(57)【要約】  本発明は、リトナビルの有効量を患者に投与する段階を含む、ＵＧＴ１Ａ１基質の血清濃度上昇に起因する疾患又は障害又は有害作用を治療するためにＵＧＴ１Ａ１アイソフォーム発現を誘導する方法を対象とする。特に、本発明は、リトナビルの有効量を患者に投与する段階を含む、ＵＧＴ１Ａ１誘導による非抱合高ビリルビン血症の治療方法を対象とする。【特許請求の範囲】
【請求項１】
リトナビルの有効量を患者に投与する段階を含む、ＵＧＴ１Ａ１基質の血清濃度上昇に起因する疾患又は障害又は有害作用を治療するためにＵＧＴ１Ａ１アイソフォーム発現を誘導する方法。
【請求項２】
前記疾患又は障害が非抱合高ビリルビン血症である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＵＧＴ１Ａ１基質がビリルビンである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
リトナビルの前記有効量が、１日当たり約２５ｍｇから約１２００ｍｇの範囲である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
非抱合高ビリルビン血症の治療を必要とする患者にリトナビルの有効量を投与する段階を含む、非抱合高ビリルビン血症を治療する方法。
【請求項６】
リトナビルの前記有効量が、１日当たり約２５ｍｇから約１２００ｍｇの範囲である請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ＵＧＴ１Ａ１基質の血清濃度上昇に起因する疾患、障害又は有害作用の治療を必要とする患者にリトナビルの有効量を共に投与する段階を含む、活性のある医薬品成分を投与してＵＧＴ１Ａ１基質の血清濃度上昇に起因する疾患、障害又は有害作用を治療する方法。
【請求項８】
リトナビルの前記有効量が、約２５ｍｇから約１２００ｍｇの範囲である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記活性のある医薬品成分が、インジナビル、アタザナビル、アンホテリシンＢ／コレステリル硫酸複合体、テストステロン、インターフェロンベータ−１ｂ、ビカルタミド、シプロフロキサシン、オキサリプラチン、フロクスリジン、塩酸ゲムシタビン、サルグラモスチム、ゲムツズマブ  オゾガマイシン、酒石酸ビノレルビン、カルボプラチン、ペグインターフェロンアルファ−２Ｂ、タクロリムス、アルデスロイキン、ダルホプリスチン／キヌプリスチン、ジダノシン及びカペシタビンから実質的になる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記活性のある医薬品成分がインジナビルである、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
前記活性のある医薬品成分がアタザナビルである、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
ＵＧＴ１Ａ１基質の血清濃度上昇に起因する疾患、障害又は有害作用が、非抱合高ビリルビン血症である、請求項７に記載の方法。
【請求項１３】
リトナビルの有効量を投与する段階を含むＵＧＴ１Ａ１基質のグルクロン酸抱合を増加させる方法。
【請求項１４】
前記ＵＧＴ１Ａ１基質がビリルビンである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
リトナビルの前記有効量が、１日当たり約２５ｍｇから約１２００ｍｇの範囲である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
リトナビルの有効量を投与する段階を含む、ＵＧＴ１Ａ１基質の排泄を増加させる方法。
【請求項１７】
前記ＵＧＴ１Ａ１基質がビリルビンである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
リトナビルの前記有効量が、１日当たり約２５ｍｇから約１２００ｍｇの範囲である請求項１６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リトナビルの有効量を患者に投与する段階を含む、ＵＧＴ１Ａ１基質の血清濃度上昇に起因する疾患、障害又は有害作用を治療するためにＵＧＴ１Ａ１アイソフォームの発現を誘導する方法を対象とする。特に、本発明は、リトナビルの有効量を患者に投与する段階を含む、ＵＧＴ１Ａ１誘導による非抱合高ビリルビン血症の治療方法を対象とする。
【背景技術】
【０００２】
グルクロン酸抱合は、様々な内因性基質、たとえば、エストリオール及びビリルビンなど、並びに外因性基質、たとえばエチニルエストラジオールの廃棄を決定する主要な代謝経路である。ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）は、補助因子としてのＵＤＧ−グルクロン酸とのこれらの反応を触媒するスーパーファミリー酵素である。ＵＧＴスーパーファミリーは、ラットでは少なくとも１０種類、ヒトでは１０種類を上回るアイソザイムを含む。実際に、全部で１６種類のヒトＵＧＴアイソザイムは、それぞれの基質特異性が異なることが確認されており、ＵＧＴ１Ａ１はビリルビン特異的アイソザイムである。ビリルビンは、ヘム異化反応の主要な産物で、グルクロン酸抱合、すなわちグルクロン酸との抱合を行い、モノ及びジグルクロニドなどの水溶性代謝物を生じる肝臓によって循環から取り除かれ、最終的に糞便に排泄される。
【０００３】
インジナビル（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ、ＵＳＡ）は、逆転写酵素阻害剤と組み合わせて使用したとき、ＨＩＶに対して高い有効性を示した通常使用される有力なプロテアーゼ阻害剤である。Ｚｕｃｋｅｒ、Ｓ．Ｄ．，  Ｑｉｎ．Ｘ、Ｒｏｕｓｔｅｒ、Ｓ．Ｄ他、「インジナビル誘発性高ビリルビン血症（Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｉｎｄｉｎａｖｉｒ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｈｙｐｅｒｂｉｌｉｒｕｂｉｎｅｍｉａ）」ＰＮＡＳ  ２００１；９８：１２６７１〜１２６７６。残念ながら、インジナビル治療は、組織学的肝傷害のない無症候性非抱合高ビリルビン血症の発病率６％から２５％に関係がある。同著。過剰なビリルビン蓄積によって臨床的黄疸を発症した患者は、治療を中断して、さらに臨床検査を行った。同著。インジナビル治療に関連した血清非抱合ビリルビンの上昇は、ビリルビン抱合活性の直接阻害によってもたらされることが発見された。同著。
