(57)【要約】  水可溶性かつ安定なナノサイズの粒子のナノ分散が、両親媒性ポリマーによって囲まれ、その中に入れられた、非結晶状態の活性化合物の親水性の封入複合体の構成物として提供される。その封入複合体は、活性化合物とポリマーの間の無価の相互作用によって安定化される。活性化合物／両親媒性ポリマーの以下のペアが提供される：（ｉ）アジスロマイシン／多糖またはポリビニルアルコール、またはクラリスロマイシン／アルギン酸またはキトサン；（ｉｉ）ドネペジル塩酸塩／多糖；（ｉｉｉ）アゾール化合物／多糖、ポリアクリル酸、ポリアクリル酸の共重合体、ポリメタクリル酸、そしてポリメタクリル酸の共重合体；そして（ｉｖ）タキサン／ゼラチン。【特許請求の範囲】
【請求項１】
両親媒性のポリマーによって囲まれ、その中に入れられた活性化合物から本質的に成る、親水性の封入複合体を構成する、水可溶性かつ安定なナノサイズの粒子のナノ分散であって、該活性化合物は非結晶状態であり、そして該封入複合体は、活性化合物と、その周囲を囲む両親媒性ポリマーとの間の無価の相互作用によって安定化され、そして該封入複合体は、以下に示すものから構成されるグループから選択されるナノ分散、
（ｉ）活性化合物がクラリスロマイシンであり両親媒性ポリマーがアルギン酸またはキトサンである、または、活性化合物がアジスロマイシンであり両親媒性ポリマーが多糖またはポリビニルアルコールである封入複合体；
（ｉｉ）活性化合物がドネペジル塩酸塩であり、両親媒性ポリマーが多糖である封入複合体；
（ｉｉｉ）活性化合物がアゾール化合物であり、両親媒性ポリマーが、多糖、ポリアクリル酸、ポリアクリル酸の共重合体、ポリメタクリル酸、そしてポリメタクリル酸の共重合体、から成るグループから選択される封入複合体；そして
（ｉｖ）活性化合物がタキサンであり、両親媒性ポリマーがゼラチンである封入複合体。
【請求項２】
ナノ粒子が、活性化合物がアジスロマイシンであり、両親媒製ポリマーが多糖である封入複合体を構成する、請求項１のナノ分散。
【請求項３】
前述の多糖がデンプン、または、その親水性を向上させるように、またはその枝分かれを減少させるように、またはその両方の変性が為されたデンプンである、請求項２のナノ分散。
【請求項４】
前述のデンプンが、一つまたはそれ以上の以下の処理、すなわち酸加水分解、ポリエチレングリコールまたは過酸化水素との反応、または熱処理によって変性された、請求項３のナノ分散。
【請求項５】
多糖がキトサンまたはプロピレングリコールアルギン酸である、請求項２のナノ分散。
【請求項６】
ナノ粒子が、活性化合物がアジスロマイシンであり、両親媒性ポリマーがポリビニルアルコール（ＰＶＡ）である封入複合体を構成する、請求項１のナノ分散。
【請求項７】
ナノ粒子が、活性化合物がドネペジル塩酸塩であり、両親媒性ポリマーが多糖である封入複合体を構成する、請求項１のナノ分散。
【請求項８】
前述の多糖が、アルギン酸、デンプングリコール酸ナトリウム、そしてα化された変性デンプンから成るグループから選択される、請求項７のナノ分散。
【請求項９】
ナノ粒子が、活性化合物がアゾール化合物であり両親媒性ポリマーが多糖、ポリアクリル酸、ポリアクリル酸の共重合体、ポリメタクリル酸、ポリメタクリル酸の共重合体である封入複合体を構成する、請求項１のナノ分散。
【請求項１０】
アゾール化合物が、人間または獣医学的応用または農業での使用のための、イミダゾールまたはトリアゾール化合物である、請求項９のナノ分散。
【請求項１１】
アゾール化合物が、テルコナゾール、イトラコナゾール、フルコナゾール、クロトリマゾール、ミコナゾール、エコナゾール、ケトコナゾール、チオコナゾール、イソコナゾール、オキシコナゾール、そしてフェンチコナゾールから成るグループから選択されるアゾール抗真菌剤である、請求項１０のナノ分散。
【請求項１２】
アゾール化合物が、レトロゾール、アナストロゾール、ボロゾール、そしてファドロゾールから成るグループから選択される非ステロイド性抗エストロゲンである、請求項１０のナノ分散。
【請求項１３】
アゾール化合物が、ビテルタノール、シプロコナゾール、ディフェノコナゾール、エポキシコナゾール、フルキンコナゾール、フルシラゾール、フルトリアフォール、ヘキサコナゾール、メトコナゾール、マイクロブタニル、ペンコナゾール、プロピコナゾール、テブコナゾール、トリアジメフォン、トリアジメノール、そしてトリチコナゾール、イマザリル、プロコラズ、そしてトリフルミゾールから成るグループから選択される、農業において有用なアゾール抗真菌剤である、請求項１０のナノ分散。
【請求項１４】
アゾール化合物が、アゾシクロチン、パクロブトラゾール、カルフェントラゾール、イサゾフォス、そしてメタザクロールから成るグループから選択される農業における使用のための非抗真菌性アゾールである、請求項１０のナノ分散。
【請求項１５】
両親媒性多糖が、キトサン、そして一つまたはそれ以上の次の処理、すなわち酸加水分解、ポリエチレングリコールまたは過酸化水素との反応、または熱処理によって変性されたデンプン、から成るグループから選択される、請求項９から１４のいずれかのナノ分散。
【請求項１６】
両親媒性ポリマーが、ポリアクリル酸またはアクリル酸とブチルアクリル酸の共重合体である、請求項９から１４のいずれかのナノ分散。
【請求項１７】
アゾール化合物がイトラコナゾールであり、両親媒性ポリマーが、ポリアクリル酸、アクリル酸とブチルアクリル酸の共重合体、キトサン、そして一つまたはそれ以上の次の処理、すなわち酸加水分解、ポリエチレングリコールまたは過酸化水素との反応、または熱処理によって変性されたデンプン、から成るグループから選択される、請求項９のナノ分散。
【請求項１８】
ナノ粒子が、活性化合物がタキサンであり、両親媒性ポリマーがゼラチンである封入複合体を構成する、請求項１のナノ分散。
【請求項１９】
タキサンが、パクリタキセル、ドセタキセル、またはタキサンの半合成誘導体である、請求項１８のナノ分散。
【請求項２０】
ビタミンＢ１２、ポリビニルピロリドン、そしてポリ（４−スチレンスルホン酸）から成るグループから選択される試薬が、ゼラチンに加えられる、請求項１９のナノ分散。
【請求項２１】
（ｉ）水の中で両親媒性ポリマーの分子溶液を調製する；
（ｉｉ）活性化合物がアジスロマイシン、ドネペジル塩酸塩、アゾール化合物、そしてタキサンから成るグループから選択される、有機溶媒中での前述の活性化合物の分子溶液の調製；
（ｉｉｉ）一定の混合の下、（ｉｉ）の有機溶媒の沸点より５から１０℃上の温度で加熱したポリマー溶液（ｉ）に対して、活性化合物（ｉｉ）の冷えた溶液を滴下する；
（ｉｖ）有機溶媒の蒸発、その結果、前述の活性化合物が、無価の相互作用を介して前述の両親媒性ポリマー内に包まれた封入複合体から成るナノ粒子を構成するナノ分散を得る、
という行程から成る、請求項１のナノ分散の調製のためのプロセス。
【請求項２２】
請求項１のナノ分散と、製薬上許容できる担体を構成する、安定な医薬組成物。
【請求項２３】
経口投与のための、請求項２２の安定な医薬組成物。
【請求項２４】
液体または固体形状である、請求項２２または２３の安定な医薬組成物。
【請求項２５】
錠剤の形状である、請求項２４の安定な医薬組成物。
【請求項２６】
活性化合物がアジスロマイシンであり、両親媒性ポリマーが多糖またはポリビニルアルコールである封入複合体を構成する水可溶性ナノ粒子のナノ分散から成る、細菌感染の治療のための、請求項２２の安定な医薬組成物。
【請求項２７】
活性化合物がドネペジル塩酸塩であり、両親媒性ポリマーが多糖である封入複合体を構成する水可溶性ナノ粒子のナノ分散から成る、痴呆症やアルツハイマー病の治療のための、請求項２２の安定な医薬組成物。
【請求項２８】
活性化合物がアゾール抗真菌剤であり、両親媒性ポリマーが多糖、ポリアクリル酸、ポリアクリル酸の共重合体、ポリメタクリル酸、そしてポリメタクリル酸の共重合体から成るグループから選択される、封入複合体を構成する水可溶性ナノ粒子のナノ分散から成る、真菌感染の治療のための、請求項２２の安定な医薬組成物。
【請求項２９】
アゾール抗真菌剤がイトラコナゾールであり、両親媒性ポリマーがポリアクリル酸、アクリル酸とブチルアクリル酸の共重合体、キトサン、そして一つまたはそれ以上の次の処理、すなわち酸加水分解、ポリエチレングリコールまたは過酸化水素との反応、または熱処理によって変性されたデンプン、から成るグループから選択される、請求項２８の安定な医薬組成物。
【請求項３０】
活性化合物がレトロゾール、アナストロゾール、ボロゾール、そしてファドロゾールから成るグループから選択される非ステロイド性抗エストロゲンアゾールである、封入複合体を構成する水可溶性ナノ粒子のナノ分散から成るエストロゲン応答性乳ガンの治療のための、請求項２２の安定な医薬組成物。
【請求項３１】
活性化合物がタキサンであり、両親媒性ポリマーがゼラチンである封入複合体を構成する水可溶性ナノ粒子のナノ分散から成る、ガンの治療のための、請求項２２の安定な医薬組成物。
【請求項３２】
タキサンがパクリタキセルである、ガンの治療のための、請求項３１の安定な医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ナノ粒子の分野に属するものである。より詳しく言えば、本発明は、適切な両親媒性ポリマーに囲まれ、そしてその中に入れられた医薬または農薬のような活性化合物の封入複合体で構成される、水可溶性であり、かつ安定なナノサイズの粒子のナノ分散に関連するものであり、そして上述のナノ分散を実現するための方法に関連するものである。
【背景技術】
【０００２】
効果的なドラッグデリバリーそしてそれゆえに病気の治療に対する、二つのやっかいな障害とは、溶解性と安定性である。人間の体に吸収されるために、化合物は、水と脂肪（脂質）の両方に可溶性でなければならない。しかしながら、水における可溶性は、しばしば低い脂肪への可溶性と結びつき、逆もまた同様である。
