(57)【要約】  癌などの疾患を治療するための組成物及び方法が本明細書中で開示される。この組成物は１以上のポリサッカライドを１以上の治療薬との混合物として含む。この混合物は公知の投与方法を用いて治療を必要とする対象に投与できる。治療薬は、単独で投与される場合、望ましくない副作用を対象に生ずる可能性がある。ポリサッカライド成分はこのような副作用を最小にするか、又は排除する。ここで記載される組成物は、治療効果の増強を、毒性の減少と併せて達成する。
2007505041.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１以上のポリサッカライドと１以上の治療薬を含む組成物であって、当該組成物が治療効力を増強し、そして上記治療薬に付随する毒性を低減する、前記組成物。
【請求項２】
前記ポリサッカライドが分枝状であるか又は非分枝状である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ポリサッカライドが、ガラクトマンナン、アラビノガラクタン、ラムノガラクツロナン、及びそれらの組み合わせからなる群から選ばれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記ガラクトマンナンが、β−１，４−Ｄ−ガラクトマンナンである、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記ガラクトマンナンが、(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12) である、請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
前記(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12)が、約２,０００Ｄａ〜６００,０００Ｄａの範囲の分子量を有する、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12)が約５０,０００Ｄａ〜４１５,０００Ｄａの範囲の分子量を有する、請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
前記(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12)が約４０００Ｄａ〜６０,０００Ｄａの範囲の分子量を有する、請求項５に記載の組成物。
【請求項９】
前記治療薬が、５-ＦＵ、５-ＦＵｄＲ、メトトレキセート、ａｒａ-Ｃ、６-メルカプトプリン、６-チオグアニン、ヒドロキシ尿素、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、メクロレタミン、フェニルアラニン・マスタード、クロラムブシル、エチレンイミン類、メチル・メラミン類、アルキルスルホネート類、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、シスプラチン、ダカルバジン、プロカルバジン、ドキソルビシン、ダクチノマイシン、ミトマイシンＣ、プリカマイシン、シクロホスファミド、メルファラン、チオテパ、ブスルファン、プレドニゾン、プレドニソロン、トリアムシノロン、パクリタキセル、及びそれらの組み合わせからなる群から選らばれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記治療薬が、５-ＦＵ、５-ＦＵｄＲ、シスプラチン、及びそれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記治療薬が５-ＦＵである、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
さらにロイコボリンを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
癌を治療する方法であって、治療を必要とする対象に、 (((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12)及び化学療法薬を医薬として許容される担体中に有する有効量の混合物を投与することを含む、前記方法。
【請求項１４】
前記化学療法薬が、５-ＦＵ、５-ＦＵｄＲ、メトトレキセート、ａｒａ-Ｃ、６-メルカプトプリン、６-チオグアニン、ヒドロキシ尿素、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、メクロレタミン、フェニルアラニン・マスタード、クロラムブシル、エチレンイミン類、メチル・メラミン類、アルキルスルホネート類、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、シスプラチン、ダカルバジン、プロカルバジン、ドキソルビシン、ダクチノマイシン、ミトマイシンC、プリカマイシン、シクロホスファミド、メルファラン、チオテパ、ブスルファン、プレドニゾン、プレドニソロン、トリアムシノロン、パクリタキセル、及びそれらの組み合わせからなる群から選らばれる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記化学療法薬が、５-ＦＵ、５-ＦＵｄＲ、シスプラチン、及びそれらの組み合わせからなる群から選ばれる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記化学療法薬が５-ＦＵである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
さらにロイコボリンを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
前記癌が、慢性白血病、乳癌、肉腫、卵巣癌、直腸癌、咽喉癌、メラノーマ、結腸癌、膀胱癌、肺癌、乳房腺癌、胃腸癌、胃癌、前立腺癌、膵臓癌、及びカポジ肉腫からなる群から選ばれる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
前記混合物が、ある量の前記(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12)とある量の前記化学療法薬を、前記対象が受ける毒性を低減するのに適した比で有する、請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】
前記混合物が、ある量の前記(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12)とある量の前記化学療法薬を、前記化学療法薬の治療効力を増強するのに適した比で有する、請求項１３に記載の方法。
【請求項２１】
前記混合物が、ある量の前記(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12)とある量の前記化学療法薬を、前記対象が受ける毒性を低減し、かつ前記化学療法薬の効力を増強するのに適した比で有する、請求項１３に記載の方法。
【請求項２２】
前記混合物が、ある量の前記(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12)とある量のサイトカイン及び化学療法薬を前記対象において毒性を減らすのに適した比で有する、請求項１３に記載の方法。
【請求項２３】
前記混合物が、ある量の前記(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12)とある量のＩＬ-２、 ＩＬ-１２、若しくはα-インターフェロン、又はその両方及び化学療法薬を前記対象が受ける毒性を減らすのに適した比で有する、請求項１３に記載の方法。
【請求項２４】
前記混合物が、ある量の前記(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12)とある量のサイトカインと化学療法薬を前記化学療法薬の効力を増強するのに適当な比で有する、請求項１３に記載の方法。
【請求項２５】
前記混合物が、ある量の前記(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12)とある量のＩＬ-２、ＩＬ-１２、若しくはα-インターフェロン、又はその両方及び化学療法薬を前記化学療法薬の効力を増強するのに適当な比で有する、請求項１３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[0002]  本発明は、疾患治療用の組成物及び方法に関する。詳しくは、本発明は、ポリサッカライドと医薬品を含む組成物であって、当該ポリサッカライドが薬剤の毒性を低下させ、同時にその効力を高めることを特徴とする組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
[0001]  本出願は、2003年9月8日に出願された米国特許出願第10/657,508号の優先権と利益を主張する。
【０００３】
[0003]  癌を治療するために最も広く用いられる方法は、手術、放射線、及び化学療法である。癌患者は多くの場合これらの治療の組み合わせを受け、約半数の患者は化学療法を受ける。残念ながら化学療法薬には、患者に対する毒性効果と特定の用量が癌細胞を標的として殺す効力に関して大きな制約がある。
【０００４】
[0004]  多くの化学療法薬は、癌細胞が分裂と複製を行おうとし始めるとそれを殺す。細胞は、細胞分裂が妨げられることによって殺される。例えば、化学療法薬は新しいDNAの形成を阻止したり、細胞内の他の何らかの不可欠の機能をブロックする。ある種の化学療法薬はアポトーシスを誘発することによって働くが、これは本質的には細胞のプログラムされた死亡プロセスを引き起こすことによって細胞を自殺させることである。これらの物質は、一般に制御されない細胞分裂によって急速に増殖する癌細胞を効果的に処理するが、同時に癌細胞以外の健康な細胞も、通常の細胞分裂を行おうとするときに殺される。この有毒な作用は、速く増殖する正常細胞で、例えば骨髄細胞、消化管の細胞、毛嚢、及び生殖細胞、などで特に顕著である。化学療法は健康な組織を傷つけるので、薬の有効性は、非癌細胞の許容レベルを超えないような投薬レベルと治療頻度によって制限される。さらに、化学療法は、その身体的及び感情的な副作用によって、患者の生活の質を著しく低下させる。薬の標的を癌組織だけに絞ることができないので、化学療法の用量は健康な組織が許容できる範囲（すなわち、治療指数）に抑える必要があり、しばしば病気の組織への化学療法の最適な有効性を低下させる。
【０００５】
[0005]  化学療法薬の毒性を減らすことができるならば、医師は許容できないほどの副作用を生ずることなしにある薬剤の用量を増やすことができる。薬の効力を高めることは、用量の減少と言い換えることができ、それもやはり患者に対して最大の利益を提供しながら有害な作用の可能性を最小にすることになる。ある化学療法薬の効力を高めることによって用量を減らすことは、有毒な副作用を減少させることと併せて、腫瘍を抑え、有害な副作用を減らすことによって患者の生活の質を改善することにつながる。
【０００６】
[0006]  これまで、化学療法治療の有効性と有害な副作用をバランスさせるためにいろいろなアプローチがなされてきた。例えば、あるアプローチは、患者が治療により許容しやすくするために、少ない用量をより頻繁に与えることにより、化学療法治療をうすめて広げることを試みている。別のアプローチは、化学療法の治療に別の物質を付け加える。そのような物質としては、化学療法薬の有害な副作用（例えば、吐き気）を抑えて患者が化学療法薬を許容しやすくすると称するものがある。このような物質は、また、化学療法薬に対する患者の許容度が改善又は高められるので、癌と戦うためにより多量の薬剤を用いることを可能にする。
【０００７】
[0007]  化学療法治療の進歩にもかかわらず、化学療法薬の効力を高め、同時にその毒性を減らすという点で、医療における大きなニーズが満たされることなく残っている。治療が、癌とより効果的に戦い、しかも同時に、ほとんどの化学療法治療の有害で体を衰弱させる副作用を減少させることによって、治療の間、患者に対してより良い生活の質を提供できるようにする必要がある。
【発明の開示】
【０００８】
発明の要約
[0008]  本発明は、癌などの疾病を治療するための組成物及び方法を含む。本発明の組成物は、１以上のポリサッカライドを１以上の医薬品と併せて含む。本発明の方法は、１以上の医薬品と１以上のポリサッカライドを、治療を必要とする患者へ同時に投与することを含み、ここで医薬品とポリサッカライドを含む医薬製剤の毒性が減少していることを特徴とする。ある態様では、本発明の組成物は、毒性の減少と効力の増加の両方を実現する。
【０００９】
[0009]  本発明のある実施態様では、対象における癌を治療する方法が記載され、その方法は、その対象に１以上のポリサッカライドと有効量の化学療法薬を医薬として許容される剤形で投与するステップを含み、当該ポリサッカライドは、いくつかの植物及び微生物の源から入手できるガラクトマンナン類から成る群から選択される。この医薬製剤が治療を必要とする患者に、当業者に周知の許容される方式で投与される。
【００１０】
[0010]  本発明の別の実施態様では、１以上のポリサッカライドと１以上の化学療法薬の混合物がそれを必要とする対象に投与され、この混合物は十分な量のポリサッカライドと化学療法薬を、対象における有毒な副作用を減らし、同時に治療する特定の病気に対して有効であるような適当な比で含む。ここで、当該ポリサッカライドは、（シアンポシス・テトラゴノロブス（Cyamopsis tetragonolobus）由来の）ガラクトマンナン類、（ラリックス・オシデンタリス（Larix occidentalis）由来の）アラビノガラクタン、（ポテト由来の）ラムノガラクツロナン、（ユーケウム・シーウィード（Eucheuma seaweed）由来の）カラギーナン、及び（セラトニア・シリクア（Ceratonia siliqua）由来の）ローカスト・ビーン・ガム（Locust Bean Gum)から成る群から選択される。有毒な副作用は、ポリサッカライドを欠いた化学療法薬の投与から生ずる対象によって自覚される生理的影響（症状）と定義される。
【００１１】
[0011]  本発明の別の実施態様では、１以上のポリサッカライドと有効量の１以上の化学療法薬の混合物を医薬として許容される製剤で含む医薬製剤が提供され、ここで当該ポリサッカライドは、（シアンポシス・テトラゴノロブス由来の）ガラクトマンナン類、（ラリックス・オシデンタリス由来の）アラビノガラクタン、（ポテト由来の）ラムノガラクツロナン、（ユーケウム・シーウィード由来の）カラギーナン、及び（セラトニア・シリクア由来の）ローカスト・ビーン・ガムから成る群から選択される。ある態様では、この製剤における混合物は、ある量の１以上のポリサッカライドと１以上の化学療法薬を対象における有毒な副作用を減らすために適した比で含む。ポリサッカライド 対 化学療法薬の比は、10:1から1:10までの範囲が可能である。５０,０００ＭＷ修飾ガラクトマンナンでは、最適な比は、6:1から1:3までの範囲にあった。別の態様では、混合物は、ある量の１以上のポリサッカライドと１以上の化学療法薬を、癌を治療するための化学療法の効果の効力を高めるのに適当な比で含む。さらに別の態様では、混合物は、ある量の１以上のポリサッカライドと１以上の化学療法薬を、癌を効果的に治療すると同時に、有毒な副作用の可能性を減らすのに適当な比で含む。本発明のさらに別の態様では、それを必要とする対象における癌を治療するための方法であって、１以上のポリサッカライドと１以上の化学療法薬の混合物を、化学療法薬がポリサッカライド成分の存在下で治療の効力が高められるように剤形して投与するステップを含む方法が提供される。
