(57)【要約】  角質層を通りその下にある表皮層または表皮および真皮層の中に貫通するように適合されている複数の微細突起（またはそれらの列）を包含する微細突起部品（またはシステム）を有するデリバリーシステムを含んでなり、この微細突起部品がその上に配置された免疫学的に活性な作用物質を包含する生体適合性コーティングを有する、免疫学的に活性な作用物質を経皮デリバリーするための装置および方法。好ましくは、生体適合性コーティングはワクチンコーティング調合物から製造される。
2007530680.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
微細突起上に配置された生体適合性コーティングを有する複数の角質層−貫通微細突起を有する微細突起部品を含んでなる免疫学的に活性な作用物質を経皮的にデリバリーするためのシステムであって、該コーティングが該免疫学的に活性な作用物質を含有するシステム。
【請求項２】
該生体適合性コーティングが該免疫学的に活性な作用物質の調合物から形成される、請求項１のシステム。
【請求項３】
該免疫学的に活性な作用物質がインフルエンザ・ワクチンを含んでなる、請求項１のシステム。
【請求項４】
該免疫学的に活性な作用物質がウイルス類、細菌類、蛋白質−ベースワクチン、多糖−ベースワクチン、および核酸−ベースワクチンよりなる群から選択される、請求項１のシステム。
【請求項５】
該免疫学的に活性な作用物質がウイルス類、弱化したウイルス類、死滅したウイルス類、細菌類、弱化した細菌類、死滅した細菌類、蛋白質−ベースワクチン、多糖−ベースワクチン、核酸−ベースワクチン、蛋白質、複合多糖類、オリゴ糖類、リポ蛋白質、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）（組み換え体ＰＴワクチン−非細胞）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）（精製済み、組み換え体）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）（精製済み、組み換え体）、サイトメガロウイルス類（糖蛋白質サブユニット）、群Ａ連鎖球菌（糖蛋白質サブユニット、破傷風トキソイドを有する複合糖質群Ａ多糖、毒素サブユニット担体に結合されたＭ蛋白質／ペプチド類、Ｍ蛋白質、多価タイプ−特異的エピトープ類、システイン・プロテアーゼ、Ｃ５ａペプチダーゼ）、Ｂ型肝炎ウイルス（組み換え体ＰｒｅＳ１、Ｐｒｅ−Ｓ２、Ｓ、組み換え体芯蛋白質）、Ｃ型肝炎ウイルス（組み換え体−発現された表面蛋白質およびエピトープ類）、ヒト・乳頭腫ウイルス（カプシド蛋白質、ＴＡ−ＧＮ組み換え体蛋白質Ｌ２およびＥ７［ＨＰＶ−６から］、ＨＰＶ−１１からのＭＥＤＩ−５０１組み換え体ＶＬＰＬ１、四価組み換え体ＢＬＰＬ１［ＨＰＶ−６から］、ＨＰＶ−１１、ＨＰＶ−１６、およびＨＰＶ−１８、ＬＡＭＰ−Ｅ７［ＨＰＶ−１６から］）、レジオネラ・ニューモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）（精製された細菌表面蛋白質）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）（破傷風トキソイドとの複合糖質）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）（合成ペプチド類）、風疹ウイルス（合成ペプチド）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）（髄膜炎菌Ｂ  ＯＭＰに結合された複合糖質［１、４、５、６Ｂ、９Ｎ、１４、１８Ｃ、１９Ｖ、２３Ｆ］、ＣＲＭ１９７に結合された複合糖質［４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆ］、ＣＲＭ１９７０に結合された結合された複合糖質［１、４、５、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆ］、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ）（表面リポ蛋白質）、水痘帯状ヘルペス（Ｖａｒｉｃｅｌｌａ  ｚｏｓｔｅｒ）ウイルス（サブユニット、糖蛋白質）、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）（複合リポ多糖）、サイトメガロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ヒト・乳頭腫ウイルス、風疹ウイルス、水痘帯状ヘルペスウイルス、百日咳菌、破傷風菌、ジフテリア菌、群Ａ連鎖球菌、レジオネラ・ニューモフィラ、髄膜炎菌、緑膿菌、肺炎連鎖球菌、梅毒トレポネーマ、コレラ菌、流感ワクチン、ライム（Ｌｙｍｅ）病ワクチン、狂犬病ワクチン、麻疹ワクチン、流行性耳下腺炎ワクチン類、水痘ワクチン、天然痘ワクチン、肝炎ワクチン、百日咳ワクチン、ジフテリアワクチン、核酸類、一本鎖核酸類、二本鎖核酸類、超コイルプラスミドＤＮＡ、線状プラスミドＤＮＡ、コスミド類、細菌人工染色体（ＢＡＣ類）、酵母人工染色体（ＹＡＣ類）、哺乳動物人工染色体、ＲＮＡ分子、およびｍＲＮＡよりなる群から選択される、請求項１のシ��テム。
【請求項６】
該調合物が燐酸アルミニウムゲル、水酸化アルミニウム、アルファグルカン、β−グルカン、コレラ毒素Ｂサブユニット、ＣＲＬ１００５、ｘ＝８およびｙ＝２０５の平均値を有するＡＢＡブロック重合体、ガンマイヌリン、線状（非分枝鎖状）β−Ｄ（２→１）ポリフルクトフラノキシル−α−Ｄ−グルコース、ゲルブ（Ｇｅｒｂｕ）アジュバント、Ｎ−アセチルグルコサミン−（β１−４）−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−グルタミン（ＧＭＤＰ）、ジメチルジオクタデシルアンモニウムクロリド（ＤＤＡ）、亜鉛Ｌ−プロリン塩錯体（Ｚｎ−Ｐｒｏ−８）、イミキモド（Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）（１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）、ＩｍｍＴｈｅｒＴＭ、ジパルミチン酸Ｎ−アセチルグルコアミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−イソＧｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−グリセロール、ＭＴＰ−ＰＥリポソーム類、Ｃ５９Ｈ１０８Ｎ６Ｏ１９ＰＮａ−３Ｈ２Ｏ（ＭＴＰ）、ムラメチド（Ｍｕｒａｍｅｔｉｄｅ）、Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−Ｇｌｎ−ＯＣＨ３、プレウラン（Ｐｌｅｕｒａｎ）、ＱＳ−２１；Ｓ−２８４６３、４−アミノ−ａ，ａ−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール、スクラボ（ｓｃｌａｖｏ）ペプチド、ＶＱＧＥＥＳＮＤＫ・ＨＣｌ（ＩＬ−１β  １６３−１７１ペプチド）、スレオニル−ＭＤＰ（ＴｅｒｍｕｒｔｉｄｅＴＭ）、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＤＮＡオリゴヌクレオチド類、ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチド類、ガンマインターフェロン、およびＮＦカッパＢ調節信号化蛋白質よりなる群から選択される免疫応答増大アジュバントをさらに含んでなる、請求項１のシステム。
【請求項７】
該微細突起部品が少なくとも約１００個の微細突起／ｃｍ２の微細突起密度を有する、請求項１のシステム。
【請求項８】
該微細突起部品が約２００−３０００個の範囲内の微細突起／ｃｍ２の微細突起密度を有する、請求項７のシステム。
【請求項９】
該微細突起部品の各々が約５０−１４５ミクロンの範囲内の長さを有する、請求項１のシステム。
【請求項１０】
該微細突起部品の各々が約７０−１４０ミクロンの範囲内の長さを有する、請求項９のシステム。
【請求項１１】
該生体適合性コーティングが約２−５０ミクロンの範囲内の厚さを有する、請求項１のシステム。
【請求項１２】
該調合物が水性調合物を含んでなる、請求項２のシステム。
【請求項１３】
該コーティング調合物が界面活性作用物質を包含する、請求項２のシステム。
【請求項１４】
該界面活性作用物質がラウロアンフォ酢酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｌａｕｒｏａｍｐｈｏａｃｅｔａｔｅ）、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、セチルピリジニウムクロリド（ＣＰＣ）、ドデシルトリメチルアンモニウムクロリド（ＴＭＡＣ）、ベンズアルコニウム、クロリド、ポリソルベート類、例えばツイーン（Ｔｗｅｅｎ）２０およびツイーン８０、ソルビタン誘導体、ラウリン酸ソルビタン、アルコキシル化されたアルコール類、およびラウレス（ｌａｕｒｅｔｈ）−４よりなる群から選択される、請求項１３のシステム。
【請求項１５】
該コーティング調合物が両親媒性重合体を包含する、請求項２のシステム。
【請求項１６】
該両親媒性重合体がセルロース誘導体、ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）、ヒドロキシプロピル−メチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、メチルセルロース（ＭＣ）、ヒドロキシエチルメチルセルロース（ＨＥＭＣ）、エチルヒドロキシエチルセルロース（ＥＨＥＣ）、およびプルロニック類（ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ）よりなる群から選択される、請求項１５のシステム。
【請求項１７】
該コーティング調合物が親水性重合体を包含する、請求項２のシステム。
【請求項１８】
該親水性重合体がポリ（ビニルアルコール）、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（ｎ−ビニルピロリドン）、ポリエチレングリコールおよびそれらの混合物よりなる群から選択される、請求項１７のシステム。
【請求項１９】
該コーティング調合物が生体適合性担体を包含する、請求項２のシステム。
【請求項２０】
該生体適合性重合体がヒト・アルブミン、生物工学処理されたヒト・アルブミン、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、ポリヒスチジン、ペントサンポリ硫酸塩、ポリアミノ酸類、スクロース、トレハロース、メレジトース、ラフィノースおよびスタキオースよりなる群から選択される、請求項１９のシステム。
【請求項２１】
該コーティング調合物が非−還元糖、多糖、還元糖、およびＤＮアーゼ阻害作用物質よりなる群から選択される安定作用物質を包含する、請求項２のシステム。
【請求項２２】
該コーティング調合物が血管収縮作用物質を包含する、請求項２のシステム。
【請求項２３】
該血管収縮作用物質がエピネフリン（ｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ）、ナファゾリン（ｎａｐｈａｚｏｌｉｎｅ）、テトラヒドロゾリン（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｚｏｌｉｎｅ）、インダナゾリン（ｉｎｄａｎａｚｏｌｉｎｅ）、メチゾリン（ｍｅｔｉｚｏｌｉｎｅ）、トラマゾリン（ｔｒａｍａｚｏｌｉｎｅ）、チマゾリン（ｔｙｍａｚｏｌｉｎｅ）、オキシメタゾリン（ｏｘｙｍｅｔａｚｏｌｉｎｅ）、キシロメタゾリン（ｘｙｌｏｍｅｔａｚｏｌｉｎｅ）、アミデフリン（ａｍｉｄｅｐｈｒｉｎｅ）、カファミノール（ｃａｆａｍｉｎｏｌ）、シクロペンタミン（ｃｙｃｌｏｐｅｎｔａｍｉｎｅ）、デオキシエピネフリン（ｄｅｏｘｙｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ）、エピネフリン（ｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ）、フェリプレッシン（ｆｅｌｙｐｒｅｓｓｉｎ）、インダナゾリン（ｉｎｄａｎａｚｏｌｉｎｅ）、メチゾリン（ｍｅｔｉｚｏｌｉｎｅ）、ミドドリン（ｍｉｄｏｄｒｉｎｅ）、ナファゾリン（ｎａｐｈａｚｏｌｉｎｅ）、ノルデフリン（ｎｏｒｄｅｆｒｉｎ）、オクトドリン（ｏｃｔｏｄｒｉｎｅ）、オルニプレッシン（ｏｒｎｉｐｒｅｓｓｉｎ）、オキシメタゾリン（ｏｘｙｍｅｔｈａｚｏｌｉｎｅ）、フェニルエフリン（ｐｈｅｎｙｌｅｐｈｒｉｎｅ）、フェニルエタノールアミン（ｐｈｅｎｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ）、フェニルプロパノールアミン（ｐｈｅｎｙｌｐｒｏｐａｎｏｌａｍｉｎｅ）、プロピルヘキセドリン（ｐｒｏｐｙｌｈｅｘｅｄｒｉｎｅ）、プソイドエフェドリン（ｐｓｅｕｄｏｅｐｈｅｄｒｉｎｅ）、テトラヒドロゾリン（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｚｏｌｉｎｅ）、トラマゾリン（ｔｒａｍａｚｏｌｉｎｅ）、ツアミノヘプタン（ｔｕａｍｉｎｏｈｅｐｔａｎｅ）、チマゾリン（ｔｙｍａｚｏｌｉｎｅ）、バソプレッシン（ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ）およびキシロメタゾリン（ｘｙｌｏｍｅｔａｚｏｌｉｎｅ）よりなる群から選択される、請求項２２のシステム。
【請求項２４】
該コーティング調合物が経路開通性調節作用物質を包含する、請求項２のシステム。
【請求項２５】
該経路開通性調節作用物質が浸透作用物質、塩化ナトリウム、双性イオン性化合物、アミノ酸類、抗−炎症作用物質、ベータメタソン２１−ホスフェート二ナトリウム塩、トリアンシノロンアセトニド２１−二ナトリウムホスフェート、ヒドロコルタメート塩酸塩、ヒドロコルチソン２１−ホスフェート二ナトリウム塩、メチルプレドニソロン２１−ホスフェート二ナトリウム塩、メチルプレドニソロン２１−スクシネートナトリウム塩、パラメタソン二ナトリウムホスフェート、プレドニソロン２１−スクシネートナトリウム塩、抗凝固作用物質、クエン酸、クエン酸塩、クエン酸ナトリウム、硫酸デキストランナトリウム、およびＥＤＴＡよりなる群から選択される、請求項２４のシステム。
【請求項２６】
該コーティング調合物が約５ポイズより低く且つ約０．３ポイズより高い粘度を有する、請求項２のシステム。
【請求項２７】
複数の微細突起を有する微細突起部品を準備し、
バルクワクチンを準備し、
該バルクワクチンを接線−流（ｔａｎｇｅｎｔｉａｌ−ｆｌｏｗ）濾過にかけてワクチン溶液を与え、
少なくとも１種の賦形作用物質を該ワクチン溶液に加え、
該ワクチン溶液を凍結−乾燥してワクチン製品を生成せしめ、
該ワクチン製品を最初の溶液を用いて再構成してワクチンコーティング調合物を生成せしめ、
該微細突起部品を該ワクチンコーティング調合物でコーティングし、そして
該コーティングされた微細突起部品を患者の皮膚に適用する
段階を含んでなる、免疫学的に活性な作用物質を患者に経皮デリバリーする方法。
【請求項２８】
少なくとも１種の賦形作用物質を該ワクチン溶液に加える段階がスクロース、トレハロースおよびマンニトールよりなる群から選択される賦形作用物質を加えることを含んでなる、請求項２７の方法。
【請求項２９】
バルクワクチンを準備する段階がインフルエンザワクチンを準備することを含んでなる、請求項２７の方法。
【請求項３０】
該インフルエンザワクチンがヘマググルチニン（ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）を含んでなる、請求項２９の方法。
【請求項３１】
約４５μｇのヘマググルチニンをデリバリーする段階をさらに含んでなる、請求項３０の方法。
【請求項３２】
ヘマググルチニンをデリバリーする段階が該ヘマググルチニンの少なくとも約７０％を該患者の表皮のＡＰＣ−豊富層にデリバリーすることを含んでなる、請求項３１の方法。
【請求項３３】
バルクワクチンを準備し、
該バルクワクチンを接線−流濾過にかけてワクチン溶液を与え、
少なくとも１種の賦形作用物質を該ワクチン溶液に加え、そして
該ワクチン溶液を凍結−乾燥してワクチン製品を生成せしめ
段階を含んでなる、ワクチン溶液を調合する方法。
【請求項３４】
該ワクチン製品が該バルクワクチンより少なくとも約５００倍多く濃縮されている濃度を示す、請求項３３の方法。
【請求項３５】
該ワクチン製品が室温安定性を少なくとも約６ヶ月間にわたり保つ、請求項３３の方法。
【請求項３６】
バルクワクチンを準備する段階がインフルエンザワクチンを準備することを含んでなる、請求項３３の方法。
