(57)【要約】  本発明は、式Ｉの新規化合物、それらの製造方法、療法におけるそれらの使用、ならびに新規化合物を含む医薬組成物に関する。新規化合物は、療法、特に胃食道逆流疾患(GERD)の処置に有用である。2007509934.tif 000069
2007509934.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物
【化１】
2007509934.tif 000063
ならびにその医薬的に許容できる塩類、水和物、イソ形および／または光学異性体
［式中、
R1は、水素、C1-C4アルキル、C3-C6シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールから選択され、これらにおいてアリールまたはヘテロアリールはC1-C4アルキルで置換されていてもよく；
R2は、水素およびC1-C4アルキルから選択され；
R3は、水素、C1-C4アルキル、F、CF3、CHF2およびCH2Fから選択され；
R4は、水素、F、CF3、CHF2、CH2FおよびCH3から選択され；
R5は、水素およびFから選択され；
R6は、水素およびFから選択され；
Y1は、下記のものから選択され：水素；ハロゲン；ニトリル；C1-C4アルコキシ；C1-C4アルキル（アルキル基の１個以上の水素原子はフッ素原子で置換されていてもよい）；ベンジルオキシ；メタまたはパラ位のニトロ；およびC1-C4アルキルエステル；
Y2は、下記のものから選択され：水素；ハロゲン；ニトリル；C1-C4アルコキシ；C1-C4アルキル（アルキル基の１個以上の水素原子はフッ素原子で置換されていてもよい）；およびC1-C4アルキルエステル；
Y3は、下記のものから選択され：水素；ハロゲン；ニトリル；C1-C4アルコキシ；C1-C4アルキル（アルキル基の１個以上の水素原子はフッ素原子で置換されていてもよい）；およびC1-C4アルキルエステル；あるいは
Y1とY2は、芳香族または非芳香族の環を形成していてもよく、これらは場合によりハロゲン、ニトリル、C1-C4アルコキシ、C1-C4アルキル（アルキル基の１個以上の水素原子はフッ素原子で置換されていてもよい）、ベンジルオキシまたはC1-C4アルキルエステルで置換されていてもよく；
ただし、Y1が水素である場合、Y2はハロゲン、ニトリル、C1-C4アルコキシおよびC1-C4アルキルから選択される］。
【請求項２】
式Ｉの化合物
【化２】
2007509934.tif 000064
ならびにその医薬的に許容できる塩類、水和物、イソ形および／または光学異性体
［式中、
R1は、水素、C1-C4アルキル、C3-C6シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールから選択され、これらにおいてアリールまたはヘテロアリールはC1-C4アルキルで置換されていてもよく；
R2は、水素およびC1-C4アルキルから選択され；
R3は、水素、C1-C4アルキル、F、CF3、CHF2およびCH2Fから選択され；
R4は、水素、F、CF3、CHF2、CH2FおよびCH3から選択され；
R5は、水素およびFから選択され；
R6は、水素およびFから選択され；
Y1は、水素、ハロゲン、ニトリル、C1-C4アルコキシ、およびC1-C4アルキルから選択され；
Y2は、水素、ハロゲン、ニトリル、C1-C4アルコキシ、およびC1-C4アルキルから選択され；
Y3は、水素、ハロゲン、ニトリル、C1-C4アルコキシ、およびC1-C4アルキルから選択され；
ただし、Y1が水素である場合、Y2はハロゲン、ニトリル、C1-C4アルコキシおよびC1-C4アルキルから選択される］。
【請求項３】
R1は、水素またはC1-C3アルキルであり；
R2は、水素であり；
R3は、水素およびC1-C2アルキルから選択され；
R4は、水素であり；
R5は、水素であり；
R6は、水素であり；
Y1は、水素、クロロ、C1-C2アルコキシ、およびC1-C2アルキルから選択され；
Y2は、水素、クロロ、C1-C2アルコキシ、およびC1-C2アルキルから選択され；
ただし、Y1が水素である場合、Y2はクロロ、C1-C2アルコキシ、およびC1-C2アルキルから選択され；
Y3は、水素である、
請求項１または２に記載の式Ｉの化合物。
【請求項４】
下記のものから選択される、請求項１に記載の化合物：
2-[3-(3メトキシフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]-6メチルピリジン；
2-[3-(3-メトキシフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]ピリジン；
2-[3-(3-クロロフェノキシ)ブタ-1-イン-1-イル]-6-メチルピリジン；
2-メチル-6- (3-p-トリルオキシ-プロパ-1-イニル)-ピリジン；
2-[3-(2,3-ジクロロ-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジン；
2-[3-(2,3-ジメチル-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジン；
2-[3-(2,3-ジメチル-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジン；
2-[3-(2,4-ジクロロ-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジン；
2-[3-(2,4-ジメチル-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジン；
2-[3-(2,5-ジクロロ-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジン；
2-[3-(2,5-ジメチル-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジン；
2-[3-(2,6-ジメチル-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジン；
2-メチル-6-[3-(2-トリフルオロメチル-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-ピリジン；
2-[3-(2-ベンジルオキシ-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジン；
2-[3-(2-ブロモ-4,5-ジメチル-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジン；
2-[3-(2-クロロ-4-メトキシ-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジン；
2-[3-(2-クロロ-5-メチル-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジン；
2-[3-(2-クロロ-6-メチル-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジン；
2-メチル-6-(3-o-トリルオキシ-プロパ-1-イニル)-ピリジン；
2-メチル-6-[3-(3,4,5-トリメチル-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-ピリジン；
2-[3-(3,4-ジクロロ-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジン；
2-[3-(3,4-ジメトキシ-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジン；
2-[3-(3,4-ジメチル-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジン；
2-[3-(3,5-ジクロロ-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジン；
2-[3-(3,5-ジメトキシ-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジン；
2-[3-(3,5-ジメチル-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジン；
2-[3-(3-ブロモ-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジン；
3-[3-(6-メチル-ピリジン-2-イル)-プロパ-2-イニルオキシ]-ベンゾニトリル；
2-[3-(3-エチル-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジン；
2-メチル-6-[3-(3-メチルフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]ピリジン；
2-[3-(4-クロロ-2-メチルフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]-6-メチルピリジン；
2-[3-(4-クロロ-3,5-ジメチルフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]-6-メチルピリジン；
2-[3-(4-クロロ-3-メチルフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]-6-メチルピリジン；
2-[3-(4-クロロフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]-6-メチルピリジン；
2-[3-(4-メトキシフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]-6-メチルピリジン；
2-メチル-6-[3-(4-ニトロフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]ピリジン；
2-メチル-6-[3-(3-ニトロフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]ピリジン；
2-メチル-6-[3-(3-メチルフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]ピリジン；
2-メチル-6-[3-(5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-イルオキシ)プロパ-1-イン-1-イル]ピリジン；
