(57)【要約】  本発明は、化学療法誘導性ニューロパシー（ＣＩＰＮ）の治療または予防のための組成物および方法におけるＩＬ−６の使用に関する。より具体的には、本発明は、ＣＩＰＮの治療および／または予防のための、低用量のＩＬ−６の使用に関する。
2007534746.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学療法誘発末梢性ニューロパシーの予防および／または治療のための医薬の製造のための、低用量のＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩の使用。
【請求項２】
前記化学療法誘発末梢性ニューロパシーが、少なくとも１つの化学療法薬剤によって引き起こされる請求項１記載の使用。
【請求項３】
前記少なくとも１つの化学療法薬剤が、ビンクリスチン、シスプラチン、カルボプラチンまたはタキソールである請求項２記載の使用。
【請求項４】
前記化学療法薬剤が、カルボプラチンとタキソールとの混合物よりなる請求項２記載の使用。
【請求項５】
前記ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩の用量が、４〜２１０μｇの範囲である請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
前記ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩の用量が、７〜１４０μｇの範囲である請求項５記載の使用。
【請求項７】
前記ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩の用量が、約４、７、１４、２８、７０または１４０μｇである請求項５記載の使用。
【請求項８】
前記ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩が、１つ以上の部位でグルコシル化される請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項９】
前記ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩が、グルコシル化されていない請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０】
前記ＩＬ−６の機能性誘導体が、アミノ酸残基上の１つ以上の側鎖に存在する１つ以上の官能基に連結した少なくとも１つの化学部分を含む請求項１〜９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１】
前記化学部分が、ポリエチレングリコール部分である請求項１０記載の使用。
【請求項１２】
化学療法誘発末梢性ニューロパシーの予防および／または治療のための医薬の製造のための、低用量のＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、活性画分または円順列誘導体を産生する組換え細胞の使用。
【請求項１３】
化学療法誘発末梢性ニューロパシーの予防および／または治療のための医薬の製造のための、ＩＬ−６のコード配列を含み、かつ低用量のＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、活性画分または円順列誘導体を発現可能であるベクターの使用。
【請求項１４】
前記ベクターがレンチウイルスベクターである請求項１３記載の使用。
【請求項１５】
医薬の製造のための、少なくとも１つの化学療法薬剤と、ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体または断片との組み合わせの使用。
【請求項１６】
前記少なくとも１つの化学療法薬剤がビンクリスチン、シスプラチン、カルボプラチンまたはタキソールである請求項１５記載の使用。
【請求項１７】
前記化学療法薬剤が、カルボプラチンとタキソールとの混合物である請求項１５記載の使用。
【請求項１８】
前記ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩が、１つ以上の部位でグルコシル化されている請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１９】
前記ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩が、グルコシル化されていない請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２０】
ＩＬ−６の機能性誘導体が、アミノ酸残基上の１つ以上の側鎖に存在する１つ以上の官能基に連結した少なくとも１つの化学部分を含む請求項１５〜１９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２１】
前記化学部分が、ポリエチレングリコール部分である請求項２０記載の使用。
【請求項２２】
低用量のＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分、円順列誘導体または塩を、少なくとも１つの化学療法薬剤での治療下または治療前に、患者に投与することを含む、化学療法誘発末梢性ニューロパシーの治療および／または予防方法。
【請求項２３】
前記患者が、化学療法誘発末梢性ニューロパシーの罹患に関してハイリスク患者である請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
前記患者が、循環中に高レベルのＩＬ−６レセプターを示す請求項２２記載の方法。
【請求項２５】
前記ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩を、毎日投与する請求項２２〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩を、１週間に３回投与する請求項２２〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分、円順列誘導体または塩を、少なくとも２週間投与する請求項２２〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩を、皮下に投与する請求項２２〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記低用量のＩＬ−６の投与が、内因性遺伝子の活性化（ＥＧＡ）によって達成される請求項２２〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記低用量のＩＬ−６の投与が、ＩＬ−６を産出する組換え細胞の投与によって達成される請求項２２〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記低用量のＩＬ−６の投与が、ＩＬ−６を発現可能であるベクターの投与によって達成される請求項２２〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
患者における、化学療法誘発末梢性ニューロパシーを予防するために、低用量のＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分、円順列誘導体または塩を投与することを含む、化学療法薬剤での治療下、または治療の前の、患者への少なくとも１つの化学療法薬剤の用量を増加させるため、および／または投与を延長するための方法。
【請求項３３】
前記ＩＬ−６が、化学療法薬剤の投与前、あいだおよび／または後のいずれかに投与される請求項３２記載の方法。
【請求項３４】
前記ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分、円順列誘導体または塩の用量が、０．０６〜３μｇ／ｋｇ体重の範囲内である請求項３２または３３記載の方法。
【請求項３５】
前記ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分、円順列誘導体または塩の用量が、０．１〜２μｇ／ｋｇ体重の範囲内である請求項３４記載の方法。
【請求項３６】
前記ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分、円順列誘導体または塩の用量が、約０．２、０．３、１、２または３μｇ／ｋｇ体重である請求項３４記載の方法。
【請求項３７】
前記ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩の用量が、４〜２１０μｇの範囲である請求項３２または３３記載の方法。
【請求項３８】
前記ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩の用量が、７〜１４０μｇの範囲である請求項３７記載の方法。
【請求項３９】
前記ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩の用量が、約４、７、１４、２８、７０または１４０μｇである請求項３７記載の使用。
【請求項４０】
薬学的に許容され得る担体、およびＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体または断片と少なくとも１つの化学療法薬剤との組み合わせを含む医薬組成物。
【請求項４１】
前記少なくとも１つの化学療法薬剤が、ビンクリスチン、シスプラチン、カルボプラチンまたはタキソールである請求項４０記載の医薬組成物。
【請求項４２】
前記化学療法薬剤が、カルボプラチンとタキソールの混合物からなる請求項４０記載の医薬組成物。
【請求項４３】
前記ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩が、１つ以上の部位でグルコシル化されている請求項４０〜４２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４４】
前記ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩が、グルコシル化されない請求項４０〜４２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４５】
前記ＩＬ−６の機能性誘導体が、アミノ酸残基上の１つ以上の側鎖に存在する１つ以上の官能基に連結した、少なくとも１つの化学部分を含む請求項４０〜４４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４６】
前記化学部分が、ポリエチレングリコール部分である請求項４５記載の医薬組成物。
【請求項４７】
さらに神経保護薬物を含む請求項４０〜４６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
前記神経保護薬物が、神経増殖因子（ＮＧＦ）である請求項４７記載の医薬組成物。
【請求項４９】
前記神経保護薬物が、グルタミンである請求項４７記載の医薬組成物。
【請求項５０】
前記ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩の量が、４〜２１０μｇの範囲である請求項４０〜４９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５１】
前記ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩の量が、７〜１４０μｇの範囲である請求項５０記載の医薬組成物。
【請求項５２】
前記ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩の量が、約４、７、１４、２８、７０または１４０μｇである請求項５０記載の医薬組成物。
【請求項５３】
それぞれ１つの化学療法薬剤を含む１つ以上の容器；ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩を含む１つの容器；および化学療法誘発末梢性ニューロパシーの予防および／または治療のための、該化学療法薬剤および該ＩＬ−６の投与のための仕様説明書、を含むキット。
【請求項５４】
それぞれ１つの化学療法薬剤を含む２つの容器（１つの容器がカルボプラチンを含み、もう１つの容器がタキソールを含む）を含む請求項５３記載のキット。
【請求項５５】
各容器内のＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩の量が、４〜２１０μｇの範囲である請求項５３または５４記載のキット。
【請求項５６】
各容器内のＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩の量が、７〜１４０μｇの範囲である請求項５５記載のキット。
【請求項５７】
各容器内のＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩の量が、約４、７、１４、２８、７０または１４０μｇである請求項５５記載のキット。
【請求項５８】
神経保護薬物を含むさらなる容器を含む請求項５３、５４、５５、５６または５７記載のキット。
【請求項５９】
前記神経保護薬物が、神経増殖因子（ＮＧＦ）である請求項５８記載のキット。
【請求項６０】
前記神経保護薬物が、グルタミンである請求項５８記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化学療法誘発性ニューロパシー（ＣＩＰＮ）におけるＩＬ−６の使用に関する。より具体的には、本発明は化学療法誘発性ニューロパシーの治療および／または予防のための、低用量のＩＬ−６の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
末梢性ニューロパシーは、神経の、またはミエリン鞘の損傷に起因する末梢神経系の疾患の集合である。損傷は長期化し、通常、きっかけの傷より長く続く（outlasting）。
【０００３】
化学療法誘発末梢性ニューロパシー（ＣＩＰＮ）は、多くの細胞毒性薬物のよく知られた、潜在的な身体を不能にする副作用（disabling side effect）である。化学療法誘発性ニューロパシーは、蓄積用量または用量−強度に関係する（Ｖｅｒｓｔａｐｐｅｎ  ｅｔ  ａｌ．２００３  Ｄｒｕｇｓ  ６３：１５４９−６３）。
【０００４】
現在、ＣＩＰＮは、用量減少によってのみ緩和されるが、これは、化学療法治療の効果を減少させ得る。糖尿病、遺伝性ニューロパシー、または神経毒性化学療法での早期治療によって、神経因性症状をすでに持つ患者は、ＣＩＰＮの発症をより受けやすいと考えられる。
【０００５】
ビンカ−アルカロイド類（たとえば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）、白金系化合物類（たとえばシスプラチン）およびタキサン類（パクリタキセルおよびドセタキセル）が、末梢神経毒性を誘導する最も重要な薬物の一群である（Ｖｉｓｏｖｓｋｙ  Ｃ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｖｅｓｔ．２００３  Ｊｕｎ；２１（３）：４３９−５１）、Ｑｕａｓｔｈｏｆｆ  Ｓ，Ｈａｒｔｕｎｇ  ＨＰ  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ．２００２  Ｊａｎ；２４９（１）：９−１７．総説）。これらの薬物は、卵巣癌、乳癌、および血液性癌のような、種々の悪性物の治療のために広く使用されている（Ｖｅｒｓｔａｐｐｅｎ  ｅｔ  ａｌ．２００３  Ｄｒｕｇｓ  ６３（１５）：１５４９）。
【０００６】
ビンクリスチン−駆動ニューロパシーは、主に、運動神経および感覚神経不全（ニューロパシーの混合型）によって特徴付けられる。関与する機構がいまだ完全に理解されてはいないが、最終的に軸索変性を導く、順行性軸索輸送の変化が関与することが記述されてきている。現在までのところ効果的な治療法が開発されてきていないので、ビンクリスチン−駆動ニューロパシーの治療は、現在一時しのぎのみである。
【０００７】
シス−ジクロロジアミン白金（シスプラチン）は、生殖細胞がんの治療のために選択される薬物である。これはまた、他の固形癌に対しても併用されるが、投与可能な総量が、腎臓毒性および末梢性ニューロパシーなどの重篤な副作用によって制限される。用量を制限する、ニューロパシーの発生は、塩化利尿薬によって有意に減少した。末梢性ニューロパシーの問題は、この薬物の導入後すぐに現れる。ニューロパシーは用量を限定し、総蓄積薬物用量に非常に関連する。有意な末梢神経毒性が、＞４００〜５００ｍｇ／ｍ2のシスプラチンを受けた成人患者の大部分においてみられる。ニューロパシーは遠位先端での、知覚障害（バーニング、プリックリング、蟻走感のような異常な感覚）の初期病状を持つ、主に感覚的なものである。神経病理学研究によって、大有髄繊維の欠損および軸索編成の兆候が示された。ニューロパシーは、シスプラチンの停止後、数ヶ月間進展し続けえ、症状が、化学療法の最後の投与後、３〜８週間発達し得る（Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、（１９８４）Ｃａｎｃｅｒ．５４（７）：１２６９−７５）。白金が蓄積する組織をモニタする、組織白金アッセイの研究によって、腫瘍組織中で、もっとも高い白金濃度が明らかになったが、同様に、末梢神経組織でも、高い濃度が見られた。一方、脳内では非常に低濃度であった。シスプラチンで処理したがん患者での、電気組織学的研究によって、大直径感覚軸索が関与することが確認される。
【０００８】
