(57)【要約】１態様において、HIV感染のようなレトロウィルス感染の症状１つ以上を治療または予防する方法を提供し、この方法は、抗レトロウィルス薬物療法と組み合わせてのレトロウィルス抗原およびサイトカインまたはその機能的なホモログ、誘導体、一部もしくはアナログをコードするポックスウィルスベクターの投与を含み、ここでポリペプチドおよび／またはサイトカインは一定期間、被験体内で発現され、被験体内の低レベルのウィルス量を維持する際（例えば、抗レトロウィルス薬物療法の中断の間のウィルスリバウンドの有効な予防、減少又は遅延）に有効である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗レトロウィルス薬物療法と組み合わせて、レトロウィルス抗原、またはレトロウィルス抗原およびサイトカイン、またはレトロウィルス抗原および／またはサイトカインの機能的ホモログ、誘導体、一部もしくはそのアナログをコードするヌクレオチド配列を含むポックスウィルスベクターを被験体に投与することを含む、レトロウィルス感染の治療または予防方法であって、抗原、または抗原およびサイトカインは被験体内で発現され、一定期間、被験体内における低レベルのレトロウィルス量を維持または長期化するために有効であり、抗レトロウィルス薬物療法の中断の間のウィルスリバウンドの予防、減少又は遅延に有効である方法。
【請求項２】
レトロウィルス感染がHIV感染である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ベクターを被験体に投与すると、抗レトロウィルス薬物療法の結果として、低レベルのレトロウィルスのウィルス量を示す、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
抗レトロウィルス薬物療法の開始前に、低レベルのレトロウィルス量を示す患者にベクターを投与する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
サイトカインがＩＦＮγ、IL-12、IL-2、TNFおよびIL-6からなる群から選択される、請求項１、２、３または４に記載の方法。
【請求項６】
サイトカインがＩＦＮγである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
レトロウィルス抗原がgag、env、polおよびproコード領域から選択されるコード領域によりコードされている、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
レトロウィルス抗原がgagおよび／またはpolコード領域によりコードされている、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
レトロウィルス抗原がHIVのgagおよびpolコード領域によりコードされている、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ポックスウィルスベクターがアビポックスウィルスベクターである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
アビポックスウィルスベクターが鶏痘ウィルスベクターである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
抗レトロウィルス薬物療法と組み合わせて、レトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列ならびにサイトカインをコードするヌクレオチド配列、あるいはその機能的ホモログ、一部、誘導体もしくはアナログ、あるいは抗原および／またはサイトカインの機能的ホモログ、一部、誘導体もしくはそのアナログを含むポックスウィルスベクターを被験体に投与することを含むHIV/AIDSの治療または予防方法であって、被験体内において低レベルのレトロウィルス量を維持する場合、および抗レトロウィルス薬物療法がない場合のレトロウィルスリバウンドの予防、軽減または遅延に有効である方法。
【請求項１３】
レトロウィルス抗原がHIV抗原である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
抗レトロウィルス薬物療法の結果としてレトロウィルスのウィルス量を低レベルで示している被験体にベクターを投与する、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１５】
抗レトロウィルス薬物療法の開始前に、レトロウィルス量を低レベルで示す被験体にベクターを投与する、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１６】
サイトカインがＩＦＮγ、IL-12、IL-2、TNFおよびIL-6から選択される、請求項１２、１３、１４または１５に記載の方法。
【請求項１７】
サイトカインがＩＦＮγである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
ＩＦＮγが配列番号６に記載のアミノ酸配列またはそれらに少なくとも約６０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ＩＦＮγが配列番号５に記載のヌクレオチド配列、またはこれに少なくとも６０％類似性を有する機能的ホモログ、一部、誘導体またはアナログをコードするヌクレオチド配列、またはこれらもしくはこれらの相補形に中程度のストリンジェントな条件下でハイブリダイズする配列によりコードされる、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
レトロウィルス抗原がgag、env、polおよびproコード領域から選択されるコード領域によりコードされている、請求項１２〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
レトロウィルス抗原がgag および／またはpolコード領域によりコードされている、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
レトロウィルス抗原がHIVのgagおよびpolコード領域によりコードされている、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
gagおよびpolによりコードされるレトロウィルス抗原が、それぞれ、配列番号２に記載のアミノ酸配列またはその機能的ホモログ、一部もしくは誘導体、またはそれらに少なくとも６０％の類似性を有するアミノ酸配列、ならびに配列番号４に記載のアミノ酸配列またはその機能的ホモログ、一部もしくは誘導体、またはそれらに少なくとも６０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
gagによりコードされるレトロウィルス抗原が、配列番号１に記載のヌクレオチド配列、または最適にアラインメントした後、これと少なくとも６０％の類似性を有する機能的ホモログ、一部もしくは誘導体をコードするヌクレオチド配列、または中程度のストリンジェントな条件下でそれらもしくはそれらの相補型にハイブリダイズする配列によりコードされ、polによりコードされるレトロウィルス抗原が配列番号３に記載のヌクレオチド配列、または最適にアラインメントした後、それらと少なくとも６０％の類似性を有する機能的ホモログ、一部または誘導体をコードするヌクレオチド配列、または中程度のストリンジェントな条件下でそれらまたはそれらの相補型にハイブリダイズする配列によりコードされる、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
ポックスウィルスベクターがアビポックスウィルスベクターである、請求項１２〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
アビポックスウィルスベクターが鶏痘ウィルスベクターである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
鶏痘ベクター中の挿入部位が配列番号７に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
抗原およびサイトカインを同時に発現し、そして被験体内における抗レトロウィルス薬物療法の副作用１つ以上を軽減または緩解するために充分な時間および条件下で、レトロウィルスの抗原またはその機能的誘導体、ホモログ、一部またはアナログをコードするヌクレオチド配列、ならびにサイトカインもしくはその機能的誘導体、ホモログ、一部もしくはそのアナログをコードするヌクレオチド配列を含むポックスウィルスベクターをレトロウィルス感染を示す被験体に投与することを含む、抗レトロウィルス薬物療法の副作用１つ以上を軽減または緩解する方法。
【請求項２９】
レトロウィルス感染がHIV感染である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
抗レトロウィルス薬物療法の結果として低レベルのレトロウィルスのウィルス量を示す被験体にベクターを投与する、請求項２８または２９に記載の方法。
【請求項３１】
抗レトロウィルス薬物療法の開始前に低レベルのレトロウィルス量を示す被験体にベクターを投与する、請求項２８または２９に記載の方法。
【請求項３２】
サイトカインがＩＦＮγ、IL-12、IL-2、TNFおよびIL-6から選択される、請求項２８、２９、３０または３１に記載の方法。
【請求項３３】
サイトカインがＩＦＮγである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
ＩＦＮγが配列番号６に記載のアミノ酸配列またはこれに対して少なくとも約６０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
ＩＦＮγが配列番号５に記載のヌクレオチド配列またはこれらに少なくとも６０％の類似性を有する機能的ホモログまたは誘導体をコードするヌクレオチド配列、または中程度のストリンジェントな条件下でこれらもしくはこれらの相補型にハイブリダイズする配列によりコードされる、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
レトロウィルス抗原がgag、env、polおよびproコード領域から選択されるコード領域によりコードされている、請求項２８〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
レトロウィルス抗原がgagおよび／またはpolコード領域によりコードされている、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
レトロウィルス抗原がHIVのgagおよびpolコード領域によりコードされている、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
gagおよびpolによりコードされるレトロウィルス抗原が、それぞれ、配列番号２に記載のアミノ酸配列またはそれらの機能的ホモログ、一部もしくは誘導体、またはそれらに対して少なくとも６０％の類似性を有するアミノ酸配列、ならびに配列番号４に記載のアミノ酸配列またはそれらの機能的ホモログ、一部もしくは誘導体、またはそれらに対して少なくとも６０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
gagによりコードされるレトロウィルス抗原は配列番号１に記載のヌクレオチド配列または最適にアラインメントした後にそれらと少なくとも６０％の類似性を有するそれらの機能的ホモログ、一部または誘導体をコードするヌクレオチド配列、または中程度のストリンジェントな条件下でそれらもしくはそれらの相補型にハイブリダイズする配列によりコードされ、ここでpolによりコードされるレトロウィルス抗原は配列番号３に記載のヌクレオチド配列または最適にアラインメントした後にそれらと少なくとも６０％の類似性を有するそれらの機能的ホモログ、一部または誘導体をコードするヌクレオチド配列、または中程度のストリンジェントな条件下でそれらもしくはそれらの相補型にハイブリダイズする配列によりコードされている、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
ポックスウィルスベクターがアビポックスウィルスベクターである、請求項２８〜４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
アビポックスウィルスベクターが鶏痘ウィルスベクターである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
鶏痘ベクター中の挿入部位が配列番号７に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
レトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列またはその機能的誘導体、ホモログ、一部もしくはアナログ、ならびにサイトカインをコードするヌクレオチド配列もしくはその機能的誘導体、ホモログ、一部もしくはそのアナログを含む組換えベクターの、一定期間の間、被験体におけるレトロウィルス量を低レベルに維持または長期化する場合、および抗レトロウィルス薬物療法の中断の間のウィルスリバウンドの有効な予防、減少又は遅延に用いる医薬の製造における使用。
