(57)【要約】ムスカリン性アセチルコリン受容体アンタゴニストおよびその使用方法が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式Ｉ：
【化１】
2007513181.tif 000006
［式中、
ＸおよびＹが炭素である場合、ｎは１、２もしくは３であり；ｍは、１、２もしくは３であり；ｐは０、１もしくは２であり；
Ｘが酸素であり、かつＹが炭素である場合、ｎは１であり；ｍは２であり；ｐは１であり；
Ｘが炭素であり、かつＹが窒素である場合、ｎは２であり；ｍは１であり；ｐは２であり；
Ｗは、Ｏ、ＳもしくはＮＨであり；
Ｕは、ＮＲ３、Ｏもしくは結合であり；
Ｒ３は、水素、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、非置換もしくは置換フェニルまたは非置換もしくは置換フェニルＣ１−Ｃ３低級アルキルからなる群より選択され；ここで、置換されている場合、一つの基は、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、トリフルオロメチル、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルおよびＣ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキルからなる群より選択される１またはそれ以上の基により置換され；
ｑは、０ないし７の整数であり；
ｈは、０、１もしくは２であり；
ｇは、１、２もしくは３であり；
Ｖは、フェニル、チオフェニル、フラニル、ピリジニル、ナフチル、キノリニル、インドリル、ベンゾチオフェニルおよびベンゾフラニルからなる群より選択され；
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、シアノ、トリフルオロメチル、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、フェニル、フェニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ＣＯＲ６、ＣＯＯＲ６、ＣＯＮＨＲ６、ＣＯＮ（Ｒ６）２、ＮＨＲ６、Ｎ（Ｒ６）２およびＧからなる群より選択され；
ｋは、０ないし５の整数であり；
Ｔは、置換されていないもしくは置換されている以下の基：一、二および三置換フェニル、チオフェニル、フラニル、ピリジニル、ナフチル、キノリニル、インドリル、ベンゾチオフェニル、ピロール、チオゾール、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、フラザン、ベンゾフラニル、イソインドール、インダゾール、カルバゾール、ベンズイミダゾール、インドリジン、プリン、アデニン、グアニン、キサンチン、カフェイン、尿酸、アゼピン、ピリジン、ピリダジン、ピザジン、ピリミジン、トリアジン、ピリミドン、ウラシル、シトシン、チミン、イソキノリン、フタラジン、プテリジン、ナフチリジン、アクリジン、シンノリン、フェナジン、キナゾリン、フェノキサジン、キノキサリン、フェノチアジンからなる群より選択され；ここで、置換されている場合、一つの基は、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、トリフルオロメチル、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、フェニルおよびフェニルＣ１−Ｃ３低級アルキルからなる群より選択される１またはそれ以上の基により置換され；
Ｒ５は、ＣＯＯＲ６、ＣＯＮＨＲ６、ＣＯＲ６、ＣＯＮ（Ｒ６）２、ＣＯＧ、非置換もしくは置換オキサジアゾリル、非置換もしくは置換オキサゾリル、非置換もしくは置換イミダゾリル、非置換もしくは置換フェノキシまたはシアノからなる群より選択され；ここで、置換されている場合、一つの基は、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、フェニルおよびフェニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、シアノおよびトリフルオロメチルからなる群より選択される１またはそれ以上の基により置換され；
Ｇは、置換されていないもしくは置換されている以下の基：ピロリジニル、ピペリジニル、ジヒドロインドリル、テトロヒドロキノリニル、モルホリノ、アゼチジニル、ヘキサヒドロアゼピニルまたはオクタヒドロアゾシニルからなる群より選択され；ここで、置換されている場合、一つの基は、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、フェニルおよびフェニルＣ１−Ｃ３低級アルキルからなる群より選択され；
Ｒ１は、置換されていないもしくは置換されている以下の基：水素、フェニル、フェニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、チオフェニル、チオフェニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、フラニル、フラニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ピリジニル、ピリジニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、イミダゾリル、イミダゾリルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ナフチル、ナフチルＣ１−Ｃ６低級アルキル、キノリニル、キノリニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、インドリル、インドリルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチオフェニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ベンゾフラニル、ベンゾフラニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾイミダゾリルＣ１−Ｃ６低級アルキル、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルＣ１−Ｃ６低級アルキルまたはＣ３−Ｃ８アルケニルからなる群より選択され；ここで、置換されている場合、一つの基は、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、フェノキシ、フェニルＣ１−Ｃ３アルコキシ、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、トリフルオロメチル、メチレンジオキシ、エチレンジオキシ、プロピレンジオキシ、ブチレンジオキシ、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、フェニル、フェニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、チオフェニル、チオフェニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、フラニル、フラニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ピリジニル、ピリジニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ナフチル、ナフチルＣ１−Ｃ３低級アルキル、キノリニル、キノリニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、インドリル、インドリルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチオフェニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ベンゾフラニル、ベンゾフラニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ＣＯＯＨ、ＣＯＲ６、ＣＯＯＲ６、ＣＯＮＨＲ６、ＣＯＮ（Ｒ６）２、ＣＯＧ、ＮＨＲ６、Ｎ（Ｒ６）２、Ｇ、ＯＣＯＲ６、ＯＣＯＮＨＲ６、ＮＨＣＯＲ６、Ｎ（Ｒ６）ＣＯＲ６、ＮＨＣＯＯＲ６およびＮＨＣＯＮＨＲ６からなる群より選択される１またはそれ以上の基により置換されている］
で示される化合物または医薬上許容される塩。
【請求項２】
ＸおよびＹが炭素である場合、ｎが１もしくは２であり；ｍが１、２もしくは３であり；ｐが０もしくは１である；
Ｘが酸素であり、かつＹが炭素である場合、ｎが１であり；ｍが２であり；ｐが１である；
Ｘが炭素であり、かつＹが窒素である場合、ｎが２であり；ｍが１であり；ｐが２である；
ＷがＯである；
ＵがＮＲ３である；
Ｒ３が、水素、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキルまたはフェニルＣ１−Ｃ３低級アルキルからなる群より選択される；
ｑが０である；
ｈが０である；
ｇが１である；
Ｖが、フェニル、チオフェニル、フラニル、ナフチル、ベンゾチオフェニルおよびベンゾフラニルからなる群より選択される；
Ｒ４が、水素、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、シアノ、トリフルオロメチル、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、フェニル、フェニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、フェニルカルボニルからなる群より選択される；
