(57)【要約】  本発明は悪性腫瘍を治療するための治療剤として有用な新規ＩＡＰインヒビターを提供するもので、該化合物は次の一般式(Ｉ)：2007530553.tif 000063[上式中、Ｘ１及びＸ２は独立してＯ又はＳ；Ｌは結合又は-Ｃ(Ｘ３)-、-Ｃ(Ｘ３)ＮＲ１２、-Ｃ(Ｘ３)Ｏ-で、Ｘ３はＯ又はＳ、Ｒ１２はＨ又はＲ１；Ｒ１はアルキル、炭素環、炭素環置換アルキル、複素環又は複素環置換アルキルで、それぞれハロゲン、ヒドロキシル、メルカプト、カルボキシル、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、アルキルスルホニル、アミノ、ニトロ、アリール及びヘテロアリールで置換されていてもよいもの；Ｒ２はアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アラルキル、複素環又はヘテロシクリルアルキル；Ｒ３はＨ又はアルキル；Ｒ４及びＲ４’は独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、又はヘテロアラルキルで、それぞれハロゲン、ヒドロキシル、メルカプト、カルボキシル、アルキル、アルコキシ、アミノ及びニトロで置換されていてもよいもの；Ｒ５及びＲ５’はそれぞれ独立してＨ又はアルキル；Ｒ６はＨ又はアルキルである]を有し、またその塩及び溶媒和物である。
2007530553.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の式Ｉ：
2007530553.tif 000060
[上式中、
Ｘ１及びＸ２は独立してＯ又はＳであり；
Ｌは、結合、-Ｃ(Ｘ３)-、-Ｃ(Ｘ３)ＮＲ１２又は-Ｃ(Ｘ３)Ｏ-であり、ここで、Ｘ３はＯ又はＳで、Ｒ１２はＨ又はＲ１であり；
Ｒ１は、アルキル、炭素環、炭素環置換アルキル、複素環又は複素環置換アルキルで、それぞれハロゲン、ヒドロキシル、メルカプト、カルボキシル、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、アルキルスルホニル、アミノ、ニトロ、アリール及びヘテロアリールで置換されていてもよいものであり；
Ｒ２は、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アラルキル、複素環又はヘテロシクリルアルキルであり；
Ｒ３は、Ｈ又はアルキルであり；
Ｒ４及びＲ４’は独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、又はヘテロアラルキルで、それぞれハロゲン、ヒドロキシル、メルカプト、カルボキシル、アルキル、アルコキシ、アミノ及びニトロで置換されていてもよいものであり；
Ｒ５及びＲ５’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキルであり；
Ｒ６は、Ｈ又はアルキルである]
の化合物及びその塩及び溶媒和物。
【請求項２】
Ｒ３がメチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｌが-Ｃ(Ｘ３)-であり、Ｒ１が、式ＩＩａ〜ＩＩｄ：
2007530553.tif 000061
[上式中
Ｒ７は、Ｈ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシル、メルカプト、カルボキシル、アミノ、ニトロ、アリール、アリールオキシ、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、又はヘテロアラルキルであり；
Ｒ８は、Ｈ、アルキル、アリール又はヘテロアリールで、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、カルボキシル又はアミノで置換されていてもよいものであり；
Ｒ９及びＲ９'は独立して、Ｈ又はアルキルであり；
ＹはＮＨ、ＮＲ１０、Ｏ又はＳであり、ここでＲ１０はＨ、アルキル又はアリールであり；
ＺはＣＨ、ＣＨ２又はＮであり；
ｍは０、１、２又は３である]
からなる群から選択される、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１が式ＩＩａの基である、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ７が、Ｈ、ハロゲン、アルキル、ヒドロキシル又はアルコキシである、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２がアルキル又はシクロアルキルである、請求項４に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ２がイソプロピル、ｔ-ブチル又はシクロヘキシルである、請求項４に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ３がメチルである、請求項４に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ４がＨ又はメチルで、Ｒ４’がＨである、請求項４に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｘ１、Ｘ２及びＸ３がＯで、Ｒ５、Ｒ５’及びＲ６がそれぞれＨである、請求項４に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ１が式ＩＩｂの基である、請求項３に記載の化合物。
【請求項１２】
式ＩＩｂの基が、ベンゾチオフェン、インドール、Ｎ-メチルインドール、ベンゾフラン又は２,３-ジヒドロ-ベンゾフランである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ２がアルキル又はシクロアルキルである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ２がイソプロピル、ｔ-ブチル又はシクロヘキシルである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ３がメチルである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ４がＨ又はメチルで、Ｒ４’がＨである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｘ１、Ｘ２及びＸ３がＯで、Ｒ５、Ｒ５’及びＲ６がそれぞれＨである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ１が式ＩＩｃの基である、請求項３に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ１が式ＩＩｃ１：
2007530553.tif 000062
[上式中
Ｒ７及びＲ７’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシル、メルカプト、カルボキシル、アミノ、ニトロ、アリール、アリールオキシ、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、又はヘテロアラルキルであり；
Ｒ９はＨ又はアルキルであり；
ｍは０又は１である]
の基である、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ７がＨであり、Ｒ９がＨであり、ｍが０である、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ２がアルキル又はシクロアルキルである、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ２がイソプロピル、ｔ-ブチル又はシクロヘキシルである、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ３がメチルである、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２４】
Ｒ４がＨ又はメチルで、Ｒ４’がＨである、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｘ１、Ｘ２及びＸ３がＯで、Ｒ５、Ｒ５’及びＲ６がそれぞれＨである、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｒ１が式ＩＩｄの基である、請求項３に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｒ７がＨ又はフェニルであり；Ｒ９がＨ又はアルキルであり、Ｒ９’がＨ又はアルキルであり、ｍが０又は１である、請求項２６に記載の化合物。
【請求項２８】
Ｒ２がアルキル又はシクロアルキルである、請求項２６に記載の化合物。
【請求項２９】
Ｒ２がイソプロピル、ｔ-ブチル又はシクロヘキシルである、請求項２６に記載の化合物。
【請求項３０】
Ｒ３がメチルである、請求項２６に記載の化合物。
【請求項３１】
Ｒ４がＨ又はメチルで、Ｒ４’がＨである、請求項２６に記載の化合物。
【請求項３２】
Ｘ１、Ｘ２及びＸ３がＯで、Ｒ５、Ｒ５’及びＲ６がそれぞれＨである、請求項２６に記載の化合物。
【請求項３３】
細胞においてアポトーシスを誘発させる方法において、請求項１に記載の化合物を前記細胞に導入することを含んでなる方法。
【請求項３４】
細胞をアポトーシスシグナルに対して過敏化させる方法において、請求項１に記載の化合物を前記細胞に導入することを含んでなる方法。
【請求項３５】
前記アポトーシスシグナルが、シタラビン、フルダラビン、５-フルオロ-２'-デオキシウイリジン、ゲムシタビン、メトトレキセート、ブレオマイシン、シスプラチン、シクロホスファミド、アドリアマイシン(ドキソルビシン)、ミトキサントロン、カンプトテシン、トポテカン、コルセミド、コルヒチン、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、タモキシフェン、フェナステリド、タキソテール、及びマイトマイシンＣからなる群から選択される化合物に前記細胞を接触させることによって誘導される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記アポトーシスシグナルがＡｐｏ２Ｌ／ＴＲＡＩＬに前記細胞を接触させることによって誘導される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
カスパーゼタンパク質へのＩＡＰタンパク質の結合を阻害する方法において、前記ＩＡＰタンパク質を請求項１に記載の化合物に接触させることを含む方法。
【請求項３８】
哺乳動物におけるＩＡＰの過剰発現に関連した病気又は症状を処置する方法において、前記哺乳動物に、請求項１に記載の有効量の化合物を投与することを含む方法。
【請求項３９】
前記病気又は症状が癌である、請求項３８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
(発明の分野)
本発明は、哺乳動物における治療及び／又は予防に有用な有機化合物、特に癌の治療に有用なＩＡＰタンパク質のアザビシクロ-オクタンインヒビターに関する。
【０００２】
(発明の背景)
アポトーシス又はプログラム細胞死は、無脊椎動物並びに脊椎動物の成長及びホメオスタシスにおいて重要な役割を担っている遺伝的及び生化学的な調節メカニズムである。時期尚早の細胞死に至るアポトーシスにおける異常は、様々な発達障害に関連している。細胞死の欠失を生じるアポトーシスの欠乏は、癌及び慢性的なウイルス感染に関連している(Thompsonら, (1995) Science 267, 1456-1462)。
アポトーシスにおいて鍵となるエフェクター分子の一つはカスパーゼ(システイン含有のアルパラギン酸特異性プロテアーゼ)である。カスパーゼは強力なプロテアーゼで、アスパラギン酸残基の後を切断し、ひとたび活性化されると、細胞内から生きている細胞タンパク質を消化する。カスパーゼはこのように強力なプロテアーゼであるため、このファミリーのタンパク質を厳格にコントロールすることが、時期尚早の細胞死を防止するために必要である。一般に、カスパーゼは、活性であるためには、タンパク質分解プロセシングを必要とする主として不活性なチモーゲンとして合成される。このタンパク質分解プロセシングは、カスパーゼが調節される方法のほんの一つである。第２のメカニズムは、カスパーゼに結合してこれを阻害するファミリーのタンパク質を介する。
【０００３】
