(57)【要約】  リンパ球癌、自己免疫病又はＢ細胞の過剰増殖を特徴とする状態の疾患のヒト患者の治療製剤及び治療方法を開示する。治療は（１）細胞障害量のＢ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的に結合する抗体と、（２）細胞傷害性薬剤、例えば、化学療法薬、放射性同位元素、細胞傷害性抗体、免疫複合体、リガンド複合体、免疫抑制剤、細胞増殖制御因子および／または阻害剤、毒素またはそれらの混合物であり、Ｂ細胞の細胞骨格を破壊する薬剤であり、特にはビンカルカロイド又はコルヒチンである。
2007513072.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｂ細胞の過剰増殖を特徴とする状態の疾病のヒト患者を治療する方法であって、前記Ｂ細胞を（１）細胞傷害量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体と、（２）細胞傷害性薬剤とに接触させることを含む方法。
【請求項２】
前記Ｂ細胞の過剰増殖を特徴とする状態がリンパ球癌、ウイルス感染、免疫不全または自己免疫疾患である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ウイルス感染がヒト免疫不全ウイルスまたは単核球症である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記免疫不全が移植後リンパ球増殖性疾患または免疫不全症候群である、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記自己免疫疾患が全身性エリテマトーデス、リウマチ関節炎、自己免疫リンパ球増殖性疾患、多発性硬化症、乾癬、重症筋無力症、橋本甲状腺炎、アルツハイマー病、ループス腎炎、急性特発性血小板減少性紫斑病および慢性特発性血小板減少性紫斑病などの免疫介在性血小板減少症などのクラスIII自己免疫疾患、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、多発性硬化症、シドナム舞踏病、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、リウマチ熱、多内分泌線症候群、水疱性類天疱瘡、真性糖尿病、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、溶連菌感染後腎炎、結節性紅斑、高安動脈炎、アジソン病、クローン病、サルコイドーシス、潰瘍性大腸炎、多形性紅斑、ＩｇＡ腎症、結節性多発性動脈炎、強直性脊椎炎、グッドパスチャー症候群、閉塞性血栓性血管炎、原発性胆汁性肝硬変、甲状腺中毒症、強皮症、慢性活動性肝炎、多発性筋炎／皮膚筋炎、多発性軟骨炎、尋常性天疱瘡、ウェジナー肉芽腫症、膜性腎症、筋萎縮性側索硬化症、脊髄癆、巨細胞性動脈炎／多発性筋痛、悪性貧血、急速進行性糸球体腎炎および繊維化肺胞炎である、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記細胞傷害性薬剤が、化学療法薬、放射性同位元素、細胞傷害性抗体、免疫複合体、リガンド複合体、免疫抑制剤、細胞増殖制御因子および／または阻害剤、毒素またはそれらの混合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記化学療法薬がＢ細胞の細胞骨格を破壊する薬剤である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記Ｂ細胞の細胞骨格を破壊する薬剤が、微小管の重合または脱重合を妨げる薬剤である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記微小管の重合または脱重合を妨げる薬剤が、タキサン、ビンカアルカロイドもしくはコルヒチン、またはそれらの混合物である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ビンカアルカロイドがビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンもしくはビノレルビン、またはそれらの混合物である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記タキサンがパクリタキセルもしくはドセタキセル、またはそれらの混合物である、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記Ｂ細胞の細胞骨格を破壊する薬剤が、抗アクチン剤である、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
前記化学療法薬が、アスパラギナーゼ、エピポドフィロトキシン、カンプトセシン、抗生物質、プラチナ錯体、アルキル化剤、葉酸アナログ、ピリミジンアナログ、プリンアナログもしくはトポイソメラーゼ阻害剤、またはそれらの混合物である、請求項６に記載の方法。
【請求項１４】
前記トポイソメラーゼ阻害剤がエピポドフィロトキシンである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記エピポドフィロトキシンがエトポシドまたはテニポシドである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記ピリミジンアナログがカペシタビン、５−フルオルウラシル、５−フルオロデオキシウリジン、５−フルオロデオキシウリジン一リン酸、シトシンアラビノシド、５−アザシチジン、２’，２’−ジフルオロデオキシシチジンである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記プリンアナログがメルカプトプリン、アザチオプレン、チオグアニン、ペントスタチン、エリスロヒドロキシノニルアデニン、クラドリビン、ビダラビン、リン酸フルダラビンである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
前記葉酸アナログがメトトレキサート、ラルチトレキセド、ロメトレキソール、ペルメフレキセド、エダトレキサート、ペメトレキセドである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
前記カンプトセシンがイリノトカン、トポテカン、カンプトテカンである、請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗生物質がダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、イダルビシン、エピルビシン、バルルビシン、ミトキサントロン、ブレオマイシンまたはマイトマイシンである、請求項１３に記載の方法。
【請求項２１】
前記プラチナ錯体がシスプラチン、カルボプラチンまたはオキサリプラチンである、請求項１３に記載の方法。
【請求項２２】
前記アルキル化剤がメクロレタミン、シクロホスファミド、イフォスファミド、メルファラン、ダカルバジン、テモゾロマイド、チオテパ、ヘキサメチルメラミン、ストレプトゾシン、カルムスチン、ブスルファン、アルトレタミンまたはクロラムブシルである、請求項１３に記載の方法。
【請求項２３】
前記細胞傷害性薬剤を、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体の投与と同時に、その前に、またはその後に投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
前記細胞傷害性薬剤がＢ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体と共有結合によって、または非共有結合によって結合している、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体がＶＨ４−３４によってコードされる抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
前記Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体がｍＡｂ２１６、ＲＴ−２Ｂ、ＦＳ１２、Ａ６（Ｈ４Ｃ５）、Ｃａｌ−４Ｇ、Ｓ２０Ａ２、ＦＳ３、Ｇｅｅ、ＨＴ、Ｚ２Ｄ２、Ｙ２Ｋである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体がｍＡＢ２１６である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体が、正味の正電荷を有するＣＤＲ配列を含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
前記細胞傷害性薬剤が放射性同位元素である、請求項６に記載の方法。
【請求項３０】
前記放射性同位元素が１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、９０Ｙ、１１１Ｉｎ、１０５Ｒｈ、１５３Ｓｍ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、１６６Ｈｏ、１７７Ｌｕ、１８８Ｒｅまたは１８６Ｒｅである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記細胞傷害性抗体がＢ細胞上の細胞表面受容体に特異的な結合を有する、請求項６に記載の方法。
【請求項３２】
前記細胞傷害性抗体がＣＤ１１ａ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ３４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ５２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−８Ｒ、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３Ｒ、α−４／β−１インテグリン（ＶＬＡ４）、ＢＬＹＳ受容体、細胞表面イディオタイプＩｇ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、またはそれらの混合物に特異的な結合を有する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記細胞傷害性抗体がエファリツマブ（ラプティバ）、リツキシマブ（リツキサン）、ダクリツマブ（ゼナパックス）、エピラツズマブ、バシリキシマブ（シムレクト）、抗ＣＤ５２（カンパス）、ナタリズマブ、またはインフリキシマブ（レミケード）である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記細胞傷害性抗体が免疫複合体である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
前記細胞傷害性薬剤がリガンド複合体である、請求項６に記載の方法。
【請求項３６】
前記リガンド複合体がＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＢＬＹＳ、またはＴＮＦを含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記免疫抑制剤がグルココルチコイド、カルシニュリン阻害剤、抗増殖性／代謝拮抗性薬剤、または免疫抑制抗体である、請求項６に記載の方法。
【請求項３８】
前記カルシニュリン阻害剤がシクロスポリンまたはタクロリムスである、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記抗増殖性／代謝拮抗性薬剤がアザチオプリン、クロラムブコル、シクロホスファミド、レフルノミド、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキサート、ラパマイシン、サリドマイド、またはそれらの混合物である、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
前記グルココルチコイドがプレドニゾロン、プレドニゾン、またはデキサメタゾンから選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項４１】
前記細胞増殖制御因子および／または阻害剤が小分子治療薬、遺伝子治療薬または遺伝子発現修飾因子である、請求項３７に記載の方法。
【請求項４２】
前記小分子治療薬がキナーゼ阻害剤、またはプロテアソーム阻害剤である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記キナーゼ阻害剤がｂｃｒ／ａｂｌチロシンキナーゼ阻害剤、またはチロシンキナーゼ阻害剤である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記プロテアソーム阻害剤がボロン酸エステルである、請求項４２に記載の方法。
【請求項４５】
前記遺伝子治療薬がプラスミド、裸のＤＮＡ、または核酸−ペプチド複合体である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４６】
前記遺伝子発現修飾因子がアンチセンス核酸、または干渉核酸（例えば、ＲＮＡｉ）である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４７】
前記毒素がシュードモナス外毒素Ａ、リシン、ジフテリア毒素、モモルジン、ブタクサ抗ウイルスタンパク質、ブドウ球菌内毒素Ａ、ゲロニン、またはメイタンシノイドである、請求項６に記載の方法。
【請求項４８】
前記リンパ球癌がＢ細胞起源の任意の急性もしくは慢性白血病またはリンパ腫である、請求項２に記載の方法。
【請求項４９】
前記リンパ球癌が急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、バーキットリンパ腫、Ｂ前駆細胞型ＡＬＬ、成人ＡＬＬ、または慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である、請求項２に記載の方法。
【請求項５０】
前記接触をインビボ、インビトロまたはエキソビボで実施する、請求項１に記載の方法。
【請求項５１】
前記インビボ接触を、ヒト患者に、前記Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を、非経口注射によって投与することによって実施する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
リンパ球癌を特徴とする状態の疾患のヒト患者を治療する方法であって、（１）細胞傷害量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体と（２）化学療法薬とを投与することを含む方法。
【請求項５３】
リンパ球癌を特徴とする状態の疾患のヒト患者を治療する方法であって、（１）細胞傷害量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体と、（２）Ｂ細胞上の細胞表面受容体に特異的な結合を有する細胞傷害性抗体とを投与することを含む方法。
【請求項５４】
ＣＤＩＭエピトープと結合する抗体のＢ細胞細胞傷害性を増強する方法であって、Ｂ細胞を、ＣＤＩＭエピトープと結合する抗体と、Ｂ細胞の細胞骨格を破壊する薬剤とに接触させることを含む方法。
【請求項５５】
前記Ｂ細胞の細胞骨格を破壊する薬剤が、微小管の重合または脱重合を妨げる薬剤である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記微小管の重合または脱重合を妨げる薬剤が、タキサン、ビンカアルカロイドまたはコルヒチンである、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記ビンカアルカロイドがビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、またはビノレルビンである、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記タキサンがパクリタキセル、またはドセタキセルである、請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
前記Ｂ細胞細胞傷害性を増強する方法を、リンパ球癌、Ｂ細胞過剰増殖性疾患、または自己免疫疾患の治療に用いる、請求項５４に記載の方法。
【請求項６０】
哺乳類において自己免疫疾患を治療する方法であって、（１）細胞傷害量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体と、（２）化学療法薬、Ｂ細胞上の細胞表面受容体に特異的な結合を有する抗体、免疫抑制剤、細胞増殖制御因子および／又は阻害剤、あるいはそれらの混合物とを投与することを含む方法。
【請求項６１】
化学療法薬、細胞増殖制御因子および／または阻害剤、または細胞傷害性抗体に耐性である悪性Ｂ細胞を死滅させる方法であって、前記悪性Ｂ細胞を、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体と接触させることを含む方法。
【請求項６２】
前記悪性Ｂ細胞を、さらなる化学療法薬と接触させることを含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体に耐性である悪性Ｂ細胞を死滅させる方法であって、前記Ｂ細胞を、化学療法薬と、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体とで治療することを含む方法。
【請求項６４】
Ｂ細胞の過剰増殖を特徴とする疾病または障害を治療する方法であって、Ｂ細胞を、Ｂ細胞を透過性にするのに十分な量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体と接触させることを含む方法。
【請求項６５】
再寛解導入療法に反応しない、リンパ球癌を患っている患者において腫瘍量を減少させる方法であって、細胞傷害量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を投与することを含み、前記治療によって患者がその後の再寛解導入療法を受けることが可能となる、方法。
【請求項６６】
抗Ｂ細胞抗体の細胞傷害性を増強する方法であって、細胞傷害量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を投与することを含む方法。
【請求項６７】
細胞傷害量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を含む、非経口注射用医薬製剤。
【請求項６８】
化学療法薬をさらに含んでなる、請求項６７に記載の医薬製剤。
【請求項６９】
Ｂ細胞の過剰増殖を特徴とする状態の疾患の患者を治療するキットであって、
（ａ）患者においてＢ細胞を透過性にするのに十分な量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体と、
（ｂ）Ｂ細胞の過剰増殖を特徴とする状態を治療するのに有効な、治療上有効量の細胞傷害性薬剤とを含む、キット。
【請求項７０】
骨髄機能廃絶療法後の患者において、骨髄の再移植の前に悪性Ｂ細胞のリンパ球癌を患っている患者の骨髄をパージする方法であって、骨髄をエキソビボで、細胞傷害量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を用いて処理することを含む方法。
【請求項７１】
さらに、骨髄を細胞傷害性薬剤を用いて治療することを含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
Ｂ細胞の過剰増殖を特徴とする状態の疾患のヒト患者を治療する方法であって、前記Ｂ細胞を、（１）細胞傷害量の、抗ＣＤＩＭ抗体ｍＡｂ２１６またはＹ２Ｋと、（２）抗ＣＤ２０抗体とに接触させることを含む方法。
【請求項７３】
前記抗ＣＤ２０抗体がリツキシマブ、トスチマブまたはイブリツモマブである、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
さらに、患者Ｂ細胞をビンクリスチンまたはビンブラスチンと接触させることを含む、請求項７２に記載の方法。
【請求項７５】
Ｂ細胞の過剰増殖を特徴とする状態の疾患のヒト患者を治療する方法であって、前記Ｂ細胞を、（１）細胞傷害量の、抗ＣＤＩＭ抗体ｍＡｂ２１６またはＹ２Ｋと、（２）抗ＣＤ５２抗体とに接触させることを含む方法。
【請求項７６】
前記抗ＣＤ５２抗体がカンパスである、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
さらに、患者のＢ細胞をビンクリスチンまたはビンブラスチンと接触させることを含む、請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】
Ｂ細胞の過剰増殖を特徴とする状態の疾患のヒト患者を治療する方法であって、前記Ｂ細胞を、（１）細胞傷害量の、抗ＣＤＩＭ抗体ｍＡｂ２１６またはＹ２Ｋと、（２）抗ＣＤ２２抗体とに接触させることを含む方法。
【請求項７９】
前記抗ＣＤ２２抗体がエピラツズマブである、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
