(57)【要約】  トランスサイレチンを安定化するための、ならびにトランスサイレチン介在性疾患の1つまたは複数の症候を治療、予防、または改善するための、化合物、組成物および方法を提供する。ある態様では、本化合物は、ベンゾオキサゾールおよび関連化合物であり、ここでYは、COOH、COOR5、CONR7R8、テトラゾリル、CONHOH、B(OH)2、CONHSO2Ar、CONHCH(R6)COOH、OH、CH2OHまたは-(CH2)n-C(R6)(NH2)-COOHであり；XはO、SまたはNR11であり；Hetはヘテロアリールであって、ハロ、OR、アルキルまたはハロアルキルで置換されていてもよく；ここでR、R1-R3、R5-R8およびR11は、本出願中に記載されるとおりである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式Iの化合物、または薬学的に許容されるその誘導体：
2007538095.tif 000054
式中、
YはCOOH、COOR5、CONR7R8、テトラゾリル、CONHOH、B(OH)2、CONHSO2Ar、CONHCH(R6)COOH、OH、CH2OHまたは-(CH2)n-C(R6)(NH2)-COOHであり；
XはO、SまたはNR11であり；
R1、R2およびR3は、それぞれ独立に、水素、ハロ、OR5、OAr、OHet、OCH2Ar、OCH2Het、CN、B(OH)2、CONR7R8、アルキル、-(CR9R10)nOH、-(CR9R10)nNR7R8、-(CR9R10)nSHまたはCF3より選択され；
Hetはヘテロアリールであり、ハロ、OR、アルキルまたはハロアルキルで置換されていてもよく；
Arはアリールであり、ハロ、OR、アルキルまたはハロアルキルで置換されていてもよく；
Rは水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールであり；
R5はアルキル、ハロアルキル、シクロアルキルまたはヘテロシクリルであり；
R6は天然に存在するα-アミノカルボン酸の側鎖であり；
R7およびR8は、それぞれ独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールであり；
R9およびR10は、それぞれ独立に、水素、ハロ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールであり；
R11は水素またはアルキルであり；かつ
nは0〜3の整数であり；
ただし、(i) YはCOOHであって4、5、6または7位にある場合、R1、R2およびR3は3,5-ジフルオロ、2,6-ジフルオロ、2-もしくは3-トリフルオロメチル、3,5-ジクロロまたは2,6-ジクロロではなく；(ii) YはCOOHであって4、5、6または7位にあり、かつXはOである場合、R1、R2およびR3は全てが水素とは限らず；(iii) YはCOOHまたはCONH2であり、かつXはOである場合、R1、R2およびR3は、3-、4-、もしくは5-アルキル、3-シクロアルキル、4-アルコキシ、4-シクロアルコキシ、2-もしくは4-COOH、Rはアルキルである4-COOR 、2-もしくは4-OHではなく；(iv)YはCOOHであり、かつXはNHである場合、R1、R2およびR3は4-CNではない。
【請求項２】
下記式IAを有する、請求項1記載の化合物：
2007538095.tif 000055
【請求項３】
YはCOOH、テトラゾリル、CONHOH、B(OH)2またはOHであり；
XはOであり；
R1、R2およびR3は、それぞれ独立に、水素、ハロ、OH、B(OH)2またはCF3より選択される、
請求項1または2記載の化合物。
【請求項４】
YはCOOHである、請求項1〜3のいずれか一項記載の化合物。
【請求項５】
Yはテトラゾリル、B(OH)2またはCONHOHである、請求項1〜3のいずれか一項記載の化合物。
【請求項６】
YはOHである、請求項1〜3のいずれか一項記載の化合物。
【請求項７】
R1、R2およびR3は、それぞれ独立に、水素、ハロおよびOHより選択される、請求項1〜6のいずれか一項記載の化合物。
【請求項８】
R1、R2およびR3は、それぞれ独立に、水素およびCF3より選択される、請求項1〜6のいずれか一項記載の化合物。
【請求項９】
R1、R2およびR3は、それぞれ独立に、水素、ハロゲンおよびOR5より選択される、請求項1〜6のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１０】
R1およびR2はそれぞれ独立に水素であり、R3はCF3である、請求項1〜6のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１１】
R1、R2およびR3は、それぞれ独立に、水素、ハロおよびB(OH)2より選択される、請求項1〜6のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１２】
R1、R2およびR3は、それぞれ独立に、水素、F、BrおよびIより選択される、請求項1〜6のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１３】
R1、R2およびR3は、それぞれ独立に、ハロおよびOHより選択される、請求項1〜6のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１４】
R1、R2およびR3は、それぞれ独立に、ハロおよびおよびB(OH)2より選択される、請求項1〜6のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１５】
R1およびR2はそれぞれハロであり、R3はOHである、請求項1〜6のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１６】
R1およびR2はそれぞれハロであり、R3はB(OH)2である、請求項1〜6のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１７】
R1およびR2はそれぞれハロであり、R3はHである、請求項1〜6のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１８】
下記式のうちの1つを有する、請求項1〜17のいずれか一項記載の化合物：
2007538095.tif 000056
2007538095.tif 000057
2007538095.tif 000058
2007538095.tif 000059
2007538095.tif 000060
2007538095.tif 000061
2007538095.tif 000062
【請求項１９】
Hetはピリミジニル、ピリジル、フリルまたはチエニルである、請求項1〜6のいずれか一項記載の化合物。
【請求項２０】
下記式を有する請求項19記載の化合物、または薬学的に許容されるその誘導体：
2007538095.tif 000063
【請求項２１】
Hetはハロ、OR、アルキルまたはハロアルキルで置換されていてもよい、3-または4-ピリジルであり、ここでRは水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールである、請求項19または20記載の化合物。
【請求項２２】
Hetはハロ、アルキルまたはハロアルキルで置換されていてもよい、3-または4-ピリジルである、請求項19〜21のいずれか一項記載の化合物。
【請求項２３】
Hetはトリフルオロメチル、クロロまたはメチルで置換されていてもよい、3-または4-ピリジルである、請求項19〜22のいずれか一項記載の化合物。
【請求項２４】
以下より選択される、請求項1〜23のいずれか一項記載の化合物：
2007538095.tif 000064
【請求項２５】
請求項1〜24のいずれか一項記載の化合物および薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
【請求項２６】
薬学的に許容される担体および下記式Iの化合物を含む、薬学的組成物：
2007538095.tif 000065
式中、
YはCOOH、COOR5、CONR7R8、テトラゾリル、CONHOH、B(OH)2、CONHSO2Ar、CONHCH(R6)COOH、OH、CH2OHまたは(CH2)n-C(R6)(NH2)-COOHであり；
XはO、SまたはNR11であり；
R1、R2およびR3は、それぞれ独立に、水素、ハロ、OH、OR5、OAr、OHet、OCH2Ar、OCH2Het、CN、B(OH)2、CONR7R8、アルキル、ハロアルキル、-(CR9R10)nOH、-(CR9R10)nNR7R8、-(CR9R10)nSH、CF3またはNR7R8より選択され；
Hetはヘテロアリールであり、ハロ、OR、アルキルまたはハロアルキルで置換されていてもよく；
Arはアリールであり、ハロ、OR、アルキルまたはハロアルキルで置換されていてもよく；
Rは水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールであり；
R5はアルキル、ハロアルキル、シクロアルキルまたはヘテロシクリルであり；
R6は天然に存在するα-アミノカルボン酸の側鎖であり；
R7およびR8は、それぞれ独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールであり；
R9およびR10は、それぞれ独立に、水素、ハロ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールであり；
R11は水素又がアルキルであり；かつ
nは0〜3の整数であり；
ただし、(i) YはCOOHであって4、5、6または7位にある場合、R1、R2およびR3は3,5-ジフルオロ、2,6-ジフルオロ、2-もしくは3-トリフルオロメチル、3,5-ジクロロまたは2,6-ジクロロではなく；(ii) YはCOOHであって4、5、6または7位にあり、かつXはOである場合、R1、R2およびR3は全てが水素とは限らず；(iii) YはCOOHまたはCONH2であり、かつXはOである場合、R1、R2およびR3は3-、4-もしくは5-アルキル、3-シクロアルキル、4-アルコキシまたは4-シクロアルコキシではなく；(iv)YはCOOHであり、かつXはNHである場合、R1、R2およびR3は4-CNではない。
【請求項２７】
単回投与のために処方される、請求項25または26記載の薬学的組成物。
【請求項２８】
請求項1〜24のいずれか一項記載の化合物または請求項25〜27のいずれか一項記載の薬学的組成物の投与を含む、組織中または体液中でのトランスサイレチンを安定化する方法。
【請求項２９】
トランスサイレチンを、請求項1〜24のいずれか一項記載の化合物または請求項25〜27のいずれか一項記載の薬学的組成物と接触させる段階を含む、トランスサイレチンのミスフォールディングを阻害する方法。
【請求項３０】
請求項1〜24のいずれか一項記載の化合物または請求項25〜27のいずれか一項記載の薬学的組成物を投与する段階を含む、トランスサイレチン型アミロイド疾患の1つまたは複数の症候を治療、予防、または改善する方法。
【請求項３１】
トランスサイレチン四量体の未変性状態の動的安定化により、該トランスサイレチン四量体の解離を妨げる方法であって、該四量体を請求項1〜24のいずれか一項記載の化合物または請求項25〜27のいずれか一項記載の薬学的組成物と接触させる段階を含む方法。
【請求項３２】
トランスサイレチン型アミロイド疾患が、家族性アミロイド多発性ニューロパシー、家族性アミロイド心筋症または老年性全身性アミロイドーシスである、請求項30記載の方法。
【請求項３３】
疾患が、アルツハイマー病、海綿状脳症、多発性ニューロパシー、II型糖尿病および甲状腺髄様癌である、請求項32記載の方法。
【請求項３４】
請求項1〜24のいずれか一項記載の化合物または請求項25〜27のいずれか一項記載の薬学的組成物を投与する段階を含む、トランスサイレチン介在性疾患または障害の1つまたは複数の症候を治療、予防、または改善する方法。
【請求項３５】
疾患が肥満症である、請求項34記載の方法。
【請求項３６】
トランスサイレチン四量体を安定化する方法であって、該四量体を請求項1〜24のいずれか一項記載の化合物または請求項25〜27のいずれか一項記載の薬学的組成物と接触させる段階を含む方法。
【請求項３７】
請求項1〜24のいずれか一項記載の化合物または請求項25〜27のいずれか一項記載の薬学的組成物を投与する段階を含む、TTRアミロイドの形成を阻害する方法。
【請求項３８】
トランスサイレチン型アミロイド疾患の1つまたは複数の症候を治療、予防、または改善するために使用される、請求項1〜24のいずれか一項記載の化合物または請求項25〜27のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項３９】
トランスサイレチン型アミロイド疾患の1つまたは複数の症候を治療、予防、または改善するための薬剤の製造における、請求項1〜24のいずれか一項記載の化合物または請求項25〜27のいずれか一項記載の薬学的組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
分野
本明細書において提供されるのは、一般にタンパク質のミスフォールディングに関する化合物、組成物および方法である。さらに具体的には、本明細書において提供されるのは、トランスサイレチンを安定化し、トランスサイレチンのミスフォールディングを阻害し、トランスサイレチンフィブリルおよびアミロイド形成を阻害し、かつこれらに関連するアミロイド疾患を治療するための、ベンゾオキサゾール化合物、組成物および方法である。
【０００２】
関連出願
本明細書において、2004年5月20日出願の米国仮出願第60/573,720号、標題「COMPOUNDS, COMPOSITIONS AND METHODS FOR STABILIZING TRANSTHYRETIN AND INHIBITING TRANSTHYRETIN MISFOLDING」に対して優先権を主張する。上記参照出願の開示内容は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【背景技術】
【０００３】
背景
トランスサイレチン(TTR)は、血清および脳脊髄液中に存在する55kDaのホモ四量体タンパク質である。TTRの機能は、L-チロキシン(T4)およびホロレチノール結合タンパク質(RBP)を輸送することである。TTRは、ヒトにおける病因に結びつくフィブリルや他の凝集塊に変換されうる、20個を超える非相同アミロイド形成性タンパク質の1つである。これらの疾患は、タンパク質凝集による機能の消失によって引き起こされるとは考えられていない。それどころか凝集は、未だ明らかでない機序によりニューロン/細胞の機能不全を引き起こすと考えられている。
【０００４】
変性条件下では、律速の野生型TTR四量体解離および急速モノマーミスフォールディングが、アミロイドへのミスアセンブリーを可能にし、老年性全身性アミロイドーシス(SSA)を引き起こすと推定される。80を超えるTTR変種のうちの1つの解離およびミスフォールディングが、家族性アミロイド多発性ニューロパシー(FAP)および家族性アミロイド心筋症(FAC)を含む、多種多様な家族性アミロイドーシスをもたらす。
【０００５】
TTR四量体は、2個のC2対称性T4結合部位を有する。T4の負の協同的結合は、TTR四量体を安定化し、かつアミロイドフィブリル形成を阻害することが知られている。残念ながら、甲状腺結合グロブリン(TBG)は、TTRに比較するとT4に対する親和性が非常に高いため、ヒト血清中ではT4が結合しているTTRは1%未満である。さらには、T4の血清濃度は、TTRの濃度(3.6〜7.2μM)に比較して相対的に低い(0.1μM)。
【発明の開示】
【０００６】
概要
本明細書において提供されるのは、トランスサイレチンの未変性状態を動的に安定化し、それによってタンパク質のミスフォールディングを阻害する化合物である。タンパク質ミスフォールディングは、トランスサイレチン型アミロイド疾患を含む種々の疾患過程においてある役割を果たす。トランスサイレチンのミスフォールディングを阻害することにより、このような疾患に介入するか、またはこれを治療し、症候を改善し、かつ/あるいは少数の症例では疾患を予防するか、または治すことができる。
【０００７】
TTRアミロイドーシスの1つまたは複数の症候を治療、予防、または改善するための、化合物、組成物および方法が本明細書に記述されている。TTRアミロイドーシスは、典型的には5年から10年以内に死に至り、最近まで不治の病と考えられてきた。肝臓移植は、肝臓が典型的にはアミロイド形成性TTRの供給源であるため、家族性アミロイド多発性ニューロパシーの症例では、野生型(WT)対立遺伝子により疾患関連対立遺伝子を置換する有効な手段である。肝臓移植は、遺伝子治療の一形態として有効であるが、問題がないわけではない。移植には、レシピエントとドナーの両方に対する侵襲的手術の必要性、長期にわたる移植後免疫抑制の治療、ドナーの不足、高いコスト、およびその疾患の進行のため移植に相応しくない多数のTTRアミロイドーシス患者という問題が伴う。残念ながら、WT TTRが沈着し続けることが多いため、ある家族性患者では心アミロイドーシスが、肝臓移植後にも進行する。また、脈絡叢によるTTRの合成のため、移植によってTTRの中枢神経系(CNS)沈着は軽減しない。移植は、最も蔓延しているTTR疾患であり、WT TTRの沈着のため80歳を越える人々の最大約25%が罹患している、老年性全身性アミロイドーシス(SSA)、およびアフリカ系アメリカ人の3.9%で同定される変異体である、V122Iのキャリアーを含む家族性心アミロイドーシスにとって実行可能な選択肢ではない。
【０００８】
ある態様では、本明細書において提供される組成物および方法において使用するための化合物は、式Iを有する：
2007538095.tif 000002
式中、
Yは、COOH、COOR5、CONR7R8、テトラゾリル、CONHOH、B(OH)2、CONHSO2Ar、CONHCH(R6)COOH、OH、CH2OHまたは-(CH2)n-C(R6)(NH2)-COOHであり；