【０００４】
同様に、アタザナビル（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ、Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ、ＵＳＡ）はまた、非抱合ビリルビン血中濃度上昇の原因となる。一研究では、アタザナビルを摂取した被験者の５７％が非抱合高ビリルビン血症を示した。２００２年９月２７日から３０日、カリフォルニア州サンディエゴでの４２回抗菌薬及び化学療法に関する学術会議でポスター発表されたＡｇａｒｗａｌａ、Ｓ．，Ｒｕｓｓｏ、Ｒ．他。「健常な被験者におけるアタザナビル（ＡＴＶ）とリトナビル（ＲＴＶ）の定常状態における薬物動態的（ＰＫ）相互作用の研究（Ｓｔｅａｄｙ  Ｓｔａｔｅ  Ｐｈａｎｎａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ（ＰＫ）  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  Ａｔａｚａｎａｖｉｒ（ＡＴＶ）  ｗｉｔｈ  Ｒｉｔｏｎａｖｉｒ（ＲＴＶ）  ｉｎ  Ｈｅａｌｔｈｙ  Ｓｕｂｊｅｃｔｓ）」。ヒトミクロソームのインビトロ系及びＵＧＴ１Ａ１アイソフォームでトランスフェクトしたヒト細胞の両方でアタザナビルはマイクロモルの範囲でビリルビン抱合を阻害することが発見された。２０００年９月１７日から２０日、カナダ、オンタリオ州トロントでの４０回抗菌薬及び化学療法に関する学術会議でポスター発表されたＯ’Ｍａｒａ、Ｅ．，  Ｍｕｍｍａｎｅｎｉ、Ｖ．他。「ＢＭＳ−２３２６３２及びサキナビルを投与された健康な被験者におけるウリジン二リン酸−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＤＰ−ＧＴ）１Ａ１遺伝子型と総ビリルビン増加との関係（Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  Ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｕｒｉｄｉｎｅ  Ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ−Ｇｌｕｃｕｒｏｎｏｓｙｌ  Ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＵＤＰ−ＧＴ）１Ａ１  Ｇｅｎｏｔｙｐｅ  ａｎｄ  Ｔｏｔａｌ  Ｂｉｌｉｒｕｂｉｎ  Ｅｌｅｖａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｈｅａｌｔｈｙ  Ｓｕｂｊｅｃｔｓ  Ｒｅｃｅｉｖｉｎｇ  ＢＭＳ−２３２６３２  ａｎｄ  Ｓａｑｕｉｎａｖｉｒ）」。
【０００５】
非抱合高ビリルビン血症はまた、薬物又は薬物の組み合わせ、たとえば、アンホテリシンＢ／コレステリル硫酸複合体、テストステロン、インターフェロンベータ−１ｂ、ビカルタミド、シプロフロキサシン、オキサリプラチン、フロクスリジン、塩酸ゲムシタビン、サルグラモスチム、ゲムツズマブ  オゾガマイシン、酒石酸ビノレルビン、カルボプラチン、ペグインターフェロンアルファ−２Ｂ、タクロリムス、アルデスロイキン、ダルホプリスチン／キヌプリスチン、ジダノシン及びカペシタビンに関連した有害作用である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
血清ＵＧＴ１Ａ１基質の上昇による疾患又は障害又は有害作用、たとえば、非抱合高ビリルビン血症を克服するためには、ＵＧＴ１Ａ１を誘導することが望ましい。
【０００７】
ＵＧＴ１Ａ１の阻害によって引き起こされる血清ビリルビンの上昇のため治療を中断することなく、ＨＩＶ感染及びＡＩＤＳを効果のあるＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、たとえば、インジナビル及びアタザナビルで治療できることもまた望ましい。
【０００８】
さらに、血清ビリルビンの上昇のため治療を中断することなく、薬剤、たとえば、アンホテリシンＢ／コレステリル硫酸複合体、テストステロン、インターフェロンベータ−１ｂ、ビカルタミド、シプロフロキサシン、オキサリプラチン、フロクスリジン、塩酸ゲムシタビン、サルグラモスチム、ゲムツズマブ  オゾガマイシン、酒石酸ビノレルビン、カルボプラチン、ペグインターフェロンアルファ−２Ｂ、タクロリムス、アルデスロイキン、ダルホプリスチン／キヌプリスチン、ジダノシン及びカペシタビンを投与することが望ましい。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、リトナビルの有効量を患者に投与する段階を含む、ＵＧＴ１Ａ１基質の血清濃度上昇に起因する疾患又は障害又は有害作用を治療するためにＵＧＴ１Ａ１アイソフォームの発現を誘導する方法を提供する。好ましくは、本発明は、非抱合高ビリルビン血症の治療を必要とする患者にリトナビルの有効量を投与することを含む、非抱合高ビリルビン血症の治療方法を提供する。一実施形態では、リトナビルの有効量の範囲は、１日当たり約２５ｍｇから約１２００ｍｇである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
