(57)【要約】  本発明は、ＣＯＰＤの治療のためのテトラヒドロビオプテリン（ＢＨ４）又はその誘導体の使用を記載している。有利な一実施態様では、ＢＨ４又はその誘導体をアルギニン又はその誘導体と組み合わせる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
呼吸器疾患の予防及び／又は治療用の医薬品の製造のためのＢＨ４又はその誘導体の使用。
【請求項２】
呼吸器疾患が、ＣＯＰＤ、気管支喘息、肺線維症、肺気腫、間質性肺疾患及び肺炎からなる群から選択される、請求項１記載のＢＨ４又はその誘導体の使用。
【請求項３】
呼吸器疾患がＣＯＰＤである、請求項１記載のＢＨ４又はその誘導体の使用。
【請求項４】
ＣＯＰＤ患者における筋不全の予防及び／又は治療用の医薬品の製造のためのＢＨ４又はその誘導体の使用。
【請求項５】
ＢＨ４又はその誘導体の他に、アルギニン又はその誘導体を、ＢＨ４又はその誘導体と同時に、別々に又は順次に組み合わせて使用する、請求項１から４までのいずれか１項記載の使用。
【請求項６】
必要とする患者におけるＣＯＰＤの予防及び／又は治療のための方法において、有効量のＢＨ４又はその誘導体を投与する工程を含む方法。
【請求項７】
有効量のＢＨ４又はその誘導体の他に、有効量のアルギニン又はその誘導体を、ＢＨ４又はその誘導体と、同時に、別々に又は順次に組み合わせて投与する、請求項６記載の方法。
【請求項８】
ＣＯＰＤの予防及び／又は治療のための、ＢＨ４又はその誘導体を含有する医薬組成物の使用。
【請求項９】
医薬組成物が、ＢＨ４又はその誘導体の他に、アルギニン又はその誘導体を同時に、別々に又は順次に組み合わせた調剤として含有する、請求項８記載の使用。
【請求項１０】
慣用の二次包装と、ＢＨ４又はその誘導体の製剤を有する一次包装と、所望であれば添付文書とを含む商品であって、該製剤が必要とする患者におけるＣＯＰＤの予防及び／又は治療のために適している商品。
【請求項１１】
呼吸器疾患の予防及び／又は治療用の医薬品の製造のためのＢＨ４又はその誘導体とアルギニン又はその誘導体の組合せの使用。
【請求項１２】
呼吸器疾患が、ＣＯＰＤ、気管支喘息、肺線維症、肺気腫、間質性肺疾患及び肺炎からなる群から選択される、請求項１１記載の使用。
【請求項１３】
呼吸器疾患がＣＯＰＤである、請求項１１記載の使用。
【請求項１４】
ＣＯＰＤ患者における筋不全の予防及び／又は治療用の医薬品の製造のための、ＢＨ４又はその誘導体とアルギニン又はその誘導体との組合せの使用。
【請求項１５】
必要とする患者におけるＣＯＰＤの予防及び／又は治療のための方法において、有効量のＢＨ４又はその誘導体と組み合わせて有効量のアルギニン又はその誘導体を投与する工程を含む方法。
【請求項１６】
呼吸器疾患の予防及び／又は治療で使用するための、同時に、別々に又は順次に投与するための組合せ調剤としての、ＢＨ４又はその誘導体とアルギニン又はその誘導体とを含有する調剤。
【請求項１７】
ＢＨ４又はその誘導体とアルギニン又はその誘導体とを含有する医薬組成物。
【請求項１８】
更に製剤学的に認容性の担体を含有する、請求項１７記載の医薬組成物。
【請求項１９】
医薬品として使用するための、請求項１８又は１９記載の医薬組成物。
【請求項２０】
呼吸器疾患の予防及び／又は治療において使用するための、請求項１８又は１９記載の医薬組成物。
【請求項２１】
呼吸器疾患の予防及び／又は治療のための、請求項１８又は１９記載の医薬組成物の使用。
【請求項２２】
呼吸器疾患の予防及び／又は治療用の医薬品の製造のための、請求項１８又は１９記載の医薬組成物の使用。
【請求項２３】
薬剤のＢＨ４又はその誘導体及び／又はアルギニン又はその誘導体と一緒に、これらの薬剤を組み合わせて呼吸器疾患の予防及び／又は治療のために同時に、別々に又は順次に投与するための説明書を有する販売パッケージ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の技術分野
本発明は、ＣＯＰＤの治療におけるテトラヒドロビオプテリン（ＢＨ４）又はその誘導体の新規の使用に関する。
【０００２】
従来技術
内皮依存性血管拡張の低下は、主に、内皮依存性血管拡張剤である窒素酸化物（ＮＯ）の生物学的利用能の低下と、血管収縮物質として作用するスーパーオキシドアニオンのような毒性の酸素フリーラジカルの活性の増加によって誘発される。
【０００３】
先行技術からは、窒素酸化物合成酵素（ＮＯＳ：ｎＮＯＳ（ＮＯＳ１）、ｉＮＯＳ（ＮＯＳ２）及びｅＮＯＳ（ＮＯＳ３））がＮＯとスーパーオキシドアニオンの両者を生成することが知られている。ＮＯＳによりＮＯを生成する正味の成果に重要なことは、テトラヒドロビオプテリン（ＢＨ４）の存在であると考えられる。
【０００４】