2-[3-(4-イソプロピルフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]-6-メチルピリジン；
2-[3-(4-t-ブチルフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]-6-メチルピリジン；
6-[3-(3,4-ジメチルフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]-3-フルオロ-2-メチルピリジン；および
6-[3-(3,4-ジメチルフェノキシ)ブタ-1-イン-1-イル]-3-フルオロ-2-メチルピリジン。
【請求項５】
療法に使用するための、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
療法が胃食道逆流疾患の治療または予防である、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
一過性下部食道括約筋弛緩を抑制する医薬の製造のための、請求項１または２に記載の式Ｉの化合物またはその医薬的に許容できる塩もしくは光学異性体の使用。
【請求項８】
胃食道逆流疾患を治療または予防する医薬の製造のための、請求項１または２に記載の式Ｉの化合物またはその医薬的に許容できる塩もしくは光学異性体の使用。
【請求項９】
有効成分としての請求項１または２に記載の式Ｉの化合物を、薬理学的および医薬的に許容できるキャリヤーと共に含む、医薬組成物。
【請求項１０】
アリールブロミドＡ
【化３】
2007509934.tif 000065
とアルコールＢ
【化４】
2007509934.tif 000066
の結合反応をトリエチルアミンなどの塩基の存在下で行って、アルコールＣ
【化５】
2007509934.tif 000067
を製造し、次いでこれをメシラートＤ
【化６】
2007509934.tif 000068
に変換し、そしてアルコール類と反応させることによる、式Ｉの化合物の製造方法
［これらの式中、
R1は、水素、C1-C4アルキル、C3-C6シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールから選択され、これらにおいてアリールまたはヘテロアリールはC1-C4アルキルで置換されていてもよく；
R2は、水素およびC1-C4アルキルから選択され；
R3は、水素、C1-C4アルキル、F、CF3、CHF2およびCH2Fから選択され；
R4は、水素、F、CF3、CHF2、CH2FおよびCH3から選択され；
R5は、水素およびFから選択され；
R6は、水素およびFから選択される］。
【請求項１１】
3-(5-フルオロ-6-メチルピリジン-2-イル)プロパ-2-イン-1-オール；4-(5-フルオロ-6-メチルピリジン-2-イル)ブタ-3-イン-2-オール；メタンスルホン酸3-(5-フルオロ-6-メチルピリジン-2-イル)プロパ-2-イン-1-イル；メタンスルホン酸3-(5-フルオロ-6-メチルピリジン-2-イル)-1-メチルプロパ-2-イン-1-イル；4-(6-メチルピリジン-2-イル)ブタ-3-イン-2-オール；およびメタンスルホン酸1-メチル-3-(6-メチル-ピリジン-2-イル)-プロパ-2-イニルエステルから選択される化合物。
【請求項１２】
一過性下部食道括約筋弛緩を抑制する方法であって、その抑制を必要とする対象に有効量の請求項１または２に記載の式Ｉの化合物を投与することによる方法。
【請求項１３】
胃食道逆流疾患を治療または予防する方法であって、その治療または予防を必要とする対象に有効量の請求項１または２に記載の式Ｉの化合物を投与することによる方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規化合物、それらの製造方法、療法におけるそれらの使用、ならびに当該新規化合物を含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
代謝共役型グルタミン酸受容体（mGluR）は中枢神経系（CNS）の多くのシナプスの調節および活性に関与するGタンパク質共役型受容体である。8種類の代謝共役型グルタミン酸受容体サブタイプが同定されており、これらは配列類似性に基づいて3グループに分けられる。グループＩはmGluR1およびmGluR5からなる。これらの受容体はホスホリパーゼCを活性化し、神経の興奮性を高める。mGluR2およびmGluR3からなるグループII、ならびにmGluR4、mGluR6、mGluR7およびmGluR8からなるグループIIIは、アデニル酸シクラーゼ活性を阻害し、シナプス伝達を低下させることができる。幾つかの受容体は、オルタナティブスプライシングにより生成する各種イソ形としても存在する(Chen, C-Y et al., Journal of Physiology (2002), 538.3, pp. 773-786; Pin, J-P et al., European Journal of Pharmacology (1999), 375, pp. 277-294; Brauner-Osborne, H et al. Journal of Medicinal Chemistry (2000), 43, pp. 2609-2645; Schoepp, D.D, Jane D.E. Monn J.A. Neuropharmacology (1999), 38, pp. 1431-1476)。
【０００３】
下部食道括約筋(LES)は、間欠的に弛緩する性質をもつ。その結果、機械的バリヤーがその時点で一時的に失われるので、胃からの流体が食道内へ通過する可能性がある；これは、以下において”逆流（reflux）”と呼ぶ事象である。
【０００４】
胃食道逆流疾患(GERD)は、最も広くみられる上部消化管疾患である。現在の薬物療法は、胃酸分泌の減少または食道内の酸の中和を目標とする。逆流の原因をもたらす主な機序は、下部食道括約筋の緊張低下に依存すると考えられている。しかし、たとえばHolloway & Dent (1990) Gastroenterol. Clin. N. Amer. 19, pp. 517-535は、大部分の逆流エピソードが一過性下部食道括約筋弛緩(TLESR)、すなわち嚥下により誘発されるものではない弛緩に際して起きることを示した。GERD患者では胃酸分泌は正常であることも示された。
【発明の開示】
【０００５】
本発明の課題は、GERDの処置に有用な新規化合物を見いだすことであった。
WO 01/16121 A1に化合物A-L-Bが開示されており、ここで
Aは5-、6-または7-員複素環
【０００６】
【化１】
2007509934.tif 000003
【０００７】
であり；
Lは、アルケニレン、アルキニレンまたはアゾであり；
Bは、炭化水素；環式炭化水素；複素環（場合により１以上の二重結合を含む）；またはアリールである。これらの化合物は、特に脳虚血、慢性神経変性症、精神障害、てんかん、ならびに肺系および冠血管系の疾患に有用であると記載されている。
【０００８】
WO 99/02497 A2には次式の化合物
【０００９】
【化２】
2007509934.tif 000004
【００１０】
が開示されており、式中のXは、ビシナル（隣接）不飽和炭素原子により結合したアルケニレンもしくはアルキニレン、またはアゾ基であり；R5は、芳香族またはヘテロ芳香族基であってよい。これらの化合物は、特にてんかん、脳虚血およびアルツハイマー病に有用であると記載されている。
【００１１】
発明の概要
本発明は、式Ｉの化合物
【００１２】
【化３】
2007509934.tif 000005
【００１３】
ならびにその医薬的に許容できる塩類、水和物、イソ形および／または光学異性体に関する：
式中、
R1は、水素、C1-C4アルキル、C3-C6シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールから選択され、これらにおいてアリールまたはヘテロアリールはC1-C4アルキルで置換されていてもよく；
R2は、水素およびC1-C4アルキルから選択され；
R3は、水素、C1-C4アルキル、F、CF3、CHF2およびCH2Fから選択され；
R4は、水素、F、CF3、CHF2、CH2FおよびCH3から選択され；
R5は、水素およびFから選択され；
R6は、水素およびFから選択され；
Y1は、下記のものから選択され：水素；ハロゲン；ニトリル；C1-C4アルコキシ；C1-C4アルキル（アルキル基の１個以上の水素原子はフッ素原子で置換されていてもよい）；ベンジルオキシ；メタまたはパラ位のニトロ；およびC1-C4アルキルエステル；
Y2は、下記のものから選択され：水素；ハロゲン；ニトリル；C1-C4アルコキシ；C1-C4アルキル（アルキル基の１個以上の水素原子はフッ素原子で置換されていてもよい）；およびC1-C4アルキルエステル；
Y3は、下記のものから選択され：水素；ハロゲン；ニトリル；C1-C4アルコキシ；C1-C4アルキル（アルキル基の１個以上の水素原子はフッ素原子で置換されていてもよい）；およびC1-C4アルキルエステル；あるいは
Y1とY2は、芳香族または非芳香族の環を形成していてもよく、これらは場合によりハロゲン、ニトリル、C1-C4アルコキシ、C1-C4アルキル（アルキル基の１個以上の水素原子はフッ素原子で置換されていてもよい）、ベンジルオキシまたはC1-C4アルキルエステルで置換されていてもよく；
ただし、Y1が水素である場合、Y2はハロゲン、ニトリル、C1-C4アルコキシおよびC1-C4アルキルから選択される。
【００１４】
式Ｉの定義に際して用いた一般的な用語は、下記の意味をもつ：
ハロゲンはクロロ、フルオロ、ブロモまたはヨードである。
C1-C4アルキルは、それぞれ独立して1、2、3または4個の炭素原子を含む直鎖または分枝鎖アルキル基、たとえばメチル、エチル、n-プロピル、n-ブチルまたはイソプロピルである。１態様において、アルキル基はO、NおよびSから選択される１個以上のヘテロ原子を含むことができる。そのような基の例は、メチル−エチルエーテル、メチル−エチルアミンおよびメチル−チオメチルである。
【００１５】
シクロアルキルは、それぞれ独立して3、4、5または6個の炭素原子を含む環式アルキル、たとえばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルである。
【００１６】
C1-C4アルコキシは、それぞれ独立して1、2、3または4個の炭素原子を含むアルコキシ基、たとえばメトキシ、エトキシ、n-プロポキシ、n-ブトキシまたはイソプロポキシである。