【０００３】
アメリカ薬局方に登録されている薬のうちの３分の１以上、そして新規化学物質（ＮＣＥｓ）の約５０％が、水に不溶性または不十分に不溶性である。薬分子と薬化合物の４０％以上が、人間の体に不溶性である。これにもかかわらず、低い水可溶性を有する脂溶性の薬物質は、様々な治療の分野において、そして様々な病理学にとって、ますます増える適用がある、増大している薬の部類である。今日、２５００以上の高分子が開発の様々な段階にあり、５５００以上の低分子が開発中である（Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｃｏｍｐａｎｉｅｓ  Ｒｅｐｏｒｔ  ２００１，ｐ．２，ｗｗｗ．ｐｈａｒｍａｖｅｎｔｕｒｅｓ．ｃｏｍを参照）。これらの大きいそして小さい分子に重点を置いている現行の企業のそれぞれが、注目している大きいそして小さい分子の両方に関して、独自の規制と制限を設けている。
【０００４】
溶解性と安定性の問題は、治療薬の開発を妨げる主要な処方障害である。水への溶解性は、必須であるが、医薬において見られる複雑な有機構造の処方のための、しばしば捕らえどころのない性質である。非常に不溶性な薬のための伝統的な処方のシステムは、有機溶媒、界面活性剤、そして極端なｐＨ条件の組み合わせを必要としていた。これらの処方は、しばしば患者にとってもどかしく、そして不利な反応をもたらすかもしれない。時々、これらの方法は、非経口の処方のための薬の十分な量の溶解には不適切である。そのような場合、医師は、例えば溶解性に乏しいビタミンなどについて、「過剰量」の投薬をするかもしれない。ほとんどの場合、この過剰投与は、吸収されなかった分量は尿とともに体から排出されるので、害をもたらさない。しかしながら、過剰投与は、大量の活性物質の無駄である。
【０００５】
薬分子のサイズもまた、その溶解性と安定性と同様に、生体利用効率においても、主要な役割を果たす。生体利用効率とは、薬が体内に投与された後、標的組織またはいずれかの別のｉｎ  ｖｉｖｏ標的（すなわちレセプターやガン細胞など）に対して、利用可能になる度合いについて言及している。乏しい生体利用効率は、特に含まれている活性含有物が水への溶解性に乏しい場合、医薬組成物の開発において直面する重大な問題である。水可溶性に乏しい薬は、循環器系に吸収される前に、胃腸管から排泄される傾向にある。粒子状の薬の溶解の効率は、表面積の増大、すなわち粒子サイズの減少とともに増加しうることが知られている。
【０００６】
近年、ナノスケールにおける操作である、ナノテクノロジーへの興味が急増してきている。ナノテクノロジーは全く新しい分野ではない、すなわち、コロイド状ゾルや、支持されたプラチナ触媒は、ナノ粒子である。にもかかわらず、ナノスケールにおける近年の興味は、多数の他のものの中でも、ドラッグデリバリーのために、そしてドラッグデリバリーにおいて使われる素材を生産してきた。ナノ粒子は、一般的に、その粒径が１から１０００ｎｍの間の様々である固体と考えられている。
【０００７】
リポソーム、シクロデキストリン、微小カプセル化、そしてデンドリマーといった、数多くの可溶化技術が存在するが、これらの技術のそれぞれが、多くの重大な欠点を持っている。
【０００８】
水性の環境にさらされたリン脂質は、リポソームと呼ばれる二重層構造を形成する。リポソームは、１９６０年代初期に最初に発見された、リン脂質で構成された、微細な球形の構造である。水性の媒体中で、リン脂質分子は、両親媒性であり、親水性と疎水性の相互作用の結果として、自身が自己閉鎖的な二重層へと自然に組織化する。結果として生じたリポソームと呼ばれる小胞は、それゆえ、それらが懸濁された時、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて生物学的に活性な親水性の分子や薬のための可能性のあるキャリアーとなる性質を持つように、水性媒体の内側部分にカプセルのように包む。親油性の物質もまた、リポソーム膜に埋まった形で輸送されるかもしれない。リポソームは、生体膜に似ていて、水に溶けない生物活性分子の可溶化のためのツールとして、長年にわたって使われてきた。それらは、毒性がなく、生物分解可能で、特異的な標的器官のために使用することができる。
【０００９】
リポソームテクノロジーは、単層の小胞（ＵＬＶ）と多層の小胞（ＭＬＶ）を用いて、より小さい小胞からより大きい小胞までを調製することを可能にしている。ＭＬＶは、機械的撹拌によって生産される。大きなＵＬＶは、既知の孔径の膜を通して、圧力下で押し出し成形することによって、ＭＬＶから調製される。そのサイズは、直径２００ｎｍかそれ以下である；しかしながら、リポソームは、脂質の含量の変化、表面の変化、そして調製方法によって、ほとんどの必要性に応じてカスタムデザインすることが可能である。
【００１０】
薬の運び手として、リポソームは、かなりの量の薬を運搬する能力、調製の相対的な容易さ、そして天然の脂質が使われた場合の低い毒性などを含めて、いくつかの可能性のある長所を持っている。しかしながら、リポソームが直面する共通の問題、すなわち、低い安定性、短い有効期限、乏しい組織特異性、そして非天然脂質と使った時の毒性、などがある。加えて、食細胞による取り込みが循環時間を減少させる。さらに、狭いサイズ分布を示すリポソーム製剤を調製することは、お金がかかることと同時に、要求の多い条件下においてはやっかいな挑戦である。また、膜の目詰まりが、特定の薬を医薬として生産するのに必要な大量の生産の間に、しばしば起こる。
【００１１】
シクロデキストリンは、結晶性、水可溶性、環状で、６、７または８のグルコピラノース単位から成る非還元オリゴ糖であり、アルファ、ベータ、そしてガンマシクロデキストリンとそれぞれ呼ばれ、封入複合体を形成する能力を持つ生産物として長い間知られていた。シクロデキストリン構造は、外側の親水性表面と内側の疎水性空洞を持った、中空の円錐の部分のような形をした分子を与える。
【００１２】
親水性表面は、シクロデキストリンにとって良い水可溶性を生み出し、そして疎水性の空洞は、薬分子を囲む、包む、または入れるためにふさわしい環境を提供する。この連携は、水性溶媒から薬を単離し、そして薬の水への溶解性と安定性を向上させるかもしれない。長い間、ほとんどのシクロデキストリンは、その限られた利用可能性と高い価格のために、ほんの科学的興味にすぎなかった。
【００１３】
徹底的な研究と酵素技術の進歩の結果として、シクロデキストリンとその化学修飾誘導体は、現在、市販されていて、新しい技術、すなわち分子レベルでの包装を生み出している。しかしながら、シクロデキストリンは、不都合をはらんでいる。理想的なシクロデキストリンは、経口の、そして全身の安全性の両方を示すだろう。それは元のシクロデキストリンを超える水溶解性を持ち、さらにその複合体形成の特性を保持する、または凌ぐだろう。しかしながら、シクロデキストリンの不利な点は、内部の中心に入れられる活性分子のための利用可能な空間が限られていること、複合体の純粋な安定性の不足、市場での入手可能性が限られていること、そして高価であること、が挙げられる。
【００１４】
微小カプセル化は、ガス、液体、または固体の（また、“コア素材”とここで言及され、そして“コア素材”とともに交互に用いられた）活性組成物の小さな包みが、周囲の環境から活性組成物を保護する目的のための、第二の素材内に包装されることによるプロセスである。これらのカプセルは、１ミクロン（ミリメートルの１０００分の１）から、およそ７ミリメートルのサイズにわたり、その応用に適した方法によって後の時間に、その内容物を放出する。
【００１５】
コア素材が微小カプセルから放出される、４つの典型的なメカニズムがある。すなわち、（１）カプセル壁の機械的な破裂、（２）壁の分解、（３）壁の溶解、そして（４）壁を通した拡散、である。より一般的でない放出メカニズムには、除去（殻のゆっくりとした浸食）と生物分解がある。
【００１６】
微小カプセル化は、ある素材が、活性化合物の微小梱包を得るためにコートされるような、いくつかの技術の範囲にわたっている。コーティングは、素材を安定化させるため、風味を閉じこめるため、他の目詰まりを起こさせる物質から自由に流れる素材を調製するためなど、そして他の多くの目的のために行われる。この技術は、食品添加物産業や農業に対して、うまく応用された。しかしながら、製剤化の多くに対して比較的高い生産コストを必要とすることが、重大な欠点である。
【００１７】
ナノカプセル化と、ナノ粒子（有利に球形に形づくられる、それゆえナノスフィアである）の場合、異なった内部構造を持つシステムの二つのタイプが可能である。すなわち、（ｉ）ナノ粒子またはナノスフィアとして定義された、オリゴマーまたはポリマー単位の絡み合いから構成されたマトリクス型システム、そして（ｉｉ）ナノカプセルとして定義された、ポリマーの壁によって囲まれた油状の中心で構成される、リザーバ型システム、である。
【００１８】
ナノスフィアを調製するために使われた素材の性質に依存して、次のクラス分けが存在する。すなわち、（ａ）ナノスフィアの調製の間、架橋反応を行う両親媒性の高分子；（ｂ）ナノ粒子の調製の間、ポリマー化するモノマー；そして（ｃ）最初に有機溶媒に溶解し、それからナノ粒子を生産するための制御された条件下で沈殿した疎水性ポリマー、である。
【００１９】
ミクロ、そしてナノカプセル化におけるポリマーの使用に関連した問題がある。すなわち、乳濁液または分散液中での毒性な乳化剤の使用、ポリマー化または乳化処理の間の高いせん断力の適用、不十分な生体適合性と生物分解性、親水性と疎水性部分とのバランス、などである。これらの特性は、不十分な薬剤放出の原因となる。
【００２０】
デンドリマーは、その高度に枝分かれした、木のような構造によって分類された、ポリマーの一つのクラスである。それらは、層を加えることそれぞれの繰り返し、または成長するポリマーの“世代”とともに、ＡＢｎモノマーから繰り返しの方法で合成される。１０世代以上のデンドリマーは、１０６ｋＤａを超える分子量を持って合成されている。デンドリマーポリマーの一つの重要な特徴は、その狭い分子量分布である。確かに、用いられた合成戦略にも依存するが、２０ｋＤａを超える分子量を持つデンドリマーは、単一の化合物として合成されうる。