【請求項４５】
レトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列またはその機能的誘導体、ホモログ、一部もしくはそのアナログ、およびサイトカインをコードするヌクレオチド配列またはその機能的誘導体、ホモログ、一部もしくはアナログを含む組換えベクターの、抗レトロウィルス薬物療法の副作用１つ以上を軽減または緩解する際に用いる医薬の製造における使用。
【請求項４６】
レトロウィルスがHIVである、請求項４４または４５に記載の使用。
【請求項４７】
レトロウィルス抗原またはその機能的なホモログ、誘導体、一部もしくはアナログをコードするヌクレオチド配列、ならびにサイトカインまたはその機能的なホモログ、誘導体、一部もしくはアナログをコードするヌクレオチド配列を含む組換えポックスウィルスベクターであって、被験体内における低レベルのレトロウィルス量を維持または長期化するため、および被験体内における抗レトロウィルス薬物療法の中断の間のウィルスリバウンドの予防、軽減または遅延のために、抗レトロウィルス薬物療法と組み合わせて用いるためのベクター。
【請求項４８】
抗レトロウィルス薬物療法の１以上の副作用を軽減または緩解する際に使用するための、レトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列またはその機能的なホモログ、誘導体、一部あるいはアナログおよびサイトカインをコードするヌクレオチド配列またはその機能的ホモログ、誘導体、一部もしくはそのアナログを含む組換えポックスウィルスベクター。
【請求項４９】
被験体内の低レベルのレトロウィルス量を維持または延長する場合、および抗レトロウィルス薬物療法の１以上の副作用を軽減または緩解する場合に用いるための、請求項４８に記載の組換えポックスウィルスベクター。
【請求項５０】
レトロウィルスがHIVである、請求項４７、４８または４９に記載の組換えポックスウィルスベクター。
【請求項５１】
サイトカインがＩＦＮγ、IL-12、IL-2、TNFおよびIL-6から選択される、請求項４７、４８、４９または５０に記載の組換えベクター。
【請求項５２】
サイトカインがＩＦＮγである、請求項５１に記載の組換えベクター。
【請求項５３】
ＩＦＮγが配列番号６に記載のアミノ酸配列またはこれに対して少なくとも約６０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５２に記載の組換えベクター。
【請求項５４】
ＩＦＮγが、配列番号５に記載のヌクレオチド配列、あるいはこれに少なくとも６０％の類似性を有する機能的ホモログまたは誘導体をコードするヌクレオチド配列、または中程度のストリンジェントな条件下でこれらもしくはこれらの相補型にハイブリダイズする配列によりコードされている、請求項５２に記載の組換えベクター。
【請求項５５】
レトロウィルス抗原がgag、ｅｎｖ、ｐｏｌおよびｐｒｏコード領域から選択されるコード領域によりコードされている、請求項４７〜５４のいずれか１項に記載の組換えベクター。
【請求項５６】
レトロウィルス抗原がgagおよび／またはｐｏｌコード領域によりコードされている、請求項５５に記載の組換えベクター。
【請求項５７】
レトロウィルス抗原が、HIVのgagおよびpolコード領域によりコードされている、請求項５６に記載の組換えベクター。
【請求項５８】
gagおよびｐｏｌによりコードされるレトロウィルス抗原が、それぞれ、配列番号２に記載のアミノ酸配列またはその機能的ホモログ、一部もしくは誘導体またはそれらに少なくとも６０％の類似性を有するアミノ酸配列、ならびに配列番号４に記載のアミノ酸配列またはその機能的ホモログ、一部もしくは誘導体またはそれらに少なくとも６０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５７に記載の組換えベクター。
【請求項５９】
gagによりコードされるレトロウィルス抗原が配列番号１に記載のヌクレオチド配列または最適にアラインメントした後にこれと少なくとも６０％の類似性を有する機能的ホモログ、一部または誘導体をコードするヌクレオチド配列、または中程度のストリンジェントな条件下でそれらもしくはそれらの相補型にハイブリダイズする配列によりコードされ、ｐｏｌによりコードされるレトロウィルス抗原は配列番号３に記載のヌクレオチド配列または最適にアラインメントした後にそれらと少なくとも６０％の類似性を有するそれらの機能的ホモログ、一部または誘導体をコードするヌクレオチド配列、または中程度のストリンジェントな条件下でそれらもしくはそれらの相補型にハイブリダイズする配列によりコードされている、請求項５７に記載のベクター。
【請求項６０】
ポックスウィルスベクターがアビポックスウィルスベクターである、請求項４７〜５９のいずれか１項に記載の組換えベクター。
【請求項６１】
アビポックスウィルスベクターが鶏痘ウィルスベクターである、請求項６０に記載の組換えベクター。
【請求項６２】
鶏痘ベクター中の挿入部位が配列番号７に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項６１に記載の組換えベクター。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の背景
技術分野
本発明は、概して、組換えベクター、ならびにレトロウィルス感染およびそれらに関連した症状の治療および／または予防におけるそのベクターの使用に関する。さらに具体的には、本発明は被験体におけるウィルス量（viral load）を調節するための、抗レトロウィルス薬物治療（ARDT）と関連して用いる組換えベクターを提供する。特に、本発明は、レトロウィルス抗原および／または調節因子を発現する組換えポックスウィルスベクター、ならびにヒト被験体でのHIV感染、AIDSおよびAIDS関連障害の治療又は予防における抗HIVレトロウィルス薬物治療と関連しての使用に関する。本発明のベクターおよび方法は、レトロウィルス治療が中断されている場合のウィルスリバウンドを予防、軽減または遅延させる際に特に有用である。
【０００２】
技術分野の説明
本明細書中、刊行物の文献の詳細は本発明の説明の最後にまとめる。
【０００３】
明細書中のいずれの先行技術に対する参照も、この先行技術が一般的な技術常識を形成しているといずれの国においても、認識されるものでも、了承するものでも、またはそのように示唆するものでもない。
【０００４】
レトロウィルスは脊椎動物細胞の偏性細胞内寄生体である。エンベロープを有するRNAウィルスのウィルス繁殖は二本鎖DNAプロウィルス中間体を介し、これは感受性宿主細胞のゲノムＤＮＡに組込み、多数の宿主細胞因子を利用する。この効率の良い感染および増殖システムにより、ウィルスの撲滅が非常に困難になっている。感染個体におけるHIV複製は、１日あたり100億ウィルス粒子の産生および排泄を伴い得ると推定されており、全身循環における各ウィルス粒子の半減期は約６時間である（Australian Society for HIV Medicine (ASHM)-2001 Australian Antiretroviral Guidelines）。
【０００５】
全てのレトロウィルスゲノムは３つの主要なコードドメインを含む：gag（これは、マトリクス、カプシドおよび核タンパク質構造に関与する）；pol（これはRNA依存性DNAポリメラーゼ、逆転写酵素およびインテグラーゼ酵素をもコードする）；ならびに、env（これはウィルスエンベロープタンパク質を産生する）。さらに、レトロウィルスは全てビリオンプロテアーゼの産生に関与するproコードドメインをも含む。「複合体」レトロウィルスと命名されているレトロウィルスのサブセットはまた、それら自身の、および宿主発現経路に影響を与える一定範囲の調節因子を含む。
【０００６】
レトロウィルスファミリーとしては、レンチウルス（ヒト免疫不全ウィルス（HIV-1およびHIV-2）、サル免疫不全ウィルス（SIV））、ヒトＴ細胞白血病−ウシ白血病ウィルス群（例えば、ヒトＴ細胞白血病ウィルス（HTLV）、ネコ白血病ウィルス（FIV））およびスプマウィルス（Vogt P.K.（Chapter 1: Retroviruses：Coffin John Mら（編）、Cold Spring Harbour Laboratory Press, USA, 1997)に記載）が挙げられる。
【０００７】
HIVは、後天性免疫不全症候群（AIDS）の原因因子であるので、特に重要なヒト複合体レトロウィルスであり、これは近年の抗レトロウィルス薬物治療における進歩に関わらず、破壊的かつ複雑な問題のままである。
【０００８】
HIVはCD4+免疫細胞に感染し、確立されたHIV感染は、特徴として、進行性免疫系障害、日和見感染症および消耗症候群に関連する。免疫不全症が存在する（例えば、CD４＋細胞のレベルが低い等により測定する）場合、抗レトロウィルス治療の開始は、通常、ＨＩＶ感染のいずれの段階においても推奨されている。抗レトロウィルス治療に反応した血漿ウィルス量の減少は、生存および臨床転帰における統計上有意な改善と関連している（Melors J.W.ら、Science 272:1167-1170, 1996）。被験体内におけるHIVの完全な縛滅は、現在の所は現実的な目標であるとは見なされておらず、治療が中断されるとウィルスレベルは増加またはリバウンドするかもしれないので、感染個体は、表面上は一生、抗レトロウィルス薬物治療に束縛されている。
【０００９】
概して、抗レトロウィルス化合物の併用投与に関連する広範囲の抗レトロウィルス薬物治療レジメが存在する（例えば、ASHM-2001 draft Australian antiretroviral guidelines、上記を参照）。特に、わずかな臨床データにより、急性かつ進行性のHIV感染の治療においてヌクレオシドアナログの組合せおよび非ヌクレオシド逆転写酵素インヒビター又はプロテアーゼインヒビターを用いる３剤併用療法が疾患進行の代理マーカーに陽性の結果を有し、少なくとも短期間の臨床上の利点があることが記載されている。
【００１０】
抗レトロウィルス治療に最適なレジメおよびタイミングは不明瞭である。薬物耐性株の出現は薬物治療失敗の原因となる大きな問題である。コンプライアンスもまた大きな問題である。なぜなら、抗レトロウィルス薬物治療レジメは、特質上、複雑であり、成功の可能性を得るためには厳密な遵守を要求するからである。現在のレジメは、しばしば、最大４種類の異なる活性薬剤の多様な投薬に関する。通常、各活性薬剤はそれら自身の投与要件を有している（例えば、食前または食後での投与）。同様に、各薬剤は、特定の時間に特定量で投与する必要があり、その結果、患者は、例えば、ある医薬品を１日４回、別の医薬品を１日３回、そして別の医薬品を１日２回、ある医薬品は食前に、そしてある医薬品は食後に摂取する必要があることもしばしばある。さらに、抗レトロウィルス薬物治療の一般的な副作用として、吐き気、嘔吐、心疾患、糖尿病および肝障害を挙げることができる。
【００１１】
抗レトロウィルス薬物治療に関連する困難性を考慮すると、宿主−レトロウィルス相互作用のより深い理解、およびレトロウィルス感染の制御および現在の抗レトロウィルス薬物治療レジメの改善（特に長期有効性の容易化するため）のための有効な方法および試薬の同定が緊急に必要とされている。また、望ましくなく、そして重篤となることも多い副作用の点から、抗レトロウィルス薬物が投与されない時期を許容する治療プロトコルの必要性がある。厄介かつ煩わしい治療レジメの結果として、抗レトロウィルス薬剤を摂取していない期間を許容するプロトコルに対する要求が患者側にある。
【００１２】
発明の要旨
本明細書中を通じて、特に記載しない限り、単語「含む（comprise）」またはその変化形（「含有する（comprises）」または「有する（comprising）」など）は、記載の要素または整数あるいは要素または整数の群を含むが、他の要素または整数あるいは他の要素又は整数の群を排除するものではないことを意味すると理解される。
【００１３】
ヌクレオチドおよびアミノ酸配列は、配列識別番号（配列番号、SEQ ID NO）で示す。配列番号は、配列識別子 <400>1（配列番号１）、 <400>2（配列番号２）等、数字が対応する。配列識別子の要旨を表１に示す。配列表は、本明細書中の最後に示す。
【００１４】
本発明は、一部に、レトロウィルス抗原および／または宿主調節因子を発現するベクターおよび被験体に投与するとウィルスリバウンドを低下、予防または遅延、あるいは被験体内におけるウィルス量の増加または増加速度の低下、予防または遅延を可能とするベクターの開発に基づいて予測される。有効性、副作用およびコンプライアンスの点で現在の抗レトロウィルス薬剤治療レジメには重篤な欠点および困難があるので、本発明のベクターは、抗レトロウィルス薬剤治療と併用してレトロウィルス感染治療において広範な適用があると予測される。
【００１５】
１局面において、本発明のベクターは１以上のレトロウィルス抗原および／またはサイトカインを発現するポックスウィルスベクターであり、抗レトロウィルス薬物療法と併用して投与される。いくつかの態様において、レトロウィルス抗原およびサイトカインはポックスウィルスベクターにより同時に発現される。
【００１６】