ＢＨ４はＮＯＳの必須の補因子であり、それはＮＯＳによるＮＯとスーパーオキシドの生成率に影響する［Werner-Felmayer G et al. (2002) Current Drug Metabolism 3: 159］。ＢＨ４が減少した状況では、ＮＯＳはＮＯの代わりにスーパーオキシドを生成する［Vasquez-Vivar et al.(1998) PNAS 95: 9220］。ＮＯはスーパーオキシドアニオンによって迅速に不活性化され、こうして血管毒性のパーオキシ亜硝酸イオン（ＯＮＯＯ−）が形成される。毒性のオキサイドラジカル、すなわちスーパーオキシドアニオン及びＯＮＯＯ−の存在下に、ＢＨ４は分解されてＢＨ２となる。ＢＨ２はＮＯＳの補因子として作用せず、ＮＯＳ活性に悪影響を及ぼす［Landmesser et al. J Clin Invest (2003) 111: 1201］。並行して、ＯＮＯＯ−はＮＯＳを脱共役させるので、ＮＯＳはＮＯの代わりにスーパーオキシドを生成する。内皮において、ＮＯは血管拡張に主要な役割を担うが、一方でスーパーオキシドは血管収縮をもたらす。内皮でのＢＨ４の分解とＮＯＳの脱共役と、こうして生ずるＮＯ濃度の低下は、血管収縮をもたらし、最終的には高血圧をもたらす。
【０００５】
先行技術からは、ＢＨ４が、神経伝達物質形成、血管緊張低下及び免疫応答に関連する幾つかの生物学的過程と病理学的状態で主要な役割を担うことは知られている［Werner-Felmayer G et al. (2002) Current Drug Metabolism 3: 159］。一例としては、ＢＨ４の生成不全は“異型”フェニルケトン尿症に関連し［Werner-Felmayer G et al. (2002) Current Drug Metabolism 3: 159］、かつそれがアテローム性硬化症、糖尿病、高コレステロール血漿及び喫煙における内皮不全の基礎をなしている［Tiefenbacher et al. (2000) Circulation 102: 2172, Shinozaki et al (2003) J Pharmacol Sci 91: 187, Fukuda et al (2002) Heart 87: 264, Heitzer et al (2000) Circulation 86: e36］。
【０００６】
また、当該技術分野においては、ＢＨ４が内皮不全を改善し、それによりＮＯの利用能が向上し、毒性のラジカルの存在を低下させることが知られている。ＢＨ４は、内皮機能に有用な効果を有し、その効果はＮＯＳのための補因子という役割によって惹起される［Werner-Felmayer G et al. (2002) Current Drug Metabolism 3: 159］。
【０００７】
先行技術から知られているように、ＢＨ４とその医薬品としての使用は幾つかの疾病と関連している。ウエダ他（Ueda et al.）［Ueda S et al. (2000) J. Am. Coll. Cardiol. 35:71］によれば、ＢＨ４は慢性喫煙者における内皮依存性血管拡張を改善することができる。マイヤー他（Mayer W. et al.）［Mayer W. et al. (2000) J. Cardiovasc. Pharmacol. 35: 173］によれば、ヒトにおける冠状血流応答はＢＨ４の適用によって大きく改善される。ＷＯ９５３２２０３号は、ＮＯ濃度の増大によって引き起こされる疾病の治療のためのＮＯＳ阻害性プテリジン誘導体（“アンチプテリン”）の使用に関連している。特に、ＷＯ９５３２２０３号によれば、阻害性プテリジン誘導体は、病理学的な血圧増大、潰瘍性大腸炎、心筋梗塞、移植片拒絶、アルツハイマー病、てんかん及び偏頭痛の予防又は治療に関して記載されている。ＥＰ０９０８１８２号は、ＮＯＳ機能不全に関連する疾病の予防及び／又は治療用のＢＨ４又はその誘導体を含有する医薬組成物に関連する。そしてＥＰ０２０９６８９号は、幼児自閉症の治療用の医薬品の製造におけるテトラヒドロビオプテリンの使用に関連する。
【０００８】
ＣＯＰＤの予防又は治療のためのＢＨ４又はその誘導体の使用は先行技術から公知ではない。
【０００９】
発明の要旨
本発明は、呼吸器疾患の予防及び／又は治療のためのＢＨ４又はその誘導体の使用に関する。特に、本発明は、ＣＯＰＤの予防及び／又は治療のためのＢＨ４又はその誘導体の使用に関する。驚くべきことに、ＢＨ４又はその誘導体が、呼吸器不全における潅流−換気ミスマッチの予防及び／又は治療において有用であり、特にＣＯＰＤの予防及び／又は治療において有用であることが判明した。
【００１０】
第一の実施態様では、呼吸器疾患の予防及び／又は治療用の医薬品の製造のためのＢＨ４又はその誘導体の使用を提供している。
【００１１】
本発明の更なる一実施態様では、ＣＯＰＤ、気管支喘息、肺線維症、肺気腫、間質性肺疾患及び肺炎からなる群から選択される疾病の予防及び／又は治療用の医薬品の製造のためのＢＨ４又はその誘導体の使用を提供している。
【００１２】
本発明の更なる一実施態様では、ＣＯＰＤの予防及び／又は治療用の医薬品の製造のためのＢＨ４又はその誘導体の使用を提供している。
【００１３】
本発明の更なる一実施態様では、ＣＯＰＤ患者における筋不全の予防及び／又は治療用の医薬品の製造のためのＢＨ４又はその誘導体の使用を提供している。
【００１４】
本発明の更なる一実施態様では、ＣＯＰＤの予防及び／又は治療のためのＢＨ４又はその誘導体を含有する製剤の使用を提供している。
【００１５】
本発明の更なる一実施態様では、必要とする患者においてＣＯＰＤを予防及び／又は治療するための方法において、ＢＨ４又はその誘導体を投与する工程を含む方法を提供している。