【００１７】
本明細書中で用いる用語アリールは、6〜14個の炭素原子をもつ芳香環を意味し、単環式および多環式両方の化合物、たとえばフェニル、ベンジルまたはナフチルを含む。
本明細書中で用いる用語ヘテロアリールは、5〜14個の炭素原子をもち、１個または数個の環原子が酸素、窒素または硫黄である芳香環、たとえばフラニルまたはチオフェニルを意味し、単環式および多環式（たとえばイミダゾピリジン）両方の化合物が含まれる。
【００１８】
本発明の範囲には、式Ｉの化合物の医薬的に許容できる塩類ならびにその異性体、水和物およびイソ形も含まれる。
式Ｉの化合物の医薬的に許容できる塩類も本発明の範囲に含まれる。そのような塩類は、たとえば塩酸などの鉱酸により形成される塩；アルカリ金属塩、たとえばナトリウム塩もしくはカリウム塩；またはアルカリ土類金属塩、たとえばカルシウム塩もしくはマグネシウム塩である。
【００１９】
本発明の新規化合物は、療法に有用である。本発明の１態様において、それらの化合物は一過性下部食道括約筋弛緩(TLESR)の抑制に有用であり、したがって胃食道逆流疾患(GERD)の治療または予防に有用である。他の態様において、本発明の化合物は逆流の抑制、吐出（regurgitation）の治療または予防、喘息の治療または予防、喉頭炎の治療または予防、肺疾患の治療または予防、および成長障害の処置に有用である。
【００２０】
本発明の他の態様は、一過性下部食道括約筋弛緩の抑制、GERDの治療または予防、逆流の抑制、吐出の治療または予防、喘息の治療または予防、喉頭炎の治療または予防、肺疾患の治療または予防、および成長障害の処置のための医薬の製造における式Ｉの化合物の使用である。
【００２１】
本発明の他の態様は、機能性消化器障害、たとえば機能性消化不良(FD)の治療または予防のための医薬の製造における式Ｉの化合物の使用である。本発明のさらに他の態様は、過敏性腸症候群(IBS)、たとえば便秘型IBS、下痢型IBSまたは交代性便通型IBSの治療または予防のための医薬の製造における式Ｉの化合物の使用である。
【００２２】
本発明のさらに他の態様は、前記の状態のいずれかを伴う対象に医薬として有効な量の前記式Ｉの化合物を投与することにより、それらの状態を処置する方法である。
本発明の１態様において、式Ｉの化合物は急性または慢性の神経障害および精神障害、不安、ならびに慢性および急性疼痛障害の治療および／または予防に有用である。他の態様において、それらの化合物は片頭痛関連疼痛、炎症性疼痛、神経障害性疼痛障害、たとえば糖尿病性神経障害、関節炎およびリウマチ性疾患、腰痛、術後疼痛、ならびに癌、アンギナ、腎石疝痛または胆石仙痛、月経、片頭痛および痛風を含む各種状態に関連する痛みの治療および／または予防に有用である。
【００２３】
用語”異性体”は、本明細書中において、官能基の位置および／または配向が異なる式Ｉの化合物と定義される。”配向”とは、立体異性体、ジアステレオ異性体、レギオ異性体および鏡像異性体を意味する。
【００２４】
本明細書中で用いる用語”イソ形”は、結晶格子が異なる式Ｉの化合物と定義される：たとえば結晶性化合物と非晶質化合物。
語句”TLESR”、一過性下部食道括約筋弛緩は、本明細書中においてMittal, R.K., Holloway, R.H., Penagini, R., Blackshaw, L.A., Dent, J., 1995; 一過性下部食道括約筋弛緩. Gastroenterology 109, pp. 601-610に従って定義される。
【００２５】
用語”逆流”は、本明細書中において、機械的バリヤーがその時点で一時的に失われるため胃からの流体が食道へ通過できることと定義される。
用語”GERD”、胃食道逆流疾患は、本明細書中において、van Heerwarden, M.A., Smout A.J.P.M., 2000; 逆流疾患の診断. Gastroenterol. 14, pp. 759-774に従って定義される。
【００２６】
製造方法
まず、アリールブロミドＡとアルコールＢを、塩基、たとえばトリエチルアミンの存在下に、室温ないし60℃でソノガシラ（Sonogashira）結合(Tetrahedron Letters 1975, 50, 4467, S. Thorand, N. Krause J. Org. Chem., 1998, 63, 8551-8553；M. Erdelyi, A. Gogoll, J. Org. Chem., 2001, 66, 4165-4169)させると、アルコールＣが得られ、これを次いでメタンスルホニルクロリドにより、トリエチルアミン中、0〜-20℃でメシラートＤに変換する。第一級アルコールのメシラートは単離して特性解明される。一方、第二級アルコールのメシラートの特性解明はその場で行われる。最後に各メシラートをアルコール類と反応させる。これは、アルコール類および塩基、たとえばトリエチルアミンをDCMなどの溶媒中のメシラートに添加することにより、またはアルコール類と塩基、たとえば水素化ナトリウムをTHFなどの溶媒中で予め反応させ、次いでこの溶液にメシラートを添加することにより行われ、生成物(I)が得られる(反応経路１)。
【００２７】
【化４】
2007509934.tif 000006
【００２８】
目的のR1-基をもつアルコールＢが市販されていない場合、生成物(I)は別経路で形成される(反応経路２)：まずアリールブロミドＡとエチニル(トリメチル)シランＦを、ソノガシラ結合により60℃においてトリエチルアミン中で反応させると、生成物Ｇが得られる。Ｇを室温でメタノール/DCM中において炭酸カリウムにより脱保護すると、末端アルキンＨが得られ、これをリチウムビス(トリメチルシリル)アミドにより-78℃で脱保護する。-78℃でアルデヒド類またはケトン類を添加し、反応混合物を室温になるまで放置し、その温度に適宜な時間保持すると、アルコールＩが生成する。Ｉを単離し、メタンスルホニルクロリドおよびトリエチルアミンによりその場で、室温または冷却してメシラートＪを形成する。アルコール類とこのメシラートの反応は、アルコールおよび塩基、たとえばトリエチルアミンを、DCMなどの溶媒中のメシラートに添加することにより、またはアルコール類と塩基、たとえば水素化ナトリウムをTHFなどの溶媒中で予め反応させ、次いでこの溶液にメシラートを添加することにより行われ、生成物(I)が得られる。
【００２９】
【化５】
2007509934.tif 000007
【００３０】
式Ｉの化合物の変異を行う。まずフェノールＫと3-ブロモプロパ-1-イン[=プロパルギルブロミド]Ｌを、塩基、たとえば炭酸カリウムの存在下に、たとえばアセトン中、室温から60℃までの温度で適切な時間反応させることにより、アリールプロパ-2-イン-1-イルエーテルＭを形成する(反応経路３)。次いでプロパルギルエーテルＭとアリールブロミドをソノガシラ結合により、塩基、たとえばトリエチルアミンの存在下に、室温から60℃までの温度で適切な時間反応させる。
【００３１】
【化６】
2007509934.tif 000008
【００３２】
前記の反応経路１、２および３において、R1、R2、R3, R4、R5、R6、Y1、Y2およびY3は前記式Ｉの化合物について定めたものである。
実験の詳細
DCMを3Aのモレキュラーシーブにより乾燥させる。THFを使用直前にNa/ベンゾフェノンから蒸留した。すべての反応を窒素雰囲気下で実施する。すべてのガラス器具を使用前に150℃で少なくとも2時間、乾燥させる。International Sorbent Technology (IST)からの相分離器を使用する。カラムクロマトグラフィーによる精製をシリカゲル60 (0.040〜0.063 mm)上で、またはC8カラムを用いる逆相クロマトグラフィーにより行う。すべてのNMRスペクトルをδ-クロロホルム中で測定する。
【００３３】
2-ブロモ-6-メチルピリジンはAldrichから、(PPh3)2PdCl2はAvacadoから、Pd(OAc)2はAldrichから、CuIはFlukaから市販されている。別途記載しない限り、使用した薬品は市販されており、さらに精製せずにそのまま使用される。
【００３４】
医薬配合物
臨床用として、式Ｉの化合物を本発明に従って経口投与用の医薬配合物中に適切に配合することができる。直腸、非経口その他のいずれの投与経路も、配合技術分野の専門家には考慮できる。たとえば、式Ｉの化合物に少なくとも１種類の医薬的および薬理学的に許容できるキャリヤーまたは佐剤を配合することができる。キャリヤーは固体、半固体または液体希釈剤の形であってよい。
【００３５】
本発明による経口用の医薬配合物を調製する際には、配合する式Ｉの化合物を固体、粉末状成分、たとえば乳糖、ショ糖、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アミロペクチン、セルロース誘導体、ゼラチン、または他の適切な成分、ならびに崩壊剤および滑沢剤、たとえばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、フマル酸ステアリルナトリウムおよびポリエチレングリコールワックスと混合する。次いでこの混合物を顆粒に加工し、あるいは圧縮して錠剤にする。
【００３６】
軟ゼラチンカプセル剤は、有効化合物、すなわち本発明化合物、植物油、脂肪、または他の適切な軟ゼラチンカプセル用賦形剤の混合物を収容したカプセルを用いて調製できる。硬ゼラチンカプセル剤は、有効化合物を固体粉末状成分、たとえば乳糖、ショ糖、ソルビトール、マンニトール、バレイショデンプン、トウモロコシデンプン、アミロペクチン、セルロース誘導体またはゼラチンと組み合わせたものを収容することができる。
【００３７】
直腸投与用の投与単位は、下記の形で調製できる：（i）有効物質（１種類以上）を中性脂肪基剤と混合したものを含有する坐剤の形；（ii）有効物質を植物油、パラフィン油、もしくは直腸用ゼラチンカプセル剤に適した他の賦形剤との混合物として収容した、直腸用ゼラチンカプセル剤の形；（iii）既製のミクロ浣腸剤の形；または（iv）投与直前に適切な溶剤中に再構成する乾燥ミクロ浣腸剤の形。
【００３８】
経口投与用の液体製剤は、シロップ剤または懸濁剤の形で、たとえば有効化合物を含有し、配合物の残部は糖類または糖アルコール、ならびに混合物：エタノール、水、グリセロール、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコールからなる、液剤または懸濁剤の形で調製できる。所望によりそれらの液剤または懸濁剤は、着色剤、着香剤、サッカリンおよびカルボキシメチルセルロースまたは増粘剤を含有してもよい。経口投与用の液体製剤は、使用前に適切な溶剤で再構成する乾燥粉末の形でも調製できる。
