(57)【要約】本発明は、医学的治療および/または病的状態から生じる部分的または完全なグレリン欠乏になるリスクのある個体におけるグレリン欠乏および/またはそれに関連する望ましくない症状を予防または治療ための医薬の製造するための成長ホルモン(GH)分泌促進薬、例えばグレリン様化合物の使用に関する。本発明は、グレリン欠乏に罹るかまたは罹るリスクのある個体における脂肪量の減少、除脂肪体重の減少、体重の減少、悪液質、性欲減退、免疫機能不全、栄養失調、睡眠パターンの乱れ、眠気、腸管吸収の減少および/または腸管運動の問題の1またはそれ以上を予防または治療するための医薬を製造するための分泌促進薬化合物の使用にも関する。さらに、本発明は、a) 甲状腺機能亢進状態から甲状腺機能正常状態に転換するかまたはb) 甲状腺機能亢進状態から甲状腺機能正常状態への転換から寛解している個体における体重増加を抑制するための医薬を製造するための分泌促進薬、例えばグレリン様化合物の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
グレリン欠乏の治療または予防を必要とする個体におけるグレリン欠乏を治療または予防するための医薬を製造するための分泌促進薬化合物の使用。
【請求項２】
以下の症状：脂肪量の減少、除脂肪体重の減少、体重減少、悪液質、性欲減退、免疫機能不全、および栄養失調、睡眠パターンの乱れ、眠気、腸管吸収の減少および/または腸運動の問題の1またはそれ以上を治療することを含む請求項1記載の使用。
【請求項３】
該グレリン欠乏が病的状態により生じる請求項1または2に記載の使用。
【請求項４】
該病的状態がインスリン抵抗性、例えば高インスリン血症に関連する請求項3記載の使用。
【請求項５】
該病的状態が多嚢胞性卵巣症候群、先端巨大症、一次/二次性腺機能低下症、非アルコール性脂肪肝疾患(NAFLD)および/またはＩ型糖尿病からなる群から選ばれる請求項4記載の使用。
【請求項６】
該グレリン欠乏が医学的治療により生じる請求項1または2に記載の使用。
【請求項７】
該個体が完全または部分的なGI管の上皮の崩壊に関連するグレリン欠乏に罹るか罹るリスクがあるものである請求項1または2に記載の使用。
【請求項８】
該上皮の崩壊が病的状態、遺伝病、または医学的治療の1またはそれ以上により生じる請求項7記載の使用。
【請求項９】
該医学的治療が化学療法および/または放射線療法から選ばれる請求項8記載の使用。
【請求項１０】
該病的状態が胃炎である請求項8記載の使用。
【請求項１１】
該病的状態が甲状腺機能亢進症である請求項3記載の使用。
【請求項１２】
該甲状腺機能亢進症が、グレーブス病、高レベルのヨウ素を含む薬剤、甲状腺炎、亜急性甲状腺炎、分娩後甲状腺炎、甲状腺ホルモン産生細胞のフィードバック制御の低下、中毒性結節性甲状腺腫、甲状腺ホルモンの過剰服用、または甲状腺薬物療法の1またはそれ以上により生じる請求項11記載の使用。
【請求項１３】
該病的状態が低血漿グレリン濃度に関連するグレリン突然変異、例えばArg51 Glnグレリン突然変異に関連する請求項1〜4のいずれかに記載の使用。
【請求項１４】
インスリン抵抗性に関連する病的状態に罹るかまたは罹るリスクがある個体において、以下：
-脂肪量の減少
-除脂肪体重の減少
-体重の減少
-悪液質
-性欲減退
-免疫機能不全
-栄養失調
-睡眠パターンの乱れ
-眠気
-腸管吸収の減少
-腸運動の問題
の1またはそれ以上を予防または治療するための医薬を製造するための分泌促進薬化合物の使用。
【請求項１５】
該症候群が多嚢胞性卵巣症候群、先端巨大症、一次/二次性腺機能低下症、非アルコール性脂肪肝疾患(NAFLD)および/またはI型糖尿病からなる群から選ばれる請求項14記載の使用。
【請求項１６】
GI管の上皮の崩壊に罹るかまたは罹るリスクがある個体において、以下：
-脂肪量の減少
-除脂肪体重の減少
-体重の減少
-悪液質
-性欲減退
-免疫機能不全
-栄養失調
-睡眠パターンの乱れ
-眠気
-腸管吸収の減少
-腸運動の問題
の1またはそれ以上を予防または治療するための医薬を製造するための分泌促進薬化合物の使用。
【請求項１７】
該乱れが化学療法、放射線療法、または胃炎の1またはそれ以上により生じる請求項16記載の使用。
【請求項１８】
甲状腺機能亢進症に罹患するか罹患するリスクのある個体において以下：
-脂肪量の減少
-除脂肪体重の減少
-体重の減少
-悪液質
-性欲減退
-免疫機能不全
-栄養失調
-睡眠パターンの乱れ
-眠気
-腸管吸収の減少
-腸運動の問題
1またはそれ以上を予防または治療するための医薬を製造するための分泌促進薬化合物の使用。
【請求項１９】
該甲状腺機能亢進症が、以下：グレーブス病、高レベルのヨウ素を含む薬剤、甲状腺炎、亜急性甲状腺炎、分娩後甲状腺炎、甲状腺ホルモン産生細胞のフィードバック制御の低下、中毒性結節性甲状腺腫、甲状腺ホルモンの過剰服用、または甲状腺薬物療法の1またはそれ以上により生じる請求項18記載の使用。
【請求項２０】
a) 甲状腺機能亢進状態から甲状腺機能正常状態に転換しているか、または
b) 甲状腺機能亢進状態から甲状腺機能正常状態への転換からの寛解にある
個体の体重増加を予防するための医薬を製造するための分泌促進薬化合物の使用。
【請求項２１】
該個体がグレーブス病に罹患しているかまたはその罹患から寛解している請求項20記載の使用。
【請求項２２】
該個体が甲状腺炎に罹患しているかまたはその罹患から寛解している請求項20または21記載の使用。
【請求項２３】
該甲状腺炎が亜急性甲状腺炎または分娩後甲状腺炎である請求項22記載の使用。
【請求項２４】
該甲状腺炎がDe Quervain(ドケルバン)甲状腺炎である請求項22記載の使用。
【請求項２５】
該個体が孤立性腺腫に罹患しているかまたはその罹患から寛解している請求項20記載の使用。
【請求項２６】
該個体が結節性甲状腺中毒症に罹患しているかまたはその罹患から寛解している請求項20記載の使用。
【請求項２７】
該個体が、甲状腺ホルモンの過剰投薬により生じた症状があるかまたはそれから寛解している個体、例えばT3を含むある形の甲状腺薬物療法を受けた個体である請求項20記載の使用。
【請求項２８】
該個体が、甲状腺産生細胞のフィードバック制御の低下により生じる症状があるかまたはそれから寛解している請求項20記載の使用。
【請求項２９】
該医薬が甲状腺機能亢進症を治療するための医薬と組み合わせて投与される請求項20〜28のいずれかに記載の使用。
【請求項３０】
甲状腺機能亢進症を治療するための医薬が、所望により心臓血管系を標的とする薬剤と組み合わせた、
A) 抗甲状腺薬、および/または
B) 外科手術、および/または
C) 放射性ヨウ素
の1またはそれ以上である請求項29記載の使用。
【請求項３１】
該分泌促進薬がグレリンまたはその医薬的に許容される塩である先の請求項のいずれかに記載の使用。
【請求項３２】
該分泌促進薬がグレリン様化合物またはその医薬的に許容される塩であり、該グレリン様化合物が、式I：Z1-(X1)m-(X2)-(X3)n-Z2
[式中、Z1は、所望により存在する保護基であり、
各X1は独立してアミノ酸から選ばれ、該アミノ酸は天然および合成アミノ酸から選ばれ、
X2は、天然および合成アミノ酸から選ばれるあらゆるアミノ酸であり、該アミノ酸は大きな疎水性基、好ましくはアシル基または脂肪酸で修飾されており、
各X3は、アミノ酸から独立して選ばれ、該アミノ酸は天然および合成アミノ酸から選ばれる。ここで、X1およびX3の1またはそれ以上が大きな疎水性基、好ましくはアシル基または脂肪酸で修飾されていてよい；
Z2は所望により存在する保護基であり、
mは1〜10の範囲の整数であり、
nは0または1〜35の範囲の整数である。］
で定義される構造を含む先の請求項のいずれかに記載の使用。
【請求項３３】
mが、1〜9、例えば1〜8、例えば1〜7、例えば1〜6、例えば1〜5、例えば1〜4、例えば1〜3、例えば1〜2、例えば2の範囲の整数である請求項32記載の使用。
【請求項３４】
Xが、修飾されたSer、修飾されたCys、および修飾されたLysからなる群から選ばれ、例えばXが修飾されたSerである請求項32または33記載の使用。
【請求項３５】
該グレリン様化合物が、
式II：Z1-Gly-(X1)m-1-(X2)-(X3)n-Z2、
式III：Z1-Gly-Ser-(X2)-(X3)n-Z2、および
式IV：Z1-Gly-(X2)-(X3)n-Z2
の化合物から選ばれる請求項32〜34のいずれかに記載の使用。
【請求項３６】
該グレリン様化合物が式IIIを有する請求項35記載の使用。
【請求項３７】
(X3)nが、下記に示す配列：
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln 
Phe Leu Ser Pro Glu His 
Phe Leu Ser Pro Glu 
Phe Leu Ser Pro 
Phe Leu Ser 
Phe Leu 
Phe 
の1またはそれ以上から選ばれる配列を含む請求項32〜36のいずれかに記載の使用。
【請求項３８】
nが、1〜25、例えば1〜24、例えば1〜15、例えば1〜10、例えば10〜25、例えば10〜24、例えば15〜25、例えば15〜24の範囲の整数である請求項32〜37のいずれかに記載の使用。
【請求項３９】
該アシル基がC1-C35アシル基から選ばれる請求項32〜38のいずれかに記載の使用。
【請求項４０】
該医薬が、非経口、静脈内、筋肉内、または皮下投与用の製剤である先の請求項のいずれかに記載の使用。
【請求項４１】
医薬が経口投与用製剤である請求項1〜40のいずれかに記載の使用。
【請求項４２】
該医薬が経鼻投与用製剤である請求項1〜40のいずれかに記載の使用。
【請求項４３】
該医薬が肺投与用製剤である請求項1〜40のいずれかに記載の使用。
【請求項４４】
該製剤が非経口投与用製剤である請求項1〜40のいずれかに記載の使用。
【請求項４５】
該製剤が皮下投与用製剤である請求項1〜40のいずれかに記載の使用。
【請求項４６】
該製剤が分泌促進薬、例えばグレリン様化合物またはその医薬的に許容される塩を含む請求項40〜45のいずれかに記載の使用。
【請求項４７】
該製剤が、分泌促進薬、例えばグレリン様化合物またはその塩を凍結乾燥物として含み、該製剤がさらに溶媒を含み、該凍結乾燥物および該溶媒が投与されるまで別のコンパートメント中にある請求項40〜46のいずれかに記載の使用。
【請求項４８】
該製剤が分泌促進薬、例えばグレリン様化合物またはその塩の溶液である請求項40〜47のいずれかに記載の使用。
【請求項４９】
該溶媒が生理食塩水である請求項48記載の使用。
【請求項５０】
該医薬が10ng〜10gグレリン/kg体重と等価な濃度で投与される先の請求項のいずれかに記載の使用。
【請求項５１】
該医薬が0.1μg〜1mgグレリン/kg体重、例えば0.5μg〜0.5mgグレリン/kg体重、例えば1.0μg〜0.1mgグレリン/kg体重、例えば1.0μg〜50μgグレリン/kg体重、例えば1.0μg〜10μgグレリン/kg体重と等価な濃度で投与される請求項50記載の使用。
【請求項５２】
該医薬が食事前または食事中にボーラスとして投与され、該ボーラスが0.3μg〜600mgグレリンと等価な量のグレリン様化合物またはその塩を含む先の請求項のいずれかに記載の使用。
【請求項５３】
該医薬が食事前または食事中にボーラスとして投与され、該ボーラスが2.0μg〜200mgグレリン、例えば5.0μg〜100mgグレリン、例えば10μg〜50mgグレリン、例えば10μg〜5mgグレリン、例えば10μg〜1.0mgグレリンと等価な量のグレリン様化合物またはその塩を含む請求項52記載の使用。
【請求項５４】
該医薬が、1日1〜3回投与され、各投与は、好ましくは食事前または食事中、好ましくは食事前180分未満、例えば食事前90分未満、例えば食事前45分未満、例えば食事前30分未満、例えば食事前25分未満、例えば食事前20分未満、例えば食事前15分未満、例えば食事前約10分未満、例えば食事前約5分未満、例えば食事の直前、または食事中、例えば食事開始後90分未満、例えば食事開始後45分未満、例えば食事開始後30分未満、例えば食事開始後25分未満、例えば食事開始後20分未満、例えば食事開始後15分未満、例えば食事開始後10分未満、例えば食事開始後5分未満である先の請求項のいずれかに記載の使用。
【請求項５５】
該医薬が1日3回投与される請求項54記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
出願または本願に引用したすべての特許および非特許文献は本明細書の一部を構成する。
【０００２】
本発明は、医学的治療および/または病的状態から生じる部分的または完全なグレリン欠乏に陥るリスクがある個体において、グレリン欠乏および/またはそれに関連する望ましくない症状を予防または治療するための医薬を製造するための成長ホルモン(GH)分泌促進薬、例えばグレリン様化合物の使用に関する。本発明は、グレリン欠乏に罹るかまたは罹るリスクのある個体における脂肪量の減少、除脂肪体重の減少、体重の減少、悪液質、性欲減退、免疫機能不全、栄養失調、睡眠パターンの乱れ、眠気、腸管吸収の減少および/または腸管運動の問題の1またはそれ以上を予防または治療するための医薬を製造するための分泌促進薬化合物の使用にも関する。さらに、本発明は、a)甲状腺機能亢進状態から甲状腺機能正常状態に転換するかまたはb)甲状腺機能亢進状態から甲状腺機能正常状態への転換から寛解している個体における体重増加を予防するための医薬を製造するための分泌促進薬、例えばグレリン様化合物の使用に関する。本発明は、さらに分泌促進薬、例えばグレリン様化合物を投与することによりa)甲状腺機能亢進状態から甲状腺機能正常状態に転換するかまたはb)甲状腺機能亢進状態から甲状腺機能正常状態への転換から寛解している個体における体重増加を予防する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
グレリンは、最初GH分泌の調節に関与すると記載された生体活性ペプチドであるが、後に食欲、食物摂取、およびエネルギー恒常性の主要な調節因子であることがわかった(Kojima M et al.、Trends Endocrinol Metab 12：118-122; Nakazato M et al.、2001、Nature 409：194-198)。他の多くの生体活性ポリペプチドと同様に、グレリンは、ホルモン、パラクリン物質、および神経伝達物質の両方として作用するようである。グレリン、そのレセプター、およびこのレセプターを介して作用する合成化合物の情報は、独特な「逆の」順番で明らかになった。80年代に、一連のオピオイド用ペプチド由来の合成ヘキサペプチドが単離下垂体細胞から成長ホルモン(GH)を放出させることができることがわかった(Bowers CY et al.、1980、Endocrinology 106：663-667)。この作用は成長ホルモン放出ホルモン(GHRH)レセプターと無関係であったため、製薬会社数社がこのヘキサペプチドGH分泌促進薬(GHS)およびその推定レセプターに基づいて薬剤発見プロジェクトに着手した。数シリーズの有力で有効なペプチドおよび非ペプチドGH分泌促進薬は、90年代中頃に続いて記載された(Bowers CY et al.、Endocrinology 114：1537-1545; Patchett AA et al.、1995; Proc Natl Acad Sci U S A 92：7001-7005; Smith RG et al.、Science 260：1640-1643)。しかしながら、わずか数年後にこれら合成GH分泌促進薬が作用するレセプターが最終的にクローンされ、多くの7TM Gプロテイン結合レセプターファミリーであることが示された(Howard AD et al.、Science 273：974-977; Smith RG et al.、1997 Endocr Rev 18：621-645)。1999年において、このレセプターの内在性リガンドであるホルモングレリンが最終的に発見された(Kojima M et al.、1999、Nature 402：656-660)。グレリンの主要産生部位は胃であり、該ペプチドが胃粘膜の古典的内分泌細胞中にみいだされる。
【０００４】
ここから、グレリンは食前状態に分泌され、食事の1〜2時間前に始まり、食事開始後少しの間続く、食前のグレリンの血漿レベルの急な短期間の急上昇をもたらす。グレリンは末梢のみで産生される食欲増進(食欲促進)物質であるため、グレリンの血漿レベルの増加は食事の開始に不可欠であると考えられる。
【０００５】
食欲の重要な開始因子としての役割において、GI管粘膜の内分泌細胞から放出されるグレリンはパラクリン物質として局所的に、ホルモンとして中枢的に作用しうる。
グレリン欠乏
【０００６】
グレリン欠乏の個体は、十分なレベルのペプチドホルモンのグレリンを欠く。グレリン欠乏には多くの病因が関連するが、現在まで、それ自身さらなる病因の重要な原因であるとは見なされなかった。特に、グレリンがマウス身体系の不可欠な調節因子ではないことを示すグレリン欠損マウスが作製され、該欠損マウスは、健康な同腹仔と同じサイズの成長速度、食物摂取、身体組成、繁殖、全体的行動、および組織病理を示した。Sun et al.、Molecular and Cellular Biology、23(22)：7973-7981、「Deletion of Ghelin affects neither growth nor appetite」)。すなわち、グレリン欠乏はさらなる病状の原因というより病状の結果であるかもしれない。
【０００７】
グレリン欠乏は、ある症例、例えば甲状腺機能亢進症で知られた現象であるが、以前はグレリン欠乏はGHS-1aレセプター発現の代償性上方調節であり、次いで該ホルモンに対する感受性の増加を誘導すると考えられていた。確かに明確なグレリン欠乏症候群は今まで実証されておらず、グレリン欠損患者に対するグレリン投与の必要性も実証されなかった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、グレリン欠乏および/またはグレリン欠損関連症状の予防または治療が必要な患者におけるグレリン欠乏および/またはグレリン欠損関連症状を予防または治療するための医薬を製造するための分泌促進薬化合物、例えばグレリンまたはグレリン様化合物の使用に関する。該個体は、例えば医学的治療または病的状態から生じる部分的または完全なグレリン欠乏を生じるかまたはそのリスクがあるかもしれない。本明細書に記載の全ての態様において、分泌促進薬、例えばグレリン様化合物を用いてグレリン欠乏に以前に罹患していたかまたはそれから寛解している患者の症状を治療/予防することができることも予想される。
【０００９】
ヒトのグレリン欠乏の効果がノックアウトマウスモデルより非常に異なることは驚くべき予期しないことである。ヒトにおけるグレリン欠乏症候群は、本発明者らにより以下の症状：脂肪量の減少、除脂肪体重の減少、体重の減少、悪液質、性欲減退、免疫学的崩壊、および栄養失調、睡眠パターンの乱れ、眠気、腸の吸収不良および運動の問題の1またはそれ以上と関連することがわかった。以前にはグレリン欠乏がヒト患者でそのような副作用があることは理解されていなかった。
【００１０】
本発明は、
-インスリン抵抗性に関連する病的状態
-GI管の上皮の崩壊に関連する病的状態
-甲状腺機能亢進症
から選ばれる病的状態に罹患するか罹患するリスクのある個体における、脂肪量の減少、除脂肪体重の減少、体重の減少、悪液質、性欲減退、免疫機能不全、栄養失調、睡眠パターンの乱れ、眠気、腸管吸収の減少および/または腸運動の問題の1またはそれ以上を予防または治療するための医薬を製造するための分泌促進薬化合物の使用にも関する。本発明は、グレリン欠乏に罹患した個体の治療方法にも関し、該個体にはGH分泌促進薬化合物またはその医薬的塩が投与される。さらに本発明は、
