(57)【要約】  本発明は、Ｒ４、Ｒ６、およびＹが、本明細書でそのために規定する意味のいずれかである、炎症性疾患、心血管疾患、および癌を含む疾患および状態の治療において薬剤として有用な式（Ｉ）のピリミジン、および薬学的に許容できるその塩を提供する。式（Ｉ）の１種または複数の化合物を含む医薬組成物も提供する。    【化１】2007509924.tif 000025
2007509924.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式Ｉの化合物
【化１】
2007509924.tif 000024
［式中、
Ｒ６は、水素またはメチルであり、
Ｙは、Ｏ、ＮＨ、またはＳであり、
Ｒ４は、Ｃ２〜Ｃ６アルキル、−Ｌ−Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、アダマンチル、５員または６員ヘテロシクロアルキル、および−Ｊ−Ｒｃからなる群から選択され、
Ｒｃは、フェニル基またはナフチル基であり、
Ｌは、不在であり、またはＣ１〜Ｃ３アルキレンであり、
Ｊは、不在であり、またはＣ１〜Ｃ４−アルキレンである］または薬学的に許容できるその塩。
【請求項２】
ＹがＯであり、Ｒ６が水素であり、Ｒ４が−Ｌ−Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
４−シクロヘプチルオキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド；
４−シクロペンチルオキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド；
４−シクロヘキシルオキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド；
４−シクロオクチルオキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド；
４−（２−シクロヘキシル−エトキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド；
４−シクロヘキシルメトキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド；
４−（３，３−ジメチル−シクロヘキシルオキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド；および
４−（３，５−ジメチル−シクロヘキシルオキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド
である、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
４−（アダマンタン−２−イルオキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド、および
４−（ビシクロ［２．２．１］ヘプタ−２−イルオキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
ＹがＯであり、Ｒ６が水素であり、Ｒ４がＣ３〜Ｃ８シクロアルキルまたはＣ１〜Ｃ３アルキレン−Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
ＹがＯであり、Ｒ６が水素であり、Ｒ４が５員または６員ヘテロシクロアルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ４がテトラヒドロピラニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
ＹがＯであり、Ｒ６が水素であり、Ｒ４がフェニル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
４−（４−イソプロピル−フェノキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド、および
４−（４−シクロヘキシル−フェノキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド
からなる群から選択される、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
ＹがＮＨであり、Ｒ６が水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
関節リウマチ、強直性脊椎炎、骨関節炎、乾癬性関節炎、乾癬、炎症性疾患、および自己免疫疾患からなる群から選択される疾患に罹患している対象を治療する方法であって、
関節リウマチ、強直性脊椎炎、骨関節炎、乾癬性関節炎、乾癬、炎症性疾患、および自己免疫疾患からなる群から選択される疾患に罹患している対象に、治療有効量の請求項１に記載の化合物と薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を投与することを含む方法。
【請求項１２】
前記化合物が請求項１から１０のいずれか一項に記載の化合物である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
治療有効量の請求項１に記載の化合物と薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物。
【請求項１４】
治療有効量の請求項１から１０のいずれか一項に記載の化合物と、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物。
【請求項１５】
治療有効量の、
４−シクロヘプチルオキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド；
４−シクロペンチルオキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド；
４−シクロヘキシルオキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５  −イル）−アミド；
４−シクロオクチルオキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド；
４−（２−シクロヘキシル−エトキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド；
４−シクロヘキシルメトキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド；
４−（３，３−ジメチル−シクロヘキシルオキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド；
４−（３，５−ジメチル−シクロヘキシルオキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド；
４−（アダマンタン−２−イルオキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド；
４−（ビシクロ［２．２．ｌ］ヘプト−２−イルオキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド；
４−（４−イソプロピル−フェノキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド；および
４−（４−シクロヘキシル−フェノキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド
からなる群から選択される化合物を含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
【背景技術】
【０００２】
ホスホイノシチド−３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）は、ホスホイノシトールの３’−ＯＨをリン酸化してＰＩ−３−Ｐ（ホソファチジルイノシトール３リン酸）、ＰＩ−３，４−Ｐ２、およびＰＩ−３，４，５−Ｐ３を生成する脂質キナーゼの１ファミリーである。あるクラスのＰＩ３Ｋは、増殖因子によって刺激される。別のクラスのＰＩ３Ｋは、Ｇタンパク質結合受容体によって活性化され、これにはＰＩ３Ｋγが含まれる。増殖因子によって刺激されるＰＩ３Ｋ（たとえば、ＰＩ３Ｋα）は、細胞増殖および癌と関係付けられている。ＰＩ３Ｋγは、シグナル伝達カスケードに関与することが示されている。たとえば、ＰＩ３Ｋγは、Ｃ５ａ、ｆＭＬＰ、ＡＤＰ、およびＩＬ−８などのリガンドに応答して活性化される。ＰＩ３Ｋγはさらに、免疫疾患とも関係付けられている（Ｈｉｒｓｃｈら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２０００、第２８７巻：１０４９〜１０５３ページ）。ＰＩ３Ｋγヌルマクロファージは、走化性応答が弱まっており、炎症と闘う能力が低下している（Ｈｉｒｓｃｈら、２０００年、前掲書）。また、ＰＩ３Ｋγは、血栓性疾患（たとえば、血栓塞栓症、虚血性疾患、心臓発作、および卒中）とも関係付けられている（Ｈｉｒｓｃｈら、ＦＡＳＥＢ  Ｊ．２０００年、第１５巻（１１）：２０１９〜２０２１ページ；およびＨｉｒｓｃｈら、ＦＡＳＥＢ  Ｊ．、２００１年７月９日、１０．１０９６／ｆｊ．００−０８１０ｆｊｅ（本明細書では、Ｈｉｒｓｃｈら、２００１年として引用する）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
ヒトの疾患の治療のためのＰＩ３Ｋのメンバーの阻害剤が開発されている（たとえば、ＷＯ０１／８１３４６、ＷＯ０１／５３２６６、およびＷＯ０１／８３４５６を参照されたい）。医薬品としての使用するためのＰＩ３Ｋを阻害できる更なる化合物が求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
一態様では、本発明は、次式Ｉのピリミジン
【０００５】
【化１】
2007509924.tif 000003
［式中、
Ｒ６は、水素またはメチルであり、
Ｙは、Ｏ、ＮＨ、またはＳであり、
Ｒ４は、Ｃ２〜Ｃ６アルキル、−Ｌ−Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、アダマンチル、５員または６員ヘテロシクロアルキル、および−Ｊ−Ｒｃからなる群から選択され、
Ｒｃは、フェニル基またはナフチル基であり、
Ｌは、不在であり、またはＣ１〜Ｃ３アルキレンであり、
Ｊは、不在であり、またはＣ１〜Ｃ４−アルキレンである］または薬学的に許容できるその塩を提供する。
【０００６】
ある式Ｉの実施形態では、ＹはＯであり、Ｒ６は水素であり、Ｒ４はＣ３〜Ｃ８シクロアルキルである。すなわち、次式ＩＩ
【０００７】
【化２】
2007509924.tif 000004
の化合物である。
【０００８】
式ＩＩの化合物の例には、それらに限定されるものではないが、
４−シクロヘプチルオキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド；
４−シクロペンチルオキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド；
４−シクロヘキシルオキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド；
４−シクロオクチルオキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド；
４−（２−シクロヘキシル−エトキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド；
４−シクロヘキシルメトキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド；
４−（３，３−ジメチル−シクロヘキシルオキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド；および
４−（３，５−ジメチル−シクロヘキシルオキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド
が含まれる。
【０００９】
ある式Ｉの実施形態では、ＹはＯであり、Ｒ６はメチルであり、Ｒ４はＣ３〜Ｃ８シクロアルキルである。すなわち、次式ＩＩＩ
【００１０】
【化３】
2007509924.tif 000005
の化合物である。
【００１１】
式ＩＩＩの化合物の例は、４−シクロヘプチルオキシ−６−メチル−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミドである。
【００１２】
ある式Ｉの実施形態では、ＹはＮＨであり、Ｒ６は水素である。すなわち、次式ＩＶ
【００１３】
【化４】
2007509924.tif 000006
の化合物である。
【００１４】
式ＩＶの化合物の例には、それらに限定されるものではないが、
４−シクロペンチルアミノ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド、
４−ベンジルアミノ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド、および
４−シクロヘキシルアミノ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド
が含まれる。
【００１５】
ある式Ｉの実施形態では、ＹはＳである。すなわち、次式Ｖ
【００１６】
【化５】
2007509924.tif 000007
の化合物である。
【００１７】
式Ｖの化合物の例は、４−シクロヘプチルスルファニル−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミドである。
【００１８】
別の態様では、本発明は、治療有効量の式Ｉ〜Ｖのいずれか１種の化合物と、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を提供する。ある実施形態では、これらの組成物は、ＰＩ３Ｋが仲介する障害または状態の治療に有用である。本発明の化合物は、癌、血栓性疾患、心疾患、卒中、関節リウマチなどの炎症性疾患、またはＰＩ３Ｋが仲介する別の障害の治療に有用な化合物も含む医薬組成物中に配合してもよい。
【００１９】
別の態様では、本発明は、ＰＩ３Ｋが仲介する障害または状態に罹患している対象を治療する方法であって、ＰＩ３Ｋが仲介する状態または障害に罹患している対象に、治療有効量の式Ｉ〜Ｖのいずれか１種の化合物と薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。ある実施形態では、ＰＩ３Ｋが仲介する状態または障害は、関節リウマチ、強直性脊椎炎、骨関節炎、乾癬性関節炎、乾癬、炎症性疾患、および自己免疫疾患からなる群から選択される。他の実施形態では、ＰＩ３Ｋが仲介する状態または障害は、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、高血圧、深在静脈血栓症、卒中、心筋梗塞、不安定狭心症、血栓塞栓症、肺塞栓症、血栓性疾患、急性動脈虚血、末梢血栓性閉塞、および冠動脈疾患からなる群から選択される。その他の実施形態では、ＰＩ３Ｋが仲介する状態または障害は、癌、大腸癌、グリア芽細胞腫、子宮体癌、肝細胞癌、肺癌、黒色腫、腎細胞癌、甲状腺癌、細胞リンパ腫（ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）、リンパ球増殖性障害、小細胞肺癌、扁平上皮肺癌、神経膠腫、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頚癌、および白血病からなる群から選択される。さらに別の実施形態では、ＰＩ３Ｋが仲介する状態または障害は、ＩＩ型糖尿病からなる群から選択される。その他の実施形態では、ＰＩ３Ｋが仲介する状態または障害は、呼吸器疾患、気管支炎、喘息、および慢性閉塞性肺疾患からなる群から選択される。ある実施形態では、対象はヒトである。
【００２０】
定義
