(57)【要約】  本発明は放射線被曝に関連する１またはそれ以上の徴候の予防または処置方法に関する。具体的には、本発明は放射線被曝に関連する１またはそれ以上の徴候（例えば、胃腸（ＧＩ）症候群、造血（骨髄）の症候群および脳血管（ＣＮＳ）の症候群）の予防または処置方法であって、ＣＧ５３１３５−０５、繊維芽細胞成長因子−２０（ＦＧＦ−２０）蛋白を含有する組成物を該処置の必要がある対象へ投与することを含んでなる方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象において放射線被曝に関連する疾患またはその１もしくはそれ以上の徴候を予防または処置する方法であって、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドを含有する組成物を対象へ投与することを含んでなる方法。
【請求項２】
対象がヒトである請求項１記載の方法。
【請求項３】
疾患が好中球減少症である請求項１記載の方法。
【請求項４】
疾患が胃腸粘膜炎である請求項１記載の方法。
【請求項５】
徴候が下痢、皮膚の火傷、傷、疲労、脱水、炎症、脱毛、口腔粘膜の潰瘍または鼻、口もしくは直腸からの出血である請求項１記載の方法。
【請求項６】
予防的に有効量の該ポリペプチドが放射線に曝される可能性のある対象へ投与される請求項１記載の方法。
【請求項７】
有効量が該ポリペプチドの一回用量である請求項６記載の方法。
【請求項８】
有効量が該ポリペプチドの一回用量以上である請求項７記載の方法。
【請求項９】
治療的に有効量の該ポリペプチドが放射線を被曝した後の対象へ投与される請求項１記載の方法。
【請求項１０】
有効量が該ポリペプチドの一回用量である請求項９記載の方法。
【請求項１１】
有効量が該ポリペプチドの一回用量以上である請求項９記載の方法。
【請求項１２】
該ポリペプチドが非経口経路にて投与される請求項１記載の方法。
【請求項１３】
投与経路が静脈内、筋内、皮下、皮内または経鼻投与から成る請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
治療的に有効量の該ポリペプチドが医薬組成物中に処方される請求項１記載の方法。
【請求項１５】
放射線損傷から造血組織を回復または防護する方法であって、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドを含有する組成物を該処置の必要のある対象へ投与することを含んでなる方法。
【請求項１６】
放射線損傷から胃腸組織を回復または防護する方法であって、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドを含有する組成物を該処置の必要のある対象へ投与することを含んでなる方法。
【請求項１７】
対象においてマスタードガス剤への被曝に関連する疾患またはその１もしくはそれ以上の徴候を予防または処置する方法であって、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドを含有する組成物を対象へ投与することを含んでなる方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本出願は米国仮出願番号第６０／４６９，３５３号（２００３年５月９日出願）および第６０／５４４，３０８号（２００４年２月２６日出願）ならびに代理人整理番号Ｃｕｒａ  ５７ＵＮにて特定される米国仮出願（題名“Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｇ５３１３５−０５（ＦＧＦ−２０）  ｉｎ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ”２００４年４月２６日出願）の優先権を主張し、出典明示によりその全てを本明細書の一部とする。
【０００２】
（技術分野）
本発明は放射線被曝に関連する１またはそれ以上の徴候を防止または処置する方法に関する。特に、本発明は放射線被曝に関連する１またはそれ以上の徴候（例えば胃腸（ＧＩ）症候群、造血（骨髄）の症候群および脳血管（ＣＮＳ）の症候群）を予防または処置する方法であって、ＣＧ５３１３５−０５、繊維芽細胞成長因子−２０（ＦＧＦ−２０）蛋白を含有する組成物を該処置の必要がある対象へ投与することを含んでなる方法を提供する。
【０００３】
（従来技術）
ＦＧＦファミリーは２０以上のメンバーから成り、各々保存されたアミノ酸コアを含む（例えばＰｏｗｅｒｓｅｔら，Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｌａｔ．Ｃａｎｃｅｒ，７（３）：６５−１９７（２０００）を参照のこと）。ＦＧＦは成長、生残、アポトーシス、運動性および分化のごとき多様な細胞機能を調節する（例えばＳｚｅｂｅｎｙｉｅｔら，Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｃｙｔｏｌ．，１８５：４５−１０６（１９９９）を参照のこと）。ＦＧＦファミリーのメンバーは、形態形成、肢の発達、組織修復、炎症、血管形成ならびに腫瘍の成長および湿潤を含む、胚形成および成人期における様々な生理学的および病理学的過程に関与する。（例えばＰｏｗｅｒｓｅｔら，Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｌａｔ．Ｃａｎｃｅｒ，７（３）：１６５−１９７（２０００）；またはＳｚｅｂｅｎｙｉら，Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｃｙｔｏｌ．１８５：４５−１０６（１９９９）を参照のこと）。相同性に基づくゲノムマイニング法により、ＦＧＦファミリーの新しいメンバー、ＦＧＦ−２０（ＣＧ５３１３５としても知られている）が同定された（例えばＪｅｆｆｅｒｓら，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，６１（７）：３１３１−８（２００１）を参照のこと）。
【０００４】
一回の、大量の電離放射線への被曝はフリーラジカルの発生により組織へ即時的な効果を生じ、多くの場合放射線宿酔を生じ得る。放射線に誘発される致死率は被曝線量に依存する。３つの主要な症候群は一回の線量の放射線被曝に関連する：脳血管（ＣＮＳ）の症候群、胃腸（ＧＩ）症候群および造血（骨髄）の症候群（例えばＣｏｌｅｍａｎら，Ｒａｄｉａｔ．Ｒｅｓ．，１５９（６）：８１２−８３４（２００３）を参照のこと）。死亡時間は被曝線量に依存するが、ＣＮＳ症候群では数時間以内、ＧＩ症候群では３ないし１０日以内、および造血の症候群では３０ないし６０日以内である。放射線宿酔に関連する他の徴候は悪心、嘔吐、下痢、皮膚の火傷および傷、疲労、脱水、炎症、脱毛、好中球減少症、口腔粘膜およびＧＩ系の潰瘍、ならびに鼻、口および直腸からの出血を包含するが、これらに限定されない。放射線宿酔に関連する該徴候の一般的かつ根本的な原因は、電離放射線が幹細胞前駆細胞へ直接作用するためである。胃腸および／または造血系において特に影響される幹細胞は、薬理学的介入のための細胞標的である。好中球減少症（好中球の数を減少し、感染のリスクを増大する）および胃腸粘膜炎は電離放射線に起因する最も重大な死因のうちの２つである。放射線と同様にマスタード剤は細胞レベルで同様の効果を惹起する；これらの併用は羅患率に幾何級数的な効果を与えるだろう。
【０００５】
血液細胞の置換、抗生物質、サイトカイン、および高線量の場合には造血幹細胞の移植などの対症的な医療介入は全体的な生残を増大し得るだろう。放射線応答の生物学的修飾は長年にわたり活発に研究されている領域である。有効な放射線増感剤および防護剤の両方の発展により、放射線療法を受けている患者に治療的な利点を提供し得るだろう（例えばＣａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ，１９９５：５０１−５２７を参照のこと）。放射線防護剤のさらなる適応は産業または軍事環境にて不測の電離放射線被曝に関わる個人の防護も包含する。ＦＧＦファミリーのメンバーでの処置は全身へ電離放射線を被曝した後のマウスにおいて生残および造血の回復を改善した（例えばＣｙｔｏｋｉｎｅ，９（１）：５９−６５（１９９７）；ＡｃｔａＯｎｃｏｌ．，３６（３）：３３７−３４０（１９９７）；ＡｃｔａＯｎｃｏｌ．，３４（３）：４３５−４３８（１９９５）；Ｒａｄｉａｔ．Ｒｅｓ．，１５０（２）：２０４−１１（１９９８）；およびＡｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，２４（５）：４９１−５（２００１）を参照のこと）。酸性ＦＧＦ（ａＦＧＦまたはＦＧＦ−１、１−２４ｍｇ）は全身へ８４０センチ−グレイ（ｃＧｙ）の電離放射線を受けているＣ３Ｈ／ＨｅＣＮＲマウスの生残を増大した（Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，９（１）：５９−６５（１９９７）を参照のこと）。ＦＧＦファミリーの他の３つのメンバーである、塩基性ＦＧＦ（ｂＦＧＦまたはＦＧＦ−２）、ケラチノサイト成長因子１および２（ＫＧＦ−１またはＦＧＦ−７、およびＫＦＧ−２またはＦＧＦ−１０）の放射線防護効果をＣ３Ｈ／ＨｅおよびＢａｌｂＣの両マウスにおいて試験した（Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，２４（５）：４９１−５（２００１）を参照のこと）。これらの研究により電離放射線のＬＤ５０は一回用量（６μｇ）の成長因子にて約１００ｃＧｙ増大することが示された。
【０００６】
電離放射線は、細胞内または他の場所にて別の分子に対し照射される場合に、反応性イオンを生じる放射線粒子の能力のために、そのように呼ばれている。細胞内の最も一般的な分子の１つは水、Ｈ２０であるため、非常に多くの場合に生じるラジカルはこの分子の分解形態である（例えばＩｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．Ｂｉｏｌ，６５：２７−３３（１９９４）参照のこと）。反応性酸素種（ＲＯＳ）はスーパーオキシド（Ｏ２）、ヒドロキシル（ＨＯ）および過酸化水素（Ｈ２０２）を包含する（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７８：１００１−１００３（１９８１）を参照のこと）。ミトコンドリアにて電子伝達系によりエネルギーを産生するなど、これらの分子中間体は細胞に有用であるが、過剰量では高い反応性に起因して組織破壊を惹起し得る。ゲノムＤＮＡの切断、ミトコンドリア膜の脱分極および蛋白変性はかかるラジカルが惹起し得る損傷である。これらの因子に対する身体の初めの防御ラインはラジカルをスカベンジ（消去）し、より反応性の低い種にする酵素である。これらの酵素はスーパーオキシドジムスターゼ（ＭｎＳＯＤ、Ｃｕ、ＺｎＳＯＤ、細胞外−ＳＯＤ）、グルタチオンペルオキシダーゼおよび転写因子Ｎｒｆ２に誘発される遺伝子を包含する（Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．，１７：３８９−３９５（１９９４）；ＦＡＳＥＢ  Ｊ．，７：３６１−３６８（１９９３）；Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９４：５３６１−５３６６を参照のこと）。実際に、これらの蛋白の多くは過剰発現した場合に細胞に対し放射線防護的であることが示された（Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．，１７：３８９−３９５（１９９４）、およびＦＡＳＥＢ  Ｊ．，７：３６１−３６８（１９９３）を参照のこと）。加えて、ＫＧＦなどの繊維芽細胞成長因子ファミリーの他のメンバーはＮｒｆ２の発現に影響することが示された（Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，２２：５４９２−５５０５（２００２）を参照のこと）。故に、ＲＯＳが電離放射線を照射した後の細胞損傷において主要な役割を担うため、ＲＯＳが介する経路へのＦＧＦ−２０の効果を理解することは全動物への放射線防護効果の機序の幾つかを描き出すだろう。
【０００７】
（発明の概要）
本発明は放射線被曝、化学療法、化学兵器に関連する１またはそれ以上の徴候および／または急速に増殖する体内組織に作用する任意の他の傷害を防止または処置する方法であって、ＣＧ５３１３５−０５、ＦＧＦ−２０蛋白を含有する組成物を該処置の必要のある対象へ投与する方法を提供する。一つには、本発明は、ＣＧ５１３５−０５が造血および胃腸組織のごとき急速に増殖する組織を放射線被曝、化学療法および化学兵器から防護するという本発明の知見に基づいている。任意の理論に限定されないが、ＣＧ５３１３５−０５は増殖組織の再生能に関連する幹細胞を細胞障害性の有害作用から防護すると考えられる。最終的に、この一般的な防護は急速に増殖する組織に作用する傷害に関連する徴候の改善および／または罹患率および致死率の改善に至る。
