(57)【要約】本発明は、神経の再生およびその神経の再生に基づいて神経学的疾患を処置するための薬学的組成物および方法を提供する。本発明は、ｐ７５シグナル伝達経路に関与するＰｅｐ５、ＰＫＣ，ＩＰ３、ｐ７５、Ｒｈｏ、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ＭＡＧ、ＧＴ１ｂ、ｐ２１、Ｒｈｏキナーゼなどの組成物またはそれに特異的に相互作用する因子を用いることによって、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断または抑制することによって、再生阻害がストップすることにより再生が再開することによって解決された。本発明はまた、ＰＴＤドメインが神経再生薬において有用であることを初めて開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
神経を再生するための組成物であって、Ｐｅｐ５ポリペプチドを含む、組成物。
【請求項２】
前記Ｐｅｐ５ポリペプチドは、
（ａ）配列番号１に記載の核酸配列もしくはそのフラグメントによってコードされる、ポリペプチド；
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列もしくはそのフラグメントを有する、ポリペプチド；
（ｃ）配列番号２に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する、改変体ポリペプチド；または
（ｄ）（ａ）〜（ｃ）のいずれか１つのポリペプチドのアミノ酸配列に対する同一性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列からなり、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、
を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記Ｐｅｐ５ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列の全範囲を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記Ｐｅｐ５ポリペプチドは、さらに、ＰＴＤドメインを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
神経を再生するための組成物であって、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子を含む、組成物。
【請求項７】
前記Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子は、
（ａ）配列番号１に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有する、ポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列またはそのフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド；
（ｃ）配列番号２に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；
（ｄ）（ａ）〜（ｃ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；または
（ｅ）（ａ）〜（ｃ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
を含む、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子は、配列番号１の核酸配列におけるヌクレオチド配列の全範囲を含む、請求項６に記載の組成物。
【請求項９】
前記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、請求項６に記載の組成物。
【請求項１０】
前記Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子は、ＰＴＤドメインをコードする配列を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
神経を再生するための組成物であって、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子を含む、組成物。
【請求項１２】
前記Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドは、
（ａ）配列番号５に記載の核酸配列もしくはそのフラグメントによってコードされる、ポリペプチド；
（ｂ）配列番号６に記載のアミノ酸配列もしくはそのフラグメントを有する、ポリペプチド；
（ｃ）配列番号６に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する、改変体ポリペプチド；
（ｄ）配列番号５に記載の塩基配列のスプライス改変体もしくは対立遺伝子改変体によってコードされる、ポリペプチド；
（ｅ）配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドの、種相同体ポリペプチド；または
（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリペプチドのアミノ酸配列に対する同一性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列からなり、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、
を含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドは、配列番号６のアミノ酸配列の全範囲を含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記因子は、抗体を含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１６】
神経を再生するための組成物であって、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子を含む、組成物。
【請求項１７】
前記Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子は、
（ａ）配列番号５に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有する、ポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号６に記載のアミノ酸配列のアミノ酸またはそのフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド、
（ｃ）配列番号６に記載のアミノ酸配列のアミノ酸において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；
（ｄ）配列番号５に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体である、ポリヌクレオチド；
（ｅ）配列番号６に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドの種相同体をコードする、ポリヌクレオチド；
（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；または
（ｇ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
からなる群より選択される、ポリヌクレオチド、
を含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記Ｒｈｏ  ＧＤＩは、配列番号５の核酸配列の全範囲を含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１９】
前記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２０】
前記因子は、アンチセンス分子またはＲＮＡｉを含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２１】
神経を再生するための組成物であって、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子を含む、組成物。
【請求項２２】
前記Ｒｈｏポリペプチドは、
（ａ）配列番号１１に記載の核酸配列もしくはそのフラグメントによってコードされる、ポリペプチド；
（ｂ）配列番号１２に記載のアミノ酸配列もしくはそのフラグメントを有する、ポリペプチド；
（ｃ）配列番号１２に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する、改変体ポリペプチド；
（ｄ）配列番号１１に記載の塩基配列のスプライス改変体もしくは対立遺伝子改変体によってコードされる、ポリペプチド；
（ｅ）配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドの、種相同体ポリペプチド；または
（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリペプチドのアミノ酸配列に対する同一性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列からなり、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、
を含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記Ｒｈｏポリペプチドは、配列番号１２のアミノ酸の１位〜１９３位を含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２４】
前記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２５】
前記因子は、抗体を含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２６】
神経を再生するための組成物であって、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子を含む、組成物。
【請求項２７】
前記Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子は、
（ａ）配列番号１１に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有する、ポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号１２に記載のアミノ酸配列またはそのフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド；
（ｃ）配列番号１２に記載のアミノ酸配列のアミノ酸において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；
（ｄ）配列番号１１に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体である、ポリヌクレオチド；
（ｅ）配列番号１２に記載のアミノ酸配列のアミノ酸からなるポリペプチドの種相同体をコードする、ポリヌクレオチド；
（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；または
（ｇ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
からなる群より選択される、ポリヌクレオチド、
を含む、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子は、配列番号１１の１位〜５７９位を含む、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２９】
前記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、請求項２６に記載の組成物。
【請求項３０】
前記因子は、アンチセンス分子またはＲＮＡｉを含む、請求項２６に記載の組成物。
【請求項３１】
神経を再生するための組成物であって、Ｒｈｏキナーゼポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子を含む、組成物。
【請求項３２】
前記Ｒｈｏキナーゼポリペプチドは、
（ａ）配列番号１８に記載の核酸配列もしくはそのフラグメントによってコードされる、ポリペプチド；
（ｂ）配列番号１９に記載のアミノ酸配列もしくはそのフラグメントを有する、ポリペプチド；
（ｃ）配列番号１９に記載のアミノ酸配列のアミノ酸において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する、改変体ポリペプチド；
（ｄ）配列番号１８に記載の塩基配列のスプライス改変体もしくは対立遺伝子改変体によってコードされる、ポリペプチド；
（ｅ）配列番号１９に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドの、種相同体ポリペプチド；または
（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリペプチドのアミノ酸配列に対する同一性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列からなり、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、
を含む、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記Ｒｈｏキナーゼポリペプチドは、配列番号１９のアミノ酸の１位〜１３８８位を含む、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３４】
前記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３５】
前記因子は、抗体を含む、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３６】
神経を再生するための組成物であって、Ｒｈｏキナーゼポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子を含む、組成物。
【請求項３７】
前記Ｒｈｏキナーゼポリペプチドをコードする核酸分子は、
（ａ）配列番号１８に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有する、ポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号１９に記載のアミノ酸配列またはそのフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド、
（ｃ）配列番号１９に記載のアミノ酸配列のアミノ酸において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；
（ｄ）配列番号１８に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体である、ポリヌクレオチド；
（ｅ）配列番号１９に記載のアミノ酸配列のアミノ酸からなるポリペプチドの種相同体をコードする、ポリヌクレオチド；
（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；または
（ｇ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
からなる群より選択される、ポリヌクレオチド、
を含む、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
前記Ｒｈｏキナーゼポリペプチドをコードする核酸分子は、配列番号１８に記載の核酸配列のヌクレオチド１位〜４１６４位を含む、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３９】
前記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、請求項３６に記載の組成物。
【請求項４０】
前記因子は、アンチセンス分子またはＲＮＡｉを含む、請求項３６に記載の組成物。
【請求項４１】
ＰＴＤドメインおよび神経再生因子を含む、神経を再生するための組成物。
【請求項４２】
前記神経再生因子は、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４３】
前記神経再生因子は、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子もしくはその改変体もしくはフラグメント、またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子に対して特異的に相互作用する因子を含む、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４４】
前記ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子を含む、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４５】
前記神経再生因子は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用の阻害、ＰＫＣの阻害、ＩＰ３の活性化、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の阻害、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の維持または強化、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換阻害、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用の阻害およびＲｈｏキナーゼの活性阻害からなる群より選択される少なくとも１つの作用を有する、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４６】
前記神経再生因子は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用を抑制または消失する因子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用を抑制または消失する因子、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を維持または強化する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換を阻害する因子、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用を阻害する因子、およびＲｈｏキナーゼの活性を阻害する因子からなる群より選択される少なくとも１つの因子を含む、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４７】
前記神経再生因子は、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される因子を含む、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４８】
前記ＰＴＤドメインは、ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲまたはその１つ以上の置換、付加および／もしくは欠失を含むアミノ酸配列を有する、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４９】
前記ＰＴＤドメインは、前記ｐ２１ポリペプチドのＣ末端側またはＮ末端側に配置される、請求項４１に記載の組成物。
【請求項５０】
前記神経再生因子は、細胞質に留まり得る、請求項４１に記載の組成物。
【請求項５１】
ＰＴＤドメインをコードする核酸配列および神経再生因子をコードする核酸配列を含む核酸分子を含む、神経を再生するための組成物。
【請求項５２】
前記神経再生因子は、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５３】
前記神経再生因子は、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子もしくはその改変体もしくはフラグメント、またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子に対して特異的に相互作用する因子を含む、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５４】
前記ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子を含む、請求項５３に記載の組成物。
【請求項５５】
前記神経再生因子は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用の阻害、ＰＫＣの阻害、ＩＰ３の活性化、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の阻害、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の維持または強化、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換阻害、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用の阻害およびＲｈｏキナーゼの活性阻害からなる群より選択される少なくとも１つの作用を有する、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５６】
前記神経再生因子は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用を抑制または消失する因子、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用を抑制または消失する因子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用を抑制または消失する因子、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を維持または強化する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換を阻害する因子、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用を阻害する因子、およびＲｈｏキナーゼの活性を阻害する因子からなる群より選択される少なくとも１つの因子を含む、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５７】
前記神経再生因子は、Ｐｅｐ５ポリペプチド、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される因子を含む、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５８】
前記ＰＴＤドメインは、ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲまたはその１つ以上の置換、付加および／もしくは欠失を含むアミノ酸配列を有する、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５９】
前記ＰＴＤドメインをコードする配列は、前記ｐ２１ポリペプチドの５’末端側または３’末端側に配置される、請求項５１に記載の組成物。
【請求項６０】
前記神経再生因子は、細胞質中に留まり得る、請求項５１に記載の組成物。
【請求項６１】
神経の再生を調節するための組成物であって、ｐ７５シグナル伝達経路を調節する因子を含み、ここで、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子はＰＫＣおよびＩＰ３を含む、組成物。
【請求項６２】
さらに、ＰＫＣを調節する因子およびＩＰ３を調節する因子からなる群より選択される少なくとも１つの因子を含む、請求項６１に記載の組成物。
【請求項６３】
ＰＫＣを調節する因子およびＩＰ３を調節する因子の両方をさらに含む、請求項６１に記載の組成物。
【請求項６４】
ＰＫＣを阻害する因子をさらに含む、請求項６１に記載の組成物。
【請求項６５】
ＩＰ３を活性化する因子をさらに含む、請求項６１に記載の組成物。
【請求項６６】
前記ｐ７５シグナル伝達経路を調節する因子は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子の調節因子を含む、請求項６１に記載の組成物。
【請求項６７】
前記ｐ７５シグナル伝達経路を調節する因子は、ＲｈｏＡの調節因子を含む、請求項６１に記載の組成物。
【請求項６８】
前記ｐ７５シグナル伝達経路を調節因子は、ＲｈｏＡの活性化因子およびＰＫＣの阻害因子を含み、前記神経再生の調節は神経再生の活性化である、請求項６１に記載の組成物。
【請求項６９】
さらにＩＰ３の活性化因子を含む、請求項６８に記載の組成物。
【請求項７０】
前記ＰＫＣの調節因子は、ＭＡＧ、Ｎｏｇｏおよびｐ７５からなる群より選択される、請求項６２に記載の組成物。
【請求項７１】
前記ＩＰ３の調節因子は、ＭＡＧ、Ｎｏｇｏおよびｐ７５からなる群より選択される、請求項６２に記載の組成物。
【請求項７２】
前記神経の再生は、インビボまたはインビトロで行われる、請求項６１に記載の組成物。
【請求項７３】
前記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、請求項６１に記載の組成物。
【請求項７４】
前記因子は、ＰＴＤドメインに結合する、請求項６２に記載の組成物。
【請求項７５】
神経疾患、神経障害および／または神経の状態を、処置、予防、診断または予後するための組成物であって、ｐ７５シグナル伝達経路を調節する因子を含む、組成物。
【請求項７６】
さらに、ＰＫＣを調節する因子およびＩＰ３を調節する因子からなる群より選択される少なくとも１つの因子を含む、請求項７５に記載の組成物。
【請求項７７】
ＰＫＣを調節する因子およびＩＰ３を調節する因子の両方をさらに含む、請求項７５に記載の組成物。
【請求項７８】
ＰＫＣを阻害する因子をさらに含む、請求項７５に記載の組成物。
【請求項７９】
ＩＰ３を活性化する因子をさらに含む、請求項７５に記載の組成物。
【請求項８０】
前記ｐ７５シグナル伝達経路を調節する因子は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子の調節因子を含む、請求項７５に記載の組成物。
【請求項８１】
前記ｐ７５シグナル伝達経路を調節する因子は、ＲｈｏＡの調節因子を含む、請求項７５に記載の組成物。
【請求項８２】
前記ｐ７５シグナル伝達経路を調節する因子は、ＲｈｏＡの活性化因子およびＰＫＣの阻害因子を含み、前記神経再生の調節は神経再生の活性化である、請求項７５に記載の組成物。
【請求項８３】
さらにＩＰ３の活性化因子を含む、請求項８２に記載の組成物。
【請求項８４】
前記ＰＫＣの調節因子は、ＭＡＧ、Ｎｏｇｏおよびｐ７５からなる群より選択される、請求項７６に記載の組成物。
【請求項８５】
前記ＩＰ３の調節因子は、ＭＡＧ、Ｎｏｇｏおよびｐ７５からなる群より選択される、請求項７６に記載の組成物。
【請求項８６】
前記神経の再生は、インビボまたはインビトロで行われる、請求項７５に記載の組成物。
【請求項８７】
前記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、請求項７５に記載の組成物。
【請求項８８】
前記因子は、ＰＴＤドメインに結合する、請求項７６に記載の組成物。
【請求項８９】
ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子を含む、組成物。
【請求項９０】
神経疾患、神経障害および／または神経の状態を、処置、予防、診断または予後するための組成物であって、ｐ７５シグナル伝達経路を調節する因子を含み、該ｐ７５シグナル伝達経路を調節する因子は、ＰＫＣを調節する因子およびＩＰ３を調節する因子からなる群より選択される少なくとも１つの因子を含む、組成物。
【請求項９１】
ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子を含む、神経突起伸展の阻害を破壊または減少する組成物。
【請求項９２】
ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子を含む、神経細胞のネットワークの構築のための組成物。
【請求項９３】
神経を再生するための組成物であって、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子を含む、組成物。
【請求項９４】
神経を再生するための組成物であって、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドを含む、組成物。
【請求項９５】
神経を再生するための組成物であって、ｐ２１ポリペプチドを含む、組成物。
【請求項９６】
神経を再生するための組成物であって、ｐ２１ポリペプチドをコードする核酸分子を含む、組成物。
【請求項９７】
神経学的疾患を処置するためのキットであって、
（Ａ）ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子を含む組成物によって再生された細胞集団；
（Ｂ）該細胞集団を保存するための容器
を包含する、キット。
【請求項９８】
神経を再生するための方法であって、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する工程を含む、方法。
【請求項９９】
神経疾患、神経障害および／または神経の状態を、処置、予防、診断または予後する方法であって、該処置、予防、診断または予後を必要とするかまたはそのことが予想される被検体においてｐ７５シグナル伝達経路を調節する工程を包含する、方法。
【請求項１００】
神経の再生を調節する方法であって、ｐ７５シグナル伝達経路を調節する工程を含む、方法。
【請求項１０１】
神経突起伸展の阻害を破壊または減少する方法であって、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する工程を含む、方法。
【請求項１０２】
神経細胞のネットワークの構築のための方法であって、該神経細胞におけるｐ７５シグナル伝達経路を阻害する工程を含む、方法。
【請求項１０３】
神経学的疾患を処置するための方法であって、該方法は、以下：
（ａ）ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子を含む組成物によって再生された細胞集団を提供する工程；および
（ｂ）該細胞集団を該患者に移植する工程、
を包含する、方法。
【請求項１０４】
神経疾患、神経障害および／または神経の状態を、処置、予防、診断または予後する方法であって、該処置、予防、診断または予後を必要とするかまたはそのことが予想される被検体において、ｐ７５シグナル伝達経路を調節する工程であって、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子は、ＰＫＣおよびＩＰ３を含む、工程を包含する、方法。
【請求項１０５】
神経再生を誘導する因子を同定するためのスクリーニング方法であって、該方法は、以下：
（ａ）ｐ７５シグナル伝達経路において相互作用する少なくとも２つの因子を、試験因子の存在下で接触させる工程、および
（ｂ）該少なくとも２つの相互作用する因子の間の試験因子の存在下における相互作用レベルを、該試験因子の非存在下における相互作用レベルと比較する工程、
を包含し、
ここで、該試験因子の非存在下と比較して、試験因子の存在下において相互作用が減少した場合、該試験因子は、神経を再生するための因子として同定される、方法。
【請求項１０６】
請求項１０５に記載の方法によって同定される、調節因子。
【請求項１０７】
請求項１０６に記載の調節因子を含む、薬学的組成物。
【請求項１０８】
神経学的疾患、障害または状態を、予防または処置する方法であって、該方法は、請求項１０７に記載の薬学的組成物を被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項１０９】
ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏをコードする核酸分子、ｐ２１をコードする核酸分子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子からなる群より選択される少なくとも１つの核酸分子の配列において野生型とは異なる配列が導入された配列を有する少なくとも１つの核酸分子を含む、ベクター。
【請求項１１０】
請求項１０９に記載のベクターを含む、細胞。
【請求項１１１】
請求項１０９に記載のベクターを含む、組織。
【請求項１１２】
請求項１０９に記載のベクターを含む、臓器。
【請求項１１３】
請求項１０９に記載のベクターを含む、生物。
【請求項１１４】
請求項１０９に記載のベクターで形質転換された、神経改変トランスジェニック動物。
【請求項１１５】
ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏをコードする核酸分子、ｐ２１をコードする核酸分子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子からなる群より選択される少なくとも１つの核酸分子が欠失された、神経改変ノックアウト動物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、神経学的疾患を処置するための薬学的組成物および方法、ならびに神経を再生する薬学的組成物および方法に関する。詳細には、本発明は、神経突起伸展の阻害を破壊することによって、神経学的疾患を処置する薬学的組成物および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ニューロトロフィンレセプター（ｐ７５）は、驚くべきほど多様な生物学的効果（例えば、細胞死、シュヴァン細胞移動、シナプス伝達の調節、ならびに感覚ニューロンおよびカルシウム流動の機能的調節が挙げられる）を媒介する（例えば、非特許文献１を参照のこと）。近年の研究において、ｐ７５は、軸索伸長の調節にも関連付けられている。神経成長因子（ＮＧＦ）は、ＮＧＦレセプターに関してｐ７５のみを発現する胚性ラット海馬ニューロンおよびヒヨコ毛様体ニューロンからの神経突起伸展を刺激する（例えば、非特許文献２を参照のこと）。これらの効果は、ｐ７５によるＲｈｏ活性の調節の説明となり得る。Ｒｈｏは、アクチン重合化の状態を調節する低分子ＧＴＰａｓｅである。その活性なＧＴＰ結合形態において、Ｒｈｏは、アクチン細胞骨格を堅くし、それによって、軸索伸長を阻害し、そして成長円錐の崩壊を媒介する（例えば、非特許文献３および４を参照のこと）。ｐ７５へのニューロトロフィン結合は、ＨＮ１０ｅ細胞および小脳ニューロンにおいてＲｈｏＡを不活性化し、一方、トランスフェクト２９３細胞におけるＲｈｏＡの過剰発現は、ＲｈｏＡの活性化をもたらし、このことは、ｐ７５が双方向性のシグナルを誘発することを示唆する（例えば、非特許文献２を参照のこと）。実際、その後の研究によって、ミエリン由来の糖タンパク質であるミエリン結合糖タンパク質（ＭＡＧ）が、ｐ７５依存性機構でＲｈｏＡを活性化し、ゆえに、生後感覚ニューロンおよび小脳ニューロンからの神経突起伸展を阻害することが示されている（例えば、非特許文献５を参照のこと）。さらに、Ｎｏｇｏおよび稀突起神経膠細胞ミエリン糖タンパク質（ＯＭｇｐ）、神経突起伸展の他のミエリン由来インヒビターは、ｐ７５を介してニューロンに作用する（例えば、非特許文献６を参照のこと）。Ｎｏｇｏレセプターと複合体化したｐ７５は、現在までに見出されている全ミエリン由来インヒビターに対するレセプターを形成することが示唆されている（例えば、非特許文献６および７を参照のこと）。しかし、ｐ７５によるＲｈｏ活性の調節の正確な機構は、解明されるべきままの状態にある。
【０００３】
ＲｈｏＡは、酵母ツーハイブリッドシステムおよび同時免疫沈降によってｐ７５と相互作用することが示されている（例えば、非特許文献２を参照のこと）。野生型ＲｈｏＡ（これは、優先的にＧＤＰ結合形態であるが、ＲｈｏＡの構成性活性形態ではない）のみがｐ７５と相互作用するので、ＲｈｏＡの活性化が、ＲｈｏＡおよびｐ７５の直接的な相互作用に依存することが示唆される。ＧＤＰ結合形態のＲｈｏタンパク質は、Ｒｈｏ  ＧＤＰ解離抑制因子（Ｒｈｏ  ＧＤＩ）と相互作用する。このＲｈｏ  ＧＤＰ解離抑制因子は、ヌクレオチド解離の阻害ならびに細胞質と膜との間のＲｈｏタンパク質の往復に役割をはたす（例えば、非特許文献８を参照のこと）。Ｒｈｏ  ＧＤＩは、Ｒｈｏファミリーのタンパク質が、膜に転位する活性なＧＴＰ結合形態に変換されることを妨げる。さらに、Ｒｈｏタンパク質の活性形態が膜において不活性形態に変換された後、Ｒｈｏ  ＧＤＩは、そのＲｈｏタンパク質と複合体を形成し、そして細胞質ゾルに転位する。Ｒｈｏ  ＧＤＩファミリーは、少なくとも３つのアイソフォーム：Ｒｈｏ  ＧＤＩα、Ｒｈｏ  ＧＤＩβ、およびＲｈｏ  ＧＤＩγを含む。Ｒｈｏ  ＧＤＩαは、遍在的に発現し、これまで研究されているＲｈｏファミリーのタンパク質の全てに結合し、一方、Ｒｈｏ  ＧＤＩβおよびＲｈｏ  ＧＤＩγは、特有の組織発現パターンを示し、そしてこれらの基質特異性は、正確に決定されていない。
【０００４】
また、神経伝達においてＰＫＣ、細胞内カルシウム濃度、ＩＰ３などの因子が関与しているようであることが知られているが、これらの因子を調節して神経再生を調節することができるかどうかは知られていない。ましてや、ｐ７５伝達経路における影響についての報告はない。
【非特許文献１】Ｄｅｃｈａｎｔ，Ｇ．＆Ｂａｒｄｅ，Ｙ．Ａ．，Ｎａｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．５，１１３１−１１３６（２００２）
【非特許文献２】Ｙａｍａｓｈｉｔａ，Ｔ．，Ｔｕｃｋｅｒ，Ｋ．Ｌ．＆Ｂａｒｄｅ，Ｙ．Ａ．，Ｎｅｕｒｏｎ  ２４，５８５−５９３（１９９９）
【非特許文献３】Ｄａｖｉｅｓ，Ａ．Ｍ．，Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．１０，Ｒ１９８−２００（２０００）
【非特許文献４】Ｓｃｈｍｉｄｔ，Ａ．＆Ｈａｌｌ，Ａ．，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．，１６，１５８７−１６０９（２００２）
【非特許文献５】Ｙａｍａｓｈｉｔａ，Ｔ．，Ｈｉｇｕｃｈｉ，Ｈ．＆Ｔｏｈｙａｍａ，Ｍ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１５７，５６５−５７０（２００２）
【非特許文献６】Ｗａｎｇ，Ｋ．Ｃ．＆Ｋｉｍ，Ｊ．Ａ．，Ｓｉｖａｓａｎｋａｒａｎ，Ｒ．，Ｓｅｇａｌ，Ｒ．＆Ｈｅ，Ｚ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４２０，７４−７８（２００２）
【非特許文献７】Ｗｏｎｇ，Ｓ．Ｔ．ｅｔ．ａｌ．，Ｎａｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．５，１３０２−１３０８（２００２）
【非特許文献８】Ｓａｓａｋｉ，Ｔ．＆Ｔａｋａｉ，Ｙ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．２４５，６４１−６４５（１９９８）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
以上にかんがみて、本発明は、神経突起伸展の阻害に関連するｐ７５とその相互作用因子との関係を明らかにすることによって、神経の再生を導き、さらにはその神経の再生に基づいて神経学的疾患を処置することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の開示）
上記課題は、一部、本発明者らが、ｐ７５を介したシグナル伝達経路の全容を解明したことに基づいて解決された。
【０００７】
本発明者らは、ｐ７５によるＲｈｏ活性の正確な調節機構を報告する。興味深いことに、ｐ７５は、Ｒｈｏ  ＧＤＩαからＲｈｏＡのＧＤＰ結合形態を外す活性を示す。ｐ７５と特異的に会合することが示されたペプチド（Ｐｅｐ５）は、ｐ７５によって媒介されるシグナルを効率的に阻害する。このペプチドは、ミエリン由来インヒビターによって誘発される成長阻害を反転させる際の有用な治療剤であり得る。
【０００８】
ニューロトロフィンレセプターｐ７５は、ニューロトロフィンならびにいくつかのミエリン成分（例えば、ミエリン結合糖タンパク質、Ｎｏｇｏおよび稀突起神経膠細胞ミエリン糖タンパク質を含む）による軸索伸長の調節に関与する。ニューロトロフィンは、Ｒｈｏ活性を阻害することによって神経突起伸展を刺激し、一方、ミエリン由来タンパク質は、ＲｈｏＡを活性化し、これらの両方ともが、ｐ７５依存性機構を介する。ここで、本発明者らは、Ｒｈｏ  ＧＤＰ解離抑制タンパク質とｐ７５との直接的な相互作用が、ＲｈｏＡの活性化を開始することを示す。ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用は、ミエリン結合タンパク質またはＮｏｇｏによって強化される。ｐ７５は、Ｒｈｏ  ＧＤＰ解離抑制因子からのプレニル化ＲｈｏＡの離脱を促進する。ｐ７５の６個のα−ヘリックスのうちの５番目と会合することが示されたペプチドリガンドは、Ｒｈｏ  ＧＤＰ解離抑制因子とｐ７５との間の相互作用を阻害し、従ってｐ７５によって媒介される作用をサイレンシングする。このペプチドは、中枢神経系の再生欠如の一因となる阻害合図に対する治療剤としての可能性、すなわち、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの間の相互作用を破壊する因子は、中枢神経系の再生欠如の一因となる阻害合図に対する治療剤としての可能性、脊髄損傷、アルツハイマー病、脳梗塞、脳出血、脳外傷などの治療剤としての可能性を有する。
【０００９】
このように、いくつかのミエリン由来タンパク質が、成体脊椎動物のＣＮＳ中の軸索再生を妨害する中枢神経系（ＣＮＳ）ミエリンの成分であると同定されている。ＲｈｏＡの活性化は、これらのタンパク質のシグナル伝達機構の重要な部分であることが示されている。さらに、本発明者らは、これらのタンパク質が軸索伸展を促進するかまたは阻害するかを決定する、さらなるシグナルをも同定した。ミエリン結合糖タンパク質（ＭＡＧ）およびＮｏｇｏは、細胞内Ｃａ２＋上昇およびＰＫＣの活性化を誘発し、これはおそらく、Ｇｉによって媒介される。ＭＡＧまたはＮｏｇｏによる軸索伸展阻害および成長円錐の破壊は、ＰＫＣの阻害によって軸索伸長および成長円錐の拡大に変わり得るが、イノシトール１，４，５−三リン酸（ＩＰ３）の阻害によっては変わらない。逆に、ＭＡＧによって促進される未成熟ニューロンの軸索成長は、ＩＰ３を阻害することによって破壊される。ＲｈｏＡの活性化は、ＰＫＣ非依存性である。従って、ＰＫＣとＩＰ３との間のバランスは、ミエリン由来タンパク質による軸索再生の双方向調節に対して重要であり得ることが判明した。したがって、本発明は、ＰＫＣとＩＰ３との間のバランスを調節することによって、ｐ７５シグナル伝達経路の調節による神経再生の調節をさらに、コントロールすることができることが判明した。このようにＰＫＣおよび／またはＩＰ３の調節は、他のｐ７５シグナル伝達経路の調節による神経再生の促進または阻害を増強または抑制することができ、よりきめ細かい神経再生のシステムを提供することができる。
【００１０】
従って、本発明は、以下を提供する。
【００１１】
（１）  神経を再生するための方法であって、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する工程を含む、方法。
【００１２】
（２）  上記ｐ７５シグナル伝達経路は、神経再生が所望される部位における神経細胞のものである、項目１に記載の方法。
【００１３】
（３）  上記ｐ７５シグナル伝達経路の阻害は、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子もしくはその改変体もしくはフラグメント、またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子に対して特異的に相互作用する因子を再生に有効な量で提供することによる、項目１に記載の方法。
【００１４】
（４）  上記ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子を含む、項目３に記載の方法。
【００１５】
（５）  上記ｐ７５シグナル伝達経路の阻害は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用の阻害、ＰＫＣの阻害、ＩＰ３の活性化、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の阻害、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の維持または強化、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換阻害、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用の阻害およびＲｈｏキナーゼの活性阻害からなる群より選択される、項目１に記載の方法。
【００１６】
（６）  上記ｐ７５シグナル伝達経路の阻害は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用を抑制または消失する因子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用を抑制または消失する因子、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を維持または強化する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換を阻害する因子、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用を阻害する因子、およびＲｈｏキナーゼの活性を阻害する因子からなる群より選択される少なくとも１つの因子を再生に有効な量で提供することによる、項目１に記載の方法。
【００１７】
（７）  上記神経の再生は、インビボまたはインビトロで行われる、項目１に記載の方法。
【００１８】
（８）  上記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、項目１に記載の方法。
【００１９】
（９）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する工程は、再生に有効な量の、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される少なくとも１つの分子を含む組成物を上記神経に与える工程、
を包含する、項目１に記載の方法。
【００２０】
（１０）  上記因子は、ＰＴＤドメインに結合する、項目４に記載の方法。
【００２１】
（１１）  神経疾患、神経障害および／または神経の状態を、処置、予防、診断または予後する方法であって、上記処置、予防、診断または予後を必要とするかまたはそのことが予想される被検体においてｐ７５シグナル伝達経路を調節する工程を包含する、方法。
【００２２】
（１２）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を調節する工程は、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子もしくはその改変体もしくはフラグメント、またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子に対して特異的に相互作用する因子を再生に有効な量で、上記処置、予防、診断または予後を必要とするかまたはそのことが予想される被検体に投与する工程を包含する、項目１１に記載の方法。
【００２３】
（１３）  上記ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子を含む、項目１１に記載の方法。
【００２４】
（１４）  上記ｐ７５シグナル伝達経路の調節は、上記処置、予防、診断または予後を必要とするかまたはそのことが予想される被検体における、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用の阻害、ＰＫＣの阻害、ＩＰ３の活性化、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の阻害、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の維持または強化、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換阻害、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用の阻害およびＲｈｏキナーゼの活性阻害からなる群より選択される調節を少なくとも１つ包含する、項目１１に記載の方法。
【００２５】
（１５）  上記ｐ７５シグナル伝達経路の調節は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用を抑制または消失する因子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用を抑制または消失する因子、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を維持または強化する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換を阻害する因子、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用を阻害する因子、およびＲｈｏキナーゼの活性を阻害する因子からなる群より選択される少なくとも１つの因子を再生に有効な量で、上記処置、予防、診断または予後を必要とするかまたはそのことが予想される被検体に投与する工程を包含する、項目１１に記載の方法。
【００２６】
（１６）  上記神経の再生は、インビボまたはインビトロで行われる、項目１１に記載の方法。
【００２７】
（１７）  上記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、項目１１に記載の方法。
【００２８】
（１８）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を調節する工程は、診断、予防、処置または予後に有効な量のＰｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される少なくとも１つの分子を含む組成物を上記神経に与える工程、
を包含する、項目１１に記載の方法。
【００２９】
（１９）  さらに、１以上の薬剤を提供する工程をさらに包含する、項目１１に記載の方法。
【００３０】
（２０）  上記因子は、ＰＴＤドメインに結合する、項目１３に記載の方法。
【００３１】
（２１）  ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子を含む、組成物。
【００３２】
（２２）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、神経再生が所望される部位における神経細胞に送達されるのに適切な形態である、項目２１に記載の組成物。
【００３３】
（２３）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子もしくはその改変体もしくはフラグメント、またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子に対して特異的に相互作用する因子を含む、項目２１に記載の組成物。
【００３４】
（２４）  上記ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子を含む、項目２３に記載の組成物。
【００３５】
（２５）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用の阻害、ＰＫＣの阻害、ＩＰ３の活性化、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の阻害、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の維持または強化、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換阻害、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用の阻害およびＲｈｏキナーゼの活性阻害からなる群より選択される少なくとも１つの作用を有する、項目２１に記載の組成物。
【００３６】
（２６）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用を抑制または消失する因子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用を抑制または消失する因子、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を維持または強化する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換を阻害する因子、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用を阻害する因子、およびＲｈｏキナーゼの活性を阻害する因子からなる群より選択される少なくとも１つの因子を含み、上記ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、再生に有効な量で存在する、項目２１に記載の組成物。
【００３７】
（２７）  上記組成物は、インビボまたはインビトロでの投与形態に適切である、項目２１に記載の組成物。
【００３８】
（２８）  上記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、項目２１に記載の組成物。
【００３９】
（２９）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される少なくとも１つの分子を含む、項目２１に記載の組成物。
【００４０】
（３０）  上記因子は、ＰＴＤドメインに結合する、項目２１に記載の組成物。
【００４１】
（３１）  神経疾患、神経障害および／または神経の状態を、処置、予防、診断または予後するための組成物であって、ｐ７５シグナル伝達経路を調節する因子を含む、組成物。
【００４２】
（３２）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を調節する因子は、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子もしくはその改変体もしくはフラグメント、またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子に対して特異的に相互作用する因子を含む、項目３１に記載の組成物。
【００４３】
（３３）  上記ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子を含む、項目３１に記載の組成物。
【００４４】
（３４）  上記ｐ７５シグナル伝達経路の調節は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用の阻害、ＰＫＣの阻害、ＩＰ３の活性化、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の阻害、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の維持または強化、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換阻害、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用の阻害およびＲｈｏキナーゼの活性阻害からなる群より選択される、項目３１に記載の組成物。
【００４５】
（３５）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を調節する因子は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用を抑制または消失する因子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用を抑制または消失する因子、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を維持または強化する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換を阻害する因子、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用を阻害する因子、およびＲｈｏキナーゼの活性を阻害する因子からなる群より選択される少なくとも１つの因子を含む、項目３１に記載の組成物。
【００４６】
（３６）  経口または非経口での投与に適した形態である、項目３１に記載の組成物。
【００４７】
（３７）  上記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、項目３１に記載の組成物。
【００４８】
（３８）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を調節する因子は、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される少なくとも１つの分子を含む、項目３１に記載の組成物。
【００４９】
（３９）  さらに、１以上のさらなる薬剤を含む、項目３１に記載の組成物。
【００５０】
（４０）  上記因子は、ＰＴＤドメインに結合する、項目３１に記載の組成物。
【００５１】
（４１）  神経を再生するための組成物であって、Ｐｅｐ５ポリペプチドを含む、組成物。
【００５２】
（４２）  上記Ｐｅｐ５ポリペプチドは、
（ａ）配列番号１に記載の核酸配列もしくはそのフラグメントによってコードされる、ポリペプチド；
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列もしくはそのフラグメントを有する、ポリペプチド；
（ｃ）配列番号２に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する、改変体ポリペプチド；または
（ｄ）（ａ）〜（ｃ）のいずれか１つのポリペプチドのアミノ酸配列に対する同一性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列からなり、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、
を含む、項目４１に記載の組成物。
【００５３】
（４３）  上記Ｐｅｐ５ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列の全範囲を含む、項目４１に記載の組成物。
【００５４】
（４４）  上記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、項目４１に記載の組成物。
【００５５】
（４５）  上記Ｐｅｐ５ポリペプチドは、さらに、ＰＴＤドメインを含む、項目４１に記載の組成物。
【００５６】
（４６）  神経を再生するための組成物であって、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子を含む、組成物。
【００５７】
（４７）  上記Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子は、
（ａ）配列番号１に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有する、ポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列またはそのフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド、
（ｃ）配列番号２に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；
（ｄ）（ａ）〜（ｃ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；または
（ｅ）（ａ）〜（ｃ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
を含む、項目４６に記載の組成物。
【００５８】
（４８）  上記Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子は、配列番号１の核酸配列におけるヌクレオチド配列の全範囲を含む、項目４６に記載の組成物。
【００５９】
（４９）  上記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、項目４６に記載の組成物。
【００６０】
（５０）  上記Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子は、ＰＴＤドメインをコードする配列を含む、項目４１に記載の組成物。
【００６１】
（５１）  神経を再生するための組成物であって、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子を含む、組成物。
【００６２】
（５２）  上記ｐ７５ポリペプチドは、
（ａ）配列番号３または１６に記載の核酸配列もしくはそのフラグメントによってコードされる、ポリペプチド；
（ｂ）配列番号４または１７に記載のアミノ酸配列もしくはそのフラグメントを有する、ポリペプチド；
（ｃ）配列番号４または１７に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する、改変体ポリペプチド；
（ｄ）配列番号３または１６に記載の塩基配列のスプライス改変体もしくは対立遺伝子改変体によってコードされる、ポリペプチド；
（ｅ）配列番号４または１７に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドの、種相同体ポリペプチド；または
（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリペプチドのアミノ酸配列に対する同一性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列からなり、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、
を含む、項目５１に記載の組成物。
【００６３】
（５３）  上記ｐ７５ポリペプチドは、配列番号４または１７のアミノ酸配列のうち、それぞれ２７３位〜４２７位または２７４位〜４２５位の範囲を含む、項目５１に記載の組成物。
【００６４】
（５４）  上記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、項目５１に記載の組成物。
【００６５】
（５５）  上記因子は、抗体を含む、項目５１に記載の組成物。
【００６６】
（５６）  神経を再生するための組成物であって、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子を含む、組成物。
【００６７】
（５７）  上記ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子は、
（ａ）配列番号３または１６に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有する、ポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号４または１７に記載のアミノ酸配列またはそのフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド、
（ｃ）配列番号４または１７に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；
（ｄ）配列番号３または１６に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体である、ポリヌクレオチド；
（ｅ）配列番号４または１７に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドの種相同体をコードする、ポリヌクレオチド；
（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；または
（ｇ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
からなる群より選択される、ポリヌクレオチド、
を含む、項目５６に記載の組成物。
【００６８】
（５８）  上記ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子は、配列番号３または１６の核酸配列において、それぞれヌクレオチド１１１０位〜１２８３位または１１１３位〜１２７７位の範囲を含む、項目５６に記載の組成物。
【００６９】
（５９）  上記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、項目５６に記載の組成物。
【００７０】
（６０）  上記因子は、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子のアンチセンスまたはＲＮＡｉである、項目５６に記載の組成物。
【００７１】
（６１）  神経を再生するための組成物であって、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドを含む、組成物。
【００７２】
（６２）  上記ｐ７５細胞外ドメインは、
（ａ）配列番号３または１６に記載の核酸配列の、それぞれヌクレオチド１９８位〜８６３位または２０１位〜８６６位もしくはそのフラグメントによってコードされる、ポリペプチド；
（ｂ）配列番号４または１７に記載のアミノ酸配列の、それぞれアミノ酸２９位〜２５０位または３０位〜２５１位もしくはそのフラグメントを有する、ポリペプチド；
（ｃ）配列番号４または１７に記載のアミノ酸配列の、それぞれアミノ酸２９位〜２５０位または３０位〜２５１位において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する、改変体ポリペプチド
（ｄ）配列番号３または１６に記載の塩基配列の、それぞれヌクレオチド１９８位〜８６３位または２０１位〜８６６位のスプライス改変体もしくは対立遺伝子改変体の配列によってコードされる、ポリペプチド；
（ｅ）配列番号４または１７に記載のアミノ酸配列の、それぞれアミノ酸２９位〜２５０位または３０位〜２５１位を有するポリペプチドの、種相同体ポリペプチド；または
（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリペプチドのアミノ酸配列に対する同一性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列からなり、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、
を含む、項目６１に記載の組成物。
【００７３】
（６３）  上記ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドは、配列番号４または１７のアミノ酸配列において、それぞれアミノ酸２９位〜２５０位または３０位〜２５１位の範囲を含む、項目６１に記載の組成物。
【００７４】
（６４）  上記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、項目６１に記載の組成物。
【００７５】
（６５）  上記ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドは、可溶性である、項目６１に記載の組成物。
【００７６】
（６６）  神経を再生するための組成物であって、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子を含む、組成物。
【００７７】
（６７）  上記ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子は、
（ａ）配列番号３または１６に記載の塩基配列の、それぞれヌクレオチド１９８位〜８６３位または２０１位〜８６６位またはそのフラグメント配列を有する、ポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号４または１７に記載のアミノ酸配列の、それぞれアミノ酸２９位〜２５０位または３０位〜２５１位またはそのフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド、
（ｃ）配列番号４または１７に記載のアミノ酸配列の、それぞれアミノ酸２９位〜２５０位または３０位〜２５１位において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；
（ｄ）配列番号３または１６に記載の塩基配列の、それぞれヌクレオチド１９８位〜８６３位または２０１位〜８６６位のスプライス変異体または対立遺伝子変異体である、ポリヌクレオチド；
（ｅ）配列番号４または１７に記載のアミノ酸配列、それぞれアミノ酸２９位〜２５０位または３０位〜２５１位からなるポリペプチドの種相同体をコードする、ポリヌクレオチド；
（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；または
（ｇ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
からなる群より選択される、ポリヌクレオチド、
を含む、項目６６に記載の組成物。
【００７８】
（６８）  上記ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子は、配列番号３または１６の核酸配列において、それぞれヌクレオチド１９８位〜８６３位または２０１位〜８６６位の範囲を含む、項目６６に記載の組成物。
【００７９】
（６９）  上記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、項目６６に記載の組成物。
【００８０】
（７０）  上記ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドは、可溶性である、項目６６に記載の組成物。
【００８１】
（７１）  神経を再生するための組成物であって、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子を含む、組成物。
【００８２】
（７２）  上記Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドは、
（ａ）配列番号５に記載の核酸配列もしくはそのフラグメントによってコードされる、ポリペプチド；
（ｂ）配列番号６に記載のアミノ酸配列もしくはそのフラグメントを有する、ポリペプチド；
（ｃ）配列番号６に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する、改変体ポリペプチド
（ｄ）配列番号５に記載の塩基配列のスプライス改変体もしくは対立遺伝子改変体によってコードされる、ポリペプチド；
（ｅ）配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドの、種相同体ポリペプチド；または
（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリペプチドのアミノ酸配列に対する同一性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列からなり、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、
を含む、項目７１に記載の組成物。
【００８３】
（７３）  上記Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドは、配列番号６のアミノ酸配列の全範囲を含む、項目７１に記載の組成物。
【００８４】
（７４）  上記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、項目７１に記載の組成物。
【００８５】
（７５）  上記因子は、抗体を含む、項目７１に記載の組成物。
【００８６】
（７６）  神経を再生するための組成物であって、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子を含む、組成物。
【００８７】
（７７）  上記Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子は、
（ａ）配列番号５に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有する、ポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号６に記載のアミノ酸配列のアミノ酸またはそのフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド、
（ｃ）配列番号６に記載のアミノ酸配列のアミノ酸において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；
（ｄ）配列番号５に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体である、ポリヌクレオチド；
（ｅ）配列番号６に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドの種相同体をコードする、ポリヌクレオチド；
（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；または
（ｇ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
からなる群より選択される、ポリヌクレオチド、
を含む、項目７６に記載の組成物。
【００８８】
（７８）  上記Ｒｈｏ  ＧＤＩは、配列番号５の核酸配列の全範囲を含む、項目７６に記載の組成物。
【００８９】
（７９）  上記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、項目７６に記載の組成物。
【００９０】
（８０）  上記因子は、アンチセンス分子またはＲＮＡｉを含む、項目７６に記載の組成物。
【００９１】
（８１）  神経を再生するための組成物であって、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子を含む、組成物。
【００９２】
（８２）  上記ＭＡＧポリペプチドは、
（ａ）配列番号７に記載の核酸配列もしくはそのフラグメントによってコードされる、ポリペプチド；
（ｂ）配列番号８に記載のアミノ酸配列もしくはそのフラグメントを有する、ポリペプチド；
（ｃ）配列番号８に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する、改変体ポリペプチド
（ｄ）配列番号７に記載の塩基配列のスプライス改変体もしくは対立遺伝子改変体によってコードされる、ポリペプチド；
（ｅ）配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドの、種相同体ポリペプチド；または
（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリペプチドのアミノ酸配列に対する同一性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列からなり、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、
を含む、項目８１に記載の組成物。
【００９３】
（８３）  上記ＭＡＧポリペプチドは、配列番号８のアミノ酸配列の１位〜６２６位を含む、項目８１に記載の組成物。
【００９４】
（８４）  上記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、項目８１に記載の組成物。
【００９５】
（８５）  上記因子は、抗体を含む、項目８１に記載の組成物。
【００９６】
（８６）  神経を再生するための組成物であって、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子を含む、組成物。
【００９７】
（８７）  上記ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子は、
（ａ）配列番号７に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有する、ポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号８に記載のアミノ酸配列またはそのフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド；
（ｃ）配列番号８に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；
（ｄ）配列番号７に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体である、ポリヌクレオチド；
（ｅ）配列番号８に記載のアミノ酸配列のアミノ酸からなるポリペプチドの種相同体をコードする、ポリヌクレオチド；
（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；または
（ｇ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
からなる群より選択される、ポリヌクレオチド、
を含む、項目８６に記載の組成物。
【００９８】
（８８）  上記ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子は、配列番号７の核酸配列において、ヌクレオチド１位〜２４７５位の範囲を含む、項目８６に記載の組成物。
【００９９】
（８９）  上記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、項目８６に記載の組成物。
【０１００】
（９０）  上記因子は、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子のアンチセンスまたはＲＮＡｉである、項目８６に記載の組成物。
【０１０１】
（９１）  神経を再生するための組成物であって、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子を含む、組成物。
【０１０２】
（９２）  上記Ｒｈｏポリペプチドは、
（ａ）配列番号１１に記載の核酸配列もしくはそのフラグメントによってコードされる、ポリペプチド；
（ｂ）配列番号１２に記載のアミノ酸配列もしくはそのフラグメントを有する、ポリペプチド；
（ｃ）配列番号１２に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する、改変体ポリペプチド；
（ｄ）配列番号１１に記載の塩基配列のスプライス改変体もしくは対立遺伝子改変体によってコードされる、ポリペプチド；
（ｅ）配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドの、種相同体ポリペプチド；または
（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリペプチドのアミノ酸配列に対する同一性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列からなり、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、
を含む、項目９１に記載の組成物。
【０１０３】
（９３）  上記Ｒｈｏポリペプチドは、配列番号１２のアミノ酸の１位〜１９３位を含む、項目９１に記載の組成物。
【０１０４】
（９４）  上記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、項目９１に記載の組成物。
【０１０５】
（９５）  上記因子は、抗体を含む、項目９１に記載の組成物。
【０１０６】
（９６）  神経を再生するための組成物であって、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子を含む、組成物。
【０１０７】
（９７）  上記Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子は、
（ａ）配列番号１１に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有する、ポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号１２に記載のアミノ酸配列またはそのフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド；
（ｃ）配列番号１２に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；
（ｄ）配列番号１１に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体である、ポリヌクレオチド；
（ｅ）配列番号１２に記載のアミノ酸配列のアミノ酸からなるポリペプチドの種相同体をコードする、ポリヌクレオチド；
（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；または
（ｇ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
からなる群より選択される、ポリヌクレオチド、
を含む、項目９６に記載の組成物。
【０１０８】
（９８）  上記Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子は、配列番号１１のヌクレオチド１位〜５７９位を含む、項目９６に記載の組成物。
【０１０９】
（９９）  上記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、項目９６に記載の組成物。
【０１１０】
（１００）  上記因子は、アンチセンス分子またはＲＮＡｉを含む、項目９６に記載の組成物。
【０１１１】
（１０１）  神経を再生するための組成物であって、Ｒｈｏキナーゼポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子を含む、組成物。
【０１１２】
（１０２）  上記Ｒｈｏキナーゼポリペプチドは、
（ａ）配列番号１８に記載の核酸配列もしくはそのフラグメントによってコードされる、ポリペプチド；
（ｂ）配列番号１９に記載のアミノ酸配列もしくはそのフラグメントを有する、ポリペプチド；
（ｃ）配列番号１９に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する、改変体ポリペプチド
（ｄ）配列番号１８に記載の塩基配列のスプライス改変体もしくは対立遺伝子改変体によってコードされる、ポリペプチド；
（ｅ）配列番号１９に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドの、種相同体ポリペプチド；または
（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリペプチドのアミノ酸配列に対する同一性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列からなり、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、
を含む、項目１０１に記載の組成物。
【０１１３】
（１０３）  上記Ｒｈｏキナーゼポリペプチドは、配列番号１９のアミノ酸１位〜１３８８位を含む、項目１０１に記載の組成物。
【０１１４】
（１０４）  上記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、項目１０１に記載の組成物。
【０１１５】
（１０５）  上記因子は、抗体を含む、項目１０１に記載の組成物。
【０１１６】
（１０６）  神経を再生するための組成物であって、Ｒｈｏキナーゼポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子を含む、組成物。
【０１１７】
（１０７）  上記Ｒｈｏキナーゼポリペプチドをコードする核酸分子は、
（ａ）配列番号１８に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有する、ポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号１９に記載のアミノ酸配列またはそのフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド、
（ｃ）配列番号１９に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；
（ｄ）配列番号１８に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体である、ポリヌクレオチド；
（ｅ）配列番号１９に記載のアミノ酸配列のアミノ酸からなるポリペプチドの種相同体をコードする、ポリヌクレオチド；
（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；または
（ｇ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
からなる群より選択される、ポリヌクレオチド、
を含む、項目１０６に記載の組成物。
【０１１８】
（１０８）  上記Ｒｈｏキナーゼポリペプチドをコードする核酸分子は、配列番号１８のヌクレオチド１位〜４１６４位を含む、項目１０６に記載の組成物。
【０１１９】
（１０９）  上記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、項目１０６に記載の組成物。
【０１２０】
（１１０）  上記因子は、アンチセンス分子またはＲＮＡｉを含む、項目１０６に記載の組成物。
【０１２１】
（１１１）  神経を再生するための組成物であって、ｐ２１ポリペプチドを含む、組成物。
【０１２２】
（１１２）  上記ｐ２１ポリペプチドは、
（ａ）配列番号１３または配列番号２２に記載の核酸配列もしくはそのフラグメントによってコードされる、ポリペプチド；
（ｂ）配列番号１４または配列番号２３に記載のアミノ酸配列もしくはそのフラグメントを有する、ポリペプチド；
（ｃ）配列番号１４または配列番号２３に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する、改変体ポリペプチド
（ｄ）配列番号１３または配列番号２２に記載の塩基配列のスプライス改変体もしくは対立遺伝子改変体によってコードされる、ポリペプチド；
（ｅ）配列番号１４または配列番号２３に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドの、種相同体ポリペプチド；または
（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリペプチドのアミノ酸配列に対する同一性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列からなり、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、
を含む、項目１１１に記載の組成物。
【０１２３】
（１１３）  上記ｐ２１ポリペプチドは、配列番号１４または配列番号２３のアミノ酸の１位〜１４０位を含む、項目１１１に記載の組成物。
【０１２４】
（１１４）  上記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、項目１１１に記載の組成物。
【０１２５】
（１１５）  上記ｐ２１ポリペプチドは、さらに、ＰＴＤドメインを含む、項目１１１に記載の組成物。
【０１２６】
（１１６）  上記ＰＴＤドメインは、ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲまたはその１つ以上の置換、付加および／もしくは欠失を含むアミノ酸配列を有する、項目１１５に記載の組成物。
【０１２７】
（１１７）  上記ＰＴＤドメインは、上記ｐ２１ポリペプチドのＣ末端側またはＮ末端側に配置される、項目１１５に記載の組成物。
【０１２８】
（１１８）  上記ｐ２１ポリペプチドは、核移行ドメインを実質的に含まない、項目１１１に記載の組成物。
【０１２９】
（１１９）  上記ｐ２１ポリペプチドは、さらに、ＰＴＤドメインを含み、かつ、上記ｐ２１ポリペプチドは、核移行ドメインを実質的に含まない、項目１１１に記載の組成物。
【０１３０】
（１２０）  上記ｐ２１ポリペプチドは、さらに、ＰＴＤドメインを含み、かつ、上記ｐ２１ポリペプチドは、核移行ドメインを実質的に含まず、上記ＰＴＤドメインは上記ｐ２１ポリペプチドのＣ末端側に配置される、項目１１１に記載の組成物。
【０１３１】
（１２１）  神経を再生するための組成物であって、ｐ２１ポリペプチドをコードする核酸分子を含む、組成物。
【０１３２】
（１２２）  上記ｐ２１ポリペプチドをコードする核酸分子は、
（ａ）配列番号１３または配列番号２２に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有する、ポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号１４または配列番号２３に記載のアミノ酸配列またはそのフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド；
（ｃ）配列番号１４または配列番号２３に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；
（ｄ）配列番号１３または配列番号２２に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体である、ポリヌクレオチド；
（ｅ）配列番号１４または配列番号２３に記載のアミノ酸配列のアミノ酸からなるポリペプチドの種相同体をコードする、ポリヌクレオチド；
（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；または
（ｇ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
からなる群より選択される、ポリヌクレオチド、
を含む、項目１２１に記載の組成物。
【０１３３】
（１２３）  上記ｐ２１ポリペプチドをコードする核酸分子は、配列番号１３または配列番号２２の塩基配列の１位〜４２０位を含む、項目１２１に記載の組成物。
【０１３４】
（１２４）  上記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、項目１２１に記載の組成物。
【０１３５】
（１２５）  上記ｐ２１ポリペプチドをコードする核酸分子は、さらに、ＰＴＤドメインをコードする因子を含む、項目１２１に記載の組成物。
【０１３６】
（１２６）  上記ＰＴＤドメインは、ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲまたはその１つ以上の置換、付加および／もしくは欠失を含むアミノ酸配列を有する、項目１２５に記載の組成物。
【０１３７】
（１２７）  上記ＰＴＤドメインをコードする配列は、上記ｐ２１ポリペプチドをコードする配列の５’末端側または３’末端側に配置される、項目１２５に記載の組成物。
【０１３８】
（１２８）  上記ｐ２１ポリペプチドをコードする核酸分子は、核移行ドメインをコードする配列を実質的に含まない、項目１２１に記載の組成物。
【０１３９】
（１２９）  上記ｐ２１ポリペプチドをコードする核酸分子は、さらに、ＰＴＤドメインをコードする配列を含み、かつ、上記ｐ２１ポリペプチドをコードする核酸分子は、核移行ドメインをコードする配列を実質的に含まない、項目１２１に記載の組成物。
【０１４０】
（１３０）  上記ｐ２１ポリペプチドをコードする核酸分子は、さらに、ＰＴＤドメインをコードする配列を含み、かつ、上記ｐ２１ポリペプチドをコードする核酸分子は、核移行ドメインをコードする配列を実質的に含まず、上記ＰＴＤドメインをコードする配列は上記ｐ２１ポリペプチドをコードする核酸分子の３’末端側に配置される、項目１２１に記載の組成物。
【０１４１】
（１３１）  ＰＴＤドメインおよび神経再生因子を含む、神経を再生するための組成物。
【０１４２】
（１３２）  上記神経再生因子は、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する、項目１３１に記載の組成物。
【０１４３】
（１３３）  上記神経再生因子は、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子もしくはその改変体もしくはフラグメント、またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子に対して特異的に相互作用する因子を含む、項目１３１に記載の組成物。
【０１４４】
（１３４）  上記ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子を含む、項目１３３に記載の組成物。
【０１４５】
（１３５）  上記神経再生因子は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用の阻害、ＰＫＣの阻害、ＩＰ３の活性化、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の阻害、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の維持または強化、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換阻害、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用の阻害およびＲｈｏキナーゼの活性阻害からなる群より選択される少なくとも１つの作用を有する、項目１３１に記載の組成物。
【０１４６】
（１３６）  上記神経再生因子は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用を抑制または消失する因子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用を抑制または消失する因子、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を維持または強化する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換を阻害する因子、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用を阻害する因子、およびＲｈｏキナーゼの活性を阻害する因子からなる群より選択される少なくとも１つの因子を含む、項目１３１に記載の組成物。
【０１４７】
（１３７）  上記神経再生因子は、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される因子を含む、項目１３１に記載の組成物。
【０１４８】
（１３８）  上記ＰＴＤドメインは、ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲまたはその１つ以上の置換、付加および／もしくは欠失を含むアミノ酸配列を有する、項目１３１に記載の組成物。
【０１４９】
（１３９）  上記ＰＴＤドメインは、上記ｐ２１ポリペプチドのＣ末端側またはＮ末端側に配置される、項目１３１に記載の組成物。
【０１５０】