さらに、患者のＢ細胞をビンクリスチンまたはビンブラスチンと接触させることを含む、請求項７８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して、癌および過剰増殖性疾患などを治療するための組成物および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）は小児において、最も一般的な悪性腫瘍である。およそ８０％の小児ＡＬＬがＢ細胞系列のものである。現在の治療でＡＬＬを患う小児の８０％近くが治癒するが、残りの群の患者には治療上の課題である新規な異なる治療戦略が引き続き必要とされている。同種骨髄移植（ＢＭＴ）後に白血病の骨髄再発を起こした小児には、治癒の可能性は低い。同様に、適したドナーがないためにＢＮＴを受けていない小児および疾病が少なくとも２回再発した小児は、従来の化学療法では治癒する見込みがない。こういった状況下では、白血病の難治性及び大量に前治療されている患者の脆弱性の可能性のために、再導入化学療法で完全な寛解を達成するのが困難である場合がある。したがって、単独または化学療法と組合せてのいずれかでＡＬＬに対して有効である新規薬剤を開発する必要性が、引き続き現在の白血病治療の目標として残っている。白血病性芽球に特異性を示すが、化学療法薬と同様の毒性プロフィールは示さない薬剤が、抗白血病治療の新規戦略を設計するのに特に有利である。さらに、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）およびＢ細胞系列のリンパ腫、ならびにＢ細胞によって引き起こされる自己免疫疾患をはじめとするその他のＢ細胞癌の治療において既存の化学療法薬または生物剤の効力を高められる薬剤および方法を発見することが期待されている。
【０００３】
すべて同一出願人による、米国特許第５，５９３，６７６号および同５，４１７，９７２号およびＥＰ０７１２３０７Ｂ１に記載されるＭＡｂ２１６によって、Ｂ細胞を死滅させるための、ＣＤＩＭエピトープと結合する抗体の使用が記載されている。この抗体を用いることによって、不定量のＢ細胞を死滅させることができ、リンパ球癌などのＢ細胞の過剰増殖を特徴とする疾病を治療するための効力の増強が望まれる。
【発明の開示】
【０００４】
したがって、本発明の主目的は、リンパ球癌およびＢ細胞の過剰増殖を特徴とするその他の疾患に対する新規方法および医薬製剤を提供することによって、当技術分野における前述の必要性に対応することである。
【０００５】
したがって、一実施形態では、Ｂ細胞系列の細胞に限定されるＣＤＩＭ抗原を発現する、Ｂ細胞の過剰増殖を特徴とする状態の疾患のヒトまたはその他の哺乳類種を治療するための一方法を提供する。本方法は、前記Ｂ細胞を（１）細胞傷害量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体と、（２）細胞傷害性薬剤とに接触させることを含む。好ましい一態様では、Ｂ細胞の過剰増殖を特徴とする状態は、リンパ球癌、ウイルス感染、免疫不全または自己免疫疾患である。代表的なウイルス感染としては、ヒト免疫不全ウイルスまたは単核球症を挙げることができる。代表的な免疫不全症としては、移植後リンパ球増殖性疾患または免疫不全症候群が挙げられ、抗癌療法またはその他の免疫抑制療法を受けている患者に見られる。代表的な自己免疫疾患としては、全身性エリテマトーデス、リウマチ関節炎、自己免疫リンパ球増殖性疾患、多発性硬化症、乾癬および重症筋無力症を挙げることができるが、橋本甲状腺炎、ループス腎炎、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、シドナム舞踏病、ループス腎炎、リウマチ熱、多内分泌線症候群、水疱性類天疱瘡、真性糖尿病、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、溶連菌感染後腎炎、結節性紅斑、高安動脈炎、アジソン病、クローン病、アルツハイマー病、サルコイドーシス、潰瘍性大腸炎、多形性紅斑、ＩｇＡ腎症、結節性多発性動脈炎、強直性脊椎炎、グッドパスチャー症候群、閉塞性血栓性血管炎、原発性胆汁性肝硬変、甲状腺中毒症、強皮症、慢性活動性肝炎、多発性筋炎／皮膚筋炎、多発性軟骨炎、尋常性天疱瘡、ウェジナー肉芽腫症、膜性腎症、筋萎縮性側索硬化症、脊髄癆、巨細胞性動脈炎／多発性筋痛、悪性貧血、急速進行性糸球体腎炎、繊維化肺胞炎、急性特発性血小板減少性紫斑病および慢性特発性血小板減少性紫斑病などの免疫介在性血小板減少症などのクラスＩＩＩ自己免疫疾患なども含まれる。
【０００６】
細胞傷害性薬剤は、化学療法薬、放射性同位元素、細胞傷害性抗体、免疫複合体、リガンド複合体、免疫抑制剤、細胞増殖制御因子および／または阻害剤、毒素、またはそれらの混合物であり得る。化学療法薬は、Ｂ細胞の細胞骨格を破壊する薬剤であり得る。さらなる実施形態では、化学療法薬は、アスパラギナーゼ、エピポドフィロトキシン、カンプトセシン、抗生物質、プラチナ錯体、アルキル化剤、葉酸アナログ、ピリミジンアナログ、プリンアナログまたはトポイソメラーゼ阻害剤、あるいはそれらの混合物であり得る。
【０００７】
Ｂ細胞の細胞骨格を破壊する薬剤は、微小管の重合または脱重合を妨げる薬剤、例えばタキサン、ビンカアルカロイドおよびコルヒチン、またはそれらの混合物であることが好ましい。ビンカアルカロイドとしては、例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、またはビノレルビン、あるいはそれらの混合物を挙げることができる。タキサンとしては、パクリタキセルおよびドセタキセル、ならびにそれらの混合物を挙げることができる。もう１つの実施形態では、Ｂ細胞の細胞骨格を破壊する薬剤として、抗アクチン剤、例えばジャスプラキノリドおよびサイトカラシンがある。
【０００８】
トポイソメラーゼ阻害剤としては、エピポドフィロトキシン、例えばエトポシドまたはテニポシドを挙げることができる。ピリミジンアナログとしては、カペシタビン、５−フルオルウラシル、５−フルオロデオキシウリジン、５−フルオロデオキシウリジン一リン酸、シトシンアラビノシド、５−アザシチジン、２’，２’−ジフルオロデオキシシチジンを挙げることができるが限定はされない。プリンアナログとしては、例えば、メルカプトプリン、アザチオプリン、チオグアニン、ペントスタチン、エリスロヒドロキシノニルアデニン、クラドリビン、ビダラビン、リン酸フルダラビンを挙げることができる。葉酸アナログとしては、メトトレキサート、ラルチトレキセド、ロメトレキソール、ペルメフレキセド、エダトレキサート、ペメトレキセドを挙げることができる。カンプトテシンとしては、イリノトカン、トポテカン、カンプトテカンを挙げることができる。抗生物質としては、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、イダルビシン、エピルビシン、バルルビシン、ミトキサントロン、ブレオマイシンおよびマイトマイシンを挙げることができるが、限定はされない。プラチナ錯体としては、例えば、シスプラチン、カルボプラチンおよびオキサリプラチンを挙げることができる。アルキル化剤としては、例えば、メクロレタミン、シクロホスファミド、イフォスファミド、メルファラン、ダカルバジン、テモゾロマイド、チオテパ、ヘキサメチルメラミン、ストレプトゾシン、カルムスチン、ブスルファン、アルトレタミンおよびクロラムブシルを挙げることができる。
【０００９】
細胞傷害性薬剤はＢ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体の投与と同時に、その前にまたはその後に投与することができる。例えば、リンパ球癌を患っている患者に、従来の化学または免疫療法での治療に先立って、細胞傷害量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を投与することによって、患者の腫瘍量を減少させる方法を提供する。例えば、患者が再寛解導入療法に反応しなくなった場合に、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を投与することで患者がその後の再寛解導入療法を受けることが可能となる。本方法は、細胞傷害性薬剤で患者を治療することをさらに含む場合がある。
【００１０】
もう１つの実施形態では、骨髄機能廃絶療法後、患者における骨髄の再移植に先立って、悪性Ｂ細胞のリンパ球癌を患っている患者の骨髄をパージする方法を提供する。本方法は、骨髄を、細胞傷害量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を用いてエキソビボ（ｅｘ  ｖｉｖｏ）で治療することを含む。本方法は、骨髄細胞を、細胞傷害性薬剤を用いてエキソビボで治療することをさらに含む場合がある。
【００１１】
細胞傷害量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体は、細胞膜の傷を誘導し、これによって化学療法薬、ならびに再び効力を増強し得たその他の細胞傷害性薬剤に対するＢ細胞の透過化がもたらされ、細胞膜の傷によってＢ細胞サイトゾルへ入ることが容易になる。したがって、従来の化学療法での治療の前に、その間に、またはその後でさえ、細胞傷害量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を投与することによって、本方法は化学療法薬の細胞傷害性の増強を提供し、それによって化学療法の効力が高められる。さらに、化学療法の効力をこのように高めることによって、低濃度の化学療法薬を用いて患者を治療することが可能となり、それによって副作用および有害事象の可能性が少ない有効な治療が提供される。
【００１２】
同様に、従来の免疫療法での治療の前に、その間に、またはその後でさえ、細胞傷害量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を投与することによって、免疫療法の際に用いられる抗Ｂ細胞抗体の細胞傷害性を増強する方法を提供する。さらに、従来の抗Ｂ細胞免疫療法は、腫瘍量が高い状態または免疫不全の状態のもと、例えば、補体貯蔵量が枯渇した場合、および抗Ｂ細胞免疫療法が有効でなくなっている場合には、有効性を欠くことがある。Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体と組合わせることは、例えば、補体欠乏症がある場合の、この従来のＢ細胞免疫療法の有効性の欠如に打ち勝つことになる。したがって、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体の投与の前またはその間に、細胞傷害性薬剤を投与することが最も有利であり得るが、これはこの抗体が細胞損傷を誘導し、抗体と細胞傷害性薬剤双方の効力を増強するからである。
【００１３】
Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体は、抗体によって細胞膜透過化および／または細胞傷害性が提供される限りは、天然抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、一本鎖Ｆｖ抗体、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ）、ペグ化抗体、四価抗体、ダイアボディー、またはミニボディー(minibody)などであり得る。Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体はまた、細胞傷害性薬剤を含む免疫複合体を形成するための異種ポリペプチドを含む融合タンパク質として調製でき、または細胞傷害性薬剤、例えば放射性同位元素もしくは毒素を含むよう共有結合によってもしくは非共有結合によって修飾することもできる。Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体が細胞傷害性薬剤と結合しているか、それで標識されているか、それと融合している場合は、抗体によって提供される細胞損傷細胞傷害性、ならびに細胞傷害性薬剤によって提供されるさらなる細胞傷害性を利用するために、全長抗体を用いることが好ましい。
【００１４】
特定の態様では、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体は、ＶＨ４−３４によってコードされる抗体である。この抗体ファミリーの好ましいメンバーとしては、ｍＡｂ２１６、ＲＴ−２Ｂ、ＦＳ１２、Ａ６（Ｈ４Ｃ５）、Ｃａｌ−４Ｇ、Ｓ２０Ａ２、ＦＳ３、Ｇｅｅ、ＨＴ、Ｚ２Ｄ２、Ｙ２Ｋを挙げることができる。Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する好ましい抗体は、正味の正電荷を有するＣＤＲ配列を含むものである。
【００１５】
特定の実施形態では、細胞傷害性薬剤は放射性同位元素、例えば、１３１１、１２５Ｉ、１２３Ｉ、９０Ｙ、１１１Ｉｎ、１０５Ｒｈ、１５３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、１７７Ｌｕならびに１８８Ｒｅおよび１８６Ｒｅ、３２Ｐ、５７Ｃｏ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、７７Ｇａ、８１Ｒｂ、８１Ｋｒ、８７Ｓｒ、１１３Ｉｎ、１２７Ｃｓ、１２９Ｃｓ、１３２Ｉ、１９７Ｈｇ、２１３Ｐｂ、２１６Ｂｉ、１１７Ｌｕ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉ、４７Ｓｃ、１０５Ｒｈ、１０９Ｐｄ、１９９Ａｕ、２２５Ａｃ、２１１Ａｔ、および２１３Ｂｉである。これらの放射性同位元素のうち、１３１Ｉ、１２５Ｉ、９０Ｙ、１１１Ｉｎおよび１８６Ｒｅが最も好ましい。放射性同位元素は免疫複合体またはリガンド複合体の一部を含むこともできる。特定のその他の実施形態では、放射性同位元素は、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体、またはＢ細胞上の細胞表面受容体に特異的な結合を有する細胞傷害性抗体と共有結合している。
【００１６】
特定の実施形態では、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を、Ｂ細胞上の細胞表面分子に特異的な結合を有するさらなる細胞傷害性抗体と併用する。細胞傷害性抗体は、Ｂ細胞上の任意の細胞表面分子に特異的な結合を有することができる。細胞表面分子としては、受容体、免疫グロブリン、サイトカイン、糖タンパク質などを挙げることができる。例えば、細胞傷害性抗体はＣＤｌｌａ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ３４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ５２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−８Ｒ、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３Ｒ、α−４／β−１インテグリン（ＶＬＡ４）、ＢＬＹＳ受容体、細胞表面イディオタイプＩｇ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、またはそれらの混合物に特異的な結合を示すことができるが、限定はされない。例えば、ＣＤ１１ａに特異的な結合を有する細胞傷害性抗体は、例えば、エファリツマブ（ラプティバ）であり得る。ＣＤ２０に特異的な結合を有する細胞傷害性抗体は、リツキシマブ（リツキサン）であり得る。ＣＤ２２に特異的な結合を有する細胞傷害性抗体は、例えば、エピラツズマブであり得る。ＣＤ２５に特異的な結合を有する細胞傷害性抗体は、例えば、ダクリツマブ（ゼナパックス）またはバシリキシマブ（シムレクト）であり得る。ＣＤ５２の抗体としては、例えば、カンパスを挙げることができる。α−４／β−１インテグリン（ＶＬＡ４）の抗体としては、例えば、ナタリズマブを挙げることができる。ＴＮＦの抗体としては、例えば、インフリキシマブ（レミケード）を挙げることができる。
【００１７】
したがって、好ましい実施形態では、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を、例えば、リツキサン、ゼナパックス、レミケードまたはラプティバとともに、またはそれらの組合せとともに併用免疫療法投薬計画で使用することができる。細胞傷害性抗体はまた、例えば、放射性同位元素または毒素を含む免疫複合体として使用することができる。さらに、さらなる実施形態では、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体と、Ｂ細胞上の細胞表面分子に特異的な結合を有するさらなる細胞傷害性抗体と、１種以上の化学療法薬とを含む併用療法を使用することができる。例えば、ｍＡｂ２１６は、抗ＣＤ２０抗体、例えばリツキシマブ、トスチマブまたはイブリツモマブと組合せて、または抗ＣＤ５２抗体、例えばカンパスと組合せて、または抗ＣＤ２２抗体、例えばエプラツクスマブ(epratuxumab)と組合せてなどで使用することができる。併用療法は、併用化学療法および免疫療法投薬計画で、化学療法、例えば細胞の細胞骨格を破壊する薬剤、例えばビンクリスチンをさらに含み得る。
【００１８】
さらなる実施形態では、細胞傷害性薬剤は、リガンド複合体であり得、例えばＢ細胞上の細胞表面受容体と結合する任意のＢ細胞受容体リガンドを挙げることができる。このようなリガンドとしては、限定はされないが、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＢＬＹＳまたはＴＮＦなどを挙げることができる。免疫複合体のようなリガンド複合体は、融合タンパク質または共有結合しているか非共有結合している毒素、放射性同位元素、またはその他の毒物を含む。したがって、この実施形態では、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を、Ｂ細胞に対してその生物学的効果によって細胞傷害性を示すか、又はそれに融合もしくは結合している細胞傷害性薬剤によって細胞傷害性を示す前記のリガンド複合体と併用することができる。
【００１９】
したがって、さらなる実施形態では、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を、リガンド複合体、例えばジフテリア毒素結合ＩＬ−１３などとの併用投薬計画で使用することができる。また、リガンド複合体は、放射性同位元素または例えば、細胞傷害性にするその他の毒素を含むことができる。
【００２０】
さらなる実施形態では、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を細胞傷害性薬剤と併用して自己免疫疾患を治療する。細胞傷害性薬剤は免疫抑制剤、例えばグルココルチコイド、カルシニュリン阻害剤、抗増殖性／代謝拮抗性薬剤、または生物剤、例えば免疫抑制効果を提供する抗体、あるいはそれらの混合物であり得る。免疫抑制剤との組合せは、Ｂ細胞によって媒介される自己免疫疾患の治療において、または癌を治療するために場合によっては有用である。特定の実施形態では、カルシニュリン阻害剤は、シクロスポリンまたはタクロリムスである。その他の実施形態では、抗増殖性／代謝拮抗性薬剤は、アザチオプリン、クロラムブコル、シクロホスファミド、レフルノミド、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキサート、ラパマイシン、サリドマイド、またはそれらの混合物である。グルココルチコイドとしては、例えば、プレドニゾロン、プレドニゾンまたはデキサメタゾンを挙げることができる。
【００２１】
特定の実施形態では、免疫抑制剤は、細胞増殖制御因子および／または阻害剤であり、小分子治療薬、遺伝子治療薬または遺伝子発現修飾因子を挙げることができる。小分子治療薬としては、例えば、キナーゼ阻害剤およびプロテアソーム阻害剤が挙げることができる。好ましい実施形態では、キナーゼ阻害剤はｂｃｒ／ａｂｌチロシンキナーゼ阻害剤、例えばグリーベックである。もう１つの好ましい実施形態では、プロテアソーム阻害剤はボロン酸エステル、例えばベルケードである。
【００２２】
特定の実施形態では、細胞傷害性薬剤は毒素であり、限定はされないが、シュードモナス外毒素Ａ、リシン、ジフテリア毒素、モモルジン、ブタクサ抗ウイルスタンパク質、ブドウ球菌内毒素Ａ、ゲロニン、メイタンシノイド、又はダウナルビシン(daunarubicin)などを挙げることができる。毒素は、細胞特異的ターゲッティングのために抗体またはリガンドに結合されていることが好ましい。
【００２３】
好ましい実施形態では、Ｂ細胞の過剰増殖を特徴とする状態はリンパ球癌、特に、任意のＢ細胞起源の急性白血病である。リンパ球癌としては、急性白血病、例えば急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、Ｂ前駆細胞型ＡＬＬ、成人ＡＬＬ、ならびに慢性白血病およびリンパ腫を挙げることができる。リンパ腫としては、高悪性度のもの、低悪性度のものおよびマントル細胞型のものを挙げることができる。リンパ球癌の個々の例としては、限定はされないが、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、バーキットリンパ腫、Ｂ前駆細胞型ＡＬＬ、成人ＡＬＬ、または慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）などを挙げることができる。
【００２４】
特定の実施形態では、過剰増殖性Ｂ細胞を接触させることを、インビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）、インビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）またはエキソビボ（ｅｘ  ｖｉｖｏ）で実施することができる。前述の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を非経口注射によって投与することによって、Ｂ細胞をインビボで接触させることが好ましい。細胞傷害性薬剤による、Ｂ細胞のインビボ接触は、当技術分野で公知の、細胞傷害性薬剤およびの製剤に応じて適切な、任意の適した手段によってできる。
【００２５】