タキソールは、悪性メラノーマおよび卵巣がんのような固形がんの治療において、非常に利用される、効果的な化学療法薬剤である。それにもかかわらず、タキソールによって引き起こされる末梢性ニューロパシーが、がんの治療において、ますます、用量を制限する問題となってきている（Ｒｏｗｉｎｓｋｙ  Ｅ．Ｋ．，Ｃｈａｕｄｈｒｙ  Ｖ．，Ｃｏｒｎｂｌａｔｈ  Ｄ．Ｒ，Ｄｏｎｅｈｏｗｅｒ  Ｒ．Ｃ．Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｔａｘｏｌ（１９９３）．Ｍｏｎｏｇｒ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．１０７−１１５）。タキソールは、チューブリンサブユニットへの結合を介して、微小管動力学を抑制する、植物アルカロイドであり、分裂細胞における核分裂停止（Ｄｅｒｒｙ  Ｗ．Ｂ，Ｗｉｌｓｏｎ  Ｌ．，Ｊｏｒｄａｎ  Ｍ．Ａ．Ｓｕｂｓｔｏｉｃｈｉｏｍｅｔｒｉｃ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  ｔａｘｏｌ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ  ｄｙｎａｍｉｃｓ（１９９５）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３４：２２０３−２２１１）、および軸索輸送の干渉によって、末梢神経における軸索変性（Ｒｏｗｉｎｓｋｙら、１９９３）を引き起こす。結果としてのニューロパシーが、主に小感覚神経線維に影響を与え、またより高い用量で、運動神経および大感覚神経線維不全が起こる（Ｆｒｅｉｌｉｃｈ  Ｒ．Ｉ．、Ｂａｌｍａｃｅｄａ  Ｃ．，Ｓｅｉｄｍａｎ  Ａ．Ｄ．，Ｒｕｂｉｎ  Ｍ．，ＤｅＡｎｇｅｌｉｓ  Ｌ．Ｍ．Ｍｏｔｏｒ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ  ｄｕｅ  ｔｏ  ｄｏｃｅｔａｘｅｌ  ａｎｄ  ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ（１９９６）．Ｎｕｔｒ．Ｒｅｖ．４７：１１５−１１８）。
【０００９】
一般的に、末梢性ニューロパシーの治療は、全身性であり、神経への損傷を根底におく有益な効果はない（Ｐｅｌｔｉｅｒ  ＡＣ，Ｒｕｓｓｅｌｌ  ＪＷ．Ｒｅｃｅｎｔ  ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｄｒｕｇ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｅｓ．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｎｅｕｒｏｌ．２００２  Ｏｃｔ；１５（５）：６３３−８）。たとえば、ピリドキシン（ビタミンＢ６）は、末梢神経損傷に続く栄養サポートの方法として使用され、抗酸化剤類（たとえば、ガンマ−リノール酸、アルファリポ酸、およびＰＫＣ阻害剤およびアルドース還元酵素阻害剤）が、末梢性ニューロパシーに関与し得る毒素を排除するために使用され、抗けいれん剤が、痛み症状を抑制するために使用される。ビタミンＢ１、ビタミンＢ１２、グルタミン酸（Ｂｏｙｌｅ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．  １９９６  Ｏｃｔ；２７９（１）：４１０−５）、イソアキソニン（Ｌｅ  Ｑｕｅｓｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．１９８５  Ｓｅｐ；４８（９）：９３３−５）、ガングリオシドまたは神経成長因子（Ｈａｙａｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．１９９４；５５（７）：５１９−２５．４；Ｌｅｗｉｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｘｐ  Ｎｅｕｒｏｌ．１９９３  Ｎｏｖ；１２４（１）：７３−８８．）のような推定される神経保護薬剤を用いる、ビンクリスチン−ニューロパシーを予防する試みは、ある程度の成功を示している。
【００１０】
とりわけ、化学療法誘発性ニューロパシーの治療のための共通のアプローチには、以下の、化学療法薬剤の用量および期間制限、および神経増殖因子（ＮＧＦ）およびグルタミンの利用が含まれる（Ｐｅｌｉｔｅｒ  ＡＣ，Ｒｕｓｓｅｌｌ  ＪＷ．Ｒｅｃｅｎｔ  ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｄｒｕｇ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｅｓ．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｎｅｕｒｏｌ．２００２  Ｏｃｔ；１５（５）：６３３−８）。
【００１１】
４−メチルカテコール（４−ＭＣ）は、坐骨神経再生において、および糖尿病性ニューロパシーの２つの実験モデルにおいて、有益な効果を持つ、カテコール誘導体である［Ｈａｎａｏｋｏａ  ａｎｄ  Ｏｈｉ  Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌｏｇ．１９９４  １２２，２８−３２、およびＳａｉｔａら、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．１９９６，２７６，２３１−２３７］。４−メチルカテコール（４−ＭＣ）のようなカテコール誘導体は、インビトロおよびインビボにて、培養星状細胞からの、神経増殖因子（ＮＧＦ）の産出を刺激し［Ｔａｋｅｕｃｈｉら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  １９９０，２６１，６３−６６］、ラットにて、脳−由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）を誘導する［Ｎｉｔｔａら、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．１９９９，２９１，１２７６−８３］。しかしながら、反応性化学物質であり、治療濃度にて、多数の副作用または薬物−薬物相互作用を産出し得るので、カテコール類の治療的な有用性は明らかではない（Ｓｃｈｗｅｉｇｅｒｔら、２００１  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌｕｍｅ  ３  Ｉｓｓｕｅ  ２  Ｐａｇｅ  ８１）。
【００１２】
ＩＬ−６は、炎症促進サイトカインとしてのみでなく、抗炎症サイトカインとしても働く（Ｊｏｎｅｓら、ＦＡＳＥＢ  Ｊ．２００１  Ｊａｎ；１５（１）：４３−５８．Ｒｅｖｉｅｗ）。ＩＬ−６の機能的特性は非常に広く、本サイトカインを記述するために本来使用した用語によって反映される（Ｈｏｒｓｔ  Ｉｂｅｌｇａｕｆｔｓ’  ＣＯＰＥ：Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  Ｏｎｌｉｎｅ  Ｐａｔｈｆｉｎｄｅｒ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐａｅｄｉａ）。
【００１３】
２つのタンパク質、ＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）およびｇｐ１３０がＩＬ−６に結合する（Ｈｉｒａｎｏら、Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ．１９９４  Ｍａｙ；１２（３）：２６２−７７．総説によって概説された）。ｇｐ８０の細胞外ドメインに相当する、可溶型ＩＬ−６Ｒ（ｓＩＬ−６Ｒ）は、血液および尿内で糖タンパク質として見出されるヒト体内の天然の産物である（Ｎｏｖｉｃｋら，Ｊ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．１９９０  ２７；５１０：３３１−７およびＣｙｔｏｋｉｎｅ．１９９２  Ｊａｎ；４（１）：６−１１）。ｓＩＬ−６Ｒ分子の例外的特性は、これらが、ヒト細胞を含む種々の細胞に、ＩＬ−６の強力なアゴニストとして作用することである（Ｔａｇａ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｅｌｌ．１９８９  Ａｕｇ  １１；５８（３）：５７３−８１．Ｎｏｖｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．１９９２  Ｊａｎ；４（１）：６−１１）。ｇｐ８０の細胞質内ドメインなしでさえ、ｓＩＬ−６Ｒは、ＩＬ−６に応答してｇｐ１３０の二量体化を引き起こすことができ、言い換えれば、続くＩＬ−６−特異的シグナル伝達および生物学的効果を仲介する（Ｍｕｒａｋａｍｉ  Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９９３  Ｊｕｎ  １８；２６０（５１１５）：１８０８−１０）。ｓＩＬ−６Ｒは、ｇｐ１３０との二種類の相互作用を有し、その両方がＩＬ−６特異的生物学的活性に必須である（Ｈａｌｉｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｎｅｔｗ．１９９５  Ｍａｙ−Ｊｕｎ；６（３）：１３５−４３）、活性ＩＬ−６受容体複合体が、２つのｇｐ１３０鎖、２つのＩＬ−６Ｒおよび２つのＩＬ−６リガンドによって形成される六量体構造であることが提案された（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４；Ｐａｏｎｅｓｓａ  ｅｔ  ａｌ，ＥＭＢＯ  Ｊ．１９９５  Ｍａｙ  １；１４（９）：１９４２−５１）。
【００１４】
限定的細胞分布を有する同起源ＩＬ−６Ｒの発現（Ｊｏｎｅｓら．２００１）とは異なり、膜貫通全ｇｐ１３０の発現は、心臓、腎臓、脾臓、肝臓、肺、胎盤および脳などのほとんどすべての器官で見られる（Ｓａｉｔｏら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９２  Ｊｕｎ  １５；１４８（１２）：４０６６−７１）。
【００１５】
可溶性ＩＬ−６Ｒが投与されない限り、ＩＬ−６単独では特定の活性を誘導しないことを示す、多くの異なる実例が存在する。たとえば、ＩＬ−６は、ｓＩＬ−６Ｒと組み合わせた場合のみ、マウス骨髄および骨芽細胞の共培養中で、骨芽細胞形成を誘導する（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．２００１）。また、多くの神経細胞がＩＬ−６を産生可能であるが、これらは、ＩＬ−６自身による刺激に対して応答しない。しかしながら、神経細胞の分化および生存は、ｓＩＬ−６Ｒの作用を介して仲介され得る（Ｈｉｒｏｔａ  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１９９６  Ｊｕｎ  １；１８３（６）：２６２７−３４．Ｍａｒｔｚ  Ｃｈｅｎｇ，Ｊ．−Ｇ．，Ｇａｄｉｅｎｔ，Ｒ．Ａ．，Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ，Ｐ．Ｈ．，Ｓｔｏｙａｎ，Ｔ．，Ｏｔｔｅｎ，Ｕ．，Ｒｏｓｅ−Ｊｏｈｎ，Ｓ．（１９９８）Ｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ｃａｎ  ｐｒｏｄｕｃｅ  ａｎｄ  ｒｅｓｐｏｎｄ  ｔｏ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５，３２５１−３２５６）。
【００１６】
健常被験者におけるｓＩＬ−６Ｒ（アンタゴニスト）の循環濃度は、比較的高く、可溶性ｇｐ１３０（ＩＬ−６の天然アンタゴニスト）の濃度、１０ｎｇ／ｍｌ以上に匹敵する（Ｃｏｒｂｉら  ２０００  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｔｈｅｒａｃ  Ｓｕｒｇ．１８（１）：９８−１０３，ＤｉｓｔｈａｂａｎｃｈｏｎｇらＣｌｉｎ  Ｎｅｐｈｒｏｌ．２００２  Ｏｃｔ；５８（４）：２８９−９５）。反対に、ＩＬ−６の循環濃度は、およそ１０ｐｇ／ｍｌまたはそれ以下である（Ｋａｄｏ  ｅｔ  ａｌ．１９９９  Ａｃｔａ  Ｄｉａｂｅｔｏｌ．Ｊｕｎ  ３６（１−２）６７−７２、Ｃｏｒｂｉ  ｅｔ  ａｌ  ２０００．）。したがって、疾患におけるｓＩＬ−６Ｒとの同時投与なしでの、インビボでのＩＬ−６の単独投与の効果は、有効かもしれないし、有効でないかもしれず、特定の疾患、および体内の特定の場所における、可溶性アゴニスト／アンタゴニストの濃度に依存する。
【００１７】
可溶性ＩＬ−６受容体とＩＬ−６とを一緒に連結するキメラ分子が記述された（Ｃｈｅｂａｔｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｕｒ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｎｅｔｗ．１９９７  Ｄｅｃ；８（４）：３５９−６５）。これらは、ＩＬ−６Ｒ／ＩＬ−６キメラと名付けられた。キメラＩＬ−６Ｒ／ＩＬ−６分子は、可溶性ＩＬ−６受容体（ｓＩＬ−６Ｒ）およびＩＬ−６をコードしているｃＤＮＡｓの全コード領域を融合することによって産出された。組換えＩＬ−６Ｒ／ＩＬ−６キメラは、ＣＨＯ細胞内で産生された（Ｃｈｅｂａｔｈ  ｅｔ  ａｌ，Ｅｕｒ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｎｅｔｗ．１９９７，国際公開第９９／０２５５２号パンフレット）。ＩＬ−６Ｒ／ＩＬ−６は、ｓＩＬ−６ＲとＩＬ−６の混合物で行なうよりも、インビトロにおいてｇｐ１３０鎖により高い効率で結合する（Ｋｏｌｌｅｔ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ．１９９９  Ａｕｇ  １；９４（３）：９２３−３１）。
【００１８】
上述したように、インターロイキン−６シグナリングは、ｇｐ１３０の、リガンド−レセプター複合体へのホモ二量体化を介して促進される。細胞内シグナル伝達が続いて、ｇｐ１３０−結合細胞質チロシンキナーゼ（ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、およびＴＹＫ２）の活性化、およびＳＴＡＴ１およびＳＴＡＴ３のリン酸化を介して誘発される（Ｍｕｒａｋａｍｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９９３  Ｊｕｎ  １８；２６０（５１１５）：１８０８−１０．Ｇｅｒｈａｒｔｚら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．１９９６  Ｍａｙ  ３１；２７１（２２）：１２９９１−８）。反対に、ＬＩＦ、ＯＳＭおよびＣＮＴＦの高親和性レセプターは、ｇｐ１３０とｇｐ１３０−関連タンパク質（ＬＩＦレセプター）間のヘテロ二量体化によって細胞を活性化する（Ｄａｖｉｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９９３  Ｊｕｎ  １８；２６０（５１１５）：１８０５−８）。そのような、ホモ−またはヘテロ二量体は、細胞質チロシンキナーゼのＪａｋ−Ｔｙｋファミリーを介して、異なるが、重なり合うパターンのチロシンリン酸化を活性化する（Ｂｏｕｌｔｏｎら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．１９９４  Ａｐｒ  １５；２６９（１５）：１１６４８−５５）。これは、このタンパク質のファミリーに関連した、異なる細胞応答に寄与し得る。
【００１９】
糖尿病−誘発末梢性ニューロパシーの動物モデルにおける、可溶性ＩＬ−６Ｒなしでの、組換えＩＬ−６単独の治療効果は、特許出願、国際公開第０３０３３０１５号パンフレットにて開示されている。しかしながら、化学療法誘発末梢性ニューロパシー（ＣＩＰＮ）のような異なる型の末梢性ニューロパシーにおいて、可溶性ＩＬ−６Ｒなしでの、単独で投与されるＩＬ−６が、治療的および／または予防的効果を示し得るかどうかは明らかでない。
【００２０】
骨髄異形成症候群およびトロンボサイトペニアの患者での、ｈｒＩＬ−６の第Ｉ相臨床試験において、許容された最大用量は、３．７５μｇ／ｋｇ／ｄであることがわかった（Ｇｏｒｄｏｎら、Ｂｌｏｏｄ  １９９５  ８５（１１）：３０６６−７６）。
【００２１】
毒性を排除するであろう、低用量のＩＬ−６が、化学療法誘発性ニューロパシーを予防すること、および／または治癒すること、および／または改善することにおいて、効果的であるかどうか、不明である。
【００２２】
他のｇｐ１３０活性物である、組換え体白血病阻害因子（ＬＩＦ）が、神経速度、振幅およびＨ−反射潜時、振動知覚閾値および症状スコアに基づく、複合末梢神経電気生理学（ＣＰＮＥ）スコア（２００３、ＡＳＣＯ  ａｎｎｕａｌ  ｍｅｅｔｉｎｇ  Ａｂｓｔｒａｃｔ  ｎｕｍｂｅｒ  ２９７６）によって査定した、カルボプラチン／パクリタキセルによって引き起こされるＣＩＰＮを予防するための、臨床試験にて試験された。これらの研究において、２または４μｇ／ｋｇ  ＬＩＦのいずれかを、カルボプラチン／パクリタキセルの前日に開始して、７日間、毎日、ほぼ同時に与えた。臨床試験の結果によって、ＬＩＦが、試験した用量およびレジメにて、ＣＩＰＮを予防することにおいて、効果を持たないことが示唆された。
【００２３】
したがって、広範囲の化学療法によって引き起こされる、末梢性ニューロパシーを予防する／治療するための、新規の薬物／戦略が必要である。
【発明の開示】
【００２４】
本発明は、化学療法誘発末梢性ニューロパシーの予防および／または治療のための医薬の製造のための、低用量のＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩の使用に関する。
【００２５】
本発明の１つの実施様態において、化学療法誘発末梢性ニューロパシーは、ビンクリスチン、シスプラチン、カルボプラチンまたはタキソールのような、少なくとも１つの化学療法薬剤によって引き起こされる。
【００２６】
本発明のさらなる実施様態において、化学療法薬剤は、カルボプラチンおよびタキソールの混合からなる。
【００２７】
本発明のさらなる実施様態において、ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩の用量は、４〜２１０μｇの範囲、好ましくは７〜１４０μｇの範囲、または約４、７、１４、２８、７０または１４０μｇである。
【００２８】
本発明の１つの実施様態において、ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩は、１つ以上の部位でグルコシル化され、一方、本発明の他の実施様態においては、ＩＬ−６はグルコシル化されない。
【００２９】
本発明のさらなる実施様態において、ＩＬ−６の機能性誘導体は、アミノ酸残基上の１つ以上の側鎖に存在する１つ以上の官能基に結合した、ポリエチレングリコールのような、少なくとも１つの化学部位を含む。
【００３０】
１つの観点において、本発明は、化学療法誘発末梢性ニューロパシーの予防および／または治療のための医薬の製造のための、低用量のＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、活性画分または円順列誘導体を産出する組換え細胞の使用を提供する。