本明細書では、以下の用語は、別段の指定がない限り、割り当てられた意味を有する。
【００２１】
「ＰＩ３Ｋが仲介する障害または状態」は、１種または複数のＰＩ３ＫまたはＰＩ３Ｐホスファターゼ（たとえば、ＰＴＥＮなど）が、障害または状態の開始、１つまたは複数の症状もしくは疾患マーカーの出現、重症度、または進行に関与していることを特徴とする。ＰＩ３Ｋが仲介する障害および状態には、関節リウマチ、強直性脊椎炎、骨関節炎、乾癬性関節炎、乾癬、炎症性疾患、肺線維症、自己免疫疾患、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、高血圧、深在静脈血栓症、卒中、心筋梗塞、不安定狭心症、血栓塞栓症、肺塞栓症、血栓性疾患、急性動脈虚血、末梢血栓性閉塞、冠動脈疾患、癌、乳癌、グリア芽細胞腫、子宮体癌、肝細胞癌、大腸癌、肺癌、黒色腫、腎細胞癌、甲状腺癌、小細胞肺癌、扁平上皮肺癌、神経膠腫、前立腺癌、卵巣癌、子宮頚癌、白血病、細胞リンパ腫、リンパ球増殖性障害、ＩＩ型糖尿病、呼吸器疾患、気管支炎、喘息、および慢性閉塞性肺疾患が含まれるが、それらに限定されるものではない。
【００２２】
ＰＩ３Ｋは、ホスホイノシトールの３’−ＯＨをリン酸化して、ＰＩ３Ｐを生成することのできる酵素である。ＰＩ３Ｋには、ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ、ＰＩ３Ｋγ、およびＰＩ３Ｋδが含まれるが、それらに限定されるものではない。ＰＩ３Ｋは通常、少なくとも１個の触媒サブユニット（たとえば、ｐ１１０ｒなど）を含み、調節サブユニット（たとえば、ｐ１０１γなど）をさらに含んでもよい。
【００２３】
用語「アルキル基」または「アルキル」は、直鎖状および分枝鎖状の炭素基を含む。用語「アルキレン」とは、非置換または置換アルカンジラジカルを指す。たとえば、「Ｃ２〜６アルキル」は、２〜６個の炭素原子を有するアルキル基である。Ｃ２〜Ｃ６直鎖状アルキル基の例には、それらに限定されるものではないが、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、およびｎ−ヘキシルが含まれる。分枝鎖アルキル基の例には、それらに限定されるものではないが、イソプロピル、ｔ−ブチル、イソブチルなどが含まれる。アルキレン基の例には、それらに限定されるものではないが、−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−、および−（ＣＨ２）１〜３が含まれる。アルキレン基は、以下でアルキルについて述べる基で置換されていてもよい。
【００２４】
用語アルキルは、「非置換アルキル」および「置換アルキル」の両方を含み、後者は、炭化水素主鎖の１個または複数の炭素上で置換基が水素と入れ替わっているアルキル部分を指す。そのような置換基は、ハロ、Ｉ、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、トリフルオロメチル、ＮＨ２、−ＯＣＦ３、およびＯ−Ｃ１〜Ｃ３アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される。
【００２５】
典型的な置換アルキル基は、したがって、２，３−ジクロロペンチル、３−ヒドロキシ−５−カルボキシヘキシル、２−アミノプロピル、ペンタクロロブチル、トリフロロメチル、メトキシエチル、３−ヒドロキシペンチル、４−クロロブチル、１，２−ジメチル−プロピル、およびペンタフルオロエチルである。
【００２６】
「ハロ」には、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨードが含まれる。
【００２７】
用語「Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル」とは、３〜８個の炭素を含むシクロアルキル基を指す。したがって、用語「Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル」は、３〜８個の炭素を含む単環式シクロアルキル基、および７または８個の炭素を含む二環式シクロアルキル基を含む。「Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル」の例には、それらに限定されるものではないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、およびビシクロ［２．２．１］ヘプチルが含まれる。シクロアルキル基は、１または２個の二重結合（すなわち、シクロアルキレニル）を含んでいてもよく、それらに限定されるものではないが、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、およびシクロヘプテニルを含めることができる。「Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル」は、Ｃ１〜Ｃ３アルキル（たとえば、メチル）および−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３アルキル（たとえば、メトキシ）からそれぞれ独立に選択される１または２個の基で置換されていてもよい。置換シクロアルキル基の例には、メチル−シクロプロピル、ジメチル−シクロヘキシル、２−メチル−シクロヘキシル、３−メチル−シクロヘキシル、３，５−ジメチル−シクロヘキシル、および４−メチル−シクロヘキシルが含まれるが、それらに限定されるものではない。
【００２８】
用語「アダマンチル」は、非置換アダマンチル、およびＣ１〜Ｃ３アルキル（たとえば、メチル）および−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３アルキル（たとえば、メトキシ）からそれぞれ独立に選択された１または２個の基で置換されているアダマンチルを含む。
【００２９】
語句「５員または６員ヘテロシクロアルキル」とは、炭素原子と、Ｓ、Ｎ、またはＯからそれぞれ独立に選択される１〜３個のヘテロ原子とを有する安定な環状基を意味し、２個のＯ原子、または１個のＯ原子および１個のＳ原子が存在するとき、その２個のＯ原子、または１個のＯ原子および１個のＳ原子は、それぞれ互いに直接には結合しない。５または６員ヘテロシクロアルキルは、１または２個の炭素−炭素に重結合または炭素−窒素二重結合を含んでいてもよい。５員または６員ヘテロシクロアルキルの実例には、テトラヒドロフラン−３−イル、モルホリン−４−イル、テトラヒドロ−チオピラン−４−イル、ピペリジニル、テトラヒドロピラニル、および４−メチル−ピペラジン−２−イルが含まれる。
【００３０】
別段の指摘がない限り、前述のヘテロシクロアルキルは、それが可能であり、安定な構造をもたらす場合には、Ｃ結合型でもＮ結合型でもよい。たとえば、ピペリジニルは、ピペリジン−１−イル（Ｎ結合型）でもよいし、またはピペリジン−４−イル（Ｃ結合型）でもよい。
【００３１】
用語「５または６員ヘテロシクロアルキル」の範囲には、環中に１個の炭素−炭素二重結合または１個の炭素−窒素二重結合を有する５員環（たとえば、２−ピロリニル、３−ピロリニルなど）、および環中に１個の炭素−炭素二重結合または１個の炭素−窒素二重結合を有する６員環（たとえば、ジヒドロ−２Ｈ−ピラニル、１，２，３，４−テトラヒドロピリジン、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジンなど）が含まれる。
【００３２】
「５員ヘテロシクロアルキル」とは、２〜４個の炭素原子と、１Ｏ、１Ｓ、１Ｎ、２Ｎ、３Ｎ、１Ｓおよび１Ｎ、ＩＳおよび２Ｎ、１Ｏおよび１Ｎ、ならびに１Ｏおよび２Ｎからなる群から選択される１〜３個のヘテロ原子とを有する安定な５員単環式シクロアルキル環である。安定な５員ヘテロシクロアルキルの実例には、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ジヒドロチエニル、イミダゾリジニル、オキサゾリジニル、イミダゾリニル、イソオキサゾリジニル、ピロリジニル、２−ピロリニル、および３−ピロリニルが含まれる。
【００３３】
「６員ヘテロシクロアルキル」とは、３〜５個の炭素原子と、１Ｏ、２Ｏ、１Ｓ、２Ｓ、１Ｎ、２Ｎ、３Ｎ、１Ｓ、１Ｏおよび１Ｎ、１Ｓおよび１Ｎ、１Ｓおよび２Ｎ、１Ｓおよび１Ｏ、１Ｓおよび２Ｏ、１Ｏおよび１Ｎ、ならびに１Ｏおよび２Ｎからなる群から選択される１〜３個のヘテロ原子とを有する安定な６員単環式シクロアルキル環である。安定な６員ヘテロシクロアルキルの実例には、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピラニル、ジオキサニル、１，３−ジオキソラニル、１，４−ジチアニル、ヘキサヒドロピリミジン、モルホリニル、ピペラジニル、ピペリジニル、２Ｈ−ピラニル、４Ｈ−ピラニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、１，２，３，６−テトラヒドロピリジニル、テトラヒドロチオピラニル、１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロ−１λ６−チオピラニル、１，１−ジオキソ−１λ６−チオモルホリニル、チオモルホリニル、チオキサニル、およびトリチアニルが含まれる。
【００３４】
用語「５員または６員ヘテロシクロアルキル」は、飽和および不飽和の「５員または６員ヘテロシクロアルキル」を含む。「５員または６員ヘテロシクロアルキル」は、可能な場合では上でＣ３〜Ｃ８シクロアルキルについて述べたように置換されていてもよい。
【００３５】
用語「フェニル」とは、非置換および置換フェニル基を指す。フェニル基は、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３アルキル、−ＯＣＦ３、ハロ、およびＣ５〜Ｃ６シクロアルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよい。
【００３６】
典型的な置換フェニル基には、それらに限定されるものではないが、３−クロロフェニル、２，６−ジブロモフェニル、２，４，６−トリブロモフェニル、２，６−ジクロロフェニル、４−トリフルオロメチルフェニル、３−メチル−フェニル、４−メチル−フェニル、３，５−ジメチル−フェニル、３，４，５−トリメトキシ−フェニル、３，５−ジメトキシ−フェニル、３，４−ジメトキシ−フェニル、３−メトキシ−フェニル、４−メトキシ−フェニル、３，５−ジフルオロ−フェニル、４−クロロ−フェニル、３−トリフルオロメチル−フェニル、３，５−ジクロロ−フェニル、２−メトキシ−５−メチル−フェニル、２−フルオロ−５−メチル−フェニル、４−クロロ−２−トリフルオロメチル−フェニルなどが含まれる。
【００３７】
「ナフチル基」とは、非置換および置換ナフチル基を指す。ナフチル基は、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３アルキル、−ＯＣＦ３、ハロ、およびＣ５〜Ｃ６シクロアルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい。
【００３８】
本発明の一部の化合物は、鏡像異性体、ジアステレオ異性体、および幾何異性体を含む立体異性体として存在する場合がある。幾何異性体としては、Ｅ立体配置またはＺ立体配置として存在し得るアルケニル基を有する本発明の化合物が挙げられ、この場合では、そのすべての幾何学的形態、すなわち、ＥおよびＺ、シスおよびトランス、ならびにこれらの混合物が本発明の範囲内である。ある本発明の化合物は、１箇所を超える炭素原子のところで置換されていてもよいシクロアルキル基を有し、この場合では、そのすべての幾何学的形態、すなわち、シスおよびトランス、ならびにこれらの混合物が本発明の範囲内である。これらの形態には、（Ｒ）、（Ｓ）、エピマー、ジアステレオ異性体、シス、トランス、シン、アンチ、（Ｅ）、（Ｚ）、互変異性体、およびこれらの混合物が含まれ、これらを本発明の化合物に入れて企図する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３９】
Ｉ．序文
本発明は、Ｒ４、Ｒ６、およびＹが、本明細書でそのために規定する意味のいずれかである、炎症性疾患、心血管疾患、および癌を含む疾患および状態の治療において薬剤として有用な式Ｉ〜Ｖのピリミジン、および薬学的に許容できるその塩に関する。式Ｉ〜Ｖの１種または複数の化合物を含む医薬組成物も提供する。
【００４０】
ＩＩ．化合物の調製
本発明の化合物（たとえば、式Ｉ〜Ｖの化合物）は、当技術分野で知られている合成法、および以下に記載するスキームで概略を述べる合成法を適用して調製することができる。
【００４１】
【化６】
2007509924.tif 000008
【００４２】
スキーム１では、２（４−クロロ−２−メチルスルファニル−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ．）を適切なヒドロキシル保護基試薬ＰＧ（たとえば、（４−ニトロ−フェニル）−メタノール）と反応させて、３（たとえば、２−メチルスルファニル−４−（４−ニトロ−ベンジルオキシ）−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル）を得る。当業者ならば、ヒドロキシル基に適する保護基として広範な種類の保護基がスキーム１で使用できることを承知されよう。（たとえば、ＧｒｅｅｎｅおよびＷｕｔｓ、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」第２版、第２章（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、１９９１年）を参照のこと）。たとえば、２と、アルキル−リチウム（たとえば、ｓ−ブチル−リチウム、ｎ−ブチル−リチウム）で処理した置換型または非置換のベンジルアルコール（たとえば、（４−ニトロ−フェニル）−メタノール）とを、ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）などの溶媒中で反応させて、３（たとえば、２−メチルスルファニル−４−（４−ニトロ−ベンジルオキシ）−ピラニジン−５−カルボン酸エチルエステル）を得ることができる。
【００４３】
次いで、クロロホルムやジクロロメタンなどの溶媒中で、適切なオキサジリジン（たとえば、Ｄａｖｉｓオキサジリジン（（ＩＳ）−（＋）−（１０−カンファースルホニル）オキサジリジン）や、３−フェニル−２−（フェニルスルホニル）−１，２−オキサジリジンなど）、ジメチルジオキシラン、またはｍＣＰＢＡ（３−クロロペルオキシ安息香酸）を使用して、３のメチルチオ基を酸化させ、対応するメチルスルフィニル誘導体にする。次いで、メチルスルフィニル基をモルホリンで置換して、４（たとえば、２−モルホリン−４−イル−４−（４−ニトロ−ベンジルオキシ）−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル）を得る。
【００４４】
次いで、４のヒドロキシル保護基を除去して、５（たとえば、４−クロロ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル）を得る。たとえば、適切な圧力の水素ガス中に置いたエタノールなどのアルコール溶媒中でパラジウム／炭素触媒を用いる還元によってニトロ−ベンジルオキシ基を切断すると、ヒドロキシルにすることができる。ある実施形態で、保護基が置換されていてもよいフェニル基またはナフチル基Ｒ４であるならば、保護基は除去しない。そして、以下に記載するように、４を塩基で処理し、アミノテトラゾールと反応させて９を得る。
【００４５】