本発明のさらなる態様では、リンパ球癌を患っているヒト患者を治療する方法を提供し、これは、（１）細胞傷害量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体と、（２）化学療法薬とを投与することを含む。好ましい実施形態では、化学療法薬は、タキサン、コルヒチン、ビンカアルカロイド、アスパラギナーゼ、抗アクチン剤、エピポドフィロトキシン、カンプトセシン、抗生物質、プラチナ錯体、アルキル化剤、葉酸アナログ、ピリミジンアナログ、プリンアナログまたはトポイソメラーゼ阻害剤、あるいはそれらの混合物である。特定の実施形態では、ビンカアルカロイドは、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンまたはビノレルビンである。ピリミジンアナログとしては、カペシタビン、５−フルオルウラシル、５−フルオロデオキシウリジン、５−フルオロデオキシウリジン一リン酸、シトシンアラビノシド、５−アザシチジン、または２’，２’−ジフルオロデオキシシチジンを挙げることができる。プリンアナログは、メルカプトプリン、アザチオプレン、チオグアニン、ペントスタチン、エリスロヒドロキシノニルアデニン、クラドリビン、ビダラビンまたはリン酸フルダラビンであり得る。葉酸アナログは、メトトレキサート、ラルチトレキセド、ロメトレキソール、ペルメフレキセドまたはエダトレキサート、ペメトレキセドであり得る。エピポドフィロトキシンは、エトポシドまたはテニポシドであり得る。カンプトテシンとしては、イリノトカン、トポテカン、カンプトテカンを挙げることができる。化学療法薬抗生物質としては、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、イダルビシン、エピルビシン、バルルビシン、ミトキサントロン、ブレオマイシンまたはマイトマイシンを挙げることができる。プラチナ錯体としては、シスプラチン、カルボプラチンまたはオキサリプラチンを挙げることができる。アルキル化剤としては、メクロレタミン、シクロホスファミド、イフォスファミド、メルファラン、ダカルバジン、テモゾロマイド、チオテパ、ヘキサメチルメラミン、ストレプトゾシン、カルムスチン、ブスルファン、アルトレタミンまたはクロラムブシルを挙げることができる。等価物、修飾体および誘導体なども、本発明の方法および組成物に使用することができる化学療法薬の範囲内に含まれる。化学療法薬は、ＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体の前、その後またはそれと同時に投与することができる。
【００２６】
好ましい実施形態では、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体は、正味の正電荷を有するＣＤＲ配列を含む。特定の実施形態では、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体は、ＶＨ４−３４によってコードされる抗体であり、限定はされないが、ｍＡｂ２１６、ＲＴ−２Ｂ、ＦＳ１２、Ａ６（Ｈ４Ｃ５）、Ｃａｌ−４Ｇ、Ｓ２０Ａ２、ＦＳ３、Ｇｅｅ、ＨＴ、Ｚ２Ｄ２、Ｙ２Ｋを挙げることができる。特に好ましい抗体としては、ｍＡｂ２１６がある。
【００２７】
本発明のさらにもう１つの態様では、（１）細胞傷害量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体と、（２）Ｂ細胞上の細胞表面受容体に特異的な結合を有する細胞傷害性抗体とを投与することを含むリンパ球癌を患っているヒト患者を治療する方法を提供する。特定の実施形態では、細胞傷害性抗体は、Ｂ細胞上の任意の細胞表面分子（ＣＤＩＭエピトープ以外）に特異的な結合を有し得る。例えば、細胞傷害性抗体は、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ３４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ５２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−８Ｒ、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３Ｒ、α−４／β−１インテグリン（ＶＬＡ４）、ＢＬＹＳ受容体、細胞表面イディオタイプＩｇ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、またはそれらの混合物に対して特的な結合を示し得るが、限定はされない。例えば、ＣＤ１１ａに特異的な結合を有する細胞傷害性抗体は、例えばエファリツマブ（ラプティバ）であり得る。ＣＤ２０に特異的な結合を有する細胞傷害性抗体は、リツキシマブ（リツキサン）であり得る。ＣＤ２２に特異的な結合を有する細胞傷害性抗体は、例えばエピラツズマブであり得る。ＣＤ２５に特異的な結合を有する細胞傷害性抗体は、例えばダクリツマブ（ゼナパックス）またはバシリキシマブ（シムレクト）であり得る。ＣＤ５２の抗体としては、例えばカンパスを挙げることができる。α−４／β−１インテグリン（ＶＬＡ４）の抗体としては、例えばナタリズマブを挙げることができる。ＴＮＦの抗体としては、例えばインフリキシマブ（レミケード）を挙げることができる。したがって、好ましい実施形態では、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を、例えばリツキサン、ゼナパックス、レミケードまたはラプティバとともに、またはそれらの組合せとともに併用免疫療法投薬計画で使用することができる。細胞傷害性抗体はまた、例えば放射性同位元素または毒素を含む免疫複合体として使用することができる。
【００２８】
Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体は、正味の正電荷を有するＣＤＲ配列を含む。特定の実施形態では、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体は、ＶＨ４−３４によってコードされる抗体である。好ましいＶＨ４−３４抗体としては、ｍＡｂ２１６、ＲＴ−２Ｂ、ＦＳ１２、Ａ６（Ｈ４Ｃ５）、Ｃａｌ−４Ｇ、Ｓ２０Ａ２、ＦＳ３、Ｇｅｅ、ＨＴ、Ｚ２Ｄ２、Ｙ２Ｋを挙げることができる。
【００２９】
さらなる実施形態では、細胞傷害量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体と、Ｂ細胞上の細胞表面受容体に特異的な結合を有する細胞傷害性抗体とを投与することを含むリンパ球癌を患っているヒト患者を治療する方法は、さらに、化学療法薬、放射性同位元素、免疫複合体、リガンド複合体、免疫抑制剤、細胞増殖制御因子および／または阻害剤、あるいはそれらの混合物を投与することを含む。Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体は、放射性同位元素で標識することができる。さらに、Ｂ細胞上の細胞表面受容体に特異的な結合を有する細胞傷害性抗体も放射性同位元素で標識することができる。好ましい放射性同位元素としては、１３１Ｉ、１２５Ｉ、９０Ｙ、１１１Ｉｎおよび１８６Ｒｅを挙げることができる。いずれかの抗体を免疫複合体として使用してもよい。好ましい実施形態では、免疫複合体はシュードモナス外毒素Ａ、リシン、ジフテリア毒素、モモルジン、ブタクサ抗ウイルスタンパク質、ブドウ球菌内毒素Ａ、ゲロニン、メイタンシノイド、又はダウナルビシンなどを含む。
【００３０】
リガンド複合体はＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＢＬＹＳまたはＴＮＦなどを含むことができ、さらに放射性同位元素、または毒素を含むことができる。免疫抑制剤としては、グルココルチコイド、カルシニュリン阻害剤、抗増殖性／代謝拮抗性薬剤または抗体を挙げることができるが、限定はされない。特定のカルシニュリン阻害剤としては、シクロスポリン、またはタクロリムスなどを挙げることができる。特定の抗増殖性／代謝拮抗性薬剤としては、アザチオプリン、クロラムブコル、シクロホスファミド、レフルノミド、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキサート、ラパマイシン、サリドマイドまたはそれらの混合物を挙げることができる。グルココルチコイド、例えばプレドニゾロン、プレドニゾンまたはデキサメタゾンもまた利用することができる。細胞増殖制御因子および／または阻害剤としては、小分子治療薬（例えば、キナーゼ阻害剤、またはプロテアソーム阻害剤）、遺伝子治療薬または遺伝子発現修飾因子を挙げることができる。
【００３１】
本発明のもう１つの態様では、Ｂ細胞を、ＣＤＩＭエピトープと結合する抗体と、Ｂ細胞の細胞骨格を破壊する薬剤とに接触させることを含むＣＤＩＭエピトープと結合する抗体のＢ細胞細胞傷害性を増強する方法を提供する。Ｂ細胞の細胞骨格を破壊する薬剤は、微小管の重合または脱重合を妨げる薬剤、例えばタキサン、ビンカアルカロイドまたはコルヒチンであることが好ましい。ビンカアルカロイドとしては、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、またはビノレルビンを挙げることができる。タキサンとしては、限定はされないが、パクリタキセル、またはドセタキセルを挙げることができる。Ｂ細胞の細胞骨格を破壊する薬剤はまた、抗アクチン剤、すなわち、アクチンフィラメントがアクチンを重合することか、アクチンを脱重合することのいずれかに影響を及ぼす薬剤でもあり得る。好ましい実施形態では、Ｂ細胞細胞傷害性を増強する方法を、リンパ球癌、Ｂ細胞過剰増殖性疾患または自己免疫疾患の治療に用いる。リンパ球癌としては、任意のＢ細胞起源の急性白血病、例えば急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、バーキットリンパ腫、Ｂ前駆細胞型ＡＬＬ、成人ＡＬＬ、または慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を挙げることができる。好ましい実施形態では、Ｂ細胞は細胞傷害量の、ＣＤＩＭエピトープと結合する抗体を含む医薬製剤の非経口注射によって接触される。
【００３２】
さらにもう１つの態様では、（１）細胞傷害量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体と、（２）化学療法薬、Ｂ細胞上の細胞表面受容体に特異的な結合を有する抗体、免疫抑制剤、細胞増殖制御因子および／または阻害剤、あるいはそれらの混合物とを投与することを含む哺乳類における自己免疫疾患を治療する方法を提供する。免疫抑制剤はグルココルチコイド、カルシニュリン阻害剤、または抗増殖性／代謝拮抗性薬剤であることが好ましい。カルシニュリン阻害剤は、シクロスポリン、またはタクロリムスであることが好ましい。抗増殖性／代謝拮抗性薬剤は、アザチオプリン、クロラムブコル、シクロホスファミド、レフルノミド、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキサート、ラパマイシン、サリドマイド、またはそれらの混合物であり得る。グルココルチコイドは、プレドニゾロン、プレドニゾン、またはデキサメタゾンから選択することができる。細胞増殖制御因子および／または阻害剤は、小分子治療薬、または遺伝子治療薬もしくは遺伝子発現修飾因子であり得る。
【００３３】
Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体は、正味の正電荷を有するＣＤＲ配列を含むことが好ましい。特定の実施形態では、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体は、ＶＨ４−３４によってコードされる抗体、例えばｍＡｂ２１６、ＲＴ−２Ｂ、ＦＳ１２、Ａ６（Ｈ４Ｃ５）、Ｃａｌ−４Ｇ、Ｓ２０Ａ２、ＦＳ３、Ｇｅｅ、ＨＴ、Ｚ２Ｄ２、Ｙ２Ｋである。本方法は、自己免疫疾患、例えば全身性エリテマトーデス、リウマチ関節炎、自己免疫リンパ球増殖性疾患、多発性硬化症、乾癬、重症筋無力症、橋本甲状腺炎、ループス腎炎、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、シドナム舞踏病、アルツハイマー病、ループス腎炎、リウマチ熱、多内分泌線症候群、水疱性類天疱瘡、真性糖尿病、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、溶連菌感染後腎炎、結節性紅斑、高安動脈炎、アジソン病、クローン病、サルコイドーシス、潰瘍性大腸炎、多形性紅斑、ＩｇＡ腎症、結節性多発性動脈炎、強直性脊椎炎、グッドパスチャー症候群、閉塞性血栓性血管炎、原発性胆汁性肝硬変、甲状腺中毒症、強皮症、慢性活動性肝炎、多発性筋炎/皮膚筋炎、多発性軟骨炎、尋常性天疱瘡、ウェジナー肉芽腫症、膜性腎症、筋萎縮性側索硬化症、脊髄癆、巨細胞性動脈炎/多発性筋痛、悪性貧血、急速進行性糸球体腎炎、繊維化肺胞炎、急性特発性血小板減少性紫斑病および慢性特発性血小板減少性紫斑病などの免疫介在性血小板減少症などのクラスＩＩＩ自己免疫疾患その他を治療するのに有用である。
【００３４】
本発明のもう１つの態様では、前記悪性Ｂ細胞を、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体と接触させることを含む。特定の一実施形態では、この方法は、さらに、悪性Ｂ細胞を化学療法薬と接触させることを含む、化学療法薬、細胞増殖制御因子および／または阻害剤、または細胞傷害性抗体に耐性である悪性Ｂ細胞を死滅させる方法を提供する。特定の実施形態では、抗体は、化学療法薬の不在下よりも低い濃度で有効であり、及び／または化学療法薬は抗体の不在下よりも低い濃度で有効である。
【００３５】
本発明のさらなる態様では、前記Ｂ細胞を化学療法薬および／またはＢ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体で治療することを含むＢ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体に耐性である悪性Ｂ細胞を死滅させる方法を提供する。特定の実施形態では、化学療法薬は抗体の不在下よりも低い濃度で有効である。
【００３６】
本発明のさらなる態様では、Ｂ細胞をＢ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体と接触させることを含むＢ細胞を透過性にする方法を提供する。Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体は、正味の正電荷を有するＣＤＲ配列を含む。好ましい実施形態では、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体は、ＶＨ４−３４によってコードされる抗体、例えばｍＡｂ２１６、ＲＴ−２Ｂ、ＦＳ１２、Ａ６（Ｈ４Ｃ５）、Ｃａｌ−４Ｇ、Ｓ２０Ａ２、ＦＳ３、Ｇｅｅ、ＨＴ、Ｚ２Ｄ２、Ｙ２Ｋである。
【００３７】
本発明のさらにもう１つの態様では、Ｂ細胞の過剰増殖を特徴とする疾病または疾患を治療する方法を提供し、これは、Ｂ細胞を透過性にするのに十分な量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体と接触させることを含み得る。この方法は、さらに、前記Ｂ細胞を細胞傷害性薬と接触させることを含む。特定の実施形態では、Ｂ細胞を細胞傷害性薬と接触させるステップを、Ｂ細胞をＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体と接触させるステップの前に、その間に、またはその後に実施する。Ｂ細胞の透過化は、種々の手段によって細胞傷害性薬剤の効力を高め、特定の実施形態では、細胞傷害性薬剤の効力は、細胞傷害性薬剤のＢ細胞のサイトゾルへのアクセスを増加することによって、高められる。好ましい実施形態では、細胞傷害性薬剤は、化学療法薬、免疫抑制剤、細胞増殖制御因子および／または阻害剤、毒素、あるいはそれらの混合物である。さらに好ましい実施形態では、Ｂ細胞を接触させるステップを、ヒト患者に、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を非経口的に注射することによって実施する。
【００３８】
特定の態様では、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を、約２．５〜約３０００ｍｇ／ｍ２の用量で投与し、またはより好ましくは、投与する抗体の用量は約２５〜１０００ｍｇ／ｍ２、または特に、約７５、１５０、３００もしくは６００ｍｇ／ｍ２である。さらなる態様では、抗体を約０．２５ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの用量で投与し、より好ましくは、投与する抗体の用量は約１．２５、２．５、５、１０、または２０ｍｇ／ｋｇである。抗ＣＤＩＭ抗体は、通常、週１回の頻度で投与するが、いくつかの実施形態では、週１回よりも高頻度、１日１回と同程度の頻度で投与する。さらなる細胞傷害性抗体は、週あたり１０〜３７５ｍｇ／ｍ２の量で４週間にわたって、または週あたり０．４〜２０ｍｇ／ｋｇで２〜１０週にわたって投与することができる。
【００３９】
本発明のさらなる態様では、細胞傷害量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を含む非経口注射用の医薬製剤を提供する。特定の実施形態では、医薬製剤は化学療法薬をさらに含んでなる。
【００４０】
本発明のもう１つの態様では、（ａ）患者においてＢ細胞を透過性にするのに十分な量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を含む医薬組成物と、（ｂ）Ｂ細胞の過剰増殖を特徴とする状態を治要するの有効な、治療上有効量の細胞傷害性薬剤を含む医薬組成物とを含むＢ細胞の過剰増殖を特徴とする状態の疾患の患者を治療するためのキットを提供する。組成物を製剤するための、任意の製薬上許容される注射用溶液を提供することができる。抗体組成物は、非経口的に投与することが好ましく、細胞傷害性薬剤は、任意の適した手段で投与してもよい。抗体組成物および細胞傷害性薬剤組成物を投与するための使用説明書もキットとともに提供することができる。
【００４１】
さらなる態様では、本発明は、Ｂ細胞リンパ球癌、自己免疫疾患およびＢ細胞過剰増殖性疾患の治療のための医薬の製造における、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体の使用を含む。
【００４２】
本発明のさらなる目的、利点および新規特徴は、幾分かは以下の説明中で示し、幾分かは以下の試験から当業者には明らかとなり、または本発明の実施によって分かる場合もある。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】ＶＨ４−３４によってコードされる抗体が原発性Ｂ細胞リンパ腫および白血病と結合することを示す図である。
【００４４】
【図２】ＶＨ４−３４によってコードされるモノクローナル抗体がヒトＢ細胞株と結合し、死滅させることを示す図である。
【００４５】
【図３】ｍＡｂ２１６の濾胞性リンパ腫細胞に対する細胞傷害性の可変性を示す図である。
【００４６】
【図４】ｍＡｂ２１６およびビンクリスチンによるＢ細胞の死滅が相乗的であることを示す図である。
【００４７】
【図５Ａ】ｍＡｂ２１６で処理したＢ細胞の表面でのＬａｍｐ−１の出現の経時変化を、細胞生存率の喪失の経時変化と比較して示す図である。
【００４８】
【図５Ｂ】損傷を受けた細胞からのＡＴＰの放出の経時変化を、生細胞数と比較して示す図である。
【００４９】
【図６Ａ】２種の、カルシウムを含むか含まない培地中のＶＨ４−３４抗体で処理した細胞の生存率を示す図である。
【００５０】
【図６Ｂ】細胞傷害性薬剤で処理した細胞の生存率を示す図である。
【００５１】
【図７】２つの異なる細胞濃度での、Ｃ２Ｂ８、ｍＡｂ２１６および２種の抗体の組合せによる細胞を死滅させる効力を示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５２】
１．定義および概要
本発明を詳細に説明する前に、特に断りのない限り、本発明は特定のバッファー、賦形剤、化学療法薬などに限定されず、そのようなものとして変わり得るということは理解されなくてはならない。本明細書に用いた技術用語は特定の実施形態を説明する目的だけのものであって、本発明の範囲を制限しようとするものではないということも理解されなくてはならない。
【００５３】
本明細書および特許請求の範囲において用いられるような、単数形「一」、「および」および「その」は、文脈上明確に別に指示しない限りは、複数形の指示対象を含むことができるということに留意しなければならない。したがって、例えば、「化学療法薬」とは２種以上の化学療法薬を含み、「製薬上の賦形剤」とは２種以上の製薬上の賦形剤を含むことがあるなどである。
【００５４】
値の範囲が与えられる場合には、各中間の値、文脈上明確に別に指示しない限りは下限の単位の１／１０、その範囲の上限と下限の間、および記載した範囲内の任意の他に記載した値または中間の値が本発明の範囲内に包含されると理解される。これらのより小さな範囲の上限および下限が独立に、より小さな範囲内に含まれることもあり、これらもまた本発明の範囲内に包含され、記載した範囲内の何らかの具体的に排除される限界になることがある。記載した範囲が限界の一方または双方を含む場合には、これらの含まれる限界のいずれかまたは双方ともが本発明に含まれる。
【００５５】
本明細書において、用語「抗ＣＤＩＭ抗体」および「ＣＤＩＭ結合抗体」とは、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を指す。これらの用語は、本明細書において同義的に用いられる。
【００５６】
本明細書において、「成長を抑止する」薬剤または「成長阻害性薬剤」とは、細胞、特に、必要に応じてＢ細胞抗原、例えばＣＤ２０抗原を発現する腫瘍性細胞種の成長または増殖を阻害する化合物または組成物を指す。したがって、成長阻害性薬剤とは、例えば、Ｓ期にある腫瘍性細胞のパーセンテージを有意に減少させるものである。
【００５７】
用語「癌」および「癌性」とは、通常、制御されていない細胞増殖を特徴とする、哺乳類における、生理学的条件を指すか説明する。
【００５８】