【００１２】
[0012]  以下の用語は、文脈がそれ以外のことを要求している場合を除き、下に示される意味を有するものとする。
[0013]  “対象”とは、ヒト、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ラット、マウスなどの哺乳類を含む動物を指す。
[0014]  “患者”とは、臨床的な背景において病理生理プロセスに合致する症状（単数又は複数）を示したヒト対象を指す。
[0015]  “ポリサッカライド”とは、主に１以上の糖及び置換された糖のモノマーから構成されるポリマーを指す。当該糖モノマーは、当業者に周知の方法で修飾されうる。
【００１３】
[0016]  ある有毒治療薬の“効力”とは、最小の有効な用量とそれに伴う有毒な副作用の間の関係を指す。ある薬剤の効力は、より低い用量の投与又はより短い投薬期間で治療エンドポイントが達成できる場合に高められる。毒性を減らすことができれば、治療薬は、より長い投薬期間、又は慢性的にも、患者の高いコンプライアンスで生活の質を改善しながら投与することができる。さらに、ある薬剤の毒性が減少すると、医師は用量を増やして治療エンドポイントを早く達成すること、又はもっと高い治療エンドポイントを達成することができる。非毒性の治療薬の場合、“効力”は、ある病状を治療するための治療効果の改善に関する。
【００１４】
[0017]  “医薬として許容される担体”とは、生理的に適合するすべての任意の溶媒、分散媒質、例えばヒト・アルブミン又は架橋ゼラチン・ポリペプチド、コーティング剤、抗菌及び抗カビ剤、等張液、例えば塩化ナトリウム又はグルタミン酸ナトリウム、及び吸収遅延剤などを指す。医薬的に活性な物質のためのこの種の媒質や薬剤の使用は当業者に周知である。好ましくは、担体は経口、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄又は硬膜外投与（例えば、注射、又は輸液による）に適したものである。投与経路よっては、活性化合物は、その化合物を不活性化する可能性がある酸その他の自然条件の作用から保護する物質でコーティングすることができる。
【００１５】
[0018]  “活性化合物”とは、癌の治療のためにここで用いられるすべての化学療法薬、及び化学療法薬の効力を増加させる及び／又は化学療法薬の毒性を減少させるすべての添加される物質を指す。
【００１６】
[0019]  “非経口投与”とは、ボーラス・インジェクション又は注入による投与、並びに静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊椎内、硬膜外、及び胸骨内の注射及び注入を含む。
【００１７】
[0020]  “有毒”とは、ある物質が対象に投与されたときに生ずる何らかの有害な影響を指す。
[0021]  “腫瘍退縮”とは、（不特定の死亡を除き）“部分的”（治療開始時のサイズの50パーセント未満）又は“完全”（腫瘍が触知できない）と記録する。
【００１８】
[0022]  “退縮の持続期間”とは、部分的又は完全縮小と分類された腫瘍が治療開始時のサイズの50パーセント以下であり続ける期間を指す。
【００１９】
[0023]  “評価サイズ”とは、治療開始時の初期腫瘍サイズに対して１又は２質量倍で選ばれる腫瘍質量を指す。
【００２０】
[0024]  “腫瘍質量倍化に要する時間”とは、評価サイズに到達するための時間を指す；これは中央値の腫瘍の成長における全体的な遅れの計算、［（Ｔ−Ｃ）／Ｃ×１００％］に用いられる、ここでＴ−Ｃ（日）は、治療群（Ｔ）の腫瘍が評価サイズに達する移植後時間の中央値と、対照群の当該時間の中央値との差である。Ｔ−Ｃ値は、特定できない死亡及び腫瘍が評価サイズに達することなく死んだ動物を除いて測定される。
【００２１】
[0025]  “有効な用量”とは、その物質に対する患者の許容範囲を超えずに、予め定められた効果、例えば腫瘍サイズの縮小、などを達成するのに必要な化学療法薬の用量である。
【００２２】
[0026]  治療効力の増強とは、化学療法薬の（単独で、又は１以上のポリサッカライド及び１以上の治療薬を含む組成物として）治療指数が、基準の化学療法薬の効果を超える所望の生理的効果、例えば腫瘍サイズの縮小、腫瘍増殖の遅れ、等を達成する、及び／又はその物質に対する患者の許容度を改善することを意味する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
[0038]  本発明は、それを必要とする人を治療するための組成物及び方法を提供する。本発明の組成物は、１以上のポリサッカライドと１以上の治療薬の混合物を含む。本発明の混合物は、癌などの疾病で苦しむ人たちに向けられている。本発明のポリサッカライド／治療薬の組成物は、それを必要とする人に投与されたとき、治療薬の治療効力を高め、同時に有毒な副作用を減ずることが好ましい。
【００２４】
[0039]  癌を治療するために最も広く用いられる方法は、手術、放射線、及び化学療法である。癌患者は、しばしばこれらの治療の組み合わせを受け、すべての患者の約半数が化学療法での治療を受ける。残念ながら、化学療法薬には、患者に対するその有毒な作用及び腫瘍細胞を標的として殺す特定投薬の効力に関して大きな制約がある。
【００２５】
[0040]  化学療法は健康な組織に害を及ぼすので、ある薬の有効性は、その用量及び治療頻度が非癌細胞の許容レベルを超えないようにすることで制限される。さらに、化学療法による治療は、しばしばその身体的及び感情的な副作用によって患者の生活の質を劇的に低下させる。薬の標的を癌細胞だけに絞ることができないので、化学療法の用量は、健康な組織が許容できるある範囲内に抑えなければならず（すなわち、治療指数）、こうして病気の組織への化学療法の最適な効果が低下する。したがって、化学療法薬の毒性を減らすことができれば、医師は有毒な副作用を生ずることなく薬の用量を増やすことができる。
【００２６】
[0041]  ある部類の薬、フルオロピリミジン類（例えば、5-フルオロウラシル（５-ＦＵ））は、結腸直腸癌、乳癌、肺の非小細胞カルシノーマ（NSCCL）、胃癌、膵臓癌、卵巣癌、及び頭と頚の腫瘍など、いくつかの固形腫瘍の標準的な化学療法で40年以上用いられている。長時間の静脈注入などの５-ＦＵ投与のスケジュール変更、及び薬物動態の改変は奏効率と許容性の改善をもたらしたが、これは必ずしも生存率の改善にしっかりと反映されない。５-ＦＵと一緒に与えたときに、腫瘍特異的なデリバリーを強化し安全性と投与の利便を改善するここで記述されるような物質を開発する余地が残されている。
【００２７】
[0042]   ５-ＦＵは、過去20 年間、結腸直腸癌などの癌の治療における主力であった。結腸直腸腺癌は癌死亡の原因の第二位にあり、総数の10-12パーセントを占める。推定130,000〜155,000人の新しい症例が毎年米国で発症している。約25%の患者は離れた転移を伴っており、さらに別の20%は生きている間に転移を生ずる。1990年の死亡率は、男性が24/100,000、女性が16/100,000であった。この病気の生存率は、過去20年間に主として早期発見によって約8%改善された。
【００２８】
[0043]  進行した結腸直腸癌の治療の進歩は、主として依然として転移性結腸直腸癌の治療の第一線の化学療法薬である５-ＦＵを中心とする治療方式の修正、又はそれに対する追加によるものである。約10年前まで標準的な治療であった静脈内（“IV”）ボーラス注入治療は11%から18%までにわたる奏効率をもたらした。“濃度  対 時間曲線”の下の面積により測定される５-ＦＵへの曝露の強度は抗腫瘍活性と良く相関するが、それだけでなく毒性とも良く相関している。３週毎に５日の治療を含む方式は、口内炎、下痢、及び白血球減少症を生ずる。連続IV注入又はボーラス・インジェクションをロイコボリン（葉酸）と組み合わせることによってチミジレート・シンターゼ阻害の持続時間を増強することを目標とする治療法は、奏功率を22%から38%に改善した。連続注入治療は、約20%の患者に手足症候群を引き起こし、口内炎は連続注入でもボーラス治療と同程度であるが、下痢と白血球減少症は連続注入経路によって頻度が低下する。
【００２９】
[0044]  イリノテカンなどのトポイソメラーゼ阻害薬が、進行した結腸直腸癌の患者であって、化学療法が初めてであるか又は５-ＦＵ治療が成功しなかった患者に用いられてきた。化学療法が初めての患者では、Southern Italy Oncology GroupによるPhase Ii研究が、５-ＦＵプラス・ロイコボリンを受けた患者で18%の奏功率、５-ＦＵプラス・ロイコボリンの直前にイリノテカン投与を受けた患者で40%の奏功率を示した。どちらの治療でも、悪性度3-4の毒性が珍しくなかった。二つの無作為試験により、イリノテカンが、５-ＦＵで失敗した患者において最良の支持療法又は連続注入５-ＦＵに比べて奏功率と生存率を改善したということが示された。イリノテカンは、５-ＦＵに比べて、より重篤な生命の危険となる骨髄抑制と下痢を生じた。この二つの物質の毒性が重なっているために、両方の化合物をいっしょに最大用量強度で用いることも制限される。
【００３０】
[0045]  オキサルプラチンはジアミノシクロヘキサンプラチナ錯体であり、すでに治療された結腸直腸癌患者において10%という単一薬剤での奏功率を示している。最初の治療を受ける患者で５-ＦＵ 注入と組み合わせたとき、58%という高い奏功率が観測された。この薬の合併症には、末梢神経障害と口−咽喉異常感覚などがある。進行した結腸直腸癌の初期治療として、オキサルプラチンと５-ＦＵ又はイリノテカンの組み合わせを５-ＦＵと比較する臨床試験が進行中である。
【００３１】
[0046]  本発明は、対象における疾病を治療するために１以上のポリサッカライドを１以上の治療薬と組み合わせる方法及び組成物を提供する。本発明の方法は、有効な用量の１以上のポリサッカライドを有効な用量の１以上の治療薬と併せて投与することを含み、その結果治療薬が、ポリサッカライドの存在下で治療効果を高められ、そして毒性が提言されるように混合物が剤形される。
混合物を剤形して投与するスペクトルを含み、ポリサッカライドの存在下でその治療薬の治療効力が高められ毒性が減ずることを特徴とする。
【００３２】
[0047]  本発明が標的とする疾病の一つは癌である。本発明の範囲に入ると考えられる癌のタイプは、慢性白血病、乳癌、肉腫、卵巣癌、直腸癌、咽喉癌、メラノーマ、結腸癌、膀胱癌、肺癌、乳房腺癌、胃腸癌、胃癌、前立腺癌、膵臓癌、及びカポジ肉腫、などであるがそれだけに限定されない。
【００３３】
[0048]  しかし、その他の治療方法も本発明の範囲内にあると考えられ、それは、非限定的に、抗鬱剤、抗炎症剤、胃腸薬（潰瘍や関連症状を治療する）、抗精神病薬、抗高脂血症薬などを含み、多くの治療薬が慢性医薬として、すなわち、長期的に投与されなければならないので、用量の減少及び生活の質の改善が利用可能性、治療薬のコスト、及び患者のコンプライアンスにおける重要な因子になる。
【００３４】
[0049]  ポリサッカライド成分の有効な用量とは、化学療法薬を受ける対象に生ずる有毒な副作用の、全部ではなくてもいくつかを、最小にする又は完全に軽減するために必要な量である。ある態様では、有効な用量とは、治療薬の効力を高めるために必要な量である。別の態様では、有効な用量とは、薬の有毒な副作用を最小にする又は除去すると同時に対象を治療する薬の効力を高めるために必要な量である。
【００３５】
[0050]   治療効力の増強とは、化学療法薬の治療指数が（１以上のポリサッカライド及びを含む組成物として）、基準の化学療法薬の効果を超える所望の生理的効果、例えば腫瘍サイズの縮小、腫瘍増殖の遅れ、又は／及び、その物質に対する患者の許容度を改善することを意味する。
【００３６】
[0051]  ある実施態様では、１以上のポリサッカライドと１以上の治療薬を含む組成物が開示される。ポリサッカライドはモノマー・ユニットから形成される。修飾されたポリサッカライドも本発明の範囲内にあると考えられ、例えば、限定された制御された解重合による修飾、又は、例えば、ポリサッカライドのモノマー・ユニットに付着した脂質、タンパク質、又は核酸分子を有することによる修飾などを含む。組成物のポリサッカライドは、枝分かれしたものであっても枝分かれしないものであっても良い。ポリサッカライドは、非限定的にいくつかの植物や微生物の源、例えば植物：グレディツシア・トリアカントス（Gleditsia triacanthos）、メディカゴ・ファルケート（medicago falcate）、シアンポシス・テトラゴノルバ（Cyamopsis tetragonoloba）、トリゴネラ・フェナムグラカム（Trigonella Foenumgraecum）、及び微生物：例えばセラトニア・シリクア（Ceratonia siliqua）、ザントモナス・カムペストリス（Xanthomonas campestris）、酵母及び粘菌から得られるガラクトマンナン類、（ラリクス・オシデンタリス（Larix occidentalis）由来の）アラビノガラクタン、（ポテト由来の）ラムノガラクツロナン、（ユーケウマ・シーウィード（Eucheuma seaweed）由来の）カラギーナン、及び（セラトニア・シリクア（Ceratonia siliqua）由来の）ローカスト・ビーン・ガムなどを含む。ある態様では、ポリサッカライドはβ-1,4-D-ガラクトマンナンであってよく、マンノースのガラクトースに対する比が約1.7の範囲にあるものを含む。別の態様では、ガラクトマンナン・ポリサッカライドの分子量は、約4,000〜約200,000 Dという範囲にある。ある特定の態様では、ガラクトマンナンは平均重量が約40,000〜60,000 Dである。別の態様では、ガラクトマンナン類の構造は、ポリ-β-1,4マンナン骨格に側鎖置換基がα-1-6-グリコシド結合によって付着したものである。ある態様では、ガラクトマンナン・ポリサッカロイドはβ-１,４-Ｄガラクトマンナンであってよい。ある特定の態様では、ポリサッカライドは、(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合-β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12)である。別の態様では、ガラクトマンナンはシアンポシス・テトラゴノロバ（Cyamopsis tetragonoloba）の種子由来のグアルガムの誘導体であってよい。
【００３７】
[0052]  本発明のポリサッカライドは、標的特異的な炭水化物、例えばガラクトース、ラムノース、マンノース、又はアラビノースなどの側鎖を有することができ、それが細胞、特に腫瘍細胞の表面上の特異的レクチン・タイプのレセプターを標的するポリマー認識能力を、表面に提供する。枝は、単一のユニットでありうるし、又はオリゴサッカライドの２以上のユニットでありうる。
【００３８】
[0053]  本発明の組成物はさらにエンハンサーを含むことができる。そのようなエンハンサーの一例はロイコボリンである。研究によって、ロイコボリンなどのエンハンサーの付加は奏功率を改善することが示されている。Benson, A.B., Oncology, 12 (10 suppl. 7): 28-34, 1998; 及びHarms, B.A., et al., Chapter 62 in Clinical Oncology, 2nd ed., Abeloff (ed), 2000, Churchill Livingstone, Inc. pp. 1611-1637,を参照のこと。これらの文献の教示は、本明細書に援用される。化学療法が初めての患者で、Southern Italy Oncology Groupが行ったフェーズII研究は、５-ＦＵ＋ロイコボリンを受けた患者で18%の奏功率、５-ＦＵ＋ロイコボリンの直前にイリノテカン投与を受けた患者で40%の奏功率、を示した。Maniello, E., et al., Ann. Oncol. 11: 1045-51, 2000を参照のこと。この教示の全体は本明細書中に援用される。
