(57)【要約】  本発明は老化及びストレス抑制に関連する、シーエレガンスから分泌されるフェロモンである６Ｒ−（３、６−ジデオキシ−Ｌ−アラビノ−ヘキソピラノシルオキシ）ヘプタン酸の立体化学構造、その合成および長期休眠誘発効果に関する。  本発明によって、生体内の老化、ストレス、代謝経路と信号伝達体系および抗癌、肥満および老化、ストレス抑制薬物と関連してフェロモンを用いる薬物の開発ができるようになる。また、このフェロモンの活性ターゲットタンパク体の研究もできるようになる。
2007500186.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
立体構造式（Ｉ−１）のフェロモン化合物。
【化１】
2007500186.tif 000017
前記式で、ＸはＨ、アルカリまたはアルカリ土類金属で、ｎは１〜６の整数である。
【請求項２】
前記立体構造式（Ｉ−１）化合物が６Ｒ−（３、６−ジデオキシ−Ｌ−アラビノ−ヘキソピラノシルオキシ）ヘプタン酸である請求項１記載のフェロモン化合物。
【請求項３】
前記立体構造式（Ｉ−１）化合物が６Ｒ−（３、６−ジデオキシ−Ｌ−アラビノ−ヘキソピラノシルオキシ）ヘプタン酸のアルカリまたはアルカリ土類金属塩である請求項１記載のフェロモン化合物。
【請求項４】
前記立体構造式（Ｉ−１）化合物が立体構造式（Ｉ−２）のＳ−形立体異性体である請求項１記載のフェロモン化合物。
【化２】
2007500186.tif 000018
【請求項５】
前記立体構造式（Ｉ−１）化合物が立体構造式（Ｉ−３）のＣ−１’Ｓ−形立体異性体である請求項１記載のフェロモン化合物。
【化３】
2007500186.tif 000019
【請求項６】
構造式（Ｘ）のフェロモン合成中間体。
【化４】
2007500186.tif 000020
前記式で、Ｒ1はＨ、ベンゾイルまたはベンジル基である。
【請求項７】
構造式（ＸI）のフェロモン合成中間体。
【化５】
2007500186.tif 000021
前記式で、Ｒ2はＨ、ベンゾイルまたはベンジル基である。
【請求項８】
構造式（II）化合物をルイス酸触媒の存在下に構造式（III）化合物とアセタル化反応させ；生成されたカップリング反応物の脂肪族末端二重結合を酸化剤で有機酸に変換させ；そして、デオキシラムノシル部分の二つのＯ−ベンゾイル保護基を塩基で除去して、酸で酸性化する段階を含む立体構造式（Ｉ−１）のフェロモン化合物の製造方法。
【化６】
2007500186.tif 000022
前記式で、Bzはベンゾイルまたはベンジル基である。
【請求項９】
前記触媒はBF3-Et2Oとモレキュラーシーブである請求項８記載の製造方法。
【請求項１０】
前記酸化剤はKMnO4であり、NaHCO3が補助剤として用いられる請求項８記載の製造方法。
【請求項１１】
前記塩基はNaOHまたはKOHであり、前記酸はアンバーライト樹脂形の酸である請求項８記載の製造方法。
【請求項１２】
前記構造式（II）化合物は構造式（ＶII）化合物から得られる請求項８記載の製造方法。
【化７】
2007500186.tif 000023
【請求項１３】
前記構造式（ＶII）化合物は構造式（ＶI）化合物を酸化して得られる請求項１２記載の製造方法。
【化８】
2007500186.tif 000024
【請求項１４】
立体構造式（Ｉ−１）の６Ｒ−（３、６−ジデオキシ−Ｌ−アラビノ−ヘキソピラノシルオキシ）ヘプタン酸及びそのアルカリまたはアルカリ土類金属塩のフェロモン化合物を老化及びストレス関連疾患調節剤で用いる用途。
【化９】
2007500186.tif 000025
前記式で、ＸはＨ、アルカリまたはアルカリ土類金属で、ｎは１〜６の整数である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は老化及びストレス抑制に関連する６Ｒ−（３、６−ジデオキシ−Ｌ−アラビノ−ヘキソピラノシルオキシ）ヘプタン酸の立体化学構造、その製造方法及びそれの長期休眠誘発効果に関する。より詳しくは、本発明はシーエレガンスから始めて分離されたフェロモンである６Ｒ−（３、６−ジデオキシ−Ｌ−アラビノ−ヘキソピラノシルオキシ）ヘプタン酸の三次元立体化学構造の決定、その製造方法と合成に必要な中間体、そしてそのフェロモンの長期休眠効果誘発に関する。
【背景技術】
【０００２】
生理活性物質として知られたフェロモン（pheromones）は動物の体内で生産されて体外に分泌されて同種の他の個体に作用して特定な行動とか生理的変化を起こす物質の総称である。
【０００３】
現在まで知られた文献によると、シーエレガンス（C. elegence）から分泌されるフェロモンは非常に少量に存在し、分子量が１，０００ダルトン以下である。前記フェロモンは非常に安定的で、非揮発性であり、水酸化されている短い脂肪酸のようなクロマトグラフィー特性を有する単一物質またはこれと密接な複合物質で知られている（Riddle、D．L.、Science、218:  578-580、1982）。
【０００４】
しかし、前記 Riddleの論文ではフェロモン成分は部分精製されたが、純粋なフェロモンの構造とか特性に対する情報はまだ知られていない。また、現在まで研究者達に用いられたシーエレガンス（C.elegence）からのフェロモン抽出物は部分精製された組抽出物であるので、フェロモンによる活性の生体内の正確な作用位置と作用機転及び生理過程を直接的に研究できる方法がなかった。
【０００５】
従って、本発明者らはストレスとか生存環境の悪化によって長期休眠幼虫期（dauer larva stage）に誘発することができるフェロモンを一番多く含有した状態でシーエレガンスを大量培養した。そして、本発明者らはシーエレガンスから分泌されるフェロモンを純粋に分離精製してその分離精製されたフェロモンの化学構造を決定した。その結果、分離精製されたフェロモンは、下記の二次平面構造式を有する６−（３、５−ジヒドロキシ−６−メチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−ヘプタン酸であることを究めた（PaiK et al, 韓国特許出願第１０−２００２−００７０５９１号及びＰＣＴ／ＫＲ０３／０２０５９号）。