【００３９】
非経口投与用の液剤は、医薬的に許容できる溶剤中における本発明化合物の液剤として調製できる。これらの液剤は安定化成分および／または緩衝成分を含有することもでき、アンプル剤またはバイアル剤の形で単位用量に分注される。非経口投与用の液剤は、使用直前に適切な溶剤で再構成する乾燥製剤として調製することもできる。
【００４０】
本発明の１態様においては、患者の状態の重症度に応じて式Ｉの化合物を１日１または2回投与することができる。
式Ｉの化合物の一般的な１日量は、処置される対象の体重kg当たり0.1〜10 mgであるが、これは投与経路、患者の年齢および体重、ならびに患者の状態の重症度など各種の要因に依存するであろう。
【００４１】
実施例
方法Ｋ
実施例１
3-(プロパ-2-イン-1-イルオキシ)ベンゼン(化合物21)の製造：
【００４２】
【化７】
2007509934.tif 000009
【００４３】
炭酸カリウム(1.382 g, 0.1 mol)を、フェノール(0.941 g, 0.01 mmol, 1.0当量)の、アセトン(15 mL)中における溶液に、0℃で添加した。3-ブロモプロパ-1-イン(1.19 g, 0.89 mL, 0.01 mol, 1.0当量)を添加した。この溶液を室温に達するまで放置し、次いで60℃に17時間加熱した。冷却後、溶媒を蒸発させた。水(15 mL)を添加し、混合物をEtOAc (3回, 15 mL)で抽出した。有機相を合わせて水(1回, 15 mL)、ブライン(1回, 15 mL)で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、蒸発させた。これにより1.026 g (78 %)の生成物を得た；
TLC: Rf (ヘプタン/EtOAc 2:1) = 0.67；
1H NMR (300 MHz): 7.32-7.24 (m, 2H), 7.02-6.92 (m, 3H), 4.64 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 2.48 (t, J = 2.4 Hz, 1H)；
13C NMR (75 MHz): 157.6, 129.8, 121.7, 115.1, 78.9, 75.7, 56.0。
【００４４】
実施例２
1-メトキシ-3-(プロパ-2-イン-1-イルオキシ)ベンゼン(化合物22)の製造：前記の方法Ｋに従い、出発物質として3-メトキシフェノールを使用；
【００４５】
【化８】
2007509934.tif 000010
【００４６】
収率：99 %；
1H NMR (500 MHz): 7.20-7.14 (m 2H), 6.57-6.51 (m, 3H), 4.63 (d, J = 2.3 Hz, 2H), 3.74 (s, 3H), 2.51 (t, J = 2.4 Hz, 1H)；
13C NMR (125 MHz): 160.8, 158.8, 129.9, 107.2, 106.9, 101.5, 78.6, 75.6, 55.8, 55.2。
【００４７】
実施例３
2-メチル-6-(3-フェノキシプロパ-1-イン-1-イル)ピリジン(化合物23)の製造：
【００４８】
【化９】
2007509934.tif 000011
【００４９】
2-ブロモ-6-メチルピリジン(1.055 g, 6.13 mmol)に、3-(プロパ-2-イン-1-イルオキシ)ベンゼン(0.851 g, 6.44 mmol, 1.10当量)、続いて(PPh3)2PdCl2 (0.129 g, 0.18 mmol, 0.03当量)、CuI (0.035 g, 0.18 mmol, 0.03当量)およびトリエチルアミン(3.50 mL)を添加した。混合物を窒素下で60℃に2時間加熱した。リン酸緩衝液(10 mL, 0.2 M, pH 7)を添加し、水相をDCM (3回, 10 mL)で抽出した。有機相を合わせて硫酸マグネシウムで乾燥させ、蒸発させ、次いでジエチルエーテル/ペンタン1:1、約25 mLですすぎながらSi-プラグ1 gにより濾過した。これにより、蒸発後に1.491 gを得た；
Si-ゲル上、ヘプタン/AcOEt（まず9:1、次いで3:1）を溶離剤として用いるフラッシュクロマトグラフィーにより0.908 gの化合物を得た；
1H NMR (500 MHz): 7.42 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.27 (t, J = 7.8, 2H), 7.17 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.01 (m, 3H), 6.95 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 4,88 (s, 2H), 2.94 (s, 3H)；
13C NMR (125 MHz): 158.2, 157.1, 140.9, 135.8, 128.9, 123.7, 122.4, 120.8, 114.2, 85.8, 83.1, 55.7, 23.8。
【００５０】
実施例４
2-[3-(3-メトキシフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]-6-メチルピリジン(化合物24)の製造：
【００５１】
【化１０】
2007509934.tif 000012
【００５２】
THF (1 mL)中のNaH (0.038 g, 純度95 %, 1.50 mmol, 5.0当量)に、THF (1 mL)中の1-メトキシ-3-(プロパ-2-イン-1-イルオキシ)ベンゼン(0.037 g, 0.30 mmol,1.0当量)を、0℃で窒素下に添加した。混合物を室温で10分間撹拌した。次いでTHF (1 mL)中のメタンスルホン酸3-(6-メチルピリジン-2-イル)プロパ-2-イン-1-イル(0.068 g, 0.30 mmol)を、0℃で添加した。混合物を室温で一夜(18時間)撹拌した。混合物を水(10 mL)に注入し、水相をEt2O (2回, 10 mL)、次いでDCM (2回, 10 mL)で抽出した。有機相を合わせて硫酸マグネシウムで乾燥させ、蒸発させた。これにより0.041 gの粗生成物が得られ、次いでこれを逆相クロマトグラフィーにより精製した。これにより0.009 g (収率: 12 %)の生成物を得た；
1H NMR (300 MHz): 7.52 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.25 [m (CDCl3信号下), 1H), 7.20 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.66-6-53 (m, 3H), 4.91 (s, 2H), 3.79 (s, 3H), 2.55 (s, 3H)。
【００５３】
実施例５
2-[3-(3-メトキシフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]ピリジン(化合物25)の製造：実施例３に従い、出発物質として2-ブロモピリジンおよび1-メトキシ-3-(プロパ-2-イン-1-イルオキシ)ベンゼンを用いて製造。
【００５４】
【化１１】
2007509934.tif 000013
【００５５】
実施例６、方法Ａ
2-メチル-6-(3-p-トリルオキシ-プロパ-1-イニル)-ピリジンの製造
【００５６】
【化１２】
2007509934.tif 000014
【００５７】
4-メチル-フェノール(19mg, 0.18mmol)およびK2CO3(31mg, 0.225mmol)の、アセトン(0.3ml)中における撹拌混合物に、アセトン(0.2ml)に溶解したメタンスルホン酸3-(6-メチル-ピリジン-2-イル)-プロパ-2-イニルエステル(34mg, 0.15mmol)を室温で添加した。混合物を60℃で18時間撹拌した。すべての溶媒を蒸発させたが反応は完了していなかったので、ジメチルホルムアミド(0.5ml)を添加し、反応物を60℃でさらに20時間撹拌した。固体塩を濾去し、濾液をHPLCにより精製した：Waters FractionLynxsystem；UV、ELSDおよびMS付き。カラム：Ace C8 5μ 100 mm x 内径21.2 mm、移動相A: 95 %アセトニトリル、移動相B: 5%アセトニトリル + 95% 0.1 M NH4OAc；勾配：100% Bから100% Aまで10分間で；流速: 25 ml/分；UV: 254 nm。表題化合物0.010g (収率28%)を単離した。M+H: 238.1。
【００５８】
実施例７
2-[3-(3-クロロフェノキシ)ブタ-1-イン-1-イル]-6-メチルピリジンの製造
方法Ａに従い、メタンスルホン酸1-メチル-3-(6-メチル-ピリジン-2-イル)-プロパ-2-イニルエステルおよび3-クロロフェノールを用いて、この化合物を製造した；
【００５９】
【化１３】
2007509934.tif 000015
【００６０】
1H NMR: 7.58 (s, 1H), 7.5 (t, 1H), 7.43 (m, 1H), 7.27 (m, 2H), 7.15 (d, 1H), 7.06 d, 1H), 4.14 (q, 1H), 2.52 (s, 3H), 1.62 (d, 3H)；
13C NMR: 159.0, 142.4, 136.5, 136.0, 134.6, 132.8, 131.2, 130.0, 128.2, 124.6, 122.9, 89.5, 83.8, 34.1, 24.7, 21.6。
【００６１】
実施例８
2-[3-(2,3-ジクロロ-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジンの製造
【００６２】
【化１４】
2007509934.tif 000016
【００６３】
方法Ａを用い、2,3-ジクロロフェノール(0.029g, 0.18mmol)から出発して、0.012g (収率27 %)の表題化合物を単離した。M+H: 292.0。
【００６４】
実施例９
2-[3-(2,3-ジメチル-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジンの製造
【００６５】
【化１５】
2007509934.tif 000017
【００６６】
方法Ａを用い、2,3-ジメチルフェノール(0.022g, 0.18mmol)から出発して、0.010g (収率26 %)の表題化合物を単離した。M+H: 252.1。
【００６７】
