(57)【要約】【課題】血管新生（角膜、網膜、及び／又は脈絡膜における新しい血管）の低減に有用な製剤及び方法を開示する。【解決手段】本発明によれば、本製剤は、眼への送達に適した薬学的に許容可能な形態中に略中性のｐＨで、眼血管新生の軽減に十分な量及び期間存在する、ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含むテトラサイクリン又はその誘導体を含む。本発明によれば、本製剤は、局所的眼球投与、眼球注射、又は眼内インプラント用の薬学的に許容可能な製剤であることが好ましく、また、リポソーム又は持続放出カプセル中に包含されうる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
マトリックスメタロプロテナーゼ活性を阻害する化学的に修飾されたテトラサイクリンを含むテトラサイクリン又はその誘導体を含む、眼血管新生治療用の薬学的に許容可能な眼用製剤であって、
前記テトラサイクリン又はその誘導体が、眼への送達に適した薬学的に許容可能な形態中に眼血管新生の軽減に十分な量存在することを特徴とする眼血管新生治療用の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項２】
マトリックスメタロプロテナーゼ活性を阻害する化学的に修飾されたテトラサイクリンを含むテトラサイクリン又はその誘導体を含む、眼血管新生治療用の薬学的に許容可能な眼用製剤であって、
前記テトラサイクリン又はその誘導体が、眼への送達に適した薬学的に許容可能な形態中に、略中性のｐＨで、眼血管新生の軽減に十分な量存在することを特徴とする眼血管新生治療用の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項３】
前記テトラサイクリン又はその誘導体の濃度が、約１ｐｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌである請求項１に記載の眼血管新生治療用製剤。
【請求項４】
硝子体内投与した場合、前記テトラサイクリン誘導体が最大約２００μｇ／ｍｌの用量で存在する請求項１に記載の眼血管新生治療用製剤。
【請求項５】
眼球内投与した場合、前記テトラサイクリン誘導体が約１ｐｇ／ｍｌ〜約２ｍｇ／ｍｌの用量で存在する請求項１に記載の眼血管新生治療用製剤。
【請求項６】
前記テトラサイクリン又はその誘導体が、ドキシサイクリン、デメクロサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、ライムサイクリン、及び化学的に修飾されたテトラサイクリンからなる群から選ばれる請求項１〜５いずれかに記載の眼血管新生治療用製剤。
【請求項７】
前記化学的に修飾されたテトラサイクリンが、ＣＭＴ−３１５、ＣＭＴ−３，ＣＭＴ−８、ＣＭＴ−３０８、及び６−デメチル−６−デオキシ−４−デジメチルアミノテトラサイクリン（ＣＯＬ−３）からなる群から選ばれる請求項６に記載の眼血管新生治療用製剤。
【請求項８】
ドキシサイクリンが、製剤中に使用された前記テトラサイクリン誘導体である請求項１に記載の眼血管新生治療用製剤。
【請求項９】
製剤中のドキシサイクリンの濃度が、約０．０１μｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの間である請求項８に記載の眼血管新生治療用製剤。
【請求項１０】
製剤中のドキシサイクリンの濃度が、約０．０５ｍｇ／ｍｌから約１０ｍｇ／ｍｌの間である請求項８に記載の眼血管新生治療用製剤。
【請求項１１】
製剤中のドキシサイクリンの濃度が、約１ｍｇ／ｍｌから約２０ｍｇ／ｍｌの間である請求項８に記載の眼血管新生治療用製剤。
【請求項１２】
薬学的に許容可能な眼用製剤であって、
（ａ）眼への送達に適した薬学的に許容可能な形態中に、略中性のｐＨで、眼血管新生の軽減に十分な量及び期間存在する、ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含むテトラサイクリン又はその誘導体と、
（ｂ）眼血管新生の軽減に十分な濃度及び用量の、ステロイド、ヘパリン、抗菌薬、抗プロスタグランジン薬、及び／又はメタロプロテナーゼ阻害剤からなる群から選択される少なくとも１つの化合物と
を含むことを特徴とする薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項１３】
ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、
約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌのステロイドとを含む請求項１２に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項１４】
前記ステロイドが、トリアムシノロン、ブデソニド、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾンリン酸ナトリウム、フルオロメトロン、フルオロメトロンアルコール、リメキソロン、メドリゾンアルコール、ロテプレドノールエタボネート、１１−デオキシコルチゾル、及び酢酸アネコルタブからなる群から選ばれる請求項１３に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項１５】
前記ステロイドが、１１−置換−１６α，１７α−置換メチレンジオキシステロイドである請求項１３に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項１６】
前記ステロイドが、９−フルオロ−１１，１２−ジヒドロキシ−１６，１７−[１−メチルエチルイジンビス（オキシ）]プレグナ−１，４−ジエン−３，２０−ジオンである請求項１３に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項１７】
前記ステロイドの濃度が、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌである請求項１３に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項１８】
前記ステロイドの濃度が、約１ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌである請求項１３に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項１９】
前記ステロイドの濃度が、約２０ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌである請求項１３に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項２０】
前記ステロイドの濃度が、約２０ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌである請求項１３に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項２１】
ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、
約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのヘパリンとを含む請求項１２に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項２２】
前記ヘパリンが、低分子量ヘパリンである請求項２１に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項２３】
前記ヘパリンが、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する請求項２１に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項２４】
前記ヘパリンが、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する請求項２１に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項２５】
前記ヘパリンが、約０．５ｍｇ／ｍｌから約１５ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する請求項２１に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項２６】
前記ヘパリンが、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約２．５ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、又は約５ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する請求項２１に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項２７】
ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、
約１μｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの抗プロスタグランジン薬とを含む請求項１２に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項２８】
前記抗プロスタグランジン薬が、フルルビプロフェン、インドメタシン、トロメタミン、メクロフェナメート、フルルビプロフェン，及び非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）のピロロピロール群化合物からなる群から選択される請求項２７に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項２９】
前記抗プロスタグランジン薬が、フルルビプロフェンである請求項２７に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項３０】
ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、
約２０μｇ／ｍｌ〜約２００μｇ／ｍｌの抗菌薬とを含む請求項１２に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項３１】
前記抗菌薬が、マクロライド系抗生物質である請求項３０に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項３２】
前記マクロライド系抗生物質が、タクロリムス、シクロスポリン、シロリムス、エバロリムス、アスコマイシン、エリスロマイシン、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、クリンダマイシン、リンコマイシン、ジリスロマイシン、ジョサマイシン、スピラマイシン、ジアセチル-ミデカマイシン、チロシン、ロキシスロマイシン、ＡＢＴ−７７３、テリスロマイシン、ロイコマイシン、及びリンコサミドからなる群から選択される請求項３１に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項３３】
前記マクロライド系抗生物質が、アスコマイシンである請求項３１に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項３４】
ミコフェノール酸を更に含む、請求項３１に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項３５】
前記ミコフェノール酸が、約０．５％（ｗ/ｖ）〜約１０％（ｗ/ｖ）の濃度で存在する請求項３４に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項３６】
ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、
眼血管新生を軽減する濃度及び用量のメタロプロテナーゼ阻害剤とを含む請求項１２に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項３７】
前記メタロプロテナーゼ阻害剤が、マトリックスメタロプロテナーゼを特異的に阻害するＴＩＭＰ−１等の天然タンパク質、及び、バチマスタット（ＢＢ−９４）及びマリマスタット（ＢＢ−２５１６）等の合成メタロプロテナーゼ阻害剤からなる群から選択される請求項３６に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項３８】
前記メタロプロテナーゼ阻害剤が、コラゲナーゼＩ及びＩＩＩ（ＭＭＰ−１及びＭＭＰ−１３）、ゼラチナーゼＡ及びＢ（ＭＭＰ−２及びＭＭＰ−９）、ストロメリシン（ＭＭＰ−３）、マトリリシン（ＭＭＰ−７）、及び膜タイプＭＭＰ（ＭＭＰ−１４）からなる群から選択される請求項３６に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項３９】
薬学的に許容可能な眼用製剤であって、
（ａ）眼への送達に適した薬学的に許容可能な形態中に、略中性のｐＨで、眼血管新生の軽減に十分な量及び期間存在する、ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含むテトラサイクリン又はその誘導体と、
（ｂ）眼血管新生を軽減する濃度及び用量の、ステロイド、ヘパリン、抗菌薬、抗プロスタグランジン薬、及び／又はメタロプロテナーゼ阻害剤からなる群から選択される複数の化合物とを含む薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項４０】
ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのドキシサイクリン等のテトラサイクリン又はその誘導体と、
約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌのトリアムシノロンアセトニド等のステロイドと、
約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの低分子量ヘパリン等のヘパリンとを含む請求項３９に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項４１】
ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのドキシサイクリン等のテトラサイクリン又はその誘導体と、
約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌのトリアムシノロンアセトニド等のステロイドと、
約１μｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌのフルルビプロフェン等の抗プロスタグランジン薬とを含む請求項３９に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項４２】
ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのドキシサイクリン等のテトラサイクリン又はその誘導体と、
約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌのトリアムシノロンアセトニド等のステロイドと、
約２０μｇ／ｍｌ〜約２００μｇ／ｍｌのアスコマイシン等のマクロライド系抗生物質とを含む請求項３９に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項４３】
ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのドキシサイクリン等のテトラサイクリン又はその誘導体と、
約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの低分子量ヘパリン等のヘパリンと、
約１μｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌのフルルビプロフェン等の抗プロスタグランジン薬とを含む請求項３９に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項４４】
ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのドキシサイクリン等のテトラサイクリン又はその誘導体と、
約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの低分子量ヘパリン等のヘパリンと、
約１μｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌのフルルビプロフェン等の抗プロスタグランジン薬とを含む請求項３９に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項４５】
ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのドキシサイクリン等のテトラサイクリン又はその誘導体と、
約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌのトリアムシノロンアセトニド等のステロイドと、
約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの低分子量ヘパリン等のヘパリンと、
約１μｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌのフルルビプロフェン等の抗プロスタグランジン薬とを含む請求項３９に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項４６】
ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのドキシサイクリン等のテトラサイクリン又はその誘導体と、
約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌのトリアムシノロンアセトニド等のステロイドと、
約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの低分子量ヘパリン等のヘパリンと、
約２０μｇ／ｍｌ〜約２００μｇ／ｍｌのアスコマイシン等のマクロライド系抗生物質とを含む請求項３９に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項４７】
ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのドキシサイクリン等のテトラサイクリン又はその誘導体と、
約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌのトリアムシノロンアセトニド等のステロイドと、
約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの低分子量ヘパリン等のヘパリンと、
約１μｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌのフルルビプロフェン等の抗プロスタグランジン薬と、
約２０μｇ／ｍｌ〜約２００μｇ／ｍｌのアスコマイシン等のマクロライド系抗生物質とを含む請求項３９に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項４８】
眼血管新生の治療方法であって、
ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含むテトラサイクリン又はその誘導体を、眼への送達に適した薬学的に許容可能な形態で略中性のｐＨで、眼血管新生の治療に十分な量及び期間、患者の眼に投与するステップを含むことを特徴とする眼血管新生の治療方法。
【請求項４９】
前記ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含むテトラサイクリン又はその誘導体が、ドキシサイクリン、ライムサイクリン、ミノサイクリン、デメクロサイクリン、及びオキシテトラサイクリンからなる群から選択される請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
眼血管新生の治療方法であって、
請求項１〜４７に記載の製剤を、眼血管新生の治療に十分な時間患者に投与するステップを含むことを特徴とする眼血管新生の治療方法。
【請求項５１】
眼血管新生の治療方法であって、
請求項１〜４７いずれかに記載の製剤を、角膜手術後に患者の眼に投与するステップを含むことを特徴とする眼血管新生の治療方法。
【請求項５２】
眼血管新生の治療方法であって、
請求項１〜４７に記載の製剤を一種以上、循環的腫瘍治療計画を以って患者の眼に投与して、腫瘍部位の血管成長及び増殖を軽減することを特徴とする眼血管新生の治療方法。
【請求項５３】
初期治療として、化学療法薬の投与を行うか、あるいは、非化学療法的治療である放射線治療、光線治療、及び熱療法の一種以上を行うステップを含む請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