【００２１】
デンドリマーは、リポソームのように、カプセル化の性質を示し、そして内部の空間に分子を閉じこめることができる。それらは単一分子であり、集合体ではないので、薬−デンドリマー複合体は、リポソームと薬の複合体よりもかなり安定であることが期待される。デンドリマーは従って、ドラッグデリバリーシステムのための最も有望な運搬手段の一つと考えられる。しかしながら、デンドリマー技術は、未だ研究の段階であり、安全で効果的なドラッグデリバリーシステムとして産業上応用されるまでには、数年かかるだろうと推測される。
【００２２】
必要なものは、過去の発明で内在していた問題を克服する、生体利用効率の向上のための、活性組成物のナノサイズの粒子を構成する、安全で、生体適合性で、安定かつ効果的なドラッグデリバリーシステムである。
【００２３】
本出願人に譲渡された、アメリカ公開特許公報番号ＵＳ  ２００３／０１２９２３９は、本発明に記載されているナノ粒子の調製のための一般的な技術を公開している。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２４】
ナノサイズの粒子、つまり“ナノ粒子”の形で可溶化された、親油性と親水性の化合物は、薬理学、食品添加物の生産、化粧品、そして農業、同様にペットフード、獣医の製品、そして他の使用法にも共通して、使用することが可能である。
【００２５】
本発明は、ナノ粒子のナノ分散と、溶解性ナノ粒子の生産の方法、そして特に、水に不溶な親油性の有機素材と水に溶ける親水性の有機素材の封入複合体の生産方法を提供する。
【００２６】
封入複合体とは、定義によれば、“ホスト”と呼ばれる一つの成分が、“ゲスト”と呼ばれる第二の化学種の分子存在物が位置する空洞を形成する複合体である。したがって、本発明に基づいて、溶解性ナノ粒子は、ホストが両親媒性のポリマーまたはポリマーのグループでありゲストが前述のポリマーホストによって形成された空洞または空間内に包まれ固定化された、または保護された、活性複合分子であるような封入複合体を構成すると定義できる。
【００２７】
本発明に基づいて、封入複合体は、無価の相互作用によってポリマーと相互作用し、別個の分子存在物としてポリマー活性化合物を形成する、活性複合分子を含む。本発明の封入複合体の明らかな長所とユニークな特徴は、封入複合体形成の間に、新しい化学結合が全く形成されず、存在する結合が全く破壊されないことである。封入複合体を構成している粒子は、サイズにおいてナノレベルであり、そしてポリマーによって包装された、または有利に包まれた場合、薬分子自身に全く変化が起こらない。
【００２８】
封入複合体の外側の表面は、活性化合物が薬分子である場合、それを目標となる行き先まで運搬するポリマーから成る。ナノ粒子の形成に使われたポリマーに依存して、複合体内の薬や医薬は、体の特異的部分に容易にかつ素早く到達することができる。選択されたポリマーと活性化合物はまた、体内での薬または医薬の、多層の、多段階の、そして／または制御された放出をする能力のあるナノ粒子を提供するだろう。
【００２９】
この発明のナノ粒子は、長い期間安定であり、低いコストで製造される可能性があり、そして活性化合物の全体的な生体利用効率を向上させるかもしれない。
【００３０】
特に、本発明は、両親媒性のポリマーによって囲まれ、その中に入れられた活性化合物から本質的に成る、親水性の封入複合体を構成する、水可溶性かつ安定なナノサイズの粒子のナノ分散であって、該両親媒性ポリマー中の活性化合物は非結晶状態であり、該封入複合体は、活性化合物と、その周囲を囲む両親媒性ポリマーとの間の無価の相互作用によって安定化され、そして該封入複合体は、以下に示すものから構成されるグループから選択されるナノ分散が提供される、
【００３１】
（ｉ）活性化合物がクラリスロマイシンであり両親媒性ポリマーがアルギン酸またはキトサンである、または、活性化合物がアジスロマイシンであり両親媒性ポリマーが多糖またはポリビニルアルコールである封入複合体；
【００３２】
（ｉｉ）活性化合物がドネペジル塩酸塩であり、両親媒性ポリマーが多糖である封入複合体；
【００３３】
（ｉｉｉ）活性化合物がアゾール系抗真菌剤であり、両親媒性ポリマーが、多糖、ポリアクリル酸、ポリアクリル酸の共重合体、ポリメタクリル酸、そしてポリメタクリル酸の共重合体、から成るグループから選択される封入複合体；そして
【００３４】
（ｉｖ）活性化合物がタキサンであり、両親媒性ポリマーがゼラチンである封入複合体。
【００３５】
本発明はまた、この発明における安定なナノ分散を構成する医薬組成物を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００３６】
本発明のナノ粒子は、水可溶性な両親媒性ポリマーに包まれた、不溶性または溶解性の活性化合物またはコアを構成している。異なるポリマーの種類が、親油性または親水性である選択された活性化合物のいずれに対しても、本発明によれば使用することができる。ポリマー、またはポリマーのグループは、親油性または親水性の活性化合物と、結果として生じた活性化合物／ポリマーナノ粒子内でのこの化合物の相互作用との両方の、様々な物理的性質を計算に入れたアルゴリズムによって選択される。この技術は、上記に参照されたＵＳ  ２００３／０１２９２３９に完全に記載されている。
【００３７】
ポリマーまたはポリマー群の選択における一つの重要なパラメーターは、ＨＬＢ、すなわち、化合物の親水性と親油性の部分の分子バランスの測定である。０から２０のＨＬＢ国際尺度内で、親油性分子は６より小さいＨＬＢであり、親水性の分子は６より大きいＨＬＢである。したがって、本発明によれば、ポリマーのＨＬＢは、活性化合物と結合した後で、複合体の全体の結果的なＨＬＢ値が８より大きい場合は、複合体は水可溶性とする、といった方法で選択される。
【００３８】
ここで使われる、“非結晶性”という用語は、不定形または乱れた結晶状態の両方の素材について言及している。好ましい実施例では、その素材は不定形である。不定形状態は、確かに生体利用効率を高めるかもしれないので、ドラッグデリバリーには好ましいということは、当業者には知られている。
【００３９】
ここで使われる、“水可溶性ナノ粒子”、“ナノ粒子の水性溶液”そして“ナノ分散”という用語は、相互交換可能に使われ、ともに同じものについて言及することを意図していて、すなわち、溶液の見かけを持つが、伝統的な水性溶液ではない、ナノ粒子の上質の分散について言及することを意図している。
【００４０】
ここで使われる、“安定なナノ分散”そして“水可溶性で安定なナノサイズの粒子のナノ分散”という用語は、相互交換可能に使われ、ともに同じもの、すなわち、安定で上質なナノ粒子の分散について言及することを意図している。
【００４１】
ナノ粒子と封入複合体の安定性は、単に一つの意味を持つだけではない。ナノ粒子は、分散媒体にとどまっている間は、ナノ複合体の一部として長い時間経っても安定であろう。ナノ分散は、段階の分離がなくても長い時間安定である。さらに、不定形状態もまた、長い時間にわたって保持されるだろう。
【００４２】
本発明で用いられるプロセスにおいて、システムの構成要素は、ミセルをもたらさないし、古典的な分散システムも形成しないことは、注目に値する。本発明の技術は、以下の事柄をもたらす：
【００４３】
（ｉ）封入複合体を形成した後、かすかに溶解する、または溶解しない（または湿潤することすら不可能な）活性化合物は、疑似可溶性となる。粒子サイズが約２０から３０ｎｍの場合、結果、素材は可溶性となり、見た目は不透明というよりむしろ透き通る；
【００４４】
（ｉｉ）活性化合物のナノサイズへの分散と、封入複合体を形成するポリマーによる固定の後、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、生理的流動体におけるよう改正の向上、吸収の改善、そして生物活性の改善と同様に、安定な非結晶、好ましくは不定形状態への伝達が達成される；
【００４５】
（ｉｉｉ）生物学的に活性な化合物の結晶が不定形になり、したがって生物活性の向上を示す。
【００４６】
本発明の最も好ましい実施例では、サイズ偏差が２０％より大きくなく、かつ粒子のサイズがナノ範囲以内、すなわち１０００ｎｍより小さい場合、ナノ分散中でナノ粒子の８０％以上がサイズ範囲以内である。
【００４７】
この発明の有利な、そして好ましい実施例では、ポリマー溶液中のポリマー分子が、無価の相互作用を介して活性化合物を“包む”。ここで使われる“無価の”という用語は、非共有結合性、非イオン性、そして非半極性の結合そして／または相互作用であり、例えば、封入複合体におけるポリマーと活性化合物との間の静電力、ファンデルワールス力、そして水素結合などの、結果として活性化合物とポリマーの分子柔軟性を減少させる、ポリマー内への活性化合物の固定という無価の相互作用のような力を含んでいる。いずれかの有価結合の形成は、活性化合物の特徴または性質を変化させるだろう。無価の結合の形成は、活性化合物が医薬である場合には特に重要である、親油性化合物の構造と性質を保持する。
【００４８】
本発明は、両親媒性のポリマーによって囲まれ、その中に入れられた活性化合物から本質的に成る、親水性の封入複合体を構成する、水可溶性かつ安定なナノサイズの粒子のナノ分散を提供する。ここで、前述の両親媒性ポリマー中の活性化合物は非結晶状態であり、そして前述の封入複合体は、活性化合物と、その周囲を囲む両親媒性ポリマーとの間の無価の相互作用によって安定化され、そして前述の封入複合体は、以下に示すものから構成されるグループから選択される。すなわち、
【００４９】