５は、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）などの溶媒中でＤＥＡＤ（アゾジカルボン酸ジエチル）およびＰＰｈ３（トリフェニルホスフィン）を用いる光延反応で、Ｒｂ−ＯＨ（たとえば、シクロヘプタノール）と反応させて、７（たとえば、４−シクロヘプチルオキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル）にする。Ｒｂ−ＯＨは、それらに限定されるものではないが、式ＨＯ−Ｌ−Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル（ここで、Ｌは不在または存在する）の化合物、ビシクロ［２．２．１］ヘプタノール、アダマンタノールを含む化合物であり、Ｌは、不在またはＣ１〜Ｃ３アルキレンである。Ｒｂ−ＯＨの例には、それらに限定されるものではないが、シクロヘキシル−メタノール、シクロヘキサノール、フェニル−メタノール、シクロヘプタノール、およびシクロオクタノールが含まれる。
【００４６】
次いで、ＭｅＯＨおよびＴＨＦ、ジオキサン、ジオキサンおよび水、またはメタノールおよび水中で、７を無機塩基（たとえば、ＬｉＯＨ、ＮａＯＨなど）によってけん化して、対応するカルボン酸８（たとえば、４−シクロヘプチルオキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸）を得る。次いで、ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）などの非プロトン性溶媒中でカルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）を使用して、このカルボン酸を５−アミノテトラゾールと結合させ、カルボキサミド９（たとえば、４−シクロヘプチルオキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド）を得る。あるいは、無水ＣＨ２Ｃｌ２中の８を、触媒量のＤＭＦ、次いで塩化オキサリルで処理することもできる。次いで、５−アミノテトラゾールおよびトリエチルアミンをその混合物に加えた後、アセトニトリルを加えて９を得る。
【００４７】
【化７】
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【００４８】
スキーム２では、無水ＴＨＦ中で、２と、ｎ−ブチルリチウムなどのアルキルリチウム試薬または水素化物塩基（たとえば、ＮａＨ）で処理してあるＲｂ−ＯＨ化合物とを反応させて、３を生成する。次いで、３を、スキーム１のように酸化させ、モルホリンと反応させて４を得る。次に４を、スキーム１のようにアミノテトラゾールと反応させて９を得る。
【００４９】
【化８】
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【００５０】
スキーム３では、１０（モルホリン−４−カルボキサミジン）と１１（２−エトキシメチレン−マロン酸ジエチルエステル）および酢酸ナトリウムとをＤＭＦ中で反応させて、５（４−ヒドロキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル）を得る。
【００５１】
【化９】
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【００５２】
スキーム４では、ジクロロメタン中の５を塩化オキサリルおよび触媒量のＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）と反応させて、２０（たとえば、４−クロロ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル）を得る。２０を、水素化物塩基（たとえば、ＮａＨ）で処理したアルコール（Ｒｃ−ＯＨ）またはチオール（Ｒ４−ＳＨ）と反応させて、２２（たとえば、２−モルホリン−４−イル−４−フェノキシ−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル）を得る。Ｒｃ−ＯＨは、それらに限定されるものではないが、式ＨＯ−Ｌ−Ｒｄ（ここで、Ｌは存在し、Ｒｄは、置換されていてもよいフェニル基またはナフチル基である）の化合物を含む化合物である。Ｒｃ−ＯＨの例には、それらに限定されるものではないが、４−シクロヘキシルフェノールおよび４−イソプロピルフェノールが含まれる。次いで、２２を、スキーム１のように塩基で処理し、アミノテトラゾールと反応させて２４を得る。
【００５３】
【化１０】
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【００５４】
スキーム５では、ジクロロメタンまたは塩化メチレン中の２を、トリエチルアミンなどの塩基性アミンと反応させた後、Ｒ４−ＮＨ２（たとえば、シクロペンチルアミン、ベンジルアミン、シクロヘキシルアミンなど）と反応させて、３０（たとえば、４−シクロペンチルアミノ−２−メチルスルファニル−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル）を得る。次いで、３０を、スキーム１のように酸化させ、モルホリンと反応させて、３２（たとえば、４−シクロペンチルアミノ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル）を生成する。次いで、３２をけん化して、３４（たとえば、４−シクロペンチルアミノ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸）を生成し、次いでこれを、スキーム１で述べたように５−アミノ−テトラゾールに結合させて、３６（たとえば、４−シクロペンチルアミノ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド）を得る。
【００５５】
【化１１】
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【００５６】
スキーム６では、無水ジクロロメタン中のチオ尿素を、窒素ガス中でＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドジメチルアセタールと反応させる。この反応の生成物を後処理し、無水ＴＨＦに新たに懸濁させ、窒素ガス中でＭｅＩと反応させて、３０（１−［１−（ジメチルアミノ）エチリデン］−２−メチルイソチオ尿素ヨウ化水素酸塩）にする。次いで、窒素ガス中で、３０と塩化マロニルとを無水ジクロロメタンまたはクロロホルム中で反応させ、その後トリエチルアミンなどの塩基を加えて、３２（エチル−４−ヒドロキシ−６−メチル−２−（メチルチオ）−５−ピリミジンカルボキシラート）を得る。３２を出発材料として使用する合成を、上のスキーム１〜５で述べたのと同様にして実施すると、Ｒ６がメチルである本発明の化合物を得ることができる。
【００５７】
ＩＩＩ．化合物の評価
本発明の化合物（たとえば、式Ｉ〜Ｖの化合物および薬学的に許容できるその塩）を、ＰＩ３Ｋを阻害する能力について検定することができる。そうした検定の例を以下で述べるが、それらは、ＰＩ３Ｋ活性のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイおよびｉｎ  ｖｉｖｏアッセイを含む。
【００５８】
本発明のある実施形態では、化合物は、環状ヌクレオチド依存性プロテインキナーゼ、ＰＤＧＦ、チロシンキナーゼ、ＭＡＰキナーゼ、ＭＡＰキナーゼキナーゼ、ＭＥＫＫ、サイクリン依存性プロテインキナーゼを含むがこれに限定されない１種または複数の酵素と比べて１種または複数のＰＩ３Ｋを選択的に阻害する。本発明の他の実施形態では、化合物は、一方のＰＩ３Ｋと比べてもう一方のＰＩ３Ｋを選択的に阻害する。たとえば、ある実施形態では、本発明の化合物は、ＰＩ３ＫαまたはＰＩ３Ｋβと比べてＰＩ３Ｋγを選択的に阻害する能力を示す。第一の酵素に対する化合物のＩＣ５０が、第二の化合物に対する化合物のＩＣ５０よりも小さいとき、その化合物は、第二の酵素と比べて第一の酵素を選択的に阻害する。ＩＣ５０は、たとえば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏＰＩ３Ｋアッセイで測定することができる。
【００５９】
現時点で好ましい実施形態では、本発明の化合物は、そのＰＩ３Ｋ活性阻害能をｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイまたはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイで評価することができる（以下を参照のこと）。
【００６０】
ＰＩ３Ｋアッセイは、ＰＩ３Ｋ阻害化合物の存在下または不在下で実施し、酵素活性の量を比較して、ＰＩ３Ｋ阻害化合物の阻害活性を決定する。
【００６１】
ＰＩ３Ｋ阻害化合物を含まないサンプルに、相対ＰＩ３Ｋ活性値１００を割り当てる。ＰＩ３Ｋ阻害化合物存在下でのＰＩ３Ｋ活性が、対照サンプル（すなわち、阻害化合物なし）よりも低いとき、ＰＩ３Ｋ活性は阻害されている。化合物のＩＣ５０を、対照サンプル活性の５０％を示す化合物濃度である。ある実施形態では、本発明の化合物のＩＣ５０は、約１００μＭ未満である。他の実施形態では、本発明の化合物のＩＣ５０は、約１μＭ以下である。さらに別の実施形態では、本発明の化合物のＩＣ５０は、約２００ｎＭ以下である。
【００６２】
ＰＩ３Ｋγアッセイについては、当技術分野で記載されている（たとえば、Ｌｅｏｐｏｌｄｔら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１９９８年、第２７３巻：７０２４〜７０２９ページを参照のこと）。通常、ｐ１０１タンパク質とｐ１１０γタンパク質からなる複合体を含有するサンプルに、Ｇβタンパク質およびＧγタンパク質（たとえば、Ｇタンパク質β１／γ２サブユニット）を配合する。次いで、この混合物に放射標識ＡＴＰ（たとえば、γ−３２Ｐ−ＡＴＰ）を加える。ＰＩＰ２を含有する脂質ミセルを作製して脂質基質を生成する。次いで、脂質および酵素混合物を加えて反応を開始し、Ｈ３ＰＯ４を加えて反応を停止する。次いで、脂質生成物をガラスファイバー製フィルタープレートに移し、Ｈ３ＰＯ４で数回洗浄する。当技術分野でよく知られている放射分析法を使用して、放射性脂質生成物（ＰＩＰ３）の存在を測定することができる。
【００６３】
増殖因子によって調節されるＰＩ３Ｋの活性も、脂質キナーゼアッセイを使用して測定することができる。たとえば、ＰＩ３Ｋαは、調節サブユニットおよび触媒サブユニットを含むサンプルを使用して検定することができる。放射標識ＡＴＰを加えたサンプルに、活性ペプチド（たとえば、ｐＹペプチド、ＳｙｎＰｅｐ  Ｃｏｒｐ．）を加える。次いで、ＰＩＰ２を含有する脂質ミセルをサンプルに加えて、反応を開始する。直前で記載したＰＩ３Ｋγアッセイについて述べたとおりに反応の後処理および分析を行う。細胞抽出物を使用してアッセイを実施することもできる（Ｓｕｓａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１９９２年、第２６７巻：２２９５１〜２２９５６ページ）。
【００６４】
ＩＶ．化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ評価
本発明の化合物（たとえば、式Ｉ〜Ｖの化合物および薬学的に許容できるその塩）を、炎症などの過程の量的または質的なマーカーを低減し得る能力について検定することができる。本発明の化合物が関節リウマチを治療し得る能力の検定に使用できる関節炎動物モデルの例を以下で述べる。
【００６５】
連鎖球菌細胞壁（ＳＣＷ）誘発関節炎アッセイ
少しの変更を加えて、Ｓｃｈｗａｂら（１９９１年）、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ第５９巻：４４３６〜４４４２ページに記載されているとおりに関節炎を誘発させる。０日目に右脛距関節への関節内注射を行って、ラットに超音波処理した６μｇのＳＣＷ（１０μｌのダルベッコＰＢＳ（ＤＰＢＳ）中）を与える。２１日目に、１００μｇのＳＣＷ（２５０μｌ）を静脈内投与して、全身性のＳＣＷによる遅延型過敏反応を惹起することができる。経口化合物試験については、化合物を適切な賦形剤（たとえば、０．５％のヒドロキシプロピル−メチルセルロース／０．２％のＴｗｅｅｎ８０）に懸濁させ、超音波処理し、ＳＣＷの静脈内注射によって遅延型過敏性反応を惹起する１時間前から始めて１日２回（１０ｍｌ／ｋｇの体積）投与する。化合物は、通常、２０、３０、６０、１００、２００、および３００ｍｇ／ｋｇ／日など、１日に体重１ｋｇあたり１０ｍｇと５００ｍｇの間の量を投与する。２１日目の新たな活性化の前に、感作された後足のベースライン体積を求め、その体積を、２２日目、２３日目、２４日目、２５日目などのその後の時点の体積と比較することによって、浮腫測定値を得る。水銀式体積変動記録法は、動物の足体積の検定に使用することのできる一方法である。
【００６６】
痛みを測定するために、ラットを、各後足にかかる圧力量を測定する装置に入れる。関節炎の足と正常な足の平均の差は、痛みの測定に使用される一方法である。さらに、関節炎のある動物の関節から洗い出した材料中の炎症性サイトカインレベルを測定し、関節炎でない関節のレベルまたは典型的な非関節炎関節レベルと比較する。
【００６７】
コラーゲン関節炎アッセイ
マウスのＩＩ型コラーゲン関節炎（ＣＩＡ）は、関節リウマチの実験モデルである（たとえば、Ｓｔｕａｒｔら（１９８４年）、Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．第２巻：１９９〜２１８ページ、Ｗｏｏｌｅｙ（１９８８年）、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．第１６２巻：３６１〜３７３ページを参照のこと）。この疾患は通常、フロイント完全アジュバント中の１００μｇのＩＩ型コラーゲン（「ＣＩＩ」）（たとえば、ウシまたはニワトリのＩＩ型コラーゲン）を尾の付け根から皮内投与して送達することによる、ＤＢＡ／１マウスの免疫感作によって誘発される。
【００６８】
足幅が１００％にまで増大していることを特徴とする免疫感作マウスの大半が、進行性かつ炎症性の関節炎になる。試験化合物は、２０、６０、１００、および２００ｍｇ／体重ｋｇ／日などの範囲の量でマウスに投与することができる。試験期間は、４０日、６０日、または８０日などの数週間から２〜３カ月でよい。臨床スコア指数を使用して、紅斑および浮腫（１期）、関節破壊（２期）、関節強直（３期）からの疾患の進行を評価することができる。疾患は、動物の１本またはすべての足を侵すことがあり、各マウスについて１２の合計スコアが取得可能となり得る。関節炎関節の組織病理学では、一般に、滑膜炎、パンヌス生成、軟骨および骨の腐食が明らかになる。ＣＩＡに罹りやすいすべてのマウス系統で、ＩＩ型コラーゲンに対する抗体応答が高く、ＣＩＩに対する細胞性応答が顕著である。
【００６９】
試験化合物の投与は、普通は予防目的（１０週間）または治療目的（疾患が最初に認められたときに１０日間）で行われる。マウスは、関節炎が発症しているかどうか通常は毎日検査し、多くの場合臨床スコアを割り当てる。（必要に応じて）抗体またはサイトカインを測定するために、様々な時点で各動物から血清を回収することもできる。試験の終わりに、マウスを安楽死させ、定量的な組織病理学スコアを割り当てる。
【００７０】
モノクローナル抗体関節炎アッセイ
関節リウマチの別の実験モデルは、ＩＩ型コラーゲンエピトープに対する抗体をマウスに注射して、２〜３日で関節炎を誘発するものである（たとえば、Ｂｕｒｋｈａｒｄｔら（２００２年）、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ第４６巻：２３３９〜２３４８ページ、Ｔｅｒａｔｏら（１９９２年）、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．第１４８巻：２１０３〜２１０８ページを参照のこと）。このモデルでの使用向けに、４種の抗体からなるカクテルが市販されている（Ａｒｔｈｒｏｇｅｎ−ＣＩＡ（登録商標）モノクローナル抗体カクテル、ＣＨＥＭＩＣＯＮ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．、米国カリフォルニア州Ｔｅｍｅｃｕｌａ）。このモデルは、ＤＢＡ／１系統のマウスを必要としない。試験化合物は、１日に体重１ｋｇあたり２０ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、および２００ｍｇ／ｋｇなどの範囲の量を、１回または複数回、試験中のどの時点でマウスに投与してもよい。くるぶしおよび足の腫脹は通常、端点（ｅｎｄ  ｐｏｉｎｔ）としてだけでなく組織学として量的または質的に測定する。さらに、抗体またはサイトカインを測定するために、様々な時点で各動物から血清を回収することもできる。
