(57)【要約】  本発明は、慢性炎症性疾患、ガン、及び不随意性体重低下の予防及び治療のための方法に関する。本発明の実施において、患者はＨＭＢ単独で又はそれに替わるものとしてエイコサペンタエン酸（２０：５  ω−３）、ＦＯＳ、カルニチン及びそれらの混合物との組み合わせで経腸的に投与される。ＨＭＢは、ロイシン、イソロイシン、バリン、チロシン、スレオニン及びフェニルアラニンなどの大型中性アミノ酸で強化されたアミノ−窒素源を含み、遊離アミノ酸を実質的に欠失している食品へ添加されてもよい。
2007530542.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＭＢ、ＨＭＢの塩、これらの代謝産物又は誘導体を投与することを含む、タンパク質キナーゼＣ、核因子κＢ、ユビキチン連結酵素及び２６Ｓプロテアソームの構成要素からなる群から選択される構成要素の発現及び／又は活性を下方制御することによる、患者における疾病状態の予防又は治療のための方法。
【請求項２】
ＨＭＢ、ＨＭＢの塩、これらの代謝産物又は誘導体の投与がタンパク質キナーゼＣの発現及び／又は活性を下方制御する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＨＭＢ、ＨＭＢの塩、これらの代謝産物又は誘導体の投与が核因子κＢの発現及び／又は活性を下方制御する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ＨＭＢ、ＨＭＢの塩、これらの代謝産物又は誘導体の投与がユビキチン連結酵素の発現及び／又は活性を下方制御する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ＨＭＢ、ＨＭＢの塩、これらの代謝産物又は誘導体の投与が２６Ｓプロテアソームの構成要素の発現及び／又は活性を下方制御する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
Ｌ−カルニチン、遊離アミノ酸を実質的に欠如する大型中性アミノ酸で強化されたアミノ窒素源、ω−３脂肪酸及び難消化性オリゴ糖からなる群から選択される構成要素の少なくとも１つがＨＭＢ又はＨＭＢの塩との組み合わせで投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
疾病状態が癌、カヘキシー、年齢関連消耗、長期入院と関連した消耗、ＨＩＶ／エイズ、関節炎、外傷、肝疾患、クローン病、ＩＢＤ、腎不全及びＣＯＰＤからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
疾病がカヘキシーである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ａ．ＨＭＢ、ＨＭＢの塩、これらの代謝産物又は誘導体、
ｂ．カルニチン、
ｃ．大型中性アミノ酸で強化されたアミノ窒素源
を含み、遊離アミノ酸を実質的に欠如する組成物。
【請求項１０】
ＨＭＢがＨＭＢナトリウム、ＨＭＢカリウム、ＨＭＢマグネシウム、ＨＭＢクロム、ＨＭＢカルシウム、ＨＭＢアルカリ金属、ＨＭＢアルカリ土類金属及びＨＭＢラクトンからなる群から選択される、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
ω−３脂肪酸をさらに含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ω−３脂肪酸がエイコサペンタエン酸及びドコサヘキサエン酸からなる群から選択される、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記大型中性アミノ酸がアミノ窒素源の少なくとも１０％である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１４】
前記遊離アミノ酸が組成物の０．４ｇ／回未満である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１５】
カルニチンの２ｇ未満／回をさらに含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１６】
ＦＯＳの少なくとも１ｇ／回をさらに含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１７】
ビタミン、ミネラル及び微量ミネラルからなる群から選択される栄養素をさらに含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１８】
ａ．ＨＭＢカルシウムの約２ｇ／ｌから１０ｇ／ｌまで、
ｂ．ω−３脂肪酸の少なくとも１ｇ／ｌ、
ｃ．カルニチンの約１ｇ／ｌから約８ｇ／ｌまで、
ｄ．ＦＯＳの約１ｇ／ｌから約２５ｇ／ｌまで、
大型中性アミノ酸で強化されたアミノ窒素源を含む組成物であり、前記アミノ窒素源が大型中性アミノ酸の約１０重量％から６０重量％までを含み、及び前記組成物が遊離アミノ酸を実質的に欠如する組成物。
【請求項１９】
組成物がヒト又は動物へ投与される、請求項９に記載の組成物。
【請求項２０】
組成物が食事性サプリメント、食事置換物、栄養バー、咀嚼物又は咬合物及び飲料からなる群から選択される、請求項９に記載の組成物。
【請求項２１】
請求項９に記載の組成物を患者へ投与することを含む、患者の疾病関連消耗を治療する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、慢性炎症性疾患、癌、及び不随意性体重低下の予防及び治療のための方法に関する。本発明の実施において、患者はＨＭＢ単独で、又はこれに代えて、エイコサペンタエン酸（２０：５  ω−３）、ＦＯＳ、カルニチン及びこれらの混合物との組み合わせで経腸的に投与される。ＨＭＢは、ロイシン、イソロイシン、バリン、チロシン、スレオニン及びフェニルアラニンなどの大型中性アミノ酸で強化されたアミノ窒素源を含み、遊離アミノ酸を実質的に欠失している食品へ添加されてもよい。
【背景技術】
【０００２】
望ましくない体重低下、特に除脂肪体重の低下は、危篤において比較的一般的に発生するものであり、罹患率及び死亡率に有意な影響を及ぼす。このことは、癌患者に特に当てはまり、その場合、このような体重低下は治療を制限する場合があり得、したがって全体的な予後に影響を与える。
【０００３】
カヘキシーは、摂食障害、体重低下、早発性満腹、無力症、除脂肪体重の低下、及び多臓器機能障害によって特徴付けられる症候群である。カへキシーは、慢性疾患（悪性及び非悪性の両者）の一般的な結果であり、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性心不全（ＣＨＦ）、腎不全、エイズ、認知症、慢性肝疾患及び癌における、より予後の悪化と関連している。カヘキシーは、疾病の重度の他の指標とは無関係であることが多い。（Ｗｉｔｔｅ，Ｋ．Ｋ．Ａ．及びＣｌａｒｋ，Ａ．Ｌ．：慢性疾患におけるカヘキシーに関与する栄養上の異常性、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ  ８５：  ２３−３１，  ２００２）
【０００４】
肺疾患はしばしばカヘキシーと関連しており、ＣＯＰＤ、特に肺気腫に苦しむ患者の相当数が疾患の経過の間に衰弱してくる。体重低下は、予後についての独立した危険因子であり、酸素消費量の増加としばしば関係する。このことは、非効率的な筋エネルギー代謝の発達と関連付けられてきた（Ｋｕｔｓｕｚａｗａ，  Ｔ．ｅｔ  ａｌ．：Ｍｕｓｃｌｅ  ｅｎｅｒｇｙ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ａｎｄ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．  １５２（２）：  ６４７−６５２，  １９９５）。ＣＯＰＤは、全身性炎症反応の一般的な亢進とも関連しており、末梢血における炎症誘発性サイトカインの及び急性期のタンパク質の濃度上昇によって反映される（Ｓｃｈｏｌｓ，Ａ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ：Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ａ  ｒｅｌａｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｄｅｒａｎｇｅｍｅｎｔｓ  ａｎｄ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  ｉｎ  ａ  ｓｕｂｇｒｏｕｐ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｏｂｓｔｒｕｔｉｖｅ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｔｈｏｒａｘ  ５１：  ８１９−８２４，  １９９６；  Ｔａｋａｂａｔａｋｅ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．：Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｌｅｐｔｉｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １５９：  １２１５−１２１９，  １９９９；  Ｄｅｎｔｅｎｅｒ，Ｍ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．：Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  ｉｎ  ＣＯＰＤ：ｉｎｃｒｅａｓｅ  ｉｎ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  Ｉ  ｒｅｃｅｐｔｏｒＩＩ  ｄｕｒｉｎｇ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｅｘａｃｅｒｂａｔｉｏｎｓ.Ｔｈｏｒａｘ  ５６：  ７２１−７２６，  ２００１）。このような変化はしばしば、筋消耗性症候群と関連している。
【０００５】
インキュベートした筋及び筋抽出物を使用する研究は、ＡＴＰ依存性ユビキチン−プロテオソーム経路が、筋消耗を最終的に生じるタンパク質分解の亢進のほとんどの原因であることを示唆する。特に、ユビキチン結合タンパク質のレベルの上昇、及びポリユビキチン、特定のプロテオソームサブユニット及びユビキチン連結酵素Ｅ２１４ＫについてのｍＲＮＡレベルにおける亢進は、ほとんどの萎縮している筋で見られる特徴である（Ｓｃｈｏｌｓ，Ａ．Ｍ．Ｗ．Ｊ：Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｃａｃｈｅｘｉａ．Ｉｎｔｌ  Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ  ８５：  １０１−１１０，  ２００２；  Ｊａｇｏｅ，Ｒ．Ｔ．及びＧｏｌｄｂｅｒｇ，Ａ．Ｌ．：Ｗｈａｔ  ｄｏ  ｗｅ  ｒｅａｌｌｙ  ｋｎｏｗ  ａｂｏｕｔ  ｔｈｅ  ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ−ｐｒｏｔｅｏｓｏｍｅ  ｐａｔｈｗａｙ  ｉｎ  ｍｕｓｃｌｅ  ａｔｒｏｐｈｙ？Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｔｒ  Ｍｅｔａｂ  Ｃａｒｅ  ４：  １８３−１９０，  ２００１）。
【０００６】
疾患が転移性疾患へと進行する癌患者の大部分は、彼らの治療プログラムの間にカヘキシーを発達させ、カヘキシーは彼らの死に関与する。癌患者における体重低下の頻度は、乳癌、急性骨髄性白血病及び肉腫の患者についての４０％から、膵臓及び胃の癌腫の患者における８０％超にまで及ぶ。肺、結腸又は前立腺の癌腫の患者の約６０％は、化学療法を開始する前に体重低下を経験している。治療前栄養不良（体重低下）と有害な結果との関係は確立されているが、カヘキシーの発達と腫瘍の大きさ、疾病の段階、及び悪性腫瘍のタイプ又は期間との間に一致した関係性は示されていない。
【０００７】
癌カヘキシーは単に腫瘍の局所的な効果ではない。タンパク質、脂肪及び炭水化物の代謝における変化が共通して生じる。例えば、炭水化物代謝における異常性には、総グルコース代謝回転の速度の亢進、肝糖新生の亢進、耐糖能障害及びグルコースレベルの上昇が含まれる。脂質分解の亢進、遊離脂肪酸及びグリセロールの代謝回転の亢進、高脂血症、及びリポタンパク質リパーゼ活性の低下がしばしば認められる。癌カヘキシーに付随する体重低下は、体脂肪の保存量における減少によるだけでなく、広範囲にわたる骨格筋消耗を伴う総体タンパク質量における減少にも起因する。タンパク質代謝回転の亢進及びほとんど制御されていないアミノ酸酸化も重要であるかもしれない。癌に応じて生じる宿主由来の因子の存在は、カヘキシーの原因因子、例えば腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−α又はカケクチン、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−６、γ−インターフェロン（ＩＦＮ）、及びプロスタグランジン（ＰＧ）（例、ＰＧＥ２）として関係付けられてきた。
【０００８】
体重低下は、肺及び消化管の癌腫を有する患者において共通であり、体脂肪及び筋タンパク質の両者の重量減少を生じる一方で、非筋タンパク質は影響を受けないままである。体脂肪の減少はエネルギー貯蔵の点で重要である一方、不動及び最終的には下位型肺炎由来の死に至る呼吸筋機能の機能障害を生じるのは骨格筋タンパク質の減少である。カヘキシーは摂食障害を頻繁に併発するが、栄養補助単独では安定した体重を維持できず、増加する体重はいずれも、除脂肪体重より、むしろ脂肪組織及び水の増加による。同じことは酢酸メゲストロール及び酢酸メドロキシプロゲステロンなどの食欲刺激剤について真であり、除脂肪体重の低下がエネルギー不足以外の因子によることを示唆する。
【０００９】
骨格筋重量は、タンパク質合成の速度と分解速度との平衡である。癌カヘキシーを有する患者は、骨格筋におけるタンパク質合成の抑制及びタンパク質分解の亢進を示し、それは、タンパク質分解の主要決定因子であるユビキチン−プロテアソームタンパク質分解経路の発現の亢進に反映される。したがって、悪液性癌患者由来の骨格筋は、ユビキチン及びプロテアソームサブユニットの両者についてのｍＲＮＡの発現の亢進を示すのに対し、プロテアソームタンパク質分解活性はユビキチン発現と並行して亢進することを示す。同化刺激が悪液性患者において除脂肪体重を増加させることができないということは、筋重量が増加できる前にタンパク質分解が減弱しなければならないことを示唆する。エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）は、悪液性マウスの骨格筋におけるユビキチン−プロテアソームタンパク質分解経路の発現の亢進を下方制御し、膵臓癌を有する悪液性患者の体重を安定化することが示されてきた。患者がタンパク質の３２ｇ及びＥＰＡの２ｇを含有する高エネルギーサプリメントを消費したとき、体重は増加し、このことは単に除脂肪体重の増加に起因した（Ｂａｒｂｅｒ，Ｍ．Ｄ．，  Ｒｏｓｓ，Ｊ．Ａ．，  Ｖｏｓｓ，Ａ．Ｃ．，  Ｔｉｓｄａｌｅ，Ｍ．Ｊ．，  Ｆｅａｒｏｎ，Ｋ．Ｃ．Ｈ．Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａｎ  ｏｒａｌ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  ｅｎｒｉｃｈｅｄ  ｗｉｔｈ  ｆｉｓｈ  ｏｉｌ  ｏｎ  ｗｅｉｇｈｔ−ｌｏｓｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，  ８１：  ８０−８６，  １９９９）。
【００１０】
Ｍａｙほかによる最近の研究（Ｍａｙ，Ｐ．Ｅ．，  Ｂａｒｂｅｒ，Ａ．，  Ｄ’Ｏｌｉｍｐｉｏ，Ｊ．Ｔ．，  Ｈｏｕｒｉｈａｎｅ，Ａ．  ａｎｄ  Ａｂｕｍｒａｄ，Ｎ．Ｎ．  Ｒｅｖｅｒｓａｌ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｗａｓｔｉｎｇ  ｕｓｉｎｇ  ｏｒａｌ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ａ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  β−ｈｙｄｒｏｘｙ−β−ｍｅｔｈｙｌｂｕｔｙｒａｔｅ,  ａｒｇｉｎｉｎｅ  ａｎｄ  ｇｌｕｔａｍｉｎｅ．Ａｍ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．，  １８３：  ４７１−４７９，  ２００２）は、ＨＭＢ、アルギニン及びグルタミンの混合物が、進行した（段階ＩＶの）癌を有する体重低下する患者において体重を増加させる上で効果的であることを示した。さらに、体重の増加は、ＥＰＡを使用して観察されるように、除脂肪体重の増加に起因した。
【００１１】
