(57)【要約】本発明者らによって、末梢生物学的流体サンプルにおいて測定され得るタンパク質性バイオマーカー（「ＡＤバイオマーカー」）のコレクションが、神経変性疾患、特にアルツハイマー病および軽度の認識障害（ＭＣＩ）の診断を補助することが発見された。さらに本明細書中の記載により、有望な因子をＡＤバイオマーカーレベルを調節する活性について試験することによる、アルツハイマー病の処置のための候補因子を同定する方法が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断を補助する方法であって、該方法は、
個体からの生物学的流体サンプル中の少なくとも１種類のＡＤ診断バイオマーカーの測定レベルを、該バイオマーカーの基準レベルと比較する工程を包含し、ここで、該ＡＤ診断バイオマーカーは、ＧＣＳＦ；ＩＦＮ−ｇ；ＩＧＦＢＰ−１；ＢＭＰ−６；ＢＭＰ−４；エオタキシン−２；ＩＧＦＢＰ−２；ＴＡＲＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＡＮＧ；ＰＡＲＣ；Ａｃｒｐ３０；ＡｇＲＰ（ＡＲＴ）；ＴＩＭＰ−１；ＴＩＭＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬ  Ｒ３；ｕＰＡＲ；ＩＧＦＢＰ−４；ＬＥＰＴＩＮ（ＯＢ）；ＰＤＧＦ−ＢＢ；ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＮＴ−３；ＮＡＰ−２；ＩＬ−１ｒａ；ＭＳＰ−ａ；ＳＣＦ；ＴＧＦ−ｂ３；ＴＮＦ−ｂ；ＭＩＰ−１ｄ；ＩＬ−３；ＦＧＦ−６；ＩＬ−６Ｒ；ｓＴＮＦ  ＲＩＩ；ＡＸＬ；ｂＦＧＦ；ＦＧＦ−４；ＣＮＴＦ；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ｂ；ＴＰＯ；ＶＥＧＦ−Ｂ；ＩＬ−８；ＦＡＳ；ＥＧＦ−Ｒからなる群から選択される、方法。
【請求項２】
前記ＡＤ診断バイオマーカーが、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）；ＢＢホモダイマー血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）；脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）；上皮成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子６（ＦＧＦ−６）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、可溶性インターロイキン−６レセプター（ｓＩＬ−６Ｒ）、レプチン（ｏｂとしても公知である）、マクロファージ炎症性タンパク質−１δ（ＭＩＰ−１δ）、マクロファージ刺激タンパク質α鎖（ＭＳＰ−α）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、好中球活性化ペプチド−２（ＮＡＰ−２）、ＲＡＮＴＥＳ、可溶性腫瘍壊死因子レセプター−２（ｓＴＮＦ  ＲＩＩ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポイエチン（ＴＰＯ）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−１（ＴＩＭＰ−１）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−２（ＴＩＭＰ−２）、トランスフォーミング増殖因子−β３（ＴＧＦ−β３）、および腫瘍壊死因子β（ＴＮＦ−β）からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＡＤ診断マーカーが、ＢＤＮＦ、ｓＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−８、レプチン、ＭＩＰ−１δ、ＰＤＧＦ−ＢＢおよびＴＩＭＰ−１からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ＡＤ診断マーカーが、ｓＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−８およびＴＩＭＰ−１からなる群から選択される、請求項に３記載の方法。
【請求項５】
前記ＡＤ診断マーカーが、ＢＤＮＦ、ＭＩＰ−１δ、およびＴＩＭＰ−１からなる群から選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記ＡＤ診断マーカーが、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
少なくとも２種類のＡＤ診断バイオマーカーの測定レベルを、該バイオマーカー類の基準レベルと比較する工程を包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記少なくとも２種類のＡＤ診断バイオマーカーの一つがレプチンである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記少なくとも２種類のＡＤ診断バイオマーカーの一つがＢＤＮＦである、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＡＤ診断バイオマーカーが、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳからなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
少なくとも３種類のＡＤ診断バイオマーカーの測定レベルを、該バイオマーカー類の基準レベルと比較する工程を包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
少なくとも４種類のＡＤ診断バイオマーカーの測定レベルを、該バイオマーカー類の基準レベルと比較する工程を包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
少なくともＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳの測定レベルを前記バイオマーカー類の基準レベルと比較する工程を包含する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記測定値と各測定ＡＤ診断バイオマーカーの基準値とを比較する工程が、該測定値と該基準値との倍数差を計算する工程を包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
測定した各ＡＤ診断バイオマーカーの倍数差を最小倍数差の値と比較する工程をさらに包含する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
アルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断を補助する方法であって、該方法は、
個体からの生物学的流体サンプル中の少なくとも４種類のＡＤ診断バイオマーカーの測定レベルを、各ＡＤ診断バイオマーカーの基準レベルと比較する工程を包含し、該バイオマーカーはＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳを含む、方法。
【請求項１７】
ＢＤＮＦがＢＤＮＦの基準レベルと比較して少なくとも約２０％減少する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
レプチンがレプチンの基準レベルと比較して少なくとも約２５％減少する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
ＲＡＮＴＥＳがＲＡＮＴＥＳの基準レベルと比較して少なくとも約１６％減少する、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
ＰＤＧＦ−ＢＢが正常個体におけるＰＤＧＦ−ＢＢの基準レベルと比較して少なくとも約８５％減少し、その減少が重度ＡＤと関連している、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
前記生物学的流体サンプルが末梢生物学的流体サンプルである、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記末梢生物学的流体サンプルが血液、血清または血漿である、請求項１６または請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記生物学的流体サンプルにおける前記ＡＤバイオマーカーの測定レベルを得る工程をさらに包含する、請求項１または請求項１６に記載の方法。
【請求項２４】
アルツハイマー病（ＡＤ）患者におけるＡＤの進行をモニタリングする方法であって、該方法は：
個体からの生物学的流体サンプル中の少なくとも１種類のＡＤ診断バイオマーカーの測定レベルを、該バイオマーカーの基準レベルと比較する工程を包含し、ここで、該ＡＤ診断バイオマーカーが、ＧＣＳＦ；ＩＦＮ−ｇ；ＩＧＦＢＰ−１；ＢＭＰ−６；ＢＭＰ−４；エオタキシン−２；ＩＧＦＢＰ−２；ＴＡＲＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＡＮＧ；ＰＡＲＣ；Ａｃｒｐ３０；ＡｇＲＰ（ＡＲＴ）；ＴＩＭＰ−１；ＴＩＭＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬ  Ｒ３；ｕＰＡＲ；ＩＧＦＢＰ−４；ＬＥＰＴＩＮ（ＯＢ）；ＰＤＧＦ−ＢＢ；ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＮＴ−３；ＮＡＰ−２；ＩＬ−１ｒａ；ＭＳＰ−ａ；ＳＣＦ；ＴＧＦ−ｂ３；ＴＮＦ−ｂ；ＭＩＰ−１ｄ；ＩＬ−３；ＦＧＦ−６；ＩＬ−６Ｒ；ｓＴＮＦ  ＲＩＩ；；ＡＸＬ；ｂＦＧＦ；ＦＧＦ−４；ＣＮＴＦ；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ｂ；ＴＰＯ；ＶＥＧＦ−Ｂ；ＩＬ−８；ＦＡＳ；ＥＧＦ−Ｒからなる群から選択される、方法。
【請求項２５】
前記ＡＤ診断バイオマーカーが、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）；ＢＢホモダイマー血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）；脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）；上皮成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子６（ＦＧＦ−６）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、可溶性インターロイキン−６レセプター（ｓＩＬ−６Ｒ）、レプチン（ｏｂとしても公知である）、マクロファージ炎症性タンパク質−１δ（ＭＩＰ−１δ）、マクロファージ刺激タンパク質α鎖（ＭＳＰ−α）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、好中球活性化ペプチド−２（ＮＡＰ−２）、ＲＡＮＴＥＳ、可溶性腫瘍壊死因子レセプター−２（ｓＴＮＦ  ＲＩＩ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポイエチン（ＴＰＯ）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−１（ＴＩＭＰ−１）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−２（ＴＩＭＰ−２）、トランスフォーミング増殖因子−β３（ＴＧＦ−β３）、および腫瘍壊死因子β（ＴＮＦ−β）からなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＡＤ診断マーカーが、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳからなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＡＤ診断マーカーがレプチンである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２８】
前記生物学的流体サンプル中のレプチンのレベルを測定し、それによってレプチンの前記測定値を得る工程をさらに包含する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記基準値が、過去のある時点で同一ＡＤ患者からの生物学的流体サンプルから得られた値である、請求項２４に記載の方法。
【請求項３０】
前記生物学的流体サンプルが末梢生物学的流体サンプルである、請求項２４記載の方法。
【請求項３１】
個体のアルツハイマー病（ＡＤ）を層化するための方法であって、該方法は、
該患者からの生物学的流体サンプル中の脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）およびＢＢホモダイマー血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）のレベルの測定値を、ＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢの基準値と比較する工程を包含する、方法。
【請求項３２】
前記生物学的流体サンプルが、血液、血清または血漿を含む末梢液体サンプルである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
レプチンおよびＲＡＮＴＥＳレベルの測定値をレプチンおよびＲＡＮＴＥＳの基準値と比較する工程をさらに包含し、ここで、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲａｎｔｅｓの基準値が、ＭＭＳＥスコア２５〜２８を有する個体群からのサンプルで得られたものであり、ここで、レプチンおよびＰＤＧＦ−ＢＢレベルが増加し、さらにＢＤＮＦおよびＲＡＮＴＥＳレベルが実質的に同レベルであると、ＭＭＳＥスコア２０−２５によって示されるような軽度ＡＤであると示される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
レプチンおよびＲＡＮＴＥＳレベルの測定値をレプチンおよびＲａｎｔｅｓの基準値と比較する工程をさらに包含し、ここで、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲａｎｔｅｓの基準値は、ＭＭＳＥスコア２０−２５を有する個体群からのサンプルで得られたものであり、ここで、Ｒａｎｔｅｓ、ＢＤＮＦおよびＰＤＧＦレベルが減少し、さらにレプチンレベルが実質的に同レベルであると、ＭＭＳＥスコア１０−２０によって示されるような中程度ＡＤであると示される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
アルツハイマー病処置のための候補因子を同定する方法であって、該方法は：
有望な候補因子をＡＤバイオマーカーを調節する活性についてアッセイする工程を包含し、該ＡＤバイオマーカーは、ＧＣＳＦ；ＩＦＮ−ｇ；ＩＧＦＢＰ−１；ＢＭＰ−６；ＢＭＰ−４；エオタキシン−２；ＩＧＦＢＰ−２；ＴＡＲＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＡＮＧ；ＰＡＲＣ；Ａｃｒｐ３０；ＡｇＲＰ（ＡＲＴ）；ＴＩＭＰ−１；ＴＩＭＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬ  Ｒ３；ｕＰＡＲ；ＩＧＦＢＰ−４；ＬＥＰＴＩＮ（ＯＢ）；ＰＤＧＦ−ＢＢ；ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＮＴ−３；ＮＡＰ−２；ＩＬ−１ｒａ；ＭＳＰ−ａ；ＳＣＦ；ＴＧＦ−ｂ３；ＴＮＦ−ｂ；ＭＩＰ−１ｄ；ＩＬ−３；ＦＧＦ−６；ＩＬ−６Ｒ；ｓＴＮＦ  ＲＩＩ；ＡＸＬ；ｂＦＧＦ；ＦＧＦ−４；ＣＮＴＦ；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ｂ；ＴＰＯ；ＶＥＧＦ−Ｂ；ＩＬ−８；ＦＡＳ；ＥＧＦ−Ｒからなる群から選択される、方法。
【請求項３６】
前記ＡＤバイオマーカーが、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）、ＢＢホモダイマー血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子６（ＦＧＦ−６）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、可溶性インターロイキン−６レセプター（ｓＩＬ−６Ｒ）、レプチン（ｏｂとしても公知である）、マクロファージ炎症性タンパク質−１δ（ＭＩＰ−１δ）、マクロファージ刺激タンパク質α鎖（ＭＳＰ−α）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、好中球活性化ペプチド−２（ＮＡＰ−２）、ＲＡＮＴＥＳ、可溶性腫瘍壊死因子レセプター−２（ｓＴＮＦ  ＲＩＩ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポイエチン（ＴＰＯ）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−１（ＴＩＭＰ−１）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−２（ＴＩＭＰ−２）、トランスフォーミング増殖因子−β３（ＴＧＦ−β３）、および腫瘍壊死因子β（ＴＮＦ−β）からなる群から選択される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
有望な候補因子を、ＡＤバイオマーカーのセットを調節する活性についてアッセイする工程を包含し、ここで、該セットがＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳを含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記アッセイする工程がｉｎ  ｖｉｖｏで行われる、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
キットであって、該キットは：
少なくとも１種類のＡＤ診断バイオマーカーに対して特異的な少なくとも１種類の試薬であって、ここで該少なくとも１種類のＡＤ診断バイオマーカーが、ＧＣＳＦ；ＩＦＮ−ｇ；ＩＧＦＢＰ−１；ＢＭＰ−６；ＢＭＰ−４；エオタキシン−２；ＩＧＦＢＰ−２；ＴＡＲＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＡＮＧ；ＰＡＲＣ；Ａｃｒｐ３０；ＡｇＲＰ（ＡＲＴ）；ＴＩＭＰ−１；ＴＩＭＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬ  Ｒ３；ｕＰＡＲ；ＩＧＦＢＰ−４；ＬＥＰＴＩＮ（ＯＢ）；ＰＤＧＦ−ＢＢ；ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＮＴ−３；ＮＡＰ−２；ＩＬ−１ｒａ；ＭＳＰ−ａ；ＳＣＦ；ＴＧＦ−ｂ３；ＴＮＦ−ｂ；ＭＩＰ−１ｄ；ＩＬ−３；ＦＧＦ−６；ＩＬ−６Ｒ；ｓＴＮＦ  ＲＩＩ；；ＡＸＬ；ｂＦＧＦ；ＦＧＦ−４；ＣＮＴＦ；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ｂ；ＴＰＯ；ＶＥＧＦ−Ｂ；ＩＬ−８；ＦＡＳ；ＥＧＦ−Ｒからなる群から選択される、試薬、および
請求項１記載の方法を実施するための指示書
を含む、キット。
【請求項４０】
前記ＡＤ診断バイオマーカーが、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）、ＢＢホモダイマー血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）；上皮成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子６（ＦＧＦ−６）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、可溶性インターロイキン−６レセプター（ｓＩＬ−６Ｒ）、レプチン（ｏｂとしても公知である）、マクロファージ炎症性タンパク質−１δ（ＭＩＰ−１δ）、マクロファージ刺激タンパク質α鎖（ＭＳＰ−α）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、好中球活性化ペプチド−２（ＮＡＰ−２）、ＲＡＮＴＥＳ、可溶性腫瘍壊死因子レセプター−２（ｓＴＮＦ  ＲＩＩ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポイエチン（ＴＰＯ）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−１（ＴＩＭＰ−１）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−２（ＴＩＭＰ−２）、トランスフォーミング増殖因子−β３（ＴＧＦ−β３）、腫瘍壊死因子β（ＴＮＦ−β）からなる群から選択される、請求項３９に記載のキット。
【請求項４１】
少なくとも２種類のＡＤ診断マーカーの各々に特異的な少なくとも１種類の試薬を含む、請求項３９に記載のキット。
【請求項４２】
少なくとも３種類のＡＤ診断マーカーの各々に特異的な少なくとも１種類の試薬を含む、請求項３９に記載のキット。
【請求項４３】
少なくとも４種類のＡＤ診断マーカーの各々に特異的な少なくとも１種類の試薬を含む、請求項３９に記載のキット。
【請求項４４】
前記ＡＤ診断マーカーが、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳからなる群から選択される、請求項４１、請求項４２または請求項４３のいずれか１項に記載のキット。
【請求項４５】
前記ＡＤ診断バイオマーカーに特異的な試薬が、該ＡＤ診断バイオマーカーに特異的な抗体、またはそのフラグメントである、請求項４４に記載のキット。
【請求項４６】
サンプルの特性を測定するバイオマーカーに特異的な少なくとも１種類の試薬をさらに含む、請求項３９に記載のキット。
【請求項４７】
ＡＤ診断バイオマーカーのセット中の、各ＡＤ診断バイオマーカーに特異的な少なくとも１種類の試薬を結合して含む表面であって、ここで、該ＡＤ診断バイオマーカーのセットは、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳを含む、表面。
【請求項４８】
以下：
ａ．ＡＤ診断バイオマーカーのセット中の各ＡＤ診断バイオマーカーに特異的な少なくとも１種類の試薬であって、ここで、該ＡＤ診断バイオマーカーのセットがＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳからなる、試薬；および
ｂ．サンプル特性を測定するバイオマーカーに特異的な少なくとも１種類の試薬
を結合して含む、表面。
【請求項４９】
前記ＡＤ診断バイオマーカーに特異的な前記試薬が、該ＡＤ診断バイオマーカーに特異的な抗体、またはそのフラグメントである、請求項４７または請求項４８に記載の表面。
【請求項５０】
請求項４８または請求項４９の表面および個体からの末梢生物学的流体サンプルを含む、組み合わせ。
【請求項５１】
前記個体が少なくとも６０歳、６５歳、７０歳、７５歳、８０歳または８５歳である、請求項５０に記載の組み合わせ。
【請求項５２】
前記測定レベルを前記基準レベルと比較するための値を得る工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項５３】
前記測定レベルを前記基準レベルと比較するための値を得る工程をさらに包含する、請求項１３に記載の方法。
【請求項５４】
請求項５２または請求項５３の方法によって得られた前記値を含む、コンピューター可読フォーマット。
【請求項５５】
ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳを含む、ＡＤ診断バイオマーカーの基準値のセット。
【請求項５６】
ＡＤ診断バイオマーカーに特異的な試薬のセットであって、ここで、該バイオマーカーが、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳを含む、試薬のセット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は２００３年１１月１９日に提出された米国仮特許出願第６０／５２３，７９６号、２００４年４月３０日に提出された米国仮特許出願第６０／５６６，７８３号および２００４年４月３０日に提出された米国仮特許出願第６０／５６６，７８２号の利益を主張するものである。これらは全て参考としてそのまま本明細書に組み込まれる。
【０００２】
（国の援助による研究または開発に関する供述）
適用なし。
【０００３】
（コンパクトディスク付録の参照）
適用なし。
【背景技術】
【０００４】
（発明の背景）
アメリカ人の約４５０万人がアルツハイマー病（「ＡＤ」）にかかっていると推定される。２０５０年までにＡＤ患者は１１３０万人ないし１６００万人の範囲に達すると推定される。現在米国におけるＡＤの社会的コストは、米国実業界によって生み出される６１０億ドルを含めて１年間に１０００億ドルに達する。メディケアも大部分の個人的健康保険も多くの患者が必要とする長期ケアを賄うことができない。
【０００５】
アルツハイマー病は、最後には痴呆を起こす進行性記憶喪失に関連する中枢神経系の神経変性疾患である。剖検で次のような二つの病理学的特徴が観察される：海馬、大脳皮質および認識機能にとって必要なその他の脳領域における細胞外プラークおよび細胞内の塊。プラークは、ほとんどがアミロイド前駆体タンパク質（「ＡＰＰ」）に由来するペプチドであるアミロイドβ（「Ａβ」）の沈着によって形成されている。繊維状の塊は、神経繊維および微細小管関連タンパク質である高燐酸化タウプロテインからなる一対のらせん線維から形成されている。しかしこれら二つの病理学的変化がこの病気と関連しているだけなのか、またはこれら変化が実際にこの変性過程に関係しているのかどうかは明らかでない。後期発症性／散発性ＡＤは遺伝性早期発症性／家族性ＡＤ（ＦＡＤ）とほとんど同じ病態を有し、どちらの型のＡＤも共通の病的経路を辿ることが示唆される。現在、遺伝的研究により、常染色体優性の早期発生ＡＤ、アミロイド前駆体タンパク質（「ＡＰＰ」）、プレセニリン１（「ＰＳ１」）、およびプレセニリン２（「ＰＳ２」）を生成する３種類の遺伝子が確認された。第四の遺伝子、アポリポプロテインＥ（「ＡｐｏＥ」）はＡＤの最も強い、最も一般的な遺伝リスク因子であるが、必ずＡＤを起こすというわけではない。ＡＰＰおよびＰＳタンパク質に関連する全ての突然変異はＡβペプチド、特に、よりアミロイド誘起性型であるＡβ４２の産生を高める可能性がある。アミロイドプラークおよび細胞内塊の形成に対する遺伝的影響に加えて、環境因子（例えばサイトカイン、神経毒など）もＡＤの発生および進行に重要な役割を演ずるらしい。