「ＣＤ２０」抗原とは、末梢血またはリンパ器官由来のＢ細胞の９０％より多くの表面に見られる、３５ｋＤａの非グリコシル化リンタンパク質である。ＣＤ２０はプレＢ細胞発達の初期に発現され、血漿細胞分化まで残る。ＣＤ２０は正常Ｂ細胞ならびに悪性Ｂ細胞の双方に存在する。文献中の、ＣＤ２０の他の名前としては、「Ｂリンパ球限定抗原」および「Ｂｐ３５」が挙げられる。ＣＤ２０抗原は、例えば、Clarkら、PNAS(USA) 82、1766(1985)に記載されている。
【００５９】
用語「細胞損傷」とは、通常な膜不透過性トレーサーのサイトゾル中への取り込みを特徴とする生存可能な原形質膜破壊事象を指す。細胞損傷破壊は、通常、約１〜１０００μｍ２の間の範囲であり、したがって、補体介在性細胞傷害性もしくはパーフォリンに伴って起こる膜破壊または毒素もしくは孔形成剤、例えばグラミシジンもしくは黄色ブドウ球菌アルファトキシンによって形成されるより大きな孔よりもはるかに大きい。細胞損傷は、傷の結果として起こる細胞修復機構、すなわち、傷を修復するためのリソソーム融合の結果としての細胞表面でのＬａｍｐ−１の発現によって検出される。
【００６０】
用語「化学療法薬」とは、癌またはその他の細胞の過剰増殖を特徴とする状態の治療に有用な化学物質を指す。
【００６１】
本明細書において、用語「細胞傷害性薬剤」および「細胞毒素」とは、増殖を阻害または抑止する、細胞の機能を阻害または抑止する、および／または細胞死を引き起こす物質である。この用語は１種以上の放射性同位元素、化学療法薬、免疫抑制剤、細胞増殖制御因子および／または阻害剤を含むものとし、これらは小分子治療薬、細胞傷害性抗体および毒素、例えば細菌、真菌、植物または動物起源の酵素的に活性な毒素、またはその断片であり得る。この用語にはまた、標的細胞との特異的結合のための、毒素または放射性同位元素で標識された抗体を含む免疫複合体、ならびに他のリガンド複合体、例えば放射標識リガンド、および毒素標識リガンドも含まれる。さらに、１種以上の細胞傷害性薬剤を併用することができる。
【００６２】
「疾患」とは、本明細書に記載した併用療法での治療から恩恵を受ける任意の状態である。これには、哺乳類を問題の疾患にさせる病態をはじめとする、慢性および急性疾患または疾病が含まれる。本明細書において治療されようとする疾患の例としては、限定はされないが、癌、血液悪性腫瘍、白血病およびリンパ性悪性疾患ならびに炎症性疾患および免疫不全などの自己免疫疾患を挙げることができる。
【００６３】
用語「過剰増殖」および「過剰増殖する」とは、癌性または良性であり得る細胞種の異常な増殖を指す。過剰増殖としては、自己免疫疾患を媒介する、Ｂ細胞分泌性自己抗体のポリクローナル増殖を挙げることができる。
【００６４】
用語「免疫複合体」とは、細胞傷害性薬剤に結合された抗体を指し、これは共有結合による場合も非共有結合による場合もある。
【００６５】
用語「静脈内注入」とは、一定時間をかけての、一般に、約１５分より長い、より一般的には、約３０〜９０分の間の、動物またはヒト患者の静脈への薬剤の導入を指す。
【００６６】
用語「静脈内ボーラス」または「静注」とは、身体が約１５分以下、通常５分以下で薬物を受けるような動物またはヒトの静脈への薬物投与を指す。
【００６７】
治療目的の用語「哺乳類」とは、ヒト、家畜および動物園の動物、競技用動物または愛玩動物をはじめ、誕生後、ＣＤＩＭ抗原発現が主にＢ細胞系列の細胞に限定されている任意の哺乳類種を指す。
【００６８】
「リツキサン（登録商標）ブランド」抗ＣＤ２０抗体と呼ばれる、ヒト化抗ＣＤ２０抗体とは、通常、ＣＤ２０抗原に対する操作されたキメラネズミ／ヒトモノクローナル抗体である。リツキシマブは、１９９８年４月７日に発行された米国特許第５，７３６，１３７号において「Ｃ２Ｂ８」と呼ばれる抗体である。Ｃ２Ｂ８抗体のリツキサン（登録商標）ブランドは、再発性または難治性の低悪性度または濾胞性の、ＣＤ２０陽性、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫を患う患者の治療に適応される。
【００６９】
用語特異的結合とは、少なくとも１０６Ｍ−１、通常、約１０６Ｍ−１〜約１０８Ｍ−１の間の高い結合親和性を有する能力を指す。
【００７０】
用語「皮下投与」とは、薬物容器からの比較的緩徐な持続性の送達による、動物またはヒト患者の皮膚の下への、好ましくは、皮膚と下層組織の間のポケット内への薬剤の導入を指す。このポケットは、皮膚をつまみ上げるか引き上げるかして下層組織から離すことによって作成することができる。
【００７１】
用語「皮下ボーラス」とは、動物またはヒト患者の皮膚の真下への薬物投与を指し、ボーラス薬物送達は、約１５分未満であることが好ましく、５分未満であることがより好ましく、６０秒未満であることが最も好ましい。投与は、皮膚と下層組織の間のポケット内であることが好ましい。
【００７２】
用語「皮下注入」とは、一定期間、例えば、限定はされないが、３００分以下、または９０分以下の間の、薬物容器からの比較的緩徐な持続性の送達による、動物またはヒト患者の皮膚の下への、好ましくは、皮膚と下層組織の間のポケット内への薬物の導入を指す。状況に応じて、注入を、動物またはヒト患者の皮膚の下に埋め込まれる薬物送達ポンプの皮下埋め込みによって行うことができ、このポンプは所定量の薬物を、所定の期間、例えば、３０分、９０分の間または治療計画の長さに及ぶ期間送達する。
【００７３】
用語「治療上有効量」とは、増殖抑止作用を有するか、細胞死を引き起こす活性薬剤の一定量を指すように用いる。特定の実施形態では、治療上有効量は、細胞を透過性にし、増殖性シグナル伝達を阻害し、細胞の代謝を阻害し、アポトーシス活性を促進し、または細胞死を誘導する能力を有する。特定の態様では、治療上有効量とは、例えば、疾病進行を減速させるのに有効であるとわかっている標的血清濃度を指す。効力は、治療されようとする状態に応じて、従来法で測定することができる。例えば、リンパ球癌では、効力は疾病進行までの時間（ＴＴＰ）を評価することによって、または反応率（ＲＲ）を求めることによって測定することができる。
【００７４】
本発明の範囲内において用いられる、用語「治療する」、「治療」および「療法」などは、限定はされないが、疾病または疾患の、１種以上の症状の軽減、退行、進行の減速または停止をはじめとする、何らかの臨床上望ましい、または有益な作用をもたらす、疾病または疾患に対する、治療的ならびに予防的、または抑制的手段を含むものとする。したがって、例えば、用語治療は、疾病または疾患の症状の発生に先立って、またはその後に薬剤を投与し、それによって疾病または疾患のすべての徴候を防ぐか、除去することを含む。もう１つの例として、この用語は、疾病の臨床症状後に、疾病の症状と闘うために薬剤を投与することを含む。さらに、治療が疾病の寛解をもたらすかどうかに関わらず、投与が疾病または疾患の臨床パラメーター、例えば、組織傷害度または転移の量もしくは程度に影響を及ぼす、発症後および臨床症状の発現後の薬剤の投与は、本発明の中の「治療」または「療法」を含む。
【００７５】
ＶＨ４−３４遺伝子（重鎖可変領域）は５３種の同定されたヒト機能性抗体生殖系列遺伝子のうちの１種である１。ＶＨ４−３４遺伝子は、すべてのハプロタイプに存在し、無関係な個体から単離された生殖系列ＤＮＡで配列変異は全く報告されていない２３。ＶＨ４−３４遺伝子によってコードされる抗体は、特異的性質を有するとわかっている。赤血球（ＲＢＣ）の「Ｉ」または「ｉ」抗原に対するすべてのｍＡｂはＶＨ４−３４遺伝子によってコードされており４  ５  ６、通常、ＩｇＭクラスのものであり、４℃でＲＢＣを凝集させるために、古典的には寒冷凝集素（ＣＡ）として記載されている。ＣＡによって認識されるリガンドは、ＲＢＣのタンパク質および／または脂質上に存在する直鎖または分枝複合糖質である。新生児および臍帯血ＲＢＣには直鎖ｉ抗原が含まれている。分枝Ｉ鎖は誕生後に生じる７  ８。ヒトＢ細胞で認識される「ｉ」抗原は、酵素エンド−β−ガラクトシダーゼに対して感受性である、直鎖ラクトサミン決定基である。独立に導いたＶＨ４−３４と抗Ｂ細胞／抗−ｉｍＡｂの配列解析によって、それらは生殖系列配置にあるが、Ｄ、Ｊ、Ｈおよび軽鎖を独立に発現することがわかっている２０。
【００７６】
インビボでは、ＶＨ４−３４遺伝子由来抗体の発現は厳密に調節されている。４〜８％のヒトＢ細胞がＶＨ４−３４によってコードされる抗体を発現するが、ＶＨ４−３４由来抗体の血清レベルは、正常な成人では、無視できるほどである９  １０。循環ＶＨ４−３４由来抗体の増加は、ＥＢＶ（単核球症）およびＨＩＶ感染および特定の自己免疫疾患をはじめとする選択的病態でのみ見られる１１  １２  １３  １４  １５  １６。
【００７７】
本発明者は、ＶＨ４−３４によってコードされる抗体および自己免疫疾患におけるその役割を広く研究してきた。これまでの研究により、特定の抗Ｂ細胞ＶＨ４−３４抗体はＢ細胞に対して細胞傷害性であり、Ｂ細胞増殖の減少をもたらすことを実証したBhat, N.ら(1997) Clin. Exp. Immunol. 108、151、Bhat, N. ら(2001) Crit. Rev. Oncol. Hematol. 39、59。細胞傷害性は補体とは無関係であり、高度に温度依存性であり、４℃で処理すると、より多くの細胞死および原形質膜欠損、例えば細胞表面上のブレブおよび孔の形成をもたらすことがわかった。原形質膜欠損は、他のよく知られている孔形成タンパク質、例えばＣ９補体成分（約１００Å）およびパーフォリン（約１６０Å）によって形成される孔よりもかなり大きいものであるとわかった。このことは細胞傷害性が新規機構によって媒介されるものであり得るということを示唆した。
【００７８】
本発明者らは、これらのＶＨ４−３４遺伝子由来抗体がＢ細胞において細胞膜損傷を誘導し得るという驚くべき、予期しない発見をした。膜損傷は有核哺乳類細胞が直面する共通の脅威であるが、抗体が膜損傷の直接原因であり得るという事実は新規なものである。本発明者らはさらに、抗体が、特定の条件下で、細胞において孔および膜欠損を引き起こすものの、致死下濃度で処理すれば、Ｂ細胞のいくらかは単に損傷を受けるだけで、損傷を修復できる場合もあるということを発見した。
【００７９】
本発明者らはさらに、抗体が誘導した細胞膜損傷は、いかなる他の膜損傷とも同様の方法で修復されることを実証した。細胞傷害性抗体とは無関係なこれらの補体で処理された細胞は、抗体が誘導した細胞膜損傷を、膜損傷を繕うために原形質膜とのリソソーム融合を利用して修復しようとし、その結果、細胞表面にリソソーム膜タンパク質が現れる。細胞がダメージを修復できない場合は、最終的には死滅という結果となることも実証した。
【００８０】
さらに、本発明者らは、損傷を受けた細胞は、少なくとも一時的に透過性であり、さらなる細胞傷害性薬剤の作用に対してより感受性となり、このことがヒトおよび動物の疾病および疾患の治療について効力が増した新規治療選択肢を提供することを発見した。細胞膜損傷はＢ細胞の透過をもたらし、化学療法薬などの細胞傷害性薬剤が入るのを可能にし、その結果、このような薬剤に対して耐性であるか、不透過性である細胞においてでさえ、またはそれらを細胞から外へ活発に運ぶ細胞において、化学療法薬の効力が高まる。
【００８１】
ＣＤＩＭ結合抗体によって提供される細胞死および損傷の機構は、従来の細胞傷害性抗体によって利用される細胞傷害性機構(補体または細胞媒介性死滅）とは異なっているため、ＣＤＩＭ結合抗体と従来の免疫療法を組合せることによって、特に、補体枯渇または欠乏などの免疫不全という条件下で、さらなるＢ細胞抗原と結合する細胞傷害性抗体による死滅率を高めることができる。
【００８２】
好ましい実施形態では、図１および２に示すように、本発明の一態様に従う抗体は、ヒトＢ細胞上のＣＤＩＭエピトープと結合する、ＶＨ４−３４によってコードされるモノクローナル抗体である１７  １８  １９。図３に示すように、これらの抗体は、再発性濾胞性リンパ腫患者から得たＢ細胞に対して細胞傷害性である。さらに、図４に示されるように、これらの抗体はＢ細胞株に対して細胞傷害性である。好ましい実施形態では、これらのｍＡｂは、ヒトリンパ球と、ヒト抗体を分泌するハイブリドーマを製造するヘテロミエローマ細胞株との融合によって作製する。例えば、ｍＡｂ２１６はＶＨ４−３４遺伝子によってコードされるヒトＩｇＭであり、本明細書に記載されるＣＤＩＭ結合ＶＨ４−３４抗体の好ましい一実施形態である。ＭＡｂ２１６は、さらにＢｈａｔらの米国特許第５，５９３，６７６号および同５，４１７，９７２号およびＥＰ７１２３０７Ｂ１に記載されている。
【００８３】
ＣＤＩＭエピトープと結合するさらなるＶＨ４−３４由来抗体として、ＲＴ−２Ｂ、ＦＳ１２、Ａ６（Ｈ４Ｃ５）、Ｃａｌ−４Ｇ、Ｓ２０Ａ２、ＦＳ３、Ｇｅｅ、ＨＴ、Ｚ２Ｄ２、Ｙ２Ｋを挙げることができる。これらの抗体のうち特定のものは、塩基性アミノ酸残基が豊富なＣＤＲ３配列を特徴とし、ＣＤＲ３の正味電荷が＋２である場合に特に強い結合を特徴とする。したがって、正味の正のＣＤＲ、特にＣＤＲ３を有し、ＣＤＩＭエピトープとの結合を示す抗体はいずれも、添付の特許請求の範囲において特許請求されるように、本発明の範囲内に包含される。
【００８４】
本発明者らは、これらの抗ＣＤＩＭ抗体のＢ細胞傷害性は、細胞傷害性薬剤、例えば、化学療法薬、放射性同位元素、細胞傷害性抗体、免疫複合体、リガンド複合体、免疫抑制剤、細胞増殖制御因子および／または阻害剤、毒素、あるいはそれらの混合物の添加によって、著しく、また相乗的にさえ増強され得るという驚くべき発見をした。
【００８５】
したがって、一実施形態では、Ｂ細胞を、（１）細胞傷害量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体と、（２）細胞傷害性薬剤とに接触させることを含む前記Ｂ細胞の過剰増殖を特徴とする状態の疾患の哺乳類を治療する方法を提供する。Ｂ細胞の過剰増殖は、癌、ウイルス性疾患、免疫不全または自己免疫疾患を患っている患者で起こる。
【００８６】
本発明のさらにもう１つの態様では、Ｂ細胞を、Ｂ細胞を透過性にするのに十分な量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体と接触させることを含むＢ細胞の過剰増殖を特徴とする疾病または疾患を治療する方法を提供する。この方法は、さらに、前記Ｂ細胞を細胞傷害性薬剤と接触させることを含む場合もある。
【００８７】
リンパ球癌の治療
Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を使用して、任意のリンパ球癌、特に任意のＢ細胞起源の急性白血病で起きるＢ細胞の過剰増殖を治療することができる。リンパ球癌としては、急性白血、例えば急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、Ｂ前駆細胞型ＡＬＬ、成人ＡＬＬ、ならびに慢性白血病およびリンパ腫を挙げることができる。リンパ腫としては、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、および高悪性度のもの、低悪性度のもの、およびマントル細胞型のものを挙げることができる。リンパ球癌としては、末梢ならびに中枢神経系リンパ腫、濾胞性リンパ腫、  粘膜リンパ腫を挙げることができるが、限定はされない。リンパ球癌の特定の例としては、限定はされないが、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、バーキットリンパ腫、Ｂ前駆細胞型ＡＬＬ、成人ＡＬＬ、または慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）などを挙げることができる。
【００８８】
実施例１１に、ＡＬＬを治療するための代表的な治療プロトコールを示す。ＡＬＬまたはその他のＢ細胞起源のリンパ球癌の治療のために、抗ＣＤＩＭ抗体と組合せた、さらなる化学療法治療計画を利用でき、これらのさらなる化学療法治療計画も特に限定されずに、本発明の範囲内に含まれる。
【００８９】
ウイルス性疾患によるＢ細胞過剰増殖の治療
Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を用いて、特定のウイルス感染、例えばヒト免疫不全ウイルスまたは単核球症で起こるＢ細胞過剰増殖を治療することができる。
【００９０】
免疫不全によるＢ細胞過剰増殖の治療
Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を用いて、癌治療または自己免疫疾患を治療するための免疫抑制療法の結果として起こる特定の免疫不全症で起こるＢ細胞過剰増殖を治療することができる。例えば、Ｂ細胞過剰増殖は、抗癌療法またはその他の免疫抑制療法を受けている患者における、移植後リンパ球増殖性疾患および免疫不全症候群で起こる。
【００９１】
Ｂ細胞によって媒介される自己免疫疾患の治療
Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を単独または細胞傷害性薬剤と組合せてのいずれかで用いて、自己免疫疾患を治療することができる。細胞傷害性薬剤は、免疫抑制剤、例えばグルココルチコイド、カルシニュリン阻害剤、抗増殖性／代謝拮抗性薬剤、または生物剤、例えば免疫抑制効果を提供する抗体、あるいはそれらの混合物であり得る。免疫抑制剤との組合せは、Ｂ細胞によって媒介される自己免疫疾患の治療において、または癌を治療するために場合によっては有用である。特定の実施形態では、カルシニュリン阻害剤は、シクロスポリンまたはタクロリムスである。その他の実施形態では、抗増殖性／代謝拮抗性薬剤は、アザチオプリン、クロラムブコル、シクロホスファミド、レフルノミド、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキサート、ラパマイシン、サリドマイド、またはそれらの混合物である。グルココルチコイドとしては、例えば、プレドニゾロン、プレドニゾンまたはデキサメタゾンを挙げることができる。
【００９２】
特定の実施形態では、免疫抑制剤は、細胞増殖制御因子および／または阻害剤であり、これとしては、小分子治療薬、遺伝子治療薬または遺伝子発現修飾因子を挙げることができる。小分子治療薬としては、例えば、キナーゼ阻害剤およびプロテアソーム阻害剤を挙げることができる。好ましい実施形態では、キナーゼ阻害剤はｂｃｒ／ａｂｌチロシンキナーゼ阻害剤、例えばグリーベックである。もう１つの好ましい実施形態では、プロテアソーム阻害剤はボロン酸エステル、例えばベルケードである。
【００９３】
特定の実施形態では、細胞傷害性薬剤は毒素であり、限定はされないが、シュードモナス外毒素Ａ、リシン、ジフテリア毒素、モモルジン、ブタクサ抗ウイルスタンパク質、ブドウ球菌内毒素Ａ、ゲロニン、メイタンシノイド、又はダウナルビシン(daunarubicin)などを挙げることができる。毒素は、細胞特異的ターゲッティングのために抗体またはリガンドに結合されていることが好ましい。
【００９４】
代表的な自己免疫疾患としては、全身性エリテマトーデス、リウマチ関節炎、自己免疫リンパ球増殖性疾患、多発性硬化症、乾癬および重症筋無力症を挙げることができるが、橋本甲状腺炎、ループス腎炎、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、アルツハイマー病、シドナム舞踏病、ループス腎炎、リウマチ熱、多内分泌線症候群、水疱性類天疱瘡、真性糖尿病、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、溶連菌感染後腎炎、結節性紅斑、高安動脈炎、アジソン病、クローン病、サルコイドーシス、潰瘍性大腸炎、多形性紅斑、ＩｇＡ腎症、結節性多発性動脈炎、強直性脊椎炎、グッドパスチャー症候群、閉塞性血栓性血管炎、原発性胆汁性肝硬変、甲状腺中毒症、強皮症、慢性活動性肝炎、多発性筋炎／皮膚筋炎、多発性軟骨炎、尋常性天疱瘡、ウェジナー肉芽腫症、膜性腎症、筋萎縮性側索硬化症、脊髄癆、巨細胞性動脈炎／多発性筋痛、悪性貧血、急速進行性糸球体腎炎、繊維化肺胞炎、急性特発性血小板減少性紫斑病および慢性特発性血小板減少性紫斑病などの免疫介在性血小板減少症などのクラスＩＩＩ自己免疫疾患なども含まれる。
【００９５】
腫瘍量を減少させ、再寛解導入療法を可能にする方法
細胞傷害量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を患者に投与することによって、リンパ球癌を患っている患者において、従来の化学または免疫療法での治療に先立って腫瘍量を減少させる方法を提供する。
【００９６】
さらに、患者が従来の化学療法薬または免疫療法に反応しなくなり、再寛解導入を必要とする場合に、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体、例えばｍＡｂ２１６を投与することによって患者を再寛解導入療法に対して準備させることができる。この処理によって、患者における生存腫瘍細胞数が減少し、患者がその後再寛解導入療法を受けることが可能となる。
【００９７】
インビトロおよびエキソビボでの使用
もう１つの実施形態では、本明細書において本方法は骨髄機能廃絶療法後の患者において、骨髄の再移植の前に悪性Ｂ細胞のリンパ球癌を患っている患者の骨髄をパージする方法を含む。この方法は、患者の骨髄をエキソビボで、細胞傷害量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を用いて治療することを含む。この方法は、さらに、骨髄細胞をエキソビボで細胞傷害性薬剤、例えば化学療法薬または細胞傷害性抗体を用いて治療することを含むこともできる。
【００９８】
抗ＣＤＩＭ抗体に対する感受性についてのインビトロでの患者細胞のプレスクリーニング
一実施形態では、患者の血液サンプルを、好ましくは、ＶＨ４−３４抗体、例えばｍＡｂ２１６によって、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに対する抗体の特異的結合および抗体媒介性細胞傷害性について調べることができる。１００％未満の細胞死滅を示す患者には、患者の治療法を最適化するためにさらなる細胞傷害性薬剤との組合せを調べることができる。
【００９９】
治療方法の利点