（１４０）  上記神経再生因子は、細胞質に留まり得る、項目１３１に記載の組成物。
【０１５１】
（１４１）  ＰＴＤドメインをコードする核酸配列および神経再生因子をコードする核酸配列を含む核酸分子を含む、神経を再生するための組成物。
【０１５２】
（１４２）  上記神経再生因子は、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する、項目１４１に記載の組成物。
【０１５３】
（１４３）  上記神経再生因子は、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子もしくはその改変体もしくはフラグメント、またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子に対して特異的に相互作用する因子を含む、項目１４１に記載の組成物。
【０１５４】
（１４４）  上記ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子を含む、項目１４３に記載の組成物。
【０１５５】
（１４５）  上記神経再生因子は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用の阻害、ＰＫＣの阻害、ＩＰ３の活性化、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の阻害、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の維持または強化、ＲｈｏＧＤＰからＲｈｏＧＴＰへの変換阻害、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用の阻害およびＲｈｏキナーゼの活性阻害からなる群より選択される少なくとも１つの作用を有する、項目１４１に記載の組成物。
【０１５６】
（１４６）  上記神経再生因子は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用を抑制または消失する因子、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用を抑制または消失する因子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用を抑制または消失する因子、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を維持または強化する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換を阻害する因子、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用を阻害する因子、およびＲｈｏキナーゼの活性を阻害する因子からなる群より選択される少なくとも１つの因子を含む、項目１４１に記載の組成物。
【０１５７】
（１４７）  上記神経再生因子は、Ｐｅｐ５ポリペプチド、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される因子を含む、項目１４１に記載の組成物。
【０１５８】
（１４８）  上記ＰＴＤドメインは、ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲまたはその１つ以上の置換、付加および／もしくは欠失を含むアミノ酸配列を有する、項目１４１に記載の組成物。
【０１５９】
（１４９）  上記ＰＴＤドメインをコードする核酸配列は、上記ｐ２１ポリペプチドの５’末端側または３’末端側に配置される、項目１４１に記載の組成物。
【０１６０】
（１５０）  上記神経再生因子は、細胞質中に留まり得る、項目１４１に記載の組成物。
【０１６１】
（１５１）  神経突起伸展の阻害を破壊または減少する方法であって、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する工程を含む、方法。
【０１６２】
（１５２）  上記ｐ７５シグナル伝達経路の阻害は、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子もしくはその改変体もしくはフラグメント、またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子に対して特異的に相互作用する因子を再生に有効な量で提供することによる、項目１５１に記載の方法。
【０１６３】
（１５３）  上記ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子を含む、項目１５１に記載の方法。
【０１６４】
（１５４）  上記ｐ７５シグナル伝達経路の阻害は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用の阻害、ＰＫＣの阻害、ＩＰ３の活性化、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の阻害、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の維持または強化、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換阻害、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用の阻害およびＲｈｏキナーゼの活性阻害からなる群より選択される、項目１５１に記載の方法。
【０１６５】
（１５５）  上記ｐ７５シグナル伝達経路の阻害は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用を抑制または消失する因子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用を抑制または消失する因子、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を維持または強化する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換を阻害する因子、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用を阻害する因子、およびＲｈｏキナーゼの活性を阻害する因子からなる群より選択される少なくとも１つの因子を再生に有効な量で提供することによる、項目１５１に記載の方法。
【０１６６】
（１５６）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する工程は、再生に有効な量の、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される少なくとも１つの分子を含む組成物を上記神経に与える工程、
を包含する、項目１５１に記載の方法。
【０１６７】
（１５７）  上記因子は、ＰＴＤドメインに結合する、項目１５３に記載の方法。
【０１６８】
（１５８）  ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子を含む、神経突起伸展の阻害を破壊または減少する組成物。
【０１６９】
（１５９）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、神経再生が所望される部位における神経細胞に送達されるのに適切な形態である、項目１５８に記載の組成物。
【０１７０】
（１６０）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子もしくはその改変体もしくはフラグメント、またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子に対して特異的に相互作用する因子を含む、項目１５８に記載の組成物。
【０１７１】
（１６１）  上記ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子を含む、項目１６０に記載の組成物。
【０１７２】
（１６２）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用の阻害、ＰＫＣの阻害、ＩＰ３の活性化、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の阻害、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の維持または強化、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換阻害、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用の阻害およびＲｈｏキナーゼの活性阻害からなる群より選択される少なくとも１つの作用を有する、項目１５８に記載の組成物。
【０１７３】
（１６３）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用を抑制または消失する因子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用を抑制または消失する因子、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を維持または強化する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換を阻害する因子、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用を阻害する因子、およびＲｈｏキナーゼの活性を阻害する因子からなる群より選択される少なくとも１つの因子を含み、上記上記ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、再生に有効な量で存在する、項目１５８に記載の組成物。
【０１７４】
（１６４）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される少なくとも１つの分子を含む、項目１５８に記載の組成物。
【０１７５】
（１６５）  上記因子は、ＰＴＤドメインに結合する、項目１５８に記載の組成物。
【０１７６】
（１６６）  神経細胞のネットワークを構築するための方法であって、上記神経細胞におけるｐ７５シグナル伝達経路を阻害する工程を含む、方法。
【０１７７】
（１６７）  上記ｐ７５シグナル伝達経路の阻害は、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子もしくはその改変体もしくはフラグメント、またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子に対して特異的に相互作用する因子を再生に有効な量で上記神経細胞に提供することによる、項目１６６に記載の方法。
【０１７８】
（１６８）  上記ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子を含む、項目１６６に記載の方法。
【０１７９】
（１６９）  上記ｐ７５シグナル伝達経路の阻害は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用の阻害、ＰＫＣの阻害、ＩＰ３の活性化、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の阻害、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の維持または強化、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換阻害、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用の阻害およびＲｈｏキナーゼの活性阻害からなる群より選択される、項目１６６に記載の方法。
【０１８０】
（１７０）  上記ｐ７５シグナル伝達経路の阻害は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用を抑制または消失する因子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用を抑制または消失する因子、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を維持または強化する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換を阻害する因子、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用を阻害する因子、およびＲｈｏキナーゼの活性を阻害する因子からなる群より選択される少なくとも１つの因子を再生に有効な量で提供することによる、項目１６６に記載の方法。
【０１８１】
（１７１）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する工程は、再生に有効な量の、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される少なくとも１つの分子を含む組成物を上記神経に与える工程、
を包含する、項目１６６に記載の方法。
【０１８２】
（１７２）  上記因子は、ＰＴＤドメインに結合する、項目１６７に記載の方法。
【０１８３】
（１７３）  ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子を含む、神経細胞のネットワークを構築するための組成物。
【０１８４】
（１７４）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子もしくはその改変体もしくはフラグメント、またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子に対して特異的に相互作用する因子を含む、項目１７３に記載の組成物。
【０１８５】
（１７５）  上記ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子を含む、項目１７４に記載の組成物。
【０１８６】
（１７６）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用の阻害、ＰＫＣの阻害、ＩＰ３の活性化、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の阻害、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の維持または強化、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換阻害、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用の阻害およびＲｈｏキナーゼの活性阻害からなる群より選択される少なくとも１つの作用を有する、項目１７３に記載の組成物。
【０１８７】
（１７７）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用を抑制または消失する因子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用を抑制または消失する因子、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を維持または強化する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換を阻害する因子、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用を阻害する因子、およびＲｈｏキナーゼの活性を阻害する因子からなる群より選択される少なくとも１つの因子を含み、上記上記ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、再生に有効な量で存在する、項目１７３に記載の組成物。
【０１８８】
（１７８）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される少なくとも１つの分子を含む、項目１７３に記載の組成物。
【０１８９】
（１７９）  上記因子は、ＰＴＤドメインに結合する、項目１７４に記載の組成物。
【０１９０】
（１８０）  神経学的疾患を処置するためのキットであって、
（Ａ）ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子を含む組成物によって再生された細胞集団；
（Ｂ）上記細胞集団を保存するための容器
を包含する、キット。
【０１９１】
（１８１）  上記上記ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子もしくはその改変体もしくはフラグメント、またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子に対して特異的に相互作用する因子を含む、項目１８０に記載のキット。
【０１９２】
（１８２）  上記ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子を含む、項目１８１に記載のキット。
【０１９３】
（１８３）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用の阻害、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用の阻害、ＰＫＣの阻害、ＩＰ３の活性化、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の阻害、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の維持または強化、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換阻害、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用の阻害およびＲｈｏキナーゼの活性阻害からなる群より選択される少なくとも１つの作用を有する、項目１８０に記載のキット。
【０１９４】
（１８４）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用を抑制または消失する因子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用を抑制または消失する因子、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を維持または強化する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換を阻害する因子、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用を阻害する因子、およびＲｈｏキナーゼの活性を阻害する因子からなる群より選択される少なくとも１つの因子を含み、上記ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、再生に有効な量で存在する、項目１８０に記載のキット。
【０１９５】
（１８５）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される少なくとも１つの分子を含む、項目１８０に記載のキット。
【０１９６】
（１８６）  上記因子は、ＰＴＤドメインに結合する、項目１８１に記載のキット。
【０１９７】
（１８７）  神経学的疾患を処置するための方法であって、上記方法は、以下：
（ａ）ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子を含む組成物によって再生された細胞集団を提供する工程；および
（ｂ）上記細胞集団を上記患者に移植する工程、
を包含する、方法。
【０１９８】
（１８８）  上記ｐ７５シグナル伝達経路の阻害は、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子もしくはその改変体もしくはフラグメント、またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子に対して特異的に相互作用する因子を再生に有効な量で上記神経細胞に提供することによる、項目１８７に記載の方法。
【０１９９】
（１８９）  上記ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子を含む、項目１８８に記載の方法。
【０２００】
（１９０）  上記ｐ７５シグナル伝達経路の阻害は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用の阻害、ＰＫＣの阻害、ＩＰ３の活性化、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の阻害、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の維持または強化、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換阻害、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用の阻害およびＲｈｏキナーゼの活性阻害からなる群より選択される、項目１８７に記載の方法。
【０２０１】
（１９１）  上記ｐ７５シグナル伝達経路の阻害は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用を抑制または消失する因子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用を抑制または消失する因子、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を維持または強化する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換を阻害する因子、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用を阻害する因子、およびＲｈｏキナーゼの活性を阻害する因子からなる群より選択される少なくとも１つの因子を再生に有効な量で提供することによる、項目１８７に記載の方法。
【０２０２】
（１９２）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する工程は、再生に有効な量の、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される少なくとも１つの分子を含む組成物を上記神経に与える工程、
を包含する、項目１８７に記載の方法。
【０２０３】
（１９３）  上記因子は、ＰＴＤドメインに結合する、項目１８８に記載の方法。
【０２０４】
（１９４）  神経再生を誘導する因子を同定するためのスクリーニング方法であって、上記方法は、以下：
（ａ）ｐ７５シグナル伝達経路において相互作用する少なくとも２つの因子を、試験因子の存在下で接触させる工程、および
（ｂ）上記試験因子の存在下における少なくとも２つの相互作用する因子の間の相互作用レベルを、上記試験因子の非存在下における相互作用レベルと比較する工程、
を包含し、
ここで、上記試験因子の非存在下と比較して、試験因子の存在下において相互作用が減少した場合、上記試験因子は、神経を再生するための因子として同定される、方法。
【０２０５】
（１９５）  上記相互作用は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用およびＲｈｏキナーゼの活性からなる群より選択される少なくとも１つの相互作用を含み、
上記相互作用の減少は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用の阻害、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の阻害、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の維持または強化、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換阻害、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用の阻害およびＲｈｏキナーゼの活性阻害からなる群より選択される少なくとも１つの作用を含む、項目１９４に記載の方法。
【０２０６】
（１９６）  上記少なくとも２つの因子は、配列番号４または１７に少なくとも７０％相同性であるアミノ酸配列を有する第１のポリペプチドまたはそのフラグメントおよび配列番号６に少なくとも７０％相同性であるアミノ酸配列を有する第２のポリペプチドまたはそのフラグメントを含み、
上記比較工程（ｂ）は、上記試験因子の存在下における第１のポリペプチドと上記第２のポリペプチドとの間の結合レベルを、上記試験因子の非存在下における上記第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとの間の結合レベルと比較することを含む、項目１９４に記載の方法。
【０２０７】
（１９７）  項目１９４に記載の方法によって同定される、調節因子。
【０２０８】
（１９８）  項目１９７に記載の調節因子を含む、薬学的組成物。
【０２０９】
（１９９）  神経学的疾患、障害または状態を、予防または処置する方法であって、上記方法は、項目１９８に記載の薬学的組成物を被験体に投与する工程を包含する、方法。
【０２１０】
（２００）  ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏをコードする核酸分子、ｐ２１をコードする核酸分子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子からなる群より選択される少なくとも１つの核酸分子の配列において野生型とは異なる配列が導入された配列を有する核酸分子を含む、ベクター。
【０２１１】
（２０１）  項目２００に記載のベクターを含む、細胞。
【０２１２】
（２０２）  項目２００に記載のベクターを含む、組織。
【０２１３】
（２０３）  項目２００に記載のベクターを含む、臓器。
【０２１４】
（２０４）  項目２００に記載のベクターを含む、生物。
【０２１５】
（２０５）  項目２００に記載のベクターで形質転換された、神経改変トランスジェニック動物。
【０２１６】
（２０６）  ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏをコードする核酸分子、ｐ２１をコードする核酸分子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子からなる群より選択される少なくとも１つの核酸分子が欠失された、神経改変ノックアウト動物。
【０２１７】
（２０７）  神経の再生を調節する方法であって、ｐ７５シグナル伝達経路を調節する工程を含む、方法。
【０２１８】
（２０８）  さらに、ＰＫＣおよびＩＰ３からなる群より選択される少なくとも１つの因子を調節する工程を包含する、項目２０７に記載の方法。
【０２１９】
（２０９）  ＰＫＣおよびＩＰ３の両方の因子を調節する因子をさらに包含する、項目２０７に記載の方法。
【０２２０】
（２１０）  ＰＫＣを阻害する工程を包含する、項目２０７に記載の方法。
【０２２１】
（２１１）  ＩＰ３を活性化する工程を包含する、項目２０７に記載の方法。
【０２２２】
（２１２）  上記ｐ７５シグナル伝達経路の調節は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子の調節を含む、項目２０７に記載の方法。
【０２２３】
（２１３）  上記ｐ７５シグナル伝達経路の調節は、ＲｈｏＡの調節を含む、項目２０７に記載の方法。
【０２２４】
（２１４）  上記ｐ７５シグナル伝達経路の調節は、ＲｈｏＡの活性化およびＰＫＣの阻害を含み、上記神経の再生の調節は神経の再生の活性化である、項目２０７に記載の方法。
【０２２５】
（２１５）  さらにＩＰ３を活性化することを包含する、項目２１４に記載の方法。
【０２２６】
（２１６）  上記ＰＫＣを調節する工程は、ＭＡＧ、Ｎｏｇｏおよびｐ７５からなる群より選択される少なくとも１つの因子を調節する工程を含む、項目２０７に記載の方法。
【０２２７】
（２１７）  上記ＩＰ３を調節する工程は、ＭＡＧ、Ｎｏｇｏおよびｐ７５からなる群より選択される少なくとも１つの因子を調節する工程を含む、項目２０７に記載の方法。
【０２２８】
（２１８）  上記神経の再生は、インビボまたはインビトロで行われる、項目２０７に記載の方法。
【０２２９】
（２１９）  上記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、項目２０７に記載の方法。
【０２３０】
（２２０）  上記因子は、ＰＴＤドメインに結合する、項目２０８に記載の方法。
【０２３１】
（２２１）  神経障害および／または神経の状態を、処置、予防、診断または予後する方法であって、上記処置、予防、診断または予後を必要とするかまたはそのことが予想される被検体において、ｐ７５シグナル伝達経路を調節する工程を含み、ここで、上記ｐ７５伝達経路の伝達因子が、ＰＫＣおよびＩＰ３を含む、方法。
【０２３２】
（２２２）  さらに、ＰＫＣおよびＩＰ３からなる群より選択される少なくとも１つの因子を調節する工程を包含する、項目２２１に記載の方法。
【０２３３】
（２２３）  ＰＫＣおよびＩＰ３の両方を調節する工程をさらに包含する、項目２２１に記載の方法。
【０２３４】
（２２４）  ＰＫＣを阻害する工程をさらに包含する、項目２２１に記載の方法。
【０２３５】
（２２５）  ＩＰ３を活性化する工程をさらに包含する、項目２２１に記載の方法。
【０２３６】
（２２６）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を調節する工程は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子の調節を含む、項目２２１に記載の方法。
【０２３７】
（２２７）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を調節する工程は、ＲｈｏＡの調節を含む、項目２２１に記載の方法。
【０２３８】
（２２８）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を調節する工程は、ＲｈｏＡの活性化およびＰＫＣの阻害を含み、上記神経の再生の調節は神経の再生の活性化である、項目２２１に記載の方法。
【０２３９】
（２２９）  さらにＩＰ３を活性化することを包含する、項目２２８に記載の方法。
【０２４０】
（２３０）  上記ＰＫＣを調節する工程は、ＭＡＧ、Ｎｏｇｏおよびｐ７５からなる群より選択される、少なくとも１つの因子の調節を含む、項目２２２に記載の方法。
【０２４１】
（２３１）  上記ＩＰ３を調節する工程は、ＭＡＧ、Ｎｏｇｏおよびｐ７５からなる群より選択される、少なくとも１つの因子の調節を含む、項目２２２に記載の方法。
【０２４２】
（２３２）  上記神経の再生は、インビボまたはインビトロで行われる、項目２２１に記載の方法。
【０２４３】
（２３３）  上記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、項目２２１に記載の方法。
【０２４４】
（２３４）  上記因子は、ＰＴＤドメインに結合する、項目２０８に記載の方法。
【０２４５】
（２３５）  神経の再生を調節するための組成物であって、ｐ７５シグナル伝達経路を調節する因子を含む、組成物。
【０２４６】
（２３６）  さらに、ＰＫＣを調節する因子およびＩＰ３を調節する因子からなる群より選択される少なくとも１つの因子を含む、項目２３５に記載の組成物。
【０２４７】
（２３７）  ＰＫＣを調節する因子およびＩＰ３を調節する因子の両方をさらに含む、項目２３５に記載の組成物。
【０２４８】
（２３８）  ＰＫＣを阻害する因子を含む、項目２３５に記載の組成物。
【０２４９】
（２３９）  ＩＰ３を活性化する因子を含む、項目２３５に記載の組成物。
【０２５０】
（２４０）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を調節する因子は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子の調節因子を含む、項目２３５に記載の組成物。
【０２５１】
（２４１）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を調節する因子は、ＲｈｏＡの調節因子を含む、項目２３５に記載の組成物。
【０２５２】
（２４２）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を調節因子は、ＲｈｏＡの活性化因子およびＰＫＣの阻害因子を含み、上記神経の再生の調節は神経の再生の活性化である、項目２３５に記載の組成物。
【０２５３】
（２４３）  さらにＩＰ３の活性化因子を含む、項目２４２に記載の組成物。
【０２５４】
（２４４）  上記ＰＫＣの調節因子は、ＭＡＧ、Ｎｏｇｏおよびｐ７５からなる群より選択される、項目２３６に記載の組成物。
【０２５５】
（２４５）  上記ＩＰ３の調節因子は、ＭＡＧ、Ｎｏｇｏおよびｐ７５からなる群より選択される、項目２３６に記載の組成物。
【０２５６】
（２４６）  上記神経の再生は、インビボまたはインビトロで行われる、項目２３５に記載の組成物。
【０２５７】
（２４７）  上記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、項目２３５に記載の組成物。
【０２５８】
（２４８）  上記因子は、ＰＴＤドメインに結合する、項目２３６に記載の組成物。
【０２５９】
（２４９）  神経疾患、神経障害および／または神経の状態を、処置、予防、診断または予後するための組成物であって、ｐ７５シグナル伝達経路を調節する因子を含み、ここで、上記ｐ７５シグナル伝達経路を調節する因子は、ＰＫＣおよびＩＰ３を含む、組成物。
【０２６０】
（２５０）  さらに、ＰＫＣを調節する因子およびＩＰ３を調節する因子からなる群より選択される少なくとも１つの因子を含む、項目２４９に記載の組成物。
【０２６１】
（２５１）  ＰＫＣを調節する因子およびＩＰ３を調節する因子の両方をさらに含む、項目２４９に記載の組成物。
【０２６２】
（２５２）  ＰＫＣを阻害する因子を含む、項目２４９に記載の組成物。
【０２６３】
（２５３）  ＩＰ３を活性化する因子を含む、項目２４９に記載の組成物。
【０２６４】
（２５４）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を調節する因子は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子の調節因子を含む、項目２４９に記載の組成物。
【０２６５】
（２５５）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を調節する因子は、ＲｈｏＡの調節因子を含む、項目２４９に記載の組成物。
【０２６６】
（２５６）  上記ｐ７５シグナル伝達経路を調節因子は、ＲｈｏＡの活性化因子およびＰＫＣの阻害因子を含み、上記神経の再生の調節は神経の再生の活性化である、項目２４９に記載の組成物。
【０２６７】
（２５７）  さらにＩＰ３の活性化因子を含む、項目２５６に記載の組成物。
【０２６８】
（２５８）  上記ＰＫＣの調節因子は、ＭＡＧ、Ｎｏｇｏおよびｐ７５からなる群より選択される、項目２５０に記載の組成物。
【０２６９】
（２５９）  上記ＩＰ３の調節因子は、ＭＡＧ、Ｎｏｇｏおよびｐ７５からなる群より選択される、項目２５０に記載の組成物。
【０２７０】
（２６０）  上記神経の再生は、インビボまたはインビトロで行われる、項目２４９に記載の組成物。
【０２７１】
（２６１）  上記神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある、項目２４９に記載の組成物。
【０２７２】
（２６２）  上記因子は、ＰＴＤドメインに結合する、項目２５０に記載の組成物。
【０２７３】
以下に、本発明の好ましい実施形態を示すが、当業者は本発明の説明および当該分野における周知慣用技術からその実施形態などを適宜実施することができ、本発明が奏する作用および効果を容易に理解することが認識されるべきである。
【発明の効果】
【０２７４】
神経突起伸展の阻害に関連するｐ７５とその相互作用因子との関係を明らかにすることによって、神経の再生およびその神経の再生に基づいて神経学的疾患を処置するための薬学的組成物および方法が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０２７５】
本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。従って、単数形の冠詞または形容詞（例えば、英語の場合は「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」など）は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。したがって、他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての専門用語および科学技術用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。
【０２７６】
（定義）
本明細書において「ｐ７５シグナル伝達経路」とは、ミエリン由来タンパク質が神経膜のｐ７５レセプターを介してＲｈｏを活性化し、神経突起の伸展を阻害するにいたる一連のシグナル伝達経路をいう。従来、ｐ７５シグナル伝達経路は、中枢神経の軸索がいったん損傷をうけたらもはや再生しない現象をもたらすメカニズムであると思われていた。ｐ７５シグナル伝達経路は、図２２を参照して説明すると、ミエリン由来タンパク質がｐ７５に作用すると、ｐ７５を介してＲｈｏが活性化され、神経の突起伸展を阻害する経路である。しかし、本発明により、このｐ７５シグナル伝達経路を調節することによって神経再生を調節することができることが判明した。
【０２７７】
本明細書において「Ｐｅｐ５」とは、ｐ７５の細胞内ドメインに結合することにより、ｐ７５によるＲｈｏの活性化を阻害するペプチドをいう。Ｐｅｐ５は、代表的に、配列番号１（縮重核酸配列）および配列番号２（アミノ酸配列）に示す配列を有し、その改変体およびフラグメントもまた、生物学的活性を有する限り、Ｐｅｐ５の定義内に含まれる。Ｐｅｐ５の生物学的活性としては、例えば、ミエリン由来タンパク質による神経突起伸展阻害のブロックが挙げられるがそれらに限定されず、そのような活性は、ミエリン由来タンパク質によるＲｈｏ活性化のブロックのような、Ｒｈｏの活性アッセイで測定することができる。
【０２７８】
本明細書において「ｐ７５」は、ｐ７５ＮＴＲと本明細書において交換可能に用いられ、ニューロトロフィンをリガンドとし、また、ミエリン由来タンパク質のシグナル伝達を介する、一回膜貫通型レセプターをいう。ｐ７５は、ニューロトロフィンレセプターであり、ニューロトロフィンならびにいくつかのミエリン成分（ミエリン結合糖タンパク質、Ｎｏｇｏおよび稀突起神経膠細胞ミエリン糖タンパク質を含む）による軸索伸長の調節に関与する。ニューロトロフィンレセプター（ｐ７５）は、驚くべきほど多様な生物学的効果（例えば、細胞死、シュヴァン細胞移動、シナプス伝達の調節、ならびに感覚ニューロンおよびカルシウム流動の機能的調節が挙げられる）を媒介する（例えば、Ｄｅｃｈａｎｔ，Ｇ．＆Ｂａｒｄｅ，Ｙ．Ａ．，Ｎａｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．５，１１３１−１１３６（２００２）を参照のこと）。近年の研究において、ｐ７５は、軸索伸長の調節にも関連付けられている。
【０２７９】
ｐ７５は、代表的に、配列番号３または１６（それぞれヒトまたはラットの核酸配列）および配列番号４または１７（それぞれヒトまたはラットのアミノ酸配列）に示す配列を有し、その改変体およびフラグメントもまた、生物学的活性を有する限り、ｐ７５の定義内に含まれる。ｐ７５の生物学的活性としては、例えば、ニューロトロフィンによる神経突起伸展の促進が挙げられるがそれらに限定されず、そのような活性は、ミエリン由来タンパク質によるＲｈｏの活性阻害のようなアッセイで測定することができる。
【０２８０】
本明細書において「ｐ７５細胞外ドメイン」とは、細胞膜上に一回膜貫通型レセプターとして存在しているｐ７５のアミノ末端で細胞外にある部分をいう。ｐ７５細胞外ドメインは、代表的に、配列番号３（核酸配列、ヒト）の１１１０位〜１２８３位または配列番号１６（核酸配列、ラット）の１１１３位〜１２７７位および配列番号４（アミノ酸配列、ヒト）の２７３位〜４２７位、または配列番号１７（アミノ酸配列、ラット）の２７４位〜４２５位に示す配列を有し、その改変体およびフラグメントもまた、生物学的活性を有する限り、ｐ７５細胞外ドメインの定義内に含まれる。またこのｐ７５細胞外ドメインの上記のような特定の動物の他の種の対応するペプチドもまた、本発明の範囲内に入る。ｐ７５細胞外ドメインの生物学的活性としては、例えば、ミエリン由来タンパク質による神経突起伸展阻害のブロックが挙げられるがそれらに限定されず、そのような活性は、ミエリン由来タンパク質によるＲｈｏの活性化のブロックのようなアッセイで測定することができる。
【０２８１】
本明細書中では、「ｐ７５細胞外ドメイン」はまた「可溶性ｐ７５ポリペプチド」とも称される。したがって、可溶性ｐ７５ポリペプチドは、それ自体が膜中に係留していないｐ７５ポリペプチドである。このような、可溶性ポリペプチドとしては、例えば、そのポリペプチドを係留するのに十分な、そのＧＰＩアンカーシグナル部分を欠いているか、あるいはＧＰＩアンカーシグナルがポリペプチドをＧＰＩアンカーに置換するのに十分でないよう改変されている、ｐ７５ポリペプチドが挙げられるがそれに限定されない。好ましい実施形態において、５、１０、２０または２５アミノ酸までが、ｐ７５のＣ末端から除去され、各タンパク質を可溶性にする。
【０２８２】
可溶性ｐ７５ポリペプチドとしては、推定ＧＰＩシグナル配列までの全ｐ７５タンパク質を含み得る。他の実施形態において、これらのタンパク質のシグナルペプチドは、除去され得るかまたは短縮化され得る。
【０２８３】
用語「Ｒｈｏ  ＧＤＰ解離抑制タンパク質」または「Ｒｈｏ  ＧＤＩ」は、交換可能に使用され、ヌクレオチド解離の阻害ならびに細胞質と膜との間のＲｈｏタンパク質の往復に役割を果たすタンパク質である（例えば、Ｓａｓａｋｉ，Ｔ．ら（前出）を参照のこと）。Ｒｈｏ  ＧＤＩは、Ｒｈｏファミリーのタンパク質が、膜に転位する活性なＧＴＰ結合形態に変換されることを妨げる。さらに、Ｒｈｏタンパク質の活性形態が膜において不活性形態に変換された後、Ｒｈｏ  ＧＤＩおよびＲｈｏタンパク質は、複合体を形成し、そして細胞質ゾルに転位する。Ｒｈｏ  ＧＤＩファミリーは、少なくとも３つのアイソフォーム：Ｒｈｏ  ＧＤＩα、Ｒｈｏ  ＧＤＩβ、およびＲｈｏ  ＧＤＩγを含む。Ｒｈｏ  ＧＤＩαは、遍在的に発現し、これまで研究されているＲｈｏファミリーのタンパク質の全てに結合し、一方、Ｒｈｏ  ＧＤＩβおよびＲｈｏ  ＧＤＩγは、特有の組織発現パターンを示す。Ｒｈｏ  ＧＤＩは、代表的に、配列番号５（核酸配列）および配列番号６（アミノ酸配列）に示す配列を有し、その改変体およびフラグメントもまた、生物学的活性を有する限り、Ｒｈｏ  ＧＤＩの定義内に含まれる。Ｒｈｏ  ＧＤＩの生物学的活性としては、例えば、ＧＤＰ結合型Ｒｈｏとの結合が挙げられるがそれらに限定されず、そのような活性は、ＧＤＰ−ＧＴＰ  Ｅｘｃｈａｎｇｅ  Ａｓｓａｙのようなアッセイで測定することができる。
【０２８４】
本明細書において「ＭＡＧ」または「ミエリン結合糖タンパク質」とは、交換可能に使用され、ｍｙｅｌｉｎ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎの略であり、オリゴデンドロサイトおよびシュワン細胞の膜上に存在する糖タンパク質をさす。ＭＡＧは、代表的に、配列番号７（核酸配列）および配列番号８（アミノ酸配列）に示す配列を有し、その改変体およびフラグメントもまた、生物学的活性を有する限り、ＭＡＧの定義内に含まれる。ＭＡＧの生物学的活性としては、例えば、神経突起伸展阻害が挙げられるがそれらに限定されず、そのような活性は、神経細胞においてＲｈｏの活性化を観察するようなアッセイで測定することができる。
【０２８５】
本明細書において「Ｎｏｇｏ」とは、オリゴデンドロサイトの細胞膜上に存在する、２回膜貫通型タンパク質をいう。Ｎｏｇｏは、代表的に、配列番号９（核酸配列）および配列番号１０（アミノ酸配列）に示す配列を有し、その改変体およびフラグメントもまた、生物学的活性を有する限り、Ｎｏｇｏの定義内に含まれる。Ｎｏｇｏの生物学的活性としては、例えば、神経細胞の突起伸展阻害が挙げられるがそれらに限定されず、そのような活性は、神経細胞のＲｈｏの活性化を観察するアッセイなどで測定することができる。
【０２８６】
用語「Ｒｈｏ」とは、アクチン重合化の状態を調節する低分子ＧＴＰａｓｅである。その活性なＧＴＰ結合形態において、Ｒｈｏは、アクチン細胞骨格を堅くし、それによって、軸索伸長を阻害し、そして成長円錐の崩壊を媒介する（例えば、Ｄａｖｉｅｓ，Ａ．Ｍ．ら（前出）およびＳｃｈｍｉｄｔ，Ａ．ら（前出）を参照のこと）。Ｒｈｏは、代表的に、以下に説明するＲｈｏＡの配列である、配列番号１１（核酸配列）および配列番号１２（アミノ酸配列）に示す配列を有し、その改変体およびフラグメントもまた、生物学的活性を有する限り、Ｒｈｏの定義内に含まれる。Ｒｈｏの生物学的活性としては、例えば、神経突起の伸展制御が挙げられるがそれらに限定されず、そのような活性は、エフェクタータンパク質を用いたＡｆｆｉｎｉｔｙ  Ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ（親和性沈降）のようなアッセイで測定することができる。
【０２８７】
本明細書において「ＲｈｏＡ」とは、Ｒｈｏファミリーのメンバーである分子であり、代表的に、配列番号１１（核酸配列）および配列番号１２（アミノ酸配列）に示す配列を有し、その改変体およびフラグメントもまた、生物学的活性を有する限り、ＲｈｏＡの定義内に含まれる。ＲｈｏＡの生物学的活性としては、例えば、神経突起の伸展制御が挙げられるがそれらに限定されず、そのような活性は、エフェクタータンパク質を用いた親和性沈降のようなアッセイで測定することができる。
【０２８８】
本明細書において「Ｒｈｏキナーゼ」とは、Ｒｈｏによってリン酸化機能が調節される機能を有する生体分子をいう。Ｒｈｏキナーゼは、代表的には、配列番号１８（核酸配列）および配列番号１９（アミノ酸配列）を有し、その改変体およびフラグメントもまた、生物学的活性（代表的には、リン酸化する活性、Ｒｈｏによって調節されることなど）を有する限り、Ｒｈｏキナーゼの定義内に含まれる。
【０２８９】
本明細書において「ＧＴ１ｂ」とは、ガングリオシドの一種である分子であり、当該分野において定義されるのと同じ意味で用いられる。ＧＴ１ｂの生物学的活性としては、例えば、ＭＡＧまたはｐ７５への結合が挙げられるがそれらに限定されず、そのような活性は、ＭＡＧまたはｐ７５への結合アッセイのようなアッセイで測定することができる。ＭＡＧとの結合という意味においてＧＴ１ｂと同等の働きを有する分子としては、たとえば、ＧＤ１ａ、α系列のガングリオシドなどが挙げられるがそれらに限定されない。ここで、ＧＴ１ｂ以外のこのようなガングリオシドは、ＧＴ１ｂとの競争阻害作用を有し得ることから、ＭＡＧのインヒビターとして使用することが可能である。
【０２９０】
本明細書において「ｐ２１」とは、サイクリン依存性タンパク質キナーゼインヒビター（ｃｙｃｌｉｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）をいい、別名ＷＡＦ１またはＣｉｐ１とも呼ばれる。したがって、本明細書では、「ｐ２１」は、「ｐ２１Ｃｉｐ１／ＷＡＦ１」とも表記される。ｐ２１は、代表的に、配列番号１３または配列番号２２（核酸配列）および配列番号１４または配列番号２３（アミノ酸配列）に示す配列を有し、その改変体およびフラグメントもまた、生物学的活性を有する限り、ｐ２１の定義内に含まれる。ｐ２１の生物学的活性としては、例えば、細胞サイクルの停止が挙げられるがそれらに限定されず、そのような活性は、神経細胞の分子誘導のようなアッセイで測定することができる。
【０２９１】
ｐ２１遺伝子は、Ｃｄｋ２との相互作用を介して同定され（Ｈａｒｐｅｒ，Ｊ．Ｗ．，Ａｄａｍｉ，Ｇ．Ｒ．，Ｗｅｉ，Ｎ．，Ｋｅｙｏｍａｒｓｉ，Ｋ．およびＥｌｌｅｄｇｅ．Ｓ．Ｊ．１９９３．，Ｃｅｌｌ．７５：８０５−８１６）、そしてその発現は、野生型ｐ５３の活性化によって（ｅｌ−Ｄｅｉｒｙ，Ｗ．Ｓ．，Ｔｏｋｉｎｏ，Ｔ．，Ｖｅｌｃｕｌｅｓｃｕ，Ｖ．Ｅ．，Ｌｅｖｙ，Ｄ．Ｂ．，Ｐａｒｓｏｎｓ，Ｒ．，Ｔｒｅｎｔ，Ｊ．Ｍ．，Ｌｉｎ，Ｄ．，Ｍｅｒｃｅｒ，Ｗ．Ｅ．，Ｋｉｎｚｌｅｒ，Ｋ．Ｗ．およびＶｏｇｅｌｓｔｅｉｎ．Ｂ．１９９３，Ｃｅｌｌ．７５：８１７−８２５）、ならびに細胞老化の間（Ｎｏｄａ，Ａ．，Ｎｉｎｇ，Ｙ．，Ｖｅｎａｂｌｅ，Ｓ．Ｆ．，Ｐｅｒｅｉｒａ−Ｓｍｉｔｈ，Ｏ．Ｍ．，およびＳｍｉｔｈ，Ｊ．Ｒ．１９９４．，Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ．Ｒｅｓ．２１１：９０−９８）および分化の間（Ｊｉａｎｇ，Ｈ．，Ｌｉｎ，Ｊ．，Ｓｕ，Ｚ．Ｚ．，Ｃｏｌｌａｒｔ，Ｆ．Ｒ．，Ｈｕｂｅｒｍａｎ，Ｅ．およびＦｉｓｈｅｒ，Ｐ．Ｂ．１９９４．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．９：３３９７−３４０６）に誘導される。ｐ２１のＮＨ２末端ドメインは、サイクリン−Ｃｄｋキナーゼを阻害し、そしてｐ２１のＣＯＯＨ−末端ドメインは、増大している細胞核抗原を阻害する（Ｗａｇａ，Ｓ．ら１９９４．，Ｎａｔｕｒｅ．３６９：５７４−５７８；Ｃｈｅｎ，Ｊ．１９９５．Ｎａｔｕｒｅ．３７４：３８６−３８８；Ｓｈｅｒｒ，Ｃ．ら１９９５．、Ｇｅｎｅｓ．Ｄｅｖ．９：１１４９−１１６３、Ｌｕｏ，Ｙ．，ら１９９５．、Ｎａｔｕｒｅ．３７５：１５９−１６１）。ｐ２１のこれらの細胞周期阻害活性は、その核局在化に起因する（Ｇｏｕｂｉｎ，Ｆ．ら、１９９５．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．１０：２２８１−２２８７；Ｓｈｅｒｒ，Ｃ．Ｊ．ら、１９９５．Ｇｅｎｅｓ．Ｄｅｖ．９：１１４９−１１６３）。しかし、近年の研究によって、ｐ２１は細胞質において他の生物学的活性を有することが証明された。ビタミンＤ３を用いた処理による、Ｕ９３７細胞およびＨＬ６０細胞の単球分化のプロセスの間に、ｐ２１発現が細胞質で誘導され、そしてこの細胞質ｐ２１は、アポトーシスシグナル調節キナーゼ１と複合体を形成し、ストレス活性化ＭＡＰＫカスケードを阻害し、ゆえに、種々のアポトーシス生成（ａｐｏｐｔｏｇｅｎｉｃ）刺激に対する耐性の獲得に寄与する（Ａｓａｄａ，Ｍ．，Ｙａｍａｄａ，Ｔ．，Ｉｃｈｉｊｏ，Ｈ．，Ｄｅｌｉａ，Ｄ．，Ｍｉｙａｚｏｎｏ，Ｋ．，Ｆｕｋｕｍｕｒｏ，Ｋ．およびＭｉｚｕｔａｎｉ．Ｓ．１９９９．，ＥＭＢＯ．Ｊ．１８：１２２３−１２３４）。ｐ２１の細胞質局在はまた、末梢血単球においても観察されている（Ａｓａｄａ，Ｍ．，Ｙａｍａｄａ，Ｔ．，Ｉｃｈｉｊｏ，Ｈ．，Ｄｅｌｉａ，Ｄ．，Ｍｉｙａｚｏｎｏ，Ｋ．，Ｆｕｋｕｍｕｒｏ，Ｋ．およびＭｉｚｕｔａｎｉ．Ｓ．１９９９．，ＥＭＢＯ．Ｊ．１８：１２２３−１２３４）。いくつかの報告によって、核から細胞質へのｐ２１の可能性のある転移機構が提案されている。ホスファチジルイノシトール−３キナーゼ／Ａｋｔがｐ２１のＣＯＯＨ末端ＮＬＳ中のトレオニン１４５をリン酸化し、そしてリン酸化されたｐ２１は核に局在する能力を欠くことが報告されている（Ｚｈｏｕ，Ｂ．Ｐ．ら、２００１．，Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：２４５−２５２）。他の論文は、プロテアーゼのカスパーゼファミリーのメンバーによるｐ２１のＣＯＯＨ末端の短縮化がそのＮＬＳの欠失および局在の変化を引き起こすことを示している（Ｌｅｖｋａｕ，Ｂ．，Ｋｏｙａｍａ，Ｈ．，Ｒａｉｎｅｓ，Ｅ．Ｗ．，Ｃｌｕｒｍａｎ，Ｂ．Ｅ．，Ｈｅｒｒｅｎ，Ｂ．，Ｏｒｔｈ，Ｋ．，Ｍ．Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｊ．，およびＲｏｓｓ．Ｒ．１９９８．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．１：５５３−５６３）。
【０２９２】
ニューロン細胞の分化過程の間、ｐ２１はまた、細胞周期の調節に重要な役割を果たす。いくつかの細胞株において、神経成長因子での処理後の間に、ｐ２１タンパク質の発現が増大した（Ｄｅｃｋｅｒ，Ｓ．Ｊ．１９９５．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：３０８４１−３０８４４；Ｄｏｂａｓｈｉ，Ｙ．，Ｋｕｄｏｈ，Ｔ．，Ｍａｔｓｕｍｉｎｅ，Ａ．，Ｔｏｙｏｓｈｉｍａ，Ｋ．およびＡｋｉｙａｍａ．Ｔ．１９９５．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：２３０３１−２３０３７；Ｙａｎ，Ｇ．Ｚ．，およびＺｉｆｆ．Ｅ．Ｂ．，１９９５．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１５：６２００−６２１２；Ｐｏｌｕｈａ，Ｗ．，Ｄ．Ｐｏｌｕｈａ，Ｋ．，Ｃｈａｎｇ，Ｂ．，Ｃｒｏｓｂｉｅ，Ｎ．Ｅ．，Ｓｃｈｏｎｈｏｆｆ，Ｃ．Ｍ．，Ｋｉｌｐａｔｒｉｃｋ，Ｄ．Ｌ．およびＲｏｓｓ，Ａ．Ｈ．１９９６．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１６：１３３５−１３４１；ｖａｎ  Ｇｒｕｎｓｖｅｎ，Ｌ．Ａ．，Ｂｉｌｌｏｎ，Ｎ．，Ｓａｖａｔｉｅｒ，Ｐ．，Ｔｈｏｍａｓ，Ａ．，Ｕｒｄｉａｌｅｓ，Ｊ．Ｌ．およびＲｕｄｋｉｎ，Ｂ．Ｂ．，１９９６．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．１２：１３４７−１３５６；Ｇｏｌｌａｐｕｄｉ，Ｌ．，およびＮｅｅｔ，Ｋ．Ｅ．１９９７．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．４９：４６１−４７４；Ｅｒｈａｒｄｔ，Ｊ．Ａ．，およびＰｉｔｔｍａｎ，Ｒ．Ｎ．１９９８．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：２３５１７−２３５２３）。しかし、分化後のニューロンは、他の細胞型と異なり特別な特性を有するようである。なぜなら、新生ニューロンは、軸索および樹状突起を伸長して、適切な標的と連絡するからである。例えば、生後３日〜４日までの脊髄神経節ニューロンまたは胚性網膜神経節ニューロンは、急速にその神経突起をミエリン結合糖タンパク質（これは、成体ニューロンの有効な神経突起伸展インヒビターである）にまで伸長し得る（Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｐ．Ｗ．，Ａｂｒａｍｏｗ−Ｎｅｗｅｒｌｙ，Ｗ．，Ｓｅｉｌｈｅｉｍｅｒ，Ｂ．，Ｓａｄｏｕｌ，Ｒ．，Ｔｒｏｐａｋ，Ｍ．Ｂ．，Ａｒｑｕｉｎｔ，Ｍ．，Ｄｕｎｎ，Ｒ．Ｊ．，Ｓｃｈａｃｈｎｅｒ，Ｍ．，およびＲｏｄｅｒ，Ｊ．Ｃ．１９８９．，Ｎｅｕｒｏｎ．３：３７７−３８５；Ｍｕｋｈｏｐａｄｈｙａｙ，Ｇ．，Ｄｏｈｅｒｔｙ，Ｐ．，Ｗａｌｓｈ，Ｆ．Ｓ．，Ｃｒｏｃｋｅｒ，Ｐ．Ｒ．，およびＦｉｌｂｉｎ，Ｍ．Ｔ．１９９４．，Ｎｅｕｒｏｎ．１３：７５７−７６７；ｄｅＢｅｌｌａｒｄ，Ｍ．Ｅ．，Ｔａｎｇ，Ｓ．，Ｍｕｋｈｏｐａｄｈｙａｙ，Ｇ．，Ｓｈｅｎ，Ｙ．Ｊ．およびＦｉｌｂｉｎ，Ｍ．Ｔ．１９９６．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．７：８９−１０１；ならびに、Ｃａｉ，Ｄ．，Ｑｉｕ，Ｊ．，Ｃａｏ，Ｚ．，ＭｃＡｔｅｅ，Ｍ．，Ｂｒｅｇｍａｎ，Ｂ．Ｓ．およびＦｉｌｂｉｎ，Ｍ．Ｔ．２００１．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２１：４７３１−４７３９）。これらの知見は、未成熟のニューロンが、阻害分子に対する耐性を与える固有の機構を有し得ることを示唆する。
【０２９３】
本明細書において「ＰＫＣ」とは、プロテインキナーゼＣの略称であり、プロテインキナーゼのうち、ＡＴＰのγ-リン酸基を蛋白質に存在するある特定のセリンまたはスレオニンの水酸基に転移させる反応を触媒する酵素（EC2.7.1.37）をいう。ＰＫＣは、ジアシルグリセロールにより活性化されて，細胞内の種々の機能タンパク質などをリン酸化し、その結果、基質タンパク質の活性が変化し、細胞外からの刺激に対する生理応答が発現される。ＰＫＣの活性発現にはＣａ２＋とホスファチジルセリンなどリン脂質が必須であり、ジアシルグリセロールはＰＫＣのＣａ２＋に対する親和性を上昇させるといわれている。ＰＫＣは分子量約８万の単一ペプチドであり、α、βＩ、βＩＩ、γ、δ、ε、ζ、ηなどのアイソザイムが存在する。本明細書において特に意図されるのは、ＰＫＣαであり、配列番号２６（アミノ酸配列は配列番号２７）を有するものが代表例として挙げられる。
【０２９４】
本明細書において「ＩＰ３」とは、１，４，５−ＩＰ３とも略記され、一般にはイノシトール−１，４，５−三リン酸をいう。サイトカイン、ホルモンなどの刺激により活性化された細胞内のホスホリパーゼＣがホスファチジルイノシトール−４，５−二リン酸を加水分解することにより産生されるセカンドメッセンジャーの一つである。ＩＰ３が、小胞体に存在するＩＰ３レセプターに結合する場合、小胞体からＣａ２＋を遊離させることにより細胞内のＣａ２＋濃度を上昇させる。
【０２９５】
本明細書において「ＰＬＣ」とは、ホスホリパーゼＣの略称をいい、ＥＣ３．１．４．３に分類され、代表的にはレシチン（ホスファチジルコリン）をジグリセリドとコリンのリン酸エステルとに加水分解する活性を有する。
【０２９６】
本明細書において「Ｇタンパク質共役型レセプター」とは、細胞膜７回貫通型レセプターであり、三量体型Ｇタンパク質と共役しているレセプターをいう。この型のレセプターはさらにｃＡＭＰをセカンドメッセンジャーとして産生するｃＡＭＰ系およびイノシトール−１，４，５−三リン酸（ＩＰ３）またはジアシルグリセロール（ＤＧ）をセカンドメッセンジャーとするイノシトールリン脂質情報伝達系とに分けられる。ｃＡＭＰは、いくつかの経路を単独あるいは並行して活性化することができる。嗅覚受容神経細胞をはじめとする一部の神経細胞などでは、ｃＡＭＰ依存性イオンチャネルを開かせ、細胞膜電位を脱分極させると同時に、このチャネルを通り細胞外からのＣａ２＋流入が生じるために一過性の細胞内Ｃａ２＋濃度上昇が起きる。また、ｃＡＭＰは、ｃＡＭＰ依存性のキナーゼ（Ａキナーゼ）を活性化し，機能タンパク質のセリンおよび／またはスレオニン残基のリン酸化を起こし，活性を修飾する。他方ＩＰ３は小胞体上のＩＰ３レセプターに結合し，Ｃａ２＋の細胞内への遊離を促し、ジアシルグリセロールはＣキナーゼを活性化してホルモンの発現を促す。
【０２９７】
一般にＧｓと呼ばれる促進性Ｇタンパク質が活性化されると、ｃＡＭＰ合成を担うアデニル酸シクラーゼが活性化され、ｃＡＭＰレベルが上昇する。Ｇｉと呼ばれる抑制性Ｇタンパク質が活性化されると、アデニル酸シクラーゼが抑制され、ｃＡＭＰレベルが低下する。視細胞のトランスデューシンはＧｉの一種であり、これが活性化されるとｃＧＭＰ分解酵素であるホスホジエステラーゼが活性化されて、ｃＧＭＰレベルが低下する。Ｇｑ呼ばれるＧタンパク質は、活性化されると、ホスホリパーゼＣが活性化されて、ＩＰ３が産生される。これらの経路のいずれもが、本発明において使用され得る。
【０２９８】
本明細書において、「Ｇタンパク質」とは、グアニンヌクレオチド結合性調節タンパク質をいい、ＧＴＰ（グアノシン５’三リン酸）またはＧＤＰ（グアノシン５’二リン酸）と特異的に結合し、結合したＧＴＰをＧＤＰとリン酸とに分解する酵素活性を示すＧＴＰ結合タンパク質である。代表的に、Ｇタンパク質は、ホルモン、サイトカイン、神経伝達物質などのレセプターを介した細胞内シグナル伝達経路で情報を変換し伝達する因子として機能する。３量体型Ｇタンパク質はα（Ｇα）、β（Ｇβ）、γ（Ｇγ）の３種類のサブユニットからなる。Ｇタンパク質は、酵母などの単純な構造を有する真核生物からヒト、マウスなどの真核生物にまで広く存在することから、本発明では、そのようなＧタンパク質もまた、利用することができる。Ｇタンパク質の例としては、例えば、Ｇα、ＧβおよびＧγが挙げられるがそれに限定されない。Ｇタンパク質は、通常αβγ（Ｇαβγ）の複合体として存在し、膜を７回貫通する構造を有するレセプター（Ｇタンパク質共役型レセプター）により活性化される．細胞外の第１メッセンジャーにより活性化されたＧタンパク質共役型レセプターは、Ｇαに結合しているＧＤＰをＧＴＰに交換する。ＧＴＰが結合したＧαはＧβγと解離し、ＧαとＧβγは独立にあるいは相互にアデニル酸シクラーゼなど細胞内の第２メッセンジャーの量を変動する酵素、イオンチャネルの活性などを調節する。Ｇα自身の酵素活性によりＧＴＰがＧＤＰに分解されると、ＧαとＧβγとは再び結合し不活性型の３量体Ｇαβγに戻る。より好ましくは、Ｇαタンパク質、Ｇβタンパク質およびＧγタンパク質をすべて調節することが有利であり得る。これらのタンパク質は共役を調節することが有利であり得る。
【０２９９】
本明細書において「ＴＡＴ  ＰＴＤドメイン」または「ＰＴＤドメイン」とは、交換可能に使用され、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）のＴＡＴタンパク質のアミノ末端のアミノ酸配列であって、タンパク質の細胞内導入を促す作用を有するものをいう。代表的に、この配列は、ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号２０）を含むが、それに限定されない。この配列は、任意の作用因子（例えば、ｐ２１、Ｐｅｐ５など）と融合させることができる。本明細書ではまた、ＰＴＤドメインを「ＴＡＴ」と称することがある。
【０３００】
本明細書において「神経再生因子」とは、ｐ７５シグナル伝達経路などの神経再生に関与する因子であって、神経再生（例えば、神経再生の促進または神経抑制の遮断など）の作用を有するものをいう。そのような因子としては、本発明のＰｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントなどが挙げられるがそれに限定されない。
【０３０１】
用語「サイレンシング」または「サイレンシングする」は交換可能に使用され、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの間の相互作用を破壊することをいう。「サイレンサ」は、そのような遮断効果を有する因子、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの間の相互作用を破壊する因子のことをいう。
【０３０２】
（用語の定義）
以下に本明細書において特に使用される用語の定義を列挙する。
【０３０３】
本明細書において使用される用語「タンパク質」、「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」および「ペプチド」は、本明細書において同じ意味で使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーをいう。このポリマーは、直鎖であっても分岐していてもよく、環状であってもよい。アミノ酸は、天然のものであっても非天然のものであってもよく、改変されたアミノ酸であってもよい。この用語はまた、複数のポリペプチド鎖の複合体へとアセンブルされたものを包含し得る。この用語はまた、天然または人工的に改変されたアミノ酸ポリマーも包含する。そのような改変としては、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化または任意の他の操作もしくは改変（例えば、標識成分との結合体化）が挙げられる。この定義にはまた、例えば、アミノ酸の少なくとも１つのアナログを含むポリペプチド（例えば、非天然のアミノ酸などを含む）、ペプチド様化合物（例えば、ペプトイド）および当該分野において公知の他の改変が包含される。本発明の遺伝子産物（例えば、Ｐｅｐ５、ＰＫＣ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ＭＡＧ、ｐ２１、Ｒｈｏ、Ｒｈｏキナーゼなど）は、通常ポリペプチド形態をとる。このようなポリペプチド形態の本発明の遺伝子産物は、本発明の診断、予防、治療または予後のための組成物として有用である。
【０３０４】
本明細書において使用される用語「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」および「核酸」は、本明細書において同じ意味で使用され、任意の長さのヌクレオチドのポリマーをいう。この用語はまた、「誘導体オリゴヌクレオチド」または「誘導体ポリヌクレオチド」を含む。「誘導体オリゴヌクレオチド」または「誘導体ポリヌクレオチド」とは、ヌクレオチドの誘導体を含むか、またはヌクレオチド間の結合が通常とは異なるオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドをいい、互換的に使用される。そのようなオリゴヌクレオチドとして具体的には、例えば、２’−Ｏ−メチル−リボヌクレオチド、オリゴヌクレオチド中のリン酸ジエステル結合がホスホロチオエート結合に変換された誘導体オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチド中のリン酸ジエステル結合がＮ３’−Ｐ５’ホスホロアミデート結合に変換された誘導体オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチド中のリボースとリン酸ジエステル結合とがペプチド核酸結合に変換された誘導体オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチド中のウラシルがＣ−５プロピニルウラシルで置換された誘導体オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチド中のウラシルがＣ−５チアゾールウラシルで置換された誘導体オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチド中のシトシンがＣ−５プロピニルシトシンで置換された誘導体オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチド中のシトシンがフェノキサジン修飾シトシン（ｐｈｅｎｏｘａｚｉｎｅ−ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｃｙｔｏｓｉｎｅ）で置換された誘導体オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ中のリボースが２’−Ｏ−プロピルリボースで置換された誘導体オリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド中のリボースが２’−メトキシエトキシリボースで置換された誘導体オリゴヌクレオチドなどが例示される。他にそうではないと示されなければ、特定の核酸配列はまた、明示的に示された配列と同様に、その保存的に改変された改変体（例えば、縮重コドン置換体）および相補配列を包含することが企図される。具体的には、縮重コドン置換体は、１またはそれ以上の選択された（または、すべての）コドンの３番目の位置が混合塩基および／またはデオキシイノシン残基で置換された配列を作成することにより達成され得る（Ｂａｔｚｅｒら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５−２６０８（１９８５）；Ｒｏｓｓｏｌｉｎｉら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ  ８：９１−９８（１９９４））。本発明の遺伝子（例えば、Ｐｅｐ５、ＰＫＣ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ＭＡＧ、ｐ２１、Ｒｈｏ、Ｒｈｏキナーゼなど）は、通常、このポリヌクレオチド形態をとる。このようなポリヌクレオチド形態の本発明の遺伝子または遺伝子産物は、本発明の診断、予防、治療または予後のための組成物として有用である。
【０３０５】
本明細書では「核酸分子」もまた、核酸、オリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドと互換可能に使用され、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡなどを含む。本明細書では、核酸および核酸分子は、用語「遺伝子」の概念に含まれ得る。ある遺伝子配列をコードする核酸分子はまた、「スプライス変異体（改変体）」を包含する。同様に、核酸によりコードされた特定のタンパク質は、その核酸のスプライス改変体によりコードされる任意のタンパク質を包含する。その名が示唆するように「スプライス変異体」は、遺伝子のオルタナティブスプライシングの産物である。転写後、最初の核酸転写物は、異なる（別の）核酸スプライス産物が異なるポリペプチドをコードするようにスプライスされ得る。スプライス変異体の産生機構は変化するが、エキソンのオルタナティブスプライシングを含む。読み過し転写により同じ核酸に由来する別のポリペプチドもまた、この定義に包含される。スプライシング反応の任意の産物（組換え形態のスプライス産物を含む）がこの定義に含まれる。したがって、本明細書では、本発明の遺伝子には、そのスプライス変異体もまた包含され得る。
【０３０６】
本明細書において、「遺伝子」とは、遺伝形質を規定する因子をいう。遺伝子は、通常染色体上に一定の順序に配列している。構造遺伝子の発現を左右するものを調節遺伝子（例えば、プロモーター）という。本明細書では、遺伝子は、特に言及しない限り、構造遺伝子および調節遺伝子を包含する。したがって、Ｐｅｐ５、ＰＫＣ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ＭＡＧ、ｐ２１、Ｒｈｏ、Ｒｈｏキナーゼなどの遺伝子というときは、通常、本発明の遺伝子の構造遺伝子ならびにそのプロモーターなどの転写および／または翻訳の調節配列の両方を包含する。本発明では、構造遺伝子のほか、転写および／または翻訳などの調節配列もまた、神経再生、神経疾患の診断、治療、予防、予後などに有用であることが理解される。本明細書では、「遺伝子」は、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」、「核酸」および「核酸分子」ならびに／または「タンパク質」、「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」および「ペプチド」を指すことがある。本明細書においてはまた、「遺伝子産物」は、遺伝子によって発現された「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」、「核酸」および「核酸分子」ならびに／または「タンパク質」「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」および「ペプチド」を包含する。当業者であれば、遺伝子産物が何たるかはその状況に応じて理解することができる。
【０３０７】
本明細書において遺伝子（例えば、核酸配列、アミノ酸配列など）の「相同性」とは、２以上の遺伝子配列の、互いに対する同一性の程度をいう。また、本明細書において配列（核酸配列、アミノ酸配列など）の同一性とは、２以上の対比可能な配列の、互いに対する同一の配列（個々の核酸、アミノ酸など）の程度をいう。従って、ある２つの遺伝子の相同性が高いほど、それらの配列の同一性または類似性は高い。２種類の遺伝子が相同性を有するか否かは、配列の直接の比較、またはストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーション法によって調べられ得る。２つの遺伝子配列を直接比較する場合、その遺伝子配列間でＤＮＡ配列が、代表的には少なくとも５０％同一である場合、好ましくは少なくとも７０％同一である場合、より好ましくは少なくとも８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である場合、それらの遺伝子は相同性を有する。本明細書において、遺伝子（例えば、核酸配列、アミノ酸配列など）の「類似性」とは、上記相同性において、保存的置換をポジティブ（同一）とみなした場合の、２以上の遺伝子配列の、互いに対する同一性の程度をいう。従って、保存的置換がある場合は、その保存的置換の存在に応じて相同性と類似性とは異なる。また、保存的置換がない場合は、相同性と類似性とは同じ数値を示す。
【０３０８】
本明細書では、アミノ酸配列および塩基配列の類似性、同一性および相同性の比較は、配列分析用ツールであるＦＡＳＴＡを用い、デフォルトパラメータを用いて算出される。
【０３０９】
本明細書において、「アミノ酸」は、本発明の目的を満たす限り、天然のものでも非天然のものでもよい。「誘導体アミノ酸」または「アミノ酸アナログ」とは、天然に存在するアミノ酸とは異なるがもとのアミノ酸と同様の機能を有するものをいう。そのような誘導体アミノ酸およびアミノ酸アナログは、当該分野において周知である。用語「天然のアミノ酸」とは、天然のアミノ酸のＬ−異性体を意味する。天然のアミノ酸は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、メチオニン、トレオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、プロリン、ヒスチジン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、γ−カルボキシグルタミン酸、アルギニン、オルニチン、およびリジンである。特に示されない限り、本明細書でいう全てのアミノ酸はＬ体であるが、Ｄ体のアミノ酸を用いた形態もまた本発明の範囲内にある。用語「非天然アミノ酸」とは、タンパク質中で通常は天然に見出されないアミノ酸を意味する。非天然アミノ酸の例として、ノルロイシン、パラ−ニトロフェニルアラニン、ホモフェニルアラニン、パラ−フルオロフェニルアラニン、３−アミノ−２−ベンジルプロピオン酸、ホモアルギニンのＤ体またはＬ体およびＤ−フェニルアラニンが挙げられる。「アミノ酸アナログ」とは、アミノ酸ではないが、アミノ酸の物性および／または機能に類似する分子をいう。アミノ酸アナログとしては、例えば、エチオニン、カナバニン、２−メチルグルタミンなどが挙げられる。アミノ酸模倣物とは、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と同様な様式で機能する化合物をいう。
【０３１０】
アミノ酸は、その一般に公知の３文字記号か、またはＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨される１文字記号のいずれかにより、本明細書中で言及され得る。ヌクレオチドも同様に、一般に認知された１文字コードにより言及され得る。
【０３１１】
本明細書において、「対応する」アミノ酸とは、あるタンパク質分子またはポリペプチド分子において、比較の基準となるタンパク質またはポリペプチドにおける所定のアミノ酸と同様の作用を有するか、または有することが予測されるアミノ酸をいい、特に酵素分子にあっては、活性部位中の同様の位置に存在し触媒活性に同様の寄与をするアミノ酸をいう。例えば、アンチセンス分子であれば、そのアンチセンス分子の特定の部分に対応するオルソログにおける同様の部分であり得る。
【０３１２】
本明細書において、「対応する」遺伝子とは、ある種において、比較の基準となる種における所定の遺伝子と同様の作用を有するか、または有することが予測される遺伝子をいい、そのような作用を有する遺伝子が複数存在する場合、進化学的に同じ起源を有するものをいう。従って、ある遺伝子の対応する遺伝子は、その遺伝子のオルソログであり得る。したがって、マウスのＰｅｐ５、ＰＫＣ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ＭＡＧ、ｐ２１、Ｒｈｏ、Ｒｈｏキナーゼなどの遺伝子に対応する遺伝子は、他の動物（ヒト、ラット、ブタ、ウシなど）においても見出すことができる。そのような対応する遺伝子は、当該分野において周知の技術を用いて同定することができる。したがって、例えば、ある動物における対応する遺伝子は、対応する遺伝子の基準となる遺伝子（例えば、マウスのＰｅｐ５、ＰＫＣ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ＭＡＧ、ｐ２１、Ｒｈｏ、Ｒｈｏキナーゼなどの遺伝子）の配列をクエリ配列として用いてその動物（例えばヒト、ラット）の配列データベースを検索することによって見出すことができる。
【０３１３】
本明細書中で使用される「異種」とは、異なる配列または対応しない配列、あるいは異なる種由来の配列である、ヌクレオチド配列またはアミノ酸配列をいう。例えば、マウスＭＡＧのヌクレオチド配列またはアミノ酸配列は、ヒトＭＡＧのヌクレオチド配列またはアミノ酸配列に対して異種であり、そしてヒトＭＡＧの核酸配列またはアミノ酸配列は、ヒトアルブミンのヌクレオチド配列またはアミノ酸配列に対して異種である。
【０３１４】
本明細書において「ヌクレオチド」は、天然のものでも非天然のものでもよい。「誘導体ヌクレオチド」または「ヌクレオチドアナログ」とは、天然に存在するヌクレオチドとは異なるがもとのヌクレオチドと同様の機能を有するものをいう。そのような誘導体ヌクレオチドおよびヌクレオチドアナログは、当該分野において周知である。そのような誘導体ヌクレオチドおよびヌクレオチドアナログの例としては、ホスホロチオエート、ホスホルアミデート、メチルホスホネート、キラルメチルホスホネート、２−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、ペプチド−核酸（ＰＮＡ）が含まれるが、これらに限定されない。
【０３１５】
本明細書において「フラグメント」とは、全長のポリペプチドまたはポリヌクレオチド（長さがｎ）に対して、１〜ｎ−１までの配列長さを有するポリペプチドまたはポリヌクレオチドをいう。フラグメントの長さは、その目的に応じて、適宜変更することができ、例えば、その長さの下限としては、ポリペプチドの場合、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５，２０、２５、３０、４０、５０およびそれ以上のアミノ酸が挙げられ、ここの具体的に列挙していない整数で表される長さ（例えば、１１など）もまた、下限として適切であり得る。また、ポリヌクレオチドの場合、５、６、７、８、９、１０、１５，２０、２５、３０、４０、５０、７５、１００およびそれ以上のヌクレオチドが挙げられ、ここの具体的に列挙していない整数で表される長さ（例えば、１１など）もまた、下限として適切であり得る。本明細書において、ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの長さは、上述のようにそれぞれアミノ酸または核酸の個数で表すことができるが、上述の個数は絶対的なものではなく、同じ機能を有する限り、上限または加減としての上述の個数は、その個数の上下数個（または例えば上下１０％）のものも含むことが意図される。そのような意図を表現するために、本明細書では、個数の前に「約」を付けて表現することがある。しかし、本明細書では、「約」のあるなしはその数値の解釈に影響を与えないことが理解されるべきである。本明細書において有用なフラグメントの長さは、そのフラグメントの基準となる全長タンパク質の機能のうち少なくとも１つの機能が保持されているかどうかによって決定され得る。
【０３１６】
本明細書において第一の物質または因子が第二の物質または因子に「特異的に相互作用する」とは、第一の物質または因子が、第二の物質または因子に対して、第二の物質または因子以外の物質または因子（特に、第二の物質または因子を含むサンプル中に存在する他の物質または因子）に対するよりも高い親和性で相互作用することをいう。物質または因子について特異的な相互作用としては、例えば、核酸におけるハイブリダイゼーション、抗原抗体反応、リガンド−レセプター反応、酵素−基質反応など、核酸およびタンパク質の両方が関係する場合、転写因子とその転写因子の結合部位との反応など、タンパク質−脂質相互作用、核酸−脂質相互作用などが挙げられるがそれらに限定されない。従って、第１および第２の物質または因子がともに核酸である場合、第一の物質または因子が第二の物質または因子に「特異的に相互作用する」ことには、第一の物質または因子が、第二の物質または因子に対して少なくとも一部に相補性を有することが包含される。また例えば、物質または因子がともにタンパク質である場合、第一の物質または因子が第二の物質または因子に「特異的に相互作用する」こととしては、例えば、抗原抗体反応による相互作用、レセプター−リガンド反応による相互作用、酵素−基質相互作用などが挙げられるがそれらに限定されない。２種類の物質または因子がタンパク質および核酸である場合、「特異的に相互作用する」ことには、転写因子と、その転写因子が対象とする核酸分子の結合領域との間の相互作用が包含される。
【０３１７】
本明細書においてポリヌクレオチドまたはポリペプチドなどの生物学的因子に対して「特異的に相互作用する因子」とは、そのポリヌクレオチドまたはそのポリペプチドなどの生物学的因子に対する親和性が、他の無関連の（特に、同一性が３０％未満の）ポリヌクレオチドまたはポリペプチドなどの生物学的因子に対する親和性よりも、代表的には同等またはより高いか、好ましくは有意に（例えば、統計学的に有意に）高いものを包含する。そのような親和性は、例えば、ハイブリダイゼーションアッセイ、結合アッセイなどによって測定することができる。本明細書において「因子」（ａｇｅｎｔ）としては、意図する目的を達成することができる限りどのような物質または他の要素（例えば、光、放射能、熱、電気などのエネルギー）でもあってもよい。そのような物質としては、例えば、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、ペプチド、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ヌクレオチド、核酸（例えば、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡのようなＤＮＡ、ｍＲＮＡのようなＲＮＡを含む）、ポリサッカリド、オリゴサッカリド、脂質、有機低分子（例えば、ホルモン、リガンド、情報伝達物質、有機低分子、コンビナトリアルケミストリで合成された分子、低分子（例えば、薬学的に受容可能な低分子リガンドなど）など）、これらの分子の組み合わせが挙げられるがそれらに限定されない。ポリヌクレオチドに対して特異的な因子としては、代表的には、そのポリヌクレオチドの配列に対して一定の配列相同性を（例えば、７０％以上の配列同一性）もって相補性を有するポリヌクレオチド、プロモーター領域に結合する転写因子のようなポリペプチドなどが挙げられるがそれらに限定されない。ポリペプチドに対して特異的な因子としては、代表的には、そのポリペプチドに対して特異的に指向された抗体またはその誘導体あるいはそのアナログ（例えば、単鎖抗体）、そのポリペプチドがレセプターまたはリガンドである場合の特異的なリガンドまたはレセプター、そのポリペプチドが酵素である場合、その基質などが挙げられるがそれらに限定されない。
【０３１８】
本明細書中で使用される「化合物」は、任意の識別可能な化学物質または分子を意味し、これらには、低分子、ペプチド、タンパク質、糖、ヌクレオチド、または核酸が挙げられるが、これらに限定されず、そしてこのような化合物は、天然物または合成物であり得る。
【０３１９】
本明細書においてｐ７５シグナル伝達経路における「伝達因子」とは、ｐ７５シグナル伝達経路において、シグナルを伝達する役割を担う分子をいう。そのような分子としては、例えば、ＭＡＧ、Ｎｏｇｏ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼなどが挙げられるがそれらに限定されない。
【０３２０】
本明細書においてｐ７５シグナル伝達経路の「抑制」および「阻害」とは、そのシグナル伝達経路が一部または全部遮断され、その結果シグナルが完全には伝達されなくなる（好ましくは、全く伝達されない）ことをいう。本明細書においてｐ７５シグナル伝達経路の伝達因子の「抑制」および「阻害」もまた、本明細書において同様に解され、シグナル伝達経路の伝達因子が一部または全部機能しなくなり、その結果シグナルが完全には伝達されなくなる（好ましくは、全く伝達されない）ことをいう。そのような抑制または阻害の機構としては、例えば、ＭＡＧ、Ｎｏｇｏ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼなどを変異、抑制または阻害あるいは消失させることが挙げられるがそれらに限定されない。
【０３２１】
本明細書において「有機低分子」とは、有機分子であって、比較的分子量が小さなものをいう。通常有機低分子は、分子量が約１０００以下のものをいうが、それ以上のものであってもよい。有機低分子は、通常当該分野において公知の方法を用いるかそれらを組み合わせて合成することができる。そのような有機低分子は、生物に生産させてもよい。有機低分子としては、例えば、ホルモン、リガンド、情報伝達物質、コンビナトリアルケミストリで合成された分子、医薬品として利用され得る低分子（例えば、低分子リガンドなど）などが挙げられるがそれらに限定されない。
【０３２２】
本明細書中で使用される「接触（させる）」とは、化合物を、直接的または間接的のいずれかで、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドに対して物理的に近接させることを意味する。ポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、多くの緩衝液、塩、溶液などに存在し得る。「接触」とは、核酸分子またはそのフラグメントをコードするポリペプチドを含む、例えば、ビーカー、マイクロタイタープレート、細胞培養フラスコまたはマイクロアレイ（例えば、遺伝子チップ）などに化合物を置くことが挙げられる。
【０３２３】
本明細書において用いられる用語「抗体」は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、多重特異性抗体、キメラ抗体、および抗イディオタイプ抗体、ならびにそれらの断片、例えばＦ（ａｂ’）２およびＦａｂ断片、ならびにその他の組換えにより生産された結合体を含む。さらにこのような抗体を、酵素、例えばアルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、αガラクトシダーゼなど、に共有結合させまたは組換えにより融合させてよい。
【０３２４】
本明細書中で使用される「モノクローナル抗体」は、同質な抗体集団を有する抗体組成物をいう。この用語は、それが作製される様式によって限定されない。この用語は、全免疫グロブリン分子ならびにＦａｂ分子、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、およびもとのモノクローナル抗体分子の免疫学的結合特性を示す他の分子を含む。ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を作製する方法は当該分野で公知であり、そして以下でより十分に記載される。
【０３２５】
モノクローナル抗体は、当該分野で周知の標準的な技術（例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ（１９７５）２５６：４９５）またはその改変（例えば、Ｂｕｃｋら（１９８２）Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  １８：３７７）を使用して調製される。代表的には、マウスまたはラットを、タンパク質キャリアに結合したタンパク質で免疫化し、追加免疫し、そして脾臓（および必要に応じていくつかの大きなリンパ節）を取り出し、そして単一細胞を解離する。必要に応じて、この脾臓細胞は、非特異的接着細胞の除去後、抗原でコーティングされたプレートまたはウェルに細胞懸濁液を適用することにより、スクリーニングされ得る。抗原に特異的なイムノグロブリンを発現するＢ細胞がプレートに結合し、そして懸濁液の残渣でもリンス除去されない。次いで、得られたＢ細胞（すなわちすべての剥離した脾臓細胞）をミエローマ細胞と融合させて、ハイブリドーマを得、このハイブリドーマを用いてモノクローナル抗体を産生させる。
【０３２６】
本明細書において「抗原」（ａｎｔｉｇｅｎ）とは、抗体分子によって特異的に結合され得る任意の基質をいう。本明細書において「免疫原」（ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ）とは、抗原特異的免疫応答を生じるリンパ球活性化を開始し得る抗原をいう。
【０３２７】
本明細書において「単鎖抗体」とは、Ｆｖ領域の重鎖フラグメントおよび軽鎖フラグメントがペプチド架橋を介して連結されれることによって形成され、単鎖ポリペプチドを生じたものをいう。
【０３２８】
本明細書において「複合分子」とは、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、脂質、糖、低分子などの分子が複数種連結してできた分子をいう。そのような複合分子としては、例えば、糖脂質、糖ペプチドなどが挙げられるがそれらに限定されない。本明細書では、Ｐｅｐ５、ＰＫＣ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ＭＡＧ、ｐ２１、Ｒｈｏ、Ｒｈｏキナーゼまたはその改変体もしくはフラグメントなどをコードする核酸分子またはその産物あるいはＧＴ１ｂまたは本発明の因子と同様の機能を有する限り、それぞれＰｅｐ５、ＰＫＣ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ＭＡＧ、ｐ２１、Ｒｈｏ、Ｒｈｏキナーゼまたはその改変体もしくはフラグメントなどをコードする核酸分子またはその産物あるいはＧＴ１ｂまたは本発明の因子としてそのような複合分子も使用することができる。
【０３２９】
本明細書において「単離された」生物学的因子（例えば、核酸またはタンパク質など）とは、その生物学的因子が天然に存在する生物体の細胞内の他の生物学的因子（例えば、核酸である場合、核酸以外の因子および目的とする核酸以外の核酸配列を含む核酸；タンパク質である場合、タンパク質以外の因子および目的とするタンパク質以外のアミノ酸配列を含むタンパク質など）から実質的に分離または精製されたものをいう。「単離された」核酸およびタンパク質には、標準的な精製方法によって精製された核酸およびタンパク質が含まれる。したがって、単離された核酸およびタンパク質は、化学的に合成した核酸およびタンパク質を包含する。
【０３３０】
本明細書において「精製された」生物学的因子（例えば、核酸またはタンパク質など）とは、その生物学的因子に天然に随伴する因子の少なくとも一部が除去されたものをいう。したがって、通常、精製された生物学的因子におけるその生物学的因子の純度は、その生物学的因子が通常存在する状態よりも高い（すなわち濃縮されている）。
【０３３１】
本明細書中で使用される用語「精製された」および「単離された」は、好ましくは少なくとも７５重量％、より好ましくは少なくとも８５重量％、よりさらに好ましくは少なくとも９５重量％、そして最も好ましくは少なくとも９８重量％の、同型の生物学的因子が存在することを意味する。  
【０３３２】
本明細書において遺伝子、ポリヌクレオチド、ポリペプチドなど遺伝子産物の「発現」とは、その遺伝子などがインビボで一定の作用を受けて、別の形態になることをいう。好ましくは、「発現」とは、遺伝子、ポリヌクレオチドなどが、転写および翻訳されて、ポリペプチドの形態になることをいうが、転写されてｍＲＮＡが作製されることもまた発現の一形態であり得る。より好ましくは、そのようなポリペプチドの形態は、翻訳後プロセシングを受けたものであり得る。
【０３３３】
従って、本明細書において遺伝子、ポリヌクレオチド、ポリペプチドなどの「発現」の「減少」とは、本発明の因子を作用させたときに、作用させないときよりも、発現の量が有意に減少することをいう。好ましくは、発現の減少は、ポリペプチド（例えば、Ｐｅｐ５、ＰＫＣ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ＭＡＧ、ｐ２１、Ｒｈｏ、Ｒｈｏキナーゼまたはその改変体もしくはフラグメントなど）の発現量の減少を含む。本明細書において遺伝子、ポリヌクレオチド、ポリペプチドなどの「発現」の「増加」とは、本発明の因子を作用させたときに、作用させないときよりも、発現の量が有意に増加することをいう。好ましくは、発現の増加は、ポリペプチド（例えば、Ｐｅｐ５、ＰＫＣ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ＭＡＧ、ｐ２１、Ｒｈｏ、Ｒｈｏキナーゼまたはその改変体もしくはフラグメントなど）の発現量の増加を含む。本明細書において遺伝子の「発現」の「誘導」とは、ある細胞にある因子を作用させてその遺伝子の発現量を増加させることをいう。したがって、発現の誘導は、まったくその遺伝子の発現が見られなかった場合にその遺伝子が発現するようにすること、およびすでにその遺伝子の発現が見られていた場合にその遺伝子の発現が増大することを包含する。このような遺伝子または遺伝子産物（ポリペプチドまたはポリヌクレオチド）の発現の増加または減少は、本発明の治療形態、予後形態または予防形態において有用であり得る。
【０３３４】
本明細書において、遺伝子が「特異的に発現する」とは、その遺伝子が、特定の部位または時期において他の部位または時期とは異なる（好ましくは高い）レベルで発現されることをいう。「特異的に発現する」とは、ある部位（特異的部位）にのみ発現してもよく、それ以外の部位においても発現していてもよい。好ましくは「特異的に発現する」とは、ある部位においてのみ発現することをいう。したがって、本発明において、ある実施形態では、罹患した箇所（例えば、神経）に特異的に、あるいは局所的に、Ｐｅｐ５、ＰＫＣ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ＭＡＧ、ｐ２１、Ｒｈｏ、Ｒｈｏキナーゼまたはその改変体もしくはフラグメントなどを発現させてもよい。
【０３３５】
本明細書において「生物学的活性」とは、ある因子（例えば、ポリヌクレオチド、タンパク質など）が、生体内において有し得る活性のことをいい、種々の機能（例えば、転写促進活性）を発揮する活性が包含される。例えば、２つの因子が相互作用する（例えば、Ｐｅｐ５とｐ７５、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩ、ＭＡＧとｐ７５、ＧＴ１ｂとｐ７５）場合、その生物学的活性は、その二分子との間の結合およびそれによって生じる生物学的変化、例えば、一つの分子を抗体を用いて沈降させたときに他の分子も共沈するとき、２分子は結合していると考えられる。したがって、そのような共沈を見ることが一つの判断手法として挙げられる。また、神経突起の伸展を指標にしてある分子と他の分子とが機能的に関連していると関連付けることができる。具体的には、「生物学的活性」とは、ＭＡＧ、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩは相互に連関して神経突起の伸展を阻害するが、Ｐｅｐ５およびｐ２１は、その作用をブロックすることを観察することなどを包含する。例えば、ある因子が酵素である場合、その生物学的活性は、その酵素活性を包含する。別の例では、ある因子がリガンドである場合、そのリガンドが対応するレセプターへの結合を包含する。そのような生物学的活性は、当該分野において周知の技術によって測定することができる。
【０３３６】
したがって、「活性」は、結合（直接的または間接的のいずれか）を示すかまたは明らかにするか；あるいは応答に影響する（すなわち、いくらかの曝露または刺激に応答する測定可能な影響を有する）、種々の測定可能な指標をいい、例えば、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドに直接結合する化合物の親和性、または例えば、いくつかの刺激後または事象後の上流または下流のタンパク質の量あるいは他の類似の機能の尺度が、挙げられる。このような活性は、ＧＴ１ｂ対するＭＡＧ結合の競合阻害のようなアッセイによって測定され得る。ここでは、例えば、標識していない可溶性ＭＡＧが、漸増濃度でアッセイ系に添加され、ＣＨＯ細胞の表面上に発現されたｐ７５−ＧＴ１ｂに対するＭＡＧの結合を阻害する。別の例として、神経損傷によって引き起こされた病変を横切って伸長するニューロンの能力を評価し得る（ＳｃｈｎｅｌｌおよびＳｃｈｗａｂ（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ  ３４３、２６９−２７２）。
【０３３７】
本明細書において「相互作用」とは、２つの物質についていうとき、一方の物質と他方の物質との間で力（例えば、分子間力（ファンデルワールス力）、水素結合、疎水性相互作用など）を及ぼしあうこという。通常、相互作用をした２つの物質は、会合または結合している状態にある。