【００３９】
[0054]  本発明の組成物の治療薬は、すべての知られている医薬、例えばPhysician’s Desk Referenceにリストされている医薬、並びに実験的な治療薬、を含む。ある態様では、治療薬は化学療法薬である。
【００４０】
[0055]  現代的な癌化学療法は第二次世界大戦後にナイトロジェンマスタードの導入から始まった。これはサルファマスタードとアミノプテリン、葉酸塩拮抗剤、で見られた造血系毒性の結果として臨床用に開発されたアルキル化剤である。これらの化合物は、リンパ腫の患者及び急性リンパ性白血病の小児において劇的な寛解を生じた。残念ながら、薬に対する耐性が急速に生じたために治癒に至らなかった。この問題は、臨床的に導入される新薬での単独治療で記録された。
【００４１】
[0056]  実験的腫瘍に関する研究は、最適な抗腫瘍効果は、宿主の許容する範囲で実現できる最大の用量が用いられた場合に見られることをはっきりと確立しており、これが本発明の主題である。近年は、単位時間あたり送達される薬の量、通常は毎週１平方メートル当たりのミリグラムという単位で表される薬剤量を定義するのに用量強度（dosage intensity）という用語が用いられる。ある種の薬、例えばアルキル化剤などスケジュール依存的でない薬の場合、送達される用量強度は治療結果と正比例する。治癒が可能なほとんどの腫瘍で、この問題は決定的に重要であり、最適用量に満たない投薬は治療の失敗につながることがある。
【００４２】
[0057]  組み合わせ治療によって治癒が可能なヒト腫瘍の多くで、このプログラムで効果的に治療できない通常進行した大きな腫瘍がある患者のグループがある。自家骨髄移植又は造血細胞増殖因子を用いてこのグループの患者も治癒できる可能性について研究が続いている。
【００４３】
[0058]  単一の薬を用いていると、薬に対する耐性が急速に生ずる。化学療法薬の組み合わせを用いていろいろな癌を治療することができる。一つの薬の用量を制限する毒性が他の薬と重なっていない場合、複数の薬を組み合わせて用いることができる。毒性が生じたとき、主な原因物質が分からないことがあるので、その後の用量の調整が難しくなることがある。
【００４４】
[0059]  サイクル活性薬剤とは、細胞がサイクルにあること、すなわち、細胞毒性となる細胞分裂の準備を進めるセル・サイクルを活発に進めていることを必要とする薬剤である。これらの薬剤のいくつかは、主として細胞の一つの段階にある細胞に対して効果的である。この呼称の重要性は、セル・サイクル活性薬剤が通常スケジュール依存的であるということ、そして曝露の持続時間が重要であり、通常は用量よりも重要であるということにある。それに対して、非セル・サイクル活性薬剤は通常スケジュール依存的ではなく、効果はスケジュールに関わりなく投与される全用量に依存する。アルキル化剤は一般に非サイクル活性であり、代謝拮抗剤はサイクル活性化合物の原型である。
【００４５】
[0060]  セル・サイクル活性薬剤の一例はフルオロピリミジン類、例えば5-フルオロウラシル（５-ＦＵ）と5-フルオロデオキシウリジン（５-ＦＵｄＲ）である。５-ＦＵはDNA合成の阻害によって、又はRNAへの取り込みによって、RNAのプロセスと機能を阻害することによって、細胞毒性効果を発揮する。チミジレート・シンターゼの強い阻害によってDNA合成を阻害する５-ＦＵの活性代謝産物は5-フルオロデオキシウリジレート（5-FdUMP）である。急速に増殖する腫瘍では、チミジレート・シンターゼの阻害が５-ＦＵによって引き起こされる細胞死の鍵となるメカニズムであるようだ；しかし、他の腫瘍では、細胞死はRNAへの５-ＦＵの取り込みともっと良く相関している。DNAへの５-ＦＵの取り込みも起こり、それも５-ＦＵの細胞毒性に寄与している。
【００４６】
[0061]  ５-ＦＵと５-ＦＵdRはいくつかの固形腫瘍、特に結腸癌、乳癌、及び頭と頚の癌，に対して抗腫瘍活性を有する。５-ＦＵを含む製剤は、皮膚過角化症及び表皮基底細胞癌を治療するのに局所施用される。
【００４７】
[0062]  ５-ＦＵと５-ＦＵdRの主な制約的毒性としては、骨髄及びGI毒性があげられる。口内炎と下痢は、通常、治療の4-7日後に起こる。それ以後の治療は、通常有毒な副作用からの回復が見られるまで保留される。白血球減少症と血小板減少症の最下点は、通常5-日コースの単独投与から7-10日後に起こる。５-ＦＵdRの肝動脈を通した輸液に対する用量制限的な毒性は一時的な肝臓毒性で、ときには胆道硬化を起こす。５-ＦＵの全身的な投与後に見られるそれほど頻繁でない副作用は、皮膚の発疹、小脳症状、及び結膜炎である。
【００４８】
[0063]  セル・サイクル活性薬剤のもう一つの例はメトトレキセートである。この葉酸塩拮抗剤は、ALLの小児に完全な寛解をもたらすことが示された最初の代謝拮抗物質である。メトトレキセート（アメトプテリン）とアミノプテリンはビタミン葉酸のアナログである。メトトレキセート、及び同様の化合物、は酵素ジヒドロフォレート・レダクターゼを阻害することによって作用する。この阻害の結果、細胞内の葉酸塩補酵素は急速に枯渇する。この補酵素はチミジレートの生合成並びにプリンの生合成に必要とされ、したがって、DNA合成がメトトレキセートなどを用いることによってブロックされる。メトトレキセートの使用に関連して、骨髄抑制やGI症状など、かなりの毒性がある。GI管へのメトトレキセートの毒性の初期兆候の一つは口内炎である。深刻な副作用では、小腸の損傷による下痢があり、それは進行して潰瘍や出血につながることがある。
【００４９】
[0064]  シトシン・アラビノシド（ara-C）はデオキシシチジンの代謝拮抗薬アナログである。このアナログでは、２’位でＯＨ基がβ配置になっている。この化合物は最初に海綿クリプトテチア・クリプタ（Cryptothethya crypta）から単離された。Ａｒａ‐Ｃは急性骨髄生白血病の治療で最適薬剤である。Ara-Cは細胞内で三リン酸のヌクレオチド（ara-CTP）に変換され、それはDNAポリメラーゼの阻害剤であり、かつDNAに取り込まれる。後者がara-Cの致死作用を生ずると考えられる。ara-Cで治療されている患者で吐き気と嘔吐が見られる。
【００５０】
[0065]  その他に本発明の範囲内にあると考えられる化学療法薬が多くある。プリンアナログ、例えば6-メルカプトプリンや6-チオグアニン、がやはり癌に対する治療薬として用いられる薬である。ヒドロキシ尿素が癌を治療するために用いられる別の薬である。ヒドロキシ尿素は、二リン酸塩レベルでリボヌクレオチドをデオキシリボヌクレオチドに変換する酵素であるリボヌクレオチド・レダクターゼを阻害する。ビンカアルカロイド類も癌の治療に関わっている。ビンカアルカロイド類は、ビンブラスチン、ビンクリスチン、及びビンデシンを含む。エピポドフィロトキシンはポドフィロトキシンの誘導体で、白血病、ホジキン病、などの癌やその他の癌の治療に用いられる。
【００５１】
[0066]  アルキル化剤、例えばメクロレタミン、フェニルアラニン・マスタード、クロラムブシル、エチレンイミン、及びメチル・メラミン、並びにアルキルスルホネート、はいろいろな癌を治療するために用いられる。
【００５２】
[0067]  ニトロソ尿素類、例えばカルムスチン、ロムスチン、及びストレプトゾシン、はいろいろな癌を治療するのに用いられ、血液−脳関門を容易に越えることができる。
【００５３】
[0068]  シスプラチン（ジアミノ-ジクロロ-プラチナ）は、広いスペクトルの抗腫瘍活性を有するプラチナ配位錯体である。シスプラチンは反応性分子であり、DNAとタンパク質を架橋するためにDNAと鎖間及び鎖内結合を形成できる。カルボプラチンはもう一つのプラチナをベースとする抗腫瘍薬である。
【００５４】
[0069]  トリアゼン類、例えばダカルバジンやプロカルバジンは抗腫瘍アーセナルの一部である。
【００５５】
[0070]  アントラサイクリン類、例えばドキソルビシン、ダウノルビシン、及びミトキサントロンなど、抗腫瘍活性を有する抗生物質がある。その他の抗腫瘍抗生物質は、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ミトマイシンC、及びプリカマイシンなどを含む。
【００５６】
[0071]  アスパラギナーゼなど、本発明の範囲に入ると考えられる他の抗腫瘍薬がある。これらの薬、及び上記のその他の薬はすべて当業者に周知の毒性プロファイルを有する。
【００５７】
[0072]  本発明で用いることができる他の治療薬としては、シクロホスファミド（サイトキサン）、メルファラン（アルケラン）、クロラムブシル（ロイケラン）、カルムスチン（BCNU）、チオテパ、ブスルファル（マイレラン）；グルココルチコイド類、例えばプレドニゾン／プレドニソロン、トリアムシノロン（ベタログ）；その他のタンパク質／DNA／RNA合成阻害剤、例えばデカルバジン（DTIC）、プロカルバジン（マチュラン）；及びパクリタキセル、などがある。
【００５８】
[0073]  一つのポリサッカライドと一緒に投与して毒性を減じたり、効力を高めたりできる治療薬の例としては次のようなものがある：抗生物質、抗ウイルス剤、及びワクチンを含む抗感染薬、抗腫瘍薬、抗不整脈薬や抗高血圧薬などの心臓血管薬、中枢神経系薬、例えば鎮静剤、食欲抑制薬、抗痙攣薬、抗炎症薬とトランキライザー、など、OTICS、眼科薬、抗潰瘍薬や抗コリン作用薬などの胃腸薬、ホルモン、呼吸器薬、例えばアレルギー医薬、気管支拡張薬、鼻炎薬、局所施用薬、及びビタミン類とミネラル類。
【００５９】
[0074]  理論によって束縛されることは望まないが、５-ＦＵなどの治療薬との混合物におけるガラクトマンナンなどのポリサッカライドの有益な効果を説明できる三つの可能なメカニズムがある。一つは、薬とガラクトマンナンの間の直接の物理的相互作用に関わるものである。例えば、ガラクトマンナンが標的細胞の表面におけるガラクトース特異的な相互作用の結果として癌細胞の膜の流動性と透過性を高めるという可能性である。こうしてポリサッカライドは薬を標的に送達するための効果的なビークルという役目を果たすことができる。さらに、ガラクトマンナンは、腫瘍細胞の凝集と正常細胞への付着を阻害するように作用して癌が転移できなくなる可能性もある。ポリマー−薬複合体が、ポリサッカライドがその構造と組成によって認識する腫瘍の中に入ると、ポリサッカライドは抗癌剤を放出する。治療薬の毒性は、ポリマーに結合している限り薬が不活性であるから減少する。ポリマー−薬複合体が腫瘍の中に入ると、ポリサッカライドは治療薬を放出しうる。
【００６０】
[0075]  ガラクトマンナンなどのポリサッカライドのもう一つの作用モードは、生物システムにおける何らかの調節部位との相互作用、例えばその部位がガラクトース特異的な残基、例えばガレクチン、によって支配される場合の相互作用に関わる。さらに別の可能な作用モードは、ある化学構造（ある一定のMan:Gal比）及びある一定のサイズ（分子量）を有するポリサッカライドが体からの治療薬の急速な排出に与っている酵素システムに及ぼす阻害効果に関わり、したがって、その薬の体内での生物的利用可能性を高め平均滞留時間を延ばし、癌治療におけるその薬の治療プロファイルを改善する。
【００６１】
[0076]  ある特定の態様では、ポリサッカライドはガラクトマンナンである。ガラクトマンナンを含む組成物の利用は化学療法に対する患者の応答を高める直接的な効果がある。例えば、一つの効果は、有効な化学療法のために必要な治療薬の用量の減少である。それは、ここで例示した、それだけに限定されないが、アドラマイシン、５-ＦＵ、イリノテカン、及びシスプラチン、などの化学療法薬の毒性を減少させることによって患者に直ちに有益な効果を及ぼすことができる。
【００６２】
[0077]  ガラクトマンナンは様々な天然の源、例えば植物や微生物の源、から得られる。このポリサッカライドは、また、合成して作ることもできる。ガラクトマンナンはキャロブガム（セロトニア・シリクア（Ceratonia siliqua））、グアルガム（シアンポシス・テトラゴノロバ（Cyamopsis tetragonoloba））、及びハニーローカスト（グレディストシア・トリカントス（Gleditsia triacanthos））から誘導することができ、これらが市販されているガラクトマンナン類の例である。
【００６３】
[0078]  ガラクトマンナンはマンノースとガラクトースを含むポリマーである。単離されたポリサッカライドで得られるマンノースのガラクトースに対する比はガラクトマンナンの源及び用いる単離手順によって異なり、普通は１〜４の範囲にある。
【００６４】
[0079]  ポリサッカライドであるガラクトマンナンはいろいろなサイズ範囲で見られるポリマーである。例えば、ガラクトマンナンは分子量が約20,000〜約600,000 Dという範囲でありうる。ガラクトマンナンのサイズは約90,000〜約415,000 Dという範囲でありうる。さらに、ガラクトマンナンは誘導体化又は加水分解することができ、例えば4000〜60,000という範囲にある天然分子の断片が得られる。
【００６５】
[0080]  本発明のある実施態様では、癌などの疾病を治療する方法であって、対象に１以上のポリサッカライドと１以上の化学療法薬の混合物を医薬として許容される製剤で投与するステップを含み、そのポリサッカライドがいろいろな源からのガラクトマンナン類から成る群から選択されることを特徴とする方法が提供される。この医薬製剤は、それを必要とする患者に、当業者に公知の何らかの許容される仕方で投与される。この実施態様のある態様では、成分、すなわちポリサッカライドと医薬、は対象に別々に投与することができる。
【００６６】
[0081]  この実施態様のポリサッカライド成分は、本明細書において示される方法を用いて調製することができる。例えばガラクトマンナンが本実施態様の成分の一つである場合、それはグアルガムから抽出することができ、グアルガム自身はシアンポシス・テトラゴノロバ（Cyamopsis tetragonoloba）の種子から得られる。
【００６７】
[0082]  ポリサッカライドが調製されたら、それは粉末、又は水溶液で、例えば生理食塩水中で貯蔵することができる。他の許容される生理的溶液も用いることができる。医薬製剤は、調製されたポリサッカライドと１以上の医薬品を用いて形成できる。ポリサッカライド治療薬IVの用量は10〜200 mg/kgの範囲とすることができ、通常、治療効能が最良になるように化学療法薬の最適治療用量に合わせて最適化される。５-ＦＵの場合、最適用量（マウスにおける）は30〜150 mg/kgで最良の結果は約120 mg/kgで得られるということが確立されている。しかし、他の化学療法では異なることがある。本発明の組成物の投与に用いることができる医薬担体は当業者には周知である。
【００６８】
[0083]  投与経路としては、経口、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内、などがある。投与経路は、組成物を良好な医学的なやり方に矛盾しない仕方で対象に導入するのに十分などんな経路であってもよい。これらのいろいろな投与経路は当業者に周知である。