【０００６】
ＡＤの主な臨床的特徴は記憶喪失に至る進行性認識低下である。記憶障害は新しい情報の学習障害（短期記憶喪失として特徴づけられることが多い）を含む。この病気の初期（軽度）および中期には、昔の、よく学習された事柄の記憶は保存されるようにみえるが、新しい情報は記憶に十分組み込まれない。時に関する見当識障害が記憶障害と密接に関係している。
【０００７】
言語障害もＡＤの顕著な部分である。これらは最初、自発的会話において言葉を見いだしにくいという形であらわれる。ＡＤ患者の言語はあいまいで、明確さに欠けることが多く、無意識なフレーズや決まり文句が増えるかも知れない。多くのＡＤ患者には視機能の複雑な欠陥がみられ、失行、失算および左右失見当のようなその他の焦点性認識欠陥もある。判断や問題解決の障害がよくみられる。
【０００８】
非認識性または行動性症状もＡＤには一般的であり、この症状が介護者にとって認識障害以上により大きい負担またはストレスとなることが認められる。進行性受動性から顕著な興奮までの範囲の人格的変化が一般的に報告されている。患者は感情表現の低下などの変化を示すことがある。患者の４０％までにうつ症状がある。不安についても同様なパーセンテージが確認されている。精神病が２５％に起きる。若干の症例では人格変化が認識異常に先立って起きる。
【０００９】
現在のところ患者のＡＤを診断する主な方法としては、患者の詳細な履歴を知ること、記憶および心理テストを行うこと、そして記憶喪失を説明できるその他の事柄、例えば一時的（例えばうつ状態またはビタミンＢ１２欠乏など）または慢性的（例えば発作）状態などを排除することなどが含まれる。しかしこれらの臨床的診断法は絶対確実なものではない。
【００１０】
診断に至る障害の一つは、痴呆の型の正確な指摘である；ＡＤは痴呆を起こす７０の症状の１つであるに過ぎない。このため、ＡＤは患者が死亡して始めて完全に正確に診断できる：その時解剖によってこの疾患の特徴であるアミロイドプラークおよび神経繊維塊が患者の脳に明らかにされる。その上、臨床的診断法は、患者が顕著な異常記憶喪失または人格変化をあらわし始めた後を補助するに過ぎない。それまでに患者は多分数年間はＡＤに罹っている。
【００１１】
ＡＤによって示される一般大衆の健康問題の大きさから、ＡＤの病因の解明、並びにある人がＡＤにかかり得るかどうかを診断および／または予測するために使用できるバイオマーカー類（分泌タンパク質または代謝産物）の同定にかなりの研究努力が費やされてきた。中枢神経系は体のその他の器官および系から比較的孤立しているので、大部分の研究（病因およびバイオマーカーのいずれに関しても）は中枢神経系内の出来事、遺伝子発現、バイオマーカーなどに焦点をあてている。バイオマーカーに関しては、タンパク質アミロイドβおよびタウが最もよく特徴づけられていると考えられる。研究の結果、ＡＤ患者からの脳脊髄液「ＣＳＦ」サンプルはニューロンの変性につれて放出されるタウを通常より多量に含み、βミロイドは通常より少量が含まれる：これはβミロイドがアミロイドプラークの形で脳内に留まるためと考えられる。これらのバイオマーカーはＣＳＦ中に放出されるから、試験サンプルを得るために腰椎穿刺（または「脊椎穿刺」）が必要である。
【００１２】
ＡＤの診断法に関しては多数の米国特許が発行されている：例えば特許文献１、特許文献２、特許文献３、特許文献４、特許文献５、特許文献６、特許文献７、特許文献８、特許文献９、特許文献１０、特許文献１１および特許文献１２。その他に科学文献中の多くの報告が幾つかの生化学的マーカー類およびそれらとＡＤとの相関性／関連性に関するものである；例えば非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；および非特許文献４。その他に、非特許文献５および非特許文献６はレプチンを記憶および多発性硬化症それぞれと関連づけて研究した。
【００１３】
本明細書に記載する全ての特許および出版物は参考としてそのまま本明細書に組み込まれる。
【特許文献１】米国特許第４，７２８，６０５号明細書
【特許文献２】米国特許第５，８７４，３１２号明細書
【特許文献３】米国特許第６，０２７，８９６号明細書
【特許文献４】米国特許第６，１１４，１３３号明細書
【特許文献５】米国特許第６，１３０，０４８号明細書
【特許文献６】米国特許第６，２１０，８９５号明細書
【特許文献７】米国特許第６，３５８，６８１号明細書
【特許文献８】米国特許第６，４５１，５４７号明細書
【特許文献９】米国特許第６，４６１，８３１号明細書
【特許文献１０】米国特許第６，４６５，１９５号明細書
【特許文献１１】米国特許第６，４７５，１６１号明細書
【特許文献１２】米国特許第６，４９５，３３５号明細書
【非特許文献１】Ｆａｈｎｅｓｔｏｃｋら、Ｊ．Ｎｅｕｒａｌ．Ｔｒａｎｓｍ．Ｓｕｐｐｌ．２００２年（６２）：ｐ．２４１−５２
【非特許文献２】Ｍａｓｌｉａｈら、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ａｇｉｎｇ  １９９５年，１６（４）：ｐ．５４９−５６
【非特許文献３】Ｐｏｗｅｒら、Ｄｅｍｅｎｔ．Ｇｅｒｉａｔｒ．Ｃｏｇｎ．Ｄｉｓｏｒｄ．２００１年，１２（２）：ｐ．１６７−７０
【非特許文献４】Ｂｕｒｂａｃｈら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００４年，２４（１０）：ｐ．２４２１−３０
【非特許文献５】Ｌｉら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ２００２年，１１３（３）：ｐ．６０７−１５
【非特許文献６】Ｓａｎｎａら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．２００３年，１１１（２）：ｐ．２４１−５０
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１４】
（発明の簡単な概要）
発明者らは個体の血清中に存在する、アルツハイマー病（「ＡＤ」）患者において変化している生化学的マーカーのコレクションを発見した。よってこれらのバイオマーカー（「ＡＤ診断バイオマーカー」）を使用して認識機能を評価し、ＡＤを診断しまたはＡＤ診断に役立ち、および／またはＡＤ患者のＡＤの進行を測定することができる。ＡＤ診断マーカーを個々にまたは組み合わせて使用し、ＡＤを診断しまたはＡＤ診断を補助することができる。本発明は、生物学的流体サンプル、例えば個体からの末梢生物学的流体サンプル中の１種類以上のＡＤ診断バイオマーカーの量を測定し、その測定量を各測定ＡＤ診断バイオマーカーの基準値と比較することによって、個体のＡＤを診断するまたはＡＤ診断を補助する方法を提供する。このようにして得られた情報を用いてその個体のＡＤ診断に役立ちまたはＡＤを診断することができる。よって本発明は、ある個体からの生物学的流体サンプル中の少なくとも１種類のＡＤ診断バイオマーカーの測定値を上記バイオマーカーの基準値に比較することによってアルツハイマー病（ＡＤ）の診断を補助する方法であって、上記ＡＤ診断バイオマーカーはＧＣＳＦ；ＩＦＮ−ｇ；ＩＧＦＢＰ−１；ＢＭＰ−６；ＢＭＰ−４；エオタキシン−２；ＩＧＦＢＰ−２；ＴＡＲＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＡＮＧ；ＰＡＲＣ；Ａｃｒｐ３０；ＡｇＲＰ（ＡＲＴ）；ＴＩＭＰ−１；ＴＩＭＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬ  Ｒ３；ｕＰＡＲ；ＩＧＦＢＰ−４；ＬＥＰＴＩＮ（ＯＢ）；ＰＤＧＦ−ＢＢ；ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＮＴ−３；ＮＡＰ−２；ＩＬ−１ｒａ；ＭＳＰ−ａ；ＳＣＦ；ＴＧＦ−ｂ３；ＴＮＦ−ｂ；ＭＩＰ−１ｄ；ＩＬ−３；ＦＧＦ−６；ＩＬ−６Ｒ；ｓＴＮＦ−ＲＩＩ；；ＡＸＬ；ｂＦＧＦ；ＦＧＦ−４；ＣＮＴＦ；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ｂ；ＴＰＯ；ＶＥＧＦ−Ｂ；ＩＬ−８；ＦＡＳ；ＥＧＦ−Ｒからなる群から選択されるという上記方法を提供する。ある実施例においてはＡＤ診断バイオマーカーは塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）；ＢＢホモダイマー血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）；脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）；上皮成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子６（ＦＧＦ−６）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、可溶性インターロイキン−６レセプター（ｓＩＬ−６Ｒ）、レプチン（ｏｂとしても公知である）、マクロファージ炎症性タンパク質−１δ（ＭＩＰ−１δ）、マクロファージ刺激タンパク質α鎖（ＭＳＰ−α）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、好中球活性化ペプチド−２（ＮＡＰ−２）、ＲＡＮＴＥＳ、可溶性腫瘍壊死因子レセプター−２（ｓＴＮＦ  ＲＩＩ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポイエチン（ＴＰＯ）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−１（ＴＩＭＰ−１）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−２（ＴＩＭＰ−２）、トランスフォーミング増殖因子−β３（ＴＧＦ−β３）、および腫瘍壊死因子β（ＴＮＦ−β）からなる群から選択される。ある実施例においてはＡＤ診断マーカーはＢＤＮＦ、ｓＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−８、レプチン、ＭＩＰ−１δ、ＰＤＧＦ−ＢＢおよびＴＩＭＰ−１からなる群から選択される。また別の実施例においてＡＤ診断マーカーはｓＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−８およびＴＩＭＰ−１からな��群から選択される。さらに別の実施例において、ＡＤ診断マーカーはＢＤＮＦ、ＭＩＰ−１δ、およびＴＩＭＰ−１からなる群から選択される。さらに別の実施例において、ＡＤ診断マーカーはＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳからなる群から選択される。また別の実施例において、ＡＤ診断マーカーはＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳを含んでなる。
【００１５】
本明細書には、個体からの生物学的流体サンプル中の少なくとも４種類のＡＤ診断バイオマーカー（上記バイオマーカーはＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳを含む）の測定値を各ＡＤ診断バイオマーカーの基準値と比較することを含む、アルツハイマー病（ＡＤ）の診断を補助する方法が提供される。ある実施例において、ＢＤＮＦがＢＤＮＦの基準値に比較して少なくとも約２０％減少したときにＡＤと診断される。またある実施例においてはレプチンがレプチンの基準値に比較して少なくとも２５％減少したときにＡＤと診断される。さらに別の実施例において、ＰＤＧＦ−ＢＢがＰＤＧＦ−ＢＢの基準値に比較して少なくとも約８５％減少したときに重度ＡＤと診断される。また別の実施例において、生物学的流体サンプルは末梢生物学的流体サンプルである。
【００１６】
本明細書には、ある個体からの生物学的流体サンプル中の少なくとも１種類のＡＤ診断バイオマーカーの測定値を上記バイオマーカーの基準値に比較することを含んでなる、アルツハイマー病患者のアルツハイマー病の進行をモニターする方法であって、上記ＡＤ診断バイオマーカーはＧＣＳＦ；ＩＦＮ−ｇ；ＩＧＦＢＰ−１；ＢＭＰ−６；ＢＭＰ−４；エオタキシン−２；ＩＧＦＢＰ−１２；ＴＡＲＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＡＮＧ；ＰＡＲＣ；Ａｃｒｐ３０；ＡｇＲＰ（ＡＲＴ）；ＴＩＭＰ−１；ＴＩＭＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬ  Ｒ３；ｕＰＡＲ；ＩＧＦＢＰ−４；ＬＥＰＴＩＮ（ＯＢ）；ＰＤＧＦ−ＢＢ；ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＮＴ−３；ＮＡＰ−２；ＩＬ−１ｒａ；ＭＳＰ−ａ；ＳＣＦ；ＴＧＦ−ｂ３；ＴＮＦ−ｂ；ＭＩＰ−１ｄ；ＩＬ−３；ＦＧＦ−６：ＩＬ−６；ｓＴＮＦ  ＲＩＩ；ＡＸＬ；ｂＦＧＦ；ＦＧＦ−４；ＣＮＴＦ；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ｂ；ＴＰＯ；ＶＥＧＦ−Ｂ；ＩＬ−８；ＦＡＳ；ＥＧＦ−Ｒ；からなる群から選択される上記方法が提供される。ある実施例において、ＡＤ診断バイオマーカーは、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）；ＢＢホモダイマー血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）；脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）上皮成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子６（ＦＧＦ−６）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、可溶性インターロイキン−６レセプター（ｓＩＬ−６Ｒ）、レプチン（ｏｂとしても知られている）、マクロファージ炎症性タンパク質−１δ（ＭＩＰ−１δ）、マクロファージ刺激タンパク質α鎖（ＭＳＰ−α）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、好中球活性化ペプチド−２（ＮＡＰ−２）、ＲＡＮＴＥＳ、可溶性腫瘍壊死因子レセプター−２（ｓＴＮＦ  ＲＩＩ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポイエチン（ＴＰＯ）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−１（ＴＩＭＰ−１）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−２（ＴＩＭＰ−２）、トランスフォーミング増殖因子−β３（ＴＧＦ−β３）、および腫瘍壊死因子β（ＴＧＦ−β）からなる群から選択される。他の実施例において、ＡＤ診断マーカーはＢＤＮＦ；ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳからなる群から選択される。
【００１７】
発明者らは、軽度認識欠陥（ＭＣＩ）を有する個体、認識および記憶が軽度に低下している個体、ＡＤとは異なると考えられる臨床的に認められる病気を有する個体を確認する方法も発見した。発明者らはバイオマーカーＲＡＮＴＥＳがＭＣＩ患者では減少することを見いだした。ＡＤ患者では減少するがＭＣＩ患者では減少しないバイオマーカー（例えばレプチン）を測定することによってＭＣＩ患者をＡＤ患者から区別することができる。よって、本発明は末梢生物学的流体サンプル中のＲＡＮＴＥＳレベルの測定値を得、その測定値を基準値に対して比較することによってＭＣＩを診断するか、またはＭＣＩ診断を補助する方法を提供する。幾つかの実施形態においてこの種の方法は、末梢生物学的流体サンプル中のレプチンレベルの測定値を得、その測定値を基準値に比較することを含む。このようにして得られた情報を用いて個体のＭＣＩ診断に役立ちまたはＭＣＩを診断することができる。
【００１８】
さらに、発明者はＡＤ患者からの末梢生物学的流体サンプル中の脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）およびＢＢ−ホモダイマー血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）のレベルの測定値を得ることによってＡＤ患者を層状分類する（すなわちＡＤと診断できる可能性のある個体またはＡＤと診断された個体をＡＤの種々の階層に分類する）方法を発見した。これら２種類のバイオマーカーの測定値を基準値と比較する。こうして得られた情報を使用して個体のＡＤ診断（またはＡＤの可能性があるという診断）の層状分類を補助することができる。よって本発明は、前記患者からの生物学的流体サンプル中の脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）およびＢＢホモダイマー血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）レベルの測定値をＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢの基準値と比較することを含んでなる、個体のアルツハイマー病の分類法を提供する。ある実施例において、生物学的流体サンプルは血液、血清または血漿を含む末梢性液体サンプルである。その他の実施例において、本発明の方法はさらにレプチンおよびＲａｎｔｅｓレベルの測定値をレプチンおよびＲａｎｔｅｓの基準値と比較することを含んでなり、その際ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲａｎｔｅｓの基準値はＭＭＳＥスコア２５ないし２８を有する個体からのサンプルに関するものであり、レプチンおよびＰＤＧＦ−ＢＢレベルが増加し、ＢＤＮＦおよびＲＡＮＴＥＳレベルが実質的に同じレベルに留まる場合はＭＭＳＥスコア２０ないし２５によって示される軽度ＡＤであることを示す。さらに別の実施例において、本発明の方法はさらにレプチンおよびＲａｎｔｅｓレベルの測定値をレプチンおよびＲａｎｔｅｓの基準値と比較することを含んでなり、その際ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲａｎｔｅｓの基準値はＭＭＳＥスコア２０−２５を有する個体からのサンプルに関するものであり、Ｒａｎｔｅｓ、ＢＤＮＦ、およびＰＤＧＦレベルが低下し、レプチンレベルが実質的に同じレベルに留まる場合、ＭＭＳＥ１０−２０によって示される中程度ＡＤであることを示す。
【００１９】
一局面において、本発明は個体からの末梢生物学的流体サンプル中の少なくとも１種類のＡＤ診断バイオマーカー、すなわち塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）；ＢＢホモダイマー血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）；脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）；上皮成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子６（ＦＧＦ−６）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、可溶性インターロイキン−６レセプター（ｓＩＬ−６Ｒ）、レプチン（ｏｂとしても公知である）、マクロファージ炎症性タンパク質−１δ（ＭＩＰ−１δ）、マクロファージ刺激タンパク質α鎖（ＭＳＰ−α）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、好中球活性化ペプチド−２（ＮＡＰ−２）、ＲＡＮＴＥＳ、可溶性腫瘍壊死因子レセプター−２（ｓＴＮＦ  ＲＩＩ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポイエチン（ＴＰＯ）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−１（ＴＩＭＰ−１）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−２（ＴＩＭＰ−２）、トランスフォーミング増殖因子−β３（ＴＧＦ−β３）、および腫瘍壊死因子β（ＴＮＦ−β）からなる群から選択される上記１種類のＡＤ診断バイオマーカーの測定値を得、その測定値をその基準レベルと比較することによってアルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断を補助する方法を提供する。幾つかの実施形態においては、少なくとも２、３、４また５種類のバイオマーカーについて測定値を得る。ある実施形態においては、測定値と基準値との比較は測定値と基準値との間の倍差を計算することを含む。ある実施形態においては測定値はサンプル中のＡＤ診断バイオマーカーのレベルを測定することによって得られ、ある実施形態においては測定値は第三者から得られる。個体からの末梢生物学的流体サンプル中の少なくとも１種類のＡＤ診断バイオマーカーを基準レベルと比較することによってアルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断を補助する方法も提供される。さらに、個体からの末梢生物学的流体サンプル中の少なくとも１種類のＡＤ診断バイオマーカーのレベルを測定し、基準レベルに比較して減少した場合はＡＤの診断が示唆されるという、アルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断を補助する方法が提供される。
【００２０】
その他の局面において、本発明は、個体からの末梢生物学的流体サンプル中のＲＡＮＴＥＳの測定レベルを得、この測定レベルを基準レベルに比較することによって軽度認識障害（ＭＣＩ）の診断を補助する方法を提供する。ある実施形態において、ＭＣＩの診断を補助する方法は、末梢生物学的流体サンプル中のレプチンの測定値を得、レプチン測定値を基準レベルと比較することも含む。幾つかの実施形態において、測定値はサンプル中のＲＡＮＴＥＳ（および／またはレプチン）レベルを測定することによって得られ、他の実施形態においては上記測定値（類）は第三者から得られる。基準レベルを有する個体からの末梢生物学的流体サンプル中のＲＡＮＴＥＳの測定値、および任意にレプチンの測定値を基準レベルと比較することによって軽度認識障害（ＭＣＩ）の診断を補助する方法も提供される。さらに、個体からの末梢生物学的流体サンプル中のＲＡＮＴＥＳ、および任意にレプチンのレベルを測定し、基準値と比較してＲＡＮＴＥＳレベルが減少している場合はＭＣＩの診断が示唆されるという、ＭＣＩ診断を補助する方法も提供される（レプチンを測定する実施形態においてレプチンレベルが基準値に等しいかまたは基準値より大きいこともＭＣＩを示唆する）。
【００２１】
また別の局面において本発明は、末梢生物学的流体サンプル中のレプチンの測定値を得；このレプチン測定値を基準値と比較することによって、ＡＤ患者のアルツハイマー病（ＡＤ）の進行をモニターする方法を提供する。ある実施形態においては測定値は作成したサンプル中のレプチンレベルを測定することによって得られ、ある実施形態においては測定値は第三者から得られる。末梢生物学的流体サンプル中のレプチンの測定値を基準値と比較することによって、ＡＤ患者のＡＤ進行をモニターする方法も提供される。末梢生物学的流体サンプル中のレプチンレベルを測定し、基準値と比較した際のレプチンの減少がＡＤの進行（重症度上昇）を示唆するという、ＡＤ患者のＡＤ進行をモニターする方法も提供される。
【００２２】
また別の局面において、本発明はＡＤ患者のＡＤを層状分類する方法を提供する。幾つかの実施形態において、軽度ＡＤと、より進行したＡＤとの類別は、ＡＤ患者からの末梢生物学的流体サンプル中の脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）レベルの測定値を得、その測定値をＢＤＮＦの基準値と比較することによって行われる。その他の実施形態において、軽度、中程度および重度ＡＤ間の類別は、ＢＤＮＦおよびＢＢホモダイマー血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）のレベルを測定し、その測定値をＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢの基準値と比較することによって行われる。幾つかの実施形態において測定値は、サンプル中のＢＤＮＦ（およびＰＤＧＦ−ＢＢ）レベル（類）を測定して測定値（類）を生成することによって得られ、一方他の実施形態において測定値（類）は第三者から得られる。ＡＤ患者からの末梢生物学的流体サンプル中のＢＤＮＦ（および任意にＰＤＧＦ−ＢＢ）レベルをＢＤＮＦ（および適切な場合はＰＤＧＦ−ＢＢ）の基準値と比較することによってＡＤ患者のＡＤを層化するという方法も提供される。さらに末梢生物学的流体サンプル中のＢＤＮＦレベル（および任意にＰＤＧＦ−ＢＢレベル）を測定し、（基準値に比較して）低いレベルのＢＤＮＦは軽度ＡＤを示唆し、高いレベルのＢＤＮＦ（基準値に比較して）はより進行したＡＤを示唆し、高レベルのＢＤＮＦおよび低レベルのＰＤＧＦ−ＢＢ（基準値に比較して）は中程度ＡＤを示唆し、高レベルのＢＤＮＦおよび高レベルのＰＤＧＦ−ＢＢ（基準値に比較して）は重度ＡＤを示唆することによって、ＡＤ患者のＡＤを層化する方法が提供される。
【００２３】
幾つかの実施形態において、末梢生物学的流体サンプルは血液体サンプルである。ある実施形態において、末梢生物学的流体サンプルは血漿サンプルである。他の実施形態において末梢生物学的流体サンプルは血清サンプルである。
【００２４】