【００３１】
他の観点において、本発明は、化学療法誘発末梢性ニューロパシーの予防および／または治療のための医薬の製造のための、ＩＬ−６のコード配列を含みかつ低用量のＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、活性画分または円順列誘導体を発現可能である、レンチウイルスベクターのような、ベクターの使用を提供する。
【００３２】
さらなる観点において、本発明は、医薬の製造のための、ビンクリスチン、カルボプラチン、タキソールまたは化学療法薬剤の混合物などの少なくとも１つの化学療法薬剤との、好ましくは、カルボプラチンとタキソールの混合物との、ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、または活性画分の組み合わせの使用を提供する。
【００３３】
本発明の１つの実施様態において、前記組み合わせ中の、ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩は１つ以上の部位でグルコシル化される。
【００３４】
本発明の他の実施様態において、前記組み合わせ中の、ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩はグルコシル化されない。
【００３５】
本発明のさらなる実施様態において、前記組み合わせ中のＩＬ−６の機能性誘導体はグルコシル化されず、アミノ酸残基上の１つ以上の側鎖に存在する１つ以上の官能基に結合した、ポリエチレングリコールのような、少なくとも１つの化学部分を含む。
【００３６】
１つの観点において、本発明は、低用量のＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩を、少なくとも１つの化学療法薬剤での処理下または処理前に、患者に投与することを含む、化学療法誘発末梢性ニューロパシーの治療および／または予防方法を提供する。
【００３７】
本発明による治療における、治療および／または予防方法のさらなる実施様態において、患者は、化学療法誘発末梢性ニューロパシーを受ける高リスク患者、または循環中、高レベルのＩＬ−６レセプターを示す患者である。
【００３８】
本発明の方法のさらなる実施様態において、ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩は、毎日、または１週間、少なくとも２週間に３回投与される。
【００３９】
本発明の方法のまたさらなる実施様態において、ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩は、皮下に投与される。
【００４０】
本発明の方法のまたさらなる実施様態において、低用量のＩＬ−６のＩＬ−６投与は、内因性遺伝子活性化（ＥＧＡ）によって、ＩＬ−６を産出している組換え細胞の投与によって、またはＩＬ−６を発現可能な、レンチウイルスのようなベクターによって、影響を受ける。
【００４１】
１つの観点において、本発明は、患者における、化学療法誘発末梢性ニューロパシーを予防するために、低用量のＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分、円順列誘導体または塩を投与することを含む、化学療法薬剤での治療下、または治療の前の、患者への少なくとも１つの化学療法薬剤の用量を増加させるため、および／または投与を延長するための方法を提供する。
【００４２】
本発明の前記方法のさらなる実施様態において、ＩＬ−６は、化学療法薬剤の前、あいだ、および／または後のいずれかで投与される。
【００４３】
本発明の方法のさらなる実施様態において、ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩の用量は、０．０６〜３μｇ／ｋｇ体重、好ましくは、０．１〜２μｇ／ｋｇ体重の範囲であり、または約０．２、０．３、１、２または３μｇ／ｋｇ体重である。
【００４４】
本発明の方法のさらなる実施様態において、ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩の用量は、４〜２１０μｇの範囲、好ましくは７〜１４０μｇの範囲であり、または約４、７、１４、２８、７０または１４０μｇである。
【００４５】
本発明はまた、ビンクリスチン、シスプラチン、カルボプラチンまたはタキソールのような、少なくとも１つの化学療法薬剤、またはカルボプラチンおよびタキソールの混合のようなこれらの混合物との、ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、または活性画分の組み合わせと、薬学的に許容され得る担体を含む、医薬組成物も提供する。
【００４６】
本発明のさらなる実施様態において、医薬組成物中の、ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体、または塩は、１つ以上の部位で、グルコシル化されるか、またはＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体、または塩は、グルコシル化されない。
【００４７】
本発明のさらなる実施様態において、医薬組成物中のＩＬ−６の機能性誘導体は、アミノ酸残基上の１つ以上の側鎖に存在する１つ以上の官能基に結合した、ポリエチレングリコールのような、少なくとも１つの化学部位を含む。
【００４８】
本発明のさらなる実施様態において、医薬組成物はさらに、神経増殖因子（ＮＧＦ）またはグルタミンのような、神経保護薬物を含む。
【００４９】
さらにとりわけ、本発明の１つの実施様態において、ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩の用量は、４〜２１０μｇの範囲、好ましくは７〜１４０μｇの範囲であり、または約４、７、１４、２８、７０または１４０μｇである。
【００５０】
１つの観点において、本発明は、それぞれ、化学療法薬剤を含む１つ以上の容器、ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩を含む１つの容器、および、化学療法誘発末梢性ニューロパシーの予防および／または治療のための、前記化学療法薬剤と、前記ＩＬ−６の投与のための説明書、を含むキットを提供する。
【００５１】
１つの実施様態において、本発明にしたがうキットには、それぞれ１つの化学療法薬剤を含む２つの容器、カルボプラチンを含む１つの容器、およびタキソールを含む他の容器が含まれる。
【００５２】
本発明のキットのさらなる実施様態において、各容器内の、ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩の用量は、４〜２１０ｍｇの範囲、好ましくは７〜１４０μｇの範囲であり、または約４、７、１４、２８、７０または１４０μｇである。
【００５３】
またさらなる実施様態において、本発明のキットにはさらに、神経増殖因子（ＮＧＦ）またはグルタミンのような、神経保護薬物を含む容器が含まれる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５４】
本発明は、化学療法誘発末梢性ニューロパシー（ＣＩＮＰ）の治療および／または予防のための、医薬品の製造のための、低用量のＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩の使用に関する。
【００５５】
現在、末梢性ニューロパシーの治療は、全身性であり、神経への障害に関与している、有益な効果はない。典型的に、ＣＩＰＮは、用量減少によって緩和され、これは、化学療法処置の効果を減少させる。
【００５６】
したがって、本発明は、ＣＩＰＮ発達を予防するため、および／またはいったんＣＩＰＮが確立された場合、薬物の化学療法効果を損なうことなしに、ＣＩＰＮを治療および／または改善するための、実質的な進展、すなわち、低用量のＩＬ−６の使用を示している。さらに、本発明にしたがって、低用量のＩＬ−６を投与することによって、化学療法薬剤の増加が可能でありえ、および／または必要なときに、化学療法を延長することが可能である。たとえば、本発明は、より高濃度の化学療法の投与、および／または、たとえばより耐性および／または浸潤性腫瘍をたたくため、必要なときに現在使用されている濃度および周期数よりも多くの化学療法周期を許容し得る。
【００５７】
したがって、本発明は、ビンカ−アルカロイド類（たとえば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）、白金基礎化合物類（たとえばシスプラチン）、およびタキサン類（パクリタキセルおよびドセタキセル）、カルボプラチン、またはカルボプラチンとパクリタキセルのような、それらの１つ以上の薬剤の組み合わせから選択される、広範囲の化学療法薬剤による、そして低用量のＩＬ−６の投与による、ＣＩＰＮの治療および／または予防に関連する。
【００５８】
本発明は、信頼性のある動物モデルで、低用量のＩＬ−６を投与することが、ＣＩＰＮを予防すること、ならびに、いったんニューロパシーが確立された場合、ＣＩＰＮを治療および／または改善することにおいて効果的である、という発見に基づいている。
【００５９】
たとえば、ＣＩＰＮの動物モデルで実施した実験によって、ＩＬ−６の、化学療法薬剤との同時投与が、化学療法誘発性運動神経／感覚神経欠損、および神経変性を予防することが示された。使用したプロトコールによって、ＩＬ−６投与が、投与のスケジュールにかかわらず、化学療法誘発性ニューロパシーに対して保護したこと、すなわち、毎日投与に対して、一週間に３回が、化合物の神経保護効果の減少を導かなかったことが示された。
【００６０】
さらに、ニューロパシーがすでに確立された動物モデルにおいて実施した実験によって、ＩＬ−６が、化学療法誘発性感覚神経欠損、繊維／神経機能の欠損、ミエリン鞘厚逆転、大／小繊維比の増加を効果的に治療および／または緩和し、および化学療法−治療によって誘導された変性繊維の割合を減少させた、ことが示された。
【００６１】
げっ歯類における、造血因子としての、ヒトＩＬ−６の活性用量が、サルにおいて１０μｇ／ｋｇであるのに対して、５００μｇ／ｋｇ以上であることに注意すべきである（Ｈｅｒｏｄｉｎら、１９９２  Ｂｌｏｏｄ  ８０  （３）６８８）。したがって、ヒトＩＬ−６は、げっ歯類よりも、霊長類において、５０倍以上効果的であると考えられる。したがって、ヒト組換え体ＩＬ−６（ｈｒＩＬ−６）は、げっ歯類においてよりも、ヒトにおいて、５０倍、または１オーダー量より効果的であるか、またはすくなくとも５倍効果的であることが予想される。本実施様態において、ＣＩＰＮにおける陽性の結果が、３〜１０μｇ／ｋｇの範囲の用量にて見られることから、５０、１０および／または５倍低いヒト組換え体ＩＬ−６の用量が、ヒトにおけるＣＩＰＮを予防する／治療するために効果的であると予想される。ヒトにおける好ましい用量は、約０．０６〜３μｇ／ｋｇの範囲、より好ましくは、０．１〜２μｇ／ｋｇの範囲、より好ましくは、約０．２、０．３、１、２および〜３μｇ／ｋｇの用量である。
【００６２】
あるいは、４〜２１０μｇ／患者の範囲、好ましくは７〜１４０μｇの範囲、より好ましくは、約４、７、１４、２８、７０または１４０μｇ  ＩＬ−６／患者の範囲のような、ＩＬ−６の固定低用量を、患者の体重に関係なく投与可能である。
【００６３】
要するに、得られた結果は、ＣＩＰＮにおける低用量ＩＬ−６の、予防的（preventive）、予防的（prophylactic）および／または治療的価値を明らかに示している。得られた結果はまた、低用量のＩＬ−６が、化学療法誘発性ニューロパシーを、４−ＭＣよりも効果的に保護したことを示した。
【００６４】
本明細書で使用するところの語句「治療すること／改善すること（treating／ameliorating）」は、化学療法ニューロパシー、ならびに化学療法誘発性ニューロパシーに付随する症状、疾患または合併症の、１つ以上の症状または原因を、予防すること、阻害すること、弱めること、改善することまたは無効にすること、として理解されるべきである。化学療法誘発性ニューロパシーを「治療する／改善する」場合、本発明にしたがった薬物を、疾患の開始後に与え、「予防（prevention）」は、患者において診られ得る疾患の任意の兆候の前での、薬物の投与に関する。
【００６５】
予防的投与は、長時間にわたりすでに糖尿病を患っている患者、後天性免疫欠損症候群（ＡＩＤＳ）によって、神経因性症状をすでに持つ患者、および遺伝性ニューロパシーの患者または神経毒性化学療法での早期治療を受けた患者などのような、病気であるか、またはＣＩＰＮを受ける高リスクをもつ患者でとりわけ有用である。
【００６６】
ＩＬ−６投与はとりわけ、循環中に、高レベルのＩＬ−６レセプターを示している患者で有用である。
【００６７】
語句「化学療法（chemotherapy）」は、がん細胞を殺すか、より活性を弱くする薬物での治療に関する。
【００６８】
語句「化学療法誘発性ニューロパシー（chemoltherapy-induced neuropathy）」は、化学療法に付随する、または化学療法によって引き起こされる、１つ以上の症状（類）または疾病（類）、または以上のイントロダクションにて詳細に記述したような、神経に影響を与える化学療法の合併症の任意の形態に関する。
【００６９】
本発明の薬物、ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩（「薬物（substance）」は、シスプラチン、ジカルバジン、ストレプトゾシン、シクロホスファミド、カルムスチン、ロムスチン、プロカルバジン、マイトマイシン、シタラビン、メトトレキサート、５−フルオロウラシル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ブレオマイシン、パクリタキセル、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、ダカルバジン、フルダラビン、ヒドロキシウレア、イフォスファミド、メルカプトプリン、ミトタン、ストレプトゾシン、タキソールおよびまたはこれらの２つ以上の薬剤の混合物のような、種々の化学療法薬剤によって引き起こされる、末梢性ニューロパシーにおいて、使用または投与可能である。
【００７０】
本発明の１つの実施様態において、ＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩を、化学療法薬剤が、タキソール、シスプラチンおよびビンクリスチン、およびまたは、カルボプラチンとパクリタキセルのような混合物である場合に、ＣＩＰＮを治療するため、および／または保護するために使用する。
【００７１】
タキソールは、たとえば、約２０〜２５０ｍｇ／ｍ２の範囲で投与可能であり、シスプラチンは、約３０〜１００ｍｇ／ｍ２の範囲で、ビンクリスチンは、約０．５〜２ｍｇ／ｍ２の範囲で、そしてカルボプラチン／パクリタキセルは、１００〜２００μｇ／ｍ２の範囲、好ましくは約１７５μｇ／ｍ２にて使用可能である。化学療法は、１周期〜約６周期で与え、化学療法投与なしで、３〜４週間に分けられ得る。化学療法レジメは，ＷＷＷ．ｏｈａｃｉ．ｃｏｍ／ｐａｌｍ／ｃｈｅｍｏｐａｇｅ．ｈｔｍ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ／ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ｏｆ  ｃｅｎｔｒａｌ  Ｉｌｌｉｎｏｉｓにて見ることができる。
【００７２】
本発明の薬物は、約０．０６〜３μｇ／ｋｇ、より好ましくは、０．１〜２μｇ／ｋｇの範囲、もっとも好ましくは、約０．２、０．３、１、２および〜３μｇ／ｋｇの用量で、本発明にしたがって投与可能である。
【００７３】
あるいは、低用量のＩＬ−６を、たとえば、低用量で、体重に関係なく、７〜１４０μｇ／患者の範囲、好ましくは、約７、２８、７０または１４０μｇＩＬ−６／患者で投与する。
【００７４】
本発明の薬物は、１つ以上の部位でグルコシル化されていてよく、またはグルコシル化されていなくてもよい。
【００７５】
本発明の薬物は、アミノ酸残基上の１つ以上の側鎖に存在する１つ以上の官能基に連結した、少なくとも１つの化学部位を含む、機能性誘導体でありえ、より好ましくは、前記部位は、ポリエチレングリコール部位である。
【００７６】
本発明にしたがった薬物は、本発明の薬物を発現している細胞、および／または、本発明の薬物のコード配列を含むベクター、好ましくはレンチウイルスとして投与し得る。
【００７７】
通常はＩＬ−６の発現にサイレントである細胞内で、ＩＬ−６の内因性産出を、または十分でないＩＬ−６の発現量を誘導する、および／または増強するためのベクターがまた、本発明にしたがって企図される。ベクターは、ＩＬ−６を発現することが望ましい細胞内で機能的である、調節配列を含み得る。そのような調節配列には、プロモーターまたはエンハンサーが含まれる。ついで、調節配列を、相同組み換えによって、ゲノムの正しい座に、したがって、その発現が、誘導または増強される必要がある遺伝子と、前記調節配列を動作可能に連結して、導入する。本技術は通常、「内因性遺伝子活性化（ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｇｅｎｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）」（ＥＧＡ）として呼ばれ、たとえば国際特許第ＷＯ９１／０９９５５号にて記述されている。
【００７８】
本発明はまた、低用量のＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列誘導体または塩を、任意に薬学的に許容され得る担体と一緒に、それを必要とする患者に投与することを含む、ＣＩＰＮを治療する、および／または予防するための方法に関する。
【００７９】
本発明はまた、すでに長時間糖尿病を患っている患者、すでに糖尿病によって、神経因性症状を持つ患者、すでにＡＩＤＳによって神経因性症状を持つ患者、および遺伝性ニューロパシーの患者、または神経毒性化学療法による早期治療を受けている患者などのような、ＣＩＰＮ高リスク患者を治療する方法も提供する。
【００８０】
本発明はまた、循環中のＩＬ−６Ｒレベルが上昇した、白血病、卵巣癌または乳癌の患者のような、がん患者におけるＣＩＰＮを治療および／または予防するための方法も提供する。
【００８１】
本発明の薬物の用量は、毎日、および好ましくは１週間、少なくとも２週間あたり３回投与し得る。
【００８２】
語句「用量（dose）」は、医薬品の規定量のような、一度に投与されるべき量に関する。