【００６９】
[0084]  本発明の別の実施態様では、一つのポリサッカライドと１以上の化学療法薬の混合物がそれを必要とする対象に投与され、混合物は十分な量のポリサッカライドと化学療法薬を、対象における有毒な副作用を減らし、目的とする特定病理に対して効果的である適当な比で含み、ポリサッカライドはいろいろな植物源からのガラクトマンナン類、（ラリックス・オシデンタリス（Larix occidentalis）由来の）アラビノガラクタン、（ポテト由来の）ラムノガラクツロナン、（ユーケウマ・シーウィード（Eucheuma seaweed）由来の）カラギーナン、及び（セラトニア・シリクア（Ceratonia siliqua）由来の）ローカスト・ビーン・ガムから成る群から選択される。有毒な副作用は、ポリサッカライドを欠いた化学療法薬の投与から生ずる対象が自覚する生理的影響（症状）と定義される。したがって、十分な量のポリサッカライドとは、本明細書では、医薬品の投与から生ずる有毒な副作用を最小にする又は軽減するのに必要な量を意味すると理解される。
【００７０】
[0085]  本発明の別の実施態様では、１以上のポリサッカライドと有効な用量の化学療法薬の混合物を医薬として許容される製剤で含む医薬製剤が提供され、ポリサッカライドは植物源からのガラクトマンナン類から成る群から選択される。ある態様では、製剤中の混合物はある分量の１以上のポリサッカライドと化学療法薬を、癌を効果的に治療するため、並びに対象における有毒な副作用を減らすために適当な比で含む。別の態様では、混合物はある分量の１以上のポリサッカライドと化学療法薬を、癌を治療するための化学療法の効果の効力を高めるのに適当な比で含む。本発明のさらに別の態様では、それを必要とする患者における癌を治療する方法であって、１以上のポリサッカライドと有効な用量の化学療法薬の混合物を、化学療法薬が対象に対して高められた治療効力と減少した毒性を有するように剤形された形で投与することを含む方法が提供される。
【００７１】
[0086]  本発明の同定された化合物はいずれも、ヒトを含めた対象に、それだけで投与することも、又は医薬組成物として、本明細書で述べることで特徴づけられる疾病を含むいろいろな障害を予防、治療、又は改善するのに治療的に有効な用量で適当な担体又は賦型剤と混合して投与することもできる。治療的に有効な用量とは、さらに、そのような障害と関連した症状の予防又は改善を生ずるのに十分な化合物の量を指す。本発明の化合物の製剤と投与の技術は、Goodman and Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics, Pergamon Press, latest edition,に見出される。
【００７２】
[0087]  本発明の化合物は、特定部位に直接注入することによってその部位を標的にすることができる。中枢神経系に使用するように設計された化合物は、血液−脳関門を越えることができるか、又は局部注入による投与に適したものでなければならない。
【００７３】
[0088]  本発明で用いるのに適した医薬組成物は、活性成分が意図する目的を達成するために有効な量で含まれる組成物を含む。さらに具体的に、治療的に有効な量とは治療している対象に存在する症状と根底にある病理の進展を阻止する又は軽減するのに有効な量を意味する。有効量の決定は十分に当業者の能力の範囲内にある。
【００７４】
[0089]  本発明の方法で用いられる化合物に関して、治療的に有効な用量は、最初は細胞培養の分析から推定できる。例えば、動物モデルにおいてある用量を剤形して、細胞培養で決定されたIC50（50%の細胞が所望の効果を示す用量）を含む血中濃度の範囲を実現することができる。その情報を用いてヒトで用いられる用量をより正確に決定できる。
【００７５】
[0090]  治療的に有効な用量とは、対象における症状の軽減又は生存期間の延長を生ずる化合物の量を指す。そのような化合物の毒性と治療的効力は、細胞培養又は実験動物について標準的な薬理学手順によって、例えばLD50（ある与えられた集団の50%に致死的な用量）及びED50（ある与えられた集団の50%に治療的に有効な用量）を決定する手順によって、決定することができる。有毒な効果と治療的効果の間の用量比が治療指数であり、これはLD50とED50の間の比として表すことができる。高い治療指数を示す化合物が好ましい。細胞培養分析及び動物研究で得られたデータを用いてヒトで用いられる用量の範囲を定めることができる。そのような化合物の用量は、毒性がほとんど全くなくED50を含む血中濃度の範囲にあることが好ましい。この範囲内で、用いる投薬形態及び利用する投与経路によって用量は異なってもよい。正確な製剤、投与経路、及び用量は、個々の医師が患者の状態を考慮して選ぶことができる。用量及び投薬間隔は個別に調整して、所望の効果を維持するのに十分な活性成分の血漿レベルが得られるようにすることができる。
【００７６】
[0091]  局所投与又は選択的な取り込みの場合、薬の実効的な局所濃度は血漿濃度と無関係なことがある。
【００７７】
[0092]  投与される組成物の量は、もちろん、治療される対象、対象の体重、病気の重篤さ、投与の仕方、及び処方する医師の判断、に依存する。
【００７８】
[0093]  本発明の医薬組成物は、それ自体は公知の仕方で、例えば、通常の混合、溶解、顆粒化、練り、乳化、カプセル封入、トラッピング、又は凍結乾燥などのプロセスによって、製造することができる。
【００７９】
[0094]  本発明に従って用いられる医薬組成物は、活性化合物を医薬的に使用できる製剤に加工するのを助ける賦型剤及び補助剤を含む１以上の生理的に許容される担体を用いて通常の仕方で剤形することができる。適切な製剤の仕方は選ばれる投与経路に依存する。
【００８０】
[0095]  注射の場合、本発明の物質は水溶液で、好ましくは生理的に共用できるバッファー、例えばハンクス液、リンゲル液、又は生理食塩水バッファー、で剤形することができる。経粘膜投与の場合、透過すべきバリアに適した浸透剤が製剤に用いられる。そのような浸透剤は一般に当業者には公知である。
【００８１】
[0096]  経口投与の場合、化合物は、当業者に周知の医薬として許容される担体で活性化合物を結合することによって容易に製剤できる。そのような担体によって本発明の化合物は、錠剤、ピル、糖衣丸、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液、などに、治療される対象によって経口嚥下されるように剤形することができる。経口使用される医薬製剤は、固体賦型剤を用い、オプションとして得られた混合物をすりつぶし、望むならば適当な補助剤を加えた後、顆粒混合物を加工して錠剤又は糖衣丸の核にする。適当な賦型剤としては、特に、ラクトース、スクロース、マンニトール、又はソルビトール、を含む砂糖などの充填剤；セルロース調剤、例えばトウモロコシ・スターチ、コムギ・スターチ、ライス・スターチ、ポテト・スターチ、ゼラチン、ガム・トラガカント、メチル・セルロース、ヒドロキシプロピル・メチルセルロース、ナトリウム・カルボキシメチルセルロース、及び／又はポリビニルピロリドン（PVP）、などがある。望む場合、崩壊剤、例えば架橋ポリビニルピロリドン、寒天、又はアルギン酸又はその塩、例えばアルギン酸ナトリウム、など、を加えることができる。
【００８２】
[0097]  糖衣丸の核には適当なコーティングが施される。このために濃縮された砂糖溶液が用いられ、オプションとしてアラビアガム、タルク、ポリビニル・ピロリドン、カルボポルゲル、ポリエチレングリコール、及び／又は二酸化チタン、ラッカー液、及び適当な有機溶媒又は溶媒混合物、も含むことができる。色素又は染料を、同定のため又は活性化合物用量の異なる組み合わせを特徴づけするために、錠剤又は糖衣丸コーティングに加えることができる。
【００８３】
[0098]  経口使用できる医薬製剤は、ゼラチンから作られるプッシュフィット・カプセル、並びにゼラチンと可塑剤、例えばグリセロールやソルビトールから作られるソフトな、密封されたカプセルを含む。プッシュフィット・カプセルは、活性成分を、ラクトースなどの充填剤、スターチなどの結合剤、及び／又はタルクやステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、及び場合により安定剤と混合した形で含むことができる。ソフト・カプセルでは、活性化合物を適当な液体、例えば油脂、液体パラフィン、又は液体ポリエチレングリコール、などに溶解又は懸濁させることができる。さらに、安定剤を加えることもできる。経口投与されるすべての製剤はそのような投与に適当な用量でなければならない。
【００８４】
[0099]  口腔投与の場合、組成物は通常の仕方で剤形された錠剤又はロゼンジという形態をとることができる。
【００８５】
[00100]  吸入による投与の場合、本発明に従って用いられる化合物は加圧されたパック又は噴霧器から適当な噴射剤、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロメタン、二酸化炭素、又はその他の適当な気体を用いてエアロゾル・スプレー噴射の形で好適に送達される。加圧エアロゾルの場合、用量ユニットは計量された量を送達する弁を設けることによって決定することができる。例えば、吸入器又は注入器で使用されるゼラチンのカプセル及びカートリッジを化合物の混合粉末及びラクトース又はスターチなどの適当な粉末基剤を含むようにして剤形することができる。
【００８６】
[00101]  この化合物は、注射による非経口投与、例えばボーラス注射、又は連続輸液用に剤形することができる。注射用の製剤は単位投薬形態で、例えばアンプル又は複数用量の容器で、防腐剤を加えて提供される。組成物は、油性又は水性溶媒での懸濁液、溶液、又はエマルジョンの形をとることができ、懸濁、安定化、及び／又は分散剤などの製剤物質を含むことができる。
【００８７】
[00102]  非経口投与のための医薬製剤には、水溶性の形の活性化合物の水溶液がある。さらに、活性化合物の懸濁液も適当な油性注射懸濁液として調製できる。適当な親油性溶媒又はビヒクルとしては、ゴマ油などの脂肪油、又は合成脂肪酸エステル、例えばオレイン酸エチル又はトリグリセリド、又はリポソームなどがある。水性の注射用懸濁液は、懸濁液の粘度を高める物質、例えばナトリウム・カルボキシメチル・セルロース、ソルビトール、又はデキストランを含むことができる。場合により、懸濁液はまた、適当な安定化剤又はきわめて濃縮された溶液を調製できるようにするために化合物の溶解度を高める物質を含むことができる。
【００８８】
[00103]  或いは、活性成分は、適当なビヒクル、例えば無菌パイロジェン・フリー水で溶かして構成するための粉末形態であってもよい。
【００８９】
[00104]  化合物はまた、例えばココアバターやその他のグリセリドなどの通常の座薬基剤を含む座薬又は滞留浣腸などの直腸用組成物に剤形することもできる。
【００９０】
[00105]  前述のような製剤の他に、化合物はまた、デポー製剤に剤形することもできる。このような長時間作用する製剤は、（例えば、皮下へ、又は筋肉内への）埋め込みによって又は筋肉内注射によって投与することができる。したがって、例えば、化合物は適当なポリマー又は疎水性物質によって（例えば許容される油中のエマルジョンとして）、又はイオン交換樹脂によって、又は難溶性の誘導体、例えば難溶性の塩として剤形することができる。
【００９１】
[00106]  本発明の疎水性化合物のための医薬担体は、ベンジル・アルコール、非極性界面活性剤、水に混合可能な有機ポリマー、及び水性相を含む共溶媒系ある。もちろん、共溶媒系の比率は溶解度と毒性の特性を壊すことなくかなり変えることができる。さらに、共溶媒成分の内容も変えることができる。
【００９２】
[00107]  或いは、疎水性医薬化合物のための他の送達システムを用いることもできる。リポソームとエマルジョンは疎水性の薬の送達ビヒクル又は担体として良く知られている例である。ジメチルスルフォキシドなど、いくつかの有機溶媒を用いることもできるが、通常は毒性が強くなるというコストを払わなければならない。さらに、化合物は持続放出システム、例えば治療薬を含む固体疎水性ポリマーの半透過マトリックスなど、を用いて送達することもできる。いろいろな持続放出用の物質が確立されており、当業者に周知である。持続放出カプセルは、化学的性質によるが、化合物を数週間から100日以上にわたって放出することができる。治療薬の化学的性質と生物的安定性によっては、タンパク質の安定化のための更なる戦略も用いることができる。
【００９３】
[00108]  医薬組成物は、また、適当な固相又はゲル相の担体又は賦型剤を含むことができる。そのような担体又は賦型剤の例としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、いろいろな砂糖、スターチ、セルロース誘導体、ゼラチン、及びポリエチレングリコールなどのポリマーなどがあるが、それだけに限定されない。
【００９４】
[00109]  本発明の化合物の多くは、医薬的に適合性を有する対イオンによる塩として提供できる。医薬的に適合性を有する塩は、多くの酸、例えば非限定的に、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸などによって形成でき、塩は、水性溶媒又は対応する遊離塩基形態であるプロトン性溶媒に溶けやすい傾向がある。
【００９５】
[00110]  適当な投与経路は、例えば、経口、直腸、経粘膜、経皮、又は腸への投与；非経口送達、例えば筋肉内、皮下、髄内注射、並びに、くも膜下、直接心室内、静脈内、腹腔内，鼻内、又は眼球内注射、などがある。
【００９６】
[00111]  あるいはまた、化合物を全身的ではなく局所的に、例えば病んでいる部分に化合物を直接に、しばしばデポー剤又は持続放出製剤で注入することによって投与することができる。
【００９７】
[00112]  さらに、化合物を薬剤標的送達システムによって、例えば病んでいる細胞に特異的な抗体でコーティングしたリポソーム中で、投与することもできる。リポソームはその細胞を標的し、その細胞に選択的に取り込まれる。
【００９８】
[00113]  組成物は、望むなら、活性成分を含む１以上の単位投薬形態を含むパック又はディスペンサー・デバイスで提供することができる。パックは、例えばブリスター・パックなど、金属又はプラスチック・ホイルから成るものであってもよい。パック又はディスペンサー・デバイスには、投与のための説明書を添付することができる。適合性を有する医薬担体中に剤形された本発明の化合物を含む組成物が製造されて、適当な容器に入れ、ラベルを付けて治療される病状を記すことができる。ラベルに記された適当な病状として、ここで述べたような疾病の治療を含めることができる。
【００９９】
[00114]  医薬として許容される担体が典型的な製剤に普通加えられる。例えば、経口製剤では、ヒドロキシプロピル・セルロース、コロイド状二酸化シリコン、炭酸マグネシウム、メタクリル酸共重合体、スターチ、タルク、糖スフィア、スクロース、ポリエチレングリコール、ポリソルベート80、及び二酸化チタン：クロスカルメローズ・ナトリウム、食用インク、ゼラチン、ラクトース・モノホドレート、ステアリン酸マグネシウム、ポビドン、ラウリル硫酸ナトリウム、カルヌバ・バックス、クロスポビドン、ヒドロキシプロピル・メチルセルロース、ラクトース、微結晶セルロース、その他の成分を用いることができる。例えば、ガラクトマンナンは非液体形態である物質の経口送達の担体として用いられている。米国特許第4,447,337号;第5,128,143号;及び第6,063,402号を参照のこと。これらの教示は本明細書中に援用される。
