(57)【要約】  本発明は、タンシノン誘導体を有効成分として含む、メタボリックシンドロームを予防または治療するための組成物に関する。より具体的には、本発明は、代謝活性の向上において優れた作用を示すタンシノン誘導体を有効成分として含む、メタボリックシンドロームを予防または治療するための組成物に関する。【選択図】なし
2007517025.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療および／または予防有効量の丹参（Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ）抽出物を有効成分として含む、肥満およびメタボリックシンドローム疾患を予防または治療するための組成物。
【請求項２】
前記丹参抽出物は、テトラヒドロフェナントレン誘導体およびフェナントレン誘導体よりなる群から選ばれる１種以上の化合物を含むことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記テトラヒドロフェナントレン誘導体は、クリプトタンシノンおよびタンシノンＩＩＡよりなる群から選ばれる１種以上の化合物を含むことを特徴とする請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記フェナントレン誘導体は、タンシノンＩおよび１５，１６−ジヒドロタンシノンＩよりなる群から選ばれる１種以上の化合物を含むことを特徴とする請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
前記丹参抽出物は、クリプトタンシノン、タンシノンＩＩＡ、１５，１６−ジヒドロタンシノンＩおよびタンシノンＩよりなる群から選ばれる１種以上の化合物を含むことを特徴とする請求項２に記載の組成物。
【請求項６】
１β−ヒドロキシクリプトタンシノン、１−オキソクリプトタンシノン、タンシノールＢ、タンシノールＩＩＢ、プルゼワキノンＡ、ジヒドロイソタンシノンＩ、タンシノンＩＩＡスルフォネート、１，２−ジヒドロタンシノンＩおよびタンシノンＶＩよりなる群から選ばれる１種以上の化合物を更に含むことを特徴とする請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記テトラヒドロフェナントレン誘導体：前記フェナントレン誘導体の重量比は、１０：１〜１：１０であることを特徴とする請求項２〜６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
前記テトラヒドロフェナントレン誘導体：前記フェナントレン誘導体の重量比は、５：１〜１：５であることを特徴とする請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記テトラヒドロフェナントレン誘導体：前記フェナントレン誘導体の重量比は、２．５：１〜１：２．５であることを特徴とする請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記テトラヒドロフェナントレン誘導体は、クリプトタンシノンおよびタンシノンＩＩＡを含み、両者の重量比は、１：５〜５：１であることを特徴とする請求項２に記載の組成物。
【請求項１１】
前記フェナントレン誘導体は、１５，１６−ジヒドロタンシノンＩおよびタンシノンＩを含み、両者の重量比は、１：５〜５：１であることを特徴とする請求項２に記載の組成物。
【請求項１２】
クリプトタンシノンを主成分として含むことを特徴とする請求項５に記載の組成物。
【請求項１３】
１５，１６−ジヒドロタンシノンＩを主成分として含むことを特徴とする請求項５に記載の組成物。
【請求項１４】
タンシノンＩＩＡを主成分として含むことを特徴とする請求項５に記載の組成物。
【請求項１５】
タンシノンＩを主成分として含むことを特徴とする請求項５に記載の組成物。
【請求項１６】
クリプトタンシノンを必須成分として含み、タンシノンＩＩＡ、１５，１６−ジヒドロタンシノンＩおよびタンシノンＩよりなる群から選ばれる１種以上の化合物を任意に含むことを特徴とする請求項５に記載の組成物。
【請求項１７】
タンシノンＩＩＡを必須成分として含み、クリプトタンシノン、１５，１６−ジヒドロタンシノンＩおよびタンシノンＩよりなる群から選ばれる１種以上の化合物を任意に含むことを特徴とする請求項５に記載の組成物。
【請求項１８】
１５，１６−ジヒドロタンシノンＩを必須成分として含み、クリプトタンシノン、タンシノンＩＩＡおよびタンシノンＩよりなる群から選ばれる１種以上の化合物を任意に含むことを特徴とする請求項５に記載の組成物。
【請求項１９】
タンシノンＩを必須成分として含み、クリプトタンシノン、タンシノンＩＩＡおよび１５，１６−ジヒドロタンシノンＩよりなる群から選ばれる１種以上の化合物を任意に含むことを特徴とする請求項５に記載の組成物。
【請求項２０】
クリプトタンシノンおよび１５，１６−ジヒドロタンシノンＩの両者を含むことを特徴とする請求項１６または１８に記載の組成物。
【請求項２１】
クリプトタンシノンおよびタンシノンＩＩＡの両者を含むことを特徴とする請求項１６または１７に記載の組成物。
【請求項２２】
タンシノンＩＩＡおよび１５，１６−ジヒドロタンシノンＩの両者を含むことを特徴とする請求項１７または１８に記載の組成物。
【請求項２３】
タンシノンＩＩＡおよびタンシノンＩの両者を含むことを特徴とする請求項１７または１９に記載の組成物。
【請求項２４】
１５，１６−ジヒドロタンシノンＩおよびタンシノンＩの両者を含むことを特徴とする請求項１８または１９に記載の組成物。
【請求項２５】
タンシノンＩおよびクリプトタンシノンの両者を含むことを特徴とする請求項１６または１９に記載の組成物。
【請求項２６】
前記両成分の重量混合比は、１０：１〜１：１０であることを特徴とする請求項２０〜２５のいずれかに記載の組成物。
【請求項２７】
前記混合比は、５：１〜１：５であることを特徴とする請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記メタボリックシンドローム疾患は、肥満、糖尿病、動脈硬化症、高血圧、高脂血症、肝臓疾患、脳卒中、心筋梗塞、虚血性疾患および循環器疾患よりなる群から選ばれる１種以上であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項２９】
５’−ＡＭＰ活性化プロテインキナーゼ（ＡＭＰＫ）の活性を上昇させることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３０】
ＡＭＰＫの活性を上昇させて、細胞性血中グルコース取り込みを促進し、血中グルコースレベルを低下させることを特徴とする請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
ＡＭＰＫの活性を上昇させて、肥満阻害作用を示すことを特徴とする請求項２９に記載の組成物。
【請求項３２】
ＡＭＰＫの活性を上昇させて、血中脂質低下作用を示すことを特徴とする請求項２９に記載の組成物。
【請求項３３】
ＡＭＰＫの活性を上昇させて、肝細胞障害および脂肪肝形成に対する阻害作用を示すことを特徴とする請求項２９に記載の組成物。
【請求項３４】
ＡＭＰＫの活性を上昇させて、動脈硬化症、高血圧、脳卒中、虚血性疾患および循環器疾患に対する治療作用を示すことを特徴とする請求項２９に記載の組成物。
【請求項３５】
有効成分としての請求項１の組成物および薬学的に許容される担体または賦形剤を含む肥満およびメタボリックシンドローム疾患を予防または治療するための医薬処方物。
【請求項３６】
前記有効成分の含有量は、０．０００１〜１０重量％であることを特徴とする請求項３５に記載の処方物。
【請求項３７】
錠剤、散剤、硬および軟カプセル、懸濁剤、注射剤並びに乳剤を含む、経口または非経口投与用の複数回用量形態または単位用量形態であることを特徴とする請求項３５に記載の処方物。
【請求項３８】
前記処方物中の前記有効成分は、成人に対し、体重１ｋｇあたり、１日０．１〜６０００ｍｇ投与されることを特徴とする請求項３５に記載の処方物。
【請求項３９】
前記担体または賦形剤を、前記処方物が飲料、食料または化粧品の形態で投与されうるように含むことを特徴とする請求項３５に記載の処方物。
【請求項４０】
丹参（Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ）を水または有機溶媒による抽出に付して、粗抽出物を得る工程；
前記粗抽出物をろ過し、次いで（減圧）濃縮する工程；および
任意に、溶媒を除去する工程
を含む丹参抽出物の調製方法。
【請求項４１】
前記丹参は、乾燥医薬品原料または未乾燥医薬品原料であることを特徴とする請求項４０に記載の調製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、タンシノン誘導体を有効成分として含む、メタボリックシンドロームを予防または治療するための組成物に関する。より具体的には、本発明は、代謝活性の向上において優れた作用を示すタンシノン誘導体を有効成分として含む、メタボリックシンドロームを予防または治療するための組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
メタボリックシンドロームとは、高トリグリセリド血症、高血圧、糖代謝異常、血液凝固異常および肥満のような、健康に対する危険因子（ｈｅａｌｔｈ  ｒｉｓｋ  ｆａｃｔｏｒｓ）を含む症候群をいう。メタボリックシンドローム自体は致命的ではないが、糖尿病、虚血性循環器疾患などの重篤な疾患になりやすい体質（ｐｒｅｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｔｏ  ｓｅｖｅｒｅ  ｄｉｓｅａｓｅ）を示すものであり、現代人の間で最大の脅威となる疾患と目されるようになっている。メタボリックシンドロームはかつて、そのような症候群の原因についての知識が不足していたため、「Ｘ症候群」を初め、他の様々な名称で知られていたが、ＷＨＯおよびＩＮＨの米国国立心肺血管研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｒｔ  Ｌｕｎｇ  ａｎｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）が制定した成人治療プログラム（Ａｄｕｌｔ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｐｒｏｇｒａｍ）（ＡＴＰ）ＩＩＩを通じて、公式にメタボリックシンドロームまたはインスリン抵抗性症候群と命名された。
【０００３】
メタボリックシンドロームの診断には、全米コレステロール教育プログラム（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｇｒａｍ）（ＮＣＥＰ）の、成人血中高コレステロールの検出・評価・治療に関する専門委員会（Ｅｘｐｅｒｔ  Ｐａｎｅｌ）による第３回報告書（成人治療委員会（Ａｄｕｌｔ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｐａｎｅｌ）ＩＩＩ）で提案された基準（２００１年公開）が、最近最も広く用いられている。ＡＴＰ  ＩＩＩの基準によれば、以下のうち３つ以上の要素を有する者は、メタボリックシンドロームと診断される。
