(57)【要約】  本発明は少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントをコードする単離された核酸を含む少なくとも１つの新規ＥＰＯヒトＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント、ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント、ベクター、宿主細胞、トランスジェニック動物もしくは植物、および治療用組成物、方法およびデバイスを含むそれらの作成および使用法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号８２および８４の少なくとも１つのアミノ酸配列をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドまたはそれに相補的なポリヌクレオチドを含んでなる、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ核酸。
【請求項２】
配列番号８３および８５〜８９の少なくとも１つのアミノ酸配列をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドまたはそれに相補的なポリヌクレオチドを含んでなる、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ核酸。
【請求項３】
配列番号１〜３０の少なくとも１つのアミノ酸配列をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドまたはそれに相補的なポリヌクレオチドを含んでなる、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ核酸。
【請求項４】
式（Ｉ）：
【数１】
2007507225.tif 000011
［式中、Ｖは免疫グロブリン可変領域のＮ−末端の少なくとも１つの部分であり、Ｐは少なくとも１つの生物活性ＥＰＯ模倣ペプチドであり、Ｌはリンカー配列であり、Ｈは免疫グロブリン可変ヒンジコア領域の少なくとも一部であり、ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２定常領域の少なくとも一部であり、ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３定常領域の少なくとも一部であり、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒおよびｓは独立して０、１または２から１０の間の整数であることができる］
のポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含んでなる少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ核酸。
【請求項５】
配列番号８２および８４の少なくとも１つの連続するアミノ酸のすべてを含んでなる、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディポリペプチド。
【請求項６】
配列番号８３および８５〜８９の少なくとも１つの連続するアミノ酸のすべてを含んでなる、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディポリペプチド。
【請求項７】
配列番号１〜３０の少なくとも１つの連続するアミノ酸のすべてを含んでなる、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディポリペプチド。
【請求項８】
式（Ｉ）：
【数２】
2007507225.tif 000012
［式中、ＶはＱＩＱであり、Ｐは配列番号１−３０から選択された少なくとも１つの生物活性ペプチドであり、ＬはＧＳ、ＧＧＧＳ（配列番号７３）またはＧＳＧＧＧＳ（配列番号７４）を含んでなり、ＨはＣＰＰＣＰ（配列番号７５）であり、ＣＨ２は
【表１】
2007507225.tif 000013
であり、ＣＨ３は
【表２】
2007507225.tif 000014
であり、そしてｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒおよびｓは独立して０、１または２から１０の間の整数である］
のポリペプチドを含んでなる少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディポリペプチド。
【請求項９】
式（Ｉ）：
【数３】
2007507225.tif 000015
［式中、ＶはＱＩＱであり、Ｐは配列番号１−３０から選択された少なくとも１つの生物活性ペプチドであり、ＬはＧＳ、ＧＧＧＳ（配列番号７３）またはＧＳＧＧＧＳ（配列番号７４）を含んでなり、ＨはＣＰＰＣＰ（配列番号７５）であり、ＣＨ２は
【表３】
2007507225.tif 000016
であり、ＣＨ３は
【表４】
2007507225.tif 000017
であり、そしてｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓは独立して０、１または２から１０の間の整数である］
のポリペプチドを含んでなる少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディポリペプチド。
【請求項１０】
式（Ｉ）：
【数４】
2007507225.tif 000018
［式中、ＶはＱＩＱであり、Ｐは配列番号１−３０から選択された少なくとも１つの生物活性ペプチドであり、ＬはＧＳ、ＧＧＧＳ（配列番号７３）またはＧＳＧＧＧＳ（配列番号７４）を含んでなり、ＨはＣＰＰＣＰ（配列番号７５）であり、ＣＨ２は
【表５】
2007507225.tif 000019
であり、ＣＨ３は
【表６】
2007507225.tif 000020
であり、そしてｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓは独立して０、１または２から１０の間の整数である］
のポリペプチドを含んでなる少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディポリペプチド。
【請求項１１】
式（Ｉ）：
【数５】
2007507225.tif 000021
［式中、ＶはＱＩＱであり、Ｐは配列番号１−３０から選択された少なくとも１つの生物活性ペプチドであり、ＬはＧＳ、ＧＧＧＳ（配列番号７３）またはＧＳＧＧＧＳ（配列番号７４）を含んでなり、ＨはＣＰＰＣＰ（配列番号７５）であり、ＣＨ２は
【表７】
2007507225.tif 000022
であり、ＣＨ３は
【表８】
2007507225.tif 000023
であり、そしてｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓは独立して０、１または２から１０の間の整数である］
のポリペプチドを含んでなる少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディポリペプチド。
【請求項１２】
式（Ｉ）：
【数６】
2007507225.tif 000024
［式中、Ｖはヒト可変領域のＮ−末端部分であり、Ｐは配列番号１−３０から選択された少なくとも１つの生物活性ペプチドであり、Ｌはリンカーポリペプチドであり、Ｈは免疫グロブリン可変ヒンジコア領域の少なくとも一部であり、ＣＨ２は
【表９】
2007507225.tif 000025
であり、ＣＨ３は
【表１０】
2007507225.tif 000026
であり、そしてｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓは独立して０、１または２から１０の間の整数である］
のポリペプチドを含んでなる少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディポリペプチド。
【請求項１３】
式（Ｉ）：
【数７】
2007507225.tif 000027
［式中、Ｖはヒト可変領域のＮ−末端部分であり、Ｐは配列番号１−３０から選択された少なくとも１つの生物活性ペプチドであり、Ｌはリンカーポリペプチドであり、Ｈは免疫グロブリン可変ヒンジコア領域の少なくとも一部であり、ＣＨ２は
【表１１】
2007507225.tif 000028
であり、ＣＨ３は
【表１２】
2007507225.tif 000029
であり、そしてｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓは独立して０、１または２から１０の間の整数である］
のポリペプチドを含んでなる少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディポリペプチド。
【請求項１４】
式（Ｉ）：
【数８】
2007507225.tif 000030
［式中、Ｖはヒト可変領域のＮ−末端部分であり、Ｐは配列番号１−３０から選択された少なくとも１つの生物活性ペプチドであり、Ｌはリンカーポリペプチドであり、Ｈは免疫グロブリン可変ヒンジコア領域の少なくとも一部であり、ＣＨ２は
【表１３】
2007507225.tif 000031
であり、ＣＨ３は
【表１４】
2007507225.tif 000032
であり、そしてｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓは独立して０、１または２から１０の間の整数である］
のポリペプチドを含んでなる少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディポリペプチド。
【請求項１５】
式（Ｉ）：
【数９】
2007507225.tif 000033
［式中、Ｖはヒト可変領域のＮ−末端部分であり、Ｐは配列番号１−３０から選択された少なくとも１つの生物活性ペプチドであり、Ｌはリンカーポリペプチドであり、Ｈは免疫グロブリン可変ヒンジコア領域の少なくとも一部であり、ＣＨ２は
【表１５】
2007507225.tif 000034
であり、ＣＨ３は
【表１６】
2007507225.tif 000035
であり、そしてｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓは独立して０、１または２から１０の間の整数である］
のポリペプチドを含んでなる少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディポリペプチド。
【請求項１６】
式（Ｉ）：
【数１０】
2007507225.tif 000036
［式中、ＶはＱＩＱであり、Ｐは配列番号１−３０から選択された少なくとも１つの生物活性ペプチドであり、Ｌはリンカーポリペプチドであり、Ｈは免疫グロブリン可変ヒンジコア領域の少なくとも一部であり、ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２定常領域の少なくとも一部であり、ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３定常領域の少なくとも一部であり、そしてｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓは独立して０、１または２から１０の間の整数である］
のポリペプチドを含んでなる少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディポリペプチド。
【請求項１７】
式（Ｉ）：
【数１１】
2007507225.tif 000037
［式中、Ｖは免疫グロブリン可変領域のＮ−末端の少なくとも１つの部分であり、Ｐは少なくとも１つの生物活性ＥＰＯ模倣ペプチドであり、ＬはＧＳ、ＧＧＧＳ（配列番号７３）またはＧＳＧＧＧＳ（配列番号７４）を含んでなり、Ｈは免疫グロブリン可変ヒンジコア領域の少なくとも一部であり、ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２定常領域の少なくとも一部であり、ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３定常領域の少なくとも一部であり、そしてｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓは独立して０、１または２から１０の間の整数である］
のポリペプチドを含んでなる少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディポリペプチド。
【請求項１８】
式（Ｉ）：
【数１２】
2007507225.tif 000038
［式中、Ｖは免疫グロブリン可変領域のＮ−末端の少なくとも１つの部分であり、Ｐは少なくとも１つの生物活性ＥＰＯ模倣ペプチドであり、Ｌはリンカーポリペプチドであり、Ｈは免疫グロブリン可変ヒンジコア領域の少なくとも一部であり、ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２定常領域の少なくとも一部であり、ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３定常領域の少なくとも一部であり、そしてｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓは独立して０、１または２から１０の間の整数である］
のポリペプチドを含んでなる少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディポリペプチド。
【請求項１９】
式（Ｉ）：
【数１３】
2007507225.tif 000039
［式中、Ｖは免疫グロブリン可変領域のＮ−末端の少なくとも１つの部分であり、Ｐは少なくとも１つの生物活性ＥＰＯ模倣ペプチドであり、Ｌはリンカーポリペプチドであり、ＨはＣＰＰＣＰ（配列番号７５）であり、ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２定常領域の少なくとも一部であり、ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３定常領域の少なくとも一部であり、そしてｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓは独立して０、１または２から１０の間の整数である］
のポリペプチドを含んでなる少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディポリペプチド。
【請求項２０】
式（Ｉ）：
【数１４】
2007507225.tif 000040
［式中、Ｖは免疫グロブリン可変領域のＮ−末端の少なくとも１つの部分であり、Ｐは配列番号１−３０から選択された少なくとも１つの生物活性ペプチドであり、Ｌはリンカーポリペプチドであり、Ｈは免疫グロブリン可変ヒンジコア領域の少なくとも一部であり、ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２定常領域の少なくとも一部であり、ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３定常領域の少なくとも一部であり、そしてｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓは独立して０、１または２から１０の間の整数である］
のポリペプチドを含んでなる少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディポリペプチド。
【請求項２１】
上記ポリペプチドが少なくとも１つのＰポリペプチドの少なくとも１つの活性を有する、請求項１ないし２０の少なくとも１項に記載のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ核酸またはＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディポリペプチド。
【請求項２２】
請求項５ないし２０の少なくとも１項に記載の少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディポリペプチドに特異的に結合する抗イディオタイプモノクローナルもしくはポリクローナル抗体、融合タンパク質またはそのフラグメント。
【請求項２３】
請求項１ないし２０のいずれかに記載の少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディポリペプチドまたはＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ抗体をコードするＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ核酸。
【請求項２４】
請求項２３に記載の少なくとも１つの単離された核酸を含んでなるＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディベクター。
【請求項２５】
請求項２３に記載の単離された核酸を含んでなるＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ宿主細胞。
【請求項２６】
上記宿主細胞が、ＣＯＳ−１、ＣＯＳ−７、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ２１、ＣＨＯ、ＢＳＣ−１、ＨｅｐＧ２、６５３、ＳＰ２／０、２９３、ＮＳＯ、ＤＧ４４ＣＨＯ、ＣＨＯＫ１、ＨｅＬａ、骨髄腫もしくはリンパ腫細胞、またはそれらの任意の誘導体、不死化または形質転換した細胞から選択される少なくとも１つである、請求項２３に記載のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ宿主細胞。
【請求項２７】
ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは抗体が検出可能もしくは回収可能な量で発現されるように、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏもしくはｉｎ  ｓｉｔｕの条件下で、請求項２３に記載の核酸を翻訳することを含んでなる、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディポリペプチドまたはＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ抗体の生産法。
【請求項２８】
請求項１ないし２０の少なくとも１項に記載のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ核酸、ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディポリペプチドまたはＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ抗体の少なくとも１つを含んでなる組成物。
【請求項２９】
上記組成物が、少なくとも１つの製薬学的に許容され得る担体または希釈剤をさらに含んでなる請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
少なくとも１つの検出可能な標識もしくはレポーター、ＴＮＦアンタゴニスト、抗感染薬、心血管（ＣＶ）系薬、中枢神経系（ＣＮＳ）薬、自律神経系（ＡＮＳ）薬、気道薬、胃腸管（ＧＩ）薬、ホルモン薬、流体もしくは電解質バランスのための薬剤、血液製剤、抗腫瘍薬、免疫調節薬、目、耳もしくは鼻の薬、局所薬、栄養剤、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニストから選択される、治療的に有効量の少なくとも１つの化合物、組成物またはポリペプチドを含んで成る少なくとも１つの組成物をさらに含んでなる、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３１】
液体、ガスまたは乾燥物、溶液、混合物、懸濁液、乳液もしくはコロイド、凍結乾燥調製物もしくは粉末から選択される少なくとも１つの形態である、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３２】
