(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）の新規な化合物、それらの製造方法、それらの使用、および該新規な化合物を含む医薬組成物に関する。該新規な化合物は、療法において、具体的には、胃食道逆流性疾患（ＧＥＲＤ）の処置に有用である。2007509935.tif 000047
2007509935.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2007509935.tif 000041
（式中、Ｒ１は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールより選択され、ここにおいて、そのアリールまたはヘテロアリールは、Ｃ１−Ｃ４アルキルで置換されていてよく；
Ｒ２は、水素およびＣ１−Ｃ４アルキルより選択され；
Ｒ３は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｆ、ＣＦ３、ＣＨＦ２およびＣＨ２Ｆより選択され；
Ｒ４は、水素、Ｆ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２ＦおよびＣＨ３より選択され；
Ｒ５は、水素およびＦより選択され；
Ｒ５は、水素およびＦより選択され；
Ｑは、Ｓ、ＮＨまたはＮＣＨ３であって、Ｃ１−Ｃ４アルキルで置換されていてもよいものであり；
Ｙ１は、水素；ハロゲン；ニトリル；Ｃ１−Ｃ４アルコキシ；Ｃ１−Ｃ４アルキルであって、そのアルキル基の一つまたはそれを超える水素原子が、フッ素原子へと置換されていてもよいもの；ベンジルオキシ；メタ位またはパラ位にあるニトロ；およびＣ１−Ｃ４アルキルエステルより選択され；
Ｙ２は、水素；ハロゲン；ニトリル；Ｃ１−Ｃ４アルコキシ；Ｃ１−Ｃ４アルキルであって、そのアルキル基の一つまたはそれを超える水素原子が、フッ素原子へと置換されていてもよいもの；およびＣ１−Ｃ４アルキルエステルより選択され；
Ｙ３は、水素；ハロゲン；ニトリル；Ｃ１−Ｃ４アルコキシ；Ｃ１−Ｃ４アルキルであって、そのアルキル基の一つまたはそれを超える水素原子が、フッ素原子へと置換されていてもよいもの；およびＣ１−Ｃ４アルキルエステルより選択され；または
Ｙ１およびＹ２は、芳香環または非芳香環であって、ハロゲン；ニトリル；Ｃ１−Ｃ４アルコキシ；Ｃ１−Ｃ４アルキルであって、そのアルキル基の一つまたはそれを超える水素原子が、フッ素原子へと置換されていてもよいもの；ベンジルオキシ；またはＣ１−Ｃ４アルキルエステルで置換されていてもよい環を形成してよい）
を有する化合物；並びに
その薬学的に許容しうる塩、水和物、イソフォームおよび／または光学異性体。
【請求項２】
式Ｉ
【化２】
2007509935.tif 000042
（式中、Ｒ１は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールより選択され、ここにおいて、そのアリールまたはヘテロアリールは、Ｃ１−Ｃ４アルキルで置換されていてよく；
Ｒ２は、水素およびＣ１−Ｃ４アルキルより選択され；
Ｒ３は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｆ、ＣＦ３、ＣＨＦ２およびＣＨ２Ｆより選択され；
Ｒ４は、水素、Ｆ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２ＦおよびＣＨ３より選択され；
Ｒ５は、水素およびＦより選択され；
Ｒ５は、水素およびＦより選択され；
Ｑは、Ｓ、ＮＨまたはＮＣＨ３であって、Ｃ１−Ｃ４アルキルで置換されていてもよいものであり；
Ｙ１は、水素、ハロゲン、ニトリル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシおよびＣ１−Ｃ４アルキルより選択され；
Ｙ２は、水素、ハロゲン、ニトリル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシおよびＣ１−Ｃ４アルキルより選択され；
Ｙ３は、水素、ハロゲン、ニトリル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシおよびＣ１−Ｃ４アルキルより選択される）
を有する化合物；並びに
その薬学的に許容しうる塩、水和物、イソフォームおよび／または光学異性体。
【請求項３】
Ｒ１が、水素またはＣ１−Ｃ３アルキルであり；
Ｒ２が水素であり；
Ｒ３が、水素およびメチルより選択され；
Ｒ４が水素であり；
Ｒ５が水素であり；
Ｒ６が水素であり；
Ｑが、Ｓ、ＮＨまたはＮＣＨ３であって、Ｃ１−Ｃ４アルキルで置換されていてもよいものであり；
Ｙ１が、水素、クロロ、Ｃ１−Ｃ２アルコキシおよびＣ１−Ｃ２アルキルより選択され；そして
Ｙ２が、水素、クロロ、Ｃ１−Ｃ２アルコキシおよびＣ１−Ｃ２アルキルより選択され；そして
Ｙ３が水素である、請求項１または請求項２に記載の式Ｉの化合物。
【請求項４】
Ｎ−［３−（６−メチルピリジン−２−イル）プロプ−２−イン−１−イル］アニリン；
Ｎ−ベンジル−３−（６−メチルピリジン−２−イル）プロプ−２−イン１−アミン；
Ｎ−メチル−Ｎ−［３−（６−メチルピリジン−２−イル）プロプ−２−イン−１−イル］アニリン；
（３−メチルフェニル）［３−（６−メチルピリジン−２−イル）プロプ−２−イン−１−イル］アミン；
（３−メトキシフェニル）［３−（６−メチルピリジン−２−イル）プロプ−２−イン−１−イル］アミン；
（３−クロロフェニル）［３−（６−メチルピリジン−２−イル）プロプ−２−イン−１−イル］アミン；
［（３−フェニルプロプ−２−イン−１−イル）チオ］ベンゼン；
１−メトキシ−３−［（３−フェニルプロプ−２−イン−１−イル）チオ］ベンゼン；
２−｛３−［（３−クロロフェニル）チオ］ブト−１−イン−１−イル｝−６−メチルピリジン；
２−メチル−６−［３−（フェニルチオ）プロプ−１−イン−１−イル］ピリジン；
２−｛３−［（３−クロロフェニル）チオ］プロプ−１−イン−１−イル｝−６−メチルピリジン；
２−｛３−［（３−メトキシフェニル）チオ］プロプ−１−イン−１−イル｝−６−メチルピリジン；
２−メチル−６−｛３−［（３−メチルフェニル）チオ］プロプ−１−イン−１−イル｝ピリジン；
（ＲＳ）−２−｛３−［（３−メトキシフェニル）チオ］ブト−１−イン−１−イル｝−６−メチルピリジン；
２−［３−（３−クロロフェニル）−４−メチルペント−１−イン−１−イル］−６−メチルピリジン；
２−｛３−［（３，４−ジメチルフェニル）チオ］プロプ−１−イン−１−イル｝−６−メチルピリジン；
２−｛３−［（３，５−ジメチルフェニル）チオ］プロプ−１−イン−１−イル｝−６−メチルピリジン；
２−｛３−［（３−エトキシフェニル）チオ］プロプ−１−イン−１−イル｝−６−メチルピリジン；
２−｛３−［（４−tert−ブチルフェニル）チオ］プロプ−１−イン−１−イル｝−６−メチルピリジン；および
２−｛３−［（３−クロロフェニル）チオ］ペント−１−イン−１−イル｝−６−メチルピリジン
より選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
療法に用いるための、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
療法が、胃食道逆流性疾患の処置または予防である、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
一過性下部食道括約筋弛緩の阻害用の薬剤の製造のための、請求項１または請求項２に記載の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容しうる塩または光学異性体の使用。
【請求項８】
胃食道逆流性疾患の処置または予防用の薬剤の製造のための、請求項１または請求項２に記載の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容しうる塩または光学異性体の使用。
【請求項９】
医薬組成物であって、活性成分としての請求項１または請求項２に記載の式Ｉの化合物を、薬理学的におよび薬学的に許容しうる担体と一緒に含む医薬組成物。
【請求項１０】
式Ｉの化合物の製造方法であって、アリールブロミドＡ
【化３】
2007509935.tif 000043
およびアルコールＢ
【化４】
2007509935.tif 000044
のカップリング反応を、トリエチルアミンなどの塩基の存在下で行って、アルコールＣ
【化５】
2007509935.tif 000045
を生じ、次に、それをメシラートＤ
【化６】
2007509935.tif 000046
へと変換し、そして第一級または第二級アミン、またはチオール求核試薬と反応させることにより、そしてここにおいて、
Ｒ１は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールより選択され、ここにおいて、そのアリールまたはヘテロアリールは、Ｃ１−Ｃ４アルキルで置換されていてよく；
Ｒ２は、水素およびＣ１−Ｃ４アルキルより選択され；
Ｒ３は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｆ、ＣＦ３、ＣＨＦ２およびＣＨ２Ｆより選択され；