１）男性では４０インチ（１０２ｃｍ）以上、女性では３５インチ（８８ｃｍ）以上のウェスト寸法（ウェスト近辺で測定した中心性肥満）
２）１５０ｍｇ／ｄｌを超えるトリグリセリドレベル
３）４０ｍｇ／ｄｌ未満（男性）または５０ｍｇ／ｄｌ未満（女性）の高比重リポ蛋白（ＨＤＬ）レベル
４）１３０／８５ｍｍＨｇ以上の血圧
５）１１０ｍｇ／ｄｌを超える空腹時血中グルコース（糖質）レベル
東洋人に対しては、中心性肥満に関する基準が若干修正され、男性では９０ｃｍ以上、女性では８０ｃｍ以上となっている。最近の調査では、そのような基準に従うと、韓国人の２５％程度がメタボリックシンドロームであると報告されている。インスリン抵抗性とは、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいてインスリンが正常に分泌されているにもかかわらず、インスリンが細胞に対する十分なグルコース供給を誘起しない、という現象をいう。従って、グルコースが細胞に入っていかず、高血糖を引き起こす。またその結果、グルコースの不足により細胞が正常に機能できず、メタボリックシンドロームの発症（ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎ）に至る。
【０００４】
現在、メタボリックシンドローム治療用の入手可能な薬物は存在しない。メタボリックシンドローム治療のための努力は、糖尿病、高脂血症および高血圧の治療薬を用いてなされてきたが、これらの薬物がメタボリックシンドロームの治療において有する薬物としての有効性は限られたものであった。現在入手可能な薬物として、糖尿病の治療に用いる薬物である、メトホルミン、ＴＺＤ（チアゾリジンジオン）ファミリーに属する薬物、グルコシダーゼ阻害剤、ＰＰＡＲγ／α二元アゴニストおよびＤＤＰ（ジペプチジルペプチダーゼ）ＩＶ阻害剤は、メタボリックシンドローム治療のための有望な薬物として大いに注目されてきた。加えて、抗高血圧薬および抗高脂血症薬、またＣＥＴＰ（コレステロールエステル輸送タンパク質）阻害剤の標的である、アポＡ−Ｉのアイソフォームおよびその関連ペプチドに対して、大いに関心が寄せられてきた。
【０００５】
メタボリックシンドロームの原因および治療と直接または間接に関連していることが知られている因子には、物理的運動、食事の習慣および様式、体重、血中グルコース、トリグリセリドレベル、コレステロールレベル、インスリン抵抗性、アディポネクチン、レプチン、ＡＭＰＫ活性、エストロゲンなどの性ホルモン、遺伝的因子並びにｉｎ  ｖｉｖｏマロニルＣｏＡ濃度が含まれる。
【０００６】
現在、メタボリックシンドローム関連の条件と戦うための最も有効な方法は、より運動して体重を減少し、食事を制限することであることがわかっている。メタボリックシンドロームと戦う現状の方法はいずれも共通に、エネルギー代謝を促進し、結果として体内における過剰エネルギーの消費を最大化させ、エネルギー蓄積の阻害に至らせるという事実を共有している。加工食品やファストフードからの、不十分な運動に比して高いカロリー摂取のため、過剰エネルギーが脂肪として蓄積され、代謝障害を含む種々の疾患の潜在的な原因となる。そのような過剰エネルギーを効果的に排除することが、代謝障害を治療する方法であると考えられる。過剰エネルギーを効果的に排除するためには、代謝活性を上昇させることが必須である。この目的のため、脂肪合成の阻害、糖新生の阻害、グルコース消費の促進、脂肪酸化の促進、エネルギー代謝における中心的な装置であるミトコンドリアの生合成促進および代謝活性に関与する因子の活性化に対する本質的な必要性が存在すると考えられる。代謝の促進に結びつく活性化因子には、例えば、エネルギー代謝において重要な役割を果たす、ＡＭＰ活性化プロテインキナーゼ（ＡＭＰＫ）、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γコアクチベータ１α（ＰＧＣ−１α）、グルコース輸送体１および４（ＧＬＵＴ１および４）、カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ１（ＣＰＴ１）、脱共役タンパク質１、２および３（ＵＣＰ−１、２および３）並びにアセチルＣｏＡカルボキシラーゼＩおよびＩＩ（ＡＣＣＩおよびＩＩ）が含まれる。
【０００７】
そのような因子は、エネルギー代謝において、代謝障害に関連する、以下の主要な機能を果たしている。
【０００８】
１．糖代謝
筋肉および心筋組織においては、ＡＭＰＫが筋収縮を増進してグルコース取り込みを促進し、次いでこのことが、ＧＬＵＴ１を活性化、またはＧＬＵＴ４の細胞膜への遊走を誘起して、インスリンの作用と関係なく、細胞へのグルコース輸送増加をもたらす（非特許文献１、非特許文献２）。グルコース取り込みが増加した後、ＡＭＰＫがヘキソキナーゼを活性化して、糖代謝プロセスの流入を増加させると同時に、グリコーゲン合成を阻害する。心筋組織においては、虚血時、ＡＭＰＫがリン酸化プロセスを介して６−ホスホフルクト−２−キナーゼ（ＰＦＫ−２）を活性化して、代謝カスケードの活性化をもたらし、糖代謝の流入に至らせることが知られている（非特許文献３）。加えて、肝臓におけるＡＭＰＫの活性化が、肝細胞からのグルコース放出を阻害する。その間、糖新生の酵素であるホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ（ＰＥＰＣＫ）およびグルコース−６−ホスファターゼの活性が、ＡＭＰＫにより抑止されることが確かめられている（非特許文献４）。このことは、ＡＭＰＫがインスリンと関係なく、肝細胞からのグルコース放出を独立に阻害して、血中グルコースレベルの調節に関与することを示している。
【０００９】
２．ミトコンドリア生合成
ミトコンドリアの一つの重要な機能は、グルコース、脂肪酸等の燃料代謝物（ｆｕｅｌ  ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ）から生成したエネルギーを、ＡＴＰに変換する酸化的リン酸化を行うことである。ミトコンドリアの機能的変質は、老化に関連する変性疾患、例えば糖尿病、循環器疾患、パーキンソン病、老年痴呆等の病因をもたらすことがある（非特許文献５）。Ｐｅｔｅｒｓｏｎらは、年配者では、ミトコンドリアの酸化的リン酸化機能が約４０％低下していると報告している（非特許文献６）。このことは、ミトコンドリアの低下した機能が、インスリン抵抗性症候群の発症原因である可能性を示唆している。Ｌｅｅらは、糖尿病の進行に先んじて、抹消血におけるミトコンドリア性ＤＮＡ含量の減少が起こることを確認している（非特許文献７）。筋肉におけるミトコンドリア生合成は、筋細胞における酸化的リン酸化の代謝活性が、継続的なエネルギー欠乏および運動によって増加するという適応反応（ａｄａｐｔｉｖｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）により増進されることが知られている。
【００１０】
ところで、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γコアクチベータ１α（ＰＧＣ−１α）は、核内ＤＮＡの転写を増進するコアクチベータであることがわかっており、主な機能として、グルコース代謝、ミトコンドリア生合成、筋繊維分化および適応熱産生（ａｄａｐｔｉｖｅ  ｔｈｅｒｍｏｇｅｎｅｓｉｓ）において重要な役割を果たすことが知られている。ＰＧＣ−１αの発現増加が、ミトコンドリア性ＤＮＡのコピー数増加およびミトコンドリア増殖を促進することが確かめられている（非特許文献８）。
【００１１】
マウスモデルにおけるＵＣＰ−２およびＵＣＰ−３の過剰発現が、脂肪細胞数の減少、代謝速度の増加および酸素消費の増加をもたらし、従ってＵＣＰ−２およびＵＣＰ−３は、エネルギー代謝および肥満抑制において重要な役割を果たすことが示唆されている（非特許文献９）。
【００１２】
３．脂肪代謝の制御
ＡＭＰＫが脂肪代謝に関与している機構を参照すると、ＡＭＰＫがアセチルＣｏＡカルボキシラーゼのリン酸化を誘起し、次いでこのことが脂肪酸合成を阻害し、マロニルＣｏＡ（脂肪酸合成の中間体であり、またカルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ１（ＣＰＴ１）の阻害剤でもある）の細胞内濃度低下をもたらし、脂肪酸酸化の増進に至らせることが知られている。ＣＰＴ１は、脂肪酸がミトコンドリアに入り酸化されるプロセスに必須の酵素であり、マロニルＣｏＡ細胞内濃度による調節を受けることが知られている。加えて、コレステロールおよびトリアシルグリセロール合成に関与するＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼおよびグリセロールリン酸アシルトランスフェラーゼ（ＧＰＡＴ）の活性を、ＡＭＰＫがリン酸化を通じて阻害することが知られている（非特許文献１０、非特許文献１１）。一方、肝臓におけるＡＭＰＫの活性化が、炭水化物応答因子結合タンパク（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ−ｒｅｓｐｏｎｓｅ−ｅｌｅｍｅｎｔ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ）（ＣｈＲＥＢＰ）のリン酸化を通じてピルビン酸キナーゼ、脂肪酸シンターゼおよびＡＣＣの活性を阻害することが見出されている（非特許文献１２）。
【００１３】
上記したように、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏのグルコース、タンパク質および脂肪のエネルギー代謝においては、代謝に関連する活性化因子が中心的な役割を果たすことが知られている。Ｎｅｉｌらは、ＡＭＰＫおよびマロニルＣｏＡは、メタボリックシンドローム治療処置の標的であり、メタボリックシンドロームに罹患した患者は、インスリン抵抗性、肥満、高血圧、異脂肪血症、膵臓β細胞機能不全、２型糖尿病および動脈硬化症発現によって特徴付けられると主張している（非特許文献１３）。これら複数の異常を結びつける共通の特徴は、ＡＭＰＫ／マロニルＣｏＡ燃料検知・シグナリング（ｆｕｅｌ  ｓｅｎｓｉｎｇ  ａｎｄ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）ネットワークの調節不全であると仮定されている。そのような調節不全が、細胞の脂肪酸代謝を変化させ、次いでこれが、異常な脂肪蓄積、細胞の機能不全、そして最終的には疾患を引き起こすとの提案がなされている。ＡＭＰＫを活性化および／またはマロニルＣｏＡレベルを減少させる因子は、これらの異常および症候群を逆転させるか、その発生を防ぐかもしれないとの証拠も示されている。
【００１４】
