保護基としては、その他多種多様なものが当技術分野で公知である。
【００９４】
最後に、永続的な側鎖保護基を除去し、ペプチドを樹脂から切断するが、これらは、例えばトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）のような適当な酸性試薬での処理によって同時に行われるのが一般的である。
【００９５】
ＬとＶのカップリング
Ｌは公知の化学合成法を用いてＶに結合させることができる。特に有用なものは、ペプチドＮ末端の脱離基をＬの求核基で置換する求核置換反応である。かかる脱離基は、カルボニル基にα位で結合した臭素とすることができ、求核基は窒素とすることができる。
【００９６】
ＺとＶ又はＬとのカップリング
Ｚは、ＬとＶとの結合法と同様の方法を用いてＶに直接に結合させることができる。ＺがＬを介してＶに連結する場合、ＺとＬの結合にはあらゆる化学合成法を使用できる。特に有用なものはアミド結合の形成である。
【００９７】
実施例１  ９９ｍＴｃ標識用ＡｎｇＩ類似体［配列番号２］
【００９８】
【化７】
2007526300.tif 000008
Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＳＡＳＲＩＮ樹脂０．１ｍｍｏｌから出発して、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ４３３Ａペプチド合成装置で、ＡｎｇＩのペプチド類似体を合成した。アルギニンまでのカップリング段階には、（ＨＢＴＵ：Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートを用いて）予め活性化したアミノ酸を過剰の１ｍｍｏｌ用いた。Ｎ末端を、ＤＭＦ中の０．５ｍｍｏｌ無水ブロモ酢酸を用いて６０分間ブロモアセチル化した。このブロモアセチル化した樹脂を、ジメチルホルムアミドに溶解したｃＰｎ２１６（０．１ｍｍｏｌ）及びＮ−メチルモルホリン（０．２）溶液で６０分間処理した。
【００９９】
トリイソプロピルシラン２．５％及び水２．５％を含むトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）５ｍＬ中で、側鎖保護基の除去と樹脂からのペプチドの切断を同時に６０分間行った。ＴＦＡを減圧下で除去し、残留物にジエチルエーテルを加え、沈澱生成物をジエチルエーテルで洗浄し、風乾した。
【０１００】
生成物の分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（２０〜３５％Ｂ（４０分）、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速１０ｍＬ／分、Ｖｙｄａｃ  Ｃ１８  ２５０×２１．２０ｍｍカラム）での精製によって、純粋なキレート−ペプチドコンジュゲート３ｍｇが得られた。生成物を分析ＨＰＬＣで分析した（条件：勾配２０〜３５％Ｂ（２０分）、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速１ｍＬ／分、カラムＶｙｄａｃ  Ｃ１８  ２５×４．６ｍｍ、検出ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間１４．９分）。エレクトロスプレー質量分析を用いてさらに生成物のキャラクタリゼーションを行った（計算値：ＭＨ＋  １５６４．９、実測値：ＭＨ＋  １５６４．９）。
【０１０１】
実施例１ａ  ＡＣＥ切断
ＡＣＥ保存液の調製は次の通り行った。ＡＣＥ（Ｓｉｇｍａ  Ａ−６７７８）０．３４ｍｇを、ＫＯＨでｐＨ７．８に調節した２００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ１ｍＬに溶解した。
【０１０２】
ＡｎｇＩペプチド類似体０．１ｍｇをＡＣＥ保存液１００μＬに溶解し、溶液を室温でインキュベートした。溶液からサンプル（１０μＬ）を採取して、Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ（４００μＬ）で希釈し、ＬＣ−ＭＳで分析した。
【０１０３】
【表１】
2007526300.tif 000009
実施例２  ［配列番号３］
【０１０４】
【化８】
2007526300.tif 000010
合成
Ｆｍｏｃ法を用いてＦｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＳＡＳＲＩＮ樹脂０．２５ｍｍｏｌから出発して、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ４３３Ａペプチド合成装置で、ペプチジル樹脂Ｈ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｖａｌ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ｌｅｕ−Ｒを構築した。カップリング段階では、（ＨＢＴＵで）予め活性化したアミノ酸を過剰の１ｍｍｏｌ用いた。次いで、樹脂を窒素バブラーに移した。