【０００８】
本発明は急速に増殖する組織に作用する傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）に曝された対象を処置する方法であって、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドを含有する組成物の治療的な有効量を対象へ投与することを含んでなる方法を提供する。
【０００９】
本発明は急速に増殖する組織に作用する傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）に曝された対象の造血組織を防護および／または再生する方法であって、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドを含有する組成物の治療的な有効量を対象へ投与することを含んでなる方法も提供する。一の実施態様において、本発明は急速に増殖する組織に作用する傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）に曝された対象の好中球減少症を処置する方法であって、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドを含有する組成物の治療的な有効量を対象へ投与することを含んでなる方法を提供する。
【００１０】
本発明は急速に増殖する組織に作用する傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）に曝された対象の胃腸組織を防護および／または再生する方法であって、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドを含有する組成物の治療的な有効量を対象へ投与することを含んでなる方法も提供する。一の実施態様において、本発明は急速に増殖する組織に作用する傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）に曝された対象の胃腸粘膜炎を処置する方法であって、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドを含有する組成物の治療的な有効量を対象へ投与することを含んでなる方法を提供する。
【００１１】
さらに、本発明は急速に増殖する組織に作用する傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）に関連する徴候（例えば下痢、皮膚の火傷、傷、疲労、脱水、炎症、脱毛、口腔粘膜の潰瘍、および鼻、口または直腸からの出血であるが、これらに限定されない）を防止、処置または改善する方法であって、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドを含有する組成物の予防的または治療的な有効量を該処置の必要のある対象へ投与することを含んでなる方法を提供する。一の実施態様において、ＣＧ５３１３５−０５を含有する組成物は対象が傷害に曝される前に投与される。もう一つ別の実施態様において、ＣＧ５３１３５−０５を含有する組成物は対象が傷害に曝された後に投与される。さらにもう一つ別の実施態様において、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドは急速に増殖する組織に作用する傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）に曝される危険性のある対象へ投与される。
【００１２】
本発明は対象が放射線、化学療法および化学兵器のごとき急速に増殖する組織に作用する傷害に曝される前に、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドを含有する組成物の予防的な有効量を対象へ投与することを含んでなる、造血組織を防護および／または再生する方法を提供する。一の実施態様において、本発明は対象が急速に増殖する組織に作用する傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）に曝される前に、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドを含有する組成物の予防的な有効量を対象へ投与することを含んでなる、対象の好中球減少症を予防する方法を提供する。
【００１３】
本発明は対象が急速に増殖する組織に作用する傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）に曝される前に、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドを含有する組成物の予防的な有効量を対象へ投与することを含んでなる、対象の胃腸組織を防護および／または再生する方法も提供する。一の態様において、本発明は対象が急速に増殖する組織に作用する傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）に曝される前に、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドを含有する組成物の予防的な有効量を対象へ投与することを含んでなる、対象の胃腸粘膜炎を予防する方法を提供する。
【００１４】
一の実施態様において、本発明はＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドを含有する組成物の予防的または治療的な有効量を対象へ投与することを含んでなる、急速に増殖する組織に作用する傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）に曝された対象の生残を改善する方法を提供する。治療的な有効量はＣＧ５３１３５−０５の一回用量か、二回またはそれ以上の用量であってもよい。
【００１５】
もう一つ別の実施態様おいて、一回かつ予防的用量のＣＧ５３１３５−０５が、急速に増殖する組織に作用する傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）に後で曝されることとなる対象へ投与される。ここで、かかる予防的用量は増殖する組織内の様々なコンパートメント（例えば腸絨毛）への限定的な、短期作用の増殖効果を生じる。もう一つ別の実施態様において、一回以上の予防的な用量（ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドは二回またはそれ以上の用量であってもよい）が急速に増殖する組織に作用する傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）に曝された対象へ、該傷害に関連する徴候を予防、処置または改善するために投与されてもよい。
【００１６】
幾つかの実施態様において、急速に増殖する組織に作用する傷害は放射線被曝である。幾つかの実施態様において、急速に増殖する組織に作用する傷害は１もしくはそれ以上のアルキル化剤、１もしくはそれ以上のマスタード剤、または１もしくはそれ以上の他の化学療法剤、或いはそれらの組み合わせである。幾つかの実施態様において、急激に増殖する組織に作用する障害は放射線被曝、１もしくはそれ以上のアルキル化剤、１もしくはそれ以上のマスタード剤、または１もしくはそれ以上の他の化学療法剤、或いはそれらの組み合わせである。
【００１７】
幾つかの実施態様において、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドは急速に増殖する組織に作用する傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）に関連する１またはそれ以上の徴候を予防、処置または改善するために、当業者に知られている１またはそれ以上の他の療法と組み合わせて用いられる。
【００１８】
医薬組成物、処方およびキットもまた本発明により提供される。
【００１９】
３．１．用語
本発明は新規ＦＧＦ−２０の核酸およびアミノ酸、ならびにＣＧ５３１３５に関して本明細書および他に記載されているその改変体の同定に基づく（米国仮出願番号第０９／４９４，５８５号および第１０／１７４，３９３号にて“ＦＧＦ−ＣＸ”と記載。両文献は出典明示によりその全てを本明細書の一部とする）。本明細書中、用語「ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチド」は２１１アミノ酸から成るアミノ酸配列を含んでなる、単離されたポリペプチドを言う。さらに、本発明はＣＧ５３１３５−０５の断片、誘導体、改変体、ホモログまたはアナログも包含する。幾つかの実施態様において、本発明はＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドの改変体を包含し、ここでＣＧ５３１３５−０５のアミノ酸配列の幾つかのアミノ酸残基（例えばわずか１％、２％、３％、５％、１０％または１５％）が変更される。幾つかの実施態様において、単離されたＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドはＣＧ５３１３５により提供されるアミノ酸配列の成熟形態のアミノ酸配列、またはＣＧ５３１３５により提供されるアミノ酸配列の成熟形態の改変体を含む。好ましくは、アミノ酸配列の成熟形態の改変体において、ＣＧ５３１３５−０５のアミノ酸配列のわずか１％、２％、３％、５％、１０％または１５％が変更される。
【００２０】
本明細書中、用語「有効量」は、急速に増殖する組織への傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）を特徴とする疾患もしくは傷害、またはその１もしくはそれ以上の徴候の重篤度および／または持続時間を軽減および／または改善し、該疾患もしくは傷害の進行を防止し、該疾患もしくは傷害の緩解を惹起し、該傷害に関連する１もしくはそれ以上の徴候の再発、発達または発症を防止し、或いは別の療法（例えば予防的または治療的な剤）の予防的もしくは治療的効果を高める、または改善するのに十分な療法（例えばＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドを含有する組成物）の用量を言う。
【００２１】
本明細書中、用語「組み合わせて」は１つ以上の療法の使用を言う。用語「組み合わせて」の使用は療法が該療法の必要のある対象へ実施される順を限定しない。第一の療法は該療法の必要のある対象へ第二の療法を実施する前（例えば５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間前）、同時または後（例えば５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間後）に実施され得る。
【００２２】
本明細書中、用語「予防的な有効量」は、急激に増殖する組織への傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）に関連する疾患もしくは障害、またはその１もしくはそれ以上の徴候の発達、再発または発症の防止に帰着するか、或いは別の療法の予防的効果を高める、もしくは改善するのに十分な療法（例えばＣＧ５３１３５−０５ポリペプチド）の用量を言う。
【００２３】
本明細書中、用語「対象」は動物、好ましくは非霊長類（例えばウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラットまたはマウス）および霊長類（例えばサル、チンパンジーまたはヒト）を含んでなる哺乳類、さらにより好ましくはヒトを言う。一の実施態様において、対象は、急速に増殖する組織に作用する傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）に曝されたか、後に曝される予定である哺乳類であり、好ましくはヒトである。もう一つ別の実施態様において、対象は急速に増殖する組織に作用する傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）に曝されたか、後に曝される予定である家畜（例えばウマ、ブタまたはウシ）またはペット（例えばイヌまたはネコ）である。もう一つ別の実施態様において、対象は急速に増殖する組織に作用する傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）に曝されるかもしれない哺乳類であり、好ましくはヒトである。用語「対象」は本明細書中「患者」と同義で用いられる。