１態様において、本発明は、被験体内において低レベルのレトロウィルス量を維持または長期化させるため、ならびに被験体における抗レトロウィルス薬物治療の中断の間のウィルスリバウンドの予防、減少または遅延のための、レトロウィルス抗原またはその機能的なホモログ、誘導体、一部もしくはアナログをコードするヌクレオチド配列、ならびにサイトカインもしくはその機能的ホモログ、誘導体、一部もしくはそのアナログをコードするヌクレオチド配列を含む、抗レトロウィルス薬物療法と併用して用いるための組換えポックスウィルスベクターを提供する。
【００１７】
いくつかの態様において、組換えポックスウィルスベクターは、抗レトロウィルス薬物療法と併用して用いるための、レトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列およびサイトカインをコードするヌクレオチド配列、又はそれらの機能的なホモログ、誘導体、一部もしくはアナログを含み、ここでこの抗原およびサイトカインは同時に発現され、抗レトロウィルス薬物治療の１以上の副作用の減少または軽減に有効である。
【００１８】
他の態様において、ベクターは、抗レトロウィルス薬物療法の１以上の副作用を軽減または緩和する際に用いるための、レトロウィルス抗原またはその機能的なホモログ、誘導体、一部もしくはアナログをコードするヌクレオチド配列、ならびにサイトカインまたはその機能的なホモログ、誘導体、一部もしくはアナログをコードするヌクレオチド配列を含む。
【００１９】
特定の態様において、サイトカインは、ＩＦＮγ、IL-12、IL-2、TNFおよびIL-6から選択される。いくつかの態様において、サイトカインはＩＦＮγである。
【００２０】
特定の態様において、ＩＦＮγは配列番号６に記載のアミノ酸配列またはこの配列に少なくとも約60％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。他の態様において、ＩＦＮγは配列番号５に記載のヌクレオチド配列、またはこの配列に少なくとも約60％の類似性を有する機能的なホモログもしくは誘導体をコードするヌクレオチド配列、またはこの配列もしくはその相補型に中程度のストリンジェントな条件下でハイブリダイズする配列によりコードされる。
【００２１】
いくつかの態様において、レトロウィルス抗原は、gag、env、polおよびproコード領域から選択されるコード領域によりコードされる。好ましい態様において、レトロウィルス抗原はgagおよび／またはpolコード領域によりコードされる抗原であり、HIVのgagおよび／またはpolコード領域が特に好ましい。特定の態様において、gagおよびpolによりコードされるレトロウィルス抗原は、それぞれ、配列番号２および配列番号４に記載のアミノ酸配列、またはそれらに対して少なくとも６０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む機能的ホモログ、一部もしくは誘導体を含む。他の態様において、gagは配列番号１に記載のヌクレオチド配列または適切にアラインメントした後にそれに対して少なくとも６０％の類似性を有する機能的ホモログ、一部または誘導体をコードするヌクレオチド配列、あるいは中程度にストリンジェントな条件下でそれら又はそれらの相補型にハイブリダイズする配列によりコードされ、polは配列番号３に記載のヌクレオチド配列または適切にアラインメントした後にそれに対して少なくとも６０％の類似性を有する機能的ホモログ、一部または誘導体をコードするヌクレオチド配列、あるいは中程度のストリンジェントな条件下でそれら又はそれらの相補型にハイブリダイズする配列によりコードされる。本発明は、鶏痘ウィルスベクターについて例示するが、他のアビポックスウィルスベクターの使用にも及ぶ。
【００２２】
いくつかの局面において、本発明は、レトロウィルス感染（例えば、HIV感染）の１以上の症状の治療方法または予防方法を提供し、この方法はレトロウィルス抗原およびサイトカイン、またはそれらの機能的なホモログ、誘導体、一部もしくはアナログをコードするポックスウィルスベクターを抗レトロウィルス薬物療法と組み合わせて投与することを含み、ここでこのポリペプチドおよび／またはサイトカインは被験体内で発現され、一定期間の間、被験体内におけるウィルス量を低レベルに維持（例えば、抗レトロウィルス薬物療法の中断の間のウィルスリバウンドの有効な予防、減少又は遅延）するときに有効である。
【００２３】
他の態様において、本発明の方法は、抗レトロウィルス薬物療法と組み合わせて、レトロウィルスの抗原、またはレトロウィルス抗原およびサイトカイン、またはレトロウィルス抗原および／またはサイトカインの機能的ホモログ、誘導体、一部又はアナログをコードするポックスウィルスベクターを被験体に投与することを含み、ここで、抗原または抗原およびサイトカインは被験体内で発現され、一定期間の間、被験体内において低レベルのレトロウィルス量を維持または長期化する際に有効であり、そして抗レトロウィルス薬物療法の中断の間のウィルスリバウンドの予防、減少又は遅延に有効である。
【００２４】
別の態様では、抗レトロウィルス薬物療法の結果として低レベルのレトロウィルス量を示す被験体にベクターを投与する。他の態様では、抗レトロウィルス薬物療法の開始前に低レベルのレトロウィルス量を示す被験体にベクターを投与する。
【００２５】
具体的な態様では、サイトカインはＩＦＮγ、IL-12、IL-2、TNFおよびIL-6から選択される。いくつかの態様では、サイトカインはＩＦＮγである。
【００２６】
特定の態様において、ＩＦＮγは、配列番号６に記載のアミノ酸配列またはこれに少なくとも約６０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。他の態様において、ＩＦＮγは配列番号５に記載のヌクレオチド配列、またはこれに少なくとも６０％の類似性を有する機能的ホモログまたは誘導体をコードするヌクレオチド配列、または中程度のストリンジェントな条件下でこれらもしくはこれらの相補体にハイブリダイズする配列により、コードされる。
【００２７】
いくつかの態様において、レトロウィルス抗原はgag、env、polおよびproコード領域から選択されるコード領域によりコードされる。好ましい態様において、レトロウィルス抗原はgagおよび／またはpolコード領域によりコードされる抗原であり、ここでHIVのgagおよび／またはpolコード領域が特に好ましい。具体的な態様において、gagおよびpolによりコードされるレトロウィルス抗原は、それぞれ、配列番号２および配列番号４に記載のアミノ酸配列、またはそれらに少なくとも６０％の類似性を有するアミノ酸配列を含むそれらの機能的ホモログ、一部又は誘導体を包含する。他の態様において、gagは、配列番号１に記載のヌクレオチド配列、または最適にアラインメントした後にそれらに対して少なくとも６０％の類似性を有する機能的ホモログ、一部又は誘導体をコードするヌクレオチド配列、または中程度のストリンジェントな条件下でそれらもしくはそれらの相補体にハイブリダイズする配列によりコードされ、polは、配列番号３に記載のヌクレオチド配列、または最適にアラインメントした後にこれに少なくとも６０％の類似性を有する機能的ホモログ、一部もしくは誘導体をコードするヌクレオチド配列、または中程度のストリンジェントな条件下でそれらもしくはそれらの相補体にハイブリダイズする配列によりコードされる。鶏痘ウィルスベクターに関して本発明を例示するが、他のアビポックスウィルスベクターの使用にも拡張する。
【００２８】
他の態様において、本発明は、HIV/AIDSの治療方法又は予防方法を提供し、この方法は、抗レトロウィルス薬物療法と組み合わせて、レトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列およびサイトカインをコードするヌクレオチド配列、またはそれらの機能的ホモログ、一部、誘導体もしくはアナログを含むポックスウィルスベクターを被験体に投与することを含み、この方法は、被験体内における低レベルのレトロウィルス量の維持、または抗レトロウィルス薬物療法を行っていない場合のウィルスリバウンドの予防、減少または遅延に有効である。
【００２９】
別の態様において、この方法は、抗レトロウィルス薬物療法と組み合わせて、レトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列およびサイトカインをコードするヌクレオチド配列、または抗原および／もしくはサイトカインの機能的ホモログ、一部、誘導体もしくはアナログを含有するポックスウィルスベクターを被験体に投与することを含み、この方法は被験体内における低レベルのレトロウィルス量を維持、および抗レトロウィルス薬物療法を行っていない場合のレトロウィルスリバウンドの予防、減少または遅延に有効である。
【００３０】
いくつかの態様において、レトロウィルス抗原はHIV抗原である。
【００３１】
また、１態様において、ARDTの副作用を１以上軽減または緩解する方法を提供し、この方法は本発明のベクターをARDTの上記作用を１以上軽減または緩解するための時間および条件下で、投与することを含む。ベクターは、ARDTの前、および／またはその間、および／またはARDTの退薬の後に、投与することができる。本発明の方法により、とりわけ、ARDTの中断に関わる治療プラグラムが容易となり、副作用の軽減または緩解を伴う。
【００３２】
この態様において、当該方法は、レトロウィルスの抗原またはその機能的誘導体、ホモログ、一部またはアナログをコードするヌクレオチド配列、ならびにサイトカインまたはその機能的誘導体、ホモログ、一部またはアナログをコードするヌクレオチド配列を含むポックスウィルスベクターを、抗原およびサイトカインを同時に発現し、かつ被験体内における抗レトロウィルス薬物療法の副作用を１以上軽減または緩解するために充分な時間および条件下でレトロウィルス感染を示す被験体に投与することを含む。
【００３３】
特に、本発明は抗レトロウィルス薬物療法の副作用を１種以上軽減または緩解する方法を提供し、この方法は、レトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列およびサイトカインをコードするヌクレオチド配列、またはそれらの機能的誘導体、ホモログ、一部もしくはアナログを含むポックスウィルスベクターを、被験体内において抗原およびサイトカインを同時に発現し、かつ抗レトロウィルス薬物療法の副作用１つ以上を軽減または緩解するために充分な時間および条件下で被験体に投与することを包含する。
【００３４】
いくつかの態様では、抗レトロウィルス薬物療法の結果として低レベルのレトロウィルスのウィルス量を示す被験体にベクターを投与する。他の態様では、抗レトロウィルス薬物療法の開始前に低レベルのレトロウィルス量を示す被験体にベクターを投与する。
【００３５】
特定の態様では、サイトカインはＩＦＮγ、IL-12、IL-2、TNFおよびIL-6から選択する。いくつかの態様において、サイトカインはＩＦＮγである。
【００３６】
特定の態様において、ＩＦＮγは、配列番号６に記載のアミノ酸配列またはこれに少なくとも約６０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。他の態様において、ＩＦＮγは配列番号５に記載のヌクレオチド配列またはこれに少なくとも６０％の類似性を有する機能的ホモログまたは誘導体をコードするヌクレオチド配列によりコードされ、または中程度のストリンジェントな条件下でこれらまたはこれらの相補体にハイブリダイズする配列によりコードされる。
【００３７】
いくつかの態様において、レトロウィルス抗原はgag、env、polおよびproコード領域から選択されるコード領域によりコードされる。好ましい態様において、レトロウィルス抗原はgagおよび／またはpolコード領域によりコードされる抗原であり、HIVのgagおよび／またはpolコード領域が特に好ましい。具体的な態様において、gagおよびpolによりコードされるレトロウィルス抗原は、それぞれ、配列番号２および４に記載のアミノ酸配列、またはそれらに少なくとも６０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む機能的ホモログ、一部もしくは誘導体を含む。他の態様において、gagは配列番号１に記載のヌクレオチド配列、または最適なアラインメントの後にそれらに対して少なくとも６０％の類似性を有する機能的ホモログ、一部もしくは誘導体をコードするヌクレオチド配列、または中程度のストリンジェントな条件下でそれらもしくはそれらの相補体にハイブリダイズする配列によりコードされ、polは配列番号３に記載のヌクレオチド配列、または最適なアラインメントの後にそれらに対して少なくとも６０％の類似性を有する機能的ホモログ、一部もしくは誘導体をコードするヌクレオチド配列、または中程度のストリンジェントな条件下でそれらもしくはそれらの相補体にハイブリダイズする配列によりコードされている。本発明は、鶏痘ウィルスベクターに関して例示するが、他のアビポックスウィルスベクターの使用にも及ぶ。
【００３８】
関連する局面において、本発明は、レトロウィルス感染（例えば、HIV感染）の１以上の症状の治療または予防において用いるための医薬の製造の際での、レトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列およびサイトカインをコードするヌクレオチド配列、またはそれらの機能的誘導体、ホモログ、一部もしくはアナログを含む組換えベクターの使用を意図し、ここで抗原およびサイトカインは、被験体内において同時に発現され、一定期間の間、被験体内において低レベルのレトロウィルス量を維持または長期化させるのに有効であり、および／または抗レトロウィルス薬物療法の中断の間のウィルスリバウンドの予防、減少又は遅延に有効である。
