(57)【要約】遺伝子の発現状態に関連する健康状態（例えば、受精障害、癌、増殖性疾患、脈管疾患、治療介入を必要とする創傷、炎症、および肺障害）を罹患している患者を処置するための化合物および方法が、提供され、この方法は、ｅｇｒ−１および／またはｅｇｒ−１応答要素コンセンサス配列を調節し、それによって、上記遺伝子の発現状態を変更し得る化合物をその患者に投与する工程を包含する。ｅｇｒ−１および／またはｅｇｒ−１コンセンサス配列要素のエフェクターを同定する化合物をスクリーニングするための新規の方法、ならびに、ｅｇｒ−１および／またはｅｇｒ−１コンセンサス配列を調節するためにそのようなエフェクターを投与し、それによって、それと関連する遺伝子の発現を改変し、次いで、そのような遺伝子の発現と関連する疾患または他の生理学的条件を処置することによって、患者を処置するための方法もまた記載されている。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｅｇｒ−１応答要素コンセンサス配列と関連する遺伝子の発現状態と関連する疾患または健康状態の処置のための医薬の製造における、ｅｇｒ−１応答要素コンセンサス配列から生じる転写および遺伝子の発現状態を調節し得る、化合物の使用。
【請求項２】
前記化合物が、レスベラトロール、３，４’，５  トリニトロキシトランススチルベン、および３，４’，５  トリ（ニトロキシ）エトキシトランススチルベン、これらの化合物のいずれかのアナログ、ならびにこれらの化合物のいずれかの薬学的に受容可能な塩からなる群より選択される化合物を含む、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記疾患が、癌および他の増殖性疾患、脈管疾患、治療的介入を必要とする創傷、炎症、ならびに肺疾患からなる群より選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記肺疾患が、気腫、ぜん息、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患、ＣＶＤ、アテローム性動脈硬化症、高血圧、および／または再狭窄から選択される、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
前記癌に関連する疾患が、ｐ５３の変化したレベルに関連する細胞周期の停止またはアポトーシス疾患、ならびにＦＧＦ−２の変化した活性レベルに関連する新脈管形成および狭窄からなる群より選択される、請求項３に記載の使用。
【請求項６】
前記健康状態が、受精能および不妊、脈管疾患、治療介入を必要とする創傷、炎症、および肺疾患からなる群より選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項７】
前記脈管疾患が、アテローム性動脈硬化症、脳血管疾患、血管形成または虚血後の再狭窄を含む、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
前記ｅｇｒ−１応答要素コンセンサス配列が、トランス活性化トランスホーミング増殖因子β（ＴＧＦ−β）と結合される、請求項１に記載の使用。
【請求項９】
前記疾患が、癌および他の増殖性疾患からなる群より選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項１０】
前記ｅｇｒ−１応答要素コンセンサス配列が、黄体形成ホルモンと結合される、請求項１に記載の使用。
【請求項１１】
前記健康状態が、受精能の減少である、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
癌、他の増殖性疾患からなる群より選択される疾患または健康状態、および細胞の形質転換に対する感受性の処置のための医薬の製造における、ｅｇｒ−１応答要素コンセンサス配列から生じる転写およびｐ２１の発現状態を調節し得る、化合物の使用。
【請求項１３】
誘導された細胞周期の停止、細胞損傷、および細胞修復の必要性からなる群より選択される、処置を必要とする健康状態の処置のための医薬の製造における、ｅｇｒ−１応答要素コンセンサス配列から生じる転写およびｐ５３の発現状態を調節し得る、化合物の使用。
【請求項１４】
新脈管形成および狭窄からなる群より選択される、処置を必要とする健康状態の処置のための医薬の製造における、ｅｇｒ−１応答要素コンセンサス配列から生じる転写およびＦＧＦ−２の発現状態を調節し得る、化合物の使用。
【請求項１５】
前記化合物が、レスベラトロール、３，４’，５  トリニトロキシトランススチルベンおよび３，４’，５  トリ（ニトロキシ）エトキシトランススチルベンまたはこれらのアナログを含む、請求項１に記載の使用。
【請求項１６】
ｅｇｒ−１応答要素コンセンサス配列に関連する遺伝子の発現を調節し得る化合物を同定するための方法であって、該方法は、細胞または細胞抽出物、およびプロモーターに作動可能に連結したｅｇｒ−１応答要素を含む発現系を提供する工程であって、該発現が、調節され得、測定され得る、工程、ならびに該化合物が、該発現系において発現の調節を誘導し得るか否かを決定する工程、を包含する、方法。
【請求項１７】
前記ｅｇｒ−１応答要素コンセンサス配列が、ＡＧＣＣＣＣＣＧＣを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
疾患または健康状態の処置のための医薬の製造における、請求項１７に記載の方法によって同定された化合物の使用。
【請求項１９】
前記化合物が、供与可能な一酸化窒素成分および遊離ラジカル除去抗酸化分子を有する化合物を含む、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
前記化合物が、レスベラトロールの少なくとも一つの天然に存在するヒドロキシル基を置換した少なくとも一つの一酸化窒素供与部分を有するレスベラトロールおよびそのアナログを含む、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
前記化合物が、３，４’，５  トリニトロキシトランススチルベンおよび３’，４’，５  トリ（ニトロキシ）エトキシトランススチルベンからなる群より選択される、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
前記アナログが、ＯＣＸＮＯ２置換化合物からなる群より選択される、請求項２０に記載の使用。
【請求項２３】
前記アナログが、ジアゼニウムジオレートアナログである、請求項２２に記載の使用。
【請求項２４】
前記レスベラトロールの少なくとも一つの天然に存在するヒドロキシル基が、硫黄または窒素で置換されている、請求項２０に記載の使用。
【請求項２５】
ｅｇｒ−１またはｅｇｒ−１コンセンサス配列要素から生じる転写を調節し得る化合物を同定するための方法であって、検出可能な生成物を発現し得る遺伝子に作動可能に連結したｅｇｒ−１またはｅｇｒ−１コンセンサス配列要素を含む試験系を提供する工程、検出可能な生成物の基準レベルを測定する工程、該試験系を試験されるべき化合物と接触させてその後、該検出可能な生成物のレベルを測定する工程、該検出されたレベルを該基準レベルに対して比較する工程、および該比較する工程から該化合物が、ｅｇｒ−１またはｅｇｒ−１コンセンサス配列要素のエフェクターであるか否かを決定する工程、を包含する、方法。
【請求項２６】
ｅｇｒ−１応答要素コンセンサス配列に関連する遺伝子の発現を調節し得る化合物であって、供与可能な一酸化窒素成分および遊離ラジカル除去抗酸化分子を含む、化合物。
【請求項２７】
以下の構造：
【化１】
2007509035.tif 000057
を含むフラボノイド化合物を包含する、請求項２６に記載の化合物であって、
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１３およびＲ１４は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［サルフェート接合体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン酸（別名グルクロン酸）接合体］であり得、但し、Ｒ１〜Ｒ１０の少なくとも一つ、またはＲ１３またはＲ１４は、ニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２またはＯＣＯＲ１２であり、そして、
ここで、
ＯＣＯＲは、
【化２】
2007509035.tif 000058
を意味し、
Ｒは、Ｒ１１またはＲ１２であり、
ここで、
Ｒ１１は、Ｃ１〜１８のアリール、ヘテロアリール、またはこれらの誘導体であり、ここで、該誘導体は、必要に応じて置換され、そして必要に応じて分枝し、そして、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された一つ以上のＣ原子を有し、
ここで、
Ｒ１２は、Ｃ１〜１８のアリール、ヘテロアリール、またはこれらの誘導体であり、ここで、該誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分枝し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された一つ以上のＣ原子を有し得、そして、必要に応じて一つ以上のＯＮＯ２を含み；
ここで、
Ｘは、Ｏ、ＣＲ１３またはＮＲ１３であり得；
Ｙは、ＣＯ［６原子の環構造をなお維持するケトン］、ＣＲ１４、またはＮＲ１４であり得；そして、
Ｚは、単結合または二重結合であり得る、
化合物。
【請求項２８】
薬学的に受容可能なキャリアと組合せて、請求項２７に記載のフラボノイド化合物を含有する、薬学的組成物。
【請求項２９】
ｅｇｒ−１応答要素コンセンサス配列に関連する遺伝子の発現状態と関連する疾患または健康状態の処置のための医薬の製造における、請求項２８に記載のフラボノイド化合物の使用。
【請求項３０】
前記疾患が、癌および他の増殖性疾患、脈管疾患、治療的介入を必要とする創傷、炎症、ならびに肺疾患からなる群より選択される、請求項２９に記載の使用。
【請求項３１】
前記肺疾患が、気腫、ぜん息、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患、ＣＶＤ、アテローム性動脈硬化症、高血圧、および／または再狭窄から選択される、請求項３０に記載の使用。
【請求項３２】
前記癌に関連する疾患が、ｐ５３の変化したレベルに関連する細胞周期の停止またはアポトーシス疾患、ならびにＦＧＦ−２の変化した活性レベルに関連する新脈管形成および狭窄からなる群より選択される、請求項３０に記載の使用。
【請求項３３】
以下の構造：
【化３】
2007509035.tif 000059
を含むイソフラボノイド化合物を包含する、請求項２６に記載の化合物であって、
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１３およびＲ１４は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［サルフェート接合体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン酸（別名グルクロン酸）接合体］であり得、但し、Ｒ１〜Ｒ１０の少なくとも一つ、またはＲ１３またはＲ１４は、ニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２またはＯＣＯＲ１２であり、そして、
ここで、
ＯＣＯＲは、
【化４】
2007509035.tif 000060
を意味し、
Ｒは、Ｒ１１またはＲ１２であり、
ここで、
Ｒ１１は、Ｃ１〜１８のアリール、ヘテロアリール、またはこれらの誘導体であり、ここで、該誘導体は、必要に応じて置換され、そして必要に応じて分枝し、そして、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された一つ以上のＣ原子を有し得、
ここで、
Ｒ１２は、Ｃ１〜１８のアリール、ヘテロアリール、またはこれらの誘導体であり、ここで、該誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分枝し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された一つ以上のＣ原子を有し得、そして、必要に応じて一つ以上のＯＮＯ２を含み；
ここで、
Ｘは、Ｏ、ＣＲ１３またはＮＲ１３であり得；
Ｙは、ＣＯ［６原子の環構造をなお維持するケトン］、ＣＲ１４、またはＮＲ１４であり得；そして、
Ｚは、単結合または二重結合であり得る、
化合物。
【請求項３４】
薬学的に受容可能なキャリアと組合せて、請求項３３に記載のイソフラボノイド化合物を含有する、薬学的組成物。
【請求項３５】
ｅｇｒ−１応答要素コンセンサス配列に関連する遺伝子の発現状態と関連する疾患または健康状態の処置のための医薬の製造における、請求項３４に記載のイソフラボノイド化合物の使用。
【請求項３６】
前記疾患が、癌および他の増殖性疾患、脈管疾患、治療的介入を必要とする創傷、炎症、ならびに肺疾患からなる群より選択される、請求項３５に記載の使用。
【請求項３７】
前記肺疾患が、気腫、ぜん息、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患、ＣＶＤ、アテローム性動脈硬化症、高血圧、および／または再狭窄から選択される、請求項３６に記載の使用。
【請求項３８】
前記癌に関連する疾患が、ｐ５３の変化したレベルに関連する細胞周期の停止またはアポトーシス疾患、ならびにＦＧＦ−２の変化した活性レベルに関連する新脈管形成および狭窄からなる群より選択される、請求項３６に記載の使用。
【請求項３９】
以下の構造：
【化５】
2007509035.tif 000061
を含むスチルベン化合物を包含する、請求項２６に記載の化合物であって、
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［サルフェート接合体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン酸（別名グルクロン酸）接合体］であり得、但し、Ｒ１〜Ｒ１０の少なくとも一つは、ニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２またはＯＣＯＲ１２であり、そして、
ここで、
ＯＣＯＲは、
【化６】
2007509035.tif 000062
を意味し、
Ｒは、Ｒ１１またはＲ１２であり、
ここで、
Ｒ１１は、Ｃ１〜１８のアリール、ヘテロアリール、またはこれらの誘導体であり、ここで、該誘導体は、必要に応じて置換され、そして必要に応じて分枝し、そして、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された一つ以上のＣ原子を有し得、
ここで、
Ｒ１２は、Ｃ１〜１８のアリール、ヘテロアリール、またはこれらの誘導体であり、ここで、該誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分枝し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された一つ以上のＣ原子を有し得、そして、必要に応じて一つ以上のＯＮＯ２を含み；
ここで、
Ｘは、単結合、二重結合または三重結合であり得る、
化合物。
【請求項４０】
薬学的に受容可能なキャリアと組合せて、請求項３９に記載のスチルベン化合物を含有する、薬学的組成物。
【請求項４１】
ｅｇｒ−１応答要素コンセンサス配列に関連する遺伝子の発現状態と関連する疾患または健康状態の処置のための医薬の製造における、請求項４０に記載のスチルベン化合物の使用。
【請求項４２】
前記疾患が、癌および他の増殖性疾患、脈管疾患、治療的介入を必要とする創傷、炎症、ならびに肺疾患からなる群より選択される、請求項４１に記載の使用。
【請求項４３】
前記肺疾患が、気腫、ぜん息、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患、ＣＶＤ、アテローム性動脈硬化症、高血圧、および／または再狭窄から選択される、請求項４２に記載の使用。
【請求項４４】
前記癌に関連する疾患が、ｐ５３の変化したレベルに関連する細胞周期の停止またはアポトーシス疾患、ならびにＦＧＦ−２の変化した活性レベルに関連する新脈管形成および狭窄からなる群より選択される、請求項４２に記載の使用。
【請求項４５】
以下の構造：
【化７】
2007509035.tif 000063
を含むカルコン化合物を包含する、請求項２６に記載の化合物であって、
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１３およびＲ１４は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［サルフェート接合体］、またＯ−グルコロニデート［グルコロン酸（別名グルクロン酸）接合体］であり得、但し、Ｒ１〜Ｒ１０の少なくとも一つ、またはＲ１３またはＲ１４は、ニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２またはＯＣＯＲ１２であり、そして、
ここで、
ＯＣＯＲは、
【化８】
2007509035.tif 000064
を意味し、
Ｒは、Ｒ１１またはＲ１２であり、
ここで、
Ｒ１１は、Ｃ１〜１８のアリール、ヘテロアリール、またはこれらの誘導体であり、ここで、該誘導体は、必要に応じて置換され、そして必要に応じて分枝し、そして、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された一つ以上のＣ原子を有し得、
ここで、
Ｒ１２は、Ｃ１〜１８のアリール、ヘテロアリール、またはこれらの誘導体であり、ここで、該誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分枝し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された一つ以上のＣ原子を有し得、そして、必要に応じて一つ以上のＯＮＯ２を含み；
ここで、
Ｘは、単結合または二重結合であり得；
Ｙは、単結合または二重結合であり得；
Ｚは、ＣＯ［ケトン］、ＣＲ１３、またはＮＲ１３であり得る、
化合物。
【請求項４６】
薬学的に受容可能なキャリアと組合せて、請求項４５に記載のカルコン化合物を含有する、薬学的組成物。
【請求項４７】
ｅｇｒ−１応答要素コンセンサス配列に関連する遺伝子の発現状態と関連する疾患または健康状態の処置のための医薬の製造における、請求項４６に記載のカルコン化合物の使用。
【請求項４８】
前記疾患が、癌および他の増殖性疾患、脈管疾患、治療的介入を必要とする創傷、炎症、ならびに肺疾患からなる群より選択される、請求項４７に記載の使用。
【請求項４９】
前記肺疾患が、気腫、ぜん息、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患、ＣＶＤ、アテローム性動脈硬化症、高血圧、および／または再狭窄から選択される、請求項４８に記載の使用。
【請求項５０】
前記癌に関連する疾患が、ｐ５３の変化したレベルに関連する細胞周期の停止またはアポトーシス疾患、ならびにＦＧＦ−２の変化した活性レベルに関連する新脈管形成および狭窄からなる群より選択される、請求項４８に記載の使用。
【請求項５１】
以下の構造：
【化９】
2007509035.tif 000065
を含むポリフェノール化合物を包含する、請求項２６に記載の化合物であって、
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［サルフェート接合体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン酸（別名グルクロン酸）接合体］であり得、但し、Ｒ１〜Ｒ１０の少なくとも一つは、ニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２またはＯＣＯＲ１２であり、そして、
ここで、
ＯＣＯＲは、
【化１０】
2007509035.tif 000066
を意味し、
Ｒは、Ｒ１１またはＲ１２であり、
ここで、
Ｒ１１は、Ｃ１〜１８のアリール、ヘテロアリール、またはこれらの誘導体であり、ここで、該誘導体は、必要に応じて置換され、そして必要に応じて分枝し、そして、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された一つ以上のＣ原子を有し得、
ここで、
Ｒ１２は、Ｃ１〜１８のアリール、ヘテロアリール、またはこれらの誘導体であり、ここで、該誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分枝し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された一つ以上のＣ原子を有し得、そして、必要に応じて一つ以上のＯＮＯ２を含み；
ここで、
Ｘは、Ｃ、Ｓ、（ＣＯ）、ＳＯ、別名ケトン、（ＳＯ２）Ｎ、（ＣＯ）Ｃ、（ＣＯ）Ｎ、（ＣＯ）Ｏ、Ｃ−Ｎ［単結合］、Ｃ＝Ｎ［二重結合］、Ｃ−Ｏ、Ｎ−Ｏ、Ｎ−Ｎ［単結合］またはＮ＝Ｎ［二重結合］であり得る、
化合物。
【請求項５２】
薬学的に受容可能なキャリアと組合せて、請求項５１に記載のポリフェノール化合物を含有する、薬学的組成物。
【請求項５３】
ｅｇｒ−１応答要素コンセンサス配列に関連する遺伝子の発現状態と関連する疾患または健康状態の処置のための医薬の製造における、請求項５２に記載のポリフェノール化合物の使用。
【請求項５４】
前記疾患が、癌および他の増殖性疾患、脈管疾患、治療的介入を必要とする創傷、炎症、ならびに肺疾患からなる群より選択される、請求項５３に記載の使用。
【請求項５５】
前記肺疾患が、気腫、ぜん息、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患、ＣＶＤ、アテローム性動脈硬化症、高血圧、および／または再狭窄から選択される、請求項５４に記載の使用。
【請求項５６】
前記癌に関連する疾患が、ｐ５３の変化したレベルに関連する細胞周期の停止またはアポトーシス疾患、ならびにＦＧＦ−２の変化した活性レベルに関連する新脈管形成および狭窄からなる群より選択される、請求項５４に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、ＡＰＯ  ＡＩタンパク質の発現を調節するための化合物をスクリーニングするための方法、ならびに、関連する遺伝子の発現に影響を及ぼすために、ｅｇｒ−１および／またはｅｇｒ−１コンセンサス配列要素の活性を調節し、それによって疾患の処置を達成するための方法を記載する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
心血管疾患は、高血圧、冠状動脈性心疾患、脳血管疾患、末梢血管疾患、心不全、リウマチ性心疾患、先天性心疾患および心筋症を含む、心臓および血管の障害の群を特定するのに用いられる総称である。心血管疾患の主な原因は、アテローム性動脈硬化症であり、脂質の蓄積が動脈壁上に沈着する。血中コレステロール値の上昇は、アテローム性動脈硬化症を発症する危険性と高度に相関し、従って、かなりの医学研究が、血中コレステロールを低下させる治療の開発に捧げられてきた。
【０００３】