Ｇｅｎｅｖｉｅｖｅらは、ＡＭＰＫの活性化は、慢性炎症状態またはエンドトキシンショック（肥満に関連した糖尿病を含む）における炎症メディエータであるｉＮＯＳ酵素の活性を阻害し、従ってインスリン感受性を向上しうる機構を有する新たな医薬品の開発に有効であると報告している（非特許文献１４）。加えて彼らは、ｉＮＯＳ活性の阻害はＡＭＰＫの活性化によって生じ、従ってこの発見は、敗血症、多発性硬化症、心筋梗塞、炎症性腸疾患、膵臓β細胞機能不全等の疾患に臨床応用しうると報告している。Ｚｉｎｇｐｉｎｇらは、ラット筋細胞および心筋細胞において、ＡＭＰＫは、Ｃａ−カルモジュリンの存在下に、リン酸化を通じて内皮ＮＯシンターゼを活性化させると報告している（非特許文献１５）。このことは、狭心症を含む心疾患における、ＡＭＰＫの関与が証明されたことを示している。Ａｌａｎ  Ｄらは、筋肉ミトコンドリアの呼吸代謝が、加齢または糖尿病により減少し、酸化的リン酸化プロセスに関与する遺伝子の発現における協調的変動をもたらすことを確認している（非特許文献１６）。彼らはまた、この遺伝子の発現における変動をＰＧＣ−１αが担当していると報告している。Ｍａｒｙらは、ＰＧＣ−１α発現の減少が、糖尿病患者におけるインスリン抵抗性および代謝不全の主因であると報告している（非特許文献１７）。Ｉｓａｂｅｌｌａらは、ＰＧＣ−１αは、甲状腺ホルモンＴ３による環境変化に対するミトコンドリアの適応および筋収縮を賦活する、主要な（ｋｅｙ）因子であると報告している（非特許文献１８）。Ｋｉｍらは、グルコース／脂肪酸代謝の因果関係を通じて、インスリン抵抗性等を引き起こすミトコンドリアの数および質の異常が、メタボリックシンドロームの主因であると報告している（非特許文献１９）。
【００１５】
【特許文献１】韓国特許出願公開第２０００−００２７３０６号明細書
【特許文献２】韓国特許出願公開第２００４−００８４４８２号明細書
【非特許文献１】Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．３０８，３４７−３５２，２０００
【非特許文献２】Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．９１，１０７３−１０８３，２００１
【非特許文献３】Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．１０，１２４７−１２５５，２０００
【非特許文献４】Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ４９，８９６−９０３，２０００
【非特許文献５】Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１５，７０６−７１６，２００３
【非特許文献６】Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３００，１１４０−１１４２，２００３
【非特許文献７】Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｐｒａｃ．４２，１６１−１６７，１９９８
【非特許文献８】Ｃｅｌｌ  ９８，１１５−１２４，１９９９
【非特許文献９】Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  ２０，１３９−１４４，２００４
【非特許文献１０】Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７，３２５７１−３２５７７，２００２
【非特許文献１１】Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．９２，２４７５−２４８２，２００２
【非特許文献１２】Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７，３８２９−３８３５，２００２
【非特許文献１３】Ｎａｔｕｒｅ  ｄｒｕｇ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ３（Ａｐｒｉｌ），３４０，２００４
【非特許文献１４】Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９，２０７６７−７４，２００４
【非特許文献１５】ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４４３，２８５−２８９，１９９９
【非特許文献１６】Ｎａｔｕｒｅ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ３４（３），２４４，２００３
【非特許文献１７】ＰＮＡＳ  １００，８４６６，２００３
【非特許文献１８】Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．２８４，ｃ１６６９，２００３
【非特許文献１９】Ｔｈｅ  Ｋｏｒｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，１１，１６，２００４
【非特許文献２０】Ｐｌａｎｔａ  Ｍｅｄ．２００２，６８，１１０３−１１０７
【非特許文献２１】Ｐｌａｎｔａ  Ｍｅｄ．２００４，７０，１７８−１８０
【非特許文献２２】Ｐｌａｎｔａ  Ｍｅｄ．２００２，６８，１０７７−１０８１
【非特許文献２３】Ｐｌａｎｔａ  Ｍｅｄ．２００４，７０，２０１−２０４
【非特許文献２４】Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ６４，７４５−７５０（２００２）
【非特許文献２５】Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６３（１２），２２３６−２２３９，１９９９
【非特許文献２６】Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ４９，３５５−３６１，２０００
【非特許文献２７】Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．２５，４４６−４４８，２００２
【非特許文献２８】Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ６５，５１−５７，２００３
【非特許文献２９】Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔ  ＆  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｊｕｎｅ，１８３６−１８４１，２００３
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１６】
代謝を活性化する物質は、メタボリックシンドローム疾患の治療に有効であるという前提のもとに、本発明者らは、代謝を活性化する薬物の広範な探索を行った。その結果、タンシノン誘導体が治療薬として有効な成分であることを確認した。
従って本発明は、上記課題、即ち、以前から解決が望まれていた技術的課題を解決することを目的としてなされたものである。
【００１７】
本発明者らは、種々の研究・実験を鋭意行った。そのような広範な調査の結果、本発明者らは、丹参（Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ）から抽出されるタンシノン誘導体が、細胞および組織における代謝の活性化において有効であることを見出した。また更に、ｏｂ／ｏｂマウス（レプチン分泌の減少による肥満のモデル）、ｄｂ／ｄｂマウス（肥満／糖尿病のモデル）およびＤＩＯ（食餌誘導肥満）マウス（高脂肪食条件により生じる）をタンシノン誘導体で処理すると、これらの物質が、肥満および糖尿病を含むメタボリックシンドロームの予防および治療に有効であることを見出した。これらの発見に基づき、本発明を完成させた。
【００１８】
従って、本発明の１つの目的は、筋芽細胞Ｃ２Ｃ１２、脂肪細胞および動物疾患モデルにおいて、そのようなメタボリックシンドローム疾患に対し、代謝活性化因子の活性化を通じて予防および治療効果を示すタンシノン誘導体を有効成分として含む、メタボリックシンドロームを予防および治療するための組成物を提供することにある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
本発明の一実施形態によれば、上記およびその他の目的は、治療および／または予防有効量の丹参（Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ）抽出物由来タンシノン誘導体を有効成分として含む、肥満およびメタボリックシンドローム疾患を予防または治療するための組成物を提供することにより達成することができる。
【００２０】
これまでに知られているタンシノン誘導体の生理活性は以下の通りである。Ｔｏｓｈｉｙｕｋｉらは、タンシノンＶＩが心筋細胞の肥大を減じ、また心臓繊維芽細胞によるコラーゲン合成を阻害して心臓繊維芽細胞の繊維症を遅延させると報告している（非特許文献２０）。Ｃｈｏｉらは、マスト細胞の脱顆粒化阻害による抗アレルギー薬としての、タンシノン誘導体の利用可能性を示唆している（非特許文献２１）。Ｉｐらは、肝細胞におけるメナジオン誘発毒性に対する、ジヒドロイソタンシノンＩの肝臓保護作用を示している（非特許文献２２）。Ｒｅｎらは、タンシノン誘導体がアセチルコリンエステラーゼの酵素活性を阻害することを確認している（非特許文献２３）。Ｋｙｏｋｏらは、タンシノンＩＩＡスルフォネートが、アンギオテンシンＩＩで誘発される心筋細胞の肥大を減じると報告している（非特許文献２４）。Ｌｅｅらは、タンシノン誘導体がスーパーオキシドを生成して抗菌活性を示すと報告している（非特許文献２５）。Ｋａｎｇらは、タンシノン誘導体が免疫細胞におけるＩＬ−１２およびＩＮＦ−γの賛成を阻害すると報告している（非特許文献２６）。Ｋｏらは、タンシノン誘導体がＤＧＡＴの酵素活性を阻害すると報告している（非特許文献２７）。Ｚｈｏｕらは、タンシノンＩＩＡスルフォネートがミトコンドリアにおける電子伝達反応を促進すると報告している（非特許文献２８）。Ｗａｎｇらは、タンシノン誘導体がアミノグリコシド誘発フリーラジカル形成を阻害すると報告している（非特許文献２９）。Ｙｕｎらは、タンシノン誘導体がＢ型肝炎の治療薬として有効であると主張している（特許文献１）。Ｓｏｈｎらは、有効成分としてタンシノンＩを含む、肝繊維症または肝硬変治療用の組成物を開示している（特許文献２）。しかしながら、上記刊行物および特許はいずれも、本発明のような、ＡＭＰＫの活性を増強することによる、肥満およびメタボリックシンドローム疾患の予防または治療を開示または示唆するものではない。
【００２１】
本発明の組成物における有効成分として用いるタンシノン誘導体は、粗薬物（ｃｒｕｄｅ  ｄｒｕｇ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅ）として用いられる、Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ、Ｐｅｒｏｖｓｋｉａ ａｂｒｏｔａｎｏｉｄｅｓ等の丹参中に、主成分として（ｐｒｉｍａｒｉｌｙ）存在する。タンシノン誘導体は、テトラヒドロフェナントレン誘導体とフェナントレン誘導体に大きく分けられる。好ましくは、本発明の組成物は、上記誘導体および両者の混合物よりなる群から選ばれる１種以上の化合物を含む。
【００２２】
好ましくは、テトラヒドロフェナントレン誘導体は、クリプトタンシノン（下記式１）およびタンシノンＩＩＡ（下記式２）よりなる群から選ばれる１種以上の化合物である。
【化１】
2007517025.tif 000003
【化２】
2007517025.tif 000004
【００２３】
好ましくは、フェナントレン誘導体は、タンシノンＩ（下記式３）および１５，１６−ジヒドロタンシノンＩ（下記式４）よりなる群から選ばれる１種以上の化合物である。
【化３】
2007517025.tif 000005
【化４】
2007517025.tif 000006
【００２４】