【００３９】
また、いくつかの態様においては、本発明の方法は、一定期間の間、被験体内において低レベルのレトロウィルス量を維持または長期化させる際に用いる医薬の製造に際しての、そして抗レトロウィルス薬物療法の中断の間のウィルスリバウンドの予防、軽減又は遅延に際しての、レトロウィルス抗原またはその機能的誘導体、ホモログ、一部もしくはアナログをコードするヌクレオチド配列、およびサイトカインまたはその機能的誘導体、ホモログ、一部もしくはアナログをコードするヌクレオチド配列を含む組換えベクターの使用を意図する。
【００４０】
いくつかの態様において、本発明はレトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列および／またはサイトカインをコードするヌクレオチド配列、またはそれらの機能的誘導体、ホモログ、一部もしくはアナログを含む組換えベクターの、抗レトロウィルス薬物療法の副作用１以上を軽減または緩和する場合に用いるための医薬の製造における使用を提供する。
【００４１】
例示的な態様では、ベクターはgag/polおよびＩＦＮγを同時に発現する鶏痘ベクターであり、低レベルのウィルス量を有効に維持するか、または抗レトロウィルス薬物療法が中断されている期間の間のウィルス量の増加を遅延させる。本発明は、本発明のベクターを含む医薬製剤およびその治療レジメの範囲におけるその使用に及ぶものである。
【００４２】
本明細書中で用いる配列識別子を以下の表１にまとめる。
【００４３】
表１  配列識別子の要旨
【表１】
2007508327.tif 000002
【００４４】
本発明の詳細な説明
本発明は、被験体内におけるレトロウィルス量を有効に調節するベクターを提供する。具体的には、本発明のベクターは、レトロウィルス感染を感染した被験体における低レベルのウィルス量を維持または長期化する。好ましい局面において、本発明のベクターは抗レトロウィルス薬物療法と組み合わせて用いられ、薬物療法の期間の前、後、またはその間、ウィルス量を低レベルに維持するのに有用である。
【００４５】
１局面において、本発明は、レトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列および／または調節因子をコードするヌクレオチド配列またはそれらの機能的なホモログ、誘導体、一部もしくはアナログを含有する組換えベクターを提供し、これは被験体内におけるレトロウィルス感染と関連した１以上の症状の治療または予防の際にARDTと組み合わせて用いるために上記配列を発現する。
【００４６】
いくつかの態様において、本発明はレトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列および／または調節因子をコードするヌクレオチド配列、またはそれらの機能的なホモログ、誘導体、一部もしくはアナログを含む組換えベクターを提供し、このベクターは被験体におけるレトロウィルス感染と関連した１以上の症状の治療または予防においてARDTと組み合わせて用いる場合に、これらの配列を発現する。
【００４７】
本明細書中、抗レトロウィルス薬物療法（ARDT）との言及は、最も広い意味で用いられ、１以上の化合物を単独で、またはレトロウィルス、特にHIVレトロウィルス治療用のレジメと併用して用いることを含む。
【００４８】
抗レトロウィルス化合物は、ウィルスに選択的に影響を与える多数の異なるメカニズムにより作用する。例えば、プロテアーゼインヒビター、逆転写酵素インヒビターおよびリボヌクレオチド還元インヒビターを用いてもよいし、またはウィルス吸着、アセンブリ、融合および転写を阻害する化合物であってもよい。当業者に公知のように、投与することができる多数の抗レトロウィルス化合物が存在する。プロテアーゼインヒビターの例としては、インディナビルおよびネルフィナビルが挙げられる。逆転写酵素インヒビターとしては、例えば、ジドフィスジン（Zidovisdine）、スタブジンおよびディダノシンが挙げられる。リボヌクレオチドレダクターゼインヒビターの例としては、チオセミカルバゾン誘導体が挙げられる。
【００４９】
使用する具体的な化合物および組合せ、ならびに用量およびレジメは、投与施術者により決定され、とりわけ、治療に応答する個体に依存する。
【００５０】
別の局面において、本発明は、被験体のレトロウィルス感染と関連した１以上の症状の治療または予防の際に、ARDTと組み合わせて用いるための、レトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列および調節因子をコードするヌクレオチド配列、または上記構成要素を同時に発現するその機能的なホモログ、誘導体、一部もしくはアナログを含む組換えベクターを提供する。
【００５１】
本明細書中で用いる場合、単数形である「１つの（ａ）」、「１個の（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、文章が明確にそうではないと記載しない限り、複数形の局面を含む。従って、例えば、「化合物」と記載した場合は、単数の化合物および２以上の化合物を含み、「活性薬剤」と記載した場合は、単独の活性薬剤および２以上の活性薬剤を含み、他も同様である。
【００５２】
用語「抗原」は最も広い意味で用いられ、それに対して免疫反応が産生される１以上のエピトープを含む分子が含まれる。しかしまた、この用語はその範囲内に、任意のポリペプチド（タンパク質またはペプチドを含む）を包含する。抗原性部分は、Paul, Fundamental Immunology, 3rd Ed., 243-247（Raven Press, 1993）およびその中で引用されている参考文献に記載されているような周知の技術を用いて同定することができる。
【００５３】
用語「組換えベクター」は、本明細書中、標的細胞内での発現のために核酸分子をその細胞中に方向付ける、または運ぶことができる構築物を意味するように、最も広い意味で用いられる。本発明のベクターは、ウィルスベクターまたはその類似の構築物もしくは誘導体、プラスミドベクターもしくは裸の核酸分子を含む。
【００５４】
ポックスウィルスベクターは特に便利なベクターである。本明細書中で用いる用語「ポックスウィルス」は、アビポックス（例えば、鶏痘、カナリア痘ウイルス、ハトポックス）、オルトポックス（例えば、ワクシニア）カプリポックス（例えば、ヒツジ、ヤギ）およびスイポックス（suipox）（例えば、豚痘）を含む群から選択されるウィルスを含む。好ましいポックスウィルスベクターはアビポックスベクターまたはオルトポックスベクターである。アビポックスベクターが好ましいベクターである。特に好ましいアビポックスウィルスベクターは鶏痘ベクター（FPV）である。典型的な鶏痘ベクターは、国際特許出願番号WO 00/28003に記載のFPV-M3ベクターである。組換えポックスウィルスベクターを作製および使用するための原則および方法は、当該分野において周知である。簡単に説明すると、宿主細胞内でのドナー組換えベクターとポックスウィルスとの相同組換えは、所望の配列の正確な導入を可能とする。
【００５５】
「調節する」という場合には、ウィルス量のダウンレギュレーション、ウィルス量の維持、およびウィルス量の増加率の変化を含む。具体的には、ウィルス量における任意の変化は、適当な期間にわたり、通常、しかし排他的に決定され、被験体または被験体群の経時的平均ウィルス量における変化という点で表される。
【００５６】
従って、本発明はレトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列および調節因子をコードするヌクレオチド配列またはその機能的なホモログ、誘導体、一部もしくはアナログを含む組換えポックスウィルスベクターを提供し、これは被験体のレトロウィルス感染と関連した症状１以上の治療または予防においてARDTと共に用いるための構成要素を同時に発現する。
【００５７】
「治療」および「予防」と言う場合、最も広い文脈で認識されるべきである。用語、治療は、HIV感染またはAIDSの臨床症状の部分的および完全な回復を含む。用語「予防」は、HIV感染にかかる、またはAIDSの臨床症状を含むHIV感染の症状を経験することを遅らせることを含む。特定の症状はHIV感染の症状とAIDSの臨床症状とで共通である。当業者であれば理解するように、共通の症状の例としては、検出できるウィルス量およびCD4+細胞レベルの減少が挙げられる。特定のHIV感染個体はウィルス量のレベルが低く、AIDSの臨床症状（例えば、免疫抑制、消耗性疾患または日和見感染のレベルの増加）を示さない。従って、本発明のベクターはHIV感染の症状ならびにAIDSおよびAIDS関連障害の臨床症状を治療するために用いられる。
【００５８】
ヒト被験体が主に意図されるが、「被験体」という場合、霊長類（例えば、ヒト、サル）、家畜動物（例えば、ヒツジ、ウシ、ウマ、ロバ、ヤギ、ブタ）、実験動物（例えば、マウス、ラット、アヒル、イヌ、モルモット、ラビット、ハムスター（hampsters））、愛玩動物（例えば、イヌ、ネコ、鳥）、および捕獲野生動物（例えば、カンガルー、シカ、キツネ）を含む哺乳動物を挙げることができると理解されるべきである。好ましくは、被験体は哺乳動物であり、より好ましくは霊長類であり、ヒト被験体がさらにより好ましい。
【００５９】
本明細書中で用いる語句「調節因子」は、外部または内部刺激に応答して変化をもたらす、細胞間で化学メッセンジャーとして働く宿主因子を意味する。従って、細胞性レセプター用リガンド（例えば、サイトカイン、増殖因子およびケモカイン）が、その機能的ホモログ、一部、誘導体およびアナログと共に意図される。当業者であれば理解するように、このような因子の活動は、これら因子のアゴニストまたはこれら因子のインヒビターのアンタゴニストとして作用する化合物の投与を通じて、あるいは同じ経路またはネットワークにおける下流イフェクターによっても、達成することができる。従って、用語、調節因子は、宿主因子、その下流イフェクターおよびそのアゴニストに対する言及を含む。
【００６０】
さらなる態様において、本発明は、レトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列およびサイトカインをコードするヌクレオチド配列、またはそれらの機能的なホモログ、誘導体、一部もしくはアナログを含む組換えベクターを提供し、これは被験体におけるレトロウィルス感染と関連した１以上の症状を治療または予防する際に、ARDTと組み合わせて用いるために、上記配列を同時に発現する。
【００６１】
さらなる態様において、本発明はレトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列およびサイトカインをコードするヌクレオチド配列またはその機能的なホモログ、誘導体、一部もしくはアナログを含む組換えポックスウィルスベクターを提供し、これは被験体におけるレトロウィルス感染と関連した１以上の症状を治療または予防する際に、ARDTと組み合わせて用いるために、上記配列を同時に発現する。
【００６２】
特定の好ましい態様において、本発明の調節因子はＩＦＮγ、IL-12、IL-2、TNFおよびIL-6、ならびにそれらの下流イフェクターおよびアゴニストから選択される。ＩＦＮγを本明細書中において例示し、ＩＦＮγまたはその機能的ホモログ、一部、誘導体およびアナログが好ましい。
【００６３】
好ましい局面において、本発明はレトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列およびＩＦＮγまたはその機能的なホモログ、誘導体、一部もしくはアナログをコードするヌクレオチド配列を含む組換えポックスウィルスベクターを提供し、これは、被験体におけるレトロウィルス感染の１以上の症状の治療または予防においてARDTと共に用いるための構成要素を同時に発現する。
【００６４】
好ましいレトロウィルス抗原としては、gag、env、polおよびproコード領域から選択されるコード領域によりコードされるものが挙げられる。
【００６５】
特に好ましい抗原は、gagおよび／またはpolコード領域によりコードされる抗原である。gag/pol構築物もまた好ましい。
【００６６】
本発明はヒトレトロウィルス感染（例えば、HIV、および好ましくはHIV-1）の治療に特に向けられる。
【００６７】
特に好ましい態様において、レトロウィルス抗原はHIVおよび好ましくはHIV-1に由来するgagおよびpolコード領域によりコードされる
【００６８】
従って、別の好ましい局面において、本発明は、HIV由来のgagおよび／またはpol抗原をコードするヌクレオチド配列およびＩＦＮγをコードするヌクレオチド配列、またはそれらの機能的ホモログ、誘導体、一部もしくはアナログを含む組換えポックスウィルスベクターを提供し、このベクターは被験体におけるHIV感染またはAIDSの１以上の症状を治療または予防する際に、ARDTと組み合わせて用いるために、上記配列を同時に発現する。
【００６９】
従って、別の局面において、本発明は、HIV由来のgagおよびpol抗原をコードするヌクレオチド配列およびＩＦＮγをコードするヌクレオチド配列、またはそれらの機能的ホモログ、誘導体、一部またはアナログを含む組換えポックスウィルスベクターを提供し、このベクターは被験体におけるHIV感染またはAIDSの１以上の症状の治療または予防においてARDTと組み合わせて用いるために上記配列を同時に発現する。
