(57)【要約】【課題】【解決手段】本発明は白金系化合物を投与することによって耐性又は不応性腫瘍を治療するための方法、医薬組成物、及び包装された医薬品に関する。【選択図】図１
2007523123.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
非白金系治療剤に対し耐性である腫瘍細胞を殺す、又はその成長を阻害する方法が：
（ａ）経口的に利用可能な白金系化学療法剤と；
（ｂ）白金系化学療法剤が白金（ＩＶ）配位錯体を含む白金系化学療法剤と；
（ｃ）次の一般構造式：
2007523123.tif 000021
で表される白金系化学療法剤であって、Ｒ１及びＲ２は存在しても存在しなくても良く、Ｒ１からＲ４のそれぞれは、ハロゲン、ヒドロキシル、及びアセテートから独立して選択され、Ｒ５はシクロアルキルである白金系化学療法剤と；
（ｄ）サトラプラチン又はサトラプラチン代謝物と；
又は（ａ）から（ｄ）のいずれかの薬学的に許容される塩、異性体若しくはプロドラッグと
から選択される有効量の白金系化学療法剤に前記細胞を曝露することを具えることを特徴とする方法。
【請求項２】
非白金系治療剤に耐性又は不応性である腫瘍を有する個体を治療する方法が、
（ａ）経口的に利用可能な白金系化学療法剤と；
（ｂ）白金系化学療法剤が白金（ＩＶ）配位錯体を含む白金系化学療法剤と；
（ｃ）次の一般構造式：
2007523123.tif 000022
で表される白金系化学療法剤であって、Ｒ１及びＲ２は存在しても存在しなくても良く、Ｒ１からＲ４のそれぞれは、ハロゲン、ヒドロキシル、及びアセテートから独立して選択され、Ｒ５はシクロアルキルである白金系化学療法剤と；
（ｄ）サトラプラチン又はサトラプラチン代謝物と；
又は（ａ）から（ｄ）のいずれかの薬学的に許容される塩、異性体若しくはプロドラッグと
から選択される有効量の白金系化学療法剤を個体に投与することを具えることを特徴とする方法。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の方法において、Ｒ５がシクロヘキシルであることを特徴とする方法。
【請求項４】
請求項１又は２に記載の方法において、前記白金系化合物は、ＪＭ２１６、ＪＭ１１８及びＪＭ３８３、又はその薬学的に許容される塩、異性体若しくはこれらのプロドラッグから選択されることを特徴とする方法。
【請求項５】
請求項１から４のいずれか１項に記載の方法において、非白金系薬剤に対する前記腫瘍細胞又は前記腫瘍の耐性が、多剤耐性によって生ずることを特徴とする方法。
【請求項６】
請求項５に記載の方法において、非白金系治療剤に対する前記腫瘍細胞又は前記腫瘍の耐性が、ＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）トランスポータを介して生ずることを特徴とする方法。
【請求項７】
請求項６に記載の方法において、前記ＡＴＰ結合カセットトランスポータが、Ｐ−糖タンパク質（ＡＢＣＢ１）、乳癌耐性タンパク質（ＡＢＣＧ２）又は多剤耐性タンパク質１（ＡＢＣＣ１）であることを特徴とする方法。
【請求項８】
請求項７に記載の方法において、前記非白金系治療剤が：ビンカアルカロイド（ビンブラスチン）、アントラサイクリン（アドリアマイシン）、エピポドフィロトキシン（エトポシド）、タキサン（パクリタキセル、ドセタキセル）、抗生物質（アクチノマイシンD及びグラミシジンD）、抗微小管剤（コルヒチン）、タンパク質合成阻害剤（ピューロマイシン）、毒性ペプチド（バリノマイシン）、トポイソメラーゼＩ阻害剤（トポテカン）、ＤＮＡインターカレータ（エチジウムブロマイド）及び細胞分裂抑制剤から選択されることを特徴とする方法。
【請求項９】
請求項１から４のいずれか１項に記載の方法において、非白金系治療剤に対する前記腫瘍細胞又は前記腫瘍の耐性が、チューブリンを介して生ずることを特徴とする方法。
【請求項１０】
請求項９に記載の方法において、前記非白金系治療剤が：タキサン（パクリタキセル、ドセタキセル及びタキソール誘導体）、ビンカアルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン及びビノレルビン）、エポシロン（エポシロンＡ、エポシロンＢ及びディスコデルモライド）、ノコダゾール、コルヒチン、コルヒチン誘導体、アロコルヒチン、ハリコンドリンＢ、ドルスタチン１０、マイタンシン、リゾキシン、チオコルヒチン、トリチルシステリン、エストラムスチン及びノコダゾールから選択されることを特徴とする方法。
【請求項１１】
請求項１から４のいずれか１項に記載の方法において、非白金系治療剤に対する前記腫瘍細胞又は前記腫瘍の耐性が、トポイソメラーゼＩを介して生ずることを特徴とする方法。
【請求項１２】
請求項１１に記載の方法において、前記非白金系治療剤が：カンプトテシン、９−ニトロカンプトテシン（Ｏｒｅｔｈｅｃｉｎ、ルビテカン）、９−アミノカンプトテシン（ＩＤＥＣ−１３’）、エキサテカン（ＤＸ−８９５１ｆ）、ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ（ＧＩ−１４７２１１Ｃ）、ＢＡＹ３８−３４４１、ｄｉｆｌｏｍｏｔｅｃａｎ（ＢＮ−８０９１５）及びＢＮ−８０９２７等のホモカンプトテシン、トポテカン（Ｈｙｃａｍｐｔｉｎ）、ＮＢ−５０６、Ｊ１０７０８８、ＧＳ−５等のピラゾロ［１，５−ａ］インドール誘導体、ラメラリンD及びイリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ、ＣＰＴ−１１）から選択されることを特徴とする方法。
【請求項１３】
請求項１から４のいずれか１項に記載の方法において、前記腫瘍細胞又は前記腫瘍が：パクリタキセル、ドセタキソール、アドリアマイシン、ミトキサントロン、エトポシド及びカンプトテシンから選択される非白金系治療剤に対し耐性であることを特徴とする方法。
【請求項１４】
請求項１から４のいずれか１項に記載の方法において、前記腫瘍が固形腫瘍を含むか、又は前記腫瘍細胞が固形腫瘍に含まれることを特徴とする方法。
【請求項１５】
請求項１４に記載の方法において、前記固形腫瘍が：乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、腹膜癌、卵巣癌、気管支癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胃癌、前立腺癌、頭頸部癌、又はそれらの転移から選択されることを特徴とする方法。
【請求項１６】
請求項１から４のいずれか１項に記載の方法において、前記腫瘍が血液腫瘍を含むか、又は前記腫瘍細胞が血液腫瘍に含まれることを特徴とする方法。
【請求項１７】
請求項１から４のいずれか１項に記載の方法において、非白金系治療剤に不応性である癌又は腫瘍を持つと診断された個体、又はこれまで非白金系治療剤による治療を受けた個体に、前記白金系化合物を投与することを特徴とする方法。
【請求項１８】
請求項１７に記載の方法において、前記個体に１つ又はそれ以上の制吐剤又は抗下痢剤を更に投与することを特徴とする方法。
【請求項１９】
請求項１７に記載の方法において、前記個体を１つ又はそれ以上の他の抗癌剤で更に治療することを特徴とする方法。
【請求項２０】
請求項１９に記載の方法において、前記他の抗癌剤が、特定の薬物耐性機序を克服する薬剤であることを特徴とする方法。
【請求項２１】
請求項２０に記載の方法において、前記特定の薬物耐性機序が、ＡＴＰ結合カセットトランスポータによりもたらされる薬物排出の増加であることを特徴とする方法。
【請求項２２】
請求項１から４のいずれか１項に記載の方法において、前記非白金系治療剤がホルモン系薬物でないことを特徴とする方法。
【請求項２３】
パクリタキセル、ドセタキソール、アドリアマイシン、ミトキサントロン、エトポシド又はカンプトテシンに対し耐性又は不応性である腫瘍を有する個体を治療する方法が、有効量のサトラプラチンを個体に投与することを含むことを特徴とする方法。
【請求項２４】
（ａ）経口的に利用可能な白金系化学療法剤と；
（ｂ）白金系化学療法剤が白金（ＩＶ）配位錯体を含む白金系化学療法剤と；
（ｃ）次の一般構造式：
2007523123.tif 000023
で表される白金系化学療法剤であって、Ｒ１及びＲ２は存在しても存在しなくても良く、Ｒ１からＲ４のそれぞれは、ハロゲン、ヒドロキシル、及びアセテートから独立して選択され、Ｒ５はシクロアルキルである白金系化学療法剤と；
（ｄ）サトラプラチン又はサトラプラチン代謝物と；
又は（ａ）から（ｄ）のいずれかの薬学的に許容される塩、異性体若しくはプロドラッグと
から選択される白金系治療剤の使用において：
非白金系治療剤に耐性又は不応性である癌又は腫瘍の治療を目的とすることを特徴とする医薬組成物の調製のための使用。
【請求項２５】
パクリタキセル、ドセタキソール、アドリアマイシン、ミトキサントロン、エトポシド又はカンプトテシンに対し耐性又は不応性である癌又は腫瘍の治療を目的とすることを特徴とする医薬組成物の調製のためのサトラプラチンの使用。
【請求項２６】
包装された医薬品が、
（ａ）経口的に利用可能な白金系化学療法剤と；
（ｂ）白金系化学療法剤が白金（ＩＶ）配位錯体を含む白金系化学療法剤と；
（ｃ）次の一般構造式：
2007523123.tif 000024
で表される白金系化学療法剤であって、Ｒ１及びＲ２は存在しても存在しなくても良く、Ｒ１からＲ４のそれぞれは、ハロゲン、ヒドロキシル、及びアセテートから独立して選択され、Ｒ５はシクロアルキルである白金系化学療法剤と；
（ｄ）サトラプラチン又はサトラプラチン代謝物と；
又は（ａ）から（ｄ）のいずれかの薬学的に許容される塩、異性体若しくはプロドラッグと
から選択される白金系化学療法剤の医薬組成物を含み；
前記包装された医薬品が、非白金系治療剤に耐性又は不応性である癌又は腫瘍を患う個体に有効量の医薬組成物を投与する指示書を更に含むことを特徴とする包装された医薬品。
【請求項２７】
請求項２６に記載の包装された医薬品において、Ｒ５がシクロヘキシルであることを特徴とする包装された医薬品。
【請求項２８】
請求項２６又は２７に記載の包装された医薬品が、他の医薬成分及び／又は有効量の他の医薬成分を更に投与する指示書を更に含むことを特徴とする包装された医薬品。
【請求項２９】
請求項２８に記載の包装された医薬品において、前記他の医薬成分が、制吐又は抗下痢用治療組成物であることを特徴とする包装された医薬品。
【請求項３０】
請求項２８に記載の包装された医薬品において、前記他の医薬成分が、特定の薬物耐性機序を克服する薬剤であることを特徴とする包装された医薬品。
【請求項３１】
包装された医薬品がサトラプラチンの医薬組成物を含み、前記包装された医薬品が、パクリタキセル、ドセタキソール、アドリアマイシン、ミトキサントロン、エトポシド又はカンプトテシンに対し耐性又は不応性である癌又は腫瘍を患う個体に有効量の前記医薬組成物を投与する指示書を更に含むことを特徴とする包装された医薬品。
【請求項３２】
非白金系治療剤に耐性又は不応性である癌又は腫瘍から選択される疾患の治療に用いる医薬組成物が、白金系化合物を、薬学的に許容される担体、希釈剤又は媒体と共に含み、前記白金系化学療法剤が、
（ａ）経口的に利用可能な白金系化学療法剤と；
（ｂ）白金系化学療法剤が白金（ＩＶ）配位錯体を含む白金系化学療法剤と；
（ｃ）次の一般構造式：
2007523123.tif 000025
で表される白金系化学療法剤であって、Ｒ１及びＲ２は存在しても存在しなくても良く、Ｒ１からＲ４のそれぞれは、ハロゲン、ヒドロキシル、及びアセテートから独立して選択され、Ｒ５はシクロアルキルである白金系化学療法剤と；
（ｄ）サトラプラチン又はサトラプラチン代謝物と；
又は（ａ）から（ｄ）のいずれかの薬学的に許容される塩、異性体若しくはプロドラッグと
から選択されることを特徴とする医薬組成物。
【請求項３３】
請求項３２に記載の医薬組成物において、Ｒ５がシクロヘキシルであることを特徴とする医薬組成物。
【請求項３４】
タキサン系治療剤に耐性又は不応性である癌又は腫瘍を患う個体を治療する方法が、前記個体に有効量のＪＭ２１６、ＪＭ１１８及びＪＭ３８３、又はこれらの薬学的に許容される塩、異性体若しくはプロドラッグを投与することを含むことを特徴とする方法。
【請求項３５】
カンプトテシン系治療剤に耐性又は不応性である癌又は腫瘍を患う個体を治療する方法が、前記個体に有効量のＪＭ２１６、ＪＭ１１８及びＪＭ３８３、又はこれらの薬学的に許容される塩、異性体若しくはプロドラッグを投与することを含むことを特徴とする前記方法。
【請求項３６】
医薬組成物と、前記医薬組成物が非白金系化学療法剤に対し耐性又は不応性である癌又は腫瘍を患う個体の治療に使用できることを指示するラベルとを含む製造物において、前記医薬組成物が、白金系化合物を、薬学的に許容される担体、希釈剤又は媒体と共に含み、前記白金系化学療法剤が、
（ａ）経口的に利用可能な白金系化学療法剤と；
（ｂ）白金系化学療法剤が白金（ＩＶ）配位錯体を含む白金系化学療法剤と；
（ｃ）次の一般構造式：
2007523123.tif 000026
で表される白金系化学療法剤であって、Ｒ１及びＲ２は存在しても存在しなくても良く、Ｒ１からＲ４のそれぞれは、ハロゲン、ヒドロキシル、及びアセテートから独立して選択され、Ｒ５はシクロアルキルである白金系化学療法剤と；
（ｄ）サトラプラチン又はサトラプラチン代謝物と；
又は（ａ）から（ｄ）のいずれかの薬学的に許容される塩、異性体若しくはプロドラッグと
から選択されることを特徴とする製造物。
【請求項３７】
請求項３６に記載の製造物が包装材を更に含み、前記医薬組成物が前記包装内に含まれるか、又は前記ラベルが、前記包装内に含まれるか、若しくは前記包装によって構成されていることを特徴とする製造物。
【請求項３８】
請求項３６に記載の製造物が、制吐剤若しくは抗下痢剤を更に含むか、又は前記ラベルが、制吐剤若しくは抗下痢剤を、前記医薬組成物と共に更に投与するべきことを指示することを特徴とする製造物。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
臨床薬の耐性は、大部分の癌患者にとって、化学療法が治療効果を発揮するようになる前に克服すべき大きな障害である。多くの一般的な癌（例えば非小細胞肺癌、精巣癌及び卵巣癌）では、従来の化学療法により、50%を超える症例で実質的な腫瘍の縮小が期待できる。他の症例では、反応率はより低い；腎細胞癌、膵臓癌及び食道癌患者ではわずか10〜20%しか治療に反応しない。ほとんど全ての症例において、結局、薬物耐性が短期間に発生し、多くの場合致死的である。これを治療、予防又は克服できれば、その影響は大きいだろう。
【０００２】
化学療法に対する臨床での腫瘍の耐性は、内因性の場合も獲得性の場合もある。内因性の耐性は、診断時に一次化学療法に反応しない腫瘍に存在している。獲得耐性は、初期治療には、しばしばよく反応する腫瘍に起こり、治療経過中に耐性を生ずるか、又は腫瘍再発時に全く別の表現型を示すものである。これらは以前使用していた薬物と、異なる構造及び作用機序を持つ新規薬剤との、両方に対し耐性になることがある。
【０００３】
精巣癌及び卵巣癌を含む様々な悪性腫瘍の治療に利用できる最も活性な化学療法剤には、白金化合物がある。これらの化合物の幾つか、たとえばシスプラチンの使用は、毒性及び耐性の両方を考慮して制限されている。これらの問題を克服するために、シスプラチンのこの様な特性を有しない新規の白金化合物を発見する努力が始まっている。見つかった化合物の１つは、白金(Pt)IV錯体のサトラプラチン(JM216)である。サトラプチンは、その経口利用性、ならびに腎臓毒性及び神経毒性がない等の好ましい安全プロフィールから、シスプラチンに比べ利点を有する。サトラプラチンの活性は、前立腺癌、卵巣癌及びSCL癌の患者において示されている。ホルモン不応性前立腺癌（HRPC）患者での第II-III相臨床試験では、サトラプラチンとプレドニゾンの組合せが、プレドニゾン単独に比べより活性であった（ASCO、2003）。HRPCの現在の標準的治療は主に一時的であり、エストラムスチン、ミトキサントロン及びタキサン等の薬剤を用いた第一次化学療法を含むが、ドセタキソールを第一次選択化学療法剤として使用する例が増加しつつある。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
臨床での抗癌剤耐性の広がりと、その耐性の広がりが癌患者にとって不幸な結果を招くことを考えると、一次選択剤に耐性な腫瘍を治療する方法が望まれる。本発明では、このような方法を提供する。
【０００５】
本発明は、非白金系治療剤に耐性又は不応性である腫瘍を治療するための方法、医薬組成物及び包装された薬剤を提供する。一般的には、その方法は有効量の白金系化合物を、非白金系治療剤に耐性又は不応性である癌又は腫瘍を持つ個体に投与することを含む。白金系化合物は、次のうちの１つである。（総称して「主題の白金系化合物」と呼ぶ）：
（ａ）経口的に利用可能な白金系化学療法剤と；
（ｂ）白金系化学療法剤が白金（IV）配位錯体を含む白金系化学療法剤と；
（ｃ）次の一般構造式：
2007523123.tif 000003
で表される白金系化学療法剤であって、Ｒ１及びＲ２は存在しても存在しなくても良く、R1からR4のそれぞれは、ハロゲン、ヒドロキシル、及びアセテートから独立して選択され、R5はシクロアルキルである白金系化学療法剤と；