【請求項３７】
該インフルエンザワクチンがヘマググルチニンを含んでなる、請求項３６の方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本出願は２００４年４月１日に出願された米国暫定特許出願第６０／５５９，１５３号の権利を主張する。
【技術分野】
【０００２】
発明の分野
本発明は一般的に経皮作用物質デリバリー（ｄｅｌｉｖｅｒｙ）システムおよび方法に関する。より特に、本発明はインフルエンザワクチンの経皮デリバリーのための装置、方法および調合物に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
活性作用物質（ａｃｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔｓ）（または薬品）は経口的にまたは注射により最も簡便に投与される。あいにく、多くの活性作用物質は経口投与時には、それらが血液流に入る前に吸収されないかまたは悪影響を受けそしてその結果として所望される活性を有さなくなるため、全く無効であるかまたは急激に減じられる効力を有する。他方で、血液流中への作用物質の直接的注射は、投与中の作用物質が変化しないことを確実にするが、難しく、不便で、疼痛があり且つ不快な工程であり、それは時には劣悪な患者コンプライアンスをもたらす。
【０００４】
従って、一般原則として、経皮デリバリーはそうでなければ皮下注射または静脈注入を介してデリバリーする必要がある活性作用物質の投与方法を提供する。ここで使用される用語「経皮」は、皮膚の実質的な切開または浸透、例えば手術ナイフを用いる切開または皮下針を用いる皮膚の貫通、を行わない皮膚を通る局部組織または全身的循環系に対する活性作用物質（例えば、治療作用物質、例えば薬品、または免疫学的に活性な作用物質、例えばワクチン）のデリバリーをさす総称である。経皮作用物質デリバリーは、受動的拡散によるデリバリー並びに外部エネルギー源、例えば電気（例えば、イオン泳動）および超音波（例えば、音波泳動（ｐｈｏｎｏｐｈｏｒｅｓｉｓ））に基づくデリバリーを包含する。
【０００５】
当該技術で既知であるように、皮膚は身体を外的危険から遮断する物理的障壁だけでなく免疫系の構成部分でもある。皮膚の免疫機能は、まとめて皮膚免疫系として知られる先天性および後天性の両方の免疫機能を有する生存可能な（ｖｉａｂｌｅ）表皮および真皮の常在細胞および上腕成分（ｈｕｍｅｒａｌ  ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ）の集合から生ずる。
【０００６】
皮膚免疫系の最も重要な成分の１種はランゲルハンス細胞（ＬＣ）であり、それらは生存可能表皮で見られる特異化された抗原発現細胞である。ＬＣ類は生存可能表皮内で周囲細胞間のそれらの樹状突起の広範な分枝鎖化により半連続的網目構造を形成する。ＬＣ類の正常な機能は、抗原を検出し、捕獲しそして発現して侵襲する病原体に対する免疫応答を引き出すことである。ＬＣ類はその機能を、上皮抗原を吸収し、局所的な皮膚−排液リンパ節に運び、そして処理された抗原をＴ細胞に発現することにより、行う。
【０００７】
皮膚免疫系の有効性は、皮膚に目標設定された予防接種計画の成功および安全性の原因になる。皮膚乱切り法（ｓｋｉｎ  ｓｃａｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ）による生体−弱毒化種痘を用いる予防接種は致死的な天然痘疾病の世界的な根絶を成功裡にもたらした。種々のワクチンの標準的ＩＭ服用量の１／５〜１／１０を用いる皮内注射は多くのワクチンを用
いて免疫応答を誘発する際に有効であった一方で、低−服用量の狂犬病ワクチンは皮内適用に関して商業的に認可されてきた。
【０００８】
別法として、経皮デリバリーはそうでなければ皮下注射、静脈注入を介してまたは経口的にデリバリーされる必要がある生物学的に活性な作用物質、特にワクチン、の投与方法を提供する。経皮ワクチンデリバリーはこれらの分野の両方において改良を与える。経皮デリバリーは経口デリバリーと比べて、消化管の過酷な環境を回避し、胃腸薬品の代謝を迂回し、初回通過効果を減少させ、そして消化および肝臓酵素による起きうる不活性化を回避する。逆に、消化管は経皮投与中にワクチンを受けない。
【０００９】
より普遍的である受動的な経皮作用物質デリバリーシステムは典型的には、高濃度の活性作用物質を含有する薬品受器（ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ）を包含する。受器は皮膚に接触するように適合されており、それは作用物質を皮膚を通してそして患者の身体組織または血液流の中に拡散可能にする。
【００１０】
受動的な経皮拡散作用物質流量を増加させる１つの普遍的な方法は、皮膚浸透促進作用物質を用いる皮膚の予備処理または作用物質と一緒の皮膚浸透促進作用物質の同時デリバリーを包括する。浸透促進作用物質は、作用物質がその中を通ってデリバリーされる身体表面に適用される場合には、そこを通る作用物質の流量を増加させる。しかしながら、経皮蛋白質流量を増加させる際のこれらの方法の効果は、少なくとも比較的大きい蛋白質に関しては、それらの寸法のために限定されていた。
【００１１】
経皮的にデリバリーされる作用物質の量を増加させるために最も外側の皮膚層に機械的に浸透させるかまたはその皮膚層を裂き、それにより皮膚内への経路を形成するために開発された多くの技術およびシステムもあった。乱切り器（ｓｃａｒｉｆｉｅｒ）として知られる初期の予防接種装置は一般的に皮膚に適用される複数の尖叉または針を包含しそして適用領域を剥離するかまたは小さい切断部を形成する。ワクチンは例えば特許文献１に開示されているように皮膚に局所的にまたは例えば特許文献２、特許文献３および特許文献４に開示されているように乱切り器の尖叉に適用された湿った液体状で適用された。
【００１２】
一部は、患者に免疫作用を与える際に有効であるには非常に少量だけのワクチンがデリバリーされる必要があるため、乱切り器は皮内ワクチンデリバリーが示唆されてきた。さらに、過剰量も満足のいく免疫感作を達成するため、デリバリーされるワクチンの量は特に厳密でない。
【００１３】
しかしながら、活性作用物質、例えばワクチン、をデリバリーするための乱切り器を使用する際の重大な欠点は経皮作用物質流量およびその結果として生ずるデリバリーされる服用量を決める際の困難である。また、穿刺を偏らせそしてそれに抵抗する皮膚の弾性、変形および柔軟性質のために、極小貫通部品はしばしば皮膚に均一に浸透せずおよび／または皮膚浸透時に作用物質の液体コーティングが拭い取られる。
【００１４】
さらに、皮膚の自己−治癒過程のために、皮膚内に形成された穿孔またはスリットは角質層からの貫通部品の除去後にふさがる傾向がある。それ故、皮膚の弾性は極小貫通部品の皮膚内への浸透時にこれらの部品に適用された活性作用物質液体コーティングを除去するように作用する。さらに、貫通部品により形成された極小スリットが装置の除去後に急速に直るため、貫通部品により形成された通路を通る液体作用物質溶液の通過を制限しそしてまたそのような装置の経皮流量を制限する。
【００１５】
経皮作用物質デリバリーを促進させるために極小皮膚貫通部品を使用する他のシステムおよび装置は特許文献５、特許文献６、特許文献７、特許文献８、特許文献９、並びにＰ
ＣＴ公開の特許文献１０、特許文献１１、特許文献１２、特許文献１３、特許文献１４、特許文献１５、特許文献１６、特許文献１７、特許文献１８、特許文献１９、特許文献２０、特許文献２１、特許文献２２、および特許文献２３に開示されており、全ては引用することにより本発明の内容となる。
【００１６】
開示されたシステムおよび装置は、皮膚の最も外側の層（すなわち、角質層）を貫通するための種々の形状および寸法の貫通部品を使用する。これらの参考文献に開示された貫通部品は一般的に薄く平らな部品、例えばパッドまたはシート、から垂直に伸びている。ある種のこれらの装置の中の貫通部品は極端に小さく、あるものは約２５−４００ミクロンだけの微細突起長さおよび約５−５０ミクロンだけの微細突起厚さを有する。これらの極小の貫通／切断部品は中を通る経皮作用物質デリバリーを促進させるための対応して小さい微細スリット／微細切断部を角質層内で形成する。
【００１７】
開示されたシステムはさらに典型的には、作用物質を保持するための受器並びに作用物質を受器から角質層を通して例えば装置自体の中空尖叉により移送するためのデリバリーシステムを含む。そのような装置の一例は特許文献２４に開示されており、それは液体作用物質受器を有する。しかしながら、受器は加圧されて液体作用物質を極小管部品を通して皮膚の中に強制的に加えなければならない。そのような装置の欠点は加圧可能な液体受器を加えるための追加の複雑さおよび費用並びに圧力−駆動デリバリーシステムの存在による複雑さを包含する。
【００１８】
ここ引用することにより全てが本発明の内容となる特許文献２５に開示されているように、物理的受器内に含有される代わりに微細突起上にコーティングされてデリバリーされる活性作用物質を有することも可能である。これは、別個の物理的受器および受器に特定な作用物質調合物または組成物の開発の必要性を省く。
【特許文献１】米国特許第５，４８７，７２６号明細書
【特許文献２】米国特許第４，４５３，９２６号明細書
【特許文献３】米国特許第４，１０９，６５５号明細書
【特許文献４】米国特許第３，１３６，３１４号明細書
【特許文献５】米国特許第５，８７９，３２６号明細書
【特許文献６】米国特許第３，８１４，０９７号明細書
【特許文献７】米国特許第５，２５０，０２３号明細書
【特許文献８】米国特許第３，９６４，４８２号明細書
【特許文献９】米国特許再発行第２５，６３７号明細書
【特許文献１０】国際公開第９６／３７１５５号パンフレット
【特許文献１１】国際公開第９６／３７２５６号パンフレット
【特許文献１２】国際公開第９６／１７６４８号パンフレット
【特許文献１３】国際公開第９７／０３７１８号パンフレット
【特許文献１４】国際公開第９８／１１９３７号パンフレット
【特許文献１５】国際公開第９８／００１９３号パンフレット
【特許文献１６】国際公開第９７／４８４４０号パンフレット
【特許文献１７】国際公開第９７／４８４４１号パンフレット
【特許文献１８】国際公開第９７／４８４４２号パンフレット
【特許文献１９】国際公開第９８／００１９３号パンフレット
【特許文献２０】国際公開第９９／６４５８０号パンフレット
【特許文献２１】国際公開第９８／２８０３７号パンフレット
【特許文献２２】国際公開第９８／２９２９８号パンフレット
【特許文献２３】国際公開第９８／２９３６５号パンフレット
【特許文献２４】国際公開第９３／１７７５４号パンフレット
【特許文献２５】米国特許出願第１０／０４５，８４２号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
しかしながら、コーティングされた微細突起システムの欠点は、コーティング厚さが増加するにつれて微細突起（およびそれらの列）が角質層に浸透する能力が減じられるためデリバリーされる活性作用物質そして特に免疫学的に活性な作用物質の最大量が制限されることである。さらに、上部に配置された厚いコーティングを有する微細突起を角質層に効果的に浸透させるためには、アプリケーターの衝撃エネルギーは増加されなければならず、それは衝撃に対する耐えられない感覚を引き起こす。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
従って、コーティングされた微細突起を介して免疫学的に（または生物学的に）有効な量で容易に投与されうる高濃度の免疫学的に活性な作用物質そして特に液体インフルエンザワクチンを提供することが望ましいであろう。
【００２１】
従って、先行技術の免疫学的に活性な作用物質のデリバリー方法およびシステムに伴う欠点および不利を実質的に減ずるかまたは排除する免疫学的に活性な作用物質の経皮デリバリーのための装置および方法を提供することが本発明の目的である。
【００２２】
内部に配置されたインフルエンザワクチンを有する生体適合性（ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ）コーティングでコーティングされた微細突起を包含するインフルエンザワクチンの経皮デリバリーのための装置および方法を提供することが本発明の別の目的である。
【００２３】
インフルエンザワクチンコーティング調合物でコーティングされた複数の微細突起を有する微細突起部品を包含するインフルエンザワクチンの経皮デリバリーのための装置および方法を提供することが本発明の別の目的である。
【００２４】
コーティングされた微細突起システムを介して免疫学的に有効な量で容易に投与されうるインフルエンザワクチンを提供することが本発明のさらに別の目的である。
【００２５】
実質的に防腐作用物質を含まないインフルエンザワクチンを提供することが本発明の別の目的である。
【００２６】
増加した貯蔵寿命を有するインフルエンザワクチンを提供することが本発明のさらに別の目的である。
【００２７】
発明の要旨
上記の目的並びに以下で述べられそして明らかになるであろうものによると、本発明に従う免疫学的に活性な作用物質を経皮的にデリバリーするための装置および方法は角質層を通りその下にある表皮層、または表皮および真皮層、の中に貫通するように適合されている複数の微細突起（またはそれらの列）を包含する微細突起部品（またはシステム）を有するデリバリーシステムを含んでなり、微細突起部品は上に配置された免疫学的に活性な作用物質を含む生体適合性コーティングを有する。本発明の好ましい態様では、生体適合性コーティングは免疫学的に活性な作用物質コーティング調合物から製造される。
【００２８】
本発明の好ましい態様では、免疫学的に活性な作用物質はインフルエンザ・ワクチンを含んでなる。
【００２９】
本発明の別の態様では、免疫学的に活性な作用物質はウイルス類および細菌類、蛋白質−ベースワクチン、多糖−ベースワクチン、および核酸−ベースワクチンよりなる群から選択される抗原作用物質またはワクチンを含んでなる。
【００３０】
適する抗原作用物質は蛋白質、複合多糖類（ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ）、オリゴ糖類、およびリポ糖類の形態の抗原を包含するが、それらに限定されない。これらのサブユニットワクチンは百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）（組み換え体ＰＴワクチン−非細胞）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ
ｔｅｔａｎｉ）（精製済み、組み換え体）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）（精製済み、組み換え体）、サイトメガロウイルス類（糖蛋白質サブユニット）、群Ａ連鎖球菌（糖蛋白質サブユニット、破傷風トキソイドを有する複合糖質群Ａ多糖、毒素サブユニット担体に結合されたＭ蛋白質／ペプチド類、Ｍ蛋白質、多価タイプ−特異的エピトープ類、システイン・プロテアーゼ、Ｃ５ａペプチダーゼ）、Ｂ型肝炎ウイルス（組み換え体ＰｒｅＳ１、Ｐｒｅ−Ｓ２、Ｓ、組み換え体芯蛋白質）、Ｃ型肝炎ウイルス（組み換え体−発現された表面蛋白質およびエピトープ類）、ヒト・乳頭腫ウイルス（カプシド蛋白質、ＴＡ−ＧＮ組み換え体蛋白質Ｌ２およびＥ７［ＨＰＶ−６から］、ＨＰＶ−１１からのＭＥＤＩ−５０１組み換え体ＶＬＰＬ１、四価組み換え体ＢＬＰＬ１［ＨＰＶ−６から］、ＨＰＶ−１１、ＨＰＶ−１６、およびＨＰＶ−１８、ＬＡＭＰ−Ｅ７［ＨＰＶ−１６から］）、レジオネラ・ニューモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）（精製された細菌表面蛋白質）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）（破傷風トキソイドとの複合糖質）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）（合成ペプチド類）、風疹ウイルス（合成ペプチド）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）（髄膜炎菌Ｂ  ＯＭＰに結合された複合糖質［１、４、５、６Ｂ、９Ｎ、１４、１８Ｃ、１９Ｖ、２３Ｆ］、ＣＲＭ１９７に結合された複合糖質［４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆ］、ＣＲＭ１９７０に結合された結合された複合糖質［１、４、５、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆ］、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ）（表面リポ蛋白質）、水痘帯状ヘルペス（Ｖａｒｉｃｅｌｌａ  ｚｏｓｔｅｒ）ウイルス（サブユニット、糖蛋白質）、およびコレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）（複合リポ多糖）を包含する。