驚くべきことに、リトナビルは、ＵＧＴ１Ａ１アイソフォーム発現を誘導することが発見された。これは特に、ＵＧＴ１Ａ１基質の血清濃度上昇に起因する疾患又は障害又は有害作用の治療に有用である。非抱合高ビリルビン血症は、患者に薬物又は薬物の組み合わせ、たとえば、インジナビル、アタザナビル、アンホテリシンＢ／コレステリル硫酸複合体、テストステロン、インターフェロンベータ−１ｂ、ビカルタミド、シプロフロキサシン、オキサリプラチン、フロクスリジン、塩酸ゲムシタビン、サルグラモスチム、ゲムツズマブ  オゾガマイシン、酒石酸ビノレルビン、カルボプラチン、ペグインターフェロンアルファ−２Ｂ、タクロリムス、アルデスロイキン、ダルホプリスチン／キヌプリスチン、ジダノシン及びカペシタビンなどを投与することによって引き起こされる望ましくない疾患又は障害又は有害作用である。
【００１１】
望ましくない疾患又は障害又は有害作用を克服するためには、リトナビアをインジナビル、アタザナビル、アンホテリシンＢ／コレステリル硫酸複合体、テストステロン、インターフェロンベータ−１ｂ、ビカルタミド、シプロフロキサシン、オキサリプラチン、フロクスリジン、塩酸ゲムシタビン、サルグラモスチム、ゲムツズマブ  オゾガマイシン、酒石酸ビノレルビン、カルボプラチン、ペグインターフェロンアルファ−２Ｂ、タクロリムス、アルデスロイキン、ダルホプリスチン／キヌプリスチン、ジダノシン及びカペシタビンと共に投与して、ＵＧＴ１Ａ１アイソフォーム発現を誘導し、次に血清ビリルビン濃度を低くすることができる。
【００１２】
第１の実施形態では、本発明は、リトナビアの有効量を患者に投与する段階を含む、ＵＧＴ１Ａ１基質の血清濃度上昇に起因する疾患又は障害又は有害作用を治療するためにＵＧＴ１Ａ１を誘導する方法を提供する。好ましくは、本発明は、非抱合高ビリルビン血症の治療を必要とする患者にリトナビルの有効量を投与することを含む非抱合高ビリルビン血症の治療方法を提供する。
【００１３】
第２の実施形態では、本発明は、ＵＧＴ１Ａ１基質の血清濃度上昇に起因する疾患又は障害又は有害作用の治療を必要とする患者にリトナビルの有効量を活性のある医薬品成分と共に投与する段階を含む、ＵＧＴ１Ａ１基質の血清濃度上昇に起因する疾患又は障害又は有害作用の活性のある医薬品成分の投与による治療方法を提供する。一実施形態では、活性のある該医薬品成分は、インジナビル、アタザナビル、アンホテリシンＢ／コレステリル硫酸複合体、テストステロン、インターフェロンベータ−１ｂ、ビカルタミド、シプロフロキサシン、オキサリプラチン、フロクスリジン、塩酸ゲムシタビン、サルグラモスチム、ゲムツズマブ  オゾガマイシン、酒石酸ビノレルビン、カルボプラチン、ペグインターフェロンアルファ−２Ｂ、タクロリムス、アルデスロイキン、ダルホプリスチン／キヌプリスチン、ジダノシン及びカペシタビンから本質的に構成される群から選択される。他の実施形態では、活性のある該医薬品成分は、インジナビルである。さらに他の実施形態では、活性のある該医薬品成分は、アタザナビルである。一実施形態では、ＵＧＴ１Ａ１基質の血清濃度上昇に起因する疾患又は障害は、非抱合高ビリルビン血症である。
【００１４】
第３の実施形態では、本発明は、リトナビルの有効量を投与する段階を含むＵＧＴ１Ａ１基質のグルクロン酸抱合を増加させる方法を提供する。一実施形態では、該ＵＧＴ１Ａ１基質はビリルビンである。
【００１５】
第４の実施形態では、本発明は、リトナビルの有効量を投与する段階を含むＵＧＴ１Ａ１基質排出を増加させる方法を提供する。一実施形態では、該ＵＧＴ１Ａ１基質はビリルビンである。
【００１６】
第５の実施形態では、本発明は、リトナビルの有効量を含む組成物を患者に投与する段階を含む、ＵＧＴ１Ａ１基質の血清濃度上昇に起因する疾患又は障害又は有害作用を治療するためにＵＧＴ１Ａ１を誘導する方法を提供する。好ましくは、本発明は、非抱合高ビリルビン血症の治療を必要とする患者にリトナビルの有効量を含む組成物を投与する段階を含む非抱合高ビリルビン血症の治療方法を提供する。該組成物はさらに、リトナビルに加えてロピナビルの有効量を含むことが可能である。このような組成物の例は、米国特許第６４５８８１８号に開示されている。
【００１７】
「併行投与」及び「併行投与すること」と言う用語は、リトナビル及び他の活性のある医薬品成分を別々の剤形で、同時に、又は異なる時点で、或いは単一の剤形として一緒に被験者に投与することを意味する。
【００１８】
「患者」という用語は、哺乳類、より具体的にはヒトを意味する。
【００１９】
「有効量」といういい方は、ＵＧＴ１Ａ１アイソフォーム発現の誘導又はＵＧＴ１Ａ１基質のグルクロン酸抱合の増加又はＵＧＴ１Ａ１基質排出の増加に十分なリトナビルの量である。好ましい実施形態では、リトナビルの有効量は、１日当たり約２５ｍｇから約１２００ｍｇまでの範囲の量である。
【００２０】
単一剤形を形成するために担体物質と一緒にすることができるリトナビルの量は、治療する患者及び特定の投与様式に応じて変化する。
【００２１】
しかし、任意の特定の患者に対する特定の用量濃度は、患者の年齢、体重、一般的な健康状態、性別及び食生活、並びに投与時間、投与経路、排泄速度、薬剤の組み合わせ、血清ビリルビンの上昇に起因する疾患又は障害又は有害作用の重症度を含む様々な要素に左右される。
【００２２】
リトナビルは、以下の式（Ｉ）のように構造的に表される。
【００２３】
【化１】
2007525432.tif 000002
【００２４】
リトナビルは、本明細書に参照により全体を組み込む米国特許第５１４２０５６号、第５１５１４３８号、第５３５４８６６号、第５３６２９１２号、第５４９１２５３号、第５５０８４０９号、第５５２６６７７号、第５５３９１２２号、第５５４１２０６号第５５４１３２８号、第５５４１３３４号、第５５４３５４９号、第５５４３５５１号、第５５４３５５２号、第５５４５７５０号、第５５５２５５８号、第５５５４７８３号、第５５６５４１８号、第５５６５６０４号、第５５６７８２３号、第５５６９７７７号、第５５８０９８４号、第５５８３２３２号、第５５８３２３３号、第５５９１８６０号、第５５９７９２６号、第５５９７９２７号、５５９７９２８号、第５６０８０７２号、第５６１６７１４号、第５６１６７２０号、第５６１６７７６号、第５６２５０７２号、第５６２５０９２号、第５６３５５２３号、第５６４８４９７号、第５６５４４６６号、第５６５９０４４号、第５６５９０４５号、第５６７０６７５号、第５６７４８８２号、第５６７９７９７号、第５６９６２７０号、第５７８６５００号、第５８３７８７３号、第５８４６９８７号、第５８８６０３６号、第５８９２０５２号、第６０１７９２８号、第６１５０５３０号及び第６５３１６１０号に開示された方法のいずれかを使用して調製することができる。
