(57)【要約】【課題】スフィンゴミエリン、その中間体及びその調製方法【解決手段】本発明は、新規のオキサザホスホラン、環式及び非環式、スフィンゴミエリン及びスフィンゴミエリン類似体の合成におけるそれらの使用、並びに、それらから得られた合成的スフィンゴミエリンに関する。本発明によるオキサザホスホランの一つのグループは、本明細書に記載された一般式（１）を有する。特に、本発明は、開示されたオキサザホスホラン及びスフィンゴミエリンの2R,3R立体異性体、及び、それらの調製のための合成方法を提供する。【選択図】      なし。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下式（１）のオキサザホスホラン化合物：
【化１】
2007517860.tif 000020
式中、R1は疎水性基を表し、R2は水素原子又は疎水性基を表し、Zは保護基を表し、及びXは脱離基を表す。
【請求項２】
請求項１のオキサザホスホラン化合物であって、式中
-  R1は、飽和又は不飽和であり、分枝鎖又は直鎖であり、任意に脂肪族環を含む、C1-C24 脂肪族部分を表し、；及び
-  R2は、水素原子又は飽和又は不飽和の、分枝鎖又は直鎖の脂肪族鎖から選択されるC1-C24 脂肪族部分を表し、前記脂肪族鎖は任意に脂肪族環を含み；該脂肪族鎖及び脂肪族環は任意に、酸素、ハロゲン、窒素及び硫黄から選択されるヘテロ原子を含む一以上の置換基で置換される。
【請求項３】
請求項２に記載のオキサザホスホラン化合物であって、式中 R1がC8-C24 脂肪族部分を表す化合物。
【請求項４】
請求項２又は３に記載のオキサザホスホラン化合物であって、式中 R2が水素原子又は飽和又は不飽和のC8-C24 脂肪族部分を表す化合物。
【請求項５】
請求項４に記載のオキサザホスホラン化合物であって、式中 R2が水素原子を表す化合物。
【請求項６】
請求項１〜５の何れか１項に記載のオキサザホスホラン化合物であって、式中Xがハロゲン原子を表す化合物。
【請求項７】
請求項６に記載のオキサザホスホラン化合物であって、式中 XがClを表す化合物。
【請求項８】
請求項１〜７の何れか１項に記載のオキサザホスホラン化合物であって、式中 ZがSi(R5)3 基を表し、ここでR5は同じ化合物中で同じであるか又は異なり、C1-C6の分枝鎖又は直鎖のアルキル基又はアリール基を表す化合物。
【請求項９】
請求項８に記載のオキサザホスホラン化合物であって、式中、前記ZがSi(Ph)2(t-Bu)を表す化合物。
【請求項１０】
請求項１〜９の何れか１項に記載の化合物の、2S,3R立体異性体である、下式（1a）のオキサザホスホラン化合物：
【化２】
2007517860.tif 000021
式中 R1、R2、X及びZは、定義されたとおりである。
【請求項１１】
請求項１〜８の何れか１項に記載のオキサザホスホラン化合物であって、式中 R1は(E)-CH=CHC13H27であり、R2は水素であり、XはClであり、及びZはSi(Ph)2(t-Bu)である化合物。
【請求項１２】
請求項１〜８の何れか１項に記載のオキサザホスホラン化合物であって、式中 R1は(E)-CH=CHC13H27であり、R2は水素であり、Xは-O-CH2-CH2-N+(CH3)3基で置換される化合物。
【請求項１３】
請求項１〜８の何れか１項に記載のオキサザホスホラン化合物であって、下式（1b）の化合物の(E)-幾何異性体である化合物：
【化３】
2007517860.tif 000022
【請求項１４】
単離された安定な化合物である、請求項１〜１３の何れか１項に記載のオキサザホスホラン化合物。
【請求項１５】
請求項１〜１４の何れか１項で定義された式（1）のオキサザホスホラン化合物の製造方法であって、該方法が、
リン酸化試薬を下式（2）の3-O-保護スフィンゴイド（sphingoid）化合物と反応させることを含む方法：
【化４】
2007517860.tif 000023
式中、R1、Z及びXは、定義されたとおりであり、Yはアミン又はアミノ基である。
【請求項１６】
請求項１５に記載の方法であって、前記リン酸化試薬を下式（2a）の2S,3R 立体異性体と反応させることを含む方法：
【化５】
2007517860.tif 000024
【請求項１７】
請求項１５又は１６に記載の方法であって、前記リン酸化試薬が、YがNH2を表す保護されたスフィンゴイド化合物と反応される方法。
【請求項１８】
請求項１５〜１７の何れか１項に記載の方法であって、前記リン酸化試薬がPOW3から選択され、式中 Wは、ハロゲン原子、ボラート、エチレンクロロホスファイト（ethylene chlorophosphite）、メチルホスホジクロリジト（methyl phosphodichloridite）、クロロ-N,N-ジイソプロピルアミノメチキソホスファイト（diisopropyoaminomethyxophosphite）又は[(イソプロピル)2N]2POCH2CH2CNを表す方法。
【請求項１９】
前記リン酸化試薬は、POCl3である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
請求項１５〜１９の何れか１項に記載の方法であって、下式（1b）の化合物の(E)- 幾何異性体の合成のための方法
【化６】
2007517860.tif 000025
【請求項２１】
下式（1）のオキサザホスホラン化合物であって：
【化７】
2007517860.tif 000026
式中 R1、R2、Z及びXは、請求項１〜１４の何れか１項で定義されたとおりであり、請求項１５〜２０の何れか１項の方法によって得られる化合物。
【請求項２２】
下式（1a）のオキサザホスホラン化合物：
【化８】
2007517860.tif 000027
式中 R1、R2、Z及びXは、請求項１〜１４の何れか１項で定義されたとおりであり、請求項１５〜２０の何れか１項の方法によって得られる化合物。
【請求項２３】
下式（3）を有する非環式オキサザホスホラン誘導体の製造のための、請求項１〜１４、２１、及び２２の何れか１項で定義された式（1）のオキサザホスホランの使用方法であって：
【化９】
2007517860.tif 000028
式中 R1、R2及びZは定義されたとおりであり、及びR3は、水素原子；脂肪族鎖、アミノ脂肪族鎖、ヘテロ原子含有脂肪族鎖、飽和したか、部分的に飽和した環又はアリール基である環を含む脂肪族鎖から選択される脂肪族部分、該脂肪族鎖は分枝鎖又は直鎖の、飽和又は不飽和の鎖である；又はエーテル、ポリエーテル、又は糖部分を表し；
該記方法は、前記式（1）のオキサザホスホランを、アルコール又は式 R3OH（式中、R3は定義されたとおりである）と反応させ、続いて、水溶性の塩基又は水溶性の酸で処理する工程を含む方法。
【請求項２４】
請求項２３に記載の方法であって、前記アルコールが、コリン、N-保護エタノールアミン、オリゴエチレングリコールモノエーテル、ポリエチレングリコールモノエーテル、ポリエーテル、又は糖部分から選択される方法。
【請求項２５】
前記アルコールがコリンである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
請求項２３〜２５の何れか１項に記載の方法であって、前記水溶性の塩基が、トリアルキルアミン、アルカリ金属又はアルカリ土類金属-水酸化物、炭酸塩又は炭酸水素塩から選択される方法。
【請求項２７】
請求項２３〜２６の何れか１項に記載の方法であって、前記水溶性の酸が、強い鉱酸又はルイス酸である方法。
【請求項２８】
式（3a）の2S,3R立体異性体の製造のための、請求項２３〜２７の何れか１項に記載の方法であって：
【化１０】
2007517860.tif 000029
式（1a）の化合物を使用する方法
【化１１】
2007517860.tif 000030
式中 R1、R2、R3、X及びZは定義されたとおりである。
【請求項２９】
請求項２３〜２８の何れか１項に記載の方法であって、前記式（3）又は（3a）の化合物を、保護基除去試薬と反応させて、保護基Ｚを水素原子と置換することを含む方法。
【請求項３０】
請求項２３〜２９の何れか１項の方法によって得られる、
下式（3）を有する非環式オキサザホスホラン誘導体：
【化１２】
2007517860.tif 000031
又は式（3a）のその2S,3R立体異性体：
【化１３】
2007517860.tif 000032
式中、R1、R2、R3及びZは定義されたとおりである。
【請求項３１】
下式（4）を有する非環式オキサザホスホラン誘導体の製造のための、請求項１〜１４、２１、及び２２の何れか１項で定義された式（1）のオキサザホスホラン（式中 R2は水素原子である）を使用する方法であって、
【化１４】
2007517860.tif 000033