【００８３】
本明細書で使用するところの語句「ムテイン（muteins）」は、天然に存在するＩＬ−６の成分の１つ以上のアミノ酸残基が、本来のＩＬ−６と比較して得られた産物の活性を著しく変化することなく、異なるアミノ酸残基によって置換されるか、または欠損するか、または１つ以上のアミノ酸残基が本来のＩＬ−６の配列に加えられる、ＩＬ−６の類似体を意味する。これらのムテインは、公知の合成によって、および／または部位特異的変異導入技術によって、または適切な他の任意の公知の技術によって製造される。
【００８４】
本発明により使用されるムテインには、ストリンジェントな条件下で、ＩＬ−６をコードするＤＮＡまたはＲＮＡにハイブリダイズする、ＤＮＡまたはＲＮＡのような核酸によってコードされるタンパク質が含まれる。語句「ストリンジェントな条件」は、当業者が「ストリンジェント」として従来言及した、ハイブリダイゼーションと、それに続く洗浄条件を意味する。Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、上記、Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，§§６．３および６．４（１９８７，１９９２）、およびＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．Ｃ．，Ｆｒｉｔｓｃｈ，Ｅ．Ｆ．，ａｎｄ  Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｔ．（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照のこと。
【００８５】
限定はせずに、ストリンジェントな条件の例としては、試験下のハイブリッドの計算Ｔｍより１２〜２０℃低い洗浄条件、たとえば、２×ＳＳＣおよび０．５％  ＳＤＳ  ５分間、２×ＳＳＣおよび０．１％  ＳＤＳ  １５分間、０．１×ＳＳＣおよび０．５％  ＳＤＳ  ３７℃にて３０〜６０分間、ついで、０．１×ＳＳＣおよび０．５％  ＳＤＳ  ６８℃にて３０〜６０分間が含まれる。当業者は、ストリンジェントな条件がまた、ＤＮＡ配列の長さ、オリゴヌクレオチドプローブ（１０〜４０塩基など）、または混合オリゴヌクレオチドプローブに依存することを理解する。混合プローブを使用する場合、ＳＳＣのかわりに、塩化テトラメチルアンモニウム（ＴＭＡＣ）を使用することが好ましい。Ａｕｓｕｂｅｌ  上記を参照のこと。
【００８６】
そのような任意のムテインは好ましくは、ＩＬ−６と実質的に同様の、またはよりよい活性を有するような、ＩＬ−６のアミノ酸配列の十分に複製であるアミノ酸配列を有する。
【００８７】
ＩＬ−６の特徴的な活性は、ＩＬ−６受容体のｇｐ８０部分への結合能力および／または肝細胞増殖を誘導能力である。ムテインが、実質的にＩＬ−６受容体のｇｐ８０部分に結合可能であり、および／または肝細胞増殖を誘導可能である限り、実質的にＩＬ−６と同様の活性を有するとみなすことができる。したがって、任意の所定のムテインがＩＬ−６と少なくとも同等の活性を有するかどうかは、肝細胞にそのようなムテインを作用させ、肝細胞の増殖を誘導するかどうかを、たとえばＢｒｄＵまたは標識化メチオニンの取り込みを測定するか、または単に、未処理対照細胞およびＷＴ  ＩＬ−６にて処理した細胞と比較して細胞の数を計測するかによって決定することを含む決まりきった実験によって決定することができる。ＩＬ−６Ｒ／ＩＬ−６キメラのｇｐ１３０への結合を測定するための、酵素免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）型のアッセイが、本明細書で参考文献として完全に組み込まれている国際公開第９９／０２５５２号パンフレットの３９頁、実施例７にて詳細に記述されている。ムテインが、ＧＰ８０のその結合部位に対する、実質的な結合活性を有する限り、ＩＬ−６に対して実質的に同様の活性を有すると考えられ得る。
【００８８】
たとえば、マイクロタイター９６−ウェルプレート（ヌンク（Nunc））を、抗−ヒトｇｐ８０モノクローナル抗体でコートし、５０ｎｇ／ｍｌのｇｐ８０を加える（両方ともＲ＆Ｄシステムズ、ミネアポリスより入手）。リン酸緩衝食塩水中での洗浄の後、ＩＬ−６を、異なるウェルに、０．１〜５０ｎｇ／ｍｌの範囲の異なる濃度で加える。４０℃で一晩インキュベーションした後、ウサギポリクローナル抗−ＩＬ−６を加え、続いて、ホースラディッシュ  ペルオキシダーゼ共役ヤギ抗ウサギＩｇを加え、発色反応によって検出する（シグマ（Sigma）、セントルイス）。
【００８９】
マイクロタイター９６−ウェルプレート（ヌンク（Ｎｕｎｃ））を、抗−ヒトｇｐ８０モノクローナル抗体でコートし、５０ｎｇ／ｍｌのｇｐ８０を加える（両方ともＲ＆Ｄシステムズ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓより）。リン酸緩衝食塩水中での洗浄の後、ＩＬ−６を、異なるウェルに、０．１〜５０ｎｇ／ｍｌの範囲の異なる濃度で、加える。４０℃での一晩のインキュベーションの後、ウサギポリクローナル抗−ＩＬ−６を加え、続いて、ホースラディッシュ  ペルオキシダーゼ共役ヤギ抗ウサギＩｇを加え、発色反応によって検出する（シグマ、セントルイス）。
【００９０】
したがって、任意の所定の変異体が、少なくとも実質的に、ＩＬ−６と同一の活性を有するかどうかは、そのような変異体を、たとえば国際公開第９９／０２５５２号パンフレットの実施例７で記述されたような、単純サンドイッチ結合アッセイにかけ、固定化ｇｐ８０または可溶性ｇｐ８０（ｇｐ８０の細胞外断片）に結合するかしないかを決定することを含む、決まりきった実験によって決定することができる。
【００９１】
好ましい実施様態において、任意のそのようなムテインは、成熟ＩＬ−６Ｒ／ＩＬ−６キメラの配列と、少なくとも４０％の同一性または相同性を有する。より好ましくは、任意のそのようなムテインは、成熟ＩＬ−６の配列に少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％の同一性または相同性を有する。
【００９２】
同一性は、配列を比較することによって決定される、２つ以上のポリペプチド配列間、または２つ以上のポリヌクレオチド配列間の関係を反映する。一般的に、同一性は、比較している配列の長さにわたって、２つのポリヌクレオチドまたは２つのポリペプチドの、それぞれ、ヌクレオチドに対するヌクレオチドの、またはアミノ酸に対するアミノ酸の正確な対応関係を意味する。
【００９３】
実際、正確な対応関係が存在しない配列に関して、「％同一性」が決定され得る。一般的に、比較されるべき２つの配列を、配列間の最大の相関が得られるように並べる。これには、アライメントの程度を高めるために、いずれか１つまたは両方の配列に、「ギャップ」を挿入することが含まれ得る。％同一性は、比較されている各配列の全長にわたって決定されてもよく（いわゆるグローバルアライメント）（これはとりわけ、同一または非常に類似の長さの配列により適している）、またはより短い、定義された長さにわたって決定されてもよい（いわゆるローカルアライメント）（これは等しくない長さの配列に対してより適している）。
【００９４】
２つ以上の配列の同一性および相同性を比較するための方法は、本技術分野でよく知られている。したがって、たとえば、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ，バージョン９．１（Devereux J ら 1984）にて使用可能なプログラム、たとえば、プログラムＢＥＳＴＦＩＴおよびＧＡＰを、２つのポリヌクレオチド配列間の％同一性、および２つのポリペプチド配列間の％同一性および％相同性を決定するために使用し得る。ＢＥＳＴＦＩＴは、Smith および Waterman(1981)の「ローカル相同性」アルゴリズムを使用し、２つの配列間の類似性の最もよい単一領域を発見する。配列間の同一性および／または類似性を決定するための他のプログラムも、本技術分野で公知であり、たとえば、ＢＬＡＳＴプログラムファミリー（Altschul S F ら,1990, Altschul S F ら,1997, www.ncbi.nlm.nih.govにてNCBIのホームページよりアクセス可能）、およびＦＡＳＴＡ（Pearson W R, 1990；Pearson 1988）があげられる。
【００９５】
本発明により使用可能であるＩＬ−６のムテイン、またはそれをコードする核酸には、過度の実験をすることなく、本明細書で提示される教示およびガイドラインに基づいて、当業者によって通常得られ得る、置換ペプチドまたはポリヌクレオチドのような、実質的に対応する配列の限定された組が含まれる。
【００９６】
本発明により、ムテインに対する好ましい変化は、「保存的（conservative）」置換として知られるものである。ＩＬ−６の保存的アミノ酸置換には、充分に類似した物理化学的特性を有し、かつ群のメンバー間での置換が分子の生物学的機能を保存している一群内の同義アミノ酸が含まれ得る（Grantham, 1974）。特に、挿入または欠失が数個のアミノ酸（たとえば３０個未満、好ましくは１０個未満）のみを伴い、かつ機能的コンホメーションに必須のアミノ酸（たとえば、システイン残基）が除去または置換されない場合、アミノ酸の挿入および欠失もまた、その機能を改変することなく前記規定配列において行なわれ得ることは明白である。かかる欠失および／または挿入によって生じるタンパク質およびムテインは、本発明の範囲に含まれる。
【００９７】
好ましくは、同義アミノ酸群は表Ａに規定されるものである。より好ましくは、同義アミノ酸群は表Ｂに規定されるものであり、最も好ましくは、同義アミノ酸群は表Ｃに規定されるものである。
【００９８】
【表１】
2007534746.tif 000003
【００９９】
【表２】
2007534746.tif 000004
【０１００】
【表３】
2007534746.tif 000005
【０１０１】
本発明における使用のため、ＩＬ−６ポリペプチドのムテインを得るのに使用され得るタンパク質内でのアミノ酸置換の生成の例としては、任意の公知の方法の工程（たとえば、Markらの米国特許第4,959,314号、同第4,588,585号および同第4,737,462号；Kothsらの同第5,116,943号、Namenらの同第4,965,195号；Chongらの同第4,879,111号；およびLeeらの同第5,017,691号に示されるものなど）ならびに米国特許第4,904,584号（Shawら）に示されたリジン置換タンパク質が挙げられる。
【０１０２】
本発明に連結して有用である、ＩＬ−６の特定のムテインが記述されている（国際特許第ＷＯ９４０３４９２Ａ１号）。さらに、欧州特許第ＥＰ６６７８７２Ｂ１号は、野生型ＩＬ−６上で生物学的活性が改善された、ムテインＩＬ−６を記述している。これに加えて、欧州特許第ＥＰ０６５６１１７号は、ＩＬ−６のスーパーアゴニストを単離する方法を記述している。ムテインまたはスーパーアゴニストは、本発明にしたがって使用し得る。
【０１０３】
用語「融合タンパク質」は、ＩＬ−６、またはそのムテインもしくは断片を、別のタンパク質と融合された状態で含有するポリペプチドをいい、これは、体液中で長期の滞留時間を有する。ＩＬ−６は、したがって、たとえば、免疫グロブリンまたはその断片と融合されていてもよい。
【０１０４】
本明細書で使用するところの「機能性誘導体」は、残基の側鎖またはＮまたはＣ末端基として存在する官能基から、当該技術分野において公知の手段により調製され得る、ＩＬ−６の誘導体ならびにそのムテインおよび融合タンパク質を包含し、薬学的に許容され得る状態を維持している（すなわち、ＩＬ−６の活性に実質的に類似したタンパク質の活性を破壊せず、かつこれを含有する組成物に対して毒性を付与しない）限り、本発明に含まれる。
【０１０５】
このような誘導体としては、たとえば、ポリエチレングリコール側鎖が挙げられ得、これは、抗原性部位をマスクし、体液中でのＩＬ−６の滞留時間を延長し得る。他の誘導体としては、カルボキシル基の脂肪族エステル、アンモニアもしくは第一級または第二級アミンとの反応によるカルボキシル基のアミド、アシル部分と形成されるアミノ酸残基の遊離アミノ基のＮ−アシル誘導体（たとえば、アルカノイルまたは炭素環式アロイル基）またはアシル部分と形成される遊離ヒドロキシル基のＯ−アシル誘導体（たとえば、セリル残基もしくはスレオニル残基のもの）があげられる。
【０１０６】
本発明による「活性画分」は、たとえば、ＩＬ−６の画分であり得る。語句画分は、分子の任意のサブセット、すなわち、望む生物額的活性を持つより短いペプチドを意味する。画分は、ＩＬ−６分子のいずれかの末端からアミノ酸残基を除去すること、およびｇｐ８０および／またはｇｐ１３０に結合するその特性に関して、得られた画分を試験することによって簡単に調製し得る。ポリペプチドのＮ−末端またはＣ−末端のいずれかから、一時点で、１つのアミノ酸を除去し、望む生物学的活性を維持する断片を決定するためのプロテアーゼが、従来の実験にのみ関与する。
【０１０７】
ＩＬ−６、そのムテインおよび融合タンパク質の活性画分のように、前記画分が、本質的にＩＬ−６に対する本質的に同様の活性、たとえばｇｐ８０および／またはｇｐ１３０のＩＬ−６結合部位に結合するという条件で、本発明は、さらに、単独または関連した分子と一緒に、タンパク質のポリペプチド鎖の任意の画分または前駆体、またはそれに連結した残基、たとえば、糖またはリン酸残基、またはそれらによるタンパク質分子または糖残基の凝集物をカバーする。
【０１０８】
本明細書において、用語「塩」は、ＩＬ−６分子またはそのアナログのカルボキシル基の塩およびアミノ基の酸付加塩の両方をいう。カルボキシル基の塩は、当該技術分野において公知の手段により形成され得、無機塩（たとえば、ナトリウム、カルシウム、アンモニウム、鉄または亜鉛の塩など）、および有機塩基との塩（たとえば、トリエタノールアミンなどのアミン、アルギニンまたはリジン、ピペラジン、プロカインなどと形成されるものなど）があげられる。酸付加塩としては、たとえば、無機酸（たとえば、塩酸または硫酸など）との塩および有機酸（たとえば、酢酸またはシュウ酸など）との塩があげられる。もちろん、任意のかかる塩は、ＩＬ−６の生物学的活性（たとえば、ｇｐ８０および／またはｇｐ１３０のＩＬ−６結合部位への結合能力）を維持していなければならない。
【０１０９】
ＩＬ−６の「アイソフォーム」は、ｇｐ８０および／またはｇｐ１３０に結合することができるタンパク質、または選択的スプライシングによって生成し得るその断片である。
【０１１０】
用語「円順列誘導体」は、本明細書で使用する場合、末端同士を直接またはリンカーを介してのいずれかで互いに結合して環状分子を作製し、次いで該環状分子を別の位置で開裂して末端が元の分子の末端と異なる新たな線状分子が作製された線状分子をいう。円順列誘導体のものとしては、その構造が、環化した後開裂された分子と等価である分子が挙げられる。したがって、円順列誘導体分子は、線状分子として最初から合成され、環化工程および開裂工程を経ないものであってもよい。円順列誘導体の製造は、国際公開第９５／２７７３２号パンフレットに記載されている。
【０１１１】
本発明の１つの実施様態において、本発明の薬物は、１つ以上の部位でグルコシル化される。
【０１１２】
本発明によるＩＬ−６は、酵母細胞、昆虫細胞、細菌などのような、適切な任意の原核または真核細胞中で産出され得る。１つの実施様態において、ＩＬ−６は、国際公開第９９／０２５５２号パンフレットにて記述されたような、遺伝子工学的に改変されたＣＨＯ細胞などの哺乳動物細胞中で産出される。
【０１１３】
本発明のさらなる実施様態において、本発明の物質はグルコシル化されない。有利には、分子はついで、グリコシル残基は合成することができないが、通常、高い収率で組み換えタンパク質を産生する細菌細胞内で産出することができる。非グルコシル化ＩＬ−６の産生は、たとえば、欧州特許第ＥＰ５０４７５１Ｂ１号にて詳しく記述されている。
【０１１４】
またさらなる実施様態において、本発明による物質には、免疫グロブリン融合体が含まれ、すなわち、本発明による分子が、免疫グロブリンのすべて、または一部分に融合する。免疫グロブリン融合タンパク質の作製方法は、たとえば、国際公開第０１／０３７３７号パンフレットにて記述されたもののように、本技術分野でよく知られている。当業者は、本発明の得られた融合タンパク質が、ＩＬ−６の生物学的活性を維持することを理解するであろう。得られた融合タンパク質は、理想的に、長期間の体液中の滞留時間（半減期）、特異的活性の増加、発現レベルの増加、または融合タンパク質の精製を容易にするなどの改善された特性を持つ。
【０１１５】
好ましくは、本発明による物質はＩｇ分子の定常領域に融合される。たとえば、ヒトＩｇＧ１のＣＨ２およびＣＨ３ドメインのような重鎖領域に融合され得る。たとえば、ＩｇＧ2またはＩｇＧ4アイソフォーム、またはＩｇＭまたはＩｇＡのような他のＩｇクラスなどのＩｇＧ分子の他のアイソフォームも本発明による融合タンパク質の産生に適している。融合タンパク質は、単量体または多量体、ヘテロ−またはホモ多量体であり得る。
【０１１６】
本発明による物質の機能性誘導体は、安定性、半減期、バイオアベイラビリティー、ヒト体によるトレランスまたは免疫原性のような、タンパク質の特性を改善するために、ポリマーに連結してもよい。
【０１１７】
したがって、本発明の好ましい実施様態は、アミノ酸残基上の１つ以上の側鎖に存在する１つ以上の官能基に連結した、少なくとも１つの部分を含む、本発明による薬物の機能性誘導体に関する。
【０１１８】
非常に好ましい実施様態は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に連結した本発明の薬物に関連する。ＰＥＧ化は、たとえば、国際公開第９２／１３０９５号パンフレットにて記述されたもののような、公知の方法によって実施し得る。
【０１１９】
１つの実施様態において、本発明の薬物は、０．０６〜３μｇ／ｋｇ体重の範囲の用量で投与される。本発明の好ましい実施様態において、薬物は毎日投与される。さらに好ましい実施様態において、薬物は一週間あたり３回投与される。またさらに好ましい実施様態において、薬物は一週間に一回投与される。
【０１２０】
「薬学的に許容され得る」の定義は、活性成分の生物学的活性の有効性を妨げず、かつ投与対象の宿主に対して毒性でない任意の担体を包含することを意味する。たとえば、非経口投与では、薬物は、ビヒクル（たとえば、生理食塩水，デキストロース溶液，血清アルビミンおよびリンガー溶液）中にて注射用の単位投薬形態に製剤化され得る。