【００７０】
好ましくは、ポックスウィルスは鶏痘ウィルスである。
【００７１】
さらなる態様において、gag抗原は配列番号１に記載のヌクレオチド配列、またはこれに対して最適なアラインメントの後に少なくとも６０％の類似性を有するヌクレオチド配列、または中程度にストリンジェントな条件下でそれらにハイブリダイズするか、その相補型にハイブリダイズする配列によりコードされる。
【００７２】
さらなる態様において、gag抗原は配列番号２に記載のアミノ酸配列、またはこれに対して最適なアラインメント後に少なくとも６０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。
【００７３】
さらなる態様において、pol抗原は配列番号３に記載のヌクレオチド配列、またはこれに対して最適なアラインメント後に少なくとも６０％の類似性を有するヌクレオチド配列、または中程度にストリンジェントな条件下でそれらまたはそれらの相補型にハイブリダイズする配列によりコードされる。
【００７４】
さらなる態様において、pol抗原は配列番号４に記載のアミノ酸配列またはこれに対して最適にアラインメントした後に少なくとも６０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。
【００７５】
さらなる態様において、ＩＦＮγ抗原は配列番号５に記載のヌクレオチド配列、またはこれに対して少なくとも６０％の類似性を有するヌクレオチド配列、または中程度のストリンジェンシーの条件下でそれらにハイブリダイズするか、その相補型にハイブリダイズする配列によりコードされる。
【００７６】
さらなる態様において、ＩＦＮγ抗原は配列番号６に記載のアミノ酸配列、またはこれに対して最適にアラインメントした後に少なくとも６０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。
【００７７】
さらなる態様において、ベクターは、配列番号７に記載のヌクレオチド配列またはこれに少なくとも６０％の類似性を有するヌクレオチド配列、または中程度のストリンジェントな条件下でそれらもしくはそれらの相補体にハイブリダイズする配列を含む鶏痘ベクターである。
【００７８】
配列番号７および図３は、rFPV gag/pol  ＩＦＮγの挿入部位の配列を提供し、これは例示態様を示す。図１に示されるように、この構築物を投与した被験体は、試験期間にわたり、ARDT無しの場合に平均ウィルス量が約１／１０に減少することを示した。これにより、ほとんどの被験体に対してARDTの再開始において少なくとも遅延が生じた。
【００７９】
「機能的ホモログ」としては、種間において機能が保存されている種ホモログが挙げられる。それゆえ、ＩＦＮγの機能的ホモロジーは調節機能を保持している。polの機能的ホモログは、例えば、抗原性または生化学的機能を保持している。
【００８０】
抗原または調節因子の「機能的誘導体」は、変異体および全長ポリペプチドの一部または部分を含み、これは親分子の機能的活性を保持している。このような、活性フラグメントは、例えば、少なくとも１０、好ましくは少なくとも２０、より好ましくは少なくとも３０個の、必要な活性を示す連続的なアミノ酸の欠失変異体および小ペプチドを含む。このタイプのペプチドは、標準的な組換え核酸技術の適用を通じて入手することができるか、または第９章、表題「Peptide Synthesis」、AthertonおよびShephard（これは表題「Synthetic Vaccines」の刊行物（Nicholson編、Blackwell Scientific Publications発行）に含まれている）に記載の従来的な液相または固相合成を用いて合成することができる。
【００８１】
用語「機能的」とは、その分子が親（分子）の全体的な機能を保持する、または超えることを意味する。それゆえ、特に、誘導体またはホモログにおいて機能が減退している場合、より高い抗原性、寿命、半減期、活性、アビディティーなどのような新規機能が補われる。
【００８２】
用語「変異体」は、本明細書中以下に規定するストリンジェントな条件下において参照配列とハイブリダイズする参照ヌクレオチド配列またはポリヌクレオチドと実質的に配列同一性を示すヌクレオチド配列を意味する。本明細書中、用語「ヌクレオチド配列」、「ポリヌクレオチド」および「核酸分子」は同義的に用いることができ、１以上のヌクレオチドが付加または欠失している、または異なるヌクレオチドで置換されているポリヌクレオチドを含む。この点において、変異、付加、欠失および置換を含む特定の変更は、参照ヌクレオチド配列に対して行うことができ、これにより変更されたポリヌクレオチドは、参照ポリヌクレオチドの生物学的機能または活性を保持していることは当該分野において周知である。用語「変異体」は、天然の対立遺伝子変異体も含む。
【００８３】
標的分子の機能的誘導体としては標的分子の活性部分が挙げられ、被験体内でのその修飾は疾患または状態を緩解し、その影響を増強するようにさらに修飾されていてもよい。タンパク質またはペプチドの形での標的分子の機能的誘導体は、標的分子またはその一部に少なくとも６０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。ペプチド型における「一部」は５個未満のアミノ酸を含む程の小ささのエピトープであってもよく、または数百キロダルトン程の大きさであってもよい。ホモロジーに関して比較したポリペプチド配列長は、通常、少なくとも約１６アミノ酸であり、通常、少なくとも約２０残基であり、さらに通常は、少なくとも約２４残基であり、典型的には少なくとも約２８残基であり、好ましくは約３５残基より大きい。
【００８４】
核酸形の場合、機能的誘導体は最適にアラインメントした後に標的分子に少なくとも６０％の類似性を有するヌクレオチド配列を含む。標的核酸分子の「一部」は、最小サイズが少なくとも約10ヌクレオチドまたは好ましくは約13ヌクレオチドまたはより好ましくは少なくとも約20ヌクレオチドと定義され、少なくとも最小サイズが約35ヌクレオチドであってもよい。この定義は、10〜35ヌクレオチドの範囲の全てのサイズ（10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34または35ヌクレオチドを含む）を包含し、ならびに35ヌクレオチドよりも大きいもの（50、100、300、500、600ヌクレオチドまたはこれらの値の内の任意のヌクレオチド数を有する核酸分子）を包含する。
【００８５】
核酸型での標的分子の機能的誘導体としては、ストリンジェンシーが低い条件下で標的分子またはその相補型にハイブリダイズしうるヌクレオチド配列を含む核酸分子が挙げられる。
【００８６】
本明細書中で意図するアナログは、側鎖に対する修飾、ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質合成の間での非天然アミノ酸およびそれらの誘導体の組込、ならびに架橋剤およびタンパク質性分子またはそれらにアナログに立体配座上の拘束を与える他の方法の使用が挙げられるがこれらに限定されない。
【００８７】
本発明により意図される側鎖修飾の例としては、アミノ基の修飾（例えば、アルデヒドとの反応、続いてNaBH４での還元による還元的アルキル化、メチルアセチミデート（methylacetimidate）でのアミジン化、酢酸無水物でのアシル化、シアネートを用いてのアミノ基のカルバモイル化、２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）でのアミノ基のトリニトロベンジル化、コハク酸無水物およびテトラヒドロフタル酸無水物でのアミノ基のアシル化、ならびにピリドキサール−５−ホスフェートでのリシンのピリドキシル化、続いてNaBH４での還元）が挙げられる。
【００８８】
アルギニン残基のグアニジン基を、試薬（２，３−ブタンジオン、フェニルグリオキサールおよびグリオキサール等）を用いて複素環縮合産物を形成することにより修飾してもよい。
【００８９】
カルボキシル基は、Ｏ−アシルイソウレア形成を介するカルボジイミド活性化、続いて対応するアミド等への誘導体化により修飾することができる。
【００９０】
スルフヒドリル基は、ヨード酢酸またはヨードアセトアミドでのカルボキシメチル化、システイン酸への過ギ酸酸化、他のチオール化合物での混合型ジスルフィドの形成、マレイミド、無水マレイン酸または他の置換マレイミドとの反応、４−クロロ水銀ベンゾエート、４−クロロ水銀フェニルスルホン酸、フェニル水銀塩化物、２−クロロ水銀−４−ニトロフェノールおよび他の水銀剤を用いての水銀誘導体の形成、アルカリ性ｐＨでのシアネートでのカルバモイル化等の方法により修飾することができる。
【００９１】
トリプトファン残基は、例えば、Ｎ−ブロモスクシンイミドでの酸化または２−ヒドロキシ−５−ニトロベンジルブロミドまたはスルフェニルハロリドでのインドール環のアルキル化により修飾することができる。他方、チロシン残基は、テトラニトロメタンとのニトロ化により改変して３−ニトロチロシン誘導体を形成することができる。
【００９２】
ヒスチジン残基のイミダゾール環の修飾は、ヨード酢酸誘導体のアルキル化、またはジエチルピロカーボネートでのＮ−カルボエトキシ化により達成することができる。
【００９３】
ペプチド合成の間に非天然のアミノ酸および誘導体を組み込む例としては、ノルロイシン、４−アミノ絡酸、４−アミノ−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンタン酸、６−アミノヘキサン酸、ｔ−ブチルグリシン、ノルバリン、フェニルグリシン、オルニチン、サルコシン、４−アミノ−３−ヒドロキシ−６−メチルヘプタン酸、２−チエニルアラニンおよび／またはアミノ酸のＤ−イソマーの使用が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書中で意図する非天然のアミノ酸のリストを表２に示す。
【００９４】
【表２−１】
2007508327.tif 000003
【表２−２】
2007508327.tif 000004
【表２−３】
2007508327.tif 000005
【表２−４】
2007508327.tif 000006
【表２−５】
2007508327.tif 000007
【００９５】
架橋剤を用いて、例えば、ホモ二官能性架橋剤（例えば、(CH２)ｎであるスペーサー基（n=1〜n=6）を有する）、二官能性イミドエステル、グルタルアルデヒド、N-ヒドロキシスクシンイミドエステルおよびヘテロ二官能性試薬（通常、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドのようなアミノ反応性部分およびマレイミドまたはジチオ部分（SH）またはカルボジイミド（COOH）のような別の基特異的反応性部分を含む）を用いて３Ｄ立体配座を安定化することができる。さらに、ペプチドは、ＣαおよびＮα−メチルアミノ酸の組込み、アミノ酸のＣαおよびＣβ原子の間への二重結合の導入、ならびにＮ末端およびＣ末端の間、２つの側鎖の間、または側鎖とＮもしくはＣ末端の間でのアミド結合の形成のような共有結合の導入による環状ペプチドまたはアナログの形成等による立体配座により拘束されうる。
【００９６】
これらのタイプの分子は、ベクター構築物またはその発現産物を安定化するために重要であり得る。
【００９７】
本明細書中で用いる用語「類似性」または「同一性」は、ヌクレオチドまたはアミノ酸レベルで比較した配列間での正確な同一性を含む。ヌクレオチドレベルで同一性がない場合、「類似性」には、異なるアミノ酸を生じるが、それでも構造的、機能的、生化学的および／または立体配座レベルで互いに関連のある配列間の差異を含む。アミノ酸レベルで同一性がない場合、「類似性」とは、なおも構造的、機能的、生化学的および／または立体配座レベルで互いに関連のあるアミノ酸を含む。特に好ましい態様において、ヌクレオチドおよびアミノ酸の配列比較は類似性よりも同一性のレベルで行われる。
【００９８】
２以上のポリヌクレオチドまたはポリペプチド間での配列関連性を記載するために用いる用語には、「参照配列」、「比較ウィンドウ」、「配列類似性」、「配列同一性」、「配列類似性割合」、「配列同一性割合」、「実質的に類似」および「実質的に同一」が挙げられる。「参照配列」は少なくとも１２モノマー単位長（ヌクレオチドおよびアミノ酸残基長を含む）であるが、１５〜１８モノマー単位長であることが多く、少なくとも２５モノマー単位長以上（例えば、３０モノマー単位長）であることも多い。２個のポリヌクレオチドは互いに、（１）２個のポリヌクレオチド間で類似する配列（すなわち、完全なポリヌクレオチド配列の一部のみ）、および（２）２個のポリヌクレオチド間で相違する配列を含むかもしれないので、２個（以上）のポリヌクレオチド間の配列比較は、通常、「比較ウィンドウ」により２個のポリヌクレオチドの配列を比較して配列類似の部分領域を同定し、比較することにより行う。「比較ウィンドウ」とは、参照配列と比較する、通常は１２個の連続残基のセグメント概念を意味する。比較ウィンドウは、２個の配列の最適なアラインメントのために参照配列（これは付加および欠失を含まない）と比較した場合に、約２０％以下の付加または欠失（すなわち、ギャップ）を含んでも良い。比較ウィンドウを整列させるための最適な配列のアラインメントは、コンピューターによるアルゴリズムの実施により行ってもよいし（Wisconsin Genetics Software Package Release 7.0, Genetics Computer Group, 575 Science Drive Madison, WI, USA のGAP、BESTFIT、FASTAおよびTFASTA）、または綿密な調査および選択した種々の方法のいずれかにより作製した最も良いアラインメント（すなわち、比較ウィンドウで最も高い相同性の割合を生じる）により行ってもよい。また、参照は、例えば、Altschulら（Nucl．Acids Res．25：3389，1997）により開示されるＢＬＡＳＴファミリープログラムに対して行っても良い。配列分析の詳細な議論は、AusubelらのUnit 19.3に見出すことができる（「Current Protocols in Molecular Biology」John Wiley＆Sons Inc, 1994-1998, Chapter 15）。