Xは、O、SまたはNR11であり；
R1、R2およびR3は、それぞれ独立に、水素、ハロ、OR5、OAr、OHet、OCH2Ar、OCH2Het、CN、B(OH)2、COOH、CONR7R8、アルキル、ハロアルキル、-(CR9R10)nOH、-(CR9R10)nNR7R8、-(CR9R10)nSHまたはCF3より選択され；
Hetは、ヘテロアリールであり、ハロ、OR、アルキルまたはハロアルキルで置換されていてもよく；
Arは、アリールであり、ハロ、OR、アルキルまたはハロアルキルで置換されていてもよく；
Rは、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールであり；
R5は、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリルまたはアラルキルであり；
R6は、天然に存在するα-アミノカルボン酸の側鎖であり；
R7およびR8は、それぞれ独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールであり；
R9およびR10は、それぞれ独立に、水素、ハロ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールであり；
R11は、水素またはアルキルであり；ならびに
nは、0〜3の整数である。
【０００９】
ある態様では、Hetは、ピリミジニル、ピリジル、フリルまたはチエニルである。別の態様では、Hetは、ピリジルである。
【００１０】
別の態様では、R1、R2およびR3は、それぞれ独立に、水素、ハロ、OR5、OAr、OHet、OCH2Ar、OCH2Het、CN、B(OH)2、COOH、CONR7R8、アルキル、-(CR9R10)nOH、-(CR9R10)nNR7R8、-(CR9R10)nSHまたはCF3より選択される。
【００１１】
ある態様では、Yが、COOHであり、4、5、6または7位にある場合、R1、R2およびR3は、Cl、FまたはCF3ではないという条件で、本化合物は、式Iを有する。別の態様では、Yが、COOHであり、かつ4、5、6または7位にある場合、R1、R2およびR3は、3,5-ジフルオロ、2,6-ジフルオロ、2-もしくは3-トリフルオロメチル、3,5-ジクロロまたは2,6-ジクロロではないという条件で、本化合物は、式Iを有する。別の態様では、Yが、COOHであり、かつ4、5、6または7位にある場合、R1、R2およびR3は、全てが水素とは限らないという条件で、本化合物は、式Iを有する。別の態様では、Yが、COOHまたはCONH2である場合、R1、R2およびR3は、アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、COOH、COOR(ここで、Rは、アルキルである)またはOHではないという条件で、本化合物は、式Iを有する。別の態様では、Yが、COOHであり、かつXが、NHである場合、R1、R2およびR3は、4-CNではないという条件で、本化合物は、式Iを有する。別の態様では、Yが、COOHである場合、R1、R2およびR3は、CNではないという条件で、本化合物は、式Iを有する。別の態様では、Yが、COOHまたはCONH2である場合、R1、R2およびR3は、アルキル、アルコキシ、シクロアルコキシまたはCNではないという条件で、本化合物は、式Iを有する。別の態様では、Yが、COOHまたはCONH2である場合、R1、R2およびR3は、3-、4-、もしくは5-アルキル、4-アルコキシまたは4-シクロアルコキシではないという条件で、本化合物は、式Iを有する。
【００１２】
また本明細書において提供されるのは、本明細書において提供される化合物を含む薬学的組成物である。
【００１３】
組織中または体液中でトランスサイレチンを安定化し、それによってミスフォールディングを阻害する方法もまた提供される。一般に、この方法は、トランスサイレチンに結合して、トランスサイレチン四量体の未変性状態の動的安定化によりトランスサイレチン四量体の解離を妨げる、安定化量の本明細書において提供される化合物を、組織または体液に投与することを伴う。
【００１４】
即ち、病変組織においてトランスサイレチンを安定化する方法は、ミスフォールディングを改善し、かつ関連疾患の症候を軽減し、そして疾患に応じて、疾患の治癒の一助となりうる。また本明細書において企図されるのは、組織内および/または細胞内におけるトランスサイレチンのミスフォールディングの阻害である。ミスフォールディングの程度、よって本方法により達成される阻害の程度は、実施例、および国際特許出願公開公報第2004/056315号に記載されているような、種々の方法により評価することができる。上記参照出願の開示内容は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【００１５】
また本明細書において提供されるのは、トランスサイレチン型アミロイド疾患の1つまたは複数の症候を治療、予防、または改善する方法であって、治療有効量の本明細書において提供される化合物を投与することを伴う方法である。ある態様では、化合物は、トランスサイレチン四量体の未変性状態の動的安定化によりトランスサイレチン四量体の解離を妨げる。トランスサイレチン型アミロイド疾患は、例えば、家族性アミロイド多発性ニューロパシー、家族性アミロイド心筋症、または老年性全身性アミロイドーシスであってもよい。他のトランスサイレチン型アミロイド疾患は、特に限定されないが、アルツハイマー病、海綿状脳症(クロイツフェルト・ヤコブ病)、多発性ニューロパシー、II型糖尿病および甲状腺髄様癌を含む(例えば、国際特許出願公開公報第98/27972号および第95/12815号を参照されたい)。
【００１６】
本明細書において提供される化合物を投与することにより、トランスサイレチン介在性疾患または障害の1つまたは複数の症候を治療、予防、または改善する方法が提供される。トランスサイレチン介在性疾患および障害は、特に限定されないが、肥満症を含む(例えば、国際特許出願公開公報第02/059621号を参照されたい)。
【００１７】
さらに提供されるのは、本明細書において提供される化合物または組成物を用いてTTR四量体を安定化する方法である。また、本明細書において提供される化合物または組成物を用いてTTRアミロイドの形成を阻害する方法も提供される。
【００１８】
また本明細書において提供されるのは、トランスサイレチン型アミロイド疾患(例えば、家族性アミロイド多発性ニューロパシー、家族性アミロイド心筋症、または老年性全身性アミロイドーシス)の1つまたは複数の症候の治療、予防、または改善のための、本明細書に記載される化合物または薬学的組成物のいずれかの使用である。
【００１９】
また本明細書において提供されるのは、トランスサイレチン型アミロイド疾患(例えば、家族性アミロイド多発性ニューロパシー、家族性アミロイド心筋症、または老年性全身性アミロイドーシス)の1つまたは複数の症候の治療、予防、または改善のための薬剤の製造における、本明細書に記載される化合物または薬学的組成物のいずれかの使用である。
【００２０】
以下を含む製品もまた提供される：包装材料；TTRミスフォールディングを妨げるのに有効な、あるいはTTRミスフォールディングに関連する疾患もしくは障害、またはTTRミスフォールディングが影響する疾患もしくは障害の1つまたは複数の症候の治療、予防または改善に有効であり、包装材料内にある、本明細書において提供される化合物または薬学的に許容されるその誘導体；および本化合物もしくは組成物、または薬学的に許容されるその誘導体が、TTRフォールディングを調節するために、あるいはTTRミスフォールディングに関連する疾患もしくは障害、またはTTRミスフォールディングが影響する疾患もしくは障害の1つまたは複数の症候の治療、予防または改善に使用されることを示す、ラベル。
【００２１】
詳細な説明
A.  定義
特に断りない限り、本明細書において使用される全ての技術および科学用語は、本発明が属する当該分野において通常の技術者が共通に理解するものと同じ意味を有する。全ての特許、出願、公開出願および他の刊行物は、その全体が参照により組み入れられる。本明細書中のある用語に複数の定義が存在する場合、特に断りない限りこの項の定義が優先する。
【００２２】
本明細書において使用される場合、トランスサイレチンまたはTTRは、二量体-二量体界面に2個の同一の漏斗型結合部位(ここに、甲状腺ホルモン(T4)は、血漿およびCSF中で結合することができる)を有する、2,2,2対称性を特徴とする、55kDaのホモ四量体である。TTRは、典型的には1当量未満のホロレチノール結合タンパク質に結合している。TTRは、生理条件下で四量体化する127残基タンパク質である。TTRは、血清中ではチロキシンの第3の輸送体を、脳脊髄液中では第1の担体を務める。TTRはまた、レチノール結合タンパク質との結合によってレチノールを輸送する。TTRは、低pHでアミロイドを形成する。
【００２３】
本明細書において使用される場合、化合物の薬学的に許容される誘導体は、その塩、エステル、エノールエーテル、エノールエステル、アセタール、ケタール、オルトエステル、ヘミアセタール、ヘミケタール、溶媒和物、水和物またはプロドラッグを含む。このような誘導体は、このような誘導体化のための既知の方法を用いて、当業者には容易に調製することができる。製造される化合物は、実質的な毒性作用なしに動物またはヒトに投与することができ、薬学的に活性であるか、またはプロドラッグのいずれかである。薬学的に許容される塩は、特に限定されないが、アミン塩(特に限定されないが、N,N'-ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、アンモニア、ジエタノールアミンおよび他のヒドロキシアルキルアミン、エチレンジアミン、N-メチルグルカミン、プロカイン、N-ベンジルフェネチルアミン、1-パラクロロベンジル-2-ピロリジン-1'-イルメチル-ベンゾイミダゾール、ジエチルアミンおよび他のアルキルアミン、ピペラジンおよびトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンなど)；アルカリ金属塩(特に限定されないが、リチウム、カリウムおよびナトリウムなど)；アルカリ土類金属塩(特に限定されないが、バリウム、カルシウムおよびマグネシウムなど)；遷移金属塩(特に限定されないが、亜鉛など)；および他の金属塩(特に限定されないが、リン酸水素ナトリウムおよびリン酸二ナトリウムなど)を含み；さらには特に限定されないが、鉱酸の塩(特に限定されないが、塩酸塩および硫酸塩など)；および有機酸の塩(特に限定されないが、酢酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、酪酸塩、吉草酸塩およびフマル酸塩など)を含む。他の薬学的に許容される塩は、酸性塩(酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、カンホラート、カンファースルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、2-ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、2-ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、3-フェニル-プロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシラートおよびウンデカン酸塩など)；塩基性塩［アンモニウム塩、アルカリ金属塩(ナトリウムおよびカリウム塩など)、アルカリ土類金属塩(カルシウムおよびマグネシウム塩など)、有機塩基との塩(ジシクロヘキシルアミン塩、N-メチル-D-グルカミンなど)、およびアミノ酸との塩(アルギニン、リジンなど)を含む］などを含む。また、塩基性窒素含有基は、低級アルキルハロゲン化物(塩化、臭化およびヨウ化メチル、エチル、プロピル、およびブチルなど)；硫酸ジアルキル(硫酸ジメチル、ジエチル、ジブチルおよびジアミルなど)；長鎖ハロゲン化物(塩化、臭化およびヨウ化デシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリルなど)；アラルキルハロゲン化物(臭化ベンジルおよびフェネチル��ど)などのような物質で四級化することができる。水または油溶性または分散性生成物は、こうして得られる。薬学的に許容されるエステルは、特に限定されないが、酸基(特に限定されないが、カルボン酸、リン酸、ホスフィン酸、スルホン酸、スルフィン酸およびボロン酸を含む)のアルキル、アルケニル、アルキニル、およびシクロアルキルエステルを含む。薬学的に許容されるエノールエーテルは、特に限定されないが、式：C=C(OR)(式中、Rは、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはシクロアルキルである)の誘導体を含む。薬学的に許容されるエノールエステルは、特に限定されないが、式：C=C(OC(O)R)(式中、Rは、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはシクロアルキルである)の誘導体を含む。薬学的に許容される溶媒和物および水和物は、化合物と1個または複数の溶媒または水分子、または1から約100個、または1から約10個、または1から約2、3もしくは4個の溶媒または水分子との複合体である。
【００２４】
本明細書において使用される場合、治療とは、疾患または障害の1つまたは複数の症候を改善するか、そうでなければ有利に変化させる任意のやり方を意味する。治療とはまた、本明細書における組成物の任意の薬学的使用、例えばTTR介在性疾患もしくは障害、またはTTRミスフォールディングを含む、TTRが影響する疾患もしくは障害を処置するための使用を包含する。
【００２５】
本明細書において使用される場合、特定の化合物または薬学的組成物の投与による特定の障害の症候の改善とは、永続的であろうと一時的であろうと、持続的であろうと過渡的であろうと、組成物の投与に帰すことができるかまたはこれに関連する、任意の軽減を意味する。
【００２６】
本明細書において使用される場合、IC50とは、TTRミスフォールディングの阻害のような、応答を測定するアッセイにおいて最大応答の50%阻害を実現する特定の被験化合物の量、濃度または用量を意味する。
【００２７】
本明細書において使用される場合、EC50とは、特定の被験化合物により誘導、惹起または増強される、特定の応答の最大発現の50%での用量依存性応答を引き出す、特定の被験化合物の用量、濃度または量を意味する。
【００２８】
本明細書において使用される場合、プロドラッグとは、インビボ投与されると、生物学的に、薬学的に、または治療学的に活性型の化合物へと、1つまたは複数の工程もしくは過程により代謝されるか、そうでなければ変換される化合物である。プロドラッグを製造するには、薬学的に活性な化合物は、その活性化合物が代謝過程により再生されるように修飾される。プロドラッグは、薬物の代謝安定性または輸送特性を変化させるために、副作用または毒性をマスクするために、薬物の香味を改善するために、あるいは薬物の他の特性または性質を変化させるために、設計してもよい。薬力学的過程およびインビボの薬物代謝の知識によって、当業者であれば、一旦薬学的に活性な化合物が分かると、その化合物のプロドラッグを設計することができる(例えば、Nogrady (1985) Medicinal Chemistry A Biochemical Approach, Oxford University Press, New York, pages 388-392を参照されたい)。
【００２９】
当然のことながら、本明細書において提供される化合物は、キラル中心を含んでもよい。このようなキラル中心は、(R)または(S)立体配置のいずれかであっても、あるいはその混合物であってもよい。即ち、本明細書において提供される化合物は、エナンチオマーとして純粋であっても、または立体異性体の、もしくはジアステレオマーの混合物であってもよい。アミノ酸残基の場合には、このような残基は、L-またはD型のいずれかであってよい。天然に存在するアミノ酸残基の立体配置は、一般にLである。明記されていないとき、この残基はL型である。本明細書において使用される場合、「アミノ酸」という用語は、ラセミ体であるか、またはD-もしくはL-立体配置のいずれかである、α-アミノ酸を意味する。アミノ酸記号に先行する記号「d」(例えば、dAla、dSer、dValなど)は、アミノ酸のD-異性体を意味する。アミノ酸記号に先行する記号「dl」(例えば、dlPip)は、アミノ酸のL-およびD-異性体の混合物を意味する。当然のことながら、本明細書において提供される化合物のキラル中心は、インビボでエピマー化を受けてもよい。そのため、当業者であれば、インビボでエピマー化を受ける化合物については、その(R)型での化合物の投与は、その(S)型での化合物の投与と同等であることを認める。
【００３０】
本明細書において使用される場合、実質的に純粋とは、そのような純度を評価するために当業者が使用する標準的分析方法(薄層クロマトグラフィー(TLC)、ゲル電気泳動、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)および質量分析(MS)など)により測定する場合、容易に検出できる不純物を含まないように見えるほど十分に均質であるか、あるいはそれ以上精製しても、酵素活性および生物学的活性などの物質の物理的および化学的性質に検出可能な変化がないくらい十分に純粋であることを意味する。実質的に化学的に純粋な化合物を製造するための化合物の精製方法は、当業者には公知である。しかし実質的に化学的に純粋な化合物は、立体異性体の混合物であってもよい。このような場合には、さらなる精製により、化合物の比活性が上昇するかもしれない。
【００３１】