請求項１〜４７に記載の製剤を一種以上ローテーションで、且つ該ローテーションのサイクル中異なるステージで投与する請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
上皮細胞上のＶＥＧＦの活動を阻害するように設計された抗血管新生薬を投与するステップを更に含む、請求項４８〜５０いずれかに記載の方法。
【請求項５６】
前記抗血管新生薬が、ｒｈｕＦａｂ  Ｖ２、ヒト化ＡＭＤ−Ｆａｂ、又は抗ＶＥＧＦアプタマーである請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
眼への送達に適した薬学的に許容可能な形態での、ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含むテトラサイクリン又はその誘導体の、眼血管新生治療用の薬剤の製造への略中性のｐＨでの使用であって、該ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含むテトラサイクリン又はその誘導体が、該治療に十分な量で存在するＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含むことを特徴とするテトラサイクリン又はその誘導体の使用。
【請求項５８】
前記ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含むテトラサイクリン又はその誘導体が、ドキシサイクリン、ライムサイクリン、ミノサイクリン、デメクロサイクリン、及びオキシテトラサイクリンからなる群から選択される請求項５７に記載の使用。
【請求項５９】
請求項１〜４７に記載の製剤の、眼血管新生治療用の薬剤の調製への使用。
【請求項６０】
上皮細胞表面のＶＥＧＦの活動を阻害するように設計された抗血管新生薬に加えた、請求項１〜４７に記載の製剤の眼血管新生治療用の薬剤の調製への使用。
【請求項６１】
前記抗血管新生薬が、ｒｈｕＦａｂ  Ｖ２、又はヒト化ＡＭＤ−Ｆａｂ、又は抗ＶＥＧＦアプタマーである請求項６０に記載の使用。
【請求項６２】
請求項１に記載及び明細書に実質的に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項６３】
請求項１に記載及び実施例に実質的に記載の薬学的に許容可能な眼用製剤。
【請求項６４】
請求項４８に記載及び明細書に実質的に記載の方法。
【請求項６５】
請求項４８に記載及び実施例に実質的に記載の方法。
【請求項６６】
請求項５５に記載及び明細書に実質的に記載の使用。
【請求項６７】
請求項５５に記載及び実施例に実質的に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、米国出願第１０／７８７，５８０号明細書（２００４年２月２６日出願）、米国出願第１０／８２８，９８２号明細書（２００４年４月２１日出願）、米国出願第１０／９３５，８５０号明細書（２００４年９月８日出願）、米国出願第１０／９３６，３０３号明細書（２００４年９月８日出願）、豪州仮特許出願第２００４９０６９３２号明細書（２００４年１２月３日出願）、及び豪州仮特許出願第２００４０６９３４号明細書（２００４年１２月３日出願）の利益を主張する。
【０００２】
上記出願及び本明細書中で引用する全ての文書は、本明細書中又は本明細書に参照により援用するすべての文書に記載する全ての製品に関する全てのメーカー指示書、説明書、製品仕様書、及び製品シートと共に、本明細書に参照により援用し、本発明の実施に使用されうる。
【０００３】
眼血管新生治療用製剤、並びに、眼病変を患う患者において眼血管新生を制限、減少、防止、または形成速度を減少させ且つ／又は既存の新生血管を退行させる治療法を開示する。
【背景技術】
【０００４】
眼血管新生は、角膜、網膜、又は脈絡膜における血管の病理的な内部成長である。血管成長すなわち形成は、様々な出来事により引き起こされ、視界を脅かす状態、更には出血及びその結果生じる瘢痕化、繊維形成等による失明にも繋がりうる。血管成長すなわち形成の原因としては、低酸素症（糖尿病で起こるもの等）、炎症応答（目瞼炎等）、微生物感染（角膜炎等）、物理的損傷（不適切なコンタクトレンズの使用等）、化学的損傷（毒素等）、薬物、又は他の因子（組織不適合等）が挙げられる。具体的には、炎症反応は角膜移植の後に起こりうる。眼球における微生物感染としては、トラコーマ、ウイルス性間質性角膜炎、及び角結膜炎が挙げられるが、これに限定されない。物理的損傷（例えば角膜損傷）は、酸性又はアルカリ性溶液への接触、外傷、長時間に渡るコンタクトレンズの装着等の不適切な衛生状態及び／若しくは不適切なコンタクトレンズの使用、又は硝酸銀等の化学薬品が原因と考えられる。眼血管新生を引き起こす他の因子としては、輪部溝の機械的刺激、角膜低酸素症、上皮細胞の侵食又は肥大が挙げられる。ドライアイ（結膜乾燥症）では、脱水状態によって上皮が剥がれ落ち、新しい血管が形成される。
【０００５】
公衆衛生上の大きな問題である眼血管新生の一形態は、角膜における血管新生であり、眼病疾患の大きな原因となっている。米国だけでも毎年１４０万人（人口の４％）が角膜血管新生（ＣｏＮＶ）を患っていると推測される。ＣｏＮＶは、角膜に影響を及ぼす疾患の多くに起こりうる。例えば、炎症（化学薬品によるやけど等）、免疫を介した症状（単純ヘルペス性角膜炎等）、同種移植反応、又は長時間装用コンタクトレンズによって起こるものと考えられる。このような損傷によって、輪部血管叢から毛細血管が侵入しＣｏＮＶが引き起こされ、間質浮腫、脂質沈着、結膜炎、及び瘢痕化が起こり視力の低下を招きうる。
【０００６】
ＣｏＮＶの病因は、血管新生因子及び抗血管新生因子の同定及び重要性という点でまだ完全に明らかになっておらず、角膜を無血管状態にするには血管新生分子及び抗血管新生分子の間でバランスが必要であることが判っている。この恒常性が崩れると、血管新生が起こりうる。具体的には、ＣｏＮＶは血管新生因子のアップ・レギュレーション若しくは抗血管新生因子のダウン・レギュレーション、又は双方が起こったときに発生する。幾つかの血管新生分子及び抗血管新生分子が角膜から単離されている。
【０００７】
多くの物質、例えば種々の成長因子（繊維芽細胞成長因子、形質転換成長因子、腫瘍壊死因子等）、プロスタグランジン、及びインターロイキンによって新生血管の形成が促進される。実験的及び臨床的ＣｏＮＶにおいて、様々な化合物、例えばステロイド、非ステロイド系抗炎症剤、シクロスポリンＡ、メトトレキサート、ＦＫ５０６、サリドマイド、及び他の抗血管新生因子が阻害剤として同定されている。
【０００８】
眼血管新生の治療方法はある程度成功している。明確なコンセンサスはないものの、治療方法は、可能ならば、基礎症状の治療を含む。すなわち、全体及び進行中の血管新生に対するコルチコステロイドの局所投与；肉芽組織（パンヌス）が浸潤した角膜表面の血管新生の治療用、大血管ジアテルミー及び角膜レーザー光凝固術；さらには重症な化学的損傷及び輪部上皮損失のための輪部移植が挙げられる。
【０００９】
局所的コルチコステロイド投与は、ＣｏＮＶの防止及び治療の主流であったが、必ずしも効果的ではなく、白内障、高眼圧症、緑内障、及び感染症等の深刻な合併症を伴うことがある。コルチコステロイドを血管新生治療に使用する際の潜在的な副作用が認識され、天然又は合成の他の血管新生阻害剤の探索が始まった。コルチコステロイドが様々な臨床及び実験的環境においてＣｏＮＶの防止に有効な薬剤であることは長年知られていたが、他の薬剤との併用に関しては、十分な研究がなされてなかった。
【００１０】
眼血管新生を軽減又は防止し且つ眼病変を治療しうる他の方法及び製剤が望まれている。
【００１１】
本願でいかなる文書を引用すなわち特定しても、そのような文書が本発明に対しての先行技術（prior  art）として利用可能であると認めることにはならない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
眼血管新生（角膜、網膜、結膜、及び／又は脈絡膜における新血管成長）治療に有用な製剤及び方法を開示する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明によれば、前記製剤は、マトリックスメタロプロテナーゼ（ＭＭＰ）活性を阻害する化学的に修飾されたテトラサイクリン（ＣＭＴ）を含む、テトラサイクリン又はその誘導体を含む製剤であって、前記テトラサイクリン又はその誘導体が、眼への送達に適した薬学的に許容可能な形態中に眼血管新生の軽減に十分な量で調製されることを特徴とする製剤である。
【００１４】
好ましくは、前記製剤は、マトリックスメタロプロテナーゼ（ＭＭＰ）活性を阻害する化学的に修飾されたテトラサイクリン（ＣＭＴ）を含む、テトラサイクリン又はその誘導体を含む製剤であって、前記テトラサイクリン又はその誘導体が、眼への送達に適した薬学的に許容可能な形態中に略中性のｐＨで、眼血管新生の軽減に十分な量で存在することを特徴とする製剤である。本発明によれば、前記製剤は、局所的眼球投与、眼球注射、又は眼内インプラント用の薬学的に許容可能な製剤であることが好ましく、また、リポソーム又は持続放出カプセル中に包含されうる。
【００１５】
本実施形態の一形態においては、本発明は、眼血管新生の軽減に十分な量のドキシサイクリンを略中性のｐＨで、局所投与、結膜下投与、又は眼球内投与用の賦形剤と共に有する製剤である。代替の実施形態においては、前記製剤は、デモクロサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、ライムサイクリン、又は化学的に修飾されたテトラサイクリンを、ドキシサイクリンの代わりに、又はドキシサイクリンに加えて含む。本実施形態では、前記製剤は、局所的眼球適用、眼球投与、又は眼内インプラント用の薬学的に許容可能な製剤であり、また、リポソーム又は持続放出カプセル中に包含させてもよい。
【００１６】
他の実施形態においては、前記製剤は、（ａ）ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含むテトラサイクリン又はその誘導体であって、眼への送達に適した薬学的に許容可能な形態中に略中性のｐＨで、眼血管新生の軽減に十分な量及び期間存在することを特徴とするテトラサイクリン又はその誘導体と、（ｂ）眼血管新生の軽減に十分な濃度及び用量の、ステロイド、ヘパリン、抗菌薬、抗プロスタグランジン薬、及び／又はメタロプロテナーゼ阻害剤からなる群から選択される少なくとも１つの他の化合物とを含む。さらに好ましくは、前記製剤は、テロイド、ヘパリン、抗菌薬、抗プロスタグランジン薬、及び／又はメタロプロテナーゼ阻害剤からなる群から選択される複数の化合物を、眼血管新生の軽減に十分な濃度及び用量で含む。例えば、このような製剤は、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン誘導体と、眼血管新生の軽減に十分な濃度及び用量のステロイドとを含みうる。
【００１７】
あるいは、前記製剤は、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの、ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含むテトラサイクリン又はその誘導体と、眼血管新生の軽減に十分な濃度及び用量のヘパリンとを含みうる。テトラサイクリン又はその誘導体をステロイド無しで使用することは、ステロイドが眼球内圧力を増加する場合（緑内障）に有益でありうる。このような製剤は、緑内障の患者または緑内障を患う危険性のある患者、及び緑内障手術後の患者にとって有益である。
【００１８】
さらに他の代替の形態において、前記製剤は、ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、眼血管新生の軽減に十分な濃度及び用量の抗プロスタグランジン薬とを含みうる。例えば、前記製剤は、０．０１５％フルルビプロフェンを含む１０ｍｇ/ｍｌ実濃度のドキシサイクリンを含みうる。
【００１９】
さらに他の代替の形態において、前記製剤は、ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、眼血管新生の軽減に十分な濃度及び用量の抗菌薬とを含みうる。
【００２０】
さらに他の代替の形態において、前記製剤は、ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、眼血管新生の軽減に十分な濃度及び用量のメタロプロテナーゼ阻害剤とを含みうる。
【００２１】
さらに他の代替の形態において、前記製剤は、ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、眼血管新生の軽減に十分な濃度及び用量のステロイド及びヘパリンとを含みうる。
【００２２】
他の形態において、本発明は眼血管新生を軽減する方法であって、ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含むテトラサイクリン又はその誘導体を、眼への送達に適した薬学的に許容可能な形態で略中性のｐＨで、眼血管新生の軽減に十分な量及び期間、患者の眼に投与するステップを含む方法である。投与は、局所的、結膜下及び眼球内経路でも、あるいは眼内インプラントで行ってもよい。前記製剤は、デモクロサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、ライムサイクリン、及び化学的に修飾されたテトラサイクリンのうちの少なくとも一種を含んでよい。本実施形態の好ましい形態において、前記製剤は、約２％の前記テトラサイクリン誘導体を含む。前記方法は、眼の前部及び／又は後部、角膜、網膜、脈絡膜等における血管新生を軽減しうる。
【００２３】
本発明の方法の他の実施形態においては、一種以上の上述の製剤が、循環的腫瘍治療計画を以って患者に投与され、腫瘍部における血管成長及び増殖が軽減される。本実施形態では、標準の腫瘍治療と並行して、該治療薬をローテーションさせて患者に体系的に投与することで、治療サイクル期間中の血管増殖が阻害される。
【００２４】
本発明の他の目的、特徴、及び利点の詳細は、上記及び、添付の特許請求の範囲を照らし合わせて下記の説明から明らかとなる。
【００２５】
本発明の理解は、下記の詳細な説明を添付の図面を参照しながら読むことにより、容易となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
概論（General）
当業者には、本明細書に記載した発明が、ここに具体的に記載したもの以外の改良及び改変を受けること可能性があることが理解されよう。本発明は、全てのそのような改良及び改変を含むものである。本発明はまた、明細書中で参照または示した全てのステップ、特徴、製剤、及び化合物を、個別又は集合的に含み、且つ任意の二つ以上の該ステップ又は該特徴、あるいはその全て又は任意の組み合わせを含む。
【００２７】
本明細書中に引用した文書、参考文献、特許出願又は特許の各々は、参照によりその全体を本明細書中に援用する。これは、読者がそれらを本明細書の一部として読み且つ見なすべきであることを意味する。本明細書中に引用した前記文書、参考文献、特許出願又は特許を繰り返し記載しないのは、簡潔にすることのみを目的としている。
【００２８】
本発明は、本明細書中に記載の具体的な実施形態に限定されず、それら具体的な実施形態の例示のみを目的としている。機能的に等価である製品、製剤及び方法は、本明細書に記載するように、明らかに本発明の範囲内に属する。
【００２９】
本明細書に記載の本発明は、１つ以上の値（サイズ、濃度等）の範囲を含みうる。値の範囲は、その範囲を画定する値を含む該範囲中の全ての値と、該範囲の境界を画定する値に隣接した値と同一若しくは略同一の結果をもたらす、該範囲に隣接した値とを含む。
【００３０】
本願の包袋は、少なくとも１つのカラー図面を含む。カラー図面の本願のコピーは、所要の費用を支払って米国特許商標庁に請求して入手可能である。
【００３１】
明細書中を通して、文脈から必要とされない限り、「含有する(comprise)」なる単語及びその変形、例えば「含有する(comprises)」又は「含有している(comprising)」は、提示した整数及び整数グループを含み、その他の整数及び整数グループを除外するものではないこと暗示する。また、本開示、特に、特許請求の範囲及び／又はパラグラフにおいて、「含有する(comprises)」、「含有した(comprised)」、「含有している(comprising)」等の用語は、米国特許法に帰属する意味を有する。すなわち、例えばそれらは「含む(includes)」、「含んだ(included)」、「含んでいる(including)」等を意味しうる。また、「〜から実質的になる(consisting  essentially  of,  consists  essentially  of)」は米国特許法に帰属する意味を有する。すなわち、例えば、その様な用語は、明確に記載されていないエレメントは含むが、従来技術に見出されるかあるいは発明の基本的若しくは新規な特徴に影響を及ぼすエレメントは除外する。
【００３２】
本明細書に使用する用語の他の定義は、本発明の説明中に見出さられ明細書全体に適用される。特に定義しない限り、本明細書に使用する他の全ての科学的・技術的用語は、本発明が属する分野の当業者に通常理解される意味と同じ意味を有する。
【００３３】
発明の詳細な開示(Detailed  Disclosure  of  the  invention)
眼血管新生治療用製剤、並びに、眼血管新生を制限、減少、防止、または形成速度を減少させ且つ／又は既存の新生血管の退行（一般的に「軽減した新生血管」という）を引き起こさせる治療法を開示する。該用語は、あらゆる方法によるあらゆる阻害度を網羅するものであり、且つ既存の新生血管のあらゆる退行の程度をも網羅する。
【００３４】
眼血管新生は表面又は深部で発生し、間質出血、瘢痕化、脂質沈着等によって光透過性の損失を招きうる。血管新生は、角膜、網膜、結膜、又は脈絡膜等、眼のあらゆる領域において発生しうる。新生血管が存在することによって、血管新生緑内障又は高眼圧症と命名された、眼内圧の増加を招きうる。新生血管は、出血及び繊維症の原因となり、眼構造が破壊され、その結果視力が低下しうる。例えば、角膜がやけどを負うと新しい血管が形成されて、角膜を浸潤・貫通して視力を低下させる。角膜移植においては、角膜輪部由来の新生血管が角膜を貫通して、移植組織の拒絶を生じうる。したがって、新生血管の阻害はより大きいほうが望ましく、また完全に阻害することが特に望ましいが、できる限り制御又は防止することが望ましい。
【００３５】
本明細書で使用するように、「眼血管新生」という語句及びその複数形は、眼のあらゆる疾患又は病的症状、すなわち病状の１つとしての血管成長又は増殖によって引き起こされる眼疾患のことを言う。このような眼疾患としては、とりわけ、眼血管新生；網膜疾患（例えば、糖尿病性網膜症、鎌状赤血球網膜症、未熟網膜症、黄斑変性症（早期発症黄斑変性症、新生血管黄斑変性症、加齢性黄斑変性症等））；虹彩炎；虹彩ルベオーシス；炎症性疾患；慢性的ブドウ膜炎等の前部及び後部ブドウ膜炎；新生物（網膜芽種、偽網膜膠腫）；Ｆｕｃｈｓ虹彩異色性虹彩毛様体炎；血管新生緑内障；角膜血管新生（炎症性、移植性）；虚血性網膜症；血管疾患後遺症（網膜虚血、脈絡膜血管不足、脈絡膜血栓、頚動脈虚血）；脈絡膜血管新生；翼状片；視神経血管新生；眼の貫通又は打撲及び近視性網膜症のような滲出性網膜症、様々の原因で起こる類嚢胞黄斑浮腫、滲出性黄斑変性症、糖尿病性黄斑浮腫、中心静脈閉塞、枝静脈閉塞による血管新生；網膜のレーザー治療又は角膜移植、又はレーシック（Ｒ）術、レーザー屈折矯正角膜切除術（ＰＲＫ）、若しくは他の角膜手術等の眼の外科手術後の治療として起こる、未熟網膜症、毛様体炎、鎌状赤血球網膜症、及び黄斑浮腫、等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。望ましくは、本発明の方法および製剤は、眼疾患、低酸素症、外傷、物理的又は化学的損傷等によるあらゆる出来事に起因する眼血管新生を阻害しうる。
【００３６】
種々の実施形態において、本発明の製剤が、眼血管新生病理学に加えて、あるいはその治療として、患者に投与される。
【００３７】
本発明によれば、前記製剤は、マトリックスメタロプロテナーゼ（ＭＭＰ）活性を阻害する化学的に修飾されたテトラサイクリン（ＣＭＴ）を含む、テトラサイクリン又はその誘導体を含む製剤であって、前記テトラサイクリン又はその誘導体が、眼への送達に適した薬学的に許容可能な形態中に眼血管新生の軽減に十分な量で存在することを特徴とする製剤である。
【００３８】
本発明に使用するテトラサイクリン化合物を、眼またはその周辺組織に投与可能或いは塗布可能な形態とするだけでよいことが理解されよう。したがって、前記テトラサイクリン化合物を、酸性又は塩基性の環境で調製しても、及び／或いは投与に適した最終形態で提供してもよい。しかしながら、前記テトラサイクリン化合物は、眼球環境への投与に適した形態に調製することが好ましい。前記テトラサイクリン化合物は、眼と生理学的にある程度親和性を有する最終形態となるように調製することがより好ましい。例えば、前記製剤を眼に注入する場合、該製剤は眼への挿入に生理学的に適していなければならない。同様に、前記製剤を局所投与用に調製した場合、必ずしも眼球環境と生理学的に親和的ではなく作用部位に到達するまでに親和的となる形態に該製剤を調製してもよい。
【００３９】