実施例１０
2-[3-(2,4-ジクロロ-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジンの製造
【００６８】
【化１６】
2007509934.tif 000018
【００６９】
方法Ａを用い、2,4-ジクロロフェノール(0.029g, 0.18mmol)から出発して、0.009g (収率20 %)の表題化合物を単離した。M+H: 292.0。
【００７０】
実施例１１
2-[3-(2,4-ジメチル-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジンの製造
【００７１】
【化１７】
2007509934.tif 000019
【００７２】
方法Ａを用い、2,4-ジメチルフェノール(0.022g, 0.18mmol)から出発して、0.007g (収率18 %)の表題化合物を単離した。M+H: 252.1。
【００７３】
実施例１２
2-[3-(2,5-ジクロロ-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジンの製造
【００７４】
【化１８】
2007509934.tif 000020
【００７５】
方法Ａを用い、2,5-ジクロロフェノール(0.029g, 0.18mmol)から出発して、0.024g (収率54 %)の表題化合物を単離した。M+H: 292.0。
【００７６】
実施例１３
2-[3-(2,5-ジメチル-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジンの製造
【００７７】
【化１９】
2007509934.tif 000021
【００７８】
方法Ａを用い、2,5-ジメチルフェノール(0.022g, 0.18mmol)から出発して、0.017g (収率45 %)の表題化合物を単離した。M+H: 252.1。
【００７９】
実施例１４
2-[3-(2,6-ジメチル-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジンの製造
【００８０】
【化２０】
2007509934.tif 000022
【００８１】
方法Ａを用い、2,6-ジメチルフェノール(0.022g, 0.18mmol)から出発して、0.019g (収率50 %)の表題化合物を単離した。M+H: 252.1。
【００８２】
実施例１５
2-メチル-6-[3-(2-トリフルオロメチル-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-ピリジンの製造
【００８３】
【化２１】
2007509934.tif 000023
【００８４】
方法Ａを用い、2-トリフルオロメチルフェノール(0.029g, 0.18mmol)から出発して、0.015g (収率35 %)の表題化合物を単離した。M+H: 292.1。
【００８５】
実施例１６
2-[3-(2-ベンジルオキシ-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジンの製造
【００８６】
【化２２】
2007509934.tif 000024
【００８７】
方法Ａを用い、ベンジルアルコール(0.036g, 0.18mmol)から出発して、0.016g (収率32 %)の表題化合物を単離した。M+H: 330.2。
【００８８】
実施例１７
2-[3-(2-ブロモ-4,5-ジメチル-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジンの製造
【００８９】
【化２３】
2007509934.tif 000025
【００９０】
方法Ａを用い、2-ブロモ-4,5-ジメチルフェノール(0.036g, 0.18mmol)から出発して、0.017g (収率33 %)の表題化合物を単離した。M+H: 330.1。
【００９１】
実施例１８
2-[3-(2-クロロ-4-メトキシ-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジンの製造
【００９２】
【化２４】
2007509934.tif 000026
【００９３】
方法Ａを用い、2-クロロ-4-メトキシフェノール(0.029g, 0.18mmol)から出発して、0.022g (収率50 %)の表題化合物を単離した。M+H: 288.1。
【００９４】
実施例１９
2-[3-(2-クロロ-5-メチル-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジンの製造
【００９５】
【化２５】
2007509934.tif 000027
【００９６】
方法Ａを用い、2-クロロ-5-メチルフェノール(0.026g, 0.18mmol)から出発して、0.021g (収率53 %)の表題化合物を単離した。M+H: 272.1。
【００９７】
実施例２０
2-[3-(2-クロロ-6-メチル-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジンの製造
【００９８】
【化２６】
2007509934.tif 000028
【００９９】
方法Ａを用い、2-クロロ-6-メチルフェノール(0.026g, 0.18mmol)から出発して、0.017g (収率42 %)の表題化合物を単離した。M+H: 272.1。
【０１００】
実施例２１
2-メチル-6-(3-o-トリルオキシ-プロパ-1-イニル)-ピリジンの製造
【０１０１】
【化２７】
2007509934.tif 000029
【０１０２】
方法Ａを用い、2-メチルフェノール(0.019g, 0.18mmol)から出発して、0.017g (収率47 %)の表題化合物を単離した。M+H: 238.1。
【０１０３】
実施例２２
2-メチル-6-[3-(3,4,5-トリメチル-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-ピリジンの製造
【０１０４】
【化２８】
2007509934.tif 000030
【０１０５】
方法Ａを用い、3,4,5-トリメチルフェノール(0.025g, 0.18mmol)から出発して、0.012g (収率30 %)の表題化合物を単離した。M+H: 266.1。
【０１０６】
実施例２３
2-[3-(3,4-ジクロロ-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジンの製造
【０１０７】
【化２９】
2007509934.tif 000031
【０１０８】
方法Ａを用い、3,4-ジクロロフェノール(0.029g, 0.18mmol)から出発して、0.021g (収率49 %)の表題化合物を単離した。M+H: 292.0。
【０１０９】
実施例２４
2-[3-(3,4-ジメトキシ-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジンの製造
【０１１０】
【化３０】
2007509934.tif 000032
【０１１１】
方法Ａを用い、3,4-ジメトキシフェノール(0.028g, 0.18mmol)から出発して、0.017g (収率39 %)の表題化合物を単離した。M+H: 284.1。
【０１１２】
実施例２５
2-[3-(3,4-ジメチル-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジンの製造
【０１１３】
【化３１】
2007509934.tif 000033
【０１１４】
方法Ａを用い、3,4-ジメチルフェノール(0.022g, 0.18mmol)から出発して、0.012g (収率32 %)の表題化合物を単離した。M+H: 252.1。
【０１１５】
実施例２６
2-[3-(3,5-ジクロロ-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジンの製造
【０１１６】
【化３２】
2007509934.tif 000034
【０１１７】
方法Ａを用い、3,5-ジクロロフェノール(0.029g, 0.18mmol)から出発して、0.015g (収率34 %)の表題化合物を単離した。M+H: 292.0。
【０１１８】
実施例２７
2-[3-(3,5-ジメトキシ-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジンの製造
【０１１９】
【化３３】
2007509934.tif 000035
【０１２０】
方法Ａを用い、3,5-ジメトキシフェノール(0.028g, 0.18mmol)から出発して、0.014g (収率33 %)の表題化合物を単離した。M+H: 284.1。
【０１２１】
実施例２８
2-[3-(3,5-ジメチル-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジンの製造
【０１２２】
【化３４】
2007509934.tif 000036
【０１２３】
方法Ａを用い、3,5-ジメチルフェノール(0.022g, 0.18mmol)から出発して、0.018g (収率47 %)の表題化合物を単離した。M+H: 252.1。
【０１２４】
実施例２９
2-[3-(3-ブロモ-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジンの製造
【０１２５】
【化３５】
2007509934.tif 000037
【０１２６】
方法Ａを用い、3-ブロモフェノール(0.031g, 0.18mmol)から出発して、0.020g (収率45 %)の表題化合物を単離した。M+H: 302.0。
【０１２７】
実施例３０
3-[3-(6-メチル-ピリジン-2-イル)-プロパ-2-イニルオキシ]-ベンゾニトリルの製造
【０１２８】
【化３６】
2007509934.tif 000038
【０１２９】
方法Ａを用い、3-ヒドロキシベンゾニトリル(0.021g, 0.18mmol)から出発して、0.010g (収率27 %)の表題化合物を単離した。M+H: 249.1。
【０１３０】
実施例３１
2-[3-(3-エチル-フェノキシ)-プロパ-1-イニル]-6-メチル-ピリジンの製造
【０１３１】
【化３７】
2007509934.tif 000039
【０１３２】
方法Ａを用い、3-エチルフェノール(0.022g, 0.18mmol)から出発して、0.030g (収率79 %)の表題化合物を単離した。M+H: 252.1。
【０１３３】
実施例３２
2-メチル-6-[3-(3-メチルフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]ピリジンの製造