式中、R1、及びZは定義されたとおりであり、R3は、水素原子；脂肪族鎖、アミノ脂肪族鎖、ヘテロ原子含有脂肪族鎖、飽和したか、部分的に飽和した環又は芳香族環である環を含む脂肪族鎖から選択される脂肪族部分、前記脂肪族鎖は分枝又は直鎖の、飽和又は不飽和の鎖である；又はエーテル、ポリエーテル、又は糖部分を表し；及びR4は疎水性基であり；
該方法は、
請求項２３〜２７の何れか１項に従って式（3）のオキサザホスホランを調製し；
前記式（3）のオキサザホスホランを、式 R4C(O)Q（式中Qは脱離基である）のアシル化合物と反応させることを含む。
【請求項３２】
請求項３１に記載の方法であって、前記R4は飽和又は不飽和の、分枝鎖又は直鎖の脂肪族鎖から選択されるC1-C24 脂肪族部分を表し、前記脂肪族鎖は、任意に脂肪族環を含み；該脂肪族鎖又は環は任意に、酸素、ハロゲン、窒素及び硫黄から選択されるヘテロ原子を含む一以上の置換基で置換される方法。
【請求項３３】
前記R4は、飽和又は不飽和のC8-C24 脂肪族鎖を表す、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
式（4）の化合物の2S,3R立体異性体の製造のための、請求項３１〜３３の何れか１項に記載の方法であって、式（1a）の化合物の2S,3R立体異性体を使用する方法。
【請求項３５】
請求項３０〜３６の何れか１項の方法によって得られる、
下式（4）を有する非環式オキサザホスホラン誘導体：
【化１５】
2007517860.tif 000034
又はその2S,3R立体異性体；
式中、R1、R3、R4及びZは定義されたとおりである。
【請求項３６】
下式（5）を有するフィンゴミエリン誘導体の製造のための、請求項１〜１４、２１、及び２２の何れか１項で定義された式（1）のオキサザホスホラン（式中R2は水素原子である）を使用する方法：
【化１６】
2007517860.tif 000035
式中、R1及びR3は定義されたとおりであり、R4は請求項３１〜３４の何れか１項で定義されたとおりであり；
該方法は：
前記式（1）のオキサザホスホランを、アルコール又は式R3OH （式中R3は定義されたとおりである）と反応させ、続いて、水溶性の塩基又は水溶性の酸で処理して、下式（3）を有する非環式オキサザホスホランを得ること：
【化１７】
2007517860.tif 000036
式中、R1、R2及びZは定義されたとおりであり、及びR3は、水素原子；脂肪族鎖、アミノ脂肪族鎖、ヘテロ原子含有脂肪族鎖、飽和したか、部分的に飽和した、環又はアリール基を含む脂肪族鎖から選択される脂肪族部分、該脂肪族鎖は分枝鎖又は直鎖の、飽和又は不飽和の鎖である；又はエーテル、ポリエーテル、又は糖部分を表し；
前記式（3）のオキサザホスホランを、式R4C(O)Qのアシル化合物（式中Qは脱離基であり、R4は、飽和又は不飽和の、分枝鎖又は直鎖の脂肪族鎖から選択される、C1-C24 脂肪族部分を表し、該脂肪族鎖は任意に脂肪族環を含み；前記脂肪族の鎖又は環は任意に、酸素、ハロゲン、窒素及び硫黄から選択されるヘテロ原子を含む一以上の置換基で置換される）と反応させること；
前記式（4）のオキサザホスホランを、保護基除去試薬と反応させて、前記スフィンゴミエリンを得ることを含む方法。
【請求項３７】
式（5）の化合物の2S,3R立体異性体の製造のための、請求項３６に記載の方法であって、式（1a）の化合物の2S,3R立体異性体を使用する方法。
【請求項３８】
前記式（4）の化合物中の前記Ｚが、Si(Ph2)(t-Bu)である、請求項３６又は３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記保護基が、フッ化水素又は(R6)4NF（式中 R6はC1-C6アルキル基である）の使用によって除去される、請求項３６〜３８の何れか１項に記載の方法。
【請求項４０】
前記R6がn-ブチルである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
出発原料として式(1)、(1a)、(2)又は(2a)の化合物を有する、単一ポット（single pot）方法である、請求項１５〜２０、２３〜２９、３１〜３４及び３６〜４０の何れか１項に記載の方法。
【請求項４２】
前記式(1)又は(1a)のスフィンゴミエリンの大規模生産のための、請求項３６〜４１の何れか１項に記載の方法。
【請求項４３】
請求項３６〜４２の何れか１項に記載の方法によって得られる、下式（5）を有するスフィンゴミエリン：
【化１８】
2007517860.tif 000037
又はその2S,3R立体異性体、
式中、前記R1、R3及びR4は定義されたとおりであり、前記R2がパルミトイル又はステアロイル基を表す場合、R1はトランス-CH=CHC13H27を表さず、R3はCH2CH2N+(CH3)3を表さない。
【請求項４４】
請求項３６〜４２の何れか１項に記載の方法によって得られる、下式（5）を有するスフィンゴミエリン：
【化１９】
2007517860.tif 000038
又はその2S,3R立体異性体
式中、前記R1、R3及びR4は定義されたとおりである。
【請求項４５】
下式（6）を有する非環式オキサザホスホランの製造のための、請求項１〜１４、２１、及び２２のいずれか１項で定義された式（1）のオキサザホスホランを使用する方法であって：
【化２０】
2007517860.tif 000039
式中 R1、R2及びZは定義されたとおりであり、該方法は、前記式(1)のオキサザホスホランを、水溶性の塩基又は水溶性の酸と反応させることを含む方法。
【請求項４６】
式（6）の化合物の2S,3R立体異性体の製造のための、請求項４５に記載の方法であって、式（1a）の化合物の2S,3R立体異性体を使用する方法。
【請求項４７】
請求項４５又は４６に記載の方法であって、前記水溶性の塩基が、トリアルキルアミン、アルカリ金属-及びアルカリ土類金属-水酸化物、炭酸塩又は重炭酸塩から選択される方法。
【請求項４８】
請求項４５又は４６に記載の方法であって、前記水溶性の酸は、強い鉱酸又はルイス酸である方法。
【請求項４９】
式（6）の化合物の非保護誘導体を得るための、請求項４５〜４６の何れか１項に記載の方法であって、式（7）を有する該誘導体：
【化２１】
2007517860.tif 000040
（式中 R1及びR2は定義されたとおりである）
該方法は、前記式（6）のオキサザホスホランを、保護基除去試薬と反応させて、前記非保護誘導体を得ることを含む方法。
【請求項５０】
式（7）の化合物の2S,3R立体異性体の製造のための、請求項４９に記載の方法であって、式（1a）の化合物の2S,3R立体異性体を使用する方法。
【請求項５１】
前記式（4）の化合物のＺが、Si(Ph2)(t-Bu)である、請求項４５〜５０の何れか１項に記載の方法。
【請求項５２】
前記保護基が、フッ化水素又は(R6)4NF（式中 R6はC1-C6アルキル基である）の使用によって除去される、請求項４９〜５１の何れか１項に記載の方法。
【請求項５３】
R6がn-ブチルである、請求項５３に記載の方法。
【請求項５４】
請求項３８〜４１の何れか１項に記載の方法によって得られる、式（6）又は（6a）を有するオキサザホスホラン、或いは式（7）又は（7a）のその非保護誘導体。
【請求項５５】
請求項４３又は４４に記載のスフィンゴミエリンを含む薬学的組成物。
【請求項５６】
薬学的組成物の調製のための、請求項４３又は４４に記載のスフィンゴミエリンの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規のリン脂質に関し、特に、とりわけスフィンゴミエリン及びスフィンゴミエリン類似体の調製方法における中間体である、オキサザホスホラン（oxazaphospholane）に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来技術
以下は、本発明の分野の技術状態を説明するために適切であると考えられる従来技術である。
【０００３】
Bruzik, K. S. J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1: 423-431, 1988
米国特許第5,220,043号。
【０００４】
発明の背景
近年、スフィンゴミエリン（sphingomyelins）(SPM)のようなホスホスフィンゴ脂質は、医薬及び治療的適用のために関心を得ている。
【０００５】
スフィンゴ脂質及び特に、SPMは、それらの化学的安定性において独特である。エステル結合と多価不飽和アシル鎖の欠如のために、それらは貯蔵及び処方過程の間の加水分解と酸化に耐性である。それ故、ＳＰＭは、リポソーム及び他の脂質アセンブリーに基づく薬物送達製剤のための優れた候補である。組成物の完全なコントロールを有するために、生理学的な条件下（例えば、体温）の脂質二重膜中に存在するとき、ＳＰＭが液体（即ち、N-オレオイル スフィンゴミエリン)、又は固体(即ち、N-ステアロイル スフィンゴミエリン)の状態であるように設計することができ、又は、SPMが温度感受性リポソームの産生を可能にするように設計することができる。