（ｄ）サトラプラチン又はサトラプラチン代謝物と；
又は（ａ）から（ｄ）のいずれかの薬学的に許容される塩、異性体若しくはプロドラッグ。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
ある好ましい実施形態では、白金系化合物はサトラプラチン(JM216)、JM118若しくはJM383、又は、その薬学的に許容される塩、異性体若しくはプロドラッグである。
【０００７】
ある実施形態では、非白金系治療剤に対し耐性な腫瘍として、多剤耐性を介して耐性を生ずる腫瘍を含む。このような多剤耐性は、P糖タンパク質（P-gp)等のＡＴＰ結合カセット(ABC)トランスポータを介して生ずることもある。耐性がP-gpを介し生ずる非白金系治療剤には、ビンカアルカロイド（ビンブラスチン）、アントラサイクリン（アドリアマイシン）、エピポドフィロトキシン（エトポシド）、タキサン（パクリタキセル、ドセタキセル）、抗生物質（アクチノマイシンD及びグラミシジンD）、抗微小管剤（コルヒチン）、タンパク質合成阻害剤（ピューロマイシン）、毒性ペプチド（バリノマイシン）、トポイソメラーゼI阻害剤（トポテカン）、DNAインターカレータ（エチジウムブロマイド）及び細胞分裂抑制剤が含まれる。
【０００８】
別の実施形態では、非白金系治療剤に耐性な腫瘍として、チューブリンを介して耐性を生ずる腫瘍を含む。チューブリンを介して耐性を生ずる非白金系治療剤には、タキサン（パクリタキセル、ドセタキセル及びその誘導体）、ビンカアルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン及びビノレルビン）、エポシロン（エポシロンA、エポシロンB及びディスコデルモライド）、ノコダゾール、コルヒチン、コルヒチン誘導体、アロコルヒチン、ハリコンドリンB、ドルスタチン10、マイタンシン、リゾキシン、チオコルヒチン、トリチルシステリン、エストラムスチン及びノコダゾールが含まれる。
【０００９】
別の実施形態では、非白金系治療剤に耐性な腫瘍は、トポイソメラーゼIを介して耐性を生ずる腫瘍を含む。トポイソメラーゼIを介して耐性を生ずる非白金系治療剤には、カンプトテシン、９−ニトロカンプトテシン（Orethecin、ルビテカン）、９−アミノカンプトテシン（IDEC-13'）、エキサテカン（DX-8951f）、lurtotecan（GI-147211C）、BAY38-3441、diflomotecan（BN-80915）及びBN-80927等のホモカンプトテシン、トポテカン（Hycamptin）、NB-506、J10708B、GS-5等のピラゾロ［１，５−ａ］インドール誘導体、ラメラリンD及びイリノテカン（Camptosar、CPT-11）が含まれる。
【００１０】
更に別の実施形態では、非白金系治療剤に不応性である腫瘍、又は非白金系治療剤で以前治療を受けていた腫瘍は、本発明の方法の実施、又は本発明の医薬組成物の使用に適している。
【００１１】
本発明の別の態様は、主題の白金系化合物を用いる、上記のものを含む非白金系治療剤に耐性又は不応性である腫瘍を殺すか、その増殖を阻害するための方法を提供する。
【００１２】
本発明の更に別の態様は、ヒト患者での使用に適した形態をした主題の白金系化合物を含み、かつ、非白金系治療剤に耐性な腫瘍の治療における主題の白金系化合物の適切な使用及び副作用について述べた使用説明書及び／又はラベルが付属した、包装された医薬品を提供する。
【００１３】
本発明の更に別の態様は、非白金系治療剤に耐性な腫瘍を治療するための医薬組成物及び包装された医薬品を提供する。医薬組成物及び包装された医薬品は、主題の白金系化合物を含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
1.概要
本発明は、非白金系治療剤に耐性な腫瘍を治療するための新規の方法及び医薬組成物を特徴とする。本発明は、少なくともその一部が、例示の主題の白金含有化合物の効果が、増殖細胞、例えば各種化学療法薬物に対し耐性な腫瘍細胞において維持されるという出願人の発見に基づいている。重要なのは、出願人がこれら例示の主題の白金系化合物が、複数の異なる機序を介し生ずる薬物耐性を克服できることを証明したことである。これらの耐性機序のそれぞれが、様々な薬物に対する耐性を腫瘍に与えている。出願人の発見に照らして、抗癌薬を含む様々な非白金系治療剤及び／又は化学療法薬物に対し耐性な腫瘍を有する患者が、本発明の方法及び医薬組成物を用いた治療から便益を得ることができる。
【００１５】
このように、本発明は、白金系化合物を有効量投与することを含む、非白金系治療剤に対し耐性又は不応性である癌又は腫瘍を持つ個体を治療する方法を提供する。好ましい実施形態では、白金系化合物は、次のものから選択される：
（ａ）経口的に利用可能な白金系の化学療法剤
（ｂ）白金系化学療法剤が白金（IV）配位錯体を含む白金系化学療法剤と；
（ｃ）次の一般構造式：
2007523123.tif 000004
で表される白金系化学療法剤であって、R1及びＲ２は存在しても存在しなくても良く、R1からR4のそれぞれは、ハロゲン、ヒドロキシル、及びアセテートから独立して選択され、R5はシクロアルキルである白金系化学療法剤と；
（ｄ）サトラプラチン又はサトラプラチン代謝物と；
又は（ａ）から（ｄ）のいずれかの薬学的に許容される塩、異性体若しくはプロドラッグ。
【００１６】
本発明はまた、非白金系治療剤に対し耐性な腫瘍細胞を殺す、又はその成長を阻害する方法であって、前記細胞を有効量の白金系化合物に曝露させることを含む方法も提供する。好ましい実施形態では、白金系化合物は次のものから選択される。
（ａ）経口的に利用可能な白金系化学療法剤と；
（ｂ）白金系化学療法剤が白金（IV）配位錯体を含む白金系化学療法剤と；
（ｃ）次の一般構造式：
2007523123.tif 000005
で表される白金系化学療法剤であって、R1及びＲ２は存在しても存在しなくても良く、R1からR4のそれぞれは、ハロゲン、ヒドロキシル、及びアセテートから独立して選択され、R5はシクロアルキルである白金系化学療法剤と；
（ｄ）サトラプラチン又はサトラプラチン代謝物と；
又は（ａ）から（ｄ）のいずれかの薬学的許容される塩、異性体若しくはプロドラッグ。
【００１７】
ある実施形態では、R1及びR2は同一であり、ヒドロキシル又はアセテートである。好ましくは、R3及びR4は同一であり、共にヒドロキシル又は好ましくは塩素等のハロゲンである。ある好ましい実施形態では、R5はシクロヘキシルである。
【００１８】
II.定義
用語「投与され」、「投与」、化合物を「投与する」は、治療を必要とする個体に本発明の方法の任意の化合物を提供することを意味すると解する。
【００１９】
用語「アルキル」は、任意に置換される、直鎖又は分鎖の、1〜約20個の炭素原子、好ましくは1〜約7個の炭素原子を有する飽和炭化水素基を指す。アルキルの例には、これらに限定されるものではないが、メチル、エチル、nプロピル、i-プロピル、n-ブチル、s-ブチル、t-ブチル、n-ペンチル及びs-ペンチルが含まれる。更に、この用語は非置換及び置換アルキル基を含むものであり、後者は、これらに限定されるものではないが、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボニル、アルコキシ、エステル、エーテル、シアノ、ホスホリル、アミノ、イミノ、アミド、スルフヒドリル、アルキチオ、チオエステル、スルホニル、ニトロ、ヘテロシクロ、アリール、又はヘテロアリールによって置換された水素置換基を１つ又はそれ以上有するアルキル成分を指す。当業者は、適切な場合、置換成分そのものも置換できることを理解するだろう。
【００２０】
用語「シクロアルキル」は、任意に置換される、飽和環式の炭化水素環系、好ましくは環当たり3〜7個の炭素を含有するものを指す。例示の基には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロデシル、シクロドデシル及びアダマンチルが含まれる。例示の置換基には、１つ若しくは複数の上記アルキル基、又はアルキル基の置換基として上述した１つ若しくは複数の基が含まれる。
【００２１】
用語「有効量」とは、研究者、薬学者、薬剤師、獣医師、医師、又はその他臨床医が望む、細胞、組織、系、体、動物、個体、患者又はヒトの生物学的、生理学的、薬理学的、治療的又は医学的反応、例えば癌若しくは腫瘍等の細胞増殖性疾患の影響／症状を軽減すること、又は腫瘍細胞等の増殖性細胞を殺すか、若しくはその成長を阻害することを誘発する主題化合物の量を意味する。
【００２２】
用語「更に治療した」、「更に投与する」、又は「更に投与した」とは、別の治療剤を一緒に、代わりに、又は間欠的に投与することを意味する。このようなさらなる投与は、時間的又は空間的に離れていてもよく、例えば別の時間、別の日、又は別の投与形態若しくは経路を介してよい。
【００２３】
用語「ハロゲン」又は「ハロ」は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素を指す。
【００２４】
用語「IC50」は、本明細書では、測定可能な表現型又は反応、例えば腫瘍細胞等の細胞の成長が50%阻害される濃度を指す。IC50値は、適切な用量−反応曲線から、例えば肉眼により、又は適当なカーブ適合若しくは統計ソフトウエアを用いて推定できる。IC50値は、非線形回帰分析を用いてより正確に決定してもよい。
【００２５】
本明細書では、「個体」は多細胞生物、例えば哺乳類等の動物、好ましくは霊長類を意味する。ヒト等の霊長類に加えて、その他様々な哺乳類を本発明の方法に従って治療できる。例えば、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、モルモット、ラット、又はその他のウシ科、ヒツジ科、ウマ科、イヌ科、ネコ科、齧歯類又はネズミ科を含む哺乳類を用いることができるが、これらに限られるわけではない。
【００２６】
用語「代謝物」は、本明細書では、代謝又は代謝的過程によって生成される任意の物質を指す。代謝とは、本明細書では、細胞、組織、系、体、動物、個体、患者又はヒトの内部で起こる分子又は化合物の変換に関わる様々な物理的／化学的／生化学的／薬理学的反応を指す。
【００２７】
用語「プロドラッグ」は、本明細書では、in vivoにて薬学的に活性な親薬物に変換される作用物質を指す。プロドラッグは、ある状況では、親薬物よりも容易に投与できることから、有用であることが多い。例えば、プロドラッグが経口投与により生物学的に利用可能であるのに対し、親薬物はそうでないこともある。プロドラッグはまた親薬物に比べ医薬組成物への可溶性が高いこともある。プロドラッグは酵素的過程、及び代謝的加水分解を含む様々な機序によって親薬物に変換することができる。Gangwar et al., "Prodrug, molecular structure and percutaneous delivery"、Des. Biopharm. Prop. Prodrugs Analogs, [Symp.] Meeting Date 1976, 409-21. (1977); Nathwani and Wood, "Penicillins: a current review of their clinical pharmacology and therapeutic use" Drugs 45(6):866-94(1993); Sinhababu and Thakker, "Prodrugs of anticancer agents"、Adv. Drug Delivery Rev. 19(2):241-273 (1996); Stella et al., "Prodrugs. Do they have advantages in clinical practice?"、Drugs 29(5):455-73 (1985); Tan et al., "Development and optimization of anti-HIV nucleoside analogs and prodrugs: A review of their cellular pharmacology, structure-activity relationships and pharmacokinetics"、Adv. Drug Delivery Rev. 39(1-3): 117-151(1999)を参照のこと。
【００２８】
本明細書では、「増殖性障害」は細胞の成長、分化又は増殖過程に影響する障害又は疾病を含む。本明細書では、「細胞成長、分化又は増殖過程」とは、細胞がその数、サイズ又は内容物を増やす過程、細胞が他の細胞とそれらを区別する特殊な特性のセットを発生する過程、又は細胞が特定の場所又は刺激に近づくか、若しくは遠ざかる過程である。細胞成長、分化又は増殖過程は、アミノ酸の輸送と分解、及びその他細胞の代謝過程を含む。細胞増殖性障害は、異常な制御を受けた細胞の成長、増殖、分化又は移動によって特徴づけることができる。細胞増殖性障害は、腫瘍形成性の疾病又は障害を含む。本明細書では、「腫瘍性の疾病又は障害」は、結果として腫瘍の生成又はその傾向をもたらし得る、異常な制御を受けた細胞の成長、増殖、分化、接着又は移動を特徴とする疾病又は障害を含む。本明細書では、「腫瘍」は良性又は悪性の組織塊を含む。細胞の成長障害又は増殖性障害の例には、これらに限られるものではないが、癌、例えば癌腫、肉腫又は白血病が含まれる。それらの例には、結腸、卵巣、肺、乳房、子宮内膜、子宮、肝臓、胃腸管、前立腺及び脳の癌；腫瘍形成及び転移；骨格形成異常；ならびに造血性及び／又は骨髄増殖性の障害が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００２９】
III.白金系化合物
本発明の実施形態の１つでは、主題の白金系化合物は経口的に利用可能な白金化学療法剤である。「経口的に利用可能」という用語は、本明細書では、経口投与されたときに、薬物又は薬剤が生物学的、生理学的、薬理学的、治療的、医学的又は臨床的に有意な活性を有することを意味する。適切な、経口的に利用可能な白金系治療剤には、サトラプラチン、(JM216)、JM118及びJM383、又は薬学的に許容されるその塩、異性体又はプロドラッグ、ならびにEP 0147926及びU.S.5,072,011に記載のその他のものが含まれる。しかしながら、白金系化学療法剤は経口的に利用可能であるが、直腸、皮下、静脈内、腹膜内、又は筋肉内等、他の適切な経路から投与してもよいことを認識しなければならず、それら投与は、本発明の教示に従うものとして認識される。同様に、非経口経路を通じて一般的に投与される他の白金化合物は、適切に調合するか、化学的に修飾することによって、経口的に利用できる。
【００３０】
別の実施形態では、白金系化合物は白金（IV）配位化合物であり、その化合物内の白金の酸化状態は+4である。例は本明細書にその全体が組み入れられているUS 6,413,953、US 5,072,011、US 5,519,155、US 5,547,982、US 6,518,428、WO 01/76569及びWO 02/28871、ならびにCoordination Chemistry Reviews (2002) 232、49〜67に開示されているサトラプラチン(JM216)、JM518、JM559、JM383、イプロプラチン、テトラプラチン（オルマプラチン）、LA-12((OC-6-43)-ビス(アセタト)(1-アダマンチルアミン)アミンジクロロ白金（IV）)、JM149、JM221、JM335、ZD0473(AMD473)及び白金(Pf)IV化合物である。
【００３１】
さらなる実施形態では、白金系化合物は次の一般構造式（式I)で表される構造の白金化合物である。
2007523123.tif 000006
【００３２】
R1〜R4は同じであっても異なっていてもよく、また、それぞれ独立にハロゲン、ヒドロキシル及びアセテートから選択される。R5はシクロアルキル、好ましくはシクロヘキシルである。ある実施形態では、R1及びR2は存在しない。別の実施形態では、R1とR2は同一であり、ヒドロキシル又はアセテートである。ある実施形態では、R3とR4は同一であり、共にヒドロキシル若しくは好ましくはハロゲン、例えば塩化物である。
【００３３】
本発明の更に別の態様では、白金系化学療法剤はサトラプラチン、又はサトラプラチンの代謝物である。サトラプラチン(JM216)は次の構造を有する。
2007523123.tif 000007
【００３４】
サトラプラチンは米国特許第5,072,011号及び第5,244,919号に開示されている方法によって、又はUS 6,518,428に開示の方法を適切に変更することによって合成できる。
【００３５】
細胞、動物又はヒト患者にサトラプラチンを投与すると、複数の関連する白金含有代謝物が形成される。用語「代謝物」は、本明細書では、薬物が投与された後に、体内又は細胞内の物理的、化学的、生物学的又は生化学的過程を経て薬物から派生した物質も含む。
