(57)【要約】本発明は、重度の肺炎を治療または予防する方法を提供し、この方法は、重度の肺炎を有するか、または重度の肺炎を有する危険性のある患者に、約１．０ｍｇ／ｋｇ／時未満の投与速度での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価な投与速度での、連続的な静脈内注入により、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログを投与する工程を包含し、その患者はＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの投与の２４時間以内に抗凝固剤を受けていない。本方法は、好ましくは有害な副作用を避けるために低用量でのＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの連続的な静脈内注入の使用をともなう。【特許請求の範囲】
【請求項１】
重度の肺炎を治療または予防する方法であって、該方法は、以下：
重度の肺炎を有するか、または重度の肺炎を有する危険性のある患者に、約１．０ｍｇ／ｋｇ／時未満の投与速度での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価な投与速度での、連続的な静脈内注入により、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログを投与する工程
を包含し、該患者はＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの投与の２４時間以内に抗凝固剤を受けていない、方法。
【請求項２】
前記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記患者が実証可能な感染を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、約０．８０ｍｇ／ｋｇ／時未満の投与速度での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価な投与速度での、連続的な静脈内注入により投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記投与速度が、約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／時〜約０．１０ｍｇ／ｋｇ／時の投与速度での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等しく、かつ該ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが少なくとも約７２時間投与される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記投与速度が、約０．０１０ｍｇ／ｋｇ／時〜約０．１０ｍｇ／ｋｇ／時の投与速度での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記投与速度が、約０．０２０ｍｇ／ｋｇ／時〜約０．０８ｍｇ／ｋｇ／時の投与速度での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価である、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、少なくとも約９６時間投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、約０．０２５ｍｇ／ｋｇ〜約２．５ｍｇ／ｋｇの総用量での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価な総用量を提供するように連続的な静脈内注入により投与される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、約０．０２ｍｇ／ｋｇ／時〜約０．０９ｍｇ／ｋｇ／時の投与速度での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価な投与速度での連続的な静脈内注入により投与される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、約０．０６ｍｇ／ｋｇ〜約４ｍｇ／ｋｇの１日用量での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価な１日用量を提供するように連続的な静脈内注入により投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＴＦＰＩアナログが、配列番号１のアミノ酸１９〜８９からなる第１のＫｕｎｉｔｚドメインを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＴＦＰＩアナログが、さらに配列番号１のアミノ酸９０〜１６０からなる第２のＫｕｎｉｔｚドメインを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＴＦＰＩアナログが、配列番号１のアミノ酸１〜１６０を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＴＦＰＩアナログが配列番号１のアミノ酸９０〜１６０からなる第２のＫｕｎｉｔｚドメインを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログを含む凍結乾燥組成物から調製される、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、アルギニンを含む処方物として投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、クエン酸塩を含む処方物として投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
前記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、約３００ｍＭ塩酸アルギニンおよび約２０ｍＭクエン酸ナトリウムを含み、かつ約５．５のｐＨを有する処方物において、約０．１５ｍｇ／ｍｌの濃度を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
さらに、抗生物質、抗体、内毒素アンタゴニスト、抗凝固活性を有する組織因子アナログ、免疫抑制剤、細胞接着ブロッカー、ヘパリン、ＢＰＩタンパク質、ＩＬ−１アンタゴニスト、パファーゼ（ＰＡＦ酵素インヒビター）、ＴＮＦインヒビター、ＩＬ−６インヒビター、および補体のインヒビターからなる群から選択される追加物質を、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの投与と同時またはその２４時間以内に投与する工程を包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記追加物質が抗体であり、該抗体がＴＮＦ、ＩＬ−６およびＭ−ＣＳＦからなる群から選択される抗原に特異的に結合する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
重度の肺炎を処置する方法であって、該方法は、以下：
患者に、
（ｉ）ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログ、および
（ｉｉ）抗生物質、モノクローナル抗体、サイトカインインヒビターおよび補体インヒビターからなる群から選択される追加物質、
を投与する工程を包含する、方法。
【請求項３６】
前記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記患者が、実証可能な感染を有する、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、約１．０ｍｇ／ｋｇ／時未満の投与速度での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価な投与速度での連続的な静脈内注入により投与される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
前記投与速度が、約０．００１ｍｇ／ｋｇ／時〜約０．０９０ｍｇ／ｋｇ／時の投与速度での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記投与速度が、約０．００２ｍｇ／ｋｇ／時〜約０．０５０ｍｇ／ｋｇ／時の投与速度での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記投与速度が、約０．００２ｍｇ／ｋｇ／時〜約０．０１０ｍｇ／ｋｇ／時の投与速度での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記投与速度が、約０．００２５〜約０．０７５ｍｇ／ｋｇ／時の投与速度での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価である、請求項４１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、重度の市中肺炎の治療的処置の方法に関する。さらに具体的には、重度の肺炎に関連する、過増殖の生理学的経路または増幅された生理学的経路を減弱させるための、組織因子経路インヒビタータンパク質の投与に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
肺炎は、肺（肺胞腔および間質組織を含む）の一つ以上の機能エレメントの急性感染から生じる。米国において、毎年約２００万人の人々が肺炎を発症し、これらの人々のうち４０，０００〜７０，０００人が死亡する。肺炎は、すべての疾患分類の中で死因として６番目に位置付けられ、最も一般的な致命的な院内で始まる（院内）感染症である。市中肺炎（ＣＡＰ）は、米国におケル医療費にかなりの影響を有し、直接費で毎年推計１４０億ドル、逸失賃金で９０億ドルを占める（非特許文献１）。発展途上国においては、下気道感染は主要な死因であるか、または伝染性下痢症に次いで２番目に位置する。（非特許文献２）。
【０００３】
「重度の肺炎」として知られる状態は、多様な組織（例えば、アメリカ胸部学会（ＡＴＳ））により示される指針に従って特徴付けられる（非特許文献３）。例えば、このＡＴＳは、重度の肺炎の診断の他の基準に加えて、少なくとも一つの主要な基準（例えば、機械的人工換気の必要性または敗血性ショック）を要求している。一般的に、重度の肺炎は、急性肺疾患、肺の炎症性疾患、または炎症もしくは凝固のような要因に起因する肺機能の任意の混乱から生じうる。重度のＣＡＰの診断は、特に肺炎にためにＩＣＵに収容されている患者に基づく。疫学的には、この患者集団は、すべてのＩＣＵ入院患者の約１０％を構成する。肺炎のＩＣＵ患者は、ＣＡＰを有する一般的な入院患者の死亡率の１５％未満と比較して、全てのＣＡＰ患者の最大の死亡率（３０％〜４０％）を有する。
【０００４】
米国では毎年、約４百万人の成人において市中肺炎（ＣＡＰ）と診断されており、６００，０００もの多くの人が入院を必要とする（非特許文献４）。全体として、ＣＡＰの発生率は年齢とともに増加し、最大の罹患率が６５歳以上の人に見られる（非特許文献５）。この発生率は、併存症（例えば、慢性閉塞性肺疾患、喘息、糖尿病、アルコール依存症、免疫抑制、腎不全、慢性肝疾患および心臓病）を有する患者でも増加する。非特許文献６；非特許文献７。
【０００５】