望ましくは、前記製剤は、マトリックスメタロプロテナーゼ（ＭＭＰ）活性を阻害する化学的に修飾されたテトラサイクリン（ＣＭＴ）を含む、テトラサイクリン又はその誘導体を含む製剤であって、前記テトラサイクリン又はその誘導体が、眼への送達に適した薬学的に許容可能な形態中に略中性のｐＨで、眼血管新生の軽減に十分な量で存在することを特徴とする製剤である。本発明によれば、前記製剤は、局所的眼球適用、眼球投与、又は眼内インプラント用の薬学的に許容可能な製剤であることが好ましく、また、リポソーム、持続放出カプセル、又は本明細書に記載の他のあらゆる形態中に包含させてもよい。
【００４０】
本明細書中で使用するように、「略中性のｐＨ」という語句は、約５から約９の間のｐＨ値のことを言い、例えば、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５及びその誤差を含むｐＨ値を含む。この語句が、眼球環境へ注入される製剤と共に使用された場合、この語句は、投与用最終製剤の量が眼球環境と略親和的となるレベル以上であるという更なる限定を有する。
【００４１】
前記製剤中の前記テトラサイクリン又はその誘導体の濃度は、約1ｐｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌの範囲である。前記テトラサイクリン又はその誘導体は、実質的に毒性のない量すなわち濃度で投与されることが好ましく、これは、投与経路、使用化合物、及び多くの患者関連因子によって異なりうる。例として、テトラサイクリン誘導体を最大約２００μｇ用量で硝子体投与した場合、実質的に毒性はなく、また、約１ｐｇ/ｍｌ〜約２ｍｇ/ｍｌ用量で眼内投与した場合、実質的に毒性はない。一般的に、高用量投与は局所投与または結膜下投与の場合には、毒性はない。
【００４２】
本明細書中に使用されるように、マトリックスメタロプロテナーゼ（ＭＭＰ）活性を阻害する化学的に修飾されたテトラサイクリン（ＣＭＴ）を含む、テトラサイクリン又はその誘導体としては、とりわけ、ドキシサイクリン、デメクロサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、ライムサイクリン、又は化学的に修飾されたテトラサイクリンが挙げられる。化学的に修飾されたテトラサイクリンとしては、デメクロサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、ＭＭＰ−８及びＭＭＰ−９の合成を阻害する同類の化合物が挙げられる。これらの例としては、ＣＭＴ−３１５、ＣＭＴ−３，ＣＭＴ−８、及びＣＭＴ−３０８等のＣＭＴ、及び６−デメチル−６−デオキシ−４−デジメチルアミノテトラサイクリン（ＣＯＬ−３）等は、例えば、Liuらによる“A  Chemically  Modified  Tetracycline  (CMT-3)  Is  a  New  Antifungal  Agent  in  Antimicrobial  Agents  Chemother.  2000  May;46:1447”また、Seftorらによる“Targeting  the  Tumor  Microenvironment  with  Chemically  Modified  Tetracyclines:  Inhibition  of  Laminin  5γ2  Chain  Promigratory  Fragments  and  Vasculogenic  Mimicry  2000  November;1:1173”に記載のものが挙げられ、これらを参照により本明細書に援用する。
【００４３】
テトラサイクリン類は、その抗菌活性とは独立して生物学的効果を発揮する。すなわち、テトラサイクリン類は、ＭＭＰを阻害して病原組織破壊を防ぐことができる。更に、最近の研究によりテトラサイクリン類及びメタロプロテアーゼ阻害剤が腫瘍進行、骨吸収、及び血管形成を抑制し、抗炎症作用を有しうることが示唆されている。したがって、テトラサイクリン類及びその同類化合物が眼領域において血管成長及び増殖を軽減する有益な効果のメカニズムとしては、腫瘍進行に関係する亜鉛依存性プロテナーゼ酵素である、メタロプロテアーゼの阻害が考えられる。本明細書に記載の本発明の製剤及び方法による、そのようなメタロプロテアーゼの選択的阻害によって、眼血管新生を生じる反応が阻害されるものと考えられる。そのようなメタロプロテアーゼ阻害剤も本発明に含まれる。
【００４４】
本発明の極めて好ましい形態においては、ドキシサイクリンは、前記製剤中に使用されている前記テトラサイクリン誘導体である。ドキシサイクリン（４−（ジメチルアミノ）−１，４，４ａ，５，５ａ，６，１１，１２ａ−オクタヒドロ３，５，１０，１２，１２ａ−ペンタヒドロキシ−６−メチル−１，１１−ジオキソ−２−ナフタセンカルボキサミドモノハイドレート、Ｃ２２Ｈ２４Ｎ２Ｏ８・Ｈ２Ｏ）は、テトラサイクリン系抗生物質クラスにおける広域抗生物質であり、市販されている。
【００４５】
本発明のこの形態によれば、前記製剤は、眼血管新生の軽減に十分な量のドキシサイクリンを略中性のｐＨで、局所投与、結膜下投与、又は眼球内投与用の賦形剤と共に有する。例えば、前記製剤は、略中性のｐＨで２％のドキシサイクリンを含む。
【００４６】
本発明のこの形態で使用されるドキシサイクリンの濃度は、約０．０１μｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの範囲である。具体的には、ドキシサイクリン濃度は、約０．０５ｍｇ/ｍｌ〜約１ｍｇ/ｍｌの範囲である。あるいは、ドキシサイクリン濃度は、約０．０５ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの範囲である。さらに他のドキシサイクリン濃度としては、約１ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌの範囲である。これら用量は、患者に実質的に無害である。抗血管形成効果のほかに、ドキシサイクリンは、ステロイドを投与した眼の約０．５％に起こる眼内炎の発生を減少可能である。
【００４７】
他の実施形態において、本発明は、眼用の薬学的に許容可能な（すなわち、当業者に周知のバッファー及び賦形剤を含んだ）製剤であって、（ａ）眼への送達に適した薬学的に許容可能な形態中に略中性のｐＨで、眼血管新生の軽減に十分な量及び期間存在する、ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含むテトラサイクリン又はその誘導体と、（ｂ）眼血管新生の軽減に十分な濃度及び用量の、ステロイド、ヘパリン、抗菌薬、抗プロスタグランジン薬、及び／又はメタロプロテナーゼ阻害剤からなる群から選択される少なくとも１つの化合物とを含む。
【００４８】
第一の形態において、本発明の製剤は、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの、ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含むテトラサイクリン又はその誘導体と、約０．１ｐｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌのステロイドとを含む。
【００４９】
ステロイド類は、通常、加齢性黄斑変性症等の光線力学治療期間中に、ブドウ膜炎、真性糖尿病、網膜中心静脈閉塞、及び偽水晶体に次いで起こる糖尿病性網膜症、突発性傍中心窩毛細血管拡張症、黄斑浮腫等の眼病変の治療に投与され、また、硝子体後部を術中に視覚化するために投与される。該ステロイド類もまた、眼血管新生を阻害することが望ましい。眼球ステロイド治療の望ましくない深刻な副作用は、緑内障又は高眼圧症と命名された、眼内圧の増加である。緑内障患者、あるいは緑内障に罹りやすい人へのステロイド治療は、許容外に高い眼圧を招く危険性があり、眼圧を低下させる外科手術が必要になる可能性がある。患者をトリアムシノロンで治療するか他のステロイド類で治療するか決定するうえで、このような危険性と有益性との間でバランスをとらなければならない。患者がステロイド治療によって緑内障に罹る危険性を予測するための製剤及び方法が、係属中の米国出願番号１０／７８７，５８０に開示されており、本明細書中に参照によりその全体を援用する。
【００５０】
眼内投与に使用されるステロイド類としては、トリアムシノロン（Ａｒｉｓｔｏｃｏｒｔ（Ｒ）；Ｋｅｎａｌｏｇ（Ｒ））、ベタメタゾン（Ｃｅｌｅｓｔｏｎｅ（Ｒ））、ブデソニド、コルチゾン、デキサメタゾン（Ｄｅｃａｄｒｏｎ-ＬＡ（Ｒ）；  Ｄｅｃａｄｒｏｎ（Ｒ）リン酸塩；Ｍａｘｉｄｅｘ（Ｒ），及びＴｏｂｒａｄｅｘ（Ｒ）（Ａｌｃｏｎ））、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン（ＤｅｐｏＭｅｄｒｏ（Ｒ）、ＳｏｌｕＭｅｄｒｏ（Ｒ））、プレドニゾロン（プレドニゾロン酢酸塩、例えばＰｒｅｄ  Ｆｏｒｔｅ（Ｒ）（アラガン）；Ｅｃｏｎｏｐｒｅｄ（Ｒ）  及び  Ｅｃｏｎｏｐｒｅｄ  Ｐｌｕｓ（Ｒ）（Ａｌｃｏｎ）；ＡＫ−Ｔａｔｅ（Ｒ）（Ａｋｏｒｎ）；Ｐｒｅｄ  Ｍｉｌｄ（Ｒ）（アラガン）；プレドニゾンリン酸ナトリウム（Ｉｎｆｌａｍａｓｅ  Ｍｉｌｄ（Ｒ）及びＩｎｆｌａｍａｓｅ  Ｆｏｒｔｅ（Ｒ）（Ｃｉｂａ）；Ｍｅｔｒｅｔｏｎ（Ｒ）（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＡＫ−Ｐｒｅｄ（Ｒ）（Ａｋｏｒｎ））、フルオロメトロン（フルオロメトロン酢酸塩（Ｆｌａｒｅｘ（Ｒ）（Ａｌｃｏｎ）；Ｅｆｌｏｎｅ（Ｒ））、フルオロメトロンアルコール（ＦＭＬ（Ｒ）及びＦＭＬ-Ｍｉｌｄ（Ｒ）（アラガン）；ＦｌｕｏｒｏＯＰ（Ｒ）））、リメキソロン（Ｖｅｘｏｌ（Ｒ）（Ａｌｃｏｎ））、メドリゾンアルコール（ＨＭＳＯ（Ａｌｌｅｒｇａｎ））；ロテプレドノールエタボネート（Ｌｏｔｅｍａｘ（Ｒ）及びＡｌｒｅ（Ｒ）（Ｂａｕｓｃｈ＆Ｌｏｍｂ）、１１−デオキシコルチゾル、及び酢酸アネコルタブ（Ａｌｃｏｎ）が挙げられるが、これらに限定されず、上記列挙は例示目的のみで排他的ではないことが理解されよう。
【００５１】
本発明の極めて好ましい形態においては、前記製剤中に使用されるステロイドは、Billson及びPenfoldに付与された米国特許第５，７７０，５８９号（米国出願第０８／５８６，７５０号明細書）記載の化合物から選択される１１−置換−１６α，１７α−置換メチレンジオキシステロイドであり、該特許はまた、本明細書中に参照によりその全体を援用する。あるいは、該化合物は、Ｆｒｉｅｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９５８）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８０，２３３８（１９５８）、米国特許第２，９９０，４０１号明細書、米国特許第３，０４８，５８１号明細書、又は米国特許第３，０３５，０５０号明細書に記載のステロイドであり、各々を本明細書中に参照によりその全体を援用する。また、これら刊行物は共同して、上記化合物の製造方法を提供し、このような製造方法を開示する目的で援用する。該方法で使用されるステロイドとしては、トリアムシノロンアセトニドが望ましい。
【００５２】
本発明の製剤中のステロイド濃度は、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌの範囲である。より好ましくは、ステロイド濃度は、約１ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌの範囲である。あるいは、ステロイド濃度は、約２０ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌ、又は約２０ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌの範囲である。
【００５３】
特定の製剤中に使用されるステロイドの濃度は、使用するステロイドに依存する。例えば、トリアムシノロンアセトニド（アセトンを有する９α−フルオロ−１１，１３，１６ａ，１７，２１テトラヒドロキシ−プレグナ−１，４ジエン−３，２０−ジオン環状１６，１７−アセタール（Ｃ２４Ｈ３１ＦＯ６））  Ｋｅｎａｃｏｒｔ（Ｒ）、Ｋｅｎａｌｏｇ（Ｒ）（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ社、ニュージャージー州プリンストン）を、約４ｍｇ〜８ｍｇの範囲の治療用量で、例えば、硝子体内投与してよい。対照的に、トリアムシノロンと比べて眼圧を上昇させる見込みは低いが眼中では使用されないステロイドである酢酸アネコルタブは、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの範囲の用量で投与される。
【００５４】
第二の形態において、本発明の製剤は、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの、ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含むテトラサイクリン又はその誘導体と、約０．１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのヘパリンとを含む。テトラサイクリン又はその誘導体をステロイド無しで使用することは、ステロイドが眼球内圧力を増加する場合（緑内障）に有益でありうる。したがって、本発明のこの形態の製剤は、緑内障の患者または緑内障を患う危険性のある患者、及び緑内障手術後の患者にとって有益である。
【００５５】
ヘパリンは、グリコサミノグリカンと命名された、抗凝固活性を有する直鎖陰イオン性ムコ多糖の異種グループである。主要な糖類は、ａ−Ｌ−イズロン酸２−硫酸塩、２−デオキシ−２−サルファアミノ−α−Ｄ−グルコース６−硫酸塩、（３−Ｄ−グルクロン酸、２−アセトアミド−２−デオキシ−ａ−Ｄ−グルコース、及びα−Ｌ−イズロン酸）である。これら糖類は異なる量で存在してグリコシド結合で互いに結合し、様々なサイズのポリマーを形成している。ヘパリンは、共有結合した硫酸塩とカルボキシル基を含むため、強酸性である。ヘパリンナトリウムでは、硫酸塩の酸性プロトンが部分的にナトリウムイオンと置換している。本発明の一実施例において、低分子量ヘパリンが使用される。低分子量ヘパリンは、標準ヘパリンを化学的または酵素的に解重合することによって得られるものであり、市販されている。標準ヘパリンの分子量は、約５，０００〜約３０，０００ダルトンであり、低分子量ヘパリンの分子量は、約１，０００〜約１０，０００ダルトンである。標準ヘパリンと比べ、低分子量ヘパリンのタンパク質への結合性は低く、生体利用効率が高く、血小板との相互作用が低く予想可能な用量応答及び用量依存性血漿レベルを引き起こし、所定の抗トロンビン効果に対する出血が少ない。低分子量ヘパリンは、低硫酸化、高アセチル化ヘパリンである、ヘパリン硫酸塩であってよく、これらヘパリンはすべて、市販されている（例えば、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州セントルイス）。
【００５６】
ヘパリン又は低分子量ヘパリンが血管成長及び増殖を軽減する有益な効果のメカニズムとしては、多陽イオン性血管新生因子に容易に結合可能な、その多陰イオン性構造が考えられる。ヘパリンが結合した血管新生因子の生物活性は減少するため、新しい血管形成を促進しない。生体内では、ヘパリン硫酸塩は、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）及び上皮細胞表面と結合している。ＥＣＭ中のヘパリン硫酸塩は、即効効果の発揮が必要な際に放出可能な、活性成長因子を貯蔵する役目があると考えられる。可溶性ヘパリンは、ＥＣＭ上で、成長因子及びタンパク質と結合するために、ヘパリン硫酸塩と競合しそれらを放出しうる。非分画ヘパリン（ＵＦＨ）は、成長因子の血漿内レベルを増加しうる。血管形成を促進しうるＵＨＦとは異なり、低分子量ヘパリンはサイズが小さいため、成長因子の高親和性受容体への結合を阻害しうる。低分子量ヘパリンは、ＥＣＭから放出された血管新生因子へ結合するだけでなく、競合的（拮抗的）に血管新生因子受容体に結合することによって、損傷した新生血管角膜に作用しうる。
【００５７】
一実施形態において、ヘパリン又は低分子量ヘパリンの濃度は、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの範囲である。あるいは、ヘパリン又は低分子量ヘパリンは、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度で投与することが好ましい。本発明の更に好ましい形態においては、ヘパリン又は低分子量ヘパリンの濃度は、約０．５ｍｇ／ｍｌから約１５ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌ（例えば、１００ｍｇ／ｍｌの低分子量ヘパリン製剤の０．１ｍｌ投与）の範囲である。様々な実施形態において、ヘパリン又は低分子量ヘパリンの濃度は、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約２．５ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、又は約５ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの範囲でありうる。この範囲内のいかなる濃度も使用してよい。
【００５８】
極めて好適な形態において、以下の製剤が使用されうる。すなわち、約２０ｍｇ／ｍｌのドキシサイクリンと約１０ｍｇ／ｍｌの低分子量ヘパリンの組み合わせ（１：１）（実際の濃度：ドキシサイクリン１０ｍｇ／ｍｌ及び低分子量ヘパリン５ｍｇ／ｍｌ）。
【００５９】
第三の形態において、本発明の製剤は、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの、ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含むテトラサイクリン又はその誘導体と、約０．１μｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの抗プロスタグランジン薬とを含む（例えば、フルルビプロフェン約１０ｍｇ／ｍｌ用量に対して１μｇ／ｍｌ）。
【００６０】
プロスタグランジンアンタゴニストとも命名されている抗プロスタグランジン薬は、プロスタグランジン阻害効果を引き起こすのに十分な濃度で投与されうる。一例として、フルルビプロフェン等の抗プロスタグランジン薬は、約０．００１％（ｗ/ｖ）〜約０．５％（ｗ/ｖ）の濃度で投与されうる。例として、ＯＣＵＦＥＮ（Ｒ）（フルルビプロフェンナトリウム  ０．０３％（アラガン）、（±）−２−（２−フルオロ−４−ビフェニルイル）−プロピオン酸ナトリウム二水和物  ０．０３％）が約０．００３％（ｗ/ｖ）〜約０．３％（ｗ/ｖ）の濃度で投与されうる。フルルビプロフェン以外の抗プロスタグランジン薬を含んでいてもよい。抗プロスタグランジン薬は、前述の用量及び方法で投与してよく、例としては、インドメタシン、ケトロラク，トロメタミン０．５％（（±）−５−ベンゾイル−２，３ジヒドロ−１Ｈ−ピロリジン−１−カルボン酸、２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）１，３−プロパンジオールを有する化合物（１：１）（ＡＣＵＬＡＲ（Ｒ）  アラガン、カリフォルニア州アーバイン）、メクロフェナメート、フルオビプロフェン、及び非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）のピロロピロール群化合物が挙げられる。例えば、ＡＣＵＬＡＲ（Ｒ）は、約０．００３％（ｗ/ｖ）〜約０．３％（ｗ/ｖ）の濃度で投与されうる。一実施例において、ＡＣＵＬＡＲ（Ｒ）の濃度は約０．３％（ｗ/ｖ）である。
【００６１】
具体的な実施形態において、以下の製剤が使用されうる。すなわち、約０．０３％（ｗ/ｖ）のフルルビプロフェンと約２０ｍｇ／ｍｌのドキシサイクリンとの組み合わせ（１：１）である。例えば、この製剤は、１０ｍｇ／ｍｌのドキシサイクリンを有する実濃度０．０１５％のフルルビプロフェンを含有しうる。
【００６２】
第四の形態において、本発明の製剤は、ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、約２０μｇ／ｍｌ〜約２００μｇ／ｍｌ（約０．００２％（ｗ/ｖ）〜約０．０２％（ｗ/ｖ））の抗菌薬（例えばマクロライド系抗生物質）とを含む。
【００６３】
マクロライド系抗生物質の有益な効果のメカニズムとしては、抗炎症効果が考えられる。
【００６４】