図1（Raynaud et al. 1996 Cancer Chemother Phamacol 38:155-162より）は、サトラプラチン(JM216)の例示的代謝物を示しており、JM118、JM383、JM518、JM559及びJM149を描いている。当業者が理解するように、更なる白金含有分子を、細胞、動物又はヒト患者に投与後のサトラプラチンの代謝によって形成してもよく、このようなサトラプラチンの代謝物は本発明の範囲内に包含される。適した代謝物は、、生物学的又は生化学的な生体内変化によって、処置を施した細胞、動物又はヒト内部に形成することができる。又は、このような代謝物は、最初は処置した細胞の外（胃腸管等）で形成してもよく、又は好適な出発材料から合成反応によって形成し、細胞、動物又はヒト患者に直接投与してもよい。例えば、JM118はEP 147926、GB 2,060,615及びU.S. 4,329,299に開示されている方法に従って合成してもよく、又は別の発酵段階にてJM216から生体内変化により形成してもよい。
【００３６】
サトラプラチンは、その経口利用度ならびに、腎臓及び神経毒性がないといった好ましい安全プロフィールによってシスプラチンとは大きく異なっている。更に、サトラプラチンとシスプラチンの間に交差耐性は存在しない（Cancer Res, 53,2581; Br J Cancer 68,240）。実際、本明細書では、我々は、サトラプラチン及びその代謝物の有効性がシスプラチン耐性腫瘍細胞で維持されることを実証している（実施例4）。
【００３７】
好ましい実施形態では、白金系化合物は、サトラプラチン(JM216）、JM118及びJM383、又はそれらのプロドラッグから選択される。用語「プロドラッグ」は、本明細書では、薬理学的に活性な代謝物を生ずることができる物質も含む。プロドラッグそれ自体は、活性であっても、またなくともよい。例えば、それは不活性な前駆体でもよい。
【００３８】
例示の主題の白金系化学療法剤は、細胞、動物又はヒト患者に直接投与してもよい。しかしながら、代謝物に関する考察から明らかになるように、第１白金系化合物を細胞に投与し、その後投与した第１白金系化合物の代謝によって例示の白金系化学療法剤を形成してもよい。こうして投与した、このような第１白金系化合物は、例示の主題の白金系化学療法剤の「プロドラッグ」と見なすことができる。例えば、JM518（本発明の方法にとって有用な例示的化合物）は、JM518の代謝により形成されることから、JM118のプロドラッグと考えることができる。同じように、JM216もJM118のプロドラッグと考えられる。細胞、動物、個体、患者又はヒトに投与された時に、JM118のように、本発明の方法にとって有用である例示の化合物に変換（代謝）される他の化合物は、本発明の範囲内にあると見なされる。このような他の化合物には、本発明の方法に有用である例示の主題の化合物の塩、エステル又はリン酸塩も含まれる。当業者は、本発明の開示に基づいて、ふさわしいこのようなプロドラッグ化合物を複数思い浮かべることができるだろう。
【００３９】
別の実施形態では、白金系化合物はサトラプラチン(JM216)、JM118及びJM383合成の中間体である。例示の中間体には、IP-118（米国特許第4,687,780号）、JM-118（サトラプラチン合成の中間体、EP 147926）及びJM149(EP 333351）が含まれる。
【００４０】
更に別の実施形態では、白金系化合物は次の一般構造式の１つで表される。
(A)US 5,072,011に開示されている白金系化合物で、次の一般構造式で表される。
1.  次式のPt（IV）抗腫瘍錯体
2007523123.tif 000008
式中のA及びA1は、NH3及び1〜10個の炭素原子を持つアミノ基からなる基より別個に選択される。但し、A及びA1が共にアミノ基であるとき、少なくとも１つは炭素原子が1〜3個であることを条件とする。；両X基は同一であって、かつCl又はBrであり；R及びR１は、C1〜C10アルキル、シクロアルキル、アリール、炭素原子数3〜7のアラルキル、アルコキシ、アルケニル、炭素原子数1〜6のアルキルアミノからなる基、及びHから選択され、その基は、アルコキシ及びアルキルアミノの例ではヘテロ原子を介してカルボニルに結合している；X基は互いにシスであり、またCO2R及びCO2R1基は互いにトランスの関係にある。
【００４１】
(B)US 5,244,919に開示されている白金系化合物で、次の一般構造式で表される。
2007523123.tif 000009
式中のA及びA1は、NHNH3からなる基及びアミノ基からなる基から選択され；R及びR1は水素、C1〜C10アルキル、アルケニル、アリール、アラルキル、アルキルアミノ又はアルコキシであり；そしてXは水素又はアルキルモノカルボン酸塩若しくはジカルボキシレートである。
【００４２】
(C)US 5,519,155に開示されている白金系化合物で、次の一般構造式で表される。
1.  一般構造式IのPt（IV）錯体であって、
2007523123.tif 000010
式中、
Xはハロゲン原子、擬ハロゲン化物、又はヒドロキシ基であり、
R1及びR2は水素、C1〜C6直鎖若しくは枝分かれしたアルキル若しくはシクロアルキル若しくはアリールであり、又はR2NH2はヘテロ環式窒素供与体であり、かつ、R1及びR2は互いに同じでも、異なっていてもよく、
R3及びR4は水素、C1〜C5直鎖若しくは枝分かれしたアルキル若しくはシクロアルキル若しくはアリールであり、R3及びR4は互いに同じでも、異なっていてもよく、かつ、p1R5は水素、メチル又はエチルであり、
シス、トランス、シス構造を有している。
【００４３】
(D)EP 0 147 926 A1に開示されている白金系化合物で、次の一般構造式で表される。
2007523123.tif 000011
式中A及びBは同じでも異なっていてもよく、アミン及びアルキルアミンからそれぞれ選択されるか、又は１つになってジアミノシクロアルカンとなる。X及びYは同じでも、異なっていてもよく、ハロゲン化物及び擬ハロゲン化物から選択されるか、又は１つになってシクロアルカンジカルボキシレートとなる。但し、X及びYが１つになってシクロアルカンジカルボキシレートになるとき、A及びBはアミン及び／又はアルキルアミンではなく、A及びBが１つになってジアミノシクロヘキサンになるとき、X及びYはハロゲン化物及び／又は擬ハロゲン化物ではなく、かつ、Aがアミンのとき、Bはエチルアミン、イソプロピルアミン、又はシクロペンチルアミンではないことを条件とする。また、Z成分は任意であり、ハロゲン化物及びヒドロキシから選択される。
【００４４】
(E)次の一般構造式で表される、US 5,547,982に開示されている白金系化合物。
2007523123.tif 000012
式中RはH、炭素数8までの低級アルキル、炭素数8までのアルケニル若しくはアルキニル、又はアリールであり；XはCl、マロネート、グリコレート又はオキサレートであり；YはOH、Cl、COOR1 Lens B又は存在せず；Qはアルキレン、アルケニル、アルキニル又はアリール連結基であり；R4はH、低級アルキル又はアリールであり；R1はH、脂肪族、芳香族若しくはシクロ脂肪族基であり、そしてR2は環式脂肪族ケトン、ケタール、ヘミアセタール又はアセタールである。
【００４５】
(F)次の一般構造式で表されるEB 0 727 430B1に開示されている白金系化合物。
2007523123.tif 000013
式中
各Aは脱離基であり、同じであっても異なっていてもよく、又は１つになって２座のカルボキシレート又はサルフェートを形成してもよく、
各Bは同じでも異なっていてもよく、ハロ、ヒドロキシ、カルボキシレート、カルバメート、又は炭酸エステルであり、Zは置換アミンであり、置換基はPt原子が腫瘍細胞のDNA鎖に近づくことを立体的に妨げ、Zは、アミン窒素原子を通して、Ptに配意結合した不飽和環状アミンであり、その環状アミンは１つ又はそれ以上の他のヘテロ原子を含み、前記Zはアミン窒素原子に隣接する原子上に置換基を有し、かつ、
XはNH3である。
【００４６】
(G)次の一般構造式で表されるUS 4,329,299に開示されている白金系化合物。
2007523123.tif 000014
式中Aは式R-NH2を有するアミンであり、ここでRは枝分かれしたアルキルであり、X及びYは同じ又は異なったハロゲンである。
【００４７】
上記の白金系化合物は、本明細書では総称で「主題の白金系化合物」と呼ぶ。主題の白
金系化合物は、薬学的に許容される塩の形態をした任意の化合物をも包含する。本発明の主題の白金系化合物は、１つ又はそれ以上の非対称中心、好ましくは炭素若しくは白金を含み、従って、幾何異性体又は立体異性体になる。本発明は、これらの異性体及びその混合物の全て、ならびに薬学的に許容される塩及びプロドラッグ、又は主題の白金系化合物を包含する。
【００４８】
IV.非白金系治療剤
各種治療剤による治療に抵抗性又は不応性である癌又は腫瘍は、本発明の方法による治療から便益を受けることができる。好適な腫瘍は、非白金系化学療法剤に抵抗性又は不応性である腫瘍である。本発明の別のある実施形態では、主題の白金系化合物は、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチンを含む他の白金系化学療法剤に対し不応性である腫瘍の治療に有用であり得る。例えば実施例4は、サトラプラチン（JM216)等のある主題の白金系化合物の、シスプラチン抵抗性細胞における有効性を示している。これらの白金系化合物に対する抵抗性は、実施例に記述の方法を用いて試験し、検証することができる。
【００４９】
好ましい実施形態では、前記非白金系治療剤は、ホルモン系薬物ではない。ある実施形態では、前記非白金系治療剤は脳下垂体ダウンレギュレータではない。別の実施形態では、前記非白金系治療剤は、抗アンドロゲン剤ではない。
【００５０】
用語「ホルモン系薬物」とは、ホルモン治療に使用される化合物を表す。このような化合物は、ホルモン、又はホルモンの誘導体若しくは変異体でもよい。ホルモン系薬物はまた、ホルモンでもホルモンの誘導体又は変異体でもないが、ホルモンの産生若しくは作用に影響を及ぼす分子も含む。ホルモン系薬物による治療は、「ホルモン除去療法」と呼ばれる。ホルモン除去療法は、このタイプの癌又は腫瘍が成長に必要とするホルモンの供給を制限することによって癌又は腫瘍の成長を制限することを目的としている。
【００５１】
幾つかのタイプの癌、例えば前立腺癌は、その成長をホルモン、例えばテストステロンに依存している。テストステロンの量を減らすと、腫瘍の遅延又は縮小が可能なことが多い。このような治療は、通常、限られた期間、一般的には18〜24ヶ月間有効である。その後は、腫瘍は治療に反応しなくなり、成長が再開する。即ちホルモン不応性前立腺癌（HRPC）が発生する。
【００５２】
テストステロンレベルは、例えば手術（例えば、精巣除去）又は、ホルモン系薬物治療を含む薬物をベースとする治療によって下げることができる。このようなホルモン系薬物には主に2種類のものがある。１つめは、脳下垂体ダウンレギュレータで、脳下垂体から放出される黄体形成ホルモン放出ホルモン（LHRH）を遮断する。遮断されない場合、LHRHは、精巣を刺激してテストステロンを産生させる。このような脳下垂体ダウンレギュレータの例には、リュープロレリン（Prostap）、トリプトレリン（De-capaptyl）、ブセレリン（Suprefact)及びゴセレリン（Zoladex）が含まれる。２つめは、抗アンドロゲン剤で、前立腺に於けるテストステロンの作用を遮断する。このような抗アンドロゲン剤の例には、シプロテロンアセテート（Cyprostat）、フルタミド（Eulexin、Drogenil）、ニルタミド（Nilandrone）及びビカルタミド（Casodex）が含まれる。他のタイプの癌もまた、ホルモン系薬物により治療できることを理解されよう。そのような癌には、乳癌、子宮癌、甲状腺癌及び結腸癌が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００５３】
主題の白金系化合物と交差耐性でない適した非白金系薬剤を次に記述する。これらを、「抗癌剤」の非限定例としてとらえてよい。
【００５４】
1.タキサン
パクリタキセル及びドセタキソール等のタキサンに対する耐性は、これら薬物を利用するあらゆる化学療法にとって重大な問題である。タキサンは、チューブリンに結合して、異常なほど安定した微小管を形成させることにより、その細胞毒性効果を発揮する。その結果として起こる分裂停止が紡錘体のチェックポイントを誘発し、アポトーシスとなる。微小管の機能不全とは関係のない経路を介してアポトーシスを生じる他の機序も詳しく記述した。それらの機序には、細胞分裂制御-2（cdc-2)キナーゼの活性化、BCL-2のリン酸化、及びインターロイキン1β(IL-1β）と腫瘍壊死因子-α(TNF-α)の誘導によって起こる分子的事象が含まれる。更に、タキサンはアポトーシスカスケードを直接活性化する以外の機序を介しても、抗腫瘍活性を発揮することが示されている。これらの機序には、メタロプロテイナーゼ産生の低下と、内皮細胞の増殖及び運動性の阻害と、結果としての血管形成の阻害が含まれる。
【００５５】
実施例に示すように、出願人らは、サトラプラチン(JM216)等の、例示の主題の白金系化合物が、タキサンに耐性な腫瘍細胞株においてその治療効果を維持していることを証明している。換言すれば、タキサン治療に耐性である腫瘍細胞株は、例示の本発明の主題の白金系化合物を用いた治療には耐性を示さない。従って、本発明の実施形態の１つは、本発明の主題の白金系化合物、好ましくはサトラプラチン(JM216)を投与することによって、タキサンに耐性な腫瘍を持つ患者を治療する方法に関する。
【００５６】
用語「タキサン」とは、パクリタキセル（Taxol）及びドセタキセル（Taxotere）を含むが、これらに限定されないテルペン科のあらゆるメンバーを含むことを意味する。テルペンは、主に太平洋イチイの木、Taxus brevifoliaから得られ、一部の腫瘍、特に乳房、肺及び卵巣の腫瘍に対する活性を有する（例えばPazdur et al. Cancer Treat Res. 1993, 19:3 5 1; Bissery et al. Cancer Res. 1991 51:4845を参照のこと）。本発明の方法及び包装された医薬品では、好ましいタキサンはパクリタキセル、ドセタキセル、脱酸素化したパクリタキセル、TL-139及びそれらの誘導体である。Annu. Rev. Med. 48:353-374(1997)を参照のこと。
【００５７】
本明細書では、用語「タキサン」は、天然産及び関連形態のもの、ならびに参照により本明細書に組み入れられている米国特許第5,440,056号及び4,942,184号に記載され、Bristol-Myers OncologyよりTAXOL（登録商標）として販売されているもの等の、脱酸素化されたパクリタキセル化合物を含む、化学的に合成されたタキサン又はその誘導体の両方を包含している。パクリタキセルは不応性卵巣癌の治療への臨床使用が、米国において承認されている（Markman et al., Yale Journal of Biology and Medicine, 64:583, 1991; McGuire et al., Ann. Intern. Med., 111:273, 1989）。それは乳癌を含む複数タイプの新生物の化学療法に有効であり（Holmes et.al., J. Nat. Cancer Inst., 83:1797, 1991）、同様に乳癌の治療について承認されている。パクリタキセルは皮膚の新生物（Einzig et al., Proc. Am. Soc. Clin. Oncol., 20:46）及び頭頸部癌腫（Forastire et al. Sem. Oncol., 20:56, 1990）の治療に関する有力候補である。パクリタキセル化合物はまた腎多嚢胞症（Woo et al, Nature, 368:750, 1994）、肺癌及びマラリアの治療にとっても潜在性を示す。ドセタキセル（N-デベンゾイル-N-tert-ブトキシカルボニル-10-デアセチルパクリタキセル）は、Rhone-Poulenc Rorer S.Aより商品名TAXOTERE（登録商標）で製造されている。更に、別のタキサンが"Synthesis and Anticancer Activity of Taxol other Derivatives"D.G.I. Kingston et al., Studies in Organic Chemistry, vol.26,entitled "New Trends in Natural Products Chemistry"（1986)、Atta-urRabman, P.W.le Quesne, Eds. (Elvesier, Amsterdam 1986), pp 219-235に記載されており、これらは本明細書に組み入れられている。様々なタキサンはまた、米国特許第6,380,405号にも記載されており、その全体が本明細書に組み入れられている。
【００５８】
