(57)【要約】  本出願は、櫛形ポリマーの製造方法であって、（ａ）（ｉ）線状、分枝状又は星形の、置換又は非置換の、且つオレフィン性不飽和部分を有する、モノマーであって、該オレフィン性不飽和部分が付加重合を受け得る複数のモノマー；（ｉｉ）開始剤化合物であって、均等開裂可能な結合を含む化合物；及び上記（ｉｉｉ）モノマーの重合を触媒し得る触媒を準備する工程、及び（ｂ）上記開始剤と組合せて、上記触媒に上記複数のモノマーの重合を触媒させる工程を含む方法を提供する。該製法により得られる触媒及びポリマーも提供される。好ましくはタンパク質と結合することができる櫛形ポリマーであり、且つアルコキシポリエーテル、例えばポリ（アルキレングリコール）又はポリテトラヒドロフランであるモノマーから生成され得る櫛形ポリマーである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
櫛形ポリマーの製造方法であって、
（ａ）
（ｉ）線状、分枝状又は星形の、置換又は非置換の、且つ付加重合を受け得るオレフィン性不飽和部分を有する複数のモノマー、
（ｉｉ）均等開裂可能な結合を含む開始剤化合物、
（ｉｉｉ）前記モノマーの重合を触媒し得る触媒、
を準備する工程と、
（ｂ）前記櫛形ポリマーを生成するために、前記開始剤と組合せて、前記触媒に前記複数のモノマーの重合を触媒させる工程と、を含み、
前記開始剤化合物（ｉｉ）が、前記櫛形ポリマーに結合したときに、生物学的物質と結合し得る部分を含むことを特徴とする、櫛形ポリマーの製造方法。
【請求項２】
（ｉ）における前記モノマーがアルコキシポリエーテルであることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記アルコキシポリエーテルがポリ（アルキレングリコール）又はポリテトラヒドロフランであることを特徴とする、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記生物学的物質がタンパク質又はポリペプチドであることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記触媒がリビングラジカル重合又はリビングフリーラジカル重合による前記モノマーの重合を触媒し得ることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
遷移金属と成長中のポリマーラジカルとの間に直接結合が形成されないよう、δ−結合で前記遷移金属と配位結合し得る任意のＮ−、Ｏ−、Ｐ−又はＳ−含有化合物、又はπ−結合で前記遷移金属と配位結合し得る任意の炭素含有化合物であるリガンドを、前記触媒が含むことを特徴とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記触媒が
Ｍが一形式酸化状態により酸化され得る遷移金属、特にＣｕ＋、Ｃｕ２＋、Ｆｅ２＋、Ｆｅ３＋、Ｒｕ２＋、Ｒｕ３＋、Ｃｒ２＋、Ｃｒ３＋、Ｍｏ２＋、Ｍｏ３＋、Ｗ２＋、Ｗ３＋、Ｍｎ３＋、Ｍｎ４＋、Ｒｈ３＋、Ｒｈ４＋、Ｒｅ２＋、Ｒｅ３＋、Ｃｏ−、Ｃｏ２＋、Ｖ２＋、Ｖ３＋、Ｚｎ＋、Ｚｎ２＋、Ａｕ＋、Ａｕ２＋、Ａｇ＋及びＡｇ２＋であり、Ｙは一価又は二価の対イオンである、第一化合物ＭＹと、
窒素のうちの少なくとも１つが芳香族環の一部にないオルガノジイミンとを含むことを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記触媒が次式で表される化合物：
［ＭＬｍ］ｎ＋Ａｎ−
（式中、Ｍは一形式酸化状態により酸化され得る遷移金属、特にＣｕ＋、Ｃｕ２＋、Ｆｅ２＋、Ｆｅ３＋、Ｒｕ２＋、Ｒｕ３＋、Ｃｒ２＋、Ｃｒ３＋、Ｍｏ２＋、Ｍｏ３＋、Ｗ２＋、Ｗ３＋、Ｍｎ３＋、Ｍｎ４＋、Ｒｈ３＋、Ｒｈ４＋、Ｒｅ２＋、Ｒｅ３＋、Ｃｏ＋、Ｃｏ２＋、Ｖ２＋、Ｖ３＋、Ｚｎ＋、Ｚｎ２＋、Ａｕ＋、Ａｕ２＋、Ａｇ＋及びＡｇ２＋、
Ａは陰イオン、
ｎは１〜３の整数、
ｍは１〜２の整数、
Ｌは窒素のうちの少なくとも１つが芳香族環の一部にないオルガノジイミン）
を含むことを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記オレフィン性不飽和部分がアクリレート、メタクリレート、メチルメタクリレート、スチレン、メチルアクリレート又はブタジエンのようなジエンであることを特徴とする、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ポリ（アルキレングリコール）がポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）又はポリ（プロピレングリコール）であることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記モノマーのＰＥＧ部分の分子量が４５０〜２０，０００であることを特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
チオエステル含有化合物又はキサンテートである開始剤を用いることを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記開始剤がハロゲン原子との均等開裂可能な結合を含むことを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記開始剤化合物（ｉｉ）が
Ａ−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ、Ａ−Ｓ−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−Ｒ、Ｒ−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−Ａ、Ｒ−Ｓ−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−Ａ（ここで、ＲはＣ１〜Ｃ２０の置換又は非置換の、直鎖、分枝鎖、環状、複素環式又は芳香族のアルキルである）；
Ａ−Ｂ−Ｘ；
【化１】
2007516302.tif 000031
から選択されることを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記Ａが、スクシンイミジルスクシネート、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、スクシンイミジルプロピオネート、スクシンイミジルブタノエート、トリアジン、ビニルスルホン、プロピオンアルデヒド、アセトアルデヒド、トレシレート（tresylate）、ベンゾトリアゾールカルボネート、マレイミド、ピリジルスルフィド、ヨードアセトアミド及びスクシンイミジルカルボネートから選択されることを特徴とする、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記リンカーが、存在する場合、Ｃ１〜Ｃ２０の置換又は非置換の、直鎖、分枝鎖、環状、複素環式又は芳香族のアルキル基；−（ＣＨ２Ｚ）ａＣＨ２−、−ＣＨ２ＺＣＨ２−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｚ）ｎＲ、−（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）Ｚ）ｎＲ、−（ＣＨ２）ｂ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｃ−、−（ＣＨ２）ａ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｙ−、−
Ｎ（Ｒ）２−；−Ｓ−；−Ｎ−Ｒ；又は−Ｏ−Ｒ（ここで、ＲはＣ１〜Ｃ２０の置換又は非置換の、直鎖、分枝鎖、環状、複素環式又は芳香族のアルキル、ＺはＯ又はＳであり、ｎ、ａ、ｂ及びｃは独立して選択可能な１〜１０の整数である）から選択されることを特徴とする、請求項１４又は１５に記載の方法。
【請求項１７】
タンパク質又はポリペプチドと反応し得る前記部分が次式を有することを特徴とする、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【化２】
2007516302.tif 000032
【請求項１８】
前記開始剤（ｉｉ）が、次式を有することを特徴とする、請求項１４〜１７のいずれか
一項に記載の方法。
【化３】
2007516302.tif 000033
【請求項１９】
前記開始剤が、次式を有することを特徴とする、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【化４】
2007516302.tif 000034
【請求項２０】
前記オルガノジイミンが、
【化５】
2007516302.tif 000035
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及びＲ１３は独立して選択可能であり、Ｈ、直鎖、分枝鎖又は環状の飽和アルキル、ヒドロキシアルキル、カルボキシアルキル、アリール、ＣＨ２Ａｒ（ここで、Ａｒはアリール又は置換アリールである）又はハロゲンから選択されてよく；
Ｒ３〜Ｒ９は独立して選択可能であり、Ｈ、直鎖、分枝鎖又は環状のアルキル、ヒドロキシアルキル、カルボキシアルキル、アリール、ＣＨ２、Ａｒ、ハロゲン、ＯＣＨ２ｎ＋１（ここで、ｎは１〜２０の整数である）、ＮＯ２、ＣＮ、Ｏ＝ＣＲ（ここで、Ｒ＝アルキル、アリール、置換アリール、ベンジルＰｈＣＨ２又は置換ベンジル）から選択さ
れてよい）
から選択されることを特徴とする、請求項７〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記オルガノジイミンが、Ｎ−（ｎ−プロピル）−２−ピリジルメタンイミン（ＮＭＰＩ）、Ｎ−（ｎ−エチル）−２−ピリジルメタンイミン又はＮ−エチル−２−ピリジルメタンイミンであることを特徴とする、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記触媒がビピリジン基を含むことを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記触媒が４，４’−ジ（５−ノニル）−２，２’−ビピリジル（ｄＮｂｐｙ）であることを特徴とする、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
請求項１のパート（ｉ）に記載された複数の異なるモノマーの使用を含むことを特徴とする、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
請求項１のパート（ｉ）に記載されたモノマーと、１つ又は複数の異なるオレフィン性不飽和モノマーとのブロックコポリマーを生成する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記１つ又は複数の異なるオレフィン性不飽和モノマーの付加の前に、前記請求項１のパート（ｉ）に記載されたモノマーを含む前記櫛形ポリマーが、前記開始剤（ｉｉ）及び前記触媒（ｉｉｉ）で重合されることを特徴とする、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
請求項１のパート（ｉ）に記載されたモノマーの重合の前に、前記１つ又は複数の異なるオレフィン性不飽和モノマーが前記開始剤（ｉｉ）及び前記触媒（ｉｉｉ）で重合されることを特徴とする、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記１つ又は複数の異なるオレフィン性不飽和モノマーが、メチルメタクリレート、ブチルメタクリレート、アクリレート、メタクリレート及びスチレンから選択されることを特徴とする、請求項２５〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記反応体が疎水性又は親水性溶媒中で反応されることを特徴とする、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記溶媒が水、プロピオニトリル、ヘキサン、ヘプタン、ジメトキシエタン、ジエトキシエタン、テトラヒドロフラン、エチルアセテート、ジエチルエーテル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、アニソール、アセトニトリル、ジフェニルエーテル、メチルイソブチレート、ブタン−２−オン、トルエン及びキシレンから選択されることを特徴とする、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記重合反応が−２０℃〜２００℃で行なわれることを特徴とする、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記触媒が担持触媒であることを特徴とする、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
付加的重合を受け得る少なくとも１つの蛍光標識モノマーと共重合又はブロック重合する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記蛍光標識がクマリンであることを特徴とする、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