【０１０５】
ブロモ酢酸（２ｍｍｏｌ、２７８ｍｇ）とＤＣＣ（１ｍｍｏｌ、２０６ｍｇ）をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解した。混合物を１５分間撹拌し、沈澱したＤＣＣＵを濾過し、濾液を減圧下で蒸発乾固して、無水ブロモ酢酸を白色固体として得た。この無水物をＤＭＦに溶解して、上方から樹脂に添加した。３０分後に無水物溶液を濾過によって除去し、樹脂をＤＭＦで洗浄した。ブロモアセチル化樹脂（０．０５ｍｍｏｌ）を次いでｃＰｎ２１６（ＮＣ−１００６７６、アミンフリー）（０．１ｍｍｏｌ、３４ｍｇ）のＤＭＦ溶液で２時間処理した。最後に樹脂をＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄し、窒素気流下で乾燥させた。
【０１０６】
ＴＩＳ２．５％及び水２．５％を含むＴＦＡ１０ｍＬ中で、側鎖保護基の除去と樹脂からのペプチドの切断を同時に９０分間行った。ＴＦＡを減圧下で除去し、残留物にジエチルエーテルを加えた。沈殿をジエチルエーテルで洗浄し、風乾し、粗製ＡＨ−１１１２３２（７０ｍｇ）を得た。
【０１０７】
精製及びキャラクタリゼーション
粗製材料７０ｍｇを、分取ＨＰＬＣ（勾配：５〜５０％Ｂ（４０分）、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μ  Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：２７．２分）で精製して略純粋なＡＨ−１１１２３２（７．４ｍｇ）を得た。ＴＦＡをＨＣＯＯＨで置き換えた第２精製段階（勾配：Ｂ０％〜３０％、他の条件は上記と同一）で純粋なＡＨ−１１１２３２（５．４ｍｇ）を得た。
【０１０８】
純生成物を分析ＨＰＬＣで分析した（勾配：０〜３０％Ｂ（１０分）、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＨＣＯＯＨ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＨＣＯＯＨ、流速：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：７．０３分）。エレクトロスプレー質量分析を用いて、さらに生成物のキャラクタリゼーションを行った（計算値：ＭＨ＋  １５３１．０、実測値：ＭＨ＋  １５３０．８）。
【０１０９】
実施例３  ＡｎｇＩ類似体［配列番号４］
【０１１０】
【化９】
2007526300.tif 000011
合成
Ｆｍｏｃ法を用いてＦｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＳＡＳＲＩＮ樹脂０．２５ｍｍｏｌから出発して、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ４３３Ａペプチド合成装置で、ペプチジル樹脂Ｈ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｖａｌ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ｐｒｏ−Ｂｉｐ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ｌｅｕ−Ｒを構築した。カップリング段階では、（ＨＢＴＵで）予め活性化したアミノ酸を過剰の１ｍｍｏｌ用いた。次いで、樹脂を窒素バブラーに移した。
【０１１１】
ＴＩＳ２．５％及び水２．５％を含むＴＦＡ５ｍＬ中で、側鎖保護基の除去と樹脂からのペプチドの切断を同時に６０分間行った。ＴＦＡを減圧下で除去し、残留物にジエチルエーテルを加えた。沈殿をジエチルエーテルで洗浄し、風乾し、粗製ＡＨ−１１１４１５を得た。
【０１１２】
キャラクタリゼーション
粗生成物を分析ＨＰＬＣで分析した（勾配：１０〜６０％Ｂ（２０分）、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：１ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）２５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：１４．４３分）。質量分析を用いて、さらに生成物のキャラクタリゼーションを行った（計算値：（ＭＨ２）２＋  ６２９．３、実測値：（ＭＨ２）２＋  ６２９．４）。