もう一つの局面において、本発明は有望な候補作用物質におけるＡＤバイオマーカー調節活性をアッセイすることによってアルツハイマー病治療のための候補作用物質を同定する方法を提供する。その際上記ＡＤバイオマーカーは塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）；ＢＢホモダイマー血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）；脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）；上皮成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子６（ＦＧＦ−６）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、可溶性インターロイキン−６レセプター（ｓＩＬ−６Ｒ）、レプチン（ｏｂとしても公知である）、マクロファージ炎症性タンパク質−１δ（ＭＩＰ−１δ）、マクロファージ刺激タンパク質α鎖（ＭＳＰ−α）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、好中球活性化ペプチド−２（ＮＡＰ−２）、ＲＡＮＴＥＳ、可溶性腫瘍壊死因子レセプター−２（ｓＴＮＦ  ＲＩＩ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポイエチン（ＴＰＯ）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−１（ＴＩＭＰ−１）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−２（ＴＩＭＰ−２）、トランスフォーミング増殖因子−β３（ＴＧＦ−β３）、および腫瘍壊死因子β（ＴＮＦ−β）からなる群から選択される。本明細書には、有望な候補作用物質についてＡＤバイオマーカーを調節する活性をアッセイすることを含んでなる、アルツハイマー病治療の候補作用物質を同定する方法が提供される。前記ＡＤバイオマーカーはＧＣＳＦ；ＩＦＮ−ｇ；ＩＧＦＢＰ−１；ＢＭＰ−６；ＢＭＰ−４；エオタキシン−２；ＩＧＦＢＰ−２；ＴＡＲＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＡＮＧ；ＰＡＲＣ；Ａｃｒｐ３０；ＡｇＲＰ（ＡＲＴ）；ＴＩＭＰ−１；ＴＩＭＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬ  Ｒ３；ｕＰＡＲ；ＩＧＦＢＰ−４；ＬＥＰＴＩＮ（ＯＢ）；ＰＤＧＦ−ＢＢ；ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＮＴ−３；ＮＡＰ−２；ＩＬ−１ｒａ；ＭＳＰ−ａ；ＳＣＦ；ＴＧＦ−ｂ３；ＴＮＦ−ｂ；ＭＩＰ−１ｄ；ＩＬ−３；ＦＧＦ−６；ＩＬ−６Ｒ；ｓＴＮＦ−ＲＩＩ；；ＡＸＬ；ｂＦＧＦ；ＦＧＦ−４；ＣＮＴＦ；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ｂ；ＴＰＯ；ＶＥＧＦ−Ｂ；ＩＬ−８；ＦＡＳ；ＥＧＦ−Ｒからなる群から選択される。ある実施例において、上記ＡＤバイオマーカーはＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳからなる群から選択される。
【００２５】
さらなる局面において、本発明はＡＤ診断マーカーに特異的な少なくとも１種類の試薬と、本明細書に記載されるＡＤ診断を補助する方法を実施するための指示書とを含むアルツハイマー病（ＡＤ）診断キットを提供する；上記ＡＤ診断バイオマーカーは塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）、；ＢＢホモダイマー血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）；脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）；上皮成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子６（ＦＧＦ−６）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、可溶性インターロイキン−６レセプター（ｓＩＬ−６Ｒ）、レプチン（ｏｂとしても公知である）、マクロファージ炎症性タンパク質−１δ（ＭＩＰ−１δ）、マクロファージ刺激タンパク質α鎖（ＭＳＰ−α）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、好中球活性化ペプチド−２（ＮＡＰ−２）、ＲＡＮＴＥＳ、可溶性腫瘍壊死因子レセプター−２（ｓＴＮＦ  ＲＩＩ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポイエチン（ＴＰＯ）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−１（ＴＩＭＰ−１）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−２（ＴＩＭＰ−２）、トランスフォーミング増殖因子−β３（ＴＧＦ−β３）、および腫瘍壊死因子β（ＴＮＦ−β）からなる群から選択される。本明細書には、少なくとも１種類のＡＤ診断マーカーに特異的な少なくとも１種類の試薬と、本明細書に提供される方法を実施するための指示書とを含むキット類が提供され、前記少なくとも１種類のＡＤ診断バイオマーカーはＧＣＳＦ；ＩＦＮ−ｇ；ＩＧＦＢＰ−１；ＢＭＰ−６；ＢＭＰ−４；エオタキシン−２；ＩＧＦＢＰ−２；ＴＡＲＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＡＮＧ；ＰＡＲＣ；Ａｃｒｐ３０；ＡｇＲＰ（ＡＲＴ）；ＴＩＭＰ−１；ＴＩＭＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬ  Ｒ３；ｕＰＡＲ；ＩＧＦＢＰ−４；ＬＥＰＴＩＮ（ＯＢ）；ＰＤＧＦ−ＢＢ；ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＮＴ−３；ＮＡＰ−２；ＩＬ−１ｒａ；ＭＳＰ−ａ；ＳＣＦ；ＴＧＦ−ｂ３；ＴＮＦ−ｂ；ＭＩＰ−１ｄ；ＩＬ−３；ＦＧＦ−６；ＩＬ−６Ｒ；ｓＴＮＦ−ＲＩＩ；；ＡＸＬ；ｂＦＧＦ；ＦＧＦ−４；ＣＮＴＦ；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ｂ；ＴＰＯ；ＶＥＧＦ−Ｂ；ＩＬ−８；ＦＡＳ；ＥＧＦ−Ｒからなる群から選択される。加えて本明細書にはＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳを含んでなるＡＤ診断バイオマーカー類の基準値セット、およびＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳを含んでなるＡＤ診断バイオマーカー類に特異的な試薬セットが提供される。
【００２６】
もう一つの局面において、本発明はＲＡＮＴＥＳに特異的な少なくとも１種類の試薬、および本明細書に記載のＭＣＩの診断を補助する方法を実施するための指示書類を含む、軽度認識障害（ＭＣＩ）患者を確認するためのキット類が提供される。ある実施形態において、ＭＣＩ患者を確認するためのキット類はレプチンに特異的な試薬も含む。
【００２７】
また別の局面において、本発明はレプチンに特異的な少なくとも１種類の試薬と、本明細書に記載のＡＤの進行をモニターする方法を実施するための指示書類とを含む、ＡＤ患者のアルツハイマー病（ＡＤ）の進行をモニターするためのキット類を提供する。
【００２８】
さらに別の局面において、本発明は脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）に特異的な少なくとも１種類の試薬、ＢＢホモダイマー血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）に特異的な少なくとも１種類の試薬、および本明細書に記載のＡＤ患者を層化する方法を実施するための指示書類を含む、アルツハイマー病（ＡＤ）患者を層化するためのキット類を提供する。また別の実施例においてキット類は、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳからなる群から選択されるＡＤ診断マーカーを含む。キット類のまた別の実施例において、ＡＤ診断バイオマーカーに特異的な試薬は、前記ＡＤ診断バイオマーカーに特異的な抗体、またはそのフラグメントである。その他の実施例において、キット類はさらに、サンプルの特性を測定するバイオマーカーに特異的な、少なくとも１種類の試薬を含む。
【００２９】
本明細書にはＡＤ診断バイオマーカーセット中の各ＡＤ診断バイオマーカーに特異的な少なくとも１種類の試薬が結合する表面が提供される。前記ＡＤ診断バイオマーカーセットはＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳからなる。本明細書には、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳからなるＡＤ診断バイオマーカーセット中の各ＡＤ診断バイオマーカーに特異的な少なくとも１種類の試薬と；サンプルの特性を測定する、バイオマーカーに特異的な少なくとも１種類の試薬とが結合している表面が提供される。さらに別の実施例において、本明細書には、前記ＡＤ診断バイオマーカーに特異的な前記試薬が前記ＡＤ診断バイオマーカーに特異的な抗体またはそのフラグメントであるという表面が提供される。
【００３０】
本明細書には、各ＡＤ診断バイオマーカーに特異的な少なくとも１種類の試薬が結合した本明細書に記載される表面と、個体からの末梢生物学的流体サンプルとからなる組み合わせが提供される。ある実施例において前記個体は最低６０、６５、７０、７５、８０または８５歳である。
【００３１】
本明細書には、生物学的流体サンプルの測定レベルを基準レベルに比較するための数値を得る方法が提供される。本発明は、本明細書に記載の方法によって得られる数値を含む、コンピューター可読フォーマットを提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３２】
（発明の詳細な説明）
ＡＤ、ＰＤ、前頭側頭痴呆、脳血管疾患、多発性硬化症およびニューロパシーにおいて炎症および損傷反応は常にニューロン変性と関係している。脳およびＣＮＳはそれ自体免疫学的に活性であるだけでなく、複雑な末梢性免疫学的相互作用も有する。Ｆｉａｌａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．Ｊｕｌ；４（７）：４８０−９）は、アルツハイマー病においては血液−脳障壁の透過性および化学走性の変化（一部ケモカイン類およびサイトカイン類によって媒介される）が、末梢細胞の脳実質への補充および経内皮的通過を可能にすることを示唆した。ヒト脳内皮および星状グリア細胞を用いて、ｉｎ  ｖｉｖｏで観察される解剖学的および生理学的特徴を有する血液−脳障壁パラダイムが作られた。このモデルを用いて、この血液−脳障壁モデルの脳側がＡβ１−４２によって攻撃された際の単球／マクロファージの移行能力を試験した。このモデルにおいて脳側のＡβ１−４２および単球は、単球の血液側から脳側への移行を増強した。ある個体群において循環する単球／マクロファージは、活性化小グリア細胞およびマクロファージによって生成したケモカインによって補強されると、アルツハイマー病の脳の炎症性破壊に参加することがある。
【００３３】
発明者らは、血清中で同時に測定した多数の分泌マーカーの相対的濃度をモニターするやり方が、任意の単一生化学的マーカーの絶対濃度の測定によって可能な感度にくらべてより敏感な疾患亢進モニター法であると主張している。表７の５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００マーカーを同時に使用する構成物またはアレーは固体支持体に結合した抗体類または固体支持体に結合したタンパク質からなり、ＡＤ、ＰＤ、前頭側頭痴呆、脳血管病、多発性硬化症およびニューロパシーにおけるニューロン変性と関連する炎症および損傷反応マーカーを検出できる。
【００３４】
発明者らは、ＡＤを診断し、ＡＤ診断に役立ち、ＡＤ患者のＡＤをモニターし（例えばＡＤ患者の疾患進行を追跡する；これはＡＤ患者の内科的または外科的治療結果を追跡するのに有用である）、ＡＤ患者を層化し、軽度認識障害（ＭＩＣ）を診断しまたは診断に役立ち、並びに認識障害を診断しまたは診断を補助するために有用な生化学的マーカー類のコレクション（まとめて「ＡＤバイオマーカー類と呼ぶ」）を発見した。上記ＡＤバイオマーカー類は個体の生物学的液中に存在する。ある実施例ではＡＤバイオマーカー類は個体類の末梢性生物学的液（例えば血液）中に存在し、比較的非侵襲的な方法、特に一般に利用される腰椎穿刺法に比較して非侵襲的な方法によるサンプル採取が可能である。
【００３５】
（定義）
本明細書に使用される用語「アルツハイマー患者」、「ＡＤ患者」、および「ＡＤと診断された個体」は全てＡＤと診断された個体または、アルツハイマー病（ＡＤ）の可能性があると診断された個体を指す。
【００３６】
本明細書に使用される用語「ＡＤバイオマーカー」はＡＤ診断バイオマーカーであるバイオマーカーを言う。
【００３７】
本明細書に使用される用語「ＡＤバイオマーカーポリヌクレオチド」はＡＤバイオマーカーをコードするポリヌクレオチド配列、関連するトランスに作用する調節因子（例えばプロモータ、エンハンサおよびその他の遺伝子調節配列）、および／またはＡＤバイオマーカーをコードするｍＲＮＡのいずれかである。
【００３８】
本明細書に使用される「診断を補助する」方法とは、ＡＤまたはＭＣＩの存在または性質に関する臨床的決定に役立ち、確定診断に関して決定的であるかも知れないし、決定的でないかも知れない方法を言う。したがって、例えばＡＤ診断を補助する方法は、個体から採取した生物学的サンプル中の１種類以上のＡＤバイオマーカー量を測定することを含む。
【００３９】
本明細書に使用される用語「層化する」はある神経的疾患の特徴に基づいて個体を異なるクラスまたは層に分けることを言う。例えばアルツハイマー病にかかった個体の集団を層化するとは、上記疾患の重症度に基づいて上記個体群を割り付ける（例えば軽度、中程度、進行性、などに）ことを含む。
【００４０】
本明細書に使用される用語「予測する」とは、ある個体において神経疾患を発生する可能性が非常に高いことを見いだすことを言う。
【００４１】
本明細書に使用される用語「神経疾患」とは中枢神経系の病気または異常を意味する。神経疾患は多発性硬化症、ニュ−ロパシー、および神経変性疾患、例えばＡＤ、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、軽度認識障害（ＭＣＩ）および前頭葉性痴呆などを含む。
【００４２】
本明細書に使用する「生物学的流体サンプル」は個体から得られる種々の型の液体サンプルを包含し、診断的またはモニタリングアッセイに使用できる。この定義は血液、脳脊髄液（ＣＳＦ）、尿、および生物由来のその他の液体サンプルを包含する。この定義は、採取後に試薬による処理、可溶化、またはタンパク質またはポリヌクレオチドなどの成分類の添加など、なんらかの操作を加えたサンプルも含む。
【００４３】
本明細書に使用される用語「末梢生物学的流体サンプル」は中枢神経系に由来しない（すなわちＣＳＦサンプルでない）生物学的流体サンプルを指し、血液体サンプルおよび、ＣＮＳから誘導されないその他の生物学的液を含む。
【００４４】
「血液体サンプル」は血液から、好ましくは末梢（または循環）血液から誘導される生物学的サンプルである。血液体サンプルは例えば全血、血漿または血清でよい。
【００４５】
「個体」は哺乳動物、より好ましくはヒトである。哺乳動物は非制限的にヒト、霊長類、家畜、競技用動物、齧歯類およびペットなどである。
【００４６】
定量的および定性的データに関して本明細書に使用される「正常な」個体、または「正常な」個体からのサンプルは、ＡＤまたはＭＣＩにかかっていないかまたは医者がＡＤまたはＭＣＩではないと評価した個体、およびＭｉｎｉ−Ｍｅｎｔａｌ  Ｓｔａｔｅ  Ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ（ＭＭＳＥ）（Ｆｏｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒ．Ｒｅｓ  １９７５；１２：１２８９−１９８を参照）スコア２５〜３０を有するかまたは２５〜３０の範囲のＭＭＳＥスコアに達すると考えられる個体について言う。「正常な」個体は評価すべき個体とは一般に５ないし１０年の範囲内で年齢的にマッチしている（非制限的に、年齢が一致した個体も含む）。
【００４７】
「軽度ＡＤの個体」とは（ａ）ＡＤと診断されたかまたはＡＤの可能性ありと診断され、（ｂ）Ｍｉｎｉ−Ｍｅｎｔａｌ  Ｓｔａｔｅ  Ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ（ＭＭＳＥ）（Ｆｏｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒ．Ｒｅｓ  １９７５；１２：１２８９−１９８を参照）で評価され、２２−２７と採点されたか、またはＭＭＳＥ試験でスコア２２−２７に達すると考えられる個体である。したがって「軽度ＡＤ」とは、ＭＭＳＥで評価して２２−２７と採点されるか、ＭＭＳＥ試験で２２−２７のスコアに達すると考えられる個体のＡＤを言う。
【００４８】
「中程度ＡＤの個体」は、（ａ）ＡＤと診断されたかまたはＡＤの可能性ありと診断され、（ｂ）ＭＭＳＥで評価して１６−２１と採点されたか、ＭＭＳＥ試験で１６−２１のスコアを得ると考えられる個体である。よって、「中程度ＡＤ」とはＭＭＳＥで評価され、１６−２１と採点されたかまたはＭＭＳＥ試験で１６−２１のスコアを得ると考えられる個体のＡＤを言う。
【００４９】
「重度ＡＤの個体」は（ａ）ＡＤと診断されたかまたはＡＤの可能性ありと診断され、（ｂ）ＭＭＳＥで評価して１２−１５と採点されるかまたはＭＭＳＥ試験で１２−１５のスコアを得ると考えられる個体である。よって、「重度ＡＤ」とは、ＭＭＳＥで評価され、１２−１５と採点されたかまたはＭＭＳＥ試験で１２−１５のスコアを得るであろうと考えられる個体のＡＤを言う。
【００５０】
本明細書に使用される用語「処置」とは、症状の軽減、改善、および／または安定化、並びに特定の疾患の症状の進行の遅滞を言う。例えば、ＡＤの「処置」は次のうちの任意の一つ以上を含む：一つ以上のＡＤ症状の排除、一つ以上のＡＤ症状の軽減、ＡＤの諸症状の安定化（例えばＡＤがより進んだ病期へ進行しない）、および一つ以上のＡＤ症状の進行（すなわち悪化）の遅滞。
【００５１】
本明細書に使用される用語「倍数差」はＡＤバイオマーカーの測定値と基準値との差の大きさを数字で表したものである。倍数差は測定値の数字を基準値の数字で割ることによって計算される。例えばＡＤバイオマーカーの測定値が２０ナノグラム／ミリリットル（ｎｇ／ｍｌ）で、基準値が１０ｎｇ／ｍｌである場合、倍数差は２である（２０／１０＝２）。或いは、ＡＤバイオマーカーの測定値が１０ナノグラム／ミリリットル（ｎｇ／ｍｌ）で、基準値が２０ｎｇ／ｍｌである場合、倍数差は１０／２０または−．５０または−５０％である。
【００５２】
本明細書に使用される「基準値」は絶対値；相対値；上限および／または下限を有する値；数値の範囲；平均値（ａｖｅｒａｇｅ  ｖａｌｕｅ）；中間値；平均値（ｍｅａｎ  ｖａｌｕｅ）、または特定のコントロールまたはベースライン値に比較した数値でよい。基準値は個々のサンプル値、例えばＡＤ、ＭＣＩまたは認識障害患者から、より早期の時点に採取したサンプルから得られる数値、または検査する個体以外のＡＤ患者のサンプルから得られる数値、または「正常」個体（すなわちＡＤと診断されていない個体）からのサンプルから得られる数値に基づくものでもよい。基準値は多数のサンプル、例えば複数のＡＤ患者または正常個体から得られるサンプルに基づくものでもよいし、試験すべきサンプルを含むまたは含まないサンプル群に基づくものでもよい。
【００５３】
本明細書に使用される「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は別途記載がない限り、単数または複数を意味することができる（すなわち１つ以上を意味する）。
【００５４】
（発明の方法）
（バイオマーカーを決定する方法）
本発明は神経疾患の診断、診断の補助、層化、リスク評価、モニタリングおよび／または予測のために有用な１種類以上のバイオマーカーを決定する方法を提供する。本発明のある局面において、１つ以上の個体からの末梢生物学的流体サンプルのセットについてバイオマーカー群のレベルを得る。それらサンプルはある神経疾患をベースとして１つ以上のサブセットに分離できる（例えば正常個体や筋萎縮性側索硬化症と診断された個体からのサンプルまたは軽度アルツハイマー病患者および重度アルツハイマー病患者からのサンプル）。それらサンプルからの測定値を互いに比較してそれらサブセット間で異なるバイオマーカーを確認する。それらサブセット間で顕著に変化するバイオマーカー類をその後、診断の補助、診断、層化、モニタリングおよび／または予測のための方法に利用する。本発明のその他の局面において、１つ以上の個体から得たある末梢生物学的流体サンプルのセット（上記サンプルはある神経疾患をもとにして１つ以上のサブセットに分けることができる）の測定値を比較する。その際顕著に変化するバイオマーカーは神経疾患の診断の補助、診断、層化、モニタリングおよび／または予測を補助する。本発明のさらに別の局面において、１つ以上の個体から得られる末梢生物学的流体サンプルセットのレベル（このサンプルは神経疾患をもとに１つ以上のサブセットに分けることができる）を測定し、測定値を得る。その際顕著に変化するバイオマーカー類は診断の補助、診断、層化、モニタリングおよび／または予測を補助する。
【００５５】
本発明は１つ以上の個体から誘導される血液などの末梢生物学的流体サンプルのセットを利用する。サンプルセットは、ある神経疾患をもとに１つ以上のサブセットに分割することができる。サブセットへの分割は疾患の存否、疾患の層化（例えば軽度  対  中程度）、または疾患の下位分類（例えば再発／緩解  対  進行性再発）に基づいて行うことができる。
【００５６】
本発明を実施する際に測定されるバイオマーカー類は末梢生物学的流体サンプル中に見いだされる任意のタンパク質性生物学的マーカーである。表７は定型的バイオマーカーのコレクションを含む。本明細書には追加的バイオマーカーが記載されている。
【００５７】
よって、本発明は神経変性疾患のような神経疾患の診断の補助、診断、発見、層化、および／または予測に役立ち得る１種類以上のバイオマーカーを決定する方法を提供する。本発明の方法は末梢生物学的流体サンプルセットから得られる複数のバイオマーカーについて測定値セットを得（その際上記末梢生物学的流体サンプルセットはある神経疾患に関して少なくとも２つのサブセットに分けられる）、各バイオマーカーについて上記サブセット間で前記測定値を比較し、上記サブセット間で有意に異なるバイオマーカーを確認するというやり方で実施される。
【００５８】
測定値を比較する方法は当業者に公知の任意の方法、例えばマイクロアレイの有意性の分析、ツリー・ハーベスティング、ＣＡＲＴ、ＭＡＲＳ、自己組織化マップ、頻出アイテムセットまたはベイジアンネットワークによって行われる。
【００５９】
一局面において、本発明は複数のバイオマーカーについて末梢生物学的流体サンプルセットから測定値を得（その際上記末梢生物学的流体サンプルセットはある神経疾患に関してサブセットに分けられ）、少なくとも１種類のバイオマーカーについて各サブセットから得られる測定値を比較し；測定値がサブセット間で有意に異なる少なくとも１種類のバイオマーカーを確認することによって、神経疾患の診断に有用な１種類以上のバイオマーカーを決定する方法を提供する。幾つかの実施形態において、上記比較プロセスはマイクロアレイの有意性の分析を用いて行われる。ある実施形態において、神経変性疾患はアルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）からなる群に含まれる。
【００６０】
もう一つの局面において、本発明は複数のバイオマーカーについて末梢生物学的流体サンプルセットから測定値を得（その際末梢生物学的流体サンプルセットはある神経疾患に関してサブセットに分けられる）、少なくとも１種類のバイオマーカーについて各サブセットからの測定値を比較し；測定値がサブセット間で有意に異なるバイオマーカーを確認するというやり方で神経疾患の診断の補助を補助する少なくとも１種類のバイオマーカーを決定する方法を提供する。
【００６１】
さらに別の局面において、本発明は複数のバイオマーカーについて末梢生物学的流体サンプルセットから測定値を得（その際末梢生物学的流体サンプルセットはある神経疾患の層に関してサブセットに分けられ）；少なくとも１種類のバイオマーカーについて各サブセットからの測定値を比較し；測定値がサブセット間で有意に異なるバイオマーカーを確認するというやり方で神経疾患の層化を補助する少なくとも１種類のバイオマーカーを決定する方法を提供する。
【００６２】
また別の局面において、本発明は複数のバイオマーカーについて末梢生物学的流体サンプルセットから測定値を得（その際上記末梢生物学的流体サンプルセットはある神経疾患の階層に関してサブセットに分けられ）、少なくとも１種類のバイオマーカーについて各サブセットからの測定値を比較し；測定値がサブセット間で有意に異なるバイオマーカーを確認するというやり方で神経疾患のモニタリングに有用な少なくとも１種類のバイオマーカーを決定する方法を提供する。
【００６３】
さらに別の局面において、本発明は複数のバイオマーカーについて末梢生物学的流体サンプルセットから測定値を得、その際上記末梢生物学的流体サンプルセットはある神経疾患に関してサブセットに分けられ、少なくとも１種類のバイオマーカーについて各サブセットからの測定値を比較し；測定値がサブセット間で有意に異なるバイオマーカーを確認するというやり方で、神経疾患を予測するのに有用な少なくとも１種類のバイオマーカーを決定する方法を提供する。
【００６４】
（認識機能を評価する方法）
本明細書には、個体からの生物学的流体サンプル、例えば個体からの末梢生物学的流体サンプル中の１種類以上のＡＤ診断バイオマーカーを測定し、これら測定レベルと基準レベルとを比較するというやり方で、認識機能の評価、認識障害の評価、認識障害の診断または認識障害の診断補助を行う方法が提供される。本明細書の「ＡＤ診断マーカー」とは本明細書に記載されるマーカー類およびそれらの使用を示す便宜上の用語で、ＡＤを診断するためだけに使用されるマーカーを示すものではない。本開示が明らかにするように、これらのバイオマーカーは例えば認識機能の評価、ＭＣＩの評価、ＡＤ発生リスクの評価、ＡＤの層化などに有用である。ＡＤバイオマーカーは非制限的に、人の生物学的液（すなわち生物学的流体サンプル）、例えば全血、血漿または血清などを含む血液；尿；脳脊髄液；涙；および唾液などに存在する分泌タンパク質類または代謝産物を含む。生物学的流体サンプルは臨床的サンプルを包含し、血清、血漿およびその他の生物学的液も含む。本明細書に記載されるように、結果の評価は、データが本明細書に記載される定性的または定量的方法によって得られたかどうか、および／または使用した基準点のタイプに左右されることがある。例えば実施例４に記載されるように、ＡＤバイオマーカーレベルの定性的測定が別の基準レベルに対して行われ、上記別の基準レベルはまた別のＡＤバイオマーカーレベルに相対的なものであるかも知れない。本明細書の例えば実施例７に記載されるその他の方法では、生物学的流体サンプル中の定量値または絶対値、すなわちタンパク質濃度レベル、が得られる。「定量的」結果またはデータは絶対値を示し（実施例７を参照）、それはサンプル中の分子ｐｇ／ｍｌまたはｎｇ／ｍｌであらわされるバイオマーカー濃度を含む。定量値の例は、例えばＥＬＩＳＡ法によるタンパク質レベル濃度の直接的測定値である。「定性的」結果またはデータは基準値に比較した相対値を与える。本明細書のある実施例では（実施例４）、定性的測定値はフィルター上のシグナル強度によって評価される。本明細書のある実施例において、ＡＤバイオマーカーに特異的な複数の抗体がスライドまたはフィルターなどの適切な表面に結合する。