多価不飽和脂肪酸であるエイコサペンタエン酸の使用は、体液中の脂肪分解因子の脂肪分解活性及び酵素であるグアニジノ−安息香酸分解酵素（ｂｅｎｚｏａｔａｓｅ）の活性を阻害することによるカヘキシーの治療について示唆される。Ｔｉｓｄａｌｅ，Ｍ．Ｊ．及びＢｅｃｋ，Ａ．、米国特許第５，４５７，１３０号、１９９５年１０月１０日発行、及びＴｉｓｄａｌｅほか、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５０：  ５０２２−５０２６（１９９０年８月）を参照。しかしながら、Ｔｉｓｄａｌｅにより教示される製剤は固体剤形にあり、すでに病気の患者に１日当たり１２個ないし１６個のカプセルを服用させる必要がある。この方法は、嚥下、げっぷ及び悪臭の困難を含む重大な欠点を有した。
【００１２】
ＨＭＢは、さまざまな適用の場面で有用であることがわかってきた。特に、Ｎｉｓｓｅｎほかの米国特許第６，０３１，０００号において記載されているのは、ＨＭＢのカルシウム塩の重量に基づいている、ＨＭＢの約０．５ｇないし約３０ｇ、約０．５ｇないし約３０ｇが、遊離Ｌ−アルギニンの約０．５ｇないし約５０ｇ、及び遊離Ｌ−グルタミンの約０．５ｇないし約５０ｇを含む組成物である。この特許は、動物の疾病関連消耗の治療のための方法、動物のトリグリセリドの血清レベルを低下させるための方法、動物の血清ウィルス量を低下させるための方法、並びに内臓領域及び皮下領域を有する動物において脂肪を再分配するための方法も提供する。方法はすべて、動物へＨＭＢと少なくとも一つの遊離アミノ酸とを含む組成物を投与することを含む。
【００１３】
Ｎｉｓｓｅｎほかの米国特許第５，３４８，９７９号は、ヒト対象での窒素保持におけるＨＭＢの使用を記載する。投与されるＨＭＢの量は、尿窒素の低下によって決定されるタンパク質を保護するのに効果的である。この方法は、疾病状態による負の窒素平衡を有する患者に使用でき、タンパク質減少に曝される健常老年者にも使用できる。ＨＭＢは、経口的に又は静脈内注入によって投与されてもよい。ＨＭＢの効果的な量は、体重１ｋｇ当たり２４時間当たり、ＨＭＢのカルシウム塩に基づいたＨＭＢの０．０１ｇないし０．２０ｇの範囲内である。
【００１４】
Ｎｉｓｓｅｎの米国特許第５，０２８，４４０号は、除脂肪組織の発達を亢進するために食肉産生用家畜を飼育するための方法を記載する。ＨＭＢ又はその食用塩は、除脂肪組織重量における実質的な増加を得るために十分な長さの時間、ある量で動物へ投与される。方法は、ＨＭＢが相当の反芻胃を破壊しやすくはないため、畜牛及び子ヒツジを含む反芻動物での使用に特に適している。方法は、ニワトリ及びシチメンチョウを含む他の家畜でも実施できる。ＨＭＢは０．５ｍｇないし１００ｍｇの範囲内で供給される。
【００１５】
Ｎｉｓｓｅｎの米国特許第４，９９２，４７０号は、α−ケトイソカプロン酸塩（ＫＩＣ）よりも哺乳類のＴリンパ球の免疫機能を活性化するのに著しくより効果的であるＨＭＢの使用を記載する。Ｔリンパ球の活性化のため、ＨＭＢ又はその食用水溶性塩を、ＨＭＢが哺乳類の血液へ入る経路によって哺乳類へ投与される。投与される量は、哺乳類のＴリンパ球の胚発生を効果的に亢進するのに十分である。方法は、特にウシ、ヒツジ、及びブタを含む家畜哺乳類での使用に適している。ＨＭＢは、免疫系刺激剤としてヒトでも使用できる。ＨＭＢ（Ｃａ−ＨＭＢベース）を、ヒト対象当たり２４時間当たり５００ないし２，５００ミリグラム（ｍｇ）の量で経口的又は非経口的に投与される。
【００１６】
Ｋｕｎｚの独国特許第ＤＥ２９７０７３０８号は、ウェイトトレーニング集団において筋産生を促進するための、ＨＭＢと組み合わせた分岐鎖アミノ酸の使用を記載する。Ｋｕｎｚは、１日当たり２００ｇのタンパク質消費とともに毎日摂取される３ｇのサプリメントが栄養性タンパク質の値を亢進し、タンパク質効率性を有意に亢進することを教示する。Ｋｕｎｚは、ＨＭＢを無処置の（純粋な）タンパク質とよりもむしろ、タンパク質加水分解産物及び／又は遊離アミノ酸混合物と組み合わせるとき、より良好な効果に到達できることも教示する。
【００１７】
Ｅｎｇｅｌほかの米国特許第５，９７６，５０号は、キトサン、カバ及び、コリン／イヌシタル（ｉｎｕｓｉｔａｌ）、ピコリン酸クロム、ＨＭＢ、カルニチン及びピルビン酸塩を含有してもよい脂肪燃焼栄養補助食品の治療量を含有する糖質ベースの菓子の混合物から形成される体重低下用食事性サプリメントを記載する。キトサン及びカバと混合した栄養補助食品成分は、身体が消費した脂肪が何であれ燃焼するよう機能し、すなわち消化され及びキトサンへ結合しないどんな脂肪もよりよく代謝するよう機能する。
【００１８】
ＨＭＢを含有するウェイトリフティング集団用に企図された商業製品には、Ｇｏｌｄｅｎ，ＣｏｌｏｒａｄｏのＥＡＳ社によるＬｅａｎ  ＤｙｎａｍＸが含まれる。Ｌｅａｎ  ＤｙｎａｍＸは、強力な刺激剤を使用せずに脂肪減少を支持する成分の配合物を提供する。成分には、ＨＭＢ、ピコリン酸クロム、共役したリノール酸、マテ茶葉及び茎並びに酒石酸カルニチンが含まれる。粉末組成物を水と混合し、毎日２〜３回摂取し、１回の摂取量は運動３０分前に摂取する。
【００１９】
更なる商業製品には、Ｈａｕｐｐａｕｇｅ，ＮＹにあるＴｗｉｎｌａｂ社製のＭｅｇａ  ＨＭＢ  Ｆｕｅｌ（Ｒ）がある。Ｍｅｇａ  ＨＭＢ  Ｆｕｅｌ（Ｒ）は、１個のカプセルにＨＭＢの７５０ｍｇを含有する。示唆された毎日の投与量は、高強度の負荷抵抗運動後に生じうる筋細胞への損傷に対応するように、４カプセルである。
【００２０】
また、Ｇａｒｌｅｂほかの米国特許第５，４４４，０５４号及び関連した米国特許第５，７８０，４５１号も興味深い。これらの文書は潰瘍性大腸炎の治療に有用な組成物及び方法について記載している。このような組成物には、生物学的値の高い（ｃｏｌ．２１）無処置の又は加水分解されたタンパク質でありうるタンパク質源、フラクトオリゴ糖どの難消化性オリゴ糖、及び比較的高いω−３とω−６との脂肪酸比へ関与するエイコサペンタエン酸の比較的高い割合を含有する脂質配合物が含まれる。
【００２１】
長鎖脂肪酸生体経路及び生理学的作用は、ＤｅＭｉｃｈｅｌｅほかの米国特許第５，２２３，２８５号に論議されており、そのすべてが参照によって本明細書に組み込まれている。
【００２２】
カヘキシーの予防及び／又は治療はいらだたしい問題を残している。動物及びヒトの両研究は、癌罹患宿主において除脂肪体重を十分備える上で、栄養的な補助がさほど効果的ではないことを示唆する。細胞毒性抗新生物療法に対するアジュバントとしての総非経口栄養（ＴＰＮ）補助の有用性を探索する無作為化された試験は、治療結果にほとんど改善を示さなかった。例えば、「Ｂｒｅｎｎａｎ，Ｍ．Ｆ．及びＢｕｒｔ，Ｍ．Ｅ．，  １９８１，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ６５  （Ｓｕｐｐｌ．５）：  ６７−６８」を参照してほしい。このことは、ＴＰＮが動物において腫瘍成長を刺激できることを明確に示すのに付随して、癌治療におけるＴＰＮの決まりきった使用が正当ではないことを示唆する。Ｋｉｓｎｅｒ，Ｄ．Ｌ．，  １９８１，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ６５  （Ｓｕｐｐｌ．５）：  １−２。
【発明の開示】
【００２３】
本発明は、慢性炎症性疾患、癌、及び不随意性体重低下の予防及び治療のための方法に関する。本発明の実施において、患者はＨＭＢ単独で又はそれに替わるものとしてエイコサペンタエン酸（２０：５  ω−３）、ＦＯＳ、カルニチン及びそれらの混合物との組み合わせで経腸的に投与される。
【００２４】
別の実施態様において、本発明は、患者の疾病と関連した消耗の治療のための方法を提供する。方法は、患者へ前述の組成物を投与することを含み、組成物は疾病と関連した消耗を治療するのに十分な量でＨＭＢを含み、組成物を患者へ投与すると、疾病と関連した消耗が治療される。
【００２５】
別の実施態様において、本発明は、患者における腫瘍成長速度を低下させるための方法を提供する。方法は、患者へ前述の組成物を投与することを含み、組成物は腫瘍成長速度を低下するのに十分な量でＨＭＢを含み、組成物を患者へ投与すると、腫瘍成長速度が低下する。
【００２６】
別の実施態様において、本発明は、タンパク質キナーゼＣ、核因子κＢ、ユビキチン連結酵素、及び２６Ｓプロテアソーム構成要素の発現及び／又は活性を下方制御することによって、患者における疾病の予防又は治療のための方法を提供する。これらの方法は、患者へＨＭＢ、ＨＭＢの塩、これらの代謝産物又は誘導体を投与することを含む。
【００２７】
さらに別の実施態様において、ＨＭＢは、ロイシン、イソロイシン、バリン、チロシン、スレオニン及びフェニルアラニンなどの大型中性アミノ酸で強化されたアミノ窒素源を含み、遊離アミノ酸を実質的に欠失している食品へ添加されてもよい。
【００２８】
β−ヒドロキシ−β−メチル酪酸又はβ−ヒドロキシ−イソ吉草酸とも呼ばれるＨＭＢという語は、（ＣＨ３）２（ＯＨ）ＣＣＨ２ＣＯＯＨとしてのＨＭＢの遊離酸形態に表されることができる。ＨＭＢは、筋中でのα−ケトイソカプロン酸（ＫＩＣ）へのアミノ基転移後に、ＨＭＢを供与するために肝臓のサイトゾル中でのＫＩＣの酸化によって形成されるロイシンの代謝産物である。
【００２９】
「大型中性アミノ酸」という語は、ロイシン、イソロイシン、バリン、チロシン、スレオニン及びフェニルアラニンを指す。アミノ酸は、タンパク質の構築ブロックである。アミノ酸は、カルボキシル基（ＣＯＯＨ）及び化合物の末端にある同一炭素へ結合されるアミノ基（ＮＨ２）の存在によって特徴付けられる。
【００３０】
「遊離アミノ酸において実質的に欠失している」という語は、組成物の毎日の投与量における総遊離アミノ酸含有量が０．４ｇ未満である組成物を指す。例えば、もし生成物が１日当たり１缶の速度で供給されるよう企図されれば、生成物の１缶は遊離アミノ酸の総計０．４ｇ未満を含有する。問題のアミノ酸は、以下の化合物の１つ以上からなる自然発生的に生じるＬ−異性体である。すなわち、Ｌ−アラニン、Ｌ−アルギニン、Ｌ−アスパラギン、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−システイン（又はＬ−シスチン）、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−グルタミン、グリシン、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−ロイシン、Ｌ−リジン、Ｌ−メチオニン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−プロリン、Ｌ−セリン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−トリプトファン、Ｌ−チロシン及びＬ−バリン、又はそれらの食品上若しくは医薬的に許容可能な塩、エステル、塩又は誘導体（メチル又はエチルエステルなど）である。
【００３１】
「カヘキシー」という語は、一般的な疾病状態及び栄養不良の状態を指す。カヘキシーは、悪性癌としばしば関係付けられ悪性癌によって誘発され、食欲低下、体重、特に除脂肪体重の低下、及び筋の消耗によって特徴付けられる。
【００３２】
「脂肪酸」という語は、炭化水素鎖を有するカルボン酸のファミリーを指し、一般に約１２個ないし２４個の炭素長である。（二重結合を有する）不飽和のとき、脂肪酸などの炭化水素鎖における少なくとも一箇所が第一の二重結合の位置によって命名される。ω−３脂肪酸は、鎖のメチル末端から３番目の炭素で最初の二重結合を有し、それらにはα−リノレン酸、ステアリドン酸、エイコサペンタエン酸（「ＥＰＡ」）、ドコサペンタエン酸及びドコサヘキサエン酸（「ＤＨＡ」）及びそれらの類似物が含まれるがそれには限定されない。ω−６脂肪酸は鎖のメチル末端から６番目の炭素で最初の二重結合を有し、それらにはリノール酸、γ−リノレン酸、アラキドン酸（「ＡＡ」）、及びそれらの類似物が含まれるがそれらには限定されない。
【００３３】
本明細書で使用される「食品」という語は、脂肪、アミノ窒素及び炭水化物の１つ以上を含有する送達担体を指し、栄養的な補助のいくつか又はすべてを、推奨される１日量で患者に提供する。しばしば、食品は、食品置換物、医用食品、サプリメントへバランスの取れた栄養を提供するため、ビタミン、ミネラル、微量ミネラル及びそれらの類似物を含有するであろう。食品は、飲料、粉末、バー、ジュース、炭酸飲料、ミネラルウォーター（ｂｏｔｔｌｅｄ  ｗａｔｅｒ）などの任意の典型的な形態とすることができる。
【００３４】
「基準１日摂取量又はＲＤＩ」という語は、栄養所要量に基づいた、必須ビタミン及びミネラルについての食事基準の１セットを指す。推奨栄養所要量は、最新の科学的知識を反映するように、周期的に更新される、米国科学アカデミーにより確立される概算された栄養所要量の１セットである。
【００３５】
「患者」という語は、ヒト、イヌ、ネコ、及びその他の非反芻動物を指す。
【００３６】
本願における数の範囲に対するいずれの表記も、「約」という形容詞によって修飾されるものと考慮されるべきである。さらに、いずれの数の範囲も、その範囲のサブセットを志向する請求項についての対応を提供するよう考慮されるべきである。例えば、１から１０までという範囲の開示は、明細書及び特許請求の範囲における対応を１ないし１０の範囲におけるいずれかのサブセット（すなわち、２ないし９、３ないし６、４ないし５、２．２ないし３．６、２．１ないし９．９、等）へ提供すると考えるべきである
【００３７】
操作の何らかの特定の理論に本発明を限定することを意図するものではないが、出願者は推測されるメカニズムを以下に記載する。
【００３８】
極端な必要性（例、飢餓など）の場合、骨格筋はしばしば、アミノ酸及びエネルギーの貯蔵庫として身体によって使用される。このことは、筋におけるタンパク質分解の上方制御及びタンパク質合成の下方制御によって仲介される。その正味の結果は、必須なシステムの維持において使用するための、一般的な循環へのアミノ酸の筋からの放出である。良好な健康状態及び適切な栄養上の利用可能性が回復されるとき、筋は再構築される。カヘキシーの場合、このシステムは不適切に活性化され、そのため、栄養上適切な場合でさえ、筋組織タンパク質は分解され続ける。
【００３９】
不適切に活性化された鍵となるタンパク質分解系の１つは、ユビキチンプロテオソーム系である。正常に機能しているとき、この系は、老化したタンパク質、又は、何らかの様式で、損傷を受け、若しくはもはや必要とされていないタンパク質を認識し、ユビキチンとの結合を介して除去するためにタンパク質をマークする。このようなユビキチン化したタンパク質は、プロテオソームによって認識され、分解され、遊離ユビキチン及びペプチド及び遊離アミノ酸をエネルギー消費過程において放出する。この系を活性化又は上方制御するシグナル伝達分子は多く存在し、それには特定のカヘキシー誘発腫瘍によって生じるタンパク質因子であるタンパク質分解誘発因子（ＰＩＦ）が含まれる。ＰＩＦの筋細胞への結合は、ホスホリパーゼＡ（ＰＬＡ）の上方制御を生じる。これが順に、タンパク質キナーゼＣを最終的に活性化するシグナル伝達因子を生じ、ユビキチン共役についての及びプロテオソームの特定のサブユニットについての（核因子κＢ、ＮＦκＢを介する）遺伝子の活性化を生じる。このシグナル伝達の全体の正味の結果は、ユビキチンプロテオソーム系の上方制御であり、及び筋における不適切な持続されたタンパク質分解である。図１は、この活性化シーケンスの詳細な経路を示す。
【００４０】
タンパク質キナーゼＣ
タンパク質キナーゼＣは、カルシウム及び脂質により活性化されるセリン−スレオニンキナーゼのファミリーであり、多くの細胞内シグナル伝達カスケードにおいて重要な役割を担う。少なくとも１２個の異なるＰＫＣアイソタイプがあり、それらはその一次構造及び生化学的特性に基づいて３つのクラスへ分類される（ＣＡ  Ｃａｒｔｅｒ：“Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ｃ  ａｓ  ａ  ｄｒｕｇ  ｔａｒｇｅｔ:Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｄｒｕｇ  ｏｒ  ｄｉｅｔ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔｏ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ．”Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  １：  １６３−１８３  （２０００））。これらは、活性化のためにジアシルグリセロール、ホスファチジルセリン及びカルシウムを要する従来型（ｃＰＫＣα、βＩ、βＩＩ及びγ）、ジアシルグリセロール及びホスファチジルセリンを要するがカルシウムとは無関係の新規型（ｎＰＫＣδ、ε、η、θ及びμ）、並びにカルシウム及びジアシルグリセロールとは無関係の非定型（ａＰＫＣλ、τ及びζ）である。
【００４１】
ＰＫＣは、膜結合型酵素前駆体として合成される。タンパク質分解性開裂による前駆配列の除去、及びその後のリン酸化は、膜からサイトゾルへ形質転換受容性酵素を放出する。その後の活性化因子の独特のセットとの相互作用は活性型酵素を生じる。したがって、可能な制御のいくつものレベルがあり、それには発現の調節、タンパク質分解プロセシングの調節、初期リン酸化事象の調節及び最終的には、完全な活性のために必要とされるさまざまな活性化因子のサイトゾルレベルの制御が含まれる。
【００４２】