【００３１】
全てのウイルス類または細菌類は弱化したもしくは死滅したウイルス類、例えばサイトメガロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ヒト・乳頭腫ウイルス、風疹ウイルス、および水痘帯状ヘルペスウイルス、弱化したもしくは死滅した細菌類、例えば百日咳菌、破傷風菌、ジフテリア菌、群Ａ連鎖球菌、レジオネラ・ニューモフィラ、髄膜炎菌、緑膿菌、肺炎連鎖球菌、梅毒トレポネーマ、およびコレラ菌、並びにそれらの混合物を包含するが、それらに限定されない。
【００３２】
抗原作用物質を含有する別の市販ワクチンは流感ワクチン、ライム（Ｌｙｍｅ）病ワクチン、狂犬病ワクチン、麻疹ワクチン、流行性耳下腺炎、水痘ワクチン、天然痘ワクチン、肝炎ワクチン、百日咳ワクチン、およびジフテリアワクチンを包含するが、それらに限定されない。
【００３３】
核酸類を含んでなるワクチンは一本鎖および二本鎖核酸類、例えば、超コイルプラスミドＤＮＡ、線状プラスミドＤＮＡ、コスミド類、細菌人工染色体（ＢＡＣ類）、酵母人工染色体（ＹＡＣ類）、哺乳動物人工染色体、およびＲＮＡ分子、例えばｍＲＮＡを包含するが、それらに限定されない。核酸を蛋白質作用物質とカップリングさせることもできまたは１種もしくはそれ以上の化学的改質、例えば、ホスホロチオエート部分、を包含しうる。
【００３４】
ワクチン抗原と一緒にワクチンを構成しうる適当な免疫応答増大アジュバントは燐酸アルミニウムゲル、水酸化アルミニウム、アルファ（ａｌｇａｌ）グルカン、β−グルカン、コレラ毒素Ｂサブユニット、ＣＲＬ１００５、ｘ＝８およびｙ＝２０５の平均値を有するＡＢＡブロック重合体、ガンマイヌリン、線状（非分枝鎖状）β−Ｄ（２→１）ポリフルクトフラノキシル−α−Ｄ−グルコース、ゲルブ（Ｇｅｒｂｕ）アジュバント、Ｎ−アセチルグルコサミン−（β１−４）−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−グルタミン（ＧＭＤＰ）、ジメチルジオクタデシルアンモニウムクロリド（ＤＤＡ）、亜鉛Ｌ−プロリン塩錯体（Ｚｎ−Ｐｒｏ−８）、イミキモド（Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）（１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン、ＩｍｍＴｈｅｒＴＭ、ジパルミチン酸Ｎ−アセチルグルコアミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−イソＧｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−グリセロール、ＭＴＰ−ＰＥリポソーム類、Ｃ５９Ｈ１０８Ｎ６Ｏ１９ＰＮａ−３Ｈ２Ｏ（ＭＴＰ）、ムラメチド（Ｍｕｒａｍｅｔｉｄｅ）、Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−Ｇｌｎ−ＯＣＨ３、プレウラン（Ｐｌｅｕｒａｎ）、β−グルカン、ＱＳ−２１；Ｓ−２８４６３、４−アミノ−ａ，ａ−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール、サルボ（ｓａｌｖｏ）ペプチド、ＶＱＧＥＥＳＮＤＫ・ＨＣｌ（ＩＬ−１β１６３−１７１ペプチド）、およびスレオニル−ＭＤＰ（ＴｅｒｍｕｒｔｉｄｅＴＭ）、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５を包含する。アジュバントはＤＮＡオリゴヌクレオチド類、例えばＣｐＧ含有オリゴヌクレオチド類も包含する。さらに、免疫−調節リンホカイン類、例えばＩＬ−１８、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−４、ＩＬ１０をコードする核酸配列、ガンマインターフェロン、およびＮＦカッパＢ調節信号化蛋白質を使用することもできる。
【００３５】
本発明の１つの態様では、微細突起部品は少なくとも約１０個の微細突起／ｃｍ２の、好ましくは、約１００個の微細突起／ｃｍ２より大きい、そしてより好ましくは、約２００−３０００個／ｃｍ２の範囲内の、微細突起密度を有する。さらに、微細突起の各々は好ましくは約５０−１４５ミクロンの範囲内の、そしてより好ましくは、約７０−１４０ミクロンの範囲内の、長さを有する。
【００３６】
１つの態様では、微細突起部品はステンレス鋼、チタン、ニッケルチタン合金、または同様な生体適合性材料、例えば重合体材料、から構成される。
【００３７】
別の態様では、微細突起部品は非−伝導性材料、例えば重合体、から構成される。或いは、微細突起部品を非−伝導性材料、例えばパリレン（Ｐａｒｙｌｅｎｅ）（Ｒ）、でコーティングされうる。
【００３８】
本発明の１つの態様では、生体適合性コーティングは１００ミクロンより薄い厚さを有する。好ましい態様では、生体適合性コーティングは約２−５０ミクロンの範囲内の厚さを有する。
【００３９】
固体の生体適合性コーティングを製造するための微細突起部品に適用されるコーティング調合物は免疫学的に活性な作用物質を含む水性または非−水性調合物を含んでなりうる。好ましい態様では、コーティング調合物は水性調合物を含んでなる。
【００４０】
本発明１つの態様では、コーティング調合物は少なくとも１種の界面活性作用物質を包含し、それらは双性イオン性、両性イオン性、カチオン性、アニオン性、または非イオン性でありうる。適する界面活性作用物質はラウロアンフォ酢酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ
ｌａｕｒｏａｍｐｈｏａｃｅｔａｔｅ）、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、セチルピリジニウムクロリド（ＣＰＣ）、ドデシルトリメチルアンモニウムクロリド（ＴＭＡＣ）、ベンズアルコニウム、クロリド、ポリソルベート類、例えばツイーン（Ｔｗｅｅｎ）２０およびツイーン８０、他のソルビタン誘導体、例えばラウリン酸ソルビタン、およびアルコキシル化されたアルコール類、例えばラウレス（ｌａｕｒｅｔｈ）−４を包含するが、それらに限定されない。
【００４１】
本発明の別の態様では、コーティング調合物は少なくとも１種の重合体材料または両親媒性質を有する少なくとも１種の重合体を包含し、それらはデキストラン類、ヒドロキシエチル澱粉（ＨＥＳ）、セルロース誘導体、例えばヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、メチルセルロース（ＭＣ）、ヒドロキシエチルメチルセルロース（ＨＥＭＣ）、またはエチルヒドロキシ−エチルセルロース（ＥＨＥＣ）、並びにプルロニック類（ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ）を包含するが、それらに限定されない。
【００４２】
本発明の１つの態様では、固体の生体適合性コーティング中の両親媒性質を示す重合体の濃度はコーティング調合物の好ましくは約０．００１−７０重量％の範囲内、より好ましくは、約０．０１−５０重量％の範囲内、さらにより好ましくは、約０．０３−３０重量％の範囲内、である。
【００４３】
本発明の１つの態様では、固体の生体適合性コーティング中の両親媒性質を示す重合体の濃度は固体の生体適合性コーティングの好ましくは約０．００２−９９．９重量％の範囲内、より好ましくは、約０．１−６０重量％の範囲内、である。
【００４４】
別の態様では、コーティング調合物は下記の群：ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（ｎ−ビニルピロリドン）、ポリエチレングリコールおよびそれらの混合物、並びに同様な重合体から選択される親水性重合体を包含する。
【００４５】
好ましい態様では、コーティング調合物中の親水性重合体の濃度は好ましくはコーティング調合物の約０．００１−９０重量％の範囲内、より好ましくは、約０．０１−２０重量％の範囲内、さらにより好ましくは、約０．０３−１０重量％の範囲内、である。
【００４６】
好ましい態様では、固体の生体適合性コーティング中の親水性重合体の濃度はコーティング調合物の約０．００２−９９．９重量％の範囲内、より好ましくは、約０．１−２０重量％の範囲内、である。
【００４７】
本発明の別の態様では、コーティング調合物は生体適合性担体を包含し、それはヒト・アルブミン、生物工学処理されたヒト・アルブミン、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、ポリヒスチジン、ペントサンポリ硫酸塩、ポリアミノ酸類、スクロース、トレハロース、メレジトース、ラフィノースおよびスタキオースを包含するが、それらに限定されない。
【００４８】
好ましくは、コーティング調合物中の生体適合性担体の濃度はコーティング調合物の好ましくは約０．００１−９０重量％の範囲内、より好ましくは、約２−７０重量％の範囲内、さらにより好ましくは、約５−５０重量％の範囲内、である。
【００４９】
好ましくは、固体の生体適合性コーティング中の生体適合性担体の濃度は固体の生体適合性調合物の約０．００２−９９．９重量％の範囲内、より好ましくは、約０．１−９５重量％の範囲内、である。
【００５０】
別の態様では、コーティング調合物は安定作用物質を包含し、それらは非−還元糖、多糖、還元糖、またはＤＮアーゼ阻害作用物質を含んでなりうるがそれらに限定されない。
【００５１】
別の態様では、コーティング調合物は血管収縮作用物質を包含し、それらはアミデフリン（ａｍｉｄｅｐｈｒｉｎｅ）、カファミノール（ｃａｆａｍｉｎｏｌ）、シクロペンタ
ミン（ｃｙｃｌｏｐｅｎｔａｍｉｎｅ）、デオキシエピネフリン（ｄｅｏｘｙｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ）、エピネフリン（ｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ）、フェリプレッシン（ｆｅｌｙｐｒｅｓｓｉｎ）、インダナゾリン（ｉｎｄａｎａｚｏｌｉｎｅ）、メチゾリン（ｍｅｔｉｚｏｌｉｎｅ）、ミドドリン（ｍｉｄｏｄｒｉｎｅ）、ナファゾリン（ｎａｐｈａｚｏｌｉｎｅ）、ノルデフリン（ｎｏｒｄｅｆｒｉｎ）、オクトドリン（ｏｃｔｏｄｒｉｎｅ）、オルニプレッシン（ｏｒｎｉｐｒｅｓｓｉｎ）、オキシメタゾリン（ｏｘｙｍｅｔｈａｚｏｌｉｎｅ）、フェルエフリン（ｐｈｅｎｙｌｅｐｈｒｉｎｅ）、フェニルエタノールアミン（ｐｈｅｎｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ）、フェニルプロパノールアミン（ｐｈｅｎｙｌｐｒｏｐａｎｏｌａｍｉｎｅ）、プロピルヘキセドリン（ｐｒｏｐｙｌｈｅｘｅｄｒｉｎｅ）、プソイドエフェドリン（ｐｓｅｕｄｏｅｐｈｅｄｒｉｎｅ）、テトラヒドロゾリン（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｚｏｌｉｎｅ）、トラマゾリン（ｔｒａｍａｚｏｌｉｎｅ）、ツアミノヘプタン（ｔｕａｍｉｎｏｈｅｐｔａｎｅ）、チマゾリン（ｔｙｍａｚｏｌｉｎｅ）、バソプレッシン（ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ）、キシロメタゾリン（ｘｙｌｏｍｅｔａｚｏｌｉｎｅ）およびそれらの混合物を含んでなりうるがそれらに限定されない。最も好ましい血管収縮作用物質はエピネフリン、ナファゾリン、テトラヒドロゾリン、インダナゾリン、メチゾリン、トラマゾリン、チマゾリン、オキシメタゾリンおよびキシロメタゾリンを包含する。
【００５２】
使用される場合には、血管収縮作用物質の濃度は好ましくはコーティングの約０．１重量％〜１０重量％の範囲内である。
【００５３】
本発明のさらに別の態様では、コーティング調合物は少なくとも１種の「経路開通性調節作用物質（ｐａｔｈｗａｙ  ｐａｔｅｎｃｙ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒ）」を包含し、それは浸透作用物質（例えば、塩化ナトリウム）、双性イオン性化合物（例えば、アミノ酸類）、および抗−炎症作用物質、例えばベータメタソン２１−ホスフェート二ナトリウム塩、トリアンシノロン・アセトニド２１−二ナトリウムホスフェート、ヒドロコルタメート塩酸塩、ヒドロコルチソン２１−ホスフェート二ナトリウム塩、メチルプレドニソロン２１−ホスフェート二ナトリウム塩、メチルプレドニソロン２１−スクシネートナトリウム塩、パラメタソン二ナトリウムホスフェート、およびプレドニソロン２１−スクシネートナトリウム塩、並びに抗凝固作用物質、例えばクエン酸、クエン酸塩（例えば、クエン酸ナトリウム）、硫酸デキストランナトリウム、アスピリン、並びにＥＤＴＡを含んでなりうるがそれらに限定されない。
【００５４】
好ましくは、本発明のコーティング調合物は約５ポイズより低い、より好ましくは、約０．３−２．０ポイズの範囲内の、粘度を有する。
【００５５】
本発明の１つの態様によると、免疫学的に活性な作用物質をデリバリーする方法は下記の段階：（ｉ）複数の微細突起を有する微細突起部品を準備し、（ｉｉ）バルクワクチンを準備し、（ｉｉｉ）バルクワクチンを接線−流（ｔａｎｇｅｎｔｉａｌ−ｆｌｏｗ）濾過にかけてワクチン溶液を与え、（ｉｖ）少なくとも１種の賦形作用物質（例えばスクロース、トレハロースまたはマンニトール）をワクチン溶液に加え、（ｖ）ワクチン溶液を凍結−乾燥してワクチン製品を生成し、（ｖｉ）ワクチン製品を最初の溶液（例えば、水）を用いて再構成してワクチンコーティング調合物を生成し、（ｖｉｉ）微細突起部品をワクチンコーティング調合物でコーティングし、そして（ｖｉｉｉ）コーティングされた微細突起部品を患者の皮膚に適用すること、を含んでなる。
【００５６】
１つの態様では、ワクチンはインフルエンザワクチンを含んでなる。好ましくは、この方法は  約４５μｇのヘマググルチニン（ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）をデリバリーする段階を含んでなる。より好ましくは、ワクチンをデリバリーする段階はワクチンの少なくとも約７０％をＡＰＣ−豊富表皮層にデリバリーすることを含んでなる。
【００５７】
別の態様では、本発明のワクチン溶液を調合する方法は下記の段階：（ｉ）バルクワクチンを準備し、（ｉｉ）バルクワクチンを接線−流濾過にかけてワクチン溶液を与え、（ｉｉｉ）少なくとも１種の賦形作用物質をワクチン溶液に加え、（ｉｖ）ワクチン溶液を凍結−乾燥してワクチン製品を生成すること、を含んでなる。１つの態様では、ワクチン製品はバルクワクチンより少なくとも約５００倍ほど多く濃縮されている濃度を示す。好ましくは、ワクチン製品は室温安定性を少なくとも約６ヶ月間にわたり保つ。
【００５８】
図面の簡単な説明
さらなる特徴および利点は、添付図面で説明されているような以下のそしてより特に発明の好ましい態様の記述から明らかになろうし、そしてここで同様な参照文字は図面全体にわたり同じ部分または部品を一般的にさしており、そしてここで、
図１はインフルエンザウイルス粒子の説明図であり、
図２は本発明に従う微細突起部品の１つの態様の一部の透視図であり、
図３は本発明に従う微細突起上に配置された生体適合性コーティングを有する図２に示
された微細突起部品の透視図であり、
図４は本発明に従う接着作用物質裏打ち材を有する微細突起部品の断面側面図であり、
図５は本発明に従う微細突起部品の別の態様の一部の透視図であり、
図６は本発明に従う内部に配置された微細突起部品を有する保持器（ｒｅｔａｉｎｅ  
ｒ）の断面側面図であり、
図７は図６に示された保持器の透視図であり、
図８はアプリケーターおよび図６に示された保持器の透視図であり、
図９は本発明に従う調合前工程のフローチャートであり、
図１０は本発明に従う溶液濁度の減少に対するｐＨの影響を説明する吸光度対ｐＨのグ  ラフ説明図であり、
図１１はワクチンであるＦｌｕｚｏｎｅ（Ｒ）およびＶａｘｉｇｒｉｐＴＭに関する粘
度対ｒｐｍのグラフ説明図であり、
図１２は２２．５ｍｇ／ｍＬにおける１５％ＨＡ純度を有するＡ／ニュー・カレドニア（Ｎｅｗ  Ｃａｌｅｄｏｎｉａ）菌株に関する粘度対温度のグラフ説明図であり、
図１３Ａおよび１３Ｂは本発明に従う種々の微細突起列デザインに関するワクチンデリ
バリー性をまとめたグラフ説明図であり、
図１４ＡはＨＡ（Ａ／パナマ（Ｐａｎａｍａ）菌株）の種々の服用量に関する平均抗−
ＨＡ力価対時間のグラフ説明図であり、
図１４Ｂは合計Ａ／パナマ−特異的ＩｇＧ力価対ＨＩ活性のグラフ説明であり、
図１５Ａおよび１５Ｂは抗−Ａ／パナマ−特異的ＩｇＧ抗体およびＨＩ活性を説明する