（ｉ）活性化合物がクラリスロマイシンとアジスロマイシンから選択されたマクロライド抗生物質であり、活性化合物がクラリスロマイシンの場合、両親媒性ポリマーがアルギン酸またはキトサンで、活性化合物がアジスロマイシンの場合、両親媒性ポリマーが多糖またはポリビニルアルコールである、封入複合体；
【００５０】
（ｉｉ）活性化合物がドネペジル塩酸塩であり、両親媒性ポリマーが多糖である封入複合体；
【００５１】
（ｉｉｉ）活性化合物がアゾール化合物であり、両親媒性ポリマーが、多糖、ポリアクリル酸、ポリアクリル酸の共重合体、ポリメタクリル酸、そしてポリメタクリル酸の共重合体、から成るグループから選択される封入複合体；そして
【００５２】
（ｉｖ）活性化合物がタキサンであり、両親媒性ポリマーがゼラチンである封入複合体。
【００５３】
一つの好ましい実施例において、この発明のナノ粒子が、活性化合物がマクロライド抗生物質であるクラリスロマイシンまたは第一アザライド抗生物質であるアジスロマイシンである、封入複合体を構成する。これらのマクロライドは、大きな、親油性分子で、幅広い様々な細菌に対して幅広い範囲で抗生物質活性を持ち、そして人体と獣医の両方の医薬として使われうる。マクロライド抗生物質は、特に呼吸器への感染症の治療に有用である。
【００５４】
マクロライド抗生物質との封入複合体の調製に適したポリマーは、天然型または変性した多糖である。一つの実施例では、多糖は、望ましくは大部分が直鎖状であるデンプンである、すなわち、アンヒドログルコース単位が、直鎖を形成する（−Ｄ−１，４  グルコシド結合によって連結したデンプンの構成要素であるアミロースを多く含み、そしてポリマー状の、枝分かれした構造を持つデンプンの構成要素であるアミロペクチンを少なく含むようなデンプンである。アミロースとアミロペクチンの量と、その分子量は、異なったデンプンのタイプの間で変化する。
【００５５】
この発明での使用のためのデンプンの特性を改善するために、トウモロコシまたはジャガイモデンプンといったデンプンは、例えば、クエン酸を用いた酸加水分解によって、そして／または、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）そして／または過酸化水素といった試薬と反応させることによって、その疎水性を向上させるような変性を施すことができる。加えて、デンプンは、ＰＥＧそして／または過酸化水素で処理した後で任意的に、枝分かれの量を減らすために、例えば１６０から１８０℃で３０から６０分間、熱処理に供することができる（以下、これを“熱破壊されたデンプン”という）。
【００５６】
別の好ましい実施例では、この発明のナノ粒子が、活性化合物がクラリスロマイシンであり、両親媒性ポリマーが、デンプン、キトサン、そしてアルギン酸、例えばアルギン酸ナトリウム、から成るグループから選択される、封入複合体を構成している。デンプンは、加水分解されたデンプン、異なる量のＰＥＧ、好ましくはＰＥＧ−４００、そして／または過酸化水素によって変性されたデンプン、そして熱破壊されたデンプンであるかもしれない。
【００５７】
別の好ましい実施例では、この発明のナノ粒子が、活性化合物がアジスロマイシンであり、両親媒性ポリマーがキトサン、またはプロピレングリコールアルギン酸（ＭａｎｕｃｏｌエステルＢ）といったアルギン酸誘導体である、封入複合体を構成している。別の好ましい実施例では、この発明のナノ粒子が、活性物質がアジスロマイシンであり、両親媒性ポリマーがポリビニルアルコール（ＰＶＡ）である封入複合体を構成している。
【００５８】
別の好ましい実施例では、この発明のナノ粒子が、活性物質がドネペジルであり、両親媒性ポリマーが多糖である封入複合体を構成している。
【００５９】
ドネペジル、１−ベンジル−４−（（５，６−ジメトキシ−１−インダノン）−２−イル）メチルピペリジン、とそのアナログは、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤としてＵＳ  ４，８９５，８４１に記載されていて、アルツハイマー型老人性痴呆症、ハンチントン舞踏病、ピック病、そして運動失調などを含む様々な種類の痴呆症の治療に有用である。ドネペジル塩酸塩は、白色の結晶性粉末であり、クロロホルムに自由に溶解し、水と氷酢酸には可溶性であり、エタノールとアセトニトリルにはかすかに溶解し、そして酢酸エチルとヘキサンにはほとんど溶解しない。ドネペジル塩酸塩は、アルツハイマー型の痴呆症を和らげるための低刺激な治療のために、それを５または１０ｍｇ含んだ、フィルムで覆われた錠剤で経口投与によって利用可能である。不定形のドネペジル塩酸塩は、特許ＵＳ  ５，９８５，８６４とＵＳ  ６，１４０，３２１に記載されている。最近、ＵＳ  ６，７３４，１９５は、ドネペジル塩酸塩の湿潤粒状化が、乾燥と粉化の後に、不定形ドネペジル塩酸塩を均質に含む安定な粒状を生産することを公開した。
【００６０】
本発明によれば、水可溶性なナノ粒子は、非結晶状態、例えば不定形状態のドネペジル塩酸塩が、両親媒性の多糖によって包まれ、囲まれた両親媒性の多糖との無価の相互作用によって固定化／安定化された封入複合体の構成を提供する。一つの好ましい実施例では、多糖はアルギン酸である。別の好ましい実施例では、多糖はデンプングリコール酸ナトリウムである。さらに別の実施例では、多糖はα化された変性デンプンである。
【００６１】
別の好ましい実施例では、この発明のナノ粒子は、活性物質がアゾール化合物であり、両親媒性ポリマーが、多糖、ポリアクリル酸、ポリアクリル酸の共重合体、ポリメタクリル酸、そしてポリメタクリル酸の共重合体である、封入複合体を構成する。
【００６２】
アゾール化合物は、農業や人間の真菌症における抗真菌剤として、また閉経後の女性のエストロゲン応答性乳ガンの治療における非ステロイド性抗エストロゲンとして、重要な役割を果たす。このアゾールの幅広い使用は、酵素であるステロール１４−デメチラーゼとアロマターゼへの高いアフィニティーの結合によるステロール合成系のある経路の阻害に基づいている。アゾール抗真菌剤は、幅広い抗真菌活性を示し、真菌の感染を妨げたり、感染を治療したりするのに使われる。それゆえ、それらは統合的な農業生産における重要なツールである。その化学構造によれば、アゾール化合物は、トリアゾールとイミダゾールにクラス分けされる；しかしながら、その抗真菌活性は同じ分子メカニズムによる。アゾール抗真菌剤は、農業と、人間や獣医の抗カビ性治療において、幅広く使われる。
【００６３】
本発明によれば、“アゾール化合物”は、人間や獣医の応用のための、または農業において使用するための、イミダゾールやトリアゾール化合物について言及している。
【００６４】
一つの好ましい実施例では、アゾール化合物は、トリアゾールであるテルコナゾール、イタコナゾール、そしてフルコナゾールに限定されることなく、イミダゾールであるクロトリマゾール、ミコナゾール、エコナゾール、ケトコナゾール、チオコナゾール、イソコナゾール、オキシコナゾール、そしてフェンチコナゾールなどを含む、多くの異なる抗カビ性製剤に使われるアゾール抗真菌剤から選択される。
【００６５】
別の実施例では、アゾール化合物は、非ステロイド性の抗エストロゲンとして作用し、閉経後の女性のエストロゲン応答性乳ガンの治療に使われうる、レトロゾール、アナストロゾール、ボロゾール、そしてファドロゾールを含む、しかしそれに限定されないアゾールから選択される。
【００６６】
別の実施例では、アゾール化合物は、農業において有用な、トリアゾールであるビテルタノール、シプロコナゾール、ディフェノコナゾール、エポキシコナゾール、フルキンコナゾール、フルシラゾール、フルトリアフォール、ヘキサコナゾール、メトコナゾール、マイクロブタニル、ペンコナゾール、プロピコナゾール、テブコナゾール、トリアジメフォン、トリアジメノール、そしてトリチコナゾール、そしてイミダゾールであるイマザリル、プロコラズ、そしてトリフルミゾールを含む、しかしそれに限定されない、アゾール抗真菌剤である。さらに別の実施例では、アゾール化合物は、トリアゾールであり、ダニ駆除剤として使われるアゾシクロチン、成長調整剤として使われるパクロブトラゾール、除草剤として使われるカルフェントラゾール、そして殺虫剤として使われるイサゾフォス、そしてイミダゾールであり、除草剤として使われるメタザクロールといった、農業における使用のための非抗真菌性アゾールである。
【００６７】
一つのより好ましい実施例では、アゾール化合物は、真菌の感染症の治療に使われるアゾール医薬、イトラコナゾールである。イトラコナゾールは、皮膚糸状菌（白癬感染症）、カンジダやマラセジア感染などの酵母、ヒストプラズマ、アスペルギルス、コクシジオイデス真菌症、クロモ−ブラストミセス症といった組織性真菌感染症を含む、真菌の幅広い範囲に対して効果的である。イトラコナゾールは、スポラノックスＴＭ（ヤンセン−シラグ）という登録商標の下、１００ｍｇカプセルとして入手可能である。それは、白色からやや黄色がかった粉末である。それは親油性であり、水には不溶で、アルコールにはかすかに溶解し、そしてジクロロメタンには自由に溶解する。スポラノックスは、糖質の球体に覆われたイトラコナゾールを１００ｍｇ含んでいる。
【００６８】
一つの実施例では、アゾール化合物を包むのに使われる両親媒性ポリマーは、多糖、より好ましくはキトサン、または加水分解か熱破壊されたデンプンであり、ともに任意的にＰＥＧ、過酸化水素、またはその両方によって変性される。アルギン酸もまた、アゾール化合物のある濃度とともに使用することができる（下記の表５を参照）。
【００６９】
別の実施例では、アゾール化合物を包むのに使われる両親媒性ポリマーは、ポリアクリル酸、ポリアクリル酸の共重合体、ポリメタクリル酸、ポリメタクリル酸の共重合体から成るグループから選択される。ポリアクリル酸・ポリメタクリル酸の共重合体は、例えばアルキルアクリル酸・アルキルメタクリル酸といった、別のアクリル酸・メタクリル酸誘導体を含むアクリル酸・メタクリル酸の共重合体であるかもしれない。一つの好ましい実施例では、両親媒性ポリマーはポリアクリル酸である。別の好ましい実施例では、両親媒性ポリマーは、異なった比率でブチルアクリル酸を含む、アクリル酸の共重合体である（表５参照）。