Ｒ４は、水素、Ｆ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２ＦおよびＣＨ３より選択され；
Ｒ５は、水素およびＦより選択され；
Ｒ６は、水素およびＦより選択される方法。
【請求項１１】
（ＲＳ）−４−（６−メチルピリジン−２−イル）ブタ−３−イン−２−オール；
４−メチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）ペント−１−イン３−オール；
３−ピリジン−２−イルプロパ−２−イニルメタンスルホン酸エステル；および
１−（６−メチルピリジン−２−イル）−ペント−１−イン３−オール
より選択される化合物。
【請求項１２】
一過性下部食道括約筋弛緩の阻害方法であって、請求項１または請求項２に記載の式Ｉの化合物の有効量を、このような阻害を必要としている対象に投与することによる方法。
【請求項１３】
胃食道逆流性疾患の処置または予防の方法であって、請求項１または請求項２に記載の式Ｉの化合物の有効量を、このような処置または予防を必要としている対象に投与することによる方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な化合物、それらの製造方法、療法におけるそれらの使用、およびそれら新規な化合物を含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
代謝共役型グルタミン酸受容体（ｍＧｌｕＲ）は、中枢神経系（ＣＮＳ）における多数のシナプスの調節および活性に関与しているＧタンパク質に共役した受容体である。８種類の代謝共役型グルタミン酸受容体サブタイプが識別されており、配列類似性に基づいて３群に再分される。Ｉ群は、ｍＧｌｕＲ１およびｍＧｌｕＲ５から成る。これら受容体は、ホスホリパーゼＣを活性化し、ニューロン興奮性を増加させる。ｍＧｌｕＲ２およびｍＧｌｕＲ３から成るII群、並びにｍＧｌｕＲ４、ｍＧｌｕＲ６、ｍＧｌｕＲ７およびｍＧｌｕＲ８から成るIII群は、アデニリルシクラーゼ活性を阻害することができ、シナプス伝達を減少させる。それら受容体のいくつかは、更に、選択的スプライシングによって生じる種々のイソフォーム（isoform）で存在する（Chen, C-Y et al., Journal of Physiology (2002), 538.3, pp. 773-786; Pin, J-P et al., European Journal of Pharmacology (1999), 375, pp. 277-294; Brauner-Osborne, H et al. Journal of Medicinal Chemistry (2000), 43, pp. 2609-2645; Schoepp, D.D, Jane D.E. Monn J.A. Neuropharmacology (1999), 38, pp. 1431-1476）。
【０００３】
下部食道括約筋（low esophageal sphincter：ＬＥＳ）は、間欠的に弛緩する傾向がある。結果として、以下、「逆流」と称するイベントであるこのような時に、機械的障壁が一時的に失われるので、胃液が食道に入ることがありうる。
【０００４】
胃食道逆流性疾患（Gastro-esophageal reflux disease：ＧＥＲＤ）は、最も一般的な上部胃腸管疾患である。現行の薬物療法は、胃酸分泌を減少させることまたは食道内の酸を中和することを目指している。逆流の裏にある主な機構は、低緊張性下部食道括約筋に依存すると考えられた。しかしながら、例えば、Holloway & Dent (1990) Gastroenterol. Clin. N. Amer. 19, pp. 517-535 は、大部分の逆流エピソードが、一過性下部食道括約筋弛緩（ＴＬＥＳＲ）、すなわち、嚥下によって引き起こされるのではない弛緩の際に起こるということを示した。更に、胃酸分泌は、通常、ＧＥＲＤの患者においては正常であるということを示した。
【０００５】
本発明の基礎にある課題は、ＧＥＲＤの処置に有用な新しい化合物を発見することであった。
ＷＯ０１／１６１２１  Ａ１号は、化合物Ａ−Ｌ−Ｂ
［式中、Ａは、５員、６員または７員の複素環
【０００６】
【化１】
2007509935.tif 000003
【０００７】
であり；
Ｌは、アルケニレン、アルキニレンまたはアゾであり；そして
Ｂは、ヒドロカルビル；シクロヒドロカルビル；複素環（１個またはそれを超える二重結合を含有してよい）；またはアリールである］
を開示している。これら化合物は、特に、大脳虚血、慢性神経変性、精神障害、癲癇、および肺系の疾患並びに心臓血管系の疾患に有用であると記載された。
【０００８】
ＷＯ９９／０２４９７  Ａ２号は、式
【０００９】
【化２】
2007509935.tif 000004
【００１０】
（式中、Ｘは、ビシナル不飽和炭素原子によって結合したアルケニレンまたはアルキニレン、またはアゾ基であってよく；そしてＲ５は、芳香族基またはヘテロ芳香族基であってよい）
を有する化合物を開示している。これら化合物は、特に、癲癇、大脳虚血およびアルツハイマー病に有用であると記載された。
【発明の開示】
【００１１】
発明の概説
本発明は、一般式Ｉ：
【００１２】
【化３】
2007509935.tif 000005
【００１３】
（式中、Ｒ１は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールより選択され、ここにおいて、そのアリールまたはヘテロアリールは、Ｃ１−Ｃ４アルキルで置換されていてよく；
Ｒ２は、水素およびＣ１−Ｃ４アルキルより選択され；
Ｒ３は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｆ、ＣＦ３、ＣＨＦ２およびＣＨ２Ｆより選択され；
Ｒ４は、水素、Ｆ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２ＦおよびＣＨ３より選択され；
Ｒ５は、水素およびＦより選択され；
Ｒ６は、水素およびＦより選択され；
Ｑは、Ｓ、ＮＨまたはＮＣＨ３であって、Ｃ１−Ｃ４アルキルで置換されていてもよいものであり；
Ｙ１は、水素；ハロゲン；ニトリル；Ｃ１−Ｃ４アルコキシ；Ｃ１−Ｃ４アルキルであって、そのアルキル基の一つまたはそれを超える水素原子が、フッ素原子へと置換されていてもよいもの；ベンジルオキシ；メタ位またはパラ位にあるニトロ；およびＣ１−Ｃ４アルキルエステルより選択され；
Ｙ２は、水素；ハロゲン；ニトリル；Ｃ１−Ｃ４アルコキシ；Ｃ１−Ｃ４アルキルであって、そのアルキル基の一つまたはそれを超える水素原子が、フッ素原子へと置換されていてもよいもの；およびＣ１−Ｃ４アルキルエステルより選択され；
Ｙ３は、水素；ハロゲン；ニトリル；Ｃ１−Ｃ４アルコキシ；Ｃ１−Ｃ４アルキルであって、そのアルキル基の一つまたはそれを超える水素原子が、フッ素原子へと置換されていてもよいもの；およびＣ１−Ｃ４アルキルエステルより選択され；または
Ｙ１およびＹ２は、芳香環または非芳香環であって、ハロゲン；ニトリル；Ｃ１−Ｃ４アルコキシ；Ｃ１−Ｃ４アルキルであって、そのアルキル基の一つまたはそれを超える水素原子が、フッ素原子へと置換されていてもよいもの；ベンジルオキシ；またはＣ１−Ｃ４アルキルエステルで置換されていてもよい環を形成してよい）
による新規な化合物；並びに
それらの薬学的に許容しうる塩、水和物、イソフォームおよび／または光学異性体に関する。
【００１４】
式Ｉの定義に用いられる包括的用語は、次の意味を有する。
ハロゲンは、クロロ、フルオロ、ブロモまたはヨードである。
Ｃ１−Ｃ４アルキルは、１個、２個、３個または４個の炭素原子を各々独立して含有する直鎖または分岐状のアルキル基、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチルまたはイソプロピルである。一つの態様において、それらアルキル基は、Ｏ、ＮおよびＳより選択される１個またはそれを超えるヘテロ原子を含有してよい。このような基の例は、メチルエチルエーテル、メチルエチルアミンおよびメチルチオメチルである。
【００１５】
シクロアルキルは、３個、４個、５個または６個の炭素原子を各々独立して含有する環状アルキルであって、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルなどである。
【００１６】
Ｃ１−Ｃ４アルコキシは、１個、２個、３個または４個の炭素原子を含有するアルコキシ基であって、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｎ−ブトキシまたはイソプロポキシなどである。
【００１７】
本明細書中で用いられるアリールという用語は、単環および多環式化合物双方を含めた、６〜１４個の炭素原子を含む芳香環であって、フェニル、ベンジルまたはナフチルなどを意味する。
【００１８】
本明細書中で用いられるヘテロアリールという用語は、単環およびイミダゾピリジンなどの多環式化合物双方を含めた、５〜１４個の炭素原子を含む芳香環であって、フラニルまたはチオフェニルのような、１個または数個の環原子が、酸素か、窒素かまたは硫黄であるものを意味する。
【００１９】
本発明の範囲内には、更に、式Ｉの化合物の薬学的に許容しうる塩、並びにそれらの異性体、水和物およびイソフォームがある。