カスパーゼを阻害する分子ファミリーは、アポトーシスのインヒビター(ＩＡＰ)である(Deverauxら, J Clin Immunol (1999), 19:388-398)。ＩＡＰは、Ｐ３５タンパク質、抗アポトーシス遺伝子に代わるその機能的能力により、元々はバキュロウイルスにおいて発見された(Crookら (1993) J Virology 67, 2168-2174)。ＩＡＰはショウジョウバエからヒトまでの範囲にわたる生物において記述されている。その由来にかからわず、構造的には、ＩＡＰは１〜３のバキュロウイルスＩＡＰ反復(ＢＩＲ)ドメインを含み、そのほとんどがカルボキシル末端ＲＩＮＧフィンガーモチーフをまた有する。ＢＩＲドメインそれ自体は、亜鉛イオンを配位したシステイン及びヒスチジン残基と共に、４つのアルファ-ヘリックスと３つのベータ-ストランドを含む、約７０残基の亜鉛結合ドメインである(Hindsら, (1999) Nat. Struct. Biol. 6, 648-651)。カスパーゼを阻害し、よってアポトーシスを阻害することによって、抗アポトーシス効果を生じると考えられているのはＢＩＲドメインである。一例として、ヒトＸ-染色体連鎖ＩＡＰ(ＸＩＡＰ)は、カスパーゼ３、カスパーゼ７、及びカスパーゼ９のＡｐａｆ-１-チトクロムＣ媒介性活性化を阻害する(Deverauxら, (1998) EMBO J. 17, 2215-2223)。カスパーゼ３及び７はＸＩＡＰのＢＩＲ２ドメインにより阻害される一方、ＸＩＡＰのＢＩＲ３ドメインはカスパーゼ９活性の阻害の原因である。ＸＩＡＰはほとんどの成人及び胎児組織において遍在的に発現しており(Listonら, Nature, 1996, 379(6563):349)、ＮＣＩ６０株化細胞パネルの多数の腫瘍細胞株で過剰発現している(Fongら, Genomics, 2000, 70:113; Tammら, Clin. Cancer Res. 2000, 6(5):1796)。腫瘍細胞におけるＸＩＡＰの過剰発現は、多様なアポトーシス誘発性刺激から保護し、化学療法に対する耐性を促進することが示されている(LaCasseら, Oncogene, 1998, 17(25):3247)。これに一致して、急性骨髄性白血病を患っている患者においては、ＸＩＡＰタンパク質レベルと生存率との間に強い相関関係があることが証明されている(Tammら, 上掲)。アンチセンスオリゴヌクレオチドによるＸＩＡＰ発現のダウンレギュレーションが、インビトロ及びインビボの双方において、広範囲のアポトーシス促進剤により誘発される死に対し腫瘍細胞を過敏化することが示されている(Sasakiら, Cancer Res., 2000, 60(20):5659; Linら, Biochem J., 2001, 353:299; Huら, Clin. Cancer Res., 2003, 9(7):2826)。また、Ｓｍａｃ／ＤＩＡＢＬＯ-誘導性ペプチドも、種々のアポトーシス促進剤により誘発されるアポトーシスに対し、多数の異なる腫瘍細胞株を過敏化させることが証明されている(Arntら, J. Biol. Chem., 2002, 277(46):44236; Fuldaら, Nature Med., 2002, 8(8):808; Guoら, Blood,2002, 99(9):3419; Vucicら, J. Biol. Chem.,2002, 277(14):12275; Yangら, Cancer Res., 2003, 63(4):831)。
【０００４】
メラノーマＩＡＰ(ＭＬ-ＩＡＰ)は、ほとんどの正常な成人組織においては検出されないＩＡＰであるが、メラノーマにおいては強力にアップレギュレートしている(Vucicら, (2000) Current Bio 10:1359-1366)。タンパク質構造の測定では、ヒトＸＩＡＰ、Ｃ-ＩＡＰ１及びＣ-ＩＡＰ２に存在する対応ドメインに対し、ＭＬ-ＩＡＰ ＢＩＲ及びＲＩＮＧフィンガードメインには有意な相同性があることが示された。ＭＬ-ＩＡＰのＢＩＲドメインは、ＸＩＡＰ、Ｃ-ＩＡＰ１及びＣ-ＩＡＰ２のＢＩＲ２及びＢＩＲ３に対して最も類似性を有していると思われ、欠失分析により測定されるところでは、アポトーシス阻害の原因であると思われる。さらに、Vucicらは、ＭＬ-ＩＡＰが、化学治療剤誘発性アポトーシスを阻害しうることを証明した。アドリアマイシン及び４-tert-ブチルフェノール(４-ＴＢＰ)等の薬剤を、ＭＬ-ＩＡＰを過剰発現しているメラノーマの細胞培養系において試験し、正常なメラノサイトコントロールと比較したところ、化学治療剤は細胞の殺傷においてあまり効果的ではなかった。ＭＬ-ＩＡＰが抗アポトーシス活性を生ずるメカニズムは、カスパーゼ３、７及び９の阻害による。ＭＬ-ＩＡＰはカスパーゼ１、２、６又は８を効果的には阻害しなかった。
【０００５】
アポトーシスは、複数の相互作用する要因を有する厳密にコントロールされた経路であるため、ＩＡＰそれ自体が調節されるという発見は異常なことではなかった。ショウジョウバエ(fruit fly Drosophila)において、Reaper(ｒｐｒ)、Head Involution Defective(ｈｉｄ)及びＧＲＩＭタンパク質は、ショウジョウバエファミリーと物理的に相互作用し、そのＩＡＰの抗アポトーシス活性を阻害する。哺乳動物において、タンパク質ＳＭＡＣ／ＤＩＡＢＬＯは、ＩＡＰをブロックするように作用し、アポトーシスの進行を可能にする。正常なアポトーシス中、ＳＭＡＣは活性形態にプロセシングされ、ミトコンドリアから細胞質に放出され、そこでＩＡＰに物理的に結合し、カスパーゼに対する結合からＩＡＰを保護することが示されている。ＩＡＰのこの阻害により、カスパーゼは活性なままで、アポトーシスを進行させる。興味深いことに、ＩＡＰインヒビター間の配列相同性から、プロセシングされた活性タンパク質のＮ末端に４つのアミノ酸モチーフが存在することが示されている。このテトラペプチドは、ＢＩＲドメインの疎水性ポケットに結合し、カスパーゼに結合するＢＩＲドメインを破壊すると思われる(Chaiら, (2000) Nature 406:855-862, Liuら, (2000) Nature 408:1004-1008, Wuら, (2000) Nature 408 1008-1012)。
【０００６】
(発明の概要)
本発明の一態様では、次の一般式(Ｉ)：
2007530553.tif 000003
[上式中、
Ｘ１及びＸ２は独立して、Ｏ又はＳであり；
Ｌは、結合、-Ｃ(Ｘ３)-、-Ｃ(Ｘ３)ＮＲ１２又は-Ｃ(Ｘ３)Ｏ-であり、ここで、Ｘ３はＯ又はＳであり、Ｒ１２はＨ又はＲ１であり；
Ｒ１は、アルキル、炭素環、炭素環置換アルキル、複素環又は複素環置換アルキルで、それぞれハロゲン、ヒドロキシル、メルカプト、カルボキシル、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、アルキルスルホニル、アミノ、ニトロ、アリール及びヘテロアリールで置換されていてもよいものであり；
Ｒ２は、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アラルキル、複素環又はヘテロシクリルアルキルであり；
Ｒ３は、Ｈ又はアルキルであり；
Ｒ４及びＲ４’は独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、又はヘテロアラルキルで、それぞれハロゲン、ヒドロキシル、メルカプト、カルボキシル、アルキル、アルコキシ、アミノ及びニトロで置換されていてもよいものであり；
Ｒ５及びＲ５’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキルであり；
Ｒ６は、Ｈ又はアルキルである]
を有する新規なインヒビターＩＡＰとその塩及び溶媒和物が提供される。
【０００７】
本発明の他の態様では、式Ｉの化合物と、担体、希釈剤又は賦形剤を含有する組成物が提供される。
本発明の他の態様では、細胞にアポトーシスを誘発させる方法であって、式Ｉの化合物を前記細胞に導入することを含む方法が提供される。
本発明の他の態様では、アポトーシスシグナルに対して細胞を過敏化させる方法であって、式Ｉの化合物を前記細胞に導入することを含む方法が提供される。
本発明の他の態様では、カスパーゼタンパク質へのＩＡＰタンパク質の結合を阻害する方法であって、式Ｉの化合物と前記ＩＡＰタンパク質を接触させることを含む方法が提供される。
本発明の他の態様では、哺乳動物におけるＩＡＰの過剰発現に関連した病気又は症状を処置する方法であって、有効量の式Ｉの化合物を前記哺乳動物に投与することを含む方法が提供される。
【０００８】
(好ましい実施態様の詳細な記述)
定義：
「アルキル」とは、別の特定をしない限りは、１２までの炭素原子を有する、直鎖状又は分枝状で飽和又は不飽和(すなわちアルケニル、アルキニル)の脂肪族炭化水素基を意味する。例えば「アルキルアミノ」等、他の用語の一部として使用される場合、アルキル部分は飽和した炭化水素鎖であってよいが、不飽和の炭化水素炭素鎖、例えば「アルケニルアミノ」及び「アルキニルアミノ」も含まれる。特定のアルキル基の例には、メチル、エチル、ｎ-プロピル、イソプロピル、ｎ-ブチル、イソ-ブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、ｎ-ペンチル、２-メチルブチル、２,２-ジメチルプロピル、ｎ-ヘキシル、２-メチルペンチル、２,２-ジメチルブチル、ｎ-ヘプチル、３-ヘプチル、２-メチルヘキシル等が含まれる。「低級アルキル」「Ｃ１−Ｃ４アルキル」及び「１〜４の炭素原子のアルキル」という用語は同義語であって、交換可能に使用され、メチル、エチル、１-プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、１-ブチル、sec-ブチル又はｔ-ブチルを意味する。特定しない限りは、置換アルキル基は、同一でも異なっていてもよい１、２、３又は４の置換基を有していてよい。上述した置換アルキル基の例には、限定されるものではないが；シアノメチル、ニトロメチル、ヒドロキシメチル、トリチルオキシメチル、プロピオニルオキシメチル、アミノメチル、カルボキシメチル、カルボキシエチル、カルボキシプロピル、アルキルオキシカルボニルメチル、アリルオキシカルボニルアミノメチル、カルバモイルオキシメチル、メトキシメチル、エトキシメチル、t-ブトキシメチル、アセトキシメチル、クロロメチル、ブロモメチル、ヨードメチル、トリフルオロメチル、６-ヒドロキシヘキシル、２,４-ジクロロ(ｎ-ブチル)、２-アミノ(イソ-プロピル)、２-カルバモイルオキシエチル等が含まれる。またアルキル基は炭素環基で置換されていてもよい。具体例には、シクロプロピルメチル、シクロブチルメチル、シクロペンチルメチル、及びシクロヘキシルメチル基、並びに対応する-エチル、-プロピル、-ブチル、-ペンチル、-ヘキシル基等が含まれる。特定の置換アルキルは置換メチル基、例えば、「置換Ｃｎ-Ｃｍアルキル」基と同じ置換基で置換されたメチル基である。置換メチル基の例には、ヒドロキシメチル、保護されたヒドロキシメチル(例えばテトラヒドロピラニルオキシメチル)、アセトキシメチル、カルバモイルオキシメチル、トリフルオロメチル、クロロメチル、カルボキシメチル、ブロモメチル及びヨードメチル等の基が含まれる。
【０００９】
「アミジン」は、ＲがＨ又はアルキル又はアラルキルである、-Ｃ(ＮＨ)-ＮＨＲ基を示す。特定のアミジンは-ＮＨ-Ｃ(ＮＨ)-ＮＨ２基である。
「アミノ」とは、第１級(すなわち-ＮＨ２)、第２級(すなわち-ＮＲＨ)及び第３級(すなわち-ＮＲＲ)アミンを示す。特定の第２級及び第３級アミンはアルキルアミン、ジアルキルアミン、アリールアミン、ジアリールアミン、アラルキルアミン及びジアラルキルアミンである。特定の第２級及び第３級アミンは、メチルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、イソプロピルアミン、フェニルアミン、ベンジルアミン、ジメチルアミン、ジエチルアミン、ジプロピルアミン及びジイソプロピルアミンである。
ここで使用される場合「アミノ-保護基」とは、化合物上の他の官能基に対して反応が行われている間、アミノ基をブロック又は保護するのに通常用いられる基の誘導体を意味する。このような保護基の例には、カルバマート類、アミド類、アルキル及びアリール基、イミン類、並びに所望のアミン基を再生するために除去可能な多くのＮ-ヘテロ原子誘導体が含まれる。特定のアミノ保護基はＢｏｃ、Ｆｍｏｃ及びＣｂｚである。これらの基のさらなる例は、T. W. Greene及びP. G. M. Wuts, 「Protective Groups in Organic Synthesis」, 第2版, John Wiley & Sons, Inc., New York, NY, 1991, 第7章; E. Haslam,「Protective Groups in Organic Chemistry」, J. G. W. McOmie編, Plenum Press, New York, NY, 1973, 第5章, 及びT.W. Greene, 「Protective Groups in Organic Synthesis」, John Wiley and Sons, New York, NY, 1981に見出される。「保護アミノ」なる用語は、上のアミノ保護基の一つで置換されたアミノ基を意味する。