【０３３８】
本明細書中で使用される用語「結合」は、２つのタンパク質もしくは化合物または関連するタンパク質もしくは化合物の間、あるいはそれらの組み合わせの間での、物理的相互作用または化学的相互作用を意味する。結合には、イオン結合、非イオン結合、水素結合、ファンデルワールス結合、疎水性相互作用などが含まれる。物理的相互作用（結合）は、直接的または間接的であり得、間接的なものは、別のタンパク質または化合物の効果を介するかまたは起因する。直接的な結合とは、別のタンパク質または化合物の効果を介してもまたはそれらに起因しても起こらず、他の実質的な化学中間体を伴わない、相互作用をいう。
【０３３９】
本明細書中で使用される用語「調節する（ｍｏｄｕｌａｔｅ）」または「改変する（ｍｏｄｉｆｙ）」は、特定の活性、因子またはタンパク質の量、質または効果における増加または減少あるいは維持を意味する。
【０３４０】
本明細書において「アンチセンス（活性）」とは、標的遺伝子の発現を特異的に抑制または低減することができる活性をいう。アンチセンス活性は、通常、目的とする遺伝子（例えば、Ｐｅｐ５、ＰＫＣ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ＭＡＧ、ｐ２１、Ｒｈｏ、Ｒｈｏキナーゼまたはその改変体もしくはフラグメントなど）の核酸配列と相補的な、少なくとも８の連続するヌクレオチド長の核酸配列によって達成される。そのような核酸配列は、好ましくは、少なくとも９の連続するヌクレオチド長の、より好ましく１０の連続するヌクレオチド長の、さらに好ましくは１１の連続するヌクレオチド長の、１２の連続するヌクレオチド長の、１３の連続するヌクレオチド長の、１４の連続するヌクレオチド長の、１５の連続するヌクレオチド長の、２０の連続するヌクレオチド長の、３０の連続するヌクレオチド長の、４０の連続するヌクレオチド長の、５０の連続するヌクレオチド長の、核酸配列であり得る。そのような核酸配列を有する分子を本明細書において「アンチセンス分子」、「アンチセンス核酸分子」または「アンチセンス核酸」と称し、これらは交換可能に使用される。そのような核酸配列には、上述の配列に対して、少なくとも７０％相同な、より好ましくは、少なくとも８０％相同な、さらに好ましくは、９０％相同な、もっとも好ましくは９５％相同な核酸配列が含まれる。そのようなアンチセンス活性は、目的とする遺伝子の核酸配列の５’末端の配列に対して相補的であることが好ましい。そのようなアンチセンスの核酸配列には、上述の配列に対して、１つまたは数個あるいは少なくとも１つのヌクレオチドの置換、付加および／または欠失を有するものもまた含まれる。本明細書中で開示される核酸配列（例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１または１３など）が与えられれば、本発明のアンチセンス核酸は、ＷａｔｓｏｎおよびＣｒｉｃｋ塩基対形成の法則またはＨｏｏｇｓｔｅｅｎ塩基対形成の法則に従い設計され得る。アンチセンス核酸分子は、ｐ７５シグナル伝達因子のｍＲＮＡの全コード領域に相補的であり得るが、より好ましくは、ｐ７５シグナル伝達因子のｍＲＮＡのコード領域または非コード領域の一部のみに対してアンチセンスであるオリゴヌクレオチドである。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ｐ７５シグナル伝達因子のｍＲＮＡの翻訳開始部位の周辺の領域に相補的であり得る。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、または約５０ヌクレオチド長であり得る。本発明のアンチセンス核酸は、当該分野で公知の手順を用いて、化学合成または酵素的連結反応を用いて構築され得る。例えば、アンチセンス核酸（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）は、天然に存在するヌクレオチド、またはその分子の生物学的安定性を増加させるかもしくはアンチセンス核酸とセンス核酸との間で形成された二本鎖の物理的安定性を増加させるように設計された種々の改変ヌクレオチドを用いて（例えば、ホスホロチオエート誘導体およびアクリジン置換ヌクレオチドが使用され得る）化学合成され得る。アンチセンス核酸を生成するために使用され得る改変ヌクレオチドの例として���５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、β−Ｄ−ガラクトシルキューオシン（ｑｕｅｏｓｉｎｅ）、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデニン、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルキューオシン、５’−メトキシカルボキシメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、ワイブトキシン（ｗｙｂｕｔｏｘｏｓｉｎｅ）、プソイドウラシル、キューオシン、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、５−メチル−２−チオウラシル、３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボキシプロピル）ウラシル、（ａｃｐ３）ｗ、および２，６−ジアミノプリンなどが挙げられるがそれらに限定されない。
【０３４１】
本明細書において「ＲＮＡｉ」とは、ＲＮＡ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅの略称で、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡともいう）のようなＲＮＡｉを引き起こす因子を細胞に導入することにより、相同なｍＲＮＡが特異的に分解され、遺伝子産物の合成が抑制される現象およびそれに用いられる技術をいう。本明細書においてＲＮＡｉはまた、場合によっては、ＲＮＡｉを引き起こす因子と同義に用いられ得る。
【０３４２】
本明細書において「ＲＮＡｉを引き起こす因子」とは、ＲＮＡｉを引き起こすことができるような任意の因子をいう。本明細書において「遺伝子に対してＲＮＡｉを引き起こす因子」とは、その遺伝子に関するＲＮＡｉを引き起こし、ＲＮＡｉがもたらす効果（例えば、その遺伝子の発現抑制など）が達成されることをいう。そのようなＲＮＡｉを引き起こす因子としては、例えば、標的遺伝子の核酸配列の一部に対して少なくとも約７０％の相同性を有する配列またはストリンジェントな条件下でハイブリダイズする配列を含む、少なくとも１０ヌクレオチド長の二本鎖部分を含むＲＮＡまたはその改変体が挙げられるがそれに限定されない。ここで、この因子は、好ましくは、３’突出末端を含み、より好ましくは、３’突出末端は、２ヌクレオチド長以上のＤＮＡ（例えば、２〜４ヌクレオチド長のＤＮＡであり得る。
【０３４３】
理論に束縛されないが、ＲＮＡｉが働く機構として考えられるものの一つとして、ｄｓＲＮＡのようなＲＮＡｉを引き起こす分子が細胞に導入されると、比較的長い（例えば、４０塩基対以上）ＲＮＡの場合、ヘリカーゼドメインを持つダイサー（Ｄｉｃｅｒ）と呼ばれるＲＮａｓｅＩＩＩ様のヌクレアーゼがＡＴＰ存在下で、その分子を３’末端から約２０塩基対ずつ切り出し、短鎖ｄｓＲＮＡ（ｓｉＲＮＡとも呼ばれる）を生じる。本明細書において「ｓｉＲＮＡ」とは、ｓｈｏｒｔ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡの略称であり、人工的に化学合成されるかまたは生化学的に合成されたものか、あるいは生物体内で合成されたものか、あるいは約４０塩基以上の二本鎖ＲＮＡが体内で分解されてできた１０塩基対以上の短鎖二本鎖ＲＮＡをいい、通常、５’−リン酸、３’−ＯＨの構造を有しており、３’末端は約２塩基突出している。このｓｉＲＮＡに特異的なタンパク質が結合して、ＲＩＳＣ（ＲＮＡ−ｉｎｄｕｃｅｄ−ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ−ｃｏｍｐｌｅｘ）が形成される。この複合体は、ｓｉＲＮＡと同じ配列を有するｍＲＮＡを認識して結合し、ＲＮａｓｅＩＩＩ様の酵素活性によってｓｉＲＮＡの中央部でｍＲＮＡを切断する。ｓｉＲＮＡの配列と標的として切断するｍＲＮＡの配列の関係については、１００％一致することが好ましい。しかし、ｓｉＲＮＡの中央から外れた位置についての塩基の変異については、完全にＲＮＡｉによる切断活性がなくなるのではなく、部分的な活性が残存する。他方、ｓｉＲＮＡの中央部の塩基の変異は影響が大きく、ＲＮＡｉによるｍＲＮＡの切断活性が極度に低下する。このような性質を利用して、変異をもつｍＲＮＡについてのみ、その変異を中央に配したｓｉＲＮＡを合成し、細胞内に導入することで特異的に変異を含むｍＲＮＡだけを分解することができる。従って、本発明では、ｓｉＲＮＡそのものをＲＮＡｉを引き起こす因子として用いることができるし、ｓｉＲＮＡを生成するような因子（例えば、代表的に約４０塩基以上のｄｓＲＮＡ）をそのような因子として用いることができる。
【０３４４】
また、理論に束縛されることを希望しないが、ｓｉＲＮＡは、上記経路とは別に、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖がｍＲＮＡに結合してＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲＰ）のプライマーとして作用し、ｄｓＲＮＡが合成され、このｄｓＲＮＡが再びダイサーの基質となり、新たなｓｉＲＮＡを生じて作用を増幅することも企図される。従って、本発明では、ｓｉＲＮＡ自体およびｓｉＲＮＡが生じるような因子もまた、有用である。実際に、昆虫などでは、例えば３５分子のｄｓＲＮＡ分子が、１，０００コピー以上ある細胞内のｍＲＮＡをほぼ完全に分解することから、ｓｉＲＮＡ自体およびｓｉＲＮＡが生じるような因子が有用であることが理解される。
【０３４５】
本発明においてｓｉＲＮＡと呼ばれる、約２０塩基前後（例えば、代表的には約２１〜２３塩基長）またはそれ未満の長さの二本鎖ＲＮＡを用いることができる。このようなｓｉＲＮＡは、細胞に発現させることにより遺伝子発現を抑制し、そのｓｉＲＮＡの標的となる病原遺伝子の発現を抑えることから、疾患の治療、予防、予後などに使用することができる。
【０３４６】
本発明において用いられるｓｉＲＮＡは、ＲＮＡｉを引き起こすことができる限り、どのような形態を採っていてもよい。
【０３４７】
別の実施形態において、本発明のＲＮＡｉを引き起こす因子は、３’末端に突出部を有する短いヘアピン構造（ｓｈＲＮＡ；ｓｈｏｒｔ  ｈａｉｒｐｉｎ  ＲＮＡ）であり得る。本明細書において「ｓｈＲＮＡ」とは、一本鎖ＲＮＡで部分的に回文状の塩基配列を含むことにより、分子内で二本鎖構造をとり、ヘアピンのような構造となる約２０塩基対以上の分子をいう。そのようなｓｈＲＮＡは、人工的に化学合成される。あるいは、そのようなｓｈＲＮＡは、センス鎖およびアンチセンス鎖のＤＮＡ配列を逆向きに連結したヘアピン構造のＤＮＡをＴ７  ＲＮＡポリメラーゼによりインビトロでＲＮＡを合成することによって生成することができる。理論に束縛されることは希望しないが、そのようなｓｈＲＮＡは、細胞内に導入された後、細胞内で約２０塩基（代表的には例えば、２１塩基、２２塩基、２３塩基）の長さに分解され、ｓｉＲＮＡと同様にＲＮＡｉを引き起こし、本発明の処置効果があることが理解されるべきである。このような効果は、昆虫、植物、動物（哺乳動物を含む）など広汎な生物において発揮されることが理解されるべきである。このように、ｓｈＲＮＡは、ｓｉＲＮＡと同様にＲＮＡｉを引き起こすことから、本発明の有効成分として用いることができる。ｓｈＲＮＡはまた、好ましくは、３’突出末端を有し得る。二本鎖部分の長さは特に限定されないが、好ましくは約１０ヌクレオチド長以上、より好ましくは約２０ヌクレオチド長以上であり得る。ここで、３’突出末端は、好ましくはＤＮＡであり得、より好ましくは少なくとも２ヌクレオチド長以上のＤＮＡであり得、さらに好ましくは２〜４ヌクレオチド長のＤＮＡであり得る。
【０３４８】
本発明において用いられるＲＮＡｉを引き起こす因子は、人工的に合成した（例えば、化学的または生化学的）ものでも、天然に存在するものでも用いることができ、この両者の間で本発明の効果に本質的な違いは生じない。化学的に合成したものでは、液体クロマトグラフィーなどにより精製をすることが好ましい。
【０３４９】
本発明において用いられるＲＮＡｉを引き起こす因子は、インビトロで合成することもできる。この合成系において、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼおよびＴ７プロモーターを用いて、鋳型ＤＮＡからアンチセンスおよびセンスのＲＮＡを合成する。これらをインビトロでアニーリングした後、細胞に導入すると、上述のような機構を通じてＲＮＡｉが引き起こされ、本発明の効果が達成される。ここでは、例えば、リン酸カルシウム法でそのようなＲＮＡを細胞内に導入することができる。
【０３５０】
本発明のＲＮＡｉを引き起こす因子の別の例としてはまた、ｍＲＮＡとハイブリダイズし得る一本鎖、あるいはそれらのすべての類似の核酸アナログのような因子も挙げられる。そのような因子もまた、本発明の処置方法および組成物において有用である。
【０３５１】
本明細書において、「ストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチド」とは、当該分野で慣用される周知の条件をいう。本発明のポリヌクレオチド中から選択されたポリヌクレオチドをプローブとして、コロニー・ハイブリダイゼーション法、プラーク・ハイブリダイゼーション法あるいはサザンブロットハイブリダイゼーション法等を用いることにより、そのようなポリヌクレオチドを得ることができる。具体的には、コロニーあるいはプラーク由来のＤＮＡを固定化したフィルターを用いて、０．７〜１．０ＭのＮａＣｌ存在下、６５℃でハイブリダイゼーションを行った後、０．１〜２倍濃度のＳＳＣ（ｓａｌｉｎｅ−ｓｏｄｉｕｍ  ｃｉｔｒａｔｅ）溶液（１倍濃度のＳＳＣ溶液の組成は、１５０ｍＭ  塩化ナトリウム、１５ｍＭ  クエン酸ナトリウムである）を用い、６５℃条件下でフィルターを洗浄することにより同定できるポリヌクレオチドを意味する。この方法によって同定されるポリヌクレオチドは、「ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチド」をいう。ハイブリダイゼーションは、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ２ｎｄ  ｅｄ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  １〜３８、ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  １：Ｃｏｒｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９９５）等の実験書に記載されている方法に準じて行うことができる。ここで、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする配列からは、好ましくは、Ａ配列のみまたはＴ配列のみを含む配列が除外される。「ハイブリダイズ可能なポリヌクレオチド」とは、上記ハイブリダイズ条件下で別のポリヌクレオチドにハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドをいう。ハイブリダイズ可能なポリヌクレオチドとして具体的には、本発明で具体的に示されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするＤＮＡの塩基配列と少なくとも６０％以上の相同性を有するポリヌクレオチド、好ましくは８０％以上の相同性を有するポリヌクレオチド、さらに好ましくは９５％以上の相同性を有するポリヌクレオチドを挙げることができる。
【０３５２】
本明細書において「高度にストリンジェントな条件」は、核酸配列において高度の相補性を有するＤＮＡ鎖のハイブリダイゼーションを可能にし、そしてミスマッチを有意に有するＤＮＡのハイブリダイゼーションを除外するように設計された条件をいう。ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーは、主に、温度、イオン強度、およびホルムアミドのような変性剤の条件によって決定される。このようなハイブリダイゼーションおよび洗浄に関する「高度にストリンジェントな条件」の例は、０．００１５Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍ クエン酸ナトリウム、６５〜６８℃、または０．０１５Ｍ 塩化ナトリウム、０．００１５Ｍ クエン酸ナトリウム、および５０％ ホルムアミド、４２℃である。このような高度にストリンジェントな条件については、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ  ＆  Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第２版（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎ，Ｙ．１９８９）；およびＡｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、ＩＶ、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ  Ｌｉｍｉｔｅｄ（Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｘｐｒｅｓｓ）を参照のこと。必要により、よりストリンジェントな条件（例えば、より高い温度、より低いイオン強度、より高いホルムアミド、または他の変性剤）を、使用してもよい。他の薬剤が、非特異的なハイブリダイゼーションおよび／またはバックグラウンドのハイブリダイゼーションを減少する目的で、ハイブリダイゼーション緩衝液および洗浄緩衝液に含まれ得る。そのような他の薬剤の例としては、０．１％ウシ血清アルブミン、０．１％ポリビニルピロリドン、０．１％ピロリン酸ナトリウム、０．１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＮａＤｏｄＳＯ４またはＳＤＳ）、Ｆｉｃｏｌｌ、Ｄｅｎｈａｒｄｔ溶液、超音波処理されたサケ精子ＤＮＡ（または別の非相補的ＤＮＡ）および硫酸デキストランであるが、他の適切な薬剤もまた、使用され得る。これらの添加物の濃度および型は、ハイブリダイゼーション条件のストリンジェンシーに実質的に影響を与えることなく変更され得る。ハイブリダイゼーション実験は、通常、ｐＨ６．８〜７．４で実施されるが；代表的なイオン強度条件において、ハイブリダイゼーションの速度は、ほとんどｐＨ独立である。Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、第４章、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ（Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ）を参照のこと。
【０３５３】
ＤＮＡ二重鎖の安定性に影響を与える因子としては、塩基の組成、長さおよび塩基対不一致の程度が挙げられる。ハイブリダイゼーション条件は、当業者によって調整され得、これらの変数を適用させ、そして異なる配列関連性のＤＮＡがハイブリッドを形成するのを可能にする。完全に一致したＤＮＡ二重鎖の融解温度は、以下の式によって概算され得る。
Ｔｍ（℃）＝８１．５＋１６．６（ｌｏｇ［Ｎａ＋］）＋０．４１（％Ｇ＋Ｃ）−６００／Ｎ−０．７２（％ホルムアミド）
ここで、Ｎは、形成される二重鎖の長さであり、［Ｎａ＋］は、ハイブリダイゼーション溶液または洗浄溶液中のナトリウムイオンのモル濃度であり、％Ｇ＋Ｃは、ハイブリッド中の（グアニン＋シトシン）塩基のパーセンテージである。不完全に一致したハイブリッドに関して、融解温度は、各１％不一致（ミスマッチ）に対して約１℃ずつ減少する。
【０３５４】
本明細書において「中程度にストリンジェントな条件」とは、「高度にストリンジェントな条件」下で生じ得るよりも高い程度の塩基対不一致を有するＤＮＡ二重鎖が、形成し得る条件をいう。代表的な「中程度にストリンジェントな条件」の例は、０．０１５Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍ クエン酸ナトリウム、５０〜６５℃、または０．０１５Ｍ 塩化ナトリウム、０．００１５Ｍ クエン酸ナトリウム、および２０％ホルムアミド、３７〜５０℃である。例として、０．０１５Ｍナトリウムイオン中、５０℃の「中程度にストリンジェントな」条件は、約２１％の不一致を許容する。
【０３５５】
本明細書において「高度にストリンジェントな条件」と「中程度にストリンジェントな条件」との間に完全な区別は存在しないことがあり得ることが、当業者によって理解される。例えば、０．０１５Ｍナトリウムイオン（ホルムアミドなし）において、完全に一致した長いＤＮＡの融解温度は、約７１℃である。６５℃（同じイオン強度）での洗浄において、これは、約６％不一致を許容にする。より離れた関連する配列を捕獲するために、当業者は、単に温度を低下させ得るか、またはイオン強度を上昇し得る。
【０３５６】
約２０ヌクレオチドまでのオリゴヌクレオチドプローブについて、１ＭＮａＣｌにおける融解温度の適切な概算は、
Ｔｍ＝（１つのＡ−Ｔ塩基につき２℃）＋（１つのＧ−Ｃ塩基対につき４℃）
によって提供される。なお、６×クエン酸ナトリウム塩（ＳＳＣ）におけるナトリウムイオン濃度は、１Ｍである（Ｓｕｇｇｓら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｕｓｉｎｇ Ｐｕｒｉｆｉｅｄ Ｇｅｎｅｓ、６８３頁、ＢｒｏｗｎおよびＦｏｘ（編）（１９８１）を参照のこと）。
【０３５７】
Ｐｅｐ５、ＰＫＣ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ＭＡＧ、ｐ２１、Ｒｈｏ、Ｒｈｏキナーゼまたはその改変体もしくはフラグメントなどのタンパク質をコードする天然の核酸は、例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５または１６などの核酸配列の一部またはその改変体を含むＰＣＲプライマーおよびハイブリダイゼーションプローブを有するｃＤＮＡライブラリーから容易に分離される。好ましいＰｅｐ５、ＰＫＣ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ＭＡＧ、ｐ２１、Ｒｈｏ、Ｒｈｏキナーゼまたはその改変体もしくはフラグメントなどをコードする核酸は、本質的に１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）；５００ｍＭ  リン酸ナトリウム（ＮａＰＯ４）；１ｍＭ  ＥＤＴＡ；４２℃の温度で  ７％  ＳＤＳ  を含むハイブリダイゼーション緩衝液、および本質的に２×ＳＳＣ（６００ｍＭ  ＮａＣｌ；６０ｍＭ  クエン酸ナトリウム）；５０℃の０．１％  ＳＤＳを含む洗浄緩衝液によって定義される低ストリンジェント条件下、さらに好ましくは本質的に５０℃の温度での１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）；５００ｍＭ  リン酸ナトリウム（ＮａＰＯ４）；１５％ホルムアミド；１ｍＭ  ＥＤＴＡ；  ７％  ＳＤＳ  を含むハイブリダイゼーション緩衝液、および本質的に５０℃の１×ＳＳＣ（３００ｍＭ  ＮａＣｌ；３０ｍＭ  クエン酸ナトリウム）；１％  ＳＤＳを含む洗浄緩衝液によって定義される低ストリンジェント条件下、最も好ましくは本質的に５０℃の温度での１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）；２００ｍＭ  リン酸ナトリウム（ＮａＰＯ４）；１５％ホルムアミド；１ｍＭ  ＥＤＴＡ；７％ＳＤＳを含むハイブリダイゼーション緩衝液、および本質的に６５℃の０．５×ＳＳＣ（１５０ｍＭ  ＮａＣｌ；１５ｍＭ  クエン酸ナトリウム）；０．１％  ＳＤＳを含む洗浄緩衝液によって定義される低ストリンジェント条件下に配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５または１６に示す配列の全てまたはその一部とハイブリダイズし得る。
【０３５８】
本明細書において「プローブ」とは、インビトロおよび／またはインビボなどのスクリーニングなどの生物学的実験において用いられる、検索の対象となる物質をいい、例えば、特定の塩基配列を含む核酸分子または特定のアミノ酸配列を含むペプチドなどが挙げられるがそれに限定されない。
【０３５９】
通常プローブとして用いられる核酸分子としては、目的とする遺伝子の核酸配列と相同なまたは相補的な、少なくとも８の連続するヌクレオチド長の核酸配列を有するものが挙げられる。そのような核酸配列は、好ましくは、少なくとも９の連続するヌクレオチド長の、より好ましくは少なくとも１０の連続するヌクレオチド長の、さらに好ましくは少なくとも１１の連続するヌクレオチド長の、少なくとも１２の連続するヌクレオチド長の、少なくとも１３の連続するヌクレオチド長の、少なくとも１４の連続するヌクレオチド長の、少なくとも１５の連続するヌクレオチド長の、少なくとも２０の連続するヌクレオチド長の、少なくとも２５の連続するヌクレオチド長の、少なくとも３０の連続するヌクレオチド長の、少なくとも４０の連続するヌクレオチド長の、少なくとも５０の連続するヌクレオチド長の、少なくとも核酸配列であり得る。プローブとして使用される核酸配列には、上述の配列に対して、少なくとも７０％相同な、より好ましくは、少なくとも８０％相同な、さらに好ましくは、少なくとも９０％相同な、少なくとも９５％相同な核酸配列が含まれる。
【０３６０】
本明細書において、「検索」とは、電子的にまたは生物学的あるいは他の方法により、ある核酸塩基配列を利用して、特定の機能および／または性質を有する他の核酸塩基配列を見出すことをいう。電子的な検索としては、ＢＬＡＳＴ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０））、ＦＡＳＴＡ（Ｐｅａｒｓｏｎ  ＆  Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ  ８５：２４４４−２４４８（１９８８））、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ法（Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１４７：１９５−１９７（１９８１））、およびＮｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ法（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３（１９７０））などが挙げられるがそれらに限定されない。生物学的な検索としては、ストリンジェントハイブリダイゼーション下で、ゲノムＤＮＡをナイロンメンブレン等に貼り付けたマクロアレイまたはガラス板に貼り付けたマイクロアレイ（マイクロアレイアッセイ）、ＰＣＲおよびｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションなどが挙げられるがそれらに限定されない。本明細書において、本発明において使用されるＰｅｐ５、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ＭＡＧ、ｐ２１、Ｒｈｏ、Ｒｈｏキナーゼなどには、このような電子的検索、生物学的検索によって同定された対応遺伝子も含まれるべきであることが意図される。
【０３６１】
本明細書において「配列（アミノ酸または核酸など）の同一性、相同性および類似性のパーセンテージ」は、比較ウィンドウで最適な状態に整列された配列２つを比較することによって求められる。ここで、ポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列の比較ウィンドウ内の部分には、２つの配列の最適なアライメントについての基準配列(他の配列に付加が含まれていればギャップが生じることもあるが、ここでの基準配列は付加も欠失もないものとする)と比較したときに、付加または欠失(すなわちギャップ)が含まれる場合がある。同一の核酸塩基またはアミノ酸残基がどちらの配列にも認められる位置の数を求めることによって、マッチ位置の数を求め、マッチ位置の数を比較ウィンドウ内の総位置数で割り、得られた結果に１００を掛けて同一性のパーセンテージを算出する。検索において使用される場合、相同性については、従来技術において周知のさまざまな配列比較アルゴリズムおよびプログラムの中から、適当なものを用いて評価する。このようなアルゴリズムおよびプログラムとしては、ＴＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴＰ、ＦＡＳＴＡ、ＴＦＡＳＴＡおよびＣＬＵＳＴＡＬＷ（Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５（８）：２４４４−２４４８、  Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５（３）：４０３−４１０、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２２（２）：４６７３−４６８０、Ｈｉｇｇｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：３８３−４０２、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５（３）：４０３−４１０、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ３：２６６−２７２）があげられるが、何らこれに限定されるものではない。特に好ましい実施形態では、従来技術において周知のＢａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）（例えば、Ｋａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：２２６７−２２６８、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ３：２６６−２７２、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２を参照のこと）を用いてタンパク質および核酸配列の相同性を評価する。特に、５つの専用ＢＬＡＳＴプログラムを用いて以下の作業を実施することによって比較または検索が達成され得る。
【０３６２】
（１）  ＢＬＡＳＴＰおよびＢＬＡＳＴ３でアミノ酸のクエリー配列をタンパク質配列データベースと比較；
（２）  ＢＬＡＳＴＮでヌクレオチドのクエリー配列をヌクレオチド配列データベースと比較；
（３）  ＢＬＡＳＴＸでヌクレオチドのクエリー配列（両方の鎖）を６つの読み枠で変換した概念的翻訳産物をタンパク質配列データベースと比較；
（４）  ＴＢＬＡＳＴＮでタンパク質のクエリー配列を６つの読み枠（両方の鎖）すべてで変換したヌクレオチド配列データベースと比較；
（５）  ＴＢＬＡＳＴＸでヌクレオチドのクエリ配列を６つの読み枠で変換したものを、６つの読み枠で変換したヌクレオチド配列データベースと比較。
【０３６３】
ＢＬＡＳＴプログラムは、アミノ酸のクエリ配列または核酸のクエリ配列と、好ましくはタンパク質配列データベースまたは核酸配列データベースから得られた被検配列との間で、「ハイスコアセグメント対」と呼ばれる類似のセグメントを特定することによって相同配列を同定するものである。ハイスコアセグメント対は、多くのものが従来技術において周知のスコアリングマトリックスによって同定（すなわち整列化）されると好ましい。好ましくは、スコアリングマトリックスとしてＢＬＯＳＵＭ６２マトリックス（Ｇｏｎｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１４４３−１４４５、Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ａｎｄ  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，１９９３，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  １７：４９−６１）を使用する。このマトリックスほど好ましいものではないが、ＰＡＭまたはＰＡＭ２５０マトリックスも使用できる（例えば、Ｓｃｈｗａｒｔｚ  ａｎｄ  Ｄａｙｈｏｆｆ，ｅｄｓ．，１９７８，Ｍａｔｒｉｃｅｓ  ｆｏｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  Ｄｉｓｔａｎｃｅ  Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ：  Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ：  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎを参照のこと）。ＢＬＡＳＴプログラムは、同定されたすべてのハイスコアセグメント対の統計的な有意性を評価し、好ましくはユーザー固有の相同率などのユーザーが独自に定める有意性の閾値レベルを満たすセグメントを選択する。統計的な有意性を求めるＫａｒｌｉｎの式を用いてハイスコアセグメント対の統計的な有意性を評価すると好ましい（Ｋａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：２２６７−２２６８参照のこと）。
【０３６４】
本明細書における「プライマー」とは、高分子合成酵素反応において、合成される高分子化合物の反応の開始に必要な物質をいう。核酸分子の合成反応では、合成されるべき高分子化合物の一部の配列に相補的な核酸分子（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡなど）が用いられ得る。
【０３６５】
通常プライマーとして用いられる核酸分子としては、目的とする遺伝子の核酸配列と相補的な、少なくとも８の連続するヌクレオチド長の核酸配列を有するものが挙げられる。そのような核酸配列は、好ましくは、少なくとも９の連続するヌクレオチド長の、より好ましくは少なくとも１０の連続するヌクレオチド長の、さらに好ましくは少なくとも１１の連続するヌクレオチド長の、少なくとも１２の連続するヌクレオチド長の、少なくとも１３の連続するヌクレオチド長の、少なくとも１４の連続するヌクレオチド長の、少なくとも１５の連続するヌクレオチド長の、少なくとも１６の連続するヌクレオチド長の、少なくとも１７の連続するヌクレオチド長の、少なくとも１８の連続するヌクレオチド長の、少なくとも１９の連続するヌクレオチド長の、少なくとも２０の連続するヌクレオチド長の、少なくとも２５の連続するヌクレオチド長の、少なくとも３０の連続するヌクレオチド長の、少なくとも４０の連続するヌクレオチド長の、少なくとも５０の連続するヌクレオチド長の、核酸配列であり得る。プローブとして使用される核酸配列には、上述の配列に対して、少なくとも７０％相同な、より好ましくは、少なくとも８０％相同な、さらに好ましくは、少なくとも９０％相同な、少なくとも９５％相同な核酸配列が含まれる。プライマーとして適切な配列は、合成（増幅）が意図される配列の性質によって変動し得るが、当業者は、意図される配列に応じて適宜プライマーを設計することができる。そのようなプライマーの設計は当該分野において周知であり、手動でおこなってもよくコンピュータプログラム（例えば、ＬＡＳＥＲＧＥＮＥ，ＰｒｉｍｅｒＳｅｌｅｃｔ，ＤＮＡＳｔａｒ）を用いて行ってもよい。
【０３６６】
本明細書において、「エピトープ」とは、構造の明らかな抗原決定基をいう。従って、「エピトープ」には特定の免疫グロブリンによる認識に関与するアミノ酸残基のセット、または、Ｔ細胞の場合は、Ｔ細胞レセプタータンパク質および／もしくは主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）レセプターによる認識について必要であるアミノ酸残基のセットが包含される。この用語はまた、「抗原決定基」または「抗原決定部位」と交換可能に使用される。免疫系分野において、インビボまたはインビトロで、エピトープは、分子の特徴（例えば、一次ペプチド構造、二次ペプチド構造または三次ペプチド構造および電荷）であり、免疫グロブリン、Ｔ細胞レセプターまたはＨＬＡ分子によって認識される部位を形成する。ペプチドを含むエピトープは、エピトープに独特な空間的コンフォメーション中に３つ以上のアミノ酸を含み得る。一般に、エピトープは、少なくとも５つのこのようなアミノ酸からなり、代表的には少なくとも６つ、７つ、８つ、９つ、または１０のこのようなアミノ酸からなる。エピトープの長さは、より長いほど、もとのペプチドの抗原性に類似することから一般的に好ましいが、コンフォメーションを考慮すると、必ずしもそうでないことがある。アミノ酸の空間的コンフォメーションを決定する方法は、当該分野で公知であり、例えば、Ｘ線結晶学、および２次元核磁気共鳴分光法を含む。さらに、所定のタンパク質におけるエピトープの同定は、当該分野で周知の技術を使用して容易に達成される。例えば、Ｇｅｙｓｅｎら（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：３９９８（所定の抗原における免疫原性エピトープの位置を決定するために迅速にペプチドを合成する一般的な方法）；米国特許第４，７０８，８７１号（抗原のエピトープを同定し、そして化学的に合成するための手順）；およびＧｅｙｓｅｎら（１９８６）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２３：７０９（所定の抗体に対して高い親和性を有するペプチドを同定するための技術）を参照されたい。同じエピトープを認識する抗体は、単純な免疫アッセイにおいて同定され得る。このように、ペプチドを含むエピトープを決定する方法は、当該分野において周知であり、そのようなエピトープは、核酸またはアミノ酸の一次配列が提供されると、当業者はそのような周知慣用技術を用いて決定することができる。
【０３６７】
従って、ペプチドを含むエピトープは、少なくとも３アミノ酸の長さの配列を必要とし、好ましくは、この配列は、少なくとも４アミノ酸、より好ましくは少なくとも５アミノ酸、少なくとも６アミノ酸、少なくとも７アミノ酸、少なくとも８アミノ酸、少なくとも９アミノ酸、少なくとも１０アミノ酸、少なくとも１５アミノ酸、少なくとも２０アミノ酸、少なくとも２５アミノ酸の長さの配列が必要であり得る。エピトープは線状であってもコンフォメーション形態であってもよい。
【０３６８】
（遺伝子、タンパク質分子、核酸分子などの改変）
あるタンパク質分子（例えば、Ｐｅｐ５、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ＭＡＧ、ｐ２１、Ｒｈｏ、Ｒｈｏキナーゼなど）において、配列に含まれるあるアミノ酸は、相互作用結合能力の明らかな低下または消失なしに、例えば、カチオン性領域または基質分子の結合部位のようなタンパク質構造において他のアミノ酸に置換され得る。あるタンパク質の生物学的機能を規定するのは、タンパク質の相互作用能力および性質である。従って、特定のアミノ酸の置換がアミノ酸配列において、またはそのＤＮＡコード配列のレベルにおいて行われ得、置換後もなお、もとの性質を維持するタンパク質が生じ得る。従って、生物学的有用性の明らかな損失なしに、種々の改変が、本明細書において開示されたペプチドまたはこのペプチドをコードする対応するＤＮＡにおいて行われ得る。
【０３６９】
上記のような改変を設計する際に、アミノ酸の疎水性指数が考慮され得る。タンパク質における相互作用的な生物学的機能を与える際の疎水性アミノ酸指数の重要性は、一般に当該分野で認められている（Ｋｙｔｅ．ＪおよびＤｏｏｌｉｔｔｌｅ，Ｒ．Ｆ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７（１）：１０５−１３２，１９８２）。アミノ酸の疎水的性質は、生成したタンパク質の二次構造に寄与し、次いでそのタンパク質と他の分子（例えば、酵素、基質、レセプター、ＤＮＡ、抗体、抗原など）との相互作用を規定する。各アミノ酸は、それらの疎水性および電荷の性質に基づく疎水性指数を割り当てられる。それらは：イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン／シスチン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（−０．４）；スレオニン（−０．７）；セリン（−０．８）；トリプトファン（−０．９）；チロシン（−１．３）；プロリン（−１．６）；ヒスチジン（−３．２）；グルタミン酸（−３．５）；グルタミン（−３．５）；アスパラギン酸（−３．５）；アスパラギン（−３．５）；リジン（−３．９）；およびアルギニン（−４．５）である。
【０３７０】
あるアミノ酸を、同様の疎水性指数を有する他のアミノ酸により置換して、そして依然として同様の生物学的機能を有するタンパク質（例えば、酵素活性において等価なタンパク質）を生じさせ得ることが当該分野で周知である。このようなアミノ酸置換において、疎水性指数が±２以内であることが好ましく、±１以内であることがより好ましく、および±０．５以内であることがさらにより好ましい。疎水性に基づくこのようなアミノ酸の置換は効率的であることが当該分野において理解される。
【０３７１】
当該分野において、親水性指数もまた、改変設計において考慮され得る。米国特許第４，５５４，１０１号に記載されるように、以下の親水性指数がアミノ酸残基に割り当てられている：アルギニン（＋３．０）；リジン（＋３．０）；アスパラギン酸（＋３．０±１）；グルタミン酸（＋３．０±１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）；スレオニン（−０．４）；プロリン（−０．５±１）；アラニン（−０．５）；ヒスチジン（−０．５）；システイン（−１．０）；メチオニン（−１．３）；バリン（−１．５）；ロイシン（−１．８）；イソロイシン（−１．８）；チロシン（−２．３）；フェニルアラニン（−２．５）；およびトリプトファン（−３．４）。アミノ酸が同様の親水性指数を有しかつ依然として生物学的等価体を与え得る別のものに置換され得ることが理解される。このようなアミノ酸置換において、親水性指数が±２以内であることが好ましく、±１以内であることがより好ましく、および±０．５以内であることがさらにより好ましい。
【０３７２】
本明細書において、「保存的置換」とは、アミノ酸置換において、元のアミノ酸と置換されるアミノ酸との親水性指数または／および疎水性指数が上記のように類似している置換をいう。保存的置換の例としては、例えば、親水性指数または疎水性指数が、±２以内のもの同士、好ましくは±１以内のもの同士、より好ましくは±０．５以内のもの同士のものが挙げられる。従って、保存的置換の例は、当業者に周知であり、例えば、次の各グループ内での置換：アルギニンおよびリジン；グルタミン酸およびアスパラギン酸；セリンおよびスレオニン；グルタミンおよびアスパラギン；ならびにバリン、ロイシン、およびイソロイシン、などが挙げられるがこれらに限定されない。
【０３７３】
本明細書において、「改変体」とは、もとのポリペプチドまたはポリヌクレオチドなどの物質に対して、一部が変更されているものをいう。そのような改変体としては、置換改変体、付加改変体、欠失改変体、短縮（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）改変体、対立遺伝子変異体などが挙げられる。そのような改変体としては、基準となる核酸分子またはポリペプチドに対して、１または数個の置換、付加および／または欠失、あるいは少なくとも１つの置換、付加および／または欠失を含むものが挙げられるがそれらに限定されない。「対立遺伝子」（ａｌｌｅｌｅ）とは、同一遺伝子座に属し、互いに区別される遺伝的改変体のことをいう。従って、「対立遺伝子変異体」とは、ある遺伝子に対して、対立遺伝子の関係にある改変体をいう。そのような対立遺伝子変異体は、通常その対応する対立遺伝子と同一または非常に類似性の高い配列を有し、通常はほぼ同一の生物学的活性を有するが、まれに異なる生物学的活性を有することもある。本明細書において「種相同体またはホモログ（ｈｏｍｏｌｏｇ）」とは、ある種の中で、ある遺伝子とアミノ酸レベルまたはヌクレオチドレベルで、相同性（好ましくは、６０％以上の相同性、より好ましくは、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上の相同性）を有するものをいう。そのような種相同体を取得する方法は、本明細書の記載から明らかである。「オルソログ（ｏｒｔｈｏｌｏｇ）」とは、オルソロガス遺伝子（ｏｒｔｈｏｌｏｇｏｕｓ  ｇｅｎｅ）ともいい、二つの遺伝子がある共通祖先からの種分化に由来する遺伝子をいう。例えば、多重遺伝子構造をもつヘモグロビン遺伝子ファミリーを例にとると、ヒトおよびマウスのαヘモグロビン遺伝子はオルソログであるが，ヒトのαヘモグロビン遺伝子およびβヘモグロビン遺伝子はパラログ（遺伝子重複で生じた遺伝子）である。オルソログは、分子系統樹の推定に有用である。オルソログは、通常別の種において、もとの種と同様の機能を果たしていることがあり得ることから、本発明のオルソログもまた、本発明において有用であり得る。
【０３７４】
本明細書において「保存的（に改変された）改変体」は、アミノ酸配列および核酸配列の両方に適用される。特定の核酸配列に関して、保存的に改変された改変体とは、同一のまたは本質的に同一のアミノ酸配列をコードする核酸をいう。遺伝コードの縮重のため、多数の機能的に同一な核酸が任意の所定のタンパク質をコードする。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧ、およびＧＣＵはすべて、アミノ酸アラニンをコードする。したがって、アラニンがコドンにより特定される全ての位置で、そのコドンは、コードされたポリペプチドを変更することなく、記載された対応するコドンの任意のものに変更され得る。このような核酸の変動は、保存的に改変された変異の１つの種である「サイレント改変（変異）」である。ポリペプチドをコードする本明細書中のすべての核酸配列はまた、その核酸の可能なすべてのサイレント変異を記載する。当該分野において、核酸中の各コドン（通常メチオニンのための唯一のコドンであるＡＵＧ、および通常トリプトファンのための唯一のコドンであるＴＧＧを除く）が、機能的に同一な分子を産生するために改変され得ることが理解される。したがって、ポリペプチドをコードする核酸の各サイレント変異は、記載された各配列において暗黙に含まれる。好ましくは、そのような改変は、ポリペプチドの高次構造に多大な影響を与えるアミノ酸であるシステインの置換を回避するようになされ得る。このような塩基配列の改変法としては、制限酵素などによる切断、ＤＮＡポリメラーゼ、Ｋｌｅｎｏｗフラグメント、ＤＮＡリガーゼなどによる処理等による連結等の処理、合成オリゴヌクレオチドなどを用いた部位特異的塩基置換法（特定部位指向突然変異法；Ｍａｒｋ  Ｚｏｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｓｍｉｔｈ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１００，４６８−５００（１９８３））が挙げられるが、この他にも通常分子生物学の分野で用いられる方法によって改変を行うこともできる。
【０３７５】
本明細書中において、機能的に等価なポリペプチドを調製するために、アミノ酸の置換のほかに、アミノ酸の付加、欠失、または修飾もまた行うことができる。アミノ酸の置換とは、もとのペプチドを１つ以上、例えば、１〜１０個、好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜３個のアミノ酸を異なるアミノ酸で置換することをいう。アミノ酸の付加とは、もとのペプチド鎖に１つ以上、例えば、１〜１０個、好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜３個のアミノ酸を付加することをいう。アミノ酸の欠失とは、もとのペプチドから１つ以上、例えば、１〜１０個、好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜３個のアミノ酸を欠失させることをいう。アミノ酸修飾は、アミド化、カルボキシル化、硫酸化、ハロゲン化、短縮化、脂質化（ｌｉｐｉｄａｔｉｏｎ）、アルキル化、グリコシル化、ホスホリル化、水酸化、アシル化（例えば、アセチル化）などを含むが、これらに限定されない。置換、または付加されるアミノ酸は、天然のアミノ酸であってもよく、非天然のアミノ酸、またはアミノ酸アナログでもよい。天然のアミノ酸が好ましい。
【０３７６】
本明細書において使用される用語「ペプチドアナログ」または「ペプチド誘導体」とは、ペプチドとは異なる化合物であるが、ペプチドと少なくとも１つの化学的機能または生物学的機能が等価であるものをいう。したがって、ペプチドアナログには、もとのペプチドに対して、１つ以上のアミノ酸アナログまたはアミノ酸誘導体が付加または置換されているものが含まれる。ペプチドアナログは、その機能が、もとのペプチドの機能（例えば、ｐＫａ値が類似していること、官能基が類似していること、他の分子との結合様式が類似していること、水溶性が類似していることなど）と実質的に同様であるように、このような付加または置換がされている。そのようなペプチドアナログは、当該分野において周知の技術を用いて調製することができる。したがって、ペプチドアナログは、アミノ酸アナログを含むポリマーであり得る。
【０３７７】
本発明のポリペプチドがポリマーに結合している、化学修飾されたポリペプチド組成物は、本発明の範囲に包含される。このポリマーは、水溶性であり得、水溶性環境（例えば、生理学的環境）でこのタンパク質の沈澱を防止し得る。適切な水性ポリマーは、例えば、以下からなる群より選択され得る：ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、モノメトキシポリエチレングリコール、デキストラン、セルロース、または他の炭水化物に基づくポリマー、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）およびポリビニルアルコール。この選択されたポリマーは、通常は改変され、単一の反応性基（例えば、アシル化のための活性エステルまたはアルキル化のためのアルデヒド）を有し、その結果、重合度は制御され得る。ポリマーは、任意の分子量であり得、そして、このポリマーは分枝状でも分枝状でなくてもよく、そしてこのようなポリマーの混合物はまた、使用され得る。この化学修飾された本発明のポリマーは、治療用途において、薬学的に受容可能なポリマーが選択される。
【０３７８】
このポリマーがアシル化反応によって改変される場合、このポリマーは、単一の反応性エステル基を有するべきである。あるいは、このポリマーが還元アルキル化によって改変される場合、このポリマーは単一の反応性アルデヒド基を有するべきである。好ましい反応性アルデヒドは、ポリエチレングリコール、プロピオンアルデヒド（このプロピオンアルデヒドは、水溶性である）または、そのモノＣ１〜Ｃ１０の、アルコキシ誘導体もしくはアリールオキシ誘導体である（例えば、米国特許第５，２５２，７１４号（これは、本明細書中で全体が参考として援用される）を参照のこと）。
【０３７９】
本発明のポリペプチドのペグ化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）は、例えば、以下の参考文献に記載されるような、当該分野で公知の、任意のペグ化反応によって実施され得る：Ｆｏｃｕｓ  ｏｎ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ  ３，４−１０（１９９２）；ＥＰ  ０  １５４  ３１６  ；およびＥＰ  ０  ４０１  ３８４（これらの各々は、本明細書中で、全体が参考として援用される）。好ましくは、このペグ化は、反応性ポリエチレングリコール分子（または、類似の反応性水溶性ポリマー）とのアシル化反応またはアルキル化反応を介して実施される。本発明のポリペプチド（例えば、ＭＡＧ、ｐ７５、ｐ２１、Ｐｅｐ５、Ｒｈｏ、Ｒｈｏ  ＧＤＩなど）のペグ化のための好ましい水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。本明細書中で使用される場合、「ポリエチレングリコール」は、ＰＥＧの任意の形態の包含することを意味し、ここで、このＰＥＧは、他のタンパク質（例えば、モノ（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシポリエチレングリコールまたはモノ（Ｃ１〜Ｃ１０）アリールオキシポリエチレングリコール（ＰＥＧ））を誘導体するために使用される。
【０３８０】
本発明のポリペプチドの化学誘導体化を、生物学的に活性な物質を活性化したポリマー分子と反応させるのに使用される適切な条件下で、実施され得る。ペグ化した本発明のポリペプチドを調製するための方法は、一般に以下の工程を包含する：（ａ）ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子が１以上のＰＥＧ基に結合するような条件下で、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧの、反応性エステルまたはアルデヒド誘導体）とこのポリペプチドを反応させる工程および（ｂ）この反応生成物を得る工程。公知のパラメータおよび所望の結果に基づいて、最適な反応条件またはアシル化反応を選択することは当業者に容易である。
【０３８１】
一般に、ペグ化された本発明のポリペプチドを投与することによって、緩和または調節され得る状態を処置するために使用され得るが、しかし、本明細書中で開示された、化学誘導体化された本発明のポリペプチド分子は、それらの非誘導体分子と比較して、さらなる活性、増大された生物活性もしくは減少した生物活性、または他の特徴（例えば、増大された半減期または減少した半減期）を有し得る。本発明のポリペプチド、それらのフラグメント、改変体および誘導体は、単独で、併用して、または他の薬学的組成物を組み合わせて使用され得る。これらのサイトカイン、増殖因子、抗原、抗炎症剤および／または化学療法剤は、徴候を処置するのに適切である。
【０３８２】
同様に、「ポリヌクレオチドアナログ」、「核酸アナログ」は、ポリヌクレオチドまたは核酸とは異なる化合物であるが、ポリヌクレオチドまたは核酸と少なくとも１つの化学的機能または生物学的機能が等価であるものをいう。したがって、ポリヌクレオチドアナログまたは核酸アナログには、もとのペプチドに対して、１つ以上のヌクレオチドアナログまたはヌクレオチド誘導体が付加または置換されているものが含まれる。
【０３８３】
本明細書において使用される核酸分子は、発現されるポリペプチドが天然型のポリペプチドと実質的に同一の活性を有する限り、上述のようにその核酸の配列の一部が欠失または他の塩基により置換されていてもよく、あるいは他の核酸配列が一部挿入されていてもよい。あるいは、５’末端および／または３’末端に他の核酸が結合していてもよい。また、ポリペプチドをコードする遺伝子をストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、そのポリペプチドと実質的に同一の機能を有するポリペプチドをコードする核酸分子でもよい。このような遺伝子は、当該分野において公知であり、本発明において利用することができる。
【０３８４】
このような核酸は、周知のＰＣＲ法により得ることができ、化学的に合成することもできる。これらの方法に、例えば、部位特異的変位誘発法、ハイブリダイゼーション法などを組み合わせてもよい。
【０３８５】
本明細書において、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの「置換、付加または欠失」とは、もとのポリペプチドまたはポリヌクレオチドに対して、それぞれアミノ酸もしくはその代替物、またはヌクレオチドもしくはその代替物が、置き換わること、付け加わることまたは取り除かれることをいう。これは、当該分野において周知の技術によって達成され、そのような技術の例としては、部位特異的変異誘発技術などが挙げられる。置換、付加または欠失は、１つ以上であれば任意の数でよく、そのような数は、その置換、付加または欠失を有する改変体において目的とする機能（例えば、ホルモン、サイトカインの情報伝達機能など）が保持される限り、多くすることができる。例えば、そのような数は、１または数個であり得、そして好ましくは、全体の長さの２０％以内、１０％以内、または１００個以下、５０個以下、２５個以下などであり得る。
【０３８６】
（一般技術）
本明細書において用いられる分子生物学的手法、生化学的手法、微生物学的手法は、当該分野において周知であり慣用されるものであり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９８９）．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒおよびその３ｒｄ  Ｅｄ．（２００１）；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．（１９８７），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．（１９８９），Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：  Ａ  Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｒｏｍ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ；Ｉｎｎｉｓ，Ｍ．Ａ．（１９９０），ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：  Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．（１９９２），Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：  Ａ  Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｒｏｍ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．（１９９５），Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：  Ａ  Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｒｏｍ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ；Ｉｎｎｉｓ，Ｍ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．（１９９５），ＰＣＲ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．（１９９９），Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：  Ａ  Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｒｏｍ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗｉｌｅｙ，ａｎｄ  ａｎｎｕａｌ  ｕｐｄａｔｅｓ；Ｓｎｉｎｓｋｙ，Ｊ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９９），ＰＣＲ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ：  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、別冊実験医学「遺伝子導入＆発現解析実験法」羊土社、１９９７などに記載されており、これらは本明細書において関連する部分（全部であり得る）が参考として援用される。
【０３８７】
人工的に合成した遺伝子を調製するためのＤＮＡ合成技術および核酸化学については、例えば、Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．（１９８５），Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ；Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．（１９９０），Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ；Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ｆ．（１９９１），Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ；Ａｄａｍｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（１９９２），Ｔｈｅ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ，Ｃｈａｐｍａｎ＆Ｈａｌｌ；Ｓｈａｂａｒｏｖａ，Ｚ．ｅｔ  ａｌ．（１９９４），Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ；Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ，Ｇ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６），Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ；Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．（Ｉ９９６），Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓなどに記載されており、これらは本明細書において関連する部分が参考として援用される。
【０３８８】
（遺伝子工学）
本発明において用いられるＰｅｐ５、ＰＫＣ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ＭＡＧ、ｐ２１、Ｒｈｏ、Ｒｈｏキナーゼなどならびにそのフラグメントおよび改変体は、遺伝子工学技術を用いて生産することができる。
【０３８９】
本明細書において遺伝子について言及する場合、「ベクター」または「組み換えベクター」とは、目的のポリヌクレオチド配列を目的の細胞へと移入させることができるベクターをいう。そのようなベクターとしては、原核細胞、酵母、動物細胞、植物細胞、昆虫細胞、動物個体および植物個体などの宿主細胞において自立複製が可能、または染色体中への組込みが可能で、本発明のポリヌクレオチドの転写に適した位置にプロモーターを含有しているものが例示される。ベクターのうち、クローニングに適したベクターを「クローニングベクター」という。そのようなクローニングベクターは通常、制限酵素部位を複数含むマルチプルクローニング部位を含む。そのような制限酵素部位およびマルチプルクローニング部位は、当該分野において周知であり、当業者は、目的に合わせて適宜選択して使用することができる。そのような技術は、本明細書に記載される文献（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、前出）に記載されている。
【０３９０】
好ましいベクターとしては、プラスミド、ファージ、コスミド、エピソーム、ウイルス粒子またはウイルスおよび組み込み可能なＤＮＡフラグメント（すなわち、相同組換えによって宿主ゲノム中に組み込み可能なフラグメント）が挙げられるが、これらに限定されない。好ましいウイルス粒子としては、アデノウイルス、バキュロウイルス、パルボウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、アデノ随伴ウイルス、セムリキ森林ウイルス、ワクシニアウイルスおよびレトロウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３９１】
ベクターの１つの型は、「プラスミド」であり、これは、さらなるＤＮＡセグメントが連結され得る環状二重鎖ＤＮＡループをいう。別の型のベクターは、ウイルスベクターであり、ここで、さらなるＤＮＡセグメントは、ウイルスゲノム中に連結され得る。特定のベクター（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）は、これらが導入される宿主細胞中で自律的に複製し得る。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞中への導入の際に宿主細胞のゲノム中に組み込まれ、それにより、宿主ゲノムと共に複製される。さらに、特定のベクターは、これらが作動可能に連結される遺伝子の発現を指向し得る。このようなベクターは、本明細書中で、「発現ベクター」といわれる。
【０３９２】
従って、本明細書において「発現ベクター」とは、構造遺伝子およびその発現を調節するプロモーターに加えて種々の調節エレメントが宿主の細胞中で作動し得る状態で連結されている核酸配列をいう。調節エレメントは、好ましくは、ターミネーター、薬剤耐性遺伝子のような選択マーカーおよび、エンハンサーを含み得る。生物（例えば、植物）の発現ベクターのタイプおよび使用される調節エレメントの種類が、宿主細胞に応じて変わり得ることは、当業者に周知の事項である。
【０３９３】
本発明において用いられ得る原核細胞に対する「組み換えベクター」としては、ｐｃＤＮＡ３（＋）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ−ＳＫ（＋／−）、ｐＧＥＭ−Ｔ、ｐＥＦ−ＢＯＳ、ｐＥＧＦＰ、ｐＨＡＴ、ｐＵＣ１８、ｐＦＴ−ＤＥＳＴＴＭ、４２ＧＡＴＥＷＡＹ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）などが例示される。
【０３９４】
本発明において用いられ得る動物細胞に対する「組み換えベクター」としては、ｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐ、ｐｃＤＮＡＩ、ｐＣＤＭ８（いずれもフナコシより市販）、ｐＡＧＥ１０７［特開平３−２２９（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ｐＡＧＥ１０３［Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０１，１３０７（１９８７）］、ｐＡＭｏ、ｐＡＭｏＡ［Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６８，２２７８２−２２７８７（１９９３）］、マウス幹細胞ウイルス（Ｍｕｒｉｎｅ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉｒｕｓ）（ＭＳＣＶ）に基づいたレトロウイルス型発現ベクター、ｐＥＦ−ＢＯＳ、ｐＥＧＦＰなどが例示される。
【０３９５】
本明細書において「ターミネーター」は、遺伝子のタンパク質をコードする領域の下流に位置し、ＤＮＡがｍＲＮＡに転写される際の転写の終結、ポリＡ配列の付加に関与する配列である。ターミネーターは、ｍＲＮＡの安定性に関与して遺伝子の発現量に影響を及ぼすことが知られている。
【０３９６】
本明細書において「プロモーター」とは、遺伝子の転写の開始部位を決定し、またその頻度を直接的に調節するＤＮＡ上の領域をいい、通常ＲＮＡポリメラーゼが結合して転写を始める塩基配列である。したがって、本明細書においてある遺伝子のプロモーターの働きを有する部分を「プロモーター部分」という。プロモーターの領域は、通常、推定タンパク質コード領域の第１エキソンの上流約２ｋｂｐ以内の領域であることが多いので、ＤＮＡ解析用ソフトウエアを用いてゲノム塩基配列中のタンパク質コード領域を予測すれば、プロモータ領域を推定することはできる。推定プロモーター領域は、構造遺伝子ごとに変動するが、通常構造遺伝子の上流にあるが、これらに限定されず、構造遺伝子の下流にもあり得る。好ましくは、推定プロモーター領域は、第一エキソン翻訳開始点から上流約２ｋｂｐ以内に存在する。
【０３９７】
本明細書において「複製起点」とは、ＤＮＡ複製が開始する染色体上の特定領域をいう。複製起点は、内因性起点を含むようにそのベクターを構築することによって提供され得るか、または宿主細胞の染色体複製機構により提供され得るかのいずれかであり得る。そのベクターが、宿主細胞染色体中に組み込まれる場合、後者が十分であり得る。あるいは、ウイルス複製起点を含むベクターを使用するよりも、当業者は、選択マーカーと本発明のＤＮＡとを同時形質転換する方法によって、哺乳動物細胞を形質転換し得る。適切な選択マーカーの例は、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）またはチミジンキナーゼである（米国特許第４，３９９，２１６号を参照）。
【０３９８】
例えば、組織特異的調節エレメントを使用して核酸を発現することによって、組換え哺乳動物発現ベクターでは、特定の細胞型において核酸の発現を優先的に指向し得る。組織特異的調節エレメントは、当該分野で公知である。適切な組織特異的プロモーターの非限定的な例としては、発生的に調節されたプロモーター（例えば、マウスｈｏｘプロモーター（ＫｅｓｓｅｌおよびＧｒｕｓｓ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９，３７４−３７９）およびα−フェトプロテインプロモーター（ＣａｍｐｅｓおよびＴｉｌｇｈｍａｎ（１９８９）Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ  ３，５３７−５４６）、アルブミンプロモーター（肝臓特異的；Ｐｉｎｋｅｒｔら（１９８７）Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ  １，２６８−２７７）、リンパ特異的プロモーター（ＣａｌａｍｅおよびＥａｔｏｎ（１９８８）Ａｄｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４３，２３５−２７５）、特にＴ細胞レセプター（ＷｉｎｏｔｏおよびＢａｌｔｉｍｏｒｅ（１９８９）ＥＭＢＯ  Ｊ．８，７２９−７３３）および免疫グロブリン（Ｂａｎｅｒｊｉら（１９８３）Ｃｅｌｌ  ３３，７２９−７４０；ＱｕｅｅｎおよびＢａｌｔｉｍｏｒｅ（１９８３）Ｃｅｌｌ  ３３，７４１−７４８）のプロモーター、ニューロン特異的プロモーター（例えば、神経線維プロモーター；ＢｙｒｎｅおよびＲｕｄｄｌｅ（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６，５４７３−５４７７）、膵臓特異的プロモーター（Ｅｄｌｕｎｄら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３０，９１２−９１６）、および乳腺特異的プロモーター（例えば、乳清プロモーター；米国特許第４，８７３，３１６号および欧州出願公開番号２６４，１６６）が挙げられるがそれらに限定されない。
【０３９９】
本明細書において「エンハンサー」とは、目的遺伝子の発現効率を高めるために用いられる配列をいう。そのようなエンハンサーは当該分野において周知である。エンハンサーは１個または複数個用いられ得、用いなくともよい。
【０４００】
本明細書において「作動可能に連結された（る）」とは、所望の配列の発現（作動）がある転写翻訳調節配列（例えば、プロモーター、エンハンサーなど）または翻訳調節配列の制御下に配置されることをいう。プロモーターが遺伝子に作動可能に連結されるためには、通常、その遺伝子のすぐ上流にプロモーターが配置されるが、必ずしも隣接して配置される必要はない。
【０４０１】
本明細書において、核酸分子を細胞に導入する技術は、どのような技術でもよく、例えば、形質転換、形質導入、トランスフェクションなどが挙げられる。そのような核酸分子の導入技術は、当該分野において周知であり、かつ、慣用されるものであり、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  Ｆ．Ａ．ら編（１９８８）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ；Ｓａｍｂｒｏｏｋ  Ｊら（１９８７）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  Ｅｄ．およびその第三版，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ、別冊実験医学「遺伝子導入＆発現解析実験法」羊土社、１９９７などに記載される。遺伝子の導入は、ノーザンブロット、ウェスタンブロット分析のような本明細書に記載される方法または他の周知慣用技術を用いて確認することができる。
【０４０２】
また、ベクターの導入方法としては、細胞にＤＮＡを導入する上述のような方法であればいずれも用いることができ、例えば、トランスフェクション、形質導入、形質転換など（例えば、リン酸カルシウム法、リポソーム法、ＤＥＡＥデキストラン法、エレクトロポレーション法、パーティクルガン（遺伝子銃）を用いる方法など）が挙げられる。
【０４０３】
本明細書において「形質転換体」とは、形質転換によって作製された細胞などの生命体の全部または一部をいう。形質転換体としては、原核細胞、酵母、動物細胞、植物細胞、昆虫細胞などが例示される。形質転換体は、その対象に依存して、形質転換細胞、形質転換組織、形質転換宿主などともいわれる。本発明において用いられる細胞は、形質転換体であってもよい。
【０４０４】
本発明において遺伝子操作などにおいて原核生物細胞が使用される場合、原核生物細胞としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ属、Ｓｅｒｒａｔｉａ属、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属などに属する原核生物細胞、具体的には、例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＸＬ１−Ｂｌｕｅ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＸＬ２−Ｂｌｕｅ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＤＨ１が例示される。
【０４０５】
本明細書において使用される場合、動物細胞としては、マウス・ミエローマ細胞、ラット・ミエローマ細胞、マウス・ハイブリドーマ細胞、チャイニーズ・ハムスターの細胞であるＣＨＯ細胞、ＢＨＫ細胞、アフリカミドリザル腎臓細胞、ヒト白血病細胞、ＨＢＴ５６３７（特開昭６３−２９９）、ヒト結腸癌細胞株などを挙げることができる。マウス・ミエローマ細胞としては、ｐｓ２０、ＮＳＯなど、ラット・ミエローマ細胞としてはＹＢ２／０など、ヒト胎児腎臓細胞としてはＨＥＫ２９３（ＡＴＣＣ：ＣＲＬ−１５７３）など、ヒト白血病細胞としてはＢＡＬＬ−１など、アフリカミドリザル腎臓細胞としてはＣＯＳ−１、ＣＯＳ−７、ヒト結腸癌細胞株としてはＨＣＴ−１５、ヒト神経芽細胞腫ＳＫ−Ｎ−ＳＨ、ＳＫ−Ｎ−ＳＨ−５Ｙ、マウス神経芽細胞腫Ｎｅｕｒｏ２Ａなどが例示される。
【０４０６】
本明細書において使用される場合、組換えベクターの導入方法としては、ＤＮＡを導入する方法であればいずれも用いることができ、例えば、塩化カルシウム法、エレクトロポレーション法（Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１９４，１８２（１９９０））、リポフェクション法、スフェロプラスト法（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４，１９２９（１９７８））、酢酸リチウム法（Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１５３，１６３（１９８３））、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７５，１９２９（１９７８）記載の方法などが例示される。
【０４０７】
本明細書において、レトロウイルスの感染方法は、例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  前出（特にＵｎｉｔｓ  ９．９−９．１４）などに記載されるように、当該分野において周知であり、例えば、トリプシナイズした胚性幹細胞を単一細胞懸濁物（ｓｉｎｇｌｅ−ｃｅｌｌ  ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ）にした後、ウイルス産生細胞（ｖｉｒｕｓ−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ）（パッケージング細胞株＝ｐａｃｋａｇｉｎｇ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ）の培養上清と一緒に１〜２時間共培養（ｃｏ−ｃｕｌｔｕｒｅ）することにより、十分量の感染細胞を得ることができる。
【０４０８】
本明細書において使用されるゲノムまたは遺伝子座などを除去する方法において用いられる、Ｃｒｅ酵素の一過的発現、染色体上でのＤＮＡマッピングなどは、細胞工学別冊実験プロトコールシリーズ「ＦＩＳＨ実験プロトコール  ヒト・ゲノム解析から染色体・遺伝子診断まで」松原謙一、吉川  寛  監修  秀潤社（東京）などに記載されるように、当該分野において周知である。
【０４０９】
本明細書において遺伝子発現（例えば、ｍＲＮＡ発現、ポリペプチド発現）の「検出」または「定量」は、例えば、ｍＲＮＡの測定および免疫学的測定方法を含む適切な方法を用いて達成され得る。分子生物学的測定方法としては、例えば、ノーザンブロット法、ドットブロット法またはＰＣＲ法などが例示される。免疫学的測定方法としては、例えば、マイクロタイタープレートを用いるＥＬＩＳＡ法、ＲＩＡ法、蛍光抗体法、ウェスタンブロット法、免疫組織染色法などが例示される。また、定量方法としては、ＥＬＩＳＡ法またはＲＩＡ法などが例示される。アレイ（例えば、ＤＮＡアレイ、プロテインアレイなど）を用いた遺伝子解析方法によっても行われ得る。ＤＮＡアレイについては、（秀潤社編、細胞工学別冊「ＤＮＡマイクロアレイと最新ＰＣＲ法」）に広く概説されている。プロテインアレイについては、Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ．２００２  Ｄｅｃ；３２  Ｓｕｐｐｌ：５２６−３２に詳述されている。遺伝子発現の分析法としては、上述に加えて、ＲＴ−ＰＣＲ、ＲＡＣＥ法、ＳＳＣＰ法、免疫沈降法、ｔｗｏ−ｈｙｂｒｉｄシステム、インビトロ翻訳などが挙げられるがそれらに限定されない。そのようなさらなる分析方法は、例えば、ゲノム解析実験法・中村祐輔ラボ・マニュアル、編集・中村祐輔  羊土社（２００２）などに記載されており、本明細書においてそれらの記載はすべて参考として援用される。
【０４１０】
本明細書において「発現量」とは、対象となる細胞などにおいて、ポリペプチドまたはｍＲＮＡが発現される量をいう。そのような発現量としては、本発明の抗体を用いてＥＬＩＳＡ法、ＲＩＡ法、蛍光抗体法、ウェスタンブロット法、免疫組織染色法などの免疫学的測定方法を含む任意の適切な方法により評価される本発明ポリペプチドのタンパク質レベルでの発現量、またはノーザンブロット法、ドットブロット法、ＰＣＲ法などの分子生物学的測定方法を含む任意の適切な方法により評価される本発明のポリペプチドのｍＲＮＡレベルでの発現量が挙げられる。「発現量の変化」とは、上記免疫学的測定方法または分子生物学的測定方法を含む任意の適切な方法により評価される本発明のポリペプチドのタンパク質レベルまたはｍＲＮＡレベルでの発現量が増加あるいは減少することを意味する。
【０４１１】
本明細書において「上流」という用語は、特定の基準点からポリヌクレオチドの５’末端に向かう位置を示す。
【０４１２】
本明細書において「下流」という用語は、特定の基準点からポリヌクレオチドの３’末端に向かう位置を示す。
【０４１３】
本明細書において「塩基対の」および「Ｗａｔｓｏｎ  ＆  Ｃｒｉｃｋ塩基対の」という表現は、本明細書では同義に用いられ、二重らせん状のＤＮＡにおいて見られるものと同様に、アデニン残基が２つの水素結合によってチミン残基またはウラシル残基と結合し、3つの水素結合によってシトシン残基とグアニン残基とが結合するという配列の正体に基づいて互いに水素結合可能なヌクレオチドを示す（Ｓｔｒｙｅｒ，Ｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９５を参照）。このような塩基対は、相互作用を考慮する際に重要である。
【０４１４】
本明細書において「相補的」または「相補体」という用語は、本明細書では、相補領域全体がそのまま別の特定のポリヌクレオチドとＷａｔｓｏｎ  ＆  Ｃｒｉｃｋ塩基対を形成することのできるポリヌクレオチドの配列を示す。本発明の目的で、第１のポリヌクレオチドの各塩基がその相補塩基と対になっている場合に、この第１のポリヌクレオチドは第２のポリヌクレオチドと相補であるとみなす。相補塩基は一般に、ＡとＴ（あるいはＡとＵ）、またはＣとＧである。本願明細書では、「相補」という語を「相補ポリヌクレオチド」、「相補核酸」および「相補ヌクレオチド配列」の同義語として使用する。これらの用語は、その配列のみに基づいてポリヌクレオチドの対に適用されるものであり、２つのポリヌクレオチドが事実上結合状態にある特定のセットに適用されるものではない。
【０４１５】
（ポリペプチドの製造方法）
本発明のポリペプチド（例えば、Ｐｅｐ５、ＰＫＣ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ＭＡＧ、ｐ２１、Ｒｈｏ、Ｒｈｏキナーゼまたはその改変体もしくはフラグメントなど）をコードするＤＮＡを組み込んだ組換え体ベクターを保有する微生物、動物細胞などに由来する形質転換体を、通常の培養方法に従って培養し、本発明のポリペプチドを生成蓄積させ、本発明の培養物より本発明のポリペプチドを採取することにより、本発明に係るポリペプチドを製造することができる。
【０４１６】
本発明の形質転換体を培地に培養する方法は、宿主の培養に用いられる通常の方法に従って行うことができる。大腸菌等の原核生物あるいは酵母等の真核生物を宿主として得られた形質転換体を培養する培地としては、本発明の生物が資化し得る炭素源、窒素源、無機塩類等を含有し、形質転換体の培養を効率的に行える培地であれば天然培地、合成培地のいずれを用いてもよい。
【０４１７】
炭素源としては、それぞれの微生物が資化し得るものであればよく、グルコース、フルクトース、スクロース、これらを含有する糖蜜、デンプンあるいはデンプン加水分解物等の炭水化物、酢酸、プロピオン酸等の有機酸、エタノール、プロパノール等のアルコール類を用いることができる。
【０４１８】
窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等の各種無機酸または有機酸のアンモニウム塩、その他含窒素物質、ならびに、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、コーンスチープリカー、カゼイン加水分解物、大豆粕および大豆粕加水分解物、各種発酵菌体およびその消化物等を用いることができる。
【０４１９】
無機塩としては、リン酸第一カリウム、リン酸第二カリウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸カルシウム等を用いることができる。培養は、振盪培養または深部通気攪拌培養等の好気的条件下で行う。
【０４２０】
培養温度は１５〜４０℃がよく、培養時間は、通常５時間〜７日間である。培養中ｐＨは、３．０〜９．０に保持する。ｐＨの調整は、無機あるいは有機の酸、アルカリ溶液、尿素、炭酸カルシウム、アンモニア等を用いて行う。また培養中必要に応じて、アンピシリンまたはテトラサイクリン等の抗生物質を培地に添加してもよい。
【０４２１】
プロモーターとして誘導性のプロモーターを用いた発現ベクターで形質転換した微生物を培養するときには、必要に応じてインデューサーを培地に添加してもよい。例えば、ｌａｃプロモーターを用いた発現ベクターで形質転換した微生物を培養するときにはイソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド等を、ｔｒｐプロモーターを用いた発現ベクターで形質転換した微生物を培養するときにはインドールアクリル酸等を培地に添加してもよい。遺伝子を導入した細胞または器官は、ジャーファーメンターを用いて大量培養することができる。
【０４２２】
例えば、動物細胞を用いる場合、本発明の細胞を培養する培地は、一般に使用されているＲＰＭＩ１６４０培地（Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，１９９，５１９（１９６７））、ＥａｇｌｅのＭＥＭ培地（Ｓｃｉｅｎｃｅ，１２２，５０１（１９５２））、ＤＭＥＭ培地（Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，８，３９６（１９５９））、１９９培地（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，７３，１（１９５０））またはこれら培地にウシ胎児血清等を添加した培地等が用いられる。
【０４２３】
培養は、通常ｐＨ６〜８、２５〜４０℃、５％ＣＯ２存在下等の条件下で１〜７日間行う。また培養中必要に応じて、カナマイシン、ペニシリン、ストレプトマイシン等の抗生物質を培地に添加してもよい。
【０４２４】
本発明のポリペプチドをコードする核酸配列で形質転換された形質転換体の培養物から、本発明のポリペプチドを単離または精製するためには、当該分野で周知慣用の通常の酵素の単離または精製法を用いることができる。例えば、本発明のポリペプチド製造用形質転換体の細胞外に本発明のポリペプチドが分泌される場合には、その培養物を遠心分離等の手法により処理し、可溶性画分を取得する。その可溶性画分から、溶媒抽出法、硫安等による塩析法脱塩法、有機溶媒による沈澱法、ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、ＤＩＡＩＯＮ  ＨＰＡ−７５（三菱化成）等樹脂を用いた陰イオン交換クロマトグラフィー法、Ｓ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＦＦ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）等の樹脂を用いた陽イオン交換クロマトグラフィー法、ブチルセファロース、フェニルセファロース等の樹脂を用いた疎水性クロマトグラフィー法、分子篩を用いたゲルろ過法、アフィニティークロマトグラフィー法、クロマトフォーカシング法、等電点電気泳動等の電気泳動法等の手法を用い、精製標品を得ることができる。
【０４２５】
本発明のポリペプチド（例えば、Ｐｅｐ５、ＰＫＣ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ＭＡＧ、ｐ２１、Ｒｈｏ、Ｒｈｏキナーゼまたはその改変体もしくはフラグメントなど）が本発明のポリペプチド製造用形質転換体の細胞内に溶解状態で蓄積する場合には、培養物を遠心分離することにより、培養物中の細胞を集め、その細胞を洗浄した後に、超音波破砕機、フレンチプレス、マントンガウリンホモジナイザー、ダイノミル等により細胞を破砕し、無細胞抽出液を得る。その無細胞抽出液を遠心分離することにより得られた上清から、溶媒抽出法、硫安等による塩析法脱塩法、有機溶媒による沈澱法、ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、ＤＩＡＩＯＮ  ＨＰＡ−７５（三菱化成）等樹脂を用いた陰イオン交換クロマトグラフィー法、Ｓ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＦＦ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）等の樹脂を用いた陽イオン交換クロマトグラフィー法、ブチルセファロース、フェニルセファロース等の樹脂を用いた疎水性クロマトグラフィー法、分子篩を用いたゲルろ過法、アフィニティークロマトグラフィー法、クロマトフォーカシング法、等電点電気泳動等の電気泳動法等の手法を用いることによって、精製標品を得ることができる。
【０４２６】
本発明のポリペプチドが細胞内に不溶体を形成して発現した場合は、同様に細胞を回収後破砕し、遠心分離を行うことにより得られた沈澱画分より、通常の方法により本発明のポリペプチドを回収後、そのポリペプチドの不溶体をポリペプチド変性剤で可溶化する。この可溶化液を、ポリペプチド変性剤を含まないあるいはポリペプチド変性剤の濃度がポリペプチドが変性しない程度に希薄な溶液に希釈、あるいは透析し、本発明のポリペプチドを正常な立体構造に構成させた後、上記と同様の単離精製法により精製標品を得ることができる。
【０４２７】
また、通常のタンパク質の精製方法（Ｊ．Ｅｖａｎ．Ｓａｄｌｅｒら：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，８３，４５８）に準じて精製できる。また、本発明のポリペプチドを他のタンパク質との融合タンパク質として生産し、融合したタンパク質に親和性をもつ物質を用いたアフィニティークロマトグラフィーを利用して精製することもできる（山川彰夫，実験医学（Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ），１３，４６９−４７４（１９９５））。例えば、Ｌｏｗｅらの方法（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８６，８２２７−８２３１（１９８９）、ＧｅｎｅｓＤｅｖｅｌｏｐ．，４，１２８８（１９９０））に記載の方法に準じて、本発明のポリペプチドをプロテインＡとの融合タンパク質として生産し、イムノグロブリンＧを用いるアフィニティークロマトグラフィーにより精製することができる。
【０４２８】
また、本発明のポリペプチドをＦＬＡＧペプチドとの融合タンパク質として生産し、抗ＦＬＡＧ抗体を用いるアフィニティークロマトグラフィーにより精製することができる（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８６，８２２７（１９８９）、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖｅｌｏｐ．，４，１２８８（１９９０））。このような融合タンパク質では、発現ベクターにおいて、タンパク質分解切断部位は、融合タンパク質の精製に続いて、融合部分からの組換えタンパク質の分離を可能にするために、融合部分と組換えタンパク質との接合部に導入される。このような酵素およびこれらの同族の認識配列は、第Ｘａ因子、トロンビン、およびエンテロキナーゼを含む。代表的な融合発現ベクターとしては、それぞれ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトースＥ結合タンパク質、またはプロテインＡを標的組換えタンパク質に融合する、ｐＧＥＸ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｉｎｃ；ＳｍｉｔｈおよびＪｏｈｎｓｏｎ（１９８８）Ｇｅｎｅ  ６７，３１−４０）、ｐＭＡＬ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ．Ｂｅｖｅｒｌｙ，Ｍａｓｓ．）およびｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）が挙げられる。
【０４２９】
さらに、本発明のポリペプチド自身に対する抗体を用いたアフィニティークロマトグラフィーで精製することもできる。本発明のポリペプチドは、公知の方法（Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ＮＭＲ，６，１２９−１３４、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４２，１１６２−１１６４、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１１０，１６６−１６８（１９９１））に準じて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写・翻訳系を用いてを生産することができる。
【０４３０】
本発明のポリペプチドは、そのアミノ酸情報を基に、Ｆｍｏｃ法（フルオレニルメチルオキシカルボニル法）、ｔＢｏｃ法（ｔ−ブチルオキシカルボニル法）等の化学合成法によっても製造することができる。また、Ａｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍＴｅｃｈ、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ、Ｓｙｎｔｈｅｃｅｌｌ−Ｖｅｇａ、ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ、島津製作所等のペプチド合成機を利用し化学合成することもできる。
【０４３１】
精製した本発明のポリペプチドの構造解析は、タンパク質化学で通常用いられる方法、例えば「遺伝子クローニングのためのタンパク質構造解析」（平野久著、東京化学同人発行、１９９３年）に記載の方法により実施可能である。本発明のポリペプチドの生理活性は、公知の測定法に準じて測定することができる。
【０４３２】
本発明において有用な可溶性ポリペプチドの産生もまた、当該分野で公知の種々の方法によって達成され得る。例えば、ポリペプチドは、エキソペプチダーゼ、エドマン分解またはその両方と組み合わせて特定のエンドペプチダーゼを使用することによるタンパク質分解によって、インタクトな膜貫通ｐ７５ポリペプチド分子から誘導され得る。このインタクトなｐ７５ポリペプチド分子は、従来の方法を使用して、その天然の供給源から精製され得る。あるいは、インタクトなｐ７５ポリペプチドは、ｃＤＮＡ、発現ベクターおよび組換え遺伝子発現のための周知技術を利用する組換えＤＮＡ技術によって生成され得る。
【０４３３】
好ましくは、本発明において有用な可溶性ポリペプチドは、直接的に産生され、従って、出発材料としてのｐ７５ポリペプチド全体の必要性を排除する。これは、従来の化学合成技術によって達成され得るか、または周知の組換えＤＮＡ技術（ここで、所望のペプチドをコードするＤＮＡ配列のみが形質転換された宿主で発現される）によって達成され得る。例えば、所望の可溶性ｐ７５ポリペプチドをコードする遺伝子は、オリゴヌクレオチド合成機を使用する化学的手段によって合成され得る。このようなオリゴヌクレオチドは、所望の可溶性ｐ７５ポリペプチドのアミノ酸配列に基づいて設計される。所望のペプチドをコードする特定のＤＮＡ配列はまた、特定の制限エンドヌクレアーゼフラグメントの単離によってか、またはｃＤＮＡからの特定の領域のＰＣＲ合成によって、全長ＤＮＡ配列から誘導され得る。
【０４３４】
（変異型ポリペプチドの作製方法）
本発明のポリペプチド（例えば、Ｐｅｐ５、ＰＫＣ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ＭＡＧ、ｐ２１、Ｒｈｏ、Ｒｈｏキナーゼなど）のアミノ酸の欠失、置換もしくは付加（融合を含む）は、周知技術である部位特異的変異誘発法により実施することができる。かかる１もしくは数個のアミノ酸の欠失、置換もしくは付加は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９８９）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  １〜３８，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（１９８７−１９９７）、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１０，６４８７（１９８２）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，７９，６４０９（１９８２）、Ｇｅｎｅ，３４，３１５（１９８５）、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１３，４４３１（１９８５）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，８２，４８８（１９８５）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８１，５６６２（１９８４）、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２４，１４３１（１９８４）、ＰＣＴ  ＷＯ８５／００８１７（１９８５）、Ｎａｔｕｒｅ，３１６，６０１（１９８５）等に記載の方法に準じて調製することができる。
【０４３５】
（合成化学）