式Ｉの化合物の薬学的に許容しうる塩も、本発明の範囲内である。このような塩は、例えば、塩酸などの鉱酸で形成される塩；ナトリウム塩またはカリウム塩のようなアルカリ金属塩；またはカルシウム塩またはマグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩である。
【００２０】
本発明による新規な化合物は、療法において有用である。本発明の一つの側面において、それら化合物は、一過性下部食道括約筋弛緩（transient lower esophageal sphincter relaxation：ＴＬＥＳＲ）の阻害に有用であり、したがって、胃食道逆流性障害（gastro-esophageal reflux disorder：ＧＥＲＤ）の処置または予防に有用である。更に別の態様において、本発明による化合物は、逆流の予防；吐き戻しの処置または予防；喘息の処置または予防；喉頭炎の処置または予防；肺疾患の処置または予防；および発育不全の管理に有用である。
【００２１】
本発明のもう一つの側面は、一過性下部食道括約筋弛緩の阻害用の；ＧＥＲＤの処置または予防用の；逆流の予防用の；吐き戻しの処置または予防用の；喘息の処置または予防用の；喉頭炎の処置または予防用の；肺疾患の処置または予防用の；および発育不全の管理用の薬剤の製造のための、式Ｉによる化合物の使用である。
【００２２】
本発明のもう一つの側面は、機能性消化不良（functional dyspepsia：ＦＤ）などの胃腸機能障害の処置または予防用の薬剤の製造のための、式Ｉによる化合物の使用である。本発明のなおもう一つの側面は、過敏性腸症候群（irritable bowel syndrome：ＩＢＳ）であって、便秘支配的ＩＢＳ、下痢支配的ＩＢＳまたは交代性便通支配的ＩＢＳなどの処置または予防用の薬剤の製造のための、式Ｉによる化合物の使用である。
【００２３】
本発明の更にもう一つの側面は、上述のいずれか一つの状態の処置方法であって、上の式Ｉによる化合物の薬学的有効量を、一つまたは複数のそれら状態に苦しむ対象に投与することによる方法である。
【００２４】
本発明の一つの側面において、式Ｉの化合物は、急性および慢性の神経障害および精神障害、不安、および慢性および急性の疼痛障害の処置および／または予防に有用である。もう一つの側面において、それら化合物は、片頭痛に関係した疼痛；炎症性疼痛；糖尿病性ニューロパシーなどのニューロパシー性疼痛障害；関節炎およびリウマチ様疾患；腰痛症；術後性疼痛；および癌、アンギナ、腎疝痛または胆石疝痛、月経、片頭痛および痛風を含めたいろいろな状態に関連した疼痛の予防および／または処置に有用である。
【００２５】
「異性体」という用語は、官能基の位置および／または配向が異なる式Ｉの化合物として本明細書中に定義される。「配向」により、立体異性体、ジアステレオ異性体、レギオ異性体および鏡像異性体を意味する。
【００２６】
本明細書中で用いられる「イソフォーム」という用語は、結晶性化合物および非晶性化合物のような、結晶格子が異なる式Ｉの化合物として定義される。
一過性下部食道括約筋弛緩である「ＴＬＥＳＲ」という表現は、Mittal, R.K., Holloway, R.H., Penagini, R., Blackshaw, L.A., Dent, J., 1995;  Transient lower esophageal sphincter relaxation. Gastroenterology 109, pp. 601-610 にしたがって本明細書中に定義される。
【００２７】
「逆流（reflux）」という表現は、このような時に、機械的障壁が一時的に失われるので、胃液が食道に入ることが可能であると本明細書中に定義される。
胃食道逆流性疾患である「ＧＥＲＤ」という表現は、van Heerwarden, M.A., Smout A.J.P.M., 2000; Diagnosis of reflux disease. Bailliere’s Clin. Gastroenterol. 14, pp. 759-774 にしたがって本明細書中に定義される。
【００２８】
製造方法
最初に、トリエチルアミンなどの塩基の存在下における室温〜６０℃でのアリールブロミドＡおよびアルコールＢの Sonogashira カップリング（Tetrahedron Letters 1975, 50, 4467, S. Thorand, N. Krause J. Org. Chem., 1998, 63, 8551-8553, M. Erdelyi, A. Gogoll, J. Org. Chem., 2001, 66, 4165-4169）が、アルコールＣを生じ、次に、それを、トリエチルアミン中のメタンスルホニルクロリドで、約−２０〜０℃においてメシラートＤへと変換する。第一級アルコールのメシラートを単離し且つ特性決定し、同時に、第二級アルコールのメシラートを現場で生じさせる。最後に、それぞれのメシラートを、第一級または第二級アミンまたはチオール求核試薬と反応させて、生成物（Ｉ）を生じる（スキーム１）。
【００２９】
【化４】
2007509935.tif 000006
【００３０】
所望のＲ１／Ｒ２基を含むアルコールＢが、商業的に入手不能である場合、生成物（Ｉ）を、別の経路によって形成させる（スキーム２）。最初に、アリールブロミドＡを、Sonogashira カップリングによって、トリエチルアミン中において６０℃でエチニル（トリメチル）シランＦとカップリングさせて、生成物Ｇを生じる。メタノール中の炭酸カリウムまたはメタノール／ＤＣＭでの室温におけるＧの脱保護は、末端アルキンＨを生じ、それを、ＴＨＦ中のリチウムヘキサメチルジシラジドまたはリチウムビス（トリメチルシリル）アミドで−７８℃において脱プロトンする。−７８℃において、アルデヒドまたはケトンを加え、反応混合物を室温に達しさせ、その温度で適当な時間保持して、アルコールＩを形成させる。Ｉを単離したら、メタンスルホニルクロリドおよびトリエチルアミンで、室温においてかまたは冷却しながら、メシラートＪを現場で形成させる。次に、アミンを加え、反応混合物を室温で適当な時間撹拌して、生成物（Ｉ）を形成させる。
【００３１】
【化５】
2007509935.tif 000007
【００３２】
上のスキーム１およびスキーム２において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｙ１、Ｙ２およびＹ３は、上の式Ｉの化合物の場合のように定義される。
実験の詳細
ＤＣＭは、３Åモレキュラーシーブ上で乾燥させる。ＴＨＦは、Ｎａ／ベンゾフェノンから使用直前に蒸留した。全ての反応を、窒素雰囲気下で行う。ガラス器具は全て、１５０℃で、使用直前に少なくとも２時間乾燥させる。International Sorbent Technology（ＩＳＴ）よりの相分離器を用いる。クロマトグラフィーによる精製は、シリカゲル６０（０．０４０〜０．０６３ｍｍ）で行うかまたは、Ｃ８カラムでの逆相クロマトグラフィーによる。ＮＭＲスペクトルは全て、δ−クロロホルム中で測定する。
【００３３】
２−ブロモ−６−メチルピリジンは、Aldrich より商業的に入手可能であり、（ＰＰｈ３）２ＰｄＣｌ２は、Avacado より、Ｐｄ（ＯＡｃ）２は、Aldrich より、そしてＣｕＩは、Fluka より商業的に入手可能である。それ以外に述べられていないとしても、用いられる化学薬品は商業的に入手可能であるし、更に精製することなく、そのままで用いられる。
【００３４】
医薬製剤
臨床使用のために、式Ｉの化合物を、本発明によって好適に製剤化して、経口投与用の医薬製剤にする。直腸、非経口またはいずれか他の投与経路も、製剤業者に考慮されることがありうる。したがって、式Ｉの化合物を、少なくとも一つの薬学的におよび薬理学的に許容しうる担体またはアジュバントと一緒に製剤化する。その担体は、固体、半固体または液体の希釈剤の形であってよい。
【００３５】
本発明による経口医薬製剤の製造において、製剤化される式Ｉの化合物を、ラクトース、サッカロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アミロペクチン、セルロース誘導体、ゼラチンなどの固体粉末成分または別の適する成分と、更には、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリルフマル酸ナトリウムおよびポリエチレングリコールワックスなどの崩壊剤および滑沢剤と混合する。次に、その混合物を加工して顆粒剤にする、または圧縮して錠剤にする。
【００３６】
ゼラチン軟カプセル剤は、本発明の一つまたは複数の活性化合物、植物油、脂肪、またはゼラチン軟カプセル剤に適する他のビヒクルの混合物を含有するカプセルで製造することができる。ゼラチン硬カプセル剤は、ラクトース、サッカロース、ソルビトール、マンニトール、バレイショデンプン、トウモロコシデンプン、アミロペクチン、セルロース誘導体またはゼラチンなどの固体粉末成分との組合せで活性化合物を含有することができる。
【００３７】
直腸投与用の投薬単位は、（ｉ）中性脂肪基剤と混合された一つまたは複数の活性物質を含有する坐剤の形で；（ii）植物油、パラフィン油、または直腸用ゼラチンカプセル剤に適する他のビヒクルとの混合物で活性物質を含有する直腸用ゼラチンカプセル剤の形で；（iii）既製の微小浣腸剤の形で；または（iv）投与直前に適する溶媒中で再構成される乾燥微小浣腸製剤の形で製造することができる。