【００６５】
一局面において、本発明は、個体からの生物学的流体サンプル、例えば個体からの末梢生物学的流体サンプル中の１種類以上のＡＤ診断バイオマーカー類の測定レベルを知り、それらの測定レベルを基準レベルに比較するというやり方でアルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断に役立てる方法、およびＡＤを診断する方法を提供する。ある実施例においては、ＡＤ診断バイオマーカーは表７に示す群から選択される。別の実施例においてＡＤ診断バイオマーカーは群ＧＣＳＦ；ＩＦＮ−ｇ；ＩＧＦＢＰ−１；ＢＭＰ−６；ＢＭＰ−４；エオタキシン−２；ＩＧＦＢＰ−２；ＴＡＲＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＡＮＧ；ＰＡＲＣ；Ａｃｒｐ３０；ＡｇＲＰ（ＡＲＴ）；ＴＩＭＰ−１；ＴＩＭＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬ  Ｒ３；ｕＰＡＲ；ＩＧＦＢＰ−４；ＬＥＰＴＩＮ（ＯＢ）；ＰＤＧＦ−ＢＢ；ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＮＴ−３；ＮＡＰ−２；ＩＬ−１ｒａ；ＭＳＰ−ａ；ＳＣＦ；ＴＧＦ−ｂ３；ＴＮＦ−ｂ  ＭＩＰ−１ｄ；ＩＬ−３；ＦＧＦ−６；ＩＬ−６Ｒ；ｓＴＮＦ−ＲＩＩ；；ＡＸＬ；ｂＦＧＦ；ＦＧＦ−４；ＣＮＴＦ；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ｂ；ＴＰＯ；ＶＥＧＦ−Ｂ；ＩＬ−８；ＦＡＳ；ＥＧＦ−Ｒから選択される。また別の実施例において、ＡＤ診断バイオマーカーは表３に示す群から選択される。さらに別の実施例において、ＡＤ診断バイオマーカーはＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳからなる群から選択される。本明細書の実施例に示されるように、定量的レプチンおよびＢＤＮＦレベルはＭＭＳＥと統計的に有意な正の相関関係を有する；定量的ＰＤＧＦ−ＢＢレベルは男性においてＭＭＳＥスコアと統計的に有意な負の相関関係を有する；そして定量的ＲＡＮＴＥＳレベルはＰＤＧＦ−ＢＢおよびＢＤＮＦと統計的に有意な正の相関関係を有する。ある実施例において、アルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断を補助する方法およびＡＤを診断する方法に使用するためのＡＤ診断バイオマーカーは次の４種類のバイオマーカーのうちの２種類以上を含む：ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳ。さらに別の実施例において、アルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断を補助する方法およびＡＤを診断する方法に使用するためのＡＤ診断バイオマーカーは、レプチンとＲＡＮＴＥＳ；レプチンとＢＤＮＦ；レプチンとＰＤＧＦ−ＢＢ；レプチン、ＲＡＮＴＥＳおよびＢＤＮＦ；レプチン、ＲＡＮＴＥＳおよびＰＤＧＦ−ＢＢ；レプチン、ＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢ；ＲＡＮＴＥＳとＢＤＮＦ；ＲＡＮＴＥＳとＰＤＧＦ−ＢＢ；ＲＡＮＴＥＳ、ＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢ；ＢＤＮＦとＰＤＧＦ−ＢＢ；またはレプチン、ＲＡＮＴＥＳ、ＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢを含む。ある実施例において、ＡＤの診断を補助する方法またはＡＤを診断する方法に用いられるＡＤ診断マーカーにはレプチン、ＲＡＮＴＥＳ、ＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢが含まれる。ある実施例において、ＡＤの診断を補助する方法またはＡＤを診断する方法に用いられるＡＤ診断マーカーは（実質的に）レプチン、ＲＡＮＴＥＳ、ＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢからなる。
【００６６】
本明細書に記載されるような、認識機能を評価し、ＡＤの診断に役立ち、ＡＤを診断する方法は次の諸工程のいずれを含んでもよい：個体から生物学的流体サンプルを採取し、サンプル中の少なくとも１種類のＡＤ診断バイオマーカーのレベルを測定し、その測定レベルを適切な基準に比較する；あるサンプル中の少なくとも１種類のＡＤ診断バイオマーカーの測定レベルを得てその測定レベルを適切な基準に比較する；サンプルから得られる少なくとも１種類のＡＤ診断バイオマーカーの測定レベルを適切な基準に比較する；サンプル中の少なくとも１種類のＡＤ診断バイオマーカーのレベルを測定する；サンプル中の少なくとも１種類のＡＤ診断バイオマーカーのレベルを測定し、その測定レベルを適切な基準に比較する；測定レベルと適切な基準との比較に基づいてＡＤを診断する；またはサンプル中の少なくとも１種類のＡＤ診断バイオマーカーについて測定値を得る。ＡＤ診断バイオマーカーの測定レベルを基準レベルに比較する工程、またはサンプル中のＡＤ診断バイオマーカーの測定値を得る工程を、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上のＡＤ診断バイオマーカー（類）で行うことができる。本発明は本明細書に記載される分析法の結果を評価する方法も提供する。このような評価は一般的にそのような結果の再検討を伴い、例えば臨床的および／または診断的フォローアップおよび／または処置の選択可能性に関するアドバイスを補助する。本発明は、本明細書に記載のＡＤ診断バイオマーカーの測定レベルを測定するかまたは入手し、または比較することによって、ある生物学的流体サンプルを下記の任意の１つ以上のインジケータに関して評価する方法も提供する：すなわち認識機能および／または障害；ＭＣＩ；ＡＤ；ＡＤの程度、例えば軽度、中程度、重度；ＡＤの進行。認識障害を評価する方法には、ＭＭＳＥスコアリングに匹敵すると一般に認められているＡＤＡＳ−ＣＯＧがある。
【００６７】
本明細書に記載のＡＤ診断法において基準レベルとは、特定のＡＤ診断バイオマーカーに関して「正常」と考えられるあらかじめ決められたレベル（ＡＤと診断されていない、年齢的にマッチする個体群の平均レベル）である；ただし同時に決定される基準レベル（例えば被験サンプルを含むサンプル群から誘導される基準値）も考慮される。生物学的流体サンプル、例えば末梢生物学的流体サンプル中の少なくとも１種類のＡＤ診断バイオマーカーの測定レベルを基準レベルに比較することによってアルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断に役立てる方法も提供される。さらに個体からの生物学的流体サンプル、例えば末梢生物学的流体サンプル中の少なくとも１種類のＡＤ診断バイオマーカーのレベルの測定によって、アルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断に役立てる方法も提供される。本明細書に開示されるＡＤ診断バイオマーカーについて、基準レベルより低いマーカー測定値はＡＤの診断を示唆し（すなわちＡＤの診断の役に立つ）または指示する。
【００６８】
もう一つの局面において、本発明は、個体からの生物学的流体サンプル、例えば末梢生物学的流体サンプル中のＲＡＮＴＥＳの定量的測定レベルを測定し、そのレベルを基準レベルに比較するというやり方で軽度認識障害（ＭＣＩ）にかかった個体を確認する方法を提供する。一般にＲＡＮＴＥＳの基準レベルは、ＲＡＮＴＥＳの正常と考えられるあらかじめ決定されたレベルであり、ＲＡＮＴＥＳについて年齢的にマッチする正常レベルである。ただし同時に決定される基準レベル（例えば被験サンプルを含めたサンプル群から誘導される基準値）も考慮される。個体からの生物学的流体サンプル、例えば末梢生物学的流体サンプル中のＲＡＮＴＥＳの定量的測定レベルを基準レベルと比較することによってＭＣＩの診断に役立てる方法も提供される。その他に、個体からの生物学的流体サンプル、例えば末梢生物学的流体サンプル中のＲＡＮＴＥＳのレベルを測定することによってＭＣＩの診断に役立てる方法も提供される。個体からの生物学的流体サンプル、例えば末梢生物学的流体サンプル中のＲＡＮＴＥＳの定量的レベルが低い（基準値より低い）という知見は、ＭＣＩの診断を示唆するか（すなわちＭＣＩの診断の役に立つ）または指示する。幾つかの実施形態において、このような方法は生物学的流体サンプル、例えば末梢性生物学的サンプル中のレプチンの定量的レベルを測定し、入手し、および／または比較することをさらに含む。ＲＡＮＴＥＳおよびレプチンのレベルを両方とも使用する場合、定量的ＲＡＮＴＥＳレベルは低いが定量的レプチンレベルは低くない（すなわちレプチン基準値と実質的に同じかまたはレプチン基準値より高い）という知見はＭＣＩの診断を示唆する（すなわちＭＣＩの診断の役に立つ）か、またはＭＣＩの診断を指示す。よって本発明は、個体から得た生物学的流体サンプル中のＲＡＮＴＥＳの測定レベルを基準値に比較することを含んでなる、軽度認識障害（ＭＣＩ）の診断に役立てるための方法を提供する。ある実施例において、本発明の方法は個体から得た生物学的流体サンプル中のレプチンの測定値を基準レベルに比較することをさらに含む。また別の実施例において、本発明の方法はさらに、前記生物学的流体サンプル中のレプチンレベルを測定し、それによって前記レプチン測定値を生成することをさらに含む。また別の実施例において、本発明の方法は前記生物学的流体サンプル中のＲＡＮＴＥＳのレベルを測定し、それによってＲＡＮＴＥＳの測定値を生成することをさらに含む。また別の実施例において、生物学的流体サンプルは末梢性液体サンプルである。
【００６９】
その他の局面において、本発明はＡＤ患者におけるＡＤの進行をモニターする方法を提供する。実施例７に示すように、疑わしいＡＤ患者ではＲＡＮＴＥＳの定量的レベルが減少する（ＭＭＳＥ＝２５−２８）、軽度ＡＤにかかっているＡＤ患者ではＲＡＮＴＥＳの定量的レベルが減少する（ＭＭＳＥ＝２０−２５）、そしてＡＤの重症度が増すにつれてＲＡＮＴＥＳレベルがさらに減少することを発明者らは見いだした。定量的データ（絶対的測定値とも言われる）に関して「疑わしいＡＤ」患者とは、（ａ）ＡＤと診断されるかまたはＡＤの可能性という診断を受けた個体、および（ｂ）Ｍｉｎｉ−Ｍｅｎｔａｌ  Ｓｔａｔｅ  Ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ（ＭＭＳＥ）（Ｆｏｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒ．Ｒｅｓ  １９７５；１２：１２８９−１９８を参照）で評価した際、２５−２８と採点されるか、またはＭＭＳＥ試験で２５−２８のスコアが得られた個体である。よって、「疑わしいＡＤ」とは、ＭＭＳＥが２５−２８と採点されるかまたはＭＭＳＥ試験で２５−２８のスコアを得た個体のＡＤを意味する。基準レベルは特定のＲＡＮＴＥＳに関して「正常」と考えられるあらかじめ決められたレベル（例えば、より早期の時点における、同じ個体から誘導されたサンプルで得られたＲＡＮＴＥＳレベル）も考慮される。同時に決められる基準レベル（例えば被験サンプルを含むサンプル群から誘導される基準値）も考慮される。よって本発明は、例えば末梢生物学的流体サンプルなどの生物学的流体サンプルのＲＡＮＴＥＳの定量値を測定し、その測定値を基準値と比較することによってＡＤ患者におけるＡＤの進行をモニターする方法を提供する。例えば末梢生物学的流体サンプルのような生物学的流体サンプル中のレプチンの測定値を基準値と比較することによって、ＡＤ患者におけるＡＤの進行をモニターする方法も提供される。さらに、例えば末梢生物学的流体サンプルなどの生物学的流体サンプル中のレプチンレベルを測定することによってＡＤ患者におけるＡＤの進行をモニターする方法も提供される。測定値の減少はＡＤ患者におけるＡＤの進行（例えば重症度の増加）を指示または示唆する（診断するかまたは診断を示唆する）。
【００７０】
また別の局面において、発明者らは、疑わしいＡＤを有するＡＤ患者では定量的レプチンレベルが減少すること；軽度ＡＤ患者のＡＤではレプチンの定量的レベルは減少し、ＡＤの重症度が増すにつれて定量的レプチンレベルが減少すること；レプチンの定量的レベルはＭＭＳＥスコアと正の相関関係を示すことを見いだした（実施例７に記載される）。基準レベルは特定のレプチンに関して「正常」と考えられるあらかじめ決められたレベル（例えばＡＤまたはＭＣＩと診断されていない、年齢的にマッチした個体群の平均レベル）であるか、またはある特定の患者の履歴的基準レベル（例えばより早い時点に同じ個体から採取されたサンプルから得られたレプチンレベル）である。同時に決定される定量的基準レベル（例えば試験するサンプルを含むサンプル群から誘導される基準値）も考慮される。よって、本発明は末梢生物学的流体サンプルのような生物学的流体サンプルからレプチンの定量的測定値を得て、その測定値と基準値とを比較するというやり方でＡＤ患者のＡＤの進行をモニターする方法を提供する。生物学的流体サンプル、例えば末梢生物学的流体サンプル中のレプチンの測定値を基準値と比較することによってＡＤ患者のＡＤの進行をモニターする方法も提供される。さらに、生物学的流体サンプル、例えば末梢生物学的流体サンプル中のレプチンレベルを測定することによってＡＤ患者のＡＤの進行をモニターする方法も提供される。上記定量的測定値の減少はそのＡＤ患者のＡＤの進行（例えば重症度の増加）を指示するかまたは示唆する（診断するか、または診断を示唆する）。
【００７１】
発明者らは、定量的ＢＤＮＦレベルが軽度ＡＤ患者のＡＤでは減少すること、および女性の定量的ＢＤＮＦレベルはＭＭＳＥスコアと相関関係を有し、ＡＤの重症度が増すにつれてＢＤＮＦレベルはさらに減少することを見いだした（実施例７に記載される）。その基準値は、特定のＢＤＮＦについて「正常」と考えられるあらかじめ決められたレベル（例えばＡＤまたはＭＣＩと診断されていない、年齢的にマッチした個体群の平均レベル）であるか、または特定の患者の履歴的基準レベル（例えばより早い時点に同一個体から採取したサンプルから得られたＢＤＮＦレベル）でもよい。同時に決定される基準レベル（例えば被験サンプルを含むサンプル群から誘導される基準値）も考慮される。よって本発明は、生物学的流体サンプル、例えば末梢生物学的流体サンプルからＢＤＮＦの定量的測定値を得、測定値を基準値に比較するというやり方でＡＤ患者のＡＤの進行をモニターする方法を提供する。生物学的流体サンプル、例えば末梢生物学的流体サンプル中のＢＤＮＦの定量的測定値を基準値と比較することによってＡＤ患者のＡＤの進行をモニターする方法も提供される。生物学的流体サンプル、例えば末梢生物学的流体サンプル中のＢＤＮＦレベルを測定することによってＡＤ患者のＡＤの進行をモニターする方法も提供される。一般的に、上記測定値の減少はＡＤ患者のＡＤの進行（重症度の増加など）を示し、または示唆する（診断するかまたは診断を示唆する）。
【００７２】
発明者らはＡＤが疑われるＡＤ患者では定量的ＰＤＧＦ−ＢＢレベルが減少すること；ＰＤＧＦ−ＢＢレベルは疑わしいＡＢでは軽度ＡＤに比較して減少すること；そして男性ＡＤ患者のＭＭＳＥスコアはＰＤＧＦ−ＢＢレベルと負の相関関係を示すことを見いだした（実施例７に記載される）。基準レベルはＰＤＧＦ−ＢＢに関して「正常」と考えられるあらかじめ決められたレベル（例えばＡＤまたはＭＣＩと診断されていない年齢的にマッチした男性における平均レベル）でもよいし、または特定患者の履歴的基準レベル（例えば同一男性から、より早い時点に採取されたサンプルから得られたＰＤＧＦ−ＢＢレベル）でもよい。同時に測定される基準レベル（例えば被験サンプルを含むサンプル群から得られる基準値）も考慮される。よって本発明は男性から得られる生物学的流体サンプル、例えば末梢生物学的流体サンプルからＰＤＧＦ−ＢＢの測定値を得、測定値を基準値に比較するというやり方でＡＤ患者のＡＤの進行をモニターする方法を提供する。生物学的流体サンプル、例えば末梢生物学的流体サンプル中のＰＤＧＦ−ＢＢ測定値を基準値と比較することによってＡＤ患者のＡＤの進行をモニターする方法も提供される。さらに生物学的流体サンプル、例えば末梢生物学的流体サンプル中のＰＤＧＦ−ＢＢレベルを測定することによってＡＤ患者のＡＤの進行をモニターする方法も提供される。上記測定値の減少はＡＤ患者のＡＤの進行（例えば重症度の増加）を示すか、または示唆する（診断するかまたは診断を示唆する）。
【００７３】
その他に本発明はＡＤと診断された（またはＡＤの可能性があると診断された）個体を層化する方法も提供する。生物学的流体サンプル、例えば末梢生物学的流体サンプル中のＢＤＮＦレベル、またはＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢのレベルの分析によって上記末梢生物学的流体サンプルを採取したＡＤ患者におけるＡＤの重症度に関する情報が与えられることを発明者らは見いだした。本発明のこれらの局面に用いられるＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢの基準値は、試験サンプルを採取するＡＤ患者以外のＡＤ患者集団から得るのが最も一般的である（例えば多数のＡＤ患者から誘導される平均値または中間値）。ただし同時に決められるＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢの基準レベル（例えば被験サンプルを含むサンプル群から誘導される基準値）も考慮される。よって本発明は、ＢＤＮＦの測定値を明らかにし、その測定値をＢＤＮＦの基準値と比較することによって、ＡＤ患者を軽度ＡＤ期とより進んだＡＤ期とに分類する方法を提供する。よって本発明は生物学的流体サンプル、例えば末梢生物学的流体サンプル中のＢＤＮＦ、および任意にＰＤＧＦ−ＢＢの測定値を知り、その測定レベルを基準レベルと比較することによってＡＤ患者のＡＤを層化する方法を提供する。本発明は生物学的流体サンプル、例えば末梢生物学的流体サンプル中のＢＤＮＦ、および任意にＰＤＧＦ−ＢＢの測定値を基準値と比較することによってＡＤ患者のＡＤを層化する方法も提供する。本発明は生物学的流体サンプル、例えば末梢生物学的流体サンプル中のＢＤＮＦおよび任意にＰＤＧＦ−ＢＢを測定することによってＡＤ患者のＡＤを層化する方法も提供する。実施例４、に記載されるように、定性的結果を示す実施例４に開示された実験条件の下で基準レベルより低いＢＤＮＦレベルを有するサンプルは軽度ＡＤを示唆するかまたは指示し、その一方で基準レベルより高いＢＤＮＦレベルを有するサンプルはより進んだＡＤ（すなわち中程度または重度ＡＤ）を示唆する。基準レベルより高いＢＤＮＦレベルを有するサンプルのなかで、基準レベルより低いＰＤＧＦ−ＢＢレベルも示すサンプルは中程度ＡＤを示唆または指示し、その一方で基準レベルより高いＰＤＧＦ−ＢＢレベルも示すサンプルは重度ＡＤを示唆しまたは指示する。疑わしいＡＤ（範囲２５−２８のＭＭＳＥスコア）では、レプチンおよびＰＤＧＦ−ＢＢのレベルが有意に増加し、その一方でＢＤＮＦおよびＲＡＮＴＥＳは有意には変化しないことが見いだされた。軽度ＡＤ（ＭＭＳＥスコア２０−２５）ないし中程度ＡＤ（ＭＭＳＥスコア１０−２０）において、ＬＥＰＴＩＮレベルは減少せず、ＲＡＮＴＥＳ、ＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢのレベルは減少することが見いだされた。よってある実施形態において（実施例７に示される上記のＭＭＳＥスコアによって決められるように）、定量的アッセイにおいて、レプチンおよび／またはＰＤＧＦ−ＢＢレベルが有意に増加し、その一方でＢＤＮＦおよびＲＡＮＴＥＳはコントロールである疑わしいＡＤに比較して有意には変化しない場合、軽度ＡＤと診断される。よって、ある実施形態においては（実施例７からの上記ＭＭＳＥによって定義されるように）レプチンが減少せず、ＲＡＮＴＥＳ、ＢＤＮＦおよびＰＤＧＦのレベルがコントロールとしての軽度ＡＤに比較して減少する際には中程度ＡＤと診断される。よって本明細書には、前記患者からの生物学的流体サンプル中のＲＡＮＴＥＳおよびレプチンの測定レベルをＲＡＮＴＥＳおよびレプチンの基準値と比較すること；前記患者からの生物学的流体サンプル中の脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、レプチン、およびＲＡＮＴＥＳレベルの測定値を、ＢＤＮＦ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳの基準値と比較すること；前記患者からの生物学的流体サンプル中のレプチンおよびＢＢホモダイマー血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）レベルの測定値をレプチンおよびＰＤＧＦ−ＢＢの基準値と比較することを含む方法が提供される。よって本発明は、ある個体のアルツハイマー病（ＡＤ）を層化する方法であって、前記患者からの生物学的流体サンプル中の脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）およびＢＢホモダイマー血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）レベルの測定値をＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢの基準値と比較することを含む方法を提供する。ある実施例において、本発明の方法はレプチンおよびＲＡＮＴＥＳの測定値をレプチンおよびＲＡＮＴＥＳの基準値と比較することをさらに含み、その際ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲａｎｔｅｓの基準値はＭＭＳＥ２５−２８を有する個体群から得られるサンプルで得られるものであり、その際レプチンおよびＰＤＧＦ−ＢＢレベルが増加し、ＢＤＮＦおよびＲＡＮＴＥＳのレベルが実質的に同じレベルに留まる場合は、ＭＭＳＥ２０−２５によって示される軽度ＡＤが示唆される。本発明はレプチンおよびＲａｎｔｅｓレベルの測定値をレプチンおよびＲａｎｔｅｓの基準値に比較することをさらに含む方法も提供する；その際ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲａｎｔｅｓの基準値はＭＭＳＥスコア２０−２５を有する個体群からのサンプルで得られるものであり、その際Ｒａｎｔｅｓ、ＢＤＮＦ、およびＰＤＧＦレベルが減少し、レプチンレベルが実質的に同じレベルに留まる場合はＭＭＳＥスコア１０−２０によって示される中程度ＡＤが示唆される。「実質的に同じレベル」に留まるＡＤバイオマーカーとは、有意な変化がなく、数値がほぼ同一のままであることを意味する。ある実施形態において、実質的に同じとは、約１２％、１０％、５％、２％、１％のいずれかより小さい変化である。ある実施形態において、有意な（ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ）変化とは、当業者の標準的方法を使用した際に非統計的に有意であることを意味する。上に記載の方法はＡＤの進行を評価する方法にも適用できる。本明細書のマーカー類によって示される認識機能は、本明細書に記載されるＭＭＳＥスコアとほぼ同じレベルの認識機能に一致する結果または指数をもたらすその他の測定によっても可能であることは当然である。
【００７４】
本発明は、個体からの生物学的流体サンプル中の少なくとも１種類のＡＤ診断バイオマーカーの測定レベルを、測定する各バイオマーカーについて、そのバイオマーカーの基準レベルに比較することを含んでなるアルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断を補助する方法も提供し、その際少なくとも１種類のＡＤ診断バイオマーカーが表７から選択され、ＭＭＳＥスコアと統計的に有意な正の相関関係を有し（すなわちＢＤＮＦおよび／またはレプチンの、ＭＭＳＥスコアとの相関関係に匹敵する相関関係）、少なくとも１種類のＡＤ診断バイオマーカーは年齢との統計的相関関係はない。ＢＤＮＦおよび／またはレプチンとＭＭＳＥスコアとの相関関係に匹敵する、ＭＭＳＥスコアとの正の統計的相関関係を有するＡＤ診断バイオマーカーは、上記バイオマーカーがＡＤ診断マーカーであることを意味する。ある実施例において、ＡＤ診断バイオマーカーはＧＣＳＦ；ＩＦＮ−ｇ；ＩＧＦＢＰ−１；ＢＭＰ−６；ＢＭＰ−４；エオタキシン−２；ＩＧＦＢＰ−２；ＴＡＲＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＡＮＧ；ＰＡＲＣ；Ａｃｒｐ３０；ＡｇＲＰ（ＡＲＴ）；ＴＩＭＰ−１；ＴＩＭＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬ  Ｒ３；ｕＰＡＲ；ＩＧＦＢＰ−４；ＬＥＰＴＩＮ（ＯＢ）；ＰＤＧＦ−ＢＢ；ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＮＴ−３；ＮＡＰ−２；ＩＬ−１ｒａ；ＭＳＰ−ａ；ＳＣＦ；ＴＧＦ−ｂ３；ＴＮＦ−ｂ；ＭＩＰ−１ｄ；ＩＬ−３；ＦＧＦ−６；ＩＬ−６Ｒ；ｓＴＮＦ  ＲＩＩ；ＡＸＬ；ｂＦＧＦ；ＦＧＦ−４；ＣＮＴＦ；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ｂ；ＴＰＯ；ＶＥＧＦ−Ｂ；ＩＬ−８；ＦＡＳ；ＥＧＦ−Ｒからなるバイオマーカー群から選択され、他の実施例においては、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）；ＢＢホモダイマー血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）；脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）；上皮成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子６（ＦＧＦ−６）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、可溶性インターロイキン−６レセプター（ｓＩＬ−６Ｒ）、レプチン（ｏｂとしても知られている）、マクロファージ炎症性タンパク質−１δ（ＭＩＰ−１δ）、マクロファージ刺激タンパク質α鎖（ＭＳＰ−α）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、好中球活性化ペプチド−２（ＮＡＰ−２）、ＲＡＮＴＥＳ、可溶性腫瘍壊死因子レセプター−２（ｓＴＮＦ  ＲＩＩ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポイエチン（ＴＰＯ）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−１（ＴＩＭＰ−１）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−２（ＴＩＭＰ−２）、トランスフォーミング増殖因子−β３（ＴＧＦ−β３）、および腫瘍壊死因子β（ＴＮＦ−β）からなるバイオマーカー群から選択される。