-インスリン抵抗性に関連する病的状態
-GI管の上皮の崩壊に関連する病的状態
-甲状腺機能亢進症
から選ばれる病的状態に罹患するか罹患するリスクのある個体における、脂肪量の減少、除脂肪体重の減少、体重の減少、悪液質、性欲減退、免疫機能不全、骨再変調(bone remodulation)、栄養失調、睡眠パターンの乱れ、眠気、腸管吸収の減少および/または腸運動の問題の1またはそれ以上を治療する方法に関する。
【００１１】
本発明化合物の投与が個体のグレリン欠乏状態を予防または逆転するよう作用することが好ましい。
【００１２】
別の局面において、本発明は、甲状腺機能亢進状態から甲状腺機能正常状態に転換し、および/または甲状腺機能亢進症の状態から寛解している個体における体重増加を予防するための医薬を製造するための分泌促進薬化合物の使用に関する。該個体が甲状腺機能亢進状態から甲状腺機能正常状態に転換していることが好ましい。さらに、本発明は、甲状腺機能亢進状態から甲状腺機能正常状態に転換し、および/または甲状腺機能亢進症の状態から寛解している個体に分泌促進薬を投与することを含む、該個体の体重増加を予防する方法に関する。
【００１３】
好ましくは、本発明の使用および方法に用いる分泌促進薬は、本明細書に以下に記載の構造を含むグレリン様化合物またはその医薬的に許容される塩である。
【００１４】
体重増加を最小限にするため、分泌促進薬療法は、個体の血漿グレリンレベルを少なくとも正常化する、すなわち個体のグレリンレセプター数の上方調節を抑制する用量で、甲状腺機能亢進症の治療が推奨された時に開始し、治療期間を通して(および所望により寛解期間中、その後)継続することが好ましい。
【００１５】
本発明の好ましい局面において、分泌促進薬、例えばグレリン様化合物は、特に修飾アミノ酸を脱アシル化から保護するために、例えば該分泌促進化合物をリポソーム、ミセル、イスコム、および/またはマイクロスフェア、または他の輸送分子に組み込むことにより該分泌促進薬の半減期を増大することができる物質と共に投与される。
【００１６】
本発明の全ての態様において、該医薬は、ボーラス注射として、または速い連続注入、すなわち好ましくは120分未満、例えば90分未満、例えば60分未満、例えば45分未満、例えば30分未満、例えば25分未満、例えば20分未満、例えば15分未満、例えば12分未満、例えば10分未満、例えば8分未満、例えば6分未満、例えば5分未満、例えば4分未満、例えば3分未満、例えば2分未満、例えば1分間持続する注入により投与することができる。
【００１７】
ある好ましい態様において、該医薬はボーラスとして投与される。該ボーラスは好ましくは皮下投与される。
【００１８】
甲状腺機能亢進状態から甲状腺機能正常状態に転換した個体の体重増加の予防
【００１９】
理論に縛られることなく、甲状腺機能亢進症における低血漿グレリンレベルおよび欠乏(starvation)の一般的状態は視床下部におけるグレリンレセプターレベルの増加を誘導しうる。この上方調節は、甲状腺機能の実際の増加より遙かに長く続き得るが、グレリンレセプターの構造的活性により視床下部は食物摂取の増加に反応する。そのような代謝変化を伴う個体の分泌促進薬による治療は、グレリンレセプターの上方調節を予防し、すなわち高レベルの食物摂取の抑制または減少および体重増加の減少または抑制をもたらす。
【００２０】
分泌促進薬、例えばグレリンの投与は、甲状腺機能正常状態が、例えば抗甲状腺治療または放射性ヨウ素治療により達成された1〜5年後に観察される体重増加を抑制または減少させるようにも作用しうる。すなわち、個体に甲状腺機能正常状態が達成された1〜5年後に代謝変化による体重増加のリスクがまだあるとき、グレリンは、甲状腺機能亢進症治療からの寛解中の体重増加を予防することもできる。
【００２１】
これらの効果は、おそらく、グレリンが甲状腺機能亢進性疾患のある不安な患者をリラックスさせるのに有用な運動活性を低下させる寄与効果とも相乗的に作用する。別の寄与効果は、特に甲状腺機能亢進状態から甲状腺機能正常状態に転換している個体における体重増加の予防または体重維持の促進は、エネルギー摂取とエネルギー消費のアンバランス、すなわち全身体代謝を是正することであるかもしれない。甲状腺機能亢進症期中に分泌促進薬、例えばグレリンは、代謝増加を是正し、体重を増加させ、体温を低下させ、異化状態を最小限にすることができよう。さらに、グレリンは、甲状腺機能亢進症性疾患のある不安な患者をリラックスさせるのを助ける運動活性の減少も示した。
(発明の詳細な説明)
定義
【００２２】
アミノ酸：少なくとも1の側鎖または官能基を含む、炭素原子を含む中心部分すなわち炭素原子鎖により分けられたアミノ末端部分(NH2)とカルボキシ末端部分(COOH)を含む存在。NH2はアミノ酸またはペプチドのアミノ末端に存在するアミノ基を表し、COOHはアミノ酸またはペプチドのカルボキシル末端に存在するカルボキシル基を表す。総称的用語アミノ酸は、天然アミノ酸および非天然アミノ酸の両方を含む。J. Biol. Chem.、243：3552-59(1969)に記載され、37C.F.R.、section 1.822(b)(2)に採用された標準的名称の天然アミノ酸は下記表1に記載したアミノ酸群に属する。非天然アミノ酸は表1に記載していないものである。非天然アミノ酸の例は例えば37C.F.R. section 1.822(b)(4)に記載されたものである(この内容は本明細書の一部を構成する。)。非天然アミノ酸のさらなる例を以下に記載する。本明細書に記載のアミノ酸残基は「D」または「L」異性体型でありうる。
【００２３】
略号              アミノ酸
1文字      3文字                 
Y          Tyr          チロシン
G          Gly          グリシン
F          Phe          フェニルアラニン
M          Met          メチオニン
A          Ala          アラニン
S          Ser          セリン
I          Ile          イソロイシン
L          Leu          ロイシン
T          Thr          トレオニン
V          Val          バリン
P          Pro          プロリン
K          Lys          リジン
H          His          ヒスチジン
Q          Gln          グルタミン
E          Glu          グルタミン酸
W          Trp          トリプトファン
R          Arg          アルギニン
D          Asp          アスパラギン酸
N          Asn          アスパラギン
C          Cys          システイン
表1．天然アミノ酸およびその対応コード
【００２４】
食欲：個体の食欲は、摂取した食物の量を測定し、個体の食欲を評価することにより評価する。食欲(すなわち空腹)は、典型的には1週間に数回、無作為に個体に行った短い質問表で評価する。典型的には、対象を、空腹、食物への執着、およびより大量の種々の種類の食物への食欲について、1(全くない)〜5(極度)の範囲のアナログスケールを用いる質問に答えることにより評価する。
【００２５】
アミノ酸残基：用語「アミノ酸残基」は、標準アミノ酸、非標準アミノ酸、または少なくとも1の他の種、例えば2、例えば3、例えば3を超える他の種と反応する偽アミノ酸を含むことを意味する。特にアミノ酸残基は、遊離カルボキシル基の代わりにアシル結合、および/または遊離アミン基の代わりにアミン結合および/またはアミド結合を含んでよい。さらに、反応したアミノ酸残基はアミド結合の代わりにエステルまたはチオエステル結合を含んでよい。
【００２６】
BMI：肥満度指数(body mass index)(BMI)は、個体の身長と体重の比を測定する。BMIは体重(キログラム)÷(身長(メートル))2を計算して決定する。BMIの「正常」範囲は19〜22である。
【００２７】
体脂肪量：体脂肪量は、例えば脂肪折りたたみ技術により測定することができ、ペンチ型キャリパーを用いて身体の典型的部位の皮膚の折りたたみ厚を測定することにより皮下脂肪を測定する。次に、これら皮膚折りたたみ測定値を用いて種々の測定値から得たスコアを加え、この値を個人間の相対肥満度の指標として用いるか、または体脂肪率を推定するために開発された数式に該測定値を用いることにより体脂肪を計算する。体脂肪量を計算するのに用いることができる別の測定方法はDEXAスキャンである。
【００２８】
悪液質：消耗性疾患。その症状に体重の減少、筋肉の消耗、性欲減退、および全般的衰弱を含む。これら症状は、しばしば化学療法の治療計画と関連がある。
【００２９】
化学療法：本明細書において用語「化学療法」は、通常骨髄容量の減少をもたらす細胞毒性薬による個体のあらゆる処置(治療)をいう。「細胞毒性薬」は、好ましくは細胞増殖周期の特定部分を標的にすることにより細胞を殺すかまたは細胞の増殖を停止させる薬剤を意味する。化学療法により治療することができる疾患には転移癌が含まれる。
【００３０】
濃度等価：濃度等価は、in vitroおよび/またはin vivoで野生型グレリンと用量反応曲線から評価した反応が等しい分泌促進薬の用量として定義される等価用量である。
【００３１】
グレリン：Kojima M、Hosoda H、Date Y、Nakazato M、Matsuo H、Kangawa K 1999、Ghrelin is a growth-hormone-releasing acylated peptide from stomach. Nature 402：656-660に記載のポリペプチド。ヒト28aaグレリンは配列番号1のアミノ酸を有する。
【００３２】
グレリン類似体：本発明は、グレリン類似体の使用も含む。本願の文脈において、グレリンの類似体は、実質的にin vivoでグレリンと同じ生物学的作用を有するあらゆるペプチドまたは非ペプチド化合物と理解すべきである。非ペプチドグレリン類似体の例は、多くのグレリン類似体を記載したEP 0 869 974およびEP 1 060 190に記載されている(この内容は本明細書の一部を構成する。)。本明細書で言及した文献に記載のあらゆる類似体を利用しうる。好ましい化合物は、NN703[5-アミノ-5-メチレックス-2-エン酸 N-メチル-N-((1R)-1-(メチル-((1R)-1-(メチルカルバモイル-2-フェニルエチルカルボモイル)-2-(ナフタレン-2-イル)エチル)アミド]、およびMK677[MK0677とも呼ばれる。cf. Drug Discovery Today、vol. 4、No. 11、November 1999,497-506]、またはNNC26-1291、またはNNC26-1187(それぞれWO 99/58501およびWO 00/26252に記載の非ペプチジル成長ホルモン分泌促進薬である。この内容は本明細書の一部を構成する。)で表される化合物である。
【００３３】
グレリン様化合物：本明細書で用いている用語「グレリン様化合物」は、本明細書に記載の所望の治療効果をもたらすグレリン機能に関して野生型グレリン、特に野生型ヒトグレリンの機能と似ているあらゆる化合物を表し、好ましくは、
式I：Z1-(X1)m-(X2)-(X3)n-Z2
[式中、Z1は、所望により存在する保護基であり、
各X1は独立してアミノ酸から選ばれ、該アミノ酸は天然および合成アミノ酸から選ばれ、
X2は、天然および合成アミノ酸から選ばれるあらゆるアミノ酸であり、該アミノ酸は大きな疎水性基、好ましくはアシル基または脂肪酸で修飾されており、
各X3は、アミノ酸から独立して選ばれ、該アミノ酸は天然および合成アミノ酸から選ばれる。ここで、X1およびX3の1またはそれ以上が大きな疎水性基、好ましくはアシル基または脂肪酸で修飾されていてよい；
Z2は所望により存在する保護基であり、
mは1〜10の範囲の整数であり、
nは0または1〜35の範囲の整数である。］
で表される。
【００３４】
グレリン欠乏：多くのグレリン欠乏測定法があり、これら方法を用いて計算したグレリンの「レベル」は、常に直接比較できるわけではない。本発明の開示のために、「グレリン欠乏」は、以下の方法の一つまたは当業者の技術内にある等価な方法を用いて定義される。
(a)Marchesini et al.、J. Clin. Endocrinol. Metab、2003 Dec; 88(12)：5674-9の方法
【００３５】
この方法は、正常空腹時グレリンレベルを401fmol/ml(誤差範囲130fmol/ml)と計算する。このアッセイ法を用いて、グレリン欠乏は、個体の空腹時グレリンレベルが265fmol/ml未満、例えば255fmol/ml未満、例えば245fmol/ml未満、例えば235fmol/ml未満、例えば225fmol/ml未満、例えば215fmol/ml未満、例えば205fmol/ml未満、例えば195fmol/ml未満、例えば185fmol/ml未満、例えば175fmol/ml未満、例えば165fmol/ml未満、例えば155fmol/ml未満、例えば145fmol/mlの時に診断されると本明細書では理解すべきである。
(b)Ariyasu et al.、Endocrinology 2002、143(9)：3341-3351の方法
【００３６】
この方法は、正常空腹時グレリンレベルを150fmol/ml(誤差範囲40fmol/ml)と計算する。このアッセイ法を用いて、グレリン欠乏は、個体の空腹時グレリンレベルが105fmol/ml未満、例えば100fmol/ml未満、例えば95fmol/ml未満、例えば90fmol/ml未満、例えば85fmol/ml未満、例えば80fmol/ml未満、例えば75fmol/ml未満、例えば70fmol/ml未満、例えば65fmol/ml未満、例えば60fmol/mlの時に診断されると本明細書では理解すべきである。
(c)Enomoto et al.、Clinical Science 105,431-435、2003の方法
【００３７】
この方法は、正常空腹時グレリンレベルを150fmol/mlと計算する。このアッセイ法を用いて、グレリン欠乏は、個体の空腹時グレリンレベルが130fmol/ml未満、例えば125fmol/ml未満、例えば120fmol/ml未満、例えば115fmol/ml未満、例えば110fmol/ml未満、例えば105fmol/ml未満、例えば100fmol/ml未満、例えば95fmol/ml未満、例えば90fmol/ml未満、例えば85fmol/ml未満、例えば80fmol/ml未満、例えば75fmol/ml未満、例えば70fmol/ml未満、例えば65fmol/ml未満、例えば60fmol/mlの時に診断されると本明細書では理解すべきである。
(d)Cummings et al.、New England Journal of Medicine、2002、346(21)：1623-30の方法
【００３８】
この方法は、朝食ピーク時の正常グレリンレベルを192fmol/mlと計算する。このアッセイ法を用いて、グレリン欠乏は、朝食ピーク時のグレリンレベルが175fmol/ml未満、例えば170fmol/ml未満、例えば165fmol/ml未満、例えば160fmol/ml未満、例えば155fmol/ml、例えば150fmol/ml未満、例えば145fmol/ml未満、例えば140fmol/ml未満、例えば135fmol/ml未満、例えば130fmol/ml未満、例えば125fmol/ml未満、例えば120fmol/ml未満、例えば115fmol/ml未満、例えば110fmol/ml未満、例えば105fmol/mlの時に診断されると本明細書では理解すべきである。
(e)Arioso et al.、J. Clin. Endocrinol Metab; 2003,88(2)：701-4の方法
【００３９】
この方法は、正常空腹時グレリンレベルを1967fmol/mlと計算する。このアッセイ法を用いて、グレリン欠乏は、個体の空腹時グレリンレベルが1800fmol/ml未満、例えば1700fmol/ml未満、例えば1600fmol/ml未満、例えば1500fmol/ml未満、例えば1400fmol/ml未満、例えば1300fmol/ml未満、例えば1200fmol/ml未満、例えば1100fmol/ml未満、例えば1000fmol/ml未満、例えば900fmol/ml未満、例えば800fmol/ml未満、例えば700fmol/ml、例えば600fmol/ml未満、例えば500fmol/ml未満、例えば400fmol/mlの時に診断されると本明細書では理解すべきである。
(f)Stoeckli et al.、2004,12(2)：346-50の方法
この方法は、正常空腹時グレリンレベルを553pg/ml(164fmol/ml)(誤差範囲105pg/ml)と計算する。このアッセイ法を用いて、グレリン欠乏は、個体の空腹時グレリンレベルが400pg/ml未満、例えば380pg/ml未満、例えば360pg/ml未満、例えば340pg/ml未満、例えば320pg/ml未満、例えば300pg/ml未満、例えば280pg/ml、例えば260pg/ml未満、例えば240pg/ml未満、例えば220pg/ml未満、例えば200pg/ml未満、例えば180pg/ml未満、例えば160pg/ml未満、例えば140pg/ml未満、例えば120pg/mlの時に診断されると本明細書では理解すべきである。
【００４０】
本発明の目的において、グレリン欠乏は、Cummings、EnomotoまたはAriasuの方法、最も好ましくはCummingsの方法を用いて定義するのが最も好ましい。
【００４１】
グレリン欠乏を評価する場合は、グレリン欠乏に関連する他の指標、例えば、共にグレリン欠乏に関連するHDLコレステロールの低下およびインスリン抵抗性の増加も考慮してよい。本明細書において、グレリン欠乏を診断するときは、当業者は個体の年齢、性別、および体格のような他の因子も考慮すると予想される。
【００４２】
GHS：本明細書において、成長ホルモン分泌促進薬は、「分泌促進薬」または「GH分泌促進薬」とも呼ばれる。
【００４３】
GHS-R1a：GHSのレセプター。GHS-R1aはGHS1aとも呼ばれる。該レセプターは、GENBANK受託番号NM 198407を有する。
【００４４】
免疫機能不全：「免疫機能不全」およびその文法的変形は、免疫系のあらゆる障害、例えば免疫抑制、免疫系の活性増加、および自己免疫障害を意味する。免疫系の障害の例には、自己免疫疾患、例えばグレーブス病がある。
【００４５】
個体：生動物またはヒト。好ましい態様において、該対象はヒトおよび非ヒト哺乳動物、例えばイヌ、ネコ、ブタ、乳牛、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ラット、およびマウスを含む哺乳動物である。
【００４６】
単離された：は、その天然環境の成分から同定および分離、および/または回収された、本明細書に記載のあらゆる種々の分泌促進薬、ポリペプチド、およびヌクレオチドを説明するのに用いる。その天然環境の不純成分は、典型的には該ポリペプチドの診断または治療的使用と干渉する物質であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質様または非タンパク質様溶質が含まれよう。好ましい態様において該ポリペプチドは精製される。
【００４７】
「体重の減少」：は、本明細書においてBMIの減少と定義した。
【００４８】