【０００６】
ＳＰＭの他の独特の特徴は、コレステロールに対するそれらの高い親和性であり、それによって、循環器病における逆性のコレステロール輸送を誘導する潜在的な薬物として役立つ。
【０００７】
初期には、ＳＰＭは動物組織の抽出とさらなる精製によって得られた。しかし、最近の２０年間に、ＳＰＭ及び関連化合物を調製する幾つかの合成ストラテジーが提案された。
【０００８】
正確に合成された場合、スフィンゴミエリンは、D-エリスロ立体配置の一つのスフィンゴイド（sphingoid）塩基と一つのアシル鎖で構成される単一分子種である(例えば、D-エリスロN-パルミトイルスフィンゴミエリン)。そのようなＳＰＭは、主にミルク又は卵黄から得られ、それらの中に極めて低い濃度で存在する。結果として、抽出物は典型的に、1-アルキル-sn-グリセロホスホエタノールアミン及び1アルキル-sn-グリセロールホスホコリン [Do, U.H. and Ramochardarn, S. (1980) J. Lipid Res. 21, 888-894]のような他の脂質で汚染される。
【０００９】
加えて、抽出物は、既知の精製方法に耐性である脂質混入物を含み得る。例えば、ミルクに由来する脂質は、中性のスフィンゴ糖脂質及びガングリオシドのようなＳＰＭの混合物を含み [Martin, M.J., et al. (2001) J. Dairy Sci. 84, 995-1000; Martin, M.J., et al. (2001) Lipids 36, 291-298]、アルカリ加水分解に耐性であり、よって、スフィンゴ糖脂質は、ミルクに由来するスフィンゴミエリンを汚染する。当該分野に精通した技術者によって認められるように、スフィンゴ糖脂質、同様のペプチド及びタンパク質は、免疫原性であり、それ故、抽出物中にそれらが存在することは好ましくない。
【００１０】
ミルクに由来する脂質（ミルクに由来するスフィンゴミエリンを含む）が、ストレプトコッカス・アガラシアル（Streptococcus agalacial）のような細菌性の産物によって汚染され得るということも報告されている[Bendle, P. and Vuyletelova, M. (1997) Vet. Med. 42, 71-80]。
【００１１】
さらに、ミルクに由来するＳＰＭ及び卵に由来するＳＰＭは、それらのアシル鎖において異なるＳＰＭの混合物を含むことが知られている[例えばAvanti Polar Lipids Inc. Products Catalog Edition VI, p. 58を参照されたい]。典型的には、ミルクに由来するSPMは、C24:0 > C18:1 > C16:0 >> C18:0に富み、多くの他のアシル鎖を含む。それらの長いアシル鎖の極めて高い割合、及び、それ故二つの炭化水素鎖間の大きなミスマッチが、このＳＰＭを卵黄に由来するＳＰＭと大きく異ならせている。鎖のミスマッチのレベルは、ＳＰＭの物理化学的性質の決定において極めて重要なパラメーターである[rev. in Barenholz, Y. and Thompson, T.E. (1999) Chem. Phys. Lipids 102, 29-34; Barenholz, Y. and Thompson, T.E. (1980) Biochim. Biophys. Acta 604, 129-158; Barenholz et al. (1976) Biochemistry 15, 2441-2447]。コレステロールモノマーの熱力学的な活性を減少させることによって腸のコレステロール吸収を抑制するための二つのＳＰＭの能力の主な相違が近年観察された[Eckhardt, E.R., et al. W (2002) Gastroenterology 122, 948-956]。加えて、天然源に由来するSPMは、二以上のスフィンゴイド塩基を有する。C18 D-エリスロスフィンゴシンが主要なスフィンゴイド塩基ではあるが、他のスフィンゴイド塩基は著しい割合で、主要な塩基を付随する。特に、スフィンゴイド塩基ジヒドロスフィンゴシン（これは、飽和し、C4-C5間のトランス二重結合を欠如する）、及びより小量のスフィンゴシン及びC18以外のジヒドロスフィンゴシン塩基[Morrison, W.R. and Hay, J.D. (1970) Biochim. Biophys. Acta 202, 460-467]。卵黄由来のＳＰＭ及びミルク由来のＳＰＭのいずれのスフィンゴイド塩基及びアシル鎖成分は、食事制限によって影響され、それ故、スフィンゴイド及びアシル鎖成分におけるバッチ間の変動が生じ、注意深い調査が必要となる。そのような変化は、異なるバッチの物理化学的及び生物学的な性質に反映されることもある。
【発明の開示】
【発明の概要】
【００１２】
本発明は、スフィンゴミエリン誘導体及びその中間体をスフィンゴイドから製造するための、単一ポット（single pot）方法の新規の開発に基づく。驚くべきことに、該方法における一つの中間体は、下文で定義されるとおりの下式（１）の環式オキサザホスホラン化合物であることが発見された。この環式オキサザホスホラン化合物は、単離されて安定であることが発見された。
【００１３】
よって、本発明の第１の側面に従って、下式（１）のオキサザホスホラン化合物が提供される：
【化２２】
2007517860.tif 000002
【００１４】
式中、R1及びR2 は疎水性基を表し、またR2は水素原子を表し、Zは保護基を表し、及びXは脱離基を表し、それらの全ては、さらに以下で定義される。この化合物は、さらに特に、その2S,3R立体異性体が単離され、出発原料としてのスフィンゴイドからスフィンゴミエリン誘導体及びその前駆体を調製する方法における安定な中間体として特徴づけられる。
【００１５】
以下の記述で、化合物の参照番号に文字「ａ」が添えられている場合は、それは参照された化合物の2R,3S立体異性体を意味する。例えば、化合物(1a)は、化合物（１）の2S,3R立体異性体を称する。
【００１６】
本発明はまた、式（１）のオキサザホスホラン化合物又はその2S,3R立体異性体(1a)の製造のための方法を提供し、該方法は、リン酸化試薬を下式（２）の3-O-保護スフィンゴイド化合物と反応させることを含む：
【化２３】
2007517860.tif 000003
【００１７】
式中、R1、Z及びXは定義されたとおりであり、Yはアミン又はアミノ基（即ち、任意のアミン又はアミノ含有基）である。
【００１８】
明らかに上記方法によって得られる式（１）又は（１ａ）の任意のオキサザホスホラン化合物は、本発明の一部を形成する。
【００１９】
本発明はまた、幾つかの重要なスフィンゴミエリン中間体を調製するための、単離された出発原料として、或いは、式（２）のスフィンゴイド化合物から得られた粗製物質としての何れかの、式（１）又は（１ａ）のオキサザホスホラン化合物の使用に関する。
【００２０】
本発明の一つの側面に従って、下式（３）を有する非環式オキサザホスホラン或いはその2S,3R立体異性体 (3a)の調製のための、式（１）又は（１ａ）のオキサザホスホラン化合物を使用する方法を提供する：
【化２４】
2007517860.tif 000004
【００２１】
式中、R1, R2及びZは定義されたとおりであり、R3は水素原子、脂肪族鎖、アミノ脂肪族鎖、ヘテロ原子含有脂肪族鎖、飽和したか、部分的に飽和した環又はアリール基である環を含む脂肪族鎖から選択される脂肪族部分、前記脂肪族鎖は分枝又は直鎖の、飽和したか又は不飽和の鎖である；又はエーテル、ポリエーテル又は糖部分を表し；該方法は、水溶性塩基又は水溶性酸の存在下において、式 (1)の前記オキサザホスホランを、式 R3OHのアルコール（式中R3は定義されたとおりである）と反応させる工程を含む。
【００２２】
本発明の他の態様に従って、下式（４）を有する非環式オキサザホスホラン誘導体或いはその2S,3R立体異性体 (4a)の調製のための、式（１）又は（１ａ）のオキサザホスホラン（式中、R1,及びZは定義されたとおりであり、R2は水素原子である）を使用する方法を提供する：
【化２５】
2007517860.tif 000005
【００２３】
式中、R3は、水素原子；
脂肪族鎖、アミノ脂肪族鎖、ヘテロ原子含有脂肪族鎖、飽和したか、部分的に飽和した、環又は芳香族環である環を含む脂肪族鎖から選択される脂肪族部分、前記脂肪族鎖は分枝の又は直鎖の、飽和したか又は不飽和の鎖である；又はエーテル、ポリエーテル又は糖部分を表し；及びR4は疎水溶性の基を表し；
該方法は、式（３）のオキサザホスホランを調製し、該式（３）のオキサザホスホランを、式R4C(O)Q（式中、Qは脱離基であり、Ｘと同じであるか又は異なる）のアシル化合物と反応させることを含む。
【００２４】
本発明のさらに他の態様に従って、下式（５）を有するスフィンゴミエリン誘導体又はその2S,3R立体異性体 (5a)の調製のための、式（１）のオキサザホスホラン（式中、R1,及びZは定義されたとおりであり、R2は水素原子である）を使用する方法を提供する：