ポリマーに結合したとき、タンパク質又はポリペプチドと結合し得る部分を含む、リビングラジカル重合反応に用いられ得る開始剤化合物。
【請求項３６】
Ａ−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ、Ａ−Ｓ−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−Ｒ、Ｒ−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−Ａ、Ｒ−Ｓ−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−Ａ（ここで、ＲはＣ１〜Ｃ２０の置換又は非置換の、直鎖、分枝鎖、環状、複素環式又は芳香族のアルキルである）；
Ａ−Ｂ−Ｘ；
【化６】
2007516302.tif 000036
から選択される式を有し、リビングラジカル重合反応に用いるための開始剤。
【請求項３７】
前記Ａがスクシンイミジルスクシネート、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、スクシンイ
ミジルプロピオネート、スクシンイミジルブタノエート、プロピオンアルデヒド、アセトアルデヒド、トレシレート（tresylate）、ベンゾトリアゾールカルボネート、マレイミド、トリアジン、ビニルスルホン、ピリジルスルフィド、ヨードアセトアミド及びスクシンイミジルカルボネートから選択されることを特徴とする、請求項３５又は３６に記載の開始剤。
【請求項３８】
リンカーが、存在する場合、Ｃ１〜Ｃ２０の置換又は非置換の、直鎖、分枝鎖、環状、複素環式又は芳香族のアルキル基；−（ＣＨ２Ｚ）ａＣＨ２−、−ＣＨ２ＺＣＨ２−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｚ）ｎ−Ｒ、−（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）Ｚ）ｎ−Ｒ、−（ＣＨ２）ｂ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｃ−、−（ＣＨ２）ａ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｙ−、−Ｎ（Ｒ）２−；−Ｓ−；−Ｎ−Ｒ；又は−Ｏ−Ｒ（ここで、Ｒ＝Ｃ１〜Ｃ２０の置換又は非置換の、直鎖、分枝鎖、環状、複素環式又は芳香族のアルキル、ＺはＯ又はＳであり、ｎ、ａ、ｂ及びｃは独立して選択可能な１〜１０の整数である）から選択されることを特徴とする、請求項３５〜３７のいずれか一項に記載の開始剤。
【請求項３９】
タンパク質又はポリペプチドと反応し得る前記部分が次式を有することを特徴とする、請求項３５〜３８のいずれか一項に記載の開始剤。
【化７】
2007516302.tif 000037
【請求項４０】
前記開始剤が、次式を有することを特徴とする、請求項３４〜３９のいずれか一項に記載の開始剤。
【化８】
2007516302.tif 000038
【請求項４１】
前記開始剤が、次式を有することを特徴とする、請求項３４〜４０のいずれか一項に記載の開始剤。
【化９】
2007516302.tif 000039
【請求項４２】
請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法により得られる、タンパク質又はポリペプチドと結合し得る櫛形ポリマー。
【請求項４３】
一般式：
Ａ−（Ｄ）ｄ−（Ｅ）ｅ−（Ｆ）ｆ
（式中、Ａは、存在しても存在しなくてもよく、タンパク質又はポリペプチドと結合し得る部分であり；
Ｄは、存在する場合、Ｅに記載されない１つ又は複数のオレフィン性不飽和モノマーの付加的重合により得られ；
Ｅは、線状、分枝状又は星形の置換又は非置換であり、且つオレフィン性不飽和部分を有する複数のモノマーの付加的重合により得られ；
Ｆは、存在する場合、Ｅに記載されない１つ又は複数のオレフィン性不飽和モノマーの付加的重合により得られ；
ｄ及びｆは０〜５００の整数であり；
ｅは０〜１，０００の整数）
を有する櫛形ポリマーであって、Ａが存在する場合、Ｄ、Ｅ及びＦのうちの少なくとも１つが存在することを特徴とする、櫛形ポリマー。
【請求項４４】
前記Ｅがポリ（アルキレン）グリコール又はポリテトラヒドロフランであることを特徴とする、請求項４３に記載の櫛形ポリマー。
【請求項４５】
２，０００〜８０，０００の平均分子量を有することを特徴とする、請求項４２又は４３に記載の櫛形ポリマー。
【請求項４６】
蛍光標識されることを特徴とする、請求項４２〜４５のいずれか一項に記載の櫛形ポリマー。
【請求項４７】
クマリンで蛍光標識されることを特徴とする、請求項４６に記載の櫛形ポリマー。
【請求項４８】
ポリマーを化合物に結合させる方法であって、請求項４２〜４７のいずれか一項に記載の櫛形ポリマーを前記化合物と反応させることを包含する方法。
【請求項４９】
前記櫛形ポリマーに共有結合されたタンパク質、ポリペプチド、チオール、アミン及び／又はベンジルアミン含有化合物を生成するために、請求項４２〜４７のいずれか一項に記載の櫛形ポリマーとタンパク質、ポリペプチド、チオール、炭水化物、ジアミン及び／又はベンジルアミン含有化合物とを反応させて得られる化合物。
【請求項５０】
タンパク質又はポリペプチド、チオール及び／又はベンジルアミン含有化合物であることを特徴とする、請求項４８又は４９に記載の化合物。
【請求項５１】
生物学的に活性であることを特徴とする請求項４８〜５０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５２】
薬剤であることを特徴とする請求項５１に記載の化合物。
【請求項５３】
薬学的に許容可能な担体と組合せた請求項４９〜５２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５４】
癌化学療法薬、抗生物質、抗真菌剤及び／又は免疫抑制剤であることを特徴とする、請求項４９〜５３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５５】
化学療法剤、抗生物質、抗真菌剤及び／又は免疫抑制剤として使用するための、請求項５４に記載の化合物。
【請求項５６】
化学療法剤、抗生物質、抗真菌剤及び／又は免疫抑制剤としての、請求項５４に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルコキシポリエーテル、例えばポリ（エチレングリコール）のようなポリアルキレングリコール、又はポリテトラヒドロフラン（ＰＴＨＦ）を含むモノマーからの櫛形ポリマーの製造方法に関する。このような方法は、櫛形ポリマーに結合された場合、タンパク質又はポリマーと結合し得る部分を含む開始剤化合物の使用を包含し得る。開始剤化合物及び得られた櫛形ポリマー並びにそれらの使用も、本発明の範囲内である。
【背景技術】
【０００２】
略号ＰＥＧにより既知であるポリ（エチレングリコール）のようなポリマーを用いたタンパク質の修飾は、当該技術分野でよく知られている。ＰＥＧ誘導体は、例えばShearwater Corporation, Huntsville, AL., USA及びEnzon, Inc., Bridgewater, NJ., USAにより製造されている。ＰＥＧの使用は、これらの会社のカタログ、そして実際に、2002 Enzon, Inc. Annual Reportで検討されている。
【０００３】
ＰＥＧ化として既知である、タンパク質又はポリペプチドへのＰＥＧの結合は、多数の利点を有することが判明している。第一に、これは、ＰＥＧが結合される分子の抗原性及び免疫原性を低減させる。ＰＥＧは、ポリマーの見かけサイズが糸球体濾過限界を超すまで増大する結果として、腎クリアランスを回避し、及び／又は細胞クリアランスメカニズムを回避することにより、ｉｎ  ｖｉｖｏでの循環半減期の顕著な改善も生じさせる。ＰＥＧは、それが結合されるタンパク質及びポリペプチドの溶解度を顕著に改善することができ、例えばＰＥＧは、水から多数の有機溶媒、例えばトルエン、塩化メチレン、エタノール及びアセトンにわたる多数の異なる溶媒中で可溶性であることが判明している。この一用途は、例えば相分配標的分子又は細胞にＰＥＧ修飾抗体を使用することである。ＰＥＧ化は、複合タンパク質のタンパク質分解耐性を増強し、且つ皮下注射部位での損失を低減することにより生物学的利用能を改善することも見出されている。ＰＥＧ化は、それが結合されるタンパク質又はポリペプチドの毒性を低減すること、分子の熱的及び機械的安定性を改善すること、且つ改善処方物をいくつかの除放投与方法に用いられる物質にすることも観察されている。これらの利点は、例えばChapman A.P. (Advanced Drug Delivery
Reviews, Vol. 54 (2002), pages 531-545)による論文で検討されている。ポリペプチド及びタンパク質ＰＥＧ化の化学は、Roberts, M.J., et al. (Advanced Drug Delivery Reviews, Vol. 54 (2002), pages 459-476)による論文及びKinstler, O., et al. (Advanced Drug Delivery Reviews, Vol. 54 (2002), pages 477-485)による論文でもさらに検討されている。
【０００４】
多数のＰＥＧ化薬剤が市販されており、例えばＰＥＧ−ＩＮＴＲＯＮ（商標）は、Schering-Plough 及びEnzon, Inc.により製造されたα−インターフェロン製品であり、これはＣ型肝炎及び癌を治療するのに用いられる。Ｐｒｏｔｈｅｃａｎ（商標）は、いくつかの癌に対して有効であるトポイソメラーゼＩ阻害剤であるカンプトテシンのＰＥＧ増強バージョンである。非ＰＥＧ化化合物と比較して、例えば腫瘍中での良好な摂取及び副作用低減を示す、ＰＥＧ化タキソール及びいくつかの酵素ベースの製品も製造されている。Roberts（上記）による再検討で考察されているように、ＰＥＧのようなポリマーは、リシン、システイン、ヒスチジン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、トレオニン、チロシン、Ｎ末端アミノ基及びＣ末端カルボン酸基などのタンパク質又はポリペプチド分子上の多数の反応性アミノ酸を介して結合され得る。糖タンパク質の場合、近接ヒドロキシル基は過ヨウ素酸塩で酸化されて、２つの反応性ホルミル部分を生成し得る。ＰＥＧのような化合物に広範囲の官能基を結合させて、リシンアミン基及びＮ末端アミ
ン基に結合される。これらの例としては、スクシンイミジルスクシネート、ヒドロキシスクシンアミド及びヒドロキシスクシンアミドエステル、例えばプロピオンアルデヒド及びアセトアルデヒドのようなアルデヒド誘導体、スクシンイミジルのプロピオネート及びスクシンイミジルのブタノエート誘導体、ベンゾトリアゾールカルボネート、ｐ−ニトロフェニルカルボネート、トリクロロフェニルカルボネート及びカルボニルイミダゾールが挙げられる。トレシレート（tresylate）のような化合物は、求核攻撃によりタンパク質と結合することが既知である。タンパク質又はポリペプチド上のシステイン残基と反応し得る多数の化合物も存在する。これらの例としては、マレイミド、ビニルスルホン、ピリジルスルフィド及びヨードアセトアミドが挙げられる。さらにスクシンイミジルカルボネートも、ＰＥＧ又はその他のポリマーを、タンパク質又はポリペプチド内のアラニン又はヒスチジンアミノ酸に結合するための官能基として用いられ得る。すでに示されたように、このような官能化された基の反応は、Roberts、Kinsler及びChapmanによる論文中に示されたように、そして実際に、例えばShearwaterカタログ（２００１）に示されているように、すでに十分に特徴付けられている。
【０００５】
一般に市販されているＰＥＧは、通常は長いポリ（エチレングリコール）ポリマー、又は分枝状若しくは星形ポリ（エチレングリコール）の形態である。
【０００６】
生物学的物質、例えばタンパク質及びポリペプチド、核酸（ＤＮＡ及びＲＮＡ）、炭水化物及び脂肪に結合されたポリマーのサイズを変更させ、且つ制御させる櫛形ポリマーを生成し得る、ということを本出願人等はここに確認した。タンパク質及びポリペプチドと結合する、様々なサイズ及び流体力学的容積である広範な種々の異なるポリマーを生成する可能性は、ポリマーが結合される化合物の特性を変化させる。例えばこれは、このようなコポリマーと共有結合された薬剤の安定性、溶解性、毒性及び／又は薬剤保持時間を変更するために用いられ得る。このようなコポリマーは、いわゆるリビングラジカル重合により制御された方法で製造され得る。
【０００７】
リビングラジカル重合は、国際特許出願ＷＯ  ９７／４７６６１の対象である。担持重合触媒及び特定重合開始剤も、ＷＯ  ９９／２８３５２及びＷＯ  ０１／９４４２４に示されている。基本的に、当該系は、遷移金属と錯体形成された化合物を用いる。この化合物は好ましくは、オルガノジイミンであるが、ジイミンの窒素の一つが好ましくは芳香族環の一部にない（例えば１，４−ジアザ−１，３−ブタジエン、２−ピリジンカルバルデヒドイミン、オキサゾリドン又はキノリンカルバルデヒド）。
