(57)【要約】  本発明は、キレート配位子及び遷移金属イオンを含有し、前記配位子が、スピン状態の変化を引き起こす間に、標的物質と化学的又は生物化学的に反応することのできる置換基を有する磁気共鳴画像法用造影剤に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
キレート配位子及び遷移金属イオンを含有し、前記配位子が、スピン状態の変化を引き起こす間に、標的物質と化学的又は生物化学的に反応することのできる置換基を有する磁気共鳴画像法用造影剤であって、
ａ）一般式（Ｉ）
【化１】
2007530646.tif 000025
を有するか、
（式中、
−Ｒ４は、水素原子、１〜４個の炭素原子の直鎖もしくは分岐鎖アルキル基又はアリール基を表わし；
−Ｗは、−（ＣＨ２）ｍ−基を表わし、ｍは０又は１に等しく；
−Ｒ５は、大員環のＮ原子と前記Ｒ５基を有する炭素との間の結合を切断するための標的物質と反応し得る基を表すか、又は水素原子を表わし、
i)Ｒ５が、大員環のＮ原子と前記Ｒ５基を有する炭素との間の結合を切断するための標的物質と反応し得る基を表す場合（複合体Ｉａ）、置換基Ｒｉによって示される置換基Ｒ１〜Ｒ３は、相互に独立的に、水素原子、又は生物学的媒体中、及び複合体の磁気モーメント中の溶解特性及び分散性を調節するために選択された置換基を表わし、また、Ｒｉ置換基の１つについては、標的物質の反応によって隣接するピリジル基の電気的修飾を起こすことのできる置換基を表すことが可能であり；
ii)Ｒ５置換基が水素原子を表す場合（複合体Ｉｂ）、Ｒｉ基の１つは、標的物質との反応により隣接するピリジル基の電気的修飾を起こすことのできる置換基を表わし、残りのＲｉ基は、相互に独立的に、水素原子、又は生物学的媒体中、及び複合体の磁気モーメント中の溶解特性及び分散性を調節するために選択された置換基を表わし；
であると理解される）：
又は、ｂ）一般式（ＩＩ）
【化２】
2007530646.tif 000026
を有する造影剤。
（式中、Ｒｉで示されるＲ１及びＲ２は、相互に独立的に、水素原子、又は生物学的媒体中、及び複合体の磁気モーメント中の溶解特性及び分散性を調節するために選択された置換基を表わし；
Ｒ４及びＷは前記に定義した通りであり；
Ｒ５は、置換基（−Ｃ６Ｘ４−Ｙ−Ｒ６）を表わし、Ｘは電子吸引性基であり、Ｙは酸素原子、窒素原子又は硫黄原子から選択されるヘテロ原子であり、Ｒ６はグリコシダーゼにより切断を起こし得る置換基、又はアミノペプチダーゼにより切断を起こし得るアミノアシル基、又はエステラーゼ又はリパーゼにより切断を起こし得るアシル基、又は天然のアルドラーゼとの逆行性アルドール反応を起こし得る基、又はホスファターゼにより変換を起こし得る置換基を表わし；
Ｚは、それを有する２個の窒素原子と共に、
芳香族ベンゾトリアゾール、トリアゾール、テトラゾール又はピラゾール環を形成し、前記芳香環がＮＯ２置換基を有する二価の置換基である。）
【請求項２】
Ｒ６がβ−ガラクトシル基、β−グルクロニル基、Ｌ−プロリル基、Ｌ−ロイシル基、−ＣＯＣ５Ｈ１１基、
【化３】
2007530646.tif 000027
型のα，β−ジヒドロキシケトン基、又はホスホリル基を表し；
Ｘ基が、相互に独立的に、水素原子、フッ素原子又はＮＯ２基を表すことを特徴とする請求項１記載の式（ＩＩ）の造影剤。
【請求項３】
Ｒｉ基が、相互に独立的に、水素原子、Ｒ７が１〜４個の炭素原子を有するアルキル基を表す−ＣＯＯＲ７基、−ＮＯ２基、ハロゲン原子及び−ＣＨ２−ＣＯＯ-基から選択される電子吸引基、又は、３個のＲｉ基が−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨ２基である場合に残りのＲｉ基が前述した通りであることを特徴とする、式（Ｉａ）に対応する請求項１記載の造影剤。
【請求項４】
Ｒ５が式−Ｅ−Ｒ６に対応し、ＥがＥ−Ｒ６結合の切断の現象において自己破壊し得るスペーサー基であり、Ｒ６が、化合物又は生化学的化合物と反応し得る置換基であり、ピリジン−２−カルバルデヒドの脱離を引き起こす切断の連続を引き起こすことを特徴とする、式Ｉａに対応する請求項３記載の造影剤。
【請求項５】
Ｒ６がグリコシダーゼにより切断を起こし得る置換基、又はアミノペプチダーゼにより切断を起こし得るアミノアシル基、又はエステラーゼ又はリパーゼにより切断を起こし得るアシル基、又は天然アルドラーゼと逆行性アルドール反応を起こし得る置換基、又はホスファターゼにより変換を起こし得る置換基、例えばホスホリル基を表わし；
Ｅが、−Ｏ−ＣＯ−（ＣＲ’２）ｎ−Ｙ−基であり、
Ｒ’基が、相互に独立的に、水素原子、メチル基、又は
２個の隣接する炭素原子によって維持される２個のＲ’基は、一緒になって２個の隣接する炭素原子によって維持される、５又は６員環脂肪族又は芳香族環を形成しており；
ｎが３又は４の整数であり；
Ｙが酸素原子、窒素原子又は硫黄原子から選択されるヘテロ原子であることを特徴とする、請求項４記載の造影剤。
【請求項６】
Ｒ６がβ−ガラクトシル基、β−グルクロニル基、Ｌ−プロリル基、Ｌ−ロイシル基、−ＣＯＣ５Ｈ１１基、
【化４】
2007530646.tif 000028
型のα，β−ジヒドロキシケトン基、又はホスホリル基を表すことを特徴とする、請求項５記載の造影剤。
【請求項７】
５又は６員環芳香環が、フェニル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、インドリル、インダゾリル、フリル及びチエニル基から選択され、前記置換基は、メチル、クロロ、フルオロ、メトキシ、カルボキシ及びアセトアミド基から選択される種々の置換基を有することができ、５又は６員環脂肪族環がシクロヘキシル基又はシクロペンチル基であることを特徴とする、請求項５又は６記載の造影剤。
【請求項８】
Ｅが以下の式の１つに対応することを特徴とする、請求項５〜７のいずれか１項記載の造影剤。
【化５】
2007530646.tif 000029
【請求項９】
Ｒ５が式−Ｃ６Ｘ４−Ｙ−Ｒ６に対応し、（Ｃ６Ｘ４−Ｙ）が−（Ｃ６Ｘ４−Ｙ）−Ｒ６結合の切断の現象において自己破壊し得るスペーサー基であり、
Ｒ６がキノネメチドの脱離の原因となる切断の連続を引き起こす間に化合物又は生化学的化合物と反応し得る置換基である、式Ｉａに対応することを特徴とする、請求項１又は３記載の造影剤。
【請求項１０】
Ｙが、酸素原子、窒素原子又は硫黄原子から選択されるヘテロ原子であり、
Ｘが電子吸引基を表わし、
Ｒ６はグリコシダーゼにより切断を起こし得る置換基、又はアミノペプチダーゼにより切断を起こし得るアミノアシル基、又はエステラーゼ又はリパーゼにより切断を起こし得るアシル基、又は天然のアルドラーゼとの逆行性アルドラーゼ反応を起こし得る置換基、又はホスファターゼにより変換を起こし得る置換基、例えばホスホリル基を表わすことを特徴とする、請求項９記載の造影剤。
【請求項１１】
Ｒ６が、β−ガラクトシル基、β−グルクロニル基、Ｌ−プロリル基、Ｌ−ロイシル基、−ＣＯＣ５Ｈ１１基、
【化６】
2007530646.tif 000030
型のα，β−ジヒドロキシケトン基、又はホスホリル基を表わし、
Ｘが相互に独立的に、水素原子、フッ素原子またはＮＯ２基を表すことを特徴とする、請求項１０記載の造影剤。
【請求項１２】
（Ｃ６Ｘ４−Ｙ）が、以下の式の１つに対応することを特徴とする、請求項９〜１１のいずれか１項記載の造影剤。
【化７】
2007530646.tif 000031
【請求項１３】
３個のＲｉ基の１個が、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨ２基であり、残りのＲｉ基が、相互に独立的に、水素原子、ハロゲン原子、又はＲ７が、１〜４個の炭素原子を有するアルキル基を表わす−ＣＯＯＲ７基から選択され、−ＮＯ２基又は−ＣＨＯ基であることを特徴とする、式Ｉｂに対応する請求項１記載の造影剤。
【請求項１４】
（Ｃ６Ｘ４−Ｙ）が、以下の式の１に対応することを特徴とする、式（ＩＩ）に対応する請求項１又は２記載の造影剤。
【化８】
2007530646.tif 000032
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか１項記載の造影剤を含有することを特徴とする医薬組成物。
【請求項１６】
磁気共鳴画像法による診断を意図する医薬組成物の製造における、請求項１〜１４のいずれか１項記載の造影剤の使用。
【請求項１７】
造影剤が、請求項４又は９のいずれか１項で定義され、Ｒ６が、それぞれβ−ガラクトシル基又はβ−グルクロニル基であることを特徴とする、β−ガラクトシダーゼ又はβグルクロニダーゼの生体内分布の測定に使用される、請求項１５記載の医薬組成物。