ＨＡ（Ａ／パナマ菌株）の数種の調合物の免疫原性の棒グラフであり、
図１６Ａおよび１６Ｂは２８日および４９日における抗−ＨＡ  ＩｇＧ抗体活性および
ＨＩ活性を説明する微細突起上に乾燥−コーティングされたＨＡ（Ａ／パナマ菌株）の
数種の調合物の免疫原性の棒グラフであり、
図１７はＨＩ活性を説明する微細突起上に乾燥−コーティングされた三価ＨＡ（Ａ／パ
ナマ、Ａ／ニュー・カレドニアおよびＢ／シャンドン（Ｓｈａｎｇｄｏｎｇ）菌株）の
数種の調合物の免疫原性の棒グラフであり、
図１８は本発明に従う８週間までにわたり４０℃において貯蔵された数種の調合物の安
定性特徴を説明するＨＡ量対時間のグラフ表示であり、
図１９および２０は本発明に従う３ヶ月間までにわたり４０℃においてそして６ヶ月間
までにわたり５℃および４０℃において貯蔵された調合物の安定性特徴を説明する２種
の三価調合物の棒グラフであり、
図２１は本発明に従うスクロースと共に調合されそして８週間までにわたり４０℃にお
いて貯蔵されたＡ／ニュー・カレドニア菌株の安定性特徴を示すＳＲＩＤ／ＢＣＡ対時
間のグラフ説明図である。
【００５９】
発明の詳細な記述
本発明を詳細に記載する前に、特に例示された物質、調合物、方法または構造はもちろん変動しうるため、本発明はそれらに限定されないことを理解すべきである。それ故、ここに記載されたものと同様なまたは同等な多くの物質および方法を本発明の実施において使用できるが、好ましい物質および方法がここに記載される。
【００６０】
ここで使用される用語は本発明の特定の態様だけを記載する目的のためでありそして限定しようとする意図はない。
【００６１】
断らない限り、ここで使用される全ての技術的および科学的用語は本発明が関係する当該技術の専門家により普遍的に理解されるものと同じ意味を有する。
【００６２】
さらに、以上または以下のいずれかで、ここに引用された全ての文献、特許および特許出願は引用することにより本発明の内容となる。
【００６３】
最後に、この明細書および添付された請求項で使用される場合には、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は内容が明らかに別のものを示さない限り複数対象を包含する。それ故、例えば、「免疫学的に活性な作用物質」の言及は２種もしくはそれ以上のそのような作用物質を包含し、「微細突起」の言及は２個もしくはそれ以上のそのような微細突起を包含するなどである。
【００６４】
定義
ここで使用される用語「経皮」は、局所または全身療法のための作用物質の皮膚の中へのおよび／または皮膚を通るデリバリーを意味する。
【００６５】
ここで使用される用語「経皮流束」は、経皮デリバリーの速度を意味する。
【００６６】
ここで使用される用語「共−デリバリー」は、１種もしくは複数の作用物質がデリバリーされる前、作用物質の経皮流束の前および最中、作用物質の経皮流束中、作用物質の経皮流束の最中および後、および／または作用物質の経皮流束後のいずれかに作用物質が経皮的に投与されることを意味する。さらに、２種もしくはそれ以上の免疫学的に活性な作用物質を本発明の生体適合性コーティングの中に調合して異なる免疫学的に活性な作用物質の共−デリバリーを生ずることもできる。
【００６７】
ここで使用される用語「生物学的に活性な作用物質」は、治療的に有効な量で投与される時に薬理学的に有効である活性作用物質または薬品を含有する物体または混合物の組成物をさす。そのような活性作用物質の例は小分子量化合物、ポリペプチド類、蛋白質、オリゴヌクレオチド類、核酸類および多糖類を包含するが、それらに限定されない。
【００６８】
ここで使用される用語「免疫学的に活性な作用物質」は、免疫学的に有効な量で投与される時に有利な免疫応答を引き起こしうるいずれかのおよび全ての源からの抗原作用物質および／または「ワクチン」を含有する物体または混合物の組成物をさす。免疫学的に活性な作用物質の具体例はインフルエンザワクチンである。
【００６９】
免疫学的に活性な作用物質の別の例はウイルス類および細菌、蛋白質をベースとしたワクチン、多糖をベースとしたワクチン、および核酸をベースとしたワクチンを包含するが、それらに限定されない。
【００７０】
適する免疫学的に活性な作用物質は蛋白質、複合多糖類、オリゴ糖類、およびリポ蛋白質の形態の抗原を包含するが、それらに限定されない。これらのサブユニットワクチンは
百日咳菌（組み換え体ＰＴワクチン−非細胞）、破傷風菌（精製済み、組み換え体）、ジフテリア菌（精製済み、組み換え体）、サイトメガロウイルス類（糖蛋白質サブユニット）、群Ａ連鎖球菌（糖蛋白質サブユニット、破傷風トキソイドを有する複合糖質群Ａ多糖、毒素サブユニット担体に結合されたＭ蛋白質／ペプチド類、Ｍ蛋白質、多価タイプ−特異的エピトープ類、システイン・プロテアーゼ、Ｃ５ａペプチダーゼ）、Ｂ型肝炎ウイルス（組み換え体ＰｒｅＳ１、Ｐｒｅ−Ｓ２、Ｓ、組み換え体芯蛋白質）、Ｃ型肝炎ウイルス（組み換え体−発現された表面蛋白質およびエピトープ類）、ヒト・乳頭腫ウイルス（カプシド蛋白質、ＴＡ−ＧＮ組み換え体蛋白質Ｌ２およびＥ７［ＨＰＶ−６から］、ＨＰＶ−１１からのＭＥＤＩ−５０１組み換え体ＶＬＰＬ１、四価組み換え体ＢＬＰＬ１［ＨＰＶ−６から］、ＨＰＶ−１１、ＨＰＶ−１６、およびＨＰＶ−１８、ＬＡＭＰ−Ｅ７［ＨＰＶ−１６から］）、レジオネラ・ニューモフィラ（精製された細菌表面蛋白質）、髄膜炎菌（破傷風トキソイドとの複合糖質）、緑膿菌（合成ペプチド類）、風疹ウイルス（合成ペプチド）、肺炎連鎖球菌（髄膜炎菌Ｂ  ＯＭＰに結合された複合糖質［１、４、５、６Ｂ、９Ｎ、１４、１８Ｃ、１９Ｖ、２３Ｆ］、ＣＲＭ１９７に結合された複合糖質［４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆ］、ＣＲＭ１９７０に結合された結合された複合糖質［１、４、５、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆ］、梅毒トレポネーマ（表面リポ蛋白質）、水痘帯状ヘルペスウイルス（サブユニット、糖蛋白質）、コレラ菌（複合リポ多糖）を包含するが、それらに限定されない。
【００７１】
全てのウイルス類または細菌類は弱化したまたは死滅したウイルス類、例えばサイトメガロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ヒト・乳頭腫ウイルス、風疹ウイルスおよび水痘帯状ヘルペスウイルス、弱化したまたは死滅した細菌類、例えば百日咳菌、破傷風菌、ジフテリア菌、群Ａ連鎖球菌、レジオネラ・ニューモフィラ、髄膜炎菌、緑膿菌、肺炎連鎖球菌、梅毒トレボネーマ、およびコレラ菌、並びにそれらの混合物を包含するが、それらに限定されない。
【００７２】
本発明での用途を有する抗原作用物質を含有する多くの市販ワクチンは流感ワクチン、ライム病ワクチン、狂犬病ワクチン、麻疹ワクチン、流行性耳下腺炎、水痘ワクチン、天然痘ワクチン、肝炎ワクチン、百日咳ワクチン、およびジフテリアワクチンを包含するが、それらに限定されない。
【００７３】
本発明の方法に従いこれらもデリバリーされうる核酸類を含んでなるワクチンは一本鎖および二本鎖核酸類、例えば超コイルプラスミドＤＮＡ、線状プラスミドＤＮＡ、コスミド類、細菌人工染色体（ＢＡＣ類）、酵母人工染色体（ＹＡＣ類）、哺乳動物人工染色体、並びにＲＮＡ分子、例えばｍＲＮＡ、を包含するが、それらに限定されない。
【００７４】
核酸の寸法は数千キロ塩基まででありうる。核酸を蛋白質性の作用物質と結合させることもできまたは１種もしくはそれ以上の化学的変更、例えば、ホスホロチオエート部分、を包含しうる。
【００７５】
ワクチン抗原と一緒になってワクチンを構成しうる適当な免疫応答強化アジュバントは燐酸アルミニウムゲル、水酸化アルミニウム、アルファグルカン、β−グルカン、コレラ毒素Ｂサブユニット、ＣＲＬ１００５、ｘ＝８およびｙ＝２０５の平均値を有するＡＢＡブロック重合体、ガンマイヌリン、線状（非分枝鎖状）β−Ｄ（２→１）ポリフルクトフラノキシル−α−Ｄ−グルコース、ゲルブアジュバント、Ｎ−アセチルグルコサミン−（β１−４）−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−グルタミン（ＧＭＤＰ）、ジメチルジオクタデシルアンモニウムクロリド（ＤＤＡ）、亜鉛Ｌ−プロリン塩錯体（Ｚｎ−Ｐｒｏ−８）、イミキモド（１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン、ＩｍｍＴｈｅｒＴＭ、ジパルミチン酸Ｎ−アセチルグルコアミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−イソＧｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−グリセロール、ＭＴＰ−ＰＥリポソーム類、Ｃ５９Ｈ１０８Ｎ６Ｏ１９ＰＮａ−３Ｈ２Ｏ（ＭＴＰ）、ムラメチド、Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−Ｇｌｎ−ＯＣＨ３、プレウラン、ＱＳ−２１；Ｓ−２８４６３、４−アミノ−ａ，ａ−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール、サルボペプチド、ＶＱＧＥＥＳＮＤＫ・ＨＣｌ（ＩＬ−１β
１６３−１７１ペプチド）、およびスレオニル−ＭＤＰ（ＴｅｒｍｕｒｔｉｄｅＴＭ）、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン、並びにインターロイキン１８、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５を包含するが、それらに限定されない。アジュバントはＤＮＡオリゴヌクレオチド類、例えばＣｐＧ含有オリゴヌクレオチド類、も包含する。さらに、免疫−調節リンホカイン類例えばＩＬ−１８、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−４、ＩＬ−１０をコードする核酸配列、ガンマインターフェロン、およびＮＦカッパＢ調節信号化蛋白質を使用することもできる。
【００７６】
ここで使用される用語「生物学的に有効な量」または「生物学的に有効な割合」は、所望する免疫学的なしばしば有利な結果を刺激するかまたは開始させるのに必要な免疫学的に活性な作用物質の量または割合をさす。本発明のコーティング中で使用される免疫学的に活性な作用物質の量は、所望する免疫学的な結果を得るために必要な免疫学的に活性な作用物質の量をデリバリーするのに必要な量であろう。実際に、これはデリバリーされる特定の免疫学的に活性な作用物質、デリバリーの部位、並びに皮膚組織内への免疫学的に活性な作用物質のデリバリーのための溶解および放出動力学に依存して広く変動するであろう。
【００７７】
当業者に認識されるように、デリバリーされる免疫学的に活性な作用物質の服用量は微細突起列（またはパッチ）寸法、密度などを変えることにより変更または操作することもできる。
【００７８】
ここで使用される用語「コーティング調合物」は微細突起および／またはそれらの列をコーティングするために使用される自由流動性組成物または混合物を意味し且つ包含することを意味する。
【００７９】
ここで使用される用語「生体適合性コーティング」および「固体コーティング」は実質的に固体状態の「コーティング調合物」を意味し且つ包含することを意味する。
【００８０】
ここで使用される用語「微細突起」は生存動物、特に哺乳動物そしてより特に人間、の角質層を通ってその下にある表皮層または表皮および真皮層の中に貫通するかまたは切断するように適合される貫通部品をさす。
【００８１】
ここで使用される用語「微細突起部品」は一般的に角質層を貫通するために列内に配置された複数の微細突起を含んでなる微細突起列を意味する。微細突起部品は、薄いシートから複数の微細突起を侵食（ｅｔｃｈｉｎｇ）または穿孔（ｐｕｎｃｈｉｎｇ）しそして微細突起をシートの面から折るかもしくは曲げて例えば図２に示されるような構造を形成することにより、形成できる。微細突起部品は他の既知の方法で、例えば引用することにより本発明の内容となる米国特許第６，０５０，９８８号に開示されているように１個もしくは複数の片の各々の角に沿って微細突起を有する１個もしくはそれ以上の片を形成することにより、形成することもできる。
【００８２】
１つの態様では、微細突起部品は少なくとも約１０個の微細突起／ｃｍ２、好ましくは少なくとも約１００個の微細突起／ｃｍ２、そしてより好ましくは、約２００−３０００個の微細突起／ｃｍ２の範囲内、の微細突起密度を有する列を有する。
【００８３】
以上で示されたように、本発明は角質層を通ってその下にある表皮層または表皮および
真皮層の中に貫通するように適合される複数の微細突起（またはそれらの列）を有する微細突起部品（またはシステム）を包含する免疫学的に活性な作用物質の経皮デリバリーのための装置および方法を含んでなり、微細突起部品はその上に配置された免疫学的に活性な作用物質を包含する生体適合性コーティングを有する。
【００８４】
本発明の好ましい態様では、免疫学的に活性な作用物質はインフルエンザワクチン、より好ましくは、三価インフルエンザワクチン、を含んでなる。本発明によると、皮膚の角質層の貫通時に、生体適合性コーティングが体液（細胞内流体および細胞外流体、例えば間質流体）により溶解しそしてインフルエンザワクチンが全身療法のために皮膚内に放出される（すなわち、大型丸作用物質（ｂｏｌｕｓ）デリバリー）。
【００８５】
本発明によると、コーティング溶解および放出の動力学は免疫学的に活性な作用物質の性質、コーティング方法、コーティング厚さおよびコーティング組成物（例えば、コーティング調合添加作用物質の存在）を包含する多くの因子に依存するであろう。放出動力学特徴によって、長期間にわたり皮膚と関連して貫通する際にコーティングされた微細突起を維持することが必要でありうる。これは、微細突起部品を皮膚に接着作用物質を用いて固定することによりまたは例えば図５に示されそして引用することにより本発明の内容となる国際公開第９７／４８４４０号パンフレットに記載されているような固定された微細突起を用いることにより、達成されうる。
【００８６】
当該技術で既知のように、インフルエンザウイルス粒子は人間における保護性の抗−ＨＡ抗体の導入に寄与する一次表面抗原としてのヘマググルチニン（ＨＡ）を有する多くの蛋白質成分よりなる。インフルエンザ粒子の説明は図１に示される。
【００８７】
免疫学的には、インフルエンザＡウイルスは２種の表面抗原であるＨＡおよびニューラミニダーゼ（ｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅ；ＮＡ）に基づきサブタイプに分類される。これらの抗原に対する、特にヘマググルチニンに対する、免疫性は感染症の可能性を減少させそして感染症が起きた場合に疾病の重篤度を小さくする。
【００８８】
流布する菌株の抗原特性は各年のワクチン中に含まれるウイルス菌株の選択のための基礎を与える。毎年、インフルエンザワクチンは到来する冬に世界的に流布しそうなインフルエンザウイルスを代表する３種のウイルス菌株（普通は２つのタイプＡおよび１つのＢ）を含有する。インフルエンザＡおよびＢはそれらの核蛋白質およびマトリックス蛋白質における差異により区別できる。タイプＡは最も普遍的な菌株でありそして大規模な人間流行の原因となる。三価ワクチン中の各菌株のＨＡ含有量は典型的には１回人間服用量に関して１５μｇに、すなわち４５μｇの合計ＨＡに、設定される。
【００８９】
ここで詳細に論じられるように、独特な予備−調合方法により、インフルエンザワクチンの人間服用量の全部、すなわち４５μｇのヘマググルチニン、を皮膚の最も免疫−反応性のある成分であるＡＰＣが豊富な表皮層に、コーティングされた微細突起列を介して、経皮的にデリバリーすることができ、ここでインフルエンザワクチンの少なくとも７０％は言及した表皮層にデリバリーされる。さらに重要なことに、抗原は皮膚内で免疫原性を保有して強い抗体および血清−保護免疫応答を引き出す。さらに、乾燥したコーティングされたワクチン調合物は実質的に防腐作用物質を含まずそして少なくとも６ヶ月間の室温安定性を維持しうる。
【００９０】
次に図２を参照すると、本発明での使用のための微細突起部品３０の１つの態様が示される。図２で説明されるように、微細突起部品３０は複数の微細突起３４を有する微細突起列３２を包含する。微細突起３４は好ましくはシート３６から実質的に９０°の角度で伸び、それは言及した態様では開口部３８を含む。
【００９１】
本発明によると、シート３６をシート３６用の裏打ち４０を包含するデリバリーパッチの中に加えることができ、そしてさらにパッチを皮膚に付着するための接着作用物質片（示されていない）を包含しうる（図４参照）。この態様では、微細突起３４は複数の微細突起３４を薄い金属シート３６から侵食または穿孔しそして微細突起３４をシート３６の面から曲げることにより形成される。