【００２５】
リトナビルはまた、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤及びチトクロームＰ４５０モノオキシダーゼの阻害剤、特に、米国特許第６０３７１５７号で開示されたＣＹＰ３Ａ４であることが知られている。
【００２６】
リトナビルは、説明したような薬剤として許容される従来の非毒性の担体、補助剤及びビヒクルを含有する投与単位製剤で経口的、非経口的、舌下、吸入噴霧によって、直腸又は局所的に投与することが可能である。局所投与はまた、経皮パッチ又はイオン注入装置などの経皮投与の使用を含むことができる。本明細書で使用した非経口という用語は、皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨内注射又は注入技術を含む。
【００２７】
注射可能な調製物、たとえば、注射可能な水性又は油性の滅菌懸濁液は、適切な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤を使用して公知の技術によって調製することができる。注射可能な滅菌調製物はまた、非毒性の非経口的に許容される希釈液又は溶媒、たとえば、１．３−プロパンジオールに溶かした注射可能な滅菌溶液又は懸濁液であってよい。使用可能な許容されるビヒクル及び溶媒には、水、リンガー溶液及び等張塩化ナトリウム溶液がある。さらに、滅菌不揮発性油は従来、溶媒または懸濁溶媒として使用されている。このために、合成モノ又はジグリセリドを含めた任意の無菌不揮発製油を使用してよい。さらに、オレイン酸などの脂肪酸は、注射可能な調製物で用途が見いだされる。
【００２８】
リトナビルを直腸投与するための座薬は、通常の温度では固形だが、直腸温度では液体で、したがって結腸内で融解し、該薬剤を放出するカカオ脂及びポリエチレングリコールなどの適切な非刺激性医薬品添加物と該薬剤を混合することによって調製することができる。
【００２９】
経口投与用固形剤形には、カプセル、錠剤、丸剤、散剤及び顆粒剤を含めることができる。このような固形剤形では、リトナビルは少なくとも１種類の不活性希釈剤、たとえばシュクロース  ラクトース又は澱粉と混合することができる。このような剤形はまた、慣例通り、不活性希釈剤以外の他の物質、たとえば、ステアリン酸マグネシウムなどの潤沢剤を含むことができる。カプセル、錠剤及び丸剤の場合、剤形はまた、緩衝剤を含むことができる。錠剤及び丸剤はさらに、腸溶コーティングを伴って調製することができる。
【００３０】
経口投与用の液体剤形は、水などの当業界で通常使用される不活性希釈剤を含有する薬剤として許容されるエマルジョン、液剤、懸濁液、シロップ及びエリキシールを含むことができる。このような組成物はまた、補助剤、たとえば、湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、並びに甘味剤、矯臭剤、並びに香料を含むことができる。
【００３１】
リトナビルはまた、リポソームの形態で投与されることができる。当業界で公知のように、リポソームは一般的にリン脂質又はその他の脂質物質から得られる。リポソームは、水性溶媒に分散された単層又は多層の水和化した液晶によって形成される。リポソームを形成することができ、生理学的に許容される非毒性の代謝可能な脂質を使用することができる。リポソーム型の本発明の組成物は、本発明の化合物に加えて、安定剤、保存剤、医薬品添加物などを含有することができる。好ましい脂質は、天然及び合成両方のリン脂質及びホスファチジルコリン（レシチン）である。
【００３２】
リポソームの作製方法は、当業界では公知である。たとえば、以下のＰｒｅｓｃｏｔｔ著、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、ＸＩＶ巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（１９７６）、３３ページを参照されたい。
【００３３】
例示的なリトナビル調製物は、本明細書に参照により全体を組み込む米国特許第５１４２０５６号、第５１５１４３８号、第５３５４８６６号、第５３６２９１２号、第５４８４８０１号、第５４９１２５３号、第５５０８４０９号、第５５２６６７７号、第５５３９１２２号、第５５４１２０６号、第５５４１３２８号、第５５４１３３４号、第５５４３５４９号、第５５４３５５１号、第５５４３５５２号、第５５４５７５０号、第５５５２５５８号、第５５５４７８３号、第５５５９１５８号、第５５６５４１８号、第５５６５６０４号、第５５６７８２３号、第５５６９７７７号、第５５８０９８４号、第５５８３２３２号、第５５８３２３３号、第５５９１８６０号、第５５９７９２６号、第５５９７９２７号、第５５９７９２８号、第５６０８０７２号、第５６１０１９３号、第５６１６７１４号、第５６１６７２０号、第５６１６７７６号、第５６２５０７２号、第５６２５０９２号、第５６３５５２３号、第５６４８４９７号、第５６５４４６６号、第５６５９０４４号、第５６５９０４５号、第５６７０６７５号、第５６７４８８２号、第５６７９７９７号、第５６９６２７０号、第５７２５８７８号、第５７８６５００号、第５８３７８７３号、第５８４６９８７号、第５８７６７４９号、第５８８６０３６号、第５８９２０５２号、第５９４８４３６号、第６０１７９２８号、第６１５０５３０号、第６２３２３３３号、第６４５８８１８号、第６５２１６５１号及び第６５３１６１０号、米国特許出願番号ＵＳ−２００３−００３２６１９−Ａ１及びＰＣＴ出願番号ＷＯ９３／２３３６１、ＷＯ９４／１４４３６、ＷＯ９５／０７６９６、ＷＯ９５／０９６１４、ＷＯ９５／２０３８４、ＷＯ９８／２２１０６、ＷＯ００／７４６７７、ＷＯ０１／５２８２１及びＷＯ０２／０９６３９５に開示されている。前述の参考文献は様々なリトナビル調製物を例として開示しているが、本発明はそれらに限定されないことに注意されたい。