丹参（Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａの根）中に含まれるタンシノン誘導体は、タンシノンＩＩＡ０．２９％、クリプトタンシノン０．２３％、タンシノンＩ０．１１％および１５，１６−ジヒドロタンシノンＩ０．０５４％からなる。丹参の主成分として、タンシノン誘導体はジテルペンｏ−キノン化合物である。これらの化合物の生合成プロセスは、クリプトタンシノンのジテルペンからの生合成と、脱メチル化、クリプトタンシノンの脱水素化等の酸化的プロセスによる、丹参のタンシノン誘導体（タンシノンＩＩＡ、１５，１６−ジヒドロタンシノンＩ、タンシノンＩ等）の生合成によって行われる。
【００２５】
本発明者らは、そのようなタンシノン誘導体が、代謝を活性化して、体内におけるグルコース、タンパク質および脂肪の代謝を増進し、また体内における脂肪蓄積を阻害するので、メタボリックシンドロームを治療する能力を有することを見出した。これらの発見および事実は、以下の例によっても示すことができる。具体的には、本発明者らは、筋芽細胞（Ｃ２Ｃ１２）における代謝活性化因子の活性並びにタンパク質および遺伝子の発現に対しての、また前脂肪細胞（３Ｔ３−Ｌ１およびＦ４４２Ａ細胞）の細胞分化抑制に対しての、タンシノン誘導体の影響を測定した。その結果、そのような化合物が、優れた代謝活性化を示すことを確認した。タンパク質および遺伝子の発現に対するタンシノン誘導体の作用からわかることであるが、そのようなタンシノン化合物は、単独でも、また何らかの組み合わせであっても、代謝活性化において優れた活性化を示しうる。同時に、本発明者らは、脂肪酸合成の阻害、脂肪酸酸化の増進およびミトコンドリア生合成因子の発現レベルが、タンシノン誘導体の構造と相関していることを確認した。
【００２６】
従って、本発明の組成物は、クリプトタンシノン、タンシノンＩＩＡ、タンシノンＩおよび１５，１６−ジヒドロタンシノンＩよりなる群から選ばれる１種以上のタンシノン誘導体からなる。
【００２７】
そのような組成物は、以下の事例を全て包含する。
（ｉ）クリプトタンシノンを主成分として含む組成物
（ｉｉ）タンシノンＩＩＡを主成分として含む組成物
（ｉｉｉ）タンシノンＩを主成分として含む組成物
（ｉｖ）１５，１６−ジヒドロタンシノンＩを主成分として含む組成物
（ｖ）クリプトタンシノンを必須成分として含み、タンシノンＩＩＡ、タンシノンＩおよび１５，１６−ジヒドロタンシノンＩよりなる群から選ばれる１種以上の化合物を任意に含む組成物
（ｖｉ）タンシノンＩＩＡを必須成分として含み、クリプトタンシノン、タンシノンＩおよび１５，１６−ジヒドロタンシノンＩよりなる群から選ばれる１種以上の化合物を任意に含む組成物
（ｖｉｉ）タンシノンＩを必須成分として含み、クリプトタンシノン、タンシノンＩＩＡおよび１５，１６−ジヒドロタンシノンＩよりなる群から選ばれる１種以上の化合物を任意に含む組成物
（ｖｉｉｉ）１５，１６−ジヒドロタンシノンＩを必須成分として含み、クリプトタンシノン、タンシノンＩＩＡおよびタンシノンＩよりなる群から選ばれる１種以上の化合物を任意に含む組成物
【００２８】
所望であれば、上記組成物は、１β−ヒドロキシクリプトタンシノン、１−オキソクリプトタンシノン、タンシノールＢ、タンシノールＩＩＢ、プルゼワキノンＡ（ｐｒｚｅｗａｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ）、ジヒドロイソタンシノンＩ、タンシノンＩＩＡスルフォネート、１，２−ジヒドロタンシノンＩおよびタンシノンＶＩよりなる群から選ばれる１種以上のタンシノン誘導体を更に含んでもよい。
【００２９】
更に驚くべきことに、本発明者らは、クリプトタンシノン、タンシノンＩＩＡ、タンシノンＩおよび１５，１６−ジヒドロタンシノンＩのＡＭＰＫ活性に対する増強作用が、これらの化合物を２種以上組み合わせて用いることにより有意に増加することを確認した。そのような有意な相乗効果は、全く予期せぬものであった。また、これら４種のタンシノン誘導体の種類を問わず、そのような効果が生じることも確認された。従って、上記の組成物における組み合わせのうち、組成物（ｖ）〜（ｖｉｉｉ）が特に好ましい。
【００３０】
組成物（ｖ）〜（ｖｉｉｉ）の具体例としては、以下のものを挙げることができる。
・クリプトタンシノンおよび１５，１６−ジヒドロタンシノンＩを含む組成物
・クリプトタンシノンおよびタンシノンＩＩＡを含む組成物
・タンシノンＩＩＡおよび１５，１６−ジヒドロタンシノンＩを含む組成物
・タンシノンＩＩＡおよびタンシノンＩを含む組成物
・１５，１６−ジヒドロタンシノンＩおよびタンシノンＩを含む組成物
・タンシノンＩおよびクリプトタンシノンを含む組成物
【００３１】
上記の組成物において、２成分間の重量比は、好ましくは１０：１〜１：１０、より好ましくは５：１〜１：５である。
【００３２】
天然の丹参に含まれるタンシノン誘導体の組成物は、収穫の時期や栽培地域により異なる分布を示すことがある。上記の相乗効果を考慮すると、効果が均等に示されるよう、タンシノン誘導体間の最適組成比が必要である。本発明者らは、タンシノン誘導体に関し、遺伝子およびタンパク質の発現活性に対する効果と、構造の違いに従ったそれらの特徴を確認した。これらの結果に基づき組成比を任意に制御することにより、本発明者らは、タンシノン誘導体間の比を調節することの体重減少に対する効果を確認し、次いで最適組成比を得る努力を行った。
【００３３】
上記したように、本発明の組成物が、テトラヒドロフェナントレン誘導体およびフェナントレン誘導体よりなる群から選ばれる１種以上の化合物（好ましくは両方の誘導体）を含む場合、両者間の好ましい組み合わせ比（重量）は１０：１〜１：１０であってよく、より好ましくは５：１〜１：５、特に好ましくは２．５：１〜１：２．５である。好ましくは、テトラヒドロフェナントレン誘導体成分はクリプトタンシノンおよびタンシノンＩＩＡの両者を含み、両者間の重量比は１：５〜５：１である。加えて、フェナントレン誘導体成分は１５，１６−ジヒドロタンシノンＩおよびタンシノンＩの両者を含み、両者間の重量比は１：５〜５：１である。
【００３４】
本発明者らは更に、ｏｂ／ｏｂマウス（肥満のモデル）、ｄｂ／ｄｂマウス（肥満／糖尿病のモデル）およびＤＩＯ（食餌誘導肥満）マウス（高脂肪食条件により生じる）における、メタボリックシンドロームの予防および治療に関する広範なｉｎ  ｖｉｖｏ実験を通じて、タンシノン誘導体が、メタボリックシンドロームに対し優れた予防および治療効果を有することを確認した。
【００３５】
その結果、有効成分としてタンシノン誘導体を含む、メタボリックシンドロームを予防および治療するための組成物は、代謝の活性化を通じてメタボリックシンドロームを予防および治療することができ、よってそれら誘導体を、種々のメタボリックシンドローム関連疾患用の種々の治療薬として開発することができると予測される。本発明の、メタボリックシンドロームを予防および治療するための組成物は、上記タンシノン誘導体またはそれらの任意の混合物を有効成分として含み、必要に応じて薬学的に許容される担体と組み合わせて、メタボリックシンドローム予防薬および治療薬として処方することができる。
【００３６】
ａ．薬理学的特性
本発明の組成物は、メタボリックシンドロームに関連する臨床症状（ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ）の予防および治療に有用である。これらの臨床症状には、通常肥満（ｃｏｍｍｏｎ  ｏｂｅｓｉｔｙ）、内臓肥満（ａｂｄｏｍｉｎａｌ  ｏｂｅｓｉｔｙ）、高血圧、動脈硬化症、高インスリン血症、高血糖、２型糖尿病および異脂肪血症（インスリン抵抗性において特徴的に現れる）が含まれるが、これらに限定されない。異脂肪血症（表現型Ｂのアテローム産生性リポタンパクプロファイル（ａｔｈｅｒｏｇｅｎｉｃ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｒｏｆｉｌｅ  ｏｆ  ｐｈｅｎｅｔｙｐｅ  Ｂ）としても知られる）は、有意に上昇した非エステル化脂肪酸、上昇した超低密度リポタンパク（ＶＬＤＬ）、トリグリセリドリッチな粒子、高いＡｐｏＢ値、微小・高密度な低密度リポタンパク（ＬＤＬ）粒子の存在、表現型Ｂの存在下における高いＡｐｏＢ値、および低いＡｐｏＡ１粒子値に関連する低い高密度リポタンパク（ＨＤＬ）値により特徴付けられる。
【００３７】
本発明の組成物は、複合または混合（ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｏｒ  ｍｉｘｅｄ）異脂肪血症または高トリグリセリド血症（メタボリックシンドロームの他の兆候あり、またはなし）、および種々の程度の食後異脂肪血症（ｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉａ  ａｆｔｅｒ  ｍｅａｌ）に罹患した患者の治療に有用であることが期待される。
【００３８】
本発明の組成物は、抗炎症性を有し、また異脂肪血症による動脈硬化症に関連する循環器の罹患率および死亡率を低下させることが期待される。これらの循環器疾患症状には、心筋梗塞、心不全、脳血管疾患および下肢における末梢血管不全を引き起こす、種々の内臓における大血管障害（ｍａｃｒｏ−ａｎｇｉｏｐａｔｈｉｅｓ）が含まれる。また本発明の組成物は、そのインスリン感受性作用により、メタボリックシンドロームにおける２型糖尿病の進行および妊娠中の糖尿病の進行を阻害または遅延させることが期待される。従って、本発明の組成物はまた、糖尿病における臨床的高血糖に関連する慢性合併症、例えば、腎疾患、網膜障害および下肢における末梢血管疾患を引き起こす微小血管障害の進行を遅延させることが期待される。本発明の組成物は更に、インスリン抵抗性との関連と関係なく、循環器系以外の種々の症状、例えば、多嚢胞性卵巣症候群、肥満、癌、炎症性疾患および神経変性疾患（軽度（ｍｉｌｄ）認知障害（ＭＣＩ）、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症等）の治療に有用でありうる。
【００３９】
本発明の組成物は、肝臓における脂肪肝（肝脂肪変性）の発達に対して阻害作用を示し、また脂肪酸のβ−酸化を活性化して、トリグリセロール濃度を低下する役割を果たすので、アルコール性および非アルコール性肝臓の脂質代謝異常による脂肪肝および肝炎の予防および治療に有用であることが期待される。
【００４０】
本発明の組成物は、種々の組織において脂肪組成を変化させる。加えて、脂肪の含量および分布を変化させ、また血漿コレステロールおよびトリグリセリドレベルを低下させることができる。
【００４１】
本発明の組成物は、内皮細胞におけるＮＯの形成に有効であり、よって心疾患、血管疾患、高血圧および勃起不全の予防および治療に有用であることが期待される。高血圧が引き起こす疾患としては、心不全、心筋梗塞、脳血管系の破裂、血栓症および腎障害を挙げることができる。
【００４２】
本発明の組成物は、脂肪酸酸化およびエネルギー消費の促進を誘起する物質であり、よって通常肥満の治療および予防、また局所的脂肪沈着（皮下脂肪、内臓脂肪など）の除去に有用であることが期待される。従って、本発明の組成物は、例えば、瞼、腕および臀部の隆起した部位からの皮下脂肪の除去、内臓脂肪の除去、特定領域（セルライトなど）の脂肪の除去など、脂肪が沈着している特定の領域から脂肪を除去することが望まれる際に、軟膏、パッチ（抗炎症パッチを含む）およびクリームの形態で薬物を送達するのに有用であることが期待される。