細胞、組織、器官または動物のＥＰＯリガンド関連状態を診断または処置する方法であって、
（ａ）有効量の請求項１ないし２０の少なくとも１項に記載の少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ核酸、ポリペプチドまたは抗体を含んでなる組成物を、該細胞、組織、器官または動物に接触または投与することを含んでなる上記方法。
【請求項３３】
上記の有効量が、上記細胞、組織、器官または動物１キログラムあたり０．００１〜５０ｍｇのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ抗体；０．０００００１〜５００ｍｇの該ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ；または０．０００１〜１００μｇの該ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ核酸である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
上記接触または上記投与が、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、網内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、膀胱内、病変内局所、ボーラス、膣、直腸、頬内、舌下、鼻内または経皮から選択される少なくとも１つの様式による、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
上記（ａ）の接触または投与の前、同時または後に少なくとも１つの検出可能な標識もしくはレポーター、ＴＮＦアンタゴニスト、抗感染薬、心血管（ＣＶ）系薬、中枢神経系（ＣＮＳ）薬、自律神経系（ＡＮＳ）薬、気道薬、胃腸管（ＧＩ）薬、ホルモン薬、流体もしくは電解質バランスのための薬剤、血液製剤、抗腫瘍薬、免疫調節薬、目、耳もしくは鼻の薬、局所薬、栄養剤、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニストから選択される、有効量の少なくとも１つの化合物またはポリペプチドを含んで成る少なくとも１つの組成物を投与することをさらに含んでなる、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
請求項１ないし２０の少なくとも１項に記載の少なくとも１つの単離されたＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディポリペプチド、抗体または核酸を含んでなるデバイスであって、該デバイスが該少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディポリペプチド、抗体または核酸を、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、網内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、膀胱内、病変内局所、ボーラス、膣、直腸、頬内、舌下、鼻内または経皮から選択される少なくとも１つの様式により接触または投与するために適する上記デバイス。
【請求項３７】
包装材料および請求項１ないし２０の少なくとも１項に記載の単離されたＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディポリペプチド、抗体または核酸の少なくとも１つを含んでなる容器を含んでなる、ヒトの製薬学的または診断的使用のための製品。
【請求項３８】
上記容器が非経口、皮下、筋肉内、静脈内、網内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、膀胱内、病変内局所、ボーラス、膣、直腸、頬内、舌下、鼻内または経皮送達デバイスまたはシステムの構成要素である、請求項３２に記載の製品。
【請求項３９】
検出可能または回収可能な量で上記ポリペプチド、抗体または核酸を発現することができる宿主細胞、トランスジェニック動物、トランスジェニック植物、植物細胞の少なくとも１つを準備することを含んでなる、請求項１ないし２０の少なくとも１項に記載の少なくとも１つの単離されたＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディポリペプチド、抗体または
核酸の生産法。
【請求項４０】
請求項３９に記載の方法により生産された少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディポリペプチド、抗体または核酸。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、生物学的に活性なタンパク質、フラグメントまたリガンドに特異的な哺乳動物のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ（ＥＰＯ  ｍｉｍｅｔｉｃ  ｈｉｎｇｅ  ｃｏｒｅ  ｍｉｍｅｔｉｂｏｄｙ）、特定部分およびバリアント、ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディをコードする核酸および相補的核酸、宿主細胞、および治療用製剤、投与およびデバイスを含むそれらの作成および使用法に関する。
【背景技術】
【０００２】
背景および関連技術
組換えタンパク質は新興している治療薬の種類である。そのような組換え治療薬は、タンパク質製剤および化学的修飾を進歩させた。そのような修飾は、半減期を上昇させ（例えばタンパク質分解酵素に対してそれらの暴露を遮断することにより）、生物学的活性を強化し、または望ましくない副作用を減少させることによるように、治療用タンパク質の治療的用途を潜在的に強化することができる。１つのそのような修飾は、エンテラセプト（ｅｎｔｅｒａｃｅｐｔ）のようなレセプタータンパク質に融合した免疫グロブリンフラグメントの使用である。また治療用タンパク質は、より長い半減期を提供するために、あるいはＦｃ受容体結合、プロテインＡ結合および補体結合のような機能を包含するために、Ｆｃドメインを使用して構築されてきた。哺乳動物の造血系の１つの特別かつ生命維持に必要な役割は、酸素を動物の身体の種々の組織に輸送する赤血球（すなわちｒｅｄ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ）の生産である。赤血球を生産するプロセス（「赤血球生成」）は、動物の生涯を通じて連続して起こり、赤血球の破壊を相殺する。多くの赤血球は通常、１００〜１２０日の比較的短い寿命を有する。赤血球生成は生理学的メカニズムにより正しく制御され、これにより十分な数の赤血球が生産されて正しい組織への酸素付加を可能とするが、循環を妨害するほど多くはない。
【０００３】
今では赤血球生成はポリペプチドであるエリスロポエチン（ＥＰＯ）（酸性糖タンパク質）により主に制御されることが知られている。エリスロポエチンは哺乳動物の染色体に位置する１つのコピー遺伝子の発現の結果として生産される。組換えヒトＥＰＯ（“ｒＨｕＥＰＯ”）のアミノ酸配列は、ヒトの尿起源から得たＥＰＯのアミノ酸配列と実質的に同一である。しかしｒＨｕＥＰＯのグリコシル化は尿のＥＰＯおよびヒト血清のＥＰＯとは異なる。
【０００４】
健康な哺乳動物では、組織が既存の循環している赤血球数により十分に酸素付加されているので、ＥＰＯは血漿中に大変低濃度で存在する。存在するＥＰＯは新たな赤血球の生産を刺激して、加齢プロセスに対して失なわれた赤血球に代わる。加えてＥＰＯの生産は、身体組織への酸素供給が血液による十分な組織潅流にもかかわらず正常な生理学的レベル未満に低下している低酸素状態下で刺激される。低酸素は出血、放射線が誘導する赤血球破壊、種々の貧血、高所、または長期の意識消失により引き起こされ得る。対照的に循環中の赤血球数が正常な組織酸素付加に必要な数を越えれば、ＥＰＯ生産は低下する。
【０００５】
しかし特定の疾患状態には異常な赤血球生成が関与する。組換えヒトＥＰＯ（ｒＨｕＥＰＯ）は多くの国で治療的に使用されている。米国では、米国食品および医薬品局（ＦＤＡ）が末期の腎臓疾患に伴う貧血の処置にｒＨｕＥＰＯの使用を認めた。この障害を処置するために血液透析を受けている患者の多くは、透析処置の結果として赤血球の破裂および未成熟死（ｐｒｅｍａｔｕｒｅ  ｄｅａｔｈ）により生じる重篤な貧血に罹患している。またＥＰＯは他の種類の貧血の処置にも有用である。例えば化学療法が誘導する貧血、脊髄形成異常に伴う貧血、種々の先天的障害に伴う貧血、ＡＩＤＳに関連する貧血、および早熟に伴う貧血はＥＰＯで処置することができる。さらにＥＰＯは、骨髄移植患者、自己血液の輸血を準備している患者、および鉄過剰負荷障害に罹患している患者における正常なヘマトリットをより迅速に回復するために役立つような他の分野でも役割を果たすことができる。
【０００６】
エリスロポエチン（ＥＰＯ）は、赤血球前駆細胞の表面上の特異的受容体に結合することにより赤血球生成の主要なレギュレーターとして機能する、１６５アミノ酸および４つの炭水化物鎖からなる糖タンパク質ホルモンである。この結合はそれらの増殖および成熟赤血球への分化のシグナルを出す。エリスロポエチン受容体はエリスロポエチンに対して高い親和性を有する４８４個のアミノ酸の糖タンパク質である。エリスロポエチン受容体について、リガンドが誘導するホモ二量体化が活性化を支配する鍵となる出来事である。
【０００７】
エリスロポエチンは比較的半減期が短い。静脈内に投与されたエリスロポエチンは、ＣＲＦの患者では約３〜４時間の範囲の循環半減期で１次動力学に合致した速度で排除される。治療的用量の範囲内で、血漿エリスロポエチンの検出可能なレベルは、少なくとも２４時間維持される。エリスロポエチンの皮下投与後、ピーク血清レベルは５〜２４時間内に達成され、そしてその後ゆっくりと低下する。
【０００８】
エリスロポエチンの小ペプチドミメティックス（ｐｅｐｔｉｄｅｍｉｍｅｔｉｃｓ）は、エリスロポエチン受容体に対する親和性に関するランダムファージディスプレイペプチドライブラリーのスクリーニングを介して、幾つかのグループにより同定された。これらの配列はエリスロポエチンと相同性が無い。機能的アッセイではこれらペプチドの幾つかの活性が示されたが、それは組換えエリスロポエチンのわずか１／１００，０００倍であった。これらペプチドの効力を増すために、ペプチドミメティックスの共有二量体または多量体を調製することが幾つか試みられたが、これらの化合物もモル基準で活性がエリスロポエチンよりも１，０００〜１０，０００倍低く、そしてそれらを治療薬として使用するには適さなくする大変短い半減期を有する。
【０００９】
したがってこれらの、および当該技術分野で既知な他の問題をもう一つ克服する、改善され、かつ／または治療用タンパク質の修飾された変形を提供することが必要である。
【発明の開示】
【００１０】
発明の要約
本発明は、当該技術分野で知られている事柄と組み合わせて、本明細書に記載し、かつ／または本明細書で可能となるような、修飾された免疫グロブリン、その分解産物および他の特定部分およびそのバリアントを含むヒトのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ、ならびにＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ組成物、コードまたは相補的核酸、ベクター、宿主細胞、組成物、製剤、デバイス、トランスジェニック動物、トランスジェニック植物、およびそれらの作成および使用法を提供する。
【００１１】
また本発明は、本明細書に記載し、かつ／または当該技術分野で知られているような少なくとも１つの単離されたＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントも提供する。ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディは任意選択により、少なくとも１つの可変抗体配列（Ｖ）の少なくとも一部にさらに直接連結した少なくとも１つのＥＰＯ模倣治療用ペプチド（Ｐ）に直接連結した任意選択のリンカー配列（Ｌ）に直接連結した少なくとも１つのヒンジ領域またはそのフラグメント（Ｈ）に直接連結した少なくとも１つのＣＨ２領域に直接連結した少なくとも１つのＣＨ３領域を含んでなることができる。好適な態様である、任意選択のＮ−末端抗体配列を含む１対のＣＨ３−ＣＨ２−ヒンジ−治療用ペプチドでは、この対は場合により例えば限定するわけではないが少なくとも
１つのＣｙｓ−Ｃｙｓジスルフィド結合または少なくとも１つのＣＨ４または他の免疫グロブリン配列のような会合もしくは共有結合により連結されている。１つの態様では、ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディは式（Ｉ）：
【００１２】
【数１】
2007507225.tif 000002
【００１３】
［式中、Ｖは免疫グロブリン可変領域のＮ−末端の少なくとも１つの部分であり、Ｐは少なくとも１つの生物活性ＥＰＯ模倣ペプチドであり、Ｌは少なくとも１つのリンカー配列であり、Ｈは免疫グロブリン可変ヒンジ領域の少なくとも一部であり、ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２定常領域の少なくとも一部であり、ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３定常領域の少なくとも一部であり、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒおよびｓは独立して０、１、２から１０の間の整数であることができる］を含んでなり、免疫グロブリン分子の種々の型、例えば限定するわけではないがＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ等またはその任意のサブクラス、およびそれらの組み合わせを模する。
【００１４】
すなわち本発明のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディは、その本来の特性および機能を持つ抗体または免疫グロブリン構造または機能の少なくとも部分を模すると同時に、治療用ペプチドおよびその本来の、または獲得したｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｓｉｔｕ特性または活性を提供する。本発明の少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディの抗体の種々の部分および治療用ペプチド部分は、当該技術分野で知られている事柄と組み合わせて本明細書に記載するように変動させることができる。
【００１５】
本発明は１つの観点において、少なくとも１つの特定した配列、それらのドメイン、部分またはバリアントを含んで成る特定のミティボディまたはその特定部分またはバリアントをコードするポリヌクレオチドを含んで成る、それに相補的、それに有意な同一性を有する、またはそれにハイブリダイズする単離された核酸分子を提供する。本発明はさらに、少なくとも１つの該単離されたＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ核酸分子を含んで成る組換えベクター、そのような核酸および／または組換えベクターを含む宿主細胞、ならびにそのようなＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ核酸、ベクターおよび／または宿主細胞の作成および／または使用法を提供する。
【００１６】
本発明の少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントは、ミメティボディのＰ部分の少なくとも１つのリガンドへの結合を模するか、または少なくとも１つのタンパク質、サブユニット、フラグメント、部分またはそれらの組み合わせの少なくとも１つの生物学的活性を有する。
【００１７】
また本発明は、本明細書に記載し、かつ／または当該技術分野で知られている少なくとも１つの単離されたＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントも提供し、ここでＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントは、限定するわけではないが式ＩのＰ部分に対応する少なくとも１つの生物活性ペプチドまたはポリペプチドの既知の生物活性のような少なくとも１つの活性を有する。すなわちＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディを、タンパク質またはそのフラグメントに対する少なくとも１つの中和活性のような対応する活性について、既知の方法に従いスクリーニングすることができる。
【００１８】
また本発明は、（ａ）本明細書に記載する少なくとも１つの単離されたＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントをコードする核酸および／または
ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ；（ｂ）および適切な担体もしくは希釈剤を含んで成る少なくとも１つの組成物も提供する。担体もしくは希釈剤は、既知の方法に従い任意の製薬学的に許容され得るものである。組成物は場合により少なくとも１つのさらなる化合物、タンパク質または組成物をさらに含むことができる。
【００１９】
また本発明は、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントを宿主細胞中で発現させる少なくとも１つの方法も提供し、この方法は本明細書に記載し、かつ／または当該技術分野で知られている宿主細胞を、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントが検出可能かつ／または回収可能な量で発現される条件下で培養することを含んで成る。
【００２０】
本発明はさらに、少なくとも１つの骨および関節障害、心血管障害、歯または経口障害、皮膚学的障害、耳、鼻もしくは喉の障害、内分泌もしくは代謝障害、胃腸管障害、婦人科学的障害、肝臓もしくは胆管障害、産科学的障害、血液学的障害、免疫学的もしくはアレルギー障害、感染性疾患、筋肉骨格障害、癌性障害、神経障害、栄養障害、眼科的障害、小児科学的障害、毒性障害、精神障害、腎臓障害、肺障害または任意の他の障害の症状をモジュレートするために、処置もしくは減少するために治療に有効な量で投与する時に（例えばメルクマニュアル（Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ）、第１７版、メルクリサーチラボラトリーズ、メルク社（Ｍｅｒｃｋ  ａｎｄ  Ｃｏ）、ホワイトハウス  ステーション、ニュージャージー州（１９９９）を参照にされたい。これは引用により全部、本明細書に編入する）、限定するわけではないが当該技術分野で知られている関連疾患または処置条件の前、後または最中のような多くの異なる条件において必要に応じて、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ、特定部分またはバリアントを方法または組成物に提供する。
【００２１】
さらに本発明は、細胞、組織、器官、動物または患者における少なくとも１つの免疫、心血管、感染性、悪性および／または神経疾患の症状をモジュレートするために、処置もしくは減少するために治療に有効な量で投与する時、かつ／または限定するわけではないが、当該技術分野で知られ、かつ／または本明細書に記載するような関連疾患または処置条件の前、後または最中のような多くの異なる条件下で必要に応じて、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ、特定部分またはバリアントを方法または組成物に提供する。
【００２２】
また本発明は、本発明に従い治療的もしくは予防的に有効な量の少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントを送達するための少なくとも１つの組成物、デバイスおよび／または方法も提供する。
【００２３】