【００２４】
本明細書中、用語「治療的な有効量」は、急速に増殖する組織への傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）を特徴とする疾患もしくは障害の重篤度を軽減し、該疾患もしくは障害の持続時間を減少し、該疾患もしくは障害の進行を防止し、該疾患もしくは障害の緩解を惹起し、急速に増殖する組織への傷害に関連する１またはそれ以上の徴候を改善し、或いは別の療法の治療的効果を高める、または改善するのに十分な療法（例えば５３１３５−０５ポリペプチド）の用量を言う。
【００２５】
用語「療法」および「治療剤」は急速に増殖する組織への傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）を特徴とする疾患もしくは障害、またはその１もしくはそれ以上の徴候の防止、処置または改善において用いられ得る任意のプロトコル、方法および／または剤を言ってもよい。ある実施態様において、用語「療法」および「治療剤」は急速に増殖する組織への傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）を特徴とする疾患もしくは障害、またはその１もしくはそれ以上の徴候の処置または改善に有用である抗ウィルス療法、抗バクテリア療法、抗菌療法、生物学的療法、支持療法および／または他の療法を言い、これらは医者に知られている。
【００２６】
（発明の詳細な記載）
本発明は放射線被曝、化学療法、化学兵器に関連する１またはそれ以上の徴候および／または急速に増殖する体内組織に作用する他の任意の障害を予防または処置する方法あって、ＦＧＦ−２０蛋白であるＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドを含有する組成物を該処置の必要のある対象へ投与する方法を提供する。
ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドおよびかかるポリペプチドの作成方法は米国出願番号第０９／４９４，５８５号および第１０／１７４，３９４号に記載されており、両文献は出典明示によりその全てを本明細書の一部とする。
【００２７】
本発明は急激に増殖する組織に作用する傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）に関連する疾患または１もしくはそれ以上の徴候を防止、処置または改善する方法であって、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドを含有する組成物の予防的または治療的な有効量を該処置の必要のある対象へ投与することを含んでなる方法を提供する。
【００２８】
幾つかの実施態様において、急速に増殖する組織に作用する傷害は放射線被曝である。ある特定の実施態様において、該傷害は電離放射線である。もう一つ別の実施態様において、該傷害は１またはそれ以上の化学療法、もしくは１またはそれ以上の化学兵器、或いはそれらの組み合わせであってよい。化学療法および化学兵器の一例はアルキル化剤およびマスタード剤であるが、これらに限定されない。幾つかの実施態様において、急速に増殖する組織に作用する傷害は１またはそれ以上の放射線被曝、１またはそれ以上の化学療法、１またはそれ以上の化学兵器或いはそれらの組み合わせである。
【００２９】
電離放射線のごとき傷害作用に最も感受性のある器官および身体系は皮膚、造血およびリンパ系、生殖腺、肺、神経組織およびＧＩ管を包含する。一の実施態様において、該傷害は特に対象の造血および／または胃腸組織への損傷である。もう一つ特定の実施態様において、防止または処置されるべき疾患は粘膜炎である。幾つかの実施態様において、急速に増殖する組織に作用する傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）に関連する徴候は下痢、皮膚の火傷、傷、疲労、脱水、炎症、脱毛、口腔粘膜の潰瘍および鼻、口または直腸からの出血を包含するが、これらに限定されない。
【００３０】
本発明の方法を用いる対象とされ得る患者群は、急速に増殖する組織に作用する傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）に曝された対象、急速に増殖する組織に作用する傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）に曝された疑いのある対象、急速に増殖する組織に作用する傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）へ後に曝されることとなる対象、ならびに急速に増殖する組織に作用する傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）に曝される危険性にある対象を包含するが、これらに限定されない。
【００３１】
一の実施態様において、ＣＧ５３１３５−０５を含有する組成物は対象が該傷害に曝される前に投与される。もう一つ別の実施態様において、ＣＧ５３１３５−０５を含有する組成物は対象が該傷害に曝された後に投与される。さらにもう一つ別の実施態様において、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドは急速に増殖する組織に作用する傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）に曝される危険性にある対象へ投与される。
【００３２】
ＣＧ５３１３５−０５を含有する組成物は急速に増殖する組織に作用する傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）に関連する疾患または１もしくはそれ以上の徴候を予防、処置または改善するために、１もしくはそれ以上の他の療法と組み合わせて投与されることもできる。一の好ましい実施態様において、ＣＧ５３１３５−０５を含有する組成物は、急速に増殖する組織に作用する傷害（例えば放射線、化学療法および化学兵器）に関連する疾患または１もしくはそれ以上の徴候の予防、処置または改善において用いられることが知られている１またはそれ以上の療法と組み合わせて投与される。かかる他の療法の例はメスナ（２−メルカプトエタンスルホン酸ナトリウム）および遊離チオール部分を有する他のアナログ、ジメスナ（２，２’−ジチオビスエタンスルホン酸ジナトリウム）および他のジスルフィドおよび米国出願番号第２００３００９２６８１号に記載のごとき化合物を包含するが、これらに限定されない。
【００３３】
一の実施態様において、併用療法にて、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドおよび／または別の治療剤が準至適用量で投与され、該量は例えば単独投与された場合には検出可能な治療効果を示さない用量（測定は当業者に知られている方法による）である。かかる方法において、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドと他の治療剤の併用投与は処置効果を全体として改善する。
【００３４】
一の実施態様において、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドおよび１またはそれ以上の治療剤は一回の患者来診にて投与される。もう一つ別の実施態様において、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドは１またはそれ以上の他の治療剤の投与前に投与される。さらにもう一つ別の実施態様において、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドは１またはそれ以上の治療剤の投与後に投与される。ある特定の実施態様において、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドおよび１またはそれ以上の他の治療剤は対象へ周期的に投与される。周期的な投与はある期間におけるＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドの投与、ついで、ある期間における１またはそれ以上の他の治療剤の投与、およびこの一連の投与の繰り返しを包含する。周期的な投与は１またはそれ以上の治療剤への耐性の発達を減じ、一の治療剤による副作用を回避または軽減し、および／または該処置の効果を改善し得る。
【００３５】
本発明の組成物（例えばＣＧ５３１３５−０５ポリペプチド）の毒性および治療的な効果は、例えばＬＤ５０（集団の５０％を致死させる用量）およびＥＤ５０（集団の５０％に治療的に有効である用量）を決定するなどの、細胞培養または実験動物における標準的な医薬的手法により決定され得る。毒性と治療的効果の用量比は治療指数であり、比ＬＤ５０／ＥＤ５０で示され得る。高い治療指数を示す組成物が好ましい。毒性の副作用を示す組成物が用いられてもよいが、非感染細胞への潜在的な損傷を最小限にし、それにより副作用を軽減するために、かかる組成物を罹病組織部位へ到達させるデリバリーシステムを設計する際には配慮すべきである。
【００３６】
一の実施態様において、細胞培養アッセイおよび動物の研究から得たデータは、ヒトにおける使用のための用量範囲を考案する際に利用され得る。好ましくは、複合体の用量はほとんどまたは全く毒性を有さないＥＤ５０を含む、循環濃度の範囲内にある。該用量は用いられる投与形態、利用する投与経路、疾患の重篤度、対象の年齢および体重、および医学の専門家（例えば医者）により通常考えられる他の要因に依存して、この範囲内で変化してもよい。本発明の方法にて用いられる任意の組成物に関して、治療的な有効量は初め細胞培養アッセイから推定される。細胞培養にて決定されるように、該用量はＩＣ５０（すなわち徴候を半分阻害する試験化合物の濃度）を含む、循環血漿濃度の範囲に達するように動物モデルにて処方されてもよい。かかる情報はヒトにおける有用な用量をより正確に決定するために用いられ得る。血漿中のレベルは例えば高速液体クロマトグラフィーにより測定されてもよい。
【００３７】
幾つかの実施態様において、本発明により提供される、ヒト患者に投与するためのＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドの用量は少なくとも０．１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも６０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも７０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも９０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１００ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１５０ｍｇ／ｋｇまたは少なくとも２００ｍｇ／ｋｇである。幾つかの実施態様において、本発明により提供される、ヒト患者に投与するためのＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドの用量は０．１−３００ｍｇ／ｋｇ、０．５−２５０ｍｇ／ｋｇ、１−２００ｍｇ／ｋｇ、１−１５０ｍｇ／ｋｇ、１−１２５ｍｇ／ｋｇ、１−１００ｍｇ／ｋｇ、１−９０ｍｇ／ｋｇ、１−８０ｍｇ／ｋｇ、１−７０ｍｇ／ｋｇ、１−６０ｍｇ／ｋｇ、１−５０ｍｇ／ｋｇ、１−４０ｍｇ／ｋｇ、１−３５ｍｇ／ｋｇ、１−３０ｍｇ／ｋｇ、１−２５ｍｇ／ｋｇ、１−２０ｍｇ／ｋｇ、１−１５ｍｇ／ｋｇ、１−１０ｍｇ／ｋｇまたは１−５ｍｇ／ｋｇである。
【００３８】
化学療法剤、放射線療法およびサイトカインなどの生物学的／免疫学的な療法のごとき処置様式のための、適切かつ推奨される用量、処方および投与経路は当業者に知られており、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（５８ｔｈ  ｅｄ．，２００４）などの文献に記載されている。
【００３９】