【００９２】
本発明の１つの態様では、微細突起部品３０は少なくとも１０個の微細突起／ｃｍ２、より好ましくは、少なくとも約２００−３０００個の微細突起／ｃｍ２の範囲内、の微細突起密度を有する。好ましくは、単位面積当りのそこを通って作用物質が通過する開口部の数は少なくとも約１０個の開口部／ｃｍ２であり且つ約３０００個の開口部／ｃｍ２より少ない。
【００９３】
示されるように、微細突起３４は好ましくは１０００ミクロンより短い突起長さを有する。１つの態様では、微細突起３４は５００ミクロンより短い、より好ましくは、２５０ミクロンより短い、突起長さを有する。
【００９４】
出血および刺激を最少にするために適合される別の態様では、微細突起は好ましくは１４５ミクロンより短い突起長さ、より好ましくは、約５０−１４５ミクロンの範囲内、そしてさらにより好ましくは、約７０−１４０ミクロンの範囲内、の突起長さを有する。
【００９５】
微細突起３４は好ましくは約２５−５００ミクロンの範囲内の図２に「Ｗ」で表示された幅および約１０−１００ミクロンの範囲内の厚さも有する。
【００９６】
次に図５を参照すると、発明の範囲内で使用できる微細突起部品５０の別の態様が示される。微細突起部品５０は同様に複数の微細突起５４を有する微細突起列５２を包含する。微細突起５４は好ましくはシート５１から実質的に９０°の角度で伸び、これも同様に開口部５６を含む。
【００９７】
図５に示されるように、数個の微細突起５４は案内端部近くに配置された保持部品または固定具５８を包含する。以上で示されたように、保持部品５８は患者の皮膚に対する微細突起部品５０の付着を強める。
【００９８】
微細突起部品（例えば、３０、５０）は種々の金属、例えばステンレス鋼、チタン、ニッケルチタン合金、または同様な生体適合性材料、例えば重合体材料、から製作することができる。好ましくは、微細突起部品はチタンから製作される。
【００９９】
本発明によると、微細突起部品を非−伝導性材料、例えば重合体、から構成することもできる。或いは、微細突起部品に非−伝導性材料、例えばパリレン（Ｐａｒｙｌｅｎｅ）（Ｒ）、または疎水性材料、例えばテフロン（Ｔｅｆｌｏｎ）（Ｒ）、珪素もしくは他の低エネルギー材料、でコーティングすることができる。記載された疎水性材料および付随するベース（例えば、耐光性（ｐｈｏｔｏｒｅｓｉｓｔ））層は引用することにより本発明の内容となる米国特許出願第６０／４８４，１４２号明細書に示されている。
【０１００】
本発明で使用できる微細突起部品は引用することにより本発明の内容となる米国特許第６，０８３，１９６号、第６，０５０，９８８号および第６，０９１，９７５号明細書並びに米国特許出願公開第２００２／００１６５６２号明細書に開示されている部品を包含するが、それらに限定されない。
【０１０１】
本発明で使用できる他の微細突起部品は、珪素チップ侵食技術を使用して珪素を侵食す
ることによりまたは侵食された微細型を用いてプラスチックを成型することにより形成された部品、例えば引用することにより本発明の内容となる米国特許第５，８７９，３２６号明細書に開示された部品、を包含する。
【０１０２】
次に図３を参照すると、生体適合性コーティング３５でコーティングされた微細突起３４を有する微細突起部品３０が示される。本発明によると、コーティング３５は各微細突起３４を部分的にまたは完全に被覆しうる。例えば、コーティング３５は微細突起３４上のドライパターンコーティングでありうる。コーティング３５は微細突起３４が形成される前または後に適用することもできる。
【０１０３】
本発明によると、コーティング３５を微細突起３４に種々の既知の方法により適用することができる。好ましくは、皮膚を貫通する微細突起部品３０または微細突起３４の部分（例えば、先端３９）だけにコーティングを適用する。
【０１０４】
１つのそのようなコーティング方法は浸漬−コーティングを含んでなる。浸漬−コーティングは微細突起３４をコーティング溶液中に部分的にまたは完全に浸漬することにより微細突起をコーティングするための手段として記載することができる。部分的な浸漬技術の使用により、コーティング３５を微細突起３４の先端３９だけに制限することが可能である。
【０１０５】
別のコーティング方法はローラーコーティングを含んでなり、それは同様にコーティング３５を微細突起３４の先端３９だけに制限するローラーコーティング機構を使用する。ローラーコーティング方法は引用することにより本発明の内容となる米国特許出願第１０／０９９，６０４号（出願公開第２００２／０１３２０５４号）に開示されている。言及した出願で詳細に論じられるように、開示されたローラーコーティング方法は皮膚貫通中に微細突起３４から容易に除去されない滑らかなコーティングを与える。
【０１０６】
本発明によると、微細突起３４はコーティング３５の容量を受けおよび／または増強させるように適合された手段、例えば開口部（示されていない）、溝（示されていない）、表面の不規則性（示されていない）または同様な変更、をさらに包含することができ、ここでこれらの手段はより大量のコーティングを沈着させうる増加した表面積を与える。
【０１０７】
本発明の範囲内で使用できる別のコーティング方法は噴霧コーティングを含んでなる。本発明によると、噴霧コーティングはコーティング組成物のエーロゾル懸濁液の生成を包括しうる。１つの態様では、約１０〜２００ピコリットルの小滴寸法を有するエーロゾル懸濁液を微細突起１０の上に噴霧しそして次に乾燥する。
【０１０８】
パターンコーティングを使用して微細突起３４をコーティングすることもできる。パターンコーティングは沈着した液体を微細突起表面上に置くための分配システムを用いて適用できる。沈着する液体の量は好ましくは０．１〜２０ナノリットル／微細突起の範囲内である。適する正確に計量された液体分配器の例は引用することにより本発明の内容となる米国特許第５，９１６，５２４号、第５，７４３，９６０号、第５，７４１，５５４号、および第５，７３８，７２８号明細書に開示されている。
【０１０９】
微細突起コーティング調合物または溶液を既知のソレノイド弁分配器、場合により流体運動手段および電場の使用により一般的に調節される配置手段を使用するインキジェット技術を用いて適用することもできる。本発明のパターンコーティングを適用するために印刷産業からの他の液体分配技術または当該技術で既知である同様な液体分配技術を使用することができる。
【０１１０】
次に図６および７を参照すると、貯蔵および適用のために、引用することにより本発明の内容となる現在出願継続中の米国特許出願第０９／９７６，７６２号（出願公開第２００２／００９１３５７号）明細書に記載されているように、微細突起部品３０を好ましくは保持環４０の中に接着作用物質タブ６により懸垂する。
【０１１１】
保持環４０中への微細突起部品３０の配置後に、微細突起部品３０を患者の皮膚に適用する。好ましくは、微細突起部品３０を皮膚に衝撃アプリケーター、例えば図８に示されそして引用することにより本発明の内容となる現在出願継続中の米国特許出願第０９／９７６，７９８号明細書に記載されているもの、を用いて適用する。
【０１１２】
示されるように、本発明の好ましい態様では、微細突起部品３０に適用されて固体コーティングを形成するコーティング調合物は水性調合物を含んでなる。別の態様では、コーティング調合物は非−水性調合物を含んでなる。本発明によると、免疫学的に活性な作用物質を生体適合性担体内に溶解させるかまたは担体内に懸濁させることができる。
【０１１３】
示されるように、本発明の好ましい態様では、免疫学的に活性な作用物質はインフルエンザワクチンを含んでなる。より好ましくは、三価インフルエンザワクチン。
【０１１４】
本発明の別の態様では、免疫学的に活性な作用物質はウイルス類および細菌、蛋白質をベースとしたワクチン、多糖をベースとしたワクチン、および核酸をベースとしたワクチンよりなる群から選択されるワクチン（または抗原作用物質）を含んでなる。
【０１１５】
適する抗原作用物質は蛋白質、複合多糖類、オリゴ糖類、およびリポ蛋白質の形態の抗原を包含するが、それらに限定されない。これらのサブユニットワクチンは百日咳菌（組み換え体ＰＴワクチン−非細胞）、破傷風菌（精製済み、組み換え体）、ジフテリア菌（精製済み、組み換え体）、サイトメガロウイルス類（糖蛋白質サブユニット）、群Ａ連鎖球菌（糖蛋白質サブユニット、破傷風トキソイドを有する複合糖質群Ａ多糖、毒素サブユニット担体に結合されたＭ蛋白質／ペプチド類、Ｍ蛋白質、多価タイプ−特異的エピトープ類、システイン・プロテアーゼ、Ｃ５ａペプチダーゼ）、Ｂ型肝炎ウイルス（組み換え体ＰｒｅＳ１、Ｐｒｅ−Ｓ２、Ｓ、組み換え体芯蛋白質）、Ｃ型肝炎ウイルス（組み換え体−発現された表面蛋白質およびエピトープ類）、ヒト・乳頭腫ウイルス（カプシド蛋白質、ＴＡ−ＧＮ組み換え体蛋白質Ｌ２およびＥ７［ＨＰＶ−６から］、ＨＰＶ−１１からのＭＥＤＩ−５０１組み換え体ＶＬＰＬ１、四価組み換え体ＢＬＰＬ１［ＨＰＶ−６から］、ＨＰＶ−１１、ＨＰＶ−１６、およびＨＰＶ−１８、ＬＡＭＰ−Ｅ７［ＨＰＶ−１６から］）、レジオネラ・ニューモフィラ（精製された細菌表面蛋白質）、髄膜炎菌（破傷風トキソイドとの複合糖質）、緑膿菌（合成ペプチド類）、風疹ウイルス（合成ペプチド）、肺炎連鎖球菌（髄膜炎菌Ｂ  ＯＭＰに結合された複合糖質［１、４、５、６Ｂ、９Ｎ、１４、１８Ｃ、１９Ｖ、２３Ｆ］、ＣＲＭ１９７に結合された複合糖質［４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆ］、ＣＲＭ１９７０に結合された結合された複合糖質［１、４、５、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆ］、梅毒トレポネーマ（表面リポ蛋白質）、水痘帯状ヘルペスウイルス（サブユニット、糖蛋白質）、およびコレラ菌（複合リポ多糖）を包含するが、それらに限定されない。
【０１１６】
全てのウイルス類または細菌類は弱化したまたは死滅したウイルス類、例えばサイトメガロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ヒト・乳頭腫ウイルス、風疹ウイルスおよび水痘帯状ヘルペスウイルス、弱化したまたは死滅した細菌類、例えば百日咳菌、破傷風菌、ジフテリア菌、群Ａ連鎖球菌、レジオネラ・ニューモフィラ、髄膜炎菌、緑膿菌、肺炎連鎖球菌、梅毒トレボネーマ、およびコレラ菌、並びにそれらの混合物を包含するが、それらに限定されない。
【０１１７】
抗原作用物質を含有する他の市販ワクチンは流感ワクチン、ライム病ワクチン、狂犬病ワクチン、麻疹ワクチン、流行性耳下腺炎、水痘ワクチン、天然痘ワクチン、肝炎ワクチン、百日咳ワクチン、およびジフテリアワクチンを包含するが、それらに限定されない。
【０１１８】
核酸類を含んでなるワクチンは一本鎖および二本鎖核酸類、例えば超コイルプラスミドＤＮＡ、線状プラスミドＤＮＡ、コスミド類、細菌人工染色体（ＢＡＣ類）、酵母人工染色体（ＹＡＣ類）、哺乳動物人工染色体、並びにＲＮＡ分子、例えばｍＲＮＡ、を包含するが、それらに限定されない。核酸の寸法は数千キロ塩基まででありうる。さらに、本発明のある態様では、核酸を蛋白質性の作用物質と結合させることもできまたは１種もしくはそれ以上の化学的変更、例えば、ホスホロチオエート部分、を包含しうる。核酸のコードする配列はそれに対して免疫応答が所望される抗原の配列を含んでなる。さらに、ＤＮＡの場合には、プロモーターおよびポリアデニル化配列もワクチン構造に導入される。コードされうる抗原は感染性疾病の全ての抗原成分、病原体、並びに癌抗原を包含する。それ故、核酸は感染性疾病、癌、アレルギー、自己免疫、および炎症性疾病の分野において用途を見出す。
【０１１９】
ワクチン抗原と一緒になってワクチンを構成しうる適当な免疫応答強化アジュバントは燐酸アルミニウムゲル、水酸化アルミニウム、アルファグルカン、β−グルカン、コレラ毒素Ｂサブユニット、ＣＲＬ１００５、ｘ＝８およびｙ＝２０５の平均値を有するＡＢＡブロック重合体、ガンマイヌリン、線状（非分枝鎖状）β−Ｄ（２→１）ポリフルクトフラノキシル−α−Ｄ−グルコース、ゲルブアジュバント、Ｎ−アセチルグルコサミン−（β１−４）−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−グルタミン（ＧＭＤＰ）、ジメチルジオクタデシルアンモニウムクロリド（ＤＤＡ）、亜鉛Ｌ−プロリン塩錯体（Ｚｎ−Ｐｒｏ−８）、イミキモド（１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン、ＩｍｍＴｈｅｒＴＭ、ジパルミチン酸Ｎ−アセチルグルコアミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−イソＧｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−グリセロール、ＭＴＰ−ＰＥリポソーム類、Ｃ５９Ｈ１０８Ｎ６Ｏ１９ＰＮａ−３Ｈ２Ｏ（ＭＴＰ）、ムラメチド、Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−Ｇｌｎ−ＯＣＨ３、プレウラン、ＱＳ−２１；Ｓ−２８４６３、４−アミノ−ａ，ａ−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール、サルボペプチド、ＶＱＧＥＥＳＮＤＫ・ＨＣｌ（ＩＬ−１β
１６３−１７１ペプチド）、およびスレオニル−ＭＤＰ（ＴｅｒｍｕｒｔｉｄｅＴＭ）、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン、並びにインターロイキン１８、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５を包含するが、それらに限定されない。アジュバントはＤＮＡオリゴヌクレオチド類、例えばＣｐＧ含有オリゴヌクレオチド類、も包含する。さらに、免疫−調節リンホカイン類例えばＩＬ−１８、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−４、ＩＬ−１０をコードする核酸配列、ガンマインターフェロン、およびＮＦカッパＢ調節信号化蛋白質を使用することもできる。
【０１２０】
本発明によると、コーティング調合物は少なくとも１種の湿潤作用物質を包含しうる。適する湿潤作用物質は界面活性作用物質および両親媒性を示す重合体を包含する。
【０１２１】
それ故、本発明の１つの態様では、コーティング調合物は少なくとも１種の界面活性作用物質を包含する。本発明によると、１種もしくは複数の界面活性作用物質は双性イオン性、両性イオン性、カチオン性、アニオン性、または非イオン性でありうる。適する界面活性作用物質の例はラウロアンフォ酢酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、セチルピリジニウムクロリド（ＣＰＣ）、ドデシルトリメチルアンモニウムクロリド（ＴＭＡＣ）、ベンズアルコニウム、クロリド、ポリソルベート類、例えばツイーン２０およびツイーン８０、他のソルビタン誘導体、例えばラウリン酸ソルビタン、およびアルコキシル化されたアルコール類、例えばラウレス−４でありうる。最も好ましい界面活性作用物質はツイーン２０、ツイーン８０、およびＳＤＳを包含する。
【０１２２】
本発明の別の態様では、コーティング調合物は少なくとも１種の重合体材料または両親媒性質を有する少なくとも１種の重合体を包含する。言及した重合体の例はセルロース誘導体、例えばヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、メチルセルロース（ＭＣ）、ヒドロキシエチルメチルセルロース（ＨＥＭＣ）、またはエチルヒドロキシ−エチルセルロース（ＥＨＥＣ）、並びにプルロニック類を包含するが、それらに限定されない。
【０１２３】
本発明の１つの態様では、両親媒性質を示す重合体の濃度はコーティング調合物の好ましくは約０．０１−２０重量％の範囲内、より好ましくは、約０．０３−１０重量％の範囲内である。さらにより好ましくは、湿潤財の濃度はコーティング調合物の約０．１−５重量％の範囲内である。
【０１２４】
当業者に認識されるように、言及した湿潤作用物質は別個にまたは組み合わせて使用することができる。
【０１２５】
本発明によると、コーティング調合物は親水性重合体をさらに含んでなりうる。好ましくは、親水性重合体は下記の群：デキストラン類、ヒドロキシエチル澱粉（ＨＥＳ）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（ｎ−ビニルピロリドン）、ポリエチレングリコールおよびそれらの混合物、並びに同様な重合体から選択される。当該技術で既知であるように、言及した重合体は粘度を増加させる。
【０１２６】
コーティング調合物中の親水性重合体の濃度はコーティング調合物の約０．０１−５０重量％の範囲内、より好ましくは、約０．０３−３０重量％の範囲内、である。さらにより好ましくは、湿潤作用物質の濃度はコーティング調合物の約０．１−２０重量％の範囲内である。