本発明はさらに、本発明の少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディに対する少なくとも１つの抗−イディオタイプ抗体を提供する。抗−イディオタイプ抗体には、本発明の少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディのＥＰＯ受容体結合領域に競合的に結合する、限定するわけではないが少なくとも１つの重もしくは軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）またはそれらのリガンド結合部分、重鎖もしくは軽鎖可変領域、重鎖もしくは軽鎖定常領域、骨格領域、またはそれらの任意の部分のような免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含んでなる分子を含有する任意のタンパク質またはペプチドを含む。本発明のそのようなイディオタイプ抗体は、限定するわけではないがヒト、マウス、ウサギ、ラット、齧歯類、霊長類等のような任意の哺乳動物を含むか、またはそれらに由来することができる。
【００２４】
また本発明は、少なくとも１つの特定した配列、それらのドメイン、部分またはバリアントを含んで成る少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ抗−イディオタ
イプ抗体をコードするポリヌクレオチドを含んで成る、それに相補的またはそれにハイブリダイズする単離された核酸分子を提供する。本発明はさらに、該ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ抗−イディオタイプ抗体をコードする核酸分子を含んでなる組換えベクター、そのような核酸および／または組換えベクターを含む宿主細胞、ならびにそのような抗−イディオタイプ抗体核酸、ベクターおよび／または宿主細胞の作成および／または使用法を提供する。
【００２５】
また本発明は、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたはＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ抗イディオタイプ抗体を宿主細胞中で発現させる少なくとも１つの方法も提供し、この方法は本明細書に記載する宿主細胞を、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは抗イディオタイプ抗体が検出可能かつ／または回収可能な量で発現される条件下で培養することを含んで成る。
【００２６】
また本発明は、（ａ）本明細書に記載する単離されたＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディをコードする核酸および／またはＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ；および（ｂ）および適切な担体もしくは希釈剤を含んで成る少なくとも１つの組成物も提供する。担体もしくは希釈剤は、既知の担体または希釈剤に従い任意の製薬学的に許容され得るものである。組成物は場合により少なくとも１つのさらなる化合物、タンパク質または組成物をさらに含むことができる。
【００２７】
本発明はさらに、細胞、組織、器官、動物または患者における少なくとも１つのタンパク質関連状態をモジュレートまたは処置するために、かつ／または当該技術分野で知られ、かつ／または本明細書に記載するような関連状態の前、後または最中に、治療に有効量を投与するための少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ法または組成物を提供する。
【００２８】
また本発明は、本発明に従い治療的もしくは予防的に有効な量の少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディを送達するための少なくとも１つの組成物、デバイスおよび／または方法も提供する。
【００２９】
本発明はさらに、細胞、組織、器官、動物または患者の少なくとも１つのＥＰＯ関連状態を診断するための、かつ／または当該技術分野で既知であり、かつ／または本明細書に記載するような関連状態の前、後または最中に診断するための少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ法または組成物を提供する。
【００３０】
また本発明は、本発明に従い少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディを診断するための少なくとも１つの組成物、デバイスおよび／または送達方法も提供する。
【００３１】
１つの観点では、本発明は以下の表１に提示する少なくとも１つの配列番号１−３０の少なくとも一部（あるいは本明細書に記載するような、または当該技術分野で知られている任意の１もしくは複数の置換、欠失または挿入を含む）を含んでなる少なくとも１つのＰ（ｎ）領域を含んでなる、少なくとも１つの単離されたヒトのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディを提供する。
【００３２】
別の観点では、本発明は少なくとも１つの単離されたヒトのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディを提供し、ここでＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディは、リガンドが以下の表１に提示する少なくとも１つの配列番号１−３０の少なくとも一部（あるいは本明細書に記載するような、または当該技術分野で知られている任意の１もしくは複数の置換、欠失または挿入を含む）に結合する少なくとも１つのリガンドまたは結合領域の少なくとも１〜３を含んでなる少なくとも１つのエピトープに特異的に結合する。
【００３３】
少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディは、場合によりさらに：少なくとも１０−９Ｍ、少なくとも１０−１０Ｍ、少なくとも１０−１１Ｍ、または少なくとも１０−１２Ｍから選択される少なくとも１つの親和性でタンパク質と結合することができ；少なくとも１つのタンパク質またはその部分の少なくとも１つの活性を実質的に中和することができる少なくとも１つである。また提供するのは、少なくとも１つの単離されたヒトのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディをコードする単離された核酸であり；単離された核酸ベクターは単離された核酸を含んでなり、かつ／または原核もしくは真核宿主細胞は単離された核酸を含んでなる。宿主細胞は、場合によりＣＯＳ−１、ＣＯＳ−７、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ２１、ＣＨＯ、ＢＳＣ−１、ＨｅｐＧ２、６５３、ＳＰ２／０、２９３、ＨｅＬａ、骨髄腫もしくはリンパ腫細胞、またはそれらの任意の誘導体、不死化または形質転換した細胞から選択される少なくとも１つであることができる。また提供されるのは、ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディが検出可能または回収可能な量で発現されるように、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏもしくはｉｎ  ｓｉｔｕの条件下で、ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディをコードする核酸を翻訳することを含んでなる、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディの生産法である。
【００３４】
また提供するのは、少なくとも１つの単離されたヒトのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディおよび少なくとも１つの製薬学的に許容され得る担体または希釈剤を含んでなる組成物である。組成物は場合により少なくとも１つの検出可能な標識もしくはレポーター、抗感染薬、心血管（ＣＶ）系薬、中枢神経系（ＣＮＳ）薬、自律神経系（ＡＮＳ）薬、気道薬、胃腸管（ＧＩ）薬、ホルモン薬、流体もしくは電解質バランスのための薬剤、血液製剤、抗腫瘍性薬、免疫調節薬、目、耳もしくは鼻の薬、局所薬、栄養剤、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋弛緩剤、麻薬、非−ステロイド系抗炎症薬（ＮＴＨＥ）、鎮痛剤、麻酔薬、鎮静剤、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬、止痒薬、コルチコステロイド、同化性ステロイド、エリスロポエチン、免疫感作、免疫グロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン代用薬、放射性薬品、抗鬱薬、抗精神病薬、刺激物質、喘息薬物療法、ベータアゴニスト、吸入ステロイド、エピネフリンもしくは類似体、サイトカインもしくはサイトカインアンタゴニストから選択される有効量の少なくとも１つの化合物またはタンパク質をさらに含んでなることができる。
【００３５】
本発明はさらに、本発明の少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディに特異的に結合する抗−イディオタイプ抗体またはフラグメントを提供する。
【００３６】
また提供するのは、（ａ）本発明の少なくとも１つの単離されたヒトのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディの有効量を含んで成る組成物を、細胞、組織、器官または動物に接触または投与することを含んで成る、細胞、組織、器官または動物の疾患状態を診断または処置する方法である。この方法は場合によりさらに、有効量の０．００１〜５０ｍｇ／（キログラムの細胞、組織、器官または動物）を使用することを含んでなることができる。この方法は場合によりさらに、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、網内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、頬内、舌下、鼻内または経皮から選択される少なくとも１つの様式による接触または投与を使用することを含んでなることができる。この方法は場合により、（ａ）少なくとも１つの検出可能な標識もしくはレポーター、抗感染薬、心血管（ＣＶ）系薬、中枢神経系（ＣＮＳ）薬、自律神経系（ＡＮＳ）薬、気道薬、胃腸管（ＧＩ）薬、ホルモン薬、流体もしくは電解質バランスのための薬剤、血液製剤、抗腫瘍薬、免疫調節薬、目、耳もしくは鼻の薬、局所薬、栄養剤、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋弛緩剤、睡眠薬、非−ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断剤、抗菌剤、止痒薬、コルチコステロイド、タンパク質同化ステロイド、エリスロポエチン、免疫感作、免疫グロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン代用薬、放射性薬品、抗鬱薬、抗精神薬、刺激物、喘息薬物療法、ベータアゴニスト、吸入型ステロイド、エピネフリンもしくは類似体、サイトカインもしくはサインカインアンタゴニストから選択される有効量の少なくとも１つの化合物またはタンパク質を含んで成る少なくとも１つの組成物を接触または投与する前に、それと同時にまたは後に投与することをさらに含んでなることができる。
【００３７】
また本発明の少なくとも１つの単離されたヒトのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディを含んで成る医療用デバイスも提供し、ここでこのデバイスは非経口、皮下、筋肉内、静脈内、網内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、頬内、舌下、鼻内または経皮から選択される少なくとも１つの様式により、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディを接触または投与するのに適している。
【００３８】
また提供するのは、ヒトの製薬学的または診断的使用のための製品であり、これは包装材料および溶液もしくは凍結乾燥形態の本発明の少なくとも１つの単離されたヒトのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディを含んでなる容器を含んでなる。この製品は場合により構成要素として、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、網内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、頬内、舌下、鼻内または経皮送達デバイスまたはシステムの容器を有することを含んでなることができる。
【００３９】
また提供するのは本発明の少なくとも１つの単離されたヒトのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディを生産する方法であり、この方法は回収可能な量でＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディを発現することができる宿主細胞またはトランスジェニック動物またはトランスジェニック植物または植物細胞を提供することを含んでなる。さらに本発明で提供するのは、上記方法により生産された少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディである。
【００４０】
また本発明は、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは抗イディオタイプ抗体を宿主細胞中で発現させる少なくとも１つの方法も提供し、この方法は本明細書に記載する宿主細胞を、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディが検出可能かつ／または回収可能な量で発現される条件下で培養することを含んで成る。
【００４１】
本発明は、本明細書に記載する任意の発明をさらに提供する。
【００４２】
発明の記述
本発明は、単離された、組換えおよび／または合成のミメティボディまたは特定部分またはバリアント、ならびに少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含んでなる、組成物およびコード核酸分子を提供する。本発明のそのようなミメティボディまたは特定部分またはバリアントは、特異的なＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ配列、ドメイン、フラグメントおよびその特定バリアント、ならびに治療用組成物、方法およびデバイスを含む該核酸およびミメティボディまたは特定部分またはバリアントの作成および使用法も提供する。
【００４３】
また本発明は本明細書に記載し、かつ／または当該技術分野で既知の少なくとも１つの
単離されたＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントも提供する。ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディは任意選択により、少なくとも１つの可変（Ｖ）抗体配列の少なくとも部分にさらに直接連結した少なくとも１つの治療用ペプチド（Ｐ）に直接連結した任意選択のリンカー配列（Ｌ）に直接連結した少なくとも１つのヒンジ領域もしくはそのフラグメント（Ｈ）に直接連結した少なくとも１つのＣＨ２領域に直接連結した少なくとも１つのＣＨ３領域を含んでなることができる。
【００４４】
好適な態様では、ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディは式（Ｉ）：
【００４５】
【数２】
2007507225.tif 000003
【００４６】
［式中、Ｖは免疫グロブリン可変領域のＮ−末端の少なくとも１つの部分であり、Ｐは少なくとも１つの生物活性ペプチドであり、Ｌはミメティボディが代替的な方向性および結合特性を有することを可能にすることにより構造的柔軟性を提供するポリペプチドであり、Ｈは免疫グロブリン可変ヒンジ領域の少なくとも一部であり、ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２定常領域の少なくとも一部であり、ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３定常領域の少なくとも一部であり、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒおよびｓは独立して０、１または２から１０の間の整数であることができる］を含んでなり、免疫グロブリン分子の種々の型、例えば限定するわけではないがＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ等またはそれらの組み合わせを模する。ｍ＝１である単量体は会合または共有結合、例えば限定するわけではないがＣｙｓ−Ｃｙｓジスルフィド結合または他の免疫グロブリン配列により他の単量体と連結することができる。本発明のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディは、その本来の特性および機能を持つ抗体構造を模すると同時に、治療用ペプチドおよびその本来の、または獲得したｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｓｉｔｕ特性または活性を提供する。抗体の種々の部分および本発明の少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディの治療用ペプチド部分は、当該技術分野で知られている事柄と組み合わせて本明細書に記載するように変動させることができる。
【００４７】
本明細書で使用する「ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ」、「ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ部分」または「ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディフラグメント」および／または「ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディバリアント」等は、限定するわけではないが、少なくとも１つの配列番号１−３０のような、リガンド結合またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｓｉｔｕおよび／または好ましくはｉｎ  ｖｉｖｏでの活性のような、少なくとも１つのタンパク質のなくとも１つのリガンド結合または少なくとも１つの生物学的活性を模するか、有するか、または刺激する。例えば本発明の適当なＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ、特定部分またはバリアントは、少なくとも１つのタンパク質リガンドに結合することができ、そして少なくとも１つのタンパク質リガンド、受容体、可溶性受容体等を含む。適当なＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ、特定部分またはバリアントは、少なくとも１つのタンパク質受容体シグナリングまたは他の測定可能もしくは検出可能な活性をモジュレート、増加、修飾、活性化することもできる。
【００４８】
本発明の方法および組成物に有用なミメティボディは、タンパク質リガンドまたは受容体に対する適切な結合親和性を特徴とし、そして場合により、そして好ましくは低い毒性を有する。特にＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディは、可変領域、定常領域（ＣＨ１部分を含まない）および骨格の部分、またはそれらの任意の部分（例えば可変重または軽鎖のＪ、ＤまたはＶ領域の部分；ヒンジ領域、定常重鎖または軽鎖等）のような個々の成分が個別に、かつ／または集合的に任意に、そして好ましくは低い免疫原性を有する場合に