【００７１】
Ｖ．薬学的に許容できる塩および溶媒和化合物
本発明で使用する化合物は、溶媒和でない形態だけでなく、水和した形態を含めて溶媒和の形態で存在し得る。一般に、水和形態を含む溶媒和形態は、溶媒和でない形態に等しく、本発明の範囲内に含まれるものとする。
【００７２】
本発明の化合物（たとえば、式Ｉ〜Ｖの化合物）は、酸の付加塩および／または塩基の塩を含むが、それらに限定されるものではない、薬学的に許容できる両方の塩をさらに生成し得る。式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容できる塩には、その酸の付加塩および塩基の塩（複塩（ｄｉｓａｌｔ）を含む）が含まれる。適切な塩の例は、たとえば、ＳｔａｈｌおよびＷｅｒｍｕｔｈの「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｕｓｅ」、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、ドイツＷｅｉｎｈｅｉｍ（２００２年）およびＢｅｒｇｅらの「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊ．ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９７７年、第６６巻：１〜１９ページの中に見ることができる。
【００７３】
式Ｉ〜Ｖの化合物の薬学的に許容できる酸付加塩には、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸などの無機酸由来の非毒性の塩、ならびに脂肪族モノおよびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、アルカン二酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族のスルホン酸などの有機酸由来の塩が含まれる。たとえば、そのような塩には、式Ｉ〜Ｖの化合物の酢酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシラート（ベンゼンスルホン酸塩）、重炭酸塩／炭酸塩、重硫酸塩、カプリル酸塩、カムシラート（カンファースルホン酸塩）、クロロ安息香酸塩、クエン酸塩、エジシラート（１，２−エタンジスルホン酸塩）、リン酸二水素塩、ジニトロ安息香酸塩、エシラート（エタンスルホン酸塩）、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、ヒベンズ酸、塩酸塩／塩化物、臭化水素酸塩／臭化物、ヨウ化水素酸／ヨウ化物、イソ酪酸塩、一水素リン酸塩、イセチオン酸塩、Ｄ−乳酸塩、Ｌ−乳酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシラート（メタンスルホン酸塩）、メタリン酸塩、メチル安息香酸塩、メチル硫酸塩、２−ナフシラート（２−ナフタレンスルホン酸塩）、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、フェニル酢酸塩、リン酸塩、フタル酸塩、プロピオン酸塩、ピロリン酸塩、ピロ硫酸塩、サッカラート、セバシン酸塩、ステアリン酸塩、スベリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、亜硫酸塩、Ｄ−酒石酸塩、Ｌ−酒石酸塩、トシラート（トルエンスルホン酸塩）、およびキシナホ酸塩などが含まれる。アルギン酸塩、グルコン酸塩、ガラクツロン酸塩などのアミノ酸の塩も企図する。
【００７４】
塩基性の化合物の酸付加塩は、従来の方式で遊離塩基形態を十分な量の所望の酸と接触させて塩を生成して調製する。遊離塩基形態は、従来の方式で、塩形態を塩基と接触させ、遊離塩基を単離することで再生できる。遊離塩基形態は、極性溶媒への溶解性などのある種の物理的性質がそのそれぞれの塩形態と多少異なるが、他の点では、塩は、本発明の目的に関してそのそれぞれの遊離塩基と同等である。
【００７５】
薬学的に許容できる塩基付加塩は、アルカリ金属およびアルカリ土類金属の水酸化物や、有機アミンなどの、金属またはアミンを相手に生成される。カチオンとして使用される金属の例は、アルミニウム、カルシウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウムなどである。適切なアミンの例には、アルギニン、コリン、クロロプロカイン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、ジエタノールアミン、ジオールアミン、エチレンジアミン（エタン−１，２−ジアミン）、グリシン、リシン、メグルミン、Ｎ−メチルグルカミン、オールアミン、プロカイン（ベンザチン）、およびトロメタミンが含まれる。
【００７６】
酸性化合物の塩基付加塩は、従来の方式で遊離酸形態を十分な量の所望の塩基と接触させて塩を生成して調製する。遊離酸形態は、従来の方式で、塩形態を酸と接触させ、遊離酸を単離することで再生できる。遊離酸形態は、極性溶媒への溶解性などのある種の物理的性質がそのそれぞれの塩形態と多少異なるが、他の点では、塩は、本発明の目的に関してそのそれぞれの遊離酸と同等である。
【００７７】
ＶＩ．医薬組成物および投与方法
本発明は、治療有効量の式Ｉ〜Ｖの化合物もしくは薬学的に許容できるその塩と、薬学的に許容できるそのための担体、希釈剤、または賦形剤とを含む医薬組成物も提供する。語句「医薬組成物」とは、医学的または獣医学的用途での投与に適する組成物を指す。語句「治療有効量」とは、特定の対象または対象集団において、単独で投与し、または別の医薬品もしくは治療と併せて投与したとき、治療中の障害または状態を抑制し、休止させ、または改善させるのに十分な、化合物または薬学的に許容できるその塩の量を意味する。たとえば、ヒトまたは他の哺乳動物では、治療有効量は、検査室または臨床的な状況で経験的に決定することができ、あるいは治療がなされる特定の疾患および対象向けに米国食品医薬局または外国の同等機関のガイドラインによって義務付けられる量でよい。
【００７８】
適正な剤形、投与量、および投与経路の決定については、以下で記載するが、製薬業界および医療業界の標準の範囲内であることを理解されたい。
【００７９】
本発明の化合物は、シロップ、エリキシル、懸濁液、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、ロゼンジ、トローチ剤、水溶液、クリーム、軟膏、ローション、ゲル、乳濁液などの形の医薬組成物として製剤することができる。本発明の化合物は、ＰＩ３Ｋが仲介する障害に随伴する症状または疾患徴候を、量的または質的に測定したとき、軽減させることが好ましい。
【００８０】
本発明の化合物から医薬組成物を調製するための薬学的に許容できる担体は、固体または液体のどちらでもよい。固体形態の製剤には、粉末、錠剤、丸剤、カプセル剤、カシェ剤、坐剤、および分散性顆粒が含まれる。固体担体は、希釈剤、着香剤、結合剤、保存剤、錠剤崩壊剤、またはカプセル化材料としても働き得る１種または複数の物質でよい。
【００８１】
粉末では、担体は、固体を砕いたものであり、これを砕いた活性成分との混合物にする。錠剤では、活性成分を、必要な結合特性を有する担体と適切な割合で混合し、所望の形状および大きさに圧縮する。
【００８２】
粉末および錠剤は、活性化合物を１％〜９５％（ｗ／ｗ）含有する。ある実施形態では、活性化合物は、５％〜７０％（ｗ／ｗ）の範囲である。適切な担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ろう、カカオ脂などである。用語「製剤」は、活性成分が担体によって他の担体と一緒にまたは他の担体なしで包囲され、したがって担体と共同関係にあるカプセルをもたらす担体としてのカプセル化材料が加えられた活性化合物配合物を含むものとする。同様に、カシェ剤およびロゼンジも含まれる。錠剤、粉末、カプセル剤、丸剤、カシェ剤、およびロゼンジは、経口投与に適する固体剤形として使用することができる。
【００８３】
坐剤を調製するには、まず脂肪酸グリセリドまたはカカオ脂の混合物などの低融点ろうを融解させ、その中に、活性成分を攪拌しながら均質に分散させる。次いで、融解した均質混合物を好都合な大きさの型に注ぎ、冷まし、それによって凝固させる。
【００８４】
液状の製剤には、溶液、懸濁液、および乳濁液、たとえば、水や水／プロピレングリコール溶液が含まれる。非経口注射用の液体製剤は、ポリエチレングリコール水溶液の溶液に製剤することができる。
【００８５】
経口での使用に適する水溶液は、活性成分を水に溶解させ、所望に応じて適切な着色剤、フレーバー、安定剤、および増粘剤を加えて調製することができる。経口での使用に適する水性懸濁液は、砕いた活性成分を、天然または合成のゴム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、他のよく知られている懸濁化剤などの粘性の材料と共に水中に分散させて製することができる。
【００８６】
使用直前に経口投与用の液状製剤に変換されることになる固体状製剤も含まれる。そのような液体形態には、溶液、懸濁液、および乳濁液が含まれる。これらの製剤は、活性成分に加えて、着色剤、フレーバー、安定剤、緩衝剤、合成および天然の甘味剤、分散剤、増粘剤、溶解補助剤などを含有していて差し支えない。
【００８７】
医薬製剤は、単位投与形態にすることが好ましい。そのような形態では、製剤が、適切な量の活性成分を含有する単位用量に細分されている。単位投与形態は、錠剤、カプセル剤、および粉末をバイアルまたはアンプルに詰めたものなどの、分量別の製剤を含む包装製品にすることができる。単位投与形態は、カプセル剤、錠剤、カシェ剤、またはロゼンジそれ自体でもよいし、あるいは包装形態にしたもののいずれかを適切な個数としてもよい。
【００８８】
単位用量製剤中の活性成分の分量は、特定の適用例および活性成分の効力に応じて、０．１ｍｇ〜１０００ｍｇ、好ましくは１．０ｍｇ〜１００ｍｇ、または単位用量の１％〜９５％（ｗ／ｗ）と変動させ、またはこの範囲に調整することができる。組成物は、所望であれば、他の適合する治療薬を含んでいてもよい。
【００８９】
薬学的に許容できる担体は、一部には、投与する特定の組成物のみならず、組成物の投与に使用される特定の方法によって決められる。したがって、本発明の医薬組成物の適切な配合法はバラエティーに富む（たとえば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ」第２０版、Ｇｅｎｎａｒｏら編、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ、２０００年を参照のこと）。
【００９０】
本発明の化合物は、単独または他の適切な成分との合剤としてエアロゾル製剤にする（すなわち、化合物を「噴霧する」ことができる）と、吸入によって投与することができる。エアロゾル製剤は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン窒素などの許容できる加圧噴射剤中に入れることができる。
【００９１】
たとえば、静脈内、筋肉内、皮内、および皮下の経路によるものなどの、非経口投与に適する製剤としては、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および製剤を目的のレシピエントの血液と等張性にする溶質を含有してよい水性および非水性の等張性無菌注射溶液、ならびに懸濁化剤、溶解補助剤、増粘剤、安定剤、および保存剤を含んでよい水性および非水性の無菌懸濁液が挙げられる。本発明の実施では、組成物の投与は、たとえば、静脈内注入による投与、経口、局所、腹腔内、膀胱内、またはクモ膜下の各投与にすることができる。化合物製剤は、アンプルやバイアルなどの単位用量または多用量用の密閉容器に入れて提供することができる。注射溶液および注射懸濁液は、前に述べた種類の無菌の粉末、顆粒、および錠剤から調製することができる。
【００９２】
対象に投与する用量は、本発明では、対象において徐々に有益な治療応答をもたらすのに十分にすべきである。用語「対象」とは、哺乳類綱のメンバーを指す。哺乳動物の例には、それらに限定されるものではないが、ヒト、霊長類、チンパンジー、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ、ウマ、家畜、イヌ、ネコ、ヒツジ、およびウシが含まれる。
【００９３】
用量の決定は、使用する特定の化合物の有効性および対象の状態、ならびに治療を受ける対象の体重または体表面積によってなされる。用量の大きさの決定はまた、特定の対象における特定の化合物の投与に付随する有害な副作用の存在、性質、および程度によってなされる。治療しようとする障害の治療または予防において投与される化合物の有効量を決定する際、医師は、化合物の循環血漿レベル、化合物の毒性、および／または疾患の進行などの要素を評価することができる。一般に、化合物の用量当量は、典型的な対象で約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇである。異なる多くの投与法が当業者に知られている。
【００９４】
投与については、本発明の化合物は、集団に適用したときの化合物のＬＤ５０、化合物の薬物動態プロフィール、禁忌薬物、および化合物の様々な濃度での副作用、ならびに対象の全般的な健康を含めることができるが、それらに限定されるものではない諸要素によって決定された速度で投与することができる。投与は、１回で、または数回に分けて行うことができる。
【００９５】
典型的な錠剤、非経口製剤、およびパッチ製剤の例に含まれるものは以下のとおりである。
【００９６】
【表１】
2007509924.tif 000014
本発明の化合物（たとえば、式Ｉ〜Ｖの化合物または薬学的に許容できるその塩）は、ラクトースおよびコーンスターチ（ミックス用）と混合し、均質にブレンドして、一粉末にする。コーンスターチ（ペースト用）を６ｍＬの水に懸濁させ、攪拌しながら加熱してペーストにする。このペーストを混合粉末に加え、混合物を顆粒化する。湿った顆粒を８番の硬質のふるいに通し、５０℃で乾燥させる。混合物を１％のステアリン酸マグネシウムで滑らかにし、圧縮して錠剤にする。ＰＩ３Ｋが仲介する障害または状態の治療のために、錠剤は１日に１〜４個の速度で患者に投与する。
【００９７】
非経口溶液製剤実施例１
７００ｍＬのプロピレングリコールと２００ｍＬの水からなる注射用の溶液には、本発明の化合物２０．０ｇを加えることができる。混合物を攪拌し、塩酸を用いてｐＨを５．５に調整する。注射用の水で体積を１０００ｍＬに調整する。溶液を滅菌し、５．０ｍＬ容アンプルに、それぞれが２．０ｍＬを（４０ｍｇの発明化合物）含有するように充填し、窒素中で密閉する。溶液は、ＰＩ３Ｋが仲介する障害または状態に罹患し、治療の必要がある対象に注射によって投与する。
【００９８】
パッチ製剤実施例１
本発明の化合物１０ｍｇは、プロピレングリコール１ｍＬおよび樹脂架橋剤を含有するアクリルポリマー接着剤２ｍｇと混合することができる。混合物を不浸透性の支持体（３０ｃｍ２）に塗布し、患者の上背にあてがって、ＰＩ３Ｋが仲介する障害または状態の徐放治療を行う。
【００９９】
ＶＩＩ．ＰＩ３Ｋが仲介する障害および状態の治療法
本発明の化合物および本発明の化合物を含む医薬組成物は、ＰＩ３Ｋが仲介する障害または状態に罹患している対象に投与することができる。ＰＩ３Ｋが仲介する障害および状態は、障害または状態の種類に応じて、本発明の化合物を使用しながら予防的、短期的、および長期的な治療を行うことができる。他の哺乳動物も本発明の化合物の投与の恩恵を受けることができるが、通常、これらの各方法の宿主または対象はヒトである。
【０１００】
