(57)【要約】本発明は、下記の式１に示す広防風グリコシドＡ、2007505839.tif 000011とそれを含む広防風根抽出物製剤及びその調製方法に関する。この製剤は広防風根抽出物と薬用補助材からなる各種の内服製剤であり、その中の広防風根抽出物は広防風の根部を水で抽出し濃縮してから得られたエキスであり、広防風グリコシドＡが０．１０〜１．５０％占める。本発明の広防風根製剤にはホルモンがないので、服用してから、プロゲストゲンを追加で使用して不良反応を予防する必要がない。臨床治療効果も著しく、品質も安定しており、コントロール性も安全性もよく、特に更年期の女性の長期服用に適する。
2007505839.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの構造を有する広防風グリコシドＡ
【化１】
2007505839.tif 000010
【請求項２】
広防風根抽出物製剤であって、該製剤が広防風根抽出物と薬用補助材からなる各種の内服製剤であり、その中の広防風根抽出物は広防風の根部を水で抽出し濃縮して得られるエキスであり、請求項１の広防風グリコシドＡを０．１０〜１．５０％含むことを特徴とする製剤。
【請求項３】
請求項２の広防風根抽出物製剤であって、前記の内服製剤はハードカプセル、ソフトカプセル、細粒剤、錠剤又は内服液等を含む医学的に受け入れられる各種の内服剤であることを特徴とする製剤。
【請求項４】
請求項２の広防風根抽出物製剤の調製方法であって、下記ステップ、即ち
１）広防風の根を取り、粉砕し、十倍量の水で２回（１〜２時間／回）抽出し煎じ、煎液を一緒にし、相対密度１．０１〜１．０８（２５〜３０℃の条件下）の糊状になるまで濾過してから、噴霧乾燥や真空乾燥して抽出物を得て、広防風根抽出物中の広防風グリコシドＡの含量を高圧液相法にて測定して０．１０〜１．５０％とし、
２）抽出物と補助材を一定の割合で掻き混ぜて、乾式法や湿式法により造粒し、通常の方法で各種の製剤を調製するステップより成ることを特徴とする調製方法。
【請求項５】
請求項４の広防風根抽出物製剤の調製方法であって、前記抽出物製剤中の広防風グリコシドＡの含量測定方法は下記の工程を含むことを特徴とする調製方法。
1 ）測定器と材料
測定器：Ａｇｌｉｅｎｔｌ  １００高効液相クロマトグラフ装置
対照物：広防風グリコシドＡ
試薬：メチルアルコール、アセトニトリル、蒸留水など全ての試薬は分析純度であること
サンプル：広防風根抽出物（上海薬港生物技術有限公司製）
2 ）クロマトグラフ条件：
クロマトグラフコラム： Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｃ１８（２５０×４．６ｍｍ，５μｍ  ）
移動相：アセトニトリル：水 ＝ ２７：７３
流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ 温度：室温
検査波長：３２０ｎｍ サンプル量：２０μl
3）標準カーブ
（1） 標準備蓄液の製作：精密に計量し対照物広防風グリコシドＡを４．９５ｍｇ採取し、メチルアルコールを加えて超音溶解して、２５ｍｌになるまで定量する。
（2） 標準カーブの制作：対照物の備蓄液をそれぞれ０．４、０．８、１．２、１．６、２．０の量で容量２ｍｌのボトルに注入し、メチルアルコールを加えて目盛りまで溶解して、均一に振って、それぞれ濃度が３９．６μｇ／ｍｌ、７９．２μｇ／ｍｌ、 １１８．８μｇ／ｍｌ、 １５８．４μｇ／ｍｌ、１９８μｇ／ｍｌの広防風グリコシドＡの標準液を得て、上記のクロマトグラフ条件でサンプルを２０μｌ採取する。ピークエリア（Ｙ）を縦軸とし、広防風グリコシドＡの濃度（Ｘ）を横軸として、線形回帰を実施し、回帰方程式Ｙ＝２０．１３９Ｘ−１５４．３５ 、 Ｒ２ ＝０．９９９４、線形範囲０．７９２〜３．９６μｇ、広防風グリコシドＡのピークオーバー時間９．５５ｍｉｎを得る。