アテローム性動脈硬化症は、脈管構造内層の正常機能が損なわれる障害である内皮機能不全に関連し、この内皮機能不全は、多数の他の心血管疾患（例えば、狭心症、心筋梗塞および脳血管疾患）の重要な危険因子であるのみならず、アテローム性動脈硬化症の病因に寄与する。内皮機能不全の顕著な特徴としては、酸化的血管ストレスおよび血管収縮の増大、ならびに血中コレステロール値の上昇が挙げられ、これらは全て、互いに促進して心血管疾患の進行を加速させる。疾患の進行を最も首尾よく妨害するために、心血管疾患の多重因果的危険因子に対する改善された治療ストラテジーが必要とされる。
【０００４】
レスベラトロール（ｔｒａｎｓ−３，５，４’−トリヒドロキシスチルベン）は、特定の植物およびベリー（赤ブドウ、ラズベリー、マルベリーが挙げられる）、ピーナッツおよびいくつかの他の植物に見出される天然のポリフェノールである。赤ワインに存在するレスベラトロール、その代謝産物および関連するポリフェノールが、「フレンチパラドックス」と称される疫学的観察の基礎となり得ることが示唆されてきた。このパラドックスは、北アメリカの住民の食事と比較して、多量の飽和脂肪を含む食事の消費にも関わらずフランスの住民における心臓血管疾患（ＣＶＤ）の発生率が低いという発見に関連する。北アメリカの食事における飽和脂肪の含有量が、虚血症性心臓疾患の発生に対する主要な原因である。しかし、フランスにおいては、比較される食事は、北アメリカの住民の虚血性心臓疾患の発生率の１／３に等しいこの疾患の発生に関連する。レスベラトロールがこのパラドックスに寄与し、その寄与が抗酸化剤として、さらに、いまだ公知でない作用の機構としての、その潜在的役割に由来していることが推測されている。レスベラトロールおよび関連化合物は、天然に豊富に見出され、そしてその最良の公知の供給源の１つは、赤ブドウの皮であり、皮１グラムにつき、５０〜１００μｇを含み得る（非特許文献１）。レスベラトロールは、多くの赤ワイン中に見出され、そしてまた市販の調製物中で得られ得る。
【０００５】
部分的に、レスベラトロールの作用は、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）粒子の脂質過酸化を阻害し、従って、酸化されたＬＤＬの細胞障害性を防止するその推測される抗酸化特性から発生し得る。酸化ＬＤＬの量の増加は、ＣＶＤの発症についての危険因子である（非特許文献２；非特許文献３）。ＣＶＤの病原における血小板凝集は、その疾患の初期および後期（最終の動脈血栓症の発作を含む）に発生する。これは、通常、虚血または心筋梗塞に結び付く最終的な事象である。従って、この血小板活性を阻害するレスベラトロールの能力は、アテローム硬化症（非特許文献４；非特許文献５）とその最後の発作との両方の予防におそらく役立っていると考えられる。これらのレスベラトロールの効果は、部分的に、中程度の量の赤ワイン消費による心臓を防御する効果を含み得る。
【０００６】
（コレステロール代謝）
コレステロールは、その不溶性に起因して、リポタンパク質と称する脂質およびタンパク質の複合体によって血中で輸送される。低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）は、肝臓から体内の他の組織へのコレステロールの送達を担うと考えられ、従って、一般に「悪玉コレステロール」と呼ばれるようになってきた。ＬＤＬ粒子は、中密度リポタンパク質（ＩＤＬ）から変換され、このＩＤＬ自体は、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）からトリグリセリドを除去することによって生成される。ＶＬＤＬは、肝臓においてトリグリセリドおよびいくつかのアポリポタンパク質から合成され、次いで血流中に直接分泌される。
【０００７】
高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）は、コレステロールを肝外組織から肝臓（ここでコレステロールは異化され、次いでコレステロール逆輸送（ＲＣＴ）と呼ばれるプロセスで排出される）に輸送する主要なキャリア分子であると考えられ、これによって、ＨＤＬは「善玉コレステロール」のあだ名を得ている。この肝臓で生じる排出プロセスにおいて、コレステロールは胆汁酸に変換され、次いで体外に排泄される。
【０００８】
（高脂血症の現在の処置）
現在認可されているコレステロールを低下させる薬物は、正常なコレステロール代謝経路を多数の異なる点で攻撃することによって治療的利点をもたらす。胆汁酸結合樹脂（例えば、コレスチラミン）は、胆汁酸に吸着して体外に排泄され、その結果、胆汁酸へのコレステロールの変換を増大させ、結果的に血中コレステロールを低下させる。樹脂は、血清コレステロールを最大２０％低下させるにすぎず、胃腸の副作用を引き起こし、そしてこれらの樹脂は他の薬物に結合してその排泄を引き起こすため、他の薬物療法と同時に投与することができない。
【０００９】
ナイアシンは、リポタンパク質合成を阻害し、そしてＬＤＬを作製するのに必要なＶＬＤＬ粒子の生成を低下させる。ＨＤＬレベルを増大するのに必要な高濃度で投与されると、顔面紅潮のような重篤な副作用が生じる。
【００１０】
フィブラート（例えば、クロフィブラートおよびフェノフィブラート）は、核ホルモンレセプターのペルオキシソーム増殖因子活性化レセプター（ＰＰＡＲ）ファミリーに属する転写制御因子を活性化すると考えられる。これらの転写制御因子は、ＨＤＬの生成に関与する遺伝子をアップレギュレートし、そしてＬＤＬの生成に関与する遺伝子をダウンレギュレートする。フィブラートは、ＶＬＤＬ画分を減少させることによって血清トリグリセリドを減少させるため、高脂血症を処置するのに用いられる。しかし、フィブラートは、患者における脂質応答の不均質性のため、および冠状動脈性心疾患を発症した患者において観察される効力の欠如のため、高コレステロール血症治療法として米国で認可されていない。同様に、フィブラートの使用は、胃腸癌、胆嚢疾患および非冠動脈疾患死の発生率の増加のような、重篤な副作用を伴う。
【００１１】
スタチンは、ＨＭＧ  ＣｏＡレダクターゼインヒビターとしても公知であり、肝コレステロール合成における律速酵素を阻害することによって、ＶＬＤＬ、ＬＤＬ、およびＩＤＬコレステロールを減少させる。スタチンは、ＨＤＬレベルをごくわずかに増加させるのみであり、多数の肝および腎機能不全の副作用がこれらの薬物の使用に伴う。
【００１２】
エゼチミブは、心血管治療法の新しいクラスにおいて初めて認可された薬物であり、腸におけるコレステロール取り込みを阻害することによって機能する。エゼチミブは、ＬＤＬを低下させるが、ＨＤＬレベルをあまり増加させず、体内で合成されるコレステロールにも、血流中を循環しているかまたはアテローム斑中に存在するコレステロールにも対処しない。コレステロール吸収に影響を及ぼすことも見出されている他の化合物としては、胆汁酸結合剤コレスチラミンおよび植物ステロールが挙げられる。
【００１３】
これらの治療アプローチの開発にもかかわらず、ＨＤＬの血中レベルを増加することはほとんど達成されておらず、そして現在認可されている全ての薬物は、副作用および効力によってそれらの治療有効性が限定されている。結果的に、ＨＤＬを安全に増加させ、従って逆コレステロール輸送速度を増加させてコレステロールの血中レベルを低下させるために、治療アプローチを改善する必要性がある。
【００１４】
（内皮機能不全およびアテローム性動脈硬化症）
内皮機能障害は、アテローム性動脈硬化症の発生初期に生じ、実際には脂質が沈着する前に検出可能である。内皮機能不全は、血管収縮を症候的な特徴とし、高血圧（脳卒中および心筋梗塞のような他の心血管疾患の周知の危険因子である）を引き起こす。研究により、アテローム性動脈硬化症患者における内皮機能低下が、血管拡張を誘導するシグナル伝達分子である一酸化窒素（ＮＯ）のバイオアベイラビリティの低下に、原因として関連づけられている。
【００１５】
ＮＯのバイオアベイラビリティの低下はまた、アテローム性動脈硬化症の病因の一因となる他の機構を活性化する。例えば、ＮＯは、アテローム性動脈硬化症を特徴付ける脂質プラークの発生に必要な工程である、血小板凝集を阻害することが周知である。同様に、ＮＯは、白血球接着（アテローム性動脈硬化症の発症における主要な工程であり、そしておそらく高脂血症の患者における血管酸化的ストレスの増加による結果である）を阻害する、重要な内因性のメディエーターである。粘着白血球は、大量の活性酸素種を放出することによって酸化的ストレスをさらに増大させる。
【００１６】
血管酸化的ストレスの増大および高コレステロール血症は、ＮＯバイオアベイラビリティの低下を引き起こす誘因として、個々に同定されてきた。酸化の増加はまた、アテローム硬化性病変形成の別の誘導因子である、フリーラジカル媒介性の脂質過酸化も引き起こす。要約すれば、これらの３つの主要因子（高コレステロール血症、血管酸化的ストレスおよびＮＯのバイオアベイラビリティの低下）はそれぞれ、他の因子の程度および病理学的重症度を増大させる、正のフィードバックループが存在すると考えられる。
【００１７】
（抗酸化剤およびプロ−アポリポタンパク質ＡＩ因子としてのレスベラトロール）
レスベラトロールが心臓血管疾患の発生率を減少させる機構が、いくつかの両立しない仮説を伴って、かなりの議論の話題を保持している。レスベラトロールは、強力な抗酸化剤であることを実証されてきており、この抗酸化剤は、ＬＤＬ粒子のより低いレベルの過酸化をもたらし、そしてその後にアテローム硬化症を阻害することが示唆されている。レスベラトロールはまた、白血球の付着および血小板の凝集のインヒビターとして関与を示唆されてきた。さらに、レスベラトロールは、ｐ２１およびｐ５３の活性レベルを調節する、その記載された能力に起因して、潜在的な抗癌治療として調査されている。
【００１８】
レスベラトロールは、抗炎症薬として同定されており、シクロオキシゲナーゼ−１酵素の阻害（特許文献１；非特許文献６；特許文献２）およびプロテインキナーゼ阻害（特許文献３）を含む機構が提唱されている。従って、レスベラトロールは、関節性障害、喘息性障害、乾癬性障害、胃腸障害、眼障害、肺炎症性障害、癌を処置するために、鎮痛薬として、解熱剤として、または血管疾患、中枢神経系障害ならびに細菌、真菌およびウイルス感染に関連する炎症の処置のために、治療的に用いられる可能性を有し得る。
【００１９】
レスベラトロールは、サーチュインを活性化させる化合物として最近記載され、ＳｉｒＴ１と直接相互作用してｐ５３のダウンレギュレーションを引き起こすことによって、寿命を延長することが示唆された。レスベラトロールはまた、アリール炭化水素レセプターをアンタゴナイズし、エストロゲンレセプターをアゴナイズすることも知られており、ＥＲＫ１／２経路の活性化によって、および転写制御因子ｅｇｒ−１の活性の増大によって、活性を仲介することが記載されている。
【００２０】
ごく最近、レスベラトロールは、部位Ｓ（ＡｐｏＡ−Ｉ遺伝子のプロモーター領域におけるヌクレオチド配列）を通じて媒介されると推定される、アポリポタンパク質ＡＩの転写を増加させることが見出された（非特許文献７）。
【特許文献１】米国特許第６，５４１，０４５号明細書
【特許文献２】米国特許第６，４１４，０３７号明細書
【特許文献３】米国特許出願公開第００３０１７１４２９号明細書
【非特許文献１】Ｊａｎｇ，Ｍ．ら、「Ｓｃｉｅｎｃｅ」、１９９７年、２７５号、ｐ．２１８
【非特許文献２】Ｆｒａｎｋｅｌ，Ｅ．Ｎ．ら、「Ｌａｎｃｅｔ」、１９９３年、３４１号、ｐ．１１０３
【非特許文献３】Ｃｈａｎｖｉｔａｙａｐｏｎｇｓ，Ｓ．ら、「Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ」、１９９７年、８号、ｐ．１４９９
【非特許文献４】Ｒｏｔｏｎｄｏ，Ｓ．ら、「Ｂｒｉｔ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ」、１９９８年、１２３号、ｐ．１６９１
【非特許文献５】Ｓｏｌｅａｓ，Ｇ．Ｊ．ら、「Ｃｌｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍ」、１９９７年、３０号、ｐ．９１
【非特許文献６】Ｊａｙａｔｉｌａｋｅ，Ｇ．Ｓ．ら、「Ｊ  Ｎａｔ  Ｐｒｏｄ」、１９９３年、５６号、ｐ．１８０５
【非特許文献７】Ｔａｙｌｏｒら、「Ｊ  Ｍｏｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎ」、２０００年、２５号、ｐ．２０７
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００２１】
（発明の要旨）
レスベラトロールに対する作用の機構の理解の増加を提供すること、および、類似の有益な作用を有するレスベラトロールのアナログの開発のための基礎を提供することが、本発明の目的である。
【００２２】
ＡＰＯ  ＡＩおよび／またはＨＤＬのレベルを増加することを目的にしたさらなる薬物の開発のための分子標的を提供することが、本発明のさらなる目的である。
【００２３】
ｅｇｒ−１プロモーター活性を増加し得る新規の化合物を提供することが、本発明のさらなる目的である。
【００２４】
本発明の種々の局面および原則に従って、ＡＰＯ  ＡＩ遺伝子発現を促進することによってＨＤＬレベルを増加し得る化合物をアッセイし、そして同定するための新規の手段および試薬が提供される。遺伝子の活性を制御するために重要であるようであるＡＰＯ  ＡＩ遺伝子に関連する種々の領域、および具体的には関連するプロモーター領域内の領域が、同定された。ポリフェノール化合物（例えば、レスベラトロール）は、その遺伝子の活性を増大することが発見された。ＡＰＯ  ＡＩ遺伝子発現をアップレギュレーションするための他のそのような化合物（レスベラトロールの模倣物およびアナログを含む）を同定するためのスクリーニングの手段として有用な細胞株が、発見されそして作製されてきた。同様に、そのような手段は、ＡＰＯ  ＡＩ発現に対して類似の利益を提供し得る化合物を同定するための合成化合物または栄養薬剤（ｎｅｕｔｒａｃｅｕｔｉｃａｌ）をスクリーニングするために有利に使用され得る。
【００２５】
本発明の一局面は、腸細胞および肝臓細胞中のＡＰＯ  ＡＩ発現を選択的に促進するための治療有効量の活性化因子を投与することによって、個体中の血漿のＨＤＬ／ＡＰＯ  ＡＩレベルを増加するための方法を提供する。そのような活性化因子は、腸細胞中の（具体的には、遺伝子の−１９０〜−１７０の範囲にわたるＤＮＡモチーフにおいて）ＤＮＡに対して作用する。レスベラトロールまたはそのアナログが、そのような活性化因子として作用し得ることが、発見された。そのような化合物の最も好ましい実施形態はまた、薬学的に受容可能なキャリア（例えば、緩衝液）、または当該分野において周知の他のビヒクルを含む。
【００２６】
本発明のさらなる局面は、特に腸細胞における、ＡＰＯ  ＡＩ発現を促進する新規の方法を提供する。
【００２７】
本発明のさらなる局面は、レスベラトロールまたは本明細書中で提供される新規の化合物のクラスに対して感受性であり得る他の遺伝子を同定するための方法を提供し、この方法は、ハイブリダイゼーション条件下のレスベラトロールによって作用されるＡＰＯ  ＡＩプロモーター中のモチーフの相補配列を用いてそのような遺伝子をインキュベートし、次いで、そのモチーフプロモーターの相補配列のハイブリダイゼーションの存在についてアッセイする工程を含有する。
【００２８】
本発明のさらなる局面は、哺乳動物における循環しているＡＰＯ  ＡＩ／ＨＤＬレベルを増加し得る合成化合物または栄養薬剤についてスクリーニングし、そして同定する方法を提供する。候補化合物をスクリーニングまたは同定するための好ましい手順は、永久的にトランスフェクトされた細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）またはＣａＣｏ２細胞株を、スクリーニングされるその合成化合物または栄養薬剤に暴露する工程、および高レベルのＡＰＯ  ＡＩ遺伝子の転写および／またはＡＰＯ  ＡＩタンパク質についてアッセイし、それによってそのような転写の高レベルまたはＡＰＯ  ＡＩタンパク質の高レベルが、循環しているＨＤＬレベルを増加し得る化合物または栄養薬剤を同定する工程を包含する。同様に、ＡＰＯ  ＡＩ発現を増加するための他の化合物は、完全なもしくは短縮型ＡＰＯ  ＡＩプロモーター配列を含む永久的にトランスフェクトされた細胞株と一緒にそのような化合物をインキュベートし、そしてＡＰＯ  ＡＩ発現の増加についてアッセイすることによって、同定され得る。従って、（特に、薬学的に受容可能なキャリアを用いて）同定された化合物は、優れた臨床上の利点を提供する。
【００２９】
本発明のさらなる局面は、ｅｇｒ−１様のプロモーター配列に結合し、それによって、癌に関連する遺伝子（例えば、ｐ２１およびｐ５３）の発現を調節し、そして、それによって癌を処置する転写因子を増加するために使用され得る新規化合物のクラス、ならびに、それを用いた処置の方法を提供する。さらに、このアプローチは、以下により詳細に記載されるように、ｅｇｒ−１またはｅｇｒ−１プロモーター様の配列によって少なくとも一部は制御される遺伝子に関連する他の疾患状態の処置を可能にするように拡張され得る。
【００３０】
本発明のさらなる局面は、ｅｇｒ−１様のプロモーター配列に結合し、それによって長寿に関連する遺伝子（例えば、サーチュイン（ｓｉｒｔｕｉｎ））の発現を調節する転写因子を増加し、そして、それによってそのように処置された個体の寿命を延ばすために使用され得る新規の化合物のクラス、ならびに、それを用いた処置の方法を提供する。
【００３１】
本発明のなおさらなる局面は、ｅｇｒ−１様のプロモーター配列に結合し、それによって、癌に関連する遺伝子（例えば、ｐ２１およびｐ５３）の発現を調節し、そして、それによって癌を処置する転写因子を増加するために使用され得る新規化合物のクラス、ならびに、それを用いた処置の方法を提供する。さらに、このアプローチは、以下により詳細に記載されるように、ｅｇｒ−１またはｅｇｒ−１プロモーター様の配列によって少なくとも一部は制御される遺伝子に関連する他の疾患状態の処置を可能にするように拡張され得る。
【００３２】
本発明のさらなる局面は、ｅｇｒ−１様のプロモーター配列に結合し、それによって長寿に関連する遺伝子（例えば、サーチュイン）の発現を調節する転写因子を増加し、そして、それによってそのように処置された個体の寿命を延ばすために使用され得る新規の化合物のクラス、ならびに、それを用いた処置の方法を提供する。
【００３３】
本発明において提供された化合物は、例示的な化学構造として提示されるが、このことは、本発明の範囲を以下に列挙される化合物に制限するものではない。用語「ニトロオキシ」が使用される場合、それが意味するものは、硝酸エステル基−ＯＮＯ２である。用語「ヒドロキシル」または「ヒドロキシ」が使用される場合、それが意味するものは、基−ＯＨである。用語「逆エステル（ｒｅｖｅｒｓｅ  ｅｓｔｅｒ）」が使用される場合、それが意味するものは、基である。
【００３４】
より詳細には、本発明は、ｅｇｒ−１様のプロモーター配列に結合する転写因子を増加させるのに有用な化合物を提供し、この化合物は、以下の構造：
【００３５】
【化１１】
2007509035.tif 000002
を含むスチルベン化合物を含み、
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ１０の少なくとも１つはニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【００３６】
【化１２】
2007509035.tif 000003
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ必要に応じて１つ以上のＯＮＯ２を含み、そして
ここで、Ｘは、単結合、二重結合または三重結合であり得る、スチルベン化合物である。
【００３７】
より詳細には、本発明は、ｅｇｒ−１様のプロモーター配列に結合する、転写因子を増加させるのに有用な化合物を提供し、この化合物は、以下の構造：
【００３８】
【化１３】
2007509035.tif 000004
を含むフラボノイド化合物を含み、
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１３およびＲ１４は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ１０またはＲ１３またはＲ１４の少なくとも１つはニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【００３９】
【化１４】
2007509035.tif 000005
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ必要に応じて１つ以上のＯＮＯ２を含み；
ここで、Ｘは、Ｏ、ＣＲ１３またはＮＲ１３であり得；
Ｙは、ＣＯ［６員環構造を依然として維持しているケトン］、ＣＲ１４またはＮＲ１４であり得；そして
Ｚは、単結合または二重結合であり得る、フラボノイド化合物である。
【００４０】
より詳細には、本発明は、ｅｇｒ−１様のプロモーター配列に結合する、転写因子を増加させるのに有用な化合物を提供し、この化合物は、以下の構造：
【００４１】
【化１５】
2007509035.tif 000006
を含むイソフラボノイド化合物を含み、
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１３およびＲ１４は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ１０またはＲ１３またはＲ１４の少なくとも１つはニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【００４２】
【化１６】
2007509035.tif 000007
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ必要に応じて１つ以上のＯＮＯ２を含み；
Ｘは、Ｏ、ＣＲ１３またはＮＲ１３であり得；
Ｙは、ＣＯ［６員環構造を依然として維持しているケトン］、ＣＲ１４またはＮＲ１４であり得；そして
Ｚは、単結合または二重結合であり得る、イソフラボノイド化合物である。
【００４３】
より詳細には、本発明は、ｅｇｒ−１様のプロモーター配列に結合する、転写因子を増加させるのに有用な化合物を提供し、この化合物は、以下の構造：
【００４４】
【化１７】
2007509035.tif 000008
を含むカルコン化合物を含み、
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１３は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ１０またはＲ１３の少なくとも１つはニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【００４５】
【化１８】
2007509035.tif 000009
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含み；
ここで、Ｘは、単結合または二重結合であり得；
Ｙは、単結合または二重結合であり得；そして
Ｚは、ＣＯ［ケトン］、ＣＲ１３またはＮＲ１３であり得るが；
ただし、ＸおよびＹの両方が二重結合であるわけではなく、そしてＺがＣＯであればＹは二重結合ではない、カルコン化合物である。
【００４６】
より詳細には、本発明は、ｅｇｒ−１様のプロモーター配列に結合する、転写因子を増加させるのに有用な化合物を提供し、この化合物は、以下の構造：
【００４７】
【化１９】
2007509035.tif 000010
を含むポリフェノール化合物を含み、