【００４３】
本発明の組成物は更に、血中グルコースレベルを低下させることによる抗糖尿病薬として使用しうる。加えて、本発明の組成物は、低下したインスリン感受性を改善して、インスリンの作用を増強することが確認された。
【００４４】
本発明の組成物は、ミトコンドリアの生合成を増進して、ミトコンドリアの活性（ａｃｔｉｖｅ  ｃａｐａｃｉｔｙ）を上昇させると同時に、筋組織の運動組織（ｍｏｔｏｒ  ｔｉｓｓｕｅｓ）への変換を誘発して、患者の運動能向上、持久力強化、エネルギー産生向上、疲労回復、活力増強、並びに反応性酸素種（ＲＯＳ）およびフリーラジカル除去能の向上による酸化的ストレスの低減をもたらす。従って同組成物は、関連する疾患の治療に有用であることが期待される。
【００４５】
反応性酸素種（ＲＯＳ）によって引き起こされうる疾患としては、動脈硬化症、糖尿病、神経疾患、腎疾患、肝硬変、関節炎、未熟児網膜症、眼ぶどう膜炎（ｏｃｕｌａｒ  ｕｖｅｉｔｉｓ）、老年性白内障、放射線療法による副作用障害、喫煙による気管支障害、制癌剤による副作用障害、脳浮腫、肺浮腫、足浮腫、脳梗塞、溶血性貧血、早老症、癲癇、アルツハイマー病、ダウン症候群、クローン病および膠原病を挙げることができる。
【００４６】
上記したように、本発明の組成物は、グルコースおよび脂質の恒常性を調節することにより、上記全ての症状および疾患に関し、有益な効果を提供することが示された。従って本発明の組成物は、メタボリックシンドロームの制御に適する物質であることがわかる。
【００４７】
本発明は、特に多発（ｍｕｌｔｉｐｌｅ）メタボリックシンドローム（メタボリックシンドローム）、即ち高インスリン血症において特徴的に現れるメタボリックシンドローム、インスリン抵抗性、肥満、グルコース不耐性、２型糖尿病、異脂肪血症、循環器疾患または高血圧を治療および／または予防するための医薬組成物を調製するための化合物の用途に関する。
【００４８】
ｂ．医薬製剤
タンシノン誘導体を有効成分として含む、メタボリックシンドロームを予防および治療するための組成物は、代謝の活性化を通じてメタボリックシンドロームを予防および治療することができるので、それら誘導体を、種々のメタボリックシンドローム関連疾患用の種々の薬物として開発することができると考えられる。本発明の、メタボリックシンドロームを予防および治療するための組成物は、上記タンシノン誘導体を有効成分として含み、必要に応じて薬学的に許容される担体と組み合わせて、メタボリックシンドローム予防薬および治療薬として処方することができる。
【００４９】
本発明の医薬組成物の適切な投与量は、処方の方法、投与形式、患者の年齢、体重および性別、病理学的症状、食餌、投与時間、投与経路、排泄速度、応答の感受性（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）等、種々の因子により変動しうる。本発明の、メタボリックシンドローム予防薬および治療薬である医薬組成物は、タンシノン誘導体を有効成分として含む。タンシノン誘導体は、臨床での投与において、経口的経路でも非経口的経路でも投与することができ、一般的な形態の医薬処方物として用いることができる。即ち、本発明の組成物は、実際の臨床での投与において、種々の経口または非経口処方で投与してよい。処方時、処方物は、従来の充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、希釈剤（界面活性剤など）または賦形剤を用いて調製される。経口投与用の固形処方物には、例えば錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤およびカプセル剤が含まれ、タンシノン誘導体をデンプン、炭酸カルシウム、ショ糖、乳糖、ゼラチン等の賦形剤１種以上と混合して調製される。単純（ｓｉｍｐｌｅ）賦形剤の場合を除き、ステアリン酸マグネシウム、タルク等の滑沢剤も用いてよい。経口投与用の液体処方物としては、懸濁液、内服用溶液、乳液およびシロップを挙げることができる。上記処方物には、水、流動パラフィンなどの通常用いられる単純希釈剤に加え、種々の賦形剤、例えば湿潤剤、甘味剤、芳香剤および保存剤が含まれていてもよい。非経口投与用の処方物には、滅菌水溶液、非水溶液、懸濁液、乳液、凍結乾燥処方物および坐剤が含まれる。非水溶液および懸濁液には、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油（オリーブ油等）、注射用（ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ）エステル（オレイン酸エチル等）等を用いることができる。坐剤の基材としては、ウィテップゾール、マクロゴール、Ｔｗｅｅｎ  ６１、カカオ脂、ラウリン脂（ｌａｕｒｉｎ  ｂｕｔｔｅｒ）、グリセロールおよびゼラチンを用いてよい。
【００５０】
投与単位は、個別（ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ）投与量の１、２、３または４倍量、或いは個別投与量の１／２、１／３または１／４量を含むものとしてよい。好ましくは、個別投与量は有効な薬物を１回で投与する量を含み、典型的には、１日に投与する投与量の合計、またはその１／２、１／３または１／４量に相当する。タンシノン誘導体の有効投与量は濃度依存的であるが、好ましくは０．１〜１０００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは０．４〜５００ｍｇ／ｋｇであり、１日に１〜６回投与してよい。従ってタンシノン誘導体は、成人に対し、体重１ｋｇあたり、１日０．１〜６０００ｍｇ投与してよい。
【００５１】
本発明の他の実施形態によれば、タンシノン誘導体を有効成分として含む、メタボリックシンドロームを予防および治療するための健康および機能性食品組成物が提供される。
【００５２】
本願明細書全体を通して用いられる用語「健康および機能性食品」とは、一般的な食品にタンシノン誘導体を添加して、その機能を向上させた食品をいう。タンシノン誘導体は、カプセル剤、散剤、懸濁剤等の形態で一般的な食品に添加してもよく、またそれらの形態に調製してもよい。タンシノン誘導体を含むそのような健康および機能性食品を摂取すると、健康に有益な効果が提供され、また従来の薬物と異なり、食品材料を原料として用いているため、薬物の長期使用による副作用がないとの利点がもたらされる。
【００５３】
本発明のタンシノン誘導体を食品添加物として用いることが望まれる場合、これらの誘導体を単独で添加してもよく、他の食品または食品成分と組み合わせて用いてもよく、他の従来の方法に従って適宜に用いてもよい。有効成分の混合量は、使用目的（予防、健康または治療処理）に応じて適宜決定してよい。一般に、タンシノン誘導体を混合した食品または飲料の製造においては、これらの誘導体を、原料の合計重量を基準として０．０００１〜１０重量％、好ましくは０．１〜５重量％添加してよい。しかしながら、健康および衛生を目的とした、または健康管理のための長期摂取を意図する場合、上記のタンシノン誘導体量を、上記の範囲未満に調節してもよい。加えて、本発明の健康食品は、好ましくは、測定された毒性範囲内（医薬組成物として用いる場合の）のタンシノン誘導体を含む。
【００５４】
上記食品の種類は特に限定されない。タンシノン誘導体を添加することのできる食品の例としては、肉、ソーセージ、パン、チョコレート、キャンディー、スナック、菓子類（ｃｏｎｆｅｃｔｉｏｎｅｒｙ）、ピッツァ、ラーメンその他の麺類、ガム、スキムミルク、乾燥食品、非乾燥（ｒａｗ）食品、乳製品（乳酸菌発酵乳およびアイスクリームを含む）、各種スープ、飲料、茶、ドリンク類、アルコール飲料およびマルチビタミン製剤を挙げることができる。具体的には、タンシノン誘導体を含む健康食品の例として、タンシノン誘導体を主成分として製造された圧搾液、茶、ゼリー、ジュースなどの健康食品および特殊嗜好品を挙げることができる。加えて、浮腫、腎炎および尿道炎を標的とする民間薬を挙げることができる。
【００５５】
本発明のタンシノン誘導体を化粧品原料として用いることが望まれる場合、これらの誘導体自体を添加してもよく、他の化粧品成分と組み合わせて用いてもよく、他の従来の方法に従って適宜に用いてもよい。有効成分の混合量は、使用目的に応じて適宜決定してよい。一般に、タンシノン誘導体を用いる化粧品の製造においては、これらの誘導体を、原料の合計重量を基準として０．０００１〜１０重量％、好ましくは０．１〜５重量％添加してよい。化粧品にはひげそり後用製品（ａｆｔｅｒｓｈａｖｅｓ）、ローション、クリーム、パックおよび着色用化粧品（ｃｏｌｏｒ  ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ）が含まれるが、これらに限定されない。
【００５６】
本発明のタンシノン誘導体は、丹参（Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ）を乾燥医薬品原料または未乾燥（ｒａｗ）医薬品原料として用いて抽出してもよく、有機化学的手法により合成してもよい。
【００５７】
丹参からタンシノン誘導体を抽出する方法は、
ａ）丹参を水または有機溶媒による抽出に付して、粗抽出物を得る工程；
ｂ）前記粗抽出物をろ過し、次いで（減圧）濃縮する工程；および
ｃ）任意に、溶媒を除去する工程
を含む。
【００５８】
例えば、丹参をメタノールで抽出し、減圧濃縮し、塩化メチレンで再抽出して濃縮溶液を得る。この溶液をシリカカラムクロマトグラフィーにより精製して、純粋なタンシノン誘導体を得る。本発明を、下記の実施例により更に詳細に記載する。
【００５９】
本発明の上記および他の目的、特徴および利点は、以下の詳細な記載を添付の図面と組み合わせて解釈することにより、より明確に理解される。
【実施例】
【００６０】
以下の実施例を参照して、本発明をより詳細に記載する。これらの実施例は本発明の例示のみを目的として提供されるものであり、本発明の範囲および精神を限定すると解釈すべきものではない。
【００６１】
実施例１：タンシノン誘導体の単離
材料の丹参（Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ）は、５ｋｇを漢方薬店（Ｃｈｉｎｅｓｅ  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｈｅｒｂ  ｓｈｏｐ）にて購入した。それ以上の必要な材料は、原野（ｆｉｅｌｄ）または山中にて採集、或いは前記漢方薬店にて購入した。５０リットルのメタノールを用いて丹参を２４時間溶出し、減圧下で濃縮した。得られた物質に、水１５００ｍｌを添加した。次いで、同量のｎ−ヘキサン、ジクロロメタン（）および酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）を順次添加して２回ずつ抽出し、赤色ゼラチン様の抽出物を得た。得られた各層につき活性を測定したところ、ジクロロメタン層において活性が最も高かった。
【００６２】
１００％ｎ−ヘキサンを用いてシリカゲル（Ｋｅｉｓｅｌｇｅｌ  ６０、２３０〜４６０メッシュ、Ｍｅｒｃｋ社製）を十分膨潤させ、カラム（高さ５３０ｃｍ）に充填した。ＣＨ２Ｃｌ２層より得た抽出物５０ｇを少量のＥｔＯＡｃおよびｎ−ヘキサンに溶解し、得られた試料をカラムに装填した。試料の装填および十分な溶出の後、ＥｔＯＡｃ１０〜２０％のグラジエントで溶出物を溶出させ、次いでＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３のグラジエント（０／１００〜５０／５０）で溶出させて、タンシノン誘導体を得た。ＡＭＰＫ活性の測定を通じて活性画分をプールし、減圧下で濃縮した。