【００７５】
測定値と基準値とを比較した結果を使用してＡＤまたはＭＣＩを診断し、またはＡＤ診断に役立ち、ＡＤ患者の病気の重症度によってＡＤ患者を層化し、またはＡＤ患者のＡＤの進行をモニターする。よって、上記比較が、ＡＤまたはＭＣＩを示唆／指示する測定値および基準値間の差を示すならば、適切な診断の一助となり、または適切な診断がなされる。反対に、基準値に対する測定値の比較がＡＤまたはＭＣＩの診断を示唆または指示する差を示さない場合は、適切な診断には役立たず、または適切な診断はなされない。同様に、ＡＤ患者から誘導したサンプル中のレプチンの測定値の比較が基準値と比較して減少している場合、その患者のＡＤが進行していると診断され、またはその診断を補助する。同様に、ＡＤ患者からのサンプル中のＢＤＮＦレベルおよびＰＤＧＦ−ＢＢレベルの比較がＡＤの特定の病期を示しまたは示唆する場合、ＡＤの上記特定の病期（軽度、中程度または重度）の診断を補助するか、または上記病期が診断される。
【００７６】
当業者には明らかなように、本発明のＡＤ診断法（すなわちＡＤを診断し、またはＡＤの診断の役に立つ方法）の実施において１種類以上のＡＤ診断バイオマーカーが使用されるが、それらマーカーが全く疑義なくＡＤの診断を示唆または指示するものではない場合、そのアッセイの結果は「多数決」示唆または指示と考えられる（例えば５種類のＡＤ診断バイオマーカーを用いる方法において、そのうち３種類がＡＤを示唆／指示する場合、その結果はその個体がＡＤであるという診断を示唆または指示すると考えてよい）。しかし、少なくとも２種類のＡＤ診断バイオマーカーの測定値が得られ、その測定値の１つがレプチンの測定値である実施形態において、ＡＤの診断を示しまたは示唆するためにはレプチンの測定値は基準値より小さくなければならない。当業者には明らかなように、本明細書に開示される方法は、種々様々の生物学的マーカー（ＡＤマーカーでもよいしＡＤマーカーでなくてもよい）の任意のものを使用して上記生物学的サンプル（類）の信頼性および／または特徴を決めることも含む。例えば一般的に女性において高いレプチンレベルを性別のマーカーとして測定してもよい。
【００７７】
本発明のある実施形態において、ある個体から１以上の時点におけるＡＤバイオマーカーレベルが得られる。このような「逐次的」サンプリングはＡＤ患者のＡＤの進行のモニタリングに関する本発明の局面に十分適合する。逐次的サンプリングは任意の望ましい時間的スケジュールで、例えば月に１回、年４回（すなわち３カ月ごと）、半年ごと、年１回、２年に１回またはそれ以上の期間を置いて行うことができる。測定値と基準値との比較は、新しいサンプルを測定するときに毎回行ってもよいし、それらのレベルに関するデータを保存してより少ない頻度で分析してもよい。
【００７８】
当業者には明らかなように、末梢生物学的流体サンプルなどの生物学的流体サンプルはＡＤ罹患、またはＡＤかＭＣＩの発生が疑われる個体から採取するのが普通である。本発明は、認識機能の評価が望まれる個体からのサンプルも考慮する。或いは、人々（または例えば研究などに携わる他の人および／または医者ら）はＡＤの兆候、ＡＤの疑い、ＡＤのリスクがなくてもそのような評価を望むかも知れない。例えば正常な個体がそのような情報を望むかも知れない。そのような人々はたいてい６５歳以上であるが、若年性ＡＤまたは家族性ＡＤが疑われる際には末梢生物学的流体サンプルなどの生物学的流体サンプルを採取される個体は３５ないし４０歳のように若くてもよい。
【００７９】
本発明はＡＤバイオマーカーの調節における活性について有望な候補作用物質をアッセイすることによって、ＡＤおよび／またはＭＣＩを処置する候補作用物質をスクリーニングする方法も提供する。上記スクリーニングアッセイはｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｖｏで行うことができる。本明細書に記載のスクリーニング法において決定される候補作用物質類はＡＤおよび／またはＭＣＩを処置する治療薬として有用であるかも知れない。
【００８０】
構成物が、上記構成物中に存在するマーカー類のいかなるサブセットよりもより予測的である確率Ｐは数学的に次のようにあらわされる：
Ｐ＝１−（１−Ｐ１）（１−Ｐ２）（１−Ｐ３）．．．．．（１−Ｐｎ）
。
【００８１】
ここで確率Ｐ１、Ｐ２、Ｐｎは臨床的表現型を予想できる個々のマーカーの確率をあらわし、１−Ｐｎはその確率の補数をあらわす。したがって上記構成物の任意のサブセットは常により小さいＰ値を有する。
【００８２】
本発明のその他の実施形態によると、５種類以上の要素からなる構成物または集合体、またはこのような構成物の任意のサブセットとして表７に記載されるバイオマーカー類の、血清、ＣＳＦまたはその他の液中の相対的濃度は、ＡＤ、ＰＤ、前頭側頭痴呆、脳血管病、多発性硬化症およびニューロパシーの臨床的表現型、病気の発生、層化、モニタリングおよび処置を予測する上で、任意の個々のマーカーの絶対濃度に比べてより予測的である。
【００８３】
（ＡＤ診断バイオマーカー）
免疫機構はホスト防御システムの重要な部分であり、一般に炎症性反応において明らかに主要な役割を演ずる。増加する多数の研究が免疫系とＣＮＳとの間の興味深い関連性を発見しつつある。例えばＣＮＳが免疫監視から完全に遮断されてはおらず、種々の免疫細胞が血液脳障壁を横切ることができることが明らかになった。侵入した白血球はＣＮＳの標的抗原を攻撃することができ、またはニューロンの変性を防ぐと考えられる増殖因子類を産生することができる。（Ｈｏｈｌｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．１０７，１６１−１６６）。これらの反応は、ニューロン、星状膠細胞、内皮細胞および白血球にわたって細胞間を連絡する種々のタンパク質メディエータ、すなわち非制限的にサイトカイン類、ケモカイン類、神経栄養因子類、コレクチン類、キニン類および免疫系および炎症系の急性期タンパク質によって誘発される。理論によって裏付けられているわけではないが、サイトカイン類、ケモカイン類、神経栄養因子類、コレクチン類、キニン類および表７に列挙される急性期タンパク質類は、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症およびニューロパシーにおいて血清中に異なる程度で発現する。サイトカイン類は免疫系および炎症反応を含む多数の機能の活性化と関連するポリペプチドメディエータの異成分からなる群である。末梢性サイトカイン類も能動輸送メカニズムによって直接、または迷走神経刺激によって間接的に血液−脳障壁を通過する。サイトカインはオートクライン的に作動し、そのサイトカインを放出する細胞の行動に影響を与え、またはパラクリン的に作動して隣接細胞の行動に影響を与える。幾つかのサイトカインは内分泌的に作用して離れた細胞の行動に影響を与えることがあるが、これは循環に侵入するそれらの能力およびそれらの半減期に依存する。サイトカインファミリーは、非制限的に、インターロイキン（ＩＬ−Ｉα、ＩＬ−Ｉβ、ＩＬＩｒａおよびＩＬ−２ないしＩＬ−１８）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−αおよびＴＮＦ−β）、インターフェロン（ＩＮＦ−α、βおよびγ）、コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３およびその他のＩＬｓの幾つか）および増殖因子（ＥＧＦ、ＦＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＧＦα、ＴＧＦβ、ＢＭＰｓ、ＧＤＦｓ、ＣＴＧＦおよびＥＣＧＦ）を含む。
【００８４】
発明者らはＡＤを診断したりＡＤ診断に役立てるなど、認識機能を評価するために使用できる生化学的マーカーの一群を末梢性体液中に発見した。これらの「ＡＤ診断マーカー」は非制限的に、ＧＣＳＦ；ＩＦＮ−ｇ；ＩＧＦＢＰ−１；ＢＭＰ−６；ＢＭＰ−４；エオタキシン−２；ＩＧＦＢＰ−２；ＴＡＲＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＡＮＧ；ＰＡＲＣ；Ａｃｒｐ３０；ＡｇＲＰ（ＡＲＴ）；ＴＩＭＰ−１；ＴＩＭＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬ  Ｒ３；ｕＰＡＲ；ＩＧＦＢＰ−４；ＬＥＰＴＩＮ（ＯＢ）；ＰＤＧＦ−ＢＢ；ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＮＴ−３；ＮＡＰ−２；ＩＬ−１ｒａ；ＭＳＰ−ａ；ＳＣＦ；ＴＧＦ−ｂ３；ＴＮＦ−ｂ；ＭＩＰ−１ｄ；ＩＬ−３；ＦＧＦ−６；ＩＬ−６Ｒ；ｓＴＮＦ−ＲＩＩ；；ＡＸＬ；ｂＦＧＦ；ＦＧＦ−４；ＣＮＴＦ；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ｂ；ＴＰＯ；ＶＥＧＦ−Ｂ；ＩＬ−８；ＦＡＳ；ＥＧＦ−Ｒである。他の実施例において、これらの「ＡＤ診断バイオマーカー」は：塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）；ＢＢホモダイマー血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）；脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）；上皮成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子６（ＦＧＦ−６）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、可溶性インターロイキン−６レセプター（ｓＩＬ−６Ｒ）、レプチン（ｏｂとしても公知である）、マクロファージ炎症性タンパク質−１δ（ＭＩＰ−１δ）、マクロファージ刺激タンパク質α鎖（ＭＳＰ−α）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、好中球活性化ペプチド−２（ＮＡＰ−２）、ＲＡＮＴＥＳ、可溶性腫瘍壊死因子レセプター−２（ｓＴＮＦ  ＲＩＩ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポイエチン（ＴＰＯ）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−１（ＴＩＭＰ−１）、プロテアーゼインヒビタ−２（ＴＩＭＰ−２）、トランスフォーミング増殖因子−β３（ＴＧＦ−β３）、腫瘍壊死因子β（ＴＮＦ−β）である。他の実施例において、ＡＤ診断マーカーはレプチン、ＲＡＮＴＥＳ、ＰＤＧＦ−ＢＢおよびＢＤＮＦの１種類以上を含む。
【００８５】
発明者らによって発見されたＡＤ診断バイオマーカは全て公知の分子である。脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）は例えばＲｏｓｅｎｎｔｈａｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １２９（３）：１２８９−９４に記載されている。塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）は例えばＡｂｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，ＥＭＢＯ  Ｊ．５（１０）：２５２３−２８に記載されている。上皮成長因子（ＥＧＦ）は例えばＧｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｎａｔｕｒｅ  ３０３（５９１９）：７２２−２５に記載されている。線維芽細胞成長因子６（ＦＧＦ−６）は例えばＭａｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ４（３）：３３５−４０に記載されている。インターロイキン−３（ＩＬ−３）は例えばＹａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１０８６、Ｃｅｌｌ  ４７（１）：３−１０に記載されている。可溶性インターロイキン−６レセプター（ｓＩＬ−６Ｒ）は例えばＴａｇａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｃｅｌｌ  ５８（３）：５７３−８１に記載されている。レプチン（「ｏｂ」としても知られている）は、例えばＭａｓｕｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ４４（７）：８５５−５８に記載されている。マクロファージ炎症性タンパク質−１δ（ＭＩＰ−１δ）は例えばＷａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（３）：２１４−２２に記載されている。マクロファージ刺激タンパク質α鎖（ＭＳＰ−α）は例えばＹｏｓｈｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８（２１），１５４６１−６８およびＹｏｓｈｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．３６３（２）：３５６−６０に記載されている。好中球活性化ペプチド−２（ＮＡＰ−２）は例えばＷａｌｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．３０５−３９−４６に記載されている。ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）は例えばＨｏｈｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｎａｔｕｒｅ  ３４４（６２６４）：３３９−４１に記載されている。ＢＢホモダイマー血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）は例えばＣｏｌｌｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ  ３１６（６０３０）：７４８−５０に記載されている。ＲＡＮＴＥＳは例えばＳｃｈａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１（３）：１０１８−２５に記載されている。幹細胞因子（ＳＣＦ）は例えばＺｓｅｂｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｃｅｌｌ  ６３（１）：２１２−２４に記載されている。可溶性腫瘍壊死因子レセプター−２（ｓＴＮＦ  ＲＩＩ）は例えばＳｃｈａｌｌｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｃｅｌｌ  ６１（２）：３６１−７０に記載されている。トランスフォーミング増殖因子−β３（ＴＧＦ−β３）は例えばｔｅｎ  Ｄｉｊｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５（１３）：４７１５−１９に記載されている。組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−１（ＴＩＭＰ−１）は例えばＤｏｃｈｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ  ３１８（６０４１）：６６−６９およびＧａｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ  ３１５（６０���２）：７６８−７１に記載されている。組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−２（ＴＩＭＰ−２）は例えばＳｔｅｔｌｅｒ−Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１１９０，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５（２３）：１３９３３−３８に記載されている。腫瘍壊死因子β（ＴＮＦ−β）は例えばＧｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｎａｔｕｒｅ  ３１２（５９９６）：７２１−２４に記載されている。トロンボポイエチン（ＴＰＯ）は例えばＦｏｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９１（２６）：１３０２３−２７に記載されている。
【００８６】
発明者らはＡＤ診断法を実施するために単一のＡＤ診断バイオマーカーについて容認できるレベルの感度及び特異性を見いだしたが、本発明のＡＤ診断法の幾つかの方法の効果（例えば感度および／または特異性）は、少なくとも２種類のＡＤ診断バイオマーカーを用いると一般的に高まる。ある実施例において、本発明のＡＤ診断法の方法は、少なくとも４種類のＡＤ診断バイオマーカーを使用すると一般的に高まる。「ｑ」値を含む種々の方法によって、および／またはクラスターの多様性を選択することによって、本明細書に開示されるＡＤ診断バイオマーカーのなかから複数のＡＤ診断バイオマーカーを選択できる。ＡＤ診断バイオマーカーは、ＡＤ診断バイオマーカーを決定する際に発明者らが誘導した統計的数値である「ｑ値」を基にして選択できる（実施例の表３を参照）。ＡＤ診断バイオマーカーを選択するための「ｑ」値は約０．０００１未満から約０．０５までの範囲であり、幾つかの実施例では約０．０１ないし約０．０５の範囲である。或いは（またはその上）、ＡＤ診断バイオマーカーを選択してクラスターの多様性を保存する。発明者らはＡＤ診断バイオマーカー類を多数のクラスターに分けた（表１参照）。ここではこれらのクラスターは最も密接に相関する各バイオマーカーの定性的測定値によって形成される。本明細書に使用する「相関する」または「相関関係」は２つの数字的な無作為の変数、例えばＭＭＳＥスコアおよび定量的タンパク質濃度または定性的タンパク質濃度などの数値の同時変化である。本明細書に使用する「区別する」または「差別的」は、与えられた変数に関して２つ以上のサンプル間に定量的または定性的差があることを言う。このようなクラスターに隣接するクラスターは、上記クラスターと最も密接に相関している。バイオマーカー間およびクラスター間の相関関係は、ｃｌｕｔｏ．ｃｃｇｂ．ｕｍｎ．ｅｄｕ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ｗＣｌｕｔｏ／ｗＣｌｕｔｏ．ｃｇｉで利用できる、ｗＣＬＵＴＯと呼ばれる公開されたウェブ−ベースのソフトウエアを用い、教師なしクラスタリングによって形成される階層木によってあらわすことができる。ある実施例において、１種類以上のＡＤ診断バイオマーカーを選択して試験する場合、選択されたＡＤ診断バイオマーカー類は少なくとも一部分は異なり（すなわちそれらのＡＤ診断バイオマーカーは少なくとも２種類のクラスター、例えば表１のクラスター４からのレプチン、ＢＤＮＦおよび／またはＰＤＧＦ−ＢＢおよび表１のクラスター３からのＲＡＮＴＥＳを含むＡＤ診断バイオマーカーセット）、ある実施例では上記ＡＤ診断バイオマーカー類は完全に異なっている（すなわち２種類の選択されたＡＤ診断バイオマーカーは同じクラスターからのものではない）。したがって、本発明はＡＤを診断するかまたはＡＤ診断を補助する多数の異なる実施形態を提供する。
【００８７】
【表１】
2007513337.tif 000002
ある実施形態においては、末梢生物学的流体サンプル中の単一のＡＤ診断バイオマーカーのレベルを測定し、その測定レベルを基準レベルと比較し、ＡＤを診断するかまたはＡＤの診断を補助する。本発明の実施に際して単一のＡＤ診断バイオマーカーの測定レベルを得る幾つかの実施形態において、測定レベルは末梢生物学的流体サンプルのＲＡＮＴＥＳに関するものである。
【００８８】
その他の実施形態において、末梢生物学的流体サンプル中の少なくとも２種類のＡＤ診断バイオマーカーのレベルを測定し、上記マーカー類の各々の基準レベルと比較する。したがって、本発明は少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１５または２０のＡＤ診断バイオマーカーのレベルを測定し、それらの測定レベルを基準レベルと比較することによって、ＡＤを診断しおよび／またはＡＤの診断を補助するための方法を提供する。典型的実施形態は２、３、４または５種類のＡＤ診断バイオマーカーを用いる。ある実施形態において、本明細書には、少なくともレプチン、ＲＡＮＴＥＳ、ＢＤＮＦ、およびＰＤＧＦ−ＢＢのレベルを測定することによってＡＤを診断しおよび／またはＡＤの診断を補助する方法が提供される。
【００８９】
１種類以上のＡＤ診断バイオマーカーを使用する実施形態（すなわち測定値が１種類以上のＡＤ診断バイオマーカーで得られる実施形態）において、表３に示すＡＤ診断バイオマーカー類の典型的組み合わせは（１）レプチンと任意のその他のＡＤ診断バイオマーカーとの組み合わせ（すなわちレプチンとＢＤＮＦ、レプチンとｂＦＧＦ、レプチンとＥＧＦ、レプチンとＦＧＦ−６、レプチンとＩＬ−３、レプチンとｓＩＬ−６Ｒ、レプチンとＭＩＰ−１δ、レプチンとＭＳＰ−α、レプチンとＮＡＰ−２、レプチンとＮＴ−３、レプチンとＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンとＲＡＮＴＥＳ、レプチンとＳＣＦ、レプチンとｓＴＮＲ  ＲＩＩ、レプチンとＴＧＦ−β３、レプチンとＴＩＭＰ−１、レプチンとＴＩＭＰ−２、レプチンとＴＢＦ−β、およびレプチンとＴＰＯ）、（２）ＲＡＮＴＥＳと任意のその他のＡＤ診断バイオマーカー類（すなわちＲＡＮＴＥＳとＢＤＮＦ、ＲＡＮＴＥＳとｂＦＧＦ、ＲＡＮＴＥＳとＥＧＦ、ＲＡＮＴＥＳとＦＧＦ−６、ＲＡＮＴＥＳとＩＬ−３、ＲＡＮＴＥＳとｓＩＬ−６Ｒ、ＲＡＮＴＥＳとレプチン、ＲＡＮＴＥＳとＭＩＰ−１δ、ＲＡＮＴＥＳとＭＳＰ−α、ＲＡＮＴＥＳとＮＡＰ−２、ＲＡＮＴＥＳとＮＴ−３、ＲＡＮＴＥＳとＰＤＧＦ−ＢＢ、ＲＡＮＴＥＳとＳＣＦ、ＲＡＮＴＥＳとｓＴＮＲ  ＲＩＩ、ＲＡＮＴＥＳとＴＧＦ−β３、ＲＡＮＴＥＳとＴＩＭＰ−１、ＲＡＮＴＥＳとＴＩＭＰ−２、ＲＡＮＴＥＳとＴＮＦ−β、およびＲＡＮＴＥＳとＴＰＯ）；（３）ＰＤＧＦ−ＢＢと任意のその他のＡＤ診断バイオマーカー類（ＰＤＧＦ−ＢＢとＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢとｂＦＧＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＥＧＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＦＧＦ−６、ＰＤＧＦ−ＢＢとＩＬ−３、ＰＤＧＦ−ＢＢとｓＩＬ−６Ｒ、ＰＤＧＦ−ＢＢとレプチン、ＰＤＧＦ−ＢＢとＭＩＰ−１δ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＭＳＰ−α、ＰＤＧＦ−ＢＢとＮＡＰ−２、ＰＤＧＦ−ＢＢとＮＴ−３、ＰＤＧＦ−ＢＢとＲＡＮＴＥＳ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＳＣＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢとｓＴＮＲ  ＲＩＩ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＴＧＦ−β３、ＰＤＧＦ−ＢＢとＴＩＭＰ−１、ＰＤＧＦ−ＢＢとＴＩＭＰ−２、ＰＤＧＦ−ＢＢとＴＮＦ−β、およびＰＤＧＦ−ＢＢとＴＰＯ）；（４）ＢＤＮＦと任意のその他のＡＤ診断バイオマーカーとの組み合わせ（すなわちＢＤＮＦとｂＦＧＦ、ＢＤＮＦとＥＧＦ、ＢＤＮＦとＦＧＦ−６、ＢＤＮＦとＩＬ−３、ＢＤＮＦとｓＩＬ−６Ｒ、ＢＤＮＦとレプチン、ＢＤＮＦとＭＩＰ−１δ、ＢＤＮＦとＭＳＰ−α、ＢＤＮＦとＮＡＰ−２、ＢＤＮＦとＮＴ−３、ＢＤＮＦとＰＤＧＦ−ＢＢ、ＢＤＮＦとＲＡＮＴＥＳ、ＢＤＮＦとＳＣＦ、ＢＤＮＦとｓＴＮＲ  ＲＩＩ、ＢＤＮＦとＴＧＦ−β３、ＢＤＮＦとＴＩＭＰ−１、ＢＤＮＦとＴＩＭＰ−２、ＢＤＮＦとＴＮＦ−β、およびＢＤＮＦとＴＰＯ）；（５）ＲＡＮＴＥＳ、ＰＤＧＦ−ＢＢおよびＮＴ−３；（６）レプチン、ＰＤＧＦ−ＢＢおよびＲＡＮＴＥＳ；（７）ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢおよびＲＡＮＴＥＳ；（８）ＢＤＮＦ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳ；（９）ＢＤＮＦ、レプチン、ＰＤＧＦ−ＢＢ；（１０）ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＥＧＦ、ＮＴ−３；（１１）ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＮＴ−３、レプチン；（１２）ＢＤＮＦ、レプチン、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＲＡＮＴＥＳ；��よび（１３）ＲＡＮＴＥＳ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＮＴ−３、ＥＧＦ、ＮＡＰ−２、レプチンを含む。ＡＤ診断バイオマーカーのその他の典型的組み合わせは（１４）レプチンと本明細書に開示される任意のその他のＡＤ診断バイオマーカーとの組み合わせ（すなわちレプチンとＧＣＳＦ、レプチンとＩＦＮ−γ、レプチンとＩＧＦＢＰ−１、レプチンとＢＭＰ−６、レプチンとＢＭＰ−４、レプチンとエオタキシンー２、レプチンとＩＧＦＢＰ−２、レプチンとＴＡＲＣ、レプチンとＡＮＧ、レプチンとＰＡＲＣ、レプチンとＡｃｒｐ３０、レプチンとＡｇＲＰ（ＡＲＴ）、レプチンとＩＣＡＭ−１、レプチンとＴＲＡＩＬ  Ｒ３、レプチンとｕＰＡＲ、レプチンとＩＧＦＢＰ−４、レプチンとＩＬ−１Ｒａ、レプチンとＡＸＬ、レプチンとＦＧＦ−４、レプチンとＣＮＴＦ、レプチンとＭＣＰ−１、レプチンとＭＩＰ１ｂ、レプチンとＶＥＧＦ−Ｂ、レプチンとＩＬ−８、レプチンとＦＡＳおよびレプチンとＥＧＦ−Ｒ）、（１５）ＲＡＮＴＥＳと本明細書に記載される任意のその他のＡＤ診断バイオマーカーとの組み合わせ（すなわちＲＡＮＴＥＳとＧＣＳＦ、ＲＡＮＴＥＳとＩＦＮ−γ、ＲＡＮＴＥＳとＩＧＦＢＰ−１、ＲＡＮＴＥＳとＢＭＰ−６、ＲＡＮＴＥＳとＢＭＰ−４、ＲＡＮＴＥＳとエオタキシン−２、ＲＡＮＴＥＳとＩＧＦＢＰ−２、ＲＡＮＴＥＳとＴＡＲＣ、ＲＡＮＴＥＳとＡＮＧ、ＲＡＮＴＥＳとＰＡＲＣ、ＲＡＮＴＥＳとＡｃｒｐ３０、ＲＡＮＴＥＳとＡｇＲＰ（ＡＲＴ）、ＲＡＮＴＥＳとＩＣＡＭ−１、ＲＡＮＴＥＳとＴＲＡＩＬ  Ｒ３、ＲＡＮＴＥＳとｕＰＡＲ、ＲＡＮＴＥＳとＩＧＦＢＰ−４、ＲＡＮＴＥＳとＩＬ−１Ｒａ、ＲＡＮＴＥＳとＡＸＬ、ＲＡＮＴＥＳとＦＧＦ−４、ＲＡＮＴＥＳとＣＮＴＦ、ＲＡＮＴＥＳとＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳとＭＩＰ１ｂ、ＲＡＮＴＥＳとＶＥＧＦ−Ｂ、ＲＡＮＴＥＳとＩＬ−８、ＲＡＮＴＥＳとＦＡＳおよびＲＡＮＴＥＳとＥＧＦ−Ｒ）、（１６）ＰＤＧＦ−ＢＢと本明細書に開示される任意のその他のＡＤ診断バイオマーカーとの組み合わせ（すなわち、ＰＤＧＦ−ＢＢとＧＣＳＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＩＦＮ−γ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＩＧＦＢＰ−１、ＰＤＧＦ−ＢＢとＢＭＰ−６、ＰＤＧＦ−ＢＢとＢＭＰ−４、ＰＤＧＦ−ＢＢとエオタキシンー２、ＰＤＧＦ−ＢＢとＩＧＦＢＰ−２、ＰＤＧＦ−ＢＢとＴＡＲＣ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＡＮＧ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＰＡＲＣ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＡｃｒｐ３０、ＰＤＧＦ−ＢＢとＡｇＲＰ（ＡＲＴ）、ＰＤＧＦ−ＢＢとＩＣＡＭ−１、ＰＤＧＦ−ＢＢとＴＲＡＩＬ  Ｒ３、ＰＤＧＦ−ＢＢとｕＰＡＲ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＩＧＦＢＰ−４、ＰＤＧＦ−ＢＢとＩＬ−１Ｒａ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＡＸＬ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＦＧＦ−４、ＰＤＧＦ−ＢＢとＣＮＴＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＭＣＰ−１、ＰＤＧＦ−ＢＢとＭＩＰ１ｂ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＶＥＧＦ−Ｂ、ＰＤＧＦ−ＢＢとＩＬ−８、ＰＤＧＦ−ＢＢとＦＡＳおよびＰＤＧＦ−ＢＢとＥＧＦ−Ｒ）、（１７）ＢＤＮＦと本明細書に開示される任意のその他のＡＤ診断バイオマーカーとの組み合わせ（すなわちＢＤＮＦとＧＣＳＦ、ＢＤＮＦとＩＦＮ−γ、ＢＤＮＦとＩＧＦＢＰ−１、ＢＤＮＦとＢＭＰ−６、ＢＤＮＦとＢＭＰ−４、ＢＤＮＦとエオタキシンー２、ＢＤＮＦとＩＧＦＢＰ−２、ＢＤＮＦとＴＡＲＣ、ＢＤＮＦとＡＮＧ、ＢＤＮＦとＰＡＲＣ、ＢＤＮＦとＡｃｒｐ３０、ＢＤＮＦとＡｇＲＰ（ＡＲＴ）、ＢＤＮＦとＩＣＡＭ−１、ＢＤＮＦとＴＲＡＩＬ  Ｒ３、ＢＤＮＦとｕＰＡＲ、ＢＤＮＦとＩＧＦＢＰ−４、ＢＤＮＦとＩＬ−１Ｒａ、ＢＤＮＦとＡＸＬ、ＢＤＮＦとＦＧＦ−４、ＢＤＮＦとＣＮＴＦ、ＢＤＮＦとＭＣＰ−１、ＢＤＮＦとＭＩＰ１ｂ、ＢＤＮＦとＶＥＧＦ−Ｂ、ＢＤＮＦとＩＬ−８、ＢＤＮＦとＦＡＳ、そしてＢＤＮＦとＥＧＦ−Ｒ）を含む。