【００３８】
経口投与用の液状製剤は、シロップ剤または懸濁剤の形で、例えば、活性化合物を含有し且つその製剤の残部が、糖または糖アルコール、およびエタノール、水、グリセロール、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコールの混合物から成る溶液または懸濁液の形で製造することができる。所望ならば、このような液状製剤は、着色剤、着香剤、サッカリンおよびカルボキシメチルセルロースまたは他の増粘剤を含有してよい。経口投与用の液状製剤は、使用前に適する溶媒で再構成される乾燥粉末の形で製造することもできる。
【００３９】
非経口投与用の液剤は、薬学的に許容しうる溶媒中の本発明の化合物の溶液として製造することができる。これら液剤は、安定化用成分および／または緩衝化用成分を含有してもよく、アンプルまたはバイアルの形の単位用量へと調剤される。非経口投与用の液剤は、使用前に即座に、適する溶媒で再構成される乾燥製剤として製造することもできる。
【００４０】
本発明の一つの側面において、式Ｉの化合物は、患者の状態の重症度に依存して、１日１回または２回投与することができる。
式Ｉの化合物の典型的な１日用量は、処置される対象の体重ｋｇ当たり０．１〜１０ｍｇであるが、これは、投与経路、患者の年齢および体重、並びに患者の状態の重症度などのいろいろな因子に依存するであろう。
【実施例】
【００４１】
方法Ｇ
実施例１
３−（６−メチルピリジン−２−イル）プロプ−２−イン−１−オール（化合物１６）の製造：
【００４２】
【化６】
2007509935.tif 000008
【００４３】
２−ブロモ−６−メチルピリジン（１．７２ｇ，０．０１ｍｏｌ）に、（ＰＰｈ３）２ＰｄＣｌ２（０．１１６ｇ，０．２ｍｍｏｌ，０．０２ｅｑ．）およびＣｕＩ（０．０６３ｇ，０．３ｍｍｏｌ，０．０３ｅｑ．）を、窒素下において０℃で加えた後、プロプ−２−イン１−オール（２．２４ｇ，２．３３ｍＬ，０．４ｍｏｌ，４．０ｅｑ．）およびトリエチルアミン（１．５０ｍＬ）を加えた。その反応混合物を、室温に達しさせた後、６０℃で３．５時間加熱した。次に、反応混合物を水（１０ｍＬ）に加え、そのｐＨを、２Ｍ  ＨＣｌで６〜７に調整した。水相をＤＣＭ（３ｘ１０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機相を、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。これは、１．７１９ｇの粗生成物を生じた。これの１．０９８ｇを、シリカゲル上において最初に１：１、次に１：２、最後に１：３のペンタン／ＥｔＯＡｃを溶離剤としたフラッシュクロマトグラフィーに供した。これは、０．５７８ｇの生成物を生じた。
【００４４】
13C NMR (75 MHz): 157.7, 141.1, 136.2, 123.7, 122.3, 88.4, 83.0, 49.9, 23.5.
方法Ｈ
実施例２
３−（６−メチルピリジン−２−イル）プロプ−２−イン−１−イルメタンスルホネート（化合物１７）の製造：
【００４５】
【化７】
2007509935.tif 000009
【００４６】
３−（６−メチルピリジン−２−イル）プロプ−２−イン１−オール（０．３００ｇ，２．０４ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中に、窒素下で５〜１０分間にわたって溶解させた。その溶液を−２０℃に冷却した（冷却浴：アセトン＋ドライアイス片）。トリエチルアミン（０．２６８ｇ，０．３７ｍＬ，０．２７ｍｍｏｌ，１．３０ｅｑ．）を加えた。ＤＣＭ（１．５ｍＬ）中のメタンスルホニルクロリド（０．２８０ｇ，０．１９ｍＬ，０．２４ｍｍｏｌ，１．２ｅｑ．）を、３分間にわたって加えた。反応混合物を−１８〜−２２℃で１時間撹拌し、その後、ＬＣ／ＭＳだけが生成物を示した。水（１０ｍＬ）を加えた。有機相を分離し、水相をＤＣＭ（３ｘ１０ｍＬ）で抽出した。有機相をプールし、硫酸マグネシウムで乾燥させ、蒸発させた。これは、０．４５０ｇ（収率：９８％）を黄色油状物として生じた。
【００４７】
1H NMR (300 MHz): 7.61 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.31 (d, J =7.7 Hz,1H), 7.19 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 5.10 (s, 2H), 3.18 (s, 3H), 2.58 (s, 3H).
13C NMR (75 MHz): 158.9, 140.2, 136.8, 124.5, 123.8, 87.8, 80.7, 57.7, 38.9, 24.2.
方法Ｉ
実施例３
Ｎ−［３−（６−メチルピリジン−２−イル）プロプ−２−イン−１−イル］アニリン（化合物１８）の製造：
【００４８】
【化８】
2007509935.tif 000010
【００４９】
３−（６−メチルピリジン−２−イル）プロプ−２−イン−１−イルメタンスルホネート（０．０４４ｇ，０．１９５ｍｍｏｌ）を、トリエチルアミン（０．３７２ｇ，０．２７０ｍＬ，１０．０ｅｑ．）中のアニリン（０．１８２ｇ，０．１８０ｍＬ，１．９５ｍｍｏｌ，１０．０ｅｑ．）と一緒に、室温で１．５時間撹拌した。その後、ＬＣ／ＭＳによれば、メシラートは残っていなかった。
【００５０】
その混合物を蒸発させ、逆相カラムクロマトグラフィーによって精製した。収率：０．０１７ｇ（４０％）。
1H NMR (500 MHz): 7.50 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.28-7.16 (m,CDCl3 と重なる, 3H), 7.08 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.82-6.69 (m, 3H), 4.18 (s, 2H), 2.54 (s, 3H).
13C NMR (125 MHz): 158.6, 146.7, 141.9, 136.1, 129.0,124.0, 122.5, 118.3, 113.4, 86.0, 82.7, 34.4, 24.5.
実施例４
Ｎ−ベンジル−３−（６−メチルピリジン−２−イル）プロプ−２−イン−１−アミン（化合物１９）の製造：
上の方法Ｉにしたがって、ベンジルアミンを出発物質として製造する。
【００５１】
【化９】
2007509935.tif 000011
【００５２】
収率：逆相クロマトグラフィー後に２３％。
1H NMR (500 MHz): 7.54 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.38-7.32 (m, 4H), 7.29-7.23 (m, 2H), 7.09 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 3.95 (s, 2H), 3.68 (s, 2H), 2.56 (s, 3H), 1.80 (br, 2H, アセテート).
方法Ｊ
実施例５
Ｎ−メチル−Ｎ−［３−（６−メチルピリジン−２−イル）プロプ−２−イン−１−イル］アニリン（化合物２０）の製造：
【００５３】
【化１０】
2007509935.tif 000012
【００５４】
３−（６−メチルピリジン−２−イル）プロプ−２−イン−１−イルメタンスルホネート（０．０４２ｇ，０．１９ｍｍｏｌ）を、トリエチルアミン（０．２０ｍＬ）中のＮ−メチルアニリン（０．０４０ｇ，０．０４０ｍＬ，０．３７ｍｍｏｌ，２．０ｅｑ．）で、室温において２１時間撹拌した。その後、ＬＣ／ＭＳによれば、メシラートは残っていなかった。その混合物を蒸発させ、逆相カラムクロマトグラフィーによって精製した。収率：３．５ｍｇ（７％）。
【００５５】
1H NMR (500 MHz): 7.48 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.29-7.25 (m, 2H), 7.16 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.91 (m, 2H), 6.81 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 4.30 (s, 2H), 3.05 (s, 3H), 2.53 (s, 3H), 1.68 (br, 3H, アセテート).
実施例６
（３−クロロフェニル）−［１−メチル−３−（６−メチルピリジン−２−イル）−プロパ−２−イニル］−アミンの製造
その化合物を、方法Ｍにしたがって、（ＲＳ）−４−（６−メチルピリジン−２−イル）ブタ−３−イン−２−オールおよび３−クロロアニリンを出発物質として用いて製造した。
【００５６】
【化１１】
2007509935.tif 000013
【００５７】
1H NMR (400 MHz): 7.48 (t, 1 H), 7.18-7.04 (m, 3 H), 6.71 (m, 2 H), 6.60 (m, 1 H), 4.43 (m, 1 H), 3.93 (br s, 1 H), 2.53 (s, 3 H), 1.61 (d, 3 H).