「体脂肪の減少」：は、本明細書において個体の全体的脂肪量の減少、または個体の体脂肪率の減少と定義した。
【００４９】
医学的治療(医学的処置)：本明細書で用いている用語「医学的治療」は、疾患および/または病的状態の治癒、軽減、治療、または予防を意図して用いるあらゆる食物、薬物、用具、または方法をいう。
【００５０】
修飾(修飾された)アミノ酸：その任意な基が化学修飾されているアミノ酸。特に、αアミノ酸のα炭素原子が化学修飾された修飾アミノ酸が好ましい。
【００５１】
モノクローナル抗体：用語モノクローナル抗体はその種々の文法的形において、ただ一種の、特定の抗原と免疫応答することができる抗体結合部位を含む抗体分子のポピュレーションを表す。
【００５２】
非アシル化グレリン様化合物：あらゆるその構成アミノ酸と結合したアシル基を含まない、本明細書で定義するグレリン様化合物。
【００５３】
苦痛緩和処置(治療)：疾患または障害の症状を軽減しまたは和らげるが治癒させない処置。
【００５４】
ポリクローナル抗体：ポリクローナル抗体は、特定の抗原を認識する抗体分子の混合物であり、ポリクローナル抗体は該抗原内の種々のエピトープを認識することができよう。
【００５５】
ポリペプチド：用語ポリペプチドは、隣り合ったアミノ酸残基間のアミド結合以外の結合を含まないアミノ酸残基を含む分子を表す。
【００５６】
病的状態：「病的状態」は、個体の身体および/または精神の健康に有害作用を有するあらゆる疾患または症候群を意味する。該病的状態は遺伝的原因を有していてよい。好ましくは、本発明化合物を用いて治療される該病的状態は、脂肪量の減少、除脂肪体重の減少、体重の減少、悪液質、性欲減退、免疫機能不全、骨再変調(bone remodulation)、栄養失調、睡眠パターンの乱れ、眠気、腸管吸収の減少、および/または腸管運動の減少を含む1またはそれ以上の望ましくない症状をもたらす。
【００５７】
ペプチド：配列を定義し、アミド結合により結合する複数の共有結合したアミノ酸残基。該用語は、オリゴペプチドおよびポリペプチドと同様に用いる。アミノ酸は天然アミノ酸および非天然アミノ酸の両方(そのあらゆる組み合わせを含む)であってよい。天然および/または非天然アミノ酸はペプチド結合または非ペプチド結合により結合してよい。用語ペプチドは、当該分野で知られている化学または酵素触媒反応により導入された翻訳後修飾も含む。そのような翻訳後修飾は、所望によりパーティショニング前に導入することができる。本明細書に記載のアミノ酸は、もっぱらL-立体異性形であろう。アミノ酸類似体を、20個の天然アミノ酸の代わりに用いることができる。フルオロフェニルアラニン、ノルロイシン、アゼチジン-2-カルボン酸、S-アミノエチルシステイン、4-メチルトリプトファンなどを含むいくつかのそのような類似体が知られている。
【００５８】
さらに、アミノ酸残基の始まりまたは終わりのダッシュは、1またはそれ以上のアミノ酸残基のさらなる配列とのペプチド結合またはNH2またはアシルのようなアミノ末端基、またはCOOHのようなカルボキシ末端基との共有結合を示すことに注意すべきである。
【００５９】
レセプター：レセプターは別の分子と特異的に(非無作為に)結合することができる分子、例えばタンパク質、糖タンパク質である。
【００６０】
寛解：個体が罹患した病的状態の症状または結果および/または個体が治療それ自体の作用(特に個体が受けた治療の副作用)に(いかなる程度でも)まだ罹患しているか、または罹患するリスクがある場合に、個体は病的状態から「寛解している」。本明細書において、甲状腺機能亢進状態から甲状腺機能正常状態への転換から「寛解している」個体が同じ年齢の平均的健康個体より体重増加のリスクが大きいことが特に望ましい。
【００６１】
分泌促進薬：成長ホルモン分泌促進薬、すなわち成長ホルモン放出刺激物質、例えばグレリンまたはグレリン様化合物。本発明の分泌促進薬は、例えばL-692-429、L-692-585(ベンゾエラクタム(Benzoelactam)化合物)、MK677(スピロインダナー)、G-7203、G-7039、G-7502(イソニペコチン酸ペプチド模倣物)、NN703、イパモレリンの群から選ばれうる。
【００６２】
特に、該分泌促進薬は、28aaヒトグレリンを含むグレリン様化合物である。該分泌促進薬は、ある態様において非アシル化、例えば、グレリンの非アシル化形または非アシル化グレリン様化合物であってよい。
【００６３】
配列相同性：ある態様において、配列相同性は当該分野でよく知られた標準的アルゴリズムを用いて2分子間で行う比較をいう。本発明の配列相同性を計算するための好ましいアルゴリズムは、Smith-Watermanアルゴリズムであり、例えば配列番号1をその長さにわたるポリペプチドホモログの同一パーセンテージを定義するための参考配列として用いる。マッチ、ミスマッチ、および挿入もしくは欠失に関するパラメーター値の選択は任意であるが、いくつかのパラメーター値は他より生物学的に現実的な結果をもたらすことがわかった。Smith-Watermanアルゴリズムに関するパラメーター値のある好ましいセットは「最大類似セグメント(maximum similarity segments)」アプローチに記載されており、これはマッチ残基に1、およびミスマッチ残基に-1/3の値を用いる(残基は単一ヌクレオチドまたは単一アミノ酸である)(Waterman、Bull. Math. Biol. 46,473-500(1984))。挿入および欠失(indels)、xは、xk=1+k/3(式中、kは特定挿入または欠失(Id.)中の残基番号である。)と加重される。
【００６４】
表面分子：疎水性部分および親水性部分を含む分子、すなわち脂溶性相と親水性相の間の界面相に存在することができる分子。
(発明の詳細な説明)
【００６５】
本発明は、グレリン欠乏および/またはグレリン欠損関連症状の予防または治療を必要とする患者におけるグレリン欠乏および/またはグレリン欠損関連症状を予防または治療するための医薬を製造するための分泌促進薬化合物、例えばグレリン様化合物の使用に関する。好ましくは、該望ましくない症状には、脂肪量の減少、除脂肪体重の減少、体重の減少、悪液質、性欲減退、免疫機能不全、骨栄養失調、睡眠パターンの乱れ、眠気、腸管吸収の減少および/または腸運動の問題の1またはそれ以上が含まれる。
【００６６】
特に、本発明は、体重、除脂肪体重、および体脂肪の減少の治療および/または予防、または体重増加の刺激、より好ましくは体重、除脂肪体重、および体脂肪の減少の治療および/または予防に関する。治療および予防は、すでに生じた体重の減少が進行を止め、および/または体重増加が開始する時にみられる。これはおそらくグレリンまたはその類似体の食欲を刺激することにより食物摂取を促進する効果、および個体の代謝および体組成に対するグレリンの効果による。本発明は、部分的または完全なグレリン欠乏を生じるリスクのある個体における食欲刺激および食物摂取の刺激、より具体的には食欲刺激に関する。別の態様において、分泌促進薬、例えばグレリンは同化因子IGF-1を増加する物質として使用してよく、結果として、体重増加および/または体重および体脂肪の減少の予防をもたらすと予想される。ある好ましい態様において、本発明は除脂肪体重の増加および/または除脂肪体重の減少の予防に関する。
グレリン欠乏の原因
【００６７】
本発明の方法は、グレリン欠乏のあらゆる望ましくない副作用、例えば脂肪量の減少、除脂肪体重の減少、体重の減少、悪液質、性欲減退、免疫機能不全、および栄養失調、睡眠パターンの乱れ、眠気、吸収不良、および腸の運動性の問題の1またはそれ以上の治療に用い得る。本発明の方法により治療しうるグレリン欠乏に関連する医学的治療および症候群のいくつかの特定の例を以下に記載する。
(i) インスリン抵抗性症候群
【００６８】
低血漿グレリンレベルは、インスリン抵抗性、例えば多嚢胞性卵巣症候群、先端巨大症、および一次/二次性腺機能低下症を特徴とする種々の病的状態で観察される。これら病状の多くは、低レベルの血漿グレリンと関連することがよく知られている肥満と関連する。しかしながら、低レベルの血漿グレリンは、インスリン抵抗性でBMIが正常または低い病状にも観察された。
【００６９】
この2つの例を以下に示す：
-非アルコール性脂肪肝疾患(NAFLD)は、代謝症候群と有意に関連する。ほとんどの患者は太り過ぎすなわち肥満であるが、患者の10〜20%が正常限界内のBMIを有する。恒常性モデル評価により測定したインスリン抵抗性が、正常BMIの患者を含むNAFLDに罹患したほとんどすべての患者にみられた。BMIと無関係のNAFLD患者は血漿グレリンが低レベルであることがわかった(例えば、Marchesini G et al.、Low ghrelin concentrations in nonalcoholic fatty liver disease are related to insulin resistance. J Clin Endocrinol Metab. 2003 Dec;88(12)：5674-9)。
【００７０】
-Ｉ型糖尿病：小児研究において、新たに診断されたI型DMの患者は多くの異なるホルモンレベルが無調節であることが観察された。観察された低レベルのレプチン、IGFBP-3、およびIGF-Iは、患者をインスリンで治療すると正常化するが、有意に低レベルのグレリンは治療開始後4カ月でも正常化しない。
【００７１】
アシル化型のグレリンが実際にマウスモデルで糖尿病誘発性であることが知られているので、インスリン抵抗性症候群に罹患した個体のグレリンまたはその類似体による治療は新規で驚くべきことであり(Clark et al.、Endocrinology、Vol. 138、no 10.、p4316-4323)、グレリンまたはその類似体の患者への投与の利益は明白ではないだろう。しかしながら、本発明者らは、ヒトグレリン欠乏の今まで未知の症状を抑制するためにグレリンを投与することにより生じる利益は、筋肉に比べて肝臓に蓄積したトリグリセリド間の好都合な平衡により投与のリスクを上回ることを見いだした。好ましくは、本発明を用いて治療したインスリン抵抗性症候群は高インスリン血症である。
(ii) GI管の上皮の崩壊：
【００７２】
本発明者らは、グレリンレベルの低下がGI管の上皮の崩壊に関連することをみいだした。理論に縛られることなく、この効果は該崩壊の効果が上皮の内分泌細胞に影響を与え、一連の重要なホルモンが抑制されることによると仮定される。これらホルモンのほとんどは食物消化に関与するが、胃で産生されるグレリンのような他のホルモンは食欲および身体組成により重要かもしれない。
【００７３】
種々の病的状態およびいくつかの医学的治療は、胃腸(GI)管の上皮の崩壊を誘発することがある。GI管の上皮の崩壊の一つの原因は化学療法である。化学療法は、種々のタイプの腫瘍性病状の治療の確立された技術であり、成長し、急速に増殖する細胞に細胞毒性剤を標的化することにより作用する。化学療法に関連する副作用は、正常および急速に再生する細胞、例えば毛胞細胞、骨髄、精子および卵子、および口およびGI管の内張(ライニング)の上皮の構造を含む不可避の非選択的損傷に関連しうる。腸の内張の損傷は、脂肪量の減少、除脂肪体重の減少、体重の減少、悪液質、免疫機能不全、および栄養失調を含む化学療法の副作用の一因となる2つの因子である悪心と下痢も生じるかもしれない。化学療法は、性欲減退の一因となることがあり、除脂肪体重、脂肪量の減少、体重の減少、悪液質、免疫機能不全、および栄養失調をもたらす一因となる因子でもある。すなわち、現在の化学療法技術により生じる多くの望ましくない副作用がある。本発明は、GH分泌促進薬、例えばグレリンまたはその類似体の投与によるGI管の上皮の崩壊により生じる副作用の予防または治療のための医薬を提供する。
【００７４】
グレリン欠乏をもたらし得る上皮管(epithelial tract)崩壊の他の原因には、放射線療法および種々の病的因子により生じ得る胃炎(例えば、胃の上皮のアトロフィ(萎縮)と内分泌細胞の損傷をもたらす)が含まれる。好ましくは上記原因によるGI管の崩壊により生じるグレリン欠乏に罹った個体は、分泌促進薬化合物、例えばグレリンまたはグレリン様化合物の投与の利益を得るだろう。GI管の崩壊がグレリン欠乏をもたらすことは今まで知られておらず、グレリン欠乏が病的作用をもたらすことも知られていなかったので、これは驚くべきことである。
(iii) 甲状腺機能亢進症
【００７５】
甲状腺機能亢進症は一般的であり、全女性の約2〜5%がある時期に罹患し、性別比は5：1で20〜40歳に最も一般的である。ほぼすべての症例が内因性甲状腺疾患により生じ、ごくわずかのみが下垂体障害によるものである。
【００７６】
甲状腺機能亢進症は、多くの異なる因子、例えばT3を含む甲状腺薬物療法の形をとる患者の場合は、例えばグレーブス病、高レベルのヨウ素を含む薬剤、甲状腺炎(例えば、亜急性甲状腺炎および分娩後甲状腺炎)、甲状腺ホルモン産生細胞のフィードバック制御の低下、孤立性腺腫、De Quervain甲状腺炎、中毒性結節性甲状腺腫、または甲状腺ホルモンの過剰服用により生じうる。
【００７７】
グレーブス病は、甲状腺機能亢進症の最も一般的な原因であり、自己免疫により生じる。血清IgG抗体は、内因性甲状腺刺激ホルモン(TSH)のように作用し、甲状腺と結合し、甲状腺THSレセプター刺激甲状腺ホルモン産生を拘束する。中毒性孤立性腺腫、中毒性多結節性甲状腺腫、およびDe Quervain甲状腺炎は、甲状腺機能亢進性疾患の総数の約5〜10%を構成する。
【００７８】
甲状腺機能亢進症の臨床的特徴は以下の通りである：
-代謝増加による：体重の減少、食欲増加、情緒不安、倦怠感、筋衰弱、振戦、息切れ、および高熱不耐性；
-生殖系に対する間接的影響により最も生じるようである：過少月経、性欲減退、およびギネコマスチア(gynaecomastia)；
-心臓効果：頻脈または心房細動による動悸、収縮期高血圧、および心不全；
-胃運動の増加による：嘔吐および下痢(自己抗体がGI管のレセプターと交差反応する患者の小さなサブポピュレーションにのみ観察される)；
-眼の症状は、グレーブス病と関連してのみ観察される；
-興奮性(被刺激性)、睡眠障害、および精神病を含む行動変化。
【００７９】
診断は臨床的に観察された症状とTSHの抑制(<0.1mU/L)に基づき、T3およびT4の上昇により確認される。
【００８０】
現在の治療：3つの異なる可能性：抗甲状腺薬、外科手術、および放射性ヨウ素が心血管系を標的とする薬剤と組み合わせて利用可能である。診療は国内および国の間で大きく異なるが、大甲状腺腫および多結節性甲状腺腫、および単結節性甲状腺腫は、抗甲状腺治療にあまり反応性ではない。
【００８１】
チオアミドおよび放射性ヨウ素治療により治療された両患者は、甲状腺パラメーターの正常化後の2〜5年後に体重増加を示す。該効果は、外科手術後および一過性甲状腺機能低下期間のある患者において最も強いが、甲状腺機能低下のない患者でも肥満になる。体重増加は、1年間に約3〜5kgである。肥り過ぎすなわち肥満はそれ自身さらに健康問題の主原因であり、甲状腺機能亢進症の治療に関連した過剰な体重増加を抑制する治療の必要性がある。甲状腺機能亢進症は、循環グレリンレベルの抑制に関連する(Riis AL、et al.、Hyperthyroidism is associated with suppressed circulating ghrelin levels、J Clin Endocrinol Metab. 2003 Feb;88(2)：853-7)。この血漿グレリン増加の理由は分かっていないが、同時にレプチンの高レベルが観察されるので、該状況を低脂肪組織能(low adipose tissue capacity)の患者、肥満および脂肪異栄養の患者で観察される状況と比較してよい。
【００８２】
非常に初期の甲状腺機能亢進症のグレリン治療は2つの異なる目的を有しうる：
1) 代謝速度を低下させ、脂肪組織の能力を増大する。サイトカインIL-1(αおよびβ)、IL-6、およびTNFαのグレリン誘導性低下は、自己免疫性グレーブス病の場合において甲状腺機能亢進症状のあまりはっきりしない発現にも寄与しうる。
2) 甲状腺機能亢進症処置後2〜5年間観察される肥満と食欲増加に寄与する視床下部領域におけるGHS-R1a発現の代償性増加を予防する。
(iv) 他のグレリン欠乏症例
【００８３】
グレリン欠乏のある原因は、活性循環グレリンのレベル低下をもたらすグレリン遺伝子の突然変異によるかもしれない。例えば、グレリンArg51Gln突然変異は低血漿グレリン濃度に関連する(Poykko et al.、「Low plasma ghrelin is associated with insulin resistance、hypertension、and the prevalence of type 2 diabetes」 Diabetes. 2003 Oct;52(10)：2546-53)。
【００８４】
すなわち、本発明の好ましい態様において、治療する個体は、病的状態から生じる部分的または完全なグレリン欠乏になるかそのリスクがある。ある好ましい態様において、該病的状態はインスリン抵抗性に関連する。好ましくは、インスリン抵抗性に関連する該病状は、非アルコール性脂肪肝疾患(NAFLD)および/またはＩ型糖尿病からなる群から選ばれる。別の好ましい態様において、該病状は、多嚢胞性卵巣症候群、先端巨大症、および一次/二次性腺機能低下症からなる群から選ばれる。別の好ましい態様において、該病的状態は甲状腺機能亢進症である。好ましくは、該甲状腺機能亢進症は、以下：グレーブス病、高レベルのヨウ素を含む薬剤、甲状腺炎、亜急性甲状腺炎、分娩後甲状腺炎、甲状腺ホルモン産生細胞のフィードバック制御の低下、中毒性結節性甲状腺腫、甲状腺ホルモンの過剰服用、または甲状腺医学的治療の1またはそれ以上により生じる。
【００８５】
本発明の別の好ましい態様において、本発明化合物で治療する必要がある個体は、GI管の上皮の崩壊に関連するグレリン欠乏に罹患するかまたは罹患するリスクがある。「上皮の崩壊」は、本明細書において上皮の少なくとも部分が損傷していることを意味する。すなわち、該損傷は必ずしも上皮全体にわたる必要はない。該上皮の崩壊は、好ましくは病的状態、遺伝病、または医学的治療の1またはそれ以上により生じる。本発明化合物は、該医学的治療を用いて治療された、治療されるであろう、または現在治療されている患者に投与することができると予想される。該医学的治療は、好ましくは化学療法である。別の好ましい態様において、該医学的治療は放射線療法であり、これを化学療法処置と組み合わせて用いてよい。本発明の別の好ましい態様において、GI管の上皮の崩壊は胃炎により生じる。
【００８６】
本発明の別の好ましい態様において、本発明化合物の治療を必要とする該個体は、低血漿グレリン濃度に関連する遺伝子突然変異、例えばArg51Glnグレリン突然変異を有する。
【００８７】
本発明の化合物および方法により治療する必要がある個体は胃切除術を受けていない。すなわち、該個体は、個体の胃の少なくとも部分を除去する外科手術を受けておらず、例えば該個体は解剖学的に完全な胃を有する。すなわち、好ましくは該個体は胃切除されていない。
【００８８】
本発明の別の好ましい態様において、治療を必要とする個体はグレリン産生細胞数が異常に低くはないがグレリン産生細胞の機能の低下または欠損により機能的に「グレリン欠乏」である。本発明の別の好ましい態様において、治療を要する個体はグレリン産生細胞数が、例えばGI管上皮の損傷、例えば小腸および/または大腸の崩壊により異常に低い。
【００８９】
混合物のある好ましい態様において、治療する個体は異化病状に罹患している。本発明の別の好ましい態様において、治療する個体はインスリン抵抗性に関連する病的状態に罹患している。
【００９０】
本発明の別の局面は、インスリン抵抗性に関連する病的状態に罹患するかまたはそのリスクがある個体における以下：
-脂肪量の減少
-体重の減少