【００３４】
以下の実施例は、リトナビルによるＵＧＴ１Ａ１誘導をさらに例示するために提供するものである。
【実施例１】
【００３５】
ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）活性を欠損しているＧｕｎｎラット（ｎ＝８）に、胃管栄養法によってアタザナビル／リトナビルを一緒に１日総投与量５００／１００ｍｇ／ｋｇ／日で投与した。第２のラット群には、リトナビルを１日総投与量１００ｍｇ／ｋｇ／日で投与した。第３のラット群には、ビヒクルのみを投与した。アタザナビルは、ＥｔＯＨ５％：プロピルグリコール（ＰＧ）９５％：ｐ−トルエンスルホン酸１モル当量から構成されるビヒクルで調製した。リトナビルは、ＥｔＯＨ５％：プロピルグリコール（ＰＧ）９５％：ｐ−トルエンスルホン酸２モル当量から構成されるビヒクルで調製した。ラット全てが処理毎に総量で２ｍｌ／ｋｇの一定量を投与されるように製剤を調製した。ラットには、０日目に約１２時間の間隔で１日２回、３回目を１日目の朝に、全部で３回投与した。
【００３６】
１回目及び３回目の投与から４時間後に、血液試料（約０．５ｍｌ）を各ラットの頚静脈から平底微小遠心管（抗凝固剤を含まない）に収集し、総ビリルビンの分析に使用した。ラット３群の経時的な平均（±ＳＤ）血清ビリルビンを図１に示す。血清ビリルビンは１回目の投与後著しく増加し、３回目の投与後に減少した。
【００３７】
同様の手法を使用して、インジナビル／リトナビルによって生じたビリルビン上昇を評価し、結果を図２に示す。また、血清ビリルビンは１回目の投与後に著しく増加し、その後３回目の投与後に減少した。
【実施例２】
【００３８】
約６〜１２週齢の体重２２５グラムと２７５グラムとの間の雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに、リトナビルを指示した濃度で経口投与した。リトナビルは、エノタール５％：プロピレングリコール９５％：ｐ−トルエンスルホン酸２モル当量において調製した。ラットに、１日間又は３日間毎日投与し、翌日に殺処分した。それぞれの肝臓約１００ｍｇをＴＲＩｚｏｌ（登録商標）試薬に入れ、Ｔｕｒｒａｘ組織粉砕機を使用してすぐにホモゲナイズした。
【００３９】
ＲＮＡの調製及び分析は、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  Ｉｎｃ．の方法に従って実施した。収集した試料のＲＮＡの完全性は、Ａｇｌｉｅｎｔ２１００  Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒを使用して測定した。ｃＤＮＡは、Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  Ｃｈｏｉｃｅシステム（カタログ番号１８０９０−０１９）を使用してＲＮＡ１５μｇから調製した。逆転写酵素反応用に使用したプライマーが５末端に２４個のチミジンを有する改変Ｔ７プライマーであること以外は、Ｇｉｂｃｏの方法に確かに従った。該配列は、
【００４０】
【化２】
2007525432.tif 000003
であった。
【００４１】
この後、標識ｃＲＮＡは、ＥｎｚｏＲＮＡトランスクリプト標識キット（カタログ番号９００１８２）を使用して製造者の指示に従ってｃＤＮＡから合成された。次に、ｃＲＮＡ約２０ｍｇを４０ｍＭ  トリス酢酸、ｐＨ８．１、ＫＯＡｃ  １００ｍＭ及びＭｇＯＡｃ  ３０ｍＭの溶液中で、９４ｏで３５分間断片化させた。この後、約９０００個の遺伝子配列を含有するＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  Ｒａｔ  Ｕ３４チップにｃＤＮＡをハイブリダイズさせた。ｃＲＮＡは、４５℃で一晩ハイブリダイズさせた。
【００４２】
マイクロアレイのデータは、Ｒｏｓｅｔｔａ  Ｒｅｓｏｌｖｅｒ  ｖ２．０発現データ分析システムを使用して分析した。２種類のアレイの間の発現変化は、発現比が正規化された誤差加重ＰＭ／ＭＭ差強度であるとした「変化倍数」として定量した。
【００４３】
Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  Ｕ３４チップは、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ１Ａ（ＵＧＴ１Ａ１）に対応する５種類の異なるプローブ配列を含有する。リトナビル処理に応答するこれらのプローブ群の誘導を図１に示す。用量濃度１００ｍｇ／ｋｇ以上のリトナビルで処理したラットでは、処理１日後及び３日後にプローブ群全てにおいて一貫してＵＧＴ１Ａ１濃度の増加が示された。この結果は、リトナビルがＵＧＴ１Ａ１発現の誘導因子であることを示している。
【００４４】
【表１】
2007525432.tif 000004
【実施例３】
【００４５】
リトナビルは、エタノール５％、プロピルグリコール９５％及びｐ−トルエンスルホン酸２モル当量に溶かした７．５及び２５ｍｇ／ｍＬ溶液として調製した。対照群のラットは、エタノール５％、プロピルグリコール９５％及びｐ−トルエンスルホン酸３７．６ｍｇ／ｍＬから構成されるビヒクルを投与された。フェノバルビタールナトリウム投与溶液は、通常の生理食塩水で２５ｍｇ塩基／ｍｌの濃度で調製された。
【００４６】
体重約２５０ｇの雌雄ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（ＶＡＦ  Ｃｒｌ：ＣＤ（ＳＤ）ＢＲ）１６匹は、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．（Ｐｏｒｔａｇｅ、ＭＩ）から入手した。該ラットを表２に示した４種の処理群に無作為に分けた。
【００４７】
【表２】
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【００４８】
動物にはＣｅｒｔｉｆｉｅｄ  Ｒｏｄｅｎｔ  Ｃｈｏｗ＊＃５００２ペレット（Ｐｕｒｉｎａ  Ｍｉｌｌｓ、Ｉｎｃ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ．）及び水を自由に摂取させた。該ラットを個別にステンレススチールケージに収容し、固有の認識番号によって識別した。体重は０日目、７日目及び実験最終日に記録した。