本発明の方法及び包装された医薬品は、耐性機序に関わらず、タキサンによる治療に耐性な腫瘍の治療に適用できる。タキサン耐性を与える既知の機序に含まれるのは、例えば、標的分子内、即ちα-チューブリン及び／又はβ-チューブリン内の分子変化、P-糖タンパク質（多剤耐性遺伝子MDR-1）のアップレギュレーション、アポトーシス制御及び有糸分裂チェックポイントタンパク質の変化、細胞膜の変化、インターロイキン6の過剰発現（IL-6; Clin Cancer Res (1999) 5, 3445-3453; Cytokine (2002) 17, 234-242)、インターロイキン8の過剰発現（IL-8; Clin Cancer Res (1999)5, 3445-3453; Cancer Res (1996)56, 1303-1308)若しくは単球走化性タンパク質1の過剰発現(MCP-1；(MCP-1; Clin Cancer Res (1999) 5, 3445-3453)、酸性及び塩基性繊維芽細胞成長因子、p185等の膜貫通型因子(HER2;Oncogene(1996)13, 1359-1365）若しくはEGFR（Oncogene (2000)19, 6550-6565; Bioessays (2000)22, 673-680）のレベルの変化、β1インテグリン等の接着分子の変化（Oncogene (2001) 20, 4995-5004）、グルタチオン-S-トランスフェラーゼ及び／又はグルタチオンペルオキシダーゼ等のハウスキーピング分子の変化（Jpn J Clin Oncol (1996) 26, 1-5）、インターフェロン反応因子9等の細胞シグナル伝達に関与する分子、NF-κBシグナル伝達に関与する分子、PI-3キナーゼ／AKT生存経路に関与する分子、RAF-1キナーゼ活性、PKCα/β若しくはPKCβ/β2の変化、ならびに、核アネクシンIV、DNA Jファミリータンパク質のメチル化制御Jタンパク質、チミジル酸合成酵素若しくはc-jun等の核タンパク質を介するものである。
【００５９】
タキサン耐性を与える別の既知の機序は、例えばアポトーシス制御及び有糸分裂チェックポイントタンパク質の変化である。このようなアポトーシス制御及び有糸分裂チェックポイントタンパク質の変化は、Bcl-2の過剰発現（Cancer Chemother Pharmacol (2000) 46, 329-337; Leukemia (1997) 11, 253-257）及びBcl-xLの過剰発現（Cancer Res(1997) 57, 1109-1115; Leukemia (1997)11, 253-257）を含む。Bcl-2の過剰発現は、エストラジオールの影響を受けることがある。（Breast Cancer Res Treat (1997)42, 73-81）。
【００６０】
タキサン耐性はまた、細胞膜の変化を介して与えられることもある。このような変化は、脂肪酸メチレン：メチル比の変化（CancerRes (1996)56, 3461-3467）、コリン：メチル比の変化（CancerRes (1996) 56, 3461-3467）、及び細胞膜透過性の変化（J Cell Biol(1986)102, 1522-1531）を含む。
【００６１】
タキサン耐性を与える、別の既知の機序は、酸性及び塩基性繊維芽細胞成長因子（Proc Natl Acad Sci USA(2000) 97, 8658-8663）、インターフェロン反応因子9等の細胞シグナル伝達に関与する分子（Cancer Res (2001) 61, 6540-6547）、NF-κBシグナル伝達に関与する分子（Surgery (2991) 130, 143-150）、PI-3キナーゼ／AKT生存経路に関与する分子（Oncogene (2001) 20, 4995-5004）、RAF-1キナーゼ活性（Anticancer Drugs (2000) 11, 439-443; Chemotherapy (2000) 46, 327-334）、PKCα/β（Int J Cancer (1993) 54, 302-308）又はPKCβ/β2( Int J Cancer (2001) 93, 179-184, Anticancer Drugs (1997) 8, 189-198）の変化である。
【００６２】
タキサン耐性は、核アネクシンIV（Br J Cancer (2000) 83, 83-88）、DNA Jファミリータンパク質のメチル化制御Jタンパク質（Cancer Res (2001) 61, 4258-4265）、チミジル酸合成酵素（Anticancer Drugs (1997) 8, 189-198）若しくはc-jun（Anticancer Drugs (1997) 8, 189-198）等の核タンパク質の変化、LPS（J Leukoc Biol (1996) 59, 280-286）、HIF-1（Mech Dev (1998) 73, 117-123）、VEGF(Mech Dev (1998) 73, 117-123）等のパラクリン因子を介して、及びスフェロイド培養中のbcl-XLの減少不足（Cancer Res (1997) 57, 2388-2393）によって与えられることもある。
【００６３】
2.インドールアルカロイド
実施例に示すように、出願人は例示の主題の白金系化合物が、インドールアルカロイドの一種であるカンプトテシンに耐性な腫瘍においても、その治療効果を維持していることを証明した。換言すれば、カンプトテシン治療に耐性な腫瘍は、例示の本発明の主題の白金系化合物による治療に耐性を示さない。従って、本発明の実施形態の１つは、本発明の白金系化合物を投与することによる、インドールアルカロイドに耐性な腫瘍を持つ患者を治療する方法に関する。
【００６４】
例示的インドールアルカロイドには、ビンクリスチン、ビンブラスチン及び5'−ノル−アンヒドロビンブラスチン（以下5'−ノル−ビンブラスチンと呼ぶ）等のビス−インドールアルカロイドが含まれる。ビス−インドール化合物（アルカロイド）、特に天然のビンクリスチン及びビンブラスチン、ならびに最近合成的に調製された5'−ノル−ビンブラスチンは、抗腫瘍療法において重要な役割を果たすことが知られている。これらの化合物は商品化され、又は、塩（それぞれ、主にサルフェート又はジフマラートとして）として各種薬局方にそれぞれ記載されている。
【００６５】
好ましいインドールアルカロイドは、カンプトテシン及びその誘導体と類縁物質である。カンプトテシンは、アジア産樹木であるCamptotheca acuminataの木部、樹皮及び果実中に見出される植物性アルカロイドである。カンプトテシン誘導体は、現在幾つかの悪性疾患の治療において標準的成分である。Pizzolato and Saltz, 2003を参照のこと。研究からは、カンプトテシンがDNA及びRNA合成の両方を阻害することが明らかにされている。最近の研究は、カンプトテシン及びその類縁物質が、多くの細胞過程（例えばDNA複製及び組み換え、RNA転写、染色体の脱凝集等）にとって重要な、細胞酵素であるトポイソメラーゼIの作用機序を妨害することを証明している。理論に拘束されることなく、カンプトテシンは、単鎖切断を可逆的に誘導し、その結果、細胞の複製能力に影響を及ぼすと考えられている。カンプトテシンは、トポイソメラーゼIとDNA間のいわゆる切断複合体を安定化する。この安定化された切断は、完全に可逆的であり、非致死性である。しかしながら、DNA複製フォークが切断複合体に衝突すると、単鎖の切断が不可逆的な２本鎖の切断に変換される。次に、カスパーゼの活性化を介してアポトーシスによる細胞死が生じる。カスパーゼ活性化の阻害によって、細胞はアポトーシスから一過性のG1休止に移り、続いて細胞の壊死が起こる。このように、細胞死の機序は、活発なDNA複製が起こる必要があり、その結果、S期に特異的な、カンプトテシン由来の細胞毒性効果が生じる。実際、in vitroにおいてS期にある細胞は、G1又はG2にある細胞に比べ、カンプトテシンに対し100〜1000倍の感受性があることを示した。
【００６６】
カンプトテシン類縁物質及び誘導体には、例えばイリノテカン（Camptosar, CPT-11)、トポテカン（Hycamptin）、BAY 38-3441、９−ニトロカンプトテシン（Orethecin、ルビテカン）、エキサテカン(DX-8951）、lurtotecan（GI-147211C）、ギマテカン、ホモカンプトテシン diflomotecan(BN-80915)及び９−アミノカンプトテシン(IDEC-13'）が含まれる。Pizzolato and Saltz, The Lancet, 361:2235-42(2003)；及びUlukan and Swaan, Drug 62:2039-57 (2002)を参照のこと。それ以外のカンプトテシン類縁物質及び誘導体には、SN-38（プロドラッグイリノテカンの活性化合物；変換は細胞のカルボキシエステラーゼによって触媒される）、ST1481、カレニテシン（BNP1350）、NB-506等のインドロカルバゾール、プロトベルベリン、イントプリシン、idenoisoquinolone、ベンゾ−フェナジン及びNB-506が含まれる。
【００６７】
本発明の方法及び医薬組成物は、上記薬物の任意の１つ又はそれ以上に対して耐性である腫瘍の治療に有用である。より多くのカンプトテシン誘導体が、WO 03/101998、米国特許第6100273号及び米国特許第5587673号に記載されている。
【００６８】
3.その他の非白金系治療剤
出願人らは、主題の白金系薬剤は、次の3つの機序：即ち、多剤耐性、チューブリン及びトポイソメラーゼIの少なくとも１つを介して耐性を生じる耐性腫瘍の治療に有効であることを証明した。この章では、これらの3つの耐性機序と、これらの機序の少なくとも１つを介して耐性を起こす治療剤について記述する。当業者は、腫瘍細胞が複数の機序を介して化学療法剤に対し耐性になることがあることを理解するだろう。例えば、パクリタキセルに対する腫瘍細胞の耐性は、多剤耐性、又はそれに替わって、又はそれに加えて、チューブリン変異を介して生じることもある。
【００６９】
好ましい実施形態では、本発明の方法及び医薬組成物は、非白金系化学療法剤に耐性である腫瘍の治療にとって有用である。
【００７０】
別の実施形態では、本発明の方法、包装された医薬品及び医薬組成物は、白金系化学療法剤に耐性な腫瘍の治療にとって有用である。
【００７１】
a.チューブリンを介して生じる耐性
微小管は、全ての真核細胞に存在する細胞内繊維構造である。有糸分裂紡錘体、中心小体、基底小体、繊毛、鞭毛、軸足及び細胞骨格等の各種細胞内小器官の構成要素として、微小管は、有糸分裂中の染色体移動、細胞運動、細胞内小器官輸送、細胞質分裂、細胞板形成、細胞の形態の維持、及び発生中の植物細胞壁での細胞の微小繊維蓄積の方向付けを含む多くの細胞機能に関与している。微小管の主要成分は、アルファ及びベータと呼ばれる２つのサブユニットから構成されたタンパク質であるチューブリンである。細胞におけるチューブリンの重要な特性は、重合して微小管を形成する能力、又は適切な条件下で解重合する能力である。この過程は、単離されたチューブリンを用いてin vitroでも起こすことができる。
【００７２】
微小管は、分裂中の細胞内の染色体を2つの娘核に正確に分配することに関与する細胞内小器官である有糸分裂紡錘体の構成成分として、細胞分裂において重要な役割を果たしている。様々な薬物が、チューブリン又は微小管に結合することによって細胞分裂を妨げる。この機序によって作用する抗癌剤には、アルカロイドのビンクリスチンやビンブラスチン、そしてタキサン系化合物であるパクリタキセルやドセタキセルが含まれる（例えばE.K.Rowinsky and R.C.Donehower, Pharmacology and Therapeutics, 52, 35-84(1991)を参照のこと）。哺乳類細胞に対し活性を持つ別の抗チューブリン化合物には、ノコダゾール等のベンズイミダゾールならびにコルヒチン、ポドフィロトキシン、エピシロン及びコンブレタスタチン等の天然産物が含まれる。
【００７３】
非白金系治療剤は、例えばα-チューブリン、β-チューブリン、又はその両方に結合すること、及び／又はその解重合を妨げて微小管を安定化させることによって、その活性を発揮する。活性の別の様態には、このようなチューブリンタンパク質の発現のダウンレギュレーション、又は、チューブリンの発現、活性若しくは機能の制御に関わる他のタンパク質への結合及びその活性の修飾が含まれる。
【００７４】
実施形態の１つでは、非白金系治療剤に対する腫瘍細胞の耐性は、チューブリンを介して生じる。「チューブリンを介して生じる」とは、チューブリンの直接的及び間接的な関与を含むことを意味する。例えば、耐性はチューブリンの変異によって生ずることもあり、チューブリンは耐性に直接関与する。又は、耐性は、チューブリン及び／又は微小管に影響する、細胞内の別の場所での修飾によって生ずることもある。これらのの修飾は、チューブリンの発現レベル又はパターンに影響を及ぼす遺伝子の変異でも、又は微小管の集合に一般的に影響を及ぼす遺伝子の変異でもよい。
【００７５】
哺乳類は6個のα及び6個のβ-チューブリン遺伝子を発現しており、それぞれが薬物耐性に介在することができる。
【００７６】
具体的には、特にチューブリン介在の非白金系治療剤に対する腫瘍の耐性は、チューブリン分子内の分子変化を介して与えることができる。例えば、分子変化には、点変異、欠失又は挿入等の変異、スプライス変異、又は遺伝子、メッセージ若しくはタンパク質のレベルでの他の変化が含まれる。特定の実施形態では、このような分子の変化は、β-チューブリンのアミノ酸250〜300で起こるか、又はβ-チューブリン遺伝子のヌクレオチド810及び／又は1092に影響する。例えば、これに限定するわけではないが、パクリタキセル耐性ヒト卵巣癌細胞株1A9-PTX10は、β-チューブリンのアミノ酸残基β270及びβ364が変異している（Giannakakou et al., 1997を参照）。別の例では、2種類のエポシロン耐性ヒト癌細胞株がアミノ酸残基β274及びβ282にそれぞれβ-チューブリン変異を獲得していた（Giannakakou et al., 2000を参照）。これらの変異は、チューブリンへの薬物の結合に影響を及ぼすと考えられている。又は、薬物耐性を与えるチューブリンの変異は、微小管集合に影響を及ぼす変更でもよい。この微小管集合における変化は、野生型の制御に比べ微小管集合を減少させたことによって、薬物の効果を補償することが示されている（Minotti, A.M., Barlow, S.B., and Cabral, F. (1991) J Biol Chem 266, 3987-3994）。当業者は、α-チューブリンでの分子変化も、一部の化合物に対する耐性を与えることが可能なことを理解するだろう。WO 00/71752は、チューブリン分子への多様な分子変化と、このような分子変化が細胞に与える可能性のある、一部の化学療法化合物に対する耐性について記載している。WO 00/71752及びその中の全ての参照は、本明細書にそのまま組み入れられる。
【００７７】
チューブリン介在の非白金系治療剤に対する腫瘍の耐性は、α-チューブリン又はβ-チューブリン、あるいはその両方の発現パターンの変更を介しても与えられることがある。例えば、いくつかの研究室が、特定のβ-チューブリン遺伝子の発現の変化が、培養腫瘍細胞株のパクリタキセル耐性と関係している証拠を提出している（Haber, M., Burkhart, C.A., Regel, D.L., Madafiglio, J., Norris, M.D., and Horwitz, S.B. (1995) J BioL Chem. 270, 31269-75; Jaffrezou, J.P., Durnontet, C., Deny, W. B., DUran, G., Chen, G., Tsuchiya, E., Wilson, L., Jordan, M. A., and Sikie, B.1.(1995) Oncology Res. 7,517-27; Kavallaris, M., Kuo, D.Y.S., Burkhart, C. A., RgeI, D.L., Norris, M. D., Haber, M., and Horwitz., S.B.(1997) J Clin. Invest. 100,1282-93;及びRanganathan, S., Dexter, D.W., Benetatos, C.A., and Hudes,G.R (1998) Biochi,. Biophys. Acta 1395,237-245）。
【００７８】
チューブリン介在の非白金系治療剤に対する腫瘍の耐性はまた、細胞のチューブリン総含有量の増加、α-チューブリン含有量の増加、又はα-チューブリンの様々な電気泳動による変異体の発現を介しても与えることができる。更にまた、耐性は、β-チューブリンの電気泳動移動度の変化、Hβ2チューブリン遺伝子の過剰発現、Hβ3チューブリン遺伝子の過剰発現、Hβ4チューブリン遺伝子の過剰発現、又はHβ5チューブリン遺伝子の過剰発現を介して与えられりこともある。
【００７９】
チューブリン介在の非白金系治療剤に対する腫瘍の耐性は、α-チューブリンのアセチル化増加等のチューブリンの翻訳後修飾（Jpn J Cancer Res (85) 290-297）、チューブリンダイマー又は重合した微小管と相互作用することで微小管の動態を調節するタンパク質を介しても与えられることがある。このようなタンパク質には、スタスミン（Mol Cell Biol(1999) 19, 2242-2250）及びMAP4（Biochem Pharmacol (2001) 62, 1469-1480）が含まれるが、これらのに限定されるものではない。