４）サンプルの測定
対照物溶液の調合：一定の対照物を計量して採取し、メチルアルコールを加えて超音波溶解し、定量し、それぞれ試験品溶液を２０μｇ吸い取り、上記液相条件で測定する。ピークエリアを記録し、標準カーブにて広防風グリコシドＡの含量を計算する。
サンプル液の調製：広防風根抽出物の粉末を１７０．５ｍｇ精密に測定して採取し、遠心分離管に入れて、水を加えて超音波で２回抽出し、遠心分離し、上澄液を採取して、残滓を水で洗い、上澄液と洗液を合わせて容量１０ｍｌのボトルに入れて、サンプリングする前に０．４５μｍのフィルターで濾過する。
上記のサンプル液をクロマトグラフ条件でサンプリングして、コロン校正方法でサンプルの成分の含量を計算する。計算式は下記のとおりである。
Ｙ＝ ２０．１３９Ｘ一１５４．３５
Ｙはピークエリア値
Ｘはサンプルの濃度μｇ／ｍｌ
かくて、サンプルには広防風グリコシドＡの含量Ｘ×１０／サンプル量＊１００％となる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は漢方薬製薬分野に属し、具体的には女性更年期症候群治療用の広防風グリコシドＡ、とそれを含む広防風根抽出物製剤及びその調製方法に関する。
【技術背景】
【０００２】
更年期症候群の治療に対しては、長期にわたりエストロゲン類を使用して製剤してきたが、ホルモンには多くの副作用及び悪い反応があり、ガンの原因になる場合さえあるので、多くの女性に受け入れられにくくなくなってきた。したがって、現在、臨床上には理想的な薬品はまだ存在していないとも言える。
【０００３】
広防風は、別名が防風草で、ラテン名は Ｅｐｉｍｅｒｅｄｉ  ｉｎｄｉｃａ  （Ｌ．）Ｒｏｔｈｍａｌｅｘで、シソ科植物である防風草の全草であり、主に感冒発熱、咽吐、腹痛、筋骨の痛み、皮膚病、湿疹、痔病などの治療に効用があると≪漢方薬大辞典≫に記載されており、中華人民共和国衛生部により発布された基準≪漢方薬既成処方製剤≫の第二十巻に記載された貫防感冒剤の一種である。
【０００４】
本発明の出願人は既に中国特許出願０２１１０５２２．７において広防風根の新しい用途を公開した。広防風の根は、卵巣機能を改善しエストロゲンとプロゲストゲンを調節する作用を持つので、エストロゲンやプロゲストゲンのアンバランスに関係する病気を治療し予防する薬品や保健薬品を調製することが出来る。
【発明の内容】
【０００５】
本発明の技術的課題は、中国特許出願０２１１０５２２．７を基に、さらに一歩進めて広防風根の抽出物製剤を開発し、活性成分含量が正確で品質が安定した新型広防風根内服製剤を提供することにある。
【０００６】
本発明にて開示する広防風根抽出物製剤とは広防風根抽出物と薬用補助材からなる各種の内服製剤であり、その中の広防風根抽出物は広防風の根部を水で抽出し濃縮して得られたエキスであり、広防風グリコシドＡが０．１０〜１．５０％含まれる。
【０００７】
本発明にいわゆる薬用補助材は、通常製剤の薬用補助材と同様で、いわゆる内服剤とはハードカプセル、ソフトカプセル、細粒剤、錠剤又は内服液等を含む医学的に受け入れられる各種の内服剤をいう。
【０００８】
本発明の課題であるもう一つの技術的問題は、上記の広防風根抽出物製剤の調製方法及び活性成分の測定方法を開示することにある。
【０００９】