肺炎は米国において感染による死亡の主要原因で、全体的な死亡の６番目の主要原因である。肺炎関連死亡率は１９７９年から１９９２年までに２２％増加し、高齢患者（６５歳以上）は１９９２年のすべての肺炎関連死亡の８９％を占めている。肺炎およびインフルエンザ死亡率−米国、１９７９年〜１９９４年［公開された訂正はＭＭＷＲ．１９９５；４４：７８２にある］を参照されたい。ＭＭＷＲ．１９９５；４４：５３５−５３７。Ｆｉｎｅおよびその共同研究者ら（１９９７年）は、ある共存する病気（腫瘍性疾患、鬱血性心不全（ＣＨＦ）、脳血管疾患、腎疾患および肝疾患）およびある種の健康診断での知見（精神状態の異常、心拍数の増加、呼吸数の増加、収縮期血圧の減少および異常な低温または異常な高温）もまた、ＣＡＰ関連死亡率の増加に関連することを報告した。さらに、ＣＡＰは米国において医療費に対して著しい影響を有し、直接費で毎年推測１４０億ドルおよび逸失賃金で９０億ドルを占める（非特許文献８）。
【０００６】
組織因子経路インヒビター（ＴＦＰＩ）は、タンパク質であり、そして哺乳動物の血漿に存在するセリンプロテアーゼインヒビターである。非特許文献９；非特許文献１０；非特許文献１１。ＴＦＰＩは組織因子インヒビター、組織トロンボプラスチンインヒビター、第ＩＩＩ因子インヒビター、外因経路インヒビター（ＥＰＩ）、およびリポタンパク質関連凝固阻止剤（ＬＡＣＩ）としても知られている。「組織因子経路インヒビター」（ＴＦＰＩ）との名称は、１９９１年６月３０日に血栓症および止血に関する国際学会（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｎ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ）により承認された。
【０００７】
血液凝固活性化は、液体血液の固体ゲルまたは凝血塊への変換である。さらに、凝固プロテアーゼの消費は過剰な出血を導く。主要な事象は、可溶性フィブリノーゲンの、フィブリン不溶性ストランドへの変換であるが、フィブリン自体は全血液凝塊のわずかに０．１５％を形成するだけである。この変換は、複合的な酵素カスケードの最終工程である。成分（因子）は、チモーゲン（タンパク質分解酵素の不活性前駆体）として存在し、これは特定部位でのタンパク質分解切断により活性酵素に変換される。１つの因子の少量の活性化が、より大量の次のものの形成を触媒し、その結果フィブリンの著しく迅速な形成をもたらす増幅をもたらす。
【０００８】
凝固は、内皮細胞下の細胞に発現される第ＶＩＩａを組織因子（ＴＦ）に曝す血管損傷により開始されると考えられている。第ＶＩＩａ因子−ＴＦ複合体は第Ｘ因子を第Ｘａ因子に切断し、第ＩＸ因子を第ＩＸａ因子に切断する。ＴＦＰＩは第ＶＩＩａ因子と第Ｘａ因子の両方に結合する。ＴＦＰＩと、（結合ＴＦを伴う）第ＶＩＩａ因子と、第Ｘａ因子との間に形成される複合体は、持続した止血に必要とされる第Ｘａ因子および第ＩＸａ因子のさらなる形成を阻害する（非特許文献１２）。
【０００９】
血流に直接導入される内毒素等の細菌産物による凝固カスケードの活性化は、動脈表面上の広範なフィブリン堆積、ならびにフィブリノーゲン、プロトロンビン、第Ｖ因子および第ＶＩＩＩ因子、および血小板の減少をもたらし得る。さらに、フィブリン溶解系が促進され、フィブリン分解産物のさらなる形成をもたらす。
【００１０】
凝固活性化が明らかに細菌産物（例えば、内毒素）により開始されるのと同時に、相反する機構も凝固により活性されるようである（すなわちフィブリン溶解系の活性化）。活性化第ＸＩＩＩ因子はプラスミノーゲンプロアクチベータをプラスミノーゲンアクチベーターに変換し、このアクチベータは続いて、プラスミノーゲンをプラスミンに変換することにより血塊溶解を媒介する。しがたって、血漿フィブリン溶解系はまた、出血傾向にも寄与し得る。
【００１１】
内毒血症は、組織プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター（ＰＡＩ）の血中濃度の増加に関連する。このインヒビターは、組織プラスミノーゲンアクチベーター（ＴＰＡ）を迅速に不活化することにより、プラスミノーゲンのプラスミンへの活性化による繊維素溶解を促進するＴＰＡの能力を妨げる。繊維素溶解の欠陥は、血管のフィブリン堆積を引き起こし、それゆえ敗血症ショックに関連するＤＩＣに寄与し得る。
【００１２】
重篤な肺炎および関連する血液凝固障害の予防または処置のための、満足できる介入を同定する努力が進行している。凝固経路を遮断する因子は、重度の肺炎の治療上の処置または予防的治療として必ずしも効果的ではない。例えば、ヘパリンは一般的に使用される抗凝血剤である。しかし、ヘパリンは過剰な出血を誘発し、凝固異常は緩和するが、延命効果を提供しないことがわかったため、ヘパリンの使用の運用は困難である。例えば、非特許文献１３を参照されたい。主に、激症ＤＩＣが際立った特徴である髄膜炎菌内毒血症におけるいくつかの臨床試験はヘパリン治療による敗血症の死亡率の減少を示すことはできなかった。例えば、非特許文献１４；非特許文献１５；非特許文献１６を参照。
【００１３】
重度の市中肺炎にかかりやすい患者は、集中治療室（ＩＣＵ）への入院を必要とする市中肺炎を有する患者である。市中肺炎を有する患者は、肺実質の感染を有すると臨床的に同定され、そして／またはＸ線写真および臨床的徴候によって確認される。重度の肺炎は、重度の市中肺炎を包含し、代表的には十分に規定されている病原体（Ｓ．Ｐｎｅｕｍｏｎａｅ、ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎａｅまたは多様なグラム陰性桿菌が挙げられる）を有する。重度の市中肺炎を有する患者の大部分は、ＣＡＰ症状の発見前は地域社会に住み、わずかに約２０％の患者のみが病院、養護施設または長期医療からの移動を承認される。重度ＣＡＰを有する米国の患者は、約５０％が男性であり、約５０％が女性であるが、年上である傾向がある。米国における重度ＣＡＰを有する約１７％の患者が５０歳未満であり、約２４％が５０歳〜６４歳であり、約２１％が６５歳〜７４歳であり、約３８％が７５歳を超える。重度ＣＡＰを有するほとんどの患者は、１種類以上の顕著な共存症を有する。２００３年にＩＣＵ介護治療を受けた米国のＣＡＰ患者のうち、これらの患者は、代表的に、対応する心臓病、ＣＯＰＤ／嚢胞性線維症、糖尿病、腎疾患、癌、アルコール依存症および／または薬物乱用を有する。
【００１４】
組換えヒトａｌａ−ＴＦＰＩ（ＴＦＰＩアナログ）の投与は、敗血症の動物モデルにおいて、生存率を向上させることが示されている。例えば、特許文献１を参照されたい。内在性タンパク質として、ＴＦＰＩは良好な耐容性を示す。静脈内注射または皮下注射によるＴＦＰＩ投与は、凝固能力を減少させることが示された。この減少は、プロトロンビン時間（ＰＴ）の増加として現れる。動物およびヒトの研究において、ＰＴの延長は、血漿ＴＦＰＩの増加に対して直線的に関連した。非特許文献１７。
【００１５】
重度の肺炎の致死的な影響を阻害し、同時に潜在的に深刻な副作用を最小化する治療方法に対する必要性が、当該分野においてなお存在している。
【特許文献１】米国特許第６，０６３，７６４号明細書
【非特許文献１】Ｌｙｎｃｈ  Ｊ  Ｐ，Ｍａｒｔｉｎｅｚ  Ｆ  Ｊ．Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ−ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｐｕｌｍ  Ｍｅｄ．１９９８年；４：ｐ．１６２−１７２
【非特許文献２】Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ，２０００年、Ｓｅｃ．６，Ｃｈ．７３，Ｐｎｅｕｍｏｎｉａ
【非特許文献３】Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  ２００１年；１６３：ｐ．１７３０−１７５４
【非特許文献４】Ｆｉｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．１９９７年、３３６，ｐ．２４３−５０
【非特許文献５】Ｍａｒｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ．１９９７年；１５７：ｐ．１７０９−１７１８
【非特許文献６】Ｍａｒｒｉｅ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｐｕｌｍ  Ｍｅｄ．１９９６年；２：ｐ．１９２−１９７
【非特許文献７】Ｎｉｅｄｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｒｅｖ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｄｉｓ．１９９３年；１４８：ｐ．１４１８−１４２６
【非特許文献８】Ｌｙｎｃｈ  ＆  Ｍａｒｔｉｎｅｚ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｐｕｌｍ  Ｍｅｄ．１９９８年；４：ｐ．１６２−１７２
【非特許文献９】Ｔｈｏｍａｓ，Ｂｕｌｌ．Ｊｏｈｎｓ  Ｈｏｐｋｉｎｓ  Ｈｏｓ  １９４７年、２６、ｐ．８１
【非特許文献１０】Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１９４７年、１４９，ｐ．１２３
【非特許文献１１】Ｂｒｏｚｅ  ＆  Ｍｉｌｅｔｉｃｈ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １９８７年、８４，ｐ．１８８６
【非特許文献１２】Ｂｒｏｚｅ，Ｊｒ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．１９９５年、４６：ｐ．１０３
【非特許文献１３】Ａｏｋｉら，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｌ．「Ａ  Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｄｏｕｂｌｅ−ＢＬＩＮＤ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  Ｔｒｉａｌ  ｏｆ  Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃ  ａｎｄ  Ｕｎｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ  Ｈｅｐａｒｉｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｅｄ  Ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ  Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ」、２００２年、７５，ｐ．５４０−４７
【非特許文献１４】Ｃｏｒｒｉｇａｎら，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，「Ｈｅｐａｒｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ｓｅｐｔａｃｅｍｉａ  ｗｉｔｈ  Ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｅｄ  Ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ  Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ．Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｎ  Ｍｏｒａｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｏｎ  Ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｅｍｏｓｔａｔｉｃ  Ｄｅｆｅｃｔｓ」、１９７０年、２８３：ｐ．７７８−７８２