【００１６】
本発明の更なる一実施態様では、慣用の二次包装と、ＢＨ４又はその誘導体の製剤を有する一次包装と、所望であれば添付文書とを含む商品であって、その製剤が必要とする患者におけるＣＯＰＤの予防及び／又は治療のために適している商品を提供している。
【００１７】
発明の詳細な説明
本発明の対象は、肺変化及び肺外変化を原因とする呼吸器疾患の治療におけるＢＨ４又はその誘導体の新規の医学的使用である。このように本発明は、呼吸器疾患の予防及び／又は治療用の医薬品の製造における、特にＣＯＰＤの予防及び／又は治療におけるＢＨ４又はその誘導体の使用に関する。
【００１８】
用語“ＢＨ４”（テトラヒドロビオプテリン）は、以下の式：
【００１９】
【化１】
2007509909.tif 000002
［式中、
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ水素原子を表すか、又は互いにひとまとめに考えて、単結合を表すが、一方でＲ３が−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＣＨ（ＯＣＯＣＨ３）ＣＨ（ＯＣＯＣＨ３）、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ又はフェニルを表すのは、Ｒ１及びＲ２が水素原子を表す場合であって、又はＲ３が−ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３を表すのは、Ｒ１及びＲ２が一緒になって単結合を表す場合である］を有するテトラヒドロビオプテリンの全ての天然及び非天然の立体異性形又はそれらの製剤学的に認容性の塩を指す。
【００２０】
本発明で有用に使用できる“ＢＨ４又はその誘導体”は、例えばＥＰ０９０８１８２号及びＥＰ００７９５７４号に示される化合物である。
【００２１】
特に、以下の化合物：
【００２２】
【化２】
2007509909.tif 000003
【００２３】
【化３】
2007509909.tif 000004
及びこれらの化合物の製剤学的に認容性の塩が挙げられる。
【００２４】
用語“製剤学的に認容性の塩”の範囲内に含まれる塩は、遊離塩基と好適な有機酸又は無機酸とを反応させるか、又は該酸と好適な有機塩基又は無機塩基とを反応させることによって一般的に製造される無毒の化合物の塩を指す。薬学で慣用に使用される製剤学的に認容性の無機酸及び有機酸の塩が特に挙げられる。適当な塩は、例えば塩酸、臭化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸、酢酸、クエン酸、Ｄ−グルコン酸、安息香酸、２−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、酪酸、スルホサリチル酸、マレイン酸、ラウリン酸、リンゴ酸、フマル酸、コハク酸、シュウ酸、酒石酸、エンボン酸、ステアリン酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸又は１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸のような酸との水溶性及び水不溶性の酸付加塩であり、その際、前記の酸は塩調製において（一塩基酸又は多塩基酸のどちらであるかに依存して、そしてどの塩が望ましいかに依存して）等モル量比又はそれとは異なる比で使用される。
【００２５】
塩基との塩の例としては、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アルミニウム、マグネシウム、チタン、アンモニウム、メグルミン又はグアニジニウムの塩であり、その際、この場合にも塩基は塩調製において等モル量比又はそれとは異なる比で使用される。
【００２６】
前記の有効化合物及び製剤学的に認容性の塩は、例えば製剤学的に認容性の溶媒和物の形、特にその水和物の形で存在してもよいと解されるべきである。
【００２７】
用語“呼吸器疾患”とは、部分呼吸不全及び全呼吸不全、すなわち肺における酸素摂取又は二酸化炭素放出の障害を原因とする肺疾患を指す。
【００２８】
人の健康な肺において、休息時と運動中の両方で、常に換気が良好な領域と換気が乏しい又は全く換気がない領域とが同時に並行して存在する（換気不均等）。今までに未知の機構により、殆ど換気がないか又は換気がない肺胞に隣接する毛細血管に潅流が殆どないか又は全くないようになる。これにより、ガス交換に関連しない肺の領域の非効率的な潅流が最小限となる。身体運動中には、換気の分布が変化し（新規の肺胞の動員）、そして関連の毛細血管床の潅流に増大が見られる。反対に、生理学的又は病理学的な過程により殆ど換気がない場合に（気道閉塞）、毛細血管流は血管収縮を通じて減少する。この過程を、低酸素性血管収縮と呼ぶ（Euler-Liljestrand機構）。
【００２９】
前記の換気と潅流の順応機構が損なわれる（“ミスマッチ”）と、換気が適切で肺の潅流が正常であるにも拘わらず、ガス交換機能に多かれ少なかれ顕著な虚脱が見られることがあり、これは換気又は潅流を更に高めても不適切にのみ補償できるに過ぎない。これらの状態では、換気がなくてもより良く潅流がなされる（短絡）領域と、より換気が良くても潅流がない（死腔換気）領域とが存在する。