【実施例】
【０１００】
実施例１
ガラクトマンナンの構造
[00114]  本発明のガラクトマンナン・オリゴマーはポリサッカライドである。ある態様では、その平均分子量は約48,000 Dである。本発明のガラクトマンナンの許容される化学名称と構造式を下に示す。立体化学形態も示されている。
【０１０１】
[00115]  正式化学名称：(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合-β-Ｄ-マンノピラノース)10)12)
[00116]  骨格は線状の(1→4)-β-Ｄ-マンノピラノシル・ユニットから成り、それに単一のβ-Ｄ-ガラクトピラノシルが下に示すように(1→6)結合によって結合されている：
【化１】
2007505041.tif 000003
【０１０２】
[00117]  図２は、核磁気共鳴（ＮＭＲ）によって決定された本発明のガラクトマンナン・ポリサッカライドの構造を示す。本発明のガラクトマンナンが、カロブ（Carob）（ローカストビーン）ガム由来のガラクトマンナンと比較された。二つの主糖残基はマンノース（Man）とガラクトース（Gal）であるが、それは、それぞれ４．８p.p.m.にある二つのピーク（ダブレット）から容易に同定される。Man／Galの比は、グアルガム由来のガラクトマンナン（本発明のガラクトマンナン）では１．７：１であり、カロブガム（セラトニア・シリクア（Ceratonia siliqua））由来のガラクトマンナンでは４：１である。
【０１０３】
[00118]  図３は、本発明のグアルガムからのガラクトマンナンのFourier Transform 1H-ＮＭＲスペクトルを示す。ガラクトースのアノマー・プロトンのシグナルは約４.９ ppmに現れる（ダブレット）。マンノースのアノマー・プロトンのシグナルは約４.６ ppmに現れる（広いシグナル）。シグナルは、遊離したモノサッカライドのシグナルから完全に分離している；ガラクトースのαプロトンは５．１ppmに、そしてβは４．５ppmにあり、マンノースのαは４．８ppmに、そしてβは５．０ppmにある。マンノース・ユニットのガラクトース・ユニットに対する比は、この作業標準について１.７と容易に計算できる。
【０１０４】
[00119]  図４は、本発明のガラクトマンナンの１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示し、化学シフトの詳しい位置とその強度を示している。この研究は、ガラクトマンナンに関する上記の化学構造を裏付ける。
【０１０５】
[00120]  図４は以下のことを示す：
[00121]  １）ＮＭＲスペクトルには３つの糖、すなわち、β-Ｄ-ガラクトピラノシル、４-Ｏ-β-Ｄ-マンノピラノシル（非置換）、及び４,６‐ジ‐Ｏ‐β‐Ｄ-マンノピラノシル（置換）のすべてが見られる。３つの糖全部で、Ｃ１からＣ６までからのシグナルは、それぞれＧ１からＧ６まで、Ｍ−１からＭ−６まで、及びＧＭ−１からＧＭ−６までであり、図に示されている（Ｇ−２とＧ−４、Ｍ−１とＧＭ−１、Ｍ−２とＧＭ−２、Ｍ−３とＧＭ−３、Ｍ−４とＧＭ−４の位置はそれぞれのペア内で一致している）。
【０１０６】
[00122]  ２）ＮＭＲスペクトルにおけるガラクトースのシグナルの位置は、遊離ガラクトピラノースの炭素原子の位置に対応し、ガラクトマンナンのGalユニットの位置に置換基が存在しないという証拠を与える。
【０１０７】
[00123]  ３）あるマンノースの残基の置換基は、Ｃ−６に位置する（“通常”の非置換メチレン炭素について６３．６ p.p.m.から、６９．６ p.p.m.である“置換された”メチレン炭素へのシグナル・シフト、並びに隣接するＣ−５シグナルの“通常”７８ p.p.m.から76.4 p.p.m.へのシフトが起きているためである）；63.6 p.p.m.の メチレン炭素に関するシフトは良く調べられている。
【０１０８】
[00124]  ４）ガラクトース残基のＣ−１は、ガラクトシド結合の形成に関わる（遊離ガラクトースのＣ−１に比べて、ＮＭＲスペクトルにおけるものは低フィールド・シフト+６．５ p.p.m.を有しているためである）。
【０１０９】
[00125]  ５）マンノース残基は互いに“ヘッド・トゥ・テイル”で結合して(１→４)骨格鎖を形成する。
【０１１０】
[00126]  ６）置換された、Man(Gal)-Man、Man-Man(Gal)、及びMan(Gal)-Man(Gal)と共に置換されないMan-Manペアが存在する；グアルガム、カロブガム、及びクローバー種子からのガラクトマンナンのＮＭＲスペクトルは、Ｃ−４ (Man)共鳴（３つのピークに分かれている）の領域で、高フィールドでの最高のピーク（非置換Man-Manペアに対応する）がカロブガムからのガラクトマンナンで観測され（Man/Gal=3.8）；最低のピークはクローバー種子からのガラクトマンナンに対応し（Man/Gal=1.4）；中間のピークが本発明のガラクトマンナン（グアルガムからのガラクトマンナン、Man/Gal=1.7）に対応することを示す。
【０１１１】
[00127]  ７）本発明のガラクトマンナン（グアルガムからのガラクトマンナン）におけるマンノースのガラクトースに対する比は1.7であった（これは、マンノースとガラクトースのC-1シグナルの積分強度比であり、またC-4 (Man)共鳴から測定される置換されないMan残基と置換されたMan残基の二つの周波数からも計算された）。
【０１１２】
[00128]  ８）非置換Man-Manペアの相対周波数は22%、Man(Gal)-ManとMan-Man(Gal)は全体で48%、全く置換されたペアMan (Gal) - Man(Gal) の比は30%であった（それぞれ３つの線／ピークに分かれたC-4シグナルの強度から）。
【０１１３】
[00129]  図５は、HPLC-MALLS（高性能液体クロマトグラフィー／屈折率−多重角度レーザー光散乱）による本発明のガラクトマンナンの定量と分子量を示す。
【０１１４】
[00130]  ゲル透過クロマトグラフィー（GPC）分離法を用いる高性能液体クロマトグラフィー（HPLC）（サイズ排除クロマトグラフィー（SEC）とも呼ばれる）は、ポリマーの特性決定のための確立された方法である。GPCを多重角度レーザー光散乱（MALLS）及び屈折率（RI）検出と組み合わせると、炭水化物ポリマーの絶対分子量を決定するための強力なツールになる。光散乱検出を用いると時間がかかるGPCシステムのコンフォメーションに依存する校正の必要がなくなる。古典的なGPCに比べたGPC-MALLSのもう一つの利点は、分子量の他に、溶液中の半径とコンフォメーションに関する追加情報をフォローできることである。
【０１１５】
[00131]  GPC-MALLS法の原理は、光が小さな分子よりも大きな分子によって強く散乱されるという事実に基づいている。クロマトグラフィーを運転している間に、MALLS検出器がレーザー光の光散乱を15の異なる角度に置かれた検出器で測定する。光散乱検出器の出力は、巨大分子の濃度と分子量の積に比例する。したがって、光散乱ピークの形は対称である。さらに、これはRIピークと一致しない。RI検出器のシグナルは濃度だけに比例するからである（図５を参照のこと）。どの溶出時刻においても、カラムから溶出するポリマーの分子量はMALLSとRIシグナルの商から計算できる。分子量 対 溶出体積のグラフが得られ、（平均）分子量と分子量分布を計算できる。
【０１１６】
[00132]  本発明者らは、本発明のR&D及びスケールアップ段階にわたって、薬物質の定量化と分子量の平均と分布を測定するためにGPC/IR-MALLS法を応用した。MALLS分析の利用によって、“古典的GPC”によるMW推定に干渉する多くの因子が除去される。GPC分離は分子量よりもむしろ流体力学的な体積の差に基づいている。分子コンフォメーション、例えばデキストランにおける枝分かれの差が流体力学的な体積に強く影響する。第二に、正又は負に帯電したポリマーのGPC溶出は、静止相による斥力又は引力のため理想的ではないかもしれない。GPC-MALLS結果はこれらのクロマトグラフィーの欠点に影響されず、絶対分子量が得られる。
【０１１７】
[00133]  本発明のガラクトマンナンのHPLC溶出プロファイルの二重モニタリングを用いることで二つの重要な化学的な特性が得られる、すなわち、屈折率シグナルの定量的測定と多重角度レーザー光散乱（MALLS）検出器による絶対分子量である。さらに、これらのクロマトグラムは、本発明のガラクトマンナンの分子安定性と崩壊誘導体についてのデータを提供できる。
【０１１８】
実施例２
[00134]  精製及び製造プロセス
[00135]  図５には、本発明のガラクトマンナンの精製及び製造プロセスの一例のフローチャートが示されている。高品質のグアルガムが1%で2時間４５℃の温水中に溶解される。ｐＨは１Ｍ・ＨＣｌによって２．２にされ、溶液は９５℃で〜２時間加熱される。次に、ｐＨは１Ｍ・ＮａＯＨによって５．８に調整される。次に、溶液は２０℃に冷却され、ガラス・フィルターで濾過される。次に、ＣｕＳＯ４／Ｎａ−Ｋ酒石酸塩が加えられ、沈澱が２００メッシュのフィルターで集められ、水で洗浄され、９６％ＥｔＯＨ中の５％ＨＣｌで洗浄される。次に、７５％ＥｔＯＨで、そして９６％ＥｔＯＨで二回洗浄される。最後に、真空凍結乾燥されて白色固体となる。容易に入手できる源（例えば、グアルガム）からのガラクトマンナンが、プロセス最適化と製造のために選ばれた。可溶なガラクトマンナン・オリゴマーが、効力及び全体的な毒性減少に関してin vivoで（動物で）テストされた。
【０１１９】
[00136]  上述のプロセスは、保証されたプレミア・グアルガム粉末（Cyamopsis tetragonolobaの種子由来の）からガラクトマンナン（GM）のきわめて可溶なオリゴマーという形の製品を生成する。このプロセスは、きわめて純粋で均一なオリゴマーを生成するように設計され、その平均分子量は約48,000ダルトンの程度であり、マンノース対ガラクトース比は約1:7の程度である。このプロセスは、次の４つの主要段階を含む：すなわち、制御された解重合によって所望のガラクトマンナン・オリゴマーを生成するステップ、及び３つの精製ステップ、すなわち、不溶不純物の除去、水溶性不純物の除去、有機可溶不純物の除去、そして最後に、凍結乾燥によって純粋で安定した形態のガラクトマンナン粉末を生成する。
【０１２０】
[00137]  ガラクトマンナンは一回使用バイアルに無菌濃縮溶液としてパッケージされて送給することができるが、バルクのガラクトマンナンは粉末として製造して貯蔵することができる。ガラクトマンナン薬製品は、医薬製剤の活性成分となる5-フルオロウラシルなどの医薬と一緒にして投与することができる。薬製品は輸液用の通常の生理食塩水（水中で約0.9Ｍの塩化ナトリウム）を含み、約6.5というpHを有する。
【０１２１】
実施例３−５
[00138]  効力研究
[00139]  本発明のガラクトマンナンは、マンノース骨格に露出したガラクトース部分が結合して成るガラクトマンナン誘導体である。この化合物は、一般に細胞表面に存在するガラクトースと結合するレクチン又はガレクチンと相互作用すると考えられる。レクチンは、炭水化物と結合するタンパク質であって、普通細胞表面に存在し、いろいろなタイプの細胞相互作用を媒介する。レクチンは、植物及び動物組織における、及び腫瘍細胞系統における、多くの生物的認識事象を媒介するということが一般に受け入れられている。レクチンは、細胞−細胞の付着に、そして細胞外マトリックスの組織にある役割を演じている。細胞表面で、レクチンは選択的細胞付着及び細胞移動、循環する糖タンパク質の認識、及び細胞−細胞及び細胞−マトリックス相互作用の修飾、に関与する受容体として働くことができる。ガレクチンは、β-ガラクトシドと結合するレクチンのファミリーの一員であり、関連したアミノ酸配列を有する。ガレクチンとレクチンは、癌細胞表面でそれらと相互作用すると言われる多くの実験物質（モノクローナル抗体、単糖、及びペクチンなどのポリサッカライド）の標的にされてきた。これらの物質のいくつかは、腫瘍細胞コロニーの発展を阻害することが示されている。
【０１２２】
[00140]  本発明のガラクトマンナンは、かなり単純で比較的規則的な構造のために、多くの知られているポリサッカライドと異なり、はっきりと識別でき特徴づけられる。その露出したガラクトース残基はレクチンやガレクチンなどの生物的標的と容易に相互作用してシグナルの導入、細胞−細胞相互作用、又はその他の機能を変調することができる。このようにして、それはガレクチン（又はその他の受容体）の作用をブロックし、その特異的（又は非特異的）リガンドと競合することができる。５-ＦＵと組み合わされて投与されると、本発明のガラクトマンナンは、その詳しいメカニズムはまだはっきりしていないが、結腸直腸癌の動物モデルで５-ＦＵの抗腫瘍効果を高める。
【０１２３】
[00141]  40年以上にわたって、5-フルオロウラシル（５-ＦＵ）は、転移性結腸直腸癌の治療で、標準の第一選択薬として、単独で、又は他の物質と組み合わせて用いられてきた。いろいろな可溶ガラクトマンナン・オリゴマーによる予備的な動物研究は、５-ＦＵとマンノース対ガラクトース比が1:7であるガラクトマンナンとの組み合わせ治療に対して期待できる応答を示した。
【０１２４】
[00142]  腫瘍になったマウスにおける本発明のガラクトマンナンの単独での、又は５-ＦＵと組み合わせたときの効果を評価するために三種の非臨床薬理研究が行われた。ヒト結腸腫瘍COLO205が移植された胸腺欠損MCr-nuマウスでの二つの別々の研究の結果は、本発明のガラクトマンナンが５-ＦＵの抗腫瘍作用を増強することを示した。
【０１２５】
実施例３
[00143]  ガラクトマンナンの存在下で抗腫瘍剤５-ＦＵが投与されたときの腫瘍増殖のより大きな減少
[00144]  この研究では、胸腺欠損MCr-nuマウス中のヒト結腸腫瘍COLO205を用いて、５-ＦＵの静脈内注射が腫瘍の増殖を顕著に減少させることが示された。この研究の結果は図７にまとめられている。しかし、本発明のガラクトマンナンが120 mg/kg/日 (360 mg/m2)で上記用量の５-ＦＵと組み合わせて投与されると、腫瘍の増殖は平均腫瘍サイズでも増殖率でもさらに減少した。腫瘍重量が４倍になるのに必要な時間は、５-ＦＵ単独での23.5日から本発明のガラクトマンナン／５-ＦＵ組み合わせで56.0日に増加し、これに対して対照（治療しない）動物では12.5日であった。この研究の結果は図８にまとめられている。二つの研究は次のように行われた。
【０１２６】
[00145]  シアモプシス・テトラゴノロバ（Cyamopsis tetragonoloba）由来のガラクトマンナンが、４日に１回、静脈内に（i.v.）120 mg/kg/投与（mg/kg/投与）（（360 mg/m2/投与）という用量で、全部で３回の注射（q4d x 3）で投与、又は同じq4d x 3という治療スケジュールで120 mg/kg/投与のGM及び75 mg/kg/投与（225 mg/m2/投与）の５-ＦＵという用量で５-ＦＵと共に一つの注射で同時投与された。５-ＦＵは単独で、q4d x 3という治療スケジュールで75 mg/kg/投与（225 mg/m2/投与）の５-ＦＵという用量でi.v.で投与された。５-ＦＵは各治療日において新たに3.75 mg/mLという濃度で、pH 9.2にて生理食塩水中に剤形された。GMと５-ＦＵが同時投与されるグループでは、GM粉末が５-ＦＵ溶液に溶解されて、6 mg/mLのGM濃度と3.75 mg/mLの５-ＦＵ濃度の溶液にした。個々の化合物もそれらの混合物も、正確な体重に従って投与され、注射体積は、0.2 mL/10 g体重であった。