【化１０】
2007500186.tif 000003
【０００６】
しかしながら、前記平面構造のフェロモン化合物に対する三次元化学構造とこれらの全合成に対しては現在まで知られたものがない。新規フェロモン化合物 は不斉炭素が五個であるので、その立体化学構造は三十六個の立体異性体ができる。したがって、正しい立体構造を有する正確な天然物質と同一な物質を合成するためには、立体化学構造が必須的に確認されなければならない。
【０００７】
また、生体内の老化、ストレス、代謝経路と信号伝達体系の研究、抗癌剤、肥満および老化、ストレス抑制薬物の開発そしてフェロモンの活性ターゲットタンパク体の発掘研究のためには、前記フェロモンの大量製造を解決することができる全合成法の開発が必須的である。
【０００８】
よって、本発明者らは正確な天然物質と同一な物質を合成するために、シーエレガンスから分離されたフェロモンの三次立体化学構造を分光学的技法を用いて決定した。また、本発明者らは立体選択的全合成を成功的に完成して自然に存在する天然フェロモンと完全に同一なフェロモンを合成した。この合成法は大量生産方法を提供して、天然フェロモンの制限された量の限界を克服した。また、本発明により得られたフェロモンは、シーエレガンスを用いた生体実験で長期休眠効果を誘発することを確認した。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
従って、本発明の目的は、立体構造式（Ｉ−１）のフェロモン化合物を提供するものである。
【化１１】
2007500186.tif 000004
前記式で、ＸはＨ、アルカリまたはアルカリ土類金属で、ｎは１〜６の整数である。
【００１０】
本発明の他の目的は、前記フェロモンを高収率で容易に大量製造する方法を提供するものである。
本発明のまた他の目的は、前記フェロモンの正確な合成のために、フェロモンの三次元立体分子構造を究明するものである。
本発明のまた他の目的は、前記フェロモンを高収率で大量製造するための中間体を提供するものである。
本発明のまた他の目的は、前記フェロモンを老化及びストレス関連疾患調節剤で用いる用途を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
シーエレガンスから分離されたフェロモンである６Ｒ−（３、６−ジデオキシ−Ｌ−アラビノ−ヘキソピラノシルオキシ）ヘプタン酸の三次立体構造式（I）は、ＨＲ−ＭＡＳＳ、ＩＲ、ＤＥＰＴ、２Ｄ−ＮＭＲ（ＨＭＢＣ、ＨＭＱＣ、ＮＯＥ、ＲＯＥＳＹ、ＴＯＣＳＹ）などの分光学的分析によって決定された。
【化１２】
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【００１２】
前記フェロモン、６Ｒ−（３、６−ジデオキシ−Ｌ−アラビノ−ヘキソピラノシルオキシ）ヘプタン酸の純粋分子量は２７６ダルトンであり、フェロモンの分子式はＣ13Ｈ24０6である。前記フェロモンの計算された超精密質量数は２７６．１６５１である。超精密質量分析機（High Resolution−FAB）によって測定された超精密質量数は２７６．１６５２であり、この質量数は計算された質量数に一致することを確認した（図１参照）。また、フェロモン分子のカルボニルとヒドロキシ基の機能基らは赤外線分析（ＩＲ）によって確認した（図２参照）。
【００１３】
前記構造式（Ｉ）の新規フェロモン化合物の三次元立体化学構造を決定するために、２Ｄ−水素核磁気共鳴スペクトル（1Ｈ−ＮＭＲ）はデュートロメタノール（ＣＤ3ＯＤ）を溶媒として測定した。また、炭素核磁気共鳴スペクトル（13Ｃ−ＮＭＲ）もデュートロメタノール（ＣＤ3ＯＤ）を溶媒として測定した。化学シフトはＰＰＭで示した。
【００１４】
1Ｈ−ＮＭＲ（図３参照）、13Ｃ−ＮＭＲ(図４参照)とＤＥＰＴ（図５参照）により各炭素の位置を確認した後、1Ｈ−と13Ｃとの明白な関係を分かるために、1Ｈ−と13Ｃ−ＮＭＲの化学シフトをＨＭＢＣ（図６参照）、ＨＭＱＣ（図７参照）、ＲＯＥＳＹ（図８参照）およびＴＯＣＳＹ（図９参照）スペクトルを用いて測定した。表４にＨＭＢＣ結果を示した。
【００１５】
三次元空間上の立体相互関係を測定するために、ＮＯＥの二次元ＮＭＲ技術を用いられた。得られたＮＯＥスペクトルは図１０乃至図１２に示した。
本発明の前記立体構造式（I）の６Ｒ−（３、６−ジデオキシ−Ｌ−アラビノ−ヘキソピラノシルオキシ）ヘプタン酸は、構造式（II）と構造式（III）の反応物質のカップリング反応により製造した。
【化１３】
2007500186.tif 000006
【００１６】
前記構造式（II）の２、４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−３、６−ジデオキシ−Ｌ−アラビノ−ヘキソピラノスは、Ｌ−ラムノース(rhamnose)モノハイドレート（IＶ）から反応式Iのように合成した。
【化１４】
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前記式で、Ｂｚはベンゾイルまたはベンジル基である。
【００１７】
構造式（IＶ）化合物の四つのヒドロキシ基をベンゾイルクロライドを用いて保護して、構造式（IＶ）化合物から構造式（Ｖ）化合物を製造した。アンモニアを用いて構造式（Ｖ）化合物 Ｃ−１ベンゾイルグループを選択的に除去して構造式（ＶI）化合物を製造した。
【００１８】