【００８０】
化学療法剤のうち、その耐性が少なくとも一部チューブリンを介して生じる例示的な化学療法剤には、タキサン（パクリタキセル、ドセタキセル及びその誘導体）、ビンカアルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン及びビノレルビン）、エポシロン（エポシロンA、エポシロンB及びジスコデルモリド）、ノコダゾール、コルヒチン、コルヒチン誘導体、アロコルヒチン、ハリコンドリンB、ドルスタチン10、マイタンシン、リゾキシン、チオコルヒチン、トリチルシステリン、エストラムスチン及びノコダゾールが含まれる。WO 03/099210及びGiannakakou et al., 2000を参照のこと。化学療法剤のうち、その耐性が少なくとも一部チューブリンを介して生じる例示的化学療法剤に含まれるのは、更に、コルヒチン、クラシン、コンブレタスタチン、クリプトフィシン、ドラスタチン、auristatin PHE、symplostatin1、eleutherobin、ハリコンドリンB、ハリミド、ヘミアステリン、ロウリマリド、メイタンシノイド、PC-SPES、ペロルシドA、レスベラトロール、S-アリルメルカプトシステイン（SAMC）、スポンギスタチン、タキサン、vitilevuamide、2-メトキシエストラジオール(2-ME2)、A-289099、A-293620/A-318315、ABT-751/E7010、ANG 600シリーズ、アンヒドロビンブラスチン(AVLB)、AVE806、bivatuzumab mertansine、BMS-247550、BMS-310705、cantuzumab mertansine、コンブレタスタチン、コンブレタスタチンA-4プロドラッグ（CA4P)、CP248/CP461、D-24851/D-64131、ドラスタチン10、E7389、EPO906、FR182877、HMN-214、huN901-DM1/BB-10901TAP、ILX-651、KOS-862、LY355703、メベンダゾール、MLN591DM1、My9-6-DMI、NPI-2353及びNPI2358、Oxi-4503、R440、SB-715992、SDX-103、T67/T607、トラツズマブ-DM１、TZT-1027、ビンフルニン、ZD6126、ZK-EPOである。
【００８１】
これらの化合物及び他の化合物に対する耐性は、実施例に記述した方法を用いて試験及び検証することができる。本発明の方法及び医薬組成物は、上記薬剤の任意の１つ又はそれ以上に対し耐性な腫瘍の治療にとって有用である。
【００８２】
化学療法剤のうち、その耐性が少なくとも部分的にチューブリンを介して生じる好ましい化学療法剤は、タキサンである。タキサンは、パクリタキセル及びドセタキセル（Taxotere）を含むが、これらのに限定されるものではなく、主に太平洋イチイ、Taxus brevifoliaに由来するもので、一部の腫瘍、特に乳房腫瘍と卵巣腫瘍に対し活性を有する（例えばPazdur et al. Cancer Treat Res. 1993.19:3 5 1; Bissery et al. Cancer Res. 1991 51:4845を参照のこと）。
【００８３】
b.多剤耐性を介して生じる耐性
別の実施形態では、非白金系治療剤に対する腫瘍細胞の耐性は、多剤耐性を介して生じる。用語「多剤耐性（MDR）」とは、本明細書では、広範な疎水性の、弱い陽イオン性の化合物が持つ細胞内に蓄積する能力を制限する特定の機序を表す。このような化合物は、多様な構造と作用機序を有するが、それでも全てこの機序の影響を受ける。
【００８４】
実験モデルは、多剤耐性が、ＡＴＰ依存の排出ポンプとして機能するＡＴＰ結合カセット（ABC）トランスポータの発現増加によって起こり得ることを証明する。これらのポンプは、様々な種類の抗癌剤や細胞毒性薬物、特に天然の疎水性の薬物を細胞外に活発に運び出す。哺乳類では、ABCトンラスポータのスーパーファミリーには、P-糖タンパク質（P-gp、ABCB1）トランスポータ（ヒトではMDR1及びMDR3遺伝子）、MRPサブファミリー（6つのメンバーから構成されている、例えばMRP1（ABCC1））及び胆汁酸塩搬出タンパク質（ABCB11;Cancer Res (1998) 58, 4160-4167）、MDR-3（Nature Rev Cancer(2002) 2, 48-58）、肺耐性タンパク質（LRP）及び乳癌耐性タンパク質（BCRP、ABCG2）が含まれる。(Kondratov et al., 2001及びその中の参考文献;Cancer Res(1993) 53, 747-754; J Biol Chem(1995) 270, 31269-31275; Leukemia (1994)8, 465-475; Biochem Pharmacol (1997) 53, 461-470）を参照のこと。これらのタンパク質は、多くの抗癌剤を含む、多様な化学構造を持つ数多くの物質を認識して排出することができる。P-gpの過剰発現は、MDRの最も一般的な原因である。MDRの別の原因は、トポイソメラーゼII、プロテインキナーゼC及び特異的グルタチオントランスフェラーゼ酵素内の変化によるとされている。Endicott and Ling, 1989を参照のこと。
【００８５】
本発明の方法は、非白金系治療剤のうち、その耐性が少なくとも部分的にMDRによるものである非白金系治療剤に対し耐性な腫瘍の治療に有用である。好ましい実施形態では、腫瘍の薬物耐性は、ABCトンラスポータの過剰発現を介して生じる。さらなる好ましい実施形態では、腫瘍の薬物耐性は、P-gpの過剰発現を介して生じる。P-gpの過剰発現は、数多くの機序が原因となる。その原因には、MDR-1遺伝子の増幅（Anticancer Res (2002) 22, 2199-2203）、RGP8.5等の転写因子を介して生じ得る（Nat Genet 2001 (27), 23-29）MDR-1遺伝子の転写の増加（J Clin Invest (1995) 95, 2205-2214; Cancer Lett (1999) 146, 195-199; Clin Cancer Res (1999) 5, 3445-3453; Anticancer Res (2002) 22, 2199-2203）、MDR-1翻訳効率の変化を伴う機序（Anticancer Res(2002) 22, 2199-2203）、MDR-1遺伝子の変異（Cell (1988) 53, 519-529; Proc Natl Acad Sci USA (1991) 88, 7289-7293; Proc Natl Acad Sci USA (1992) 89, 4564-4568）ならびにMDR-1遺伝子が関与し、結果としてハイブリッド遺伝子が形成される染色体再配置（J Clin Invest (1997) 99, 1947-1958）が含まれる。
【００８６】
別の実施形態では、本発明の方法は、非白金系治療剤のうち、その耐性が、MDRを生ずる別の原因、例えばトポイソメラーゼII、プロテインキナーゼC及び特異的グルタチオントランスフェラーゼ酵素内の変化を含む原因によるものである、非白金系治療剤に対し耐性な腫瘍の治療に有用である。
【００８７】
P-gpの作用を介して耐性が与えられる治療剤には、ビンカアルカロイド（例えばビンブラスチン）、アントラサイクリン（例えばアドリアマイシン、ドキソルビシン）、エピポドフィロトキシン（例えばエトポシド）、タキサン（例えばパクリタキセル、ドセタキセル）、抗生物質（例えばアクチノマイシンD及びグラミシジンD）、抗微小管剤（例えばコルヒチン）、タンパク質合成阻害剤（例えばピューロマイシン）、毒性ペプチド（例えばバリノマイシン）、トポイソメラーゼ阻害剤（例えばトポテカン）、DNAインターカレータ（例えばエチジウムブロマイド）及び抗有糸分裂剤が含まれるが、これらのに限定されるものではない。WO 99/20791を参照のこと。本発明の方法及び医薬組成物は、上記に挙げた薬物の任意の１つ又はそれ以上に耐性な腫瘍の治療に有用である。
【００８８】
c.トポイソメラーゼIを介して生ずる耐性
さらなる実施形態では、非白金系治療剤に対する腫瘍細胞の耐性は、トポイソメラーゼを介して生ずる。この分類に属する例示の治療剤には、トポイソメラーゼを、直接又は間接的に標的とする薬剤が含まれる。
【００８９】
DNAは通常スーパーコイル状二重螺旋として存在している。複製中、それは巻き戻され、単鎖は新規鎖合成のための鋳型となる。複製フォークの先端に生ずるねじり応力を軽減するためには、一過性に一方のDNA又は両方のDNAに切れ目を入れる必要がある。いずれの機序にも拘束されずに、トポイソメラーゼはこの過程を次のように行うと考えられている。トポイソメラーゼIIは一過性に２本鎖を切断し、これに対しトポイソメラーゼIは単鎖を切断する。この作用によって、切断された鎖が無傷の鎖の回りを回転できるようになる。次にトポイソメラーゼIが切断された鎖を繋ぎ直し、２本鎖DNAを完全な形に回復する。
【００９０】
実施形態の１つでは、非白金系治療剤に対する腫瘍細胞の耐性は、トポイソメラーゼを介して生ずる。「トポイソメラーゼを介して生ずる」とは、それがトポイソメラーゼの直接的及び間接的関与を含むことを意味する。例えば、耐性はトポイソメラーゼの変異によって生じ、耐性にトポイソメラーゼが直接関与することもある。又は、耐性はトポイソメラーゼに影響を及ぼす細胞内の別の部位での変更によって生ずることもある。これらの変更は、トポイソメラーゼの発現レベル又はパターンに影響する遺伝子の変異であってもよく、トポイソメラーゼの機能又は活性に広く影響する遺伝子の変異であってもよい。好ましい実施形態では、前記トポイソメラーゼはトポイソメラーゼIである。別の実施形態では、前記トポイソメラーゼはトポイソメラーゼIIである。
【００９１】
理論に拘束されずに、トポイソメラーゼIに作用する化合物は、トポイソメラーゼI-DNA複合体に、DNA複製を妨げる形で結合する。トポイソメラーゼIは、まずDNAと共有結合して相互作用する。次にトポイソメラーゼIはDNAの単鎖を切断し、トポイソメラーゼIのチロシン-273と切断されたDNA鎖の3'-リン酸基との間のリン酸ジエステル結合を介して共有結合中間体を形成する。次に無傷のDNA鎖が切れ目を通過し、次にトポイソメラーゼIがDNAを連結し直して複合体を開放する。カンプトテシン等の薬物はこの共有結合複合体に、DNAの再連結を妨げるように結合する。DNAの切れ目が残ることで、おそらくこれらの損傷と、複製複合体若しくは転写複合体との衝突によってアポトーシスが誘導される。
【００９２】
トポイソメラーゼIを介して耐性を生ずる好ましい治療剤には、カンプトテシン、その誘導体及び類縁物質が含まれる。例えば、９−ニトロカンプトテシン（IDEC-132）、エキサテカン（DX-8951f）、ルビテカン（９−ニトロカンプトテシン）、lurtotecan（GI-147211C）、diflomotecan（BN-80915）やBN-80927等のホモカンプトテシン、トポテカン、NB-506、J10708B、ピラゾロ［１，５−ａ］インドール誘導体（GS-5、ラメラリンD、SN-38、９−アミノカンプトテシン、ST1481及びカラニテシン(BNP1350)等）、ならびにイリノテカン(CPT-11）である。本発明の実施に用いることができる他のカンプトテシンは、The Camptothecins: Unfolding Their Anticancer Potential, Annals of the New York Academy of Science, Volume 922(ISBN 1-57331-291-6）に見出すことができる。
【００９３】
特定の理論に拘束されずに、カンプトテシンはトポイソメラーゼIの切断／再連結反応の再結合段階を妨げることによって、トポイソメラーゼIを阻害し、その結果共有結合中間体である、切断複合体が蓄積すると考えられている。具体的には、トポイソメラーゼI介在の非白金系治療剤に対する腫瘍の耐性は、トポイソメラーゼI分子内の分子変化を介して与えられる。分子変化には、例えば、点変異、欠失若しくは挿入等の変異、スプライス変異、又は遺伝子、メッセージ若しくはタンパク質のレベルでの他の変化が含まれる。
【００９４】
特定の実施形態では、このような分子の変化はアミノ酸位置723にある触媒性チロシン残基近傍に起こる。このような分子変化が起こり得る残基には、アミノ酸位置717、722、723、725、726、727、729、736及び737が含まれるが、これらのに限定されるものではない（確認する場合にはOncogene (2003) 22, 7296-7304を参照のこと）。
【００９５】
同等に好ましい実施形態では、このような分子変化はアミノ酸361と364との間に起こる。このような分子変化が起こり得る残基には、アミノ酸位置361、363及び364が含まれるが、これらのに限定されるものではない。
【００９６】
別の同等に好ましい実施形態では、このような分子変化はアミノ酸533の近傍に起こる。このような分子変化が生じ得る残基には、アミノ酸位置503及び533が含まれるが、これらのに限定されるものではない。
【００９７】
別の同等に好ましい実施形態では、このような分子変化はトポイソメラーゼIタンパク質の別のアミノ酸にも存在できる。このような分子変化が生じ得る残基には、アミノ酸位置418及び503が含まれるが、これらのに限定されるものではない。  
【００９８】
別の実施形態では、このような分子変化が重複することがある。実施形態の１つでは、このような重複はトポイソメラーゼIタンパク質のアミノ酸20から609に相当するヌクレオチドに存在し得る。
【００９９】
別の実施形態では、トポイソメラーゼI介在の腫瘍の耐性は、トポイソメラーゼIと相互作用する細胞タンパク質を介して与えることができる。このようなタンパク質としてはヌクレオリンがあるが、これに限定されるものではない。
【０１００】
特定の実施形態では、このような分子変化はアミノ酸370及び／又は723に起こる。例えば、これに限定することは意図していないが、カンプトテシン耐性ヒト白血病細胞株CEM/C2（ATCC No. CRL-2264）には、位置370（MetからThr）及び722（AsnからSer）の位置に2つのアミノ酸置換がある（Cancer Res(1995) 55, 1339-1346）。カンプトテシン耐性CEM/C2細胞は、カンプトテシンを存在させてin vitroで選択することでTリンパ芽球性白血病細胞株CCRF/CEMより派生させたものである（Kapoor et al., 1995. Oncology Research 7; 83-95, ATCC）。CEM/C2耐性細胞は、非定型多剤耐性を示し、カンプトテシンの阻害作用に対し、CCRF/CEM細胞由来のものに比べ感受性の低い形のトポイソメラーゼIを、親細胞に比べて低レベルで発現する。カンプトテシンに対する耐性に加えて、CEM/C2細胞はエトポシド、ダクチノマイシン、ブレオマイシン、ミトキサントロン、ダウノルビシン、ドキソルビシン及び4'-(９−アクリジニルアミノ）メタンスルホン-m-アニシダイドと交差耐性を示す。
【０１０１】
別の実施形態では、トポイソメラーゼI介在の非白金系治療剤に対する腫瘍の耐性は、トポイソメラーゼI遺伝子の発現パターンの変更によって与えられることもある（Oncol Res (1995) 7, 83-95）。さらなる実施形態では、トポイソメラーゼI介在の腫瘍の耐性は、薬物の代謝の変更によって与えられることもある。更に別の実施形態では、トポイソメラーゼI介在の腫瘍の耐性は、腫瘍内への薬物の不適切な蓄積及び／若しくは蓄積の減少、トポイソメラーゼIの構造又は位置の変更、トポイソメラーゼI薬物相互作用に対する細胞の反応の変更、又は薬物−DNA三重複合体形成に対する細胞反応の変更によって与えられることもある（Oncogene (2003) 22, 7296-7304; Ann N Y Acad Sci (2000) 922, 46-55）。
【０１０２】
トポイソメラーゼIは、細胞がカンプトテシンに曝露した後、速やかに核小体から核又は細胞質に移動すると考えられている。
【０１０３】
実施形態の１つでは、トポイソメラーゼI介在の腫瘍の耐性は、ユビキチン／26Sプロテアソーム経路又はSUMOに関与する因子等の、核小体から核及び／又は細胞質へのトポイソメラーゼIの移動に関与する因子を介して生ずる。
【０１０４】
別の実施形態では、トポイソメラーゼI介在の腫瘍の耐性は、DNA複製、DNAチェックポイント制御、及びDNA修復に関与する因子を介して生ずる。
【０１０５】
DNAチェックポイント制御の因子には、Chk1、ATR、ATM及びDNA-PK多量体等のS-チェックポイント制御のタンパク質が含まれる。
【０１０６】
別の実施形態では、トポイソメラーゼI介在の腫瘍の耐性は、アポトーシス経路又は他の細胞死経路の因子を介して生ずる。これには、bcl-2の過剰発現及びp21Waft/Cip1の過剰発現が含まれるが、これらのに限定されるものではない。
【０１０７】
別の実施形態では、トポイソメラーゼI介在の腫瘍の耐性は、トポイソメラーゼIの翻訳後修飾を介して生ずる。このような翻訳後修飾は、ユビキチン化及びスモイル化である。更にまた、このような翻訳後修飾には、Ubp11、DOA4及びトポール等の他の細胞タンパク質が関与することもある。