【請求項１８】
造影剤が、請求項４又は９のいずれか１項で定義され、Ｒ６が、Ｌ−ロイシル基、−ＣＯＣ５Ｈ１１基、
【化９】
2007530646.tif 000033
型のα，β−ジヒドロキシアセトン基、又はホスホリル基を表すことを特徴とする、アミノペプチダーゼ、リパーゼ、トランスアルドラーゼ、及びホスファターゼの生体内分布の測定に使用される、請求項１５記載の医薬組成物。
【請求項１９】
造影剤が、請求項１３で定義される、Ｌ−スレオニンアルドラーゼの生体内分布の測定に使用される、請求項１５記載の医薬組成物。
【請求項２０】
合成中間体として使用する、式（４）の化合物。
【化１０】
2007530646.tif 000034
【請求項２１】
Ｒ５及びＲｉが請求項４〜８のいずれか１項で定義されている、式（Ｉａ）の複合体の製造方法であって、化合物（４）を、予め水素化し、請求項２０に記載された、式Ｃｌ−ＣＯ−（ＣＲ’２）ｎ−Ｙ−Ｒ６の塩化アシルと、塩基の存在下に結合し、Ｒ６基が任意に保護型である化合物を製造し、次いで、任意に脱保護により式（Ｉａ−１）の複合体を製造することを特徴とする方法。
【請求項２２】
Ｒ５が−Ｏ−ＣＯ−Ｃ（ＣＨ３）２−（ＣＨ２）２−ＯＲ６基であり、Ｒ６がペンタアセチル化β−ガラクトシル基であり、他のＲｉ及びＲ４基が水素原子である、式（Ｉａ−１）の複合体の製造方法であって、請求項２１に記載された化合物（４）を、予め水素化し、下記式（６）の化合物と、塩基の存在下に反応させ、ガラクトシル基が保護型の中にある複合体を製造し、次いで、脱保護により式（Ｉａ−１）の複合体を製造する段階を含むことを特徴とする方法。
【化１１】
2007530646.tif 000035
【請求項２３】
合成中間体として使用される、式（９）の化合物。
【化１２】
2007530646.tif 000036
【請求項２４】
Ｒ５が、Ｃ６Ｈ４−Ｏ−Ｒ６基であり、Ｒ６がペンタアセチル化β−ガラクトシル基であり、他のＲｉ及びＲ４置換基が水素原子である、式（Ｉａ−２）の複合体の製造方法であって、
下記式（２’）の化合物を、
【化１３】
2007530646.tif 000037
下記式（５’）の化合物と反応させ、
【化１４】
2007530646.tif 000038
ガラクトシル基が保護形態である下記式（６’）の化合物を製造し、次いで、脱保護の段階及びＦｅ（ＢＦ４）２を用いて処理し、式（Ｉａ−２）の化合物を製造する段階を含むことを特徴とする方法。
【化１５】
2007530646.tif 000039
【請求項２５】
Ｒ５が水素原子であり、Ｒｉ置換基の１個がＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨ２基である、式（Ｉｂ）の複合体を製造する方法であって、請求項２３に記載された、式（９）の化合物を、下記式（８）の化合物と反応させ、一級アミンの脱保護及び鉄複合体への変換による脱保護段階で式（Ｉｂ）の複合体を製造する段階を含むことを特徴とする方法。
【化１６】
2007530646.tif 000040
【請求項２６】
Ｒ５が−Ｃ６Ｈ４−Ｏ−β−ガラクトシル基であり、２個の窒素原子及びＺ基が、一緒にベンゾトリアゾール単位を構成し、Ｒ１、Ｒ２及びＲ４が水素原子である、式（ＩＩ）の複合体の製造方法であって、
下記式（１”）の化合物を、
【化１７】
2007530646.tif 000041
下記式（２”）の化合物と反応させ、
【化１８】
2007530646.tif 000042
ガラクトシル基が保護形態である下記式（３”）の化合物を製造し、
【化１９】
2007530646.tif 000043
次いで、Ｆｅ（ＢＦ４）２で処理する段階、次いで、脱保護段階により、式（ＩＩ）の複合体を製造する段階を含むことを特徴とする方法。
【請求項２７】
Ｒ５が、−Ｅ−Ｒ６基又は（Ｃ６Ｘ４−Ｙ−Ｒ６）基であり、Ｒ６が、それぞれβ−ガラクトシル基又はβ−グルクロニル基であり、Ｅ、（Ｃ６Ｘ４−Ｙ）、Ｒ４及びＲｉ基が、β−ガラクトシダーゼ又はβ−グルクロニダーゼの生体内分布を測定することを意図した医薬組成物の製造において、請求項３〜１２のいずれか１項で定義された通りである、式（Ｉａ）に対応する造影剤の請求項１６記載の使用。
【請求項２８】
Ｒ５が、Ｅ−Ｒ６基又は（Ｃ６Ｘ４−Ｙ−Ｒ６）基であり、Ｒ６がＬ−ロイシル基、−ＣＯＣ５Ｈ１１基、
【化２０】
2007530646.tif 000044
型のα，β−ジヒドロキシアセトン基、プロリル基又はホスホリル基を表わし、Ｅ、（Ｃ６Ｘ４−Ｙ）、Ｒ４及びＲｉ基が、アミノペプチダーゼ、リパーゼ、トランスアルドラーゼ又はホスファターゼの生体内分布の測定を意図する医薬組成物の製造における、請求項３〜１２のいずれか１項で定義されている、式（Ｉａ）に対応する造影剤の請求項１６に記載の使用。
【請求項２９】
Ｌ−スレオニンアルドラーゼの生体内分布を意図する医薬組成物の製造における、請求項１３に記載された、式（Ｉｂ）に対応する造影剤の請求項１６に記載の使用。
【請求項３０】
請求項１〜１４のいずれか１項記載の造影剤を投与する、細胞又は組織の磁気共鳴画像法による診断方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、磁気共鳴画像法造影剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）は、医療分野、特に診断の目的で広く用いられている技術である。ＭＲＩは、主に水分子の水素原子の核のスピンの磁化に基づいている。それは、画像を形成するために、平衡状態における分布に関して水分子の２つのモード（Ｔ１及びＴ２）による緩和を測定することにある。緩和は、全てのスピンが、高周波パルスの使用により外部磁場の影響の下に完全に整列する状態の後に発生する。ＭＲＩは、造影剤の高濃度の領域及び低濃度の領域の間の区別を可能にする。生物学の分野において、得られる画像は、基本的に実際は親水性である、造影剤の豊富にある組織を示す。
【０００３】
第一世代の造影剤は、本来、親油性勾配及び非特異的結合の機能として、ＭＲＩを受ける試料を通じて分布する、受動的な薬剤である。
【０００４】
研究は、活性物質すなわち化学的又は生物化学的活性、ｐＨ条件又は特定のイオンの濃度の存在を示すことのできる物質を明らかにするために実施されてきている。これらの物質は、配位子による、強い常磁性のイオン複合体からなり、イオンは一般にＧｄ（ＩＩＩ）である。このように強く常磁性のイオンを含む造影剤は、水分子周囲の緩和において、常に多少とも効果を有する永久分子磁石を構成する。それらの環境の特定の化合物に対して敏感なタイプの永久分子磁石の複合体を与えるための方法は、基本的に水分子についての常磁性金属の直接の環境の接近性の修飾に基づいている。それらが作用するという点で、水分子の迅速な交換のための触媒が種々の文献に記載されている、このようなラベルは、酵素的活性による緩和がいずれであるかについて改良された。
【０００５】
米国特許第５７０７６０５号明細書は、常磁性金属イオン及び配位子の複合体であり、前記配位子がキレート基、及びキレート基に共有結合している置換基を含む、ＭＲＩ薬剤を開示している。標的物質の非存在下で、置換基は、複合体の金属イオンと一体化しているか結合しており、金属イオンの少なくとも１カ所の配位部位を占有するかブロックしている。その結果、金属イオンの全ての配位部位はキレート基及び置換基によって飽和されている。標的物質の存在下で、置換基は、前記物質と反応し、金属イオンの少なくとも１カ所の配位部位におけるブロック又は占有をやめており、その結果、水の迅速な交換が、その部位で起こり、ＭＲ画像を向上させる。酢酸塩置換基のうちの１個が、ヒドロキシエチルβ−ガラクトース置換基と置換される、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ”Ｎ”’−テトラ酢酸（ＤＯＴＡ）の誘導体はこのような複合体の具体例である。この複合体において、酵素に感受性の末端基は水による配位に関してわずかの保護効果を有する。今すぐにでもガドリニウムの第九の配位部位に対して配位する水分子の平均数は、８個のみの配位部位を占有することのできる配位子を含有する同様の化合物の開裂した形態について１．０２に変わり、０．６５である（Meade,T.J.らの論文、「磁気共鳴画像法を用いた遺伝子発現のインビボ可視化」、Nature Biotechnology, 18, 321-325 (2000)を参照せよ）。造影剤の生物活性化の際の水分子の低い付加的な接近は、緩和を満足のいくように修飾しない。
【０００６】