【００１０】
「アリール」は、単独で又は他の用語の一部として用いられる場合、標記された炭素原子数を有するか、又は数が標記されない場合は１４までの炭素原子を有する、縮合又は非縮合の炭素環式芳香族基を意味する。特定のアリール基には、フェニル、ナフチル、ビフェニル、フェナントレニル、ナフタセニル(naphthacenyl)等が含まれる(Lang's Handbook of Chemistry (Dean, J.A.編)13版, 表7-2[1985]参照)。特定の実施態様では、アリール基はフェニルである。置換フェニル又は置換アリールとは、他に特定しない限りは、ハロゲン(Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ)、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシ、シアノ、ニトロ、アルキル(例えばＣ１-Ｃ６アルキル)、アルコキシ(例えばＣ１-Ｃ６アルコキシ)、ベンジルオキシ、カルボキシ、保護されたカルボキシ、カルボキシメチル、保護されたカルボキシメチル、ヒドロキシメチル、保護されたヒドロキシメチル、アミノメチル、保護されたアミノメチル、トリフルオロメチル、アルキルスルホニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、ヘテロシクリルスルホニルアミノ、ヘテロシクリル、アリール、又は他の特定された基から選択される１、２、３、４又は５の置換基で置換されたフェニル基又はアリール基を示す。これらの置換基におけるメチン(ＣＨ)及び／又はメチレン(ＣＨ２)基の一又は複数は、さらに上述したようなものと同様の基で置換され得る。「置換フェニル」という用語の例には、限定されるものではないが、モノ-又はジ(ハロ)フェニル基、例えば２-クロロフェニル、２-ブロモフェニル、４-クロロフェニル、２,６-ジクロロフェニル、２,５-ジクロロフェニル、３,４-ジクロロフェニル、３-クロロフェニル、３-ブロモフェニル、４-ブロモフェニル、３,４-ジブロモフェニル、３-クロロ-４-フルオロフェニル、２-フルオロフェニル等；モノ-又はジ(ヒドロキシ)フェニル基、例えば４-ヒドロキシフェニル、３-ヒドロキシフェニル、２,４-ジヒドロキシフェニル、それらの保護されたヒドロキシ誘導体等；ニトロフェニル基、例えば３-又は４-ニトロフェニル；シアノフェニル基、例えば４-シアノフェニル；モノ-又はジ(低級アルキル)フェニル基、例えば、４-メチルフェニル、２,４-ジメチルフェニル、２-メチルフェニル、４-(イソ-プロピル)フェニル、４-エチルフェニル、３-(ｎ-プロピル)フェニル等；モノ又はジ(アルコキシ)フェニル基、例えば３,４-ジメトキシフェニル、３-メトキシ-４-ベンジルオキシフェニル、３-メトキシ-４-(１-クロロメチル)ベンジルオキシ-フェニル、３-エトキシフェニル、４-(イソプロポキシ)フェニル、４-(t-ブトキシ)フェニル、３-エトキシ-４-メトキシフェニル等；３-又は４-トリフルオロメチルフェニル；モノ-又はジカルボキシフェニル又は(保護されたカルボキシ)フェニル基、例えば４-カルボキシフェニル；モノ-又はジ(ヒドロキシメチル)フェニル又は(保護されたヒドロキシメチル)フェニル、例えば３-(保護されたヒドロキシメチル)フェニル又は３,４-ジ(ヒドロキシメチル)フェニル；モノ-又はジ(アミノメチル)フェニル又は(保護されたアミノメチル)フェニル、例えば２-(アミノメチル)フェニル又は２,４-(保護されたアミノメチル)フェニル；あるいはモノ-又はジ(Ｎ-(メチルスルホニルアミノ))フェニル、例えば３-(Ｎ-メチルスルホニルアミノ)フェニルが含まれる。また、「置換フェニル」という用語は、その置換基が異なっている二置換フェニル基、例えば３-メチル-４-ヒドロキシフェニル、３-クロロ-４-ヒドロキシフェニル、２-メトキシ-４-ブロモフェニル、４-エチル-２-ヒドロキシフェニル、３-ヒドロキシ-４-ニトロフェニル、２-ヒドロキシ-４-クロロフェニル等、並びにその置換基が異なっている三置換フェニル基、例えば３-メトキシ-４-ベンジルオキシ-６-メチルスルホニルアミノ、３-メトキシ-４-ベンジルオキシ-６-フェニルスルホニルアミノ、及びその置換基が異なっている四置換フェニル基、例えば３-メトキシ-４-ベンジルオキシ-５-メチル-６-フェニルスルホニルアミノを表す。特定の置換フェニル基は、２-クロロフェニル、２-アミノフェニル、２-ブロモフェニル、３-メトキシフェニル、３-エトキシ-フェニル、４-ベンジルオキシフェニル、４-メトキシフェニル、３-エトキシ-４-ベンジルオキシフェニル、３,４-ジエトキシフェニル、３-メトキシ-４-ベンジルオキシフェニル、３-メトキシ-４-(１-クロロメチル)ベンジルオキシ-フェニル、３-メトキシ-４-(１-クロロメチル)ベンジルオキシ-６-メチルスルホニルアミノフェニル基である。縮合アリール環は、また、置換アルキル基と同じようにして、ここで特定した置換基、例えば１、２又は３の置換基で置換され得る。
【００１１】
「カルボシクリル(carbocyclyl)」、「カルボサイクリック(carbocyclylic)」、「炭素環(carbocycle)」及び「カルボシクロ(carbocyclo)」なる用語は、単独で及びカルボシクロアルキル基のような複合基中の一部として使用される場合には、飽和又は不飽和で芳香族又は非芳香族であってよい、３〜１４の炭素原子、例えば３〜７の炭素原子を有する単環式、二環式、又は三環式の脂肪族環を意味する。特定の飽和したカルボサイクリック基には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシル基が含まれる。特定の実施態様では、飽和したカルボサイクリック基はシクロプロピル及びシクロヘキシルである。他の特定の実施態様では、飽和したカルボサイクリック基はシクロヘキシルである。特定の不飽和の炭素環は芳香族、例えば上述したアリール基である。特定の不飽和の炭素環はフェニルである。「置換カルボシクリル」、「炭素環」及び「カルボシクロ」なる用語は、「置換アルキル」基と同じ置換基により置換されたこれらの基を意味する。
【００１２】
ここで使用される場合「カルボキシ-保護基」とは、化合物上の他の官能基に対して反応が行われている間、カルボン酸基をブロック又は保護するのに通常用いられるカルボン酸基のエステル誘導体の一つを意味する。そのようなカルボン酸保護基の例には、４-ニトロベンジル、４-メトキシベンジル、３,４-ジメトキシベンジル、２,４-ジメトキシベンジル、２,４,６-トリメトキシベンジル、２,４,６-トリメチルベンジル、ペンタメチルベンジル、３,４-メチレンジオキシベンジル、ベンズヒドリル、４,４'-ジメトキシベンズヒドリル、２,２',４,４'-テトラメトキシベンズヒドリル、アルキル、例えばt-ブチル又はt-アミル、トリチル、４-メトキシトリチル、４,４'-ジメトキシトリチル、４,４',４"-トリメチトキシトリチル、２-フェニルプロプ-２-イル、トリメチルシリル、t-ブチルジメチルシリル、フェナシル、２,２,２-トリクロロエチル、ベータ-(トリメチルシリル)エチル、ベータ-(ジ(ｎ-ブチル)メチルシリル)エチル、ｐ-トルエンスルホニルエチル、４-ニトロベンジルスルホニルエチル、アリル、シンナミル、１-(トリメチルシリルメチル)プロプ-１-エン-３-イル及び同様の部分が含まれる。誘導体化カルボン酸が、分子の他の位置に対する引き続く反応の条件に対して安定であり、適当な時点で分子の残りの部分を破壊することなく除去できる限り、用いられるカルボキシ保護基の化学種は重要ではない。特に、カルボキシ-保護分子を強い求核塩基や、ラネーニッケル等の高活性化金属触媒を用いる還元条件を施さないことが重要である。(このような過酷な除去条件は、下記に検討するアミノ-保護基及びヒドロキシ-保護基を除去する際でもまた避けるべきである。)特定のカルボン酸保護基は、アリル及びｐ-ニトロベンジル基である。セファロスポリン、ペニシリン及びペプチド分野で使用されるのと同様のカルボキシ保護基も、カルボキシ基置換基の保護に使用できる。これらの基の更なる例は、T. W. Greene及びP. G. M. Wuts,「Protective Groups in Organic Synthesis」, 第2版, John Wiley & Sons, Inc., New York, N.Y., 1991, 第5章;E. Haslam,「Protective Groups in Organic Chemistry」, J.G.W. McOmie編, Plenum Press, New York, N.Y., 1973, 第5章,及びT.W. Greene,「Protective Groups in Organic Synthesis」, John Wiley and Sons, New York, NY, 1981, 第5章に見出される。「保護されたカルボキシ」なる用語は、上述したカルボキシ-保護基の一つで置換されたカルボキシ基を意味する。
【００１３】
「グアニジン」とは、ＲがＨ又はアルキル又はアラルキルである-ＮＨ-Ｃ(ＮＨ)-ＮＨＲ基を示す。特定のグアニジンは-ＮＨ-Ｃ(ＮＨ)-ＮＨ２基である。
【００１４】
ここで使用される場合「ヒドロキシ-保護基」とは、化合物上の他の官能基に対して反応が行われている間、ヒドロキシル基をブロック又は保護するのに通常用いられるヒドロキシル基のエステル誘導体を意味する。このような保護基の例には、テトラヒドロピラニルオキシ、アセトキシ、カルバモイルオキシ、トリフルオロ、クロロ、カルボキシ、ブロモ及びヨード基が含まれる。これらの基のさらなる例は、T.W. Greene及びP.G.M. Wuts,「Protective Groups in Organic Synthesis」、第2版, John Wiley & Sons, Inc., New York, N.Y., 1991, 第2-3章；E. Haslam, 「Protective Groups in Organic Chemistry」、J.G.W. McOmie編, Plenum Press, New York, N.Y., 1973, 第5章、及びT.W. Greene, 「Protective Groups in Organic Synthesis」、John Wiley & Sons, New York, N.Y., 1981に見出される。「保護されたヒドロキシ」なる用語は、上述したヒドロキシ-保護基の一つで置換されたヒドロキシ基を意味する。
【００１５】
「複素環基(heterocyclic group)」、「ヘテロサイクリック(heterocyclic)」、「複素環(heterocycle)」、「ヘテロシクリル(heterocyclyl)」又は「ヘテロシクロ(heterocyclo)」は、単独で及びヘテロシクロアルキル基のような複合基中の部分として使用される場合には、交換可能に使用され、一般に５〜約１４の環原子の、標記された原子数を有する任意の単環式、二環式又は三環式の飽和又は不飽和の芳香族(ヘテロアリール)又は非芳香族環を意味し、ここで環原子は炭素と少なくとも一のヘテロ原子(窒素、硫黄又は酸素)である。特定の実施態様では、基には１〜４のヘテロ原子が含まれる。典型的には、５員環は０〜２の二重結合を有し、６員又は７員環は０〜３の二重結合を有し、窒素又は硫黄ヘテロ原子は場合によっては酸化されてもよく(例えばＳＯ、ＳＯ２)、任意の窒素へテロ原子は場合によっては第４級化されていてもよい。特定の非芳香族複素環には、モルホリニル(モルホリノ)、ピロリジニル、オキシラニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、２,３-ジヒドロフラニル、２Ｈ-ピラニル、テトラヒドロピラニル、チイラニル、チエタニル、テトラヒドロチエタニル、アジリジニル、アゼチジニル、１-メチル-２-ピロリル、ピペラジニル及びピペリジニルが含まれる。「ヘテロシクロアルキル」基は、上述したようなアルキル基に共有結合した上述したような複素環基である。硫黄又は酸素原子と１〜３の窒素原子を有する特定の５員複素環には、チアゾリル、例えばチアゾル-２-イル及びチアゾル-２-イル-Ｎ-オキシド、チアジアゾリル、例えば１,３,４-チアジアゾル-５-イル及び１,２,４-チアジアゾル-５-イル、オキサゾリル、例えばオキサゾル-２-イル、及びオキサジアゾリル、例えば１,３,４-オキサジアゾル-５-イル、及び１,２,４-オキサジアゾル-５-イルが含まれる。２〜４の窒素原子を有する特定の５員環複素環には、イミダゾリル、例えばイミダゾル-２-イル；トリアゾリル、例えば１,３,４-トリアゾル-５-イル、１,２,３-トリアゾル-５イル、及び１,２,４-トリアゾル-５-イル、及びテトラゾリル、例えば１Ｈ-テトラゾル-５-イルが含まれる。特定のベンゾ縮合した５員複素環は、ベンズオキサゾル-２-イル、ベンズチアゾル-２-イル及びベンズイミダゾル-２-イルである。特定の６員複素環は１〜３の窒素原子と場合によっては硫黄又は酸素原子を有し、特にピリジル、例えばピリド-２-イル、ピリド-３-イル、及びピリド-４-イル；ピリミジル、例えばピリミド-２-イル及びピリミド-４-イル；トリアジニル、例えば１,３,４-トリアジン-２-イル、及び１,３,５-トリアジン-４-イル；ピリダジニル、例えばピリダジン-３-イル、及びピラジニルである。置換されていてもよい複素環のための置換基と、先に検討した５員及び６員環系の更なる例は、W. Druckheimer等の米国特許第４２７８７９３号に見出すことができる。