【０１０８】
トポイソメラーゼIIを介して耐性が生ずる治療剤には、VP16及びVM26等のエピポドフィロトキシン、及びGS-2、GS-3、GS-4及びGS-5等のピラゾロ［１，５−ａ］インドール誘導体が含まれる。
【０１０９】
V. 治療効果のアッセイ
実施形態の１つでは、本発明の白金系化合物は、非白金系治療剤に耐性な腫瘍細胞を殺す。腫瘍細胞の生存性は、当技術分野公知の方法によって判定できる。例えば、Shekan et al., J. Natl. Cancer. Inst. 82:1107-12(1990)に抗ガン剤スクリーニングに関して記載されている比色細胞毒性アッセイを使用してもよい。他の例としては、細胞を色素と接触させて、顕微鏡下でそれを見ることで腫瘍細胞の生存性を判定してもよい。生細胞は膜が無傷であるために染色されないことが観察でき、死亡しつつあるか、又は死んだ細胞は膜が「漏れ」をおこすために染色されることが観察できる。細胞による色素の取り込みは、細胞死を示している。この目的に有用な色素は、トリパンブルーである。
【０１１０】
本発明の例示的白金含有組成物は、耐性腫瘍細胞に細胞死の１つの様態であるアポトーシスを誘導することができる。アポトーシスは、形態学的、生化学的及び分子学的な変化の特徴的なパターンによって認識される。アポトーシスを起こしつつある細胞は、収縮しながら丸くなる。それらはまた、細胞が維持されている培養皿から剥離し始めることが観察できる。形態学的変化には、染色体及び細胞質の凝縮の特徴的なパターンが含まれ、これらのは顕微鏡法で容易に識別できる。DNA結合色素、例えばH33258で染色すると、アポトーシスを起こした細胞は、均質で丸い核に代わって、典型的な凝縮して穴のあいた核を示す。
【０１１１】
アポトーシスの典型的特徴は、ヌクレオチド鎖切断である。ヌクレオチド鎖切断とは、分子的変化の１つで、最初に核DNAがヌクレオソームのリンカー部分で分解されて、単一又は複数のヌクレオソームに等しい断片を生ずる。これらのDNA断片をゲル電気泳動にかけると、ゲル上で互いにほぼ等間隔の一連のDNAバンドを示す。隣り合う2本のバンドのサイズの違いは、ほぼ1ヌクレオソームの長さ、すなわち120塩基対長である。この特徴的なDNAバンド像は、DNAラダーと呼ばれ、細胞がアポトーシスを起こしていることを示す。アポトーシスを起こした細胞は、細胞DNA含有量の測定、変性に対するDNAの感受性の上昇、又は光の散乱特性の変化に基づいて、フローサイトメトリー法によっても識別できる。これらの方法は当技術分野では周知である。しかしながら、アポトーシスを含むプログラム細胞死の様態は多くの機序に拠るものであり、又は上記とは異なる表現型／特性を示すことがあることを認識しなければならない。このような例では、これらの機序を「アポトーシス」として特徴付け、分類し、又は見なすことができる。
【０１１２】
細胞毒性はまた、実施例に記載するように、Shekan他によるSRBアッセイを用いても測定してもよい( J Natl Cancer Inst(1990)82,1107-112)。
【０１１３】
細胞生存性に関するその他のアッセイは、Handbook of Fluorescent Probes and Research Products (Molecular Probes Handbook)の15章に記載されており、これは、その全体をここに組み入れる。
【０１１４】
別の実施形態では、本発明の白金系化合物は、非白金系治療剤に耐性な腫瘍細胞の成長を阻害する。白金系化合物による耐性腫瘍細胞の成長阻害は、部分的（細胞成長を遅らせる）か、又は完全に阻害（すなわち細胞周期のある点で細胞を停止させる）するもののどちらでもよい。細胞成長は当技術分野公知の任意の技術によって測定できる。このような技術には、例えばMTTアッセイ（テトラゾリウム塩3,[4,5-ジメチルチアゾール-2-イル]-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロマイドの還元に基づく）及びDNA-結合色素のピコグリーンを用いたピコグリーンアッセイが含まれるが、これらのは共にその全体をここに組み入れているTorrance, et al., Nat. Biotech. 19:940-945 (2001)に記載されている。細胞増殖／成長のための他のアッセイはHandbook of Fluorescent Probes and Research Products (Molecular Probes Handbook)の15章に記載されている。
【０１１５】
主題の白金系化合物を用いた治療に対する反応としての疾患、癌又は腫瘍の経過は、当技術分野公知の任意の標準的技術を用いてモニタリングできる。例えば腫瘍のサイズをモニタリング及び評価して、治療の結果として腫瘍のサイズの縮小が起こったか否かを見ることができる。モニタリング及び評価を、生検、触診、顕微鏡法、全身又は身体部位の画像及びスキャン、及び腫瘍特異的マーカー又は変異を調べる方法を含む様々な分子ベースの診断法及び予測法によって補助してもよい。
【０１１６】
VI.腫瘍及びその他増殖性障害
主題の白金系化合物は、非白金系治療剤に耐性な増殖性障害の治療に有用である。用語「増殖性障害」とは当技術分野で認められたものであり、更には動物のあるサブセットの細胞の異常な、若しくは不要な増殖に特徴づけられるように、動物に悪影響を及ぼす障害を含む。癌及び腫瘍は増殖性障害である。腫瘍を含む、又は腫瘍に由来する細胞は、一般的には増殖細胞、典型的には増殖亢進細胞と考えられ、また別の状況では腫瘍細胞は異形成的であってもよく、増殖したものであってもよい。
【０１１７】
本発明の開示を読めば、主題の白金系化合物を含む方法、医薬組成物、及び包装された医薬品は、他の増殖性障害の治療、又は腫瘍細胞を含む増殖中の細胞を殺すこと、若しくは阻害することに有用であることが、当業者に明らかになるだろう。
【０１１８】
様々な化学療法剤を用いた治療に耐性又は不応性である腫瘍は、本発明の方法及び医薬組成物を使った治療から便益を受けることができる。適した腫瘍は固形腫瘍であり、これは血液、骨髄、又はリンパ系以外の体組織の癌である。好適腫瘍は、非白金系化学療法剤に耐性な腫瘍である。白血病及びリンパ腫といった血液腫瘍もまた適している。白血病は、悪性化した白血球の増殖を特徴とする悪性疾患の総称である。リンパ系組織から生じた疾患は、リンパ腫と呼ばれる。
【０１１９】
固形腫瘍は、肝臓癌、胃癌、結腸癌、乳癌、膵臓癌、前立腺癌、皮膚癌、腎臓癌、骨癌、皮膚癌、子宮頸癌、卵巣癌、肺癌、気管支癌、小細胞及び非小細胞肺癌、胃、前立腺、膵臓及び頭頸部の癌、から選択できる。  
【０１２０】
血液腫瘍は、急性骨髄性白血病（AML）、急性リンパ芽球性白血病（ALL）、急性白血病、急性前骨髄球性白血病、慢性顆粒球性白血病（CGL）、慢性白血病、慢性リンパ白血病（CLL）、慢性骨髄性白血病（CML）、慢性骨髄単球性白血病、普通型急性リンパ芽球性白血病、好酸球性白血病、赤白血病、節外性リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、単球性白血病、及び前リンパ球性白血病等の、白血病である。
【０１２１】
血液腫瘍はまた、B細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、皮膚T細胞リンパ腫、高悪性度リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、低悪性度リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、粘膜関連リンパ組織（MALT)リンパ腫、T細胞リンパ腫、末梢T細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、本態性血小板血症、髄外骨髄腫、及び顆粒球性肉腫等の、リンパ腫でもよい。
【０１２２】
ある実施形態では、本発明の方法及び組成物は、タキサンに耐性又は不応性である腫瘍の治療に用いることができる。このような腫瘍には、例えば、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、腹膜癌、卵巣癌、気管支癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、再発性扁平上皮細胞癌を含む胃、前立腺及び頭頸部の癌が含まれる。
【０１２３】
別の実施形態では、本発明の方法及び組成物は、カンプトテシン及びその類縁物質に耐性又は不応性である腫瘍の治療に適用できる。このような腫瘍は、カンプトテシン及びその類縁物質が活性を示したいずれの腫瘍も含む。このような腫瘍の例には、トポテカン及びイリノテカンが共に有効であることが示されている卵巣癌及び小細胞肺癌、イリノテカンが有効であることが示されている結腸直腸癌、上部消化管悪性腫瘍、非小細胞肺癌、中皮腫、及び頭頸部癌、小細胞肺癌、子宮頸癌、乳癌、前立腺癌、直腸癌、白血病、リンパ腫癌及び悪性メラノーマが含まれる。Pizzolato and Saltz, The Lancet 361:2235-42 (2003)を参照のこと。
【０１２４】
不応性の癌又は腫瘍には、化学療法剤単独、放射線単独、又はその組み合わせによる治療に失敗したか、又は耐性である癌又は腫瘍が含まれる。本明細書の目的においては、不応性の癌又は腫瘍は、化学療法剤及び／又は放射線による治療によって阻害されたように見えるが、治療中止から5年、時には10年以上経た後に再発したものも包含する。
【０１２５】
用語「耐性」は、本明細書では、部分耐性と完全耐性の両方を含む。このように、非白金系治療剤に対して部分的にのみ耐性である腫瘍も、主題の白金系化合物を用いた治療からの便益を受けることができる。実際、ある実施形態では、このような耐性が単に疑われた場合、このような耐性が生じたことがまだ不明な場合、又は耐性が生じる前でさえも、腫瘍の治療することは有益であり得る。このような例では、主題の白金系化合物を適切な非白金系治療剤と共に適切に使用することによる、同時投与、併用療法又は治療処方が想定できる。本発明のあらゆる態様の別の実施形態では、主題の白金系化合物は、これまで任意の非白金系治療剤を用いて治療してきた癌又は腫瘍を患う個体を治療するのに有用である。このような実施形態では、癌又は腫瘍が非白金系治療剤に対し耐性又は不応性であるかをその後判定してもよく、又は全くしなくともよい。
【０１２６】
本発明の化合物が薬物耐性細胞株に対し細胞毒性活性を有するか否かを評価するために使用することができる本発明の細胞株には、タキセン耐性チューブリン変異細胞株の1A9-PTX10と1A9-PTX22、及びその親細胞株である1A9（J Biol Chem (1997) 272, 17118-17123）、アドリアマイシン耐性P-gp過剰発現細胞株NCI-Adr耐性（Vickers et al., 1989. Mol Endocrinology 3 (1):157-164）、カンプトテシン耐性細胞株CEM/C1とCEM/C2及びその親細胞株CEM（Kapoor et al., 1995. Oncology Research 7;83-95）、TWIST過剰発現細胞株HNE1-T3及びその親細胞株（Oncogene(2004)23,474-482）、ヒト卵巣癌細胞株SKOV-3及びSKOV-3のパクリタキセル耐性サブクローン（Clin Cancer Res (2003) 9, 2778-2785）、ミトキサントロン耐性結腸癌細胞株HT29/MIT及びその親株細胞株HT29（Cancer Res(2001)61, 6034-6037）ならびにエトポシド耐性乳癌細胞株MCF-7／VP及びその親細胞株MCF-7（Cancer Res(1994) 54, 152-158; Int J Cancer (1997) 71, 35-41)が含まれるが、これらのに限定されない。
【０１２７】
主題の白金系化合物はまた、良性の兆候を特徴とする増殖性障害を含む、別のタイプの増殖性障害の治療にも有用と考えられている。このような障害はまた、体が異常に速い速度で細胞を作る「細胞増殖性」又は「高増殖性」としても知られる。このような障害には、次のものが含まれるが、これらのに限定されるものではない：新生児の血管腫症、二次性の進行性多発性硬化症、慢性の進行性骨髄変性疾患、神経線維腫症、神経節細胞腫症、ケロイド形成、骨のパジェット病、乳房繊維嚢胞症、Peronies(ペロニー)とDuputren（デュプトレン）繊維症、再狭窄及び硬変。
【０１２８】
VII.併用治療
主題の医薬組成物は、例えば同一又は異なる製剤として、様々な他の薬物と同時に投与することができる。例えば、主題の医薬組成物は、癌の成長を阻害する抗癌剤、抗血管新生剤、及び抗転移剤を含む他の化学療法剤とそれらを組み合わせた治療法の一部として用いることができる。主題の医薬組成物はまた、免疫調整剤と組み合わせてもよい。
【０１２９】
好ましい実施形態では、主題の医薬組成物は、特定の薬物耐性機序を攻撃及び／又は克服する薬剤と同時に投与される。この状況においては、「特定の薬物耐性機序」とは、癌、腫瘍、癌細胞又は腫瘍細胞を抗癌剤に対して耐性にさせる任意の生理学的機序又は任意の細胞機序をさすが、薬物耐性機序は、適切な化合物、薬剤又は治療剤を投与することによって克服すること、即ち耐性を回避することができる。例えば、腫瘍の薬物耐性が、P-糖タンパク質等のＡＴＰ依存性ポンプの過剰発現によりもたらされる薬物排出の増加によるとき、耐性腫瘍の治療には、主題の医薬組成物と組み合わせて、P-糖タンパク質を介した過剰な薬物排出を逆転させる薬剤を用いることができる。このように、実施形態の１つでは、主題の医薬組成物は特定の薬物耐性機序を克服する薬剤と同時投与される。より好ましくは、前記特定の薬物耐性機序は、APT結合カセットトランスポータによりもたらされる薬物排出の増加である。このような適切な薬剤には、例えば、フェノチアジン、ベラパミル、タモキシフェン、キニジン、フェノチアジン、シクロスポリンA、メチレンジオキシメタフェタミン、メチレンジオキシエチルアンフェタミン、パラメトキシアンフェタミン、pervilleineF、PSC833及びLY335979が含まれる。P-糖タンパク質阻害剤の臨床使用に関する薬理学的兆候に関する一般的な考察については、Lun et al., Drug Resist. Clin. Onc. Hemat., 9:319-336 (1995);Schinkel et al., Eur. J. Cancer, 31A:1295-1298 (1995)を参照のこと。
【０１３０】
主題の医薬組成物と組み合わせることができる具体的な薬物の１つは、シクロスポリンの類縁物質であるPSC-833（Valspodar）である。PSC-833はシクロスポリンに比べて10倍強力なP-gp阻害剤であり、かつ腎毒性及び免疫抑制の副作用を持たないことが分かっている。様々なタイプの腫瘍に関する第I相及び第II相の試験から、PSC-833は同時投与した化学療法剤の薬物動態に大きな影響を及ぼすことが見いだされているが、この作用は投与する化学療法剤の用量を減らすことで調整できる。Baird and Kaye, 2003を参照のこと。
【０１３１】
別の実施形態では、腫瘍の薬物耐性がβ-チューブリンの変異によるとき、微小管以外のものを細胞標的とする癌治療剤を主題の医薬組成物と組み合わせて使用してもよい。
【０１３２】
さらなる実施形態では、主題の白金系化合物は、制吐薬も投与される患者に投与される。本発明による制吐剤は、当業者に公知である任意の制吐剤を含む。それらの制吐剤には、グラニセトロン、オンダンセトロン及びトロピセトロン等のセロトニン-3レセプター拮抗薬、NK1レセプター拮抗薬、シナリジン、シクリジン及びプロメタジン等の抗ヒスタミン剤、ラニチジン（Zantac）等のヒスタミンH2レセプター拮抗薬、クロロプロマジン、ドロペリドール、ハロペリドール、メトトリメプラジン、ペルフェナジン、トリフルオペラジン及びプロクロルペラジン等のフェノチアジン、ドンペリドンならびにメトクロプラミドが含まれるが、これらのに限定されるわけではない。
【０１３３】
別の実施形態では、主題の白金系化合物はロペラミド等の抗下痢剤、コルチゾン等のコルチコステロイド、GCSF又はエリスロポイエチン等の成長ホルモン又は成長因子、フロセミド等の利尿剤、オピエート例えばモルヒネ、若しくはパラセタモール等のステロイド性又は非ステロイド性鎮痛剤、又はアロプリノール等の尿酸降下剤でも治療を受ける患者に投与される。
【０１３４】
別の実施形態では、主題の白金系化合物は、血小板、赤血球又は全血でも治療を受ける患者に投与される。
【０１３５】
別の実施形態では、主題の白金系化合物は、骨髄幹細胞でも治療を受ける患者に投与される。
【０１３６】
別の実施形態では、本発明はまた、患者治療の方法に関する。その方法では、主題の白金系化合物が投与される患者は、非経口的に食事が与えられる。
【０１３７】
用語「同時投与」又は「同時投与された」とは、本明細書では、複数の種類の治療剤を、本発明の方法のあらゆる態様において、同時に、連続的に、又は断続的に投与することを含む。従って、主題の白金系化合物は、それを必用とする個体に、他の１つ又はそれ以上の治療剤の前に、その後に、又は一緒に投与できる。実施形態の１つでは、複数の治療剤を、主題の白金系化合物と共に調合して、単一の丸薬にする。
【０１３８】