本明細書において使用される場合、アルキル、アルケニルおよびアルキニル炭素鎖は、明記されていない場合、1から20個の炭素、または1もしくは2から16個の炭素を含み、直鎖であるか、または分岐している。2から20個の炭素のアルケニル炭素鎖は、特定の態様では、1から8個の二重結合を含み、2から16個の炭素のアルケニル炭素鎖は、特定の態様では、1から5個の二重結合を含む。2から20個の炭素のアルキニル炭素鎖は、特定の態様では、1から8個の三重結合を含み、2から16個の炭素のアルキニル炭素鎖は、特定の態様では、1から5個の三重結合を含む。本明細書において具体例としてのアルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、特に限定されないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、n-ブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、イソペンチル、ネオペンチル、tert-ペンチル、イソヘキシル、アリル(プロペニル)およびプロパルギル(プロピニル)を含む。本明細書において使用される場合、低級アルキル、低級アルケニル、および低級アルキニルとは、約1個または約2個の炭素から約6個までの炭素を有する炭素鎖を意味する。本明細書において使用される場合、「アル(ケニ)(キニ)ル」とは、少なくとも1個の二重結合と少なくとも1個の三重結合とを含むアルキル基を意味する。
【００３２】
本明細書において使用される場合、「シクロアルキル」とは、特定の態様では3から10個の炭素原子の、他の態様では3から6個の炭素原子の飽和単環または多環系を意味し；シクロアルケニルおよびシクロアルキニルとは、それぞれ少なくとも1個の二重結合および少なくとも1個の三重結合を含む、単環または多環系を意味する。シクロアルケニルおよびシクロアルキニル基は、特定の態様では、3から10個の炭素原子を含んでよいが、さらなる態様ではシクロアルケニル基は、4から7個の炭素原子を含み、さらなる態様ではシクロアルキニル基は、8から10個の炭素原子を含む。シクロアルキル、シクロアルケニルおよびシクロアルキニル基の環系は、1個の環または2個以上の環(縮合、架橋またはスピロ結合式に結合していてよい)から成っていてよい。「シクロアル(ケニ)(キニ)ル」とは、少なくとも1個の二重結合と少なくとも1個の三重結合とを含むシクロアルキル基を意味する。
【００３３】
本明細書において使用される場合、「アリール」とは、6から19個の炭素原子を含む芳香族の単環または多環基を意味する。アリール基は、特に限定されないが、非置換または置換フルオレニル、非置換または置換フェニル、および非置換または置換ナフチルのような基を含む。
【００３４】
本明細書において使用される場合、「ヘテロアリール」とは、特定の態様では約5から約15個の環員の単環式または多環式の芳香環系を意味し、ここで環系内の原子の1個または複数、ある態様では1から3個が、ヘテロ原子、即ち、特に限定されないが、窒素、酸素または硫黄を含む、炭素以外の元素である。ヘテロアリール基は、任意でベンゼン環に縮合していてもよい。ヘテロアリール基は、特に限定されないが、フリル、イミダゾリル、ピリミジニル、テトラゾリル、チエニル、ピリジル、ピロリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、トリアゾリル、キノリニルおよびイソキノリニルを含む。
【００３５】
本明細書において使用される場合、「ヘテロアリーリウム」基は、1個または複数のヘテロ原子が正に荷電しているヘテロアリール基である。
【００３６】
本明細書において使用される場合、「ヘテロシクリル」とは、ある態様では3から10個の環員の、別の態様では4から7個の環員の、さらなる態様では5から6個の環員の単環式または多環式の非芳香環系を意味し、ここで環系内の原子の1個または複数、特定の態様では1から3個が、ヘテロ原子、即ち、特に限定されないが、窒素、酸素または硫黄を含む、炭素以外の元素である。ヘテロ原子が窒素である態様では、窒素は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、アシル、グアニジノで置換されていてもよく、あるいは窒素は四級化されて、置換基は上記のように選択されるアンモニウム基を形成してもよい。
【００３７】
本明細書において使用される場合、「アラルキル」とは、アルキルの1個の水素原子がアリール基により置換されている、アルキル基を意味する。
【００３８】
本明細書において使用される場合、「ヘテロアラルキル」とは、アルキルの1個の水素原子がヘテロアリール基により置換されている、アルキル基を意味する。
【００３９】
本明細書において使用される場合、「ハロ」、「ハロゲン」または「ハロゲン化物」とは、F、Cl、BrまたはIを意味する。
【００４０】
本明細書において使用される場合、擬ハロゲン化物または擬ハロ基は、実質的にハロゲン化物と同様に挙動する基である。このような化合物は、ハロゲン化物と同じやり方で使用することができ、同じやり方で処理することができる。擬ハロゲン化物は、特に限定されないが、シアン化物、シアナート、チオシアナート、セレノシアナート、トリフルオロメトキシおよびアジドを含む。
【００４１】
本明細書において使用される場合、「ハロアルキル」とは、1個または複数の水素原子がハロゲンにより置換されている、アルキル基を意味する。このような基は、特に限定されないが、クロロメチル、トリフルオロメチルおよび1-クロロ-2-フルオロエチルを含む。
【００４２】
本明細書において使用される場合、「ハロアルコキシ」とは、RO-を意味し、ここでRは、ハロアルキル基である。
【００４３】
本明細書において使用される場合、「スルフィニル」または「チオニル」とは、-S(O)-を意味する。本明細書において使用される場合、「スルホニル」または「スルフリル」とは、-S(O)2-を意味する。本明細書において使用される場合、「スルホ」とは、-S(O)2O-を意味する。
【００４４】
本明細書において使用される場合、「カルボキシ」とは、二価ラジカルの-C(O)O-を意味する。
【００４５】
本明細書において使用される場合、「アミノカルボニル」とは、-C(O)NH2を意味する。
【００４６】
本明細書において使用される場合、「アルキルアミノカルボニル」とは、-C(O)NHRを意味し、式中Rは、低級アルキルを含むアルキルである。本明細書において使用される場合、「ジアルキルアミノカルボニル」とは、-C(O)NR'Rを意味し、式中R'およびRは、独立に、低級アルキルを含むアルキルであり；「カルボキサミド」とは、式：-NR'CORの基を意味し、式中R'およびRは、独立に、低級アルキルを含むアルキルである。
【００４７】
本明細書において使用される場合、「ジアリールアミノカルボニル」とは、-C(O)NRR'を意味し、式中RおよびR'は、独立に、フェニルのような、低級アリールを含むアリールより選択される。
【００４８】
本明細書において使用される場合、「アリールアルキルアミノカルボニル」とは、-C(O)NRR'を意味し、式中RおよびR'の一方は、フェニルのような、低級アリールを含むアリールであり、RおよびR'のもう一方は、低級アルキルを含むアルキルである。
【００４９】
本明細書において使用される場合、「アリールアミノカルボニル」とは、-C(O)NHRを意味し、式中Rは、フェニルのような、低級アリールを含むアリールである。
【００５０】
本明細書において使用される場合、「ヒドロキシカルボニル」とは、-COOHを意味する。
【００５１】
本明細書において使用される場合、「アルコキシカルボニル」とは、-C(O)ORを意味し、式中Rは、低級アルキルを含むアルキルである。
【００５２】
本明細書において使用される場合、「アリールオキシカルボニル」とは、-C(O)ORを意味し、式中Rは、フェニルのような、低級アリールを含むアリールである。
【００５３】
本明細書において使用される場合、「アルコキシ」および「アルキルチオ」とは、RO-およびRS-を意味し、式中Rは、低級アルキルを含むアルキルである。
【００５４】
本明細書において使用される場合、「アリールオキシ」および「アリールチオ」とは、RO-およびRS-を意味し、式中Rは、フェニルのような、低級アリールを含むアリールである。
【００５５】
本明細書において使用される場合、「アルキレン」とは、直鎖、分岐または環状の、特定の態様では、直鎖または分岐の、ある態様では1から約20個の炭素原子を有し、別の態様では1から12個の炭素を有する、二価脂肪族炭化水素基を意味する。さらなる態様では、アルキレンは、低級アルキレンを含む。任意で、アルキレン基に沿って、1個または複数の酸素、S(=O)およびS(=O)2基を含む硫黄、または-NR-および-N+RR-基を含む置換もしくは非置換窒素原子が挿入されていてもよく、ここで窒素置換基は、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキルまたはCOR'であり、式中R'は、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、-OYまたは-NYYであり、式中Yは、水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクリルである。アルキレン基は、特に限定されないが、メチレン(-CH2-)、エチレン(-CH2CH2-)、プロピレン(-(CH2)3-)、メチレンジオキシ(-O-CH2-O-)およびエチレンジオキシ(-O-(CH2)2-O-)を含む。「低級アルキレン」という用語は、1から6個の炭素を有するアルキレン基を意味する。特定の態様では、アルキレン基は、1から3個の炭素原子のアルキレンを含む低級アルキレンである。
【００５６】
本明細書において使用される場合、「アザアルキレン」とは、-(CRR)n-NR-(CRR)m- を意味し、式中nおよびmは、それぞれ独立に0から4の整数である。本明細書において使用される場合、「オキサアルキレン」とは、-(CRR)n-O-(CRR)m- を意味し、式中nおよびmは、それぞれ独立に0から4の整数である。本明細書において使用される場合、「チアアルキレン」とは、-(CRR)n-S-(CRR)m-、-(CRR)n-S(=O)-(CRR)m-、および-(CRR)n-S(=O)2-(CRR)m- を意味し、式中nおよびmは、それぞれ独立に0から4の整数である。
【００５７】
本明細書において使用される場合、「アルケニレン」とは、直鎖、分岐または環状の、ある態様では直鎖または分岐の、特定の態様では、2から約20個の炭素原子と少なくとも1個の二重結合を有する、他の態様では1から12個の炭素を有する、二価脂肪族炭化水素基を意味する。さらなる態様では、アルケニレン基は、低級アルキレンを含む。任意で、アルケニレン基に沿って、1個または複数の酸素、硫黄または置換もしくは非置換窒素原子が挿入されていてもよく、ここで窒素置換基は、アルキルである。アルケニレン基は、特に限定されないが、-CH=CH-CH=CH-および-CH=CH-CH2-を含む。「低級アルケニレン」という用語は、2から6個の炭素を有するアルケニレン基を意味する。特定の態様では、アルケニレン基は、3から4個の炭素原子のアルケニレンを含む低級アルケニレンである。
【００５８】
本明細書において使用される場合、「アルキニレン」とは、直鎖、分岐または環状の、特定の態様では直鎖または分岐の、ある態様では2から約20個の炭素原子と少なくとも1個の三重結合を有する、別の態様では1から12個の炭素を有する、二価脂肪族炭化水素基を意味する。さらなる態様では、アルキニレンは、低級アルキニレンを含む。任意で、アルキニレン基に沿って、1個または複数の酸素、硫黄または置換もしくは非置換窒素原子が挿入されていてもよく、ここで窒素置換基は、アルキルである。アルキニレン基は、特に限定されないが、-C≡C-C≡C-、-C≡C-および-C≡C-CH2-を含む。「低級アルキニレン」という用語は、2から6個の炭素を有するアルキニレン基を意味する。特定の態様では、アルキニレン基は、3から4個の炭素原子のアルキニレンを含む低級アルキニレンである。
【００５９】
本明細書において使用される場合、「アル(ケニ)(キニ)レン」とは、直鎖、分岐または環状の、特定の態様では直鎖または分岐の、ある態様では2から約20個の炭素原子と少なくとも1個の三重結合、および少なくとも1個の二重結合を有する、別の態様では1から12個の炭素を有する、二価脂肪族炭化水素基を意味する。さらなる態様では、アル(ケニ)(キニ)レンは、低級アル(ケニ)(キニ)レンを含む。任意で、アルキニレン基に沿って、1個または複数の酸素、硫黄または置換もしくは非置換窒素原子が挿入されていてもよく、ここで窒素置換基は、アルキルである。アル(ケニ)(キニ)レン基は、特に限定されないが、-C=C-(CH2)n-C≡C-を含み、式中nは、1または2である。「低級アル(ケニ)(キニ)レン」という用語は、最大6個の炭素を有するアル(ケニ)(キニ)レン基を意味する。特定の態様では、アル(ケニ)(キニ)レン基は、約4個の炭素原子を有する。
【００６０】
本明細書において使用される場合、「シクロアルキレン」とは、特定の態様では3から10個の炭素原子の、他の態様では3から6個の炭素原子の、二価飽和単環系または多環系を意味し；シクロアルケニレンおよびシクロアルキニレンとは、それぞれ少なくとも1個の二重結合および少なくとも1個の三重結合を含む、二価の単環系または多環系を意味する。シクロアルケニレンおよびシクロアルキニレン基は、特定の態様では、3から10個の炭素原子を含んでもよく、特定の態様ではシクロアルケニレン基は、4から7個の炭素原子を含んでもよく、かつ特定の態様ではシクロアルキニレン基は、8から10個の炭素原子を含んでもよい。シクロアルキレン、シクロアルケニレンおよびシクロアルキニレン基の環系は、1個の環、または2個以上の環(縮合、架橋またはスピロ結合式に結合していてよい)から成っていてよい。「シクロアル(ケニ)(キニ)レン」とは、少なくとも1個の二重結合および少なくとも1個の三重結合を含むシクロアルキレン基を意味する。
【００６１】
本明細書において使用される場合、「アリーレン」とは、単環式または多環式の、特定の態様では単環式の、ある態様では5から約20個の炭素原子と少なくとも1個の芳香環を有する、別の態様では5から12個の炭素を有する、二価芳香族基を意味する。さらなる態様では、アリーレンは、低級アリーレンを含む。アリーレン基は、特に限定されないが、1,2-、1,3-および1,4-フェニレンを含む。「低級アリーレン」という用語は、6個の炭素を有するアリーレン基を意味する。
【００６２】
本明細書において使用される場合、「ヘテロアリーレン」とは、ある態様では環内に約5から約15個の原子の二価の単環式または多環式芳香環系を意味し、ここで環系内の原子の1個または複数、特定の態様では1から3個は、ヘテロ原子、即ち、特に限定されないが、窒素、酸素または硫黄を含む、炭素以外の元素である。「低級ヘテロアリーレン」という用語は、環内に5個または6個の原子を有するヘテロアリーレン基を意味する。
【００６３】
本明細書において使用される場合、「ヘテロシクリレン」とは、特定の態様では3から10個の環員の、ある態様では4から7個の環員の、別の態様では5から6個の環員の二価の単環式または多環式非芳香環系を意味し、ここで環系内の原子の1個または複数(1から3個を含む)は、ヘテロ原子、即ち、特に限定されないが、窒素、酸素または硫黄を含む、炭素以外の元素である。
【００６４】
本明細書において使用される場合、「置換アルキル」、「置換アルケニル」、「置換アルキニル」、「置換シクロアルキル」、「置換シクロアルケニル」、「置換シクロアルキニル」、「置換アリール」、「置換ヘテロアリール」、「置換ヘテロシクリル」、「置換アルキレン」、「置換アルケニレン」、「置換アルキニレン」、「置換シクロアルキレン」、「置換シクロアルケニレン」、「置換シクロアルキニレン」、「置換アリーレン」、「置換ヘテロアリーレン」および「置換ヘテロシクリレン」とは、それぞれ、1個または複数の置換基、特定の態様では1個、2個、3個または4個の置換基で置換されている、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、シクロアルキレン、シクロアルケニレン、シクロアルキニレン、アリーレン、ヘテロアリーレンおよびヘテロシクリレン基を意味し、ここで置換基は、本明細書に定義されるものであり、ある態様ではQ1より選択される。
【００６５】
本明細書において使用される場合、「アルキリデン」とは、別の基の1個の原子に結合して二重結合を形成している、=CR'R''のような二価基を意味する。アルキリデン基は、特に限定されないが、メチリデン(=CH2)およびエチリデン(=CHCH3)を含む。本明細書において使用される場合、「アリールアルキリデン」とは、R'またはR''のいずれかがアリール基である、アルキリデン基を意味する。「シクロアルキリデン」基は、R'およびR''が、結合して炭素環を形成しているものである。「ヘテロシクリリデン」基は、R'およびR''の少なくとも1個が、鎖中にヘテロ原子を含み、かつR'およびR''が、結合して複素環を形成しているものである。
【００６６】
本明細書において使用される場合、「アミド」とは、二価基の-C(O)NH-を意味する。「チオアミド」とは、二価基の-C(S)NH-を意味する。「オキシアミド」とは、二価基の-OC(O)NH-を意味する。「チアアミド」とは、二価基の-SC(O)NH-を意味する。「ジチアアミド」とは、二価基の-SC(S)NH-を意味する。「ウレイド」とは、二価基の-HNC(O)NH-を意味する。「チオウレイド」とは、二価基の-HNC(S)NH-を意味する。
【００６７】
本明細書において使用される場合、「セミカルバジド」とは、-NHC(O)NHNH-を意味する。「カルバザート」とは、二価基の-OC(O)NHNH-を意味する。「イソチオカルバザート」とは、二価基の-SC(O)NHNH-を意味する。「チオカルバザート」とは、二価基の-OC(S)NHNH-を意味する。「スルホニルヒドラジド」とは、二価基の-SO2NHNH-を意味する。「ヒドラジド」とは、二価基の-C(O)NHNH-を意味する。「アゾ」とは、二価基の-N=N-を意味する。「ヒドラジニル」とは、二価基の-NH-NH-を意味する。
【００６８】