-除脂肪体重の減少
-悪液質
-性欲減退
-免疫機能不全
-骨折(例えば、骨無機質の状態を改善することにより、対症療法として)
-栄養失調
-睡眠パターンの乱れ
-眠気
-腸管吸収の減少
-腸運動の問題
の1またはそれ以上を予防または治療するための医薬を製造するための分泌促進薬化合物の使用を含む。好ましくはインスリン抵抗性に関連する病的状態は、多嚢胞性卵巣症候群、先端巨大症、一次/二次性腺機能低下症、非アルコール性脂肪肝疾患(NAFLD)、および/またはＩ型糖尿病からなる群から選ばれる。
【００９１】
本発明の別の局面は、GI管の上皮の崩壊に罹患するかまたはそのリスクがある個体における以下の
-脂肪量の減少
-除脂肪体重の減少
-体重の減少
-悪液質
-性欲減退
-免疫機能不全
-栄養失調
-睡眠パターンの乱れ
-眠気
-腸管吸収の減少
-腸運動の問題
の1またはそれ以上を予防または治療するための医薬を製造するための分泌促進薬化合物の使用を含む。該崩壊は好ましくは化学療法および/または放射線療法により生じる。同様に好ましくは、該崩壊は胃炎により生じる。
【００９２】
本発明の別の局面は、甲状腺機能亢進症に罹患するかまたはそのリスクがある個体における以下の
-脂肪量の減少
-除脂肪体重の減少
-体重の減少
-悪液質
-性欲減退
-免疫機能不全
-栄養失調
-睡眠パターンの乱れ
-眠気
-腸管吸収の減少
-腸運動の問題
の1またはそれ以上を予防または治療するための医薬を製造するための分泌促進薬化合物の使用を含む。好ましくは、該甲状腺機能亢進症は、以下の、グレーブス病、高レベルのヨウ素を含む薬剤、甲状腺炎、亜急性甲状腺炎、分娩後甲状腺炎、甲状腺ホルモン産生細胞のフィードバック制御の低下、中毒性結節性甲状腺腫、甲状腺ホルモンの過剰服用、または甲状腺医学的治療の1またはそれ以上により生じる。
【００９３】
用語「栄養失調」は、患者が元気で健康なままであるように1またはそれ以上の主要栄養素または微量栄養素を身体に十分なレベルで消費、吸収、または維持していない状態をいう。「免疫抑制された」は、個体の免疫機能が平均より低いことを意味する。免疫抑制されたヒトは、例えば白血球数が減少しているかもしれない。その原因は、例えば骨髄の減少および/または蛋白摂取の減少(栄養失調の一つの形)であり、これら両因子は化学療法により生じうる。
【００９４】
ある局面において、本発明は、甲状腺機能亢進状態から甲状腺機能正常状態に転換し、および/または甲状腺機能亢進状態から寛解している個体、特に体重増加のリスクがある該患者の治療を指向する。
【００９５】
ある態様において、該個体は、グレーブス病に罹患しているかまたはその罹患から寛解している。別の態様において、該個体は、甲状腺炎、例えば亜急性甲状腺炎、分娩後甲状腺炎、またはDe Quervain甲状腺炎に罹患しているかまたはその罹患から寛解している。別の態様において、該個体は孤立性腺腫に罹患しているかまたはその罹患から寛解している。別の態様において、該個体は中毒性結節性甲状腺に罹患しているかまたはその罹患から寛解している。別の態様において、該個体は過剰用量の甲状腺ホルモンにより生じる症状に罹患しているかまたはその罹患から寛解している。例えば、T3を含むある形の甲状腺薬物療法を受けた個体。
【００９６】
別の態様において、該個体は、甲状腺産生細胞のフィードバック制御の低下により生じた症状に罹患しているかまたはその罹患から寛解している。
クオリティオブライフ(生活の質)
【００９７】
本発明のすべての態様において、本発明の治療方法および/または医薬組成物および/または化合物はそのように治療される個体に、例えば体重および/または栄養状態の改善によりもたらされるクオリティオブライフ(QOL)の改善をもたらすことができることが好ましい。すなわち、ある局面において本発明は、本明細書に記載の分泌促進薬、例えばグレリンまたはグレリン様化合物を用いるクオリティオブライフの改善に関する。別の態様において、個体のクオリティオブライフの改善は、当業者に知られた「クオリティオブライフ」質問表を用いて評価する。
【００９８】
本発明の化合物を投与することにより生じるクオリティオブライフの改善を評価するのに用いるのに好ましい2つの有効なクオリティオブライフ調査は以下の通りである：
(i) MOS SF健康調査(Medical Outcomes Study Short-Form Health Survey)(SF-36)。SF-36は、患者のQOLの8局面；身体機能(PF)、日常役割機能（身体）(RP)、体の痛み(BP)、全体的健康感(GH)、活力(VT)、社会生活機能(SF)、日常役割機能（精神）(RE)、心の健康(MH)を評価する36の質問を含む。マニュアルおよび説明書に従ってスケール内の質問に対する応答を合計し、0(健康状態不良を示す)〜100(最良の健康状態を示す)の範囲のスケールスコアに直線的に変換する。スウェーデン版の正当性が確認されており、標準的データが一般スウェーデン人個体群について示されている(Sullivan MKJ、Ware J. Haelsoenkaet：svensk manual och tolkningsguide(SF-36 Health Survey. Swedish manual and interpretation guide). Goeteborg：Sahlgrenska University Hospital; 1994.))。
(ii) EORTC QLQ-C30(+3)質問表。EORTC QLQ-C30(バージョン1.0)は、患者のQOLの評価を意図した30項目コア質問表(30 item core questionnaire)であり、該道具はEORTCクオリティオブライフ研究グループが開発した。最初のバージョンは癌患者で確認され、一般集団からの参考データが公表された。該質問表は、5つの機能スケール；身体機能(5質問)、役割機能(2質問)、精神機能(4質問)、認知機能(2質問)、および社会機能(2質問)を含む。3つの症状スケール；倦怠感(3質問)、悪心および嘔吐(2質問)、および痛み(2質問)があり、呼吸困難、不眠症、性欲減退、便秘、下痢、および資金難に関する6単項目がある。2つの全体的質問は患者の健康状態と全体的QOLについて問うものである。すべてのスケールおよび単項目尺度は、0〜100のスコアの範囲にわたる。高スコアの機能スケールおよび全体的健康状態およびQOLは、高レベルの機能/健康状態、およびQOLを示す。高スコアの症状/項目スケールは、高レベルの症状/問題を示す。QOLスコアは、EORTC QLQ-C30スコアリングマニュアルに従って計算することができる。
【００９９】
1またはそれ以上の分泌促進薬化合物で処置した後の患者のクオリティオブライフの改善を評価するための好ましい質問表は、PCT出願公開公報WO2005014032(Gastrotech Pharma A/S)の実施例8に記載されている。
【０１００】
本発明の好ましい態様において、記載した病状を有する患者の治療は、患者のクオリティオブライフの有意な改善をもたらす。好ましくは、該治療は、限定されるものではないが、上記質問表、例えば、それぞれ個体の測定用具に適したクオリティオブライフスコアまたは複合クオリティオブライフスコアの増加、または症状および/または問題に対するスコアの低下を含むクオリティオブライフのあらゆる試験方法を用いて測定されるクオリティオブライフの有意な増加をもたらす。この増加または低下はそれぞれ治療開始前に得られるスコアの好ましくは1%以上、より好ましくは2%以上、より好ましくは5%、例えば10%、さらにより好ましくは治療前スコアの20%、50%、75%以上である。別の態様において、治療後のスコアが比較できる健康対象プールに見られる平均スコアと等しいかまたはそのような「正常」スコアに近いように、該治療はクオリティオブライフスコアの測定可能な、すなわち、該スコアの50%以上、さらにより好ましくは該スコアの60%、またはより好ましくは該スコアの75%の増加をもたらす。さらに、別の態様において、該症状および/または問題に対するスコアの、治療開始前のスコアの少なくとも1%、より好ましくは3%、さらにより好ましくは5%、またはより好ましくは10%、20%、30%、もしくは50%の低下をもたらす。これらの増加または低下はそれぞれ個体のクオリティオブライフ測定手段または適切であれば複合スコアの1、数個、またはすべての局面を表しうる。
【０１０１】
あらゆる分泌促進薬、例えばグレリンまたはグレリン様化合物を本発明に用いてよい。本発明によれば用語「分泌促進薬」は、その通常の意味、すなわち成長ホルモン放出を刺激することができる物質に用いる。本明細書の文脈において、分泌促進薬はそのGHS-R1a結合能、より好ましくは該レセプターの活性化能により定義される。本発明の分泌促進薬はアシル化または非アシル化であってよい。本発明に用いる好ましい分泌促進薬はグレリン類似体である。「グレリン類似体」および「グレリン様化合物」は本明細書では互換性に用い、実質的にin vivoでグレリンと同じ生物学的作用を示すペプチドまたは非ペプチド化合物を表すと理解される。典型的非ペプチドグレリン類似体は多くのグレリン類似体を例示するEP 0 869 974およびEP 1 060 190に記載されている((この内容は本明細書の一部を構成する)。
【０１０２】
ある好ましい態様において、本発明に使用するためのグレリン様化合物には、天然28aaヒトグレリン(そのアミノ酸を配列番号1に示す)および天然27aaヒトグレリン(そのアミノ酸を配列番号2に示す)が含まれる。
グレリン様化合物
【０１０３】
あらゆるGHS-R1A分泌促進薬、例えばグレリンまたはグレリン様化合物を本発明に用いてよい。本明細書に記載の本発明のある好ましいタイプのグレリン様化合物は、
式I：Z1-(X1)m-(X2)-(X3)n-Z2
[式中、Z1は、所望により存在する保護基であり、
各X1は独立してアミノ酸から選ばれ、該アミノ酸は天然および合成アミノ酸から選ばれ、
X2は、天然および合成アミノ酸から選ばれるあらゆるアミノ酸であり、該アミノ酸は大きな疎水性基、好ましくはアシル基または脂肪酸で修飾されており、
各X3は、アミノ酸から独立して選ばれ、該アミノ酸は天然および合成アミノ酸から選ばれる。ここで、X1およびX3の1またはそれ以上が大きな疎水性基、好ましくはアシル基または脂肪酸で修飾されていてよい；
Z2は所望により存在する保護基であり、
mは1〜10の範囲の整数であり、
nは0または1〜35の範囲の整数である。］
で定義される構造を含む化合物である。
【０１０４】
したがって、用語「分泌促進薬」または「成長ホルモン分泌促進薬」または「GHSR1a分泌促進薬」には、天然28aaヒトグレリン(そのアミノ酸を配列番号1に示す)および天然27aaヒトグレリン(そのアミノ酸を配列番号2に示す)が含まれる。すなわち、本発明はグレリンまたはそれとホモローガスなペプチドの使用に関する。グレリンは、Kojima、Nature(1999)、vol.402,656-660に記載されている。
【０１０５】
本発明は、ジアステレオマーおよびそのラセミ的および分解したエナンチオマー的に純粋な形を含む。GHS-R1a分泌促進薬は、D-アミノ酸、L-アミノ酸、α-アミノ酸、β-アミノ酸、γ-アミノ酸、天然アミノ酸、および合成アミノ酸など、またはその組み合わせを含み得る。好ましくは、グレリン様化合物中に存在するアミノ酸はL-エナンチオマーである。
【０１０６】
本発明に用いるさらに適切なGHS-R1a分泌促進薬は、PCT特許出願PCT/DK2004/000529、デンマーク特許出願PA 200401875、およびPCT出願公開公報WO0192292(Merck and Co. Inc)、WO0134593(Novo Nordisk AS)、およびWO0107475(「Novel peptides」、Kangawa et al.)に記載されている(この内容は本明細書の一部を構成する)。
【０１０７】
GHS-R1a分泌促進薬の製造方法は当業者によく知られている(例えば、PCT特許出願PCT/DK2004/000519(Gastrotech Pharma)の実施例2(この内容は本明細書の一部を構成する))。
機能性
【０１０８】
本明細書に記載のGHS-R1Aリガンドは、上記GHSのレセプター、すなわちレセプターGHS-R1aに活性である。該化合物は、該レセプターと結合し、レセプター活性を刺激し、部分的に刺激し、または阻害することができる。さらに、該化合物は、例えばグレリンの作用をブロックすることにより他のGHS-R1Aリガンド、例えばグレリンの活性を調節する、すなわちアゴニストの効果と拮抗することができよう。
【０１０９】
GHS-R1Aのアゴニストは、下記測定により、完全なアゴニスト、すなわちグレリンの活性と等しい該レセプターおよびシグナリングカスケードを完全に刺激することができるか、または部分アゴニスト、すなわち該レセプターおよびシグナリングカスケードを部分的に刺激することができるのみである。そのような部分アゴニストは、グレリンのような完全アゴニストの作用と完全または部分的に拮抗することもできよう。
【０１１０】
レセプター活性は、該レセプターの細胞内コンフォメーション、該レセプターと結合するGプロテインの活性、および/または細胞内メッセンジャーレベルの変化を検出するような種々の技術を用いて測定することができる。
【０１１１】
グレリンレセプターを活性化するリガンドの能力のある簡単な測定法は、そのEC50、すなわち、化合物を用いて得られる最大効果の半分のレセプターを活性化する化合物の用量を測定することである。該レセプターは、一次細胞培養、例えば下垂体細胞に内因性に発現するか、またはグレリンレセプターをコードするcDNAでトランスフェクトされた細胞にヘテロローガスに発現することができる。全細胞アッセイまたはこれら細胞種のいずれかから製造した膜を用いるアッセイをアッセイの種類に応じて用いることができる。
【０１１２】
該レセプターは主としてGqシグナリング経路と結合すると一般に信じられているので、Gq/G11シグナリング経路の活性をモニターするのに適した以下のようなあらゆるアッセイを用いることができる。
【０１１３】
1)シグナル/ノイズ比を増すために、GTPgS結合を、例えば、抗G-α-qまたは-11抗体沈殿と組み合わせて測定することにより行うGq/G11の活性化を測定するアッセイ。このアッセイはGq/11より他のGプロテインに対する結合を検出することもできる。
【０１１４】
2)例えば、PLCの生成物の一つであるイノシトールホスフェートの蓄積を測定することにより該経路の最初の下流エフェクター分子の1つであるホスホリパーゼC(PLC)の活性を測定するアッセイ。
【０１１５】
3)シグナリングカスケードのより下流は、細胞内貯蔵場所からのカルシウムの移動である。
【０１１６】
4)種々の種類のMAPキナーゼ(ERK1/2、p38、junKなど)の活性のようなさらにより下流のシグナリング分子。NF-κ-B転移およびCRE由来遺伝子転写を測定することができる。
5)蛍光標識アレスチンの活性化グレリンレセプターとの結合
【０１１７】
GHS-R1Aリガンドの機能性を測定するのに用いる適切なプロトコールの例はPCT出願公開公報WO2005014032(Gastrotech Pharma A/S)の実施例5に記載されている。
【０１１８】
ある態様において、化合物のレセプターGHS-R1Aに対する結合は、上記のあらゆるアッセイを用いて測定される。
【０１１９】
本発明のGHS-R1Aリガンドは、上記アッセイを用いて測定した28aaアシル化ヒトグレリンに対する機能活性の、好ましくは少なくとも約50%、少なくとも約60%、少なくとも約70%、少なくとも約80%、または少なくとも約90%を有する。より大きい値は有効性を示し、より小さい値が結合阻害を達成するのに必要であることを示す。
【０１２０】
本発明のある態様において、GHS-R1Aリガンドは、GHS-R1Aに対する有効性(EC50)が500nM未満である。別の態様において、該化合物は、GHS-R1Aに対する有効性(EC50)が100nM未満、例えば80nM未満、例えば60nM未満、例えば40nM未満、例えば20nM未満、例えば10nM未満、例えば5nM未満、例えば1nM未満、例えば0.5nM未満、例えば0.1nM未満、例えば0.05nM未満、例えば0.01nM未満である。
【０１２１】
さらなる態様において、GHS-R1Aリガンドの解離定数(Kd)は500nM未満である。さらなる態様において、該リガンドの解離定数(Kd)は、100nM未満、例えば80nM未満、例えば60nM未満、例えば40nM未満、例えば20nM未満、例えば10nM未満、例えば5nM未満、例えば1nM未満、例えば0.5nM未満、例えば0.1nM未満、例えば0.05nM未満、例えば0.01nM未満である。
【０１２２】
結合アッセイは、種々の環境に存在する組換えにより製造したレセプターポリペプチドを用いておこなうことができる。そのような環境には、例えば組換え核酸または天然核酸から発現したレセプターポリペプチドを含む細胞抽出物および精製細胞抽出物が含まれ、例えば種々の環境に導入される組換え手段により製造されるかまたは天然核酸由来の精製GHSレセプターポリペプチドの使用も含まれる。
【０１２３】
組換え発現GHSレセプターを用いて、種々の利点、例えば限定細胞系における該レセプターの発現能力を提供することにより、該レセプターでの化合物に対する反応を他のレセプターでの反応とより容易に区別することができる。例えば、該レセプターは通常発現ベクターによって該レセプターを発現しないHEK293、COS7、およびCHOのような細胞系中で発現させることができる(ここで、発現ベクターを用いない同じ細胞系はコントロールとして作用しうる。)。
同一性および相同性
【０１２４】
用語「同一性」または「相同性」は、配列を一列にならべ、必要であれば全配列について最大同一性パーセントを達成するためにギャップを挿入した後、配列同一性の部分としてあらゆる保存置換を考慮せずに比較する対応する配列の残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基の割合を意味すると解釈すべきである。NまたはC末端伸長および挿入は同一性または相同性を低下させないと解釈すべきである。アラインメントのための方法とコンピュータープログラムは当該分野でよく知られている。配列同一性は配列分析ソフトウエア(例えば、Sequence Analysis Software Package、Genetics Computer Group、University of Wisconsin Biotechnology Center、1710 University Ave.、Madison、Wis. 53705)を用いて測定することができる。このソフトウエアは種々の置換、欠失、および他の修飾に対する相同性の程度を割り当てることにより同様の配列を適合させる。
【０１２５】
本明細書に記載の配列の1またはそれ以上の相同物は、定義した配列に比べて1またはそれ以上のアミノ酸が異なり得るが、同じ機能を果たすことができる。すなわち、相同物は、予め決定した配列の機能的等価物として予想し得る。グレリン相同物は、好ましくは上記のグレリン様化合物である。
【０１２６】
上記のごとく、本明細書のあらゆる予め決定された配列の相同物は以下のごとく定義することができる：
i)28aaヒトグレリン、好ましくはアシル化28aaヒトグレリンも認識する抗体により認識され得るアミノ酸配列を含む相同物、および/または
ii)GHS-R1aと選択的に結合することができるアミノ酸配列を含む相同物、および/または
iii)28aaヒトグレリンよりGHS-R1aと実質的に同等またはより高い結合親和性を有する相同物、好ましくはアシル化28aaヒトグレリン。
【０１２７】
上記例において、28aaヒトグレリンは、配列番号1に示す配列を有し、アシル化される場合は3位がアシル化される。
【０１２８】