本発明に有用である。本発明に使用することができるミメティボディは場合により良好から優れた症状の緩和および低毒性で長期間、患者を処置するそれらの能力により特徴付けられる。低い免疫原性および／または高い親和性、ならびに他の不確定な特性は、達成される治療的結果に貢献し得る。本明細書では「低い免疫原性」は、処置した患者の約７５％未満、または好ましくは約５０、４５、４０、３５、３０、３５、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２および／または１％未満に有意なＨＡＭＡ、ＨＡＣＡまたはＨＡＨＡ応答を生じ、かつ／または処置した患者に低い力価を生じる（二重抗原酵素イムノアッセイで測定した時、約３００未満、好ましくは約１００未満）と定める（例えばＥｌｌｉｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ ３４４：１１２５−１１２７（１９９４）を参照にされたい）。
【００４９】
用途 
本発明の単離された核酸は、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ、そのフラグメントまたは特定バリアントの生産に使用することができ、これは限定するわけではないが少なくとも１つの免疫障害もしくは疾患、心血管障害もしくは疾患、感染、悪性および／または神経障害もしくは疾患、貧血；免疫／自己免疫：および／またはガン／感染、ならびに他の既知の、または特定されたタンパク質関連状態から選択される少なくとも１つのタンパク質関連状態の症状をモジュレートし、処置し、緩和し、発生の防止を助け、または低減するために、細胞、組織、器官または動物（哺乳動物およびヒトを含む）で行うために使用できる。
【００５０】
そのような方法は少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントを含んでなる有効量の組成物または製薬学的組成物を、症状、効果もしくはメカニズムにおいてそのようなモジュレーション、処置、緩和、防止または低減が必要な細胞、組織、器官、動物または患者に投与することを含んでなることができる。有効量は単回または多回投与あたり約０．０００１〜５００ｍｇ／ｋｇの量、または単回または多回投与あたり約０．０００１〜５０００μｇ／ｍｌの血清濃度を達成する量、または本明細書に記載する、または関連する技術分野で知られている既知の方法を使用してなされ、そして決定された任意の有効範囲またはその中の値の量を含んでなることができる。
【００５１】
引用
本明細書に引用するすべての刊行物または特許は全部、それらが本発明のこの時点の技術の状況を示し、かつ／または本発明の説明および可能性を提供するので参考により本明細書に編入する。刊行物とは任意の科学的もしくは特許公報、またはすべての記録された、電子的または印刷形式を含む任意の媒体形式で入手できる任意の他の情報を称する。以下の参考文献は引用により全部、本明細書に編入する：Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．編集、分子生物学の現在のプロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）、ジョン  ウィリー＆サンズ社（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．）、ニューヨーク、ニューヨーク州（１９８７−２００２）：Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．、モレキュラークローニング：ア  ラボラトリーマニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）、第２版、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク州（１９８９）；Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ、抗体（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、ア  ラボラトリーマニュアル、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク州（１９８９）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．編集、免疫学の現在のプロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）、ジョン  ウィリー＆サンズ社、ニューヨーク州（１９９４−２００２）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．，タンパク質科学の現在のプロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）、ジョン  ウィリー＆サンズ社、ニューヨーク、ニューヨーク州、（１９９７−２００２）。
【００５２】
本発明のミメティボディ
ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディは、少なくとも１つの可変抗体配列（Ｖ）の少なくとも一部にさらに直接連結していてもよい少なくとも１つの治療用ペプチド（Ｐ）に直接連結した任意選択のリンカー配列（Ｌ）に直接連結した少なくとも１つのコアヒンジ領域を含んでなるような少なくとも１つのヒンジ領域フラグメント（Ｈ）の少なくとも一部に直接連結した少なくとも１つのＣＨ２領域に直接連結した少なくとも１つのＣＨ３領域を場合により含んでいることができる。１対のＣＨ３−ＣＨ２−Ｈ−Ｌ−Ｖの好適な態様では、この対は会合もしくは共有結合により連結されている。すなわち本発明のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディは、その本来の特性および機能を持つ抗体構造を模すると同時に、治療用ペプチドおよびその本来の、または獲得したｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｓｉｔｕ特性または活性を提供する。本発明の少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディの抗体の種々の部分および治療用ペプチド部分は、当該技術分野で知られている事柄と組み合わせて本明細書に記載するように変動させることができる。
【００５３】
このように本発明のミメティボディは、既知のタンパク質に比べて、限定するわけではないが少なくとも１つの増加した半減期、増加した活性、より特異的な活性、増加したアビディティ、増加または減少したオフレイト（ｏｆｆ  ｒａｔｅ）、選択された、またはより適切な活性のサブセット、低い免疫原性、少なくとも１つの所望する治療効果の増加した質または期間、低い副作用等のような、少なくとも１つの適切な特性を提供する。
【００５４】
式（Ｉ）のミメティボディのフラグメントは、当該技術分野で知られ、かつ／または本明細書に記載するような酵素的分解、合成または組換え技術により生産することができる。またミメティボディは１以上の終結コドンが天然の終結部位の上流に導入された抗体遺伝子を使用して、種々の短縮形で生成することもできる。ミメティボディの種々の部分は通常の技術により化学的に一緒に連結することができ、または遺伝子工学技術を使用して連続するタンパク質として調製することができる。例えばヒト抗体鎖の少なくとも１つの定常領域をコードする核酸は、本発明のミメティボディで使用するための連続タンパク質を生産するために発現させることができる。例えば単鎖抗体に関してはＬａｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第４，９４６，７７８号明細書、およびＢｉｒｄ，Ｒ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４２：４２３−４２６（１９８８）を参照にされたい。
【００５５】
本明細書で使用する「ヒトの抗体」という用語は、実質的にタンパク質の各部分（例えばＥＰＯ模倣ペプチド、骨格、ＣＬ、ＣＨドメイン（例えばＣＨ２、ＣＨ３）、ヒンジ、（ＶＬ、ＶＨ））がヒトで実質的に非免疫原性であり、わずかな配列の変化（ｃｈａｎｇｅ）または変更（ｖａｒｉａｔｉｏｎ）を含む抗体を指す。そのような変化または変更は任意に、そして好ましくは非修飾ヒト抗体または本発明のミメティボディに比べて、ヒトにおける免疫原性を保持しているか、または減少している。すなわちヒト抗体および対応する本発明のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディは、キメラまたはヒト化抗体とは区別される。ヒト抗体およびＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディは、ヒトの免疫グロブリン（例えば重鎖および／または軽鎖）遺伝子を発現することができる非ヒト動物または細胞により生産されることができると指摘することができる。
【００５６】
少なくとも１つのタンパク質リガンドまたはその受容体に特異的なヒトのミメティボディは、単離されたような適切なリガンド、かつ／またはタンパク質受容体もしくはリガンド、またはそれらの部分（合成ペプチドのような合成分子を含む）に対して設計することができる。そのようなミメティボディの調製を既知の技術を使用して行って、少なくとも１つのタンパク質またはその部分のリガンド結合領域または配列を同定し、そして特性決定する。
【００５７】
好適な態様では、本発明の少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントは、少なくとも１つの細胞株、混合細胞株、不死化細胞、または不死化および／または培養細胞のクローン群により生産される。不死化したタンパク質生産細胞は、適当な方法を使用して生産することができる。好ましくは少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントは、機能的に再配列されたか、または機能的な再配列を受けることができ、そしてさらに本明細書に記載するミメティボディ構造、例えば限定するわけではないが式（Ｉ）を含んでなる少なくとも１つのヒト免疫グロブリン座から誘導されるか、またはそれに実質的に類似する配列を有するＤＮＡを含んでなる核酸またはベクターを提供することにより生成され、ここで当該技術分野で知られているようにＣ−およびＮ−末端可変領域の部分はＶに、ヒンジ領域はＨに、ＣＨ２はＣＨ２に、そしてＣＨ３はＣＨ３に使用することができる。
【００５８】
本明細書で使用する用語「機能的に再配列された」とは、Ｖ（Ｄ）Ｊ組換えを受け、それにより免疫グロブリン鎖（例えば重鎖、軽鎖）、またはその任意の部分をコードする免疫グロブリン遺伝子を生産する免疫グロブリン座に由来する核酸のセグメントを指す。機能的に再配列された免疫グロブリン遺伝子は、例えばヌクレオチドシークエンシング、ハイブリダイゼーション（例えばサザンブロッティング、ノーザンブロッティング）のような適切な方法を使用して、遺伝子セグメント間のコーディングジョイント（ｃｏｄｉｎｇ
ｊｏｉｎｔｓ）にアニールすることができるプローブ、または遺伝子セグメント間のコーディングジョイントにアニールすることができるプライマーを用いた免疫グロブリン遺伝子の酵素的増幅（例えばポリメラーゼ連鎖反応）を使用して、直接的または間接的に同定することができる。細胞が特定の可変領域または特定の配列（例えば少なくとも１つのＰ配列）を含んでなる可変領域を含んでなるＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは部分またはバリアントを生産するかどうかも、適切な方法を使用して決定することができる。
【００５９】
本発明のミメティボディ、特定部分およびバリアントは、そのようなミメティボディまたは特定部分またはバリアントを乳の中に生産するヤギ、ウシ、ウマ、ヒツジ等のようなトランスジェニック動物または哺乳動物を提供するために、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントをコードする核酸を使用して調製することもできる。そのような動物は抗体コード配列について応用される既知の方法を使用して提供することができる。例えば限定するわけではないが、米国特許第５，８２７，６９０号；同第５，８４９，９９２号；同第４，８７３，３１６号；同第５，８４９，９９２号；同第５，９９４，６１６号；同第５，５６５，３６２号；同第５，３０４，４８９号明細書等（これらの各々は引用により全部、本明細書に編入する）を参照にされたい。
【００６０】
本発明のミメティボディ、特定部分およびバリアントは、そのようなミメティボディ、特定部分またはバリアントを、植物の一部またはそれらから培養した細胞中に生産するトランスジェニック植物および培養植物細胞（例えば限定するわけではないが、タバコおよびトウモロコシ）を提供するために、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントをコードする核酸を使用してさらに調製することができる。非限定的な例として、組換えタンパク質を発現するトランスジェニックタバコの葉が、例えば誘導性プロモーターを使用して大量の組換えタンパク質を提供するために成功裏に使用された。例えばＣｒａｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４０：９５−１１８（１９９９）およびそこに引用されている技術文献を参照にされたい。またトランスジェニックトウモロコシは、他の組換え系で生産されたものに、または天然の起源から精製されたものに等しい生物学的活性を持つ哺乳動物のタンパク質を工業的生産レベルで発現するために使用されてきた。例えばＨｏｏ
ｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．４６４：１２７−１４７（１９９９）およびそこに引用されている技術文献を参照にされたい。単鎖ミメティボディ（ｓｃＦｖ’ｓ）のような抗体フラグメントを含め、抗体はタバコ種子およびジャガイモの塊茎を含むトランスジェニック植物の種子からも大量に生産された。例えばＣｏｎｒａｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３８：１０１−１０９（１９９８）およびそこに引用されている技術文献を参照にされたい。すなわち本発明のミメティボディ、特定部分およびバリアントは、既知の方法に従いトランスジェニック植物を使用して生産することもできる。また例えば、Ｆｉｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３０：９９−１０８（Ｏｃｔ．，１９９９）、Ｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３：５２２−７（１９９５）；Ｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１０９：３４１−６（１９９５）；Ｗｈｉｔｅｌａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．２２：９４０−９４４（１９９４）；およびそこに引用されている技術文献を参照にされたい。上記参考文献は引用により全部、本明細書に編入する。  
【００６１】
本発明のミメティボディは、広い範囲の親和性（ＫＤ）でヒトのタンパク質リガンドに結合することができる。好適な態様では、本発明の少なくとも１つのヒトＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディは場合により高い親和性で少なくとも１つのタンパク質リガンドに結合することができる。例えば本発明の少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディは、約１０−７Ｍ以下のＫＤ、またはより好ましくは約０．１〜９．９（またはこの中の任意の範囲もしくは値）Ｘ１０−７、１０−８、１０−９、１０−１０Ｍ、１０−１１、１０−１２または１０−１３以下のＫＤ、またはこの中の任意の範囲もしくは値で少なくとも１つのタンパク質リガンドに結合することができる。
【００６２】
少なくとも１つのタンパク質リガンドに関するＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディの親和性またはアビディティーは、例えば抗体−抗原結合親和性またはアビディティを決定するために使用されるような適当な方法を使用して実験的に定めることができる。（例えばＢｅｒｚｏｆｓｋｙ，ｅｔ  ａｌ．，「抗体−抗原相互作用（Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ）」、基本的免疫学（Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）で、Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．編集、ラベン（Ｒａｖｅｎ）出版：ニューヨーク、ニューヨーク州（１９８４）；Ｋｕｂｙ，Ｊａｎｉｓ  免疫学（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）、Ｗ．Ｈ．フリーマン  アンド  カンパニー（Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ）：ニューヨーク、ニューヨーク州（１９９２）；およびそこに記載されている方法を参照にされたい）。測定された特定のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ−リガンド相互作用の親和性は、異なる条件下（例えば、塩濃度、ｐＨ）で測定すれば変動し得る。すなわち親和性および他のリガンド−結合パラメーター（例えばＫＤ、Ｋａ、Ｋｄ）の測定は、好ましくはＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディおよびリガンドの標準化された溶液、および本明細書に記載するバッファーのような標準化バッファーを用いて作成される。
【００６３】
核酸分子
少なくとも１つの配列番号１−３０ならびに抗体の少なくとも１つの部分の連続するアミノ酸の少なくとも９０−１００％をコードするヌクレオチド配列（ここで上記配列は式（Ｉ）のＰ配列として挿入されて、本発明のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディを提供し、さらに特定のフラグメント、バリアントまたはそのコンセンサス配列を含んでなる）、またはこれらの配列の少なくとも１つを含んでなる寄託されたベクターのような本明細書に提供する情報を使用して、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントをコードする本発明の核酸分子は、本明細書に記載する方法または当該技術分野で知られているように得ることができる。
【００６４】
本発明の核酸分子は、ｍＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｔＲＮＡまたは他の任意の形態のようなＲＮＡの形態、あるいは限定するわけではないがクローニングにより得た、または合成的に生成されたｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡを含むＤＮＡの形態、またはそれらの任意の組み合わせであることができる。ＤＮＡは３本鎖、２本鎖もしくは１本鎖、またはそれらの組み合わせであることができる。ＤＮＡまたはＲＮＡの少なくとも１つの鎖の部分はコード鎖（センス鎖としても知られている）であることができ、またはそれは非コード鎖（アンチ−センス鎖とも言われる）であることができる。
【００６５】