構造式（ＶI）化合物のＣ−１ヒドロキシ基をピリジニウムクロロクロメート（ＰＣＣ）を用いて酸化して構造式（ＶII）のケトン化合物を製造した。トリエチルアミンを用いて構造式（ＶII）化合物のＣ−３ベンゾイルグループを選択的に除去して構造式（ＶIII）化合物を製造した。構造式（ＶIII）化合物を１０％パラジウム/カーボン触媒の存在に水素化反応をして構造式（IＸ）化合物を得た。この時、構造式（IＸ）化合物のＣ−２  Ｏ−ベンゾイルグループはβ−方向を有する。
【００１９】
最後に、キラルジーイソアミルボロハイドライドを用いて構造式（IＸ）化合物のＣ−１ケトン基を還元して、２、４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−３、６−ジデオキシ−Ｌ−アラビノ−ヘキソピラノス（II）のα−アノマーを立体選択的Ｃ−１中間体として製造した。
【００２０】
他の反応物質である構造式（III）化合物は（Ｒ）−（＋）−１、２−エポキシプロパンを原料として反応式２の方法によって製造した。
【化１５】
2007500186.tif 000008
前記反応式２に示したように、別に合成された１M ４−ペンテニルマグネシウムブロマイドに（Ｒ）−（＋）−１、２−エポキシプロパンを加えて（２Ｒ）−７−オクテン−２−オル（III）を得た。
【００２１】
構造式（I）化合物は、構造式（II）と構造式（III）化合物を反応式３のように反応して得られた。
【化１６】
2007500186.tif 000009
【００２２】
前記構造式（II）と構造式（III）化合物をルイス酸触媒の存在下にアセタル化反応させてカップリング化合物（２Ｒ）−オクト−７−エン−２−イル−２、４−ジ−Ｏ−ベンジル−３、６−ジデオキシ−α−Ｌ−アラビノ−ヘキソピラノシド（Ｘ）を得た。構造式（Ｘ）化合物の脂肪族末端二重結合を酸化剤として過マンガン酸カリウムを用いて単一反応により有機酸である（６Ｒ）−６−（２、４−ジ−Ｏ−ベンジル−３、６−ジデオキシ−α−Ｌ−アラビノ−ヘキソピラノシル）ヘプタン酸（ＸI）を製造した。最後に、前記構造式（ＸI）化合物のＣ−２とＣ−４ベンゾイル基を水酸化ナトリウムで除去し、アンバーライトを用いて酸性化させて構造式（Ｉ）化合物を製造した。
【００２３】
また、前記構造式（Ｉ）化合物は塩基と反応して構造式（Ｉ−１）の付加塩を形成した。前記塩基としては、医薬的に許容できるアルカリまたはアルカリ土類金属塩を用いることができる。
【化１７】
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前記式で、ＸはＨ、アルカリまたはアルカリ土類金属で、ｎは１〜６の整数である。
【００２４】
全合成された前記構造式（Ｉ）化合物のスペクトラは、分光学的(2D-NMR、 C-13 NMR、IR、HRMS、 specific rotation = [α]D20 =−81.0 (c = 0.1、 MeOH))に天然フェロモンの分光スペクトルと一致した。
【００２５】
この全合成は、絶対立体化学構造（absolute stereo  configuration）が知られたＬ−ラムノース（rhamnose）から始めて、合成された構造式（Ｉ）化合物の全てのスペクトラの測定値が天然フェロモンの分光スペクトルと同一であるので、シーエレガンスから分離された天然フェロモンの絶対立体化学構造が構造式（Ｉ）であることを確認した。
【００２６】
また、反応式３の過程において、前記構造式（III）の代わりに１〜６ 炭素チェーンを有する他のアルキル有機酸をカップリング反応させて構造式（Ｉ−１）の多様な誘導体を合成することもできる。
【００２７】
また、反応式３の過程において、前記構造式（III）の７Ｓ−立体異性体を反応させると、構造式（I）化合物の６Ｓ立体異性体（Ｉ−２）が合成できる。
【００２８】
前記反応式１の構造式（IＸ）化合物から構造式（II）化合物を製造する過程において、得られる構造式（II）化合物のＣ−１’β―エピマーを用いると、Ｃ−１’Ｓ立体異性体を有する構造式（Ｉ−３）化合物を合成することもできる。
【化１８】
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【化１９】
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前記式で、ｎは１〜６の整数で、ＸはＨ、アルカリまたはアルカリ土類金属である。
【００２９】
前記合成により、本発明のフェロモン（I）とその誘導体の大量製造ができるようになった。したがって、老化およびストレス抑制関連薬効検索およびフェロモンの活性ターゲットタンパク体の検索発掘ができるようになった。
【００３０】
次に、本発明の製造方法によって合成された化合物、６Ｒ−（３、６−ジデオキシ−Ｌ−アラビノ−ヘキソピラノシルオキシ）ヘプタン酸（I）の長期休眠効果をシーエレガンスを用いて測定した。
【００３１】
すなわち、合成されたフェロモンを餌、温度そして群集密度のような条件を変化させながらシーエレガンスによる長期休眠効果を測定した。餌および温度（１５−２５℃）が適合し、個体群集密度が低い状態においては、シーエレガンスがＬ２前半部或いはＬ３後半部から成体(adult)段階に経るべきにも拘らず、合成したフェロモンを入れた時には、休眠幼虫期（dauer larva）段階に進行した。
【００３２】
休眠幼虫期のシーエレガンスは食べなくて動かない形態に円形態を取っている。比較のために、休眠幼虫期のシーエレガンス七匹と成体段階のシーエレガンス一匹を比較観察した。その結果、合成されたフェロモンは長期休眠効果に大きく影響を及ぼすことに判断された。表１の写真で、シーエレガンスは動かなくて成長しないことを観察することができる。
【表１】
2007500186.tif 000013
【００３３】
また、表２にシーエレガンスが完全に休眠幼虫期（dauer larva）段階に入るイメージを示した。
【表２】
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【００３４】