本発明の製剤に添加可能なマクロライド系抗生物質としては、とりわけ、タクロリムス、シクロスポリン、シロリムス、エバロリムス、アスコマイシン、エリスロマイシン、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、クリンダマイシン、リンコマイシン、ジリスロマイシン、ジョサマイシン、スピラマイシン、ジアセチル-ミデカマイシン、チロシン、ロキシスロマイシン、ＡＢＴ−７７３、テリスロマイシン、ロイコマイシン、リンコサミド等が挙げられる。他の抗生物質としては、アミノグリコサイド類（ストレプトマイシン、アミカシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン等）、セファロスポリン類（ペニシリン等のβ−ラクタム系）、テトラサイクリン系、アシクロビル、アマンタジン、ポリミキシンＢ、アンフトテリシンＢ、アモキシシリン、アンピシリン、アトバクオン、アジスロマイシン、アジスロマイシン、バシトラシン、セファゾリン、セフェピム、セフォタキシム、セフォテタン、セフポドキシム、セフタジジム、セフチゾキシム、セフトリアキゾン、セフロキシム、セファレキシン、クロラムフェニコール、クロチマゾール、シプロフロキサシン、クラリスロマイシン、クリンダマイシン、ダプソーン、ジクロキサシリン、フルコナゾール、フォスカーネット、ガンシクロビル、ガチフロキサシン、グリセオフルビン、イソニアジド、イタコナゾール、ケトコナゾール、メトロニダゾール、ナフシリン、ネオマイシン、ニトロフラントイン、ナイスタチン、ペンタミジン、リファンピン、リファマイシン、バラシクロビル、バンコマイシン等が挙げられる。これら抗生物質の適用、有効量、処方、禁忌、製造供給元等は、当業者に知られている。
【００６５】
マクロライド系抗生物質は、約２０μｇ／ｍｌ〜約２００μｇ／ｍｌ（約０．００２％（ｗ/ｖ）〜約０．０２％（ｗ/ｖ））の濃度で投与可能である。マクロライド系抗生物質製剤および用量は、係属中の米国出願番号１０／６６７，１６１及び１０／７５２，１２４号明細書に記載されており、各々を本明細書中にその全体を参照により援用する。
【００６６】
マクロライド系抗生物質の他に、前記製剤はミコフェノール酸を含有可能である。薬学的に許容可能な局所投与用溶液として調製した場合、このような製剤は約０．５％（ｗ/ｖ）〜約１０％（ｗ/ｖ）のミコフェノール酸を含みうる。好ましくは、薬学的に許容可能な局所投与用溶液中のマクロライド系抗生物質及び／又はミコフェノール酸の濃度は、約３％（ｗ/ｖ）〜約５％（ｗ/ｖ）の範囲でありうる。他の実施形態において、薬学的に許容可能な局所投与用溶液中のマクロライド系抗生物質及び／又はミコフェノール酸の濃度は、約１％（ｗ/ｖ）〜約３％（ｗ/ｖ）の範囲でありうる。他の実施形態において、薬学的に許容可能な局所投与用溶液中のマクロライド系抗生物質及び／又はミコフェノール酸の濃度は、約３％（ｗ/ｖ）〜約１０％（ｗ/ｖ）の範囲でありうる。他の実施形態において、糖尿病性網膜症、加齢性黄斑変性症、又は網膜色素変性症治療用の局所眼用製剤中のマクロライド系抗生物質及び／又はミコフェノール酸の濃度は、約０．１％（ｗ/ｖ）〜約１０％（ｗ/ｖ）の範囲でありうる。他の実施形態において、マクロライド系抗生物質及び／又はミコフェノール酸が持続放出用のマトリックス又はポリマーに結合している場合、眼内濃度４０μｇ／ｍｌを超えない範囲で最大約２％、約５％、又は約１０％を超える濃度のマクロライド系抗生物質及び／又はミコフェノール酸が局所投与用に製剤化される。
【００６７】
第五の形態において、前記製剤は、ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、血管新生を軽減する濃度および用量のメタロプロテナーゼ阻害剤とを含む。
【００６８】
メタロプロテナーゼ阻害剤としては、マトリックスメタロプロテナーゼを特異的に阻害するＴＩＭＰ−１等の天然タンパク質、メタロプロテナーゼ生成を強力且つ特異的に阻害するバチマスタット（ＢＢ−９４）及びマリマスタット（ＢＢ−２５１６）等の合成メタロプロテナーゼ阻害剤等が挙げられる。これら阻害剤は細胞外マトリックスを分解して腫瘍浸潤及び転移を促進するだけでなく、ホスト防衛機構および通常の細胞機能を制御する。本発明の製剤及び方法においては、選択的阻害が血管新生を引き起こす反応を阻害すると思われる。このようなメタロプロテナーゼ阻害剤も本発明に含まれる。記載した２４種のＭＭＰのうち、コラゲナーゼＩ及びＩＩＩ（ＭＭＰ−１及びＭＭＰ−１３）、ゼラチナーゼＡ及びＢ（ＭＭＰ−２及びＭＭＰ−９）、ストロメリシン（ＭＭＰ−３）、マトリリシン（ＭＭＰ−７）、及び膜タイプＭＭＰ（ＭＭＰ−１４）の８種が角膜において確認されている。
【００６９】
本発明の代替の実施形態においては、前記製剤は、（ａ）眼への送達に適した薬学的に許容可能な形態中に略中性のｐＨで、眼血管新生の軽減に十分な量及び期間存在する、ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含むテトラサイクリン又はその誘導体と、（ｂ）眼血管新生の軽減に十分な濃度及び用量の、ステロイド、ヘパリン、抗菌薬、抗プロスタグランジン薬、及び／又はメタロプロテナーゼ阻害剤からなる群から選択される複数の化合物とを含む。
【００７０】
前記製剤中にステロイド、ヘパリン、抗菌薬、抗プロスタグランジン薬、及び／又はメタロプロテナーゼ阻害剤の複数の化合物が存在する場合、好適な化合物及びその用量は上述の通りである。本発明の例示の形態において、このような製剤は以下のようなものである。
（１）ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体（ドキシサイクリン等）と、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌのステロイド（トリアムシノロンアセトニド等）と、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのヘパリン（低分子量ヘパリン等）とを含む製剤。
（２）ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体（ドキシサイクリン等）と、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌのステロイド（トリアムシノロンアセトニド等）と、約１μｇ/ｍｌ〜約１０ｍｇ/ｍｌの抗プロスタグランジン薬（フルルビプロフェン等）とを含む製剤。
（３）ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体（ドキシサイクリン等）と、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌのステロイド（トリアムシノロンアセトニド等）と、約２０μｇ／ｍｌ〜約２００μｇ／ｍｌのマクロライド系抗生物質（アスコマイシン等）とを含む製剤。
（４）ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体（ドキシサイクリン等）と、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのヘパリン（低分子量ヘパリン等）と、約１μｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの抗プロスタグランジン薬（フルルビプロフェン等）とを含む製剤。
（５）ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体（ドキシサイクリン等）と、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのヘパリン（低分子量ヘパリン等）と、約１μｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの抗プロスタグランジン薬（フルルビプロフェン等）とを含む製剤。
（６）ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体（ドキシサイクリン等）と、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌのステロイド（トリアムシノロンアセトニド等）と、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのヘパリン（低分子量ヘパリン等）と、約１μｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの抗プロスタグランジン薬（フルルビプロフェン等）とを含む製剤。
（７）ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体（ドキシサイクリン等）と、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌのステロイド（トリアムシノロンアセトニド等）と、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのヘパリン（低分子量ヘパリン等）と、約２０μｇ／ｍｌ〜約２００μｇ／ｍｌのマクロライド系抗生物質（アスコマイシン等）とを含む製剤。
（８）ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体（ドキシサイクリン等）と、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌのステロイド（トリアムシノロンアセトニド等）と、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのヘパリン（低分子量ヘパリン等）と、約１μｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの抗プロスタグランジン薬（フルルビプロフェン等）と、約２０μｇ／ｍｌ〜約２００μｇ／ｍｌのマクロライド系抗生物質（アスコマイシン等）とを含む製剤。
【００７１】
熟練した読者には、本発明の上記製剤が眼環境に滞留する期間が、とりわけ、製剤中に使用した化合物の薬理的性質、該化合物の濃度及び生体利用効率、疾患の種類、投与経路、好ましい治療効果期間等の要因に依存することが理解されよう。このバランスの均衡は、眼中で必要とされる効果期間及び治療対象の疾患に依存することが多い。本発明に従って調製した製剤は、数時間〜数ヶ月、好ましくは数年の滞留期間を有することが好ましいが、後者の滞留期間では特別な送達システムが必要となる。このような送達システムの例示的形態の幾つかを以下に開示する。特に好ましくは、本明細書中に開示した製剤は、時間単位（すなわち１〜２４時間）、日単位（すなわち１日、２日、３日、４日、５日、６日、又は７日）又は週単位（すなわち１週間、２週間、３週間、４週間）の滞留期間（すなわち眼内持続時間）を有する。あるいは、前記製剤は、４、５、６、７〜１２ヶ月を超えた滞留期間を可能として、少なくとも２〜３ヶ月、例えば、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月の滞留期間を有する。
【００７２】
本発明の医薬品製剤に使用する正確な製剤設計は、広範囲の商業的及び科学的基準によって変化する。熟練した読者は、本発明の上記製剤が他の薬剤を含みうることを理解するであろう。例えば、本発明の製剤は、生理食塩水をビークルとして使用して調製することが好ましい。該製剤のｐＨは、当業者に知られた適当な緩衝液システム（酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液等）を用いて略中性（例えば、６．５〜７．４の範囲で約７．４）に維持されうる。
【００７３】
前記製剤は、更に、薬学的に許容可能な添加剤（希釈剤、キャリア、補助薬、賦形剤すなわち非毒性、非治療性、非免疫性安定剤等）を少なくとも含んでもよい。好ましくは、前記薬学的に許容可能な添加剤は、眼科的に許容可能であるべきで、硝子体との親和性を有することが好ましく、また、眼に視力を低下させる残留物を残さないものでなければならない。望ましくは、前記製剤中に使用されるあらゆる薬学的に許容可能な添加物は、硝子体内蓄積注射としての前記医薬品製剤の送達に適することが好ましい。
【００７４】
記薬学的に許容可能な製剤の調製に使用する希釈剤としては、該製剤の生物活性に対して過度に影響を及ぼさないようなものを選ぶことが好ましい。注射可能な製剤に特に有用なそのような希釈剤の例としては、水、種々の生理食塩水、有機又は無機塩溶液、リンガー液、デキストロース液、ハンクス液等が挙げられる。
【００７５】
また、前記製剤は、他の緩衝液、希釈剤、キャリア、補助薬、賦形剤等の添加剤を含んでもよい。トリス緩衝液又はリン酸緩衝液等、眼への適用に適切である薬学的に許容可能な緩衝液はすべて使用してよい。他の薬剤を、前記製剤中に様々な目的で使用してもよい。例えば、緩衝剤、保存剤、共溶剤、界面活性剤、オイル、保湿剤、皮膚軟化剤、キレート剤、安定化剤、又は酸化防止剤を使用してもよい。使用可能な水溶性保存剤としては、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、チメロサール、二硫化ナトリウム、酢酸フェニル水銀、硝酸フェニル水銀、エチルアルコール、メチルパラベン、ポリビニルアルコール、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコール等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。界面活性剤としてＴｗｅｅｎ８０でよい。使用可能な他のビークルとしては、ポリビニルアルコール、ポビドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポロキサマー、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、純水等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。等張化剤を含有させてもよく、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、マンニトール、グリセリン等が挙げられる。酸化防止剤としては、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、アセチルシステイン、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。これら化合物の適用、有効量、処方、禁忌、製造供給元等は入手可能であるか、あるいは当業者に知られている。
【００７６】
これら薬剤は、それぞれ約０．００１〜５重量％、好ましくは約０．０１〜２重量％の量で存在しうる。使用可能な好適な水溶性緩衝剤は、所望の投与経路とするために米国食品医薬品局（ＦＤＡ）に承認されているように、炭酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム等である。これら薬剤は、システムのｐＨを約２〜９の間、好ましくは約４〜８の間に保持するのに十分な濃度で存在しうる。このような緩衝剤は、重量比で製剤全体の５％も占めうる。塩化ナトリウム及び塩化カリウム等の電解質を、前記製剤中に含有させてもよい。
【００７７】
前記製剤はすべて、局所投与、結膜下投与、テノン嚢下投与、眼内投与等の眼経路で投与されうる。さらに、前記製剤は、当業者に知られているように、静脈注射用溶液若しくは懸濁液としてのマイクロスフィア、マイクロカプセル、リポソーム等のキャリアを有する持続放出製剤として投与しても、あるいは眼内注射してもよい。持続放出性薬物送達システムは眼内に投与され、その結果薬物が持続的に放出される。前記製剤は、マイクロ若しくはマクロカプセル、又はポリカプロラクトン、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、ポリ無水物、ポリラクチド／グリコライド共重合体、ポリアミノ酸、ポリエチレンオキシド、アクリル末端ポリエチレンオキシド、ポリアミド、ポリエチレン、ポリアクリロニトリル、ポリフォスファザン、ポリ（オルトエーテル）、スクロースアセテートイソブチレート（ＳＡＩＢ）等の生体適合性ポリマー、又は米国特許第６，６６７，３７１号、６，６１３，３５５号、６，５９６，２９６号、６，４１３，５３６号、５，９６８，５４３号、４，０７９，０３８号、４，０９３，７０９号、４，１３１，６４８号、４，１３８，３４４号、４，１８０，６４６号、４，３０４，７６７号、及び４，９４６，９３１号明細書（各々を本明細書中にその全体を参照により援用する）に開示のポリマーのマトリックス、あるいはマイクロスフィア若しくはリポソームに形成可能な脂質等のビークルとした形態でもよい。ミクロ又はマクロ製剤は、針を通して投与しても、あるいは、眼例えば水晶体嚢内に縫合することによって埋め込んでもよい。遅延性すなわち持続放出性は、コーティング又は非コーティングマイクロスフィア、コーティング又は非コーティングカプセル、脂質又はポリマー成分、単層又は複層構造、及び上記の組み合わせ等の、様々な製剤によって提供されうる。マイクロスフィア、マイクロカプセル、リポソーム等の製剤設計及び投与、並びにそれらの埋め込みは、当業者に知られている標準的手法であり、例えば、Vitreoretinal  Surgical  Techniques, Reyman  et  al.,  Eds.  (Martin  Dunitz,  London  2001,  chapter  45);  Handbook  of  Pharmaceutical  Controlled  Release  Technology,  Wise,  Ed.(Marcel  Dekker,  New  York  200)では、ガンシクロビル持続放出性インプラントを使用したサイトメガロウイルス性網膜炎治療法が開示されており、その該当セクションについて本明細書中に参照により全体を援用する。例えば、持続放出性眼内インプラントは、へん平部を介して挿入して、硝子体腔へ埋め込みを行ってもよい。眼内注射は、硝子体内、結膜下、眼球後部、あるいはテノン嚢下でもよく、また蓄積型でもよい。他の眼投与経路、注射部位、及び形態も考えられ、それらも本発明の範囲内である。
【００７８】
本発明の製剤を投与することによって、少なくとも眼血管新生が軽減されなくてはならない。血管退行は、更なる血管成長及び増殖の防止に加えて、あるいはその代わりとして起こりうる。理解されるように、複雑な疾病要因をコントロールすることが患者の生活の質の維持の根底にある病状のコントロールと同等に重要である、糖尿病等の疾患を管理する上で、この累積効果は重要でありうる。
【００７９】
したがって、他の実施形態において、本発明は眼血管新生を軽減する方法であって、ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含むテトラサイクリン又はその誘導体を、眼への送達に適した薬学的に許容可能な形態で略中性のｐＨで、眼血管新生の軽減に十分な量及び期間、患者の眼に投与するステップを含む方法である。望ましくは、該方法は、デモクロサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、ライムサイクリン、又は化学的に修飾されたテトラサイクリンのうちの少なくとも一種を、眼への送達に適した薬学的に許容可能な形態で略中性のｐＨで、眼血管新生の軽減に十分な量及び期間、患者の眼に投与するステップからなる方法である。本発明のさらに好適な形態において、上記方法に使用される本発明の製剤は、眼の前部及び／又は後部、角膜、網膜、脈絡膜等における血管新生を軽減する上述の製剤である。
【００８０】
該テトラサイクリン又はその誘導体の投与経路および投与形態は、前述のように、当業者に知られたいかなる方法であってよい。投与は、局所的、結膜下及び眼球内経路でも、あるいは眼球用インプラントで行ってもよい。
【００８１】
一実施形態において、前記製剤は眼内注射、例えば、硝子体内に注射される。前記製剤を硝子体内投与する場合、活性薬剤は注射容量を最小とするために濃縮しなければならない。例えば、約２０ｍｇ／ｍｌ未満の濃度で投与し、すべての量が前述の要因に依存して効果的でありうる。好ましくは、７ｍｇ／ｍｌ未満の濃度で投与し、６ｍｇ／ｍｌ未満、５ｍｇ／ｍｌ未満、４ｍｇ／ｍｌ未満、３ｍｇ／ｍｌ未満、２ｍｇ／ｍｌ未満、及び１ｍｇ／ｍｌ未満がより好ましい。サンプル濃度としては、約５μｇ／ｍｌ〜約５０μｇ／ｍｌ、約２５μｇ／ｍｌ〜約１００μｇ／ｍｌ、約１００μｇ／ｍｌ〜約２００μｇ／ｍｌ、約２００μｇ／ｍｌ〜約５００μｇ／ｍｌ、約５００μｇ／ｍｌ〜約７５０μｇ／ｍｌ、約５００μｇ／ｍｌ〜最大１ｍｇ／ｍｌ等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００８２】
例えば、注射の準備として、眼球表面にアルカインを局所的に塗布し、次いで５％ポビドンイオジンを塗布する。４％リドカインに浸した、先端に綿を付けた塗布具を、有水晶体眼中の角膜輪部の４．０ｍｍ後方且つ偽水晶体眼中の角膜輪部の３．５ｍｍ前方の注射部位に当てる。２７−ゲージ針を使用して、扁平部の上に注入する。間接検眼鏡検査によって、懸濁液が硝子体内に適切に注入されたか確認可能である。
【００８３】
本発明の実施に使用されるシリンジとしては、２１〜３０ゲージ針（例えば２３、２４、２５、２６又は２７ゲージ針）を収容可能なものが好適であり、また少量サイズ（例えば１．５ｍＬ、より好ましくは０．５ｍＬ）のものが好ましい。針がシリンジから着脱可能なものとすることが可能であるが、一体型のシリンジ/針構造であることが好ましい。これによって、シリンジから針が離脱する恐れが明らかに抑えられる。また、不正操作できない構成とすることが好ましい。したがって、本発明の製剤は、いつでも投与可能な、１単位用量を含む事前調製シリンジの形で提供可能である。
【００８４】
好適なシリンジは、例えば、Ｕｎｉｊｅｃｔ（R）（ベクトン・ディッキンソン社）の名で売られている。このシリンジの仕様では、プランジャではなく、針への供給用の柔軟なリザーバ両側に加えられた圧力によって、内容物が針を通して眼へ放出される。名前から示唆されるように、このリザーバと針の構成は単一ユニットである。
【００８５】