【非特許文献１５】Ｌａｓｃｈら，Ｔｈｒｏｍｂｏｓ．Ｄｉａｔｈｅｓ．Ｈａｅｍｏｒｒｈ．，「Ｈｅｐａｒｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｄｉｆｆｕｓｅ  Ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ  Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ（ＤＩＣ）」，１９７４年、３３：ｐ．１０５
【非特許文献１６】Ｓｔｒａｕｂ，Ｔｈｒｏｍｂｏｓ．Ｄｉａｔｈｅｓ．Ｈａｅｍｏｒｒｈ．，「Ａ  Ｃａｓｅ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｈｅｐａｒｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ  Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ」，１９７４年，３３：ｐ．１０７
【非特許文献１７】Ａ．Ａ．Ｃｒｅａｓｅｙ，Ｓｅｐｓｉｓ  １９９９年、３：ｐ．１７３
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１６】
（発明の要約）
本発明の一実施態様は、重度の肺炎を治療または予防する方法である。この方法は、重度の肺炎を有するか、または重度の肺炎を有する危険性のある患者に、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログを投与する工程を包含する。いくつかの実施態様において、患者は実証可能な感染を有する。
【００１７】
本発明の別の実施態様は、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログからなる群から選択される因子の連続的な静脈内注入液を患者に投与する工程を包含する、重度の肺炎を処置する方法である。いくつかの実施態様において、患者は実証可能な感染を有する。
【００１８】
他の実施態様としては、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、参照ａｌａ−ＴＦＰＩの約２．０ｍｇ／ｋｇ／時未満の投与速度での投与と等価な投与速度で連続的な静脈内注入により投与される、上記実施態様のいずれかが挙げられる。好ましい実施態様において、その投与速度は、参照ａｌａ−ＴＦＰＩの約０．０００２５ｍｇ／ｋｇ／時〜約２．０ｍｇ／ｋｇ／時、もしくは約０．００１ｍｇ／ｋｇ／時〜約１．７５ｍｇ／ｋｇ／時での投与速度での投与と等価である。別の好ましい実施態様において、その投与速度は、参照ａｌａ−ＴＦＰＩの約０．００５ｍｇ／ｋｇ／時〜約１．５０ｍｇ／ｋｇ／時での投与と等価である。さらに好ましい実施態様において、その投与速度は、参照ａｌａ−ＴＦＰＩの約０．０１０ｍｇ／ｋｇ／時〜約０．７５ｍｇ／ｋｇ／時の投与と等価である。さらに好ましい実施態様において、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログは、参照ａｌａ−ＴＦＰＩの約０．２ｍｇ／ｋｇ／時〜約０．８ｍｇ／ｋｇ／時での投与と等価な投与速度で投与される。別の好ましい実施態様において、投与速度は、参照ａｌａ−ＴＦＰＩの約０．０２４〜約４．８ｍｇ／ｋｇでの総用量での投与と等価な総用量を提供するように投与される。別の好ましい実施態様において、投与速度は、参照ａｌａ−ＴＦＰＩの少なくとも約０．００６ｍｇ／ｋｇおよび約１．２ｍｇ／ｋｇ未満での一日の用量での投与と等価な一日の用量を提供するように投与される。
【００１９】
他の実施態様としては、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが少なくとも７２時間投与される上記実施態様のいずれかが挙げられる。好ましい実施態様において、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログは、少なくとも９６時間投与される。
【００２０】
他の実施態様としては、ＴＦＰＩアナログが非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである上記実施態様のいずれかが挙げられる。
【００２１】
他の実施態様としては、ＴＦＰＩアナログが配列番号１のアミノ酸１９〜８９からなる第１のＫｕｎｉｔｚドメインを含む上記実施態様のいずれかが挙げられる。好ましい実施態様において、ＴＦＰＩアナログが、さらに配列番号１のアミノ酸９０〜１６０からなる第２のＫｕｎｉｔｚドメインを含む。
【００２２】
他の実施態様としては、ＴＦＰＩアナログが配列番号１のアミノ酸１〜１６０からなるか、またはＴＦＰＩアナログが配列番号１のアミノ酸９０〜１６０からなる第２のＫｕｎｉｔｚドメインを含む上記実施態様のいずれかが挙げられる。
【００２３】
他の実施態様としては、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログがＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログを含む凍結乾燥組成物から調製される上記実施態様のいずれかが挙げられる。
【００２４】
他の実施態様としては、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログがアルギニンを含む処方物として投与される上記実施態様のいずれかが挙げられる。
【００２５】
他の実施態様として、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログがシトレートを含む処方物として投与される上記実施態様のいずれかが挙げられる。
【００２６】
他の実施態様として、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、約３００ｍＭ塩酸アルギニンおよび約２０ｍＭクエン酸ナトリウムを含み、約５．５のｐＨを有する処方物中に約０．１５ｍｇ／ｍｌの濃度を有する上記実施態様のいずれかが挙げられる。
【００２７】
他の実施態様としては、さらに、抗生物質、抗体、内毒素アンタゴニスト、抗凝固活性を有する組織因子アナログ、免疫抑制剤、細胞接着ブロッカー、ヘパリン、ＢＰＩタンパク質、ＩＬ−１アンタゴニスト、パファーゼ（ＰＡＦ酵素インヒビター）、ＴＮＦインヒビター、ＩＬ−６インヒビター、および補体のインヒビターからなる群から選択されるさらなる物質を、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの投与と同時またはその２４時間以内に投与する工程を包含する、上記実施態様のいずれかが挙げられる。好ましい実施態様において、さらなる物質がＴＮＦ、ＩＬ−６およびＭ−ＣＳＦからなる群から選択される抗原に特異的に結合する抗体である。
【００２８】
本発明のさらなる実施態様は、詳細な説明とともに添付の参考図面を考慮すれば明らかである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
（発明の詳細な説明）
ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩのアナログの投与は、重度の肺炎の予防および治療に効果的である。ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩのアナログの連続低用量投与（以下、「低用量ＴＦＰＩ投与」と称する）もまた、重度の肺炎の予防および処置に効果的である。ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログ投与、特に低用量投与は、急性炎症または慢性炎症（特に重度の肺炎）を阻害または軽減する。低用量ＴＦＰＩ投与が少なくとも３日間続けられた場合に、重度の肺炎による死亡の危険性が減少する一方で、有害な副作用による合併症（特に出血性疾患）発生率が最小化され得る。低用量ＴＦＰＩ投与のさらなる利点は、十分に高い用量でＴＦＰＩの血漿濃度を減少させうる許容効果の回避である。許容効果は、約８５０ｎｇ／ｍｌの血漿ＴＦＰＩ濃度で最大の半分促進されるが、低用量ＴＦＰＩ投与では血漿レベルは一般的には５００ｎｇ／ｍｌ以下にある。低用量ＴＦＰＩ投与は、一般的にはＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの連続的な静脈注入により実施される。
【００３０】
（ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログ）
本明細書中で用いられる場合、「ＴＦＰＩ」とは、配列番号１に示される２７６アミノ酸残基の配列と約３８，０００ダルトンの分子量を有する成熟した血清糖タンパク質をいう。それは組織因子活性（すなわち凝固活性化）の天然のインヒビターである。米国特許第５，１１０，７３０号は組織因子（ＴＦ）を記載し、米国特許第５，１０６，８３３号はＴＦＰＩを記載する。ＴＦＰＩのｃＤＮＡのクローニングは、Ｗｕｎらの米国特許第４，９６６，８５２号に記載されている。ＴＦＰＩはプロテアーゼインヒビターであり、３つのＫｕｎｉｔｚドメインを有し、そのうちの２ドメインはそれぞれ第ＶＩＩ因子と第Ｘａ因子と相互作用することが知られている。第３ドメインの機能は、未知のままである。ＴＦＰＩはインビボで機能して、第Ｘａ因子：ＴＦＰＩ：第ＩＩａ因子：組織因子の４成分からなる不活性な複合体を形成することにより凝固の開始を制限すると考えられている。Ｒａｐａｐｏｒｔ，Ｂｌｏｏｄ  ７３：３５９−３６５（１９８９）およびＢｒｏｚｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２９：７５３９−７５４６（１９９０）の概説を参照されたい。ＴＦＰＩの構造的特徴の多くは、他のよく研究されたプロテアーゼインヒビターとの相同性から推定することができる。ＴＦＰＩは酵素ではないので、おそらくそのプロテアーゼ標的を化学量論的に阻害する（すなわち、ＴＦＰＩのＫｕｎｉｔｚドメインの一つが、一つのプロテアーゼ分子を阻害する）。好ましくは、Ｋｕｎｉｔｚドメイン１および／またはＫｕｎｉｔｚドメイン２は、本発明のＴＦＰＩ分子中に存在し得る。Ｋｕｎｉｔｚドメイン３の機能は、未知である。
【００３１】
「ＴＦＰＩアナログ」は、一つ以上のアミノ酸付加または置換（一般的には、本質的に保存的である）、一つ以上のアミノ酸欠失（例えば、ＴＦＰＩフラグメント）、または一つ以上のアミノ酸に対する一つ以上の化学的部分の付加により修飾された、ＴＦＰＩの誘導体である（ただし、ＴＦＰＩへの修飾がＴＦＰＩ生物活性を破壊しない限り）。ポリペプチドアナログを作製する方法は当該分野において公知であり、以下にさらに詳しく説明され，る。好ましいＴＦＰＩアナログはＮ−Ｌ−アラニル−ＴＦＰＩアナログ（ａｌａ−ＴＦＰＩ）であり、そのアミノ酸配列は配列番号２に示される。ＴＦＰＩアナログは、下記で説明するように、生物活性アッセイにより決定されたＴＦＰＩの活性をいくぶんか有する。ＴＦＰＩおよびアナログの好ましい生物活性アッセイはプロトロンビン時間（ＰＴ）アッセイである（下記を参照）。
【００３２】
ＴＦＰＩとＴＦＰＩアナログはグリコシル化されていてもよいし、グリコシル化されていなくてもよい。ＴＦＰＩのアナログは、米国特許第５，１０６，８３３号に記載されている。Ａｌａ−ＴＦＰＩは、国際的薬物名「チファコギン」（ｔｉｆａｃｏｇｉｎ）としても知られるＴＦＰＩアナログである。Ａｌａ−ＴＦＰＩは、アミノ酸末端にさらにアラニン残基が付加された成熟した完全長のヒトＴＦＰＩの全アミノ酸配列を含む。Ａｌａ−ＴＦＰＩのアミノ酸末端のアラニン残基は、大腸菌での発現を向上させ、かつ本来はアミノ末端メチオニン残基であるものの切断を達成するように、ＴＦＰＩ配列へと設計したものである。米国特許第５，２１２，０９１号を参照されたい。
【００３３】