【００７０】
さらに別の好ましい実施例では、この発明のナノ粒子が、活性物質がタキサンであり、両親媒性ポリマーがゼラチンである封入複合体を構成している。
【００７１】
ここで使われる、“タキサン”という用語は、例えば、完全に公開された全体の参照によって具体化されたＵＳ  ６，２０１，１４０に示された構造式によって代表される、２０炭素のタキサンの中心骨組みを含む化合物について言及している。タキサンという用語は、化学療法薬剤タキソール（一般名：パクリタキセル；化学名：５β，２０−エポキシ−１，２α，４，７β，１０β，１３α−ヘキサヒドロキシタクス−１１１−エン−９−オン，４，１０−ジアセテート  ２−ベンソエート  １３−エステル  （２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−ベンゾイル−３−フェニルイソセリン）と、タキソテア（一般名：ドセタキセル）、そして、例えば、Ｃ（７）位でのエステルまたはエーテル置換、Ｃ（１０）位でのヒドロキシ置換、そして様々なＣ（２）、Ｃ（９）、Ｃ（１４）位、そして例えば、全てのこれらの特許は完全に公開された全体の参照によって具体化されている特許ＵＳ  ６，７９４，５２３、ＵＳ  ６，７８０，８７９、ＵＳ  ６，７６５，０１５、ＵＳ  ６，６１０，８６０、ＵＳ  ６，５５２，２０５、そしてＵＳ  ６，２０１，１４０に記載された側鎖の置換、などを持つタキサンの半合成誘導体を含んでいる。
【００７２】
タキソールは、今では一般名“パクリタキセル”を持つ抗ガン剤で、登録商標が“タキソールＲ”（ブリストル・マイヤーズ  スクイブ社）であり、元々は太平洋のイチイの木（Ｔａｘｕｓ  ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ）の皮から単離された、複雑な多重酸素化されたジテルペンである。タキソールは、乳ガン、卵巣ガン、そして肺ガン、それらと同様にエイズに関連したカポジ肉腫を治療するために、ＦＤＡによって承認されている。ドセタキセル（タキソテア−Ｒ）は、パクリタキセルと類似していて、またイチイの木の針葉から得られた物質であり、他の抗ガン剤では効き目を示さないような、進行した乳ガンや非小細胞肺ガンを治療するために、ＦＤＡによって承認されている。パクリタキセルとドセタキセルは、静脈注射で投与される。パクリタキセルとドセタキセルはともに、深刻な副作用を持つ。パクリタキセルは、白色から灰色がかった白色の結晶性粉末である。この天然物は高度に疎水性であり、水に不溶である。タキソールの投与に関する一つの問題は、ほとんどの医薬上で使用可能な溶媒に対する溶解性の低さである；臨床上使われる製剤は、賦形剤としてクレモフォアＥＬ（多重エトキシ化されたヒマシ油）やエタノールを含み、それらは深刻な不利な効果をもたらす。したがって、パクリタキセルの良好な臨床上の効果、そしてガンの医薬の中で最も大きな有利点を持つものの一つとして認められているにもかかわらず、患者におけるパクリタキセルのより良い安全性と薬物動態学的側面を達成するための高まる必要性が、今なお存在する。
【００７３】
ＵＳ  ６，７５３，００６は、３０から１０００ｍｇ／ｍ２の範囲の量の、人間に対する全身性の投与が可能な、非結晶性で、クレモフォアを含まないパクリタキセルの十分な量を含む、安定で、無菌状態で、非水性の製剤を公開している。
【００７４】
本発明によれば、水可溶性のナノ粒子が、非結晶状態、例えば、ゼラチンによって包まれ、囲まれたゼラチンとの無価の相互作用によって固定化／安定化された、不定形状態のパクリタキセルを含む封入複合体の構成を提供する。好ましい実施例では、ビタミンＢ１２そして／またはポリスチレンスルホン酸が、パクリタキセルの溶解性を向上させるために、ゼラチンに加えられる。
【００７５】
この発明の水性のナノ分散は、凍結乾燥され、それから、安定な医薬組成物を与える、医薬的に容認できる担体と混合することができる。
【００７６】
医薬的に容認できる担体または賦形剤は、活性化合物のタイプと製剤のタイプに適合させ、そして、よく知られた方法、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（以前はＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓと言われた本）１９ｔｈ  ｅｄ．，１９９５に記載された標準的な賦形剤から選択されうる。
【００７７】
したがって、もう一つの側面では、本発明は、医薬的に容認できる担体と、この発明のナノ分散から成る、安定な医薬的組成物を提供する。この組成物は、経口投与、静脈投与、粘膜投与、そして肺からの投与を意図している。より好ましい実施例では、組成物は経口投与であり、液体または固体の形状で差し支えない。一つの好ましい実施例では、アジスロマイシンのためにここに例示された、錠剤形態が提供される。
【００７８】
一つの好ましい実施例では、この発明は、活性化合物がエリスロマイシン、クラリスロマイシン、アジスロマイシンから成るグループから選択され、両親媒性ポリマーが多糖である封入複合体を構成する水可溶性ナノ粒子から成る細菌感染の治療のための安定な医薬組成物に関係している。これらの組成物は、前述のマクロライド抗生物質によって治療可能な細菌感染、特に呼吸器系の感染に対して有用である。
【００７９】
別の好ましい実施例では、この発明は、活性化合物がドネペジル塩酸塩であり、両親媒性ポリマーが多糖である封入複合体を構成する水可溶性ナノ粒子のナノ分散から成る、痴呆症やアルツハイマー病の治療のための安定な医薬組成物に関係する。
【００８０】
さらに好ましい実施例では、この発明は、活性化合物がアゾール抗真菌剤であり、両親媒性ポリマーが多糖、ポリアクリル酸、ポリアクリル酸の共重合体、ポリメタクリル酸、ポリメタクリル酸の共重合体から成るグループから選択される封入複合体を構成する水可溶性ナノ粒子のナノ分散から成る、真菌感染症の治療のための安定な医薬組成物に関係する。より好ましい実施例では、アゾール抗真菌剤はイトラコナゾールであり、両親媒性ポリマーはポリアクリル酸、アクリル酸とブチルアクリル酸との共重合体、キトサン、そして酸加水分解、ポリエチレングリコールまたは過酸化水素との反応、または熱処理のうち一つかそれ以上の処理がなされた変性したデンプン、から成るグループから選択される。
【００８１】
さらに別の好ましい実施例では、この発明は、活性化合物がレトロゾール、アナストロゾール、ボロゾール、そしてファドロゾールから成るグループから選択された非ステロイド性抗エストロゲンアゾールである封入複合体を構成する水可溶性ナノ粒子のナノ分散から成る、エストロゲン応答性乳ガンの治療のための安定な医薬組成物に関係する。
【００８２】
さらに好ましい実施例では、この発明は、活性化合物がタキサン、最も好ましくはパクリタキセルであり、両親媒性ポリマーがゼラチンである封入複合体を構成する水可溶性ナノ粒子のナノ分散から成る、ガンの治療のための安定な医薬組成物に関係する。
【実施例】
【００８３】
この発明は、以下の限定されない例によって、今から説明されるだろう。
【００８４】
例１  封入複合体を構成するナノ粒子の生産のための一般的方法
この発明のナノ粒子の調製のために、以下の一般的方法が行われる：
（ｉ）水の中での両親媒性ポリマーの分子溶液の調製；
（ｉｉ）有機溶媒中での活性化合物の分子溶液の調製；
（ｉｉｉ）一定の混合の下、（ｉｉ）の有機溶媒の沸点より５から１０℃上の温度で加熱したポリマー溶液（ｉ）に対して、活性化合物（ｉｉ）の冷えた溶液を滴下する；
（ｉｖ）有機溶媒の蒸発、その結果、両親媒性ポリマー内に入れられた活性化合物の封入複合体を構成するナノ粒子の望みのナノ分散を得る。
【００８５】
この方法は、上記に参照されたＵＳ  ２００３／０１２９２３９における発明者によって以前に記載された通りに、そこに書かれた化学反応器を使い、または前述の装置の適切な改変を伴って、行われるかもしれない。本発明によれば、可溶性のナノサイズの粒子を形成するプロセスの間、ポリマーは、化学反応器の第一の容器内でポリマー溶液を形成するように、水性溶液、好ましくは水に加えられる。加えて、原料が、活性化合物とポリマーを選択するために使われたアルゴリズムを介して決定されたパラメーターに基づいて、必要に応じ、この溶液のｐＨとイオン力レベルを調節するために加えられる。水不溶性（親油性）または水可溶性（親水性）化合物である活性化合物は、化学反応器の第二の容器に収められる。非水性溶媒（または溶媒の混合物）中の活性な親油性または親水性の化合物の溶液は、“担体”として言及される。ポリマー溶液に担体を注ぐまたは加える早さは、ポリマー溶液に加えられた有機溶液が３％より低い濃度であることを確実にするように、一つまたはそれ以上の調節可能な蛇口によって制御される。
【００８６】
活性化合物溶液は、ポリマー溶液が加熱され、加熱されたポリマー溶液からの蒸気が、第二の容器中に存在する活性化合物を液化させ溶解する時に形成される。（担体中の）活性化合物溶液は、それから乳濁液または懸濁液中で分散相を形成するように、ポリマー溶液と混合される。化学反応器内で、乳濁液は、乳濁液または懸濁液内でナノサイズの活性化合物分子の形成をもたらす撹拌機（より正確には、ナノ撹拌機）によってもたらされる乱流の領域へと加えられる。この乱流の領域は“作用域”または“相互作用の領域”として言及される。乱流の領域へと加えられた乳濁液または懸濁液は、レイノルズ数がＲｅ＞１０，０００である。乳濁液は、したがって、およそ１からおよそ１０００ｎｍの範囲の粒子を持つ“ナノ乳濁液”または“ナノ懸濁液”になる。粒子の生産はまた、小さなミクロンサイズの粒子を含むものにまで拡張することができ、そしてこれらの粒子は、いくつかの使用法に適していて、また本発明によって網羅される。