【００３０】
この“換気と潅流とのミスマッチ”の結果は、低酸素症（ガス交換の低下に伴う患者の血液の酸素含量の低下）、無効潅流（換気がない領域の不経済な潅流）及び無効換気（潅流の乏しい領域の不経済な換気）である。
【００３１】
“部分呼吸不全及び全呼吸不全”の原因は、肺内潅流状態と換気の不均等分布との不適切な順応である。生ずるミスマッチは、生理学的順応機構で支配的な血管作動性（炎症性）メディエータの効果に由来している。この作用は、特に運動中と、酸素要求量が高まり、それが呼吸困難（低酸素症）と身体能力の限界によって表面化した場合とで明らかである。
【００３２】
本発明によれば“部分呼吸不全”は、前記の酸素摂取又は二酸化炭素放出の障害の発現としての血中Ｏ２分圧の低下に関連している。
【００３３】
本発明によれば“全呼吸不全”は、前記の酸素摂取又は二酸化炭素放出の障害の発現としての血中Ｏ２分圧の低下と血中ＣＯ２分圧の増加に関連している。
【００３４】
炎症性肺疾患及び変性性肺疾患、例えば慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気管支喘息、肺線維症、肺気腫、間質性肺疾患及び肺炎を患う患者においては、部分呼吸不全又は全呼吸不全であることが観察される。従って、本発明によれば、用語“必要とする患者”とは、以下の少なくとも１種の臨床状態：ＣＯＰＤが気管支喘息、肺線維症、肺気腫、間質性肺疾患又は肺炎を患う患者を指す。
【００３５】
用語“ＣＯＰＤ”は、慢性閉塞性肺疾患の略語である。ＣＯＰＤを患う患者は、身体能力の限界のような肺変化並びに肺外変化を特徴としている。肺変化は、炎症、粘液過剰分泌及び肺血管の変化により閉塞した気道の変化である。生ずる気流の制限と気道上皮の損失によって酸素化が損なわれる。更に、肺血液循環は、血管再構築［Santos S et al. Eur Respir J 2002 19: 632-8]と、生理学的順応機構で支配的な血管作動性（炎症性）メディエータの効果に由来し、かつ疾患悪化に伴い発生する肺血管の構造変化に部分的に由来する換気／潅流ミスマッチとにより損なわれる。この作用は、特に運動中と、酸素要求量が高まり、それが呼吸困難（低酸素症）と身体能力の限界によって表面化した場合とで明らかである。
【００３６】
ここで驚くべきことに、ＢＨ４が部分呼吸不全及び全呼吸不全の患者の治療に適していることが判明した。本発明によれば、内皮中で、ＮＯＳの調節障害及びＯＮＯＯ−濃度の増大は、両者ともＢＨ４の酸化をもたらし、こうして肺中及び骨格筋中のＢＨ４濃度の低下をもたらす。ＢＨ４濃度の低下により、ＮＯＳ（ｉＮＯＳ及びｅＮＯＳ）の脱共役が生じ、そしてスーパーオキシドの増大がもたらされ、最終的にはＯＮＯＯ−の生成に導かれる。スーパーオキシドアニオン濃度の増大は、より多くのＯＮＯＯ−に導き、そしてそのＯＮＯＯ−の増大が生ずることで、肺中及び骨格筋中でＢＨ４が少なくなる。このスーパーオキシドとＯＮＯＯ−の生成の循環並びにＢＨ４不活性化は最終的には内皮不全と換気／潅流ミスマッチをもたらす。ＢＨ４の投与は、ＮＯＳの再共役（すなわちＮＯＳがスーパーオキシドアニオンの代わりにＮＯを生成する）をもたらし、スーパーオキシドアニオンとＯＮＯＯ−の生成を低下させ、こうしてとりわけ血管拡張を生ずるＮＯの増大に導く。
【００３７】
用語“呼吸器疾患の予防及び／又は治療”並びに“部分呼吸不全又は全呼吸不全の予防及び／又は治療”及びそれに加えて用語“ＣＯＰＤの予防及び／又は治療”とは、ＢＨ４の投与が肺循環の血管の拡張をもたらすのと同時に、肺内の換気のより良い領域を選んで血流が再配分に導かれる状況を指すこの原理は、以下にリマッチングと呼称するが、これは部分呼吸不全又は全呼吸不全を患う患者、例えばＣＯＰＤ患者の肺において休息時と身体運動中の両方でガス交換機能に改善をもたらす。リマッチングは、肺中にガス交換の改善をもたらすだけでなく、骨格筋中にもガス交換の改善をもたらし、従って身体能力の改善をももたらす。用語“ＣＯＰＤ患者における筋不全の予防及び／又は治療”とは、まさに前記のＣＯＰＤ患者へのＢＨ４の投与の優れた結果を指すものである。
【００３８】
ＢＨ４又はその誘導体は当業者に公知の任意の好適な経路によって投与することができる。該製剤は、経口、非経口（皮下、皮内、筋内、静脈内及び動脈内）、鼻内、吸入（例えば、種々の型の加圧式定量エーロゾル、噴霧器又は注入器によって生成できる微粒子ダスト又はミスト）、直腸及び局所（例えば、皮膚、頬、舌下及び眼内の投与）のために適した製剤を含むが、最も好適な経路は、例えば被検者の状態及び疾患に依存しうる。
【００３９】
本発明の治療剤は、当該技術分野で公知の種々の方法によって投与できるが、多くの治療用途のためには、有利な投与形路は経口経路である。もう一つの有利な投与形路は、ＢＨ４又はその誘導体の吸入の様式によるものである。
【００４０】