【０１２７】
本発明によると、コーティング調合物は生体適合性担体、例えば引用することにより本発明の内容となる現在出願継続中の米国特許出願第１０／１２７，１０８号明細書に開示されたもの、をさらに包含しうる。生体適合性担体の例はヒト・アルブミン、生物工学処理されたヒト・アルブミン、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、ポリヒスチジン、ペントサンポリ硫酸塩、ポリアミノ酸類、スクロース、トレハロース、メレジトース、ラフィノースおよびスタキオースを包含する。
【０１２８】
コーティング調合物中の生体適合性担体の濃度はコーティング調合物の好ましくは約２−７０重量％の範囲内、より好ましくは、約５−５０重量％の範囲内、である。さらにより好ましくは、湿潤作用物質の濃度はコーティング調合物の約１０−４０重量％の範囲内である。
【０１２９】
コーティング調合物は血管収縮作用物質、例えば引用することにより本発明の内容となる現在出願継続中の米国特許出願第１０／６７４，６２６号明細書に開示されたもの、をさらに包含しうる。言及した現在出願継続中の出願に示されているように、血管収縮作用物質を使用して微細突起部品上への適用中および後の出血を調節する。好ましい血管収縮作用物質はアミデフリン、カファミノール、シクロペンタミン、デオキシエピネフリン、エピネフリン、フェリプレッシン、インダナゾリン、メチゾリン、ミドドリン、ナファゾリン、ノルデフリン、オクトドリン、オルニプレッシン、オキシメタゾリン、フェルエフリン、フェニルエタノールアミン、フェニルプロパノールアミン、プロピルヘキセドリン、プソイドエフェドリン、テトラヒドロゾリン、トラマゾリン、ツアミノヘプタン、チマゾリン、バソプレッシン、キシロメタゾリンおよびそれらの混合物を包含するが、それらに限定されない。最も好ましい血管収縮作用物質はエピネフリン、ナファゾリン、テトラヒドロゾリン、インダナゾリン、メチゾリン、トラマゾリン、チマゾリン、オキシメタゾリンおよびキシロメタゾリンを包含する。
【０１３０】
使用される場合には、血管収縮作用物質の濃度は好ましくはコーティングの約０．１重量％〜１０重量％の範囲内である。
【０１３１】
本発明のさらに別の態様では、コーティング調合物は少なくとも１種の「経路開通性調節作用物質」、例えば引用することにより本発明の内容となる現在出願継続中の米国特許出願第０９／９５０，４３６号明細書に開示されたもの、をさらに包含しうる。言及した現在出願継続中の出願に示されているように、経路開通性調節作用物質は皮膚の自然治癒工程を妨害または減少圧せ、それにより微細突起列により角質内で形成された経路または微細スリットの閉鎖を防ぐ。経路開通性調節作用物質の例は浸透作用物質（例えば、塩化ナトリウム）、および双性イオン性化合物（例えば、アミノ酸類）を包含するが、それらに限定されない。
【０１３２】
現在出願継続中の出願で定義された用語「経路開通性調節作用物質」は抗−炎症作用物質、例えばベンタメタソン２１−ホスフェート二ナトリウム塩、トリアミシノロンアセトニド２１−二ナトリウムホスフェート、ヒドロコルタメート塩酸塩、ヒドロコルチソン２１−ホスフェート二ナトリウム塩、メチルプレドニソロン２１−ホスフェート二ナトリウム塩、メチルプレドニソロン２１−スクシネートナトリウム塩、パラメタソン二ナトリウムホスフェートおよびプレドニソロン２１−スクシネートナトリウム塩、並びに抗凝固作用物質、例えばクエン酸、クエン酸塩（例えば、クエン酸ナトリウム）、デキストリンサルフェートナトリウム、アスピリンおよびＥＤＴＡをさらに包含する。
【０１３３】
本発明によると、コーティング調合物は非−水性溶媒、例えばエタノール、クロロホルム、エーテル、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど、染料、顔料、不活性充填作用物質、浸透促進作用物質、賦形作用物質、および当該技術で既知である製薬学的製品または経皮装置の他の従来化合物も包含しうる。
【０１３４】
他の既知の調合アジュバントを、それらがコーティング調合物の必要な溶解度および粘度並びに乾燥したコーティングの物理的一体性に悪影響を与えない限り、コーティング調合物に加えることもできる。
【０１３５】
好ましくは、各微細突起１０を効果的にコーティングするためにはコーティング調合物は約５より小さい粘度を有する。より好ましくは、コーティング調合物は約０．３−２．０ポイズの範囲内の粘度を有する。
【０１３６】
本発明によると、コーティング厚さは好ましくは１００ミクロンより薄く、より好ましくは５０ミクロンより薄い。さらにより好ましくは、コーティング厚さは約２−３０ミクロンの範囲内である。
【０１３７】
所望するコーティング厚さは、必要な服用量そしてその結果としての服用量をデリバリーするのに必要なコーティング厚さ、単位面積のシート当たりの微細突起の密度、コーティング調合物の粘度および組成並びに選択されるコーティング方法を包含する数種の因子に依存する。
【０１３８】
全ての場合に、コーティングが適用された後に、コーティング調合物を種々の手段により微細突起上で乾燥することができる。本発明の１つの態様では、コーティングされた微細突起部品（例えば、３０）を周囲室内条件で空気−乾燥する。別の態様では、コーティ
ングされた微細突起部品を真空−乾燥する。さらに別の態様では、コーティングされた微細突起部品を空気−乾燥しそしてその後に真空−乾燥する。
【０１３９】
種々の温度および湿度レベルを使用してコーティング調合物を微細突起上で乾燥することもできる。それ故、コーティングされた微細突起部品３０を加熱し、凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ）し、凍結乾燥し（ｆｒｅｅｚｅｄｒｉｅｄ）または同様な技術にかけて水をコーティングから除去することができる。
【実施例】
【０１４０】
試験／実施例
以下の試験および実施例は、本発明の装置、調合物、方法および工程を説明する。実施例は説明目的だけのためでありそして本発明の範囲をいずれかの方法で限定することを意味しない。
【０１４１】
最初に表１に言及すると、以下に示される試験において得られそして使用された一価菌株（すなわち、ロット）のまとめが示される：
【０１４２】
【表１】
2007530680.tif 000003
【０１４３】
予備−調合方法
得られた最初のバルクワクチンは４００μｇのＨＡ／ｍＬでの一価Ａ／パナマ／２００７／９９菌株（フルゾン（Ｆｌｕｚｏｎｅ）（Ｒ））であった。溶液は受容時に濁っており、恐らく水−不溶性脂質、脂質−蛋白質複合体、および集合した蛋白質による不溶性粒子の存在を示唆する。一価のＢＣＡ分析並びに透析は、塩および他の低分子量物質が固体含有量の大部分を占めることを示した。服用量条件を満たすためにコーティングのＨＡ含有量を増すために、これらの低分子量成分類を除去しなければならなかった。ディアフィルトレーション（ｄｉａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）／濃縮方法はこのようにして開発されてこの論点を処理した。
【０１４４】
次に図９を参照すると、使用された予備−調合方法の工程表が示される。工程表に示された段階を以下で論ずる。
【０１４５】
接線−流濾過（ＴＦＦ）
当該技術で既知であるように、ＴＦＦはディアフィルトレーションおよび濃縮を同時に行うことを可能にする。ディアフィルトレーションを使用して低分子量物質を除去した。再生セルロース膜であるペリコン（Ｐｅｌｌｉｃｏｎ）ＸＬ（ミリポア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、５０ｃｍ２、３０ｋＤ  ＭＷＣＯ）を装着したＴＦＦシステム（ミリポア、ラブスケール（Ｌａｂｓｃａｌｅ））を設置しそしてワクチン原料物質のディアフィルトレーションおよび濃縮に関して評価した。ワクチン溶液の容量は元の容量の１／２０倍−１／５０倍に減じられ、ＨＡ濃度を５−１０ｍｇのＨＡＡ／ｍＬに高めた。緩衝溶液を緩衝液交換および濃縮用に加えた。
【０１４６】
凍結乾燥
接線−流濾過後に、濃縮されたワクチンを２０ｍＬガラス瓶内に充填された分散保護性（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ）賦形作用物質、例えばスクロースまたはトレハロース、と共に調合し、液体窒素でフラッシュ凍結しそして多岐−スタイル凍結乾燥機（ビルチス（Ｖｉｒｔｉｓ）、２５ＥＬフリーズモビル（Ｆｒｅｅｚｅｍｏｂｉｌｅ）の上に置いた。室圧力が一定状態（〜５０ｍトル）に達すまで瓶を２−５日間にわたり凍結乾燥させた。
【０１４７】
記載された予備−調合方法は、高度に濃縮されそして固体状態のヘマググルチニン（ＨＡ）調合物を中間生成物として与えた。実際に、ＨＡ調合物の濃度は市販製品の濃度の少なくとも５００倍であった。記載された中間生成物も高度に有効であり且つ免疫原性であった。
【０１４８】
当業者により認識されるように、種々のワクチン源物質およびそれらの形態を予備−調合するために本発明の記載された調合方法を改変しそして応用することができる。例えば、この方法を応用して比較的高濃度で受容された原料物質を使用することができる。この場合には、ディアフィルトレーションは必要なくそして高濃度原料物質を直接凍結乾燥しそして再構成してコーティング調合物を製造するであろう。
【０１４９】
予備−調合方法を応用して例えば凍結乾燥されたまたは噴霧乾燥された粉末の如きものであるがそれらに限定されない固体として受容される原料物質を使用することもできる。この場合には、固体原料物質を直接再構成してコーティング溶液調合物を製造するであろう。
【０１５０】
例えば細胞由来インフルエンザワクチンの如きものであるがそれらに限定されない高純度原料物質を用いる用途のためにこの予備−調合方法を改変することもできる。この場合には、物質は凍結乾燥および再構成段階が必要ない充分な純度でありうる。
【０１５１】
調合開発
調合努力を適切なコーティング性質および安定性を有するコーティング調合物を開発するために向けて、再現可能なコーティング服用量を信頼のいくように製造することができるコーティングシステムを定めそして良好なデリバリー効率および許容可能な皮膚耐性を有するワクチンをデリバリーできる列デザインを確認した。
【０１５２】
コーティング方法
２つのタイプのコーターを試験で使用した。第一のコーターにデルリン（Ｄｅｌｒｉｎ）製の０．３８”直径ドラムを装着した。ドラムを０．２５−ｍＬの充填容量を有する受器の中に沈めた。この受器は冷却能力を有していないが、操作中の蒸発を相殺するために淡水の直接注入を可能にする。ドラム上に定着されたフィルムの厚さは〜２００−２５０μｍである。
【０１５３】
評価される第二のコーターに０．６２１”直径ステンレス鋼ドラムおよび同心受器を装着した。このコーター用の受器は、ドラムの直径によって、０．３−０．７ｍＬの充填容量を有する。ドラム直径はフィルムの厚さも支配し、それは０．６２１”ドラムに関しては〜８０−９０μｍである。このコーターの受器に熱−電気冷却（ＴＥＣ）を装着する。周囲条件の露点におけるドラム温度を調節することにより、コーティング溶液の濃度における変動を最小にすることができる。コーティング高さは微細突起長さと列片厚さの合計により決められた。
【０１５４】
微細突起列デザイン
８つの微細突起列を調合物開発において使用した。微細突起列デザインは、微細突起長さ、先端角度、並びに追加デザイン特徴、例えば保持棒、および／または微細突起停止具、の存在において変動した。２種の微細突起列デザインであるＭＦ−１およびＭＦ−２を最初に評価した。
【０１５５】
賦形作用物質
微細突起を懸濁液、すなわち、透明でないコーティング溶液、を用いてコーティングできるかどうかを評価するために、界面活性作用物質の添加による不溶性粒子の安定化に対して最初の焦点を当てた。
【０１５６】
次に表ＩＩを参照すると、溶液濁度の減少における界面活性作用物質の影響が示される。記載されたデータは、界面活性作用物質の添加が溶液濁度の減少により測定される粒子の崩壊／溶解を助けうることを示唆する。界面活性作用物質強度の順番はＳＤＳ＞トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）Ｘ１００＞ツイーン２０であり、これは同一界面活性作用物質の存在下における溶液透明度と一致する（表ＩＩＩ参照）。
【０１５７】
【表２】
2007530680.tif 000004
【０１５８】
【表３】
2007530680.tif 000005
【０１５９】
別の有効な種類の界面活性作用物質であるツヴィッテルジェント（Ｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ）も蛋白質／脂質をベースとした集合体を破壊しうる。表ＩＶは、ツヴィッテルジェントの疎水性が増加するにつれてその溶解力が増加する３種のタイプのツヴィッテルジェントを挙げており、すなわち、ツヴィッテルジェント３−１４が最も強い。
【０１６０】
【表４】
2007530680.tif 000006
【０１６１】
図１０に示されるように、ｐＨの調節が高いおよび低いｐＨにおいてワクチンの濁度を減ずることも示された。しかしながら、ｐＨにおける大きな増減は高濃度における抗原の安定性を危うくすることがある。従って、溶液濁度を除くためにはｐＨ７．２からの有意な逸脱は使用されなかった。
【０１６２】
溶解または懸濁させたコーティング溶液の製造戦略と共に、ワクチンをコーティング用に要求されるレベルに濃縮可能にする予備−調合方法を用いて、７種の候補調合物をさらに検討した。表Ｖに示されている調合物は少なくとも１種もしくはそれ以上の賦形作用物質を含有する。
【０１６３】
【表５】
2007530680.tif 000007
【０１６４】
調合物１−４は溶解した溶液であった。調合物５−７は懸濁液／濁った溶液であった。全ての調合物は蛋白質を安定化させるために少なくとも糖を含有した。調合物５は、ワクチンの増加した溶解および多分増加した免疫原性を与えうることが信じられていた弱い界面活性作用物質であるツイーン８０を含有した。スクロースだけを含有する調合物６は全ての評価した調合物の中で最も簡単な調合物であった。調合物７は、マンニトールおよびコーティングの吸湿性を減少させそしてコーティング一体性／物理的安定性を増加させうることが信じられていた固体界面活性作用物質であるプルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｆ６８を包含していた。
【０１６５】
コーティング溶液／懸濁液特性
当該技術で良く認識されているように、２つの物理的パラメーターであるコーティング溶液の粘度および湿潤性がコーティング実行可能性を主として支配する。記載されたパラメーターの各々を以下で論ずる。
【０１６６】
粘度
溶液粘度は微細突起コーティング中のコーティング溶液の流れに影響する。コーティン
グ溶液粘度が低すぎる場合には、液体が微細突起の先端の周囲でフィルムを形成する機会を有する前に沈められた微細突起列がコーティング溶液から除去される時に液体の有意な部分が受器内に逆に滴下されうる。これは、コーティングの多くのさらなるサイクルを必要とするあまり効果的でない方法となろう。
【０１６７】
他方で、コーティング溶液粘度が高すぎる場合には、微細突起列上の液体が非常にゆっくり移動しそして異常なコーティング形態をもたらしうる。表ＶＩは固体状態の７種の候補調合物の組成物をまとめる。全ての７種のコーティング溶液調合物は２−フェノキシエタノールを６ｍｇ／ｍＬで防腐作用物質として含有した。コーティング溶液中のＨＡ含有量はこの場合には〜３０％であり、ここでＨＡ純度は５０％である。
【０１６８】
【表６】
2007530680.tif 000008
【０１６９】
次に図１１を参照すると、２種のロットのワクチンであるフルゾン（Ｆｌｕｚｏｎｅ）（Ｒ）およびバキシグリップ（Ｖａｘｉｇｒｉｐ）ＴＭを比較するグラフが示される。両方のロットはＡ／パナマ菌株を含んでなりそして調合物番号５（ＨＡ：トレハロース：ツイーン８０＝５：５：２重量比）に調合された。
【０１７０】
コーティング調合物は通常は５０ｍｇ／ｍＬ（５％）のＨＡであった。しかしながら、この濃度では、バキシグリップＴＭに関する溶液粘度ははるかにより高く、すなわち、２００ｒｐｍにおいて〜０．８ポイズであった。
【０１７１】
図１１で説明されているように、調合物の粘度は希釈で減少する。３５ｍｇ／ｍＬのＨＡ（３．５％）において、バキシグリップＴＭ調合物の溶液粘度は２００ｒｐｍにおいて〜０．４ポイズと測定された５０ｍｇ／ｍＬのＨＡ（５％）におけるフルゾン（Ｒ）調合物と同じレベルに達した。
【０１７２】