【０１２７】
[00146]  全部で４つのグループがあり、それぞれ10匹の動物がおり、COLO 205ヒト結腸腫瘍移植片がs.c.埋め込みされた。グループは、腫瘍の埋め込みから13日後にq4d x 3というスケジュールで次のように治療された：１）生理食塩水（NaCl, 0.9%）、２）５-ＦＵ（75 mg/kg/投与）、３）GM (120 mg/kg/投与)、４）５-ＦＵ (75 mg/kg/投与) + GM (120 mg/kg/投与)。
【０１２８】
[00147]  対照である治療されない腫瘍はすべてのマウスで良く増殖し、腫瘍体積が４倍になるまでの中央値は12.5日であった。研究の56日以後、腫瘍の退縮はなく、実際に腫瘍の縮小は何もなかった。腫瘍体積の中央値は、治療（この場合生理食塩水のみ）の開始時の111 mm3から5-8週後の2058 mm3に増加した。平均生存時間は14.2日であった。
【０１２９】
[00148]  ５-ＦＵの用量75 mg/kg/投与（すなわち、8日で全用量225 mg/kg）は、最大許容用量を超えており、２週以内に10匹中3匹の治療関連死亡を生じた。治療は腫瘍体積が４倍になるまでの中央値を、12.5日から23.7日に遅延させた。やはり、研究の56日以後、腫瘍の退縮はなかった；しかし、治療の開始時に各75 mm3で研究の最後では126 mm3と567 mm3に増加した二つの比較的小さな腫瘍があった。腫瘍体積の中央値は治療の開始時の101 mm3から56日の研究の後に2254 mm3に増加した。平均生存時間は14.2 日（対照、治療しないマウス）から23.7日になった。
【０１３０】
[00149]  GMは、q4d x 3というスケジュールで120 mg/kg/投与という用量で単独で投与された場合は十分に許容される。死亡や体重減少は何も観測されなかった。腫瘍体積が4倍になるまでの中央値は15.5日であったが、これは治療されなかったマウスに関する値（12.5日）よりも少し長い。研究の56日以降、腫瘍の退縮はなかったが、二つの比較的小さな腫瘍（腫瘍体積の中央値に比べて）が、治療開始時の100 mm3と126 mm3から、研究の最後には270 mm3と729 mm3に、それぞれ増加したことが観測された。腫瘍体積の中央値は、治療開始時の100 mm3から56日の研究の後に1813 mm3に増加したが、これは治療されなかったマウスの2058 mm3及び５-ＦＵで（75 mg/kg/投与）治療されたマウスに比べて著しく小さい。平均生存時間は、14.2日（対照、治療されなかったマウス）から19.2日に延びた。
【０１３１】
[00150]  q4d x 3というスケジュールでのGM (120 mg/kg/投与)と５-ＦＵ (75 mg/kg/投与)の同時投与は著しい効果をもたらした。これは腫瘍体積が４倍になるまでの時間を、治療されないマウス（対照）の12.5日及び５-ＦＵだけとGMだけの、それぞれ23.7日と15.5日から、それらの組み合わせの場合の56.0日に顕著に遅らせた。研究の最後に完全に消滅した腫瘍が一つあった。この腫瘍は、最初の75 mm3から、最初の注射の３日後には126 mm3になり、第二回及び第三回の注射の後で144 mm3になり、研究で二週間後にはほとんど検出できないくらいに減少し、その後完全に消失した。さらに二つの腫瘍が研究の最後には比較的小さく、対照の値の20%未満になった。全体として、腫瘍体積中央値は、治療開始時の111 mm3から56日の研究の後でもわずか379 mm3にしか増加しなかった。これは、治療されなかったマウスや５-ＦＵだけで治療されたマウスに比べて顕著に小さい値である。平均生存時間は14.2日（対照、治療されなかったマウス）及び23.7日（５-ＦＵ治療）から組み合わせ治療では44.2日に増加した。
【０１３２】
実施例４
[00151]  ガラクトマンナン／５-ＦＵとロイコボリンの適合可能性
[00152]  マウスにおけるCOLO 205腫瘍を用いた第二の研究は、ガラクトマンナン／５-ＦＵとロイコボリン（経口投与、25 mg/kg/投与）の適合可能性とガラクトマンナンの用量の6から600 mg/kg/日へ（又は18から1800 mg/m2へ）の用量の上昇を調べた。５-ＦＵとガラクトマンナンの組み合わせ（それぞれ、48 mg/kg と120 mg/kg）は、平均腫瘍サイズに関しても、腫瘍重量が４倍になるのに必要な時間に関しても最良の抗腫瘍応答を示し、５-ＦＵだけより及び５-ＦＵ＋ロイコボリンの組み合わせよりも優れていた。
【０１３３】
[00153]  実施例３で説明した研究との主な差異は、（a）ガラクトマンナンは別の源からのもので、サイズ（分子量）が異なり、Man/Gal比が異なる、（b）3回ではなく、引き続いて4回注射した、（c）テストされたガラクトマンナンの用量は一つでなく４つあった、（d）５-ＦＵは、最初の研究のように75 mg/kg/投与ではなく、48 mg/kg/投与で（i.v.）投与された、及び（e）ガラクトマンナン（i.v. 注射）がロイコボリン（強制経口投与、５-ＦＵから2時間後に投与）と、効力及び毒性に関して比較された。C. tetragonolobaからのガラクトマンナンは、4日に１回、全部で4回（q4d x 4）、120 mg/kg/投与 (360 mg/m2/投与)という用量で静脈内に（i.v.）投与された、又は同じq4d x 4治療スケジュールで５-ＦＵと一つの注射で、6, 30, 120, 及び600 mg/kg/投与 (それぞれ、18, 90, 360 及び1800 mg/m2/投与)のGMと48 mg/kg/投与 (144 mg/m2/投与)の５-ＦＵという用量で同時投与された。同じq4d x 4治療スケジュールで、５-ＦＵだけが単独で48 mg/kg/投与という用量でi.v.投与された。５-ＦＵは各治療日に新しい生理食塩水で4.8 mg/mLという濃度、pH 9.2で剤形された。GMと５-ＦＵが同時投与されるグループでは、GM粉末が５-ＦＵ溶液に溶解されて、0.6, 3.0, 12, 及び60 mg/mLのGM濃度と4.8 mg/mLの５-ＦＵ濃度の溶液にした。ロイコボリン粉末（臨床用製剤、注射用のロイコボリン・カルシウム）を注射のために水に溶かして10 mg/mLの濃度にした。各治療日にストック溶液を水で希釈して注射用に2.5 mg/mLの濃度にした。５-ＦＵとGM及びそれらの互い同士及びロイコボリンの混合物が、正確な体重によって注射で、又はp.o.体積0.1 mL/10 gの体重で、投与された。
【０１３４】
[00154]  さらに二つの組み合わせ治療グル−プも研究に含められた。一つのマウス・グループは、５-ＦＵ（48 mg/kg/投与, i.v., q4d x 4）で治療され、続いてロイコボリンの強制経口投与（p.o.）が５-ＦＵの２時間後25 mg/kg/投与という用量で投与された。別の二つのグループのマウスは、５-ＦＵをガラクトマンナン（それぞれ、48 mg/kg/投与と120 mg/kg/投与, i.v., q4d x 4）で治療され、続いてp.o.ロイコボリンが、５-ＦＵ+ガラクトマンナンの２時間後に25 mg/kg/投与という用量で投与された。
【０１３５】
[00155]  各10匹のCOLO 205ヒト結腸腫瘍移植片をs.c.埋め込みされたマウスから成る９つのグループがあった。グループは腫瘍埋め込みから14日後にq4d x 4スケジュールで次のように治療された：１）生理食塩水（NaCl, 0.9%）、２）５-ＦＵ (48 mg/kg/投与)、３）GM (120 mg/kg/投与) 、４）５-ＦＵ (48 mg/kg/投与)＋GM (6 mg/kg/投与)、５）５-ＦＵ (48 mg/kg/投与)＋GM (30 mg/kg/投与)、６）５-ＦＵ (48 mg/kg/投与)＋GM (120 mg/kg/投与)、７）５-ＦＵ (48 mg/kg/投与)＋GM (600 mg/kg/投与)、８）５-ＦＵ (48 mg/kg/投与)＋ロイコボリン(経口、25 mg/kg/投与)、及び９）５-ＦＵ (48 mg/kg/投与)＋ロイコボリン(経口、25 mg/kg/投与)＋GM (120 mg/kg/投与)。最後の二つのグループは、ロイコボリンの効果をガラクトマンナンの効果と比較するために導入された。
【０１３６】
[00156]  この研究ではマウスは一匹も死ななかった。実施例３で説明した研究のように、対照の治療されなかった腫瘍はすべてのマウスで良く増殖した。腫瘍体積が４倍になるまでの時間の中央値は7.2日であった。研究の13日以降、腫瘍の退縮又は縮小は何も起こらなかった。腫瘍体積の中央値は、治療開始時の162 mm3から（この場合は生理食塩水のみ）13日後の1288 mm3に増加した。
【０１３７】
[00157]  ５-ＦＵの用量48 mg/kg/投与（すなわち、12日にわたる全用量で192 mg/kg）は十分に許容され、多少の増殖の遅れを生じて、腫瘍体積が４倍になるまでの中央値を7.2日から8.7日に増加させた。10匹のマウスのグループのうち二つの腫瘍は、13日の治療の後に腫瘍サイズの中央値に比べて顕著に小さく（３分の１以下）、治療開始時の100と163 mm3から研究の最後には、それぞれ、270と138 mm3に増加した。腫瘍体積の中央値は治療開始時の172 mm3から13日の研究の後に800 mm3に増加したが、これは対照の値1288 mm3よりも小さい。
【０１３８】
[00158]  GMは、120 mg/kg/投与という用量で単独でq4d x 4スケジュールで投与された場合、増殖を遅らせなかった（腫瘍体積が４倍になる時間の中央値は6.9日で、これに対して対照グループでは7.2日であった）。13日の研究の後で何も腫瘍の退縮は起こらず、比較的小さな腫瘍（腫瘍体積の中央値に比べて）は何も観測されなかった。腫瘍体積の中央値は治療開始時の157 mm3から1152 mm3に増加したが、これは治療されなかったマウスの値（1288 mm3）と本質的に等しい値である。
【０１３９】
[00159]   ５-ＦＵ (48 mg/kg/投与)とGM (6, 30, 120, 及び600 mg/kg/投与)のq4d x 4スケジュールでの同時投与は、テストされたすべての用量で十分に許容された。これは、腫瘍体積が４倍になる時間に顕著な遅れを生じ、治療されなかったマウス（対照）の7.2日及び５-ＦＵだけ及びGMだけの8.7日と6.9日から、それぞれ、14.8, 13.5, 16.5, 及び16.2日に増加した。最良の結果は、５-ＦＵと120 mg/kg/投与のガラクトマンナンの組み合わせで得られ、13日目、最終治療の日の翌日、の腫瘍体積の中央値は540 mm3になった。これに対して５-ＦＵ治療だけでは800 mm3であった。また、腫瘍体積が４倍になる日数の中央値は５-ＦＵ+GM 120 mg/kg/投与では、５-ＦＵだけに比べてほぼ２倍であった。
【０１４０】
[00160]  ロイコボリンの存在下での５-ＦＵによる治療は、薬の効力に何も付け加えなかった。腫瘍重量が４倍になるまでの日数の中央値はむしろ8.7日から8.2日に減少し、治療開始後13日目の腫瘍重量は、中央値で（800 mgから775 mgに）わずかに減少したが、平均では（734 mgから969 mg に）顕著に増加した。５-ＦＵとロイコボリンの組み合わせにガラクトマンナン120 mg/kg/投与を加えても状況はわずかしか改善されず、腫瘍重量が４倍になる日数の中央値が増加して8.7日に戻り、13日目の腫瘍重量はわずかに減少し、中央値で800 mg (５-ＦＵ)と775 mg (５-ＦＵ/ロイコボリン)から725 mgに、平均では、それぞれ、734 mgと969 mgから706 mgに減少する。
【０１４１】
実施例５
[00161]  ５-ＦＵとガラクトマンナンのいろいろな用量での組み合わせの抗腫瘍効力
[00162]  第二のヒト結腸腫瘍、HT-29、がNU/NU-nuBRヌード・マウスにおいて研究され、48 mg/kg/投与での５-ＦＵと30及び120 mg/kg/投与でのガラクトマンナンの組み合わせをI.V.で4日に１回、全部で4回の注射で投与したときの抗腫瘍効力が調べられた。すべてのグループが経口ロイコボリン、25 mg/kg/投与を受けた。33日目に平均腫瘍体積が５-ＦＵ＋ロイコボリン＋ガラクトマンナン120 mg/kg/投与で最低であった。これらの結果は、ガラクトマンナンがロイコボリンの存在下で５-ＦＵの抗腫瘍活性を高めることを実証した。この研究の結果は図１０にまとめられている。
【０１４２】
[00163]  ３つの効力研究全部の結果が、比較のために、図１１に一緒に示されている。
【０１４３】
[00164]  第二の研究との主な差異は、（a）別の腫瘍（HT-29）が用いられたこと、及び（b）ロイコボリンが治療方式に加えられたことであった。GMが、4日に１回、全部で4回の注射（q4d x 4）、尾の静脈へのi.v.注射、用量30及び120 mg/kg/投与で、５-ＦＵ（48 mg/kg/投与）との一つの注射として同時投与され、続いて強制経口投与（p.o.）のロイコボリンが注射から2時間後、用量25 mg/kg/投与で同じq4d x 4スケジュールで投与された。GM又は５-ＦＵは、また、同じq4d x 4治療スケジュールで120 mg/kg/投与 (GM)又は48 mg/kg/投与という用量で投与され、続いて2時間後に25 mg/kg/投与のロイコボリンが投与された。
【０１４４】
[00165]  GMは、各治療日に0.9%無菌新鮮生理食塩水に12 mg/mLの濃度で剤形された。ロイコボリン粉末（臨床製剤、注射用のロイコボリン・カルシウム）は0.9%無菌生理食塩水に2.5 mg/mLの濃度に溶かされた。５-ＦＵは、各治療日に0.9%無菌新鮮生理食塩水に4.8 mg/mLの濃度、pH 9.2、で剤形された。GMと５-ＦＵが同時投与されるグループでは、GM粉末と５-ＦＵが0.9%無菌新鮮生理食塩水に溶解されて、3.0 mg/mL又は12mg/mLというGM濃度と4.8 mg/mLという５-ＦＵ濃度にされた。個々の化合物もそれらの混合物も正確な体重に従って投与され、注射量は0.1 mL/10g体重であった。
【０１４５】
[00166]   各10匹のHT-29ヒト結腸癌移植片をs.c.埋め込みされたマウスから成る５つのグループがあった。グループは腫瘍埋め込みから7日後にq4d x 4スケジュールで次のように治療された：１）生理食塩水（NaCl, 0.9%）、２）GM (120 mg/kg/投与)＋ロイコボリン(p.o., 25 mg/kg/投与）、３)５-ＦＵ (48 mg/kg/投与)＋ロイコボリン(p.o., 25 mg/kg/投与）、４）５-ＦＵ (48 mg/kg/投与)＋GM (30 mg/kg/投与)＋ロイコボリン(p.o., 25 mg/kg/投与）、及び５）５-ＦＵ (48 mg/kg/投与)＋GM (120 mg/kg/投与)＋ロイコボリン(p.o., 25 mg/kg/投与）。
【０１４６】
[00167]  前の二つの研究と同様に、対照（治療されなかった）腫瘍は、すべてのマウスで良く増殖し、腫瘍体積が4倍になる時間の中央値は13.3日であった。腫瘍体積の中央値は治療開始時（腫瘍埋め込みの7日後）の196 mm3から26日後に1318 mm3に増加した。
【０１４７】
[00168]   ５-ＦＵの用量48 mg/kg/投与（すなわち、12日にわたる全用量で192 mg/kg）は、上述のようなロイコボリンの経口投与と併せて、最大許容用量の範囲内にあり、３週以内に10匹のマウスのグループに治療に関連した死亡を何も生じなかった。治療は腫瘍体積が4倍になる時間に2日の遅れを生じた（13.3日から15.3日に）。腫瘍体積の中央値は、治療開始時の179 mm3から研究26日目には1120 mm3に増加した。５-ＦＵとGM (30 mg/kg/投与)の同時投与は、上述のようなロイコボリンの経口投与と併せて、腫瘍の増殖にさらに遅れを生じ、特に研究の前半において生じた：腫瘍が4倍になる時間はGMなしでの15.3日からGMがあるときの18.1日に延びた。