【０１１３】
実施例４  ［配列番号５］
【０１１４】
【化１０】
2007526300.tif 000012
合成
上記の樹脂Ｈ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｖａｌ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ｐｒｏ−Ｂｉｐ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ｌｅｕ−Ｒ（０．２５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦに溶解した無水ブロモ酢酸溶液（上述の通り調製）で３０分間処理した。ブロモアセチル化樹脂（０．０５ｍｍｏｌ）を、次いでｃＰｎ２１６（ＮＣ−１００６７６、アミンフリー）（０．２５ｍｍｏｌ、８６ｍｇ）のＴＨＦ溶液で６０分間処理した。最後に樹脂をＴＨＦで洗浄し、窒素気流下で乾燥させた。
【０１１５】
ＴＩＳ２．５％及び水２．５％を含むＴＦＡ１０ｍＬ中で、側鎖保護基の除去と樹脂からのペプチドの切断を同時に９０分間行った。ＴＦＡを減圧下で除去し、残留物にジエチルエーテルを加えた。沈殿をジエチルエーテルで洗浄し、風乾して、粗製ＡＨ−１１１４５３（９０ｍｇ）を得た。
【０１１６】
精製及びキャラクタリゼーション
粗製材料９０ｍｇを、分取ＨＰＬＣ（勾配：５〜５０％Ｂ（４０分）、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μ  Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：３２分）で精製して略純粋なＡＨ−１１１４５３（３４ｍｇ）を得た。ＴＦＡをＨＣＯＯＨで置き換えた第２精製段階（勾配：Ｂ０％〜３０％、他は上記と同じ条件）で純粋なＡＨ−１１１４５３（１８ｍｇ）を得た。
【０１１７】
純生成物を分析ＨＰＬＣで分析した（勾配：０〜３０％Ｂ（１０分）、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＨＣＯＯＨ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＨＣＯＯＨ、流速：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：７．４０分）。エレクトロスプレー質量分析を用いて、さらに生成物のキャラクタリゼーションを行った（計算値：ＭＨ＋  １６４１．０、実測値：ＭＨ＋  １６４０．７）。
【０１１８】
実施例５  ［配列番号６］
【０１１９】
【化１１】
2007526300.tif 000013
合成
Ｆｍｏｃ法を用いてＴｅｎｔａ  Ｇｅｌ  Ｓａｃ  Ｌｅｕ−Ｆｍｏｃ樹脂０．１ｍｍｏｌから出発して、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ４３３Ａペプチド合成装置で、ペプチジル樹脂Ｈ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｖａｌ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ｐｒｏ−Ｈｐｈ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ｌｅｕ−Ｒを構築した。カップリング段階では、（ＨＢＴＵで）予め活性化したアミノ酸を過剰の１ｍｍｏｌ用いた。次いで、樹脂を窒素バブラーに移した。
【０１２０】
ブロム酢酸（１ｍｍｏｌ、１３９ｍｇ）とＤＣＣ（０．５ｍｍｏｌ、１０３ｍｇ）をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解した。混合物を１５分間撹拌し、沈澱したＤＣＣＵを濾過し、濾液を減圧下で蒸発乾固して、無水ブロモ酢酸を白色固体として得た。この無水物をＤＭＦに溶解して、上方から樹脂に添加した。３０分後に無水物溶液を濾過によって除去し、樹脂をＤＭＦで洗浄した。ブロモアセチル化樹脂（０．０５ｍｍｏｌ）を次いでｃＰｎ２１６（ＮＣ−１００６７６）（０．２５ｍｍｏｌ、８６ｍｇ）のＤＭＦ溶液で２時間処理した。最後に樹脂をＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄した。
【０１２１】
ＴＩＳ２．５％及び水２．５％を含むＴＦＡ１０ｍＬ中で、側鎖保護基の除去と樹脂からのペプチドの切断を同時に９０分間行った。ＴＦＡを減圧下で除去し、残留物にジエチルエーテルを加えた。沈殿をジエチルエーテルで洗浄し、風乾して、粗製ＡＨ−１１１４５４（２４ｍｇ）を得た。
【０１２２】
精製及びキャラクタリゼーション