【化２６】
2007517860.tif 000006
【００２５】
式中、R3及びR4は定義されたとおりである；該方法は、定義された通りに式（４）のオキサザホスホランを調製し、該式（４）のオキサザホスホランを保護基除去剤と反応させて前記スフィンゴミエリンを得ることを含む。
【００２６】
明らかに本発明は、本発明の一連の方法によって得られる、任意のスフィンゴミエリン類似体(5)又は一般式（３）及び（４）を有するその中間体を提供し、好ましくは、それらは、本発明の一連の方法によって得られたものである。
【００２７】
本発明に従って、下式（６）を有する非環式オキサザホスホラン又はその2S,3R立体異性体 (6a)の製造のための、本発明の式（１）のオキサザホスホランを使用する方法を提供する：
【化２７】
2007517860.tif 000007
【００２８】
式中、R1, R2及びZは定義されたとおりであり、該方法は、式（１）の前記オキサザホスホランを、水溶性塩基又は水溶性酸と反応させることを含む。下式（６）を有する非環式オキサザホスホランもまた、本発明の一部を形成する。
【００２９】
最後に、本発明は、薬学的組成物の調製における上記開示の一連の合成反応によって得られるスフィンゴミエリン及びスフィンゴミエリン類似体の使用及びそのような治療的組成物それ自体に関する。
【発明の詳細な説明及び実施態様】
【００３０】
以下の説明において、参照番号は具体的な一般式を示すために括弧内で用いる。例えば、以下の説明で、スフィンゴミエリン（５）は、下文に定義されたような一般式（５）のスフィンゴミエリンを示す。
【００３１】
認識されているように、スフィンゴミエリン（５ａ）及びその類似体の製造のための合成経路の開発のために、数多くの試みがなされてきた：
【化２８】
2007517860.tif 000008
【００３２】
R1, R4は疎水性基を表し（同じであるか又は異なる）、及びR3は、水素原子；脂肪族鎖、アミノ脂肪族鎖、ヘテロ原子含有脂肪族鎖、飽和したか、部分的に飽和した環又はアリール基である環を含む脂肪族鎖から選択される脂肪族部分、該脂肪族鎖は、分枝の又は直鎖の、飽和した又は不飽和の鎖である；又はエーテル、ポリエーテル又は糖部分の任意の一つを表す。
【００３３】
現在SPMは、天然源から得られるか、又は小規模生産で合成的に得られる。異なる基によって用いられる合成的なアプローチは、セラミド骨格中へのリン酸部分の導入の戦略によって大きく異なる。該方法のほとんどは、複数工程方法であり、これは、中間体の単離及び精製を必要とする（典型的には、カラムクロマトグラフィーによる）。当該分野で開示された方法は、適切に置換された塩化ホスホリル又はホスホラミダイトをリン酸化試薬として用いる。
【００３４】
Bruzikら[Bruzik, K. S. 1988. J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1: 423-431] によって開示された一つの方法は、単一ポット方法を示しているが、しかし、用いられた試薬、ホスホラミダイトは、かなり高価であり、反応及び貯蔵条件に非常に感受性であり、それによってＳＰＭ生産のスケールアップに都合が悪いと考えられる。
【００３５】
本発明は、高価でなく、広く入手可能な試薬POCl3が、これはリン脂質合成において数十年の間、広範に利用されているが、単一ポット方法における異なったスフィンゴ脂質の生産に適しているという驚くべき発見に基づいている。この単一ポット方法は、ここで詳細に説明されるいずれのスフィンゴ脂質の大規模生産にも容易に利用できる。ここで用いられるように、「単一ポット方法」という語は、一連の合成反応において、一連の終了点での産物の合成まで、各化学反応工程で得られる中間体の単離及び精製（部分的な生成も含む）を必要としないことを示す。それにもかかわらず、必要であれば、一連の合成反応における各中間体産物を単離及び精製し、他の目的のために用いることも可能であることは理解されるであろう。
【００３６】
オキサザホスホラン(1)、スフィンゴミエリン(5)、スフィンゴシン-1-ホスフェート(7) リソスフィンゴミエリン(8)及びそれらの2S,3R立体異性体、並びに、それらの化学的類似体及び前駆体は、広く入手可能なリン酸化試薬を使用することにより、経済的に実行可能な方法によって調製されることができることが見出された。
【００３７】
本発明に従って、オキサザホスホラン(1)及びその2S,3R立体異性体 (1a)が提供される。
【化２９】
2007517860.tif 000009
【００３８】
式中、R1は疎水性基を表し、R2は水素原子又は疎水性基を表し、Zは保護基を表し、Xは脱離基を表す。
【００３９】
一つの態様に従って、R1は、飽和又は不飽和の、分枝鎖又は直鎖であり、任意に、脂肪族環を含むC1-C24 脂肪族部分を表す；及びR2は、水素原子又は飽和又は不飽和の、分枝鎖又は直鎖の脂肪族鎖から選択されるC1-C24 脂肪族部分を表し、該脂肪族鎖は任意に、脂肪族環を含み；該脂肪族鎖又は環は、酸素、ハロゲン、窒素及び硫黄から選択されるヘテロ原子を含む一以上の置換基で任意に置換される。
【００４０】
より具体的には、本発明は、前記R1がC8-C24 脂肪族部分を表すオキサザホスホラン化合物に関する。
【００４１】
さらに、より具体的には、本発明は、前記R2が水素原子又は飽和又は不飽和の C8-C24 脂肪族部分を表し、しかし好ましくは水素原子を表す、オキサザホスホランに関する。
【００４２】
本発明に従って、Ｘは脱離基である。「脱離基」という語は、置換基Ｘ又はＱ（下文）に関してここで用いられるように、求核性試薬の存在下において求核試薬によって置換される任意の化学的部分を示す。それらの条件下で、Ｘが、脱離基が置換された（求核性の攻撃の結果として）後の求核性部分を示すことは理解されるであろう。
【００４３】
脱離基(X又はQ、後者は以下で言及する)の非制限的な例は、ハロゲン原子、ボラート、エチレンクロロホスファイト、メチルホスホジクロリジト（phosphodichloridite）、クロロ-N,N-ジイソプロピルアミノメチキソホスファイト（methyxophosphite）又は[(イソプロピル)2N]2POCH2CH2CNを含む。
【００４４】
一つの態様に従って、Xはハロゲン、好ましくはClを表す。
【００４５】
他の態様に従って、Xは、脂肪族鎖、アミノ脂肪族、ヘテロ原子含有脂肪族鎖、飽和したか、部分的に飽和した環又はアリール基である環を含む脂肪族鎖から選択される脂肪族部分を含むアルコール、該脂肪族鎖は、分枝鎖又は直鎖の、飽和又は不飽和鎖である；又はエーテル、ポリエーテル、又は糖部分から選択される基で置換される（好ましくは、置換反応の結果として）。一つの態様に従って、Xは-O-CH2-CH2-N+(CH3)3である。
【００４６】
本発明に従って、好ましいZ保護基は、これらに限定されないが、メトキシメチル (MOM)、テトラヒドロピラニル (THP)、ジフェニルメチル、トリエチルシリル(TES)、t-ブチルジメチルシリル(TBDMS)、メシトエート（mesitoate）、9-フルオレニルメチルカルボナート (f-moc)、t-ブチルカルバミン酸 (t-boc)である。
【００４７】
一つの態様に従って、Ｚは化合物Si(R5)3を表し、式中、R5は同じ部分において同じであるか又は異なり、及び、C1-C6の分枝又は直鎖のアルキル基又はアリール基を表す。アリールは、置換された芳香族環並びに非置換芳香族環を含むことが理解されるであろう。好ましいＺ基は、Si(Ph)2(t-Bu)である。
【００４８】
2S,3R立体異性体(1a)に関する具体的な態様：
【化３０】
2007517860.tif 000010
【００４９】
R1, R2, X及びZは上記定義のとおりである。
【００５０】
オキサザホスホラン(1)の具体的な例は、R1が(E)-CH=CHC13H27であり、R2が水素であり、XがClであり、ZがSi(Ph)2(t-Bu)である、式 (1b)を有するものである。
【化３１】
2007517860.tif 000011
【００５１】
この化合物 (1b)の構造は、マススペクトルにおける具体的な分子量ピークが観察されることによって立証された（詳細は下記）。
【００５２】
オキサザホスホラン(1)の他の具体的な例は、R1が(E)-CH=CHC13H27であり、R2が水素であり、Xが-O-CH2-CH2-N+(CH3)3基で置換されたものである。
【００５３】
上記に述べたように、本発明の独特の発見は、オキサザホスホラン(1)又は(1a)が単離されることができ、また、実質的に安定であるということである。
【００５４】
また、本発明は、オキサザホスホラン（１）、（１ａ）又は（１ｂ）の製造のための方法に関する。本発明に従えば、該方法は、リン酸化試薬を下式（２）の3-O-保護スフィンゴイド化合物と反応させることを含む：
【化３２】