【００６３】
第１のカラムにおいて活性を示した物質を、シリカゲル（Ｋｅｉｓｅｌｇｅｌ  ６０、２３０〜４６０メッシュ、Ｍｅｒｃｋ社製）を用いて再び分離した。これは、１００％ｎ−ヘキサンを用いて膨潤させ、カラム（高さ４２５ｃｍ）に充填した後に行った。ＥｔＯＡｃ／ｎ−ヘキサン＝０／１００（ｖ／ｖ）→２０／８０（ｖ／ｖ）を展開溶媒として用いた。阻害活性を示す画分をプールし、減圧下で濃縮した。
【００６４】
次に、ＥｔＯＡｃ／ｎ−ヘキサン＝３０／７０（ｖ／ｖ）を展開溶媒として分取ＴＬＣを行った。各工程においてＴＬＣを行い、各画分における分離の程度を観察した。展開溶媒としてＥｔＯＡｃ／ｎ−ヘキサン＝８０／２０（ｖ／ｖ）を順相で用いた。各物質の探索は、アニスアルデヒド発色液（５％硫酸、２．５％酢酸、５％アニスアルデヒドおよび８７．５％エタノール）を用い、ＴＬＣプレートをホットプレートで加熱・展開することにより行った。この方法により、タンシノン誘導体の抽出・分離・精製を行った。
【００６５】
実施例２：分離された活性物質の構造解析
ＮＭＲ解析を行って、実施例１において分離されたクリプトタンシノン、タンシノンＩ、タンシノンＩＩＡおよび１５，１６−ジヒドロタンシノンＩの構造を各々決定した。
【００６６】
クリプトタンシノン
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ７．４２（２Ｈ、ＡＢｑ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、４．８３（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝９．２Ｈｚ）、４．３１（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝９．２および６．０Ｈｚ）、３．５５（１Ｈ、ｍ）、３．１７（２Ｈ、ｂｒｔ）、１．６５（４Ｈ、ｍ）、１．４０（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ）、１．２８（６Ｈ、ｓ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ９．５８（Ｃ−１）、１９．００（Ｃ−２）、３７．７３（Ｃ−３）、３４．７６（Ｃ−４）、１４３．５７（Ｃ−５）、１３２．４８（Ｃ−６）、１２２．４３（Ｃ−７）、１２８．３０（Ｃ−８）、１２６．１９（Ｃ−９）、１５２．２８（Ｃ−１０）、１８４．１６（Ｃ−１１）、１７５．５９（Ｃ−１２）、１１８．２１（Ｃ−１３）、１７０．６６（Ｃ−１４）、８１．３８（Ｃ−１５）、３４．５４（Ｃ−１６）、１８．７４（Ｃ−１７）、３１．８５（Ｃ−１８）、３１．８０（Ｃ−１９）
【００６７】
タンシノンＩＩＡ
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００．４０ＭＨｚ）：δ７．６３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ）、７．５４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ）、７．２２（１Ｈ、ｓ）、３．１８（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ）、２．２６（３Ｈ、ｓ）、１．７８（２Ｈ、ｍ）、１．６５（２Ｈ、ｍ）、１．３１（６Ｈ、ｓ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、７５．４５ＭＨｚ）：δ１８４．２９、１７６．４３、１６２．３８、１５０．８０、１４５．１４、１４１．９６、１３４．１３、１２８．１２、１２７．１６、１２１．８１、１２０．９１、１２０．５７、３８．５２、３５．３３、３２．５１、３０．５６、１９．７９、９．４６
【００６８】
１５，１６−ジヒドロタンシノンＩ
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００．４０ＭＨｚ）：δ９．２４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０．６Ｈｚ）、８．２４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０．３Ｈｚ）、７．６９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０．３Ｈｚ）、７．５４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１０．６および８．４Ｈｚ）、７．４１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、４．９５（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝１１．３Ｈｚ）、４．４１（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１１．３および７．５Ｈｚ）、３．６２（１Ｈ、ｍ）、２．６６（３Ｈ、ｓ）、１．３８（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、７５．４５ＭＨｚ）：δ１８４．２６、１７５．６７、１７０．５６、１４２．００、１３４．９５、１３４．７２、１３２．０６、１３１．９０、１３０．３８、１２８．８１、１２８．１８、１２６．０１、１２４．９９、１２０．２８、１１８．３２、１１４．０６、８１．６２、３４．６８、１９．８５、１８．８１
【００６９】
タンシノンＩ
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００．４０ＭＨｚ）：δ９．１９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０．６Ｈｚ）、８．２３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０．３Ｈｚ）、７．７３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０．３Ｈｚ）、７．５０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１０．６および８．５Ｈｚ）、７．３０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ）、７．２６（１Ｈ、ｑ、Ｊ＝１．３Ｈｚ）、２．６４（３Ｈ、ｓ）、２．２５（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．３Ｈｚ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、７５．４５ＭＨｚ）：δ１８３．３８、１７５．５５、１６１．１３、１４２．００、１３５．１８、１３３．５８、１３２．９０、１３２．６９、１３０．６３、１２９．５７、１２８．３１、１２４．７３、１２３．０３、１２１．７２、１２０．４３、１１８．６９、１９．８４、８．７９
【００７０】
実施例３：ＡＭＰＫ活性の測定
筋芽細胞Ｃ２Ｃ１２を、１０％仔ウシ血清を含むＤＭＥＭ中で細胞培養した。細胞密度が約８５〜９０％に達したら、培地を１％仔ウシ血清培地に変えて、細胞の分化を誘発した。ＡＭＰＫの酵素活性は、以下のようにして測定した。Ｃ２Ｃ１２細胞を溶解してタンパク抽出物を得、最終濃度３０％となるように硫酸アンモニウムを添加して、タンパク質を沈殿させた。タンパク質沈殿物を緩衝液（６２．５ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ、ｐＨ７．２、６２．５ｍＭ  ＮａＣｌ、６２．５ｍＭ  ＮａＦ、１．２５ｍＭピロリン酸Ｎａ、１．２５ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＤＴＴ、０．１ｍＭ  ＰＭＳＦおよび２００μＭ  ＡＭＰ）に溶解した。その後、これに２００μＭ  ＳＡＭＳペプチド（ＨＭＲＳＡＭＳＧＬＨＬＶＫＲＲ：下線を付けたセリン残基は、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼのＡＭＰＫリン酸化部位としてのリン酸化部位である）および［γ−３２Ｐ］ＡＴＰを添加し、反応物を３０℃で１０分間反応させた。この後、得られた反応液をｐ８１ホスホセルロース紙にスポットした。ｐ８１ホスホセルロース紙を３％リン酸溶液で洗浄し、放射活性を測定した。各反応条件において、ＳＡＭＳペプチドを含まない反応も行い、合計の数値からベースの数値を差し引いた。
【００７１】
図１からわかるように、筋芽細胞Ｃ２Ｃ１２を丹参抽出物およびタンシノン誘導体で処理すると、ＡＭＰＫ酵素活性の増加がもたらされる。
【００７２】
実施例４：ｔ−ＡＭＰＫ、ｐ−ＡＭＰＫ、ｐ−ＡＣＣおよびＧＬＵＴ４酵素の発現レベル測定
筋芽細胞Ｃ２Ｃ１２を、１０％仔ウシ血清を含むＤＭＥＭ中で細胞培養した。細胞密度が約８５〜９０％に達したら、培地を１％仔ウシ血清培地に変えて、細胞の分化を誘発した。分化した細胞を、３０ｍＭのタンシノン誘導体それぞれで処理した。ＡＭＰＫの酵素活性は、Ｃ２Ｃ１２細胞を溶解してタンパク抽出物を得、得られたタンパク抽出物をウェスタンブロット分析に付して、総ＡＭＰＫ、ｐ−ＡＭＰＫ（リン酸化ＡＭＰＫ）、ｐ−ＡＣＣ（リン酸化アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ）およびＧＬＵＴ４（グルコース輸送体４）タンパクの量を測定することにより測定した。
【００７３】
図２からわかるように、対照群と比較すると、タンシノン誘導体で処理した細胞は、総ＡＭＰＫの量には変化がないが、リン酸化ＡＭＰＫタンパクの増加、リン酸化ＡＣＣタンパクの増加およびＧＬＵＴ４タンパク発現レベルの増加を示していた。
【００７４】
実施例５：脂肪酸代謝およびミトコンドリア生合成に対するタンシノン誘導体の作用
筋芽細胞Ｃ２Ｃ１２を、１０％仔ウシ血清を含むＤＭＥＭ中で細胞培養した。細胞密度が約８５〜９０％に達したら、培地を１％仔ウシ血清培地に変えて、細胞の分化を誘発した。分化した細胞を、３０ｍＭのタンシノン誘導体それぞれで処理した。細胞からＲＮＡを抽出し、ＲＴ−ＰＣＲを行って、ＡＣＣ−１（アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ−１）、ＡＣＣ−２、ＣＰＴ１（カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ１）、ＰＧＣ−１α（ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γコアクチベータ１α）、ＧＬＵＴ１（グルコース輸送体１）および脱共役タンパク質２（ＵＣＰ−２）の遺伝子発現に対する各タンシノン誘導体の作用を観察した。
【００７５】
図３からわかるように、対照群と比較すると、タンシノン誘導体で処理した細胞は、ＡＣＣ１、ＡＣＣ２、ＣＰＴ１、ＰＧＣ−１α、ＵＣＰ−２およびＧＬＵＴ１に関し、遺伝子発現レベルの増加を示していた。