本発明にて開示する広防風根抽出物製剤の調製は下記のような手順による。
【００１０】
１ 、広防風の根を取り、粉砕し、十倍量の水で２回（１〜２時間／回）抽出し、一緒に煎じて、相対密度１．０１〜１．０８（２５〜３０℃の条件下）の糊状の濾液になるまで濾過してから、噴霧乾燥や真空乾燥を行って抽出物を得る。広防風根抽出物を高圧液相法にて測定し、広防風グリコシドＡの含量０．１０％〜１．５０％となるようにする。
【００１１】
２、抽出物と補助材を所定の比例で掻き混ぜて、乾式法や湿式法で製粒、通常の方法で各種の製剤を調製する。
【００１２】
本発明において、広防風根抽出物の中の広防風グリコシドＡの含量測定方法は下記の通りである。
【００１３】
１ 、測定器と材料
測定器：Ａｇｌｉｅｎｔｌ  １００高効液相クロマトグラフ装置
対照物：広防風グリコシドＡ
試薬：メチルアルコール、アセトニトリル、蒸留水など全ての試薬は分析純度であること
サンプル：広防風根抽出物（上海薬港生物技術有限公司製）
２ 、クロマトグラフ条件：
クロマトグラフコラム：Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｃ１８（２５０×４．６ｍｍ,5μｍ）
移動相：アセトニトリル：水＝２７：７３
流速：ｌ．０ｍｌ／ｍｉｎ 温度：室温
測定波長：３２０ｎｍ サンプル量：２０μl
３、標準カーブ
（1） 標準備蓄液の調製：精密に計量して対照物広防風グリコシドＡを４．９５ｍｇ取り、メチルアルコールを添加し、超音波溶解して、２５ｍｌになるまで定量する。
（2） 標準カーブの制作：対照物の備蓄液をそれぞれ０．４、０．８、１．２、１．６、２．０の量で容量２ｍｌのボトルに注し、メチルアルコールを目盛りまで加え、均一に振って、それぞれ濃度が３９．６μｇ／ｍ１、７９．２μｇ／ｍ、１１８．８μｇ／ｍ、１５８．４μｇ／ｍ、１９８μｇ／ｍの広防風グリコシドＡの標準液を得て、上記のクロマトグラフ条件でサンプルを２０μl取る。ピークエリア（Ｙ）を縦軸として、広防風グリコシドＡの濃度（Ｘ）を横軸として、線形回帰を実施して、回帰方程式はＹ＝２０．１３９Ｘ−１５４．３５、Ｒ２ ＝０．９９９４となり、線形範囲は０．７９２〜３．９６μｇとなり、広防風グリコシドＡのピークオーバー時間は９．５５ｍｉｎとなる。
【００１４】
４、サンプルの測定
対照物溶液の調合：一定の対照物を精密に計量して取り、メチルアルコールを加えて超音波溶解し、定量し、それぞれ試験品溶液を２０μg吸い取り、上記条件で測定する。ピークエリアを記録し、標準カーブにて広防風グリコシドＡの含量を計算する。
【００１５】
試薬の調製：広防風根抽出物の粉末を精密に測定して取り、遠心分離管に入れて、水を加えて超音波で2回抽出し、遠心分離し、上澄液を取って、残滓を水で洗い、溶媒と洗液を合わせて容量１０ｍｌのボトルに入れて、サンプリングする前に０．４５μｍフィルターで濾過する。
【００１６】
上記のサンプル液をクロマトグラフ条件でサンプリングして、コロン校正方法でサンプルの成分の含量を計算する。計算式は下記のようである。
【００１７】
Ｙ＝２０．１３９Ｘ一１５４．３５
Ｙはピークエリア値
Ｘはサンプルの濃度μｇ／ｍｌ
かくて、サンプルには広防風グリコシドＡの含量Ｘ×１０／サンプルの量×１００％である。
【００１８】
本発明において使用する対照物の広防風グリコシドＡは広防風根抽出物を分離純化して得られた有効成分の単体であり、すなわち、広防風根抽出物を ノルマルブチルアルコールで抽出して、それぞれマクロ孔樹脂とＣ一１８シリカゲル柱を通し、アルコールで洗浄し，収集し、薄層で検査し、一緒にし、回収取得したものである。そのＨＰＬＣ図は図２を参照された、その構造は下記のようである。