【０００８】
フリーラジカル開始剤の使用を包含するリビングフリーラジカル系も既知である（例えばＷＯ  ９６／３０４２１及びＷＯ  ９７／１８２４７参照）。これは、Kamigaito, et al., Chem. Rev. (2001), Vol. 12, pages 3689-3745で再検討されている。
【発明の開示】
【０００９】
触媒及び開始剤の組合せは、オレフィン性不飽和モノマー、例えばビニルモノマーを重合するために、従来用いられている。発明者等は、これらの系を用いて制御的に櫛形ポリマーを生成させた。これらの櫛形ポリマーは、慣用的化学作用によりそれらに結合された官能基を有し得る。しかしながら、発明者等は、リビングラジカル重合に用いられる開始剤を、開始剤とモノマーとの反応の結果として、櫛形ポリマーに結合させることを達成した。これは、官能基を有する開始剤を用いることにより、コポリマーを生成すると同時に櫛形ポリマーを官能化し得る、ということを意味する。
【００１０】
したがって、本発明の第一の態様は、櫛形ポリマーの製造方法であって
（ａ）
（ｉ）線状、分枝状又は星形の、置換又は非置換の、好ましくは２、特に３〜１０
の炭素原子を含み、且つ付加重合を受け得るオレフィン性不飽和部分を有する複数のモノマーであって、
（ｉｉ）均等開裂可能な結合を含む開始剤化合物、
（ｉｉｉ）上記モノマーの重合を触媒し得る触媒、
を準備する工程と、
（ｂ）上記櫛形ポリマーを生成するために、上記開始剤と組合せて、上記触媒に上記複数のモノマーの重合を触媒させる工程と、
を含み、上記開始剤化合物（ｉｉ）が、上記櫛形ポリマーに結合したときに、生物学的物質と結合し得る部分を含むことを特徴とする櫛形ポリマーの製造方法を提供する。
【００１１】
（ｉ）におけるモノマーが、ポリ（アルキレングリコール）又はポリテトラヒドロフランのようなアルコキシポリエーテルであることが好ましい。
【００１２】
櫛形ポリマーは、櫛形ポリマーに結合された場合、慣用的化学作用を用いてそれに結合される、例えばタンパク質又はポリペプチドを結合し得る部分を有し得る。しかしながら、すでに示したように、それらに結合される部分を有する開始剤化合物を生成することができる。したがって、好ましい開始剤化合物は、櫛形ポリマーに結合された場合、例えばタンパク質又はポリペプチド、核酸（ＤＮＡ又はＲＮＡ）、炭水化物又は脂肪などの生物学的物質と結合し得る部分を有する。
【００１３】
好ましくは、ポリ（アルキレングリコール）は、２〜１０、好ましくは少なくとも３個の炭素原子を含有するアルキレングリコールのポリマー、最も好ましくはポリ（エチレングリコール）、ポリ（プロピレングリコール）又はポリ（ブチレングリコール）である。例えばポリ（エチレングリコール）が用いられ得る。
【００１４】
その最も一般的形態では、これは、ヒドロキシル基末端の線状又は分枝状ポリエーテルである。これは、エポキシド環の水酸化物イオンの求核攻撃により開始される酸化エチレンの陰イオン性開環重合によって合成される。例えば、モノメトキシＰＥＧ（ｍＰＥＧ）を生成するために、一端にモノメトキシ基を配置するなど、ポリエチレングリコールを修飾することも可能である。これは、メトキシドイオンで開始されるイオン性開環重合により合成され、市販されている。しかしながら、反応混合物中に存在する微量の水は、ヒドロキシ基により両端が終結されているかなりの量のＰＥＧを生成させる。タンパク質又はペプチドと結合し得る部分がポリマー鎖の両端に結合し、このことが望ましくない身体中のタンパク質の架橋を生じるので、これは望ましくない。
【００１５】
この不純物の生成を最小限にする方法は、エポキシド環上のベンゾイルオキシイオンの求核攻撃により酸化エチレンの開環を開始することである。上記の方法と似た方法で、ヒドロキシにより両端が終結されているＰＥＧ鎖と同様に、モノベンゾイルオキシＰＥＧが生成される。この混合物はメチル化されて、ＢｚＯ及びＯＭｅで終結される一鎖、並びにジメトキシＰＥＧを生成する。この混合物の水素化は、ベンゾイルオキシ基を排除して、ｍＰＥＧ及びジメトキシＰＥＧを産生する。ジメトキシＰＥＧは、不活性不純物として依然として存在する。しかしながらこの方法を用いる場合でも、得られた生成物は、その分析証明書によれば、５〜１０％の望ましくないジヒドロキシＰＥＧを依然として含有する。
【００１６】
本発明の方法は、実質的に１００％純粋である生成物を産生し、実質的に全てのジヒドロキシＰＥＧ不純物を排除し、したがって既知の方法の欠点を回避して、タンパク質の架橋の可能性を除去する。
【００１７】
ＰＥＧのような分枝状及び星形ポリマーは、多数の商業的供給元、例えばEnzon及びShe
arwaterから入手可能である。ポリテトラヒドロフランも、商業的供給元、例えばAldrich（Gillingham, Dorset, UK）から入手され得る。
【００１８】
好ましくはＰＥＧメタクリレートの分子量は、４７５、１，１００、２，０８０、５，０００又は２０，０００である。
【００１９】
ポリアルキレングリコール及びポリテトラヒドロフランは、例えばポリマー鎖の末端に、オレフィン性不飽和部分を含む。このオレフィン性不飽和部分は、付加的重合を受け得る。
【００２０】
オレフィン性不飽和モノマーは、メタクリレート、アクリレート、スチレン、メタクリロニトリル又はブタジエンのようなジエンであり得る。
【００２１】
用いられ得るオレフィン性不飽和部分の例としては、メチルメタクリレート、エチルメタクリレート、プロピルメタクリレート（全て異性体）、ブチルメタクリレート（全て異性体）、及びその他のアルキルメタクリレート；アクリレート類似物；さらにまた官能化メタクリレート及びアクリレート、例えばグリシジルメタクリレート、トリメトキシシリルプロピルメタクリレート、アリルメタクリレート、ヒドロキシエチルメタクリレート、ヒドロキシプロピルメタクリレート、ジアルキルアミノアルキルメタクリレート、例えばジメチルエチルアミノメタクリレート；フルオロアルキル（メタ）アクリレート；メタクリル酸、アクリル酸；フマル酸（及びエステル）、イタコン酸（及びエステル）、無水マレイン酸；スチレン、α−メチルスチレン；ビニルハロゲン化物、例えば塩化ビニル及びフッ化ビニル；アクリロニトリル、メタクリロニトリル；グリセロール；式ＣＨ２＝Ｃ（Ｈａｌ）２（ここで、各ハロゲンは独立してＣｌ又はＦである）のビニリデンハロゲン化物；式ＣＨ２＝Ｃ（Ｒ１５）Ｃ（Ｒ１５）＝ＣＨ２（ここで、Ｒ１５は、独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃｌ又はＦである）の任意に置換されたブタジエン；式ＣＨ２＝ＣＨＳＯ２ＯＭ（ここで、ＭはＮａ、Ｋ、Ｌｉ、Ｎ（Ｒ１６）４（ここで、Ｒ１６は、各々独立して、Ｈ又はＣ１〜Ｃ１０アルキル、ＣＯＺ、ＯＮ、Ｎ（Ｒ１６）２又はＳＯ２ＯＺであり、ＺはＨ、Ｌｉ、Ｎａ、Ｋ又はＮ（Ｒ１６）４である）である）のスルホン酸又はその誘導体；式ＣＨ２＝ＣＨＣＯＮ（Ｒ１６）２のアクリルアミド又はその誘導体、及び式ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＮ（Ｒ１６）２のメタクリルアミド又はその誘導体が挙げられる。
【００２２】
このようなモノマーの混合物を用いてもよい。
【００２３】
このような不飽和部分は、慣用的化学作用により、例えばポリマーの一端に結合され得る。あるいはこのようなモノマーは、商業的に入手され得る。例えばＰＥＧアクリレート、ジアクリレート、メタクリレート及びジメタクリレートは、Aldrich（Gillingham, Dorset, UK）から市販されている。
【００２４】
不飽和部分は、任意の適切な結合基により、例えばメチルエーテル結合を介して、ポリアルキレングリコール又はポリテトラヒドロフランに結合され得る。それゆえ、ポリ（エチレングリコール）メチルエーテルメタクリレート（Aldrich Chemicalsから入手可能）を用いることができる。リビングラジカル重合技術の一利点は、フリーラジカル阻害剤、例えばヒドロキノンを有するこのような市販化合物を、さらに精製することなく用いられ得ることである。従来のフリーラジカルベースの系を用いた場合、フリーラジカル阻害剤の存在は、付加的重合反応を防止する。これは、リビングラジカル重合ではこのような事はない。
【００２５】
開始剤化合物は、ハロゲン原子による均等開裂可能な結合を含み得る。これは、均等開
裂においてどちらの原子上でも積分電荷生成を伴わずに切れる結合を含有し得る。ＷＯ  ９７／０１５８９、ＷＯ  ９９／２８３５２及びＷＯ  ０１／９４４２４に記載されているように、実際のフリーラジカルは、いくつかの触媒を用いて生成されるようには見えないと考えられる。これは、系において別個のフリーラジカル種の生成を伴わずに、モノマーが結合中に挿入される協奏的方法で起こる、と考えられる。即ち、成長中、これは、フリーラジカル生成を伴わずに新規の炭素−炭素結合及び新規の炭素−ハロゲン結合の形成を生じる。不対電子を有する原子又は原子の基であり、相互作用を伴わない別個の存在物であるフリーラジカルは、開始剤化合物とそれが相互作用するモノマーとの相互作用により生成されない。
【００２６】
適切な開始剤化合物は、例えばＷＯ  ９７／４７６６１に記載されている。しかしながら、開始剤化合物は、櫛形ポリマーに結合された場合、タンパク質又はポリペプチドと結合し得る部分も含むことが好ましい。これらの部分は、Roberts他（上記）、Chapman（上記）に、そして例えばEnzon及びShearwaterのカタログに、実際に記載されているように、当該技術分野で既知である。
【００２７】
開始剤は、チオエステル又はキサンテートであり得る。これらは、いわゆるＲＡＦＴ（付加−開裂移動反応及び酸化窒素媒介性重合）及びＭＡＤＩＸ触媒化に用いられる。開始剤及びそれらの反応は、ＷＯ  ９９／３１１４４、ＷＯ  ９８／０１４７８及び米国特許第６，１５３，７０５号に記載されている。
【００２８】
好ましい上記開始剤化合物（ｉｉ）は、以下の中から選ばれる。
Ａ−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ、Ａ−Ｓ−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−Ｒ、Ｒ−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−Ａ、Ｒ−Ｓ−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−Ａ（ここで、ＲはＣ１〜Ｃ２０の置換又は非置換の、直鎖、分枝鎖、環状、複素環式又は芳香族のアルキルである）；
Ａ−Ｂ−Ｘ；
【００２９】
【化１】
2007516302.tif 000002
【００３０】
上記Ａは、スクシンイミジルスクシネート、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、スクシンイミジルプロピオネート、スクシンイミジルブタノエート、プロピオンアルデヒド、アセトアルデヒド、トレシレート（tresylate）、トリアジン、ビニルスルホン、ベンゾトリアゾールカルボネート、マレイミド、ピリジルスルフィド、ヨードアセトアミド及びスクシンイミジルカルボネートから選択されることが好ましい。
【００３１】
上記リンカーは、Ｃ１〜Ｃ２０の置換又は非置換の、直鎖、分枝鎖、環状、複素環式又は芳香族のアルキル基；−（ＣＨ２Ｚ）ａＣＨ２−、−ＣＨ２ＺＣＨ２−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｚ）ｎＲ、−（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）Ｚ）ｎＲ、−（ＣＨ２）ｂ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｃ−、−（ＣＨ２）ａ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｙ−、−Ｎ（Ｒ）２−；−Ｓ−；−Ｎ−Ｒ；又は−Ｏ−Ｒ（ここで、Ｒ＝Ｃ１〜Ｃ２０の置換又は非置換の、直鎖
、分枝鎖、環状、複素環式又は芳香族のアルキル、ＺはＯ又はＳであり、ｎ、ａ、ｂ及びｃは独立して１〜１０の選択可能な整数である）から選択されることが好ましい。好ましくは、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個の炭素原子を含有する。最も好ましくは、リンカーは、メチル、エチル、プロピル、ブチル又はペンチルである。
【００３２】
好ましくは、タンパク質又はポリペプチドと反応し得る部分が次式を有する。
【００３３】
【化２】
2007516302.tif 000003
【００３４】
最も好ましい開始剤（ｉｉ）は、次式を有する。
【００３５】
【化３】
2007516302.tif 000004
【００３６】
開始剤は、次式から選ばれる化合物を有する。
【００３７】
【化４】
2007516302.tif 000005
【００３８】