タンパク質キナーゼＣは、細胞の有糸分裂誘発及び増殖、アポトーシス、血小板活性化、アクチン細胞骨格のリモデリング、イオンチャネルの修飾及び分泌にいたるシグナル伝達経路のいくつかにおいて関与する。さらに、ＰＫＣが腫瘍促進性ホルボールエステルに対す主要な受容体でもあるという他の知見は、この酵素の作用のメカニズムを研究するための重要な試薬を提供した。ＰＫＣは、炎症、心臓循環器系、末梢微小循環系、ＣＮＳ、腫瘍学、免疫及び感染性の疾病状態に関与する経路を制御し、薬物開発のための重大かつ重要な標的として考慮される（Ｐ．Ｇ．Ｇｏｅｋｊｉａｎ及びＭ．Ｒ．Ｊｉｒｏｕｓｅｋ：「Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｋｉｎａｓｅ  Ｃ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｄｉｓｅａｓｅ：Ｓｉｇｎａｌ  Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  Ｐａｔｈｗａｙｓ，  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，  ａｎｄ  Ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ“、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ６（９）：  ８７７−９０３，  （１９９９）；  ＣＡ  Ｏ’Ｂｒｉａｎ、ＮＥ  Ｗａｒｄ，  ＫＲ  Ｇｒａｖｉｔｔ及びＫＰ  Ｇｕｐｔａ：「Ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｐｒｏｍｏｔｅｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅＣ：Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  ｃｈｅｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｃｏｌｏｎ  ｃａｎｃｅｒ．”、Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ  ａｎｄ  Ｔｕｍｏｒ  Ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ：  Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｒｉｓｋ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ、１１７ページ−１２０ページ、１９９５、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ社；  Ｆ  Ｂａｔｔａｉｎｉ：“Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ｃ  ｉｓｏｆｏｒｍｓ  ａｓ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｉｎ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｓｙｓｔｅｍ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｓｔａｔｅｓ．」、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４４（５）：  ３５３−３６１、（２００１）；  ＲＮ  Ｆｒａｎｋ：“Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｎｅｗ  ｍｅｄｉｃａｌ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ：ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ｃ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．”Ａｍ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  １３３：  ６９３−６９８  （２００２）；  Ｍ  Ｍｅｉｅｒ及びＧＬ  Ｋｉｎｇ：“Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ｃ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ．”Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ５：  １７３−１８５  （２０００））。
【００４３】
ＮＦκＢ
核因子κＢ（ＮＦκＢ）は、哺乳類細胞の幅広い種類で見られる転写因子のファミリーである。成熟分子は、次の５つの遺伝子産物（ＲｅｌＡ  （ｐ６５）、ｐ５０、ＲｅｌＢ、ｃ−Ｒｅｌ及びｐ５２）の１つ又は２つから生成されるホモ二量体又はヘテロ二量体であり、そのもっとも共通のものはＲｅｌＡ及びｐ５０の二量体である。非活性化条件下で、ＮＦκＢは、阻害性タンパク質ＩκＢαとの会合によって、サイトゾルに局在化する。上流のシグナル伝達はＩκＢキナーゼを包含し、結合したＩκＢαのリン酸化はＮＦκＢからのその放出を生じ、後者を核へと転移させ、特異的遺伝子転写を活性化させる。リン酸化したＩκＢαはユビキチン−プロテオソーム経路によって分解される。
【００４４】
ＮＦκＢは、炎症と関連した重要な制御分子として広く認識される。したがって、ＮＦκＢは、急性及び慢性の両炎症性疾患において重要な役割を担う（ＡＢ  Ｌｅｎｔｓｃｈ及びＰＡ  Ｗａｒｄ：“Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＮＦκＢ  ｄｕｒｉｎｇ  ａｃｕｔｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ”Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ  Ｌａｂ  Ｍｅｄ  ３７（３）：２０５−２０８  （１９９９））。ＮＦκＢは、癌の転移などの他の疾病の特定の側面においても役割を担う（ＶＢ  Ａｎｄｅｌａ，  ＡＨ  Ｇｏｒｄｏｎ，  Ｇ  Ｚｏｔａｌｉｓ，  ＲＮ  Ｒｏｓｉｅｒ，  ＪＪ  Ｇｏａｔｅｒ，  ＧＤ  Ｌｅｗｉｓ，  ＥＭ  Ｓｃｈｗａｒｚ，  ＪＥ  Ｐｕｚａｓ及びＲＪ  Ｏ’Ｋｅｅｆｅ：“ＮＦκＢ：Ａ  ｐｉｖｏｔａｌ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  ｔｏ  ｂｏｎｅ”Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃｓ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４１５Ｓ：  Ｓ７５−Ｓ８５  （２００３））。この転写因子は、糖尿病症候群の発達（Ｅ．Ｈｏ及びＴＭ  Ｂｒａｙ：“Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ，  ＮＦκＢ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｉａｂｅｔｏｇｅｎｅｓｉｓ”Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２２２：  ２０５−２１３  （１９９９））並びに免疫発達及び制御（Ｊ  Ｍｏｓｃａｔ，  ＭＴ  Ｄｉａｚ−Ｍｅｃｏ及びＰ  Ｒｅｎｎｅｒｔ：“ＮＦκＢ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｐｒｏｐｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ｃ  ｉｓｏｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．”、ＥＭＢＯ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ４：３１−３６  （２００３））において関与する。最後に、ＮＦκＢは、アポトーシスの、並びに成長及び分化における調節と関連している。実際、ＰＩＦ（腫瘍により放出され、癌により誘発される除脂肪体重の低下に関与するタンパク質分解誘発因子）は、胚発生の制御因子であると考えられており、最終的にＮＦκＢを通じてシグナル伝達カスケードの引き金を引く（Ｆ  Ｄｅｌｆｉｎｏ及びＷＨ  Ｗａｌｋｅｒ：“Ｈｏｒｍｏｎａｌ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＮＦκＢ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙ．”、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １５７：  １−９  （１９９９）；  ＴＭ  Ｗａｔｃｈｏｒｎ，  Ｉ  Ｗａｄｄｅｌｌ，  Ｎ  Ｄｏｗｉｄａｒ及びＪＡ  Ｒｏｓｓ：“Ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ−ｉｎｄｕｃｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｖｉａ  ｔｈｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  ＮＦκＢ  ａｎｄ  ＳＴＳＴ３．”、ＦＡＳＥＢ  Ｊ  １５：  ５６２−５６４  （２００１））。
【００４５】
ＰＬＡの活性化から生じるシグナル伝達の阻害、特にアラキドン酸（ＡＡ）の放出を介してカヘキシーに及ぼすＥＰＡの有利な効果をＥＰＡが発揮することも周知である。このことは、初期のシグナル伝達事象を除去することによって、ユビキチン−プロテオソーム経路のその後の上方制御及び活性化を予防する。ＨＭＢは、ＰＬＡの活性化又はＡＡの放出を予防しない一方で、タンパク質キナーゼＣの上方制御を予防し、シグナル伝達経路におけるその後の活性化すべてを予防し、最終的に、ユビキチン−プロテオソーム系の活性化も予防する。
【００４６】
ＨＭＢ単独は腫瘍の成長速度を低下でき、ＥＰＡの最適下の投与量レベルと組み合わせて抗悪液性効果を増強することができることはいまや驚くべきことに及び予期せぬことに発見されている。ＥＰＡ及びＨＭＢの組み合わせは、ユビキチン−プロテアソームタンパク質分解経路の重要な制御構成要素の発現の亢進の下方制御を通じてタンパク質分解を減弱することによって、筋重量を保存する。
【００４７】
「ＨＭＢ」という語は、その遊離酸及び塩の両形態にある、前述の化学式を有する化合物、その代謝産物及び誘導体を指す。ＨＭＢのいずれかの適切な形態が本発明に関連して使用できるが、好ましくはＨＭＢが、遊離酸、塩、エステル、及びラクトンからなる群から選択され、より好ましくはＨＭＢが塩である。
【００４８】
ＨＭＢのいずれかの医薬的に適切な塩が本発明の脈絡内で使用できるが、好ましくはＨＭＢ塩が患者の胃又は腸において水溶性であるか又は水溶性になる。より好ましくは、ＨＭＢ塩はナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、クロム塩、及びカルシウム塩からなる群から選択される。最も好ましくは、ＨＭＢ塩はカルシウム塩である。しかしながら、他のアルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩などの他の非毒性塩が使用できる。
【００４９】
同様に、いずれかの医薬的に許容可能なエステルは、本発明において使用できる。望ましくは、ＨＭＢエステルは、その遊離酸の形態でＨＭＢへ迅速に変換される。好ましくは、ＨＭＢエステルはメチルエステル又はエチルエステルである。ＨＭＢメチルエステル及びＨＭＢエチルエステルはＨＭＢの遊離酸形態へ迅速に変換される。
【００５０】
同様に、いずれかの医薬的に許容可能なラクトンは、本発明において使用できる。望ましくは、ＨＭＢラクトンは、その遊離酸の形態でＨＭＢへ迅速に変換される。好ましくは、ＨＭＢラクトンはイソバラリルラクトン又は同様のラクトンである。このようなラクトンはＨＭＢの遊離酸形態へ迅速に変換される。
【００５１】
ＨＭＢ及びその誘導体を生成するための方法は本分野で周知である。例えば、ＨＭＢはジアセトンアルコールの酸化によって合成できる。ある適切な手法は、Ｃｏｆｆｍａｎほか、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８０：  ２８８２-２８８７  （１９５８）によって記載されている。そこに記載されるように、ＨＭＢはジアセトンアルコールのアルカリ性の次亜塩素酸ナトリウムの酸化によって合成される。生成物を遊離酸の形態で回収し、それを望ましい塩へ変換できる。例えば、３−ヒドロキシ−３−メチル酪酸（ＨＭＢＡ）を、冷次亜塩素酸塩水溶液（漂白剤）を使用する酸化を介してジアセトンアルコール（４−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−２−オン）から合成できる。ＨＣｌを使用して反応混合物を酸性化した後、ＨＭＢＡ生成物を、酢酸エチルを使用する抽出によって回収し、抽出混合物から有機層を分離及び保持する。酢酸エチルを蒸発により除去し、残渣をエタノールに溶解する。Ｃａ（ＯＨ）２の添加及び冷却後、結晶性ＣａＨＭＢをろ過により回収でき、結晶をエタノールで洗浄した後に乾燥させる。あるいは、ＨＭＢのカルシウム塩はＳａｌｔ  Ｌａｋｅ  Ｃｉｔｙ，ＵｔａｈにあるＴＳＩから商業的に入手可能である。
【００５２】
癌患者における栄養的な補助は、（ｉ）適切に栄養を供与された患者における栄養の悪化を予防するよう、又は最終的な療法の前に欠亡した患者にリハビリさせるよう栄養的な補助が開始される支持的なもの、（ｉｉ）治療上の計画における統合的な役割を栄養的な補助が担う付属的なもの、及び（ｉｉｉ）積極的な栄養的な補助が患者の存在にとって必要とされる決定的なもの、として分類できる。栄養的な補助を提供するための経路には、経口食、チューブ摂食及び末梢若しくは全身的非経口栄養がある。本発明の栄養的方法及び組成物についての好ましい実施態様は、経口経路によるものである。
【００５３】
経口摂食に替わるものとして、鼻腔胃、鼻腔十二指腸、食道瘻造設術、胃瘻造設術又は空腸瘻造設術のチューブによるチューブ摂食である。
【００５４】
ＨＭＢが患者の除脂肪体重に及ぼす有益な効果は、多くの方法において達成できる。所望であれば、ＨＭＢは単独で、担体なしで投与してもよい。ＨＭＢは水に単純に溶解され、患者によって消費されてもよい。あるいは、ＨＭＢは、食物上に振り掛けられ、コーヒーに溶解されるなどしてもよい。患者のための総１日投与量は幅広く変動するであろうが、典型的には患者はＨＭＢの少なくとも２ｇ／日を消費することから利益を得るであろう。あるいは、２０ｍｇ／ｋｇ／日ないし４０ｍｇ／ｋｇ／日である。
【００５５】
更なる実施態様において、ＨＭＢはピル、カプセル、迅速に溶解される錠剤、トローチ剤などへと組み込まれてもよい。活性投与量は幅広く変動できるが、典型的には１回の投与当たり２５０ｍｇないし１ｇの範囲であり、患者は２回ないし８回の投与を１日に消費し、最低２ｇ／日の目標を達成するであろう。このような剤形を調製するための方法は本分野で周知である。読者の注意は、このような剤形を調製する方法に関するガイダンスについてのＲｅｍｉｎｇｔｏｎｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓの最新版へ向けられる。
【００５６】
ＨＭＢは、単回実体として投与されてもよいが、典型的には、食品へ組み込まれ、患者の食事又は間食の間に患者によって消費されるであろう。もし望めば、患者は彼らが通常食事に振り掛け、コーヒーに溶解するなどによって消費する食事のレシピを単純に修正してもよい。
【００５７】
更なる実施態様において、ＨＭＢは、その嗜好性を増強し、代替形態の選別を増加させるよう特に企図された飲料、バー、クッキーなどへ組み込まれ、それにより患者／消費者の受容を増強するであろう。
【００５８】
典型的に、ＨＭＢは、Ｅｎｓｕｒｅ（Ｒ）、Ｂｏｏｓｔ（Ｒ）、Ｇｌｕｃｅｍａ（Ｒ）、Ｐｅｄｉａｓｕｒｅ（Ｒ）、Ｐｅｄｉａｌｙｔｅ（Ｒ）等の食事置換飲料へと組み込まれるであろう。ＨＭＢは、ＰｏｗｅｒＢａｒｓ（Ｒ）、Ｇｌｕｃｅｍａ（Ｒ）バー、Ｃｈｏｉｃｅ  ＤＭ（Ｒ）バー、Ｅｎｓｕｒｅ（Ｒ）バー、及びＢｏｏｓｔ（Ｒ）バー等の食事置換バーへも組み込まれてもよい。あるいは、ＨＭＢは、ジュース、炭酸飲料、ミネラルウォーターなどへ組み込まれてもよい。さらに、ＨＭＢは、癌、ＨＩＶ／エイズ、ＣＯＰＤ、関節炎等の特定の疾病状態を支援するよう企図されたＰｒｏＳｕｒｅ（Ｒ）、Ｐｒｏｍｏｔｅ（Ｒ）、Ｊｅｖｉｔｙ（Ｒ）及びＡｄｖｅｒａ（Ｒ）などの医用栄養剤へと組み込まれてもよい。このような食品のいずれかを製造するための方法は、当業者に周知である。以下の論議は、このような食品及びそれらの調製を説明するように意図される。
【００５９】
たいていの食事置換製品（すなわちバー又は液体）は、脂肪、炭水化物、及びタンパク質由来のカロリーを提供する。これらの製品はそれらが一つの栄養源として使用するのに適しているよう企図されるため、ビタミン及びミネラルも典型的に含有する。これらの食事置換製品が栄養の単一源として提供されてもよいが、典型的には、それらは提供されない。個人は１日に１回又は２回の食事を置換するために、又は健康的なスナックを提供するためにこれらの製品を消費する。本発明の栄養補助製品はこれらの実施態様のいずれかを包含するよう解釈されるべきである。