【０１２１】
１つの実施様態において、本発明は、ＩＬ−６またはそのアイソフォーム、ムテイン、融合タンパク質、機能性誘導体または断片と、１つ以上の化学療法薬剤との組み合わせを含む医薬組成物を提供する。
【０１２２】
薬物は、それを必要とする患者に、種々の様式で投与され得る。投与経路としては、肝臓内、皮内、経皮（たとえば、低速放出製剤にて）、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、経口、硬膜外、局所および鼻腔内経路が挙げられる。任意の他の治療上有効な投与経路が使用され得、たとえば、上皮または内皮の組織からの吸収、またはＩＬ−６をコードするＤＮＡ分子を患者に投与し（たとえば、ベクターにより）、インビボでＩＬ−６の発現および分泌を引き起こす遺伝子療法によるものである。加えて、ＩＬ−６は、生物学的に活性な薬剤の他の成分（たとえば、薬学的に許容され得る界面活性剤、賦形剤、担体、希釈剤およびビヒクルなど）と共に投与してもよい。
【０１２３】
薬物を種々の方法において、それを必要とする患者に投与可能である。投与経路は、肝臓内、皮内、経皮（たとえば、持続放出処方）、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、経口、硬膜外、局所および鼻腔内経路が含まれる。たとえば、内皮または外皮組織を介した吸収、またはＩＬ−６がインビボで発現し、分泌させる、ＩＬ−６をコードしているＤＮＡを（たとえばベクターを介して）患者に投与する、遺伝子治療によってのような、任意の他の治療的に効果的な投与経路を使用可能である。さらに、薬物を、薬学的に許容され得る界面活性剤、ビヒクル、担体、希釈液およびビヒクルのような、生物学的に活性や薬剤の他の成分と一緒に投与可能である。
【０１２４】
非経口（たとえば、静脈内、皮下、筋肉内）投与のためには、ＩＬ−６は、薬学的に許容され得る非経口用ビヒクル（たとえば、水、生理食塩水、デキストロース溶液）ならびに等張性を維持する添加剤（たとえば、マンニトール）または化学的安定性を維持する添加剤（たとえば、保存剤およびバッファー）と組合せて、液剤、懸濁剤、乳剤または凍結乾燥した散剤として製剤化され得る。製剤は、一般的に用いられる手法によって滅菌する。
【０１２５】
本発明のさらなる目的は、低用量のＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分、円順列誘導体または塩を、任意には薬学的に許容され得る担体とともに、必要とする患者に投与することを含む、ＣＩＰＮの治療および／または予防方法を提供することである。
【０１２６】
個体に、単回用量または反復用量として投与される投薬量は、種々の要因（薬物の薬物動態学的性質、投与経路、患者の状態および特徴（性別、年齢、体重、健康状態、体格）、症状の程度、併用療法、処置の頻度ならびに所望の効果など）に依存して変化する。確立された投薬範囲の調整および操作は、充分、当業者の能力の範囲である。
【０１２７】
語句「投薬量（ｄｏｓａｇｅ）」は、投与の頻度および回数の決定および調節に関する。
【０１２８】
本発明は、ＣＩＰＮの治療／予防のための医薬の製造における、低用量のＩＬ−６、そのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分、または円順列誘導体の使用に関する。
【０１２９】
低用量の薬物は、化学療法の前、あいだおよび／または後に投与可能である。低用量の薬物は、ＣＩＰＮが確立する前に予防的に投与してもよく、または確立したＣＩＰＮを治療するために投与してもよい。
【０１３０】
本発明は、化学療法誘発末梢性ニューロパシーの予防および／または治療のための、それぞれ１つの化学療法薬剤を含む１つ以上の容器；ＩＬ−６、またはそのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分、円順列誘導体または塩を含む１つの容器；および前記化学療法薬剤と前記ＩＬ−６の投与のための取扱説明書を含むキットにも関する。
【０１３１】
前記キットは、それぞれが１つの化学療法薬剤を含む２つの容器を含み得、たとえば、１つの容器がカルボプラチンを含有しおよびもう１つがタキソールを含有し得る。
【０１３２】
各容器内の、ＩＬ−６、またはそのムテイン、アイソフォーム、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分、円順列誘導体または塩の量は、４〜２１０μｇ、７〜１４０μｇの範囲、または約４、７、１４、２８、７０または１４０μｇであり得る。
【０１３３】
本発明は、さらに神経増殖因子（ＮＧＦ）およびグルタミンのような神経保護薬物含有容器を含む、前記キットを検討する（contemplates）。
【０１３４】
本発明を充分に記載してきたが、当業者には、広範な均等のパラメータ、濃度および条件の範囲内で、過度の実験をすることなく、本発明の精神および範囲を逸脱することなく本発明を行ない得ることが認識されよう。
【０１３５】
本発明を、その特定の実施形態に関して記載したが、さらなる改良が可能であることを理解されたい。本特許出願明細書は、一般的に本発明の原理にしたがう本発明の任意の変形、使用または適応を包含し、本発明が属する技術分野において既知または慣用的な実務の範囲内である場合、および以下の添付の特許請求の範囲に記載された前述の本質的な特徴に適用され得る場合、本開示からのかかる逸脱を含むものとする。
【０１３６】
本明細書で引用した参考文献、たとえば、学術論文もしくは要約、公開もしくは未公開の米国もしくは外国の特許出願、発行済の米国もしくは外国の特許、または任意の他の参考文献などは、引用により本明細書に完全に組み込まれる（引用した参考文献に示されたすべてのデータ、表、図および文章を含む）。加えて、参考文献内に引用された参考文献の全内容もまた、引用により本明細書に完全に組み込まれる。
【０１３７】
公知の方法の工程、従来の方法の工程、公知の方法または従来の方法を参照することは、決して、本発明の任意の側面、説明または実施態様が関連技術において開示、教示または示唆されているという是認（admission）ではない。
【０１３８】
特定の実施様態の以上の記述によって、完全に、他ではなく、本発明の一般的な性質が、（本明細書で引用した参考文献の内容を含む）当業者の知識を適用することによって、余計な実験なしに、本発明の一般的なコンセプトから逸脱することなしに、そのような特定の実施様態への種々の適用のために、簡単に改変および／または適合可能である。したがって、そのような適合および改変が、本明細書で示した協議およびガイダンスに基づいて、開示された実施様態の等価のものの範囲を意味することの範囲内であることが意図される。本明細書の語法または専門用語は、記述の目的であって、制限の目的ではなく、本明細書の専門用語または語法が、当業者の知識と組み合わせて、本明細書で示された協議およびガイドラインに関して、当業者によって解釈されるべきものであることが理解されるべきである。
【０１３９】
次に、以下の非限定的な実施例および添付の図面にしたがって本発明をより詳細に説明する。
【実施例】
【０１４０】
実施例１：ビンクリスチン誘発ニューロパシー、動物および薬物投与
ビンクリスチン誘発ニューロパシーは、混合型のニューロパシー（すなわち、感覚神経および運動神経関連ニューロパシー）である。Ｂｏｙｌｅと共同研究者ら（Ｂｏｙｌｅら、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．１９９６  Ｏｃｔ；２７９（１）：４１０−５）は、ビンクリスチンニューロパシーのラットモデルを開発し、そこで、行動試験（それぞれテール−フリックおよびロータロッド行動）によって測定したような感覚神経および運動神経末梢欠損が、任意の先に記述されたものよりも、ヒトでの状態をより近く象徴すると報告された。このビンクリスチン−誘発ニューロパシーのモデルを、ＩＬ−６がビンクリスチン−誘発ニューロパシーから保護可能であるかどうかを調査するために使用した。
【０１４１】
実験は、１０週齢雌Ｄａｒｋ  Ａｇｏｕｔｉラット（Ｊａｎｖｉｅｒ，Ｌｅ  Ｇｅｎｅｓｔ−Ｓｔ−Ｉｓｌｅ、フランス）を用いて実施した。ラットを無作為に以下のように７つの実験群にわけた。（ａ）生理食塩水中０．０２％  ＢＳＡのＩＰ注射を受けるビヒクル対照群（ｎ＝１０）；（ｂ）生理食塩水中０．０２％ＢＳＡの皮下（ＳＣ）注射で毎日投与される、ビンクリスチン−処置群（ｎ＝１０）；（ｃ）０．３、１、３または１０μｇ／ｋｇにて、ヒト組換えＩＬ−６（実施例２３）のＳＣ注射を毎日投与される、ビンクリスチン−処置ラットの４つの異なる群（各群ｎ＝１０）；および（ｄ）４−メチルカテコール（４−ＭＣ）の腹腔内（ＩＰ）注射を毎日受けるビンクリスチン−処置群。４−ＭＣは、確立された神経保護作用を有する標準化合物であり、１０μｇ／ｋｇの用量で使用した（ｎ＝１０）。
【０１４２】
動物を、ケージあたり２匹で飼い、えさおよび水が自由に得られる状態で、制御した温度（２１〜２２℃）、および逆明暗周期（１２時間／１２時間）の部屋内で維持した。
【０１４３】
ビンクリスチン（トクリス（Tocris）、Ｉｌｌｋｉｒｃｈ、フランス）を、０日〜５日目、８日〜１２日目および１５日〜１６日目に、０．１５ｍｇ／ｋｇの用量で、ビンクリスチン溶液を注射することによって与えた。ビンクリスチン溶液（０．０３ｍｇ／ｍｌ）は生理食塩水中で調製した。
【０１４４】
ＩＬ−６を、０．０２％  ＢＳＡを含む生理食塩水中で希釈し、ビンクリスチン投与の第１日から、実験の最後まで、毎日皮下経路にて投与した。
【０１４５】
４−ＭＣ（先のページを参照のこと）を生理食塩水中で希釈し、ビンクリスチン投与の第１日から、試験の最後まで、毎日ＩＰ経路を介して注射した。
【０１４６】
体重におけるビンクリスチンの効果を調査した。図１は、ビンクリスチンで処置した動物が、対照群よりも、有意に軽い体重を示すことをあらわしている［Ｆ（６，２１０）＝７．１４４およびｐ＜０．００１、繰り返し測定ＡＮＯＶＡ］。たとえば、ビヒクルで処理したビンクリスチン中毒動物は、ビンクリスチン投与の完了の時点で、その体重の約１０％を失った。しかしながら、ＩＬ−６の投与にかかわらず、ビンクリスチン治療にかけた群間では、有意な差は検出されなかった。いったんビンクリスチンを停止すると、動物はすぐに成長した。
【０１４７】
実施例２：ビンクリスチン仲介運動神経協調障害を予防する／減少させることにおける、ＩＬ−６同時投与の効果
ビンクリスチンによる運動神経協調の障害、およびＩＬ−６同時投与の効果を査定するために、ａ、生理食塩水中０．０２％ＢＳＡのＩＰ注射を受けるビヒクル対照ラット群（ｎ＝１０）；（ｂ）生理食塩水中０．０２％ＢＳＡのＳＣ注射にて、毎日処置したビンクリスチン−処置群（ｎ＝１０）（実施例１）；（ｃ）０．３、１、３または１０μｇ／ｋｇの用量にて、ＩＬ−６のＳＣ注射にて毎日投与される、ビンクリスチン−処置ラットの４つの異なる群（以下を参照のこと）（各群ｎ＝１０）；および（ｄ）１０μｇ／ｋｇの用量にて、４−ＭＣのＩＰ注射で毎日投与したビンクリスチン−治療群（ｎ＝１０）を、走行試験にてモニタした（実施例１６）。
【０１４８】
図２は、対照、ビンクリスチン−処置およびＩＬ−６処置動物群における、走行試験の結果を要約している。結果は、各実験動物がロッドを横断するために必要な時間を示している。
【０１４９】
ビンクリスチン投与の２および３週間後、未処置対照ラットと比較して、パフォーマンスが有意に減少した。
【０１５０】
ＩＬ−６と同時投与したラットは、ビンクリスチンのみ投与したラットと比較して、より早くロッドを横断した。ＩＬ−６の有益な効果が、試験したＩＬ−６の用量すべてで観察され、０．３、１、３または１０μｇ／ｋｇが、中毒後、２および３週間で観察された。
【０１５１】
したがって、走行試験で得られた結果によって、試験したすべてのＩＬ−６用量、０．３、１、３または１０μｇ／ｋｇで、ＩＬ−６の同時投与が、ビンクリスチンによって誘発される運動神経協調障害を予防することが示される。
【０１５２】
実施例３：ビンクリスチン−誘導傷害受容欠損（nociception loss）におけるＩＬ−６の効果
ラットにおけるビンクリスチンによって誘導された感覚神経欠損（すなわち傷害受容欠損）、およびＩＬ−６同時投与の効果を評価するために、ａ、生理食塩水中０．０２％ＢＳＡのＩＰ注射を受けるビヒクル対照ラット群（ｎ＝１０）、（ｂ）生理食塩水中０．０２％ＢＳＡのＳＣ注射にて、毎日処理したビンクリスチン−処理群（ｎ＝１０）（実施例１）、（ｃ）０．３、１、３または１０μｇ／ｋｇにて、ヒト組換え体ＩＬ−６のＳＣ注射にて毎日投与される、ビンクリスチン−治療ラットの４つの異なる群（各群ｎ＝１０）。および（ｄ）１０μｇ／ｋｇにて、４−ＭＣのＩＰ注射で、毎日投与したビンクリスチン−治療群（ｎ＝１０）を、実施例１５で記述したように、ホットプレート試験にてモニタした。
【０１５３】
ホットプレート試験の結果を、図３で要約している。ビンクリスチン−治療群において、対照未処理群のラットと比較して、熱に対する第一反応の遅延が観察された。第一反応の遅延は、治療開始後３および５週間で有意であった。
【０１５４】
試験したすべての用量にて、ＩＬ−６の同時投与が、処理開始後５週間で、痛覚を有意に予防し、また、ＩＬ−６の予防的傾向が、実験を通して観察されえた。
【０１５５】
４−ＭＣは、ラットにおける、ビンクリスチン−誘導傷害受容欠損において、主要な保護効果を持つようには見られなかった。
【０１５６】
したがって、ホット試験プレートで得られた結果は、試験したすべての用量、０．３、１、３または１０μｇ／ｋｇで、ＩＬ−６の同時投与が、ラットにおけるビンクリスチン−誘導傷害受容欠損から保護したことを示している。ホットプレート試験はまた、ＩＬ−６が、４−ＭＣよりも、ラットにおけるビンクリスチン−誘導傷害受容欠損より、保護することも示した（図３）。
【０１５７】
実施例４：電気生理学的試験（筋電図検査またはＥＭＧ）は、ビンクリスチン−誘発ニューロパシーに対する、ＩＬ−６の保護効果を示す
行動試験と平行して、実施例１７で記述したように、電気生理学的試験を実施して、ＩＬ−６を同時投与したラットと比較して、ビンクリスチン−投与ラットにおける繊維／神経機能を評価した。
【０１５８】
（実施例１７で記述したように試験した）Ｍ波振幅における有意な減少が、すでにビンクリスチン投与の２週間後に検出され得る（図４）。動物は、対照未処理動物と比較して、約２０％の振幅を失った。振幅欠損が、ビンクリスチンを停止した後でさえも維持された。
【０１５９】
試験したすべてのＩＬ−６用量で、ＩＬ−６との同時投与が、Ｍ派振幅のビンクリスチン−誘導欠損を予防することが示され、１〜１０μｇ／ｋｇの用量で使用したＩＬ−６が、完全にＨ波振幅を予防した。
【０１６０】
４−ＭＣとの同時投与が、一時的にのみ、Ｍ派振幅の欠損を保護することが観察され、一方で、３〜１０μｇ／ｋｇ  ＩＬ−６が、実験全体にわたって安定であった。
【０１６１】
図５で示したように、化合物筋肉活性電位（ＣＭＡＰ）潜時における最初の変化が、ビンクリスチン処理を停止した後にのみ検出された。
【０１６２】
ビンクリスチン−誘導ＣＭＡＰ潜時は、試験したすべての濃度０．３〜１０μｇ／ｋｇにて、ＩＬ−６の同時投与（ｐ＜０．０５；ダネット検定）によって減少したことが示された。１０μｇ／ｋｇ  ＩＬ−６と同時投与したラットは、実験を通して、それらのＣＡＭＰ潜時を完全に予防した。
【０１６３】
感覚神経伝導速度（ＳＮＣＶ）における初期変化が、ビンクリスチンの停止の際（またはビンクリスチン投与後２週間で  図６）検出された。その時点で、未処理対照ラットにおけるそれと比較して、ＳＮＣＶのわずかな減少が観察された。ビンクリスチンの効果は、ビンクリスチン処理開始の５週間後に有意になり始め、これは、約１０ｍ／ｓの欠損を示している。
【０１６４】
ＳＮＣＶの完全な復旧が、１〜１０μｇ／ｋｇ  ＩＬ−６で同時投与した、ビンクリスチン処理動物群で観察された。
【０１６５】
したがって、電気生理学的試験の結果は、試験したすべてのＩＬ−６用量、０．３、１、３および１０μｇ／ｋｇで、ＩＬ−６との同時投与が、ビンクリスチン−誘導繊維／神経機能欠損に対して保護したことを示している。電気生理学的試験はまた、ＩＬ−６が、４−ＭＣよりも、ビンクリスチン−誘導繊維／神経機能欠損に対して、より保護を与えることを示した（図４）。
【０１６６】
実施例５：形態学的解析ビンクリスチン−誘発ニューロパシーに対する、ＩＬ−６の保護効果を示す
形態学的解析を、実験の完了時に、実施例１８で記述したように実施し、ビンクリスチンで処理したラット、およびＩＬ−６と同時投与したラットにおいて、繊維および軸索直径およびミエリン厚でおこる形態学的変化を調査した。
【０１６７】
図７で示したように、ビンクリスチン処理ラットから回収した坐骨神経は、対照未処理標本と比較して、繊維直径の有意な減少を示した。用量１〜１０μｇ／ｋｇでのＩＬ−６との同時投与によって、ビンクリスチン−誘導繊維収縮が予防された。ビンクリスチン−誘導繊維収縮はまた、４−ＭＣ治療によっても保護された。
【０１６８】
軸索の直径が、ビンクリスチン処理ラットで有意に減少した（図８）。０．３〜１０μｇ／ｋｇの用量でのＩＬ−６の同時投与が、ビンクリスチンによる軸索直径の減少を、有意に減らし／予防した。
【０１６９】
４−ＭＣ治療が、ビンクリスチンによる軸索直径の減少を、有意に減らし／予防した。
【０１７０】
ミエリン厚が、対照未処理ラットと比較して、ビンクリスチン−処理で、軸索において、有意に減少した。
【０１７１】
１〜１０μｇ／ｋｇの用量でのＩＬ−６との同時投与が、ビンクリスチン−誘導ミエリン欠損を減少させ／予防した（図９）。
【０１７２】
変性した繊維の割合をまた、対照、ビンクリスチンおよびビンクリスチン−ＩＬ−６投与ラットから回収した試料中でモニタした（図１０）。ビンクリスチン処理ラットの試料から回収した変性した繊維の割合は、対照ラットからの試料中のものよりも、２倍高かった。さらに、ビンクリスチン処理群での有髄繊維の割合は、対象未処理群でのものよりも少なかった。
【０１７３】
ＩＬ−６（０．３〜１０μｇ／ｋｇ）または４−ＭＣとの同時投与が、ビンクリスチン処理ラットでの、変性繊維の割合を減少させることがわかった。
【０１７４】
したがって、上記形態学的解析によって、試験したすべての用量、０．３、１、３および１０μｇ／ｋｇでのＩＬ−６との同時投与が、ビンクリスチン−誘導神経変性を効果的に予防／減少させ、とりわけ、繊維および軸索直径の減少、ミエリン厚の減少、および繊維の変性を予防したことが示されている。
【０１７５】