2007517860.tif 000012
【００５５】
式中、R1, Z及びXは定義されたとおりであり、及びYはアミン又はアミノ基である。「アミノ基」という用語は、アルキルアミン（飽和した並びに不飽和の、分枝鎖又は直鎖の)、アミノアルコール、アリールアミン、アミノチオール、アミノ糖などを含む、当該分野で周知の部分を含む任意のアミンを示す。一つの態様に従えば、YはNH2である。
【００５６】
2S,3R立体異性体を得るための、上記方法における出発原料は下式（２ａ）のスフィンゴイド化合物である：
【化３３】
2007517860.tif 000013
【００５７】
「リン酸化試薬」という語は、化合物（２）の水酸基及びＹ基と反応して環式オキサザホスホラン（１）を形成し得る反応性P=O 部分を有する任意の試薬を示す。リン酸化試薬の非制限的な例は、一般式POW3を有する化合物を含み、ここでWはハロゲン原子、ボラート、エチレンクロロホスファイト、メチルホスホジクロリジト（phosphodichloridite）、クロロ-N,N-ジイソプロピルアミノメチキソホスファイト（chloro-N,N-diisopropylaminomethyxophosphite）又は[(イソプロピル)2N]2POCH2CH2CNを含む。
【００５８】
好ましいリン酸化試薬はPOCl3である。
【００５９】
明らかに本発明は、本発明の方法によって調製されたものは全て、並びに他の任意の方法によって調製された、任意のオキサザホスホラン(1)並びにその立体異性体に関する。
【００６０】
オキサザホスホラン(1)が、オキサザホスホラン誘導体、スフィンゴミエリン及びスフィンゴミエリン誘導体の調製における出発(又は中間体)原料としてを含む、種々の適用及び方法において利用され得ることは、認められるであろう。以下の方法は、出発原料としてオキサザホスホラン（１）に関して記載されているが、以下の産物は、対応するスフィンゴイド（２）であるオキサザホスホラン（１）の原料から得られ、それによって該方法の間、オキサザホスホラン（１）の単離を必要としないということは理解されよう。
【００６１】
一つの態様に従えば、オキサザホスホラン（１）又は（１ａ）は、下式（３）を有する非環式のオキサザホスホラン誘導体又はその2S,3R立体異性体の製造のために用いられる：
【化３４】
2007517860.tif 000014
【００６２】
式中 R1, R2及びZは定義されたとおりであり、R3は水素原子；脂肪族鎖、アミノ脂肪族鎖、ヘテロ原子含有脂肪族鎖、飽和したか、部分的に飽和した環又はアリール基である環を含む脂肪族鎖から選択される脂肪族部分、該脂肪族鎖は、分枝鎖又は直鎖の、飽和した又は不飽和の鎖である；又はエーテル、ポリエーテル、又は糖部分を表す。本態様に従えば、該方法は、オキサザホスホラン（１）を式R3OHのアルコールと反応させ（ここで R3は定義されたとおりである(しかしながら水素原子は含まず)）、続いて、水溶性塩基又は水溶性酸で処理する工程を含む。
【００６３】
一つの態様に従えば、好ましいアルコールは、コリン、N-保護エタノールアミン、オリゴエチレングリコールモノエーテル、ポリエチレングリコールモノエーテル、ポリエーテル、又は糖部分から選択される。それでもなお、コリンは一つの好ましい態様である。
【００６４】
「水溶性塩基」という用語は、有機合成分野で周知であり、その中のＰ−Ｎ結合を開裂することによって、環式亜リン酸部分を開き、その結果非環式オキサザホスホラン誘導体（３）を得ることができる、いずれの無機又は有機の水溶性の試薬として、当業者に理解されるであろう。そのような試薬は、当該分野で周知であり、以下はそのような試薬の非限定的な一覧と解釈される：トリアルキルアミン、アルカリ金属-又はアルカリ土類金属-水酸化物、炭酸塩又は重炭酸塩。具体的な水溶性塩基には、トリエチルアミン、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムが含まれる。
【００６５】
本発明に従う水溶性酸は、有機合成分野で周知の任意の無機酸又は有機酸であってよい。好ましい酸は、当該分野で既知の強鉱酸及びルイス酸である。一つの特定の例はHClである。
【００６６】
オキサザホスホラン(3)は、該化合物を当該分野で周知の適切な保護基除去試薬と反応させることによる非保護形態において得られる[T.W Greene, P.G.M Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Second Edition,(1980) , John Wiley & Sons, Inc.]。2S,3R立体異性体化合物 (3a)の非保護形態は、式(8a)の化合物として下文のスキーム１で示される。
【００６７】
オキサザホスホラン(1)又は(1a)（式中、R1,及びZは定義されたとおりであり、R2は水素原子である）は、下式（４）を有する非環式オキサザホスホラン誘導体又はその2S,3R立体異性体(4a)の製造のためにも用いられる：
【化３５】
2007517860.tif 000015
【００６８】
式中、R3は、水素原子;脂肪族鎖、アミノ脂肪族鎖、ヘテロ原子含有脂肪族鎖、飽和したか、部分的に飽和した環又は芳香環である環を含む脂肪族鎖から選択される脂肪族部分、該脂肪族鎖は分枝鎖又は直鎖の、飽和したか又は不飽和の鎖である；又はエーテル、ポリエーテル、又は糖部分を表す；及びR4は疎水性基である。この側面に従えば、該方法は、オキサザホスホラン（３）を、Ｘに関して定義されたように、Ｘと同じであるか又は異なる、式R4C(O)Qのアシル化合物（式中、Qは脱離基である）と反応させることを含む。
【００６９】
一つの態様に従えば、R4は、飽和又は不飽和の、分枝又は直鎖の、脂肪族鎖から選択されるC1-C24 脂肪族部分、該脂肪族鎖は任意に脂肪族環を含む；酸素、ハロゲン、窒素及び硫黄から選択されるヘテロ原子を含む一以上の置換基で任意に置換された、脂肪族の鎖又は環を表す。一つの具体的な態様は、飽和又は不飽和のC8-C24 脂肪族鎖を表すR4に関する。
【００７０】
また、オキサザホスホラン(1)は、式（５）のスフィンゴミエリン及びスフィンゴミエリン類似体或いはその対応する2S,3R立体異性体 (5a)の調製のために用いられる。
【００７１】
よって、本発明は、Bruzikらによる先の開示[Bruzik, K. S. J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1: 423-431, 1988] 又は米国特許第5,220,043号に開示されたものを除く、ここで定義されたような式（５）又は（５ａ）の任意の合成スフィンゴミエリンに関する。本発明から除外される具体的なスフィンゴミエリンは、R2がパルミトイル基又はステアロイル（stearoyl）基を表し、R1がt-CH=CHC13H27を表さず、R3がCH2CH2N+(CH3)3を表さないものである。
【００７２】
本発明に従った合成方法によって得られる合成的なスフィンゴミエリン及びその類似体は、多くの適用を有しうる。上文に示したように、スフィンゴミエリン及びスフィンゴミエリン類似体は、リポソーム及び他の脂質集合に基づく薬物輸送製剤のための優れた候補であり、同時に、循環器病における逆コレステロール輸送を誘導する。当業者には、本発明のスフィンゴミエリン及びスフィンゴミエリン類似体の薬理学的及び生化学的な可能性と、医薬品及び製薬工業においてそれらがいかに用いられ得るかということが認識されるであろう。本発明のスフィンゴミエリン及びその中間体の使用の一つの具体的な例は、リポソームの調製におけるものである。
【００７３】
3-O-及びN-保護スフィンゴイド塩基を使用する現在有用な方法は、得られた中間体の単離及び精製を伴う保護−脱保護３工程を含む。１ポット方法は、現在開発されており、本明細書に開示される。
【００７４】
この側面に従って、式（５）のスフィンゴミエリンがオキサザホスホラン（１）（式中、R2は水素原子であり、R1, R3及びR4は上記定義のとおりである）から調製される。
【化３６】
2007517860.tif 000016
【００７５】
該方法は、オキサザホスホラン（４）を、保護基除去試薬と反応させて前記スフィンゴミエリン又はスフィンゴミエリン誘導体を得ることを含む。
【００７６】
「保護基除去試薬」という用語は、有機合成の分野において、特定の保護基を切断することができる任意の試薬として理解される[T.W Greene, P.G.M Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Second Edition,(1980) , John Wiley & Sons, Inc.]。そのような試薬の中には、テトラブチルアンモニウムフッ化物、フッ化水素、三フッ化ホウ素エーテラート、硫酸のような強酸、トシル酸などを含む。
【００７７】
また、本発明は、下式（６）を有する非環式オキサザホスホラン及びその対応する2S,3R立体異性体(6a)の製造のための、オキサザホスホラン(1)又は(1a)の使用にも関する：