本発明の単離された核酸分子は、場合により１以上のイントロンを含むオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含んでなる核酸分子、ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントのコード配列を含んでなる核酸分子；および上記のものとは実質的に異なるが、遺伝子暗号の縮重によりそれでも本明細書に記載し、かつ／または当該技術分野で既知の少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディをコードするヌクレオチド配列を含んで成る核酸分子を含むことができる。もちろん遺伝子暗号は当該技術分野では周知である。すなわち当業者には本発明の特異的なＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントをコードするそのような縮重核酸バリアントを生成することは日常的なことである。例えばＡｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，同上を参照にされたい、そしてそのような核酸バリアントは本発明に包含される。
【００６６】
本明細書に示すように、ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントをコードする核酸を含んで成る本発明の核酸分子は、限定するわけではないが自身によりＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディフラグメントのアミノ酸配列をコードするもの；全ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたはそれらの部分のコード配列；ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ、フラグメントまたは部分のコード配列、ならびにスプライシングおよびポリアデニル化シグナルを含む（例えば、リボソーム結合およびｍＲＮＡの安定性）転写、ｍＲＮＡプロセッシングに役割を果たす、転写された、非翻訳配列のような限定するわけではない非コード５’および３’配列を含むさらなる非コード配列と一緒に、少なくとも１つのイントロンのような前記のさらなるコード配列を含むか、または含まない少なくとも１つのシグナルリーダーまたは融合ペプチドのコード配列のようなさらなる配列；さらなる機能性を提供する配列のようなさらなるアミノ酸をコードするさらなるコード配列を含むことができる。すなわちＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントをコードする配列は、ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディフラグメントまたは部分を含んで成る融合ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントの精製を容易にするペプチドをコードする配列のようなマーカー配列と融合させることができる。
【００６７】
本明細書に記載するポリヌクレオチドに選択的にハイブリダイズするポリヌクレオチド
本発明は選択的なハイブリダイゼーション条件下で、本明細書に開示するポリヌクレオチド、またはその特定バリアントもしくは部分を含む本明細書に開示する他のものとハイブリダイズする単離された核酸を提供する。すなわち本態様のポリヌクレオチドは、そのようなポリヌクレオチドを含んで成る核酸を単離し、検出し、かつ／または定量するために使用することができる。
【００６８】
低または中程度のストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件は典型的には（しかし排他的ではなく）、相補的配列に比べて低下した配列同一性を有する配列に採用する。中および高ストリンジェンシー条件も、より大きな同一性の配列のために場合により使用することができる。低ストリンジェンシー条件は、約４０−９９％の配列同一性を有する配列の選択的ハイブリダイゼーションを可能とし、そしてオーソロガス（ｏｒｔｈｏｌｏｇｏｕｓ）またはパラロガス（ｐａｒａｌｏｇｏｕｓ）配列を同定するために使用することができる。
【００６９】
場合により本発明のポリヌクレオチドは、本明細書に記載するポリヌクレオチドによりコードされるＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントの少なくとも一部をコードする。本発明のポリヌクレオチドは、本発明のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントをコードするポリヌクレオチドへの選択的ハイブリダイゼーションに使用できる核酸配列を包含する。例えばＡｕｓｕｂｅｌ、同上；Ｃｏｌｌｉｇａｎ、同上を参照にされたい（各々、引用により全部、本明細書に編入する）。
【００７０】
核酸の構築
本発明の単離された核酸は、当該技術分野で周知な（ａ）組換え法、（ｂ）合成技術、（ｃ）精製技術、またはそれらの組み合わせを使用して作成することができる。
【００７１】
核酸は本発明のポリヌクレオチドに加えた配列を都合よく含んで成ることができる。例えばポリヌクレオチドの単離を補助するために、１以上のエンドヌクレアーゼ制限部位を含んで成るマルチクローニング部位を核酸に挿入することができる。また翻訳可能な配列を、本発明の翻訳されたポリヌクレオチドの単離を補助するために挿入することができる。例えばヘキサ−ヒスチジンマーカー配列は、本発明のタンパク質を精製するための便利な手段を提供する。本発明の核酸（コード配列を除く）は場合により、本発明のポリヌクレオチドのクローニングおよび／または発現のためのベクター、アダプターまたはリンカーである。
【００７２】
クローニングおよび／または発現における機能を至適化するために、ポリヌクレオチドの単離を補助するために、またはポリヌクレオチドの細胞への導入を向上させるために、そのようなクローニングおよび／発現配列にさらなる配列を加えることができる。クローニングベクター、発現ベクター、アダプターおよびリンカーの使用は、当該技術分野では周知である。例えばＡｕｓｕｂｅｌ、同上；またはＳａｍｂｒｏｏｋ、同上を参照にされたい。
【００７３】
核酸を構築するための組換え法  
ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたはそれらの任意の組み合わせのような本発明の単離された核酸組成物は、当業者に既知な多数のクローニング法を使用して生物起源から得ることができる。幾つかの態様では、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡライブラリー中の所望する配列を同定するために、適切なストリンジェンシー条件下で本発明のポリヌクレオチドと選択的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプローブを使用する。ＲＮＡの単離、およびｃＤＮＡおよびゲノムライブラリーの構築は、当業者には周知である。（例えばＡｕｓｕｂｅｌ、同上；またはＳａｍｂｒｏｏｋ、同上を参照にされたい）。
【００７４】
核酸分子を構築するための合成法
本発明の単離された核酸は、既知の方法で直接的な化学合成により調製することもできる（例えばＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．、同上を参照にされたい）。化学合成は一般に１本鎖オリゴヌクレオチドを生成し、これを相補的配列とのハイブリダイゼーションにより、または１本鎖を鋳型として使用したＤＮＡポリメラーゼによる重合化により２本鎖ＤＮＡに転換することができる。当業者はＤＮＡの化学合成は約１００余りの塩基の配列に限定されるが、より長い配列は短い配列の連結により得ることができると認識するだろう。
【００７５】
組換え発現カセット
本発明はさらに、本発明の核酸を含んでなる組換え発現カセットを提供する。本発明の核酸配列、例えば本発明のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバ
リアントをコードするｃＤＮＡまたはゲノム配列は、少なくとも１つの所望する宿主細胞に導入することができる組換え発現カセットを構築するために使用することができる。組換え発現カセットは典型的には、意図する宿主細胞でポリヌクレオチドの転写を支配する転写開始調節配列に操作可能に連結された本発明のポリヌクレオチドを含んでなる。ヘテロロガスおよび非ヘテロロガス（すなわち内因性）の両方のプロモーターを使用して、本発明の核酸の発現を支配することができる。
【００７６】
幾つかの態様では、プロモーター、エンハンサーまたは他の要素として役立つ単離された核酸は、本発明のポリヌクレオチドの発現をアップまたはダウンレギュレートするように、非ヘテロロガス状態の本発明のポリヌクレオチドの適当な位置（上流、下流またはイントロン中）に導入することができる。例えば内因性プロモーターを当該技術分野で知られているように突然変異、欠失および／または置換によりインビボまたはインビトロで改変することができる。本発明のポリヌクレオチドは、所望によりセンスまたはアンチセンス方向のいずれかで発現することができる。センスまたはアンチセンス方向のいずれかの遺伝子発現の制御は、観察可能な特性に直接的な影響を有することができると考えられる。サプレッションの別の方法はセンスサプレッションである。センス方向に形成された核酸の導入は、標的遺伝子の転写を遮断する効果的な手段であることが示された。
【００７７】
ベクターおよび宿主細胞
本発明は、本発明の単離された核酸分子を含むベクター、組換えベクターにより遺伝的に操作された宿主細胞、および当該技術分野で周知な組換え法による少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントの生産に関する。例えばＳａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．、同上；Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．、同上（各々、引用により全部、本明細書に編入する）を参照にされたい。
【００７８】
ポリヌクレオチドは場合により、宿主中での増殖のための選択可能なマーカーを含むベクターに連結することができる。一般にプラスミドベクターは電気穿孔等のような適当な既知の方法を使用して細胞に導入され、他の既知の方法にはリン酸カルシウム沈殿のような沈殿として、または荷電した脂質との複合体でのベクターの使用を含む。ベクターがウイルスである場合、適当なパッケージング細胞株を使用してインビトロでパッケージングし、そして次いで宿主細胞に形質導入することができる。
【００７９】
ＤＮＡ挿入物は適当なプロモーターに操作可能に連結されるべきである。発現構築物は任意に少なくとも１つの転写開始、終結用の部位、および転写領域中に翻訳のためのリボソーム結合部位をさらに含むだろう。構築物により発現された成熟転写産物のコード部分は、好ましくは最初に翻訳開始、および翻訳されるべきｍＲＮＡの終わりに適切に位置する終結コドン（例えばＵＡＡ、ＵＧＡまたはＵＡＧ）を含み、ＵＡＡおよびＵＡＧが哺乳動物または真核細胞の発現には好適である。
【００８０】
発現ベクターは好ましくは、しかし任意に少なくとも１つの選択可能なマーカーを含む。そのようなマーカーには例えば限定するわけではないが、真核細胞培養用のメトトレキセート（ＭＴＸ）、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ、米国特許第４，３９９，２１６号；同第４，６３４，６５５号；同第４，６５６，１３４号；同第４，９５６，２８８号；同第５，１４９，６３６号；同第５，１７９，０１７号明細書、アンピシリン、ネオマイシン（Ｇ４１８）、マイコフェノール酸、またはグルタミンシンテターゼ（ＧＳ、米国特許第５，１２２，４６４号；同第５，７７０，３５９号；同第５，８２７，７３９号細書）耐性、そして大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）および他の細菌または原核細胞での培養にはテトラサイクリンまたはアンピシリン耐性遺伝子を含む（上記の特許明細書は引用により全部、本明細書に編入する）。上記の宿主細胞に関する適当な培養基および条件は、当該技術分野では既知である。適当なベクターは当業者には直ちに明らかである。ベクター構築物の宿主細胞への導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、電気穿孔、形質導入、感染または他の既知の方法により行うことができる。そのような方法はＳａｍｂｒｏｏｋ、同上、第１〜４および１６〜１８章；Ａｕｓｕｂｅｌ、同上、第１、９、１３、１５、１６章のように当該技術分野で記載されている。
【００８１】
本発明の少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントは、融合タンパク質のように修飾された形態で発現することができ、そして分泌シグナルだけでなく、さらにヘテロロガスな機能的領域を含むことができる。例えばさらなるアミノ酸の領域、特に荷電したアミノ酸を、ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントのＮ−末端に付加して、宿主細胞中の、精製中の、あるいは後の取り扱いおよび保存中の安定性および持続性を向上させることができる。またペプチド部分を本発明のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントに付加して、精製を容易することができる。そのような領域は、ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたはその少なくとも１つのフラグメントの最終調製前に除去することができる。そのような方法は多くの標準的な研究室用マニュアル、例えば：Ｓａｍｂｒｏｏｋ、同上、第１７．２９〜１７．４２および１８．１〜１８．７４章；Ａｕｓｕｂｅｌ、同上、第１６、１７および１８章に記載されている。
【００８２】
当業者は本発明のタンパク質をコードする核酸の発現に利用可能な多数の発現系についての知識がある。
【００８３】
ミメティボディ、その特定部分またはバリアントの生産に有用な細胞培養の具体例は哺乳動物細胞である。哺乳動物細胞系は単層状態の細胞であることが多いが、哺乳動物細胞懸濁物またはバイオリアクターも使用することができる。完全なグリコシル化タンパク質を発現することができる多数の適当な宿主細胞株が当該技術分野で開発され、そしてそれにはＣＯＳ−１（例えばＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５０）、ＣＯＳ−７（例えばＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１６５１）、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ２１（例えばＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１０）、ＣＨＯ（例えばＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６１０）およびＢＳＣ−１（例えばＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２６）細胞株、ｈｅｐＧ２細胞、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３、ＳＰ２／０−Ａｇ１４、２９３細胞、ＨｅＬａ細胞等を含み、これらは例えばバージニア州マナッサスのアメリカンタイプカルチャーコレクションから容易に入手できる。好適な宿主細胞には骨髄腫およびリンパ腫細胞のようなリンパ節起源の細胞を含む。特に好適な宿主細胞は、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３細胞（ＡＴＣＣ寄託番号  ＣＲＬ−１５８０）およびＳＰ２／０−Ａｇ１４細胞（ＡＴＣＣ寄託番号  ＣＲＬ−１８５１）である。
【００８４】
これらの細胞用の発現ベクターは、限定するわけではないが１以上の以下のような発現制御配列を含むことができる；複製起点；プロモーター（例えば後期または初期ＳＶ４０プロモーター、ＣＭＶプロモーター（例えば米国特許第５，１６８，０６２号；同第５，３８５，８３９号明細書）、ＨＳＶ  ｔｋプロモーター、ｐｇｋ（ホスホリグリセレート
キナーゼ）プロモーター、ＥＦ−１アルファプロモーター（米国特許第５，２６６，４９１号明細書）、少なくとも１つのヒト免疫グロブリンプロモーター；エンハンサーおよび／またはリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位（例えばＳＶ４０ラージＴＡｇポリＡ付加部位）および転写終結配列のようなプロセッシング情報部位。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．、同上；Ｓａｍｂｒｏｏｋ、ｅｔ  ａｌ．、同上を参照にされたい。本発明の核酸またはタンパク質の生産に有用な他の細胞は知られており、かつ／または例えば細胞株およびハイブリドーマのアメリカンタイプカルチャーコレクションカタログ（ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ）あるいは既知の他の市販の供給源から入手可能である。
【００８５】
真核宿主細胞を使用する時、典型的にはポリアデニル化または転写終結配列をベクターに包含する。終結配列の例は、ウシ成長ホルモン遺伝子に由来するポリアデニル化配列である。転写の正確なスプライシングのための配列も含むことができる。スプライシング配列の例は、ＳＶ４０に由来するＶＰ１イントロン（Ｓｐｒａｇｕｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．４５：７７３−７８１（１９８３））である。さらに当該技術分野で既知であるように、宿主細胞中で複製を制御する遺伝子配列をベクターに包含することができる。
【００８６】
ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたはその特定部分またはバリアントの精製
ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントは、限定するわけではないがプロテインＡ精製、硫酸アンモニウムもしくはエタノール沈殿、酸抽出、アニオンもしくはカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、ハイドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含む周知な方法により、組換え細胞培養物から回収し、そして精製することができる。高性能液体クロマトグラフィー（“ＨＰＬＣ”）も精製に使用することができる。例えばＣｏｌｌｉｇａｎ、免疫学における現在のプロトコール、またはタンパク質科学における現在のプロトコール、ジョン  ウィリー  ＆  サンズ、ニューヨーク、ニューヨーク州（１９９７−２００２）、例えば第１、４、６、８、９、１０章を参照にされたい（各々が全部、引用により本明細書に編入される）。
【００８７】
本発明のミメティボディまたは特定部分またはバリアントには、自然に精製された生成物、化学合成法の生成物、および例えば酵母、高等植物、昆虫および哺乳動物細胞を含む真核細胞宿主から組換え技術により生産される産物を含む。組換え生産法で使用する宿主に依存して、本発明のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントはグリコシル化されることができ、または非グリコシル化であることができるが、グリコシル化が好適である。そのような方法は：Ｓａｍｂｒｏｏｋ、同上、第１７．３７〜１７．４２；Ａｕｓｕｂｅｌ、同上、第１０、１２、１３、１６、１８および２０章、Ｃｏｌｌｉｇａｎ、タンパク質科学（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）、同上、第１２〜１４（すべて引用により本明細書に編入する）のような多くの標準的な研究室マニュアルに記載されている。
【００８８】
ミメティボディ、特定フラグメントおよび／またはバリアント
本発明の単離されたミメティボディは、本明細書でさらに完全に検討する本発明の１つのポリヌクレオチドによりコードされるＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント、あるいは任意の単離もしくは調製されたＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたはその特定部分またはバリアントを含んでなる。
【００８９】
好ましくはＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたはリガンド結合部分またはバリアントは、少なくとも１つのＥＰＯタンパク質リガンドまたは受容体に結合し、そしてこれにより対応するタンパク質またはそのフラグメントの少なくとも１つのＥＰＯ生物活性を提供する。種々の治療的または診断的に重要なタンパク質が当該技術分野では周知であり、そしてそのようなタンパク質の適切なアッセイまたは生物学的活性も当該技術分野では周知である。
【００９０】
本発明のＥＰＯ模倣ペプチドの非限定的例は、以下の表１に見られる。これらのペプチドは当該技術分野で開示され、かつ／または知られている方法により調製することができる。１文字のアミノ酸略号を多くの場合で使用する。これらの配列（および特別な場合で他に特定しない限り本明細書を通して）におけるＸは、２０種の自然に存在するアミノ酸残基またはそれらの既知の誘導体、あるいはそれらの既知の修飾されたアミノ酸が存在し
得ることを意味する。これらのペプチドのいずれもリンカーを用いて、もしくは用いずに直列（ｔａｎｄｅｍ）（すなわち連続して）に連結されることができ、そして幾つかの直列連結した例を表に提供する。リンカーは“Δ”として掲げ、そして本明細書に記載するいかなるリンカーでもよい。直列反復はおよびリンカーは、明確にするために斜線により分けて示す。システイン残基を含むペプチドは、場合により他のＣｙｓ−含有ペプチドと架橋連結されることができ、その１方もしくは両方を媒介物に連結することができる。２、３の架橋結合した例を表に提供する。１より多くのＣｙｓ残基を有するペプチドは、ペプチド内ジスルフィド結合も形成することができる；例えば表１のＥＰＯ−模倣ペプチドを参照にされたい。ペプチド内ジスルフィド結合したペプチドの２、３の例を、表に具体的に表す。これらの任意のペプチドは本明細書に記載するように誘導化され、そして２、３の誘導化された例を表に提供する。カルボキシル末端がアミノ基でキャップされた誘導体については、キャップ化されたアミノ基を−ＮＨ２として表す。アミノ酸残基がアミノ酸残基以外の部分により置換されている誘導体については、置換基をδにより示し、これは例えばＢｈａｔｎａｇａｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６），Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３９：３８１４−９およびＣｕｔｈｂｅｒｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７），Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４０：２８７６−８２（これらは引用により全部、本明細書に編入する）に記載されているような当該技術分野で既知の任意の部分を示す。Ｊ置換基およびＺ置換基（Ｚ５、Ｚ６．．．．．Ｚ４０）は、米国特許第５，６０８，０３５号、同第５，７８６，３３１号および同第５，８８０，０９６号明細書に定義されている（これらは引用により全部、本明細書に編入する）。ＥＰＯ−模倣配列（表１）について、置換基Ｘ２からＸ１１および整数“ｎ”は国際公開第９６／４０７７２号パンフレットに定義されている通りである（これは引用により全部、本明細書に編入する）。太字で書かれた残基はＤ−アミノ酸であるが、場合によりＬ−アミノ酸でもよい。すべてのペプチドは特記しない限りペプチド結合を介して連結されている。略号はこの明細書の最後に列挙する。「配列番号」のカラムで、“ＮＲ”は所定の配列に必要な配列表が必要無いことを意味する。
【００９１】
【表１】
2007507225.tif 000004
【００９２】
【表２】
2007507225.tif 000005
【００９３】
ＥＰＯの生物活性は当該技術分野では周知である。例えばＡｎａｇｎｏｓｔｏｕ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．のエリスロポエチンは有糸分裂促進効果および陽性の化学走性効果を内皮細胞に有する、を参照にされたい。Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（ＵＳＡ）８７：５９７８−８２（１９９０）；Ｆａｎｄｒｅｙ  Ｊ  ａｎｄ  Ｊｅｌｋｍａｎ  ＷＥ  インターロイキン１および腫瘍壊死因子−アルファは、インビトロでエリスロポエチン生産を阻害する。Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ６２８：２５０−５（１９９１）；Ｇｅｉｓｓｌｅｒ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ  組換えヒトエリスロポエチン：インビボおよびインビトロの多能性造血増殖因子。Ｃｏｎｔｒｉｂ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．８７：１−１０（１９９０）；Ｇｒｅｇｏｒｙ  ＣＪ  造血系の分化マーカーとしてのエリスロポエチン感受性。培養における３種のエリスロポエチンコロニー応答の研究。Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ８９：２８９−３０１（１９７６）；Ｊｅｌｋｍａｎ  Ｗ  ｅｔ  ａｌ  モノカインはヒト肝癌培養および単離された潅流ラット腎臓におけるエリスロポエチン生産を阻害する。Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．５０：３０１−８（１９９２）；Ｋｉｍａｔａ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ  ヒト組換えエリスロポエチンは無血清培地でＢ細胞免疫グロブリン生産および増殖を直接刺激する。Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ８５：１５１−６（１９９１）；Ｋｉｍａｔａ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ  エリスロポエチンは無血清培地でヒト血漿細胞による免疫グロブリン生産および増殖を強化する。Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．５９：４９５−５０１（１９９１）：Ｋｉｍａｔａ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ  インビトロでヒトＩｇＥ生産に及ぼす組換えヒトエリスロポエチンの効果  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ８３：４８３−７（１９９１）；Ｋｏｕｒｙ  ＭＪ  ａｎｄ  Ｂｏｎｄｕｒａｎｔ  ＭＣ  エリスロポエチンは赤芽球前駆細胞におけるＤＮＡ分解を遅らせ、そしてプログラムされた細胞死を防止する。Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４８：３７８−８１（１９９０）；Ｌｉｍ  ＶＳ  ｅｔ  ａｌ  組換えヒトエリスロポエチンがヒトの腎機能に及ぼす効果。Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ３７：１３１−６（１９９０）；Ｍｉｔｊａｖｉｌａ  ＭＴ  ｅｔ  ａｌ  エリスロポエチンによるオートクライン刺激、およびインビトロでのヒト赤芽球白血病細胞の自律的成長。Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ８８：７８９−９７（１９９１）；Ａｎｄｒｅ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ  貧血および真性赤血球増加症患者からの検体に関するエリスロポエチンのイムノラジオメトリックアッセイの性能および結果。Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３８：７５８−６３（１９９２）；Ｈａｎｋｉｎｓ  ＷＤ  ｅｔ  ａｌ  エリスロポエチン依存的およびエリスロポエチン生産細胞株。調査および白血病治療における密接な関係。Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ５５４：２１−８（１９８９）；Ｋｅｎｄａｌｌ  ＲＧＴ  ｅｔ  ａｌ  エリスロポエチンのラジオイムノアッセイ用のサンプル保存および調製。Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ  １３：１８９−９６（１９９１）；Ｋｒｕｍｖｉｅｈ  Ｄ  ｅｔ  ａｌ  生物学的に活性なエリスロポエチンの測定に関する関連生物アッセイの比較。Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄ．６９：１５−２２（１９８８）；Ｍａ  ＤＤ  ｅｔ  ａｌ  ＲＩＡおよびインビトロバイオアッセイと比較したヒト血清エリスロポエチンを測定するためのＥＩＡの評価。Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ８０：４３１−６（１９９２）；Ｎｏｅ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ  ヒト血清中のエリスロポエチンを測定するための感度があるサンドイッチＥＬＩＳＡ  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ８０：２８５−９２（１９９２）；Ｐａｕｌｙ  ＪＵ  ｅｔ  ａｌ  血清中のヒトインターロイキン３（ＩＬ−３）およびヒトエリスロポエチン（ＥＰＯ）に対する抗体用の高度に特異的かつ高度に感受性の酵素イムノアッセイ。Ｂｅｈｒｉｎｇ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  Ｍｉｔｔｅｉｌｕｎｇｅｎ  ９０：１１２−２５（１９９１）；Ｓａｋａｔａ  Ｓ  ａｎｄ  Ｅｎｏｋｉ  Ｙ  ＣＦＵ−Ｅコロニー形成に基づく血漿エリスロポエチンに関する改善されたマイクロバイオアッセイ。Ａｎｎ．Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ６４：２２４−３０（１９９２）；Ｓａｎｅｎｇｅｎ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ  超輸血（ｈｙｐｅｒｔｒａｎｓｆｕｓｅｄ）新生児および成体マウスに由来する血漿中の免疫反応性エリスロポエチンおよび造血刺激因子（１つまたは複数）。エリスロポエチンに関するラジオイムノアッセイおよび細胞培養アッセイを用いた実験に。Ａｃｔａ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｓｃａｎｄ．１３５：１１−６（１９８９）；Ｗｉｄｎｅｓｓ  ＪＡ  ｅｔ  ａｌ  感受性があり、しかも特異的なエリスロポエチン免疫沈降アッセイ：薬物動態学的実験に対する応用。Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１１９：２８５−９４（１９９２）：さらなる情報については、個々のバイオアッセイで使用した個々の細胞株も参照にされたい。上記の各参考文献は引用により全部、本明細書に編入する。ＥＰＯは因子に応答するＨＣＤ５７、ＮＦＳ−６０、ＴＦ−１およびＵＴ−７のような細胞株を使用することによりアッセイすることができる。ＥＰＯ活性は、骨髄細胞からＣＦＵ−Ｅの数を測定することによりコロニー形成アッセイでも評価することができる。別の、および全く異なる検出法は、サイトカインのＲＴ−ＰＣＲ定量である。
【００９４】
部分的に、または好ましくは実質的に少なくとも１つのタンパク質またはフラグメントの少なくとも１つの生物活性を提供するＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ、またはその特定部分もしくはバリアントは、タンパク質またはフラグメントリガンドに結合することができ、そしてこれによりタンパク質の少なくとも１つのタンパク質リガンドもしくは受容体への結合を介して、または他のタンパク質依存的もしくは媒介型メカニズムを介して媒介される少なくとも１つの活性を提供する。本明細書で使用する用語「ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ活性」とは、約２０〜１０，０００％まで、好ましくはアッセイに依存して少なくとも約６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００％以上までの少なくとも１つのタンパク質依存的活性をモジュレートまたは引き起こすことができるＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディを指す。
【００９５】
ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントが少なくとも１つのタンパク質依存的活性を提供する能力は、好ましくは本明細書に記載し、かつ／または当該技術分野で既知の少なくとも１つの適当なタンパク質生物学的アッセイにより評価される。本発明のヒトＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントは、任意のクラス（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ等）またはアイソタイプに類似することができ、そして少なくともカッパまたはラムダ軽鎖の部分を含んでなることができる。１つの態様では、ヒトＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントはＩｇＧ重鎖可変フラグメント、ヒンジ領域、ＣＨ２およびＣＨ３、例えば少なくとも１つのアイソタイプ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４を含んでなる。
【００９６】
本発明の少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントは、少なくとも１つのタンパク質、サブユニット、フラグメント、部分またはそれらの組み合わせに対して特異的な少なくとも１つの特定リガンドに結合する。本発明の少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ、特定部分またはバリアントの少なくとも１つのＥＰＯ模倣ペプチドは、場合によりリガンドの少なくとも１つの特定したリガンドエピトープに結合することができる。結合エピトープは、少なくとも１〜３個のアミノ酸の少なくとも１つのアミノ酸配列から、ＥＰＯ受容体またはその部分のようなタンパク質リガンドからなる群から選択される配列の連続するアミノ酸の全特定部分の組み合わせを含んでなることができる。
【００９７】
そのようなミメティボディは、既知の技術を使用して式（Ｉ）のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディの種々の部分を一緒に連結することにより、組換えＤＮＡ技術の既知の技術を使用してＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディをコードする少なくとも１つ（すなわち１以上）の核酸分子を調製し、そして発現させることにより、あるいは化学合成のような他の適切な方法を使用することにより調製することができる。
【００９８】
ヒトのＥＰＯリガンドまたは受容体に結合し、そして定めた重または軽鎖可変領域の少なくとも一部を含んでなるミメティボディは、ファージディスプレイ（Ｋａｔｓｕｂｅ，Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ，１（５）：８６３−８６８（１９９８））、または当該技術分野で知られ、かつ／または本明細書に記載するようなトランスジェニック動物を使用する方法のような適切な方法を使用して調製することができる。ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ、特定部分またはバリアントは、コード核酸またはその部分を適当な宿主細胞で使用して発現させることができる。
【００９９】
好ましくはそのようなミメティボディまたはそのリガンド結合フラグメントは、ヒトのＥＰＯリガンドまたは受容体と高い親和性で（例えば約１０−７Ｍ以下のＫＤ）で結合できる。本明細書に記載する配列と実質的に同じアミノ酸配列には、保存的アミノ酸置換、ならびにアミノ酸欠失および／または挿入を含んで成る配列を含む。保存的アミノ酸置換とは、第１アミノ酸と類似の化学的および／または物理的特性（例えば、荷電、構造、極性、疎水性／親水性）を有する第２のアミノ酸に、第１アミノ酸を置き換えることを言う。保存的置換には、以下の群内で１つのアミノ酸が別のアミノ酸に置き換わることを含む：リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）およびヒスチジン（Ｈ）；アスパルテート（Ｄ）およびグルタメート（Ｅ）；アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、チロシン（Ｙ）、Ｋ、Ｒ、Ｈ、ＤおよびＥ；アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、プロリン（Ｐ）、フェニルアラニン（Ｆ）、トリプトファン（Ｗ）、メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）およびグリシン（Ｇ）；Ｆ、ＷおよびＹ；Ｃ、ＳおよびＴ。
【０１００】
アミノ酸暗号
本発明のミメティボディまたは特定部分またはバリアントを作るアミノ酸は、しばしば略記される。アミノ酸の命名法は当該技術分野で周知であり、表に示すように、その１文字暗号、その３文字暗号、名前または３ヌクレオチドコドン（１つまたは複数）によるアミノ酸の命名により示すことができる（Ａｌｂｅｒｔｓ，Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．，細胞の分子生物学（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ）、第３版、ガーランド（Ｇａｒｌａｎｄ）出版社、ニューヨーク、１９９４を参照にされたい）：
【０１０１】
【表３】
2007507225.tif 000006
【０１０２】
本発明のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントは、本明細書に特定するように天然の突然変異または人為的操作のいずれかに由来する１以上のアミノ酸置換、欠失または付加を含むことができる。本発明に使用することができるそのような、または他の配列には、さらに引用により全部、本明細書に編入する２００４年６月１７日に出願された国際特許出願第ＵＳ０４／１９７８３号の図１〜４１に対応する、引用により本明細書に全部編入する３０／０９／２００３に出願された米国特許仮出願第６０／５０７，３４９の図１〜４２にさらに記載されているような限定するわけではない表３に示す以下の配列を含み、配列番号３１〜７２に対応する。これらの参照とする図面１〜４２（配列番号３１〜７２）または国際特許出願ＰＣＴ  ＵＳ０４／１９７８３は、本明細書に教示するような本発明のＩｇ誘導化タンパク質で使用することができる重／軽鎖可変／定常領域配列、骨格／サブドメインおよび置換の例を示す。
【０１０３】
【表４】
2007507225.tif 000007
【０１０４】
もちろんアミノ酸の置換数は、上記のようなものを含む多くの因子に依存して当業者が作成するだろう。一般に、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディのアミノ酸置換、挿入または欠失の数は、本明細書に特定する１〜３０またはその中の範囲もしくは値のように４０、３０、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１個のアミノ酸を越えることはない。
【０１０５】
以下の本発明のＥＰＯヒンジコアミメティボディの成分の記載は、本発明の式（Ｉ）：
【０１０６】
【数３】
2007507225.tif 000008
【０１０７】