本明細書で使用する抗体は、グレリンのN末端部分またはグレリンのC末端部分、好ましくはグレリンのN末端部分と結合する抗体でありうる。該抗体は、Ariyasu et al. 「Delayed short-term secretory regulation of ghrelin in obese animals：Evidensed by a specific RIA for the active form of ghrelin」、Endocrinology 143(9)：3341-3350、2002に記載の抗体でありうる。
【０１２９】
相同物の例には、予め決定したアミノ酸の同じ群内に1またはそれ以上保存的アミノ酸置換、または複数の保存的アミノ酸置換を含む1またはそれ以上の保存的アミノ酸置換が含まれる。ここで、各保存的酸置換は、予め決定したアミノ酸の異なる群内の置換により生じる。
【０１３０】
すなわち、相同物は、互いに独立した保存置換(ここで、該相同物の少なくとも1のグリシン(Gly)は、Ala、Val、Leu、およびIleからなるアミノ酸の群から選ばれるアミノ酸で置換されている。)、および独立してその相同物(ここで、該相同物の少なくとも1のアラニン(Ala)は、Gly、Val、Leu、およびIleからなるアミノ酸の群から選ばれるアミノ酸で置換されている。)、および独立してその相同物(ここで、該相同物の少なくとも1のバリン(Val)は、Gly、Val、Leu、およびIleからなるアミノ酸の群から選ばれるアミノ酸で置換されている。)、および独立してその相同物(ここで、該相同物の少なくとも1のロイシン(Leu)は、Gly、Ala、Val、およびIleからなるアミノ酸の群から選ばれるアミノ酸で置換されている。)、および独立してその相同物(ここで、該相同物の少なくとも1のイソロイシン(Ile)は、Gly、Ala、Val、およびLeuからなるアミノ酸の群から選ばれるアミノ酸で置換されている。)、および独立してその相同物(ここで、該相同物の少なくとも1のアスパラギン酸(Asp)は、Glu、Asn、およびGlnからなるアミノ酸の群から選ばれるアミノ酸で置換されている。)、および独立してその相同物(ここで、該相同物の少なくとも1のフェニルアラニン(Phe)は、Tyr、Trp、His、Proからなるアミノ酸の群から選ばれる好ましくはTyrおよびTrpからなるアミノ酸の群から選ばれるアミノ酸で置換されている。)、および独立してその相同物(ここで、該相同物の少なくとも1のチロシン(Tyr)は、Phe、Trp、His、Proからなるアミノ酸の群から選ばれるアミノ酸、好ましくはPheおよびTrpからなるアミノ酸の群から選ばれるアミノ酸で置換されている。)、および独立してその相同物(ここで、該相同物の少なくとも1のアルギニン(Arg)は、LysおよびHisからなるアミノ酸の群から選ばれるアミノ酸で置換されている。)、および独立してその相同物(ここで、該相同物の少なくとも1のリジン(Lys)は、ArgおよびHisからなるアミノ酸の群から選ばれるアミノ酸で置換されている。)、および独立してその相同物(ここで、該相同物の少なくとも1のアスパラギン(Asn)は、Asp、Glu、およびGinからなるアミノ酸の群から選ばれるアミノ酸で置換されている。)、および独立してその相同物(ここで、該相同物の少なくとも1のグルタミン(Gln)は、Asp、Glu、およびAsnからなるアミノ酸の群から選ばれるアミノ酸で置換されている。)、および独立してその相同物(ここで、該相同物の少なくとも1のプロリン(Pro)は、Phe、Tyr、Trp、およびHisからなるアミノ酸の群から選ばれるアミノ酸で置換されている。)、および独立してその相同物(ここで、該相同物の少なくとも1のシステイン(Cys)は、Asp、Glu、Lys、Arg、His、Asn、Gin、Ser、Thr、およびTyrからなるアミノ酸の群から選ばれるアミノ酸で置換されている。)を含んでよい。
【０１３１】
保存的置換は好ましい予め決定された配列のあらゆる位置に導入し得る。しかしながら、非保存的置換、特に、限定されるものではないがあらゆる1またはそれ以上の位置に非保存的置換を導入することも望ましいかもしれない。
【０１３２】
以下の表は、限定されるものではないが好ましい保存アミノ酸置換を示す。
【表１】
2007532495.tif 000002
本明細書に記載の配列の機能的に等価な相同物の形成をもたらす非保存的置換は、例えば、i)実質的に極性が異なる。例えば、非極性側鎖を有する残基(Ala、Leu、Pro、Trp、Val、lie、Leu、Phe またはMet)で極性側鎖を有する残基、例えばGly、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、またはGin、もしくは荷電アミノ酸、例えばAsp、Glu、Arg、またはLysを置換するか、または荷電残基または極性残基で非極性残基を置換する、そして/または
ii)ProまたはGlyの別の残基による置換のようなポリペプチドバックボーンの配向に対するその効果が実質的に異なる、および/または
iii)実質的に荷電が異なる。例えば、負に荷電した残基、例えばGluまたはAspで正に荷電した残基、例えばLys、His、またはArgを置換(およびその逆もある)、および/または
iv)実質的に立体的容積が異なる。例えば、大きな残基、例えばHis、Trp、Phe、またはTyrで小さな側鎖を持つ残基、例えばAla、Gly、またはSerを置換する(およびその逆もある)。
【０１３３】
アミノ酸の置換は、ある態様において、疎水性値および親水性値、および荷電、サイズなどを含むアミノ酸側鎖置換基の相対的類似性に基づいて行ってよい。種々の前記特性を考慮した典型的アミノ酸置換は当業者によく知られており、これにはアルギニンおよびリジン；グルタメートおよびアスパルテート；セリンおよびトレオニン；グルタミンおよびアスパラギン；およびバリン、ロイシン、およびイソロイシンが含まれる。
【０１３４】
好ましい態様において、結合ドメインは配列番号1と少なくとも60%ホモローガスなアミノ酸配列を有する相同物を含む。
【０１３５】
より好ましくは該相同物は、配列番号1と少なくとも70%、例えば少なくとも75%ホモローガス、例えば少なくとも80%ホモローガス、例えば少なくとも85%ホモローガス、例えば少なくとも90%ホモローガス、例えば少なくとも95%ホモローガス、例えば少なくとも97%ホモローガス、例えば少なくとも98%、例えば少なくとも99%ホモローガスである。
【０１３６】
より好ましい態様において、上記パーセンテージは、配列番号1と比較した相同物の配列の同一性に関する。
【０１３７】
配列番号1に対する相同物は、27aaヒトグレリン配列番号2、ラットグレリン配列番号3であり得る。他の相同物は、EP1197496(Kangawa)に記載の変異体である(この内容は本明細書の一部を構成する)。
大きな疎水性基
【０１３８】
本発明の分泌促進薬の大きな疎水性基は、3位のSer残基が大きな疎水性基で修飾されているときにGHS-R1aに対する結合親和性を有するdes-アシル化28aaヒトグレリンを提供することができるあらゆる大きな疎水性基である。
【０１３９】
修飾されたアミノ酸がその側鎖に置換基として、例えば、-OH、-SH、-NH、または-NH2を含む場合は、そのような置換基をアシル化することにより形成される基が好ましい。すなわち、結合方法は、エステル、エーテル、チオエーテル、アミド、およびカルバミドからなる群から選んでよい。
【０１４０】
例えば、修飾されたアミノ酸がセリン、トレオニン、チロシン、またはオキシプロリンである場合は、該アミノ酸は側鎖中にヒドロキシル基を有する。修飾されたアミノ酸がシステインである場合は、該アミノ酸は側鎖中にメルカプト基を有する。修飾されたアミノ酸がリジン、アルギニン、ヒスチジン、トリプトファン、プロリン、またはオキシプロリンである場合は、該アミノ酸は側鎖中にアミノ基またはイミノ基を有する。
【０１４１】
すなわち、ヒドロキシル基、メルカプト基、アミノ基、およびイミノ基は、化学修飾されていてよい。すなわち、該ヒドロキシル基またはメルカプト基は、エーテル化、エステル化、チオエーテル化、またはチオエステル化されていてよい。イミノ基は、イミノエーテル化、イミノチオエーテル化、またはアルキル化されていてよい。アミノ基は、アミド化、チオアミド化、またはカルバミド化されていてよい。
【０１４２】
さらに、該メルカプト基はジスルフィドされていてよく、該イミノ基はアミド化またはチオアミド化されていてよく、該アミノ基はアルキル化またはチオカルバミド化されていてよい。
【０１４３】
好ましい態様において、該修飾されたアミノ酸は疎水基にエステル結合を通して結合したSerである。
【０１４４】
疎水性基は1またはそれ以上の炭素原子を含む飽和または不飽和のアルキルまたはアシル基を有するあらゆる基でありうる。ある態様において、大きな疎水性基は、有機カルボン酸からヒドロキシル基を除去することにより形成される基を含むアシル基である。有機カルボン酸には例えば脂肪酸が含まれ、その炭素原子数は好ましくは1〜35である。有機スルホン酸または有機リン酸において、その炭素原子数は好ましくは1〜35である。
【０１４５】
したがって、該アシル基は、好ましくはC1-C35アシル基、例えばC1-C20アシル基、例えばC1-C15アシル基、例えばC6-C15アシル基、例えばC6-C12アシル基、例えばC8-C12アシル基から選ばれる。
【０１４６】
より好ましくは、該アシル基は、C7アシル基、C8アシル基、C9アシル基、C10アシル基、C11アシル基、およびC12アシル基の群から選ばれる。そのようなアシル基は、オクタン酸(好ましくはカプリル酸)、デカン酸(好ましくはカプリン酸)、またはドデカン酸(好ましくはラウリン酸)、およびそのモノエンまたはポリエン脂肪酸から形成されてよい。
【０１４７】
ある態様において、該アシル基はC8アシル基およびC10アシル基の群から選ばれる。そのようなアシル基はオクタン酸(好ましくはカプリル酸)またはデカン酸(好ましくはカプリン酸)から形成されうる。
【０１４８】
別の態様において、該アシル基は、C7アシル基、C9アシル基、およびC11アシル基の群、例えばC9アシル基およびC11アシル基の群から選ばれる。
【０１４９】
さらに、該修飾されたアミノ酸は、基がEP 1 197 496(Kangawa)に記載のごとく修飾されるあらゆるアミノ酸であってよい(この内容は本明細書の一部を構成する。)。
保護基
【０１５０】
本発明の分泌促進薬は、N末端またはC末端またはその両方に保護基を含んでよい。
【０１５１】
N末端アミノ基残基と共有結合した保護基は、in vivo条件下でアミノ末端の反応性を減少させる。アミノ保護基には、-C1-10アルキル、-C1-10置換アルキル、-C2-10アルケニル、-C2-10置換アルケニル、アリール、-C1-6アルキルアリール、-C(O)-(CH2)1-6-COOH、-C(O)-C1-6アルキル、-C(O)-アリール、-C(O)-O-C1-6アルキル、または-C(O)-O-アリールが含まれる。好ましくは、該アミノ末端保護基は、アセチル、プロピル、スクシニル、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル、またはtブチルオキシカルボニルである。
【０１５２】
C末端カルボキシ基と共有結合した保護基は、in vivo条件下でカルボキシ末端の反応性を低下させる。カルボキシ末端残基は好ましくは最後のアミノ酸のa-カルボニル基と結合する。カルボキシ末端保護基には、アミド、メチルアミド、およびエチルアミドが含まれる。
コンジュゲート
【０１５３】
本発明に用いる分泌促進薬、例えばグレリン様化合物は、分泌促進薬コンジュゲート、すなわち、例えば半減期が延長するように別の構成要素と結合した分泌促進薬を含む分子の形で提供することができる。他の構成要素は、例えば安定性、半減期などの改善に関して分泌促進薬に改善された特性をもたらすことができるあらゆる物質でありうる。
【０１５４】
ある態様において、該コンジュゲートは、グレリンまたはその誘導体もしくは相同物のコンジュゲートおよびAc-RYY(RK)(WI)RK)-NH2のコンジュゲートである(ここで、括弧はアミノ酸残基の可能な変化を示す。)。コンジュゲート中のポリペプチドの例は、米国特許出願2003040472にもみることができよう。
医薬組成物
【０１５５】
本発明の化合物または塩を生(き)化学物質として投与することができるが、それらは医薬組成物の形で存在することが好ましい。したがって、本発明は本明細書に記載の治療方法を実施するのに有用な医薬組成物を提供する。該医薬組成物は、好ましくは生理学的に許容される担体を、活性成分としてその中に溶解または分散した本明細書に記載の少なくとも1の分泌促進薬、例えばグレリンまたはグレリン様化合物(例えば、上記式Iの化合物)またはその塩とともに含む。本発明の組成物は、好ましくは、刺激食欲および/または栄養失調の予防、および/または個体の幸福感またはクオリティオブライフの改善により有益な効果を達成するあらゆる方法で個体に送達されよう。ある好ましい態様において、本発明の組成物は、経口、経鼻、肺、経皮、または非経口経路を介して投与される。より好ましくは、該組成物は経口または肺経路を介して投与される。別の好ましい態様において、該投与は皮下である。薬剤を標的部位に送達し、または薬剤を血流中に導入するのに有効な他の薬剤投与方法も予期される。
【０１５６】
本発明化合物は、少なくとも1の他の化合物と共に投与してよい。該化合物は、同時に、別個の組成物としてまたは単位剤形に混合して投与するか、または続いて投与することができよう。ある特定の態様において、本発明は、少なくとも2の異なるグレリン様化合物の混合物、例えばC8アシルでアシル化されたグレリン様化合物およびC10アシルでアシル化されたグレリン様化合物の混合物を含む医薬組成物の使用に関する。理論に縛られることなく、そのような混合物は血漿中でより長い半減期を有すると考えられる。すなわち、好ましい態様において、該医薬組成物は治療効果を増大させるために少なくとも2の上記式Iの異なるグレリン様化合物を含む。相違は、例えば上記の異なるアシル化を有する化合物であってよい。
【０１５７】
さらに別の態様において、用いる医薬組成物は、アシル化グレリン様化合物、所望により好ましくはC7アシル基、C9アシル基、およびC11アシル基の群、例えばC9アシル基およびC11アシル基の群から選ばれる異なるアシル鎖長を有する化合物を、さらに所望により脱アシル化グレリン様化合物と組み合わせて含む。
【０１５８】
好ましい態様において、該組成物は治療目的で個体に投与するときその目的が免疫応答を誘導するためでない限り免疫原性ではない。
【０１５９】
好ましくは、該組成物は、例えば化学療法治療を受けた個体における体重および体脂肪の減少を治療するための、グレリンまたはその類似体もしくは医薬的に許容される塩、および医薬的に許容される担体、ビークル、および/または賦形剤、および/または輸送分子を含む。
【０１６０】
des-アシル化グレリンはGHS-R1aに活性ではないので、該輸送分子は主として早期des-アシル化を防ぎ、アシル化化合物の半減期を増大するために加える。輸送分子は、本発明化合物を取り込むかまたは固定することにより作用する。当業者に知られたあらゆる適切な輸送分子を用いてよい。輸送分子の例には、コンジュゲートの項に記載されたものがある。他の好ましい例はリポソーム、ミセル、および/またはマイクロスフェアである。
【０１６１】
従来のリポソームは典型的にはリン脂質(中性または負に荷電)および/またはコレステロールからなる。該リポソームは水性コンパートメントを囲む脂質二重層に基づく小胞構造である。リポソームは、サイズ、脂質組成、表面の荷電および数、およびリン脂質二重層の流動性のような物理化学特性が異なりうる。リポソーム形成のために最も頻繁に用いる脂質は、1,2-ジラウロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DLPC)、1,2-ジミリストイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DMPC)、1,2-ジパルミトイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DPPC)、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DSPC)、1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DOPC)、1,2-ジミリストイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DMPE)、1,2-ジパルミトイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DPPE)、1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DOPE)、1,2-ジミリストイル-sn-グリセロ-3-ホスフェート(1ナトリウム塩)(DMPA)、1,2-ジパルミトイル-sn-グリセロ-3-ホスフェート(1ナトリウム塩)(DPPA)、1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスフェート(1ナトリウム塩)(DOPA)、1,2-ジミリストイル-sn-グリセロ-3-[ホスホ-rac-(1-グリセロール)](ナトリウム塩)(DMPG)、1,2-ジパルミトイル-sn-グリセロ-3-[ホスホ-rac-(1-グリセロール)](ナトリウム塩)(DPPG)、1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-[ホスホ-rac-(1-グリセロール)](ナトリウム塩)(DOPG)、1,2-ジミリストイル-sn-グリセロ-3-[ホスホ-L-セリン](ナトリウム塩)(DMPS)、1,2-ジパルミトイル-sn-グリセロ-3-[ホスホ-L-セリン)(ナトリウム塩)(DPPS)、1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-[ホスホ-L-セリン](ナトリウム塩)(DOPS)、1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-(グルタリル)(ナトリウム塩)、および1,1',2,2'-テトラミリストイルカルジオリピン(アンモニウム塩)である。DPPCを他の脂質またはリポソームの重合調整剤(modifier)と組み合わせて含む製剤は、例えば、コレステロールおよび/またはホスファチジルコリンと組み合わせることが好ましい。
【０１６２】
長時間循環(Long-circulating)リポソームは、血管壁の透過性を増加する身体の部位に浸出する能力により特徴づけられる。長時間循環リポソームを製造する最もよく知られた方法は、疎水性ポリマーポリエチレングリコール(PEG)をリポソームの外部表面と共有結合させることである。好ましい脂質には、1,2-ジパルミトイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-2000](アンモニウム塩)、1,2-ジパルミトイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-5000](アンモニウム塩)、1,2-ジオレオイル-3-トリメチルアンモニウム-プロパン(クロリド塩)(DOTAP)がある。
【０１６３】
リポソームに適用できる可能性がある脂質はAvanti、Polar lipids、Inc、Alabaster、ALにより供給される。さらに、リポソームサスペンジョンは、脂質をフリーラジカルおよび保存時の脂質過酸化損傷から保護する脂質保護剤を含んでよい。脂溶性フリーラジカルクエンチャー(quencher)、例えばalpha-トコフェロール、および水溶性鉄特異的キレート剤、例えばフェリオキシアニンが好ましい。