【００８７】
ナノ乳濁液またはナノ懸濁液中には、ポリマー溶液から成る分散溶媒と、担体中の活性化合物の溶液を構成する分散相が存在する。しかしながら、この二相のナノ乳濁液またはナノ懸濁液は不安定である。担体の蒸発は、およそ１からおよそ１０００ｎｍのサイズ範囲の分散相の粒子にさせる。ポリマー溶液中のポリマー分子はそれから、担体の蒸発後に分散相の粒子にとどまった活性化合物を、囲み、または包装し、より適切には包み、したがって、封入複合体中の親水性ポリマーによって包まれた水不溶性の親油性化合物の均質なナノサイズの分散を形成する。残った担体はそれから、真空乾燥、または他の適切な乾燥技術（例えば、凍結乾燥、減圧蒸留）によって排除される。乳濁液または懸濁液、そして結果として生じる複合体の形成のために、適切な活性化合物とポリマーを選択するために使われたアルゴリズムの結果、一般的に、担体の蒸発の後で残っている遊離のポリマーはない。担体の蒸発に続いて、安定な封入複合体が、不定形そして／または部分的な結晶、または結晶性の活性物から構成される。
【００８８】
例２  変性デンプンの調製
この発明の利用のために、大部分が直鎖状であるデンプンを用いるのが望ましい、すなわち、アンヒドログルコース単位が、直鎖を形成するようなα−Ｄ−１，４グリコシド結合によって繋がったデンプンの構成要素であるアミロースを高い含量で含み、ポリマー状の枝分かれした構造を持つデンプンの構成要素であるアミロペクチンを低い含量で含むデンプンである。アミロースとアミロペクチンのレベルとその分子量は、異なるデンプンのタイプの間で変化する。
【００８９】
この発明での使用に際してその特性を改善するために、トウモロコシまたはジャガイモのデンプンは、例えば、酸加水分解によって、そして／またはポリエチレングリコールそして／または過酸化水素といった試薬との反応によって、その疎水性を向上させることによって変性されうる。加えて、デンプンは、例えば１６０から１８０℃で約３０から６０分間、枝分かれの量を減らすために、熱処理に供されうる（これ以降、“熱破壊されたデンプン”と称する）。
【００９０】
変性のために、様々な量のジャガイモデンプンと蒸留水が反応容器に入れられ（Ｃ  ｐ．ｓｔ＝ジャガイモデンプンの濃度、表１のＸ１）、そして望みのｐＨ（２から５の範囲）が与えられるまで、混合下でクエン酸が加えられた（Ｘ２、表１）。得られた懸濁液は、均質な不透明な物体（加水分解されたデンプン）が得られるまで、継続的に撹拌しながら、室温から７０から９５℃まで、およそ１０から２０分間で加熱された。得られた物体は、オートクレーヴ中で、時間Ｘ３（分）の間、１６０から１８０℃にさらされた。これらの条件の下、デンプンの網目状の構造は、水に溶解するような、直鎖状で若干枝分かれした高分子へと、部分的に、または完全に変換される。その物体は１００℃以下に冷やされた（熱破壊されたデンプン）。
【００９１】
いくつかのサンプルに対して、ＰＥＧ−４００が加えられ（量Ｘ４、デンプンに対する％、表１）、得られた混合物は、時間Ｘ５（表１）の間、オートクレーヴ中で１６０から１８０℃で加熱され、その後１００℃以下に冷やされた（ＰＥＧ変性熱分解されたデンプン）。溶液の濁度（ＦＴＵ、ホルマジン濁度単位による）と粘度（分子量、ＭＷ）が測定された。結果は表１に示している。さらなる使用に適切な溶液は、透き通っている、または乳白光を発し、好ましくは２０から４０ＦＴＵの範囲内の濁度を持つべきである。さらに、変性デンプンの分子量（ＭＷ）は、固有の粘度測定により計算される。許容可能なＭＷ（固有の粘度によって反映された）値は、最大でおよそ１００，０００までであり、複合体化される活性化合物に依存する。
【００９２】
【表１】
2007507489.tif 000002
【００９３】
例３  変性デンプンに包まれたクラリスロマイシンの封入複合体を構成するナノ粒子の調製
この例は、本発明の一部ではなく、ナノ粒子の調製のプロセスを例証することを紹介するものである。
【００９４】
両親媒性ポリマーの調製のために、分子量（５−１０）×１０４のジャガイモデンプンが蒸留水に溶解され、最初に１６０から１８０℃で加熱され、そして、デンプン：ＰＥＧ−４００の比率が２：１と４：１の間の範囲を用い、溶液のｐＨはクエン酸を用いて６．５またはそれ以下に調節され、温度は１６０から１８０℃で、変性時間は６０から１８０分で、例２に記載された通りにＰＥＧ−４００によって変性された。酢酸メチルまたはジクロロメタン中のクラリスロマイシンの溶液が準備された。
【００９５】
変性デンプンの水性溶液が反応容器に入れられ、１０，０００回転／分以上の速さでホモジナイザーを用いて混合しながら、６０℃にまで加熱された。デンプン溶液の温度が６０℃に達した後、クラリスロマイシンの溶液が、約１ｍｌ／秒の速度でそこに加えられた。ホモジナイザーの速度はまた、少なくとも１０，０００回転／分であった。クラリスロマイシンは、ナノ粒子を作るように変性デンプンと相互作用し、そして有機溶媒は蒸発され、直接濃縮器内で濃縮された。全てのクラリスロマイシンがポリマーと相互作用し、クラリスロマイシン−デンプン封入複合体として溶解した後、残った有機溶媒は継続的に混合しながら真空乾燥され、クラリスロマイシン−デンプン封入複合体を構成するナノ粒子の水性溶液は３０から３５℃に冷やされた。
【００９６】
ナノ粒子の冷却された水性溶液の濁度と粘度は、分散の安定性を評価するために、規定の保存時間で測定された。いくつかのクラリスロマイシン−デンプン封入複合体のナノ分散の濁度値は、表２に示される。安定なナノ分散は、時間の間中ずっと不変の濁度値を示す。結晶相の存在と複合体の粒子のサイズが決定された。
【００９７】
【表２−１】
2007507489.tif 000003
【表２−２】
2007507489.tif 000004
【００９８】
例４  さらなるクラリスロマイシン−ポリマー封入複合体の物理的特徴
さらなる、クラリスロマイシンの親水性封入複合体が、クラリスロマイシンを酢酸メチルまたはジクロロメタンに溶解し、ポリマーに、加水分解したジャガイモデンプン、アルギン酸、キトサン、またはポリビニルアルコール（ＰＶＡ）を用い、例１に記載された方法に従って調製された。
【００９９】
下記の表３は、様々なそのような複合体の性質を示している。表３に示されているのは、複合体の名称（Ｅｘｐ．、最初のカラム）、ポリマーの名前と濃度（％）、薬剤の濃度、ｐＨ、そして、ＡＬＶサイズとサイズの分布（ｎｍ）、ＨＰＬＣ（濃度と溶解性）、そしていくつかのケースにおいては結晶相の決定のための粉末Ｘ線分析、などを含む、様々な複合体ナノ粒子の物理化学的分析である。複合体のサイズ測定はＡＬＶ技術を用いて行われ、粉末Ｘ線分析は例６の上の方に記載された通りに行われた。
【０１００】
図１は、およそ８３８ｎｍのサイズであった、１％キトサン内のクラリスロマイシン親水性封入複合体（表３の＃１０−１３４）を構成するナノ粒子のサイズ分布を図解している。
【０１０１】
【表３】
2007507489.tif 000005
【０１０２】
表３に示したように、ナノ粒子（１０００ｎｍ未満のサイズ）は、加水分解したデンプン、アルギン酸、そして異なるソースからのキトサンなどのポリマーを使って調製できるが、ＰＶＡを使った場合、粒子は１６００ｎｍのサイズであり、粒子は結晶で、不定型ではないので、明らかにＰＶＡは、マクロライドを含むナノ粒子の調製には有用ではないことを表している。
【０１０３】
表３の結果は、溶解性に乏しい疎水性化合物である、マクロライド抗生物質クラリスロマイシンが、両親媒性ポリマーに囲まれた時、結果として生じる封入複合体は親水性であることを示している。本願に記載された適合技術を使用すると、クラリスロマイシンは、アルギン酸、ＰＶＡ、そしてキトサンといった、適合パラメーターに見合う様々なポリマーによって囲まれた場合でも、親水性になされた。結果は、ｐＨ５．５で１０ｍｇ／ｍｌのクラリスロマイシンと結合した２％アルギン酸は、５３０ｎｍのＡＬＶサイズ分布分析のナノ粒子になり；ｐＨ６でクラリスロマイシンと結合した２％ＰＶＡは、１６００ｎｍのＡＬＶのナノ粒子になり；ｐＨ４から６でクラリスロマイシンと結合した１％キトサン（Ｆｌｕｋａ）は、１６５ｎｍのＡＬＶとなり；ｐＨ４でクラリスロマイシンと結合した１％キトサン（Ｆｌｕｋａ）は、３２１ｎｍのＡＬＶとなり；ｐＨ６でクラリスロマイシンと結合した１％キトサン（Ｆｌｕｋａ）は、６６０ｎｍのＡＬＶとなり；そしてｐＨ５でクラリスロマイシンと結合した１％キトサン（Ｓｉｇｍａ）は、８３８ｎｍのＡＬＶとなったことを示している。これらの結果は、明細書の教示（親油性／両親媒性ポリマー適合技術）を用いて、乏しい溶解性の疎水性抗生物質（クラリスロマイシン）が、様々な両親媒性ポリマー（すなわち、アルギン酸、ＰＶＡ、そしてキトサン）によって囲まれ、結果として生じた封入複合体が水の中で親水性になることができることを示している。
【０１０４】
クラリスロマイシン−加水分解したデンプンの封入複合体ＩＣ−７６の不変の球形のナノ粒子がすぐに、そして調製後５週間経っても得られたこともまた、見出された（データは示さず）。
【０１０５】
例５  透析を介したクラリスロマイシン−ポリマー封入複合体からのクラリスロマイシンの制御された放出
この実験は、ＵＳ  ２００３／０１２９２３９に（その例７において）記載された通りに、３５００Ｄの分子量カットオフ値のセルロース透析膜（ＳｎａｋｅＳｋｉｎＴＭ透析チューブ、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．、製品番号６８０３５）を用いて行われた。
【０１０６】
クラリスロマイシンの三種の剤形がテストされた：
１．水に溶解した市販のクラリスロマイシン（１０ｍｇ／ｍｌ）、ｐＨ４
２．初期の計算上の濃度が１０ｍｇ／ｍｌである、表３の２％ＰＶＡ中のクラリスロマイシン複合体、ｐＨ＝６．０（Ｓ−Ｃｌａｒｉ＃３４）