【００６０】
これらの栄養補助成分の量は、標的とされる患者集団（すなわち、癌、ＨＩＶ／エイズ、関節炎、感覚受容性考慮、文化的優先度、使用、等）によって幅広く変動しうる。しかしながら、一般的な制限のないガイドラインとして、本発明の食事置換製品は、（総カロリーの相対的な割合に基づいた）タンパク質、脂肪、及び炭水化物の以下の相対的な量を含有するであろう。すなわち、総カロリー含有量の５％ないし８０％を提供するタンパク質成分、総カロリー含有量の１０％ないし７０％を提供する炭水化物成分、及び総カロリー含有量の５％ないし５０％を提供する脂質成分である。
【００６１】
食事置換物は、栄養処方を調製する当業者に公知のように、適切な炭水化物、脂質及びタンパク質を含有するであろう。適切な炭水化物には、トウモロコシ、タピオカ、コメ又はジャガイモを原材料とするワックス形態又は非ワックス形態にある加水分解された、無処置の、天然修飾される、及び／又は化学的に修飾されるデンプン、及びグルコース、果糖、ラクトース、ショ糖、マルトース、高濃度果糖トウモロコシシロップ、トウモロコシシロップ固体、フラクトオリゴ糖、及びそれらの混合物などの糖が含まれるが、それらには限定されない。
【００６２】
適切な脂質には、やし油、大豆油、トウモロコシ油、オリーブ油、ベニバナ油、高オレインベニバナ油、ＭＣＴ油（中鎖トリグリセリド）、ヒマワリ油、高オレインヒマワリ油、パーム油、パームオレイン、アブラナ油、綿実油、魚油、パーム殻粒油、メンヘイデン（ｍｅｎｈａｄｅｎ）油、大豆油、レシチン、アラキドン酸及びドコサヘキサエン酸の脂質源、及びそれらの混合物が含まれるが、それらには限定されない。アラキドン酸及びドコサヘキサエン酸の脂質源には、海洋油（ｍａｒｉｎｅ  ｏｉｌ）、卵黄油、及び真菌油若しくは藻類油が含まれるが、それらには限定されない。
【００６３】
これらの脂肪の数多くの商業源は容易に入手可能であり、当業者に公知である。例えば、大豆油及びアブラナ油はＤｅｃａｒｔｕｒ，  ＩｌｌｉｎｏｉｓのＡｒｃｈｅｒ  Ｄａｎｉｅｌｓ  Ｍｉｄｌａｎｄ社から利用可能である。トウモロコシ油、やし油、パーム油、及びパーム穀粒油はＰｏｒｔｌａｎｄ，  ＯｒｇａｎのＰｒｅｍｉｅｒ  Ｅｄｉｂｌｅ  Ｏｉｌｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手可能である。精製やし油は、ＬａＧｒａｎｇｅ，  ＩｌｌｉｎｏｉｓのＨｅｎｋｅｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手可能である。高オレインベニバナ油及び高オレインヒマワリ油は、Ｅａｓｔｌａｋｅ，  ＯｈｉｏのＳＶＯ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓから入手可能である。海洋油は、日本の東京の持田インターナショナルから入手可能である。オリーブ油は、英国のＮｏｒｔｈ  ＨｕｍｂｅｒｓｉｄｅのＡｎｇｉｌａ  Ｏｉｌｓから利用可能である。ヒマワリ油及び綿実油は、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，  ＭｉｎｎｅｓｏｔａのＣａｒｇｉｌから利用可能である。ベニバナ油は、Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，  ＣａｌｉｆｏｒｎｉａのＣａｌｉｆｏｒｎｉａ  Ｏｉｌｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから利用可能である。
【００６４】
これらの食品級の油に加えて、調整脂質が、もし望めば食品へ組み込まれてもよい。調整脂質は本分野で公知である。調整脂質の簡潔な記載は、調整脂質は脂肪適合化を可能にするという表題でＩＮＦＯＲＭ，  Ｖｏｌ．８，  Ｎｏ．１０，  １００４ページ（１９９７年１０月）に見られる。又、米国特許第４，８７１，７６８号を参照してほしい。調整脂質は主に、同一グリセロール核の中鎖脂肪酸及び長鎖脂肪酸の混合物を含有するトリアシルグリセロールである。調整脂質及び経腸処方におけるそれらの使用は米国特許第６，１９４，３７９号及び第６，１６０，００７号にも記載されている。
【００６５】
必要に応じて、ω−３脂肪酸は油配合物の約３０％を含んでもよく、好ましくは、ω−３脂肪酸はエイコサペンタエン酸及びドコサヘキサエン酸から主としてなる。栄養組成物の調製において使用される食用油は、トリグリセリドの形態にあるω−３脂肪酸を一般に含有し、それにはアブラナ油、中鎖トリグリセリド、魚油、大豆油、大豆レシチン、トウモロコシ油、ベニバナ油、ヒマワリ油、高オレインヒマワリ油、高オレインベニバナ油、オリーブ油、ルリヂサ油、クロスグリ油、マツヨイグサ油及び亜麻仁油が含まれるが、それらには限定されない。必要に応じて、本発明に記載の脂質配合物におけるω−６脂肪酸とω−３脂肪酸との重量比は約０．１ないし３．０である。ω−３脂肪酸の毎日の送達は少なくとも４５０ｍｇであるべきであり、個体の体重、性別、年齢及び医学的状態によって変動してもよい。前述のように、より高いレベルが成人の消費に対して望ましく、例えば毎日約０．５ｇないし５０ｇ、より好ましくは毎日約２．５ｇないし５ｇである。
【００６６】
ω−３脂肪酸及びＨＭＢを組み合わせることの予期せぬ利点は、食事置換物の味における改善である。ω−３脂肪酸の典型的な供給源は魚油及び藻類油である。各供給源は、食事置換製品へ不快な香りをもたらす。本発明者は、ＨＭＢを添加することによって、製品中のω−３脂肪酸の最適量以下の低いレベルを使用するときでさえ、不随意的な体重低下を予防することに関する同一又はより良好な臨床結果が得られうることを発見した。結果的に発明者は、ω−３脂肪酸及びＨＭＢのレベル間に逆の関係があることを発見した。例えば、もしω−３脂肪酸の効果的な投与量が食事置換物２缶に送達される３ｇであれば、同一の臨床結果は、２缶に送達されるω−３脂肪酸の２ｇ及びＨＭＢの１ｇを含有するよう処方される製品において、又は２缶に送達されるω−３脂肪酸の１ｇ及びＨＭＢの２ｇを含有するよう処方される製品において見られるであろう。ω−３脂肪酸の１ｇのみを含有するよう処方される製品は、同一の臨床的な有効性に達しながらω−３脂肪酸の２ｇ又は３ｇで処方される製品よりも非常により良好な味であろう。さらに、ω−３脂肪酸は炎症の仲介物質であるＡＡの公知の阻害剤であるため、ω−３脂肪酸及びＨＭＢを含有する製品は、成分のいずれかを単独で含有するものよりも幅広い利点を有しうるであろう。
【００６７】
適切なタンパク質源には乳、乳清及び乳清画分、大豆、米、食肉（例、牛肉）、動物及び野菜（例、エンドウ、ジャガイモ）、卵（卵アルブミン）、ゼラチン及び魚があるがそれらには限定されない。適切な無処置のタンパク質源には、大豆ベース、乳ベース、カゼインタンパク質、乳清タンパク質、米タンパク質、牛肉コラーゲン、エンドウタンパク質、ジャガイモタンパク質、及びそれらの混合物が含まれるが、それらには限定されない。
【００６８】
必要に応じて、無処置のタンパク質源は、バリン、イソロイシン、ロイシン、スレオニン、チロシン及びフェニルアラニンを含む大型中性アミノ酸（ＬＮＡＡ）に富んでいる。典型的には、カゼイン、乳清及び大豆のタンパク質源の約４０％が大型中性アミノ酸である。例えば、カゼインは約３８重量％のＬＮＡＡを含有し、乳清タンパク質濃縮物は約３９重量％のＬＮＡＡを含有し、大豆タンパク質単離物は約３４重量％のＬＮＡＡを含有する。典型的には、食事置換物は、１日当たりＬＮＡＡの約１ｇないし２５ｇ、好ましくは１日当たりＬＮＡＡの約１ｇないし２０ｇ、より好ましくは１日当たりＬＮＡＡの約４ｇないし２０ｇを送達するであろうタンパク質源とともに処方される。一例として、４．８ｇのＬＮＡＡを含むタンパク質を含有する１日に３回消費される食事置換物は、１日当たり１４．４ｇのＬＮＡＡを送達するであろう。
【００６９】
食事置換物は、処方を受容する人の１日栄養所要量を供給又は補充するよう企図された量でビタミン及びミネラルも好ましく含有する。当業者は、栄養処方にはしばしば、製品の保存期間の間、目標とするレベルに適合するのを確実にするための特定のビタミン及びミネラルの賞味期限があることを認識する。当業者は、患者が苦しむいずれかの潜在的な疾患又は疾病による、人々にとって有力な利益を特定の微量成分が有するかもしれないことも認識する。例えば、癌患者はβカロテン、ビタミンＥ、ビタミンＣ及びセレンなどの抗酸化剤から利益を得る。食品には好ましくは以下のビタミン及びミネラルが含まれるがそれらには限定されない。すなわち、カルシウム、リン、ナトリウム、塩化物、マグネシウム、マンガン、鉄、銅、亜鉛、セレン、ヨウ素、クロム、モリブデン、条件つきで必須栄養素であるｍ−イノシトール、カルニチン及びタウリン、及びビタミンＡ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｋ及びＢ複合体、及びそれらの混合物である。
【００７０】
条件付きで必須栄養素であるカルニチンは、メチオニン及びリジンから形成される、天然に存在するアミノ酸である。その主要な代謝上の役割は、ミトコンドリア膜を通過する長鎖脂肪酸を輸送し、したがって、代謝エネルギーのためのこれらの燃料物質の酸化を刺激することと関連する。カルニチン補充は、肝臓及び腎臓の疾患、並びに栄養不良によって複雑になる主要慢性疾患又は広範囲の損傷などの状態における重要な代謝上のツールである。必要に応じて、食事置換物は、カルニチンの４ｇ／日まで供給するのに十分なレベルでカルニチンにより補充されてもよい。
【００７１】
食事置換物は、繊維及び安定剤も含有してもよい。繊維及び／又は安定剤の適切な源には、キサンタンガム、グアーガム、アラビアガム、ゴートガム、カラヤガム、トラカカンスガム（ｇｕｍ  ｔｒａｃａｃａｎｔｈ）、アガー、フルセララン（ｆｕｒｃｅｌｌａｒａｎ）、ゲランガム（ｇｅｌｌａｎ  ｇｕｍ）、イナゴマメガム、ペクチン、低及び高メトキシペクチン、カラスムギ及び大麦グルカン、カラゲナン、サイリウム、ゼラチン、微結晶性セルロース、ＣＭＣ（カルボキシメチルセルロースナトリウム）、メチルセルロースヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ＤＡＴＥＭ（モノグリセリド及びジグリセリドの酒石酸ジアセチルエステル）、デキストラン、カラゲナン、ＦＯＳ（フラクトオリゴ糖）、及びそれらの混合物である。可溶性食物繊維の多くの商業源が入手可能である。例えば、アラビアゴム、加水分解されたカルボキシメチルセルロース、グアーガム、ペクチン並びに低及び高メトキシペクチンがＢｅｌＣａｍｐ，ＭａｒｙｌａｎｄのＴＩＣ  Ｇｕｍｓ社から入手可能である。カラスムギグルカン及び大麦グルカンは、Ｏｍａｈａ，ＮｅｂｒａｓｋａのＭｏｕｎｔａｉｎ  Ｌａｋｅ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ社から入手可能である。サイリウムは、Ｎｏｒｔｈ  Ｂｅｒｇｅｎ，Ｎｅｗ  ＪｅｒｓｅｙのＭｅｅｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手可能であるのに対し、カラゲナンは、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａのＦＭＣ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手可能である。
【００７２】
組み込まれた繊維は、カラスムギ穀皮繊維、エンドウ穀皮繊維、大豆穀皮繊維、大豆子葉繊維、テンサイ繊維、セルロース及びトウモロコシふすまを代表例が含む不溶性食物繊維であってもよい。不溶性食物繊維のための多くの源も入手可能である。例えば、トウモロコシふすまはＣｈｉｃａｇｏ，ＩｌｌｉｎｏｉｓのＱｕａｋｅｒ  Ｏａｔｓから入手可能であり、カラスムギ穀皮繊維はＣａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭｉｎｎｅｓｏｔａのＣａｎａｄｉａｎ  Ｈａｒｖｅｓｔから、エンドウ穀皮繊維はＷｉｎｎｉｐｅｇ，カナダのＷｏｏｄｓｔｏｎｅ  Ｆｏｏｄｓから、大豆穀皮繊維及びカラスムギ穀皮繊維はＬａＶａｌｅ，ＭａｒｙｌａｎｄのＴｈｅ  Ｆｉｂｒａｄ  Ｇｒｏｕｐから、大豆子葉繊維はＳｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭｉｓｓｏｕｒｉのＰｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓから、テンサイ繊維はＭｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭｉｎｎｅｓｏｔａのＤｅｌｔａ  Ｆｉｂｅｒ  Ｆｏｏｄｓから、セルロースはＳａｄｄｌｅ  Ｂｒｏｏｋ，Ｎｅｗ  ＪｅｒｓｅｙのＪａｍｅｓ  Ｒｉｖｅｒ社から入手可能である。
【００７３】
繊維の例のより詳細な論議及び食品へのそれらの組み込みは、Ｇａｒｌｅｂほかの発行した米国特許第５，０８５，８８３号に見出されるかもしれない。
【００７４】
処方で利用される繊維の量は変動できる。利用される繊維の特定のタイプは決定的ではない。人間の消費に適し、食品のマトリクス中で安定であるいずれかの繊維が利用されてもよい。
【００７５】
繊維に加え、食事置換物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）又はグルコオリゴ糖（ＧＯＳ）などのオリゴ糖も含有してもよい。オリゴ糖は、大腸に生息する嫌気性微生物によって短鎖脂肪酸へと迅速かつ広範囲に発酵される。これらのオリゴ糖はたいていのビフィズス菌種のための優先的なエネルギー源であるが、クロストリジウムペルフィンゲン（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｉｎｇｅｎ）、クロストリジウムディフィシレ、又は大腸菌などの潜在的に病原性の生命体によっては利用されない。
【００７６】
典型的には、ＦＯＳは食事置換物の０ｇ／回ないし５ｇ／回を、好ましくは１ｇ／回ないし５ｇ／回を、より好ましくは食事置換物の２ｇ／回ないし４ｇ／回を含む。
【００７７】
食事置換物は、その口に合いやすさを亢進するための香料も含有してもよい。人工甘味料は、香料を補完し塩味を隠すよう添加されてもよい。有用な人工甘味料には、サッカリン、ヌートラスイート（ｎｕｔｒａｓｗｅｅｔ）、スクラロース、アセスルファン（ａｃｅｓｕｌｆａｎｅ）−Ｋ（ａｃｅ−Ｋ）、等がある。
【００７８】
食事置換物は、当業者に周知の技術を使用して製造できる。さまざまな加工技術が存在する。典型的には、これらの技術には水及び以下のもの、すなわち炭水化物、タンパク質、脂質、安定剤、ビタミン及びミネラルのうちの１つ以上を含有してもよい１つ以上の溶液からのスラリーの形成が含まれる。ＨＭＢを、その他のミネラルの前に炭水化物スラリーへ典型的に添加する。スラリーを乳化し、均質化し、冷却する。さまざまな他の溶液は、加工前、加工後又は両者の時にスラリーへ添加されてもよい。次に、加工された処方を、滅菌し、粉末へと乾燥するために希釈し、即時供給ベースで利用し、又は濃縮された液体形態に包装してもよい。結果として生じる処方が即時供給液体又は濃縮液体であることを意味されるとき、滅菌前に水の適切な量を添加するであろう。
【００７９】
バー、クッキー、等の固体組成物も、当業者に公知の技術を利用して製造されてもよい。例えば、それらは、本分野で公知の冷却押し出し成形技術を使用して製造されてもよい。このような組成物を調製するために、典型的に粉末化した構成要素のすべてを互いに乾燥配合するであろう。このような構成要素には典型的に、タンパク質、ビタミン予備混合物、特定の炭水化物等が含まれる。次に、脂溶性構成要素を互いに配合し、前述の粉末化した予備混合物と混合する。その後、最終的にいずれの液体構成要素も組成物へと混合し、プラスチック様の組成物又は生地を形成する。
【００８０】
前述のプロセスは、冷却形成又は押し出し成形として公知の手段によって生じるさらなる物理的変化又は化学的変化がなく、後に成形できるプラスチック塊を供与するよう企図される。このプロセスにおいて、プラスチック塊は望ましい形状を付与するダイスを通じて比較的低圧で力を加えられる。次に、結果として生じる押し出し成形物を適切な位置で切断して、望ましい重量の製品を供与する。もし望めば、固体製品を次にコーティングして嗜好性を亢進し、分配のために包装する。典型的には、包装は末端消費者による使用（つまり、癌患者によって消費される、除脂肪筋の減少を予防するのを助ける、等）のための方向付けを提供するであろう。
【００８１】
本発明の固体組成物は、シリアル、クッキー、及びクラッカーを製造するための焼き上げ適用又は加熱された押し出し成形を通じても製造されてもよい。当業者は、望ましい最終製品を製造するのに利用可能な多くの製造プロセスのうちの１つを選択できるであろう。
【００８２】
前述のように、ＨＭＢは、ジュース、非炭酸飲料、炭酸飲料、電解質溶液、フレーバー水（以下、集約的に「飲料」）等へも組み込まれてもよい。ＨＭＢは、飲料の０．５ｇ／杯ないし２ｇ／杯を典型的に含むであろう。このような飲料を製造するための方法は、本分野で周知である。読者の注意は米国特許第６，１７６，９８０号及び第５，７９２，５０２号へ向けられ、各内容は参考文献によって本明細書に組み込まれる。例えば、ＨＭＢを含む成分はすべて、水の適切な量に溶解される。香料、着色料、ビタミン等が次に、必要に応じて添加される。次に、混合物を低温殺菌し、包装し、発送まで保存する。