【０１６４】
例えばSzoka et al.、Ann. Rev. Biophys. Bioeng. 9：467(1980)、米国特許4,235,871、4,501,728、および4,837,028に記載の種々の方法がリポソームの製造に利用可能である(この内容は本明細書の一部を構成する。)。リポソームを製造するためのある適切な方法は、PCT出願公開公報WO2005014032(Gastrotech Pharma A/S)の実施例9で調製され、グレリンの血漿レベルを増加することができることが同出願の実施例10で確認されている。別の方法は、不均一サイズの多重膜小胞を生成する。この方法において、小胞形成脂質を適切な有機溶媒または溶媒系に溶解し、減圧下または不活性ガス下で乾燥し、薄脂質フィルムを形成する。所望により、該フィルムを適切な溶媒、例えば第3ブタノールに再溶解し、次いで凍結乾燥して、より容易に水和する粉末状のより均一な脂質混合物を形成する。このフィルムは標的薬剤および標的成分の水性溶液で覆われ、典型的には撹拌しながら15〜60分間かけて水和することができる。得られる多重膜小胞のサイズ分布はより激しい撹拌条件下で脂質を水和するか、可溶化用界面活性剤、例えばデオキシコレートを加えることによりより小さなサイズに変化させることができる。
【０１６５】
ミセルは、水性溶液中の界面活性剤(疎水性部分および1またはそれ以上のイオン性もしくは強疎水性基を含む分子)により形成される。固体界面活性剤の濃度が増加するにつれて、空気/水またはガラス/水接触面に吸着した単層は、さらなる占有がすでに2つの単層になっている界面活性剤分子の過剰な圧縮を必要とするのでかたく密集する。溶解した界面活性剤がその濃度を超えてさらに増加すると新たな分子と等価な量が凝集してミセルを生じる。このプロセルは「臨界ミセル濃度」と呼ばれる特徴的濃度で始まる。
【０１６６】
希界面活性剤溶液中で形成されるミセルの形状はほぼ球状である。界面活性剤分子の極性頭部基は、外側の球状シェルに配置されるが、その炭化水素鎖は中心に向かい、ミセルの球状コアを形成する。炭化水素鎖は無作為に絡みつき、もつれ、ミセル内部は非極性で液体様の特性を有する。ポリオキシエチル化非イオン性界面活性剤のミセルでは、ポリエチレン部分は外側に向かってならび、水が浸透する。親水性頭部基は水と接触し、炭化水素部分は水性媒質から排除され、極性頭部基による水との接触から部分的に遮断されるので、この配置はエネルギー的に好ましい。ミセル内部に位置する界面活性剤の炭化水素尾部は弱いファンデルワールス力により互いに相互作用する。
【０１６７】
ミセルのサイズまたはその凝集数は、主として幾何学的因子により支配される。炭化水素コアの半径は、界面活性剤分子の広がった炭化水素鎖の長さを超えることはできない。したがって、鎖長の増加またはホモローガスな連続の上昇は球状ミセルの凝集数を増加させる。界面活性剤の濃度が数パーセント以上増加し、電解質が加わるか(イオン性界面活性剤の場合)、および温度が上昇する(非イオン性界面活性剤の場合)と、ミセルのサイズが増加する。これら条件下では、ミセルは球状のままでいるには大きすぎ、形が楕円体、円筒状、または最終的に層状になる。
【０１６８】
当業者によく知られた一般的界面活性剤は本発明のミセルに用いることができる。適切な界面活性剤には、ナトリウムラウレエート、オレイン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、オクタオキシエチレングリコールモノドデシルエーテル、オクタオキシノール9、およびPLURONIC F-127(Wyandotte Chemicals Corp.)が含まれる。好ましい界面活性剤には、TWEEN-80、PLURONIC F-68、n-オクチル-β-D-グルコピラノシドなどのようなIV注射に適合性の非イオン性ポリオキシエチレンおよびポリオキシプロピレン界面活性剤が含まれる。さらに、リポソームの製造に用いるための上記したようなリン脂質は、ミセル形成に用いることもできよう。
【０１６９】
本明細書で用いている、組成物、担体、希釈剤、および試薬に言及する用語「医薬的に許容される」、「生理学的に許容性の」、およびその文法的変化は互換性に用い、該物質が悪心、目まい、胃の異常亢進などのような不快な生理学的作用を生じることなく個体に投与することができることを表す。
【０１７０】
溶解または分散した活性成分を含む医薬組成物の製造は当該分野でよく理解されている。典型的にはそのような組成物は、水性もしくは非水性の液体溶液またはサスペンジョンとして無菌注射剤として製造されるが、使用前に液体中の溶液またはサスペンジョンにするのに適した固形に製造することもできる。該製剤はエマルジョンにすることもできる。
【０１７１】
活性成分は、医薬的に許容される、活性成分と適合性の賦形剤と、本明細書に記載の治療方法に用いるのに適した量で混合することができる。適切な賦形剤は、例えば水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、またはエタノールなどまたはその組み合わせである。さらに、所望により、該組成物は活性成分の効果を増強する少量の補助剤、例えば湿潤剤または乳化剤、pH緩衝剤などを含むことができる。該製剤はpHが3.5-8の範囲、例えば4.5-7.5の範囲、例えば5.5-7の範囲、例えば6-7.5の範囲、最も好ましくは約7.3であることが好ましい。しかしながら、当業者が理解するようにpH範囲は治療する個体と投与方法に従って調整してよい。例えば、ある種の分泌促進薬、例えばグレリンおよびグレリン相同物は低pHで容易に安定化しうるが、本発明の別の好ましい態様において該製剤は、pHが3.5-7、例えば4-6、例えば5-6、例えば5.3-5.7の範囲内、例えば5.5である。
【０１７２】
本発明の医薬組成物は、本発明化合物の医薬的に許容される塩を含みうる。医薬的に許容される塩には酸付加塩(ポリペプチドの遊離アミノ基で形成される)。
【０１７３】
そのような塩には、医薬的に許容される酸付加塩、医薬的に許容される金属塩、アンモニウム塩、およびアルキル化アンモニウム塩が含まれる。酸付加塩には無機酸および有機酸の塩が含まれる。適切な無機酸の典型例には、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、リン酸、硫酸、および硝酸などが含まれる。適切な有機酸の典型例には、ギ酸、酢酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、安息香酸、桂皮酸、クエン酸、フマル酸、グリコール酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、シュウ酸、ピクリン酸、ピルビン酸、サリチル酸、コハク酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、酒石酸、アスコルビン酸、パモン酸、ビスメチレンサリチル酸、エタンジスルホン酸、グルコン酸、シトラコン酸、アスパラギン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)、p-アミノ安息香酸、グルタミン酸、ベンゼンスルホン酸、およびp-トルエンスルホン酸などが含まれる。医薬的に許容される無機または有機酸付加塩のさらなる例には、J. Pharm. Sci. 1977,66,2に記載の医薬的に許容される塩が含まれる(この内容は本明細書の一部を構成する。)。金属塩の例には、リチウム、ナトリウム、カリウム、およびマグネシウム塩などが含まれる。
【０１７４】
アンモニウムおよびアルキル化アンモニウム塩の例には、アンモニウム、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、エチルアンモニウム、ヒドロキシエチルアンモニウム、ジエチルアンモニウム、ブチルアンモニウム、およびテトラメチルアンモニウム塩などが含まれる。
【０１７５】
遊離カルボキシル基と形成される塩は、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、または水酸化第2鉄のような無機塩基、およびイソプロピルアミン、トリメチルアミン、2-エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどのような有機塩基から誘導することもできる。
【０１７６】
本発明の文脈において化合物、またはその医薬的に許容される酸付加塩の範囲内にはそのあらゆる水和物(水和形)も含まれる。
【０１７７】
液体組成物は水に加えておよび水を除外した液相も含み得る。そのようなさらなる液相の例にはグリセリン、植物油例えば綿実油、有機エステル例えばオレイン酸エチル、および水/油エマルジョンがある。
【０１７８】
適切な医薬担体には、不活性固体希釈剤または充填剤、無菌水性溶液、および種々の有機溶媒が含まれる。固体担体の例には、ラクトース、石膏、ショ糖、シクロデキストリン、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカシア、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、またはセルロースの低級アルキルエーテルがある。液体担体の例には、シロップ、ピーナッツ油、オリーブ油、リン脂質、脂肪酸、脂肪酸アミン、ポリオキシエチレン、または水がある。例えば非経口投与には無菌水性溶液、水性プロピレングリコール、またはゴマ油またはピーナッツ油中の本発明化合物の溶液を用いてよい。そのような水性溶液は必要であれば適切に緩衝されるべきであり、液体希釈液は十分な生理食塩水またはグルコースで等張にする。水性溶液は、静脈内、筋肉内、皮下、および腹腔内投与に特に適している。用いる無菌水性媒質は、当業者に知られた標準的技術によりすべて容易に利用可能である。例えば鼻エアロゾルまたは吸入により投与するのに適した製剤は、例えばバイオアベイラビリティを増大するためにベンジルアルコールまたは他の適切な保存料、吸収促進剤を用い、過フッ化炭化水素を用い、および/または他の可溶化剤または分散剤を用い、生理食塩水中の溶液として製造してよい。
【０１７９】
次いで、本発明化合物と医薬的に許容される担体を混合することにより形成される医薬組成物は、開示した投与経路に適した種々の剤形で容易に投与される。該組成物は、好都合には製薬の分野で知られた方法により単位剤形で存在してよい。
【０１８０】
本発明の好ましい態様において、該組成物はGH分泌促進薬またはその塩を凍結乾燥物として含み、さらに該組成物は溶媒を含む。別の態様において、該組成物は分泌促進薬またはその塩の溶液である。好ましくは、該溶媒は例えば本明細書に記載のあらゆる適切な溶媒であってよく、好ましくは該溶媒は生理食塩水またはホスフェート緩衝液のような生理学的緩衝液である。
【０１８１】
本発明は、少なくとも1の上記GH分泌促進薬と医薬的に許容される担体を混合することを含む本発明化合物を含む医薬または医薬組成物を製造する方法にも関する。
【０１８２】
さらなる局面において、本発明は活性成分として上記化合物またはその医薬的に許容される塩と医薬的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。
【０１８３】
したがって、該組成物はさらに上記輸送分子を含みうる。
投与
【０１８４】
本発明に有用な好ましい組成物は、該活性成分を投与経路に従って当業者が選ぶことができる医薬的に許容される担体または希釈剤とともに含む。用いる医薬担体または希釈剤は、常套的固体または液体担体、例えばラクトース、シクロデキストリン、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、ステアリン酸マグネシウム、セルロース誘導体、またはシロップ、オリーブ油、リン脂質、ポリオキシエチレン、または単に水であってよい。同様に、該担体または希釈剤は、当該分野で知られたあらゆる持続放出物質、例えばグリセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレートを単独または1またはそれ以上のワックスと混合して含んでよい。該組成物は、常套的形、例えばカプセル、錠剤、エアロゾル、溶液、サスペンジョン、または局所適用剤であってよい。本明細書に記載のごとく該製剤はリポソームおよび/またはミセルも含みうる。
【０１８５】
本発明の適用では、用量は用いる化合物および投与方法に応じて変化するであろう。用量レベルは、約0.01μg/kg体重〜10g/kg体重/日、好ましくは約0.01μg/kg体重〜1mg/kg体重、より好ましくは0.01〜10μg/kg体重、最も好ましくは約0.01μg/kg体重で変化するであろう。投与経路は、活性化合物を適切または所望の作用部位に効果的に輸送するあらゆる経路、例えば経口、経鼻、肺、経皮、または非経口経路であってよく、経口または肺経路が好ましい。
【０１８６】
目的とする化合物を医薬的に許容される酸付加塩として、または適切であればアルカリ金属もしくはアルカリ土類金属、または低級アルキルアンモニウム塩として投与してよい。そのような塩は、遊離塩基とほぼ同じオーダーの活性を有すると考えられる。適切な用量は、例えば、約50mg〜約200mg、好ましくは約20mg〜約100mgの範囲の式Iの化合物を医薬的に許容される担体または希釈剤と混合して含んでよい。別の好ましい態様において、適切な用量は好ましくは10μg/kgを1日1回投与する。
【０１８７】
通常末梢的に生成されたグレリンの標的であるグレリンレセプターが十分なレベルの生物活性形のグレリン(または別の分泌促進薬)に曝露されるのを保証するあらゆる投与が本発明の一部であり得る。しかしながら、治療する可能性がある個体が長期間、例えば数週間または数カ月間治療を受ける必要があることを考慮して、投与形を十分適合させることが好ましい。
【０１８８】
ある態様において、分泌促進薬、例えばグレリン様化合物を、それを必要とする個体に、非グレリン欠損個体のグレリンレベルと機能的に等価な濃度の分泌促進薬を生じるような、例えば、非グレリン欠損個体のグレリンレベルと機能的に等価な濃度の分泌促進薬を生じるような量で投与することが好ましい。本明細書に記載の種々の分泌促進薬化合物の機能性は本明細書に記載のあらゆる方法を用いてアッセイすることができよう。
【０１８９】
したがって、例えばグレリン様化合物のような本発明の分泌促進薬を十分なレベルの生物活性形のグレリン、すなわち、アシル化形が該レセプターに到達するのを可能にするのに十分な量で皮下投与するのが好ましい。グレリンの皮下投与の有効性を示す例は、PCT出願公開公報WO2005014032(Gastrotech Pharma A/S)の実施例6に記載されている。
【０１９０】
本発明のある態様は、好ましくは可能な限り生理学的に食前状態に似るように分泌促進薬、例えばグレリンを投与する方法に関する。
【０１９１】
上記のごとく、本発明のある局面において、該分泌促進薬、例えばグレリンまたはグレリン様化合物を皮下投与する。
【０１９２】
別の局面において、分泌促進薬、例えばグレリンまたはグレリン様化合物はボーラスとして投与され、投与形はあらゆる適切な非経口形であってよい。
【０１９３】
好ましい態様において、分泌促進薬、例えばグレリンまたはグレリン様化合物は皮下にボーラス投与される。
【０１９４】
非経口投与用の医薬組成物には、無菌水性、および非水性注射用溶液剤、分散剤、サスペンジョン、またはエマルジョン、および使用前に無菌注射用溶液剤または分散剤に再構成する無菌粉末剤が含まれる。
【０１９５】
他の適切な投与形には、坐剤、スプレー、軟膏、クリーム、ゲル、吸入剤、皮膚パッチ、インプラント、丸薬、錠剤、ローゼンジー、およびカプセルが含まれる。
【０１９６】
本発明に従って用いる化合物の典型的用量は、10ng〜10mgグレリン/kg体重と等価な濃度である。本明細書における濃度および量は、グレリン量の等価で与えられ、ここでグレリンは28aaヒトグレリンである。等価は上記「機能性」の項に記載のごとく試験することができる。
【０１９７】
好ましい態様において、該医薬は、0.1μg〜1mgグレリン/kg体重、例えば0.5μg〜0.5mgグレリン/kg体重、例えば1.0μg〜0.1mgグレリン/kg体重、例えば1.0μg〜50μgグレリン/kg体重、例えば1.0μg〜10μgグレリン/kg体重と等価な濃度で投与される。
【０１９８】
上記のごとく、分泌促進薬、例えばグレリンまたはグレリン様化合物は、好ましくはボーラス、例えば0.3μg〜600mgグレリンと等価な量の分泌促進薬またはその塩を含むボーラスとして投与するのが好ましく、より好ましくは該ボーラスは2.0μg〜200mgグレリン、例えば5.0μg〜100mgグレリン、例えば10μg〜50mgグレリン、例えば10μg〜5mgグレリン、例えば10μg〜1.0mgグレリンと等価な量の分泌促進薬またはその塩を含む。
経口投与用組成物
【０１９９】
経口投与後に個体中で生物学的に活性なままであることができる分泌促進薬のタイプ(例えば低分子、および短ペプチドのような)は、広範囲の経口投与用剤形に製造することができる。該医薬組成物および剤形は、活性成分として混合物化合物またはその医薬的に許容される塩またはその結晶形を含みうる。医薬的に許容される担体は固体でも液体でもよい。固体製剤には粉末剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、カシェー剤、坐剤、および分散顆粒剤が含まれる。固体担体は、希釈剤、香味剤、可溶化剤、潤沢剤、懸濁剤、結合剤、保存料、湿潤剤、錠剤崩壊剤、または封入物質としても作用し得る1またはそれ以上の物質であり得る。
【０２００】
好ましくは該組成物は本発明化合物または化合物(複数)が約0.5%〜75%体重であり、残りは適切な医薬的賦形剤からなる。経口投与には、該賦形剤には医薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、滑石粉、セルロース、グルコース、ゼラチン、ショ糖、炭酸マグネシウムなどが含まれる。
【０２０１】
粉末剤において、担体は微粉化活性成分との混合物である微粉化固体である。錠剤において、該活性成分を必要な結合能を有する担体と適切な割合で混合し、所望の形およびサイズに圧縮する。粉末剤および錠剤は、好ましくは1〜約70%の活性化合物を含む。適切な担体には、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、低融点ワックス、ココアバターなどが含まれる。用語「製剤」は、担体を含むか含まない活性成分がそれと関連して担体で取り囲まれるカプセルを提供する封入物質を担体として有する活性化合物組成物を含むことを意図する。同様に、カシェー剤およびローゼンジー剤が含まれる。錠剤、粉末剤、カプセル剤、丸剤、カシェー剤、およびローゼンジー剤は経口投与に適した固形であり得る。
【０２０２】
本発明の滴下剤(Drops)は、無菌または非無菌の水性または油性溶液剤もしくはサスペンジョン剤を含んでよく、所望により殺菌剤および/または殺真菌剤および/またはあらゆる他の適切な保存料を含み、所望により界面活性剤を含む適切な水性溶媒中に活性成分を溶解することにより製造することができる。次に、得られる溶液を濾過して不純物を除去し、適切な容器に移し、次いで密封し、オートクレーブにかけるかまたは98-100℃に30分間保つことにより滅菌してよい。あるいはまた、該溶液を濾過滅菌し、無菌的に容器に移してよい。滴下剤に含めるのに適した殺菌剤および殺真菌剤の例には、硝酸フェニル水銀もしくは酢酸フェニル水銀(0.002%)、塩化ベンザルコニウム(0.01%)、および酢酸クロルヘキシジン(0.01%)がある。油状溶液剤を製造するのに適した溶媒には、グリセロール、希アルコール、およびプロピレングリコールが含まれる。