治療のための適用例では、本発明の化合物は、広範な種類の経口剤形および非経口剤形に調製し、そうした形態で投与することができる。用語「投与する」とは、化合物と対象とを接触させる方法を指す。たとえば、本発明の化合物は、注射によって、すなわち静脈内、筋肉内、皮内、皮下、十二指腸内、非経口、または腹腔内に投与することができる。本明細書に記載の化合物はまた、吸入によって、たとえば鼻腔内に投与することもできる。さらに、本発明の化合物は、経皮投与、局所投与、および植込みによる投与を行うことができる。ある実施形態では、本発明の化合物は、経口的に送達される。化合物を、直腸、頬側、膣内、眼内、アンディアリー（ａｎｄｉａｌｌｙ）に、または通気法によって送達することもできる。
【０１０１】
本発明の薬学的方法で利用する化合物は、１日約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの初期量で投与することができる。ある実施形態では、１日の用量範囲は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲である。しかし、投与量は、対象の必要量、治療する状態の重症度、および使用する化合物に応じて様々となり得る。特定の状況のための適正な投与量の決定は、従事者の技量の範囲内である。一般に、治療は、化合物の適量を下回る少なめの投与量で開始する。その後は、その状況で最適な効果に到達するまで投与量を少しずつ増やす。便宜上、所望ならば合計１日投与量を分割し、１日の間に少量ずつ投与してもよい。用語「治療」は、治療する障害に随伴し、またはそれによって引き起こされる少なくとも１種の症状または特性の、短期的、長期的、または予防的な軽減または緩和を含む。たとえば、治療には、障害のいくつかの症状の軽減、障害の病態の進行阻止、または障害の完全な根絶を含めることができる。本発明の化合物は、患者に同時投与することができる。用語「同時投与」とは、同じ医薬組成物または別々の医薬組成物の形で組み合わせて対象に投与される、２種以上の異なる医薬または治療（たとえば、放射線治療）を与えることを意味する。すなわち、同時投与は、２種以上の医薬品を含む単一の医薬組成物の同時の投与、または２種以上の異なる組成物の同じ対象への同じもしくは異なる時期での投与を含む。たとえば、本発明の化合物を含む最初の投与量が午前８時に与えられ、次いで１〜１２時間後、たとえば同じ日の午後６時にＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標）が与えられる対象は、本発明の化合物とＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標）の同時投与を受けている。あるいは、たとえば、本発明の化合物とＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標）を含む単一剤形が午前８時に投与されることがあっても、対象は、本発明の化合物とＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標）の同時投与を受けている。
【０１０２】
たとえば、本発明の化合物は、癌の治療に有用な化合物（たとえば、ＴＡＸＯＬ（登録商標）、タキソテール、ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）（メシル酸イマチニブ）、アドリアマイシン、ダウノマイシン、シスプラチン、エトポシド、ビンカアルカロイド、ビンブラスチン、ビンクリスチン、メトトレキサート、またはアドリアマイシンなどの細胞毒、ビンクリスチンなどのアルカロイド、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、エンドスタチンおよびアンギオスタチン、ＶＥＧＦ阻害剤、ならびにメトトレキサートなどの代謝拮抗薬）と同時投与することもできる。本発明の化合物は、タキサン誘導体、白金配位錯体、ヌクレオシド類似体、アントラサイクリン、トポイソメラーゼ阻害剤、またはアロマターゼ阻害剤と併せて使用してもよい。癌治療のために、放射線治療と本発明の化合物の同時投与を行うこともできる。
【０１０３】
本発明の化合物は、血栓性疾患、心疾患、卒中などの治療に有用な化合物（たとえば、アスピリン、ストレプトキナーゼ、組織プラスミノーゲン活性化因子、ウロキナーゼ、抗凝固薬、抗血小板薬（たとえば、ＰＬＡＶＩＸ（登録商標）、重硫酸クロピドグレル）、スタチン（たとえば、ＬＩＰＩＴＯＲ（登録商標）（アトロバスタチンカルシウム）、ＺＯＣＯＲ（登録商標）（シンバスタチン）、ＣＲＥＳＴＯＲ（登録商標）（ロスバスタチン）など）、β遮断薬（たとえば、アテノロール）、ＮＯＲＶＡＳＣ（登録商標）（ベシル酸アムロジピン）、およびＡＣＥ阻害剤（たとえば、Ａｃｃｕｐｒｉｌ（登録商標）（塩酸キナプリル）、リシノプリルなど）と同時投与することもできる。
【０１０４】
本発明の化合物は、高血圧の治療に向けて、ＡＣＥ阻害剤、スタチン、すなわちＬＩＰＩＴＯＲ（登録商標）（アトロバスタチンカルシウム）などの脂質低下剤、ＮＯＲＶＡＳＣ（登録商標）（ベシル酸アミロジピン）などのカルシウムチャネル遮断薬といった化合物と同時投与することもできる。本発明の化合物は、フィブラート、β遮断薬、ＮＥＰＩ阻害剤、アンギオテンシン２受容体拮抗薬、および血小板凝固阻害剤と併せて使用してもよい。
【０１０５】
関節リウマチを含む炎症性疾患の治療では、本発明の化合物を、抗ＴＮＦαモノクローナル抗体（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標）、ＣＤＲ−８７０、およびＨＵＭＩＲＡ（商標）（アダリムマブ）など）やＴＮＦ受容体−免疫グロブリン融合分子（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）など）などのＴＮＦ−α阻害剤、ＩＬ−１阻害剤、受容体拮抗薬、もしくは可溶性ＩＬ−１Ｒα（たとえば、ＫＩＮＥＲＥＴ（商標）またはＩＣＥ阻害剤）、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤＳ）、すなわち、ピロキシカム、ジクロフェナク、ナプロキセン、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、イブプロフェン、フェナム酸系、メフェナム酸、インドメタシン、スリンダク、アパゾン（ａｐａｚｏｎｅ）、ピラゾロン、フェニルブタゾン、アスピリン、ＣＯＸ−２阻害剤（ＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標）（セレコキシブ）、ＶＩＯＸＸ（登録商標）（ロフェコキシブ）、ＢＥＸＴＲＡ（登録商標）（バルデコキシブ）、およびエトリコキシブなど）、メタロプロテイナーゼ阻害剤（好ましくは、ＭＭＰ−１３選択的阻害剤）、ＮＥＵＲＯＴＩＮ（登録商標）、プレガバリン、スルファサラジン、低用量メトトレキサート、レフルノミド、ヒドロキシクロロキン、ｄ−ペニシルアミン、オーラノフィン、または非経口もしくは経口用の金などの薬剤と同時投与することができる。
【０１０６】
本発明の化合物は、骨関節炎治療用の既存の治療薬と同時投与してもよい。併せて使用するのに適する薬剤には、ピロキシカム、ジクロフェナク、ナプロキセン、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、およびイブプロフェンなどのプロピオン酸、メフェナム酸などのフェナム酸系、インドメタシン、スリンダク、アパゾン、フェニルブタゾンなどのピラゾロン、アスピリンなどのサリチル酸系、セレコキシブ、バルデコキシブ、ロフェコキシブ、およびエトリコキシブなどのＣＯＸ−２阻害剤といった標準の非ステロイド系抗炎症薬（以下ではＮＳＡＩＤ）、ならびにコルチコステロイド、およびヒアルガン（ｈｙａｌｇａｎ）やシンビスク（ｓｙｎｖｉｓｃ）などのヒアルロン酸といった鎮痛薬および関節内治療薬が含まれる。
【０１０７】
本発明の化合物は、ビラセプト、ＡＺＴ、アシクロビル、およびファムシクロビルなどの抗ウイルス薬、ならびにバラント（Ｖａｌａｎｔ）などの消毒薬化合物と同時投与してもよい。
【０１０８】
本発明の化合物はさらに、抗うつ薬（セルトラリンなど）、抗パーキンソン病薬（デプレニル、Ｌ−ドーパ、レキップ、ミラペックス、セレギンやラサギリンなどのＭＡＯＢ阻害剤、タスマーなどのｃｏｍＰ阻害剤、Ａ−２阻害剤、ドーパミン再取込み阻害剤、ＮＭＤＡ拮抗薬、ニコチン作動薬、ドーパミン拮抗薬、神経性一酸化窒素シンターゼ阻害剤など）、ＮＥＵＲＯＮＴＩＮ（登録商標）、プレガバリン、およびＡＲＩＣＥＰＴ（登録商標）、タクリン、プロペントフィリン、またはメトリホナートなどの抗アルツハイマー病薬といったＣＮＳ薬剤と同時投与してもよい。
【０１０９】
本発明の化合物はまた、ＥＶＩＳＴＡ（登録商標）（塩酸ラロキシフェン）、ドロロキシフェン、ラソフォキシフェン、またはＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標）などの骨粗鬆症薬剤、およびＦＫ−５０６やラパマイシンなどの免疫抑制剤と同時投与してもよい。
【実施例】
【０１１０】
【化１２】
2007509924.tif 000015
【０１１１】
【表２−１】
2007509924.tif 000016
【０１１２】
【表２−２】
2007509924.tif 000017
【０１１３】
中間体１．２−メチルスルファニル−４−（４−ニトロ−ベンジルオキシ）−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル。４−ニトロベンジルアルコール（１６．７ｇ、１０９ミリモル）を無水ＴＨＦ（１２０ｍＬ）に溶かした−７８℃の攪拌溶液に、ｎＢｕＬｉ（ヘキサン中１．６Ｍ、７５ｍＬ、１２０ミリモル）をシリンジで加えた。反応液を−７８℃で１０分間攪拌し、次いで冷浴を取り外し、混合物が室温に温まるようにした。このニトロベンジルアルコキシド溶液を、４−クロロ−２−メチルチオ−５−ピリミジンカルボン酸エチル（２５．０ｇ、１０７．３ミリモル）を無水ＴＨＦ（１２０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液中に注いだ。反応液を室温で１５分間攪拌した。混合物をＨ２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃでの抽出に数回かけた。有機抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、デカントし、濃縮して固体を得た。最少量のジクロロメタンを用いて固体をスラリーにし、濾過した。固体を収集し、真空オーブン中で終夜乾燥させて、所望の表題生成物（１９．４ｇ、収率５１．８％）を固体として得た。ＭＳ：Ｍ＋１＝３５０．１。
【０１１４】
中間体２．２−メタンスルフィニル−４−（４−ニトロ−ベンジルオキシ）−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル。中間体１（１９．４ｇ、５５．６ミリモル）をクロロホルム（１８５ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ｍＣＰＢＡ（１３．８ｇ、６１．２ミリモル）を少量ずつ加えた。発熱反応を氷水浴で和らげて、反応温度を室温付近に保った。次いで、反応液を室温で２５分間攪拌した。混合物をＮａＨＣＯ３飽和水溶液で失活させ、水で希釈した。希釈物をＥｔＯＡｃでの抽出に数回かけた。有機抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、セライトで濾過し、濃縮して、所望の表題生成物（１８．８４ｇ、収率９２．８％）を橙色の固体として得た。この生成物をさらに精製せずそのまま使用した。ＭＳ：Ｍ＋１＝３６６．１（ＡＰＣＩ）。
【０１１５】
中間体３．２−モルホリン−４−イル−４−（４−ニトロ−ベンジルオキシ）−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル。中間体２（３５．４ｇ、９７．０ミリモル）を１００℃のモルホリン（１６．９ｍＬ）中で１５分間攪拌した。反応液を室温に冷まし、次いでトルエン（約１００ｍＬ）で希釈した。希釈混合物を真空中で濃縮した。残った残渣をＥｔＯＡｃ（約３００ｍＬ）中で煮沸し、次いで濾過した。液を真空中で濃縮した。残った固体を最少量のジクロロメタン中でスラリーにし、濾過した。固体を収集し、真空オーブン中で終夜乾燥させて、所望の表題生成物（１２．８ｇ、収率３４．０％）を白色の固体として得た。ＭＳ：Ｍ＋１＝３８９．１（ＡＰＣＩ）。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）８．７９（ｓ，１Ｈ）、８．２４（ｍ，２Ｈ）、７．６８（ｍ，２Ｈ）、５．５４（ｓ，２Ｈ）、４．３３（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．９９（ｍ，２Ｈ）、３．８５（ｍ，２Ｈ）、３．７４（ｍ，２Ｈ）、３．２３（ｍ，２Ｈ）、１．３６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。
【０１１６】
中間体４．４−ヒドロキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル。水素バルーン中で、中間体３（４．００ｇ、１０．３ミリモル）を２０％Ｐｄ／Ｃ（０．４００ｇ）と共に室温のエタノール（５２ｍＬ）中で１６時間攪拌した。追加分の２０％Ｐｄ／Ｃ（０．４００ｇ）を加え、反応混合物中に水素を１０分間バブルした。室温の水素バルーン中で反応液を４時間攪拌した。混合物をセライトで濾過した。濾過ケーキをＥｔＯＡｃおよびジクロロメタンですすいだ。液を濃縮して固体を得た。この固体を室温の最少量のジエチルエーテルで２時間かけてスラリーにし、次いで濾過した。固体を収集し、真空オーブン中で終夜乾燥させて、所望の表題生成物（２．４９ｇ、収率９５．６％）をオフホワイトの固体として得た。ＭＳ：Ｍ＋１＝２５４．１（ＡＰＣＩ）。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）８．６７（ｓ，１Ｈ）、４．３８（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）、３．９３（ｍ，４Ｈ）、３．７４（ｍ，４Ｈ）、１．３９（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）。
【０１１７】
中間体５．４−シクロヘプチルオキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル。中間体４（１０．００ｇ、３９．４９ミリモル）を、ＴＨＦ（１５０ｍｌ）中でシクロヘプタノール（７．１３４ｍＬ、５９．２３ミリモル）、ＤＥＡＤ（８．２５ｇ、４７．４ミリモル）、およびトリフェニルホスフィン（１２．４ｇ、４７．４ミリモル）と合わせた。反応液を室温で１８時間攪拌した。ＨＰＬＣ分析にかけると、過剰のトリフェニルホスフィンおよびトリフェニルホスフィンオキシドと一緒に新しい生成物が示された。反応混合物を真空中で濃縮した。濃縮物をシリカゲルのクロマトグラフィー（０〜３０％のＥｔＯＡｃ−ヘキサンによる勾配溶離、２０％のＥｔＯＡｃ−ヘキサンでのＴＬＣ）によって精製して、所望の表題生成物（１０．８４ｇ、収率７８．５７％）を淡桃色の油として得た。ＭＳ：Ｍ＋１＝３５０．３（ＡＰＣＩ）。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）ｐｐｍ  １．３３（ｔ，Ｊ＝７．２０Ｈｚ，３Ｈ）、１．５４（ｍ，５Ｈ）、１．７５（ｍ，２Ｈ）、１．９４（ｍ，５Ｈ）、３．７４（ｍ，１Ｈ）、３．９２（ｍ，４Ｈ）、４．２８（ｑ，Ｊ＝７．０８Ｈｚ，２Ｈ）、５．３５（ｍ，１Ｈ）、８．７０（ｍ，１Ｈ）。
【０１１８】