経口投与を意図する医薬組成物の場合には、治療剤を配合して、自体公知でかつ当業者によく知られた方法に従って医薬品が得られる。治療剤は医薬品として、有利には適当な医薬担体と組み合わせて、錠剤、被覆錠剤、カプセル剤、カプレット剤、エマルジョン、懸濁液、シロップ又は液剤の形で使用され、その際、治療剤含量は有利には０．１〜９５質量%であり、そして適当な担体の選択によって、治療剤及び／又は所望の作用開始（例えば徐放形又は腸溶形）に厳密に合わせた医薬品投与形を達成することができる。
【００４１】
当業者はその専門知識により所望の医薬品製剤に適した担体又は賦形剤に精通している。溶剤、ゲル形成剤、錠剤助剤及び他の有効化合物担体の他に、例えば、酸化防止剤、分散剤、乳化剤、消泡剤、矯臭剤、保存剤、可溶化剤、着色剤又は浸透促進剤及び錯化剤（例えばシクロデキストリン）を使用することができる。
【００４２】
吸入用製剤は、有利にはラクトースを含有する粉末組成物と、例えば加圧包装から好適な噴射剤、例えば１，１，１，２−テトラフルオロエタン、１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン、二酸化炭素又は他の好適なガスを用いて送達される水溶液又は水性懸濁液又はエーロゾルとして配合されてよい噴霧組成物とを含む。慣用のクロロフルオロカーボンと比較して最小限のオゾン減少効果を有すると考えられる噴射剤の種類はヒドロフルオロカーボンを含み、かつかかる噴射剤系を用いた幾つかの医学的エーロゾル製剤は、例えばＥＰ０３７２７７７号、ＷＯ９１／０４０１１号、ＷＯ９１／１１１７３号、ＷＯ９１／１１４９５号、ＷＯ９１／１４４２２号、ＷＯ９３／１１７４３号及びＥＰ０５５３２９８号に開示されている。これらの用途は、全て、医薬品の投与のために加圧式エーロゾルを製造することを関連しており、そして新規の噴射剤のクラスの使用と関連する問題、特に製造される医薬品製剤に付随する安定性の問題を克服すると考えられる。それらの用途には、例えば極性の助溶剤のような１種以上の賦形剤（例えばエタノールのようなアルコール）、アルカン、ジメチルエーテル、界面活性剤（例えばフッ素化及び非フッ素化の界面活性剤、オレイン酸のようなカルボン酸、ポリエトキシレートなど）又は糖類のような増量剤の添加が推奨される（例えばＷＯ０２／３０３９４号を参照のこと）。懸濁液エーロゾルに関しては、有効成分を微細化して、エーロゾル製剤の投与後に肺中に有効成分の事実上全てが吸入されることが望ましく、従って、有効成分は１００ミクロン未満、所望には２０ミクロン未満、有利には１〜１０ミクロンの範囲、例えば１〜５ミクロンの範囲の粒度を有する。
【００４３】
該治療剤は、治療を必要とするひと、投与経路、治療されるべき症状及び患者の状態に慣用の程度の規模で投与されるが、最終決断は付き添いの医師によってなされるべきであることは、当業者には明らかなことである。
【００４４】
ＢＨ４調剤を経口投与する場合に、１錠が１０〜５００ｍｇのＢＨ４又はその誘導体を含有する調剤１〜３錠を投与することが好ましいことが判明した。有利には、本発明による調剤は、１回服用あたり、ＢＨ４又はその誘導体の量が体重ｋｇあたり０．５〜５０ｍｇとなる量で投与される。一般的に慢性呼吸器疾患、例えばＣＯＰＤの長期治療においては、ＢＨ４又はその誘導体は、数年間にわたって１０〜１００ｍｇの用量で１〜３回投与することができる。慢性疾患の急性エピソードの治療では、用量を５００ｍｇまで増大させることも可能である。
【００４５】
慢性疾患の連続的治療は、ＢＨ４又はその誘導体を吸入によって又は静脈内もしくは皮下の経路で投与することでも可能である。
【００４６】
ＢＨ４又はその誘導体を吸入により投与する場合には、治療剤を配合して当業者に公知の剤形とし、そして治療が必要なひとに慣用の程度の規模で投与する。ＢＨ４又はその誘導体を以下の適用計画で吸入によって投与することが好ましいと判明した：有利には、１０〜１０００ｍｇのＢＨ４を１％のアスコルビン酸を含有する滅菌水中に溶解させる。その溶液を、吸入装置を用いて、一日一回ないし一日三回で、ＢＨ４の最終量が一日当たり体重１ｋｇにつき０．５〜５０ｍｇとなるような量で投与する。ＢＨ４を吸入によって１０〜５００ｍｇの用量で１〜３回で連続的に投与することが好ましいと判明した。慢性疾患の急性エピソードの治療においては、用量を付き添いの医師の経験に基づいて用量を増大させることも可能である。
【００４７】
“二次包装”、製剤を有する“一次包装”及び患者パッケージは、当業者がこの種の製剤に関して標準的な商品と見なすものに相当する。好適な“一次包装”は、例えばブリスターである。吸入による投与の場合には、用語“好適な一次包装”とは、ＢＨ４又はその誘導体を含むバイアル、滅菌水を含むバイアル及び吸入に適した装置を指す。例として挙げられる適した“二次包装”は、折畳箱である。
【００４８】
本発明の有利な一実施態様では、ＢＨ４又はその誘導体は、呼吸器疾患の予防及び／又は治療のために、特に呼吸器疾患の予防及び／又は治療用の医薬品の製造のために、有利にはＣＯＰＤの予防及び／又は治療のためにアルギニン又はその誘導体と組み合わせて使用される。
【００４９】