実施例７
（３−メチルフェニル）［３−（６−メチルピリジン−２−イル）プロプ−２−イン−１−イル］アミンの製造：
【００５８】
【化１２】
2007509935.tif 000014
【００５９】
ガラスバイアル中のｍ−トルイジン（０．０５４ｇ，０．５０ｍｍｏｌ，２．５ｅｑ．）に、無水炭酸カルシウム（０．０３３ｇ，０．０２４ｍｍｏｌ，１．２ｅｑ．）およびアセトン（０．２ｍＬ）を加えた。次に、０．５ｍＬのアセトン中のＡの０．４Ｍ溶液（０．０４５ｇ，０．２０ｍｍｏｌ）を加えた。そのバイアルを密封し、６０℃で５時間加熱した。その反応物質を、Celite を介して濾過後、真空遠心分離した。精製は、逆相カラムクロマトグラフィーによって行った。収率：０．０１３ｇ（２８％）。
【００６０】
1H NMR (500 MHz): 7.50 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.13-7.06 (m, 2H), 6.61 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.55-6.52 (m, 2H), 4.17 (s, 2H), 2.54 (s, 3H), 2.30 (s, 3H).
MS m/Z:  237 (M+1)
実施例８
（３−メトキシフェニル）［３−（６−メチルピリジン−２−イル）プロプ−２−イン−１−イル］アミンの製造：
【００６１】
【化１３】
2007509935.tif 000015
【００６２】
実施例６と同様であるが、３−メトキシアニリンを出発物質として製造する。収率：０．０１６ｇ（３１％）。
1H NMR (500 MHz): 7.51 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.14-7.07 (m, 2H), 6.34 (m, 2H), 6.27 (br t, J = 2.2 Hz, 1H), 4.16 (s, 2H), 3.78 (s, 3H), 2.54 (s, 3H).
13C NMR (75 Hz): 160.5, 158.6, 148.2, 141.9, 136.1, 129.8, 124.0, 122.5, 106.3, 103.6, 99.4, 85.9, 82.8, 55.1, 34.4, 24.5.
MS m/Z:  253 (M+1)
実施例９
（３−クロロフェニル）［３−（６−メチルピリジン−２−イル）プロプ−２−イン−１−イル］アミンの製造：
【００６３】
【化１４】
2007509935.tif 000016
【００６４】
実施例６と同様であるが、３−クロロアニリンを出発物質として製造する。収率：０．０１１ｇ（２１％）。
1H NMR (500 MHz): 7.51 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.20 (br d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.14-7.07 (m, 2H), 6.74 (br d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.69 (m, 1H), 6.58 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.16 (s, 2H), 2.54 (s, 3H).
実施例１０
［（３−フェニルプロプ−２−イン−１−イル）チオ］ベンゼンの製造
その化合物を、実施例１５にしたがって、メタンスルホン酸３−ピリジン−２−イルプロパ−２−イニルエステルおよびチオフェノールを用いて製造した。
【００６５】
【化１５】
2007509935.tif 000017
【００６６】
1H NMR: 8.55 (m, 1H),  7.59 (m, 1H), 7.48 (m, 2H), 7.25 (m, 5H), 3.84 (s, 2H).
13C NMR: 150.1, 143.3, 136.3, 135.2, 130.6, 129.2, 127.4, 127.2, 123.0, 85.9, 83.1, 23.8
実施例１１
３−ピリジン−２−イルプロプ−２−イン−１−オールの製造
３−ピリジン−２−イルプロプ−２−イン１−オールを、方法Ｇにしたがって、２−ブロモピリジンおよびプロプ−２−イン１−オールを出発物質として製造した。
【００６７】
【化１６】
2007509935.tif 000018
【００６８】
1H NMR (400 MHz, MeOH-d4): 8.48 (m, 1 H), 7.82 (dt, 1 H), 7.53 (m, 1 H), 7.38 (dd, 1 H), 4.42 (s, 2 H).
実施例１２
メタンスルホン酸３−ピリジン−２−イル−プロプ−２−イニルエステルの製造
メタンスルホン酸３−ピリジン−２−イル−プロプ−２−イニルエステルを、方法Ｈにしたがって、３−ピリジン−２−イルプロプ−２−イン−１−オールを出発物質として製造した。
【００６９】
【化１７】
2007509935.tif 000019
【００７０】
実施例１３
１−メトキシ−３−［（３−フェニルプロプ−２−イン−１−イル）チオ］ベンゼンの製造：
その化合物を、実施例１５にしたがって、メタンスルホン酸３−ピリジン−２−イルプロパ−２−イニルエステルおよび３−メトキシチオフェノールを用いて製造した。
【００７１】
【化１８】
2007509935.tif 000020
【００７２】
1H NMR: 8.55 (m, 1H), 7.61 (t, 1H), 7.34 (d, 1H), 7.22 (m, 2H), 7.07 (m, 2H), 6.78 (m, 1H), 3.86 (s, 2H), 3.78 (s, 3H)
13C NMR: 160.1, 150.1, 143.2, 136.5, 136.3, 130.0, 127.4, 123.1, 122.5, 115.6, 113.2, 85.9, 83.1, 55.5, 23.6.
実施例１４
２−｛３−［（３−クロロフェニル）チオ］ブト−１−イン−１−イル｝−６−メチルピリジンの製造：
その化合物を、方法Ｍにしたがって、（ＲＳ）−４−（６−メチルピリジン−２−イル）ブタ−３−イン−２−オールおよび３−クロロチオフェノールを出発物質として用いて製造した。
【００７３】
【化１９】
2007509935.tif 000021
【００７４】
1H NMR: 7.59 (m, 1H), 7.47 (m, 2H), 7.26 (m, 2H), 7.14 (d, 1H), 7.06 (d, 1H), 4.14 (q, 1H), 2.53 (s, 3H), 1.62 (d, 3H).
13C NMR: 159.0, 142.4, 136.5, 136.0, 134.6, 131.2, 130.0, 128.2, 124.5, 122.9, 89.5, 83.8, 34.1, 24.7, 21.6.
実施例１５
２−メチル−６−［３−（フェニルチオ）プロプ−１−イン−１−イル］ピリジン（化合物２６）の製造：
【００７５】
【化２０】
2007509935.tif 000022
【００７６】
チオフェノール（０．０１９ｇ，０．１１ｍｍｏｌ，１．５０ｅｑ．）を、ＴＨＦ（０．５ｍＬ）中に、窒素下において０℃で溶解させた。トリエチルアミン（０．０１５ｇ，２．０ｅｑ．）を加えた。その混合物を室温で５分間撹拌した。次に、ＴＨＦ（０．５ｍＬ）中の３−（６−メチルピリジン−２−イル）プロプ−２−イン−１−イルメタンスルホネート（０．０１７ｇ，０．０７５ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。次に、その混合物を室温で１時間撹拌した。水（１０ｍＬ）を加えた。次に、ＤＣＭ（３ｘ１０ｍＬ）での抽出を行った。合わせた有機相を、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、蒸発させた。これは、０．０２３ｇの生成物を生じ、それを、逆相クロマトグラフィーによって精製した。選択され画分をプールした。水を加え、そしてＭｅＣＮ−水相を、ＤＣＭ（３ｘ１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、蒸発させた。これは、０．００７ｇ（収率：３９％）を生じた。
【００７７】
1H NMR (300 MHz): 7.53-7.45 (m, 3H), 7.36-7.20 (m, 3H), 7.14 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 3.86 (s, 2H), 2.53 (s, 3H).
13C NMR (75 MHz): 158.6, 142.1, 136.1, 134.9,130.2, 128.8, 126.8, 124.0, 122.5, 85.0, 83.0, 24.5, 23.7.
実施例１６
２−｛３−［（３−クロロフェニル）チオ］プロプ−１−イン−１−イル｝−６−メチルピリジン（化合物２７）の製造：
実施例１５にしたがって、３−クロロベンゼンチオールを出発物質として製造した。
【００７８】
【化２１】
2007509935.tif 000023
【００７９】
1H NMR (500 MHz): 7.46-7.41 (m, 2H), 7.29 (d t, J1 = 7.6 Hz, J2 = 1.4 Hz, 1H), 7.18 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.16-7.13 (m, 1H), 7.10 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 3.79 (s, 2H), 2.46 (s, 3H).
13C NMR (75 MHz): 158.8, 141.9, 137.0, 136.2, 134.5, 129.9, 129.7, 128.0, 127.0, 124.2, 122.7, 84.3, 83.4, 24.4, 23.3.
実施例１７
２−｛３−［（３−メトキシフェニル）チオ］プロプ−１−イン−１−イル｝−６−メチルピリジン（化合物２８）の製造：
実施例１５にしたがって、３−メトキシベンゼンチオールを出発物質として製造した。
【００８０】
【化２２】
2007509935.tif 000024
【００８１】
1H NMR (500 MHz): 7.50 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 2.27-7.21 (m, 1H), 7.17 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.09-7.05 (m, 3H), 6.79 (d d, J1 = 8.4 Hz, J2 = 2.3 Hz, 1H), 3.86 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 2.53 (s, 3H).