皮膚の５〜１０ｍｍ直径面積を、後ろ足からパンチ−生検した。皮膚試料をすぐに、４℃にてパラホルムアルデヒド中で一晩固定化し、冷凍保存のために、０．１Ｍ  ＰＢＳ中３０％  スクロース中でインキュベート（一晩）し、ＯＣＴ中に埋包し、解凍まで−８０℃で冷凍した。ついで、５０μｍ−厚凍結切片を、クリオスタットにて、皮膚の表面に垂直に切断した。遊離浮遊切片を、４℃にて、ウサギ抗−タンパク質遺伝子産物９．５（１：１００００、Ｕｌｔｒａｃｌｏｎｅ，Ｉｓｌｅ  ｏｆ  Ｍａｎ，ＵＫ）の浴中で７日間インキュベートした。次いで切片を、ＡＢＣペルオキシダーゼ法にしたがって、免疫応答性を明らかにするために処理した。簡単に記すと、ビオチン化抗−ヤギ抗体（１：２００）で、１時間インキュベートし、ついで、室温にて、アビジンビオチン化複合体中で３０分間インキュベートした。ペルオキシダーゼ活性を、ＤＡＢシステムを用いて視覚化した。ついで切片を、エオシンまたはヘマトキシリンにて対比染色した。切片を脱水し、バイオクリアで洗浄し、エウキット上にマウントした。３つの顕微鏡視野の皮膚神経の数を、’４０倍率視野下、マニュアルで計数した。ビンクリスチン中毒は、表皮神経線維の密度の、５０％以上の減少を誘導した。皮膚生検が、ヒトにおけるニューロパシーをモニタする種々の技術の１つである。本実験の結果によって、ビンクリスチン中毒が、皮膚繊維の密度の大きな減少に関連することが示唆され、これは、臨床条件で起こっているものと似ている。１０μｇ／ｋｇ  ＩＬ−６での処理が、皮膚繊維欠損の症状を完全に予防した（データは示していない）。
【０１７６】
実施例６：シスプラチン誘発ニューロパシー、動物および薬物投与
Ｈｏｌｍｅｓおよびその共同研究者ら（Ｈｏｌｍｅｓら、Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｓｃｉ．１９９８  Ｄｅｃ；４６（２）：３４２−５１）によって開発された、シスプラチン誘発ニューロパシーの信頼性のある動物モデルを使用して、シスプラチン誘発ニューロパシーにおけるＩＬ−６同時投与の効果を調査した。ラットにおけるシスプラチン−誘発ニューロパシーが、臨床条件の写しであると記述されてきている。実際、（ヒトで見られるような）軸索変性の行動および電気生理学的相関が、シスプラチンニューロパシーのラットモデルにおいてすでに報告されている（Ｈｏｌｍｅｓら、１９９８）。
【０１７７】
１０週齢メスＤａｒｋ  Ａｇｏｕｔｉラット（Ｊａｎｖｉｅｒ，Ｌｅ  Ｇｅｎｅｓｔ−Ｓｔ−Ｉｓｌｅ，Ｆｒａｎｃｅ）を、無作為に以下のように７つの実験群にわけた。（ａ）生理食塩水−０．０２％  ＢＳＡ（重量／容量）の無菌溶液を注射した、ビヒクル対照群（ｎ＝１０）。（ｂ）生理食塩水−０．０２％ＢＳＡの無菌溶液を注射した、シスプラチン−中毒化群（ｎ＝１０）。（ｃ）０．３、１、３または１０μｇ／ｋｇの４つの異なる用量での、ＩＬ−６化合物の毎日ＳＣ注射を受ける動物からなる、４つの治療−シスプラチン−中毒化群群（ｎ＝１０）。および（ｄ）１０μｇ／ｋｇでの、４−ＭＣの毎日ＩＰ注射を受ける、４−メチルカテコール（４−ＭＣ）処理、シスプラチン−中毒化群（ｎ＝１０）。
【０１７８】
動物を、グループで飼い（ケージあたり２匹）、えさおよび水が自由に得られる状態で、制御した温度（２１〜２２℃）、および逆明暗周期（１２時間／１２時間）の部屋内で維持した。すべての実験を、研究所ガイドラインにしたがって実施した。
【０１７９】
シスプラチン（シグマ、Ｌ‘Ｉｓｌｅ  ｄ’Ａｂｅａｕ  Ｃｈｅｓｎｅｓ，Ｆｒａｎｃｅ）を、４週間のあいだ、２ｍｇ／ｋｇの用量にて一週間に二回、腹腔内に注射することによって誘導した。薬物を、塩化ナトリウムの０．９％無菌水溶液中に希釈した。
【０１８０】
ＩＬ−６を、生理食塩水−０．０２％  ＢＳＡの無菌溶液中で希釈し、シスプラチン投与の第一日から、実験の最後まで、毎日皮下経路にて投与した。
【０１８１】
４−ＭＣを、塩化ナトリウムの０．９％無菌水溶液中で希釈し、シスプラチン投与の第一日から、試験の最後まで、毎日、ＩＰ経路を介して注射した。
【０１８２】
体重におけるシスプラチンの効果を調査した。図１１は、シスプラチンで処理した動物が、対照群よりも、有意に軽い体重を示すことをあらわしている［ｐ＜０．００１］。ＩＬ−６の投与にかかわらず、シスプラチンの投与が、動物の成長の明らかな阻害を誘導することも注目される。たとえば、ビヒクルで処理したシスプラチン中毒動物は、シスプラチン投与の完了の時点で、その体重の約１０％を失う。いったんシスプラチンを停止した場合、動物はすぐに成長した。
【０１８３】
実施例７：シスプラチン−誘導傷害受容欠損における、ＩＬ−６の効果
ラットにおけるシスプラチン治療によって誘導された感覚神経欠損（すなわち傷害受容欠損）、およびＩＬ−６同時投与の効果を評価するために、ａ、生理食塩水中０．０２％ＢＳＡのＩＰ注射を受けるビヒクル対照ラット群（ｎ＝１０）、（ｂ）生理食塩水中０．０２％ＢＳＡのＳＣ注射にて、毎日処理したビンクリスチン−処理群（ｎ＝１０）（実施例１）、（ｃ）０．３、１、３または１０μｇ／ｋｇにて、ヒト組換え体ＩＬ−６のＳＣ注射にて毎日投与される、ビンクリスチン−治療ラットの４つの異なる群（各群ｎ＝１０）。および（ｄ）１０μｇ／ｋｇにて、４−ＭＣのＩＰ注射で、毎日投与したビンクリスチン−治療群（ｎ＝１０）を、実施例１５で記述したように、ホットプレート試験にてモニタした。
【０１８４】
シスプラチン投与３週間後に、ラットが、対照未処理群のラットと比較して、熱に対する第一反応の有意な遅延を示した。シスプラチン治療群対対照群での、熱に対する第一反応の遅延は有意であり、シスプラチン治療の停止後（またはシスプラチン治療開始５および６週間後）でさえ持続する。
【０１８５】
試験したすべての用量、０．３、１、３または１０μｇ／ｋｇにて、ＩＬ−６の同時投与が、シスプラチンによる熱に対する第一応答の遅延を、完全に予防／減少させた。
【０１８６】
シスプラチンによる、熱に対する第一反応の遅延が、１０μｇ／ｋｇ  ＩＬ−６との同時投与によって完全に予防された。
【０１８７】
４−ＭＣ治療によって、シスプラチンのみで処理したラットと比較して、３週間シスプラチン−処理ラットで、第一反応時間の、明らかであるが、有意ではない減少が産出された。差は、シスプラチン治療開始４および６時間後のみで有意であった。
【０１８８】
ホットプレート試験で得られた結果は、シスプラチンと一緒の、ＩＬ−６の同時投与が、試験したすべての用量、０．３、１、３および１０μｇ／ｋｇにて、シスプラチン−仲介感覚神経欠損を予防したことを示している。
【０１８９】
実施例８：電気生理学的試験（筋電図検査またはＥＭＧ）は、シスプラチン−誘発ニューロパシーに対する、ＩＬ−６の保護効果を示す
シスプラチン−誘発ニューロパシーモデルにおける、電気生理学的モニタリングを、実施例１７で記述したように実施した。目的は、繊維／神経機能のシスプラチン−誘導欠損における、ＩＬ−６との同時投与の効果を査定することであった。
【０１９０】
Ｈ波振幅における最初の変化が、シスプラチンを投与した後３週間で観察された（図１３）。振幅のわずかな減少が、対照未処理群と比較して、シスプラチン処理群で観察された。シスプラチン治療開始から４〜６週間で、Ｈは振幅が、約８０％まで、劇的に減少した。
【０１９１】
それぞれ、０．３、１、３および１０μｇ／ｋｇ  ＩＬ−６の同時投与が、Ｈ波振幅の欠損を減少／予防することがわかった一方で、１０μｇ／ｋｇ  ＩＬ−６との同時投与が、実験を通して、Ｈ波振幅の欠損を完全に予防した。
【０１９２】
一方で、４−ＭＣ同時投与は、シスプラチンによって誘導されたＨ波の欠損を予防することにおいて、遅延および一過性の効果しか持たなかった（図１３）。
【０１９３】
感覚神経伝道速度（ＳＮＣＶ）における最初の変化が、シスプラチン投与の４週間後に観察された。その時点で、シグナル速度が、相当する未処理対照においてのものよりも、有意に遅かった（図１４）。
【０１９４】
ＩＬ−６との同時投与が、５週間後、特に３および１０μｇ／ｋｇ  ＩＬ−６（図１４）にて、ＳＮＣＶを改善することがわかった。
【０１９５】
４−ＭＣとの同時投与は、治療のわずか５週間後に、シスプラチン中毒のＳＮＣＶの減少を一過性に阻害した（図１４）。
【０１９６】
上記電気生理学的試験の結果によって、ＩＬ−６との同時投与が、繊維／神経機能のシスプラチン−誘導欠損を効果的に予防することが示されている。電気生理学的試験の結果はまた、ＩＬ−６が、４−ＭＣよりも、繊維／神経機能のシスプラチン−誘導欠損を予防することにおいて、より効果的であることも示している（図１３および１４）。
【０１９７】
実施例９：シスプラチン−誘発ニューロパシーに対する、ＩＬ−６の保護効果−形態学的解析
組織形態学的解析を、シスプラチン投与に続く、繊維／軸索直径およびミエリン厚で発生する形態学的変化、およびＩＬ−６同時投与の効果を調査するために、実験の完了時点で実施した。
【０１９８】
図１５は、対照、シスプラチンおよびシスプラチンＩＬ−６同時投与ラットから回収した試料中での、繊維直径測定を示している。
【０１９９】
得られた直径測定値は、シスプラチンが、繊維直径を有意に減少させたことを示している。試験したすべてのＩＬ−６用量で、ＩＬ−６と同時投与したラットの切片からの結果によって、ＩＬ−６が、シスプラチンによる直径減少を予防／減少させることが示されている。有意な統計学的有意さが、１〜１０μｇ／ｋｇ  ＩＬ−６の範囲で検出された。
【０２００】
さらに有髄繊維の割合の測定を、対照未処理、シスプラチン処理ラットおよびＩＬ−６とのシスプラチン同時投与ラットから回収した繊維内で実施した（図１７）。有髄繊維の割合における有意な減少が、対照未処理ラットでのものと比較して、シスプラチン処理ラットで観察された。
【０２０１】
ＩＬ−６（１、３、１０μｇ／ｋｇ）が、ミエリン壁の欠損に対して、繊維を有意に保護することがわかった。
【０２０２】
４−ＭＣ処理は、シスプラチン−誘導繊維直径または軸索の減少を保護し、ミエリン壁の欠損に対する有意な保護を誘導した。
【０２０３】
また、変性繊維の割合を、対照、シスプラチン処理ラット、およびＩＬ−６とシスプラチンを同時投与したラットから回収した試料中でモニタした（図１８）。シスプラチン処理ラットから回収した試料中の変性繊維の割合が、対照未処理ラットから回収した試料中のものよりも、２倍高いことがわかった。このことに加えて、有髄繊維の割合が、対照未処理群でのものと比較して、シスプラチン処理群で減少した（図１７）。
【０２０４】
１、３、１０μｇ／ｋｇ  ＩＬ−６との同時投与が、シスプラチンによる変性繊維の割合を減少することがわかった（図１８）。図１７は、変性繊維の割合の減少に加えて、ＩＬ−６との同時投与が、シスプラチン処理ラットでの有髄繊維を増加させたことを示している（図１７）。
【０２０５】
したがって、上記形態学的解析によって、１、３または１０μｇ／ｋｇ  ＩＬ−６との同時投与が、神経変性を効果的に予防／減少させ、とりわけ、シスプラチンによる、軸索直径の減少、ミエリン厚の減少、またはミエリン壁の欠損および繊維の変性を予防したことが示された。
【０２０６】
実施例１０：シスプラチン−誘発ニューロパシーモデルにおける、ＩＬ−６の治療的効果−動物および薬物投与
実験の進行において、化学療法剤との、ＩＬ−６（０．３、１、３、１０μｇ／ｋｇ）の同時投与が、行動、電気生理学的および組織学的査定によって証明されるように、ラットにおいて、化学療法によって引き起こされる神経因性欠損を予防／減少することが示された。そのような実験においては、ＩＬ−６治療を、ニューロパシーの発達の前、または間に開始した。したがって、先の実験では、化学療法−関連ニューロパシーの発達におけるＩＬ−６の予防的解析が確認された。以下の実験は、動物モデルにおいて、ニューロパシーがすでに確立された後の、ＩＬ−６の効果を評価するために実施した。ＩＬ−６の可能性のある治療効果を、行動、電気生理学的および組織学的査定を用いて調査した。
【０２０７】
１０週齢メスＤａｒｋ  Ａｇｏｕｔｉラット（Ｊａｎｖｉｅｒ，Ｌｅ  Ｇｅｎｅｓｔ−Ｓｔ−Ｉｓｌｅ，Ｆｒａｎｃｅ）を、無作為に以下のように７つの実験群にわけた。（ａ）生理食塩水−０．０２％  ＢＳＡ（重量／容量）の無菌溶液を注射した、ビヒクル対照群（ｎ＝１０）。（ｂ）生理食塩水−０．０２％ＢＳＡの無菌溶液を注射した、シスプラチン−中毒化群（ｎ＝１０）。（ｃ）２つの異なる用量、３および１０μｇ／ｋｇにて、ＩＬ−６を毎日ＳＣ注射にて与えられる動物からなる、２つの処理−シスプラチン−中毒化群（ｎ＝１０）。および（ｄ）１０μｇ／ｋｇでの、４−ＭＣの毎日ＩＰ注射を受ける、４−メチルカテコール（４−ＭＣ）処理、シスプラチン−中毒化群（ｎ＝１０）。
【０２０８】
動物を、グループで飼い（ケージあたり２匹）、えさおよび水が自由に得られる状態で、制御した温度（２１〜２２℃）、および逆明暗周期（１２時間／１２時間）の部屋内で維持した。
【０２０９】
シスプラチン（シグマ、Ｌ‘Ｉｓｌｅ  ｄ’Ａｂｅａｕ  Ｃｈｅｓｎｅｓ，Ｆｒａｎｃｅ）を、４週間の間、２ｍｇ／ｋｇの用量にて一週間に二回、腹腔内に注射することによって誘導した。薬物を、塩化ナトリウムの０．９％無菌水溶液中に希釈した。
【０２１０】
ＩＬ−６を、生理食塩水−０．０２％  ＢＳＡの無菌溶液中で希釈し、２３日目（シスプラチン投与の最終週）から、実験の最後まで、毎日皮下経路にて投与した。
【０２１１】
４−ＭＣを、塩化ナトリウムの０．９％無菌水溶液中で希釈し、２３日目から、試験の最後まで、毎日、ＩＰ経路を介して注射した。
【０２１２】
体重および生存率を毎日記録した。
【０２１３】
ホットプレートおよびＥＭＧ試験を、−６、２３、３０，３７および４４日にて実施した。
【０２１４】
シスプラチン投与の最初の日を１日目と考えた。
【０２１５】
実施例１１：シスプラチンによって確立した傷害受容欠損における、ＩＬ−６の治療的効果
ＩＬ−６が、シスプラチンによって誘導された、感覚神経欠損（または傷害受容欠損）を治癒させる、および／または改善し得るかどうかを決定するために、ラットを、（ａ）生理食塩水−０．０２％  ＢＳＡ（重量／容量）の無菌溶液を注射した、ビヒクル対照群（ｎ＝１０）。（ｂ）生理食塩水−０．０２％ＢＳＡの無菌溶液を注射した、シスプラチン−中毒化群（ｎ＝１０）。（ｃ）２つの異なる用量、３および１０μｇ／ｋｇにて、ＩＬ−６を毎日ＳＣ注射にて与えられる動物からなる、２つの処理−シスプラチン−中毒化群（ｎ＝１０）。および（ｄ）１０μｇ／ｋｇでの、４−ＭＣの毎日ＩＰ注射を受ける、４−メチルカテコール（４−ＭＣ）処理、シスプラチン−中毒化群（ｎ＝１０）で処理し、実施例１５にて記述したように、ホットプレート試験を用いて試験した。
【０２１６】
結果は、２日目（ベースライン）から２３日目まで、対照動物におけるホットプレートスコアが、明らかに減少し、これが、試験に対する習慣作用と関連した現象であることが示された。２３日目から後、対照動物のスコアが安定した。
【０２１７】
シスプラチン投与のあいだ、およびシスプラチン後治療３週間にわたり、シスプラチン−治療群が、対照未処理ラットと比較して、熱に対する第一反応の有意な遅延を示した（図１９）。
【０２１８】
ＩＬ−６処理開始２週間後、第一反応の時間の合計減少が、ＩＬ−６で処理したラットで観察された（ｐ＜０．０５、マノバ−ダネット検定）。ＩＬ−６での有意な結果が、１０μｇ／ｋｇの用量でのＩＬ−６処理後２週間で観察された（ｐ＜０．０５、マノバ−ダネット検定）。
【０２１９】
４−ＭＣで処理したラットにおける、熱に対する第一反応の時間の減少も、４−ＭＣ治療開始から２週間後に観察された（ｐ＜０．０５、マノバ−ダネット検定）。
【０２２０】
ホットプレート試験を用いて得られた結果により、ＩＬ−６が、シスプラチン−誘導感覚神経欠損を効果的に治癒する、および／または改善することが示されている。
【０２２１】
実施例１２：シスプラチン−誘発ニューロパシーにおける、ＩＬ−６の治療的効果−電気生理学的測定
実施例１７で記述した電気生理学的試験を、シスプラチン−確立ニューロパシーモデルにおいて、（先の実施例で記述した）行動試験と平行して実施した。目的は、繊維／神経機能のシスプラチン−誘導欠損における、ＩＬ−６の治療効果を査定することである。
【０２２２】
本実験組において、Ｈ波振幅の最初の変化が、シスプラチン処理開始後２３日で検出された（図２０）。シグナル振幅の劇的な欠損（約７０％）が、シスプラチン処理群で観察された。Ｈ−波振幅の自発的回復は観察されなかった。
【０２２３】
３および１０μｇ／ｋｇを用いるＩＬ−６処理によって、Ｈ波振幅の欠損が明らかになった（ｐ＜０．０５、マノバ−ダネット検定）。ＩＬ−６処理の開始後１週間ほどで、約５０％の振幅欠損が回復し、ＩＬ−６処理の２週間までに、完全回復に至った（図２０）。
【０２２４】
４−ＭＣ処理もまた、増幅における、シスプラチン誘導Ｈ波欠損を逆転させた。
【０２２５】
シスプラチン投与によって誘導された、感覚神経伝導速度（ＳＮＣＶ）の最初の変化が、シスプラチン処理の開始後２３日で観察され得る（図２１）。シスプラチン処理ラットにおけるＳＮＣＶが、相当する未処理対照群におけるＳＮＣＶよりも、有意に遅いことがわかった（ｐ＜０．０１、マノバ−ダネット検定）（図２１）。
【０２２６】
結果によって、３μｇ／ｋｇの用量でのＩＬ−６が、処理の１週間のみのあとで、シスプラチン−処理動物におけるＳＮＣＶを有意に（ｐ＜０．０１、マノバ−ダネット検定）改善したことを示している。
【０２２７】
反対に、４−ＭＣ処理は、シスプラチン処理ラットのＳＮＣＶを改善するように見えるが、有意な統計学的差が、処理開始後２週間で検出されただけである（ｐ＜０．０５、マノバ−ダネット検定）。
【０２２８】
したがって、電気生理学的試験の結果が、シスプラチン−処理動物におけるＳＮＣＶでの有意な改善が、ＩＬ−６処理の１週間のみの後で観察され、早期効果が、試験したもっとも低い用量のＩＬ−６、すなわち３μｇ／ｋｇを用いて観察され、Ｈ波の欠損を逆転させた、ことを示している。電気生理学的試験によって、ＩＬ−６が、シスプラチンによって誘導された繊維／神経機能の欠損を治癒させる、および  または改善させることにおいて、４−ＭＣよりもより効果的であることが示されている（図２１）。
【０２２９】
実施例１３：シスプラチン−誘発ニューロパシーにおける、ＩＬ−６の治療的効果−形態学的解析
組織形態学的解析を、シスプラチン誘発ＣＩＰＮのモデルにおいて、繊維および軸索直径、およびミエリン厚にて起こる、形態学的変化、およびそのようなモデルにおいて、ＩＬ−６投与後に起こる変化を調査するために、実験の完了時に実施した。
【０２３０】
結果は、治療開始の前（２３日まで）、シスプラチン処理ラットにおけるミエリンの総サイズが、対照未処理ラットと比較して、わずかに減少したが、差は有意ではなかった（ｐ＞０．０５、ステューデントｔ−検定）、ことを示している（図２２）。