【００８３】
消耗又は炎症が心臓循環器、末梢微小循環、中枢神経系、腫瘍学、免疫及び感染性の疾病状態などと関連するいずれかの疾病は、本発明の方法に従って治療できる。好ましくは、疾病は、癌、カヘキシー、年齢関連消耗、長期入院と関連した消耗、ＨＩＶ／エイズ、関節炎、外傷、肝疾患、クローン病又は他の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、腎不全及びＣＯＰＤ（慢性閉塞性肺疾患）からなる群から選択される。より好ましくは、疾病はカヘキシーである。
【００８４】
本発明は、別の実施態様において、哺乳類など、好ましくはヒトの患者の疾病と関連した消耗の治療のための方法を提供する。方法は、患者へ前述の組成物を投与することを含み、組成物は疾病と関連した消耗を治療するのに十分な量でＨＭＢを含み、組成物を患者へ投与すると、疾病と関連した消耗が治療される。
【００８５】
ある患者における疾病と関連した消耗を治療するのに十分なＨＭＢの量は、本分野で周知の方法に従って決定できる。患者の疾病と関連した消耗を治療するとき、望ましくは、ＨＭＢを含む組成物は、患者の除脂肪体重が患者の体脂肪量の減少を付随せずに増加するであろう量、様式、時間で、疾病と関連した消耗に苦しむ患者へ投与される。ヒトの癌カヘキシーと関連した消耗を治療する脈絡内にある一例は、組成物が最短２週間で１日に約２回経口投与されるとき、投与量は少なくとも２ｇＨＭＢ／日を提供するのに十分である。
【００８６】
本発明は、別の実施態様において、哺乳類など、好ましくはヒトの患者において腫瘍成長速度を低下させるための方法を提供する。方法は、患者へ前述の組成物を投与することを含み、組成物は腫瘍成長速度を低下するのに十分な量でＨＭＢを含み、組成物を患者へ投与すると、腫瘍成長速度が低下する。
【００８７】
ある患者において腫瘍成長を減退させるのに十分なＨＭＢの量は、本分野で周知の方法に従って決定できる。患者における腫瘍成長を治療するとき、望ましくは、ＨＭＢを含む組成物は、患者の腫瘍成長速度が低下するであろう量、様式、時間において、腫瘍成長に苦しむ患者へ投与される。成人における腫瘍成長を治療する脈絡内での一例は、組成物が最短２週間で１日に約２回経口投与されるとき、投与量は少なくとも約２ｇＨＭＢ／日を提供するのに十分である。
【００８８】
本発明は、別の実施態様において、タンパク質キナーゼＣの発現及び／又は活性を下方制御するための方法を提供する。実施例ＩないしＩＶは、ＥＰＡ及びＨＭＢの両者がタンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）のＰＩＦにより誘発される活性化及び、その後のＩκＢαの分解及び核因子−κＢ（ＮＦ−κＢ）の核内蓄積を減退させたことを示す。
【００８９】
本発明は、別の実施態様において、核因子−κＢの発現及び／又は活性を下方制御するための方法を提供する。実施例ＩないしＩＶは、ＥＰＡ及びＨＭＢの両者がタンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）のＰＩＦにより誘発される活性化及び、その後のＩκＢαの分解及び核因子−κＢ（ＮＦ−κＢ）の核内蓄積を減退させたことを示す。
【００９０】
本発明は、別の実施態様において、核因子κＢの発現及び／又は活性を下方制御するための方法を提供する。実施例１ないし４は、ＥＰＡ及びＨＭＢの両者が、タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）のＰＩＦにより誘発される活性化及びその後のＩκＢαの分解及び核因子−κＢ（ＮＦ−κＢ）の核内蓄積を減退させたことを示す。
【００９１】
本発明は、別の実施態様において、ユビキチン連結酵素の発現及び／又は活性を下方制御するための方法を提供する。実施例１ないし４は、ユビキチン連結酵素の発現及び／又は活性の下方制御にはＥ２１４ｋユビキチン連結酵素の発現における低下が伴ったことを示す。ＥＰＡ及びＨＭＢの組み合わせはいずれかの治療単独と少なくとも同じ程度効果的であったか又はいずれかの治療単独よりも効果的であった。これらの結果は、ＥＰＡ及びＨＭＢの両者が、ユビキチン−プロテアソームタンパク質分解経路の重要な制御構成要素の発現の亢進の下方制御を通じてタンパク質分解を減弱させることによって、筋重量を保存する。
【００９２】
本発明は、別の実施態様において、２６Ｓプロテアソームの構成要素の発現及び／又は活性を下方制御するための方法を提供する。実施例１ないし４は、「キモトリプシン様」酵素活性によって決定されるプロテアソーム活性がＨＭＢによって減弱したことを示す。２０Ｓα−サブユニット又はβ−サブユニットのタンパク質発現は、１９Ｓプロテアソーム制御サブユニットのＡＴＰａｓｅサブユニットであるＭＳＳ１及びｐ４２と同様、少なくとも５０％まで低下した。
【実施例１】
【００９３】
癌カヘキシーを有する動物における体重低下の予防及びタンパク質分解の減退。
【００９４】
本研究は、ＭＡＣ１６腫瘍によって誘発される体重低下に関して、ＥＰＡとの比較で又は組み合わせでのＨＭＢの効果及び関与したメカニズムを査定する。ＭＡＣ１６腫瘍により誘発される体重低下はＰＩＦにより主として誘発される。
【００９５】
純系雄ＮＭＲＩマウス（平均体重２５ｇ）を我々独自の交配コロニーから得、ＭＡＣ１６腫瘍の断片を脇腹へ、トロカールによって皮下移植し、Ｂｉｂｂｙ，Ｍ．Ｃ．ほかによる、「レシピエント動物においてカヘキシーを生じるマウス結腸の移植可能な腺癌の特徴づけ」、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．，  ７８：  ５３９−５４６，  １９８７に記載のように、体重低下の確立されたドナー動物から選択した。移植された動物にラット及びマウス飼育食（Ｓｐｅｃｉａｌ  Ｄｉｅｔ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  Ｗｉｔｈａｍ，英国）及び水を自由摂取で給餌し、体重低下は腫瘍移植１０日ないし１２日後に明白であった。図の凡例に記載されるように、胃管栄養法によって経口投与される（オリーブ油中の）ＥＰＡ、（ＰＢＳ中の）ＨＭＢ又はこれらの組み合わせのいずれかを毎日受容するよう、一方、コントロール動物はオリーブ油又はＰＢＳのいずれかを受容するよう、体重低下の発達の直前の動物を無作為に分けた。ＥＰＡ（遊離酸として９８％）を米国ＰＡのＢｉｏｍｏｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社から購入した。（カルシウム塩としての）ＨＭＢを米国Ｃｏｌｕｍｂｕｓ，ＯｈｉｏのＡｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから得た。すべての群は最低６匹のマウスを含有した。腫瘍の体積、体重並びに餌及び水の摂取量を毎日モニターした。体重低下が２５％に達したとき、動物を頸部脱臼により屠殺し、すべての研究を実験動物の取り扱い及び使用のためのＵＫＣＣＲ指針に従って実施した。ヒラメ筋を無処置の腱とともに迅速に摘出し、タンパク質分解の決定前に等張性の氷冷塩類溶液中に維持した。
【００９６】
摘出されたヒラメ筋を即時、腱を介してアルミニウムワイヤ支持体へほぼ静止長で固定して筋の短縮を予防し、５ｍＭグルコース及び０．５ｍＭシクロヘキシミドを含有する、酸素化された（９５％酸素：５％二酸化炭素）クレブス−ヘンスレイ（Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ）炭酸水素緩衝液（ｐＨ７．４）の３ｍｌ中で４５分間予備インキュベートした。Ｗａａｌｋｅｓ，Ｔ．Ｐ．ほか、血漿及び組織におけるチロシンの概算のための蛍光測定方法、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．，  ５０：  ７３３−７３６，  １９５７に記載のように、２時間にわたるチロシンの放出によってタンパク質分解を決定した。
【００９７】
機能的プロテアソーム活性を、プロテアソームのβサブユニットの有力なタンパク質分解活性である「キモトリプシン様」酵素活性を、Ｏｒｉｎｏ，Ｅほかの方法（ヒトＨＬ−６０細胞におけるユビキチン化したタンパク質を分解する２６Ｓ複合体を形成するためのプロテアソームの複数のタンパク質構成要素とのＡＴＰ依存性可逆的会合、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  ２８４：  ２０６−２１０，  １９９１）に従って測定することによって決定した。筋を氷冷ＰＢＳですすぎ、細かく刻み、２０ｍＭトリスＨＣｌ、ｐＨ７．５、２ｍＭＡＴＰ、５ｍＭＭｇＣｌ２及び１ｍＭＤＴＴ中で超音波処理した。超音波処理したものを次に、１８，０００ｇで４℃において１０分間遠心分離し、上清を使用して、蛍光源基質であるスクシニル−ＬＬＶＹ−アミノメチルクマリン（ＡＭＣ）からのＡＭＣの放出によって「キモトリプシン様」酵素活性を決定した。プロテアソーム特異的阻害剤であるラクタシスチン（１０μＭ）の有無の下で活性を測定した。ラクタシスチン抑制可能活性のみをプロテアソーム特異的であると考慮した。
【００９８】
ウェスタンブロッティングのため、前述のアッセイから得られたヒラメ筋サイトゾルタンパク質（２μｇないし５μｇ）の試料を１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離し、ＰＢＳ中の５％マーヴェルでブロッキングしておいた０．４５μｍのニトロセルロース膜（Ｈｙｂｏｎｄ（Ｒ）、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，  Ｂｕｃｋｓ，英国）へ転写した。ＭＳＳ１及びｐ４２についての一次抗体を１：５０００の希釈で使用し、２０Ｓプロテアソームαサブユニットについては１：１５００の、βサブユニットについては１：１０００の希釈で使用したのに対し、Ｅ２１４ｋについての抗体を１：５００の希釈で使用した。二次抗体を１：２０００の希釈で使用した。２０Ｓプロテアソームサブユニットα１、２、３、５、６及び７（クローンＭＣＰ２３１）、２０Ｓプロテアソームサブユニットβ３（ＨＣ１０）、１９Ｓ制御因子ＡＴＰａｓｅサブユニットＲｐｔ１（Ｓ７，  Ｍｓｓ１；  クローンＭＳＳ１−１０４）及び１９Ｓ制御因子ＡＴＰａｓｅサブユニットＲｐｔ４（Ｓ１０６，  ｐ４２；  クローンｐ４２−２３）に対するマウスモノクローナル抗体をＡｆｆｉｎｉｔｉ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，  Ｅｘｅｔｅｒ，英国から購入した。ユビキチン連結酵素Ｅ２に対するウサギポリクローナル抗血清（抗ＵＢＣ２抗体）はＳｉｍｏｎ  Ｗｉｎｇ博士、ＭｃＧｉｌｌ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，Ｑｕｅｂｅｃ，カナダから送られたものであった。ペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ウサギ及びウサギ抗マウス二次抗体は、Ｄａｋｏ社（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、英国）製であった。インキュベーションを室温で２時間実施し、化学発光（ＥＣＬ；  Ａｍｅｒｓｈａｍ）により現像した。
【００９９】
ＭＡＣ１６腫瘍を有するマウスにおける体重低下に及ぼすＨＭＢの投与量−反応関係を図２に示す。０．１２５ｇ／ｋｇよりも多量のＨＭＢの投与量は、体重低下における有意な縮小を生じた（図２Ａ）。コントロール群との差異を、ａ、ｐ＜０．０５；  ｂ、ｐ＜０．０１及びｃ、ｐ＜０．００５として示す。体重低下の減退には、摂餌量及び摂水量における変化は伴わなかった。０．２５ｇ／ｋｇの投与レベルをすべてのその後の実験のために選択した。ＭＡＣ１６悪液性腫瘍を有するマウスにおける体重低下に及ぼすＨＭＢ、ＥＰＡ及びＨＭＢとＥＰＡとの組み合わせの効果を図３に示す。コントロール群との差異を、ａ、ｐ＜０．０５；  ｂ、ｐ＜０．０１又はｃ、ｐ＜０．００５として示す。ＨＭＢとの相互作用を研究するために、ＥＰＡの最適下の投与量を選択した。実験はすべて、ヒラメ筋重量における有意な増加（図４Ａ）、及びチロシン放出における有意な減少（図４Ｂ）を生じ、これらは総タンパク質分解における減少を示す。ＰＢＳコントロール群との差異を、ａ、ｐ＜０．０５；  ｂ、ｐ＜０．０１及びｃ、ｐ＜０．００５として示す。選択された投与量において、ＨＭＢはＥＰＡと同程度に効果的であった。
【０１００】
プロテアソーム発現は、ＭＡＣ１６腫瘍を有するマウスの腓腹筋で亢進するのが示され、この遺伝子発現の亢進はＥＰＡによって減退されることが示された。図５における結果は、「キモトリプシン様」酵素活性によって決定される機能的プロテアソーム活性が、選択された投与量でＥＰＡと同一の程度までＨＭＢにより減退され、ＨＭＢとＥＰＡとの組み合わせは活性において更なる減退を生じなかったことを示す。コントロールとの差異をｃ、ｐ＜０．００５として示す。プロテアソームサブユニットのタンパク質発現を、超音波処理した筋組織由来の上清のウェスタンブロッティングにより分析した。２０Ｓプロテアソームの構造的ユニットであるプロテアソームαサブユニットの発現をＨＭＢ及びＥＰＡの両者によって減退させ、組み合わせについてのバンド２の更なる減少のいくらかの徴候があった（図６Ａ）。コントロールとの差異をｃ、ｐ＜０．００１として示す一方、ＨＭＢとの差異をｅ、ｐ＜０．０１として示す。２０Ｓプロテアソームの触媒作用サブユニットであるプロテアソームβサブユニットの発現もＨＭＢ及びＥＰＡによって減退したが、組み合わせは、いずれかの因子単独よりも効果的であった（図６Ｂ）。コントロールとの差異をｃ、ｐ＜０．００５として示す。
【０１０１】
１９Ｓプロテアソーム制御複合体のＡＴＰａｓｅサブユニットであるＭＳＳ１の発現を図７Ａに示す。ＨＭＢ及びＥＰＡの両者はＭＳＳ１発現を減退させたが、組み合わせは更なる減少を生じるようではなかった。同様の結果を、２０ＳプロテアソームのＡＴＰ依存性会合を１９Ｓ制御因子で促進して、２６Ｓプロテアソームを形成する、１９Ｓ制御因子の別のＡＴＰａｓｅサブユニットであるｐ４２で得た（図７Ｂ）。コントロールとの差異をｃ、ｐ＜０．００５として示す。これも又、ＨＭＢ及びＥＰＡの両者は等しく効果的であるように見えたが、組み合わせはｐ４２発現をさらに低下させるようには見えなかった。ユビキチン連結酵素Ｅ２１４ｋの発現もＨＭＢ及びＥＰＡの両者によって低下したが、組み合わせは発現における更なる低下を生じた（図８）。コントロールとの差異をｂ、ｐ＜０．０１及びｃ、ｐ＜０．００１として示す一方、ＨＭＢ単独との差異をｄ、ｐ＜０．０５及びｆ、ｐ＜０．００１として示す。これらの結果は、筋重量の減少、タンパク質の分解及びユビキチン−プロテアソーム分解経路の下方制御を減退させる上で、ＨＭＢがＥＰＡと同程度に効果的であることを確認し、この機構は、ＭＡＣ１６腫瘍を有する悪液性マウスにおける筋重量の保存を生じるようである。
【０１０２】
本研究は、ＨＭＢがＭＡＣ１６腫瘍を有するマウスにおけるカヘキシーの発達又は不随意的体重低下を減退させる上で効果的であることを示し、ユビキチン−プロテアソーム経路の発現の亢進を下方制御することによって、骨格筋におけるタンパク質分解の低下を生じた。したがって、２０Ｓプロテアソームα及びβサブユニットのタンパク質発現を、１９Ｓ制御因子の２つのサブユニットであるＭＳＳ１及びｐ４２、及びＥ２１４ｋの発現及びプロテアソームのタンパク質分解活性と同様に低下させる上で、ＨＭＢはＥＰＡと同様に効果的であった。
【実施例２】
【０１０３】
動物における腫瘍成長の減退。
【０１０４】
前述の実施例１において記載される動物研究は、ＭＡＣ１６悪液性腫瘍を有するマウスにおける腫瘍成長速度に及ぼすＨＭＢの効果も評価した。本実験を実施例１に記載されるように実施した。
【０１０５】
ＭＡＣ１６腫瘍を有するマウスにおける腫瘍成長速度に及ぼすＨＭＢ単独の投与量−反応関係を図２Ｂに示す。コントロール群との差異を、ａ、ｐ＜０．０５；  ｂ、ｐ＜０．０１及びｃ、ｐ＜０．００５として示す。０．１２５ｇ／ｋｇを超えるＨＭＢの投与量は、腫瘍成長速度における有意な低下を生じた。腫瘍成長速度の減退には、摂餌量及び摂水量における変化は伴わなかった。
【実施例３】
【０１０６】
ネズミ筋管におけるタンパク質分解の減退。
【０１０７】
本研究は、ユビキチン−プロテアソームタンパク質分解経路の発現の亢進の減退のメカニズムを決定するため、ネズミ筋管におけるＰＩＦ誘発性タンパク質分解及びシグナル伝達経路に及ぼすＨＭＢの効果を検討する。
【０１０８】
Ｃ２Ｃ１２筋管を１０％ＦＣＳ、グルタミン及び１％ペニシリン−ストレプトマイシンで補充したＤＭＥＭ中で、３７℃で空気中にある１０％ＣＯ２の大気下で慣例通り経代培養した。培地を２日ごとに交換しながら、コンフルエント培養物を２％ＨＳを含有するＤＭＥＭ中で分化させることによって、筋管を形成した。
【０１０９】