本明細書におけるペプチド、化学物質、低分子などの因子は、合成化学技術を用いて合成することができる。そのような合成化学技術は、当該分野において周知の技術を用いることができる。そのような周知技術としては、例えば、Ｆｉｅｓｅｒｓ’  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ  （２００２）などを参照することができる。
【０４３６】
本発明の因子が化合物として利用される場合、塩形態で用いることができる。薬学的に受容可能な塩が好ましく、例えば無機塩基との塩、有機塩基との塩、無機酸との塩、有機酸との塩、塩基性または酸性アミノ塩との塩などが挙げられる。無機塩基との塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、バリウム塩などのアルカリ土類金属塩、ならびにアルミニウム塩、アンモニウム塩などが挙げられる。有機塩基との塩としては、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、エタノ−ルアミン、ジエタノ−ルアミン、トリエタノ−ルアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミンなどとの塩が挙げられる。無機酸との塩としては、塩酸、フッ化水素酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸、過塩素酸、ヨウ化水素酸などとの塩が挙げられる。有機酸との塩としては、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、マンデル酸、アスコルビン酸、乳酸、グルコン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸などとの塩が挙げられる。塩基性アミノ酸との塩としては、アルギニン、リジン、オルニチンなどとの塩が挙げられ、酸性アミノ酸との塩としては、アスパラギン酸、グルタミン酸などとの塩が挙げられる。
【０４３７】
本発明の因子が化合物として利用される場合、水和物形態で用いることができる。「水和物」としては、薬理学的に許容される水和物が好ましく、また、含水塩も含まれ。具体的には、一水和物、二水和物、六水和物等が挙げられる。
【０４３８】
（コンビナトリアルケミストリ）
本発明で使用する化合物は、例えば、コンビナトリアルケミストリー技術、醗酵技術、植物および細胞抽出手順などが挙げられるがこれらに限定されない、いずれかの手段により、作製することができるかまたは入手することができる。コンビナトリアルライブラリを作成する方法は、当該技術分野で周知である。例えば、Ｆｅｌｄｅｒ，Ｅ．Ｒ．，Ｃｈｉｍｉａ  １９９４，４８，５１２−５４１；Ｇａｌｌｏｐら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９４，３７，１２３３−１２５１；Ｈｏｕｇｈｔｅｎ，Ｒ．Ａ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ．１９９３，９，２３５−２３９；Ｈｏｕｇｈｔｅｎら、Ｎａｔｕｒｅ  １９９１，３５４，８４−８６；Ｌａｍら、Ｎａｔｕｒｅ  １９９１，３５４，８２−８４；Ｃａｒｅｌｌら、Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１９９５，３，１７１−１８３；Ｍａｄｄｅｎら、Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ａｎｄ  Ｄｅｓｉｇｎ２，２６９−２８２；Ｃｗｉｒｌａら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９０，８７，６３７８−６３８２；Ｂｒｅｎｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １９９２，８９，５３８１−５３８３；Ｇｏｒｄｏｎら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９４，３７，１３８５−１４０１；Ｌｅｂｌら、Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  １９９５，３７  １７７−１９８；およびそれらで引用された参考文献を参照のこと。これらの参考文献は、その全体を、本明細書中で参考として援用する。
【０４３９】
（免疫化学）
本発明のポリペプチド（例えば、Ｐｅｐ５、ＰＫＣ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ＭＡＧ、ｐ２１、Ｒｈｏ、Ｒｈｏキナーゼまたはその改変体もしくはフラグメントなど）を認識する抗体の作製もまた当該分野において周知である。例えば、ポリクローナル抗体の作製は、取得したポリペプチドの全長または部分断片精製標品、あるいは本発明のタンパク質の一部のアミノ酸配列を有するペプチドを抗原として用い、動物に投与することにより行うことができる。
【０４４０】
抗体を生産する場合、投与する動物として、ウサギ、ヤギ、ラット、マウス、ハムスター等を抗原として用いることができる。その抗原の投与量は動物１匹当たり５０〜１００μｇが好ましい。ペプチドを用いる場合は、ペプチドをスカシガイヘモシアニン（ｋｅｙｈｏｌｅ  ｌｉｍｐｅｔ  ｈａｅｍｏｃｙａｎｉｎ）またはウシチログロブリン等のキャリアタンパク質に共有結合させたものを抗原とするのが望ましい。抗原とするペプチドは、ペプチド合成機で合成することができる。その抗原の投与は、１回目の投与の後１〜２週間おきに３〜１０回行う。各投与後、３〜７日目に眼底静脈叢より採血し、その血清が免疫に用いた抗原と反応することを酵素免疫測定法（酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ法）：医学書院刊  １９７６年、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ−Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｖｏｒａｔｏｒｙ（１９８８））等で確認する。
【０４４１】
免疫に用いた抗原に対し、その血清が充分な抗体価を示した非ヒト哺乳動物より血清を取得し、その血清より、周知技術を用いてポリクローナル抗体を分離、精製することができる。モノクローナル抗体の作製もまた当該分野において周知である。抗体産性細胞の調製のために、まず、免疫に用いた本発明のポリペプチドの部分断片ポリペプチドに対し、その血清が十分な抗体価を示したラットを抗体産生細胞の供給源として使用し、ミエローマ細胞との融合により、ハイブリドーマの作製を行う。その後、酵素免疫測定法になどより、本発明のポリペプチドの部分断片ポリペプチドに特異的に反応するハイブリドーマを選択する。このようにして得たハイブリドーマから産生されたモノクローナル抗体は種々の目的に使用することができる。
【０４４２】
このような抗体は、例えば、本発明のポリペプチドの免疫学的検出方法に使用することができ、本発明の抗体を用いる本発明のポリペプチドの免疫学的検出法としては、マイクロタイタープレートを用いるＥＬＩＳＡ法・蛍光抗体法、ウェスタンブロット法、免疫組織染色法等を挙げることができる。
【０４４３】
さらに、本発明の抗体は、本発明ポリペプチドの免疫学的定量方法にも使用することができる。本発明ポリペプチドの定量方法の例としては、液相中で本発明のポリペプチドと反応する抗体のうちエピトープが異なる２種類のモノクローナル抗体を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡ法、１２６Ｉ等の放射性同位体で標識した本発明のタンパク質と本発明のタンパク質を認識する抗体とを用いるラジオイムノアッセイ法等を挙げることができる。
【０４４４】
本発明のポリペプチドのｍＲＮＡの定量方法もまた、当該分野において周知である。例えば、本発明のポリヌクレオチドあるいはＤＮＡより調製した上記オリゴヌクレオチドを用い、ノーザンハイブリダイゼーション法またはＰＣＲ法により、本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡの発現量をｍＲＮＡレベルで定量することができる。このような技術は、当該分野において周知であり、本明細書において列挙した文献にも記載されている。
【０４４５】
当該分野で公知の任意の方法によって、これらのポリヌクレオチドが得られ得、そしてこれらポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が、決定され得る。例えば、抗体のヌクレオチド配列が公知である場合、この抗体をコードするポリヌクレオチドは、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドからアセンブルされ得（例えば、Ｋｕｔｍｅｉｅｒら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １７：２４２（１９９４）に記載されるように）、これは、手短に言えば、抗体をコードする配列の部分を含むオーバーラップするヌクレオチドの合成、それらのオリゴヌクレオチドのアニーリングおよび連結、ならびに次いでＰＣＲによるこの連結されたオリゴヌクレオチドの増幅を含む。
【０４４６】
あるいは、抗体をコードするポリヌクレオチドは、適切な供給源由来の核酸から作製することができる。ある抗体をコードする核酸を含むクローンは入手不可能だが、その抗体分子の配列が既知である場合、免疫グロブリンをコードする核酸は、化学的に合成され得るか、あるいは適切な供給源（例えば、抗体ｃＤＮＡライブラリーまたは抗体を発現する任意の組織もしくは細胞（例えば、本発明の抗体の発現のために選択されたハイブリドーマ細胞）から生成されたｃＤＮＡライブラリー、またはそれから単離された核酸（好ましくはポリＡ＋ＲＮＡ））から、例えば、抗体をコードするｃＤＮＡライブラリーからのｃＤＮＡクローンを同定するために、その配列の３’末端および５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを使用するＰＣＲ増幅によって、またはその特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを使用するクローニングによって得ることができる。ＰＣＲによって作製され、増幅された核酸は、当該分野で周知の任意の方法を用いて、複製可能なクローニングベクターにクローニングされ得る。
【０４４７】
一旦、抗体のヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列が決定されると、抗体のヌクレオチド配列は、ヌクレオチド配列の操作について当該分野で周知の方法（例えば、組換えＤＮＡ技術、部位指向性変異誘発、ＰＣＲなど（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９９０，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，第２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹおよびＡｕｓｕｂｅｌら編、１９９８，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹに記載の技術を参照のこと。これらは両方がその全体において本明細書に参考として援用される。））を用いて操作され、例えば、アミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を生成するように異なるアミノ酸配列を有する抗体を作製し得る。
【０４４８】
特定の実施形態において、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、相補性決定領域（ＣＤＲ）の配列の同定のために、当該分野において周知の方法によって（例えば、配列超可変性の領域を決定するために、他の重鎖可変領域および軽鎖可変領域の既知のアミノ酸配列と比較することによって）調べられ得る。慣用的な組換えＤＮＡ技術を用いて、１つ以上のＣＤＲが、前述のようにフレームワーク領域内に（例えば、非ヒト抗体をヒト化するために、ヒトフレームワーク領域中に）挿入され得る。このフレームワーク領域は天然に存在し得るか、またはコンセンサスフレームワーク領域であり得、そして好ましくはヒトフレームワーク領域であり得る（例えば、列挙したヒトフレームワーク領域については、Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７８：４５７−４７９（１９９８）を参照のこと）。好ましくは、フレームワーク領域およびＣＤＲの組み合わせによって生成されたポリヌクレオチドは、本発明のポリペプチドに特異的に結合する抗体をコードする。好ましくは、上記に議論されるように、１つ以上のアミノ酸置換は、フレームワーク領域内で作製され得、そして好ましくは、そのアミノ酸置換は、抗体のその抗原への結合を改善する。さらに、このような方法は、１つ以上の鎖内ジスルフィド結合が欠如した抗体分子を生成するように、鎖内ジスルフィド結合に関与する１つ以上の可変領域のシステイン残基のアミノ酸置換または欠失を作製するために使用され得る。ポリヌクレオチドへの他の変更は、本発明によって、および当該分野の技術において包含される。
【０４４９】
さらに、適切な抗原特異性のマウス抗体分子由来の遺伝子を、適切な生物学的活性のヒト抗体分子由来の遺伝子と共にスプライシングさせることによって、「キメラ抗体」の産生のために開発された技術（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：８５１−８５５（１９８４）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：６０４−６０８（１９８４）；Ｔａｋｅｄａら、Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４５２−４５４（１９８５））が使用され得る。上記のように、キメラ抗体は、異なる部分が異なる動物種に由来する分子であり、このような分子は、マウスｍＡｂおよびヒト免疫グロブリンの定常領域由来の可変領域を有する（例えば、ヒト化抗体）。
【０４５０】
単鎖抗体を製造する場合、単鎖抗体の産生に関する記載された公知の技術（米国特許第４，９４６，７７８号；Ｂｉｒｄ、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２（１９８８）；Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３（１９８８）；およびＷａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３４：５４４−５４（１９８９））が、利用され得る。単鎖抗体は、Ｆｖ領域の重鎖フラグメントおよび軽鎖フラグメントがアミノ酸架橋を介して連結されれることによって形成され、単鎖ポリペプチドを生じる。Ｅ．ｃｏｌｉにおける機能性Ｆｖフラグメントのアセンブリのための技術もまた、使用され得る（Ｓｋｅｒｒａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：１０３８−１０４１（１９８８））。
【０４５１】
（抗体を産生する方法）
本発明の抗体は、抗体の合成のために当該分野で公知の任意の方法によって、化学合成によって、または、好ましくは、組換え発現技術によって産生され得る。
【０４５２】
本発明の抗体、またはそのフラグメント、誘導体もしくはアナログ（例えば、本発明の抗体の重鎖もしくは軽鎖）の組換え発現は、その抗体をコードするポリヌクレオチドを含有する発現ベクターの構築を必要とする。一旦、本発明の抗体分子または抗体の重鎖もしくは軽鎖、あるいはそれらの部分（好ましくは、重鎖または軽鎖の可変ドメインを含有する）をコードするポリヌクレオチドが得られると、抗体分子の産生のためのベクターは、当該分野で周知の技術を用いる組換えＤＮＡ技術によって生成され得る。従って、抗体をコードするヌクレオチド配列を含有するポリヌクレオチドの発現によってタンパク質を調製するための方法は、本明細書に記載される。当業者に周知の方法は、抗体をコードする配列ならびに適切な転写制御シグナルおよび翻訳制御シグナルを含有する発現ベクターの構築のために使用され得る。これらの方法としては、例えば、インビトロの組換えＤＮＡ技術、合成技術、およびインビボの遺伝子組換えが挙げられる。従って、本発明は、プロモーターに作動可能に連結された、本発明の抗体分子、あるいはその重鎖もしくは軽鎖、または重鎖もしくは軽鎖の可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を含む、複製可能なベクターを提供する。このようなベクターは、抗体分子の定常領域（例えば、ＰＣＴ公開  ＷＯ８６／０５８０７；ＰＣＴ公開  ＷＯ８９／０１０３６；および米国特許第５，１２２，４６４号を参照のこと）をコードするヌクレオチド配列を含み得、そしてこの抗体の可変ドメインは、重鎖または軽鎖の全体の発現のためにこのようなベクターにクローニングされ得る。
【０４５３】
この発現ベクターは、従来技術によって宿主細胞へと移入され、次いで、このトランスフェクトされた細胞は、本発明の抗体を産生するために、従来技術によって培養される。従って、本発明は、異種プロモーターに作動可能に連結された、本発明の抗体、あるいはその重鎖もしくは軽鎖、または本発明の単鎖抗体をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を含む。二重鎖抗体の発現についての好ましい実施形態において、重鎖および軽鎖の両方をコードするベクターは、以下に詳述されるように、免疫グロブリン分子全体の発現のために宿主細胞中に同時発現され得る。
【０４５４】
本発明の関連した実施形態において、薬学的組成物（例えば、ワクチン組成物）が、予防適用または治療適用のために提供される。このような組成物は、一般に、本発明の免疫原性ポリペプチドまたはポリヌクレオチドおよび免疫刺激剤（例えば、アジュバント）を含む。
【０４５５】
本発明の抗体（例えば、モノクローナル抗体）は、標準的な技術（例えば、親和性クロマトグラフィーまたは免疫沈降）によって、本発明のポリペプチドなどを単離するために用いられ得る。ある因子に特異的な抗体は、細胞からの天然の因子、そして宿主細胞において発現される組換え的に産生された因子の精製を容易にし得る。さらに、そのような抗体が、（例えば、細胞の溶解液または細胞上清における）本発明のタンパク質を検出するために用いられ、本発明のタンパク質の発現の存在の量およびパターンを評価し得る。このような抗体は、例えば、所定の処置レジメンの有効性を決定するために、臨床試験の手順の一部として組織におけるタンパク質レベルを診断的にモニターするために用いられ得る。検出は、抗体を検出可能物質に連結する（すなわち、物理的に連結する）ことにより容易になり得る。検出可能物質の例としては、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質および放射性物質が挙げられる。適切な酵素の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが挙げられる；適切な補欠分子族複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられる；適切な蛍光物質の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミン（ｄｉｃｈｌｏｒｏｔｒｉａｚｉｎｙｌａｍｉｎｅ）フルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンが挙げられる；発光物質の例としては、ルミノールが挙げられる；生物発光物質の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンが挙げられ；そして、適切な放射性物質の例としては１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓまたは３Ｈが挙げられるがそれらに限定されない。
【０４５６】
本発明の別の局面は、哺乳動物において、免疫応答を誘導するに十分な量のポリペプチドをこの哺乳動物に投与することにより本発明のポリペプチドに対する免疫応答を誘導する方法に関する。この量は、動物種、動物の大きさなどに依存するが、当業者により決定され得る。
【０４５７】
（スクリーニング）
本明細書において「スクリーニング」とは、目的とするある特定の性質をもつ生物または物質などの標的を、特定の操作／評価方法で多数を含む集団の中から選抜することをいう。スクリーニングのために、本発明の因子（例えば、抗体）、ポリペプチドまたは核酸分子を使用することができる。スクリーニングは、インビトロ、インビボなど実在物質を用いた系を用いて生成されたライブラリーを使用してもよく、インシリコ（コンピュータを用いた系）の系を用いて生成されたライブラリーを用いてもよい。本発明では、所望の活性を有するスクリーニングによって得られた化合物もまた、本発明の範囲内に包含されることが理解される。また本発明では、本発明の開示をもとに、コンピュータモデリングによる薬物が提供されることも企図される。
【０４５８】
１実施形態において、本発明は、本発明のタンパク質または本発明のポリペプチド、あるいはその生物学的に活性な部分に結合するか、またはこれらの活性を調節する、候補化合物もしくは試験化合物をスクリーニングするためのアッセイを提供する。本発明の試験化合物は、当該分野において公知のコンビナトリアルライブラリー法における多数のアプローチの任意のものを使用して得られ得、これには、以下が挙げられる：生物学的ライブラリー；空間的にアクセス可能な平行固相もしくは溶液相ライブラリー；逆重畳を要する合成ライブラリー法；「１ビーズ１化合物」ライブラリー法；およびアフィニティークロマトグラフィー選択を使用する合成ライブラリー法。生物学的ライブラリーアプローチはペプチドライブラリーに限定されるが、他の４つのアプローチは、ペプチド、非ペプチドオリゴマーもしくは化合物の低分子ライブラリーに適用可能である（Ｌａｍ（１９９７）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ．１２：１４５）。
【０４５９】
分子ライブラリーの合成のための方法の例は、当該分野において、例えば以下に見出され得る：ＤｅＷｉｔｔら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６９０９；Ｅｒｂら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：１  １１４２２；Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎら（１９９４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ  ３７：２６７８；Ｃｈｏら（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６１：１３０３；Ｃａｒｒｅｌｌら（１９９４）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０５９；Ｃａｒｅｌｌら（１９９４）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０６１；およびＧａｌｌｏｐら（１９９４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：１２３３。
【０４６０】
化合物のライブラリーは、溶液中で（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ（１９９２）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １３：４１２−４２１）、あるいはビーズ上（Ｌａｍ（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：８２−８４）、チップ上（Ｆｏｄｏｒ（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  ３６４：５５５−５５６）、細菌（Ｌａｄｎｅｒ  米国特許第５，２２３，４０９号）、胞子（Ｌａｄｎｅｒ、上記）、プラスミド（Ｃｕｌｌら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１８６５−１８６９）またはファージ上（ＳｃｏｔｔおよびＳｍｉｔｈ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：３８６−３９０；Ｄｅｖｌｉｎ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：４０４−４０６；Ｃｗｉｒｌａら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：６３７８−６３８２；およびＦｅｌｉｃｉ（１９９１）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２２：３０１−３１０；Ｌａｄｎｅｒ上記）において示され得る。
【０４６１】
（神経疾患および神経の再生）
本明細書中に使用される用語「軸索」は、ニューロンからの長い細胞の突出をいう。軸索によって、活動電位が、細胞体へまたは細胞体から伝導される。
【０４６２】
本明細書中に使用される用語「軸索成長」は、長い突起または軸索の伸長をいう。軸索は、細胞体で発生し、そして成長円錐に続く。
【０４６３】
本明細書中に使用される用語「成長円錐」は、局所的環境の感知およびその適切なシナプスの標的細胞への軸索の移動を担う、成長する神経突起の先端の特定の領域をいう。
【０４６４】
本明細書中に使用される用語「成長円錐移動」は、ニューロンの標的細胞へ向かう成長円錐の伸長または崩壊をいう。
【０４６５】
本明細書中に使用される用語「神経突起」は、ニューロンから成長する突起のことをいう。培養物中で樹状突起と軸索を区別することは時折困難であるので、この用語「神経突起」は、両方に関して使用される。
【０４６６】
本明細書中に使用される用語「稀突起膠細胞」は、その機能がＣＮＳ軸索を有髄化することである中枢神経の神経膠細胞をいう。
【０４６７】
本明細書において「神経疾患」または「神経学的疾患」とは、本明細書において交換可能に用いられ、神経の機能、構造、器官などの断絶、停止、または障害をいい、通常、次の基準のうち少なくとも２つを満たす病変をいう：１）病因物質をもつこと；２）はっきりと指摘できる徴候および／または症候群があること；３）一致した解剖学的変化があること。神経疾患としては、例えば、脳血管障害（脳出血、くも膜下出血、脳梗塞、一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）、脳動脈硬化症、Ｂｉｎｓｗａｎｇｅｒ病、脳静脈洞血栓・脳静脈血栓、高血圧性脳症、側頭動脈炎、一過性全健忘（ＴＧＡ）、もやもや病、線維筋性形成異常症、内頚動脈海綿静脈洞瘻、慢性硬膜下血腫、アミロイドアンギオパチー（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病参照）など）；脊髄血管障害（例えば、脊髄梗塞、一過性脊髄虚血、脊髄出血、脊髄血管奇形、脊髄くも膜下出血、亜急性壊死性脊髄炎など）；感染性・炎症性疾患（例えば、髄膜炎、脳炎、単純ヘルペス脳炎（ＨＳＥ）、日本脳炎、その他の脳炎、狂犬病、遅発性ウイルス感染症（例えば、亜急性硬化性全脳炎（ＳＳＰＥ）、進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）、Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−Ｊａｋｏｂ病（ＣＪＤ）など）、神経Ｂｅｈｃｅｔ病、小舞踏病、ＡＩＤＳ痴呆症候群、神経梅毒、脳膿瘍、脊髄硬膜外膿瘍、ＨＴＬＶ−Ｉ関連ミエロパチー（ＨＡＭ）、ポリオ）；脱髄疾患（多発性硬化症（ＭＳ）、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、Ｂａｌｏ同心円硬化症、炎症性汎発性硬化症、白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、Ｋｒａｂｂｅ病、副腎白質ジストロフィー（ＡＬＤ）、Ｃａｎａｖａｎ病（白質ジストロフィー）、Ｐｅｌｉｚａｅｕｓ−Ｍｅｒｚｂａｃｈｅｒ病（白質ジストロフィー）、Ａｌｅｘａｎｄｅｒ病（白質ジストロフィー）など）；痴呆性疾患（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病、Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ型老年痴呆（ＳＤＡＴ）、Ｐｉｃｋ病、脳血管性痴呆、Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−Ｊａｋｏｂ病（ＣＪＤ）、Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ痴呆複合、正常圧水頭症、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）など）；基底核変性疾患（例えば、Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ病（ＰＤ）、症候性ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ、線条体黒質変性症（ＳＮＧ）、Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ痴呆複合、Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ病（ＨＤ）、本態性振戦、アテトーゼ、ジストニー症候群（例えば、特発性捻転ジストニー、局所性ジストニー（痙性斜頚、書痙、Ｍｅｉｇｅ症候群など）、症候性ジストニー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｓ病、薬剤性ジストニーなど）、Ｇｉｌｌｅｓ  ｄｅ  ｌａ  Ｔｏｕｒｅｔｔｅ症候群など）；脊髄小脳変性疾患（例えば、脊髄小脳変性症（ＳＣＤ）（Ｓｈｙ−Ｄｒａｇｅｒ症候群、Ｍａｃｈａｄｏ−Ｊｏｓｅｐｈ病（ＭＪＤ）など）、Ｌｏｕｉｓ−Ｂａｒ症候群、Ｂａｓｓｅｎ−Ｋｏｒｎｚｗｅｉｇ症候群、Ｒｅｆｓｕｍ病、他の小脳失調症など）；運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）（例えば、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、進行性球麻痺（筋萎縮性側索硬化症参照）、家族性筋萎縮性側索硬化症、Ｗｅｒｄｎｉｇ−Ｈｏｆｆｍａｎｎ病（ＷＨＤ）、Ｋｕｇｅｌｂｅｒｇ−Ｗｅｌａｎｄｅｒ（Ｋ−Ｗ）病、球脊髄性筋萎縮症、若年性一側上肢筋萎縮症など）；脳・脊髄の腫瘍性疾患（例えば、頭蓋内腫瘍、脊髄腫瘍、髄膜癌腫症など）；機能性疾患（例えば、てんかん、慢性頭痛、失神（失神参照）、特発性頭蓋内圧亢進症、Ｍｅｎｉｅｒｅ病、ナルコレプシー、Ｋｌｅｉｎｅ−Ｌｅｖｉｎ症候群など）；中毒・代謝性疾患（例えば、薬物中毒（フェノチアジン系向精神薬中毒、鎮静・催眠薬中毒、抗生物質中毒、抗Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ病薬、抗癌薬中毒、β遮断薬中毒、Ｃａ拮抗薬中毒、クロフィブラート中毒、制吐薬中毒、スモン病、サリチル酸中毒、ジギタリス中毒、麻薬中毒など）、慢性アルコール中毒（Ｗｅｒｎｉｃｋｅ脳症、Ｍａｒｃｈｉａｆａｖａ−Ｂｉｇｎａｍｉ症候群、橋中心髄鞘崩壊症など）、有機溶剤中毒、農薬中毒（例えば、有機リン剤中毒、カーバメイト剤中毒、クロルピクリン中毒、パラコート中毒など）、有機リン系神経ガス中毒、一酸化炭素中毒、硫化水素中毒、シアン化物中毒、水銀中毒な（金属水銀中毒、無機水銀中毒、有機水銀中毒など）、鉛中毒、四エチル鉛中毒、ヒ素中毒、カドミウム中毒、クロム中毒、マンガン中毒、金属熱、睡眠薬・鎮静薬中毒、サリチル酸中毒、ジギタリス中毒、麻薬中毒、食中毒（例えば、自然毒食中毒（フグ中毒、麻痺性貝毒食中毒、下痢性貝毒食中毒、シガテラ、キノコ中毒、ジャガイモ中毒など）、ビタミン欠乏症（ビタミンＡ欠乏症、ビタミンＢ１欠乏症、ビタミンＢ２欠乏症、ペラグラ、壊血病、ビタミン依存症）、リピドーシス（Ｇａｕｃｈｅｒ病、Ｎｉｅｍａｎｎ−Ｐｉｃｋ病など）、先天性アミノ酸代謝異常、Ｗｉｌｓｏｎ病、アミロイドーシスなど）；先天奇形（Ａｒｎｏｌｄ−Ｃｈｉａｒｉ奇形、Ｋｌｉｐｐｅｌ−Ｆｅｉｌ症候群、頭蓋底陥入症、脊髄空洞症）；神経・皮膚症候群（例えば、母斑症、ｖｏｎ−Ｒｅｃｋｌｉｎｇｈａｕｓｅｎ病、結節性硬化症、Ｓｔｕｒｇｅ−Ｗｅｂｅｒ病、ｖｏｎ、Ｈｉｐｐｅｌ−Ｌｉｎｄａｕ病など）；脊椎疾患（変形性脊椎症、椎間板ヘルニア、後縦靱帯骨化症など）などが挙げられるがそれらに限定されない。
【０４６８】
本明細書において「神経障害」とは、神経の機能、構造、あるいは両方の障害で、発育における遺伝、発生上の欠陥、または毒素、外傷、疾病など外因性要因に起因するものをいう。そのような神経障害としては、例えば、末梢神経障害、糖尿病性神経障害などが挙げられるがそれらに限定されない。末梢神経は各種の原因で障害されるが、原因のいかんを問わずすべての末梢神経の障害は、総称して「神経障害（ニューロパシー）」と呼ばれる。神経障害の原因としては、例えば、遺伝、感染、中毒、代謝障害、アレルギー、膠原病、癌、血管障害、外傷、機械的圧迫、腫瘍などが挙げられるがそれらに限定されない。神経障害の原因は、臨床では特定されないことがあるが、本発明の処置の対象にはそのような原因不明の神経障害も包含される。神経障害としては、実質性神経障害および間質性神経障害が挙げられるがそれらに限定されない。実質性神経障害とは、末梢神経の実質であるニューロン、シュワン細胞および髄鞘の少なくとも１つに病因が作用し、病変が現れたものをいい、間質性神経障害とは、間質に作用して障害が現れるものであり、物理的圧迫、血管性病変（結節性動脈周囲炎（ＰＡＮ）、膠原病など）、炎症反応、肉芽組織（例えば、癩結節、サルコイドーシスなど）による障害が挙げられるがそれらに限定されない。ニューロン全体の代謝が障害を受けると、ニューロンの末梢部から変性し、神経細胞に向けて変性が進行し、最終的に神経細胞が萎縮する（逆行性死滅神経障害）。神経障害の症候としては、運動障害、知覚障害、筋力低下、筋萎縮、反射低下、自律神経障害、およびそれらの組み合わせなどが挙げられる。本発明は、このような神経障害の処置、予防などにも有効である。
【０４６９】
本明細書において「神経の状態」とは、神経の健常度を示す度合いをいう。そのような状態は、種々のパラメータによって表すことができる。本発明により、Ｐｅｐ５、ＰＫＣ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ＧＴ１ｂ、ＭＡＧ、ｐ２１などを測定することにより神経の状態が判定できるようになった。
【０４７０】
本明細書中に使用される用語「中枢神経系障害」は、中枢神経系（ＣＮＳ）の異常な機能に関連する任意の病理学的状態をいう。この用語は、脳組織に対する物理的外傷、ウイルス感染、自己免疫機構および遺伝的変異から生じる、変化された中枢神経系機能を含むが、これに限定されない。
【０４７１】
本明細書中に使用される用語「脱髄性疾患」は、稀突起膠細胞の細胞膜のミエリン鞘の変性によって特徴付けられる病理学的障害をいう。
【０４７２】
本発明の分子および方法を使用して処置され得る例示的疾患、障害および損傷（状態）としては、大脳損傷、脊髄損傷、発作、脱髄疾患（単語症脱髄）、脳脊髄炎、多病巣性白質脳症、汎脳炎、マルキアファーヴァ−ビニャーミ病、海綿状変性、アレグザンダー病、キャナヴァン病、異染性白質萎縮症およびクラッベ病が挙げられるがそれらに限定されない。
【０４７３】
本明細書において「再生」とは、損傷した組織ないし臓器が元通りに回復することをいい、病理的再生ともいう。生物の体は一生の間に外傷や病気によって臓器の一部を失ったり、大きな傷害を受けたりする。その場合、損傷した臓器が再生できるか否かは、臓器によって（または動物種によって）異なる。自然には再生できない臓器（または組織）を再生させ、機能を回復させようというのが再生医学である。組織が再生したかどうかは、その機能が改善したかにどうかによって判定することができる。哺乳動物は、組織・器官（臓器）を再生する力をある程度備えている（例えば、皮膚、肝臓および血液の再生）。しかし、心臓、肺、脳などの臓器、中枢神経などの組織は再生能力に乏しく、一旦損傷すると、その機能を再生させることができないと考えられてきた。従って、従来であれば、例えば、そのような臓器が損傷した場合、臓器移植による処置しかほとんど有効な措置がなく、移植では処置できない中枢神経などの場合は、有効な処置がないに等しい状態であった。
【０４７４】
本明細書において「神経の再生」とは、損傷したかあるいは消失した神経が回復することをいう。従来、成体では特に中枢神経の再生は不可能とされており、いったん神経が機能を損なうと、その再生は困難であった。ここで、神経が再生したかどうかは、運動能力、感覚能力の評価、組織において神経軸索の再生を評価することなどによって確認することができる。
【０４７５】
本明細書において「予防（する）」は、生物が病気にかかる（ｃｏｎｔｒａｃｔ）かまたは異常な状態を発生する可能性を減少させることをいう。
【０４７６】
本明細書において「処置（する）」は、治療効果を有すること、および生物における異常な状態を少なくとも部分的に軽減するかまたは抑止することをいう。
【０４７７】
本明細書において「治療効果」は、異常な状態を引き起こすかまたはこれに寄与する阻害因子または活性化因子をいう。治療効果は、異常な状態の症状の１つ以上をある程度緩和する。異常な状態の処置に関して、治療効果とは、以下の１つ以上をいい得る：（ａ）細胞の増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）、増殖（ｇｒｏｗｔｈ）、および／または分化における増加；（ｂ）細胞死の阻害（すなわち、遅らせることまたは停止させること）；（ｃ）変性の阻害；（ｄ）異常な状態に関連する症状の１つ以上をある程度緩和する；および（ｅ）罹患した細胞集団の機能を強化すること。異常な状態に対する効力を示す化合物は、本明細書中に記載されるように同定され得る。
【０４７８】
本明細書において「異常な状態」は、生物におけるその正常な機能から逸脱する、生物の細胞または組織における機能をいう。異常な状態は、細胞増殖、細胞分化、細胞シグナル伝達、または細胞生存に関連し得る。異常な状態としてはまた、神経伝達における異常、肥満、網膜変性のような糖尿病合併症、ならびにグルコースの取り込みおよび代謝における不規則性、ならびに脂肪酸の取り込みおよび代謝における不規則性が挙げられ得る。
【０４７９】
異常な細胞増殖状態としては、例えば、神経細胞の異常増殖、線維症およびメサンギウム障害のような癌、異常な新脈管形成および脈管形成、創傷治癒、乾癬、糖尿病および炎症が挙げられる。
【０４８０】
異常な分化としては、例えば、神経変性障害、緩徐な創傷治癒速度および緩徐な組織移植片治癒速度が挙げられる。
【０４８１】
異常な細胞シグナル伝達としては、例えば、過度の神経伝達物質活性を含む精神障害が挙げられる。
【０４８２】
異常な細胞生存は、アポトーシス（プログラム細胞死）経路が活性化されるかまたは抑止される状態に関連する。多数のタンパク質キナーゼが、アポトーシス経路に関連している。タンパク質キナーゼのいずれか１つの機能における異常は、細胞不死または未熟な細胞死を生じ得る。
【０４８３】
本発明は、神経疾患、障害または異常状態のある（罹患しているおそれのある）被験体または上記障害を有する被験体を処置する、予防的方法および治療的方法の両方を提供する。
【０４８４】
生物学的活性レベルの増大（疾患または障害を罹患しない被験体と比較して）によって特徴付けられる疾患および障害は、活性をアンタゴナイズする（すなわち、減少または阻害する）治療剤で処置され得る。活性をアンタゴナイズする治療剤は、治療様式または予防様式において投与され得る。利用され得る治療剤としては、限定されないが、以下が挙げられる；（ｉ）ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子（例えば、ポリペプチド）、またはそのアナログ、誘導体、フラグメントもしくはホモログ；（ｉｉ）ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子に対する抗体；（ｉｉｉ）ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子をコードする核酸（因子がポリペプチドの場合）；（ｉｖ）アンチセンス核酸および「機能障害性」（すなわち、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子（ポリペプチドである場合）に対するコード配列のコード配列内における異種挿入に起因する）の核酸（例えば、ＲＮＡｉ）の投与は、相同組換えによるｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子の「ノックアウト」内在性機能に利用される（例えば、Ｃａｐｅｃｃｈｉ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４，１２８８−１２９２を参照のこと）；あるいは（ｖ）ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子とその結合パートナーとの間の相互作用を調節する因子（すなわち、インヒビター、アゴニストおよびアンタゴニスト（本発明のさらなるペプチド模倣物または本発明のペプチドに特異的な抗体を含む）。
【０４８５】
生物学的活性レベルの減少（疾患または障害を罹患していない被験体と比較して）によって特徴付けられる疾患または障害は、活性を増加させる（すなわち、アゴニストである）治療剤で処置され得る。活性を上方制御する治療剤は、治療様式または予防様式で投与され得る。利用され得る治療剤としては、限定されないが、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子、またはそのアナログ、誘導体、フラグメントまたはホモログ；あるいはバイオアベイラビリティーを増大させるアゴニストが挙げられる。
【０４８６】
レベルの増加または減少は、ペプチドおよび／またはＲＮＡを定量することによって、患者組織サンプル（例えば、生検組織から）を得てＲＮＡまたはペプチドのレベル、発現したペプチド（またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子のｍＲＮＡ）の構造および／または活性に関してインビトロで上記サンプルをアッセイすることによって、容易に検出され得る。当該分野で周知の方法としては、限定されないが、免疫アッセイ（例えば、ウエスタンブロット分析、免疫沈降後のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）ポリアクリルアミドゲル電気泳動、免疫組織化学などによって）、および／またはｍＲＮＡの発現を検出するためのハイブリダイゼーションアッセイ（例えば、ノーザンアッセイ、ドットブロット、インサイチュハイブリダイゼーションなど）が挙げられる。
【０４８７】
本発明はまた、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子の発現または少なくとも１つのｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子の活性を調節する薬剤を被験体に投与することによって、被験体において、異常なｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子の発現またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子の活性に関連する疾患または状態を予防するための方法を提供する。異常なｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子の発現またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子の活性によって引き起こされるかまたは寄与される疾患に対するリスクのある被験体は、例えば、本明細書中に記載されるような診断アッセイまたは予後アッセイのいずれかまたは組み合わせによって同定され得る。予防剤の投与は、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子の異常に特徴的な症状の出現の前に行い得、その結果、疾患または障害が予防されるか、またはその進行を遅らせる。ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子の異常の型に基づいて、例えば、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子のアゴニスト薬剤またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子のアンタゴニスト薬剤が、被験体を処置するために使用され得る。適切な薬剤は、本明細書中で記載されるスクリーニングアッセイに基づいて決定され得る。
【０４８８】
本発明はまた、治療目的のためのｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子の発現または活性を調節する方法に関する。本発明の調節法は、細胞を、細胞と関連するｐ７５シグナル伝達経路における１つ以上の伝達因子の活性を調節する薬剤と接触させる工程を包含する。ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子の活性を調節する薬剤は、本明細書中で記載されるような薬剤であり得、例えば、核酸またはタンパク質、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子の天然に存在する同族リガンド、ペプチド、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子のペプチド模倣物、または他の低分子であり得る。１つの実施形態において、薬剤は、１つ以上のｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子の活性を刺激する。このような刺激剤の例としては、活性ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子および細胞中に導入されたｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子をコードする核酸分子が挙げられる。別の実施形態において、薬剤は、１つ以上のｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子活性を阻害する。このような阻害剤の例としては、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子核酸分子に対するアンチセンスおよびｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子に対する抗体が挙げられる。これらの調節方法は、インビトロで（例えば、細胞を薬剤とともに培養することによって）、あるいはインビボで（例えば、薬剤を被験体に投与することによって）実行され得る。このように、本発明は、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子（例えば、ポリペプチド）またはそれをコードする核酸分子の異常発現または異常活性によって特徴付けられる疾患または障害に悩まされる被験体を処置する方法を提供する。１つの実施形態において、本方法は、薬剤（例えば、本明細書に記載されるスクリーニングアッセイによって同定される薬剤）およびｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子発現またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子活性を調節する（例えば、上方制御または下方制御する）薬剤の組み合わせを投与する工程を包含する。別の実施形態において、本方法は、減少したｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子発現もしくは活性または異常なｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子発現もしくは活性を補うための治療として、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子またはそれをコードする核酸分子を投与する工程を包含する。
【０４８９】
（遺伝子治療）
特定の実施形態において、本発明の正常な遺伝子の核酸配列、抗体またはその機能的誘導体をコードする配列を含む核酸は、本発明のポリペプチドの異常な発現および／または活性に関連した疾患または障害を処置、阻害または予防するために、遺伝子治療の目的で投与される。遺伝子治療とは、発現されたか、または発現可能な核酸の、被験体への投与により行われる治療をいう。本発明のこの実施形態において、核酸は、それらのコードされたタンパク質を産生し、そのタンパク質は治療効果を媒介する。
【０４９０】
当該分野で利用可能な遺伝子治療のための任意の方法が、本発明に従って使用され得る。例示的な方法は、以下のとおりである。
【０４９１】
遺伝子治療の方法の一般的な概説については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌら，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  １２：４８８−５０５（１９９３）；ＷｕおよびＷｕ，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ３：８７−９５（１９９１）；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９６（１９９３）；Ｍｕｌｌｉｇａｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６０：９２６−９３２（１９９３）；ならびにＭｏｒｇａｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７（１９９３）；およびＭａｙ，ＴＩＢＴＥＣＨ  １１（５）：１５５−２１５（１９９３）を参照のこと。遺伝子治療において使用される一般的に公知の組換えＤＮＡ技術は、Ａｕｓｕｂｅｌら（編），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）；およびＫｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）に記載される。
【０４９２】
したがって、本発明では、Ｐｅｐ５、ＰＫＣ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ＭＡＧ、ｐ２１、Ｒｈｏ、Ｒｈｏキナーゼまたはその改変体もしくはフラグメント、あるいはこれらを調節する因子などをコードする核酸分子を用いた遺伝子治療が有用であり得る。
【０４９３】
本明細書において「形質」および「表現型」という用語は、本明細書では交換可能に用いられ、生物の可視的な性質、検出可能な性質またはこれ以外の場合における測定可能な性質すべてを意味するものであり、一例として疾患の徴候または疾患に対する感受性があげられる。本明細書では通常、「形質」または「表現型」という用語は、乳房に関する疾患（例えば、乳がん）、肥満または肥満に関連した障害、特に、アテローム性動脈硬化症、インスリン抵抗性、高血圧症、ＩＩ型糖尿病の肥満個体における細小血管障害、ＩＩ型糖尿病の肥満個体における細小血管障害に関連した眼病変、またはＩＩ型糖尿病の肥満個体における細小血管障害に関連した腎病変の症状またはこれらに対する羅患性を示すときに用いられ得る。
【０４９４】
本明細書において「遺伝子型」という用語は、ある生物個体の遺伝子の構成をいい、しばしば個体または試料中に存在する対立遺伝子を意味することがある。試料または個体の「遺伝子型を判定する」という表現は、個体の特定の遺伝子の配列を解析することを包含する。
【０４９５】
本明細書において「多型」という用語は、異なるゲノムまたは個体間で２以上の選択的ゲノム配列または対立遺伝子が出現することを示すために用いられる。「多型（の）」という表現は、特定のゲノム配列の２以上の変異体が個体群に見出される可能性がある状態を示す。「多型部位」は、そのような変異が発生する遺伝子座である。単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰｓ）は、多型部位で１つのヌクレオチドが別のヌクレオチドに置換されたものである。１つのヌクレオチドの欠失または１つのヌクレオチドの挿入によっても単一ヌクレオチド多型が生じる。本明細書において「単一ヌクレオチド多型」は、１つのヌクレオチドの置換を示すものであることが好ましい。一般に、異なる個体間では、多型部位を２つの異なるヌクレオチドが占めている場合がある。本発明では、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ＭＡＧ、Ｒｈｏ、ＰＫＣ、Ｒｈｏキナーゼなどの多型もまた、神経疾患に関連すると考えられることから、１つの実施形態では、このような多型の分析によって同定された対立遺伝子を用いることが、再生、予防、診断、治療または予後に有効であり得る。
【０４９６】
本明細書中で使用されるように、用語「合成（ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）」または「合成する（ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅ）」とは、酵素的方法とは対照的に、純粋に化学的に生成された化学物質（例えば、ポリヌクレオチド、ポリペプチドなど）をいう。従って、「全体が」（ｇｌｏｂａｌｌｙ）合成された化学物質（例えば、ポリヌクレオチド、有機低分子、ポリペプチドなど）は、その全体が化学的手段によって生成され、そして「部分的に」合成された化学物質（例えば、ポリヌクレオチド、ポリペプチドなど）は、その得られた化学物質（例えば、ポリヌクレオチド、ポリペプチドなど）の一部分のみが化学的手段によって生成された化学物質（例えば、ポリヌクレオチド、ポリペプチドなど）を包含する。
【０４９７】
本明細書において使用される用語「領域」によって、生体分子の一次構造の物理的に連続した部分を意味する。タンパク質の場合、領域は、そのタンパク質のアミノ酸配列の連続した部分によって定義される。用語「ドメイン」は、本明細書中で、生体分子の既知の機能または推測されている機能に寄与する、その生体分子の構造部分をいうものとして定義される。ドメインは、領域またはその部分と同じ領域を有し得；ドメインはまた、その領域の全てまたは一部に加えて、特定の領域と区別される生体分子の一部を組み込み得る。本発明のｐ７５シグナル伝達におけるタンパク質のドメインの例としては、シグナルペプチド、細胞外（すなわち、Ｎ末端）ドメイン、ロイシンリッチ反復ドメインが挙げられるが、これらに限定されない。
【０４９８】
（治療活性または予防活性の証明）
本発明の化合物または薬学的組成物は、好ましくは、ヒトでの使用の前にインビトロで、そして次いでインビボで、所望の治療活性または予防活性について試験される。例えば、化合物または薬学的組成物の、治療有用性または予防有用性を証明するためのインビトロアッセイとしては、細胞株または患者組織サンプルに対する化合物の効果が挙げられる。細胞株および／または組織サンプルに対する化合物または組成物の効果は、当業者に公知である技術（細胞溶解アッセイが挙げられるがこれらに限定されない）を利用して決定され得る。本発明に従って、特定の化合物の投与が示されるか否かを決定するために用いられ得るインビトロアッセイとしては、インビトロ細胞培養アッセイが挙げられ、このアッセイでは、患者組織サンプルが培養物において増殖し、そして化合物に曝されるか、そうでなければ化合物が投与され、そして、組織サンプルに対するそのような化合物の効果が観察される。
【０４９９】
（治療的／予防的な投与および組成物）
本発明は、被験体への有効量の本発明の化合物または薬学的組成物の投与による処置、阻害および予防の方法を提供する。好ましい局面において、化合物は実質的に精製されている（例えば、その効果を制限するかまたは望ましくない副作用を生じる物質が実質的に存在しない状態が挙げられる）。
【０５００】
本明細書において「診断、予防、処置または予後上有効な量」とは、それぞれ、診断、予防、処置（または治療）または予後において、医療上有効であると認められる程度の量をいう。このような量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができる。
【０５０１】
本発明が対象とする動物は、神経系または類似の系を有するものであれば、任意の生物（例えば、動物（例えば、脊椎動物、無脊椎動物））でもよい。好ましくは、脊椎動物（例えば、メクラウナギ類、ヤツメウナギ類、軟骨魚類、硬骨魚類、両生類、爬虫類、鳥類、哺乳動物など）であり、より好ましくは、哺乳動物（例えば、単孔類、有袋類、貧歯類、皮翼類、翼手類、食肉類、食虫類、長鼻類、奇蹄類、偶蹄類、管歯類、有鱗類、海牛類、クジラ目、霊長類、齧歯類、ウサギ目など）であり得る。例示的な被験体としては、例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ニワトリ、ネコ、イヌなどの動物が挙げられるがそれらに限定されない。さらに好ましくは、霊長類（例えば、チンパンジー、ニホンザル、ヒト）由来の細胞が用いられる。最も好ましくはヒト由来の細胞が用いられる。
【０５０２】
本発明の核酸分子またはポリペプチドが医薬として使用される場合、そのような組成物は、薬学的に受容可能なキャリアなどをさらに含み得る。本発明の医薬に含まれる薬学的に受容可能なキャリアとしては、当該分野において公知の任意の物質が挙げられる。
【０５０３】
そのような適切な処方材料または薬学的に受容可能なキャリアとしては、抗酸化剤、保存剤、着色料、風味料、および希釈剤、乳化剤、懸濁化剤、溶媒、フィラー、増量剤、緩衝剤、送達ビヒクルおよび／または薬学的アジュバントが挙げられるがそれらに限定されない。代表的には、本発明の医薬は、Ｐｅｐ５、ＰＫＣ、ＩＰ３、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ＭＡＧ、ｐ２１、Ｒｈｏ、Ｒｈｏキナーゼまたはその改変体もしくはフラグメントなどのポリペプチドまたはポリヌクレオチド、またはその改変体もしくは誘導体、あるいはそれらの調節因子を、１つ以上の生理的に受容可能なキャリア、賦形剤または希釈剤とともに含む組成物の形態で投与される。例えば、適切なビヒクルは、注射用水、生理的溶液、または人工脳脊髄液であり得、これらには、非経口送達のための組成物に一般的な他の物質を補充することが可能である。
【０５０４】
本明細書で使用される受容可能なキャリア、賦形剤または安定化剤は、好ましくはレシピエントに対して非毒性であり、そして好ましくは、使用される投薬量および濃度において不活性であり、例えば、リン酸塩、クエン酸塩、または他の有機酸；アスコルビン酸、α−トコフェロール；低分子量ポリペプチド；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン）；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジン）；モノサッカリド、ジサッカリドおよび他の炭水化物（グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む）；キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）；糖アルコール（例えば、マンニトールまたはソルビトール）；塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）；ならびに／あるいは非イオン性表面活性化剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ、プルロニック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ））などが挙げられるがそれらに限定されない。
【０５０５】
例示の適切なキャリアとしては、中性緩衝化生理食塩水、または血清アルブミンと混合された生理食塩水が挙げられる。好ましくは、その生成物は、適切な賦形剤（例えば、スクロース）を用いて凍結乾燥剤として処方される。他の標準的なキャリア、希釈剤および賦形剤は所望に応じて含まれ得る。他の例示的な組成物は、ｐＨ７．０−８．５のＴｒｉｓ緩衝剤またはｐＨ４．０−５．５の酢酸緩衝剤を含み、これらは、さらに、ソルビトールまたはその適切な代替物を含み得る。
【０５０６】
以下に本発明の医薬組成物の一般的な調製法を示す。なお、動物薬組成物、医薬部外品、水産薬組成物、食品組成物および化粧品組成物等についても公知の調製法により製造することができる。
【０５０７】
本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチドなどは、薬学的に受容可能なキャリアと配合し、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、粉剤、座剤等の固形製剤、またはシロップ剤、注射剤、懸濁剤、溶液剤、スプレー剤等の液状製剤として経口または非経口的に投与することができる。薬学的に受容可能なキャリアとしては、上述のように、固形製剤における賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、崩壊阻害剤、吸収促進剤、吸着剤、保湿剤、溶解補助剤、安定化剤、液状製剤における溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤等が挙げられる。また、必要に応じ、防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤等の製剤添加物を用いることができる。また、本発明の組成物には本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチドなど以外の物質を配合することも可能である。非経口の投与経路としては、静脈内注射、筋肉内注射、経鼻、直腸、膣および経皮等が挙げられるがそれらに限定されない。
【０５０８】
固形製剤における賦形剤としては、例えば、グルコース、ラクトース、スクロース、Ｄ−マンニトール、結晶セルロース、デンプン、炭酸カルシウム、軽質無水ケイ酸、塩化ナトリウム、カオリンおよび尿素等が挙げられる。
【０５０９】
固形製剤における滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ホウ酸末、コロイド状ケイ酸、タルクおよびポリエチレングリコール等が挙げられるがそれらに限定されない。
【０５１０】
固形製剤における結合剤としては、例えば、水、エタノール、プロパノール、白糖、Ｄ−マンニトール、結晶セルロース、デキストリン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、デンプン溶液、ゼラチン溶液、ポリビニルピロリドン、リン酸カルシウム、リン酸カリウム、およびシェラック等が挙げられる。
【０５１１】
固形製剤における崩壊剤としては、例えば、デンプン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カンテン末、ラミナラン末、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、アルギン酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、デンプン、ステアリン酸モノグリセリド、ラクトースおよび繊維素グリコール酸カルシウム等が挙げられるがそれらに限定されない。
【０５１２】
固形製剤における崩壊阻害剤の好適な例としては、水素添加油、白糖、ステアリン、カカオ脂および硬化油等が挙げられるがそれらに限定されない。
【０５１３】
固形製剤における吸収促進剤としては、例えば、第四級アンモニウム塩基類およびラウリル硫酸ナトリウム等が挙げられるがそれらに限定されない。
【０５１４】
固形製剤における吸着剤としては、例えば、デンプン、ラクトース、カオリン、ベントナイトおよびコロイド状ケイ酸等が挙げられるがそれらに限定されない。
【０５１５】
固形製剤における保湿剤としては、例えば、グリセリン、デンプン等が挙げられるがそれらに限定されない。
【０５１６】
固形製剤における溶解補助剤としては、例えば、アルギニン、グルタミン酸、アスパラギン酸等が挙げられるがそれらに限定されない。
【０５１７】
固形製剤における安定化剤としては、例えば、ヒト血清アルブミン、ラクトース等が挙げられるがそれらに限定されない。
【０５１８】
固形製剤として錠剤、丸剤等を調製する際には、必要により胃溶性または腸溶性物質（白糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート等）のフィルムで被覆していてもよい。錠剤には、必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例えば、糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーテイング錠あるいは二重錠、多層錠が含まれる。カプセル剤にはハードカプセルおよびソフトカプセルが含まれる。座剤の形態に成形する際には、上記に列挙した添加物以外に、例えば、高級アルコール、高級アルコールのエステル類、半合成グリセライド等を添加することができるがそれらに限定されない。
【０５１９】
液状製剤における溶剤の好適な例としては、注射用水、アルコール、プロピレングリコール、マクロゴール、ゴマ油およびトウモロコシ油等が挙げられる。
【０５２０】
液状製剤における溶解補助剤の好適な例としては、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、Ｄ−マンニトール、安息香酸ベンジル、エタノール、トリスアミノメタン、コレステロール、トリエタノールアミン、炭酸ナトリウムおよびクエン酸ナトリウム等が挙げられるがそれらに限定されない。
【０５２１】
液状製剤における懸濁化剤の好適な例としては、ステアリルトリエタノールアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアミノプロピオン酸、レシチン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、モノステアリン酸グリセリン等の界面活性剤、例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース等の親水性高分子等が挙げられるがそれらに限定されない。
【０５２２】
液状製剤における等張化剤の好適な例としては、塩化ナトリウム、グリセリン、Ｄ−マンニトール等が挙げられるがそれらに限定されない。
【０５２３】
液状製剤における緩衝剤の好適な例としては、リン酸塩、酢酸塩、炭酸塩およびクエン酸塩等が挙げられるがそれらに限定されない。
【０５２４】
液状製剤における無痛化剤の好適な例としては、ベンジルアルコール、塩化ベンザルコニウムおよび塩酸プロカイン等が挙げられるがそれらに限定されない。
【０５２５】
液状製剤における防腐剤の好適な例としては、パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、２−フェニルエチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸等が挙げられるがそれらに限定されない。
【０５２６】
液状製剤における抗酸化剤の好適な例としては、亜硫酸塩、アスコルビン酸、α−トコフェロールおよびシステイン等が挙げられるがそれらに限定されない。
【０５２７】
注射剤として調製する際には、液剤および懸濁剤は殺菌され、かつ血液と等張であることが好ましい。通常、これらは、バクテリア保留フィルター等を用いるろ過、殺菌剤の配合または照射によって無菌化する。さらにこれらの処理後、凍結乾燥等の方法により固形物とし、使用直前に無菌水または無菌の注射用希釈剤（塩酸リドカイン水溶液、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、エタノールまたはこれらの混合溶液等）を添加してもよい。
【０５２８】
さらに、必要ならば、本発明の医薬組成物は、着色料、保存剤、香料、矯味矯臭剤、甘味料等、ならびに他の薬剤を含んでいてもよい。
【０５２９】
本発明の医薬は、経口的または非経口的に投与され得る。あるいは、本発明の医薬は、静脈内または皮下で投与され得る。全身投与されるとき、本発明において使用される医薬は、発熱物質を含まない、薬学的に受容可能な水溶液の形態であり得る。そのような薬学的に受容可能な組成物の調製は、ｐＨ、等張性、安定性などを考慮することにより、当業者は、容易に行うことができる。本明細書において、投与方法は、経口投与、非経口投与（例えば、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、粘膜投与、直腸内投与、膣内投与、患部への局所投与、皮膚投与など）であり得る。そのような投与のための処方物は、任意の製剤形態で提供され得る。そのような製剤形態としては、例えば、液剤、注射剤、徐放剤が挙げられる。
【０５３０】
本発明の医薬は、必要に応じて生理学的に受容可能なキャリア、賦型剤または安定化剤（日本薬局方第１４版、その追補またはその最新版、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０などを参照）と、所望の程度の純度を有する糖鎖組成物とを混合することによって、凍結乾燥されたケーキまたは水溶液の形態で調製され保存され得る。
【０５３１】
様々な送達系が公知であり、そして本発明の化合物を投与するために用いられ得る（例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセル）。導入方法としては、皮内、筋内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、および経口経路が挙げられるがそれらに限定されない。化合物または組成物は、任意の好都合な経路により（例えば、注入またはボーラス注射により、上皮または粘膜内層（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜および腸粘膜など）を通しての吸収により）投与され得、そして他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与され得る。投与は、全身的または局所的であり得る。さらに、本発明の薬学的化合物または組成物を、任意の適切な経路（脳室内注射および髄腔内注射を包含し；脳室内注射は、例えば、Ｏｍｍａｙａリザーバのようなリザーバに取り付けられた脳室内カテーテルにより容易にされ得る）により中枢神経系に導入することが望まれ得る。例えば、吸入器または噴霧器の使用、およびエアロゾル化剤を用いた処方により、肺投与もまた使用され得る。
【０５３２】
特定の実施形態において、本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチドまたは組成物を、処置の必要な領域（例えば、中枢神経、脳など）に局所的に投与することが望まれ得る；これは、制限する目的ではないが、例えば、手術中の局部注入、局所適用（例えば、手術後の創傷包帯との組み合わせて）により、注射により、カテーテルにより、坐剤により、またはインプラント（このインプラントは、シアラスティック（ｓｉａｌａｓｔｉｃ）膜のような膜または繊維を含む、多孔性、非多孔性、または膠様材料である）により達成され得る。好ましくは、抗体を含む本発明のタンパク質を投与する際、タンパク質が吸収されない材料を使用するために注意が払われなければならない。
【０５３３】
別の実施形態において、化合物または組成物は、小胞、特に、リポソーム中に封入された状態で送達され得る（Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３（１９９０）；Ｔｒｅａｔら，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ，Ｌｏｐｅｚ−ＢｅｒｅｓｔｅｉｎおよびＦｉｄｌｅｒ（編），Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，３５３〜３６５頁（１９８９）；Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ，同書３１７〜３２７頁を参照のこと；広く同書を参照のこと）。
【０５３４】
さらに別の実施形態において、化合物または組成物は、制御された徐放系中で送達され得る。１つの実施形態において、ポンプが用いられ得る（Ｌａｎｇｅｒ（前出）；Ｓｅｆｔｏｎ，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１（１９８７）；Ｂｕｃｈｗａｌｄら，Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０７（１９８０）；Ｓａｕｄｅｋら，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４（１９８９）を参照のこと）。別の実施形態において、高分子材料が用いられ得る（Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ（編），ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ（１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，ＳｍｏｌｅｎおよびＢａｌｌ（編），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４）；ＲａｎｇｅｒおよびＰｅｐｐａｓ，Ｊ．、Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１（１９８３）を参照のこと；Ｌｅｖｙら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１９０（１９８５）；Ｄｕｒｉｎｇら，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１（１９８９）；Ｈｏｗａｒｄら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５（１９８９）もまた参照のこと）。
【０５３５】
さらに別の実施形態において、制御された徐放系は、治療標的、即ち、脳の近くに置かれ得、従って、全身用量の一部のみを必要とする（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，（前出），第２巻，１１５〜１３８頁（１９８４）を参照のこと）。
【０５３６】
他の制御された徐放系は、Ｌａｎｇｅｒにより総説において議論される（Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３（１９９０））。
【０５３７】
本発明の処置方法において使用される組成物の量は、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。本発明の処置方法を被験体（患者）に対して施す頻度もまた、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、および治療経過などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。頻度としては、例えば、毎日−数ヶ月に１回（例えば、１週間に１回−１ヶ月に１回）の投与が挙げられる。１週間−１ヶ月に１回の投与を、経過を見ながら施すことが好ましい。
【０５３８】
本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチドなどの投与量は、被験体の年齢、体重、症状または投与方法などにより異なり、特に限定されないが、通常成人１日あたり、経口投与の場合、０．０１ｍｇ〜１０ｇであり、好ましくは、０．１ｍｇ〜１ｇ、１ｍｇ〜１００ｍｇ、０．１ｍｇ〜１０ｍｇなどであり得る。非経口投与の場合、０．０１ｍｇ〜１ｇであり、好ましくは、０．０１ｍｇ〜１００ｍｇ、０．１ｍｇ〜１００ｍｇ、１ｍｇ〜１００ｍｇ、０．１ｍｇ〜１０ｍｇなどであり得るが、これらに限定されない。
【０５３９】
本明細書中、「投与する」とは、本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチドなどまたはそれを含む医薬組成物を、単独で、または他の治療剤と組み合わせて、生物の細胞、組織または生体に取り込むことを意味する。組み合わせは、例えば、混合物として同時に、別々であるが同時にもしくは並行して；または逐次的にかのいずれかで投与され得る。これは、組み合わされた薬剤が、治療混合物としてともに投与される提示を含み、そして組み合わせた薬剤が、別々であるが同時に（例えば、同じ個体へ別々の静脈ラインを通じての場合）投与される手順もまた含む。「組み合わせ」投与は、第１に与えられ、続いて第２に与えられる化合物または薬剤のうちの１つを別々に投与することをさらに含む。
【０５４０】
異常な状態はまた、生物へのシグナル伝達経路に異常を有する細胞の群に化合物を投与することによって予防または処置され得る。次いで、化合物を投与することの生物機能に対する効果が、モニターされ得る。この生物は、好ましくは、マウス、ラット、ウサギ、またはヤギ、より好ましくは、サル（ｍｏｎｋｅｙまたはａｐｅ）、および最も好ましくは、ヒトである。これらの非ヒト動物の特定の因子に関するモニターにより、ヒトにおけるその因子の効果を蓋然性を持って推定することができる。
【０５４１】
本明細書において「指示書」は、本発明の医薬などを投与する方法または診断する方法などを、投与を行う人または投与される人、あるいは、診断する人または診断される人（例えば、医師、患者など）に対して記載したものである。この指示書は、本発明の診断薬、医薬などを投与する手順を指示する文言が記載されている。この指示書は、本発明が実施される国の監督官庁（例えば、日本であれば厚生労働省、米国であれば食品医薬品局（ＦＤＡ）など）が規定した様式に従って作成され、その監督官庁により承認を受けた旨が明記される。指示書は、いわゆる添付文書（ｐａｃｋａｇｅ  ｉｎｓｅｒｔ）であり、通常は紙媒体で提供されるが、それに限定されず、例えば、電子媒体（例えば、インターネットで提供されるホームページ（ウェブサイト）、電子メール、ＳＭＳ、ボイスメール、インスタントメッセージ）のような形態でも提供され得る。
【０５４２】
本発明の方法による治療の終了の判断は、商業的に利用できるアッセイもしくは機器使用による標準的な臨床検査室の結果またはＰｅｐ５、ＰＫＣ，ＩＰ３、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ＭＡＧ、ＧＴ１ｂ、ｐ２１、Ｒｈｏ、Ｒｈｏキナーゼなどに関連する疾患（例えば、神経疾患）に特徴的な臨床症状の消滅によって支持され得る。治療は、Ｐｅｐ５、ＰＫＣ，ＩＰ３、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ＭＡＧ、ＧＴ１ｂ、ｐ２１、Ｒｈｏ、Ｒｈｏキナーゼなどに関連する疾患（例えば、神経疾患）の再発により再開することができる。
【０５４３】
本発明はまた、本発明の医薬組成物の１つ以上の成分を満たした１つ以上の容器を備える薬学的パックまたはキットを提供する。医薬品または生物学的製品の製造、使用または販売を規制する政府機関が定めた形式の通知が、このような容器に任意に付属し得、この通知は、ヒトへの投与に対する製造、使用または販売に関する政府機関による承認を表す。
【０５４４】
血漿、腫瘍および主要器官中での薬物および代謝産物の血漿半減期および体内分布はまた、障害を阻害するのに最も適切な薬物の選択を容易にするように決定され得る。このような測定が行われ得、例えば、ＨＰＬＣ分析は、薬物で処置された動物の血漿において行われ得、放射線標識された化合物の位置が、Ｘ線、ＣＡＴスキャンおよびＭＲＩのような検出方法を用いて決定され得る。スクリーニングアッセイにおいて強力な阻害活性を示すが、薬物動態学的特徴が不十分な化合物は、化学構造の変更や再試験によって最適化され得る。この点について、良好な薬物動態学的特徴を示す化合物が、モデルとして使用され得る。
【０５４５】
毒性研究はまた、血液細胞組成を測定することによって行われ得る。例えば、毒性研究は、以下のような適切な動物モデルにおいて行われ得る：（１）化合物がマウスに投与される（未処置のコントロールマウスもまた、使用されるべきである）；（２）各々の処置群中の１匹のマウスから尾静脈を介して血液サンプルを周期的に得る；そして（３）上記サンプルを、赤血球および白血球の数、血液細胞組成ならびにリンパ球と多形核細胞との割合について分析する。各々の投薬レジメンについての結果とコントロールとの比較は、毒性が存在するか否かを示す。
【０５４６】
各々の毒性研究の終了の際に、動物を屠殺することによって、さらなる研究を行い得る（好ましくは、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃ．Ｐａｎｅｌ  ｏｎ  Ｅｕｔｈａｎａｓｉａ，（１９９３）Ｊ．Ａｍ．Ｖｅｔ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃ．２０２：２２９−２４９に従う）。次いで、各処置群からの代表的な動物が、転移、異常な病気または毒性の直接的な証拠のために全体的な検屍によって試験され得る。組織における全体の異常が記載され、組織が組織学的に試験される。体重の減少または血液成分の減少を引き起こす化合物は、主要な器官に対する有害作用を有する化合物と同様に好ましくない。一般的に、有害作用が大きいほど、その化合物は好ましくない。
【０５４７】
（詳細な説明）
本発明者らの研究によって、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの会合が、ＭＡＧおよびＮｏｇｏによって増強されることが実証された。ｐ７５は、インビトロにおいてＲｈｏ  ＧＤＩからＲｈｏＡを離脱させる能力を有するので、ｐ７５を介したＭＡＧおよびＮｏｇｏによるＲｈｏＡの活性化は、少なくとも部分的に、Ｒｈｏ  ＧＤＩ置換に起因し得る。Ｒｈｏ  ＧＤＩからのＲｈｏの離脱は、グアニンヌクレオチド交換因子による活性化およびＲｈｏのＧＴＰ結合形態の膜会合を可能にする重要な工程である。ｐ７５自体は、グアニンヌクレオチド交換のプロセスを媒介し得ないので、いくつかのＲｈｏグアニンヌクレオチド交換因子は、ｐ７５と協同し得る（これは、将来取り組まれるべき論点のうちの１つである）。別のＲｈｏ  ＧＤＩ置換因子であるエズリン／ラディキシン／モエシンもまた、Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３細胞中でＲｈｏＡの活性化を誘導し、このことは、ｐ７５がＲｈｏＡを活性化するという本発明者らの知見に類似することに注意すること。
【０５４８】
ｐ７５が、発生段階の間の軸索誘導または軸索成長において重要な役割を有するという証拠は増大している（Ｄｅｃｈａｎｔ，Ｇ．＆  Ｂａｒｄｅ，Ｙ．Ａ．Ｎａｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．５，１１３１−１１３６（２００２））。ｐ７５に変異を保有するマウスの脊髄運動ニューロンまたは前肢運動ニューロンからの軸索伸展は、インビボで有意に妨害される（Ｙａｍａｓｈｉｔａ，Ｔ．，Ｔｕｃｋｅｒ，Ｋ．Ｌ．＆  Ｂａｒｄｅ，Ｙ．Ａ．Ｎｅｕｒｏｎ  ２４，５８５−５９３（１９９９）、Ｂｅｎｔｌｅｙ，Ｃ．Ａ．＆  Ｌｅｅ  Ｋ．Ｆ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０，７７０６−７７１５（２０００））。この表現型は、ｐ７５へのリガンド結合に起因し得る。なぜなら、ｐ７５を発現するがＴｒｋＡは発現しないヒヨコ毛様体ニューロンは、ＮＧＦに応答して神経突起を伸長させるからである。これらの観察と対照的に、異常な軸索伸長が、ｐ７５に変異を保有するマウスにおいて、軸索が通常成長しないミエリンに富む領域中に観察されている（Ｗａｌｓｈ，Ｇ．Ｓ．，Ｋｒｏｌ，Ｋ．Ｍ．，Ｃｒｕｔｃｈｅｒ，Ｋ．Ａ．＆  Ｋａｗａｊａ，Ｍ．Ｄ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１９，４１５５−４１６８（１９９９））。これらの知見と一致して、現在までに同定された神経突起伸展のミエリン由来インヒビターの全てが、ｐ７５に依存する成長を阻害している（Ｙａｍａｓｈｉｔａ，Ｔ．，Ｈｉｇｕｃｈｉ，Ｈ．＆  Ｔｏｈｙａｍａ，Ｍ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１５７，５６５−５７０（２００２）、Ｗａｎｇ，Ｋ．Ｃ．＆  Ｋｉｍ，Ｊ．Ａ．，Ｓｉｖａｓａｎｋａｒａｎ，Ｒ．，Ｓｅｇａｌ，Ｒ．＆  Ｈｅ，Ｚ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４２０，７４−７８（２００２）、Ｗｏｎｇ，Ｓ．Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．５，１３０２−１３０８（２００２））。本発明者らの知見は、これらの効果が、ｐ７５のＲｈｏ  ＧＤＩ置換活性から生じ得るということを示唆する。さらに、ｐ７５発現ニューロンの軸索先導の誤りは、ｐ７５に変異を保有するマウス中で観察される表現型の間で顕著である（交感神経軸索および皮質サブプレート軸索の誤った標的化を含む）（Ｌｅｅ，Ｋ．Ｆ，Ｂａｃｈｍａｎ，Ｋ．，Ｌａｎｄｉｓ，Ｓ．＆  Ｊａｅｎｉｓｃｈ，Ｒ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６３，１４４７−１４４９（１９９４）、ＭｃＱｕｉｌｌｅｎ，Ｐ．Ｓ．，ＤｅＦｒｅｉｔａｓ，Ｍ．Ｆ．，Ｚａｄａ，Ｇ．＆  Ｓｈａｔｚ，Ｃ．Ｊ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２２，３５８０−３５９３（２０００））。Ｒｈｏは、発生段階における軸索先導の調節に関与しているようなので、ｐ７５の非存在下における誤った標的化は、Ｒｈｏ活性の適切な調節の失敗に起因し得る可能性があり得る。興味深いことに、近年の報告は、Ｒａｃ１の下流経路の空間的な活性化および時間的な活性化におけるＲｈｏ  ＧＤＩの役割を示唆している（Ｄｅｌ  Ｐｏｚｏ，Ｍ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．４，２３２−２３９（２００２））。Ｒｈｏ  ＧＤＩはＲａｃ１と会合し、そしてエフェクター結合をブロックするが、インテグリンが局在化する特定の領域におけるＲｈｏ  ＧＤＩからのＲａｃ１の離脱は、Ｒａｃ１がそのエフェクターに結合することを可能にする。従って、Ｒｈｏ  ＧＤＩは、Ｒｈｏ  ＧＴＰａ��ｅ−エフェクター相互作用の空間的に制限された調節を与えることが示唆されている。さらなる研究において、Ｒｈｏ  ＧＤＩによって調節されるＲｈｏシグナル伝達の空間的な制御が、軸索先導に関与し得るという仮説を試験することは興味深い。
【０５４９】
ｐ７５の短いアイソフォーム（これは、細胞外リガンド結合ドメイン中の４つのシステインリッチリピートのうち３つを欠くが、インタクトな細胞内ドメインを有する）が見出されている（ｖｏｎ  Ｓｃｈａｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．４，９７７−９７８（２００１））。ｐ７５遺伝子の第３エキソンの破壊が標的化されたマウス（Ｌｅｅ，Ｋ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  ６９．７３７−７４９（１９９２））由来の細胞は、この短い形態のｐ７５を発現するが、阻害分子と無反応である（Ｙａｍａｓｈｉｔａ，Ｔ．，Ｈｉｇｕｃｈｉ，Ｈ．＆  Ｔｏｈｙａｍａ，Ｍ．Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１５７，５６５−５７０（２００２）、Ｗａｎｇ，Ｋ．Ｃ．＆  Ｋｉｍ，Ｊ．Ａ．，Ｓｉｖａｓａｎｋａｒａｎ，Ｒ．，Ｓｅｇａｌ，Ｒ．＆  Ｈｅ，Ｚ．Ｎａｔｕｒｅ  ４２０，７４−７８（２００２）、Ｗｏｎｇ，Ｓ．Ｔ．ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．５，１３０２−１３０８（２００２））。本発明者らのデータによって、ｐ７５の短いアイソフォームを発現するが全長ｐ７５は発現しないニューロンの神経突起伸展にＰｅｐ５が影響を与えなかったことが示されたので（図５Ｂ）、短いアイソフォームは、神経突起伸展の調節因子として作用し得ない。
【０５５０】
そのような短いアイソフォームは、細胞内ドメインを構成する成分であることから、好ましい実施形態において、細胞外ドメインを含む成分を含むｐ７５が使用され得る。
【０５５１】
成体の中枢神経系の軸索は、損傷後に限定された量の再生しか可能ではないこと、ならびに所望されない環境は、再生の欠如に主要な役割を果たすということが、ここで十分に確立された。軸索成長阻害効果のほとんどは、ミエリンと関連する。ミエリン由来インヒビターの同定によって、生物学的活性の分子機構に関する本発明者らの認識が高められた。従って、阻害シグナルを克服するための戦略を探索することが、ここで重要な問題となる。本発明者らは、Ｐｅｐ５が、ミエリン由来インヒビターによって媒介される作用を特異的に阻害するようであることに注目した。なぜなら、Ｐｅｐ５は、海馬ニューロンからの神経突起伸展のＮＧＦ誘導性増進も（データには示さない）、１００ｎｇ／ｍｌ  ＢＤＮＦで処理した上頸神経節ニューロンの細胞死も（データには示さない）阻害しなかったからである。ミエリン関連インヒビター効果の特異的な阻害は、中枢神経系への損傷に対する実質的な治療剤を提供し得る。
【０５５２】
いくつかのミエリン由来タンパク質が、成体脊椎動物のＣＮＳ中の軸索再生を妨害する中枢神経系（ＣＮＳ）ミエリンの成分であると同定されている。ＲｈｏＡの活性化は、これらのタンパク質のシグナル伝達機構の重要な部分であることが示されている。ここで本発明者らは、これらのタンパク質が軸索伸展を促進するかまたは阻害するかを決定する、さらなるシグナルを報告する。ミエリン結合糖タンパク質（ＭＡＧ）およびＮｏｇｏは、細胞内Ｃａ２＋上昇およびＰＫＣの活性化を誘発し、これはおそらく、Ｇｉによって媒介される。ＭＡＧまたはＮｏｇｏによる軸索伸展阻害および成長円錐の破壊は、ＰＫＣの阻害によって軸索伸長および成長円錐の拡大に変わり得るが、イノシトール１，４，５−三リン酸（ＩＰ３）の阻害によっては変わらない。逆に、ＭＡＧによって促進される未成熟ニューロンの軸索成長は、ＩＰ３を阻害することによって破壊される。ＲｈｏＡの活性化は、ＰＫＣ非依存性である。従って、ＰＫＣとＩＰ３との間のバランスは、ミエリン由来タンパク質による軸索再生の双方向調節に対して重要であり得る。
【０５５３】
（本発明を実施する最良の形態）
以下に本発明の好ましい実施形態を説明する。以下に提供される実施形態は、本発明のよりよい理解のために提供されるものであり、本発明の範囲は以下の記載に限定されるべきでないことが理解される。従って、当業者は、本明細書中の記載を参酌して、本発明の範囲内で適宜改変を行うことができることは明らかである。
【０５５４】
（Ｐｅｐ５のポリペプチド形態）
１つの局面において、本発明は、Ｐｅｐ５ポリペプチドを含む神経を再生するための組成物、およびＰｅｐ５ポリペプチドを含む神経疾患、神経障害または神経の状態の、処置、予防、診断または予後のための組成物を提供する。ここで、再生、診断、予防、処置または予後上有効な量は、本明細書の開示に基づいて、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって（Ｐｅｐ５による）、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０５５５】
１つの実施形態において、本発明において用いられるＰｅｐ５、またはそのフラグメントもしくは改変体は、（ａ）配列番号１に記載の核酸配列もしくはそのフラグメントによってコードされる、ポリペプチド；（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列またはそのフラグメントからなる、ポリペプチド；（ｃ）配列番号２に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド；または（ｄ）（ａ）〜（ｃ）のいずれか１つのポリペプチドに対する相同性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、を含む。
【０５５６】
１つの好ましい実施形態において、上記（ｃ）における置換、付加および欠失の数は限定されていてもよく、例えば、５０以下、４０以下、３０以下、２０以下、１５以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下であることが好ましい。より少ない数の置換、付加および欠失が好ましいが、生物学的活性を保持する（好ましくは、Ｐｅｐ５と類似するかまたは実質的に同一の活性を有する）限り、多い数であってもよい。
【０５５７】
別の好ましい実施形態において、上記（ｄ）における上記改変体ポリペプチドが有する生物学的活性としては、例えば、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントに対して特異的な抗体との相互作用、ｐ７５ポリペプチドとの相互作用などが挙げられるがそれらに限定されない。
【０５５８】
好ましい実施形態において、上記（ａ）〜（ｃ）のいずれか１つのポリペプチドに対する相同性は、少なくとも約８０％であり得、より好ましくは少なくとも約９０％であり得、さらに好ましくは少なくとも約９８％であり得、もっとも好ましくは少なくとも約９９％であり得る。
【０５５９】
本発明のポリペプチドは、通常、少なくとも３の連続するアミノ酸配列を有する。本発明のポリペプチドが有するアミノ酸長は、目的とする用途に適合する限り、どれだけ短くてもよいが、好ましくは、より長い配列が使用され得る。従って、好ましくは、少なくとも４アミノ酸長、より好ましくは少なくとも５アミノ酸長、少なくとも６アミノ酸長、少なくとも７アミノ酸長、少なくとも８アミノ酸長、少なくとも９アミノ酸長、少なくとも１０アミノ酸長であってもよい。さらに好ましくは少なくとも１５アミノ酸長であり得、なお好ましくは少なくとも２０アミノ酸長であり得る。これらのアミノ酸長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明のポリペプチドは、ある因子と相互作用することができる限り、その上限の長さは、配列番号２に示す配列の全長と同一であってもよく、それを超える長さであってもよい。
【０５６０】
１つの実施形態において、Ｐｅｐ５ポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号２のアミノ酸に示す全範囲を含む。より好ましくは、Ｐｅｐ５、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号２のアミノ酸全範囲からなることが有利であり得る。
【０５６１】
１つの実施形態において、処置されるべき神経の疾患、障害または状態は、本明細書において他の場所において記載されており、例えば、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷などを含む。好ましくは、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、アルツハイマー病であり得る。別の好ましい実施形態では、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷であり得る。
【０５６２】
（Ｐｅｐ５の核酸形態）
１つの局面において、本発明は、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子を含む神経を再生するための組成物、およびＰｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子を含む神経疾患、神経障害または神経の状態の、処置、予防、診断または予後のための組成物を提供する。ここで、再生、診断、予防、処置または予後上有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって（Ｐｅｐ５による）、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０５６３】
１つの実施形態において、本発明において用いられるＰｅｐ５をコードする核酸分子、またはそのフラグメントもしくは改変体は、（ａ）配列番号１に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有するポリヌクレオチド；（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列（ＣＦＦＲＧＧＦＦＮＨＮＰＲＹＣ）からなるポリペプチドまたはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド；（ｃ）配列番号２に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；（ｄ）（ａ）〜（ｃ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェント条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；または（ｅ）（ａ）〜（ｃ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、を含む。