【化１】
2007505839.tif 000003
【００１９】
本発明の広防風グリコシドＡの含量測定方法について考察する。
【００２０】
(1)標準カーブの設定
1）   標準備蓄液の調製：精密に計量し対照物を４．９５ｍｇ取り、メチルアルコールを加えて超音波溶解して、２５ｍｌになるまで定量する。
【００２１】
2）   標準カーブの制作：対照物の備蓄液をそれぞれ０．４、０．８、１．２、１．６、２．０の量で容量２ｍｌ のボトルに注し、メチルアルコールを目盛りまで加え、溶解して、均一に振って、それぞれ濃度が３９．６μｇ／ｍ１、７９．２μｇ／ｍ１、１１８．８μｇ／ｍ１、１５８．４μｇ／ｍ１、１９８μｇ／ｍ１の広防風グリコシドＡの標準液を得て、上記のクロマトグラフ条件でサンプルを２０μｌ取る。ピークエリア（Ｙ）を縦軸として、広防風グリコシドＡの濃度（Ｘ）を横軸として、線形回帰を実施して、回帰方程式はＹ＝２０．１３９Ｘ−１５４．３５、Ｒ２ ＝０．９９９４となり、線形範囲は０．７９２〜３．９６μｇとなり、広防風グリコシドＡのピークオーバー時間は９．５５ｍｉｎ となる。
【表１】
2007505839.tif 000004
【００２２】
広防風グリコシドＡの標準カーブは図１を参照されたい。
【００２３】
(2）精密度試験
濃度０．１９８（ｍｇ／ｍｌ）の広防風グリコシドＡ対照液を精密に採取し、上記と同様な条件で６回連続サンプリングして、精密度の試験を行う。
【表２】
2007505839.tif 000005
【００２４】
結果から見ると、この方法の精密度は良好である。
【００２５】
(3）安定性試験
対照溶液を採取し、それぞれ０、４、８、１２時間内で広防風グリコシドＡのピークエリアを測定し、毎回２０μｇのサンプルを注入する。
【表３】
2007505839.tif 000006
【００２６】
（４）再現性試験
上記と同じロットのサンプルを５件取り、“サンプル含量測定”に述べた方法に従ってサンプル液を調製し、上記方法で２０μｇのサンプルを注入し、サンプル液の広防風グリコシドＡのピークエリアを測定する。
【表４】
2007505839.tif 000007
【００２７】
（５）回収率試験
含量測定済みのサンプルを精密に測定して取り、広防風グリコシドＡ対照物の備蓄液を取り、それぞれ精密に当該対照物溶液を入れて、“サンプル含量測定”項の手順に従って、同一の液相条件で広防風グリコシドＡの含量を測定する。
【表５】
2007505839.tif 000008
【００２８】
上記の試験は、本発明においての広防風グリコシド根抽出物の品質検査方法は正確で且つ安定していることが証明できる。
【００２９】
本発明の広防風根製剤にはホルモンを含有しないので、服用したのち、プロゲストゲンを追加使用して不良反応を予防する必要がない。臨床治療効果も著しく、品質は安定しており、コントロール性も安全性もよく、特に更年期の女性の長期服用に適する。それと同時に、エストロゲンの治療が必要であるのに、ホルモン禁忌症の故にこれができない患者達にも新しい治療ルートを提供することが出来る。
【００３０】
発明の詳細実施方法
実施例１、広防風グリコシドＡの調製
（１）広防風の根を取り、粉砕し、十倍量の水を加え、２時間煎じ、液を濾過して、予備用とし、また残滓に8倍量の水を加え、２時間煎じ、濾過し、濾液を合わせて、濃縮し、噴霧乾燥や真空乾燥を行い、広防風根抽出物を得る。
【００３１】