体重低下が２０％ないし２５％のマウスから摘出した固体ＭＡＣ１６腫瘍（Ｔｏｄｏｒｏｖ，Ｐ．ほか、「癌悪液性因子の特徴づけ」、Ｎａｔｕｒｅ、３７９：  ７３９−７４２，  １９９６）からＰＩＦを精製した。０．５ｍＭフッ化フェニルメチルスルホニル、０．５ｍＭＥＧＴＡ及び１ｍＭジチオスレイトールを含有する１０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．０中に５ｍｌ／ｇ腫瘍の濃度で腫瘍を均質化した。固体硫酸アンモニウムを４０％（ｗ／ｖ）まで添加し、硫酸アンモニウムの除去後の上清を、Ｔｏｄｏｒｏｖ，Ｐほか、「腫瘍生成物による筋タンパク質分解および体重低下の誘発」、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，  ５６：  １２５６−１２６１，  １９９６に記載のように固体マトリクスへ連結される抗ＰＩＦモノクローナル抗体を使用するアフィニティクロマトグラフィーへ供した。免疫原性画分を濃縮し、更なる研究に使用した。
【０１１０】
６穴のマルチ皿にある筋管をＬ−［２，６−３Ｈ］フェニルアラニン（０．６７ｍＣｉ／ｍｍｏｌｅ）により、２％ＨＳを含有する２ｍｌのＤＭＥＭ中で２４時間標識した。次にこれらをＰＢＳ中で３回洗浄した後、フェノール赤を含まないＤＭＥＭ中で、更なる放射性活性が上清に現れなくなるまで、３７℃で２時間インキュベートした。次に、これらの筋管をＰＩＦの存在下で、フェノール赤を含まない新鮮なＤＭＥＭ中でＥＰＡ又はＨＭＢの有無の下で２４時間さらにインキュベートして、放射性活性の再組み込みを予防した。培地中へ放出される放射性活性の量を、総タンパク質分解を決定するためにＰＩＦへ暴露されないコントロール培養物の％として表した。
【０１１１】
アラキドン酸放出の測定について、２％ＨＳの入った２ｍｌのＤＭＥＭを含有する６穴のマルチ皿にある筋管を、（[３Ｈ]アラキドン酸塩／ｍｌの１μＣｉを含有する）１０μＭのアラキドン酸で２４時間標識した（Ｓｍｉｔｈ，Ｈ．ほか、ネズミＣ２Ｃ１２筋芽細胞におけるタンパク質合成／分解に及ぼす癌悪液性因子の効果：  エイコサペンタエン酸による修飾、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，  ５９；  ５５０７−５５１３，  １９９９）。次に、細胞をＰＢＳで広範囲に洗浄して、組み込まれていない［３Ｈ］アラキドン酸塩の痕跡を除去し、ＥＰＡ又はＨＭＢのいずれかをＰＩＦの２時間前に添加した。さらに２４時間後、培地の１ｍｌを回収して、放出された放射性活性を決定した。
【０１１２】
プロテアソームのβサブユニットの機能的活性を、Ｏｒｉｎｏ，Ｅ．ほか（ヒトＨＬ−６０細胞におけるユビキチン化したタンパク質を分解する２６Ｓ複合体を形成するための、プロテアソームの多重タンパク質構成要素とのＡＴＰ依存性可逆的会合、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，  ２８４：  ２０６−２１０，  １９９１）の方法に従って蛍光測定的に得られた「キモトリプシン様」酵素活性として決定した。筋管をＰＩＦへ２４時間、ＥＰＡの有無の下で暴露したか又はＰＩＦの２時間前にＨＭＢを添加し、特異的プロテアソーム阻害剤であるラクタシスチン（１０μＭ）（Ｆｅｎｔｅａｎｙ，Ｇ．ほか、ラクタシスチン、プロテアソーム機能及び細胞の運命、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，  ２７３：  ８５４５−８５４８，  １９９８）の有無の下で、スクシニル−ＬＬＶＹ−アミノメチルクマリン（ＡＭＣ）（０．１ｍＭ）からのＡＭＣの放出によって酵素活性を上清画分中で決定した（Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ，Ａ．Ｓ．ほか、タンパク質分解誘発因子（ＰＩＦ）によるネズミ筋管におけるユビキチン−プロテアソーム経路の発現の亢進は、転写因子ＮＦ−κＢの活性化と関係する、Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，  ８９：  １１１６−１１２２，  ２００３）。ラクタシスチン抑制可能活性のみをプロテアソーム特異的であると考慮した。ウシ血清アルブミンを標準物質として使用するブラッドフォードアッセイ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社、Ｄｏｒｓｅｔ、英国）を使用して決定される試料のタンパク質濃度について、活性を調整した。
【０１１３】
ウェスタンブロット分析について、前述のアッセイ用に得られたサイトゾルタンパク質（２ないし５μｇ）を１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥ上で分離し、ＰＢＳ中の５％マーベルにより４℃で一晩ブロッキングしておいた０．４５μｍニトロセルロース膜へ転写した。一次抗体を１：１００（抗アクチン及び抗ＰＫＣα）、１：５００（抗ＥＲＫ１及び抗ＥＲＫ２）、１：１０００（抗２０Ｓプロテアソームβサブユニット及び抗Ｉ−κＢα）、１：１５００（抗２０Ｓプロテアソームαサブユニット）又は１：５０００（抗ｐ４２）の希釈で使用したのに対し、二次抗体を１：２０００の希釈で使用した。インキュベーションを室温で２時間実施し、ＥＣＬにより現像した。負荷をアクチン濃度により一定にした。
【０１１４】
ＤＮＡ結合タンパク質を筋管から、低張溶解後の核の高塩抽出を利用するＡｎｄｒｅｗｓ，Ｎ．Ｃ．ほかの方法（哺乳類細胞の限定数からＤＮＡ結合タンパク質を抽出するための迅速な微量調製技術、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，  １９：  ２４９９，  １９９１）によって抽出した。ＥＭＳＡ（電気泳動度シフトアッセイ）結合アッセイを製造者の説明書に従って実施した。
【０１１５】
ＭＡＣ１６腫瘍を有するマウスにおけるユビキチン−プロテアソームタンパク質分解経路のタンパク質分解及び活性化は、ＰＩＦにより仲介されていると考えられるため、タンパク質分解に及ぼすＨＭＢの効果に関する機械論的研究を、ＰＩＦで処理したネズミ筋管において実施した。ＰＩＦ誘発性総タンパク質分解は、４ｎＭで最大効果のある、Ｇｏｍｅｓ−Ｍａｒｃｏｎｄｅｓほか（タンパク質分解誘発因子により誘発される筋タンパク質異化作用のメカニズムを研究するための試験管内モデルシステムの開発、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，  ８６：  １６２８−１６３３，  ２００２）によりすでに報告されている典型的なベル型投与量−反応曲線を有した。ＥＰＡの効果は、５０μＭで効果のあることがすでに示されており（Ｓｍｉｔｈ，Ｈ．Ｊ．ほか、ネズミＣ２Ｃ１２筋芽細胞に及ぼすタンパク質合成／分解に及ぼす癌悪液性因子の効果：  エイコサペンタエン酸による修飾、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５９：  ５５０７−５５１３，  １９９９；  Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ，Ａ．Ｓ．ほか、ユビキチン−プロテアソーム経路の発現の亢進を通じての１５（Ｓ）−ヒドロキシエイコサテトラ塩酸による筋管におけるタンパク質異化作用の誘発、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，  ８９：  ７３７−７４５，  ２００３；  Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ，Ａ．Ｓ．ほか、タンパク質分解誘発因子（ＰＩＦ）によるネズミ筋管におけるユビキチン−プロテアソームの発現の亢進は転写因子ＮＦ−κＢの活性化と関係する、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８９：  １１１６−１１２２，  ２００３）、図９Ａにあるデータは、５０μＭの濃度でＨＭＢ及びＥＰＡの両者がＰＩＦ誘発性タンパク質分解を減退させる上で等しく効果的であったことを示す。低い２５μＭＨＭＢではいくらか減退もあったが、ＰＩＦの高濃度ではなかった。ＰＩＦのない場合のコントロールとの差異を、ａ、ｐ＜０．００５として示すのに対し、（ＨＭＶ又はＥＰＡの添加のある群についての）ＰＩＦのある場合のコントロールとの差異をｂ、ｐ＜０．０１及びｃ、ｐ＜０．００５として示す。
【０１１６】
ＰＩＦ誘発性タンパク質分解は、Ｌｏｒｉｔｅ，Ｍ．Ｊ．，  Ｓｍｉｔｈ，Ｈ．Ｊ．，  Ａｒｎｏｌｄ，Ｊ．Ａ．，  Ｍｏｒｒｉｓ，Ａ．，  Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｍ．Ｇ．及びＴｉｓｄａｌｅ，Ｍ．Ｊ．（タンパク質分解誘発因子（ＰＩＦ）による生体内における骨格筋及び試験管内におけるネズミ筋芽細胞におけるＡＴＰ−ユビキチン依存性タンパク質分解の活性化、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，  ８５：  ２９７-３０２，  ２００１）及びＧｏｍｅｓ−Ｍａｒｃｏｎｄｅｓ，Ｍ．Ｃ．Ｃ．，  Ｓｍｉｔｈ，Ｈ．Ｊ．，  Ｃｏｏｐｅｒ，Ｊ．Ｃ．及びＴｉｓｄａｌｅ，Ｍ．Ｊ．（タンパク質誘発因子により誘発される筋タンパク質異化作用のメカニズムを研究するための試験管内モデルシステムの開発、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８６：  １６２８−１６３３，  ２００２）によって、ユビキチン−プロテアソームタンパク質分解経路の制御構成要素の発現の亢進によることがすでに示されている。
【０１１７】
この経路の機能的活性は、プロテアソームのβサブユニットの有力なタンパク質分解活性である「キモトリプシン様」酵素活性によって測定される。ＰＩＦは、４．２ｎＭで最大である「キモトリプシン様」酵素活性における亢進を誘発した。ＰＩＦの効果は、５０μＭＥＰＡ及び２５μＭ及び５０μＭの両者のＨＭＢによって完全に減退した。（図９Ｂ、コントロールとの差異をａ、ｐ＜０．００１として示すのに対し、ＥＰＡ又はＨＭＢの存在下での差異をｂ、ｐ＜０．００１として示す。）同様の効果を、プロテアソーム２０Ｓαサブユニット、βサブユニット、及び２６Ｓプロテアソームを形成するよう２０Ｓプロテアソームと１９Ｓ制御因子とのＡＴＰ依存性会合を促進する１９Ｓ制御因子のＡＴＰａｓｅサブユニットであるｐ４２の発現及びに関して観察した（図１０）。すべての場合において、４．２ｎＭ及び１０ｎＭでＰＩＦによって発現が亢進し、このことは５０μＭでＥＰＡ及びＨＭＢによって減退したが、２５μＭでは減退しなかった。これらの結果は、ユビキチン−プロテアソーム経路のＰＩＦ誘発に及ぼす効果を通じてＨＭＢがタンパク質分解を減退させることを確認する。
【実施例４】
【０１１８】
炎症及びタンパク質分解におけるシグナル伝達の仲介物質の活性に及ぼす効果。
【０１１９】
前述の実施例３において記載される試験管内研究は、炎症の経路における重要な仲介物質である分子に及ぼすＨＭＢの効果も査定した。本実験を実施例３に記載されるように実施した。
【０１２０】
ＰＫＣの活性化はＭＡＰＫシグナル伝達経路の細胞外シグナルにより制御されるキナーゼ（ＥＲＫ）カスケードを活性化することが示されてきた（Ｔｏｋｅｒ，Ａ．タンパク質キナーゼＣを通じてのシグナル伝達、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．，  ３：  １１３４−１１４７，  １９９８；  Ｗｏｌｆ，Ｉ及びＳｅｇｅｒ，Ｒ、有糸分裂により活性化されるタンパク質キナーゼシグナル伝達カスケード：ベンチからベッドサイドまで、ＩＭＡＪ．，  ４：  ６４１−６４７）。活性化されるＥＲＫ、例えばＥＲＫ１（又はｐ４４  ＭＡＰＫ）及びＥＲＫ２（又はｐ４２  ＭＡＰＫ）は炎症におけるアラキドン酸放出を包含する経路における律速酵素であるサイトゾルホスホリパーゼＡ２をリン酸化した後に活性化できる。さらに、ＰＩＦは、ｐ４２／４４ＭＡＰＫのリン酸化を誘発することが示されてきたのに対し、総ＭＡＰＫは変化しないままであり、ＰＩＦ誘発性プロテアソーム発現に関与することが示されてきた（Ｓｍｉｔｈ，Ｈ．Ｊ．ほか、ネズミ筋管におけるタンパク質分解誘発因子により誘発されるプロテアソーム発現に関与するシグナル伝達経路、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，  ８９：  １７８３−１７８８，  ２００３）。この過程に及ぼすＥＰＡ及びＨＭＢの効果を図１２に示す。ＰＩＦは、４．２ｎＭで最大であるｐ４２／４４のリン酸化の亢進を誘発し、この効果は５０μＭでのＥＰＡ及びＨＭＢの両者によって完全に減退するが、２５μＭでのＨＭＢではそうならなかった。ＥＲＫ１／２リン酸化を減退させるＨＭＢの能力は、ＨＭＢによるＰＩＦ誘発性プロテアソーム発現の阻害に重要でありうる。
【０１２１】
ＰＫＣの突然変異をこの酵素の阻害剤と同様に使用する実験は、ＰＫＣがＰＩＦによる細胞内シグナル伝達の中心的な仲介物質を形成することを示す。ＰＫＣは、ＮＦ−κＢの核内蓄積及び遺伝子転写の亢進にいたるＩ−κＢαのリン酸化（及び分解）に関与していそうである。ＰＩＦは、細胞質から形質膜へのＰＫＣαの転位を刺激し（図１１）、タンパク質分解によるのと同様の、４．２ｎＭＰＩＦでの最大効果による活性化を生じる（図９）。この過程は、５０μＭでＥＰＡ及びＨＭＢの両者によって効果的に減退したのに対し、ＨＭＢは２５μＭでほとんど効果的ではなかった（図１１）。このことは、ＰＫＣのＰＩＦ誘発性刺激が、ＰＫＣの阻害を通じてＨＭＢにより減退されることを示唆する。
【０１２２】
前述のように、ＰＩＦは、Ｉ−κＢαの分解を誘発し、ＮＦ−κＢの核内蓄積を刺激し、この過程は５０μＭＥＰＡによって減退することが示されてきた（Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ，Ａ．Ｓ．ほか、タンパク質分解誘発因子（ＰＩＦ）によるネズミ筋管におけるユビキチン−プロテアソームの発現の亢進は転写因子ＮＦ−κＢの活性化と関係する、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８９：  １１１６−１１２２，  ２００３）。図１３Ａにおける結果は、５０μＭでのＨＭＢがネズミ筋管におけるＰＩＦの存在下でのＩ−κＢα分解を効果的に減退させ、ＮＦ−κＢの核内蓄積を予防することを示す（図１３Ｃ）。０ｎＭのＰＩＦとの差異をｂ、ｐ＜０．０１及びｃ、ｐ＜０．００１として示す。ＨＭＢを２５μＭの濃度で使用したとき、ＮＦ−κＢのＤＮＡへの結合の部分的な阻害のみを観察した（図１３Ｂ）。０ｎＭのＰＩＦとの差異はｂ＝ｐ＜０．０１及びｃ＝ｐ＜０．００１である。５０μＭでのＰＩＦ単独に対して処理した５０μＭのＨＭＢとＰＩＦとの差異はｅ＝ｐ＜０．０１及びｆ＝ｐ＜０．００１であった。これらの結果は、遺伝子発現の同時活性化による核へのＮＦ−κＢの移動を予防する上で、ＨＭＢの全体的な効果がＥＰＡの全体的な効果に匹敵することを示唆する。
【０１２３】
したがって、ＨＭＢは癌カヘキシーにおけるサイトカイン誘発性炎症及び筋消耗の治療において効果的な因子であるように見える。ＨＭＢは、ＰＫＣ活性の阻害によりＨＭＢの効果を発揮するように見え、その結果、細胞質ＩκＢ／ＮＦ−κＢ複合体の安定化が生じる。これらの分子は、炎症の経路における重要な仲介物質であるため、ＨＭＶは抗炎症性化合物であるようである。
【実施例５】
【０１２４】
不随意的体重低下を予防するための栄養製品の組成。
【０１２５】
この例における栄養製品を製造するための材料の特異的なリストを表１に表す。もちろん、特異的な成分及び量におけるさまざまな変化は、本発明の範囲から逸脱せずになされてもよい。
【０１２６】
【表１】
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2007530542.tif 000004
【０１２７】
本発明の液状栄養製品を、互いに配合し、精製脱臭いわし油と組み合わせ、熱処理し、標準化し、包装し、滅菌した３つのスラリーを調製することによって製造した。表１の材料のリストを使用して液状栄養製品の４５４ｋｇ（１，０００ポンド）を製造するための過程を以下に記載する。
【０１２８】
炭水化物／ミネラルのスラリーを、水約６２．６ｋｇを約７１℃ないし７７℃の範囲の温度へ撹拌しながら加熱することによって調製する。ＨＭＢを水へ添加し、できた溶液を少なくとも５分間撹拌することによって溶解する。クエン酸カリウム及び超微量／微量ミネラル予備混合物の必要な量を水へ添加し、できた溶液を少なくとも１０分間撹拌することによって溶解する。次に、以下のミネラルを列挙されている順に激しく撹拌しながら添加する。すなわち、塩化マグネシウム、塩化カリウム、クエン酸ナトリウム、ヨウ化カリウム、リン酸マグネシウム及びリン酸三カルシウムである。スラリーを完全に溶解するか又は分散するまで中程度の撹拌の下で混合させる。次に、トウモロコシシロップ、ショ糖及びマルトデキストリンをスラリーへ撹拌しながら添加する。ＦＯＳの必要な量を添加して混合させる。完全になった炭水化物／ミネラルスラリーを約６０℃ないし６６℃の範囲の温度で、その他のスラリーと配合するまで８時間以内で激しく撹拌しながら保持する。
【０１２９】
中鎖トリグリセリド（精製したやし油）、アブラナ油及び大豆油を組み合わせて、撹拌しながら約３２℃ないし４３℃の範囲の温度まで加熱することによって油性スラリーを調製する。ビタミンＤＥＫ予備混合物を添加し、完全に分散するまで混合させる。以下の成分の必要な量を添加する。すなわち、大豆レシチン、ビタミンＡ、パルミチン酸アスコルビル、及びビタミンＥである。カラゲナンを添加し、完全に分散されるまで混合させる。完全になった油性スラリーを約３２℃ないし４３℃の範囲の温度で、その他のスラリーと配合するまで８時間以内で中程度の撹拌の下で保持する。