【００１６】
「ヘテロアリール」とは、単独で及びヘテロアラルキル基等の複合基中の一部として使用される場合、標記された数の原子を有する任意の単環式、二環式又は三環式の芳香族環系を意味し、ここで少なくとも１つの環は、窒素、酸素及び硫黄から選択される１〜４のヘテロ原子を有する５員、６員又は７員環である(Lang's Handbook of Chemistry, 上掲)。上述した任意のヘテロアリール環がベンゼン環に縮合している任意の二環式の基も定義に含まれる。次の環系：チエニル、フリル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、テトラゾリル、チアトリアゾリル、オキサトリアゾリル、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、ピリダジニル、チアジニル、オキサジニル、トリアジニル、チアジアジニル、オキサジアジニル、ジチアジニル、ジオキサジニル、オキサチアジニル、テトラジニル、チアトリアジニル、オキサトリアジニル、ジチアジアジニル、イミダゾリニル、ジヒドロピリミジル、テトラヒドロピリミジル、テトラゾロ[１,５-ｂ]ピリダジニル及びプリニル、並びにベンゾ-縮合誘導体、例えばベンゾオキサゾリル、ベンゾフリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾイミダゾリル及びインドリルが、「ヘテロアリール」という用語で示される(置換された又は未置換の)ヘテロアリール基の例である。特に「ヘテロアリール」には；１,３-チアゾル-２-イル、４-(カルボキシメチル)-５-メチル-１,３-チアゾル-２-イル、４-(カルボキシメチル)-５-メチル-１,３-チアゾル-２-イルのナトリウム塩、１,２,４-チアジアゾル-５-イル、３-メチル-１,２,４-チアジアゾル-５-イル、１,３,４-トリアゾル-５-イル、２-メチル-１,３,４-トリアゾル-５-イル、２-ヒドロキシ-１,３,４-トリアゾル-５-イル、２-カルボキシ-４-メチル-１,３,４-トリアゾル-５-イルのナトリウム塩、２-カルボキシ-４-メチル-１,３,４-トリアゾル-５イル、１,３-オキサゾル-２-イル、１,３,４-オキサジアゾル-５-イル、２-メチル-１,３,４-オキサジアゾル-５-イル、２-(ヒドロキシメチル)-１,３,４-オキサジアゾル-５-イル、１,２,４-オキサジアゾル-５-イル、１,３,４-チアジアゾル-５-イル、２-チオール-１,３,４-チアジアゾル-５-イル、２-(メチルチオ)-１,３,４-チアジアゾル-５-イル、２-アミノ-１,３,４-チアジアゾル-５-イル、１Ｈ-テトラゾル-５-イル、１-メチル-１Ｈ-テトラゾル-５-イル、１-(１-(ジメチルアミノ)エト-２-イル)-１Ｈ-テトラゾル-５-イル、１-(カルボキシメチル)-１Ｈ-テトラゾル-５-イル、１-(カルボキシメチル)-１Ｈ-テトラゾル-５-イルのナトリウム塩、１-(メチルスルホン酸)-１Ｈ-テトラゾル-５-イル、１-(メチルスルホン酸)-１Ｈ-テトラゾル-５-イルのナトリウム塩、２-メチル-１Ｈ-テトラゾル-５-イル、１,２,３-トリアゾル-５-イル、１-メチル-１,２,３-トリアゾル-５-イル、２-メチル-１,２,３-トリアゾル-５-イル、４-メチル-１,２,３-トリアゾル-５-イル、ピリド-２-イル-Ｎ-オキシド、６-メトキシ-２-(ｎ-オキシド)-ピリダズ-３-イル、６-ヒドロキシピリダズ-３-イル、１-メチルピリド-２-イル、１-メチルピリド-４-イル、２-ヒドロキシピリミド-４-イル、１,４,５,６-テトラヒドロ-５,６-ジオキソ-４-メチル-アス-トリアジン-３イル、１,４,５,６-テトラヒドロ-４-(ホルミルメチル)-５,６-ジオキソ-アス-トリアジン-３-イル、２,５-ジヒドロ-５-オキソ-６-ヒドロキシ-アストリアジン-３-イル、２,５-ジヒドロ-５-オキソ-６-ヒドロキシ-アス-トリアジン-３-イルのナトリウム塩、２,５-ジヒドロ-５-オキソ-６-ヒドロキシ-２-メチル-アストリアジン-３-イルのナトリウム塩、２,５-ジヒドロ-５-オキソ-６-ヒドロキシ-２-メチル-アス-トリアジン-３-イル、２,５-ジヒドロ-５-オキソ-６-メトキシ-２-メチル-アス-トリアジン-３-イル、２,５-ジヒドロ-５-オキソ-アス-トリアジン-３-イル、２,５-ジヒドロ-５-オキソ-２-メチル-アス-トリアジン-３-イル、２,５-ジヒドロ-５-オキソ-２,６-ジメチル-アス-トリアジン-３-イル、テトラゾロ[１,５-ｂ]ピリダジン-６-イル及び８-アミノテトラゾロ[１,５-ｂ]-ピリダジン-６-イルが含まれる。「ヘテロアリール」の他の基には：４-(カルボキシメチル)-５-メチル-１,３-チアゾル-２-イル、４-(カルボキシメチル)-５-メチル-１,３-チアゾル-２-イルのナトリウム塩、１,３,４-トリアゾル-５-イル、２-メチル-１,３,４-トリアゾル-５-イル、１Ｈ-テトラゾル-５-イル、１-メチル-１Ｈ-テトラゾル-５-イル、１-(１-(ジメチルアミノ)エト-２-イル)-１Ｈ-テトラゾル-５-イル、１-(カルボキシメチル)-１Ｈ-テトラゾル-５-イル、１-(カルボキシメチル)-１Ｈ-テトラゾル-５-イルのナトリウム塩、１-(メチルスルホン酸)-１Ｈ-テトラゾル-５-イル、１-(メチルスルホン酸)-１Ｈ-テトラゾル-５-イルのナトリウム塩、１,２,３-トリアゾル-５-イル、１,４,５,６-テトラヒドロ-５,６-ジオキソ-４-メチル-アス-トリアジン-３-イル、１,４,５,６-テトラヒドロ-４-(２-ホルミルメチル)-５,６-ジオキソ-アス-トリアジン-３-イル、２,５-ジヒドロ-５-オキソ-６-ヒドロキシ-２-メチル-アス-トリアジン-３-イルのナトリウム塩、２,５-ジヒドロ-５-オキソ-６-ヒドロキシ-２-メチル-アス-トリアジン-３-イル、テトラゾロ[１,５-ｂ]ピリダジン-６-イル、及び８-アミノテトラゾロ[１,５-ｂ]ピリダジン-６-イルが含まれる。
【００１７】
インヒビターとは、カスパーゼタンパク質へのＩＡＰタンパク質の結合を低減又は防止し、もしくはＩＡＰタンパク質によるアポトーシスの阻害を低減又は防止する化合物を意味する。
「製薬的に許容可能な塩」には、酸及び塩基との付加塩の双方が含まれる。「製薬的に許容可能な酸付加塩」は、フリー塩基の生物学的効能と性質とを保持し、生物学的に又は他の形で所望されないものではない塩を意味するもので、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、炭酸、リン酸等で生成され、有機酸は、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、アスパラギン酸、アスコルビン酸、グルタミン酸、アントラニル酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、エンボン酸、フェニル酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ-トルエンスルホン酸、サリチル酸等の有機酸の脂肪族、脂環式、芳香族、アリール脂肪族(araliphatic)、複素環式、カルボキシル及びスルホンクラスのものから選択され得る。
「製薬的に許容可能な塩基付加塩」には、無機塩基、例えばナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウムの塩等から誘導されるものが含まれる。特に塩基付加塩は、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、カルシウム及びマグネシウムの塩である。製薬的に許容可能な無毒の有機塩基から誘導される塩には、第１級、第２級及び第３級アミン、自然に生じる置換アミンを含む置換アミン、環状アミン及び塩基性イオン交換樹脂、例えばイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２-ジエチルアミノエタノール、トリメタミン、ジシクロヘキシルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン(hydrabamine)、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペリジン(piperizine)、ピペリジン(piperidine)、Ｎ-エチルピペリジン、ポリアミン樹脂等が含まれる。特定の無毒の有機塩基は、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、トリメタミン、ジシクロヘキシルアミン、コリン及びカフェインである。
【００１８】
本発明は、次の一般式Ｉ：
2007530553.tif 000004
[上式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｌ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５、Ｒ５’及びＲ６はここで記載したものである]
を有する新規化合物を提供する。
【００１９】
Ｘ１及びＸ２はそれぞれ独立して、Ｏ又はＳである。特定の実施態様では、Ｘ１及びＸ２は双方ともＯである。他の特定の実施態様では、Ｘ１及びＸ２は双方ともＳである。他の特定の実施態様では、Ｘ１はＳであり、一方Ｘ２はＯである。他の特定の実施態様において、Ｘ１はＯである一方、Ｘ２はＳである。
Ｌは、結合、-Ｃ(Ｘ３)-、-Ｃ(Ｘ３)ＮＲ１２又は-Ｃ(Ｘ３)Ｏ-であり、ここでＸ３はＯ又はＳであり、Ｒ１２はＨ又はＲ１である。特定の実施態様では、Ｌは結合である。他の特定の実施態様では、Ｌは-Ｃ(Ｘ３)-であり、ここでＸ３はＯである。他の特定の実施態様では、Ｌは-Ｃ(Ｘ３)-であり、ここでＸ３はＳである。特定の実施態様では、Ｌは-Ｃ(Ｘ３)ＮＨ-であり、ここでＸ３はＯである。他の特定の実施態様では、Ｌは-Ｃ(Ｘ３)ＮＨ-であり、ここでＸ３はＳである。特定の実施態様では、Ｌは-Ｃ(Ｘ３)Ｏ-であり、ここでＸ３はＯである。他の特定の実施態様では、Ｌは-Ｃ(Ｘ３)Ｏ-であり、ここでＸ３はＳである。
【００２０】
Ｒ１は、アルキル、炭素環、炭素環置換アルキル、複素環又は複素環置換アルキルであり、ここでそれぞれはハロゲン、ヒドロキシル、メルカプト、カルボキシル、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、アルキルスルホニル、アミノ、ニトロ、アリール及びヘテロアリールで置換されていてもよい。特定の実施態様では、Ｒ１は、アルキル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール又はヘテロアラルキルであり、ここでそれぞれは、ハロゲン、ヒドロキシル、メルカプト、カルボキシル、アルキル、ハロアルキルアミノ、ニトロ、アリール及びヘテロアリールで置換されていてもよい。特定の実施態様では、Ｒ１は次の式ＩＩａ、ＩＩｂ、ＩＩｃ及びＩＩｄ：
2007530553.tif 000005
[上式中
Ｒ７は、Ｈ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシル、メルカプト、カルボキシル、アミノ、ニトロ、アリール、アリールオキシ、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、又はヘテロアラルキルであり；Ｒ８は、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、カルボキシル又はアミノで置換されていてもよいＨ、アルキル、アリール又はヘテロアリールであり；Ｒ９はＨ又はアルキルであり；ＹはＮＨ、ＮＲ１０、Ｏ又はＳであり、ここでＲ１０はＨ、アルキル又はアリールであり；ＺはＣＨ、ＣＨ２又はＮであり；ｍは０、１、２又は３である]
からなる群から選択される。
特定の実施態様では、Ｌが-Ｃ(Ｘ３)-であり、特にＸ３がＯである場合に、Ｒ１は、式ＩＩａ、ＩＩｂ、ＩＩｃ及びＩＩｄからなる群から選択される。