ＢＨ４又はその誘導体とアルギニン又はその誘導体とのどちらも１つの製剤中で組み合わせることによって（同時組合せ）、又は小分けキット組合せ物として、両者を別々に同じ又は異なる経路を介して投与することによって（分離組合せ）、又は両者を異なる時点で同じ又は異なる経路を介して別々に投与することによって（順次的組合せ）、所定の単独投与で行った２つの治療の１つより明白な呼吸器疾患の予防又は治療を達成することができる。
【００５０】
用語“アルギニン又はその誘導体”とは、アルギニン、有利にはＬ−アルギニン（遊離形）、アルギニン前駆物質、有利にはＬ−アルギニン前駆物質、アルギニンと生理学的に認容性の酸との製剤学的に認容性の塩、有利にはＬ−アルギニンと生理学的に認容性の酸との製剤学的に認容性の塩及び製剤学的に認容性のアルギニン誘導体、有利には製剤学的に認容性のＬ−アルギニン誘導体を意味する。
【００５１】
有利な製剤学的に認容性のＬ−アルギニンの塩は、Ｌ−アルギニン塩酸塩（Ｌ−Ａｒｇ ＨＣｌ）、Ｌ−アルギニンアセチルアスパラギン酸塩、Ｌ−アルギニンアスパラギン酸塩、Ｌ−アルギニンクエン酸塩、Ｌ−アルギニングルタミン酸塩、Ｌ−アルギニンオキソグルタル酸塩、Ｌ−アルギニンチジアシク酸塩（tidiacicate）及びＬ−アルギニンチモナシク酸塩（timonacicate）である。
【００５２】
アルギニン及びその誘導体は、経口的に又は非経口的に、慣用の様式で（皮下的に、静脈内で、筋内で、腹腔内で、直腸内で）投与することができる。また投与は、鼻咽頭腔を通じて蒸気又は噴霧によって実施することもできる。経口投与が好ましい。
【００５３】
用量は、患者の年齢、状態及び体重と投与様式に依存する。投与は、数回の単一投与（例えば２〜４回）で又はデポー製剤として一日一回又は一日二回で行うことができる。
【００５４】
アルギニン及びその誘導体を経口投与する場合に、成人に一日あたり少なくとも２ｇ〜３０ｇ、有利には６ｇ〜２４ｇ、最も有利には約１０ｇを投与することが好ましいと判明した。有利には、本発明による調剤は、１回服用あたり、アルギニン又はその誘導体の量が一日につき体重１ｋｇあたり５０ｍｇ〜１２００ｍｇ、有利には２００ｍｇ〜８００ｍｇとなる量で投与される。
【００５５】
前記のように、ＢＨ４又はその誘導体とアルギニン又はその誘導体は、１つの医薬組成物中で一緒に、別個の経路で同時に、小分けキット組合せとして、両者を同じ又は異なる経路を介して別々に投与することによって（分離組合せ）又は異なる時点で同じ又は異なる経路を介して別々に投与することによって（順次的組合せ）投与することができる。
【００５６】
従って、本発明は、呼吸器疾患の予防及び／又は治療で使用するための、同時の、別々の又は順次の投与のための組合せ調剤としての、ＢＨ４又はその誘導体とアルギニン又はその誘導体とを含有する調剤にも関する。用語“調剤”とは、有利には“小分けキット”を意味する。
【００５７】
有利な一実施態様では、ＢＨ４又はその誘導体とアルギニン又はその誘導体は、同時に２つの異なる経口医薬組成物で投与される。
【００５８】
もう一つの有利な実施態様では、ＢＨ４又はその誘導体とアルギニン又はその誘導体は、同時であるが、異なる経路を介して別々に投与される。前記の有利な実施態様では、ＢＨ４又はその誘導体は、前記のように吸入によって投与され、そしてアルギニン又はその誘導体は経口で投与される。
【００５９】
もう一つの有利な実施態様では、ＢＨ４又はその誘導体とアルギニン又はその誘導体は、１つの経口医薬組成物において一緒に投与される。
【００６０】
従って、本発明はまた、ＢＨ４又はその誘導体とアルギニン又はその誘導体とを含有する医薬組成物にも関する。有利な実施態様では、医薬組成物は、更に製剤学的に認容性の担体を含有する。更なる有利な一実施態様では、この医薬組成物は、医薬品として、有利には呼吸器疾患の予防及び／又は治療において使用される。
【００６１】
該化合物は、個々に又は一緒に、慣用の固形医薬剤形又は液体医薬剤形で、例えば未被覆の錠剤又は（皮膜）被覆錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、坐剤、液剤、軟膏剤、クリーム剤又はスプレー剤として使用することができる。これらは慣用の様式で製造される。これらの剤形においては、有効物質と一緒に慣用の医薬品助剤、例えば錠剤結合剤、充填剤、保存剤、錠剤崩壊剤、流動調節剤、可塑剤、湿潤剤、分散剤、乳化剤、溶剤、遅延放出剤、酸化防止剤及び／又は噴射ガスを用いて加工することができる（Sucker et al. Pharmaceutische Technologie, Thieme Verlag, Stuttgart, 1978を参照のこと）。前記のようにして得られた投与形は、通常は、有効物質を０．１〜９９質量％の量で含有する。
【００６２】
また本発明の対象は、好適な容器中にＢＨ４又はその誘導体を含有し、かつ別個の容器中にアルギニン又はその誘導体を含有する、前記の投与計画に従って使用されるべき製剤である。
【００６３】
本発明により製造される医薬品単位包装は、ＢＨ４又はその誘導体を含有する好適な投与形と、アルギニン又はその誘導体を含有する好適な単位包装とからなっていてよい。２種の有効化合物は、有利には２種の異なる容器において単位包装中で、例えば錠剤又は錠剤と吸入装置で存在する。更に、医薬品単位包装は、説明書を、例えばＢＨ４又はその誘導体の治療学的有効量の投与を有利にはアルギニン又はその誘導体の投与と組み合わせて実施することが指示された医薬品用の添付文書の形で有する。