３．初期の計算上の濃度が１０ｍｇ／ｍｌである、１％キトサン中のクラリスロマイシン複合体（表３のＩＣ−１３５）、ｐＨ＝６．５（Ｓ−Ｃｌａｒｉ＃１３５）
【０１０７】
それぞれの剤形（２ｍｌ）が、１００ｍｌの水、ｐＨ＝４（２０％クエン酸で滴定）とともに、ガラス瓶の中に入れた透析袋に入れられた。透析は、２３±２℃で一定に撹拌しながら、６時間まで行われた。外部のバッファーのサンプル（１ｍｌ）は、薬剤の放出を分析するために、透析開始後５時間ごとに採取された。外部の液体の体積は、一定して１００ｍｌであった。外部（袋の外）と内部（袋の中）の液体と採取されたサンプルのクラリスロマイシンの濃度は、ＨＰＬＣによって決定された。図２に示したその結果は、ＰＶＡ複合体（Ｓ−Ｃｌａｒｉ＃３４、正方形）からのクラリスロマイシンの放出は、市販の剤形のもの（Ｃｌａｒｉ、菱形）よりも早く、一方で、キトサン複合体（Ｓ−Ｃｌａｒｉ＃１３５、三角形）からのクラリスロマイシンの放出は、市販の剤形のものよりもかなり遅いことを示している。これは、キトサンとのナノ分散が、クラリスロマイシンの放出に耐える能力があり、マクロライドとの封入複合体の調製により適しているということを示している。表３に示したように、ＰＶＡとの複合体は１６００ｎｍのサイズであり、ナノ範囲内ではなく、したがって放出に耐えられなかった。
【０１０８】
例６  様々なアジスロマイシン親水性封入複合体の物理的測定と特性
別のマクロライド抗生物質、アジスロマイシンの封入複合体が、アジスロマイシンが酢酸メチルまたはジクロロメタンに溶解され、ポリマーがアルギン酸、マヌコールエステルＢ（アルギン酸誘導体）、キトサンまたはＰＶＡであるような、例１に記載された方法によって調製された。
【０１０９】
下記の表４は、そのような様々な複合体の性質を示している。表４に示されているのは、複合体の名称（Ｅｘｐ．、最初のカラム）、ポリマーの名前と濃度（％）、薬剤の濃度、ｐＨ、そして、ＡＬＶサイズとサイズの分布（ｎｍ）、ＨＰＬＣ（濃度と溶解性）などを含む、様々な複合体ナノ粒子の物理化学的分析である。封入複合体のサイズの測定は、３から３０００ｎｍの解像度を持つＡＬＶ−粒子寸法測定器（ＡＬＶ−Ｌａｓｅｒ  ＧｍｂＨ、Ｌａｎｇｅｎ、ドイツ）を用いて行われた。ＡＬＶは、平均の粒子サイズを測定するのに使われる、直接的な光散乱技術である。実験は、レーザー動力の非侵入性後方散乱＝高性能粒子寸法測定器（ＡＬＶ−ＮＩＢＳ／ＨＰＰＳ）を用いて行われた。
【０１１０】
図３は、およそ３６２ｎｍのサイズを持つ１％キトサン内のアジスロマイシン親水性封入複合体（表４の＃１０−１４８／２）を構成するナノ粒子のサイズ分布を示している。さらに、これらの粒子中のアジスロマイシンは、図４の下側の線に示したとおり、不定形であることが明らかとなり、そして、その不定形は少なくとも１０ヶ月間は安定であることが明らかとなった。図４は、市販のアジスロマイシン（上側の線）と比較した、１０ヶ月経過したアジスロマイシン‐キトサン封入複合体サンプル（下側の線）のＸ線スペクトルを示している。
【０１１１】
【表４】
2007507489.tif 000006
【０１１２】
表４の結果は、溶解性に乏しい疎水性化合物であるマクロライド抗生物質アジスロマイシンが、両親媒性ポリマーに囲まれた時、結果として生じる封入複合体は親水性であることを示している。本願に記載された適合技術を用いると、アルギン酸、ＰＶＡ、マヌコールエステルＢ、そしてキトサンといった、適合パラメーターに見合う様々なポリマーによって囲まれた時、アジスロマイシンは親水性になる。その結果は、１０ｍｇ／ｍｌのアジスロマイシンと結合した２％ＰＶＡは５ｎｍのＡＬＶのナノ粒子サイズ分布分析という結果となり；アジスロマイシンと結合した４％マヌコールエステルＢは３３０ｎｍのＡＬＶという結果となり；アジスロマイシンと結合した１％ＰＶＡは５ｎｍのＡＬＶ、そして別の製剤プロセスでは３５０ｎｍという結果となり；アジスロマイシンと結合した２％アルギン酸は１６００ｎｍのＡＬＶ、そして別の製剤プロセスでは１０６０ｎｍという結果となり；アジスロマイシンと結合した１％キトサン（Ｓｉｇｍａ）は５１０ｎｍのＡＬＶ、そして他の製剤プロセスでは７５２ｎｍと３６２ｎｍであることを示している。これらの結果は、上記のクラリスロマイシンを用いた場合の結果と一致し、本明細書の教示（親油性／両親媒性ポリマー適合技術）を用いて、溶解性に乏しい疎水性抗生物質（アジスロマイシン）が様々な両親媒性ポリマー（すなわち、アルギン酸、ＰＶＡ、マヌコールエステルＢ、そしてキトサン）によって囲まれると、結果として生じる封入複合体は水の中で親水性になる、ということを示している。
【０１１３】
例７  様々なイトラコナゾール親水性封入複合体の物理的測定と特徴
アゾール抗真菌性イトラコナゾールの封入複合体が、イトラコナゾールが酢酸メチルまたはジクロロメタンに溶解され、ポリマーが加水分解されたジャガイモデンプン、熱破壊されたジャガイモデンプン、アルギン酸、キトサン、ポリアクリル酸、そしてアクリル酸とブチルアクリル酸の共重合体である、例１に記載された方法に従って調製された。
【０１１４】
下記の表５は、様々なそのようなイトラコナゾール親水性封入複合体の性質を示している。図５は、およそ４１４ｎｍのサイズを持つ、熱破壊されたジャガイモデンプン内のイトラコナゾール親水性封入複合体（＃２３−１２０）を構成するナノ粒子のサイズ分布を示している。
【０１１５】
【表５】
2007507489.tif 000007
【０１１６】
表５の結果は、不溶性の化合物である抗真菌性薬剤イトラコナゾールが両親媒性ポリマーに囲まれた時、結果として生じる封入複合体は親水性であるということを示している。本願に記載された適合技術を用いると、イトラコナゾールは、Ｈ２Ｏ２やＰＥＧ変性と組み合わされた熱分解されたデンプン、アルギン酸、キトサンといった、適合パラメーターに見合う様々なポリマーに囲まれた時、親水性になる。その結果は、５ｍｇ／ｍｌのイトラコナゾールと結合した５％の熱分解されたデンプン＋１．２５％Ｈ２Ｏ２＋１．２５％ＰＥＧは、３８２ｎｍのＡＬＶという結果となり；５ｍｇ／ｍｌのイトラコナゾールと結合した５％の熱分解されたデンプン＋０．６２５％Ｈ２Ｏ２＋１．２５％ＰＥＧは、６４０ｎｍのＡＬＶという結果となり；５％の熱分解されたデンプン＋１％Ｈ２Ｏ２＋２％ＰＥＧは、４１４ｎｍのＡＬＶという結果となり；５ｍｇ／ｍｌのイトラコナゾールと結合した５％の熱分解されたデンプン＋１％Ｈ２Ｏ２＋１％ＰＥＧは、７９３ｎｍのＡＬＶという結果となり；２０ｍｇ／ｍｌのイトラコナゾールと結合した２％アルギン酸は、１８０ｎｍのＡＬＶという結果となり、１０ｍｇ／ｍｌのイトラコナゾールと結合した時は、１８０ｎｍのＡＬＶという結果となり；〜８ｍｇ／ｍｌのイトラコナゾールと結合した１％キトサン（Ｆｌｕｋａ）は、１２０ｎｍのＡＬＶという結果となったことを示している。これらの結果は、この明細書の教示（親油性／両親媒性ポリマー適合技術）を用いると、不溶性な抗真菌薬剤であるイトラコナゾールが、様々な両親媒性ポリマー（すなわち、Ｈ２Ｏ２やＰＥＧ変性と結合した熱分解されたデンプン、アルギン酸、そしてキトサン）によって囲まれると、結果として生じる封入複合体は水の中で親水性になる、ということを示している。
【０１１７】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）が、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ２０１０モジュールと２１００システムコントローラーを用いて、複合体の結晶性を精査するために行われた。テストは、−５０から２００℃まで、１０度／分の走査速度で行われた。図６ＡからＢは、イトラコナゾール結晶と、実験ＩＴ−５６（表５参照）で調製されたイトラコナゾール複合体の、それぞれの結果の図を提供している。イトラコナゾール結晶が、特有の融点で融解しているのに対して、イトラコナゾール複合体は、特有の融点で融解していない。
【０１１８】
例８  様々なパクリタキセル親水性封入複合体の物理的測定と特徴
抗ガン剤パクリタキセルの封入複合体は、パクリタキセルが酢酸メチルまたはジクロロメタンに溶解され、ポリマーが、ビタミンＢ１２添加または非添加の、異なった分子量のゼラチンであるような、例１に記載された方法によって調製された。ポリビニルピロリドン（ＰＶＰまたはポヴィドン、例えばＫｏｌｌｉｄｏｎＴＭ）、またはポリスチレンスルホン酸が、パクリタキセルの溶解性を向上させるために加えられることも可能である。ポリスチレンスルホン酸はまた、単独で、パクリタキセルを可溶化するために使うことができる。
【０１１９】
下記の表６は、様々なそのようなパクリタキセル親水性封入複合体の性質を示している。図７は、およそ１７９ｎｍのサイズを持つゼラチン（７０から１００ｋＤ、１ｍｇ／ｍｌ  ビタミンＢ１２）（＃２５−８５）内のパクリタキセル親水性封入複合体を構成しているナノ粒子のサイズ分布を示している。
【０１２０】
【表６】
2007507489.tif 000008
【０１２１】
表６の結果は、不溶性化合物である抗ガン剤パクリタキセルが、両親媒性ポリマーに囲まれた時、結果として生じる封入複合体は親水性であるということを示している。本願によって教示された適合技術を用いて、パクリタキセルは、様々な濃度で（例えば、０．８７２ｍｇ／ｍｌ、０．６４６ｍｇ／ｍｌ、３．７８１ｍｇ／ｍｌそして０．９２５ｍｇ／ｍｌ）、本願に記載された適合パラメーターに見合うポリマーである（任意的にビタミンＢ１２補形薬を加えられた）ゼラチンによって囲まれた時、親水性になる。
【０１２２】
例９  様々なドネペジル親水性封入複合体の物理的測定と性質
ドネペジル塩酸塩の封入複合体が、ドネペジル塩酸塩が酢酸メチルまたはジクロロメタンに溶解され、そしてポリマーが変性トウモロコシデンプン、アルギン酸、そしてデンプングリコール酸ナトリウムである、例１に記載された方法によって調製された。