【０５６４】
１つの好ましい実施形態において、上記（ｃ）における置換、付加および欠失の数は、限定され、例えば、５０以下、４０以下、３０以下、２０以下、１５以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下であることが好ましい。より少ない数の置換、付加および欠失が好ましいが、生物学的活性を保持する（好ましくは、Ｐｅｐ５と類似するかまたは実質的に同一の活性を有する）限り、多い数であってもよい。
【０５６５】
別の好ましい実施形態において、上記改変体ポリペプチドが有する生物学的活性としては、例えば、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントに対して特異的な抗体との相互作用、ｐ７５との相互作用、ｐ７５によるＲｈｏ  ＧＤＩの機能調節の調節などが挙げられるがそれらに限定されない。これらは例えば、免疫学的アッセイ、リン酸化定量などによって測定することができる。
【０５６６】
好ましい実施形態において、上記（ａ）〜（ｃ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性は、少なくとも約８０％であり得、より好ましくは少なくとも約９０％であり得、さらに好ましくは少なくとも約９８％であり得、もっとも好ましくは少なくとも約９９％であり得る。
【０５６７】
好ましい実施形態において、本発明のＰｅｐ５をコードする核酸分子またはそのフラグメントおよび改変体は、少なくとも８の連続するヌクレオチド長であり得る。本発明の核酸分子は、本発明の使用目的によってその適切なヌクレオチド長が変動し得る。より好ましくは、本発明の核酸分子は、少なくとも１０の連続するヌクレオチド長であり得、さらに好ましくは少なくとも１５の連続するヌクレオチド長であり得、なお好ましくは少なくとも２０の連続するヌクレオチド長であり得る。これらのヌクレオチド長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、９、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明の核酸分子は、目的とする用途（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉ、マーカー、プライマー、プローブ、所定の因子と相互作用し得ること）として使用することができる限り、その上限の長さは、配列番号１に示す配列の全長であってもよく、それを超える長さであってもよい。あるいは、プライマーとして使用する場合は、通常少なくとも約８のヌクレオチド長であり得、好ましくは約１０ヌクレオチド長であり得る。プローブとして使用する場合は、通常少なくとも約１５ヌクレオチド長であり得、好ましくは約１７ヌクレオチド長であり得る。
【０５６８】
１つの実施形態において、Ｐｅｐ５をコードする核酸分子、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号１の核酸配列の全範囲を含む。より好ましくは、Ｐｅｐ５をコードする核酸分子、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号１の核酸配列の全範囲からなる。
【０５６９】
１つの実施形態において、処置されるべき神経の疾患、障害または状態は、本明細書において他の場所において記載されており、例えば、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷などを含む。好ましくは、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、アルツハイマー病であり得る。別の好ましい実施形態では、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷であり得る。
【０５７０】
（Ｐ７５のポリペプチド形態に対して特異的に相互作用する因子）
１つの局面において、本発明は、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子を含む神経を再生するための組成物、およびｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子を含む神経疾患、神経障害または神経の状態の、処置、予防、診断または予後のための組成物を提供する。ここで、再生、診断、予防、処置または予後上有効な量は、本明細書の開示に基づいて、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって（ｐ７５に特異的に相互作用する因子による）、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０５７１】
１つの実施形態において、本発明の因子は、（ａ）配列番号４に記載のアミノ酸配列またはそのフラグメントからなる、ポリペプチド；（ｂ）配列番号４に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド；（ｃ）配列番号３または１６に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体によってコードされる、ポリペプチド；（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸配列の種相同体である、ポリペプチド；または（ｅ）（ａ）〜（ｄ）のいずれか１つのポリペプチドに対する相同性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、と特異的に相互作用する、因子であり得る。
【０５７２】
１つの好ましい実施形態において、上記（ｂ）における置換、付加および欠失の数は限定されていてもよく、例えば、５０以下、４０以下、３０以下、２０以下、１５以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下であることが好ましい。より少ない数の置換、付加および欠失が好ましいが、生物学的活性を保持する（好ましくは、Ｐ７５遺伝子産物と類似するかまたは実質的に同一の活性を有する）限り、多い数であってもよい。
【０５７３】
別の好ましい実施形態において、上記（ｃ）における対立遺伝子変異体は、配列番号４に示すアミノ酸配列と少なくとも９９％の相同性を有することが好ましい。
【０５７４】
別の好ましい実施形態において、上記種相同体は、本明細書中上述のように同定することができ、配列番号４に示すアミノ酸配列と少なくとも約３０％の相同性を有することが好ましい。好ましくは、種相同体は、上記基準配列と、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、相同であり得る。、
別の好ましい実施形態において、上記（ｅ）における上記改変体ポリペプチドが有する生物学的活性としては、例えば、配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントに対して特異的な抗体との相互作用、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドとの相互作用などが挙げられるがそれらに限定されない。
【０５７５】
好ましい実施形態において、上記（ａ）〜（ｄ）のいずれか１つのポリペプチドに対する相同性は、少なくとも約８０％であり得、より好ましくは少なくとも約９０％であり得、さらに好ましくは少なくとも約９８％であり得、もっとも好ましくは少なくとも約９９％であり得る。
【０５７６】
本発明の因子が特異的に相互作用するポリペプチドは、通常、少なくとも３の連続するアミノ酸配列を有する。本発明のポリペプチドが有するアミノ酸長は、目的とする用途に適合する限り、どれだけ短くてもよいが、好ましくは、より長い配列が使用され得る。従って、好ましくは、少なくとも４アミノ酸長、より好ましくは少なくとも５アミノ酸長、少なくとも６アミノ酸長、少なくとも７アミノ酸長、少なくとも８アミノ酸長、少なくとも９アミノ酸長、少なくとも１０アミノ酸長であってもよい。さらに好ましくは少なくとも１５アミノ酸長であり得、なお好ましくは少なくとも２０アミノ酸長であり得る。これらのアミノ酸長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明の因子が特異的に相互作用するポリペプチドは、ある因子と相互作用することができる限り、その上限の長さは、配列番号４に示す配列の全長と同一であってもよく、それを超える長さであってもよい。
【０５７７】
好ましい実施形態において、本発明の因子は、核酸分子、ポリペプチド、脂質、糖鎖、有機低分子およびそれらの複合分子からなる群より選択される。より好ましくは、本発明の因子は、抗体またはその誘導体（例えば、単鎖抗体）である。従って、本発明の因子は、プローブおよび／またはインヒビターとして使用することができる。
【０５７８】
１つの実施形態において、Ｐ７５ポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号４のアミノ酸２７３〜４２７位または配列番号１７のアミノ酸２７５位〜４２５位の範囲を含む。他に好ましい実施形態では、ｐ７５ポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号４のアミノ酸３９３位〜４０８位、または配列番号１７のアミノ酸３９１位〜４０６位の範囲からなる。
【０５７９】
１つの実施形態において、処置されるべき神経の疾患、障害または状態は、本明細書において他の場所において記載されており、例えば、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷などを含む。好ましくは、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、アルツハイマー病であり得る。別の好ましい実施形態では、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷であり得る。
【０５８０】
好ましい実施形態において、本発明の因子は、標識されているかまたは標識と結合し得るものであることが有利であり得る。そのように標識がされている場合、本発明の因子によって測定することができる種々の状態を直接および／または容易に測定することができる。そのような標識は、識別可能に標識される限り、どのような標識でもよく、例えば、蛍光標識、化学発光標識、放射能標識などが挙げられるがそれらに限定されない。あるいは、その因子が抗体などの免疫反応を利用して相互作用する場合、ビオチン−ストレプトアビジンのような免疫反応においてよく利用される系を用いてもよい。
【０５８１】
（ｐ７５ポリペプチドの核酸形態に対して相互作用する因子）
１つの局面において、本発明は、Ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子を含む神経を再生するための組成物、およびＰ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子を含む神経疾患、神経障害または神経の状態の、処置、予防、診断または予後のための組成物を提供する。ここで、再生、診断、予防、処置または予後上有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって（ｐ７５に特異的に相互作用する因子による）、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０５８２】
１つの実施形態において、この因子は、（ａ）配列番号３または１６に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有するポリヌクレオチド；（ｂ）配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド；（ｃ）配列番号４に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；（ｄ）配列番号３または１６に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体である、ポリヌクレオチド；（ｅ）配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドの種相同体をコードする、ポリヌクレオチド；（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェント条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；および（ｇ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、と特異的に相互作用する、因子であり得る。
【０５８３】
１つの好ましい実施形態において、上記（ｃ）における置換、付加および欠失の数は、限定され、例えば、５０以下、４０以下、３０以下、２０以下、１５以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下であることが好ましい。より少ない数の置換、付加および欠失が好ましいが、生物学的活性を保持する（好ましくは、Ｐ７５遺伝子産物と類似するかまたは実質的に同一の活性を有する）限り、多い数であってもよい。
【０５８４】
別の好ましい実施形態において、上記改変体ポリペプチドが有する生物学的活性としては、例えば、配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントに対して特異的な抗体との相互作用、ｐ７５との相互作用、ｐ７５によるＲｈｏ  ＧＤＩの機能調節の調節などが挙げられるがそれらに限定されない。これらの活性は例えば、免疫学的アッセイ、リン酸化定量などによって測定することができる。
【０５８５】
別の好ましい実施形態において、上記（ｃ）に記載の対立遺伝子変異体は、配列番号３または１６に示す核酸配列と少なくとも９９％の相同性を有することが有利である。
【０５８６】
上記種相同体は、その種の遺伝子配列データベースが存在する場合、そのデータベースに対して、本発明のＰ７５をクエリ配列として検索することによって同定することができる。あるいは、本発明のＰ７５の全部または一部をプローブまたはプライマーとして、その種の遺伝子ライブラリーをスクリーニングすることによって同定することができる。そのような同定方法は、当該分野において周知であり、本明細書において記載される文献にも記載されている。種相同体は、例えば、配列番号３または１６に示す核酸配列と少なくとも約３０％の相同性を有することが好ましい。好ましくは、種相同体は、上記基準配列と、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、相同であり得る。
【０５８７】
好ましい実施形態において、上記（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性は、少なくとも約８０％であり得、より好ましくは少なくとも約９０％であり得、さらに好ましくは少なくとも約９８％であり得、もっとも好ましくは少なくとも約９９％であり得る。
【０５８８】
好ましい実施形態において、本発明のＰ７５をコードする核酸分子またはそのフラグメントおよび改変体は、少なくとも８の連続するヌクレオチド長であり得る。本発明の核酸分子は、本発明の使用目的によってその適切なヌクレオチド長が変動し得る。より好ましくは、本発明の核酸分子は、少なくとも１０の連続するヌクレオチド長であり得、さらに好ましくは少なくとも１５の連続するヌクレオチド長であり得、なお好ましくは少なくとも２０の連続するヌクレオチド長であり得る。これらのヌクレオチド長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、９、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明の核酸分子は、目的とする用途（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉ、マーカー、プライマー、プローブ、所定の因子と相互作用し得ること）として使用することができる限り、その上限の長さは、配列番号３または１６に示す配列の全長であってもよく、それを超える長さであってもよい。あるいは、プライマーとして使用する場合は、通常少なくとも約８のヌクレオチド長であり得、好ましくは約１０ヌクレオチド長であり得る。プローブとして使用する場合は、通常少なくとも約１５ヌクレオチド長であり得、好ましくは約１７ヌクレオチド長であり得る。
【０５８９】
１つの実施形態において、Ｐ７５をコードする核酸分子、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号３の核酸配列の１１４位〜１３９７位または配列番号１６の核酸配列の１１４〜１３９１位の範囲を含む。より好ましくは、Ｐ７５をコードする核酸分子、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号３の核酸配列１位〜３３８６位、または配列番号１６の核酸配列１位〜３２５９位の範囲からなる。
【０５９０】
１つの実施形態において、処置されるべき神経の疾患、障害または状態は、本明細書において他の場所において記載されており、例えば、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷などを含む。好ましくは、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、アルツハイマー病であり得る。他に好ましい実施形態では、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷であり得る。
【０５９１】
好ましい実施形態において、本発明の因子は、核酸分子、ポリペプチド、脂質、糖鎖、有機低分子およびそれらの複合分子からなる群より選択される。
【０５９２】
好ましい実施形態では、本発明の因子は、核酸分子である。本発明の因子が核酸分子である場合、そのような核酸分子は、少なくとも８の連続するヌクレオチド長であり得る。本発明の核酸分子は、本発明の使用目的によってその適切なヌクレオチド長が変動し得る。より好ましくは、本発明の核酸分子は、少なくとも１０の連続するヌクレオチド長であり得、さらに好ましくは少なくとも１５の連続するヌクレオチド長であり得、なお好ましくは少なくとも２０の連続するヌクレオチド長であり得る。これらのヌクレオチド長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、９、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明の核酸分子は、目的とする用途（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉ、マーカー、プライマー、プローブ、ある因子と相互作用すること）として使用することができる限り、その上限の長さは、配列番号３または配列番号６に示す配列の全長であってもよく、それを超える長さであってもよい。あるいは、プライマーとして使用する場合は、通常少なくとも約８のヌクレオチド長であり得、好ましくは約１０ヌクレオチド長であり得る。プローブとして使用する場合は、通常少なくとも約１５ヌクレオチド長であり得、好ましくは約１７ヌクレオチド長であり得る。
【０５９３】
従って、１つの例示的な実施形態において、本発明の因子は、上記（ａ）〜（ｇ）のいずれかのポリヌクレオチドの核酸配列に対して相補的な配列またはそれに対して少なくとも７０％の同一性を有する配列を有する核酸分子であり得る。
【０５９４】
別の例示的な実施形態において、本発明の因子は、（ａ）〜（ｇ）のいずれかのポリヌクレオチドの核酸配列に対してハイブリダイズする核酸分子であり得る。
【０５９５】
別の好ましい実施形態では、本発明の因子は、アンチセンスまたはＲＮＡｉである。ＲＮＡｉは、ｓｉＲＮＡであってもｓｈＲＮＡであってもよく、そのような例としては、例えば、約２０塩基前後（例えば、代表的には約２１〜２３塩基長）またはそれ未満の長さの二本鎖ＲＮＡであって、好ましくは、５’−リン酸、３’−ＯＨの構造を有しており、３’末端は約２塩基突出している。ｓｈＲＮＡはまた、好ましくは、３’突出末端を有し得る。二本鎖部分の長さは特に限定されないが、約１０ヌクレオチド長、より好ましくは約２０ヌクレオチド長以上であり得る。ここで、３’突出末端は、好ましくはＤＮＡであり得、より好ましくは２ヌクレオチド長のＤＮＡであり得、さらに好ましくは２〜４ヌクレオチド長のＤＮＡであり得る。
【０５９６】
（ｐ７５細胞外ドメインのポリペプチド形態）
１つの局面において、本発明は、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドを含む神経を再生するための組成物、およびｐ７５細胞外ドメインポリペプチドを含む神経疾患、神経障害または神経の状態の、処置、予防、診断または予後のための組成物を提供する。ここで、再生、診断、予防、処置または予後上有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって（ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドによる）、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０５９７】
１つの実施形態において、本発明のｐ７５細胞外ドメインは、（ａ）配列番号３または１６に記載の核酸配列の、それぞれヌクレオチド１９８位〜８６３位または２０１位〜８６６位もしくはそのフラグメントによってコードされる、ポリペプチド；（ｂ）配列番号４に記載のアミノ酸配列、それぞれアミノ酸２９位〜２５０位または３０位〜２５１位もしくはそのフラグメントを有する、ポリペプチド；（ｃ）配列番号４に記載のアミノ酸配列、それぞれアミノ酸２９位〜２５０位または３０位〜２５１位において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する、改変体ポリペプチド（ｄ）配列番号３または１６に記載の塩基配列、それぞれヌクレオチド１９８位〜８６３位または２０１位〜８６６位のスプライス改変体もしくは対立遺伝子改変体によってコードされる、ポリペプチド；（ｅ）配列番号４に記載のアミノ酸配列の、それぞれアミノ酸２９位〜２５０位または３０位〜２５１位を有するポリペプチドの、種相同体ポリペプチド；または（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリペプチドのアミノ酸配列に対する同一性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列からなり、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、を含む。
【０５９８】
１つの好ましい実施形態において、上記（ｂ）における置換、付加および欠失の数は限定されていてもよく、例えば、５０以下、４０以下、３０以下、２０以下、１５以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下であることが好ましい。より少ない数の置換、付加および欠失が好ましいが、生物学的活性を保持する（好ましくは、ｐ７５遺伝子産物と類似するかまたは実質的に同一の活性を有する）限り、多い数であってもよい。
【０５９９】
別の好ましい実施形態において、上記（ｃ）における対立遺伝子変異体は、配列番号４に示すアミノ酸配列と少なくとも９９％の相同性を有することが好ましい。
【０６００】
別の好ましい実施形態において、上記種相同体は、本明細書中上述のように同定することができ、配列番号４に示すアミノ酸配列と少なくとも約３０％の相同性を有することが好ましい。好ましくは、種相同体は、上記基準配列と、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、相同であり得る。
【０６０１】
上記種相同体は、その種の遺伝子配列データベースが存在する場合、そのデータベースに対して、本発明のｐ７５をクエリ配列として検索することによって同定することができる。あるいは、本発明のｐ７５の全部または一部をプローブまたはプライマーとして、その種の遺伝子ライブラリーをスクリーニングすることによって同定することができる。そのような同定方法は、当該分野において周知であり、本明細書において記載される文献にも記載されている。種相同体は、例えば、配列番号３または１６に示す核酸配列または配列番号４に示すアミノ酸配列と少なくとも約３０％の相同性を有することが好ましい。好ましくは、種相同体は、上記基準配列と、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、相同であり得る。
【０６０２】
別の好ましい実施形態において、上記（ｅ）における上記改変体ポリペプチドが有する生物学的活性としては、例えば、配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントに対して特異的な抗体との相互作用、Ｐｅｐ５との相互作用、Ｒｈｏとの相互作用、ＧＴ１ｂとの相互作用、ＭＡＧとの相互作用、ＮｇＲとの相互作用、Ｎｏｇｏとの相互作用、ＯＭｇｐとの相互作用、ｐ７５によるＲｈｏ  ＧＤＩの機能調節の調節などが挙げられるがそれらに限定されない。これらは例えば、免疫学的アッセイ、リン酸化定量などによって測定することができる。
【０６０３】
好ましい実施形態において、上記（ａ）〜（ｄ）のいずれか１つのポリペプチドに対する相同性は、少なくとも約８０％であり得、より好ましくは少なくとも約９０％であり得、さらに好ましくは少なくとも約９８％であり得、もっとも好ましくは少なくとも約９９％であり得る。
【０６０４】
本発明のポリペプチドは、通常、少なくとも３の連続するアミノ酸配列を有する。本発明のポリペプチドが有するアミノ酸長は、目的とする用途に適合する限り、どれだけ短くてもよいが、好ましくは、より長い配列が使用され得る。従って、好ましくは、少なくとも４アミノ酸長、より好ましくは少なくとも５アミノ酸長、少なくとも６アミノ酸長、少なくとも７アミノ酸長、少なくとも８アミノ酸長、少なくとも９アミノ酸長、少なくとも１０アミノ酸長であってもよい。さらに好ましくは少なくとも１５アミノ酸長であり得、なお好ましくは少なくとも２０アミノ酸長であり得る。これらのアミノ酸長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明のポリペプチドは、ある因子と相互作用することができる限り、その上限の長さは、配列番号４に示す配列の全長と同一であってもよく、それを超える長さであってもよい。
【０６０５】
１つの実施形態において、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号４または１７の、それぞれアミノ酸２９位〜２５０位または３０位〜２５１位の範囲を含む。より好ましくは、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号４または１７の、それぞれアミノ酸２９位〜２５０位または３０位〜２５１位からなる。
【０６０６】
１つの実施形態において、処置されるべき神経の疾患、障害または状態は、本明細書において他の場所において記載されており、例えば、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷などを含む。好ましくは、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、アルツハイマー病であり得る。別の好ましい実施形態では、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷であり得る。
【０６０７】
別の実施形態において、本発明のｐ７５細胞外ドメインポリペプチドは、可溶性であることが好ましい。そのような可溶性のポリペプチドは、膜貫通ドメインを全部または一部削減することによって遺伝子工学的または合成により作製することができる。
【０６０８】
（ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドの核酸形態）
１つの局面において、本発明は、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子を含む神経を再生するための組成物、およびｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子を含む神経疾患、神経障害または神経の状態の、処置、予防、診断または予後のための組成物を提供する。ここで、再生、診断、予防、処置または予後上有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって（ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドによる）、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０６０９】
１つの実施形態において、本発明において用いられるｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、またはそのフラグメントもしくは改変体は、（ａ）配列番号３または１６に記載の塩基配列、それぞれヌクレオチド１９８位〜８６３位または２０１位〜８６６位またはそのフラグメントを有する、ポリヌクレオチド；（ｂ）配列番号４または１７に記載のアミノ酸配列、それぞれアミノ酸２９位〜２５０位または３０位〜２５１位またはそのフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド、（ｃ）配列番号４または１７に記載のアミノ酸配列の、それぞれアミノ酸２９位〜２５０位または３０位〜２５１位において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；（ｄ）配列番号３または１６に記載の塩基配列の、それぞれヌクレオチド１９８位〜８６３位または２０１位〜８６６位のスプライス変異体または対立遺伝子変異体である、ポリヌクレオチド；（ｅ）配列番号４に記載のアミノ酸配列、それぞれアミノ酸２９位〜２５０位または３０位〜２５１位からなるポリペプチドの種相同体をコードする、ポリヌクレオチド；（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；および（ｇ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、からなる群より選択される、ポリヌクレオチド、を含む。
【０６１０】
１つの好ましい実施形態において、上記（ｃ）における置換、付加および欠失の数は、限定され、例えば、５０以下、４０以下、３０以下、２０以下、１５以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下であることが好ましい。より少ない数の置換、付加および欠失が好ましいが、生物学的活性を保持する（好ましくは、ｐ７５細胞外ドメイン遺伝子産物と類似するかまたは実質的に同一の活性を有する）限り、多い数であってもよい。
【０６１１】
別の好ましい実施形態において、上記改変体ポリペプチドが有する生物学的活性としては、例えば、配列番号４または１７に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドまたはそのフラグメントに対して特異的な抗体との相互作用、Ｐｅｐ５ポリペプチドとの相互作用、Ｒｈｏとの相互作用、ＧＴ１ｂとの相互作用、ＭＡＧとの相互作用、ＮｇＲとの相互作用、Ｎｏｇｏとの相互作用、ＯＭｇｐとの相互作用、ｐ７５によるＲｈｏ  ＧＤＩの機能調節の調節などが挙げられるがそれらに限定されない。これらは例えば、免疫学的アッセイ、リン酸化定量などによって測定することができる。
【０６１２】
別の好ましい実施形態において、上記（ｃ）に記載される対立遺伝子変異体は、配列番号３または１６に示す核酸配列と少なくとも９９％の相同性を有することが有利である。
【０６１３】
上記種相同体は、その種の遺伝子配列データベースが存在する場合、そのデータベースに対して、本発明のｐ７５細胞外ドメインをクエリ配列として検索することによって同定することができる。あるいは、本発明のｐ７５細胞外ドメインの全部または一部をプローブまたはプライマーとして、その種の遺伝子ライブラリーをスクリーニングすることによって同定することができる。そのような同定方法は、当該分野において周知であり、本明細書において記載される文献にも記載されている。種相同体は、例えば、配列番号３または１６に示す核酸配列と少なくとも約３０％の相同性を有することが好ましい。好ましくは、種相同体は、上記基準配列と、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、相同であり得る。
【０６１４】
好ましい実施形態において、上記（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性は、少なくとも約８０％であり得、より好ましくは少なくとも約９０％であり得、さらに好ましくは少なくとも約９８％であり得、もっとも好ましくは少なくとも約９９％であり得る。
【０６１５】
好ましい実施形態において、本発明のｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子またはそのフラグメントおよび改変体は、少なくとも８の連続するヌクレオチド長であり得る。本発明の核酸分子は、本発明の使用目的によってその適切なヌクレオチド長が変動し得る。より好ましくは、本発明の核酸分子は、少なくとも１０の連続するヌクレオチド長であり得、さらに好ましくは少なくとも１５の連続するヌクレオチド長であり得、なお好ましくは少なくとも２０の連続するヌクレオチド長であり得る。これらのヌクレオチド長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、９、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明の核酸分子は、目的とする用途（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉ、マーカー、プライマー、プローブ、所定の因子と相互作用し得ること）として使用することができる限り、その上限の長さは、配列番号３または１６に示す配列の全長であってもよく、それを超える長さであってもよい。あるいは、プライマーとして使用する場合は、通常少なくとも約８のヌクレオチド長であり得、好ましくは約１０ヌクレオチド長であり得る。プローブとして使用する場合は、通常少なくとも約１５ヌクレオチド長であり得、好ましくは約１７ヌクレオチド長であり得る。
【０６１６】
１つの実施形態において、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号３または１６の核酸配列のうち、それぞれヌクレオチド１９８位〜８６３位または２０１位〜８６６位の範囲を含む。より好ましくは、ｐ７５細胞外ドメインをコードする核酸分子、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号３または１６の核酸配列の、それぞれヌクレオチド１９８位〜８６３位または２０１位〜８６６位からなる。
【０６１７】
１つの実施形態において、処置されるべき神経の疾患、障害または状態は、本明細書において他の場所において記載されており、例えば、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷などを含む。好ましくは、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、アルツハイマー病であり得る。別の好ましい実施形態では、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷であり得る。
【０６１８】
別の実施形態において、本発明のｐ７５細胞外ドメインポリペプチドは、可溶性であることが好ましい。そのような可溶性のポリペプチドは、膜貫通ドメインをコードする核酸配列を全部または一部削減することによって遺伝子工学的または合成により調製することができる。
【０６１９】
（Ｒｈｏのポリペプチド形態）
１つの局面において、本発明は、Ｒｈｏポリペプチドを含む神経を再生するための組成物、およびＲｈｏポリペプチドを含む神経疾患、神経障害または神経の状態の、処置、予防、診断または予後のための組成物を提供する。ここで、再生、診断、予防、処置または予後上有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって（Ｒｈｏによる）、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０６２０】
１つの実施形態において、本発明のＲｈｏポリペプチドは、（ａ）配列番号５に記載の核酸配列またはそのフラグメントによってコードされる、ポリペプチド；（ｂ）配列番号６に記載のアミノ酸配列またはそのフラグメントを有する、ポリペプチド；（ｃ）配列番号６に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する、改変体ポリペプチド（ｄ）配列番号５に記載の塩基配列のスプライス改変体もしくは対立遺伝子改変体によってコードされる、ポリペプチド；（ｅ）配列番号６に記載のアミノ酸配列の種相同体ポリペプチド；または（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリペプチドのアミノ酸配列に対する同一性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列からなり、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、を含む。
【０６２１】
１つの好ましい実施形態において、上記（ｂ）における置換、付加および欠失の数は限定されていてもよく、例えば、５０以下、４０以下、３０以下、２０以下、１５以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下であることが好ましい。より少ない数の置換、付加および欠失が好ましいが、生物学的活性を保持する（好ましくは、ＲｈｏまたはＲｈｏＡ遺伝子産物と類似するかまたは実質的に同一の活性を有する）限り、多い数であってもよい。
【０６２２】
別の好ましい実施形態において、上記（ｃ）における対立遺伝子変異体は、配列番号６に示すアミノ酸配列と少なくとも９９％の相同性を有することが好ましい。
【０６２３】
別の好ましい実施形態において、上記種相同体は、本明細書中上述のように同定することができ、配列番号６に示すアミノ酸配列と少なくとも約３０％の相同性を有することが好ましい。好ましくは、種相同体は、上記基準配列と、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、相同であり得る。
【０６２４】
上記種相同体は、その種の遺伝子配列データベースが存在する場合、そのデータベースに対して、本発明のＲｈｏ（またはより好ましくはＲｈｏＡ）をクエリ配列として検索することによって同定することができる。あるいは、本発明のＲｈｏ（またはより好ましくはＲｈｏＡ）の全部または一部をプローブまたはプライマーとして、その種の遺伝子ライブラリーをスクリーニングすることによって同定することができる。そのような同定方法は、当該分野において周知であり、本明細書において記載される文献にも記載されている。種相同体は、好ましくは、配列番号５に示す核酸配列または配列番号６に示すアミノ酸配列と少なくとも約３０％の相同性を有することが好ましい。好ましくは、種相同体は、上記基準配列と、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、相同であり得る。
【０６２５】
別の好ましい実施形態において、上記（ｅ）における上記改変体ポリペプチドが有する生物学的活性としては、例えば、配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドまたはそのフラグメントに対して特異的な抗体との相互作用、Ｐｅｐ５との相互作用、ｐ７５との相互作用、ＧＴ１ｂとの相互作用、ＭＡＧとの相互作用、Ｒｈｏ  ＧＤＩとの相互作用などが挙げられるがそれらに限定されない。これらの活性は例えば、免疫学的アッセイ、リン酸化定量などによって測定することができる。
【０６２６】
好ましい実施形態において、上記（ａ）〜（ｄ）のいずれか１つのポリペプチドに対する相同性は、少なくとも約８０％であり得、より好ましくは少なくとも約９０％であり得、さらに好ましくは少なくとも約９８％であり得、もっとも好ましくは少なくとも約９９％であり得る。最も好ましくは、本発明のＲｈｏポリペプチドは、ＲｈｏＡポリペプチドである。
【０６２７】
本発明のポリペプチドは、通常、少なくとも３の連続するアミノ酸配列を有する。本発明のポリペプチドが有するアミノ酸長は、目的とする用途に適合する限り、どれだけ短くてもよいが、好ましくは、より長い配列が使用され得る。従って、好ましくは、少なくとも４アミノ酸長、より好ましくは少なくとも５アミノ酸長、少なくとも６アミノ酸長、少なくとも７アミノ酸長、少なくとも８アミノ酸長、少なくとも９アミノ酸長、少なくとも１０アミノ酸長であってもよい。さらに好ましくは少なくとも１５アミノ酸長であり得、なお好ましくは少なくとも２０アミノ酸長であり得る。これらのアミノ酸長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明のポリペプチドは、ある因子と相互作用することができる限り、その上限の長さは、配列番号６に示す配列の全長と同一であってもよく、それを超える長さであってもよい。
【０６２８】
１つの実施形態において、Ｒｈｏポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号６の、それぞれアミノ酸２９位〜２５０位または３０位〜２５１位の範囲を含む。より好ましくは、Ｒｈｏポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号６の、それぞれアミノ酸２９位〜２５０位または３０位〜２５１位からなる。
【０６２９】
１つの実施形態において、処置されるべき神経の疾患、障害または状態は、本明細書において他の場所において記載されており、例えば、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷などを含む。好ましくは、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、アルツハイマー病であり得る。別の好ましい実施形態では、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷であり得る。
【０６３０】
別の実施形態において、本発明のＲｈｏポリペプチドは、可溶性であることが好ましい。そのような可溶性ペプチドは、膜貫通ドメインを全部または一部削減することによって遺伝子工学的または合成により調製することができる。
【０６３１】
（Ｒｈｏポリペプチドの核酸形態）
１つの局面において、本発明は、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子を含む神経を再生するための組成物、およびＲｈｏポリペプチドをコードする核酸分子を含む神経疾患、神経障害または神経の状態の、処置、予防、診断または予後のための組成物を提供する。ここで、再生、診断、予防、処置または予後上有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって（Ｒｈｏポリペプチドの調節による）、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０６３２】
１つの実施形態において、本発明において用いられるＲｈｏポリペプチドをコードする核酸分子、またはそのフラグメントもしくは改変体は、（ａ）配列番号５に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有する、ポリヌクレオチド；（ｂ）配列番号６に記載のアミノ酸配列またはそのフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド、（ｃ）配列番号６に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；（ｄ）配列番号５に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体である、ポリヌクレオチド；（ｅ）配列番号６に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドの種相同体をコードする、ポリヌクレオチド；（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；および（ｇ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、からなる群より選択される、ポリヌクレオチド、を含む。
【０６３３】
１つの好ましい実施形態において、上記（ｃ）における置換、付加および欠失の数は、限定され、例えば、５０以下、４０以下、３０以下、２０以下、１５以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下であることが好ましい。より少ない数の置換、付加および欠失が好ましいが、生物学的活性を保持する（好ましくは、Ｒｈｏ遺伝子産物と類似するかまたは実質的に同一の活性を有する）限り、多い数であってもよい。
【０６３４】
別の好ましい実施形態において、上記改変体ポリペプチドが有する生物学的活性としては、例えば、配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドまたはそのフラグメントに対して特異的な抗体との相互作用、Ｐｅｐ５との相互作用、ｐ７５との相互作用、ＧＴ１ｂとの相互作用、ＭＡＧとの相互作用、Ｒｈｏ  ＧＤＩとの相互作用などが挙げられるがそれらに限定されない。これらの作用は例えば、免疫学的アッセイ、リン酸化定量などによって測定することができる。
【０６３５】
別の好ましい実施形態において、（ｄ）に記載の対立遺伝子変異体は、配列番号５に示す核酸配列と少なくとも９９％の相同性を有することが有利である。
【０６３６】
上記種相同体は、その種の遺伝子配列データベースが存在する場合、そのデータベースに対して、本発明のＲｈｏ（またはより好ましくはＲｈｏＡ）をクエリ配列として検索することによって同定することができる。あるいは、本発明のＲｈｏ（またはより好ましくはＲｈｏＡ）の全部または一部をプローブまたはプライマーとして、その種の遺伝子ライブラリーをスクリーニングすることによって同定することができる。そのような同定方法は、当該分野において周知であり、本明細書において記載される文献にも記載されている。種相同体は、例えば、配列番号５に示す核酸配列と少なくとも約３０％の相同性を有することが好ましい。好ましくは、種相同体は、上記基準配列と、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、相同であり得る。
【０６３７】
好ましい実施形態において、上記（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性は、少なくとも約８０％であり得、より好ましくは少なくとも約９０％であり得、さらに好ましくは少なくとも約９８％であり得、もっとも好ましくは少なくとも約９９％であり得る。最も好ましくは、本発明のＲｈｏポリペプチドはＲｈｏＡポリペプチドである。
【０６３８】
好ましい実施形態において、本発明のＲｈｏポリペプチドをコードする核酸分子またはそのフラグメントおよび改変体は、少なくとも８の連続するヌクレオチド長であり得る。本発明の核酸分子は、本発明の使用目的によってその適切なヌクレオチド長が変動し得る。より好ましくは、本発明の核酸分子は、少なくとも１０の連続するヌクレオチド長であり得、さらに好ましくは少なくとも１５の連続するヌクレオチド長であり得、なお好ましくは少なくとも２０の連続するヌクレオチド長であり得る。これらのヌクレオチド長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、９、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明の核酸分子は、目的とする用途（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉ、マーカー、プライマー、プローブ、所定の因子と相互作用し得ること）として使用することができる限り、その上限の長さは、配列番号５に示す配列の全長であってもよく、それを超える長さであってもよい。あるいは、プライマーとして使用する場合は、通常少なくとも約８のヌクレオチド長であり得、好ましくは約１０ヌクレオチド長であり得る。プローブとして使用する場合は、通常少なくとも約１５ヌクレオチド長であり得、好ましくは約１７ヌクレオチド長であり得る。
【０６３９】
１つの実施形態において、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号５の核酸配列の全範囲を含む。より好ましくは、Ｒｈｏをコードする核酸分子、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号５の核酸配列の全範囲からなる。
【０６４０】
１つの実施形態において、処置されるべき神経の疾患、障害または状態は、本明細書において他の場所において記載されており、例えば、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷などを含む。好ましくは、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、アルツハイマー病であり得る。別の好ましい実施形態では、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷であり得る。
【０６４１】
別の実施形態において、本発明のＲｈｏポリペプチドは、ＰＴＤドメインに結合していることが好ましい。そのようなＰＴＤドメイン結合型ポリペプチドをコードする核酸分子は、ＰＴＤドメインをコードする核酸配列を結合することによって遺伝子工学的または合成により調製することができる。
【０６４２】
（Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子）
１つの局面において、本発明は、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子を含む神経を再生するための組成物、およびＲｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子を含む神経疾患、神経障害または神経の状態の、処置、予防、診断または予後のための組成物を提供する。ここで、再生、診断、予防、処置または予後上有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって（Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに特異的に相互作用する因子による）、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０６４３】
１つの実施形態において、この因子は、（ａ）配列番号５に記載の核酸配列のヌクレオチドもしくはそのフラグメントによってコードされる、ポリペプチド；（ｂ）配列番号６に記載のアミノ酸配列のアミノ酸もしくはそのフラグメントを有する、ポリペプチド；（ｃ）配列番号６に記載のアミノ酸配列のアミノ酸において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する、改変体ポリペプチド；（ｄ）配列番号５に記載の塩基配列のヌクレオチドのスプライス改変体もしくは対立遺伝子改変体によってコードされる、ポリペプチド；（ｅ）配列番号６に記載のアミノ酸配列のアミノ酸を有するポリペプチドの、種相同体ポリペプチド；または（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリペプチドのアミノ酸配列に対する同一性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列からなり、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチドに対して特異的に相互作用する、因子であり得る。
【０６４４】
１つの好ましい実施形態において、上記（ｂ）における置換、付加および欠失の数は限定されていてもよく、例えば、５０以下、４０以下、３０以下、２０以下、１５以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下であることが好ましい。より少ない数の置換、付加および欠失が好ましいが、生物学的活性を保持する（好ましくは、Ｒｈｏ  ＧＤＩ遺伝子産物と類似するかまたは実質的に同一の活性を有する）限り、多い数であってもよい。
【０６４５】
別の好ましい実施形態において、上記（ｃ）における対立遺伝子変異体は、配列番号４に示すアミノ酸配列と少なくとも９９％の相同性を有することが好ましい。
【０６４６】
別の好ましい実施形態において、上記種相同体は、本明細書中上述のように同定することができ、配列番号６に示すアミノ酸配列と少なくとも約３０％の相同性を有することが好ましい。好ましくは、種相同体は、上記基準配列と、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、相同であり得る。
【０６４７】
別の好ましい実施形態において、上記（ｅ）における上記改変体ポリペプチドが有する生物学的活性としては、例えば、配列番号６に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントに対して特異的な抗体との相互作用、ｐ７５との相互作用などが挙げられるがそれらに限定されない。
【０６４８】
好ましい実施形態において、上記（ａ）〜（ｄ）のいずれか１つのポリペプチドに対する相同性は、少なくとも約８０％であり得、より好ましくは少なくとも約９０％であり得、さらに好ましくは少なくとも約９８％であり得、もっとも好ましくは少なくとも約９９％であり得る。
【０６４９】
本発明の因子が特異的に相互作用するポリペプチドは、通常、少なくとも３の連続するアミノ酸配列を有する。本発明のポリペプチドが有するアミノ酸長は、目的とする用途に適合する限り、どれだけ短くてもよいが、好ましくは、より長い配列が使用され得る。従って、好ましくは、少なくとも４アミノ酸長、より好ましくは少なくとも５アミノ酸長、少なくとも６アミノ酸長、少なくとも７アミノ酸長、少なくとも８アミノ酸長、少なくとも９アミノ酸長、少なくとも１０アミノ酸長であってもよい。さらに好ましくは少なくとも１５アミノ酸長であり得、なお好ましくは少なくとも２０アミノ酸長であり得る。これらのアミノ酸長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明の因子が特異的に相互作用するポリペプチドは、ある因子と相互作用することができる限り、その上限の長さは、配列番号６に示す配列の全長と同一であってもよく、それを超える長さであってもよい。
【０６５０】
好ましい実施形態において、本発明の因子は、核酸分子、ポリペプチド、脂質、糖鎖、有機低分子およびそれらの複合分子からなる群より選択される。より好ましくは、本発明の因子は、抗体またはその誘導体（例えば、単鎖抗体）である。従って、本発明の因子は、プローブおよび／またはインヒビターとして使用することができる。
【０６５１】
１つの実施形態において、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号６のアミノ酸配列の全範囲を含む。より好ましくは、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号６のアミノ酸の全範囲からなる。
【０６５２】
１つの実施形態において、処置されるべき神経の疾患、障害または状態は、本明細書において他の場所において記載されており、例えば、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷などを含む。好ましくは、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、アルツハイマー病であり得る。別の好ましい実施形態では、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷であり得る。
【０６５３】
（Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子）
１つの局面において、本発明は、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子を含む神経を再生するための組成物、およびＲｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子を含む神経疾患、神経障害または神経の状態の、処置、予防、診断または予後のための組成物を提供する。ここで、再生、診断、予防、処置または予後上有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって（Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに特異的に相互作用する因子による）、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０６５４】
１つの実施形態において、この因子は、（ａ）配列番号５に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有するポリヌクレオチド；（ｂ）配列番号６に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド；（ｃ）配列番号６に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；（ｄ）配列番号５に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体である、ポリヌクレオチド；（ｅ）配列番号６に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドの種相同体をコードする、ポリヌクレオチド；（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェント条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；および（ｇ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、と特異的に相互作用する、因子であり得る。
【０６５５】
１つの好ましい実施形態において、上記（ｃ）における置換、付加および欠失の数は、限定され、例えば、５０以下、４０以下、３０以下、２０以下、１５以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下であることが好ましい。より少ない数の置換、付加および欠失が好ましいが、生物学的活性を保持する（好ましくは、Ｒｈｏ  ＧＤＩ遺伝子産物と類似するかまたは実質的に同一の活性を有する）限り、多い数であってもよい。
【０６５６】
別の好ましい実施形態において、上記改変体ポリペプチドが有する生物学的活性としては、例えば、配列番号６に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントに対して特異的な抗体との相互作用、ｐ７５との相互作用、ｐ７５によるＲｈｏ  ＧＤＩの機能調節の調節などが挙げられるがそれらに限定されない。これらの活性は例えば、免疫学的アッセイ、リン酸化定量などによって測定することができる。
【０６５７】
別の好ましい実施形態において、上記（ｃ）における対立遺伝子変異体は、配列番号５に示す核酸配列と少なくとも９９％の相同性を有することが有利である。
【０６５８】
上記種相同体は、その種の遺伝子配列データベースが存在する場合、そのデータベースに対して、本発明のＲｈｏ  ＧＤＩをクエリ配列として検索することによって同定することができる。あるいは、本発明のＲｈｏ  ＧＤＩの全部または一部をプローブまたはプライマーとして、その種の遺伝子ライブラリーをスクリーニングすることによって同定することができる。そのような同定方法は、当該分野において周知であり、本明細書において記載される文献にも記載されている。種相同体は、例えば、配列番号５に示す核酸配列と少なくとも約３０％の相同性を有することが好ましい。好ましくは、種相同体は、上記基準配列と、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、相同であり得る。
【０６５９】
好ましい実施形態において、上記（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性は、少なくとも約８０％であり得、より好ましくは少なくとも約９０％であり得、さらに好ましくは少なくとも約９８％であり得、もっとも好ましくは少なくとも約９９％であり得る。
【０６６０】
好ましい実施形態において、本発明のＲｈｏ  ＧＤＩをコードする核酸分子またはそのフラグメントおよび改変体は、少なくとも８の連続するヌクレオチド長であり得る。本発明の核酸分子は、本発明の使用目的によってその適切なヌクレオチド長が変動し得る。より好ましくは、本発明の核酸分子は、少なくとも１０の連続するヌクレオチド長であり得、さらに好ましくは少なくとも１５の連続するヌクレオチド長であり得、なお好ましくは少なくとも２０の連続するヌクレオチド長であり得る。これらのヌクレオチド長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、９、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明の核酸分子は、目的とする用途（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉ、マーカー、プライマー、プローブ、所定の因子と相互作用し得ること）として使用することができる限り、その上限の長さは、配列番号５に示す配列の全長であってもよく、それを超える長さであってもよい。あるいは、プライマーとして使用する場合は、通常少なくとも約８のヌクレオチド長であり得、好ましくは約１０ヌクレオチド長であり得る。プローブとして使用する場合は、通常少なくとも約１５ヌクレオチド長であり得、好ましくは約１７ヌクレオチド長であり得る。
【０６６１】
１つの実施形態において、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号５の核酸配列の全範囲を含む。より好ましくは、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号５の核酸配列の全範囲からなる。
【０６６２】
１つの実施形態において、処置されるべき神経の疾患、障害または状態は、本明細書において他の場所において記載されており、例えば、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷などを含む。好ましくは、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、アルツハイマー病であり得る。別の好ましい実施形態では、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷であり得る。
【０６６３】
好ましい実施形態において、本発明の因子は、核酸分子、ポリペプチド、脂質、糖鎖、有機低分子およびそれらの複合分子からなる群より選択される。
【０６６４】
好ましい実施形態では、本発明の因子は、核酸分子である。本発明の因子が核酸分子である場合、そのような核酸分子は、少なくとも８の連続するヌクレオチド長であり得る。本発明の核酸分子は、本発明の使用目的によってその適切なヌクレオチド長が変動し得る。より好ましくは、本発明の核酸分子は、少なくとも１０の連続するヌクレオチド長であり得、さらに好ましくは少なくとも１５の連続するヌクレオチド長であり得、なお好ましくは少なくとも２０の連続するヌクレオチド長であり得る。これらのヌクレオチド長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、９、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明の核酸分子は、目的とする用途（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉ、マーカー、プライマー、プローブ、所定の因子と相互作用し得ること）として使用することができる限り、その上限の長さは、配列番号５に示す配列の全長であってもよく、それを超える長さであってもよい。あるいは、プライマーとして使用する場合は、通常少なくとも約８のヌクレオチド長であり得、好ましくは約１０ヌクレオチド長であり得る。プローブとして使用する場合は、通常少なくとも約１５ヌクレオチド長であり得、好ましくは約１７ヌクレオチド長であり得る。
【０６６５】
従って、１つの例示的な実施形態において、本発明の因子は、上記（ａ）〜（ｇ）のいずれかのポリヌクレオチドの核酸配列に対して相補的な配列またはそれに対して少なくとも７０％の同一性を有する配列を有する核酸分子であり得る。
【０６６６】
別の例示的な実施形態において、本発明の因子は、（ａ）〜（ｇ）のいずれかのポリヌクレオチドの核酸配列にハイブリダイズする核酸分子であり得る。
【０６６７】
別の好ましい実施形態では、本発明の因子は、アンチセンスまたはＲＮＡｉである。ＲＮＡｉは、ｓｉＲＮＡであってもｓｈＲＮＡであってもよく、そのような例としては、例えば、約２０塩基前後（例えば、代表的には約２１〜２３塩基長）またはそれ未満の長さの二本鎖ＲＮＡであって、好ましくは、５’−リン酸、３’−ＯＨの構造を有しており、３’末端は約２塩基突出している。ｓｈＲＮＡはまた、好ましくは、３’突出末端を有し得る。二本鎖部分の長さは特に限定されないが、約１０ヌクレオチド長、より好ましくは約２０ヌクレオチド長以上であり得る。ここで、３’突出末端は、好ましくはＤＮＡであり得、より好ましくは２ヌクレオチド長のＤＮＡであり得、さらに好ましくは２〜４ヌクレオチド長のＤＮＡであり得る。
【０６６８】
（ＭＡＧのポリペプチド形態に特異的な因子）
１つの局面において、本発明は、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子を含む神経を再生するための組成物、およびＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子を含む神経疾患、神経障害または神経の状態の、処置、予防、診断または予後のための組成物を提供する。ここで、再生、診断、予防、処置または予後上有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって（ＭＡＧポリペプチドに特異的に相互作用する（例えば、阻害または抑制する）因子による）、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０６６９】
１つの実施形態において、この因子は、（ａ）配列番号７に記載の核酸配列のヌクレオチドもしくはそのフラグメントによってコードされる、ポリペプチド；（ｂ）配列番号８に記載のアミノ酸配列のアミノ酸もしくはそのフラグメントを有する、ポリペプチド；（ｃ）配列番号８に記載のアミノ酸配列のアミノ酸において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する、改変体ポリペプチド；（ｄ）配列番号７に記載の塩基配列のヌクレオチドのスプライス改変体もしくは対立遺伝子改変体によってコードされる、ポリペプチド；（ｅ）配列番号８に記載のアミノ酸配列のアミノ酸を有するポリペプチドの、種相同体ポリペプチド；または（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリペプチドのアミノ酸配列に対する同一性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列からなり、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチドに対して特異的に相互作用する、因子であり得る。
【０６７０】
１つの好ましい実施形態において、上記（ｂ）における置換、付加および欠失の数は限定されていてもよく、例えば、５０以下、４０以下、３０以下、２０以下、１５以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下であることが好ましい。より少ない数の置換、付加および欠失が好ましいが、生物学的活性を保持する（好ましくは、ＭＡＧ遺伝子産物と類似するかまたは実質的に同一の活性を有する）限り、多い数であってもよい。
【０６７１】
別の好ましい実施形態において、上記（ｃ）における対立遺伝子変異体は、配列番号４に示すアミノ酸配列と少なくとも９９％の相同性を有することが好ましい。
【０６７２】
別の好ましい実施形態において、上記種相同体は、本明細書中上述のように同定することができ、配列番号８に示すアミノ酸配列と少なくとも約３０％の相同性を有することが好ましい。好ましくは、種相同体は、上記基準配列と、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、相同であり得る。
【０６７３】
別の好ましい実施形態において、上記（ｅ）における上記改変体ポリペプチドが有する生物学的活性としては、例えば、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントに対して特異的な抗体との相互作用、ｐ７５ポリペプチドとの相互作用などが挙げられるがそれらに限定されない。
【０６７４】
好ましい実施形態において、上記（ａ）〜（ｄ）のいずれか１つのポリペプチドに対する相同性は、少なくとも約８０％であり得、より好ましくは少なくとも約９０％であり得、さらに好ましくは少なくとも約９８％であり得、もっとも好ましくは少なくとも約９９％であり得る。
【０６７５】
本発明の因子が特異的に相互作用するポリペプチドは、通常、少なくとも３の連続するアミノ酸配列を有する。本発明のポリペプチドが有するアミノ酸長は、目的とする用途に適合する限り、どれだけ短くてもよいが、好ましくは、より長い配列が使用され得る。従って、好ましくは、少なくとも４アミノ酸長、より好ましくは少なくとも５アミノ酸長、少なくとも６アミノ酸長、少なくとも７アミノ酸長、少なくとも８アミノ酸長、少なくとも９アミノ酸長、少なくとも１０アミノ酸長であってもよい。さらに好ましくは少なくとも１５アミノ酸長であり得、なお好ましくは少なくとも２０アミノ酸長であり得る。これらのアミノ酸長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明の因子が特異的に相互作用するポリペプチドは、ある因子と相互作用することができる限り、その上限の長さは、配列番号８に示す配列の全長と同一であってもよく、それを超える長さであってもよい。
【０６７６】
好ましい実施形態において、本発明の因子は、核酸分子、ポリペプチド、脂質、糖鎖、有機低分子およびそれらの複合分子からなる群より選択される。より好ましくは、本発明の因子は、抗体またはその誘導体（例えば、単鎖抗体）である。従って、本発明の因子は、プローブおよび／またはインヒビターとして使用することができる。
【０６７７】
１つの実施形態において、ＭＡＧポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号８のアミノ酸配列の１位〜６２６位を含む。より好ましくは、ＭＡＧポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号８のアミノ酸の全配列からなる。
【０６７８】
１つの実施形態において、処置されるべき神経の疾患、障害または状態は、本明細書において他の場所において記載されており、例えば、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷などを含む。好ましくは、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、アルツハイマー病であり得る。別の好ましい実施形態では、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷であり得る。
【０６７９】
（ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子）
１つの局面において、本発明は、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子を含む神経を再生するための組成物、およびＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子を含む神経疾患、神経障害または神経の状態の、処置、予防、診断または予後のための組成物を提供する。ここで、再生、診断、予防、処置または予後上有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって（ＭＡＧポリペプチドに特異的に相互作用する因子による）、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０６８０】
１つの実施形態において、この因子は、（ａ）配列番号７に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有するポリヌクレオチド；（ｂ）配列番号８に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド；（ｃ）配列番号８に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；（ｄ）配列番号７に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体である、ポリヌクレオチド；（ｅ）配列番号８に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドの種相同体をコードする、ポリヌクレオチド；（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェント条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；または（ｇ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、と特異的に相互作用する、因子であり得る。
【０６８１】
１つの好ましい実施形態において、上記（ｃ）における置換、付加および欠失の数は、限定され、例えば、５０以下、４０以下、３０以下、２０以下、１５以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下であることが好ましい。より少ない数の置換、付加および欠失が好ましいが、生物学的活性を保持する（好ましくは、ＭＡＧ遺伝子産物と類似するかまたは実質的に同一の活性を有する）限り、多い数であってもよい。
【０６８２】
別の好ましい実施形態において、上記改変体ポリペプチドが有する生物学的活性としては、例えば、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントに対して特異的な抗体との相互作用、ｐ７５との相互作用、ｐ７５によるＭＡＧの機能調節の調節などが挙げられるがそれらに限定されない。これらの活性は例えば、免疫学的アッセイ、リン酸化定量などによって測定することができる。
【０６８３】
別の好ましい実施形態において、上記（ｃ）における対立遺伝子変異体は、配列番号７に示す核酸配列と少なくとも９９％の相同性を有することが有利である。
【０６８４】
上記種相同体は、その種の遺伝子配列データベースが存在する場合、そのデータベースに対して、本発明のＭＡＧをクエリ配列として検索することによって同定することができる。あるいは、本発明のＭＡＧの全部または一部をプローブまたはプライマーとして、その種の遺伝子ライブラリーをスクリーニングすることによって同定することができる。そのような同定方法は、当該分野において周知であり、本明細書において記載される文献にも記載されている。種相同体は、例えば、配列番号７に示す核酸配列と少なくとも約３０％の相同性を有することが好ましい。好ましくは、種相同体は、上記基準配列と、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、相同であり得る。
【０６８５】
好ましい実施形態において、上記（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性は、少なくとも約８０％であり得、より好ましくは少なくとも約９０％であり得、さらに好ましくは少なくとも約９８％であり得、もっとも好ましくは少なくとも約９９％であり得る。
【０６８６】
好ましい実施形態において、本発明のＭＡＧをコードする核酸分子またはそのフラグメントおよび改変体は、少なくとも８の連続するヌクレオチド長であり得る。本発明の核酸分子は、本発明の使用目的によってその適切なヌクレオチド長が変動し得る。より好ましくは、本発明の核酸分子は、少なくとも１０の連続するヌクレオチド長であり得、さらに好ましくは少なくとも１５の連続するヌクレオチド長であり得、なお好ましくは少なくとも２０の連続するヌクレオチド長であり得る。これらのヌクレオチド長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、９、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明の核酸分子は、目的とする用途（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉ、マーカー、プライマー、プローブ、所定の因子と相互作用し得ること）として使用することができる限り、その上限の長さは、配列番号７に示す配列の全長であってもよく、それを超える長さであってもよい。あるいは、プライマーとして使用する場合は、通常少なくとも約８のヌクレオチド長であり得、好ましくは約１０ヌクレオチド長であり得る。プローブとして使用する場合は、通常少なくとも約１５ヌクレオチド長であり得、好ましくは約１７ヌクレオチド長であり得る。
【０６８７】
１つの実施形態において、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号７の核酸配列の全範囲を含む。より好ましくは、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号７の核酸配列の全範囲からなる。
【０６８８】
１つの実施形態において、処置されるべき神経の疾患、障害または状態は、本明細書において他の場所において記載されており、例えば、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷などを含む。好ましくは、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、アルツハイマー病であり得る。別の好ましい実施形態では、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷であり得る。
【０６８９】
好ましい実施形態において、本発明の因子は、核酸分子、ポリペプチド、脂質、糖鎖、有機低分子およびそれらの複合分子からなる群より選択される。
【０６９０】
好ましい実施形態では、本発明の因子は、核酸分子である。本発明の因子が核酸分子である場合、そのような核酸分子は、少なくとも８の連続するヌクレオチド長であり得る。本発明の核酸分子は、本発明の使用目的によってその適切なヌクレオチド長が変動し得る。より好ましくは、本発明の核酸分子は、少なくとも１０の連続するヌクレオチド長であり得、さらに好ましくは少なくとも１５の連続するヌクレオチド長であり得、なお好ましくは少なくとも２０の連続するヌクレオチド長であり得る。これらのヌクレオチド長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、９、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明の核酸分子は、目的とする用途（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉ、マーカー、プライマー、プローブ）として使用することができるかまたは所定の因子と相互作用することができる限り、その上限の長さは、配列番号７に示す配列の全長であってもよく、それを超える長さであってもよい。あるいは、プライマーとして使用する場合は、通常少なくとも約８のヌクレオチド長であり得、好ましくは約１０ヌクレオチド長であり得る。プローブとして使用する場合は、通常少なくとも約１５ヌクレオチド長であり得、好ましくは約１７ヌクレオチド長であり得る。
【０６９１】
従って、１つの例示的な実施形態において、本発明の因子は、上記（ａ）〜（ｇ）のいずれかのポリヌクレオチドの核酸配列に対して相補的な配列またはそれに対して少なくとも７０％の同一性を有する配列を有する核酸分子であり得る。
【０６９２】
別の例示的な実施形態において、本発明の因子は、（ａ）〜（ｇ）のいずれかのポリヌクレオチドの核酸配列に対してハイブリダイズする核酸分子であり得る。ストリンジェンシーは、高くても、中程度であっても、低くてもよく、程度は、当業者が適宜状況に応じて決定することができる。
【０６９３】
別の好ましい実施形態では、本発明の因子は、アンチセンスまたはＲＮＡｉである。ＲＮＡｉは、ｓｉＲＮＡであってもｓｈＲＮＡであってもよく、そのような例としては、例えば、約２０塩基前後（例えば、代表的には約２１〜２３塩基長）またはそれ未満の長さの二本鎖ＲＮＡであって、好ましくは、５’−リン酸、３’−ＯＨの構造を有しており、３’末端は約２塩基突出している。ｓｈＲＮＡはまた、好ましくは、３’突出末端を有し得る。二本鎖部分の長さは特に限定されないが、約１０ヌクレオチド長、より好ましくは約２０ヌクレオチド長以上であり得る。ここで、３’突出末端は、好ましくはＤＮＡであり得、より好ましくは２ヌクレオチド長のＤＮＡであり得、さらに好ましくは２〜４ヌクレオチド長のＤＮＡであり得る。
【０６９４】
（Ｎｏｇｏのポリペプチド形態に特異的な因子）
１つの局面において、本発明は、Ｎｏｇｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子を含む神経を再生するための組成物、およびＮｏｇｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子を含む神経疾患、神経障害または神経の状態の、処置、予防、診断または予後のための組成物を提供する。ここで、再生、診断、予防、処置または予後上有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって（Ｎｏｇｏポリペプチドに特異的に相互作用する（例えば、阻害または抑制する）因子による）、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０６９５】
１つの実施形態において、この因子は、（ａ）配列番号９に記載の核酸配列のヌクレオチドもしくはそのフラグメントによってコードされる、ポリペプチド；（ｂ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列のアミノ酸もしくはそのフラグメントを有する、ポリペプチド；（ｃ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列のアミノ酸において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する、改変体ポリペプチド；（ｄ）配列番号９に記載の塩基配列のヌクレオチドのスプライス改変体もしくは対立遺伝子改変体によってコードされる、ポリペプチド；（ｅ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列のアミノ酸を有するポリペプチドの、種相同体ポリペプチド；または（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリペプチドのアミノ酸配列に対する同一性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列からなり、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチドに対して特異的に相互作用する、因子であり得る。
【０６９６】
１つの好ましい実施形態において、上記（ｂ）における置換、付加および欠失の数は限定されていてもよく、例えば、５０以下、４０以下、３０以下、２０以下、１５以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下であることが好ましい。より少ない数の置換、付加および欠失が好ましいが、生物学的活性を保持する（好ましくは、Ｎｏｇｏ遺伝子産物と類似するかまたは実質的に同一の活性を有する）限り、多い数であってもよい。
【０６９７】
別の好ましい実施形態において、上記（ｃ）における対立遺伝子変異体は、配列番号４に示すアミノ酸配列と少なくとも９９％の相同性を有することが好ましい。
【０６９８】
別の好ましい実施形態において、上記種相同体は、本明細書中上述のように同定することができ、配列番号１０に示すアミノ酸配列と少なくとも約３０％の相同性を有することが好ましい。好ましくは、種相同体は、上記基準配列と、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、相同であり得る。
【０６９９】
別の好ましい実施形態において、上記（ｅ）における上記改変体ポリペプチドが有する生物学的活性としては、例えば、配列番号１０に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントに対して特異的な抗体との相互作用、ｐ７５ポリペプチドとの相互作用などが挙げられるがそれらに限定されない。
【０７００】
好ましい実施形態において、上記（ａ）〜（ｄ）のいずれか１つのポリペプチドに対する相同性は、少なくとも約８０％であり得、より好ましくは少なくとも約９０％であり得、さらに好ましくは少なくとも約９８％であり得、もっとも好ましくは少なくとも約９９％であり得る。
【０７０１】
本発明の因子が特異的に相互作用するポリペプチドは、通常、少なくとも３の連続するアミノ酸配列を有する。本発明のポリペプチドが有するアミノ酸長は、目的とする用途に適合する限り、どれだけ短くてもよいが、好ましくは、より長い配列が使用され得る。従って、好ましくは、少なくとも４アミノ酸長、より好ましくは少なくとも５アミノ酸長、少なくとも６アミノ酸長、少なくとも７アミノ酸長、少なくとも８アミノ酸長、少なくとも９アミノ酸長、少なくとも１０アミノ酸長であってもよい。さらに好ましくは少なくとも１５アミノ酸長であり得、なお好ましくは少なくとも２０アミノ酸長であり得る。これらのアミノ酸長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明の因子が特異的に相互作用するポリペプチドは、ある因子と相互作用することができる限り、その上限の長さは、配列番号１０に示す配列の全長と同一であってもよく、それを超える長さであってもよい。
【０７０２】
好ましい実施形態において、本発明の因子は、核酸分子、ポリペプチド、脂質、糖鎖、有機低分子およびそれらの複合分子からなる群より選択される。より好ましくは、本発明の因子は、抗体またはその誘導体（例えば、単鎖抗体）である。従って、本発明の因子は、プローブおよび／またはインヒビターとして使用することができる。
【０７０３】
１つの実施形態において、Ｎｏｇｏポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号１０のアミノ酸配列の１位〜６２６位を含む。より好ましくは、Ｎｏｇｏ、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号１０のアミノ酸の全配列からなる。
【０７０４】
１つの実施形態において、処置されるべき神経の疾患、障害または状態は、本明細書において他の場所において記載されており、例えば、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷などを含む。好ましくは、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、アルツハイマー病であり得る。別の好ましい実施形態では、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷であり得る。
【０７０５】
（Ｎｏｇｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子）
１つの局面において、本発明は、Ｎｏｇｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子を含む神経を再生するための組成物、およびＮｏｇｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子を含む神経疾患、神経障害または神経の状態の、処置、予防、診断または予後のための組成物を提供する。ここで、再生、診断、予防、処置または予後上有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって（Ｎｏｇｏポリペプチドに特異的に相互作用する因子による）、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０７０６】
１つの実施形態において、この因子は、（ａ）配列番号９に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有するポリヌクレオチド；（ｂ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド；（ｃ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；（ｄ）配列番号９に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体である、ポリヌクレオチド；（ｅ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドの種相同体をコードする、ポリヌクレオチド；（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェント条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；および（ｇ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、と特異的に相互作用する、因子であり得る。
【０７０７】
１つの好ましい実施形態において、上記（ｃ）における置換、付加および欠失の数は、限定され、例えば、５０以下、４０以下、３０以下、２０以下、１５以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下であることが好ましい。より少ない数の置換、付加および欠失が好ましいが、生物学的活性を保持する（好ましくは、Ｎｏｇｏ遺伝子産物と類似するかまたは実質的に同一の活性を有する）限り、多い数であってもよい。
【０７０８】
別の好ましい実施形態において、上記改変体ポリペプチドが有する生物学的活性としては、例えば、配列番号１０に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントに対して特異的な抗体との相互作用、ｐ７５との相互作用、ｐ７５によるＮｏｇｏの機能調節の調節などが挙げられるがそれらに限定されない。これらの活性は例えば、免疫学的アッセイ、リン酸化定量などによって測定することができる。
【０７０９】
別の好ましい実施形態において、上記（ｃ）における対立遺伝子変異体は、配列番号９に示す核酸配列と少なくとも９９％の相同性を有することが有利である。
【０７１０】
上記種相同体は、その種の遺伝子配列データベースが存在する場合、そのデータベースに対して、本発明のＮｏｇｏをクエリ配列として検索することによって同定することができる。あるいは、本発明のＮｏｇｏの全部または一部をプローブまたはプライマーとして、その種の遺伝子ライブラリーをスクリーニングすることによって同定することができる。そのような同定方法は、当該分野において周知であり、本明細書において記載される文献にも記載されている。種相同体は、例えば、配列番号９に示す核酸配列と少なくとも約３０％の相同性を有することが好ましい。好ましくは、種相同体は、上記基準配列と、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、相同であり得る。
【０７１１】
好ましい実施形態において、上記（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性は、少なくとも約８０％であり得、より好ましくは少なくとも約９０％であり得、さらに好ましくは少なくとも約９８％であり得、もっとも好ましくは少なくとも約９９％であり得る。
【０７１２】
好ましい実施形態において、本発明のＮｏｇｏをコードする核酸分子またはそのフラグメントおよび改変体は、少なくとも８の連続するヌクレオチド長であり得る。本発明の核酸分子は、本発明の使用目的によってその適切なヌクレオチド長が変動し得る。より好ましくは、本発明の核酸分子は、少なくとも１０の連続するヌクレオチド長であり得、さらに好ましくは少なくとも１５の連続するヌクレオチド長であり得、なお好ましくは少なくとも２０の連続するヌクレオチド長であり得る。これらのヌクレオチド長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、９、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明の核酸分子は、目的とする用途（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉ、マーカー、プライマー、プローブ、所定の因子と相互作用し得ること）として使用することができる限り、その上限の長さは、配列番号９に示す配列の全長であってもよく、それを超える長さであってもよい。あるいは、プライマーとして使用する場合は、通常少なくとも約８のヌクレオチド長であり得、好ましくは約１０ヌクレオチド長であり得る。プローブとして使用する場合は、通常少なくとも約１５ヌクレオチド長であり得、好ましくは約１７ヌクレオチド長であり得る。
【０７１３】
１つの実施形態において、Ｎｏｇｏポリペプチドをコードする核酸分子、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号９の核酸配列の全範囲を含む。より好ましくは、Ｎｏｇｏポリペプチドをコードする核酸分子、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号９の核酸配列の全範囲からなる。
【０７１４】
１つの実施形態において、処置されるべき神経の疾患、障害または状態は、本明細書において他の場所において記載されており、例えば、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷などを含む。好ましくは、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、アルツハイマー病であり得る。別の好ましい実施形態では、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷であり得る。
【０７１５】
好ましい実施形態において、本発明の因子は、核酸分子、ポリペプチド、脂質、糖鎖、有機低分子およびそれらの複合分子からなる群より選択される。
【０７１６】