【００９０】
（ＡＤバイオマーカーレベルの測定）
サブセット間で著しく変動するバイオマーカーを確認する統計的試験は一般的ｔ検定を含めて多数ある。しかし、測定するバイオマーカーの数が増えるにつれて、ＳＡＭのようなより複雑な方法を使用するのが一般的に有益である（Ｔｕｓｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９８（９）：５１１６−２１）。その他の有用な方法としてはツリー・ハーベスティング（Ｈａｓｔｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２００１，２：ｒｅｓｅａｒｃｈ０００３．１−０００３．１２）、自己組織化マップ（Ｋｏｈｏｎｅｎ，１９８２ｂ，Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ  ４３（１）：５９−６９）、頻出アイテムセット（Ａｇｒａｗａｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３「Ｍｉｎｉｎｇ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｒｕｌｅｓ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｓｅｔｓ  ｏｆ  ｉｔｅｍｓ  ｉｎ  ｌａｒｇｅ  ｄａｔａｂａｓｅｓ．」Ｉｎ  Ｐｒｏｃ．ｏｆ  ｔｈｅ  ＡＣＭ  ＳＩＧＭＯＤ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  ｏｎ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｄａｔａ，ｐａｇｅｓ  ２０７−２１６，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，Ｍａｙ  １９９３）、ベイジアンネットワーク（Ｇｏｔｔａｒｄｏ，Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ  ｄａｔａ，Ａ  Ｂａｙｅｓｉａｎ  ａｐｐｒｏａｃｈ．Ｂｉｏｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ（２００１），１，１，ｐｐ１−３７）、および一般に使用できるソフトウエアパッケージ類、ＣＡＲＴおよびＭＡＲＳなどがある。
【００９１】
ＳＡＭ法は反復測定値の標準偏差に対する発現の変化に基づいて各バイオマーカーにスコアを割り当てる。調節可能の閾値よりも高いスコアを有するバイオマーカーでは、アルゴリズムにより上記反復測定値の組み合わせを使用して、特定のバイオマーカーが偶然に確認される確率（「ｑ値」として計算される）、または精度の測定のために使用される偽陽性率が推定される。ＳＡＭ法はマイクロアレイの有意性の分析と呼ばれる一般に手に入るソフトウエアを用いて行うことができる（ｗｗｗ−ｓｔａｔ  ｃｌａｓｓ．ｓｔａｎｆｏｒｄ．ｅｄｕ／−〜ｔｉｂｓ／ｃｌｉｃｋｗｒａｐ／ｓａｍ．ｈｔｍｌを参照）。
【００９２】
あるバイオマーカーが被験末梢性生物学的サンプル類のサブセット間で有意に異なるとき、そのバイオマーカーは神経疾患の診断に役立ち、神経疾患を診断し、層化し、モニターし、および／または予測するのに有用であることが「確認された」と考えられる。あるバイオマーカーのレベルは、上記特定のバイオマーカーが偶然に確認される確率があらかじめ決められた数値より低い場合に「有意に異なる」。このような確率の計算法はサブセット間のレベルを比較するために用いる正確な方法に依存する（例えばＳＡＭを用いる場合、ｑ値は誤確認の確率を与え、ｐ値はｔ−検定（または同様な統計分析）を使用する場合の確率を与えると考えられる）。当業者には明らかなように、あらかじめ決められた数値はサンプルごとに測定するバイオマーカーの数および使用するサンプルの数に依存して変化する。よって、あらかじめ決められた数値は５０％と高いレベルから２０、１０、５、３、２または１％と低いレベルまでの範囲になる。
【００９３】
本明細書に記載されるように、少なくとも１つのＡＤ診断バイオマーカーのレベルをある個体からの生物学的サンプルで測定する。そのＡＤバイオマーカーレベル（類）はある生物学的サンプル中の上記ＡＤバイオマーカーのレベルを特異的に決定することができる任意の使用可能の測定法を用いて測定できる。上記測定が、上記末梢生物学的流体サンプル中のＡＤバイオマーカーレベルが基準値より高いか低いかを決めることができる限り、その測定は定量的でも定性的でもよい。
【００９４】
測定レベルは特定のバイオマーカーのレベルの一次測定値（バイオマーカーそのものの量の測定（実施例７におけるような定量的データ）、例えばサンプル中のバイオマーカー分子数の検出によるもの）でもよいし、上記バイオマーカーの二次測定値（上記バイオマーカーの量を必ずしも導き出さない測定値（  実施例４におけるような定性的データ）、例えば酵素活性の測定値（バイオマーカーが酵素である場合）または上記バイオマーカーをコードするｍＲＮＡの測定値など）でもよい。
【００９５】
幾つかのアッセイフォーマットでは末梢生物学的流体サンプルを前処理せずに試験することができるとはいえ、大部分の末梢生物学的流体サンプルは試験の前に処理することが期待される。処理は概ね細胞（有核および無核）、例えば血液中の赤血球、白血球、および血小板などの除去の形をとり、幾つかの凝固カスケードタンパク質などのある種のタンパク質を血液から除去することも含む。ある実施例において、末梢生物学的流体サンプルはＥＤＴＡを含む容器に集められる。
【００９６】
一般に、ＡＤバイオマーカーレベルは親和性をベースにする測定技術を用いて測定される。抗体に関係する「親和性」とは当業者には十分理解されている用語であり、抗体が結合パートナー、例えば本明細書に記載されるＡＤ診断バイオマーカーなど（またはそのエピトープ）に結合する程度または強度を意味する。親和性は当業者に公知の多数の方法によって測定および／または表現される；例えば非制限的に、平衡解離定数（ＫＤまたはＫｄ）、見かけ平衡解離定数（ＫＤ’またはＫｄ’）、およびＩＣ５０（競合アッセイにおいて５０％阻害を起こすのに必要な量；本明細書では「Ｉ５０」と交換可能に用いられる）。本発明の目的では親和性はエピトープに結合する抗体類の所定の集団に対する平均親和性である。本明細書においてｍｌあたりｍｇＩｇＧまたはｍｇ／ｍｌの表現で報告されるＫＤ’の数値は、血清（血漿も使用できる）ｍｌあたりのｍｇＩｇを示す。
【００９７】
親和性をベースにする測定技術は測定すべきＡＤバイオマーカーに特異的に結合する分子（抗体またはアプタマーなどの「親和性試薬」）を利用する。ただしその他の方法、例えば分光法をベースにする技術（例えばマトリックス支援レーザー脱離イオン化−飛行時間型、またはＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ、分光法）または生体活性を測定するアッセイ（例えば成長因子の有糸分裂誘発性を測定するアッセイなど）を使用してもよい。
【００９８】
親和性をベースにする方法には抗体をベースにするアッセイ（イムノアッセイ類）およびアプタマー（他の分子に特異的に結合する核酸分子）を使用するアッセイ、例えばＥＬＯＮＡなどがある。その他に、抗体とアプタマーとを両方使用するアッセイも考えられる（例えば捕獲のための抗体と検出のためのアプタマーとを利用するサンドイッチフォーマット）。
【００９９】
イムノアッセイを使用する場合、生物学的サンプル中のＡＤバイオマーカーレベルを定量的または定性的に測定できる任意のイムノアッセイ法が使用できる。適切なイムノアッセイ法にはラジオイムノアッセイ、免疫蛍光アッセイ、酵素イムノアッセイ、化学ルミネセントアッセイ、ＥＬＩＳＡ、免疫−ＰＣＲ、およびウエスタンブロットアッセイなどがある。
【０１００】
同様に、生物学的サンプル中のＡＤバイオマーカーレベルを定量的または定性的に測定できるアプタマー−ベースのアッセイが本発明の方法に使用できる。概してアプタマーはイムノアッセイのほとんど全てのフォーマットにおいて抗体類の代わりとなり得る。ただしアプタマーはその他のアッセイフォーマット（例えばＰＣＲのような核酸増幅技術（Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．４，６８３，２０２）または複合プライマーを用いる等温的増幅（Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．６，２５１，６３９および６，６９２，９１８）など）も可能である。
【０１０１】
種々様々の親和性−ベースのアッセイが当業者には知られている。親和性をベースにするアッセイは対象のＡＤバイオマーカーから誘導される少なくとも１つのエピトープを利用し、多くの親和性ベースのアッセイフォーマットは１つより多くのエピトープを利用する（例えば「サンドイッチ」フォーマットアッセイには２つ以上のエピトープが関係する；少なくとも１つのエピトープを用いて上記マーカーを捕獲し、少なくとも１つの別のエピトープを用いてそのマーカーを検出する）。
【０１０２】
親和性をベースにするアッセイは競合または直接反応フォーマットにおいてサンドイッチ型フォーマットを利用することができ、さらに不均質（例えば固体支持体を使用）または均質（例えば単一相にあらわれる）でもよく、および／または免疫沈殿を利用することができる。大部分のアッセイは標識化親和性試薬（例えば抗体、ポリペプチド、またはアプタマー）の使用を含む；上記標識は例えば酵素、蛍光、化学ルミネセント、放射性または色素分子でよい。プローブからのシグナルを増幅するアッセイも知られている；その例はビオチンとアビジンを使用するアッセイ、および酵素標識−および酵素介在性−イムノアッセイ、例えばＥＬＩＳＡおよびＥＬＯＮＡアッセイである。本明細書において、バイオマーカー濃度の「定量的データ」について参照される実施例ではＥＬＩＳＡを用いて得た。バイオマーカーまたはそのバイオマーカーに特異的な試薬のいずれかが、ある表面に結合することができ、レベルを直接または間接的に測定できる。
【０１０３】
不均質フォーマットにおいて、上記アッセイは二相（一般的には水性液および固体）を使用する。一般的にＡＤバイオマーカーに特異的な親和性試薬は固体支持体に結合し、生物学的サンプル全体からＡＤバイオマーカーを容易に分離させる。親和性試薬／ＡＤバイオマーカー複合体を形成させる十分な時間反応させた後、上記抗体を含む固体支持体または表面を洗い、その後結合ポリペプチドを検出するのが普通である。ＡＤバイオマーカーを測定するアッセイにおいて親和性試薬を支持体（固体または半固体）上に用意することができ、或いは上記サンプル中のポリペプチド類を支持体または表面に固定することもできる。使用できる支持体の例はニトロセルロース（例えば膜またはミクロタイターウェル型）、ポリ塩化ビニル（例えばシートまたはミクロタイターウェル）、ポリスチレンラテックス（例えばビーズまたはミクロタイタープレート）、ポリフッ化ビニリデン、ジアゾ化紙、ナイロン膜、活性化ビーズ、ガラスおよびプロテインＡビーズなどである。これらのアッセイのための標準および競合的フォーマットは当業者には知られている。よって、少なくとも１種類のＡＤ診断バイオマーカーと上記バイオマーカーと結合した上記バイオマーカーに特異的な試薬との複合体がここに与えられる；その際上記試薬は表面に結合している。また、少なくとも１種類のＡＤ診断バイオマーカーと、上記バイオマーカーと結合した上記バイオマーカーに特異的な試薬との複合体であって、前記バイオマーカーが表面に結合している上記複合体も提供される。
【０１０４】
本発明の方法を複数のＡＤバイオマーカーを使用して実施する場合にはアレイ型不均質アッセイがＡＤバイオマーカーレベルの測定に適する。本発明の方法の実施において使用するアレイ型アッセイは一般には固体基質と、あらかじめ決められたパターン（例えば格子）で上記基質に結合する異なるＡＤバイオマーカー類に特異的な２つ以上の捕獲試薬とを使用する。末梢生物学的流体サンプルが上記基質に塗布され、サンプル中のＡＤバイオマーカーは上記捕獲試薬によって結合する。サンプルの除去（および適切な洗浄）後、結合したＡＤバイオマーカー類を、種々のＡＤバイオマーカーに特異的に結合する適切な検出試薬類の混合物を使用して検出する。検出試薬の結合は蛍光色素をベースとするシステムなど、目で見るシステムを用いて行われる。捕獲試薬はあらかじめ決められたパターンで基質上に配置されるから、アレイ型アッセイはマルチプレックス検出装置を必要とせずに複数のＡＤバイオマーカーを検出するという利点を与える。
【０１０５】
均質フォーマットにおいては、上記アッセイは単一相で行われる（例えば水性液相）。一般的には生物学的サンプルをＡＤバイオマーカーに特異的な親和性試薬と共に溶液中でインキュベートする。例えばそれは形成される任意の親和性試薬／抗体複合体を沈殿する条件下にある。これらのアッセイのための標準的および競合的フォーマットは当業者には知られている。
【０１０６】
標準的（直接反応）フォーマットにおいてはＡＤバイオマーカー／親和性試薬複合体のレベルを直接モニターする。競合的フォーマットにおいては、サンプル中のＡＤバイオマーカー量は、複合体中の既知量の標識ＡＤバイオマーカー（例えばその他の競合するリガンド）の結合に与える競合的効果をモニターすることによって推測される。結合または複合体形成量は定性的または定量的に測定できる。
【０１０７】
この特許に記載される方法は、これらの方法を実施できる任意のデバイスを用いて実施できる。使用できるデバイスの例は、非制限的に、あらゆる型のコンピューターを含む電気的コンピューターデバイスなどである。この特許に記載される方法がコンピューターで実施されるとき、これらの方法の工程を行うためのコンピューターを構成するために使用できるコンピュータープログラムは、そのコンピュータープログラムを含むことができる任意のコンピューター・リーダブル媒体に含まれる。使用できるコンピューター・リーダブル媒体の例は非制限的にディスケット類、ＣＤ−ＲＯＭｓ、ＤＶＤｓ、ＲＯＭ、ＲＡＭ、およびその他のメモリーおよびコンピューター保存デバイス類を含む。これらの方法の諸工程を実施するためのコンピューターを構成するために使用できるコンピュータープログラムは電気的ネットワーク、例えばインターネット、ワールドワイドウェブ、イントラネットまたはその他のネットワークによって提供される。
【０１０８】
一実施例において、この特許に記載される方法はプロセッサーおよびコンピューター・リーダブル媒体を含むシステムにおいて実施される。上記コンピューター・リーダブル媒体は上記システムにこの特許に記載される方法の工程を行わせるためのプログラムコード手段を含む。プロセッサーは上記方法を実施するために必要な操作を行うことができる任意のプロセッサーでよい。プログラムコード手段は、上記システムで実施することによりそのシステムが本特許に記載の諸工程を行うことができる任意のコードでよい。プログラムコード手段の例としては非制限的に、Ｃ＋＋、ＪＡｖａ、またはフォルトランなどの高レベルコンピューター言語で書かれた、本特許記載の方法を実施するための指示書類；アセンブリー言語のような低レベルコンピューター言語で書かれた、本特許記載の方法を実施するための指示書類；またはコンパイルおよびリンクされた機械言語のようなコンピューター実行可能な形態で本特許記載の方法を行うための指示書類などがある。
【０１０９】
ＡＤバイオマーカーと親和性試薬を含んで形成される複合体は、そのアッセイフォーマットおよび使用者の好みにより、当業者に公知の多数の方法のいずれかによって検出できる。例えば、非標識親和性試薬はＤＮＡ増幅技術（例えばアプタマー類およびＤＮＡ標識抗体のためのもの）または上記親和性試薬に結合する標識「二次抗体」で検出できる。或いは親和性試薬を標識してもよいし、そして複合体の量を直接的（色素−（蛍光または可視）、ビーズ−、または酵素−標識親和性試薬に対して）または間接的に（ビオチン、発現タグ類などで「タグをつけた」親和性試薬に対して）測定してもよい。本明細書において化学ルミネッセンスを用いる「定性的データ」フィルター−ベース・抗体アレイとして提供される実施例を用いてバイオマーカー類の測定値を得ることができた。
【０１１０】
当業者には明らかなように、シグナルの検出モードはそのアッセイで使用する正確な検出システムに依存する。例えば、放射性検出試薬を用いる場合、シグナルは生物学的サンプルからのシグナルを定量でき、生物学的サンプルからのそのシグナルを基準サンプルからのシグナルと比較できる方法、例えばシンチレーションカウンティング、オートラジオグラフィー（一般には走査濃度計と連結している）などを使用して測定される。化学ルミネッセント検出システムを用いる場合、上記シグナルはルミノメータを用いて検出するのが普通である。検出システムからのシグナルを検出する方法は当業者にはよく知られており、ここにより詳細に記載する必要はない。
【０１１１】
１種類より多いＡＤバイオマーカーを測定する場合、生物学的サンプルは多数の部分に分けられ、別々に分離した部分を用いて異なるＡＤバイオマーカー類を測定する（ただしある特定サンプル中のＡＤバイオマーカーのレベルを複数測定できるように、生物学的サンプルを多数の部分に分割することも考えられる）。或いは、生物学的サンプル（またはそれから得られる部分）を試験して、異なるＡＤバイオマーカー類の個々のレベルを、１回の分析試験、例えばアレイ型アッセイまたはマルチプレックス検出法を用いるアッセイ（例えば異なる蛍光色素マーカーで標識した検出試薬を使用するアッセイなど）で測定できるアッセイを用い、単一反応で複数のＡＤバイオマーカーのレベルを測定することができる。
【０１１２】
バイオマーカーを測定する場合「反復」測定を行うことは当業者には一般的である。反復測定はサンプルを複数の部分に分割し、同じアッセイ系の別々の反応でバイオマーカー（類）を別々に測定することによって得るのが普通である。反復測定は本発明の方法には必ずしも必要でないが、本発明の多くの実施形態は反復試験、特に二重および三重試験を行う。
【０１１３】
（基準レベル）
あるＡＤバイオマーカーについて測定レベルと比較するために使用する基準レベルは前述の議論から明らかなように、実施する発明の局面に応じて変化する。ＡＤ診断法では、「基準レベル」は一般的にはあらかじめ決められた基準レベル、例えばＡＤまたはＭＣＩに罹っていない集団から得られる平均レベルであるが、幾つかの例では基準レベルはＡＤ患者を含む個体群の平均または中間レベルである。幾つかの例において、あらかじめ決められた基準レベルは、年齢がマッチしている集団から得られるレベルから誘導される（例えば平均値または中間値）。
【０１１４】
ＭＣＩ診断法（すなわちＭＣＩを診断する方法またはＭＣＩの診断を補助する方法）では、基準レベルは、一般的にはＡＤまたはＭＣＩにかかっていない集団から得られる平均レベルなどのあらかじめ決められた基準レベルであるが、幾つかの例では基準レベルはＭＣＩおよび／またはＡＤ患者を含む個体群からの平均値または中間レベルである。幾つかの例において、あらかじめ決められた基準レベルは年齢がマッチした集団から得られるレベルから誘導される（例えばこれらレベルのまたは中間レベル）。
【０１１５】
ＡＤモニタリング法（例えばＡＤ患者のＡＤ進行を診断する方法、またはＡＤ進行の診断を補助する方法）では、基準レベルはＡＤまたはＭＣＩにかかっていない集団およびＭＣＩまたはＡＤと診断された集団から得られる平均レベルなどのあらかじめ決められたレベルでよく、ある例では基準レベルはＭＣＩおよび／またはＡＤ患者を含む個体群からの平均または中間レベルでよい。或いは、基準レベルは特定患者の履歴的基準レベルでよい（例えば同じ個体からより早い時点に得たサンプルから得られる）。ある例において、あらかじめ決められたレベルは年齢がマッチした集団から得られるレベルから誘導される（例えば平均または中間値）。
【０１１６】
ＡＤの層化法（すなわちＡＤ患者を軽度、中程度および重度ＡＤ期に分類する方法）では、基準レベルは通常、ＡＤまたはＭＣＩと診断された集団（より好ましくはＡＤと診断された集団）からの平均または中間レベルであるあらかじめ決められた基準レベルである。ある例において、あらかじめ決められた基準レベルは年齢がマッチした集団から得られるレベルから誘導される（例えば平均または中間値）。
【０１１７】
年齢がマッチした集団（この集団から基準値が得られる）は試験すべき個体と同じ年齢であるのが理想的であるが、年齢が大体マッチしている集団も容認される。年齢が大体マッチしている集団とは被験者の年齢から１、２、３、４または５年以内の個体でよい。年齢が大体マッチしている集団は２、３、４、５、６、７、８、９、または１０年以内の増加分でよい（例えば６２歳の個体のための基準値のソースとして役立つ「５年増加」群は、５８−６２歳の個体群、５９−６３歳の個体群、６０−６４歳の個体群、６１−６５歳の個体群または６２−６６歳の個体群を含む）。
【０１１８】
（ＡＤバイオマーカーのレベルの比較）
測定値および基準値を比較するプロセスは、問題のＡＤバイオマーカーの測定値および基準値のタイプに適した任意の便利な方法で行うことができる。上に述βように、「測定」は定量的または定性的測定法によって行われ、測定値と基準値を比較する方法は使用する測定技術によって変わる。例えば定性的比色アッセイを用いてＡＤバイオマーカーレベルを測定する際、それらのレベルは、着色反応産物の強度を目で見て比較することによって、または着色反応産物の濃度測定または分光測定からのデータ（測定デバイスから誘導される例えば棒チャートなどの数字的またはグラフ的データ）を比較することによって比較できる。しかし、本発明の方法に使用される測定値は最も一般的には定量的数値（例えばサンプル１ミリリットルあたりのＡＤバイオマーカーのナノグラム、または絶対量などの定量的濃度測定値）である。定性的測定に関しては比較は数字的データの検査、データ表示の検査によって（例えば棒または線グラフのようなグラフ的表現を検査することによって）行うことができる。
【０１１９】
測定値が基準値の少なくとも９５％である場合、その測定値は基準値と比較して実質的に等しいか、またはより大きいと考えるのが一般的である（例えば１．７１の測定値は１．８０の基準値に実質的に等しいと考えられる）。測定値が基準値の９５％未満である場合、その測定値は基準値より小さいと考えられる（例えば測定値１．７は基準値１．８０より小さいと考えられる）。
【０１２０】
比較プロセスはマニュアルでもよいし（方法を実施する人による目視的検査）、または自動機器を使用してもよい。例えばアッセイデバイス（化学ルミネッセントシグナルを測定するためのルミノメータなど）はあるＡＤバイオマーカーの測定値と基準値との比較を可能にする回路およびソフトウェアを含むことができる。或いは別のデバイス（例えばデジタルコンピューター）を使用して測定値（類）と基準値（類）とを比較することができる。比較のための自動機器は測定すべきＡＤバイオマーカー類の保存された基準値を含むことができ、または上記測定値（類）を、同時に測定した基準サンプルから誘導される基準値と比較することができる。
【０１２１】
幾つかの実施形態において、本発明の方法は測定レベル（類）および基準レベル（類）との間の「ｓｉｍｐｌｅ」または「ｂｉｎａｒｙ」比較を用いる（例えば測定レベルと基準レベルとの比較によって、測定レベルが基準レベルより高いか低いかを決める）。ＡＤ診断バイオマーカーについて、上記バイオマーカーの測定値が基準値より低いことを示した比較は、ＡＤ診断を指示または示唆する。ＭＣＩの診断に関する方法では、ＲＡＮＴＥＳの測定値が基準値より低いことを示した比較は、ＡＤの診断を指示、または示唆する。追加的にレプチン測定値を利用するＭＣＩ診断に関する実施形態において、ＲＡＮＴＥＳが基準値より低く、レプチンが基準値に実質的に等しいかまたは基準値より大きいことを示した比較は、ＭＣＩの診断を示唆または指示する。
【０１２２】