【０１４８】
[00169]  上述のようなロイコボリンの経口投与と併せたq4d x 4スケジュールでの５-ＦＵとの同時投与におけるGMの用量を120 mg/kg/投与に増やすと、腫瘍が4倍になるのにさらに顕著な遅れが生じた：治療されなかった対照マウスの13.3日、及び５-ＦＵ／ロイコボリン治療されたマウスの15.3日から、３つの薬全部で治療されたマウスで23.5日になった。さらに、３つの薬全部を組み合わせて用いたとき、治療開始から4週後に一つの腫瘍が完全に消失し、さらに二つの腫瘍は研究の最後にサイズが比較的小さくなり（269及び352 mm3）、さらに３つの腫瘍は1000 mm3よりずっと小さな体積でほとんど安定した。全体として、腫瘍体積の中央値は治療開始時の176 mm3から研究の26日目にわずか729 mm3に増加しただけであった（治療されなかったマウスの1318 mm3、及び５-ＦＵとロイコボリンで治療されたマウスの1120 mm3に比べて著しく小さい）。
【０１４９】
実施例６
[00170]  生体分布研究
[00171]  3H-ガラクトマンナンの生体分布が腫瘍をもつマウスと腫瘍をもたないマウスで調べられた。この研究からの主要な結果は、トリチウム標識ガラクトマンナンが自由に肝臓、腎臓、肺、腫瘍、及び血漿に結合することを示した。結合の飽和は、6から60 mg/kg (18から180 mg/m2)という濃度では起こらなかった。
【０１５０】
[00172]  3Hガラクトマンナンの組織分布は注射された用量と無関係であり、５-ＦＵ (342 mg/m2)が3H-ガラクトマンナンと組み合わせられてもそのパターンは変化しなかった。いろいろなグループにおける血漿、腎臓、肺及び腫瘍からの3H-ガラクトマンナンの排出は速やかであり、腫瘍をもつマウスを除き1時間後放射能の約50%が6時間後に検出された。腫瘍をもつマウスでは、５-ＦＵあり又はなしで6又は60 mg/kgの3H-ガラクトマンナンで治療されたマウスからの腫瘍サンプルにおける放射能は、6時間後に平均して約72%が残っていた。肝臓からの3H-ガラクトマンナンの排出は他の組織よりもゆっくりであり、平均して、注射から1時間後放射能の50%を超える放射能が24時間後にもまだ存在していた。
【０１５１】
[00173]  雄のNCr-nu胸腺欠損ヌード・マウス（Charles Rivers Laboratories, Raleigh, NC）が上述のように環境馴化されて収容された。第一組のマウス（全部で18匹）は非腫瘍マウスであった。第二組の18匹のマウスは次のように腫瘍を形成された。COLO 205ヒト結腸腫瘍のin vivo継代からの30〜40 mgの断片が上述のように皮下に（s.c.）埋め込まれ、増殖させられた。腫瘍は、重量で245-392 mgに達するのを待って治療が開始された。十分な数のマウスに埋め込んで、治療開始の日にできるだけ狭い重量範囲の腫瘍を選んで試験するようにした。適切なサイズ範囲の腫瘍を有して選ばれたマウスは様々な治療グループに分けられた。
【０１５２】
[00174]  G. triacanthosからのGMのトリチウム標識は次のように行われた。12.8 mgのGMが2.0 mLの水に溶解され、Pd/BaSO4触媒（120 mg, 水に全く不溶）の存在下で25キュリーのトリチウム・ガスに曝露された。1時間後、ガスの供給を止め、触媒を濾過して除き、GMの水溶液を乾燥まで繰り返し（水を加えて4回）、不安定なトリチウムが見つからなくなるまで蒸発させた。標識されたGMの全収量は3.8 mCiであり、比放射能は300 μCi/mgであった。
【０１５３】
[00175]  36匹のマウス全部は18グループに分けられ、同じ日に、非標識又はトリチウム標識されたGM (6又は60 mg/kg)、又はGM (60 mg/kg、非標識又はトリチウム標識された)と５-ＦＵ (114 mg/kg)の組み合わせ、の一回の皮下注射を受けた。標識されないGMは生理食塩水で剤形され、トリチウム標識されたGMが溶液に加えられ、各マウスが10μCiの放射能を受け取るようにした。５-ＦＵはGM (6 mg/mLの濃度)を含む溶液に溶解された。すべての投薬溶液（各100μL）は二重にカウントされた。
【０１５４】
[00176]  グループ毎に2匹のマウスが注射から1, 6, 及び24時間後に採血され、血漿が調製された。マウスはその後屠殺され；肝臓、腎臓、肺、及び腫瘍（腫瘍を形成されたマウスから）が集められ、秤量され、さらに分析するために瞬間凍結された。
【０１５５】
[00177]  秤量後、肝臓は10 mLのSoluene 350 (Packard Instruments, Downers Grove, ＩＬ)に溶解され、最初は4時間500℃で、そして室温で組織が可溶化するまで、インキュベートされた。得られた溶液1ミリリットルがシンチレーション・カウンターで単一サンプルとしてカウントされた。組織重量とサンプル体積に基づいて、組織1グラムあたりのトリチウム標識されたGMのμCi数が計算された。
【０１５６】
[00178]  腎臓も同様の仕方で処理されたが、2 mLのソリューエン（Soluene）に溶解された。組織を室温で可溶化した後、15 mLのSafety Solveシンチレーション液（Research Products International, Mount Prospect, ＩＬ）を加え、サンプルを一晩インキュベートした。得られた溶液5 mLを15 mLのSafety Solveに希釈し、単一サンプルとしてシンチレーション・カウンターでカウントした。肺も同様の仕方で処理されたが、1 mLのSolueneに溶解された。血漿サンプル（各50μL）は直接Safety Solveに入れて単一サンプルとしてカウントされた。
【０１５７】
[00179]  秤量後、腫瘍は1又は2ミリリットルのSolueneに溶解され、3日間500℃でインキュベートされて可溶化された。次に、15ミリリットルのSolueneを加え、サンプルは一晩室温でインキュベートされた。次に2ミリリットルの水を加え、サンプルはシンチレーション・カウンターで単一サンプルとしてカウントされた。
【０１５８】
[00180]  雄のNCr-nu胸腺欠損ヌード・マウスが、各18匹のマウスを含む二つの主要な組に分けられた。第一の組のマウスは腫瘍にされなかったマウスであった。第二の組は、次のように腫瘍を形成された。COLO 205ヒト結腸腫瘍のin vivo継代からの30〜40 mgの断片が上述のように皮下に（s.c.）埋め込まれ、増殖させられた。腫瘍は、重量で245-392 mgに達するのを待って治療が開始された。十分な数のマウスに埋め込んで、治療開始の日にできるだけ狭い重量範囲の腫瘍を選んで試験するようにした。適切なサイズ範囲の腫瘍を有して選ばれたマウスはいろいろな治療グループに分けられた。
【０１５９】
[00181]   36匹のマウス全部は18グループに分けられ、同じ日に、非標識又はトリチウム標識されたGM (6又は60 mg/kg)、又はGM (60 mg/kg、非標識又はトリチウム標識された)と５-ＦＵ (114 mg/kg)の組み合わせ、の一回の皮下注射を受けた。GMのトリチウム標識は上で記述されている（得られる比放射能は300 μCi/mg）。非標識GMは生理食塩水で剤形され、トリチウム標識されたGMが溶液に加えられ、各マウスが10μCiの放射能を受け取るようにした。５-ＦＵはGM (6 mg/mLの濃度)を含む溶液に溶解された。
【０１６０】
[00182]   グループ毎に2匹のマウスが注射から1, 6, 及び24時間後に採血され、血漿が調製された。マウスはその後、上述のように、屠殺され；肝臓、腎臓、肺、及び腫瘍（腫瘍にされたマウスから）が集められ、秤量され、さらに分析するために瞬間凍結された。
【０１６１】
[00183]   ガラクトマンナンは自由に肝臓、腎臓、肺、腫瘍、及び血漿に結合することが観測され、結合の限界に達しなかった、例えば、6 mg/kgから60 mg/kgという濃度では結合の飽和に達しなかった。6 mg/kg (相対放射能1.0)及び60 mg/kg (相対放射能0.1)という用量のガラクトマンナンを用いた場合、結合した放射性ガラクトマンナンの量は同じだった：すなわち、10倍高い用量で結合したガラクトマンナンの量は10倍に増加した。
【０１６２】
[00184]  組織全体における放射能の分布、並びに重量又は体積（血漿における）あたりの放射能の分布、は6 及び60 mg/kgのGMでほとんど同一であり、したがって、それぞれのデータはプールされた。また、組織全体における放射能の分布、並びに重量又は体積あたりの放射能の分布、は腫瘍を形成された動物でも腫瘍を形成されなかった動物でもほとんど同一であり（腫瘍におけるものを除く、腫瘍は腫瘍を形成された動物にしかない）、したがって、それぞれのデータはプールされた。全体として、データは8匹の動物で平均されたが、腫瘍に関するデータは4匹の動物についての平均である。
【０１６３】
[00185]  研究の主な結果は次の通りである：
[00186]  ５-ＦＵの存在下で、腫瘍中のGMの量はGMの排出される過程で増加し、増加したままになる；そして
[00187]  ５-ＦＵの存在下で、肝臓中のGMの量はGMの排出される過程で減少し、減少したままになる。
【０１６４】
[00188]  すなわち、５-ＦＵとGMは、腫瘍に送達されたとき、相乗的に作用する。これによって、GMが５-ＦＵと組み合わされるとマウスがもつCOLO 205ヒト結腸腫瘍に対する薬の効力を増加させる理由を説明されるかもしれない（上を参照のこと）。
【０１６５】
[00189]  同時に、５-ＦＵとGMは、肝臓に送達されたとき、拮抗物質として作用する（明らかに、肝臓における同じ結合部位について互いに競合する）。
【０１６６】
実施例７−９
[00190]  急性毒性研究
[00191]  本発明のガラクトマンナンの急性毒性研究が、マウス、ラット、及びイヌについて行われ、準慢性毒性研究が、ラット及びイヌについて行われた。以下はこれらの研究の結果の要約である：
【０１６７】
[00192]  1500 mg/m2 (336 mg/m2)のガラクトマンナン又は417/222 mg/kg (1251/666 mg/m2)の５-ＦＵ／ガラクトマンナンの一回IV投薬は、マウス（n=5/グループ）に毒性、死亡、又は体重増加の低下という臨床徴候を生じなかったが、409 mg/kg (1227 mg/m2)の５-ＦＵは13-16日後に3/5マウスの死亡を生じた。
【０１６８】
[00193]  ラット（n=5/性/グループ）では、140 mg/kg (840 mg/m2)の５-ＦＵ、72 mg/kg (432 mg/m2)のガラクトマンナン、又は140/72 mg/kgの組み合わせは、いずれのグループにも死亡を生じなかった。体重、食餌消費、及び血液成分における毒性による変化は、組み合わせを注射されたラットで、５-ＦＵのみを注射されたものと比べて多少小さかった。ガラクトマンナンのみは顕著な困った効果を何も生じなかった。
【０１６９】
[00194]  28.5 mg/kg (570 mg/m2)の５-ＦＵ、15 mg/kg (300 mg/m2)のガラクトマンナン、又は28.5/15 mg/kgの５-ＦＵ／ガラクトマンナンは、５-ＦＵを注射された2/2イヌ、組み合わせを注射された2/4イヌ、及びガラクトマンナンだけを受けた0/2イヌ、の死亡を引き起こした。生き残ったイヌは臨床的には正常であり、体重、食餌消費、ECGトレーシング、臨床病理における治療に関連した変化、又は大きな組織変化を21日間の研究期間の間に何も示さなかった。
【０１７０】
実施例７
[00195]  準慢性ラット研究
[00196]  28日間の準慢性ラット研究が研究等級の無濾過ガラクトマンナンを用いて行われ、毎日一回のIV用量として10 mL/kgの生理食塩水、48 mg/kg (288 mg/m2)の５-ＦＵ、48 mg/kg (288 mg/m2)のガラクトマンナン、或いは24/13 mg/kg (144/78 mg/m2)、36/19 mg/kg (216/114 mg/m2)、又は48 /25 mg/kg (288/150 mg/m2)の５-ＦＵ／ガラクトマンナン組み合わせ、が引き続く4日にわたって1 mL/分の速さで投与された。４つの用量の５-ＦＵが死亡を生じた（48 mg/kgの５-ＦＵで7/8；24/13、36/19、及び48/25 mg/kgの５-ＦＵ／ガラクトマンナンで、それぞれ、1/8、2/8、及び7/8）。
【０１７１】
[00197]  ５-ＦＵを投与されたすべてのグループで、脱毛症、体重と食餌消費の深刻な一時的減少、及び赤血球パラメーターと血小板の一時的減少が観測された。スケジュールにない死亡の動物における病変は主に５-ＦＵが造血系及びリンパ系に及ぼす予期された作用によるものであり、二次的なバクテリアの侵入と凝集への影響による播種性出血による。研究の第５日の剖検で、病変は骨髄の顕著な低細胞性、胸腺のリンパ球萎縮、及び小腸のいろいろな部分の絨毛の萎縮を含んでいた（すべて５-ＦＵの予期された作用によると考えられた）。肺におけるわずかな肉芽腫性病巣を除き、治療に関連した組織病理的な病変は研究の第29日に屠殺された動物では消滅していた（グループ２とグループ６で１匹の雌だけが生存していた）。
【０１７２】
実施例８
[00198]  反復投薬ラット研究
[00199]  ラットにおける52日までの回復期間による反復IV投薬による研究が48又は96 mg/kg (288又は576 mg/m2)を含む濾過GMP等級ガラクトマンナン材料を用いて行われた。雌雄それぞれの5匹の動物が第5, 28, 及び56日目に屠殺された。監査された報告草案は、第5日目に屠殺された１匹のラットの肺における組織所見は96 mg/kgでのガラクトマンナンの静脈内投与が、引き続く4日間投薬されて第5日目に屠殺されたラットの肺の微量レベルの肉芽腫性炎症の低い発生率と結びついていることを示唆した。ガラクトマンナンを96 mg/kg（第一の研究で用いた最も高い用量より2倍大きい用量）で投与され、28日目に屠殺された雄のラットは、肺の微量レベルの間質炎の発生を増加させたが、肉芽腫性炎症を示す組織徴候は何もなかった。ガラクトマンナンを96 mg/kgで投与され56日目に屠殺された雄のラットは微量レベルの肺胞マクロファージ蓄積発生の増加を示したが、やはり肉芽腫性炎症を示す組織徴候は何もなかった。
【０１７３】
[00200]  本発明のガラクトマンナンは、組織への影響が最小であり、48 mg/kgという用量のGMPガラクトマンナン臨床溶液を注射された1/30のラットが肉芽腫性炎症を示しただけだった。96 mg/kgという用量のGMPガラクトマンナン臨床溶液を注射された30匹のラットはいずれも影響を受けなかった。ガラクトマンナン臨床溶液は、15 mg/kg (555 mg/m2; 9 mg/mL)という用量まで、ヒトで使用するのに安全であり、健康に何も大きな危険にならない。
【０１７４】
実施例９
イヌ研究
[00201]  28日間のイヌ研究で、６グループのビーグル犬に、引き続く4日間、毎日１回のIV投薬として、生理食塩水、6 mg/kg (120 mg/m2)の５-ＦＵと(500 mg/m2 (240 mg/m2)ガラクトマンナン又は4/2 mg/kg (80/40 mg/m2)、6/3.2 mg/kg (120/64 mg/m2)又は6/6 mg/kg (120/120 mg/m2)の５-ＦＵ／ガラクトマンナン、が注射された。48匹のイヌのうち13匹が研究の2日目から5日目の間に死亡した（5匹は瀕死の状態で屠殺、8匹は死んで発見された）（それぞれ、4/4の５-ＦＵの雄；3/4の4/2 mg/kg ５-ＦＵ／ガラクトマンナン・グループの雄；2/4の雄と1/4の雌が6/3.2及び6/6 ５-ＦＵ／ガラクトマンナン・グループで）。