次に、表３で分かるように、３２０μｇ／plateの合成フェロモンが用いられる場合に、１００％の長期休眠効果を示すことを確認することができる。このような結果は、多い量のフェロモン物質を必要とする以後の様々な実験の基礎になる。これは、合成したフェロモン物質の重要性を現す。すなわち、本発明により、多量のフェロモン物質と多様な誘導体の合成が可能になって、よりいい研究が期待される。
【発明の効果】
【００３５】
以上に説明した通り、本発明はフェロモン、６Ｒ−（３、６−ジデオキシ−Ｌ−アラビノ−ヘキソピラノシルオキシ）ヘプタン酸及びその塩の立体分子構造を初めて決定した。これに基づいて、最初の効率的な全合成を成功して、シーエレガンスから得られるフェロモンの微量分離の限界を克服してフェロモンの大量生産ができるようになる。
【００３６】
従って、生体内の老化、ストレス、代謝経路と信号伝達体系及び抗癌、肥満および老化、ストレス抑制薬物と関連してフェロモンを用いる薬物の開発ができるようになる。また、このフェロモンの活性ターゲットタンパク体の研究もできるようになる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３７】
以下、実施例によって本発明をより具体的に説明する。
【実施例１】
【００３８】
1,2,3,4-テトラ-O-ベンゾイル-L-ラムノピラノース（Ｖ）の合成
L-ラムノースモノハイドレート(IＶ) (7.5g、41.2 mmol)を乾燥ピリジン (100ml)に溶いた後、温度を０℃に下げてベンゾイルクロライド (28.7ml、0.247 mmol)を添加した。反応物の温度を徐々に常温に上げて、１６時間後水（15 ml）を加えて反応を終結した。
【００３９】
得られた生成物をCH2Cl2 (50ml×2)で抽出し、１M HCl (40 ml×2)と飽和NaHCO3 水溶液 (40 ml)で洗った後、無水MgSO4で乾燥した。溶液を減圧濃縮した後、フラッシュカラムクロマトグラフィー(flash column chromatography)（トルエン/EtOAc、10:1、v/v）を用いて化合物（Ｖ）(22.7g、95%、α:β = 2:1)を分離した。
Vα; 無定形白色固体、Rf=0.58 (トルエン/EtOAc、10:1、v/v);
[α]D22= +82.0 (c=1.5、CHCl3) [lit.41 [α]D=+80.0 (c=1.5、CHCl3)]; 
IR(film) Vmax 3066, 3032, 2986, 1730, 1601, 1452, 1260, 1176, 1094, 1068, 1027, 965 cm-1;
1H NMR (250 MHz, CDCl3) δ 8.22-7.25 (m, 20H, aromatic H), 6.57 (d, 1H, J = 1.6 Hz, H-1), 6.01 (dd, 1H, J = 3.4, 10.2 Hz, H-3), 5.89 (dd, 1H, J = 1.9, 3.2 Hz, H-2), 5.82 (t, 1H, J = 10.0 Hz, H-4), 4.41-4.35 (m, 1H, H-5), 1.42 (d, 3H, J = 6.2 Hz, -CH3);
13C NMR (62.9 MHz, CDCl3) δ 165.8(2), 165.4, 164.1, 134.0, 133.8, 133.6, 133.4, 130.2(2), 130.1(2), 129.8(4), 129.1(2), 129.0(2), 128.8(2), 128.7(2), 128.6(2), 128.4(2), 91.4(C-1, α), 71.3, 70.0, 69.8, 69.4, 17.8(C-6);
HRMS(FAB) 計算値 C34H28NaO9 (M+ + Na) m/z 603.1631、実測値 603.1637
【実施例２】
【００４０】
2,3,4-トリ-O-ベンゾイル-L-ラムノピラノース(VI)の合成
化合物(V) (22.4g、38.6 mmol)を MeOH:THF (3:7、400ml)に溶いた後、０℃でNH3 ガスを１５分間バブリング(bubbling)し、０℃で１時間攪拌した。前記過程を反復しながらＴＬＣ(thin layer chromatography)で反応の進行を確認した。溶媒を減圧濃縮した後、フラッシュカラムクロマトグラフィー（トルエン/EtOAc、10:1、v/v）を用いて化合物（ＶI）(16g、87%、α:β = 14:1)を分離した。
VIα; 白色固体、Rf = 0.18 (トルエン/EtOAc、10:1、v/v);
[α]D23= +236.0 (c = 1.0、CHCl3);
IR(film) Vmax 3458, 3062, 2985, 2935, 1727, 1601, 1451, 1348, 1264, 1102, 1069, 1027 cm-1;
1H NMR (250 MHz, CDCl3) δ 8.12-7.22 (m, 15H, aromatic H), 5.95 (dd, 1H, J = 3.2, 10.1 Hz, H-3), 5.74-5.62 (m, 2H), 5.49-5.48 (m, 1H), 4.54-4.43 (m, 1H, H-5), 4.21 (d, 1H, J = 4.0 Hz, -OH), 1.37 (d, 3H, J = 6.2 Hz, -CH3);
13C NMR (62.9 MHz, CDCl3) δ 166.0, 165.9, 165.8, 133.6, 133.5, 133.3, 130.0(2), 129.9(2), 129.8(2), 129.4, 129.3, 129.2, 128.7(2), 128.5(2), 128.4(2), 92.3(C-1, α), 72.1, 71.5, 69.9, 66.7, 17.8(C-6);
HRMS(FAB) 計算値 C27H24NaO8 (M+ + Na) m/z 499.1369、実測値 499.1372.