中間体６．４−シクロヘプチルオキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸。丸底フラスコ中で、中間体５（１０．８４ｇ、３１．０２ミリモル）をジオキサン（６０ｍＬ）および１Ｎ  ＬｉＯＨ（４０ｍＬ）と共に８０℃で２時間攪拌した。混合物を室温に冷まし、次いで１Ｎ  ＨＣｌでゆっくりかつ慎重にｐＨ約１に酸性化した。白色の固体が沈殿した。混合物を過剰のＨ２Ｏで希釈し、次いで濾過した。濾過ケーキをＨ２Ｏですすぎ、収集し、真空オーブン中で終夜乾燥させて、所望の表題生成物（５．７０ｇ、収率５７．２％）を淡黄色の固体として得た。ＭＳ：Ｍ＋１＝３２２．２（ＡＰＣＩ）。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）ｐｐｍ  １．４〜１．７（ｍ，８Ｈ）、１．８９（ｓ，２Ｈ）、２．０９（ｍ，２Ｈ）、３．７６（ｍ，４Ｈ）、３．８９（ｍ，４Ｈ）、５．４５（ｍ，１Ｈ）、８．８６（ｓ，１Ｈ）。
【０１１９】
（実施例１）
４−シクロヘプチルオキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド。中間体６（５．７０ｇ、１７．７ミリモル）を無水ジクロロメタン（５０ｍＬ）と溶解はさせないが混合した。約５滴のＤＭＦを加えた。塩化オキサリル（１．７０ｍＬ、１９．５ミリモル）をシリンジで加えた。混合物が泡立ち、ゆっくりと均質になった。反応液を室温で１０分間攪拌した。ＭｅＯＨ／Ｋ２ＣＯ３中に入れて失活させた一定分量をＨＰＬＣ分析にかけると、出発材料の酸が完全に消費され、新しい極性のより弱い生成物が生成していることが示された。５−アミノテトラゾール（３．１７ｇ、３７．２ミリモル）、トリエチルアミン（５．１９ｍＬ、３７．３ミリモル）、そして最後にアセトニトリル（５０ｍＬ）を加えた。反応液を８０℃で６０分間攪拌した。ＭｅＯＨ／Ｋ２ＣＯ３中に入れて失活させた一定分量をＨＰＬＣ分析にかけると、新しい生成物が示された。反応容器を開き、煮沸してほぼ乾燥するようにした。油浴を取り外し、混合物を室温に冷ました。残ったタールを最少量のアセトニトリル（約１５ｍＬ）に溶かした。混合物をＨ２Ｏ（約１００ｍＬ）で希釈し、綿毛状の白色固体が沈殿するまで１Ｎ  ＨＣｌで酸性化した。固体を濾別し、Ｈ２Ｏですすいだ。ケーキを収集し、最少量のＭｅＯＨで３０分間かけてスラリーにした。スラリーを濾過し、ケーキを最少量のＭｅＯＨですすいだ。固体を真空オーブン中で終夜乾燥させて、所望の表題生成物（４．８３２ｇ、収率７０．１４％）を細い淡黄色の針結晶として得た。融点：２８７．１〜２８７．４℃（Ｂｕｃｈｉ  Ｍｅｌｔｉｎｇ  Ｐｏｉｎｔ  Ｂ−５４５装置で測定）。
【０１２０】
実施例２〜１５の表題化合物は、シクロヘプタノールの代わりに相応しいアルコール（たとえば、シクロペンタノール）を用い、実施例１と同様にして合成した。
【０１２１】
（実施例２）
４−シクロペンチルオキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド。
【０１２２】
（実施例３）
４−イソプロポキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド。
【０１２３】
（実施例４）
４−シクロヘキシルオキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド。
【０１２４】
（実施例５）
４−シクロオクチルオキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド。
【０１２５】
（実施例６）
４−（２−シクロヘキシル−エトキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド。
【０１２６】
（実施例７）
４−シクロヘキシルメトキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド。
【０１２７】
（実施例８）
４−（２−メトキシ−エトキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド。
【０１２８】
（実施例９）
４−（３，３−ジメチル−シクロヘキシルオキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド。
【０１２９】
（実施例１０）
２−モルホリン−４−イル−４−（テトラヒドロ−ピラン−４−イルオキシ）−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド。
【０１３０】
（実施例１１）
４−（アダマンタン−２−イルオキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド。
【０１３１】
（実施例１２）
４−（ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イルオキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド。
【０１３２】
（実施例１３）
４−（２，２ジメチル−プロポキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド。
【０１３３】
（実施例１４）
４−（１，２−ジメチル−プロポキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド。
【０１３４】
（実施例１５）
４−（１−メチル−シクロプロピルメトキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド。
【０１３５】
中間体７．４−（３，５−ジメチル−シクロヘキシルオキシ）−２−メチルスルファニル−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル。３，５−ジメチルシクロヘキサノール（６．１８ｍＬ、４３．１ミリモル）の−７８℃の無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）溶液に、ｎＢｕＬｉ（ヘキサン中１．６Ｍ、２６．９ｍＬ、４３．１ミリモル）をシリンジで加えた。冷浴を取り外し、反応液が室温に温まるようにした。次いで、反応混合物を、４−クロロ−２−メチルチオ−５−ピリミジンカルボン酸エチル（１０．０ｇ、４３．１ミリモル）を無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶かした攪拌溶液中に注いだ。混合物を室温で２時間攪拌した。この混合物をＨ２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃでの抽出に数回かけた。有機抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、デカントし、濃縮した。濃縮物をシリカゲルのクロマトグラフィー（０〜１２％のＥｔＯＡｃ−ヘキサンの勾配溶離、１０％のＥｔＯＡｃ−ヘキサンでのＴＬＣ）によって精製して、所望の表題生成物（５．９５ｇ、収率４２．６％）を無色の油として得た。ＭＳ：Ｍ＋１＝３２５．３（ＡＰＣＩ）。
【０１３６】
中間体８．４−（３，５−ジメチル−シクロヘキシルオキシ）−２−メタンスルフィニル−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル。中間体８（５．８９ｇ、１８．２ミリモル）をクロロホルム（６０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ｍＣＰＢＡ（４．９０ｇ、２１．８ミリモル）を少量ずつ加えた。発熱反応を氷水浴で和らげて、反応温度を室温付近に保った。次いで、反応液を室温で２５分間攪拌した。混合物をＮａＨＣＯ３飽和水溶液で失活させ、水で希釈した。希釈物をＥｔＯＡｃでの抽出に数回かけた。有機抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、セライトで濾過し、濃縮して、所望の表題生成物を定量的な収率で得た。この生成物をさらに精製せずそのまま使用した。ＭＳ：Ｍ＋１＝３４１．１（ＡＰＣＩ）。
【０１３７】
中間体９．４（３，５−ジメチル−シクロヘキシルオキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル。中間体８（７．１３ｇ、２１．０ミリモル）を１００℃のモルホリン（９．１４ｍＬ）中で１時間攪拌した。反応液を室温に冷ました。反応混合物全部をシリカゲルのクロマトグラフィー（０〜１６％のＥｔＯＡｃ−ヘキサンによる勾配溶離、２０％のＥｔＯＡｃ−ヘキサンでのＴＬＣ）によって精製して、所望の表題生成物（２．６８ｇ、収率３５．２％）を無色の油として得た。ＭＳ：Ｍ＋１＝３６４．７（ＡＰＣＩ）。
【０１３８】
中間体１０．４−（３，５−ジメチル−シクロヘキシルオキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸。丸底フラスコ中で、中間体９（２．４８ｇ、６．８３ミリモル）をジオキサン（１９．２ｍＬ）および１Ｎ  ＬｉＯＨ（１２．８ｍＬ）と共に８０℃で９０分間攪拌した。混合物を室温に冷まし、次いで１Ｎ  ＨＣｌでゆっくりかつ慎重にｐＨ約１に酸性化した。白色の固体が沈殿した。混合物を過剰のＨ２Ｏで希釈し、次いで濾過した。濾過ケーキをＨ２Ｏですすぎ、収集し、真空オーブン中で終夜乾燥させて、所望の表題生成物（１．４３ｇ、収率６２．２％）を白色の固体として得た。ＭＳ：Ｍ＋１＝３３６．２（ＡＰＣＩ）。微量分析：計算値Ｃ−６０．８８％、Ｈ−７．５１％、Ｎ−１２．５３％、実測値Ｃ−６０．８７％、Ｈ−７．６７％、Ｎ−１２．２４％。
【０１３９】
（実施例１６）
４−（３，５−ジメチル−シクロヘキシルオキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド。中間体１０（０．７５０ｇ、２．２４ミリモル）を無水ジクロロメタン（１１ｍＬ）と溶解はさせないが混合した。約３滴のＤＭＦを加えた。塩化オキサリル（０．２１３ｍＬ、２．４６ミリモル）をシリンジで加えた。混合物があわ立ち、ゆっくりと均質になった。反応液を室温で１０分間攪拌した。ＭｅＯＨ／Ｋ２ＣＯ３中に入れて失活させた一定分量をＨＰＬＣ分析にかけると、出発材料の酸が完全に消費され、新しい極性のより弱い生成物が生成していることが示された。５−アミノテトラゾール（０．４００ｇ、４．７０ミリモル）、トリエチルアミン（０．６５４ｍＬ、４．７０ミリモル）、そして最後にアセトニトリル（１１ｍＬ）を加えた。反応液を８０℃で６０分間攪拌した。ＭｅＯＨ／Ｋ２ＣＯ３中に入れて失活させた一定分量をＨＰＬＣ分析にかけると、新しい生成物が示された。反応容器を開き、煮沸してほぼ乾燥するようにした。油浴を取り外し、混合物を室温に冷ました。残ったタールを最少量のアセトニトリル（約１５ｍＬ）に溶かした。混合物をＨ２Ｏ（約１００ｍＬ）で希釈し、綿毛状の白色固体が沈殿するまで１Ｎ  ＨＣｌで酸性化した。固体を濾別し、Ｈ２Ｏですすいだ。ケーキを収集し、最少量のＭｅＯＨで３０分間かけてスラリーにした。スラリーを濾過し、ケーキを最少量のＭｅＯＨですすいだ。固体を真空オーブン中で終夜乾燥させて、所望の表題生成物（０．６９９ｇ、収率７７．６％）を白色の固体として得た。
【０１４０】
【化１３】
2007509924.tif 000018
【０１４１】
【表３】
2007509924.tif 000019
【０１４２】
中間体１１．４−（４−イソプロピル−フェノキシ）−２−メチルスルファニル−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル。４−イソプロピルフェノール（５．８６ｇ、４３．１ミリモル）を無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、水素化ナトリウム（１．０３ｇ、４３．１ミリモル）をゆっくりかつ慎重に加えた。反応液を室温で２０分間攪拌した。次いで、このフェノキシド溶液を、４−クロロ−２−チオメチル−５−ピリミジンカルボン酸エチル（１０．０ｇ、４３．１ミリモル）を無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶かした攪拌溶液中に注いだ。反応液を室温で１５分間攪拌した。この反応液をＨ２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃでの抽出に数回かけた。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、デカントし、濃縮した。濃縮物をシリカゲルのクロマトグラフィー（０〜２０％のＥｔＯＡｃ−ヘキサンによる勾配溶離、１０％のＥｔＯＡｃ−ヘキサンでのＴＬＣ）によって精製して、所望の表題生成物（９．８８ｇ、収率６９．０％）を淡黄色の油として得た。ＭＳ：Ｍ＋１＝３３３．５（ＡＰＣＩ）。
【０１４３】
中間体１２．４−（４−イソプロピル−フェノキシ）−２−メタンシルフィニル−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル。中間体１１（９．０３ｇ、２７．２ミリモル）をクロロホルム（９１ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ｍＣＰＢＡ（７．３２ｇ、３２．６ミリモル）を少量ずつ加えた。発熱反応を氷水浴で和らげて、反応温度を室温付近に保った。次いで、反応液を室温で２５分間攪拌した。混合物をＮａＨＣＯ３飽和水溶液で失活させ、水で希釈した。希釈物をＥｔＯＡｃでの抽出に数回かけた。有機抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、セライトで濾過し、濃縮して、所望の表題生成物を無色の油として定量的な収率で得た。ＭＳ：Ｍ＋１＝３４９．１（ＡＰＣＩ）。
【０１４４】
中間体１３．４−（４−イソプロピル−フェノキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル。中間体１２（９．８２ｇ、２８．２ミリモル）を１００℃のモルホリン（１２．３ｍＬ）中で１時間攪拌した。反応液を室温に冷ました。反応混合物をシリカゲルのクロマトグラフィー（０〜３０％のＥｔＯＡｃ−ヘキサンによる勾配溶離、２０％のＥｔＯＡｃ−ヘキサンでのＴＬＣ）によって精製して、所望の表題生成物（２．５６ｇ、収率２４．４％）を淡黄色の油として得た。ＭＳ：Ｍ＋１＝３７２．５（ＡＰＣＩ）。
【０１４５】
中間体１４．４−（４−イソプロピル−フェノキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸。丸底フラスコ中で、中間体１３（２．３６ｇ、６．３６ミリモル）をジオキサン（１９．２ｍＬ）および１Ｎ  ＬｉＯＨ（１２．８ｍＬ）と共に８０℃で９０分間攪拌した。混合物を室温に冷まし、次いで１Ｎ  ＨＣｌでゆっくりかつ慎重にｐＨ約２〜３に酸性化した。白色の固体が沈殿した。混合物を過剰のＨ２Ｏで希釈し、次いで濾過した。濾過ケーキをＨ２Ｏですすぎ、収集し、真空オーブン中で終夜乾燥させて、所望の表題生成物（１．８１ｇ、収率８２．９％）を白色の固体として得た。ＭＳ：Ｍ＋１＝３４４．２（ＡＰＣＩ）。微量分析：計算値Ｃ−６２．９６％、Ｈ−６．１６％、Ｎ−１２．２４％、実測値Ｃ−６２．９５％、Ｈ−６．２０％、Ｎ−１２．１８％。
【０１４６】
（実施例１７）
４−（４−イソプロピル−フェノキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド。中間体１４（０．８００ｇ、２．３３ミリモル）を無水ジクロロメタン（１１ｍＬ）と溶解はさせないが混合した。約５滴のＤＭＦを加えた。塩化オキサリル（０．２２２ｍＬ、２．５６ミリモル）をシリンジで加えた。混合物があわ立ち、ゆっくりと均質になった。反応液を室温で１０分間攪拌した。ＭｅＯＨ／Ｋ２ＣＯ３中に入れて失活させた一定分量をＨＰＬＣ分析にかけると、出発材料の酸が完全に消費され、新しい極性のより弱い生成物が生成していることが示された。５−アミノテトラゾール（０．４１６ｇ、４．８９ミリモル）、トリエチルアミン（０．６８０ｍＬ、４．８９ミリモル）、そして最後にアセトニトリル（１１ｍＬ）を加えた。反応液を８０℃で６０分間攪拌した。ＭｅＯＨ／Ｋ２ＣＯ３中に入れて失活させた一定分量をＨＰＬＣ分析にかけると、新しい生成物が示された。反応容器を開き、煮沸してほぼ乾燥するようにした。油浴を取り外し、混合物を室温に冷ました。残ったタールを最少量のアセトニトリル（約１ｍＬ）に溶かした。混合物をＨ２Ｏ（約１５ｍＬ）で希釈し、綿毛状の白色固体が沈殿するまで１Ｎ  ＨＣｌで酸性化した。固体を濾別し、Ｈ２Ｏですすいだ。ケーキを収集し、最少量のＭｅＯＨで３０分間かけてスラリーにした。スラリーを濾過し、ケーキを最少量のＭｅＯＨですすいだ。固体を真空オーブン中で終夜乾燥させて、所望の表題生成物（０．７３９ｇ、収率７７．４％）を白色の固体として得た。