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ１０の少なくとも１つはニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【００４８】
【化２０】
2007509035.tif 000011
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ必要に応じて１つ以上のＯＮＯ２を含み、そして
ここで、Ｘは、Ｃ、Ｓ、（ＣＯ）、ＳＯ、ＡＫＡケトン、（ＳＯ２）Ｎ、（ＣＯ）Ｃ、（ＣＯ）Ｎ、（ＣＯ）Ｏ、Ｃ−Ｎ［単結合］、Ｃ＝Ｎ［二重結合］、Ｃ−Ｏ、Ｎ−Ｏ、Ｎ−Ｎ［単結合］、またはＮ＝Ｎ［二重結合］であり得る、ポリフェノール化合物である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４９】
（発明の詳細な説明および最良の形態）
本発明の原則に従って、本発明の一局面は、ｅｇｒ−１プロモーターおよびｅｇｒ−１コンセンサス配列を含むプロモーターを増加させるための方法を提供し、そして、それによって、ＡＰＯ  ＡＩ発現を促進し；そして上記遺伝子の転写を増大するためのレスベラトロールの使用に関して詳細に、その工程および潜在的な機構の特徴付けをする。その潜在的な作用の理解は、増大した治療効果を有する誘導体およびアナログについての開発または探索の改良に結び付く。
【００５０】
心臓血管疾患（ＣＶＤ）が多くのパラメータと関連することは、疫学的研究から明白であるが、その最も重要なものの１つは、低レベルのＨＤＬ／ＡＰＯ  ＡＩである。ＡＰＯ  ＡＩ／ＨＤＬを増加させる方法論は、ＣＶＤの危険を減少させるはずである。ＡＰＯ  ＡＩ遺伝子活性のホルモン調節は、その遺伝子の発現を制御する方法であるが、不運にも付随する不利益は、増加した濃度のホルモン（例えば、その遺伝子の活性をアップレギュレーションする甲状腺ホルモン）を使用し得ないことである。正常値を上回るレベルの甲状腺ホルモンは、ヒトに有毒であり、それゆえ、ＡＰＯ  ＡＩ遺伝子活性を増大するために使用され得ない。従って、有毒な効果を付随しないＡＰＯ  ＡＩ遺伝子活性を増大し得る模倣物またはアナログの使用が望まれる。
【００５１】
本発明によって提供される化合物は、レスベラトロールのアナログ、ならびに患者に投与される場合に一酸化窒素を放出し得る結合した部分を有するレスベラトロールのアナログを含む。そのような化合物としては、限定されないが、レスベラトロールのアナログが挙げられ、ここで、一酸化窒素を与える部分は、有機硝酸（ｏｒｇａｎｉｃ  ｎｉｔｒａｔｅ）、アルコキシ硝酸（ａｌｋｏｘｙｎｉｔｒａｔｅ）、ジアゼニウムジオレート（ｄｉａｚｅｎｉｕｍｄｉｏｌａｔｅ）、チオニトロキシなどの化学構造のクラスに属する。
【００５２】
有機硝酸（「ニトロキシ」）基は、公知のニトロ化因子（例えば、濃縮硝酸、硝酸と硫酸との混合物、または硝酸／無水酢酸混合物）を使用して、化合物に添加され得る。アルコキシニトロキシ基は、例えば、米国特許第５，８６１，２４６号中に教示される方法を使用して、化合物に添加され得る。
【００５３】
ジアゼニウムドレート（ｄｉａｚｅｎｉｕｍｄｏｌａｔｅ）は、種々の方法（例えば、米国特許第４，９５４，５２６号、同第５，０３９，７０５号、同第５，１５５，１３７号、同第５，４０５，９１９号および同第６，２３２，３３６号（これらの全ては、完全に本明細書において参考として援用されている）中に教示される方法が挙げられる）によって合成され得る。
【００５４】
一酸化窒素を与える部分は、共有結合またはイオン結合を介して、レスベラトロールまたはその誘導体もしくはアナログに有利に結合され得る。好ましくは、一酸化窒素を与える部分またはその複数の部分は、１つ以上の共有結合によって結合される。レスベラトロールまたはそのアナログもしくはその誘導体に結合する一酸化窒素を与える部分は、レスベラトロール分子の任意の部分に結合され得る。一実施形態において、一酸化窒素を与える部分は、１つ以上のヒドロキシル基の代わりに置換される。好ましい実施形態において、その置換は、レスベラトロール（例えば、天然レスベラトロール）上に生じる。別の好ましい実施形態において、その置換は、ヒドロキシル基の代わりに有機硝酸基である。別の好ましい実施形態において、一酸化窒素を与える部分は、レスベラトロールまたはレスベラトロールアナログもしくはその誘導体の３つの全てのヒドロキシル基を置換している。
【００５５】
明瞭性のために、−１９０〜−１７０の領域が、「Ｑｅｓｔｒａｄｉｏｌ  ｄｅｃｒｅａｓｅｓ  ｒａｔ  ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ＡＩ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｖｉａ  ｐｒｏｍｏｔｅｒ  ｓｉｔｅ  Ｂ」Ｔａｙｌｏｒら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，２５（２）；２０７−１９（２０００）中で、「部位Ｓ」と称されることが注意される。本明細書において引用される−１９０〜−１７０の配列は、部位Ｓと相互交換可能であると考えられる。ラットおよびヒトのＡＰＯ  ＡＩプロモーター領域についての部位Ｓ配列は、この範囲にわたって１塩基だけ異なる。ラットＡＰＯ  ＡＩ−１９０〜−１７０の領域のプロモーターは、ヌクレオチド配列「ＴＧＣＡＧＣＣＣＣＣＧＣＡＧＣＴＴＣＣＴＧ」を含むと考えられる。部位Ｓに対して顕著な相同性を有するヒトＡＰＯ  ＡＩモチーフは、ヌクレオチド配列の「ＴＧＣＡＧＣＣＣＣＣＧＣＡＧＣＴＴＧＣＴＧ」を含むと考えられる。この２つの配列の違いは、１つのヌクレオチドにあり、それは、ラットにおいてＣであり、そしてヒトにおいてＧである。そのヒト配列は、Ｈｉｇｕｃｈｉら、１９８８，ＪＢＣ，２６３（３４）：１８５３０−６（ｇｅｎｂａｎｋ登録番号Ｍ２０６５６）において、そして、ラット配列については、Ｄａｉら、１９９０，ＥＪＢ，１９０（２）：３０５−１０（ｇｅｎｂａｎｋ登録番号Ｘ５４２１０）において記載されている。モチーフのこの違いは、横方向の変異（ｔｒａｎｓｖｅｒｓｅ  ｍｕｔａｔｉｏｎ）である。
【００５６】
いずれの特定の理論にも束縛されるのは望まないが、腸の系統および肝臓の系統の細胞におけるＡＰＯ  ＡＩ発現のレスベラトロールの活性は、部位Ｓ中に含まれるコンセンサス配列を通じて媒介される。部位Ｓ中に見出される配列「ＡＧＣＣＣＣＣＧＣ」は、「Ｅｇｒ−１応答要素」コンセンサス配列として記載されてきた。このモチーフは、ヒトＡＰＯ  ＡＩプロモーター（Ｋｉｌｂｏｕｍｅら、１９９５，ＪＢＣ，２７０（１２）：７００４−１０）の−１９６〜−１７４にわたっているヌクレオチド中に含まれている。ふたたび、いずれの特定の理論に束縛されることなく、部位Ｓ中に含まれると見出されたこのＡＧＣＣＣＣＣＧＣ要素は、レスベラトロールがその活性を媒介する配列であるが、これは他の潜在的に必要とされる要素を排除するものではない。レスベラトロールは、ＡＰＯ  ＡＩ発現を調節し、肝細胞および腸細胞における活性の誘導につながる。このことは、部分的にＡＧＣＣＣＣＣＧＣ要素からなる部位Ｓを介するものと考えられる。レスベラトロールは、腸の系統および肝臓の系統の細胞中のＡＧＣＣＣＣＣＧＣ要素を通じて活性を媒介する。
【００５７】
部位Ｓまたは任意の約８つの連続した塩基のＡＧＣＣＣＣＣＧＣ要素を含むヌクレオチド配列は、レポーター遺伝子の発現を調節するために、異種のプロモーターに作動可能に結合される場合、エンハンサー要素として作用すると考えられる。例えば、発現系（例えば、ＣａＣｏ２、ＨｅｐＧ２もしくは他の真核生物細胞、またはその細胞内抽出物もしくは核の抽出物）において、−１９０〜−１７０（または−１９６〜−１７４）の領域を含み、プロモーター（例えば、チミジンキナーゼ（ＴＫ）プロモーター）に作動可能に連結され、レポーター遺伝子（例えば、ルシフェラーゼ、ＣＡＴ、またはアポリポタンパク質Ａ−Ｉそれ自身）に作動可能に連結される、単離された核酸は、部位Ｓまたは「ＡＧＣＣＣＣＣＧＣ」要素のいずれかを介して媒介される生物学的活性を有する化合物と接触される場合に、レポーター遺伝子の発現の測定可能な調節を誘導する。そのような生物学的活性を有する化合物の例としては、レスベラトロール、レスベラトロール誘導体、レスベラトロール様のポリフェノール、および他のポリフェノール（天然のものまたは合成のもの）が挙げられる。次いで、そのような化合物は、ｅｇｒ−１および／またはｅｇｒ−１コンセンサス配列要素に影響するように作用し得、この要素は、次いでそのようなエンハンサー要素と関連する遺伝子の発現を調節し得る。結果的に、このアプローチは、次いで、以下にかなり詳しく記載されるように、少なくとも部分的にはｅｇｒ−１またはｅｇｒ−１プロモーター様の配列によって制御される遺伝子に関連する疾患または他の生理学的条件の処置を達成するように使用され得る。
【００５８】
そのような核酸を構築する工程、そのような核酸で真核生物細胞をトランスフェクトする工程、およびレポーター遺伝子発現についてアッセイする工程は、公知のプロトコル（例えば、Ｔｏｍ  ＭａｎｉａｔｉｓによるＭｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ；ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌおよびＳｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，第５版、Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ  Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら（編）中に記載されるもの）によって構築される。そのような単離された核酸、そのような単離された核酸で形質転換された細胞、そのような細胞またはその抽出物を使用してスクリーニングする方法、ならびに、そのようなスクリーニング方法によって同定された化学物は、本明細書において企図される。
【００５９】
これらの単離された（組換え型）核酸、この核酸でトランスフェクトされた真核生物細胞、その細胞またはその抽出物を使用するスクリーニング方法、ならびに、そのスクリーニング方法を利用して同定された化合物は、増殖性疾患（例えば、癌）の処置に有用である。本明細書において提供されるスクリーニング方法によって同定され得る化合物の例としては、生物学的に活性なレスベラトロール、レスベラトロール誘導体、レスベラトロール様のポリフェノール、および他のポリフェノール（天然のものまたは合成のもの）が挙げられる。
【００６０】
（ＥＧＲ−１およびＥＧＲ−１コンセンサス配列のエフェクターを使用した処置の方法）
以下の説明において、本発明者らは、語句「ｅｇｒ−１コンセンサス配列要素」を便利な一貫性のために使用するが、本発明者らもまたその語句がｅｇｒ−１部位を通じて働く媒介機構を包含し、そしてその効果がコンセンサス配列に限定される媒介機構だけを包含するわけではないことを意図していることが理解されるべきである。結果的に、ｅｇｒ−１活性の活性化または抑制は、ｅｇｒ−１コンセンサス配列要素を通じて媒介される作用だけではなく、ｅｇｒ−１またはそのコンセンサス配列以外のｅｇｒ−１に関連した要素に対して直接的に働く活性調節も包含することが理解されるべきである。
【００６１】
ｅｇｒ−１は、ｅｇｒ−１コンセンサス配列要素に結合する重要な転写因子であり、そして外傷またはストレスに誘導された事象からエフェクター遺伝子までの細胞内シグナル伝達の介在に関与し、そのエフェクター遺伝子の内のいくつかは、傷ついた組織の修復またはアポトーシスを補助し、そして他のエフェクター遺伝子は、誘導病変から起こる障害の病態生理および病原に関連する。ｅｇｒ−１コンセンサス配列要素を通じて媒介される事象の活性化を変更し得るストレス因子または外傷としては、剪断応力、紫外線誘導損傷、低酸素症、ラジカル酸素種、アンギオテンシンＩＩ、血小板由来の成長因子、酸化線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ−１）、ならびに、さらなる機械的および非機械的外傷およびストレスが挙げられる。
【００６２】
一旦活性化されると、ｅｇｒ−１は、多数の下流遺伝子（ＰＤＧＦ−Ａ、ＰＤＧＦ−Ｂ、ＦＧＦ−２、アポリポタンパク質ＡＩ、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、ＴＮＦ−α、組織因子、ウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベーター（ｕ−ＰＡ）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、細胞内接着分子−１（ＩＣＡＭ−１）、銅−亜鉛スーパーオキシドジスムターゼ遺伝子（ＳＯＤ  Ｉ）、ｐ５３、トロンボスポンジン、ＣＤ４４、および５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）、およびペルオキシソーム増殖因子活性化レセプター−Ｉ（ＰＰＡＲ−１）が挙げられる）の転写レベルを増加させるかまたは減少させるかのいずれかによって、変化させる。明らかに、これらの遺伝子の多くは、強制的な治療上の標的である（例えば、白血球の増殖に関連する障害についてはＭ−ＣＳＦ、コレステロールに関連する障害についてはアポリポタンパク質ＡＩ、ＰＰＡＲおよび５−ＬＯ、細胞の接着に関連する障害（癌を含む）についてはＩＣＡＭ−１、過多の酸化または過少の酸化に関連する障害についてはＳＯＤ  １、ならびに当業者に容易に理解できる他のもの）。
【００６３】
標的遺伝子のトランス活性化におけるｅｇｒ−１の関与は、標的遺伝子のプロモーター領域におけるｅｇｒ−１コンセンサス配列部位の数、位置、および相同性の程度によって、他のトランス活性化因子の隣接ＤＮＡ結合モチーフによって、他のアクチベーターおよび／またはレプレッサーとの直接の相互作用によって、ｅｇｒ−１活性化が起こる細胞型によって、ならびにｅｇｒ−１のリン酸化の状態によって影響される。それゆえ、ｅｇｒ−１発現の調節は、標的遺伝子の活性化かまたは抑制のいずれかを生じ得る。
【００６４】
（ＥＧＲ−１発現の調節を生じ得る化合物）
本発明によって提供される化合物としては、患者に投与されると一酸化窒素を放出する能力がある結合部分を含む、レスベラトロール、他のスチルベン、他のポリフェノール、およびフラボノイドのアナログが挙げられる。このような化合物としては、レスベラトロール、他のスチルベン、他のポリフェノール、およびフラボノイドのアナログが挙げられるがこれらに限定されず、ここで、一酸化窒素供与部分は、有機ニトラート、アルコキシニトラート、ジアゼニウムジオレート、チオニトロキシなどの化学構造のクラスに属する。
【００６５】
本発明の化合物を改変させる正確な機構の理解は、本発明の実施を必要としない。本明細書中に開示される機構は、非限定的であることを意図し、本発明をより良く記述するためにのみ提供される。理論に制限されることはないが、レスベラトロールは、その分子構造（芳香環上に位置する少なくとも１つのヒドロキシル基を有する、少なくとも１つの芳香環構造からなる反応性かつ必須のコア）に起因して、前述の効果を生じると考えられる。天然に存在しているレスベラトロール自体は、具体的には２つの芳香環から構成され、一方の環の３位および５位に位置する２つのヒドロキシルおよび他方の環の４’位に位置する１つのヒドロキシルを含み、そしてこれらの２つの芳香環が２つの炭素原子（それらの原子間に二重結合を有する）によって結合される。少なくとも１つの芳香族環構造を含み、この環に位置する少なくとも１つのヒドロキシル基を有する化合物である、この一般クラスの他の化合物は、レスベラトロールについて記載されたと同じ能力を有し、そして同じ結果を生じると考えられる。
【００６６】
従って、スチルベン（２つの炭素原子によって連結される２つの芳香族環を含む）、他のポリフェノール（窒素、炭素、酸素および硫黄からなる群より独立して選択され、ケトン酸素のような側鎖に独立して置換されていても置換されていなくてもよい、１つ、２つ、または３つの原子によって連結された、２つ以上の、好ましくは２つの芳香族環を含むポリフェノールのような）、ならびにフラボノイド（例えば限定されないが、天然に存在するフラボノイド、例えば限定されないが、ナリンゲニン、ケルセチン、ピセアタンノール、ブテイン、フィセチン、イソリキリチゲニン、およびヘスペリチン）は全て、レスベラトロールについて記載された性質と類似の性質を有する化合物である。結果として、任意のこれらの化合物は、疾患、障害または状態（特に、限定されないが、コレステロール、心血管疾患、高血圧、酸化的損傷、異脂肪血症、アポリポタンパク質Ａ１もしくはアポＢ調節に関連する疾患、障害または状態）の予防または処置に利用される場合、あるいはＨＭＧ  ＣｏＡレダクターゼを阻害するか、ＰＰＡＲ活性を高めるか、ＡＣＡＴを阻害するか、ＡＢＣＡ−１活性を高めるか、ＨＤＬを増加させるか、またはＬＤＬもしくはトリグリセリドを減少させるような、コレステロール代謝の他の面を改変または調節する際に、レスベラトロールと機能的に交換可能であるとみなされ得ることが見出されている。一酸化窒素供与部分が結合されていないフラボノイドは、以前に、強力な血清コレステロール低下活性を有するとして、例えば、米国特許第５，８７７，２０８号、同第６，４５５，５７７号、同第５，７６３，４１４号、同第５，７９２，４６１号、同第６，１６５，９８４号、および同第６，１３３，２４１号に教示されている。
【００６７】
同様に、このクラスの任意のスチルベン、ポリフェノール、イソフラボノイド、カルコンおよびフラボノイドは、部位Ｓからの（ＡＧＣＣＣＣＣＧＣエレメントからの）転写を調節するのに利用される場合、あるいは白血球接着もしくは血小板凝集を阻害するか、またはＣＯＸ−１を阻害するのに利用される場合、レスベラトロールと機能的に交換可能であるとみなされ得る。このことは、これらの化合物の全てが、これら化合物の各々の機能または能力について、あるいはインビボでの毒性または効力について、あるいはバイオアベイラビリティについての活性のレベルの点で同一であることを意味するわけではない。これらの化合物は、当業者によって容易に実施され且つ過度の実験を必要としない簡単な試験を通じて、一部の化合物が、他の化合物と比較して改善された能力または機能性を提供し、従って他の化合物よりも治療薬として好ましいことを示す。
【００６８】
同様に、本発明によって改良された基本化合物中に見出されるようなフェノール性ヒドロキシル基は、排泄を促進するグルコロン酸抱合反応および硫酸化反応を受けやすいことが知られている。フェノール性ヒドロキシル基を別の化学基（例えば、硝酸エステル（有機ニトラートまたはＯＮＯ２とも呼ばれる）基、アルコキシニトロオキシ、あるいは逆エステルニトロオキシ（ニトロオキシ基（ｎｉｔｒｏｏｘｙ  ｇｒｏｕｐ）はまたニトロオキシ基（ｎｉｔｒｏ  ｏｘｙ  ｇｒｏｕｐ）とも呼ばれる））でブロックすることによる、これらの反応に対する保護は、体内における分子の半減期をさらに延長し、排泄を延期する。
【００６９】
一例として、３つの推定上重要でありかつ治療的に活性なヒドロキシル基を含むレスベラトロールは、硝酸エステル（ニトラート、ニトロオキシ基、またはＯＮＯ２としても公知であり、時折ニトロキシと呼ばれるが、ＮＯ２と混同すべきではない）アルコキシニトロオキシ基、あるいは体内で経時的にヒドロキシル基に置換されて活性化合物レスベラトロールを再構成する逆エステルニトロオキシ基で、これらのヒドロキシル基を置換することによって保護され得る。一酸化窒素供与基は一定期間にわたって１つずつヒドロキシル基に置換され、１つまたは２つの一酸化窒素供与基を含むレスベラトロール分子は依然として部分的に活性であるため、レスベラトロール活性の体内での実効半減期は増大する。このようなストラテジーにより、ニトラート形態のレスベラトロールは、親のヒドロキシル化形態のレスベラトロールと比較して、より低い用量の使用がさらに可能になり、その結果、患者においてより低い副作用を生じる。明らかに、このようなアプローチはまた、本発明において企図される他のスチルベン、ポリフェノール、イソフラボノイド、カルコンおよびフラボノイドにも有効である。なぜなら、これらはまた、分子の活性部位の不可欠な部分を形成し得る１つ以上のヒドロキシル基を含むことが企図されるためである。
【００７０】
本発明は、上記スチルベン、ポリフェノール、イソフラボノイド、カルコンおよびフラボノイド以外の化合物のニトロオキシ誘導体の合成、組成および処置方法を提供し、ニトロオキシ誘導体であり得るこの化合物が合成され、そして、芳香族環または芳香族複素環、１つ以上のヒドロキシル基を含み、血清コレステロールレベルを調節することが知られている。芳香族環または芳香族複素環の１つ以上のヒドロキシル基を含み、血清コレステロールレベルを調節することが知られている化合物のクラスの一例としては、スタチンとしても知られるＨＭＧ  ＣｏＡレダクターゼインヒビターが挙げられる。そのニトロオキシ誘導体が本発明において提供される、市販のスタチンとしては、アトルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチン、セリバスタチン、およびロスバスタチンが挙げられる。芳香族環または芳香族複素環の１つ以上のヒドロキシル基を含み、血清コレステロールレベルを調節することが知られているという規定内にある２つの他の化合物は、エゼチミブおよびナイアシンである。従って、エゼチミブおよびナイアシンのニトロオキシ誘導体はまた、本発明において提供される。
【００７１】
（スチルベン、ポリフェノール、フラボノイド、スタチンおよびエゼチミブの一酸化窒素供与誘導体の合成）
有機ニトラート（ニトロオキシ、硝酸エステル、ＯＮＯ２とも呼ばれ、時折「ニトロキシ」と呼ばれるが、ＮＯ２と混同すべきではない）基は、Ｈａｋｉｍｅｌａｈｉの方法（ここで、ニトロオキシ基は、親分子上に存在するヒドロキシル基と置換される）のような公知の方法を用いて化合物に付加され得る（Ｈａｋｉｍｅｌａｈｉら、１９８４．Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ．６７：９０６〜９１５）。
【００７２】
アルコキシニトロキシ基は、例えば、米国特許第５，８６１，４２６号に教示される方法を用いて、化合物に付加され得る。ジアゼニウムジオレートは、例えば、米国特許第４，９５４，５２６号、同第５，０３９，７０５号、同第５，１５５，１３７号、同第５，４０５，９１９号および同第６，２３２，３３６号（これらの全てが、本明細書中に参考として完全に援用される）に教示される方法を含む種々の方法によって、合成され得る。
【００７３】
一酸化窒素供与部分は、スチルベン（例えば、レスベラトロール）、ポリフェノール、またはフラボノイド（例えば、ナリンゲニン）、または本発明中で記載され、提供されるような他の化合物（例えば、スタチンのクラスのメンバー）、あるいは共有結合またはイオン結合を介したそれらの誘導体またはアナログに有利に結合され得る。好ましくは、１つまたは複数の一酸化窒素供与部分は、１つ以上の共有結合によって結合される。一酸化窒素供与部分は、この分子の任意の部分に有利に結合され得る。１つの実施形態において、１つ以上のヒドロキシル基の代わりに一酸化窒素供与部分に置換する。好ましい実施形態において、これらの置換は、ヒドロキシル基の代わりに有機ニトラート基への置換である。別の好ましい実施形態において、これらの置換は、ヒドロキシル基の代わりにエステルまたは逆エステルに結合される有機ニトラート基への置換である。別の好ましい実施形態において、一酸化窒素供与部分は、スチルベン（例えば、レスベラトロール）、フェノール、またはフラボノイド（例えば、ナリンゲニン）、または本発明中で記載され、提供されるような他の化合物（例えば、スタチンのクラスの任意のメンバー）のヒドロキシル基の全て、あるいはそれらのアナログまたは誘導体のヒドロキシル基を置換した。