実施例１８
２−メチル−６−｛３−［（３−メチルフェニル）チオ］プロプ−１−イン−１−イル｝ピリジン（化合物２９）の製造：
実施例１５にしたがって、３−メチルベンゼンチオールを出発物質として製造した。
【００８２】
【化２３】
2007509935.tif 000025
【００８３】
1H NMR (300 MHz): 7.42 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.28-7.04 (m, 4H), 7.02-6.95 (m, 2H), 3.77 (s, 2H), 2.46 (s, 3H), 2.26 (s, 3H).
13C NMR (75 MHz): 158.6, 142.1, 138.5, 136.1, 134.6, 130.9, 128.6, 127.7, 127.2, 124.0, 122.4, 85.1, 83.0, 24.5, 23.7, 21.3.
方法Ｌ
実施例１９
（ＲＳ）−４−（６−メチルピリジン−２−イル）ブト−３−イン−２−オール（化合物３０）の製造：
【００８４】
【化２４】
2007509935.tif 000026
【００８５】
２−ブロモ−６−メチルピリジン（０．２５８ｇ，１．５ｍｍｏｌ）を、ブト−３−イン−２−オール（０．１１６ｇ，１．６５ｍｍｏｌ，１．１ｅｑ．）および（ＰＰｈ３）２ＰｄＣｌ２（０．０３２ｇ，０．０４５ｍｍｏｌ，０．０３ｅｑ．）と混合した。０℃において、トリエチルアミン（０．６１ｇ，０．８４ｍＬ，６．０ｍｍｏｌ，４．０ｅｑ．）を加えた。その混合物を０℃で１０分間撹拌し、ＣｕＩ（０．００６ｇ，０．０３ｍｍｏｌ，０．０２ｅｑ．）を加えた。混合物を室温に達しさせ、最後に、６０℃で４時間加熱した。
【００８６】
リン酸緩衝液（１０ｍＬ，０．２Ｍ，ｐＨ  ７）を加え、そして水相を、相分離器を用いることによってＤＣＭ（３ｘ１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。これは、０．２８６ｇの粗生成物を生じた。
【００８７】
Ｓｉ上においてペンタン／ＥｔＯＡｃ画分（最初に１：１、次に３：２、そして最後に１：２）を溶離剤としたフラッシュクロマトグラフィー後、０．１６３ｇ（収率：６７％）の純粋な生成物を、黄色油状物として単離した。
【００８８】
ＴＬＣ：Ｒｆ（１：１のペンタン／ＥｔＯＡｃ）＝０．２０。
1H NMR (300 MHz): 7.40 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.96 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.90 (b, 1H), 4.76 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 2.43 (s, 3H), 1.49 (d, J = 6.7 Hz, 3H).
13C NMR (75 MHz): 158.2, 141.7, 136.2, 123.9, 122.4, 91.7, 82.3, 57.6, 23.9, 23.8.
方法Ｍ
実施例２０
（ＲＳ）−２−｛３−［（３−メトキシフェニル）チオ］ブト−１−イン−１−イル｝−６−メチルピリジン（化合物３１）の製造：
【００８９】
【化２５】
2007509935.tif 000027
【００９０】
（ＲＳ）−４−（６−メチルピリジン−２−イル）ブト−３−イン−２−オール（０．０２０ｇ，０．１２ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（２ｍＬ）中に溶解させ、−２０℃に冷却した。トリエチルアミン（０．０１５ｇ，０．０２１ｍＬ，０．１５ｍｍｏｌ，１．２０ｅｑ．）を加えた後、ＤＣＭ（１ｍＬ）中のメタンスルホニルクロリド（０．０１５ｇ，０．０１０ｍＬ，０．１３ｍｍｏｌ，１．１ｅｑ．）を加えた。反応混合物をその温度で１時間撹拌した後、水（３ｘ５ｍＬ）での抽出によって処理後、硫酸ナトリウムで乾燥させた。ＤＣＭ（３〜５ｍＬ）をすすぎ洗浄に用いて濾過後、その溶液を、僅かに濃縮して３ｍＬ容量とした後、−２０℃に再冷却した。ＮＥｔ３（１ｍＬ）を加えた後、ＤＣＭ（０．５ｍＬ）中の３−メトキシベンゼンチオール（０．０１９ｇ，０．０１７ｍＬ，１．１０ｅｑ．）を加えた。その混合物を、４時間にわたって室温に達しさせた。撹拌を室温で更に２０時間続けた。その時点で、反応混合物を蒸発させた。Ｓｉプレート上、４：１のヘプタン／ＥｔＯＡｃ中の分取クロマトグラフィー（Ｒｆ＝０．２２）は、０．００６ｇの純粋な生成物を生じた。
【００９１】
1H NMR (300 MHz): 7.49 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.28-7.20 (m, 2H), 7.18-7.11 (m, 2H), 7.06 (d, J =7.8 Hz, 1H), 6.87-6.81 (m, 1H), 4.14 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 2.53 (s, 3H), 1.63 (d, J = 7.1 Hz, 3H).
13C NMR (75 MHz): 159.4, 158.5, 142.2, 136.0, 134.7, 129.4, 125.0, 124.1, 122.3, 117.8, 113.9, 89.7, 83.1, 55.2, 33.8, 24.5, 21.5.
実施例２１
２−メチル−６−［（トリメチルシリル）エチニル］ピリジン（化合物３２）の製造：
【００９２】
【化２６】
2007509935.tif 000028
【００９３】
６−ブロモ−２−メチルピリジン（０．５１６ｇ，３．０ｍｍｏｌ）エチニル（トリメチル）シランを、エチニル（トリメチル）シラン（０．３２４ｇ，３．３ｍｍｏｌ，１．１０ｅｑ．）および（ＰＰｈ３）２ＰｄＣｌ２（０．０６３ｇ，０．０９ｍｍｏｌ，０．０３ｅｑ．）と混合し、そしてトリエチルアミン（１．２１ｇ，１．６７ｍＬ，１２．０ｍｍｏｌ，４．０ｅｑ．）を０℃で加えた。混合物を０℃で０．５時間撹拌後、ＣｕＩ（０．０１７ｇ，０．０９ｍｍｏｌ，０．０３ｅｑ．）を加えた。その混合物を、１５分間にわたって室温に達しさせた。混合物を室温で１５分間撹拌後、６０℃に加熱した。加熱を２時間維持し、そして最後に、反応混合物を室温で１６時間放置した。リン酸緩衝液（５ｍＬ，０．２Ｍ，ｐＨ７）を加えた。相分離器の使用により、ＤＣＭ（３ｘ５ｍＬ）で抽出した。有機相を一緒にし、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。これは、０．６２３ｇを生じた。
【００９４】
Ｓｉゲル上においてヘプタン中の５％、後に１０％のＥｔＯＡｃで溶離することによるフラッシュクロマトグラフィーを行った。０．３２０ｇの純粋な物質を単離した。（収率：５６％）。
【００９５】
ＴＬＣ：Ｒｆ（２：１のヘプタン／ＥｔＯＡｃ）＝０．５６。
1H NMR (300 MHz): 7.37 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 2.40 (s, 3H), 0.14 (s, 9H).
13C NMR (75 MHz): 158.2, 141.8, 135.7, 124.0, 122.3, 103.5, 93.6, 24.2, -0.51.
実施例２２
２−エチニル−６−メチルピリジン（化合物３３）の製造：
【００９６】
【化２７】
2007509935.tif 000029
【００９７】
２−メチル−６−［（トリメチルシリル）エチニル］ピリジン（１．６７ｇ，８．８２ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）およびＤＣＭ（２０ｍＬ）中に溶解させ、そして無水炭酸カリウム（３．６６ｇ，２６．５ｍｍｏｌ，３．０ｅｑ．）を室温で加えた。混合物を室温で２時間撹拌後、真空中で濃縮した。次に、その物質を、１０ｇのＳｉプラグを介して、ＤＣＭですすぎ洗浄しながら通過させた。これは、１．０ｇ（収率：９７％）の純粋な生成物を生じた。
【００９８】
1H NMR (400 MHz): 7.55 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 3.13 (s, 1H), 2.56 (s, 3H).
実施例２３
４−メチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）ペント−１−イン−３−オールの製造：
【００９９】
【化２８】
2007509935.tif 000030
【０１００】
２−エチニル−６−メチルピリジン（０．０４０ｇ，０．３４ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（２．５ｍＬ）中に溶解させ、その溶液を−７８℃に冷却した。リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（０．６９ｍＬのＴＨＦ中１．０Ｍ溶液，２．０ｅｑ．）を加え、溶液をその温度で０．５時間撹拌後、２−メチルプロパナール（０．０５０ｇ，０．０６３ｍＬ，０．６９ｍｍｏｌ，２．０ｅｑ．）を加えた。その後、反応混合物の温度を室温に達しさせ、そしてその温度で０．５時間撹拌後、混合物を、５ｇのＳＣＸカラムを介して、ＴＨＦおよびＭｅＯＨでそれぞれ溶離しながら通過させた。化合物を溶離するために、最後に、ＭｅＯＨ中の飽和アンモニア溶液でカラムを溶離した。これは、０．０８０ｇの粗生成物を生じ、それを、更に精製することなく、化合物３５（下を参照されたい）の製造に用いた。
【０１０１】
1H NMR (400 MHz): 7.48 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.38 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 2.50 (s, 3H), 1.96 (m, 1H), 1.05 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.02 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
13C NMR (100 MHz): 158.5, 142.0, 136.3, 124.1, 122.5, 89.6, 84.3, 67.5, 34.3, 24.1, 18.1, 17.7.