ある置換基の数が明記されていない場合(例えば、ハロアルキル)、1個または複数の置換基が存在してよい。例えば、「ハロアルキル」は、1個または複数の同一または異なるハロゲンを含んでいてもよい。別の例として、「C1-3アルコキシフェニル」は、1個、2個または3個の炭素を含む、1個または複数の同一または異なるアルコキシ基を含んでいてもよい。
【００６９】
本明細書において使用される場合、任意の保護基、アミノ酸および他の化合物の略語は、特に断りない限り、その一般的用法、広く認められている略語、またはIUPAC-IUB生化学命名法に関する委員会(Commision on Biochemical Nomenclature)による((1972) Biochem. 11:942-944を参照されたい)。
【００７０】
B.  TTRおよびアミロイド疾患
少なくとも幾つかのアミロイド疾患は、最終的には繊維状クロス-β-シート四次構造を与える、20個を超える非相同タンパク質またはタンパク質断片のうちのいずれか1個の沈着によって引き起こされると考えられる。トランスサイレチンのような正常にフォールディングされたタンパク質からのアミロイドフィブリルの形成には、アセンブリー能のある中間体を産生するためのタンパク質ミスフォールディングが必要である。トランスサイレチン(TTR)アミロイド形成の過程は、3つの異なるアミロイド疾患である、老年性全身性アミロイドーシス(SSA)、家族性アミロイド多発性ニューロパシー(FAP)および家族性アミロイド心筋症(FAC)を引き起こすと考えられる。SSAは、野生型TTRの沈着に関連するが、一方FAPおよびFACは、80種を超えるTTR変種のうちの1種のアミロイド形成により引き起こされる。例えば、Colon, W.; Kelly, J.W. Biochemistry 1992, 31, 8654-60; Kelly, J.W. Curr. Opin. Struct. Biol. 1996, 6, 11-7; Liu, K.ら; Nat. Struct. Biol. 2000, 7, 754-7; Westermark, P.ら; Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1990, 87, 2843-5; Saraiva, M.J.ら J. Clin. Invest. 1985, 76, 2171-7; Jacobson, D.R.ら N. Engl. J. Med. 1997, 336, 466-73; Buxbaum, J.N.; Tagoe, C.E. Ann. Rev. Med. 2000, 51, 543-569;およびSaraiva, M.J. J. Hum. Mutat. 1995, 5, 191-6を参照されたい(これらはそれぞれ、その全体が参照により本明細書に組み入れられる)。
【００７１】
TTRは、甲状腺ホルモン(T4)は、血漿およびCSF中で結合することができる二量体-二量体界面に、2個の同一の漏斗型結合部位を有する、2,2,2対称性を特徴とする、55kDaのホモ四量体である。TTRは、典型的には1当量未満のホロレチノール結合タンパク質に結合している。モノマーへの四量体の解離とこれに続くモノマー内での三次構造変化を含むTTRミスフォールディングによって、タンパク質のミスアセンブリーが可能となり、最終的にはアミロイドが生じる。FAPの利用可能な治療は、血中の変種TTRを野生型(WT)タンパク質で置換するための肝臓移植が介在する遺伝子治療を用いる。FACまたはSSAの多くの患者は、60歳を超えており、彼らの健康状態および心機能低下のため肝臓移植の候補ではないため、この治療は、これらの患者の多くには適用できない。さらには、FAPに関連する幾つかのTTR変種では、肝臓移植後に進行性心アミロイドーシスが、心臓組織のwt TTR沈着と共に進展して、死に至る。このTTRは、脈絡叢により合成されるため、肝臓移植治療はまた、軟髄膜にアミロイドフィブリルを沈着させるTTR変種の約10種では奏効せずにCNS疾患に至る。よって、一般的で非侵襲的な薬物に基づく治療方策を開発することが望まれている。薬物は、非タンパク質、非ペプチド、または非核酸性のものであることが望ましい。例えば、それぞれその全体が参照により組み入れられる、Blake, C.C.ら J. Mol. Biol. 1978, 121, 339-56; Wojtczak, A.ら Acta Crystallogr., Sect. D 1996, 758-810;Monaco, H.L.; Rizzi, M.; Coda, A. Science 1995, 268, 1039-41; Lai, Z.; Colon, W.; Kelly, J.W. Biochemistry 1996, 35, 6470-82; Holmgren, G.ら Lancet 1993, 341, 1113-6; Suhr, O.B.; Ericzon, B.G.; Friman, S. Liver Transpl. 2002, 8, 787-94; Dubrey, S.W.ら Transplantation 1997, 64, 74-80; Yazaki, M.ら Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000, 274, 702-6;およびCornwell, C.G.IIIら Am. J. of Med. 1983, 75, 618-623を参照されたい)。
【００７２】
C.  化合物
ある態様では、本明細書において提供される組成物および方法において使用するための化合物は、式IAを有する：
2007538095.tif 000003
式中、Yは、COOH、テトラゾリル、CONHOH、B(OH)2またはOHであり；
Xは、Oであり；
R1、R2およびR3は、それぞれ独立に、水素、ハロ、OH、B(OH)2またはCF3より選択される。
【００７３】
別の態様では、化合物は、YはCOOHである、式Iを有する。別の態様では、Yは、テトラゾリル、B(OH)2またはCONHOHである。別の態様では、YはOHである。
【００７４】
別の態様では、化合物は、R1、R2およびR3が、それぞれ独立に、水素、ハロおよびOHより選択される、式Iを有する。別の態様では、化合物は、R1、R2およびR3が、それぞれ独立に、水素およびCF3より選択される、式Iを有する。別の態様では、化合物は、R1およびR2が、それぞれ独立に水素であり、かつR3がCF3である、式Iを有する。別の態様では、化合物は、R1、R2およびR3が、それぞれ独立に、水素、ハロ、およびB(OH)2より選択される、式Iを有する。別の態様では、化合物は、R1、R2およびR3が、それぞれ独立に、水素、BrおよびIより選択される、式Iを有する。別の態様では、化合物は、R1、R2およびR3が、それぞれ独立に、ハロおよびOHより選択される、式Iを有する。別の態様では、化合物は、R1、R2およびR3が、それぞれ独立に、ハロおよびB(OH)2より選択される、式Iを有する。別の態様では、化合物は、R1およびR2が、それぞれハロであり、かつR3がOHである、式Iを有する。別の態様では、化合物は、R1およびR2が、それぞれハロであり、かつR3がB(OH)2である、式Iを有する。別の態様では、化合物は、R1およびR2が、それぞれハロであり、かつR3がHである、式Iを有する。
【００７５】
別の態様では、式Iの化合物は、下記式を有する：
2007538095.tif 000004
2007538095.tif 000005
2007538095.tif 000006
2007538095.tif 000007
2007538095.tif 000008
2007538095.tif 000009
2007538095.tif 000010
【００７６】
別の態様では、本明細書において提供される化合物は、下記式を有するか、または薬学的に許容されるその誘導体である：
2007538095.tif 000011
式中、Het、XおよびYは、本明細書の他の箇所と同義である。
【００７７】
別の態様では、Hetは、3-または4-ピリジルであり、ハロ、OR、アルキルまたはハロアルキルで置換されていてもよく、ここで、Rは、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールである。別の態様では、Hetは、3-または4-ピリジルであり、ハロ、アルキルまたはハロアルキルで置換されていてもよい。別の態様では、Hetは、3-または4-ピリジルであり、トリフルオロメチル、クロロまたはメチルで置換されていてもよい。
【００７８】
別の態様では、本明細書において提供される化合物は、下記式より選択される：
2007538095.tif 000012
【００７９】
D.  化合物の調製
本明細書において提供される化合物は、以下におよび実施例に示される方法により、または当業者には周知の他の方法により製造することができる。これらの合成法における出発物質は、販売業者から入手することができる(例えば、Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI, USA)。
【００８０】
試薬および溶媒は、Aldrich、Lancaster、Acros、Combi-Blocks、MatrixおよびPfaltz-Bauerから購入した。THFおよびCH2Cl2は、Al2O3を通して乾燥させた。他の溶媒および試薬は、市販の業者から入手して、特に断りない限りさらに精製することなく使用した。反応は、EM Scienceから購入した蛍光指示薬でプレコートされたシリカゲル60F254プレートで分析用薄層クロマトグラフィー(TLC)によりモニターした。TLCプレートの視覚化は、UV照明、リンモリブデン酸処理とこれに続く熱処理、またはモリブデン酸セリウムアンモニウム処理とこれに続く熱処理によって達成した。フラッシュクロマトグラフィーは、EM Scienceからのシリカゲル60(230〜400メッシュ)を用いて実行した。本文中に出された結論に必須である新しい化合物の純度は、HPLCによって測定した。順相HPLCは、Waters 600ポンプ/コントローラー、Waters 996フォトダイオードアレイ検出器およびWaters NovaPak シリカカラムにより実行した。採用した溶媒系は、ヘキサンと酢酸エチルであり、勾配は、50：50のヘキサン：酢酸エチルから0：100のヘキサン：酢酸エチルまで30分間かけて流した。逆相HPLCは、Waters 60ポンプ/コントローラー、Waters 2487二波長検出器およびバイダック(Vydac)のタンパク質およびペプチドC18カラムにより実行した。溶媒系Aは、0.5%トリフルオロ酢酸を含む95：5の水：アセトニトリルであり、溶媒Bは、0.5%トリフルオロ酢酸を含む5：95の水：アセトニトリルとした。勾配は、100：0のA：Bから0：100のA：Bまで20分間かけて流し、100%Bでさらに10分間保持した。円偏光二色性分光法は、AVIV Instrumentsの分光計モデル202SFで実行した。NMRスペクトルは、Varian FT NMR分光計で400MHzのプロトン周波数で記録した。プロトンの化学シフトは、特に断りない限り、内部化学シフト標準としてのCHCl3 (7.26ppm)を基準として百万分率(ppm)で報告される。結合定数は、ヘルツ(Hz)で報告される。炭素の化学シフトは、特に断りない限り、化学シフト標準としてCDCl3 (77.23ppm)を基準として百万分率(ppm)で報告される。
【００８１】
ベンゾオキサゾール合成の一般手順
THF(3mL)中のアミノヒドロキシ安息香酸(0.2mmol)の混合物を、順次ピリジン(500μl、0.6mmol)および所望の酸塩化物(0.2mmol)で処理した。この反応混合物を周囲温度で10時間撹拌し、1時間還流し、真空下で濃縮して、精製せずに次の工程に使用した。
【００８２】
p-トルエンスルホン酸一水和物(380.4mg、2.0mmol)を、キシレン(5mL)中の粗反応混合物に加え、生じた混合物を一晩還流させながら撹拌した。12時間後、この反応物を周囲温度まで冷却し、NaOH (2mL、1N)でクエンチして、相を分離した。水層をHCl (1N)でpH2まで酸性にして、EtOAc (4×3mL)で抽出した。合わせた有機層をMgSO4で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。生じた残渣を、MeOH：ベンゼンの混合物(2mL；1：4)に溶解し、TMS-CHN2(ヘキサン中の2.0M溶液200μL、0.4mmol)により25℃で処理して、反応の進行をTLCによりモニターした(通常0.5時間後に完了)。この反応混合物を真空下で濃縮し、残渣をクロマトグラフィー(10〜25%のEtOAc/ヘキサンの勾配)に付すことにより、目的のベンゾオキサゾールメチルエステルを得た。
【００８３】
このベンゾオキサゾールメチルエステルをTHF：MeOH：H2Oの混合物(3：1：1、0.07M)に溶解して、LiOH.H2O (4当量)で処理した。この反応液を周囲温度で撹拌し、TLCによりモニターした。完了したら、この混合物を1N HClでpH2まで酸性にして、EtOAc (4×)で抽出した。合わせた有機層をMgSO4で乾燥させ、濾過して、濃縮した。残渣を分取薄層クロマトグラフィー(4.9% MeOH、95% CH2Cl2、0.1% HOAc)により精製して、生成物を白色の固体として得た。
【００８４】
または、化合物は、以下に示されるように調製することができる：
2007538095.tif 000013
【００８５】
THF(3mL)中のアミノヒドロキシ安息香酸(0.2mmol)の混合物を、順次ピリジン(500μL、0.6mmol)および所望の酸塩化物(0.2mmol)で処理した。この反応混合物を周囲温度で10時間撹拌し、1時間還流し、真空下で濃縮して、精製せずに次の工程に使用した。
【００８６】
p-トルエンスルホン酸一水和物(380.4mg、2.0mmol)を、キシレン(5mL)中の粗反応混合物に加え、生じた混合物を一晩還流させながら撹拌した。12時間後、この反応物を周囲温度まで冷却し、NaOH (2mL、1N)でクエンチして、相を分離した。水層をHCl(1N)でpH2まで酸性にして、EtOAc (4×3mL)で抽出した。合わせた有機層をMgSO4で乾燥させ、濾過して、真空下で濃縮した。(水性処理は必要でない)。生じた残渣を、MeOH：ベンゼンの混合物(2mL；1：4)に溶解し、TMS-CHN2(ヘキサン中の2.0M溶液200μL、0.4mmol)で25℃で処理して、反応の進行をTLCによりモニターした(通常0.5時間後に完了)。この反応混合物を真空下で濃縮して、残渣をクロマトグラフィー(10〜25%のEtOAc/ヘキサンの勾配)に付すことにより、所望のベンゾオキサゾールメチルエステルを得た。
【００８７】
このベンゾオキサゾールメチルエステルを、THF：MeOH：H2Oの混合物(3：1：1、0.07M)に溶解して、LiOH.H2O(4当量)で処理した。この反応液を周囲温度で撹拌し、TLCによりモニターした。完了したら、この混合物を1N HClでpH2まで酸性にして、EtOAc(4×)で抽出した。合わせた有機層をMgSO4で乾燥させ、濾過して、濃縮した。残渣を分取薄層クロマトグラフィー(4.9% MeOH、95% CH2Cl2、0.1% HOAc)により精製して、生成物を白色の固体として得た。
【００８８】
代替経路：
反応は、キシレン中で水を共沸除去しながら実施した。水性処理後、沈殿固体を濾過し、酢酸エチルに溶解し、ヘキサンで希釈し、30分間撹拌し、次に沈殿した物質を濾別し、濾液を10mlまで濃縮し、沈殿固体を濾過することにより、純粋な化合物をクリーム色の固体として得た。
【００８９】
E.  薬学的組成物の処方
本明細書において提供される薬学的組成物は、トランスサイレチン(TTR)ミスフォールディングに関連する疾患もしくは障害、またはTTRミスフォールディングが影響する疾患もしくは障害の1つまたは複数の症候の予防、治療、または改善に有用な、治療有効量の1つまたは複数の本明細書において提供される化合物を、薬学的に許容される担体中に含む。TTRミスフォールディングに関連する疾患または障害は、特に限定されないが、家族性アミロイド多発性ニューロパシー、家族性アミロイド心筋症、老年性全身性アミロイドーシス、アルツハイマー病、海綿状脳症(クロイツフェルト・ヤコブ病)、多発性ニューロパシー、II型糖尿病、甲状腺髄様癌および肥満症を含む。本明細書において提供される化合物の投与に適した薬学的担体は、特定の投与様式に適していることが当業者に公知である任意の担体を含む。
【００９０】
さらに、化合物は、組成物中の唯一の薬学的活性成分として処方することも、または他の活性成分と併用することもできる。
【００９１】
組成物は、1つまたは複数の本明細書において提供される化合物を含む。化合物は、ある態様では、経口投与用の液剤、懸濁剤、錠剤、分散性錠剤、丸剤、カプセル剤、粉剤、徐放性製剤もしくはエリキシル剤、または非経口投与用の無菌液剤もしくは懸濁剤、ならびに経皮パッチ製剤およびドライパウダー吸入剤のような、適切な薬学的製剤に処方される。ある態様では、上述の化合物は、当該分野において周知の技術および手順を用いて薬学的組成物に処方される(例えば、Ansel Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, Fourth Edition 1985, 126を参照されたい)。
【００９２】
組成物において、有効濃度の1つまたは複数の化合物または薬学的に許容されるその誘導体は、適切な薬学的担体と混合する。化合物は、上述のように、処方の前に、対応する塩、エステル、エノールエーテルまたはエステル、アセタール、ケタール、オルトエステル、ヘミアセタール、ヘミケタール、酸、塩基、溶媒和物、水和物またはプロドラッグとして誘導体化してもよい。組成物中の化合物の濃度は、投与されると、TTRミスフォールディングに関連する疾患もしくは障害またはTTRミスフォールディングが影響する疾患もしくは障害の1つまたは複数の症候を治療、予防、または改善する量の送達に有効な濃度である。
【００９３】
ある態様では、組成物は、単回投与用に処方される。組成物を処方するために、その重量分率の化合物は、処置された症状が、軽減、予防されるか、または1つまたは複数の症候が改善されるような有効濃度で、選択された担体に溶解、懸濁、分散、そうでなければ混合する。