ｋが、１ないし５の整数である；
Ｔが、置換されていないもしくは置換されている以下の基：一、二および三置換フェニル、チオフェニル、フラニル、ピリジニル、ナフチル、キノリニル、インドリル、ベンゾチオフェニル、ピロール、チオゾール、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、フラザン、ベンゾフラニル、イソインドール、インダゾール、カルバゾール、ベンズイミダゾール、インドリジン、プリン、アデニン、グアニン、キサンチン、カフェイン、尿酸、アゼピン、ピリジン、ピリダジン、ピザジン、ピリミジン、トリアジン、ピリミドン、ウラシル、シトシン、チミン、イソキノリン、フタラジン、プテリジン、ナフチリジン、アクリジン、シンノリン、フェナジン、キナゾリン、フェノキサジン、キノキサリン、フェノチアジンからなる群より選択され；ここで、置換されている場合、一つの基は、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、トリフルオロメチル、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、フェニルおよびフェニルＣ１−Ｃ３低級アルキルからなる群より選択される１またはそれ以上の基により置換され；
Ｒ５が、ＣＯＯＲ６、ＣＯＮＨＲ６、ＣＯＲ６、ＣＯＮ（Ｒ６）２、ＣＯＧ、非置換もしくは置換オキサジアゾリル、非置換もしくは置換フェノキシまたはシアノからなる群より選択され；ここで、置換されている場合、一つの基は、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、フェニル、フェニルＣ１−Ｃ３低級アルキルおよびトリフルオロメチルからなる群より選択される１またはそれ以上の基により置換されている；
Ｇが、ピロリジニル、ピペリジニル、ジヒドロインドリル、テトロヒドロキノリニル、モルホリノ、アゼチジニル、ヘキサヒドロアゼピニルおよびオクタヒドロアゾシニルからなる群より選択される；
Ｒ１が、置換されていないもしくは置換されている以下の基：フェニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、チオフェニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、フラニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ピリジニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、イミダゾリルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ナフチルＣ１−Ｃ６低級アルキル、キノリニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、インドリルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ベンゾチオフェニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ベンゾフラニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ベンゾイミダゾリルＣ１−Ｃ６低級アルキル、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルＣ１−Ｃ６低級アルキルまたはＣ３−Ｃ８アルケニルからなる群より選択され；ここで、置換されている場合、一つの基は、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、フェノキシ、フェニルＣ１−Ｃ３アルコキシ、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、トリフルオロメチル、メチレンジオキシ、エチレンジオキシ、プロピレンジオキシ、ブチレンジオキシ、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、フェニル、フェニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、チオフェニル、チオフェニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、フラニル、フラニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ピリジニル、ピリジニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ナフチル、ナフチルＣ１−Ｃ３低級アルキル、キノリニル、キノリニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、インドリル、インドリルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチオフェニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ベンゾフラニル、ベンゾフラニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ＣＯＯＨ、ＣＯＲ６、ＣＯＯＲ６、ＣＯＮＨＲ６、ＣＯＮ（Ｒ６）２、ＣＯＧ、ＮＨＲ６、Ｎ（Ｒ６）２、Ｇ、ＯＣＯＲ６、ＯＣＯＮＨＲ６、ＮＨＣＯＲ６、Ｎ（Ｒ６）ＣＯＲ６、ＮＨＣＯＯＲ６およびＮＨＣＯＮＨＲ６からなる群より選択される１またはそれ以上の基により置換されている；
から選択される基からなる、請求項１記載の化合物または医薬上許容される塩。
【請求項３】
ＸおよびＹが炭素である；
ｎが１もしくは２である；
ｍが１、２もしくは３である；
ｐが０もしくは１である；
ＷがＯである；
ＵがＮＲ３である；
Ｒ３が水素である；
ｑが０である；
ｈが０である；
ｇが１である；
Ｖが、フェニルもしくはナフチルからなる群より選択される；
Ｒ４が、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、シアノ、トリフルオロメチル、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、フェニル、フェニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、フェニルカルボニルからなる群より選択される；
ｋが１、２もしくは３である；
Ｔが、置換されていないもしくは置換されている以下の基：一、二および三置換フェニル、チオフェニル、フラニル、ピリジニル、ナフチル、キノリニル、インドリル、ベンゾチオフェニル、ピロール、チオゾール、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、フラザン、ベンゾフラニル、イソインドール、インダゾール、カルバゾール、ベンズイミダゾール、インドリジン、プリン、アデニン、グアニン、キサンチン、カフェイン、尿酸、アゼピン、ピリジン、ピリダジン、ピザジン、ピリミジン、トリアジン、ピリミドン、ウラシル、シトシン、チミン、イソキノリン、フタラジン、プテリジン、ナフチリジン、アクリジン、シンノリン、フェナジン、キナゾリン、フェノキサジン、キノキサリン、フェノチアジンからなる群より選択され；ここで、置換されている場合、一つの基は、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、トリフルオロメチル、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、フェニルおよびフェニルＣ１−Ｃ３低級アルキルからなる群より選択される１またはそれ以上の基により置換されている；
Ｒ５が、ＣＯＯＲ６、ＣＯＮＨＲ６、ＣＯＲ６、ＣＯＮ（Ｒ６）２、ＣＯＧ、非置換もしくは置換オキサジアゾリルからなる群より選択され；ここで、置換されている場合、一つの基は、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、フェニルおよびフェニルＣ１−Ｃ３低級アルキルからなる群より選択される１またはそれ以上の基により置換されている；
Ｇが、ピロリジニル、ピペリジニル、ジヒドロインドリル、テトロヒドロキノリニル、モルホリノ、アゼチジニル、ヘキサヒドロアゼピニルおよびオクタヒドロアゾシニルからなる群より選択される；