［式中、Ｖは免疫グロブリン可変領域のＮ−末端の少なくとも１つの部分であり、Ｐは少なくとも１つの生物活性ペプチドであり、Ｌは少なくとも１つのリンカーポリペプチドであり、Ｈは少なくとも１つの免疫グロブリンヒンジ領域の少なくとも１つの部分であり、ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２定常領域の少なくとも一部であり、ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３定常領域の少なくとも一部であり、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒおよびｓは独立して０、１または２から１０の間の整数であることができる］の使用に基づき、種々の型の免疫グロブリン分子、例えば限定するわけではないがＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩａＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ等またはその任意のサブクラスまたはその任意の組み合わせを模倣する。
【０１０８】
本発明のヒンジコアミメティボディでは、任意のＮ−末端Ｖ部分は少なくとも１つの重鎖可変骨格１（ＦＲ１）領域の１〜２０個のアミノ酸を含んでなることができる。これらは例え引用により全部、本明細書に編入する２００４年６月１７日に出願された国際特許出願第ＵＳ０４／１９７８３号明細書の図１〜４１に対応する、引用により全部、本明細書に編入する３０／０９／２００３に出願された米国仮特許出願第６０／５０７，３４９号の図１〜９（配列番号１〜９）または少なくとも１つのＬＣ可変領域（例えば図１０〜３１（配列番号４０〜６１））に提示され、これらの図面に提示される置換、欠失または挿入を含み、図５、６および８が好適である。また好適であるのは、配列Ｑ−Ｘ−Ｑを含んでなる配列である。
【０１０９】
Ｐ部分は、限定するわけではないが表１、配列番号１〜３０に提示するもの、または当該技術分野で既知であるような当該技術分野で知られているか、または本明細書に記載する少なくとも１つの任意の治療用ペプチド、あるいはその任意の組み合わせもしくはコンセンサス配列、またはその融合タンパク質を含んでなることができる。
【０１１０】
任意のリンカー配列は、当該技術分野で知られている任意の適切なペプチドリンカーであることができる。好適な配列にはＧおよびＳの組み合わせ、例えばＸ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘｎ（ここでＸはＧまたはＳであることができ、そしてｎは５〜３０であることができる）を含む。非限定的例にはＧＳ、ＧＧＧＳ、ＧＳＧＧＧＳ、ＧＳＧＧＧＳＧＧ等を含む。
【０１１１】
本発明ではＣＨ１部分は使用せず、そしてヒンジ領域のＮ−末端からのアミノ酸の変数は、例えば引用により全部、本明細書に編入する２００４年６月１７日に出願された国際特許出願第ＵＳ０４／１９７８３号明細書の図１〜４１に対応する、引用により全部、本明細書に編入する３０／０９／２００３に出願された米国仮特許出願第６０／５０７，３４９号の図１〜４２、および表３に参照されるように削除される。本発明のミメティボディのヒンジコア領域に使用するアミノ酸の変数は、限定するわけではないが、例えば引用により全部、本明細書に編入する２００４年６月１７日に出願された国際特許出願第ＵＳ０４／１９７８３号明細書の図１〜４１に対応する、引用により全部、本明細書に編入する３０／０９／２００３に出願された米国仮特許出願第６０／５０７，３４９号の図３２〜４０、または上記表３に提示するような少なくとも１つのヒンジ領域のＮ−末端アミノ酸の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７または１−３、２−５、２−７、２−８、３−９、４−１０、５−９、５−１０、５−１５、１０−２０、２−３０、２０−４０、１０−５０またはその中の任意の範囲もしくは値の削除、例えば限定するわけではないが配列番号６２〜７０に対応する、引用により全部、本明細書に編入する２００４年６月１７日に出願された国際特許出願第ＵＳ０４／１９７８３号明細書の図１〜４１に対応する、引用により全部、本明細書に編入する３０／０９／２００３に出願された米国仮特許出願第６０／５０７，３４９号の図３２〜４０のアミノ酸９９−１０５、９９−１０８、９９−１１１、９９−１１２、９９−１１３、９９−１１４、９９−１１５、９９−１１９、９９−１２５、９９−１２８、９９−１３４、９９−１４０、９９−１４３、９９−１４９、９９−１５５および９９−１５８のアミノ酸９９−１０１から１０５−１５７の任意からすべての削除を含み、引用により全部、本明細書に編入する２００４年６月１７日に出願された国際特許出願第ＵＳ０４／１９７８３号明細書の図１〜４１に対応する、引用により全部、本明細書に編入する３０／０９／２００３に出願された米国仮特許出願第６０／５０７，３４９号の図３２−４０に記載された置換、挿入または欠失を含む。好適な態様では、本発明のヒンジコア領域は、Ｃｙｓ残基までの、しかしそれを含まない欠失、または配列Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｘａａ−Ｃｙｓまでの、しかしそれを含まない欠失を含むヒンジコア領域を提供するために、ヒンジ領域のＮ−末端の欠失を含む。さらに好適な態様では、本発明のヒンジコアミメティボディに使用するそのようなヒンジコア配列には、図３６のアミノ酸１０９−１１３または１１２−１１３（配列番号６６）（ＩｇＧ１）；図３７の１０５−１１０または１０９−１１０（配列番号６７）（ＩｇＧ２）；図３８の１１１−１６０、１１４−１６０、１２０−１６０、１２６−１６０、１２９−１６０、１３５−１６０、１４１−１６０、１４４−１６０、１５０−１６０、１５６−１６０および１５９−１６０（配列番号６８）（ＩｇＧ３）；または図３９の１０６−１１０または１０９−１１０（配列番号６９）（ＩｇＧ４）を含む。
【０１１２】
ＣＨ２、ＣＨ３および任意のＣＨ４配列は、例えば引用により全部、本明細書に編入する２００４年６月１７日に出願された国際特許出願第ＵＳ０４／１９７８３号明細書の図１〜４１に対応する、引用により全部、本明細書に編入する３０／０９／２００３に出願された米国仮特許出願第６０／５０７，３４９号の図１−４２および表３に提示するような、または当該技術分野で知られている任意の適切なヒトまたはヒトに適合性のある配列、あるいはその任意の組み合わせもしくはコンセンサス配列またはその任意の融合タンパク質であることができる。
【０１１３】
機能に必須な本発明のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント中のアミノ酸は、位置指定突然変異誘発法またはアラニン−走査突然変異誘発法（例えばＡｕｓｕｂｅｌ、同上、第８、１５章；Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：１０８１−１０８５（１９８９））のような当該技術分野で既知の方法により同定することができる。後者の手法は、１つのアラニン突然変異を分子の各残基に導入する。生成した突然変異体分子は次いで、本明細書に記載するか、または当該技術分野で既知の、限定するわけではないが少なくとも１つのタンパク質関連活性のような生物活性に関して試験される。ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント結合に重要な部位も、結晶化、核磁気共鳴または光親和性標識のような構造分析により同定することができる（Ｓｍｉｔｈ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：８９９−９０４  （１９９２）およびｄｅ  Ｖｏｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５５：３０６−３１２（１９９２））。
【０１１４】
本発明のミメティボディまたは特定部分またはバリアントは限定するわけではないが、式（Ｉ）のＰ部分として、少なくとも１つの配列番号１〜３０の３個からすべてから選択される少なくとも１つの部分、配列または組み合わせを含んでなることができる。少なく
とも１つの列挙した上記活性を強化または維持することができる非限定的なバリアントには、限定するわけではないが、該ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディの適切な生物活性または機能に有意な影響を及ぼさない少なくとも１つの置換、挿入もしくは欠失に対応する少なくとも１つの突然変異をさらに含んでなる上記任意のポリペプチドを含む。
【０１１５】
ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントは、式（Ｉ）のＰ部分として、さらに場合により少なくとも１つのポリペプチドの少なくとも１つの機能的部分、配列番号１−３０の少なくとも１つの９０〜１００％を含んで成ることができる。ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディはさらに場合により式（Ｉ）のＰ部分のために、１もしくは複数の配列番号１−３０から選択されるアミノ酸配列を含んでなることができる。
【０１１６】
１つの態様では、Ｐアミノ酸配列またはそれらの部分は、少なくとも１つの配列番号１−３０の対応する部分のアミノ酸配列に対して、約９０〜１００％の同一性（すなわち９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００またはこの中の任意の範囲または値）を有する。好ましくは９０〜１００％のアミノ酸同一性（すなわち、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００またはこの中の任意の範囲または値）が、当該技術分野で知られている適当なコンピューターアルゴリズムを使用して決定される。
【０１１７】
本発明のミメティボディまたは特定部分またはバリアントは、本発明のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントに由来する任意の数の連続するアミノ酸残基を含んでなることができ、ここでその数はＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ中の連続する残基数の１０〜１００％からなる整数の群から選択される。場合により連続アミノ酸のこのサブ配列は、少なくとも約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０以上のアミノ酸長、またはその中の任意の範囲または値である。さらにそのようなサブ配列の数は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０のような１〜２０からなる群から選択される任意の整数またはそれ以上であることができる。
【０１１８】
当業者は、本発明が少なくとも１つの生物的に活性な本発明のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントを含むと考えるだろう。生物的に活性なミメティボディまたは特定部分またはバリアントは、天然（非−合成）、内因性または関連する、および既知の挿入され、または融合されたタンパク質または特定部分またはバリアントの少なくとも２０％、３０％または４０％、そして好ましくは少なくとも５０％、６０％または７０％、そして最も好ましくは少なくとも８０％、９０％または９５％〜１０００％の比活性を有する。酵素活性および基質特異性を測定するアッセイおよび定量法は、当業者には周知である。
【０１１９】
別の観点では、本発明は有機部分の共有結合によりさらに修飾された本明細書に記載するヒトのミメティボディおよびリガンド結合フラグメントに関する。そのような修飾は改善された薬物動態学的特性（例えばインビボ血清半減期の上昇）を持つＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたはリガンド結合フラグメントを生じることができる。この有機部分は直鎖または分岐した親水性のポリマー性基、脂肪酸基、または脂肪酸エステル基であることができる。特定の態様では親水性のポリマー性基は約８００〜約１２０，０００ダルトンの分子量を有することができ、そしてポリアルカングリコール（例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ））、炭水化物ポリマー、アミノ酸ポリマーまたはポリビニルピロリドンであることができ、そして脂肪酸または脂肪酸エステル基は約８〜約４０個の炭素原子を含んで成ることができる。
【０１２０】
本発明の修飾されたミメティボディおよびリガンド結合フラグメントは、直接的または間接的にＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントに共有的に結合した１以上の有機部分を含んで成ることができる。本発明のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたはリガンド結合フラグメントに結合する各有機部分は、独立して親水性ポリマー性基、脂肪酸基または脂肪酸エステル基であることができる。本明細書で使用する用語「脂肪酸」は、モノ−カルボン酸およびジ−カルボン酸を包含する。本明細書で使用する用語「親水性のポリマー性基」とは、水中でオクタン中よりも溶解性の有機ポリマーを指す。例えばポリリシンは水中でオクタン中より可溶性である。すなわちポリリシンの共有結合により修飾されたＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディは、本発明に包含される。本発明のミメティボディを修飾するために適する親水性ポリマーは直鎖または分岐であることができ、そして例えばポリアルカングリコール（例えば、ＰＥＧ、モノメトキシ−ポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）、ＰＰＧ等）、炭水化物（例えばデキストラン、セルロース、オリゴ糖、多糖等）、親水性アミノ酸のポリマー（例えばポリリシン、ポリアルギニン、ポリアスパルテート等）、ポリアルカンオキシド（例えばポリエチレンオキシド、ポリプロピレンオキシド等）、およびポリビニルピロリドンを含む。好ましくは本発明のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディを修飾する親水性ポリマーは、別個の分子量の物体として約８００〜約１５０，０００ダルトンの分子量を有する。例えばＰＥＧ２５００、ＰＥＧ５０００、ＰＥＧ７５００、ＰＥＧ９０００、ＰＥＧ１００００、ＰＥＧ１２５００、ＰＥＧ１５０００およびＰＥＧ２０，０００（ここで下付文字は、ダルトンでのポリマーの平均分子量である）を使用することができる。
【０１２１】
親水性のポリマー性基は１〜約６個のアルキル、脂肪酸または脂肪酸エステル基で置換することができる。脂肪酸または脂肪酸エステル基で置換される親水性ポリマーは、適当な方法を使用することにより調製することができる。例えばアミン基を含んで成るポリマーは、脂肪酸または脂肪酸エステルのカルボキシレートにカップリングすることができ、そして脂肪酸または脂肪酸エステル上で活性化されたカルボキシレート（例えばＮ，Ｎ−カルボニルジイミダゾールにより活性化される）を、ポリマー上のヒドロキシル基にカップリングすることができる。
【０１２２】
本発明のミメティボディを修飾するために適切な脂肪酸および脂肪酸エステルは飽和であることができ、あるいは１以上の不飽和単位を含むことができる。本発明のミメティボディを修飾するために適切な脂肪酸には、例えばｎ−ドデカノエート（Ｃ１２、ラウレート）、ｎ−テトラデカノエート（Ｃ１４、ミリステート）、ｎ−オクタデカノエート（Ｃ１８、ステアレート）、ｎ−エイコサノエート（Ｃ２０、アラキデート）、ｎ−ドコサノエート（Ｃ２２、ベヘネート）、ｎ−トリアコンタノエート（Ｃ３０）、ｎ−テトラコンタノエート（Ｃ４０）、シス−Δ９−オクタデカノエート（Ｃ１８、オレート）、オールシス−Δ５，８，１１，１４−エイコサテトラエノエート（Ｃ２０、アラキドネート）、オクタン二酸、テトラデカン二酸、オクタデカン二酸、ドコサン二酸等を含む。適当な脂肪酸エステルには、直鎖もしくは分枝低級アルキル基を含んで成るジカルボン酸のモノ−エステルを含む。低級アルキル基は、１から約１２、好ましくは１から約６個の炭素原子を含んで成ることができる。
【０１２３】
修飾されたヒトミメティボディおよびリガンド結合フラグメントは、１もしくは複数の修飾剤を用いた反応によるような適当な方法を使用して調製することができる。本明細書で使用する用語「修飾剤」は、活性化基を含んで成る適当な有機基（例えば親水性ポリマー、脂肪酸、脂肪酸エステル）を指す。「活性化基」は、適当な条件下で第２の化学基と反応し、これにより修飾剤と第２の化学基との間に共有結合を形成することができる化学的部分または官能基である。例えばアミン反応性の活性化基には、トシラート、メシラート、ハロ（クロロ、ブロモ、フルオロ、ヨード）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル（ＮＨＳ）等のような求電子性基を含む。チオールと反応することができる活性化基には、例えばマレイミド、ヨードアセチル、アクリロリル、ピリジルジスルフィド、５−チオール−２−ニトロ安息香酸チオール（ＴＮＢ−チオール）等を含む。アルデヒド官能基をアミンまたはヒドラジドを含有する分子にカップリングさせることができ、そしてアジド基を三価のリン基と反応させてホスホルアミデートまたはホスホルイミド結合を形成することができる。活性化基を分子に導入する適当な方法は、当該技術分野で既知である（例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．生物結合法（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）、アカデミック出版；サンディエゴ、カリフォルニア州、（１９９６）を参照にされたい）。活性化基は有機基（例えば親水性ポリマー、脂肪酸、脂肪酸エステル）に直接、またはリンカー部分、例えば二価のＣ１−Ｃ１２基（ここで１もしくは複数の炭素原子が酸素、窒素または硫黄のようなヘテロ原子に置き換わることができる）を介して結合させることができる。適当なリンカー部分には、例えばテトラエチレングリコール、−（ＣＨ２）３−、−ＮＨ−（ＣＨ２）６−ＮＨ−、−（ＣＨ２）２−ＮＨ−および−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ−ＮＨ−を含む。リンカー部分を含んで成る修飾剤は、例えばモノ−Ｂｏｃ−アルキルジアミン（例えばモノ−Ｂｏｃ−エチレンジアミン、モノ−Ｂｏｃ−ジアミノヘキサン）を、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）の存在下で脂肪酸と反応させて、遊離アミンと脂肪酸カルボキシレートとの間にアミド結合を形成することにより生成することができる。Ｂｏｃ保護基はトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いた処理により生成物から除去し、記載した別のカルボキシレートにカップリングすることができる１級アミンを露出することができるか、または無水マレイン酸と反応させ、そして生じた生成物を環化して脂肪酸の活性化マレイミド誘導体を生成することができる（例えばＴｈｏｍｐｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，国際公開第９２／１６２２１号パンフレットを参照にされたい（この教示は全部、引用により本明細書に編入する））。
【０１２４】