ＨＡ純度およびＨＡ濃度以外に、コーティング溶液の温度が粘度に影響する他の重要な因子である。凍結乾燥されたワクチンを２２．５ｍｇ／ｍＬのＨＡ（２．２５％ＨＡ／２．２５スクロースを有する改変された調合物番号６）に再構成することにより、１５％ＨＡ純度を有するＡ／ニューカレドニア菌株を含んでなる高度に粘着性のコーティング溶液がこのようにして製造された。このコーティング溶液の粘度を室温より低い数種の温度において測定した（図１２参照）。溶液は高度に粘着性であり、すなわち、５℃において〜１．７０ｃｐであった。
【０１７３】
当該技術で既知であるように、コーティング工程中の蒸発による水損失を最少にする目
的のためにステンレス鋼溶液受器およびドラムが周囲環境の露点において調節されるため、温度はコーティングシステムにおける重要なパラメーターである。通常の周囲条件（２２℃および３０−４５％ＲＨ）下での露点は典型的には４−１０℃の範囲内である。
【０１７４】
溶液粘度は有意に変動しうるが、コーティング溶液は微細突起列の上に広範囲の粘度にわたり、好ましくは約０．３−２．０ポイズの範囲内で、容易に且つ効率的にコーティングされうることが見出された。
【０１７５】
湿潤性：接触角度
当該技術で既知であるように、コーティングしようとする表面上に接触し、付着し、そして延展する液体の能力を湿潤性が決める。表面湿潤性を同定するためには基質上における液体小滴の接触角度測定が一般的に使用される。測定された接触角度を同じ条件下での接触角度が〜７０−８０°である純水と対比する。一般的に、接触角度が小さければ小さいほど、湿潤性は良い。
【０１７６】
次に表ＶＩＩを参照すると、清浄化されなかった金属チタン表面上における表Ｖで同定された７種のインフルエンザワクチンの接触角度が示される。純水と比べて、全ての調合物は２６°から３６°にわたる範囲の接触角度で良好な湿潤性を示した。非常に異なる調合物の接触角度のこの狭い範囲は、湿潤性に対するワクチンの寄与は賦形作用物質からの寄与に優ることを示唆する。この仮説を立証するために、ワクチンの不存在下における同一調合物の接触角度を測定した。結果は、ワクチン中の成分が金属表面の湿潤を助けるようであることを示唆する。ワクチンなしでは、これらの賦形作用物質は、有力な界面活性作用物質を除いて、金属表面を効果的に湿潤することは可能でなかった。
【０１７７】
【表７】
2007530680.tif 000009
【０１７８】
全体として、コーティング溶液は強い湿潤性質を示し、それらはコーティングされた表面により最小限に影響を受け、そして接触角度が最適な接触角度範囲の低端部にあるにもかかわらず優れたコーティング性質を示した。最適な接触角度は約３０−６０°の範囲内であると思われ、それは他の生物製作用物質およびプラセーボ調合物から制定された。
【０１７９】
免疫原性試験に関する候補選択
免疫原性試験に関する最終的調合物の選択は抗原安定性およびデリバリー性能に基づいた。
【０１８０】
三価調合物
表１に戻って参照すると、各ロットのＨＡ純度が測定された。ＨＡ純度は１６％から５０％の範囲にわたった。認識された経験的関係に基づくと、ＨＡ純度が所望する５０％から２０％に減少する場合にはコーティング溶液のＨＡ含有量は〜３０％から１１％に劇的に減少する。そのようなＨＡ純度変動にもかかわらず、これらの物質は全て成功裡に処理され、予備−調合方法の豊富さを示唆する。
【０１８１】
２つの方式を、一価菌株であるＡ／パナマ／フルゾン（Ｒ）、Ａ／ニューカレドニア／フルゾン（Ｒ）およびＢ／ビクトリア／フルゾン（Ｒ）からの三価流感ワクチンの製造に関して評価した。第一の方式では、３種の一価菌株出発物質であるＡ／パナマ／フルゾン（Ｒ）、Ａ／ニューカレドニア／フルゾン（Ｒ）およびＢ／ビクトリア／フルゾン（Ｒ）を別個に処理して３種の凍結乾燥された一価中間体を与えた。等しいＨＡ量の３種の中間体の各々からの凍結乾燥された物質を一緒にしそしてコーティング用の水を用いて再構成した。
【０１８２】
第二の方式は、等しいＨＡ量の、すなわち、異なる容量の、３種の中間体を混合することにより、行われた。三価混合物を次にＴＴＦシステムによりディアフィルトレーションしそして濃縮し、そして凍結乾燥した。第二の方式からのコーティング溶液は第一の方式からのものと同じコーティング性質を有していた。
【０１８３】
三価調合物（２４ｍｇ／ｍｌのＨＡ、すなわちＨＡ菌株当たり〜８ｍｇ／ｍｌ）のコーティングは使用した微細突起列デザインにかかわらず同様な位置に先端−コーティング形態を示した。微細突起の先端から測定して、コーティングは全てのデザインに関して下方に〜９０μｍ延展し、良く調節されたコーティングシステムが確立されたことを示唆する。
【０１８４】
コーティングされた微細突起列の同定
形態以外に、調合方法の性能を理解するためにはコーティングの数種の物理的および生化学的な面を同定する必要がある。物理的パラメーターはコーティング中および後の水蒸発および水分含有量並びにコーティングの微生物学的考察を包含する。
【０１８５】
コーティング実行可能性／形態：溶解した調合物（番号１−４）
異なるコーティング調合物は種々のコーティング形態をもたらしうる事実にもかかわらず、同様なそして許容可能なコーティング位置／形態が調合物とは無関係に得られ、ある種のワクチン成分の存在が接触角度結果により反映されるようにコーティング方法に便宜を与えることを示唆する。コーティング実行可能性は４種の調合物で示された。
【０１８６】
コーティング実行可能性／形態：懸濁調合物（番号５−７）
調合物番号５−７は高度に濁った粘着性溶液であったが、冷蔵下での１ヶ月を越える貯蔵後に相分離が観察されなかったため懸濁液は安定であった。さらに、７，０００ｒｐｍにおける２分間にわたる遠心後に明白な粒子沈殿はなかった。コーティング中にドラム上に均一な薄いフィルムが形成され、明白な粒子は観察されず、それは微細な安定な懸濁液のさらなる証明であった。
【０１８７】
水分含有量
表ＶＩＩＩに反映されるように、コーティングの水分含有量は乾燥および処理環境、特に周囲条件の相対湿度、により影響を受ける。微細突起列またはチタンシート基質上で乾
燥された調合物５（ＨＡ／スクロース／ツイーン８０）からのコーティング溶液は、空気−乾燥後に真空−乾燥にかけられた場合にのみ１．７％の水分含有量をもたらした。真空乾燥なしでは、コーティングの水分含有量は６．２％と有意に比較的高く、それは周囲空気の湿度で変動するであろう。
【０１８８】
【表８】
2007530680.tif 000010
【０１８９】
微生物学
微生物学分析を低−生物負荷製造分野、すなわち、「無菌」方式でのＧＬＰ製造バッチおよびＧＭＰ製造バッチ用の防腐作用物質なしでの三価スクロースのみの生成に関して行われた。この分析からの結果は表ＩＸに示される。
【０１９０】
【表９】
2007530680.tif 000011
【０１９１】
表ＩＸに反映されるように、防腐作用物質の不存在下では、コーティング溶液の２つのバッチは非常に低レベルの毒素および微生物含有量を含有した。それ故、結果はコーティング溶液を誘導するために使用した方法およびコーティング方法自体が製品中への追加の生物負荷を導入しないような方法で操作できることを示す。
【０１９２】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ／ウェスターン・ブロット
微細突起上にコーティングされた３種の最終的調合物（調合物番号３、６および７）中のＨＡ抗原性をウェスターン・ブロット分析により分析した。出発物質（レーン２）と比
べて、全てのコーティングされそして凍結乾燥された調合物は同様な帯パターンを示した。３つの帯は単量体（〜７５ｋＤ）または三量体（〜２２５ｋＤ）としてのＨＡと関連することが信じられた。従って、（出発ワクチンと比べて）合致した帯および帯強度に基づき、凍結乾燥されそして微細突起列上にコーティングされた調合物中の抗原ＨＡは抗原性を維持したと結論された。
【０１９３】
ＢＣＡ対ＳＲＩＤ
当該技術で既知であるように、ＳＲＩＤは一般的に免疫原性と一致するインビトロ効力におけるＨＡを測定するための唯一の認可された検定である。しかしながら、それは時間がかかる（３日間）。時機を得た方式で予備−調合およびコーティング方法中のＨＡ効力を監視するために、ＢＣＡ蛋白質検定を行いそして短期ＨＡ安定性を評価可能なＳＲＩＤ検定からの結果と比較した。
【０１９４】
次に表Ｘを参照すると、ＴＦＦ濃縮、凍結乾燥、三価コーティング液体中への再構成、およびコーティング後の３種の一価菌株に関するＢＣＡ／ＳＲＩＤ結果のまとめが示される。ＢＣＡ結果は、一般的に、凍結乾燥された物質がＢＣＡ値よりはるかに低いＳＲＩＤ値を有するＡ／ニューカレドニアの場合を除いて、ＳＲＩＤ結果と一致した。しかしながら、これらの２つの値は再構成された三価液体調合物中でははるかに良く一致し、早期の不一致は全て同様に試料製造または検定変動によることを示唆した。
【０１９５】
【表１０】
2007530680.tif 000012
【０１９６】
微細突起列デリバリーよび皮膚耐性
１６の別個のデリバリー試験を行ってデリバリー効率および皮膚耐性を評価した。各試験を表ＸＩにまとめる。
【０１９７】
【表１１】
2007530680.tif 000013
【０１９８】
デリバリー試験番号１−７
デリバリー試験番号１−７は、以下でＭＦ−１およびＭＦ−２と表示される２種の微細突起デザインに向けられた。結果は、ＭＦ−１微細突起デザインによるデリバリーは高度に有効であり、調合物にかかわらず、コーティングの４０−９０％を皮膚にデリバリーすることを示唆する。
【０１９９】
デリバリー試験番号８−１５
デリバリー試験番号８−１５は、均衡のとれたデリバリー効率および皮膚耐性を与える微細突起デザインに焦点を当てた。出血は微細突起長さに正比例する深すぎる浸透により主として引き起こされるため、それぞれ２２５μｍの微細突起長さおよび１３１６個の微
細突起／２ｃｍ２の列の密度を有する６種のデザインをさらなる評価に関して選択した（ＭＦ−３、ＭＦ−４およびＭＦ−５）。
【０２００】
８種の微細突起列デザインを含んでなる検討は、それらの薬品デリバリー性能を評価するための７種のデリバリー試験に及んだ。インビボ無毛モルモット皮膚に存在するフルオレセイン−ワクチン含有量の量を薬品充填量を増加させながら測定することにより、列デザインを試験した。
【０２０１】
次に図１３Ａを参照すると、８種の微細突起列デザインに関するデリバリー結果のまとめが示される。ＭＦ−３列デザインは、比較したデザインで最大量の薬品固体がデリバリーされうるコーティング点である１４０μｇの薬品コーティングまで、その高いデリバリー効率を維持したことが見出された。ＭＦ−１、ＭＦ−６およびＭＦ−７列デザインのデリバリー効率は１００μｇ近くの薬品コーティングで減少し始め、これらのデザインを有する最大量の薬品デリバリーをＭＦ−３より低くさせた。
【０２０２】
ＭＦ−３の性能を確認するために、一連のＭＦ−３列を５０〜１７０μｇの合計コーティング固体の広範囲のコーティング量を有するＤＳ番号１５用に製造した。図１３Ｂに示されたデリバリー結果は、ＤＳ番号１５に関するデリバリー効率特徴がＤＳ番号８−１４において観察されたＭＦ−３列に関する効率特徴とほぼ重複することを示唆する（表ＸＩ参照）。デリバリーされた量は最初は１４０μｇにおける変曲点まで７０％の等傾斜（ｉｓｏｃｌｉｎｅ）であり、その点においてデリバリーされた量は増加したコーティング量にもかかわらず安定化する。列適用後のコーティング残渣は比較的少ないコーティング量に関しては低く、そして１４０μｇのコーティング量において飛躍し、それはデリバリーされたコーティング量における突然の変化と一致する。
【０２０３】
皮膚耐性（微量出血）および浸透関連特徴、例えば保持性、はシステムの安全性および耐久性を評価するために重要である。そこで、微細突起パッチを生存（各システムに関して二重）および安楽死無毛モルモット（ＨＧＰ）にそれぞれ３および１５分間にわたり適用した。パッチの除去時に、動物をメチレンブルーで染色された適用部位における皮膚反応／微量出血（生存−動物のみ））、保持機能、および浸透点数に関して評価した。
【０２０４】
保持性に関すると、保持特徴を有する微細突起デザイン（すなわち、ＭＦ−３、ＭＦ−４、ＭＦ−５およびＭＦ−７）は皮膚における観察可能な保持性を示し、それはコーティング量の増加で減少した。高いコーティング量を有するいずれの場合（１６０μｇのコーティングを有するＭＦ−３および１３８μｇのコーティングを有するＭＦ−１）も出血は観察されなかった。
【０２０５】
コーティング量の範囲は抗原純度およびデリバリーされる服用量により測定された。４０％ＨＡ純度のバルクワクチンを考察すると、賦形作用物質を包含する合計コーティング量は４５μｇのＨＡ服用量に関しては２ｃｍ２の列当たり〜１５０μｇでありそして１５μｇのＨＡ服用量に関しては２ｃｍ２の列当たり５０μｇであろう。
【０２０６】
デリバリー試験番号１６
デリバリー試験番号１６は、ＨＡの低服用量である〜１５μｇ／列、すなわち列当り〜６０−７０μｇの合計コーティング、でコーティングされた数種の微細突起列デザインに関して行われた。４種のデザイン（ＭＦ−３、ＭＦ−５、ＭＦ−６およびＭＦ−７）を包含する試験は高服用量において最も有効であることを示した。
【０２０７】
４種の列デザインをＤＳ番号１３および１４で使用した同一のＡ／パナマ／スクロース調合物に基づき６０−７０μｇの合計コーティング量でコーティングした。次に表ＸＩＩを参照すると、保持点数および出血傾向に関するコーティングされないおよびコーティン
グされた列の比較が示される。保持性能は１−５の点数システムに基づき評価された。
【０２０８】
【表１２】
2007530680.tif 000014
【０２０９】
保持性結果は、（ｉ）コーティングされない列はコーティングされた列より性能が優れそして（ｉｉ）性能順位はＭＦ−６〜ＭＦ−３＞ＭＦ−５＞ＭＦ−５の順序に従った。出血傾向と同じ傾向が観察された。全体として、ＭＦ−５デザインが保持性および浸透に関して強く、そして低服用量でより良好な皮膚耐性を与えるようであった。
【０２１０】
免疫原性試験
４種の免疫原性試験が無毛モルモット（ＨＧＰ類）において行われた。第一の試験は１、５および５０μｇのＡ／パナマ（Ｈ３Ｎ２）の服用量での筋肉内（ＩＭ）注射を用いる抗体応答動力学および抗原服用量応答を制定した。この試験は、ＨＡ服用量を１から５０μｇに高めて一次免疫感作が増加した抗体力価をもたらしたことを示した。追加の免疫感作（４週目に行われた）で、１〜５μｇＨＡの間の服用量応答が観察された。しかしながら、５〜５０μｇＨＡの間では統計学的な差異は観察されなかった。ピーク抗体力価は追加免疫感作後２−３週目に観察された（図１４Ａ参照）。合計ＨＡ−特異的ＩｇＧ力価（ＥＬＩＳＡにより測定された）対ヘマググルチニン抑制（ＨＩ）活性の間の関連性が制定された（図１４Ｂ参照）。このデータに基づき、５μｇのＨＡ服用量を次に使用してＨＡ効力に関して調合物を評価した。
【０２１１】
第二の免疫感作試験を行ってＨＡ／パナマ（Ｈ３Ｎ２）の数種の調合物の相対的免疫原性を評価した。ＨＡ／パナマ（Ｈ３Ｎ２）を含有する４種の調合物を評価した：
（１）４０−５２ｍｇ／ｍＬのＨＡ、１０％のツヴィッテルジェント３−１４
（２）４０−５２ｍｇ／ｍＬのＨＡ、５％のツヴィッテルジェント３−１４ｐＨ１０
（３）４０−５２ｍｇ／ｍＬのＨＡ、１０％のトリトンＸ１００ｐＨ１０
（４）４０−５２ｍｇ／ｍＬのＨＡ、１０％のトリトンＸ１００ｐＨ１０
【０２１２】
各濃縮物のアリコートをチタンディスクの表面に移しそして自然乾燥した（すなわち、「ドライ−コーティングした」）。液体濃縮物およびドライ−コーティングしたディスクの両方を試験で試験した。それぞれ希釈した調合物の０．１ｍＬ容量（５μｇ服用量）をＩＭ方式でＨＧＰ類に０日目（最初）および２８日目（追加）に注射した。等しい５μｇ服用量（出発物質）よりなる対照群が含まれた。
【０２１３】
試験は、全ての調合物がＥＬＩＳＡおよびＨＩ検定により測定して、抗−ＨＡ抗体応答を誘発可能であったことを示した（図１５Ａおよび１５Ｂ参照）。しかしながら、種々のＨＡ調合物の間には差異があった。１０％のトリトンＸ−１００（液体もしくは乾燥−コーティングされた）または１０％のＳＤＳ（乾燥−コーティングされた）を含有する調合物は減じられた免疫−効力を有していた。全ての他のＨＡ調合物は、出発物質を用いる同等な注射と比べた時に、満足のいくように有意義でないようだった。
【０２１４】
第三の免疫感作試験を行って、微細突起列の上にドライ−コーティングされた一価Ａ／パナマ（Ｈ３Ｎ２）コーティング調合物が一次および二次の両方のＨＡ−特異的抗体応答を包含しうることを示した。出発ＨＡ物質を用いるＩＭ調節基が包含される。単一微細突起列デザイン（ＭＦ−１）が使用された。４ＨＡ調合物の全てを２種の目標にされたＨＡコーティング服用量において微細突起列上で試験された（５および１５μｇ／列）：
ＨＡ、ツヴィッテルジェント（１０％）、トレハロース（２．５％）
ＨＡ、ツイーン−８０（２％）、スクロース（５％）
ＨＡ、プルロニックＦ６８（２％）、トレハロース（２．５％）、マンニトール（２．５％）
ＨＡ、スクロース（５％）
【０２１５】