【００４９】
処置群Ｔ０、Ｔ１及びＴ２のラットそれぞれに、胃管栄養法によってリトナビルを毎日１回２ｍＬ／ｋｇの一定用量で１４日間連続して経口投与を行った。処置群、Ｔ３のラットはそれぞれ、フェノバルビタールを毎日１回２ｍＬ／ｋｇの一定用量で１４日間連続して腹腔内投与を受けた。
【００５０】
処置群Ｔ０、Ｔ１及びＴ２のラットは、最終投与の約４８時間後に殺処分した。処置群Ｔ３のラットは、最終投与の約２４時間後に殺処分した。肝臓を取り出し、水気を拭き取って個々の重さを測定した。次に、肝臓は、１．１５％塩化カルシウムを含有する氷冷した１０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．４）中で組織ホモゲナイザーを使用して別々にホモゲナイズした。様々な遠心によってミクロソームを調製し、２０％（ｖ／ｖ）グリセロール及びＥＤＴＡ  １．０ｍＭを含有する０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．４）中において−７０℃で保存した。ミクロソームの蛋白質含量は、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）測定キット（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）を使用して、標準としてウシ血清アルブミンを用いて測定した。総チトクロームＰ４５０含量は、鉄１酸化炭素複合体形成によって測定した。該ミクロソームは、以下のチトクロームＰ４５０媒介反応、７−ペントキシレゾルフィンＯ−デアルキラーゼ、クロロゾキサゾン６−ヒドロキシラーゼ、ベンズフェタミンＮ−デメチラーゼ及びエリスロマイシンＮ−デメチラーゼで特徴付けられた。
【００５１】
肝１７α−エチニルエストラジオール及び１−ナフトールグルクロン酸抱合活性を以下の表３に示す。
【００５２】
【表３】
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【００５３】
リトナビルは、雌雄両方のラットにおいて１７α−エチニルエストラジオール、ＵＧＴ１Ａ１基質のグルクロン酸抱合を有意に増加させることが発見された。リトナビル５０ｍｇ／ｋｇ／日で処理した雌雄両ラットの１７α−エチニルエストラジオールのグルクロン酸抱合増加は、２倍であった。
【実施例４】
【００５４】
１２時間毎にリトナビル５００ｍｇを経口投与して、単回用量のエチニルエストラジオールの薬物動態に対する効果を調べるために研究を実施した。これは、研究開始前に少なくとも６ヶ月間経口避妊薬を投与されていない健康な女性ボランティアによる非盲検１施設試験であった。被験者は、１日目にエチニルエストラジオール５０μｇを含有する経口避妊薬の１回目の投与を受けた。各被験者は、１５日目から３０日目までの１６日間、リトナビルを１２時間毎に投与された。１５日目に、３００ｍｇを１２時間毎に投与され、１６日目には４００ｍｇを１２時間毎に投与され、その後は５００ｍｇを１２時間毎に投与された。２回目の経口避妊薬の投与は、リトナビル投与中の２９日目に実施された。エチニルエストラジオール濃度用に、経口避妊薬の投与それぞれの４８時間後に血液試料を収集した。リトナビル濃度用に基準時、すなわち１日目の投与前（０ｈ）、定常状態の２９日目、朝の投与後０ｈ及び４ｈに血液試料を収集した。
【００５５】
２７人の被験者をこの試験に登録した。４人の被験者は、試験を完了することができず、リトナビル投与中に経口避妊薬の投与を受けなかった。したがって、これら４人の被験者のデータは概括的な統計から排除した。試験を完了した２３人の被験者の年齢の平均±ＳＤは３４±１０歳（１０歳から４５歳の範囲）で、体重の平均±ＳＤは６７．３±１０．９ｋｇ（５０．８ｋｇから９０．３ｋｇ）で、身長の平均±ＳＤは１６７±７ｃｍ（１５５ｃｍから１８０ｃｍの範囲）であった。
【００５６】
エチニルエストラジオールは、エチニルエストラジオール５０μｇ及び二酢酸エチノジオール１ｍｇを含有するＤｅｍｕｌｅｎ  １／５０−２１錠剤（Ｇ．Ｄ．Ｓｅａｒｌｅ＆Ｃｏ．）として購入し、１日目及び２９日目の午前８：００に、食事又は軽食の１５分以内に水約２４０ｍＬと共に投与された。リトナビル（Ａｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）は、液体製剤（８０ｍｇ／ｍＬ溶液）として購入し、１５日目には１２時間毎に３００ｍｇ（３．７５ｍＬ）、１６日目には１２時間毎に４００ｍｇ（５．０ｍＬ）、１７日目から３０日目には１２時間毎に５００ｍｇ（６．２５ｍＬ）を１５日目から３０日目の午前８：００頃と午後８：００頃に投与した。
【００５７】
被験者は、−１日目（最初の投与の前日）から６４時間、最初の血液採取４８時間の間（３日目をモニターする）、及び２８日目から６４時間、２回目の血液採取４８時間の間（３１日目をモニターする）、収容された。さらに、被験者は、１５日目以降は全部で１４日間連続して、外来患者として食事、投薬及びその他の試験活動のために１日２回臨床検査室に通院した。収容中、激しい運動は許可されなかった。収容中、被験者はこの試験で提供された計画食及び軽食以外は、全ての食品及び飲料を控えた。水は、自由に摂取した。収容中、食事は全て成分に基づいて統一された。朝食、昼食及び夕食は、午前７：３０頃、午後１：００頃及び午後７：３０頃に出され、軽食は午後１０：００頃に出され、１日目及び２８日目については午後９：４５に出された。臨床検査分析用に血液採取をする前には全て、８時間の絶食を必要とした。被験者全員の間で投与の間隔が同じになるように、収容中各投与日の一連の朝食及び夕食の開始は、時間通りに維持した。
【００５８】
１日目及び２９日目の投与に関して、以下の時点、投与前（０ｈ）及び投与後０．５、１、２、３、４、６、８、１０、１２、１８、２４、３０、３６及び４８時間に血清エチニルエストラジオール濃度のために血液試料（７ｍＬ）を収集した。さらに、血漿リトナビル濃度のために１日目の投与前（０ｈ）及び２９日目の定常状態時、朝の投与の０時間後（朝の投与前）及び４時間後に血液試料（７ｍＬ）を収集した。血漿及び血清試料は全て、ドライアイスと共に密封され、分析部へ輸送された。