本発明の製剤の局所投与は、ｉｎ  ｓｉｔｕゲル化水性製剤として行ってもよい。このような製剤は、眼に接触した際又は眼の外側の涙液に接触した際にゲル化が促進するのに有効な濃度のゲル化剤を含有する。好適なゲル化剤としては、エチレンオキシドとプロピレンオキシド（ポロキサミン等）とのテトラ-置換エチレンジアミンブロック共重合体等の熱硬化性ポリマー、ポリカーボフィル、及びジェラン、カラゲナン（κ−カラゲナン、ι−カラゲナン等）、キトサン、及びアルギン酸ゴム等の多糖が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００８６】
本明細書中で使用する「ｉｎ  ｓｉｔｕゲル化水性製剤」という語句は、眼に接触した際又は眼の外側の涙液に接触した際にゲルを形成する低粘性液だけでなく、眼に投与された際に非常に高い粘性すなわちゲル剛性を呈する半液体ゲル及び揺チキソトロピーゲル等の高粘性液を含む。また、本発明の製剤をゲルとして製剤化し、例えば反射瞬きによって引き起こる涙液分泌による投与直後の製剤のロスを最小限にすることも有利である。このような製剤が、投与後粘性すなわちゲル剛性を更に増すことは好ましいが、初期のゲルが涙による散逸に対して十分耐性を有しており本明細書で規定した効果的な滞留時間がもたらされれば、これは全く必要とされない。
【００８７】
眼疾患治療用の局所製剤を調製するには、当技術分野で知られているように、治療に有効な量の本発明の製剤を眼用ビークル中に入れる。投与する治療化合物の量及び該治療化合物の局所製剤中の濃度は、希釈剤、送達システムすなわち選択した装置、患者の臨床状態、及び製剤中の該化合物の副作用及び安定性によって異なる。したがって、医者は、当該患者又は同様の患者に対する臨床経験に応じて、適切な濃度の治療化合物を含む適切な製剤を使用し、また製剤の投与量を選ぶ。
【００８８】
局所投与の場合、投与するテトラサイクリンまたはその誘導体の濃度は、当業者に知られているように、特定の患者、罹っている病気及びその重症度、投与頻度等によって異なりうる。サンプル濃度としては、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約２．５ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌ、約１５ｍｇ／ｍｌ〜最大３０ｍｇ／ｍｌ等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００８９】
前記製剤が２種以上の活性薬を含む場合、該活性薬は、同一製剤、別々の製剤、持続放出性製剤、リポソーム、マイクロカプセル、又は前述の形態中における混合物又は混合剤として投与されうる。
【００９０】
前記製剤は、局所投与しても又は眼に注射してもよく、あるいは、一種の活性薬を局所投与しても、また他の薬剤を注射してもよい。
【００９１】
本発明の方法は、単独でも、光線力学治療、レーザー治療又は一種以上の生物的若しくは医薬的治療等の他の治療法と一種以上組み合わせて行ってもよい。
【００９２】
他の実施形態において、本発明は眼の炎症を軽減する方法であって、上述のように、角膜手術（ＬＡＳＩＫ（Ｒ）術、レーザー屈折矯正角膜切除術（ＰＰＫ）、又は他の角膜手術）の後に患者に製剤を投与するステップを含む方法である。好ましくは、患者に投与される本発明の製剤は、ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴと、低分子量ヘパリン等のヘパリンとを含むテトラサイクリン又はその誘導体、あるいは、ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴと、フルルビプロフェン等の抗プロスタグランジン薬とを含むテトラサイクリン又はその誘導体である。ヘパリンはもとより、テトラサイクリン類は、コラゲナーゼ酵素およびメタロプロテナーゼ酵素を阻害するものであり、阻害しなければ、角膜を傷つけ白濁化させる堆積物を生じることとなる。あるいは、抗プロスタグランジン薬は、ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴと低分子量ヘパリン等のヘパリンとを含むテトラサイクリン又はその誘導体と共に投与してもよい。
【００９３】
本発明の方法の他の実施形態において、一種以上の前述の製剤が循環的腫瘍治療計画を以って患者に投与され、腫瘍部における血管成長及び増殖が軽減される。本実施形態では、標準の腫瘍治療と並行して、該治療薬を変えながら患者に体系的に投与することで、治療サイクル期間中の血管増殖が阻害される。
【００９４】
本実施形態では、初期治療（ステージ１）は、現在利用可能な下記の治療法より選択される。すなわち、化学療法（遺伝子治療、抗腫瘍薬等）又は一種以上の以下の非化学療法的治療法：放射線治療（エックス線、ガンマ線、（３線等）等）；光線治療（光線力学治療、光線感作物質等）；又は熱療法（熱凝縮、発熱療法、凍結療法等）。
【００９５】
初期治療直後に、本発明の製剤を使用した治療サイクルが開始される。つまり、一種以上の上記製剤を１サイクルに渡って投与させるが、活性薬をサイクル中の異なる段階で投与させる。各々の製剤は、当業者に知られているように、毒性を生じない最大濃度で体系的に投与される（静脈投与、経口投与等）。例えば、ステロイド類は、約１００ｍｇ／ｍｌ〜約２００ｍｇ／ｍｌの濃度範囲で投与される。このような血管阻害剤をそれぞれローテーションさせて使用することによって、従来の腫瘍治療（化学療法、放射線療法等）を行いつつ、血管を異なる時間及び異なるプロセスで損傷させて、血管への全体的ダメージを最大限にし、腫瘍への血液供給を阻害する。
【００９６】
本発明の循環的治療は、ステロイドを体系的に投与して、次いでこれと同一又は異なるステロイド及びドキシサイクリンを含む製剤を体系的に投与することによって開始される（ステージ２）。例えば、メチルプレドニゾロン（Ｓｏｌｕ−ｅｄｒｏｌ（Ｒ））の静脈投与後に、プレドニゾン及びドキシサイクリンを経口投与することができる。ステージ２はおよそ１〜２週間続く。ステージ２の後にステージ３があり、このステージでドキシサイクリン及びヘパリンを含む製剤が投与される。また、化学療法薬をステージ３で投与してもよい。ステージ３はおよそ１〜２週間続く。ステージ３の後にステージ４があり、このステージでドキシサイクリン、抗プロスタグランジン薬及びマクロライド系抗生物質を含む製剤が投与される。ステージ４はおよそ１〜２週間続き、これによりおよそ１〜２ヶ月続いた第一の治療サイクルが終了する。
【００９７】
腫瘍サイズ、腫瘍マーカーの有無等により、更なる治療が必要とされた場合、更なる治療サイクルが開始される。これら追加の治療サイクルは、ステージ１から開始してステージ２、３、４を進んでもよく、あるいはステージ１をバイパスして、直接ステージ４からステージ２と進んでもよい。本明細書に記載のこれら薬剤は何れも、ステージ２，３，４で使用可能であることが理解されよう。例えば、ステージ３において低分子量ヘパリンの代わりに抗プロスタグランジン薬を使用してもよく、ステージ２及び/又は３においてドキシサイクリンの代わりに低分子量ヘパリンを使用してもよい。
【００９８】
上記薬剤に加えて、本発明の製剤は、上皮細胞上のＶＥＧＦの活動を阻害するように設計された抗血管新生薬と共に投与されてもよく、本発明に使用可能なものとしては、（ａ）Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（Ｒ）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、及び（ｂ）Ｍａｃｕｇｅｎ（Ｒ）（Ｅｙｅｔｅｃｈ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）が挙げられる。Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（Ｒ）及びＭａｃｕｇｅｎ（Ｒ）は、硝子体内に投与される化合物であり且つ強力な抗血管新生化合物である。極めて好ましい形態において、本発明の医薬品製剤は、上述の製剤とＬｕｃｅｎｔｉｓ（Ｒ）又はＭａｃｕｇｅｎ（Ｒ）等の抗血管新生薬を含有する。
【００９９】
正式には「ｒｈｕＦａｂ  Ｖ２」又は「ＡＭＤ−Ｆａｂ」として知られているＬｕｃｅｎｔｉｓ（Ｒ）（ラニビズマブ）は、Ｇｅｎｅｔｅｃｈによって開発されたヒト化治療用抗ＶＥＧＦ（血管内皮細胞増殖因子）抗体であり、血管新生に重要な役割を果たすタンパク質であるＶＥＧＦに結合して阻害する。Ｌｕｃｅｎｔｉｓは、滲出型加齢性黄斑変性症を進行させると考えられている、新血管成長及び漏出を阻害/軽減するように設計されている。本発明に従って調製した医薬品製剤と共に投与した場合、Ｌｕｃｅｎｔｉｓは、４用量に対して約３００μｇ又は約５００μｇの何れかで投与しなければならない。
【０１００】
Ｅｙｅｔｅｃｈ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ製のＭａｃｕｇｅｎ（Ｒ）（ペガプタニブナトリウム、抗ＶＥＧＦアプタマー又はＥＹＥ００１）は、ＶＥＧＦ分子に特異的に結合する遺伝物質の合成断片からなり、上皮細胞表面上の受容体に対するＶＥＧＦ分子の刺激を阻害する。本発明に従って調製した医薬品製剤と共に投与した場合、Ｍａｃｕｇｅｎ（Ｒ）は、４週間又は６週間毎に約０．３ｍｇ〜は約３．０ｍｇの範囲の何れかの用量で投与しなければならない。
【０１０１】
本発明の他の態様において、本発明に従って調製した医薬品製剤は、本明細書に記載した眼疾患を治療するために、グルココルチコイド（プレドニゾロン、プレドニゾン等）、エストロゲン（エストロジール等）、アンドロゲン（テストステロン等）、レチノイン酸誘導体（９−ｃｉｓ−レチノイン酸、１３−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸、ａｌｌ−ｔｒａｎｓレチノイン酸等）、ビタミンＤ誘導体（カルシポトリオール、カルシポトリエン等）、非ステロイド系抗炎症薬、ビタミンＤ誘導体、抗感染薬、プロテインキナーゼＣ阻害剤、ＭＡＰキナーゼ阻害剤、抗アポトーシス薬、成長因子、栄養ビタミン、不飽和脂肪酸、及び／又は眼球用抗感染薬と共に投与されうる。本発明の更に他の実施形態において、これら薬剤の混合物が使用されうる。
【０１０２】
本明細書中に記載の眼球用抗感染薬としては、ペニシリン類（アンピリシリン、アジオシリン、カルベニシリン、ジクロキサシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンＧ，ピペラシリン、及びチカルシリン）、セファロスポリリン類（セファマンドール、セファゾリン、セフォタキシム、セフスロジン、セフタジジム、セフトリアキソン、セファロチン、及びモキサラクタム）、アミノグリコシド類（アミカシン、ゲンタマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、及びネオマイシン）、アズトレオナム、バシトラシン、シプロフロキサシン、クリンダマイシン、クロラムフェニコール、コトリモキサゾール、フシジン酸、イミペネム、メトロニダゾール、テイコプラニン、及びバンコマイシン等の多岐にわたる薬剤、抗真菌薬（アンホテリシンＢ、クロトリマゾール、エコナゾール、フルコナゾール、フルシトシン、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ミコナゾール、ナタマイシン、オキシコナゾール、及びターコナゾール）、抗ウイルス薬（アシクロビル、エチルデオキシウリジン、フォスカーネット、ガンシクロビル、イドクスウリジン、トリフルリジン、ビダラビン、及び（Ｓ）−１−（３−ヒドロキシ−２−ホスホ−ニルエトキシプロピル）シトシン（ＨＰＭＰＣ））、抗腫瘍薬（アルキル化剤（クロラムブシル、シクロフォスファミド、メクロレタミン、メルファラン、及びブスルファン）、アントラサイクリン系抗生物質（ドキソルビシン、ダウノマイシン、及びダクチノマイシン）、シスプラチン、及びニトロソウレア等の細胞周期非特異的抗腫瘍薬）、抗ピリミジン類（シタラビン、フルオロウラシル、及びアザシチジン）、葉酸拮抗薬（メトトレキサート）、抗プリン類（メルカプトプリン及びチオグアニン）、ブレオマイシン、ビンカ・アルカロイド類（ビンクリスチン及びビンブラスチン）ポドフィロトキシン類（エトポサイド（ＶＰ−１６））、及びニトロソウレア類（カルムスチン（ＢＣＮＵ））等の代謝拮抗剤、シクロスポリンＡ及びＳＫ５０６等免疫抑制剤、抗炎症又は抑制因子（阻害剤）、及びプラスミノゲン活性因子阻害剤等のタンパク質分解酵素阻害剤等が挙げられる。硝子体内用量及び硝子体内半減期はもとより、上記薬剤の局所及び結膜下投与用の用量は、”Intravitreal  Surgery  Principles  and  Practice,  Peyman  G  A  and  Shulman,  J
Eds.,  2nd  edition,  1994,  Appleton-Longe”に見出され、関連するセクションを本明細書中に参照により援用する。
【０１０３】
眼への送達に適した薬学的に許容可能な形態且つ略中性のｐＨで、ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含むテトラサイクリン又はその誘導体を眼血管新生治療用の薬剤の製造に使用するものであって、該ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含むテトラサイクリン又はその誘導体が、該治療に十分な量で存在する。
【０１０４】
好ましくは、上記使用において用いられるＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含むテトラサイクリン又はその誘導体は、ドキシサイクリン、ライムサイクリン、ミノサイクリン、デメクロサイクリン、及びオキシテトラサイクリンからなる群から選択される。
【０１０５】
眼血管新生治療用の薬剤の調製に、本明細書に記載の製剤を使用する。
【０１０６】
眼血管新生治療用の薬剤の調製に、上皮細胞表面のＶＥＧＦの活動を阻害するように設計された抗血管新生薬に加えて、本明細書に記載の製剤を使用する。
【実施例】
【０１０７】
本発明の更なる特徴を、以下の限定されない実施例において更に完全に記載する。この詳細な説明は、本発明を例示する目的のみに記載されるものであると理解されるべきであり、上述した本発明の広範囲な説明を何ら限定するものではないことが理解されるべきである。
【０１０８】
（実施例１）
ラット眼球に人為的な角膜やけどを引き起こして、角膜血管新生に対するドキシサイクリン、ステロイド類、及び低分子量ヘパリンの効果を、それぞれを単独に用いた場合及び組み合わせた場合について、測定した。具体的には、ドキシサイクリン、低分子量ヘパリン、及びトリアムシノロンを、硝酸銀（７０％）及び硝酸カリウム（３０％）を投与して人為的に角膜やけどを引きおこしたラット眼球に１日２回局所投与した。
【０１０９】
新生血管の有無及び新生血管の形成度をスプリット・ランプ写真術及び組織学により評価した。血管増殖の阻害は、外側角膜（角膜輪部）から角膜への血管の進行を測定することによって評価した。点数査定システムを使用して阻害の程度を「+阻害」、「++阻害」及び、「+++阻害」に定量化した。ここで「+阻害」は角膜輪部から中心部への距離１/３の阻害、「++阻害」は角膜輪部から中心部への距離２/３の阻害、「+++阻害」は角膜輪部-中心部間の完全な血管阻害を示し、また、「±阻害」は、中間の阻害度（例えば、「+阻害」、「++阻害」、又は「+++阻害」未満）を示す。前述したように、いかなる新生血管増殖の軽減及び／又は既存の血管の退行も治療効果があるものであり、完全な阻害及び/又は退行は必要とされず、また、軽減には既存の血管の退行も含むことが理解されよう。
【０１１０】
図１に示すように、生理食塩水投与（対照）の１週間後に全体的に血管新生が観察された。上記の作用物質を、やけどを引き起こした角膜に単独で局所投与した場合、血管新生は完全には阻害されなかった。例えば、約１ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌの濃度のドキシサイクリンを局所投与した角膜の血管新生阻害度は、対照群と比較した場合「+阻害」であった。約１０ｍｇ／ｍｌの濃度の低分子量ヘパリンを局所投与した角膜の血管新生阻害度は、対照群と比較した場合「+阻害」であった。また、約４ｍｇ／ｍｌの濃度のトリアムシノロンを局所投与した角膜の血管新生阻害度は「++阻害」であった。
【０１１１】
対照的に、ドキシサイクリン（約２０ｍｇ／ｍｌ）及びトリアムシノロン（４ｍｇ／ｍｌ）を含む製剤を、やけどを起こした角膜に１日２回投与した場合、「+++阻害」が観察された。すなわち、血管新生は起こらなかった。図２に示すように、血管新生の「+++阻害」が治療開始１週間後に観察され、同じ「+++阻害」が３週間維持された。
【０１１２】
低分子量ヘパリン（約１０ｍｇ／ｍｌ）及びトリアムシノロンを含む製剤を、やけどを起こした角膜に１日２回投与した場合、血管新生の「+++阻害」が、対照群の眼と比較した場合、治療開始１週間後に観察された。３週間後、血管新生阻害度は最小に減少して「++±阻害」となった。血管新生阻害はドキシサイクリン及びトリアムシノロンの製剤よりわずかに低いものの、まだ顕著な阻害が観察された。
【０１１３】
低分子量ヘパリン（約１ｍｇ／ｍｌ）及びドキシサイクリン（約２０ｍｇ／ｍｌ）を含む製剤を、やけどを起こした角膜に１日２回投与した場合も、血管新生が１週間後に阻害されたが、ドキシサイクリン及びトリアムシノロンを含む製剤、又は低分子量ヘパリン及びトリアムシノロンを含む製剤を投与した場合に比べ、阻害度は低かった（「++〜+++阻害」）。３週間後も、ドキシサイクリン及び低分子量ヘパリンを含む製剤では対照群と比較した場合、完全に血管新生が阻害されていた。治療期間中血管新生は観察されなかった。
【０１１４】
（実施例２）
本発明の製剤が既存の血管の退行を引き起こす能力を実証した。実施例１に示したように、硝酸銀を３２匹のラットの眼球に局所投与して３日間にわたって血管新生を誘発した。血管新生を角膜輪部中間から角膜へ進行させた（１日目、２日目、３日目）。
【０１１５】
４日目に、生理食塩水（対照群用）、トリアムシノロン（４０ｍｇ／ｍｌ）及び低分子量ヘパリン（１０ｍｇ／ｍｌ）を含む製剤、ドキシサイクリン（２０ｍｇ/ｍｌ）及び低分子量ヘパリン（１０ｍｇ／ｍｌ）を含む製剤、並びにドキシサイクリン（２０ｍｇ／ｍｌ）及びトリアムシノロン（４０ｍｇ／ｍｌ）を含む製剤のうちの一種の１用量（１５ｐｌ）を患眼（８個／１群）に投与した。５日目及び６日目も同じ治療方法を各々の眼に繰り返した。
【０１１６】
眼の検査は６日目に行った。対照群の眼では、血管が完全に発達して血管新生阻害は起こっておらず、血管新生が全体的に進行していた。つまり、血管新生は角膜輪部から角膜へと進行していた。
【０１１７】
対照的に、治療を行った眼では、治療用製剤の種類に関わらず、血管新生が退行していた。トリアムシノロン及び低分子量ヘパリンで治療した眼では、++〜+++の血管新生の低減を示し、ドキシサイクリン及び低分子量ヘパリンで治療した眼では、+〜++の血管新生の低減を示し、ドキシサイクリン及びトリアムシノロンで治療した眼では、++の血管新生の低減を示した。
【０１１８】
（実施例３）
３２匹のＬｏｎｇ  Ｅｖａｎｓラットの３２個の眼に人為的な角膜やけどを誘発させ、角膜血管新生に対する、ドキシサイクリン若しくは他のテトラサイクリン誘導体と低分子量ヘパリンとを含む製剤、ドキシサイクリン若しくは他のテトラサイクリン誘導体とフルルビプロフェンとを含む製剤、又はフルルビプロフェンと低分子量ヘパリンとを含む製剤の効果を測定した。誘発前に、全ての眼を検査して角膜に傷のあるもの及び／又は血管新生のあるものを除外した。具体的には、上記の薬剤の２種の組み合わせを、硝酸銀（７０％）及び硝酸カリウム（３０％）を投与して人為的に角膜やけどを引き起こしたラット眼球に１日２回局所投与した。
【０１１９】
硝酸銀焼灼によって、全ての眼に血管新生を誘発した。まず、ケタミン塩酸塩（２５ｍｇ/ｋｇ）とキシラジン塩酸塩（５ｍｇ/ｋｇ）の混合物を腹腔内注射して、すべての動物に麻酔をかけた。次いで０．５％プロパラカインを一滴垂らして角膜を麻酔した後、乾燥させた。各動物の一方の角膜を、手術用顕微鏡下で７５％硝酸銀/２５％硝酸カリウム（Ａｒｚｏｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社、ニューハンプシャー州キーン）で被覆した塗布用スティック（直径＝１．８ｍｍ）を１０秒間（ストップウォッチを使用）角膜中心部に押圧することによって焼灼した。余分な硝酸銀は、眼を平衡塩類溶液で洗浄することによって除去した。損傷の再現性を高めるために、一人の試験者が全ての眼の焼灼を行った。
【０１２０】
焼灼後、群間に生じうる損傷度の偏りをなくすため、動物を４つの群にランダムに分けた。群１（動物数ｎ＝８）には、０．０３％フルルビプロフェンナトリウム点眼剤（アラガン、カリフォルニア州アーバイン）と、１０ｍｇ／ｍｌの低分子量ヘパリン（エノキサパリン、アヴェンティス・ファーマシューティカルズ、ニュージャージー州ブリッジウォーター）との組み合わせ（１：１）を投与した（実濃度＝５ｍｇ／ｍｌ低分子量ヘパリンを含む０．０１５％フルルビプロフェン）。群２（ｎ＝８）には、０．０３％フルルビプロフェンナトリウム点眼剤と、２０ｍｇ／ｍｌのドキシサイクリン（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ、イリノイ州ショウンバーグ）との組み合わせ（１：１）を投与した（実濃度＝１０ｍｇ／ｍｌドキシサイクリンを含む０．０１５％フルルビプロフェン）。群３（ｎ＝８）には、２０ｍｇ／ｍｌのドキシサイクリンと１０ｍｇ／ｍｌの低分子量ヘパリンとの組み合わせ（１：１）を投与した（実濃度＝５ｍｇ／ｍｌ低分子量ヘパリンを含む１０ｍｇ／ｍｌドキシサイクリン）。群４（ｎ＝８）には平衡塩類溶液を投与した（対照）。上記点眼剤は、焼灼後直ちに局所投与した。１日２回、７日間処置を行った。