様々なデリバリーシステムが知られており、本発明の組成物を投与するために用いられ得る。かかるデリバリーシステムはリポソーム、微粒子、マイクロカプセルへの封入、組換え細胞による発現、受容体に介されるエンドサイトーシス、レトロウィルスまたは他のベクターなどの部分としての、本発明の核酸の構築を包含するが、これらに限定されない。導入方法は皮内、筋内、腹膜内、くも膜下腔内、側脳室内、硬膜外、静脈内、皮下、経鼻、腫瘍内、経皮、経腸および経口経路を包含するが、これらに限定されない。本発明の組成物は例えば注入またはボーラス注射、上皮または皮膚粘膜（ｍｕｃｏｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｌｉｎｉｎｇｓ）（例えば口腔粘膜、膣粘膜、直腸および腸粘膜など）からの吸収のごとき任意の有用な経路により投与されてもよく、さらに他の生物学的に活性のある剤と併用投与されてもよい。投与は全身投与または局所投与であり得る。
【００４０】
幾つかの実施態様において、本発明の医薬組成物を処置の必要のある部位へ局所投与することが望ましいだろう。これは例えば手術中の局所的注入によってか、または例えば手術後に創傷用包帯と組み合わせるなどの局所的適用によってか、注射、カテーテル、坐剤またはインプラント（該インプラントはシアラスティックメンブレン（ｓｉａｌａｓｔｉｃ  ｍｅｍｂｒａｎｅｓ）のごときメンブレンまたはファイバーを含む、多孔性、非多孔性またはゼラチン状の材料である）により達成されてもよい。一の実施態様において、放射線、化学療法または化学兵器のごとき傷害に最も感受性のある、急速に増殖する組織部位（または前部）に直接注射することにより投与され得る。
【００４１】
本発明の組成物が予防的または治療的な剤をコードする核酸である幾つかの実施態様において、該核酸はコードした蛋白（例えばＣＧ５３１３５−０５ポリペプチド）の発現を促進するようにｉｎ  ｖｉｖｏにて投与可能で、それは該核酸を適当な核酸発現ベクターの一部として構築し、レトロウィルスベクターを用いるか、直接注射するか、または微粒子照射（例えば遺伝子銃）の使用などにより該核酸が細胞内に存在するように投与するか、或いは脂質または細胞表面受容体または形質移入するための剤にコーティングするか、或いは核酸等に入り込むことが知られているホメオボックス様ペプチドと結合させて投与され得る。或いは、本発明の核酸は細胞内に導入可能で、発現のために相同組換えにより宿主細胞ＤＮＡ内に組み込まれ得る。
【００４２】
本発明の組成物は単位投与形態の調製物にて用いられ得る医薬組成物の製造において有用であるバルク薬剤組成物を包含する。好ましい実施態様において、本発明の組成物は医薬組成物である。かかる組成物は予防的または治療的な有効量の１またはそれ以上の本発明の組成物（例えばＣＧ５３１３５−０５ポリペプチド）および医薬上許容されるキャリアーを含有する。好ましくは、該医薬組成物は対象への投与経路に安定であるように処方される。
【００４３】
一の実施態様において、用語「医薬上許容される」は連邦または州の政府の監督庁に認可されているか、Ｕ．Ｓ．薬局方または動物、より好ましくはヒトにおける使用のために一般的に認識されている他の薬局方に記載されていることを意味する。用語「キャリアー」は予防的または治療的な剤と併用投与される希釈剤、アジュバント（例えばフロイントアジュバント（完全および不完全））、賦形剤またはビヒクルを言う。かかる医薬キャリアーは水および油のごとき滅菌液（例えば石油、動物油、植物油またはピーナッツ油、ミネラルオイル、ゴマ油などの合成油など）または希釈剤、香料、溶解剤、潤滑剤、懸濁剤、結合剤、錠剤の崩壊剤またはカプセル化物質として作用してもよい１またはそれ以上の物質のごとき固体キャリアーであり得る。医薬組成物が静脈内投与される場合には水は好ましいキャリアーである。生理食塩液およびブドウ糖およびグリセロール水溶液もまた液体キャリアーとして、特に注射溶液のために用いられ得る。適当な医薬用賦形剤は澱粉、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、イネ、コムギ、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールまたはそれらの組み合わせを包含するが、これらに限定されない。所望により、該組成物は少量の湿潤剤、乳化剤またはｐＨ緩衝剤も含有し得る。
【００４４】
本発明の組成物は例えば液体シロップ、錠剤、カプセル剤、ゲルカプセル、ソフトゲル、ピル、散剤、浣腸剤、徐放性処方など（これらに限定されない）の任意の多数の可能な投与形態にて処方されてもよい。本発明の組成物は水性、非水性またはその混合媒体中の懸濁液として処方されてもよい。水性懸濁液は例えばナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトールおよび／またはデキストランなどを含む、懸濁液の粘度を増大する物質をさらに含有してもよい。該懸濁液は安定剤を含有してもよい。該組成物は慣用的な結合剤およびトリグリセリドのごときキャリアーと一緒に坐剤としても処方され得る。口腔用処方は医薬的な量のマンニトール、ラクトース、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、カルボン酸マグネシウムなどの標準的なキャリアーを包含し得る。
【００４５】
幾つかの実施態様において、本発明の組成物は泡沫として処方され、用いられてもよい。医薬用の泡沫はエマルジョン、マイクロエマルジョン、クリーム、ゼリーおよびリポソームを包含するが、これらに限定されない。性質においては本質的に同様であるが、これらの処方は最終産物の成分およびコンシステンシーにより異なる。かかる組成物および処方の調製は薬剤処方の分野の当業者に一般的に知られており、さらに本発明の組成物の処方へ適用されてもよい。
【００４６】
本発明の医薬組成物は意図する投与経路に適合するように処方される。ある特定の実施態様において、該組成物はヒトへの静脈内、皮下、筋内、経口、経鼻、腫瘍内または局所投与に適合する医薬組成物として通常の方法に従い処方される。慣用的に、静脈内投与のための組成物は滅菌した水性の等張緩衝液中の溶液である。必要な場合には、該組成物は溶解剤、および注射部位の痛みを軽減するためにリドカインのごとき局所麻酔薬を含んでもよい。
【００４７】
本発明の組成物が局所投与される場合には、組成物は皮膚パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、ドロップ、坐剤、スプレー、液体および散剤の形態にて処方され得る。慣用的な医薬キャリアー、水性、粉末または油性の基剤、増粘剤などが必須または所望とされてもよい。コーティングされたコンドーム、グローブなどもまた有用である。好ましい局所用処方は本発明の分子複合体が局所送達のための剤と混合されているものを包含し、該剤は例えば脂質、リポソーム、脂肪酸、脂肪酸エステル、ステロイド、キレート剤および界面活性剤であるが、これらに限定されない。好ましい脂質およびリポソームは中性（例えばジオレオイルホスファチジルＤＯＰＥエタノールアミン、ジミリストイルホスファチジルコリンＤＭＰＣ、ジステアロイルホスファチジルコリン）、陰イオン性（例えばジミリストイルホスファチジルグリセロールＤＭＰＧ）および陽イオン性（例えばジオレオイルテトラメチルアミノプロピルＤＯＴＡＰおよびジオレオイルホスファチジルエタノールアミンＤＯＴＭＡ）を包含するが、これらに限定されない。本発明の分子複合体はリポソーム内に封入されてもよく、またはそれらと、特に陽イオン性リポソームと複合体を形成してもよい。或いは、該分子複合体は脂質、特に陽イオン性脂質と複合されてもよい。好ましい脂肪酸およびエステルはアラキドン酸、オレイン酸、エイコサン酸、ラウリン酸、カプリル酸、カプリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、ジカプラート、トリカプラート、モノオレイン、ジラウリン、１−モノカプリン酸グリセリル、１−ドデシルアザシクロヘプタン−２−オン、アシルカルニチン、アシルコリンまたはＣ１−１０アルキルエステル（例えばミリスチン酸イソプロピル  ＩＰＭ）、モノグリセリド、ジグリセリド、或いはその医薬上許容される塩を包含するが、これらに限定されない。スプレー不可である局所投与形態のために、局所適用に適合し、好ましくは水よりも大きい動粘度を有する１のキャリアーまたは１もしくはそれ以上の賦形剤を含む粘性形態ないし半固体形態または固体形態が典型的に用いられる。他の適当な局所投与形はスプレー可能なエアロゾル調製物であり、ここで、好ましくは、有効成分は固体または液体の不活性キャリアーと組み合わされて、加圧された揮発性物質（例えばフレオンなどのガス噴霧剤）との混合物としてパッケージされるか、または圧縮用ボトルにパッケージされる。加湿剤または湿潤剤もまた所望により医薬組成物および投与形に添加され得る。かかる添加成分の例は当業者に十分に知られている。
【００４８】
本発明の方法が組成物の経鼻投与を含んでなる場合には、組成物はエアロゾル形態、スプレー、霧または滴の形態にて処方され得る。特に、本発明に従い用いられるための予防的または治療的な剤は適当な高圧ガス（例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適当な気体）を用いることにより、加圧されたパックまたは噴霧器からエアロゾルスプレー形態にて、適切に送達され得る。加圧されたエアロゾルの場合には一定量を送達するためのバルブを備えることにより用量単位が決定されてもよい。吸入または粉末吸入に用いるために、該化合物のパウダーミックスおよびラクトースまたは澱粉などの適当な粉末基剤を含有するカプセル剤およびカートリッジ（例えばゼラチンから成る）が処方されてもよい。
【００４９】
本発明の方法が経口投与を含んでなる場合には、組成物は散剤、顆粒剤、マイクロ粒子、ナノ粒子、水または非水性媒体中の懸濁液または溶液、カプセル剤、ゲルカプセル、澱粉、錠剤またはミニタブレットの形態にて処方され得る。増粘剤、香料、希釈剤、乳化剤、分散助剤または結合剤が所望されてよい。錠剤またはカプセル剤は、結合剤（例えば予めゼラチン化されたトウモロコシ澱粉、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えばラクトース、微結晶セルロースまたはリン酸水素カルシウム）；潤滑剤（例えばステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ）；崩壊剤（例えばジャガイモ澱粉または澱粉グリコール酸ナトリウム）；または湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウム）のごとき医薬上許容される賦形剤と一緒に慣用的な手段により調製され得る。該錠剤は当業者に知られている方法によりコーティングされてもよい。経口投与のための液体調製物は、懸濁剤（例えばソルビトールシロップ、セルロース誘導体または水素添加された食用脂）；乳化剤（例えばレシチンまたはアカシア）；非水性ビヒクル（例えばアーモンド油、油性エステル、エチルアルコールまたは分別植物油）；および防腐剤（例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルまたはプロピル或いはソルビン酸）のごとき医薬上許容される添加剤と一緒に慣用的な手段により調製されてよい。該調製物は必要に応じてバッファー塩、香料、着色剤および甘味剤を含有してもよい。経口投与のための調製物は、予防的または治療的な剤を遅効型、制御された型または持続型で放出するように適切に処方されてもよい。
【００５０】