触媒は、リビングラジカル重合（例えばＷＯ  ９７／４７６６１参照）又はリビングフリーラジカル重合（例えばＷＯ  ９６／３０４２１、ＷＯ  ９７／１８２４７及びKamagaito, M., et al., Chem. Rev. (2001), Vol. 101 (12), pages 3689-3745）により重合反応に触媒作用を及ぼす。
【００３９】
好ましい触媒は、遷移金属と成長中のポリマーラジカルとの間の直接結合が形成されないよう、δ−結合で遷移金属と配位結合し得る任意のＮ−、Ｏ−、Ｐ−又はＳ−含有化合物、又はπ−結合で遷移金属と配位結合し得る任意の炭素含有化合物であるリガンドを含む。
【００４０】
触媒は、第一化合物：
ＭＹ
（式中、Ｍは、一形式酸化状態により酸化され得る酸化状態を有する遷移金属であり、
Ｙは、一価、二価又は多価の対イオンである）
を含み得る。
【００４１】
触媒は次式によっても定義され得る。
［ＭＬｍ］ｎ＋Ａｎ−
（式中、Ｍは一形式酸化状態により酸化され得る酸化状態を有する遷移金属、
Ｌはジイミンの窒素のうちの少なくとも１つが芳香族環の一部にないオルガノジイミン、
Ａは陰イオン、
ｎは１〜３の整数、
ｍは１〜２の整数）
【００４２】
金属イオンは、配位結合リガンド、例えば（ＣＨ３ＣＮ）４に結合され得る。Ｙは、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、ＮＯ３、ＰＦ６、ＢＦ４、ＳＯ４、ＣＮ、ＳＰｈ、ＳＣＮ、ＳｅＰｈ又はトリフレート（ＣＦ３ＳＯ３）から選択され得る。銅（Ｉ）トリフレートを用いてもよい。これは、市販ベンゼン複合体（ＣＦ３ＳＯ３Ｃｕ）２Ｃ６Ｈ６の形態で利用可能である。
【００４３】
用いられるのに特に好ましい化合物は、ＣｕＢｒである。
【００４４】
Ａは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｎ、Ｏ３、ＳＯ４又はＣｕＸ２（ここで、Ｘはハロゲンである）であり得る。
【００４５】
遷移金属は、Ｃｕ＋、Ｃｕ２＋、Ｆｅ２＋、Ｆｅ３＋、Ｒｕ２＋、Ｒｕ３＋、Ｃｒ２＋、Ｃｒ３＋、Ｍｏ２＋、Ｍｏ３＋、Ｗ２＋、Ｗ３＋、Ｍｎ３＋、Ｍｎ４＋、Ｒｈ３＋、Ｒｈ４＋、Ｒｅ２＋、Ｒｅ３＋、Ｃｏ＋、Ｃｏ２＋、Ｖ２＋、Ｖ３＋、Ｚｎ＋、Ｚｎ２＋、Ａｕ＋、Ａｕ２＋、Ａｇ＋及びＡｇ２＋から選択され得る。
【００４６】
好ましいオルガノジイミンは、以下から選択される式を有する。
【００４７】
【化５】
2007516302.tif 000006
【００４８】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及びＲ１３は独立して変更されることがあり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及びＲ１３はＨ、直鎖、分枝鎖又は環状の飽和アルキル、ヒドロキシアルキル、カルボキシアルキル、アリール（例えばフェニル又は置換されたフェニル（ここで、置換はＲ４〜Ｒ９に関して記載されたのと同様である））、ＣＨ２Ａｒ（ここで、Ａｒ＝アリール又は置換アリール）又はハロゲンである。好ましくはＲ１、Ｒ２、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及びＲ１３は、Ｃ１〜Ｃ２０のアルキル、ヒドロキシアルキル又はカルボキシアルキル、特にＣ１〜Ｃ４アルキル、特にメチル又はエチル
、ｎ−プロピルイソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロヘキシル、２−エチルヘキシル、オクチルデシル又はラウリルである。
【００４９】
好ましいリガンドとしては、以下のものが挙げられる：
【００５０】
【化６−１】
2007516302.tif 000007
【化６−２】
2007516302.tif 000008
【００５１】
好ましい触媒は以下のものである。
【００５２】
【化７】
2007516302.tif 000009
【００５３】
好ましいオルガノジイミンは、Ｎ−（ｎ−プロピル）−２−ピリジルメタンイミン（ＮＭＰＩ）、Ｎ−エチル−２−ピリジルメタンイミン又はＮ−（ｎ−エチル）−２−ピリジルメタンイミンである。
【００５４】
その他の触媒は、ＷＯ  ９６／３０４２１及びＷＯ  ９７／１８２４７に記載されている。
【００５５】
好ましい触媒は、例えば４，４’−ジ（５−ノニル）−２，２’−ビピリジル（ｄＮｂｐｙ）のようにビピリジン基を含む。
【００５６】
本発明のパート（ｉ）に明示されたような複数の異なるモノマーが用いられ得る。これは、統計コポリマーの製造を可能にする。
【００５７】
代替的に又は付加的に、１つ又は複数の異なるオレフィン性不飽和モノマーをさらに重合することにより、ブロックコポリマーが生成され得る。例えばオレフィン性不飽和モノマーは、メチルメタクリレート、エチルメタクリレート、プロピルメタクリレート（全て異性体）、ブチルメタクリレート（全て異性体）、及びその他のアルキルメタクリレート；アクリレート類似物；さらにまた官能化メタクリレート及びアクリレート、例えばグリシジルメタクリレート、トリメトキシシリルプロピルメタクリレート、アリルメタクリレート、ヒドロキシエチルメタクリレート、ヒドロキシプロピルメタクリレート、ジアルキルアミノアルキルメタクリレート；フルオロアルキル（メタ）アクリレート；メタクリル酸、アクリル酸；フマル酸（及びエステル）、イタコン酸（及びエステル）、無水マレイン酸；スチレン、α−メチルスチレン；ビニルハロゲン化物、例えば塩化ビニル及びフッ化ビニル；アクリロニトリル、メタクリロニトリル；式ＣＨ２＝Ｃ（Ｈａｌ）２（ここで、各ハロゲンは独立してＣｌ又はＦである）のビニリデンハロゲン化物；式ＣＨ２＝Ｃ（Ｒ１５）Ｃ（Ｒ１５）＝ＣＨ２（式中、Ｒ１５は独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃｌ又はＦである）の任意に置換されたブタジエン；式ＣＨ２＝ＣＨＳＯ２ＯＭ（ここで、ＭはＮａ、Ｋ、Ｌｉ、Ｎ（Ｒ１６）４（ここで、Ｒ１６は、各々独立して、Ｈ又はＣ１〜Ｃ１０アルキル、ＣＯＺ、ＯＮ、Ｎ（Ｒ１６）２又はＳＯ２ＯＺであり、ＺはＨ、Ｌｉ、Ｎａ、Ｋ又はＮ（Ｒ１６）４である）である）のスルホン酸又はその誘導体；式ＣＨ２＝ＣＨＣＯＮ（Ｒ１６）２のアクリルアミド又はその誘導体、及び式ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＮ（Ｒ１６）２のメタクリルアミド又はその誘導体から選択され得る。
【００５８】
モノマーは、本発明のパート（Ｉ）に記載されているようなモノマーの重合の前又は後に重合され得る。
【００５９】
重合反応は、多数の異なる溶媒中で、例えば疎水性又は親水性溶媒中で反応する。これらの例としては、水、プロピオニトリル、ヘキサン、ヘプタン、ジメトキシエタン、ジエトキシエタン、テトラヒドロフラン、エチルアセテート、ジエチルエーテル、Ｎ，Ｎ−ジ
メチルホルムアミド、アニソール、アセトニトリル、ジフェニルエーテル、メチルイソブチレート、ブタン−２−オン、トルエン及びキシレンが挙げられる。
【００６０】
反応温度は、−２０℃から２００℃より高い温度で、特に＋５〜１３０℃で実行され得る。例えばＷＯ  ９７／４７６６１は、リビングラジカル重合の例及び用いられ得る典型的条件を示す。
【００６１】
好ましいオルガノジイミン：遷移金属の比は、０．０１：１，０００、好ましくは０．１：１０であり、遷移金属イオン（ＭＹの場合）：開始剤は、０．０００１：１，０００、好ましくは０．１：１０であり、この場合、重合度は、モノマー対開始剤の比により制御される。比率は全て、重量：重量として示される。好ましい構成成分は、触媒：開始剤の比が３：１〜１：１００である式：［ＭＬｍ］ｎ＋Ａｎ−（上記）の触媒である。
【００６２】
系に用いられるジイミン：金属の好ましい量は、（重量で）１００：１〜１：１、好ましくは５：１〜１：１、さらに好ましくは３：１〜１：１である。
【００６３】
用いられる溶媒中のモノマーの好ましい濃度は、１００％〜１％、好ましくは１００％〜５％（容量：容量）である。
【００６４】
開始剤対触媒の好ましい比は、１：１００〜１００：１、典型的には１：１である。
【００６５】
モノマー：開始剤の好ましい比は、１：１〜１０，０００：１、特に５：１〜１００：１である。
【００６６】
反応は、不活性雰囲気下で、例えば窒素又はアルゴン下で着手され、懸濁液、乳濁液、ミニエマルジョン中で、又は分散液中で実行され得る。
【００６７】
好ましい触媒は担持触媒であり、即ち、触媒の少なくとも一部が担体に結合される。このような担持触媒は、例えばＷＯ  ９９／２８３５２に示されている。
【００６８】
担体は、無機物質、例えばシリカ、特にシリカゲルであり得る。あるいは担持体は、有機物質、特に有機ポリマー、例えば架橋有機ポリマー、例えばポリ（スチレン−ｗ−ジビニルベンゾン）であり得る。担持体は、ビーズの形態であり得る。担持触媒を使用する利点は、それが系から触媒を除去させ、且つリサイクル／再使用させる点である。
【００６９】
櫛形ポリマーは、蛍光標識モノマーを組み入れ得る。例えば本方法は、付加重合を受け得る少なくとも１つの蛍光標識モノマーと共重合するか又はブロック重合する工程をさらに包含し得る。これは、オレフィン性不飽和部分に結合された蛍光部分、例えばフルオレセイン又はクマリンを有するモノマーを用いることにより簡単に実行され得る。オレフィン性不飽和部分は、上記の不飽和部分から選択され得る。
【００７０】
好ましい蛍光標識は、クマリン、特にクマリン３４３である。クマリンは、タンパク質に結合するのに用いられる櫛形ポリマーやタンパク質の結合を、共焦点顕微鏡を用いて可視化させるため、特に有益である。これは、例えば個々のタンパク質の検出を、又は実際に細菌若しくはその他の細胞全体の可視化を可能にする。実際、細菌細胞は、大腸菌及びストレプトミセス細胞に結合する本発明の櫛形ポリマーを用いて容易に可視化することができる、ということを初期成果は示している。
【００７１】
本発明のさらなる態様は、ポリマーに結合したときに、タンパク質又はポリペプチドと結合し得る部分を含む、リビングラジカル重合反応に用いられ得る開始剤化合物を提供す
る。また、以下の式を有するリビングラジカル重合反応に用いる開始剤も提供する。
【００７２】
Ａ−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ、Ａ−Ｓ−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−Ｒ、Ｒ−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−Ａ、Ｒ−Ｓ−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−Ａ（ここで、ＲはＣ１〜Ｃ２０の置換又は非置換の、直鎖、分枝鎖、環状、複素環式又は芳香族のアルキルである）；
Ａ−Ｂ−Ｘ；
【００７３】
【化８】
2007516302.tif 000010
【００７４】
好ましくいＡは、スクシンイミジルスクシネート、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、スクシンイミジルプロピオネート、スクシンイミジルブタノエート、プロピオンアルデヒド、アセトアルデヒド、トレシレート（tresylate）、トリアジン、ビニルスルホン、ベン
ゾトリアゾールカルボネート、マレイミド、ピリジルスルフィド、ヨードアセトアミド及びスクシンイミジルカルボネートから選択される。
【００７５】
好ましいリンカーは、Ｃ１〜Ｃ２０の置換又は非置換の、直鎖、分枝鎖、環状、複素環式又は芳香族のアルキル基；−（ＣＨ２Ｚ）ａＣＨ２−、−ＣＨ２ＺＣＨ２−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｚ）ｎ−Ｒ、−（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）Ｚ）ｎ−Ｒ、−（ＣＨ２）ｂ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｃ−、−（ＣＨ２）ａ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｙ−、−Ｎ（Ｒ）２−；−Ｓ−；−Ｎ−Ｒ；又は−Ｏ−Ｒ（ここで、Ｒ＝Ｃ１〜Ｃ２０の置換又は非置換の、直鎖、分枝鎖、環状、複素環式又は芳香族のアルキル、ＺはＯ又はＳであり、ｎ、ａ、ｂ及びｃは独立して１〜１０の選択可能な整数である）から選択される。
【００７６】
好ましくは、タンパク質又はポリペプチドと反応し得る部分が次式を有する。
【００７７】
【化９】
2007516302.tif 000011
【００７８】
好ましくは開始剤が、次式を有する。
【００７９】
【化１０】
2007516302.tif 000012
【００８０】
開始剤は特に、次式を有する。
【００８１】
【化１１】
2007516302.tif 000013
【００８２】
標準条件下で、アルデヒドベースの開始剤はタンパク質と非選択的に反応する傾向があり、即ち、反応条件が制御されない場合、それらは末端窒素原子、及び例えばリシンＮＨ２基の両方と実質的に等しく反応する。しかしながら、選択された特定のアルデヒドにとって適切な反応ｐＫａ下では、アルデヒドが末端窒素を特異的に対象とするよう制御される。