【実施例３】
【００４１】
2,3,4-トリ-O-ベンゾイル-L-ラムノノ-1,5-ラクトン(VII)の合成
PCC (30g、0.139 mmol)とよく乾燥された4Åモレキュラーシーブ(molecular sieves) (25g)をＮ２気流下でフラスコに入れた。乾燥CH2Cl2 (250ml)をフラスコに入れて、フラスコを常温で一時間攪拌した後に０℃に冷却した。乾燥CH2Cl2 (250ml)に溶いた化合物(VI) (16g、33.6 mmol)を添加して、常温で４時間攪拌した。冷たいEt2O (200ml)を添加して反応を終結し、シリカゲルで濾過した。溶媒を減圧濃縮した後、フラッシュカラムクロマトグラフィー（トルエン/EtOAc、10:1、v/v）を用いて化合物（ＶII）(13.54g、85%)を分離した。
VII; 無定形白色固体、Rf = 0.51 (トルエン/EtOAc、10:1、v/v);
[α]D22= -10.0 (c = 0.5、CHCl3);
IR(film) Vmax 3064, 3031, 2983, 2936, 1784, 1730, 1601, 1452, 1393, 1259, 1096, 1026 cm-1;
1H NMR (250 MHz, CDCl3) δ 8.10-7.29 (m, 15H, aromatic H), 6.28 (d, 1H, J = 3.8 Hz), 6.05 (dd, 1H, J = 1.4, 3.8 Hz), 5.34 (dd, 1H, J = 1.4, 11.0 Hz), 4.96-4.85 (m, 1H, H-5), 1.61 (d, 3H, J = 6.3 Hz, -CH3);
13C NMR (62.9 MHz, CDCl3) δ 165.9(C-1), 165.1, 164.9, 164.8, 134.0, 133.9, 133.8, 130.1(4), 130.0(2), 128.7(5), 128.5(3), 128.4, 74.8, 74.1, 71.8, 67.6, 19.0(C-6);
HRMS(FAB) 計算値 C27H23O8 (M+ + H) m/z 475.1393、実側値 475.1393.
【実施例４】
【００４２】
2,4-ジ-O-ベンゾイル-3,6-ジデオキシ-L-エリスロ-ヘキセ-2-エノノ-1,5-ラクトン(VIII)の合成
化合物(VII) (13.2g、27.8mmol)をN2気流下でEt3N : CHCl3 (1:4、500ml)に溶いた後、常温で１６時間攪拌した。反応終結後、水で洗った。有機層を無水MgSO4で乾燥した。溶液を減圧濃縮した後、フラッシュカラムクロマトグラフィー（トルエン/EtOAc、10:1、v/v）を用いて化合物（ＶIII）(6.37g、65%)を分離した。
VIII; 結晶性白色固体、Rf = 0.53 (トルエン/ EtOAc、10:1、v/v);
mp 108-112 ℃ (lit.40 mp 107-110 ℃ );
[α]D21= -93.1 (c = 1.0、CHCl3) [lit.43 [α]D20= -93.0 (c = 1.0、CHCl3)];
IR(film) Vmax 3069, 3007, 2936, 2920, 1738, 1674, 1598, 1452, 1355, 1257, 1155, 1115, 1060 cm-1;
1H NMR (250 MHz, CDCl3) δ 8.13-7.44 (m, 10H, aromatic H), 6.71 (d, 1H, J = 4.3 Hz, H-3), 5.69 (t, 1H, J = 4.7 Hz, H-4), 5.00-4.90 (m, 1H, H-5), 1.64 (d, 3H, J = 6.7 Hz, -CH3);
13C NMR (62.9 MHz, CDCl3) δ 165.5, 164.3, 158.0(C-2), 140.8, 134.3, 133.9, 130.5(2), 130.0(2), 128.7(5), 127.9, 125.6, 77.4, 68.6, 18.4(C-6);
HRMS(FAB)  計算値  C20H17O6 (M+ + H) m/z 353.1025、実側値  353.1023.