【０２３１】
シスプラチン処理ラットから回収した試料が、対照未処理ラットからのものよりも有意に大きな、変性繊維の割合を含んだことが観察された（図２３Ａ、ｐ＜０．０５、ステューデントｔ−検定）。さらに、非変性有髄繊維の割合が、対照未処理群においてよりも、シスプラチン処理群で低かった（図２３Ｂ）。
【０２３２】
ミエリン面積における、わずかだが、有意ではない減少が、シスプラチン処理開始後４４日で観察された（ｐ＞０．０５、Ｏｎｅ−ｗａｙ  Ａｎｏｖａ）（図２４）。
【０２３３】
１０μｇ／ｋｇでのＩＬ−６の投与が、シスプラチン−誘導ミエリン鞘薄化を逆転することが明らかであった。
【０２３４】
反対に、４−ＭＣ治療は、シスプラチン−誘導ミエリン鞘薄化を干渉しなかった。
【０２３５】
小（直径＜８μｍ）および大（直径＞８．５μｍ）繊維をモニタし、大／小繊維比を計算した。図２５の結果が、大／小繊維比が、シスプラチン−処理ラットから回収した試料中で明らかに減少したことを示している。大／小繊維比のわずかな増加が、ＩＬ−６処理の後に観察された。
【０２３６】
図２６Ａで描写したように、シスプラチン投与の停止後３週間で、いまだ、変性繊維の割合が、対照未処理試料と比較して、シスプラチン処理にて、有意に高かった。さらに、非変性有髄繊維の割合は、対照群に比べて、シスプラチン処理群でより低かった（図２６Ｂ）。ＩＬ−６でのラットの処理が、変性繊維の割合を有意に減少させた。有意な効果が、１０μｇ／ｋｇ  ＩＬ−６で得られた。
【０２３７】
反対に、変性繊維の割合における、わずかだが、有意ではない減少が、４−ＭＣ処理によって誘導された（ｐ＞０．０５、ダネット検定）。
【０２３８】
上記形態学的解析結果は、１０μｇ／ｋｇでのＩＬ−６が、ミエリン鞘薄化、および繊維の変性を逆転させることを示している。形態学的解析は、システインによって仲介された、ミエリンおよび繊維変性の回復において、４−ＭＣよりも効果的であることを示している（図２４および２６）。
【０２３９】
あわせて、実施例１１での行動試験、実施例１２での電気生理学的試験、および本形態学的解析が、等しく、シスプラチン誘発ニューロパシーにおける、低用量のＩＬ−６の治療的価値を示している。これらの試験は、低用量のＩＬ−６が、シスプラチン−誘発ニューロパシーに対して、よりよい治療効果を持つことを示している。
【０２４０】
実施例１４：タキソール誘発ニューロパシーにおける、ＩＬ−６同時投与の効果
先の実施例は、シスプラチンおよびビンクリスチンによって誘発されたニューロパシーにおける、ＩＬ−６の効果を示している。
【０２４１】
以下の実験の目的は、タキソールによって仲介された化学療法誘発ニューロパシーのさらなるモデルにおける、ＩＬ−６の可能性のある神経保護効果を調査することであった。ＩＬ−６同時投与の可能性のある保護効果を試験した。ＩＬ−６の投与を、タキソールの投与と一緒に開始した。３および１０μｇ／ｋｇのＩＬ−６の用量を、毎日、または１０μｇ／ｋｇの場合はまた、１週間に３回のみ投与した。
【０２４２】
メス１０週齢Ｄａｒｋ  Ａｇｏｕｔｉラットを使用し、群あたり１２匹の動物を以下のように含めた。
１．    ビヒクル  毎日  ｓｃ
２．    タキソールビヒクル  毎日  ｓｃ、１日〜４９日
３．    タキソール  ＩＬ−６  ３μｇ／ｋｇ  毎日、ｓｃ  １日〜４９日
４．    タキソール  ＩＬ−６  １０μｇ／ｋｇ  毎日、ｓｃ  １日〜４９日
５．    タキソール  ＩＬ−６  １０μｇ／ｋｇ  ｓｃ  ３×／ｗｋ（ＴＩＷ）、１日〜４９日
６．    ４−ＭＣ  １０μｇ／ｋｇ  毎日、（腹腔内）ｉ．ｐ．  １日〜４９日
【０２４３】
タキソールを、クレモホア／エタノール／デキストロース  ５％の溶液中で希釈し、４週間、１週間に２回投与した。
【０２４４】
４−ＭＣおよび試験化合物処理は、中毒化の最初の日に開始し、試験の最後に終了した。
【０２４５】
本研究は８週間で実施した（ベースラインのために１週間、タキソール中毒化のために４週間、回復に３週間）。
【０２４６】
表示用量での、対照、タキソールおよびタキソール−ＩＬ−６同時投与ラット群を、繊維／神経機能のタキソール誘導欠損における、ＩＬ−６の効果を査定するために、電気生理学的モニタリングにかけた。
【０２４７】
Ｈ波潜時を、すべてのラット群でモニタした。Ｈ波潜時における有意な増加が、タキソール処理後３週間で観察した。潜時は、タキソール治療後６週間で、劇的に増加した。
【０２４８】
３または１０μｇ／ｋｇいずれか、毎日または一週間に３回の、ＩＬ−６の同時投与が、実験を通して、Ｈ波潜時を予防し／減少させることがわかった（図２７）。
【０２４９】
４−ＭＣ処理が、３、５、６および７週にて、Ｈ波潜時における改善を示した。
【０２５０】
Ｈ−波振幅を、タキソールで処理したラット、およびＩＬ−６または４−ＭＣを投与したタキソールラットの群からの試料中でモニタした。試験したすべての用量で、ＩＬ−６が、実験を通して、タキソールによるＨ波振幅誘導における減少を、有意に予防したことがわかった（図２８）。
【０２５１】
タキソール投与によって誘導された感覚神経伝導速度（ＳＮＣＶ）における最初の変化が、シスプラチン投与後３週間で観察された。この時点で、シグナル速度は、未処理対照における相当する速度よりも、有意にゆっくりであった（図２９）。
【０２５２】
タキソールとの、３または１０μｇ／ｋｇいずれか、毎日または一週間に３回の、ＩＬ−６の同時投与が、タキソールによるＳＮＣＶでの変化を予防することがわかった。
【０２５３】
結果により、毎日または一週間に３回いずれかで、すべての用量で、ＩＬ−６の同時投与が、繊維／神経機能のタキソール−誘導欠損を効果的に予防することが示される。結果はまた、低用量のＩＬ−６同時投与の効果的な保存効果が、４−ＭＣ同時投与のものよりも有意であることも示している（図２８）。
【０２５４】
実施例１５：感覚機能−ホットプレート試験
ラットを、５２℃にて維持した加熱−プレート上、１７ｃｍ高および２１ｃｍ直径のガラスシリンダーの内部に入れた（Ｍｅｄｉｔｅ  ＯＴＳ  ４０、Ｍｉｃｒｏｍ、Ｆｒａｎｃｈｅｖｉｌｌｅ、Ｒｈｏｎｅ、Ｆｒａｎｃｅ）。動物の行動、とりわけ、足をたたくこと、および調節飛躍を観察した。足をたたく前、または熱から逃げるためのジャンプ前（調節飛躍）の潜時を記録した。温度痛を感じるのに必要な時間は、温度感受性に関連し、温度感受性が変わったときに、増加する傾向にある。
【０２５５】
実施例１６：運動神経協調試験
運動神経協調を、５．５ｃｍ直径の１００ｃｍ−長水平木製ロッド、このロッド上１ｍの距離をカバーするための、テーブル上４０ｃｍの一端においたラットによって取られた時間を測定することを含む走行試験を用いて査定した。３回の試験（最大期間：各６０ｓ）を実施し、平均値を計算し、特性値として保持した。動物が骨折した場合、６０ｓの最大値でスコア化した。
【０２５６】
実施例１７：筋電図検査法（ＥＭＧ）
電気生理学的レコーディングを、Ｎｅｕｒｏｍａｔｉｃ  ２０００Ｍ筋電図検査法（ＥＭＧ）（Ｄａｎｔｅｃ，Ｌｅｓ  Ｕｌｉｓ，Ｆｒａｎｃｅ）を用いて実施した。ラットを、６０ｍｇ／ｋｇ塩化水素ケタミン（Ｉｍａｌｇｅｎ  ５００（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ  Ｍｅｒｉｅｕｘ，Ｌｙｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ）のＩＰ注射によって麻酔した。通常の体温を、加熱ランプで３０℃周辺に維持し、尾表面上においた、コンタクト温度計（Ｑｕｉｃｋ，Ｂｉｏｂｌｏｃｋ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｌｌｋｉｒｃｈ，Ｆｒａｎｃｅ）を用いて確認した。
【０２５７】
Ｍ波シグナルの化合物筋肉活性電位（ＣＭＡＰ）（または電気的に誘因された筋肉電位）を、坐骨神経の刺激後、腓腹筋内で記録した。Ｍ波は、筋肉繊維の活性電位のあいだに発達する電流を反映する。参照電極および活性ニードルを、後足に配置した。グラウンドニードルをラットの下背上に挿入した。坐骨神経を、最大上強度にて、単一０．２ｍｓパルスで刺激した。運動神経波の速度を記録し、ｍｓで表した。
【０２５８】
感覚神経伝導速度（ＳＮＣＶ）もまた記録した。尾皮膚電極を以下のように置いた。尾のベースにて挿入した参照ニードル、および尾の先端に向かう参照ニードルから３０ｍｍはなして配置した陽極ヌードル。グランドニードル電極を、陽極と参照ニードルあいだに挿入した。尾神経を、１２．８ｍＡの強度にて、一連の２０パルス（たとえば、０．２ｍｓ）で刺激した。速度をｍ／ｓで表した。
【０２５９】
Ｈ−波反射を、坐骨神経の刺激の後、後足パッド筋肉内で記録した。参照電極およびグランドニードルを、ラットの下背においた。坐骨神経を、最大刺激強度で、単一０．２ｍｓパルスで刺激した。Ｈ波の振幅（ｍＶ）および動物ラッキングＨ波応答が、研究したパラメータであった。
【０２６０】
実施例１８：形態学的解析
ビンクリスチンとともに、形態学的解析を、群あたり３匹の動物で、ビンクリスチン投与の終了後２週間で実施した。動物を、１００ｍｇ／ｋｇ  Ｉｍａｌｇｅｎｅ  ５００（登録商標）のＩＰ注射によって麻酔した。坐骨神経の５ｍｍ−切片を摘出し、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ＝７．４）中の４％  グルタルアルデヒド（シグマ、Ｌ’Ｉｓｌｅ  ｄ’Ａｂｅａｕ−Ｃｈｅｓｎｅｓ，Ｆｒａｎｃｅ）で一晩固定化し、３０％スクロース中で維持し、さらなる処理まで、４℃にて保存した。使用する時点で、神経試料を、ＰＢＳ中１％  オスミウム  テトラオキシド（シグマ、Ｌ’Ｉｓｌｅ  ｄ’Ａｂｅａｕ−Ｃｈｅｓｎｅｓ，Ｆｒａｎｃｅ）内で２時間、後固定し、連続アルコール溶液中で脱水し、Ｅｐｏｎ内に埋包した。埋包組織をついで、３日間、７０℃にて置き、組織ワックスの重合化を可能にした。１．５μｍ圧の断面を実施し、１％トルイジン  ブルー溶液（シグマ、Ｌ’Ｉｓｌｅ  ｄ’Ａｂｅａｕ−Ｃｈｅｓｎｅｓ，Ｆｒａｎｃｅ）にて２分間染色し、脱水し、Ｅｕｋｉｔｔ上にマウントした。試料あたり１２切片を、光学顕微鏡（ニコン、東京、日本）を用いて試験し、半自動デジタルイメージ解析ソフトウェア（バイオコム（Biocom）、フランス）を用いて解析した。繊維直径（ａ）、軸索直径（ｂ）、およびミエリン厚（ｃ）を、以下で図解したように測定した。
【０２６１】
実施例８でのシスプラチン治療のために、形態学的解析を、群あたり３匹の動物で、実験の最後（週６）に実施した。神経切片あたりの繊維の総数を、各試料の３つの無作為化スライスから得た。計数を、スライスあたり２つの選択した視野上で実施した。
【０２６２】
実施例１３でのシスプラチンのために、形態学的解析を、群あたり３匹の動物で、２３および４４日で実施した。各神経切片の全表面上の、変性および未変性繊維の数を、ブラインド様式で、オペレーターが計数した。すべての結果（比値としてあらわしたデータを除く）は、対照値に関して、変化の割合として報告した。
【０２６３】
実施例１９：データ解析
すべてのデータを、平均値±ＳＥＭとして報告した。統計学的解析を、ウインドウズのためのＳｔａｔｖｉｅｗ（ＳＡＳ  インスティテュート社（Institute Inc.））を用いて実施した。２つの治療群（対照対ビヒクル）からのデータの比較を、対応のないステューデントｔ−検定を用いることによって実施した。２つ以上の治療群からのデータを、Ａｎｏｖａ、続いて多重比較試験のためのダネット検定によって解析した。データを、種々の群の変数の、時間での多重解析（すなわちデータの縦モード解析）を可能にする、Ｍａｎｏｖａによって、実験の時間経過にわたって比較し、ダネット検定を使用して、他の群から異なる群を検出した。対象の個々の時間点を、Ａｎｏｖａを用いることによってさらに解析した。Ｈ−波シグナルをあらわしている動物の割合を示しているデータの統計学的解析のために、０をＨ−波を示している動物に割り当て、１をＨ−波を欠く動物に割り当てた。そのような名目上データに関して、χ2−検定を使用して、統計学的解析を実施した。０．０５より小さいか、または等しいｐ値をあらわしている統計学的解析値を、有意であるとみなした。
【０２６４】
実施例２０：インビボでの、種々の化学療法薬物の抗−腫瘍活性における、ＩＬ−６の効果
実施例１〜１４にて、ＩＬ−６治療が、ビンクリスチン、シスプラチンおよびタキソール治療いずれかで中毒化したラットでの、ニューロパシーを予防する、および遅延させたことが示された。しかしながら、化学療法薬剤による、ニューロパシーの阻害における、ＩＬ−６の活性が、悪性細胞の殺傷に関する薬剤の、化学療法的特性を改善することを含まないことを示すことが重要である。
【０２６５】
この問題を扱うために、ビンクリスチン、シスプラチン、カルボプラチン、タキソールのような種々の抗腫瘍薬剤、または組み合わせカルボプラチン−タキソールの抗−腫瘍活性におけるＩＬ−６の効果を、２つの腫瘍細胞株、ヒト肺（ＳＫ−ＭＥＳ１）および乳（ＭＣＦ７）腫瘍細胞株の培養液を用いて、インビトロで調査した。
【０２６６】
ヒト肺（ＳＫ−ＭＥＳ１）および乳（ＭＣＦ７）腫瘍細胞株を、ＡＴＣＣから得た。細胞株を、１％  抗生物質／抗ミコティック混合溶液（ギブコ（Gibco）、参照１５２４００６２）および１０％  熱不活性化胎児ウシ血清（ギブコ、参照Ｆ７５２４、バッチ９２Ｋ３３８７）を含む、ダルベッコＭＥＭ培地（ギブコ、インビトロジェン（Invitrogen）、Ｃｅｒｇｙ−Ｐｏｎｔｏｉｓｅ，Ｆｒａｎｃｅ、参照４１９６５０３９）中で維持した。細胞を、９５％空気中、５％ＣＯ２で、３７℃にて、加湿インキュベーター中、ヌンク（Ｎｕｎｃ）組織培養フラスコ（８０ｃｍ２）中で増幅させた。
【０２６７】
ビンクリスチン、シスプラチン、カルボプラチンおよびタキソールの抗増殖効果におけるＩＬ−６の効果を、実施例２２にて記述したように、酸ホスファターゼ活性アッセイを用いて評価した。酵素的活性が、生細胞の数に比例することが証明されてきている（Ｕｅｄａら；１９９４）。
【０２６８】
最後の複製の３日後、腫瘍細胞を、１００μｌ／ウェルの総容量中、ウェルあたり１，５００細胞（ＭＣＦ７株）または３，０００細胞（ＳＫ−ＭＥＳ１株）の密度で、９６−ウェルプレート（ＴＰＰ、ＶＷＲ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｆｏｎｔｅｎａｙ−ｓｏｕｓ−ｂｏｉｓ，Ｆｒａｎｃｅ）中にまき、９５％空気中５％ＣＯ２、３７℃にて、加湿インキュベーター中で一晩インキュベートした。細胞培養液をついで、ビンクリスチン（１０ｎＭ）、シスプラチン（２．５ｍＭ）、カルボプラチン（２５ｍＭ）、タキソール（ＭＣＦ７細胞のために３０ｎＭ、ＳＫ−ＭＥＳ１細胞のために５０ｎＭ）、またはシスプラチン（１０ｍＭ）とタキソール（１０ｎＭ）の混合液を、細胞培養培地中に加えることによって、中毒化した。（１．８ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ：７にて、緩衝溶液中）ＩＬ−６を、すぐに、０、３、１２、５０または２００ｎｇ／ｍｌの濃度で加えた。
【０２６９】
中毒化の開始４日後、各細胞培養液中の酸ホスファターゼ活性（実施例２１）を査定した。
【０２７０】
結果によって、両方の腫瘍細胞株において、ビンクリスチン（１０ｎＭ）、シスプラチン（２．５μＭ）およびカルボプラチン（２５μＭ）が、対照未処理細胞培養液と比較して、細胞の増殖において、有意な減少（約５０％）を誘導した（ｐ＜０．００１、フィッシャー検定）（それぞれ図３０−１  Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、図３０−２  Ｉ、Ｊ）。ＩＬ−６の存在で、ビンクリスチンまたはシスプラチンまたはカルボプラチン処理ＭＣＦ７細胞の生存、ビンクリスチン−シスプラチンまたはカルボプラチン中毒化細胞の生存は有意に変化しなかった（ｐ＞０．０５、Ｏｎｅ−ｗａｙ  Ａｎｏｖａ）（それぞれ、図３０−１  Ａ、Ｃ、図３０−２  Ｉ）。ＩＬ−６の存在下、ビンクリスチンまたはシスプラチン治療ＳＫ−ＭＥＳ１の生存は、有意に変化しなかった（ｐ＞０．０５、Ｏｎｅ−ｗａｙ  Ａｎｏｖａ）（それぞれ、図３０−１  Ｂ、Ｄ）。一方、カルボプラチン−中毒化ＳＫ−ＭＥＳ１細胞は、ＩＬ−６の存在下、有意な（ｐ£０．００１、Ｏｎｅ−ｗａｙ  Ａｎｏｖａ）生存の減少を示した（図３０−２  Ｊ）。
【０２７１】
タキソール（３０ｎＭ）が、ＭＣＦ７細胞株の生存において、約５５％減少を誘導した（ｐ£０．００１、フィッシャー検定）（図３０−２  Ｅ）。発生した本濃度のタキソールの細胞毒性が、ＳＫ−ＭＥＳ１細胞中でわずかに増強され、生存の約７０％の減少を示している（図３０−２  Ｆ）。ＭＣＦ７またはＳＫ−ＭＥＳ１細胞両方で、ＩＬ−６での処理が、細胞増殖におけるタキソールの効果を変化させなかった（ｐ＞０．０５、Ｏｎｅ−ｗａｙ  Ａｎｏｖａ）（それぞれ図３０−２  ＥおよびＦ）。
【０２７２】
１０μＭカルボプラチンおよび１０ｎＭタキソールの組み合わせで、両方の腫瘍細胞株の型の生存において、４０％の減少が観察された（ｐ£０．００１、フィッシャー検定）（図３０−２  ＧおよびＨ）。カルボプラチンとタキソールの組み合わせで中毒化させた両方の型の細胞株の生存は、ＩＬ−６の存在下で変化ないままであった（ｐ＞０．０５、Ｏｎｅ−ｗａｙ  Ａｎｏｖａ）。
【０２７３】
以上の実験において、ＩＬ−６と種々の化学療法薬剤間のインビトロでの可能性のある薬物相互作用を査定した。インビトロでの結果によって、ＩＬ−６が、試験した種々の化学療法薬剤の抗腫瘍活性を改善しなかったことが示された。
【０２７４】
実施例２１：インビボでのシスプラチンの抗腫瘍活性におけるＩＬ−６の効果
以下の実験を、インビボでの、ＩＬ−６と化学療法薬剤間の、可能性ある薬物相互作用を確認するために実施した。この目的のために、ヌードマウスでの、ヒトＷｉＤｒ大腸がん増殖における、ＩＬ−６の、単独および／またはシスプラチンとの組み合わせでの効果を評価した。
【０２７５】
ヒトＷｉＤｒ大腸がん腫瘍細胞の増殖に関して、影響を受けやすい宿主型であることが証明されているので、Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスを使用した。ＷｉＤｒ細胞は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｇｅｎｏｖａ−Ｉｔａｌｙのバンクより提供された。細胞種：ヒト７８週齢メス、組織：大腸、がん：大腸アデノカルシノーマ、受け入れ番号：ＩＣＬＣ  ＨＴＬＯ００００３。
【０２７６】
ＷｉＤｒ細胞を、連続培養液中の培地ＤＭＥＭ＋２ｍＭ  グルタミン＋１０％  ＦＢＳ中で培養し、単層、上皮形態として増殖させた。