【００５９】
血清試料のエチニルエストラジオール濃度は、Ｐｈａｒｍａｃｏ  ＬＳＲ、Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、ＶＡで分析された。血漿試料は凍結保存され、Ｏｎｅｉｄａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（ＯＲＳ）．Ｉｎｃ．、Ｗｈｉｔｅｓｂｏｒｏ、ＮＹでリトナビル濃度を分析した。
【００６０】
血清試料のエチニルエストラジオールを測定するための分析は、Ｐｈａｒｍａｃｏ  ＬＳＲ、Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、ＶＡで実施された。ガスクロマトグラフィー／質量分析（ＧＣ／ＭＳ）法を使用してエチニルエストラジオール血清濃度を測定した。１７α−エチニルエストラジオール及びそれに対応する同位体標識内部標準物は、血清をＰＨ８．０に緩衝し、その後エチルエーテル／塩化メチレン混合物で抽出することによってヒト血清から単離した。有機層を水性塩基に置換し、ヘキサンで洗浄して、次に酸性化して、塩化メチレンで抽出した。該抽出物を炭酸ナトリウムで乾燥し、留去して誘導体化した。誘導体化した抽出物は、分析するまで−２０℃で保存した。分析は、キャピラリーＧＣ／ＭＳによって、選択イオンモニタリングで負化学イオン化を使用して行った。この方法は、血清体積１．０ｍＬについて２．００から２５６ｐｇ／ｍＬの濃度範囲の１７α−エチニルエストラジオーを定量下限２．００ｐｇ／ｍＬで評価した。
【００６１】
この研究の血清試料は、１７α−エチニルエストラジオール２．００から２５６ｐｇ／ｍＬの範囲の検量線で測定し、平均相関係数は０．９９９４であった。品質管理基準及びアッセイ間変動の測定基準として、血清試料に低、中及び高濃度のエチニルエストラジオールを補い、未知のものと共に測定した。低濃度の品質対照は６．００ｐｇ／ｍＬ、中濃度は２４．０ｐｇ／ｍＬ、高濃度は１４４ｐｇ／ｍＬであった。分析終了時のエチニルエストラジオールの平均算出濃度値は、低濃度の品質対照では５．３１ｐｇ／ｍＬで、中濃度では２１．４ｐｇ／ｍＬ、高濃度では１３１ｐｇ／ｍＬであった。対応する変動係数は、１１．４、８．１及び７．１％であった。
【００６２】
リトナビル血漿試料の分析は、ＯＲＳ、Ｗｈｉｔｅｓｂｏｒｏ、ＮＹで実施された。リトナビル血漿濃度は、ＵＶ検出器を備えた評価済み逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法を使用して測定した。抽出方法には、内部標準物を試料の一定量５００μＬに添加すること、この一定量を中性条件下で酢酸エチル：ヘキサン、９：１（ｖ／ｖ）で抽出すること、有機層を乾燥するまで留去すること、及び該試料を移動相で再構成し、その後再構成した抽出物をヘキサンで２回洗浄することが含まれる。次に、再構成抽出物の一定量を、紫外線検出器を備えた逆相高速液体クロマトグラフィーによって２０５ｎｍで分析した。定量の下限は０．０１０μｇ／ｍＬであった。該移動相は、過塩素酸テトラメチルアンモニウム：アセトニトリル：メタノール（５５：４０：５；ｖ：ｖ：ｖ）に溶かした０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）から構成された。
【００６３】
該方法は、ＯＲＳで評価され、血漿において直線的な検量線を生じることが示された。０．１００から１５．００μｇ／ｍＬの範囲の標準物による検量線の平均相関係数は、０．９９８であった。日内変動係数（ＣＶ）は、いずれの濃度でも４．８５％未満であった。血漿の日差ＣＶは、いずれの濃度でも５．６６％未満であった。
【００６４】
略式評価法は、非ＨＩＶ陽性血漿における定量の下限が０．０１０μｇ／ｍＬであることを示すために実施した。日内ＣＶは、ＣＶが３９．７０％であった最低濃度の検量用標準物以外は全て１９．２９％未満で、検量線の相関係数は０．９９６０であった。リトナビル０．０１０μｇ／ｍＬを含有する血漿を６回反復した分析の後で得た以前のアッセイ内変動は、定量の下限でのアッセイ精度が４．２５％であることを示した。
【００６５】
この研究の血漿試料は、０．０１０から１５．００μｇ／ｍＬの範囲の検量線で測定し、平均相関係数は０．９９９３であった。品質管理基準及びアッセイ間変動の測定基準として、血漿試料に低濃度（０．１５０μｇ／ｍＬ）、中濃度（７．５００μｇ／ｍＬ）及び高濃度（１２．００μｇ／ｍＬ）のリトナビルを補い、未知のものと共に測定した。分析終了時の平均算出濃度値は、低濃度の品質対照では０．１５８μｇ／ｍＬ、中濃度では６．５５１μｇ／ｍＬ、高濃度では１０．６４μｇ／ｍＬで、対応する変動係数はそれぞれ、３．９９％、１２．９％及び２．８８％であった。
【００６６】
エチニルエストラジオール薬物動態変数は、非コンパートメント法を使用して、１日目及び２９日目の２回の単回投与後に概算した。薬物動態変数は、企図したサンプリング時間を使用して算出した。試料は全て、企図したサンプリング時間の１０％位内に収集した。最高血漿濃度（Ｃｍａｘ）及びＣｍａｘに達する時間（Ｔｍａｘ）は、個々の濃度対時間履歴から直接得られた。血漿濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ∞）は、ＡＵＣｔの和として算出し、線形台形公式を使用して終末測定濃度までの領域を算出し、無限大までの外挿は終末測定可能濃度（Ｃｔ）及び終末排泄速度定数（β）の商として算出した。終末排泄速度定数は、投与後１８時間に開始した、時間に対する血漿濃度の対数の回帰の傾きの負として算出した。終末相の半減期（ｔ１／２）は、２の自然対数をβで除することによって得られた。
【００６７】
２種類のエチニルエストラジオール濃度は、紛失として報告され、線形補間によって置換された（被験者番号１０１の２９日目の６時間目及び被験者番号１２４の２９日目の４時間目）。１種類のリトナビル濃度は、紛失として報告されたが（被験者番号１２４の２９日目の４時間目）、置換されなかった。