【００７４】
本発明の化合物の全てについて、フッ化物イオン、塩化物イオン、臭化物イオン、ＣＦ３基、ＣＣｌ３基、ＣＢｒ３、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐した１〜１８個の炭素原子のアルキル鎖、または必要に応じて置換され、必要に応じて分岐した１〜１８個の炭素原子のアルコキシ鎖によるヒドロキシル基の置換もまた企図され、提供される。なぜなら、親化合物のこのような変更は一般的であり、作用機構を変更することなく薬物の薬効を改善することが知られ、かつ当業者によって容易に達成されるためである。
【００７５】
本発明の化合物の全てについて、これらの化合物のアセチル化誘導体もまた企図され、提供される。なぜなら、親化合物のこのような変更は一般的であり、作用機構を変更することなく薬物の薬効を改善することが知られ、かつ当業者によって容易に達成されるためである。アセチル化誘導体としては、エステル、逆エステル、一酸化窒素供与部分（ニトロオキシ基が挙げられるが、これに限定されない）が結合したエステル、および一酸化窒素供与部分（ニトロオキシ基が挙げられるが、これに限定されない）が結合した逆エステルが挙げられる。
【００７６】
本発明の化合物の全てについて、これらの化合物のリン酸化誘導体もまた企図され、提供される。なぜなら、親化合物のこのような変更は一般的であり、作用機構を変更することなく薬物の薬効を改善することが知られ、かつ当業者によって容易に達成されるためである。
【００７７】
本発明によって企図される化合物のグルコロン酸抱合誘導体もまた、本明細書において企図される。なぜなら、グルコロン酸抱合は、スチルベン、他のポリフェノールおよびフラボノイドの代謝の一部として体内で天然に生じるプロセスであるためである。一旦患者に提供されると、本発明の化合物の多くは体内で修飾され、従って、グルコロン酸抱合形態で体内に存在する。従って、投与前の本発明の化合物へのグルコロン酸の抱合は、インビボ研究によって決定されるように、これらの化合物の機能または治療的有用性を妨げない。結果として、付加的な糖部分が結合した本発明の化合物は、機能的に親化合物に匹敵すると考えられ、従って本発明において提供される。本発明によって企図される任意のスチルベン、ポリフェノールまたはフラボノイド誘導体化合物のグルコロン酸抱合は、例えば、Ｏｔａｋｅの方法（Ｏｔａｋｅら、Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ  Ｄｉｓｐ．３０：５７６（２００２））におけるようにヒト肝ミクロソームを用いて達成され得る。
【００７８】
同様に、本発明によって企図される化合物の硫酸化誘導体もまた、本明細書において企図される。なぜなら、硫酸化は、スチルベン、他のポリフェノールおよびフラボノイドの代謝の一部として体内で天然に生じるプロセスであるためである。一旦患者に提供されると、本発明の化合物のいくつかは体内で修飾され、従って、硫酸化形態で体内に存在する。従って、硫酸化は、インビボ研究によって決定されるように、これらの化合物の機能または治療的有用性を妨げない。結果として、硫酸化反応を受けた本発明の化合物は、機能的に親化合物に匹敵すると考えられ、従って本発明において提供される。本発明によって企図される任意のスチルベン、ポリフェノールまたはフラボノイド誘導体化合物の硫酸化は、例えば、Ｖａｒｉｎのイオンエア抽出法（Ｖａｒｉｎら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１６１：１７６（１９８７））を用いて達成され得る。
【００７９】
本明細書中で記載した化合物の塩（薬学的処方物に好ましい塩を含む）もまた、本発明において提供される。
【００８０】
（本発明によって企図される化合物）
本発明において提供される化合物を、明らかにする目的で、例示的な化学構造で示すが、これは本発明の範囲を下記に列挙した化合物に限定するためではない。用語「ニトロオキシ」が用いられる場合、その意味するものは、硝酸エステル基−ＯＮＯ２である。用語「ヒドロキシル」または「ヒドロキシ」が用いられる場合、その意味するものは、−ＯＨ基である。用語「逆エステル」が用いられる場合、その意味するものは、以下の基：
【００８１】
【化２１】
2007509035.tif 000012
であり、ここで、Ｏ−結合はフラボノイド、スチルベンまたはポリフェノール構造の親化合物への結合であり、そしてＲはＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、そしてＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得る。
【００８２】
用語「逆エステルニトロオキシ」が用いられる場合、その意味するものは、以下の基：
【００８３】
【化２２】
2007509035.tif 000013
であり、ここで、Ｏ−結合はフラボノイド、スチルベンまたはポリフェノール構造の親化合物への結合であり、そして、Ｒは、Ｃ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして１つ以上のＯＮＯ２を含む。
【００８４】
本発明は、以下の一般的なスチルベン構造：
【００８５】
【化２３】
2007509035.tif 000014
を有する、ｅｇｒ−１様プロモーター配列に結合する転写因子を増加させるために有用である化合物を提供し、
この構造は、さらに以下の構造に細分され得る：
【００８６】
【化２４】
2007509035.tif 000015
【００８７】
【化２５】
2007509035.tif 000016
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ１０の少なくとも１つはニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【００８８】
【化２６】
2007509035.tif 000017
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ必要に応じて１つ以上のＯＮＯ２を含む。
【００８９】
本発明はまた、以下の一般構造の化合物も提供する：
【００９０】
【化２７】
2007509035.tif 000018
【００９１】
【化２８】
2007509035.tif 000019
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ１０の少なくとも１つはニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【００９２】
【化２９】
2007509035.tif 000020
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含み、
ここで、ＸおよびＹは、それぞれ独立して、Ｃ、Ｎ、Ｏであり得、ただし、ＸまたはＹのいずれかがＣである場合、他方はＣではない。
【００９３】
本発明はまた、ｅｇｒ−１様プロモーター配列に結合する転写因子を増加させるために有用である以下の一般構造の化合物も提供する：
【００９４】
【化３０】
2007509035.tif 000021
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ１０の少なくとも１つはニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【００９５】
【化３１】
2007509035.tif 000022
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ必要に応じて１つ以上のＯＮＯ２を含む。
【００９６】
本発明はまた、以下の一般的なポリフェノール構造：
【００９７】
【化３２】
2007509035.tif 000023
を有する、ｅｇｒ−１様プロモーター配列に結合する転写因子を増加させるために有用である化合物も提供し、
この構造は、さらに以下の構造に細分され得る：
【００９８】
【化３３】
2007509035.tif 000024
ここで、
ＸはＣまたはＳであり、
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ１０の少なくとも１つはニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【００９９】
【化３４】
2007509035.tif 000025
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ必要に応じて１つ以上のＯＮＯ２を含む。
【０１００】
本発明はまた、以下の一般的なフラボノイド構造：
【０１０１】
【化３５】
2007509035.tif 000026
を有する、ｅｇｒ−１様プロモーター配列に結合する転写因子を増加させるために有用である化合物も提供し、
この構造は、さらに以下の構造に細分され得る：
【０１０２】
【化３６】
2007509035.tif 000027
【０１０３】
【化３７】
2007509035.tif 000028
【０１０４】
【化３８】
2007509035.tif 000029
。
【０１０５】
本発明はまた、以下の一般的なイソフラボノイド構造：
【０１０６】
【化３９】
2007509035.tif 000030
を有する、ｅｇｒ−１様プロモーター配列に結合する転写因子を増加させるために有用である化合物も提供し、
この構造は、さらに以下の構造に細分され得る：
【０１０７】
【化４０】
2007509035.tif 000031
【０１０８】
【化４１】
2007509035.tif 000032
【０１０９】
【化４２】
2007509035.tif 000033
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１５、およびＲ１６は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１３、Ｒ１４、ＯＲ１３、ＯＲ１４、ＯＣＯＲ１３、ＯＣＯＲ１４、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ１２またはＲ１５またはＲ１６の少なくとも１つは、ニトロオキシ、Ｒ１４、ＯＲ１４、またはＯＣＯＲ１４であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【０１１０】
【化４３】
2007509035.tif 000034
を意味し、
そしてＲはＲ１３またはＲ１４であり、
ここで、Ｒ１３はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１４はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含み、
ここで、Ｘは、Ｏ、ＣＲ１５またはＮＲ１５であり得；
Ｙは、ＣＯ［６員環構造を依然として維持しているケトン］、ＣＲ１６またはＮＲ１６であり得；そして
Ｚは、単結合または二重結合であり得る。
【０１１１】
本発明はまた、以下の一般的なカルコン構造：
【０１１２】
【化４４】
2007509035.tif 000035
を有する、ｅｇｒ−１様プロモーター配列に結合する転写因子を増加させるために有用である化合物も提供し、
このうちいくつかの構造は、以下の構造によって表される：
【０１１３】
【化４５】
2007509035.tif 000036
【０１１４】
【化４６】
2007509035.tif 000037
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、およびＲ１１は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１３、Ｒ１２、ＯＲ１３、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１３、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ１１の少なくとも１つは、ニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【０１１５】
【化４７】
2007509035.tif 000038
を意味し、
そしてＲはＲ１２またはＲ１３であり、
ここで、Ｒ１３はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含み；そして
ここで、
Ｘは、単結合または二重結合であり得；
Ｙは、単結合または二重結合であり得；そして
Ｚは、ＣＯ［ケトン］、ＣＲ１１またはＮＲ１１であり得る。
【０１１６】
本発明はまた、以下の一般式の化合物も提供する：
【０１１７】
【化４８】
2007509035.tif 000039
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ４の少なくとも１つは、ニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【０１１８】
【化４９】
2007509035.tif 000040
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ必要に応じて１つ以上のＯＮＯ２を含む。
【０１１９】
本発明はまた、ｅｇｒ−１様プロモーター配列に結合する転写因子を増加させるために有用である以下の化合物も提供する：
【０１２０】
【化５０】
2007509035.tif 000041
ここで、
Ｒ１は、ニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【０１２１】
【化５１】
2007509035.tif 000042
を意味し、
そしてＲはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ必要に応じて１つ以上のＯＮＯ２を含む。
【０１２２】
本発明はまた、以下の化合物も提供する：
【０１２３】
【化５２】
2007509035.tif 000043
ここで、
Ｒ１は、ニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【０１２４】
【化５３】
2007509035.tif 000044
を意味し、
そしてＲはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ必要に応じて１つ以上のＯＮＯ２を含む。
【０１２５】
本発明はまた、以下の一般式の化合物も提供する：
【０１２６】
【化５４】
2007509035.tif 000045
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ３の少なくとも１つは、ニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【０１２７】
【化５５】
2007509035.tif 000046
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ必要に応じて１つ以上のＯＮＯ２を含む。
【０１２８】
本発明はまた、以下の一般式の化合物も提供する：
【０１２９】
【化５６】
2007509035.tif 000047
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ３の少なくとも１つは、ニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【０１３０】
【化５７】
2007509035.tif 000048
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含む。
【０１３１】
本発明はまた、ｅｇｒ−１様プロモーター配列に結合する転写因子を増加させるために有用である以下の一般式の化合物も提供する：
【０１３２】
【化５８】
2007509035.tif 000049
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ３の少なくとも１つは、ニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【０１３３】
【化５９】
2007509035.tif 000050
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含む。
【０１３４】
本発明はまた、ｅｇｒ−１様プロモーター配列に結合する転写因子を増加させるために有用である以下の一般式の化合物も提供する：
【０１３５】
【化６０】
2007509035.tif 000051
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ３の少なくとも１つは、ニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【０１３６】
【化６１】
2007509035.tif 000052
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ必要に応じて１つ以上のＯＮＯ２を含む。
【０１３７】
本発明はまた、ｅｇｒ−１様プロモーター配列に結合する転写因子を増加させるために有用である以下の一般式の化合物も提供する：
【０１３８】
【化６２】
2007509035.tif 000053
ここで、
Ｒ１、Ｒ２は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ２の少なくとも１つは、ニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【０１３９】
【化６３】
2007509035.tif 000054
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ必要に応じて１つ以上のＯＮＯ２を含む。
【０１４０】
本発明はまた、ｅｇｒ−１様プロモーター配列に結合する転写因子を増加させるために有用である以下の化合物も提供する：
【０１４１】
【化６４】
2007509035.tif 000055
ここで、
Ｒ１は、ニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【０１４２】
【化６５】
2007509035.tif 000056
を意味し、
そしてＲはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ必要に応じて１つ以上のＯＮＯ２を含む。
【０１４３】
（スチルベン、ポリフェノールおよびフラボノイドのＮＯ供与誘導体の合成方法）
スチルベン（例えば、レスベラトロール）、ポリフェノール、またはフラボノイド（例えば、ナリンゲニン）、あるいは他の抗酸化剤（血清コレステロールを低下させるかまたは逆コレステロール輸送を活性化するかまたはＨＤＬを増加させる化合物）の一酸化窒素供与アナログまたは誘導体を合成するための多数の方法が存在することは、当業者に容易に明らかである。公知の方法が存在するにもかかわらず、このような化合物は、これまでに記載または合成されていない。好ましくは、このような化合物は、スチルベン（例えば、レスベラトロール）のアナログまたは誘導体、ポリフェノールのアナログまたは誘導体、またはフラボノイド（例えば、ナリンゲニン）のアナログまたは誘導体、あるいは他の抗酸化剤のアナログまたは誘導体（一酸化窒素供与部分に結合された、血清コレステロールを低下させるかまたは逆コレステロール輸送を活性化するかまたはＨＤＬを増加させる化合物）である。最も好ましくは、このような化合物は、スチルベン（例えば、レスベラトロール）、ポリフェノール、またはフラボノイド（例えば、ナリンゲニン）のアナログまたは誘導体、あるいは他の抗酸化剤のアナログまたは誘導体（１つ以上のＯＮＯ２基（硝酸エステル、有機ニトラート、またはニトロオキシ基とも呼ばれる）で親化合物のヒドロキシル基を置換した、血清コレステロールを低下させるかまたは逆コレステロール輸送を活性化するかまたはＨＤＬを増加させる化合物）である。
【０１４４】
本発明によって提供される化合物の例は、天然に存在しているレスベラトロールに存在する３つのヒドロキシル基の代わりに有機ニトラート基に置換されたレスベラトロールである。この化合物は、３，４’，５トリニトロオキシトランススチルベン、または三硝酸レスベラトロール、またはＩＵＰＡＣ命名法を使用して、１，３−ビス−ニトロオキシ−５−［２−（４−ニトロオキシ−フェニル）−ビニル）−ベンゼンと命名される。本発明によって提供されるこのような化合物の別の例は、天然に存在しているナリンゲニンに存在する３つのヒドロキシル基の代わりに有機ニトラート基に置換されたナリンゲニンである。この化合物は、三硝酸ナリンゲニン、またはＩＵＰＡＣ命名法を使用して、５，７−ビス−ニトロオキシ−２−（４−ニトロオキシ−フェニル）−クロマン−４−オンと命名される。本発明によって提供される化合物の別の例は、ナリンゲニンの逆エステルニトロオキシアナログであり、３つのヒドロキシルが置換されたものは、５−ニトロオキシ−ペンタン酸４−［５，７−ビス−（５−ニトロオキシ−ペンタノイルオキシ）−４−オキソ−クロマン−２−イル］−フェニルエステルである。本明細書中に明記されている化合物に限定されるわけではないが、さらに多くの例が、本発明の実施例の項に提供される。
【０１４５】
この反応で用いられるトランス−レスベラトロール原料物質は、Ｂｉｏ−Ｓｔａｔ  Ｌｉｍｉｔｅｄ（Ｓｔｏｃｋｐｏｒｔ，Ｕ．Ｋ．）またはＳｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．，ＵＳＡ）から商業的に入手可能であり、Ｇｏｌｄｂｅｒｇら（１９９５）Ａｍ．Ｊ．Ｅｎｏｌ．Ｖｉｔｉｃ．４６（２）：１５９〜１６５の手順を用いてワインから単離される。あるいは、トランス−レスベラトロールは、米国特許第６，０４８，９０３号に教示されるようにＴｏｐｐｏの方法に従って、またはＭｏｒｅｎｏ−ＭａｎａｓおよびＰｌｅｉｘａｔｓの方法からＷａｔｅｒｈｏｕｓｅによって改変されたＷｉｔｔｉｇ反応によって適切に置換されたフェノールから合成され得る。
【０１４６】
合成反応の材料として用いられるナリンゲニンは、多数の市販の供給源から容易に入手可能であるか、あるいは、過度の実験を必要とせずに柑橘類の絞り汁のような天然源から周知の方法を使用して単離可能な、天然に存在する化合物である。
【０１４７】
（投与）
上記の状態の処置のために、これらの化合物がそれ自体で用いられ得るが、より好ましくは、受容可能なキャリアまたは賦形剤とともに薬学的に受容可能な処方物の形態で存在する。これらの処方物としては、経口、直腸、局所、口腔内および非経口（例えば、皮下、筋肉内、皮内、または静脈内）投与に適した処方物が挙げられるが、任意の所定の場合における最適な投与形態は、処置される状態の程度および重症度ならびに用いられる特定の化合物の性質に依存する。
【０１４８】