【０２７７】
６４匹のメスＢａｌｂ／ｃヌードマウスを、チャールズリバー（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）Ｉｔａｌｉａ  Ｓ．ｐ．Ａ．，Ｖｉａ  Ｉｎｄｉｐｅｎｄｅｎｚａ  １１−ｗ２２０５０  ＣＡＬＣＯ（Ｌｅｃｃｏ）より購入した。前処理順応期間のあいだ、動物を毎日臨床的に観察した。
【０２７８】
動物を、それぞれ２８℃±２および５５％±１０の温度および相対湿度で、換気薄板状フローキャビネット内でかった。一時間あたり、およそ１５〜２０空気変化をした。部屋を、１２時間サーカディアン周期（７ａ．ｍ．−７ｐ．ｍ．）で、人口光線によって証明した。
【０２７９】
各ケージには３匹以上のマウスをいれなかった。各ケージに、実験番号、群、動物数、実験開始日および接種日を含むラベルを貼った。ケージおよび寝具および飲用ボトルを、各ケージ交換の前に、オートクレーブ内で滅菌した。
【０２８０】
体重を、細胞注射後、４週間、一週間に２回記録した。
【０２８１】
腫瘍サイズを、細胞接種４日後に開始して４週間、一週間に二回記録した。
【０２８２】
４週間の観察期間の最後に、動物を、過剰容量のチオペンタールナトリウムのｉ．ｐ．注射によって犠牲死させた。
【０２８３】
各Ｂａｌｂ／ｃヌードマウス（約２０〜２５ｇ体重）に、１日目に、１０7＋５％  ＷｉＤｒ細胞／マウス（細胞懸濁、０．２ｍＬ／マウス）で皮下（ｓ．ｃ．）で接種させた。
【０２８４】
ついで動物を、無作為に、群あたり８ラットで、以下の実験群に割り当てた。
【０２８５】
ｐＨ＝７、４０ｍＭリン酸緩衝液中の０．０２％マウスアルブミン（シグマ）をｓ．ｃ．で与える群。（注射のために、０．９％  ＮａＣｌ無菌水中）３．５ｍｇ／ｋｇ  シス−白金、ｉ．ｐ．を与える群。３、１０または３０μｇ／ｋｇにて、（ｐＨ＝７．０、４０ｍＭ  リン酸緩衝液中、０．０２％マウスアルブミン中）ＩＬ−６、ｓ．ｃ．でそれぞれ処理する３つのラット群、およびシス−白金３．５ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．との組み合わせで、３、１０または３０μｇ／ｋｇ  ＩＬ−６、ｓ．ｃ．のいずれかのＩＬ−６で処理した３つのラット群。
【０２８６】
３、１０および３０ｍｇ／ｋｇでのＩＬ−６を、４日目から１８日目まで、毎日ｓ．ｃ．（１０ｍＬ／ｋｇ）与えた。シス白金（シグマ）３．５ｍｇ／ｋｇ（１０ｍＬ／ｋｇ）ｉ．ｐ．を、細胞注射の後、４、８、１２および１８日にのみ与えた。腫瘍サイズを、細胞接種４日後に開始して、４週間、一週間に二回記録した。腫瘍容積（ｍｍ3）を方程式（Ｇｅｒａｎ  Ｒ．Ｉ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｒｅｐｏｒｔｓ（１９７２）Ｐａｒｔ  ３，３（２）：５１）：腫瘍容積（ｍｍ3）＝（長直径）×（短直径）2／２にしたがって推定した。
【０２８７】
得られた結果により、４、８、１２および１８日に、３．５ｍｇ／ｋｇにて投与したシスプラチンが、腫瘍増殖および抗−増殖効果を減少可能であったことが示される（図３１）。シスプラチンの効果は、シスプラチンを中断した後維持された。有意な腫瘍阻害が、１８日（ｐ＜０．０５）、２２日（ｐ＜０．０１）および２５日（ｐ＜０．００１、ｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ、続いてターキー検定）にて達成された。
【０２８８】
４日目から１８日目までの、皮下経路による毎日の、２、１０および３０μｇ／ｋｇでの  ＩＬ−６のみの投与は、腫瘍の増殖に有意な影響を与えなかった（図３２）。ＩＬ−６のシスプラチンとの組み合わせが、結果として、シスプラチンのみの治療と似たような阻害腫瘍増殖となった（図３３）。
【０２８９】
結論として、単独またはシス白金との組み合わせでの、ＩＬ−６は、ＷｉＤｒ細胞腫瘍増殖、またはシス−白金の化学療法活性いずれも干渉しなかった。
【０２９０】
実施例２２：ホスファターゼアッセイ
培養培地の除去の後、細胞を、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ、ギブコ（Ｇｉｂｃｏ）、参照１４１９０−０９４）でリンスし、さらに、０．１ｍｏｌ／ｌ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．５）、０．１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ１００（シグマ、参照Ｔ９２８４）および１０ｍｍｏｌ／ｌ  リン酸ｐ−ニトロフェニル（シグマ、参照Ｎ９３８９）を含む１００μｌの緩衝液中、３７℃にて９０分間インキュベートした。反応を、１０μｌの、１ｍｏｌ／ｌ、水酸化ナトリウム溶液（Ｌａｂｏｒａｔｏｉｒｅ  ｄｅ  Ｐｒｏｄｕｉｔ  Ｃｈｉｍｊｉｑｕｅｓ  ｄｅ  ｌａ  Ｒｏｂｅｒｔｓａｕ，Ｓｔｒａｓｂｏｕｒｇ，Ｆｒａｎｃｅ；参照２８．２５２．２９３）の添加によって停止させた。着色溶液の吸収を、マイクロプレートリーダー（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ  Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ  Ｂｉｃｈｒｏｍａｔｉｃ，ＥＳＴ−ＬＡＢ，Ｓｔｒａｓｂｏｕｒｇ，Ｆｒａｎｃｅ）中、４０５ｎｍにて測定した。
【０２９１】
結果を、対照細胞培養液の光学密度の割合としてあらわした。カラムの高さは、２つの独立した培養液からの、５〜６ウェルの割合の、平均値±ＳＥＭをあらわしている。
【０２９２】
データの広範囲の解析を、変数の一方解析を用いて実施した（Ａｎｏｖａ）。適用可能である場合、フィッシャーのＰＬＳＤ検定を、多重対比較のために使用した。有意さのレベルは、ｐ＜０．０５に設定した。
【０２９３】
実施例２３：組換え体ヒトＩＬ−６産出
組換え体ヒトＩＬ−６（ｒ−ｈｌＬ−６）を、遺伝子工学的に改変したチャイニーズ  ハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞内で産出させた。産出工程は、ワーキング細胞バンク（ＷＣＢ）からの細胞の増殖と拡張で始まり、ｒ−ｈｌＬ−６が培養培地中に分泌される条件下で続けられる。ｒ−ｈｌＬ−６を、改変細胞の培養培地から回収し、精製した。純度は９９．６％以上であり、強度は、２３．３×１０6ＩＵ／ｍｌ（Ｖａｎ  Ｄａｍｍｅ  Ｊ，Ｖａｎ  Ｓｎｉｃｋ  Ｊ．Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ  Ｓｔａｎｄ．１９８８：６９：３１−８の、ＩＬ−６のハイブリドーマ増殖因子（ＨＧＦ）活性に基づく）であった。
【図面の簡単な説明】
【０２９４】
【図１】ラットの体重における、ビンクリスチン、表示用量でのビンクリスチン−ＩＬ−６同時投与、またはビンクリスチン−４−ＭＣ同時投与の効果を示す。平均値±ｓ．ｅ．ｍ．
【図２】ビンクリスチン−誘導運動神経協調欠損の予防によって明らかにされた、ビンクリスチン−仲介ニューロパシーにおけるＩＬ−６の予防効果を示す。本図は、ビンクリスチン処置、対表示用量でのビンクリスチン−ＩＬ−６同時投与、またはビンクリスチン−４−ＭＣ同時投与ラットでの、歩行試験の結果を示す。*ｐ＜０．０５  平均値±ｓ．ｅ．ｍ．（対  対照／ビヒクル；ダネット検定）。
【図３】ビンクリスチン−誘導傷害受容欠損の予防によって明らかにされた、ビンクリスチン−仲介ニューロパシーにおけるＩＬ−６の予防効果を示す。本図は、ビンクリスチン−処置、対表示用量でのビンクリスチン−ＩＬ−６同時投与、またはビンクリスチン−４−ＭＣ同時投与ラットでの、ホットプレート試験の結果を示す。*ｐ＜０．０５  平均値±ｓ．ｅ．ｍ．（対  対照／ビヒクル；ダネット検定）。
【図４】繊維／神経機能のビンクリスチン−誘導機能障害の予防によって明らかにされた、ビンクリスチン−仲介ニューロパシーにおけるＩＬ−６の予防効果を示す。本図は、ビンクリスチン−処置、対表示用量でのビンクリスチン−ＩＬ−６同時投与、またはビンクリスチン−４−ＭＣ同時投与ラットでの、化合物筋肉活性電位（ＣＡＭＰ）の振幅を示す。*ｐ＜０．０５  平均値±ｓ．ｅ．ｍ．（対  対照／ビヒクル；ダネット検定）。
【図５】繊維／神経機能のビンクリスチン−誘導機能障害の予防によって明らかにされた、ビンクリスチン−仲介ニューロパシーにおけるＩＬ−６の予防効果を示す。本図は、ビンクリスチン−処置、対表示用量でのビンクリスチン−ＩＬ−６同時投与、またはビンクリスチン−４−ＭＣ同時投与ラットでの、ＣＡＭＰの潜時を示す。*ｐ＜０．０５  平均値±ｓ．ｅ．ｍ．（対  対照／ビヒクル；ダネット検定）。
【図６】繊維／神経機能のビンクリスチン−誘導機能障害の予防によって明らかにされた、ビンクリスチン−仲介ニューロパシーにおけるＩＬ−６の予防効果を示す。本図は、ビンクリスチン−処置、対表示用量でのビンクリスチン−ＩＬ−６同時投与、またはビンクリスチン−４−ＭＣ同時投与ラットでの、感覚神経伝導速度（ＳＮＣＶ）を示す。*ｐ＜０．０５  平均値±ｓ．ｅ．ｍ．（対対照／ビヒクル；ダネット検定）
【図７】繊維／神経形態のビンクリスチン−介在障害の予防によって明らかにされた、ビンクリスチン−仲介ニューロパシーにおけるＩＬ−６の予防効果を示す。本図は、ビンクリスチン−処置、対表示用量でのビンクリスチン−ＩＬ−６同時投与、またはビンクリスチン−４−ＭＣ同時投与ラットから回収した、坐骨神経の線維直径を示す。*ｐ＜０．０５  平均値±ｓ．ｅ．ｍ．（対  対照／ビヒクル；ダネット検定）。
【図８】繊維／神経形態のビンクリスチン−介在障害の予防によって明らかにされた、ビンクリスチン−仲介ニューロパシーにおけるＩＬ−６の予防効果を示す。本図は、ビンクリスチン−処置、対表示用量でのビンクリスチン−ＩＬ−６同時投与、またはビンクリスチン−４−ＭＣ同時投与ラットから回収した、坐骨神経の軸索直径を示す。*ｐ＜０．０５  平均値±ｓ．ｅ．ｍ．（対  対照／ビヒクル；ダネット検定）。
【図９】ミエリンのビンクリスチン−介在欠損の予防によって明らかにされた、ビンクリスチン−仲介ニューロパシーにおけるＩＬ−６の予防効果を示す。本図は、ビンクリスチン−処置、対表示用量でのビンクリスチン−ＩＬ−６同時投与、またはビンクリスチン−４−ＭＣ同時投与ラットから回収した、坐骨神経のミエリン厚を示す。*ｐ＜０．０５  平均値±ｓ．ｅ．ｍ．（対  対照／ビヒクル；ダネット検定）
【図１０】ビンクリスチン介在線維変性の予防によって明らかにされた、ビンクリスチン−仲介ニューロパシーにおけるＩＬ−６の予防効果を示す。本図は、ビンクリスチン−処置、対表示用量でのビンクリスチン−ＩＬ−６同時投与、またはビンクリスチン−４−ＭＣ同時投与ラットから回収した、試料中の変性線維の割合を示す。*ｐ＜０．０５  平均値±ｓ．ｅ．ｍ．（対  対照／ビヒクル；ダネット検定）。
【図１１】ラットの体重における、シスプラチン、表示用量でのシスプラチン−ＩＬ−６同時投与、またはシスプラチン−４−ＭＣ同時投与の効果を示す。平均値±ｓ．ｅ．ｍ．。
【図１２】シスプラチン誘導傷害受容欠損の予防によって明らかにされた、シスプラチン−仲介ニューロパシーにおけるＩＬ−６の予防効果を示す。本図は、シスプラチン−処置、対表示用量でのシスプラチン−ＩＬ−６同時投与、またはシスプラチン−４−ＭＣ同時投与ラットからの、ホットプレート試験の結果を示す。*ｐ＜０．０５（対  シスプラチン／ビヒクル）。
【図１３】繊維／神経機能のシスプラチン−誘導機能障害の予防によって明らかにされた、シスプラチン−仲介ニューロパシーにおけるＩＬ−６の予防効果を示す。本図は、シスプラチン−処置、対表示用量でのシスプラチンン−ＩＬ−６同時投与、またはシスプラチン−４−ＭＣ同時投与ラットでの、Ｈ波の振幅を示す。*ｐ＜０．０５（対  シスプラチン／ビヒクル）。
【図１４】繊維／神経機能のシスプラチン−誘導機能障害の予防によって明らかにされた、シスプラチン−仲介ニューロパシーにおけるＩＬ−６の予防効果を示す。本図は、シスプラチン−処置、対表示用量でのシスプラチン−ＩＬ−６同時投与、またはシスプラチン−４−ＭＣ同時投与ラットでの、ＳＮＣＶを示す。平均値±ｓ．ｅ．ｍ  *ｐ＜０．０５（対  シスプラチン／ビヒクル）。
【図１５】繊維形態のシスプラチン−誘導障害の予防によって明らかにされた、シスプラチン−仲介ニューロパシーにおけるＩＬ−６の予防効果を示す。本図は、シスプラチン−処置、対表示用量でのシスプラチン−ＩＬ−６同時投与、またはシスプラチン−４−ＭＣ同時投与ラットから回収した、坐骨神経の繊維直径を示す。
【図１６】神経形態のシスプラチン−誘導障害の予防によって明らかにされた、シスプラチン−仲介ニューロパシーにおけるＩＬ−６の予防効果を示す。本図は、シスプラチン−処置、対表示用量でのシスプラチン−ＩＬ−６同時投与、またはシスプラチン−４−ＭＣ同時投与ラットから回収した、坐骨神経の軸索直径を示す。
【図１７】ミエリンのシスプラチン−誘導欠損の予防によって明らかにされた、シスプラチン−仲介ニューロパシーにおけるＩＬ−６の予防効果を示す。本図は、シスプラチン−処置、対表示用量でのシスプラチン−ＩＬ−６同時投与、またはシスプラチン−４−ＭＣ同時投与ラットから回収した試料中の、有髄線維の割合を示す。
【図１８】シスプラチン−誘導線維変性の予防によって明らかにされた、シスプラチン−仲介ニューロパシーにおけるＩＬ−６の予防効果を示す。本図は、シスプラチン−処置、対表示用量でのシスプラチン−ＩＬ−６同時投与、またはシスプラチン−４−ＭＣ同時投与ラットから回収した、試料中の変性線維の割合を示す。
【図１９】傷害受容欠損のシスプラチン−仲介誘導の改善によって明らかにされた、シスプラチン−仲介ニューロパシーにおけるＩＬ−６の治療効果を示す。本図は、シスプラチン−処置、対表示用量でのシスプラチン−ＩＬ−６同時投与、またはシスプラチン−４−ＭＣ同時投与ラットからの、ホットプレート試験の結果を示す。
【図２０】繊維／神経機能のシスプラチン−誘導機能障害の改善によって明らかにされた、シスプラチン−仲介ニューロパシーにおけるＩＬ−６の治療効果を示す。本図は、シスプラチン−処置、対表示用量でのシスプラチンン−ＩＬ−６同時投与、またはシスプラチン−４−ＭＣ同時投与ラットでの、振幅Ｈ波を示す。
【図２１】繊維／神経機能のシスプラチン−誘導機能障害の改善によって明らかにされた、シスプラチン−仲介ニューロパシーにおけるＩＬ−６の治療効果を示す。本図は、シスプラチン−処置、対表示用量でのシスプラチン−ＩＬ−６同時投与、またはシスプラチン−４−ＭＣ同時投与ラットでの、ＳＮＣＶを示す。
【図２２】ラットのシスプラチン−処置群から回収した試料中のミエリン面積の変化を示す。
【図２３Ａ】ラットのシスプラチン−処置群から回収した試料中の変性線維の変化を示す。
【図２３Ｂ】ラットのシスプラチン−処置群から回収した試料中の、非変性線維における変化を示す。
【図２４】ミエリンのシスプラチン−誘導欠損の改善によって明らかにされた、シスプラチン−誘導ニューロパシーにおけるＩＬ−６の治療効果を示す。本図は、シスプラチン−処置ラット、およびＩＬ−６または４−ＭＣを投与したシスプラチン処置ラットから回収した試料中の、ミエリン面積を示す。
【図２５】シスプラチン−処置ラット、およびＩＬ−６または４−ＭＣを投与したシスプラチン処置ラットから回収した試料中の、大／小繊維比のシスプラチン仲介変化の改善によって明らかにされた、シスプラチン−誘導ニューロパシーにおけるＩＬ−６の予防効果を示す。
【図２６Ａ】シスプラチン−誘導線維変性の改善によって明らかにされた、シスプラチン−誘導ニューロパシーにおけるＩＬ−６の治療効果を示す。本図は、シスプラチン−処置ラット、およびＩＬ−６または４−ＭＣを投与したシスプラチン処置ラットから回収した試料中の、変性線維の変化を示す。
【図２６Ｂ】シスプラチン−誘導線維変性の改善によって明らかにされた、シスプラチン−誘導ニューロパシーにおけるＩＬ−６の治療効果を示す。本図は、シスプラチン−処置ラット群、およびＩＬ−６または４−ＭＣを投与したシスプラチン処置ラットから回収した試料中の、非変性線維の変化を示す。
【図２７】タキソール−誘導線維変性の改善によって明らかにされた、タキソール−誘導ニューロパシーにおけるＩＬ−６の治療効果を示す。本図は、タキソールで処置したラット、およびＩＬ−６または４−ＭＣを投与したタキソール−処置ラットにおける、Ｈ−波潜時を示す。
【図２８】Ｈ−波の振幅の減少の予防によって明らかにされた、タキソール−誘導ニューロパシーにおけるＩＬ−６の予防効果を示す。本図は、タキソールで処置したラット群、およびＩＬ−６または４−ＭＣを投与したタキソール−処置ラットにおける、Ｈ−波の振幅を示す。
【図２９】タキソール仲介ＳＮＣＶ減少の予防によって明らかにされた、タキソール−誘導ニューロパシーにおけるＩＬ−６の予防効果を示す。本図は、タキソールで処置したラット、およびＩＬ−６または４−ＭＣを投与したタキソール−処置ラットにおける、ＳＮＣＶを示す。
【図３０−１】ＭＣｆ−７またはＳＫ−ＭＥＳ１細胞中の、ビンクリスチン、シスプラチン、カルボプラチンおよびタキソールの抗増殖効果対するＩＬ−６の効果を示す。Ａ−ＭＣＦ７−ビンクリスチン、Ｂ−ＳＫ−ＭＥＳ−１−ビンクリスチン、Ｃ−ＭＣＦ−７−シスプラチン、Ｄ−ＳＫ−ＭＥＳ１−シスプラチン。
【図３０−２】ＭＣｆ−７またはＳＫ−ＭＥＳ１細胞中の、ビンクリスチン、シスプラチン、カルボプラチンおよびタキソールの抗増殖効果に対するＩＬ−６の効果を示す。Ｅ−ＭＣＦ７−タキソール、Ｆ−ＳＫ−ＭＥＳ１−タキソール、Ｇ−ＭＣＦ７−タキソール＋カルボプラチン、Ｈ−ＳＫ−ＭＥＳ−タキソール＋カルボプラチン、Ｉ−ＭＣＦ７−カルボプラチンおよびＪ−ＳＫ−ＭＥＳ１−カルボプラチン。
【図３１】ヌードマウスにおける、ヒトＷｉＤｒ結腸癌腫瘍増殖における、シス−プラチナの効果を示す。
【図３２】ヌードマウスにおける、ヒトＷｉＤｒ結腸腫瘍増殖における、ＩＬ−６（アテキサキン  アルファ）の効果を示す。
【図３３】ヌードマウスにおける、ヒトＷｉＤｒ結腸腫瘍増殖における、シス−プラチナとの組み合わせでの、ＩＬ−６（アテキサキン  アルファ）の効果を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０−１】
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【図３０−２】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【国際調査報告】
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