更に、出願人の会社は、この造影剤に関する他の不都合、すなわち後者が、標的物質、すなわち酵素β−ガラクトシダーゼと十分な速度で反応しないことを見出した。これは、これと同じ造影剤の実験動物、すなわちゼブラフィッシュ胎児内での酵素の混入が、２４時間又は４８時間後でさえ、いかなる修飾をももたらさないことを示す実験を、出願人が実施したという理由である。混入された薬剤が、酵素的変換と関連して強烈な発色を起こす市販の発色性薬剤であった同一の実験と比較して、この結果が得られた。
【０００７】
ＷＯ９９／２１５９２は、米国特許第５７０７６０５号明細書の技術の治療薬タイプの標的物質への応用を開示する。しかし、上述した文献に開示されたタイプの化合物の標識を用いて得られたコントラストの程度には限界がある。
【０００８】
遷移金属イオンによって、及び配位子の性質に依存し、高スピン型及び低スピン型中に存在し得る配位子によって形成される複合体が知られている。高スピン型状態において、ほとんど全ての電子が不対電子であり、磁気モーメント中で実質的な増加をしなかった、それらのスピンの内部補強はない。低スピン型状態において、不対電子の数（通常０又は１）に依存し、複合体は、弱い、実際は０の磁気モーメントを有する。低スピンの六座大環状配位子によって複合化されるＦｅ(II)の具体例は、Wieghardtらの論文（Inorg. Chem., 1986, 25, 4877）に示され、高スピンの同様の五座大環状配位子によって複合化されるＦｅ(II)の具体例は、Spicciaらの論文（Inorg. Chim. Acta, 1998, 279, 192）に示される。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的は、標的物質、又は画像の獲得及び構築の段階の際にＭＲＩにかけられた細胞又は粗機器中の標的物質と関連する化学的活性を検出することのできる造影剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明のＭＲＩ用造影剤は、キレート配位子及び遷移金属イオンを含有する複合体であって、前記配位子が、スピン状態の変化を引き起こす間に、標的物質と化学的又は生物化学的に反応することのできる置換基を有する磁気共鳴画像法用造影剤であって、
ａ）一般式（Ｉ）
【００１１】
【化１】
2007530646.tif 000002
【００１２】
を有するか、
（式中、Ｒ４は、水素原子、又は１〜４個の炭素原子の直鎖又は分岐鎖アルキル基、又はアリール基を表わし；
Ｗは、−（ＣＨ２）ｍ−基を表わし、ｍは０又は１に等しく；
Ｒ５は、大員環のＮ原子と前記Ｒ５基を有する炭素との間の結合を切断するための標的物質と反応し得る基を表すか、又は水素原子を表わし、
i)Ｒ５が、大員環のＮ原子と前記Ｒ５基を有する炭素との間の結合を切断するための標的物質と反応し得る基を表す場合（複合体Ｉａ）、置換基Ｒｉによって示されるＲ１〜Ｒ３は、相互に独立的に、水素原子又は生物学的媒体中、及び複合体の磁気モーメント中の溶解特性及び分散性を調節するために選択された置換基を表わし、また、Ｒｉ置換基の１つについては、標的物質の反応によって隣接するピリジル基の電気的修飾を起こすことのできる置換基を表すことが可能であり；
ii)Ｒ５置換基が水素原子を表す場合（複合体Ｉｂ）、Ｒｉ基の１つは、標的物質との反応により隣接するピリジル基の電気的修飾を起こすことのできる置換基を表わし、残りのＲｉ基は、相互に独立的に、水素原子、又は生物学的媒体中、及び複合体の磁気モーメント中の溶解特性及び分散性を調節するために選択された置換基を表わし；
であると理解され）：
又はｂ）一般式（ＩＩ）
【００１３】
【化２】
2007530646.tif 000003
【００１４】
を有する。
（式中、Ｒｉで示されるＲ１及びＲ２は、相互に独立的に、水素原子、又は生物学的媒体中、及び複合体の磁気モーメント中の溶解特性及び分散性を調節するために選択された置換基を表わし、
Ｒ４及びＷは前記に定義した通りであり；
Ｒ５は、置換基（−Ｃ６Ｘ４−Ｙ−Ｒ６）を表わし、Ｘは電子吸引性基であり、Ｙは酸素原子、窒素原子又は硫黄原子から選択されるヘテロ原子であり、Ｒ６はグリコシダーゼにより切断を起こし得るβ−ガラクトシル基又はβグルクロニル基、又はアミノペプチダーゼにより切断を起こし得るアミノアシル基（例えば、Ｌ−プロリル又はＬ−ロイシル基）、又はエステラーゼ又はリパーゼにより切断を起こし得る、−ＣＯＣ５Ｈ１１等のアシル基、又は天然のアルドラーゼとの逆行性アルドール反応を起こし得る、例えば
【００１５】
【化３】
2007530646.tif 000004
【００１６】
型のα，β−ジヒドロキシケトン基、又はホスファターゼにより変換を起こし得るホスホリル基を表わし；
Ｚは、それを有する２個の窒素原子と共に、芳香族ベンゾトリアゾール、トリアゾール、テトラゾール又はピラゾール環を形成し、前記芳香環がＮＯ２置換基を有する二価の置換基である。）
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
化合物（ＩＩ）において、Ｘ基は、相互に独立的に、水素原子、フッ素原子又はＮＯ２基である。
【００１８】
Ｒ４基は、配位子の剛性を向上させ、その結果として初期金属複合体、及び標的物質による変換後の最終的な複合体の安定性を向上させるように選択される。
【００１９】
Ｗ基の選択は、自己破壊速度を改良するために行われる。
【００２０】
スピン状態における変化は、置換基の電気的除去又は修飾により得られる。
【００２１】
置換基の除去が重要である場合、スピンにおける変化は、低スピン（ＭＲにおける反磁性複合体の不活性化）から高スピン（ＭＲにおける常磁性複合体の活性化）への転移である。
【００２２】
置換基の電気的修飾が重要である場合、スピンにおける変化は、一般に低スピンから高スピンへの転移である。しかし、適当な配位子の選択により、反対方向の変化も得られる。
【００２３】
式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物の遷移金属は鉄であり、ＩＩからＩＩＩへの酸化状態の変化が好ましい。これは、そのより高い電気的緩和時間τｓ：１０−９−１０−１１ｓ（高スピンＦｅ（ＩＩＩ））；１０−１２−１０−１３ｓ（高スピンＦｅ（ＩＩ））によって隣接するプロトン緩和を修飾するために、隣接するプロトンの緩和を修飾するために、高スピン鉄（ＩＩ）と対比して、高スピン鉄（ＩＩＩ）がその協力のために認識されるためである（I. Bertini, C.Luchinat, G. Parigi:による出版物「常磁性分子の溶液ＮＭＲ」、無機化学における最新の方法、第２巻、Elsevier, Amsterdam, 2001;及びR. B. Lauffer, Chem. Rev., 1987, 87, 901を参照）。高スピンのＦｅ（ＩＩ）に基づく化合物は、半分のｄ電子核によって非常に安定した状態となる、鉄（ＩＩＩ）のｄ５電子状態を達成するために酸化される傾向にある。対照的に、本発明の場合に、強い場を提供する、他座配位子によって包囲された鉄（ＩＩＩ）は、高スピン鉄（ＩＩ）の場合のように、酸化の際の高エネルギー電子を除去する可能性がないように、その全ての６個の電子において、低エネルギーのｄ軌道（ｔ２ｇ型の３個の縮重軌道）中の対の状態中に配置される６個全ての電子をもたらす。従って、それは、トレーサー安定性から酸化まで始まる、本発明の、そしてＮＭＲ画像法に有利な電子緩和時間を有する、高いスピン複合体における、高い酵素の開始後、到着する電子スピンのない、重要な効果である。高スピン鉄（ＩＩＩ）の電子スピンは、プロトンの核スピンと良好に伝達される。
【００２４】
本発明の背景
ハロゲン原子は、塩素、フッ素、臭素又はヨウ素原子を意味する。一般に、塩素原子及びフッ素原子が好ましい；
５又は６員環芳香環は、任意にメチル、クロロ、フルオロ、ニトロ、メトキシ、カルボ
キシ及びアセトアミド基から選択される種々の置換基を有する、フェニル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、インドリル、インダゾリル、フリル及びチエニル基及びそれらの誘導体から選択される複素環基を意味する；
「５又は６員環脂肪族環」は、シクロヘキシル基又はシクロペンチル基を意味する；
「アルキル」基は、１〜４個の炭素原子の直鎖又は分岐鎖鎖を意味する；
「アリール基」は、１以上の縮合又は非縮合芳香核を含む置換基を意味する。
【００２５】
式Ｉの複合体の第一の実施態様によれば、Ｒ５置換基は、大員環のＮ原子と前記Ｒ５基を有する炭素との間の結合を切断するための標的物質と反応し得る置換基である。特定の複合体は、Ｉａによって示される。
【００２６】