【００８３】
本発明のさらなる態様は、本発明の方法により得られる、タンパク質又はポリペプチドと結合し得る櫛形ポリマーを提供する。
【００８４】
さらなる態様は、一般式：
Ａ−（Ｄ）ｄ−（Ｅ）ｅ−（Ｆ）ｆ
（式中、Ａは、存在しても存在しなくてもよく、存在する場合、タンパク質又はポリペプチドと結合し得る部分であり；
Ｄは、存在する場合、Ｅに記載されない１つ又は複数のオレフィン性不飽和モノマーの付加的重合により得られ；
Ｅは、線状、分枝状又は星形の置換又は非置換であり、且つオレフィン性不飽和部分を有する複数のモノマーの付加的重合により得られ；
Ｆは、存在する場合、Ｅに記載されない１つ又は複数のオレフィン性不飽和モノマーの付加的重合により得られ；
ｄ及びｆは０〜５００、特に０〜３００又は０〜１００の整数であり；
ｅは０〜１，０００、特に０〜１０、５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００又は９００の整数であって；
Ａが存在する場合、Ｄ、Ｅ及びＦのうちの少なくとも１つが存在する）
を有する櫛形ポリマーを提供する。
【００８５】
Ｅを得るのに用いられる好ましいモノマーはポリ（アルキレングリコール）又はポリテトラヒドロフランである。
【００８６】
これは、官能化櫛形ポリマー及び非官能化櫛形ポリマーの両方を含み、この場合、タンパク質又はポリペプチドに結合し得る部分は他の化学作用により後に結合され得る。
【００８７】
好ましい櫛形ポリマーは、２，０００〜８０，０００、特に２０，０００〜４０，０００の平均総分子量を有する。
【００８８】
本発明の方法により得られる好ましい櫛形ポリマーの例は、以下のものである。
【００８９】
【化１２−１】
2007516302.tif 000014
【化１２−２】
2007516302.tif 000015
【化１２−３】
2007516302.tif 000016
【００９０】
これらのポリマーは、有用な生体分子と直接反応させるために、又は有用な生体分子と反応する新規の高分子に単に転化するためのどちらかに用いられ得る。
【００９１】
櫛形ポリマーは、特にクマリンで蛍光標識され得る。本発明のさらなる態様は、化合物へのポリマーの結合方法であって、本発明の櫛形ポリマーを上記化合物と反応させることを包含する方法を提供する。化合物はタンパク質又はポリペプチドであってもよく、又は実際、用いられる開始剤に応じて、好適な遊離チオール又は遊離アミン基を有する任意の化合物であってもよい。このような化合物としては、アミン、例えばベンジルアミン及びエチレンジアミン、アミノ酸及び糖のような炭水化物が挙げられる。
【００９２】
好ましいこのような化合物は、生物学的活性化合物、例えば薬剤である。薬学的に許容可能な担体と組合せたこのような化合物の組合せも提供される。化合物は、癌化学療法薬、抗生物質、抗真菌剤及び／又は免疫抑制薬を包含し得る。
【００９３】
例えば図２３及び図２４は、リゾチームと本発明により調製されるポリマーとの反応に関するＨＰＬＣ追跡及びＳＤＳ−ＰＡＧＥを示す。これらの図は、ポリマーが、リゾチームの７つのアミノ基のうちの１つだけと選択的に接合している反応の進行を明白に例示する。
【００９４】
本発明のさらなる態様は、化合物、ウイルス、微生物又は細胞を蛍光標識する方法であって、化合物、ウイルス、微生物又は細胞を本発明の蛍光標識櫛形ポリマーと反応させる工程を包含する方法を提供する。蛍光標識としての櫛形ポリマーの使用もまた提供される。
【００９５】
蛍光標識櫛形ポリマーは抗体を結合するのに用いられ、これは次々に確定前の抗原に選択的に結合するのに用いられ得る。このように化合物の選択的標識が起きる。
【００９６】
このような抗体の産生方法は、当該技術分野で既知であり、実際、モノクローナル抗体は既知のＫｏｈｌｅｒ−Ｍｉｌｓｔｅｉｎ法により産生され得る。
【００９７】
従来、ポリマーがタンパク質と結合するのに用いられた場合、それらは、例えば２０，０００の分子量を有するポリマーは肝臓により身体から排出することができないので、低分子量のものでなければならなった。この問題と対抗し、約５，０００分子量の４つのポリマーが各々タンパク質に結合され、結局、問題なく排出された。本発明の櫛形ポリマーにより提供される利点は、これらが２０，０００の分子量を有し、且つ従来のポリマーを用いた場合に見出される排出の問題を伴わずにタンパク質に依然として結合され得る、ということである。これは、櫛形ポリマーの各「指」に見られるエステル結合のためである。予備的結果は、このエステル結合が酵素により容易に加水分解されて、指を次第に徐々にポリマー主鎖から外させる、ということを示す。これは、肝臓により排出させ得る分子量に達するまで、時間とともに２０，０００分子量ポリマーをより小さくさせる。従来の鎖ポリマーは、この利点を提供できず、排出されずに血流中に残存する。
【００９８】
初期成果は、本発明の櫛形ポリマーがラット血清中で数週間に亘って安定であるが、徐々に上記で詳述したように分解する、ということを示す。
【００９９】
ここで、例としてのみ以下の実施例を参照しながら本発明を説明する。
【０１００】
Ｎ−［２−（２’−ブロモ−２’−メチルプロピオニルオキシ）−エチル］フタルイミド、６の合成
【０１０１】
【化１３】
2007516302.tif 000017
【０１０２】
磁気撹拌機を装備した５００ｍＬ丸底フラスコ中に窒素下でトリエチルアミン（２８．１ｍＬ、０．２ｍｏｌ）を含有する無水ＴＨＦ（２５０ｍＬ）中に、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）フタルイミド（Aldrich、９９％）（１９．１２ｇ、０．１ｍｏｌ）を溶解した。フラスコを氷浴で０℃に冷却した後、臭化２−ブロモイソブチリル（１３．９ｍＬ、０．１１ｍｏｌ）を滴下した。混合物を４５分間撹拌し、室温に達しさせた。その後、反応混合物を余分量の冷水中に注ぎ入れ、ジエチルエーテル（３×５０ｍＬ）で抽出した。有機層をＮａ２ＣＯ３の飽和水溶液（３×５０ｍＬ）、酸性化水（ｐＨ＝４．５、３×５０ｍＬ）、再びＮａ２ＣＯ３の飽和水溶液（３×５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ４上で乾燥し、濾過した。最後に、ロータリーエバポレーターを用いて減圧下で溶媒を除去して、表題化合物を帯黄色個体として単離した（３０．６ｇ、収率９０％）。
【０１０３】
ｍ．ｐ．  ６３〜６５°Ｃ，  ＩＲ  （固形、ＡＴＲセル）  ν  （ｃｍ−１）  １７７４  （Ｃｃｙｃｌ＝Ｏ），１７０５  （Ｃ＝Ｏ）；１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣ１３，  ２９８  Ｋ，  ３００  ＭＨｚ）  δ  １．８１  （ｓ，  ６Ｈ，  Ｃ（ＣＨ３）２Ｂｒ），  ３．９５  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ＝５．３  Ｈｚ，  ＣＨ２Ｎ），  ４．３５  （ｔ，
２Ｈ，  Ｊ＝  ５．４  Ｈｚ，  ＣＨ２Ｏ），  ７．６７  （ｍ，  ２Ｈ，  ＣＨ  Ａｒ），  ７．７８  （ｍ，  ２Ｈ，  ＣＨ  Ａｒ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ  （ＣＤＣ１３，
２９８  Ｋ，  ７５  ＭＨｚ）  δ  ３１．００  （２Ｃ，  Ｃ（ＣＨ３）２Ｂｒ），
３７．１２  （１Ｃ，  ＣＨ２Ｎ），  ５５．９２  （１Ｃ，  Ｃ（ＣＨ３）２Ｂｒ），  ６３．４２  （１Ｃ，  ＣＨ２Ｏ），  １２３．７８  （２Ｃ，  ＣＨ  Ａｒ），  １３２．３５  （１Ｃ，  Ｃ  Ａｒ），  １３３．５４  （２Ｃ，  ＣＨ  Ａｒ），  １６８．４０  （２Ｃ，  Ｃｃｙｃｌ＝Ｏ），  １７１．８７（１Ｃ，  Ｃ＝０）。
【０１０４】
Ｎ−（２−ブロモ−２−メチルプロピオニルオキシ）スクシンイミド、７の合成
【０１０５】
【化１４】
2007516302.tif 000018
【０１０６】
化合物６の合成に関して上記したのと同様の手法を用いて、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）から、これを調製した。ＮＨＳがＴＨＦに不溶性であるので、この場合に用いた溶媒は無水ジクロロメタンであった。収率８５％で白色個体として表題化合物を得た。
【０１０７】
ｍ．ｐ．  ７２〜７４°Ｃ；  ＩＲ  （固形、ＡＴＲセル）  ν  （ｃｍ−１）  １７７２  （Ｃｃｙｃｌ＝Ｏ），  １７２８  （Ｃ＝０）；  １Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  ２９８  Ｋ，  ３００  ＭＨｚ）  δ  ２．０８  （ｓ，  ６Ｈ，  Ｃ（ＣＨ３）２Ｂｒ），  ２．８７  （ｓ，  ４Ｈ，  ＣＨ２）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，  ２９８
Ｋ，  ７５  ＭＨｚ）  δ  ２６．０３  （２Ｃ，  ＣＨ２），  ３１．０９（２Ｃ，
Ｃ（ＣＨ３）２Ｂｒ），  ５１．６０  （１Ｃ，  Ｃ（ＣＨ３）２Ｂｒ），  １６７．８９  （１Ｃ，  Ｃ＝０），  １６９．０２  （２Ｃ，  Ｃｃｙｃｌ＝Ｏ）；  ＭＳ  （＋ＥＩ），  （ｍ／ｚ）  ２６６，  ２６５，  １５６，  １５１，  １４９，  １２３，  １２１，  １１６，  １１５，  ９１，  ８７，  ７０，  ６９。  Ｃ８Ｈ１０ＮＯ４Ｂｒに関する分析計算値（Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ８Ｈ１０ＮＯ４Ｂｒ）：
Ｃ  ＝  ３６．３９；  Ｈ  ３．８２；  Ｎ  ＝  ５．３０，  Ｂｒ  ＝  ３０．２６。
実測値（Ｆｏｕｎｄ）：  Ｃ＝３６．３５；  Ｈ  ＝  ３．８２；  Ｎ  ＝  ５．０３；
Ｂｒ＝３０．１７。
【０１０８】
４−［（４−クロロ−６−メトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ］フェノール、４
【０１０９】
アセトン１００ｍＬ中の２，４−ジクロロ−６−メトキシ−１，３，５−トリアジン２９（９．００ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却し、撹拌しながら、固体４−アミノフェノール（５．４６ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）を約２分間に亘って少量ずつ付加した。次に、Ｎａ２ＣＯ３の２Ｍ水溶液で中和しながら、白色懸濁液を室温に暖めたままにして、さらに１時間撹拌した。次に混合物を５００ｍＬの氷／水中に注ぎ入れ、その結果生じた白色沈殿物を濾過し、乾燥して、９．６０ｇ（３８．０ｍｍｏｌ、収率７６％）の４−［（４−クロロ−６−メトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ］フェノールを得たが、これは、精製せずに次の過程のために用い得る。フラッシュクロマトグラフィー（ＣＣ、ＳｉＯ２、石油エーテル／Ｅｔ２Ｏ  １：１、Ｒｆ＝０．１４）により、分析用試料を得た。ＮＭＲ分析（ｄ６−ＤＭＳＯ）は、溶液中に、２回転異性体（モル比７：３）の存在を明示した。
【０１１０】
ｍ．ｐ．  １７２℃  検出値；  ＩＲ  ν（ＮＨ）  ３４７６  ｃｍ−１．  ν（ＯＨ）
３２６９  ｃｍ−１．
主要異性体  １Ｈ  ＮＭＲ  （ｄ６−ＤＭＳＯ，  ２９８Ｋ，  ３００  ＭＨｚ）  δ  ３．９４  （ｓ，  ３Ｈ，  ＣＨ３）；  ６  ．７９  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．８  Ｈｚ，
２Ｈ，  ＣＨ  Ａｒ），  ７．４８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．８  Ｈｚ，  ２Ｈ，  ＣＨ
Ａｒ），  ９．４０  （ｓ，  １Ｈ，  ＯＨ），  １０．４６  （ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ）；  １３Ｃ｛１Ｈ｝  ＮＭＲ  （ｄ６−ＤＭＳＯ，  ２９８Ｋ，  ７５  ＭＨｚ）  δ
５５．５２  （１Ｃ，  ＯＣＨ３）；  １１５．４６  （２Ｃ，  ＣＨ  Ａｒ），  １２３．９１  （２Ｃ，  ＣＨ  Ａｒ），  １２９．４９  （１Ｃ，  Ｃ  Ａｒ），  １５４．４４  （１Ｃ，  Ｃ  Ａｒ），  １６４．８１  （１Ｃ，Ｃ  Ａｒ），  １６９．５７  （１Ｃ，  Ｃ  Ａｒ），  ，１７１．２３  （１Ｃ，  Ｃ  Ａｒ）。
非主要異性体  １Ｈ  ＮＭＲ  （ｄ６−ＤＭＳＯ，  ２９８Ｋ，  ３００  ＭＨｚ）  δ
３．９６  （ｓ，  ３Ｈ，  ＯＣＨ３）；  ６．７９  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．９  Ｈｚ，  ２Ｈ，  ＣＨ  Ａｒ），  ７．３９  （ｄ，  Ｊ＝  ８．９  Ｈｚ，  ２Ｈ，  ＣＨ