【００２１】
Ｒ１が式ＩＩａの基である場合、Ｒ７は、Ｈ、ハロゲン、ヒドロキシル又はアルコキシであってよい。特定の実施態様では、Ｒ７はＨ、メチル、Ｆ又はメトキシである。他の特定の実施態様では、Ｒ１はＩＩａ１、ＩＩａ２、ＩＩａ３及びＩＩａ４からなる群から選択される：
2007530553.tif 000006
特定の実施態様では、Ｒ１は、ＩＩａ１、ＩＩａ２、ＩＩａ３及びＩＩａ４からなる群から選択され、その場合にＬは-Ｃ(Ｘ３)-である。特定の実施態様では、Ｒ１は式ＩＩａ１の基である。特定の実施態様では、Ｒ１は式ＩＩａ２の基である。特定の実施態様では、Ｒ１は式ＩＩａ３の基である。特定の実施態様では、Ｒ１は式ＩＩａ４の基である。
【００２２】
Ｒ１が式ＩＩｂの基である場合、Ｒ７はＨ又はメチルであってよい。特定の実施態様では、Ｒ１はベンゾチオフェンである。他の特定の実施態様では、Ｒ１はインドールである。他の特定の実施態様では、Ｒ１はＮ-メチルインドールである。他の特定の実施態様では、Ｒ１はベンゾフランである。他の特定の実施態様では、Ｒ１は２,３-ジヒドロ-ベンゾフランである。
【００２３】
Ｒ１が式ＩＩｃの基である場合、ｍは０又は１であり；Ｒ７はＨ、アルキル又はハロゲンであり；Ｒ８はＨ、アルキル又はアリールであり；Ｒ９はＨ又はメチルである。特定の実施態様では、Ｒ１は次の式ＩＩｃ１：
2007530553.tif 000007
[上式中、Ｒ７及びＲ７’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシル、メルカプト、カルボキシル、アミノ、ニトロ、アリール、アリールオキシ、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、又はヘテロアラルキルであり；Ｒ９はＨ又はアルキルでありｍは０又は１である]
の基である。特定の実施態様では、Ｒ９はＨである。他の特定の実施態様では、Ｒ９はメチルである。特定の実施態様では、ｍは０である。他の特定の実施態様では、ｍは１である。他の特定の実施態様では、ｍは０であり、Ｒ７及びＲ７’は双方ともＨであり、Ｒ９はＨである。他の特定の実施態様では、ｍは１であり、Ｒ７及びＲ７’は双方ともＨであり、Ｒ９はＨである。他の特定の実施態様では、ｍは０であり、Ｒ７及びＲ７’は双方ともＨであり、Ｒ９はメチルである。他の特定の実施態様では、ｍは１であり、Ｒ７及びＲ７’は双方ともＨであり、Ｒ９はメチルである。
【００２４】
Ｒ１がＩＩｄの基である場合、Ｒ７はＨ、アルキル又はアリールであり；ｍは０又は１であり；Ｒ９及びＲ９’は独立して、Ｈ又はアルキルである。特定の実施態様では、ｍは０であり；Ｒ７はＨ又はアリールである。特定の実施態様では、ｍは０であり；Ｒ７はＨである。他の特定の実施態様では、ｍは０であり；Ｒ７は２-フェニルである。他の実施態様では、ｍは１であり；Ｒ７はＨであり；Ｒ９及びＲ９’は双方ともＨである。他の実施態様では、ｍは１であり；Ｒ７はＨであり、またＲ９及びＲ９’は双方ともメチルである。
【００２５】
Ｌが結合である場合、Ｒ１は、それぞれハロゲン、ヒドロキシル、メルカプト、カルボキシル、アルキル、ハロアルキル、アミノ、ニトロ、アリール及びヘテロアリールで置換されていてもよい、アルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アラルキル、複素環、又はヘテロシクリルアルキルであってよい。この特定の実施態様では、Ｒ１は、アリール又はヘテロアリールで置換されていてもよいヘテロアリールである。特定の実施態様では、Ｒ１は次の式：
2007530553.tif 000008
[上式中、Ｑ１はＮＲ１１、Ｏ又はＳであり；Ｑ２、Ｑ３及びＱ４は独立して、ＣＲ１１又はＮであり；ここでＲ１１は、ハロゲン、ヒドロキシル、メルカプト、カルボキシル、アルキル、ハロアルキル、アミノ、ニトロ、アリール又はヘテロアリールで置換されていてもよい、Ｈ、アルキル、アリール、シクロアルキル又は複素環である]
のものである。そのような実施態様では、Ｒ１１は置換されていてもよいフェニル又はピリジル基である。特定の実施態様では、Ｒ１は
2007530553.tif 000009
である。
【００２６】
特定の実施態様では、Ｌが-Ｃ(Ｘ３)ＮＲ１２である場合、Ｒ１２は、それぞれハロゲン、ヒドロキシル、メルカプト、カルボキシル、アルキル、ハロアルキル、アミノ、ニトロ、アリール及びヘテロアリールで置換されていてもよい、Ｈ、アルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アラルキル、複素環、又はヘテロシクリルアルキルである。この特定の実施態様では、Ｒ１２は、ハロゲン、ヒドロキシル又はハロアルキルで置換されていてもよいアリールである。特定の実施態様では、Ｒ１２はフェニルである。
【００２７】
Ｒ２は、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アラルキル、複素環、又はヘテロシクリルアルキルである。特定の実施態様では、Ｒ２は、アルキル又はシクロアルキルである。本発明の実施態様では、Ｒ２はｔ-ブチル、イソプロピル、シクロヘキシル、シクロペンチル又はフェニルである。特定の実施態様では、Ｒ２はシクロヘキシルである。他の実施態様では、Ｒ２はテトラヒドロピラン-４-イルである。他の特定の実施態様では、Ｒ２はイソプロピルである(すなわち、バリンアミノ酸側鎖)。他の特定の実施態様では、Ｒ２はｔ-ブチルである。特定の実施態様では、Ｒ２は、それを含むアミノ酸又はアミノ酸類似体がＬ-立体配置になるように配向している。
【００２８】
Ｒ３はＨ又はアルキルである。特定の実施態様では、Ｒ３は、Ｈ、又はメチル、エチル、プロピル又はイソプロピルである。特定の実施態様では、Ｒ３はＨ又はメチルである。他の特定の実施態様では、Ｒ３はメチルである。他の特定の実施態様では、Ｒ３はｔ-ブチルである。他の特定の実施態様では、Ｒ３は、それを含むアミノ酸又はアミノ酸類似体がＬ-立体配置になるように配向している。
【００２９】
Ｒ４及びＲ４’は独立して、それぞれハロゲン、ヒドロキシル、メルカプト、カルボキシル、アルキル、アルコキシ、アミノ及びニトロで置換されていてもよい、Ｈ、アルキル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、又はヘテロアラルキルである。特定の実施態様では、Ｒ４及びＲ４’は双方ともＨである。他の特定の実施態様では、Ｒ４はメチルであり、Ｒ４’はＨである。特定の実施態様では、Ｒ４’はＨであり、Ｒ４は、Ｈ、アルキル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール又はヘテロアラルキルである。特定の実施態様では、Ｒ４は、次の式：
2007530553.tif 000010
2007530553.tif 000011
からなる群から選択される基である。
【００３０】
Ｒ５及びＲ５’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキルである。特定の実施態様では、Ｒ５及びＲ５’はＨ又はメチルである。特定の実施態様では、Ｒ５はＨであり、Ｒ５’はメチルである。他の特定の実施態様では、Ｒ５はメチルであり、Ｒ５’はＨである。他の特定の実施態様では、Ｒ５及びＲ５’は双方ともメチルである。他の特定の実施態様では、Ｒ５及びＲ５’は双方ともＨである。
Ｒ６はＨ又はアルキルである。特定の実施態様では、Ｒ６はＨ又はメチルである。特定の実施態様では、Ｒ６はＨである。
【００３１】
本発明の化合物は一又は複数の不斉炭素原子を含む。従って、化合物はジアステレオマー、エナンチオマー又はそれらの混合物として存在し得る。化合物の合成は、出発物質又は中間体として、ラセミ化合物、ジアステレオマー又はエナンチオマーを使用することができる。ジアステレオマー化合物はクロマトグラフィー又は結晶化法により分離することができる。同様に、エナンチオマー混合物は、同技術又は当該分野で公知の他の技術を使用して分離することができる。各不斉炭素原子はＲ又はＳ配置に存在し、これらの配置の双方が本発明の範囲内である。特定の実施態様では、本発明の化合物は、次の式Ｉ’：
2007530553.tif 000012
の立体化学的配置を有する。
【００３２】
また本発明は、上述した化合物のプロドラッグも含む。適用可能な場合、適切なプロドラッグは、例えば加水分解されて放出され、生理学的条件下で親化合物を生成する既知のアミノ-保護及びカルボキシ-保護基を含む。特定のクラスのプロドラッグは、アミノ、アミジノ、アミノアルキレンアミノ、イミノアルキレンアミノ又はグアニジノ基の窒素原子が、ヒドロキシ(ＯＨ)基、アルキルカルボニル(-ＣＯ-Ｒ)基、アルコキシカルボニル(-ＣＯ-ＯＲ)、アシルオキシアルキル-アルコキシカルボニル(-ＣＯ-Ｏ-Ｒ-Ｏ-ＣＯ-Ｒ)基（ここで、Ｒは一価又は二価の基であり、上述の通りである）又は式-Ｃ(Ｏ)-Ｏ-ＣＰ１Ｐ２-ハロアルキルを有する基（ここで、Ｐ１及びＰ２は同一か又は異なっており、Ｈ、低級アルキル、低級アルコキシ、シアノ、低級ハロアルキル又はアリールである）で置換された化合物である。特定の実施態様では、窒素原子は、本発明の化合物のアミジノ基の窒素原子の一つである。これらのプロドラッグ化合物は、上述した本発明の化合物と活性化アシル化合物とを反応させ、本発明の化合物中の窒素原子を活性化アシル化合物のカルボニルに結合させることで調製される。適切な活性化カルボニル化合物はカルボニル炭素に結合する良好な脱離基を有しており、アシルハロゲン化物、アシルアミン類、アシルピリジニウム塩、アシルアルコキシド、特にアシルフェノキシド、例えばｐ-ニトロフェノキシアシル、ジニトロフェノキシアシル、フルオロフェノキシアシル、及びジフルオロフェノキシアシルを含む。反応は一般的に発熱反応で、例えば−７８から約５０℃の低い温度にて不活性溶媒中で行われる。反応は通常は無機塩基、例えば炭酸カリウム又は重炭酸ナトリウム、あるいは有機塩基、例えばピリジン、トリエチルアミン等を含むアミンの存在下で行われる。プロドラッグを調製する一つの方法は、１９９７年４月１５日に出願された米国特許出願第０８／８４３３６９号(ＰＣＴ国際公開第９８４６５７６号に対応)に記載されており、その内容は出典明示によりその全体がここに援用される。
【００３３】
式Ｉの特定の化合物には、次の式：
2007530553.tif 000013
2007530553.tif 000014
2007530553.tif 000015
2007530553.tif 000016
のものが含まれる。
【００３４】
合成
本発明の化合物は、市販されている出発物質及び試薬から、標準的な有機合成技術を使用して調製される。本発明の化合物の調製に使用される合成手順は、化合物に存在している特定の置換基に依存しており、様々な保護及び脱保護が、有機合成において標準であるように必要とされることが理解される。Ｌが-Ｃ(Ｘ３)-である本発明の化合物に対しては、一般的な合成スキームは、所望の酸(例えばナフタレン-カルボン酸)の活性化エステルにカップリングされるＮ-保護された６-アミノ-アザビシクロ-オクタン基を含みうるもので、続いて環アミンが脱保護され、ついで典型的なアミドカップリング法を使用し、そこにアミノ酸残基をカップリングさせる。
2007530553.tif 000017
【００３５】
Ｎ-保護された６-アミノ-アザビシクロ-オクタン中間体は、以下のスキーム２に例証されているCaryら, Tetrahedron Letters, 1989, 30：5547に記載の手順に従って調製することができる。一般に、シクロペンテン酢酸の活性化エステルは、メチルベンジルアミンにカップリングされる。メチルベンジル基は、アミノ酸残基へのカップリングの前は、環生成物を保護するアミンとなる。得られたアミドを水素化アルミニウムリチウムで還元し、第２級アミンを形成させ、ついでＮ-ブロモスクシンアミドと反応させる。得られたＮ-ブロモアミンを触媒量の臭化第１銅で環化し、６ブロモ置換アザビシクロ-オクタン環を生じせしめる。ついで、環を水酸化アンモニウムと反応させ、ついで本発明の化合物の合成に使用され得る対応する６-アミノ環中間体に、６-ブロモ基を転換させる。
2007530553.tif 000018
【００３６】
特定の実施態様では、メチルベンジルアミンは鏡像異性的に純粋である。このようなキラル補助基を使用すると、例えばＲＰ-ＨＰＬＣ又はシリカゲルカラム等、アザビシクロ-オクタン環のジアステレオマーの簡便な分離が可能になる。ジアステレオマーの分離は、キラル補助保護基を除去する前に、６-ブロモ置換環又は６-アミノ置換環を用いて実施されてもよい。
【００３７】