Ｒ１が、置換されていないもしくは置換されている以下の基：フェニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、チオフェニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、フラニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ピリジニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、イミダゾリルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ナフチルＣ１−Ｃ６低級アルキル、キノリニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、インドリルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ベンゾチオフェニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ベンゾフラニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ベンゾイミダゾリルＣ１−Ｃ６低級アルキル、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルＣ１−Ｃ６低級アルキルまたはＣ３−Ｃ８アルケニルからなる群より選択され；ここで、置換されている場合、一つの基は、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、フェノキシ、フェニルＣ１−Ｃ３アルコキシ、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、トリフルオロメチル、メチレンジオキシ、エチレンジオキシ、プロピレンジオキシ、ブチレンジオキシ、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、フェニル、フェニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、チオフェニル、チオフェニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、フラニル、フラニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ピリジニル、ピリジニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ナフチル、ナフチルＣ１−Ｃ３低級アルキル、キノリニル、キノリニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、インドリル、インドリルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチオフェニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ベンゾフラニル、ベンゾフラニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ＣＯＯＨ、ＣＯＲ６、ＣＯＯＲ６、ＣＯＮＨＲ６、ＣＯＮ（Ｒ６）２、ＣＯＧ、ＮＨＲ６、Ｎ（Ｒ６）２、Ｇ、ＯＣＯＲ６およびＮＨＣＯＲ６からなる群より選択される１またはそれ以上の基により置換されている；
から選択される基からなる、請求項１記載の化合物または医薬上許容される塩。
【請求項４】
Ｎ−｛（３Ｓ）−１−［（３−ヒドロキシフェニル）メチル］−１−メチル−３−ピペリジニウムイル｝−Ｎ−［（｛５−［（メチルオキシ）カルボニル］−２−フラニル｝アミノ）カルボニル］−Ｌ−チロシンアミド・トリフルオロアセテート；
Ｎ−［（｛４−［（エチルオキシ）カルボニル］−１，３−オキサゾール−２−イル｝アミノ）カルボニル］−Ｎ−｛（３Ｓ）−１−［（３−ヒドロキシフェニル）メチル］−１−メチル−３−ピペリジニウムイル｝−Ｌ−チロシンアミド・トリフルオロアセテート；
Ｎ−｛（３Ｓ）−１−［（３−ヒドロキシフェニル）メチル］−１−メチル−３−ピペリジニウムイル｝−Ｎ−［（｛４−メチル−５−［（メチルオキシ）カルボニル］−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル｝アミノ）カルボニル］−Ｌ−チロシンアミド・トリフルオロアセテート；
Ｎ−［（｛４−［（エチルオキシ）カルボニル］−１，３−チアゾール−２−イル｝アミノ）カルボニル］−Ｎ−｛（３Ｓ）−１−［（３−ヒドロキシフェニル）メチル］−１−メチル−３−ピペリジニウムイル｝−Ｌ−チロシンアミド・トリフルオロアセテート；
Ｎ−［（｛４−［（エチルオキシ）カルボニル］シクロヘキシル｝アミノ）カルボニル］−Ｎ−｛（３Ｓ）−１−［（３−ヒドロキシフェニル）メチル］−１−メチル−３−ピペリジニウムイル｝−Ｌ−チロシンアミド・トリフルオロアセテート；
からなる群より選択される、請求項１記載の化合物または医薬上許容される塩。
【請求項５】
Ｎ−［（｛５−［（エチルオキシ）カルボニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル｝アミノ）カルボニル］−Ｎ−｛（３Ｓ）−１−［（３−ヒドロキシフェニル）メチル］−１−メチル−３−ピペリジニウムイル｝−Ｌ−チロシンアミド・トリフルオロアセテート；
Ｎ−｛（３Ｓ）−１−［（３−ヒドロキシフェニル）メチル］−１−メチル−３−ピペリジニウムイル｝−Ｎ−［（｛１−メチル−５−［（メチルオキシ）カルボニル］−１Ｈ−ピロール−３−イル｝アミノ）カルボニル］−Ｌ−チロシンアミド・トリフルオロアセテート；
Ｎ−｛（３Ｓ）−１−［（３−ヒドロキシフェニル）メチル］−１−メチル−３−ピペリジニウムイル｝−Ｎ−［（｛５−［（メチルオキシ）カルボニル］−１，３−チアゾール−２−イル｝アミノ）カルボニル］−Ｌ−チロシンアミド・トリフルオロアセテート；
からなる群より選択される、請求項１記載の化合物または医薬上許容される塩。
【請求項６】
請求項１記載の化合物およびその医薬上許容される担体を含む、ムスカリン性アセチルコリン受容体介在疾患を処置するための医薬組成物。
【請求項７】
その必要のある哺乳類においてアセチルコリンとその受容体の結合を阻害する方法であって、安全かつ有効量の請求項１記載の化合物を投与することを含む、方法。
【請求項８】
アセチルコリンがその受容体に結合している、ムスカリン性アセチルコリン受容体介在疾患を処置する方法であって、安全かつ有効量の請求項１記載の化合物を投与することを含む、方法。
【請求項９】
疾患が、慢性閉塞性肺疾患、慢性気管支炎、喘息、慢性呼吸閉塞、肺線維症、肺気腫およびアレルギー性鼻炎からなる群より選択される、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
口または鼻を介して吸入投与される、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
リザーバードライパウダー吸入器、複数回投与用ドライパウダー吸入器または定量式吸入器から選択される医薬ディスペンサーを介して投与される、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
化合物がヒトに投与され、かつ１ｍｇ用量について１２時間またはそれ以上の作用持続時間を有する、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
化合物が２４時間またはそれ以上の作用持続時間を有する、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
化合物が３６時間またはそれ以上の作用持続時間を有する、請求項１３記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、環状アミンの新規誘導体、医薬組成物、それらの調製方法ならびにＭ３ムスカリン性アセチルコリン受容体介在疾患の処置におけるそれらの使用に関連付けられる。
【０００２】
（背景技術）
末梢および中枢神経系においてコリン作動性神経から放出されるアセチルコリンは、２つの主要な類のアセチルコリン受容体−ニコチン性およびムスカリン性アセチルコリン受容体との相互作用を介して、多種多様な生物学的過程に作用する。ムスカリン性アセチルコリン受容体（ｍＡＣｈＲｓ）は、７回膜貫通型ドメインを有するＧ−蛋白質共役型受容体のスーパーファミリーに属する。ｍＡＣｈＲｓにはＭ１−Ｍ５と呼ばれる５つのサブタイプがあり、それぞれ別個の遺伝子の産物である。これらの５つのサブタイプのそれぞれは、特有の薬理学的性質を示す。ムスカリン性アセチルコリン受容体は、脊椎動物の器官中に広く分布しており、そしてこれらの受容体は、阻害性および興奮性作用の両方を介し得る。例えば、気道、膀胱および胃腸管内に見られる平滑筋において、Ｍ３ｍＡＣｈＲｓは収縮反応を介する。報文については、｛Ｂｒｏｗｎ  １９８９  ２４７／ｉｄ｝を参照のこと。
【０００３】
ムスカリン性アセチルコリン受容体機能障害は、多種多様な病理生理学的状態において注目されてきた。例えば、喘息および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）において、炎症状態は、肺平滑筋を満たす副交感神経での阻害性Ｍ２ムスカリン性アセチルコリン自己受容体機能の損失をもたらし、迷走神経の刺激後にアセチルコリンの放出増大を惹起する。このｍＡＣｈＲの機能不全は、Ｍ３ｍＡＣｈＲｓの刺激の増大により介される気道の反応亢進をもたらす｛Ｃｏｓｔｅｌｌｏ，  Ｅｖａｎｓら．１９９９  ７２／ｉｄ｝｛Ｍｉｎｅｔｔｅ，Ｌａｍｍｅｒｓ，ら．１９８９  ２４８／ｉｄ｝。同様に、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）における胃腸管の炎症は、Ｍ３ｍＡＣｈＲが介する運動過剰をもたらす｛Ｏｐｒｉｎｓ，Ｍｅｉｊｅｒら．２０００  ２４５  ／ｉｄ｝。膀胱の過収縮に起因する失禁は、Ｍ３ｍＡＣｈＲｓの刺激の増大により介されることも示されている｛Ｈｅｇｄｅ＆Ｅｇｌｅｎ  １９９９  ２５１／ｉｄ｝。故に、サブタイプ−選択的ｍＡＣｈＲアンタゴニストの同定は、これらのｍＡＣｈＲ介在疾患の治療として有用であるかもしれない。