Ｉａ複合体において、Ｒｉ基は、相互に独立的に、水素原子、又は金属のスピン状態を制御するための−ＣＯＯＲ７基、−ＮＯ２基、及びハロゲン原子から選択される電子吸引基、又は鉄（II）の２個の正電荷を補正し、従って、薬剤を全体として中性にするための、−ＣＨ２−ＣＯＯ−基等の負電荷を有する基を表す。
【００２７】
３個のＲｉ基の１個は、更に−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨ２基を表わすことができ、残りのＲｉ基は、前述した通りである。
【００２８】
Ｒ７は、１〜４個の炭素原子を有するアルキル基を意味する。このようなＲ７基は、全体としての薬剤の極性を低下するために用いられる。
【００２９】
下記にＩａ−１として示される、Ｉａ複合体の第一の他の代わりとなる形態によれば、Ｒ５は、−Ｅ−Ｒ６によって表され、Ｒ６は前記で定義した通りであり、ＥはＥ−Ｒ６結合が切断される現象において自己破壊し得るスペーサー基である。Ｒ６は、下記に記載される機構によってピリジン−２−カルバルデヒドの脱離を引き起こす切断のシリーズを引き起こす、化合物又は生物学的化合物と反応し得る基である。
【００３０】
Ｅは、−Ｏ−ＣＯ−（ＣＲ’２）ｎ−Ｙ−基であり、
Ｒ’基は、相互に独立的に、水素原子、又はＲ６の切断後に、その自己破壊を促進するためのスペーサーを予め決定するように選択される置換基である。特には、Ｒ’基はメチル基を表すか、２個の隣接する炭素原子によって維持される２個のＲ’基は、一緒になって２個の隣接する炭素原子によって維持される、５又は６員環脂肪族又は芳香族環を形成し（例えば、L. A. Carpino., J.Org. Chem., 1989, 54, 3303を参照のこと）、
ｎは、３又は４に等しい整数であり、
Ｙは、酸素原子、窒素原子又は硫黄原子から選択されるヘテロ原子である。
【００３１】
２個のＲ’基によって形成される、５又は６員環芳香族環は、フェニル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、インドリル、インダゾリル、フリル及びチエニル基から選択され、前記置換基は、メチル、クロロ、フルオロ、ニトロ、メトキシ、カルボキシル及びアセトアミド基から選択される種々の置換基を有することが可能である。２個のＲ’基によって形成される、５又は６員環脂肪族環は、シクロヘキシル基又はシクロペンチル基である。
【００３２】
化合物Ｉａ−１中のＥ基の具体例としては、以下の置換基が挙げられる。
【００３３】
【化４】
2007530646.tif 000005
【００３４】
Ｉａ−１化合物において、ピリジン−２−カルバルデヒドの脱離は、複合体のスピン状態を変化させ、同時に水分子の鉄の配位部位への付着を可能にする五座配位子を有する複合体を形成する。下記にＩａ−２として示される、Ｉａ複合体の第二の代わりとなる形態によれば、Ｒ５はＣ６Ｘ４−Ｙ−Ｒ６基によって表され、（Ｃ６Ｘ４−Ｙ）は、（Ｃ６Ｘ４−Ｙ）−Ｒ６結合の切断の現象において自己破壊し得るスペーサー基であり、Ｒ６が、下記に詳しく説明される機構によるキノネメチドの脱離の原因となる切断の連続を引き起こす間に化合物又は生化学的化合物と反応し得る置換基である。
【００３５】
特には、Ｘ、Ｙ及びＲ６は、前記に記載された意味を有する。
【００３６】
Ｉａ−２複合体において、（Ｃ６Ｘ４−Ｙ）基は、下記の意味をとり得る：
【００３７】
【化５】
2007530646.tif 000006
【００３８】
キノネメチドの脱離は、複合体のスピン状態を変化させ、同時に、水分子の鉄の配位部位への付着を可能にする、五座配位子を有する複合体を形成する。
【００３９】
式Ｉの複合体の第二の実施態様によれば、Ｒ５置換基は、水素原子を表す。これらの複合体は、Ｉｂによって以下に示される。
【００４０】
Ｉｂ複合体において、Ｒｉ基の１個は、標的物質との反応によって隣接するピリジル基の電気的修飾を経験し得る置換基、例えば、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨ２基を表わし、残りのＲｉ基は、相互に独立的に、水素原子、ハロゲン原子、又は−ＣＯＯＲ７基から選択される置換基であり、Ｒ７は、１〜４個の炭素原子を有するアルキル基、−ＮＯ２基又は−ＣＨＯ基を表す。
【００４１】
（Ｉｂ）タイプの複合体は、Ｒｉ置換基の１個の修飾の影響によりスピン状態を変化させる。例えば、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨ２タイプのＲｉ置換基は、Ｌ−スレオニンアルドラーゼの作用の下に再配列し、スピン状態を変化させる。アクセスは、下記に詳しく説明される機構による−ＣＨＯへの変換の間の配位圏における水分子に提供されない。第二の配位圏の水分子のみが影響を受ける。
【００４２】
一般式ＩＩの複合体の一実施態様によれば、Ｘ基は、相互に独立的に、水素原子、又はＮＯ２基及び下記の意味をとり得る（Ｃ６Ｘ４−Ｙ）基を表す。
【００４３】
【化６】
2007530646.tif 000007
【００４４】
本発明の複合体は、例えば酵素等の標的物質を検出するためのＭＲＩ標識として用いることができる。
【００４５】
（Ｉａ−１）型の複合体の作用は、Ｒ５が−Ｅ−Ｒ６基であり、Ｅが−Ｏ−ＣＯ−Ｃ（ＣＨ３）２−（ＣＨ２）２−Ｏ−スペーサー基であり、Ｒ６がβ−ガラクトシル基であり、Ｒ４基が水素原子を表わし、Ｗが単結合（言い換えれば、ｍ＝０）である、複合体について、以下の反応スキーム（スキーム１）によって説明される。このタイプの複合体は、β−ガラクトシダーゼの検出を可能にする。複合体（Ｉａ−１）が、β−ガラクトシダーゼの存在中に引き入れられた場合、β−ガラクトシル基の切断はβ−ガラクトースを形成し、それに続き、自然にスペーサー基が切断し、ラクトン４，４−ジメチルジヒドロフラン−２−オンが形成され、それに続き、Ｒ５置換基を有する炭素原子と大員環の窒素原子との間のの自然な切断が起き、ピリジン−２−カルバルデヒドが形成する。次いで、水分子は、放出される配位部位に付着し得、鉄（ＩＩ）中心は、高スピン状態を採用する。この化合物は、自発的に酸化状態ＩＩＩに酸化され、高性能ＭＲＩ造影剤になる。
【００４６】
スキーム１
【化７】
2007530646.tif 000008
【００４７】
【化８】
2007530646.tif 000009
【００４８】
この技術は、β−ガラクトシダーゼに加え、高度に変化した標的物質の存在を検出することを可能にする。特にグリコシダーゼ、アミノペプチダーゼ、リパーゼ及びホスファターゼを含む以下の標的物質を伴うカテゴリーの一部を形成する特定の標的物質又は他の酵素の存在を検出するのに用いられるＥ−Ｒ６基の具体例を以下に報告する。
【００４９】
【表１】
2007530646.tif 000010
【００５０】
ＥＣコードは、国際生化学・分子生物学会議（ＩＵＢＭＢ）によって用いられるものである。
【００５１】
上記具体例の意味は、http://www.brenda.unikoeln.de又はhttp://au.expasy.org/enzyme/に収載されたもの等のデータベース中に見出すことができる。
【００５２】
同様に、Ｅが、上記で定義されたスペーサー基（−Ｃ６Ｘ４−Ｙ−）であり、Ｒ６がβ−ガラクトシル基である、（Ｉａ−２）型の複合体の作用は、下記反応スキーム２によって説明される。
【００５３】
複合体（Ｉａ−２）が、β−ガラクトシダーゼの存在中に引き入れられた場合、β−ガラクトシダーゼの切断はβ−ガラクトースを形成し、それに続き、Ｒ５置換基を有する炭素原子と大員環の窒素原子との間の切断が起き、キノネメチドが形成する。次いで、水分子は、放出される配位部位に付着し得、次いで、酸化剤の作用は、鉄（ＩＩ）複合体を鉄（ＩＩＩ）複合体に変換することを可能にする。
【００５４】
スキーム２
【化９】
2007530646.tif 000011
【００５５】
このケースにおいても、β−ガラクトシダーゼに加え、高度に変化した標的物質の存在を検出することが可能である。特定の標的物質、又は特に、グリコシダーゼ、アミノペプチダーゼ、リパーゼ及びホスファターゼを含む以下の標的物質を伴うカテゴリーの一部を形成する、他の酵素の存在を検出するのに用いられるＲ６の具体例を以下に報告する。
下に示す。
【００５６】
【表２】
2007530646.tif 000012
【００５７】
鉄イオン、及び電気的修飾を実施し得るＲｉ基を有する六座型の配位子を含む複合体（Ｉｂ）の作用を、Ｒｉ置換基の１個が−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨ２基であり、他のＲｉ置換基が−ＮＯ２基である、複合体について、下記反応スキーム（スキーム３）によって説明する。このような置換基は、グリシンを放出するＬ−スレオニンアルドラーゼの作用の下で、スピン状態に変化をもたらすことを再配列する。従って、それはＬ−スレオニンアルドラーゼの検出を可能にする。