あるいは、本発明の化合物は、一般的なスキーム３に従い、アザビシクロ-オクタン環に、Ｒ２及びＲ３を組み入れたアミノ酸残基を逐次カップリングさせ、続いてアザビシクロ-オクタン環の６-アミノ基に、Ｒ４-含有酸をカップリングさせることにより調製することができる。この方法では、出発のアザビシクロ-オクタン環は、例えばＴｅｏｃ基(トリメチルシリルエチルオキシカルボニル)を用いて、第１級６-アミノ置換基で保護され、続いて第２級環アミンの脱保護がなされる。標準的なペプチドカップリング法を使用し、得られる脱保護された環アミンを、Ｒ２-含有残基、ついでＲ３-含有残基とカップリングする。ついで、Ｔｅｏｃ基がＴＡＳＦ(トリス(ジメチルアミノ)スルホニウムジフルオロトリメチルシリカート)を用いて除去され、脱保護された６-アミノ基がＲ４-含有酸とカップリングされる。
2007530553.tif 000019
【００３８】
カルバマート等、Ｌが-Ｃ(Ｘ３)Ｏ-である本発明の化合物に対しては、一般的な合成スキームは、Ｒ１(Ｃｌ-Ｃ(Ｏ)Ｏ-Ｒ１)のクロロホルマートと、Ｎ-保護された６-アミノ-アザビシクロ-オクタン中間体との反応を含み得る。
尿素等、Ｌが-Ｃ(Ｘ３)ＮＲ１２-である本発明の化合物に対しては、一般的な合成スキームは、パラ-ニトロフェニルクロロホルマートと、Ｎ-保護された６-アミノ-アザビシクロ-オクタン中間体とを反応させ、ついで、スキーム４に例証された強塩基条件下で、第１級又は第２級アミンＮＲ１Ｒ１２と得られたカルバマートとを反応させることを含み得る。
2007530553.tif 000020
【００３９】
Ｌが結合、すなわちＲ１とそれが依存している窒素がアミンを形成する化合物は、還元的アミノ化により調製できる。あるいは、このような化合物は、例えばＲ１がアルキル、アルケニル又はアルキニル等の脂肪族基である場合、Ｒ１基のメチルスルホナートエステルと、Ｎ-保護された６-アミノ-アザビシクロ-オクタン基とを反応させることによって調製されうる。Ｒ１がアリール又はヘテロアリールである場合、このような化合物は、Blassら, Bioorg. Med. Chem. Lett., 2000, 10:1543、及びBakhtiarら, J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1. 1994, 3:239に記載されている手順に従い、メチルスルホニル-置換Ｒ１化合物と、Ｎ-保護された６-アミノ-アザビシクロ-オクタン基とを反応させことによって調製されてもよい。例えば、Ｌが結合であり、Ｒ１が１-フェニル-１Ｈ-イミダゾール-２-イルである場合、化合物は次のスキーム５に従い調製され得る。
2007530553.tif 000021
上式中、１-フェニル-１,３-ジヒドロ-イミダゾール-２-チオンは、ヨウ化メチルと反応し、続いてｍ-クロロペルオキシ安息香酸を用いて酸化されて、Ｎ-保護された６-アミノ-アザビシクロ-オクタン基と反応するメチルスルホニルが得られる。
【００４０】
他の例では、Ｌが結合であり、Ｒ１が４-フェニル-[１,２,３]チアジアゾール-５-イルである場合、化合物は、Masudaら, J. Chem. Soc. Perkin. Trans. 1, 1981, (5) 1591に記載されているように、次のスキーム６に従って調製することができる。
2007530553.tif 000022
【００４１】
(有用性)
本発明の化合物は、細胞において、カスパーゼ、例えばカスパーゼ３、７及び／又は９へ、ＩＡＰタンパク質、例えばＸＩＡＰ及びＭＬ-ＩＡＰが結合するのを阻害する。従って、本発明の化合物は、特にＩＡＰタンパク質を過剰発現する癌細胞において、アポトーシスシグナルに対して細胞を過敏化させ、又は細胞においてアポトーシスを誘発させるのに有用である。より広義には、化合物は、アポトーシスを被り損ねた全ての癌型の処置に使用することができる。このような癌型の例には、神経芽細胞種、腸癌腫、例えば直腸癌、大腸癌、家族性大腸腺腫症癌、及び遺伝性非ポリポーシス大腸癌、食道癌、口唇癌、咽頭癌、下咽頭癌、舌癌、唾液腺癌、胃癌、腺癌、甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、腎臓癌、腎実質癌、卵巣癌、 頸部癌、子宮体癌、子宮内膜癌、絨毛癌、膵癌、前立腺癌、精巣癌、乳癌、尿癌(urinary carcinoma)、黒色腫、脳腫瘍、例えば神経膠芽腫、星細胞腫、髄膜腫、髄芽腫、及び末梢神経外胚葉性腫瘍、ホジキンリンパ腫、非-ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、急性リンパ性白血病(ＡＬＬ)、慢性リンパ性白血病(ＣＬＬ)、急性骨髄性白血病(ＡＭＬ)、慢性骨髄性白血病(ＣＭＬ)、成人Ｔ細胞白血病リンパ腫、肝臓癌、胆嚢癌、気管支癌、小細胞肺癌、非-小細胞肺癌、多発性骨髄腫、基底細胞腫、奇形腫、網膜芽細胞腫、脈絡膜黒色腫、精上皮腫、横紋筋肉腫、頭蓋咽頭腫、骨肉腫、軟骨肉腫、筋肉腫、脂肪肉腫、線維肉腫、ユーイング肉腫、及び形質細胞腫が含まれる。
【００４２】
本発明の化合物は、アポトーシスシグナルに対して細胞を過敏化させるのに有用である。従って、本化合物は、放射線治療、又は細胞増殖抑制剤又は抗悪性腫瘍剤による化学療法の前、同時又は後に投与されうる。適切な細胞増殖を抑制する化学療法用化合物には、限定されるものではないが、(ｉ)代謝拮抗剤、例えばシタラビン、フルダラビン、５-フルオロ-２'-デオキシウイリジン(uiridine)、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素又はメトトレキセート；(ｉｉ)ＤＮＡ-断片化剤、例えばブレオマイシン、(ｉｉｉ)ＤＮＡ-架橋剤、例えばクロランブシル、シスプラチン、シクロホスファミド又はナイトロジェンマスタード；(ｉｖ)挿入剤、例えばアドリアマイシン(ドキソルビシン)又はミトキサントロン；(ｖ)タンパク質合成インヒビター、例えばＬ-アスパラギナーゼ、シクロヘキシミド、ピューロマイシン又はジフテリア毒素；(ｖｉ)トポイソメラーゼＩ毒素、例えばカンプトテシン又はトポテカン；(ｖｉｉ)トポイソメラーゼＩＩ毒素、例えばエトポシド(ＶＰ-１６)又はテニポシド；(ｖｉｉｉ)微小管用薬剤(microtubule-directed agents)、例えばコルセミド、コルヒチン、パクリタキセル、ビンブラスチン又はビンクリスチン；(ｉｘ)キナーゼインヒビター、例えばフラボピリドール(flavopiridol)、スタウロスポリン、ＳＴＩ５７１(ＣＰＧ ５７１４８Ｂ)又はＵＣＮ-０１(７-ヒドロキシスタウロスポリン)；(ｘ)種々の治験薬、例えばチオプラチン(thioplatin)、ＰＳ-３４１、フェニルブチラート、ＥＴ-１８-ＯＣＨ３、又はファルネシルトランスフェラーゼインヒビター(Ｌ-７３９７４９、Ｌ-７４４８３２)；ポリフェノール類、例えばケルセチン、リスベラトロール、ピセタノール、没食子酸エピガロカテキン、テアフラビン、フラバノール、プロシアニジン、ベツリン酸及びその誘導体；(ｘｉ)ホルモン類、例えばグルココルチコイド類又はフェンレチニド(fenretinide)；(ｘｉｉ)ホルモンアンタゴニスト、例えばタモキシフェン、フェナステリド、又はＬＨＲＨアンタゴニストが含まれる。特定の実施態様では、本発明の化合物は、シスプラチン、ドキソルビシン、タキソール、タキソテール、及びマイトマイシンＣからなる群から選択される細胞増殖抑制化合物と同時投与される。特定の細胞増殖抑制化合物はドキソルビシンである。
【００４３】
本発明で使用可能な他のクラスの活性化合物は、デスレセプターに結合することによりアポトーシスを誘発するか又は過敏化可能なもの(「デスレセプターアゴニスト」)である。このようなデスレセプターのアゴニストには、デスレセプターリガンド、例えば腫瘍壊死因子ａ(ＴＮＦ-α)、腫瘍壊死因子β(ＴＮＦ-β、リンホトキシン-β)、ＬＴ-β(リンホトキシン-β)、ＴＲＡＩＬ(Ａｐｏ２Ｌ、ＤＲ４リガンド)、ＣＤ９５(Ｆａｓ、ＡＰＯ-１)リガンド、ＴＲＡＭＰ(ＤＲ３、Ａｐｏ-３)リガンド、ＤＲ６リガンド、並びに任意の該リガンドの断片及び誘導体が含まれる。特定の実施態様では、デスレセプターリガンドはＴＮＦ-αである。特定の実施態様では、デスレセプターリガンドはＡｐｏ２Ｌ／ＴＲＡＩＬである。さらに、デスレセプターアゴニストは、デスレセプターに対するアゴニスト抗体、例えば抗-ＣＤ９５、抗-ＴＲＡＩＬ-Ｒ１(ＤＲ４)抗体、抗-ＴＲＡＩＬ-Ｒ２(ＤＲ５)抗体、抗-ＴＲＡＩＬ-Ｒ３抗体、抗-ＴＲＡＩＬ-Ｒ４抗体、抗-ＤＲ６抗体、抗-ＴＮＦ-Ｒ１抗体、及び抗-ＴＲＡＭＰ(ＤＲ３)抗体、並びに任意の該抗体の断片及び誘導体を含む。
【００４４】
アポトーシスに対して細胞を過敏化させる目的に対して、本発明の化合物は、放射線治療と組合せて使用することができる。「放射線治療」なる用語は、異常増殖の処置に、電磁気又は微粒子放射線を使用することを意味する。放射線治療は、標的領域に送達される高用量の放射線により、腫瘍及び正常組織の双方において再生細胞を死亡させるという原則に基づく。線量投与計画は、放射線吸収量(ｒａｄ)、時間及び分画に関して一般的に定められており、腫瘍学者により注意深く定められなくてはならない。患者が受容する放射線の量は種々の検討材料に依存するが、最も重要な２つの検討材料は、他の重要な構造体又は体の器官に対する腫瘍の位置と、腫瘍の広がった程度である。放射線治療剤の例は、限定されるものではないが、放射線治療において提供されるものであり、当該技術(Hellman, Principles of Radiation Therapy, in Cancer, Principles I and Practice of Oncology, 24875 (Devitaら, 4th ed., vol 1, 1993)において知られている。放射線治療における近年の進歩は、３次元原体外照射、強度変調放射線治療(ＩＭＲＴ)、定位的放射線治療及び近接放射療法(組織内照射治療)が含まれ、後者は、インプラントされる「種」として、腫瘍に直接放射線源が配される。これらの新規な処置法により、より多くの用量の放射線が腫瘍に送達せしめられ、標準的な外照射療法と比較した場合に、それらの効果が増大する一因となっている。
【００４５】
β-放出核種を有する電磁放射線は、電離粒子(電子)の中程度の線エネルギー付与(ＬＥＴ)及びその中距離(典型的には組織においては数ミリメートル)の故に、放射線治療への応用において最も有用であると考えられる。ガンマ線は、より長い距離に対して低レベルの用量を送達する。アルファ粒子は全く正反対で、非常に高いＬＥＴ用量を送達するが、極度に制限された範囲であり、よって、処置される組織の細胞に密接に接触させなければならない。さらに、アルファ放射体は一般的に重金属であり、実施可能な化学種は限定され、処置される領域から放射性核種が漏出する危険性も存在する。処置される腫瘍に応じて、あらゆる種類の放射体が、本発明の範疇に入ると考えられる。
【００４６】
さらに、本発明は非電離放射線のタイプ、例えば紫外線(ＵＶ)、高エネルギーの可視光線、マイクロ波照射(温熱治療)、赤外線(ＩＲ)及びレーザーを含む。本発明の特定の実施態様では、ＵＶ線が適用される。
【００４７】
また本発明は、本発明の化合物と、治療用の不活性な担体、希釈剤又は賦形剤を含有する製薬用組成物又は医薬、並びにこのような組成物及び医薬を調製するための、本発明の化合物の使用方法も含む。典型的には、本発明の方法に使用される式Ｉの化合物は、周囲温度、適切なｐＨで、所望する純度にて、生理学的に許容可能な担体、すなわち生薬投与形態に使用される用量及び濃度でレシピエントに無毒な担体と混合することにより処方される。製剤のｐＨは、主として化合物の濃度及び特定の用途に依存するが、約３〜８の範囲であってよい。適切な実施態様では、ｐＨ５の酢酸バッファー中で処方される。ここで使用される阻害化合物は滅菌されていてもよい。通常、化合物は固形組成物として保存されるが、凍結乾燥製剤又は水溶液も許容可能である。
【００４８】
本発明の組成物は、良好な医療行為と一致した様式にて、処方、服用及び投与されるであろう。ここで考慮される要因には、処置される特定の疾患、処置される特定の哺乳動物、個人の患者の病状、疾患の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び医者に公知の他の要因が含まれる。投与される化合物の「有効量」は、このような考慮により決定され、カスパーゼとＩＡＰとの相互作用を阻害し、アポトーシスを誘発させ、又はアポトーシスシグナルに対して悪性細胞を過敏化させるのに必要な最小量である。このような量は、正常細胞、又は全体として哺乳動物に毒性である量以下であることが好ましい。
一般に、一回当たりに非経口投与される本発明の化合物の当初の製薬的有効量は、約０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ、例えば一日当たり患者の体重に対して約０．１〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲であり、使用される化合物の典型的な当初の範囲は、０．３〜１５ｍｇ／ｋｇ／日である。経口単位用量形態、例えば錠剤及びカプセルは、約２５〜約１０００ｍｇの本発明の化合物を含有していてよい。