【０１３０】
タンパク質のスラリーを、まず水約１９６．７８ｋｇを約６０℃ないし６３℃の範囲の温度へ撹拌しながら加熱することによって調製する。カゼインカルシウム及びカゼインナトリウム及び乳タンパク質単離物をスラリーへ、混合装置を使用して配合する。完全になったタンパク質スラリーを約５４℃ないし６０℃の範囲の温度で、その他のスラリーと配合する前２時間以内で激しい撹拌の下で保持する。
【０１３１】
油性及びタンパク質スラリーを撹拌しながら互いに配合し、結果としてできた配合されたスラリーを約５４℃ないし６６℃の範囲にある温度に維持する。少なくとも５分間待機した後、炭水化物／ミネラルスラリーを先行段階から配合したスラリーへ撹拌しながら添加し、結果として生じる配合されたスラリーを約５４℃ないし６６℃の範囲にある温度に維持する。精製脱臭いわし油をスラリーへ撹拌しながら添加する。（製造の最も好ましい方法において、いわし油は、配合物が定常速度で導管を通過するにつれ製品へとゆっくり測量されるであろう。）好ましくは少なくとも５分後に、配合されたスラリーのｐＨを決定する。もし、配合されたスラリーのｐＨが６．５５を下回れば、６．５ないし６．８のｐＨへ希釈した水酸化カリウムで調整する。
【０１３２】
１分以上２時間以下の間待機した後、配合したスラリーを以下に記載されるような脱気、超高温（ＵＨＴ）処理及び均質化へ供する。すなわち、この手段に向けて配合したスラリーを供給するための容積式ポンプを使用する。配合したスラリーを約６６℃ないし７１℃の範囲の温度へ加熱する。配合したスラリーをＨｇの２５．４ｃｍないし３８．１ｃｍへ脱気する。配合したスラリーを６１気圧ないし７５気圧で乳化する。約１０秒の保持時間でプレート／コイル熱交換器を通過させることによって、約１２０℃ないし１２２℃の範囲の温度へ配合したスラリーを加熱する。約５秒の保持時間で約１４４℃ないし１４７℃の範囲の温度へ配合したスラリーをＵＨＴ加熱する。瞬間冷却機を通過させることによって、約１２０℃ないし１２２℃の範囲にあるよう配合したスラリーの温度を低下させる。プレート／コイル熱交換器を通過させることによって約７１℃ないし８２℃の範囲にあるよう配合したスラリーの温度を低下させる。約２６５気圧ないし２６６気圧で配合したスラリーを均質化する。約７４℃ないし８５℃の範囲にある温度で少なくとも１６秒間保持チューブに配合したスラリーを通過させる。大型熱交換器を通過させることによって、約１℃ないし７０℃の範囲にある温度へ配合したスラリーを冷却する。
【０１３３】
配合したスラリーを約１℃ないし７℃の範囲にある温度で、好ましくは撹拌しながら保存する。
【０１３４】
好ましくは、この時点で品質調節のための適切な分析検査を実施する。検査結果に基づいて、希釈水（１０℃ないし３８℃）の適切な量を配合したスラリーへ撹拌しながら添加する。
【０１３５】
ビタミン溶液及び香料溶液を個別に調製した後、配合したスラリーへ添加する。
【０１３６】
ビタミン溶液を約４３℃ないし６６℃の範囲にある温度へ撹拌しながら、水の約３．９４ｋｇを加熱することによって調製した後、以下の成分を列挙される順に添加する。すなわち、アスコルビン酸、４５％水酸化カリウム、タウリン、水溶性ビタミン予備混合物、塩化コリン、及びＬ−カルニチンである。次に、ビタミン溶液を配合されたスラリーへ撹拌しながら添加する。
【０１３７】
香料溶液を、マシュマロ及びドゥルセ・デ・レチェ香料を水の約７．９４ｋｇへ撹拌しながら添加することによって調製する。本発明に従った栄養製品を、Ｆｉｍｅｎｉｃｈ社（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，米国）によって販売される人工マシュマロ香料及びＦｉｍｅｎｉｃｈ社によって販売される天然及び人工ドゥルセ・デ・レチェ香料を使用して製造した。次に、香料溶液を配合したスラリーへ撹拌しながら添加する。
【０１３８】
必要に応じて、製品が滅菌後に６．４ないし７．０の範囲のｐＨを有するように、希釈した水酸化カリウムを配合したスラリーへ添加する。完成した製品を次に適切な容器に入れ、滅菌へ供する。もちろん、もし望めば、無菌加工を採用できる。
【実施例６】
【０１３９】
糖血症反応を調節するための栄養製品の組成。
【０１４０】
表２は、栄養をヒトへ提供するが、結果として生じるインスリン反応を制限する、液状栄養製品の１，０００ｋｇを製造するための材料の組成を表す。栄養製品の製造の詳述は以下のとおりである。
【０１４１】
【表２】
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2007530542.tif 000006
【０１４２】
互いに配合し、熱処理し、標準化し、包装し、滅菌する４つのスラリーを調製することによって本発明の糖尿病用液状栄養製品を製造する。
【０１４３】
炭水化物／ミネラルのスラリーを、まず水約８２ｋｇを約６５℃ないし７１℃の温度へ撹拌しながら加熱することによって調製する。撹拌しながら、ＨＭＢカルシウムの必要な量を添加し、５分間撹拌する。Ｋｅｌｃｏ，Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｅｒｃｋ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ  Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，米国によって販売されるクエン酸ナトリウム及びジェレンガムの必要な量を添加し、５分間撹拌する。（Ｆｏｒｔｉｔｅｃｈ，Ｓｃｈｎｅｃｔａｄｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋによって販売される）超微量ミネラル／微量ミネラル（ＵＴＭ／ＴＭ）予備混合物を添加する。スラリーの色は緑がかった黄色である。ミネラルを完全に分散するまで撹拌を維持する。次に、撹拌しながら、以下のミネラルの必要な量を添加する。すなわち、クエン酸カリウム、塩化カリウム、塩化クロム、塩化マグネシウム及びヨウ化カリウムである。次に、Ｇｒａｉｎ  Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｕｓｃａｔａｉｎｅ，Ｉｏｗａ，米国によって販売される最初のマルトデキストリン及び果糖をスラリーへ、激しく撹拌しながら添加し、溶解させる。撹拌しながら、Ｒｏｑｕｅｔｔｅ  Ａｍｅｒｉｃａ社、Ｋｅｏｋｕｋ，Ｉｏｗａによって販売されるマルチトール粉末、ＡＩＧｒｏｕｐ  Ｌｏｎｚａ，Ｆａｉｒ  Ｌａｗｎ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙによって販売されるマルチトールシロップ、Ｇｏｌｄｅｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｇｏｌｄｅｎ，Ｃｏｌｏｒａｄｏ，米国によって販売されるフラクトオリゴ糖、松谷化学工業、兵庫、日本によってファイバーソル（Ｒ）２（Ｅ）の製品名の下で販売される第二のマルトデキストリンを添加し、完全に溶解するまで十分撹拌する。リン酸三カルシウム及びリン酸マグネシウムの必要な量をスラリーへ撹拌しながら添加する。完全になった炭水化物／ミネラルスラリーを約６５℃ないし７１℃の温度で、その他のスラリーと配合するまで１２時間以内で撹拌しながら保持する。
【０１４４】
高オレインベニバナ油及びアブラナ油の必要な量を組み合わせて約４０．５℃ないし約４９℃の温度へ撹拌しながら加熱することによって、油性スラリーにおける繊維を調製する。撹拌しながら、ＬａＧｒａｎｇｅ，ＩｌｌｉｎｏｉｓのＣｏｇｎｉｓ社製ルティンエステルの必要な量を添加する。最低１５分間撹拌する。撹拌しながら、以下の成分の必要な量を加熱した油へ添加する。すなわち、（Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｓｏｙａ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｆｏｒｔ  Ｗａｙｎｅ，Ｉｎｄｉａｎａにより販売される）レシチン、（Ｖｉｔａｍｉｎｓ社、Ｃｈｉｃａｇｏ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓにより販売される）ビタミンＤ、Ｅ、Ｋ予備混合物、ビタミンＡ、ビタミンＥ及びベータカロテンである。Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉにより販売される大豆多糖類の必要な量を加熱した油へゆっくり分散させる。完全になった油／繊維スラリーを約５５℃ないし約６５℃の温度で、その他のスラリーと配合するまで１２時間以内で中程度に撹拌しながら保持する。
【０１４５】
水の２９３ｋｇを６０℃ないし６５℃へ加熱することによって、水性スラリー中の第一タンパク質を調製する。撹拌しながら、２０％クエン酸カリウム溶液の必要な量を添加し、１分間保持する。酸性カゼインの必要な量を激しく撹拌しながら添加した直後、２０％水酸化ナトリウムの必要な量を添加する。カゼインが溶解するまで撹拌を激しいままに維持する。スラリーを約６０℃ないし６５℃に、中程度に撹拌しながら保持する。
【０１４６】
水の約７７ｋｇを約４０℃の温度へ撹拌しながらまず加熱することによって、水性スラリーにおける第二タンパク質を調製する。カゼイン塩を添加し、スラリーをカゼイン塩が完全に分散するまで十分に撹拌する。撹拌し続けながら、スラリーを６０℃ないし６５℃へゆっくり加温する。スラリーをその他のスラリーと配合するまで１２時間以内保持する。
【０１４７】
タンパク質スラリー１の３４４ｋｇをタンパク質スラリー２の８４ｋｇと配合することによってバッチを組み合わせる。撹拌しながら、油／繊維スラリーの３７ｋｇを添加する。少なくとも１分間待機した後、炭水化物／ミネラルスラリーの２１６ｋｇを、先行段階から配合したスラリーへ撹拌しながら添加し、結果として生じる配合されたスラリーを約５５℃ないし約６０℃の温度に維持する。配合したバッチのｐＨを６．４５ないし６．７５のｐＨへ、１Ｎ水酸化カリウムで調整する。
【０１４８】
１分以上２時間以下の間待機した後、配合スラリーを脱気、超高温処理及び均質化へ供する。配合したスラリーを約７１℃ないし約８２℃の温度へ加熱し、真空下で脱気する。次に、加熱したスラリーを、単一段階ホモジナイザーを通じて９００ｐｓｉｇないし１１００ｐｓｉｇで乳化する。乳化後、スラリーを約９９℃ないし約１１０℃へ加熱した後、約１４６℃の温度へ約５秒間加熱する。スラリーを瞬間冷却機へ通過させ、温度を約９９℃ないし約１１０℃へ低下させた後、プレート冷却機へ通過させ、温度を約７１℃ないし約７６℃へ低下させる。次に、スラリーを３９００ないし４１００／４００ないし６００ｐｓｉｇで均質化する。スラリーを約７４℃ないし約８０℃で１６秒間保持した後、１℃ないし約７℃へ冷却する。この時点で、試料を微生物学的検査及び分析検査のために採取する。混合物を撹拌の下で保持する。
【０１４９】
水溶性ビタミン（ＷＳＶ）溶液を個別に調製し、加工し配合したスラリーへ添加する。
【０１５０】
以下の成分を水の９．４ｋｇへ撹拌しながら添加することによって、ビタミン溶液を調製する。すなわち、（Ｊ．Ｂ．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｏｌｌａｎｄ，Ｍｉｃｈｉｇａｎによって販売される）ＷＳＶ予備混合物、ビタミンＣ、塩化コリン、Ｌ−カルニチン、タウリン、イノシトール、葉酸、塩酸ピリドキシン及びシアノコバラミンである。４５％水酸化カリウムスラリーの必要な量を添加して、ｐＨを７ないし１０へ調整する。
【０１５１】
品質調節検査の分析結果に基づいて、水の適切な量をバッチへ撹拌しながら添加して望ましい総固体に達する。さらに、ビタミン溶液の８．８ｋｇを希釈したバッチへ撹拌しながら添加する。
【０１５２】
製品のｐＨを最適な製品安定性に達するよう調整できる。完成した製品を次に適切な容器に入れ、最終的な滅菌へ供する。
【実施例７】
【０１５３】
小児科用栄養製品の組成。
【０１５４】
表３は、本発明の小児科用経腸栄養の７７１ｋｇを製造するための材料の組成を表す。栄養製品の製造の詳述は以下のとおりである。
【０１５５】
【表３】
2007530542.tif 000007
2007530542.tif 000008
【０１５６】
ＤＥＫ予備混合物の指定された量を、可溶性ビタミンの５４ｇを保持するのに十分大きな、ねじ式キャップのついた遮光性容器へ秤量して入れることによって、ストック脂溶性ビタミン配合物（ＯＳＶ配合物）を調製する。プラスチックピペットを使用して、ビタミンＡの必要な量をＤＥＫ一定分量へ添加する。容器のふたを適用する前に、容器に窒素を流す。
【０１５７】
高オレインベニバナ油、大豆油及びＭＣＴ油の必要な量を配合タンクへ添加することによって、脂肪スラリー中のストックタンパク質（ＰＩＦ）を調製した。混合物を４０．５℃ないし４９℃へ撹拌しながら加熱する。撹拌しながら、Ｈａｄｌｅｙ，ＭａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓのＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｒｉｖｅｒ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ社製のルティンエステルの必要な量を添加する。最低１５分間撹拌する。乳化剤である（Ｄｅｃａｔｕｒ，ＩｎｄｉａｎａのＣｅｎｔｒａｌ  Ｓｏｙａにより販売される）レシチン及び（Ｏｗｉｎｇｓ  Ｍｉｌｌｓ，ＭａｒｙｌａｎｄのＱｕｅｓｔにより販売される）モノグリセリドを添加し、溶解するよう十分に混合する。次に、ＯＳＶ配合物をすべて添加する。容器を油性配合物で４回ないし５回すすぎ、ビタミンの完全な転移を確実にする。（Ｒｏｃｋｌａｎｄ，ＭａｉｎｅのＦＭＣにより販売される）カラゲナン及びカゼイン塩を添加する。タンパク質を分散させるようスラリーを十分に混合する。ＰＩＦスラリーを使用するまで中程度の撹拌の下で６０℃ないし６５℃で６時間まで保持する。
【０１５８】
水の必要な量を配合タンクへ添加することによって、水性スラリー中のストックタンパク質（ＰＩＷ）を調製する。中程度の撹拌の下で水を保持し、７６℃ないし８２℃に調整する。カゼイン塩の必要な量を水へ激しく撹拌しながら添加し、タンパク質を完全に分散させるまで激しく混合する。タンパク質スラリーを、加工前に５４℃ないし６０℃へ冷却させる。一度冷却すると、乳清タンパク質の必要な量を添加し、完全に分散／溶解するまで十分混合する。ＰＩＷスラリーを使用するまで５４℃ないし６０℃で２時間まで保持する。
【０１５９】
水の必要な量を配合タンクへ添加し、６０℃ないし６８℃まで加熱することによって、ストックミネラル溶液（ＭＩＮ）を調製する。（Ｎｅｗａｒｋ，ＤｅｌａｗａｒｅのＦＭＣにより販売される）セルロースガム配合物を水へ添加し、中程度の撹拌の下で、次へ進行する前に最低５分間保持する。ＨＭＢカルシウムを添加し、次へ進行する前に最低５分間撹拌する。ミネラル塩である塩化マグネシウム、塩化カリウム、クエン酸カリウム、ヨウ化カリウム及びリン酸二カリウムを一度に一つずつ、各添加の間でミネラルが溶解するのを確実にするよう混合しながら添加する。完了したＭＩＮ溶液を使用するまで低ないし中程度の撹拌の下で５４℃ないし６５℃で保持する。
【０１６０】
ＰＩＷスラリーの指定された量を配合タンクへ添加し、５４℃ないし６０℃へ撹拌しながら加熱することによって、最終配合物を調製する。ＰＩＦスラリーの指定された量をタンクへ添加し、十分に混合する。ＭＩＦ溶液の指定された量を配合物へ添加し、十分に混合する。塩化ナトリウムの指定された量を配合物へ添加し、十分に混合する。ショ糖の指定された量を配合物へ添加し、溶解するよう十分に混合する。リン酸三カルシウムを配合物へ添加し、分散するよう十分に混合する。更なる水の指定された量を配合物へ添加し、十分に混合する。完了した最終配合物を５４℃ないし６０℃で持続的な撹拌の下で保持する。必要に応じて、ｐＨを６．４５ないし６．８へ、１ＮＫＯＨで調整する。
【０１６１】
１分以上２時間以下の間待機した後、配合スラリーを脱気、超高温処理、及び均質化へ供する。配合したスラリーを約６８℃ないし約７４℃の温度へ加熱し、真空下で脱気する。次に、加熱したスラリーを９００ｐｓｉｇないし１１００ｐｓｉｇ（約６．２ないし６．９ＭＰａｇ）で乳化する。乳化後、スラリーを約１２０℃ないし約１２２℃へ加熱した後、約１４９℃ないし約１５０℃の温度へ加熱する。スラリーを瞬間冷却機へ通過させ、温度を約１２０℃ないし約１２２℃へ低下させた後、プレート冷却機を通じて温度を約７４℃ないし約７９℃へ低下させる。次に、スラリーを３９００ないし４１００／４００ｐｓｉｇないし６００ｐｓｉｇ（約２６．９ないし２８．３／２．８ないし４．１ＭＰａｇ)で均質化する。スラリーを約７４℃ないし約８５℃で１６秒間保持した後、１℃ないし約６℃へ冷却する。この時点で、試料を微生物学的検査及び分析検査用に採取する。混合物を撹拌の下で保持する。
【０１６２】
標準化は以下のように進行する。配合タンクにおいて水の指定された量を４８℃ないし６０℃へ加熱することによってストックビタミン溶液（ＷＳＶ）を調製する。クエン酸カリウム、（Ｓｃｈｅｎｅｃｔａｄｙ，Ｎｅｗ  ＹｏｒｋのＦｏｒｔｉｔｅｃｈにより販売される）ＵＴＭ／ＴＭ予備混合物、ＷＳＶ予備混合物、ｍ−イノシトール、タウリン、Ｌ−カルニチン及び塩化コリンを溶液へ、列挙された順で各々添加し、各成分を溶解又は分散させるために十分混合させる。ビタミン溶液の１４．２ｋｇを進行した混合タンクへ添加する。