【００６４】
別々に適用する場合には、ＢＨ４又はその誘導体の投与は、アルギニン又はその誘導体の投与の前に、それと同時に又はその後に実施する。
【００６５】
更に本発明は、薬剤のＢＨ４又はその誘導体及び／又はアルギニン又はその誘導体と一緒に、この薬剤を組み合わせて呼吸器疾患の予防及び／又は治療のために同時に、別々に又は順次に投与するための説明書を有する販売パッケージに関する。
【００６６】
産業上利用可能性
今までは、チオトロピウムブロマイドのみが、ＣＯＰＤの症状の治療用の気管支拡張剤として市場に出されていたに過ぎない。このように、治効のある療法は現在では利用不可能である。本発明の有用な効果は、ＣＯＰＤのための治効のある療法として知られる化合物プロフィール（公知の副作用、公知の吸収、分布、代謝及び排泄）を有する公知化合物、すなわちＢＨ４又はその誘導体の使用に関連するものである。ＢＨ４又はその誘導体によるＣＯＰＤの治療は、ＣＯＰＤ患者における、そのリマッチング効果とＣＯＰＤの炎症性成分とによる酸素化障害に向けられ、ＮＯＳの再共役効果を通じて酸素化の改善とＣＯＰＤ患者の身体能力の改善をもたらすものである。
【００６７】
実施例
実施例１： 
注射用ＢＨ４調剤の製造
均質溶液を作製するために、１．５ｇのＢＨ４二塩酸塩、１．５ｇのアスコルビン酸、０．５ｇのＬ−システイン塩酸塩及び６．５ｇのマンニトールを滅菌精製水中に溶解させて、１００ｍｌにし、次いで滅菌し、１ｍｌのアリコートそれぞれをバイアル又はアンプル中に分注し、凍結乾燥させてから密封した。
【００６８】
実施例２： 
注射用ＢＨ４調剤の製造
有酸素雰囲気下で、２．０ｇのＢＨ４二塩酸塩を滅菌脱イオン水中に溶解させ、１００ｍｌにし、滅菌してから密封した。
【００６９】
実施例３： 
錠剤型調剤の製造
１０部のアスコルビン酸と５部のＬ−システイン塩酸塩を、１部のポリビニルピロリドンに添加し、これを滅菌脱イオン水中に溶解させ、均質溶液を得た。次いで、１０部のＢＨ４二塩酸塩を添加して、均質溶液を調製した。この溶液を５８部のラクトースと１５部の微結晶性セルロースと１部のステアリン酸マグネシウムと混合し、そして打錠した。
【００７０】
実施例４：
内皮細胞によるＢＨ４誘導体のＢＨ４への変換
内皮細胞（ＨＵＶＥＣ及びＥＡ．ｈｙ９２６）を好適な培養培地中で培養し、そして指示された時間にわたって、セピアプテリンとＢＨ４（各１００μＭ）でそれぞれ処理した。ＰＢＳを用いた過度の洗浄工程後に、細胞を溶解させ、そしてビオプテリン含量を、Hesslinger et al., J. Biol. Chem. 273, 21616-21622, 1998に詳細に記載されるように、ヨウ素還元とＤｏｗｅｘビーズ上での半精製をした後に蛍光検出（励起：３５０ｎｍ、発光：４５０ｎｍ）をもって逆相ＨＰＬＣによって分析した。
【００７１】
図１は、外因性のセピアプテリンがＥＡ．ｈｙ９２６内皮細胞によって数分以内に細胞内ビオプテリンに効果的に変換されたことを示しており、こうして内皮細胞が外因性ＢＨ４誘導体を、細胞内でＮＯＳの補因子として働きうる細胞内ＢＨ４に変換する能力が裏付けられた。
【００７２】
実施例５： 
インビトロでの、ＢＨ４及びその誘導体であるセピアプテリンによるＮＯ合成の促進
ＰｏｎＡ誘導性プロモーターの転写制御下にヒトｉＮＯＳで安定的にトランスフェクションされたＨＥＫ２９３細胞を、１０ｍＭのＤＡＨＰ（ジアミノヒドロキシピリジン）、つまりＧＴＰシクロヒドロラーゼの阻害剤（Xie et al., J. Biol. Chem. 273, 21091-21098, 1998）で処理し、内因性のテトラヒドロビオプテリン生成を遮断した。ｉＮＯＳの発現を５ｍＭのＰｏｎＡで２４時間刺激し、そして１０ｍＭのＤＡＨＰで並行して処理した後に、ＢＨ４又はセピアプテリンを濃度を高めつつ添加し、ＮＯ生成をＧｒｉｅｓｓアッセイを用いて測定して、安定なＮＯ産物である亜硝酸イオンと硝酸イオンを分析した。硝酸イオンは、硝酸イオン還元酵素によって亜硝酸イオンに還元され、そしてその吸収をＷａｌｌａｃ社製の分光光度計中で５４４ｎｍで測定した。
【００７３】
図２は、ＢＨ４又はセピアプテリンで処理されたＨＥＫ２９３ｉＮＯＳ細胞によるＮＯの濃度依存性生成を示しており、こうして明らかに、外因性ＢＨ４と細胞内ＢＨ４に変換されるその誘導体が、ＢＨ４を排除したｉＮＯＳによってＮＯ生成をもたらすことが裏付けられた。
【００７４】
図２ａでは、ＢＨ４は、ＤＡＨＰで前処理して内因性のテトラヒドロビオプテリン生成を阻害したＨＥＫ２９３ｉＮＯＳ細胞中のｉＮＯＳからのＮＯ合成を促進している。
【００７５】
図２ｂでは、セピアプテリンは、ＤＡＨＰで前処理して内因性のテトラヒドロビオプテリン生成を阻害したＨＥＫ２９３ｉＮＯＳ細胞中のｉＮＯＳからのＮＯ合成を促進している。
【００７６】
実施例６：
外因性のＢＨ４とアルギニンとを添加することによるヒトｉＮＯＳからのスーパーオキシド生成の遮断