特に好ましいＴＦＰＩアナログとしては、本質的に保存的である置換体、すなわち、側鎖において関連しているアミノ酸のファミリー内で起こる置換体が挙げられる。具体的には、アミノ酸は、一般的に、４つのファミリー、すなわち、（１）酸性…アスパラギン酸およびグルタミン酸；（２）塩基性…リジン、アルギニン、ヒスチジン；（３）非極性…アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン；および（４）非荷電極性…グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニンおよびチロシンに分けられる。ファニルアラニン、トリプトファンおよびチロシンはしばしば芳香族アミノ酸と分類される。例えば、ロイシンのイソロイシンまたはバリンへの単独置換、アスパラギン酸のグルタミン酸への単独置換、スレオニンのセリンへの単独置換、またはあるアミノ酸の構造的に関連するアミノ酸への類似の保存的置換は、生物活性に対して主要な効果を持たないことは合理的に予測可能である。その分子の望ましい機能が損なわれない限り、目的のポリペプチドは、例えば約１〜７０の保存的または非保存的アミノ酸置換、例えば、１、２、３、４、５、６〜５０、１５〜２５、５〜１０、または１〜７０のいずれかの整数のアミノ酸置換を含み得る。当業者は、ここに定義された生物活性を保持する適度な可能性を有する修飾を行なうことができる目的分子の領域を容易に決定するだろう。
【００３４】
「相同性」とは、２つのポリヌクレオチド間、または２つのポリペプチド部分間の類似性パーセントをいう。２つのポリペプチド配列は、それらの配列が、分子の規定された長さにわたって、少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約７５％、さらに好ましくは少なくとも約８０％〜８５％、好ましくは少なくとも約９０％、最も好ましくは少なくとも９５％〜９８％の配列相同性か、またはこれらの具体的な範囲間のいずれかの相同性パーセントを示す場合に、互いに「実質的に相同」である。本明細書中で用いられる場合、「実質的に相同」とはまた、特定されたポリペプチド配列に完全な同一性を示す配列もいう。
【００３５】
一般的に、「同一性」は二つのポリペプチド配列間のそれぞれのアミノ酸の一対一での正確な一致をいう。同一性パーセントは、二つの分子の配列を並べて、二つの並べられた配列間で合致した部分の正確な数を数え、短い方の配列の長さで除算し、その結果に１００を掛けることによって、二分子間の配列情報を直接的に比較することにより決定され得る。
【００３６】
好ましくは、天然または非天然のＴＦＰＩアナログは、配列番号１に由来するＴＦＰＩに対して少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％または９５％以上相同であるアミノ酸配列を有する。それら分子は、９８％または９９％相同であるのがより好ましい。相同性パーセントは、ギャップオープンペナルティー１２およびギャップ伸張ペナルティー２およびＢＬＯＳＵＭマトリックス６２のアフィンギャップ検索（ａｆｆｉｎｅ  ｇａｐ  ｓｅａｒｃｈ）を用いるＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムを使用して決定される。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムは、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌｎ．Ｍａｔｈ．２：４８２−４８９（１９８１）において教示される。
【００３７】
ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログの生物活性は、プロトロンビンアッセイにより決定され得る。適当なプロトロンビンアッセイは、米国特許第５，８８８，９６８号およびＷＯ９６／４０７８４に記載されている。簡単に説明すれば、プロトロンビン時間は凝固測定器（例えば、Ｏｒｇａｎｏｎ  Ｔｅｋｎｉｋａ社のＣｏａｇ−Ａ−Ｍａｔｅ  ＭＴＸ  ＩＩ）を用いて決定することができる。適当なアッセイ緩衝液は、１ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミンを含む１００ｍＭ  ＮａＣｌ、５０ｍＭトリス（ｐＨ７．５に調節）である。必要とされるさらなる試薬は正常なヒト血漿（例えば、Ｏｒｇａｎｏｎ  Ｔｅｋｎｉｋａ社の“Ｖｅｒｉｆｙ  １”）、トロンボプラスチン試薬（例えば、Ｏｒｇａｎｏｎ  Ｔｅｋｎｉｋａ社の“Ｓｉｍｐｌａｓｔｉｎ  Ｅｘｃｅｌ”）およびＴＦＰＩ標準溶液（例えば、アッセイ緩衝液１ｍｌあたり２０μｇの１００％の純粋なａｌａ−ＴＦＰＩ（またはその同等物））である。標準曲線は、例えば１〜５μｇ／ｍｌの範囲の最終濃度までのＴＦＰＩ標準溶液の一連の希釈物の凝固時間を分析することにより得られる。凝固時間の決定のために、最初に、試料またはＴＦＰＩ標準をアッセイ緩衝液に希釈する。次に、正常なヒト血漿を加える。凝固反応はトロンボプラスチン試薬を加えることにより開始させる。次に、装置は凝固時間を記録する。対数ＴＦＰＩ濃度に対する対数凝固時間のプロットから、直線的なＴＦＰＩ標準曲線を得る。標準曲線は、１００％純粋な標準の等価ＴＦＰＩ濃度に対応するＴＦＰＩ標準の純度に基づいて調節する。例えば、標準が９７％生化学的に純粋である（すなわち、ＴＦＰＩの生物活性のない３重量％の分子種を含む）ａｌａ−ＴＦＰＩ調製物である場合、標準の各希釈物の濃度に０．９７を掛けてＴＦＰＩの実際の濃度を得る。例えば、９７％純粋である調製物１ｍｌあたりの実際の重量に基づく１．０μｇ／ｍｌであるＴＦＰＩ標準は、１．０×０．９７、すなわち０．９７μｇ／ｍｌの濃度と等価であり、０．９７μｇ／ｍｌとして処理される。
【００３８】
（ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログの取得）
本発明の方法に用いられるＴＦＰＩおよびＴＦＰＩのアナログは、細胞または組織から単離、精製され得、化学合成され得、または原核細胞か真核細胞のいずれかにおいて組換え生産され得る。
【００３９】
ＴＦＰＩはいくつかの方法により単離することができる。例えば、ＴＦＰＩを分泌する細胞として、加齢した内皮細胞、約３〜４日間ＴＮＦで処理された幼若内皮細胞、肝細胞および肝癌細胞が挙げられる。ＴＦＰＩは、慣習的な方法（Ｐｅｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５，１６７８６−９３，Ｎｏｖｏｔｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４，１８８３２−３７，Ｎｏｖｏｔｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｂｌｏｏｄ  ７８，  ３９４−４００，Ｗｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５，１６０９６−１０１およびＢｒｏｎｚｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４，１８８６−９０のクロマトグラフィー方法）により精製することができる。ＴＦＰＩは血流に現れ、血液から精製することができる（Ｐｅｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０を参照）。
【００４０】
ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩ変異体は、アミノ酸配列を合成する化学的方法、例えば、固相法を用いる直接ペプチド合成（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５，２１４９−２１５４，１９６３；Ｒｏｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６９，２０２−２０４，１９９５）により製造することができる。タンパク質合成は手動による技術を用いるか、自動化により実施することができる。自動化された合成は、例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ４３１Ａ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いて達成することができる。状況に応じて、化学的方法を用いてＴＦＰＩまたはＴＦＰＩ変異体のフラグメントを別々に合成し、それらを結合させて全長分子を作ることができる。
【００４１】
ＴＦＰＩとＴＦＰＩアナログは米国特許第４，９６６，８５２号に示されているように組換え産生され得る。例えば、所望のタンパク質のｃＤＮＡを、原核生物または真核生物発現用のプラスミドに組み込むことができる。米国特許第４，８４７，２０１号は、微生物を特定のＤＮＡ配列で形質転換し、そのＤＮＡ配列を発現するための詳細を提供する。微生物を用いるタンパク質発現に関する詳細を提供する、当業者に公知の多くの他の参考文献が存在する。これらの多く（例えば、Ｍａｎｉａｔａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ）が、米国特許第４，８４７，２０１号に引用されている。
【００４２】
微生物を形質転換し、その微生物を用いてＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログを発現するために、種々の技術が利用可能である。以下は、可能な方法の単なる例示である。ＴＦＰＩ  ＤＮＡ配列は単離され、適当な制御配列に連結されなければならない。ＴＦＰＩ  ＤＮＡ配列は米国特許第４，９６６，８５２号に示されており、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍ等の会社から利用可能な市販のｐＵＮＣ１３やｐＢＲ３８２２等のプラスミドに組み込むことができる。ＴＦＰＩ  ＤＮＡがいったんベクターに挿入されたら、それを適当な宿主にクローニングすることができる。ＤＮＡは、Ｍｕｌｌｉｓの米国特許第４，６８３，２０２号およびＭｕｌｌｉｓらの米国特許第４，６８３，１９５号に示された技術等により増幅することができる。ＴＦＰＩ  ｃＤＮＡを得るために、ＴＦＰＩ  ｍＲＮＡを生成するように肝癌細胞（例えば、ＨｅｐＧ２およびＳＫＨｅｐ）等の細胞を誘導し、次いてそのｍＲＮＡを同定、単離し、それを逆転写して、ＴＦＰＩのｃＤＮＡを得ることができる。その発現ベクターで大腸菌等の宿主を形質転換した後、その細菌は発酵され得、タンパク質が発現させる。細菌は、好ましい原核微生物であり、大腸菌が特に好ましい。本発明に有用な好ましい微生物は、ブダペスト条約の規則に基づいて、１９８４年２月１４日にＡＴＣＣに寄託された大腸菌Ｋ−１２、ＭＭ２９４株（寄託番号３９６０７）である。
【００４３】