本明細書に記載のように、生物学的流体サンプルは定量的（絶対値）または定性的（相対値）に測定できる。所定の評価のための関連ＡＤバイオマーカーレベルは重複してもよいし、しなくてもよい。本明細書に記載のように、ある実施形態では、定性的データは認識障害の所定のレベル（軽度、中程度または重度ＡＤ）（それはＭＭＳＥスコアによって測定できる）を示し、ある実施形態では定量的データが認識障害の所定のレベルを示す。実施例４および実施例４に与えられる条件下（定性的データ）で示されるように、ＡＤの層化に関する実施形態において、基準レベルより低いＢＤＮＦレベルを示す比較は軽度ＡＤを示唆または指示し、その一方で基準レベルより高いＢＤＮＦレベルを示す比較は、より進行したＡＤ（すなわち中程度または重度ＡＤ）を示唆し、基準レベルより高いＢＤＮＦレベルを有するサンプルのなかで、基準レベルより低いＰＤＧＦ−ＢＢレベルも有するものは中程度ＡＤを示唆または指示し、その一方で基準レベルより高いＰＤＧＦ−ＢＢレベルも有するサンプルは重度ＡＤを示唆または指示する。実施例７に示されるようなＡＤの層化に関する実施形態において（定量的データ）、基準レベルより低いＢＤＮＦレベルを示し、その基準レベルが正常である場合の比較は軽度ＡＤを示唆または指示し、その一方で基準レベルより低いＢＤＮＦレベルを示し、その際その基準レベルが軽度ＡＤからのものであるという比較はより進んだＡＤ（すなわち中程度、重度ＡＤ）を示唆し、その一方で基準レベルと等しいレプチンレベルを有するサンプルであって、その基準レベルが、基準レベルより低いＲＡＮＴＥＳレベルを有する軽度ＡＤからのものであるという比較は中程度ＡＤを示唆または指示し、その一方で基準レベルに等しいレプチンレベルを有するサンプルであって、その基準レベルが、基準レベルより低いＰＤＧＦ−ＢＢ、ＲＡＮＴＥＳまたはＢＤＮＦレベルを有する中程度ＡＤからのものであるという比較は、重度ＡＤを示唆または指示する。
【０１２３】
しかし、本発明のある局面において、上記比較は測定値と基準値との差の大きさ（例えば測定値と基準値との差の「倍数」またはパーセンテージ）を決定するために行われる。本明細書に開示される最小倍数差に大体等しいかまたはより大きい倍数差は、実施する特定の方法に即して、ＡＤ、ＭＣＩ、ＭＣＩからＡＤへの進行、または軽度ＡＤから中程度ＡＤへの進行を示唆または指示する。倍数差はタンパク質の絶対濃度を測定し、それを基準の絶対値と比較することによって測定できる。または倍数差は基準値とサンプル値との間の相対的差によって測定でき、その際いずれの数値も絶対濃度の測定値でなく、および／または、両方の数値が同時に測定される。倍数差は１０％ないし９５％の範囲にある。ＥＬＩＳＡではあるタンパク質の絶対含有量または絶対濃度が測定され、それらから倍数変化が標準としての同じタンパク質の絶対濃度に比較して決定される。抗体アレイは相対的濃度を測定し、それから倍数変化が決定される。よって、特定の診断を示唆または指示する測定値および基準値間の差の大きさは、測定値および使用する基準値を得るために測定される特定のＡＤバイオマーカーに依存すると考えられる（使用する基準値自体、使用する方法に依存する）。表２Ａ−２Ｂには、測定値と基準値とを比較する際に倍数差を利用する本発明の方法に使用するＡＤバイオマーカーの最小倍数差が列挙される。倍数差の数値を利用する実施形態において、表２Ａに示される倍数差周辺の倍数差はＡＤの診断を示唆し、その際倍数変化は負の数値である。例えば本明細書に記載されるように、ＢＤＮＦレベル（ＥＬＩＳＡによって測定）は軽度ＡＤを有するＡＤ患者では減少し、ＡＤの重症度が増すにつれてＢＤＮＦレベルは減少する。表６に示すように、ＢＤＮＦの倍数変化−４６％はＢＤＮＦレベルの４６％の減少を意味する。表２Ａに示すように、抗体を使用する定性的測定では、ＢＤＮＦの倍数変化０．６０は、ＢＤＮＦレベルの６０％の減少を意味する。表２Ｂは倍数変化に関する追加的情報を提供する。
【０１２４】
【表２Ａ】
2007513337.tif 000003
【０１２５】
【表２Ｂ】
2007513337.tif 000004
当業者には明らかなように、被験バイオマーカー（類）の反復測定を行う場合、基準値と比較される測定値は上記反復測定値を考慮に入れた数値である。反復測定値は測定値の平均または中間値のいずれかを「平均値」として使用することによって考慮に入れることができる。
【０１２６】
（ＡＤバイオマーカー調節活性のための有望な作用物質のスクリーニング）
本発明はＡＤバイオマーカー調節活性のための有望な候補作用物質をアッセイすることによって、ＡＤおよび／またはＭＣＩを処置する候補作用物質をスクリーニングする方法も提供する。上記スクリーニングアッセイはｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｖｏで行われる。本明細書に記載されるスクリーニング法によって確認される候補作用物質はＡＤおよび／またはＭＣＩを処置する治療薬として有用であると考えられる。
【０１２７】
本発明のスクリーニング法は本明細書に記載されるＡＤバイオマーカー類と、「薬剤標的」としてのＡＤバイオマーカーポリヌクレオチド類を使用する。有望な作用物質について、アッセイ系における薬剤標的を調節する活性を試験する。当業者には明らかなように、活性の調節に関する試験法は使用するＡＤバイオマーカーおよび薬剤標的の種類（例えばタンパク質または遺伝子）によって異なる。種々様々の適切なアッセイが当業者には公知である。
【０１２８】
ＡＤバイオマーカータンパク質そのものが薬剤標的である場合、上記タンパク質自体のレベルまたは活性を調節する活性について上記有望な作用物質を試験する。ＡＤバイオマーカーのレベルの調節は例えばそのバイオマーカータンパク質の半減期の増加または減少によって達成できる。ＡＤバイオマーカーの活性の調節は上記ＡＤバイオマーカーの、その同種のレセプター（類）またはリガンド（類）への結合可能性を増加または減少させることによって達成できる。
【０１２９】
ＡＤバイオマーカーポリヌクレオチドが薬剤標的である場合、上記ＡＤバイオマーカーの合成を調節する活性について上記有望な作用物質を試験する。有望な作用物質の調節活性を試験する正確な方法は試験のために選ばれたＡＤバイオマーカーポリヌクレオチドの種類に依存することはもちろんである。例えば、薬剤標的がＡＤバイオマーカーポリヌクレオチドである場合、調節活性は、遺伝子から転写されるｍＲＮＡの測定（転写調節）またはこのような転写の結果として生成するタンパク質の測定（翻訳調節）のいずれかによって試験するのが一般的である。当業者には明らかなように、多くのアッセイフォーマットはＡＤバイオマーカー遺伝子の変形型（例えば酵素のような発現マーカーまたはオリゴ−ヒスチジンのような発現タグまたはｍｙｃのようなまた別のタンパク質に由来する配列をコードする非相同配列が、ＡＤバイオマーカータンパク質をコードする配列に融合し、または取って代わることさえある前記変形型）を使用する。このような非相同配列（類）は、上記薬剤標的から転写されるタンパク質レベルの便利な検出を可能にする。
【０１３０】
本発明のスクリーニング法に使用する有望な作用物質は有機および無機分子を両方とも（およびそれらの複合体も）含むあらゆる種類の化学化合物および／または複合体でよい。当業者には明らかなように、ＡＤバイオマーカー調節活性のスクリーニングが最も一般的に行われるのは有機分子である。ある状況下では、標的ＡＤバイオマーカータンパク質は試験のために有望な被験作用物質からは除外される。
【０１３１】
スクリーニングアッセイは当業者に公知の任意のフォーマット、例えば無細胞ｉｎ  ｖｉｖｏアッセイ、細胞培養アッセイ、器官培養アッセイ、およびｉｎ  ｖｉｖｏアッセイ（すなわちＡＤおよびＭＣＩの動物モデルを使用するアッセイ）などである。よって本発明は、有望な作用物質をスクリーニングし、ＡＤおよび／またはＭＣＩを処置するための候補作用物質を確認する種々の実施形態を提供する。
【０１３２】
幾つかの実施形態において、無細胞アッセイで有望な作用物質をスクリーニングし、ＡＤおよび／またはＭＣＩを処置するための候補作用物質を確認する。有望な各作用物質を無細胞環境において上記薬剤標的と共にインキュベートし、ＡＤバイオマーカーの調節を測定する。本発明の方法のスクリーニングに有用な無細胞環境とは、細胞溶解物（薬剤標的がＡＤバイオマーカー遺伝子である場合特に有用である）および生物学的液、例えば全血またはそれから誘導される血漿および血清などの分別液（ＡＤバイオマーカータンパク質が薬剤標的である場合特に有用である）を含む。薬剤標的がＡＤバイオマーカー遺伝子である場合、測定された調節は転写または翻訳の調節であるかも知れない。薬剤標的がＡＤバイオマーカータンパク質である場合、上記調節は上記タンパク質の半減期または上記ＡＤバイオマーカータンパク質の、その同種のレセプターまたはリガンドに対する結合可能性の調節であるかも知れない。
【０１３３】
その他の実施形態において、有望な作用物質をスクリーニングし、ＡＤおよび／またはＭＣＩを処置する候補作用物質を、細胞をベースにしたアッセイによって確認する。有望な各作用物質を培養細胞と共にインキュベートし、標的ＡＤバイオマーカーの調節を測定する。ある実施形態において、培養する細胞は星状膠細胞、神経細胞（海馬ニューロンなど）、線維芽細胞、またはグリア細胞である。薬剤標的がＡＤバイオマーカータンパク質である場合、そのＡＤバイオマーカータンパク質も上記アッセイ混合物に加えられ、そのタンパク質の半減期または上記ＡＤバイオマーカータンパク質のその同種レセプターまたはリガンドへの結合可能性が測定される。
【０１３４】
さらに別の実施形態は有望な作用物質をスクリーニングしてＡＤおよび／またはＭＣＩを処置するための候補作用物質を、器官をベースとするアッセイで確認することに関するものである。このフォーマットにおいて、有望な各作用物質を非ヒト動物に由来する器官全体または器官の一部（例えば脳組織の一部、例えば脳切片）どちらかと共にインキュベートし、標的ＡＤバイオマーカーの調節を測定する。薬剤標的がＡＤバイオマーカー遺伝子である場合、転写または翻訳調節が測定される。薬剤標的がＡＤバイオマーカータンパク質である場合、そのＡＤバイオマーカータンパク質も上記アッセイ混合物に加えられ、上記タンパク質の半減期の調節またはＡＤバイオマーカータンパク質の、その同種レセプターへの結合可能性が測定される。
【０１３５】
その他の実施形態は有望な作用物質をスクリーニングして、ｉｎ  ｖｉｖｏアッセイに用いるＡＤおよび／またはＭＣＩ処置のための候補作用物質を確認することに関係する。このフォーマットにおいて、有望な各作用物質を非ヒト動物に投与し、標的ＡＤバイオマーカーの調節を測定する。特定の薬剤標的によって、および取り組むべきＡＤおよび／またはＭＣＩの局面に依って、このようなアッセイに使用する動物は「正常」動物（例えばＣ５７マウス）またはＡＤまたはＭＣＩのモデルである動物のどちらでもよい。ＡＤの多数の動物モデルが当業者には知られており、３ｘＴｇ−ＡＤマウス（Ｃａｃｃａｍｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｎｅｕｒｏｎ  ３９（３）：４０９−２１）、ヒトアミロイドβ前駆体タンパク質（ＡＰＰ）およびプレセニリン遺伝子を発現するマウス（Ｗｅｓｔａｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．３（１）：６７−７２）およびその他（Ｈｉｇｇｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００３、Ｂｅｈａｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１４（５−６）：４１９−３８を参照）が含まれる。薬剤標的がＡＤバイオマーカー遺伝子である場合、転写または翻訳調節が測定される。薬剤標的がＡＤバイオマーカータンパク質である場合、上記標的ＡＤバイオマーカーの半減期の調節またはＡＤバイオマーカータンパク質の、その同種レセプターまたはリガンドへの結合可能性の調節が測定される。標的ＡＤバイオマーカーの調節を測定する正確なやり方は上記ＡＤバイオマーカーの同一性、アッセイフォーマット、および実施者による選択に依存するのはもちろんである。転写、翻訳、タンパク質半減期、タンパク質の利用性および、測定できるその他の局面の調節を測定するための種々様々の方法が当業者には公知である。これらの方法の一般的知識を考慮すると、これらについて本明細書にさらに詳しく記載する必要はない。
【０１３６】
（キット）
本発明は、本明細書に記載される任意の方法を実施するためのキットを提供する。本発明のキット類はＡＤバイオマーカーに特異的な少なくとも１種類の試薬を含み、さらに本明細書に記載の方法を実施するための指示書を含む。キットはＡＤバイオマーカーの基準サンプルも含むことができる。これは基準値として有用である。本明細書に記載されるキットに使用するための「ＡＤ診断マーカー」は、非制限的にＧＣＳＦ；ＩＦＮ−ｇ；ＩＧＦＢＰ−１；ＢＭＰ−６；ＢＭＰ−４；エオタキシン−２；ＩＧＦＢＰ−２；ＴＡＲＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＡＮＧ；ＰＡＲＣ；Ａｃｒｐ３０；ＡｇＲＰ（ＡＲＴ）；ＴＩＭＰ−１；ＴＩＭＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬ  Ｒ３；ｕＰＡＲ；ＩＧＦＢＰ−４；ＬＥＰＴＩＮ（ＯＢ）；ＰＤＧＦ−ＢＢ；ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＮＴ−３；ＮＡＰ−２；ＩＬ−１ｒａ；ＭＳＰ−ａ；ＳＣＦ；ＴＧＦ−ｂ３；ＴＮＦ−ｂ；ＭＩＰ−１ｄ；ＩＬ−３；ＦＧＦ−６；ＩＬ−６Ｒ；ｓＴＮＦ  ＲＩＩ；ＡＸＬ；ｂＦＧＦ；ＦＧＦ−４；ＣＮＴＦ；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ｂ；ＴＰＯ；ＶＥＧＦ−Ｂ；ＩＬ−８；ＦＡＳ；ＥＧＦ−Ｒを含む。その他の実施例において、本明細書に記載されるキットに使用するための「ＡＤ診断バイオマーカー」は、非制限的に塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）；ＢＢホモダイマー血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）；脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）；上皮成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子６（ＦＧＦ−６）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、可溶性インターロイキン−６レセプター（ｓＩＬ−６Ｒ）、レプチン（ｏｂとしても知られている）、マクロファージ炎症性タンパク質−１δ（ＭＩＰ−１δ）、マクロファージ刺激タンパク質α鎖（ＭＳＰ−α）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、好中球活性化ペプチド−２（ＮＡＰ−２）、ＲＡＮＴＥＳ、可溶性腫瘍壊死因子レセプター−２（ｓＴＮＦ  ＲＩＩ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポイエチン（ＴＰＯ）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−１（ＴＩＭＰ−１）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−２（ＴＩＭＰ−２）、トランスフォーミング増殖因子−β３（ＴＧＦ−β３）、腫瘍壊死因子β（ＴＧＦ−β）を含む。その他の実施例においてキットはＡＤ診断マーカー；レプチン、ＲＡＮＴＥＳ、ＰＤＦＧ−ＢＢおよびＢＤＮＦの任意の１、２、３または４種類を含む。
【０１３７】
より一般的には本発明のキットはＡＤバイオマーカー特異的親和性試薬を少なくとも２種類は含み、その際各試薬は異なるＡＤバイオマーカーに特異的である。ある実施形態において、キットはあるＡＤバイオマーカーに特異的な少なくとも５、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９または少なくとも１０種類の試薬を含む。幾つかの実施形態において、ＡＤバイオマーカーに特異的な試薬（類）は親和性試薬である。
【０１３８】
ＡＤバイオマーカーに特異的な単一の試薬を含むキットは、容器（例えばバイアル、アンプルまたはその他の適切な保存容器）内に封入された試薬を含むのが一般的である；ただし基質（例えばアッセイ反応容器の内面など）に結合した試薬を含むキットも考慮される。１種類より多い試薬を含むキットは容器内にそれらの試薬を（別々にまたは混合物として）含むこともでき、または基質に結合した試薬類を含むこともできる。
【０１３９】
幾つかの実施形態において、ＡＤバイオマーカーに特異的な試薬（類）は、検出を容易にするために検出可能マーカー（蛍光色素または検出可能酵素など）で標識するか、または修飾される（例えばアビジンまたはストレプトアビジンをベースとする検出システムで検出するためにビオチニル化される）。その他の実施形態において、ＡＤバイオマーカーに特異的な試薬は、直接は標識化されず、または修飾されない。
【０１４０】
本発明の幾つかのキットは結合ＡＤバイオマーカー特異的試薬を検出するための試薬も１種類以上含む。当業者には明らかなように、検出剤の独自性は上記キットに含まれるＡＤバイオマーカー特異的試薬（類）のタイプに依存する。検出剤としてはＡＤバイオマーカー特異的試薬に特異的な抗体類（例えば二次抗体）、ヌクレオチドをベースとするＡＤバイオマーカー特異的試薬を増幅するためのプライマー（例えばアプタマー）、またはＡＤバイオマーカー特異的試薬に結合したヌクレオチド「タグ」の増幅のためのプライマー、ビオチン修飾ＡＤバイオマーカー特異的試薬（類）の検出のためのアビジン−またはストレプトアビジン結合物などがある。検出系は当業者にはよく知られており、ここにこれ以上詳細に記載する必要はない。よって、ＲＡＮＴＥＳに特異的な少なくとも１種類の試薬と；その方法を実施するための指示書とを含んでなる、軽度認識障害（ＭＣＩ）を有する個体を確認するためのキットが本明細書に提供される。幾つかの実施例において、上記キットはさらにレプチンに特異的な試薬を含む。その他の実施例において、レプチンに特異的な少なくとも１種類の試薬；およびその方法を実施するための指示書を含んでなる、ＡＤ患者のアルツハイマー病（ＡＤ）の進行をモニターするためのキットが本明細書に提供される。脳由来神経栄養因子（ＢＦＮＦ）に特異的な少なくとも１種類の試薬；ＢＢホモダイマー血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）に特異的な少なくとも１種類の試薬；およびその方法を実施するための指示書を含んでなる、アルツハイマー病（ＡＤ）患者を層化するためのキットも提供される。
【０１４１】
ＡＤバイオマーカーの捕獲のための修飾された基質またはその他のシステムも本発明のキットに含まれる；それらキットがサンドイッチ−フォーマット・アッセイに使用するために設計される場合には特にこれが言える。捕獲系はＡＤバイオマーカーアッセイ系に有用な任意の捕獲系でよく、例えばＡＤバイオマーカー特異的試薬でコーティングしたマルチ−ウェル・プレート、ＡＤバイオマーカー特異的試薬でコーティングしたビーズなどがある。捕獲系は当業者にはよく知られており、これ以上説明する必要はない。
【０１４２】
幾つかの実施形態において、本発明によるキットはアレイ形の試薬を含む。上記アレイはあらかじめ決められたパターン（例えば格子）で基質に結合した、ＡＤバイオマーカーに特異的な少なくとも２種類の試薬（各試薬は異なるＡＤバイオマーカーに特異的である）を含む。よって、本発明は、非制限的にＧＣＳＦ；ＩＦＮ−ｇ；ＩＧＦＢＰ−１；ＢＭＰ−６；ＢＭＰ−４；エオタキシン−２；ＩＧＦＢＰ−２；ＴＡＲＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＡＮＧ；ＰＡＲＣ；Ａｃｒｐ３０；ＡｇＲＰ（ＡＲＴ）；ＴＩＭＰ−１；ＴＩＭＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬ  Ｒ３；ｕＰＡＲ；ＩＧＦＢＰ−４；ＬＥＰＴＩＮ（ＯＢ）；ＰＤＧＦ−ＢＢ；ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＮＴ−３；ＮＡＰ−２；ＩＬ−１ｒａ；ＭＳＰ−ａ；ＳＣＦ；ＴＧＦ−ｂ３；ＴＮＦ−ｂ  ＭＩＰ−１ｄ；ＩＬ−３；ＦＧＦ−６；ＩＬ−６Ｒ；ｓＴＮＦ−ＲＩＩ；；ＡＸＬ；ｂＦＧＦ；ＦＧＦ−４；ＣＮＴＦ；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ｂ；ＴＰＯ；ＶＥＧＦ−Ｂ；ＩＬ−８；ＦＡＳ；ＥＧＦ−Ｒを含む「ＡＤ診断マーカー」からなるアレイを提供する。その他の実施例において、「ＡＤ診断バイオマーカー」は非制限的に、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）；ＢＢホモダイマー血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）；脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）；上皮成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子６（ＦＧＦ−６）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、可溶性インターロイキン−６レセプター（ｓＩＬ−６Ｒ）、レプチン（ｏｂとしても公知である）、マクロファージ炎症性タンパク質−１δ（ＭＩＰ−１δ）、マクロファージ刺激タンパク質α鎖（ＭＳＰ−α）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、好中球活性化ペプチド−２（ＮＡＰ−２）、ＲＡＮＴＥＳ、可溶性腫瘍壊死因子レセプター−２（ｓＴＮＦ  ＲＩＩ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポイエチン（ＴＰＯ）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−１（ＴＩＭＰ−１）、組織性メタロプロテアーゼインヒビタ−２（ＴＩＭＰ−２）、トランスフォーミング増殖因子−β３（ＴＧＦ−β３）、および腫瘍壊死因子β（ＴＮＦ−β）を含む。他の実施例において、アレイはＡＤ診断マーカーであるレプチン、ＲＡＮＴＥＳ、ＰＤＦＧ−ＢＢおよびＢＤＮＦの任意の１、２、３または４種類を含む。種々のＡＤバイオマーカー特異的試薬（「捕獲試薬」）の位置を推定すれば、同じ反応における多数の種々のＡＤバイオマーカーのレベルの測定が可能になる。アレイ形で試薬を含むキットは一般にサンドイッチフォーマットであり、したがってそのようなキットは検出試薬も含む。通常、上記キットは種々の検出試薬を含み、各検出試薬は異なるＡＤバイオマーカーに対して特異的である。このような実施形態における検出試薬は、通常、基質に結合する試薬と同じＡＤバイオマーカー類に特異的な試薬であり（ただし上記検出試薬はＡＤバイオマーカーの、基質結合試薬の結合部位とは異なる部分または部位に結合するのが普通である）、概して親和性型検出試薬である。その他の任意のフォーマットアッセイのための検出試薬の場合と同様に、上記検出試薬は検出可能部分で修飾され、別個の検出可能部分が結合できるように修飾されているか、或いは修飾されていなくともよい。修飾されていな��か、または別個の検出可能部分が結合できるように修飾された検出試薬を含むアレイ形キットは追加的検出可能部分も含むことができる（例えば検出試薬に結合する検出可能部分、例えば非修飾検出試薬に結合する標識化抗体類、またはビオチン修飾検出試薬を検出するための検出可能部分で修飾されたストレプトアビジンなど）。
【０１４３】
本発明を実施するためのキットの使用に関する指示書は、一般的には、本発明の方法を実施するためのキットの内容物の使用法を説明する。指示書はサンプルの必要事項（例えば形、アッセイ前処理、およびサイズなど）、ＡＤバイオマーカー（類）の測定に必要な工程、および結果の説明などの情報を含む。
【０１４４】
本発明のキットにおいて提供される指示書は一般には標識または包装内挿入物（例えばキットに含まれるペーパーシートなど）に関する、書面による指示書であるが、機械で読み取れる指示書（例えば磁気または任意の保存ディスクで運ばれる指示書）でもよい。ある種の実施形態において、機械で読み取れる指示書はキットに含まれる試薬類を使用して得られる測定値を比較するためにプログラムされたデジタルコンピューターのためのソフトウェアを含む。
【０１４５】
下記の実施例は本発明を説明するためのものであるが、本発明の範囲を制限するものではない。
【実施例】
【０１４６】
（実施例１：ＡＤ診断バイオマーカー）
アルツハイマー病患者（平均年齢７４歳）から集めた３２例の血清中の１２０のタンパク質に関するタンパク質発現レベルを、コントロール群（平均年齢７４歳）から集めた１９例の血清中のそれらと比較した。アルツハイマー病患者は神経科医によって臨床的にＡＤと診断され、２６−１４の範囲のＭｉｎｉ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｓｔａｔｅ  Ｅｘａｍ（ＥＥＳＥ）を示した。
【０１４７】
血漿サンプルをニトロセルロースフィルタ基質上でサンドイッチ−フォーマットＥＬＩＳＡを用いて分析試験した。血漿サンプルを燐酸緩衝液で１：１０に希釈し、捕獲基質（捕獲抗体をスポットしたニトロセルロース膜）と共にインキュベートした。サンプルを捕獲基質と共に２時間室温でインキュベートし、その後捕獲基質から傾瀉した。基質を洗浄緩衝液（１Ｘ  ＰＢＳ；０．０５％ツイーン−２０）２ｍｌで室温で２回洗い、その後ビオチニル化検出抗体と共に室温で２時間インキュベートした。捕獲抗体溶液を傾瀉し、基質を洗浄緩衝液で５分間２回洗った。洗った基質をホースラディッシュペルオキシダーゼ／ストレプトアビジン結合体と共に４５分間インキュベートし、その結合体溶液を傾瀉し、膜を洗浄緩衝液で５分間２回洗った。基質を一片の濾紙上に移し、Ｒａｙｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃｓ．から購入した高性能化学ルミネッセンス（ＥＣＬ）検出緩衝溶液中でインキュベートした。化学ルミネッセンスを検出し、化学ルミネッセンス画像化カメラで定量した。シグナル強度を、基質上にブロットした標準タンパク質に対して標準化し、これを用いてバイオマーカー類の相対的レベルを計算した。その他の実施例において、シグナル強度を中間値に標準化し、これを用いてバイオマーカー類の相対的レベルを計算した。
【０１４８】