一の実施態様において、本発明の分子複合体は例えば界面活性剤およびキレート化剤のごとき１またはそれ以上の浸透のエンハンサーと共に経口投与される。好ましい界面活性剤は脂肪酸およびそのエステルまたは塩、胆汁酸およびその塩を包含するが、これらに限定されない。好ましい胆汁酸／塩はケノデオキシコール酸（ＣＤＣＡ）およびウルソデオキシケノデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）、コール酸、デヒドロコール酸、デオキシコール酸、グルコール酸、グリコール酸、グリコデオキシコール酸、タウロコール酸、タウロデオキシコール酸、タウロ−２４，２５−ジヒドロ−フシジン酸ナトリウム、グリコジヒドロフシジン酸ナトリウムを包含するが、これらに限定されない。好ましい脂肪酸はアラキドン酸、ウンデカン酸、オレイン酸、ラウリン酸、カプリル酸、カプリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、ジカプラート、トリカプラート、モノオレイン、ジラウリン、１−モノカプリン酸グリセリル、１−ドデシルアザシクロヘプタン−２−オン、アシルカルニチン、アシルコリンまたはモノグリセリド、ジグリセリド或いはその医薬上許容される塩（例えばナトリウム）を包含するが、これらに限定されない。幾つかの実施態様において、例えば胆汁酸／塩と併用される脂肪酸のように、浸透のエンハンサーは組み合わせて用いられる。ある特定の実施態様において、ラウリン酸、カプリン酸のナトリウム塩はＵＤＣＡと組み合わせて用いられる。さらに、浸透のエンハンサーはポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−２０−セチルエーテルを包含するが、これらに限定されない。本発明の分子複合体は顆粒形態にて経口送達されてもよく、該形態は噴霧される乾燥粒子またはミクロもしくはナノ粒子を形成するために複合されるものを包含するが、これらに限定されない。本発明の分子複合体と錯化するために用いられ得る錯化剤はポリ−アミノ酸、ポリイミン、ポリアクリラート、ポリアルキルアクリラート、ポリオキセタン、ポリアルキルシアノアクリラート、カチオン化ゼラチン、アルブミン、アクリラート、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリアルキルシアノアクリラート、ＤＥＡＥから誘導されるポリイミン、ポルラン、セルロースおよび澱粉を包含するが、これらに限定されない。特に好ましい錯化剤はキトサン、Ｎ−トリメチルキトサン、ポリ−Ｌ−リジン、ポリヒスチジン、ポリオルニチン、ポリスペルミン、プロタミン、ポリビニルピリジン、ポリチオジエチルアミノ−メチルエチレンＰ（ＴＤＡＥ）、ポリアミノスチレン（例えばｐ−アミノ）、ポリ（メチルシアノアクリラート）、ポリ（エチルシアノアクリラート）、ポリ（ブチルシアノアクリラート）、ポリ（イソブチルシアノアクリラート）、ポリ（イソヘキシルシアノアクリラート）、ＤＥＡＥ−メタクリラート、ＤＥＡＥ−ヘキシルアクリラート、ＤＥＡＥ−アクリルアミド、ＤＥＡＥ−アルブミンおよびＤＥＡＥ−デキストラン、ポリメチルアクリラート、ポリヘキシルアクリラート、ポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸）、ポリ（ＤＬ−乳酸）・グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）、アルギナートおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を包含するが、これらに限定されない。
【００５１】
本発明の方法は例えば吸入器またはネブライザーの使用による、エアロゾル化剤と共に処方された組成物の経肺投与を含んでもよい。
【００５２】
本発明の方法は注射（例えばボーラス注射または連続注入）による、非経口投与のために処方された組成物の投与を含んでもよい。注射用処方は防腐剤が添加された単位投与形態（例えばアンプルまたは複数回投与のための容器）にて提供されてもよい。該組成物には油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液または乳濁液のごとき形態を採用してもよく、さらに懸濁剤、安定剤および／または分散剤のごとき処方用の剤を含んでもよい。或いは、有効成分は使用前に適当なビヒクル（例えばパイロジェン不含滅菌水）と共に構成される散剤形態であってよい。
【００５３】
好ましい一の実施態様において、該組成物はヒトへの静脈内投与に適合した医薬組成物と同様に通常の手法に従い処方される。一般的に、静脈内投与のための組成物は滅菌した水性の等張緩衝液中の溶液である。必要に応じ、該組成物は溶解剤、および注射部位の疼痛を軽減するためにリグノカインなどの局所麻酔剤を含有してもよい。一般に、該成分は例えばアンプルまたはサシェのごとき有効成分の量を示す密封容器中の、凍結乾燥した乾燥粉末または水不含濃縮物などの単位投与形態として、別々または混合されて供給される。組成物が吸入投与される場合には、それは医薬グレードの滅菌水または生理食塩水を含有する吸入ボトルで分配され得る。組成物が注射投与される場合には、該成分を投与前に混合できるように、注射用滅菌水または生理食塩水のアンプルが提供され得る。
【００５４】
本発明の組成物は中性または塩の形態として処方され得る。医薬上許容される塩は塩化水素、リン酸、酢酸、蓚酸、洒石酸などに由来するような、遊離アミノ基で形成された塩、およびナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するような、遊離カルボキシル基で形成された塩を包含するが、これらに限定されない。医薬上許容される塩の例はアセタート、ベンゼンスルホナート、ベンゾアート、ビカルボナート、ビタルトラート、ブロミド、カルシウムアセタート、カンシラート、カルボナート、クロリド、シトラート、ジヒドロクロリド、エデタート、エジシラート、エストラート、エシラート、フマラート、グルカプタート、グルコナート、グルタマート、グリコリルアルサニラート、ヘキシルレソルシナート、ヒドラバミン、ヒドロブロミド、ヒドロクロリド、ヒドロキシナフトアート、ヨージド、イセチオナート、ラクタート、ラクトビオナート、マラート、マレアート、マンデラート、メシラート、メチルブロミド、メチルニトラート、メチルスルファート、ムカート、ナプシラート、ニトラート、パモアート（エンボナート）、パントテナート、ホスファテルジホスファート、ポリガラクトロナート、サリチラート、ステアラート、サブアセタート、スクシナート、スルファート、タンナート、タルトラート、テオクラート、トリエチオジド、ベンザチン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチルエネジアミン、メグルミン、プロカイン、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウムおよび亜鉛であるが、これらに限定されない。
【００５５】
前述した処方に加えて、組成物は徐放性の調製物として処方されてもよい。長時間作用するかかる処方はインプラント（例えば皮下または筋内に)または筋肉注射により投与されてもよい。故に、例えば該組成物は適当な重合体の、または疎水性の材料（例えば許容される油の中のエマルジョンとして）またはイオン交換樹脂と一緒に、或いは例えば難溶性の塩などの難溶性の誘導体として処方されてもよい。リポソームおよびエマルジョンは親水性薬剤のためのビヒクルまたはキャリアーとしてよく知られている例である。
【００５６】
一の実施態様において、本発明の組成物の成分は、かかる組成物のレシピエントと同じ種を起源とするか、または同じ反応性を有する種に由来する。
【００５７】
本発明は本発明の治療的な投与計画を実施するためのキットも提供する。かかるキットは１またはそれ以上の容器中に、予防的または治療的に有効な量の医薬上許容される形態にある本発明の組成物（例えばＣＧ５３１３５−０５ポリペプチド）を含む。本発明のキットのバイアル中の組成物は医薬上許容される溶液の形態であってもよく、例えば滅菌生理食塩水、デキストロース溶液もしくは緩衝液、または他の医薬上許容される滅菌流動体との組み合わせであってよい。或いは、該組成物は凍結乾燥または乾燥されてもよく；この場合に、組成物を再構成し注射目的のための溶液を形成するために、該キットは所望により容器中に医薬上許容される溶液（例えば生理食塩水、デキストロース溶液など）（好ましくは滅菌されている）をさらに含んでなる。
【００５８】
もう一つ別の実施態様において、本発明のキットはニードルまたはシリンジ（処方を注射するために、好ましくは、滅菌形態にて包装されている）および／または包装されたアルコールパッドをさらに含んでなる。所望により、医者または患者により本発明の処方を投与するための説明書が含まれる。
【００５９】
幾つかの実施態様において、本発明は一回の投与に十分な用量の本発明の組成物（例えばＣＧ５３１３５−０５ポリペプチド）を含有する医薬処方または組成物を各々含む複数の容器を含んでなるキットを提供する。
【００６０】
任意の医薬製品と同様に、包装材料および容器は貯蔵および輸送時に製品の安定性を保護するよう設計される。一の実施態様において、本発明の組成物はレシチン、タウロコール酸およびコレステロールを包含するが、これらに限定されない生物学的適合性のある界面活性剤；またはガンマグロブリンおよび血清アルブミンを包含するが、これらに限定されない他の蛋白と一緒に容器中にて貯蔵される。さらに、本発明の製品は、問題の疾患または障害を適切に防止または処置する方法について医者、技術者または患者に助言する使用説明書または他の情報材料を包含する。
本発明は以下の実施例によりさらに説明される。
【００６１】
５．１．実施例１：蛋白発現および精製
以下のように、組換えヒトＣＧ５３１３５−０５をエシュリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  Ｃｏｌｉ）ＢＬＲ（ＤＥ３）細胞（Ｎｏｖａｇｅｎ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）から精製した。ＤＥ３細胞をｐＥＴ２４ａベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ）にクローン化した全長コドン最適化ＣＧ５３１３５−０５で形質転換し、これらの細胞の製造のマスターセルバンク（ＭＭＣＢ）を作製した。ＭＭＣＢ由来の細胞の発酵により得られた、ＣＧ５３１３５−０５を含有する細胞ペーストを溶解バッファー中での高圧ホモゲナイズにて溶解し、遠心分離により清澄化した。２サイクルの硫酸アンモニウム沈殿およびイオン交換クロマトグラフィーにより、清澄化した細胞溶解物からＣＧ５３１３５−０５を精製した。最終的な蛋白のフラクションを調製バッファー（３０ｍＭ  クエン酸塩、ｐＨ  ６．０、２ｍＭ  エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、２００ｍＭ  ソルビトール、５０ｍＭ  ＫＣｌおよび２０％  グリセロール）に対して透析した。ビヒクル（ＣＧ５３１３５−０５蛋白なし）は３０ｍＭ  クエン酸ナトリウム、ｐＨ  ６．１、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、２００ｍＭ  ソルビトール、５０ｍＭ  ＫＣｌ、２０％  グリセロールを含有する。
【００６２】
５．２．実施例２：放射線被曝からのＣＧ５３１３５−０５の予防的防護効果
５．２．１．急性放射線を一回被曝した後の生残へのＣＧ５３１３５−０５の効果（Ｎ−２７２）
本研究は致命的な全身への電離放射線を照射した後のマウスにおいて、放射線防護剤として異なるスケジュールの下にて投与されたＣＧ５３１３５−０５の効果を検討するために実施した。
研究開始時に平均体重２２．１グラムの雄Ｃ３Ｈ／Ｈｅマウス（総数“ｎ”＝６０）を処置群として用いた。動物に標準的な市販のマウス用食餌を与えた。食餌および水を適宜与えた。
【００６３】
研究計画
該動物への照射をＢｒｉｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｏｍｅｎ’ｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ（Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）にて実施した。本研究をＴｈｅ  Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）にて行った。１５匹のマウスから成る対照群および各々１５匹のマウスから成る３つの試験群の４群にマウスをランダムに分けた。マウスを、全身電離放射線の一回用量６００ｃＧｙに曝した。ＣＧ５３１３５−０５（１２ｍｇ／ｋｇ）を、それぞれ照射２日後および３日後、４ないし７日後、または照射２日前および１日前（−２および−１）に毎日、腹腔内（ＩＰ）投与した。死亡数（動物数、死亡日）を各群にて記録した。
【００６４】
表１：研究計画
【表１】
2007531702.tif 000002
全動物に１日１回ＣＧ５３１３５−０５またはビヒクルを与えた（０．１ｍＬ／体重１０ｇ）。
【００６５】
統計
処置群の生残を、カプラン・マイヤー  ログランク分析を用いて比較した。台形則の変形を用いて曲線下面積（ＡＵＣ）を決定することにより体重変化を分析した。曲線下面積を、方程式：
ｉ＝｛ｙｉ（ｘ＋１−ｘｉ）＋（１／２）（ｙｉ＋１−ｙｉ）（ｘ＋１−ｘｉ）｝
［式中、ｘ＝時間（日）、ｙ＝体重変化の割合およびｉ＝時間ポイントであり、故に、ｘｉは時間ポイントｉにおけるｘ値となり、ｙｉはその時間ポイントでのｙ値となり、またｘｉ＋１およびｙｉ＋１は次の時間ポイントでのｘ値およびｙ値となる。］
を用いて算出した。ｔ−検定およびマンホイットニー順位和検定の両方を用いて、異なる処置群の間で体重変化に関するＡＵＣを比較した。
【００６６】
結果
照射２日前および１日前におけるＣＧ５３１３５−０５（１２ｍｇ／ｋｇ）でのマウスの処置は無処置対照と比較して有意に生残を増加した（Ｐ＝０．０４）。一方、照射２−３日後または４−７日後におけるＣＧ５３１３５−０５での処置は生残に対して有意な効果を有さなかった（Ｐ＞０．０５）（図１）。