【００６８】
各サンプリング時間のエチニルエストラジオールの血清濃度及びリトナビルの血漿濃度を表にまとめて、概略した統計値を計算した。経口避妊薬が単独投与された１日目に測定されたエチニルエストラジオールの薬物動態変数（Ｔｍａｘ、Ｃｍａｘ、ＡＵＣ∞及びβ）は、経口避妊薬がリトナビル併行投与中に投与された２９日目の変数と、差について対応のあるｔ検定を使用して比較された。対応のあるｔ検定は、ＵＮＩＸ操作システムでＳＡＳのＰＲＯＣ  ＵＮＩＶＡＲＩＡＴＥバージョン６．０６を使用して実施された。ｐ値≦０．０５０は、統計学的に有意と見なされた。
【００６９】
Ｃｍａｘ及びＡＵＣ∞の両方については、経口避妊薬をリトナビル併行投与中に投与した２９日の平均と経口避妊薬を単独投与した１日目の平均との比について９５％信頼区間が得られた。  エチニルエストラジオールＡＵＣ比（２９日目：１日目）と２９日目のリトナビル濃度との間の関係及びエチニルエストラジオールＡＵＣ比（２９日目：１日目）と自然対数（ｌｎ）変換トリグリセリド比（２８日目：１日目）又は自然対数変換ガンマ−グルタミルトランスペプチダーゼ（ＧＧＴ）比（２８日目：１日目）との間の関係は、単回帰分析によって検討した。
【００７０】
経口避妊薬単独投与後及びリトナビルを１２時間毎に２週間投与した後に測定されたエチニルエストラジオール薬物動態変数の結果の概要を以下の表に挙げる。
【００７１】
【表４】
2007525432.tif 000007
【００７２】
経口避妊薬の単回用量投与後は、投与して約４時間後に血清エチニルエストラジオール濃度はピークに達し、その後減少して、一般的に終末排泄半減期は１７時間、図３であった。エチニルエストラジオールの２回目の投与は、リトナビル５００ｍｇを１２時間毎に約２週間投与した後の２９日目に行われた。リトナビルと共にエチニルエストラジオールを投与すると、経口避妊薬単独投与と比較して、エチニルエストラジオールの平均Ｃｍａｘの３２％低下（ｐ＜０．００１）及び平均ＡＵＣの４２％低下（ｐ＜０．００１）が生じた。さらに、リトナビルを併用すると平均終末排泄速度定数が３１％（ｐ＜０．００１）増加し、調和平均半減期は１３時間であった。経口避妊薬を単独で、及びリトナビルと共に投与した後の個々の、及び平均のエチニルエストラジオール薬物動態変数、Ｃｍａｘ、ＡＵＣ及びβそれぞれの変化は、図４から図６に表されている。
【００７３】
ＡＵＣに対する影響は、ＡＵＣ平均の比の９５％信頼区間が比較的狭い（０．５０６〜０．６９４）ことから証明されるように、個々全体に一貫している。１人を除く被験者全てにおいて、リトナビル投与によってＡＵＣが減少した。Ｔｍａｘでは統計学的に有意な変化は見られなかった（ｐ＝０．３８７）。
【００７４】
経口避妊薬単独投与後及び１２時間毎のリトナビル５００ｍｇ投与中に測定されたエチニルエストラジオール薬物動態変数では、Ｔｍａｘ以外について統計学的有意差が認められた。リトナビル併用の場合、エチニルエストラジオールの平均Ｃｍａｘは３２％、平均ＡＵＣは４１％減少したが、平均終末排泄速度定数は増加が認められた（＋３１％）。エチニルエストラジオールの調和平均半減期は、経口避妊薬単独投与後の１７．０時間から経口避妊薬とリトナビルとの併行投与後の１３．０時間に減少した。
【００７５】
前記は、本発明を例示するのみであって、開示した方法及び組成物に本発明を限定するものではない。当業者には明らかな変更及び変化は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲及び特性に含まれるものとする。
【図面の簡単な説明】
【００７６】
【図１】Ｇｕｎｎラット３群の平均（±ＳＤ）血清ビリルビンを経時的に示した図であり、群Ｉにはアタザナビル／リトナビル  ５００／１００ｍｇ／ｋｇ／日を投与し、群ＩＩにはリトナビル  １００ｍｇ／ｋｇ／日を投与し、群ＩＩＩにはビヒクルのみを投与した。
【図２】Ｇｕｎｎラット３群の平均（±ＳＤ）血清ビリルビンを経時的に示した図であり、群Ｉにはインジナビル／リトナビル  ５００／１００ｍｇ／ｋｇ／日を投与し、群ＩＩにはリトナビル  １００ｍｇ／ｋｇ／日を投与し、群ＩＩＩにはビヒクルのみを投与した。
【図３】エチニルエストラジオールの単独投与後及びリトナビルと共に投与した後の平均（±ＳＤ）エチニルエストラジオール濃度を示した図である。
【図４】エチニルエストラジオールの単独投与後及びリトナビルと共に投与した後の平均（±ＳＤ）エチニルエストラジオールＣｍａｘを示した図である。
【図５】エチニルエストラジオールの単独投与後及びリトナビルと共に投与した後の平均（±ＳＤ）エチニルエストラジオールＡＵＣ∞を示した図である。
【図６】エチニルエストラジオールの単独投与後及びリトナビルと共に投与した後の平均（±ＳＤ）エチニルエストラジオール排泄速度定数を示した図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【手続補正書】
【提出日】平成19年3月9日(2007.3.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３９】
ＲＮＡの調製及び分析は、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  Ｉｎｃ．の方法に従って実施した。収集した試料のＲＮＡの完全性は、Ａｇｌｉｅｎｔ２１００  Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒを使用して測定した。ｃＤＮＡは、Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  Ｃｈｏｉｃｅシステム（カタログ番号１８０９０−０１９）を使用してＲＮＡ１５μｇから調製した。逆転写酵素反応用に使用したプライマーが３’末端に２４個のチミジンを有する改変Ｔ７プライマーであること以外は、Ｇｉｂｃｏの方法に確かに従った。該配列は、
【国際調査報告】
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