【００９９】
本明細書中で用いる用語「配列類似性」および「配列同一性」は、比較ウィンドウにおいてヌクレオチド毎、またはアミノ酸毎で、配列が同一または機能的もしくは構造的に類似である程度を意味する。従って、「配列同一性割合」は、例えば、最適に整列させた２個の配列を比較ウィンドウで比較し、同一の核酸塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｉ）または同一のアミノ酸残基（例えば、Ala、Pro、Ser、Thr、Gly、Val、Leu、Ile、Phe、Tyr、Trp、Lys、Arg、His、Asp、Glu、Asn、Gln、CysおよびMet）が両方の配列で生じる位置番号を決定して一致した位置数を得、比較ウィンドウ中の全位置数（すなわち、ウィンドウサイズ）で一致した位置数を除算し、その結果に１００を乗じて配列同一性の割合を得ることにより計算する。本発明の目的において、「配列同一性」はDNASISコンピュータープログラム（ウィンドウズ用Version 2.5、Hitachi Software engineering Co., Ltd., South San Francisco, California, USAから入手）によりソフトウェアに添付のリファレンスマニュアルで用いられるように標準デフォルトを用いて計算した「一致割合」を意味すると理解される。同様の注釈は配列類似性に関しても適用される。
【０１００】
好ましくは、特定の配列と参照配列（ヌクレオチドまたはアミノ酸）との間での類似性割合は、少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％、またはそれ以上（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上）である。６０％と１００％の間の類似性割合または同一性割合（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％）もまた意図される。
【０１０１】
低レベルのストリンジェント（ストリンジェンシー）という場合には、ハイブリダイゼーション用に少なくとも約０〜少なくとも約１５％  v/vホルムアルデヒドおよび少なくとも約１Ｍ〜少なくとも約２Ｍの塩を含み、洗浄条件用に少なくとも約１Ｍ〜少なくとも約２Ｍの塩を含む。通常、低レベルのストリンジェントな条件は、約２５〜３０℃から約４２℃である。この温度は変更することができ、ホルムアミドを置き換えるため、及び／または別のストリンジェントな条件を与えるためにより高温を用いることができる。必要であれば、中程度のストリンジェンシー（これはハイブリダイゼーション用に少なくとも約１６％〜少なくとも約３０％  v/vホルムアミドおよび少なくとも約０．５Ｍ〜少なくとも約０．９Ｍの塩を含み、洗浄条件用に少なくとも約０．５Ｍ〜少なくとも約０．９Ｍの塩を含む）、または高レベルのストリンジェンシー（これは少なくとも約３１％  v/v〜少なくとも約５０％  v/vのホルムアミド、およびハイブリダイゼーション用に少なくとも約０．０１Ｍ〜少なくとも約０．１５Ｍの塩を含み、洗浄条件用に少なくとも約０．０１Ｍ〜少なくとも約０．１５Ｍの塩を含む）のような別のストリンジェントな条件を適用することができる。通常、洗浄はＴｍ＝69.3＋0.41（G+C）％で行う（MarmurおよびDoty、J. Mol. Biol. 5:109, 1962)。しかし、二本鎖ＤＮＡのＴｍは、ミスマッチ塩基対の数が１％増加する毎に１℃低下する（Bonner and Laskey、Eur. J. Biochem. 46：83, 1974)。これらのハイブリダイゼーション条件にはホルムアミドが最適である。従って、特に好ましいレベルのストリンジェンシーを以下のように規定する：低いレベルのストリンジェンシーは、６×SSC緩衝液、0.1％ w/v SDS、２５〜４２℃；中程度のストリンジェンシーは、２×SSC緩衝液、0.1％ w/v SDS、温度範囲２０℃〜６５℃；高いレベルのストリンジェンシーは０．１×SSC緩衝液、0.1％ w/v SDS、温度は低くとも６５℃である。高いレベルのストリンジェントな（ストリンジェンシー）条件が特に好ましい。
【０１０２】
本発明は、レシピエント細胞内で、調節因子および／またはレトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列の発現を意図する。しかしながら、この因子をレシピエント細胞に送達する別の適当な手段を、本発明の権利範囲内で行うことができる。従って、調節因子は、タンパク質性または他の適当および製薬上許容される化学形態で、場合により、レトロウィルス抗原および／または調節因子をコードするヌクレオチド配列を含む本発明のベクターと組合せて、投与することができる。
【０１０３】
別の局面において、本発明は、製薬上許容される担体および／または希釈剤と共にレトロウィルス感染の治療または予防に際してARDTと共に用いるための、上記ベクターのいずれか１つを含有する医薬組成物を提供する。
【０１０４】
本明細書中、用語、医薬組成物は、所望の薬理学的効果および／または生理学的効果を誘導する化学的化合物を意味するために用いられる。この用語は、活性物質の製薬上許容され、かつ薬理学的に活性な成分を含み、製薬上許容され、かつ薬理学的に活性な塩、エステル、アミド、代用形、代謝体、アナログなどを含む。本明細書中で用いる用語「化合物」は化学分子のみとは解釈されず、ペプチド、ポリペプチド、およびタンパク質、ならびに核酸分子およびそれらの化学的アナログにも及ぶ。
【０１０５】
「製薬上許容される」賦形剤または希釈剤は、生物学的ではない、または望ましくない物質からなる医薬媒体、すなわち、任意のまたは実質的な副作用を引き起こすことなく投与することができる物質を意味する。キャリアとしては、賦形剤、および希釈剤、着色剤、湿潤剤または乳化剤、緩衝剤、防腐剤等のような他の添加物を挙げることができる。
【０１０６】
好ましい局面において、この医薬組成物は、被験体内におけるウィルス量を調節するために抗レトロウィルス薬物療法との組合せにおいて有用である。
【０１０７】
別の局面において、本発明はレトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列および／またはサイトカインをコードするヌクレオチド配列またはそれらの機能的ホモログ、一部、誘導体もしくはアナログを含む組換えベクターを意図し、低レベルのレトロウィルス量を保有する被験体に投与すると、この抗原および／またはサイトカインが標的細胞内において発現され、低レベルのウィルス量が効率よく維持されるか、または延長される。
【０１０８】
別の局面において、本発明は、レトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列およびサイトカインをコードするヌクレオチド配列またはその機能的ホモログ、一部、誘導体もしくはアナログを含む組換えベクターであって、低レベルのレトロウィルス量を保有する被験体に投与すると、これらのヌクレオチド配列が標的細胞内で発現され、低レベルのウィルス量が効率よく維持されるか、または延長される。
【０１０９】
本明細書中で広範に用いる発現とは、核酸分子からのポリペプチドの産生をいう。
【０１１０】
ウィルス量は、血漿のウィルス粒子数／ｍｌに関して測定し、ウィルス感染の有用かつ直接的な基準であり、薬物療法および免疫付与プロトコールを含むレトロウィルス治療レジメにおける有効性の代理マーカーである。特に、抗レトロウィルス薬物療法は通常、ウィルス量が約50ウィルス粒子／血漿ｍｌを超えた時点、または適当な期間の間にこの値を超える値が維持された時点の患者で、開始される。抗レトロウィルス薬物療法の停止または中断の結果の１つは、治療が開始される前のレベルと同じレベルか、またはそれよりも高いレベルまでウィルス量が「リバウンド」するかもしれないことである。このようなウィルスリバウンドは、未処理のままにしておくと、初期HIV感染の症状またはAIDSの臨床症状の発症、またはその悪化への、被験体内における進行と関連する。従って、被験体内での治療レジメの有効性の別の有用な基準は、検出可能な血漿ウィルス量の発症までの時間または抗レトロウィルス薬物療法再開始までの時間である。ウィルスの絶対数および相対数は診断上のものであるので、治療期間にわたって、または治療後、または治療中の、被験体における最大ウィルス量および基底値からの時間加重変化を考慮することも有用である。血漿ウィルス量を測定および定量するために用いるプロトコルは当該分野において周知であり、通常はRT-PCRを用いる。
【０１１１】
治療の成功または臨床経過の別の基準は、被験体内におけるCD4：CD8 Ｔ細胞の比である。さらに、免疫化ストラテジーの成功および被験体の免疫状態の基準は、特定の抗原に対するCD8 Ｔ細胞反応および／または抗体反応の測定により評価することができる。被験体の細胞性のウィルス学的かつ免疫学的状態を測定する方法は当該分野において周知であり、例えば、HarlowおよびLane, Antibodies：A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1998およびその中に引用されている文献に記載されている。
【０１１２】
低レベルのウィルス量とは平均データであり、経時的な平均が約50,000コピー／血漿ｍｌ未満であることが好ましい。好ましくは、低レベルの平均ウィルス量は約40,000コピー／ｍｌ未満であり、より好ましくは約30,000コピー／ｍｌ未満であり、さらにより好ましくは約20,000コピー／ｍｌ未満であり、さらになお好ましくは約10,000コピー／ｍｌ未満であり、なおさらにより好ましくは約1000コピー／ｍｌ未満であり、またはこれら数値間の任意の数、または1000〜0の間、または検出不可能なコピー数／ｍｌ、例えば、1000〜100コピー／ｍｌ、500〜50コピー／ｍｌ、または750〜80コピー／ｍｌ等である。最も好ましくは、低レベルのウィルス量は50コピー／ｍｌ未満である。
【０１１３】
ウィルスリバウンドの遅延またはウィルス量増加の遅延は、おそらく臨床上の利点を伝える任意の時間枠であり、数日、数週間、数ヶ月または数年で測定してもよい。本明細書中に例示するように、完全構築物（FC）を投与する被験体に関しての平均最大ウィルス量は約20,000コピー／ｍｌであり、これは抗レトロウィルス療法の退薬の間に、試験２０週間にわたってモニターした。
【０１１４】
ポックスウィルスベクターは特に都合の良いベクターである。好ましいポックスウィルスベクターは、ヒト被験体において効率的には複製しないアビポックスまたはオルトポックスベクターである。特に好ましいポックスウィルスベクターは鶏痘ベクター（FPV）である。代表的な鶏痘ベクターは、国際特許出願番号WO 00/28003に記載されるFPV-M3ベクターである。
【０１１５】
特に好ましい態様において、サイトカインはＩＦＮγ、IL-12、IL-2、TNFおよびIL-6、下流イフェクターおよびそれらのアゴニストから選択される。ＩＦＮγを本明細書中で例示し、そしてＩＦＮγまたはその機能的ホモログ、一部、誘導体およびアナログが好ましい。
【０１１６】
好ましいレトロウィルス抗原としては、gag、env、polおよびproコード領域から選択されるコード領域によりコードされるものが挙げられる。
【０１１７】
特に好ましい抗原は、gagおよび／またはpolコード領域によりコードされる抗原である。gag/pol構築物もまた、好ましい。
【０１１８】
好ましいレトロウィルスはHIV-1である。
【０１１９】
さらなる態様において、本発明の組換えベクターは、ARDTと組み合わせて投与される。「組合せて」とは、治療効率を改善するために本発明のベクターおよびARDTを共に用いるが、必ずしも同時である必要はないことを意味する。本発明に従って、治療効率はARDTに対して別または追加の治療を提供することにより改善され、ARDTの有害な副作用が軽減される。具体的には、本発明のベクターの投与により抗レトロウィルス薬物を断続的に投与することができる治療プロトコルを行うことができる。
【０１２０】
従って、本発明は、レトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列およびサイトカインをコードするヌクレオチド配列またはその機能的ホモログ、一部、誘導体もしくはアナログを含む組換えベクターを提供し、これはARDTの結果として低レベルのレトロウィルス量を保有する被験体に投与すると、標的細胞内で抗原が発現され、ARDTの退薬後または退薬中に、この低レベルのウィルス量が効率よく維持されるか、または延長される。