勿論、多細胞生物から得られた真核宿主細胞培養物にポリペプチドをコードする遺伝子を発現させることもできる。例えば、Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ，１９７３，Ｃｒｕｚ  ａｎｄ  Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ，ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓを参照されたい。有用な哺乳動物の細胞系として、マウスミエローマＮ５１、ＶＥＲＯ、ＨｅＬａ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＣＯＳ、Ｃ１２７、Ｈｅｐ  Ｇ２およびＳＫ  Ｈｅｐが挙げられる。ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログはバキュロウイルス感染昆虫細胞でも発現させることができる（上記引用の米国特許第４，８４７，２０１号も参照）。Ｐｅｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２６５：１６７８６−１６７９３も参照されたい。通常、真核細胞用の発現ベクターとしては、哺乳動物細胞に適合するプロモーターと制御配列、例えば、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）由来のよく使われる初期プロモーターと後期プロモーター（Ｆｉｅｒｓ，ｅｔ  ａｌ．，１９７８，Ｎａｔｕｒｅ，２７３：１１３）または他のウイルスプロモーター、例えば、ポリオーマ、アデノウイルス２、ウシパピローマウイルスまたはトリ肉腫ウイルスに由来するプロモーターまたは免疫グロブリンプロモーターおよび熱ショックプロモーターが挙げられる。哺乳動物細胞宿主系の形質転換の一般的な側面、はＡｘｅｌの米国特許第４，３９９，２１６号に記載されている。現在では、「エンハンサー」領域は発現を最適化するために重要であるとも考えられている。これらは通常はプロモーター領域の上流に見られる配列である。必要に応じて、複製開始点はウイルス源から得ることができる。しかし、染色体への組み込みは、真核生物におけるＤＮＡ複製の共通するメカニズムである。植物細胞も現在は、宿主として利用することができ、植物細胞と適合性のある制御配列、例えば、ノパリンシンターゼプロモーターおよびポリアデニル化シグナル配列（Ｄｅｐｉｃｋｅｒ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，１９８２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｇｅｎ．，１：５６１）が利用可能である。植物細胞の形質転換の方法とベクターはＷＯ８５／０４８９９に開示されている。
【００４４】
哺乳動物細胞で発現したＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログの精製に用いることのできる方法としては、ヘパリン−セファロース、モノＱ、モノＳおよび逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィーの連続的な適用が挙げられる。上記Ｐｅｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．；Ｎｏｖｏｔｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１８８３２−１８８３７；Ｎｏｖｏｔｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｂｌｏｏｄ，７８：３９４−４００；Ｗｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１６０９６−１６１０１；Ｂｒｏｚｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，ＰＮＡＳ（ＵＳＡ），８４：１８８６−１８９０；米国特許第５，１０６，８３３号；および米国特許第５，４６６，７８３号を参照されたい。これらの参考文献は、哺乳動物産生ＴＦＰＩの多様な精製方法を記載する。
【００４５】
ＴＦＰＩは、哺乳動物細胞宿主、例えば、マウスＣ１２７細胞（Ｄａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ７６，１５３８−４５，１９９０）、ベビーハムスター腎臓細胞（Ｐｅｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０）、チャイニーズハムスター卵巣細胞およびヒトＳＫ肝癌細胞を用いて、組換えグリコシル化タンパク質として発現させることもできる。Ｃ１２７  ＴＦＰＩは動物研究に用いられ、ウサギにおける組織因子誘導血管内凝固の阻害に効果的であること（上記のＤａｙ  ｅｔ  ａｌ）、イヌにおける血栓溶解後の動脈再閉塞の予防に効果的であること（Ｈａｓｋｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ８４：８２１−８２７（１９９１））、およびヒヒにおける大腸菌敗血症モデルの死亡率減少に効果的である（Ｃｒｅａｓｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９１：２８５０（１９９３））ことが示されている。Ａｌａ−ＴＦＰＩは大腸菌宿主細胞を用いて組換え非グリコシル化タンパク質として発現させることができる。大腸菌で作られた組換えタンパク質のインビトロでのリフォールディングにより高活性ａｌａ−ＴＦＰＩを作る方法が記載されている。例えば、ＷＯ９６／４０７８４を参照されたい。
【００４６】
また、ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログは細菌または酵母で作り、引き続いて精製することができる。一般的に、米国特許第５，２１２，０９１号、米国特許第６，０６３，７６４号、米国特許第６，１０３，５００号またはＷＯ９６／４０７８４に示された操作を用いることができる。本明細書中に参考として援用されるＷＯ９６／４０７８４およびＧｕｓｔａｆｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｅｘｐｒｅｓｓ．Ｐｕｒ．５：２３３（１９９４）に従って、Ａｌａ−ＴＦＰＩおよび他のＴＦＰＩアナログを精製し、可溶化し、リフォールディングさせることができる。例えば、ＷＯ９６／４０７８４の実施例９に従って調製した場合、約８５重量％〜９０重量％の全タンパク質を含むａｌａ−ＴＦＰＩの調製物を、成熟し、適切にフォールディングされ、生物活性のあるａｌａ−ＴＦＰＩとして得ることができ、その約１０〜１５％が一つ以上の酸化メチオニン残基を有する。これらの酸化型は、非誘導体化ａｌａ−ＴＦＰＩの生物活性と等しい生物活性を有するとプロトロンビンアッセイにより決定され、本明細書中に開示される発明において活性があることが予測される。残りの物質は、種々の改変形態（例えば、２量体化形態、凝集形態、およびアセチル化形態）のａｌａ−ＴＦＰＩを含む。
【００４７】
ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログは、かなりの数のシステイン残基を有し、米国特許第４，９２９，７００号に示された操作はＴＦＰＩリフォールディングに関連する。ＴＦＰＩおよびアナログは、上記のような種々のクロマトグラフィー法により緩衝溶液から精製することができる。必要に応じて、米国特許第４，９２９，７００号に示された方法を用いてもよい。ヒト投与に適する純度と活性度をもたらすＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログを精製するために、任意の方法を用いてもよい。
【００４８】
（治療方法および組成物）
一般的に、ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログは、組織因子発現の上方調節（よってＴＮＦ、ＩＬ−１または他のサイトカインによりもたらされるＴＦ活性）のために引き起こされる疾患を、処置または予防するために有用である。ＴＦＰＩ投与、特に低用量ＴＦＰＩ投与は、患者においてＩＬ−６等のサイトカインの濃度を低下させ得る。低用量ＴＦＰＩ投与は、一般的に重度の肺炎等の急性と慢性の両方の炎症状態を含む、炎症および凝固異常を処置するために有用である。
【００４９】
「重度の肺炎」は、アメリカ胸部学会により示された指針にしたがって定義される。具体的には、重度の肺炎は、肺炎の診断、およびａ）２つの主要な基準の一つ、ｂ）３つのマイナーな基準の２つ、またはｃ）英国胸部学会からの４つの基準（Ｔｈｏｒａｘ  ２００１；５６［ｓｕｐｐｌ  ＩＶ］：１−６４）の２つ、のいずれかの存在を必要とする。主要な基準は、１）機械的人工換気の必要性および２）敗血性ショックまたは４時間を超える昇圧剤の必要性である。マイナーな基準は、１）最大血圧９０ｍｍＨｇ以下、２）多大葉性肺炎、および３）（ＰａＯ２／ＦｉＯ２）＜２５０である低酸素血の基準である。英国胸部学会の基準は、１）呼吸数３０呼吸／分以上、２）最低血圧６０ｍｍＨｇ以下、３）血中尿素窒素（ＢＵＮ）＞７．０ｍＭ（＞１９．６ｍｇ／ｄＬ）および４）混乱状態である。当該分野において公知であるように、低酸素血基準（ＰａＯ２／ＦｉＯ２）は吸入酸素に対する動脈酸素の分圧をいい、ガス交換の障害レベルを示す。
【００５０】
好ましくは、重度の肺炎を有する患者は、従来知られている手段により実証可能な感染を有する。これらの方法としては、例えば、グラム染色、培養、組織化学染色、免疫化学アッセイまたは核酸アッセイによる血液または他の正常に無菌の体液または組織の培養物中の病原生物の検出が挙げられるが、これらに限定されない。実証可能な感染は、全身性抗炎症治療のための理由を構成する肺炎の診断と一致する胸部Ｘ線検査、ならびに感染の任意の臨床的症状（呼吸数３０／分以上またはＰａＣＯ２／ＦｉＯ２＜２５０における増加、血圧の減少、および体温の上昇が挙げられるが、これらに限定されない）により証拠付けられ得る。
【００５１】
（ＴＦＰＩとＴＦＰＩアナログの処方物）
ＴＦＰＩとＴＦＰＩアナログの処方物は、好ましくは静脈内注入により投与される。本質的に連続的静脈内注入が好ましい。この投与を達成する方法は、当業者に公知である。中心線または周辺線を経て注入を実施することができる。投与速度の大きな変動を避けられるべきであるが、投与されたＴＦＰＩによる血漿レベルが、本発明の好ましい実施態様による一定の投与速度での連続的注入から予測されるものの２０％以内であるという条件で、本発明の投与速度からの短期的な逸脱が許容される。
【００５２】
患者への投与前に、処方物はＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログに加えてよい。液体処方物が好ましい。ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログは、異なる濃度で、異なる処方物を用いて、ＴＦＰＩタンパク質の投与経路、溶解性および安定性に適合する生理学的に適当なｐＨで配合してよい。静脈内注入の好ましい処方物は、約０．６ｍｇ／ｍｌまでのａｌａ−ＴＦＰＩ、３００ｍＭまでの塩酸アルギニンおよびｐＨ５．０〜６．０のクエン酸ナトリウムを含む。アルギニン、ＮａＣｌ、スクロースおよびマンニトール等の特定の溶質は、ａｌａ−ＴＦＰＩを溶解および／または安定化するように機能する。ＷＯ９６／４０７８４を参照のこと。静脈内注入用の特に好ましい処方物は、約０．１５ｍｇ／ｍｌのａｌａ−ＴＦＰＩ、３００ｍＭ塩酸アルギニンおよび２０ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ５．５）を含む。ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログは、必要に応じて０．００５％または０．０１％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）を有する１５０ｍＭのＮａＣｌおよび２０ｍＭのリン酸ナトリウムまたはｐＨ５．５〜７．２の別の緩衝液中に約０．１５ｍｇ／ｍｌまでの濃度で配合することもできる。他の処方物は、１５０ｍＭのＮａＣｌ、８％（ｗ／ｖ）スクロース、または４．５％（ｗ／ｖ）マンニトールのいずれかを含む１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．５）中に約０．５ｍｇ／ｍｌまでのＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログを含有する。ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログは、高塩分を用いる数ｍｇ／ｍｌまでの高濃度で配合することもできる。例えば、ある処方物は５００ｍＭのＮａＣｌおよび２０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．０）中に約６．７ｍｇ／ｍｌまでのａｌａ−ＴＦＰＩを含有する。さらに、ＴＦＰＩ処方物はメチオニンを、好ましくは約１〜約１０ｍＭメチオニン範囲で含有してよい。