２−３日後および４−７日後におけるＣＧ５３１３５−０５での処置計画は生残に対して有意な効果を有さなかった。さらに、予防的なＣＧ５３１３５−０５の投与（−２日目および−１日目における）は放射後の体重減少も防止した（図２）。一元配置分散分析（ｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）による体重変化に関する曲線下面積（ＡＵＣ）の統計分析は群間で有意な差は示されなかった(Ｐ＝０．０５１）が、２日前および１日前（１３．９％）ならびに４−７日後（１４．８％）におけるＣＧ５３１３５−０５での処置は無処置対照（９．７％）と比較して体重増加の全体平均割合も増大させた（図２）。本研究の結果は全身への照射１日前および２日前におけるＣＧ５３１３５−０５でのマウスの処置が放射線防護に有効であることを示し、さらに全身への放射線照射による損傷効果からの胃腸または造血組織に対する防護効果も支持する。
【００６７】
５．２．２．急性電離放射線に被曝した後のマウスへのＣＧ５３１３５−０５の予防的効果（Ｎ−３０８）
本研究は、様々な線量の全身への電離放射線に後で曝されるマウスに予防的に投与したＣＧ５３１３５−０５の効果を調べるために実施した。その後の手順はセクション５．２．１に記載のものと同じであった。０日目にマウスを非麻酔下で線量範囲４８４ないし６４１ｃＧｙで電離放射線に曝した。照射１日前、または２日前および１日前に動物にＰＢＳ（対照）またはＣＧ５３１３５−０５（１２ｍｇ／ｋｇ、毎日、ＩＰ）を投与した。スケジュールを表２に示す。本研究のエンドポイントは生残および体重変化であった。生残を照射後３０日間追跡した。
【００６８】
表２.研究計画
【表２】
2007531702.tif 000003
【００６９】
結果：
全処置群において放射線量が増大するにつれ生残は低減した。ＰＢＳを投与した動物において、最小放射線量（４８４ｃＧｙ）での３０日生残率は９３．７５％であり、さらに５３４ｃＧｙでは５０．０％、５７０ｃＧｙでは３１．２５％、６０６ｃＧｙでは１２．５％および６４１ｃＧｙでは６．２５％に減少した（図３）。−１日目のみにＧＣ５３１３５（１２ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ）を投与した動物では、最小放射線量（４８４ｃＧｙ）での３０日生残率は８７．５％であり、対して５３４ｃＧｙでは８７．５％、５７０ｃＧｙでは８１．２５％、６０６ｃＧｙでは４３．７５％および６４１ｃＧｙでは３１．２５％であった（図４）。−２日目および−１日目にＧＣ５３１３５（１２ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ）を投与した動物では、最小放射線量（４８４ｃＧｙ）での３０日生残率は８７．５％であり、対して５３４ｃＧｙでは７５．０％、５７０ｃＧｙでは３７．５％、６０６ｃＧｙでは３１．２５％および６４１ｃＧｙでは０だった（図５）。
【００７０】
複合的な比較試験により、対照動物に対して−１日目に処置した動物の生残率が４．８倍増大されることが示された（ｐ＝０．０００１６）。ブートストラップ方式にて算出される９５％信頼区間を有する生残のプロビットプロットを用いて、ＬＤ５０／３０値を算出した。しかしながら、対照動物に対する−２日目および−１日目に処置した動物の生残率は有意なものではなかった（ｐ＝０．４１６２）。結果は放射線防護においてＣＧ５３１３５−０５の予防的投与が治療的効果を有することを示す。さらに、照射１日前の処置（−１日目）もまた最大放射線レベル（６４１ｃＧｙ、データは示していない）を除く全てにおいて体重減少から動物を防護した。この特定の系において、特により高い放射線レベルにおいて、１回投与（−１日目のみ）は２回投与の計画（それぞれ−２日目および−１日目）より有意に効果的であった。
【００７１】
上記結果に加えて、本発明は、放射線に曝される前および／または後におけるＣＧ５３１３５−０５の予防的および／または治療的投与のごとき、ＣＧ５３１３５−０５のさらなる投与計画に及び得る。このことは、この化合物の治療的効力の範囲を定めるために、本明細書に記載のものと同じ手順に従い同じ動物モデルにて試験することができる。治療上の処置のための投与計画は放射線被曝の１日後、１日後および２日後を包含するが、これらに限定されない。
【００７２】
５．３．実施例３：マウスへのＣＧ５３１３５−０５投与による腸陰窩細胞の増殖およびアポトーシスの調節（Ｎ−３４２）
本研究は幹細胞への効果と娘細胞への効果を区別するため、および胃腸幹細胞の損傷（例えば粘膜炎）に関連する症候群におけるＣＧ５３１３５−０５の作用機序に関する見識を得るために、小腸陰窩細胞のターンオーバーへのＣＧ５３１３５−０５の効果を評価する。さらに、幹細胞の放射線感受性へのＣＧ５３１３５−０５の効果も評価した。
【００７３】
「陰窩」は陰窩の底部に向かう、幹細胞を有する階層構造をとる。細胞は成熟するにつれ、陰窩の底部から陰窩の上部へ徐々に移動する。故に、各細胞位置における事象の頻度の変化を観察することにより、幹細胞と移行増幅する娘細胞への作用であり得る変化を検出し得る。細胞位置を図６に示す。故に、陰窩の微小構造へのＣＧ５３１３５−０５の効果を陰窩の細胞性に照らして分析した。
【００７４】
実験計画
１２ｍｇ／ｋｇ（ＩＰ）のＣＧ５３１３５−０５を１回投与した後、動物を様々な時間にて屠殺した。屠殺直前に、マウスをブロモデオキシウリジンの１回注射により標識して、Ｓ期の細胞を標識し、そして陰窩細胞の増殖／アポトーシスへの薬物の効果を決定した。幹細胞の放射線感受性への効果を評価するためにさらに２群のマウスを用いた。１群をＣＧ５３１３５−０５（１２ｍｇ／ｋｇ、１回注射、ｉｐ）で処置し、別の１群にプラシーボ対照を注射した。注射の２４時間後に動物にＸ線１Ｇｙを照射し（特に幹細胞のアポトーシスを誘発するため）、次に、通常のｉｎ  ｖｉｖｏ  ＢｒｄＵ標識を行った。４．５時間後（アポトーシスのピーク時）に動物を屠殺した。
【００７５】
マウスの体重を測定し、次にＣＧ５３１３５−０５（１２ｍｇ／ｋｇ、１回注射、ｉｐ）を投与した。６動物から成る群をＣＧ５３１３５−０５の注射の０、３、６、９、１２、２４、４８時間後に屠殺した。屠殺４０分前に全てにブロモデオキシウリジンを１回注射した（表３参照）。
【００７６】
幹細胞の放射線感受性へのＣＧ５３１３５−０５の効果を評価するために、さらに６匹のマウスからなる２群を用いた（群８および群９、表３参照）。１群をＣＧ５３１３５−０５（１２ｍｇ／ｋｇ、１回注射、ｉｐ）で処置し、別の１群にプラシーボ対照を注射した。注射の２４時間後に動物にＸ線１Ｇｙを照射し、４．５時間後に屠殺した。
【００７７】
表３. 研究計画
【表３】
2007531702.tif 000004
【００７８】
小腸陰窩細胞の増殖およびアポトーシスの調節：手順
全てのＳ期の分裂細胞は注射したブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）を取り込み、故に周期にある細胞としてマークされる。照射した動物を非麻酔下にてパースペックのジグにセットし、線量率０．７Ｇｙ／分にてＸ線１Ｇｙの全身への放射線へ曝した。この低レベルの放射線は小腸幹細胞の集団にアポトーシスを誘発したが、より成熟した細胞では誘発しなかった。
【００７９】
小腸を取り出し、カルノア固定液にて固定し、組織学的分析用に処理（パラフィン包埋）した。１組の３ｍｍ切片をＢｒｄＵについて免疫標識し、もう１組の切片をＨ＆Ｅにて染色した。ＢｒｄＵまたはアポトーシス／有糸分裂の細胞核の存在について、小腸陰窩の縦方向切片を分析した。動物１匹あたり２５個の陰窩（Ｆｉｆｔｙ  ｈａｌｆ  ｃｒｙｐｔｓ）を記録した。
【００８０】
４８時間にわたるＣＧ５３１３５−０５の効果を決定するために群１−７（結果の群：Ａ）を試験した。ＣＧ５３１３５−０５が、低線量の照射後に生じるアポトーシス細胞の数を変化させるかどうか、すなわちＣＧ５３１３５−０５が放射線感受性幹細胞集団に影響するかどうかを決定するために群８−９（結果の群：Ｂ）を試験した。
【００８１】
得られた結果は各群の動物における陰窩に関する頻度の分布を示した（さらに、統計的差異に関して分析した）。組織試料をＣＧ５３１３５−０５での処理の３、６、９、１２、２４および４８時間後にて採取した。アポトーシス、分裂指数および増殖が本研究のエンドポイントであった。
【００８２】
結果：
群Ａ
群１−７において（表３）、ＣＧ５３１３５−０５は自然発生的アポトーシスに有意な効果を有さなかった。同様の結果が分裂指数について得られた（表４）。しかしながら、表４にて示されるようにＢｒｄＵの取り込み結果は以下のことを示した：
ａ）３時間にて、増殖領域の伸長／増大が存在した（位置１２−２２）。
ｂ）９時間まで、多数の位置にて甚大な増殖効果が見られた。
ｃ）１２時間まで、位置４−８（幹細胞）のみが取り込みに増大を示した。
ｄ）２４時間まで、増殖に有意な阻害が存在した。
ｅ）４８時間まで、取り込みは対照レベルに匹敵するものであった。
【００８３】
表４．アポトーシス、有糸分裂および増殖を評価した後の陰窩における有意な細胞位置の概略
【表４】
2007531702.tif 000005
表４に示す比較は処置群対無処置群のものである。示した細胞位置は無処置対照と有意な差があるものである（Ｐ＜０．０５）。
【００８４】
群Ｂ：
群８および群９において、幹細胞の放射線感受性を評価した（表３）。表３に示すように、放射線１Ｇｙを照射する１日前に、ＣＧ５３１３５−０５またはＰＢＳを投与した。放射線照射の４．５時間後に組織を採取した。放射線が誘発するアポトーシスおよび分裂指数のいずれにも有意な効果はなかった（データは示していない）。しかしながら、１２時間までの位置４−８における取り込みの増大および増殖の有意な阻害が、ＣＧ５３１３５−０５で事前に処置し、照射したマウスにて見られ、これは群Ａの結果と一致した（表４）。
【００８５】
５．４．実施例４：放射線損傷後のマウスの腸陰窩の生残へのＣＧ５３１３５−０５の予防的投与の効果（Ｎ−３４３）
本研究の目的はＣｌｏｎｏｑｕａｎｔ（登録商標）アッセイを用いてｉｎ  ｖｉｖｏにて放射線が誘発する陰窩細胞の死亡率へのＣＧ５３１３５−０５の効力を評価することである。
【００８６】
マウスの体重を測定し、その後ＣＧ５３１３５−０５（１２ｍｇ／ｋｇ）またはプラシーボを投与した。照射する２４時間前に１回、腹腔内（ｉｐ）注射した。以下の表に示すように、６匹の動物からなる各群に照射した。各放射線量につき、薬物処置群およびプラシーボ処置群の応答を比較した。
【００８７】
小腸を取り出し、カルノア固定液にて固定し、さらに組織学的分析用に処理（パラフィン包埋）した。慣用的なプロトコルに従いＨ＆Ｅ切片を調製した。各動物について１０個の小腸周縁（ｔｅｎ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｃｉｒｃｕｍｆｅｒｅｎｃｅｓ）を分析し、１周縁あたりの生存している陰窩の数を評価し、各１群あたりの平均を決定した。Ｈ＆Ｅで強力に染色された細胞（パネート細胞を除く）を１０個またはそれ以上含んでなる陰窩、およびパイエル板不含のインタクトな周縁を評価した。
【００８８】
陰窩の大きさの差異に起因する評価誤差を補正するために陰窩の幅（最も広い位置で測定）の平均も測定した。補正は以下のように行った：
補正された、１周縁あたりの陰窩の数＝群Ｘの処置における１周縁あたりの生残している陰窩の数の平均（無処置対照における陰窩の幅の平均／処置動物における陰窩の幅の平均）。
【００８９】
表５：研究計画
【表５】
2007531702.tif 000006
【００９０】
結果:
ＣＧ５３１３５−０５を予防的に投与した後の陰窩の生残は、照射線量に逆相関を示し、照射線量が少なくなればなる程、陰窩の生残は高くなった（図７および図８）。ＣＧ５３１３５−０５の予防的投与は陰窩の数を有意に増大させた（Ｐ＜０．００１）。表６は蛋白（ＣＧ５３１３５−０５）を予防的に投与した後に、放射線量に関して得られた防護係数を示す。防護係数は処置および無処置細胞間の比を表す（表６）。放射線損傷前に動物にＣＧ５３１３５−０５を投与した場合に、平均して１．５５倍もの細胞が放射線量１２Ｇｙにて生残した。
表６：
【表６】
2007531702.tif 000007
【００９１】
５．５．実施例５：ＣＧ５３１３５−０５の放射線防護の機序