【０１４７】
中間体１５．４−クロロ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル。中間体４（３．４６ｇ、１３．７ミリモル）およびＤＭＦ（約５滴）の室温の無水ジクロロメタン（７０ｍＬ）溶液に、塩化オキサリル（１．３１ｍＬ、１５．０ミリモル）をシリンジで滴下した。反応液が発泡した。反応液を室温で２０分間攪拌した。一定分量をＨＰＬＣ分析にかけると、出発材料のピリミジンが完全に消費され、新しい極性のより弱い生成物が生成していることが示された。反応液をＮａＨＣＯ３飽和水溶液で希釈した。希釈物をジクロロメタンでの抽出に３回かけた。抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、セライトで濾過し、濃縮して、所望の表題生成物（１．０５６ｇ、収率９６．５％）を淡黄色の固体として得た。ＭＳ：Ｍ＋１＝２７２．１（ＡＰＣＩ）。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ  １．３７（ｔ，Ｊ＝７．０８Ｈｚ，３Ｈ）、３．７５（ｍ，４Ｈ）、３．９０（ｍ，４Ｈ）、４．３４（ｑ，Ｊ＝７．０８Ｈｚ，２Ｈ）、８．８１（ｓ，１Ｈ）。
【０１４８】
中間体１６．４−（４−シクロヘキシル−フェノキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル。４−シクロヘキシルフェノール（０．２９０ｇ、１．６２ミリモル）を無水ＴＨＦ（５ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、水素化ナトリウム（０．０４０ｇ、１．６２ミリモル）をゆっくりかつ慎重に加えた。反応液を室温で２０分間攪拌した。次いで、このフェノキシド溶液を、中間体１５（０．４４０ｇ、１．６２ミリモル）を無水ＴＨＦ（５ｍＬ）に溶かした攪拌溶液中に注いだ。反応液を室温で１５分間攪拌した。この反応液をＨ２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃでの抽出に数回かけた。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、セライトで濾過し、濃縮した。濃縮物をシリカゲルのクロマトグラフィー（０〜３０％のＥｔＯＡｃ−ヘキサンによる勾配溶離）によって精製して、所望の表題生成物（０．４４５ｇ、収率６６．９％）を淡黄色の油として得た。ＭＳ：Ｍ＋１＝４１２．３（ＡＰＣＩ）。
【０１４９】
中間体１７．４−（４−シクロヘキシル−フェノキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸。丸底フラスコ中で、中間体１６（０．４４５ｇ、１．０８ミリモル）をジオキサン（３．０ｍＬ）および１Ｎ  ＬｉＯＨ（２．２５ｍＬ）と共に８０℃で１５分間攪拌した。混合物を室温に冷まし、次いで１Ｎ  ＨＣｌでゆっくりかつ慎重にｐＨ約２〜３に酸性化した。白色の固体が沈殿した。混合物を過剰のＨ２Ｏで希釈し、次いで濾過した。濾過ケーキをＨ２Ｏですすぎ、収集し、真空オーブン中で終夜乾燥させて、所望の表題生成物（０．３６９ｇ、収率８８．９％）を白色の固体として得た。ＭＳ：Ｍ＋１＝３８４．２（ＡＰＣＩ）。
【０１５０】
（実施例１８）
４−（４−シクロヘキシル−フェノキシ）−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド。中間体１７（０．３６９ｇ、０．９６０ミリモル）を無水ジクロロメタン（５ｍＬ）と溶解はさせないが混合した。約３滴のＤＭＦを加えた。塩化オキサリル（０．０９３ｍＬ、１．０６ミリモル）をシリンジで加えた。混合物が泡立ち、ゆっくりと均質になった。反応液を室温で１０分間攪拌した。ＭｅＯＨ／Ｋ２ＣＯ３中に入れて失活させた一定分量をＨＰＬＣ分析にかけると、出発材料の酸が完全に消費され、新しい極性のより弱い生成物が生成していることが示された。５−アミノテトラゾール（０．２０４ｇ、２．４０ミリモル）、トリエチルアミン（０．３３０ｍＬ、２．４０ミリモル）、そして最後にアセトニトリル（５ｍＬ）を加えた。反応液を８０℃で６０分間攪拌した。ＭｅＯＨ／Ｋ２ＣＯ３中に入れて失活させた一定分量をＨＰＬＣ分析にかけると、新しい生成物が示された。反応容器を開き、煮沸してほぼ乾燥するようにした。油浴を取り外し、混合物を室温に冷ました。残ったタールを最少量のアセトニトリル（約１ｍＬ）に溶かした。混合物をＨ２Ｏ（約１５ｍＬ）で希釈し、綿毛状の白色固体が沈殿するまで１Ｎ  ＨＣｌで酸性化した。固体を濾別し、Ｈ２Ｏですすいだ。ケーキを収集し、最少量のＭｅＯＨで３０分間かけてスラリーにした。スラリーを濾過し、ケーキを最少量のＭｅＯＨですすいだ。固体を真空オーブン中で終夜乾燥させて、所望の表題生成物（０．２４６ｇ、収率５６．９％）を白色の固体として得た。
【０１５１】
【化１４】
2007509924.tif 000020
【０１５２】
【表４】
2007509924.tif 000021
【０１５３】
中間体１８：４−シクロペンチルアミノ−２−メチルスルファニル−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル。４−クロロ−２−メチルチオ−５−ピリミジンカルボン酸エチル（２．００ｇ、８．５９ミリモル）の塩化メチレン溶液を攪拌したものに、トリエチルアミン（３．６０ｍＬ、２５．８ミリモル）を加えた後、シクロペンチルアミン（１．０ｍＬ、１０．１２ミリモル）を加えた。反応溶液を４５分間加熱還流した。一定分量をＨＰＬＣ分析にかけると、出発材料のピリミジンが完全に消費され、新しい生成物が生成していることが示された。反応液を１Ｍ  ＨＣｌ中に注ぎ、塩化メチレンで希釈した。有機層を水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮してベージュ色の固体（２．３６１４ｇ、９７％）を得た。
【０１５４】
中間体１９：４−シクロペンチルアミノ−２−メタンスルフィニル−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル。中間体１９は、中間体１８（２．３６ｇ、８．３９ミリモル）およびｍＣＰＢＡ（２．１４ｇ、１．１４ミリモル）を使用しながら、中間体８と同様にして調製し、淡黄色の油（２．４５６ｇ、９８％）を得た。
【０１５５】
中間体２０：４−シクロペンチルアミノ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル。中間体２０は、中間体１９（２．４５ｇ、８．２４ミリモル）およびモルホリン（２０ｍＬ、２２９．３ミリモル）を使用しながら、中間体９と同様にして調製し、オフホワイトの粗製固体を得た。これをシリカゲルのクロマトグラフィー（２５％のエーテル／ヘキサン）によって精製して、綿毛状の白色固体（２．５２ｇ、９５％）を得た。
【０１５６】
中間体２１：４−シクロペンチルアミノ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸。中間体２１は、中間体２０（０．９７１ｇ、３．０３ミリモル）および６．２ｍＬの１Ｍ  ＬｉＯＨを使用しながら、中間体１０と同様にして調製し、白色の固体（０．７００ｇ、７９％）を得た。
【０１５７】
（実施例１９）
４−シクロペンチルアミノ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド。実施例１９は、中間体２１（０．１２９ｇ、０．４４１ミリモル）を使用しながら実施例１５と同様にして調製し、表題生成物を白色の固体（０．１２５ｇ、７９％）として得た。ＭＳ：Ｍ＋１＝３６０．３（ＡＰＣＩ）。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ６−ＤＭＳＯ）δ１．３７〜１．４５（ｍ，２Ｈ）、１．５３〜１．７０（ｍ，４Ｈ）、１．９６〜２．０４（ｍ，２Ｈ）、３．６１〜３．６３（ｍ，４Ｈ）、３．７５〜３．７８（ｍ，４Ｈ）、７．２８〜４．３４（ｍ，１Ｈ）、８．５５（ｄ，Ｊ＝６．８３Ｈｚ）、８．７６（ｓ，１Ｈ）。
【０１５８】
実施例２０および２１の表題化合物は、シクロペンチルアミンの代わりにそれぞれベンジルアミンまたはシクロヘキシルアミンを用いて、実施例１９と同様にして合成した。
【０１５９】
（実施例２０）
４−ベンジルアミノ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド。
【０１６０】
（実施例２１）
４−シクロヘキシルアミノ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド。
【０１６１】
【化１５】
2007509924.tif 000022
【０１６２】
【表５】
2007509924.tif 000023
【０１６３】
中間体  ２２．１−［１−（ジメチルアミノ）エチリデン］−２−メチルイソチオ尿素ヨウ化水素酸塩。オーバーヘッドスターラー、還流冷却器、窒素取入口、および加熱マントルを据え付けた５Ｌ容三つ口丸底フラスコに、チオ尿素（１６２．８ｇ、２．１４モル）および無水ジクロロメタン（２．４Ｌ）を装入した。Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミドジメチルアセタール（３９９．９ｇ、３モル、１．４当量）をフラスコに加えた。反応混合物を窒素中で２時間加熱還流し、次いで熱から離し、濃縮乾燥して、橙色の固体を得た。この橙色の固体を無水ＴＨＦ（１．５Ｌ）に懸濁させ、オーバーヘッドスターラー、温度プローブ、およびＮ２取入口付き滴下漏斗を据え付けた５Ｌ容三つ口丸底フラスコに移した。この懸濁液を攪拌したものに、ＭｅＩ（１６６８ｍＬ）を少量ずつゆっくりと加えた。最初の分（８０ｍＬ）によって発熱が生じ、溶液の温度が２３℃から２６℃に上昇した。反応混合物を外から氷水で冷却し、次の分ＭｅＩ（２０ｍＬ）を加えた。ＭｅＩを加え続けるにつれて温度が下降し、発熱が認められない状態で次の分のＭｅＩ（７８０ｍＬ）を加えた。氷浴を取り外し、発熱が認められない状態で最後の分のＭｅＩ（７８８ｍＬ）を加えた。加え終えた後、反応混合物をＮ２中で終夜攪拌し、次いで冷凍庫（−２０℃）に７２時間移しておいた。反応混合物を室温に温め、濾過し、固体をＥｔ２Ｏ（２×５００ｍＬ）で洗浄すると、生成物が黄褐色の固体として得られた。この固体を室温の真空中で終夜乾燥させて、所望の生成物（５５６．６ｇ、９１．０％）を黄褐色の固体として得た。
【０１６４】
中間体２３．エチル−４−ヒドロキシ−６−メチル−２−（メチルチオ）−５−ピリミジンカルボキシラート。オーバーヘッドスターラー、Ｎ２取入口付き滴下漏斗、および温度計を据え付けた１２Ｌ容三つ口丸底フラスコに、中間体２２（５５６．６ｇ、１．９４ミリモル）および無水ジクロロメタン（５Ｌ）を装入した。反応混合物を、Ｎ２中で攪拌しながら−２℃（氷浴）に冷却し、塩化エチルマロニル（ｅｔｈｙｌ  ｍａｌｏｎｙｌ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）（３５０ｇ、２．３３モル）を加えた。加えた後、反応液を−２℃でさらに１．５時間攪拌した。加える間（２．５時間）は反応液を５℃未満に保ちながら、この懸濁液にトリエチルアミン（６４８ｍＬ、４．６６モル）を滴下した。加え終えたら、反応液をＮ２中で終夜攪拌しながら室温に温めた。５２５ｍＬの１０％ＨＣｌ水溶液を加えて反応混合物をｐＨ約４に酸性化した。有機層を分離し、ブライン（１×１０５０ｍＬ）で洗浄した。有機層に別の７５０ｍＬのブラインを加え、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液（約２２５ｍＬ）を少量ずつ加えて、ブライン層のｐＨを約５から約７に調整した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４で１．５時間かけて乾燥させ、濾過し、ロータリーエバポレーターで濃縮して、橙色のゴム性固体を得、これを室温の高真空中で終夜乾燥させた。湿ったゴム性残渣（約５７９．５ｇ）を１．２Ｌのヘキサン：ＥｔＯＡｃ（１：１）で３時間かけて摩砕した。混合物を濾過してゴム性の黄色固体を得、これを高真空中で終夜乾燥させた。黄色の固体（約４００ｇ）を２．８Ｌのジクロロメタンに溶かし、得られる不均質な懸濁液を濾過した。透明なジクロロメタン溶液を、０〜１０％のＥｔＯＡｃ−ジクロロメタンを用いるＳｉＯ２のクロマトグラフィーにかけた。生成物を豊富に含む画分を収集し、濃縮し、０〜１０％のＥｔＯＡｃ−ジクロロメタンを用いるクロマトグラフィーにかけ直した。生成物を豊富に含む画分を濃縮し、８００ｍＬのヘキサン：ＥｔＯＡｃ（１：１）で一晩かけて摩砕し、濾過した。黄色の固体を高真空中で終夜乾燥させて、所望の生成物（１１３．６ｇ、２６％）を淡黄色の固体として得た。
【０１６５】
中間体２４．４−シクロヘプチルオキシ−６−メチル−２−メチルスルファニル−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル。中間体２３（３．００ｇ、１３．２ミリモル）を、ＴＨＦ（６０ｍＬ）中でシクロヘプタノール（１．７５ｍＬ、１４．５ミリモル）、ＤＥＡＤ（３．１２ｍＬ、１９．８ミリモル）、およびトリフェニルホスフィン（５．１９ｇ、１９．８ミリモル）と合わせた。反応液を室温で１８時間攪拌した。ＨＰＬＣ分析にかけると、過剰のトリフェニルホスフィンおよびトリフェニルホスフィンオキシドと一緒に新しい生成物が示された。反応混合物を真空中で濃縮した。濃縮物をシリカゲルのクロマトグラフィー（０〜１７％のＥｔＯＡｃ−ヘキサンによる勾配溶離、１０％のＥｔＯＡｃ−ヘキサンでのＴＬＣ）によって精製して、所望の表題生成物（３．６４ｇ、収率８５％）を淡桃色の油として得た。ＭＳ：Ｍ＋１＝３２５．１（ＡＰＣＩ）。
【０１６６】
中間体２５．４−シクロヘプチルオキシ−２−メタンスルフィニル−６−メチル−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル。中間体２４（３．２５２ｇ、１０．０４ミリモル）をクロロホルム（５０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ｍＣＰＢＡ（２．７１ｇ、１２．１ミリモル）を少量ずつ加えた。次いで、反応液を室温で４０分間攪拌した。別の分のｍＣＰＢＡ（３５０ｍｇ）を加え、反応液を室温で１５分間攪拌した。混合物をＮａＨＣＯ３飽和水溶液で失活させ、水で希釈した。希釈物をジクロロメタンでの抽出に数回かけた。有機抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、セライトで濾過し、濃縮して、所望の表題生成物（３．５７ｇ）を無色の油として得た。この生成物をさらに精製せずそのまま使用した。ＭＳ：Ｍ＋１＝３４１．１（ＡＰＣ１）。
【０１６７】
中間体２６．４−シクロヘプチルオキシ−６−メチル−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル。中間体２５（０．２９８ｇ、０．８７６ミリモル）を１００℃のモルホリン（０．３８１ｍＬ）中で１時間攪拌した。反応液を室温に冷ました。反応混合物をシリカゲルのクロマトグラフィー（０〜５０％のＥｔＯＡｃ−ヘキサンによる勾配溶離、２０％のＥｔＯＡｃ−ヘキサンでのＴＬＣ）によって精製して、所望の表題生成物（０．２７４ｇ、収率８６．２％）を無色の油として得た。ＭＳ：Ｍ＋１＝３６４．１（ＡＰＣＩ）。微量分析：計算値Ｃ−６２．７９％、Ｈ−８．０４％、Ｎ−１１．５６％、実測値Ｃ−６２．４２％、Ｈ−８．１３％、Ｎ−１１．５９％。