経口投与に適した処方物は、カプセル、カシェ剤、トローチ剤、または錠剤のような不連続単位（各々が、所定量の化合物を、粉末または顆粒として；水性または非水性液体中の溶液または懸濁液として；あるいは水中油型または油中水型エマルジョンとして含む）で提示され得る。示されるように、このような処方物は、活性化合物とキャリアまたは賦形剤（１つ以上の副成分を構成し得る）を結合させる工程を包含する、任意の適切な製薬方法によって調製され得る。このキャリアは、処方物の他の成分と相溶性があるという意味で受容可能でなければならず、かつレシピエントにとって有毒であってはならない。このキャリアは、固体であっても液体であっても、または両方であってもよく、好ましくは、０．０５重量％〜９５重量％の活性化合物を含み得る単位用量処方物（例えば、錠剤）として、本化合物とともに処方される。他の化合物を含む、他の薬理学的に活性な物質もまた示され得る。本発明の処方物は、これらの化合物を混合する工程から本質的に成る任意の周知の製薬技術によって調製され得る。
【０１４９】
固体組成物について、従来の無毒性固体キャリアとしては、例えば、薬学的等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルク、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウムなどが挙げられる。薬理学的に投与可能な液体組成物は、例えば、本明細書中に記載されるような活性化合物および任意の薬学的アジュバントを、賦形剤（例えば、水、生理食塩水、水性デキストロース、グリセロール、エタノールなど）中に溶解、分散などし、それによって溶液または懸濁液を形成することによって調製され得る。一般に、適切な処方物は、この活性化合物と液体もしくは微細固体キャリアまたはその両方とを均一にかつ完全に混合し、次いで、必要な場合、その生成物を成形（ｓｈａｐｅ）することによって、有利に調製され得る。例えば、錠剤は、本化合物の粉末または顆粒を、必要に応じて１つ以上の副成分とともに圧縮または成形（ｍｏｌｄ）することによって、調製され得る。圧縮された錠剤は、適切な機械中で易流動性形態の化合物（例えば、必要に応じて結合剤、潤滑剤、不活性な希釈剤および／または界面活性剤／分散剤と混合された粉末または顆粒）を圧縮することによって調製され得る。成形錠剤は、不活性な液体希釈剤で湿潤した粉末状化合物を適切な機械中で成形することによって作製され得る。
【０１５０】
口腔内（舌下）投与に適した処方物としては、化合物を香味基剤（通常、スクロースおよびアカシアまたはトラガカント）中に含むトローチ剤、ならびに本化合物を不活性基剤（例えば、ゼラチンおよびグリセリンまたはスクロースおよびアカシア）中に含む香錠が挙げられる。
【０１５１】
非経口投与に適した本発明の処方物は、本化合物の滅菌水性調製物を含み、これらの化合物は、対象とするレシピエントの血液とほぼ等張である。これらの調製物は、静脈内に投与されるが、投与はまた、皮下、筋肉内、または皮内注射によっても達成され得る。このような調製物は、本化合物を水と混合し、得られた溶液を滅菌しそして血液と等張にすることによって、便利に調製され得る。本発明による注射用組成物は、一般に０．１〜５％ｗ／ｗの活性化合物を含む。
【０１５２】
直腸投与に適した処方物は、単位用量坐薬として提供される。これらは、本化合物を１つ以上の従来の固体キャリア（例えば、カカオバター）と混合し、次いで得られた混合物を成形することによって、調製され得る。
【０１５３】
皮膚への局所投与に適した処方物は、好ましくは軟膏、クリーム剤、ローション、ペースト、ゲル、スプレー、エアロゾル、または油の形態をとる。用いられ得るキャリアおよび賦形剤としては、ワセリン、ラノリン、ポリエチレングリコール、アルコール、およびそれらの２つ以上の組み合わせが挙げられる。この活性化合物は、一般に、組成物の０．１〜１５％ｗ／ｗの濃度（例えば、０．５〜２％）で存在する。
【０１５４】
投与される活性化合物の量は、当然ながら、処置される被験体、被験体の体重、投与様式および処方する医師の判断に依存する。本発明の方法において、投与スケジュールは、一般に、１μｇ〜１０００ｍｇの認知された投薬量でのカプセル化化合物の毎日の投与、または１日に２回の投与を含む。カプセル化によって作用部位への接近が容易になり、かつ活性成分の同時投与が可能になって、理論上は相乗効果が生じる。標準投薬レジメンに従って、医師は、最適投薬量を容易に決定し、且つこのような投薬を達成するために投与を容易に変更し得る。
【実施例】
【０１５５】
以下の実施例は、本発明の理解を助けるために示されるものであり、本明細書中に記載され且つ特許請求される発明を具体的に限定すると解釈されるべきではない。処方の変更または実験計画のわずかな変更を含む、現在公知であるかまたは後に開発される等価の化合物の置き換えを含む、当業者の範囲内である本発明のこのような変法は、本明細書中に組み込まれる発明の範囲内にあるとみなされるべきである。
【０１５６】
本明細書中で提供される全ての実施例について、他に断りのない限り、用語「本化合物（ｔｈｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）」または「本化合物（ｔｈｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」とは、本発明において提供される任意の化合物をいう。実施例の範囲を限定することく、代表的な化合物としては、３，４’，５トリニトロキシトランススチルベン、３，４’，５トリ（ニトロキシ）エトキシトランススチルベン、およびトランスレスベラトロールのジアゼニウムジオレート誘導体が挙げられ、ここで、２つのフェニル環に結合する１つまたは両方の炭素原子は、結合したジアゼニウムジオレート基を有する窒素原子と置換される。
【０１５７】
本明細書において列挙された全ての実施例を、以下のプロセスおよび方法論を使用して実行し、そして他に記述される場合を除いて、以下に言及する。
【０１５８】
（細胞培養）
ヒト胚芽腫細胞（ＨｅｐＧ２）および腸の細胞（ＣａＣｏ２）を、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から得た。細胞を、ＨｅｐＧ２細胞については、２ｍＭのグルタミン、ＭＥＭビタミン溶液および１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、ならびに、ＣａＣｏ２細胞については、２０％のＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）を補充したＭｉｎｉｍｕｍ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＭＥＭ）（Ｇｉｂｃｏ）中で増殖させた。全ての細胞を、９５％  空気／５％  ＣＯ２雰囲気中でインキュベートした。
【０１５９】
（プラスミド）
この研究のために産生したプラスミドは、ベクター（ｐＧＬ３（Ｐｒｏｍｅｇａ））中にホタルルシフェラーゼ遺伝子に融合された−４７４、−３７５、−３２５、−２３５、−１９０から−１７０までのヒトＡＰＯ  ＡＩプロモーターを含んでいた。このプロモーターＤＮＡの挿入を、ヌクレオチド配列分析によって立証した。プラスミドＤＮＡを、所望のクローンを含有する細菌から調製し、そして製造元の使用説明書に従ってＱｉａｇｅｎキットを使用して単離し、そしてトランスフェクション研究においてまたは安定的な細胞株を作製するために使用した。
【０１６０】
（細胞処理）
上記ＣａＣｏ２またはＨｅｐＧ２細胞を、規定の培地中で増殖し、そしてプロモーターアッセイ研究のために、目的のレポーター構築物を用いてトランスフェクトした。次いで、細胞を、８〜１２時間、血清のない培地に静置し、その後、図面の説明文に記載される最終濃度の因子を作製するために、レスベラトロールをその培地に添加した。この細胞を、種々の期間その因子に暴露し、回収し、次いで、目的のパラメータ（ＡＰＯ  ＡＩタンパク質またはプロモーター活性のいずれか）をアッセイした。
【０１６１】
（一過性／永久的なトラスフェクション）
一過性のトランスフェクトのために、細胞を、６つのウェルプレートに播種し、そして３０〜４０％がコンフルーエントになるまで増殖させた。次いで、この細胞を、５μｌのＳｕｐｅｒｆｅｃｔ（Ｑｉａｇｅｎ）、および１００μｌの血清中の１マイクログラムまでの目的のプラスミド、および抗生物質を含まないＭＥＭを使用してトランスフェクトした。この溶液を、１０分間室温にてインキュベートした。次いで、培地を、トランスフェクトされる細胞から除去し、そして１ｍｌの培地を、細胞に付与する前に、ＤＮＡ−Ｓｕｐｅｒｆｅｃｔ混合物に添加した。次いで、この細胞を、２時間、３７℃／５％ＣＯ２にてＤＮＡに暴露し、そしてＤＮＡを含有する培地を除去し、そして血清を含まないＭＥＭ培地で置換し、回収前に一晩増殖させた。
【０１６２】
ＨｅｐＧ２細胞をまた、同時トランスフェクション方法を使用して、４７４−ルシフェラーゼで永久的にトランスフェクトした。Ｈｅｐ  Ｇ２細胞を、ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）および１０％のウシ胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ）中で増殖し、次いで、ネオマイシン耐性を保有する別のプラスミドとともに４７４−Ｌｕｃを用いて同時トランスフェクトした。次いで、１ｍｌあたり４００〜６００μｇのネオマイシンを、上記培地に添加し、そしてネオマイシンを用いた処理から生存した細胞を、Ｌｕｃ活性についてアッセイし、その細胞が、存在する場合、永久的にトランスフェクトされたことを示す。
【０１６３】
（ルシフェラーゼアッセイおよびβガラクトシダーゼアッセイについての細胞溶解物の調製）
細胞によるＤＮＡ取り込みの効率をモニタリングするために、細胞を、０．５μｇのラウス肉腫ウイルス−βガラクトシダーゼ（ＲＳＶ−β−Ｇａｌ）とともに目的のＣＡＴプラスミドを用いてトランスフェクトした（上記を参照のこと）。次いで、全ての細胞を、種々の期間のレスベラトロール（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）による処理の前に１２時間、乏血清培地に放置した。次いで、回収された細胞を、市販のレポーター溶解緩衝液（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して溶解し、そして細胞残屑を５分間、１３，０００ｒｐｍにて、収集した。上清のアリコートを、βガラクトシダーゼ活性（Ｐｒｏｍｅｇａ）の測定のため、およびＢｒａｄｆｏｒｄ  Ａｓｓａｙ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ試薬）を使用した全タンパク質の決定のために採取した。
【０１６４】
（ルシフェラーゼ活性の測定）
細胞を、目的のルシフェラーゼプラスミドでトランスフェクトし（上記を参照のこと）、乏血清培地中に一晩放置して回復させた。これらの細胞またはルシフェラーゼプロモーターを用いて永久的にトランスフェクトされた細胞を、次いで、定められた期間、種々の濃度のレスベラトロールを用いて処理した。上記のように、ＲＳＶ−β−Ｇａｌを、ＤＮＡ取り込みについて標準化するために、コントロールとして同時トランスフェクトした。次いで、細胞を回収し、そしてレポーター溶解緩衝液（Ｐｒｏｍｅｇａ）中に懸濁した。この溶解物の１０μｌのアリコートを、ルシフェラーゼ活性の決定のために使用し、そして５μｌを全タンパク質の決定（Ｂｒａｄｆｏｒｄ  Ａｓｓａｙ、Ｂｉｏ−Ｒａｄ試薬）のために使用した。次いで、ルシフェラーゼ活性を決定し、そしてそのサンプルのタンパク質濃度に対して表した。
【０１６５】
（ウエスタンブッロティング）
培地または細胞を、種々の時点において、未処理のＨｅｐＧ２／ＣａＣｏ２培養皿および処理されたＨｅｐＧ２／ＣａＣｏ２培養皿から回収し、そして必要な場合、−８０℃にて保存した。ウエスタンブロッティングのために培地を収集した実験については、これらの皿からの細胞をトリプシン処理（Ｇｉｂｃｏ）し、そして１００μｌの細胞のサンプルを、クマシーブルー染色を使用して、生存細胞／死細胞比を数えることによって死細胞のパーセンテージを決定するために使用した。次いで、残存する細胞を、Ｍａｎｉａｔｉｓ（Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｍａｎｕａｌ）によって説明される方法を使用して全ＤＮＡ含有量について評価した。次いで、ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって分離される培地の量を標準化するために、一皿あたりのＤＮＡ含有量を、生存細胞／死細胞の比とともに利用した。全細胞溶解物のウエスタンブロットを必要とする実験については、細胞を回収し、そしてレポーター溶解試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して溶解し、そして細胞残屑を、５分間、１３，０００ｒｐｍにて遠心した。次いで、上清のアリコートを、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ試薬）を使用して、サンプルあたりのタンパク質の量を決定するために使用した。次いで、全てのサンプルからの等量のタンパク質を、培地で実行したように、ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって分離した。次いで、このゲルを、ニトロセルロース膜（Ｈｙｂｏｎｄ，Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）に移動し、次いで、この膜をヒトＡＰＯ  ＡＩ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）に対するモノクローナル抗体を用いてプローブした。
【０１６６】
（ＡＰＯ  ＡＩの免疫蛍光標識化）
ＨｅｐＧ２およびＣａＣｏ２細胞を、カバーガラス上で増殖させた。ＣａＣｏ２細胞を増殖したカバーガラスをまた、フィブロネクチン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）でコーティングした。２４〜４８時間、種々の量のエタノールまたはレスベラトロールによる処理をした後、この細胞を、１０分間、室温にて、ＰＥＭ緩衝液（１６０ｍｍｏｌ／ＬのＰＩＰＥＳ、１０ｍｍｏｌ／Ｌのエグタズ酸（ｅｇｔａｚｉｃ  ａｃｉｄ）（ＥＧＴＡ）、４ｍｍｏｌ／ＬのＭｇＣｌ２、ｐＨ６．９）中の、３．７％のホルムアルデヒド、０．２５％のグルタルアルデヒドおよび０．２５％のトリトン−Ｘの混合物を含む溶液で固定し、そして透過性にした。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を用いて３回洗浄した後、その細胞を、３×５分間、還元剤（ホウ化水素ナトリウム、ＰＢＳ中１ｍｇ／ｍｌ）により処理した。次いで、この細胞を、ふたたびＰＢＳ中で洗浄した。マウスモノクローナル抗ＡＰＯ  ＡＩ抗体（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）を、ＰＢＳで１：５０に希釈し、そしてそれぞれのカバーグラスに添加し、そして加湿容器（ｈｕｍｉｄ  ｃｈａｍｂｅｒ）にて６０分間室温でインキュベートした。洗浄後、ＦＩＴＣ接合二次抗体（ヤギ抗マウスＩｇＧ、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を、ＰＢＳで１：２００に希釈し、そして４５〜６０分間室温にてカバーガラス上に添加した。次いで、細胞に、ＰＢＳを用いて最後の洗浄を行い、そしてＰＢＳ中にＰ−フェニレンジアミンおよび５０％のグリセロールを含む封入剤を使用して、スライドガラスに封入した。細胞内のＦＩＴＣ標識化ＡｐｏＡＩペプチドを、４８８ｎｍおよび５２０ｎｍのＦＩＴＣ励起および放射波長でＺｅｉｓｓ蛍光顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ，Ｄｕｓｓｅｌｄｏｒｆ；Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して視覚化した。顕微鏡上に取りつけられたＫｏｄａｋデジタルカメラを使用して、写真撮影した。露光時間は、処理された細胞と未処理の細胞とで同一であった。最終倍率は、２５０×であった。
【０１６７】
（実施例１：１，３−ビス−ニトロオキシ−５−［２−（４−ニトロオキシ−フェニル）−ビニル）−ベンゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５−［（Ｅ）−２−（４−ヒドロキシ−フェニル）−ビニル］−ベンゼン−１，３−ジオール（別名：レスベラトロール；３，４’，５トリヒドロキシトランススチルベン）の溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物（１，３−ビス−ニトロオキシ−５−［（Ｅ）−２−（４−ニトロオキシ−フェニル）−ビニル）−ベンゼン）および部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１６８】
（実施例２：四硝酸ピセアタンノールの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの１，２−ベンゼンジオール，４−（２−（３，５−ジヒドロキシフェニル）エテニル）−（Ｅ）−（別名：ピセアタンノール）の溶液に、２５℃にて、４ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物（四硝酸ピセアタンノール）および部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１６９】
（実施例３：四硝酸ブテインの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの３，４，２’，４’−テトラヒドロキシカルコン（別名：ブテイン）の溶液に、２５℃にて、４ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である四硝酸ブテインおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１７０】
（実施例４：三硝酸イソリキリチゲニンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの４，２’，４’−トリヒドロキシカルコン（別名：イソリキリチゲニン）の溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である三硝酸イソリキリチゲニンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１７１】
（実施例５：四硝酸フィセチンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの３，７，３’，４’−テトラヒドロキシフラボン（別名：フィセチン）の溶液に、２５℃にて、４ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である四硝酸フィセチンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１７２】
（実施例６：五硝酸ケルセチンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの３，５，７，３’，４’−ペンタヒドロキシフラボン（別名：ケルセチン）の溶液に、２５℃にて、５ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である五硝酸ケルセチンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１７３】
（実施例７：Ｎ−（３，５−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−Ｎ’−（４−ニトロオキシ−フェニル）−ヒドラジンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５−［Ｎ’−（４−ヒドロキシ−フェニル）−ヒドラジノ］−ベンゼン−１，３−ジオールの溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物であるＮ−（３，５−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−Ｎ’−（４−ニトロオキシ−フェニル）−ヒドラジンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１７４】
（実施例８：１，３−ビス−ニトロオキシ−５−（４−ニトロオキシ−フェニルジスルファニル）−ベンゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５−（４−ヒドロキシ−フェニルジスルファニル）−ベンゼン−１，３−ジオールの溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である１，３−ビス−ニトロオキシ−５−（４−ニトロオキシ−フェニルジスルファニル）−ベンゼンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１７５】
（実施例９：１，３−ビス−ニトロオキシ−５−（４−ニトロオキシ−フェニルペルオキシ）−ベンゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５−（４−ヒドロキシ−フェニルペルオキシ）−ベンゼン−１，３−ジオールの溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である１，３−ビス−ニトロオキシ−５−（４−ニトロオキシ−フェニルペルオキシ）−ベンゼンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１７６】
（実施例１０：１，３−ビス−ニトロオキシ−５−（４−ニトロオキシ−フェニルスルファニルメチル）−ベンゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５−（４−ヒドロキシ−フェニルスルファニルメチル）−ベンゼン−１，３−ジオールの溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である１，３−ビス−ニトロオキシ−５−（４−ニトロオキシ−フェニルスルファニルメチル）−ベンゼンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１７７】
（実施例１１：Ｎ−（３，５−ビス−ニトロオキシ−フェニル−Ｏ−（４−ニトロオキシ−フェニル）−ヒドロキシルアミンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５−（４−ヒドロキシ−フェノキシアミノ）−ベンゼン−１，３−ジオールの溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物であるＮ−（３，５−ビス−ニトロオキシ−フェニル−Ｏ−（４−ニトロオキシ−フェニル）−ヒドロキシルアミンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１７８】
（実施例１２：ベンジル−（４−ニトロオキシ−フェニル）−アミンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの４−ベンジルアミノ−フェノールの溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物であるベンジル−（４−ニトロオキシ−フェニル）−アミンを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１７９】