（２）広防風グリコシド根抽出物を６Ｋｇ取り、１０倍量の水を加えて加熱し３回抽出して、６００ｍｌまで水を回収し、飽和したノルマルブチルアルコールで３回（４００ｍ１／回）抽出して、ノルマルブチルアルコールを回収して乾燥し、蒸留水を５００ｍ１加えて溶解した後、マクロ孔樹脂（ＡＢ−８，天津南開大学化学工場）を通し、順番に２０％、５０％、９５％のエチルアルコールで洗浄して５０％のエチルアルコール洗浄後を回収して乾燥させ、適量の５０％のメチルアルコール−水（ｖ／ｖ）を加えて溶解し、Ｃ−１８シリカゲルを通し、５０％のメチルアルコール−水（ｖ／ｖ）で洗浄して、区分収集し、薄層で検査し、これらを合わせて、回収し、広防風グリコシドＡを得る。
【００３２】
化合物のＵＶ、ＩＲ、ＥＳＩ、ＨＲＥＳＩ、ＮＭＲ、２Ｄ−ＮＭＲ（ＣＯＳＹ、ＨＭＱＣ、ＨＭＢＣ、ＮＯＥＳＹ）に基づき、化合物広防風グリコシドＡを確認する。その分子式はＣ１３Ｈ４０Ｏ１５であり、分子量は６５２であり、融点は１３９〜１４２℃であり、構造式は式１のようであり、シグナル帰属は表１の通りである。
【表６】
2007505839.tif 000009
【００３３】
実施例２広防風根抽出物の調製並びにその含量測定
Ａ、広防風の根を取り、粉砕し、十倍量の水を加えて、２時間煎じ、液を濾過して、予備用とし、また残滓に８倍量の水を加えて２時間煎じ、濾過して、濾液を合わせて、濃縮し、噴霧乾燥や真空乾燥を施して、広防風根抽出物を得る。
【００３４】
Ｂ、含量の測定
１、測定器と材料
測定器：Ａｇｌｉｅｎｔｌ  １００高効率液相クロマトグラフ装置
対照物：広防風グリコシドＡ
試薬：メチルアルコール、アセトニトリル、蒸留水など全ての試薬は分析純度であるもの
サンプル：広防風根抽出物（上海薬港生物技術有限公司製）
２、クロマトグラフ条件：
クロマトグラ７コラム：ＤｉｓｃｏｖｅｒｙＣ１８（２５０×４．６ｍｍ，５μｍ）
移動相：アセトニトリル：水＝２７：７３
流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ  温度：室温
検査波長：３２０ｎｍ  サンプル量：２０μｌ
３、標準カーブ
（1） 標準備蓄液の調製：精密に計量して対照物広防風グリコシドＡを４．９５ｍｇ取り、メチル・アルコールを加えて超音波溶解して、２５ｍｌになるまで定量する。
（2） 標準カーブの制作：対照物の備蓄液をそれぞれ０．４、０．８、１．２、１．６、２．０の量で容量２ｍｌのボトルに注し、メチルアルコールを加えて目盛りまで溶解し、均一に振って、それぞれ濃度が３９．６μｇ／ｍｌ、７９．２μｇ／ｍｌ、１１８．８μｇ／ｍｌ、１５８．４μｇ／ｍｌ、１９８μｇ／ｍｌの広防風グリコシドＡの標準液を得て、上記のクロマトグラフ条件でサンプルを２０μl取る。ピークエリア（Ｙ）を縦軸とし、広防風グリコシドＡの濃度（Ｘ）を横軸として、線形回帰を実施する、回帰方程式はＹ＝２０．１３９Ｘ−１５４．３５、Ｒ２ ＝０．９９９４となり、線形範囲は０．７９２〜３．９６μｇとなり、広防風グリコシドＡのピークオーバー時間は９．５５ｍｉｎとなる。
【００３５】
４  、サンプルの測定
対照物溶液の調合：一定の対照物を計量して取り、メチルアルコールを加えて超音波溶解し、定量し、それぞれ試験品溶液を２０μｇ吸い取り、上記条件で測定する。ピークエリアを記録し、標準カーブを用いて広防風グリコシドＡの含量を計算する（図２参照）。
【００３６】
サンプル液の制作：広防風根抽出物の粉末を精密に１７６．６６ｍｇ測定して採取し、遠心分離管に入れて、水を加えて超音波で２回抽出し、遠心分離し、上澄液を取って、残滓を水で洗い、溶媒と洗液を合わせて容量１０ｍｌのボトルに入れて、サンプリングする前に０．４５μｍのフィルターで濾過する。
【００３７】