【０１６８】
中間体２７．４−シクロヘプチルオキシ−６−メチル−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸。丸底フラスコ中で、中間体６（０．２３７ｇ、０．６５３ミリモル）をジオキサン（３ｍＬ）および１Ｎ  ＬｉＯＨ（２ｍＬ）と共に８０℃で６時間攪拌した。混合物を室温に冷まし、次いで１Ｎ  ＨＣｌでゆっくりかつ慎重にｐＨ約１に酸性化した。酸性混合物をＥｔＯＡｃでの抽出に数回かけた。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、セライトで濾過し、濃縮して、所望の表題生成物（０．２１８ｇ、収率１００％）を油として得、これは放置すると凝固した。ＭＳ：Ｍ＋１＝３３６．１（ＡＰＣＩ）。
【０１６９】
（実施例２２）
４−シクロヘプチルオキシ−６−メチル−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド。中間体２７（０．１３１ｇ、０．３９１ミリモル）を無水ジクロロメタン（２．５ｍＬ）と溶解はさせないが混合した。１滴のＤＭＦを加えた。塩化オキサリル（０．０４０６ｍＬ、０．４６９ミリモル）をシリンジで加えた。混合物が泡立ち、ゆっくりと均質になった。反応液を室温で１０分間攪拌した。ＭｅＯＨ／Ｋ２ＣＯ３中に入れて失活させた一定分量をＨＰＬＣ分析にかけると、出発材料の酸が完全に消費され、新しい極性のより弱い生成物が生成していることが示された。５−アミノテトラゾール（０．０５６５ｇ、０．６６５ミリモル）、トリエチルアミン（０．１１４ｍＬ、０．８２１ミリモル）、そして最後にアセトニトリル（２．５ｍＬ）を加えた。反応液を８０℃で３０分間攪拌した。ＭｅＯＨ／Ｋ２ＣＯ３中に入れて失活させた一定分量をＨＰＬＣ分析にかけると、新しい生成物が示された。油浴を取り外し、混合物を室温に冷ました。混合物を１Ｎ  ＨＣｌで酸性化し、Ｈ２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃでの抽出に数回かけた。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、セライトで濾過し、濃縮した。粗生成物を分取逆相ＨＰＬＣによって精製して、所望の表題生成物（０．０４０ｇ、２４．４％）を白色の固体として得た。
【０１７０】
中間体４はまた、以下の手順に従って調製した。臭化水素酸モルホリノホルムアミジン（１０．００ｇ、７７．４２ミリモル）を、１１０℃のＤＭＦ（２４０ｍＬ）中でエトキシメチレンマロン酸ジエチル（２３．５ｍＬ、１１６ミリモル）および酢酸ナトリウム（１４．０ｇ、２．２０ミリモル）と共に１８時間攪拌した。反応液が最初の数時間にかけて淡黄色から赤色に変わった。ＨＰＬＣ分析にかけると、所望の生成物が生成していることが示された。反応混合物を真空中で濃縮した。残った残渣を室温のＨ２Ｏ（約１５０ｍＬ）で１時間かけてスラリーにして、ベージュ色の固体沈殿を得た。固体を濾過し、Ｈ２Ｏですすぎ、真空オーブンで乾燥させた。次いで乾燥したケーキを室温のＥｔ２Ｏ（約７０ｍＬ）で２０分間かけてスラリーにした。混合物を濾過し、ケーキを最少量のＥｔ２Ｏですすいだ。固体を収集し、真空中で終夜乾燥させて、所望の生成物、すなわち、ヒドロキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル（中間体４、７．２５１ｇ、収率５９．９％）をベージュ色の綿毛状固体として得た。
【０１７１】
生物学実施例１
ＰＩ３Ｋγタンパク質の発現および精製プロトコル
ＥＳＦ９２１培地で増殖させたＳｐｏｄｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞を、ｇｌｕタグ付きｐ１０１を発現させるバキュロウイルスとＨＡタグ付きｐ１１０γを発現させるバキュロウイルスで、ｐ１０１バキュロウイルス対ｐ１１０γバキュロウイルス比で３：１として同時感染させた。Ｓｆ９細胞を、１０Ｌ容バイオリアクター中で合計細胞１×１０７個／ｍＬに増殖させ、感染させてから４８〜７２時間後に収集した。次いで、感染させた細胞のサンプルを、ｐ１０１／ｐ１１０γＰＩ３キナーゼの発現があるかどうか免疫沈降法およびウェスタンブロット分析法によって試験した（以下参照のこと）。
【０１７２】
ＰＩ３Ｋγを精製するために、細胞ペースト１ｇあたり４体積の室温の低浸透圧性溶解緩衝液（１ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＤＴＴ、５ｍＭのＥＧＴＡ、１ｍＭのＰｅｆａｂｌｏｃ、０．５μＭのアプロチニン、５μＭのロイペプチン、２μＭのペプスタチン、５μＭのＥ６４、ｐＨ８）を、攪拌しながら凍結細胞ペレット上に注ぎ、次いで４００ｐｓｉの窒素「ボンベ」（５９９ＨＣ  Ｔ３１６、Ｐａｒｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏ．、イリノイ州モリーン）中で溶解させた。ＮａＣｌを１５０ｍＭまで加え、コール酸ナトリウムを１％まで加え、さらに４５分間混合した。可溶化液を１４，０００ｒｐｍで２５分間の遠心分離にかけて清澄化した。次いで、２０ｍＬの樹脂／５０ｇの細胞ペーストを使用して、この可溶化液を、抗ｇｌｕ結合型Ｇタンパク質セファロースビーズ（Ｃｏｖａｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、米国カリフォルニア州リッチモンド）上に載せた。カラムを１５体積の洗浄緩衝液（１ｍＭのＤＴＴ、０．２ｍＭのＥＧＴＡ、１ｍＭのＰｅｆａｂｌｏｃ、０．５μＭのアプロチニン、５μＭのロイペプチン、２μＭのペプスタチン、５μＭのＥ６４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１％のコール酸ナトリウム、ｐＨ８）で洗浄した。ＰＩ３Ｋγを、ｇｌｕタグを結合しようと競合する１００μｇ／ｍＬのペプチドを含有する６カラム体積の洗浄緩衝液で溶出した。溶出されたタンパク質を含むカラム画分（ＯＤ２８０の読みを計って画定した）を収集し、０．２ｍＭのＥＧＴＡ、１ｍＭのＤＴＴ、１ｍＭのＰｅｆａｂｌｏｃ、５μＭのロイペプチン、０．５％のコール酸ナトリウム、１５０ｍＭのＮａＣｌ、および５０％のグリセロール、ｐＨ８中で透析した。この画分を、次に使用するまで−８０℃で貯蔵した。
【０１７３】
生物学実施例２
Ｇタンパク質サブユニットの発現
Ｓｐｏｄｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞を、ｇｌｕタグ付きＧタンパク質β１を発現させるバキュロウイルスおよびＧタンパク質β２を発現させるバキュロウイルスで、ｇｌｕタグ付きＧタンパク質β１バキュロウイルス対Ｇタンパク質β２バキュロウイルス比を１：１として同時感染させた。Ｓｆ９細胞を１０Ｌ容バイオリアクター中で増殖させ、感染させてから４８〜７２時間後に収集した。感染させた細胞のサンプルを、Ｇタンパク質β１／β２の発現があるかどうかウェスタンブロット分析によって以下で述べるとおりに試験した。細胞可溶化液をホモジナイズし、生物学実施例１のようにｇｌｕタグ付きビーズカラムに載せ、ｇｌｕペプチドによってカラムから追い出し、生物学実施例１に記載したように処理した。
【０１７４】
生物学実施例３
ウェスタンブロット分析
タンパク質サンプルを８％のトリス−グリシンゲル上に流し、４５μＭニトロセルロース膜に移した。次いで、５％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）および５％のオボアルブミンの入ったＴＢＳＴ（５０ｍＭのトリス、２００ｍＭのＮａＣｌ、０．１％のＴｗｅｅｎ２０、ｐＨ７．４）によって、室温で１時間かけてブロットをブロックし、０．５％のＢＳＡを加えたＴＢＳＴで１０００倍に希釈した一次抗体と共に４℃で終夜インキュベートした。ｐ１１０γ、ｐ１１０α、ｐ１１０β、ｐ８５α、Ｇタンパク質β１、およびＧタンパク質γ２の各サブユニットに対する一次抗体は、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．、米国カリフォルニア州サンタクルーズから購入した。ｐ１０１サブユニット抗体は、ｐ１０１ペプチド抗原をもとにして、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．、米国アラバマ州ハンツヴィルに開発してもらった。
【０１７５】
一次抗体と共にインキュベートした後、ブロットをＴＢＳＴで洗浄し、ヤギ抗ウサギＨＲＰコンジュゲート（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．、米国カリフォルニア州Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、製品番号１７０−６５１５）と共に室温で２時間インキュベートし、０．５％のＢＳＡを加えたＴＢＳＴで１０，０００倍に希釈した。抗体をＥＣＬ（商標）検出試薬（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｃｏｒｐ．、米国ニュージャージー州Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ）で検出し、Ｋｏｄａｋ  ＩＳＯ４００Ｆ走査装置で定量化した。
【０１７６】
生物学実施例４
免疫沈降
生物学実施例１または２の細胞ペースト１００μＬを解凍し、氷上で４００μＬの低浸透圧性溶解緩衝液（２５ｍＭのトリス、１ｍＭのＤＴＴ、１ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭのＰｅｆａｂｌｏｃ、５μＭのロイペプチン、５μＭのＥ−６４（Ｒｏｃｈｅ）、１％のＮｏｎｉｄｅｔ  Ｐ４０、ｐＨ７．５〜８）に溶解させた。可溶化液を、ｇｌｕタグ付きビーズ（Ｃｏｖａｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、英国ケンブリッジ、製品番号ＡＦＣ−１１５Ｐ）と共に室温で２時間インキュベートした。ビーズを洗浄緩衝液（２０ｍＭのトリス、ｐＨ７．８〜８、１５０ｍＭのＮａＣｌ２、０．５％のＮＰ４０）で３回洗浄し、２倍に希釈したサンプル緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、米国カリフォルニア州カールズバッド、製品番号ＬＣ１６７６）中で加熱して、ビーズからタンパク質を溶離した。
【０１７７】
生物学実施例５
ＰＩ３Ｋγのｉｎ  ｖｉｔｒｏキナーゼアッセイ
表１の化合物の阻害特性をｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＰＩ３Ｋアッセイで検定した。９６ウェルポリプロピレンプレートにおいて、各ウェルに、所望される最終濃度の５０倍のＤＭＳＯ中化合物２μＬをスポットした。各反応用の精製組換えｐ１０１／ｐ１１０γタンパク質（０．０３μｇ、約２．７ｎＭ）とＧタンパク質β１／γ２サブユニット（０．０９μｇ、約５７．７ｎＭ）とをアッセイ緩衝液（３０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１００ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＧＴＡ、および１ｍＭのＤＴＴ）中で合わせた。反応液中の最終ＡＴＰ濃度が２０μＭになるよう、この混合物にＡＴＰおよび［γ−３２Ｐ−ＡＴＰ］（０．０９μＣｉ）を加えた。ホスファチジルイノシトール−４，５−二リン酸（ＰＩＰ２）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、およびコール酸Ｎａをアッセイ緩衝液中で１０分間超音波処理し、ＭｇＣｌ２を加え、２０分間氷上でインキュベートし、反応液中の最終濃度を２５μＭのＰＩＰ２、３００μＭのＰＥ、０．０２％のコール酸Ｎａ、および１０ｍＭのＭｇＣｌ２にすることによって、脂質ミセルを形成した。合計体積５０μＬの等体積の脂質と酵素の混合物を加えて反応を開始し、室温で２０分間進行させ、７５ｍＭのＨ３ＰＯ４  １００μＬによって停止した。脂質生成物をガラスファイバー製フィルタープレートに移し、７５ｍＭのＨ３ＰＯ４で数回洗浄した。各ウェルにＷａｌｌａｃ  Ｏｐｔｉｐｈａｓｅミックスを加え、Ｗａｌｌａｃ  １４５０  Ｔｒｉ１ｕｘプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．、米国マサチューセッツ州ボストン０２１１８）で計数することで、放射性脂質生成物（ＰＩＰ３）の存在を測定した。試験した各化合物のＩＣ５０は、上記の表においてμＭで報告している。
【０１７８】
生物学実施例６
ネズミのコラーゲン関節炎
ウシＩＩ型コラーゲン（ユタ大学）を０．０１Ｎの酢酸で２ｍｇ／ｍＬの濃度に希釈し、１ｍｇ／ｍＬの結核菌Ｈｒａ３７を補充した等体積のフロイント完全アジュバント（Ｄｉｆｃｏ、ミシガン州デトロイト）によって乳化した。齢の一致する（８〜１２週齢）雌性ＤＢＡ／１  ＬａｃＪマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、米国メイン州バーハーバー）を、１００μＬの乳濁液（コラーゲン１００μｇ）によって、尾の付け根の皮内から免疫感作した。免疫感作後２８日目に、マウスに、５０μｇのＬｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州セントルイス）の入った１００μＬの生理食塩水を腹腔内（ＩＰ）投与した。実施例１の化合物（４−シクロヘプチルオキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド）は、２７日目から初めて２週間、経口強制栄養によって、３０ｍｇ／ｋｇを１日４回投与した。２７日目、３１日目、３４日目、３７日目、および４１日目に関節炎の発症を評価した。次の尺度、すなわち（０）正常、（１）紅斑および浮腫、（２）関節のゆがみ、（３）関節強直を使用して、各肢に臨床スコアを付けた。前足、後足、および足首の浮腫の測定は、定張力カリパス（Ｄｙｅｒ、米国ペンシルヴェニア州Ｌａｎｃａｓｔｅｒ）を使用して行った。実施例１の化合物は、３０ｍｇ／ｋｇを１日４回では、このモデルの足の浮腫を５２％に抑制し、臨床スコアを３５％に抑制した。
【０１７９】
生物学実施例７
ＳＣＷ−連鎖球菌細胞壁−によって誘発される足の浮腫
０日目に右脛距関節への関節内注射を行って、雌性Ｌｅｗｉｓラット（約１５０ｇ）に、６μのＳＣＷの入った１０μｌのダルベッコＰＢＳを与えた。２１日目に、１００μｇのＳＣＷ（２５０μｌ、静脈内）によって再発応答を起こした。賦形剤（０．５％のヒドロキシプロピルメチルセルロース／０．２％のＴｗｅｅｎ８０）または実施例１の化合物（４−シクロヘプチルオキシ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−５−カルボン酸（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド）は、ＳＣＷ静脈内投与の１時間前、およびその後の日々に、１日４回（１０ｍｌ／ｋｇの体積）を経口的に与えた。２１日目の疾患発症前に、感作された後足のベースライン体積を水銀式体積変動記録法によって測定し、（各投与から２４時間後に行った）その後の評価から差し引いて、Δ値（２１日目の疾患を起こす前と各投与から２４時間後の足体積の差）を求めた。実施例１の化合物は、２１日目から始めて４日間、経口強制栄養によって、１０、３０、および１００ｍｇ／ｋｇを１日４回投与した。実施例１の化合物は、このモデルの足の浮腫を抑制し、ＩＤ５０は１６．３ｍｇ／ｋｇであった。
【０１８０】
本明細書に記載の実施例および実施形態は、例示を目的としたものにすぎず、それを考えて、当業者には様々な修正および変更が発想され、それらを本出願の精神および視野の範囲、ならびに添付の特許請求の範囲に含めるものとすることを理解されたい。本明細書で引用したすべての刊行物、特許、および特許出願は、いかようにもその全体が参照とし本明細書に援用される。
【国際調査報告】
2007509924.tif 000026
2007509924.tif 000027