【０００４】
様々な疾患状態を処置するために抗−ムスカリン性受容体療法を用いることを支持する数多くの一連の証拠があるにも関わらず、臨床において用いられている抗−ムスカリン性化合物は相対的にほとんどない。故に、Ｍ３ｍＡＣｈＲｓでの阻害を惹起し得る新規化合物が依然必要とされている。Ｍ３ｍＡＣｈＲｓの刺激増大に関連する状態、例えば、喘息、ＣＯＰＤ、ＩＢＤおよび尿失禁は、ｍＡＣｈＲ結合の阻害剤である化合物によって恩恵を得るだろう。
【０００５】
（発明の開示）
本発明は、式Ｉ
【化１】
2007513181.tif 000002
［式中、
ｎは、０もしくは１であり；
Ｚ−は、ハロ、ＣＦ３ＣＯＯ−、メシレート、トシレートまたは任意の他の医薬上許容される対イオンからなる群より選択され；
【０００６】
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、Ｃ３−Ｃ８アルケニル、非置換もしくは置換フェニルまたは非置換もしくは置換フェニルＣ１−Ｃ３低級アルキルからなる群より選択され；ここで、置換されている場合、一つの基は、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、トリフルオロメチル、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、フェニルおよびフェニルＣ１−Ｃ３低級アルキルからなる群より選択される１またはそれ以上の基により置換され；
【０００７】
Ｔは、置換されていないもしくは置換されている以下の基：一、二および三置換ピロール、チオゾール、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、フラザン、イソインドール、インダゾール、カルバゾール、ベンズイミダゾール、インドリジン、プリン、アデニン、グアニン、キサンチン、カフェイン、尿酸、アゼピン、ピリジン、ピリダジン、ピザジン、ピリミジン、トリアジン、ピリミドン、ウラシル、シトシン、チミン、イソキノリン、フタラジン、プテリジン、ナフチリジン、アクリジン、シンノリン、フェナジン、キナゾリン、フェノキサジン、キノキサリン、フェノチアジンからなる群より選択され；ここで、置換されている場合、一つの基は、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、トリフルオロメチル、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、フェニルおよびフェニルＣ１−Ｃ３低級アルキルからなる群より選択される１またはそれ以上の基により置換され；
【０００８】
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、非置換もしくは置換フェニルまたは非置換もしくは置換フェニルＣ１−Ｃ３低級アルキルからなる群より選択され；ここで、置換されている場合、一つの基は、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、トリフルオロメチル、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルおよびＣ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキルおよび複素環からなる群より選択される１またはそれ以上の基により置換され；
【０００９】
Ｒ３は、置換されていないもしくは置換されている以下の基：フェニル、フェニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、チオフェニル、チオフェニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、フラニル、フラニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ピリジニル、ピリジニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、イミダゾリル、イミダゾリルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ナフチル、ナフチルＣ１−Ｃ６低級アルキル、キノリニル、キノリニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、インドリル、インドリルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチオフェニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ベンゾフラニル、ベンゾフラニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾイミダゾリルＣ１−Ｃ６低級アルキル、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルＣ１−Ｃ６低級アルキルまたはＣ３−Ｃ８アルケニルからなる群より選択され；ここで、置換されている場合、一つの基は、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、フェノキシ、フェニルＣ１−Ｃ３アルコキシ、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、トリフルオロメチル、メチレンジオキシ、エチレンジオキシ、プロピレンジオキシ、ブチレンジオキシ、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、フェニル、フェニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、チオフェニル、チオフェニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、フラニル、フラニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ピリジニル、ピリジニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ナフチル、ナフチルＣ１−Ｃ３低級アルキル、キノリニル、キノリニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、インドリル、インドリルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチオフェニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ベンゾフラニル、ベンゾフラニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ＣＯＯＨ、ＣＯＲ６、ＣＯＯＲ６、ＣＯＮＨＲ６、ＣＯＮ（Ｒ６）２、ＣＯＧ、ＮＨＲ６、Ｎ（Ｒ６）２、Ｇ、ＯＣＯＲ６、ＯＣＯＮＨＲ６、ＮＨＣＯＲ６、Ｎ（Ｒ６）ＣＯＲ６、ＮＨＣＯＯＲ６およびＮＨＣＯＮＨＲ６からなる群より選択される１またはそれ以上の基により置換され；
【００１０】
Ｒ４は、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキルからなる群より選択される］
の化合物に関連する。
【００１１】
（発明の概要）
本発明は、本発明の化合物の全ての水和物、溶媒和物、複合体およびプロドラッグを含む。プロドラッグは、式Ｉで示される活性のある親薬剤をインビボにおいて放出する、任意の共有結合型化合物である。本発明の化合物中にキラル中心または異性体中心の別形態が存在するならば、エナンチオマーおよびジアステレオマーを含む、かかる異性体（一または複数）の全ての形態が、本明細書中に包含される。キラル中心を含む本発明の化合物は、ラセミ混合物、エナンチオマーに富む混合物として使用されてもよく、或いはラセミ混合物はよく知られている技法を用いて分割されてもよく、そして個々のエナンチオマーは単独で使用されてもよい。化合物が不飽和炭素−炭素二重結合を有する場合、シス（Ｚ）およびトランス（Ｅ）異性体の両方が本発明の範囲内にある。化合物がケト−エノール互変体のごとき互変形態にて存在してもよい場合、平衡状態で存在しているかまたは一形態が優勢的に存在しているかに関わらず、各互変形態は本発明内に含まれるものと熟慮される。
【００１２】
別記しない限り、式Ｉまたはその任意の下位式中の任意の一の場合における任意の置換基の意味は、任意の他の場合におけるその意味または任意の他の置換基の意味に無関係である。
【００１３】
ペプチドおよび化学技術分野において一般的に用いられている省略形および記号は、本明細書中、本発明の化合物を説明するために用いられる。一般的に、アミノ酸の省略形は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１５８，９（１９８４）において記載されているように、ｔｈｅ  ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ  Ｊｏｉｎｔ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ  ｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅに従う。
【００１４】