【０１２１】
誤解を避けるために、本発明のベクターはARDT/sの前、最中、後もしくはその間に投与することができる。
【０１２２】
好ましい局面において、本発明は、ARDTと組み合わせて、レトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列および／または サイトカインをコードするヌクレオチド配列またはその機能的ホモログ、一部、誘導体もしくはそのアナログを含むベクターを投与することを含む治療または予防方法を提供し、この方法は被験体内における低レベルのレトロウィルス量の維持または被験体内におけるウィルスリバウンドの軽減もしくは遅延に有効である。
【０１２３】
好ましい局面において、本発明のベクターの投与により、HIV感染またはAIDSの症状の１つ以上を有効に予防または治療する。
【０１２４】
別の局面において、本発明は、ARDTと組み合わせて、レトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列およびサイトカインをコードするヌクレオチド配列またはその機能的ホモログ、一部、誘導体もしくはそのアナログを含有するベクターを投与することを含む予防または治療方法を提供し、この方法は被験体内において低レベルのレトロウィルス量の維持または被験体内におけるウィルスリバウンドの軽減または遅延に有効である。
【０１２５】
好ましい局面において、本発明のベクターを投与することにより、１種以上のHIV感染またはAIDSの症状を効率よく予防または治療する。
【０１２６】
関連する局面において、本発明は、レトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列ならびにサイトカインをコードするヌクレオチド配列またはその機能的ホモログ、一部、誘導体もしくはそのアナログを有するベクターの投与を含む、ARDTと組み合わせてのAIDSの治療方法または予防方法を提供し、この方法は被験体における低レベルのレトロウィルス量の維持、またはARDT無しの場合のウィルスリバウンドの軽減または遅延に有効である。
【０１２７】
「有効」であるためには、本発明のベクターを「有効量」で投与する。本明細書中で用いる場合、有効量とは所望の治療的または生理学的結果を提供するために充分なベクター量を意味する。望ましくない効果、例えば副作用が所望の治療効果と共に現れることも多いので、医師は適切な「有効量」を決定する際に潜在的な利益の潜在的な危険性に対するバランスを保たなければならない。必要とされる正確な投与量と頻度は、被験体の種、年齢および全体的な臨床状態、投与態様等に応じて、被験体間で変動する。従って、正確な「有効量」を特定することはできないかもしれない。しかしながら、いずれの個体の場合においても、適切な「有効量」は、慣用的な実験のみを用いて当業者により決定することができる。
【０１２８】
本発明の分子は、従来的な医薬配合技術に従って調製される医薬組成物中に処方することができる。例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed.（1990, Mack Publishing, Company, Easton, PA, U.S.A.）を参照のこと。組成物は、活性薬剤または活性薬剤の製薬上許容される塩を含有しうる。これらの組成物は、活性薬剤の１つに加えて、製薬上許容される賦形剤、キャリア、緩衝剤、安定化剤または他の当該分野において周知の物質を含有し得る。このような物質は非毒性であるべきであり、そして活性成分の有効性と干渉するべきでない。キャリアは、投与（例えば、静脈内、経口、髄腔内、神経鞘内または非経口）に望ましい製剤の形態に応じて種々の形態をとり得る。筋肉内投与が好ましい。
【０１２９】
経口投与用に、化合物は、カプセル剤、丸剤、錠剤、ロゼンジ、散剤、懸濁剤または乳剤のような固体または液体製剤に処方することができる。組成物を経口投薬形態に調整する際には、経口液体製剤（例えば、懸濁剤、エリキシルおよび液剤など）の場合、通常の医薬媒体のいずれか（例えば、水、グリコール、オイル、アルコール、香料、防腐剤、着色料、懸濁化剤など）を利用することができ、または経口固体製剤（例えば、散剤、カプセル剤および錠剤）の場合、キャリア（例えば、デンプン、糖、希釈剤、造粒剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤など）を利用することができる。固体の製薬キャリアが明らかに使用される場合は、投与を簡単にするために、錠剤およびカプセル剤が最も有利な経口投薬単位形態を示す。所望される場合、錠剤は、標準的技法により糖衣がけをされていてもよいし、または腸溶コーティングされていてもよい。活性薬剤をカプセル化して胃腸管を通過するように安定にすることができると同時に、血液脳関門を通過することができる。例えば、国際公開番号WO 96/11698を参照。
【０１３０】
非経口投与用のために、化合物を製薬キャリアに溶解し、液剤または懸濁剤のいずれかとして投与してもよい。適当なキャリアの例示は、水、生理食塩水、デキストロース溶液、フルクトース溶液、エタノールまたは動物油、植物油または合成油である。キャリアはまた、他の成分（例えば、防腐剤、懸濁剤、可溶化剤、緩衝剤など）を含みうる。化合物が髄腔内投与される場合、脳脊髄液に溶解してもよい。
【０１３１】
好ましくは、活性薬剤は治療上有効な量で投与される。実際に投与する量および投与速度およびタイムコースは、処置する状態の性質および重篤度に依存する。治療の処方（例えば、投薬量の決定、タイミングなど）は一般開業医または専門医の責任の範囲内にあり、通常は、個々の患者の状態、送達部位、投与方法、および医師に知られている他の因子が考慮に入れられる。技術およびプロトコルの例は、Remington's Pharmaceutical Sciences（上記）に見出すことができる。
【０１３２】
あるいは、抗体または細胞特異的リガンドのような標的化システムの使用により、標的化療法を用いて、活性薬剤をより特異的に特定の細胞型に送達することができる。標的化は、薬剤が受け入れがたいほど毒性である場合、または別の方法では余りにも多くの用量を必要とする場合、または別の方法では所望の細胞に入ることができない場合など、種々の理由のために望ましいかもしれない。
【０１３３】
細胞ベースの送達システムを用いてもよい（例えば、米国特許番号5,550,050および国際公開番号WO 92/19195、WO 94/25503、WO 95/01203、WO 95/05452、WO 96/02282、WO 96/02646、WO 96/40871、WO 96/40959およびWO 97/12635に記載）。ベクターは潜伏感染を有する細胞に標的化することができるか、又は発現産物の発現が特定の細胞、発症段階または細胞サイクル段階に限定することができるかもしれない。細胞ベースの送達システムは、所望の部位で患者の体内に埋め込まれるように設計されている。あるいは、薬剤は、前駆体の形態で投与することができる。処置される細胞の中で産生された活性化薬剤、またはそこに標的化された活性化薬剤により活性型に変換されるための前駆体の形態で投与することができる。例えば、欧州特許出願番号0 425 731Aおよび国際公開WO 90/07936を参照のこと。
【０１３４】
別の局面において、本発明はARDTの１以上の副作用を軽減または緩解する方法を提供し、この方法はレトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列および／またはサイトカインをコードするヌクレオチド配列またはその機能的誘導体、ホモログ、一部もしくはアナログを含むベクターを、上記配列を同時に発現し、ARDTの副作用１種以上を軽減または緩解するために充分な時間および条件下で、被験体に投与することを含む。
【０１３５】
さらなる局面において、本発明はARDTの１以上の副作用を軽減または緩解する方法を提供し、この方法はレトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列およびサイトカインをコードするヌクレオチド配列またはその機能的誘導体、ホモログ、一部もしくはそのアナログを含むベクターを、上記配列を同時に発現し、ARDTの副作用１種以上を軽減または緩解するために充分な時間および条件下で、被験体に投与することを含む。
【０１３６】
別の局面では、本発明はARDTの１以上の副作用を軽減または緩解する方法を提供し、この方法はレトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列および／またはサイトカインをコードするヌクレオチド配列を含有するベクターを、上記配列を同時に発現し、ARDTの副作用１種以上を軽減または緩解するために充分な時間および条件下で、被験体に投与することを含む。
【０１３７】
好ましくは、ベクターはポックスウィルスベクターである。より好ましくは、アビポックスベクターである。さらにより好ましくは、鶏痘ベクターである。
【０１３８】
さらなる好ましい態様において、サイトカインはＩＦＮ−γである。
【０１３９】
好ましくは、レトロウィルス抗原はgagおよび／またはpolである。最も好ましくは、HIV gag/polを用いる。
【０１４０】
さらに好ましい態様において、本発明はARDTの副作用１以上を軽減または緩解する方法を提供し、この方法は、HIV gag/polをコードするヌクレオチド配列およびＩＦＮ−γをコードするヌクレオチド配列またはその機能的誘導体、ホモログ、一部もしくはアナログを含む鶏痘ベクターを上記配列を同時に発現し、ARDTの副作用１種以上を軽減または緩解するために充分な時間および条件で、被験体に投与することを含む。
【０１４１】
ARDTの副作用は多く、当該分野において周知であり、例としては吐き気、嘔吐、発熱脂肪再分配（fever fat redistribution）、心疾患、肝疾患およびインスリン抵抗性が挙げられるが、これらに限定されない。治療レジメおよび予防レジメは個体に対して調整され、ARDTの前または間、またはARDTの退薬の後、およびARDTの再開始の前または後での、ベクターを用いてのプライミングおよび／または追加免疫を含む。ARDTは、レシピエントが被る副作用のレベルおよび程度に応じて、数日〜数ヶ月の範囲の期間で退薬することができ、ウィルス量を低レベルで維持するために、この期間の間にプライミングおよび／または追加免疫形式でベクターを投与することができる。ウィルス量を低下させることにより、本明細書中に記載の方法は、ARDTの再開までの時間の増加、さらなるARDTの予防、または処置の副作用を有効に軽減させる抗レトロウィルス薬の組合せの変化の際に有用である。
【０１４２】
関連する局面において、本発明はレトロウィルス感染およびそれに関連する症状の治療または予防において、ARDTと組み合わせて用いるための医薬の製造における本発明のベクターの使用にわたる。
【０１４３】
１局面において、本発明はレトロウィルス抗原をコードするヌクレオチド配列および／またはサイトカインをコードするヌクレオチド配列もしくはその機能的誘導体、ホモログ、一部もしくはそのアナログを含むベクターの、ARDTの副作用を１種以上、軽減または緩解する方法で用いる医薬の製造での使用を広範に意図する。
【０１４４】
好ましくは、被験体は、抗レトロウィルス化合物を用いて予め処置されている。本発明のベクターは、ARDTの前、またはその間、あるいはARDTの退薬の後に、投与することができる。ARDTの前または間に投与する場合、次いで、ARDTを退薬させ、本発明に従って、ARDT無しの場合にウィルス量を低レベルで維持する。
【０１４５】
本発明のこの局面に従うと、好ましくは、ベクターはポックスウィルスベクターである。アビポックスベクターがさらに好ましい。鶏痘ベクターはさらにより好ましい。
【０１４６】
さらに好ましい態様において、サイトカインはＩＦＮγである。好ましくは、レトロウィルス抗原はgagおよび／またはpolである。最も好ましくは、HIV gag/polを利用する。
【０１４７】
従って、好ましい態様において、本発明は、ARDTの副作用１種以上を軽減または緩解する方法で用いる医薬の製造における、HIV gag/polをコードするヌクレオチド配列およびＩＦＮγをコードするヌクレオチド配列またはその機能的誘導体、ホモログ、一部もしくはアナログを含む鶏痘ベクターの使用を提供する。
【０１４８】
この医薬は、プライミング投薬および／または追加免疫投薬としての投与形式であることが好都合である。広範な範囲の用量が適用可能であり得る。例えば、単位投薬は、約１×10６PFU／ml〜約１×10８PFU／mlを含みうる。投薬レジメは最適治療用量を提供するように調整され、プライミング投与は、毎日、毎週、または毎月、または別の適切な時間間隔で投与することができるか、または状態の緊急性により示されるように、比例して減少させることができる。好ましいプライミング用量は、希釈物１ｍｌあたり５×10７PFUである。追加免疫用量はプライミング用量と同じでもよいし、または状態の緊急性により示されるように、さらに高濃度であってもよいし、もしくは低濃度であってもよい。他の構築物に関しては、１日あたり体重１ｋｇにつきベクター約０．１μｇ〜１ｍｇを投与することができる。
【０１４９】
本発明を以下の非限定的実施例によりさらに説明する。
【０１５０】
実施例１