【実施例５】
【００４３】
2,4-ジ-O-ベンゾイル-3,6-ジデオキシ-L-アラビノ-ヘキソノ-1,5-ラクトン(IX)の合成
化合物(VIII) (6.1g、17.31 mmol)を EtOAc (300ml)に溶解し、10%-Pd/C (400mg)を添加した後, 水素ガスに置き換えて常温で３時間攪拌した。反応物をセルライト(celite) 545を用いて濾過した。溶液を減圧濃縮した後、フラッシュカラムクロマトグラフィー（トルエン/EtOAc、10:1、v/v）を用いて化合物（IX）(5.2g、85%)を分離した。
IX; 白色固体、Rf = 0.45 (トルエン / EtOAc、10:1、v/v);
[α]D21= +18.4 (c = 1.0、CHCl3) [lit.43 [α]D20= +18.2 (c = 1.0、CHCl3)];
IR(film) Vmax 3031, 2982, 2939, 1724, 1601, 1452, 1383, 1273, 1114, 1070, 1028 cm-1;
1H NMR (250 MHz, CDCl3) δ 8.11-7.43 (m, 10H, aromatic H), 5.90 (dd, 1H, J = 7.6, 12.0 Hz, H-2), 5.30-5.25 (m, 1H, H-4), 4.87-4.77 (m, 1H, H-5), 2.78-2.52 (m, 2H, H-3eq, 3ax), 1.58 (d, 3H, J = 6.5 Hz, -CH3);
13C NMR (62.9 MHz, CDCl3) δ 168.0(C-1), 165.5(2), 133.9, 133.8, 130.2(2), 129.9(2), 129.1, 129.0, 128.8(2), 128.6(2), 76.9, 70.5, 65.0, 30.2(C-3), 19.3(C-6);
HRMS(FAB) 計算値 C20H19O6 (M+ + H) m/z 355.1182、実側値 355.1178
【実施例６】
【００４４】
2,4-ジ-O-ベンゾイル-3,6-ジデオキシ-L-アラビノ-ヘキソピラノース(II)の合成
(1)0.5M ジイソアミルボロハイドライドの製造
N2気流下で、1M BH3-THF (65ml)を-10℃に冷却させた後、2M 2,3-ジメチル−2-ブテン (65ml)を徐々に添加した。0℃で2時間攪拌後、反応（2）に使用した。
【００４５】
(2)2,4-ジ-O-ベンゾイル-3,6-ジデオキシ-L-アラビノ-ヘキソピラノース(II)の合成
反応(1)で用意した0.5Mジイソアミルボロハイドライド（127ml）に乾燥THF (15ml)に溶いた化合物(IX) (5g、14.11 mmol)を添加して、常温で２０時間攪拌した。反応終結後、水 (3ml)を添加して３０分間攪拌した。反応混合物を０℃に冷却させた後、30% H2O2 (15ml)を添加し、pHが7-8になるように3N NaOHを添加した。溶媒THFを減圧濃縮した後、反応混合物をCH2Cl2 (100ml)に溶いて水(50ml)で洗った。有機層を無水MgSO4で乾燥した。溶液を減圧濃縮した後、フラッシュカラムクロマトグラフィー（トルエン/EtOAc、10:1、v/v）を用いて化合物（II）(4.72g、93.8%、α：β＝4.6：1)を分離した。
IIα; 無色シロップ、Rf = 0.23 (トルエン/ EtOAc、10:1、v/v);
[α]D24= +51.4 (c = 1.0、CHCl3);
IR(film) Vmax 3448, 3065, 3027, 2979, 1720, 1601, 1452, 1270, 1112, 1095, 1068, 1025 cm-1;
1H NMR (250 MHz, CDCl3) δ 8.15-7.43 (m, 10H, aromatic H), 5.29 (s, 1H, H-1), 5.25-5.15 (m, 2H, H-2, H-4), 4.39-4.28 (m, 1H, H-5), 3.51 (d, 1H, J = 3.6 Hz, -OH), 2.44 (td, 1H, J = 3.8, 13.5 Hz, H-3eq), 2.29 (ddd, 1H, J = 3.1, 11.0, 13.7 Hz, H-3ax), 1.30 (d, 3H, J = 6.2 Hz, -CH3);
13C NMR (62.9 MHz, CDCl3) δ 166.0, 165.8, 133.5, 133.4, 130.0(3), 129.8(3), 128.6(4), 91.1(C-1, α), 71.0(C-2), 70.7(C-4), 67.0(C-5), 29.2(C-3), 18.0(C-6);
HRMS(FAB) 計算値 C20H21O6 (M+ + H) m/z 357.1338、実側値357.1334
【実施例７】
【００４６】
(2R)-7-オクテン-2-オル(III)の合成
(1) 4-ペンテニルマグネシウムブロマイドの合成
乾燥THF(3ml)に溶いたMg懸濁液(571mg、23.5 mmol)に乾燥THF(20ml)に溶いた5-ブロモ-1-ペンテン(2.8ml、 23.5 mmol)を 30分以上徐々に一滴ずつ添加した。反応混合物を６０℃で３時間還流させた後、実温に冷却させてグリニャール(Grignard)溶液を準備した。
【００４７】
(3)(2R)-7-オクテン-2-オル(III)の合成
(R)-(+)-1,2-エポキシプロパン(1.12ml、16.0 mmol)を乾燥THF(23ml)に溶いてCuBr (230mg、1.6 mmol)を添加した後、 温度を−78℃に下げた。反応(1)で準備した1M 4-ペンテニルマグネシウムブロマイド溶液(23ml、23.5 mmol) を反応混合物に添加する。温度を徐々に常温に上げて混合物を４時間攪拌した。飽和NH4Cl水溶液(10ml)で反応を終結した。得られた生成物をEt2O (200ml× 2)で抽出し、水(10ml)で洗った。有機層を無水MgSO4で乾燥した。溶液を減圧濃縮した後、フラッシュカラムクロマトグラフィー（Et2O/n-ペンテン、5:1、v/v）を用いて化合物（III）(1.3g、65%)を分離した。