実施例２４
２−［３−（３−クロロフェニル）−４−メチルペント−１−イン−１−イル］−６−メチルピリジンの製造：
【０１０２】
【化２９】
2007509935.tif 000031
【０１０３】
４−メチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）ペント−１−イン３−オール（０．０８０ｇの粗生成物，０．３４ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（２．５ｍＬ）中に溶解させ、トリエチルアミン（０．７３ｇ，０．０９９ｍＬ，０．７２ｍｍｏｌ，２．１ｅｑ．）を加えた。メタンスルホニルクロリド（０．６３ｇ，０．４３ｍＬ，０．５５ｍｍｏｌ，１．６ｅｑ．）を、室温で滴加した。室温での撹拌を３時間続けた。反応混合物を蒸発させた。その粗生成物を、ＤＣＭ（２．５ｍＬ）およびＮＥｔ３（０．７０ｇ，０．０９５ｍＬ，０．６９ｍｍｏｌ，２．０ｅｑ．）中に溶解させた後、３−クロロベンゼンチオール（０．１０ｇ，０．６９ｍｍｏｌ，２．０ｅｑ．）を室温で加えた。
【０１０４】
反応混合物を室温で１６時間撹拌した。１Ｍ炭酸カリウム水溶液（２５ｍＬ）を加え、水相をＤＣＭ（３ｘ２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。Ｓｉゲル上のフラッシュクロマトグラフィー（溶離剤：１００：０〜８０：２０のヘプタン／ＡｃＯＥｔ勾配）は、０．００５ｇの生成物を生じた。（収率：４％）。
【０１０５】
1H NMR (400 MHz): 7.56 (m, 1H), 7.50 (t, J = 7.8, 1H), 7.46-7.40 (m, 1H), 7.26-7.22 (m, 2H), 7.16 (d, J = 7.8, 1H), 7.08 (d, J =  7.8, 1H), 3.97 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 2.54 (s, 3H), 2.13 (m, 1H), 1.21 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.19 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
実施例２４
２−｛３−［（３，４−ジメチルフェニル）チオ］プロプ−１−イン−１−イル｝−６−メチルピリジンの製造：
【０１０６】
【化３０】
2007509935.tif 000032
【０１０７】
ガラスバイアル中の３，４−ジメチルベンゼンチオール（０．０４１ｇ，０．３０ｍｍｏｌ）に、０．５ｍＬのジクロロメタン中０．６Ｍの３−（６−メチルピリジン−２−イル）プロプ−２−イン−１−イルメタンスルホネート溶液（０．０６８ｇ，０．３０ｍｍｏｌ，１．０ｅｑ．）を加えた後、トリエチルアミン（０．３０４ｇ，０．４１８ｍＬ，３．０ｍｍｏｌ，１０．０ｅｑ．）を加えた。バイアルを密封し、反応混合物を６０℃で５時間加熱後、室温で１４時間撹拌した。その物質を、Celite を介して濾過し、真空遠心分離した。精製は、逆相カラムクロマトグラフィーによって行った。収率：０．０２４ｇ（３０％）。
【０１０８】
MS m/Z: 268 (M+1)
実施例２５
２−｛３−［（３，５−ジメチルフェニル）チオ］プロプ−１−イン−１−イル｝−６−メチルピリジンの製造：
【０１０９】
【化３１】
2007509935.tif 000033
【０１１０】
実施例２４と同様であるが、３，５−ジメチルベンゼンチオールを出発物質として製造した。収率：０．０３４ｇ（４２％）。
MS m/Z: 268 (M+1)
実施例２６
２−｛［３−（６−メチルピリジン−２−イル）プロプ−２−イン−１−イル］チオ｝安息香酸メチルの製造：
【０１１１】
【化３２】
2007509935.tif 000034
【０１１２】
実施例２４と同様であるが、２−メルカプト安息香酸メチルを出発物質として製造した。収率：０．００６ｇ（７％）。
MS m/Z: 298 (M+1)
実施例２７
２−メチル−６−［３−（１−ナフチルチオ）プロプ−１−イン−１−イル］ピリジンの製造：
【０１１３】
【化３３】
2007509935.tif 000035
【０１１４】
実施例２４と同様であるが、ナフタレン−１−チオールを出発物質として製造した。収率：０．０１５ｇ（１７％）。
MS m/Z: 290 (M+1)
実施例２８
２−｛３−［（３−エトキシフェニル）チオ］プロプ−１−イン−１−イル｝−６−メチルピリジンの製造：
【０１１５】
【化３４】
2007509935.tif 000036
【０１１６】
実施例２４と同様であるが、３−エトキシベンゼンチオールを出発物質として製造した。収率：０．０２３ｇ（０．０２７ｇ）。
MS m/Z: 284 (M+1)
実施例２９
２−｛３−［（４−tert−ブチルフェニル）チオ］プロプ−１−イン−１−イル｝−６−メチルピリジンの製造：
【０１１７】
【化３５】
2007509935.tif 000037
【０１１８】
実施例２４と同様であるが、４−tert−ブチルベンゼンチオールを出発物質として製造した。収率：０．０２４ｇ（２７％）。
MS m/Z: 296 (M+1)
実施例３０
１−（６−メチルピリジン−２−イル）−ペント−１−イン３−オールの製造
１−（６−メチルピリジン−２−イル）−ペント−１−イン３−オールを、実施例２３に記載の方法にしたがって、２−エチニル−６−メチルピリジンおよびプロピオンアルデヒドを出発物質として用いて製造した。
【０１１９】
【化３６】
2007509935.tif 000038
【０１２０】
1H NMR (400 MHz): 7.47 (t, 1 H), 7.19 (d, 1 H), 7.03 (d, 1 H), 4.55 (t, 1 H), 4.13 (br s, 1 H), 2.49 (s, 3 H), 1.81 (m, 2 H), 1.03 (t, 3 H).
実施例３１
２−｛３−［（３−クロロフェニル）チオ］ペント−１−イン−１−イル｝−６−メチルピリジンの製造：
アルコールである１−（６−メチルピリジン−２−イル）−ペント−１−イン３−オール（７４．７ｍｇ，０．４３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１７３ｍｇ，１．７０ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（５．０ｍＬ）中に溶解させ、メシルクロリド（７３．３ｍｇ，０．６４ｍｍｏｌ）を滴加した。１時間後、ｍ−クロロチオフェノール（１２３ｍｇ，０．８５ｍｍｏｌ）を溶液に加えた。その混合物を室温で一晩撹拌した。この後、Ｋ２ＣＯ３（１．０Ｍ，２５ｍＬ）を加え、その溶液をＤＣＭで抽出した。有機相をプールし、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。得られた粗生成物を、シリカゲル上の勾配（１：０〜３：２のヘプタン／ＥｔＯＡｃ）でのフラッシュクロマトグラフィーおよび分取ＨＰＬＣ（Ｃ８クロマシル（kromasil））に供して、１２．１ｍｇ（９．４％）の純粋な生成物を与えた。
【０１２１】
【化３７】
2007509935.tif 000039
【０１２２】
1H-NMR (400 MHz): 7.57 (m, 1H), 7.49 (m, 1H), 7.42 (m, 1H), 7.24 (m, 2H), 7.14 (d, 1H), 7.06 (d, 1H), 3.98 (t, 1H), 2.53 (s, 3H), 1.91 (m, 2H), 1.17 (t, 3H).
13C-NMR (400 MHz): 159.0, 142.5, 136.5, 136.2, 134.6, 132.7, 131.1, 130.0, 128.0, 124.6, 122.8, 88.5, 84.8, 41.1, 28.5, 24.8, 12.1.