【００５８】
スキーム３
【化１０】
2007530646.tif 000013
【００５９】
同様に、Ｅが、前記で定義したようなスペーサー基（−Ｃ６Ｘ４−Ｙ−）であり、Ｗが特定の置換基（ｍ＝０）でなく、Ｒ６がβ−ガラクトシル基である、（ＩＩ）型の複合体の作用を、下記反応スキーム４に示す。
【００６０】
複合体（ＩＩ）が、β−ガラクトシダーゼの存在中に引き入れられた場合、β−ガラクトシダーゼの切断はβ−ガラクトースを形成し、それに続き、キノネメチドを形成するようにスペーサー基を配置し、ベンゾトリアゾール基の脱離を引き起こす。次いで、水分子は、放出される配位部位に付着し得、次いで、酸化剤の作用は、鉄（ＩＩＩ）複合体を鉄（ＩＩ）複合体に変換することを可能にする。
【００６１】
スキーム４
【化１１】
2007530646.tif 000014
【００６２】
本発明の他の主題は、本発明の造影剤を含有する医薬組成物である。
【００６３】
本発明は、また、磁気共鳴画像法による診断を意図する医薬組成物の製造、及び本発明の造影剤を投与される細胞又は組織の磁気共鳴画像法による診断方法における、本発明の造影剤の使用に関する。
【００６４】
更に、本発明の主題は、造影剤が、Ｒ５が−Ｅ−Ｒ６基、又は（Ｃ６Ｘ４−Ｙ）−Ｒ６基を表わし、Ｒ６が、それぞれβ−ガラクトシル基又はβ−グルクロニル基を表わし、Ｅ、（Ｃ６Ｘ４−Ｙ）、Ｒｉ及びＲ４基が前記に定義した通りである、式（Ｉａ）に対応する、β−ガラクトシダーゼ又はβ−グルクロニダーゼの生体以内分布の測定を意図する医薬組成物に関する。
【００６５】
本発明の他の主題は、造影剤が、Ｒ５が−Ｅ−Ｒ６基、又は（Ｃ６Ｘ４−Ｙ）−Ｒ６基であり、Ｒ６がＬ−ロイシル基、−ＣＯＣ５Ｈ１１基、
【００６６】
【化１２】
2007530646.tif 000015
【００６７】
型のα，β−ジヒドロキシアセトン基、又はホスホリル基を表し、Ｅ、（Ｃ６Ｘ４−Ｙ）基、Ｒｉ及びＲ４基が前記で定義した通りである、式（Ｉａ）に対応する、アミノペプチダーゼ、リパーゼ、トランスアルドラーゼ及びホスファターゼの生体内分布の測定を意図する医薬組成物に関する。
【００６８】
同様に、本発明の主題は、造影剤が式（Ｉｂ）に対応する、Ｌ−スレオニンアルドラーゼの生体内分布の測定を意図する医薬組成物に関する。
【００６９】
（Ｒ５が−Ｏ−ＣＯ−Ｃ（ＣＨ３）２−（ＣＨ２）２−ＯＲ６基である、（Ｉａ）の複合体の製造）
Ｒ６がβ−ガラクトシル基であり、他のＲｉ及びＲ４置換基が水素原子である、複合体（Ｉａ−１）の製造を、スキーム５のように実施することができる。
【００７０】
スキーム５
【化１３】
2007530646.tif 000016
【００７１】
【化１４】
2007530646.tif 000017
【００７２】
市販されている１，４，７−トリアザシクロノナン（１）を、２当量のクロロメチルピリジンと、ｐＨ９で水性媒体中で３日間反応させることにより、化合物（２）を調製し、この時点でｐＨは７に低下した。Spicciaらの論文、Inorg. Chem., 1994, 33, 4663によって記載された手段によって、ｐＨを再び９に調整し、化合物（２）の抽出前に、混合物を更に３日間撹拌した。
【００７３】
次いで、Ugalde-Saldivarらの論文（J. Chem. Soc. Dalton Trans., 2001, 3099-3107）による類似生成物について公表された手段によって、６０℃でＬｉＯＨの存在下、ベンジルアルコール中で、ピリジン−２−カルバルデヒドとの反応により、化合物（２）をベンジル化Ｎ／Ｏ−アセタール（３）に変換する。
【００７４】
次いで、６０℃でメタノール中、〔Fe(DMSO)6〕(NO3)2との３０分間の反応、それに続く、５℃への冷却前のＮａＢＰｈ４の添加により、化合物を沈殿させ、それを分離し、化合物（３）を鉄複合体（４）に変換する。
【００７５】
エタノール中、木炭上のパラジウムの存在下、水素を用いてベンジル基を除去した後、化合物（５）を得、ピリジン中、塩化アシル（６）と反応させ（以下の合成を参照）、ガラクトシル基が保護形態である複合体を得る。２０℃で２．５時間、メタノール中のアンモニア水の作用により脱保護を実施し、式（Ｉａ）の所望の複合体を得る。
【００７６】
本発明は、また、合成中間体として用いられる化合物（４）に関する。
【００７７】
以下のスキーム６は、塩化アシル（６）を合成するために用いることができる。
【００７８】
スキーム６
【化１５】
2007530646.tif 000018
【００７９】
スペーサーが（Ｅ２）型のものである、式（Ｉａ）の複合体を得るために、塩化アシル（６）に類似する前駆体を、下記スキーム７に従って合成することができる。
【００８０】
スキーム７
【化１６】
2007530646.tif 000019
【００８１】
Ｒｉ置換基が水素原子でない、式（Ｉａ）の複合体を得るために、所望のＲｉ基を有するクロロメチルピリジンを用いて同様の方法で製造を実施することができる。例えば、スキーム５の最初の段階における出発物質として、パラ−ニトロ置換クロロメチルピリジンを製造するためのスキーム９を参照してもよい。
【００８２】
Ｅ−Ｒ６が一般的な定義−Ｏ−ＣＯ−（ＣＲ’２）ｎ−Ｙ−Ｒ６を有し、Ｒ’、ｎ、Ｙ及びＲ６が前記で定義された通りである、式（Ｉａ）の複合体を得るために、スキーム５のように、化合物（４）を前もって水素化し、塩基の存在下に式Ｃｌ−ＣＯ−（ＣＲ’２）ｎ−Ｙ−Ｒ６の塩化アシルと結合し、製造を実施した。次いで、式（Ｉａ）の任意に保護された複合体を得、引き続き、当業者における通常の技術に従って脱保護を行った。
【００８３】
（Ｒ５がＣ６Ｈ４−ＯＲ６基である、（Ｉａ）型の複合体の製造）
Ｒ６がβ−ガラクトシル基であり、他のＲｉ及びＲ４置換基が水素原子である、複合体（Ｉａ−２）の製造をスキーム８により説明するように実施することができる。
【００８４】
スキーム８
【化１７】
2007530646.tif 000020
【００８５】
化合物（２’）は、ジエチレンジアミン（市販されている）を塩化トシルと反応させることによって製造される。得られた化合物を、第一段階においてＭｅＯＮａと処理し、次いで、独立の段階でエチレングリコールビストシレートで処理して生成物（１’）を得る。（１’）の２個の窒素原子は、氷酢酸中の臭化水素酸の作用によって選択的に保護される塩化ピコリル塩酸塩での処理は、窒素性の大環状上に、２個のピコリルアームを導入し、最終的なトシル基は、１００℃での濃硫酸中での処理によって除去され、化合物（２’）を与える。
【００８６】
化合物（３’）は、酸化銀の存在下、４−ヒドロキシベンズアルデヒド（市販されている）を、１−ブロモ−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノースと反応させることによって得られ、後者は、ペンタ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノース（市販されている）の、氷酢酸中の臭化水素酸との反応によって得られる。
【００８７】
次いで、化合物（３’）を、１当量の２−ブロモピリジン及び１当量の臭化イソプロピルマグネシウムの混合物で処理し、アルコール（４’）を製造する。後者は、塩化チオニルとの反応により塩化物（５’）に変換される。化合物（５’）は、炭酸カリウムの補助を受けて、化合物（２’）をアルキル化するために用いられ、化合物（６’）を製造する。後者は、メタノール中のＭｅＯＮａで処理され、ガラクトシル単位上の４個のアセチル保護基が除去される。Ｉａ−２複合体の多段階合成は、鉄（ＩＩ）原子を有するリガンドを複合体化するためにメタノール中のＦｅ（ＢＦ４）２で処理して終了する。
【００８８】
この合成の間に形成される種々の化合物の製造を、実施例１〜１４によって説明する。
【００８９】
Ｒｉが水素原子でない、式（Ｉａ−２）の複合体を得るために、製造は、所望のＲｉ及び／又はＲ４基で置換されたクロロメチルピリジンを用いて同様な方法で実施され得る。例えば、スキーム８の最初の段階における出発材料としてのパラ−ニトロ−置換クロロメチルピリジンの製造のためのスキーム９がなされることが参照される。
【００９０】
Ｅ−Ｒ６が、一般的な定義−Ｃ６Ｘ４−Ｙ−Ｒ６（Ｘ、Ｙ及びＲ６は前記に定義された）を有する、式（Ｉａ−２）の複合体を得るために、ペンタ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノース反応体を、エステラーゼ／リパーゼ活性に対応するＲ６単位について、塩化アシルにより置換し、及びプロテアーゼの活性に対する応答について、アミノ酸を保護し活性化することにより、製造をスキーム８のように実施する。α，β−ジヒドロキシケトンを表わすＲ６単位について、E. Gonzalez-Garciaらの論文、Chem. Eur. J., 2003, 9, 893-899による出版物に記載の戦略が適用される。