III ; 無色液体、Rf = 0.15 (Et2O / n-ペンテン、5:1、v/v);
[α]D23= -10.7 (c = 0.28、CHCl3);
IR(film) Vmax 3357, 2969, 2930, 2858, 1641, 1460, 1416, 1374, 1305, 1122 cm-1;
1H NMR (250 MHz, CDCl3) δ 5.89-5.73 (m, 1H, H-2), 5.03-4.92 (m, 2H, H-1), 3.80-3.78 (m, 1H, H-7), 2.07 (m, 2H, H-3), 1.43-1.39 (m, 6H, H-4, 5, 6), 1.18 (d, 3H, J = 6.1 Hz, -CH3);
13C NMR (62.9 MHz, CDCl3) δ 138.9(C-2), 114.4(C-1), 68.0(C-7), 39.2(C-6), 33.8(C-3), 29.0(C-4), 25.3(C-5), 23.5(C-8)
【実施例８】
【００４８】
(2R)-オクト-7-エン-2-イル-2,4-ジ-O-ベンジル-3,6-ジデオキシ-α-L-アラビノ-ヘキソピラノシド(X)の合成
化合物(II) (2.0g、5.61 mmol、1eq)と化合物(III)(1.08g、8.42 mmol)と4Åモレキュラーシーブ(200mg)をN2気流下で乾燥CH2Cl2 (30ml)に溶いた後、温度を0℃に下げた。BF3-Et2O (2.85ml、16.8 mmol、4eq)を徐々に添加し、１０時間攪拌した後、Et3N (5ml)を付加して反応を終結して濾過した。溶液を減圧濃縮した後、フラッシュカラムクロマトグラフィー（n-ヘキサン/EtOAc、5:1、v/v）を用いて化合物（Ｘ）(1.89g、72%)を分離した。
X ; 無色シロップ、Rf = 0.55 (n-ヘキサン/ EtOAc、5:1、v/v);
[α]D22= +0.9 (c = 1.0、CHCl3);
IR(film) Vmax 3069, 2974, 2933, 2859, 1723, 1602, 1451, 1316, 1267, 1152, 1108, 1068, 1025 cm-1;
1H NMR (250 MHz, CDCl3) δ 8.14-7.42 (m, 10H, aromatic H), 5.93-5.76 (m, 1H), 5.26-5.16 (m, 2H, H-2, H-4), 5.07-5.00 (m, 3H, H-1), 4.20-4.09 (m, 1H, H-5), 3.85 (m, 1H), 2.48-2.41 (m, 1H, H-3'eq), 2.28-2.17 (m, 1H, H-3'ax), 2.11 (m, 2H), 1.68-1.37 (m, 6H), 1.30 (d, 3H, J = 6.2 Hz), 1.20 (d, 3H, J = 6.1 Hz);
13C NMR (62.9 MHz, CDCl3) δ 165.9, 165.7, 138.9, 133.3, 133.2, 129.9(3), 129.6(2), 128.5(4), 114.5, 93.8(C-1', α), 72.5, 71.3, 70.7, 67.0, 37.0, 33.8, 29.8, 28.8, 25.3, 19.2, 17.9;
HRMS(FAB)  計算値 C28H35O6 (M+ + H) m/z 467.2434、実側値 467.2438
【実施例９】
【００４９】
(6R)-6-(2,4-ジ-O-ベンゾイル-3,6-ジデオキシ-α-L-アラビノ-ヘキソピラノシル)ヘプタン酸(XI)の合成
化合物(Ｘ)(1.8g、3.86 mmol)をアセトン(150ml)に溶いた後、NaHCO3 (972mg、11.57 mmol)を添加した。KMnO4 (3g、19.29 mmol)を徐々に添加して１２時間攪拌した。反応終結後、10%HCl(20ml)を用いて酸性化させた。得られた生成物をEtOAc (100ml×2)で抽出し、ブライン(brine) (70ml)で洗った。有機層は無水MgSO4で乾燥した。溶液を減圧濃縮した後、フラッシュカラムクロマトグラフィー（N-ヘキサン/EtOAc、5:1、v/v）を用いて化合物（XI）(1.51g、87%)を分離した。
XI ; 無色シロップ、Rf = 0.13 (ヘキサン / EtOAc、5:1、v/v);
[α]D22= -1.9 (c = 1.0、CHCl3);
IR(film) Vmax 3063, 2973, 2935, 1721, 1602, 1451, 1316, 1267, 1109, 1068, 1025 cm-1;
1H NMR (250 MHz, CDCl3) δ 10.69 (bs, 1H, -OH), 8.14-7.42 (m, 10H, aromatic H), 5.26-5.17 (m, 2H, H-2', H-4'), 4.98 (s, 1H, H-1'), 4.19-4.08 (m, 1H, H-5'), 3.87 (m, 1H), 2.47-2.36 (m, 3H), 2.28-2.17 (m, 1H, H-3'ax), 1.72-1.45 (m, 6H), 1.31 (d, 3H, J = 6.2 Hz), 1.21 (d, 3H, J = 6.0 Hz);
13C NMR (62.9 MHz, CDCl3) δ 179.8, 165.8, 165.7, 133.3, 133.2, 130.0, 129.9(2), 129.8, 129.7(2), 128.5(4), 93.8(C-1', α), 72.4, 71.2, 70.7, 67.1, 36.7, 34.0, 29.7, 25.2, 24.6, 19.1, 17.9;
HRMS(FAB) 計算値 C27H33O8 (M+ + H) m/z 485.2175、実側値485.2165
【実施例１０】
【００５０】