【０１７５】
[00202]  ５-ＦＵグループにおける有害な影響は、運動失調、虚脱、発声、痙攣、ふるえ、接触過敏、攻撃行動（その結果、6/3.2 mg/kg の５-ＦＵ／ガラクトマンナン・グループでは３回の投薬しか投与されなかった）、嘔吐、唾液過多、柔らかい糞、及び赤血球パラメーターと血小板の数の減少などであった。スケジュールにない死亡のイヌにおける巨視的・微視的変化は、１以上の器官の鬱血（心臓血管系の不調を示唆）、及びGI管の粘膜の萎縮、などであった。5日目の剖検で、治療に関連した組織変化は大部分が５-ＦＵの雌に限定されていた。29日目の剖検で、生存者に何も顕著な変化はなかった。500 mg/m2のガラクトマンナンは何も観測できる有害な影響を生じなかった。
【０１７６】
実施例１０
[00203]  突然変異誘発研究
[00204]  突然変異誘発研究が行われ、二つのAmesバクテリア逆突然変異分析を含み、本発明のガラクトマンナンがそれだけで第一の研究で、５-ＦＵと組み合わせて第二の研究で調べられた。二つの研究のテスト事項は、Salmonella typhimurium系統TA97a, TA98, TA100, TA1535、及びEscherichia coli系統WP2uvrA (pKM101),を用いるバクテリア分析で、外因性代謝活性化システムの存在下と不在下で調べられた。二つの研究のいずれにおいても、突然変異誘発活性の証拠は検出されなかった。
【０１７７】
[00205]  要約すると、これまでに行われたin vivo薬理学研究は、本発明のガラクトマンナンが５-ＦＵの抗腫瘍効果を増強することを示している。ガラクトマンナンは、それ自体でも５-ＦＵ徒組み合わせても、バクテリア逆突然変異研究において突然変異誘発性がなかった。マウス、ラット、及びイヌについての毒性研究は、ガラクトマンナンの毒性の可能性が非常に低く、５-ＦＵの有毒な副作用のいくつかを軽減する能力があることを示した。
【０１７８】
[00206]  112 mg/kg (336 mg/m2)の(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12)又は417/222 mg/kg (1251/666mg/m2) の５-ＦＵ/(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12)の１回IV投薬は、毒性、死亡、又は体重増加の低下などの臨床的徴候を生じなかったが、409 mg/kg (1227 mg/m2)の５-ＦＵは13-16日後に3/5匹のマウスに死亡を引き起こした。
【０１７９】
[00207]  ラットでは、140 mg/kg (840 mg/m2)の５-ＦＵ、72 mg/kg (432 mg/m2)の(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12)又は140/72 mg/kg の組み合わせの１回IV投薬は、いずれのグループにも死亡を生じなかった。体重、食餌消費、及び血液成分の有毒な変化は、５-ＦＵだけを注射されたラットに比べて、組み合わせを注射されたラットにおいて深刻度が小さかった。(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12)だけでは何もはっきりした有害な影響は生じなかった。
【０１８０】
実施例１１
ガラクトマンナンが化学療法タンパク質に及ぼす影響
[00208]  サイトカインとケモカインは、in vitro研究で、免疫応答による破壊に対する癌細胞の感受性を高めることが示された。（サイトカインとケモカインは当業者には周知であり、それらのリストは現代の生物学／医学のどんなテキストにも載っている）。少数のケースでは、サイトカインが腫瘍細胞の増殖を直接阻害することが示されている。サイトカインはリンパ球やその他の免疫細胞にいろいろな作用を及ぼすことによって免疫応答の強度と持続時間を調節して免疫系のメッセンジャーとして機能する。サイトカインは又、細胞の増殖と分化をコントロールする。米国では、食品医薬品局（FDA）はすでに癌の治療のための二つのサイトカインＩＬ-2とα-インターフェロンの使用を認可した。
【０１８１】
[00209]  ＩＬ-2は、腎細胞疾患、メラノーム、リンパ腫、及び白血病に対する生物的活性を有することが示されている。インターフェロンは、これらの癌、並びにカポジ肉腫、慢性骨髄性白血病、及び有毛細胞白血病、に対して効果的である。
【０１８２】
[00210]  しかし、送達の問題及びサイトカイン治療による有害な副作用を含む血液中の安定性の問題がある。PEG付加を用いてインターフェロンの薬理効果がわずかに改善されたが、まだ毒性であると考えられる。
【０１８３】
[00211]  化学療法薬に対するガラクトマンナンの効果は、又、これらのタンパク質様化学療法薬につても、例えばサイトカインについても、示されている。以下の研究では、ＩＬ-12（10μg/kg）及びＩＬ-12（40 mg/kg）を単独又はガラクトマンナン（120 mg/kg）との組み合わせで用いて、ヒト結腸腫瘍HT-29を埋め込まれたマウス・モデルを治療した。腫瘍サイズが110 mgに達したときIV注射が開始され、4日の間隔で4回繰り返され、最後の注射から１週後（26日目）の結果は、すでに、腫瘍の増殖の阻害の顕著な改善が達成されたことを示した。
【図面の簡単な説明】
【０１８４】
【図１】[0027]  図１は、ガラクトマンナンの立体化学的な形態である。
【図２】[0028]  図２は、（グアルガム由来の）本発明のガラクトマンナン及びカロブ（ローカストビーン）ガム由来のガラクトマンナンの1H-ＮＭＲスペクトルの結果を表すグラフである。
【図３】[0029]  図３は、図２に示された1H-ＮＭＲの結果のフーリエ変換である。
【図４】[0030]  図４は、本発明の（グアルガムからの）ガラクトマンナン及びカロブ（ローカストビーン）ガム由来のガラクトマンナンの13C-ＮＭＲスペクトルの結果を表すグラフである。
【図５】[0031]  図５は、本発明のガラクトマンナンのHPLC/RI-MALLSのプロファイルの結果を表すグラフである。
【図６Ａ】[0032]  図６Ａは、本発明のガラクトマンナンを生産する製造及び精製プロセスを示す概略図である。
【図６Ｂ】[0032]  図６Ｂは、本発明のガラクトマンナンを生産する製造及び精製プロセスを示す概略図である。
【図７】[0033]  図７は、実施例３で述べる効力研究の第一部の結果をまとめたグラフである。
【図８】[0034]  図８は、実施例３で述べる効力研究の第二部の結果をまとめたグラフである。
【図９】[0035]  図９は、実施例４で述べる効力研究の結果をまとめたグラフである。
【図１０】[0036]  図１０は、実施例５で述べる効力研究の結果をまとめたグラフである。
【図１１】[0037]  図１１は、実施例３、４、及び５で述べる３つの効力研究の結果をまとめたグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【手続補正書】
【提出日】平成18年9月21日(2006.9.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１以上のポリサッカライドと１以上の治療薬を含む組成物であって、当該組成物が治療効力を増強し、そして上記治療薬に付随する毒性を低減する、前記組成物。
【請求項２】
前記ポリサッカライドが分枝状であるか又は非分枝状である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ポリサッカライドが、ガラクトマンナン、アラビノガラクタン、ラムノガラクツロナン、及びそれらの組み合わせからなる群から選ばれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記ガラクトマンナンが、β−１，４−Ｄ−ガラクトマンナンである、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記ガラクトマンナンが、(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12) である、請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
前記(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12)が、約２,０００Ｄａ〜６００,０００Ｄａの範囲の分子量を有する、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12)が約５０,０００Ｄａ〜４１５,０００Ｄａの範囲の分子量を有する、請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
前記(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12)が約４,０００Ｄａ〜６０,０００Ｄａの範囲の分子量を有する、請求項５に記載の組成物。
【請求項９】
前記治療薬が、５-ＦＵ、５-ＦＵｄＲ、メトトレキセート、ａｒａ-Ｃ、６-メルカプトプリン、６-チオグアニン、ヒドロキシ尿素、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、メクロレタミン、フェニルアラニン・マスタード、クロラムブシル、エチレンイミン類、メチル・メラミン類、アルキルスルホネート類、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、シスプラチン、ダカルバジン、プロカルバジン、ドキソルビシン、ダクチノマイシン、ミトマイシンＣ、プリカマイシン、シクロホスファミド、メルファラン、チオテパ、ブスルファン、プレドニゾン、プレドニソロン、トリアムシノロン、パクリタキセル、及びそれらの組み合わせからなる群から選らばれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記治療薬が、５-ＦＵ、５-ＦＵｄＲ、シスプラチン、及びそれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記治療薬が５-ＦＵである、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
さらにロイコボリンを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12)及び化学療法薬を有する有効量の混合物を医薬として許容される担体中に含む、癌治療用医薬組成物。
【請求項１４】
前記化学療法薬が、５-ＦＵ、５-ＦＵｄＲ、メトトレキセート、ａｒａ-Ｃ、６-メルカプトプリン、６-チオグアニン、ヒドロキシ尿素、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、メクロレタミン、フェニルアラニン・マスタード、クロラムブシル、エチレンイミン類、メチル・メラミン類、アルキルスルホネート類、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、シスプラチン、ダカルバジン、プロカルバジン、ドキソルビシン、ダクチノマイシン、ミトマイシンC、プリカマイシン、シクロホスファミド、メルファラン、チオテパ、ブスルファン、プレドニゾン、プレドニソロン、トリアムシノロン、パクリタキセル、及びそれらの組み合わせからなる群から選らばれる、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記化学療法薬が、５-ＦＵ、５-ＦＵｄＲ、シスプラチン、及びそれらの組み合わせからなる群から選ばれる、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記化学療法薬が５-ＦＵである、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
さらにロイコボリンを含む、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記癌が、慢性白血病、乳癌、肉腫、卵巣癌、直腸癌、咽喉癌、メラノーマ、結腸癌、膀胱癌、肺癌、乳房腺癌、胃腸癌、胃癌、前立腺癌、膵臓癌、及びカポジ肉腫からなる群から選ばれる、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記混合物が、ある量の前記(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12)とある量の前記化学療法薬を、前記対象が受ける毒性を低減するのに適した比で有する、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記混合物が、ある量の前記(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12)とある量の前記化学療法薬を、前記化学療法薬の治療効力を増強するのに適した比で有する、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記混合物が、ある量の前記(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12)とある量の前記化学療法薬を、前記対象が受ける毒性を低減し、かつ前記化学療法薬の効力を増強するのに適した比で有する、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記混合物が、ある量の前記(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12)とある量のサイトカイン及び化学療法薬を前記対象において毒性を減らすのに適した比で有する、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記混合物が、ある量の前記(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12)とある量のＩＬ-２、 ＩＬ-１２、若しくはα-インターフェロン、又はその両方及び化学療法薬を前記対象が受ける毒性を減らすのに適した比で有する、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記混合物が、ある量の前記(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12)とある量のサイトカインと化学療法薬を前記化学療法薬の効力を増強するのに適当な比で有する、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記混合物が、ある量の前記(((１,４)-結合β-Ｄ-マンノピラノース)17-((１,６)-結合β-Ｄ-ガラクトピラノース)10)12)とある量のＩＬ-２、ＩＬ-１２、若しくはα-インターフェロン、又はその両方及び化学療法薬を前記化学療法薬の効力を増強するのに適当な比で有する、請求項１３に記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
2007505041.tif 000016