本明細書中用いられる用語「Ｃ１−Ｃ８アルキル」および「Ｃ１−Ｃ６アルキル」は、１ないし６または８個の炭素原子からなる直鎖または分岐鎖基の両方を含む。例えば、この用語は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチルなどを含むが、これらに限定されない。「低級アルキル」は、Ｃ１−Ｃ８アルキルと同義である。
【００１５】
本明細書中、「Ｃ１−Ｃ８アルコキシ」は、直鎖および分岐鎖基、例えば、−Ｏ−ＣＨ３、−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ３およびｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、イソブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペントキシおよびヘキソキシなどを含む。
【００１６】
本明細書中用いるように、「Ｃ３−Ｃ８−シクロアルキル」は、置換もしくは非置換シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタンおよびシクロヘキサンなどを含むことを意味する。
【００１７】
「ハロゲン」または「ハロ」は、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩを意味する。
【００１８】
式Ｉの好ましい化合物は、
ｎが、０もしくは１であり；
Ｚ−が、ハロ、ＣＦ３ＣＯＯ−、メシレート、トシレートまたは任意の他の医薬上許容される対イオンからなる群より選択され；
【００１９】
Ｔが、置換されていないもしくは置換されている以下の基：一、二および三置換ピロール、チオゾール、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、フラザン、イソインドール、インダゾール、カルバゾール、ベンズイミダゾール、インドリジン、プリン、アデニン、グアニン、キサンチン、カフェイン、尿酸、アゼピン、ピリジン、ピリダジン、ピザジン、ピリミジン、トリアジン、ピリミドン、ウラシル、シトシン、チミン、イソキノリン、フタラジン、プテリジン、ナフチリジン、アクリジン、シンノリン、フェナジン、キナゾリン、フェノキサジン、キノキサリン、フェノチアジンからなる群より選択され；ここで、置換されている場合、一つの基は、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、トリフルオロメチル、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、フェニルおよびフェニルＣ１−Ｃ３低級アルキルからなる群より選択される１またはそれ以上の基により置換され；
【００２０】
Ｒ１が、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、Ｃ３−Ｃ８アルケニルまたは非置換もしくは置換フェニルＣ１−Ｃ３低級アルキルからなる群より選択され；ここで、置換されている場合、一つの基は、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、トリフルオロメチル、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、フェニルおよびフェニルＣ１−Ｃ３低級アルキルからなる群より選択される１またはそれ以上の基により置換され；
またはＲ２およびＲ３が、−（ＣＨ２）ｊ−もしくは−（ＣＨ２）ｉ−フェニル−（ＣＨ２）ｉ−であり；ここで、ｊは３ないし８の整数であり；ｉは１ないし３の整数であり；
【００２１】
Ｒ２が、水素、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、シアノ、トリフルオロメチル、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、フェニル、フェニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、フェニルカルボニルからなる群より選択され；
【００２２】
Ｒ３が、置換されていないもしくは置換されている以下の基：フェニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、チオフェニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、フラニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ピリジニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、イミダゾリルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ナフチルＣ１−Ｃ６低級アルキル、キノリニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、インドリルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ベンゾチオフェニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ベンゾフラニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ベンゾイミダゾリルＣ１−Ｃ６低級アルキル、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルＣ１−Ｃ６低級アルキルまたはＣ３−Ｃ８アルケニルからなる群より選択され；ここで、置換されている場合、一つの基は、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、フェノキシ、フェニルＣ１−Ｃ３アルコキシ、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、トリフルオロメチル、メチレンジオキシ、エチレンジオキシ、プロピレンジオキシ、ブチレンジオキシ、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、フェニル、フェニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、チオフェニル、チオフェニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、フラニル、フラニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ピリジニル、ピリジニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ナフチル、ナフチルＣ１−Ｃ３低級アルキル、キノリニル、キノリニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、インドリル、インドリルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチオフェニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ベンゾフラニル、ベンゾフラニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ＣＯＯＨ、ＣＯＲ６、ＣＯＯＲ６、ＣＯＮＨＲ６、ＣＯＮ（Ｒ６）２、ＣＯＧ、ＮＨＲ６、Ｎ（Ｒ６）２、Ｇ、ＯＣＯＲ６、ＯＣＯＮＨＲ６、ＮＨＣＯＲ６、Ｎ（Ｒ６）ＣＯＲ６、ＮＨＣＯＯＲ６およびＮＨＣＯＮＨＲ６からなる群より選択される１またはそれ以上の基により置換され；
【００２３】
Ｒ４が、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキルまたはフェニルＣ１−Ｃ３低級アルキルからなる群より選択される；
化合物を含む。
【００２４】
さらにより好ましいものは、
ｎが１であり；
Ｚ−が、ハロ、ＣＦ３ＣＯＯ−または任意の他の医薬上許容される対イオンからなる群より選択され；
【００２５】
Ｔが、置換されていないもしくは置換されている以下の基：一、二および三置換ピロール、チオゾール、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、フラザン、イソインドール、インダゾール、カルバゾール、ベンズイミダゾール、インドリジン、プリン、アデニン、グアニン、キサンチン、カフェイン、尿酸、アゼピン、ピリジン、ピリダジン、ピザジン、ピリミジン、トリアジン、ピリミドン、ウラシル、シトシン、チミン、イソキノリン、フタラジン、プテリジン、ナフチリジン、アクリジン、シンノリン、フェナジン、キナゾリン、フェノキサジン、キノキサリン、フェノチアジンからなる群より選択され；ここで、置換されている場合、一つの基は、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、トリフルオロメチル、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、フェニルおよびフェニルＣ１−Ｃ３低級アルキルからなる群より選択される１またはそれ以上の基により置換され；
【００２６】
Ｒ１が、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、Ｃ３−Ｃ８アルケニルまたは非置換もしくは置換フェニルＣ１−Ｃ３低級アルキルからなる群より選択され；ここで、置換されている場合、一つの基は、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、トリフルオロメチル、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、フェニルおよびフェニルＣ１−Ｃ３低級アルキルからなる群より選択される１またはそれ以上の基により置換され；