【００９１】
Ｒ４がメチル基を表す、式（Ｉａ−２）の複合体を得るために、スキーム８の最初の段階で導入される塩化ピコリルに対応する誘導体を合成する必要がある。
【００９２】
（Ｒ５が水素原子であり、Ｒ１置換基の１つが−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨ２基である、（Ｉｂ）タイプの複合体の製造）
Ｒ５が水素原子であり、Ｒ１置換基の１つが−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨ２基であり、残りのＲ１置換基が−ＮＯ２基である、（Ｉｂ）の複合体は、前述のシクレン（１）及び前記のように製造された反応体から得られる。
【００９３】
反応体（７）は、以下の反応スキーム（スキーム９）に従って製造することができる。最終段階は、ジクロロメタンの還流下に実施される。
【００９４】
スキーム９
【化１８】
2007530646.tif 000021
【００９５】
反応物質（８）は、以下の反応スキーム（スキーム１０）に従って製造することができる。第四の段階を、ジオキサン中の二酸化セレンで出発材料を４日間加熱することにより、実施する（Bishopらの論文、Tetrahedron, 2000, 4629-4638）。
【００９６】
スキーム１０
【化１９】
2007530646.tif 000022
【００９７】
複合体の製造は、スキーム１１によって示される、以下の手段に従って実施される。
【００９８】
スキーム１１
【化２０】
2007530646.tif 000023
【００９９】
製造は、式（９）の化合物を製造するためのスキーム５に記載されたものと同様の手段に従って実施される。次いで、化合物（９）を、アセトン中で、ＮａＩ及びＮＥｔ３の存在下に１当量の化合物（８）と反応させる。ジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸による一級アミン基の脱保護は、化合物（１０）をもたらす。化合物（１０）は、メタノール中のＦｅ（ＢＦ４）２の作用により鉄複合体に変換し、式（Ｉｂ）の複合体が得られる。
【０１００】
本発明は、また、合成中間体として用いられる、化合物（９）に関する。
【０１０１】
（タイプＩＩの複合体の製造）
Ｒ５が−Ｃ６Ｈ４−Ｏ−β−ガラクトシル基であり、２個の窒素原子及びＺ基が一緒にベンゾトリアゾール単位を構築し、Ｗがなにも存在せず（ｍ＝０）及びＲ１、Ｒ２及びＲ４が水素原子を表わす、タイプＩＩの複合体の製造は、スキーム１２によって示されるように実施される。
【０１０２】
スキーム１２
【化２１】
2007530646.tif 000024
【０１０３】
化合物（１”）は、スキーム８に記載されたように、生成物（２’）を、大過剰のトリエチルアミンの存在下に、他の二級アミンについて発表されている手段（P. B. Ramussenらの論文、Bull. Soc. Chem. Fr., 1985, II, 62-64）に従って、クロロトリメチルシランと反応させることによって得られる。ろ過、揮発性生成物の蒸発の後、ジクロロメタンに再溶解し、残留固体をろ過し、化合物（１”）生成物（２”）との反応に直接導入する。後者を、文献（Inorg. Chem., 1989, 28, 4022-4026）に記載された手段に従って、１−トリメチルシリルベンゾトリアゾールの製造によって、及び後者を、発表された手段（A. Bourry らの論文、J. Heterocylic Chem., 2002, 39 109-118）に従ってスキーム８に記載された化合物（３’）と反応することによってまず第一に合成する。
【０１０４】
化合物（１”）及び（２”）は、同じ出版物（A. Bourryらの論文、J. Heterocylic Chem., 2002, 39, 109-118）に記載の手段に従って、化合物（３”）に変換される。最終段階は、メタノール中のＦｅ（ＢＦ４）２で化合物（３”）を処理し、次いで、メタノール中のＭｅＯＮａで処理し、ガラクトシル単位上の４アセチル保護基を除去する。得られた複合体ＩＩを、反応混合物の蒸発、水中への再溶解、及び逆相シリカ（Ｃ１８）を充填した市販のカラムを通過させることによって精製する。
【０１０５】
本発明を、以下の実施例により更に詳細に説明するが、本発明はそれらに限定されない。
【０１０６】
実施例１〜１４は、スキーム８に従ったタイプＩａ−２の複合体の合成において必要である種々の化合物の製造を示す。
【実施例】
【０１０７】
実施例１
ビス（ｐ−トルエンスルホニル）エチレングリコールの製造
１９．８ｇ（０．３モル）のエチレングリコールを、１５０ｍｌの蒸留したピリジンに溶解し、次いで溶液を氷浴を用いて冷却する。機械的に撹拌しながら、塩化ｐ−トルエンスルホニル（１２３ｇ、０．６５モル）をゆっくりと加える。添加の間、温度を２０℃未満に維持する必要がある。約９０ｇを加えた時、撹拌が困難になり、混合物を２００ｍｌのピリジンで希釈する。反応混合物を２時間３０分、撹拌する。氷（５００ｍｌ）中のＨＣｌ水溶液（１２Ｎ  ＨＣｌ（１７０ｍｌ））を加える。添加の間に形成された固体をろ過する。この固体を、乾留したメタノール（２５０ｍｌ）に溶解し、次いで、室温に戻した後に新しく形成された沈殿をろ過する。最終的に、得られる固体を減圧下に乾燥し、生成物を得る（９２．４ｇ、収率８３％）。
特性：１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．７１（ｄ，２Ｈ）、７．３１（ｄ，２Ｈ）、４．１６（ｓ，２Ｈ）、２．４３（ｓ，３Ｈ）
【０１０８】
実施例２
トリス（ｐ−トルエンスルホニル）ジエチレントリアミンの製造
１１５ｇ（０．６モル）の塩化ｐ−トルエンスルホニルを、室温で２５０ｍｌのピリジンに溶解する。ジエチレントリアミン（２１．５ｍｌ、０．２モル）のピリジン溶液（３０ｍｌ）を滴下して加える。反応混合物を５０℃で９０分間撹拌し、次いで、暖かい条件で三角フラスコに移す。室温に戻した後、２００ｍｌの水を加える。混合物を、室温で一晩撹拌し、次いで、氷浴中に２時間放置する。形成されたオレンジ色の固体をろ過し、冷却した（０℃）９５％エタノールで洗浄する。４０℃（ロータリーエバポレーター）で減圧下で乾燥した後、明るい黄色の固体の形態で、所望の生成物を得る（９２ｇ、収率８１％）。
【０１０９】
実施例３
トリス（ｐ−トルエンスルホニル）ジエチレントリアミンの二ナトリウム塩の製造
ナトリウムの断片（７．５ｇ、０．３２モル）を無水エタノール（２２０ｍｌ）にゆっくりと加えることにより、ナトリウムエトキシド溶液を調製する。トリス（ｐ−トルエンスルホニル）ジエチレントリアミン（９２．０ｇ、０．１６モル）を、無水エタノール（２２０ｍｌ）に溶解し、混合物を還流する。加熱を停止し、ナトリウムエトキシド溶液を一度に全て加える。沈殿による分離によって、不溶性の不純物を除去する。溶液を一晩かけて結晶化させる。得られた結晶を、アルゴン雰囲気下、ろ過し、無水エタノールで洗浄し、次いで、１００℃で減圧下に乾燥する。白色結晶の形態で、二ナトリウム塩が得られる（９８．０ｇ、収率９８％）。
【０１１０】
実施例４
１，４，７−トリス（ｐ−トルエンスルホニル）−１，４，７−トリアザシクロノナン（化合物１’）の製造
ビス（ｐ−トルエンスルホニル）エチレングルコール（５９．５ｇ、０．１６モル）のＤＭＦ溶液（３００ｍｌ）を、トリス（ｐ−トルエンスルホニル）ジエチレントリアミン（９８ｇ、０．１６モル）の二ナトリウム塩のＤＭＦ溶液（９５０ｍｌ）に、１００℃で、３時間以上かけて滴下して加える。加熱を停止し、蒸留水（５７５ｍｌ）を加える。即座に沈殿が形成される。ろ過及び減圧下における乾燥後、大環状化合物を、白色固体の形態で得る（７１．８ｇ、収率７６％）。
特性：１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．６７（ｄ，６Ｈ）、７．２９（ｄ，６Ｈ）、３．３９（ｓ，１２Ｈ）、２．４１（ｓ，９Ｈ）
【０１１１】
実施例５
１−（ｐ−トルエンスルホニル）−１，４，７−トリアザシクロノナンの製造