上記のサンプル液をクロマトグラフ条件でサンプリングして、（図3参照）コロン校正方法でサンプルの成分の含量を計算する。
【００３８】
Ｙ＝３８３．３８０
Ｙ＝２０．１３９Ｘ−１５４．３５の計算式によりＸ＝２６．７０μｇ／ｍｌ
したがって、サンプルには広防風グリコシドＡの含量は
Ｘ×１０／サンプルの量×１００％＝０．１５％。
【００３９】
実施例３  細粒剤の製作
処方：
広防風根抽出物              １５０ｇ
乳糖                        ５０ｇ
ステアリン酸マグネシウム    ２ｇ
方法：実施例２で得た広防風根抽出物と乳糖などの補助材を均一にかき混ぜてふるいにかけ、細粒を作り、再度ふるいにかけて選別してから完成する。広防風グリコシドＡの含量は０．１７％である。
【００４０】
実施例４
処方：
広防風根抽出物              １３０ｇ
乳糖                        ７０ｇ
ステアリン酸マグネシウム    １ｇ
方法：実施例２で得た広防風根抽出物と乳糖などの補助材を均一にかき混ぜてふるいにかけ、細粒を作り、再度ふるいにかけて選別してから完成する。広防風グリコシドＡの含量は０．１３％である。
【００４１】
実施例５カプセルの製作
処方：
広防風根抽出物                １１０ｇ
乳糖                          ９０ｇ
ステアリン酸マグネシウム      １ｇ
方法：実施例２で得た広防風根抽出物と乳糖などの補助材を均一にかき混ぜて６０目のふるいにかけ、細粒を作り、再度ふるいにかけて選別してからカプセルに入れる。広防風グリコシドＡを０．２７％含有する。
【００４２】
実施例６錠剤の製作
処方：
広防風根抽出物                ２３０ｇ
ＭＣＣ                        ２０g
ＣＭＳ−Ｎａ                  ３g
ポリビニルポリピロリドン      １g
タルカムパウダー              １g
ステアリン酸マグネシウム      １g
方法：ＭＣＣとＣＭＳ−Ｎａなどの補助材を準備して、すり鉢に入れて混ぜ、実施例２で得た広防風根抽出物を加えて、振動磨き機に入れて、高速で数分間磨いてから、取り出す。細粒を作って、乾燥、整理して、少量のステアリン酸マグネシウム潤滑剤を投入して、加圧して平らにして、フィルムで包み、錠剤を得る。広防風グリコシドＡの含量は０．２３ ％である。
【００４３】
実施例７錠剤の製作
処方：
広防風根抽出物                ３００ｇ
ＭＣＣ                        ２６ｇ
ＣＭＳ−Ｎａ                  ２．８ｇ
ポリビニルポリピロリドン      ２．８ｇ
タルカムパウダー              ２．８ｇ
ステアリン酸マグネシウム      １g
方法は実施例６と同様である。広防風グリコシドＡの含量は０．２２％である。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】広防風グリコシドＡの標準カーブ。
【図２】広防風グリコシドＡ対照物ＨＰＬＣ図。
【図３】広防風根抽出物ＨＰＬＣ図。
【図１】
2007505839.tif 000012
【図２】
2007505839.tif 000013
【図３】
2007505839.tif 000014
【国際調査報告】
2007505839.tif 000015
2007505839.tif 000016
2007505839.tif 000017
2007505839.tif 000018