【００４９】
本発明の化合物は、経口、局所、経皮、非経口、皮下、腹膜内、肺内、及び鼻孔内、局部的治療が所望されている場合は病巣内部への投与を含む、任意の適切な手段により投与されてよい。非経口的注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹膜内、又は皮下投与が含まれる。適切な経口投与形態の例は、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２５０ｍｇ又は５００ｍｇの本発明の化合物と、約９０〜３０ｍｇの無水ラクトース、約５〜４０ｍｇのクロスカルメロース(croscarmellose)ナトリウム、約５〜３０ｍｇのポリビニルピロリドン(ＰＶＰ)Ｋ３０、及び約１〜１０ｍｇのステアリン酸マグネシウムを混合して含有する錠剤である。パウダー状の成分をまず最初に混合し、次にＰＶＰの溶液と混合する。得られた組成物を乾燥し、粒状化し、ステアリン酸マグネシウムと混合し、従来からの装置を使用して錠剤の形態に圧密化する。エアゾール製剤は、リン酸バッファー等の適切なバッファー溶液に、例えば５〜４００ｍｇの本発明の化合物を溶解し、所望するならば、塩類、例えば塩化ナトリウム等の緊張化剤(tonicifier)を添加することにより調製することができる。典型的には、溶液は、例えば０．２ミクロンのフィルターを使用して濾過され、不純物及び汚染物が除去される。
【実施例】
【００５０】
本発明は、次の実施例を参照することにより、さらに十分に理解されるであろう。しかしながら、それらは本発明の範囲を制限すると解釈されるものではない。ここで使用される略語は以下の通りである：
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン；
ＤＭＡＰ：４-ジメチルアミノピリジン；
ＤＭＥ：１,２-ジメトキシエタン；
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド；
ＥＤＣ：１-エチル-３-(３-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド；
ＨＡＴＵ：Ｏ-(７-アゾベンゾトリアゾール-１-イル)-１,１,３,３-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート；
ＮＢＳ：Ｎ-ブロモスクシンアミド；
ＴＡＳＦ：トリス(ジメチルアミノ)スルホニウムジフルオロトリメチルシリカート；
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
【００５１】
実施例１
２-アザビシクロ[３.３.０]オクタン環を、Coreyら, Tetrahedron Letters, 1989, 30:5547の手順に従い調製した。
2007530553.tif 000023
ＥＤＣ(３８．３４ｇ、２００ｍｍｏｌ)、ＤＭＡＰ(２．４４ｇ、２０ｍｍｏｌ)、シクロペンテン酢酸(２５．０ｇ、１９８ｍｍｏｌ)、及びＲ-α-メチルベンジルアミン(２５ｍＬ、１９６ｍｍｏｌ)を、逐次ＣＨ２Ｃｌ２(５００ｍＬ)に添加した。溶液を室温で２時間保持し、ついで１ＮのＨＣｌ(３ｘ１００ｍＬ)、１ＮのＮａＯＨ(３ｘ１００ｍＬ)、塩水(１ｘ１００ｍＬ)で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、濾過し、濃縮したところ、無色の固体として４３．７ｇ(９７％)のアミド３が得られた。
【００５２】
2007530553.tif 000024
０℃で、ＴＨＦ(４３０ｍＬ)にアミド３(４３．６ｇ、１９０ｍｍｏｌ)が入った溶液に、２時間以上かけて、水素化アルミニウムリチウム(ＴＨＦに２００ｍＬの１．０Ｍ溶液、２００ｍｍｏｌ)を添加した。混合物を室温まで温め、ついで３６時間、還流にて加熱  した。混合物を０℃まで冷却し、水(７．６ｍＬ)、続いて１５％のＮａＯＨ(８ｍＬ)水(２４ｍＬ)を滴下方式にて添加した。得られた混合物を一晩激しく攪拌し、ＴＨＦ及び１ＮのＮａＯＨ(２０ｍＬ)を用い、セライトパッドを通して濾過した。減圧下でＴＨＦを除去し、残留物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、層を分離させ、有機相を濃縮したところ、無色の油として定量的収率のアミン４が得られた。
【００５３】
2007530553.tif 000025
アミン４(９５０ｍｇ、４．４ｍｍｏｌ)を、激しく攪拌しつつ、０℃で２時間、ヘキサン(１１ｍＬ)中で、Ｎ-ブロモスクシンアミド(９８０ｍｇ、５．５ｍｍｏｌ)で処理した。付加的なＮＢＳ(１６０ｍｇ)を添加し、０℃で１．５時間攪拌し続けた。コース・フリット(course frit)を通して混合物を濾過し、濃縮した。残留物をＣＨ２Ｃｌ２に溶解させ、触媒のＣｕＢｒ(〜１ｍｇ)を用いて、０℃で２．５時間処理した。減圧下で溶媒を除去したところ、直接処理される、臭化物５及び６の１：１混合物が得られた。
【００５４】
2007530553.tif 000026
粗臭化物５及び６の混合物をＤＭＥ(１４ｍＬ)と濃ＮＨ４ＯＨ(７ｍＬ)に溶解させ、密封容器において、１８時間６０℃で加熱した。減圧下で溶媒を除去し、残留物をＣＨ２Ｃｌ２(５０ｍＬ)に溶解させ、１ＮのＨ２ＳＯ４(１ｘ２５ｍＬ)で抽出した。水相をＣＨ２Ｃｌ２(３ｘ５０ｍＬ)で洗浄した。ＮａＯＨ(ｓ)を用い、水相を塩基性(ｐＨ＞１１)にし、ＣＨ２Ｃｌ２(３ｘ５０ｍＬ)で抽出した。組合せた有機相を濃縮し、残留物を逆相ＨＰＬＣ(Ｃ１８、ＭｅＣＮ-Ｈ２Ｏ、０．１％ＴＦＡ)で精製した。全てのＭｅＣＮが除去されるまで、生成物を含有するフラクションを減圧下で濃縮し、１ＮのＮａＯＨを用いて塩基性(ｐＨ＞１１)にし、ＣＨ２Ｃｌ２を用いて包括的に抽出した。組合せた有機相を乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、濾過し、濃縮したところ、無色の油として７１４９ｍｇ(２９％)のアミン７が得られた。
【００５５】
実施例２
2007530553.tif 000027
アミン７(１４０ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ)を、典型的なＥＤＣカップリング手順に従い、ジフェニル酢酸(１４８ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ)とカップリングさせたところ、無色の油として２６３ｍｇ(８８％)のアミド８が得られた。
2007530553.tif 000028
ベンジルアミン８(２６３ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ)、酢酸(７１μＬ、１．２４ｍｍｏｌ)、２０％のＰｄ(ＯＨ)２・Ｃ(６２ｍｇ)、及びＭｅＯＨ(６ｍＬ)の混合物を、１気圧のＨ２下、８時間保持した。混合物を、セライトパッドを通して濾過し、濃縮した。残留物をＣＨ２Ｃｌ２(５０ｍＬ)に溶解させ、１ＮのＮａＯＨ(３ｘ１０ｍＬ)、塩水(１ｘ１０ｍＬ)で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、濾過し、濃縮したところ、無色の油として２００ｍｇ(１００％)のアミン９が得られた。
【００５６】
実施例３
2007530553.tif 000029
第２級アミン１(１６６ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ)、ＣｂｚＮｔ-ブチルグリシン(１６６ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ)、ＨＡＴＵ(４７５ｍｇ)、ＤＩＰＥＡ(１ｍＬ)及びＤＭＦ(３ｍｌ)の混合物を、室温で１時間保持した。混合物をＣＨ２Ｃｌ２(５０ｍＬ)で希釈し、１ＮのＨＣｌ(３ｘ２０ｍＬ)で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、濾過し、濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー(ＳｉＯ２、酢酸エチル-ヘキサン)で精製したところ、無色の油として、４００ｍｇ(＞１００％、過度の重量は溶媒)の２が得られ、これは直接実施された。
2007530553.tif 000030
上述したアミド２、ＭｅＯＨ(１５ｍｌ)、ＡｃＯＨ(０．３ｍｌ)及び２０％のＰｄ(ＯＨ)２・Ｃ(１５０ｍｇ)の混合物を、Ｈ２の雰囲気下、３時間激しく攪拌した。過度のＭｅＯＨを用い、セライトを通して混合物を濾過した。減圧下でＭｅＯＨを除去し、残留物をＣＨ２Ｃｌ２(５０ｍＬ)に溶解させ、０．５ＮのＮａＯＨ(３ｘ１０ｍＬ)で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、濾過し、濃縮したところ、無色の油として１６９ｍｇ(２工程を越えて７２％)のアミン３が得られた。
【００５７】
2007530553.tif 000031
アミン３(１６９ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ)を、典型的なＥＤＣカップリング手順に従い、Ｎ-Ｂｏｃ-Ｎ-メチルアラニン(１０８ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ)とカップリングさせたところ、無色の油として２６０ｍｇの保護されたアミン４が得られ、これはさらなる精製を行わないで使用された。
【化２５】
2007530553.tif 000032
保護されたアミン４(２６５ｍｇ)を、ＭｅＣＮに過度のＴＡＳ-Ｆが入ったもので、５０℃にて４時間処理した。反応体をＣＨ２Ｃｌ２(５０ｍＬ)で希釈し、０．５ＮのＮａＯＨ(３ｘ３０ｍＬ)で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、濾過し、濃縮したところ、無色の油として１６８ｍｇ(２工程を越えて９０％)のアミン５が得られた。
【００５８】
実施例４  化合物２５
2007530553.tif 000033
第２級アミン１(６５ｍｇ)を、上述にてＣｂｚ-シクロヘキシルグリシンにカップリングさせ、ついで水素添加分解によりＣｂｚ基を除去したところ、無色の油として、７３ｍｇ(２工程を越えて７４％)のアミン２が得られた。
2007530553.tif 000034
アミン２(７３ｍｇ)を上述したように反応させたところ、７６ｍｇ(２工程を越えて９４％)のアミン３が得られた。
2007530553.tif 000035
アミン３(３９ｍｇ)を、典型的なＥＤＣカップリング条件下で、ジフェニル酢酸とカップリングさせ、ついで標準的な条件下でＢｏｃ基を除去した。残留物をＨＰＬＣで精製したところ、無色の固体として、５８ｍｇ(３４％)の最終化合物４が得られた。
【００５９】
実施例５  化合物１
2007530553.tif 000036
実施例３の手順に従い調製されたＢｏｃ-保護されたアミン中間体を、典型的なＥＤＣカップリング条件に基づき、市販されている酸である１Ｈ-インドール-３-カルボキシラートとカップリングさせ、続いてＢｏｃ基を除去し、ＨＰＬＣで精製したところ、最終化合物(３１％)が得られた。
【００６０】
実施例６  化合物１９
2007530553.tif 000037
実施例３の手順に従い調製されたＢｏｃ-保護されたアミン中間体を、典型的なＥＤＣカップリング条件に基づき、市販されている酸である１-メチル-１Ｈ-インドール-３-カルボキシラートとカップリングさせ、続いてＢｏｃ基を除去し、ＨＰＬＣで精製したところ、最終化合物(３９％)が得られた。
【００６１】
実施例７  化合物１０
2007530553.tif 000038
実施例３の手順に従い調製されたＢｏｃ-保護されたアミン中間体を、典型的なＥＤＣカップリング条件に基づき、市販されている酸である１-メチル-１Ｈ-インダゾール-３-カルボキシラートとカップリングさせ、続いてＢｏｃ基を除去し、ＨＰＬＣで精製したところ、最終化合物(４２％)が得られた。
【００６２】
実施例８  化合物１７
2007530553.tif 000039
実施例３の手順に従い調製されたＢｏｃ-保護されたアミン中間体を、市販されている酸塩化物であるフェニル-アセチルクロリドとカップリングさせ、続いてＴＦＡによりＢｏｃを除去し、ＨＰＬＣで精製したところ、最終化合物(３９％)が得られた。
【００６３】
実施例９  化合物１８  
2007530553.tif 000040