従来の免疫療法での治療の前に、その間に、またはその後でさえ、細胞傷害量の、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を投与することによって、化学療法の際に用いられる細胞傷害性薬剤および免疫療法の際に用いられる抗Ｂ細胞抗体の細胞傷害性を増強する方法を提供する。従来の抗Ｂ細胞免疫療法は、腫瘍量が高い状態または免疫不全の状態のもとでは有効性を欠く場合がある。例えば、補体貯蔵量が枯渇している場合には、抗Ｂ細胞免疫療法が有効でなくなる場合がある。Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体と組合せることによって、抗ＣＤＩＭ抗体が異なる毒性機構、例えば、細胞損傷を用いて作用するために、この従来のＢ細胞免疫療法の有効性の欠如に打ち勝つことができる。細胞損傷は、従来の免疫療法による任意の補体媒介性膜漏出を悪化させる。さらなる細胞傷害性薬剤を組合せれば、抗ＣＤＩＭ抗体は、化学療法薬またはその他の細胞傷害性薬剤のＢ細胞サイトゾルに対するサイトゾルアクセスを増加することによって、治療計画の細胞傷害性を大幅に増強することができる。
【０１００】
さらに、多数の癌または自己免疫疾患の患者は、脆弱であり、積極的治療に耐えることができない。抗ＣＤＩＭ抗体の新規作用機序により、特に、化学療法薬と併用する場合に、例えば、治療計画の効力を高めることによって、また損傷が有効であるというよりも患者が低用量の化学療法薬で治療されるのを可能にすることによって、脆弱な患者の治療を可能にすることができる。
【０１０１】
抗体
本発明において有用な抗体としては、抗ＣＤＩＭ抗体およびＢ細胞上の細胞表面分子に特異的な結合を有するさらなる細胞傷害性抗体を挙げることができる。抗ＣＤＩＭ抗体とさらなる細胞傷害性抗体とは、併用療法投薬計画で使用することができる。
【０１０２】
細胞傷害性抗体はＢ細胞上の任意の細胞表面分子に特異的な結合を有し得る。細胞表面分子としては、受容体、免疫グロブリン、サイトカイン、糖タンパク質などを挙げることができる。例えば、細胞傷害性抗体はＣＤ１１ａ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ３４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ５２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−８Ｒ、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３Ｒ、α−４／β−１インテグリン（ＶＬＡ４）、ＢＬＹＳ受容体、細胞表面イディオタイプＩｇ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、またはそれらの混合物に対して特異的結合を示し得るが、限定はされない。例えば、ＣＤ１１ａに特異的な結合を有する細胞傷害性抗体は、例えば、エファリツマブ（ラプティバ）であり得る。ＣＤ２０に特異的な結合を有する細胞傷害性抗体は、リツキシマブ（リツキサン）であり得る。ＣＤ２２に特異的な結合を有する細胞傷害性抗体は、例えば、エピラツズマブであり得る。ＣＤ２５に特異的な結合を有する細胞傷害性抗体は、例えば、ダクリツマブ（ゼナパックス）またはバシリキシマブ（シムレクト）であり得る。ＣＤ５２の抗体としては、例えば、カンパスを挙げることができる。α−４／β−１インテグリン（ＶＬＡ４）の抗体としては、例えば、ナタリズマブを挙げることができる。ＴＮＦの抗体としては、例えば、インフリキシマブ（レミケード）を挙げることができる。
【０１０３】
したがって、好ましい実施形態では、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を、例えば、リツキサン、ゼナパックス、レミケードまたはラプティバとともに、またはそれらの組合せとともに併用免疫療法投薬計画で使用することができる。細胞傷害性抗体はまた、例えば、放射性同位元素または毒素を含む免疫複合体として使用することができる。さらに、さらなる実施形態では、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体と、Ｂ細胞上の細胞表面分子に特異的な結合を有するさらなる細胞傷害性抗体と、１種以上の化学療法薬とを含む併用療法を使用することができる。例えば、ｍＡｂ２１６は、抗ＣＤ２０抗体、例えばリツキシマブ、トスチマブまたはイブリツモマブと組合せて、または抗ＣＤ２２抗体、例えばエプラツズマブと組合せて、または抗ＣＤ５２抗体、例えばカンパスと組合せて使用することができる。併用療法は、併用化学療法および免疫療法投薬計画で、化学療法、例えば細胞の細胞骨格を破壊する薬剤、例えばビンクリスチンをさらに含み得る。
【０１０４】
用語「抗体」は広義で用いられ、具体的には、所望の生物活性を示す限り、無傷の自然抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２種の無傷の抗体から形成される多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、四価抗体などの合成抗体および抗体フラグメントを対象とする。ヒト抗体は、非ヒト種で作製された抗体を含む。用語抗体はまた、抗体の細胞傷害性薬剤または細胞調節剤との融合または化学カップリングも包含する。
【０１０５】
「抗体断片」は、無傷の抗体の一部、好ましくは、無傷の抗体の抗原結合領域または可変領域を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片、ダイアボディー、直鎖抗体(Zapataら、Protein Eng. 8 (10)、1057〜1062頁[1995])、一本鎖抗体分子および抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体を挙げることができる。
【０１０６】
本明細書において、用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均一な抗体の集団、すなわち、微量で存在し得る、天然に存在する突然変異の可能性を除いては同一である集団を含む個体の抗体から得た抗体を指す。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原部位に対するものである。さらに、従来の、通常、種々の決定基（エピトープ）に対する種々の抗体を含む（ポリクローナル)抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は抗原上の単一の決定基に対するものである。その特異性に加えて、モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ培養によって合成され、他の免疫グロブリンが混入していないという点で有利である。修飾語句「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体集団から得られているというような抗体の特徴を示すものであって、任意の特定の方法による抗体製造を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用するモノクローナル抗体は、最初にKohlerら、Nature、256、495 (1975)によって記載されたハイブリドーマ法によって作製してもよいし、組換えＤＮＡ法によって作製してもよい（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号参照）。「モノクローナル抗体」はまたファージ抗体ライブラリーからも、例えば、Clacksonら、Nature、352、624〜628頁(1991)およびMarksら、J. Mol.Biol.、222、581〜597頁(1991)に記載された技術を用いて単離することができる。
【０１０７】
本明細書においてモノクローナル抗体は、具体的には、重鎖および／または軽鎖の一部が、特定の種から得た抗体または特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるか相同であり、鎖の残りの部分が、別の種から得た抗体または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体、ならびに所望の生物活性を示す限りのそのような抗体の断片中の対応する配列と同一であるか相同である、「キメラ」抗体（免疫グロブリン）を含む（米国特許第４，８１６，５６７号、Morrisonら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、81、6851〜6855頁[1984])。
【０１０８】
非ヒト（例えば、ネズミ）抗体の「ヒト化」型は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含む、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはその断片（例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２またはその他の抗体の抗原結合部分配列）である。通常、ヒト化抗体は、受容体の相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来する残基が、所望の特異性、親和性および能力を有する、非ヒト種（供与抗体）、例えばマウス、ラットまたはウサギのＣＤＲに由来する残基で置換されているヒト免疫グロブリン（受容抗体）である。ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、対応する非ヒト残基で置換されている場合もある。さらに、ヒト化抗体に、受容抗体にも、移入されるＣＤＲまたはフレームワーク配列にもない残基を含めることもできる。こういった修飾は、抗体性能をさらに精緻化し、最大にするために行う。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、通常２つの可変ドメインの実質的にすべてを含んでなり、すべてまたは実質的にすべてのＣＤＲは非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、すべてまたは実質的にすべてのＦＲは非ヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体が、通常ヒト免疫グロブリンのものである免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部を含む場合もある。さらに詳細には、Jonesら、(1986) Nature 321、522〜525頁、Reichmannら、(1988) Nature 332、323〜329頁およびPresta、(1992) Curr. Op. Struct. Biol.、2、593〜596頁を参照できる。ヒト化抗体としては、抗体の抗原結合領域が、注目する抗原でマカクザルを免疫することによって得られる抗体に由来する、プリマチゼド（商標）抗体を挙げることができる。
【０１０９】
「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体フラグメントは、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含んでなり、これらのドメインが単一のポリペプチド鎖中に存在する。Ｆｖポリペプチドが、ＶＨとＶＬドメインの間に、ｓＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成できるようにするポリペプチドリンカーをさらに含んでなることが好ましい。ｓｃＦｖの概説については、Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies、第１１３巻、RosenburgおよびMoore編、Springer-Verlag、New York、269〜315頁(1994)頁参照。
【０１１０】
用語「ダイアボディー」とは、２種の抗原結合部位を含む、小さい抗体フラグメントを指し、このフラグメントは、同一ポリペプチド鎖中に軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に結合された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）（ＶＨ−ＶＬ）を含む。同一鎖上の２つのドメインの間の対形成を可能にするには短すぎるリンカーを用いることによって、ドメインは別の鎖の相補ドメインと対形成し２種の抗原結合部位を作製せざるを得なくなる。ダイアボディーは、例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ９３／１１１６１およびHollingerら(1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90、6444〜6448頁に、より十分に記載されている。
【０１１１】
「単離された」抗体とは、その天然の環境の成分から、同定および分離および／または回収されているものである。その天然の環境の夾雑成分とは、抗体の診断的または治療的使用を干渉する物質であり、これとしては、酵素、ホルモンおよびその他のタンパク質性または非タンパク質性溶質を挙げることができる。好ましい実施形態では、抗体は、ローリー法によって測定して、抗体重量の９５％より高くまで、最も好ましくは、９９重量％より高くまで、（２）スピニング・カップ(spinning cup)・シークエネーターの使用によって、Ｎ末端か内部のアミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度に、または（３）クーマシーブルーまたは、好ましくは、銀染色を用いて還元または非還元条件下で、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる均一性まで精製する。単離された抗体は、抗体の天然の環境の少なくとも１種の成分は存在していないので、組換え細胞内の原位置にある抗体を含む。しかし、通常は単離された抗体は、少なくとも１つの精製ステップによって調製する。
【０１１２】
免疫複合体
免疫複合体は、当技術分野で公知の多数の方法によって調整することができる。例えば、不安定である場合も不安定でない場合もあるが、反応性架橋基を提供するための抗体の化学誘導体化によって調製することができる。不安定反応基は、抗体からの細胞傷害性薬剤または増殖制御因子の放出を提供する。不安定でない架橋もまた有用である。所望の薬剤のＩｇ分子との結合は、従来のカップリング技術をはじめ、当技術分野で公知の種々な手段（例えば、脱水剤、例えばジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣＩ）、ＥＣＤＩなどとのカップリング）、スルフヒドリル基、アミノ基またはカルボキシル基を介してカップリングすることができるリンカーの使用（ピアスケミカル社(Pierce Chemical Co.)イリノイ州、ロックフォードから入手可能）によって、還元的アミノ化によって達成することができる。
【０１１３】
一方法では、抗体複合体、または免疫複合体を、まず抗体を架橋試薬、例えばＮ−スクシンイミジルピリジルジチオプロピオネート（ＳＰＤＰ）で修飾してジチオピリジル基を抗体に導入することによって調製することができる(Carlssonら (l978) Biochem. J. 173、723〜737頁、米国特許第５，２０８，０２０号）。第２のステップでは、チオール基を有する細胞毒素を、修飾した抗体に加え、修飾された抗体中のチオピリジル基の置換およびジスルフィド結合した細胞毒素−抗体複合体の生成をもたらす。メイタンシノイド−抗体複合体を調製する手順は、米国特許第５，２０８，０２０号に記載されている。
【０１１４】
抗体と細胞傷害性薬剤の融合タンパク質が望ましい場合もある。融合タンパク質は、分子生物学的手段によって調製することができる（例えば、所望の細胞傷害性薬剤をコードする核酸配列と機能しうる形で連結された、組換えＩｇをコードする核酸配列を含む発現ベクターを用いる融合タンパク質の製造）。
【０１１５】
放射性同位元素
治療上有用な免疫複合体またはリガンド複合体を製造するために用いる同位元素は、通常、治療上有効な路長を有する高エネルギーα、γまたはβ粒子を生じる。このような放射性核種は、それらが近くにある細胞、例えば複合体が結合している新生細胞を死滅させる。標的化送達の利点は、放射活性物質で標識された抗体またはリガンドは、通常、標的化細胞のすぐ近くにない細胞に対しては、ほとんどまたは全く効果がないということである。
【０１１６】
放射性同位元素の細胞傷害性薬剤としての使用に関しては、修飾された抗体またはリガンドを直接標識してもよいし(ヨウ素化などを介して)キレート化剤を用いて標識してもよい。いずれの方法でも、抗体またはリガンドを少なくとも１種の放射性核種で標識する。特に好ましいキレート化剤には、１−イソチオシアマトベンジル(isotiocyamatobenzyl)−３−メチルジオテレントリアミン五酢酸  （「ＭＸ−ＤＴＰＡ」）およびシクロヘキシルジエチレントリアミン五酢酸  （「ＣＨＸ−ＤＴＰＡ」）誘導体が含まれる。その他のキレート化剤には、Ｐ−ＤＯＴＡおよびＥＤＴＡ誘導体が含まれる。直接標識化に特に好ましい放射性核種としては、１１１Ｉｎおよび９０Ｙを挙げることができる。
【０１１７】
放射性同位元素は、抗体またはリガンド上の特定の部位、例えば、抗体のＦｃ部分のみに存在するＮ結合型糖残基に結合させることができる。テクネチウム−９９ｍ標識した抗体またはリガンドは、リガンド交換プロセスによって、またはバッチ標識プロセスによって調製することができる。例えば、抗体は、ペルテクネート(pertechnate)（ＴｃＯ４）を錫イオン溶液で還元し、還元したテクネチウムをセファデックスカラム上にキレートし、抗体をこのカラムに適用することによって標識することができる。バッチ標識技術は、例えばペルテクネートと、ＳｎＣｌ２等の還元剤と、フタル酸ナトリウム−カリウム溶液などのバッファー溶液と、抗体とをインキュベートすることを含む。標識するのに好ましい放射性核種は当技術分野で周知である。標識するための例示的放射性核種としては、チロシン残基を介して共有結合している１３１Ｉがある。本発明に従う放射活性物質で標識された抗体は、放射性ヨウ化ナトリウムまたはカリウムと、化学酸化剤、例えば次亜塩素酸ナトリウム、クロラミンＴなど、または酵素酸化剤、例えばラクトペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼと、グルコースとを用いて調製することができる。
【０１１８】
キレート剤およびキレート剤複合体に関する特許は当技術分野では公知である。例えば、Gansowの米国特許第４，８３１，１７５号は多置換ジエチレントリアミン五酢酸キレートとタンパク質の複合体を対象とし、それとその調製方法を含む。すべてGansowの、米国特許第５，０９９，０６９号、同５，２４６，６９２号、同５，２８６，８５０号、同５，４３４，２８７号および同５，１２４，４７１号もまた多置換ＤＴＰＡキレートに関する。これらの特許は参照によりその全文を本明細書に組込む。適合する金属キレート剤のその他の例としては、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＰＴＡ）、１，４，８，１１−テトラアザテトラデカン、１，４，８，１１テトラアザテトラデカン−１，４，８，１１−五酢酸、１−オキサ−４，７，１２，１５−テトラアザヘプタデカン、４，７，１２，１５−五酢酸などがある。シクロヘキシル−ＤＴＰＡまたはＣＨＸ−ＤＴＰＡが特に好ましい。発見されていないものも含め、さらにその他の適合するキレート剤は当業者ならば容易に認識でき、明確に本発明の範囲内含まれる。さらなるキレート剤としては、特許第６，６８２，７３４号、同６，３９９，０６１号および同５，８４３，４３９号に記載されている特定の二官能性キレート剤が挙げられ、三価の金属に対して高親和性を提供し、腫瘍対非腫瘍比の増加および骨取り込みの減少ならびに標的部位、すなわち、Ｂ細胞リンパ腫腫瘍部位での放射性核種のインビボ保持の増加を示すよう選択されることが好ましい。しかし、こういった特徴のすべてを有する場合も有さない場合もあるが、当技術分野ではその他の二官能性キレート剤が知られており、同様に、腫瘍治療において有益であり得る。
【０１１９】
また、修飾された抗体を、診断目的ならびに治療目的で、放射性標識と結合することができる。腫瘍の「画像」診断のための放射標識治療用複合体はまた、抗体および細胞傷害性薬剤を患者に投与する前に利用することができる。例えば、Ｃ２Ｂ８として知られるヒトＣＤ２０抗原に結合するモノクローナル抗体を、二官能性キレート剤、例えば１−イソチオシアナトベンジル−３−メチル−ＤＴＰＡと１−メチル−３−イソチオシアナトベンジル−ＤＴＰＡの１：１混合物を含む、ＭＸ−ＤＴＰＡ（ジエチレントリアミン五酢酸）を用いて１１１Ｉｎで放射標識することができる。１１１Ｉｎは、検出可能な毒性を伴わずに約１〜約１０ｍＣｉの間で安全に投与でき、画像データがその後の９０Ｙ標識抗体分布の指標となるので、好ましい診断用放射性同位元素である。画像研究には、５ｍＣｉという１１１Ｉｎ標識抗体の通常用量を用い、標識抗体またはリガンドの投与後種々の時間で最適画像処理を決定できるが、通常、投与後３〜６日である。例えば、Murray, J. (1985) Nuc. Med. 26、3328およびCarraguilloら、(1985) J. Nuc. Med. 26、67参照できる。
【０１２０】