【０１２３】
下記の表７は、様々なそのようなドネペジル塩酸塩親水性封入複合体の性質を示している。図８は、およそ６００ｎｍのサイズを持つ、変性トウモロコシデンプン内のドネペジル塩酸塩親水性封入複合体（＃ＬＧ−７−５１）を構成するナノ粒子のサイズ分布を示す。
【０１２４】
【表７】
2007507489.tif 000009
【０１２５】
例１０  アジスロマイシンとアジスロマイシン組成物のナノサイズの水可溶性粒子の経口吸収
１％アジスロマイシンと１％キトサンの封入複合体を構成する水可溶性なナノサイズの粒子の経口吸収が、吸収を可能にするための物理的形状の寄与を評価するために、市販のアジスロマイシン（アゼニル）を含む組成物と比較して、ラットに関連する前臨床モデルにおいて、詳しく調べられた。
【０１２６】
アジスロマイシン（５０ｍｇ／ｋｇ）が、栄養管によって、２５０から２８０ｇ、雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（５個体一組）に対して投与された。投与後の定期的時間に（１から２４時間の間）血液サンプルが回収され、そして分析のために血清が調製された。実験の最後に、全てのラットは、５個体一組の腹膜内の過剰摂取（１００ｍｇ／ｋｇ）によって犠牲にされた。
【０１２７】
ラット血清（０．１ｍｌ）中の薬剤の濃度は、ＬＣ−ＭＳによって決定された。サンプルと校正曲線は以下の通りに準備された：５０μｌのサンプルが、血清１００μｌの全量を得るために、５０μｌのコントロールの血清と混合された。その希釈されたサンプルは、メチルｔ−ブチルエーテルで抽出され、溶媒を除去した後、４０％水性アセトニトリル中に再構成された。分析は、陽イオンモードの大気圧エレクトロスプレーイオン化法で、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣシステムを用いた、ＬＣ−ＭＳによって行われた。アジスロマイシン濃度は、アジスロマイシンを加えたブランクのラット血清を使って調製された、２０から２０００ｎｇ／ｍｌの範囲の校正曲線と比較することによって定量された。濃度のプロット（図示していない）は、最大濃度（Ｃｍａｘ）のタイミングを決定するため、そして（濃度曲線下面積（ＡＵＣ）によって反映された）薬剤の全体の吸収を評価するために、使われた。
【０１２８】
主な薬物動態上の発見のまとめは、表８に示されている。これらの発見は、アゼニルとしてのアジスロマイシンと同じ量であるナノサイズの水可溶性粒子が、得られた最大濃度（Ｃｍａｘ）と、（ＡＵＣによって反映された）アジスロマイシン吸収の全体量を向上させることを示している。加えて、肺における濃度は、他の器官における濃度がより低い程度で向上しているのに対して、特に向上している。さらに、最大濃度に達した時間については変化がなかった。
【０１２９】
【表８】
2007507489.tif 000010
【０１３０】
アジスロマイシン粒子の安定性、続いて圧縮、そして錠剤賦形剤との相性が、アジスロマイシンの吸収と、錠剤調製前の複合体の吸収とを比較することによって評価された。錠剤は、複合体の凍結乾燥に続いて、その後に続く標準的な条件を満たす賦形剤との混合によって調製された。錠剤は、１トン／ｃｍ２の圧力の適用によって形成された。ラットへの投与の前に、錠剤は水に溶解された。それから、アジスロマイシン（５０ｍｇ／ｋｇ）が、栄養管によって、２５０から２８０ｇ、雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（５個体一組）に対して投与された。経口投与に関する薬物動態的調査は、上記の方法に従って行われた。
【０１３１】
ラット血清中の薬剤の濃度は、上記の方法に従って分析された。血清濃度のプロットは、図９に示されている。この図の中で、アゼニルは、アジスロマイシンの市場に出回っている市販の製剤であり、その一方で、ロット２８−３９と２８−５９は、１％キトサンと１％アジスロマイシンの複合体を構成するナノサイズの水可溶性粒子の溶液であり、そしてＴａｂ２８−５９は、投与の直前に水に溶解させた、ロット２８−５９から調製された錠剤である。アジスロマイシンの最大濃度は、調製法の全てにおいて、一般的に同じ時間に到達したということは、この図から明らかである。しかしながら、粒子からのアジスロマイシンの吸収は、常に市販の製剤のものよりも大きい。したがって、上記に示したように、向上した吸収は、水可溶性なナノサイズの粒子から成る製剤に、明らかに関連している。さらに、錠剤についての曲線の下の計算された面積は、水可溶性のナノサイズの粒子から成る溶液の面積よりも約１０％小さいのみである。それゆえ、錠剤を調製するために踏む工程は、ナノサイズの粒子に不利に影響しない。
【０１３２】
例１１  イトラコナゾールのナノサイズの水可溶性粒子の経口吸収
アクリル酸とブチルアクリル酸の共重合体とのイトラコナゾール封入複合体（＃ＩＴ−５０、表５）を構成するイトラコナゾールのナノサイズの水可溶性粒子の経口吸収が、吸収を可能にするための物理的形状の寄与を評価するために、ラットに関連した前臨床モデルで詳しく調べられ、ナノ粒子を形成しないポリアクリル酸とボルテックスによって混合したイトラコナゾールから成る組成物中の、イトラコナゾールの経口吸収と比較された。
【０１３３】
イトラコナゾール（５０ｍｇ／ｋｇ）が、栄養管によって、２５０から２８０ｇ、雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（５個体一組）に対して投与された。投与後の一定の時間（１から２４時間の間）に、血液サンプルが回収され、そして血清が分析のために調製された。実験の最後に、全てのラットは、５個体一組の腹膜内の過剰摂取（１００ｍｇ／ｋｇ）によって犠牲にされた。
【０１３４】
ラット血清（０．１ｍｌ）中の薬剤濃度は、基本的に、Ｙｏｏら（２００２）Ａｒｃｈ  Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ  ２５：３８７−３９１によって記載された方法を用いて、ＨＰＬＣによって決定された。サンプルと校正曲線は以下のように準備された：サンプルは、４００μｌの全体積が得られるように等量のアセトニトリルと混合された。ＫＣｌがタンパク質を沈殿させるためにサンプルに加えられ、そしてその結果生じた上清中のイトラコナゾールが、Ｍｅｒｃｋ社製のＨＰＬＣシステムに適用された。イトラコナゾール濃度は、イトラコナゾールを混ぜたブランクのラット血清を使って準備された、２０から１０００ｎｇ／ｍＬの範囲の校正曲線と比較することによって、定量された。濃度のプロット（図示していない）は、最大濃度（Ｃｍａｘ）のタイミングを決定するため、そして（濃度曲線下面積（ＡＵＣ）によって反映された）薬剤の全体の吸収を評価するために、使われた。
【０１３５】
主な薬物動態上の発見のまとめは、表９に示されている。これらの発見は、イトラコナゾールと同じ量であるナノサイズの水可溶性粒子の投与が、イトラコナゾールとその活性ヒドロキシル化代謝物（ヒドロキシイトラコナゾール）の両方の向上した最大血中濃度（Ｃｍａｘ）を倍加させ、そして、イトラコナゾールとその活性ヒドロキシル化代謝物の両方の曲線の下の面積（ＡＵＣ）によって反映された、吸収されたイトラコナゾールの全量を増加させる、ということを示している。
【０１３６】
【表９】
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【図面の簡単な説明】
【０１３７】
【図１】光回折（ＡＬＶ）によって測定した場合、およそ８３８ｎｍのサイズであったクラリスロマイシン−キトサン封入複合体（＃１０−１３４、表３）を構成するナノ粒子のサイズ分布
【図２】クラリスロマイシンとＰＶＡの封入複合体を構成する粒子（Ｓ−Ｃｌａｒｉ＃−３４、表３）、またはクラリスロマイシンとキトサンの封入複合体を構成するナノ粒子（Ｓ−Ｃｌａｒｉ＃１３５、表３）と比較した、市販のクラリスロマイシン（Ｃｌａｒｉ）の透析膜を介したｉｎ  ｖｉｔｒｏでの放出
【図３】光回折（ＡＬＶ）によって測定した場合、およそ３６２ｎｍのサイズであったアジスロマイシン−キトサン封入複合体（＃１０−１４８／２、表４）を構成するナノ粒子のサイズ分布
【図４】市販のアジスロマイシン（上の線）と比較した、１０ヶ月経過したアジスロマイシン−キトサン封入複合体サンプル（下の線）のＸ線スペクトル
【図５】光回折（ＡＬＶ）によって測定した場合、およそ４１４ｎｍのサイズであったイタコナゾール−変性デンプン封入複合体（＃２３−１２０、表５）を構成するナノ粒子のサイズ分布
【図６Ａ】市販の結晶イタコナゾール（１２Ａ）の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）分析
【図６Ｂ】イタコナゾール−ポリアクリル酸封入複合体（＃ＩＴ−５６、表５）の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）分析
【図７】光回折（ＡＬＶ）によって測定した場合、およそ１７９ｎｍのサイズであったパクリタキセル−ゼラチン封入複合体（＃２５−８５、表６）を構成するナノ粒子のサイズ分布
【図８】光回折（ＡＬＶ）によって測定した場合、およそ６００ｎｍのサイズであったドネペジル−変性デンプン封入複合体（＃ＬＧ−７−５１、表７）を構成するナノ粒子のサイズ分布
【図９】ラットに関する臨床前のモデルにおける、以下の素材の経口吸収；その素材とはすなわち、アジスロマイシンの市販の製剤（Ａｚｅｎｉｌ）、アジスロマイシン−キトサン封入複合体のナノ粒子の流動性製剤（ロット２８から３９と２８から５９由来）、そしてさらに錠剤型へと製剤化されたロット２８から５９のもの、である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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