好ましい実施形態では、本発明の因子は、核酸分子である。本発明の因子が核酸分子である場合、そのような核酸分子は、少なくとも８の連続するヌクレオチド長であり得る。本発明の核酸分子は、本発明の使用目的によってその適切なヌクレオチド長が変動し得る。より好ましくは、本発明の核酸分子は、少なくとも１０の連続するヌクレオチド長であり得、さらに好ましくは少なくとも１５の連続するヌクレオチド長であり得、なお好ましくは少なくとも２０の連続するヌクレオチド長であり得る。これらのヌクレオチド長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、９、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明の核酸分子は、目的とする用途（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉ、マーカー、プライマー、プローブ）として使用することができるかまたは所定の因子と相互作用することができる限り、その上限の長さは、配列番号９に示す配列の全長であってもよく、それを超える長さであってもよい。あるいは、プライマーとして使用する場合は、通常少なくとも約８のヌクレオチド長であり得、好ましくは約１０ヌクレオチド長であり得る。プローブとして使用する場合は、通常少なくとも約１５ヌクレオチド長であり得、好ましくは約１７ヌクレオチド長であり得る。
【０７１７】
従って、１つの例示的な実施形態において、本発明の因子は、上記（ａ）〜（ｇ）のいずれかのポリヌクレオチドの核酸配列に対して相補的な配列またはそれに対して少なくとも７０％の同一性を有する配列を有する核酸分子であり得る。
【０７１８】
別の例示的な実施形態において、本発明の因子は、（ａ）〜（ｇ）のいずれかのポリヌクレオチドの核酸配列に対してハイブリダイズする核酸分子であり得る。ストリンジェンシーは、高くても、中程度であっても、低くてもよく、程度は、当業者が適宜状況に応じて決定することができる。
【０７１９】
別の好ましい実施形態では、本発明の因子は、アンチセンスまたはＲＮＡｉである。ＲＮＡｉは、ｓｉＲＮＡであってもｓｈＲＮＡであってもよく、そのような例としては、例えば、約２０塩基前後（例えば、代表的には約２１〜２３塩基長）またはそれ未満の長さの二本鎖ＲＮＡであって、好ましくは、５’−リン酸、３’−ＯＨの構造を有しており、３’末端は約２塩基突出している。ｓｈＲＮＡはまた、好ましくは、３’突出末端を有し得る。二本鎖部分の長さは特に限定されないが、約１０ヌクレオチド長、より好ましくは約２０ヌクレオチド長以上であり得る。ここで、３’突出末端は、好ましくはＤＮＡであり得、より好ましくは２ヌクレオチド長のＤＮＡであり得、さらに好ましくは２〜４ヌクレオチド長のＤＮＡであり得る。
【０７２０】
（Ｒｈｏのポリペプチド形態に特異的に相互作用する因子）
１つの局面において、本発明は、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子を含む神経を再生するための組成物、およびＲｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子を含む神経疾患、神経障害または神経の状態の、処置、予防、診断または予後のための組成物を提供する。ここで、再生、診断、予防、処置または予後上有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって（Ｒｈｏポリペプチドに特異的に相互作用する（例えば、阻害または抑制する）因子による）、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０７２１】
１つの実施形態において、この因子は、（ａ）配列番号１１に記載の核酸配列のヌクレオチドもしくはそのフラグメントによってコードされる、ポリペプチド；（ｂ）配列番号１２に記載のアミノ酸配列のアミノ酸もしくはそのフラグメントを有する、ポリペプチド；（ｃ）配列番号１２に記載のアミノ酸配列のアミノ酸において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する、改変体ポリペプチド；（ｄ）配列番号１１に記載の塩基配列のヌクレオチドのスプライス改変体もしくは対立遺伝子改変体によってコードされる、ポリペプチド；（ｅ）配列番号１２に記載のアミノ酸配列のアミノ酸を有するポリペプチドの、種相同体ポリペプチド；または（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリペプチドのアミノ酸配列に対する同一性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列からなり、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチドに対して特異的に相互作用する、因子であり得る。
【０７２２】
１つの好ましい実施形態において、上記（ｂ）における置換、付加および欠失の数は限定されていてもよく、例えば、５０以下、４０以下、３０以下、２０以下、１５以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下であることが好ましい。より少ない数の置換、付加および欠失が好ましいが、生物学的活性を保持する（好ましくは、Ｒｈｏ遺伝子産物と類似するかまたは実質的に同一の活性を有する）限り、多い数であってもよい。
【０７２３】
別の好ましい実施形態において、上記（ｃ）における対立遺伝子変異体は、配列番号４に示すアミノ酸配列と少なくとも９９％の相同性を有することが好ましい。
【０７２４】
別の好ましい実施形態において、上記種相同体は、本明細書中上述のように同定することができ、配列番号１２に示すアミノ酸配列と少なくとも約３０％の相同性を有することが好ましい。好ましくは、種相同体は、上記基準配列と、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、相同であり得る。
【０７２５】
別の好ましい実施形態において、上記（ｅ）における上記改変体ポリペプチドが有する生物学的活性としては、例えば、配列番号１２に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントに対して特異的な抗体との相互作用、ｐ７５との相互作用などが挙げられるがそれらに限定されない。
【０７２６】
好ましい実施形態において、上記（ａ）〜（ｄ）のいずれか１つのポリペプチドに対する相同性は、少なくとも約８０％であり得、より好ましくは少なくとも約９０％であり得、さらに好ましくは少なくとも約９８％であり得、もっとも好ましくは少なくとも約９９％であり得る。
【０７２７】
本発明の因子が特異的に相互作用するポリペプチドは、通常、少なくとも３の連続するアミノ酸配列を有する。本発明のポリペプチドが有するアミノ酸長は、目的とする用途に適合する限り、どれだけ短くてもよいが、好ましくは、より長い配列が使用され得る。従って、好ましくは、少なくとも４アミノ酸長、より好ましくは少なくとも５アミノ酸長、少なくとも６アミノ酸長、少なくとも７アミノ酸長、少なくとも８アミノ酸長、少なくとも９アミノ酸長、少なくとも１０アミノ酸長であってもよい。さらに好ましくは少なくとも１５アミノ酸長であり得、なお好ましくは少なくとも２０アミノ酸長であり得る。これらのアミノ酸長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明の因子が特異的に相互作用するポリペプチドは、ある因子と相互作用することができる限り、その上限の長さは、配列番号１２に示す配列の全長と同一であってもよく、それを超える長さであってもよい。
【０７２８】
好ましい実施形態において、本発明の因子は、核酸分子、ポリペプチド、脂質、糖鎖、有機低分子およびそれらの複合分子からなる群より選択される。より好ましくは、本発明の因子は、抗体またはその誘導体（例えば、単鎖抗体）である。従って、本発明の因子は、プローブおよび／またはインヒビターとして使用することができる。
【０７２９】
１つの実施形態において、Ｒｈｏポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号１２のアミノ酸配列の１位〜１９３位を含む。より好ましくは、Ｒｈｏまたはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号１２のアミノ酸の全配列からなる。
【０７３０】
１つの実施形態において、処置されるべき神経の疾患、障害または状態は、本明細書において他の場所において記載されており、例えば、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷などを含む。好ましくは、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、アルツハイマー病であり得る。別の好ましい実施形態では、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷であり得る。
【０７３１】
（Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子）
１つの局面において、本発明は、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子を含む神経を再生するための組成物、およびＲｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子を含む神経疾患、神経障害または神経の状態の、処置、予防、診断または予後のための組成物を提供する。ここで、再生、診断、予防、処置または予後上有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって（Ｒｈｏポリペプチドに特異的に相互作用する因子による）、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０７３２】
１つの実施形態において、この因子は、（ａ）配列番号１１に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有するポリヌクレオチド；（ｂ）配列番号１２に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド；（ｃ）配列番号１２に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；（ｄ）配列番号１１に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体である、ポリヌクレオチド；（ｅ）配列番号１２に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドの種相同体をコードする、ポリヌクレオチド；（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェント条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；および（ｇ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、と特異的に相互作用する、因子であり得る。
【０７３３】
１つの好ましい実施形態において、上記（ｃ）における置換、付加および欠失の数は、限定され、例えば、５０以下、４０以下、３０以下、２０以下、１５以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下であることが好ましい。より少ない数の置換、付加および欠失が好ましいが、生物学的活性を保持する（好ましくは、Ｒｈｏ遺伝子産物と類似するかまたは実質的に同一の活性を有する）限り、多い数であってもよい。
【０７３４】
別の好ましい実施形態において、上記改変体ポリペプチドが有する生物学的活性としては、例えば、配列番号１２に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントに対して特異的な抗体との相互作用、ｐ７５との相互作用、ｐ７５またはＲｈｏ  ＧＤＩによるＲｈｏの機能調節の調節などが挙げられるがそれらに限定されない。これらは例えば、免疫学的アッセイ、リン酸化定量などによって測定することができる。
【０７３５】
別の好ましい実施形態において、対立遺伝子変異体は、配列番号１１に示す核酸配列と少なくとも９９％の相同性を有することが有利である。
【０７３６】
上記種相同体は、その種の遺伝子配列データベースが存在する場合、そのデータベースに対して、本発明のＲｈｏをクエリ配列として検索することによって同定することができる。あるいは、本発明のＲｈｏの全部または一部をプローブまたはプライマーとして、その種の遺伝子ライブラリーをスクリーニングすることによって同定することができる。そのような同定方法は、当該分野において周知であり、本明細書において記載される文献にも記載されている。種相同体は、例えば、配列番号１１に示す核酸配列と少なくとも約３０％の相同性を有することが好ましい。好ましくは、種相同体は、上記基準配列と、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、相同であり得る。
【０７３７】
好ましい実施形態において、上記（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性は、少なくとも約８０％であり得、より好ましくは少なくとも約９０％であり得、さらに好ましくは少なくとも約９８％であり得、もっとも好ましくは少なくとも約９９％であり得る。
【０７３８】
好ましい実施形態において、本発明のＲｈｏをコードする核酸分子またはそのフラグメントおよび改変体は、少なくとも８の連続するヌクレオチド長であり得る。本発明の核酸分子は、本発明の使用目的によってその適切なヌクレオチド長が変動し得る。より好ましくは、本発明の核酸分子は、少なくとも１０の連続するヌクレオチド長であり得、さらに好ましくは少なくとも１５の連続するヌクレオチド長であり得、なお好ましくは少なくとも２０の連続するヌクレオチド長であり得る。これらのヌクレオチド長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、９、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明の核酸分子は、目的とする用途（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉ、マーカー、プライマー、プローブ、所定の因子と相互作用し得ること）として使用することができる限り、その上限の長さは、配列番号１１に示す配列の全長であってもよく、それを超える長さであってもよい。あるいは、プライマーとして使用する場合は、通常少なくとも約８のヌクレオチド長であり得、好ましくは約１０ヌクレオチド長であり得る。プローブとして使用する場合は、通常少なくとも約１５ヌクレオチド長であり得、好ましくは約１７ヌクレオチド長であり得る。
【０７３９】
１つの実施形態において、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号１１の核酸配列の１位〜５７９位を含む。より好ましくは、Ｒｈｏまたはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号１１の核酸配列の全範囲からなる。
【０７４０】
１つの実施形態において、処置されるべき神経の疾患、障害または状態は、本明細書において他の場所において記載されており、例えば、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷などを含む。好ましくは、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、アルツハイマー病であり得る。別の好ましい実施形態では、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷であり得る。
【０７４１】
好ましい実施形態において、本発明の因子は、核酸分子、ポリペプチド、脂質、糖鎖、有機低分子およびそれらの複合分子からなる群より選択される。
【０７４２】
好ましい実施形態では、本発明の因子は、核酸分子である。本発明の因子が核酸分子である場合、そのような核酸分子は、少なくとも８の連続するヌクレオチド長であり得る。本発明の核酸分子は、本発明の使用目的によってその適切なヌクレオチド長が変動し得る。より好ましくは、本発明の核酸分子は、少なくとも１０の連続するヌクレオチド長であり得、さらに好ましくは少なくとも１５の連続するヌクレオチド長であり得、なお好ましくは少なくとも２０の連続するヌクレオチド長であり得る。これらのヌクレオチド長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、９、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明の核酸分子は、目的とする用途（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉ、マーカー、プライマー、プローブ、所定の因子と相互作用し得ること）として使用することができる限り、その上限の長さは、配列番号１１に示す配列の全長であってもよく、それを超える長さであってもよい。あるいは、プライマーとして使用する場合は、通常少なくとも約８のヌクレオチド長であり得、好ましくは約１０ヌクレオチド長であり得る。プローブとして使用する場合は、通常少なくとも約１５ヌクレオチド長であり得、好ましくは約１７ヌクレオチド長であり得る。
【０７４３】
従って、１つの例示的な実施形態において、本発明の因子は、上記（ａ）〜（ｇ）のいずれかのポリヌクレオチドの核酸配列に対して相補的な配列またはそれに対して少なくとも７０％の同一性を有する配列を有する核酸分子であり得る。
【０７４４】
別の例示的な実施形態において、本発明の因子は、（ａ）〜（ｇ）のいずれかのポリヌクレオチドの核酸配列に対してハイブリダイズする核酸分子であり得る。ストリンジェンシーは、高くても、中程度であっても、低くてもよく、程度は、当業者が適宜状況に応じて決定することができる。
【０７４５】
別の好ましい実施形態では、本発明の因子は、アンチセンスまたはＲＮＡｉである。ＲＮＡｉは、ｓｉＲＮＡであってもｓｈＲＮＡであってもよく、そのような例としては、例えば、約２０塩基前後（例えば、代表的には約２１〜２３塩基長）またはそれ未満の長さの二本鎖ＲＮＡであって、好ましくは、５’−リン酸、３’−ＯＨの構造を有しており、３’末端は約２塩基突出している。ｓｈＲＮＡはまた、好ましくは、３’突出末端を有し得る。二本鎖部分の長さは特に限定されないが、約１０ヌクレオチド長、より好ましくは約２０ヌクレオチド長以上であり得る。ここで、３’突出末端は、好ましくはＤＮＡであり得、より好ましくは２ヌクレオチド長のＤＮＡであり得、さらに好ましくは２〜４ヌクレオチド長のＤＮＡであり得る。
【０７４６】
（Ｒｈｏキナーゼのポリペプチド形態に特異的な因子）
１つの局面において、本発明は、Ｒｈｏキナーゼポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子を含む神経を再生するための組成物、およびＲｈｏキナーゼポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子を含む神経疾患、神経障害または神経の状態の、処置、予防、診断または予後のための組成物を提供する。ここで、再生、診断、予防、処置または予後上有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって（Ｒｈｏキナーゼポリペプチドに特異的に相互作用する（例えば、阻害または抑制する）因子による）、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０７４７】
１つの実施形態において、この因子は、（ａ）配列番号１８に記載の核酸配列のヌクレオチドもしくはそのフラグメントによってコードされる、ポリペプチド；（ｂ）配列番号１９に記載のアミノ酸配列のアミノ酸もしくはそのフラグメントを有する、ポリペプチド；（ｃ）配列番号１９に記載のアミノ酸配列のアミノ酸において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する、改変体ポリペプチド；（ｄ）配列番号１８に記載の塩基配列のヌクレオチドのスプライス改変体もしくは対立遺伝子改変体によってコードされる、ポリペプチド；（ｅ）配列番号１９に記載のアミノ酸配列のアミノ酸を有するポリペプチドの、種相同体ポリペプチド；または（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリペプチドのアミノ酸配列に対する同一性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列からなり、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチドに対して特異的に相互作用する、因子であり得る。
【０７４８】
１つの好ましい実施形態において、上記（ｂ）における置換、付加および欠失の数は限定されていてもよく、例えば、５０以下、４０以下、３０以下、２０以下、１５以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下であることが好ましい。より少ない数の置換、付加および欠失が好ましいが、生物学的活性を保持する（好ましくは、Ｒｈｏキナーゼ遺伝子産物と類似するかまたは実質的に同一の活性を有する）限り、多い数であってもよい。
【０７４９】
別の好ましい実施形態において、上記（ｃ）における対立遺伝子変異体は、配列番号４に示すアミノ酸配列と少なくとも９９％の相同性を有することが好ましい。
【０７５０】
別の好ましい実施形態において、上記種相同体は、本明細書中上述のように同定することができ、配列番号１９に示すアミノ酸配列と少なくとも約３０％の相同性を有することが好ましい。好ましくは、種相同体は、上記基準配列と、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、相同であり得る。
【０７５１】
別の好ましい実施形態において、上記（ｅ）における上記改変体ポリペプチドが有する生物学的活性としては、例えば、配列番号１９に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントに対して特異的な抗体との相互作用、ｐ７５との相互作用などが挙げられるがそれらに限定されない。
【０７５２】
好ましい実施形態において、上記（ａ）〜（ｄ）のいずれか１つのポリペプチドに対する相同性は、少なくとも約８０％であり得、より好ましくは少なくとも約９０％であり得、さらに好ましくは少なくとも約９８％であり得、もっとも好ましくは少なくとも約９９％であり得る。
【０７５３】
本発明の因子が特異的に相互作用するポリペプチドは、通常、少なくとも３の連続するアミノ酸配列を有する。本発明のポリペプチドが有するアミノ酸長は、目的とする用途に適合する限り、どれだけ短くてもよいが、好ましくは、より長い配列が使用され得る。従って、好ましくは、少なくとも４アミノ酸長、より好ましくは少なくとも５アミノ酸長、少なくとも６アミノ酸長、少なくとも７アミノ酸長、少なくとも８アミノ酸長、少なくとも９アミノ酸長、少なくとも１０アミノ酸長であってもよい。さらに好ましくは少なくとも１５アミノ酸長であり得、なお好ましくは少なくとも２０アミノ酸長であり得る。これらのアミノ酸長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明の因子が特異的に相互作用するポリペプチドは、ある因子と相互作用することができる限り、その上限の長さは、配列番号１９に示す配列の全長と同一であってもよく、それを超える長さであってもよい。
【０７５４】
好ましい実施形態において、本発明の因子は、核酸分子、ポリペプチド、脂質、糖鎖、有機低分子およびそれらの複合分子からなる群より選択される。より好ましくは、本発明の因子は、抗体またはその誘導体（例えば、単鎖抗体）である。従って、本発明の因子は、プローブおよび／またはインヒビターとして使用することができる。
【０７５５】
１つの実施形態において、Ｒｈｏキナーゼポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号１９のアミノ酸配列の１位〜１３８８位を含む。より好ましくは、Ｒｈｏキナーゼまたはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号１９のアミノ酸の全範囲からなる。
【０７５６】
１つの実施形態において、処置されるべき神経の疾患、障害または状態は、本明細書において他の場所において記載されており、例えば、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷などを含む。好ましくは、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、アルツハイマー病であり得る。別の好ましい実施形態では、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷であり得る。
【０７５７】
（Ｒｈｏキナーゼポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子）
１つの局面において、本発明は、Ｒｈｏキナーゼポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子を含む神経を再生するための組成物、およびＲｈｏキナーゼポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子を含む神経疾患、神経障害または神経の状態の、処置、予防、診断または予後のための組成物を提供する。ここで、再生、診断、予防、処置または予後上有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって（Ｒｈｏキナーゼポリペプチドに特異的に相互作用する因子による）、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０７５８】
１つの実施形態において、この因子は、（ａ）配列番号１８に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有するポリヌクレオチド；（ｂ）配列番号１９に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド；（ｃ）配列番号１９に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；（ｄ）配列番号１８に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体である、ポリヌクレオチド；（ｅ）配列番号１９に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドの種相同体をコードする、ポリヌクレオチド；（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェント条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；および（ｇ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、と特異的に相互作用する、因子であり得る。
【０７５９】
１つの好ましい実施形態において、上記（ｃ）における置換、付加および欠失の数は、限定され、例えば、５０以下、４０以下、３０以下、２０以下、１５以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下であることが好ましい。より少ない数の置換、付加および欠失が好ましいが、生物学的活性を保持する（好ましくは、Ｒｈｏキナーゼ遺伝子産物と類似するかまたは実質的に同一の活性を有する）限り、多い数であってもよい。
【０７６０】
別の好ましい実施形態において、上記改変体ポリペプチドが有する生物学的活性としては、例えば、配列番号１９に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントに対して特異的な抗体との相互作用、ｐ７５との相互作用、ｐ７５またはＲｈｏキナーゼ  ＧＤＩによるＲｈｏキナーゼの機能調節の調節などが挙げられるがそれらに限定されない。これらの活性は例えば、免疫学的アッセイ、リン酸化定量などによって測定することができる。
【０７６１】
別の好ましい実施形態において、上記（ｃ）に記載の対立遺伝子変異体は、配列番号１８に示す核酸配列と少なくとも９９％の相同性を有することが有利である。
【０７６２】
上記種相同体は、その種の遺伝子配列データベースが存在する場合、そのデータベースに対して、本発明のＲｈｏキナーゼをクエリ配列として検索することによって同定することができる。あるいは、本発明のＲｈｏキナーゼの全部または一部をプローブまたはプライマーとして、その種の遺伝子ライブラリーをスクリーニングすることによって同定することができる。そのような同定方法は、当該分野において周知であり、本明細書において記載される文献にも記載されている。種相同体は、例えば、配列番号１８に示す核酸配列と少なくとも約３０％の相同性を有することが好ましい。好ましくは、種相同体は、上記基準配列と、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、相同であり得る。
【０７６３】
好ましい実施形態において、上記（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性は、少なくとも約８０％であり得、より好ましくは少なくとも約９０％であり得、さらに好ましくは少なくとも約９８％であり得、もっとも好ましくは少なくとも約９９％であり得る。
【０７６４】
好ましい実施形態において、本発明のＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子またはそのフラグメントおよび改変体は、少なくとも８の連続するヌクレオチド長であり得る。本発明の核酸分子は、本発明の使用目的によってその適切なヌクレオチド長が変動し得る。より好ましくは、本発明の核酸分子は、少なくとも１０の連続するヌクレオチド長であり得、さらに好ましくは少なくとも１５の連続するヌクレオチド長であり得、なお好ましくは少なくとも２０の連続するヌクレオチド長であり得る。これらのヌクレオチド長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、９、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明の核酸分子は、目的とする用途（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉ、マーカー、プライマー、プローブ、所定の因子と相互作用し得ること）として使用することができる限り、その上限の長さは、配列番号１８に示す配列の全長であってもよく、それを超える長さであってもよい。あるいは、プライマーとして使用する場合は、通常少なくとも約８のヌクレオチド長であり得、好ましくは約１０ヌクレオチド長であり得る。プローブとして使用する場合は、通常少なくとも約１５ヌクレオチド長であり得、好ましくは約１７ヌクレオチド長であり得る。
【０７６５】
１つの実施形態において、Ｒｈｏキナーゼポリペプチドをコードする核酸分子、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号１８の核酸配列の１位〜４１６４位を含む。より好ましくは、Ｒｈｏキナーゼまたはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号１８の核酸配列の全範囲からなる。
【０７６６】
１つの実施形態において、処置されるべき神経の疾患、障害または状態は、本明細書において他の場所において記載されており、例えば、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷などを含む。好ましくは、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、アルツハイマー病であり得る。別の好ましい実施形態では、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷であり得る。
【０７６７】
好ましい実施形態において、本発明の因子は、核酸分子、ポリペプチド、脂質、糖鎖、有機低分子およびそれらの複合分子からなる群より選択される。
【０７６８】
好ましい実施形態では、本発明の因子は、核酸分子である。本発明の因子が核酸分子である場合、そのような核酸分子は、少なくとも８の連続するヌクレオチド長であり得る。本発明の核酸分子は、本発明の使用目的によってその適切なヌクレオチド長が変動し得る。より好ましくは、本発明の核酸分子は、少なくとも１０の連続するヌクレオチド長であり得、さらに好ましくは少なくとも１５の連続するヌクレオチド長であり得、なお好ましくは少なくとも２０の連続するヌクレオチド長であり得る。これらのヌクレオチド長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、９、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明の核酸分子は、目的とする用途（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉ、マーカー、プライマー、プローブ、所定の因子と相互作用し得ること）として使用することができる限り、その上限の長さは、配列番号１８に示す配列の全長であってもよく、それを超える長さであってもよい。あるいは、プライマーとして使用する場合は、通常少なくとも約８のヌクレオチド長であり得、好ましくは約１０ヌクレオチド長であり得る。プローブとして使用する場合は、通常少なくとも約１５ヌクレオチド長であり得、好ましくは約１７ヌクレオチド長であり得る。
【０７６９】
従って、１つの例示的な実施形態において、本発明の因子は、上記（ａ）〜（ｇ）のいずれかのポリヌクレオチドの核酸配列に対して相補的な配列またはそれに対して少なくとも７０％の同一性を有する配列を有する核酸分子であり得る。
【０７７０】
別の例示的な実施形態において、本発明の因子は、（ａ）〜（ｇ）のいずれかのポリヌクレオチドの核酸配列に対してハイブリダイズする核酸分子であり得る。ストリンジェンシーは、高くても、中程度であっても、低くてもよく、程度は、当業者が適宜状況に応じて決定することができる。
【０７７１】
別の好ましい実施形態では、本発明の因子は、アンチセンスまたはＲＮＡｉである。ＲＮＡｉは、ｓｉＲＮＡであってもｓｈＲＮＡであってもよく、そのような例としては、例えば、約２０塩基前後（例えば、代表的には約２１〜２３塩基長）またはそれ未満の長さの二本鎖ＲＮＡであって、好ましくは、５’−リン酸、３’−ＯＨの構造を有しており、３’末端は約２塩基突出している。ｓｈＲＮＡはまた、好ましくは、３’突出末端を有し得る。二本鎖部分の長さは特に限定されないが、約１０ヌクレオチド長、より好ましくは約２０ヌクレオチド長以上であり得る。ここで、３’突出末端は、好ましくはＤＮＡであり得、より好ましくは２ヌクレオチド長のＤＮＡであり得、さらに好ましくは２〜４ヌクレオチド長のＤＮＡであり得る。
【０７７２】
（ｐ２１のポリペプチド形態）
１つの局面において、本発明は、ｐ２１ポリペプチドを含む神経を再生するための組成物、およびｐ２１ポリペプチドを含む神経疾患、神経障害または神経の状態の、処置、予防、診断または予後のための組成物を提供する。ここで、再生、診断、予防、処置または予後上有効な量は、本明細書の開示に基づいて、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって（ｐ２１による）、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０７７３】
１つの実施形態において、本発明において用いられるｐ２１、またはそのフラグメントもしくは改変体は、（ａ）配列番号１４または配列番号２３に記載のアミノ酸配列またはそのフラグメントからなる、ポリペプチド；（ｂ）配列番号１４または配列番号２３に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド；（ｃ）配列番号１３または配列番号２２に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体によってコードされる、ポリペプチド；（ｄ）配列番号１４または配列番号２３に記載のアミノ酸配列の種相同体である、ポリペプチド；または（ｅ）（ａ）〜（ｄ）のいずれか１つのポリペプチドに対する相同性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、を含む。
【０７７４】
１つの好ましい実施形態において、上記（ｂ）における置換、付加および欠失の数は限定されていてもよく、例えば、５０以下、４０以下、３０以下、２０以下、１５以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下であることが好ましい。より少ない数の置換、付加および欠失が好ましいが、生物学的活性を保持する（好ましくは、ｐ２１遺伝子産物と類似するかまたは実質的に同一の活性を有する）限り、多い数であってもよい。
【０７７５】
別の好ましい実施形態において、上記（ｃ）における対立遺伝子変異体は、配列番号１４または配列番号２３に示すアミノ酸配列と少なくとも９９％の相同性を有することが好ましい。
【０７７６】
別の好ましい実施形態において、上記種相同体は、本明細書中上述のように同定することができ、配列番号１４または配列番号２３に示すアミノ酸配列と少なくとも約３０％の相同性を有することが好ましい。好ましくは、種相同体は、上記基準配列と、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、相同であり得る。
【０７７７】
別の好ましい実施形態において、上記（ｅ）における上記改変体ポリペプチドが有する生物学的活性としては、例えば、配列番号１４または配列番号２３に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントに対して特異的な抗体との相互作用、Ｒｈｏ  ＧＴＰ、Ｒｈｏキナーゼとの相互作用などが挙げられるがそれらに限定されない。
【０７７８】
好ましい実施形態において、上記（ａ）〜（ｄ）のいずれか１つのポリペプチドに対する相同性は、少なくとも約８０％であり得、より好ましくは少なくとも約９０％であり得、さらに好ましくは少なくとも約９８％であり得、もっとも好ましくは少なくとも約９９％であり得る。
【０７７９】
本発明のポリペプチドは、通常、少なくとも３の連続するアミノ酸配列を有する。本発明のポリペプチドが有するアミノ酸長は、目的とする用途に適合する限り、どれだけ短くてもよいが、好ましくは、より長い配列が使用され得る。従って、好ましくは、少なくとも４アミノ酸長、より好ましくは少なくとも５アミノ酸長、少なくとも６アミノ酸長、少なくとも７アミノ酸長、少なくとも８アミノ酸長、少なくとも９アミノ酸長、少なくとも１０アミノ酸長であってもよい。さらに好ましくは少なくとも１５アミノ酸長であり得、なお好ましくは少なくとも２０アミノ酸長であり得る。これらのアミノ酸長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明のポリペプチドは、ある因子と相互作用することができる限り、その上限の長さは、配列番号１４または配列番号２３に示す配列の全長と同一であってもよく、それを超える長さであってもよい。
【０７８０】
１つの実施形態において、ｐ２１ポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号１４または配列番号２３のアミノ酸に示す１位〜１４０位、または１位〜１６４位を含む。より好ましくは、ｐ２１、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号１４または配列番号２３のアミノ酸１位〜１４０位、または全範囲からなることが有利であり得る。別の好ましい実施形態では、ｐ２１ポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号１４または配列番号２３のアミノ酸１位〜１４０位（ΔＮＬＳ領域）を含み、１４１位以降の配列を含まないこと（このものをΔＮＬＳ  ｐ２１という）が有利であり得る。ΔＮＬＳとは、核移行シグナルの略称であり、核移行シグナルを機能させないような変異を挿入することによって、ｐ２１またはそのフラグメントもしくは改変体が細胞質のとどまることができ、それによって、ｐ７５シグナル伝達機構を抑制または阻害することができ、本発明の効果がより有利に達成され得る。
【０７８１】
好ましい実施形態において、本発明の組成物に含まれるｐ２１ポリペプチドは、さらに、ＰＴＤドメインを含むことが有利であり得る。ＰＴＤドメインの代表的配列としては、ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号２０）およびそのフラグメントが挙げられるがそれに限定されない。ＰＴＤドメインは、神経再生因子（例えば、ｐ２１ポリペプチド）とどのような位置関係に配置されてもよいが、好ましい実施形態において、ＰＴＤドメインは、ｐ２１ポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に配置されることが有利であり得る。
【０７８２】
１つの実施形態において、処置されるべき神経の疾患、障害または状態は、本明細書において他の場所において記載されており、例えば、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷などを含む。好ましくは、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、アルツハイマー病であり得る。別の好ましい実施形態では、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷であり得る。
【０７８３】
（ｐ２１の核酸形態）
１つの局面において、本発明は、Ｐ２１ポリペプチドをコードする核酸分子を含む神経を再生するための組成物、およびＰ２１ポリペプチドをコードする核酸分子を含む神経疾患、神経障害または神経の状態の、処置、予防、診断または予後のための組成物を提供する。ここで、再生、診断、予防、処置または予後上有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって（Ｐ２１による）、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０７８４】
１つの実施形態において、本発明において用いられるＰ２１をコードする核酸分子、またはそのフラグメントもしくは改変体は、（ａ）配列番号１３または配列番号２２に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有するポリヌクレオチド；（ｂ）配列番号１４または配列番号２３に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド；（ｃ）配列番号１４または配列番号２３に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；（ｄ）配列番号１３または配列番号２２に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体である、ポリヌクレオチド；（ｅ）配列番号１４または配列番号２３に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドの種相同体をコードする、ポリヌクレオチド；（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェント条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；および（ｇ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、を含む。
【０７８５】
１つの好ましい実施形態において、上記（ｃ）における置換、付加および欠失の数は、限定され、例えば、５０以下、４０以下、３０以下、２０以下、１５以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下であることが好ましい。より少ない数の置換、付加および欠失が好ましいが、生物学的活性を保持する（好ましくは、Ｐ２１遺伝子産物と類似するかまたは実質的に同一の活性を有する）限り、多い数であってもよい。
【０７８６】
別の好ましい実施形態において、上記改変体ポリペプチドが有する生物学的活性としては、例えば、配列番号１４または配列番号２３に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントに対して特異的な抗体との相互作用、Ｒｈｏキナーゼとの相互作用、Ｒｈｏ  ＧＴＰの機能調節の調節などが挙げられるがそれらに限定されない。これらの活性は例えば、免疫学的アッセイ、リン酸化定量などによって測定することができる。
【０７８７】
別の好ましい実施形態において、上記（ｃ）に記載の対立遺伝子変異体は、配列番号１３または配列番号２２に示す核酸配列と少なくとも９９％の相同性を有することが有利である。
【０７８８】
上記種相同体は、その種の遺伝子配列データベースが存在する場合、そのデータベースに対して、本発明のＰ２１をクエリ配列として検索することによって同定することができる。あるいは、本発明のＰ２１の全部または一部をプローブまたはプライマーとして、その種の遺伝子ライブラリーをスクリーニングすることによって同定することができる。そのような同定方法は、当該分野において周知であり、本明細書において記載される文献にも記載されている。種相同体は、例えば、配列番号１３または配列番号２２に示す核酸配列と少なくとも約３０％の相同性を有することが好ましい。好ましくは、種相同体は、上記基準配列と、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、相同であり得る。
【０７８９】
好ましい実施形態において、上記（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性は、少なくとも約８０％であり得、より好ましくは少なくとも約９０％であり得、さらに好ましくは少なくとも約９８％であり得、もっとも好ましくは少なくとも約９９％であり得る。
【０７９０】
好ましい実施形態において、本発明のＰ２１をコードする核酸分子またはそのフラグメントおよび改変体は、少なくとも８の連続するヌクレオチド長であり得る。本発明の核酸分子は、本発明の使用目的によってその適切なヌクレオチド長が変動し得る。より好ましくは、本発明の核酸分子は、少なくとも１０の連続するヌクレオチド長であり得、さらに好ましくは少なくとも１５の連続するヌクレオチド長であり得、なお好ましくは少なくとも２０の連続するヌクレオチド長であり得る。これらのヌクレオチド長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、９、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明の核酸分子は、目的とする用途（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉ、マーカー、プライマー、プローブ、所定の因子と相互作用し得ること）として使用することができる限り、その上限の長さは、配列番号１３または配列番号２２に示す配列の全長であってもよく、それを超える長さであってもよい。あるいは、プライマーとして使用する場合は、通常少なくとも約８のヌクレオチド長であり得、好ましくは約１０ヌクレオチド長であり得る。プローブとして使用する場合は、通常少なくとも約１５ヌクレオチド長であり得、好ましくは約１７ヌクレオチド長であり得る。
【０７９１】
１つの実施形態において、Ｐ２１をコードする核酸分子、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号１３または配列番号２２の核酸配列の１位〜４２０位または１位〜４９２位を含む。より好ましくは、Ｐ２１をコードする核酸分子、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号１３または配列番号２２の核酸配列の１位から４２０位または全範囲からなる。
【０７９２】
１つの実施形態において、ｐ２１ポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号１３または配列番号２２のヌクレオチド１位〜４２０位または１位〜４９２位を含む。より好ましくは、ｐ２１、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号１３または配列番号２２のヌクレオチド１位〜４２０位または１位〜４９２位、全範囲からなることが有利であり得る。別の好ましい実施形態では、ｐ２１、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号１３または配列番号２２のヌクレオチド１位〜４２０位を含み、４２１位以降を含まないことが有利であり得る（本明細書においてこの形態をΔＮＬＳ  ｐ２１ともいう）。ΔＮＬＳとは、核移行シグナルの略称であり、核移行シグナルを機能させないような変異を挿入することによって、ｐ２１またはそのフラグメントもしくは改変体が細胞質のとどまることができ、それによって、ｐ７５シグナル伝達機構を抑制または阻害することができ、本発明の効果がより有利に達成され得る。
【０７９３】
好ましい実施形態において、本発明の組成物に含まれるｐ２１ポリペプチドは、さらに、ＰＴＤドメインをコードする核酸配列を含むことが有利であり得る。ＰＴＤドメインの代表的配列としては、ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号２０）をコードする任意の核酸およびその改変体が挙げられるがそれに限定されない。ＰＴＤドメインをコードする核酸配列は、その細胞質移行活性が発揮される限り、神経再生因子（例えば、ｐ２１ポリペプチド）をコードする核酸配列とどのような位置関係に配置されてもよいが、好ましい実施形態において、ＰＴＤドメインをコードする核酸配列は、ｐ２１ポリペプチドをコードする核酸配列の３’末端または５’末端に配置されることが有利であり得る。
【０７９４】
１つの実施形態において、処置されるべき神経の疾患、障害または状態は、本明細書において他の場所において記載されており、例えば、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷などを含む。好ましくは、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、アルツハイマー病であり得る。別の好ましい実施形態では、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷であり得る。
【０７９５】
（ＰＫＣのポリペプチド形態に特異的な因子）
１つの局面において、本発明は、ＰＫＣポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子を含む神経を再生するための組成物、およびＰＫＣポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子を含む神経疾患、神経障害または神経の状態の、処置、予防、診断または予後のための組成物を提供する。ここで、再生、診断、予防、処置または予後上有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって（ＰＫＣポリペプチドに特異的に相互作用する（例えば、阻害または抑制する）因子による）、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０７９６】
好ましい実施形態において、本発明において使用されるＰＫＣは、ＰＫＣαであり得る。
【０７９７】
１つの実施形態において、この因子は、（ａ）配列番号２６に記載の核酸配列のヌクレオチドもしくはそのフラグメントによってコードされる、ポリペプチド；（ｂ）配列番号２７に記載のアミノ酸配列のアミノ酸もしくはそのフラグメントを有する、ポリペプチド；（ｃ）配列番号２７に記載のアミノ酸配列のアミノ酸において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する、改変体ポリペプチド；（ｄ）配列番号２６に記載の塩基配列のヌクレオチドのスプライス改変体もしくは対立遺伝子改変体によってコードされる、ポリペプチド；（ｅ）配列番号２７に記載のアミノ酸配列のアミノ酸を有するポリペプチドの、種相同体ポリペプチド；または（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリペプチドのアミノ酸配列に対する同一性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列からなり、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチドに対して特異的に相互作用する、因子であり得る。
【０７９８】
１つの好ましい実施形態において、上記（ｂ）における置換、付加および欠失の数は限定されていてもよく、例えば、５０以下、４０以下、３０以下、２０以下、１５以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下であることが好ましい。より少ない数の置換、付加および欠失が好ましいが、生物学的活性を保持する（好ましくは、ＰＫＣ遺伝子産物と類似するかまたは実質的に同一の活性を有する）限り、多い数であってもよい。
【０７９９】
別の好ましい実施形態において、上記（ｃ）における対立遺伝子変異体は、配列番号４に示すアミノ酸配列と少なくとも９９％の相同性を有することが好ましい。
【０８００】
別の好ましい実施形態において、上記種相同体は、本明細書中上述のように同定することができ、配列番号２７に示すアミノ酸配列と少なくとも約３０％の相同性を有することが好ましい。好ましくは、種相同体は、上記基準配列と、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、相同であり得る。
【０８０１】
別の好ましい実施形態において、上記（ｅ）における上記改変体ポリペプチドが有する生物学的活性としては、例えば、配列番号２７に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントに対して特異的な抗体との相互作用、ｐ７５ポリペプチドとの相互作用などが挙げられるがそれらに限定されない。
【０８０２】
好ましい実施形態において、上記（ａ）〜（ｄ）のいずれか１つのポリペプチドに対する相同性は、少なくとも約８０％であり得、より好ましくは少なくとも約９０％であり得、さらに好ましくは少なくとも約９８％であり得、もっとも好ましくは少なくとも約９９％であり得る。
【０８０３】
本発明の因子が特異的に相互作用するポリペプチドは、通常、少なくとも３の連続するアミノ酸配列を有する。本発明のポリペプチドが有するアミノ酸長は、目的とする用途に適合する限り、どれだけ短くてもよいが、好ましくは、より長い配列が使用され得る。従って、好ましくは、少なくとも４アミノ酸長、より好ましくは少なくとも５アミノ酸長、少なくとも６アミノ酸長、少なくとも７アミノ酸長、少なくとも８アミノ酸長、少なくとも９アミノ酸長、少なくとも１０アミノ酸長であってもよい。さらに好ましくは少なくとも１５アミノ酸長であり得、なお好ましくは少なくとも２０アミノ酸長であり得る。これらのアミノ酸長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明の因子が特異的に相互作用するポリペプチドは、ある因子と相互作用することができる限り、その上限の長さは、配列番号２７に示す配列の全長と同一であってもよく、それを超える長さであってもよい。
【０８０４】
好ましい実施形態において、本発明の因子は、核酸分子、ポリペプチド、脂質、糖鎖、有機低分子およびそれらの複合分子からなる群より選択される。より好ましくは、本発明の因子は、抗体またはその誘導体（例えば、単鎖抗体）である。従って、本発明の因子は、プローブおよび／またはインヒビターとして使用することができる。
【０８０５】
１つの実施形態において、ＰＫＣポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号２７のアミノ酸配列の１位〜１３８８位を含む。より好ましくは、ＰＫＣまたはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号２７のアミノ酸の全範囲からなる。
【０８０６】
１つの実施形態において、処置されるべき神経の疾患、障害または状態は、本明細書において他の場所において記載されており、例えば、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷などを含む。好ましくは、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、アルツハイマー病であり得る。別の好ましい実施形態では、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷であり得る。
【０８０７】
（ＰＫＣポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子）
１つの局面において、本発明は、ＰＫＣポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子を含む神経を再生するための組成物、およびＰＫＣポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子を含む神経疾患、神経障害または神経の状態の、処置、予防、診断または予後のための組成物を提供する。ここで、再生、診断、予防、処置または予後上有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって（ＰＫＣポリペプチドに特異的に相互作用する因子による）、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０８０８】
１つの実施形態において、この因子は、（ａ）配列番号２６に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有するポリヌクレオチド；（ｂ）配列番号２７に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド；（ｃ）配列番号２７に記載のアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有する改変体ポリペプチドであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；（ｄ）配列番号２６に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体である、ポリヌクレオチド；（ｅ）配列番号２７に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドの種相同体をコードする、ポリヌクレオチド；（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェント条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；および（ｇ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、と特異的に相互作用する、因子であり得る。
【０８０９】
１つの好ましい実施形態において、上記（ｃ）における置換、付加および欠失の数は、限定され、例えば、５０以下、４０以下、３０以下、２０以下、１５以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下であることが好ましい。より少ない数の置換、付加および欠失が好ましいが、生物学的活性を保持する（好ましくは、ＰＫＣ遺伝子産物と類似するかまたは実質的に同一の活性を有する）限り、多い数であってもよい。
【０８１０】
別の好ましい実施形態において、上記改変体ポリペプチドが有する生物学的活性としては、例えば、配列番号２７に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントに対して特異的な抗体との相互作用、ｐ７５との相互作用、ｐ７５によるＰＫＣの機能調節の調節などが挙げられるがそれらに限定されない。これらの活性は例えば、免疫学的アッセイ、リン酸化定量などによって測定することができる。
【０８１１】
別の好ましい実施形態において、上記（ｃ）に記載の対立遺伝子変異体は、配列番号２６に示す核酸配列と少なくとも９９％の相同性を有することが有利である。
【０８１２】
上記種相同体は、その種の遺伝子配列データベースが存在する場合、そのデータベースに対して、本発明のＰＫＣをクエリ配列として検索することによって同定することができる。あるいは、本発明のＰＫＣの全部または一部をプローブまたはプライマーとして、その種の遺伝子ライブラリーをスクリーニングすることによって同定することができる。そのような同定方法は、当該分野において周知であり、本明細書において記載される文献にも記載されている。種相同体は、例えば、配列番号２６に示す核酸配列と少なくとも約３０％の相同性を有することが好ましい。好ましくは、種相同体は、上記基準配列と、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、相同であり得る。
【０８１３】
好ましい実施形態において、上記（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性は、少なくとも約８０％であり得、より好ましくは少なくとも約９０％であり得、さらに好ましくは少なくとも約９８％であり得、もっとも好ましくは少なくとも約９９％であり得る。
【０８１４】
好ましい実施形態において、本発明のＰＫＣをコードする核酸分子またはそのフラグメントおよび改変体は、少なくとも８の連続するヌクレオチド長であり得る。本発明の核酸分子は、本発明の使用目的によってその適切なヌクレオチド長が変動し得る。より好ましくは、本発明の核酸分子は、少なくとも１０の連続するヌクレオチド長であり得、さらに好ましくは少なくとも１５の連続するヌクレオチド長であり得、なお好ましくは少なくとも２０の連続するヌクレオチド長であり得る。これらのヌクレオチド長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、９、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明の核酸分子は、目的とする用途（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉ、マーカー、プライマー、プローブ、所定の因子と相互作用し得ること）として使用することができる限り、その上限の長さは、配列番号２６に示す配列の全長であってもよく、それを超える長さであってもよい。あるいは、プライマーとして使用する場合は、通常少なくとも約８のヌクレオチド長であり得、好ましくは約１０ヌクレオチド長であり得る。プローブとして使用する場合は、通常少なくとも約１５ヌクレオチド長であり得、好ましくは約１７ヌクレオチド長であり得る。
【０８１５】
１つの実施形態において、ＰＫＣポリペプチドをコードする核酸分子、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号２６の核酸配列の１位〜４１６４位を含む。より好ましくは、ＰＫＣをコードする核酸分子、またはそのフラグメントもしくは改変体は、配列番号２６の核酸配列の全範囲からなる。
【０８１６】
１つの実施形態において、処置されるべき神経の疾患、障害または状態は、本明細書において他の場所において記載されており、例えば、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷などを含む。好ましくは、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、アルツハイマー病であり得る。別の好ましい実施形態では、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷であり得る。
【０８１７】
好ましい実施形態において、本発明の因子は、核酸分子、ポリペプチド、脂質、糖鎖、有機低分子およびそれらの複合分子からなる群より選択される。
【０８１８】
好ましい実施形態では、本発明の因子は、核酸分子である。本発明の因子が核酸分子である場合、そのような核酸分子は、少なくとも８の連続するヌクレオチド長であり得る。本発明の核酸分子は、本発明の使用目的によってその適切なヌクレオチド長が変動し得る。より好ましくは、本発明の核酸分子は、少なくとも１０の連続するヌクレオチド長であり得、さらに好ましくは少なくとも１５の連続するヌクレオチド長であり得、なお好ましくは少なくとも２０の連続するヌクレオチド長であり得る。これらのヌクレオチド長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、９、１１、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．３０、など）であってもよい。本発明の核酸分子は、目的とする用途（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉ、マーカー、プライマー、プローブ、所定の因子と相互作用し得ること）として使用することができる限り、その上限の長さは、配列番号２６に示す配列の全長であってもよく、それを超える長さであってもよい。あるいは、プライマーとして使用する場合は、通常少なくとも約８のヌクレオチド長であり得、好ましくは約１０ヌクレオチド長であり得る。プローブとして使用する場合は、通常少なくとも約１５ヌクレオチド長であり得、好ましくは約１７ヌクレオチド長であり得る。
【０８１９】
従って、１つの例示的な実施形態において、本発明の因子は、上記（ａ）〜（ｇ）のいずれかのポリヌクレオチドの核酸配列に対して相補的な配列またはそれに対して少なくとも７０％の同一性を有する配列を有する核酸分子であり得る。
【０８２０】
別の例示的な実施形態において、本発明の因子は、（ａ）〜（ｇ）のいずれかのポリヌクレオチドの核酸配列に対してハイブリダイズする核酸分子であり得る。ストリンジェンシーは、高くても、中程度であっても、低くてもよく、程度は、当業者が適宜状況に応じて決定することができる。
【０８２１】
別の好ましい実施形態では、本発明の因子は、アンチセンスまたはＲＮＡｉである。ＲＮＡｉは、ｓｉＲＮＡであってもｓｈＲＮＡであってもよく、そのような例としては、例えば、約２０塩基前後（例えば、代表的には約２１〜２３塩基長）またはそれ未満の長さの二本鎖ＲＮＡであって、好ましくは、５’−リン酸、３’−ＯＨの構造を有しており、３’末端は約２塩基突出している。ｓｈＲＮＡはまた、好ましくは、３’突出末端を有し得る。二本鎖部分の長さは特に限定されないが、約１０ヌクレオチド長、より好ましくは約２０ヌクレオチド長以上であり得る。ここで、３’突出末端は、好ましくはＤＮＡであり得、より好ましくは２ヌクレオチド長のＤＮＡであり得、さらに好ましくは２〜４ヌクレオチド長のＤＮＡであり得る。
【０８２２】
（ＩＰ３を調節する因子）
１つの局面において、本発明は、ＩＰ３を調節する因子を含む、神経再生を調節するための組成物を提供する。本発明はまた、ＩＰ３を調節する因子を含む神経疾患、神経障害または神経の状態の、処置、予防、診断または予後のための組成物を提供する。ここで、再生、診断、予防、処置または予後上有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって（ＰＫＣポリペプチドに特異的に相互作用する因子による）、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０８２３】
別の好ましい実施形態において、ＩＰ３の活性化因子は、ＭＡＧ、Ｎｏｇｏまたはｐ７５あるいはその改変体またはフラグメントあるいはそれをコードする核酸分子であり得る。
【０８２４】
ＩＰ３を調節する因子の別の例としては、例えば、ＩＰ３がＧｉにより調節されることから、Ｇｉまたはそれを調節する因子が挙げられるがそれらに限定されない。
【０８２５】
ＩＰ３を調節（例えば、阻害または増強）する因子の同定は、当該分野において周知の技術を用いてスクリーニングすることができる。そのようなスクリーニングによって得られた因子もまた、本発明の範囲内にある。そのようなスクリーニングの方法としては、例えば、カルシウムの細胞内濃度変化をアッセイする方法が挙げられるがそれらに限定されない。このようなカルシウム細胞内濃度の変化は、当該分野において周知の技術を用いて測定することができる。
【０８２６】
別の好ましい実施形態において、上記因子が有する生物学的活性としては、例えば、ＩＰ３の状態の調節などが挙げられるがそれらに限定されない。これは例えば、免疫学的アッセイ、リン酸化定量などによって測定することができる。
【０８２７】
１つの実施形態において、処置されるべき神経の疾患、障害または状態は、本明細書において他の場所において記載されており、例えば、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷などを含む。好ましくは、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、アルツハイマー病であり得る。別の好ましい実施形態では、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷であり得る。
【０８２８】
好ましい実施形態において、本発明の因子は、核酸分子、ポリペプチド、脂質、糖鎖、有機低分子およびそれらの複合分子からなる群より選択される。
【０８２９】
（ＰＴＤドメインの神経再生への作用）
別の局面において、本発明は、ＴＡＴ  ＰＴＤドメインおよび神経再生因子を含む、神経を再生するための組成物を提供する。ここで、ＴＡＴ  ＰＴＤドメインは、代表的に、ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号２０）で示されるアミノ酸配列またはその改変体（例えば、１または数個のアミノ酸の置換、付加および／または欠失）が挙げられるがそれに限定されない。本発明の組成物において使用される神経再生因子は、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントから選択され得るがそれに限定されない。
【０８３０】
したがって、別の局面において、本発明は、神経突起伸展の阻害を破壊するための組成物を提供する。
【０８３１】
（ＰＴＤドメインの神経再生医薬または補助剤としての利用）
別の局面において、本発明は、ＰＴＤドメインおよび神経再生因子を含む、神経を再生するための組成物を提供する。ＰＴＤドメインは、タンパク質の細胞内導入を促す作用を有し、細胞内に導入することが困難な分子の細胞内への導入に用いられているが、神経再生に用いられたことはなかった。したがって、本発明はまた、ＰＴＤドメインの新規用途（すなわち、神経再生組成物の改良剤）を提供する。このようなＰＴＤは、代表的に、ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号２０）で示されるアミノ酸配列またはその改変体もしくはフラグメントを含むが、それに限定されない。
【０８３２】
本発明のＰＴＤドメインを用いる神経再生組成物において含有される神経再生因子は、どのようなものであってもよいが、好ましくは、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子であり得る。このような因子は、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、抗体、アンチセンス、ＲＮＡｉなどであってもよいが、それに限定されない。
【０８３３】
別の好ましい実施形態において、本発明のＰＴＤドメインを用いる神経再生組成物において含有される神経再生因子は、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子もしくはその改変体もしくはフラグメント、またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子に対して特異的に相互作用する因子などであり得るがそれに限定されない。このような改変体およびフラグメントは好ましくは、もとの伝達因子と機能的に同等であるか少なくとも１つの機能を保持していることが有利である場合があるが、それに限定されず、所望により、機能を除去されていることが好ましくあり得る。
【０８３４】
別の好ましい実施形態において、本発明のＰＴＤドメインを用いる神経再生組成物においてｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子は、ＭＡＧ、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子を含む。より好ましくは、細胞内において作用する因子であることが有利である。そのような細胞内で作用する因子としては、例えば、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、Ｒｈｏキナーゼが挙げられるがそれに限定されない。そのようなＲｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、Ｒｈｏキナーゼの阻害因子としては、例えば、ｐ２１またはその改変体もしくはフラグメント、Ｐｅｐ５またはその改変体もしくはフラグメントが挙げられるがそれらに限定されない。このような因子とＰＴＤドメインとを組み合わせることで、本発明において初めて見出された神経再生効果が顕著に増強されることが明らかになった。このような効果は、従来見出されておらず、驚くべき効果といえる。
【０８３５】
別の好ましい実施形態において、本発明のＰＴＤドメインを用いる神経再生組成物において、神経再生因子は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用の阻害、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の阻害、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の維持または強化、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏＧＴＰへの変換阻害、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用の阻害およびＲｈｏキナーゼの活性阻害からなる群より選択される少なくとも１つの作用を有し得る。このような作用は、関連する２つまたはそれを超える分子を調製し、それらと本発明の組成物とを接触させ、相互作用すべき分子の相互作用に変化があるかどうかを判定することによってみることができる。
【０８３６】
別の好ましい実施形態において、本発明のＰＴＤドメインを用いる神経再生組成物において、神経再生因子は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用を抑制または消失する因子、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用を抑制または消失する因子、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を維持または強化する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換を阻害する因子、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用を阻害する因子、およびＲｈｏキナーゼの活性を阻害する因子からなる群より選択される少なくとも１つの因子を含み得る。このような因子は、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、低分子、抗体、ＲＮＡｉ、アンチセンスなどであり得るがそれらに限定されない。このような因子の詳細な説明は、本明細書の他の場所に記載されている。
【０８３７】
別の好ましい実施形態において、本発明のＰＴＤドメインを用いる神経再生組成物において、神経再生因子は、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される因子を含み得る。このような因子は、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、低分子、抗体、ＲＮＡｉ、アンチセンスなどであり得るがそれらに限定されない。このような因子の詳細な説明は、本明細書の他の場所に記載されている。
【０８３８】
別の好ましい実施形態において、ＰＴＤドメインは、ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲまたはその１または数個の置換、付加および／もしくは欠失を含むアミノ酸配列を有していてもよい。この場合、このような置換、付加および／もしくは欠失によって、細胞質への導入活性が失われていないことが好ましい。そのような導入活性は、このドメインを含むポリペプチドをコードする核酸分子で形質転換した細胞内で所望のポリペプチドがどこで発現されるかを判定することによって見出すことができる。
【０８３９】
好ましい実施形態において、ＰＴＤドメインは、前記神経再生因子のＣ末端側またはＮ末端側などに配置されることが有利であり得る。このような場所に配置されることによって、神経再生因子の活性を損なうことなく、所望の活性（すなわち、細胞質内への導入）が行うことができるからである。したがって、好ましくは、本発明のＰＴＤを用いた神経再生組成物において含有される神経再生因子は、細胞質に留まり得る。留まり得る時間としては、例えば、少なくとも数時間もしくは数日または数ヶ月に及び得るが、本発明では、神経再生の効果が発揮される限り、どのように短いまたは長い期間でもそのような組成物を用いることができる。本明細書においてある因子が細胞質に留まり得るかどうかを判定する方法は、当該分野において周知の技術を用いて行うことができ、例えば、細胞の細胞質とその他の成分とに分離し（例えば、細胞破壊の後遠心分離）細胞質に目的とする因子が存在するか否かを確認すること、あるいは、細胞を生きたまま観察し、目的とする因子に起因するシグナルを直接的または間接的（例えば、抗体などを使用する）に視覚化または他の検知手段（例えば、電気的検出手段）によって検出することによって達成され得る。
【０８４０】
（ＰＴＤの核酸形態の神経再生医薬または補助剤としての利用）
別の局面において、本発明は、ＰＴＤドメインおよび神経再生因子であって核酸形態のものを含む、神経を再生するための組成物を提供する。したがって、本発明は、ＰＴＤドメインをコードする核酸配列および神経再生因子をコードする核酸配列を有する核酸分子を含む、神経を再生するための組成物を提供する。このような核酸分子は、上述したタンパク質分子同様、改善された神経再生効果を達成した。したがって、本発明のこの形態もまた、予想外の驚くべき効果を達成することができる。本発明はまた、ＰＴＤドメインをコードする核酸分子の新規用途（すなわち、神経再生組成物の改良剤）を提供する。このようなＰＴＤは、代表的に、ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号２０）で示されるアミノ酸配列をコードする核酸配列またはその改変体もしくはフラグメントを含むが、それに限定されない。あるいは、そのような核酸分子は、ＨＩＶ  ＴＡＴの核酸配列（配列番号２１）に由来してもよい。
【０８４１】
本発明のＰＴＤドメインをコードする核酸配列を用いる神経再生組成物において含有される神経再生因子をコードする核酸配列は、どのようなものであってもよいが、好ましくは、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する神経再生因子をコードすることが有利であり得る。
【０８４２】
本発明のＰＴＤドメインをコードする核酸配列を用いる神経再生組成物において含有される神経再生因子をコードする核酸配列は、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子もしくはその改変体もしくはフラグメント、またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子に対して特異的に相互作用する因子をコードすることが好ましい。このような因子は、ポリペプチド、抗体などであり得るがそれらに限定されない。このような因子の詳細な説明は、本明細書の他の場所に記載されている。
【０８４３】
本発明のＰＴＤドメインをコードする核酸配列を用いる神経再生組成物において、標的とされるｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子は、ＭＡＧ、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子を含み得る。ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子とＰＴＤドメインとを組み合わせることで、本発明において初めて見出された神経再生効果が顕著に増強されることが明らかになった。このような効果は、従来見出されておらず、驚くべき効果といえる。
【０８４４】
本発明のＰＴＤドメインをコードする核酸配列を用いる神経再生組成物において用いられる神経再生因子は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用の阻害、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の阻害、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の維持または強化、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換阻害、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用の阻害およびＲｈｏキナーゼの活性阻害からなる群より選択される少なくとも１つの作用を有し得る。このような作用は、関連する２つまたはそれを超える分子を調製し、それらと本発明の組成物に含まれるべき神経再生因子をコードする核酸分子を発現させたものとを接触させ、相互作用すべき分子の相互作用に変化があるかどうかを判定することによってみることができる。
【０８４５】
本発明のＰＴＤドメインをコードする核酸配列を用いる神経再生組成物において用いられる神経再生因子は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用を抑制または消失する因子、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用を抑制または消失する因子、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を維持または強化する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換を阻害する因子、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用を阻害する因子、およびＲｈｏキナーゼの活性を阻害する因子からなる群より選択される少なくとも１つの因子を含む。このような因子は、ＰＴＤと連結可能であることが有利である。
【０８４６】
本発明のＰＴＤドメインをコードする核酸配列を用いる神経再生組成物において用いられる神経再生因子は、Ｐｅｐ５ポリペプチド、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される因子を含む。このような因子は、ＰＴＤと連結可能であることが有利である。
【０８４７】
本発明のＰＴＤドメインをコードする核酸配列を用いる神経再生組成物において、ＰＴＤドメインは、ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲまたはその１または数個の置換、付加および／もしくは欠失を含むアミノ酸配列を有し得る。
【０８４８】
本発明のＰＴＤドメインをコードする核酸配列を用いる神経再生組成物において、ＰＴＤドメインは、前記神経再生因子のＣ末端側、Ｎ末端側（すなわち、核酸配列の３’末端、５’末端）などに配置されることが有利であり得る。このような場所に配置されることによって、神経再生因子の活性を損なうことなく、所望の活性（すなわち、細胞質内への導入）が行うことができるからである。したがって、好ましくは、本発明のＰＴＤを用いた神経再生組成物において含有される神経再生因子は、細胞質に留まり得る。留まり得る時間としては、例えば、少なくとも数時間もしくは数日または数ヶ月に及び得るが、本発明では、神経再生の効果が発揮される限り、どのように短いまたは長い期間でも組成物を用いることができる。
【０８４９】
（ＰＫＣとＩＰ３とのバランスを調節することによる神経再生の調節）
１つの局面において、本発明は、神経の再生を調節（例えば、増強、維持または抑制）する方法であって、ｐ７５シグナル伝達経路を調節する工程を含む、方法、および神経の再生を調節するための組成物であって、ｐ７５シグナル伝達経路を調節（例えば、増強、維持または抑制）する因子を含む、組成物を提供する。これらの再生方法を用いて、神経疾患、神経障害または神経の状態の、処置、予防、診断または予後のための組成物を提供する。ここで、再生、診断、予防、処置または予後上有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。
【０８５０】
別の局面において、本発明は、神経障害および／または神経の状態を、処置、予防、診断または予後する方法であって、該処置、予防、診断または予後を必要とするかまたはそのことが予想される被検体において、ｐ７５シグナル伝達経路を調節する工程を含む、方法、ならびに神経疾患、神経障害および／または神経の状態を、処置、予防、診断または予後するための組成物であって、ｐ７５シグナル伝達経路を調節する因子を含む、組成物を提供する。ここで、再生、診断、予防、処置または予後上有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。
【０８５１】
１つの実施形態において、本発明は、ＰＫＣおよびＩＰ３からなる群より選択される少なくとも１つの因子を調節する工程を包含することが好ましい。本発明では、ｐ７５シグナル伝達経路の状態が、予想外にＰＫＣとＩＰ３とのバランスを調節することによっても調節され得ることが判明したことにより、神経再生もまたＰＫＣとＩＰ３とのバランスを調節することを行うことによって調節され得ることを実証した（例えば、ＰＫＣポリペプチドに特異的に相互作用する因子、ＩＰ３調節因子により、例えば、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった）。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０８５２】
より好ましくは、本発明は、ＰＫＣおよびＩＰ３の両方の因子を調節する因子をさらに包含する。両方を調節することによって、より詳細なあるいは正確な調節を行うことができ、バランス調節を行うことができるからである。
【０８５３】
好ましい実施形態では、本発明は、ＰＫＣを阻害する工程を包含し得る。ＰＫＣを阻害することによって神経再生が促進されることが予想外に判明した。
【０８５４】
好ましい実施形態では、本発明は、ＩＰ３を活性化する工程を包含し得る。ＩＰ３を活性化することによって神経再生が促進されることが予想外に判明した。
【０８５５】
ここで、上記ｐ７５シグナル伝達経路の調節は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子の調節を含む。好ましくは、ＰＫＣおよびＩＰ３と他の伝達因子との組み合わせを用いることが有利であり得るがそれに限定されない。
【０８５６】
１つの好ましい実施形態では、ｐ７５シグナル伝達経路の調節は、ＲｈｏＡの調節を含む。ＲｈｏＡの調節がＰＫＣとＩＰ３とのバランスを調節することによって影響を受けることが判明したからである。
【０８５７】
別の好ましい実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路の調節は、ＲｈｏＡの活性化およびＰＫＣの阻害を含み、前記再生の調節は再生の活性化である。あるいは、ＲｈｏＡの活性化はＩＰ３の活性化と組み合わせられ得る。さらに好ましくは、ＲｈｏＡの活性化が、ＰＫＣの阻害およびＩＰ３の活性化と組み合わせられ得る。このような組み合わせによって、神経再生が顕著に促進される。
【０８５８】
好ましい実施形態において、ＰＫＣの調節因子は、ＭＡＧ、Ｎｏｇｏ、ｐ７５、ＰＬＣおよびＧｉからなる群より選択される。より好ましくは、ＰＫＣの調節因子は、ＭＡＧ、Ｎｏｇｏまたはｐ７５であり得る。
【０８５９】
好ましい実施形態において、前記ＩＰ３の調節因子は、ＭＡＧ、Ｎｏｇｏ、ｐ７５、ＰＬＣおよびＧｉからなる群より選択される。より好ましくは、ＩＰ３の調節因子は、ＭＡＧ、Ｎｏｇｏまたはｐ７５であり得る。
【０８６０】
このようなＰＫＣおよびＩＰ３の調節因子は、既存のものを利用してもよく、スクリーニングなどによって新規に合成したものを用いてもよい。
【０８６１】
別の実施形態において、本発明の神経の再生は、インビボまたはインビトロで行われる。
【０８６２】
１つの実施形態において、処置されるべき神経の疾患、障害または状態は、本明細書において他の場所において記載されており、例えば、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷などを含む。好ましくは、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、アルツハイマー病であり得る。別の好ましい実施形態では、本発明の組成物が対象とする神経の疾患、障害または状態は、脊髄損傷、脳血管障害、脳外傷であり得る。
【０８６３】
好ましい実施形態において、本発明の因子は、核酸分子、ポリペプチド、脂質、糖鎖、有機低分子およびそれらの複合分子からなる群より選択される。
【０８６４】
このような因子は、ＰＴＤドメインに結合していてもよいがそれに限定されない。
【０８６５】
（神経再生法）
別の局面において、本発明は、神経を再生するための方法を提供する。この方法は、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する工程を含む。本発明では、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害することによって神経が再生することが見出されたのは、従来の技術から予測されていなかったことであり、予想外の効果といえる。したがって、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害することによる神経再生機構を用いて、種々の処置を行うことができ、そのような処置としては、神経疾患、障害または異常状態の処置、予防、診断、予後などが挙げられるがそれらに限定されない。
【０８６６】
好ましくは、ｐ７５シグナル伝達経路は、神経再生が所望される部位における神経細胞のものであり、対象となる神経細胞におけるｐ７５シグナル伝達経路が阻害または抑制されることによって、神経遮断が減少または阻害（破壊）され、所望の場所において有利に神経再生を生じさせることができる。
【０８６７】
１つの実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路の阻害は、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子もしくはその改変体もしくはフラグメント（好ましくは、このような改変体もしくはフラグメントはその伝達因子と同様の機能を有する）、またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子に対して特異的に相互作用する因子を再生に有効な量で提供することによって達成され得る。
【０８６８】
別の実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子を含むがそれに限定されない。このような伝達因子を阻害または抑制する方法としては、その伝達因子またはそれをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子を投与または提供する方法、その伝達因子の発現を減少、抑制または阻害する方法、その伝達因子の機能が阻害されるような変異を導入する方法などが挙げられるがそれらに限定されない。
【０８６９】
別の実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路の阻害は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用の阻害、ＰＫＣの阻害、ＩＰ３の活性化、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の阻害、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の維持または強化、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換阻害、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用の阻害およびＲｈｏキナーゼの活性阻害からなる群より選択され得るがそれに限定されない。ここで、相互作用の阻害は、インヒビターを投与すること、特異的に相互作用する因子を提供することなどによって達成され得る。相互作用の維持または強化は、相互作用を弱める因子を排除すること、あるいは、関連する分子の量を増加させることなどによって達成され得るがそれらに限定されない。
【０８７０】
別の実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路の阻害は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用を抑制または消失する因子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用を抑制または消失する因子、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を維持または強化する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換を阻害する因子、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用を阻害する因子、およびＲｈｏキナーゼの活性を阻害する因子からなる群より選択される少なくとも１つの因子を再生に有効な量で提供することによって達成され得る。
【０８７１】
本発明の神経再生法において、神経の再生は、インビボまたはインビトロで行われ得る。インビボで行われる場合は、治療処置または予防所望などが体内で直接行われ得る。インビトロで行われる場合は、神経集団を調製することができる。
【０８７２】
１つの実施形態において、神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある。あるいは、処置される神経は、本明細書において列挙される任意の神経疾患、神経障害または異常状態であり得る。そのような疾患、障害または状態としては、例えば、大脳損傷、脊髄損傷、発作、脱髄疾患（単語症脱髄）、脳脊髄炎、多病巣性白質脳症、汎脳炎、マルキアファーヴァ−ビニャーミ病、海綿状変性、アレグザンダー病、キャナヴァン病、異染性白質萎縮症およびクラッベ病が挙げられるがそれらに限定されない。
【０８７３】
別の実施形態において、本発明の神経再生法におけるｐ７５シグナル伝達経路を阻害する工程は、再生に有効な量の、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される少なくとも１つの分子を含む組成物を、所望の神経に与える工程によって達成され得る。
【０８７４】
本発明の神経再生法において、神経再生を担う因子は、ＰＴＤドメインに結合して提供され得る。
【０８７５】
本発明の神経再生法において、再生に有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって（例えば、ｐ７５シグナル伝達経路の関連因子を介する）、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０８７６】
１つの実施形態では、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントは、本明細書において上記に記載されるような形態をとることができる。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。特に、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントは、複数用いることが好ましくあり得る。そのような場合、種々の組み合わせが利用され得る。好ましくは、２つ、３つあるいは４つのポリペプチド、ポリヌクレオチドおよび／または因子を用いることができる。別の好ましい実施形態では、経路上の複数の分子が阻害されることが有利であり得る。
【０８７７】
別の局面において、本発明はまた、神経を再生するための組成物を提供する。この組成物は、再生に有効な量のｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子を含む。このような組成物は、本明細書に記載されるように、当該分野において周知の技術を用いて調製されることができる。