本発明の方法は、放射線療法、手術、免疫療法等の他の癌治療法と組み合わせることもできる。
【０１３９】
VIII.包装された医薬品及び他の方法
本発明は、主題の白金系化合物の医薬組成物、及び以前に非白金系化学療法剤による治療を受けたことがあり、かつ、好ましくはそれに耐性又は不応性であった癌患者に、医薬組成物の有効量を投与するための指示書を含む、包装された医薬品も提供する。
【０１４０】
特定の実施形態では、包装された医薬品は他の医薬成分、及び／又は有効量の他の医薬成分を投与するための指示書を更に含む。ある実施形態では、前記他の医薬成分は、制吐性又は抗下痢性の治療用組成物である。別の実施形態では、前記他の医薬成分は、ＡＴＰ結合カセットトランスポータによりもたらされる薬物排出増加等の特定の薬物耐性機序を克服する薬剤である。
【０１４１】
本発明は、医薬品事業を行う方法を更に提供し、その医薬品事業には、下記が含まれる。
a)下記を含むデータを収集すること
i.  JM216、JM118、JM383及びそれらの代謝物から選択された白金化学療法化合物に関する、市販されている起源化合物と比較した生物学的同等性データ；又は
ii.  以前に非白金系化学療法剤で治療を受けたことがある癌患者の治療における、前記白金化学療法化合物の有効性を証明する臨床データ；
b)以前に非白金系化学療法剤で治療を受けたことがある癌患者、又は好ましくは非白金系化学療法剤に対し耐性若しくは不応性である癌患者を治療することを目的とした前記白金化学療法化合物に関する法的承認、又は市販許可を得るために収集データを医薬品規制当局に提出すること；
ならびに
c)  以前に非白金系化学療法剤で治療を受けたことがある癌患者の治療を目的とする、前記白金化学療法化合物を製造、輸入、包装／再包装、ラベル／再ラベル、又はマーケティングのための、あるいは前記承認の権利をライセンスするための準備又は手続き。
【０１４２】
特定の実施形態では、医薬品事業を行うための方法は、以前に非白金系薬剤で治療を受けたことがある癌患者の治療を目的とした、前記白金系化合物のマーケティング、流通又は販売を更に含む。
【０１４３】
このような方法は、例えば既に承認された治療用化合物のジェネリック版を市場に導入することを望むジェネリック医薬品会社による追従を受けることもある。
【０１４４】
VIII.医薬製剤
本発明の組成物を調合し、非白金系治療剤に対し耐性な癌を有する個体に、前記個体、例えば哺乳類の体内の薬物作用部位に活性成分が接触するような任意の手段によって投与して治療することができる。それらは、医薬品と共に用いることができる任意の従来の手段によって、個別の治療活性成分として、又は別の異なる治療剤のさらなる投与等、治療活性成分を組み合わせて、投与することができる。それらは単独で投与できるが、一般的には選ばれた投与経路及び標準的な薬務に基づいて選択された医薬担体と共に投与される。
【０１４５】
本発明による使用のための医薬組成物は、１つ又はそれ以上の生理学的に許容される担体若しくは賦形剤を用いて、従来の方式で調合できる。本発明の医薬組成物は、全身投与及び局所若しくは局部投与を含む様々な投与経路に合わせて調合できる。技術及び製剤は、一般にRemmington’s Pharmaceutical Sciences、Meade Publishing Co., Easton, PAに見いだすことができる。全身投与の場合、筋肉内、静脈内、腹腔内、及び皮下（それぞれi.m.、i.v.、i.p.及びi.c.）注射を含む注射が好ましい。注射では、本発明の医薬組成物は溶液、好ましくはハンクス液若しくはリンガー液等の生理学的に適合した緩衝液で調合できる。更に、医薬組成物は、個体に調合してから使用直前に再溶解又は懸濁してもよい。凍結乾燥も含まれる。
【０１４６】
最も好ましい投与経路は経口である。経口投与では、医薬組成物は、薬学的に許容される賦形剤を用いて、従来の方法により錠剤又はカプセル等の単位用量形態の形をとってもよい。薬学的に許容される賦形剤には、例えば結合剤（例えば、事前にゲル化したコーンスターチ、ポリビニルピロリドン又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）、充填剤（例えば、ラクトース、微結晶性セルロース又はリン酸水素カルシウム）、潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク又はシリカ）、崩壊剤（例えば、ポテトデンプン又はデンプングリコール酸ナトリウム）、又は湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）が含まれる。錠剤は当技術分野周知の方法によりコーティングしてもよい。経口投与向けの液体製剤は、例えば溶液、シロップ若しくは懸濁液の形をとってもよく、又は、使用前に水若しくは他の好適媒体により調製する乾燥製品としてもよい。このような液体製剤は、薬学的に許容される添加物を用いて、従来の手段により調製できる。薬学的に許容される添加物としては、懸濁剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体又は硬化食用脂）、乳化剤（例えば、レシチン又はアカシア）、非水性媒体（例えば、アーモンドオイル、油性エステル、エチルアルコール、又は分別植物油）、ならびに保存剤（例えば、メチル若しくはプロピル-p-ヒドロキシベンゾエート又はソルビン酸）が含まれる。液体製剤は、緩衝塩、香料添加剤、着色剤及び甘味剤を含んでもよい。
【０１４７】
経口投与向け製剤は、活性作用物質が制御されて放出するように適切に調合してよい。口腔内投与の場合、治療組成物は従来の方法で調合された錠剤又はロゼンジの形をとってよい。吸入投与の場合には、本発明による使用のための組成物は、通常はエアゾールスプレーの形態で、加圧されたパック又は噴霧器から、適切な噴射剤、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又はその他適切なガスを用いて送り出される。加圧したエアゾールの場合、用量単位は一定量を送り出すバルブを備えることによって決定できる。例えば、吸入器又はインサフレーターで使用するためのゼラチンのカプセル又はカートリッジは、治療剤とラクトース又はデンプン等の適切な粉末基剤との混合粉末を含有するように調合してよい。
【０１４８】
医薬組成物は、注射、例えばボーラス注射又は連続的な輸液による非経口投与に合わせて調合してよい。注射用の製剤は、単位用量形態で、例えば、アンプル又はマルチドースコンテナで、保存剤と共に提示してよい。組成物は、油性又は水性媒体の懸濁液、溶液又はエマルションの形態を取ってもよく、また懸濁剤、安定化剤及び／又は分散剤等の調合剤を含んでもよい。又は、活性成分は、例えば滅菌した発熱物質を含まない水等の好適媒体を用いて、使用前に調製する粉末の形態をとってもよい。
【０１４９】
前記の製剤に加えて、医薬組成物はまたデポ剤として調合してもよい。このような長期作用製剤は、埋め込み（例えば皮下若しくは筋肉内）又は筋肉内注射によって投与してよい。従って、例えば治療組成物は、適切な重合体材料、疎水性材料（例えば許容される油中のエマルションとして）若しくはイオン交換樹脂を用いて調合してもよく、又は、やや溶けにくい塩等の、やや溶けにくい誘導体として調合してもよい。
【０１５０】
全身投与はまた経粘膜又は経皮的方法でも行うことができる。経粘膜又は経皮投与の場合、透過すべきバリアに合った浸透剤を製剤に用いる。このような浸透剤は当技術分野で公知であり、例えば経粘膜投与に関しては胆汁酸塩及びフシジン酸誘導体が含まれる。更に、透過を促進するために界面活性剤を用いてもよい。経粘膜投与は鼻スプレー又は座剤を用いて行ってよい。局所投与については、本発明の組成物は当技術分野で公知のように、軟膏、膏薬、ゲル又はクリームに調合される。洗浄液を局部的に使用して、損傷又は炎症を治療し、治癒を早めることができる。経口投与の場合は、治療組成物はカプセル、錠剤又は液剤等の従来の経口投与形態に調合される。
【０１５１】
医薬組成物は、必要に応じて、活性成分を含有する１つ又はそれ以上の単位用量形態を含むことが可能なパック又はディスペンサ装置で提示してもよい。パックは、例えばブリスタパック等の金属製若しくはプラスチック製のホイルを含んでよい。パック又はディスペンサ装置には、投与に関する指示書を添付してもよい。別の実施形態では、パック又はディスペンサ装置は更に外箱で包装してもよい。
【０１５２】
本発明の医薬組成物はまた、持続及び／又は徐放製剤としても調合できる。このような持続及び／又は徐放製剤は、当業者に周知な持続的放出手段又は送達装置を用いて作ってよい。それらについては、米国特許：第3,845,770号；第3,916,899号；第3,536,809号；第3,598,123号；第4,008,719号；第4,710,384号；第5,674,533号；第5,059,595号；第5,591,767号；第5,210,548号；第5,073,543号；第5,639,476号；第5,354,556号；及び第5,733,566号等に記載されており、その開示は、各々、参照によってここに組み入れられている。本発明の医薬組成物は、例えばヒドロプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリクス、ゲル、透過膜、浸透圧システム、多層コーティング、微粒子、リポソーム、マイクロスフェア等、又はそれらの組合せを用いて、活性成分の１つ又はそれ以上を低速又は持続的に放出させることができ、様々な割合の所望の放出プロフィールを提供することができる。ここに記述したものを含む、当業者に公知である適切な持続放出製剤は、本発明の医薬組成物と共に使用するために容易に選択できる。従って、これらのに限定されるものではないが、錠剤、カプセル、ゲルキャップ、キャプレッツ、粉末等の、持続放出に適合化した、経口投与に適した１単位用量形態は、本発明に包含される。
【０１５３】
本発明の医薬組成物は、中性又は塩の形態に調合してもよい。薬学的に許容される塩は、酸付加塩を含み、例えば塩酸若しくはリン酸等の無機酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸等の有機酸を用いて形成される。遊離カルボキシル基を用いて形成された塩を、例えばナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、又は水酸化第二鉄等の無機塩基から、そしてイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカイン等の有機塩基から誘導することもできる。
【０１５４】
本発明はまた、非白金系治療剤に耐性又は不応性である癌又は腫瘍から選択される疾患の治療に有用な医薬組成物を調合する方法であって、次のものから選択される白金系化合物を、薬学的に許容される担体、希釈剤又は媒体と共に調合することを含む方法も提供する。
（ａ）  経口利用可能な白金系化学療法剤
（ｂ）  白金（IV）配位錯体を含む白金系化学療法剤
（ｃ）  次の一般構造式で表される白金系化学療法剤
2007523123.tif 000015
で表される白金系化学療法剤であって、R1及びR2は存在しても存在しなくても良く、R1からR4のそれぞれは、ハロゲン、ヒドロキシル、及びアセテートから独立して選択され、R5はシクロアルキルである白金系化学療法剤と；
（ｄ）サトラプラチン又はサトラプラチン代謝物と；
又は（ａ）から（ｄ）のいずれかの薬学的に許容される塩、異性体若しくはプロドラッグ。
【０１５５】
好ましい実施形態では、主題の発明は、次から選択される白金系化学療法剤を、非白金系治療剤に耐性又は不応性である癌又は腫瘍の治療を目的とする医薬組成物の製剤に使用することを意図している。
（ａ）  経口利用可能な白金系化学療法剤  
（ｂ）  白金（IV）配位錯体を含む白金系化学療法剤
（ｃ）  次の一般構造式で表される白金系化学療法剤
2007523123.tif 000016
で表される白金系化学療法剤であって、R1及びR2は存在しても存在しなくても良く、R1からR4のそれぞれは、ハロゲン、ヒドロキシル、及びアセテートから独立して選択され、R5はシクロアルキルである白金系化学療法剤と；
（ｄ）サトラプラチン又はサトラプラチン代謝物と；
又は（ａ）から（ｄ）のいずれかの薬学的に許容される塩、異性体若しくはプロドラッグ。
【０１５６】
本発明は更に、非白金系薬剤に対し不応性である癌若しくは腫瘍を患う個体、又は以前非白金系薬剤による治療を受けたことがある個体の治療に有用な医薬組成物を調製する方法を提供する。方法は次のものを含む。
a)下記を含むデータの収集
i.  JM216、JM118、及びJM383、又はそれらの薬学的に許容される塩、異性体及びプロドラッグのリストから選択された白金化学療法化合物に関する、市販されている起源化合物と比較した生物学的同等性データ；又は
ii.  以前に非白金系化学療法剤で治療を受けたことがある癌患者の治療における、前記白金系化学療法化合物の有効性を証明する臨床データ；
b)以前に非白金系化学療法剤で治療を受けたことがある癌患者の治療を目的とした前記白金化学療法化合物に関する法的承認、又は市販許可を得るために収集データを医薬品規制当局に提出すること
ならびに
c)これまで非白金系化学療法剤による治療を受けてきた癌患者を治療するために、前記白金化学療法化合物を製造、輸入、包装／再包装、ラベル／再ラベル、若しくはマーケティング、又は前記承認の権利をライセンスすること
【０１５７】
用量
投与量は、癌又は腫瘍の症状の改善をもたらすのに十分な化合物の治療有効量であるが、それは、当然、個々の活性成分の薬力学的特性やその投与形態及び経路；レシピエントの年齢、性別、健康状態及び体重；症状の性質及び程度；同時に行われている治療の種類、治療の頻度及び所望の効果といった既知の要因に応じて変化するだろう。
【０１５８】
本発明の医薬組成物の毒性及び治療有効性は、例えばLD50（集団の50%に対する致死量）及びED50（集団の50%の治療的有効量）を決定するための、細胞培養又は実験動物を用いた標準的な薬学的方法により判定できる。毒作用と治療効果の用量比は治療指数であり、それはLD50/ED50の比として表される。大きな治療指数を示す治療剤が好ましい。有毒な副作用を示す治療組成物を使用してもよいが、病気に冒されていない細胞を損傷する可能性を最小限にとどめ、それによって副作用を減らすために、患部組織部位を標的とするような治療剤の送達システムを設計するように心がけねばならない。
【０１５９】
細胞培養アッセイ及び動物研究から得たデータは、ヒトに使用するための範囲の用量を調合するのに用いることができる。用量は、ほとんど又は全く毒性を示さないED50を含む循環濃度範囲内にあることが好ましい。用量はこの範囲内で、採用した剤型及び利用した投与経路に応じて変化してもよい。本発明の方法に用いるいずれの薬剤も、治療有効用量は、最初に細胞培養アッセイによって推測できる。動物モデルにおいて、用量は、細胞培養で決定されたIC50（即ち症状又は生化学的活性を最大値の半分阻害できる試験治療剤の濃度）を含む循環血漿中の濃度範囲を達成するように調合してもよい。このような情報は、ヒトにおける有益な用量をより正確に決定するために用いることができる。血漿中のレベルは、例えば高性能液体クロマトグラフィーによって測定してもよい。
【０１６０】
当然のことながら、治療剤の適切な用量は、当業者、例えば医師に公知である様々な要因に応じて変わる。低分子の用量は、例えば、治療対象となる被検者又はサンプルの身元、サイズ又は状態に応じて変わり、更には組成物を投与する経路に応じて変わり、そして該当する場合には、治療の実施者が、疾患によって引き起こされる症状及び作用がそれらを介して生じる本発明の核酸又はポリペプチド等の治療標的に対して、望む効果に応じて変わる。
【０１６１】
例示的用量には、被検者又はサンプルの重量キログラム当たりミリグラム又はマイクログラム量の低分子、例えば約1マイクログラム／キログラム〜約500ミリグラム/キログラム、約100マイクログラム／キログラム〜約50ミリグラム／キログラム、又は約1ミリグラム／キログラム〜約5ミリグラム／キログラムが含まれる。当業者は、用量が体表面積に基づいても計算できることを理解するであろう。70kg、約1.8平方メートルの体表面積を持つヒトの用量には、被検者又はサンプルの体表面積当たりミリグラム又はマイクログラム量の低分子、例えば約50マイクログラム／平方メートル〜約15グラム／平方メートル、約5ミリグラム／平方メートル〜約1.5グラム／平方メートル、又は約50ミリグラム／平方メートル〜約150ミリグラム／平方メートルが含まれる。
【０１６２】
本明細書に記述したこれらの方法は、決して包括的なものではなく、特定の適用に合った更なる方法が当業者には明らかになるだろう。更にまた、組成物の有効量は所望の効果を発揮することが判明している化合物からの類推によって概算できる。
【０１６３】