組み換え型のヒトｉＮＯＳを大腸菌中で過剰発現させ、そしてＡＤＰセファロースカラムを用い、引き続きＳｕｐｅｒｄｅｘカラムを用いて精製して、ＢＨ４不含でアルギニン不含のｉＮＯＳを得た。１μｇのヒトｉＮＯＳを２００μＭのＮＡＤＰＨ及び１ｍＭのＣＰＨと一緒にインキュベートした。３７℃で６０分間インキュベートした後に、生成されたスーパーオキシドを、安定なＣＰＨラジカルとしてＢｒｕｋｅｒ社製のｅ−ｓｃａｎ機器において電子スピン共鳴分光法（ＥＳＲ）を介して測定した。
【００７７】
１μＭ又は１０μＭのＢＨ４の添加は、スーパーオキシド信号に大きな変化をもたらさないが、１ｍＭのアルギニンを一緒に添加すると、スーパーオキシド信号はバックグラウンドレベルにまで低下した（図３ａ）。更に、アルギニンと一緒にインキュベートすることによって、スーパーオキシド生成はわずかに５０％だけ低減された（図３ｂ）。このように、ＢＨ４は、特にアルギニンと組み合わせることで、ヒトｉＮＯＳを再共役させることができ、従って、有害なスーパーオキシドとパーオキシ亜硝酸イオンの生成を抑制することができる。
【００７８】
実施例７：
ＬＰＳで刺激され、単離され、そして潅流されたウサギ肺のエクスビボＣＯＰＤ肺モデルによるＢＨ４によるスーパーオキシド生成の遮断
Weissmann et al., Am. J. Physio. 280, L638-645, 2001に記載されるように、肺を単離し、潅流させ、そして換気させた。１２０分にわたりＬＰＳ刺激した後に、スピントラップＣＰＨ（１ｍＭ）を更に１８０分間にわたり添加し、スーパーオキシド検出をＥＳＲを媒介してＭａｇｎｅｔｅｃｈ社製の装置を用いて実施した。
【００７９】
吐き出されたＮＯを換気された肺において高感度化学発光検出器を用いて測定した。ＬＰＳ刺激により、ウサギにおけるｅＮＯＳに由来する吐き出されたＮＯレベルの時間に依存する低下がもたらされる。ＢＨ４での同時の処理（１００μＭ）は、この低下を大きく減衰させた、従ってｅＮＯＳの脱共役を抑制した（図４ａ）。更にＢＨ４処理（１００μＭ）は、ＳＯＤで阻害可能なＥＳＲ信号の顕著な低下をもたらし、これは、ＢＨ４が前炎症性刺激で処理された肺においてスーパーオキシド生成を低減できることを示している（図４ｂ）。
【００８０】
実施例８：
ＬＰＳで刺激され、単離され、そして潅流されたウサギ肺のエクスビボＣＯＰＤ肺モデルにおけるＢＨ４とアルギニンとの組合せたスーパーオキシド生成の遮断
実施例７を、ＢＨ４単独の代わりにＢＨ４とアルギニンとを組み合わせて使用することによって繰り返した。その結果は、ＢＨ４とアルギニンとを組み合わせると、前炎症性刺激で処理された肺において相乗的にスーパーオキシド生成を低減しうることを示している。
【図面の簡単な説明】
【００８１】
【図１】図１は、外因性のセピアプテリンがＥＡ．ｈｙ９２６内皮細胞によって数分以内に細胞内ビオプテリンに効果的に変換された結果を示している
【図２ａ】図２ａは、ＢＨ４が、ＤＡＨＰで前処理して内因性のテトラヒドロビオプテリン生成を阻害したＨＥＫ２９３ｉＮＯＳ細胞中のｉＮＯＳからのＮＯ合成を促進している結果を示している
【図２ｂ】図２ｂは、セピアプテリンが、ＤＡＨＰで前処理して内因性のテトラヒドロビオプテリン生成を阻害したＨＥＫ２９３ｉＮＯＳ細胞中のｉＮＯＳからのＮＯ合成を促進している結果を示している
【図３ａ】図３ａは、実施例６の結果であって、１μＭ又は１０μＭのＢＨ４の添加は、スーパーオキシド信号に大きな変化をもたらさないが、１ｍＭのアルギニンを一緒に添加すると、スーパーオキシド信号はバックグラウンドレベルにまで低下したことを示すＥＳＲデータを示す
【図３ｂ】図３ｂは、実施例６の結果であって、アルギニンと一緒にインキュベートすることによって、スーパーオキシド生成はわずかに５０％だけ低減された結果を示している
【図４ａ】図４ａは、実施例７の結果であって、ＢＨ４での同時の処理（１００μＭ）が、この低下を大きく減衰させた、従ってｅＮＯＳの脱共役を抑制した結果を示している
【図４ｂ】図４ｂは、実施例７の結果であって、更にＢＨ４処理（１００μＭ）は、ＳＯＤで阻害可能なＥＳＲ信号の顕著な低下をもたらし、これは、ＢＨ４が前炎症性刺激で処理された肺においてスーパーオキシド生成を低減できることを示している
【図１】
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【図２ａ】
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【図２ｂ】
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【図３ａ】
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【図３ｂ】
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【図４ａ】
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【図４ｂ】
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【国際調査報告】
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