血漿中の相対的バイオマーカーレベルを次の４６の差別的バイオマーカーをあらわすコントロール群とＡＤ群との間で比較した：ＧＣＳＦ；ＩＦＮ−ｇ；ＩＧＦＢＰ−１；ＢＭＰ−６；ＢＭＰ−４；エオタキシン−２；ＩＧＦＢＰ−２；ＴＡＲＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＡＮＧ；ＰＡＲＣ；Ａｃｒｐ３０；ＡｇＲＰ（ＡＲＴ）；ＴＩＭＰ−１；ＴＩＭＰ−２；ＩＣＡＭ−１；ＴＲＡＩＬ  Ｒ３；ｕＰＡＲ；ＩＧＦＢＰ−４；ＬＥＰＴＩＮ（ＯＢ）；ＰＤＧＦ−ＢＢ；ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＮＴ−３；ＮＡＰ−２；ＩＬ−１ｒａ；ＭＳＰ−ａ；ＳＣＦ；ＴＧＦ−ｂ３；ＴＮＦ−ｂ  ＭＩＰ−１ｄ；ＩＬ−３；ＦＧＦ−６；ＩＬ−６Ｒ；ｓＴＮＦ  ＲＩＩ；；ＡＸＬ；ｂＦＧＦ；ＦＧＦ−４；ＣＮＴＦ；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ｂ；ＴＰＯ；ＶＥＧＦ−Ｂ；ＩＬ−８；ＦＡＳ；ＥＧＦ−Ｒ。４６の差別的マーカーを教師なしクラスタリングした結果（すなわち上記クラスタリングアルゴリズムはどの例がＡＤで、どの例が正常であるかを知らない）、それらのサンプルは２つの群またはクラスター、コントロールサンプルのクラスターとＡＤサンプルのクラスター、にクラスタリングされた。感度は、ＡＤクラスターに正しく分類されたＡＤサンプルの数／ＡＤサンプルの総数として計算された。それは２９／３２または９０．６％である。特異性はコントロールクラスターに正しく分類されたコントロールサンプルの総数／コントロールの総数として計算され、それは（１４／１９＝７３．６％）であった。
【０１４９】
バイオマーカーレベルをコントロール群とＡＤ群との間で比較し、両群間で示差的に調節される２０のバイオマーカー（各バイオマーカーはＡＤではコントロールに比較して減少する）が明らかになった（表３に示される）。統計分析を行い、任意のバイオマーカーにおいて示差的レベルの測定結果がエラーである確率（「ｑ」値）を見いだした。バイオマーカーを示差的レベルおよび関連するｑ値（パーセント値として示される）と共に表３に示す（倍数変化はコントロール対ＡＤサンプルにおけるレベル間の倍数変化を示す）。感度は、ＡＤクラスターのＡＤサンプル数／ＡＤサンプル総数として計算した。それは２９／３２または９０．６％である。特異性は正しく予測された総ＡＤ数／総予測ＡＤ数として計算された（２９／３４＝８５％）。
【０１５０】
【表３】
2007513337.tif 000005
（実施例２：ＡＤ診断マーカーデータからの決定木）
実施例１から得られるデータをさらに分析すると、ＡＤ診断バイオマーカーを用いるＡＤ診断のための２つの異なる決定木が形成された。
【０１５１】
第一の決定木はｓＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−８、およびＴＩＭＰ−１レベルを使用する。上記決定木を作成するルールを次に示す：（１）ｓＩＬ−６Ｒ≦５．１８およびＩＬ−８≦０．９５７であれば、正常と指示される；（２）ｓＩＬ−６Ｒ≦５．１８およびＩＬ−８＞０．９５７である場合、ＡＤという指示が下される；（３）ｓＩＬ−６Ｒ＞５．１８およびＴＩＭＰ−１≦７．９７８である場合、ＡＤという指示が下される；（４）ｓＩＬ−６Ｒ＞５．１８およびＴＩＭＰ−１＞７．９７８である場合、正常と指示される。ここにあらわされる数値は相対的濃度である。
【０１５２】
この決定木の精度をＣＡＲＴの１０回交差検定試験機能を利用して測定し、学習サンプルおよび試験サンプルの誤分類率を算出した。感度は、試験スコアから、ＡＤと正しく予測されたＡＤサンプルの数／ＡＤサンプル総数として計算された（２９／３２＝０．９０６）。特異性は、試験スコアから、ＡＤと正しく予測された総症例数／ＡＤと予測された総症例数として計算された（２９／３３＝０．８７８）。
【０１５３】
第二の決定木はＢＤＮＦ、ＴＩＭＰ−１およびＭＩＰ−１δレベルを用いて作成された。決定木を作るルールを次に示す：（１）ＢＤＮＦ＞４．４７６である場合、正常という指示が下される；（２）ＢＤＮＦ≦４．４７６で、ＴＩＭＰ−１≦８．９４２である場合、指示はＡＤである；（３）ＢＤＮＦ≦４．４７６、ＴＩＭＰ−１＞８．９４２、そしてＭＩＰ−１δ≦１．８９である場合、指示はＡＤである；（４）ＢＤＮＦ＞４．４７６、ＴＩＭＰ−１＞８．９４２、そしてＭＩＰ−１δ＞１．８９である場合、正常という指示である。この決定木の精度をＣＡＲＴの１０回交差検定試験機能を利用して測定し、学習サンプルおよび試験サンプルの誤分類率を計算した。感度は、試験スコアから、正しくＡＤと予想されたＡＤサンプルの数／ＡＤサンプルの総数（０．８７５）として計算された。特異性は、試験スコアから、正しく予想されたＡＤ症例の総数／ＡＤと予想された症例の総数（０．８２）として計算された。
【０１５４】
（実施例３：ＭＣＩの診断）
ＲＡＮＴＥＳおよびレプチンのレベルをコントロール被験者（平均年齢＝７４）からの１８サンプルおよび軽度認識障害（ＭＣＩ）と診断された患者からの６サンプルで測定した。ＭＣＩ患者は神経科医によって臨床的に診断され、５未満のＡＵＬＴ−Ａ７スコアおよび３０−２８の範囲のＭｉｎｉ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｓｔａｔｅ  Ｅｘａｍ（ＭＭＳＥ）スコアを示した。コントロール被験者は５以上のＡＵＬＴ−Ａ７スコアおよび３０−２８の範囲のＭＭＳＥスコアを示した。
【０１５５】
ＲＡＮＴＥＳおよびレプチンレベルをＲ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ社からのＥＬＩＳＡキットを使用し、上記製造会社の指示書にしたがって測定した。生のＥＬＩＳＡ発現値を、全サンプルの中間値によって各数値を割るというやり方で標準化した。データの分析から次のことが判明した：（ａ）レプチンはＭＣＩ患者ではコントロール被験者に比較して減少しない（６ＭＣＩサンプルにおいてレプチンはコントロール被験者より実際１１％高かった）、および（ｂ）ＲＡＮＴＥＳの二モード分布、この際ＭＣＩ患者は１．０４３ないし１．１８３のＲＡＮＴＥＳレベルを有した（コントロール被験者からのレベルは≦１．０４３または＞１．１８３であった）。しかしデータをより綿密に調べると、ＲＡＮＴＥＳ≦１．０４３を有するコントロール被験者が誤って正常と分類されていた（ＭＣＩと診断すべきであった）ことが判明した。
【０１５６】
ＲＡＮＴＥＳ≦１．０４３を有するコントロール被験者をＭＣＩ患者として再分類すると、簡単なルールが生まれた：ＲＡＮＴＥＳ≦１．１８３およびレプチン≧０．６７６である場合、指示はＭＣＩである。実施例２に記載のように計算した感度および特異性はそれぞれ８３．３％および８８．８８％であった。
【０１５７】
（実施例４：ＡＤ患者のモニタリングおよび層化）
アルツハイマー病と診断された３６名の患者（平均年齢７４）から集めた血清サンプルにおいて、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ社からのＥＬＩＳＡキットを用い、上記製造会社からの指示書にしたがって、ＲＡＮＴＥＳ、レプチン、ＰＤＮＦ−ＢＢおよびＢＤＮＦのレベルを測定した。生のＥＬＩＳＡ発現値は、各数値を全サンプルの中間値で割ることによって標準化された。これらのサンプルをＭＭＳＥスコアに基づいて次の３群に分類した：クラス１（軽度ＡＤ）、ＭＭＳＥ２７−２２；クラス２（中程度ＡＤ）、ＭＭＳＥ２１−１６；クラス３（重度ＡＤ）、ＭＭＳＥ１５−１２。
【０１５８】
ＥＬＩＳＡデータの分析で、ＢＤＮＦおよびＰＤＮＦ−ＢＢを使用する決定木を作成した。この決定木を作成するルールは：（１）ＢＤＮＦ≦０．６２６である場合、軽度ＡＤという指示が下される；（２）ＢＤＮＦ＞０．６２６およびＰＤＮＦ−ＢＢ≦０．９１９である場合、中程度ＡＤと指示される；（３）ＢＤＮＦ＞０．６２６およびＰＤＮＦ−ＢＢ＞０．９１９である場合、重度ＡＤと指示される。あらわされる数値は中間値に標準化された相対的濃度である。レプチンの平均標準化レベルは：クラスＩ＝．８８６；クラスＩＩ＝．７５７；クラスＩＩＩ＝．５８９であった。ＢＤＮＦの平均標準化レベルは：クラスＩ＝．５９５；クラスＩＩ＝．９５６；クラスＩＩＩ＝１．２３であった。「試験」データセットに適用した際、上記決定木は試験サンプルの５８％、４７％および５７％を軽度、中程度、および重度カテゴリーに正しく層化した。
【０１５９】
（実施例５：４種類の差別的マーカー）
ＥＬＩＳＡによって測定した４種類だけの差別的マーカー、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＬＥＰＴＩＮ、およびＲＡＮＴＥＳの血漿中の絶対濃度を用いてサンプルを分類した。ＥＬＩＳＡキットはＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社から購入し、測定値は製造会社の指示にしたがって得た。例えばＲＡＮＴＥＳでは次のプロトコルにしたがった。
１．５０μＬの標準、サンプルまたはコントロールを適切なウェルに加える。
２．５０μＬ抗−ＲＡＮＴＥＳビオチン結合物を各ウェルに加える。
３．ウェルを３７℃で１時間インキュベートする。
４．吸引し、洗浄緩衝液でウェルを４回洗う。
５．１００μＬストレプトアビジン−ＨＲＰ結合物を各ウェルに加える。
６．室温で３０分間インキュベートする。
７．吸引し、洗浄緩衝液でウェルを４回洗う。
８．安定化クロモゲン１００μＬを各ウェルに加える。
９．暗所において室温で３０分間インキュベートする。
１０．停止溶液１００μＬを各ウェルに加える。
１１．４５０ｎｍの吸光度を読み取る。
【０１６０】
上のプロトコルにしたがって、ｃｌｕｔｏ．ｃｃｇｂ．ｕｍｎ．ｅｄｕ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ｗＣｌｕｔｏ／ｗＣｌｕｔｏ．ｃｇｉで一般に利用できる、ウェブ−ベースのクラスタリングソフトウェアｗＣＬＵＴＯを用い、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＬＥＰＴＩＮ、およびＲＡＮＴＥＳの教師なしクラスタリングを行った。ここで上記４種類のタンパク質のクラスタリングによって、サンプルは２つの群またはクラスター、すなわちコントロールサンプルクラスターおよびＡＤサンプルクラスターにまとめられた。感度は、ＡＤサンプル中の正しく分類されたＡＤサンプル数／総ＡＤサンプル数として計算され、２１／２４または８７．５％である。特異性は、コントロールクラスター中の正しく分類されたコントロールサンプルの総数／総コントロール数として計算され、２０／２４＝８３．３％である。
【０１６１】
さらに、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、およびＬＥＰＴＩＮについて血漿中の絶対バイオマーカーレベル（ＥＬＩＳＡによって測定）をＭＭＳＥスコア（範囲１２−３０）と関連づけた。ＡＤは１２−２８の範囲のＭＭＳＥスコアで確認でき、コントロールサンプルは２５−３０の範囲のＭＭＳＥスコアで確認された。表４は相関性およびそれらの統計的有意性（ｐ−値）を示す。より高いおよびより低い相関性は、ＭＭＳＥスコア範囲の上端とバイオマーカー濃度がより相関しているか、またはＭＭＳＥスコア範囲の下端とバイオマーカー濃度がより相関しているかを示す。したがってこれらの相関関係は、ＢＤＮＦおよびレプチンのより高いレベルがより良いＭＭＳＥスコアと有意に相関すること、およびＢＤＮＦおよびレプチン濃度の基準点、またはより早い採取時点からの増加は、ＭＭＳＥによって測定した際の認識改善の兆候であることを示す。同時に、またはそれ自体、男性のＰＤＧＦ−ＢＢのより低いレベルはより良いＭＭＳＥスコアと有意に相関し、男性のサンプルのＰＤＧＦ−ＢＢの濃度が同じ男性のより早い採取時点のそれと比較した際の減少は、ＭＭＳＥによって測定した認識の改善の兆候である。
【０１６２】
これらの結果は（表４）、ＡＤに関する３種類の差別的タンパク質の血中濃度と被験者のＭＭＳＥスコアとの相関性、およびＡＤに関して差別的なタンパク質類の濃度間の相関性を示す。ＡＤ被験者のなかでＭＭＳＥスコアと年齢との相関関係はなかったし、ＡＤ被験者のなかで年齢と血中ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢまたはＬＥＰＴＩＮ濃度との相関関係もなかった。ｐ−値は相関性が統計的に有意であることを示す。カウントは症例数を示す。ＢＤＮＦはＭＭＳＥスコアと統計的に有意な正の相関関係を有する。ＰＤＧＦ−ＢＢは男性においてＭＭＳＥスコアと統計的に有意な負の相関関係を有する。ＬＥＰＴＩＮはＭＭＳＥスコアと統計的に有意な正の相関関係を有する。この実験は、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＬＥＰＴＩＮ、およびＢＤＮＦの血中濃度を使用して認識低下の進行をモニターできることを証明する。
【０１６３】
【表４】
2007513337.tif 000006
コントロールとＡＤ症例とは年齢的にマッチしており、平均年齢７４歳であった。ＡＤ症例（ｎ＝２４）の平均ＭＭＳＥスコアは２０であり、コントロール症例（ｎ＝２４）の平均ＭＭＳＥスコアは３０であった。サンプルの分類はタンパク質濃度の教師なしクラスタリングで行われた。分類の全体的精度は８５．４％であった。この結果は、ＥＬＩＳＡによって測定されるＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＬＥＰＴＩＮ、およびＲＡＮＴＥＳの血中タンパク質濃度を使用してＡＤとコントロールとを正確に区別できることを証明した。
【０１６４】
（実施例６：ＡＤおよびコントロールの平均タンパク質濃度のＥＬＩＳＡ法による確認）
ＡＤ（ｎ＝９５）対年齢的にマッチしたコントロール（ｎ＝８８）の血漿サンプルにおけるタンパク質類、ＬＥＰＴＩＮ、ＢＤＮＦおよびＲＡＮＴＥＳのタンパク質濃度を１Ａ−１Ｃに示す。我々が測定した４種類のタンパク質のうちの１つは脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）であった。ＡＤ血漿におけるＢＤＮＦの平均濃度は８．１ｎｇ／ｍｌ（ＳＥ±０．４）であり、これに対してコントロール血漿の平均は１０．８ｎｇ／ｍｌ（ＳＥ±０．６８）であった。その差は統計的に極めて有意であることが判明した（ｐ−値＝０．０００６）。ＡＤに比べてその他の形の痴呆ではＢＤＮＦの濃度がより低い（５．７４ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝２０）ことを我々は見いだした。ＡＤ血漿中の第二のタンパク質であるレプチンの平均濃度は１０．９ｎｇ／ｍｌ（ＳＥ±１．０６）であり、これに対してコントロール血漿の平均値は１７．４ｎｇ／ｍｌ（ＳＥ±１．８）であることが判明した。その差は統計的に非常に有意であることが判明した（ｐ−値＝０．００１８）。ＡＤ血漿中の第三のタンパク質であるＲＡＮＴＥＳの平均濃度は６６．３ｎｇ／ｍｌ（ＳＥ±２．４）であり、これに対してコントロールサンプルでは７４．５ｎｇ／ｍｌ（ＳＥ±３．２）であることが判明した。この差は統計的に非常に有意であることが判明した（ｐ−値＝０．０４０３）。ＭＭＳＥスコア≧２０を有するＡＤ患者（ｎ＝５４）とＭＭＳＥスコア＜２０（ｎ＝４１）のＡＤ患者との間ではＲＡＮＴＥＳ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、およびＢＤＮＦの濃度の平均値の差は認められなかった。
【０１６５】
（実施例７：血漿中のバイオマーカーの絶対濃度）
追加的に、血漿中のバイオマーカーの絶対濃度をＢＤＮＦについて測定し、コントロールの平均濃度をＭＣＩ（軽度認識障害）、ＭＭＳＥ２５−２８、ＭＭＳＥ２０−２５、およびＭＭＳＥ１０−２０と比較した。この実験の目的のために下記の実施例において使用した指数は：疑わしいＡＤ＝２５−２８の範囲のＭＭＳＥスコア；軽度ＡＤ＝２０−２５の範囲のＭＭＳＥスコア；中程度ＡＤ＝１０−２０の範囲のＭＭＳＥスコアおよび重度ＡＤ＝１０−２０の範囲のＭＭＳＥスコアである。実施例７の目的から、疑わしいＡＤを有すると評価された全ての患者は、医師によってＡＤに罹っていると診断された。図２は、ＭＭＳＥ２５−２８；ＭＭＳＥ２０−２５；ＭＭＳＥ１０−２０を示す血漿中のＢＤＮＦの平均濃度は、コントロール（正常、平均年齢７４）の平均濃度より有意に低く、ＭＣＩのＢＤＮＦ濃度はコントロールおよび全てのＡＤ症例より有意に高いことを示す。図２。
【０１６６】
【数１】
2007513337.tif 000007
その他に、異なる４カ所のアルツハイマーセンターから集めた血漿サンプルのＢＤＮＦの絶対濃度をＡＤ（女性）およびコントロール（女性）とＡＤ（男性）およびコントロール（男性）との間の性別差に関して比較した。図３は、ＡＤ女性のＢＤＮＦ濃度をコントロール女性と比較すると４０％の差があり、その差は統計的に高度に有意である（ｐ−値＝０．００４）ことを示している。全ＡＤ症例のＢＤＮＦの平均濃度と、全コントロール症例のそれとの差は統計的に極めて有意であることが判明した（ｐ−値＝０．０００６）。
【０１６７】
【数２】
2007513337.tif 000008
分割変数の数値がないため、全体の結果は個々のセルの結果と一致しないかも知れない。
【０１６８】
【数３】
2007513337.tif 000009
分割変数の数値がないため全体の結果は個々のセルの結果と一致しないかも知れない。
【０１６９】
その他に、血漿中のバイオマーカーの絶対濃度を異なる４カ所のアルツハイマーセンターから集めた血漿サンプル中のＲＡＮＴＥＳについて測定し、コントロールの平均濃度を、ＭＣＩ（軽度認識障害）、ＭＭＳＥ２５−２８；（ＭＭＳＥ２０−２５；ＭＭＳＥ１０−２０；およびＭＭＳＥ１０−２０の平均濃度と比較した。指数は上に記載されている。軽度ＡＤと中程度ＡＤとの差、軽度ＡＤと正常との差、軽度ＡＤと重度ＡＤとの差、中程度ＡＤと正常との差、疑わしいＡＤと正常との差、正常と重度ＡＤとの差は全て統計的に有意であることが判明した。図４。
【０１７０】
【数４】
2007513337.tif 000010
その他に、血漿中のバイオマーカーの絶対濃度を、異なる４カ所のアルツハイマーセンターから集めた血漿サンプル中のレプチンについて測定し、コントロールの平均濃度をＭＣＩ（軽度認識障害）；ＭＭＳＥ２５−２８；ＭＭＳＥ２０−２５；ＭＭＳＥ１０−２０；およびＭＭＳＥ１０−２０と比較した。疑わしいＡＤとＭＣＩとの間、軽度ＡＤと正常との間、軽度ＡＤと疑わしいＡＤとの間、疑わしいＡＤと正常との間、中程度ＡＤと正常との間の平均差は全て統計的に有意であることが判明した。図５。
【０１７１】
【数５】
2007513337.tif 000011
その他に血漿中のバイオマーカーの絶対濃度を、異なる４カ所のアルツハイマーセンターから集めた血漿サンプル中のＰＤＧＦ−ＢＢについて測定し、コントロールの平均濃度をＭＣＩ（軽度認識障害）；ＭＭＳＥ２５−２８；ＭＭＳＥ２０−２５；ＭＭＳＥ１０−２０；およびＭＭＳＥ１０−２０の平均濃度と比較した。軽度ＡＤと疑わしいＡＤとの比較、重度ＡＤと軽度ＡＤとの比較、重度ＡＤと中程度ＡＤとの比較、疑わしいＡＤと正常との比較、および重度ＡＤと正常との比較の平均差は全て統計的に有意であることが判明した。図６。
【０１７２】
【数６】
2007513337.tif 000012
その他に血漿中のバイオマーカーの絶対濃度を、４カ所の異なるアルツハイマーセンターから集めた血漿サンプル中のＢＤＮＦについて測定し、コントロールの平均濃度をＭＣＩ（軽度認識障害）、疑わしいＡＤ（ＭＭＳＥ２５−２８）と比較した。ＭＣＩと軽度ＡＤ、ＭＣＩと疑わしいＡＤ、軽度ＡＤと正常、軽度ＡＤと重度ＡＤ、中程度と正常、正常と疑わしいＡＤおよび正常と重度の平均差は全て統計的に有意であることが判明した。図７。
【０１７３】
【数７】
2007513337.tif 000013
疑わしいＡＤ（２５−２８範囲のＭＭＳＥスコア）では、レプチンおよびＰＤＧＦ−ＢＢのレベルは上昇し、その一方でＢＤＮＦおよびＲＡＮＴＥＳは有意には変化しないことが判明した。軽度ＡＤ（２０−２５の範囲のＭＭＳＥスコア）から中程度ＡＤ（１０−２０の範囲のＭＭＳＥスコア）では、ＬＥＰＴＩＮレベルは減少せず、ＲＡＮＴＥＳ、ＢＤＮＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢのレベルは減少することが判明した。
【０１７４】
（実施例８：）
ＡＤの末梢免疫系において変化するタンパク質を確認する目的で、ＡＤ患者３２名および年齢的にマッチしている痴呆でないコントロール１９名から得た血漿について１２０種のサイトカイン、ケモカイン、および成長因子の発現レベルをフィルター上の斑点抗体マイクロアレイを用いて測定した。統計的分析により、ＡＤとコントロールとの間で有意に異なる２０種のタンパク質が確認された。これらのうち、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）およびＮＴ−３、およびＰＤＧＦ−ＢＢ、ＥＧＦ、ＦＧＦ−６、ｂＦＧＦ、ＴＧＦ−ｂ３を含む６種類は既知の神経栄養活性を有し、ＡＤ血漿中では有意に減少していた。ＢＤＮＦレベルは、ｍｉｎｉ  ｍｅｎｔａｌ  ｓｔａｔｅ  ｅｘａｍ（ＭＭＳＥ）によるより良い認識機能と相関関係を示した。２００のＡＤ症例およびコントロールからの血漿について、市販のサンドイッチＥＬＩＳＡを用いて得られたＢＤＮＦ測定値は、ＡＤ症例において２５％という高度に有意な減少を示した。アレイデータと一致して、減少した血中ＢＤＮＦレベルは記憶機能障害と関連していた。ＢＤＮＦは神経細胞の維持、生存および機能のために重要である。理論によって裏付けられているわけではないが、ＡＤではニューロトロフィンおよびＢＤＮＦの血中レベルの減少が神経変性および認識機能異常と関連しているらしい。
【０１７５】
（実施例９：その他のバイオマーカー）
その他に、ＧＤＮＦ、ＳＤＦ−１、ＩＧＦＢＰ３、ＦＧＦ−６、ＴＧＦ−ｂ３、ＢＭＰ−４、ＮＴ−３、ＥＧＦ、ＢＤＮＦ、ＩＧＦＢＰ−２の定性的バイオマーカーレベルはＡＤサンプル（ＭＭＳＥ範囲１２−２８）およびコントロールサンプル（ＭＭＳＥ範囲２５−３０）ではＭＭＳＥスコア（範囲１２−３０）と関連していた。表５は相関性およびそれらの統計的有意性（ｐ−値）を示す。高い方および低い方の相関関係は、ＭＭＳＥスコアの範囲の上端とバイオマーカー濃度、またはＭＭＳＥスコアの範囲の下端とバイオマーカー濃度、のどちらがより大きく相関しているかを示す。負の相関関係はバイオマーカーレベルが減少するにつれてＭＭＳＥスコアは高まることを意味し、その反対も言える。正の相関関係は、バイオマーカーレベルの増加につれてＭＭＳＥスコアが増加することを意味する。
【０１７６】
【表５−１】
2007513337.tif 000014
【０１７７】
【表５−２】
2007513337.tif 000015
（実施例１０）
この実施例は表６、すなわちＡＤを確認および層化する定量的マーカーの一覧を示す。
【０１７８】
【表６−１】
2007513337.tif 000016
【０１７９】
【表６−２】
2007513337.tif 000017
よって本発明は、個体から得られる生物学的流体サンプル中の少なくとも４種類のＡＤ診断バイオマーカーの測定レベルを各ＡＤ診断バイオマーカーの基準レベルと比較することを含んでなる、アルツハイマー病（「ＡＤ」）の診断を補助する方法を提供し、その際前記バイオマーカーはＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、レプチンおよびＲＡＮＴＥＳを含む。よってＢＤＮＦの基準レベルに比較して少なくとも約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、または約３０％減少したＢＤＮＦは、例えばＡＤの徴候のような認識障害を示すものであるという方法が提供される。よってレプチン基準レベルに比較して少なくとも約１０％、約１５％、約２０％、約２５％または約３０％減少したレプチンは、例えばＡＤの徴候のような認識障害を示すものであるという方法が提供される。よってＲＡＮＴＥＳ基準レベルに比較して少なくとも約５％、約１０％、または約１５％減少したＲＡＮＴＥＳは例えばＡＤの徴候のような認識障害を示すものであるという方法が提供される。よって、ＰＤＧＦ−ＢＢ基準レベルに比較して少なくとも約８０％、約８５％または約９０％減少したＰＤＧＦ−ＢＢは例えば重度ＡＤの徴候のような認識障害を示すものであるという方法が提供される。
【０１８０】
【表７−１】
2007513337.tif 000018
【０１８１】
【表７−２】
2007513337.tif 000019
【０１８２】
【表７−３】
2007513337.tif 000020
【０１８３】
【表７−４】
2007513337.tif 000021
【０１８４】
【表７−５】
2007513337.tif 000022
【０１８５】
【表７−６】
2007513337.tif 000023
【０１８６】
【表７−７】
2007513337.tif 000024
【０１８７】
【表７−８】
2007513337.tif 000025
【０１８８】
【表７−９】
2007513337.tif 000026
【０１８９】
【表７−１０】
2007513337.tif 000027
【０１９０】
【表７−１１】
2007513337.tif 000028
理解を明確にする目的で本発明を説明および実施例によってある程度詳細に述βが、当業者には明らかなように若干の変化および変更は可能である。したがって前記の記述および実施例は本発明の範囲を制限するものではない。
【図面の簡単な説明】
【０１９１】
【図１】図１Ａ−１Ｃは、本明細書の実施例に示す表３のリストから選択した３種類のタンパク質のＥＬＩＳＡ結果を示す。すなわち図１ＡはＢＤＮＦ；図１Ｂはレプチン；図１ＣはＲＡＮＴＥＳのＥＬＩＳＡ結果である。平均ＭＭＳＥスコアが２０である平均年齢７４歳のＡＤ患者らから得た９５の血漿サンプルを平均ＭＭＳＥスコア３０を有する８８歳の匹敵するコントロールから得たサンプルと比較した。各タンパク質の平均濃度を比較するノンパラメトリック、不対ｔ検定を用いて統計的有意性（ｐ−値）を検定した。
【図２】図２は、血漿中のＢＤＮＦ濃度のエラーバー付きグラフを示す。（エラーバー付きグラフ、グループの変数（類）：病期、エラーバー：±１標準誤差、組み入れ基準：Ｓｐａｒｋｓ  ｆｒｏｍ  Ｃｅｎｔｅｒ  Ａｌｌ）
【図３】図３は、男性および女性についてＢＤＮＦをコントロール対ＡＤで示す。（エラーバー付きグラフ、グループの変数（類）：疾患、性別ごと、エラーバー：±１標準誤差（類）、除外行：Ｃｅｎｔｅｒ  Ａｌｌ）
【図４】図４は、血漿中のＲＡＮＴＥＳ濃度を示す。（エラーバー付きグラフ、グループの変数（類）：病期、エラーバー：±１標準誤差（類）、除外行：Ｃｅｎｔｅｒ  Ａｌｌ）
【図５】図５は、血漿中のレプチン濃度を示す。（エラーバー付きグラフ、グループの変数（類）：病期、エラーバー：±１標準誤差（類）、除外行：Ｃｅｎｔｅｒ  Ａｌｌ）
【図６】図６は、血漿中のＰＤＧＦ−ＢＢ濃度を示す。（エラーバー付きグラフ、グループの変数（類）：病期、エラーバー：±１標準誤差（類）、除外行：Ｃｅｎｔｅｒ  Ａｌｌ）
【図７】図７は、血漿中のＢＤＮＦ濃度を示す。（エラーバー付きグラフ、グループの変数（類）：病期、エラーバー：±１標準誤差（類）、除外行：Ｃｅｎｔｅｒ  Ａｌｌ）
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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