粗製材料２４ｍｇを、分取ＨＰＬＣ（勾配：５〜５０％Ｂ（４０分）、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μ  Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：１５分）で精製して略純粋なＡＨ−１１１４５４（４．７ｍｇ）を得た。略純粋なペプチド２．６ｍｇの第２精製段階（上記と同じ条件）で純粋なＡＨ−１１１４５４（０．５ｍｇ）を得た。
【０１２３】
純生成物を分析ＨＰＬＣで分析した（勾配：１０〜６０％Ｂ（２０分）、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：１ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）２５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：１２．５７分）。質量分析を用いて、さらに生成物のキャラクタリゼーションを行った（計算値：（ＭＨ２）２＋  ７９０．０、実測値：（ＭＨ２）２＋  ７９０．０）。
【０１２４】
実施例６  ［配列番号７］
【０１２５】
【化１２】
2007526300.tif 000014
合成
Ｆｍｏｃ法を用いてＴｅｎｔａ  Ｇｅｌ  Ｓａｃ  Ｌｅｕ−Ｆｍｏｃ樹脂０．１ｍｍｏｌから出発して、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ４３３Ａペプチド合成装置で、ペプチジル樹脂Ｈ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｖａｌ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ｌｅｕ−Ｒを構築した。カップリング段階では、（ＨＢＴＵで）予め活性化したアミノ酸を過剰の１ｍｍｏｌ用いた。次いで、樹脂を窒素バブラーに移した。
【０１２６】
ブロム酢酸（１ｍｍｏｌ、１３９ｍｇ）とＤＣＣ（０．５ｍｍｏｌ、１０３ｍｇ）をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解した。混合物を１５分間撹拌し、沈澱したＤＣＣＵを濾過し、濾液を減圧下で蒸発乾固して、無水ブロモ酢酸を白色固体として得た。この無水物をＤＭＦに溶解して、上方から樹脂に添加した。３０分後に無水物溶液を濾過によって除去し、樹脂をＤＭＦで洗浄した。次いで、ブロモアセチル化された樹脂（０．０５ｍｍｏｌ）を、ｃＰｎ２１６（ＮＣ−１００６７６）（０．２５ｍｍｏｌ、８６ｍｇ）のＴＨＦ（４ｍｌ）溶液で６０分間処理した。最後に樹脂をＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄した。
【０１２７】
ＴＩＳ２．５％及び水２．５％を含むＴＦＡ１０ｍＬ中で、側鎖保護基の除去と樹脂からのペプチドの切断を同時に９０分間行った。ＴＦＡを減圧下で除去し、残留物にジエチルエーテルを加えた。沈殿をジエチルエーテルで洗浄し、風乾して、粗製ＡＨ−１１１５１９（５５ｍｇ）を得た。
【０１２８】
精製及びキャラクタリゼーション
粗製材料３０ｍｇから分取ＨＰＬＣ（勾配：１５〜３５％Ｂ（４０分）、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μ  Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：２６．７分）で精製して純粋なＡＨ−１１１５１９（７．４ｍｇ）を得た。
【０１２９】
純生成物を分析ＨＰＬＣで分析した（勾配：１５〜３５％Ｂ（２０分）、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：１ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）２５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：１５．１分）。質量分析を用いて、さらに生成物のキャラクタリゼーションを行った（計算値：（ＭＨ２）２＋  ７７６．０、実測値：（ＭＨ２）２＋  ７７５．９）。
【図面の簡単な説明】
【０１３０】
【図１】レニン−アンジオテンシン−アルドステロン系（ＲＡＡＳ）を示す図。
【図１】
2007526300.tif 000016
【配列表】
2007526300000001.app
【国際調査報告】
2007526300.tif 000017
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2007526300.tif 000019
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