HIV-1感染被験体においてHIV gag-polおよびインターフェロン−γを発現するアビポックスウィルスの安全性および生物学的活性の無作為化プラセボコントロール型第I／IIa相評価
臨床試験を行って、併用抗レトロウィルス薬物療法（ARDT）を受けているHIVポジティブ被験体においてHIV gag-polを発現するか、またはHIV gag/polおよびヒトインターフェロンγ(ＩＦＮγ)を共に発現する組換え鶏痘ウィルスワクチン(rFPV)の安全性および免疫原性を確立した。合計34患者が、６ヶ月にわたり定期的に一連の注射および血液試験を行う試験を完了した。患者は、試験期間にわたって標準的な抗レトロウィルス療法を受け続けた。2003年２月17日に公表したように（virax.com.au）、この試験に関するデータは、いずれの構築物もARDTを受けている試験参加者での特異的免疫反応を誘発しなかったことを示した。
【０１５１】
実施例２
組換え鶏痘ウィルス（rFPV）に基づく治療用HIVワクチン候補物の抗レトロウィルス学的特性を評価するための安全性、生物学的活性および拡張試験
多施設無作為二重盲検プラセボ対照試験には、抗レトロウィルス治療（ART）の開始から、ウィルス複製（血漿ウィルス量＜５０コピー／ｍＬ）のコントロールを維持した、HIV初感染の間にARTで処置されているHIV感染個体を採用した。被験体を、次の３つの試験アームの内の１つに無作為に分けた；希釈剤単独（プラセボ）、HIV gag/polを発現するrFPV（部分的構築物-PC）またはHIV gag/polおよびＩＦＮγを発現するrFPV（全長構築物−FC）。０日目、４週目および１２週目に、５×10７pfu/mL/希釈剤1.0mLの単位用量で筋肉内注射によりワクチンを投与した。追跡を５２週間にわたり続けた。初期評価項目は、26週まではCTL反応またはELISPOTアッセイにより測定した場合のCD8+イフェクター機能のベースラインからの平均変化、および52週まではベースラインからのlogウィルス量の増加である。安全性評価項目の分析は、行った処置に応じる。全分析は、「包括解析」法を用いて行った。
【０１５２】
本試験において、35人の的確な被験体を無作為に分けた（12人のプラセボ、11人のPC-rFPV、12人のFC-rFPV）。被験体１人（プラセボ群）を除いて全員に３種の免疫付与全てを与えた。35人全ての被験体が52週間の検証を完了させた。試験中、顕著な毒性または安全性についての懸念は観察されなかった。52週間の試験期間にわたり、検出可能なHIVウィルス血症エピソード（５人の患者において８つのエピソード）は少なく、ワクチン群に差異はなかった。抗HIV gag ELISPOT反応（ベースラインからの変化における時間加重平均差分＝−５６sfu/10６PBMC；p＝0.062）、抗HIV p55 リンパ球増殖性反応（ベースラインからの変化における時間加重平均差分＝4.4 SI；p＝0.337）、抗HIV gagリンパ球増殖性反応（ベースラインからの変化における時間加重平均差分＝2.1 SI；p＝0.778）については、PCおよびFCの併用群とプラセボ患者との間で顕著な差異はなかった。検証の間、さらなる抗HIV抗体反応は観察されなかった。ウェスタンブロット反応性抗FPV抗体が６週目のPCレシピエントおよびFCレシピエントの全てで検出され、試験期間中、持続した。ワクチンレシピエントは、ワクチン候補物の投与直後に持続的に反応性抗FPV抗体を生じた。
【０１５３】
多施設二重盲検プラセボ対照の20週間の延長パイロット試験を行って、併用抗レトロウィルス治療（ART）の中止後のHIV複製の測定値における組換え鶏痘ウィルスワクチン（rFPV）での免疫付与の効果を試験した。０日目に以前に登録した個体プロトコルで再度承諾を受けた後に、元々の無作為型割り当て（original randomised assignment）に従って筋肉内注射により追加免疫付与を行った：希釈剤単独（プラセボ）、HIV gag/polを発現するrFPV（部分的構築物−PC）またはHIV gag/polおよびインターフェロン−γを発現するrFPV（全長構築物-FC）。免疫付与の１週間後に全ARTを中止した。ウィルス学的および免疫学的モニタリングを免疫付与後20週間にわたり、頻繁に行った。初期評価項目は、ARTの再導入までの、基底値での血漿HIV-RNA VL（pVL）からの時間加重型曲線下面積変化であった。二次評価項目としては、ART中止後のlog pVL（ワクチン摂取後pVL設定点）、pVL再発の動力学および速度、ARTの再開始までの時間の中央値、HIV抗原に対するCD8+ Ｔ細胞反応およびCD4+/CD8+ Ｔ細胞計測変化が挙げられる。
【０１５４】
本来の試験集団のうち25人（71％）が参加することに同意した（プラセボ＝7；PC＝8；FC＝10）。７人の患者に抗レトロウィルス治療を再導入した（プラセボ＝３；PC＝３；FC＝１）。免疫付与は良好に許容された。患者１人（PC群）は、処置無しで解決した一過性のグレード３の血小板減少症を経験していた。20週間にわたる基底pVLからの時間加重型平均変化は、プラセボ、PCおよびFCについてそれぞれ、1.80（0.72）、1.78（0.91）および0.96（0.91）であった（p＝0.253、FCおよびPCレシピエントをプラセボと比較した場合）。基底CD4+細胞カウントからの時間加重型平均変化は、プラセボ、PCおよびFCについてそれぞれ、-90.7 (210.1）、2.05（166.3）および3.45（160.9）であった（p＝0.238、FCおよびPCレシピエントをプラセボと比較した場合）。検証の間、患者は全て少なくとも１つの検出可能なpVLを有していた（＞50コピー/mL）。プラセボと比較して、FCおよびPCレシピエントは、pVLが検出可能になるまで同様の時間がかかった（危険率1.21、95％CI 0.40−2.97、p＝0.682）。ARTの再開始までの時間はプラセボと比較して、FCおよびPCレシピエントにおいて統計上有意な差異はなかった（危険率＝2.08、95％ CI 0.49−9.31、p＝0.338）。
【０１５５】
全長構築物（FC）rFPV免疫付与を行ったレシピエントは、PC rFPVまたはプラセボのレシピエントと比較して、pVLのlogの減少を受けた。具体的には、各群についての平均最大ウィルス量は以下の通りである：プラセボ群−67173コピー/ml；部分的構築物群−68841；および全長構築物群−18897（図１を参照のこと）。予想外なことに、ARDT無しでは試験の初期においては検出可能な免疫反応はなかったにもかかわらず、ベクター投与により平均ウィルス量が約１０分の１に減少し、そして試験期間２０週間にわたって治療効果を得た。上記のように、合計７人の患者に、レトロウィルス治療を再度導入した（図２に示すように、この７人は、プラセボ群からの３人、部分的構築物投与群からの３人および全長構築物を投与した最大の群からの１人を含む）。
【０１５６】
本研究において試験したrFPV gag/pol  ＩＦＮγのベクターの挿入部位のヌクレオチド配列を図３に示し、配列番号７に示す。
【０１５７】
当業者であれば、本明細書中に開示する発明は具体的に記載されている態様以外に変更および修飾しやすいことを理解する。本発明はこのような変更および修飾の全てを含むことが理解される。また、本発明は本明細書中に言及または記載した全ての工程、特徴、構成を、個別またはまとめて包含し、これらの工程または特徴のいずれか、またはそれらの２以上の組合せを含む。
【０１５８】
参考文献一覧
Altschulら、Nucl. Acids Res., 25:3389, 1997．
Australian Society for HIV Medicine (ASHM)-2001, Australian Antiretroviral Guidelines, http://www.ashm.org.au.
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Bonnerら、Eur. J. Biochem., 46:83, 1974.
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Vogt P.K., Chapter 1 In: Retroviruses, Coffin, J. M.; Hughes, S. H. and Varmus, H. E.（編）, Cold Spring Harbor Laboratory Press, USA, 1997.
【図面の簡単な説明】
【０１５９】
【図１】図１は各ベクターレシピエント群に対する２０週間の延長試験期間にわたる平均ウィルス量（非log）を示す図である。被験体群Ａ（白線）にはHIV-1 gag/polおよびインターフェロンγ（ＩＦＮγ）を発現する組換えFPVを含む全長構築物(FC)を投与した。被験体群Ｂ（黒線）にはHIV-1 gag/polを発現する組換えFPVを含む部分的構築物（PC）を投与した。被験体群Ｃ（灰色の線）には希釈剤単独（プラセボ）を投与した。
【図２】図２は、試験期間にわたりウィルス量が充分低かったのでARDTを再開始しなかった各レシピエント群におけるレシピエントの割合を示す図である。被験体群ＡにはHIV-1 gag/polおよびインターフェロンγ（ＩＦＮγ）を発現する組換えFPVを含む全長構築物(FC)を投与した。被験体群ＢにはHIV-1 gag/polを発現する組換えFPVを含む部分的構築物（PC）を投与した。被験体群Ｃには希釈剤単独（プラセボ）を投与した。
【図３】図３は、実施例で用いた組換えFPV gag/pol  ＩＦＮγの挿入部位のヌクレオチド配列（配列番号７）の注釈付きの図である。
【図１】
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【図２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図３−３】
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【図３−４】
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【図３−５】
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【図３−６】
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【図３−７】
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【図３−８】
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【図３−９】
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【図３−１０】
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【図３−１１】
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【図３−１２】
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【図３−１３】
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【図３−１４】
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【図３−１５】
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【図３−１６】
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【図３−１７】
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【図３−１８】
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【図３−１９】
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【図３−２０】
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【図３−２１】
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【図３−２２】
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【図３−２３】
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【図３−２４】
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【図３−２５】
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【図３−２６】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成18年6月19日(2006.6.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
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【国際調査報告】
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