まとめると、この試験からの結果（血清ＨＡＩ力価）は、ＨＡコーティングされたマクロフラックス（Ｍａｃｒｏｆｌｕｘ）システムを用いて一次（２８日）および二次（４９日）抗体応答が発生しうることが示された（図１６Ａおよび１６Ｂ参照）。さらに、ＨＡ−特異的な血清中和抗体がパッチで免疫感作された動物において生成された。ある種の調合物の差異が比較的高い目標にされたＨＡコーティング服用量において追加の免疫感作後に観察できた。最も高い平均ＨＡＩ力価はツヴィッテルジェント３−１４／トレハロースを用いてＨＡ調合物で免疫感作されたＨＧＰ類から生じた。この群からの血清中和抗体力価レベルはＩＭ処置対照に最も類似していた。
【０２１６】
第四の試験は、ＨＧＲ類においてチタン微細突起列上にドライ−コーティングされた三価インフルエンザ調合物の免疫原性試験により評価した。試験は、２種の三価コーティング調合物、３種のマクロフラックス微細突起列デザイン、および２種のＨＡコーティング服用量の評価よりなっていた。三価インフルエンザ調合物は、２種のＡ菌株（Ａ／パナマ／２００７／９９［Ｈ３Ｎ２］、およびＡ／ニューカレドニア／２０／９９［Ｈ１Ｎ１］）、並びに１種のＢ菌株（Ｂ／シャンドン／７／９７）よりなっていた。ＨＡ菌株は１：１：１の比で調合された。三価ＨＡを含有する２種のコーティング調合物をスクロース（５％）、または２）ツイーン−８０（２％）およびスクロース（５％）と共に調合した。微細突起列デザインはＭＦ−１、ＭＦ−３、およびＭＦ−５（直径２ｃｍ２）であった。微細突起列デザイン上に付与された２種のＨＡコーティング服用量は「低」（２１−２３μｇ）および「高」（３３−４５μｇ）として定義された。データは、三価マクロフラックスパッチが各ＨＡ菌株に対して一次抗−ＨＡ抗体応答（ＨＩ力価）を誘発しうることを示す（図１８参照）。マクロフラックス列を用いて２種の三価調合物（スクロースおよびツイーン−８０／スクロース）で免疫感作されたＨＧＰ類から発生した抗体力価レベルはそれらのそれぞれの筋肉内注射対照に匹敵した。抗−ＨＡ応答に関しては、種々の微細突起列デザインの中またはスクロース対ツイーン−８０／スクロース調合物の間で有意な差異は見られなかった。ある場合には、ＨＡ菌株および処置群によって、服用量応答が観察されたが、必ずしも常にそうではなかった。
【０２１７】
全体として、これらの免疫原性試験は表Ｖに示された調合物の各々が出発ワクチンに対する有意な調合変動にもかかわらず免疫原性であったことを示唆する。
【０２１８】
短期安定性
以上で論じた予備−調合方法は抗原を凍結だけでなく膜のディアフィルトレーション中の剪断負荷および氷／水海面および脱水／再水和から生ずる負荷を包含する一連の負荷事象にもかける。凍結−乾燥されたワクチンを再構成した後に、溶液はこのようにして１０サイクルの凍結／解凍にかけて（液体窒素により凍結しそして室温において直ちに解凍して）、存在するなら、抗原の安定性に対する影響を評価した。ＥＬＩＳＡにより測定して、１０サイクルの凍結／解凍の前後のＨＡ効力は変動せず、トレハロースまたはスクロースによる抗原安定性の保存を示唆する。
【０２１９】
凍結−乾燥よりさらに負荷のある工程段階は、有効な界面活性作用物質、例えばＳＤＳまたはツヴィッテルジェント、による高濃度における激しく振りながら（撹拌しながら）の再−溶解である。これらの界面活性作用物質は、元来の分子の物理的構成を変えることにより、蛋白質を変性させることが知られる。抗原をワクチン接種するためには、有意な構成変化の結果は抗原性および免疫原性の合計損失でありうる。強い界面活性作用物質の存在下における再−溶解の影響を以下の試験で評価した。
【０２２０】
界面活性作用物質なしで並びにＳＤＳ（１０％）、トリトン−Ｘ１００（１０％）、またはツヴィッテルジェント（５および１０％）を用いて再構成された凍結−乾燥されたワクチンを包含する一連の予備−調合後に、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ／ウェスターンブロット分析を行った。クーマッシー・ブルー（Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ  Ｂｌｕｅ）で染色されたゲル（左にあるＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル）に関する非−還元条件下で、出発ワクチン中に存在する全ての帯が再構成された試料中にも存在することが証明され、評価した調合物のいずれに関しても検出可能な変性はないことを示唆する。
【０２２１】
ゲルがウェスターンブロット分析用の膜に移されるにつれて、ここでも、異なる調合物および出発ワクチンの間に差異は見られなかった。ＨＡ蛋白質および抗−ＨＡ抗体の間の結合を反映する一連の帯が最初に高分子量において起きた。（出発ワクチンに関して）一致した帯および帯強度に基づき、凍結−乾燥しそして高濃度の強い界面活性作用物質に露出した調合物中のＨＡは抗原性を保ったと結論された。
【０２２２】
還元条件下では、全ての調合物がＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で出発ワクチンのものと同様な帯を示す。ウェスターンブロットゲル上の帯パターンも全ての調合物の間で良く一致した。ＥＬＩＳＡ分析に従うと、ＨＡは強いようでありそしてディアフィルトレーション、濃縮、凍結、脱水、および強い撹拌下での強い界面活性作用物質を用いる再−水和を包含する広範囲にわたる調合操作後でさえ抗原性を維持する。
【０２２３】
長期安定性
両方とも貯蔵中に維持されてデリバリー可能な目標服用量を保存することが必要な２つのタイプの安定性である（ｉ）コーティングの物理的安定性および（ｉｉ）抗原の生化学的安定性を検討して最適な調合物をスクリーニングしそして同定した。
【０２２４】
物理的安定性
コーティングの物理的安定性は、指定温度におけるある期間にわたる貯蔵後のコーティングの位置および形態の保存を包含する。試験を加速するために、４種のコーティング調合物（番号３、５、６および７）を高温（６５℃）に４週間までにわたり露出した。
【０２２５】
６５℃における貯蔵の前後の調合物５および６のＳＥＭ形態は４週間にわたる貯蔵で変化が起きなかったことを示した。同じ結果が調合物３および７に関しても観察され、コーティングされた全ての４種の調合物がそのような高温においてさえ物理的に強いことを示唆する。
【０２２６】
生化学的安定性
表ＸＩＩＩを参照すると、抗原の生化学的安定性を検討するために使用されるパラメーターの類似性がある。検討は４種の試験を包含し、それは一価菌株を用いる調合物３、５、６および７をスクリーニングするための加速試験で始まった。最も安定な１種もしくは複数の調合物を他の２種の菌株を一連の賦形作用物質組成物で用いる賦形作用物質希釈試験で試験した。賦形作用物質希釈試験から決められた好ましい組成物を次に変則の安定性試験の一部として箔ポーチ内に包装された微細突起列上にコーティングされた三価調合物の中で試験した。この最終的な一括した安定性試験を行って抗原安定性に対するコーティング中の水分含有量の影響を検討した。
【０２２７】
【表１３】
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【０２２８】
加速安定性試験
４種のＡ／パナマ調合物（調合物番号３、５、６および７）を微細突起列の上にコーティングした。各々のコーティングされた列をスクリュー頂部キャップを有する２０−ｍＬシンチレーション瓶の中に置いた。各瓶を真空乾燥後に密封して列取り扱い後の水分吸収を除いた。全ての試料を４０℃オーブンの中で１、２、４、および８週間にわたりインキュベートした。３つの試料（三重）を各時点で採取しそしてＥＬＩＳＡによりＨＡ効力に関して分析した。
【０２２９】
次に図１８を参照すると、４種の調合物の安定性特徴が示される。ＨＡ効力がインキュベーション時間で減少するようなツヴィッテルジェント調合物（調合物番号３）に関する明白な傾向がある。ツイーン／スクロース調合物は最終時点（８週間）でＨＡ効力の大部分を失うようであった。
【０２３０】
スクロース単独調合物の安定性は調合物の中で三番目に良く、そしてブルロニック／トレハロース／マンニトール調合物が効力維持において最良であった。
【０２３１】
２種の服用量でコーティングされた記載した調合物のうちの３種を次に室温において（真空下で）２５週間までにわたり貯蔵した。ＨＡ効力をＥＬＩＳＡにより監視した。表ＩＶを参照すると、トレハロース／マンニトール／プルロニック調合物（調合物番号７）が効力減少の傾向を示した。他の２種の調合物は、時間０における効力と比べて、抗原効力を維持するようであった。調合物番号５および７に関すると、安定性は４０℃および室温において貯蔵された試料の間で異なるようであった。
【０２３２】
スクロースのみおよびスクロース−ツイーンを含んでなる２種の三価調合物を列の上にコーティングしそして密封された、窒素を流した（ｐｕｒｇｅｄ）箔ポーチ内に３ヶ月間までにわたり４０℃においてそして６ヶ月間までにわたり５°および２５℃において貯蔵した。３種の菌株であるＡ／パナマ（Ａ／Ｐ）、Ａ／ニューカレドニア（Ａ／ＮＣ）およびＢ／シャンドン（Ｂ／ＳＤ）をＳＲＩＤ分析により評価した。スクロースのみおよびスクロース−ツイーン調合物安定性試験の結果は、それぞれ、図１９および２０に表示される。図１９および２０に反映されるように、コーティングされた列は非常に良好な安定性を５°および２５℃における６ヶ月間までの貯蔵に関して全ての３種の菌株に関して両方の調合物中で示した。
【０２３３】
賦形作用物質希釈試験
スクロース調合物に関する最適な賦形作用物質組成物を決めるために、Ｂ／ビクトリア（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）菌株（１８％のＨＡ純度）をスクロースと共にＨＡ：スクロース＝１：１、１：２、および１：４の重量比で調合した。コーティングされた列を４０℃において８週間までにわたりインキュベートした。試料を−８０℃において分析時間まで貯蔵しそして全ての試料を１ｍＬの水で再構成しそしてＳＲＩＤにより単独ゲル上でそしてＢＣＡにより単独９６ウエル板の上で分析して検定間の変動性を除いた。安定性特徴は図２１に示される。
【０２３４】
最初の２週間の貯蔵中に観察された初期減少後に、ＨＡ：スクロース＝１：２および１：４の調合物は４０℃においてさえ８週間の間ずっと安定性であるようだった。しかしながら、ＨＡ：スクロース＝１：１の調合物に関しては、減少傾向が続いた。この現象がプロテアーゼの存在により引き起こされ、それは精製中に完全には除かれずそしてそれは我々の方法の間に活性化されうることが信じられる。
【０２３５】
ＨＡに対してスクロースの量が増加すると、安定化効果があるようである。この試験用に使用したＢ／ビクトリアのロットは存在する合計蛋白質に関して〜１５％という非常に低いＨＡ純度を有し、そしてその後のバルク出発物質（＞４０％ＨＡ純度）を示すと認識されなかった。しかしながら、スクロース重量百分率増加の安定化効果は比較的高いＨＡ純度の出発物質では同等な相対的程度で観察されないかもしれない。例えば、１００ｍｇの１５％ＨＡ純度出発物質は、１：１、１：２および１：４のＨＡ：スクロースで調合される場合に、１５、３０および４５ｍｇのスクロースを必要とする。これは、それぞれ、１３、２３および３７％のスクロースの乾燥重量比をもたらす。しかしながら、１００ｍｇの４０％ＨＡ純度出発物質は同じ３種の比を調合するために４０、８０および１６０ｍｇのスクロースを必要とし、２９、４４および５４％のスクロースの乾燥重量比をもたらすであろう。その結果、高純度１：１調合物はすでに１：４の低純度調合物の乾燥重量スクロース含有量に達している。これらのレベルにおいて、スクロースの安定化効果は平ら（ｐｌａｔｅａｕ）にほぼ達しており、そしてスクロース含有量の増加は生成物の安定性に対してさらにほとんどまたは全く影響しないであろう。この理由のためそしてその後のバルク処理を簡単にするために、スクロースの固定された比は予備−凍結乾燥された溶液に関しては１．０％に設定された。凍結乾燥された粉末は典型的には元の予備−凍結乾燥された容量の１／５に再構成されるため、これは５％スクロースのコーティング溶液濃度
をもたらす。
【０２３６】
まとめ
当業者により認識されるように、独特な予備調合方法によって、インフルエンザワクチンの全部の人間服用量、すなわち、４５μｇのへマググルチニン、をコーティングされた微細突起列を介して経皮的にデリバリーすることができ、そこではインフルエンザワクチンの少なくとも７０％が皮膚内にデリバリーされる。抗原は皮膚内で免疫原性も維持して、強い抗体および血清−保護免疫応答を引き出す。さらに、乾燥コーティングされたワクチン調合物は実質的に防腐作用物質を含まずそして少なくとも６ヶ月間の室温安定性を維持しうる。
【０２３７】
本発明の精神および範囲から逸脱せずに、当業者は本発明に対して種々の変更を行ってそれを種々の用途および条件に適合させうる。そのため、これらの変更は適切であり、同等であり、そして特許請求の範囲の同等物の全範囲内にあることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【０２３８】
【図１】図１はインフルエンザウイルス粒子の説明図である。
【図２】図２は本発明に従う微細突起部品の１つの態様の一部の透視図である。
【図３】図３は本発明に従う微細突起上に配置された生体適合性コーティングを有する図２に示された微細突起部品の透視図である。
【図４】図４は本発明に従う接着作用物質裏打ち材を有する微細突起部品の断面側面図である。
【図５】図５は本発明に従う微細突起部品の別の態様の一部の透視図である。
【図６】図６は本発明に従う内部に配置された微細突起部品を有する保持器の断面側面図である。
【図７】図７は図６に示された保持器の透視図である。
【図８】図８はアプリケーターおよび図６に示された保持器の透視図である。
【図９】図９は本発明に従う調合前工程のフローチャートである。
【図１０】図１０は本発明に従う溶液濁度の減少に対するｐＨの影響を説明する吸光度対ｐＨのグラフ説明図である。
【図１１】図１１はワクチンであるＦｌｕｚｏｎｅ（Ｒ）およびＶａｘｉｇｒｉｐＴＭに関する粘度対ｒｐｍのグラフ説明図である。
【図１２】図１２は２２．５ｍｇ／ｍＬにおける１５％ＨＡ純度を有するＡ／ニュー・カレドニア（Ｎｅｗ  Ｃａｌｅｄｏｎｉａ）菌株に関する粘度対温度のグラフ説明図である。
【図１３Ａ】図１３Ａは本発明に従う種々の微細突起列デザインに関するワクチンデリバリー性をまとめたグラフ説明図である。
【図１３Ｂ】図１３Ｂは本発明に従う種々の微細突起列デザインに関するワクチンデリバリー性をまとめたグラフ説明図である。
【図１４Ａ】図１４ＡはＨＡ（Ａ／パナマ（Ｐａｎａｍａ）菌株）の種々の服用量に関する平均抗−ＨＡ力価対時間のグラフ説明図である。
【図１４Ｂ】図１４Ｂは合計Ａ／パナマ−特異的ＩｇＧ力価対ＨＩ活性のグラフ説明図である。
【図１５Ａ】図１５Ａは抗−Ａ／パナマ−特異的ＩｇＧ抗体およびＨＩ活性を説明するＨＡ（Ａ／パナマ菌株）の数種の調合物の免疫原性の棒グラフである。
【図１５Ｂ】１５Ｂは抗−Ａ／パナマ−特異的ＩｇＧ抗体およびＨＩ活性を説明するＨＡ（Ａ／パナマ菌株）の数種の調合物の免疫原性の棒グラフである。
【図１６Ａ】図１６Ａは２８日目における抗−ＨＡ  ＩｇＧ抗体活性およびＨＩ活性を説明する微細突起上に乾燥−コーティングされたＨＡ（Ａ／パナマ菌株）の数種の調合物の免疫原性の棒グラフである。
【図１６Ｂ】１６Ｂは４９日目における抗−ＨＡ  ＩｇＧ抗体活性およびＨＩ活性を説明する微細突起上に乾燥−コーティングされたＨＡ（Ａ／パナマ菌株）の数種の調合物の免疫原性の棒グラフである。
【図１７】図１７はＨＩ活性を説明する微細突起上に乾燥−コーティングされた三価ＨＡ（Ａ／パナマ、Ａ／ニュー・カレドニアおよびＢ／シャンドン（Ｓｈａｎｇｄｏｎｇ）菌株）の数種の調合物の免疫原性の棒グラフである。
【図１８】図１８は本発明に従う８週間までにわたり４０℃において貯蔵された数種の調合物の安定性特徴を説明するＨＡ量対時間のグラフ表示である。
【図１９】図１９は本発明に従う３ヶ月間までにわたり４０℃においてそして６ヶ月間までにわたり５℃および４０℃において貯蔵された調合物の安定性特徴を説明する三価調合物の棒グラフである。
【図２０】図２０は本発明に従う３ヶ月間までにわたり４０℃においてそして６ヶ月間までにわたり５℃および４０℃において貯蔵された調合物の安定性特徴を説明する三価調合物の棒グラフである。
【図２１】図２１は本発明に従うスクロースと共に調合されそして８週間までにわたり４０℃において貯蔵されたＡ／ニュー・カレドニア菌株の安定性特徴を示すＳＲＩＤ／ＢＣＡ対時間のグラフ説明図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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