種々の放射性同位元素を使用でき、当業者ならば種々の条件下でどの放射性同位元素が最も適当であるかを容易に決定することができる。例えば、標的免疫療法には131Ｉが利用されることが多い。しかし、131Ｉの臨床上の有用性はその短い半減期（８日）、血中および腫瘍または部位双方でのヨウ化抗体の脱ハロゲン化の可能性、要望どおり、腫瘍の大きさに応じて変わる、腫瘍に十分に限局された線量付与を提供しない場合がある、その高エネルギーγ放出によって制限され得る。さらなるキレート化剤の出現で、金属キレート基をタンパク質に結合させ、その他の放射性核種、例えば１１１Ｉｎおよび９０Ｙを利用するさらなる機会が提供される。９０Ｙは放射免疫療法的適用における利用にいくつかの利点を提供する。例えば、９０Ｙの６４時間というより長く有用な半減期は、腫瘍細胞による抗体蓄積を可能にするのに十分な程長く、１３１Ｉとは異なり、９０Ｙは高エネルギーの純粋なβ放射体であり、その減衰において付随するγ放射線がなく、組織において１００〜１０００細胞直径の範囲を有する。さらに、最少量の透過性放射線で９０Ｙ標識抗体の外来投与が可能となる。さらに、標識抗体の内部移行は細胞を死滅させるためには必要ではなく、イオン化放射線が標的抗原を欠く隣接する腫瘍細胞にとって致死的であるはずである。
【０１２１】
９０Ｙ標識抗体の、有効な単回治療被曝量（すなわち、治療上有効量）の範囲は、約５〜約７５ｍＣｉの間であり、より好ましくは、約１０〜約４０ｍＣｉの間である。１３１Ｉ標識抗体の有効な単回治療非骨髄除去被曝量の範囲は約５〜約７０ｍＣｉの間、より好ましくは、約５〜約４０ｍＣｉの間である。１３１Ｉ標識抗体の有効な単回治療除去被曝量（すなわち、自家骨髄移植を必要とし得る）の範囲は、約３０〜約６００ｍＣｉの間、より好ましくは、約５０〜５００ｍＣｉ未満の間である。抗体またはリガンドが外来タンパク質、例えば、マウス抗体よりも長い循環半減期を有する場合には、１３１Ｉ標識抗体の有効な単回治療被骨髄除去被曝量の範囲は、約５〜約４０ｍＣｉの間、より好ましくは、約３０ｍＣｉ未満である。放射性同位元素標識、例えば、１１１Ｉｎ標識の画像処理被曝量は通常、５ｍＣｉ未満である。
【０１２２】
臨床では、１３１Ｉおよび９０Ｙが広く用いられてきたが、当技術分野ではその他の放射性同位元素も知られており、同様の目的で用いられることもあった。画像処理には、さらにその他の放射性同位元素が用いられる。例えば、使用することができるさらなる放射性同位元素としては、限定はされないが、１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、９０Ｙ、１１１Ｉｎ、１０５Ｒｈ、１５３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、１７７Ｌｕならびに１８８Ｒｅおよび１８６Ｒ、３２Ｐ、５７Ｃｏ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、７７Ｇａ、８１Ｒｂ、８１Ｋｒ、８７Ｓｒ、１１３Ｉｎ、１２７Ｃｓ、１２９Ｃｓ、１３２Ｉ、１９７Ｈｇ、２１３Ｐｂ、２１６Ｂｉ、１１７Ｌｕ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉ、４７Ｓｃ、１０５Ｒｈ、１０９Ｐｄ、１９９Ａｕ、２２５Ａｃ、２１１Ａｔおよび２１３Ｂｉを挙げることができる。この点において、α、γおよびβ放出はすべて本発明の態様として考えられる。さらに、当業者ならば、どの放射性核種が、実験下にない選択した治療過程に適合するかは容易に決定できると思われる。この目的のために、臨床診断においてすでに使用されているさらなる放射性核種として、１２５Ｉ、１２３Ｉ、９９Ｔｃ、４３Ｋ、５２Ｆｅ、６７Ｇａ、６８Ｇａならびに１１１Ｉｎを挙げることができる。抗体はまた、例えば、Peiterszら (1987) Immunol. Cell Biol. 65、111〜125頁に記載されるように、標的免疫療法において使用する可能性のために種々の放射性核種で標識されている。これらの放射性同位元素としては、18８Ｒｅおよび１８６Ｒｅならびに９９Ａｕおよび６７Ｃｕを挙げることができる。米国特許第５，４６０，７８５号はこのような放射性同位元素に関する情報を提供しており、参照により本明細書に組み入れられる。
【０１２３】
化学療法薬：
本発明の製剤および方法に使用することができる化学療法薬としては、タキサン、コルヒチン、ビンカアルカロイド、エピポドフィロトキシン、カンプトテシン、抗生物質、プラチナ錯体、アルキル化剤、葉酸アナログ、ピリミジンアナログ、プリンアナログまたはトポイソメラーゼ阻害剤を挙げることができる。好ましいトポイソメラーゼ阻害剤としては、エピポドフィロトキシンがある。好ましいピリミジンアナログとしては、カペシタビン、５−フルオルウラシル、５−フルオロデオキシウリジン、５−フルオロデオキシウリジン一リン酸、シトシンアラビノシド、５−アザシチジンまたは２’，２’−ジフルオロデオキシシチジンを挙げることができる。好ましいプリンアナログとしては、メルカプトプリン、アザチオプレン、チオグアニン、ペントスタチン、エリスロヒドロキシノニルアデニン、クラドリビン、ビダラビンおよびリン酸フルダラビンを挙げることができる。葉酸アナログとしては、メトトレキサート、ラルチトレキセド、ロメトレキソール、ペルメフレキセド、エダトレキサートおよびペメトレキセドを挙げることができる。好ましいエピポドフィロトキシンとしては、エトポシドまたはテニポシドがある。好ましいカンプトセシンとしては、イリノトカン、トポテカンまたはカンプトテカンがある。抗生物質はダクチノマイシン、ダウノルビシン（ダウノマイシン、ダウノキソム(daunoxome))、ドキソルビシン、イダルビシン、エピルビシン、バルルビシン、ミトキサントロン、ブレオマイシンまたはマイトマイシンであることが好ましい。好ましいプラチナ錯体としては、シスプラチン、カルボプラチンまたはオキサリプラチンがある。アルキル化剤はメクロレタミン、シクロホスファミド、イフォスファミド、メルファラン、ダカルバジン、テモゾロマイド、チオテパ、ヘキサメチルメラミン、ストレプトゾシン、カルムスチン、ブスルファン、アルトレタミンまたはクロラムブシルであることが好ましい。
【０１２４】
化学療法薬のさらなる例として、チオテパおよびシクロホスファミド（シトキサン（商標））などのアルキル化剤、
【０１２５】
ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファンなどのスルホン酸アルキル、
【０１２６】
アジリジン、例えばベンゾドパ(benzodopa)、カルボコン、メツレドパ(meturedopa)およびウレドパ(uredopa)、
【０１２７】
アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミドおよびトリメチロロメラミンをはじめとする、エチレンイミンおよびメチラメラミン、
【０１２８】
アセトゲニン（特に、ブラタシンおよびブラタシノン）、
【０１２９】
カンプトテシン（合成アナログトポテカンを含む）、
【０１３０】
ブリオスタチン、カリスタチン、ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシン合成アナログを含む）、
【０１３１】
クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）、
【０１３２】
ドラスタチン、デュオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ−２１８９およびＣＢＩ−ＴＭＩを含む）、
【０１３３】
エレウテロビン(eleutherobin)、パンクラチスタチン、サルコジクチイン(sarcodictyin)、スポンジスタチン、
【０１３４】
ナイトロジェンマスタード、例えばクロラムブシル、クロルナファジン(chlornaphazine)、クロロホスファミド、エストラムスチン、イフォスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベムビチン(novembichin)、フェネステリン(phenesterine)、プレドニムスチン(prednimustine)、トロフォスファミド、ウラシルマスタード、
【０１３５】
ニトロスウレア(nitrosureas)、例えばカルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン、
【０１３６】
抗生物質、例えばエンジイン抗生物質(例えば、カリケアマイシン、特に、カリケアマイシンγ１ＩおよびカリケアマイシンｐｈｉＩ１、例えば、Agnew (1994) Chem. Intl. Ed. Engl.、33、183〜186頁参照、ダインマイシン(dynemicin)Ａをはじめとするダインマイシン、ビスホスホネート、例えばクロドネート、エスペラマイシン、ならびにネオカルチノスタチン発色団および関連色素タンパク質エネジイン抗生物質クロモモフォア(chromomophores)、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン(authramycin)、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン(cactinomycin)、カラビシン(carabicin)、カルミノマイシン、カルチノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン（商標））（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ-ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）））、エピルビシン、エソルビシン(esorubicin)、イダルビシン、マルセロマイシン(marcellomycin)、マイトマイシン、例えばマイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポロフィロマイシン(potfiromycin)、ピューロマイシン、ケラマイシン(quelamycin)、ロボルビシン(rodorubicin)、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン(tubercidin)、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン、
【０１３７】
代謝拮抗剤、例えばメトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、
【０１３８】
葉酸アナログ、例えばデノプテリン(denopterin)、メトトレキサート、プテロプテリン(pteropterin)、トリメトレキサート、
【０１３９】
葉酸補充薬、例えばフォリン酸、
【０１４０】
プリンアナログ、例えばフルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、
【０１４１】
ピリミジンアナログ、例えばアンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、
【０１４２】
アンドロゲン、例えばカルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン、
【０１４３】
アンチアドレナル、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン、
【０１４４】
アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、エニルウラシル、アムサクリン、ベストラブシル、ビサントレン、エダトラキサート(edatraxate)、デフォファミン(defofamine)、デメコルシン、ジアジクオン(diaziquone)、エルホルニチン(elfornithine)、酢酸エリプチニウム(elliptinium acetate)、エポチロン、エトグルシド、硝酸ガリウム、ヒドロキシウレア、レンチナン、ロニダミン、メイタンシノイド、例えばマイタンシンおよびアンサマイトシン、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダモール、ニトラクリン、ペントスタチン、フェナメット(phenamet)、ピラルビシン、ロソキサントロン、ポドフィリン酸、２−エチルヒドラジド、プロカルバジン、ＰＳＫ（登録商標）、ラゾキサン、リゾキシン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム、テヌアゾン酸、トリアジクオン、２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン、トリコセテン（特に、Ｔ−２毒素、ベラクリン(verracurin)Ａ、ロリジンＡおよびアンギジン(anguidine)、ウレタン、ビンデシン、ダカルバジン、マンノムスチン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ピポブロマン、ガシトシン(gacytosine)、シトシン、アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）、
【０１４５】
シクロホスファミド、チオテパ、タキソイド、例えばパクリタキセル（タキソール（登録商標）、ブリストル・マイヤーズ・スクイブ・オンコロジー(Bristol-Myers Squibb Oncology)、ニュージャージー州、プリンストン）およびドセタキセル（タキソテール（登録商標）、ローヌ・プーラン・ローラー(Rhone-Poulenc Rorer)、フランス、アントニー）、クロラムブシル、ゲムシタビン（ゲムザー(Gemzar)（商標））、６−チオグアニン、メルカプトプリン、メトトレキサート、
【０１４６】
白金アナログ、例えばシスプラチンおよびカルボプラチン、
【０１４７】
ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン（ナベルビン（商標））、
【０１４８】
エトポシド（ＶＰ−１６）、イフォスファミド、ミトキサントロン、ノバントロン、テニポシド、エダトレキサート、ダウノマイシン、アミノプテリン、ゼローダ、イバンドロネート、ＣＰＴ−１１、
【０１４９】
トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００、ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）、
【０１５０】
レチノイド、例えばレチノイン酸、カペシタビン、ならびに前述の任意の製薬上許容される塩、酸、または前記の任意の誘導体を挙げることができる。
【０１５１】
さらなる好ましい化学療法薬としては、併用療法に用いられるもの、例えば、ＣＨＯＰその他を挙げることができる。特定の実施形態では、このような併用療法は抗ＣＤＩＭ結合抗体とともに、またはさらなる細胞傷害性抗体、特に、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ５２および抗ＣＤ２０抗体と組合せて使用することができる。
【０１５２】
特に好ましいものとして、Ｂ細胞をその細胞周期で抑止する薬剤、例えば微小管の重合または脱重合を妨げる薬剤がある。例示的薬剤としては、コルヒチン、ビンカアルカロイド、例えばビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、またはビノレルビンおよびタキサン、例えばタキソール、パクリタキセルおよびドセタキセルを挙げることができる。さらに好ましい薬剤としては、抗アクチン剤がある。好ましい実施形態では、抗アクチン剤は、ジャスプラキノリドまたはサイトカラシンであり、これらはエキソビボ法、例えば、悪性細胞の骨髄をパージする方法で使用できることがより好ましい。前述の薬剤の任意の混合物、例えば、米国特許出願第２００４／０１３６９５１号で論じられているような、ＣＨＯＰ、ＣＡＭＰ、ＤＨＡＰ、ＥＰＩＣなども使用することができる。
【０１５３】
毒素
【０１５４】
毒素は免疫複合体、リガンド複合体として投与でき、または抗体とともに同時投与することができる。毒素としては、限定はされないが、シュードモナス外毒素Ａ、リシン、ジフテリア毒素、モモルジン、ブタクサ抗ウイルスタンパク質、ブドウ球菌内毒素Ａ、ゲロニン、又はメイタンシノイド（例えば、米国特許第６，４４１，１６３号に記載されるような）などを挙げることができる。
【０１５５】
細胞増殖制御因子および／または阻害剤
細胞増殖制御因子および／または阻害剤としては、小分子治療薬、例えば、ホルモンまたは抗ホルモン剤、キナーゼ阻害剤、プロテアソーム阻害剤、遺伝子治療薬または遺伝子発現修飾因子を挙げることができる。
【０１５６】
抗ホルモン剤は、特にホルモンの悪化、特に女性における卵胞ホルモン作用が関与している自己免疫疾患の治療において有用であり得る。抗エストロゲンおよび選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）などの抗ホルモン剤は、腫瘍に対するホルモン作用を調節または阻害するよう作用し、これとしては、例えば、タモキシフェン（ノルバデックス（商標）を含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストンおよびトレミフェン（フェアストン（商標））、副腎におけるエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、酢酸メゲストロール（メガス(Megace)（商標））、エキセメスタン、フォルメスタン、ファドロゾール、ボロゾール（リビソール(Rivisor)（商標））、レトロゾール（フェマラ(Femara)（商標））およびアナストロゾール（アリミデックス（商標））など、および抗アンドロゲン、例えばフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリドおよびゴセレリン、ならびに前述の任意の製薬上許容される塩、酸または誘導体を挙げることができる。男性ホルモンは、自己免疫疾患の治療において特に有用であり得、代表的な男性ホルモンとしては、ジヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）がある。選択的アンドロゲン受容体モジュレーター（ＳＡＲＭ）としては、例えば、Hutchinsonの米国特許第６，６４５，９７４号に記載された化合物、例えば、アンドロスタンおよびアンドロステンカルボキサミドを挙げることができる。
【０１５７】
キナーゼ阻害剤は広く知られており、特に好ましいキナーゼ阻害剤としては、Zimmermannの米国特許第５，５２１，１８４号に記載されるような、ｂｃｒ／ａｂｌチロシンキナーゼ阻害剤、例えばイマチニブ（グリーベック）およびその関連化合物を挙げることができる。さらなるチロシンキナーゼ阻害剤としては、Ｌｙｎキナーゼの転写の活性化に関与するシグナル伝達複合体をブロックする薬剤が挙げられ、例えば、Ｌｙｎキナーゼの活性をブロックするｓｉＲＮＡが含まれる。いっそうさらなるキナーゼ阻害剤としては、非ホジキンリンパ腫にアポトーシスを誘導することがわかっているBen-Bassat, H.ら、(2002) J. Pharmacol. Exp. Ther. 303、163に記載されたＡＧＬ２５９２などの化合物；ＤＮＡ結合とＮＦ−κＢによる遺伝子発現をブロックすることがわかっているMahon, TMおよび O'Neill, LA (1995) J. Biol. Chem. 270、28557によって記載されるハービマイシンＡ；インドリノン化合物、例えばTangの米国特許第６，６８０，３３５号に記載されるもの；ピラゾロピリミジン誘導体、例えばHirstの米国特許第６，６６０，７４４号に記載されるものなどを挙げることができる。プロテアソーム阻害剤としては、Adamsの米国特許第６，０８３，９０３号に記載されたボロン酸エステルを挙げることができる。好ましいプロテアソーム阻害剤としては、ボルテゾミブ（ベルケード）がある。
【０１５８】
遺伝子治療薬および遺伝子発現修飾因子としては、アンチセンス核酸配列、干渉核酸配列などを挙げることができる。遺伝子治療薬および遺伝子発現修飾因子は、免疫複合体としてか、別個に投与される細胞傷害性薬剤としてのいずれかで使用することができる。特に有用な遺伝子治療薬および遺伝子発現修飾因子としては、プロアポトーシス経路に関与するタンパク質をコードするもの、ならびにプロアポトーシス経路の阻害剤をブロックするものまたはそのすべてが制御されていない成長および過剰増殖に寄与することのできる増殖性シグナル伝達をブロックするものを挙げることができる。例えば、遺伝子発現修飾因子としては、ＮＦ−ｋＢ経路を阻害するよう作用し、それによってこの経路が異常に活性化されると存在する異常な増殖を阻害するアンチセンスまたはｓｉＲＮＡを挙げることができる。
【０１５９】
アンチセンスＤＮＡオリゴヌクレオチドは、一般に、標的配列、通常、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）またはｍＲＮＡ前駆体と相補的である配列からなる。ｍＲＮＡは、機能的、またはセンス方向に遺伝情報を含み、アンチセンスオリゴヌクレオチドが結合すると、対象とされるｍＲＮＡが不活化されそのタンパク質への翻訳が妨げられる。このようなアンチセンス分子は、タンパク質が特定のＲＮＡから翻訳されるということを示す生化学的実験に基づいて決定され、ひとたびＲＮＡの配列がわかれば、それと相補的ワトソン−クリック塩基対によって結合するアンチセンス分子を設計することができる。このようなアンチセンス分子は、通常、１０〜３０個の間の塩基対、より好ましくは、１０〜２５個の間、最も好ましくは、１５〜２０個の間を含む。アンチセンスオリゴヌクレオチドはヌクレアーゼ加水分解に対する耐性を向上させるために修飾でき、このようなアナログとしては、ＷＯ９７／０７７８４に記載される、ホスホロチオエート、メチルホスホネート、ホスホロセレノエート、ホスホジエステルおよびｐ-エトキシオリゴヌクレオチドを挙げることができる。
【０１６０】
遺伝子治療薬はまた、リボザイム、ＤＮＡザイム、触媒ＲＮＡ、または低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）でもあり得る。ＲＮＡ干渉には、上記のような相補的塩基対形成によって作用する、短い、通常、約３０塩基対未満のＲＮＡを利用する。ｓｉＲＮＡは直鎖である場合も、環状である場合もある。