またはＲ２およびＲ３が、−（ＣＨ２）ｊ−もしくは−（ＣＨ２）ｉ−フェニル−（ＣＨ２）ｉ−であり；ここで、ｊは３ないし８の整数であり；ｉは１ないし３の整数であり；
【００２７】
Ｒ２が、水素、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、シアノ、トリフルオロメチル、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、フェニル、フェニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、フェニルカルボニルからなる群より選択され；
【００２８】
Ｒ３が、置換されていないもしくは置換されている以下の基：フェニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、チオフェニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、フラニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ピリジニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、イミダゾリルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ナフチルＣ１−Ｃ６低級アルキル、キノリニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、インドリルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ベンゾチオフェニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ベンゾフラニルＣ１−Ｃ６低級アルキル、ベンゾイミダゾリルＣ１−Ｃ６低級アルキル、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルＣ１−Ｃ６低級アルキルまたはＣ３−Ｃ８アルケニルからなる群より選択され；ここで、置換されている場合、一つの基は、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、フェノキシ、フェニルＣ１−Ｃ３アルコキシ、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、トリフルオロメチル、メチレンジオキシ、エチレンジオキシ、プロピレンジオキシ、ブチレンジオキシ、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキル、フェニル、フェニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、チオフェニル、チオフェニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、フラニル、フラニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ピリジニル、ピリジニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ナフチル、ナフチルＣ１−Ｃ３低級アルキル、キノリニル、キノリニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、インドリル、インドリルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチオフェニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ベンゾフラニル、ベンゾフラニルＣ１−Ｃ３低級アルキル、ＣＯＯＨ、ＣＯＲ６、ＣＯＯＲ６、ＣＯＮＨＲ６、ＣＯＮ（Ｒ６）２、ＣＯＧ、ＮＨＲ６、Ｎ（Ｒ６）２、Ｇ、ＯＣＯＲ６、ＯＣＯＮＨＲ６、ＮＨＣＯＲ６、Ｎ（Ｒ６）ＣＯＲ６、ＮＨＣＯＯＲ６およびＮＨＣＯＮＨＲ６からなる群より選択される１またはそれ以上の基により置換され；
【００２９】
Ｒ４が、Ｃ１−Ｃ８分岐もしくは非分岐アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル低級アルキルまたはフェニルＣ１−Ｃ３低級アルキルからなる群より選択される；
化合物である。
【００３０】
好ましい化合物は、
Ｎ−｛（３Ｓ）−１−［（３−ヒドロキシフェニル）メチル］−１−メチル−３−ピペリジニウムイル（ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｉｕｍｙｌ）｝−Ｎ−［（｛５−［（メチルオキシ）カルボニル］−２−フラニル｝アミノ）カルボニル］−Ｌ−チロシンアミド・トリフルオロアセテート；
Ｎ−［（｛４−［（エチルオキシ）カルボニル］−１，３−オキサゾール−２−イル｝アミノ）カルボニル］−Ｎ−｛（３Ｓ）−１−［（３−ヒドロキシフェニル）メチル］−１−メチル−３−ピペリジニウムイル｝−Ｌ−チロシンアミド・トリフルオロアセテート；
Ｎ−｛（３Ｓ）−１−［（３−ヒドロキシフェニル）メチル］−１−メチル−３−ピペリジニウムイル｝−Ｎ−［（｛４−メチル−５−［（メチルオキシ）カルボニル］−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル｝アミノ）カルボニル］−Ｌ−チロシンアミド・トリフルオロアセテート；
Ｎ−［（｛４−［（エチルオキシ）カルボニル］−１，３−チアゾール−２−イル｝アミノ）カルボニル］−Ｎ−｛（３Ｓ）−１−［（３−ヒドロキシフェニル）メチル］−１−メチル−３−ピペリジニウムイル｝−Ｌ−チロシンアミド・トリフルオロアセテート；
Ｎ−［（｛４−［（エチルオキシ）カルボニル］シクロヘキシル｝アミノ）カルボニル］−Ｎ−｛（３Ｓ）−１−［（３−ヒドロキシフェニル）メチル］−１−メチル−３−ピペリジニウムイル｝−Ｌ−チロシンアミド・トリフルオロアセテート；
からなる群より選択される。
【００３１】
最も好ましい化合物は、
Ｎ−［（｛５−［（エチルオキシ）カルボニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル｝アミノ）カルボニル］−Ｎ−｛（３Ｓ）−１−［（３−ヒドロキシフェニル）メチル］−１−メチル−３−ピペリジニウムイル｝−Ｌ−チロシンアミド・トリフルオロアセテート；
Ｎ−｛（３Ｓ）−１−［（３−ヒドロキシフェニル）メチル］−１−メチル−３−ピペリジニウムイル｝−Ｎ−［（｛１−メチル−５−［（メチルオキシ）カルボニル］−１Ｈ−ピロール−３−イル｝アミノ）カルボニル］−Ｌ−チロシンアミド・トリフルオロアセテート；
Ｎ−｛（３Ｓ）−１−［（３−ヒドロキシフェニル）メチル］−１−メチル−３−ピペリジニウムイル｝−Ｎ−［（｛５−［（メチルオキシ）カルボニル］−１，３−チアゾール−２−イル｝アミノ）カルボニル］−Ｌ−チロシンアミド・トリフルオロアセテート；
またはその医薬上許容される塩；
からなる群より選択される。
【００３２】
（調製方法）
調製
式（Ｉ）の化合物は、合成方法を適用することにより得られてもよく、その幾つかを以下のスキームに示す。これらのスキームにて提供される合成は、反応性を有する多種多様なＲ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６を有し、本明細書中に記載の反応との適合性を達成するのに、適宜保護されている置換基を利用する、式（Ｉ）の化合物を製造するために適用できる。これらの場合、続く脱保護により、一般的に開示されている性質の化合物が得られる。幾つかのスキームが特定化合物について示されているが、これは単に例示を目的としている。
【００３３】
調製１
Ｂｏｃ−保護ジアミン１（スキーム１）から調製したｎｏｓｙｌ−保護ジアミンＨＣｌ塩２と一緒に、２，６−ジメトキシ−４−ポリスチレンベンジルオキシ−ベンズアルデヒド（ＤＭＨＢ樹脂）を還元的アルキル化することにより、樹脂結合型アミン３を調製した。３とＦｍｏｃ−保護アミノ酸を反応させ、続いて、保護基を除去することにより、樹脂結合型中間体４を得た。アミンと樹脂結合型中間体４をカップリングさせることにより、対応する樹脂結合型尿素５を得た。続いて、ベンゼンチオラートを用いてその尿素を処理し、２級アミンを得、適切なアルデヒドを用いて還元的アミノ化を行い、樹脂結合型３級アミン６を得た。次いで、ハロゲン化アルキルを用いて樹脂上に結合された該アミンを処理し、４級アンモニウム塩を得、これをジクロロメタン中の５０％のトリフルオロ酢酸で切断し、目的化合物７を得た（スキーム１）。
【００３４】
【化２】
2007513181.tif 000003
【００３５】