【化３７】
2007517860.tif 000017
【００７８】
式中、R1, R2及びZは定義されたとおりである。この側面に従って、該方法は、オキサザホスホラン（１）を定義された水溶性塩基又は水溶性酸と反応させることを含む。
【００７９】
オキサザホスホラン（６）は、該化合物を適切な除去試薬と反応させることによって、保護されていない形態で得ることができる[T.W Greene, P.G.M Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Second Edition,(1980) , John Wiley & Sons, Inc.]。
【００８０】
明らかに本発明は、本発明の方法によって得られた場合はいつでも、保護されたか（即ち、Ｚ置換基を含む）又は保護されていない形態のいずれかで、本明細書に記載されたいずれのオキサザホスホラン、オキサザホスホラン中間体及びスフィンゴミエリン化合物及び誘導体に関する。誘導体という用語は、類似体という用語と交換可能に用いられ、本発明の合成方法によっても提供される、本明細書で与えられた一般式の範囲内の任意の化合物を示す。
【００８１】
本発明の異なる方法は、そのようにして得られた化合物の一以上の精製工程を含み、又は、本明細書で開示されたものか又は本発明の化合物を使用する他の任意の合成方法の何れかの、さらなる合成方法のためにそれらの粗製形態での使用を含む。一つの態様に従って、該精製は、濾過を含み、必要であれば続いて、当該分野で既知の適した溶出剤を用いるシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーを含む。
【００８２】
本明細書で開示された異なる方法を、以下のスキーム１に要約する（2S,3R立体異性体に関して）：
【化３８】
2007517860.tif 000018
【００８３】
出発原料、スフィンゴ脂質（２）又はその対応物（２ａ）が下記スキーム２に記載された方法によって、Ｎ−保護ジオールアミン化合物を用いて得られることは、注目されるべきである。
【００８４】
式（２ａ）の保護されたスフィンゴイドを調製する方法を下記スキーム２に示す：
【化３９】
2007517860.tif 000019
【００８５】
上記スキーム２に従えば、Ｎ−保護ジオールアミン（Z` は保護基)は、選択的な第一のアルコール保護基 Z``と反応させ(工程 (i))、続いて、３位置で第２の保護基Ｚで第２のアルコールを保護する(工程 (ii))、ここでZ、Z`、及びZ``は異なる保護基である。続いて、位置１のアルコールの第一の保護基 Z`` が選択的に除去され(工程 iii)、位置２のアミンの保護基 Z` が除去される(工程 (iv))。Z``及びZ` の除去は、連続的に(工程(iii)及び(iv))又は同時に(工程 (v))行ってよい。
【００８６】
本発明は、ここで例によって説明される。上述の記載は本発明の一つの具体的な態様のみの詳細を説明しているとは言え、本発明がそれらの限定されないこと、及び、他のスフィンゴイド及びホスホスフィンゴイド化合物が、ここで定義されたような本発明の範囲からはずれることなく得られることは、当該分野の技術者には理解されるであろう。
【具体例】
【００８７】
3-O-tert ブチルジフェニルシリル-D-エリスロ-スフィンゴシン (2a)の合成
N-tert-ブトキシカルバモイル-D-エリスロ-スフィンゴシン (670 g, 1.67 mol)を乾燥ジクロロメタン(12 L)に溶解し、イミダゾール(284 g, 4.18 mol)及びtert-ブチルジメチルクロロシラン (277 g, 1.84 mol)を続いて加えた。室温(RT)で2.5時間攪拌した後、該反応を完了し、追加量のイミダゾール(114 g, 0.75 mol)及びtert-ブチルジフェニルクロロシラン (686 ml, 2.2 mol)を加えた。該反応混合物をさらに１２時間の間攪拌し、続いて水で洗浄し、蒸発させ、EtOH (18 L)に再溶解した。
【００８８】
この再溶解した溶液に、濃縮HCl水(4 L)を加え、該溶液を２時間攪拌した。次いで、この溶液を冷却し、中和のためにNH4OH (3.5 L, 26%)の冷却溶液を加えた。この混合物を濾過し、乾燥し、蒸発させ、この残渣を、溶出剤として勾配CHCl3: MeOH 95.5:0.5 〜97:3を用いたシリカゲルカラムで精製した。
【００８９】
(2a)の500 gの収率 (最初のN-Boc-スフィンゴシンの56 %)を黄色がかった油として得た。
【００９０】
1H NMR  300 MHz (δ ppm, CDCl3) : 0.88 (t, 3H), 1.06 (s, 9H), 1.15 (bm, 4H), 1.26 (bs, 18H), 1.81 (bm, 5H), 2.80 (m, 1H), 3.435 (m, 1H), 3.61 (m, 1H), 4.015 (m, 1H), 5.28 (m, 2H), 7.37 (m, 6H), 7.65 (m, 4H)。
【００９１】
(4S)-4-[(1R)-1-(tert-ブチルジフェニルシリロキシ)-ヘキサデカ（hexadec）-2-エニル]-2-クロロ-2-オキソ-[1,3,2]-オキサザホスホリジン(1a)の合成
ヘキサン (100 ml)中のPOCl3 (13 ml, 21.7 g, 142 mmol)の溶液に、ジクロロメタン (60 ml)中のトリエチルアミン (40 ml, 29.1 g, 288 mmol)の溶液を、-10℃で攪拌しながら加えた。このように得られた溶液を-20℃に冷却し、ジクロロメタン (500 ml)中の2a (50 g, 93 mmol)の溶液を加えた。このように得られた化合物 (1a)の溶液を、下記に記載した誘導体の調製のためのように用いた。
【００９２】
化合物 (1a)を蒸発によって単離精製し、得られた黄褐色の油をマス-スペクトル分析に供した。m/e=617 (m+)。
【００９３】
1-O-ホスホコリノ-(2S,3R)-2-ヘキサデシルアミド-オクタデカ(octadec)-4-エン-1,3-ジオール (5a) (N-パルミトイル-スフィンゴシル ホスホコリン, N-パルミトイルスフィンゴミエリン)の合成
化合物 1aを含む溶液に、MeCN (1.5 L)中のコリントシレート（tosylate）塩 (86 g, 312 mmol)の溶液を加え、続いてジクロロメタン (30 ml)中のトリエチルアミン (20 ml) の溶液を加え、該混合物を室温で12時間攪拌した。次いで、該反応混合物を濃縮し、THF (2.5 L)に再溶解し、濾過し、11 mlの濃縮HCl水で加水分解した。次いで、該溶液をMgSO4で乾燥し、過剰のトリエチルアミンの存在下で、パルミトイルクロリド(31 ml, 28 g, 102 mmol)と反応させた。この溶液を濾過し、蒸発させ、ジクロロメタンに再溶解し、MeOH/H2Oで数回洗浄し、乾燥させ、蒸発させて、THF中45℃で、この残渣を過剰のテトラブチルアンモニウム フルオリド 1M 溶液と反応させた。
【００９４】
完了後、該溶液を蒸発させ、残渣をジクロロメタンに再溶解し、MeOH/H2Oで洗浄し、濃縮し、アセトン中で沈殿させた。このように得られた粗製スフィンゴミエリンを濾過し、CH2Cl2:MeOH:H2O 65:25:4を溶出剤として用いたシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーによって精製し、20 g (スフィンゴイド出発原料 2aの31％)のスフィンゴミエリン 5aを白色固体として得た。
【００９５】
1H NMR  300 MHz (δ ppm, CD3OD) : 0.89 (t, 6H), 1.28 (bm, 44H), 1.37 (bm, 2H), 1.56 (bm, 2H), 2.015 (m, 2H), 2.17 (m, 2H), 3.21 (s, 9H), 3.62 (m, 2H), 3.90-4.12 (m, 4H), 4.26 (m, 2H), 5.435 (dd, 1H), 5.69 (dt, 1H)。
【００９６】
1-ホスホコリノ-(2S,3R)-2-アミノ-オクタデカ(octadec)-4-エン-1,3,-ジオール (7a)の合成
7.4 gの化合物 2aから出発して調製された化合物 1aを含む溶液に、乾燥アセトニトリル中の12.7 gのコリントシレートの溶液を加えた。4 mlのDCM中のトリエチルアミンの5.9 mlの溶液をそれに加えた。該反応混合物を一晩攪拌した。次いで、該反応混合物を濃縮し、250 mlのヘキサンを加え、蒸発させて乾燥させた。この残渣を390 mlのTHFに再溶解し、沈殿したコリントシレートを濾過した。濃縮HCl (1.7ml)を加え、該反応混合物を１時間攪拌した。該反応混合物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、pHをトリエチルアミンで塩基性化した。沈殿物を濾過し、濾液を蒸発させて乾燥させ、次いで、クロロホルム、メタノール及び水 (8:4:3)から成る溶媒混合物に再溶解した。低い層を分離し、同じ上層で４回洗浄し、蒸発させた。