実施例３の手順に従い調製されたＢｏｃ-保護されたアミン中間体を、市販されている酸塩化物である２-メチル-２-フェニル-プロピオニルクロリドとカップリングさせ、続いてＴＦＡによりＢｏｃを除去し、ＨＰＬＣで精製したところ、最終化合物(５４％)が得られた。
【００６４】
実施例１０  化合物８
2007530553.tif 000041
実施例３の手順に従い調製されたＢｏｃ-保護されたアミン中間体を、市販されている酸塩化物である２,２-ジフェニル-プロピオニルクロリドとカップリングさせ、続いてＴＦＡによりＢｏｃを除去し、ＨＰＬＣで精製したところ、最終化合物(６５％)が得られた。
【００６５】
実施例１１  化合物１４
2007530553.tif 000042
実施例３の手順に従い調製されたＢｏｃ-保護されたアミン中間体を、典型的なＥＤＣカップリング条件に基づき、市販されている安息香酸とカップリングさせ、続いてＢｏｃ基を除去し、ＨＰＬＣで精製したところ、最終化合物(１６％)が得られた。
【００６６】
実施例１２  化合物１１
2007530553.tif 000043
実施例３の手順に従い調製されたＢｏｃ-保護されたアミン中間体を、典型的なＥＤＣカップリング条件に基づき、市販されているベンゾフラン-３-カルボン酸とカップリングさせ、続いてＢｏｃ基を除去し、ＨＰＬＣで精製したところ、最終化合物(３２％)が得られた。
【００６７】
実施例１３  化合物２１
2007530553.tif 000044
実施例３の手順に従い調製されたＢｏｃ-保護されたアミン中間体を、典型的なＥＤＣカップリング条件に基づき、市販されているナフタレン-１-カルボン酸とカップリングさせ、続いてＢｏｃ基を除去し、ＨＰＬＣで精製したところ、最終化合物(２８％)が得られた。
【００６８】
実施例１４  化合物２４
2007530553.tif 000045
実施例３の手順に従い調製されたＢｏｃ-保護されたアミン中間体を、典型的なＥＤＣカップリング条件に基づき、市販されている４-フルオロ-ナフタレン-１-カルボン酸とカップリングさせ、続いてＢｏｃ基を除去し、ＨＰＬＣで精製したところ、最終化合物(３３％)が得られた。
【００６９】
実施例１５  化合物６
2007530553.tif 000046
実施例３の手順に従い調製されたＢｏｃ-保護されたアミン中間体を、典型的なＥＤＣカップリング条件に基づき、市販されている４-メチル-ナフタレン-１-カルボン酸とカップリングさせ、続いてＢｏｃ基を除去し、ＨＰＬＣで精製したところ、最終化合物(３９％)が得られた。
【００７０】
実施例１６  化合物４
2007530553.tif 000047
実施例３の手順に従い調製されたＢｏｃ-保護されたアミン中間体を、典型的なＥＤＣカップリング条件に基づき、市販されている(４-フルオロ-フェニル)-フェニル-酢酸とカップリングさせ、続いてＢｏｃ基を除去し、ＨＰＬＣで精製したところ、最終化合物  (６８％)が得られた。
【００７１】
実施例１７  化合物３
2007530553.tif 000048
実施例３の手順に従い調製されたＢｏｃ-保護されたアミン中間体を、典型的なＥＤＣカップリング条件に基づき、市販されている２,３-ジヒドロ-ベンゾフラン-３-カルボン酸とカップリングさせ、続いてＢｏｃ基を除去し、ＨＰＬＣで精製したところ、最終化合物(３９％)が得られた。
【００７２】
実施例１８  化合物１２
2007530553.tif 000049
実施例３の手順に従い調製されたＢｏｃ-保護されたアミン中間体を、典型的なＥＤＣカップリング条件に基づき、市販されている２-メトキシ-ナフタレン-１-カルボン酸とカップリングさせ、続いてＢｏｃ基を除去し、ＨＰＬＣで精製したところ、最終化合物(５２％)が得られた。
【００７３】
実施例１９  化合物２８
2007530553.tif 000050
実施例３の手順に従い調製されたＢｏｃ-保護されたアミン中間体を、典型的なＥＤＣカップリング条件に基づき、市販されているナフタレン-１-カルボン酸とカップリングさせ、続いてＢｏｃ基を除去し、ＨＰＬＣで精製したところ、最終化合物(４１％)が得られた。
【００７４】
実施例２０  化合物２５
2007530553.tif 000051
実施例３の手順に従い調製されたＢｏｃ-保護されたアミン中間体を、典型的なＥＤＣカップリング条件に基づき、市販されているジフェニル-酢酸とカップリングさせ、続いてＢｏｃ基を除去し、ＨＰＬＣで精製したところ、最終化合物(３３％)が得られた。
【００７５】
実施例２１  化合物２７
2007530553.tif 000052
実施例３の手順に従い調製されたＢｏｃ-保護されたアミン中間体を、典型的なＥＤＣカップリング条件に基づき、市販されているキノリン-４-カルボン酸とカップリングさせ、続いてＢｏｃ基を除去し、ＨＰＬＣで精製したところ、最終化合物(７８％)が得られた。
【００７６】
実施例２２  化合物２６
2007530553.tif 000053
実施例３の手順に従い調製されたＢｏｃ-保護されたアミン中間体を、典型的なＥＤＣカップリング条件に基づき、市販されているナフタレン-２-カルボン酸とカップリングさせ、続いてＢｏｃ基を除去し、ＨＰＬＣで精製したところ、最終化合物(７９％)が得られた。
【００７７】
実施例２３  化合物１６
2007530553.tif 000054
実施例３の手順に従い調製されたＢｏｃ-保護されたアミン中間体を、典型的なＥＤＣカップリング条件に基づき、市販されているベンゾ[ｂ]チオフェン-３-カルボン酸とカップリングさせ、続いてＢｏｃ基を除去し、ＨＰＬＣで精製したところ、最終化合物(４９％)が得られた。
【００７８】
実施例２４
2007530553.tif 000055
ジヒドロベンゾフラン１０(１６０ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ)ＤＤＱ(３００ｍｇ)及びＣＨ２Ｃｌ２(１１ｍＬ)の混合物を、室温で２日間保持した。溶液を５０％の酢酸エチル-ヘキサンで希釈し、０．５ＮのＮａＯＨ(３ｘ１０ｍＬ)、塩水(１ｘ１０ｍＬ)で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、濾過し、濃縮したところ、１５０ｍｇのベンゾフランメチルエステル１１が得られた。
2007530553.tif 000056
エステル１１(１５０ｍｇ)ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ(９５ｍｇ)ＴＨＦ(５ｍＬ)及び水(２．５ｍＬ)の混合物を、２日間激しく攪拌した。ＮＨ４Ｃｌ(１ｘ５０ｍＬ)の飽和水溶液を用いて反応を停止させ、減圧下でＴＨＦを除去した。ＣＨ２Ｃｌ２(１ｘ５０ｍＬ)を用いて水相を抽出し、乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、濾過し、濃縮したところ、１４０ｍｇのベンゾフラン１２が得られた。
【００７９】
実施例２５  ＩＡＰ阻害アッセイ
以下の実験においては、１１０残基の１１がＸＩＡＰ-ＢＩＲ３に見出されるものに対応し、残りがＭＬ-ＩＡＰ-ＢＩＲに対応する、ＭＬＸＢＩＲ３ＳＧと称されるキメラＢＩＲドメインを使用した。キメラタンパク質ＭＬＸＢＩＲ３ＳＧは、天然ＢＩＲドメインのいずれかよりも有意に良好にカスパーゼ-９に結合してこれを阻害することが示されているが、天然ＭＬ-ＩＡＰ-ＢＩＲのものに類似した親和性でＳｍａｃ-ベースタンパク質及び成熟Ｓｍａｃに結合した。キメラＢＩＲドメインＭＬＸＢＩＲ３ＳＧのカスパーゼ-９阻害度の改善度合いは、ＭＣＦ７細胞に形質移入した場合に、ドキソルビシン-誘発性アポトーシスの阻害度の増加度合いと相関している。
ＭＬＸＢＩＲ３ＳＧ配列：
ＭＧＳＳＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＶＰＲＧＳＨＭＬＥＴＥＥＥＥＥＥＧＡＧＡＴＬＳＲＧＰＡＦＰＧＭＧＳＥＥＬＲＬＡＳＦＹＤＷＰＬＴＡＥＶＰＰＥＬＬＡＡＡＧＦＦＨＴＧＨＱＤＫＶＲＣＦＦＣＹＧＧＬＱＳＷＫＲＧＤＤＰＷＴＥＨＡＫＷＦＰＧＣＱＦＬＬＲＳＫＧＱＥＹＩＮＮＩＨＬＴＨＳＬ(配列番号：１)
【００８０】
ＴＲ-ＦＲＥＴペプチド結合アッセイ
時間分解蛍光共鳴エネルギー移動競争実験を、Kolbら(Journal of Biomolecular Screening, 1996, 1(4):203)の手順に従い、Wallac Victor2 Multilabeled Counter Reader(Perkin Elmer Life and Analytical Sciences, Inc.)で実施した。３００ｎＭのｈｉｓ-タグＭＬＸＢＩＲ３ＧＳ；２００ｎＭのビオチン化ＳＭＡＣペプチド(ＡＶＰＩ)；５μｇ／ｍＬの抗ｈｉｓアロフィコシアニン(ＸＬ６６５)(CISBio International)；及び２００ｎｇ／ｍＬのストレプタビジン-ユーロピウム(Perkin Elmer)を含有する試薬混合物を、試薬用バッファー(５０ｍＭのトリス[ｐＨ７．２]、１２０ｍＭのＮａＣｌ、０．１％のウシグロブリン、５ｍＭのＤＴＴ及び０．０５％のオクチルグルコシド)において調製した。(あるいは、この混合物は、それぞれ６．５ｎＭ及び２５ｎＭ濃度のユーロピウムで標識された抗Ｈｉｓ(Perkin Elmer)及びストレプタビジン-アロフィコシアニン(Perkin Elmer)を使用して作製することもできる)。試薬カクテルを室温で３０分インキュベートした。インキュベート後、カクテルを、３８４ウェルブラックＦＩＡプレート (Greiner Bio-One, Inc.)においてアンタゴニスト化合物(出発濃度は５０μＭ)の１：３連続希釈液に添加した。室温での９０分のインキュベート後、ユーロピウムの励起(３４０ｎｍ)用、及びユーロピウム(６１５ｎｍ)及びアロフィコシアニン(６６５ｎｍ)の発光波長用のフィルターを用いて、蛍光を読み取った。６１５ｎｍにおけるユーロピウムの発光に対する、６６５ｎｍにおけるアロフィコシアニンの発光シグナルの比率として、アンタゴニストデータを算出した(データ操作を容易にするために、これらの比率には１００００という因数をかけた)。得られた値をアンタゴニスト濃度の関数としてプロットし、Kaleidographソフトウエア(Synergy Software, Reading,PA)を使用し、４-パラメータ等式にあてはめた。アンタゴニスト能の表示はＩＣ５０値から決定した。このアッセイで試験した式Ｉ'の化合物は、２００μＭ未満のＩＣ５０値を示し、ＩＡＰ阻害活性を示した。
2007530553.tif 000057
【００８１】
蛍光偏光ペプチド結合アッセイ
偏光実験を、Keating, S.M., Marsters, J, Beresini, M., Ladner, C., Zioncheck, K., Clark, K., Arellano, F., 及びBodary., S.(2000), Proceedings of SPIE : In Vitro Diagnostic Instrumentation (Cohn, G.E.編)pp128-137, Bellingham, WAの手順に従い、アナリストＨＴ ９６-３８４(Molecular Devices Corp.)で実施した。蛍光偏光親和測定のための試料を、偏光用バッファー(５０ｍＭのトリス[ｐＨ７．２]、１２０ｍＭのＮａＣｌ、１％のウシグロブリン、５ｍＭのＤＴＴ及び０．０５％のオクチルグルコシド)に、最終濃度５μＭのＭＬＸＢＩＲ３ＳＧから出発して、最終濃度５ｎＭの５-カルボキシフルオレセイン-結合ＡＶＰｄｉ-Ｐｈｅ-ＮＨ２(ＡＶＰ-ｄｉＰｈｅ-ＦＡＭ)まで、１：２連続希釈液を添加することにより調製した。
2007530553.tif 000058
【００８２】
９６ウェルブラックＨＥ９６プレート(Molecular Devices Corp.)において、フルオレセインフルオロプローブ(λｅｘ＝４８５ｎｍ；λｅｍ＝５３０ｎｍ)用の標準的なカットオフフィルターを用い、室温で１０分のインキュベート時間の後、反応を読み取った。蛍光値をタンパク質濃度の関数としてプロットし、Kaleidographソフトウエア(Synergy Software, Reading, PA)を使用し、データを４-パラメータ等式にあてはめることで、ＩＣ５０を得た。５ｎＭのＡＶＰ-ｄｉＰｈｅ-ＦＡＭプローブを含むウェルに、３０ｎＭのＭＬＸＢＩＲ３ＳＧを添加し、また偏光用バッファー中３００μＭ濃度で始めるアンタゴニスト化合物の１：３連続希釈により、競合実験を実施した。１０分のインキュベート後、試料を読み取った。蛍光偏光値をアンタゴニスト濃度の関数としてプロットし、Kaleidographソフトウエア(Synergy Software, Reading, PA)を使用し、データを４-パラメータ等式にあてはめることで、ＩＣ５０を得た。アンタゴニストに対する阻害定数(Ｋｉ)をＩＣ５０値から決定した。
2007530553.tif 000059
【国際調査報告】
2007530553.tif 000064