Ａｒ），  ９．４２  （ｂｓ，  １Ｈ，  ＯＨ），  １０．１０．３２  （ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ）；  １３Ｃ｛１Ｈ｝  ＮＭＲ  （ｄ６−ＤＭＳＯ，  ２９８  Ｋ，  ７５  ＭＨｚ）  δ  ５５．１０  （１Ｃ，  ＯＣＨ３）；  １１５．４６  （２Ｃ，  ＣＨ  Ａｒ），  １２３．０３  （２Ｃ，  ＣＨ  Ａｒ），  １２９．２６  （１Ｃ，  Ｃ  Ａｒ），  １５４．７６  （１Ｃ，  Ｃ  Ａｒ），  １６５．２０（１Ｃ，  Ｃ  Ａｒ），  １７０．４８  （１Ｃ，  Ｃ  Ａｒ），  １７０．６４  （１Ｃ，  Ｃ  Ａｒ）；  Ｃ１０Ｈ９ＣｌＮ４Ｏ２に関する分析計算値（Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ１０Ｈ９ＣｌＮ４Ｏ２）：  Ｃ  ＝  ４７．５４，  Ｈ  ＝  ３．５９，  Ｎ  ＝  ２２．１８，  Ｃｌ  ＝  １４．０３，  実測値（Ｆｏｕｎｄ）：  Ｃ  ＝  ４７．５７，  Ｈ  ＝  ３．５５，  Ｎ  ＝  ２２．１０，  Ｃｌ  ＝  １４．８。
【０１１１】
４−［（４−クロロ−６−メトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ］フェニル２−ブロモ−２−メチルプロピオネート、５
【０１１２】
【化１５】
2007516302.tif 000019
【０１１３】
２０ｍＬのＴＨＦ中の臭化２−ブロモイソブチリル（１．０ｍＬ、７．９０ｍｍｏｌ）の溶液を、−１０℃で１００ｍＬのＴＨＦ中の４−［（４−クロロ−６−メトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ］フェノール（１．９ｇ、７．５２ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミンの溶液に滴下した。付加中（約１５分）、臭化トリエチルアンモニウムの沈殿物を観察した。ＴＬＣ（ＳｉＯ２、石油エーテル／Ｅｔ２Ｏ  １：１、４−［（４−クロロ−６−メトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ］フェノール（出発物質）Ｒｆ＝０．１４；４−［（４−クロロ−６−メトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ］フェニル２−ブロモ−２−メチルプロピオネート（最終生成物）Ｒｆ＝０．２６）により、反応をモニタリングした。１．５時間後、白色懸濁液を、１５０ｍＬのＥｔ２Ｏを含有する三角フラスコ中に注ぎ入れ、焼結ガラスフリット上での濾過によりアンモニウム塩を除去した。次に溶媒を減圧下で蒸発させて、精製されていない白色残渣を得て、これを１０ｍＬのペンタン中に懸濁し、濾過した。白色固体として４−［（４−クロロ−６−メトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ］フェニル２−ブロモ−２−メチルプロピオネート２．５６ｇ（６．３７ｍｍｏｌ、収率８５％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ分析（ｄ６−ＤＭＳＯ）は、溶液中に、２回転異性体（モル比７：３）の存在を明示した。
【０１１４】
ｍ．ｐ．  １０７〜１０８  ℃；  ＩＲ  ν（ＮＨ）  ３３６５  ｃｍ−１．  ν（ｃ＝ｏ）  １７４７  ｃｍ−１。
主要異性体：  １Ｈ  ＮＭＲ  （ｄ６−ＤＭＳＯ，  ２９８  Ｋ，  ４００  ＭＨｚ）  δ  ２．０５  （ｓ，  ６Ｈ，  Ｃ（ＣＨ３）２Ｂｒ），  ３．９６  （ｓ，  ３Ｈ，  ＯＣＨ３），  ７．１７  （ｄ，Ｊ  ＝  ８．９  Ｈｚ，  ２Ｈ，  ＣＨ  Ａｒ），  ７．７７  （ｄ，Ｊ  ＝  ８．９  Ｈｚ，  ２Ｈ，  ＣＨ  Ａｒ），  １０．７８  （ｓ，
１Ｈ，  ＮＨ）；  １３Ｃ｛１Ｈ｝  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，  ２９８  Ｋ，  １００．６  ＭＨｚ）  δ  ３０．４２  （２Ｃ，  ＣＨ３），  ５５．７５  （ｂｓ，  １Ｃ，  ＯＣＨ３），  ５７．２９  （１Ｃ，  Ｃ（ＣＨ３）２Ｂｒ），  １２１．９６  （２Ｃ，  ＣＨ  Ａｒ），  １２２．１２  （２Ｃ，  ＣＨ  Ａｒ），  １３６．２９  （１Ｃ，  Ｃ  Ａｒ），  １４６．６１  （ｂｓ，  １Ｃ，  Ｃ  Ａｒ），  １６５．１０  （ｂｓ，  １Ｃ，  Ｃ  Ａｒ），  １６９．８９  （ｂｓ，  １Ｃ，  Ｃ  Ａｒ），，  １７０．１６  （１Ｃ，  Ｃ＝Ｏ），  １７１．３３  （ｂｓ，  １Ｃ，  Ｃ  Ａｒ）。
非主要異性体：  １Ｈ  ＮＭＲ  （ｄ６−ＤＭＳＯ，  ２９８  Ｋ，  ４００  ＭＨｚ）
δ  ２．０５  （ｓ，  ６Ｈ，  Ｃ（ＣＨ３）２Ｂｒ），  ３．９６  （ｓ，  ３Ｈ，
ＯＣＨ３），  ７．１７  （ｄ，Ｊ  ＝  ８．９  Ｈｚ，２Ｈ，  ＣＨ  Ａｒ），  ７．６９  （ｄ，Ｊ  ＝  ８．９  Ｈｚ，２Ｈ，  ＣＨ  Ａｒ），  １０．６６（ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ）；  １３Ｃ｛１Ｈ｝  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，  ２９８  Ｋ，  １００．６  ＭＨｚ）  δ  ３０．４２  （２Ｃ，  ＣＨ３），  ５５．７５  （ｂｓ，  １Ｃ，
ＯＣＨ３），  ５７．２９  （１Ｃ，  Ｃ（ＣＨ３）２Ｂｒ），  １２１．９６（２Ｃ，  ＣＨ  Ａｒ），  １２２．７３  （２Ｃ，  ＣＨ  Ａｒ），  １３６．２９  （１Ｃ
，  Ｃ  Ａｒ），  １４６．６１  （ｂｓ，  １Ｃ，  Ｃ  Ａｒ），  １６５．１０  （ｂｓ，  １Ｃ，  Ｃ  Ａｒ），  １６９．８９  （ｂｓ，  １Ｃ，  Ｃ  Ａｒ），，  １７０．１６  （１Ｃ，  Ｃ＝Ｏ），  １７１．３３  （ｂｓ，１Ｃ，Ｃ  Ａｒ）．
【０１１５】
ＭＭＡの代表的重合。
ＣｕＢｒ（０．１３４ｇ、０．９３４ｍｍｏｌ）を、オーブン乾燥したシュレンク管中に入れた。管にゴム隔壁を取り付けて、ドライＮ２を排気し、流し込むことを３回行なった。メチルメタクリレート（１０ｍＬ、９３．４ｍｍｏｌ）及びキシレン（２０ｍＬ）を脱気した注射器を用いて管に移した。混合物を窒素下で迅速に撹拌し、Ｎ−（ｎ−プロピル）−２−ピリジルメタンイミン（ＮＭＰＩ）（０．４０８ｇ、１．８６ｍｍｏｌ）を付加すると、これは溶液に深赤色／褐色を付与した。適切な開始剤（０．９３４ｍｍｏｌ）を付加し、その結果生じた溶液を３回の凍結ポンプ解凍循環により脱気した。その結果生じた混合物を９０℃の熱安定性制御油浴中に入れた。転化及び分子量分析のために、試料を定期的に採取した。７０℃の真空炉中で一定重量に乾燥することにより、重量測定により転化を測定した。ＳＥＣの前に活性化塩基性アルミナのカラムに通すことにより、試料から触媒を除去した（図１参照）。
【０１１６】
【表１】
2007516302.tif 000020
【０１１７】
スチレンの代表的重合。
ＣｕＢｒ（０．０５５ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を、炉乾燥シュレンク管中に入れた。管にゴム隔壁を取り付けて、ドライＮ２を排気し、流し込むことを３回行なった。スチレン（１０ｍＬ、９６ｍｍｏｌ）を脱気した注射器を用いて管に移した。混合物を窒素下で迅速に撹拌し、４，４’−ジ（５−ノニル）−２，２’−ビピリジル（ｄＮｂｐｙ）（０．３１４ｇ、０．７６８ｍｍｏｌ）を付加し、溶液に深赤色／褐色を付与した。開始剤１（０．０３５ｇ、０．０４８ｍｍｏｌ、０．１９２ｍｍｏｌの開始部位）を付加し、その結果生じた溶液を３回の凍結ポンプ解凍循環により脱気した。その結果生じた混合物を１１０℃の熱安定性制御油浴中に４．５時間入れた。ＳＥＣの前に活性化塩基性アルミナのカラムに通すことにより、試料から触媒を除去した。
【０１１８】
開始剤６及び７に関する反応速度論試験。
転化及び分子量分析のために、脱気注射器を用いて定期的に試料を取り出し、液体窒素中で急冷した。Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＰＸ３００でのＮＭＲにより、転化を測定した。開始剤６により開始されたリビングラジカル重合に関しては、塩基性アルミナカラム上に試料を通して、次に０．２２μｍの疎水性フィルターを装備した注射器で濾過した後、分子量試験を実施した。開始剤７により開始されたＬＲＰの場合、試料をＴＨＦで希釈し、それを一晩放置して触媒残渣を沈殿させることにより、分子量を定量した。次に上部液を０．２２μｍ疎水性フィルターで濾過した。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド官能化ポリマーに関しては、これらのポリマーは塩基性アルミナ上を通過することができないので、この方法を選択した。
【０１１９】
Ｎ−ベンジルアミド官能化ポリ（ＭＭＡ）の合成
【０１２０】
無水ＴＨＦ中のＮ−ヒドロキシスクシンイミド末端ポリ（メチルメタクリレート）の溶液に、ベンジルアミンを付加した。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド末端ポリ（メチルメタクリレート）（Ｍｎ＝３，２００ｇｍｏｌ−１、ＰＤＩ＝１．０６）（１．００ｇ、０．３１３ｍｍｏｌ）及び３当量のベンジルアミン（０．１００ｍＬ、０．９３８ｍｍｏｌ）を乾燥シュレンク管中のドライＴＨＦ１０ｍＬ中に溶解し、窒素下で５０℃で３日間撹拌した。反応後、ポリマーを冷石油エーテル中で沈殿させた（図２参照）。
【０１２１】
これは、Ｎ−ベンジルアミド官能基が付加され、そしてこれを用いて、タンパク質中に見出される種類の遊離アミド基と反応させる、ということを示す。
【０１２２】
【化１６】
2007516302.tif 000021
【０１２３】
試薬。
使用前に３０分間ドライ窒素でバブリングすることにより、ポリ（エチレングリコール）メチルエーテルメタクリレート（Ｍｎ＝約４７５、Aldrich、９９％）及び無水トルエンを脱気した。上記と同様に１、リガンドＮ−（ｎ−プロピル）−２−ピリジルメタンイミンを調製した。ケラー（Keller）及びウィコフ（Wycoff）２の方法を基礎にした方法により、必要に応じて臭化銅（Ｉ）（Avocado、９８％）を精製した。その他の試薬は全ての市販製品であり、さらなる精製なしに用いた。
【０１２４】
代表的手順。
臭化銅（Ｉ）／Ｎ−（ｎ−プロピル）−２−ピリジルメタンイミンで媒介させて、３０℃で重合を実行した。代表的重合配合は、トルエン中の３３％ｖ／ｖモノマーをもとにする。開始剤／Ｃｕ（Ｉ）Ｂｒ／リガンドの比は、モル比基準で１／１／２．１である。乾燥シュレンク管にＣｕ（Ｉ）Ｂｒ（０．３０９９ｇ、２．１６×１０−３ｍｏｌ）、ＮＨＳ−Ｂｒ（１）（０．５７０４ｇ、２．１６×１０−３ｍｏｌ）及び磁気棒を投入した後、窒素及び真空間を３回循環することにより酸素を除去した。次にフラスコにＰＥＧＭＡ（１０ｍｌ、２．２７×１０−２ｍｏｌ）及びトルエン（２０ｍｌ）を付加した。混合物を直ちに３回の凍結ポンプ解凍循環に付した。最後にＮ−（ｎ−プロピル）−２−ピリジルメタンイミン（０．７０７ｍｌ、４．５４×１０−３ｍｏｌ）を付加し、フラスコを３０℃に熱制御した油浴中に入れた。
【０１２５】
反応速度論試験。
転化及び分子量分析のために、脱気注射器を用いて定期的に試料を取り出し、液体窒素中で急冷した。Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＰＸ３００ＭＨｚでのＮＭＲにより、転化を測定した。試料をトルエンで希釈し、それを一晩放置して銅錯体を除去することにより、分子量を確定した。次に上部液を０．２２μｍ疎水性フィルターで濾過した。塩基性アルミナカラム上をポリマーが通過するには困難が生じるため、この方法を選択した。５ｍｍガードカラム、２つのＰｏｌｙｍｅｒ  Ｌａｂｓ混合Ｅカラム、示差屈折率検出器及び自動試料採取器を装備した系で、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により、数平均分子量（Ｍｎ）を定量した。系を１ｍＬ／分の速度でＴＨＦで溶離した。トルエンを流動マーカーとして用いた。
【０１２６】
精製。
ジエチルエーテル中のトルエン溶液からの２連続精製により、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド官能化ポリ（ＰＥＧＭＡ）を精製した。
【０１２７】
【表２】
2007516302.tif 000022
【０１２８】
参考文献。
（ａ）D.M. Haddleton, M.C. Crossman, B.H. Dana, D.J. Duncalf, A.M. Henning, D.
Kukulj and A.J. Shooter, Macromolecules, 1999, 32, 2110.
（ｂ）R.N. Keller and W.D. Wycoff, Inorg. Synth., 1947, 2, 1.