【００７６】
実施例６：グルコース取り込み度の分析
筋芽細胞Ｃ２Ｃ１２を、１０％仔ウシ血清を含むＤＭＥＭ中で細胞培養した。細胞密度が約８５〜９０％に達したら、培地を１％仔ウシ血清培地に変えて、細胞の分化を誘発した。十分分化した細胞を、５ｍＭグルコースを含むＫｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ緩衝液（ＫＲＢ）中で更に２時間培養した。細胞を所定の時間タンシノン誘導体で処理し、これに０．２μＣｉの２−デオキシグルコースを添加して２分間静置した。ＫＲＢ緩衝液を除去した後、氷冷した生理食塩水で細胞を洗浄し、０．５ＮＮａＯＨを用いて細胞を溶解し、次いで放射線計数管を用いてカウント／分（ｃｐｍ）を測定した。この場合、１０μＭサイトカラシンＢを含むＫＢＲ緩衝液を用いて非特異的グルコース取り込みを測定し、合計の数値から差し引いた。
【００７７】
図４からわかるように、Ｃ２Ｃ１２細胞をそれぞれ３０μＭのタンシノン誘導体で処理すると、処理した細胞は、対照群と比較して上昇したグルコース取り込みを示した。
【００７８】
実施例７：脂肪細胞分化阻害作用の測定
前脂肪細胞３Ｔ３−Ｌ１およびＦ４４２Ａを、１０％仔ウシ血清を含むＤＭＥＭ中で細胞培養した。各前脂肪細胞の細胞密度が約９０％に達したら、３Ｔ３−Ｌ１細胞をデキサメサゾン、ＩＢＭＸおよびインスリンで約４８〜５５時間処理し、脂肪細胞の分化を誘発した。その後２日毎に、培地をウシ胎児血清およびインスリンを含む培地に変えた。Ｆ４４２Ａ細胞については、前脂肪細胞の細胞密度が約９０％に達したら、培地を１０％ウシ胎児血清およびインスリンを含む培地に変え、２日毎に培地を変えて、脂肪細胞の分化を誘発した。脂肪細胞分化阻害作用を測定するため、脂肪細胞分化の初期段階にある細胞を丹参から抽出したタンシノン誘導体（濃度５〜３０μＭ）で処理し、対照群と比較した。９０％を超える細胞が脂肪細胞に分化するには約１２〜１５日を要する。各画分の活性を検討するため、細胞を対照群と同じ時間処理して顕微鏡下で観察し、タンシノン誘導体処理の効果を調べた。
【００７９】
図５は、脂肪細胞分化能を、脂肪細胞分化の導入タイミングに関してタンシノン誘導体処理群と対照群間で比較する顕微鏡写真である。対照群では、Ｆ４４２Ａ細胞の８０〜９０％が脂肪細胞に分化するのに約１１日を要した。これに対し、タンシノン誘導体処理群では、分化の初期段階から細胞を３０μＭのタンシノン誘導体で処理すると、同じ期間で脂肪細胞に分化した細胞は５〜１０％しかなかった。
【００８０】
実施例８：筋肉におけるインスリン感受性に対するタンシノン誘導体の作用
筋芽細胞Ｃ２Ｃ１２を、１０％仔ウシ血清を含むＤＭＥＭ中で細胞培養した。細胞密度が約８５〜９０％に達したら、培地を１％仔ウシ血清培地に変えて、細胞の分化を誘発した。分化した細胞を、インスリンおよびタンシノン誘導体で別個に、または両者を組み合わせて処理することにより、種々の濃度のタンシノン誘導体に対してのグルコース取り込み度を測定し、インスリン感受性に対するタンシノン誘導体の作用を調べた。
【００８１】
図６からわかるように、インスリンの存在下に種々の濃度でタンシノン誘導体を投与すると、このことが、インスリンのみ投与した群および対照群と比較して濃度依存的に促進された、筋細胞へのグルコース取り込みを示した。
【００８２】
実施例９：肥満の動物モデルであるＤＩＯマウスにおける、肥満予防・治療効果のアッセイ
最もよく用いられる食餌誘導肥満（ＤＩＯ）のマウスモデルとして、４週齢のＣ５７ＢＬ／６雄性マウスに高脂肪食（Ｄ１２４５１、脂肪４５％ｋｃａｌ、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ社製、Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、ニュージャージー州）を与えた。
【００８３】
その結果、動物体内に脂肪が過剰に蓄積し、生後約３ヶ月で、マウスの体重は３１〜３２ｇ超（正常マウスの１．４倍）に維持された。脂肪代謝に対するタンシノン誘導体の作用を調べるため、３ヶ月齢のＤＩＯマウス（体重３１〜３２ｇ、１６匹）を２群に分けた。一方が実験群、他方が対照群であり、各々８匹ずつである。実験群のマウス８匹に、濃度１００ｍｇ／ｋｇのタンシノン誘導体を、所定の時点で３０日間投与した。一方、対照群には同量の蒸留水のみを投与した。３０日間の投与後に、実験群と対照群の体重を測定したところ、図７に示すように、タンシノン誘導体を投与した実験群は、対照群と比較して有意に低い体重を示した。
【００８４】
実施例１０：肥満マウス（ｏｂ／ｏｂ）に対するタンシノン誘導体投与の作用
肥満の特性を有する１０週齢のＣ５７ＢＬ／６ＪＬ  Ｌｅｐ  ｏｂ／Ｌｅｐ  ｏｂ雄性マウスは、Ｄｅａｈａｎ  Ｂｉｏｌｉｎｋ  Ｃｏ.，Ｌｔｄ．（Ｃｈｕｎｇｃｈｏｎｇｂｕｋ−ｄｏ、大韓民国）より購入した。温度２３℃、湿度５５％、照度３００〜５００ルクス、明暗サイクル１２：１２時間、換気１０〜１８回／時に維持した飼育室で動物を飼育した。動物には、Ｐｕｒｉｎａ  Ｒｏｄｅｎｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｈｏｗ  ５００１（Ｐｕｒｉｎａ  Ｍｉｌｌｓ  Ｉｎｃ．社（ミズーリ州セントルイス、アメリカ合衆国）より購入）のペレットおよび水（自由に飲める）を与えた。２週間かけて飼育室の新たな環境にマウスを順応させ、３００ｍｇ／ｋｇのタンシノン誘導体を２６日間投与した。投与の時点において、体重、血中グルコースおよび食餌摂取の変動を観察した。投与完了後、コンピュータ断層写真撮影（ＣＴ）を行い、動物における脂肪組織分布の変動、各種臓器における組織の脂肪分布の変動、脂肪細胞サイズの変動、血液および肝臓中のグルコース並びに脂質および酵素の変動を確認した。図９の表は、タンシノン誘導体投与による体重減少作用を示す。
【００８５】
図８は、タンシノン誘導体を投与したＣ５７ＢＬ／６ＪＬ  Ｌｅｐ  ｏｂ／Ｌｅｐ  ｏｂマウスと対照群の間で、時間対の体重変化を比較するグラフである。図８からわかるように、タンシノン誘導体投与は、対照群と比較して有意な体重減少をもたらした。
【００８６】
図１０は、タンシノン誘導体を投与したＣ５７ＢＬ／６ＪＬ  Ｌｅｐ  ｏｂ／Ｌｅｐ  ｏｂマウスと対照群の間で、脂肪細胞の大きさを数値で比較するグラフである。図１０からわかるように、タンシノン誘導体を投与した実験群は、対照群と比較して６０％を超える脂肪細胞サイズの減少を示した。
【００８７】
図１１は、タンシノン誘導体を投与したＣ５７ＢＬ／６ＪＬ  Ｌｅｐ  ｏｂ／Ｌｅｐ  ｏｂマウスと対照群の間で、各種臓器における脂肪分布を数値で比較するグラフである。図１１からわかるように、タンシノン誘導体を投与した実験群は、全ての臓器についての組織脂肪含量の有意な減少と、対照群と比較しての褐色脂肪の増加を示した。このことは、脂肪代謝が有意に増進したことを意味するものである。
【００８８】
図１２は、正常マウス、肥満マウスおよびタンシノン誘導体を投与したＣ５７ＢＬ／６ＪＬ  Ｌｅｐ  ｏｂ／Ｌｅｐ  ｏｂマウスについて、肝臓における脂肪組織分布を、Ｈ＆Ｅ染色およびオイルレッドＯ染色により比較する写真である。図１２に示すように、タンシノン誘導体投与が、肝臓において、肥満マウスの対照群と比較して増進した脂肪蓄積減少をもたらしたことが、脂肪組織の染色により確認された。
【００８９】
図１３は、タンシノン誘導体を投与したＣ５７ＢＬ／６ＪＬ  Ｌｅｐ  ｏｂ／Ｌｅｐ  ｏｂマウスと対照群の間の、肝組織における脂質および抗酸化指示物質の変動の結果を示す表である。図１３からわかるように、タンシノン誘導体を投与した群は、肝臓において、対照群と比較して有意に減少した総脂肪含量、トリグリセリド、コレステロール、ＧＯＴおよびＧＰＴを示した。
【００９０】
図１４は、タンシノン誘導体を投与したＣ５７ＢＬ／６ＪＬ  Ｌｅｐ  ｏｂ／Ｌｅｐ  ｏｂマウスと対照群の間で、血中脂質およびグルコースの変動を比較する表である。図１４からわかるように、タンシノン誘導体を投与した群は、血中のトリグリセリド、コレステロール、ＧＯＴおよびグルコースについて、対照群と比較して有意な減少を示した。
【００９１】
図１５は、タンシノン誘導体を投与したＣ５７ＢＬ／６ＪＬ  Ｌｅｐ  ｏｂ／Ｌｅｐ  ｏｂマウスのコンピュータ断層写真撮影（ＣＴ）の解析結果を示す。図１５からわかるように、タンシノン誘導体を投与した実験群は、内臓脂肪分布に関し、対照群と比較して有意な減少を示した。
【００９２】
実施例１１：糖尿病の動物モデルであるＬｅｐｒ  ｄｂ／Ｌｅｐｒ  ｄｂマウスにおける、糖尿病予防・治療効果のアッセイ
Ｌｅｐｒ  ｄｂ／Ｌｅｐｒ  ｄｂ雄性マウスは、レプチン受容体を欠失しており、食欲が制御されないので、連続的かつ過剰に食餌を摂取する。その結果、動物体内に脂肪が過剰に蓄積し、また血中グルコースレベルが上昇して、生後約１０〜１１ヶ月で、血中グルコースレベルは約３５０〜４００ｍｇ／ｄｌとなる。タンシノン誘導体による糖尿病予防・治療作用を調べるため、血中グルコースレベル約３５０〜４００ｍｇ／ｄｌの成体Ｌｅｐｒ  ｄｂ／Ｌｅｐｒ  ｄｂ雄性マウスを２群に分けた。一方が実験群、他方が対照群であり、各々１０匹ずつである。実験群のマウス１０匹に、濃度３００ｍｇ／ｋｇのタンシノン誘導体を、１２日間投与した。一方、対照群のマウス１０匹には、タンシノン誘導体に代えて、同量の蒸留水のみを投与した。図１６は、タンシノン誘導体の投与期間についての血中グルコースの変動を示す表である。タンシノン誘導体による血中グルコース低下作用が見られることがわかる。
【００９３】
実施例１２：タンシノン誘導体間の組み合わせ比に対しての、ＡＭＰＫ活性に対する相乗効果
筋細胞を用いて、タンシノンＩ、タンシノンＩＩＡ、クリプトタンシノンおよび１５，１６−ジヒドロタンシノンＩを主成分として含む誘導体間の組み合わせ比に対しての、ＡＭＰＫ活性に対する相乗効果を確認すべく、本実施例を行った。即ち本発明者らは、実施例５に示す遺伝子発現に従い、誘導体間の相補的な（ｉｎｔｅｒ−ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ）機能、またその結果としての、ＡＭＰＫ活性を通じたタンシノン誘導体の何らかの組み合わせによる相乗効果を確認するための努力を行った。
【００９４】
タンシノンＩ、タンシノンＩＩＡ、クリプトタンシノンおよび１５，１６−ジヒドロタンシノンＩの各成分を２種または３種組み合わせて、種々の組成物を調製した。調製した組成物のＡＭＰＫ活性と、それらの組成物に含まれる各成分のＡＭＰＫ活性を比較して、相乗効果を確認した。加えて本発明者らは、組成物の成分間の比を変化させて、組み合わせ比の変動に対してのＡＭＰＫ活性を確認するための努力を行い、タンシノン誘導体の何らかの組み合わせによる相乗効果を得た。
【００９５】
図１７は、タンシノン誘導体２種の組み合わせによる組成物の活性を比較する表であり、図１８は、２種の組み合わせにおける成分比の変動に対しての活性の変動を示す表であり、図１９は、タンシノン誘導体３種の組み合わせによる組成物のＡＭＰＫ活性を比較する表である。
【００９６】
まず、図１７および図１８からわかるように、タンシノン誘導体２種または３種の組み合わせを含む組成物は、同濃度において、各成分と比較して有意に高いＡＭＰＫ活性を示した。誘導体成分の組み合わせによるこのような相乗効果は、成分の種類と関係のない、極めて特異な現象であることがわかる。一方、図１８からわかるように、同じ組成における、各成分間の組み合わせ比の差は、成分の種類に依存する、特異的に異なるＡＭＰＫ活性をもたらした。