【０２０３】
また、使用直前に経口投与用の液体製剤に変換することを意図した固体製剤も含まれる。そのような液体形には、溶液剤、サスペンジョン、およびエマルジョンが含まれる。これら製剤は、活性成分に加えて、着色料、安定化剤、緩衝剤、合成および天然甘味料、分散剤、増粘剤、可溶化剤などを含んでよい。
【０２０４】
(例えば経口)投与に適した他の形には、エマルジョン、シロップ、エリキシル、水性溶液剤、水性サスペンジョン、歯磨き粉、ゲル歯磨き剤、チューインガムを含む液体製剤、または使用直前に液体製剤に変換することを意図した固体製剤が含まれる。エマルジョンは、溶液剤、水性ポリエチレングリコール溶液剤中で製造するか、またはレシチン、ソルビタンモノオレエート、またはアカシアのような乳化剤を含んでよい。水性溶液剤は、活性成分を水に溶解し、適切な着色料、香味料、安定化剤、および増粘剤を加えることにより製造することができる。水性サスペンジョンは、微粉化活性成分を粘性物質、例えば天然または合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、および他のよく知られた懸濁化剤を含む水に分散させることにより製造することができる。固体製剤には、溶液剤、サスペンジョン、およびエマルジョンが含まれ、活性成分に加えて、着色料、香味料、安定化剤、緩衝剤、合成および天然甘味料、分散剤、増粘剤、可溶化剤などを含んでよい。
非経口投与組成物
【０２０５】
本発明化合物は、非経口投与(例えば、注射、例えばボーラス注射もしくは連続注入)用に製剤化してよく、アンプル、予め充填したシリンジ、小容量注入溶液中、または保存料を添加した多用量容器中に単位剤形で存在してよい。該組成物は、サスペンジョン、溶液剤、または油性または水性ビークル中のエマルジョン、例えば水性ポリエチレングリコール中の溶液剤のような形をとりうる。油性または非水性担体、希釈剤、溶媒、またはビークルの例には、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油(例えばオリーブ油)、および注射可能有機エステル(例えばオレイン酸エチル)が含まれ、製剤化剤(formulatory agent)、例えば保存料、湿潤剤、乳化もしくは懸濁化剤、安定化剤および/または分散剤を含んでよい。あるいはまた、活性成分は無菌固体の無菌単離によりまたは溶液から凍結乾燥することにより得られる、適切なビークル、例えば無菌、発熱物質不含水で使用前に構成するための粉末であってよい。水性溶液剤は必要であれば適切に緩衝すべきであり、液体希釈剤は最初に十分な生理食塩水またはグルコースで等張化した。水性溶液剤は、特に静脈内、筋肉内、皮下、および腹腔内投与に適している。用いた無菌水性媒質はすべて当業者に知られた標準的技術により容易に利用可能である。
【０２０６】
グレリンまたはグレリン様化合物またはその医薬的に許容される塩(および、例えば抗原性エピトープおよびプロテアーゼ阻害剤)の溶液剤は、水または生理食塩水を用いて製造し、所望により無毒性界面活性剤と混合することができる。静脈内または動脈内投与用の組成物は、緩衝剤、リポソーム、希釈剤、および他の適切な添加剤も含みうる無菌水性溶液剤を含んでよい。
【０２０７】
非経口組成物に有用な油には、石油、動物、植物または合成油が含まれる。そのような組成物に有用な油の具体例には、ピーナッツ油、大豆油、ゴマ油、綿実油、コーン油、オリーブ油、ワセリン、および鉱油が含まれる。非経口組成物に用いる適切な脂肪酸には、オレイン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸が含まれる。オレイン酸エチルおよびイソプロピルミリステートが適切な脂肪酸エステルの例である。
【０２０８】
非経口組成物に用いる適切な石けんには、脂肪アルカリ金属塩、アンモニウム塩、およびトリエタノールアミン塩が含まれ、適切な界面活性剤には(a)陽イオン界面活性剤、例えば、ジメチルジアルキルアンモニウムハリド、およびアルキルピリジニウムハリド、(b)陰イオン界面活性剤、例えばアルキル、アリール、およびオレフィンスルホネート、アルキル、オレフィン、エーテル、およびモノグリセリドサルフェート、およびスルホスクシネート、(c)非イオン界面活性剤、例えば脂肪アミンオキシド、脂肪酸アルカノールアミド、およびポリオキシエチレンポリプロピレンコポリマー、(d)両性界面活性剤、例えばアルキル-β-アミノプロピオネート、および2-アルキルイミダゾリン第四アンモニウム塩、および(e)その混合物が含まれる。
【０２０９】
非経口組成物は、典型的には溶液中に約0.5〜約25%体重の活性成分を含むであろう。保存料および緩衝剤を用いてよい。注射部位の刺激を最小限にまたは除去するために、そのような組成物は、親水性親油性バランス(HLB)が約12〜約17の1またはそれ以上の非イオン界面活性剤を含んでよい。そのような組成物中の界面活性剤の量は、典型的には約5〜約15%体重の範囲であろう。適切な界面活性剤には、ポリエチレンソルビタン脂肪酸エステル、例えばソルビタンモノオレエート、および酸化プロピレンとプロピレングリコールの縮合により形成される酸化エチレンの高分子量付加物が含まれる。非経口組成物は、単位用量または多用量密封容器、例えばアンプルおよびバイアル中に存在することができ、使用直前に注射のために無菌液体賦形剤、例えば水を加えるだけでよい凍結乾燥状態で保存することができる。即席注射溶液剤およびサスペンジョン剤は、前記の無菌粉末、顆粒、および錠剤から製造することができる。
【０２１０】
注射または注入に適した医薬剤形には、リポソーム中に封入することにより投与に適合する活性成分を含む無菌水性溶液剤または分散剤を含むことができる。すべての場合で、最終的剤形は無菌、液状、および製造および保存条件下で安定でなければならない。
【０２１１】
無菌注射用溶液剤は、所定量のグレリンまたはグレリン様化合物またはその医薬的に許容される塩を必要に応じて上記種々の他の成分中に組み込み、次いで濾過滅菌することにより製造される。
【０２１２】
健康対象に異なる3単用量のグレリンiv投与およびグレリンsc投与の絶対的バイオアベイラビリティを検討するための無作為化一施設四期間クロスオーバー試験の例は、PCT出願公開公報WO2005014032(Gastrotech Pharma A/S)の実施例3に記載されている。
局所投与用組成物
【０２１３】
本発明化合物は局所に送達することもできる。局所投与の領域には、皮膚表面、および直腸、鼻、口、および喉の粘膜組織が含まれる。皮膚および粘膜を介する局所投与用の組成物は、刺激の徴候、例えば腫脹または発赤を生じてはならない。
【０２１４】
局所用組成物は、局所投与に適合した医薬的に許容される担体を含んでよい。すなわち、該組成物は、例えばサスペンジョン、溶液、軟膏、ローション、クリーム、泡、エアロゾル、スプレー、坐剤、インプラント、吸入剤、錠剤、カプセル、乾燥粉末、シロップ、香油、またはローゼンジーの形をとりうる。そのような組成物の製造方法は医薬産業でよく知られている。
【０２１５】
本発明化合物は、表皮に軟膏、クリームもしくはローション、または経皮パッチとして局所投与するために製剤化することができる。軟膏およびクリームは、例えば適切な増粘剤および/またはゲル化剤を加えた水性または油性基剤を用いて製剤化することができる。ローションは水性または油性基剤を用いて製剤化することができ、一般に1またはそれ以上の乳化剤、安定化剤、分散剤、懸濁化剤、増粘剤、または着色料も含みうる。口に局所投与するのに適した組成物は、香味基剤、通常ショ糖およびアカシアまたはトラガカント中に活性薬剤を含むローゼンジー剤；不活性基剤、例えばゼラチン、およびグリセリンまたはショ糖およびアカシア中に活性成分を含むトローチ；および適切な液体担体中に活性成分を含むうがい薬が含まれる。
【０２１６】
本発明のクリーム、軟膏、またはペーストは、外部適用用の活性成分の半固体組成物である。それらは、単独のまたは水性または非水性液中の溶液またはサスペンジョン中の微粉または粉末状の活性成分を適切な機械の助けにより脂肪性または非脂肪性基剤と混合することにより製造することができる。該基剤は、炭化水素、例えば硬、軟、または液体パラフィン、グリセロール、蜜ロウ、金属石けん；ゴム糊；天然油、例えばアーモンド油、コーン油、落花生油、ヒマシ油、オリーブ油；羊毛脂またはその誘導体もしくは脂肪酸、例えばステアリン酸またはオレイン酸をアルコール、例えばプロピレングリコールまたはマクロゲルとともに含んでよい。該組成物は、あらゆる適切な表面活性剤、例えば陰イオン、陽イオン、または非イオン界面活性剤、例えばそのソルビタンエステルまたはポリオキシエチレン誘導体を組み込んでよい。懸濁化剤、例えば天然ゴム、セルロース誘導体または無機物質、例えば珪質シリカ、および他の成分、例えばラノリンも含んでよい。
【０２１７】
本発明のローションは皮膚に適用するのに適したものを含む。皮膚に適用するためのローションまたは塗布薬は、乾燥を早め、皮膚を冷却する薬剤、例えばアルコールまたはアセトン、および/または保湿剤、例えばグリセロールまたは油、例えばヒマシ油または落花生油も含んでよい。
【０２１８】
本明細書に記載の医薬・化学修飾剤複合体は経皮的に投与することができる。経皮投与は、典型的には医薬を経皮的に通過させて患者の全身循環に送達することを含む。皮膚の部位には薬剤を経皮的に投与するための解剖学的領域が含まれ、前腕部、腹部、胸部、背部、臀部、乳様突起(mastoidal)領域などが含まれる。
【０２１９】
経皮送達は、長期間患者の皮膚に該複合体の供給源を曝露することを伴う。経皮パッチは身体に医薬・化学修飾剤複合体の制御送達をもたらすさらなる利点がある。Transdermal Drug Delivery：Developmental Issues、およびResearch Initiatives、Hadgraft and Guy(eds.)、Marcel Dekker、Inc.,(1989)；Controlled Drug Delivery：Fundamentals and Applications、Robinson and Lee(eds. )、Marcel Dekker Inc. ,(1987);およびTransdermal Delivery of Drugs、Vols. 1-3、Kydonieus and Berner(eds.)、CRC Press,(1987)参照。そのような剤形は、該医薬・化学修飾剤複合体を適切な媒質、例えば弾性マトリックス物質に溶解、分散、または組み込むことにより製造することができる。吸収促進剤を用いて皮膚を横切る該化合物の流量を増加させることもできる。そのような流量の速度は、速度調節膜を与えるか、ポリマーマトリックスまたはゲルに化合物を分散することにより調節することができる。
【０２２０】
種々の種類の経皮パッチを本明細書に記載の方法に使用することができる。例えば、簡単な粘着性パッチは裏張り物質(backing material)とアクリレート粘着剤から製造することができる。医薬・化学修飾剤複合体およびあらゆる促進剤を粘着性成形溶液に製剤化し、完全に混合することができる。該溶液を裏張り物質上で直接成形し、成形用溶媒をオーブン中で蒸発させ、粘着フィルムが残る。放出ライナーを取り付け該システムを完結させることができる。
【０２２１】
あるいはまた、ポリウレタンマトリックスパッチを用いて医薬・化学修飾剤複合体を送達することができる。このパッチの層は、裏張り(backing)、ポリウレタン薬・増強剤マトリックス、膜、粘着剤、および放出ライナーを含む。ポリウレタンマトリックスは、ポリウレタンプレポリマーが硬化する室温で製造する。水、アルコール、および複合体をプレポリマーに加えると、裏張り物質のみを直接成形することができる粘着性フィルムエラストマーが形成される。
【０２２２】
本発明のさらなる態様では、ハイドロゲルマトリックスパッチを利用する。典型的には、ハイドロゲルマトリックスは、アルコール、水、薬剤、および数種の親水性ポリマーを含む。このハイドロゲルマトリックスは、裏張りと粘着層の間に経皮パッチに組み込むことができる。
【０２２３】
液体リザーバーパッチは、本明細書に記載の方法に用いることもできる。このパッチは、非透過性または半透過性、熱密封可能裏張り物質、熱密封可能膜、アクリレートベースの圧感受性皮膚粘着剤、およびシリコン化放出ライナーを含む。裏張りは膜に熱密封されてリザーバーを形成し、次いでこれに該複合体、増強剤、ゲル化剤、および他の賦形剤の溶液を充填することができる。
【０２２４】
泡状マトリックスパッチは、ゲル化薬剤・化学修飾剤溶液が泡状薄層、典型的にはポリウレタンに拘束される以外はデザインと成分が液体リザーバー系と同様である。この泡状層は、パッチ表面に熱密封された裏張りと膜の間に位置する。
【０２２５】
受動的送達系では、放出速度は典型的にはリザーバーと皮膚の間におかれた膜により、一体型用具からの拡散により、または該送達系において速度調節バリアーの役割を果たす皮膚それ自身により調節される。米国特許4,816,258、4,927,408、4,904,475、4,588,580、4,788,062など参照。薬剤の送達速度は、一部膜の性質に依存する。例えば、身体内への膜を横切る薬剤の送達速度は一般的に皮膚バリアーを横切るより高い。該複合体が該用具から膜に送達される速度はリザーバーと皮膚の間に置かれる律速膜を用いることにより最も好都合に調節される。皮膚が該複合体に対して十分透過性である(すなわち、皮膚を介した吸収が膜を通した通過速度より大きい)とすれば、該膜は患者が経験する投与速度を調節する役割を果たす。
【０２２６】
適切な透過膜物質は、所望の透過度、該複合体の性質、および該用具の構築に関する機械的検討に基づいて選んでよい。透過性膜物質の例には、種々の天然および合成ポリマー、例えばポリジメチルシロキサン(シリコンゴム)、エチレンビニルアセテートコポリマー(EVA)、ポリウレタン、ポリウレタンポリエーテルコポリマー、ポリエチレン、ポリアミド、塩化ポリビニル(PVC)、ポリプロピレン、ポリカーボネート、ポリテトラフルオロエチレン(PTFE)、セルロース物質、例えばセルローストリアセテート、およびセルロースニトレート/アセテート、およびハイドロゲル、例えば2-ヒドロキシエチルメタクリレート(HEMA)が含まれる。
【０２２７】
該用具には他の部材、例えば所望の用具特性に応じて治療用製剤の他の常套的成分も含まれうる。例えば、本発明の組成物は、1またはそれ以上の保存料または静菌剤、例えばメチルキドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、クロロクレゾール、塩化ベンザルコニウムなども含んでよい。これら医薬組成物は、他の活性成分、例えば抗菌剤、特に抗生物質、麻酔剤、鎮痛剤、および抗掻痒薬も含み得る。
坐剤として投与するための組成物
【０２２８】
本発明化合物は坐剤として投与するために製剤化することができる。低融点ワックス、例えば脂肪酸グリセリドまたはココアバターの混合物を最初に溶かし、次いで活性成分を例えば撹拌により均質に分散させる。次に、融解した均質な混合物を好都合なサイズの鋳型に注ぎ入れて冷却し、固形化する。
【０２２９】
活性化合物を、例えばポリエチレングリコール(PEG)担体(例えば、PEG1000[96%]、およびPEG4000[4%])中に分散させた約0.5%〜約50%の本発明化合物を含む坐剤に製剤化することができる。
併用(組み合わせ)
【０２３０】
本発明のさらなる局面において、本発明化合物は、さらなる医薬活性物質、または治療方法、または他の医薬活性物質と組み合わせて投与することができる。本明細書において、他の物質、治療方法と用語「組み合わせて」は、該別の物質および/または治療方法を、個体を分泌促進剤で治療する前、治療中(同時に、好ましくは一緒に製剤化することを含む)および/または治療後に個体に投与することを意味する。本明細書に記載の併用療法のすべての例において、併用は、組み合わせた活性物質を同時、連続的、または別個に投与するために用いることができるキットインパート(kit-in-part)システムの形であってよい。すべての例において、本明細書に記載のあらゆる医薬は医薬的有効量で投与される。すなわち、投与は、有意義な患者の利益を示すに十分な医薬又は医薬組成物の各活性成分の総量、または方法を伴う。
【０２３１】
好ましい態様において、該分泌促進薬は、甲状腺機能亢進症を治療するための1またはそれ以上の医薬と共に個体に投与される。好ましくは、甲状腺機能亢進症を治療するための医薬は、所望により心血管系を標的とする薬剤と組み合わせた
A) 抗甲状腺薬、および/または
B) 外科手術、および/または
C) 放射性ヨウ素
の1またはそれ以上である。
【０２３２】
すなわち、本発明化合物は1またはそれ以上の他の医学的治療と組み合わせて個体に投与することができる。該他の医学的治療は、別の化合物の投与を含むか、または化学療法および/または放射線療法のような方法を含みうる。
【０２３３】
さらに、「組み合わせて」は、他の医学的治療は、本発明化合物の投与前、投与と同時、または投与後に患者に対し実施してよい。併用は、組み合わせた活性物質を同時、連続的、または別個に投与するために用いることができるキットインパートシステムの形であってよい。
【０２３４】
ある好ましい態様において、本明細書に記載のあらゆる治療において、グレリンまたはその類似体は、1またはそれ以上の他の胃由来因子と組み合わせて用いてよい。この他の胃由来因子にはあらゆるホルモン、アシル化もしくは非アシル化ペプチド、アミノ酸誘導体、ヌクレオチド、脂肪酸誘導体、炭化水素、または胃由来または胃から分泌された他の炭化水素が含まれてよく、好ましくは(排他的ではないが)以下のものから選ばれる：パンクレアスタチン、ガストリン、レジスチン、プロスタグランジン、例えばプロスタグランジンE2、および内因性因子。
【０２３５】
「胃由来因子」に加え、グレリンは同じレセプターに「胃由来因子」、例えば別の分泌促進薬として作用するあらゆる合成低または高分子量アゴニストと組み合わせて用いることもできる。
【０２３６】
さらに、グレリンおよび/またはその類似体は、別の体重および/または体脂肪誘導因子と組み合わせて用いることができる。例として示す因子には、メラニン濃縮ホルモン(MCH)、MCHレセプターアゴニスト、特にMCHレセプター1アゴニスト、神経ペプチドY(NPY)、NPYレセプター1アゴニスト、NPYレセプター5アゴニスト、およびNPYレセプター2アンタゴニスト(ペプチドYY(PYY)およびPYY(3-36)を含む)、α-メラノサイト刺激ホルモン(α-MSH、α-メラノコルチン)、メラノコルチン-3レセプター(MC3R)アンタゴニスト、メラノコルチン-4レセプター(MC4R)アンタゴニスト、アグーチ関連ペプチド(Agrp)、Agrpアゴニスト、コカイン-およびアンフェタミン調節転写物(CART)アンタゴニスト、オレキシンレセプター1およびレセプター2アゴニスト、成長ホルモン(GH)、GHレセプターアゴニスト、インスリン様成長因子-1(IGF-1)、およびIGF-1レセプター1アゴニスト、高カロリー食、グルココルチコイド、プロゲステロン薬、シプロヘプタジン、および他のセロトニン拮抗薬、分岐鎖アミノ酸、運動促進薬(モチリン、メトクロプラミド、10mg)、エイコサペンタエン酸、カンナビノイド、5'-デオキシ-5-フルオロウリジン、メラトニン、タリドミド、ACE阻害剤、および/またはβレセプターアンタゴニストがある。さらにグレリンは、抗甲状腺薬、例えばヨウ素、131ヨウ素、プロピルチオウラシル、チアザゾール、カルビマゾール、メチマゾール、抗糖尿病薬、例えばインスリン、スルホニルウレア、メトホルミン、アカルボース、チアゾリジンジオン、メグリチニド、制酸剤、H2阻害剤、またはプロトンポンプ阻害剤を含む基礎疾患の治療に用いる薬剤と組み合わせてよい。
【０２３７】