【０１３４】
【化３８】
2007509934.tif 000040
【０１３５】
ガラス製バイアル内で、3-クロロフェノール(0.031 g, 0.24 mmol, 1.2当量)に、無水炭酸カリウム(0.041 g, 0.30 mmol, 1.5当量)、続いてアセトン中におけるメタンスルホン酸3-(6-メチルピリジン-2-イル)プロパ-2-イン-1-イル(0.045 g, 0.2 mmol)の0.4 M溶液0.5 mLを添加した。バイアルをシールし、60℃に5時間加熱した。この材料をセライト（Celite）により濾過し、次いで真空遠心した。逆相カラムクロマトグラフィーにより精製を行った。収量: 0.023 g (40 %)；
1H NMR (500 MHz): 7.53 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.27-7.20 (m, 約2H, CDCl3信号とオーバーラップ), 7.11 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.04-7.02 (m, 1H), 6.98 (br d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.92 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.92 (s, 2H), 2.55 (s, 3H)；
MS m/Z: 258 (M+1)。
【０１３６】
実施例３３
2-[3-(4-クロロ-2-メチルフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]-6-メチルピリジンの製造：
【０１３７】
【化３９】
2007509934.tif 000041
【０１３８】
実施例３２と同様にして、ただし4-クロロ-2-メチルフェノールを出発物質として用いて製造した。収量: 0.008 g (20 %)；
MS m/Z: 272 (M+1)。
【０１３９】
実施例３４
2-[3-(4-クロロ-3,5-ジメチルフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]-6-メチルピリジンの製造：
【０１４０】
【化４０】
2007509934.tif 000042
【０１４１】
実施例３２と同様にして、ただし0.15 mmolの規模で、4-クロロ-3,5-ジメチルフェノールを出発物質として用いて製造した。収量: 0.007 g (16 %)；
MS m/Z: 286 (M+1)。
【０１４２】
実施例３５
2-[3-(4-クロロ-3-メチルフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]-6-メチルピリジンの製造：
【０１４３】
【化４１】
2007509934.tif 000043
【０１４４】
実施例３２と同様にして、ただし0.15 mmolの規模で、4-クロロ-3-メチルフェノールを出発物質として用いて製造した。収量: 0.010 g (25 %)；
MS m/Z: 272 (M+1)。
【０１４５】
実施例３６
2-[3-(4-クロロフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]-6-メチルピリジンの製造：
【０１４６】
【化４２】
2007509934.tif 000044
【０１４７】
実施例３２と同様にして、ただし0.15 mmolの規模で、4-クロロフェノールを出発物質として用いて製造した。収量: 0.008 g (21 %)；
MS m/Z: 258 (M+1)。
【０１４８】
実施例３７
2-[3-(4-メトキシフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]-6-メチルピリジンの製造：
【０１４９】
【化４３】
2007509934.tif 000045
【０１５０】
実施例３２と同様にして、ただし0.15 mmolの規模で、4-メトキシフェノールを出発物質として用いて製造した。収量: 0.004 g (11 %)；
MS m/Z: 254 (M+1)。
【０１５１】
実施例３８
2-メチル-6-[3-(4-ニトロフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]ピリジンの製造：
【０１５２】
【化４４】
2007509934.tif 000046
【０１５３】
実施例３２と同様にして、ただし0.15 mmolの規模で、4-ニトロフェノールを出発物質として用いて製造した。収量: 0.014 g (35 %)；
MS m/Z: 269 (M+1)。
【０１５４】
実施例３９
2-メチル-6-[3-(3-ニトロフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]ピリジンの製造：
【０１５５】
【化４５】
2007509934.tif 000047
【０１５６】
実施例３２と同様にして、ただし0.15 mmolの規模で、3-ニトロフェノールを出発物質として用いて製造した。収量: 0.012 g (30 %)；
MS m/Z: 269 (M+1)。
【０１５７】
実施例４０
2-メチル-6-[3-(3-メチルフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]ピリジンの製造：
【０１５８】
【化４６】
2007509934.tif 000048
【０１５９】
実施例３２と同様にして、ただし3-メチルフェノールを出発物質として用いて製造した。収量: 0.012 g (25 %)；
1H NMR (500 MHz): 7.52 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.24 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.21-7.16 (m, 1H), 7.10 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.85-6.79 (m, 3H), 4.91 (s, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.34 (s, 3H)；
MS m/Z: 238 (M+1)。
【０１６０】
実施例４１
2-メチル-6-[3-(5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-イルオキシ)プロパ-1-イン-1-イル]ピリジンの製造：
【０１６１】
【化４７】
2007509934.tif 000049
【０１６２】
実施例３２と同様にして、ただし5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オールを出発物質として用いて製造した。収量: 0.021 g (38 %)；
1H NMR (300 MHz): 7.52 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 約7.8 Hz, 1H, CDCl3信号とオーバーラップ), 7.10 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.85-6.70 (m, 2H), 4.88 (s, 2H), 2.78-2.67 (m, 4H), 2.55 (s, 3H), 1.80-1.74 (m, 4H)；
MS m/Z: 278 (M+1)。
【０１６３】
実施例４２
2-[3-(4-イソプロピルフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]-6-メチルピリジンの製造：
【０１６４】
【化４８】
2007509934.tif 000050
【０１６５】
実施例３２と同様にして、ただし4-イソプロピルフェノールを出発物質として用いて製造した。収量: 0.046 g (85 %)；
1H NMR (500 MHz): 7.52 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 約7.7 Hz, 1H, CDCl3信号とオーバーラップ), 7.16 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.10 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.96 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.90 (s, 2H), 2.90-2.83 (m, J = 7.0 Hz, 1H), 2.55 (s, 3H), 1.23 (d, J = 7.0 Hz, 6H)；
MS m/Z: 266 (M+1)。
【０１６６】
実施例４３
2-[3-(4-t-ブチルフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]-6-メチルピリジンの製造：
【０１６７】
【化４９】
2007509934.tif 000051
【０１６８】
実施例３２と同様にして、ただし4-t-ブチルフェノールを出発物質として用いて製造した。収量: 0.017 g (30 %)；
1H NMR (500 MHz): 7.52 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.32 (br d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.25 (m, 一部がCDCl3信号とオーバーラップ, 1H(?)), 7.10 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.96 (br d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.90 (s, 2H), 2.55 (s, 3H), 1.30 (s, 9H)；
MS m/Z: 280 (M+1)。
【０１６９】
実施例４４
3-(5-フルオロ-6-メチルピリジン-2-イル)プロパ-2-イン-1-オールの製造：