【００９７】
実施例１３：タンシノン誘導体間の組み合わせ比に対しての、体重減少に対する相乗効果
肥満の特性を有する１０週齢のＣ５７ＢＬ／６ＪＬ  Ｌｅｐ  ｏｂ／Ｌｅｐ  ｏｂ雄性マウスは、Ｄｅａｈａｎ  Ｂｉｏｌｉｎｋ  Ｃｏ.，Ｌｔｄ．（Ｃｈｕｎｇｃｈｏｎｇｂｕｋ−ｄｏ、大韓民国）より購入した。温度２３℃、湿度５５％、照度３００〜５００ルクス、明暗サイクル１２：１２時間、換気１０〜１８回／時に維持した飼育室で動物を飼育した。動物には、Ｐｕｒｉｎａ  Ｒｏｄｅｎｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｈｏｗ  ５００１（Ｐｕｒｉｎａ  Ｍｉｌｌｓ  Ｉｎｃ．社（ミズーリ州セントルイス、アメリカ合衆国）より購入）のペレットおよび水（自由に飲める）を与えた。２週間かけて飼育室の新たな環境にマウスを順応させ、タンシノン誘導体を投与した。丹参抽出物に含まれるタンシノン誘導体を２群に分け（テトラヒドロフェナントレン誘導体群（クリプトタンシノンおよびタンシノンＩＩＡ、比率１：１）およびフェナントレン誘導体群（タンシノンＩおよび１５，１６−ジヒドロタンシノンＩ、比率２：１））、タンシノン誘導体間の比を任意に調節した。本発明者らはこのようにして、体重に対する成分比変動の作用を調べるための努力を行い、相補的な作用の効果を確認した。テトラヒドロフェナントレン誘導体群とフェナントレン誘導体群の組み合わせ比を１０：１〜１：１０で変化させ、投与量３００ｍｇ／ｋｇで動物に２６日間投与した。誘導体投与による体重の変動を測定した。成分比変動に対しての体重減少作用を、図２０に示す。図２０からわかるように、テトラヒドロフェナントレン誘導体群／フェナントレン誘導体群間の組み合わせ比の変動は、体重減少（％）の変動をもたらした。特に、組み合わせ比（テトラヒドロフェナントレン誘導体：フェナントレン誘導体）が５：１〜１：５、より好ましくは２．５：１〜１：２．５のときに、優れた相乗効果が確認された。
【００９８】
実施例１４：急性毒性試験
１．経口投与
ＩＣＲマウス（体重２３±２ｇ）およびＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（体重２５０±７ｇ）（Ｊｕｎｇ−Ａｎｇ  Ｌａｂ  Ａｎｉｍａｌ  Ｉｎｃ．，ソウル、大韓民国）を各１０匹の４群に分け、本発明のタンシノン誘導体を各々投与量１００、５００および１０００ｍｇ／ｋｇで経口投与した。経口投与の後、毒性を示すか否か２週間に亘り観察したところ、４群のいずれにも死亡した動物はなく、また対照群と比較して、視覚的に観察できる症状は感知されなかった（体重の減少を除く）。
【００９９】
２．腹腔内投与
ＩＣＲマウス（体重２５±３ｇ）およびＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（体重２５５±６ｇ）（Ｊｕｎｇ−Ａｎｇ  Ｌａｂ  Ａｎｉｍａｌ  Ｉｎｃ．，ソウル、大韓民国）を各１０匹の４群に分け、本発明のタンシノン誘導体を各々投与量１０、５０および１００ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与した。腹腔内投与の後、毒性を示すか否か２週間に亘り観察したところ、４群のいずれにも死亡した動物はなく、また対照群と比較して、視覚的に観察できる症状は感知されなかった（体重の減少を除く）。
【０１００】
上記の結果から、本発明のタンシノン誘導体は急性毒性を有していないことが確認された。
【０１０１】
以降、本発明の医薬組成物の調製例を記載する。これらの例は本発明の例示のみを目的として提供されるものであり、本発明の範囲および精神を限定すると解釈すべきものではない。
【０１０２】
実施例１５：錠剤の調合
タンシノン誘導体  ２００ｇ
乳清タンパク  ６４０ｇ
結晶セルロース  １４０ｇ
ステアリン酸マグネシウム  １０ｇ
ヒドロキシプロピルメチルセルロース  １０ｇ
【０１０３】
実施例１６：散剤処方物の調合
タンシノン誘導体  １０ｇ
大豆タンパク  ５０ｇ
カルボキシセルロース  ４０ｇ
合計  １００ｇ
【０１０４】
実施例１７：タンシノン誘導体の牛乳への適用
牛乳  ９９．９％
タンシノン誘導体  ０．１％
【０１０５】
実施例１８：タンシノン誘導体のオレンジジュースへの適用
液状果糖  ５％
ポリデキストロース  １％
クエン酸  ５％
ビタミンＣ  ０．０２％
タンシノン誘導体  ０．１％
オレンジ果汁濃縮物  ２５％
ショ糖脂肪酸エステル  ０．２％
水  ６３％
【０１０６】
実施例１９：飲料の調合
乳酸カルシウム  ５０ｍｇ
クエン酸  ５ｍｇ
ニコチン酸アミド  １０ｍｇ
塩酸リボフラビンナトリウム  ３ｍｇ
塩酸ピリドキシン  ２ｍｇ
アルギニン  １０ｍｇ
ショ糖脂肪酸エステル  １０ｍｇ
タンシノン誘導体  １０ｍｇ
水  ２００ｍｌ
【０１０７】
実施例２０：タンシノン誘導体の化粧品ローションへの適用
１，３−ブチレングリコール  ５％
グリセリン  ５％
ＥＤＴＡ−２Ｎａ  ０．０２％
トリメチルグリシン  ２．０％
セタノール  １．０％
グリセリルモノステアレート乳化剤  １．０％
ポリソルベート６０  １．２％
ソルビタンセスキオレエート  ０．３％
２−エチルヘキサン酸セチル  ４．０％
スクワラン  ５．０％
ジメチコン  ０．３％
グリセリルステアレート  ０．５％
カルボマー  ０．１５％
トリエタノールアミン  ０．５％
イミダゾリジニル尿素  ０．２％
タンシノン誘導体  １％
精製水  ７１．８％
【０１０８】
実施例２１：タンシノン誘導体のスキンケア化粧品への適用
１，３−ブチレングリコール  ４．０％
ジプロピレンレングリコール  ５．０％
ＥＤＴＡ−２Ｎａ  ０．０２％
オクチルドデセス−１６  ０．３％
ＰＥＧ６０水素化ヒマシ油  ０．２％
タンシノン誘導体  ０．１％
精製水  ９０％
【産業上の利用可能性】
【０１０９】
上記したように、本発明の組成物は、代謝活性化を通じて効果的に体重を減少させ、体内の脂肪蓄積を阻害し、血中グルコースレベルを低下させ、コレステロールおよびトリグリセリドの量を効果的に減少させるので、メタボリックシンドロームの予防および治療に有用である。加えて、前記組成物は、体内の脂肪蓄積を阻害し、インスリン感受性を増強して、血中グルコースレベルを制御するので、脂肪およびグルコース代謝の機能障害に起因するメタボリックシンドロームに関連した種々の疾患を予防または治療しうる食品、化粧品および医薬組成物の開発に有用でありうる。
【０１１０】
例証を目的として本発明の好ましい実施形態が開示されているが、当業者は、添付の特許請求の範囲に開示される本発明の範囲および精神から逸脱することなく、種々の修飾、付加および置換が可能であると理解する。
【図面の簡単な説明】
【０１１１】
【図１】筋芽細胞株Ｃ２Ｃ１２を丹参（Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ）抽出物およびタンシノン誘導体で処理した後のＡＭＰＫ（ＡＭＰ活性化プロテインキナーゼ）活性を、処理群と対照群間で比較する棒グラフである。
【図２】筋芽細胞株Ｃ２Ｃ１２をタンシノン誘導体で処理した後の、総ＡＭＰＫ、ｐ−ＡＭＰＫ、ｐ−ＡＣＣおよびＧＬＵＴ４のタンパク発現に対するタンシノン誘導体の作用を測定するためのウェスタンブロットの結果を示す図である。
【図３】筋芽細胞株Ｃ２Ｃ１２をタンシノン誘導体で処理した後の、ＡＣＣ１および２、ＵＣＰ−２、ＣＰＴ１、ＰＧＣ−１α並びにＧＬＵＴ１の遺伝子発現に対するタンシノン誘導体の作用を測定するためのウェスタンブロットの結果を示す図である。
【図４】筋芽細胞株Ｃ２Ｃ１２をタンシノン誘導体で処理した後の、細胞性グルコース取り込みに対するタンシノン誘導体の作用を、処理群と対照群間で比較するグラフである。
【図５】前脂肪細胞株Ｆ４４２Ａをタンシノン誘導体で処理した後の、脂肪細胞の分化に対するタンシノン誘導体の作用の結果を示す顕微鏡写真である。
【図６】筋芽細胞株Ｃ２Ｃ１２をタンシノン誘導体で処理した後の、インスリン感受性に対するタンシノン誘導体の作用に関し、処理群と対照群間で結果を比較するグラフである。
【図７】肥満の動物モデルであるＤＩＯ（食餌誘導肥満）マウスをクリプトタンシノンで処理した後の、時間対の体重変化に対するクリプトタンシノンの作用の結果を示す図である。
【図８】肥満の動物モデルであるＣ５７ＢＬ／６ＪＬ  Ｌｅｐ  ｏｂ／Ｌｅｐ  ｏｂマウスをタンシノン誘導体で処理した後の、時間対の体重変化に対するタンシノン誘導体の作用を示すグラフである。
【図９】肥満の動物モデルであるＣ５７ＢＬ／６ＪＬ  Ｌｅｐ  ｏｂ／Ｌｅｐ  ｏｂマウスをタンシノン誘導体で処理した後の、時間対の体重変化に対するタンシノン誘導体の作用を示す表である。
【図１０】肥満の動物モデルであるＣ５７ＢＬ／６ＪＬ  Ｌｅｐ  ｏｂ／Ｌｅｐ  ｏｂマウスをタンシノン誘導体で処理した後の脂肪細胞の大きさを、処理群と対照群間で比較するグラフである。
【図１１】肥満の動物モデルであるＣ５７ＢＬ／６ＪＬ  Ｌｅｐ  ｏｂ／Ｌｅｐ  ｏｂマウスをタンシノン誘導体で処理した後の脂肪分布（各臓器における数値として）を、処理群と対照群間で比較するグラフである。
【図１２】肥満の動物モデルであるＣ５７ＢＬ／６ＪＬ  Ｌｅｐ  ｏｂ／Ｌｅｐ  ｏｂマウスをタンシノン誘導体で処理した後、脂肪を染色することにより、肝臓における脂肪組織分布および脂肪蓄積を、処理群と対照群間で比較する図である。
【図１３】肥満の動物モデルであるＣ５７ＢＬ／６ＪＬ  Ｌｅｐ  ｏｂ／Ｌｅｐ  ｏｂマウスをタンシノン誘導体で処理した後の、肝組織における脂質および抗酸化指示物質の変動を、処理群と対照群間で比較する表である。
【図１４】肥満の動物モデルであるＣ５７ＢＬ／６ＪＬ  Ｌｅｐ  ｏｂ／Ｌｅｐ  ｏｂマウスをタンシノン誘導体で処理した後の、血中脂質およびグルコースの変動を、処理群と対照群間で比較する表である。
【図１５】肥満の動物モデルであるＣ５７ＢＬ／６ＪＬ  Ｌｅｐ  ｏｂ／Ｌｅｐ  ｏｂマウスをタンシノン誘導体で処理した後の、マウスにおける内臓脂肪分布の変動を、処理群と対照群間で比較する顕微鏡写真である。
【図１６】肥満の動物モデルであるＬｅｐｒ  ｄｂ／Ｌｅｐｒ  ｄｂマウスをタンシノン誘導体で処理した後の、血中グルコースの変動に対するタンシノン誘導体の作用を示す表である。
【図１７】本発明のタンシノン誘導体２種の組み合わせによる組成物の活性を比較する表である。
【図１８】本発明の組成物における成分比の変動による活性の変動を示す表である。
【図１９】本発明のタンシノン誘導体３種の組み合わせによる組成物のＡＭＰＫ活性を比較する表である。
【図２０】肥満の動物モデルであるＣ５７ＢＬ／６ＪＬ  Ｌｅｐ  ｏｂ／Ｌｅｐ  ｏｂマウスを種々の組み合わせ比のタンシノン誘導体で処理した後の、タンシノン誘導体におけるテトラヒドロフェナントレン誘導体群／フェナントレン誘導体群間の組み合わせ比の、体重の変動に対する作用の結果を示す表である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【国際調査報告】
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