別の態様において、GH分泌促進薬はNSAID、例えばインドメタシン、およびCOX1阻害剤またはCOX2阻害剤と組み合わせて投与される。別の組み合わせはエリスロポイエチン/EPOとであってよい。別の組み合わせは、レプチン、レニンアンギオテンシン系のアゴニスト、オピオイドセプターアゴニスト、またはペルオキシソーム増殖因子活性化レセプターγアゴニストの1またはそれ以上とであってよい。別の好ましい態様において、該分泌促進薬は成長ホルモン、好ましくはhGHと組み合わせて投与してよい。
【０２３８】
本発明化合物と組み合わせて使用するための他の好ましい化合物または治療法には、高カロリー食、グルココルチコイド、プロゲステロン薬、シプロヘプタジン、および/または他の抗セロトニン作動薬、分岐鎖アミノ酸、運動促進薬(例えば、モチリン、メトクロプラミド、10mg)、エイコサペンタエン酸、カンナビノイド、5'-デオキシ-5-フルオロウリジン、メラトニン、タリドミド、および/またはβ-2-アゴニストの1またはそれ以上が含まれる。
【０２３９】
別の好ましい態様において、GH分泌促進薬は、以下のプロピルチオウラシルおよび/またはメチマゾールおよび/またはカルバマゾールの1またはそれ以上と組み合わせて投与される。
医薬の包装
【０２４０】
本発明に用いる化合物は、単用量または多用量で医薬的に許容される担体または賦形剤と組み合わせて投与してよい。該製剤は好都合には当業者に知られた方法により単位剤形で存在しうる。
【０２４１】
本発明化合物はキットで提供することが好ましい。そのようなキットは典型的には投与のための剤形中に活性化合物を含む。剤形は対象に投与したときに望ましい効果を得ることができるように十分な量の活性化合物を含む。
【０２４２】
このように、医薬の包装には関連する投与方法に対応する用量単位の量を含むことが好ましい。したがって、ある態様において、医薬の包装は、上記化合物またはその医薬的に許容される塩、および医薬的に許容される担体、ビークルおよび/または賦形剤を含み、該包装は7〜21用量単位、またはその複合を有し、1週間の投与または数週間の投与のための投与単位を有する。
【０２４３】
用量単位は上記の通りであり、用量単位は、好ましくは0.3μg〜600mgグレリン、例えば2.0μg〜200mgグレリン、例えば5.0μg〜100mgグレリン、例えば10μg〜50mgグレリン、例えば10μg〜5mgグレリン、例えば10μg〜1.0mgグレリンに等価な量のグレリン様化合物またはその塩を含む。
【０２４４】
医薬の包装は非経口、特に皮下投与のためのあらゆる適切な形でありうる。好ましい態様において、該包装は、カートリッジ、例えば注射ペン用カートリッジの形であり、該注射用ペンはインスリン治療で知られたような注射用ペンである。
【０２４５】
医薬の包装が1用量単位を超えて含む場合は、該医薬の包装は各投与を1用量単位のみに調節するメカニズムを提供することが好ましい。
【０２４６】
好ましくは、キットは所望の効果を達成する剤形の使用を指示する使用説明書と特定の時間にわたり投与される量の剤形を含む。したがって、ある態様において、医薬の包装は医薬組成物を投与するための使用説明書を含む。
経鼻投与用化合物
【０２４７】
本発明化合物は、経鼻投与用に製剤化することができる。溶液剤またはサスペンジョン剤を常套的手段、例えばドロッパー、ピペット、またはスプレーを用いて鼻腔に直接適用する。該組成物は単用量または多用量形で提供することができる。ドロッパーまたはピペットの後者の場合は、これは適切な予め決定した用量の溶液剤またはサスペンジョン剤を患者に投与することにより達成することができよう。スプレーの場合は、これは例えば定量噴霧スプレーポンプにより達成することができよう。
エアロゾル投与用化合物
【０２４８】
本発明化合物は、鼻内投与を含む、特に気道へのエアロゾル投与用に製剤化してよい。該化合物は、一般に、例えば5ミクロンまたはそれ以下のオーダーの小粒子サイズを有する。そのような粒子サイズは、当該分野で知られた手段、例えば微粉化により得ることができよう。活性成分は、適切なプロペラント、例えばクロロフルオロカーボン(CFC)、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、またはジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、または他の適切なガスを用いる加圧パックを用いて提供される。エアロゾルは好都合にはレシチンのような界面活性剤を含んでもよい。薬剤の用量は、定量バルブで調節することができる、あるいはまた、活性成分は、適切な粉末塩基、例えばラクトース、デンプン、デンプン誘導体、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびポリビニルピロリジン(PVP)中の該化合物の粉末混合物のような乾燥粉末の形で提供することができる。粉末担体は鼻腔内でゲルを形成することができる。粉末組成物は、例えばゼラチンのカプセルまたはカートリッジ、または粉末が吸入器により投与されるブリスターパック中の単位剤形で存在してよい。
【０２４９】
エアロゾルにより投与する組成物は、ベンジルアルコールまたは他の適切な保存料、バイオアベイラビリティを増強する吸収促進剤を用い、フルオロカーボンを用い、および/または他の可溶化剤もしくは分散剤を用い、例えば生理食塩水中の溶液剤として製造してよい。
医薬的に許容される塩
【０２５０】
本発明化合物の医薬的に許容される塩は、それを製造できる場合は、本発明により網羅されることも意図する。これら塩は、その適用において医薬的使用に許容されるものである。それにより該塩は親化合物の生物活性を保持し、該塩は疾患の治療におけるその適用および使用において困ったまたは有害な作用がないであろうことを意味する。
【０２５１】
医薬的に許容される塩は標準的方法で製造される。親化合物が塩基である場合は、適切な溶媒中の過剰の有機酸または無機酸で処理する。親化合物が酸である場合は、適切な溶媒中の無機塩基もしくは有機塩基で処理する。
【０２５２】
本発明化合物は、特に医薬的に許容される担体または希釈剤と共に、同時に、または一緒に、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩の形で、好ましくはその医薬組成物の形で有効量を経口、直腸、または非経口(皮下を含む)経路により投与してよい。
【０２５３】
本発明の医薬組成物に用いる医薬的に許容される酸付加塩の例には、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、リン酸、メタリン酸、シュウ酸、および硫酸、および有機酸、例えば酒石酸、酢酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、安息香酸、グリコール酸、グルコン酸、コハク酸、p-トルエンスルホン酸、およびアリールスルホン酸などから誘導されるものが含まれる。
投与方法
【０２５４】
本明細書に記載の医薬製剤は好ましくは単位剤形である。そのような形において、該製剤は適切な量の活性成分を含む単位用量にさらに分けられる。単位剤形は包装製剤であってよく、該包装は分離した量の製剤、例えば包装錠剤、カプセル剤、およびバイアルまたはアンプル中の粉末剤を含む。または単位剤形は、カプセル剤、錠剤、カシェー剤、またはローゼンジー剤それ自体であるか、または適切な数の包装したあらゆるこれらであり得る。所望により、組成物は活性成分の持続または制御放出投与に適合した腸溶コーティングを用いて製造することができる。
【０２５５】
本発明のある局面において、適切な用量の本明細書に記載の組成物はそのような治療を要する個体に医薬的有効量で投与される。本明細書において「医薬的に許容される量」は、有意な患者の利益を示すに十分な医薬もしくは医薬組成物または方法の各活性成分の総量を含む投与と定義する。本明細書で用いている用語「単位剤形」は、医薬的に許容される希釈剤、担体、またはビークルと共に所望の効果を生じるのに十分な量の計算された、予め決定された量の化合物を単独または他の薬剤と組み合わせて含む、ヒトおよび動物対象に対する単位用量として適した物理的に分離した単位を表す。本発明の単位剤形のための仕様は、用いる特定化合物または化合物(複数)、および達成すべき効果、および宿主における各化合物の薬力学に依存する。投与する用量は「有効量」すなわち個体患者における「有効レベル」を達成するのに必要な量であるべきである。
【０２５６】
投与必要量は、用いる特定の薬剤組成物、投与経路、および治療する特定対象によって変化する。理想的には、本発明方法により治療すべき患者は、一般的には薬剤耐性が発現する前の必要量より高くない最大耐容用量の医薬的有効量の化合物を投与される。適切な投与方法は、好ましくは投与すべき対象のタイプ；対象の年齢、体重、性別、および医学的状態；投与経路；対象の腎および肝機能；所望の効果；および用いる特定化合物を含む当該分野でよく知られた因子を考慮して決定される。
【０２５７】
毒性を伴わずに効果を生じる範囲内の薬剤濃度を達成する最適な正確さは、標的部位に対する薬剤の利用能の動力学に基づく投与計画を要する。これには薬剤の分布、平衡、および除去の検討が含まれる。
【０２５８】
食事前に生じる正常なグレリンの反応はグレリンの血漿濃度における短時間の急上昇(サージ)であり、該ペプチドの半減期が比較的短いことによりグレリンのi.v.注射はグレリン濃度の同様の短時間のピークを得ることができることを保証することに注意すべきである。投与経路は、非分解生物活性形のペプチドが循環中で主要な形であり、これがグレリンレセプターに達し、これを刺激することを保証する必要がある。すなわち、該医薬の最大効果を得るために投与を1日に1〜3回とし、各投与を食事の90分以内、例えば食事の85分以内、例えば食事の80分以内、例えば食事の75分以内、例えば食事の70分以内、例えば食事の65分以内、例えば食事の60分以内、例えば食事の55分以内、例えば食事の50分以内、例えば食事の45分以内、例えば食事の40分以内、例えば食事の35分以内、例えば食事の30分以内、例えば食事の25分以内、例えば食事の20分以内、例えば食事の15分以内、例えば食事の10分以内、例えば食事の5分以内とすることが好ましい。より好ましくは、該医薬は各主たる食事の前に、例えば1日に3回投与する。
【０２５９】
本発明では用量は用いる化合物や投与方法により変化する。投与レベルは、1日に約0.01μg/kg体重〜1g/kg体重、好ましくは約0.01μg/kg体重〜1mg/kg体重、例えば0.01〜10μg/kg体重、例えば約0.01μg/kg体重で変化し得る。ある好ましい態様において、投与レベルは約10μg/kg体重である。該化合物について本明細書で開示しているすべての使用方法について、1日の経口投与方法は、好ましくは約0.01μg〜約80mg/kg体重である。1日の非経口投与方法は約0.01μg〜約80mg/kg体重。1日の局所投与方法は、好ましくは0.01μg〜150mgを1日に1〜4回投与、好ましくは2〜3回投与する。1日の吸入投与方法は、好ましくは約0.01μg/kg〜約1mg/kg/日である。化合物またはその医薬的に許容される塩の最適量および個々の投与間隔は治療すべき病状の性質と程度、投与の形、経路および部位、ならびに治療する特定の患者により決定され、そのような最適値は常套的技術により決定することができることも当業者が理解するであろう。最適治療単位、すなわち、特定日数で1日あたりに投与した化合物またはその医薬的に許容される塩の用量数は、常套的治療単位決定試験を用いて当業者が確定することができることも当業者は理解するであろう。
【０２６０】
さらに、「有効レベル」は投与の好ましい評価項目として用い、実際の用量およびスケジュールは、薬物動態、薬剤分布、および代謝の個体間差に応じて変化しうる。「有効レベル」は、例えば本発明の1またはそれ以上の化合物の濃度に対応する患者において望ましい血液または組織レベルと定義することができる。
【０２６１】
ある好ましい態様において、本発明化合物は、バッカル送達、舌下送達、経皮送達、吸入、および例えばPowderjetが開発した方法を用いる無針注射から選ばれる投与経路のために文献に記載のごとく製剤化される。
【０２６２】
吸入について、本発明化合物は当業者に知られた方法を用い、例えばエアロゾル、乾燥粉末、または可溶化、例えば微小滴で、好ましくはそのような送達を意図した用具(例えば、Aradigm、Alkerme、またはNektarから市販されている)中に製剤化することができる。
ボーラス投与
【０２６３】
分子薬理学的観点から、グレリンレセプターは、通常、天然アゴニストリガンド、グレリンの濃度において短期間サージに曝露されることがわかったことに注目することが重要である。GHS-R1aレセプターは、アゴニストに連続的に曝露すると脱感作、内在化、および下方調節されるレセプター、いわゆるGプロテイン結合レセプターまたは7TMレセプターのクラスに属する。全体的シグナル変換系に固有のこれらメカニズムは、レセプターのリン酸化(それ自身アゴニストに対するレセプターの親和性を低下させる)、アレスチンのような阻害タンパク質の結合(Gプロテインのようなシグナル変換分子の結合を立体的にブロックする)のようなプロセスを含む。アゴニスト介在脱感作プロセスの別の部分は、レセプターの内在化(例えば、アゴニストが結合する細胞表面からのレセプターの物理的除去)、およびレセプターの下方調節(すなわち、レセプターの産生/発現の低下)である。レセプターのアゴニストへの短期間の曝露後、レセプターの内在化に次いで再感作プロセスが生じ、レセプターが脱リン酸化され、再度使用するために細胞表面に再生される。理論に縛られることなく、例えばアゴニストの長時間連続注入中に生じる持続的刺激により該レセプターの下方調節は、そのシグナル変換系などにおいて標的細胞がこの状況に対して調整されることを保証すると考えられる。
【０２６４】
したがって、ある局面において、本発明は分泌促進薬、例えばグレリン様化合物をボーラス投与することに関する。
【０２６５】
本発明のある好ましい態様において、分泌促進薬、例えばグレリンまたはグレリン様化合物は、10μg/kg体重と等価な量をボーラスとして投与する。
グレリンの製造方法
【０２６６】
分泌促進薬化合物は当該分野でよく知られた技術を用いて製造することができる。例えば、分泌促進薬のポリペプチド領域は化学的または生化学的に合成し、修飾することができる。ポリペプチドの化学合成技術は当該分野でよく知られている(例えば、Vincent in Peptide and Protein Drug Delivery、New York、N. Y.、Dekker、1990参照)。核酸の細胞への導入および核酸の発現を含む生合成技術の例は、Ausubel、Current Protocols in Molecular Biology、John Wiley、1987-1998、およびSambrook et al.、Molecular Cloning、A Laboratory Manual、第2版、Cold Spring Harbor Laboratory Press、1989に記載されている。
【０２６７】
本発明化合物を含む医薬組成物は、例えばRemington：The Science and Practice of Pharmacy 1995、E. W. Martin編、Mack Publishing Company、第19版、Easton、Pa.に記載のような常套的技術により製造することができる。該組成物は常套的形、例えばカプセル剤、エアロゾル剤、溶液剤、サスペンジョン剤、または局所適用剤かもしれない。
【０２６８】
本発明に用いる分泌促進剤の合成製造に適したある方法は、WO2005014032(Gastrotech Pharma A/S)の実施例2に記載されている。
【実施例】
【０２６９】
以下の実施例は本発明の例示であって限定するものではない。
実施例1：甲状腺機能亢進症の治療におけるグレリン
目的：
【０２７０】
1) 血漿グレリンレベルを正常化し、甲状腺機能亢進症において観察される異化病状を安定化および逆転させる
2) 血漿グレリンの正常化は、さらに、通常、ホルモンの血漿レベルの低下に関連して観察される視床下部ニューロンにおけるグレリンレセプターの代償性上方調節を抑制しうる。視床下部のグレリンレセプターの発現の上方調節は、甲状腺機能亢進疾患後の患者でしばしば観察される食欲増加および肥満の一因となると仮定される。
3) グレーブス病に罹患した患者にも免疫系に対する阻害効果によりグレリンの利益がありうる。
方法：
【０２７１】
甲状腺機能亢進病状の2つの異なるモデルを樹立する：
1) 15日間にわたりL-チロキシンを腹腔内適用して模倣した、同時に自己免疫機能障害を伴わない甲状腺機能亢進性病状。
2) ヒト(甲状腺刺激ホルモン)TSHレセプター発現アデノウイルスの投与により誘導した自己免疫甲状腺機能亢進病状。
【０２７２】
L-チロキシンの投与：6週齢BALB/cマウスに、用量40mg/kgのL-チロキシンを15日間毎日腹腔内投与する。
【０２７３】
TSH-R発現アデノウイルス：TSH-RをアデノウイルスpAdHM4の発現ベクターにクローンし、これをPaclで直線化し、SuperFect(Qiagen)を取り扱い説明書に従って用いて293ヒト胎児腎細胞にトランスフェクトする。次に、TSH-R発現組換えアデノウイルスをプラーク精製する。アデノウイルスを、293ヒト胎児腎細胞で増殖させ、CsCl密度勾配遠心を2回行って精製する。ウイルス粒子濃度を10mM Tris-HCl、1mM EDTA、および0.1% SDS中、56℃で10分間ウイルス溶液をインキュベーション後の260nmの吸光度を測定して決定する(吸光度1は1.1x1012粒子/mlに対応する)。
【０２７４】
6週齢BALB/cマウスをアデノウイルスで免疫し、マウスに1x1011粒子のTSHレセプター発現アデノウイルスまたはコントロールウイルスを含む50μl PBSをi.m.注射する。同じ免疫スケジュールを3週間間隔で2回繰り返す。コントロールマウスおよび甲状腺機能亢進症の2つの異なるマウスモデルをともにグレリン(100μg/kg)または生理食塩水を1日1回2週間s.c.投与した。処置はL-チロキシン投与の15日後またはアデノウイルス投与の2回投与後に開始した。グレリン投与の2週間後、マウスを屠殺し、胸腔血液を回収し、視床下部と甲状腺を解剖する。
分析：
【０２７５】
血液試料：TSH(通常、高レベルの甲状腺ホルモンに対する負のフィードバック反応として減少する)。T4および遊離T3 
TSH抗体価(グレーブス病における自己免疫反応を評価するために測定した)
視床下部：定量的RT-PCRは、NPY、POMC、GHS-R1aのような重要な食欲調節ペプチドについて行う。
甲状腺：定量的RT-PCRにより測定したサイログロブリンの濾胞中含有量の測定。
結論：
【０２７６】
視床下部のGHS-R1aの発現レベルが血漿グレリンレベルの低下に対する反応として増加すれば、甲状腺機能亢進症の症状発現後に観察される肥満の原因となりうる。グレリンレセプター発現の30%のみの増加はグレリンレセプター遺伝子プロモーターの1つの点突然変異を有するファミリーにより示されるように食物摂取および肥満(BMI>30)の強い増加を誘導する(Hingstrup L and Pedersen O参照)。視床下部レセプター発現の発現レベルの増加を抑制するとグレリン投与は食物摂取の代償性増加も抑制する。
【手続補正書】
【提出日】平成18年12月6日(2006.12.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2007532495000001.app
【国際調査報告】
2007532495.tif 000003
2007532495.tif 000004
2007532495.tif 000005
2007532495.tif 000006