（実施例１３：２−（サリチリデンアミノ）フェノールジニトラートの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの２−（サリチリデンアミノ）フェノールの溶液に、２５℃にて、２ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である２−（サリチリデンアミノ）フェノールジニトラートおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、いずれかのヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１８０】
（実施例１４：（２，４−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−（２−ニトロオキシ−フェニル）−ジアゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの４−（２−ヒドロキシ−フェニラゾ）−ベンゼン−１，３−ジオール（別名：１，３−ベンゼンジオール，４−（（２−ヒドロキシフェニル）アゾ）−）の溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である２，４−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−（２−ニトロオキシ−フェニル）−ジアゼンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１８１】
（実施例１５：ビス−（２，２’−ニトロオキシ−フェニル）−ジアゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌのビス−（２，２’−ヒドロキシ−フェニル）−ジアゼン（別名：１−ヒドロキシ−２−（２−ヒドロキシフェニラゾ）ベンゼン）の溶液に、２５℃にて、２ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物であるビス−（２，２’−ニトロオキシ−フェニル）−ジアゼンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、いずれかのヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１８２】
（実施例１６：Ｎ−（３−ニトロオキシ−フェニル）−ベンゼンスルホンアミドの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌのＮ−（３−ヒドロキシ−フェニル）−ベンゼンスルホンアミド（別名：Ｎ−（３−ヒドロキシフェニル）ベンゼンスルホンアミド）の溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物であるＮ−（３−ニトロオキシ−フェニル）−ベンゼンスルホンアミドを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１８３】
（実施例１７：Ｎ−（４−ニトロオキシ−フェニル）−ベンゼンスルホンアミの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌのＮ−（４−ヒドロキシ−フェニル）−ベンゼンスルホンアミド（別名：Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）ベンゼンスルホンアミド）の溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物であるＮ−（４−ニトロオキシ−フェニル）−ベンゼンスルホンアミドを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１８４】
（実施例１８：３，３’，４，５’−テトラニトロオキシビベンジルの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの３，３’，４，５’−テトラヒドロキシビベンジルの溶液に、２５℃にて、４ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である３，３’，４，５’−テトラニトロオキシビベンジルおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１８５】
（実施例１９：１−ベンジルオキシ−２−ニトロオキシ−ベンゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの２−ベンジルオキシ−フェノールの溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物である１−ベンジルオキシ−２−ニトロオキシ−ベンゼンを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１８６】
（実施例２０：安息香酸３−ニトロオキシ−フェニルエステルの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの安息香酸３−ヒドロキシ−フェニルエステル（別名：レゾルシノールモノベンゾエート）の溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物である安息香酸３−ニトロオキシ−フェニルエステルを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１８７】
（実施例２１：２−ニトロオキシ−安息香酸フェニルエステルの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの２−ヒドロキシ−安息香酸フェニルエステル（別名：サリチル酸フェニル）の溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物である２−ニトロオキシ−安息香酸フェニルエステルを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１８８】
（実施例２２：２−ニトロオキシ−Ｎ−（４−ニトロオキシ−フェニル）−ベンズアミドの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの２−ヒドロキシ−Ｎ−（４−ヒドロキシ−フェニル）−ベンズアミド（別名：オサルミド）の溶液に、２５℃にて、２ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である２−ニトロオキシ−Ｎ−（４−ニトロオキシ−フェニル）−ベンズアミドおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、いずれかのヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１８９】
（実施例２３：２−ニトロオキシ−Ｎ−（３−ニトロオキシ−フェニル）−ベンズアミドの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの２−ヒドロキシ−Ｎ−（３−ヒドロキシ−フェニル）−ベンズアミドの溶液に、２５℃にて、２ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である２−ニトロオキシ−Ｎ−（３−ニトロオキシ−フェニル）−ベンズアミドおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、いずれかのヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１９０】
（実施例２４：３，４，５−トリス−ニトロオキシ−Ｎ−フェニル−ベンズアミドの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの３，４，５−トリヒドロキシ−Ｎ−（（Ｚ）−１−メチレン−ブタ−２−エニル）−ベンズアミド（別名：ガラニリド）の溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である３，４，５−トリス−ニトロオキシ−Ｎ−フェニル−ベンズアミドおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１９１】
（実施例２５：１−（２，４−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−２−フェニル−エタノンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの１−（２，４−ヒドロキシ−フェニル）−２−フェニル−エタノン（別名：ベンジル２，４−ジヒドロキシフェニルケトン）の溶液に、２５℃にて、２ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である１−（２，４−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−２−フェニル−エタノンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、いずれかのヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１９２】
（実施例２６：１，２−ビス−ニトロオキシ−３−フェノキシ−ベンゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの３−フェノキシ−ベンゼン−１，２−ジオールの溶液に、２５℃にて、２ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である１，２−ビス−ニトロオキシ−３−フェノキシ−ベンゼンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、いずれかのヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１９３】
（実施例２７：１，２−ビス−ニトロオキシ−３−（２−ニトロオキシ−フェノキシ）−ベンゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの３−（２−ヒドロキシ−フェノキシ）−ベンゼン−１，２−ジオールの溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である１，２−ビス−ニトロオキシ−３−（２−ニトロオキシ−フェノキシ）−ベンゼンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１９４】
（実施例２８：１−ニトロオキシ−２−フェノキシ−ベンゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの２−フェノキシ−フェノールの溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物である１−ニトロオキシ−２−フェノキシ−ベンゼンを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１９５】
（実施例２９：５，５スルフィニルビスレゾルシノールテトラニトラートの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５，５スルフィニルビスレゾルシノールの溶液に、２５℃にて、４ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である５，５−スルフィニルビスレゾルシノールテトラニトラートおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１９６】
（実施例３０：１，３−ベンゼンジオール４，４’−チオビステトラニトラートの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの１，３−ベンゼンジオール４，４’−チオビスの溶液に、２５℃にて、４ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である１，３−ベンゼンジオール４，４’−チオビステトラニトラートおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１９７】
（実施例３１：フェノール２，２’チオビスジニトラートの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌのフェノール２，２’チオビスの溶液に、２５℃にて、２ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物であるフェノール２，２’チオビスジニトラートおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、いずれかのヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１９８】
（実施例３２：１−ベンジル−２，４−ビス−ニトロオキシ−ベンゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの４−ベンジル−ベンゼン−１，３−ジオール（別名：１，３ベンゼンジオール３−フェニルメチル）の溶液に、２５℃にて、２ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である１−ベンジル−２，４−ビス−ニトロオキシ−ベンゼンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、いずれかのヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１９９】
（実施例３３：２−ベンジル−１，４−ビス−ニトロオキシ−ベンゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの２−ベンジル−ベンゼン−１，４−ジオール（別名：１，４ベンゼンジオール４−フェニルメチル）の溶液に、２５℃にて、２ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である２−ベンジル−１，４−ビス−ニトロオキシ−ベンゼンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、いずれかのヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２００】
（実施例３４：（２，３，４−トリス−ニトロオキシ−フェニル）−（３，４，５−トリス−ニトロオキシ−フェニル）−メタノンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの（２，３，４−トリヒドロオキシ−フェニル）−（３，４，５−トリヒドロキシ−フェニル）−メタノン（別名：ＥＸＩＦＯＮＥ）の溶液に、２５℃にて、６ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である（２，３，４−トリス−ニトロオキシ−フェニル）−（３，４，５−トリス−ニトロオキシ−フェニル）−メタノンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２０１】
（実施例３５：（２−ニトロオキシ−フェニル）−フェニル−アミンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの２−フェニルアミノ−フェノールの溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物である（２−ニトロオキシ−フェニル）−フェニル−アミンを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２０２】
（実施例３６：２−（３，５−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−６−ニトロオキシ−４Ｈ−クロメンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５−（６−ヒドロキシ−４Ｈ−クロメン−２−イル）−ベンゼン−１，３−ジオールの溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である２−（３，５−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−６−ニトロオキシ−４Ｈ−クロメンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２０３】
（実施例３７：２−（３，５−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−６−ニトロオキシ−１，４−ジヒドロ−ナフタレンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５−（６−ヒドロキシ−１，４−ジヒドロ−ナフタレン−２−イル−）−ベンゼン−１，３−ジオールの溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である２−（３，５−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−６−ニトロオキシ−１，４−ジヒドロ−ナフタレンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２０４】
（実施例３８：２−（３，５−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−６−ニトロオキシ−１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５−（６−ヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イル）−ベンゼン−１，３−ジオールの溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である２−（３，５−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−６−ニトロオキシ−１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２０５】
（実施例３９：５，７−ビス−ニトロオキシ−２−（４−ニトロオキシ−フェニル）−クロマン−４−オンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５，７−ジヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−フェニル）−クロマン−４−オン（別名：ナリンゲニン）の溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である５，７−ビス−ニトロオキシ−２−（４−ニトロオキシ−フェニル）−クロマン−４−オンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２０６】
（実施例４０：５，７−ビス−ニトロオキシ−２−（４−ニトロオキシ−フェニル）−クロメン−４−オンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５，７−ジヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−フェニル）−クロメン−４−オン（別名：アピゲニン）の溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である５，７−ビス−ニトロオキシ−２−（４−ニトロオキシ−フェニル）−クロメン−４−オンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２０７】
（実施例４１：５，７−ビス−ニトロオキシ−３−（４−ニトロオキシ−フェニル）−クロメン−４−オンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５，７−ジヒドロキシ−３−（４−ヒドロキシ−フェニル）−クロメン−４−オン（別名：ゲニステイン）の溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である５，７−ビス−ニトロオキシ−３−（４−ニトロオキシ−フェニル）−クロメン−４−オンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２０８】
（実施例４２：２−（３，４−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−３，４，５，７−テトラキス−ニトロオキシ−クロマンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの２−（３，４−ジヒドロキシ−フェニル）−クロマン−３，４，５，７−テトラオール（別名：ロイコシアニドール）の溶液に、２５℃にて、６ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である２−（３，４−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−３，４，５，７−テトラキス−ニトロオキシ−クロマンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２０９】
（実施例４３：６−ヒドロキシ−７−ニトロオキシ−３−（４−ニトロオキシ−フェニル）−クロマン−４−オンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの６，７−ジヒドロキシ−３−（４−ヒドロキシ−フェニル）−クロマン−４−オン（別名：６，７，４’−トリヒドロキシイソフラボン）の溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である６−ヒドロキシ−７−ニトロオキシ−３−（４−ニトロオキシ−フェニル）−クロマン−４−オンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２１０】
（実施例４４：Ｑｕｒａｃｏｌ  Ｂテトラニトラートの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌのＱｕｒａｃｏｌ  Ｂの溶液に、２５℃にて、４ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物であるＱｕｒａｃｏｌ  Ｂテトラニトラートおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２１１】
（実施例４５：１−（４−ヒドロキシ−２，６−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−３−（４−ニトロオキシ−フェニル）−プロパン−１−オンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの３−（４−ヒドロキシ−フェニル）−１−（２，４，６−トリヒドロキシ−フェニル）−プロパン−１−オン（別名：フロレチン）の溶液に、２５℃にて、４ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である１−（４−ヒドロキシ−２，６−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−３−（４−ニトロオキシ−フェニル）−プロパン−１−オンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２１２】