【０１２１】
新生血管の有無及び新生血管の形成度をスプリット・ランプ写真術及び組織学により評価した。血管増殖の阻害は、外側角膜（角膜輪部）から角膜への血管の進行を測定することによって評価した。前述したように、いかなる新生血管増殖の軽減及び／又は既存の血管の退行も治療効果があるものであり、完全な阻害及び/又は退行は必要とされず、また、軽減には既存の血管の退行も含むことが理解されよう。
【０１２２】
角膜の血管新生の程度を、焼灼後７日目に写真を使用したスリット・ランプ顕微鏡（ＳＬ−７Ｅ、株式会社トプコン、日本東京）で測定した。動物を深い麻酔にかけた状態で、二酸化炭素チャンバー内で安楽死させた。眼を摘出し、１０％ホルムアルデヒドで固定した。２４時間固定した後、眼を固定剤から取り出して角膜を脱水して切片化した。次いで、角膜をキシレン及びパラフィンに浸し、パラフィンに埋め込んだ後切り出して、光学顕微鏡で観察するため、ヘマトキシリン−エオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。
【０１２３】
角膜の血管新生は、スリット・ランプ写真をＣａｎｏＳｃａｎ  ９９００Ｆ（キヤノン、東京、日本）を用いてスキャンして、高解像度デジタル画像とすることで評価した。血管新生の面積率は、角膜血管がある領域の外郭を取り、これらをＩｍａｇｅ  ｊ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｗａｙｎｅ  Ｒａｓｂａｎｄ、リサーチサービス部門、国立精神保健研究所、メリーランド州ベテスダ）を使用して全角膜表面と比較することによって測定した。また、各眼について、角膜の傷に覆われた面積率も測定した。角膜血管の図をデジタル写真と比較し、面積率の算出中に血管領域が削除されてないことを確かめた。
【０１２４】
統計解析システム（ＳＰＳＳ  １１．５）ソフトウェアを使用して、統計解析を行った。群間の差異はＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ  Ｕ検定で測定し、ｐ値が０．０５未満の場合を有意差ありとした。
【０１２５】
治療対象眼に角膜やけどを引き起こして７日目の角膜の、代表的なスリット・ランプデジタル写真を図３Ａ〜３Ｄに示す。フルルビプロフェン及び低分子量ヘパリンの投与後、血管新生は目立ったが対照群よりは少なかった（図３Ａ）。フルルビプロフェン及びドキシサイクリンの投与後、血管新生は僅かに減少した（図３Ｂ）。ドキシサイクリン及び低分子量ヘパリンの投与後、血管新生が中程度減少した（図３Ｃ）。通常の生理食塩水の投与後、血管新生は広範囲にわたっていた（図３Ｄ）。
【０１２６】
Ｉｍａｇｅ  Ｊによるデジタル高画質化スリット・ランプ写真を使用して、角膜の血管新生率、角膜の傷の大きさ、及びやけどの程度を全ての眼について測定した。
【０１２７】
すべての眼において、角膜の傷の大きさ及びやけどの程度に対する統計的有意差は認められなかった。フルルビプロフェン及び低分子量ヘパリンを投与した眼に対する平均の血管新生率は、４８．５±１３．１（％）であった。フルルビプロフェン及びドキシサイクリンを投与した眼に対する平均の血管新生率は、６．６±５．５（％）であった。ドキシサイクリン及び低分子量ヘパリンを投与した眼に対する平均の血管新生率は、２２．０±２７．６（％）であった。対照群に対する平均の血管新生率は、６４．６±９．９（％）であった。データを図４にまとめる。
【０１２８】
各治療群の血管新生は、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ  Ｕ  検定で治療群間及び対照群とで統計的に比較した。フルルビプロフェン及びドキシサイクリンの投与と、低分子量ヘパリン及びドキシサイクリンの投与では、対照群と比較して角膜の血管新生は有意に低かった（ｐ＜０．０５）。フルルビプロフェン及び低分子量ヘパリンの投与では、対照群と比較した場合、角膜の血管新生を阻害する傾向が見られたが、有意差はなかった（ｐ＝０．１０５）。
【０１２９】
群間で比較した場合、低分子量ヘパリンの投与及びドキシサイクリンの投与の間で有意差はなく、また、フルルビプロフェンの投与及びドキシサイクリンの投与の間でも有意差はなかった（ｐ＝０．３５５）。同様に、低分子量ヘパリン及びドキシサイクリン投与群と、フルルビプロフェン及び低分子量ヘパリン投与群との間に有意差はなかった（ｐ＝０．０６９）。しかしながら、フルルビプロフェン及びドキシサイクリン投与群と、フルルビプロフェン及び低分子量ヘパリン投与群との間には、有意差があった（ｐ＝０．０２）。
【０１３０】
各治療群の眼から得た組織標本をヘマトキシリン及びエオシンで染色し、光学顕微鏡で検査した。結果を図５に示す。図５Ａは、フルルビプロフェン及びドキシサイクリンが投与された眼を示し、基質中心に血管はなかった。図５Ｂは、通常の生理食塩水が投与された眼を示し、血管新生が角膜基質中心に及んでいた。
【０１３１】
異なる群から得られた組織標本の光学顕微鏡による評価は、スリット・ランプによる評価と一致した。対照群と比較して、血管新生応答は全ての治療群において低かったが、フルルビプロフェン及びドキシサイクリンを投与した群における応答が一番低かった。これは、フルルビプロフェン及びドキシサイクリンが、評価した群の中で一番強い血管新生阻害をもたらしたことを示した。
【０１３２】
３種の組み合わせが可能な、フルルビプロフェン、ドキシサイクリン、及び低分子量ヘパリンからの２種の薬剤の組み合わせの全てが、対照群と比較して、角膜の血管新生の阻害に効果的であった。ドキシサイクリン及び低分子量ヘパリンの組み合わせと、ドキシサイクリン及びフルルビプロフェンの組み合わせが、フルルビプロフェン及び低分子量ヘパリンの組み合わせよりも効果的であった。
【０１３３】
フルルビプロフェンは、プロスタグランジンの合成を阻害する非ステロイド系の抗炎症薬である。プロスタグランジンは、角膜損傷の治癒及び血管新生の際に生成される。よって、フルルビプロフェンは活発に増殖する血管を抑制する。
【０１３４】
フルルビプロフェン（０．０３％（ｗ/ｖ））及び低分子量ヘパリン（１０ｍｇ／ｍｌ）を、別々の薬剤として投与した場合、このモデルにおいては角膜の血管新生は有意に減少しなかった（データ不図示）。ドキシサイクリンは、１０ｍｇ／ｍｌではなく２０ｍｇ／ｍｌで投与した場合に角膜の血管新生を有意に（ｐ＜０．０５）阻害した。
【０１３５】
前述のように、フルルビプロフェン、低分子量ヘパリン、及びドキシサイクリンの組み合わせは、これらを同様の濃度又は高濃度で個々に使用した場合より、効果的であった。特定の理論に縛られずに考えると、各々の薬剤が血管新生プロセスにおいて異なる作用形態/部位を有するというメカニズムが考えられる。この組み合わせにより、それぞれ異なるステップで個々の薬剤の副作用及びその対象の血管新生が低減されうる。これは、血管新生応答を減少し、眼副作用を有する、治療効果を持ちうる作用物質を高濃度で使用することを避けうる。
【０１３６】
（実施例４）
３６匹の有色の雄Ｌｏｎｇ  Ｅｖａｎｓラット（２００〜２５０ｇ）の３６の眼を３つの群にわけた。以下の濃度及びｐＨ値のドキシサイクリンを治療対象の眼に投与した（０．０５％（ｗ/ｖ）（ｐＨ３．３）、０．１％（ｗ/ｖ）（ｐＨ３．１）、１％（ｗ/ｖ）（ｐＨ２．３）、２％（ｗ/ｖ）（ｐＨ２．１）、２％（ｗ/ｖ）（ｐＨ７．４に調整）））。各動物の一方の眼を治療対象の眼、他方を非治療の対照眼とした。誘発前に、全ての眼を検査して角膜に傷のあるもの及び／又は血管新生のあるものを除外した。具体的には、上記の薬剤を、硝酸銀（７０％）及び硝酸カリウム（３０％）を投与して人為的に角膜やけどを引き起こしたラット眼球に１日２回局所投与した。
【０１３７】
硝酸銀焼灼によって、全ての眼に血管新生を誘発した。まず、ケタミン塩酸塩（２５ｍｇ/ｋｇ）とキシラジン塩酸塩（５ｍｇ/ｋｇ）の混合物を腹腔内注射して、全ての動物に麻酔をかけた。次いで０．５％プロパラカインを一滴垂らして角膜を麻酔した後、乾燥させた。各動物の一方の角膜を、手術用顕微鏡下で、７５％硝酸銀/２５％硝酸カリウム（Ａｒｚｏｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社、ニューハンプシャー州キーン）で被覆した塗布用スティック（直径＝１．８ｍｍ）を１０秒間（ストップウォッチを使用）角膜中心部に押圧することによって焼灼した。余分な硝酸銀は、眼を平衡塩類溶液で洗浄することによって除去した。損傷の再現性を高めるために、一人の検査員が全ての眼の焼灼を行った。
【０１３８】
焼灼後、群間に生じうる損傷度の偏りをなくすため、動物を６つの群にランダムに分けた。群１（ｎ＝６）には、０．５ｍｇ／ｍｌ（０．０５％（ｗ/ｖ））のドキシサイクリン（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ、イリノイ州ショウンバーグ）を投与した。群２（ｎ＝６）には、１ｍｇ／ｍｌ（０．１％（ｗ/ｖ））のドキシサイクリンを投与した。群３（ｎ＝６）には、１０ｍｇ／ｍｌ（１％（ｗ/ｖ））のドキシサイクリンを投与した。群４（ｎ＝６）には、２０ｍｇ／ｍｌ（２％（ｗ/ｖ））のドキシサイクリンを投与した。群５（ｎ＝６）には、ｐＨを７．４に調整した２０ｍｇ／ｍｌ（２％（ｗ/ｖ））のドキシサイクリンを投与した。群６（ｎ＝６）には、生理食塩水投与した。焼灼後直ちに各眼に対して各薬剤を２滴局所的に滴下した。１日２回、７日間処置を行った。
【０１３９】
新生血管の有無及び新生血管の形成度をスリット・ランプ写真術及び組織学により評価した。血管増殖の阻害は、外側角膜（角膜輪部）から角膜への血管の進行を測定することによって評価した。前述したように、いかなる新生血管増殖の軽減及び／又は既存の血管の退行も治療効果があるものであり、完全な阻害及び/又は退行は必要とされず、また、軽減には既存の血管の退行も含むことが理解されよう。
【０１４０】
前述のように全ての動物に麻酔をかけ、３日目及び６日目にスリット・ランプ顕微鏡検査によって、角膜の評価を行った。スリット・ランプ顕微鏡（ＳＬ−７Ｅ、株式会社トプコン、日本東京）に取り付けたカメラを使用して、２５倍率で角膜の写真を撮った。先入観を最小限とするため、血管新生の評価は、どの治療群にどの薬剤を投与したか知らない試験者が行った。
【０１４１】
動物を深い麻酔にかけた状態で、二酸化炭素チャンバー内で安楽死させた。眼を摘出し、１０％ホルムアルデヒド内で固定した。２４時間固定した後、眼を固定剤から取り出して角膜を脱水して切片化した。次いで、角膜をキシレン及びパラフィンに浸し、パラフィンに埋め込んだ後１μｍに切り出して、光学顕微鏡で観察するためヘマトキシリン−エオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。
【０１４２】
角膜の血管新生は、スリット・ランプ写真をＣａｎｏＳｃａｎ  ９９００Ｆ（キヤノン、東京、日本）を用いてスキャンして、高解像度デジタル画像とすることで評価した。血管新生の面積率は、角膜血管がある領域の外郭を取り、これらをＩｍａｇｅ  ｊ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｗａｙｎｅ  Ｒａｓｂａｎｄ、リサーチサービス部門、国立精神保健研究所、メリーランド州ベテスダ）を使用して全角膜表面と比較することによって測定した。また、各眼について、角膜の傷に覆われた面積率も測定した。角膜血管の図をデジタル写真と比較し、面積率の算出中に血管領域が削除されてないことを確かめた。
【０１４３】
各眼について、焼灼刺激応答の程度を「０」（腫れなし、角膜表面からの隆起なし）、「+１」（小さな腫れ、角膜表面からわずかに隆起）」、「+２」（中程度の腫れ、角膜表面から中程度に隆起）、又は「+３」（大きな腫れ）にスコアした。「+２」以上の焼灼刺激を示した角膜のみを、各群における平均焼灼刺激及び血管新生スコアの計算の対象とした。全ての写真は、スキャナ（ＣａｎｏＳｃａｎ  ９９００Ｆ（キヤノン、東京、日本）を使用して高解像度デジタル形式に変換した。新生血管に覆われた角膜表面を、角膜の全領域に対する割合として写真上で測定した。画像処理・解析ソフトウェアプログラム（Ｉｍａｇｅ  Ｊ  １．３１ｖ，Ｗａｙｎｅ  Ｒａｓｂａｎｄ、リサーチサービス部門、国立精神保健研究所、メリーランド州ベテスダ）を使用して、各眼に対して画像解析を行った。血管新生面積は、画素数として測定し、全角膜領域に対するその比率を、角膜の血管新生率とした。角膜血管の図を試験者の一人に作製させ、デジタル写真と比較し、面積率の算出中に血管領域が削除されてないことを確かめた。また、傷に覆われた角膜表面の割合を計算して傷の程度も評価した。
【０１４４】
各薬物治療群における平均血管新生率と対照群のそれとを比較して、阻害率（％）を算出した。全ての群について焼灼刺激及び血管新生率の採点をした後、７日目に動物を屠殺した。
【０１４５】
統計解析システム（ＳＰＳＳ  １１．５）ソフトウェアを用いて、実験単位としての各動物に対して統計解析を行った。Ｋｒｕｓｃａｌ−Ｖａｌｌｉｓ検定及びＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ  Ｕ検定を行い、最小有意差（ＬＳＤ）法で治療平均値をｐ＜０．０５で分けた。ｐ＜０．０５を有意差ありとした。
【０１４６】
組織病理学的評価では、鎮静させた動物にＣＯ２を吸引させて安楽死させ、即座に摘出を行った。３時及び９時の経線で角膜輪部から１．０ｍｍの位置で２７ゲージ針を眼球に貫通させて、急速に固定剤を眼に充填させた。組織病理検査するために１０％ホルムアルデヒドで眼を処理した。２４時間固定した後、眼を固定剤から取り出して、角膜を脱水して切片化した。次いで、角膜をキシレン及びパラフィンに浸し、パラフィンに埋め込んだ後１ｐｍに切り出して、光学顕微鏡で観察するため、ヘマトキシリン−エオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。
【０１４７】
全ての顕微鏡用切片について光学顕微鏡検査を行った。切片の検査は、角膜を病変部の中心で２分割にし、新生血管、多形核白血球、浮腫、及び線維芽細胞活性の強さを評価した。
【０１４８】
治療群及び対照群における、焼灼刺激スコアの平均±標準偏差と、各角膜の全角膜領域に対する血管新生率の平均±標準偏差とを以下の表に示す。
【表１】
2007523911.tif 000002
【０１４９】
焼灼刺激スコアは、全ての眼で「+２」以上であった。群間で角膜傷の面積率に有意差はなかった（ｐ＞０．０５）。
【０１５０】
各群の平均の血管新生面積率を図６に示す。０．０５％（ｗ/ｖ）のドキシサイクリンを投与した動物の平均の血管新生面積率は６９．８±１７．９％、０．０５％（ｗ/ｖ）ドキシサイクリンを投与した動物の平均の血管新生面積率は６９．８±１７．９％、０．１０％（ｗ/ｖ）ドキシサイクリンを投与した動物の平均の血管新生面積率は、６４．５±１４．０％、１％（ｗ/ｖ）ドキシサイクリンを投与した動物の平平均の血管新生面積率は５６．３±２０．８％、ｐＨを調整していない２％（ｗ/ｖ）のドキシサイクリンを投与した動物の平均の血管新生面積率は５４．７±５．９％、略中性のｐＨに調整した２％（ｗ/ｖ）ドキシサイクリンを投与した動物の平均の血管新生面積率は３５．２±４．３％、対照群の動物では平均の血管新生面積率は６９．４±５．７％であった。
【０１５１】
ｐＨ調整をした２％（ｗ/ｖ）ドキシサイクリンを投与した動物の平均の血管新生面積率は、ｐＨ調整をしていない２％（ｗ/ｖ）ドキシサイクリンを投与した動物の平均の血管新生面積率より有意に低かった。
【０１５２】
角膜やけどを誘発して７日目に各治療群から得た、角膜の代表的な写真を図７に示す。図７Ａは０．０５％（ｗ/ｖ）ドキシサイクリンを投与した眼を示す。図７Ｂは０．１％（ｗ/ｖ）のドキシサイクリンを投与した眼を示す。図７Ｃは１％（ｗ/ｖ）のドキシサイクリンを投与した眼を示す。図７ＤはｐＨを調整していない２％（ｗ/ｖ）のドキシサイクリンを投与した眼を示す。図７ＥはｐＨを７．４に調整した２％（ｗ/ｖ）のドキシサイクリンを投与した眼を示す。図７Ｆは生理食塩水投与した眼を示す。
【０１５３】
各治療群の眼から得た組織標本をヘマトキシリン及びエオシンで染色し、光学顕微鏡で検査した。結果を図８に示す。０．０５％（ｗ/ｖ）ドキシサイクリンを投与した眼（図８Ａ）、０．１％（ｗ/ｖ）ドキシサイクリンを投与した眼（図８Ｂ）及び対照群の眼（図８Ｆ）から得られた組織では、角膜基質全体に新生血管及び炎症性細胞が存在した。１％（ｗ/ｖ）ドキシサイクリンを投与した眼（図８Ｃ）から得られた組織では、炎症性細胞が存在し、また、角膜のやけどから遠く離れた角膜基質で血管新生が見られた。ｐＨを調整していない２％（ｗ/ｖ）ドキシサイクリンを投与した眼（図８Ｄ）又はｐＨを略中性に調整した２％（ｗ/ｖ）ドキシサイクリンを投与した眼（図８Ｅ）から得られた組織では、１％（ｗ/ｖ）ドキシサイクリンを投与した眼と比べて炎症性細胞は少なく、また角膜基質内の血管新生も少なかった。
【０１５４】
（実施例５）
４０匹の有色の雄Ｌｏｎｇ  Ｅｖａｎｓラット（２００〜２５０ｇ）の４０個の眼を異なる群にわけて本実験を行った。動物に対する処置はすべてAssociation  for  Research  in  Vision  and  Ophthalmology会議の「研究における動物の使用についての決議案」に準拠して行った。本実験は、チューレーン大学健康科学センターの動物保護・利用委員会からの承認を得た。
【０１５５】
全ての処置に先立って、キシラジン塩酸塩（５ｍｇ/ｋｇ）と共にケタミン塩酸塩（２５ｍｇ/ｋｇ）を腹腔内注射して、全てのラットに麻酔をかけた。プロパラカイン塩酸塩を局所麻酔薬として使用した後、各動物の一方の角膜を、７５％硝酸銀/２５％硝酸カリウム（Ａｒｚｏｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社、ニューハンプシャー州キーン）で被覆した塗布用スティック（直径＝１．８ｍｍ）を１０秒間角膜中心部に押圧することによって焼灼した。損傷の再現性を高めるために、一人の試験者が全ての眼の焼灼を行った。眼を５ｍｌの平衡塩類溶液で洗浄し、ティッシュペーパーで丁寧に眼を拭いて余分な硝酸銀を除去した。
【０１５６】
第１群（ｎ＝７）では生理食塩水を局所的に投与して、化学やけどが所望の血管新生応答を生じるのに十分な深さ・程度であることを確認し、それらを他の群の結果と比較した。第２群（ｎ＝６）では、５０μｇ／ｍｌに希釈した局所性アスコマイシン（Ａ．Ｇ．Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ.  カリフォルニア州サンディエゴ）溶液を投与した。第３群（ｎ＝６）では、０．０３％フルルビプロフェンナトリウム点眼液（アラガン、カリフォルニア州アーバイン）を使用した。第４群（ｎ＝７）では、ドキシサイクリンバイアル瓶（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ、イリノイ州ショウンバーグ）を希釈して２０ｍｇ／ｍｌとしたドキシサイクリン液を局所的に染み込ませた。第５群（ｎ＝７）では、１０ｍｇ／ｍｌに希釈した低分子量ヘパリン液（エノキサパリンナトリウム注射液、アヴェンティス・ファーマシューティカルズ、ニュージャージー州ブリッジウォーター）を局所的に染み込ませた。最後の群（ｎ＝７）では、４ｍｇ／ｍｌのトリアムシノロンアセトニド（Ｂｒｉｓｔｏｌ-Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ社、ニュージャージー州プリンストン）を局所的に染み込ませた。
【０１５７】
これら治療薬は各群の眼の焼灼を行った直後に投与した。（局所）治療は、毎日等間隔で２回、７日間継続した。角膜表面上方への隆起量を観察することによってＭａｈｏｎｅｎｙによる評価等の角膜やけどの程度の評価を行い、隆起が認められなかった場合、その個体を除外した。また、傷に占有された角膜表面の面積率を算出することによって傷の程度を評価した。
【０１５８】
液滴は２〜３秒の間隔をあけて滴下して、液滴間で動物が瞬きできるようにした。７日目に、通常の麻酔下で、スリット・ランプ顕微鏡（ＳＬ−７Ｅ、株式会社トプコン、日本東京）で角膜の写真を撮った。次いで、吸入二酸化炭素を使用して、深く麻酔にかけた状態で動物を屠殺した。焼灼した眼を摘出して１週間１０％ホルムアルデヒドで固定した。全ての眼から角膜切片を調製して、Ｈ＆Ｅ染色による組織検査を行った。
【０１５９】
角膜のカラースライドを、スキャナ（ＣａｎｏＳｃａｎ  ９９００Ｆ、キヤノン、東京、日本）を使用してデジタル画像に変換した。Ｉｍａｇｅ  ｊ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｗａｙｎｅ  Ｒａｓｂａｎｄ、リサーチサービス部門、国立精神保健研究所、メリーランド州ベテスダ）を使用して、各角膜の面積およびその血管新生を測定し、角膜中の血管及び角膜傷が占有する割合をそれぞれ算出した。角膜血管の図を試験者の一人に作製させ、デジタル写真と比較し、面積率の算出中に血管領域が削除されてないことを確かめた。各群について新生血管及び傷の面積率の統計解析を、第一種の実験全体での過誤を制御するＴｕｋｅｙのスチューデント化範囲検定を用いた一般線形モデル（ＧＬＭ）で行った（ＳＡＳ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ８．０２、ノースカロライナ州カリー）。統計的有意差はｐ≦０．０５に設定した。