【００９４】
活性化合物は、処置患者に有害な副作用を及ぼすことなく、治療上有用な作用を発揮するのに十分な量で、薬学的に許容される担体中に含められる。治療上有効な濃度は、化合物を、記載されるインビトロおよびインビボ系で試験することにより実験的に決定し、その後ヒトに対する投与量を外挿することができる。
【００９５】
薬学的組成物中の活性化合物の濃度は、活性化合物の吸収、不活化および排出速度、化合物の物理化学特性、処方計画、および投与される量、ならびに当業者には公知である他の因子に依存する。例えば、送達される量は、本明細書に記載されるように、TTRミスフォールディングに関連する疾患もしくは障害、またはTTRミスフォールディングが影響する疾患もしくは障害の1つまたは複数の症候を改善するのに十分なものである。
【００９６】
ある態様では、治療上有効な用量は、約0.1ng/mlから約50〜100μg/mlの活性成分の血清濃度を生じるべきである。薬学的組成物は、別の態様では、1日に体重1キログラム当たり約0.001mgから約2000mgの化合物の用量を提供するべきである。薬学的単位剤形は、単位剤形当たり、約0.01mg、0.1mgまたは1mgから約500mg、1000mgまたは2000mg、ある態様では約10mgから約500mgの活性成分または必須成分の組合せを提供するように調製される。
【００９７】
活性成分は、一度に投与しても、または一定時間の間隔で投与される幾つかの低用量に分割してもよい。当然ながら、正確な用量と治療期間は、治療される疾患の関数であり、既知の試験プロトコールを用いて実験的に、またはインビボもしくはインビトロ試験データからの外挿により決定することができる。濃度および用量値はまた、軽減させるべき症状の重篤度により変化しうることにも注意すべきである。さらに当然ながら、任意の特定の対象について、具体的な用量用法は、個々のニーズ、および組成物の投与を施すかまたは投与を指図する人物の専門的判断により時間をかけて調整すべきであり、本明細書に述べられる濃度範囲は、単に例示的なものであり、主張される組成物の範囲または活用を何ら限定するものではない。
【００９８】
化合物の溶解度が不十分である場合に、化合物を可溶化するための方法を利用することができる。このような方法は、当業者には公知であり、特に限定されないが、ジメチルスルホキシド(DMSO)のような共溶媒の使用、TWEEN(登録商標)のような界面活性剤の使用、または重炭酸ナトリウム水溶液への溶解を含む。化合物のプロドラッグのような、化合物の誘導体はまた、有効な薬学的組成物を処方する際に使用してもよい。
【００９９】
化合物の混合または添加の際に、生じた混合物は、溶液、懸濁液、乳濁液などであってよい。生じた混合物の形状は、意図される投与様式および選択された担体または溶剤への化合物の溶解度を含む、幾つかの因子に依存する。有効濃度は、処置される疾患、障害または症状の症候を改善するのに十分なものであり、実験的に決定することができる。
【０１００】
薬学的組成物は、適量の化合物または薬学的に許容されるその誘導体を含む、錠剤、カプセル剤、丸剤、粉剤、顆粒剤、無菌非経口液剤または懸濁剤、および経口液剤または懸濁剤、ならびに油水乳剤のような単位剤形としてヒトおよび動物への投与のために提供される。薬学的に治療活性な化合物およびその誘導体は、ある態様では、単位剤形または多回投与剤形として処方され投与される。本明細書において使用される場合、単位剤形とは、当該分野において公知であるように、ヒトおよび動物対象に適しており、かつ個々に包装されている、物理的に別個の単位を意味する。各単位剤形は、必要な薬学的担体、溶剤または希釈剤と連携して、所望の治療効果を生み出すのに十分な所定量の治療活性化合物を含む。単位剤形の例は、アンプルおよびシリンジ、ならびに個々に包装された錠剤またはカプセル剤を含む。単位剤形は、分割して、またはその倍数単位で投与してもよい。多回投与剤形は、分離した単位剤形として投与される、単一容器に包装された複数の同一単位剤形である。多回投与剤形の例は、バイアル、錠剤もしくはカプセル剤の瓶、またはパイントもしくはガロン単位の瓶を含む。よって、多回投与剤形は、包装で分離されていない単位用量の倍数である。
【０１０１】
液体の薬学的に投与可能な組成物は、例えば、上記と同義の活性化合物および任意の薬学的補助剤を、例えば、水、食塩水、水性デキストロース、グリセロール、グリコール、エタノールなどのような担体に溶解、分散、そうでなければ混合することにより、溶液または懸濁液を生成することによって、調製することができる。必要に応じて、投与される薬学的組成物はまた、湿潤剤、乳化剤、可溶化剤、pH緩衝剤など(例えば、アセテート、クエン酸ナトリウム、シクロデキストリン誘導体、モノラウリン酸ソルビタン、トリエタノールアミン酢酸ナトリウム、オレイン酸トリエタノールアミン、および他のそのような物質)のような、少量の非毒性補助剤を含むことができる。
【０１０２】
このような投与剤形の実際の調製方法は、当業者には公知であるか、または明らかである；例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 第15版, 1975を参照されたい。
【０１０３】
0.005%〜100%の範囲で活性成分を含み、残りは非毒性担体からなる、投与剤形または組成物を調製することができる。これらの組成物の調製方法は、当業者には公知である。企図された組成物は、0.001%〜100%の活性成分、ある態様では0.1〜95%、別の態様では75〜85%を含んでいてもよい。
【０１０４】
1.  経口投与用組成物
経口の薬学的剤形は、固体、ゲルまたは液体のいずれかである。固体剤形は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、および原末である。経口錠のタイプは、腸溶性コーティング、糖衣またはフィルムコーティングされていてもよい、圧縮型、チュアブル型の舐剤および錠剤である。カプセル剤は、硬ゼラチンカプセル剤でも軟ゼラチンカプセル剤でもよいが、一方、顆粒剤および粉剤は、当業者には公知である他の成分と組合せて非発泡性または発泡性剤形として提供することができる。
【０１０５】
a.  経口投与用固体組成物
特定の態様では、製剤は、固体剤形であり、ある態様では、カプセル剤または錠剤である。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などは、1種または複数の以下の成分、または類似の性質の化合物を含んでもよい：結合剤；滑沢剤；希釈剤；流動促進剤；崩壊剤；着色剤；甘味剤；香味剤；湿潤剤；催吐性コーティング剤；およびフィルムコーティング剤。結合剤の例は、微結晶性セルロース、トラガントゴム、ブドウ糖溶液、アラビアゴム漿、ゼラチン溶液、糖蜜、ポリビニルピロリドン、ポビドン、クロスポビドン、ショ糖およびデンプン糊を含む。滑沢剤は、タルク、デンプン、ステアリン酸マグネシウムまたはカルシウム、石松子およびステアリン酸を含む。希釈剤は、例えば、乳糖、ショ糖、デンプン、カオリン、塩、マンニトールおよびリン酸二カルシウムを含む。流動促進剤は、特に限定されないが、コロイド状二酸化ケイ素を含む。崩壊剤は、クロスカルメロースナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、アルギン酸、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、ベントナイト、メチルセルロース、寒天およびカルボキシメチルセルロースを含む。着色剤は、例えば、承認された認定水溶性FDおよびC色素のいずれか、その混合物；ならびにアルミナ水和物上で懸濁された水不溶性FDおよびC色素を含む。甘味剤は、ショ糖、乳糖、マンニトールおよびサッカリンのような人口甘味剤、ならびにかなり多数の噴霧乾燥香料を含む。香味剤は、果実のような植物から抽出された天然香料、および特に限定されないが、ペパーミントとサリチル酸メチルのような、心地よさを生み出す化合物の合成混合物を含む。湿潤剤は、モノステアリン酸プロピレングリコール、モノオレイン酸ソルビタン、モノラウリン酸ジエチレングリコールおよびポリオキシエチレンラウリルエーテルを含む。催吐性コーティング剤は、脂肪酸、脂肪、ロウ、シェラック、アンモニア処理シェラックおよび酢酸フタル酸セルロースを含む。フィルムコーティング剤は、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリエチレングリコール4000および酢酸フタル酸セルロースを含む。
【０１０６】
化合物、または薬学的に許容されるその誘導体は、胃の酸性環境から保護する組成物として提供することができよう。例えば、組成物は、胃内でその完全な状態を維持し、腸内で活性化合物を放出する、腸溶性コーティングをして処方することができる。組成物はまた、制酸剤または他のそのような成分と組合せて処方してもよい。
【０１０７】
単位剤形がカプセル剤である場合、これは、上記タイプの物質に加えて、脂肪油のような液体担体を含むことができる。さらに、単位剤形は、投与単位の物理形状を修飾する種々の他の物質、例えば、糖類や他の腸溶剤のコーティングを含むことができる。本化合物はまた、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、カシェ剤、スプリンクル、チューイングガムなどの成分として投与することができる。シロップ剤は、活性化合物に加えて、甘味剤としてのショ糖およびある種の保存料、色素および着色料ならびに香料を含んでいてもよい。
【０１０８】
活性物質はまた、制酸剤、H2ブロッカー、および利尿薬のような、所望の作用を障害しない他の活性物質と、または所望の作用を補う物質と混合することができる。活性成分は、本明細書に記載されている化合物または薬学的に許容されるその誘導体である。約98重量%までの高濃度の活性成分が含まれていてもよい。
【０１０９】
全ての態様において、錠剤およびカプセル剤製剤は、活性成分の溶解を変更または持続させるために、当業者には公知であるようにコーティングしてもよい。即ち、例えば、これらは、サリチル酸フェニル、ロウおよび酢酸フタル酸セルロースのような、従来の腸溶性の可消化コーティング剤でコーティングしてもよい。
【０１１０】
b.  経口投与用液体組成物
液体経口投与剤形は、水性液剤、乳剤、懸濁剤、非発泡性顆粒から再構成された液剤および/または懸濁剤ならびに発泡性顆粒から再構成された発泡性製剤を含む。水性液剤は、例えば、エリキシル剤およびシロップ剤を含む。乳剤は、水中油型または油中水型のいずれかである。
【０１１１】
エリキシル剤は、清澄な甘味をつけた含水アルコール製剤である。エリキシル剤に使用される薬学的に許容される担体は、溶媒を含む。シロップ剤は、糖類、例えば、ショ糖の濃縮水溶液であり、保存料を含んでいてもよい。乳剤は、一方の液体が別の液体中に小球の形状で分散されている二相系である。乳剤に使用される薬学的に許容される担体は、非水性液体、乳化剤および保存料である。懸濁剤は、薬学的に許容される懸濁化剤および保存料を利用する。液体経口投与剤形へと再構成される、非発泡性顆粒に使用される薬学的に許容される物質は、希釈剤、甘味料および湿潤剤を含む。液体経口投与剤形に再構成される、発泡性顆粒に使用される薬学的に許容される物質は、有機酸および二酸化炭素の供給源を含む。着色剤および香味剤は、上記投与剤形の全てに使用される。
【０１１２】
溶媒は、グリセリン、ソルビトール、エチルアルコールおよびシロップを含む。保存料の例は、グリセリン、メチルおよびプロピルパラベン、安息香酸、安息香酸ナトリウムおよびアルコールを含む。乳剤に利用される非水性液体の例は、鉱油および綿実油を含む。乳化剤の例は、ゼラチン、アラビアゴム、トラガント、ベントナイト、およびモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンのような界面活性剤を含む。懸濁化剤は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ペクチン、トラガント、ビーガム(Veegum)およびアラビアゴムを含む。甘味剤は、ショ糖、シロップ、グリセリンおよびサッカリンのような人工甘味剤を含む。湿潤剤は、モノステアリン酸プロピレングリコール、モノオレイン酸ソルビタン、モノラウリン酸ジエチレングリコールおよびポリオキシエチレンラウリルエーテルを含む。有機酸は、クエン酸および酒石酸を含む。二酸化炭素の供給源は、重炭酸ナトリウムおよび炭酸ナトリウムを含む。着色剤は、承認された認定水溶性FDおよびC色素のいずれか、ならびにその混合物を含む。香味剤は、果実のような植物から抽出された天然香料、および心地よさを生み出す化合物の合成混合物を含む。
【０１１３】
固体投与剤形では、例えば、炭酸プロピレン、植物油またはトリグリセリド中の溶液または懸濁液を、ある態様では、ゼラチンカプセルに封入する。このような溶液、ならびにその調製法および封入法は、米国特許第4,328,245号；第4,409,239号；および第4,410,545号に開示されている。液体投与剤形では、例えば、ポリエチレングリコール中の溶液は、投与用に容易に測定できるように十分な量の薬学的に許容される液体担体、例えば、水で希釈してもよい。
【０１１４】
または、液体または半固体経口製剤は、活性化合物または塩を植物油、グリコール、トリグリセリド、プロピレングリコールエステル(例えば、炭酸プロピレン)および他のそのような担体に溶解または分散し、これらの溶液または懸濁液を硬または軟ゼラチンカプセルシェルに封入することにより調製することができる。他の有用な製剤は、米国再発行特許第28,819号および米国特許第4,358,603号に記載されるものを含む。簡単に述べると、このような製剤は、特に限定されないが、本明細書において提供される化合物；特に限定されないが、1,2-ジメトキシメタン、ジグリム、トリグリム、テトラグリム、ポリエチレングリコール-350-ジメチルエーテル、ポリエチレングリコール-550-ジメチルエーテル、ポリエチレングリコール-750-ジメチルエーテル(ここで、350、550および750とは、ポリエチレングリコールの概算の平均分子量を意味する)を含む、ジアルキル化モノ-またはポリ-アルキレングリコール；ならびにブチルヒドロキシトルエン(BHT)、ブチルヒドロキシアニソール(BHA)、没食子酸プロピル、ビタミンE、ヒドロキノン、ヒドロキシクマリン、エタノールアミン、レシチン、ケファリン、アスコルビン酸、リンゴ酸、ソルビトール、リン酸、チオジプロピオン酸およびそのエステル、およびジチオカルバミン酸塩などの、1つまたは複数の酸化防止剤を含むものを含む。
【０１１５】
他の製剤は、特に限定されないが、薬学的に許容されるアセタールを含む、水性アルコール液剤を含む。これらの製剤に使用されるアルコールは、1個または複数のヒドロキシル基を有し、特に限定されないがプロピレングリコールおよびエタノールを含む、任意の薬学的に許容される水混和性溶媒である。アセタールは、特に限定されないが、アセトアルデヒドジエチルアセタールのような、低級アルキルアルデヒドのジ(低級アルキル)アセタールを含む。
【０１１６】
2.  注射用の液剤および乳剤
ある態様では、皮下、筋肉内または静脈内のいずれかの注射を特徴とする非経口投与もまた、本明細書において企図されている。注射剤は、液体溶液もしくは懸濁液のいずれかとして従来剤形で、注射の前に液体に溶解もしくは懸濁するのに適した固体剤形で、または乳剤として調製することができる。注射用の液剤および乳剤はまた、1つまたは複数の賦形剤を含む。適切な賦形剤は、例えば、水、食塩水、デキストロース、グリセロールまたはエタノールである。さらに、必要に応じて、投与される薬学的組成物はまた、例えば、酢酸ナトリウム、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミンおよびシクロデキストリンなどのように、湿潤剤または乳化剤、pH緩衝剤、安定剤、溶解度増強剤、および他のこのような物質などの、少量の非毒性の補助物質を含んでいてもよい。
【０１１７】
一定レベルの用量が維持されるような、緩効性または徐放性システムの移植(例えば、米国特許第3,710,795号を参照されたい)もまた、本明細書において企図されている。簡単に述べると、本明細書において提供される化合物を固体の内部マトリックス、例えば、ポリメタクリル酸メチル、ポリメタクリル酸ブチル、可塑化または非可塑化ポリ塩化ビニル、可塑化ナイロン、可塑化ポリエチレンテレフタレート、天然ゴム、ポリイソプレン、ポリイソブチレン、ポリブタジエン、ポリエチレン、エチレン-酢酸ビニルコポリマー、シリコーンゴム、ポリジメチルシロキサン、シリコーンカーボネートコポリマー、アクリル酸およびメタクリル酸のエステルのヒドロゲルなどの親水性ポリマー、コラーゲン、架橋ポリビニルアルコールおよび架橋部分加水分解ポリ酢酸ビニルに分散させるが、この内部マトリックスは、周りを外部ポリマー膜、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、エチレン/プロピレンコポリマー、エチレン/アクリル酸エチルコポリマー、エチレン/酢酸ビニルコポリマー、シリコーンゴム、ポリジメチルシロキサン、ネオプレンゴム、塩素化ポリエチレン、ポリ塩化ビニル；酢酸ビニル、塩化ビニリデン、エチレンおよびプロピレンとの塩化ビニルコポリマー；イオノマーのポリエチレンテレフタレート、ブチルゴムエピクロロヒドリンゴム、エチレン/ビニルアルコールコポリマー、エチレン/酢酸ビニル/ビニルアルコールターポリマー、およびエチレン/ビニルオキシエタノールコポリマーに囲まれており、この外部ポリマー膜は、体液に不溶性である。化合物は、段階を制御する放出速度で外部ポリマー膜を通って拡散する。このような非経口組成物中に含まれる活性化合物の割合は、その特異性、ならびに化合物の活性および対象のニーズに高度に依存する。
【０１１８】
組成物の非経口投与は、静脈内、皮下および筋肉内投与を含む。非経口投与用の製剤は、直ぐに注射できる無菌液剤、皮下注射用錠剤を含む、使用直前に溶媒と容易に合わせることができる無菌乾燥可溶性製剤(凍結乾燥粉末など)、直ぐに注射できる無菌懸濁剤、使用直前に溶剤と容易に合わせることができる無菌乾燥不溶性製剤および無菌乳剤を含む。液剤は、水性または非水性のいずれかであってよい。