（実施例４６：１−ニトロオキシ−４−（（Ｚ）−３−フェニル−アリル）−ベンゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの４−（（Ｚ）−３−フェニル−アリル）−フェノール（別名：４（−３−フェニル−２−プロペニル）−，（Ｅ）−フェノール）の溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物である１−ニトロオキシ−４−（（Ｚ）−３−フェニル−アリル）−ベンゼンを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２１３】
（実施例４７：１−ニトロオキシ−４−（（Ｅ）−３−フェニル−プロペニル）−ベンゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの４−（（Ｅ）−３−フェニル−プロペニル）−フェノールの溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物である１−ニトロオキシ−４−（（Ｅ）−３−フェニル−プロペニル）−ベンゼンを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２１４】
（実施例４８：５，６，７−トリス−ニトロオキシ−２−フェニル−クロメン−４−オンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５，６，７−トリヒドロキシ−２−フェニル−クロメン−４−オン（別名：バイカレイン）の溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である５，６，７−トリス−ニトロオキシ−２−フェニル−クロメン−４−オンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２１５】
（実施例４９：四硝酸ルチンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの２−（３，４−ジヒドロキシ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３−［（２Ｓ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−メチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ］−クロメン−４−オン（別名：ルチン）の溶液に、２５℃にて、４ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である２−（３，４−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−５，７−ビス−ニトロオキシ−３−［（２Ｓ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−メチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ］−クロメン−４−オン（四硝酸ルチン）および部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２１６】
（実施例５０：５−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）−７−（２−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−４−クロマノンジニトラートの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）−７−（２−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−４−クロマノン（別名：ナリンギン）の溶液に、２５℃にて、２ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である５−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）−７−（２−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−４−クロマノンジニトラートおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、いずれかのヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２１７】
（実施例５１：（Ｅ）−（３Ｓ，５Ｒ）−７−［３−（４−フルオロ−フェニル）−１−イソプロピル−１Ｈ−インドール−２−イル］−１，３，５−トリス−ニトロオキシ−ヘプタ−６−エン−１−オンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの（Ｅ）−（３Ｓ，５Ｒ）−７−［３−（４−フルオロ−フェニル）−１−イソプロピル−１Ｈ−インドール−２−イル］−３，５−ジヒドロキシ−ヘプタ−６−エン酸（別名：フルバスタチン；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）の溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である（Ｅ）−（３Ｓ，５Ｒ）−７−［３−（４−フルオロ−フェニル）−１−イソプロピル−１Ｈ−インドール−２−イル］−１，３，５−トリス−ニトロオキシ−ヘプタ−６−エン−１−オンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２１８】
（実施例５２：５−（４−フルオロ−フェニル）−２−イソプロピル−４−フェニル−１−（（３Ｒ，５Ｒ）−３，５，７−トリス−ニトロオキシ−７−オキソ−ヘプチル）−１Ｈ−ピロール−１−イル］−３−カルボン酸フェニルアミドの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの（３Ｒ，５Ｒ）−７−［２−（４−フルオロ−フェニル）−５−イソプロピル−３−フェニル−４−フェニルカルバモイル−ピロール−１−イル］−３，５−ジヒドロキシ−ヘプタン酸（別名：アトルバスタチン；Ｐａｒｋｅ−Ｄａｖｉｓ）の溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である５−（４−フルオロ−フェニル）−２−イソプロピル−４−フェニル−１−（（３Ｒ，５Ｒ）−３，５，７−トリス−ニトロオキシ−７−オキソ−ヘプチル）−１Ｈ−ピロール−１−イル］−３−カルボン酸フェニルアミドおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２１９】
（実施例５３：（Ｅ）−（３Ｒ，５Ｓ）−７−［４−（４−フルオロ−フェニル）−２，６−ジイソプロピル−５−メトキシメチル−ピリジン−３−イル］−１，３，５−トリス−ニトロオキシ−ヘプタ−６−エン−１−オンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの（Ｅ）−（３Ｒ，５Ｓ）−７−［４−（４−フルオロ−フェニル）−２，６−ジイソプロピル−５−メトキシメチル−ピリジン−３−イル］−３，５−ジヒドロキシ−ヘプタ−６−エン酸（別名：セリバスタチン；Ｂａｙｅｒ）の溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である（Ｅ）−（３Ｒ，５Ｓ）−７−［４−（４−フルオロ−フェニル）−２，６−ジイソプロピル−５−メトキシメチル−ピリジン−３−イル］−１，３，５−トリス−ニトロオキシ−ヘプタ−６−エン−１−オンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２２０】
（実施例５４：（Ｓ）−２−メチル−酪酸（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，８Ｓ，８ａＲ）−７−メチル−３−ニトロオキシ−８−（（４Ｒ，６Ｒ）−３，５，７−トリス−ニトロオキシ−７−オキソ−ヘプチル）−１，２，３，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−ナフタレン−１−イルエステルの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの（２Ｒ，４Ｒ）−３，５−ジヒドロキシ−７−［（１Ｓ，２Ｓ，６Ｓ，８Ｓ，８ａＲ）−６−ヒドロキシ−２−メチル−８−（（Ｓ）−２−メチル−ブチリルオキシ）−１，２，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−ナフタレン−１−イル］−ヘプタン酸（別名：プラバスタチン；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）の溶液に、２５℃にて、４ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である（Ｓ）−２−メチル−酪酸（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，８Ｓ，８ａＲ）−７−メチル−３−ニトロオキシ−８−（（４Ｒ，６Ｒ）−３，５，７−トリス−ニトロオキシ−７−オキソ−ヘプチル）−１，２，３，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−ナフタレン−１−イルエステルおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２２１】
（実施例５５：２，２−ジメチル−酪酸（１Ｓ，３Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，８ａＲ）−３，７−ジメチル−８−［２−（（２Ｒ，４Ｒ）−４−ニトロオキシ−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−エチル］−１，２，３，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−ナフタレン−１−イルエステルの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの２，２−ジメチル−酪酸（１Ｓ，３Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，８ａＲ）−８−［２−（（２Ｒ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−エチル］−３，７−ジメチル−１，２，３，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−ナフタレン−１−イルエステル（別名：シンバスタチン；Ｍｅｒｃｋ）の溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物である２，２−ジメチル−酪酸（１Ｓ，３Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，８ａＲ）−３，７−ジメチル−８−［２−（（２Ｒ，４Ｒ）−４−ニトロオキシ−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−エチル］−１，２，３，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−ナフタレン−１−イルエステルを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２２２】
（実施例５６：（Ｓ）−２−メチル−酪酸（１Ｓ，３Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，８ａＲ）−３，７−ジメチル−８−［２−（（２Ｒ，４Ｒ）−４−ニトロオキシ−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−エチル］−１，２，３，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−ナフタレン−１−イルエステルの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの（Ｓ）−２−メチル−酪酸（１Ｓ，３Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，８ａＲ）−８−［２−（（２Ｒ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−エチル］−３，７−ジメチル−１，２，３，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−ナフタレン−１−イルエステル（別名：ロバスタチン；Ｍｅｒｃｋ）の溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物である（Ｓ）−２−メチル−酪酸（１Ｓ，３Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，８ａＲ）−３，７−ジメチル−８−［２−（（２Ｒ，４Ｒ）−４−ニトロオキシ−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−エチル］−１，２，３，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−ナフタレン−１−イルエステルを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２２３】
（実施例５７：Ｎ−［４−（４−フルオロ−フェニル）−６−イソプロピル−５−（（Ｅ）−（３Ｒ，５Ｒ）−３，５，７−トリス−ニトロオキシ−７−オキソ−ヘプタ−１−エニル）−ピリミジン−２−イル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの（Ｅ）−（３Ｒ，５Ｒ）−７−［４−（４−フルオロ−フェニル）−６−イソプロピル−２−（メタンスルホニル−メチル−アミノ）−ピリミジン−５−イル］−３，５−ジヒドロキシ−ヘプタ−６−エン酸（別名：ロスバスタチン；Ａｓｔｒａ−Ｚｅｎｅｃａ）の溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物であるＮ−［４−（４−フルオロ−フェニル）−６−イソプロピル−５−（（Ｅ）−（３Ｒ，５Ｒ）−３，５，７−トリス−ニトロオキシ−７−オキソ−ヘプタ−１−エニル）−ピリミジン−２−イル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２２４】
（実施例５８：ニトロオキシ−ピリジン−３−イル−メタノンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌのニコチン酸（別名：ナイアシン）の溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物であるニトロオキシ−ピリジン−３−イル−メタノンを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２２５】
（実施例５９：（Ｓ）−１−（４−フルオロ−フェニル）−３−［（Ｓ）−３−（４−フルオロ−フェニル）−３−ニトロオキシ−プロピル］−４−（４−ニトロオキシ−フェニル）−アゼチジン−２−オンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの（Ｓ）−１−（４−フルオロ−フェニル）−３［（Ｓ）−３−（４−フルオロ−フェニル）−３−ヒドロキシ−プロピル］−４−（４−ヒドロキシ−フェニル）−アゼチジン−２−オン（別名：エゼチミブ；Ｍｅｒｃｋ）の溶液に、２５℃にて、２ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である（Ｓ）−１−（４−フルオロ−フェニル）−３−［（Ｓ）−３−（４−フルオロ−フェニル）−３−ニトロオキシ−プロピル］−４−（４−ニトロオキシ−フェニル）−アゼチジン−２−オンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、いずれかのヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２２６】
（実施例６０：本発明の化合物をグルコロン酸抱合するための方法）
本実施例は、本発明のグルコロン酸抱合された化合物を調製する方法を記載する。この特定の実施例において、最終容量５００μＬの、１０ｍＭのＭｇＣｌ２を含む５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．８）中の、実施例１のように調製したジニトロ化バージョンのレスベラトロールである３，４’−ニトロオキシ−５−ヒドロキシレスベラトロール（５０〜１０００μＭ）、および１０μＬのヒト腸ミクロソーム、２５μＬの結腸ミクロソームまたは１０μＬの肝臓ミクロソーム（それぞれ、２００、４００、２００μｇのタンパク質）、２０μＬの組換えＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（４００μｇのタンパク質）を、３７℃で５分間プレインキュベートする。反応を、１ｍＭの５’−ジホスホグルクロン酸の添加によって開始する。これらの反応混合物を、３７℃で６０分間インキュベートする。これらのサンプルを氷上で冷却し、ｏａｓｉｓ  Ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ−新油性  Ｂａｌａｎｃｅ  １ｃｃ  Ｃ１８抽出カートリッジ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）を使用する固相抽出に供す。これらのカートリッジを１ｍＬのメタノールで洗浄し、そして１ｍＬの水で平衡化する。０．５ｍＬのサンプルをロードした後、これらのカートリッジを５％メタノールで洗浄し、そして２ｍＬの１００％メタノールで溶出する。このメタノール溶出物をＮ２ガス下で４０℃にて乾燥し、そしてこのサンプルを、ＨＰＬＣ分析のために２５０μＬの移動相中に再び融解する。
【０２２７】
（実施例６１：本発明の化合物を硫酸化するための方法）
本実施例は、本発明の硫酸化化合物を調製する方法を記載する。この特定の実施例において、実施例１のように調製したレスベラトロール，３，４’−ニトロオキシ−５−ヒドロキシレスベラトロールのジニトロ化バージョンを、前述のイオン対抽出方法（Ｖａｒｉｎら１９８７、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１６１：１７６〜１８０）を用いて、スルホトランスフェラーゼ酵素によって硫酸化する。代表的な反応混合物は、総容量１００μＬの、８ｍＭジチオスレイトールおよび０．０６２５％ウシ血清アルブミンを含む３３ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）中に、０．１〜２００μＭの３，４’−ニトロオキシ−５−ヒドロキシレスベラトロール、１μＭの［３５Ｓ］ＰＡＰＳ、および２．５μＬのプールされたヒト肝臓サイトゾル（５０μｇのタンパク質）、２．５μＬのヒト空腸サイトゾル（３０μｇ）、Ｃａｃｏ−２サイトゾル（２２５μｇ）または０．２５μＬの組換えスルホトランスフェラーゼを含む。これらのサンプルを３７℃で３０分間インキュベートし、これらの反応を、１０μＬの２．５％酢酸、２０μＬの０．１μＭ硫酸水素テトラブチルアンモニウムおよび５００μＬの酢酸エチルの添加によって終結させる。混合および遠心分離を経た後、この４００μＬの酢酸エチル抽出物を、生分解性計数シンチラント（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ．）の添加後に、液体シンチレーション計数に供する。
【０２２８】
（実施例６２：腸由来ＣａＣｏ２細胞のレスベラトロール処理）
この研究は、レスベラトロールがＣａＣｏ２細胞（腸細胞株）中のＡＰＯ  ＡＩ遺伝子に対して効果を有するか否かを決定した。細胞を、ＡＴＣＣによって推奨され、そして方法のセクションにおいて簡潔にまとめた条件下で増殖した。最初の研究は、組織学的分析を使用して、ＡＰＯ  ＡＩ発現を増加させるレスベラトロールの潜在的な効果を調査した。細胞を、５μＭまたは１０μＭのレスベラトロールで処理し、次いで、市販のヒトＡＰＯ  ＡＩ抗体を使用して、その細胞の豊富なＡＰＯ  ＡＩを染色した（データを示さず）。このＣａＣｏ２細胞を、レスベラトロールの非存在下（未処理）および存在下（５μＭおよび１０μＭ）で、位相差、ならびにＡＰＯ  ＡＩタンパク質の免疫組織化学的染色を使用して調査した。レスベラトロールは、３６時間の処理の後の５μＭおよび１０μＭの上記因子への暴露後に、ＡＰＯ  ＡＩシグナルの量の増加をもたらした。レスベラトロールの存在下でのＡＰＯ  ＡＩタンパク質発現レベルの増加もまた示された。これらの結果は、５μＭのレスベラトロールと１０μＭのレスベラトロールとの両方が細胞のＡＰＯ  ＡＩタンパク質含有量に起因して蛍光を増加させたことを示した。
【０２２９】
次に、ＣａＣｏ２細胞を、０〜１５μＭまでの種々の濃度のレスベラトロールに暴露した。この細胞を、標準的な技術を使用して、トランスフェクションの効率についてのモニターとしてのｐＲＳＶ−β−ガラクトシダーゼとともに、レセプター構築物（ｐＡＩ．４７４−Ｌｕｃ（図１の地図を参照のこと））で、トランスフェクトした。このｐＡＩ．４７４−Ｌｕｃは、従来の分子生物学の技術を使用して本発明者らが作製した構築物であり、そしてレポーター（ホタルルシフェラーゼ（Ｌｕｃ））に融合された−４７４〜−７のヒトＡＰＯ  ＡＩプロモーターを含む。レスベラトロールを、ＤＭＳＯ中に溶解し、次いで、培養培地に添加し、０〜１５μＭまで変動する最終濃度を生成した。上記細胞を、種々の濃度のレスベラトロールにより１６時間処理した。この処理の最後に、細胞を回収し、そしてＬｕｃ活性を測定した。これらの値を、溶解液タンパク質濃度とまた３−ガラクトシダーゼ活性との両方に対して標準化した。この結果（図２）は、レスベラトロールが５〜７．５μＭの範囲のレスベラトロール濃度において、最大２．５倍までＡＰＯ  ＡＩプロモーター活性を刺激したことを示した。
【０２３０】
前述の研究は、ＡＰＯ  ＡＩプロモーター活性の最大限の刺激をもたらしたレスベラトロールの濃度が５〜７．５μＭの範囲にわたることを示したが、その作用の期間は明らかではなかった。この点に対処するために、上記と同じ実験を、ＡＰＯ  ＡＩプロモーターのレスベラトロール誘導の反応速度を評価するために使用した。ｐＡＩ．４７４−Ｌｕｃを用いてトランスフェクトされたＣａＣｏ２細胞を、４〜２４時間まで変動する選択された時点において、５μＭのレスベラトロールで処理した。この構築物（ｐＡＩ．４７４−Ｌｕｃ）は、レポーター遺伝子（ホタルルシフェラーゼ（Ｌｕｃ））に融合された、−４７４から−７までの範囲に及ぶラットＡＰＯ  ＡＩプロモーターＤＮＡを含んでいた。有意な効果を、レスベラトロールの投与の４時間後、８時間後、１６時間後、および２４時間後に観察したが、最大の刺激は、この化合物への暴露の１６時間後に現れた。結果（図３）は、ＡＰＯ  ＡＩプロモーターに対するレスベラトロールの刺激効果のための最適な時点は、約１６時間であるように見えることを示した。これらの研究に起因する情報は、レスベラトロールがＣａＣｏ２細胞中のＡＰＯ  ＡＩ遺伝子転写を刺激し得ること、およびレスベラトロールに関する最大効果の時間は、おおまかに暴露後１６時間であることを示す。