【０１６０】
（結果）
各個体における（全角膜領域に対する）やけどによる傷の面積率及び血管新生率を表２に示す。対照群における平均の面積率は７４．９±９．２％であり、ＬＭＷＨ、アスコマイシン、フルルビプロフェン、ドキシサイクリン、及びトリアムシノロン群では、それぞれ、６６．７±９．９％、５６．０±２２．４％、５０．５±１８．７％、３５．５±２９．１％、及び１３．３±７．１％であった（図９）。
【表２】
2007523911.tif 000003
【０１６１】
対照群と、ＬＭＷＨ群、アスコマイシン群、及びフルルビプロフェン群との間には血管新生面積に統計的有意差はなかった。また、アスコマイシン群、フルルビプロフェン群及びドキシサイクリン群の間、またドキシサイクリン群及びトリアムシノロン群の間にも有意差はなかった。対照群及びＬＭＷＨ群と比較して、ドキシサイクリン群及びトリアムシノロン群では血管新生面積は有意に減少しており、また、トリアムシノロン群では、アスコマイシン群及びフルルビプロフェン群と比較して有意な血管新生面積の減少が見られた。
【０１６２】
対照群と全てのテスト群との間に、やけど傷領域の割合の有意差はなかった。
【０１６３】
図１０Ａ及び図１０Ｂは、対照群の代表的な角膜の写真を示す。図１１Ａは角膜やけどを引き起こして７日目のフルルビプロフェン処置の角膜のデジタル高画質化スリット・ランプ写真である（この群では血管新生が極めて顕著である）。図１１Ｂは角膜やけどを引き起こして７日目のドキシサイクリン処置の角膜のデジタル高画質化スリット・ランプ写真である（この群では血管新生はあまり顕著ではない）。図１１Ｃは角膜やけどを引き起こして７日目のトリアムシノロンアセトニド処置の角膜のデジタル高画質化スリット・ランプ写真である（矢印は比較的小さい血管新生領域を囲んでいる）。
【０１６４】
対照群及びトリアムシノロン群の組織切片を図１２に示す。図１２Ａは通常の生理食塩水で処置した対照群の眼における角膜やけどの組織標本の写真であり、角膜基質内の角膜傷（大矢印）及び新血管（小矢印）を示す（Ｈ＆Ｅ、１００倍率）。図１２Ｂはトリアムシノロンアセトニドで処置した眼における角膜やけどの組織標本の写真である（二本矢印は無血管基質を指している）。図１３Ｂに比べて図１３Ａでは角膜基質で血管新生が広範囲に及んでいることに注意されたい（Ｈ＆Ｅ、１００倍率）。
【０１６５】
（実施例６）
２４匹の有色の雄Ｌｏｎｇ  Ｅｖａｎｓラット（２００〜２５０ｇ）の２４個の眼を３群にわけて本実験を行った。動物に対する処置はすべてAssociation  for  Research  in  Vision  and  Ophthalmology会議の「研究における動物の使用についての決議案」に準拠して行った。動物は個別のケージに入れて、標準状態で管理した。本実験は、チューレーン大学健康科学センターの動物保護・利用委員会からの承認を得た。
【０１６６】
ラットの角膜血管新生の誘発に、”Drug  effects  on  the  neovascularization  response  to  silver  nitrate  cauterization  of  the  rat  cornea  Curr  Eye  Res  1985;  4:531-35  (Mahoney  et  al)”に記載の硝酸銀焼灼法を使用した。全ての処置は、キシラジンとケタミン塩酸塩の組み合わせ（９４．７ｍｇ/体重）を腹腔内注射して全ての動物に通常の麻酔をかけた状態で行った。０．５％プロパラカイン塩酸塩を局所麻酔薬として投与した後、７５％硝酸銀/２５％硝酸カリウム（Ａｒｚｏｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社、ニューハンプシャー州キーン）で被覆した塗布用スティック（直径＝１．８ｍｍ）を、手術用顕微鏡下で、１０秒間角膜中心部に１０秒間（ストップウォッチを使用）押圧することによって各動物の一方の角膜を焼灼した。眼を５ｍｌの平衡塩類溶液で洗浄し、ティッシュペーパーで丁寧に眼を拭いて余分な硝酸銀を除去した。損傷の再現性を高めるために、一人の試験者が全ての眼の焼灼を行った。焼灼後、群間に起こりうるやけどの程度の偏りをなくすため、ラットは薬物群にランダムに振り分けた。焼灼後直ちに、各々の薬剤を２滴、各角膜に局所投与した。
【０１６７】
ラットは３つの群に分けた。群１（ｎ＝８）には４ｍｇ／ｍｌのトリアムシノロンアセトニド（Ｋｅｎａｌｏｇ−４０、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ社、ニュージャージー州プリンストン）及び１０ｍｇ／ｍｌの低分子量ヘパリン（エノキサパリン、アヴェンティス・ファーマシューティカルズ、ニュージャージー州ブリッジウォーター）を投与した。群２（ｎ＝８）には４ｍｇ／ｍｌのトリアムシノロンアセトニド及び２０ｍｇ／ｍｌのドキシサイクリン（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，イリノイ州ショウンバーグ）を投与し、群３（ｎ＝８）には生理食塩水を投与した。すべての薬剤は、１滴ずつ１日２回、７日間局所投与した。全ての群で治療は、焼灼後直ちに開始した。
【０１６８】
前述のように全ての動物に麻酔をかけ、３日目及び６日目にスリット・ランプ顕微鏡検査によって角膜の評価を行った。７日目にスリット・ランプ顕微鏡（ＳＬ−７Ｅ、株式会社トプコン、日本東京）に取り付けたカメラを使用して、２５倍率で角膜の写真を撮った。各角膜における血管新生の評価は、先入観を最小限とするためにどの治療群にどの薬剤を投与したか知らない試験者による”Drug  effects  on  the neovascularization  response  to  silver  nitrate  cauterization  of  the  rat  cornea  Curr  Eye  Res  1985;  4:531-35  (Mahoney  et  al)”記載の手法を用いて行った。各眼について、焼灼刺激応答の程度を「０」（腫れなし、角膜表面からの隆起なし）、「+１」（小さな腫れ、角膜表面からわずかに隆起）」、「+２」（中程度の腫れ、角膜表面から中程度に隆起）、又は「+３」（大きな腫れ）にスコアした。「+２」以上の初期焼灼刺激を示した角膜のみを、各群における平均焼灼刺激及び血管新生スコアの計算の対象とした。全ての写真は、スキャナ（ＣａｎｏＳｃａｎ  ９９００Ｆ（キヤノン、東京、日本）を使用して高解像度デジタル形式に変換した。新生血管に覆われた角膜表面を、角膜の全領域に対する割合として写真上で測定した。ｉｍａｇｅ  ｊ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｗａｙｎｅ  Ｒａｓｂａｎｄ、リサーチサービス部門、国立精神保健研究所、メリーランド州ベテスダ）を使用して各角膜の面積及び血管新生をそれぞれ測定し、角膜中の血管及び角膜傷が占有する割合をそれぞれ算出した。
【０１６９】
血管新生面積を測定し、全角膜領域に対するその比率を、角膜の血管新生率とした。角膜血管の図を試験者の一人に作製させ、デジタル写真と比較し、面積率の算出中に血管領域が削除されてないことを確かめた。また、傷に覆われた角膜表面の割合を計算して傷の程度も評価した。
【０１７０】
各薬物治療群における平均血管新生率と対照群のそれとを比較して、阻害率（％）を算出した。全ての群について焼灼刺激及び血管新生率の採点をした後、７日目に動物を屠殺した。
【０１７１】
各群について新生血管率及び傷の面積率の統計解析を、第一種の実験全体での過誤を制御するＴｕｋｅｙのスチューデント化範囲検定を用いた一般線形モデル（ＧＬＭ）で行った（ＳＡＳ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ８．０２、ノースカロライナ州カリー）。統計的有意差はｐ≦０．０１に設定した。
【０１７２】
（組織調製／組織病理）
キシラジンとケタミン塩酸塩の組み合わせ（９４．７ｍｇ/体重）を腹腔内注射して動物を鎮静させた後、摘出を行い動物を安楽死させた。摘出直後、３時及び９時の経線で角膜輪部から１．０ｍｍの位置で２７ゲージ針を眼球に貫通させて、急速に固定剤を眼に充填させた。組織病理検査するために１０％ホルムアルデヒドで眼を処理した。２４時間固定した後、眼を固定剤から取り出して、角膜を脱水して切片化した。次いで、角膜をキシレン及びパラフィンに浸し、パラフィンに埋め込んだ後１μｍに切り出して、光学顕微鏡で観察するため、ヘマトキシリン−エオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。
【０１７３】
全ての顕微鏡用切片について光学顕微鏡検査を行った。切片の検査は、角膜を病変部の中心で２分割にし、新生血管、多形核白血球、浮腫、及び線維芽細胞活性の強さを評価した。
【０１７４】
治療群及びプラセボ群における、各角膜のやけど刺激及び（全角膜領域に対する）血管新生の面積率、組織学的スコアを表３に示す。
【表３】
2007523911.tif 000004
ＴＡ：トリアムシノロンアセトニド、ＬＭＷＨ：低分子量ヘパリン、Ｄｘ：ドキシサイクリン
【０１７５】
やけど刺激スコアは全ての眼で「＋２」以上であった。治療群とプラセボ群の間で平均のやけど刺激スコアに統計的有意差はなかった（ｐ＝１．０）。スリット・ランプ検査では、トリアムシノロンと低分子量ヘパリンの組み合わせ、又はトリアムシノロンとドキシサイクリンの組み合わせで処置したすべての眼では、対照群の眼と比較して、治療期間中炎症が少なく、また、毛様体充血及び瞼の浮腫が少なかった。
【０１７６】
群３の角膜の代表的なスリット・ランプ写真を図１３に示す。図１３Ａは角膜にやけどを引き起こして７日目の生理食塩水処置の対照群個体のスリット・ランプ写真である（外周部から角膜やけどへ広がった血管新生が発達している）。図１３Ｂは図１３Ａのデジタル高画質化像であり、血管を強調して示している。図１３Ｃは個体角膜にやけどを引き起こして７日目のトリアムシノロンアセトニド及び低分子量ヘパリンを投与した個体のデジタル高画質化スリット・ランプ写真である（外周部に血管新生が見られる）。図１３Ｄは個体角膜にやけどを引き起こして７日目のトリアムシノロンアセトニド及びドキシサイクリンを投与した個体のデジタル高画質化スリット・ランプ写真である（血管新生は見られず、眼は平穏に見える）。
【０１７７】
トリアムシノロンとＬＭＷＨを組み合わせた群、トリアムシノロンとドキシサイクリンを組み合わせた群、及び対照群における平均の角膜新生血管面積率は、それぞれ、１８．５±１８．６％、５．８±１０．１％、６４．７±１０．０％であった（図１４）。トリアムシノロンとＬＭＷＨの群又はトリアムシノロンとドキシサイクリンの群の平均の角膜新生血管面積率は、対照群と有意差があった（双方のｐは＜０．００１）。試験群間での有意差はなかった。
【０１７８】
群間で角膜傷面積率に有意差はなかった（ｐ＞０．０５）。
【０１７９】
角膜の組織検査で、対照群では角膜血管新生及び炎症が見られた（図１５Ａ）。トリアムシノロン及びＬＭＷＨで処置した角膜では、最小の炎症応答で、角膜血管新生が減少した（図１５Ｂ）。トリアムシノロンとドキシサイクリンの群では、極僅かの炎症応答で、ほとんど血管新生がなかった（図１５Ｃ）。
【０１８０】
特定の好適な実施形態を参照して本発明を説明したが、多くの変形・改変が本発明の広い本質の範囲内で可能であることが理解されよう。したがって、添付の特許請求の範囲に記載したように、好適な実施形態およびこのような変形・改変は本発明の範囲・要旨内に含まれることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【０１８１】
【図１】図１は、生理食塩水投与（対照）後７日目のラットの眼球の写真である。
【図２】図２は、２０ｍｇ／ｍｌドキシサイクリン及び４ｍｇ／ｍｌトリアムシノロンアセトニドを含む製剤投与後３週間目のラットの眼球の写真である。
【図３Ａ】図３Ａは、フルルビプロフェン及び低分子量ヘパリンを投与したラットの眼球の写真である。
【図３Ｂ】図３Ｂは、フルルビプロフェン及びドキシサイクリンを投与したラットの眼球の写真である。
【図３Ｃ】図３Ｃは、ドキシサイクリン及び低分子量ヘパリンを投与したラットの眼球の写真である。
【図３Ｄ】図３Ｄは、平衡塩類溶液を投与したラットの眼球の写真である。
【図４】図４は、種々の薬剤の効果を、血管に占領された角膜の割合（％）で示したグラフである。
【図５Ａ】図５Ａは、フルルビプロフェン及びドキシサイクリンを投与したラットの眼球の組織標本写真である。
【図５Ｂ】図５Ｂは、平衡塩類溶液を投与したラットの眼球の組織標本写真である。
【図６】図６は、ドキシサイクリンの種々の濃度における血管新生に対する効果を示すグラフである。
【図７Ａ】図７Ａは、０．０５％ドキシサイクリンを投与したラットの眼球の写真である。
【図７Ｂ】図７Ｂは、０．１％ドキシサイクリンを投与したラットの眼球の写真である。
【図７Ｃ】図７Ｃは、１％ドキシサイクリンを投与したラットの眼球の写真である。
【図７Ｄ】図７Ｄは、２％ドキシサイクリンを投与したラットの眼球の写真である。
【図７Ｅ】図７Ｅは、ｐＨを中性にした２％ドキシサイクリンを投与したラットの眼球の写真である。
【図７Ｆ】図７Ｆは、生理食塩水を投与したラットの眼球の写真である。
【図８Ａ】図８Ａは、０．０５％ドキシサイクリンを投与したラットの眼球の組織標本写真である。
【図８Ｂ】図８Ｂは、０．１％ドキシサイクリンを投与したラットの眼球の組織標本写真である。
【図８Ｃ】図８Ｃは、１％ドキシサイクリンを投与したラットの眼球の組織標本写真である。
【図８Ｄ】図８Ｄは、２％ドキシサイクリンを投与したラットの眼球の組織標本写真である。
【図８Ｅ】図８Ｅは、ｐＨを中性にした２％ドキシサイクリンを投与したラットの眼球の組織標本写真である。
【図８Ｆ】図８Ｆは、生理食塩水を投与したラットの眼球の組織標本写真である。
【図９】図９は、各群における角膜中の血管占有率（％）を示す棒グラフ（ＬＭＷＨ：低分子量ヘパリン、ＡＳＣ：アスコマイシン、Ｆｌｕｒ：フルルビプロフェン、ＤＯＸ：ドキシサイクリン、ＴＡ：トリアムシノロン）であり、Ｘ軸下の線は有意差のない（ｐ＞０．５）群を結ぶ。
【図１０Ａ】図１０Ａは、通常の生理食塩水処置の対照群の眼に角膜やけどを引き起こして７日目の角膜のスリット・ランプ写真である。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、図１０Ａのデジタル高画質化像であり、血管を強調して示している。
【図１１Ａ】図１１Ａは、角膜やけどを引き起こして７日目のフルルビプロフェン処置の角膜のデジタル高画質化スリット・ランプ写真である（この群では血管新生が極めて顕著である）。
【図１１Ｂ】図１１Ｂは、角膜やけどを引き起こして７日目のドキシサイクリン処置の角膜のデジタル高画質化スリット・ランプ写真である（この群では血管新生はあまり顕著ではない）。
【図１１Ｃ】図１１Ｃは、角膜やけどを引き起こして７日目のトリアムシノロンアセトニド処置の角膜のデジタル高画質化スリット・ランプ写真である（矢印は比較的小さい血管新生領域を囲んでいる）。
【図１２Ａ】図１２Ａは、通常の生理食塩水で処置した対照群の眼における角膜やけどの組織標本写真であり、角膜基質内の角膜傷（大矢印）及び新血管（小矢印）を示す（Ｈ＆Ｅ、１００倍率）。
【図１２Ｂ】図１２Ｂは、トリアムシノロンアセトニドで処置した眼における角膜やけどの組織標本写真であり（二本矢印は無血管基質をさしている）、図１３Ｂに比べて図１３Ａでは角膜基質で血管新生が広範囲に及んでいることに注意されたい（Ｈ＆Ｅ、１００倍率）。
【図１３Ａ】図１３Ａは、角膜にやけどを引き起こして７日目の生理食塩水処置の対照群個体のスリット・ランプ写真である（外周部から角膜やけどへ広がった角膜血管新生が発達している）。
【図１３Ｂ】図１３Ｂは、図１３Ａのデジタル高画質化像であり、血管を強調して示している。
【図１３Ｃ】図１３Ｃは、個体角膜にやけどを引き起こして７日目のトリアムシノロンアセトニド及び低分子量ヘパリンを投与した角膜のデジタル高画質化スリット・ランプ写真である（外周部に角膜血管新生が見られる）。
【図１３Ｄ】図１３Ｄは、個体角膜にやけどを引き起こして７日目のトリアムシノロンアセトニド及びドキシサイクリンを投与した個体のデジタル高画質化スリット・ランプ写真である（角膜血管新生は見られず、眼は平穏に見える）。
【図１４】図１４は、ラットにおける平均の角膜血管新生面接率を示すグラフである（ＴＡ：トリアムシノロンアセトニド、ＬＭＷＨ：低分子量ヘパリン、Ｄｘ：ドキシサイクリン）。
【図１５Ａ】図１５Ａは、通常の生理食塩水処置の化学やけど後の角膜組織標本写真である（角膜基質全体の新生血管（長矢印）及び炎症性細胞（短矢印）に注意されたい）。
【図１５Ｂ】図１５Ｂは、トリアムシノロンアセトニド及び低分子量ヘパリン処置の化学やけど後の角膜組織標本写真であり、角膜やけど近傍の数個の炎症性細胞（短矢印）を示している（基質中に血管新生がないことに注意されたい）。
【図１５Ｃ】図１５Ｃは、トリアムシノロンアセトニド及びドキシサイクリン処置の化学やけど後の角膜組織標本写真である（炎症性細胞及び血管新生がなく、正常な角膜構造であることに注意されたい、また、矢尻は角膜やけどの縁部を示す）。
【図４】
2007523911.tif 000005
【図６】
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【図９】
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【図１０Ｂ】
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【図１４】
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【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
2007523911.tif 000021
【図７Ｅ】
2007523911.tif 000022
【図７Ｆ】
2007523911.tif 000023
【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図８Ｆ】
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【図１０Ａ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
2007523911.tif 000032
【図１１Ｃ】
2007523911.tif 000033
【図１２Ａ】
2007523911.tif 000034
【図１２Ｂ】
2007523911.tif 000035
【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
2007523911.tif 000037
【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
2007523911.tif 000039
【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【手続補正書】
【提出日】平成17年11月8日(2005.11.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬学的に許容される眼用製剤であって、
（ａ）眼への送達に適した薬学的に許容される形態中に、略中性のｐＨで、眼血管新生の軽減に十分な量及び期間存在する、ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含むテトラサイクリン又はその誘導体と、
（ｂ）眼血管新生を軽減する濃度及び用量の、ステロイド、ヘパリン、マクロライド系抗生物質、抗プロスタグランジン薬、及び／又はメタロプロテナーゼ阻害剤からなる群から選択される化合物とを含む薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項２】
前記テトラサイクリン又はその誘導体の濃度が、約１ｐｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌである請求項１に記載の眼血管新生治療用製剤。
【請求項３】
硝子体内投与した場合、前記テトラサイクリン誘導体が最大約２００μｇ／ｍｌの用量で存在する請求項１に記載の眼血管新生治療用製剤。
【請求項４】
眼球内投与した場合、前記テトラサイクリン誘導体が約１ｐｇ／ｍｌ〜約２ｍｇ／ｍｌの用量で存在する請求項１に記載の眼血管新生治療用製剤。
【請求項５】
前記テトラサイクリン又はその誘導体が、ドキシサイクリン、デメクロサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、ライムサイクリン、又は化学的に修飾されたテトラサイクリンからなる群から選ばれる請求項１〜４いずれかに記載の眼血管新生治療用製剤。
【請求項６】
前記化学的に修飾されたテトラサイクリンが、ＣＭＴ−３１５、ＣＭＴ−３，ＣＭＴ−８、ＣＭＴ−３０８、及び６−デメチル−６−デオキシ−４−デジメチルアミノテトラサイクリン（ＣＯＬ−３）からなる群から選ばれる請求項５に記載の眼血管新生治療用製剤。
【請求項７】