電離放射線攻撃の際に細胞で生じる多数の変化の中で、反応性酸素種の増大はＨ２Ｏの電離を介して生じる。この過程は、細胞損傷を軽減するために細胞内で最も反応性のある分子を生じるので、細胞核はこれらのラジカルをより反応性の低い中間体にスカベンジ（消去）する酵素の転写を増大させる。ＣＧ５３１３５−０５が放射線防護剤であることが示されたので、ＣＧ５３１３５−０５による細胞の処置が、酸素ラジカルのスカベンジ経路へ細胞を「プレローディング（ｐｒｅｌｏａｄｉｎｇ）」するために、放射線防護に関与することが知られている遺伝子のいずれかをアップレギュレートするかどうかを見出すことは適切である。ＲＯＳスカベンジャーおよび転写因子に関与する複雑な経路へのＣＧ５３１３５−０５の効果を評価することは、観察されたこの物質のｉｎ  ｖｉｖｏでの放射線防護効果を機構的に説明するだろう。従って、発現の研究および生残の研究を細胞レベルで実施した。
【００９２】
発現の研究：
ＣＧ５３１３５−０５による放射線防護の機序を描き出すために、繊維芽細胞および内皮細胞において遊離酸素ラジカルスカベンジャーおよび転写因子の発現特性を研究した。ＮＩＨ３Ｔ３（マウス繊維芽細胞）、ＣＣＤ−１０７０ｓｋ（ヒト包皮繊維芽細胞）、ＣＣＤ−１８Ｃｏ（ヒト結腸繊維芽細胞）およびＨＵＶＥＣ（ヒト臍帯血管内皮細胞）細胞を０．１％  ＦＢＳおよび所定の濃度のＣＧ５３１３５を含有する基本培地に移した。１８時間インキュベーションした後、ＲＮＥａｓｙ（Ｑｉａｇｅｎ、Ｖａｌｅｎｃｉａ、ＣＡ）を用いて細胞から全ＲＮＡを回収した。ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  Ｆｉｒｓｔ  Ｓｔｒａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＲＴ−ＰＣＲ用）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を用いてＲＮＡを逆転写し、以下に示すプライマーおよびサイクル数を用いて目的遺伝子を増幅した。
【００９３】
表７：ＲＴ−ＰＣＲ用プライマー（ヒト）
【表７】
2007531702.tif 000008
【００９４】
表８：ＲＴ−ＰＣＲ用プライマー（マウス）
【表８】
2007531702.tif 000009
【００９５】
結果
発現結果を表９に集約し、さらに図９ないし１２にて示す。
表９
【表９】
2007531702.tif 000010
【００９６】
放射線防護スーパーオキシドジスムターゼの中で、最も放射線防護的なものであるＭｎＳＯＤが、細胞株の間でＣＧ５３１３５−０５により一貫して誘発されることが見出された（表９、図９ないし１２）。
「抗酸化応答エレメント」（ＡＲＥとも言う）であると考えられていた、幾つかの抗酸化剤の調節に関与するＮｒｆ２転写因子は、研究した全ての細胞株にてＣＧ５３１３５により誘発された（表９、図９ないし１２）。
【００９７】
細胞が電離放射線から防護される一の機序は酸素ラジカルスカベンジ経路の導入によるものであることが十分に確かめられる。本明細書に記載する遺伝子発現の研究は、これが、ＣＧ５３１３５−０５が放射線防護を調節し得る経路の１つであり得ることを示す。さらに、全身への照射（ＴＢＩ）の主要な標的器官の１つは胃腸管である。本明細書にて開示するデータは（１）研究した全細胞株の中で最も反応性のあるものは胃腸繊維芽細胞（ＣＣＤ１８ＣＯ）であり；さらに（２）十分に特徴付けられた胃腸の放射線防護剤であるＴｆｆ３はＣＧ５３１３５−０５により強力にアップレギュレートされるとことを示す。当該分野にて周知の他の放射線防護剤が厳密には骨髄の生残に厳しく影響し、他のコンパートメントには全く影響しないことを考慮すると、ＣＧ５３１３５−０５が造血幹細胞と同様に影響される組織において活性があることに気付くことは重要であるが、それは動物の生残に対して同様に重要である。
【００９８】
生残の研究：
特定線量の放射線をあびた細胞は電離ラジカルの猛襲に備え、ラジカルが与えた損傷を修復し、或いは回復不能な損傷またはおそらくこれらの機序全ての組み合わせに直面してのアポトーシスの開始を遅延させなければならないだろう。従って、これらの経路の各々が細胞の最終的な生残およびその複製能に重要である。このことを、照射後にｉｎ  ｖｉｔｒｏにてコロニーを形成する細胞の能力により評価した。
【００９９】
放射線防護へのＣＧ５３１３５−０５の効果を評価するためにＣＣＤ−１８ｃｏ細胞、ＦａＤｕヒト扁平上皮細胞癌の細胞、ＩＥＣ６およびＩＥＣ１８ラット結腸陰窩細胞およびＮＩＨ３Ｔ３細胞を用いてクローン原性アッセイを実施した。細胞培養条件は以下のとおりである：ＤＭＥＭ＋１０％  ウシ血清＋５０μｇ／ｍｌ  ペニシリン／ストレプトマイシンにて、ＮＩＨ３Ｔ３細胞を成長させ；ＤＭＥＭ＋１０％  ＦＢＳ＋０．１Ｕ／ｍｌ  インスリン＋５０μｇ／ｍｌ  ペニシリン／ストレプトマイシンにて、ＩＥＣ６およびＩＥＣ１８細胞を成長させ；ＭＥＭ＋１０％  ＦＢＳ＋１ｍＭ  ピルビン酸ナトリウム＋５０ｐｇ／ｍｌ  ペニシリン／ストレプトマイシン＋非必須アミノ酸にて、ＦａＤｕ細胞を成長させた。
【０１００】
１０ｃｍディッシュあたり５×１０５（ＮＩＨ３Ｔ３）または６ウェルディッシュ１ウェルあたり５×１０５（ＩＥＣ１８、ＩＥＣ６、ＦａＤｕ）の密度で細胞を播種し、付着させた。ついで、０．１％  血清（ＩＥＣ１８、ＩＥＣ６、ＦａＤｕ）または１％  血清（ＮＩＨ３Ｔ３）を含有する基本培地中、用量１０もしくは１００ｎｇ／ｍｌ（ＩＥＣ１８、ＩＥＣ６、ＦａＤｕ）または５０および２００ｎｇ／ｍｌ（ＮＩＨ３Ｔ３）にてＣＧ５３１３５で細胞を処置し、１６時間（ＩＥＣ１８、ＩＥＣ６、ＦａＤｕ）または１時間（ＮＩＨ３Ｔ３）インキュベーションした。ついでアルミニウムフィルター（０．５ｍｍ）を装着したＸ−線照射装置（Ｆａｘｉｔｒｏｎ）（Ｗｈｅｅｌｉｎｇ、ＩＬ）を用いて２．５、５、７．５、１０、１２．５および１５Ｇｙ、１３０ｋＶｐ（結果として５０ｃＧｙ／分の照射率を生じる）にて細胞に照射した。照射直後、細胞をトリプシン処理し、ＮＩＨ３Ｔ３：６０ｍｍディッシュあたり２５０、５００、１０００、２０００、５０００および１０，０００細胞；ＦａＤｕ、ＩＥＣ１８およびＩＥＣ６：６−ウェルディッシュの１ウェルあたり５００、２５００細胞の密度で播種した（デュプリケート）。コロニーの平均直径が２ｍｍになるまで完全成長培地にて１−２週間細胞を成長させ、その後コロニーをクリスタルバイオレットで染色し、カウントした。
【０１０１】
結果：
結果を以下に記載する勾配として示す：
Ｄ０−最後の２ポイント間の曲線勾配であり、高放射線量での細胞殺傷の速度を示す。値は生存している細胞のフラクションをグラフ上の前の値の３７％まで減じるのに必要な放射線量と解釈される。数が小さいほど細胞殺傷率がより急激であることを示す。
【０１０２】
Ｄ１−最初の２ポイント間の曲線勾配であり、低放射線量での細胞殺傷の速度を示す。値は生存している細胞のフラクションをグラフ上で前の値の３７％まで減じるのに必要な放射線量と解釈される。数が小さいほど細胞殺傷率がより急激であることを示す。
【０１０３】
Ｄｑ−細胞生残における指数関数的減少が見られる前の曲線の肩幅。これは本質的には、細胞殺傷の発生が見られる前に必要とされる放射線量の閾値である。Ｄｑ値が大きいほど細胞がより低放射線量で完全に防護されることを示す。
【０１０４】
ＩＥＣ１８クローン原性アッセイの結果を図１３に示す。Ｄ０およびＤ１には傾向は見られないが、Ｄｑは無処置のものと比較してより低い放射線量でこれらの細胞がより防護されることを示した（線量１０ｎｇ／ｍｌおよび１００ｎｇ／ｍｌの両方の肩幅はより広い）。故に、両用量のＣＧ５３１３５−０５にてＩＥＣ１８は低い放射線量でより保護されるようであり、無処置細胞と比較して、細胞殺傷が見られるまでにより高い放射線量を必要とする、と結論付けられる。
【０１０５】
ＮＩＨ３Ｔ３クローン原性アッセイの結果を図１４に示す。これらの結果の解釈は下記のとおりである：
Ｄｏ−用量５０ｎｇ／ｍｌおよび２００ｎｇ／ｍｌの最終勾配は共により大きな値に傾き、用量５０ｎｇ／ｍｌについての有意性に近づく。このことは無処置のものと比較してより高い線量にて細胞死の速度がより緩慢になることを示す。
Ｄｑ−主に無処置の分散に起因して、５０ｎｇ／ｍｌおよび２００ｎｇ／ｍｌの肩幅間に傾向は見られない。
Ｄ１−用量が１００ｎｇ／ｍｌの最初の勾配はより小さな値に傾く。これは無処置のものと比較してより低い放射線量で細胞死がより緩慢な速度になることを示す。
【０１０６】
故に、ＮＩＨ  ３Ｔ３細胞のクローン原性アッセイにおいて、低線量での防護に差異はないが、細胞死の速度は、低線量および高線量の両方で、ＣＧ５３１３５−０５による処理により遅延される。
【０１０７】
ＨＵＶＥＣクローン原性アッセイの結果を図１５に示す。これらの結果の解釈は以下のとおりである：
Ｄｏ−用量１００ｎｇ／ｍｌの最終勾配はより大きな値へ傾く。これは無処置および１０ｎｇ／ｍｌと比較して、より高い線量で細胞死の速度がより緩慢になることを示す。
Ｄｑ−用量１００ｎｇ／ｍｌの肩幅はより広い。これは、これらの細胞が、無処置のものと比較してより低い放射線量で保護されることを示す。Ｄ１に傾向は見られなかった。
【０１０８】
故に、高用量のＣＧ５３１３５−０５は高放射線量での細胞殺傷の速度を有意に減少させる。細胞はまた無処置細胞と比較して低放射線量でより防護されるようである。
【０１０９】
ＦａＤｕ細胞およびＩＥＣ６はＤ０、ＤｑまたはＤ１において全く傾向を示さなかった（データは示していない）。これらの結果はＣＧ５３１３５−０５がｉｎ  ｖｉｔｒｏにて放射線に対する防護効果を有することを示す。
【０１１０】
これらの実験をさらに最適化し、
（ａ）より高い放射線量にて、現下見られているものより良好な細胞殺傷を提供し；さらに
（ｂ）処置条件および時間を調整することによりＣＧ５３１３５−０５による最大防護効果の条件を提供する。
【０１１１】
５．６．実施例６：サイトカイン放出へのＣＧ５３１３５−０５の効果
サイトカインは広範囲の生理学的応答を仲介する重要な細胞シグナル伝達蛋白である。電離放射線は遺伝子発現およびサイトカイン特性における一連の変化を誘発し得る。本研究の目的は経時的な細胞培養におけるＣＧ５３１３５−０５での処置についてのサイトカイン特性を経時的に評価することである。
【０１１２】
組織培養上清に由来する複数のサイトカインを定量するよう設計された、マルチプレックスビーズベースアッセイであるＢｉｏＰｌｅｘサイトカインアッセイをサイトカイン検出のために用いた。アッセイの原理はキャプチャーサンドイッチイムノアッセイと同様である。３Ｔ３細胞を９６ウェルプレートに播種した。細胞をＤＭＥＭ＋０．１％  子ウシ血清（ＳＦＭ）で洗浄した。１０ｎｇ／ｍｌおよび１００ｎｇ／ｍｌのＣＧ５３１３５−０５を細胞に添加した。３０分、１時間、２時間、４時間、６時間および２４時間後にて細胞上清を回収した。ＴＮＦ５０ｎｇを正対照として用いた。Ｂｉｏｐｌｅｘ１８−Ｐｌｅｘサイトカインアッセイ（ＢｉｏＲａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ、ＣＡ）を、製造元のプロトコルに従い実施した。
【０１１３】
結果：図１６はＭｏ  ＫＣ放出へのＣＧ５３１３５−０５の効果を示す。Ｍｏ  ＫＣはケモカインＣＸＣＬ１（Ｇｒｏ１、黒色腫の成長刺激活性（ＭＳＧＡ）または好中球活性化蛋白−３（ＮＡＰ３）としても記載されている）としても知られている。それは、ＣＸＣＲ１受容体を介してシグナル伝達する、好中球の化学遊走物質として機能する。それは全身照射への応答にも関与し、それ自体が放射線防護特性を有する可能性を上昇させる（Ｒａｄｉａｔ．Ｒｅｓ．１６０：６３７−４６，２００３参照のこと）。図１６は測定された応答における一定用量（ｐ＝０．００８５）および時間依存性増大（ｐ＝４．６×１０−６）を示す。さらに、両濃度のＣＧ５３１３５−０５は対照（ＣＧ５３１３５−０５なし）より有意に高い応答を示した。
【０１１４】
さらなる試験を行い、ＣＸＣＬ１と組み合わせた場合のＣＧ５３１３５−０５がｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの両方での放射線防護実験において相乗的であるかを決定できる。さらに、異なる細胞株（例えばＨＵＶＥＣ、ＣＣＤ−１８、ＮＩＨ３Ｔ３）における他のサイトカイン（例えばＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＭＣＰ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＲＡＮＴＥＳ）の誘発も、ＣＧ５３１３５−０５の存在下で試験され得る（このことを当業者は理解するだろう）。
【０１１５】
５．７．実施例７：放射線被曝後の反応性酸素中間体のスカベンジャーの測定
ＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡ法