本発明の態様の実施には、特に指定しない限り、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、トランスジェニック生物学、微生物学、組み換え型DNA及び免疫学の従来の技術を採用してもよく、それらは当技術分野の範囲内である。このような技術は、文献に詳しく説明されている。例えば、Molecular Cloning A Laboratory Manual, 2nd Ed., ed. by Sambrook, Fritsch and Maniatis (Cold Spring Harbor Laboratory Press: 1989）；DNA Cloning, Volumes Iand II(D.N. Glover ed., 1985); Oligonucleotide Synthesis (M.J.Gait ed., 1984)；Mullis et al.米国特許第4,683,195号；Nucleic Acid Hybridization (B.D.Hames & S.J.Higgins eds. 1984)；Transcription And Translation (B.D.Hames & S.J.Higgins eds. 1984)；Culture Of Animal Cells (R.I.Freshney, Alan R. Liss, Inc., 1987)；Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press, 1986)；B.Perbal, A Practicl Guide To Molecular Cloning (1984)；論文、Methods In Enzymology (Academic Press, Inc., N.Y.)；Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells (J.H.Miller and M.P.Calos eds., 
1987, Cold Spring Harbor Laboratory)；Methods In Enzymology, Vols. 154 and 155
(Wu et al, eds.), Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology (Mayerand Walker, eds., Academic Press, London, 1987)；Handbook Of Experimental Immunology, Volumes I-IV(D.M.Weir and C.C.Blackwell, eds., 1986)；Manipulating the Mouse Embryo, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1986)を参照のこと。 本明細書で言及されている全ての特許、特許出願及び参考資料は、その全体を、参照によってここに組み入れている。
【０１６４】
本発明を、当業者がそれを作り、使用できるように十分詳細に記述し、又は例示したが、本発明の精神及び範囲から逸脱することのない様々な代替、変更及び改良は、明らかである。
【０１６５】
本発明が、目的を達成し、記述した目的及び利点を得、同時にその本来の目的及び利点を得るためによく適合化されていることを当業者は容易に理解する。本明細書に記述した方法及び試薬は、好ましい実施形態を代表するものであり、例示的なものであって、発明の範囲を制限することを意図していない。当業者は、その変更や別の用途も思いつくであろう。これらの変更は本発明の精神の範囲内に包含され、請求項の範囲によって定義されたものである。
【０１６６】
本明細書に開示した発明には、本発明の範囲及び精神から逸脱することなしに、様々な置き換え及び変更を加えてよいことは、当業者には容易に理解されよう。
【０１６７】
本発明を、好ましい実施形態及び任意の特色によって具体的に開示したが、本明細書に開示された概念の変更及び変形が、当業者によって行われてもよく、このような変更及び変形は、添付の請求項によって定義されたように本発明の範囲内に入ると考えるものとする。
【０１６８】
本発明が、目的を達成し、記述した目的及び利点を得、それと同時にその本来の目的及び利点を得るためによく適合化されていることを、当業者は容易に理解する。本明細書に記述した方法及び試薬は、好ましい実施形態を代表するものであり、例示的なものであって、発明の範囲を制限することを意図していない。当業者は、その変更や別の用途も思いつくだろう。これらの変更は本発明の精神の範囲内に包含され、請求項の範囲によって定義されたものである。
【０１６９】
当業者は、過度の実験を行うことなく、本明細書に記述した本発明の特定の実施形態に対する多くの同等物を認識し、又は確認できるだろう。このような同等物は、次の請求項に包含されるものとする。当業者はまた、本明細書に記述した実施形態の全ての組合せ、請求項の態様又は特徴の組合せが本発明の範囲内であることを認識するだろう。
【０１７０】
実施例
実施例１．サトラプラチン及びその代謝物の有効性は、タキサン耐性腫瘍細胞で維持されている。
Ａ．  P-糖タンパク質を介して耐性を生ずるタキサン耐性腫瘍細胞
【０１７１】
我々は本発明の主題の白金系化合物が、他の化学療法剤に耐性である腫瘍細胞を阻害すること、又は殺すことに有用であるという驚くべき発見をした。その耐性は、P-糖タンパク質を介して生ずるものである。
【０１７２】
P-糖タンパク質を発現している細胞（NCI-Adr耐性亜株）は、ベラパミル非存在下においてアドリアマイシンに対し極めて耐性であったが、P-糖タンパク質の阻害剤であるベラパミル存在下では感受性を保っていた（相対耐性度は115倍）。JM216及びJM118を用いて処理しても、相対耐性度に変化は見られなかった（個々の実験の相対耐性度は1.0〜1.5倍の範囲内であった）。
【０１７３】
P-糖タンパク質発現NCI-Adr耐性亜株（Vickers et al.,1989 Mol Endocrinology 3(1):157-164）を用いた。3,000〜15,000細胞／ウエルを、試験化合物に48時間、様々な濃度で、12.5μg/mlのベラパミル存在下及び非存在下に曝露し、表1に示すIC50値を計算し、またShekan他によるSRBアッセイ（J Natl Cancer Inst(1990)82,1107-112）を用いて細胞毒性を測定した。簡単に述べると、細胞を96ウエルの皿に、化合物を加える24時間前に蒔いた。上記のように細胞を、化合物添加前4時間とそれに続く処理期間（48時間）ベラパミルに曝露した。アッセイは、冷やしたTCAを最終濃度10%になるように加えて停止し、プレートを1時間、4℃でインキュベートした。次にプレートを水で5回洗浄し、次に100μlのスルホローダミンB液（4%）を各ウエルに加えた。次にプレートを10分間、室温でインキュベートしてから、1%の酢酸で洗浄して未結合の色素を取り除いた。結合した色素を10mMトリズマ塩基で可溶化し、OD570で吸光度を読み取った。
【０１７４】
Ｂ．  チューブリンを介して耐性を生ずるタキサン耐性腫瘍細胞
我々は本発明の主題の白金系化合物が、他の化学療法剤に耐性である腫瘍細胞を阻害すること、又は殺すことに有用であるという驚くべき発見をした。その耐性は、チューブリンを介して生ずるものである。
【０１７５】
チューブリン変異細胞（1A9-PTX10）はパクリタキセル及びタキソテールに対し極めて耐性であり−個別の実験での相対耐性度は37〜142倍−それでもなおJM216、JM118及びJM383を用いての処理に対しては感受性を保っていた−個別の実験での相対耐性度は0.9〜3.9倍。変異を起こしていない親細胞株である1A9をコントロールとして用いた。
【０１７６】
チューブリン変異、パクリタキセル耐性ヒト卵巣癌細胞株1A9-PTX10及びパクリタキセル感受性親細胞株1A9は、A2780ヒト卵巣癌細胞株（J Biol Chem(1997) 272, 17118-17124）に由来するものであった。1,000〜4,000細胞／ウエルを、上記のように試験化合物に48時間、様々な濃度で曝露して表1に示すIC50値を計算し、またShekan他によるSRBアッセイ（J Natl Cancer Inst(1990)82,1107-112）を用いて細胞毒性を測定した（実施例1Aを参照のこと）。
【０１７７】
表１  パクリタキセル耐性細胞に於けるサトラプラチン及び代謝物の細胞IC50
2007523123.tif 000017
【０１７８】
表の説明：
表１は実施例１に記述した実験で決定されたIC50の値を示している。カッコ内の数字は、実施した実験の回数を示している。1回の実験それぞれについて、最低3個のレプリカウエルを各薬物濃度及び細胞株に使用した。個々の実験で決定された、IC50の平均値と標準偏差を示している。RRは相対耐性度、即ち表示の薬物に対して各耐性機序が与えた耐性のレベルを示しており、それは感受性細胞と比べた耐性細胞の平均値の比として計算される。
【０１７９】
実施例2．サトラプラチン及びその代謝物の有効性は、カンプトテシン耐性腫瘍細胞で維持されている
【０１８０】
我々は本発明の主題の白金系化合物が、他の化学療法剤に耐性である腫瘍細胞を阻害すること、又は殺すことに有用であるという驚くべき発見をした。その耐性は、トポイソメラーゼI を介して生ずるものである。
【０１８１】
トポイソメラーゼ変異細胞（CEM/C2）はカンプトテシンに対し極めて耐性であり−個別の実験での相対耐性度は1,280〜1,775倍−それでもなおJM216、JM118及びJM383を用いての処理に対しては感受性を保っていた−個別の実験での相対耐性度は0.48〜0.82倍。変異を起こしていない親細胞株CEMをコントロールとして用いた。
【０１８２】
カンプトテシン耐性CEM/C2細胞は、Tリンパ芽球性白血病細胞株CCRF/CEMから、in vitroでカンプトテシン存在下において選択して得られた（Kapoor et al., 1995. Oncology Research 7;83-95, ATCC）。      
【０１８３】
サトラプラチン及び代謝物の効果は、CCRF/CEM及びCEM/C2細胞について、フローサイトメトリーに適合化したカルセインAM生存性アッセイ（Molecular Probe）を用いて評価した。細胞を、化合物存在下又は非存在下にT-25フラスコに蒔き、48時間インキュベートしてからアッセイを停止した。細胞を2回PBSで洗浄し、200μlのカルセインAM溶液（0.3nM）/PBSの中で90分間、37℃でインキュベートした。細胞を一度PBSで洗浄してから、FACScanフローサイトメーターを用いて蛍光単位を決定した。
【０１８４】
表２  カンプトテシン耐性細胞におけるサトラプラチン及び代謝物の細胞IC50
2007523123.tif 000018
【０１８５】
表の説明：
表２は実施例２に記述した実験で決定されたIC50の値を示している。カッコ内の数字は、実施した実験の回数を示している。1回の実験それぞれについて、最低3個のレプリカウエルを各薬物濃度及び細胞株に使用した。個々の実験で決定された、IC50の平均値と標準偏差を示している。RRは相対耐性度、即ち非定型多剤耐性及び変異トポイソメラーゼIを介して、表示の薬物に対し与えられた耐性のレベルを示す。
【０１８６】
実施例３  サトラプラチン及びその代謝物の有効性はＡＴＰ結合カセット（ABC）トランスポータを介して耐性を生じる腫瘍細胞において維持される。
【０１８７】
我々は本発明の主題の白金系化合物が、他の化学療法剤に耐性である腫瘍細胞を阻害すること、又は殺すことに有用であるという驚くべき発見をした。その耐性は、ＡＴＰ結合カセット（ABC）トランスポータを介して生ずるものである。
【０１８８】
A.BCRP（ABCG2）を介して生ずる耐性
ミトキサントロン耐性結腸癌細胞株HT29/MITを用いた（Perego et al., Cancer Res, 61, 6034）。この細胞株における薬物耐性の発生には、乳癌耐性タンパク質（BCRP；ABCG2）のアップレギュレーションが関係する。親細胞株HT29をコントロールとして用いた。
【０１８９】
上記のように、2,000細胞／ウエルを、試験化合物に48時間、様々な濃度で曝露し、表3に示すIC50値を計算し、またShekan他によるSRBアッセイ（J Natl Cancer Inst(1990)82,1107-112）を用いて細胞毒性を測定した（実施例1Aを参照のこと）。HT29/MIT細胞はミトキサントロンに対し極めて耐性であり−個別の実験での相対耐性度は105〜239倍−それでもなおサトラプラチン及びJM118を用いての処理に対しては感受性を保っていた−個別の実験での相対耐性度は1.2〜2.0倍。
【０１９０】
Ｂ．  MRP1（ABCC1）を介して生ずる耐性
エトポシド耐性乳癌細胞株MCF-7/VPを用いた（Schneider et al., Cancer Res, 54, 152）。この細胞株における薬物耐性の発生には、多剤耐性タンパク質1（MRP1；ABCG1；Schneider et al., Cancer Res, 54, 152; Perez-Soler et al., Int J Cancer, 71, 35）のアップレギュレーションが関係する。親細胞株MCF-7をコントロールとして用いた。
【０１９１】
上記のように、2,000細胞／ウエルを、試験化合物に48時間、様々な濃度で曝露し、表3に示すIC50値を計算し、またShekan他によるSRBアッセイ（J Natl Cancer Inst(1990)82,1107-112）を用いて細胞毒性を測定した（実施例1Aを見よ）。MCF-7/VP細胞はエトポシドに対し極めて耐性であり−3つの個別の実験での相対耐性度は>20倍と決定−それでもなおサトラプラチン、シスプラチン及びJM118を用いての処理に対しては感受性を保っていた−個別の実験での相対耐性度は1.0〜1.8倍。
【０１９２】
表３  ミトキサントロン及びエトポシド耐性細胞に於けるサトラプラチン及び代謝物の細胞IC50
2007523123.tif 000019
【０１９３】
表３は実施例３に記述した実験で決定されたIC50の値を示している。カッコ内の数字は、実施した実験の回数を示している。1回の実験それぞれについて、最低3個のレプリカウエルを各薬物濃度及び細胞株に使用した。個々の実験で決定された、IC50の平均値と標準偏差を示している。RRは相対耐性度、即ち、表示の薬物に対し各耐性機序が与えた耐性の相対レベルを示す。
【０１９４】
実施例４  サトラプラチン及びその代謝物の有効性は、シスプラチン耐性腫瘍細胞において維持される。
【０１９５】
我々は本発明の主題の白金系化合物が、シスプラチン等、他の白金化合物に耐性である腫瘍細胞を阻害すること、又は殺すことに有用であるという驚くべき発見をした。
【０１９６】
卵巣癌A2780に由来するT129 cp80細胞株（Tito Jojo、NIHより得た；Biochem Pharmacol 52, 1855）は、シスプラチンに対し極めて耐性であり−個別の実験での相対耐性度は80〜106倍−それでもなおJM216、JM118及びJM383を用いての処理に対しては感受性を保っていた−個別の実験での相対耐性度は0.19〜2.59倍（表1）。変異を起こしていない親細胞株A129をコントロールとして用いた。
【０１９７】
1,000〜5,000細胞／ウエルを、試験化合物に48時間、様々な濃度で曝露し、表3に示すIC50値を計算した。細胞毒性は、実施例1Aに上述したように、Shekan他によるSRBアッセイを用いて測定した。
【０１９８】
表４  シスプラチン耐性細胞におけるサトラプラチン及び代謝物の細胞IC50
2007523123.tif 000020
【０１９９】
表の説明：
表４は実施例４に記述した実験で決定されたIC50の値を示している。カッコ内の数字は、実施した実験の回数を示している。1回の実験それぞれについて、最低3個のレプリカウエルを各薬物濃度及び細胞株に使用した。個々の実験で決定された、IC50の平均値と標準偏差を示している。RRは相対耐性度、即ちシスプラチン耐性を与える機序が表示の薬物に与えた耐性の相対レベルを示す。
【０２００】
参照：
R. D. Baird and S. B. Kaye, Drug resistance reversal-are we getting closer?, European Journal of Cancer, 39: 2450-61 (2003). 
P. Giannokakou et al. , J. Biol. Chem. 272: 17118-125 (1997). 
P. Giannokakou et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 97: 2904-2909 (2000)
Kelland L R. An update on satraplatin: the first orally available platinum anticancer drug. Expert Opin Investig Drugs 9 (6): 1373-1382,2000. 
【図面の簡単な説明】
【０２０１】
【図１】Raynaud他による、1996によるサトラプラチン(JM216)及びその代謝物の一部を示す。
【図１】
2007523123.tif 000027
【国際調査報告】
2007523123.tif 000028
2007523123.tif 000029
2007523123.tif 000030
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