前記テトラサイクリン誘導体が、ドキシサイクリンである請求項１に記載の眼血管新生治療用製剤。
【請求項８】
製剤中のドキシサイクリンの濃度が、約０．０１μｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの間である請求項７に記載の眼血管新生治療用製剤。
【請求項９】
製剤中のドキシサイクリンの濃度が、約０．０５ｍｇ／ｍｌから約１０ｍｇ／ｍｌの間である請求項７に記載の眼血管新生治療用製剤。
【請求項１０】
製剤中のドキシサイクリンの濃度が、約１ｍｇ／ｍｌから約２０ｍｇ／ｍｌの間である請求項７に記載の眼血管新生治療用製剤。
【請求項１１】
ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、
約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌのステロイドとを含む請求項１に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項１２】
前記ステロイドが、トリアムシノロン、ブデソニド、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾンリン酸ナトリウム、フルオロメトロン、フルオロメトロンアルコール、リメキソロン、メドリゾンアルコール、ロテプレドノールエタボネート、１１−デオキシコルチゾル、及び酢酸アネコウルタブからなる群から選ばれる請求項１１に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項１３】
前記ステロイドが、１１−置換−１６α，１７α−置換メチレンジオキシステロイドである請求項１１に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項１４】
前記ステロイドが、９−フルオロ−１１，１２−ジヒドロキシ−１６，１７−[１−メチルエチルイジンビス（オキシ）]プレグナ−１，４−ジエン−３，２０−ジオンである請求項１３に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項１５】
前記ステロイドの濃度が、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌである請求項１２又は１３に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項１６】
前記ステロイドの濃度が、約１ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌである請求項１２又は１３に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項１７】
前記ステロイドの濃度が、約２０ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌである請求項１２又は１３に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項１８】
前記ステロイドの濃度が、約２０ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌである請求項１２又は１３に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項１９】
ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、
約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのヘパリンとを含む請求項１に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項２０】
前記ヘパリンが、低分子量ヘパリンである請求項１９に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項２１】
前記ヘパリンが、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する請求項１９に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項２２】
前記ヘパリンが、約０．５ｍｇ／ｍｌから約１５ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する請求項１９に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項２３】
前記ヘパリンが、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約２．５ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、又は約５ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する請求項１９に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項２４】
ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、
約１μｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの抗プロスタグランジン薬とを含む請求項１に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項２５】
前記抗プロスタグランジン薬が、フルルビプロフェン、インドメタシン、トロメタミン、メクロフェナメート、フルルビプロフェン，及び非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）のピロロピロール群化合物からなる群から選択される請求項２４に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項２６】
前記抗プロスタグランジン薬が、フルルビプロフェンである請求項２５に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項２７】
ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、
約２０μｇ／ｍｌ〜約２００μｇ／ｍｌのマクロライド系抗生物質とを含む請求項１に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項２８】
前記マクロライド系抗生物質が、タクロリムス、シクロスポリン、シロリムス、エバロリムス、アスコマイシン、エリスロマイシン、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、クリンダマイシン、リンコマイシン、ジリスロマイシン、ジョサマイシン、スピラマイシン、ジアセチル−ミデカマイシン、チロシン、ロキシスロマイシン、ＡＢＴ−７７２、テリスロマイシン、ロイコマイシン、及びリンコサミドからなる群から選択される請求項２７に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項２９】
前記マクロライド系抗生物質が、アスコマイシンである請求項２８に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項３０】
ミコフェノール酸を更に含む、請求項２７に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項３１】
前記ミコフェノール酸が、約０．５％（ｗ/ｖ）〜約１０％（ｗ/ｖ）の濃度で存在する請求項３０に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項３２】
ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、
眼血管新生を軽減する濃度及び用量のメタロプロテナーゼ阻害剤とを含む請求項１に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項３３】
前記メタロプロテナーゼ阻害剤が、天然の阻害剤であるＴＩＭＰ−１、ＴＩＭＰ−２、ＴＩＭＰ−３及びＴＩＭＰ−４と合成メタロプロテナーゼ阻害剤であるバチマスタット（ＢＢ−９４）及びマリマスタット（ＢＢ−２５１６）とからなる群から選択される請求項３２に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項３４】
薬学的に許容される眼用製剤であって、
（ａ）眼への送達に適した薬学的に許容される形態中に、略中性のｐＨで眼血管新生の軽減に十分な量及び期間存在する、ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含むテトラサイクリン又はその誘導体と、
（ｂ）眼血管新生を軽減する濃度及び用量の、ステロイド、ヘパリン、マクロライド系抗生物質、抗プロスタグランジン薬、及び／又はメタロプロテナーゼ阻害剤からなる群から選択される複数の化合物とを含む薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項３５】
（ａ）ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、
（ｂ）約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌのステロイドと、
（ｃ）約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのヘパリンとを含む請求項３４に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項３６】
（ａ）ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、
（ｂ）約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌのステロイドと、
（ｃ）約１μｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの抗プロスタグランジン薬とを含む請求項３４に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項３７】
（ａ）ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、
（ｂ）約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌのステロイドと、
（ｃ）約２０μｇ／ｍｌ〜約２００μｇ／ｍｌのマクロライド系抗生物質とを含む請求項３４に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項３８】
（ａ）ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、
（ｂ）約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのヘパリンと、
（ｃ）約１μｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの抗プロスタグランジン薬とを含む請求項３４に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項３９】
（ａ）ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、
（ｂ）約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのヘパリンと、
（ｃ）血管新生を軽減する濃度及び用量のメタロプロテナーゼ阻害剤とを含む請求項３４に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項４０】
（ａ）ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、
（ｂ）約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌのステロイドと、
（ｃ）血管新生を軽減する濃度及び用量のメタロプロテナーゼ阻害剤とを含む請求項３４に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項４１】
（ａ）ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、
（ｂ）約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのヘパリンと、
（ｃ）約２０μｇ／ｍｌ〜約２００μｇ／ｍｌのマクロライド系抗生物質とを含む請求項３４に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項４２】
（ａ）ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、
（ｂ）約１μｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの抗プロスタグランジン薬と、
（ｃ）約２０μｇ／ｍｌ〜約２００μｇ／ｍｌのマクロライド系抗生物質とを含む請求項３４に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項４３】
（ａ）ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、
（ｂ）約１μｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの抗プロスタグランジン薬と、
（ｃ）血管新生を軽減する濃度及び用量のメタロプロテナーゼ阻害剤とを含む請求項３４に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項４４】
（ａ）ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、
（ｂ）約２０μｇ／ｍｌ〜約２００μｇ／ｍｌのマクロライド系抗生物質と
（ｃ）血管新生を軽減する濃度及び用量のメタロプロテナーゼ阻害剤とを含む請求項３４に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項４５】
（ａ）ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、
（ｂ）約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌのステロイドと、
（ｃ）約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのヘパリンと、
（ｄ）約１μｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの抗プロスタグランジン薬とを含む請求項３４に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項４６】
（ａ）ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、
（ｂ）約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌのステロイドと、
（ｃ）約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのヘパリンと、
（ｄ）約２０μｇ／ｍｌ〜約２００μｇ／ｍｌのマクロライド系抗生物質とを含む請求項３４に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項４７】
（ａ）ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、
（ｂ）約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌのステロイドと、
（ｃ）約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのヘパリンと、
（ｄ）約１μｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの抗プロスタグランジン薬と、
（ｅ）約２０μｇ／ｍｌ〜約２００μｇ／ｍｌのマクロライド系抗生物質とを含む請求項３４に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項４８】
（ａ）ＭＭＰ活性を阻害するＣＭＴを含む、約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン又はその誘導体と、
（ｂ）約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌのステロイドと、
（ｃ）約０．０１ｐｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのヘパリンと、
（ｄ）約１μｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの抗プロスタグランジン薬と、
（ｅ）血管新生を軽減する濃度及び用量のメタロプロテナーゼ阻害剤とを含む請求項３４に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項４９】
前記テトラサイクリン誘導体が、ドキシサイクリンである請求項３４〜４８いずれかに記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項５０】
前記ステロイドが、トリアムシノロンアセトニドである請求項３５〜３７、４５〜４８いずれかに記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項５１】
前記ヘパリンが、低分子量ヘパリンである請求項３５、３８〜４１、４５〜４８いずれかに記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項５２】
前記抗プロスタグランジン薬が、フルルビプロフェンである請求項３６、３８、４２、４３、４５、４７、又は４８に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項５３】
前記マクロライド系抗生物質薬が、アスコマイシンである請求項３７、４０、４２、４４、４６、又は４７いずれかに記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項５４】
眼血管新生の治療方法であって、
請求項１〜５３に記載の製剤を、眼血管新生の治療に十分な量及び期間、患者に投与するステップを含むことを特徴とする眼血管新生の治療方法。
【請求項５５】
眼血管新生の治療方法であって、
請求項１〜５３いずれかに記載の製剤を、角膜手術後に患者の眼に投与するステップを含むことを特徴とする眼血管新生の治療方法。
【請求項５６】
眼血管新生の治療方法であって、
請求項１〜５３に記載の製剤を一種以上、循環的腫瘍治療計画を以って患者の眼に投与して、腫瘍部位の血管成長及び増殖を軽減することを特徴とする眼血管新生の治療方法。
【請求項５７】
初期治療として、化学療法薬の投与を行うか、あるいは、非化学療法的治療である放射線治療、光線治療、及び熱療法の一種以上を行うステップを含む請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
請求項１〜５４に記載の製剤を一種以上ローテーションで、且つ該ローテーションのサイクル中異なるステージで投与する請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
上皮細胞上のＶＥＧＦの活動を阻害するように設計された抗血管新生薬を投与するステップを更に含む、請求項５６〜５８いずれかに記載の方法。
【請求項６０】
前記抗血管新生薬が、ｒｈｕＦａｂ  Ｖ２、ヒト化ＡＭＤ−Ｆａｂ、又は抗ＶＥＧＦアプタマーである請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
眼血管新生治療用薬剤の調製への請求項１〜５３いずれかに記載の製剤の使用。
【請求項６２】
上皮細胞表面のＶＥＧＦの活動を阻害するように設計された抗血管新生薬に加えた、請求項１〜５３に記載の製剤の眼血管新生治療用の薬剤の調製への使用。
【請求項６３】
前記抗血管新生薬が、ｒｈｕＦａｂ  Ｖ２、又はヒト化ＡＭＤ−Ｆａｂ、又は抗ＶＥＧＦアプタマーである請求項６２に記載の使用。
【請求項６４】
請求項１に記載及び明細書に実質的に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項６５】
請求項１に記載及び実施例に実質的に記載の薬学的に許容される眼用製剤。
【請求項６６】
請求項５４に記載及び明細書に実質的に記載の方法。
【請求項６７】
請求項５４に記載及び実施例に実質的に記載の方法。
【請求項６８】
請求項６１に記載及び明細書に実質的に記載の使用。
【請求項６９】
請求項６１に記載及び実施例に実質的に記載の使用。
【国際調査報告】
2007523911.tif 000043
2007523911.tif 000044
2007523911.tif 000045