【００９７】
粗製産物をTHF中の45 mlの1M テトラブチルアンモニウムフルオリドに溶解し、該反応混合物を45℃で２時間攪拌した。得られた溶液を蒸発させ、粗製産物をシリカゲルクロマトグラフィーカラムで精製した（溶出剤：クロロホルム中で漸進的に濃度が上昇するメタノール）。
【００９８】
関連する画分を蒸発させ、次いで得られた産物をアセトニトリルと共沸騰させた。1.49の純粋な産物を得た（23% 収率）。
【００９９】
1H NMR  300 MHz (δ ppm, CD3OD) : 0.92 (t, 3H), 1.31 (bm, 20H), 1.44 (m, 2H), 2.10 (q, 2H), 2.92 (m, 1H), 3.33 (m, 1H), 3.67 (m, 2H), 3.92 (m, 1H), 4.04 (m, 2H), 4.30 (m, 2H),  5.55 (dd, 1H), 5.78 (dt, 1H)。
【０１００】
(2S,3R)-2-アミノ-オクタデカ（octadec）-4-エン-1,3-ジオール-1-ホスフェート(8a)の合成
8 gの化合物 2aから調製した化合物 1aの溶液を、400 mlに溶解した。THF及び1.8 mlの濃縮HClを加えた。反応混合物を-20℃まで冷却し、濾過した。中和のためにアンモニア溶液 (13 ml)を加え、該反応混合物及び得られた物質を蒸発させた。得られた残渣を蒸発させて乾燥させ、残渣をクロロホルム、メタノール及び水 (8:4:3) からなる溶媒混合物400 mlに溶解し、低相を分離した。
【０１０１】
有機相を蒸発させ、溶出剤としてクロロホルム中の２０％メタノールを用いたシリカゲルカラムに供した。関連する画分をあわせ、蒸発させた；2.5 gの(2S,3R)2-アミノ-オクタデカ-4-エン-3-(t-ブチル-ジフェニルシリロキシ)-1-オール-ホスフェート得た(27% 収率)。
【０１０２】
得られた産物を30 mlのTHFに懸濁し、テトラブチルアンモニウムフルオリドの4.4 mlの1M THF 溶液をそれに加え、該反応を45℃で２時間攪拌した。該反応混合物を蒸発させ、該残渣を、溶出剤としてメタノール  クロロホルム混合物１：１を用いたシリカゲルクロマトグラフィーカラムで精製した。
【０１０３】
関連する画分をあわせて蒸発させ、アセトニトリルで倍散し、濾過して乾燥させ、1.3 gの産物を得た(23%)全体収率。
【０１０４】
1H NMR  300 MHz (δ ppm, CD3COOD) : 0.95 (t, 3H), 1.35 (bm, 21H), 1.44 (m, 2H), 2.12 (m, 2H),  2.21 (m, 1H),  3.74 (m, 1H),  4.31 (m, 2H), 4.55 (t, 1H), 5.61 (dd, 1H), 5.98 (dt, 1H)。
【手続補正書】
【提出日】平成17年11月21日(2005.11.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下式（１）のオキサザホスホラン化合物：
【化１】
2007517860.tif 000041
式中、R1は飽和又は不飽和であり、分枝鎖又は直鎖であり、任意に脂肪族環を含む、C1-C24 脂肪族部分を表し、R2は水素原子又は疎水性基を表し、Zは保護基を表し、及びXは脱離基を表す。
【請求項２】
請求項１のオキサザホスホラン化合物であって、式中、R2は、水素原子又は飽和又は不飽和の、分枝鎖又は直鎖の脂肪族鎖から選択されるC1-C24 脂肪族部分を表し、前記脂肪族鎖は任意に脂肪族環を含み；該脂肪族鎖及び脂肪族環は任意に、酸素、ハロゲン、窒素及び硫黄から選択されるヘテロ原子を含む一以上の置換基で置換される。
【請求項３】
請求項１又は２に記載のオキサザホスホラン化合物であって、式中 R1がC8-C24 脂肪族部分を表す化合物。
【請求項４】
請求項２又は３に記載のオキサザホスホラン化合物であって、式中 R2が水素原子又は飽和又は不飽和のC8-C24 脂肪族部分を表す化合物。
【請求項５】
請求項４に記載のオキサザホスホラン化合物であって、式中 R2が水素原子を表す化合物。
【請求項６】
請求項１〜５の何れか１項に記載のオキサザホスホラン化合物であって、式中Xがハロゲン原子を表す化合物。
【請求項７】
請求項６に記載のオキサザホスホラン化合物であって、式中 XがClを表す化合物。
【請求項８】
請求項１〜７の何れか１項に記載のオキサザホスホラン化合物であって、式中 ZがSi(R5)3 基を表し、ここでR5は同じ化合物中で同じであるか又は異なり、C1-C6の分枝鎖又は直鎖のアルキル基又はアリール基を表す化合物。
【請求項９】
請求項８に記載のオキサザホスホラン化合物であって、式中、前記ZがSi(Ph)2(t-Bu)を表す化合物。
【請求項１０】
請求項１〜９の何れか１項に記載の化合物の、2S,3R立体異性体である、下式（1a）のオキサザホスホラン化合物：
【化２】
2007517860.tif 000042
式中 R1、R2、X及びZは、定義されたとおりである。
【請求項１１】
請求項１〜８の何れか１項に記載のオキサザホスホラン化合物であって、式中 R1は(E)-CH=CHC13H27であり、R2は水素であり、XはClであり、及びZはSi(Ph)2(t-Bu)である化合物。
【請求項１２】
請求項１〜８の何れか１項に記載のオキサザホスホラン化合物であって、式中 R1は(E)-CH=CHC13H27であり、R2は水素であり、Xは-O-CH2-CH2-N+(CH3)3基で置換される化合物。
【請求項１３】
請求項１〜８の何れか１項に記載のオキサザホスホラン化合物であって、下式（1b）の化合物の(E)-幾何異性体である化合物：
【化３】
2007517860.tif 000043
【請求項１４】
単離された安定な化合物である、請求項１〜１３の何れか１項に記載のオキサザホスホラン化合物。
【請求項１５】
請求項１〜１４の何れか１項で定義された式（1）のオキサザホスホラン化合物の製造方法であって、該方法が、
リン酸化試薬を下式（2）の3-O-保護スフィンゴイド（sphingoid）化合物と反応させることを含む方法：
【化４】
2007517860.tif 000044
式中、R1、Z及びXは、定義されたとおりであり、Yはアミン又はアミノ基である。
【請求項１６】
請求項１５に記載の方法であって、前記リン酸化試薬を下式（2a）の2S,3R 立体異性体と反応させることを含む方法：
【化５】
2007517860.tif 000045
【請求項１７】
請求項１５又は１６に記載の方法であって、前記リン酸化試薬が、YがNH2を表す保護されたスフィンゴイド化合物と反応される方法。
【請求項１８】
請求項１５〜１７の何れか１項に記載の方法であって、前記リン酸化試薬がPOW3から選択され、式中 Wは、ハロゲン原子；エチレンクロロホスファイト（ethylene chlorophosphite）；メチルホスホジクロリジト（methyl phosphodichloridite）；クロロ-N,N-ジイソプロピルアミノメチキソホスファイト（diisopropyoaminomethyxophosphite）；又は[(イソプロピル)2N]2POCH2CH2CNを表す方法。
【請求項１９】
前記リン酸化試薬は、POCl3である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
請求項１５〜１９の何れか１項に記載の方法であって、下式（1b）の化合物の(E)- 幾何異性体の合成のための方法
【化６】
2007517860.tif 000046
【請求項２１】
下式（1）のオキサザホスホラン化合物であって：
【化７】
2007517860.tif 000047
式中 R1、R2、Z及びXは、請求項１〜１４の何れか１項で定義されたとおりであり、請求項１５〜２０の何れか１項の方法によって得られる化合物。
【請求項２２】
下式（1a）のオキサザホスホラン化合物：
【化８】
2007517860.tif 000048
式中 R1、R2、Z及びXは、請求項１〜１４の何れか１項で定義されたとおりであり、請求項１５〜２０の何れか１項の方法によって得られる化合物。
【請求項２３】
下式（3）を有する非環式オキサザホスホラン誘導体の製造のための、請求項１〜１４、２１、及び２２の何れか１項で定義された式（1）のオキサザホスホランの使用方法であって：
【化９】
2007517860.tif 000049
式中 R1、R2及びZは定義されたとおりであり、及びR3は、水素原子；脂肪族鎖、アミノ脂肪族鎖、ヘテロ原子含有脂肪族鎖、飽和したか、部分的に飽和した環又はアリール基である環を含む脂肪族鎖から選択される脂肪族部分、該脂肪族鎖は分枝鎖又は直鎖の、飽和又は不飽和の鎖である；又はエーテル、ポリエーテル、又は糖部分を表し；