【００５３】
ＴＦＰＩ処方物の好ましい実施態様は、約０．１〜約０．７ｍｇ／ｍｌのａｌａ−ＴＦＰＩ、２００〜５００ｍＭのＬ−アルギニン、１〜７ｍＭメチオニン、５〜５０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０〜６．０）である。ＴＦＰＩ処方物の好ましい実施態様は約０．１〜約０．５ｍｇ／ｍｌのａｌａ−ＴＦＰＩ、２５０〜４００ｍＭのＬ−アルギニン、３〜６．５ｍＭメチオニン、１５〜３０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０〜６．０）である。ＴＦＰＩ処方物の好ましい実施態様は約０．１５ｍｇ／ｍｌのａｌａ−ＴＦＰＩ、約３００ｍＭの塩酸Ｌ−アルギニン、５ｍＭメチオニン、２０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）である。ＴＦＰＩ処方物の別の好ましい実施態様は約０．４５ｍｇ／ｍｌのａｌａ−ＴＦＰＩ、約３００ｍＭの塩酸Ｌ−アルギニン、５ｍＭメチオニン、２０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）である。
【００５４】
ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログの処方物のさらなる例としては、オイル、ポリマー、ビタミン、炭水化物、アミノ酸、塩、緩衝液、アルブミン、界面活性剤または充填剤が挙げられる。好ましくは、炭水化物としては、糖または糖アルコール、例えば、単糖、二糖または多糖、または水溶性グルカンが挙げられる。糖類またはグルカンとしては、フルクトース、デキストロース、ラクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、スクロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、アルファおよびベータシクロデキストリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプンおよびカルボキシメチルセルロース、またはそれらの混合物が挙げられる。スクロースが最も好ましい。糖アルコールは、−ＯＨ基を有するＣ４〜Ｃ８炭化水素と定義され、ガラクトース、イノシトール、マンニトール、キシリトール、ソルビトール、グリセロールおよびアラビトールが挙げられる。マンニトールが最も好ましい。上記のこれらの糖または糖アルコールは、個々に使用されても良いし、組合せて使用されてもよい。糖または糖アルコールが水性調製物に可溶である限り、使用される量に一定の制限はない。好ましくは、糖または糖アルコール濃度は１．０ｗ／ｖ％〜７．０ｗ／ｖ％、さらに好ましくは２．０〜６．０ｗ／ｖ％の範囲にある。
【００５５】
好ましくは、アミノ酸として、左旋性（Ｌ）形のカルニチン、アルギニンおよびベタインが挙げられる。しかし、他のアミノ酸を加えてよい。好ましいポリマーとして、２，０００〜３，０００の平均分子量を有するポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）または３，０００〜５，０００の平均分子量を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられる。凍結乾燥前または再構築後に溶液のｐＨ変化を最小化するために、組成物中に緩衝液を使用することも好ましい。ほとんどの生理学的緩衝液を使用され得るが、クエン酸塩、リン酸塩、コハク酸塩およびグルタミン酸塩緩衝液またはそれらの混合物が好ましい。好ましくは、緩衝液の濃度は０．０１〜０．３モルである。処方物に加えることができる界面活性剤は、ＥＰ第２７０，７９９号およびＥＰ第２６８，１１０号に示されている。
【００５６】
さらに、ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログは、その循環半減期を高めるために、例えばポリマーに共有結合体化させることによって化学的に修飾することができる。好ましいポリマーおよびそれらをペプチドに結合させる方法は、米国特許第４，７６６，１０６号、同４，１７９，３３７号、同４，４９５，２８５号および同４，６０９，５４６号に教えられている。好ましいポリマーは、ポリオキシエチル化ポリオールおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。ＰＥＧは室温で水溶性であり、一般式：Ｒ（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−Ｏ−Ｒ（式中、Ｒは水素、またはアルキルまたはアルカノール基等の保護基であり得る）を有する。好ましくは、保護基は１〜８炭素を有し、さらに好ましくはメチルである。記号ｎは正の整数、好ましくは１〜１，０００、さらに好ましくは２〜５００である。ＰＥＧは１０００〜４０，０００、さらに好ましくは２０００〜２０，０００、最も好ましくは３，０００〜１２，０００の好ましい平均分子量を有する。好ましくは、ＰＥＧは少なくとも一つのヒドロキシ基を有し、さらに好ましくは、それは末端ヒドロキシ基である。インヒビター上の遊離アミノ基に反応させるために、このヒドロキシ基が好ましくは活性化される。しかし、反応性基の種類と量は、本発明の共有結合体化ＰＥＧ／ＴＦＰＩを得るために変動され得ることが理解される。
【００５７】
水溶性ポリオキシエチル化ポリオールも本発明で有用である。それらはポリオキシエチル化ソルビトール、ポリオキシエチル化グルコース、ポリオキシエチル化グリセロール（ＰＯＧ）等を含む。ＰＯＧが好ましい。一つの理由は、ポリオキシエチル化グリセロールのグリセロール骨格は、例えば動物およびヒトにおいてモノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド中に天然に存在する同一の骨格であるためである。したがって、この枝分かれは体内で必ずしも外来物質と見なされない。ＰＯＧは、ＰＥＧと同じ範囲の好ましい分子量を有する。ＰＯＧに関する構造はＫｎａｕｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２６３：１５０６４−１５０７０に示され、ＰＯＧ−タンパク質複合体の議論は米国特許第４，７６６，１０６号に見られる。
【００５８】
ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの液体医薬組成物を調製した後は、この組成物は、分解を妨げ、無菌を保つために凍結乾燥され得る。液体組成物の凍結乾燥方法は、当業者に公知である。使用直前に、組成物を、追加成分を含み得る滅菌希釈剤（例えば、リンガー溶液、蒸留水または滅菌食塩水）で再構築され得る。再構築したら、組成物は好ましくは連続的な静脈内注入により対象に投与する。
【００５９】
（ＴＦＰＩとＴＦＰＩアナログの用量）
ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログは、重度の肺炎を処置および予防するのに治療的に有効な濃度で投与する。そのような用量は、他の急性または慢性の炎症、および一般的には、サイトカインが組織因子発現を上方調節する疾患にも効果的である。この目標を達成するために、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログは好ましくは静脈内に投与される。この投与を達成する方法は、当業者に公知である。一般的に、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログは１μｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは２０μｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは１〜１５ｍｇ／ｋｇの用量で与えられる。
【００６０】
上記の投与量は一般的に少なくとも約１５０時間にわたって、さらに好ましくは少なくとも約１００時間にわたって投与される。一実施態様において、ＴＦＰＩの投与は約９９〜約９０時間、好ましくは約９７〜約９４時間、さらに好ましくは約９６時間継続させる。ホストに単回投与または分割投与で投与される一日の総用量は、例えば、毎日、体重１ｋｇ当たり約２ｍｇ〜約２０ｍｇ、好ましくは体重１ｋｇ当たり約２ｍｇ〜約１５ｍｇ、毎日体重１ｋｇ当たり約４ｍｇ〜約１０ｍｇの量であり得る。用量単位組成物は、この一日の投与量を構成するそのような量またはその約数量を含んでよい。毎日の低用量は、予防または他の目的のために有用である、例えば１μｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇであってよい。単一用量形態を生成するためにキャリア物質と組合せられ得る有効成分の量は、処置される患者および特定の投与様式に基づいて変動する。
【００６１】
投薬レジメンは、患者のタイプ、年齢、体重、性別、食事および病状、疾患の重症度、投与経路、活性、有効性、薬物動態および毒物学特徴等の薬理学的な検討、薬物送達系を利用するかどうか、化合物が医薬組合せの一部として投与されるかどうか等、多様な要因に従って選択される。従って、実際に用いられる投薬レジメンは広範に変動し得、それゆえ上記の好ましい投薬レジメンから逸脱してよい。好ましくは、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの投与量は、約０．６６ｍｇ／ｋｇ／時でのａｌａ−ＴＦＰＩの投与速度と等価な投与速度よりも高くすべきではない。
【００６２】
（低用量投与）
ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、少なくとも約０．０００２５ｍｇ／ｋｇ／時（０．００４１７μｇ／ｋｇ／分）および約２．００ｍｇ／ｋｇ／時（０．８３３μｇ／ｋｇ／分）未満の投与速度でのａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価な投与速度で与えられる場合、重度の肺炎を処置する有効性が保持され、出血等の有害な副作用が最小化される。一つの好ましい実施態様において、ａｌａ−ＴＦＰＩは少なくとも約０．０２ｍｇ／ｋｇ／時〜約１．０ｍｇ／ｋｇ／時、さらに好ましくは約０．２４ｍｇ／ｋｇ／時〜約０．８ｍｇ／ｋｇ／時の投与速度で投与される。改善された組み合せの有効性および安全性のために、投与速度は、好ましくは少なくとも約０．０１０ｍｇ／ｋｇ／時（０．１６７μｇ／ｋｇ／分）および約０．０４５ｍｇ／ｋｇ／時（０．８３３μｇ／ｋｇ／分）未満でのａｌａ−ＴＦＰＩの投与速度と等価であるか、または少なくとも約０．０２０ｍｇ／ｋｇ／時および約０．０４０ｍｇ／ｋｇ／時未満でのａｌａ−ＴＦＰＩの投与速度と等価であるか、最も好ましくは約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／時（０．４１７μｇ／ｋｇ／分）のａｌａ−ＴＦＰＩの投与速度と等価である。投与経路は、一般的に静脈内投与により、連続的な静脈内注入が好ましい。注入は、少なくとも約７２時間、９６時間、１２０時間または２４０時間投与することができる。好ましくは、連続的な注入は、３〜８日間、さらに好ましくは３〜６日間、最も好ましくは約４日間投与される。
【００６３】