【０８７８】
１つの実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子もしくはその改変体もしくはフラグメント（好ましくは、このような改変体もしくはフラグメントはその伝達因子と同様の機能を有する）、またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子に対して特異的に相互作用する因子であり得、この因子は、本発明の組成物において、再生に有効な量で含有される。
【０８７９】
別の実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子を含むがそれに限定されない。
【０８８０】
別の実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用の阻害、ＰＫＣの阻害、ＩＰ３の活性化、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の阻害、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の維持または強化、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換阻害、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用の阻害およびＲｈｏキナーゼの活性阻害からなる群より選択される少なくとも１つの作用を有し得る。
【０８８１】
別の実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用を抑制または消失する因子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用を抑制または消失する因子、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を維持または強化する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換を阻害する因子、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用を阻害する因子、およびＲｈｏキナーゼの活性を阻害する因子からなる群より選択される少なくとも１つの因子であり得る。このような因子は、再生に有効な量で含有され得る。
【０８８２】
別の実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、再生に有効な量の、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される少なくとも１つの分子を含む。ここで、再生に有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。
【０８８３】
別の実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、診断、予防、処置または予後上有効な量の、診断、予防、処置または予後に有効な量の、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される少なくとも１つの分子を含む。ここで、診断、予防、処置または予後上有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。
【０８８４】
別の局面において、本発明は、神経を再生するための組成物を提供し、この組成物は、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントから選択される複数のエレメントを含み得る。この場合、種々の組み合わせが利用され得る。好ましくは、２つ、３つあるいは４つのポリペプチド、ポリヌクレオチドおよび／または因子を用いることができる。別の好ましい実施形態では、経路上の複数の分子を阻害する物質を使用することが有利であり得る。
【０８８５】
本発明の組成物において使用される因子は、ＰＴＤドメインを含んでいてもよい。
【０８８６】
本発明はまた、上述の組成物を備える、神経再生キットにも関する。このようなキットは、本発明の組成物のほか、投与方法を記載した指示書を備え得る。このような指示書は、本明細書の他の場所において記載されている。
【０８８７】
本発明はまた、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子の、神経再生医薬の製造のための使用に関する。
【０８８８】
（神経学的疾患、障害または状態の診断、予防、処置または予後）
別の局面において、本発明は、神経学的疾患、障害または状態の診断、予防、処置または予後のための方法を提供する。この方法は、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する工程を含む。本発明では、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害することによって神経学的疾患、障害または状態の診断、予防、処置または予後に用いることができることが見出されたのは、従来の技術から予測されていなかったことであり、予想外の効果といえる。
【０８８９】
好ましくは、ｐ７５シグナル伝達経路は、神経学的疾患、障害または状態の診断、予防、処置または予後が所望される部位における神経細胞のものであり、対象となる神経細胞におけるｐ７５シグナル伝達経路が阻害または抑制されることによって、神経遮断が減少または阻害（破壊）され、所望の場所において有利に神経再生を生じさせることができる。
【０８９０】
１つの実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路の阻害は、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子もしくはその改変体もしくはフラグメント（好ましくは、このような改変体もしくはフラグメントはその伝達因子と同様の機能を有する）、またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子に対して特異的に相互作用する因子を再生に有効な量で提供することによって達成され得る。
【０８９１】
別の実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子を含むがそれに限定されない。このような伝達因子を阻害または抑制する方法としては、その伝達因子またはそれをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子を投与または提供する方法、その伝達因子の発現を減少、抑制または阻害する方法、その伝達因子の機能が阻害されるような変異を導入する方法などが挙げられるがそれらに限定されない。
【０８９２】
別の実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路の阻害は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用の阻害、ＰＫＣの阻害、ＩＰ３の活性化、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の阻害、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の維持または強化、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換阻害、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用の阻害およびＲｈｏキナーゼの活性阻害からなる群より選択され得るがそれに限定されない。ここで、相互作用の阻害は、インヒビターを投与すること、特異的に相互作用する因子を提供することなどによって達成され得る。相互作用の維持または強化は、相互作用を弱める因子を排除すること、あるいは、関連する分子の量を増加させることなどによって達成され得るがそれらに限定されない。
【０８９３】
別の実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路の阻害は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用を抑制または消失する因子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用を抑制または消失する因子、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を維持または強化する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換を阻害する因子、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用を阻害する因子、およびＲｈｏキナーゼの活性を阻害する因子からなる群より選択される少なくとも１つの因子を再生に有効な量で提供することによって達成され得る。
【０８９４】
本発明の神経学的疾患、障害または状態の診断、予防、処置または予後のための方法において、神経の再生は、インビボまたはエキソビボで行われ得る。インビボで行われる場合は、治療処置または予防所望などが体内で直接行われ得る。エキソビボで行われる場合は、神経集団を調製し、その集団を患者または被検体に対して調製することができる。
【０８９５】
１つの実施形態において、神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある。あるいは処置され得る神経疾患、障害または状態は、本明細書において列挙される任意の神経疾患、神経障害または異常状態であり得る。そのような疾患、障害または状態としては、例えば、大脳損傷、脊髄損傷、発作、脱髄疾患（単語症脱髄）、脳脊髄炎、多病巣性白質脳症、汎脳炎、マルキアファーヴァ−ビニャーミ病、海綿状変性、アレグザンダー病、キャナヴァン病、異染性白質萎縮症およびクラッベ病が挙げられるがそれらに限定されない。
【０８９６】
別の実施形態において、神経学的疾患、障害または状態の診断、予防、処置または予後のための方法におけるｐ７５シグナル伝達経路を阻害する工程は、再生に有効な量の、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される少なくとも１つの分子を含む組成物を、所望の神経に与える工程によって達成され得る。
【０８９７】
本発明の神経学的疾患、障害または状態の診断、予防、処置または予後のための方法において、神経再生を担う因子は、ＰＴＤドメインに結合して提供され得る。
【０８９８】
１つの実施形態において、本発明の神経学的疾患、障害または状態の診断、予防、処置または予後のための方法は、再生に有効な量の、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される少なくとも１つの分子を含む組成物を所望の神経に与える工程、を包含する。ここで、再生に有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって（例えば、ｐ７５シグナル伝達経路の関連因子により）、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０８９９】
１つの実施形態では、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントは、本明細書において上記に記載されるような形態をとることができる。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。特に、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントは、組み合わせて用いられ得る。そのような場合、種々の組み合わせが利用され得る。好ましくは、２つ、３つあるいは４つのポリペプチド、ポリヌクレオチドおよび／または因子を用いることができる。別の好ましい実施形態では、経路上の複数の分子が阻害されることが有利であり得る。
【０９００】
別の局面において、神経学的疾患、障害または状態の診断、予防、処置または予後のための組成物を提供する。この組成物は、診断、予防、処置または予後に有効な量のｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子を含む。このような組成物は、本明細書に記載されるように、当該分野において周知の技術を用いて調製することができる。
【０９０１】
１つの実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子もしくはその改変体もしくはフラグメント（好ましくは、このような改変体もしくはフラグメントはその伝達因子と同様の機能を有する）、またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子に対して特異的に相互作用する因子であり得、この因子は、本発明の組成物において、再生に有効な量で含有される。
【０９０２】
別の実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子を含むがそれに限定されない。
【０９０３】
別の実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用の阻害、ＰＫＣの阻害、ＩＰ３の活性化、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の阻害、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の維持または強化、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換阻害、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用の阻害およびＲｈｏキナーゼの活性阻害からなる群より選択される少なくとも１つの作用を有し得る。
【０９０４】
別の実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用を抑制または消失する因子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用を抑制または消失する因子、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を維持または強化する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換を阻害する因子、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用を阻害する因子、およびＲｈｏキナーゼの活性を阻害する因子からなる群より選択される少なくとも１つの因子であり得る。このような因子は、診断、予防、処置または予後に有効な量で含有され得る。
【０９０５】
別の実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、診断、予防、処置または予後に有効な量の、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される少なくとも１つの分子を含む。ここで、診断、予防、処置または予後上有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。
【０９０６】
別の好ましい実施形態では、本発明はまた、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントから選択されるエレメントを複数含む、神経学的疾患、障害または状態の診断、予防、処置または予後のための組成物を提供する。この場合、種々の組み合わせが利用され得る。好ましくは、２つ、３つあるいは４つのポリペプチド、ポリヌクレオチドおよび／または因子を用いることができる。別の好ましい実施形態では、経路上の複数の分子を阻害する物質を使用することが有利であり得る。
【０９０７】
本発明の組成物において使用される因子は、ＰＴＤドメインを含んでいてもよい。
【０９０８】
本発明はまた、上述の組成物を備える、神経学的疾患、障害または状態の診断、予防、処置または予後のためのキットにも関する。このようなキットは、本発明の組成物のほか、投与方法を記載した指示書を備え得る。このような指示書は、本明細書の他の場所において記載されている。
【０９０９】
本発明はまた、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子の、神経学的疾患、障害または状態の診断、予防、処置または予後のための医薬の製造のための使用に関する。
【０９１０】
（神経突起伸展の阻害を破壊または減少する方法）
別の局面において、本発明は、神経突起伸展の阻害を破壊または減少する方法を提供する。この方法は、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する工程を含む。本発明では、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害することによって神経突起伸展の阻害を破壊または減少することができることが見出されたのは、従来の技術から予測されていなかったことであり、予想外の効果といえる。
【０９１１】
好ましくは、ｐ７５シグナル伝達経路は、神経突起伸展の阻害の破壊または減少が所望される部位における神経細胞のものであり、対象となる神経細胞におけるｐ７５シグナル伝達経路が阻害または抑制されることによって、神経遮断が減少または阻害（破壊）され、所望の場所において有利に神経突起伸展の阻害の破壊または減少を生じさせることができる。
【０９１２】
１つの実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路の阻害は、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子もしくはその改変体もしくはフラグメント（好ましくは、このような改変体もしくはフラグメントはその伝達因子と同様の機能を有する）、またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子に対して特異的に相互作用する因子を再生に有効な量で提供することによって達成され得る。
【０９１３】
別の実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子を含むがそれに限定されない。このような伝達因子を阻害または抑制する方法としては、その伝達因子またはそれをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子を投与または提供する方法、その伝達因子の発現を減少、抑制または阻害する方法、その伝達因子の機能が阻害されるような変異を導入する方法などが挙げられるがそれらに限定されない。
【０９１４】
別の実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路の阻害は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用の阻害、ＰＫＣの阻害、ＩＰ３の活性化、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の阻害、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の維持または強化、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換阻害、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用の阻害およびＲｈｏキナーゼの活性阻害からなる群より選択され得るがそれに限定されない。ここで、相互作用の阻害は、インヒビターを投与すること、特異的に相互作用する因子を提供することなどによって達成され得る。相互作用の維持または強化は、相互作用を弱める因子を排除すること、あるいは、関連する分子の量を増加させることなどによって達成され得るがそれらに限定されない。
【０９１５】
別の実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路の阻害は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用を抑制または消失する因子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用を抑制または消失する因子、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を維持または強化する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換を阻害する因子、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用を阻害する因子、およびＲｈｏキナーゼの活性を阻害する因子からなる群より選択される少なくとも１つの因子を再生に有効な量で提供することによって達成され得る。
【０９１６】
本発明の神経突起伸展の阻害を破壊または減少する方法において、神経の再生は、インビボまたはエキソビボで行われ得る。インビボで行われる場合は、治療処置または予防所望などが体内で直接行われ得る。エキソビボで行われる場合は、神経集団を調製し、その集団を患者または被検体に対して調製することができる。
【０９１７】
１つの実施形態において、神経は、脊髄損傷、脳血管障害または脳外傷を含む状態にある。処置され得る神経疾患、障害または状態は、本明細書において列挙される任意の神経疾患、神経障害または異常状態であり得る。そのような疾患、障害または状態としては、例えば、大脳損傷、脊髄損傷、発作、脱髄疾患（単語症脱髄）、脳脊髄炎、多病巣性白質脳症、汎脳炎、マルキアファーヴァ−ビニャーミ病、海綿状変性、アレグザンダー病、キャナヴァン病、異染性白質萎縮症およびクラッベ病が挙げられるがそれらに限定されない。
【０９１８】
別の実施形態において、神経突起伸展の阻害を破壊または減少する方法におけるｐ７５シグナル伝達経路を阻害する工程は、再生に有効な量の、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される少なくとも１つの分子を含む組成物を、所望の神経に与える工程によって達成され得る。
【０９１９】
本発明の神経突起伸展の阻害を破壊または減少する方法において、神経再生を担う因子は、ＰＴＤドメインに結合して提供され得る。
【０９２０】
１つの実施形態において、本発明の神経突起伸展の阻害を破壊または減少する方法は、再生に有効な量の、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される少なくとも１つの分子を含む組成物を所望の神経に与える工程、を包含する。ここで、再生に有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる（神経内科治療ガイド、小川紀雄著、中外医学社  １９９４を参照）。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって（例えば、ｐ７５シグナル伝達経路の関連因子により）、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０９２１】
１つの実施形態では、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントは、本明細書において上記に記載されるような形態をとることができる。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。特に、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントは、好ましくは、組み合わせて用いられ得る。そのような場合、種々の組み合わせが利用され得る。好ましくは、２つ、３つあるいは４つのポリペプチド、ポリヌクレオチドおよび／または因子を用いることができる。別の好ましい実施形態では、経路上の複数の分子が阻害されることが有利であり得る。
【０９２２】
別の局面において、本発明は、神経突起伸展の阻害を破壊または減少するための組成物を提供する。この組成物は、再生に有効な量のｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子を含む。このような組成物は、本明細書に記載されるように、当該分野において周知の技術を用いて調製されることができる。
【０９２３】
１つの実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子もしくはその改変体もしくはフラグメント（好ましくは、このような改変体もしくはフラグメントはその伝達因子と同様の機能を有する）、またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子に対して特異的に相互作用する因子であり得、この因子は、本発明の組成物において、再生に有効な量で含有される。
【０９２４】
別の実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子を含むがそれに限定されない。
【０９２５】
別の実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用の阻害、ＰＫＣの阻害、ＩＰ３の活性化、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の阻害、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の維持または強化、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換阻害、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用の阻害およびＲｈｏキナーゼの活性阻害からなる群より選択される少なくとも１つの作用を有し得る。
【０９２６】
別の実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用を抑制または消失する因子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を抑制または消失する因子、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用を抑制または消失する因子、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用を維持または強化する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換を阻害する因子、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用を阻害する因子、およびＲｈｏキナーゼの活性を阻害する因子からなる群より選択される少なくとも１つの因子であり得る。このような因子は、神経突起伸展の阻害を破壊または減少するに有効な量で含有され得る。
【０９２７】
別の実施形態において、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子は、神経突起伸展の阻害を破壊または減少するに有効な量の、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される少なくとも１つの分子を含む。ここで、神経突起伸展の阻害を破壊または減少するに有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。
【０９２８】
別の好ましい実施形態では、本発明はまた、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントから選択されるエレメントを複数含む、神経突起伸展の阻害を破壊または減少するための組成物を提供する。この場合、種々の組み合わせが利用され得る。好ましくは、２つ、３つあるいは４つのポリペプチド、ポリヌクレオチドおよび／または因子を用いることができる。別の好ましい実施形態では、経路上の複数の分子を阻害する物質を使用することが有利であり得る。
【０９２９】
本発明の組成物において使用される因子は、ＰＴＤドメインを含んでいてもよい。
【０９３０】
本発明はまた、上述の組成物を備える、神経突起伸展の阻害を破壊または減少するするためのキットにも関する。このようなキットは、本発明の組成物のほか、投与方法を記載した指示書を備え得る。このような指示書は、本明細書の他の場所において記載されている。
【０９３１】
本発明はまた、ｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子の、神経突起伸展の阻害を破壊または減少する医薬の製造のための使用に関する。
【０９３２】
（神経細胞のネットワーク構築）
本発明はまた、別の局面において、神経細胞のネットワークの構築のための組成物および方法を提供する。この組成物および方法において、神経細胞におけるｐ７５シグナル伝達経路を阻害する因子が包含されるか、または神経細胞におけるｐ７５シグナル伝達経路を阻害する工程が包含される。
【０９３３】
ここで、神経細胞のネットワークの構築とは、複数の神経細胞の間で、有機的または情報が移転されるように神経細胞同士が連結されることをいう。そのようなネットワークを形成した神経細胞は、神経細胞集団ともいう。そのようなネットワークを形成した神経細胞としては、例えば、シナプスにより相互に連結した神経細胞集団、脳、脊髄、末梢神経などが挙げられるがそれらに限定されない。
【０９３４】
１つの実施形態において、本発明の神経細胞のネットワークの構築のための組成物および方法において、ｐ７５シグナル伝達経路の阻害は、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子もしくはその改変体もしくはフラグメント、またはｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子に対して特異的に相互作用する因子を再生に有効な量で前記神経細胞に提供することによって達成され得る。
【０９３５】
別の実施形態において、本発明の神経細胞のネットワークの構築のための組成物および方法において、ｐ７５シグナル伝達経路における伝達因子は、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子を含み得る。
【０９３６】
別の実施形態において、本発明の神経細胞のネットワークの構築のための組成物および方法において、ｐ７５シグナル伝達経路の阻害は、ＭＡＧとＧＴ１ｂとの相互作用の阻害、ＰＫＣの阻害、ＩＰ３の活性化、ＧＴ１ｂとｐ７５との相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏとの相互作用の阻害、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の阻害、ＲｈｏとＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用の維持または強化、Ｒｈｏ  ＧＤＰからＲｈｏ  ＧＴＰへの変換阻害、ＲｈｏとＲｈｏキナーゼとの相互作用の阻害およびＲｈｏキナーゼの活性阻害からなる群より選択される相互作用の調節によって達成され得る。
【０９３７】
この神経細胞のネットワークの構築のための組成物は、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される少なくとも１つの分子を含む。ここで、神経ネットワーク構築に有効な量は、当該分野において周知の技法を用いて当業者が種々のパラメータを参酌しながら決定することができ、そのような量を決定するためには、例えば、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。
【０９３８】
このようにネットワーク形成された神経細胞（集団）は、神経障害を伴う生物に移植することができる。
【０９３９】
１つの実施形態では、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントは、本明細書において上記に記載されるような形態をとることができる。本発明では、神経の再生が、ｐ７５シグナル伝達経路を遮断することによって、神経突起伸展の阻害が破壊されることによることが明らかになった。このようなシグナル伝達経路の遮断による神経再生およびネットワーク形成の効果は従来知られておらず、したがって、本発明は、従来技術より優れた効果を示す。特に、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントは、好ましくは、組み合わせて用いられ得る。そのような場合、種々の組み合わせが利用され得る。好ましくは、２つ、３つあるいは４つのポリペプチド、ポリヌクレオチドおよび／または因子を用いることができる。別の好ましい実施形態では、経路上の複数の分子が阻害されることが有利であり得る。
【０９４０】
別の局面において、本発明は、神経細胞のネットワークの構築のための方法を提供する。この方法は、ネットワークの構築に有効な量のＰｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される少なくとも１つの分子を含む組成物を神経細胞に与える工程、を包含する。
【０９４１】
（神経疾患処置キット）
別の局面において、本発明は、神経学的疾患を処置するためのキットを提供する。このキットは、（Ａ）Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される少なくとも１つの分子を含む組成物によって再生された細胞集団、（Ｂ）該細胞集団を保存するための容器を包含する。
【０９４２】
あるいは、このようなキットは、（Ａ）Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される少なくとも１つの分子を含む組成物；（Ｂ）神経細胞に分化することができる細胞、または神経細胞（Ｃ）該細胞集団を保存するための容器を包含する。
【０９４３】
上記キットは、神経細胞または神経細胞集団を必要とする疾患（神経疾患、神経障害、神経の異常状態など）の処置に有効である。得られた神経細胞および神経細胞集団は、どのような状態であってもよいが、分化状態が適合していることが好ましい。
【０９４４】
本発明のキットにおいて提供される指示書は、指示を伝えることができる限り、どのような形態をとってもよく、紙、コンピュータ読み取り可能な記録媒体（例えば、フレキシブルディスク、ＣＤ−Ｒなど）、電子メール、ＳＭＳ、ボイスメール、インスタントメッセージウェブサイトなどであり得る。
【０９４５】
別の局面において、本発明は神経学的疾患を処置するための方法を提供する。この方法は、（ａ）Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される少なくとも１つの分子を含む組成物によって再生された細胞集団を提供する工程；および（ｂ）該細胞集団を該患者に移植する工程、を包含する。
【０９４６】
このような細胞集団はまた、移植片とも呼ばれる。本明細書において「移植片」とは、通常、身体の特定部位に挿入されるべき同種または異種の組織または細胞群であって、身体への挿入後その一部となる。従来の移植片としては、例えば、臓器または臓器の一部、血管、血管様組織、皮片、心臓弁、心膜、硬膜、角膜骨片、歯などが使用されてきた。従って、移植片には、ある部分の欠損部に差し込んで欠損を補うために用いられるものすべてが包含される。移植片は、通常そのドナー（ｄｏｎｏｒ）の種類によって以下の群に分類される：自己（自家）移植片（ａｕｔｏｇｒａｆｔ）、同種移植片（同種異系移植片）（ａｌｌｏｇｒａｆｔ）、異種移植片が挙げられる。本明細書において「免疫反応」とは、移植片と宿主との間の免疫寛容の失調による反応をいい、例えば、超急性拒絶反応（移植後数分以内）（β−Ｇａｌなどの抗体による免疫反応）、急性拒絶反応（移植後約７〜２１日の細胞性免疫による反応）、慢性拒絶反応（３カ月以降の細胞性免疫による拒絶反応）などが挙げられる。本明細書において免疫反応を惹起するかどうかは、組織切片の、ＨＥ染色などを含む染色、免疫染色、検鏡によって、移植組織中への細胞（免疫系）浸潤について、その種、数などの病理組織学的検討を行うことにより判定することができる。
【０９４７】
細胞集団の提供は、本明細書において他の場所において詳述されている。細胞を患者に移植する技術もまた、当該分野において周知の技術を用いることができる。そのような方法は、標準外科学（医学書院）、新外科学大系（中山書店）などにに記載されている。本発明の移植片の移植に際しては、上述の一般的な方法において、過大な圧がかからないということに留意することが好ましくあり得る。
【０９４８】
本発明の移植片または細胞集団は、その中にかまたはそれに伴って、免疫抑制剤をさらに含んでいてもよい。そのような免疫抑制剤は、当該分野において公知である。免疫抑制の目的では、免疫抑制を達成する他の方法を用いてもよい。上述のような拒絶反応を起こさないようにする免疫抑制法として、免疫抑制剤によるもの、外科的手術、放射線照射等が挙げられる。まず、免疫抑制剤として主なものとして副腎皮質ステロイド薬、シクロスポリン、ＦＫ５０６等がある。副腎皮質ステロイド薬は循環性Ｔ細胞の数を減少させ、リンパ球の核酸代謝、サイトカイン分泌を阻害してその機能を抑え、マクロファージの遊走および代謝を抑制して免疫反応を抑える。一方、シクロスポリンおよびＦＫ５０６の作用は類似しており、ヘルパーＴ細胞の膜にあるレセプターと結合して細胞内に入り込み、ＤＮＡに直接働いてインターロイキン２の生成を阻害する。最終的には、キラーＴ細胞が機能できなくなり免疫抑制作用が起こる。これらの免疫抑制剤の使用においては副作用が問題となる。ステロイドは特に副作用が多く、また、シクロスポリンは肝臓・腎臓に対する毒性がある。また、ＦＫ５０６は腎臓に対する毒性を有する。次に外科的手術としては、例えば、リンパ節摘出、脾臓摘出、胸腺摘除が挙げられるが、これらについてはその効果が十分に証明されてはいない。外科的手術の中でも胸菅ろうとは、循環しているリンパ球を体外に導くものであり効果も確認されているが、大量の血清タンパク質および脂肪の流出を引き起こし、栄養障害が起こりやすくなるという欠点がある。放射線照射には全身照射と移植片照射があるが、効果が不確実な面もあり、レシピエントに対する負担が大きいので、前述の免疫抑制剤との併用により利用されている。上述のいずれの方法も拒絶反応の防止にはあまり好ましくない。
【０９４９】
（スクリーニング）
本発明はまた、神経再生を誘導する因子を同定するためのスクリーニング方法を提供する。この方法では、Ｐｅｐ５ポリペプチド、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ＰＫＣの阻害因子、ＩＰ３の活性化因子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチド、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、ｐ２１ポリペプチド、ｐ２１をコードする核酸分子、Ｒｈｏポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子およびＲｈｏキナーゼをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子ならびにその改変体およびフラグメントからなる群より選択される少なくとも１つの分子とそれらに相互作用する分子との相互作用に、試験因子が有意に影響を与える（減少、増強、消失など）かどうかを判定することによって同定することができる。
【０９５０】
１つの実施形態において、この方法は、（ａ）配列番号４に少なくとも７０％相同性であるアミノ酸配列を有する第１のポリペプチドまたはそのフラグメントおよび配列番号６に少なくとも７０％相同性であるアミノ酸配列を有する第２のポリペプチドまたはそのフラグメントを、試験因子の存在下で接触させる工程、および（ｂ）試験因子の存在下における第１のポリペプチドと該第２のポリペプチドとの間の結合レベルを、該試験因子の非存在下における結合レベルと比較する工程、を包含し、ここで、該試験因子の非存在下と比較して、試験因子の存在下において結合が減少した場合、該試験因子は、神経を再生するための因子として同定される。
【０９５１】
このような試験因子の判定方法は、当該分野において周知であり、任意の統計学的手法を用いて結果を算出することができる。
【０９５２】
本発明の同定方法において、被検体・患者の提示、選択は任意に行うことができるが、被検体がヒトである場合、ヒト患者のコンセントを事前にもらっておくことが好ましい。被検体としては、神経状態が正常ではないもの有する限りどのようなものでも選択することができる。
【０９５３】
本発明の同定方法で用いられる投与工程は、どのような技術を用いてもよい。好ましくは、経口投与、静脈注射など、通常の治療において使用される形態であることが有利である。
【０９５４】
このようなスクリーニングまたは同定の方法は、当該分野において周知であり、例えば、そのようなスクリーニングまたは同定の方法は、マイクロタイタープレート、ＤＮＡまたはタンパク質などの生体分子アレイまたはチップを用いて行うことができる。スクリーニングの試験因子を含む対象としては、例えば、遺伝子のライブラリー、コンビナトリアルライブラリーで合成した化合物ライブラリーなどが挙げられるがそれらに限定されない。
【０９５５】
したがって、本発明では、本発明の開示をもとに、コンピュータモデリングによる薬物が提供されることも企図される。
【０９５６】
本発明は、他の実施形態において、本発明の化合物に対する調節活性についてのスクリーニングの道具として、コンピュータによる定量的構造活性相関（ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ＝ＱＳＡＲ）モデル化技術を使用して得られる化合物を包含する。ここで、コンピューター技術は、いくつかのコンピュータによって作成した基質鋳型、ファーマコフォア、ならびに本発明の活性部位の相同モデルの作製などを包含する。一般に、インビトロで得られたデータから、ある物質に対する相互作用物質の通常の特性基をモデル化するは、ＣＡＴＡＬＹＳＴＴＭ  ファーマコフォア法（Ｅｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，９：４７７〜４８９，１９９９；Ｅｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．＆  Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，２８８：２１〜２９，１９９９；Ｅｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．＆  Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，２９０：４２９〜４３８，１９９９；Ｅｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．＆  Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，２９１：４２４〜４３３，１９９９）および比較分子電界分析（ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｆｉｅｌｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ；ＣｏＭＦＡ）（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ＆  Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ，２４：１〜６，１９９６）などを使用して示されている。本発明において、コンピュータモデリングは、分子モデル化ソフトウェア（例えば、ＣＡＴＡＬＹＳＴＴＭバージョン４（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）など）を使用して行われ得る。
【０９５７】
活性部位に対する化合物のフィッティングは、当該分野で公知の種々のコンピュータモデリング技術のいずれかを使用してで行うことができる。視覚による検査および活性部位に対する化合物の手動による操作は、ＱＵＡＮＴＡ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ，１９９２）、ＳＹＢＹＬ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｏｄｅｌｉｎｇ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｔｒｉｐｏｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，１９９２）、ＡＭＢＥＲ（Ｗｅｉｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１０６：７６５〜７８４，１９８４）、ＣＨＡＲＭＭ（Ｂｒｏｏｋｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ｃｈｅｍ．，４：１８７〜２１７，１９８３）などのようなプログラムを使用して行うことができる。これに加え、ＣＨＡＲＭＭ、ＡＭＢＥＲなどのような標準的な力の場を使用してエネルギーの最小化を行うこともできる。他のさらに特殊化されたコンピュータモデリングは、ＧＲＩＤ（Ｇｏｏｄｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２８：８４９〜８５７，１９８５）、ＭＣＳＳ（Ｍｉｒａｎｋｅｒ  ａｎｄ  Ｋａｒｐｌｕｓ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１１：２９〜３４，１９９１）、ＡＵＴＯＤＯＣＫ（Ｇｏｏｄｓｅｌｌ  ａｎｄ  Ｏｌｓｅｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，８：１９５〜２０２，１９９０）、ＤＯＣＫ（Ｋｕｎｔｚ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１６１：２６９〜２８８，（１９８２））などを含む。さらなる構造の化合物は、空白の活性部位、既知の低分子化合物における活性部位などに、ＬＵＤＩ（Ｂｏｈｍ，Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ａｉｄ．Ｍｏｌｅｃ．Ｄｅｓｉｇｎ，６：６１〜７８，１９９２）、ＬＥＧＥＮＤ（Ｎｉｓｈｉｂａｔａ  ａｎｄ  Ｉｔａｉ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，４７：８９８５，１９９１）、ＬｅａｐＦｒｏｇ（Ｔｒｉｐｏｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）などのようなコンピュータープログラムを使用して新規に構築することもできる。このようなコンピューターモデリングは、当該分野において周知慣用されており、当業者は、本明細書の開示に従って、適宜本発明の範囲に入る化合物を設計することができる。
【０９５８】
別の局面において、本発明は、本発明の上記同定方法によって同定される、調節因子を提供する。
【０９５９】
別の局面において、本発明は、本発明の調節因子を含む、薬学的組成物を提供する。
【０９６０】
別の局面において、本発明は、神経学的疾患、障害または状態を、予防または処置する方法を提供する。ここで、この方法は、本発明の調節因子を含む薬学的組成物を被験体に投与する工程を包含する。好ましくは、この神経に関連する状態、障害または疾患は、同定方法において有効であると判断された異常、障害または疾患であり、好ましくはアルツハイマー病を包含するがそれに限定されない。
【０９６１】
神経に関連する疾患、障害および状態は、その治療について根本的な治療が困難といわれてきた。しかし、本発明の上述のような効果によって、従来では不可能とされていた早期診断が可能となり、治療にも応用することができることが明らかとなった。したがって、本発明は、従来の診断薬でも医薬でも達成不可能であった有用性を有するといえる。
【０９６２】
（トランスジェニック動物）
別の局面において、本発明はまた、ＭＡＧ、ＰＫＣ、ＩＰ３、ＧＴ１ｂ、ｐ７５、Ｒｈｏ  ＧＤＩ、Ｒｈｏ、ｐ２１およびＲｈｏキナーゼからなる群より選択される少なくとも１つの伝達因子あるいはその調節因子（例えば、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子およびＲｈｏ  ＧＤＩポリペプチド）をコードする核酸分子からなる群より選択される少なくとも１つの核酸分子の配列において野生型とは異なる配列が導入された配列を有する核酸分子を含む、ベクターを提供する。このベクターは、種々の目的で用いることができ、例えば、トランスジェニック動物の生産、改変ポリペプチドの産生などが挙げられるがそれらに限定されない。
【０９６３】
したがって、本発明は、このようなベクターを含む、細胞、組織、臓器、生物を提供する。また、本発明はまた、このようなベクターで形質転換された神経改変トランスジェニック動物を提供する。動物を作製する方法は、当該分野において公知である。
【０９６４】
別の局面において、本発明は、本発明の遺伝子がノックアウトされたノックアウト動物を提供する。
【０９６５】
本明細書において、「ノックアウト」とは、遺伝子について言及されるとき、その遺伝子を破壊（欠損）または機能不全にさせることをいう。
【０９６６】
本明細書において、「ノックアウト動物」とは、ある遺伝子がノックアウトされた動物（例えば、マウス）をいう。
【０９６７】
本明細書において、「動物」は、ノックアウトすることができるものであればどのような動物であってもよい。従って、動物には、脊椎動物および無脊椎動物が包含される。動物としては、哺乳動物（例えば、マウス、イヌ、ネコ、ラット、サル、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウサギ、イルカ、クジラ、ヤギ、ウマなど）、鳥類（例えば、ニワトリ、ウズラなど）、両生類（例えば、カエルなど）、爬虫類、昆虫（例えば、ショウジョウバエなど）などが挙げられる。好ましくは、動物は、哺乳動物であり得、より好ましくは、ノックアウトを作製することが容易な動物（例えば、マウス）であり得る。別の好ましい形態では、動物は、ヒトのモデル動物として適切であることが判明している動物（例えば、サル）であり得る。ある実施形態では、動物は、非ヒト動物であり得るが、それに限定されない。
【０９６８】
本発明はまた、本発明の因子（例えば、ポリペプチドなど）の、本発明の目的（例えば、神経疾患、障害、異常状態の治療、診断、予防、処置、予後など）のための使用または医薬組成物の製造のための本発明の因子の使用に関する。それらの詳細な実施形態は上述したものと同様であり、当業者は適宜応用することができる。
【０９６９】
以下に、実施例に基づいて本発明を説明するが、以下の実施例は、例示の目的のみに提供される。従って、本発明の範囲は、実施例のみに限定されるものではなく、特許請求の範囲によってのみ限定される。
【実施例】
【０９７０】
以下に実施例を示して本発明をさらに詳しく説明するが、この発明は以下の実施例に限定されるものではない。動物の取り扱いは、大阪大学において規定される基準を遵守し、動物愛護精神に則って実験を行った。
【０９７１】
（実施例１：ｐ７５は、ミエリン結合タンパク質からＲｈｏにシグナルを伝達する）
（材料および方法）
（動物）
ｐ７５遺伝子の第３エキソンの破壊が標的化されたマウス系統（Ｌｅｅら、Ｃｅｌｌ  ６９：７３７−７４９、１９９２）を使用した。このマウスは、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊバックグラウンドで、最初はＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから入手した。
【０９７２】
（神経突起伸展アッセイ）
ＤＲＧを、成体マウスから取り出し、そして０．０２５％  トリプシンおよび０．１５％  １型コラゲナーゼ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いた３７℃で３０分間のインキュベーションによって、単一細胞に分離させた。小脳ニューロンについて、２匹の動物由来の小脳を、５ｍｌの０．０２５％  トリプシン中で合わせ、粉砕し、そして３７℃で１０分間インキュベートした。１０％  ＦＣＳを含むＤＭＥＭを添加し、細胞を８００ｒｐｍにて遠心分離した。ニューロンを、ポリ−Ｌ−リジンでコーティングしたチャンバスライド上のＳａｔｏ培地（Ｃａｉら、１９９９，Ｎｅｕｒｏｎ  ２２：８９−１０１）中、プレートに播いた。伸展アッセイについて、プレートに播いた細胞を、２４時間インキュベートし、そして４％（重量／容積）パラホルムアルデヒド中で固定し、そしてニューロン特異的βチューブリンＩＩＩタンパク質を認識するモノクローナル抗体（ＴｕＪ１）を用いて免疫染色した。次いで、各βチューブリンＩＩＩ陽性ニューロンの最も長い神経突起の長さまたは総突起物の伸展を、決定した。示される場合、細胞をプレートに播いた後、組換えラットＭＡＧ−Ｆｃキメラ（Ｒ  ＆  Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、培地に添加した。組換えＣ３トランスフェラーゼを、以前に記載されたように（Ｂｏｒａｓｉｏら、１９８９．，Ｎｅｕｒｏｎ  ２：１０８７−１０９６）粉砕によって、プレートに播く前にニューロンの細胞質に導入した。
【０９７３】
（ＧＴＰ−ＲｈｏＡのアフィニティー免疫沈降）
２９３細胞を、ＮＨ２末端をＨＡタグ化した野生型ＲｈｏＡ（Ｙａｍａｓｈｉｔａ，Ｔ．ら，Ｎｅｕｒｏｎ  ２４：５８５−５９３，１９９９）および／または全長ヒトｐ７５を含むｐｃＤＮＡ３ベクターを用いて、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００（ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ）を用いたリポフェクションによってトランスフェクトした。Ｐ９マウス由来の小脳ニューロンを、以前に記載されたように（Ｃａｉら、Ｎｅｕｒｏｎ  ２２：８９−１０１，１９９９）単離した。細胞を、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）、１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、０．５％  デオキシコール酸ナトリウム、０．１％  ＳＤＳ、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、および１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、ならびに１０μｇ／ｍｌ  ロイペプチンおよび１０μｇ／ｍｌ  アプロチニン中に溶解した。細胞溶解物を、１３，０００ｇ、４℃で１０分間の遠心分離によって清澄化し、そして上清を、Ｒｈｏｔｅｋｉｎビーズ（Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．）のＧＳＴ−Ｒｈｏ結合ドメインの２０μｇと共に４℃で４５分間インキュベートした。このビーズを、洗浄緩衝液（１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１０μｇ／ｍｌ  ロイペプチンおよび１０μｇ／ｍｌ  アプロチニンを含む５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５））を用いて４回洗浄した。結合したＲｈｏタンパク質を、ＲｈｏＡに対するモノクローナル抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いてウエスタンブロッティングによって検出した。
【０９７４】
（ＭＡＧ−Ｆｃ結合および免疫細胞化学）
ＤＲＧニューロン培養物を、ＰＢＳ中の１％パラホルムアルデヒド中、３０分間固定した。次いで、これらの培養物を、２％  ＦＣＳを含むＰＢＳを用いてブロックした。ＭＡＧ結合分子を局在化させるために、固定しかつブロックしたＤＲＧニューロンに添加する前に、ＭＡＧ−Ｆｃ（５μｇ／ｍｌ）および抗ヒトＩｇＧ（１μｇ／ｍｌ）を、室温にて３０分間予備的に複合体化した（ＴｕｒｎｌｅｙおよびＢａｒｔｌｅｔｔ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｄｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１７：１０９−１１９，１９９９）。ｐ７５を同定するために、細胞を、０．２％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００／ＰＢＳを用いて透過化処理し、次いで、ｐ７５に対するポリクローナル抗体（Ｐｒｏｍｅｇａ）と共に一晩インキュベートし、次いで、Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒＴＭ  ５６８標識抗ウサギＩｇＧ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）と１時間インキュベートした。抗体の特異性を、このタンパク質を発現する細胞のウエスタンブロット分析によって評価し、免疫細胞化学のコントロール実験を、一次抗体を外すことによって実行した。
【０９７５】
（組換えｐ７５とＧＴ１ｂとの同時免疫沈降）
組換えヒトｐ７５−Ｆｃキメラ（１μｇ；Ｇｅｎｚｙｍｅ−Ｔｅｃｈｎｅ）および１μｇの精製ガングリオシドＧＴ１ｂ（９８％より高い純度；Ｓｅｉｋａｇａｋｕ  Ｃｏ．）を、２００μｌ  ０．０２５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０／ＰＢＳ中で２時間インキュベートし、そしてｐ７５をプロテインＡセファロース（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を用いて沈降した。生じる沈降物を、７％ゲルを用いたＳＤＳ−ＰＡＧＥの後、二フッ化ポリビニリデンメンブランに電気的に転写し、そして抗ＧＴ１ｂ抗体（ＩｇＭ；Ｓｅｉｋａｇａｋｕ  Ｃｏ．）または抗ｐ７５抗体を用いて免疫ブロットした。
【０９７６】
（同時免疫沈降実験）
細胞を、溶解緩衝液（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１％  ＴｒｉｔｏｎＴＭ  Ｘ、２５μｇ／ｍｌ  ロイペプチン、および２５μｇ／ｍｌ  アプロチニン）を用いて２０分間氷上で溶解した。溶解物を、１３，０００ｇで２０分間遠心分離し、そして上清を、収集した。次いで、これらの上清を、抗ＧＴ１ｂ抗体または抗ＨＡ抗体（トランスフェクトしたＨＡ−ｐ７５について）と共に１晩インキュベートし、次いで、抗マウスＩｇＭ抗体（ＧＴ１ｂについて）と共にインキュベートした。免疫複合体またはＭＡＧ−Ｆｃを、プロテインＡセファロース（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を用いて収集した。懸濁液を、１，０００ｇで５分間遠心分離した。ペレットを、溶解緩衝液を用いて４回洗浄し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、次いで免疫ブロット分析に供した。
【０９７７】
（実施例１−１：神経突起伸展の阻害は、ｐ７５に依存する）
本発明者らはまず、ｐ７５がニューロンに対するＭＡＧの効果と関連するか否かを調べた。ｐ７５遺伝子に変異を保有するマウス（Ｌｅｅら、Ｃｅｌｌ  ６９：７３７−７４９，１９９２）および野生型マウス由来の成体ＤＲＧニューロンの神経突起伸展を調べた。
【０９７８】
ヒトＩｇＧのＦｃ領域に融合したＭＡＧの細胞外ドメインからなるＭＡＧの可溶性キメラ形態（ＭＡＧ−Ｆｃ）を使用した。可溶性ＭＡＧが、ミエリンから豊富に放出され、インビボで見出され、そしておよびＭＡＧ−Ｆｃが軸索成長を強力に阻害し得ることが示されている（Ｔａｎｇ，Ｓ．ら，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１３８：１３５５−１３６６，１９９７ａ；Ｔａｎｇ，Ｓ．ら，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．９：３３３−３４６，１９９７ｂ）。本発明者らは、ＭＡＧ処理ニューロンとＭＡＧ未処理ニューロンとの間で神経突起の長さを比較した。２５μｇ／ｍｌの濃度のＭＡＧ−Ｆｃは、成体野生型マウスからのＤＲＧニューロンの神経突起伸展を阻害した（図１）。Ｆｃは、ニューロンに何の影響も与えなかった（データには示さない）。興味深いことに、ＭＡＧの阻害効果は、ｐ７５遺伝子に変異を保有する成体マウス由来のＤＲＧニューロン中で観察され得なかった。測定したものが総突起の伸展であっても最も長い神経突起の長さであっても、まさに同じ結果が得られた（データには示さない）。
【０９７９】
生後小脳ニューロンを用いた類似の実験を実行した。２５μｇ／ｍｌの濃度のＭＡＧ−Ｆｃにおいて、神経突起成長は、Ｐ９野生型マウス由来の小脳ニューロンを使用した場合、有意に阻害された（図１Ｃ）。さらに、ＭＡＧによる阻害は、ｐ７５遺伝子に変異を保有するＰ９マウス由来のニューロン中では観察されなかった。これらの結果は、ＭＡＧが、ｐ７５依存性機構によって神経突起伸展を阻害することを示唆する。
【０９８０】
ｐ７５は、インビボおよびインビトロにおいて軸索成長の阻害に必要であることが示され、末梢ニューロンの神経支配を標的化し（Ｋｉｍｐｉｎｓｋｉら，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ９３：２５３−２６３，１９９９；Ｋｏｈｎら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１９：５３９３−５４０８，１９９９）、そしてインビボにおいてコリン作動性ニューロンの過剰神経支配の抑制に必要であること（Ｙｅｏ，Ｔ．Ｔ．ら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１７：７５９４−７６０５，１９９７）が示された。近年、小脳の有髄部分内の交感神経系軸索の成長が、インビボにおいて、ｐ７５を発現するマウスと比較して、ｐ７５の発現を欠くＮＧＦトランスジェニックマウス中で大きいことが報告された（Ｗａｌｓｈ，Ｇ．Ｓ．ら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１９：４１５５−４１６８，１９９９）。これは、本発明者らのデータを支持する、関連する知見であり得る。なぜなら、ｐ７５遺伝子に変異を保有するニューロンは、阻害因子に無反応性であることが示唆されるからである。
【０９８１】
（実施例１−２：ニューロン上でのＭＡＧのシグナル伝達機構）
いくつかのニューロンは、ＲｈｏＡが不活性の場合に急速に神経突起を伸展し、そして神経突起収縮は、ＲｈｏＡが活性の場合に生じる（Ｄａｖｉｅｓ，Ａ．Ｍ．，Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．１０：Ｒ１９８−Ｒ２００，２０００）。以前の研究によって、ＲｈｏＡの不活性化が、インビボにおいて軸索再生を促進したことが示された（Ｌｅｈｍａｎｎ，Ｍ．ら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１９：７５３７−７５４７，１９９９）。従って、ＲｈｏＡの活性化が、本発明者らの系のＭＡＧによる神経突起伸展の調節に必要であるか否かを調べた。
【０９８２】
ＲｈｏＡの活性化が、ＭＡＧによる神経突起伸展の調節に必要であるか否かを調べるために、本発明者らは、ＡＤＰをＲｈｏＡにリボシル化するＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ由来の外酵素Ｃ３トランスフェラーゼを使用した。組み換えＣ３トランスフェラーゼを、粉砕によってＤＲＧニューロンの細胞質に導入した。Ｃ３トランスフェラーゼは、野生型マウス由来のＤＲＧニューロンに対するＭＡＧの効果を完全に破壊した（図２Ａ）。これらのデータは、以前の報告と一致し、ＲｈｏＡがＭＡＧシグナル伝達経路上にあることを示唆する（Ｌｅｈｍａｎｎ，Ｍ．ら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１９：７５３７−７５４７，１９９９）。
【０９８３】
試験した次の仮説は、ＭＡＧがｐ７５依存性機構によってＲｈｏＡの活性を調節するか否かという仮説である。内因性にｐ７５を発現しない２９３細胞を使用し、ＭＡＧ−Ｆｃの細胞表面への結合は、分散して観察された（図２Ｂ）。エフェクタータンパク質であるＲｈｏｔｅｋｉｎ（Ｒｅｎ，Ｘ．Ｄ．ら，ＥＭＢＯ  Ｊ．１８：５７８−５８５，１９９９）のＲｈｏＡ結合ドメインを使用して、ＧＴＰ結合形態のＲｈｏＡを、アフィニティー沈降し得た。細胞中のＲｈｏＡ活性の直接的な測定を、この方法を用いて実行し得た。このアッセイによって、可溶性ＭＡＧ（２５μｇ／ｍｌ）の添加後３０分以内に、ｐ７５およびＲｈｏＡをトランスフェクトした２９３細胞の抽出物は、コントロールと比較して、劇的に増加した量のＧＴＰ−ＲｈｏＡを含み（図２Ｃ）、一方、Ｆｃの添加によって活性の変化は観察されなかったことが明らかとなった。しかし、ＭＡＧ−Ｆｃの添加によるＧＴＰ−ＲｈｏＡ含量における増加は、ｐ７５をトランスフェクトしていない細胞において観察されなかった（図２Ｃ）。
【０９８４】
タンパク質が人工的に発現される場合のＲｈｏＡ活性の調節を、天然の細胞中で検出することは困難であり得る。従って、ＲｈｏＡ活性が内因性ｐ７５を発現する細胞中でＭＡＧによって調節されるか否かを確認するために、生後小脳顆粒ニューロンを使用した。なぜなら、これらのニューロンもまた、神経突起伸展に関してＭＡＧに感受性であるからである。トランスフェクトされた２９３細胞中での観察と一致して、ＭＡＧ−Ｆｃは、野生型マウス（Ｐ９）由来の小脳顆粒ニューロン（これは、ｐ７５を豊富に発現する）中でＲｈｏＡを活性化する（図３Ａ）。この急速な活性化は、ニューロンに対するＮＧＦの効果（これもまた、ｐ７５によって媒介される）と対照的であった（図３Ｂ）。なぜなら、これらのニューロンは、ＮＧＦレセプターであるｔｒｋＡを発現したないことから、ＮＧＦの効果は、ｐ７５によって媒介されるからからである。ＲｈｏＡ活性（図３Ｃ）および神経突起伸展に対するＭＡＧの効果（データには示さない）は、２５μｇ／ｍｌの濃度のＭＡＧで飽和されるようである。ＭＡＧによるＲｈｏＡの活性化は、ｐ７５遺伝子に変異を保有するマウス由来のニューロンでは失われていた（図３Ｄ）。これらのデータは、ＭＡＧがｐ７５依存性機構によってＲｈｏＡを活性化し、ゆえに、生後小脳顆粒ニューロンの神経突起伸展を阻害する、ということを実証する。
【０９８５】
優先的にＧＤＰ結合形態であるが、ＲｈｏＡの構成的活性形態ではないＲｈｏＡの野生型のみが、ｐ７５と相互作用する（Ｙａｍａｓｈｉｔａ，Ｔ．ら，Ｎｅｕｒｏｎ．２４；５８５−５９３，１９９９）。トランスフェクト細胞において、ｐ７５の過剰発現は、ニューロトロフィン依存性様式でＲｈｏＡを活性化した。従って、ＲｈｏＡのＧＤＰ結合形態は、ＭＡＧへの曝露後に、ｐ７５へリックスドメインと相互作用し活性化され得る。ｐ７５のより詳細な構造機能分析は、ｐ７５によるＲｈｏＡ活性の調節の正確な機構を解明することを補助するはずである。
【０９８６】
（実施例１−３：ｐ７５およびＭＡＧ結合の同時局在）
ＭＡＧはシアル酸依存性様式でニューロンに結合するが、ＭＡＧのシアル酸結合部位は、その神経突起阻害活性とは異なる。ＭＡＧへのシアル酸依存性結合は、ＭＡＧの阻害効果に十分でも必要でもない（Ｔａｎｇ，Ｓ．ら，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１３８：１３５５−１３６６，１９９７ａ）。従って、ＭＡＧの結合パートナーおよびシグナル伝達エレメントがレセプター複合体を形成し得る可能性がある。本発明者らは、ＭＡＧの結合パートナーおよびｐ７５が、シス様式で相互作用し得ると想定した。この仮説を試験するために、ｐ７５およびＭＡＧ結合の局在を、細胞レベル下で評価した。
【０９８７】
ＭＡＧ−Ｆｃの結合を、蛍光タグ化抗ヒトＩｇＧを用いたインキュベーションによって可視化した。図４は、共焦点レーザー顕微鏡を用いた成体ＤＲＧニューロンに対するＭＡＧ−Ｆｃの結合を示す。ＭＡＧ−Ｆｃ結合は、斑点状のようである。同じ細胞を、抗ｐ７５抗体を用いて染色し、そして分布を評価した。細胞体でのｐ７５発現は、細かい小斑点染色を示した神経突起上よりも分散していた（図４Ａ、上部）。ｐ７５免疫反応性の斑点の大部分は、ＭＡＧ結合と同時局在した。高倍率において、神経突起原形質膜上のホットスポットの類似した分布から、同時局在は明らかであった（図４Ａ、下部）。ＭＡＧ−Ｆｃの結合は、ｐ７５遺伝子に変異を保有するマウス由来のＤＲＧニューロンにおいてもなお観察された（図４Ｂ）。これらのデータは、ｐ７５およびＭＡＧ結合の同時局在を実証する。
【０９８８】
（実施例１−４：ｐ７５は、ガングリオシドＧＴ１ｂに結合する）
本発明者らは次に、マウス由来の生後小脳から調製した溶解物を用いて、内因性ｐ７５とＭＡＧの相互作用を調べた。ＭＡＧ−Ｆｃ沈降物において、抗ｐ７５抗体によって、ｐ７５に対応するタンパク質の存在が明らかになった（図５Ａ）。しかし、ＭＡＧ−Ｆｃは、本発明者らの予備実験（データには示さない）において組換えｐ７５タンパク質を沈降しなかったことから、これらのデータは、ＭＡＧとｐ７５との間接的な相互作用を示唆する。従って、ｐ７５は、結合パートナーではないが、シグナル伝達エレメントであり得る。
【０９８９】
ＭＡＧは、ニューロンの細胞表面上に存在する特定のシアリル化されたグリカンおよびガングリオシドに結合する。末端α−２−３連結シアル酸を保有する特定のガングリオシドに結合するＭＡＧの能力は、十分に記載されている（Ｙａｎｇ，Ｌ．Ｊ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９３：８１４−８１８，１９９６）。ＭＡＧは、ＧＴ１ｂおよびＧＤ１ａ、ならびにα系列のガングリオシドに結合することが示され、そしてＧＤ１ａではなく細胞表面ＧＴ１ｂの抗体架橋は、ＭＡＧの効果を模倣する（Ｖｉｎｓｏｎ，Ｍ．ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：２０２８０−２０２８５，２００１）。複合ガングリオシドノックアウトマウスの神経系の病的特徴は、ＭＡＧの遺伝子が破壊されたマウスで報告された特徴と非常に類似する（Ｓｈｅｉｋｈ，Ｋ．Ａ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９６：７５３２−７５３７，１９９９）。これらのデータから、本発明者らは、ｐ７５とこれらのガングリオシドとの会合を試験することを試み、ｐ７５およびガングリオシドがＭＡＧに対するレセプター複合体を形成することを予測した。
【０９９０】
Ｓｆ２１細胞から精製した、Ｆｃに融合した組換えｐ７５細胞外ドメインを使用して、ガングリオシドを沈降した。ｐ７５沈降物において、抗ＧＴ１ｂ抗体によって、約１００ｋＤのバンドの存在が明らかになった（図５Ｂ、左）。ポジティブバンドがｐ７５であることを確認するために、抗ＧＴ１ｂ抗体をメンブランから取り除き、そしてこのメンブランを、抗ｐ７５抗体を用いて再プローブ化した。この結果によって、ポジティブバンドがｐ７５であることが示された（図５Ｂ、右）。これは、ＧＴ１ｂの非特異的相互作用ではない。なぜなら、ＥＧＦレセプターの細胞外ドメインとＧＴ１ｂとの会合は観察されなかったからである（データには示さない）。従って、ＧＴ１ｂは、ＳＤＳ耐性様式でｐ７５に結合する。ＧＤ１ａもまた、ＭＡＧと会合することが示されたが（Ｖｉｎｓｏｎ，Ｍ．ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：２０２８０−２０２８５，２００１）、本発明者らは、ｐ７５とＧＤ１ａとのいかなる相互作用も見出さなかった（図５Ｃ）。さらに、ｐ７５とＧＭ１との相互作用も見出されなかった（図５Ｃ）。これらのことは、ｐ７５とＧＴ１ｂとの特異的な相互作用を実証する。抗ＧＴ１ｂ抗体を用いて、本発明者らは、マウス由来の生後小脳から調製した溶解物を使用して、内因性ｐ７５とＧＴ１ｂとの相互作用を調べた。抗体を用いた免疫細胞化学によって、これらのニューロン表面上でのＧＴ１ｂの発現が確認された。ＧＴ１ｂ免疫沈降物において、抗ｐ７５抗体によって、ｐ７５に対応するタンパク質の存在が明らかになった（図５Ｄ）。抗ＧＴ１ｂ抗体と合成ＧＴ１ｂとのプレインキュベーションによって、ｐ７５の検出がなくなった（データには示さない）。最後に、本発明者らは、トランスフェクト２９３細胞（この細胞は、細胞表面上にＧＴ１ｂを豊富に発現する）を用いてｐ７５とＧＴ１ｂとの相互作用を評価した（データには示さない）。予想したように、免疫沈降されたｐ７５は、ＳＤＳ耐性様式で、ＧＴ１ｂと複合体化した（図５Ｅ）。これらのデータは、ＧＴ１ｂとｐ７５とがＭＡＧに対するレセプター複合体を形成することを示唆する。
【０９９１】
上記の結果から、ｐ７５は二重のシグナルを誘発する分子であると考えられる。ｐ７５は、単にニューロトロフィン（例えば、ＣＲＮＦ）（Ｆａｉｎｚｉｌｂｅｒ，Ｍ．ら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７４：１５４０−１５４３，１９９６）または狂犬病ウイルス糖タンパク質（Ｔｕｆｆｅｒｅａｕ，Ｃ．ら，ＥＭＢＯ  Ｊ．１７：７２５０−７２５９，１９９８）に結合するだけではないことが示されているが、これらのリガンドが任意のシグナルをｐ７５を通して誘発するか否かは知られていない。従って、ｐ７５が、ニューロトロフィンだけでなく、ＭＡＧのシグナル伝達因子でもあるということを実証する本発明者らの知見は、興味深いものである。さらに興味深いことに、ｐ７５に結合するニューロトロフィンは、ＲｈｏＡ活性を阻害することによって、おそらくニューロンの軸索伸展を促進する（Ｙａｍａｓｈｉｔａ，Ｔ．ら，Ｎｅｕｒｏｎ．２４；５８５−５９３，１９９９）が、ＭＡＧは、ＲｈｏＡを活性化することによって、ｐ７５を介してニューロンに対して反対の効果を誘発する。これは、ｐ７５が伝達エレメントとして二重のシグナルを有することを意味する。本質的に全ての成体ニューロンがＭＡＧによる阻害に感受性である。一方、ｐ７５が制限された分布することに注目することもまた、重要である。ＭＡＧシグナルの同定および特徴づけは、ニューロンが細胞外阻害分子に応答するという以前は認識されていなかった機構を解明する。
【０９９２】
（実施例２：細胞質ｐ２１は、Ｒｈｏキナーゼ活性を阻害することによって、神経突起リモデリングを調節する）
実施例１によって示されるように、ｐ７５が双方向性シグナルを誘発することが示された。本発明者らは次に、ｐ７５によるＲｈｏ活性の調節の正確な機構について分析した。
【０９９３】
（材料および方法）
（動物）
ｐ７５遺伝子の第３エキソンの標的化された崩壊を保有するマウス系統（Ｌｅｅ，Ｋ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  ６９．７３７−７４９（１９９２））を使用した。このマウスは、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊバックグラウンドで、最初はＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅ）から入手した。
【０９９４】
（同時免疫沈降）
アミノ末端をＦＬＡＧタグ化したヒトｐ７５（配列番号３および４）および／またはＨＡタグ化ＲｈｏＡ（Ｙａｍａｓｈｉｔａ，Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｕｒｏｎ  ２４，５８５−５９３（１９９９））（配列番号１１および１２）を、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）を用いてリポフェクションによって２９３Ｔ細胞またはＮ１Ｅ−１１５細胞にトランスフェクトした。細胞を、溶解緩衝液（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．２％  ＮＰ−４０、２５μｇ／ｍｌ  ロイペプチンおよび２５μｇ／ｍｌ  アプロチニン）を用いて２０分間氷上で溶解した。この溶解物を、２０分間１３，０００ｇで遠心分離し、そしてこの上清を収集した。次いでこれらを、抗ＦＬＡＧ抗体（ＦＬＡＧ−ｐ７５でトランスフェクトしたものに対して）または抗ｐ７５抗体（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ）（小脳ニューロンに対して）を用いて３時間インキュベートした。免疫複合体を、プロテインＡセファロース（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を用いて収集した。懸濁液を、１，０００ｇで５分間遠心分離した。このペレットを、溶解緩衝液を用いて４回洗浄し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥに供し、続いて抗Ｒｈｏ  ＧＤＩα抗体（Ｓｉｇｍａ）または抗ＲｈｏＡ抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いて免疫ブロット分析に供した。示された場合、組換えラットＭＡＧ−Ｆｃキメラ（２５μｇ／ｍｌ、ＲＤ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．）、Ｎｏｇｏペプチド（４μＭ、Ａｌｐｈａ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ；配列番号１０）、ＴＡＴ（ＰＴＤドメイン）融合Ｐｅｐ５（ＴＡＴ−ＣＦＦＲＧＧＦＦＮＨＮＰＲＹＣ）（配列番号２）、またはＴＡＴ（ＰＴＤドメイン）融合コントロールペプチド（ＴＡＴ−ＧＧＷＫＷＷＰＧＩＦ）（配列番号１５）を使用した。これらのペプチドを、化学合成し、そしてその組成物を、アミノ酸分析および質量分析法（Ｓｉｇｍａ  Ｇｅｎｏｓｙｓ）によって確認した。アミノ末端をＦＬＡＧタグ化したヒトｐ７５を、ｐｃＤＮＡ３．１発現プラスミド（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローニングした。
【０９９５】
（ｐ７５およびＲｈｏ  ＧＤＩの同時免疫沈降）
抗ＦＬＡＧ抗体およびプロテインＡセファロースを用いてトランスフェクトした２９３Ｔ細胞から沈降したｐ７５を、２００μｌの緩衝液（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０２５％  Ｔｗｅｅｎ２０）中で組換えヒトＧＳＴ−Ｒｈｏ  ＧＤＩ（Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ）またはＧＳＴ−ＲｈｏＡ（Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ）と共に２時間インキュベートし、洗浄した。得られる沈降物を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ後に二フッ化ポリビニリデン膜に電気泳動的に転写し、そして抗ＧＳＴ抗体（Ｓｉｇｍａ）を用いてイムノブロットした。ヌクレオチド依存性を調べるために、ＧＳＴ−ＲｈｏＡを、適切なヌクレオチドを用いてプレロードし、そしてＥＤＴＡを１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２と置換した。示された場合、Ｐｅｐ５またはコントロールペプチド（ＧＧＷＫＷＷＰＧＩＦ（配列番号１５））を使用した。
【０９９６】
（組換えタンパク質の産生）
欠失を有するかまたは有さないｐ７５  ＩＣＤコード配列を、ｐＧＥＸ−５Ｘ細菌発現ベクター（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）にクローニングして、Ｅ．ｃｏｌｉからＧＳＴ融合タンパク質を作製した。ｐＧＥＸ−ＧＳＴ−Ｒｈｏ  ＧＤＩは、Ｙ．Ｔａｋａｉ博士から提供された。細胞を６００ｎｍ（ＯＤ６００）で１．０の光学濃度に増殖させた後、１ｍＭ  イソプロピル−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を添加してタンパク質合成を誘導し、そして細胞をさらに１６時間２５℃にて増殖させた。グルタチオン−セファロース４Ｂ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて融合タンパク質を精製し、そしてＧＳＴ部分を、除去して、組換えＲｈｏ  ＧＤＩを生成した。タンパク質の純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって決定し、そして濃度を測定した。ラットｐ７５  ＩＣＤの欠失変異体は、配列番号１７の残基２７４〜３４２、残基２７４〜３５１、残基２７４〜３６３、残基２７４〜３７５、残基２７４〜３９０、残基２７４〜４０６、残基２７４〜４２５（ＥＭＢＯ  Ｊ．１６，４９９９−５００５（１９９７））。ＧＳＴ−ｐ７５変異体とＲｈｏ  ＧＤＩとの複合体形成を、ＧＳＴ−ｐ７５変異体の沈降によって評価した。
【０９９７】
（ＧＴＰ−ＲｈｏＡのアフィニティー沈降）
アミノ末端でＦＬＡＧタグ化したヒトｐ７５またはｐ７５  ＩＣＤの欠失変異体を、ｐｃＤＮＡ３．１発現プラスミドにクローニングし、そしてこれらを、２９３Ｔ細胞にトランスフェクトした。細胞を、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）、１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、０．５％  デオキシコール酸ナトリウム、０．１％  ＳＤＳ、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、ならびに１０μｇ／ｍｌ  ロイペプチンおよび１０μｇ／ｍｌ  アプロチニン中に溶解した（Ｒｅｎ，Ｘ．Ｄ．，Ｋｉｏｓｓｅｓ，Ｗ．Ｂ．＆  Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｍ．Ａ．、ＥＭＢＯ  Ｊ．１８，５７８−５８５（１９９９））。細胞溶解物を、１３，０００ｇ、４℃で１０分間の遠心分離によって清澄化し、上清を、Ｒｈｏｔｅｋｉｎビーズ（Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）のＧＳＴ−Ｒｈｏ結合ドメインの２０μｇを用いて、４℃にて４５分間インキュベートした。このビーズを、洗浄緩衝液（１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１０μｇ／ｍｌ  ロイペプチンおよび１０μｇ／ｍｌ  アプロチニンを含む、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５））を用いて４回洗浄した。結合したＲｈｏタンパク質を、ＲｈｏＡに対するモノクローナル抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いてウエスタンブロッティングによって検出した。
【０９９８】
（インビトロヌクレオチド交換アッセイ）
脂質改変したＲｈｏＡを、記載されるように（Ｆｏｒｇｅｔ，Ｍ．Ａ．，Ｄｅｓｒｏｓｉｅｒｓ，Ｒ．Ｒ．，Ｇｉｎｇｒａｓ，Ｄ．＆  Ｂｅｌｉｖｅａｕ，Ｒ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３６１，２４３−５４（２００２））、酵母の膜から精製した。Ｒｈｏ  ＧＤＩと複合体化した［３Ｈ］ＧＤＰ−ＲｈｏＡまたはＲｈｏ  ＧＤＩと複合体化したＧＤＰ−ＲｈｏＡを、以前に記載されるように（Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２，２３３７１−２３３７５（１９９７））、［３Ｈ］ＧＤＰの存在下または非存在下でＧＤＰ−ＲｈｏＡを最初にインキュベートし、続いてＲｈｏ  ＧＤＩと３０分間インキュベートすることによって得た。ゲル濾過に供したサンプルを、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ジチオトレイトールおよび０．１％  ＣＨＡＰＳを含む２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）を用いて平衡化した。ＧＤＰ解離およびＧＴＰ結合アッセイを、以前に記載されたように（Ｈａｒｔ，Ｍ．Ｊ．，Ｅｖａ，Ａ．，Ｅｖａｎｓ，Ｔ．，Ａａｒｏｎｓｏｎ，Ｓ．Ａ．＆  Ｃｅｒｉｏｎｅ，Ｒ．Ａ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５４，３１１−３１４（１９９１））、フィルター結合方法によって実行した。［３Ｈ］ＧＤＰ解離アッセイにおいて、５０ｎＭの複合体を、３０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２もしくは０．５μＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＥＤＴＡ（低濃度Ｍｇ）もしくは１０ｍＭ  ＥＤＴＡ（高濃度Ｍｇ）、０．１ｍＭ  ＧＴＰ、１ｍＭ  ジチオトレイトール、０．１２％  ＣＨＡＰＳ、ならびに０．２ｍｇ／ｍｌ  ウシ血清アルブミン含む反応混合物（５０μｌ）中、種々の濃度のＧＳＴ−融合タンパク質を用いて２０分間インキュベートした。［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ結合アッセイにおいて、１μＭ［３５Ｓ］ＧＴＰγＳを０．１ｍＭ  ＧＴＰの代わりに使用した以外、複合体を上記のようにインキュベートした。示された時間において、反応サンプルのアリコートを、取り出し、ニトロセルロースフィルター（ＩＰＶＨ  ０００、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に通した。このフィルターを洗浄し、シンチレーションでのカウントに使用した。ＧＳＴタンパク質または緩衝液を、コントロールとして使用した。Ｈｉｓタグ化したＤｂｌの触媒ドメインを、９０ｎＭの濃度で使用した。
【０９９９】
（神経突起伸展アッセイ（インビトロ））
脊髄神経節を、成体マウスから取り出し、そして０．０２５％  トリプシンおよび０．１５％  １型コラゲナーゼ（Ｓｉｇｍａ）を用いた３７℃で３０分間のインキュベーションによって、単一細胞に分離させた。小脳ニューロンについて、２匹の動物由来の小脳を、５ｍｌの０．０２５％  トリプシン中で合わせ、粉砕し、そして３７℃で１０分間インキュベートした。１０％  ＦＣＳを含むＤＭＥＭを、添加し、細胞を８００ｒｐｍにて遠心分離した。ニューロンを、ポリ−Ｌ−リジンでコーティングしたチャンバスライド上のＳａｔｏ培地（Ｃａｉ，Ｄ．，Ｓｈｅｎ，Ｙ．，Ｄｅ  Ｂｅｌｌａｒｄ，Ｍ．，Ｔａｎｇ，Ｓ．＆  Ｆｉｌｂｉｎ，Ｍ．Ｔ．，Ｎｅｕｒｏｎ  ２２，８９−１０１（１９９９））中、プレートに播いた。伸展アッセイについて、プレートに播いた細胞を、２４時間インキュベートし、そして４％（重量／容積）パラホルムアルデヒド中で固定し、そしてニューロン特異的βチューブリンＩＩＩタンパク質を認識するモノクローナル抗体（ＴｕＪ１）を用いて免疫染色した。次いで、最も長い神経突起の長さまたは各βチューブリンＩＩＩ陽性ニューロンの総プロセスでの伸展を、決定した。示される場合、ＭＡＧ−Ｆｃ（２５μｇ／ｍｌ）またはＮｏｇｏペプチド（４μＭ）を、プレートに播いた後、培地に添加した。ｐＥＦ−ＢＯＳ−ｍｙｃ−Ｒｈｏ  ＧＤＩプラスミド（これは、Ｙｏｓｈｉｍｉ  Ｔａｋａｉ博士によって提供された）またはｐＥＧＦＰプラスミドを、トランスフェクトのコントロールとして使用した。リポフェクションによるトランスフェクションの２４時間後、細胞を再びプレートに播き、そして２４時間インキュベートした。トランスフェクトされた細胞を決定するために、細胞を、透過化処理し、そして抗ｍｙｃ抗体（１：１０００、Ｓｉｇｍａ）を用いて免疫染色した。
【１０００】
（サイレンサおよび／またはｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの間の相互作用を破壊する因子の、哺乳動物における神経再生効果）
２００ｇの雄のＷｉｓｔａｒラットを使用して、第９胸椎の椎弓切除術を行った後、脊髄の背側半分を切断した。持続浸透圧ポンプを用いて損傷部位へのＴＡＴ（ＰＴＤドメイン）融合Ｐｅｐ５（ＴＡＴ−ＣＦＦＲＧＧＦＦＮＨＮＰＲＹＣ）（配列番号２）またはＴＡＴ（ＰＴＤドメイン）融合コントロールペプチド（ＴＡＴ−ＧＧＷＫＷＷＰＧＩＦ）（配列番号１５）のいずれかの持続的な投与を６週間（１ｍｇ／体重／日）行った。その際、ポンプに接続したチューブの先端を髄腔内に留置した。脊髄損傷後の機能回復の指標として、ＢＢＢスコアを使用し、損傷後７日、１４日、２１日、２８日、３５日および４２日後に観察を行った。これらの実験は、Ｆｏｕｒｎｉｅｒ  Ａ．Ｅ．，Ｔａｋｉｚａｗａ，Ｂ．Ｔ．，Ｓｔｒｉｔｔｍａｔｔｅｒ，Ｓ．Ｍ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００３，２３，１４１６−１４２３に記載される技術を用いて行った。
【１００１】
同様の実験を、抗ｐ７５抗体、抗Ｒｈｏ  ＧＤＩ抗体、およびｐ７５の細胞外ドメインを用いて実施したところ同様の神経再生効果が観察された。これらの実験は、Ｆｏｕｒｎｉｅｒ  Ａ．Ｅ．，Ｔａｋｉｚａｗａ，Ｂ．Ｔ．，Ｓｔｒｉｔｔｍａｔｔｅｒ，Ｓ．Ｍ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００３，２３，１４１６−１４２３に記載される技術を用いて行った。
【１００２】
（実施例２−１：ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの結合）
本発明者らはまず、ＲｈｏＡとＲｈｏ  ＧＤＩとの複合体がｐ７５の細胞内ドメインと会合するか否かを調べた。内因性にＲｈｏ  ＧＤＩを発現するがｐ７５は発現しない２９３Ｔ細胞を、ＦＬＡＧタグ化ｐ７５およびＨＡタグ化野生型ＲｈｏＡを用いてトランスフェクトした。ｐ７５沈降物において、抗Ｒｈｏ  ＧＤＩ抗体によって、Ｒｈｏ  ＧＤＩに対応するタンパク質の存在が明らかになった（図６Ａ）。以前示されたように（Ｙａｍａｓｈｉｔａ，Ｔ．，Ｔｕｃｋｅｒ，Ｋ．Ｌ．＆Ｂａｒｄｅ，Ｙ．Ａ．，Ｎｅｕｒｏｎ  ２４，５８５−５９３（１９９９））、ＲｈｏＡは、複合体中に含まれていた。本発明者らは次に、この相互作用が、ｐ７５依存性機構を介してＲｈｏＡを活性化することが示されているＭＡＧまたはＮｏｇｏによって強化されるか否かを調べた。内因性のＮｏｇｏレセプターを発現する（データには示さない）Ｎ１Ｅ−１１５細胞を、ＦＬＡＧタグ化ｐ７５を用いてトランスフェクトした。Ｎｏｇｏの細胞外フラグメントの残基３１〜５５に対応するペプチド（４μＭ）（Ｆｏｕｒｎｉｅｒ，Ａ．Ｅ．ら、Ｎａｔｕｒｅ  ４０９，３４１−３４６（２００１））および可溶性ＭＡＧ−Ｆｃ（２５μｇ／ｍｌ）は、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩおよびＲｈｏＡとの相互作用を有意に増強した（図６Ｂ）。対照的に、ｐ７５によってＲｈｏＡを不活性化するＮＧＦ（１００ｎｇ／ｍｌ）は、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩおよびＲｈｏＡとの相互作用を破壊した。本発明者らは、以前に、内因性ｐ７５とＲｈｏＡとの相互作用がニューロン中で観察され得ないということに注目していた（Ｙａｍａｓｈｉｔａ，Ｔ．，Ｔｕｃｋｅｒ，Ｋ．Ｌ．＆Ｂａｒｄｅ，Ｙ．Ａ．，Ｎｅｕｒｏｎ  ２４，５８５−５９３（１９９９））。従って、本発明者らは、マウス由来の生後小脳ニューロン（Ｐ９）から調製した溶解物を用いて、内因性ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩおよびＲｈｏＡとの相互作用を調べた。図６Ｃに示されるように、内因性ｐ７５とＲｈｏＡおよびＲｈｏ  ＧＤＩとの会合が、ＭＡＧまたはＮｏｇｏを用いた刺激の後にのみ観察され、このことは、ｐ７５が、内因性ｐ７５を発現する細胞においてＲｈｏＡの構成性アクチベーターではあり得ないことを示唆する。これらの知見は、ＲｈｏＡと複合体化したＲｈｏ  ＧＤＩが、ｐ７５と相互作用すること、そしてこの相互作用がＭＡＧおよびＮｏｇｏによって強化されることを実証する。
【１００３】
（実施例２−２：ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの直接的相互作用）
ＲｈｏＡが、酵母ツーハイブリッドスクリーニングによってｐ７５相互作用タンパク質として単離されたので、ＲｈｏＡは、ｐ７５に直接結合することが示唆された（Ｙａｍａｓｈｉｔａ，Ｔ．，Ｔｕｃｋｅｒ，Ｋ．Ｌ．＆Ｂａｒｄｅ，Ｙ．Ａ．，Ｎｅｕｒｏｎ  ２４，５８５−５９３（１９９９））。しかし、酵母における内因性Ｒｈｏ  ＧＤＩが哺乳動物Ｒｈｏファミリーのメンバーに対して活性であるという事実は、酵母Ｒｈｏ  ＧＤＩと複合体化したＲｈｏＡが酵母中のｐ７５と会合し得るという代替的な可能性も議論の余地があるものとしている。従って、本発明者らは次に、精製組換えタンパク質を用いて、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩまたはＲｈｏＡとの直接的な物理的相互作用を調べた。ＧＤＰ結合状態の細菌産生させたＲｈｏＡ、ＧＴＰ結合状態の細菌産生させたＲｈｏＡ、またはヌクレオチド涸渇状態の細菌産生させたＲｈｏＡを、トランスフェクトした２９３Ｔ細胞から免疫沈降したｐ７５と共にインキュベートした。しかし、本発明者らは、いかなるヌクレオチド状態においてもこれらの間の相互作用を観察しなかった（図７Ａ）。興味深いことに、組換えＲｈｏ  ＧＤＩは、ｐ７５に結合した。プレニル化ＲｈｏＡがＲｈｏ  ＧＤＩと複合体化した場合、このプレニル化ＲｈｏＡはｐ７５と会合し、このことは、ＲｈｏＡではなくＲｈｏ  ＧＤＩが、ｐ７５と直接複合体化することを示唆する。
【１００４】
本発明者らは、Ｒｈｏ  ＧＤＩとｐ７５との間の相互作用の、構造的な基礎を決定した。ｐ７５の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）の６個のαへリックスのうちの５番目が、１４マーのペプチドであるマストパランと有意な類似性を示す。マストパランは、ＲｈｏＡを活性化することが公知の毒バチの両親媒性成分である。ｐ７５  ＩＣＤの欠失変異体を用いた実験によって、この５番目のヘリックスがｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用に必要であることが示された（図７Ｂ）。これらの結果は、ＭＡＧおよびＮｏｇｏによるＲｈｏＡの活性化が、Ｒｈｏ  ＧＤＩとｐ７５  ＩＣＤの第５ヘリックスとの相互作用に依存し得ることを示唆する。この仮説をより直接的に試験するために、本発明者らは、内因性にｐ７５を発現しない２９３Ｔ細胞を使用した。ＲｈｏＡのＧＴＰ結合形態のアフィニティー沈降によって、以前に示されたように（Ｙａｍａｓｈｉｔａ，Ｔ．，Ｔｕｃｋｅｒ，Ｋ．Ｌ．＆Ｂａｒｄｅ，Ｙ．Ａ．，Ｎｅｕｒｏｎ  ２４，５８５−５９３（１９９９））、ＲｈｏＡが全長ｐ７５またはｐ７５  ＩＣＤの過剰発現によって活性化されることが明らかになった。予想したように、この第５ヘリックスを欠く欠失変異体は、ＲｈｏＡを活性化しなかった（図７Ｃ）。このことは、この第５ヘリックスがｐ７５によるＲｈｏＡの活性化に必要であることを実証する。
【１００５】
（実施例２−３：Ｒｈｏ  ＧＤＩからＲｈｏＡを離脱させる、ｐ７５の置換効果）
細菌によって発現させたｐ７５を用いたインビトロアッセイでの実験によって、組換えＲｈｏＡに対するＧＤＰ／ＧＴＰ交換活性は示されなかった（図８Ａ）。これらの結果は、ＲｈｏＡがｐ７５と直接会合しないという事実と組み合わせると、ｐ７５がＲｈｏ  ＧＤＩの活性を低減し、ゆえに、Ｒｈｏ  ＧＤＩからのＲｈｏＡの離脱を促進するという可能性を生じさせる。この工程は、グアニンヌクレオチド交換因子による活性化およびＲｈｏタンパク質のＧＴＰ結合形態の膜会合を可能にする（Ｓａｓａｋｉ，Ｔ．＆  Ｔａｋａｉ，Ｙ．、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．２４５，６４１−６４５（１９９８））。本発明者らはまず、低濃度Ｍｇ２＋においてＲｈｏＡのＧＤＰ／ＧＴＰ交換反応を阻害するＲｈｏ  ＧＤＩの能力に対する、Ｒｈｏ  ＧＤＩとｐ７５のらせんドメイン（ＨＤ）との相互作用の効果を調べた。なぜなら、Ｒｈｏ  ＧＤＩの阻害効果は、低濃度のＭｇ２＋においてより明らかであるからである（Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２，２３３７１−２３３７５（１９９７））。この反応は、Ｒｈｏ  ＧＤＩと複合体化した［３Ｈ］ＧＤＰ−ＲｈｏＡからの［３Ｈ］ＧＤＰの解離、ならびにＲｈｏ  ＧＤＩと複合体化したＧＤＰ−ＲｈｏＡに対する［３５Ｓ］ＧＴＰγＳの結合を測定することによって、概算した。ｐ７５  ＨＤは、用量依存様式でＲｈｏ  ＧＤＩ活性を低減した（図８Ｂ）。比較可能な条件下で、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）は、Ｒｈｏ  ＧＤＩ活性に影響を与えなかった（図８Ｂ）。これらの結果は、ｐ７５  ＨＤがＲｈｏ  ＧＤＩと直接相互作用して、ＲｈｏＡのＧＤＰ／ＧＴＰ交換反応を阻害するＲｈｏ  ＧＤＩの能力を低減させる能力を有することを実証する。本発明者らは次に、高濃度Ｍｇ２＋におけるＲｈｏＡのＤｂｌ刺激ＧＤＰ／ＧＴＰ交換反応を阻害するＲｈｏ  ＧＤＩ能力に対する、ｐ７５  ＨＤの効果を調べた。Ｒｈｏグアニンヌクレオチド交換因子（Ｒｈｏ  ＧＥＦ）（例えば、Ｄｂｌ）は、Ｒｈｏ  ＧＤＩ非存在下でＧＤＰ−ＲｈｏＡのＧＤＰ／ＧＴＰ交換反応を刺激するが、高濃度Ｍｇ２＋においてＲｈｏ  ＧＤＩと複合体化したＧＤＰ−ＲｈｏＡのＧＤＰ／ＧＴＰ交換反応は刺激しない（Ｙａｋｕ，Ｈ．，Ｓａｓａｋｉ，Ｔ．＆  Ｔａｋａｉ，Ｙ．、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．１９８，８１１−８１７（１９９４））。Ｄｂｌは、ＧＤＰ−ＲｈｏＡからのＧＤＰの解離を刺激した（図８Ａ）が、Ｒｈｏ  ＧＤＩと複合体化したＧＤＰ−ＲｈｏＡからのＧＤＰの解離は、顕著に低減された（図８Ｃ）。しかし、ＧＤＰの解離は、ｐ７５  ＨＤによって回復した。Ｒｈｏ  ＧＤＩ活性に対するｐ７５  ＨＤの阻害効果は、用量依存的であった。ｐ７５  ＩＣＤは、ｐ７５  ＨＤと同じ程度の阻害効果を示した（図３Ｃ）。これらの結果は、Ｒｈｏ  ＧＤＩとｐ７５  ＨＤとの相互作用が、ＲｈｏＧＥＦ非依存性のＲｈｏＡのＧＤＰ／ＧＴＰ交換反応およびＲｈｏＧＥＦ依存性のＲｈｏＡのＧＤＰ／ＧＴＰ交換反応の両方で、Ｒｈｏ  ＧＤＩの活性を増大させることを実証する。