6-ブロモ-3-フルオロ-2-メチルピリジン(0.500 g, 2.63 mmol)、プロパルギルアルコール(0.590 g, 10.5 mmol)およびビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)クロリド(46 mg, 0.065 mmol)を、トリエチルアミン(1.0 mL)に溶解し、最後にヨウ化銅(I)を添加した。混合物を徐々に50℃に加熱し、撹拌下で一夜放置した。次いでK2CO3(1.0 M, 25 mL)を添加し、この溶液をDCMで抽出した。有機相をプールし、乾燥させ(Na2SO4)、濾過し、蒸発させた。得られた粗生成物をシリカゲル上で勾配(ヘプタン/EtOAc 1:0から1:4まで)を用いてフラッシュクロマトグラフィー処理して、純粋な生成物0.332 g (76 %)を得た；
【０１７０】
【化５０】
2007509934.tif 000052
【０１７１】
1H-NMR (400 MHz): 7.22 (d, 1H), 7.20 (s, 1H), 4.57 (m, 1H), 4.47 (m, 2H), 2.43 (d, 3H)；13C-NMR (400 MHz): 158.7, 156.1, 147.6 (d), 137.9 (d), 126.4 (d), 122.9 (d), 88.2, 83.4, 50.9, 17.8。
【０１７２】
実施例４５
4-(5-フルオロ-6-メチルピリジン-2-イル)ブタ-3-イン-2-オールの製造：
6-ブロモ-3-フルオロ-2-メチルピリジン(0.500 g, 2.63 mmol)、3-ブチン-2-オール(0.738 g, 10.5 mmol)およびビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)クロリド(46 mg, 0.065 mmol)を、トリエチルアミン(1.0 mL)に溶解し、最後にヨウ化銅(I)を添加した。混合物を徐々に50℃に加熱し、撹拌下で一夜放置し、次いで70℃にさらに2時間加熱した。次いでK2CO3(1.0 M, 25 mL)を添加し、この溶液をDCMで抽出した。有機相をプールし、乾燥させ(Na2SO4)、濾過し、蒸発させた。得られた粗生成物をシリカゲル上で勾配(ヘプタン/EtOAc 1:0から1:4まで)を用いてフラッシュクロマトグラフィー処理して、純粋な生成物0.447 g (95 %)を得た；
【０１７３】
【化５１】
2007509934.tif 000053
【０１７４】
1H-NMR (400 MHz): 7.18 (s, 1H), 7.16 (s, 1H), 4.72 (m, 1H), 4.45 (m, 1H), 2.41 (d, 3H), 1.47 (d, 3H)；13C-NMR (400 MHz): 158.6, 156.0, 147.5 (d), 138.0 (d), 126.3 (d), 122.9 (d), 91.5, 82.1, 58.2, 24.1, 17.8。
【０１７５】
実施例４６
メタンスルホン酸3-(5-フルオロ-6-メチルピリジン-2-イル)プロパ-2-イン-1-イルの製造：
3-(5-フルオロ-6-メチルピリジン-2-イル)プロパ-2-イン-1-オール(40.0 mg, 0.24 mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(125 mg, 0.97 mmol)をDCM (1.0 mL)に溶解し、メシルクロリドを滴加した。混合物を室温で2時間撹拌した。水(25 mL)で反応を停止し、DCMで抽出した。有機相をプールし、乾燥させ(Na2SO4)、濾過し、蒸発させた。この粗製物質は以後の合成に使用するのに十分なほど純粋であった(LC-MS)。
【０１７６】
【化５２】
2007509934.tif 000054
【０１７７】
実施例４７
メタンスルホン酸3-(5-フルオロ-6-メチルピリジン-2-イル)-1-メチルプロパ-2-イン-1-イルの製造：
4-(5-フルオロ-6-メチルピリジン-2-イル)ブタ-3-イン-2-オール(43.4 mg, 0.24 mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(125 mg, 0.97 mmol)をDCM (1.0 mL)に溶解し、メシルクロリド(55.4 mg, 0.48 mmol)を滴加した。混合物を室温で2時間撹拌した。水(25 mL)で反応を停止し、DCMで抽出した。有機相をプールし、乾燥させ(Na2SO4)、濾過し、蒸発させた。この粗製物質は以後の合成に使用するのに十分なほど純粋であった(LC-MS)。
【０１７８】
【化５３】
2007509934.tif 000055
【０１７９】
実施例４８
6-[3-(3,4-ジメチルフェノキシ)プロパ-1-イン-1-イル]-3-フルオロ-2-メチルピリジンの製造：
メタンスルホン酸3-(5-フルオロ-6-メチルピリジン-2-イル)プロパ-2-イン-1-イル(10.0 mg, 0.041 mmol)および3,4-ジメチルフェノール(7.5 mg, 0.061 mmol)をアセトン/DMF (2:1, 3 mL)に溶解し、K2CO3(11.4 mg, 0.082 mmol)を添加した。混合物を60℃に一夜加熱した。次いでK2CO3 (1.0 M, 25 mL)を添加し、この溶液をDCMで抽出した。有機相をプールし、乾燥させ(Na2SO4)、濾過し、蒸発させた。得られた粗生成物を調節用HPLC (C8 kromasil)により精製して、純粋な生成物2.0 mg (9.0 %)を得た；
【０１８０】
【化５４】
2007509934.tif 000056
【０１８１】
1H-NMR (400 MHz): 7.26 (m, 2H), 7.04 (d, 1H), 6.76 (dd, 2H), 4.87 (s, 2H), 2.51 (d, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.19 (s, 3H)。
【０１８２】
実施例４９
6-[3-(3,4-ジメチルフェノキシ)ブタ-1-イン-1-イル]-3-フルオロ-2-メチルピリジンの製造：
メタンスルホン酸3-(5-フルオロ-6-メチルピリジン-2-イル)-1-メチルプロパ-2-イン-1-イル(62.3 mg, 0.242 mmol)および3,4-ジメチルフェノール(44.4 mg, 0.363 mmol)をアセトン/DMF (2:1, 3 mL)に溶解し、K2CO3(66.9 mg, 0.484 mmol)を添加した。混合物を60℃に一夜加熱した。次いでK2CO3 (1.0 M, 25 mL)を添加し、この溶液をDCMで抽出した。有機相をプールし、乾燥させ(Na2SO4)、濾過し、蒸発させた。得られた粗生成物を調節用HPLC (C8 kromasil)により精製して、純粋な生成物22.0 mg (32 %)を得た；
【０１８３】
【化５５】
2007509934.tif 000057
【０１８４】
1H-NMR (400 MHz): 7.22 (m, 2H), 7.03 (d, 1H), 6.82 (m, 2H), 5.04 (q, 1H), 2.50 (d, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 1.71 (d, 3H)。
【０１８５】
実施例５０
4-(6-メチルピリジン-2-イル)ブタ-3-イン-2-オールの製造：
2-ブロモ-6-メチルピリジン(0.258 g, 1.5 mmol)を、ブタ-3-イン-2-オール(0.116 g, 1.65 mmol, 1.1当量)および(PPh3)2PdCl2(0.032 g, 0.045 mmol, 0.03当量)と混合した。0℃でトリエチルアミン(0.61 g, 0.84 mL, 6.0 mmol, 4.0当量)を添加した。混合物を0℃で10分間撹拌し、CuI (0.006 g, 0.03 mmol, 0.02当量)を添加した。混合物を室温に達するまで放置し、最後に60℃に4時間加熱した。リン酸緩衝液(10 mL, 0.2 M, pH 7)を添加し、相分離器を用いて水相をDCM (3回, 10 mL)で抽出した。有機相を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。これにより0.286 gの粗生成物が得られた。Si上で溶離剤としてペンタン/EtOAc分画(まず1:1、次いで3:2、最後に1:2)を用いるフラッシュクロマトグラフィーの後、0.163 g (収率: 67 %)の純粋な生成物を黄色の油として単離した。TLC: Rf (ペンタン/EtOAc 1:1) = 0.20；
【０１８６】
【化５６】
2007509934.tif 000058
【０１８７】
1H NMR (300 MHz): 7.40 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.96 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.90 (b, 1H), 4.76 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 2.43 (s, 3H), 1.49 (d, J = 6.7 Hz, 3H)；
13C NMR (75 MHz): 158.2, 141.7, 136.2, 123.9, 122.4, 91.7, 82.3, 57.6, 23.9, 23.8。
【０１８８】
実施例５１
メタンスルホン酸1-メチル-3-(6-メチル-ピリジン-2-イル)-プロパ-2-イニルエステルの製造
この化合物を実施例４６の方法に従い、出発物質として4-(6-メチルピリジン-2-イニル)ブタ-3-イン-2-オールを用いて製造した；
【０１８９】
【化５７】
2007509934.tif 000059
【０１９０】
MS m/Z: 240 (M+1)。
【０１９１】
実施例５２
3-(6-メチルピリジン-2-イル)プロパ-2-イン-1-オールの製造：
2-ブロモ-6-メチルピリジン(1.72 g, 0.01 mol)に、(PPh3)2PdCl2 (0.116 g, 0.2 mmol, 0.02当量)およびCuI (0.063 g, 0.3 mmol, 0.03当量)を、0℃で窒素下に添加し、続いてプロパ-2-イン-1-オール(2.24 g, 2.33 mL, 0.4 mol, 4.0当量)およびトリエチルアミン(1.50 mL)を添加した。反応混合物を室温に達するまで放置し、次いで60℃に3.5時間加熱した。次いで反応混合物を水 (10 mL)に添加し、2 M HClでpHを6〜7に調整した。水相をDCM (3回, 10 mL)で抽出し、有機相を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。これにより1.719 gの粗生成物が得られた。このうち1.098 gをシリカゲル上で溶離剤としてペンタン/EtOAc(まず1:1、次いで1:2、最後に1:3)を用いるフラッシュクロマトグラフィー処理した。これにより0.578 gの生成物を得た；