条件：ａ）塩化２−ニトロベンゼンスルホニル（Ｎｏｓｙｌ−Ｃｌ）、ピリジン、ＣＨ２Ｃｌ２、０℃−室温；ｂ）１，４−ジオキサン、ＭｅＯＨ中、４ＭのＨＣｌ、室温；ｃ）２，６−ジメトキシ−４−ポリスチレンベンジルオキシ−ベンズアルデヒド（ＤＭＨＢ樹脂）、Ｎａ（ＯＡｃ）３ＢＨ、ジイソプロピルエチルアミン、１−メチル−２−ピロリジノン中、１０％の酢酸、室温；ｄ）Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸、１，３−ジイソプロピルカルボジイミド、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール、１−メチル−２−ピロリジノン、室温；ｅ）１−メチル−２−ピロリジノン中、２０％のピペリジン、室温；ｆ）４−ニトロベンゼンクロロホルマート、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、室温；ｇ）Ｋ２ＣＯ３、ＰｈＳＨ、１−メチル−２−ピロリジノン、室温；ｈ）Ｒ２ＣＨＯ、Ｎａ（ＯＡｃ）３ＢＨ、１−メチル−２−ピロリジノン中、１０％の酢酸、室温；ｉ）ＲＸ、アセトニトリル；ｊ）ジクロロメタン中、５０％のトリフルオロ酢酸、室温。
【００３６】
（合成実施例）
以下の実施例は本発明の例示として提供されるが、それらに決して限定されない：
【００３７】
実施例１
Ｎ−｛（３Ｓ）−１−［（３−ヒドロキシフェニル）メチル］−１−メチル−３−ピペリジニウムイル｝−Ｎ−［（｛５−［（メチルオキシ）カルボニル］−２−フラニル｝アミノ）カルボニル］−Ｌ−チロシンアミド・トリフルオロアセテートの調製
ａ）３−アミノ−Ｎ−（２−ニトロベンゼンスルホニル）ピロリジンＨＣｌ塩
２５０ｍＬの無水塩化メチレン中の３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−アミノ）ピロリジン（２０．１２ｇ，１０８ｍｍｏｌ）の溶液へ、０℃で、１３．１ｍＬ（１６２ｍｍｏｌ）の無水ピリジンを加え、続いて、２５．２ｇ（１１３．４ｍｍｏｌ）の塩化２−ニトロベンゼンスルホニルを徐々に加えた。混合物を１時間にわたって室温に温め、室温で１６時間攪拌した。混合物を１ＭのＮａＨＣＯ３水溶液、３００ｍＬへ注いだ。得られた混合物を室温で３０分間攪拌した後、有機相を分け、５００ｍＬの１ＮのＨＣｌ水溶液を用いて２回洗浄した。得られた有機相をＭｇＳＯ４で乾燥し、次いで、真空濃縮した。さらに精製することなく、残りを次工程に用いた。
【００３８】
無水ＭｅＯＨ中の上記残りの混合物、１４０ｍＬへ、１，４−ジオキサン溶液中の４ＭのＨＣｌ、１３６ｍＬ（５４４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間攪拌し、真空濃縮し、次いで、さらに３５℃で２４時間真空乾燥し、３−アミノ−Ｎ−（２−ニトロベンゼンスルホニル）ピロリジンＨＣｌ塩を黄色固体として得た（３０．５ｇ，２工程を通して９２％）：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ６−ＤＭＳＯ）δ  ８．６３（ｓ，３Ｈ），８．０８−７．９８（ｍ，２Ｈ），７．９６−７．８３（ｍ，２Ｈ），３．８８−３．７７（ｍ，１Ｈ），３．６６−３．５６（ｍ，２Ｈ），３．４６−３．３５（ｍ，２Ｈ），２．２８−２．１６（ｍ，１Ｈ），２．０７−１．９６（ｍ，１Ｈ）
【００３９】
ｂ）ＤＭＨＢ樹脂結合型４−［（｛［（１Ｓ）−１−（｛４−［（１，１−ジメチルエチル）オキシ］フェニル｝メチル）−２−（｛１−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−３−ピロリジニル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝カルボニル）アミノ］安息香酸エチル
無水１−メチル−２−ピロリジノン中の１０％の酢酸、１５６ｍＬ中、７．２０ｇ（１０．３７ｍｍｏｌ，１．４４ｍｍｏｌ／ｇ）の２，６−ジメトキシ−４−ポリスチレンベンジルオキシ−ベンズアルデヒド（ＤＭＨＢ樹脂）の混合物へ、９．５６ｇ（３１．１ｍｍｏｌ）の実施例１ａおよび９．０３ｍＬ（５１．８４ｍｍｏｌ）のジイソプロピルエチルアミンを加え、続いて、１１．０ｇ（５１．８４ｍｍｏｌ）のトリアセトキシホウ水素化ナトリウムを加えた。得られた混合物を室温で７２時間振盪した後、ＤＭＦ（３×２５０ｍＬ）、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１：１，３×２５０ｍＬ）およびＭｅＯＨ（３×２５０ｍＬ）を用いて、樹脂を洗浄した。得られた樹脂を３５℃で２４時間真空乾燥した。元素分析  Ｎ：４．１６，Ｓ：３．１２
【００４０】
１５ｍＬの無水１−メチル−２−ピロリジノン中、８００ｍｇ（０．８６０ｍｍｏｌ，１．０７５ｍｍｏｌ／ｇ）の上記樹脂の混合物へ、１．９８ｇ（４．３０ｍｍｏｌ）のＦｍｏｃ−Ｔｒｙ（ｔＢｕ）−ＯＨおよび１１７ｍｇ（０．８６ｍｍｏｌ）の１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾールを加え、続いて、０．８２ｍＬ（５．１６ｍｍｏｌ）の１，３−ジイソプロピルカルボジイミドを加えた。得られた混合物を室温で２４時間振盪した後、ＤＭＦ（３×２５ｍＬ）、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１：１，３×２５ｍＬ）およびＭｅＯＨ（３×２５ｍＬ）を用いて、樹脂を洗浄した。得られた樹脂を３５℃で２４時間真空乾燥した。ジクロロメタン中の５０％のトリフルオロ酢酸を用いて、分析用量の樹脂を２時間、室温で切断した。得られた溶液を真空濃縮した：ＭＳ（ＥＳＩ）６５７［Ｍ＋Ｈ−ｔＢｕ］＋
【００４１】
無水１−メチル−２−ピロリジノン溶液中の２０％のピペリジン、１５ｍＬを用いて、上の樹脂（０．８６０ｍｍｏｌ）を処理した。混合物を室温で１５分間振盪した後、溶液を捨て、さらに無水１−メチル−２−ピロリジノン溶液中の２０％のピペリジン、１５ｍＬを加えた。混合物をさらに１５分間室温で振盪した。溶液を捨て、ＤＭＦ（３×２５ｍＬ）、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１：１，３×２５ｍＬ）およびＭｅＯＨ（３×２５ｍＬ）を用いて樹脂を洗浄した。得られた樹脂を３５℃で２４時間真空乾燥した。ジクロロメタン中の５０％のトリフルオロ酢酸を用いて、分析用量の樹脂を２時間、室温で切断した。得られた溶液を真空濃縮した：ＭＳ（ＥＳＩ）４３５［Ｍ＋Ｈ−ｔＢｕ］＋
【００４２】
ｃ）Ｎ−｛（３Ｓ）−１−［（３−ヒドロキシフェニル）メチル］−１−メチル−３−ピペリジニウムイル｝−Ｎ−［（｛５−［（メチルオキシ）カルボニル］−２−フラニル｝アミノ）カルボニル］−Ｌ−チロシンアミド・トリフルオロアセテート；
５ｍＬの無水ジクロロメタン中、５６．４ｍｇ（０．４ｍｍｏｌ）の５−アミノ−２−フランカルボン酸エチルメチルの混合物へ、８４．５ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）の４−ニトロベゼンクロロホルマートを加えた。反応混合物を室温で３０分間攪拌し、次いで、濃縮した。ジイソプロピルエチルアミン（０．１４ｍＬ，０．８ｍｍｏｌ）、ＤＭＨＢ樹脂結合型Ｏ−（１，１−ジメチルエチル）−Ｎ−｛（３Ｓ）−１−［（２−ニトロフェニル）スルホニル］−３−ピロリジニル｝−Ｌ−チロシンアミド４（２００ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）およびジメチルホルムアミド（５ｍＬ）を反応混合物へ加え、次いで一晩振盪した。ＣＨ２Ｃｌ２（３×１ｍＬ）、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１：１，３×１ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×１ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（３×１０ｍＬ）を用いて樹脂を洗浄した。得られた樹脂を３５℃で２４時間真空乾燥した。ジクロロメタン中の５０％のトリフルオロ酢酸を用いて、分析用量の樹脂を２時間、室温で切断した。得られた溶液を真空濃縮した：ＭＳ（ＥＳＩ）６１６．０［Ｍ＋Ｈ−ｔＢｕ］＋
【００４３】
５ｍＬの１−メチル−２−ピロリジノン中、上の乾燥樹脂（０．１６ｍｍｏｌ）の混合物へ、１６６ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）のＫ２ＣＯ３および６０μＬ（０．６ｍｍｏｌ）のＰｈＳＨを加えた。得られた混合物を室温で２時間振盪した後、ＤＭＦ（３×１０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（３×１０ｍＬ）、ＤＭＦ（３×１０ｍＬ）、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１：１，３×１０ｍＬ）およびＭｅＯＨ（３×１０ｍＬ）を用いて樹脂を洗浄した。得られた樹脂を３５℃で２４時間真空乾燥した。ジクロロメタン中の５０％のトリフルオロ酢酸を用いて、分析用量の樹脂を２時間、室温で切断した。得られた溶液を真空濃縮した：ＭＳ（ＥＳＩ）４３１［Ｍ＋Ｈ−ｔＢｕ］＋
【００４４】
無水１−メチル−２−ピロリジノン溶液中の１０％のＨＯＡｃ、３ｍＬ中の上の乾燥樹脂５（０．１６ｍｍｏｌ）の混合物へ、２９３ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）の３−ヒドロキシルベンズアルデヒドおよび５０８．８ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）のトリアセトキシホウ水素化ナトリウムを加えた。得られた混合物を室温で４８時間振盪した後、ＤＭＦ（３×１０ｍＬ）、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１：１，３×１０ｍＬ）およびＭｅＯＨ（３×１０ｍＬ）を用いて樹脂を洗浄した。得られた樹脂を３５℃で２４時間真空乾燥した。ジクロロメタン中の５０％のトリフルオロ酢酸を用いて、分析用量の樹脂を２時間、室温で切断した。得られた溶液を真空濃縮した：ＭＳ（ＥＳＩ）５３７．２［Ｍ＋Ｈ−ｔＢｕ］＋