【０１６１】
前述のように、リン（Ｌｙｎ）キナーゼの転写の活性化に関与するシグナル伝達複合体をブロックする薬剤および修飾因子は有利である。特定の実施形態では、Ｌｙｎキナーゼの活性をブロックするｓｉＲＮＡ、例えばPtasznik, Aら、(2004) Nat. Med. 10、1187によって報告されたｓｉＲＮＡを、抗ＣＤＩＭ結合抗体とともに、免疫複合体または別個に投与される細胞傷害性薬剤として投与することができる。
【０１６２】
医薬製剤
抗体および細胞傷害性薬剤は、当技術分野で公知の任意の方法および製薬上許容される賦形剤を用いて製剤することができる。通常、抗体は、生理食塩水中で、任意の賦形剤および安定化剤とともに提供する。化学療法薬は製剤方法および賦形剤で大きく変化することがあり、この情報は、例えば、レミントンズ・ファーマシューティカル・サイエンシズ(Remington's Pharmaceutical Sciences)(Arthur Osol編)で入手できる。
【０１６３】
細胞傷害性抗体
本発明において有用である細胞傷害性抗体としては、Ｂ細胞上の任意の細胞表面分子に特異的な結合を有する抗体を挙げることができる。細胞表面分子としては、受容体、免疫グロブリン、サイトカイン、糖タンパク質などを挙げることができる。例えば、細胞傷害性抗体はＣＤ１１ａ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ３４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ５２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−８Ｒ、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３Ｒ、α−４／β−１インテグリン（ＶＬＡ４）、ＢＬＹＳ受容体、細胞表面イディオタイプＩｇ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、またはそれらの混合物に特異的結合を示し得るが、限定はされない。例えば、ＣＤ１１ａに特異的な結合を有する細胞傷害性抗体は、例えば、エファリツマブ（ラプティバ）であり得る。ＣＤ２０に特異的な結合を有する細胞傷害性抗体は、リツキシマブ（リツキサン）であり得る。ＣＤ２２に特異的な結合を有する細胞傷害性抗体は、例えば、エピラツズマブであり得る。ＣＤ２５に特異的な結合を有する細胞傷害性抗体は、例えば、ダクリツマブ（ゼナパックス）またはバシリキシマブ（シムレクト）であり得る。ＣＤ５２の抗体としては、例えば、カンパスを挙げることができる。α−４／β−１インテグリン（ＶＬＡ４）の抗体としては、例えば、ナタリズマブを挙げることができる。ＴＮＦの抗体としては、例えば、インフリキシマブ（レミケード）を挙げることができる。
【０１６４】
細胞傷害性抗体は、ウイルス性疾患および免疫不全が関係している自己免疫疾患、リンパ球癌およびその他のＢ細胞過剰増殖性疾患の治療のための併用免疫療法投薬計画の一部として使用することができる。したがって、好ましい実施形態では、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体を、例えば、エピラツズマブ、リツキサン、ゼナパックス、レミケードまたはラプティバとともに、またはそれらの組合せとともに併用免疫療法投薬計画で使用することができる。
【０１６５】
細胞傷害性抗体はまた、例えば、放射性同位元素または毒素を含む免疫複合体として使用することができる。さらに、さらなる実施形態では、Ｂ細胞上のＣＤＩＭエピトープに特異的な結合を有する抗体と、Ｂ細胞上の細胞表面分子に特異的な結合を有するさらなる細胞傷害性抗体と、１種以上の化学療法薬とを含む併用療法を使用することができる。例えば、ｍＡｂ２１６は、抗ＣＤ２０抗体、例えばリツキシマブ、トスチマブまたはイブリツモマブと組合せて、または抗ＣＤ２２、例えばエプラツズマブと組合せて、または抗ＣＤ５２抗体、例えばカンパスと組合せて、などと併用することができる。併用療法は、併用化学療法および免疫療法投薬計画で、化学療法、例えば細胞の細胞骨格を破壊する薬剤、例えばビンクリスチンをさらに含み得る。
【０１６６】
ＣＤＩＭ結合抗体、例えばＶＨ４−３４抗体と種々の細胞表面抗原に対する細胞傷害性抗体との組合せは、実施例１０において論じるように、また図７に示すように有効であり、このことは、少なくとも付加的であり、場合によっては相乗的でもあり得る結果を提供する。さらに、図４に示すように、ｍＡｂ２１６は、再発性または難治性Ｂ細胞リンパ腫の患者から得た多数の細胞を死滅させるのにおいて極めて有効である。
【０１６７】
ＣＤＩＭエピトープに対するｍＡｂ２１６またはその他のＶＨ４−３４抗体を組合せることは、リツキサン耐性細胞の発生と戦い、リツキサン治療の効力を高め、ならびにｍＡｂ治療の効力を高めると期待される。
【０１６８】
個々のＢ細胞抗原としては、インビボとインビトロの双方でＢ細胞増殖および分化を誘導する、腫瘍壊死因子（「ＴＮＦ」）スーパーファミリーのメンバーであるＢリンパ球刺激因子（ＢＬｙＳ）を挙げることができる(Mooreら、Science 285、260〜263頁(1999))。ＢＬｙＳタンパク質のレベルは、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、リウマチ関節炎およびシェーグレン症候群をはじめとする自己免疫疾患の患者では上昇することがわかっている(Zhangら、The Journal of Immunology、(2001) 166、6〜10頁、Cheemaら、Arthritis and Rheumatism (2001) 44、1313〜1319頁およびGroomら、Journal of Clinical Investigation (2002) 109、59〜68頁)。可溶形のＢＬｙＳ受容体、ＴＡＣＩの投与は、自己免疫表現型のＮＺＢＷＦ１およびＭＲＬ−ｌｐｒ／ｌｐｒマウスの症状を軽減することがわかっている(Grossら、Nature、(2000) 404、995〜999頁)。したがって、ＢＬｙＳに結合する抗体および関連分子には、自己免疫疾患およびリンパ球癌をはじめとするＢ細胞関連疾病および疾患の治療において医学的用途が見つかる可能性がある。
【０１６９】
細胞表面イディオタイプＩｇはＢ細胞起源のリンパ球癌に存在する患者特異的マーカーである。これらの細胞表面受容体はまた、細胞傷害性抗体療法の有用な標的を提供し、本明細書に記載した方法において有用である。こういった患者に特異的な細胞表面Ｉｇに対する抗イディオトープ抗体の調製が、Denneyの米国特許第５，９７２，３３４号に記載されている。
【０１７０】
投与様式
本発明の抗体は、多種多様な手段でヒトまたは動物の患者に投与できるが、通常は非経口投与によってである。機能的な形の抗体および細胞傷害性薬剤の投与に有効であるとわかっている他の任意の手段、例えば、経口、局所または埋め込みリザーバーを介しても利用することができる。局所投与には、例えば、パッチ、担体、またはイオン導入法を用いる、受動的または能動的手段、経粘膜、例えば、舌下、口内、直腸、膣、鼻腔、または経尿道、例えば、噴霧された粉末化活性薬剤の吸入による、肺、気管支および鼻道への局所送達が含まれる。経口投与には、通常、胃へのまたは十二指腸への投与が含まれる。非経口注射には、体腔または血管への注射、例えば、腹腔内、静脈内、リンパ管内、腫瘍内、筋肉内、間質性、動脈内、皮下、病巣内、眼球内、滑液嚢内または関節内、胸骨内、脳血管内(例えば、大脳内の、脳室内、くも膜下腔内)、肝内、病巣内、頭蓋内注射または注入技術が含まれる。組成物を経口または静脈内に投与することが好ましい。
【０１７１】
当然のことながら、本発明は、その好ましい具体的な実施形態とともに記載してきたが、前述の説明ならびに以下の実施例は例示しようとするものであって、本発明の範囲を制限しようとするものではない。本発明の実施には、特に断りのない限り、当業者の範囲内にある、医薬製剤を調製する従来技術などを用いる。本発明の範囲内のその他の態様、利点および改変は、本発明が属する技術分野の当業者には明らかであろう。このような技術は文献に十分に説明されている。
【０１７２】
本明細書において上記および下記の双方で挙げた、すべての特許、特許出願および刊行物は参照により本明細書に組み込まれる。
【０１７３】
以下の実施例では、用いた数字（例えば、量、温度など）に関して正確さを確実にするよう努めたが、実験誤差および偏差を明らかにすべき場合もある。特に断りのない限り、温度は℃度のものであり圧力は大気またはその近傍でのものである。
【０１７４】
略語：
【０１７５】
ＡＬＬ            急性リンパ性白血病
【０１７６】
ＮＨＬ            非ホジキンリンパ腫
【０１７７】
ＣＬＬ            慢性リンパ性白血病
【０１７８】
ＶＣＲ            ビンクリスチン
【０１７９】
ＩＶ              静脈内
【０１８０】
ＩＰ              腹腔内
【０１８１】
Ｉｇ              免疫グロブリン
【実施例１】
【０１８２】
ｍＡＢ２１６は腫瘍細胞バンクからのＣＤ１９＋骨髄細胞と結合する
２７の十分にキャラクタライズされた骨髄サンプルを、小児腫瘍学グループ(Children's Oncology Group)腫瘍細胞バンクから入手した。解凍した細胞を、ビオチン化ｍＡｂ２１６および蛍光標識ストレプトアビジンで染色した。ＭＡｂ２１６はＣＤ１９＋Ｂ前駆細胞型ＡＬＬの１５サンプルすべてと結合し、平均チャネル蛍光（ＭＣＦ）は７１７であった（２２５〜１０２０の範囲）。Ｔ細胞ＡＬＬの１２サンプルを調べ、６２というＭＣＦを示した（２８〜１４９の範囲）。３つのＴ細胞ＡＬＬはバックグラウンドを上回るｍＡｂ２１６結合を有していた。結果を図１に示し、相対結合強度を「＋」、「＋＋」および「＋＋＋」で示し、結合なしは「−」で示す。図１に示されるように、ｍＡｂ２１６はＢ細胞リンパ腫およびすべての種類の白血病と結合するが、Ｔ細胞リンパ腫とは有意な結合を示さない。
【実施例２】
【０１８３】
ｍＡＢ２１６は骨髄由来のプレＢ  ＡＬＬ細胞を死滅させる
新鮮な骨髄（ＢＭ）の１２試料を白血病のために骨髄吸引を受けている患者から採取し、ｍＡｂ２１６結合および２４時間での細胞傷害性についてインビトロで分析した。すべてのサンプルで、ＣＤ１９、ＣＤ１０、ＣＤ３４、ＣＤ２０、ＣＤ３、ＣＤ２の発現およびビオチン標識ｍＡｂ２１６の結合についての免疫表現型検査を実施した。細胞傷害性は、ＢＭを洗浄し、２０μｇ／ｍｌのｍＡｂ２１６または対照ＩｇＭとともに一晩インキュベートすることによって評価した。インキュベートした細胞をＦＩＴＣ抗ＣＤ１９とヨウ化プロピジウム（ＰＩ）で染色した。細胞死は、％ＣＤ１９＋細胞の変化によって、およびフローサイトメトリーによる、ＣＤ１９発現細胞におけるＰＩ取り込みによって測定した。
【０１８４】
対照ＩｇＭとのインキュベーションと比較した、ｍＡｂ２１６とともにインキュベートした後に死滅した細胞のパーセントとして測定される細胞傷害性は、プレＢ  ＡＬＬの患者から得たＢＭについて以下のとおりであった：６０〜９０％（ｎ＝４）、３０〜５０％（ｎ＝４）および７〜２０％（ｎ＝２）。細胞傷害性の増加は、ＭＣＦによるｍＡｂ結合の強度と相関しており、ｍＡｂ２１６のリガンドの細胞周期依存性の発現の差と関連付けることができた。Ｔ−ＡＬＬ（ｎ＝１）およびＡＭＬ（ｎ＝１）の患者から得たＢＭサンプルはｍＡｂ２１６によって死滅しなかった。
【実施例３】
【０１８５】
抗体は、Ｂ細胞白血病の動物モデルにおいて、Ｂ細胞を死滅させる
ＣＢ１７ＳＣＩＤおよびＮＯＤ／ＬｔＳｚ−ＳＣＩＤ免疫不全マウスにおける、Ｂ細胞白血病のヒトプレＢ細胞Ｎａｌｍ−６モデルを用いた実験により、ｍＡｂ２１６を用いた治療後に生存率の増加および２０％の治癒率が示されている２２。Ｎａｌｍ−６はＡＬＬ由来の細胞株であり、成熟Ｂ細胞抗原ＣＤ２０を発現せず、ＳＣＩＤマウスにおけるヒト腫瘍の再現性のある静脈内モデルとなる２３。マウスを治療するために、精製ｍＡｂ２１６、（４００ｕｇ／２００μｌ）を、移植後１、７、１４および２１日目に静脈内注射（ＩＶ）した。マウスとヒトの体表面積を比較して、マウスには各用量について９０〜１００ｍｇ／ｍ２というヒト相当物を与えた。マウスを腫瘍発達について１００日間観察した。
【０１８６】
１ｍｇの精製ｍＡｂ２１６（約２２０〜２５０ｍｇ／ｍ２というヒト相当物）と対照ポリクローナルヒトＩｇＭを、４個体のＢａｌｂ／ｃマウスにＩＶ注射した。２４時間で血液を採取した。クレアチニン、ビリルビン、アルカリ性ホスファターゼ、ＳＧＯＴ（ＡＳＴ）およびＳＧＰＴ（ＡＬＴ）を含めた化学パネルにより、多少の肝臓酵素の上昇が示されたが、ビリルビンは正常であった。１４日目には、対照および試験マウス双方においてアルカリ性ホスファターゼを除くすべての値が正常に戻った。８週間目でマウスは生存し、健康であった。Ｂａｌｂ／ｃマウスに５００μｇのｍＡｂ２１６をＩＶで与え、注射後２４および４８時間で屠殺した。脾臓、腎臓、肝臓および心臓の組織像からは病変は示されなかった。ＣＢ１７−ＳＣＩＤ／ＳＣＩＤマウスにもｍＡｂ２１６（２００μｇ／ＩＰまたはＩＶ注射）を、０、３および１０日目に注射した。ｍＡｂ  注射様式（ＩＶまたはＩＰ）にかかわらず、すべてのマウスが最後の注射後６週間で見かけ上良好な健康状態であった。
【実施例４】
【０１８７】
ｍＡｂ２１６はＢ細胞膜に傷を与え、リソソームによる再封鎖応答を惹起する
膜損傷に対する自然応答は、損傷部位での内部リソソーム膜の付加による迅速な再封鎖である。Ｌａｍｐ−１は豊富にあるリソソーム膜糖タンパク質であり、通常、原形質膜には存在しない(Granger, B. L.ら、(1990) J.Biol. Chem. 265、12036、McNeil, P. L. (2002) J. Cell Sci. 115、873)。リソソームが原形質膜と融合するよう誘導されると、Ｌａｍｐ−１のリソソーム内ＮＨ２末端ドメインが細胞表面に露出されるようになる。この融合事象は、生細胞を、Ｌａｍｐ−１のルーメンのエピトープに対するｍＡｂで表面染色することによってモニターできる(Reddy, A.ら、(2001) Cell 106、157、Rodriguez, A.ら、(1997) J. Cell. Biol.137. 93、Martinez, I.ら、(2000) J. Cell. Biol. 148、1141)。したがって、細胞表面上のＬａｍｐ−１の存在は、膜破壊後の膜再封鎖の指標である(McNeil, P. L.およびR. A. Steinhardt (2003) Ann. Rev. Cell Dev. Biol. 19、697)。
【０１８８】
ＶＨ４−３４によってコードされるｍＡｂ２１６が細胞に損傷を与え、ひいては迅速な修復および再封鎖応答を惹起するかどうかを調べるために、ｍＡｂ２１６で処理したヒトＢ細胞株を、リソソーム特異的タンパク質Ｌａｍｐ−１の細胞表面での即座の出現についてアッセイした。
【０１８９】
細胞および試薬
ヒトプレＢ細胞株Ｎａｌｍ−６(Hurwitz, R.ら、(1979) Int. J. Cancer 23. 174)、Ｒｅｈ(Rosenfield, C. , A.ら(1977) Nature 267、841)および成熟Ｂ細胞株ＯＣＩ−Ｌｙ８  Tweeddale, M. E.ら(1987) Blood 69、1307)を、熱不活化１０％ＦＣＳを含むイスコフ(iscove)培地において対数増殖期で維持した。Ｂ細胞株はＡＴＣＣから入手した。ＶＨ４−３４によってコードされるｍＡｂ、ｍＡｂ２１６(Bhat, N. M.ら、(1993) J. Immunol. 151、5011)、Ｚ２Ｄ２(Bhat, N. M.ら、(2000) Scand.J.Immunol. 51 : 134)およびＹ２ＫならびにＶＨ３ファミリーのメンバー由来の、アイソタイプがマッチした対照ｍＡｂ、ＭＳ２Ｂ６(Glasky, M. S.ら、(1992)Hum. Antibod. Hybridomas 3、114)を実験室で作製し、血清を含まないハイブリドーマ上清から、水で２回沈殿させることによって精製した。必要に応じセントリプレップ濃縮器（アムニコン(Amnicon)、マサチューセッツ州、ダンサーズ(Dancers)）でＭＡｂを濃縮した。ポリアクリルアミドゲル電気泳動で調べたＩｇＭ  ｍＡｂの純度は、純度９０〜９５％であった。精製ＩｇＭの濃度は、ヒトＩｇＭを標準として用いてサンドイッチＥＬＩＳＡによって調べた（カタログ番号３１１４６、ピアス・バイオケミカルズ(Pierce Biochemicals、イリノイ州、ロックフォード）。ＭＳ２Ｂ６に加え、ピアスＩｇＭもアイソタイプ対照として用いた。すべてのｍＡｂを滅菌濾過し、アジ化ナトリウムを除いた。
【０１９０】
ＰＩ染色と前方散乱を用いる細胞生存率アッセイ
原形質膜の完全性を、細胞のヨウ化プロピジウム（ＰＩ、シグマ(Sigma)、ミズーリ州、セントルイス）を排除する能力によって評価した。ＰＩ取り込みレベルは、標準的なＦＡＣＳ設備で、ヴェルサタームプロ(VersatermPro)とフロージョー(FlowJo)ソフトウェアにつないだＦＡＣＳｃａｎ(ベクトン−ディキンソン(Becton-Dickinson)、カリフォルニア州、サンジョゼ）でのフローサイトメトリーによって定量した。ＰＩ陰性細胞で、正常な大きさを有すると前方散乱シグナルによって測定されたものを生細胞と考えた。
【０１９１】
簡単には、細胞を各実験において指定したように処理し、３％ＦＣＳおよび１０μｇ／ｍｌのＰＩを含むＰＢＳに再懸濁した。Ｃａを含まない培地において毒性を評価した実験では、細胞を、カルシウムを含むか含まない適当な培地に再懸濁し、それに１０μｇ／ｍｌのＰＩを加えた。これまでの研究により、ｍＡｂ２１６媒介性毒性は、低温で著しく明白であるということがわかっていたので(Bhat, N. M.ら(1996) Clin. Exp. Imrnunol. 105、183)、すべての培地および細胞を３７℃で、遠心機を室温で維持するよう予防措置をとった。
【０１９２】
ＡＴＰ枯渇および放出アッセイ
細胞内および放出されたＡＴＰを、生物発光アッセイキット（カタログ番号Ａ−２２０６６、モレキュラープローブス(Molecular Probes)）によって使用説明書にしたがって測定した。１ｎＭ〜１μＭの範囲の標準ＡＴＰ希釈物を、陽性対照として試験した。細胞を、各実験において指定される種々の培地中で、種々の濃度のｍＡｂ２１６に曝露した。９０μｌの、ＤＴＴ、ルシフェリンおよびルシフェラーゼを含む標準反応溶液に、１０μｌの反応上清を加えた。補基質としてのＡＴＰの存在下での光の発生を、マイクロウィン(MicroWin)２０００、バージョン４．２ソフトウェア（マイクロテック・ラボルシステム(Mikrotek Laborsysteme)有限会社）につないだルミノメーター（ルミマーク・マイクロプレート・リーダー(Lumimark Microplate Reader)、バイオラッド(Bio- Rad)）によってすぐに測定した。このアッセイにより、フェムトモル量のＡＴＰの検出が可能となる。細胞内ＡＴＰ含量を評価するために、細胞を１％  ＮＰ−４０を用いて、室温で１０分間溶解し、１０μｌの溶解物を、前述のように調べた。
【０１９３】
Ｌａｍｐ−ｌ発現研究
表面Ｌａｍｐ−１発現を、エピ蛍光、フローサイトメトリーおよび共焦点顕微鏡によって調べた。ヒトＬａｍｐ−１のルーメンのエピトープに対する抗体（ＣＤ１０７ａ、クローンＨ４Ａ３）およびＬａｍｐ−１のアイソタイプ対照、マウスＩｇＧ１ｋは、ＢＤ−ファーミンゲン(PharMingen)から入手した。両抗体を二次ＦＩＴＣ結合ヤギＦ（ａｂ）２抗マウスＩｇＧ（ピアス・バイオケミカルズ）を用いて検出した。細胞（５×１０５）を種々の濃度のｍＡｂ２１６またはヒトＩｇＭ対照（ｍＡｂ  ＭＳ２Ｂ６またはピアスＩｇＭ）に、各実験において指定の時間、３７℃で曝露した。次いで、細胞を２％の予熱したパラホルムアルデヒドを用い、室温で２０分間固定し、予熱した培地で２回洗浄し、抗Ｌａｍｐ−１またはアイソタイプ対照を用いて１５分間染色した。次いで、細胞を染色培地（３％ＦＣＳおよび０．２％ナトリウムアジドを含むＰＢＳ）で２回洗浄し、抗Ｌａｍｐ−１に対する二次抗体とともにさらに１５分間インキュベートした。２回洗浄した後、細胞を染色培地に再懸濁し、フローサイトメトリー、免疫蛍光または共焦点顕微鏡によって分析した。
【０１９４】
共焦点像は、マルチプローブ２０１０レーザー共焦点顕微鏡（モレキュラー・ダイナミクス(Molecular Dynamics)、カリフォルニア州、サニーベール）上のスタンフォーズ・セル・サイエンシズ・イメージング設備(Stanford's Cell Sciences Imaging Facility)で実施した。マルチプローブは励起線が４８８、５６８および６４７であるＡｒ／Ｋｒ混合ガスレーザーを用い、ニコン・ダイアフォト２００倒立顕微鏡上に構築されている。４８８ｎｍという励起波長で、放射光が５１０ＬＰビームスプリッターを通過し、５１０ロングパスフィルターで集められた。ニコン６０Ｘ（ＮＡ１．４）プラナポ(planapo)対物を用いた。エピ蛍光イメージングを、アキシオビジョン(Axiovision)３．１ソフトウェア（カールツァイス）につないだ、アキシオキャム(AxioCam)ＨＲｃカメラ（カールツァイス）とオプティクイップ(Opti-Quip)電源（モデル１２００、ニューヨーク州、ハイランドミルズ(Highland Mills))を備えたアキシオプラン(Axioplan)２顕微鏡（カールツァイス(Carl Zeiss)有限会社）で実施した。フローサイトメトリーは、ＦＡＣＳｃａｎで実施した。
【０１９５】
結果および結論
未処理細胞でのＬａｍｐ−１発現は、実験間で５％程度の低いものから５０％で変動した。この変動は、Ｂ細胞株の標準的な実験操作によって起こる。ｌａｍｐ−１発現のベースラインレベルが５０％であった実験では、アイソタイプ対照処理細胞は５０％陽性のままであり、ｍＡｂ２１６処理細胞は１００％Ｌａｍｐ−１陽性であった。細胞株でのＬａｍｐ−１染色を５回反復して再現性を確実にした。結果は、ベースラインＬａｍｐ−１発現が５％である実験から論じる。
【０１９６】