【０１６３】
水の指定された量を配合タンクへ添加することによってストックバニラ溶液を調製する。（Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ，ＯｈｉｏのＧｌｖａｕｄａｎ  Ｒｏｕｒｅにより販売される）バニラの指定された量を水へ添加し、十分に混合する。バニラ溶液の１８．５ｋｇを加工した混合物タンクへ混合し、十分に混合する。
【０１６４】
水の指定された量を配合タンクへ添加することによってストックアスコルビン酸溶液を調製する。アスコルビン酸の指定された量を添加し、溶解するよう十分に混合する。４５％ＫＯＨの指定された量を添加し、十分に混合する。アスコルビン酸溶液の８．４ｋｇを混合タンクへ添加し、十分に混合する。
【０１６５】
最終的な混合物を最終的な固体全体へ、水の９２．５ｋｇを添加することによって希釈し、十分に混合する。最終的な（レトルト）滅菌の前に製品を適切な容器へと充填する。
【実施例８】
【０１６６】
完全な栄養サプリメントの組成。
【０１６７】
表４は、典型的なバニラ風味の食事置換液の１，０００ｋｇを製造するための材料の組成を表す。食事置換液の製造の詳述は以下のとおりである。
【０１６８】
【表４】
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2007530542.tif 000010
【０１６９】
互いに配合し、熱処理し、標準化し、包装し、滅菌した３つのスラリーを調製することによって、本発明の液状食事置換製品を製造する。
【０１７０】
炭水化物／ミネラルのスラリーを、まず水の必要な量を約６５℃ないし約７１℃の温度へ撹拌しながら加熱することによって調製する。ＨＭＢカルシウムの必要な量を添加し、最低５分間撹拌する。撹拌しながら、クエン酸カリウム及び（Ｆｏｒｔｉｔｅｃｈ，Ｓｃｈｎｅｃｔａｄｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋによって販売される）超微量ミネラル／微量ミネラル（ＵＴＭ／ＴＭ）予備混合物を添加する。スラリーの色は緑がかった黄色である。ミネラルを完全に分散するまで撹拌を維持する。次に、撹拌しながら、以下のミネラルの必要な量を添加する。すなわち、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ヨウ化カリウム、リン酸マグネシウム及びリン酸三カルシウムである。次に、Ｇｒａｉｎ  Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｕｓｃａｔａｉｎｅ，Ｉｏｗａ，米国によって販売される、ショ糖及びトウモロコシシロップをスラリーへ、激しく撹拌しながら添加し、溶解させる。完成した炭水化物／ミネラルスラリーを約６５℃ないし７１℃の温度で、その他のスラリーと配合するまで８時間以内で撹拌しながら保持する。
【０１７１】
高オレインベニバナ油及びアブラナ油の必要な量を組み合わせて約４０．５℃ないし約４９℃の温度へ撹拌しながら加熱することによって、脂肪スラリーにおけるタンパク質（ＰＩＦ）を調製する。撹拌しながら、Ｄｅｓ  Ｍｏｉｎｅｓ，ＩｏｗａのＫｅｍｉｎ  Ｆｏｏｄｓ社製の遊離ルティンの必要な量を添加する。最低１５分間撹拌する。以下の成分を加熱した油へ添加する。すなわち、（Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｓｏｙａ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｆｏｒｔ  Ｗａｙｎｅ，Ｉｎｄｉａｎａにより販売される）レシチン、ビタミンＡ、（Ｖｉｔａｍｉｎｓ社、Ｃｈｉｃａｇｏ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓにより販売される）ビタミンＤ、Ｅ、Ｋ予備混合物である。カラゲナンの必要な量を乳清タンパク質の必要な量と乾燥配合し、撹拌している脂質混合物へ添加し、最低１０分間撹拌させる。大豆タンパク質の必要な量を配合物へ添加し、適切な混合をゆっくりと確実にする。完成した油／タンパク質スラリーを約４０℃ないし約４３℃の温度で、その他のスラリーと配合するまで２時間以内で中程度に撹拌しながら保持する。
【０１７２】
水のほぼ必要な量を約４０℃の温度へ撹拌しながらまず加熱することによって、水性スラリーにおけるタンパク質を調製する。カゼイン塩を添加し、スラリーをカゼイン塩が完全に分散するまで十分に撹拌する。撹拌を続行し、スラリーを６０℃ないし６５℃へとゆっくり加温する。スラリーをその他のスラリーと配合するまで１２時間以内で保持する。
【０１７３】
タンパク質スラリーの必要な量を炭水化物／ミネラルスラリーの必要な量と配合することによってバッチを組み合わせ、１０分間撹拌させる。撹拌しながら、油／タンパク質スラリーの必要な量を添加し、少なくとも１０分間撹拌する。配合したバッチのｐＨを６．６６ないし６．７５のｐＨへ、１Ｎ水酸化カリウムで調整する。
【０１７４】
１分以上２時間以下の間待機した後、配合スラリーを脱気、超高温処理、及び均質化へ供する。配合したスラリーを約７１℃ないし約８２℃の温度へ加熱し、真空下で脱気する。次に、単一段階ホモジナイザーを通じて加熱したスラリーを９００ｐｓｉｇないし１１００ｐｓｉｇで乳化する。乳化後、スラリーを約９９℃ないし約１１０℃へ加熱した後、約１４６℃の温度へ約５秒間加熱する。スラリーを瞬間冷却機へ通過させ、温度を約９９℃ないし約１１０℃へ低下した後、プレート冷却機へ通過させ、温度を約７１℃ないし約７６℃へ低下する。次に、スラリーを３９００ないし４１００／４００ｐｓｉｇないし６００ｐｓｉｇで均質化する。スラリーを約７４℃ないし約８０℃で１６秒間保持した後、１℃ないし約７℃へ冷却する。この時点で、試料を微生物学的検査及び分析検査用に採取する。混合物を撹拌の下で保持する。
【０１７５】
水溶性ビタミン（ＷＳＶ）溶液を個別に調製し、加工し配合したスラリーへ添加する。
【０１７６】
以下の成分を水の９．４ｋｇへ撹拌しながら添加することによって、ビタミン溶液を調製する。すなわち、（Ｊ．Ｂ．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｏｌｌａｎｄ，Ｍｉｃｈｉｇａｎによって販売される）ＷＳＶ予備混合物、ビタミンＣ、塩化コリン、Ｌ−カルニチン、タウリン、イノシトール、葉酸、塩酸ピリドキシン及びシアノコバラミンである。４５％水酸化カリウムスラリーの必要な量を添加して、ｐＨを７ないし１０へ調整する。
【０１７７】
品質調節検査の分析結果に基づいて、水の適切な量をバッチへ撹拌しながら添加して望ましい固体全体に達する。さらに、ビタミン溶液の８．８ｋｇを希釈したバッチへ撹拌しながら添加する。
【０１７８】
製品のｐＨを最適な製品安定性に達するよう調整してもよい。完成した製品を次に適切な容器に入れ、最終的な滅菌へ供する。
【実施例９】
【０１７９】
飲料の組成。
【０１８０】
即時飲用飲料の１０００ｋｇバッチを製造するため、撹拌機を備えた容器に水の９８７．３１ｋｇを置く。大気温で、安息香酸カリウムの必要な量を添加し、完全に溶解させる。ＨＭＢカルシウムの必要な量を添加し、完全に溶解させる。以下の成分を次に、列挙される順に添加する。次の成分を添加する前に、各成分を完全に溶解する。
【０１８１】
【表５】
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【０１８２】
１２オンスのアルミ缶へと充填する直前に、アスコルビン酸を添加した。アルミ缶へと充填する前に、飲料を炭酸化してもよい。溶液を脱気した後、「カーボクーラー」へと転移し、そこで二酸化炭素の約２．５体積により冷却及び炭酸化する。
【実施例１０】
【０１８３】
電解質置換製品の組成。
【０１８４】
以下の例は、即時飲用再水和溶液の製造の仕方を説明する。ＯＲＳは、表６に概略を述べられた組成を有した。
【０１８５】
【表６】
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【０１８６】
ろ過水の必要な量を秤量し、配合タンクへ添加する。中程度に撹拌しながら、水を４３℃ないし５４℃へ加熱する。中程度の拡販を維持しながら、ＨＭＢカルシウムを添加し、最低５分間混合させる。中程度の撹拌を持続しながら、デキストロースの必要な量を添加する。溶解するまで撹拌する。果糖の必要な量を添加する。溶解するまで撹拌する。以下の成分の必要な量を、列挙される順序でデキストロース／果糖配合物へ添加し、溶解するまで撹拌する。すなわち、グルコン酸亜鉛、クエン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸カリウム、及びクエン酸である。（Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，Ｎｅｗ  ＪｅｒｓｅｙのＭｃＮｅｉｌ  Ｓｐｅｃｉａｌｉｔｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｃｏｍｐａｎｙにより販売される）スクラロース及び（Ｓｏｍｅｒｓｅｔ，Ｎｅｗ  ＪｅｒｓｅｙのＨｏｅｃｈｓｔ  Ｆｏｏｄ  ＩｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓによりＳｕｎｓｅｔｔ（Ｒ）として販売される）アセスルファムカリウムの必要な量を添加し、溶解するまで撹拌する。黄色６番及びフルーツポンチ香料をバッチへ、溶解するまで添加する。配合物を１．１℃ないし７．２℃へ冷却し、低速撹拌をしながら保持する。１ｌのプラスチック瓶の必要な数を充填し、ホイル熱シールを瓶の開口部へ適用し、食品級の滅菌標準へレトルトする。
【０１８７】
あるいは、冷却した配合物を密閉可能で凍結可能な包装材料内に封入し、熱密閉などにより密閉する。再水和溶液の単一投与量を密閉凍結可能な小袋に包装する。伝統的な冷凍ポップにおいて使用されるなどの、本発明を実施するのに使用できる包装材料のさまざまなタイプが当業者には明白であろう。包装材料は好ましくは、製品の同定、成分などのマーキングをその外部表面へ置くことのできるタイプである。再水和製剤は、この状態において好ましくはその複数の単位で輸送及び保存される。複数の単位又は冷凍ポップは商業化の目的のために互いに包装されるであろうことは熟慮される。
【０１８８】
投与の前に、液体再水和溶液の包装が凍結される。凍結後、包装を開封し、その内容物を食する。凍結した再水和製剤は通常、大気温で投与されるであろうため、各包装に含有される再水和液の量は好ましくは、凍結された状態でありながらも全体として消費できる量である。１包装当たり、好ましくは２０オンスないし３５オンス、より好ましくは２．０オンスないし２．５オンス特に好ましい実施態様において、滅菌再水和溶液の２．１オンスが長方形の例えば１”×８”の凍結可能な包装材料内に封入される。透明なプラスチック包装材料が好ましい。
【図面の簡単な説明】
【０１８９】
【図１】図１は、ＰＩＦにより誘発されるプロテアソーム活性化に関与する骨格筋における潜在的な細胞内事象を記載するスキームを表す。
【図２】図２は、ＭＡＣ１６腫瘍を有するマウスにおける体重（Ａ）及び腫瘍体積（Ｂ）に及ぼすＨＭＢの効果についての投与量−反応曲線を表す。（ＰＢＳ中の）ＨＭＢを、０．０５ｇ／ｋｇ（黒塗り丸）、０．１２５ｇ／ｋｇ（白抜き丸）及び０．２５ｇ／ｋｇ（×）の濃度での毎日の療法で胃管栄養法により経口的に投与した。コントロールマウスはＰＢＳ単独（黒塗り菱形）を受容した。示される結果は平均±標準誤差であり、ｎ＝２０である。
【図３】図３は、ＭＡＣ１６腫瘍を有するマウスの体重に及ぼすＨＭＢ（０．２５ｇ／ｋｇ；黒塗り四角）、ＥＰＡ（０．６ｇ／ｋｇ；×）及び組み合わせ（白抜き丸）並びにＰＢＳコントロール（黒塗り丸）の効果を表す。示される結果は平均±標準誤差であり、ｎ＝２０である。
【図４】図４は、ＭＡＣ１６を有し、ＥＰＡ（０．６ｇ／ｋｇ）、ＨＭＢ（０．２５ｇ／ｋｇ）、又はそれらの組み合わせのいずれかで３日間処理したマウスのヒラメ筋重量（Ａ）及びヒラメ筋におけるタンパク質分解の速度（Ｂ）を表す。示される値は平均±標準誤差であり、ｎ＝６である。
【図５】図５は、ＭＡＣ１６腫瘍を有し、３日間処理されるマウスの腓腹筋における「キモトリプシン様」酵素活性として決定されるプロテアソーム機能活性に及ぼすＨＭＢ及びＥＰＡの効果を表す。結果は平均±標準誤差として示され、ｎ＝６である。
【図６】図６は、ＰＢＳ（コントロール）、ＨＭＢ（０．２５ｇ／ｋｇ）、ＥＰＡ（０．６ｇ／ｋｇ）又はそれらの組み合わせで３日間処理されたマウスの腓腹筋における、ウェスタンブロッティングにより検出されるプロテアソーム２０Ｓα−サブユニット（Ａ）及びβ−サブユニット（Ｂ）の発現を表す。ブロット（ｎ＝６）の濃度測定分析を示す。Ａ．コントロール（黒い棒）、ＨＭＢ（白い棒）、ＥＰＡ（細切れの棒）及びそれらの組み合わせ（点模様の棒）。
【図７】図７は、ＰＢＳ（コントロール）、ＨＭＢ（０．２５ｇ／ｋｇ）、ＥＰＡ（０．６ｇ／ｋｇ）又はそれらの組み合わせ（ＨＭＢ＋ＥＰＡ）で３日間処理されたマウスの腓腹筋における、ウェスタンブロッティングにより検出されるプロテアソーム１９ＳサブユニットであるＭＳＳ１（Ａ）及びｐ４２（Ｂ）の発現を表す。ブロット（ｎ＝６）の濃度測定分析を示す。
【図８】図８は、ＰＢＳ（コントロール）、ＨＭＢ（０．２５ｇ／ｋｇ）、ＥＰＡ（０．６ｇ／ｋｇ）又はそれらの組み合わせ（ＨＭＢ＋ＥＰＡ）で３日間処理されたマウスの腓腹筋における、ウェスタンブロッティングにより検出されるＥ２１４ｋの発現を表す。ブロット（ｎ＝６）の濃度測定分析を示す。
【図９】図９（Ａ）は、５０μＭのＥＰＡ（白抜き四角）、又は２５μＭ（白抜き丸）若しくは５０μＭ（黒塗り丸）のＨＭＢのいずれかのない場合（×）又はある場合のＣ２Ｃ１２筋管における総タンパク質分解に及ぼすＰＩＦの効果を表す。ＰＩＦの添加２４時間後に測定を実施し、平均±標準誤差として示し、ｎ＝９である。１（Ｂ）はＥＰＡ（５０μＭ）又はＨＭＢ（２５μＭ若しくは５０μＭ）の有無の下でのＰＩＦで処理したネズミ筋管の可溶性抽出物のキモトリプシン活性を表す。記号は（Ａ）におけるものと同一である。結果は平均ア標準誤差として示され、ｎ＝９である。
【図１０】図１０は、２０Ｓプロテアソームα−サブユニット（Ａ）、β−サブユニット（Ｂ）及びｐ４２（Ｃ）のＰＩＦ誘発に及ぼすＥＰＡ及びＨＭＢの効果を表す。アクチン負荷コントロールを（Ｄ）に示す。ＰＩＦ単独（レーンＡないしＣ）で又は５０μＭのＥＰＡ（レーンＤないしＦ）、５０μＭのＨＭＢ（レーンＧないしＩ）又は２５μＭのＨＭＢ（レーンＪないしＬ）の存在下で、４．２ｎＭ（レーンＢ、Ｅ、Ｈ及びＫ）又は１０ｎＭ（レーンＣ、Ｆ、Ｉ及びＬ）の濃度で処理した２４時間後のＣ２Ｃ１２筋管の可溶性抽出物のウェスタンブロット。コントロール培養物はＰＢＳ（レーンＡ）、５０μＭのＥＰＡ（レーンＤ）、５０μＭのＨＭＢ（レーンＧ）又は２５μＭのＨＭＢ（レーンＪ）を受容した。示されるブロットは、３つの個別の実験を代表する。
【図１１】図１１は、ネズミ筋管における細胞質中の（Ａ）及び膜へ結合した（Ｂ）ＰＫＣαに及ぼすＰＩＦの効果のウェスタンブロットを表す。細胞を、ＰＩＦ単独（レーンＡないしＣ）で又は５０μＭのＥＰＡ（レーンＤないしＦ）、５０μＭのＨＭＢ（レーンＧないしＩ）又は２５μＭのＨＭＢ（レーンＪないしＬ）の存在下で、４．２ｎＭ（レーンＢ、Ｅ、Ｈ及びＫ）又は１０ｎＭのＰＩＦ（レーンＣ、Ｆ、Ｉ及びＬ）の濃度で処理した。コントロール細胞は、ＰＢＳ（レーンＡ）、５０μＭのＥＰＡ（レーンＤ）、５０μＭのＨＭＢ（レーンＧ）又は２５μＭのＨＭＢ（レーンＪ）を受容した。示されるブロットは、３つの個別の実験を代表する。
【図１２】図１２は、ＰＩＦ単独で（レーンＡないしＣ）又はＰＩＦで、５０μＭのＥＰＡ（レーンＤないしＦ）、５０μＭのＨＭＢ（レーンＧないしＩ）又は２５μＭのＨＭＢ（レーンＪないしＬ）の存在下で、４．２ｎＭ（レーンＢ、Ｅ、Ｈ及びＫ）又は１０ｎＭ（レーンＣ、Ｆ、Ｉ及びＬ）のＰＩＦ濃度で処理したネズミ筋管の可溶性抽出物中の総ＥＲＫ１／２（ｐ４４及びｐ４２）（Ａ）及び活性型（リン酸化）ＥＲＫ１／２（Ｂ）のウェスタンブロットを表す。コントロール細胞は、ＰＢＳ（レーンＡ）、５０μＭのＥＰＡ（レーンＤ）、５０μＭのＨＭＢ（レーンＧ）又は２５μＭのＨＭＢ（レーンＪ）のいずれかを受容した。示されるブロットは、３つの個別の実験を代表する。
【図１３】図１３は、ウェスタンブロッティングによって決定されるＩκＢαのサイトゾルレベルに及ぼす３０分間のＣ２Ｃ１２筋管の暴露の効果（Ａ）、及びＥＭＳＡによって決定される、ＤＮＡへ結合するＮＦ−κＢの活性化（Ｂ及びＣ）を表す。濃度測定（デンシトメトリー）分析は、３重のブロット又はＥＭＳＡの平均である。（Ａ）筋管を、ＰＩＦ単独で（レーンＡないしＥ）、又は５０μＭのＨＭＢの存在下でのＰＩＦで０（レーンＡ及びＦ）、２．１（レーンＢ及びＧ）、４．２（レーンＣ及びＨ）、１０．５（レーンＤ及びＩ）又は１６．８ｎＭのＰＩＦ（レーンＥ及びＪ）の濃度で処理した。（Ｂ）及び（Ｃ）において、筋管を０、２．１、４．２、１０．５又は１６．８ｎＭのＰＩＦで、２５μＭのＨＭＢ（Ｂ）又は５０μＭのＨＭＢ（Ｃ）のない場合（黒い棒）又はある場合（白い棒）で処理した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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