【００４５】
１ｍＬの無水アセトニトリル中の上の乾燥樹脂（０．０４ｍｍｏｌ）の混合物へ、１８．７μＬ（０．３ｍｍｏｌ）のヨードメタンを加えた。混合物を室温で１６時間振盪した後、ＤＭＦ（３×１０ｍＬ）、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１：１，３×１０ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×１０ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（３×１０ｍＬ）を用いて樹脂を洗浄した。得られた樹脂を３５℃で２４時間真空乾燥した。ジクロロメタン中の５０％のトリフルオロ酢酸、２ｍｌを用いて乾燥樹脂を処理した。切断溶液を集めた後、さらにジクロロメタン中の５０％のトリフルオロ酢酸、２ｍｌを用いて室温で１０分間樹脂を処理した。合わせた分解溶液を真空濃縮した。ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ（Ｃ−１８）カラム、５０ｍｍ×２０ｍｍＩＤを用いるＧｉｌｓｏｎ分取ＨＰＬＣシステムを利用し、２５ｍＬ／分の注入速度で、１０％のＢないし９０％のＢ［ここで、Ａ＝Ｈ２Ｏ（０．１％のトリフルオロ酢酸）およびＢ＝ＣＨ３ＣＮ（０．１％のトリフルオロ酢酸）］を用いて３．２分間溶離し、１分間保持することにより、残りを精製し、Ｎ−｛（３Ｓ）−１−［（３−ヒドロキシフェニル）メチル］−１−メチル−３−ピペリジニウムイル｝−Ｎ−［（｛５−［（メチルオキシ）カルボニル］−２−フラニル｝アミノ）カルボニル］−Ｌ−チロシンアミド・トリフルオロアセテートを得た；
（白色粉末，９ｍｇ，４工程を通して１０．２％）：ＭＳ（ＥＳＩ）５５１．２［Ｍ］＋
【００４６】
５−アミノ−２−フランカルボン酸を適切な複素環アミンで置き換えること以外、実施例１に記載のものと同様の方法を行うことにより、表１に記載の化合物を調製した。アミンは、それぞれＥＰ４８５５５Ａ１およびＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０００，４３，３２５７−３２６６に従って調製した実施例３および６を除いて、市販されていた。
【００４７】
【化３】
2007513181.tif 000004
【００４８】
表１
【表１】
2007513181.tif 000005
【００４９】
（生物学的実施例）
Ｍ３ｍＡＣｈＲにおける本発明の化合物の阻害効果を、以下のインビトロおよびインビボアッセイにより測定した：
【００５０】
カルシウム動員による受容体活性化の阻害分析：
１）３８４−ウェルＦＬＩＰＲアッセイ
ヒトＭ３ムスカリン性アセチルコリン受容体を安定に発現しているＣＨＯ（チャイニーズハムスター、卵巣）細胞株を、１０％のＦＢＳ、２ｍＭのグルタミンおよび２００ｕｇ／ｍｌのＧ４１８を加えたＤＭＥＭ中で培養する。酵素的またはイオンキレート化方法のいずれかを利用するアッセイに備えて、管理およびプレート用の細胞を剥離する。ＦＬＩＰＲ（蛍光イメージングプレートリーダー）アッセイ前日に、細胞を剥離し、再懸濁し、カウントし、次いで、５０ｕｌ容量で、３８４ウェルあたり２０，０００細胞を与えるように蒔く。アッセイプレートはブラッククリアーボトムプレート、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎカタログ番号３５  ３９６２である。組織培養インキュベーター中で、蒔いた細胞を一晩３７℃でインキュベーションした次の日に、アッセイを行う。アッセイを行うために、培地を吸引し、次いで、１×アッセイバッファー（１４５ｍＭのＮａＣｌ、２．５ｍＭのＫＣｌ、１０ｍＭのグルコース、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１．２ｍＭのＭｇＣｌ２、２．５ｍＭのＣａＣｌ２、２．５ｍＭのプロベネシド）（ｐＨ７．４）を用いて細胞を洗浄する。次いで、５０ｕｌのＦｌｕｏ−３色素（アッセイバッファー中、４ｕＭ）と一緒に、細胞を６０−９０分間、３７℃でインキュベーションする。カルシウム感受性色素により、細胞は、細胞内カルシウム貯蔵からのカルシウムの放出を介するリガンドに応答する、蛍光における増大を示すことが可能である。アッセイバッファーを用いて細胞を洗浄し、次いで、５０ｕｌのアッセイバッファー中に再懸濁して、その後、実験に用いる。試験化合物およびアンタゴニストを２５ｕｌ容量で加え、次いで、プレートを３７℃で５−３０分間インキュベーションする。次いで、今度は、アゴニスト攻撃、アセチルコリンを用いて、各ウェルに二度目の添加を行う。それを、ＦＬＩＰＲ装置に、２５ｕｌ容量で加える。蛍光単位における変化により、カルシウム応答を測定する。阻害剤／アンタゴニストの活性を測定するために、アセチルコリンリガンドをＥＣ８０濃度で加え、次いで、用量反応希釈曲線を用いて、アンタゴニストのＩＣ５０を測定することができる。Ｍ３について用いる対照アンタゴニストはアトロピンである。
【００５１】
２）９６−ウェルＦＬＩＰＲアッセイ
以前記載されているように、受容体活性化カルシウム動員をモニタリングすることにより、ＣＨＯ細胞上で発現されているｍＡＣｈＲｓの刺激を分析した。９６ウェルブラックウォール／クリアーボトムプレート中に、Ｍ３ｍＡＣｈＲｓを安定に発現しているＣＨＯ細胞を蒔いた。１８ないし２４時間後、培地を吸引し、次いで、１００μｌのローディング培地（Ｅａｒｌ’ｓ塩，０．１％のＲＩＡ−グレードＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ  ＭＯ）および４μＭのＦｌｕｏ−３−アセトキシメチルエステル蛍光指示色素（Ｆｌｕｏ−３  ＡＭ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を加えたＥＭＥＭ）と交換し、次いで、３７℃で１時間インキュベーションした。次いで、色素を含有する培地を吸引し、新鮮な培地（Ｆｌｕｏ−３  ＡＭなし）と交換し、次いで、細胞を３７℃で１０分間インキュベーションした。次いで、細胞を３回洗浄し、１００μｌのアッセイバッファー（０．１％のゼラチン（Ｓｉｇｍａ）、１２０ｍＭのＮａＣｌ、４．６ｍＭのＫＣｌ、１ｍＭのＫＨ２ＰＯ４、２５ｍＭのＮａＨＣＯ３、１．０ｍＭのＣａＣｌ２、１．１ｍＭのＭｇＣｌ２、１１ｍＭのグルコース、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４））中、３７℃で１０分間インキュベーションした。５０μｌの化合物（アッセイ中、１×１０−１１−１×１０−５Ｍ最終）を加え、そのプレートを３７℃で１０分間インキュベーションした。次いで、プレートを蛍光強度プレートリーダー（ＦＬＩＰＲ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）中にセットし、そこで、色素をローディングした細胞を、６ワットのアルゴンレーザーからの励起光（４８８ｎｍ）に曝した。０．１％のＢＳＡを含有するバッファー中に調製した５０μｌのアセチルコリン（０．１−１０ｎＭ最終）を５０μｌ／秒で加えることにより、細胞を活性化した。サイトゾルのカルシウム濃度における変化としてモニタリングされるカルシウム動員を、５６６ｎｍの発光強度における変化として測定した。発光強度における変化は、サイトゾルのカルシウムレベルに直接関連付けられる。同時に、冷却ＣＣＤカメラを用いて、全９６ウェルから放出された蛍光を測定する。データポイントを毎秒集める。次いで、ＧｒａｐｈＰａｄ  ＰＲＩＳＭソフトウェアを用いて、データをプロットし、解析する。
【００５２】
メタコリンが誘導する気管支収縮
覚醒、無拘束のＢａｌｂＣマウス（各群、ｎ＝６）において、メタコリンに対する気道応答性を測定した。圧プレスチモグラフィを用いて、メタコリンでの気管支の攻撃の間に生じる気道抵抗の変化と相関関係にあることが分かっている、ポウズの増大（Ｐｅｎｈ）、すなわち、単位のない尺度を測定した。５０μｌのビヒクル（１０％のＤＭＳＯ）中の５０μｌの化合物（０．００３−１０μｇ／マウス）を用いてマウスの鼻腔内を予め処置し、次いで、プレスチモグラフィチャンバー内に置いた。そのチャンバー内で、一旦、マウスを１０分間平衡状態とし、その後、５分間のベースラインＰｅｎｈ測定を行った。次いで、メタコリン（１０ｍｇ／ｍｌ）のエアロゾルを用いて２分間マウスを攻撃した。メタコリンエアロゾルの攻撃開始から７分間連続してＰｅｎｈを記録し、その後５分間攻撃を続けた。ＧｒａｐｈＰａｄ  ＰＲＩＳＭソフトウェアを用いて、各マウスについてのデータを解析し、プロットした。
【００５３】
本明細書中に引用した、特許、特許出願を含め全ての文献は、出典明示によりその全てが本明細書の一部となる。
【００５４】
上記記載は、その好ましい実施態様を含む本発明を十分に開示している。本明細書中、特に開示された実施態様の修正および変更は、添付の特許請求の範囲内にある。さらなる記載がなくとも、前記記載を用いて、当業者は本発明を最大限に利用できると考えられる。従って、本明細書の実施例は、単なる例示と解釈されるべきであり、本発明の範囲を決して限定するものではない。独占的な特性または特権が主張される本発明の実施態様は、添付の特許請求の範囲のとおり定義される。
【国際調査報告】
2007513181.tif 000007