【０１９２】
【化５８】
2007509934.tif 000060
【０１９３】
13C NMR (75 MHz): 157.7, 141.1, 136.2, 123.7, 122.3, 88.4, 83.0, 49.9, 23.5。
【０１９４】
実施例５３
メタンスルホン酸3-(6-メチルピリジン-2-イル)プロパ-2-イン-1-イルの製造：
3-(6-メチルピリジン-2-イル)プロパ-2-イン-1-オール(0.300 g, 2.04 mmol)をDCM (10 mL)に、窒素下で5〜10分間かけて溶解した。この溶液を-20℃に冷却した(冷却浴: アセトン + ドライアイス片)。トリエチルアミン(0.268 g, 0.37 mL, 0.27 mmol, 1.30当量)を添加した。DCM (1.5 mL)中のメタンスルホニルクロリド(0.280 g, 0.19 mL, 0.24 mmol, 1.2当量)を3分間かけて添加した。反応混合物を-18〜-22℃で１時間撹拌した後、LC/MSは生成物のみを示した。水(10 mL)を添加した。有機相を分離し、水相をDCM (3回, 10 mL)で抽出した。有機相をプールし、硫酸マグネシウムで乾燥させ、蒸発させた。これにより0.450 g (収率: 98 %)を黄色の油として得た；
【０１９５】
【化５９】
2007509934.tif 000061
【０１９６】
1H NMR (300 MHz): 7.61 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.31 (d, J =7.7 Hz,1H), 7.19 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 5.10 (s, 2H), 3.18 (s, 3H), 2.58 (s, 3H)；
13C NMR (75 MHz): 158.9, 140.2, 136.8, 124.5, 123.8, 87.8, 80.7, 57.7, 38.9, 24.2。
【０１９７】
生物学的評価
mGluR5dを発現する細胞系におけるmGluR5アンタゴニズムの機能評価
本発明化合物の特性を、薬理活性に関する標準アッセイ法により分析することができる。グルタミン酸受容体アッセイ法の例はたとえばAramori et al., Neuron 8:757 (1992)、Tanabe et al., Neuron 8:169 (1992)、Miller et al., J. Neuroscience 15: 6103 (1995)、Balazs, et al., J. Neurochemistry 69:151 (1997)に記載されており、当技術分野で周知である。これらの刊行物に記載された方法を本明細書に援用する。本発明化合物は、mGluR5発現細胞における細胞内カルシウム[Ca2+]iの移動を測定するアッセイ法(FLIPR)、またはリン酸イノシトール代謝回転を測定する他のアッセイ法(IP3)によって簡便に調べることができる。
【０１９８】
FLIPRアッセイ
WO 97/05252に記載されるヒトmGluR5dを発現する細胞を、コラーゲンコーティングした、側面の黒い透明底96-ウェルプレートに、ウェル当たり100,000個の密度で接種し、接種後24時間、実験を行う。127 mM NaCl、5 mM KCl、2 mM MgCl2、0.7 mM NaH2PO4、2 mM CaCl2、0.422 mg/ml NaHCO3、2.4 mg/ml HEPES、1.8 mg/mlグルコースおよび1 mg/ml BSAフラクションIVを含有する緩衝液(pH 7.4)中で、すべてのアッセイを行う。96-ウェルプレートの細胞培養物を60分間、0.01%プルロン酸（pluronic acid）(商品、非イオン界面活性剤ポリオール−CAS番号9003-11-6)中4μMのアセトキシメチルエステル形蛍光カルシウム指示薬fluo-3 (Molecular Probes、オレゴン州ユージーン)を含有する前記緩衝液に負荷する。負荷期間の後、fluo-3緩衝液を除去し、新鮮なアッセイ緩衝液と交換する。FLIPR実験を、0.800 Wのレーザーセッテイングおよび0.4秒のCCDカメラシャッター速度、励起および発光波長それぞれ488 nmおよび562 nmで行う。細胞プレートの各ウェルに160μlの緩衝液が存在する状態で各実験を開始する。アンタゴニストプレートから40μlを添加し、続いてアゴニストプレートから50μlを添加する。アンタゴニストとアゴニストの添加には90秒間の間隔をおく。これら2つの添加それぞれの直後、1秒間隔で50回、続いて5秒間隔で3回、蛍光信号をサンプリングする。応答を、アゴニストに対する応答のピーク高さ（サンプリング期間内のバックグラウンド蛍光を差し引いたもの）の相異として測定する。線形最小二乗フィッティングプログラムを用いてIC50の判定を行う。
【０１９９】
IP3アッセイ
mGluR5dの他の機能アッセイはWO 97/05252に記載されており、ホスファチジルイノシトールの代謝回転に基づくものである。受容体の活性化によりホスホリパーゼC活性が刺激され、イノシトール1,4,5-トリリン酸(IP3)の形成が増加する。
【０２００】
ヒトmGluR5dを安定に発現するGHEKを24ウェルのポリ-L-リシンコーティングしたプレートに、1μCi/ウェルの[3H] myo-イノシトールを含有する培地中、40 x 104個/ウェルで接種する。細胞を一夜(16時間)インキュベートし、次いで3回洗浄し、1単位/mlのグルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼおよび2 mMのピルビン酸を補充したHEPES緩衝化生理食塩水(146 mM NaCl, 4.2 mM KCl, 0.5 mM MgCl2, 0.1%グルコース, 20 mM HEPES, pH 7.4)中、37℃で１時間、インキュベートした。細胞をHEPES緩衝化生理食塩水で１回洗浄し、10 mMのLiClを含有するHEPES緩衝化生理食塩水中で10分間、プレインキュベートする。化合物を二重試験法により37℃で15分間インキュベートし、次いでグルタミン酸(80μM)またはDHPG (30μM)を添加し、さらに30分間インキュベートする。氷上で0.5 mlの過塩素酸(5%)を添加して4℃で少なくとも30分間インキュベートすることにより、反応を停止する。試料を15 mlのポリプロピレン製試験管内に採集し、イノシトールリン酸をイオン交換樹脂(Dowex AG1-X8ホルメート形, 200-400メッシュ, BIORAD)カラムにより分離する。イノシトールリン酸の分離は下記に従って行われた：まずグリセロホスファチジルイノシトールを8 mlの30 mMギ酸アンモニウムで溶離する。次いで全リン酸イノシトールを8 mlの700 mMギ酸アンモニウム/100 mMギ酸で溶離し、シンチレーションバイアルに採集する。次いでこの溶出液を8 mlのシンチレーション液と混合し、シンチレーション計数により[3H]イノシトールの取込みを測定する。二重試験試料から得たdpm数をプロットし、線形最小二乗フィッティングプログラムを用いてIC50の判定を行う。
【０２０１】
略号
BSA  ウシ血清アルブミン
CCD  電荷結合素子
CRC  濃度応答曲線
DHPG  3,5-ジヒドロキシフェニルグリシン
DPM  毎分崩壊数
EDTA  エチレンジアミン四酢酸
FLIPR  蛍光イメージングプレートリーダー
GHEK  GLAST含有ヒト胎児腎
GLAST  グルタミン酸/アスパラギン酸トランスポーター
HEPES  4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジンエタンスルホン酸（緩衝剤）
IP3  イノシトールトリリン酸
【０２０２】
一般に本発明化合物は前記のアッセイにおいて有効であり、10 000 nM未満のIC50値をもつ。本発明の１態様において、IC50値は１μM未満である。本発明の他の態様において、IC50値は100nM未満である。
個々の化合物に関するIC50値を以下に示す：
【０２０３】
【表１】
2007509934.tif 000062
【０２０４】
TLESRに対して有効な化合物のスクリーニング
パブロフ-スリングを付けた状態に耐えるように訓練された雌雄ラブラドル・レトリーバー成体を用いる。粘膜-皮膚食道フィステルを形成し、いずれの実験もこれらのイヌを完全に回復させた後に行う。
【０２０５】
運動性の測定
要約すると、水を自由に摂取させた状態で約17時間絶食した後、多重内腔スリーブ／サイドホール付きアセンブリー(Dentsleeve、南オーストラリ州アデレード)を食道フィステル形成部に導入し、胃、下部食道括約筋(LES)および食道の圧力を測定する。低コンプライアンスマノメーター式潅流ポンプ(Dentsleeve、南オーストラリ州アデレード)を用いて、アセンブリーに水を潅流させる。空気潅流チューブを口方向へ通して嚥下を測定し、LESの3 cm上方でアンチモン電極によりpHをモニターする。すべての信号を増幅し、10 Hzのパーソナルコンピューターに獲得する。
【０２０６】
空腹時/LES III期運動活動を含まないベースライン測定値が得られた時点で、プラセボ(0.9% NaCl)または被験化合物を前足静脈に静脈内投与する(i.v., 0.5 ml/kg)。静脈内投与の10分後、アセンブリーの中心腔を通して100 ml/分の速度で最終体積30 ml/kgになるまで栄養食(10%ペプトン, 5% D-グルコース, 5% Intralipid, pH 3.0)を胃に注入する。栄養食注入に続いて、空気を500 ml/分の速度で胃内圧10±1 mmHgが得られるまで注入する。次いで、空気の追加注入または胃からの排気のために注入ポンプを用い、実験期間中、圧力をこのレベルに維持する。栄養食注入の開始から空気注入の終了までの実験時間は45分である。この方法はTLESR誘発のための信頼できる手段であることが確認されている。
【０２０７】
TLESRは、下部食道括約筋圧力が＞１mmHg/秒の速度で低下すること（胃内圧と対比して）であると定義される。弛緩は、その開始前2秒以内に咽頭信号により先行されてはならない；この場合、弛緩は嚥下誘発性と分類される。LESと胃の間の圧力差は2 mmHg未満、完全弛緩の持続時間は１秒より長くなければならない。
【国際調査報告】
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