【０１２９】
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド由来の開始剤を用いたメトキシポリエチレングリコールメタクリレート（２０８０）の重合
３０℃での８０％トルエン溶液（ＡＪ  Ｕ２−２７ａ）中の［ＰＥＧ］／［Ｉ］／［Ｃｕ］／［Ｌ］＝１９．２／１／１／２
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド開始剤（０．０５ｇ、０．１８９ｍｍｏｌ）、Ｃｕ（Ｉ
）Ｂｒ（０．０２７ｇ、０．１８９ｍｍｏｌ、１当量）及びメトキシポリエチレングリコールメタクリレート（ＰＥＧ）（平均分子量＝２，０８０、７．５５ｇ、３．６３ｍｍｏｌ）、並びに磁気ホロワをオーブン乾燥したシュレンク管中に入れた。シュレンク管にドライＮ２を排気し、流し込むことを３回行なった。酸素が除去されたトルエン（２８ｍＬ）をシュレンク管に付加した。その結果生じた溶液を３回の凍結ポンプ解凍サイクルにより脱酸素して、次に脱気Ｎ−エチル−２−ピリジルメタンイミン（０．０５ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を付加した。反応物を３０℃（ｔ＝０）の熱安定制御油浴中に入れて、転化及び分子量分析のために定期的に試料を取り出した。１Ｈ  ＮＭＲ分光分析により転化を追跡調査し、ＳＥＣにより分子量分析を実施した。
【０１３０】
ジエチルエーテル（４００ｍＬ）を激しく撹拌した溶液に反応溶液を滴下することにより、ポリマーを精製した。その結果生じた白色粉末を濾過し、トルエン（２０ｍＬ）中に溶解し、ジエチルエーテル（４００ｍＬ）中で沈殿させた。この手順を、３回反復した。
【０１３１】
【表３】
2007516302.tif 000023
【０１３２】
水を全て除去するために、使用前にＢｉｓｏｍｅｒ  Ｓ２０Ｗ（メトキシポリエチレングリコールメタクリレートの５０％水溶液）を凍結乾燥した。
【０１３３】
５０℃での８０％トルエン溶液（ＡＪ  Ｕ２−２７ｂ）中の［ＰＥＧ］／［Ｉ］／［Ｃｕ］／［Ｌ］＝１９．２／１／１／２
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド開始剤（０．０５ｇ、０．１８９ｍｍｏｌ）、Ｃｕ（Ｉ）Ｂｒ（０．０２７ｇ、０．１８９ｍｍｏｌ、１当量）及びメトキシポリエチレングリコールメタクリレート（ＰＥＧ）（平均分子量＝２，０８０、７．５５ｇ、３．６３ｍｍｏｌ）、並びに磁気ホロワをオーブン乾燥したシュレンク管中に入れた。シュレンク管にドライ窒素を排気し、流し込むことを３回行なった。酸素を除去したトルエン（２８ｍＬ）をシュレンク管に付加した。その結果生じた溶液を３回の凍結ポンプ解凍サイクルにより脱酸素して、次に脱気Ｎ−エチル−２−ピリジルメタンイミン（０．０５ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を付加した。反応物を５０℃（ｔ＝０）の熱安定制御油浴中に入れて、転化及び分子量分析のために定期的に試料を取り出した。１Ｈ  ＮＭＲ分光分析により転化を追跡調査し、ＳＥＣにより分子量分析を実施した。
【０１３４】
ジエチルエーテル（４００ｍＬ）を激しく撹拌した溶液に反応溶液を滴下することにより、ポリマーを精製した。その結果生じた白色粉末を濾過し、トルエン（２０ｍＬ）中に溶解し、ジエチルエーテル（４００ｍＬ）中で沈殿させた。この手順を、３回反復した。
【０１３５】
【表４】
2007516302.tif 000024
【０１３６】
水を全て除去するために、使用前にＢｉｓｏｍｅｒ  Ｓ２０Ｗ（メトキシポリエチレングリコールメタクリレートの５０％水溶液）を凍結乾燥した。
【０１３７】
９０℃での８０％トルエン溶液（ＡＪ  Ｕ２−２７ｃ）中の［ＰＥＧ］／［Ｉ］／［Ｃｕ］／［Ｌ］＝１９．２／１／１／２
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド開始剤（０．０５ｇ、０．１８９ｍｍｏｌ）、Ｃｕ（Ｉ）Ｂｒ（０．０２７ｇ、０．１８９ｍｍｏｌ、１当量）及びメトキシポリエチレングリコールメタクリレート（ＰＥＧ）（平均分子量＝２，０８０、７．５５ｇ、３．６３ｍｍｏｌ）、並びに磁気ホロワをオーブン乾燥したシュレンク管中に入れた。シュレンク管にドライ窒素を排気し、流し込むことを３回行なった。酸素が除去されたトルエン（２８ｍＬ）をシュレンク管に付加した。その結果生じた溶液を３回の凍結ポンプ解凍サイクルにより脱酸素して、次に脱気Ｎ−エチル−２−ピリジルメタンイミン（０．０５ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を付加した。反応物を９０℃（ｔ＝０）の熱安定制御油浴中に入れて、転化及び分子量分析のために定期的に試料を取り出した。１Ｈ  ＮＭＲ分光分析により転化を追跡調査し、ＳＥＣにより分子量分析を実施した。
【０１３８】
ジエチルエーテル（４００ｍＬ）を激しく撹拌した溶液に反応溶液を滴下することにより、ポリマーを精製した。その結果生じた白色粉末を濾過し、トルエン（２０ｍＬ）中に溶解し、ジエチルエーテル（４００ｍＬ）中で沈殿させた。この手順を、３回反復した。
【０１３９】
【表５】
2007516302.tif 000025
【０１４０】
水を全て除去するために、使用前にＢｉｓｏｍｅｒ  Ｓ２０Ｗ（メトキシポリエチレン
グリコールメタクリレートの５０％水溶液）を凍結乾燥した。
【０１４１】
９０℃での６６％トルエン溶液（ＡＪ  Ｕ２−１１）中の［ＰＥＧ］／［Ｉ］／［Ｃｕ］／［Ｌ］＝２３．９／１／１／２
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド開始剤（２．５ｇ、９．４７ｍｍｏｌ）、Ｃｕ（Ｉ）Ｂｒ（１．３５ｇ、９．４７ｍｍｏｌ、１当量）及びメトキシポリエチレングリコールメタクリレート（ＰＥＧ）（平均分子量＝６２８,１４２．０ｇ、０．２２６ｍｏｌ）、並びに磁気ホロワをオーブン乾燥したシュレンク管中に入れた。シュレンク管に窒素で排気し、流し込むことを３回行なった。酸素が除去されたトルエン（２６１ｍＬ）をシュレンク管に付加した。その結果生じた溶液を３回の凍結ポンプ解凍サイクルにより脱酸素して、次に脱気Ｎ−プロピル−２−ピリジルメタンイミン（２．８０ｇ、０．０１９ｍｏｌ）を付加した。反応物を９０℃（ｔ＝０）の熱安定制御油浴中に入れて、転化及び分子量分析のために定期的に試料を取り出した。１Ｈ  ＮＭＲ分光分析により転化を追跡調査し、ＳＥＣにより分子量分析を実施した。
【０１４２】
ジエチルエーテル（１，０００ｍＬ）の激しく撹拌中の溶液に反応溶液を滴下することにより、ポリマーを精製した。その結果生じた油をジエチルエーテル（３×１，０００ｍＬ）で洗浄した後、真空乾燥した。
【０１４３】
【表６】
2007516302.tif 000026
【０１４４】
規定通りのＢｉｓｏｍｅｒ  ＭＰＥＧ５５０ＭＡを用いた。
【０１４５】
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド由来開始剤を用いたメトキシポリエチレングリコールメタクリレート（１０８０）の重合
９０℃での６６％トルエン溶液（ＡＪ  Ｕ２−１３）中の［ＰＥＧ］／［Ｉ］／［Ｃｕ］／［Ｌ］＝１３．９／１／１／２
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド開始剤（０．５２６ｇ、１．９９ｍｍｏｌ）、Ｃｕ（Ｉ）Ｂｒ（０．２９ｇ、２．０２ｍｍｏｌ、１当量）及びメトキシポリエチレングリコールメタクリレート（ＰＥＧ）（平均分子量＝１，０８０、２９．６２ｇ、０．０２７ｍｏｌ）、並びに磁気ホロワをオーブン乾燥したシュレンク管中に入れた。シュレンク管にドライ窒素を排気し、流し込むということを３回行なった。酸素が除去されたトルエン（６０ｍＬ）をシュレンク管に付加した。その結果生じた溶液を３回の凍結ポンプ解凍サイクルにより脱酸素して、次に脱気Ｎ−エチル−２−ピリジルメタンイミン（０．５１ｇ、３．９６ｍｏｌ）を付加した。反応物を９０℃（ｔ＝０）の熱安定制御油浴中に入れて、転化及び分子量分析のために定期的に試料を取り出した。１Ｈ  ＮＭＲ分光分析により転化を追跡調査し、ＳＥＣにより分子量分析を実施した。
【０１４６】
ジエチルエーテル（１，０００ｍＬ）の激しく撹拌中の溶液に反応溶液を滴下することにより、ポリマーを精製した。その結果生じた油をジエチルエーテル（３×１，０００ｍＬ）で洗浄した後、真空乾燥した。
【０１４７】
【表７】
2007516302.tif 000027
【０１４８】
９０℃での６６％トルエン溶液（ＡＪ  Ｕ２−１５）中の［ＰＥＧ］／［Ｉ］／［Ｃｕ］／［Ｌ］＝９．３／１／１／２
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド開始剤（０．５ｇ、１．８９ｍｍｏｌ）、Ｃｕ（Ｉ）Ｂｒ（０．２７ｇ、１．８９ｍｍｏｌ、１当量）及びメトキシポリエチレングリコールメタクリレート（ＰＥＧ）（平均分子量＝１，０８０、１８．９０ｇ、０．０１８ｍｏｌ）、並びに磁気ホロワをオーブン乾燥したシュレンク管中に入れた。シュレンク管にドライ窒素を排気し、流し込むということを３回行なった。酸素が除去されたトルエン（３５ｍＬ）をシュレンク管に付加した。その結果生じた溶液を３回の凍結ポンプ解凍サイクルにより脱酸素して、次に脱気Ｎ−エチル−２−ピリジルメタンイミン（０．５１ｇ、３．７９ｍｍｏｌ）を付加した。反応物を９０℃（ｔ＝０）の熱安定制御油浴中に入れて、転化及び分子量分析のために定期的に試料を取り出した。１Ｈ  ＮＭＲ分光分析により転化を追跡調査し、ＳＥＣにより分子量分析を実施した。
【０１４９】
【表８】
2007516302.tif 000028
【０１５０】
水を全て除去するために、使用前にＢｉｓｏｍｅｒ  Ｓ１０Ｗ（メトキシポリエチレングリコールメタクリレートの５０％水溶液）を凍結乾燥した。
【０１５１】
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド由来開始剤を用いたメトキシポリエチレングリコールメタクリレート（６２８）の重合
３０℃での６６％トルエン溶液（ＡＪ  Ｕ２−３１ａ）中の［ＰＥＧ］／［Ｉ］／［Ｃｕ］／［Ｌ］＝６．４／１／１／２
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド開始剤（０．５ｇ、１．８９ｍｍｏｌ）、Ｃｕ（Ｉ）Ｂｒ（０．２７ｇ、１．８９ｍｍｏｌ、１当量）及びメトキシポリエチレングリコールメタクリレート（ＰＥＧ）（平均分子量＝６２８,７．５７ｇ、０．０１２ｍｏｌ）、並びに磁気ホロワをオーブン乾燥したシュレンク管中に入れた。シュレンク管にドライ窒素を排
気し、流し込むということを３回行なった。酸素が除去されたトルエン（１４ｍＬ）をシュレンク管に付加した。その結果生じた溶液を３回の凍結ポンプ解凍サイクルにより脱酸素して、次に脱気Ｎ−エチル−２−ピリジルメタンイミン（０．５１ｇ、３．７９ｍｍｏｌ）を付加した。反応物を３０℃（ｔ＝０）の熱安定制御油浴中に入れて、転化及び分子量分析のために定期的に試料を取り出した。１Ｈ  ＮＭＲ分光分析により転化を追跡調査し、ＳＥＣにより分子量分析を実施した。
【０１５２】
【表９】
2007516302.tif 000029
【０１５３】
規定通りのＢｉｓｏｍｅｒ  ＭＰＥＧ５５０ＭＡを用いた。
【０１５４】