第１の段階として、増大した反応性酸素種を有する細胞は、スーパーオキシドジスムターゼ−Ｃｕ、Ｚｎ−ＳＯＤ、Ｍｎ−ＳＯＤおよび細胞外−ＳＯＤをアップレギュレートし、スーパーオキシドラジカルを過酸化水素にスカベンジ（消去）する。これらの酵素活性はアセトキシメチルエステルを用いてＨ２０２の副生成物により間接的に測定され得る。ＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡとしても知られているこのクラスの誘導体である、５−（および−６）−クロロメチル−２’，７’−ジクロロジヒドロフルオレセインジアセテートは細胞内に効果的に保持され、Ｈ２０２にて酸化された場合、蛍光緑を発する。
【表１０】
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【０１１６】
ＩＥＣ１８（ラット腸上皮細胞）およびＣＣＤ−１８Ｃｏ（ヒト結腸繊維芽細胞）細胞を１ディッシュあたり１×１０５細胞の密度で６０ｍｍディッシュに播種した。付着後、０．１％  血清および所定の用量のＣＧ５３１３５を含有する培地へ切り換えた。１８時間インキュベーションした後、Ｘ線照射装置（Ｆａｘｉｔｒｏｎ）（Ｗｈｅｅｌｉｎｇ、ＩＬ）を用いてＸ線２または４Ｇｙを細胞に照射し、５ｍＭ  ＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）で１５分間インキュベーションした。ついで細胞を洗浄し、トリプシン処理し、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）のＦＬ１チャネルにて分析した。
【０１１７】
結果は、ＩＥＣ１８およびＣＣＤ１８Ｃｏ細胞がＣＧ５３１３５−０５での処理後、用量に応答した形式で、増大した細胞内Ｈ２０２を有することを示す（図１７、１８および１９）。これはＣＧ５３１３５−０５により誘発されるスーパーオキシドジスムターゼ（主にＭｎＳＯＤ）の増強した発現に起因すると考えられる。
【０１１８】
ＩＥＣ１８細胞におけるＣＧ５３１３５−０５による細胞内Ｈ２０２の生成は、電離放射線量の増大と共に増強される（図１８）。この結果は照射によりスーパーオキシドおよびヒドロキシルのごとき反応性のより反応性のある酸素種の生成が増大され、故にＣＧ５３１３５−０５により誘発されるスーパーオキシドジスムターゼの基質が増大されることを反映している。
【０１１９】
Ｒｅｄ  ＣＣ−１法
電離放射線被曝を用いて、放射線がＨ２０をヒドロキシルラジカル（ＯＨ）、スーパーオキシド（０２−）または過酸化水素（Ｈ２０）に電離させた結果として、細胞は反応性酸素種を蓄積する。大量のこれらのイオンは細胞に対する有害効果を有し得るため、経路がアップレギュレートされ、これらの分子をより安定な変換体へスカベンジ（消去）する。サイトゾルの酸化還元能を減じる経路をアップレギュレートすることにより、ＣＧ５３１３５−０５が電離放射線から細胞を防護し得ることが仮説立てられる。ダイ、Ｒｅｄｏｘ  Ｓｅｎｓｏｒ  １（Ｒｅｄ  ＣＣ−１）は、ＦＡＣＳ（ＦＬ２チャネル）により測定され得る赤色蛍光剤に変化することにより、酸化に際してのサイトゾルの酸化還元レベルをモニターし得る。
【０１２０】
サイトゾル反応性酸素種＋Ｒｅｄ  ＣＣ−１  →  酸化Ｒｅｄ  ＣＣ−１
ＩＥＣ１８（ラット腸上皮細胞）およびＣＣＤ−１８Ｃｏ（ヒト結腸繊維芽細胞）細胞を１ディッシュあたり１×１０５細胞の密度にて６０ｍｍディッシュに播種した。付着後、細胞の培地を０．１％  血清および所定の用量のＣＧ５３１３５を含有する培地に切り換えた。１８時間インキュベーションした後、Ｘ線照射装置（Ｆａｘｉｔｒｏｎ）を用いてＸ線２または４Ｇｙを細胞に照射し、５ｍＭ  Ｒｅｄ  ＣＣ−１（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）で１５分間インキュベートした。ついで、細胞を洗浄し、トリプシン処理し、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）のＦＬ２チャネルにて分析した。
【０１２１】
結果：ＩＥＣ１８およびＣＣＤ１８Ｃｏ細胞は図２０、２１および２２に示すようにＣＧ５３１３５−０５での処置後、用量に応答した形式で、減少したサイトゾル酸化還元能を有することが見出された。本明細書にて示すデータは、ＣＧ５３１３５−０５により誘発されるスーパーオキシドジスムターゼの発現が増大し、そしてそれが、スーパーオキシドおよびヒドロキシルラジカルのより反応性の種をスカベンジ（消去）する結果と考えられる。さらに、ＣＧ５３１３５−０５は、主要な、抗酸化を制御する転写因子であるＮｒｆ２の発現を増大させ、これは他の形式でサイトゾルの反応性におけるこの減少に寄与し得ることが示される。
【０１２２】
６．均等物および引用文献
本明細書にて引用した特許、および特許出願を含め、すべての刊行物を出典明示によりその全てを本明細書の一部とする。
本発明の多数の修飾および変形もまた本発明の精神と範囲内となされ得、これは当業者に明かであろう。本明細書に記載する特定の実施態様は例示のみの目的で提供される。故に、我々は本明細書に記載する正確な用語および限定に限るつもりはないが、本発明を様々な使用および条件に適合させるためになされ得る、かかる修飾および変形を我々自身利用することを望む。かかる修飾および変形は、本発明に従い対象へポリペプチドを投与するための組成物が異なること；ポリペプチドの量が異なること；投与回数および手段が異なること；投与用量に含有される物質が異なること（異なるペプチドの組み合わせまたは異なる生物学的活性を有する化合物とペプチドの組み合わせなどを含む）を包含するが、これらに限定されない。かかる修飾および変形は、本明細書に記載する特定のポリペプチドのアミノ酸配列における修飾（ここで、かかる変形は、ポリペプチドの機能性を変化させないが、対象へ投与されるべき組成物におけるペプチドの溶解性、身体によるペプチド吸収、有効期間内、または体内にてペプチドの生理学的作用が所望の効果をもたらし得るがごとき時間までのポリペプチドの保護、を変化させる様式で配列を変更するものである）ならびにかかる同様の修飾を包含することが意図される。故に、かかる修飾および変形は本発明の均等物の十分な範囲内にあることが適切に意図される。
【図面の簡単な説明】
【０１２３】
【図１】図１は、急性放射線、線量６００ｃＧｙに一回曝された後のマウスの生残へのＣＧ５３１３５−０５の効果を示す。
【図２】図２は、急性放射線、線量６００ｃＧｙに一回曝された後のマウスの平均体重の変化を示す。
【図３】図３は、放射線量４８４ｃＧｙ、５３４ｃＧｙ、５７０ｃＧｙ、６０６ｃＧｙまたは６４１ｃＧｙに曝された後のマウスの生残へのリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）対照の効果を示す。
【図４】図４は、放射線量４８４ｃＧｙ、５３４ｃＧｙ、５７０ｃＧｙ、６０６ｃＧｙまたは６４１ｃＧｙに曝された後のマウスの生残へのＣＧ５３１３５−０５の予防的投与（−１日目）の効果を示す。
【図５】図５は、４８４ｃＧｙ、５３４ｃＧｙ、５７０ｃＧｙ、６０６ｃＧｙまたは６４１ｃＧｙの放射線量に曝された後のマウスの生残へのＣＧ５３１３５−０５の予防的投与（−２および−１日目）の効果を示す。
【図６】図６は、陰窩の細胞位置を示す。
【図７】図７は、異なる放射線照射後の、ＣＧ５３１３５−０５処置の予防的投与をＰＢＳ対照群と比較する、陰窩の生残曲線を示す。
【図８】図８は、放射線損傷を被った後のマウスの腸陰窩の生残へのＣＧ５３１３５−０５の予防的投与の効果を示す。
【図９】図９Ａおよび９Ｂは、ＣＧ５３１３５−０５がＮＩＨ３Ｔ３細胞にてスカベンジャー、シクロオキシゲナーゼ、トレフォイル因子および転写因子の発現を誘発したことを示す。
【図１０】図１０は、ＣＧ５３１３５−０５がＣＣＤ１０７０ｓｋ細胞にてスカベンジャー、シクロオキシゲナーゼ、トレフォイル因子および転写因子の発現を誘発したことを示す。
【図１１】図１１は、ＣＧ５３１３５−０５がＣＣＤ１８Ｃｏ細胞にてスカベンジャー、シクロオキシゲナーゼ、トレフォイル因子および転写因子の発現を誘発したことを示す。
【図１２】図１２は、ＣＧ５３１３５−０５がヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）にてスカベンジャー、シクロオキシゲナーゼ、トレフォイル因子および転写因子の発現を誘発したことを示す。
【図１３】図１３は、異なるＸ線量にて照射されたＩＥＣ１８細胞の生残へのＣＧ５３１３５−０５の効果を示す。
【図１４】図１４は、異なるＸ線量にて照射されたＮＩＨ  ３Ｔ３細胞の生残へのＣＧ５３１３５−０５の効果を示す。
【図１５】図１５は、異なるＸ線量にて照射されたＨＵＶＥＣの生残へのＣＧ５３１３５−０５の効果を示す。
【図１６】図１６は、ＮＩＨ  ３Ｔ３におけるサイトカイン放出へのＣＧ５３１３５−０５の効果を示す。
【図１７】図１７は、４Ｇｙにて照射後、ＣＧ５３１３５−０５で処理したＩＥＣ１８細胞由来のＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡ蛍光の用量応答を示す。
【図１８】図１８は、２Ｇｙおよび４Ｇｙにて照射した後、ＣＧ５３１３５−０５で処置したＩＥＣ１８細胞由来のＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡ蛍光の用量応答を示す。
【図１９】図１９、は４Ｇｙにて照射後、ＣＧ５３１３５−０５で処理したＣＣＤ−１８Ｃｏ細胞由来のＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡ蛍光の用量応答を示す。
【図２０】図２０は、４Ｇｙにて照射後、ＣＧ５３１３５−０５で処理したＩＥＣ１８細胞由来のＲｅｄ  ＣＣ−１蛍光の用量応答を示す。
【図２１】図２１は、４Ｇｙおよび６Ｇｙにて照射後、ＣＧ５３１３５−０５で処理したＩＥＣ１８細胞由来のＲｅｄ  ＣＣ−１蛍光の用量応答を示す。
【図２２】図２２は、１０Ｇｙにて照射した後、ＣＧ５３１３５−０５で処理したＣＣＤ−１８Ｃｏ細胞由来のＲｅｄ  ＣＣ−１蛍光の用量応答を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成18年3月14日(2006.3.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成19年5月9日(2007.5.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象において放射線被曝に関連する疾患またはその１もしくはそれ以上の徴候を予防または処置するための組成物であって、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドを含有する組成物。
【請求項２】
対象がヒトである、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
疾患が好中球減少症である請求項１記載の組成物。
【請求項４】
疾患が胃腸粘膜炎である請求項１記載の組成物。
【請求項５】
徴候が下痢、皮膚の火傷、傷、疲労、脱水、炎症、脱毛、口腔粘膜の潰瘍または鼻、口もしくは直腸からの出血である請求項１記載の組成物。
【請求項６】
予防的に有効量の該ポリペプチドが放射線に曝される可能性のある対象へ投与されるのに適している、請求項１記載の組成物。
【請求項７】
有効量が該ポリペプチドの一回用量である請求項６記載の組成物。
【請求項８】
有効量が該ポリペプチドの一回用量以上である請求項７記載の組成物。
【請求項９】
治療的に有効量の該ポリペプチドが放射線を被曝した後の対象へ投与されるのに適している、請求項１記載の組成物。
【請求項１０】
有効量が該ポリペプチドの一回用量である請求項９記載の組成物。
【請求項１１】
有効量が該ポリペプチドの一回用量以上である請求項９記載の組成物。
【請求項１２】
該ポリペプチドが非経口経路にて投与されるのに適している、請求項１記載の組成物。
【請求項１３】
投与が静脈内投与、筋内投与、皮下投与、皮内投与または経鼻投与から成る請求項１２記載の組成物。
【請求項１４】
治療的に有効量の該ポリペプチドが医薬組成物中に処方される請求項１記載の組成物。
【請求項１５】
放射線損傷から造血組織を回復または防護するための組成物であって、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドを含有する組成物。
【請求項１６】
放射線損傷から胃腸組織を回復または防護するための組成物であって、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドを含有する組成物。
【請求項１７】
対象においてマスタードガス剤への被爆に関連する疾患またはその１もしくはそれ以上の徴候を予防または処置するための組成物であって、ＣＧ５３１３５−０５ポリペプチドを含有する組成物。