【１００６】
ｐ７５はインビトロにおいてＲｈｏ  ＧＤＩからＲｈｏＡを離脱させる能力を有するので、ｐ７５を介したＭＡＧおよびＮｏｇｏによるＲｈｏＡの活性化は、Ｒｈｏ  ＧＤＩからＲｈｏを離脱させる活性に起因し得る。ＭＡＧならびにＮｏｇｏペプチドは、生後小脳ニューロンからの神経突起伸展を有意に阻害したが、Ｒｈｏ  ＧＤＩの過剰発現は、これらの阻害効果を破壊した（図８Ｄ）。これらの結果は、ｐ７５がＲｈｏ  ＧＤＩ解離因子として作用するという本発明者らの示唆と一致する。
【１００７】
（実施例２−４：ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用に対するペプチドリガンドの効果）
現在までに同定されている軸索再生のミエリン由来インヒビターの全ては、ｐ７５を介してニューロンに作用し、中枢神経系への損傷後のｐ７５シグナル伝達の妨害は、軸索再生のミエリン依存性阻害を緩和し得る。Ｒｈｏ  ＧＤＩ会合の正確な領域を示すことによって、本発明者らは、ｐ７５の機能を特異的に阻害する戦略を開発することが可能となった。ｐ７５  ＨＤへの特異的なペプチドリガンドは、以前コンビナトリアルライブラリーから得られた（Ｉｌａｇ，Ｌ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．２５５，１０４−１０９（１９９９））。このリガンドは、１５アミノ酸残基のペプチド（Ｐｅｐ５；ＣＦＦＲＧＧＦＦＮＨＮＰＲＹＣ（配列番号２））であり、そして結合部位は、核磁気共鳴分光法によって、ヘリックス５およびヘリックス６によって組み立てられる疎水性断片上にマッピングされた。しかし、このペプチド配列が哺乳動物中に存在するタンパク質であるということは示唆されなかった。本発明者らは、このペプチドがＲｈｏ  ＧＤＩのｐ７５  ＨＤに対するリクルートメントを破壊するサイレンサとしての役割を果たし得るという可能性に興味を持ち、そして驚くべきことに、実際にこのペプチドがサイレンサとして機能し得ることを実証した。本発明者らはまず、ｐ７５がＰｅｐ５と会合するか否かを確認した。Ｐｅｐ５を含有するグルタチオンＳトランスフェラーゼ融合タンパク質（ＧＳＴ−Ｐｅｐ５）を、ｐ７５を豊富に発現する生後小脳由来から調製した溶解物と共にインキュベートした。ＧＳＴ−Ｐｅｐ５沈降物において、抗ｐ７５抗体によって、ｐ７５に対応するタンパク質の存在が明らかになった（図９Ａ）。次いで、結合親和性をＰｅｐ５とＲｈｏ  ＧＤＩとの間で比較した。トランスフェクトした２９３Ｔ細胞の溶解物を免疫沈降し、精製したｐ７５を、１μＭ  ＧＳＴ−Ｒｈｏ  ＧＤＩおよび示された濃度のＰｅｐ５と共にインキュベートした（図９Ｂ）。Ｐｅｐ５は、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの会合を用量依存的に阻害したが、コントロールペプチドは阻害しなかった。従って、Ｐｅｐ５は、インビトロにおいてｐ７５によって媒介されるシグナルを破壊する能力を有する。このペプチドリガンドは、インビボにおいてｐ７５  ＨＤに対して直接的に作用する場合、細胞への侵入を増大させなければならないので、本発明者らは、ヒト免疫不全ウイルスタンパク質からのアミノ末端１１アミノ酸タンパク質導入ドメイン（ＰＴＤドメイン）と融合させたＰｅｐ５（ＴＡＴ−Ｐｅｐ５）を作製した（Ｓｃｈｗａｒｚｅ，Ｓ．Ｒ．，Ｈｏ，Ａ．，Ｖｏｃｅｒｏ−Ａｋｂａｎｉ，Ａ．＆  Ｄｏｗｄｙ，Ｓ．Ｆ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８５，１５６９−１５７２（１９９９））。解離小脳ニューロンにおけるＭＡＧ−Ｆｃによって誘導されるｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの相互作用は、競合様式でＴＡＴ−Ｐｅｐ５によって有意に阻害されたが、ＴＡＴ（ＰＴＤドメイン）融合コントロールペプチドによって阻害されなかった（図９Ｃ）。従って、Ｐｅｐ５は、ｐ７５とのＲｈｏ  ＧＤＩ会合のインヒビターとして使用され得る。
【１００８】
（実施例２−５：Ｐｅｐ５によるミエリンシグナルのサイレント化）
本発明者らが次に取り組んだ問題は、Ｐｅｐ５がＭＡＧまたはＮｏｇｏの効果を阻害するか否かということである。本発明者らは、ＭＡＧまたはＮｏｇｏの効果を測定するために神経突起成長アッセイを使用した。本発明者らは、配列番号４の残基３６８〜３８１に対応するラットｐ７５由来の別のコントロールペプチドを使用した。このペプチドは、１００ｎＭ（図１０Ｂ）または１０μＭ（データには示さない）の濃度において、脊髄神経節（ＤＲＧ）ニューロンの神経突起伸展に影響を与えず、そしてＭＡＧ−Ｆｃの作用にも（図１０Ｂ）Ｎｏｇｏペプチドの作用にも（データには示さない）影響を与えなかった。しかし、１００ｎＭの濃度で培養ニューロンに外因的に添加されたＴＡＴ−Ｐｅｐ５は、ＭＡＧ（２５μｇ／ｍｌ）ならびにＮｏｇｏペプチド（４μＭ）に対する応答性を破壊した（図１０ＡおよびＢ）。生後小脳ニューロンを使用して、Ｐｅｐ５の効果を調べた。ＤＲＧニューロンにおいて観察されたように、ＴＡＴ−Ｐｅｐ５は、ＭＡＧ（２５μｇ／ｍｌ）およびＮｏｇｏペプチド（４μＭ）の阻害効果を効果的にサイレント化した（図１０ＣおよびＤ）。最後に、このペプチドがｐ７５シグナル伝達のサイレンサとして作用することをより明確に示すために、本発明者らは、アフィニティー免疫沈降によってＲｈｏ活性を測定した。予想したように、ＲｈｏＡは、ＭＡＧ−ＦｃまたはＮｏｇｏペプチドの生後小脳ニューロンへの添加３０分後に活性化されたが、ＴＡＴ−Ｐｅｐ５は、これらの細胞に対するＭＡＧ−ＦｃまたはＮｏｇｏペプチドによって誘導されるＲｈｏＡの活性化を阻害した（図１０Ｅ）。これらの知見は、Ｐｅｐ５がＲｈｏ  ＧＤＩとｐ７５との会合を阻害することによって、ｐ７５を介したＲｈｏＡの活性化を阻害することを、強く示唆する。
【１００９】
同様の結果が、抗ｐ７５抗体、抗Ｒｈｏ  ＧＤＩ抗体、およびｐ７５の細胞外ドメインを用いて実施した場合にも観察された。
【１０１０】
（実施例２−６：サイレンサおよび／またはｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの間の相互作用を破壊する因子の、インビボにおける神経再生効果）
２００ｇの雄のＷｉｓｔａｒラットを使用して、第９胸椎の椎弓切除術を行った後、脊髄の背側半分を切断した。持続浸透圧ポンプを用いて損傷部位へのＴＡＴ融合Ｐｅｐ５またはＴＡＴ（ＰＴＤドメイン）融合コントロールペプチドのいずれかの持続的な投与を行った。その結果、コントロールペプチドの場合と比較して、ＴＡＴ−Ｐｅｐ５を用いた場合に顕著な神経再生が観察された。
【１０１１】
同様の結果が、抗ｐ７５抗体を用いて実施した場合にも観察された。
【１０１２】
（実施例２−７：マウスにおける実証）
上記と同様の実験を、マウスを用いて行ったところ、同様に、ＴＡＴ融合Ｐｅｐ５および抗ｐ７５抗体を用いた場合に、神経の再生が確認された。
【１０１３】
（実施例２−８：改変アミノ酸）
同様の実験をＰｅｐ５の配列（配列番号２）のＣ末端にアラニンを付加したもの、ｐ７５の細胞外ドメインに対する抗体、配列番号４の２７３−４２７位のうち、４２３位のアラニンをバリンに変更したもので行ったところ、同様に、神経の再生が確認された。
【１０１４】
（実施例２−９：他の因子）
同様の実験を、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子としての抗体、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子としてのアンチセンスおよびＲＮＡｉ、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子としての抗体を用いた場合でも同様にインビトロで神経突起が伸長することが観察され、かつ、インビボで神経が再生することが観察された。
【１０１５】
神経に関連する疾患、障害および状態は、特に成体において再生が困難であるという特殊事情から、その治療についても根本的な治療が困難といわれてきた。しかし、本発明の上述のような効果によって、従来では不可能とされていた診断が可能となり、治療にも応用することができることが明らかとなった。したがって、本発明は、従来の診断薬でも医薬でも達成不可能であった有用性を有するといえる。
【１０１６】
（実施例３：ｐ７５に対する中和抗体は、損傷ＣＮＳにおいて軸索再生を促進する）
ｐ７５を中心としたシグナル伝達経路をさらに詳細に調べるために、本発明者らは、ｐ７５に対する抗体がこの経路に与える影響について分析した。
【１０１７】
（材料および方法）
本質的に、実施例１および実施例２と同様の材料および方法で実施した。
【１０１８】
（実施例３−１：抗ｐ７５抗体は、ミエリン結合インヒビターに対する有望な薬剤である）
本発明者らは、神経突起成長アッセイを用いて、ＭＡＧ、Ｎｏｇｏおよびミエリンの効果を測定した。ＭＡＧ−Ｆｃ（２５μｇ／ｍｌ）およびミエリン、ならびにＮｏｇｏペプチド（４μＭ）（Ｎｏｇｏの細胞外フラグメントの残基３１〜５５に対応する；Ｆｏｕｒｎｉｅｒ，Ａ．Ｅ．ら，Ｎａｔｕｒｅ  ４０９，３４１−３４６，２００１）は、生後小脳ニューロンからの神経突起伸展を有意に阻害した（図１１Ａ）。ｐ７５のドミナントネガティブ形態として作用することが予想される、Ｆｃに融合した組換えｐ７５細胞外ドメインは、Ｎｏｇｏ阻害効果を部分的に阻害し、一方、ｐ７５へのＮＧＦの結合をブロックするために使用され得るｐ７５の細胞外ドメインに対するポリクローナル抗体（ＡＢ１５５４、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ）は、神経突起阻害効果を有意に軽減した（図１１Ａ）。抗体自体は、神経突起伸展に何の効果も有さなかった。この作用は、ｐ７５のシグナル伝達の阻害によって媒介される。なぜなら、ＮｏｇｏペプチドによるＲｈｏＡの活性化は、この抗体によって破壊されたからである（図１１Ｂ）。この抗体の阻害効果は、ｐ７５とＮｏｇｏレセプターとの会合を阻害することに依存し得る。なぜなら、カエルｐ７５に対する抗体を用いて以前に示されたように（Ｗｏｎｇ，Ｓ．Ｔ．ら，Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．５，１３０２−１３０８，２００２）、Ｎｏｇｏレセプターとｐ７５との相互作用が、この抗体によって低減されたからである（図１１Ｃ）。これらの結果は、この抗体がミエリン結合インヒビターに対する有望な薬剤であることを示す。
【１０１９】
（実施例３−２：抗ｐ７５抗体は、損傷ＣＮＳにおいて軸索再生を促進する）
本発明者らは次に、成体マウスにおいて、胸部レベルＴ１０／Ｔ１１での背側の半側切断損傷後、皮質脊髄路（ＣＳＴ）線維の再生を促進する抗体の能力を試験した。抗ｐ７５抗体またはコントロール抗体を、その損傷部位の上に配置したカテーテルを用いて浸透圧ミニポンプ（Ａｌｚｅｔ  １００２，Ｄｕｒｅｃｔ  Ｃｏｒｐ．，Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ，ＣＡ；２週間にわたって１時間あたり０．２５μｌでの、１００μｌ溶液）を介して送達した。ＣＳＴを、運動皮質への順行性ニューロントレーサＢＤＡの注射によって、順行性に標識した（Ｆｏｕｒｎｉｅｒ，Ａ．Ｅ．ら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２３，１４１６−１４２３，２００３）。損傷後、運動機能の回復を、改変ＢＢＢスケール（Ｄｅｒｇｈａｍ，Ｐら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２２．６５７０−６５７７（２００２））を用いて評価した。レベルＴ１０／Ｔ１１にて背側の半側切断を受けた動物は、最終的に、改変ＢＢＢスケールによって評価されるように、部分的な機能回復を得た（図１２Ａ）。抗ｐ７５抗体で処理したマウスの機能回復は、損傷後の７日目〜４週間にかけて、コントロール抗体で処理したマウスの機能回復よりも有意に高かった。抗ｐ７５抗体で処理したマウスにおいて、損傷部位に対して２ｍｍ尾方の横断面は、脊髄の背側半分において再生している軸索の数の増加を示した（図１２Ｂ）。再生している軸索の数は、脊髄の背側半分において二倍に増加した（図１２Ｃ）
（実施例３−３：他の因子）
同様の実験を、Ｐｅｐ５ポリペプチドをコードする核酸分子、ｐ７５ポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子としての抗体、ｐ７５ポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子としてのアンチセンスおよびＲＮＡｉ、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチド、ｐ７５細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸分子、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子としての抗体、Ｒｈｏ  ＧＤＩポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子としてのアンチセンスおよびＲＮＡｉ、ＭＡＧポリペプチドに対して特異的に相互作用する因子としての抗体、ＭＡＧポリペプチドをコードする核酸分子に対して特異的に相互作用する因子としてのアンチセンスおよびＲＮＡｉを用いた場合でも同様に、インビボで神経が再生し、脊髄機能が回復することが観察された。
【１０２０】
（実施例４：細胞質ｐ２１は、Ｒｈｏキナーゼ活性を阻害することによって、神経突起リモデリングを調節する）
活性な神経発生期間の間に、いくつかの神経芽細胞は、有糸分裂後状態に入り、次いで、それらの最終到達点に移動し始める。胚性ヒヨコ網膜において、神経節細胞は、胚５日目（Ｅ５）辺りで活性に生成される（Ｆｒａｄｅ，Ｊ．Ｍ．ら，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １２４：３３１３−３３２０，１９９７）。本発明者らは、これらの細胞におけるｐ２１の発現を調べ、ｐ２１がこれらの細胞の分化および形態形成に関与するか否かを試験した。
【１０２１】
（材料および方法）
（ヒヨコ網膜およびヒヨコ網膜細胞の調製）
ヒヨコＥ５胚全体（Ｗｈｉｔｅ  Ｌｅｇｈｏｒｎ）を、ＰＢＳ中の４％  パラホルムアルデヒドで一晩固定し、３０％  スクロースに浸した。網膜の細胞切片（厚み３０μｍ）を、前頭面で切断し、スライドガラス上で溶かしてマウントし、室温で乾燥させた。網膜ニューロン培養に関して、Ｅ５胚からの網膜を、色素上皮から切開して遊離させ、そして以前に記載されるように（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｔｅｂａｒ，Ａ．ら，Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．１３６：２９６−３０３，１９８９；ｄｅ  ｌａ  Ｒｏｓａ，Ｅ．Ｊ．ら，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ．５８：３４７−３５２，１９９４）解離させた。解離させた細胞を、４ウェルチャンバスライド（Ｎａｌｇｅ  Ｎｕｎｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｋ．Ｋ．）上でプレートに播いた（２０，０００細胞／ｃｍ２）。このプレートは、ポリ−Ｌ−オルニチン／ラミニン（Ｓｉｇｍａ）を用いて事前にコーティングしておいた（Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｆ．，Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．６５：５０−５７，１９７８）。細胞を、Ｎ２補充物を含むＤＭＥ／Ｆ１２混合物（１：１）中で培養し（Ｂｏｔｔｅｎｓｔｅｉｎ，Ｊ．Ｅ．およびＳａｔｏ，Ｇ．Ｈ．  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．７６：５１４−５１７，１９７９）、５％  ＣＯ２を含む水飽和雰囲気中３７℃にて１２時間維持し、そしてＰＢＳ中の４％  パラホルムアルデヒドで固定した。
【１０２２】
（プラスミド構築）
ｐＥＧＦＰ−ｆｕｌｌ−ｐ２１（ａａ  １〜１６４）（配列番号２３）およびｐＥＧＦＰ−ΔＮＬＳ−ｐ２１（配列番号２３のａａ  １〜１４０）は、ＧＦＰ融合タンパク質の哺乳動物発現ベクターである（Ａｓａｄａ，Ｍ．ら，ＥＭＢＯ  Ｊ．１８：１２２３−１２３４，１９９９）。ｐＥＦ−ＢＯＳ中のＭｙｃ−Ｒｈｏ−キナーゼは、Ｋ．Ｋａｉｂｕｃｈｉ博士（Ｎａｇｏｙａ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、Ｊａｐａｎ）によって供与された。
【１０２３】
（細胞培養およびトランスフェクション）
ＮＩＨ３Ｔ３細胞、Ｎ１Ｅ−１１５細胞、および２９３Ｔ細胞を、１０％  胎仔ウシ血清を含むＤＭＥ中で維持した。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）をトランスフェクションに使用した。張線維形成アッセイに関して、ＮＩＨ３Ｔ３細胞をトランスフェクション後、血清不含培地中で１６時間培養した。張線維形成を、この細胞を１０％血清と１０分間インキュベートすることによって引き起こした。海馬ニューロンを、以前に記載されたように（Ｎｅｕｍａｎｎ，Ｈ．ら，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２６９：５４９−５５２，１９９５）、１８日齢のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットから調製した。簡単に言うと、海馬を切開し、髄膜を取り出した。切り取った組織を、粉砕によって解離させた。解離した細胞をポリ−Ｌ−リジン（Ｓｉｇｍａ）で予めコーティングしたディッシュにプレートし、１０％  胎仔ウシ血清を含むＤＭＥ中で２４時間培養した。次いで、培地を、Ｂ２７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を補充したＤＭＥと置換し、そしてこれらの細胞をＧＦＰまたはＧＦＰ−ΔＮＬＳ−ｐ２１でトランスフェクトした。ニューロン形態をトランスフェクトの２４時間後に評価した。
【１０２４】
（Ｎ１Ｅ−１１５細胞の形態学的分析）
Ｎ１Ｅ−１１５細胞を、ＧＦＰ、ＧＦＰ−ｆｕｌｌ−ｐ２１またはＧＦＰ−ΔＮＬＳ−ｐ２１でトランスフェクトし、そして血清飢餓状態で５時間培養した。次いで、培地を、１０％胎仔ウシ血清を含むＤＭＥと置換した。細胞を、トランスフェクションの４８時間後に固定した。細胞の形態を、３つの群に分類した；神経突起ポジティブ細胞、丸型細胞、および他の細胞。細胞体よりも長い神経突起を有する細胞を、神経突起ポジティブ細胞と規定した。他の細胞は、種々の特徴（微小な棘状の外見、波立った外見、および平らな外見など）を有した。
【１０２５】
（ΔＮＬＳ−ｐ２１およびＲｈｏキナーゼの同時免疫沈降）
２９３Ｔ細胞を、ＧＦＰ−ｆｕｌｌ−ｐ２１またはＧＦＰ−ΔＮＬＳ−ｐ２１と組み合わせたｍｙｃ−Ｒｈｏキナーゼでトランスフェクトした。トランスフェクションの４８時間後、細胞を、１ｍｌの溶解緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％  グリセロール、０．５％  Ｎｏｎｉｄｅｔ−Ｐ４０、ならびにプロテアーゼインヒビターカクテルの錠剤；Ｒｏｃｈｅ）を用いて溶解した。細胞溶解物を、１３，０００ｇで２０分間遠心分離し、上清を収集した。免疫沈降を、抗ｐ２１マウスモノクローナル抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）および０．７５ｍｌの上清を用いて、４℃で２時間実行した。免疫複合体をプロテインＧ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）のスラリー（５０％  ｖｏｌ／ｖｏｌ）を用いて収集し、溶解緩衝液で４回洗浄し、そしてＳＤＳ−ＰＡＧＥに供した。これを二フッ化ポリビニリデンメンブランに転写し、抗ｍｙｃウサギポリクローナル抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いてブロットした。Ｎ１Ｅ−１１５細胞中の内因性タンパク質の相互作用を、抗Ｒｈｏキナーゼ抗体を用いて同様に評価した。
【１０２６】
（インビトロ結合アッセイ）
組換え全長ｐ２１（配列番号２３の１〜１６４、９８％より高い純度、１ｎＭ；Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）およびＲｈｏキナーゼフラグメントの精製ＧＳＴ融合タンパク質（ＧＳＴ−ＣＡＴ；ａａ  ６〜５５３）を、１ｍｌの緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＤＴＴ、および１ｍＭ  ＥＤＴＡ、ならびにプロテアーゼインヒビターカクテルの錠剤）中で２時間インキュベートし、そしてＧＳＴ−ＣＡＴをグルタチオンセファロース（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を用いて沈降した。生じる沈降物を、１０％  ゲルを用いたＳＤＳ／ＰＡＧＥ後に、二フッ化ポリビニリデンメンブランに電気的に転写し、そして、抗ｐ２１抗体を用いて免疫ブロットした。
【１０２７】
（キナーゼアッセイ）
Ｒｈｏキナーゼに関するキナーゼ反応を、Ｓ６キナーゼアッセイキット（Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いて製造業者の指示書に従って実行した。簡単に言うと、インビトロアッセイに関して、１０μｌのアッセイ希釈緩衝液（ＡＤＢ：２０ｍＭ  ＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）、２５ｍＭ  β−グリセロールホスフェート、５ｍＭ  ＥＧＴＡ、１ｍＭ  オルトバナジウム酸ナトリウム、および１ｍＭ  ジチオスレイトール）、１０μｌの基質カクテル（２５０μＭ  ＡＤＢ中の基質ペプチド［ＡＫＲＲＲＬＳＳＬＲＡ］（配列番号２４））、１０μｌのインヒビターカクテル、１０μｌの［γ−３２Ｐ］ＡＴＰ混合物（［γ−３２Ｐ］ＡＴＰの１０μＣｉを含む、マグネシウム／ＡＴＰカクテル）、および２０ｍＵのＲｈｏキナーゼフラグメント（ａａ  １〜５４３；Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を混合した。ｐ２１と共に３０℃で１０分間インキュベートした後、反応混合物を、Ｐ８１ホスホセルロースペーパーにスポットし、シンチレーションカウンターを用いて定量した。
【１０２８】
インビボアッセイに関して、２９３Ｔ細胞を、ＧＦＰまたはｐ２１構築物と組み合わせたｍｙｃ−Ｒｈｏキナーゼで同時トランスフェクトした。細胞を、溶解緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％  グリセロール、１％  Ｎｏｎｉｄｅｔ−Ｐ４０およびプロテアーゼインヒビターカクテル）を用いて溶解した。キナーゼアッセイを、この溶解物を用いて実行した。
【１０２９】
（免疫染色）
免疫組織化学に関して、ヒヨコ網膜の切片を、透過化処理し、ブロッキング緩衝液（ＰＢＳ中の、０．１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ１００、０．１％  ＢＳＡ、および５％  ヤギ血清）を用いて室温で３０分間ブロッキングした。免疫細胞化学に関して、細胞を、透過化処理し、そして０．２％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を含む緩衝液を用いてブロッキングした。これを抗ｐ２１抗体（１：１０００）および抗β−チューブリンクラスＩＩＩウサギポリクローナル抗体（ＴｕＪ１）（１：２，０００；Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ，Ｉｎｃ．）を用いて４℃で一晩インキュベートし、次いで、Ａｌｅｘａ  ４８８標識ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）およびＡｌｅｘａ  ５６８標識ヤギ抗ウサギＩｇＧ抗体（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）を用いて１時間インキュベートした。テトラメチルローダミンイソチオシアネート標識したファロイジン（１：１，０００；Ｓｉｇｍａ）を用いて、ＮＩＨ３Ｔ３細胞およびＮ１Ｅ−１１５細胞中のＦ−アクチンを検出した。海馬ニューロンを、抗ＴｕＪ１抗体を用いて免疫染色した。必要である場合、ＤＡＰＩ（３００ｎＭ；Ｗａｋｏ）を用いて核を染色した。サンプルを、共焦点レーザー走査顕微鏡（Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ）下で調べた。
【１０３０】
（実施例４−１：Ｅ５胚由来のヒヨコ網膜ニューロンは、細胞質ｐ２１発現を示す）
免疫組織化学を用いて、神経発生直後の網膜ニューロンが、深い層に移動することが見出された（図１３Ａ）。細胞中のｐ２１免疫反応性を、中枢神経網膜の硝子表面において、ｐ２１に対するモノクローナル抗体を用いて検出した（図１３Ａ）。ｐ２１ポジティブ細胞は、移動前の未成熟な網膜ニューロンであった。従って、ｐ２１は、インビボにおいて網膜前駆体細胞の分化に関与することが示唆される。
【１０３１】
次に、本発明者らは、ｐ２１の細胞レベル下での局在をより正確に評価するために、Ｅ５網膜から神経前駆体細胞を単離した。ラミニン−１上で培養した分離網膜細胞は、神経突起を急速に伸長した（Ｆｒａｄｅ，Ｊ．Ｍ．ら、Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ．Ｒｅｓ．２２２：１４０−１４９、１９９６ｂ）。細胞を、１μＭ  インスリンを含む化学的に規定された培地中で、ラミニン−１上で培養した。マイクロモル濃度の範囲で使用したインスリンは、おそらく、インスリン様増殖因子−Ｉレセプターに対して作用し、ゆえに、Ｅ５網膜細胞上でインスリン様増殖因子−Ｉの分化効果を模倣する（Ｆｒａｄｅ，Ｊ．Ｍ．ら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．１２２：２４９７−２５０６，１９９６ａ）。β−チューブリンに対する免疫反応性を欠く未成熟細胞のほぼ全てにおいて、ｐ２１の発現は、核の中で優先的に見出された（図１３Ｂ）。核中のｐ２１は、これらの細胞中の細胞周期における変化に寄与し得る。一方、ニューロン特異的β−チューブリンに対する免疫反応性を有する、相対的に長い神経突起を有するほとんどのニューロンにおいて、ｐ２１は、主に細胞質に局在した（図１３Ｂ）。これらの知見は、ｐ２１の細胞質発現が、新生ニューロン中で誘導されることを示唆する。
【１０３２】
（実施例４−２：Ｎ１Ｅ−１１５細胞のインビトロ分化は、細胞質におけるｐ２１発現と関連する）
本発明者らは次に、ニューロン分化がｐ２１の細胞質発現と関連するか否かを調べるために、神経芽細胞であるＮ１Ｅ−１１５細胞を使用した。ＤＭＳＯによって分化が誘導されるＮ１Ｅ−１１５細胞を、抗ｐ２１抗体を用いて免疫染色した。ＤＭＳＯ処理の２４時間後、ｐ２１は、核に誘導された（図１４Ｂ）。しかし、４日後（この時点で、過剰な神経突起生成が十分に明らかであった）、ｐ２１は、細胞質に主に局在した（図１４Ｃ）。この点に関して、ｐ２１の分化関連細胞質発現は、ヒヨコ網膜前駆体細胞に限定されない。
【１０３３】
（実施例４−３：ｐ２１の異所性発現は、Ｎ１Ｅ−１１５細胞の形態に影響を与える）
ｐ２１を細胞質で発現する細胞が長い神経突起を伸長し、そして細胞質ｐ２１を欠く細胞が長い神経突起を伸長しなかったので（図１３および１４）、本発明者らは、細胞質ｐ２１が神経突起伸長と関連するという仮説をたてた。従って、本発明者らは次に、細胞質へのｐ２１の再局在が神経突起の伸長を誘発するか否かを調べた。この問題に取り組むために、核局在シグナルを欠くｐ２１（ΔＮＬＳ−ｐ２１；ａａ  １〜１４０）の哺乳動物発現ベクターならびに全長ｐ２１（ｆｕｌｌ−ｐ２１；ａａ  １〜１６４）の哺乳動物発現ベクターを作製した（Ａｓａｄａ，Ｍ．ら，ＥＭＢＯ  Ｊ．１８：１２２３−１２３４，１９９９）。ΔＮＬＳ−ｐ２１またはＧＦＰでトランスフェクトした細胞は、トランスフェクションの４８時間後まで増殖した（図１５Ａ）が、ｆｕｌｌ−ｐ２１を用いた細胞は、増殖を停止した。ｆｕｌｌ−ｐ２１を用いてトランスフェクトした細胞またはＤＭＳＯ処理した細胞において、サイクリンＤ３のタンパク質（Ｋｒａｎｅｎｂｕｒｇ，Ｏ．ら，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１３１：２２７−２３４，１９９５）のレベルは、非常に増大し、一方、ΔＮＬＳ−ｐ２１を用いた細胞において、発現の変化は見出されなかった（図１５Ｂ）。さらに、不十分なリン酸化（ｕｎｄｅｒｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ）状態のｐＲｂ（網膜芽細胞腫遺伝子産物）が、誘導され、そして過剰にリン酸化されたｐＲｂが、ＤＭＳＯ処理によって検出不能になり、過剰にリン酸化されたｐＲｂは、観察した期間の間、ΔＮＬＳ−ｐ２１をトランスフェクトした細胞において優勢なままであった（図１５Ｂ）。これらのデータは、Ｕ９３７細胞において示されたように（Ａｓａｄａ，Ｍ．ら，ＥＭＢＯ  Ｊ．１８：１２２３−１２３４，１９９９）、ΔＮＬＳ−ｐ２１が、Ｎ１Ｅ−１１５細胞において分化誘導活性を有さないことを実証する。従って、これらのことから、本発明者らは、細胞に対する分化効果を考慮することなく、ｐ２１の効果を評価することができた。Ｎ１Ｅ−１１５細胞におけるΔＮＬＳ−ｐ２１の発現レベルは、ＤＭＳＯ処理４日後の細胞中の内因性ｐ２１の発現レベルと匹敵した（図１５Ｃ）。Ｎ１Ｅ−１１５細胞を、これらの構築物を用いてトランスフェクトし、そして形態学的変化を、４８時間後に評価した。全長ｐ２１発現を伴う細胞は、ＧＦＰ発現細胞またはトランスフェクションしていない細胞と比較して、いくらか平らかつ拡大された様子を示し、細胞の丸みが少なくなり（図１５Ｄ）、一方で、長い神経突起を有する細胞集団は増加しなかった（図１５Ｅ）。これらの変化は、核の中でｐ２１を発現するＮ１Ｅ−１１５細胞の分化によって引き起こされ得（Ｋｒａｎｅｎｂｕｒｇ，Ｏ．ら，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１３１：２２７−２３４，１９９５）、本発明者らは、細胞をＤＭＳＯ処理によって分化させた（Ｋｉｍｈｉ，Ｙ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．７３：４６２−４６６，１９７６）場合に、類似の表現型を観察した（データには示さない）。全長ｐ２１発現を伴う細胞は、４日後に長い神経突起を伸長し、この時点で、ｐ２１に対するシグナルもまた、細胞質において見出された（データには示さない）。一方、ΔＮＬＳ−ｐ２１を用いてトラ��スフェクトされた細胞の４５％より多くが、長い神経突起を伸長した（コントロールと比較して、３．１倍の増加；図１５Ｅ）。これらの結果は、細胞質ｐ２１がＮ１Ｅ−１１５細胞において神経突起のリモデリングを調節することを示唆する。
【１０３４】
（実施例４−４：細胞骨格機構に対する、細胞質ｐ２１の効果）
ＲｈｏＡのドミナントネガティブ変異体またはｐ１６０ＲＯＣＫ（Ｒｈｏキナーゼのアイソフォーム）の過剰発現は、Ｎ１Ｅ−１１５細胞の丸まりを誘導した（Ｈｉｒｏｓｅ，Ｍ．ら，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１４１：１６２５−１６３６，１９９８）が、ｐ１６０ＲＯＣＫのドミナントネガティブ変異体の発現またはＹ−２７６３２（Ｒｈｏキナーゼの特定の阻害活性を有する化合物（Ｕｅｈａｔａ，Ｍ．ら，Ｎａｔｕｒｅ  ３８９：９９０−９９４，１９９７）での処理（図１５Ｅ）は、有意な神経突起形成を誘導した（Ｈｉｒｏｓｅ，Ｍ．ら，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１４１：１６２５−１６３６，１９９８）。Ｎ１Ｅ−１１５細胞における本発明者らの知見は、これらの以前の報告と組み合わせて、細胞質ｐ２１の神経突起促進活性が、Ｒｈｏ／Ｒｈｏキナーゼと関連し得ることを示唆する。従って、本発明者らは、ｐ２１がＲｈｏによって媒介されるアクチン細胞骨格を調節するか否かを調べるために、ＮＩＨ３Ｔ３細胞を次に使用した。ＮＩＨ３Ｔ３細胞を、ΔＮＬＳ−ｐ２１でトランスフェクトし、次いで、１６時間血清を飢餓させる。血清を用いた１０分間のインキュベーションによって、アクチン張線維の形成が、好ましくはＲｈｏの活性化を通して誘導された（Ｒｉｄｌｅｙ，Ａ．Ｊ．およびＨａｌｌ，Ａ．  Ｃｅｌｌ  ７０：３８９−３９９，１９９２）。しかし、ΔＮＬＳ−ｐ２１でトランスフェクトされたＮＩＨ３Ｔ３細胞は、血清添加後にほとんど張線維を形成せず、一方、顕著な張線維が非トランスフェクト細胞中で見出された（図１６）。広範囲なアクチン張線維が、全長ｐ２１発現を用いた細胞中で観察された（データには示さない）。これらの結果は、ＮＩＨ３Ｔ３細胞におけるＲｈｏ誘導性アクチン再編成が、ｐ２１の細胞質発現によってブロックされ得ることを示唆する。
【１０３５】
（実施例４−５：ｐ２１は、細胞質においてＲｈｏキナーゼに結合する）
Ｒｈｏキナーゼは、線維芽細胞においてｍＤｉａ１と共に作用して、Ｒｈｏ誘導性表現型を誘発することが示された（Ｗａｔａｎａｂｅ，Ｎ．ら，Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１：１３６−１４３，１９９９）。血清は、Ｒｈｏの最も強力なアクチベーターのうちの１つであるので（Ｒｉｄｌｅｙ，Ａ．Ｊ．およびＨａｌｌ，Ａ．  Ｃｅｌｌ  ７０：３８９−３９９，１９９２）、血清刺激細胞における細胞質ｐ２１の発現による張線維形成の損失は、Ｒｈｏの下流経路の妨害から生じ得る。ΔＮＬＳ−ｐ２１の発現によるＮ１Ｅ−１１５細胞の形態学的変化は、Ｙ−２７６３２によるものと匹敵した（図１５Ｅ）。ｐ２１が、アポトーシスシグナル調節キナーゼ１の活性（Ａｓａｄａ，Ｍ．ら，ＥＭＢＯ  Ｊ．１８：１２２３−１２３４，１９９９）およびセリントレオニンキナーゼであるサイクリン−Ｃｄｋキナーゼの活性（総説に関して、Ｐｉｎｅｓ，Ｊ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３０８：６９７−７１１，１９９５を参照のこと）を阻害することを考慮して、本発明者らは、ｐ２１がＲｈｏキナーゼ（これはまた、セリントレオニンキナーゼでもある）の活性を阻害し得ると推測した。細胞質ｐ２１が、細胞質中でＲｈｏキナーゼと複合体を形成する可能性を試験するために、同時免疫沈降研究を、ＧＦＰ−ΔＮＬＳ−ｐ２１およびｍｙｃタグ化Ｒｈｏキナーゼで同時トランスフェクトをした２９３Ｔ細胞を用いて実行した。細胞質発現は、ＧＦＰ−ΔＮＬＳ−ｐ２１を用いてトランスフェクトした２９３Ｔ細胞中で十分に明らかであった（図１７Ａ）。溶解物を、抗ｐ２１抗体を用いて免疫沈降した場合、ｐ２１は、ｍｙｃタグ化Ｒｈｏキナーゼを効率的に沈降した（図１７Ｂ）。次いで、ΔＮＬＳ−ｐ２１とＲｈｏキナーゼとの相互作用がその細胞局在に依存するか否かを試験する試みにおいて、本発明者らは、ＲｈｏキナーゼとＧＦＰ−ｆｕｌｌ−ｐ２１（これは、核に優先的に発現する）との相互作用を試験した（図１７Ａ）。２９３Ｔ細胞におけるｐ２１の全長形態と短縮形態との比較可能な発現にも関わらず、ΔＮＬＳ−ｐ２１と対照的に、かすかなシグナルのみが検出され得た（図１７Ｂ）。
【１０３６】
人工的に過剰発現するタンパク質の相互作用を天然の細胞中で検出することは困難であり得る。抗ｐ２１抗体を用いて、本発明者らは、分化Ｎ１Ｅ−１１５細胞から調製した溶解物を用いて、内因性タンパク質の相互作用を調べた。Ｎ１Ｅ−１１５細胞は、ＤＭＳＯでの処理後３日〜４日で、細胞質中にｐ２１を発現した（図１４）。ｐ２１免疫沈降物において、抗Ｒｈｏキナーゼ抗体によって、Ｒｈｏキナーゼに対応するタンパク質の存在が明らかになった（図１７Ｃ）。
【１０３７】
全長ｐ２１とＲｈｏキナーゼとの相互作用の欠如は、細胞中の局在化の差異に起因し得る。従って、本発明者らは、組換え全長ｐ２１とＲｈｏキナーゼとのインビトロ相互作用を試験した。これらのタンパク質は、インビトロで互いに結合した（図１７Ｄ）。本明細書中に使用されるＲｈｏキナーゼのフラグメントに対した融合されたＧＳＴ（ＧＡＴ−ＣＡＴ；ａａ  ６〜５５３）は、Ｒｈｏキナーゼの触媒領域に対応するので、ｐ２１は、Ｒｈｏキナーゼの触媒領域に直接結合し得る。これは、Ｓ６キナーゼ基質ペプチド（ＡＫＲＲＲＬＳＳＬＲＡ）ならびにＹ−２７６３２が、ｐ２１とＲｈｏキナーゼとの相互作用を用量依存的に阻害したという本明細書中の知見を実証する（図１７Ｄ）。これらの結果は、ｐ２１が細胞質においてＲｈｏキナーゼと会合することを示唆する。
【１０３８】
（実施例４−６：ｐ２１は、Ｒｈｏキナーゼ活性を阻害する）
本発明者らは次に、ｐ２１がインビトロにおいてＲｈｏキナーゼの活性を阻害し得るか否かを調べた。キナーゼアッセイは、Ｓ６キナーゼ基質ペプチドおよび［γ−３２Ｐ］ＡＴＰを用いて実行した。シンチレーションカウンタを使用することによって、ホスホセルロースペーパー上の３２Ｐ−標識基質ペプチドの量を、決定した。この動的分析によって、ｐ２１が、用量依存様式でＳ６キナーゼ基質ペプチドに対するＲｈｏキナーゼ活性を阻害することが明らかとなり（図１８Ａ）、そしてＩＣ５０値は、１．４３ｎＭと概算された。
【１０３９】
これらの結果に基づき、Ｒｈｏキナーゼ活性が、インビボにおいてΔＮＬＳ−ｐ２１の発現によって阻害されるか否かを本発明者らは調べた。２９３Ｔ細胞を、ΔＮＬＳ−ｐ２１の存在下または非存在下でｍｙｃ−Ｒｈｏキナーゼを用いてトランスフェクトした。キナーゼアッセイは、インビトロアッセイと同じ方法で細胞由来の溶解物を用いて実行した。その結果によって、Ｒｈｏキナーゼ活性は、コントロールと比較して、ΔＮＬＳ−ｐ２１を発現する細胞において阻害されてもとの平均４８．１％となったことが示された（図１８Ｂ）。この阻害効果は、Ｙ−２７６３２の効果（阻害されてもとの平均５１．９％になった）に匹敵するが、全長ｐ２１の発現は、有意な効果を有さなかった。本発明者らのデータは、Ｒｈｏキナーゼ活性が、インビボおよびインビトロおいてｐ２１によって阻害されることを明確に実証する。
【１０４０】
（実施例４−７：細胞質ｐ２１は、海馬ニューロンにおいて神経突起の伸展および分枝を促進する）
細胞質ｐ２１がＲｈｏキナーゼに対して作用するという本発明者らの知見の妥当性を調べるために、本発明者らは、ニューロンに対する効果を評価した。ラットＥ１８胚由来の海馬ニューロンの培養物を使用した。このニューロンは抗ｐ２１抗体を用いた免疫細胞化学によって検出されるに十分な内因性ｐ２１を発現しなかった（データには示さない）ので、本発明者らはこのニューロンを選択した。分離した海馬ニューロンを、４８時間インキュベートし、そしてΔＮＬＳ−ｐ２１を用いてトランスフェクトした。トランスフェクションの２４時間後、細胞を固定し、β−チューブリンＩＩＩを用いて免疫標識した。１ニューロンあたりの総神経突起長、軸索長（１ニューロンあたりの最も長い神経突起の長さとして規定）、ニューロン体に由来する一次突起物の数、および１ニューロンあたりの分枝点の数を決定した（Ｎｅｕｍａｎｎ，Ｈ．ら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２２：８５４−８６２，２００２）。ΔＮＬＳ−ｐ２１を発現する細胞のニューロン形態は、トランスフェクションしていないコントロール細胞またはＧＦＰを発現するコントロール細胞とは明らかに異なった（図１９Ａ）。ΔＮＬＳ−ｐ２１発現を伴う細胞は、コントロール細胞（ＧＦＰを発現する細胞、またはトランスフェクションしていない細胞）よりも、より長い神経突起を伸長し、そしてより多くの分枝点を有した。ΔＮＬＳ−ｐ２１の異所性発現は、ニューロンあたりの総神経突起長を１３５．９μｍ（±７．２μｍ  ＳＥＭ）から３０７．２μｍ（±３４．０μｍ  ＳＥＭ）に増大し、軸索長を６６．３μｍ（±３．２μｍ  ＳＥＭ）から１６２．９μｍ（±１８．６μｍ  ＳＥＭ）に増大し、１ニューロンあたりの分枝点の数を１．３（±０．２  ＳＥＭ）から２．６（±０．３  ＳＥＭ）に増大した。しかし、一次突起物の数における変化は、細胞質ｐ２１の過剰発現によって見出されなかった（図１９Ｂ）。これらの結果は、細胞質ｐ２１が、胚性海馬ニューロン中で神経突起リモデリングを調節することを示す。
【１０４１】
（実施例４−８：ＴＡＴ結合ｐ２１の効果）
ｐ２１を、２００ｇの雄性Ｗｉｓｔａｒ系ラットを用いて、神経再生実験を行ったところ、その効果が十分に見られなかった。
【１０４２】
そこで、本発明者らは、ｐ２１にＴＡＴ  ＰＴＤドメインを結合させた分子を作製し、その効果を調べた。
【１０４３】
まず、ｐ２１をコードする核酸配列に、ＧＳＴをコードする核酸配列およびヒト免疫不全ウイルスタンパク質からのアミノ末端１１アミノ酸タンパク質導入ドメイン（ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ）（配列番号２０）をコードする核酸配列およびｍｙｃをコードする配列を融合させたものを作製した（図２０）。また、コントロールとして、ｐ２１コード配列のないものを作製した（図２０）。これを定法によりポリペプチドを発現させ、脊髄損傷後の機能回復に作用するかどうかを調べた。
【１０４４】
２００ｇの雄性Ｗｉｓｔａｒ系ラットの第９胸椎の椎弓切除を行った後、脊髄の背側半分を切断した。持続浸透圧ポンプを用いて損傷部位へ上記ＴＡＴ結合ｐ２１およびコントロールタンパク質の持続的な投与を２週間行った。このときに、ポンプに接続したチューブの先端を髄腔内に留置した。
【１０４５】
脊髄損傷後の機能回復として、ＢＢＢスコア（Ｂａｓｓｏ−Ｂｅａｔｔｉｅ−Ｂｒｅｓｎａｈａｎ（ＢＢＢ）  Ｌｏｃｏｍｏｔｏｒ  Ｒａｔｉｎｇ；Ｂａｓｓｏ  Ｄ．Ｍ．，Ｂｅａｔｔｉｅ  Ｍ．Ｓ．，Ｂｒｅｓｎａｈａｎ  Ｊ．Ｃ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ  １２（１）：１−２１（１９９５））を使用し、損傷後の２日から６週間にわたって観察を行った。その結果を図２１に示す。
【１０４６】
図２１に示すように、ＴＡＴ結合ｐ２１ポリペプチドを投与した群では、顕著な脊髄機能の回復が見られたのに対して、コントロール群ではそのような回復はほとんど見られない。したがって、本発明のＴＡＴ結合ｐ２１は、実際の神経系の再生を促進し、しかも機能回復ももたらすことが明らかになった。
【１０４７】
また、ｐ２１においてＴＡＴ  ＰＴＤドメインが作用することが明らかになったことから、このように、ＴＡＴ  ＰＴＤドメインは、神経再生のための組成物を、実際に作用させるために顕著な効果を示すことが明らかになった。
【１０４８】
（実施例４−９：他のＲｈｏキナーゼ阻害剤）
同様の実験を、Ｒｈｏキナーゼに対して特異的に相互作用する因子として抗体を用いた場合でも結果として神経突起が伸長することが観察され、かつ、インビトロで神経が再生することが観察された。
【１０４９】
（実施例５：ＰＫＣおよびＩＰ３の効果）
本実施例において、ＰＫＣとＩＰ３との調節がｐ７５シグナル伝達においてどのような影響を与え、神経再生において効果を奏するかどうかを確認した。
【１０５０】
（方法）
（カルシウム画像化）
全ての実験手順は、大阪大学によって承認されたものを利用した。培養した顆粒細胞を、４ｍＭ  Ｆｕｒａ  Ｒｅｄおよび４ｍＭ  Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ  ４８８ＢＡＰＴＡ−１（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇｏｎ）の細胞透過性アセトキシメチルエステルとともに、３７℃で１時間、同時局在化させ、そしてＬｅｉｃａ共焦点画像化システムを用いて画像化した。Ｈａｎｋ’ｓ  ＭＥＭを使用して、実験の間のｐＨ変化を回避した。ｐ７５の細胞外ドメインに対する抗体を、画像化の２時間前に添加し、そしてＵ７３１２２（５０ｎＭ）を画像化の３０分前に添加した。細胞を、アルゴンレーザーからの４８８ｎｍの光を用いて照射した。細胞体全体からの蛍光画像を、レシオメーター（ｒａｔｉｏｍｅｔｒｉｃ）カルシウム測定のために使用した。Ｆｕｒａ  ＲｅｄおよびＯｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ発光シグナルを、それぞれ６０５〜７００ｎｍおよび５００〜５６０ｎｍにて収集し、そして１０秒間隔で分析した。Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ／Ｆｕｒａ  Ｒｅｄ比率は、５３０ｎｍにおけるピクセル値を６４０ｎｍにおけるピクセル値で除算することによって計算した。２５μｇ／ｍｌの濃度のＭＡＧ−Ｆｃキメラ（ＲＤ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ）を使用した。
【１０５１】
（ＰＫＣアッセイ）
プロテインキナーゼＣ系の非放射性検出のためのＰｅｐＴａｇアッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）を用いて、ＰＫＣアッセイを実行した。血清飢餓させた培養小脳顆粒細胞を、ＰＴＸ（２０ｍｇ／ｍｌ）の存在下または非存在下で、ＭＡＧ−Ｆｃ（２５μｇ／ｍｌ）またはＮｏｇｏペプチド（Ａｌｐｈａ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ，Ｓａｎ  Ａｎｔｏｎｉｏ，ＴＸ，ＵＳＡ；４μＭ）によって刺激した。各サンプルを、ＰＫＣ基質ＰｅｐＴａｇ  Ｃ１ペプチド（２μｇ）を用いて、３０℃で３０分間インキュベートした。サンプルを、０．８％  アガロースゲル上で１００Ｖにて１５分間分離した。リン酸化されたペプチド基質は、陽極（＋）に向かって移動し、一方、リン酸化されていないペプチド基質は、陰極（−）に向かって移動した。このゲルを、トランスイルミネーター（Ｕｐｌａｎｄ  ９５−０２２０−０３）上で撮影した。
【１０５２】
（神経突起伸展アッセイ）
脊髄神経節を、Ｐ１ラット（日本クレア、東京、生後１日齢）から取り出し、そして０．０２５％  トリプシン（Ｓｉｇｍａ）を用いて１５分間３７℃でインキュベーションすることによって、単一細胞に分離させた。小脳ニューロンについて、２匹の動物（ｐ７ラット（日本クレア、東京、生後７日齢））由来の小脳を、５ｍｌの０．０２５％  トリプシン中で合わせ、粉砕し、そして３７℃で１０分間インキュベートした。１０％  ＦＣＳを含むＤＭＥＭを、添加し、細胞を８００ｒｐｍにて遠心分離した。ニューロンを、ポリ−Ｌ−リジンでコーティングしたチャンバスライド上のＳａｔｏ培地（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）中、プレートに播いた。伸展アッセイについて、プレートに播いた細胞を、２４時間インキュベートし、そして４％（重量／容積）パラホルムアルデヒド中で固定し、そしてニューロン特異的βチューブリンＩＩＩタンパク質を認識するモノクローナル抗体（ＴｕＪ１）を用いて免疫染色した。次いで、最も長い神経突起の長さまたは各βチューブリンＩＩＩ陽性ニューロンの総プロセスでの伸展を、決定した。示される場合、ＭＡＧ−Ｆｃ（２５μｇ／ｍｌ）またはＮｏｇｏペプチド（４μＭ）、ＰＴＸ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉ，ＵＳＡ；２ｎｇ／ｍｌ）、Ｕ７３１２２（Ｓｉｇｍａ；２０ｎＭ）、ＸｅｓｔｓｐｏｎｇｉｎＣ（Ｓｉｇｍａ；１μＭ）、または細胞透過性ＰＫＣインヒビター２０−２８（２μＭ；Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）を、プレートに播いた後、培地に添加した。
【１０５３】
（成長円錐崩壊アッセイ）
Ｅ１２ヒヨコ脊髄神経節の外植片を、１００μｇ／ｍｌ  ポリ−Ｌ−リジンで予めコーティングしたプラスチックスライド上にて２４時間インキュベートし、そして示された濃度の可溶性ＣＮＳミエリン抽出物（Ｓｉｇｍａ）（ＭＡＧ−Ｆｃ（２５μｇ／ｍｌ）またはＮｏｇｏペプチド（４μＭ））を用いて３０分間処理した。外植片を４％（重量／容積）パラホルムアルデヒド中で固定し、そして蛍光標識ファロイジン（Ｓｉｇｍａ）を用いて染色した。
【１０５４】
（ＧＴＰ−ＲｈｏＡのアフィニティー沈降）
細胞を、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）、１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、０．５％  デオキシコール酸ナトリウム、０．１％  ＳＤＳ、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、ならびに１０μｇ／ｍｌ  ロイペプチンおよび１０μｇ／ｍｌ  アプロチニン中に溶解した（Ｔａｎｇ  Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１３８．１３５５−１３６６（１９９７））。細胞溶解物を、１３，０００ｇ、４℃で１０分間の遠心分離によって清澄化し、上清を、Ｒｈｏｔｅｋｉｎビーズ（Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）のＧＳＴ−Ｒｈｏ結合ドメインの２０μｇを用いて、４℃にて４５分間インキュベートした。このビーズを、洗浄緩衝液（１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１０μｇ／ｍｌ  ロイペプチンおよび１０μｇ／ｍｌ  アプロチニンを含む、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５））を用いて４回洗浄した。結合したＲｈｏタンパク質を、ＲｈｏＡに対するモノクローナル抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いてウエスタンブロッティングによって検出した。
【１０５５】
３つの異なるミエリンタンパク質（ＭＡＧ、Ｎｏｇｏおよび稀突起神経膠細胞ミエリン糖タンパク質）は、共通のレセプターであるＮｏｇｏレセプターに結合することによって、軸索成長を阻害する。Ｎｏｇｏレセプターは、細胞表面に連結したＧＰＩであり、そして細胞内シグナル伝達ドメインを有さないので、Ｎｏｇｏレセプターは、ミエリンタンパク質に対する結合パートナーとして機能する。近年、Ｎｏｇｏレセプターと複合体化したｐ７５が、これらのタンパク質のシグナル伝達エレメントであることが示された（Ｙａｍａｓｈｉｔａ、Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，１５７，５６５−５７０（２００２）；Ｗａｎｇ  Ｋ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ４２０，７４−７８（２００２）；およびＷｏｎｇ  Ｓ．Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．５，１３０２−１３０８（２００２））。低分子ＧＴＰａｓｅ  Ｒｈｏが、ミエリンによる増殖阻害シグナル伝達の重要な細胞内エフェクターであることの実証は、関与するシグナル伝達機構を理解するための１つの可能性のある手掛かりである。その活性なＧＴＰ結合形態において、Ｒｈｏはアクチン細胞骨格を堅くし、それによって軸索伸長を阻害し、そして増殖円錐の破壊を媒介する（Ｄａｖｉｅｓ，Ａ．Ｍ．，Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．１０，Ｒ１９８−２００（２０００）；Ｓｃｈｍｉｄｔ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１６，１５８７−１６０９（２００２））。Ｒｈｏ  ＧＴＰａｓｅファミリーのメンバーであるＲｈｏＡは、ｐ７５依存性機構を介して、ＭＡＧ、Ｎｏｇｏおよび稀突起神経膠細胞ミエリン糖タンパク質によって活性化され、このようにして、生後感覚ニューロンおよび小脳ニューロンからの神経突起伸展を阻害する（Ｙａｍａｓｈｉｔａ、Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，１５７，５６５−５７０（２００２）；Ｗａｎｇ  Ｋ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ４２０，７４−７８（２００２））。ｐ７５を介したＭＡＧおよびＮｏｇｏによるＲｈｏＡ活性の調節は、Ｒｈｏ  ＧＤＩからのＲｈｏＡの放出によって媒介された。このことは、ＲｈｏＡの活性を抑制されたことを示す（Ｙａｍａｓｈｉｔａ  Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．６，４６１−４６７（２００３））。
【１０５６】
ＲｈｏＡは、軸索成長の調節において主要なプレーヤーのようであるが、本発明者らは、いくつかの他のシグナルがミエリン由来インヒビターの効果に関与し得る可能性について、興味を持った。ＭＡＧが生後４日まで脊髄神経節（ＤＲＧ）ニューロンからの軸索成長を促進すること（Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｐ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ  ３，３７７−３８５（１９８９）；Ｍｕｋｈｏｐａｄｈｙａｔｙ，Ｇ．Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ  １３，７５７−７６７（１９９４））は、興味深いことである。この知見によって、ミエリン由来タンパク質が軸索再生を阻害もするし、促進もする、二機能性分子であるという可能性が導かれた。この仮説を評価するために、本発明者らは、これらのタンパク質によって調節され得る他のシグナルを追求した。ＭＡＧは培養Ｘｅｎｏｐｕｓ脊髄ニューロン中の細胞内Ｃａ２＋濃度の上昇を急速に引き起こすということが、以前に示された（Ｗｏｎｇ  Ｓ．Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．５，１３０２−１３０８（２００２））。ＭＡＧ依存性の軸索成長円錐の崩壊は、Ｃａ２＋シグナル伝達を必要とする。本発明者らは、生後７日（ｐ７）のラット由来の小脳顆粒ニューロンを用いてこの結果を確認することによる、一連の実験を開始した。Ｃａ２＋感受性蛍光色素であるＯｒｅｇｏｎ−ｇｒｅｅｎ  ４８８ＢＡＰＴＡ−１およびＦｕｒａ  Ｒｅｄを用いた蛍光画像化によって、ＭＧＡ−Ｆｃを培地に添加した後１分以内に、細胞質ゾルＣａ２＋が細胞の体において有意に上昇したことが示された（図２３ＡおよびＢ）。本発明者らは、神経突起上のＣａ２＋シグナルをモニターすることはできなかった。なぜなら、これらの小さい顆粒細胞の神経突起に充填された蛍光色素の量が限られていたからである（Ｘｉａｎｇ、Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ５，８４３−８４８（２００２））。このＣａ２＋上昇は、Ｕ７３１２２（ホスホリパーゼＣ（ＰＬＣ）の特異的なインヒビター）によってブロックされた。ＰＬＣは、ニューロンにおいて、Ｇｉ（ヘテロダイマーＧＴＰ結合タンパク質）の主要な下流のエフェクターであるので、細胞内Ｃａ２＋上昇は、Ｇｉ−ＰＬＣの活性化に依存し得る。Ｇｉ経路の関与は、以前に、ＭＡＧがニューロトロフィン誘導性ｃＡＭＰ蓄積を阻害するという観察によって示唆され（Ｃａｉ，Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ  ２２，８９−１０１（１９９９））、これは、Ｇタンパク質（Ｇｉタンパク質、およびＧ０タンパク質）の特異的なインヒビターである百日咳毒素（ＰＴＸ）によって減弱される。以前に報告されたように（Ｗｏｎｇ  Ｓ．Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．５，１３０２−１３０８（２００２））、ＭＡＧによるＣａ２＋の上昇は、ｐ７５の細胞外ドメインに対する抗体によって阻害され（データには示さない）、このことは、ｐ７５がＣａ２＋シグナルに関与することを実証する。これらの知見は、以前の知見を確認するだけでなく、Ｇｉ−ＰＬＣがＭＡＧによって活性化されることも示唆する。ＰＬＣの活性化は、ホスファチジルイノシトール４，５−ビスホスフェート（ＰＩＰ２）の加水分解を導き、２つの細胞質第２メッセンジャー（ジアシルグリセロール（Ｄ��Ｇ）およびＩＰ３）を産生する（Ｂｅｒｒｉｄｇｅ，Ｍ．Ｊ．，Ｎｅｕｒｏｎ  ２１，１３−２６（１９９８））。内部貯蔵からのＩＰ３感受性Ｃａ２＋放出に起因するＣａ２＋上昇を伴うＤＡＧの産生は、ＰＫＣを活性化する。これらの事実から、本発明者らは、ＰＫＣが小脳顆粒ニューロン中のＭＡＧまたはＮｏｇｏシグナル伝達に関与するか否かを調べる実験を試みた。培養顆粒細胞を２５μｇ／ｍｌのＭＡＧまたは４μｇのＮｏｇｏペプチドを用いて５分間処理した場合、ＰＫＣ活性は、有意に増加した（図２３Ｃ）。ＭＡＧ−ＦｃまたはＮｏｇｏペプチドによるＰＫＣの活性化は、２０ｎｇ／ｍｌ  ＰＴＸによって妨害された。これらの結果は、ＰＫＣ活性化ならびにＩＰ３レセプター活性化を誘発する、ＭＡＧ媒介Ｇｉ経路またはＮｏｇｏ媒介Ｇｉ経路の活性化を示唆する。
【１０５７】
本発明者らは次に、Ｇｉ経路が神経突起伸展に対するＭＡＧまたはＮｏｇｏの効果と関連するか否かを調べた。可溶性ＭＡＧ（これは、ミエリンから大量に放出され、かつインビボで見出される）およびＭＡＧ−Ｆｃは、軸索成長を強力に阻害し得ることが、示された（Ｔａｎｇ  Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１３８，１３５５−１３６６（１９９７）；Ｔａｎｇ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．９，３３３−３４６（１９９７））。２５μｇ／ｍｌの濃度のＭＡＧ−Ｆｃは、Ｐ７ラット由来の小脳顆粒ニューロンの神経突起伸展を阻害した（図２４）。Ｆｃは、ニューロンに対して何の影響もなかった（データには示さない）。総プロセスでの伸展を測定しようとも最も長い神経突起の長さを測定しようとも、まさに同じ結果が得られた（データには示さない）。Ｎｏｇｏペプチド（４μＭ）もまた、神経突起伸展を有意に阻害した（図２４Ａ）。しかし、ＰＴＸもＵ７３１２２も、ＭＡＧ−ＦｃまたはＮｏｇｏペプチドの作用を調節しなかった（図２４Ａ）。これらの結果は、ＧｉまたはＰＬＣが神経突起伸長の調節に関して、ＭＡＧまたはＮｏｇｏの阻害効果と関連しないことを示唆する。
【１０５８】
ＰＬＣ活性化の下流の２つの異なるシグナル伝達カスケード（ＰＫＣ経路およびＩＰ３経路）が存在する。従って、本発明者らが試験した次の仮説は、２つのシグナルのバランスが、これらのインヒビターの効果に影響を与え得るかということである。ＭＡＧおよびＮｏｇｏの機能におけるＰＫＣの関与を、最初に評価した。驚くべきことに、ＭＡＧ−ＦｃおよびＮｏｇｏペプチドは、特定の膜透過性ＰＫＣインヒビターペプチドの存在下で神経突起伸展を劇的に刺激したが、ＰＫＣインヒビター自体は、成長に何の影響も与えなかった（図２４ＢおよびＣ）。ＭＡＧ−ＦｃまたはＮｏｇｏペプチドによって誘導される神経突起伸展の程度は、コントロール条件における神経突起伸展と比較して、約２倍である。他のＰＫＣインヒビター（Ｇ０６９７６）を使用した場合でも、同じ結果が得られた（データには示さない）。これらのデータは、ＰＫＣの活性に依存する、ＭＡＧおよびＮｏｇｏによる神経突起伸長の双方向性調節を示す。
【１０５９】
本発明者らは、ニューロン成長円錐に対するＭＡＧ−ＦｃおよびＮｏｇｏペプチドの効果をモニターするために、ヒヨコＥ１２  ＤＲＧ外植片を使用した。ＭＡＧ−Ｆｃ（２５μｇ／ｍｌ）の適用またはＮｏｇｏペプチド（４μＭ）の適用の両方が、有意な成長円錐の破壊活性を示した（図２５ＡおよびＢ）。神経突起伸展アッセイによって得られたデータと一致して、ＭＡＧ−ＦｃおよびＮｏｇｏペプチドは、コントロールと比較して、ＰＫＣインヒビターの存在下で成長円錐の拡大を増強した。ウシ白質由来の精製ミエリンは、０．１〜１０ｎｇ／μｌの濃度で成長円錐の破壊を誘発したが、ＰＫＣインヒビターは、ミエリンによって媒介される効果を完全に逆転させた（図２５Ｂ）。これらの知見は、ＭＡＧ、Ｎｏｇｏおよびミエリンが神経突起伸展を阻害し、そしてＰＫＣを活性化することによって成長円錐の破壊を誘発し、一方、これらのインヒビターによる神経突起伸展の促進および成長円錐の拡大が、ＰＫＣ非依存性機構によって媒介されることを示唆する。Ｇｉの阻害もＰＬＣの阻害も、ＭＡＧまたはＮｏｇｏによって媒介される効果の調節を生じなかったという事実を考慮すると、ヘテロダイマーＧｉおよびＰＬＣの下流の点で分岐するこの２経路のバランス機構が、ＭＡＧおよびＮｏｇｏペプチドが神経突起伸展を促進するかまたは阻害するか否かを決定し得る。
【１０６０】
本発明者らのデータによってＰＫＣがミエリン由来インヒビターの効果に関与することが示されたので、本発明者らは次に、ＧｉおよびＰＬＣの別の下流シグナルであるＩＰ３に注目した。ＩＰ３経路がＭＡＧおよびＮｏｇｏの効果を媒介するか否かを試験するために、本発明者らは、Ｘｅｓｔ  Ｃ（ＩＰ３レセプターのインヒビター）を浴に適用した。ＰＫＣインヒビターと対照的に、小脳顆粒ニューロンにおけるＭＡＧ−ＦｃまたはＮｏｇｏペプチドによる神経突起伸展阻害は、Ｘｅｓｔ  Ｃによって影響を受けなかった（図２６Ａ）。従って、これらのニューロンにおいて、ＰＫＣ経路は、ＩＰ３経路よりも優勢であり得、ＭＡＧおよびＮｏｇｏに応答した神経突起伸展の阻害を導く。
【１０６１】
ＭＡＧまたはＮｏｇｏによって誘導される軸索再生の阻害から促進への変換についての可能性のある機構は、ＰＫＣがＲｈｏ活性を調節するという機構である。なぜなら、Ｒｈｏは、神経突起伸長の阻害において重要なシグナル伝達分子であることが示されているからである（Ｙａｍａｓｈｉｔａ、Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，１５７，５６５−５７０（２００２）；Ｗａｎｇ  Ｋ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ４２０，７４−７８（２００２））。これに取り組むために、本発明者らは、ニューロン中のＲｈｏＡ活性を測定した。エフェクタータンパク質ＲｈｏｔｅｋｉｎのＲｈｏＡ結合ドメインを用いて（Ｒｅｎ，Ｘ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１８，５７８−５８５（１９９９））、ＲｈｏＡのＧＴＰ結合形態を、アフィニティー沈降させ得る。このアッセイによって、ＭＡＧ−ＦｃまたはＮｏｇｏペプチドをＰ７ラットの小脳ニューロンに添加した３０分後に、ＲｈｏＡが活性されることが明らかになった（図２６Ｂ）。ＰＫＣインヒビターは、ＭＡＧ−Ｆｃによって誘導されたＲｈｏ活性にも、Ｎｏｇｏペプチドによって誘導されるＲｈｏ活性にも何の影響も与えなかった。従って、ＰＫＣの阻害による小脳ニューロンの神経突起伸展の促進は、ＲｈｏＡ活性のブロックによって媒介されず、このことは、ＰＫＣがＲｈｏＡの上流ではないことを示す。
【１０６２】
ＭＡＧは、生後４日まで脊髄神経節（ＤＲＧ）ニューロンからの軸索成長を促進する（Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｐ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ  ３，３７７−３８５（１９８９）；Ｍｕｋｈｏｐａｄｈｙａｔｙ，Ｇ．Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ  １３，７５７−７６７（１９９４））。ＰＫＣの阻害は、生後小脳ニューロンにおけるＭＡＧによる軸索伸展の促進を導くので、ＩＰ３経路は、Ｇｉ−ＰＬＣがこれらのＤＲＧニューロン中で活性化される場合に、ＰＫＣ経路よりも優勢であることが予想される（図２７Ａ）。これを評価するために、Ｐ１ラット由来の分離したＤＲＧニューロンからの神経突起伸展を測定した。これまでのように、ＭＡＧ−Ｆｃ（２５μＭ）が、ＤＲＧニューロンからの神経突起伸展を促進した（図２７Ｂ）。しかし、ＭＡＧ−Ｆｃは、Ｘｅｓｔ  Ｃで処理した場合に神経突起伸展を有意に阻害し、一方、ＰＫＣインヒビターは、この成長にたいして何の調節効果も有さなかった。これらの知見は、ＩＰ３の活性に依存する、ＭＡＧが神経突起伸展を促進することを示す。
【１０６３】
本発明者らは、ＭＡＧ、Ｎｏｇｏ、およびミエリンによって媒介される効果に重要である新規シグナルを同定した。ＭＡＧによって誘導される細胞内Ｃａ２＋濃度の上昇がｐ７５に対する抗体を用いた処理によってなくなるので、ｐ７５は、このシグナル伝達に必要とされ得る。従って、いくつかのＧタンパク質結合レセプターは、ｐ７５と機能的に関連して、ＰＫＣ／ＩＰ３シグナルを伝達し得る。ｐ７５は、生存および分化を促進するニューロトロフィンに対するレセプターとして長い間知られている。ニューロンの生存およびニューロンの神経突起形成を制御する際の機能と一致して、ｐ７５は、神経系の発生段階の間に発現される。対照的に、ｐ７５は、成体の種々の病的状態において再発現され、そして、これらの状況において軸索再生のインヒビターとして作用することが示唆されている。本発明者らのデータは、ミエリン由来タンパク質が軸索成長の二機能性調節因子であることを示す進歩した概念を提供する。ｐ７５によって媒介される種々の効果は、少なくとも部分的に、ｐ７５と他の膜結合タンパク質（例えば、Ｔｒｋチロシンキナーゼ、ＮｏｇｏレセプターおよびガングリオシドＧＴ１ｂ、ならびに多様な細胞内シグナル伝達分子（Ｄｅｃｈａｎｔ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，５，１１３１−１１３６（２００２））との間の相互作用の結果である。ｐ７５と関連するＧｉ−ＰＬＣシグナルの正確な分子機構は、ｐ７５の相互作用因子について探索することによっておそらく探されるはずである。
【１０６４】
以前の研究において、Ｒｈｏはミエリン由来成長阻害シグナルの中心的な制御機構である。Ｒｈｏは、ミエリン、ＭＡＧおよびＮｏｇｏＡによって活性化される（ＭｃＫｅｒｒａｃｈｅｒ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ  ３６，３４５−３４８（２００２））。Ｒｈｏまたはその細胞内標的のうちの１つであるＲｈｏキナーゼの不活性化は、実際にこれらの基質効果を破壊し、ＣＮＳ損傷に対する潜在的な治療剤を提供する。他の有望な因子は、ｐ７５の細胞内ドメインと関連するサイレンシングペプチドである（Ｙａｍａｓｈｉｔａ  Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．６，４６１−４６７（２００３））。ｐ７５（これは、現在見出されてるミエリン由来インヒビター全てからのシグナルを伝達する）は、ＲｈｏＡからのＲｈｏ  ＧＤＩの放出を促進し、ゆえに、ＲｈｏＡがグアニンヌクレオチド交換因子によって活性化されることを可能にする。このペプチドは、Ｒｈｏ  ＧＤＩとｐ７５との会合およびシグナル伝達を阻害する。さらに、Ｎｏｇｏレセプターのペプチドアンタゴニストおよびミエリン画分に対して生成されたＩＮ−１抗体は、ＣＮＳ軸索再生に有効であることが示されている（ＭｃＫｅｒｒａｃｈｅｒ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ  ３６，３４５−３４８（２００２））。従来提案されるストラテジーは、阻害タンパク質をブロックするかまたは阻害タンパク質によってシグナル伝達を阻害するかのいずれかである。対照的に、本発明者らのデータは、ＰＫＣの阻害がこれらのインヒビターの機能を、神経突起伸展または成長円錐の拡大を阻害から促進へと逆転させることを実証し、これによりＣＮＳ損傷に対する強力な分子標的を提供する。ミエリン由来インヒビターは、特定の条件下で軸索切断されたニューロンに対する栄養因子として作用し得ることを示す。
【１０６５】
このように、本発明は、ＰＫＣ、ＩＰ３およびＧｉタンパク質の調節を行うことにより、ｐ７５シグナル伝達経路を調節し得、結果として神経再生の調節（特に増強）を行うことができたという従来予想し得なかった効果を奏することが実証された。
【１０６６】
以上のように、本発明の好ましい実施形態を用いて本発明を例示してきたが、本発明は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。
【産業上の利用可能性】
【１０６７】
神経突起伸展の阻害に関連するｐ７５とその相互作用因子との関係を明らかにすることによって、神経の再生およびその神経の再生に基づいて神経学的疾患を処置するための薬学的組成物および方法が提供される。この方法および組成物は、神経再生およびそれを必要とする処置を産業とする分野において有用である。
【図面の簡単な説明】
【１０６８】
【図１】図１は、ＭＡＧのニューロンに対する効果が、ｐ７５に依存することを示す。（Ａ）分離ＤＲＧニューロンを、ＭＡＧ−Ｆｃの有りまたは無しで２４時間インキュベートし、次いで、ニューロン特異的β−チューブリンＩＩＩタンパク質を認識するモノクローナル抗体（ＴｕＪ１）を用いて免疫染色した。ｐ７５（＋／＋）は、野生型ｐ７５遺伝子を有するマウスであり、ｐ７５（−／−）は、ｐ７５に変異を有するマウスである。（Ｂ）これは、１ニューロンあたりの、最も長い神経突起の平均長である。データは、平均±平均値の標準誤差である。アステリスクは、統計上の有意性を示す（＊Ｐ＜０．０１、スチューデントのＴ検定）。（Ｃ）これは、１ニューロンあたりの、最も長い神経突起の平均長である。分離小脳ニューロンを、ＭＡＧ−Ｆｃの有りまたは無しで２４時間インキュベートした。
【図２】図２は、ＭＡＧがｐ７５依存性機構を介してＲｈｏＡを活性化することを示す。（Ａ）これは、野生型マウス由来のＭＡＧ処理ＤＲＧニューロンに対する、Ｃ３トランスフェラーゼの効果を示し、１ニューロンあたりの、最も長い神経突起の平均長である。データは、平均±平均値の標準誤差である。アステリスクは、統計上の有意性を示す（＊Ｐ＜０．０１、スチューデントのＴ検定）。（Ｂ）ＭＡＧ−Ｆｃの２９３細胞への結合を、ＦＩＴＣタグ化抗ヒトＩｇＧを用いたインキュベーションによって可視化した。（Ｃ）これは、トランスフェクトした２９３細胞でのＲｈｏＡのアフィニティー沈降である。ＭＡＧ−Ｆｃ（２５μｇ／ｍｌ）は、２９３細胞がｐ７５を発現する場合のみ、ＲｈｏＡの活性化を誘発する。
【図３】図３は、生後小脳ニューロンでのＲｈｏＡのアフィニティー沈降を示す。（Ａ）ＲｈｏＡ活性は、ＭＡＧ−Ｆｃ（２５μｇ／ｍｌ）の添加後に増大した。ＲｈｏＡ活性を、溶解物中のＲｈｏＡ量に対して正規化したＲＢＤ結合ＲｈｏＡの量によって示す。値は、時間０における細胞と比較した、ＲｈｏＡ活性を示す。結果は、３回の実験からの平均±標準誤差を示す。アステリスクは、統計上の有意性を示す（＊Ｐ＜０．０１、スチューデントのＴ検定）。（Ｂ）これは、ＮＧＦがＲｈｏＡ活性をすぐに阻害する（約１０分）ことを示す。（Ｃ）これは、ＭＡＧの用量応答を示す。（Ｄ）これは、活性化がｐ７５遺伝子に変異を有するマウス由来のニューロンにおいて失われていることを示す。
【図４】図４は、ｐ７５およびＭＡＧ結合の同時局在を示す。（Ａ）ＤＲＧニューロンを、抗ｐ７５抗体およびＡｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒＴＭ  ５６８結合体化二次抗体を用いて染色した。ＭＡＧ−Ｆｃの結合を、ＦＩＴＣタグ化抗ヒトＩｇＧを用いたインキュベーションによって可視化した。共焦点顕微鏡での観察を、ＺＥＩＳＳ  ＬＳＭ−５１０レーザー型走査顕微鏡で実行した。ｐ７５（左）、ＭＡＧ結合（中）、および重ね合わせた画像（右）のそれぞれの、代表的な１つの視野を示す。神経突起上のマーカーの近接が、ｐ７５免疫反応性を有するほとんどのニューロン中で観察された。（Ｂ）これは、ｐ７５遺伝子に変異を保有するマウス由来のＤＲＧニューロンへのＭＡＧ−Ｆｃの結合を示す。
【図５】図５は、ＭＡＧ、ｐ７５およびＧＴ１ｂの会合を示す。（Ａ）これは、Ｐ９小脳から調製した溶解物を用いた、ｐ７５とＭＡＧ−Ｆｃとの同時沈降を示す。ＭＡＧ−Ｆｃ沈降物において、ｐ７５に対応するタンパク質の存在が抗ｐ７５抗体によって明らかになった。（Ｂ）これは、組換えｐ７５とＧＴ１ｂとの同時免疫沈降である。会合を、プロテインＡセファロースおよびＦｃ融合ｐ７５タンパク質を用いて生成した沈降物のウエスタンブロット分析によって調べた。抗ＧＴ１ｂ抗体によって１００ｋＤタンパク質の存在が明らかとなり（左）、このタンパク質は、抗ｐ７５抗体によってｐ７５であることが明らかとなった（右）。（Ｃ）これは、組換えｐ７５と他のガングリオシドとの同時沈降である。（Ｄ）これは、Ｐ９小脳から調製した溶解物を用いた、ｐ７５とＧＴ１ｂとの同時免疫沈降である。ＧＴ１ｂ免疫沈降物において、ｐ７５に対応するタンパク質の存在が抗ｐ７５抗体によって明らかとなった。下のバンドは、使用した抗体のＩｇに対応する。（Ｅ）これは、トランスフェクトした２９３細胞を用いたｐ７５およびＧＴ１ｂの同時免疫沈降である。ｐ７５免疫沈降物において、抗ＧＴ１ｂ抗体によってタンパク質の存在が明らかとなり（左）、このタンパク質は、抗ｐ７５抗体によってｐ７５であることが示された（右）。
【図６】図６は、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの同時免疫沈降である。（Ａ）これは、トランスフェクトした２９３Ｔ細胞から調製した溶解物を用いた、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩまたはＲｈｏＡとの同時免疫沈降である。ｐ７５免疫沈降物において、Ｒｈｏ  ＧＤＩに対応するタンパク質の存在が抗Ｒｈｏ  ＧＤＩ抗体によって明らかになった。（Ｂ）これは、トランスフェクトされたＮ１Ｅ−１１５細胞におけるｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩまたはＲｈｏＡとの相互作用に対する、ＭＡＧおよびＮｏｇｏの効果を示す。データは、平均±標準誤差である。アステリスクは、統計上の有意性を示す、＊；ｐ＜０．０１（スチューデントのｔ検定）。（Ｃ）これは、小脳ニューロンから調製した溶解物を用いた、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの同時免疫沈降である。会合は、ＭＡＧ処理細胞およびＮｏｇｏ処理細胞中で観察した。
【図７】図７は、ｐ７５がＲｈｏ  ＧＤＩと直接会合することを示す。（Ａ）これは、ｐ７５と組換えＧＳＴ−Ｒｈｏ  ＧＤＩまたは組換えＧＳＴ−ＲｈｏＡとの同時沈降を示す。会合は、精製ｐ７５およびプロテインＡセファロースを用いて生成された沈降物のウエスタンブロット分析によって調べた。抗ＧＳＴ抗体によって、複合体中のＲｈｏ  ＧＤＩの存在が明らかになった。（Ｂ）これは、Ｒｈｏ  ＧＤＩとｐ７５の欠失変異体との同時免疫沈降である。この欠失変異体のための構築物の模式図を示す。示した番号は、この変異体の残基に対応する。（Ｃ）これは、トランスフェクトした２９３Ｔ細胞中のＲｈｏＡのアフィニティー沈降である。ｐ７５の全長またはｐ７５  ＩＣＤの過剰発現は、ＲｈｏＡの活性化を誘発するが、第５ヘリックスを欠く変異ｐ７５は、ＲｈｏＡを活性化しない。
【図８】図８は、ｐ７５がＲｈｏ  ＧＤＩ活性を低減することを示す。（Ａ）ｐ７５は、ＲｈｏＡのグアニンヌクレオチド交換因子ではない。３０分間で３Ｈ標識ＧＤＰのＲｈｏＡからの解離を誘導するタンパク質の能力を、測定した。ＧＳＴタンパク質またはインキュベーション緩衝液を、コントロールとして使用した。このグラフは、結合したままの初期３Ｈ−ＧＤＰの相対量の平均±３つの独立した実験からの標準誤差を示す。＊、ｐ＜０．０１（スチューデントのｔ検定）。（Ｂ）ｐ７５  ＨＤは、インビトロでＲｈｏ  ＧＤＩ活性を阻害する。Ｒｈｏ  ＧＤＩと複合体化したＲｈｏＡのＧＤＰ／ＧＴＰ交換反応を、ｐ７５  ＨＤの存在下または非存在下で決定した。［３Ｈ］ＧＤＰ解離アッセイにおいて、Ｒｈｏ  ＧＤＩと複合体化した［３Ｈ］ＧＤＰ−ＲｈｏＡからの［３Ｈ］ＧＤＰの解離を、ＲｈｏＡに結合した［３Ｈ］ＧＤＰの放射能を測定することによってアッセイした。［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ結合アッセイにおいて、Ｒｈｏ  ＧＤＩと複合体化したＧＤＰ−ＲｈｏＡへの［３５Ｓ］ＧＴＰγＳの結合を、ＲｈｏＡに結合した［３５Ｓ］ＧＴＰγＳの活性を測定することによってアッセイした。黒丸、ＧＳＴ−ｐ７５  ＨＤ；白四角、ＧＳＴ。＊、ｐ＜０．０１；（スチューデントのｔ検定）。（Ｃ）ｐ７５は、Ｒｈｏ  ＧＤＩ活性を阻害する。Ｄｂｌで刺激したＲｈｏＡのＧＤＰ／ＧＴＰ交換反応を決定した。［３Ｈ］ＧＤＰ−ＲｈｏＡ−Ｒｈｏ  ＧＤＩ複合体（５０ｎＭ）を、９０ｎＭ  ＧＳＴ−Ｄｂｌおよび示された濃度のＧＳＴ融合タンパク質とインキュベートした。黒丸、ＧＳＴ−ｐ７５  ＨＤ；白四角、ＧＳＴ；白三角ＧＳＴ−ｐ７５  ＩＣＤ。＊、ｐ＜０．０１；（スチューデントのｔ検定）。（Ｄ）Ｒｈｏ  ＧＤＩの過剰発現は、ＭＡＧおよびＮｏｇｏの効果を破壊する。分離した小脳ニューロンの神経突起伸展に対するＲｈｏ  ＧＤＩの効果を、評価した。左；コントロールプラスミドまたはＲｈｏ  ＧＤＩプラスミドを用いて一過性にトランスフェクトした代表的な細胞の画像。ＭＡＧ、ＭＡＧ−Ｆｃ（２５μｇ／ｍｌ）；Ｎｏｇｏ、Ｎｏｇｏペプチド（４μＭ）；Ｒｈｏ  ＧＤＩ、ｍｙｃタグ化Ｒｈｏ  ＧＤＩでトランスフェクトした細胞。データは、平均±標準誤差である。アステリスクは、統計上の有意性を示す、＊；ｐ＜０．０１（スチューデントのｔ検定）。
【図９】図９は、Ｐｅｐ５がＲｈｏ  ＧＤＩとｐ７５との相互作用を阻害することを示す。（Ａ）ｐ７５と組換えＧＳＴ−Ｐｅｐ５との同時沈降。（Ｂ）Ｐｅｐ５は、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの結合を用量依存的に阻害する。（Ｃ）これは、小脳ニューロンから調製した溶解物を用いた、ｐ７５とＲｈｏ  ＧＤＩとの同時免疫沈降である。この相互作用は、ＴＡＴ−Ｐｅｐ５によって破壊された。
【図１０】図１０は、Ｐｅｐ５がｐ７５の阻害作用をサイレント化することを示す。（Ａ）分離ＤＲＧニューロンを、Ｎｏｇｏペプチドの存在下または非存在下で２４時間インキュベートし、次いで、ニューロン特異的βチューブリンＩＩＩタンパク質を認識するモノクローナル抗体（ＴｕＪ１）を用いて免疫染色した。Ｎｏｇｏ、Ｎｏｇｏペプチド；Ｐｅｐ５、ＴＡＴ−Ｐｅｐ５。（Ｂ）ＤＲＧニューロンの神経突起伸展。ＭＡＧ，ＭＡＧ−Ｆｃ；ＨＤ、ｐ７５  ＨＤ（残基３６８〜３８１）に対応するペプチド；ｐ７５（＋／＋）、野生型；ｐ７５（−／−）、ｐ７５遺伝子に変異を保有するマウス。データは、平均±標準誤差である。アステリスクは、統計上の有意性を示す、＊；ｐ＜０．０１（スチューデントのｔ検定）。（Ｃ）分離小脳ニューロンを、Ｎｏｇｏペプチドの存在下または非存在下で２４時間インキュベートした。（Ｄ）小脳ニューロンの神経突起伸展。データは、平均±標準誤差である。アステリスクは、統計上の有意性を示す、＊；ｐ＜０．０１（スチューデントのｔ検定）。（Ｅ）小脳ニューロン中のＲｈｏＡのアフィニティー沈降。Ｎｏｇｏペプチド（４μＭ）およびＭＡＧ−Ｆｃ（２５μｇ／ｍｌ）は、ＲｈｏＡの活性化を誘発し、一方、ＴＡＴ−Ｐｅｐ５（１μＭ）は、これらの効果を完全に破壊した。
【図１１】図１１は、ｐ７５に対する抗体がミエリンシグナルを阻害することを示す。（Ａ）解離小脳ニューロンを、ミエリン由来インヒビターの有りまたは無しで２４時間インキュベートした。これは、１ニューロンあたりの、最も長い神経突起の平均長である。データは、平均値±平均値の標準誤差である。アステリスクは、統計上の有意性を示す；＊、ｐ＜０．０１（スチューデントのｔ検定）。Ｎｏｇｏ、ＧＳＴ−Ｎｏｇｏ；Ｆｃ−ｐ７５、Ｆｃと融合したｐ７５の細胞外ドメイン；ｐ７５−Ａｂ、ｐ７５に対する抗体；ＭＡＧ、ＭＡＧ−Ｆｃ。（Ｂ）これは、小脳ニューロンにおけるＲｈｏＡのアフィニティー沈降である。（Ｃ）これは、Ｐ９小脳から調製した溶解物を用いた、内因性ｐ７５とＮｇＲとの同時免疫沈降である。
【図１２】図１２は、ｐ７５に対する抗体がマウスＣＳＴ線維の運動機能を向上し、出芽を増強することを示す。（Ａ）抗ｐ７５抗体で処理したマウス（ｎ＝１２）の改変ＢＢＢスコアは、損傷後７日〜４週目にわって、コントロール抗体で処理したマウス（ｎ＝１２）の改変ＢＢＢスコアよりも有意により高い回復であることが明らかになった。＊、ｐ＜０．０５（スチューデントのｔ検定）、コントロール抗体で処理したマウスと比較。ＳＣＩ、脊髄損傷。（Ｂ）抗ｐ７５抗体は、ＣＳＴ損傷後に軸索伸展を促進する。これは、損傷２８日後の抗ｐ７５抗体で処理したマウスの、損傷部位に対して２ｍｍ尾方の灰白質の横断面における、順行性にＢＤＡ標識された軸索（矢印）である。スケールバー：２５μｍ。（Ｃ）これは、ＣＳＴ領域に対して尾方の１横断面あたりの、ＢＤＡで標識された再生軸索の数である。データは、それぞれ、コントロールで処理した５匹のマウスまたは５匹の抗ｐ７５抗体で処理した５匹のマウスからの、平均±標準誤差を示す。＊、ｐ＜０．０５（スチューデントのｔ検定）、コントロール抗体で処理したマウスと比較。
【図１３】図１３は、Ｅ５胚由来のヒヨコ網膜ニューロンが細胞質でｐ２１を発現することを示す。（Ａ）Ｅ５胚由来のヒヨコ網膜を、抗ｐ２１抗体を用いて免疫染色した。各パネルにおいて、右側が硝子体であり、左側が色素上皮である。（Ｂ）これは、Ｅ５胚由来のヒヨコ分離網膜細胞中のｐ２１免疫活性を示す。上のパネルはβ−チューブリン免疫反応性を欠く細胞であり、下のパネルはニューロンである。
【図１４】図１４は、ＤＭＳＯで分化を誘導したＮ１Ｅ−１１５細胞におけるｐ２１の細胞レベル下の局在である。（Ａ〜Ｃ）これらは、抗ｐ２１抗体を用いたｐ２１の免疫細胞化学染色である。ＤＭＳＯなし（Ａ）、ＤＭＳＯを１日（Ｂ）、およびＤＭＳＯを４日（Ｃ）でインキュベートしたＮ１Ｅ−１１５細胞の代表的な特徴を示す。
【図１５】図１５は、ｐ２１の過剰発現によるＮ１Ｅ−１１５細胞の形態変化を示す。（Ａ）これは、Ｎ１Ｅ−１１５細胞の増殖を示す。細胞を、６ｃｍディッシュに播種し、トランスフェクトし、トランスフェクションの１日後および２日後に計数する。細胞数の相対的な増大を示す。この値は、３回の独立した実験の、平均値±平均値の標準誤差である。＊、Ｐ＜０．０１、ｆｕｌｌ−ｐ２１と比較（スチューデントのｔ検定）。ＧＦＰとＧＦＰ−ΔＮＬＳ−ｐ２１トランスフェクト細胞との間で有意な差異はなかった。（Ｂ）サイクリンＤ３およびｐＲｂのウエスタンブロット分析である。Ｎ１Ｅ−１１５細胞を、ＤＭＳＯで処理し、ＧＦＰ−ｆｕｌｌ−ｐ２１またはＧＦＰ−ΔＮＬＳ−ｐ２１でトランスフェクトし、１日目、２日目、３日目、および４日目に収集した。矢じりは、過剰にリン酸化されたｐＲｂを示し、矢印は不十分なリン酸化状態のｐＲｂを示す。（Ｃ）これは、ＤＭＳＯで４日処理したＮ１Ｅ−１１５細胞またはＧＦＰ−ΔＮＬＳ−ｐ２１でトランスフェクトしたＮ１Ｅ−１１５細胞中の、ｐ２１の発現レベルである。（Ｄ）Ｎ１Ｅ−１１５細胞を、ＧＦＰ（コントロール）、ＧＦＰ−ｆｕｌｌ−ｐ２１またはＧＦＰ−ΔＮＬＳ−ｐ２１でトランスフェクトした。各構築物でトランスフェクトした細胞の写真を示す。（Ｅ）これは、細胞の形態を定量化したものである。Ｙ−２７６３２（１０μＭ）に３０分間曝したＮ１Ｅ−１１５細胞、またはＧＦＰ、ＧＦＰ−ｆｕｌｌ−ｐ２１もしくはＧＦＰ−ΔＮＬＳ−ｐ２１を発現するＮ１Ｅ−１１５細胞を、３つの群に分類した；長い神経突起を有する細胞（ｌｏｎｇ  ｎｅｕｒｉｔｅ）、丸い形態の細胞（ｒｏｕｎｄ）および他の形態の細胞（ｏｔｈｅｒｓ）。データは、３回の独立した実験の、平均値±平均値の標準誤差である。＊、Ｐ＜０．０５、コントロールと比較。＊＊Ｐ＜０．０１、コントロールならびにｆｕｌｌ−ｐ２１と比較（スチューデントのｔ検定）。
【図１６】図１６は、細胞骨格機構に対する、細胞質ｐ２１の効果を示す。（Ａ）ＮＩＨ３Ｔ３細胞を、ＧＦＰ−ΔＮＬＳ−ｐ２１でトランスフェクトした。１６時間の血清飢餓後、細胞を１０％ウシ胎仔血清で処理し、固定し、ローダミン結合体化ファロイジンで染色した。（Ｂ）これは、張線維を含む細胞の定量化である。データは、３回の独立した実験の、平均値±平均値の標準誤差である。＊、Ｐ＜０．０１、ＧＦＰと比較（スチューデントのｔ検定）。
【図１７】図１７は、核ｐ２１はＲｈｏキナーゼを沈降しないが、細胞質ｐ２１はＲｈｏキナーゼを沈降することを示す。（Ａ）これは、２９３Ｔ細胞中で異所性発現させたタンパク質の細胞レベル下での局在を示す。ＧＦＰ−ｆｕｌｌ−ｐ２１とＧＦＰ−ΔＮＬＳ−ｐ２１との間で局在に差異があることに留意すること。（Ｂ）２９３Ｔ細胞を、ＧＦＰ−ｆｕｌｌ−ｐ２１またはＧＦＰ−ΔＮＬＳ−ｐ２１とｍｙｃ−Ｒｈｏキナーゼとで同時トランスフェクトした。溶解物を、抗ｐ２１抗体を用いて免疫沈降した。免疫複合体を電気泳動し、抗ｍｙｃ抗体を用いてブロットした。溶解物中のＲｈｏキナーゼおよびｐ２１の発現を決定した。（Ｃ）これは、ＤＭＳＯ処理によって分化しているＮ１Ｅ−１１５細胞から調製した溶解物を用いて、ｐ２１とＲｈｏキナーゼとの相互作用を示す図である。免疫沈降したｐ２１を電気泳動し、抗Ｒｈｏキナーゼ抗体を用いて免疫ブロットした。抗マウスＩｇＧ抗体をネガティブコントロールとして使用した。（Ｄ）これは、組換え全長ｐ２１とＲｈｏキナーゼの触媒ドメイン（ＧＳＴ−ＣＡＴ）とのインビトロ相互作用を示す図である。示した濃度のＳ６キナーゼ基質ペプチド（ＡＫＲＲＲＬＳＳＬＲＡ）およびＹ−２７６３２を共にインキュベートした。
【図１８】図１８は、ｐ２１がＲｈｏキナーゼ活性を阻害することを示す。（Ａ）Ｒｈｏキナーゼの活性を、示した濃度のｐ２１の存在下でアッセイした。パーセンテージは、ｐ２１の非存在下でのＣＰＭに対して比較して定量した。データは、３回の独立した実験の、平均値±平均値の標準誤差である。（Ｂ）Ｒｈｏキナーゼの活性を、Ｙ−２７６３２（１０μＭ）に３０分間曝した細胞、またはｍｙｃ−Ｒｈｏキナーゼ構築物およびｐ２１構築物を用いて同時トランスフェクトした細胞を用いて、アッセイした。Ｒｈｏキナーゼの発現を、ウエスタンブロットによって決定し、相対活性を正規化した。相対活性を、ｍｙｃ−ＲｈｏキナーゼおよびＧＦＰを用いて同時トランスフェクトしたコントロール細胞中のＣＰＭに対して比較して定量した。データは、３回の独立した実験の、平均値±平均値の標準誤差である。＊、Ｐ＜０．００１、コントロールと比較（スチューデントのｔ検定）。
【図１９】図１９は、細胞質ｐ２１の過剰発現による海馬ニューロンの神経突起伸長および分枝を示す。（Ａ）これは、コンピュータトレースによる、ＧＦＰまたはＧＦＰ−ΔＮＬＳ−ｐ２１を用いてトランスフェクトした海馬ニューロンの形態を示す。初代海馬ニューロンを、ＧＦＰ（コントロール）またはＧＦＰ−ΔＮＬＳ−ｐ２１（ΔＮＬＳ−ｐ２１）を用いてトランスフェクトした。ニューロンを抗β−チューブリンＩＩＩ抗体を用いて免疫染色し、画像分析コンピュータソフトウェアを用いてトレースした。バーは１０μｍを示す。（Ｂ）これは、ＧＦＰまたはＧＦＰ−ΔＮＬＳ−ｐ２１でトランスフェクトした初代海馬ニューロンの形態分析である。ΔＮＬＳ−ｐ２１でトランスフェクトしたニューロンにおいて、１ニューロンあたりの、総神経突起長、軸索長、および分枝点の数は、ＧＦＰでトランスフェクトニューロンのものと比較して増加した。データは、３回の独立した実験の、平均値±平均値の標準誤差である。＊、Ｐ＜０．００１、コントロールと比較（スチューデントのｔ検定）。
【図２０】図２０は、ＴＡＴのＰＴＤドメインと融合させたｐ２１の構築物（下）およびコントロール構築物（上）の略図を示す。
【図２１】図２１は、脊髄を損傷させたラットの、ｐ２１構築物による機能回復を示す。脊髄損傷後の２日から６週間にわたって観察を行った。
【図２２】図２２は、再生阻害に関与するシグナル伝達経路を示す。
【図２３】図２３は、ＰＬＣ−ＰＫＣ／ＩＰ３経路がＭＡＧおよびＮｏｇｏによって活性化される様子を示す。図２３ａは、ＭＡＧによってトリガーされるＣａ２＋シグナル伝達がＰＬＣ活性化に依存することを示す。５３０ｎｍおよび６４０ｎｍでの蛍光比率（Ｆ５３０／Ｆ６４０）における変化率を、通常の培地（ＤＭＥＭ培地）中およびＵ７３１２２（５０ｎＭ）を加えた培地中に、ＭＡＧ−Ｆｃ（２５μｇ／ｍｌ）を滴下する前後での小脳顆粒ニューロンを示す。データは平均±Ｓ．Ｅ．を示す。図２３ｂでは、蛍光比率（Ｆ５３０／Ｆ６４０）の比率変化（±Ｓ．Ｅ．）をまとめたものを示す。Ｕ７３１２２（５０ｎＭ）の前処理のあるなしでのＭＡＧ滴下後０〜４分の様子を示す。図２３ｃは、培養した小脳顆粒ニューロンにおけるＭＡＧおよびＮｏｇｏによるＰＫＣの活性化を示す。ＰＫＣ（リン酸化）の活性化は、百日咳毒素（ＰＴＸ）によって消長した。ＭＡＧは、ＭＡＧ−Ｆｃ（２５μｇ／ｍｌ）、ＮｏｇｏはＮｏｇｏペプチド（４μＭ）を示す。
【図２４】図２４は、ＰＫＣが阻害されるときに、ＭＡＧおよびＮｏｇｏが神経突起成長を増強することを示す。図２４ａは、小脳顆粒ニューロンの神経突起成長を示す。ＭＡＧは、ＭＡＧ−Ｆｃ（２５μｇ／ｍｌ）、ＮｏｇｏはＮｏｇｏペプチド（４μＭ）を示す。ＰＴＸは百日咳毒素（２ｎｇ／ｍｌ）を示す。Ｕ７３１２２は、Ｕ７３１２２（２０ｎＭ）を示す。データは、平均±Ｓ．Ｅ．である。図２４ｂは、剥離した小脳顆粒ニューロンをＭＡＧ−ＦｃおよびＰＫＣインヒビターペプチドのあるなしで２４時間インキュベートした様子を示す。ついで、これは、モノクローナル抗体（ＴｕＪ１）を用いて免疫染色した。この抗体は、ニューロン特異的なβチューブリンＩＩＩタンパク質を認識する。ＭＡＧは、ＭＡＧ−Ｆｃ（２５μｇ／ｍｌ）、ＰＫＣＩはＰＫＣインヒビター（２μＭ）を示す。図２４ｃは、小脳顆粒ニューロンの神経突起成長を示す。ＭＡＧ−ＦｃおよびＮｏｇｏペプチドは、ＰＫＣインヒビターの存在下で神経突起成長を刺激した。ＭＡＧは、ＭＡＧ−Ｆｃ（２５μｇ／ｍｌ）、ＮｏｇｏはＮｏｇｏペプチド（４μＭ）を示し、ＰＫＣＩはＰＫＣインヒビター（２μＭ）を示す。データは、平均±Ｓ．Ｅ．である。アステリスクは、統計学的有意性を示す。＊はｐ＜０．０１（スチューデントのｔ検定）を示す。
【図２５】図２５は、ＰＫＣがミエリン惹起される成長錐体破壊を示す。図２５ａは、成長錐体破壊アッセイを示す。Ｅ１２ヒヨコＤＲＧ外植片を、ＭＡＧ−Ｆｃ（２５μｇ／ｍｌ）で処置した（ＰＫＣインヒビター（２μＭ）のあるなしで）。ＰＫＣインヒビターで前処理した外植片では、顕著な拡大成長した錐体がＭＡＧ−Ｆｃによって誘導されたことが確認された。図２５ｂは、成長錐体破壊アッセイの結果を示す。０．１−１０ｎｇ／μｌのＣＮＳミエリンを用いて処置した。ＭＡＧはＭＡＧ−Ｆｃ（２５μｇ／ｍｌ）を示し、ＮｏｇｏはＮｏｇｏペプチド（４μＭ）を示す。ＰＫＣＩはＰＫＣインヒビターペプチド（２μＭ）を示す。データは、平均±Ｓ．Ｅ．である。アステリスクは、統計学的有意性を示す。＊はｐ＜０．０１（スチューデントのｔ検定）を示す。
【図２６】図２６は、ＰＫＣがＲｈｏ活性化に非依存であることを示す。図２６ａは、小脳顆粒ニューロンの神経突起成長を示す。ＭＡＧはＭＡＧ−Ｆｃ（２５μｇ／ｍｌ）を示し、ＮｏｇｏはＮｏｇｏペプチド（４μＭ）を示す。Ｘｅｓｔ  ＣはＸｅｓｔｓｐｏｎｇｉｎ  Ｃ（１μＭ）を示す。Ｘｅｓｔ  Ｃは、ＭＡＧ−ＦｃまたはＮｏｇｏペプチドによって媒介される神経突起成長阻害に対して影響を有しなかった。図２６ｂは、小脳顆粒ニューロンにおけるＲｈｏＡの親和性沈降を示す。ＭＡＧ−ＦｃおよびＮｏｇｏペプチドは、ＰＫＣインヒビターの存在下でも非存在下でもＲｈｏＡを活性化する。ＭＡＧはＭＡＧ−Ｆｃ（２５μｇ／ｍｌ）を示し、ＮｏｇｏはＮｏｇｏペプチド（４μＭ）を示す。ＰＫＣＩはＰＫＣインヒビターペプチド（２μＭ）を示す。
【図２７】図２７は、神経突起成長の調節にバランス調節機構が重要であることを示す。図２７ａは、ＭＡＧおよびＮｏｇｏがＲｈｏＡおよびＧｉ−ＰＬＣ経路を活性化することを示す。ＰＫＣが優勢であるとき、ＭＡＧおよびＮｏｇｏは、神経突起成長を抑制し、成長錐体成長も阻害する。ＩＰ３が優勢である場合、逆であった。図２７ｂは、Ｐ１  ＤＲＦニューロンの神経突起成長の促進がＩＰ３に依存するがＰＫＣには依存しないことを示す。ＤＲＧの神経突起成長は、Ｐ１ラット由来であった。ＭＡＧはＭＡＧ−Ｆｃ（２５μｇ／ｍｌ）を示し、ＰＫＣＩはＰＫＣインヒビターペプチド（２μＭ）を示す。Ｘｅｓｔ  ＣはＸｅｓｔｓｐｏｎｇｉｎ  Ｃ（１μＭ）を示す。アステリスクは、統計学的有意性を示す。＊はｐ＜０．０１（スチューデントのｔ検定）を示す。
【配列表フリーテキスト】
【１０６９】
（配列表の説明）
配列番号１：Ｐｅｐ５ポリペプチドの核酸配列
配列番号１は、配列番号２で示すＰｅｐポリペプチドの縮重核酸配列である。
Ｐｅｐ５  アミノ酸配列
Ｃ  Ｆ  Ｆ  Ｒ  Ｇ  Ｇ  Ｆ  Ｆ  Ｎ  Ｈ  Ｎ  Ｐ  Ｒ  Ｙ  Ｃ
Cys Phe Phe Arg Gly Gly Phe Phe Asn His Asn Pro Arg Tyr Cys
tgy tty tty mgn ggn ggn tty tty aay cay aay ccn mgn tay tgy  
tgt ttt     cgt ggt             aat cat     cct     tat
tgc ttc     cgc ggc             aac cac     ccc     tac
cga gga                         cca    
cgg ggg                         ccg    
aga                                   
agg
配列番号１：ｐｅｐ５縮重  ＤＮＡ
tgyttyttymgnggnggnttyttyaaycayaayccnmgntaytgy
配列番号２：Ｐｅｐ５ポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号３：ヒトｐ７５ポリペプチドの核酸配列
配列番号４：ヒトｐ７５ポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号５：ヒトＲｈｏ  ＧＤＩポリペプチドの核酸配列
配列番号６：ヒトＲｈｏ  ＧＤＩポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号７：ＭＡＧポリペプチドの核酸配列
配列番号８：ＭＡＧポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号９：Ｎｏｇｏポリペプチドの核酸配列
配列番号１０：Ｎｏｇｏポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号１１：ＲｈｏＡポリペプチドの核酸配列
配列番号１２：ＲｈｏＡポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号１３：ｐ２１ポリペプチドの核酸配列
配列番号１４：ｐ２１ポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号１５：実施例において使用されるコントロールペプチド
配列番号１６：ラットｐ７５ポリペプチドの核酸配列
配列番号１７：ラットｐ７５ポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号１８：ヒトＲｈｏキナーゼポリペプチドの核酸配列
配列番号１９：ヒトＲｈｏキナーゼポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号２０：ＴＡＴ  ＰＴＤドメインのアミノ酸配列
配列番号２１：ＨＩＶ  ＴＡＴ  ＰＴＤドメインの核酸配列
配列番号２２：実施例で使用したｐ２１ポリペプチドの核酸配列
配列番号２３：実施例で使用したｐ２１ポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号２４：ＡＤＢ基質ペプチドのアミノ酸配列
配列番号２５：ＨＩＶ  ＴＡＴ  ＰＴＤドメインの全長アミノ酸配列
配列番号２６：ラットＰＫＣαの核酸配列
配列番号２７：ラットＰＫＣαのアミノ酸配列
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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