【０１１９】
静脈内に投与する場合、適切な担体は、生理食塩水またはリン酸緩衝生理食塩水(PBS)、ならびに増粘剤および可溶化剤(ブドウ糖、ポリエチレングリコール、およびポリプロピレングリコールならびにこれらの混合物など)を含む溶液を含む。
【０１２０】
非経口製剤に使用される薬学的に許容される担体は、水性溶剤、非水性溶剤、抗菌剤、等張剤、緩衝剤、酸化防止剤、局所麻酔薬、懸濁化剤および分散剤、乳化剤、金属イオン封鎖剤またはキレート化剤ならびに他の薬学的に許容される物質を含む。
【０１２１】
水性溶剤の例は、塩化ナトリウム注射液、リンガー注射液、等張性デキストロース注射液、無菌水注射液、デキストロースおよび乳酸加リンガー注射液を含む。非水性非経口溶剤は、植物由来の不揮発性油、綿実油、トウモロコシ油、ゴマ油およびラッカセイ油を含む。抗菌剤は、静菌または静真菌濃度で、多回投与容器に包装された非経口製剤に加えなければならないが、これらは、フェノールまたはクレゾール、水銀剤、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチルおよびプロピルp-ヒドロキシ安息香酸エステル、チメロサール、塩化ベンザルコニウムおよび塩化ベンゼトニウムを含む。等張剤は、塩化ナトリウムおよびデキストロースを含む。緩衝剤は、リン酸塩およびクエン酸塩を含む。酸化防止剤は、重硫酸ナトリウムを含む。局所麻酔薬は、プロカイン塩酸塩を含む。懸濁化剤および分散剤は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびポリビニルピロリドンを含む。乳化剤は、ポリソルベート80 (TWEEN 80)を含む。金属イオンの封鎖剤またはキレート化剤は、EDTAを含む。製剤担体はまた、水混和性溶剤として、エチルアルコール、ポリエチレングリコールおよびプロピレングリコールを；そしてpH調整のために水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸または乳酸を含む。
【０１２２】
薬学的活性化合物の濃度は、注射により所望の薬理学的作用が生じる有効量を提供できるように、調整される。正確な用量は、当該分野において公知であるように、患者または動物の年齢、体重および症状に依存する。
【０１２３】
単位用量非経口製剤は、アンプル、バイアルまたは針付きのシリンジに包装される。非経口投与用の全ての製剤は、当該分野において公知であり常に行われているように、無菌である必要がある。
【０１２４】
具体例として、活性化合物を含む無菌水性液剤の静脈内または動脈内注入は、投与の有効な様式である。別の態様は、所望の薬理学的作用を起こすために必要に応じて注射される、活性物質を含む無菌の水性または油性の液剤または懸濁剤である。
【０１２５】
注射剤は、局所および全身投与用に設計される。ある態様では、治療上有効な用量は、処置組織に少なくとも約0.1%w/wから約90%w/wまたはそれ以上、特定の態様では、1%w/wを超える濃度の活性化合物を含むように処方される。
【０１２６】
化合物は、微粉化して、または他の適切な形状で懸濁しても、あるいはもっと溶けやすい生成物を製造するため、またはプロドラッグを製造するために誘導体化してもよい。生じた混合物の形状は、意図される投与様式および選択された担体または溶剤中の化合物の溶解度を含む、幾つもの因子に依存する。有効濃度は、病気の症候を改善するのに十分な濃度であり、実験的に求めることができる。
【０１２７】
3.  凍結乾燥粉末
本明細書における関心対象はまた、液剤、乳剤および他の混合物として投与するために再構成することができる、凍結乾燥粉末である。これらはまた、固体またはゲルとして再構成および処方することができる。
【０１２８】
無菌凍結乾燥粉末は、本明細書において提供される化合物、または薬学的に許容されるその誘導体を、適切な溶媒に溶解することにより調製される。溶媒は、この粉末もしくは粉末から調製される再構成溶液の、安定性または他の薬理学的要素を改善する賦形剤を含んでいてもよい。使用することができる賦形剤は、特に限定されないが、デキストロース、ソルビタール、フルクトース、コーンシロップ、キシリトール、グリセリン、ブドウ糖、ショ糖または他の適切な物質を含む。この溶媒はまた、クエン酸塩、リン酸ナトリウムもしくはカリウム、または当業者には公知である他のこのような緩衝剤などの緩衝剤を、ある態様ではおよそ中性pHで含んでいてもよい。次にこの溶液を無菌濾過に付し、続いて当業者には公知である標準条件下で凍結乾燥することにより、所望の製剤が得られる。ある態様では、生じた溶液は、凍結乾燥のためにバイアルに分配される。各バイアルは、単回用量または多回用量の化合物を含む。凍結乾燥粉末は、約4℃から室温までのような、適切な条件下で保存することができる。
【０１２９】
注射用水でのこの凍結乾燥粉末の再構成により、非経口投与において使用するための製剤が得られる。再構成には、凍結乾燥粉末を無菌水または他の適切な担体に加える。正確な量は、選択される化合物に依存する。このような量は、実験的に求めることができる。
【０１３０】
4.  局所投与
局所用混合物は、局所および全身投与について記載されたように調製される。生じた混合物は、溶液、懸濁液、乳濁液などであってよく、クリーム剤、ゲル剤、軟膏剤、乳剤、液剤、エリキシル剤、ローション剤、懸濁剤、チンキ剤、泥膏、泡沫剤、エーロゾル、灌注剤、噴霧剤、坐剤、包帯、皮膚パッチまたは局所投与に適した任意の他の製剤として処方される。
【０１３１】
本化合物または薬学的に許容されるその誘導体は、吸入によるなどの局所適用のエーロゾルとして処方することができる(例えば、米国特許第4,044,126号、第4,414,209号、および4,364,923号；これらは、炎症性疾患、特に喘息の治療に有用なステロイドの送達用のエーロゾルを記載している)。呼吸器管への投与用のこれらの製剤は、単独で、または乳糖のような不活性担体と組合せて、ネブライザー用のエーロゾルまたは液剤の剤形、あるいはガス注入法用の超微粒粉末にしてもよい。このような場合に、この製剤の粒子は、ある態様では、50ミクロン未満、ある態様では10ミクロン未満の直径を持つ。
【０１３２】
本化合物は、ゲル剤、クリーム剤、およびローション剤の剤形で、皮膚および粘膜(眼内など)への局所適用のため、ならびに眼への適用のため、または槽内もしくは髄腔内適用のためなどの、局所適用のために処方することができる。局所投与は、経皮送達のために、およびまた眼もしくは粘膜への投与のために、または吸入療法のために企図される。単独で、または他の薬学的に許容される賦形剤と組合せた、活性化合物の鼻用液剤もまた投与することができる。
【０１３３】
これらの液剤、特に眼科の使用が意図されるものは、適切な塩で0.01%〜10%の等張液、pH約5〜7として処方することができる。
【０１３４】
5.  他の投与経路のための組成物
イオン導入および電気泳動の装置を含む経皮パッチ、ならびにバッカルおよび直腸内投与のような他の投与経路もまた、本明細書において企図されている。
【０１３５】
イオン導入および電気泳動の装置を含む経皮パッチは、当業者には周知である。例えば、このようなパッチは、米国特許第6,267,983号、第6,261,595号、第6,256,533号、第6,167,301号、第6,024,975号、第6,010,715号、第5,985,317号、第5,983,134号、第5,948,433号、および第5,860,957号に開示されている。
【０１３６】
例えば、直腸内投与用の製剤の投与剤形は、全身作用のための肛門坐剤、カプセル剤および錠剤である。肛門坐剤は、体温で融解または軟化して、1種または複数の薬理学上または治療上活性な成分を放出する、直腸への挿入用の固体を意味するのに本明細書において使用される。肛門坐剤に利用される薬学的に許容される物質は、基剤または溶剤および融点を上昇させる物質である。基剤の例は、カカオバター (カカオ脂)、グリセリン-ゼラチン、カーボワックス(ポリオキシエチレングリコール)および脂肪酸のモノ-、ジ-およびトリグリセリドの適当な混合物を含む。種々の基剤の組合せを使用してもよい。坐剤の融点を上昇させる物質は、鯨蝋およびロウを含む。肛門坐剤は、圧縮法または成形のいずれかにより調製することができる。肛門坐剤の重量は、ある態様では、約2gmから3gmである。
【０１３７】
直腸内投与用の錠剤およびカプセル剤は、同じ薬学的に許容される物質を用いて、かつ経口投与用の製剤と同じ方法により製造される。
【０１３８】
6.  標的化製剤
本明細書において提供される化合物、または薬学的に許容されるその誘導体はまた、特定の組織、受容体、または治療される対象の身体の他の部位を標的とするように処方することができる。このような多くの標的化方法は、当業者には周知である。全てのそのような標的化方法は、本明細書では、即時組成物において使用するために企図される。標的化方法の非限定例については、例えば、米国特許第6,316,652号、第6,274,552号、第6,271,359号、第6,253,872号、第6,139,865号、第6,131,570号、第6,120,751号、第6,071,495号、第6,060,082号、第6,048,736号、第6,039,975号、第6,004,534号、第5,985,307号、第5,972,366号、第5,900,252号、第5,840,674号、第5,759,542号および第5,709,874号を参照されたい。
【０１３９】
ある態様では、腫瘍標的化リポソームのような組織標的化リポソームを含むリポソーム懸濁液もまた、薬学的に許容される担体として適切である。これらは、当業者には公知である方法により調製することができる。例えば、リポソーム製剤は、米国特許第4,522,811号に記載されるように調製することができる。簡単に述べると、多重膜小胞(MLV)のようなリポソームは、卵ホスファチジルコリンおよび脳ホスファチジルセリン(モル比7：3)をフラスコの内側で乾燥させることにより生成することができる。二価陽イオンを欠くリン酸緩衝生理食塩水(PBS)中の本明細書において提供される化合物の溶液を加え、脂質膜が分散するまで、このフラスコを振盪する。生じた小胞を洗浄することにより、未封入化合物を除去し、遠心分離により沈殿させ、次いでPBSに再懸濁する。
【０１４０】
7.  製品
本化合物または薬学的に許容される誘導体は、以下を含む製品として包装することができる：包装材料：包装材料中にある、TTRフォールディングを調節するために有効であるか、あるいはTTR介在性疾患もしくは障害、またはTTRミスフォールディングが影響する疾患もしくは障害の1つまたは複数の症候の治療、予防または改善のために有効である、本明細書において提供される化合物または薬学的に許容されるその誘導体；および本化合物もしくは組成物、または薬学的に許容されるその誘導体が、TTRフォールディングを調節するために、またはTTR介在性疾患もしくは障害、またはTTRミスフォールディングが影響する疾患もしくは障害の1つまたは複数の症候の治療、予防または改善のために使用されることを示す、ラベル。
【０１４１】
本明細書において提供される製品は、包装材料を含む。医薬品を包装するのに使用するための包装材料は、当業者には周知である。例えば、米国特許第5,323,907号、第5,052,558号および第5,033,252号を参照されたい。医薬品包装材料の例は、特に限定されないが、ブリスターパック、瓶、チューブ、吸入器、ポンプ、袋、バイアル、容器、シリンジ、瓶、ならびに選択された製剤および意図された投与や治療の様式に適している任意の包装材料を含む。本明細書において提供される化合物および組成物の幅広い製剤は、TTRミスフォールディングが症候または病因に対するメディエーターまたは誘因として影響する、任意の疾患または障害に対する種々の治療法と同様に企図されている。
【０１４２】
F.  化合物の活性の評価
多くのインビトロ試験を利用することにより、トランスサイレチン四量体を安定化するか、またはフィブリルの形成を妨げる能力について化合物を評価することができる。試験は、フィブリル形成アッセイ、血漿選択性アッセイ、トランスサイレチン：化合物複合体の三次元構造の決定(例えば、X線結晶学による)、トランスサイレチン四量体の解離またはフィブリル形成の速度論、ならびにトランスサイレチン：化合物相互作用の化学量論およびエネルギー論の決定(例えば、遠心分離または熱量測定法による)を含み得る。例となるインビトロアッセイの詳細は、実施例に提示される。
【０１４３】
スクリーニング法に使用されるトランスサイレチンは、野生型トランスサイレチンであっても、あるいはトランスサイレチン型アミロイド疾患(家族性アミロイド多発性ニューロパシーまたは家族性アミロイド心筋症など)の発病率が原因として関連する、自然発生変異体などの、変異体トランスサイレチンであってもよい。典型的な自然発生変異体トランスサイレチンは、特に限定されないが、V122I、V30M、L55Pを含む(変異体の命名は、野生型と比較した、記載されたアミノ酸位置での置換を記述している；例えば、Saraivaら(2001) Hum. Mut. 17:493-503を参照されたい)。
【０１４４】
化合物がTTRアミロイドーシスに対して有効な薬物であるためには、TTRに強力かつ選択的に結合しなければならないため、血漿中では、他の血漿タンパク質全ての存在下でTTR中に分配される。したがって、2つのアッセイ法を用いて化合物を評価した。第1のアッセイ法は、以前に本発明者らが掘り下げて記述した、停滞フィブリル形成アッセイである。このアッセイでは、被験化合物を3.6μMまたは7.2μMで3.6μMのTTRの溶液に加える。これら2つの濃度で、TTR結合部位の一方または両方のいずれかに積載するのに十分な被験化合物が存在する。次にpHを4.4(TTRアミロイド形成の速度が最大になるpH)まで低下させることにより、この溶液をアミロイド生成条件下に置く。72時間後、被験化合物を含むTTR溶液の濁度(Ttest)（TTR凝集の程度に関連する）を測定して、被験化合物のいずれも含まない溶液の濁度(Tcontrol)と比較する。フィブリル形成の阻害の程度を、被験化合物を含むものと含まないものの濁度の差から以下のとおり算出する：
阻害=(Tcontrol-Ttest)/(Tcontrol)×100%
高い阻害値は、非常に活性な化合物を示す。
【０１４５】
第2のアッセイ法は、他の血漿タンパク質全ての存在下でヒト血漿中のTTRに結合する被験化合物の能力を測定するために、本実験室で最近開発された抗体捕捉法である。本アッセイでは、被験化合物をヒト血漿中に10.8μM(TTRの濃度の約3倍)まで溶解して、24時間インキュベートする。TTRおよび任意の結合低分子を次に、セファロース樹脂に結合したポリクローナルTTR抗体を用いて免疫沈降させる。樹脂を洗浄後、抗体-TTR複合体を高pHで解離させ、HPLCにおけるそのピーク面積から被験化合物に対するTTRの化学量論を求める。
【０１４６】
第1のアッセイ法に関する高活性は、7.2μMで＞90%阻害および3.6μMで＞60%として定義することができる。第2のアッセイ法に関しては、TTR四量体1当量当たり結合した被験化合物＞1当量として定義することができる。
【０１４７】
G.  化合物および組成物の使用方法
組織または体液中のトランスサイレチンの安定化の方法、およびそれによってミスフォールディングを阻害する方法もまた提供される。一般に本方法は、トランスサイレチンに結合して、トランスサイレチン四量体の未変性状態の動的安定化によりトランスサイレチン四量体の解離を妨げる、本明細書において提供される化合物の安定化量を、組織または体液に投与することを伴う。
【０１４８】
従って、病変組織においてトランスサイレチンを安定化する方法は、ミスフォールディングを改善して、関連疾患の症候を軽減し、かつ疾患によっては、疾患の治癒の一助となりうる。また本明細書において企図されているのは、組織および/または細胞内におけるトランスサイレチンのミスフォールディングの阻害である。ミスフォールディングの程度、およびそのため本方法により達成される阻害の程度は、実施例および国際特許出願公開公報第2004/056315号に記載されているような、種々の方法により評価することができる。上記出願の開示内容は、全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０１４９】
また本明細書において提供されるのは、トランスサイレチン型アミロイド疾患の1つまたは複数の症候を治療、予防、または改善する方法であって、治療有効量の本明細書において提供される化合物の投与を伴う方法である。ある態様では、化合物は、トランスサイレチン四量体の未変性状態の動的安定化によりトランスサイレチン四量体の解離を妨げる。トランスサイレチン型アミロイド疾患は、例えば、家族性アミロイド多発性ニューロパシー、家族性アミロイド心筋症、または老年性全身性アミロイドーシスであってよい。他のトランスサイレチン型アミロイド疾患は、特に限定されないが、アルツハイマー病、海綿状脳症(クロイツフェルト・ヤコブ病)、多発性ニューロパシー、II型糖尿病および甲状腺髄様癌を含む(例えば、国際特許出願公開公報第98/27972号および第95/12815号を参照されたい)。
【０１５０】
本明細書において提供される化合物を投与することにより、トランスサイレチン介在性疾患または障害の1つまたは複数の症候を治療、予防、または改善する方法が提供される。トランスサイレチン介在性疾患および障害は、特に限定されないが、肥満症を含む(例えば、国際特許出願公開公報第02/059621号を参照されたい)。
【０１５１】
さらに提供されるのは、本明細書において提供される化合物または組成物を用いて、TTR四量体を安定化する方法である。また提供されるのは、本明細書において提供される化合物または組成物を用いて、TTRアミロイドの形成を阻害する方法である。
【０１５２】
また本明細書において提供されるのは、トランスサイレチン型アミロイド疾患(例えば、家族性アミロイド多発性ニューロパシー、家族性アミロイド心筋症、または老年性全身性アミロイドーシス)の1つまたは複数の症候の治療、予防、または改善のための、本明細書に記載される化合物または薬学的組成物のいずれかの使用である。
【０１５３】