【０２３１】
（実施例６３：レスベラトロールの効果は、−１９０から−１７０のヌクレオチドの範囲のＤＮＡフラグメントを必要とする）
上記の研究において使用されたｐＡＩ．４７４−Ｌｕｃは、レスベラトロールの効果を媒介することが見出され、そしてこの構築物は、−４７４から−７の範囲にわたるヒトＡＰＯ  ＡＩ  ＤＮＡフラグメントを含むので、本発明者らは、プロモーターＤＮＡのこのセグメント中の１つのモチーフまたは複数のモチーフがこの化合物の作用を媒介すると仮定した。潜在的モチーフを同定するために、漸進的により小量のＡＰＯ  ＡＩ  ＤＮＡを含む別々の構築物をＬｕｃ遺伝子に融合した。各構築物の活性を、ＣａＣｏ２細胞の一過性トランスフェクションアッセイによって試験し、次いで、５μＭのレスベラトロールを用いて最低１６時間、処理した。結果（図４）は、全長（−４７４から−７）プロモーターが２．５倍の誘導を生じたことを示した。各組のカラムの下の数は、フラグメントの５’位置を意味し、３’末端は、−７で全ての欠失クローンに共通である。例えば、左の組のカラムは、それぞれ、レスベラトロールの存在下および非存在下での−４７４から−７までのフラグメントの活性を示す。これらの結果は、プロモーターの−１９０から−１７１までのＤＮＡの除去が、レスベラトロールへの応答をなくすことを示す。親プロモーターからのＤＮＡの−２３５または−１９０から−７までのフラグメントの除去は、プロモーター活性の２．５倍の増加を誘導するレスベラトロールの能力に影響を及ぼさなかった。対照的に、プロモーターの残りの−１７０から−７までのフラグメントのさらなる欠失は、プロモーターのレスベラトロール誘導をなくした。本発明者らは、ＡＰＯ  ＡＩ  ＤＮＡ中のレスベラトロール応答性モチーフが−１９０から−１７０までのヌクレオチドの範囲にわたるはずであることを発見した。
【０２３２】
（実施例６４：レスベラトロールは、ＣａＣＯ２細胞から分泌されたＡＰＯ  ＡＩタンパク質を増加させる）
この実験は、ＣａＣｏ２細胞におけるプロモーターの転写活性のレスベラトロールの刺激が、究極的には遺伝子の抗アテローム発生活性を担う、大量のＡＰＯ  ＡＩタンパク質を増加させたか否かの測定しようとした。レスベラトロールは、ｐＡＩ．４７４−Ｌｕｃ構築物（一過性のトランスフェクションによってＣａＣｏ２細胞中に導入されるトランスジーン）中のＡＰＯ  ＡＩプロモーターの活性を増加させたが、それがＣａＣｏ２細胞に対して内因性にＡＰＯ  ＡＩ遺伝子の活性に影響するか否かは、定かではない。これらの研究のために、ＣａＣｏ２細胞を、通常のように培養し、そして５ｐ，Ｍまたは１０ｐ，Ｍの濃度のレセベラトロールを含む培地に３６時間、暴露した。ＡＰＯ  ＡＩタンパク質がＣａＣｏ２細胞から上記培地に分泌され、そして検出されるための適切な時間を与えるために、レスベラトロールへの細胞のより長い暴露を利用した。３６時間上記細胞に暴露された使用済み培地を、ウエスタンブロット分析を使用して、そのＡＰＯ  ＡＩタンパク質の含有量についてアッセイした。結果（図５）は、使用済み培地におけるレスベラトロールにより処理された細胞由来の大量のＡＰＯ  ＡＩタンパク質の顕著な増加を示したが、レスベラトロールを欠く培地におけるＡＰＯ  ＡＩはより少なかった。
【０２３３】
これらの研究の結果は、レスベラトロールの抗アテローム発生特性が、ＡＰＯ  ＡＩ遺伝子の発現を増強することを示す。ＡＰＯ  ＡＩ遺伝子の発現の増加は、ＲＣＴを増強し、それによって、体からのコレステロールの除去を増大する。ＣａＣｏ２細胞のデータは、有意であり、本発明者らは、予想外に：
１）腸細胞におけるＡＰＯ  ＡＩに対するレスベラトロールの効果を初めて同定した。
２）レスベラトロールがＡＰＯ  ＡＩ遺伝子の転写に影響することを同定した。
３）レスベラトロールが細胞中のＡＰＯ  ＡＩに対して作用するために必要とされる時間を決定した。
４）治療的にＡＰＯ  ＡＩ遺伝子発現を変更するためのレスベラトロールの濃度の範囲を決定した。
５）ＣａＣｏ２細胞におけるレスベラトロールの効果を媒介するＤＮＡモチーフを同定した。
６）レスベラトロールの効果の１つが、多量のＡＰＯ  ＡＩタンパク質を増加させることであることを示した。
【０２３４】
この情報は、以下の工程によって、レスベラトロールの使用または他の類似のＡＰＯ  ＡＩ増加因子の使用を利用することにおいて有用である：
１）腸に放出され得るレスベラトロールの処方物を設計する工程。
２）レスベラトロールまたはそのような因子の時間設定された放出のための処方物を、それが最低１６時間、腸の経路内にあることを保証するように設計する工程。
３）以前に公知ではなかった、治療用量のレスベラトロールまたはそのような因子の存在を維持するための処方物を設計する工程。
４）レスベラトロールまたはそのような因子の作用をアッセイするための種々のレポーター構築物および細胞株の使用を示し、そしてその使用を天然ポリフェノールもしくは合成ポリフェノールまたはレスベラトロールの作用に類似する作用を有する他の因子をスクリーニングするために拡張する工程。
【０２３５】
（実施例６５：肝臓由来のＨｅｐ  Ｇ２細胞のレスベラトロール処置）
ＡＰＯ  ＡＩ遺伝子は、肝臓と小腸との両方において発現されるので、以下の研究は、肝臓細胞における遺伝子の発現に影響するレスベラトロールの能力を調査する。この研究の第一のセットは、多量のＡＰＯ  ＡＩを増加させるレスベラトロールの潜在的な能力を調査し、そして組織学的分析を使用してこの可能性を評価するように調査した。細胞を、ＡＴＣＣによって推奨され、そして方法のセクションにおいて簡潔にまとめた条件下で増殖した。最初の研究は、組織学的分析を使用して、ＡＰＯ  ＡＩ発現を増加させるレスベラトロールの潜在的な効果を調査した。細胞を、５μＭまたは１０μＭのレスベラトロールで処理し、次いで、市販のヒトＡＰＯ  ＡＩ抗体を使用して、その細胞の豊富なＡＰＯ  ＡＩを染色した。レスベラトロールを用いてかもしくは用いない処理、ならびに、ＡＰＯ  ＡＩタンパク質の含有量の免疫染色の後に、位相差または蛍光顕微鏡の下、Ｈｅｐ  Ｇ２細胞を観察した。これらの結果は、５μＭまたは１０μＭのレスベラトロールによる処理の後、ＡＰＯ  ＡＩシグナルの蛍光の増加を示した。
【０２３６】
Ｈｅｐ  Ｇ２細胞中のプロモーター活性についてアッセイするために、以下に記載されるように、従来の分子生物学の技術を使用して、トランスフェクションの効率についてのモニターとしてのｐＲＳＶ−３−ガラクトシダーゼとともに、レポーター構築物（ｐＡＩ４７４−Ｌｕｃ）を、ヒト肝臓癌（Ｈｅｐ  Ｇ２）細胞中に挿入した。このトランスフェクトされた細胞を、１６時間、０〜１００μＭまでの種々の濃度のレスベラトロールに暴露した。この細胞を回収し、そしてＬｕｃ活性についてアッセイした。０μＭ、５μＭ、１０μＭ、２５μＭ、５０μＭ、７５μＭおよび１００μＭのレスベラトロールにより処理された細胞は、５〜１０μＭにおいてピーク用量を有するが、５０μＭ以上では阻害的となる用量−応答関係を示した。これらのデータを、β−ｇａｌ（トランスフェクションの効率について制御するために同時トランスフェクトされたレポーター）に対して標準化し、そしてタンパク質レベルに対して表した。この実験を、３つの異なる細胞のバッチを用いて３回繰り返した。得られた値を、タンパク質活性と６−ガラクトシダーゼ活性との両方に対して標準化した。結果（図６）は、５〜１０ｐＭのレセベラトロールによる処理後の活性の３倍の増加を示した。しかし、レスベラトロール濃度のさらなる増加は、レポーター構築物のＬｕｃ−活性をさらに増加させず、そして、実際、上記化合物の１５μＭ、２５μＭ、５０μＭ、７５μＭまたは１００μＭの濃度は、Ｌｕｃ活性の有意な増加とは関連せず、むしろ、Ｌｕｃ活性の５０％の減少に結び付いた。これらの観察を立証するために、細胞内に永久的に挿入されたｐＡＩ．４７４−Ｌｕｃを含む細胞株を、作製した。これらの永久的にトランスフェクトされた細胞を、０〜２０μＭの範囲の濃度のレスベラトロールに対する応答について試験した。ネオマイシン耐性であり、そしてＬｕｃ活性を有した細胞を、研究のために保持した。なぜなら、この細胞は、ｐＡＩ．４７４−Ｌｕｃとネオマイシン耐性マーカーとの両方を含んでいるからである。これらの細胞を、レスベラトロール（０〜２５μＭ）により処理した。永久的にトランスフェクトされた細胞を作製するために、ネオマイシン耐性を保有する別のプラスミドを用いて、４７４−Ｌｕｃを同時トランスフェクトした。ネオマイシン中で増殖する能力は、成功したトランスフェクションのためのマーカーである。レスベラトロールに対する用量−応答効果が、一過性にトランスフェクトされた細胞のその関係を模倣している結果となって観察された。結果（図７）は、永久的にトランスフェクトされた細胞中のＬｕｃ活性が、１０μＭのレスベラトロールによる処理後に、用量依存的様式で増加し、最大で４倍に増加することを示した。
【０２３７】
一定の濃度のレスベラトロールに応答する、ｐＡＩ．４７４−Ｌｕｃの時間経過を、試験した。この研究において、Ｈｅｐ  Ｇ２細胞を、ｐＡＩ．４７４−Ｌｕｃを用いて一過性にトランスフェクトし、次いで、１０ｐ．Ｍのレスベラトロールに暴露した。この細胞を、４時間、８時間、１６時間および２４時間にて回収した。このＬｕｃ活性をこれらの細胞においてアッセイし、そして結果は、プロモーターの最大の刺激が１６時間で始まり、そして２４時間まで拡張したことを示した。このレスベラトロールの最大の効果はＣａＣｏ２細胞中の効果と類似し、処理の１６時間後に観察された最大の増加を有した（図８）。
【０２３８】
（実施例６６：レスベラトロールは、Ｈｅｐ  Ｇ２細胞から分泌されるＡＰＯ  ＡＩタンパク質を増加させる）
Ｈｅｐ  Ｇ２細胞中のＡＰＯ  ＡＩプロモーターのレスベラトロール刺激もまた多量のタンパク質を増加させるか否かを測定するため、培地中に分泌されたＡＰＯ  ＡＩを上記化合物による処置の後に評価した。レスベラトロールは、ｐＡＩ．４７４−Ｌｕｃ構築物（一過性のもしくは安定的なトランスフェクションによってＨｅｐ  Ｇ２細胞中に導入されたトランスジーン）中のＡＰＯ  ＡＩプロモーターの活性を増加させた。Ｈｅｐ  Ｇ２細胞を、通常のように培養し、そして５ｐ，Ｍまたは１０ｐ，Ｍの濃度のレセベラトロールを含む培地に３６時間、暴露した。３６時間上記細胞に暴露された使用済み培地を、ウエスタンブロット分析を使用して、そのＡＰＯ  ＡＩタンパク質の含有量についてアッセイした。結果（図９）は、使用済み培地におけるレスベラトロールにより処理された細胞由来の大量のＡＰＯ  ＡＩタンパク質の顕著な増加を示したが、レスベラトロールを欠く培地におけるＡＰＯ  ＡＩはより少なかった。
【０２３９】
これらの実験は、レスベラトロールがまた予想外に、そして有利に肝臓由来のＨｅｐ  Ｇ２細胞中のＡＰＯ  ＡＩ遺伝子の発現を増加させたことを示す。それゆえ、スクリーニングアッセイの好ましい実施形態は、好ましいマーカーがＬｕｃである場合、有利に、ｐＡＩ．４７４−マーカーを含有する永久的にトランスフェクトされたＨｅｐ  Ｇ２細胞株を包含する。そのような細胞を、ＡＰＯ  ＡＩ発現またはＡＰＯ  ＡＩトランスフェクションを増加させるための化合物または因子についてスクリーニングするために使用し得る。この実験は、そのような化合物の治療上の適用のための好ましい期間、ならびに、どのように好ましい治療濃度が初めに決定され得るかを示す。当然、治療レジメンをその目的に従って改良するために、従来の臨床試行が必要とされることが、容易に認識される。
【０２４０】
本発明者らは、レスベラトロールがＡＰＯ  ＡＩ遺伝子の発現に有利に影響することを発見した。ヒト細胞株（Ｈｅｐ  Ｇ２およびＣａＣｏ２）を使用して、５〜１０μＭの範囲のレスベラトロールの濃度に暴露された両細胞型におけるＡＰＯ  ＡＩタンパク質およびプロモーター活性のレベルの増加を観察した。同じく重要なことは、この範囲を上回る濃度への細胞の暴露は、ＡＰＯ  ＡＩ遺伝子の発現に対する有害な効果を有するということである。さらに、１回のレスベラトロールの暴露に応答した遺伝子活性が１６〜２４時間において遺伝子の転写に対する最大の効果を有するが、タンパク質のレベルは暴露後３６時間まで検出され得るという発見はまた、治療効果のためのレスベラトロールへの細胞の暴露について必要とされる時間の長さの決定につながる新規の情報である。腸細胞由来のＣａＣｏ２がレスベラトロールに応答するという事実もまた、新規の情報である。レスベラトロールは、肝臓へ進む前に、まず腸細胞に接触するので、この事実は重要であり、それゆえ、腸細胞に対するレスベラトロールの相互作用および効果は、肝臓細胞に対する効果よりも重要である可能性が高い。なぜなら、消費後のレスベラトロールの濃度は肝臓細胞を刺激するのに十分な血液中のレベルに到達しない可能性があるからである。
【０２４１】
これらの基本的な観察に加えて、レスベラトロールがＡＰＯ  ＡＩ遺伝子転写を刺激する機構を、プロモーターの欠失した構築物を使用したアッセイにおいて試験した。これらの研究は、ＣａＣｏ２細胞中のレスベラトロールは、ＤＮＡの−１９０から−１７０までのフラグメントを介して作用するが、肝臓細胞における効果は同じ部位または異なる部位における相互作用に起因し得ることを示す。レスベラトロールの誘導体またはアナログを使用して腸細胞における有益な効果を生じるためには、この効果は、肝臓に対する効果とは異なる可能性があるので、このことは重要である。
【０２４２】
本発明の別の実施形態において、永久的にトランスフェクトされたＨｅｐＧ２細胞を、他の遺伝子中のレスベラトロール感受性プロモーター配列についてスクリーニングするためのスクリーニング系として使用する。欠失した構築物を有する、永久的にトランスフェクトされたＨｅｐＧ２またはＣａＣｏ２細胞は、遺伝子中のレスベラトロール感受性プロモーター配列のスクリーニングのためのアッセイ系、ならびに、ＡＰＯ  ＡＩ発現を調節し得る栄養薬剤および薬剤を同定するために栄養薬剤および薬剤をスクリーニングするためのアッセイ系の基礎を提供し得る。
【０２４３】
（実施例６７：ＡｐｏＡ−１タンパク質発現の測定）
この研究は、ＣａＣｏ２細胞（腸細胞株）中、またはＨｅｐ  Ｇ２細胞（肝癌細胞株）中のＡＰＯ  ＡＩ遺伝子に対する上記化合物の効果を測定する。細胞を、上記化合物により処理し、次いで、市販のヒトＡＰＯ  ＡＩ抗体を使用して、処理の３６時間後に豊富なＡＰＯ  ＡＩについて染色した。
【０２４４】
（実施例６８：ＡｐｏＡ−１プロモーター誘導の測定）
ＣａＣｏ２またはＨｅｐ  Ｇ２細胞を、種々の濃度の上記化合物に暴露した。これらの細胞を、標準的な技術を使用して、トランスフェクションの効率についてのモニターとしてのｐＲＳＶ−β−ガラクトシダーゼとともに、レセプター構築物（ｐＡＩ．４７４−Ｌｕｃ）を用いてトランスフェクトした。このｐＡＩ．４７４−Ｌｕｃは、従来の分子生物学の技術を使用して作製した構築物であり、そしてレポーター（ホタルルシフェラーゼ（Ｌｕｃ）（米国特許出願第１０／２２２，０１３号））に融合された−４７４〜−７までのヒトＡＰＯ  ＡＩプロモーターを含む。化合物を、ＤＭＳＯ中に溶解し、次いで、培養培地に１６時間添加する。この処理の最後に、細胞を回収し、そしてＬｕｃ活性を測定した。値を、溶解液タンパク質濃度とまたβ−ガラクトシダーゼ活性との両方に対して標準化する。３６時間上記細胞に暴露された使用済み培地を、ウエスタンブロット分析を使用して、そのＡＰＯ  ＡＩタンパク質の含有量についてアッセイし得る。
【０２４５】
（実施例６９：ＡＧＣＣＣＣＣＧＣ要素誘導の測定）
ＣａＣｏ２またはＨｅｐ  Ｇ２細胞を、種々の濃度の上記化合物に暴露する。この細胞を、標準的な技術を使用して、米国特許出願第１０／２２２，０１３号中に教示されるように、トランスフェクションの効率についてのモニターとしてのｐＲＳＶ−β−ガラクトシダーゼとともに、ＡＧＣＣＣＣＣＧＣ要素を含み、プロモーター（例えば、チミジンキナーゼ（ＴＫ）プロモーター）に作動可能に連結され、レポーター遺伝子（例えば、ルシフェラーゼ、ＣＡＴ、またはアポリポタンパク質ＡＩそれ自身）に作動可能に連結される、レポーター構築物を用いてトランスフェクトする。化合物を、ＤＭＳＯ中に溶解し、次いで、培養培地に１６時間添加する。この処理の最後に、細胞を回収し、そしてレポーター遺伝子活性を測定した。値を、溶解液タンパク質濃度と、またβ−ガラクトシダーゼ活性との両方に対して標準化する。
【０２４６】
（実施例７０：ｅｇｒ−１エフェクターを使用する受精状態の処置）
ｅｇｒ−１は、十分な黄体形成（ｌｅｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ）ホルモン−βの発現のために必要とされることがノックアウトマウス実験より公知であり、そしてｅｇｒ−１の欠如は、ホモ接合ノックアウトマウスの生殖能力の消失に結び付く。それゆえ、ｅｇｒ−１コンセンサス配列要素を通じて媒介される活性の調節は、受精能を抑制するためか、もしくは逆に、受精能の減少した個体においてそれを増大するための、ヒトもしくは哺乳動物の処置についての潜在的な機構を示す。
【０２４７】
（実施例７１：ｅｇｒ−１エフェクターを使用した癌の処置）
ｅｇｒ−１は、トランスホーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）をトランス活性化することによって転換を抑制する。ＴＧＦ−βは、それ自身種々の癌によって抑制され、それゆえ、ｅｇｒ−１コンセンサス配列要素を通じて媒介される活性の調節は、ヒトまたは哺乳動物の癌および他の増殖性疾患の処置についての潜在的な機構を示す。
【０２４８】
（実施例７２：ｐ２１に対して作用するｅｇｒ−１エフェクターを使用した癌の処置）
ｅｇｒ−１は、ｐ２１（ＣＩＰ１およびＷａｆｔとしても公知である）と協働し、転換を抑制する。このことは、ｅｇｒ−１が癌および他の増殖性疾患の処置に関与する代替的な経路を示し、それゆえ、ｅｇｒ−１コンセンサス配列要素を通じて媒介される活性の調節は、ヒトまたは哺乳動物の癌または類似の増殖性疾患の処置についての潜在的な機構を示す。
【０２４９】
（実施例７３：ｐ５３に対して作用するｅｇｒ−１エフェクターを使用した癌の処置）
ｅｇｒ−１は、細胞の損傷の重症度に依存して、トランス活性化ｐ５３を通じて、細胞周期の停止またはアポトーシスを誘導する。それゆえ、ｅｇｒ−１コンセンサス配列要素を通じて媒介される活性の調節は、ｐ５３活性化レベルの変化が、関連する障害（例えば、癌）に対するヒトまたは哺乳動物の処置のために潜在的な機構を示す。いくつかの場合、細胞周期の誘導された停止は、損傷した細胞がその損傷に応答し、そして修復を引き起こすことを可能にし得、このことは、ｅｇｒ−１コンセンサス配列要素を通じて媒介される活性の調節によって生じる処置作用の潜在的な別の機構を示す。
【０２５０】
（実施例７４：ｅｇｒ−１エフェクターを使用した前立腺癌の処置）
ｅｇｒ−１は、前立腺癌腫瘍癌細胞において過剰発現し、ここで、それは癌状態の維持に機能的に関連する。それゆえ、ｅｇｒ−１コンセンサス配列要素を通じて媒介される活性の調節は、前立腺癌の処置のための潜在的な機構を示す。
【０２５１】
（実施例７５：ｅｇｒ−１エフェクターを使用した脈管疾患の処置）
ｅｇｒ−１は、ＦＧＦ−２の活性レベルを増加させ、次いで、ＦＧＦ−２は、新脈管形成および狭窄を増加させる。それゆえ、ｅｇｒ−１コンセンサス配列要素を通じて媒介される活性の調節は、癌の処置として新脈管形成をダウンレギュレートする潜在的な治療アプローチを示す。あるいは、ｅｇｒ−１コンセンサス配列要素を通じて媒介される調節活性は、血管形成後の多数の脈管疾患（アテローム硬化症、脳血管性障害、および再狭窄を含む）に関連する狭窄をダウンレギュレートする潜在的な治療アプローチを示す。逆に、ｅｇｒ−１コンセンサス配列要素を通じて媒介される活性の調節は、例えば、創傷を治癒する治療的介入のために虚血組織を処置するために新脈管形成をアップレギュレートする潜在的な治療アプローチを示し得る。
【０２５２】
（実施例７６：ｅｇｒ−１エフェクターを使用した炎症疾患および肺疾患の処置）
ｅｇｒ−１活性化は、炎症メディエーターの持続する発現（例えば、肺障害（気腫およびぜん息を含む）において発生する）に寄与する。それゆえ、ｅｇｒ−１コンセンサス配列要素を通じて媒介される活性の調節は、肺障害（例えば、気腫、ぜん息、嚢胞性線維症および慢性閉塞性肺障害）の処置についての潜在的な治療アプローチを示す。
【図面の簡単な説明】
【０２５３】
【図１】図１は、トランスフェクションアッセイの構築物の模式図を示す；
【図２】図２は、ｐＡＩ．４７４−Ｌｕｃを用いてトランスフェクトされたＣａＣｏ２細胞中のＡＰＯ  ＡＩプロモーター活性レベルに対するレスベラトロール（０μＭ、２．５μＭ、５μＭ、７．５μＭ、および１０μＭ）の効果を示す；
【図３】図３は、レスベラトロール（５μＭ）が、報告された構築物（ｐＡＩ．４７４−Ｌｕｃ）を用いてトランスフェクトされたＣａＣｏ２細胞中のＡＰＯ  ＡＩレベルに対して効果を有している、時間経過を示す；
【図４】図４は、次第に小さくなるＡＰＯ  ＡＩプロモーターのフラグメントを含む異なるレポーター構築物を用いてトランスフェクトされ、そして５μＭレスベラトロールで１６時間処理された、ＣａＣｏ２細胞の研究を示す；
【図５】図５は、ＡＰＯ  ＡＩタンパク質のウエスタンブロット分析を示す；
【図６】図６は、ｐＡＩ．４７４−Ｌｕｃを用いて一過性にトランスフェクトされ、次いで、種々の用量のレスベラトロールを用いて１６時間処理されたＨｅｐ  Ｇ２細胞の結果を示す；
【図７】図７は、ｐＡＩ．４７４−Ｌｕｃおよび市販のネオマイシン耐性遺伝子を用いて永久的にトランスフェクトされたＨｅｐＧ２細胞からのデータを示す。このトランスフェクション由来の細胞を、ネオマイシンへの耐性について選択した；
【図８】図８は、ｐＡＩ．４７４−Ｌｕｃを用いてトランスフェクトされ、１０μＭのレスベラトロールに暴露され、次いで暴露から４時間後、８時間後、１６時間後および２４時間後に収集した、Ｈｅｐ  Ｇ２細胞中のレスベラトロールに対するＡＰＯ  ＡＩプロモーターの応答の時間経過を示す；
【図９】図９は、未処理のＨｅｐ  Ｇ２細胞か、または５μＭもしくは１０μＭのレスベラトロールを用いて処理されたＨｅｐ  Ｇ２細胞由来の使用済み培地中のＡＰＯ  ＡＩタンパク質含有量を測定するためのウエスタンブロット分析を示す。
【図１】
2007509035.tif 000067
【図２】
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【図３】
2007509035.tif 000069
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2007509035.tif 000073
【図８】
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【図９】
2007509035.tif 000075
【配列表】
2007509035000001.xml
【手続補正書】
【提出日】平成18年6月8日(2006.6.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2007509035000001.app
【国際調査報告】
2007509035.tif 000077
2007509035.tif 000078
2007509035.tif 000079
2007509035.tif 000080