５０℃での６６％トルエン溶液（ＡＪ  Ｕ２−３１ｂ）中の［ＰＥＧ］／［Ｉ］／［Ｃｕ］／［Ｌ］＝６．４／１／１／２
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド開始剤（０．５ｇ、１．８９ｍｍｏｌ）、Ｃｕ（Ｉ）Ｂｒ（０．２７ｇ、１．８９ｍｍｏｌ、１当量）及びメトキシポリエチレングリコールメタクリレート（ＰＥＧ）（平均分子量＝６２８，７．５７ｇ、０．０１２ｍｏｌ）、並びに磁気ホロワをオーブン乾燥したシュレンク管中に入れた。シュレンク管にドライ窒素を排気し、流し込むということを３回行なった。酸素が除去されたトルエン（１４ｍＬ）をシュレンク管に付加した。その結果生じた溶液を３回の凍結ポンプ解凍サイクルにより脱酸素して、次に脱気Ｎ−エチル−２−ピリジルメタンイミン（０．５１ｇ、３．７９ｍｍｏｌ）を付加した。反応物を５０℃（ｔ＝０）の熱安定制御油浴中に入れて、転化及び分子量分析のために定期的に試料を取り出した。１Ｈ  ＮＭＲ分光分析により転化を追跡調査し、ＳＥＣにより分子量分析を実施した。
【０１５５】
【表１０】
2007516302.tif 000030
【０１５６】
規定通りのＢｉｓｏｍｅｒ  ＭＰＥＧ５５０ＭＡを用いた。
【図面の簡単な説明】
【０１５７】
【図１】Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）開始剤により開始されるメチルメタクリレートのＬＲＰ（リビングラジカル重合）に関する分子量分布及び高分子分散度の発生を示す。
【図２】ＮＨＳ官能化ポリ（ＭＭＡ）（実線曲線）並びに生成物（Ｎ−ベンジルアミド官能化ポリ（ＭＭＡ）（破線曲線））に関するＳＥＣ曲線を示す。
【図３】ＮＨＳ−Ｂｒにより開始されるＰＥＧＭＡのＬＲＰに関する一次反応速度論プロット、［ＰＥＧＭＡ］０／［ＣｕＢｒ］０／［ＮＨＳＢｒ］０／［Ｌ］０＝１０／１／１／２．１（３０℃でトルエン（３３％ｖ／ｖ）中）を示す。
【図４】ＮＨＳ−Ｂｒにより開始されるＰＥＧＭＡのＬＲＰに関する分子量分布及び高分子分散度の発生、［ＰＥＧＭＡ］０／［ＣｕＢｒ］０／［ＮＨＳＢｒ］０／［Ｌ］０＝１０／１／１／２．１（３０℃でトルエン（３３％ｖ／ｖ）中）を示す。
【図５】開始剤１を用いて開始されるＭＰＥＧ（３９５）ＭＡのＬＲＰに関する分子量分布及び高分子分散度の発生、［ＭＰＥＧ（３９５）ＭＡ］０／［ＣｕＢｒ］０／［ＮＨＳＢｒ］０＝１０／１／１／２（３０℃でトルエン（５０％ｖ／ｖ）中）を示す。
【図６】開始剤１（Ｍｎ＝６，４００ｇ．ｍｏｌ−１、Ｍｗ／Ｍｎ＝１．０９）から調製されたＮＨＳエステル官能化ポリ（ＭＰＥＧ（３９５）ＭＡ）の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルの選択領域（２．７〜４．３ｐｐｍ）を示す。
【図７】開始剤２を用いたＭＰＥＧ（３９５）ＭＡのＬＲＰに関する一次反応速度論プロット、［ＭＰＥＧ（３９５）ＭＡ］０／［ＣｕＢｒ］０／［ＮＨＳＢｒ］０／［プロピルリガンド］０＝１０／１／１／２（３０℃でトルエン（５０％ｖ／ｖ）中）を示す。
【図８】開始剤２を用いたＭＰＥＧ（３９５）ＭＡのＬＲＰに関する分子量分布及び高分子分散度の発生、［ＭＰＥＧ（３９５）ＭＡ］０／［ＣｕＢｒ］０／［ＮＨＳＢｒ］０／［プロピルリガンド］０＝１０／１／１／２（３０℃でトルエン中）を示す。
【図９】開始剤８  ＭＰＥＧ（１０００）ＭＡのＴＭＭ−ＬＲＰに関する速度プロット、［モノマー］：［開始剤］：［ＣｕＣｌ］：［Ｌ］＝５：１：２：２、Ｔ＝７０℃を示す。
【図１０】開始剤８  ＭＰＥＧ（１０００）ＭＡに関する転化に対するＭｎの依存関係、［モノマー］：［開始剤］：［ＣｕＣｌ］：［Ｌ］＝５：１：１：２、Ｔ＝７０℃を示す。
【図１１】開始剤８  ＭＰＥＧ（１０００）ＭＡのＴＭＭ−ＬＲＰに関する速度プロット、［モノマー］：［開始剤］：［ＣｕＢｒ］：［Ｌ］＝２０：１：１：２、Ｔ＝５０℃を示す。
【図１２】開始剤８  ＭＰＥＧ（１０００）ＭＡのＴＭＭ−ＬＲＰに関する転化に対するＭｎの依存関係、［モノマー］：［開始剤］：［ＣｕＢｒ］：［Ｌ］＝２０：１：１：２、Ｔ＝５０℃を示す。
【図１３】開始剤１０を用いたＭＰＥＧ（３９５）ＭＡのＴＭＭ−ＬＲＰに関する速度プロット、［モノマー］：［開始剤］：［ＣｕＢｒ］：［Ｌ］＝６：１：１：２を示す。
【図１４】開始剤１０を用いたＭＰＥＧ（３９５）ＭＡのＴＭＭ−ＬＲＰに関する転化に対するＭｎの依存関係、［モノマー］：［開始剤］：［ＣｕＢｒ］：［Ｌ］＝６：１：１：２を示す。
【図１５】開始剤１０を用いたＭＰＥＧ（３９５）ＭＡのＴＭＭ−ＬＲＰに関する速度プロット、［モノマー］：［開始剤］：［ＣｕＢｒ］：［Ｌ］＝２８：１：１：２、Ｔ＝４０℃を示す。
【図１６】開始剤１０を用いたＭＰＥＧ（３９５）ＭＡのＴＭＭ−ＬＲＰに関する転化に対するＭｎの依存関係、［モノマー］：［開始剤］：［ＣｕＢｒ］：［Ｌ］＝６：１：１：２、Ｔ＝４０℃を示す。
【図１７】開始剤１０を用いたＭＰＥＧ（３９５）ＭＡのＴＭＭ−ＬＲＰに関する速度プロット、［モノマー］：［開始剤］：［ＣｕＢｒ］：［Ｌ］＝２８：１：１：２、Ｔ＝６０℃を示す。
【図１８】開始剤１０を用いたＭＰＥＧ（３９５）ＭＡのＴＭＭ−ＬＲＰに関する転化に対するＭｎの依存関係、［モノマー］：［開始剤］：［ＣｕＢｒ］：［Ｌ］＝６：１：１：２、Ｔ＝６０℃を示す。
【図１９】オンライン１Ｈ  ＮＭＲ実験：開始剤１０を用いたＭＰＥＧ（３９５）ＭＡのＴＭＭ−ＬＲＰに関する速度プロット、［モノマー］：［開始剤］：［ＣｕＢｒ］：［Ｌ］＝１０：１：１：２、Ｔ＝４０℃を示す。
【図２０】開始剤１１を用いたＭＰＥＧ（３９５）ＭＡのＴＭＭ−ＬＲＰに関する速度プロット、［モノマー］：［開始剤］：［ＣｕＢｒ］：［Ｌ］＝８：１：１：２、Ｔ＝３０℃を示す。
【図２１】開始剤１１を用いたＭＰＥＧ（３９５）ＭＡのＴＭＭ−ＬＲＰに関する転化に対するＭｎの依存関係、［モノマー］：［開始剤］：［ＣｕＢｒ］：［Ｌ］＝８：１：１：２、Ｔ＝３０℃を示す。
【図２２】異なる緩衝液中で１により開始されるＮ−スクシンイミジル末端ポリ（ＭＰＥＧ（３９５）ＭＡ）の加水分解に関する反応速度論プロットを示す。
【図２３】リゾチーム（［ポリマー］／［リゾチーム］２０：１）を伴う開始剤１（Ｍｎ＝６，４００ｇ．ｍｏｌ−１、Ｍｗ／Ｍｎ＝１．１１）から調製されたスクシンイミド末端ポリ（ＭＰＥＧ（３９５）ＭＡ）の反応に関するＨＰＬＣ追跡を示す。
【図２４】開始剤１（Ｍｎ＝６，４００ｇ．ｍｏｌ−１、Ｍｗ／Ｍｎ＝１．１１）（２０当量）から調製されたスクシンイミド末端ポリ（ＭＰＥＧ（３９５）ＭＡ）とのリゾチームの接合に関するＳＤＳ−ＰＡＧＥを示す。
【図２５】リゾチーム（［ポリマー］／［リゾチーム］５：１）を伴う開始剤１（Ｍｎ＝６，４００ｇ．ｍｏｌ−１、Ｍｗ／Ｍｎ＝１．１１）から調製されたスクシンイミド末端ポリ（ＭＰＥＧ（３９５）ＭＡ）の反応に関するＨＰＬＣ追跡を示す。
【図２６】リゾチーム（［ポリマー］／［リゾチーム］２：１）を伴う開始剤１（Ｍｎ＝６，４００ｇ．ｍｏｌ−１、Ｍｗ／Ｍｎ＝１．１１）から調製されたスクシンイミド末端ポリ（ＭＰＥＧ（３９５）ＭＡ）の反応に関するＨＰＬＣ追跡を示す。
【図２７】開始剤１から調製されたスクシンイミド末端ポリ（ＭＰＥＧ（３９５）ＭＡ）を用いた異なる比率のポリマー／リゾチームを用いて得られたリゾチームの種々の接合体のＨＰＬＣ追跡の比較を示す。
【図２８】異なる緩衝液中で２により開始されたポリ（ＭＰＥＧ（３９５）ＭＡ）ポリマーのスクシンイミド末端基の加水分解に関する反応速度論プロットを示す。
【図２９】ＮＨＳエステル官能化（開始剤２）ポリ（ＭＰＥＧ（３９５）ＭＡ）（Ｍｎ＝２，７００ｇ．ｍｏｌ−１、Ｍｗ／Ｍｎ＝１．１２）の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図３０】Ｎ−ベンジルアミド官能化ポリ（ＭＰＥＧ（３９５）ＭＡ）（Ｍｎ＝２，８００ｇ．ｍｏｌ−１、Ｍｗ／Ｍｎ＝１．１５）の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図３１】リゾチーム（［ポリマー］／［リゾチーム］３０：１）を伴う開始剤２（Ｍｎ＝２，７００ｇ．ｍｏｌ−１、Ｍｗ／Ｍｎ＝１．１２）から調製されたポリ（ＭＰＥＧ（３９５）ＭＡ）の反応に関するＨＰＬＣ追跡を示す。
【図３２】異なる反応時間で、異なる比率のポリマー／タンパク質（ａ）５／１、ポリマー／タンパク質（ｂ）１０／１及びポリマー／タンパク質（ｃ）３０／１でリゾチームを用いた開始剤２から調製されたポリ（ＭＰＥＧ（３９５）ＭＡ）の接合に関するＳＤＳ−ＰＡＧＥを示す。
【図３３】アルデヒド末端ポリマー（Ｍｎ〜２２，０００、ＰＤｉ  １．０９）とのリゾチームの接合反応のＳＥＣ−ＨＰＬＣクロマトグラフィーを示す。
【図３４】逆ディールス・アルダー反応：（黒四角＝「開始剤」及び黒三角＝マレイミドシグナル）ａ）ｔ＝０；ｂ）ｔ＝３．５ｈ；ｃ）ｔ＝７ｈを示す。
【図１】
2007516302.tif 000040
【図２】
2007516302.tif 000041
【図３】
2007516302.tif 000042
【図４】
2007516302.tif 000043
【図５】
2007516302.tif 000044
【図６】
2007516302.tif 000045
【図７】
2007516302.tif 000046
【図８】
2007516302.tif 000047
【図９】
2007516302.tif 000048
【図１０】
2007516302.tif 000049
【図１１】
2007516302.tif 000050
【図１２】
2007516302.tif 000051
【図１３】
2007516302.tif 000052
【図１４】
2007516302.tif 000053
【図１５】
2007516302.tif 000054
【図１６】
2007516302.tif 000055
【図１７】
2007516302.tif 000056
【図１８】
2007516302.tif 000057
【図１９】
2007516302.tif 000058
【図２０】
2007516302.tif 000059
【図２１】
2007516302.tif 000060
【図２２】
2007516302.tif 000061
【図２３】
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【図２４】
2007516302.tif 000063
【図２５】
2007516302.tif 000064
【図２６】
2007516302.tif 000065
【図２７】
2007516302.tif 000066
【図２８】
2007516302.tif 000067
【図２９】
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【図３０】
2007516302.tif 000069
【図３１】
2007516302.tif 000070
【図３２】
2007516302.tif 000071
【図３３】
2007516302.tif 000072
【図３４】
2007516302.tif 000073
【国際調査報告】
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2007516302.tif 000076
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