該記方法は、前記式（1）のオキサザホスホランを、アルコール又は式 R3OH（式中、R3は定義されたとおりである）と反応させ、続いて、水溶性の塩基又は水溶性の酸で処理する工程を含む方法。
【請求項２４】
請求項２３に記載の方法であって、前記アルコールが、コリン、N-保護エタノールアミン、オリゴエチレングリコールモノエーテル、ポリエチレングリコールモノエーテル、ポリエーテル、又は糖部分から選択される方法。
【請求項２５】
前記アルコールがコリンである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
請求項２３〜２５の何れか１項に記載の方法であって、前記水溶性の塩基が、トリアルキルアミン、アルカリ金属又はアルカリ土類金属-水酸化物、炭酸塩又は炭酸水素塩から選択される方法。
【請求項２７】
請求項２３〜２６の何れか１項に記載の方法であって、前記水溶性の酸が、強い鉱酸又はルイス酸である方法。
【請求項２８】
式（3a）の2S,3R立体異性体の製造のための、請求項２３〜２７の何れか１項に記載の方法であって：
【化１０】
2007517860.tif 000050
式（1a）の化合物を使用する方法
【化１１】
2007517860.tif 000051
式中 R1、R2、R3、X及びZは定義されたとおりである。
【請求項２９】
請求項２３〜２８の何れか１項に記載の方法であって、前記式（3）又は（3a）の化合物を、保護基除去試薬と反応させて、保護基Ｚを水素原子と置換することを含む方法。
【請求項３０】
請求項２３〜２９の何れか１項の方法によって得られる、
下式（3）を有するホスフェート誘導体：
【化１２】
2007517860.tif 000052
又は式（3a）のその2S,3R立体異性体：
【化１３】
2007517860.tif 000053
式中、R1、R2、R3及びZは定義されたとおりである。
【請求項３１】
下式（4）を有するホスフェート誘導体の製造のための、請求項１〜１４、２１、及び２２の何れか１項で定義された式（1）のオキサザホスホラン（式中 R2は水素原子である）を使用する方法であって、
【化１４】
2007517860.tif 000054
式中、R1、及びZは定義されたとおりであり、R3は、水素原子；脂肪族鎖、アミノ脂肪族鎖、ヘテロ原子含有脂肪族鎖、飽和したか、部分的に飽和した環又は芳香族環である環を含む脂肪族鎖から選択される脂肪族部分、前記脂肪族鎖は分枝又は直鎖の、飽和又は不飽和の鎖である；又はエーテル、ポリエーテル、又は糖部分を表し；及びR4は疎水性基であり；
該方法は、
請求項２３〜２７の何れか１項に従って式（3）のホスフェート誘導体を調製し；
前記式（3）のホスフェート誘導体を、式 R4C(O)Q（式中Qは脱離基である）のアシル化合物と反応させることを含む。
【請求項３２】
請求項３１に記載の方法であって、前記R4は飽和又は不飽和の、分枝鎖又は直鎖の脂肪族鎖から選択されるC1-C24 脂肪族部分を表し、前記脂肪族鎖は、任意に脂肪族環を含み；該脂肪族鎖又は環は任意に、酸素、ハロゲン、窒素及び硫黄から選択されるヘテロ原子を含む一以上の置換基で置換される方法。
【請求項３３】
前記R4が、飽和又は不飽和のC8-C24 脂肪族鎖を表す、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
式（4）の化合物の2S,3R立体異性体の製造のための、請求項３１〜３３の何れか１項に記載の方法であって、式（1a）の化合物の2S,3R立体異性体を使用する方法。
【請求項３５】
請求項３０〜３６の何れか１項の方法によって得られる、
下式（4）を有するホスフェート誘導体：
【化１５】
2007517860.tif 000055
又はその2S,3R立体異性体；
式中、R1、R3、R4及びZは定義されたとおりである。
【請求項３６】
下式（5）を有するフィンゴミエリン誘導体の製造のための、請求項１〜１４、２１、及び２２の何れか１項で定義された式（1）のオキサザホスホラン（式中R2は水素原子である）を使用する方法：
【化１６】
2007517860.tif 000056
式中、R1及びR3は定義されたとおりであり、R4は請求項３１〜３４の何れか１項で定義されたとおりであり；
該方法は：
前記式（1）のオキサザホスホランを、アルコール又は式R3OH （式中R3は定義されたとおりである）と反応させ、続いて、水溶性の塩基又は水溶性の酸で処理して、下式（3）を有するホスフェート誘導体を得ること：
【化１７】
2007517860.tif 000057
式中、R1、R2及びZは定義されたとおりであり、及びR3は、水素原子；脂肪族鎖、アミノ脂肪族鎖、ヘテロ原子含有脂肪族鎖、飽和したか、部分的に飽和した、環又はアリール基を含む脂肪族鎖から選択される脂肪族部分、該脂肪族鎖は分枝鎖又は直鎖の、飽和又は不飽和の鎖である；又はエーテル、ポリエーテル、又は糖部分を表し；
前記式（3）のホスフェート誘導体を、式R4C(O)Qのアシル化合物（式中Qは脱離基であり、R4は、飽和又は不飽和の、分枝鎖又は直鎖の脂肪族鎖から選択される、C1-C24 脂肪族部分を表し、該脂肪族鎖は任意に脂肪族環を含み；前記脂肪族の鎖又は環は任意に、酸素、ハロゲン、窒素及び硫黄から選択されるヘテロ原子を含む一以上の置換基で置換される）と反応させること；
前記式（4）のホスフェート誘導体を、保護基除去試薬と反応させて、前記スフィンゴミエリンを得ることを含む方法。
【請求項３７】
式（5）の化合物の2S,3R立体異性体の製造のための、請求項３６に記載の方法であって、式（1a）の化合物の2S,3R立体異性体を使用する方法。
【請求項３８】
前記式（4）の化合物中の前記Ｚが、Si(Ph2)(t-Bu)である、請求項３６又は３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記保護基が、フッ化水素又は(R6)4NF（式中 R6はC1-C6アルキル基である）の使用によって除去される、請求項３６〜３８の何れか１項に記載の方法。
【請求項４０】
前記R6がn-ブチルである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
出発原料として式(1)、(1a)、(2)又は(2a)の化合物を有する、単一ポット（single pot）方法である、請求項１５〜２０、２３〜２９、３１〜３４及び３６〜４０の何れか１項に記載の方法。
【請求項４２】
前記式(1)又は(1a)のオキサザホスホランの大規模生産のための、請求項３６〜４１の何れか１項に記載の方法。
【請求項４３】
請求項３６〜４２の何れか１項に記載の方法によって得られる、下式（5）を有するスフィンゴミエリン：
【化１８】
2007517860.tif 000058
又はその2S,3R立体異性体、
式中、前記R1、R3及びR4は定義されたとおりであり、前記R2がC15又はC17のアルキル鎖を表す場合、R1はトランス-CH=CHC13H27を表さず、R3はCH2CH2N+(CH3)3を表さない。
【請求項４４】
請求項３６〜４２の何れか１項に記載の方法によって得られる、下式（5）を有するスフィンゴミエリン：
【化１９】
2007517860.tif 000059
又はその2S,3R立体異性体
式中、前記R1、R3及びR4は定義されたとおりである。
【請求項４５】
下式（6）を有するホスフェート誘導体の製造のための、請求項１〜１４、２１、及び２２のいずれか１項で定義された式（1）のオキサザホスホランを使用する方法であって：
【化２０】
2007517860.tif 000060
式中 R1、R2及びZは定義されたとおりであり、該方法は、前記式(1)のオキサザホスホランを、水溶性の塩基又は水溶性の酸と反応させることを含む方法。
【請求項４６】
式（6）の化合物の2S,3R立体異性体の製造のための、請求項４５に記載の方法であって、式（1a）の化合物の2S,3R立体異性体を使用する方法。
【請求項４７】
請求項４５又は４６に記載の方法であって、前記水溶性の塩基が、トリアルキルアミン、アルカリ金属-及びアルカリ土類金属-水酸化物、炭酸塩又は重炭酸塩から選択される方法。
【請求項４８】
請求項４５又は４６に記載の方法であって、前記水溶性の酸は、強い鉱酸又はルイス酸である方法。
【請求項４９】
請求項３８〜４１の何れか１項に記載の方法によって得られる、式（6）又は（6a）を有するホスフェート誘導体。
【請求項５０】
請求項４３又は４４に記載のスフィンゴミエリンを含む薬学的組成物。
【請求項５１】
薬学的組成物の調製のための、請求項４３又は４４に記載のスフィンゴミエリンの使用。
【国際調査報告】
2007517860.tif 000061
2007517860.tif 000062
2007517860.tif 000063
2007517860.tif 000064
2007517860.tif 000065