また本明細書において提供されるのは、トランスサイレチン型アミロイド疾患(例えば、家族性アミロイド多発性ニューロパシー、家族性アミロイド心筋症、または老年性全身性アミロイドーシス)の1つまたは複数の症候の治療、予防、または改善用薬剤の製造における、本明細書に記載される化合物または薬学的組成物のいずれかの使用である。
【０１５４】
H.  併用療法
本明細書において提供される化合物および組成物は、単剤療法として、または他の活性成分との併用で投与することができる。例えば、本化合物および組成物は、アミロイドーシスおよびアミロイド障害の治療用に公知である他の化合物(国際特許出願公開公報第98/27972号、第02/059621号および第95/12815号、ならびに第2004/056315号に開示されるものを含むが、それらに限定されない)と組合せて投与することができる。併用療法のためのさらに別の活性成分は、ARICEPT(登録商標)およびアミロイドーシス(家族性アミロイド多発性ニューロパシー、家族性アミロイド心筋症、または老年性全身性アミロイドーシス、アルツハイマー病、海綿状脳症(クロイツフェルト・ヤコブ病)、多発性ニューロパシー、II型糖尿病および甲状腺髄様癌を含むが、それらに限定されない)の治療について承認された他の製剤を含むが、それらに限定されない。併用療法のためのさらに別の活性成分は、特に限定されないが、肥満症の治療について承認された製剤を含む。
【０１５５】
以下の実施例は、例示目的にのみ提供されるものであり、本発明の範囲を限定することを意図しない。
【０１５６】
実施例1
2007538095.tif 000014
工程1：
2007538095.tif 000015
SOCl2(15ml)を、2-クロロ-4-メトキシ安息香酸(.285gm)に加え、それを撹拌条件下で90℃にて3時間還流した。この反応混合物を真空下で蒸発して、それをさらなる反応に供した。
収率(粗)---.313gm
【０１５７】
工程2：
2007538095.tif 000016
4-アミノ-3-ヒドロキシ安息香酸(.234gm)、THF (15ml)およびピリジン(.37ml)との混合物を、粗酸塩化物(.313gm)に加え、80℃で一晩還流した。この反応混合物を水に注ぎ、次にジエチルエーテルで抽出し、蒸発してアミドを得た。
収率---.8gm
【０１５８】
工程3：
2007538095.tif 000017
酸アミド(.8gm)を、ジフェニルエーテル(25ml)に溶解し、PTSA (68mg)をそれに加え、還流条件下で220℃にて一晩保持した。反応が完了したら、生成物を濾過により回収して、ヘキサンおよびジエチルエーテルで洗浄した。
収率---.405gm
【０１５９】
工程4：
2007538095.tif 000018
酸(.405gm)を、THF 15mlに溶解し、T.M.S-CHN2 .424mlを溶液に加え、撹拌条件下で一晩保持した。この反応混合物を、5%ヘキサン酢酸エチル溶液を用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。
収率---.107gm
【０１６０】
工程5：
2007538095.tif 000019
メチルエステル(.090gm)を、THF:MeOH:H2O (3:1:1) 10mlに溶解し、LiOH・H2O (0.048gm)をそれに加え、4時間撹拌した。完了時、この反応混合物を1N HClで希釈しおよび酸性にし、酢酸エチルで抽出し、ブライン溶液で洗浄して、真空下で濃縮した。淡い黄色を帯びた固体を得た。
収率---.084gm
%収率---97.67%
最終化合物
色---淡い黄色を帯びている
状態---固体
重量---84mg
【０１６１】
実施例2
2007538095.tif 000020
工程1
2007538095.tif 000021
2-クロロ-4-ヒドロキシ安息香酸(.5g)を、DMF (10ml)に溶解し、K2CO3 (1.201g)をそれに加え、次に臭化ベンジル(.688ml)を0℃で加えながら(滴下)撹拌し、それを1時間保持した。反応完了後、水を加え、酢酸エチルで抽出し、ブライン溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮した。ヘキサンで溶離するフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。酢酸エチル溶液(5%)。
収率---.930g
【０１６２】
工程2：
2007538095.tif 000022
ジベンジルエステル(.5g)を、THF:MeOH:H2O (3:1:1) 10mlに溶解し、LiOH・H2O (.24g)をそれに加え、室温で4時間撹拌し、完了時、この反応混合物を水で希釈し、1N HClにより酸性にし、酢酸エチルで抽出し、ブライン溶液で洗浄し、真空下で濃縮して、淡い黄色を帯びた固体を得た。
収率---.157g
【０１６３】
工程3：
2007538095.tif 000023
チオニルクロリドをこの酸に加え、続いてDMF一滴を加え、還流条件下で80℃にて4時間撹拌した。この反応物を真空下で蒸発して、粗酸塩化物をさらなる反応に使用した。
【０１６４】
工程4：
2007538095.tif 000024
THF (15ml)中の4-アミノ-3-ヒドロキシ安息香酸(.122g)の溶液を、順次ピリジン(.19ml)で処理した。酸塩化物をTHFに溶解し、混合物に一滴ずつ0℃で加え、次に室温で一晩撹拌し、真空下で蒸発して、粗生成物をさらなる反応に使用した。
収率---.485g
【０１６５】
工程5：
2007538095.tif 000025
酸アミド(.485g)を、DPEに溶解し、PTSA (10モル%)をそれに加え、200〜220℃で3時間還流した。所望の生成物ならびに副産物からなる混合物を、固体として得た。
収率---.430g
【０１６６】
工程6：
2007538095.tif 000026
この酸(.430g)を、DMF (20ml)に溶解し、K2CO3 (.57g)をそれに加え、次に臭化ベンジル(.35ml)を0℃で一滴ずつ加えながら撹拌し、それを1時間保持した。反応完了後、水を加え、酢酸エチルで抽出し、ブライン溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮した。その後、粗生成物を、7%ヘキサン酢酸エチル溶液を用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。
収率---.469g
【０１６７】
工程7：
2007538095.tif 000027
ジベンジルエステル(.170g)を、THF:MeOH:H2O (3:1:1)に溶解し、LiOH・H2O (.061g)をそれに加え、室温で4時間撹拌した。完了時、この反応混合物を水で希釈し、1N HClで酸性にし、酢酸エチルで抽出し、ブライン溶液で洗浄し、真空下で濃縮した。それを酢酸エチルで洗浄して、その結果、白色の固体を得た。
収率---.044mg
最終化合物：
色---白色
融点---226.2℃
重量---43mg
【０１６８】
実施例3
2007538095.tif 000028
4-(4-シアノ-ベンゾイルアミノ)-3-ヒドロキシ-安息香酸の調製
2007538095.tif 000029
乾燥THF 18.5ml中の3-アミノ-4-ヒドロキシ安息香酸(0.185g、0.0012mol)およびピリジン(0.287g、0.00363mol)の撹拌溶液に、4-シアノベンゾイルクロリド(0.2g、0.0012mol)を加え、この溶液を窒素雰囲気下で室温にて10時間撹拌し、次に3時間還流した。この反応混合物をロータリーエバポレーターにかけ、残渣を水中でスラリーにし、濾過し、アミド(0.18g)を得て、それを次の工程にさらなる精製をせずに使用した。
【０１６９】
2-(4-シアノ-フェニル)-ベンゾオキサゾール-5-カルボン酸の調製
2007538095.tif 000030
上記アミドを、DEAN-STARCK装置を備えた一つ口RBフラスコ中で30mlキシレンに懸濁し、p-トルエンスルホン酸40mgを加えた。次にこの反応混合物を160℃で12時間還流した。この反応混合物を冷却してすぐ、濾過した。残渣をジエチルエーテル中でスラリーにし、再び濾過した。次に残渣を1.5N HCl中で30分間撹拌し、酢酸エチルで抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ロータリーエバポレーターにかけて、純粋な表記化合物0.045gを得た。
【０１７０】
実施例4
2007538095.tif 000031
4-ヒドロキシ-3-(4-トリフルオロメトキシ-ベンゾイルアミノ)-安息香酸の調製
2007538095.tif 000032
乾燥THF 13ml中の3-アミノ-4-ヒドロキシ安息香酸(0.136、0.00089mol)およびピリジン(0.211g、0.00267mol)の撹拌溶液に、4-トリフルオロメトキシ塩化ベンゾイル(0.2g、0.00089mol)を加え、溶液を窒素雰囲気下で室温にて10時間撹拌し、次に3時間還流した。この反応混合物をロータリーエバポレーターにかけ、残渣を水中でスラリーにし、濾過し、アミド(0.175g)を得て、それをさらなる精製をせずに次の工程に用いた。
【０１７１】
2-(4-トリフルオロメトキシ-フェニル)-ベンゾオキサゾール-5-カルボン酸の調製
2007538095.tif 000033
上記アミドを、DEAN-STARCK装置を備えた一つ口RBフラスコ中でキシレン30mlに懸濁し、p-トルエンスルホン酸40mgを加えた。次にこの反応混合物を160℃で12時間還流した。この反応混合物を冷却してすぐ、濾過した。残渣をジエチルエーテル中でスラリーにし、濾過して、純粋な表記化合物(70mg)を得た。
【０１７２】
実施例5
2007538095.tif 000034
工程1
2007538095.tif 000035
ニトロ化合物をメタノールに溶解し、SnCl2・2H2Oを加え、加熱還流し、反応を2時間で完了した。溶媒を完全に濃縮し、冷水を加え、酢酸エチルで洗浄した。水層を重炭酸塩溶液で塩基性化し、酢酸エチルで抽出した。有機層をD.M.水およびブライン溶液でそれぞれ洗浄した。Na2SO4で乾燥させて、濃縮した。
性質：固体
収率：82.8%
純度：91.64%
【０１７３】
工程2
2007538095.tif 000036
THF中のアミノヒドロキシベンゾニトリル(工程1)を、順次ピリジンおよび酸塩化物で処理した。この反応混合物を室温で14時間撹拌し、真空下で濃縮して、精製せずに次の工程で使用した。
【０１７４】
工程3
2007538095.tif 000037
PTSA・H2Oを、キシレン中の粗アミド(工程2)に加え、生じた混合物を一晩還流下で撹拌した。16時間後、室温に冷却し、真空下で濃縮した。残渣をクロマトグラフィー(5〜10% EtOAc/ヘキサン)に付して、所望の環化シアノ生成物を得た。
性質：白色の固体
%収率：53%
純度：100%
【０１７５】
工程4
2007538095.tif 000038
ベンゾニトリル(工程3)化合物およびNH4Clを、DMFに取った。この混合物を0℃に冷却し、NaN3を少しずつ5〜6分間かけて加えた。この反応混合物を0℃で5分間および室温で15分間撹拌した。この反応混合物を40℃で1時間加熱し、次に3時間かけてゆっくりと90℃に上げた。この反応混合物を90℃で20時間撹拌し、次に0〜5℃に冷却した。この反応物を水でクエンチし、1N HClでpHを2に調整し、EtOAcで抽出した。合わせた有機層を水で洗浄し、乾燥させ、濃縮し、ガムを得、それを真空下で2時間十分に乾燥させ、明褐色の固体を得た。固体を、5%のヘキサン：EtAcの混合物で洗浄して、乾燥させた。
性質：淡褐色の固体
収率：60.9%
純度：99.8%
【０１７６】
実施例6
2007538095.tif 000039
工程1
2007538095.tif 000040
ニトロ化合物をメタノールに溶解し、SnCl2・2H2Oを加え、加熱還流し、反応を2時間で完了した。溶媒を完全に濃縮し、冷水を加え、酢酸エチルで洗浄した。水層を、重炭酸塩溶液で塩基性化し、酢酸エチルで抽出した。有機層を、D.M.水およびブライン溶液でそれぞれ洗浄した。Na2SO4で乾燥させて、濃縮した。
性質：固体
%収率：82.8%
純度：91.64%
【０１７７】
工程2
2007538095.tif 000041
THF中のアミノヒドロキシベンゾニトリルを、順次ピリジンおよび所望の酸塩化物で処理した。この反応混合物を室温で14時間撹拌し、真空下で濃縮し、酢酸エチルを加え、1% HClおよびブラインで洗浄した。Na2SO4で乾燥させて、濃縮した。
性質：固体
%収率：66%
純度：88.9%
【０１７８】
工程3
2007538095.tif 000042
PTSA・H2Oを、キシレン中のこの粗反応混合物に加え、生じた混合物を一晩還流下で撹拌した。16時間後、室温に冷却し、真空下で濃縮した。残渣をクロマトグラフィー(5〜10% EtOAc/ヘキサン)に付して、所望の環化シアノ生成物を得た。
性質：白色の固体
%収率：30.4%
純度：97.2%
【０１７９】
工程4
2007538095.tif 000043
ベンゾニトリル化合物およびNH4Clを、DMFに取った。この混合物を0℃に冷却し、NaN3を少しずつ5〜6分間かけて加えた。この反応混合物を0℃で5分間および室温で15分間撹拌した。この反応混合物を40℃で1時間加熱し、次に3時間かけてゆっくりと90℃に上げた。この反応混合物を90℃で20時間撹拌し、次に0〜5℃に冷却した。この反応物を水でクエンチし、1N HClでpHを2に調整し、EtOAcで抽出した。合わせた有機層を水で洗浄し、乾燥させ、濃縮して、ガムを得、それを真空下で2時間十分に乾燥させて、明褐色の固体を得た。この固体を、5%のヘキサン：EtAcの混合物で洗浄して、乾燥させた。
性質：淡褐色の固体
%収率：48%
純度：99.8%
【０１８０】
実施例7
2007538095.tif 000044
4-[(6-クロロ-ピリジン-3-カルボニル)-アミノ]-3-ヒドロキシ-安息香酸の調製
2007538095.tif 000045
乾燥THF 50ml中の4-アミノ-3-ヒドロキシ安息香酸(0.490g、0.0032mol)およびピリジン(0.76g、0.0096mol)の撹拌溶液に、6-クロロニコチノイルクロリド(0.56g、0.0032mol)を加え、この溶液を窒素雰囲気下で室温にて10時間撹拌し、次に3時間還流した。この反応混合物をロータリーエバポレーターにかけ、残渣を水中でスラリーにし、濾過し、アミド(0.8g)を得て、それをさらなる精製をせずに次の工程に用いた。
【０１８１】
2-(6-クロロ-ピリジン-3-イル)-ベンゾオキサゾール-6-カルボン酸の調製
2007538095.tif 000046
上記アミドを、DEAN-STARCK装置を備えた一つ口RBフラスコ中でキシレン75mlに懸濁し、p-トルエンスルホン酸150mgを加えた。次にこの反応混合物を5時間かけてゆっくりと160℃まで加熱し、次にその温度で12時間保持した。この反応混合物を冷却してすぐ、濾過した。残渣をジエチルエーテル中でスラリーにし、濾過し、粗生成物を得て、分取HPLCにより精製して、純粋な表記化合物を得た。粗化合物0.2gから純粋な生成物0.55gを生成した。
【０１８２】
実施例8
2007538095.tif 000047
3-ヒドロキシ-4-[(2-メチル-ピリジン-3-カルボニル)-アミノ]-安息香酸の調製
2007538095.tif 000048
2-メチルニコチノイルクロリド(0.2g、0.00128mol)を乾燥DCM 30mlに溶解し、N,N'-ジイソプロピルエチルアミン(0.994g、0.00769mol)を、酸塩化物溶液に0℃にて窒素雰囲気下でゆっくりと加えた。乾燥THF 10ml中の4-アミノ-3-ヒドロキシ安息香酸(0.196g、0.00128mol)の溶液を、上記溶液に0℃でゆっくりと加えた。次にこの溶液を0℃で30分間、次に室温で一晩撹拌した。次にこの反応混合物を酢酸エチル100mlで希釈し、30分間撹拌した。沈殿したタール物質をセライトベッドで濾別し、有機相を水4×20mlで、ブライン2×10mlで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ロータリーエバポレーターにかけ、粗アミド(140mg)を得て、それをさらなる精製をせずに環化工程に使用した。
【０１８３】
2-(2-メチル-ピリジン-3-イル)-ベンゾオキサゾール-6-カルボン酸の調製
2007538095.tif 000049
粗アミドをDMSO 10mlに溶解し、p-トルエンスルホン酸40mgを加えた。次に溶液を断続的に15分間マイクロ波照射にかけた。次にこの反応混合物を室温まで冷却し、次に撹拌しながら氷冷水中に注いだ。次に水相を酢酸エチル4×50mlで抽出した。有機相を水2×20mlで、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ロータリーエバポレーターにかけ、粗生成物(100mg)を得て、それを分取HPLCで精製した。粗2-(2-メチル-ピリジン-3-イル)-ベンゾオキサゾール-6-カルボン酸200mgを、分取HPLCで精製し、純粋な生成物20mgを得た。
【０１８４】
実施例9
2007538095.tif 000050
4-[(2,6-ジクロロ-ピリジン-4-カルボニル)-アミノ]-3-ヒドロキシ-安息香酸の調製
2007538095.tif 000051
2-メチルニコチノイルクロリド(0.2g、0.00128mol)を乾燥DCM 30mlに溶解し、N,N'-ジイソプロピルエチルアミン(0.994g、0.00769mol)を、酸塩化物溶液に0℃にて窒素雰囲気下でゆっくりと加えた。乾燥THF 10ml中の4-アミノ-3-ヒドロキシ安息香酸(0.196g、0.00128mol)の溶液を、上記溶液に0℃でゆっくりと加えた。次にこの溶液を0℃で30分間、次に室温で一晩撹拌した。次にこの反応混合物を酢酸エチル100mlで希釈し、30分間撹拌した。沈殿したタール物質をセライトベッドで濾別し、有機相を水4×20mlで、ブライン2×10mlで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ロータリーエバポレーターにかけ、粗アミド(140mg)を得て、それをさらなる精製をせずに環化工程に使用した。