6R-(3,6-ジデオキシ-L-アラビノ-ヘキソピラノシルオキシ)ヘプタン酸(I)の合成
化合物(XI) (472.9mg、0.976 mmol)をMeOH (20ml)に溶いて,０℃でNaOMe (52.7mg、0.976 mmol)を添加した。温度を徐々に常温に上げて混合物を12時間攪拌した。反応終結後、MeOHを減圧濃縮した。次いで、副生成物であるメチルベンゾエートの除去のために、反応混合物を水(20ml)に溶いた後、CH2Cl2 (20ml × 5)を用いて洗った。水溶液層のpHをアンバーライト(Amberlite) IR-120(H+) (500mg)を用いて調整した。濾過後に、凍結乾燥方法を用いて水溶液層から水を除去した後、フラッシュカラムクロマトグラフィー（EtOAc/MeOH、11:1、v/v）を用いて化合物（I）(234.6g、87%)を分離した。
I ;無色オイル、 Rf = 0.43 (EtOAc / MeOH、11:1、v/v);
[α]D20 = − 81.0 (c = 0.1、MeOH);
IR(film) Vmax 3391, 2969, 2933, 1712, 1452, 1379, 1244, 1126, 1103, 1042, 1031 cm-1;
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 4.64 (s, 1H, H-1'), 3.80-3.77 (m, 1H, H-6), 3.72-3.71 (m, 1H, H-2'), 3.63-3.59 (m, 1H, H-5'), 3.54-3.49 (m, 1H, H-4'), 2.30 (t, 2H, J = 7.5 Hz, H-2), 1.96-1.92 (m, 1H, H-3'eq), 1.79-1.74 (m, 1H, H-3'ax), 1.61 (m, 2H, H-3), 1.56-1.50 (m, 2H, H-5), 1.47 (m, 2H, H-4), 1.21 (d, 3H, J = 6.5 Hz, H-6'), 1.12 (d, 3H, J = 6.5 Hz, H-7);
13C NMR (125.7 MHz, CD3OD) δ 177.7(C-1), 97.6(C-1', α), 72.4(C-6), 71.3(C-5'), 70.1(C-2'), 68.5(C-4'), 38.2(C-5), 36.1(C-3'), 35.0(C-2), 26.5(C-3), 26.1(C-4), 19.4(C-7), 18.2(C-6');
HRMS(FAB)  計算値C13H25O6 (M+ + H) m/z 277.1651、 実側値 277.1652
【実施例１１】
【００５１】
6R-(3,6-ジデオキシ-L-アラビノ-ヘキソピラノシルオキシ)ヘプタン酸の塩基付加塩(I-1: n = 4, X = Na)の合成
化合物(I)(267mg、1.0 mmol)をMeOH (10ml)に溶いた。0℃でNaOMe(40.0mg、1.0 mmol)を添加した。温度を徐々に常温に上げて混合物を1時間攪拌した。反応終結後、MeOHを減圧濃縮して濾過した。次いで、凍結乾燥方法を用いて水溶液層から水を除去して化合物(I-1)(271mg、95%)を分離した。
【００５２】
［実験例］
長期休眠効果活性の測定。
本発明のフェロモン化合物の長期休眠効果を確認するために、本発明のフェロモン化合物をペプトンがないエス.ベーサル（S. basal）寒天培地に供給した後に、活性を測定した(Vowels and Thomas, Genetics 130: 105-123, 1992)。
本発明の化合物のシーエレガンスに対する長期休眠効果活性を表３に示した。
【表３】
2007500186.tif 000015
【表４】
2007500186.tif 000016
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】本発明の立体構造式(Ｉ)のフェロモンの超精密質量分析（ＨＲ-ＭＳ ＦＭＢ）スペクトルである。
【図２】本発明のフェロモンの赤外線分析（ＩＲ）スペクトルである。
【図３】本発明のフェロモンの水素核磁気共鳴（1H−ＮＭＲ）スペクトルである。
【図４】本発明のフェロモンの炭素核磁気共鳴（13C−ＮＭＲ）スペクトルである。
【図５】本発明のフェロモンの炭素核磁気共鳴（13C−ＮＭＲ）のＤＥＰＴスペクトルである。
【図６】本発明のフェロモンの２Ｄ−核磁気共鳴（２Ｄ−ＮＭＲ）のＨＭＢＣスペクトルである。
【図７】本発明のフェロモンの２Ｄ−核磁気共鳴（２Ｄ−ＮＭＲ）のＨＭＱＣスペクトルである
【図８】本発明のフェロモンの２Ｄ−核磁気共鳴（２Ｄ−ＮＭＲ）のＲＯＥＳＹスペクトルである。
【図９】本発明のフェロモンの２Ｄ−核磁気共鳴（２Ｄ−ＮＭＲ）のＴＯＣＳＹスペクトルである。
【図１０】本発明のフェロモンの２Ｄ−核磁気共鳴（２Ｄ−ＮＭＲ）のＮＯＥ（１）スペクトルである。
【図１１】本発明のフェロモンの２Ｄ−核磁気共鳴（２Ｄ−ＮＭＲ）のＮＯＥ（２）スペクトルである。
【図１２】本発明のフェロモンの２Ｄ−核磁気共鳴（２Ｄ−ＮＭＲ）のＮＯＥ（３）スペクトルである。
【図１】
2007500186.tif 000026
【図２】
2007500186.tif 000027
【図３】
2007500186.tif 000028
【図４】
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【図５】
2007500186.tif 000030
【図６】
2007500186.tif 000031
【図７】
2007500186.tif 000032
【図８】
2007500186.tif 000033
【図９】
2007500186.tif 000034
【図１０】
2007500186.tif 000035
【図１１】
2007500186.tif 000036
【図１２】
2007500186.tif 000037
【国際調査報告】
2007500186.tif 000038
2007500186.tif 000039