生物学的評価
ｍＧｌｕＲ５ｄを発現する細胞系におけるｍＧｌｕＲ５拮抗作用の機能性評価
本発明の化合物の性状は、薬理学的活性についての標準的な検定を用いて分析することができる。グルタミン酸受容体検定の例は、例えば、Aramori et al., Neuron 8:757 (1992), Tanabe et al., Neuron 8:169 (1992), Miller et al., J. Neuroscience 15: 6103 (1995), Balazs, et al., J. Neurochemistry 69:151 (1997) に記載のように、当該技術分野において周知である。これら公報に記載された方法は、本明細書中に援用される。好都合には、本発明の化合物は、ｍＧｌｕＲ５を発現する細胞中の細胞内カルシウム［Ｃａ２＋］ｉの動員（mobilization）を測定する検定（ＦＬＩＰＲ）、またはイノシトールリン酸代謝回転を測定する別の検定（ＩＰ３）によって研究することができる。
【０１２３】
ＦＬＩＰＲ検定
ＷＯ９７／０５２５２号に記載のようなヒトｍＧｌｕＲ５ｄを発現する細胞を、コラーゲンを被覆した透明底の、黒色側面を有する９６ウェルプレート上に、１００，０００個／ウェルの細胞密度で播種し、そして播種から２４時間後に実験を行う。検定は全て、１２７ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＫＣｌ、２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．７ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４、２ｍＭ  ＣａＣｌ２、０．４２２ｍｇ／ｍｌのＮａＨＣＯ３、２．４ｍｇ／ｍｌのＨＥＰＥＳ、１．８ｍｇ／ｍｌのグルコースおよび１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ Fraction ＩＶを含有する緩衝液（ｐＨ７．４）中で行う。それら９６ウェルプレート中の細胞培養物を、０．０１％プルロニック酸（pluronic acid）（有標非イオン性界面活性剤ポリオール−ＣＡＳ Number ９００３−１１−６）中の４μＭのアセトキシメチルエステル型の蛍光カルシウム指示薬ｆｌｕｏ−３（Molecular Probes, Eugene, Oregon）を含有する上述の緩衝液中で６０分間負荷処理する。負荷時間後、ｆｌｕｏ−３緩衝液を除去し、新しい検定緩衝液と交換する。ＦＬＩＰＲ実験は、０．８００Ｗのレーザー設定および０．４秒のＣＣＤカメラシャッター速度を用いて、それぞれ、４８８ｎｍおよび５６２ｎｍの励起波長および発光波長で行う。各々の実験を、細胞プレートの各ウェル中にある１６０μｌの緩衝液で開始する。アンタゴニストプレートから４０μｌを添加後、アゴニストプレートから５０μｌを添加した。アンタゴニスト添加とアゴニスト添加を、９０秒間隔で隔てる。蛍光シグナルは、１秒間隔で５０回サンプリング後、それら二つの添加各々の直後に５秒間隔で３回サンプリングする。応答は、サンプリング時間内のバックグラウンド蛍光より小さい、アゴニストへの応答のピーク高さ間の差として測定する。ＩＣ５０測定は、線型最小二乗適合プログラムを用いて行う。
【０１２４】
ＩＰ３検定
ｍＧｌｕＲ５ｄについてのもう一つの機能性検定は、ＷＯ９７／０５２５２号に記載されており、ホスファチジルイノシトール代謝回転に基づいている。受容体活性化は、ホスホリパーゼＣ活性を刺激し、そして増加したイノシトール１，４，５，トリリン酸（ＩＰ３）形成をもたらす。
【０１２５】
ヒトｍＧｌｕＲ５ｄを安定して発現するＧＨＥＫを、２４ウェルのポリ−Ｌ−リシン被覆プレート上の、１μＣｉ／ウェルの［３Ｈ］ｍｙｏ−イノシトールを含有する培地中に、４０ｘ１０４個細胞／ウェルで播種する。細胞を一晩（１６時間）インキュベート後、３回洗浄し、そして１単位／ｍｌのグルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼおよび２ｍＭピルベートを補足したＨＥＰＥＳ緩衝化生理食塩水（１４６ｍＭ  ＮａＣｌ、４．２ｍＭ  ＫＣｌ、０．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．１％グルコース、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４）中において３７℃で１時間インキュベートした。細胞を、ＨＥＰＥＳ緩衝化生理食塩水中で１回洗浄し、そして１０ｍＭ  ＬｉＣｌを含有するＨＥＰＥＳ緩衝化生理食塩水中で１０分間プレインキュベートする。化合物を、二重試験において３７℃で１５分間インキュベート後、グルタメート（８０μＭ）かまたはＤＨＰＧ（３０μＭ）を加え、そして更に３０分間インキュベートする。その反応を、４℃で少なくとも３０分間のインキュベーションを伴う０．５ｍｌの氷上の過塩素酸（５％）の添加で停止させる。試料を、１５ｍｌポリプロピレン管に集め、そしてイオン交換樹脂（Dowex ＡＧ１−Ｘ８ギ酸型，２００〜４００メッシュ，ＢＩＯＲＡＤ）カラムを用いて、イノシトールリン酸を分離する。イノシトールリン酸分離は、最初に、グリセロホスファチジルイノシトールを８ｍｌの３０ｍＭギ酸アンモニウムで溶離することによって行った。次に、全イノシトールリン酸を、８ｍｌの７００ｍＭギ酸アンモニウム／１００ｍＭギ酸で溶離し、シンチレーションバイアル中に集める。次に、この溶出液を、８ｍｌのシンチラント（scintillant）と混合し、そして［３Ｈ］イノシトール取込みを、シンチレーション計数によって決定する。二重試験試料からのｄｐｍ計数をプロットし、そして線型最小二乗適合プログラムを用いて、ＩＣ５０測定値を生じる。
【０１２６】
略語
ＢＳＡ      ウシ血清アルブミン
ＣＣＤ      荷電結合素子
ＣＲＣ      濃度応答曲線
ＤＨＰＧ    ３，５−ジヒドロキシフェニルグリシン
ＤＰＭ      崩壊毎分
ＥＤＴＡ    エチレンジアミン四酢酸
ＦＬＩＰＲ  蛍光光度イメージングプレートリーダー（Fluorometric Imaging Plate reader）
ＧＨＥＫ    ＧＬＡＳＴ含有ヒト胎生腎
ＧＬＡＳＴ  グルタミン酸／アスパラギン酸輸送体
ＨＥＰＥＳ  ４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸（緩衝液）
ＩＰ３             イノシトールトリリン酸
概して、それら化合物は、上の検定において、１００００ｎＭ未満のＩＣ５０値で活性である。本発明の一つの側面において、そのＩＣ５０値は１μＭ未満である。本発明のもう一つの側面において、ＩＣ５０値は１００ｎＭ未満である。
【０１２７】
個々の化合物のＩＣ５０値の例を、下に示す。
【０１２８】
【表１】
2007509935.tif 000040
【０１２９】
ＴＬＥＳＲに対して活性な化合物のスクリーニング
Pavlov 吊り包帯で立っているように訓練された双方の性のラブラドル・レトリーバー成犬を用いる。粘膜−皮膚食道造瘻を形成し、それらイヌを完全に回復させた後、いずれかの実験を行う。
【０１３０】
運動性測定
簡単にいうと、自由な水供給を伴う約１７時間の絶食後、マルチルーメンスリーブ／サイドホールアセンブリー（multilumen sleeve/sidehole assembly）（Dentsleeve, Adelaide, South Australia）を、食道造瘻を介して導入して、胃、下部食道括約筋（ＬＥＳ）および食道の圧力を測定する。そのアセンブリーを、低コンプライアンス側圧灌流ポンプ（Dentsleeve, Adelaide, South Australia）を用いて水で灌流する。空気灌流管を口方向に通して、ＬＥＳより３ｃｍ上で、嚥下およびアンチモン電極監視ｐＨを測定する。全てのシグナルを増幅させ、パーソナルコンピューターにおいて１０Ｈｚで捕捉する。
【０１３１】
空腹時の胃／ＬＥＳ  III相運動活性を含まないベースライン測定値を得た時点で、プラシーボ（０．９％ＮａＣｌ）または試験化合物を、前肢静脈に静脈内投与する（ｉ．ｖ．，０．５ｍｌ／ｋｇ）。ｉ．ｖ．投与から１０分後に、栄養食（１０％ペプトン、５％Ｄ−グルコース、５％ Intralipid、ｐＨ３．０）を、アセンブリーの中心ルーメンを介して胃中に１００ｍｌ／分で注入して、３０ｍｌ／ｋｇの最終容量とする。栄養食の注入後、空気注入を５００ｍｌ／分の速度で、１０±１ｍｍＨｇの胃内圧が得られるまで行う。次に、その圧力を、更なる空気注入のためのまたは胃から空気を抜くための注入ポンプを用いて、実験の間中このレベルで維持する。栄養注入の開始から空気吹入の終わりまでの実験時間は４５分である。その手順は、ＴＬＥＳＲを引き起こす信頼性のある手段として妥当であった。
【０１３２】
ＴＬＥＳＲは、＞１ ｍｍＨｇ／秒の速度での下部食道括約筋圧力（胃内圧に関する）の減少として定義される。その弛緩は、その開始前≦２秒に咽頭シグナルが先行するはずはなく、その場合の弛緩は、嚥下に誘発されたものとして分類される。ＬＥＳと胃との間の圧力差は、２ｍｍＨｇ未満であるべきであり、完全弛緩の持続時間は１秒より長くあるべきである。
【国際調査報告】
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