【０１８５】
2-(2,6-ジクロロ-ピリジン-4-イル)-ベンゾオキサゾール-6-カルボン酸の調製
2007538095.tif 000052
上記アミドを、DEAN-STARCK装置を備えた一つ口RBフラスコ中でキシレン25mlに懸濁し、p-トルエンスルホン酸40mgを加えた。次にこの反応混合物を5時間かけてゆっくりと160℃まで加熱し、次にその温度で12時間保持した。この反応混合物を冷却してすぐ、濾過した。残渣をジエチルエーテル中でスラリーにし、濾過して、粗生成物0.65gを得た。
【０１８６】
本明細書において提供される他の化合物は、当該技術における知識の範囲内で上記実施例を少々変更して調製している。これらの化合物は、実測融点と共に以下に示す。
【０１８７】
【表１】
2007538095.tif 000053
【０１８８】
実施例10
本明細書において提供される化合物を、停滞フィブリル形成アッセイに付した。化合物をP2O5上で一晩乾燥させ、7.2mMの最終濃度までDMSOに溶解して、一次ストック溶液(10×ストック)を得た。二次ストック溶液は、一次ストック溶液を1.44mMの最終濃度までDMSOで5倍希釈することにより調製した(2×ストック)。阻害剤(1.44mM)の存在下でのTTR (3.6μM)の酸介在アミロイド形成性を、以下のとおり測定した：使い捨てUVキュベットに、10mMリン酸ナトリウム、100mM KClおよび1mM EDTA (pH7.6)中の0.4mg/mL WT TTRタンパク質溶液495μL、ならびにDMSO中の1.44mM阻害剤二次ストック溶液(2×ストック)5μLを加えた。この混合物をボルテックス混合して、30分間インキュベート(25℃)し、この時点で、200mM酢酸、100mM KClおよび1mM EDTA (pH4.2) 500μLでpHを4.4まで低下させた。この最終溶液1mLをボルテックス混合して、37℃で72時間撹拌せずにインキュベートした。72時間後、キュベットをボルテックス混合することにより、存在するいずれのフィブリルも懸濁して、この懸濁液の濁度を、UV-vis分光計を用いて350および400nmで測定した。フィブリル形成パーセントは、［各TTRプラス阻害剤試料の観測濁度］対［同じやり方で調製したが阻害剤を欠いた試料の濁度］の比に100を掛けて得た。等モルの阻害剤およびTTR濃度(3.6μM)を利用するフィブリル形成アッセイは、1×二次ストック溶液を用いて上記のように実施した。1×ストック溶液は、0.72mMの最終濃度まで7.2mM 10×一次ストック溶液をDMSOで10倍希釈することにより調製して、上述のようにフィブリル形成アッセイに使用した。全てのアッセイは、三重測定で実施して、全ての化合物は野生型TTRを用いて測定した。全ての化合物は、WT TTRの非存在下の溶液の濁度を試験することにより実験の全経過を通して可溶性であることが判明したが、これによって濁度がTTRアミロイド形成の結果であることが裏付けられた。
【０１８９】
血漿中のTTRに対する阻害剤候補の結合化学量論を、抗体捕捉/HPLC法により評価した。1.5mLエッペンドルフ管にヒト血漿1.0mLおよび評価段階の阻害剤の1.44mM DMSO溶液7.5μLを充填した。この溶液を37℃で24時間インキュベートして穏やかに揺動させた。急冷セファロースの1：1のゲル：TSA(トリス食塩水)スラリー(125μL)をこの溶液に加え、4℃で1時間穏やかに揺動させた。この溶液を遠心分離(16,000×g)して、上清を2本の400μLアリコートに分割し、次にこれらを抗TTR抗体結合セファロースの1：1のゲル：TSAスラリーの異なる200μL試料に加えた。この溶液を4℃で20分間穏やかに揺動させ、遠心分離(16,000×g)して、上清を取り出した。ゲルを4℃でTSA/0.05%サポニン1mLで洗浄(3×、各10分間)し、続いて4℃でTSA 1mLで洗浄(2×、各10分間)した。この試料を遠心分離(16,000×g)し、最終洗浄液を取り出して、100mMトリエチルアミン(pH11.5) 155μLを加えることにより、TTRおよび結合阻害剤を抗体から溶出した。4℃で30分間穏やかに揺動後、溶出試料を遠心分離(16,000×g)して、TTRおよび阻害剤を含む上清145μLを取り出した。この上清を次に、以前に報告されたように逆相HPLCにより分析した。例えば、全体が参照により組み入れられる、Purkey, H.E.; Dorrell, M.I.; Kelly, J.W. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2001, 98, 5566-71を参照されたい。
【０１９０】
TTR四量体の解離の速度論は、尿素中のリンクされたモノマーのアンフォールディング(unfolding)により評価した。低速の四量体解離は、遠UV CD分光法では検出できないが、以前に報告されたように遠UV CDにより容易に検出できる急速な(500,000倍速い)アンフォールディング工程に関連する。阻害剤(3.6μM)の関数としてのTTR四量体(3.6μM)解離の速度論は、関心対象の阻害剤の1mM溶液(エタノール中)3.6μLを、リン酸緩衝液127.4μLを加えたWT TTR(2.90mg/mL、10mMリン酸ナトリウム、100mM KCl、1mM EDTA、pH7.0) 69μLに加えることにより評価した。TTR濃度(3.6μM)の2倍の阻害剤濃度(7.2μM)については、関心対象の阻害剤の1mM溶液(エタノール中)7.2μLを、リン酸緩衝液123.8μLを加えたWT TTR (2.90mg/mL、10mMリン酸ナトリウム、100mM KCl、1mM EDTA、pH7.0) 69μLに加えた。関心対象のタンパク質-阻害剤溶液100μLを、10.3M尿素600μLおよびリン酸緩衝液300μLの溶液に加えることにより、6.5Mの最終尿素濃度を得た。この溶液をボルテックス混合して、円偏光二色性スペクトルを以下の間隔で収集した：0、5、8、23、46、71、95、118、144および168時間。阻害剤ではなくエタノール7.2μLを含む対照試料を比較のために調製して、上に指定した時点でスペクトルを収集した。CDスペクトルは、0.5nm毎に走査して10秒の平均化時間で220と213nmの間で収集した。各波長で1回走査した。振幅の値を、220と213nmの間で平均して、実験を通してのβ-シート消失の程度を求めた。
【０１９１】
酸介在フィブリル形成の速度は、pH4.4での濁度により追跡した。化合物は、P2O5上で一晩乾燥させて、7.2mMの最終濃度までDMSOに溶解して、一次ストック溶液(10×ストック)を得た。二次ストック溶液は、一次ストック溶液を1.44mMの最終濃度までDMSOで5倍希釈することにより調製した(2×ストック)。3.6μM TTR(四量体)に対して7.2μMの阻害剤濃度を採用するフィブリル形成アッセイは、以下のとおり実施した：使い捨てUVキュベットに、10mMリン酸ナトリウム、100mM KClおよび1mM EDTA (pH7.6)中の0.4mg/mL WT TTRタンパク質溶液495μL、ならびに1.44mM阻害剤二次ストック溶液(2×ストック)5μLを加えた。この混合物をボルテックス混合して、30分間インキュベート(25℃)した。30分後、200mM酢酸、100mM KCl、1mM EDTA(pH4.2)500μLでpHを4.4まで低下させた。この最終溶液1mLをボルテックス混合して、撹拌せずに37℃でインキュベートした。この溶液をボルテックス混合して、350および400nmで濁度を測定した。UVスペクトルを以下の間隔で収集した：酸性化の0、4、8、24、48、72、96、120、144、168および192時間後。DMSO 5μLを含む対照試料を比較のために調製して、上記の時点でスペクトルを収集した。各阻害剤溶液は、読み取りを行う前のキュベットの妨害を防ぐために10個ずつ調製した。UV吸光度を得た後、その時点に相当するキュベットを廃棄した。等モル(3.6μM)のTTRおよび阻害剤濃度を利用するフィブリル形成アッセイは、以下のとおり調製した1×阻害剤二次ストック溶液を用いて上記のとおり実施した：ストック溶液は、0.72mMの最終濃度まで7.2mM 10×一次ストック溶液をDMSOで10倍希釈することにより調製して、上述のようにフィブリル形成アッセイに使用した。全ての化合物は、実験の全経過を通して可溶性であることが判明したが、これによって濁度がTTRアミロイド形成の結果であることが裏付けられた。
【０１９２】
前述の化合物は、濁度測定法を用いてTTRアミロイドフィブリル阻害剤として評価した。WT TTRアミロイドーシスは、pHを4.4の最終値に跳ね上げる緩衝液の添加を利用して、阻害剤と共に前もってインキュベート(25℃、30分間)したTTRを酸性化することにより開始させた。各混合物の72時間(37℃)のインキュベーション後、UV-vis分光計を用いて350および400nmで濁度を測定した。全てのアミロイドフィブリル形成データは、100%フィブリル形成に割り当てられた、阻害剤の非存在下でのWT TTRアミロイド形成に対して標準化した。よって、5%フィブリル形成は、72時間後に95%のWT TTRフィブリル形成を阻害する化合物に相当する。各阻害剤候補を、最初に3.6μMのTTR四量体濃度に対して7.2μMの濃度で評価した。15%未満のフィブリル形成を可能にする化合物を、TTR濃度(3.6μM)と等しい濃度で再評価することにより、最も高効力の阻害剤を選抜した。このような条件下で40%未満のフィブリル形成は、非常に良好な阻害剤の特徴を示しているが、一方40〜70%阻害は、中程度の化合物を示している。
【０１９３】
TTRの濃度(3.6μM)と等しい濃度でTTRフィブリル形成を50%未満に保持する阻害剤を、他の全ての血漿中タンパク質よりもTTRに選択的に結合する能力についてさらに評価した。血中のジフルニサル濃度は、単回500mg投与の20時間後30μMを超えることも、または同じ投与の4時間後300μMを超えることもある。この高レベルの持続血漿濃度は、優れた生物学的利用能を示唆するが、より選択的な阻害剤ならば、より低用量かつ潜在的により少ない副作用を可能にする；従って、ヒト血漿を、10.8μMの最終濃度の阻害剤のこのサブセットと共にインキュベートした(ヒト血漿中の平均TTR濃度は、約5μMである)。次に樹脂結合抗体を用いてTTRを捕捉して、固定化TTRをTSA(トリス食塩水)/0.05%サポニンの溶液で3回洗浄し、続いてTSAで2回洗浄した。TTR-阻害剤複合体は、100mMトリエチルアミン(pH11.5)で樹脂から遊離させ、存在する阻害剤のTTRに対する化学量論を、逆相HPLC分析により求めた。TTR四量体当たり最大2当量の阻害剤が結合することができる。
【０１９４】
材料と方法
トランスサイレチン抗体精製およびセファロースへの結合
抗体を産生させ、精製してセファロースに結合させた。樹脂は、TSA中の1：1スラリー(10mMトリス、pH8.0/140mM NaCl/0.025% NaN3)として保存した。さらに、抗体の代わりに200mMトリス(pH8.0)を樹脂に結合させることにより急冷セファロースを調製した。
【０１９５】
ヒト血漿調製
スクリプス総合臨床研究センターの正常血採血プログラム(Scripps General Clinical Research Center's Normal Blood-Drawing Program)で、全血を健常ボランティアから採血して、50mL円錐チューブに移した。このチューブを、スウィング型ローターを装備したSorvall RT7卓上遠心分離機で、3000 RPM (1730×g)で25℃で10分間遠心分離した。血漿上清を取り出して、再度3000 RPMで10分間遠心分離して、残りの細胞を取り出した。アジ化ナトリウムを加えることにより、0.05%溶液を得た。この血漿を使用まで4℃で保存した。
【０１９６】
トランスサイレチンと結合化合物の免疫沈降
2mLエッペンドルフ管にヒト血漿1.5mLおよび評価段階の化合物の2.16mM DMSO溶液7.5μLを充填した。この溶液を37℃で24時間インキュベートした。急冷セファロースの1：1の樹脂/TSAスラリー(187μL)をこの溶液に加えて、4℃で1時間穏やかに揺動させた。この溶液を遠心分離(16,000×g)して、上清を各400μLの3本のアリコートに分割した。これらをそれぞれ抗トランスサイレチン抗体結合セファロースの1：1の樹脂/TSAスラリー200μLに加えて、4℃で20分間ゆっくり揺動させた。この試料を遠心分離(16,000×g)して、上清を取り出した。樹脂を4℃でTSA/0.05%サポニン(Acros) 1mLで洗浄して(3×10分間)、さらに4℃でTSA 1mLで洗浄した(2×10分間)。この試料を遠心分離(16,000×g)して、最終洗浄液を取り出し、100mMトリエチルアミン(pH11.5)155μLを加えることにより、TTRおよび結合低分子を抗体から溶出した。4℃で30分間の穏やかな揺動後、試料を遠心分離(16,000×g)して、TTRおよび阻害剤を含む上清145μLを取り出した。
【０１９７】
トランスサイレチンおよび結合化合物のHPLC分析および定量
TTR抗体ビーズからの上清溶出試料(145μL)を、Waters 71Pオートサンプラーに載せた。各試料の135μL注入液を、Waters 600E多溶媒送達システムにより制御される、40〜100%のB勾配を利用して8分間にわたり、Keystoneの3cm C18逆相カラムで分離した(A：94.8% H2O/5%アセトニトリル/0.2% TFA；B：94.8%アセトニトリル/5% H2O/0.2% TFA)。検出は、Waters 486可変吸光度検出器で280nmで遂行して、ピークを積分することにより、TTRおよび低分子両方の面積を得た。各化学種の量を求めるために、既知量の四量体TTRまたは化合物をHPLCに注入した。ピークを積分して、カレイダグラフ(Kaleidagraph)(Synergy Software)を用いてデータの線形回帰から較正曲線を作成した。較正曲線を使用して、血漿試料中に存在する各化学種のモル数を求めた。低分子対タンパク質の比を算出することにより、血漿中でTTRに結合している低分子の化学量論を得た。
【０１９８】
トランスサイレチンのアミロイドフィブリル形成アッセイ
化合物を720μMの濃度でDMSOに溶解した。評価する化合物の溶液5μLを、10mMリン酸(pH7.6)、100mM KCl、1mM EDTA緩衝液中の7.2μM TTR溶液0.5mLに加えることで、化合物をTTRと共に30分間インキュベートした。0.2mM酢酸(pH4.2)、100mM KCl、1mM EDTA 495μLを加えることにより、それぞれ3.6μMの最終タンパク質および阻害剤濃度、ならびに4.4のpHが生じた。次にこの混合物を37℃で72時間インキュベートし、次いでチューブを3秒間ボルテックス混合して、光学密度を400nmで測定した。フィブリル形成の程度は、各光学密度を阻害剤なしのTTRの光学密度(100%フィブリル形成と定義される)により標準化することによって求めた。TTRの非存在下での各化合物の対照溶液もまた試験したが、どれも400nmで感知できる吸光はなかった。
【０１９９】
結晶化およびX線データ収集
組換えTTRの結晶は、懸滴実験において2M硫酸アンモニウムに対して平衡化した5mg/mlのタンパク質溶液(100mM KCl、100mMリン酸(pH7.4)、1M硫酸アンモニウム中)から得た。TTR・リガンド複合体は、両方の結合部位の完全な飽和を確保するために10倍モル過剰のリガンドと共に2週間浸漬した結晶から調製した。1：1のアセトン：水の溶液を浸漬剤として使用した。RU200回転アノードX線発生装置に連結したDIP2030bイメージングプレートシステム(MAC Science、横浜、日本)をデータ収集のために使用した。結晶は、凍結防止剤としてパラトーンオイル(paratone oil)に入れて、回折実験のために120Kに冷却した。全てのTTR・リガンド複合体の結晶は、同形であり、a=43Å、b=86Åおよびc=65Åの単位格子寸法を含むアポ結晶形を有する。これらは、空間群P21212に属し、非対称単位中にホモ四量体の半分を含む。データは、DENZOおよびSCALEPACKで削減した。
【０２００】
構造決定および微調整
タンパク質データバンク（Protein Data Bank）からのTTRに関するタンパク質原子座標(アクセッション番号1BMZ)を、プログラムCNSを使用する、分子動力学およびエネルギー最小化による、未変性TTRおよびTTR-リガンド複合体の微調整のための出発モデルとして使用した。化合物と共に浸漬したか、または同時に共結晶化したTTR結晶について収集した回折データから、マップを算出した。TTRと化合物との複合体では、生じたマップから、5〜9r.m.s.のピーク高を有する、TTR四量体の両方の結合ポケット中のリガンドの近似位置が明らかになった。低分子の電子密度をさらに改善してモデルの偏りを取り除くために、このモデルを数サイクルのワープ/シェイク(warp/shake)プロトコールに供すると、これによってマップに、特に阻害剤の周りに顕著な改善が生じた。これらのマップを用いて次のモデルの当てはめを行い、リガンド分子を高密度部に配置した。3つのケース全てで、プログラムのインサイトII (InsightII) (Accelrys)により算出した阻害剤の最小エネルギーコンフォメーションが、マップと良好な一致を見た。結合チャネルに沿った二重の結晶学的対称軸のため、統計的に無秩序なモデルを適用する必要があり、そのため四量体TTRの2つの結合部位のそれぞれに2つのリガンド結合様式が生じた。不偏電子密度マップに基づいて水分子を加えた。最終マップに説明できる電子密度が欠けているため、9個のN末端および3個のC末端残基は、この最終モデルに含まれなかった。
【０２０１】
当業者には変更が明白であるため、本明細書に請求される対象物は、添付される特許請求の範囲によってのみ限定されるものである。
【国際調査報告】
2007538095.tif 000066
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