ｍＡｂ２１６に１分間曝露されたＮａｌｍ−６細胞は、Ｌａｍｐ−１染色の劇的な増加を示したが、アイソタイプ対照に曝露された細胞または処理を受けていない細胞はそのｌａｍｐ−１発現を増加しなかった。その他のＢ細胞株、ＯＣＩ−Ｌｙ８（成熟Ｂ）およびＲｅｈにおいても、ＦＡＣＳおよびエピ蛍光によってＬａｍｐ−１曝露を観察した（データは示していない）。各サンプルについて、ＰＩ取り込みによって細胞の膜の完全性を同時に評価した。細胞は２１６曝露の１分後でＰＩ陰性のままであった。
【０１９７】
Ｌａｍｐ−１染色およびＰＩ取り込みは、ｍＡｂ２１６曝露後の種々の時点でも測定した。Ｌａｍｐ−１曝露は、迅速な事象であり、最も明るい染色がＡｂ曝露の３０秒で観察され、次の５分で徐々に落ちた（図５Ａ）。細胞は、この期間の間ＰＩ陰性のままであった。ＰＩ取り込みは、ｍＡｂ２１６に対する曝露の約５分から２０分まで示され、１０〜２５％の細胞が膜透過性となったことがＰＩ取り込みによって証明された。
【０１９８】
ＡＴＰの放出によって測定される膜破壊も、同様の経時変化を示した。図５Ｂに示されるように、ＡＴＰは、２分、Ｌａｍｐ−１が細胞膜上で検出される時点の上清では検出されなかった。しかし、１５分および１時間では、ＡＴＰ放出が増加し、このことは膜損傷が起こり、それを再封鎖できなかったということを示唆する。ｍＡｂ２１６処理後２および２４時間で、測定したＡＴＰが減少したが、これは、放出されたＡＴＰを分解する、細胞溶解および壊死の結果であり得る。細胞ペレットにおけるＡＴＰ含量が上昇する場合には、生物発光アッセイが細胞増殖および細胞傷害性の尺度となる。ｍＡｂ２１６の細胞傷害性作用は、曝露の１時間以内には明らかであった。
【０１９９】
これらの結果は、ｍＡｂ２１６媒介性膜損傷は、機械的または物理的損傷による傷害後に細胞生存率を回復するものと同一の機構によって修復されることを証明するものであり、このことは、ｍＡｂ２１６処理が、何か他の大きな膜破壊と同様の細胞損傷事象をもたらすということを示唆する。これまで抗体による細胞損傷は観察されていなかった。ｍＡｂ２１６による膜損傷は、最初は内部膜が脂質二重層に迅速に加えられるように再封鎖されるが、ｍＡｂ２１６に対する曝露時間が増加するにつれ、再封鎖しようとする動きが衰え、膜がＰＩとＡＴＰの双方に対して透過性となる。ｍＡｂ２１６の他、他の抗Ｂ細胞ＶＨ４−３４によってコードされるＩｇＭ  ｍＡｂも同様の膜損傷を媒介し、同様のリソソームによる再封鎖応答を惹起した。
【実施例５】
【０２００】
ｍＡｂ２１６誘導性膜損傷の修復は機能性アクチンに依存している
McNeil, P.((2002) J. Cell Sci. 115 : 873)他によって論じられるように、膜の傷の修復はアクチン依存性プロセスを必要とする。ｍＡｂ２１６によって誘導された膜損傷の修復がアクチン依存性修復機構を利用するかどうかを調べるために、細胞をアクチン重合に影響を及ぼす薬剤で処理し、ｍＡｂ２１６によって誘導された膜の傷の修復に対する作用を評価した。細胞をサイトカラシンまたはジャスプラキノリド、アクチン重合に対して反対の作用を有する２種の薬剤で処理した。サイトカラシンは、アクチンを単量体に脱重合し、他方ジャスプラキノリド、海綿から得られる環状ペプチドはアクチンをそのフィラメント型に固定する。両処理ともアクチンベースの細胞骨格活性を妨げる。
方法：
【０２０１】
サイトカラシンはシグマから入手し、ジャスプラキノリドは、モレキュラープローブス(Molecular Probes)(オレゴン州、ユージーン)から入手した。カスパーゼ阻害剤、Ａｃ−ＩＥＴＤ−ＣＨＯおよびＡｃ−ＤＥＶＤ−ＣＨＯはファーーミンゲン（カリフォルニア州、サンディエゴ）から入手した。Ｎａｌｍ−６細胞（１×１０６細胞／ｍｌ）を、ジャスプラキノリド（３μｇ／ｍｌ）、サイトカラシン（５μｇ／ｍｌ）、またはカスパーゼ阻害剤（１０μＭ）で、３７℃で２時間処理し、その後ｍＡｂ２１６での処理を行った。同等量のＤＭＳＯを用いる対照サンプルを平行して設定した。次いで、細胞を２５μｇのｍＡｂ２１６または対照Ａｂに曝露し、フローサイトメトリーによって分析した。
結果：
【０２０２】
サイトカラシンまたはジャスプラキノリドと、ｍＡｂ２１６とで処理した細胞は、生存率（生細胞パーセント）の低下、故に、ｍＡｂ２１６に対する感受性の上昇を示し、このことは、相乗効果を証明し、また、修復プロセスにおける機能的アクチンの必要性を示すものである。サイトカラシンまたはジャスプラキノリドと対照抗体とで処理した細胞は、生存率の低下を示さなかった。代表的な一実験から得たデータを図６Ｂに示す。その他の３実験から同様の結果が得られた。
【０２０３】
細胞をカスパーゼ阻害剤Ａｃ−ＩＥＴＤ−ＣＨＯおよびＡｃ−ＤＥＶＤ−  ＣＨＯとともにインキュベートすることでは、細胞生存率は変わらず、このことは、細胞死の機構が、アポトーシスによるものではないことを示す。
【０２０４】
これらの結果から、これらの抗体に対する曝露によって引き起こされる、抗体誘導性細胞膜損傷の機構がさらに支持される。
【実施例６】
【０２０５】
ｍＡｂ２１６誘導性膜損傷の修復はカルシウムに依存する
リソソームのエキソサイトーシスはカルシウム依存性現象であることがわかっているので(Miyake, K.およびP. L. McNeil (1995) J. CellBiol. 131 : 1737、Bi, G. Q.ら、(1995)J. CellBiol. 131 : 1747)、ｍＡｂ２１６による膜損傷および傷の修復を、カルシウムを含まない条件と正常なカルシウム条件で調べた。２種の、ＶＨ４−３４によってコードされるｍＡｂ、５０、２５および１２．５ｎｇ／ｍｌ濃度のｍＡｂ２１６と５０ｎｇ／ｍｌのＹ２Ｋで処理した場合のＮａｌｍ−６細胞の細胞生存率を、カルシウムを含むか含まない培地の存在下で調べた。図６Ａに示されるように、細胞生存率は、カルシウムの不在下で有意に低下し、このことは、傷の修復にカルシウムが必要であったことを示す。対照抗体で処理した細胞または抗体で処理しなかった細胞は、カルシウムの存在下または不在下での細胞生存率に何の変化も示さなかった。その他のＢ細胞株、ＯＣＩ−Ｌｙ８およびＲｅｈもまた、カルシウムを含まない状態での細胞傷害性において同様の増加を示した（データは示していない）。
【実施例７】
【０２０６】
ｍＡｂ２１６誘導性膜損傷の修復は機能的ゴルジ依存性である
ブレフェルジンＡ（ＢＦＡ）での処理はゴルジ関連コートタンパク質の放出、ゴルジ膜の小胞体への再分配およびゴルジ体からの分泌の遮断をもたらすとわかっている(Klausner, R. D.、(1992) J. Cell Biol. 116 : 1071)。新しく形成されるリソソームは、ＢＦＡ処理細胞では生じず、したがって、その傷の修復の必要条件を調べるための条件を提供する。したがって、新しく形成されるリソソームの、ｍＡｂ２１６細胞によって誘導された膜の傷の修復を補助する能力を、細胞をＢＦＡで処理することによって調べた。
方法：
【０２０７】
ブレフェルジンＡはシグマから入手した。Ｎａｌｍ−６細胞（１×１０６細胞／ｍｌ）を、ＢＦＡ（２５μｇ／ｍｌ）を用い、３７℃で２時間処理し、その後ｍＡｂ２１６での処理を行った。同等量のＤＭＳＯを用いる対照サンプルを平行して設定した。次いで、細胞を２５μｇのｍＡｂ２１６または対照Ａｂに曝露し、フローサイトメトリーによって分析した。
結果：
【０２０８】
図６Ｂに示されるように、細胞生存率（生細胞パーセント）は、ＢＦＡとｍＡｂ２１６の組合せによって低下し、このことは生存率に対する相乗作用を証明するものである。ＢＦＡは、対照抗体で処理した細胞の生存率には何ら影響を及ぼさなかった。この結果は、その膜修復がＢＦＡによってブロックされたことを証明し、これは新しく形成されるリソソームが、ｍＡｂ２１６によって損傷を受けたＢ細胞株の膜修復ならびに生存および完全性を続けるために必要であることを示唆するものである。したがって、この結果から、ｍＡｂ２１６によってＢ細胞に膜損傷が生じ、細胞がリソソームの原形質膜との融合を利用して損傷を繕おうとすることがさらに確認される。ＢＦＡによってさらなるリソソームの生成が阻害される場合には、修復プロセスは細胞生存率を維持するのに適切ではなくなることがある。
【実施例８】
【０２０９】
ビンクリスチンとの相乗的Ｂ細胞死滅
Ｂ細胞株に対する細胞傷害性アッセイにおいて、ｍＡｂ２１６を化学療法薬、特に、ビンクリスチンと組合せた場合に細胞死滅の増強が証明された。種々の遺伝子型および表現型のＡＬＬ芽球に由来する３種の細胞株、Ｎａｌｍ６、ＲＥＨおよびＳＵＰＢ１５を、ｍＡｂ２１６単独とともに、またはビンクリスチン（ＶＣＲ）と組合せて３７℃で４８時間インキュベートした。
【０２１０】
図４および以下の表１に示されるように、これらの結果は、低いビンクリスチン濃度（０．２ｎｇ／ｍｌ）では、細胞死はビンクリスチン単独での処理によっては全く起こらなかったことを示す。しかし、ビンクリスチンをｍＡｂ２１６と組合せると、死滅したＢ細胞のパーセンテージは２倍よりも高くなり、このことは相乗的相互作用を証明するものである。Ｂ前駆体リンパ芽球に対する、単独および化学療法薬と組合せたｍＡｂ２１６の細胞傷害性により、この抗体が、小児ＡＬＬにおけるさらなる免疫療法研究にとって見込みのある試薬となる。
【実施例９】
【０２１１】
化学療法薬による、Ｂ細胞株に対するｍＡＢ２１６の細胞傷害性の増強
単一の化学療法薬と組合せたｍＡｂ２１６のインビトロ細胞傷害性を調べた。種々の遺伝子型および表現型のＡＬＬ芽球に由来する３種の細胞株、Ｎａｌｍ６、ＲＥＨおよびＳＵＰＢ１５を、ｍＡｂ２１６単独とともに、またはビンクリスチン（ＶＣＲ）、ダウノルビシン（ＤＮＲ）またはＬ−アスパラギナーゼ（ＡＳＰＲ）と組合せてインキュベートした。ｍＡｂ２１６と併用した場合、すべての化学療法薬が、単一薬剤化学療法またはｍＡｂ２１６単独のいずれかで見られたものよりも高い程度の細胞傷害性をもたらした。しかし、ビンクリスチンとｍＡｂ２１６との組合せが最も有効であり、ビンクリスチンまたはｍＡｂ２１６単独のいずれかによって誘導された細胞死滅量と比較して相乗的である細胞傷害性の大きさをもたらした。これらの結果は、化学療法薬の存在下でのｍＡｂ２１６の細胞傷害性の増強を証明するものであり、これは、幾分かは少なくともｍＡｂ２１６処理がＢ細胞の透過化をもたらすためであり、そうでなければ不透過性化学療法薬が細胞内部にアクセスするのを可能にするためである。
【０２１２】
結果を以下の表１に示す。
【表１】
2007513072.tif 000003
【実施例１０】
【０２１３】
ｍＡｂ２１６とＣ２Ｂ８（抗ＣＤ２０Ａｂ）の併用療法
ｍＡｂ２１６と抗ＣＤ２０抗体が、インビボにおいて有効な組合せを提供できるかどうかを調べるために、Ｂ細胞に対する併用抗体治療の作用を、ヒト患者のインビボ治療の際に遭遇するであろうとして、補体の存在下で調べた。
【０２１４】
リンパ腫細胞株ＯＣＩ−Ｌｙ８を、ウサギ補体の存在下ｍＡｂ２１６またはＣ２Ｂ８（リツキサン（登録商標））で処理した。細胞傷害性は、３（４，５）−ジメチルチアゾール−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミドの発色変化、ミトコンドリア酵素の機能の尺度を測定して死滅細胞％を決定する、ＭＴＴアッセイを用いて検出した。細胞は１ｍｌあたり１×１０５または１ｍｌあたり３×１０５の密度でプレーティングした。各抗体を２１５ｎｇ／ｍｌまたは４３０ｎｇ／ｍｌで別個に調べ、併用治療は併用濃度４３０ｎｇ／ｍｌに対し２１５ｎｇ／ｍｌの各抗体からなるものとした。図７に示される結果から、併用抗体治療は、特に高い細胞濃度で、抗体および／または補体濃度が効力を制限しない場合、Ｂ細胞を死滅させる効力の増強を証明することが示される。低いプレーティング密度では、２１５ｎｇ／ｍｌで別個に調べた各抗体の相加的作用が約２９％死滅であるのに対し、併用抗体治療は約３４％の死滅を提供すると思われ、したがって、少なくとも相加的であり、相乗的である可能性がある作用が証明される。高いプレーティング密度では、２１５ｎｇ／ｍｌで別個に調べた各抗体の相加的作用が約２３％死滅であるのに対し、併用抗体治療は約３０％の死滅を提供すると思われ、したがって、少なくとも相加的であり、相乗的である可能性がある作用がやはり証明される。示したデータは３回の実験のうちの1回の代表的なものである。
【実施例１１】
【０２１５】
ＡＬＬ患者においてｍＡｂ２１６の効力を調べるための臨床試験治療プロトコール
これは、再発性または難治性Ｂ前駆細胞型ＡＬＬの小児におけるヒトｍＡｂの第Ｉ相用量増加試験となる。ｍＡｂ注入について２つの治療方針が与え、同用量の抗体を０日目と7日目に投与する。
【０２１６】
0日目：ｍＡｂ２１６用量１
【０２１７】
7日目：ｍＡｂ２１６用量２
【０２１８】
抗体投与：０日目および７日目
ｍＡｂ２１６を、室温にて、正常生理食塩水で１ｍｇ／ｍｌの最終容量に希釈することが好ましい。ｍＡｂ溶液は、何か他の溶液または薬物と混合または希釈することが好ましい。第１のｍＡｂ２１６注入時の初期投与速度は、最初の３０分間は２５ｍｇ／時とする。毒性または注入関連事象が起こらなければ、投与速度を最大２００ｍｇ／時まで（３０分間隔で２５ｍｇ／時増分）上げることができる。何らかの注入関連毒性が生じたならば、抗体注入を一時的に減速するか中断しなくてはならず、患者を適切に治療しなければならない。症状が改善されれば、それまでの速度の１／２で注入を再開し、最大速度２００ｍｇ／時まで徐々に上げることができる。
【０２１９】
疾病評価および薬物動態
７日目に、第２の抗体注入を進める前に、治療に対する初期反応が行われる。第１の抗体用量に対して良好な反応を示した患者には、０日目と同じ様式で第２の用量を与えるよう進める。７日目で反応に乏しい患者には、第２の抗体用量をビンクリスチンとともに与える。５日目までに患者が治療に対する反応に乏しいことが明確であれば、すなわち、明らかに末梢芽球数が増加していれば、患者をビンクリスチンを含む第２のｍＡｂ２１６用量に５日目ぐらいの早期に進めてもよい。
【０２２０】
抗体治療に対する最終反応は３５日目に行われる。
【０２２１】
薬物動態学的サンプリングは、抗体注入の用量１に関してのみ行う。
【表２】
2007513072.tif 000004
【０２２２】
ｍＡｂ２１６の用量は、前述のように１ｋｇ体重あたりのｍｇで算出する。増加は３人の患者の群で計画し、用量規定毒性（ＤＬＴ）の最初の徴候で加えるさらなる２人の患者は以下のとおりとする：
【０２２３】
３人の患者を、用量レベル１（１．２５ｍｇ／ｋｇ）で処理する。
【０２２４】
第１の３人の患者のうち１人もＤＬＴを経験しなければ、３人の次の患者で用量を次のレベルに上げる。
【０２２５】
所与のコホート内の３人の患者のうち１人がＤＬＴを経験すれば、さらなる患者２人までをそのレベルで治療する。
【０２２６】
これら２人のさらなる患者のうちどちらもＤＬＴを経験しなければ、次の患者のコホートで用量を上げる。
【０２２７】
これら２人のさらなる患者のうち１人以上がＤＬＴを経験する場合には、その用量レベルでの患者の参加およびさらなる用量増加を停止し、ＭＴＤを上回っている。次いで、少なくとも２人のさらなる患者を、次のより低い用量レベルで治療する。
【０２２８】
任意のコホート（３〜５人の患者）実験内で２人以上の患者がＤＬＴを経験すれば、ＭＴＤを上回っている。次いで少なくとも２人のさらなる患者を次のより低い用量レベルで治療する。
【０２２９】
５人の患者のうち１人しかＤＬＴを経験しない、到達した最も高い用量レベルをＭＴＤと考える。
【０２３０】
この研究で認められる患者内用量増加はない。
【０２３１】
用量規定毒性の定義
副作用（毒性）を、ＮＣＩ  ＣＴＣバージョン２．０に従って類別する。ＤＬＴは、治験薬、ｍＡｂ２１６に少なくとも（場合によっては、おそらくまたは確かに）起因して起きる、何らかの血液学的または非血液学的毒性と定義する。
【０２３２】
化学療法
７日目評価：７日目臨床反応評価によって、骨髄検査で＞２５％白血病性芽球残存（第５節参照）または末梢血芽球数の増加として規定される、反応に乏しいことが証明される場合は、７日目に抗体用量２を開始する前にビンクリスチンを与える。その後、ビンクリスチンを、以下のスケジュールに従い全４用量を毎週投与する。
【０２３３】
ビンクリスチン、毎週１．５ｍｇ／ｍ２／ＩＶＰ用量×４用量（７、１４、２１、２８日目）。
【０２３４】
７日目のｍＡｂ２１６＋ＶＣＲと、それに続く３回のさらなる毎週ＶＣＲ用量を与えられ、３５日目までに患者が完全な寛解に達する場合には、ｍＡｂ２１６利用可能性の結果が出るまで、毎月ベースでのｍＡｂ２１６＋ＶＣＲでのその後の治療も可能であり得る。ｍＡｂの用量は、プロトコール治療の１日目および７日目に与えたものと同様のままである。
【０２３５】
１４、２１および２８日目評価：１４、２１または２８日目の臨床反応評価が、骨髄検査で＞５％白血病性芽球残存として規定される、残存病変を示す場合には、患者に再導入化学療法を開始することができる。
【０２３６】
１４、２１または２８日目に残存病変のための再導入化学療法を受ける患者には、研究目的の毎週のＢＭＡ評価はもはや必要ではない。再導入化学療法を受ける患者には、寛解状態を評価するために化学療法開始後ＢＭＡ／ＬＰを約４週間受けることが推奨される。
【０２３７】
再導入化学療法
再導入化学療法は、１４、２１または２８日目に残存病変が検出された患者のみを対象とする。標準的な４種の薬物、２８日目の再導入投薬計画としては、以下を挙げることができる：
【０２３８】
プレドニゾン４０ｍｇ／ｍ２／ＴＩＤ日分割×２８日、
【０２３９】
ビンクリスチン１．５ｍｇ／ｍ２／ＩＶＰ用量毎週×４（１、８、１５、２２日目）、
【０２４０】
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｌ−アスパラギナーゼ６，０００ＩＵ／ｍ２／ＩＭ用量×６用量
【０２４１】
（２、５、８、１２、１５、１９日目）、
【０２４２】
ダウノマイシン３０ｍｇ／ｍ２／ＩＶ用量毎週×３用量
【０２４３】
（８、１５、２１日目）、
【０２４４】
くも膜下腔内メトトレキサート(年齢に応じた用量)。
【０２４５】
再導入化学療法の第１日目として治療日は１日目から開始する。
【０２４６】
１および１５日目（５日目ＬＰで、ＣＮＳが２、すなわち＜５ＷＢＣ／μｌであり、芽球がサイトスピンにある場合は、８および２２日目にさらなる用量）。
【０２４７】
ＣＮＳ予防用量:
【０２４８】
年齢                  ＭＴＸ            容量
【０２４９】
１〜１．９９歳        ８ｍｇ            ８ｃｃ
【０２５０】
２〜２．９９歳      １０ｍｇ          １０ｃｃ
【０２５１】
３〜３．９９歳      １２ｍｇ          １２ｃｃ
【０２５２】
＞９歳              １５ｍｇ          １５ｃ
【０２５３】
前述のプロトコールによって研究者は以下の目標達成することが可能となる：
【０２５４】
１週間離れた２用量で、再発性または難治性急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）の小児に投与される、ＶＨ４−３４によってコードされるモノクローナル抗体、ｍＡｂ２１６の最大耐量（ＭＩＤ）を推定すること、
【０２５５】
単一の薬剤として、またビンクリスチンと組合わせて、このスケジュールで与えられるｍＡｂ２１６の用量規定毒性（ＤＬＴ）を求めること、
【０２５６】
再発性または難治性ＡＬＬの小児における、ｍＡｂ２１６の薬物動態挙動を特性決定すること、
【０２５７】
第Ｉ相試験の範囲内で、ｍＡｂ２１６の抗腫瘍活性を予め定義すること、および
【０２５８】
再発性または難治性ＡＬＬの患者における、ｍＡｂ２１６の生物活性を評価すること。
【参照文献】
【０２５９】
１．Cook GP、Tomlinson IM、Walter G、Riethman H、Carter NP、Buluwela L、Winter G、Rabbitts TH。染色体１４ｑのテロメア領域の解析によって完成したヒト免疫グロブリンＶＨ遺伝子座のマップ(A map of the human immunoglobulin VH locus completed by analysis of the telomeric regionof chromosome l4q.)。Nat. Genet. 1994、7、162〜168頁。
【０２６０】
２．Weng NP、Snyder JG、Yu LL、Marcus DM。ヒト免疫グロブリンＶＨ４生殖系列遺伝子の多形性(Polymorphism of human immunoglobulin VH4 germ-line genes.)。Eur. J. Immunol. 1992、22、1075〜1082頁。
【０２６１】
３．van der Maarel S、Willems van Dijk K、Alexander C、Sasso E、Bull A、Millner E。ヒトＶＨ４遺伝子ファミリーの染色体の組織化(Chromosomal organization of the human VH4 gene family.)。. J. Immunol. 1993、150、2858〜2868頁。
【０２６２】
４．Pascual V、Victor K、Lesiz D、Spellerberg MB、Hamblin TJ、Thompson KM、Randen I、Natvig JB、Capra JD、Stevenson FK。２つのＩｇＭ寒冷凝集素のＶ領域の ヌクレオチド配列分析(Nucleotide sequence analysis of the V regions of two IgM cold agglutinins.)。ＶＨ４−２１遺伝子セグメントが主要な交差イディオタイプの原因であるという証拠(Evidence that VH4-21 gene segment is responsible for the major cross-reactive idiotype.)。J. Immunol. 1991、146、4385〜4391頁。
【０２６３】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【国際調査報告】
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