「連続的な注入により」投与するとは、その注入が、所定の継続時間のほとんどで実質的に中断することなくほぼ所定の速度に維持されることを意味する。あるいは、間欠的な静脈内注入を使用することができる。間欠的な注入が用いられる場合、上記の連続的な注入の投与速度と等価な時間平均投与速度を用いなければならない。さらに、間欠的な注入のプログラムは、連続的な注入を用いて得られる最大濃度から約２０％は超えない最大血清濃度をもたらすものでなければならない。患者における有害な反応、特に出血をともなう副作用を避けるために、投与速度は約０．０５０ｍｇ／ｋｇ／時のａｌａ−ＴＦＰＩの連続的な静脈内注入に等価な投与速度よりも低いものでなければならない。
【００６４】
投与速度および総用量等、ここに記載される全ての用量は、プロトロンビンアッセイによるタンパク質濃度および生物活性を決定する際の誤差のために、実際は１０％以内の変動を受けやすい。よって、ここで述べられた用量よりも最大１０％高いかまたは最大１０％低い実際の投与用量は、述べられた用量と等しいとみなされる。この理由から、すべての用量が「おおよその」具体的な用量として述べられている。例えば、「約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／時」と記載される用量は０．０２２５〜０．０２７５ｍｇ／ｋｇ／時の範囲の実際の用量と等しいとみなされる。
【００６５】
ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩのアナログのボーラス注入または短時間での高注入速度も、低用量ＴＦＰＩ投与が引き続いてなされる場合は、本発明の実施に用いてもよい。例えば、ボーラス注入または高注入速度は、患者の血液循環中の投与ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの平衡時間を減じるために用いることができる。そうすることで、ＴＦＰＩの最終的な定常状態血漿レベルに速く到達し、ＴＦＰＩのレセプターが早く飽和できる。約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／時で２時間のａｌａ−ＴＦＰＩのヒトへの投与は、ＴＦＰＩ（プラスａｌａ−ＴＦＰＩ）の血漿レベルを約８０ｎｇ／ｍｌから約１２５ｎｇ／ｍｌへ増加させる（すなわちおおよそ５０％の増加）。投与速度を上げるか、またはボーラス注入が使用される場合に同一のレベルにさらに速く到達する。高い注入速度は定常状態が得られるまで注入を続ける場合に高いレベルをもたらす。約０．０５０ｍｇ／ｋｇ／時でのａｌａ−ＴＦＰＩの投与での定常状態レベルは約３００ｎｇ／ｍｌであることがわかり、約０．３３または約０．６６ｍｇ／ｋｇ／時でのａｌａ−ＴＦＰＩの投与での定常状態レベルは敗血症で苦しむ患者で少なくとも約２μｇ／ｍｌであることがわかった。
【００６６】
単回連続注入または分割注入投与でホストに投与された一日の総用量は、例えば、ａｌａ−ＴＦＰＩの少なくとも約０．００６ｍｇ／ｋｇ／日〜約１．２ｍｇ／ｋｇ／日未満の投与に等価な量、さらに一般的にはａｌａ−ＴＦＰＩの少なくとも約０．２４ｍｇ／ｋｇ／日〜約１．２ｍｇ／ｋｇ／日未満の投与に等価な量、好ましくはａｌａ−ＴＦＰＩの約０．６ｍｇ／ｋｇ／日に等価な量であってよい。この範囲内での低い量は予防または他の目的のために有用である。この範囲を超える高用量は、重度のＣＡＰの治療に有用である。本発明の投与プロトコールは、患者に投与される総用量として表現することもできる。総用量は、注入速度と注入の全時間との数学積としてもまた表され得る。例えば、ａｌａ−ＴＦＰＩの約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／時の好ましい投与速度および９６時間の好ましい注入時間の場合、総用量は体重１ｋｇあたり約２．４ｍｇのａｌａ−ＴＦＰＩである。一実施態様において、ａｌａ−ＴＦＰＩの約０．２５ｍｇ／ｋｇ／時の好ましい投与速度および９６時間の好ましい注入時間の場合、総用量は体重１ｋｇあたり約２４ｍｇのａｌａ−ＴＦＰＩである。一実施態様において、ａｌａ−ＴＦＰＩの約０．７５ｍｇ／ｋｇ／時の好ましい投与速度および９６時間の好ましい注入時間の場合、総用量は体重１ｋｇあたり約７２ｍｇのａｌａ−ＴＦＰＩである。別の実施態様において、本発明にしたがって投与されるＴＦＰＩの総用量は少なくとも約０．７５μｇ／ｋｇおよび約４．８ｍｇ／ｋｇ未満のａｌａ−ＴＦＰＩと等価である。好ましくは、総用量は少なくとも約１ｍｇ／ｋｇおよび約４．８ｍｇ／ｋｇ未満のａｌａ−ＴＦＰＩと等価である。さらに好ましくは、総用量は約２．４ｍｇ／ｋｇのａｌａ−ＴＦＰＩと等価である。
【００６７】
投薬レジメンを調節するために用いることのできる一つの因子は、通常はプロトロンビン時間（ＰＴ）アッセイを用いて測定される個々の患者の凝固機能、すなわち国際標準比（ＩＮＲ）である。ＩＮＲは、アッセイが国際参照トロンボプラスチン試薬に対して較正されたＲＴアッセイの標準化である。例えば、Ｒ．Ｓ．Ｒｉｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ａｎａｌ．１４：１０１−１１４（２０００）を参照されたい。健常なヒトボランティアにおいて、ａｌａ−ＴＦＰＩに対するＩＮＲ応答は、観察される血漿濃度の範囲にわたってほぼ直線的である（図３）。ＩＮＲの全体的な変化は、血漿ａｌａ−ＴＦＰＩ濃度の１μｇ／ｍｌ増加あたり１．２単位である。
【００６８】
薬力学モデルにおいて、ａｌａ−ＴＦＰＩに対するＩＮＲ応答は、対数ＩＮＲがａｌａ−ＴＦＰＩ血漿濃度に対して直線的に関連する対数線形モデルによって最もよく表現される。応答の対数線形性は、ベースライン時に増加ＩＮＲを有する被験体が、循環ａｌａ−ＴＦＰＬの類似のレベルを有する低ベースライン値を有する被験体よりも、高い抗凝固応答を経験する可能性が高いことを意味する。
【００６９】
ｍｇ／ｋｇ／時に基づく投与速度および毎日の総用量等の上記の投薬レジメンは、「参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与に等価な」用量として表される。これは、成熟し、１００％純粋（タンパク質レベルで）で、適切にフォールディングされ、生物活性があり、非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩとして定義される「参照ａｌａ−ＴＦＰＩ」の用量に対する標準化を行なうことにより、投薬レジメンが定量的に決定されることを意味する。ａｌａ−ＴＦＰＩは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を有するＴＦＰＩアナログである。成熟した全長ＴＦＰＩおよびそのアナログ等の他の形態のＴＦＰＩもまた、本発明で用いることができる。ａｌａ−ＴＦＰＩ以外の形のＴＦＰＩを用いて、そして純度が１００％未満のａｌａ−ＴＦＰＩまたは別のＴＦＰＩアナログの調製物を用いて、本発明を実施するための適当な用量範囲を決定するために、参照ａｌａ−ＴＦＰＩについてここに記載された用量範囲は、ＴＦＰＩの具体的な形態の固有の生物活性に基づいて調節され得、さらにその調製物の生化学的純度に基づいて調節され得る。
【００７０】
好ましい実施態様において、患者は、ＴＦＰＩの最初の投与を受けて１０日以内に抗凝固剤を受けない。好ましい実施態様において、患者は、ＴＦＰＩの最初の投与を受けて７日以内に抗凝固剤を受けない。好ましくは、患者は、ＴＦＰＩの最初の投与を受けて２４時間以内にある形のヘパリンを受けない。一実施態様において、患者は、ＴＦＰＩの最初の投与を受けて１０時間以内、好ましくは１２時間以内に、分画されていないヘパリンを受けない。一実施態様において、患者は、ＴＦＰＩの最初の投与を受けて２０時間以内、好ましくは２４時間以内に低分子ヘパリンを受けない。一実施態様において、患者は、ＴＦＰＩの最初の投与を受けて１０時間以内、好ましくは１２時間以内にドロトレコギン−αを受けない。
【００７１】
ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの固有生物活性とは、成熟し、１００％純粋で、適切にフォールディングされたＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログのプロトロンビンアッセイにより定義される比活性をいう。例えば、等価用量は（参照ａｌａ−ＴＦＰＩ用量）／（（相対固有活性）×（生化学的純度））として計算される一方で、相対固有活性は、（アナログの固有活性）／（参照ａｌａ−ＴＦＰＩの固有活性）をいう。例えば、ある特定のＴＦＰＩアナログが参照ａｌａ−ＴＦＰＩの８０％の固有生物活性を有する場合、この特定のＴＦＰＩアナログの等価用量は、参照ａｌａ−ＴＦＰＩの用量値を０．８で除算することにより得られる。さらに、患者に投与される処方物が、例えばわずかに９０％生物学的純度を有する（すなわち、ＴＦＰＩの生物活性を欠如する１０％の分子種を含む）場合、ａｌａ−ＴＦＰＩの参照用量値のさらなる補正が、その用量値を０．９で割ることにより実施される。例えば、ａｌａ−ＴＦＰＩの固有活性の８０％を有し、かつ９０％の生化学的純度を有する投与された仮定上のＴＦＰＩアナログについて、０．０２５ｍｇ／ｋｇ／時での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与に等価な投与速度は０．０３４７ｍｇ／ｋｇ／時（すなわち、０．０２５／（０．８×０．９））であろう。
【００７２】
等価用量は、固有活性や生化学的純度を知ることなく、相対生物活性を決定することにより決定することもできる。相対生物活性は、プロトロンビン時間アッセイを用いて、特定のＴＦＰＩアナログをＴＦＰＩ生物活性標準と比較することにより決定することができる。例えば、約８５％の生物活性のあるＴＦＰＩ分子種を含有する、ＷＯ９６／４０７８４の実施例９の方法に従って生成されたａｌａ−ＴＦＰＩを、ＴＦＰＩ生物活性標準として用いることができる。ＷＯ９６／４０７８４の実施例９の方法に従って生成されるａｌａ−ＴＦＰＩは、プロトロンビンアッセイにおいて、参照ａｌａ−ＴＦＰＩの活性の約８５％を有する。プロトロンビン時間標準曲線をプロットする際に、凝固時間の対数をＴＦＰＩ濃度の対数に対してプロットする。ＴＦＰＩ生物活性標準が参照ａｌａ−ＴＦＰＩの活性の８５％を有する場合で、ＢＦＰＩ生物活性標準の濃度をプロットする前に０．８５を掛けることでプロットされた活性が１００％純粋な参照ａｌａ−ＴＦＰＩの活性と等しくしているのであれば、参照ａｌａ−ＴＦＰＩと等しい標準曲線を作成することができる。特定のＴＦＰＩアナログの凝固時間を標準曲線と比較する場合、参照ａｌａ−ＴＦＰＩの等価濃度を曲線から読み取ることができる。もしくは、標準曲線の直線部分の傾きが線形回帰分析によって得られる場合、その傾きは参照ａｌａ−ＴＦＰＩに対するＴＦＰＩ生物活性標準の活性に基づいて補正できる。よって、特定のＴＦＰＩアナログの相対生物活性は、該アナログの活性に対する参照ａｌａ−ＴＦＰＩ活性の比率に等しい。例えば、特定のアナログが参照ａｌａ−ＴＦＰＩの１．００μｇと同じプロトロンビン時間活性を作るために１．４３μｇを必要とする場合、該アナログの相対生物活性は１．００／１．４３、すなわち０．７である。このアナログに関して、参照ａｌａ−ＴＦＰＩ用量と等価な用量（等価用量）は、リファレンスａｌａ−用量をアナログの相対生物活性で割ることにより得られる。例えば、参照ａｌａ−ＴＦＰＩの０．０２５ｍｇ／ｋｇ／時の用量はアナログの０．０３５７ｍｇ／ｋｇ／時（すなわち、０．０２５／０．７）と等価であろう。
【００７３】
ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログは、単一の活性抗凝固薬剤として投与することができる一方で、これらの分子を１種類以上の追加治療剤と組合せて用いて、重度の肺炎の治療のための併用療法を提供することもできる。そのような追加治療剤としては、例えば、抗内毒素、モノクローナル抗体（例えば、内毒素結合性モノクローナル抗体）等の抗体および抗ＴＮＦマウスモノクローナル抗体等の抗ＴＮＦ産物等が挙げられる。ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログは、インターロイキン−１レセプターアンタゴニスト、殺菌性／透過性（ＢＰＩ）タンパク質、免疫賦活剤、ＰＡＦアンタゴニスト等の抗炎症活性を有する化合物および細胞接着ブロッカー（例えば、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａインヒビター）と組合せることもできる。組合せて投与する場合、各治療剤は同時または異なる時間で施される別々の組成物として配合することができる。好ましくは、追加の各治療剤は同時（すなわち、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの投与時間中）またはＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの投与時間の２４時間以内（すなわち、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの投与時間の開始前の２４時間以内、または投与時間の終了後の２４時間以内）に施される。追加治療剤は、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログとともに単一組成物として施すこともできる。
【００７４】
ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログは、重度の肺炎を治療するために効果的と思われる他の物質と組合せて施すこともできる。例えば、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログと組合せて投与してよいのは、内在する細菌感染を治療することのできる抗生物質、細菌細胞壁成分に対するモノクローナル抗体、重度の肺炎の経路にかかわるサイトカインと複合することができるレセプター、および一般的に、サイトカイン、または重度肺炎および／またはその症状を軽減する補体タンパク質等の他の活性化または増幅生理学的経路に相互作用することのできる物質またはタンパク質である。
【００７５】
有用な抗生物質として、ベータ−ラクタム環（ペニシリン）、グリコシド結合のアミノ糖（アミノグリコシド類）、大環状ラクトン環（マクロライド類）、ナフタセンカルボキサニドの多環誘導体（テトラサイクリン類）、ジクロロ酢酸のニトロベンゼン誘導体、ペプチド（バシトラシン、グラミシジンおよびポリミキシン）、共役二重結合系を有する大きな環（ポリエン類）、スルファニルアミドに由来するサルファ剤（スルホンアミド類）、５−ニトロ−２−フラニル基（ニトロフラン類）、キノロンカルボン酸（ナリジクス酸）の一般的分類のものなどが挙げられる。他の抗生物質および上記の特定抗生物質のさらなる変形が、Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｋｉｒｋ−Ｏｔｈｙｍｅｒ（ｅｄ．），Ｖｏｌ．２，ｐａｇｅｓ  ７８２−１０３６（１９７８）ａｎｄ  Ｖｏｌ．３，ｐａｇｅｓ  １−７８，Ｚｉｎｓｓｅｒ，ＭｉｃｒｏＢｉｏｌｏｇｙ，１７ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  Ｗ．Ｊｏｌｄｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．），ｐａｇｅｓ  ２３５−２７７（１９８０）またはＤｏｒｌａｎｄ’ｓ  Ｉｌｌｕｓｔｒａｔｅｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ，２７ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ（１９８８）において見ることができる。
【００７６】
ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログに組合せられ得る他の因子としては、内毒素アンタゴニスト、例えばＥ５５３１（リピドＡアナログ、Ａｓａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２２：４３２（１９９９）を参照）、抗凝固活性を有するＴＦアナログ（例えば、Ｋｅｌｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ８９：３２１９（１９９７）およびＬｅｅ  ＆  Ｋｅｌｌｅｙ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３７：４１４９（１９９８））、サイトカインに対するモノクローナル抗体、例えば、ＩＬ−６またはＭ−ＣＳＦに対するモノクローナル抗体（例えば、１９８９年１２月１５日出願の米国特許出願第０７／４５１，２１８号を参照）およびＴＮＦに対するモノクローナル抗体（Ｃｅｒａｍｉらの米国特許第４，６０３，１０６号を参照）、成熟したＴＮＦプロホルモンを細胞（この細胞内でそのＴＮＦプロホルモンが生成された）から切断するタンパク質のインヒビター（１９８９年８月１６日出願の米国特許出願第０７／３９５，２５３号を参照）、ＩＬ−１のアンタゴニスト（１９９０年５月１日出願の米国特許出願第０７／５１７，２７６号を参照）、ＩＬ−６サイトカイン発現のインヒビン等のインヒビター（米国特許第５，９４２，２２０号を参照）、およびＩＬ−１等の多様なサイトカインのレセプター系インヒビターが挙げられる。さらに、補体に対する抗体または補体のタンパク質インヒビター、例えばＣＲ１、ＤＡＦおよびＭＣＰを用いることもできる。
【００７７】
本開示において列挙された全ての特許、特許出願および引用文献は、本明細書中にその全体が参考として援用される。
【００７８】
本発明は、特に有利な実施態様を示す下記実施例により、以下に詳しく説明される。しかし、これらの実施態様は例示的なものであって、本発明を決して限定するものと解釈すべきでないことに注意されたい。
【実施例】
【００７９】
（実施例１  重度の肺炎患者のａｌａ−ＴＦＰＩ処置）
ａｌａ−ＴＦＰＩによる処置の潜在的な効果を検討するために、比較的均一な集団中の重度の肺炎患者を評価した。治験責任医師により記録された敗血症の一因が肺炎とコードされた場合に、肺炎患者を同定した。感染の他の部位もまた、存在し得た。感染続発症を薬物続発症から区別することは困難であるため、吸引性肺炎の患者は含めなかった。次いで肺炎を有すると同定された患者を、培養陽性（培養物またはグラム染色等の任意の感染の証拠あり）、または培養陰性（陰性培養物または培養がなされない）と分類した。患者は、３００ｍＭのＬ−アルギニン、２０ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ５．５、浸透圧５６０＋／−１００ｍＯｓｍ）を含む緩衝液中に配合した用量０．０２５ｍｇ／ｋｇ／時の大腸菌発現の非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩ調製物の連続的な静脈内注入により処置した。プラシーボは、ａｌａ−ＴＦＰＩを含まない同一の緩衝液からなり、研究医薬と同じ速度で注入した。これらの分析の結果は、培養陽性肺炎を有する患者においてａｌａ−ＴＦＰＩ処置のプラスの効果を示している（表１）。感染源の所見のない患者は、陰性の効果を示した。
【００８０】
【表１】
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【００８１】
【表２】
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高ＩＮＲの培養陰性群における増加死亡率は、ヘパリンの加えられた投与なし、またはありの患者集団に存在するように見えたが、肺炎培養陰性の非ヘパリン群での被験体の数は比較的少ないことに注意されたい（表３）。強い陽性の処置効果が、培養陽性／非ヘパリン集団において観察された。
【００８２】
【表３】
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（実施例２  疾病変数のベースライン重症度の検討）
多数の疾病変数のベースライン重症度を評価して、観察された結果を説明できる集団不安定性が存在かするか否かを決定した。これらのデータは、培養物の状態に関連する結果の違いが、ベースライン不安定性によるものではないことを示している。従って、これらの結果は、感染がある患者と感染のない患者との生物学的差異によるＴＦＰＩ治療の示差効果を示すようである。重症度の指標（例えば、ＡＰＡＣＨＥ  ＩＩスコアまたは器官機能不全スコア）は、プラシーボと等しいかまたはＴＦＰＩ処置肺炎培養陰性群よりも低いのにもかかわらず、培養陰性群は全体的に最も高い死亡率を示した（表４）。
【００８３】
【表４】
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ＩＬ−６は、敗血症で初期に上昇し、炎症応答の強さを反映し、予後に関連する炎症性サイトカインである。ベースラインでは、ＩＬ−６レベルは、感染の所見なしに肺炎を有していると臨床的に同定された患者において低い（表５）。これは、肺炎の記録された感染源を有する患者と明らかな感染源のない患者との間に生物学的な違いが存在することを示す。逆説的に言えば、培養陰性ＴＦＰＩ群は、最も低いベースラインＩＬ−６レベルを有するが、最も高い死亡率を有する。敗血症集団において、ＩＬ−６レベルは経時的に減少する。ＩＬ−６の減少速度は、ＴＦＰＩ処置肺炎培養陰性対象で減少する（表５）。これは、ＴＰＰＩの生物学的な効果が感染を有する患者と有さない患者とで異なることを示唆する。
【００８４】
【表５】
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（実施例３  感染記録の種類による重度肺炎患者の分析）
上記のように、ａｌａ−ＴＦＰＩ処置の全体的な利点が、感染の最大の確実性を有する患者、すなわち、陽性血液培養物を示す患者に観察された。感染記録の種類による重度肺炎患者の分析において、ａｌａ−ＴＦＰＩ処置の利点が陽性血液培養物を示す患者と他の所見を有する患者との両方において見られた（表６）。この効果は、菌血症群（すなわち、感染の最大の確率を有するか、または実証可能な感染源を有する患者群）で最も強かった。
【００８５】
【表６】
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既に示したように、感染の記録（血液＋「他」）を有する患者は、ヘパリンなしのＴＦＰＩ処置から利益を得た。この結果は、大部分が肺炎群から得られる利益に起因する（表７）。この発見は、内因性抗凝固剤の利点が重度の肺感染を有する患者で最も高いことを示す。
【００８６】
【表７】
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不均一性をさらに限定するために、今後の治験は、市中肺炎（ＣＡＰ）に焦点が合わされ得る。入院中に肺炎を発症する患者（院内肺炎）は、病原体の侵入をより受けやすく、感染性肺炎の診断をより困難にする他の肺疾患を有しやすい。さらに、ＣＡＰを有する患者は、院内肺炎を有する患者よりもヘパリンに曝されている可能性が少ない。データを処置前の病院滞在の長さにより分析すると、同様な利点が、２日間を超えて入院した患者（院内感染）に対して２日間以下の入院培養陽性患者（市中感染）で認められた。培養陰性患者での陰性の効果は、主に院内群で見られた（表８）。
【００８７】
【表８】
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本発明が、具体的な実施態様を参照して説明された。しかし、本願は、添付の特許請求の範囲の趣旨および範囲から逸脱することなく当業者によってなされ得る変更または置換を包含することが意図される。
【００８８】
【数１−１】
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【００８９】
【数１−２】
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