１，４，７−トリス（ｐ−トルエンスルホニル）−１，４，７−トリアザシクロノナン（１７．５６ｇ、２９．７ミリモル）及びフェノール（２１ｇ、２２３．０ミリモル）を、２４０ｍｌのＨＢｒ（３３％）の氷酢酸溶液に溶解する。溶液を９０℃で３０時間加熱する。３時間後に、固体が出現する。室温に戻した後、混合物をろ過し、固体をジエチルエーテル（２×８０ｍｌ）で洗浄する。ｐＨが１２の単位のオーダーになるまで、臭化水素酸塩を、１Ｍ水酸化水溶液に溶解する。水溶液を、クロロホルム（８×５０ｍｌ）で抽出する。混合した有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下に蒸発させる。最終的に、白色固体が得られる（７．３６ｇ、収率８８％）。
【０１１２】
実施例６
１−（ｐ−トルエンスルホニル）−４，７−（ピリジニルメチル）−１，４，７−トリアザシクロノナンの製造
クロロピコリン塩酸塩（４．３０ｇ、２６．２０ミリモル）を、１−（ｐ−トルエンスルホニル）−１，４，７−トリアザシクロノナン（３．３７ｇ、１１．９１ミリモル）及びＫ２ＣＯ３（１２ｇ、８６．８３ミリモル）の６０ｍｌの蒸留アセトニトリルの懸濁液に加える。混合物をアルゴン雰囲気下、撹拌しながら５０℃に３６時間放置する。得られた塩をろ過し、次いでアセトニトリル（２×１０ｍｌ）で洗浄する。溶媒を、減圧下に蒸発させ、次いで、生成物をシリカゲルのクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨの１５／１〜５／１  勾配）によって精製し、黄色のオイルの形態で純粋な生成物を得る（２．９８ｇ、収率７５％）。
特性：
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．４９（ｄ，２Ｈ）、７．６３（ｍ，４Ｈ）、７．４７（ｄ，２Ｈ）、７．２６（ｔ，２Ｈ）、７．１３（ｔ，２Ｈ）、３．９０（ｓ，４Ｈ）、３．１９（ｄｄ，８Ｈ）、２．８０（ｓ，４Ｈ）、２．４０（ｓ，３Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５９．８３、１４８．８１、１４２．８２、１３６．２３、１３５．８１、１２９．４４、１２６．９３、１２３．０６、１２１．７７、６３．６５、５５．６５、５０．７３、２１．２９。
【０１１３】
実施例７
１，４−ジピリジニルメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン（化合物２’）の製造
１−（ｐ−トルエンスルホニル）−４，７−（ピリジニルメチル）−１，４，７−トリアザシクロノナン（５０２ｍｇ、１．０８ミリモル）を、アルゴン雰囲気下、５ｍｌの濃Ｈ２ＳＯ４に溶解する。混合物を１００℃に３２時間放置する。室温に戻した後、氷浴を用いて溶液を冷却し、次いで、５０％ＮａＯＨ溶液を、ｐＨが約１２になるまでゆっくりと加える。水相を、３×１５０ｍｌのクロロホルムで抽出する。有機相を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下に濃縮し、黄色のオイルを製造する（２５５ｍｇ、収率７６％）。
特性：
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．５７（ｄ，２Ｈ）、７．５３（ｔ，２Ｈ）、７．１５（ｄｄ，４Ｈ）、３．８５（ｓ，４Ｈ）、３．１５（ｔ，４Ｈ）、２．９５（ｔ，４Ｈ）、２．６５（ｓ，４Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５７．２、１４９．２９、１３６．７２、１２２．７６、１２２．４５、６０．８１、５２．６５、４９．３９、４５．２０。
【０１１４】
実施例８
テトラアセチル−α−ブロモガラクトースの製造
ペンタアセチル−β−ガラクトース（１０ｇ、２５．５ミリモル）を、２５ｍｌのＨＢｒ（３３％）酢酸溶液及び５ｍｌの無水酢酸に溶解する。溶液を、撹拌しながら室温に２時間放置する。２００ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２を加え、次いで、溶液を１５０ｇの氷に注ぐ。有機相を分離し、水相を２×１００ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２で抽出する。混合した有機層を、飽和Ｋ２ＣＯ３溶液、次いで蒸留水で洗浄する。Ｎａ２ＳＯ４で乾燥を実施し、溶媒を減圧下に蒸発させる。得られたオイルを、最小量のジエチルエーテルに溶解し、ペンタンを加え、生成物を沈殿させる。純粋な結晶生成物を直接ろ過する（９．７６ｇ、収率９３％）。
特性：
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．６９（ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，１Ｈ）、５．５１（ｄｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，Ｊ＝１Ｈｚ  １Ｈ）、５．４０（ｄｄ，Ｊ＝１０．６Ｈｚ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ）、５．０４（ｄｄ，Ｊ＝１０．６Ｈｚ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．４８（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．１７（ｍ，２Ｈ）、２．１５（ｓ，３Ｈ）、２．１１（ｓ，３Ｈ）、２．０９（ｓ，３Ｈ）、２．０１（ｓ，３Ｈ）；
融点＝８５．３℃；〔α〕20℃289nm＝２１９°（Ｃ＝１，ＣＨＣｌ３）
【０１１５】
実施例９
テトラアセチル−（ｐ−ホルミルフェノキシ）−β−ガラクトース（化合物３’）の製造
テトラアセチル−α−ブロモガラクトース（４．１１２ｇ、１０ミリモル）を、１００ｍｌの蒸留アセトニトリルに溶解する。Ａｇ２Ｏ（１０．０ｇ、４３ミリモル）及びｐ−ヒドロキシベンズアルデヒド（１．２２２ｇ、１０ミリモル）を加える。混合物を４時間撹拌し、減圧下に溶媒を蒸発させ、得られた金属懸濁液を、溶離液として酢酸エチルを用いてシリカの層を通じてろ過する。減圧下に溶媒を蒸発させ、得られる黄色の固体をシリカゲルのクロマトグラフィーカラム（Ｅｔ２Ｏ）を用いて精製する。それを含む画分中の溶媒の遅い蒸発によって、純粋な生成物が結晶化する。次いで、３．０４ｇ（収率６７％）の結晶が得られる。
特性：
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ９．９３（ｓ，１Ｈ）、７．８５（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ）、７．１１（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ）、５．４７（ｍ，２Ｈ）、５．１７（ｍ，２Ｈ）、４．１７（ｍ，３Ｈ）、２．１９（ｓ，３Ｈ）、２．０６（ｓ，６Ｈ）、２．０２（ｓ，３Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１９０．６０、１７０．２２、１７０．０７、１６９．９７、１６９．２１、１６１．２２、１３１．７３、１１６．６８、９８．５３、７１．２７、７０．６０、６８．３５、６６．７１、６１．２９、２０．５６、２０．４８；
融点＝１１６．４℃
【０１１６】
実施例１０
テトラアセチル−（ｐ−ピリジニル−ヒドロキシメチル）フェノキシ）−β−ガラクトース（化合物４’）の製造
２−ブロモピリジン（７２６ｍｇ、４４０μｌ、４．６ミリモル）を、室温で５ｍｌのＴＨＦに溶解する。塩化イソプロピルマグネシウム（２．３ｍｌ、４．６ミリモル、ＴＨＦ中２Ｍ）をアルゴン雰囲気下、滴下して加え、混合物を２時間撹拌する。この溶液を、室温で、テトラアセチル−（ｐ−ホルミルフェノキシ）−β−ガラクトース（２．０７ｇ、４．６ミリモル）の３ｍｌのＴＨＦ溶液に加える。混合物を１８時間撹拌し、次いで、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液をゆっくりと加える。得られた水溶液を酢酸エチルで抽出する。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下に濃縮する。粗製の反応生成物を、シリカゲルによるクロマトグラフィー（エーテル／ペンタン  ２／１  純粋なエーテル）によって精製する。次いで、黄色の固体を得る（６００ｍｇ、収率２５％）。
特性：
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．５７（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．６３（ｔｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．３０（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、７．２１（ｔ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．１３（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．９７（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、５．７２（ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，１Ｈ）、５．４３−５．４７（ｍ，２Ｈ）、５．１９（ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，１Ｈ）、５．０８（ｄｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，１Ｈ）、５．０１（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、３．９７−４．２２（ｍ，３Ｈ）、２．１７（ｓ，３Ｈ）、２．０５（ｓ，３Ｈ）、２．０３（ｓ，３Ｈ）、２．００（ｓ，３Ｈ）
【０１１７】
実施例１１
テトラアセチル−（ｐ−（ピリジニルクロロメチル）−フェノキシ）−β−ガラクトース（化合物５’）の製造
テトラアセチル−（ｐ−（ピリジニルヒドロキシメチル）フェノキシ）−β−ガラクトース（６００ｍｇ、１．１ミリモル）を、１５ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２に溶解する。ＳＯＣｌ２（１４３ｍｇ、８８μｌ、１．２ミリモル）を滴下して加え、溶液を１時間撹拌する。溶媒を減圧下に蒸発させる。生成物が、純粋かつ定量的に得られる。
特性：
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．６４（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）、８．４２（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．１９（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．８１（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．６７（ｄｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ、Ｊ＝３．３，２Ｈ）、７．１１（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．０１（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、５．４４−５．５１（ｍ，２Ｈ）、５．１２（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，１Ｈ）、５．０４（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．０１−４．２０（ｍ，３Ｈ），２．１７（ｓ，３Ｈ），２．０６（ｓ，３Ｈ）、２．０３（ｓ，３Ｈ）、２．００（ｓ，３Ｈ）
【０１１８】
実施例１２
１，４−ジピリジニルメチル−７−（ピリジニル（ｐ−（テトラアセチル−β−ガラクト）フェニル）メチル）−１，４，７−トリアザシクロノナン（化合物６’）の製造
１，４−ジピリジニルメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン（１６８ｍｇ、０．５ミリモル）、テトラアセチル−（ｐ−（ピリジニルクロロメチル）フェノキシ）−β−ガラクトース（３５６ｍｇ、０．６ミリモル）及びＫ２ＣＯ３（約１．５ｇ、１１ミリモル）を、１０ｍｌのアセトニトリルに混合する。得られる懸濁液を、アルゴン雰囲気下、５０℃で一晩撹拌する。室温に戻した後、沈殿をろ過し、２×５ｍｌのアセトニトリルで洗浄する。ろ液から溶媒を蒸発させ、純粋な生成物（３２７ｍｇ、収率７４％）が得られるように、シリカゲルによるクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  １０／１〜ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ４／１／０．１）により精製して黄色のオイルを得る。
特性：
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．４８（ｔ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，３Ｈ）、７．６３（ｔｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，３Ｈ）、７．３６（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、７．１３（ｍ，３Ｈ）、６．８９（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、５．４２（ｍ，２Ｈ）、５．０６（ｄｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，１Ｈ），４．９８（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．７８（ｓ，１Ｈ），３．９７−４．２２（ｍ，３Ｈ），３．７９（ｓ，４Ｈ）、２．９６（ｓ，４Ｈ）２．８４（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，４Ｈ）、２．１６（ｓ，３Ｈ）、２．０３（ｓ，３Ｈ）、２．０２（ｓ，３Ｈ）、２．００（ｓ，３Ｈ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１７９．２９（Ｃ）、１７９．２１（Ｃ）、１７０．０９（Ｃ）、１６９．３３（Ｃ）、１６２．９８（Ｃ）、１６０．４０（Ｃ）、１５５．８２（Ｃ）、１４８．８８（ＣＨ）、１３７．１９（Ｃ）、１３６．４２（ＣＨ）、１３６．２４（ＣＨ）、１２９．７９（ＣＨ）、１２３．１６（ＣＨ）、１２２．６４（ＣＨ）、１２１．８０（ＣＨ）、１１６．７３（ＣＨ）、９９．５０（ＣＨ）、７０．８４（ＣＨ）、６８．６１（ＣＨ）、６６．８２（ＣＨ）、６４．６３（ＣＨ２）、６１．２６（ＣＨ２）、５５．７８（ＣＨ２）、５５．５２（ＣＨ２）、５３．９９（ＣＨ２）、２０．６２（ＣＨ３）。
【０１１９】
実施例１３
１，４−ジピリジニルメチル−７−（ピリジニル（ｐ−（β−ガラクト）フェニル）メチル）−１，４，７−トリアザシクロノナンの製造
１，４−ジピリジニルメチル−７−（ピリジニル（ｐ−テトラアセチル−β−ガラクト）フェニル）メチル）−１，４，７−トリアザシクロノナン（１２４ｍｇ、０．１５ミリモル）を、２ｍｌのメタノールに溶解する。ナトリウムメトキシド（９ｍｇ、０．１５ミリモル）を加える。反応混合物を、アルゴン雰囲気下、４時間撹拌し、その期間の後、ＬＣＭＳに従い、基質を完全に消費する。溶媒を減圧下に蒸発させ、次いでＣＨＣｌ３（２ｍｌ）を加え、沈殿を出現させる。溶媒をろ過し、固体をクロロホルムで線上する。溶媒を減圧下に蒸発させ、黄色のオイルの形態で生成物を得る（７８ｍｇ、収率７９％）。
【０１２０】
実施例１４
〔Ｆｅ（１，４−ジピリジニルメチル−７−（ピリジニル（ｐ−（β−ガラクト）フェニル）メチル）−１，４，７−トリアザシクロノナン）〕２（ＢＦ）４−の製造
鉄（ＩＩ）ビス（テトラフルオロボレート）六水和物（６８ｍｇ、０．１８ミリモル）の脱気メタノール（１ｍｌ）溶液を、１，４−ジピリジニルメチル−７−（ピリジニル（ｐ−（β−ガラクト）フェニル）メチル）−１，４，７−トリアザシクロノナン（１３９ｍｇ、０．２１ミリモル）の脱気メタノール溶液（０．５ｍｌ）に、アルゴン雰囲気下、中空針を通して加える。暗褐色が瞬間的に出現する。混合物を、室温で１０分間撹拌し、次いで、溶媒を減圧下に蒸発させる。粗製の反応生成物を、溶離液として水を用いた、Ｃ１８逆相シリカカラム上の２段階の連続ろ過によって精製し、凍結乾燥後に黄色の固体として純粋な複合体を製造する（１０３ｍｇ、収率６５％）。
【国際調査報告】
2007530646.tif 000045
2007530646.tif 000046
2007530646.tif 000047
2007530646.tif 000048
2007530646.tif 000049
2007530646.tif 000050
2007530646.tif 000051
2007530646.tif 000052