本発明の修飾したミメティボディは、ヒトＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたはリガンド結合フラグメントを修飾剤と反応させることにより生成することができる。例えば有機部分は、アミン−反応性修飾剤（例えばＰＥＧのＮＨＳエステル）を使用することにより、非−部位特異的様式でＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディに結合させることができる。修飾したヒトミメティボディまたはリガンド結合フラグメントは、ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたはリガンド結合フラグメントのジスルフィド結合（例えば鎖内ジスルフィド結合）を還元することにより調製することもできる。還元されたＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたはリガンド結合フラグメントは、次いでチオール−反応性の修飾剤と反応させて、本発明の修飾されたＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディを生成することができる。本発明のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントの特異的部位に結合する有機部分を含んで成る修飾されたヒトミメティボディおよびリガンド結合フラグメントは、逆タンパク質溶解（Ｆｉｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，３：１４７−１５３（１９９２）；Ｗｅｒｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，５：４１１−４１７（１９９４）；Ｋｕｍａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．６（１０）：２２３３−２２４１（１９９７）；Ｉｔｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２４（１）；５９−６８（１９９６）；Ｃａｐｅｌｌａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，５６（４）：４５６−４６３（１９９７））のような適当な方法、およびＨｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．，生物結合法（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）、アカデミック出版；サンディエゴ、カリフォルニア州１９９６）に記載されている方法を使用して調製することができる。
【０１２５】
ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ組成物
また本発明は、自然には存在しない組成物、混合物または形態で提供される、本明細書に記載し、かつ／または当該技術分野で既知であるような少なくとも１つの、少なくとも
２つの、少なくとも３つの、少なくとも４つの、少なくとも５つの、少なくとも６以上のミメティボディまたはその特定部分またはバリアントを含んで成る、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント組成物を提供する。そのような組成物の割合は、当該技術分野で既知の、または本明細書に記載するような液体もしくは乾燥溶液、混合物、懸濁液、乳液またはコロイドとしての重量、容量、濃度、容量モル濃度または重量モル濃度による。そのような組成物の割合は、限定するわけではないが０．００００１、０．００００３、０．００００５、０．００００９、０．０００１、０．０００３、０．０００５、０．０００９、０．００１、０．００３、０．００５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．３、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４、９９．５、９９．６、９９．７、９９．８、９９．９％のような、当該技術分野で既知の、または本明細書に記載するような液体、ガスもしくは乾燥溶液、混合物、懸濁液、乳液またはコロイドとしての重量、容量、濃度、容量モル濃度またはモル重量濃度で０．００００１〜９９．９９９９パーセントを含んでなることができる。本発明のそのような組成物は、このように限定するわけではないが０．００００１〜１００ｍｇ／ｍｌおよび／または０．００００１〜１００ｍｇ／ｇを含む。
【０１２６】
組成物は場合により、さらに少なくとも１つの抗感染薬、心血管（ＣＶ）系薬、中枢神経系（ＣＮＳ）薬、自律神経系（ＡＮＳ）薬、気道薬、胃腸管（ＧＩ）薬、ホルモン薬、流体もしくは電解質バランスのための薬剤、血液製剤、抗腫瘍薬、免疫調節薬、目、耳もしくは鼻の薬、局所薬、栄養剤等から選択される少なくとも１つの化合物またはタンパク質の有効量を含んでなることができる。そのような薬剤は当該技術分野では周知であり、本明細書で提示するそれぞれについて製剤、適用、投薬および投与を含む（例えばＮｕｒｓｉｎｇ  ２００１  薬剤のハンドブック（Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ）、第２１版、スプリングハウス（Ｓｐｒｉｎｇｈｏｕｓｅ）社、スプリングハウス、ペンシルバニア州、２００１：健康の専門家の薬剤ガイド（Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ’ｓ  Ｄｒｕｇ  Ｇｕｉｄｅ）２００１、編集、Ｓｈａｎｎｏｎ，Ｗｉｌｓｏｎ，Ｓｔａｎｇ、プレンティス−ホール（Ｐｒｅｎｔｉｃｅ−Ｈａｌｌ）社、アッパー  サドル
リバー、ニュージャージー州；薬理治療ハンドブック（Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ）、Ｗｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．、編集、アペルトン＆ランゲ（Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ）、スタムフォード、コネチカット州を参照にされたい（それぞれ引用により全部、本明細書に編入する）。
【０１２７】
抗感染薬は、殺アメーバー薬または少なくとも１つの抗原虫薬、駆虫薬、抗真菌薬、抗マラリア薬、抗結核薬、または少なくとも１つの抗癩病薬、アミノグルコシド、ペニシリン、セファロスポリン、テトラサイクリン、スルホンアミド、フルオロキノロン、抗ウイルス薬、マクロライド抗感染薬、種々雑多な（ｍｉｓｃｅｌｌａｎｅｏｕｓ）抗感染薬から選択される少なくとも１つであることができる。ＣＶ薬は、強心薬、抗不整脈薬、抗狭心薬、抗高血圧症薬、抗高脂血症薬、種々雑多な心臓薬から選択される少なくとも１つであることができる。ＣＮＳ薬は、非麻酔性鎮痛薬から選択される少なくとも１つ、または解熱薬、非ステロイド系抗炎症薬、麻酔薬、または少なくとも１つのオピオイド系鎮痛薬、鎮痛−睡眠薬、鎮痙薬、抗鬱薬、抗不安薬、抗精神薬、中枢神経系刺激物、抗パーキンソン病薬、種々雑多な中枢神経系から選択される少なくとも１つであることができる。ＡＮＳ薬は、コリン作用薬（副交感神経作用薬）、抗コリン作用薬、アドレナリン作用薬（交感神経作用薬）、アドレナリン遮断薬（交感神経遮断薬）、骨格筋弛緩薬、神経筋肉遮断薬から選択される少なくとも１つであることができる。気道薬は抗ヒスタミン薬、気管支拡張薬、去痰薬または少なくとも１つの鎮咳薬、種々雑多な呼吸薬から選択される少なくとも１つであることができる。ＧＩ管薬は、制酸または少なくとも１つの吸着薬または少なくとも１つの抗発張剤（ａｎｔｉｆｌａｔｕｌｅｎｔ）、消化酵素または少なくとも１つの胆石溶解剤、止瀉薬、緩下薬、制吐薬、抗潰瘍薬から選択される少なくとも１つであることができる。ホルモン薬はコルチコステロイド、アンドロゲン、または少なくとも１つの同化性ステロイド、エストロゲン、または少なくとも１つのプロゲスチン、ゴナドトロピン、抗糖尿病薬、または少なくとも１つのグルカゴン、甲状腺ホルモン、甲状腺ホルモンアンタゴニスト、下垂体ホルモン、副甲状腺様薬から選択される少なくとも１つであることができる。流体および電解質バランスのための薬剤は、利尿剤、電解質または少なくとも１つの代替溶液、酸化剤または少なくとも１つのアルカリ化剤から選択される少なくとも１つであることができる。血液製剤は造血薬、抗凝固薬、血液誘導体、血栓溶解酵素から選択される少なくとも１つであることができる。抗腫瘍薬はアルキル化剤、代謝拮抗物質、抗生物質系抗腫瘍薬、ホルモンバランスを改変する抗腫瘍薬、種々雑多な抗腫瘍性薬から選択される少なくとも１つであることができる。免疫調節薬は免疫抑制剤、ワクチンまたは少なくとも１つの毒素、抗毒素または少なくとも１つの抗蛇毒素、免疫血清、生物学的応答モディファイヤーから選択される少なくとも１つであることができる。目、耳および鼻の薬は、目の抗感染薬、目の抗炎症薬、縮瞳薬、散瞳薬、目の血管収縮薬、種々雑多な目、耳、鼻の薬から選択される少なくとも１つであることができる。局所薬は局所用抗感染薬、殺疥癬虫薬、または少なくとも１つの殺シラミ薬、局所用コルチコステロイドから選択される少なくとも１つであることができる。栄養剤はビタミン、無機物または熱量源（ｃａｌｏｒｉｃ）から選択される少なくとも１つであることができる。例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブック（Ｎｕｒｓｉｎｇ  ２００１  Ｄｒｕｇ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ）、同上を参照にされたい。
【０１２８】
少なくとも１つの殺アメーバー薬または抗原虫薬は、アトバクオン（ａｔｏｖａｑｕｏｎｅ）、塩酸クロロキン、リン酸クロロキン、メトロニダゾール、塩酸メトロニダゾール、ペンタミジンイセチオネートから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの駆虫薬は、メベンダゾール、ピランテルパモエート、チアベンダゾールから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗真菌薬は、アンホテリシンＢ、アンホテリシンＢ硫酸コレステリル複合体、アンホテリシンＢ脂質複合体、アンホテリシンＢリポソーマル、フルコナゾール、フルシトシン、グリセオフルビンマイクロサイズ、グリセオフルビンウルトラマイクロサイズ、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ニスタチン、塩酸テルビナファイン（ｔｅｒｂｉｎａｆｉｎｅ）から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗マラリア薬は、塩酸クロロキン、リン酸クロロキン、ドキシサイクリン、硫酸ヒドロキシクロロキン、塩酸メフロキン、リン酸プリマキン、ピリメタミン、スルファドキシンを含むピリメタミンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗結核または抗癩病薬は、クロファジミン、シクロセリン、ダプソン、塩酸エタンブトール、イソニアジド、ピラジナミド、リファブチン（ｒｉｆａｂｕｔｉｎ）、リファンピン、リファペンチン（ｒｉｆａｐｅｎｔｉｎ）、硫酸ストレプトマイシンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのアミノグリコシドは、硫酸アミカシン（ａｍｉｋａｃｉｎ）、硫酸ゲンタマイシン、硫酸ネオマイシン、硫酸ストレプトマイシン、硫酸トブラマイシンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのペニシリンは、アモキシリン／クラブラネートカリウム、アモキシリン三水和物、アンピシリン、アンピシリンナトリウム、アンピシリン三水和物、アンピシリンナトリウム／スルバクタムナトリウム、クロキサシリンナトリウム、ジクロキサシリンナトリウム、メズロシリンナトリウム、ナフシリンナトリウム、オキサシリンナトリウム、ペニシリンＧベンザチン、ペニシリンＧカリウム、ペニシリンＧプロカイン、ペニシリンＧナトリウム、ペニシリンＶカリウム、ピペラシリンナトリウム、ピペラシリンナトリウム／タゾバクタム（ｔａｚｏｂａｃｔａｍ）ナトリウム、チカルシリン二ナトリウム、チカルシリン二ナトリウム／クラブラネートカリウムから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのセファロスポリンは、少なくとも１つのセファクロール、セファドロキシル、セファゾリンナトリウム、セフジニル（ｃｅｆｄｉｎｉｒ）、塩酸セフェピム（ｃｅｆｅｐｉｍｅ）、セフィキシム（ｃｅｆｉｘｉｍｅ）、セフメタゾール（ｃｅｆｍｅｔａｚｏｌｅ）ナトリウム、セフォニシドナトリウム、セフォペラゾンナトリウム、セフォタキシムナトリウム、セフォテタンジナトリウム、セフォキシチンナトリウム、セフポドキシム  プロキセチル（ｃｅｆｐｏｄｏｘｉｍｅ  ｐｒｏｘｅｔｉｌ）、セフプロジル（ｃｅｆｐｒｏｚｉｌ）、セフタジジム、セフチブテン（ｃｅｆｔｉｂｕｔｅｎ）、セフチゾキシム（ｃｅｆｔｉｚｏｘｉｍｅ）ナト��ウム、セフトリアゾンナトリウム、セフロキシム  アキセチル（ｃｅｆｕｒｏｘｉｍｅ  ａｘｅｔｉｌ）、セフロキシムナトリウム、塩酸セファレキシン、セファレキシン一水和物、セフラジン、ロラカルベフ（ｌｏｒａｃａｒｂｅｆ）から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのテトラサイクリンは、塩酸デメクロサイクリン、ドキシサイクリンカルシウム、ドキシサイクリン  ハイクレート（ｈｙｃｌａｔｅ）、塩酸ドキシサイクリン、ドキシサイクリン一水和物、塩酸ミノサイクリン、塩酸テトラサイクリンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのスルホンアミドは、コートリモキサゾール（ｃｏ−ｔｒｉｍｏｘａｚｏｌｅ）、スルファジアジン、スルファメトキサゾール、スルフィソキサゾール、スルフィソキサゾールアセチルから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのフルオロキノロンは、メシル酸アラトロフロキサシン（ａｌａｔｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、シプロフロキサシン、エノキサシン、レボフロキサシン（ｌｅｖｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、塩酸ロメフロキサシン（ｌｏｍｅｆｌｏｘａｃｉｎ）、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン（ｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、スパルフロキサシン（ｓｐａｒｆｌｏｘａｃｉｎ）、メシル酸トロバフロキサシン（ｔｒｏｖａｆｌｏｘａｃｉｎ）から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのフルオロキノロンは、メシル酸アラトロフロキサシン（ａｌａｔｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、シプロフロキサシン、エノキサシン、レボフロキサシン（ｌｅｖｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、塩酸ロメフロキサシン（ｌｏｍｅｆｌｏｘａｃｉｎ）、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン（ｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、スパルフロキサシン（ｓｐａｒｆｌｏｘａｃｉｎ）、メシル酸トロバフロキサシン（ｔｒｏｖａｆｌｏｘａｃｉｎ）から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗ウイルス薬は、硫酸アバカビル（ａｂａｃａｖｉｒ）、アシクロビルナトリウム、塩酸アマンタジン、アンプレナビル（ａｍｐｒｅｎａｖｉｒ）、シドホビル（ｃｉｄｏｆｏｖｉｒ）、メシル酸デラビルジン（ｄｅｌａｖｉｒｄｉｎｅ）、ジダノシン（ｄｉｄａｎｏｓｉｎｅ）、エファビレンズ（ｅｆａｖｉｒｅｎｚ）、ファムシクロビル（ｆａｍｃｉｃｌｏｖｉｒ）、フォミビルゼン（ｆｏｍｉｖｉｒｓｅｎ）ナトリウム、フォスカルネットナトリウム、ガンシクロビル、硫酸インジナビル、ラミブジン（ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ）、ラミブジン／ジドブジン、メシル酸ネルフィナビル（ｎｅｌｆｉｎａｖｉｒ）、ネビラピン（ｎｅｖｉｒａｐｉｎｅ）、リン酸オセルタミビル（ｏｓｅｌｔａｍｉｖｉｒ）、リバビリン、塩酸リマンタジン、リトナビル（ｒｉｔｏｎａｖｉｒ）、サキナビル（ｓａｑｕｉｎａｖｉｒ）、メシル酸サキナビル、スタブジン（ｓｔａｖｕｄｉｎｅ）、塩酸バラシクロビル（ｖａｌａｃｙｃｌｏｖｉｒ）、ザルシタビン（ｚａｌｃｉｔａｂｉｎｅ）、ザナミビル、ジドブジンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのマクロリン抗−感染薬は、アジスロマイシン（ａｚｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）、クラリスロマイシ��（ｃｌａｒｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）、ジリスロマイシン（ｄｉｒｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）、エリスロマイシン塩基、エリスロマイシンエストレート、エチルコハク酸エリスロマイシン、エリスロマイシンラクトバイオネート（ｌａｃｔｏｂｉｏｎａｔｅ）、エリスロマイシンステアレートから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの種々雑多な抗感染薬は、アズトレオナム、バシトラシン、コハク酸クロラムフェニコールナトリウム、塩酸クリンダマイシン、塩酸クリンダマイシンパルミテート、リン酸クリンダマイシン、イミペネムおよびシラスタチンナトリウム、メロペネム（ｍｅｒｏｐｅｎｅｍ）、ニトロフラントイン  マクロクリスタル（ｍａｃｒｏｃｒｙｓｔａｌ）、ニトロフラントイン  ミクロクリスタル（ｍｉｃｒｏｃｒｙｓｔａｌ）、キヌプリスチン（ｑｕｉｎｕｐｒｉｓｔｉｎ）／ダルホプリスチン（ｄａｌｆｏｐｒｉｓｔｉｎ）、塩酸スペクチノマイシン、トリメトプリム、塩酸バンコマイシンから選択される少なくとも１つであることができる。（例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブックの第２４〜２１４頁を参照にされたい。）
【０１２９】
少なくとも１つの筋収縮薬は乳酸アムリノン、ジゴキシン、乳酸ミルリノンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗不整脈薬はアデノシン、塩酸アミオダロン、硫酸アトロピン、ブレチリウムトシラート、塩酸ジルチアゼム、ジソピラミド、リン酸ジソピラミド、塩酸エスモロール、酢酸フレカイニド、フマル酸イブチリド（ｉｂｕｔｉｌｉｄｅ）、塩酸リドカイン、塩酸メキシレチン、塩酸モリシジン（ｍｏｒｉｃｉｚｉｎｅ）、フェニトイン、フェニトインナトリウム、塩酸プロカインアミド、塩酸プロパフェノン、塩酸プロプラノロール（ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ）、重硫酸キニジンビ、グルコン酸キニジン、ポリガラクツロン酸キニジン、硫酸キニジン、ソタロール、塩酸トカイニド、塩酸ベラパミルから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗狭心症薬は、アムロジピジン（ａｍｌｏｄｉｐｉｄｉｎｅ）ベシレート、アミルニトリット、塩酸ベプリジル（ｂｅｐｒｉｄｉｌ）、塩酸ジルチアゼム、イソソルビドジニトレート、イソソルビドモノニトレート、ナドロール、塩酸ニカルジピン、ニフェジピン、ニトログリセリン、塩酸プロパノロール、ベラパミル、塩酸ベラパミルから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗高血圧症薬は、塩酸アセブトロール、アムロジピンベシレート、アテノロール、塩酸ベナゼプリル（ｂｅｎａｚｅｐｒｉｌ）、塩酸ベタキソロール、フマル酸ビソプロロール（ｂｉｓｏｐｒｏｌｏｌ）、カンデサルタン  シレキセチル（ｃａｎｄｅｓａｒｔａｎ  ｃｉｌｅｘｅｔｉｌ）、カプトプリル、塩酸カルテオロール（ｃａｒｔｅｏｌｏｌ）、カルベディロール、クロニジン、塩酸クロニジン、ジアゾキシド、塩酸ジルチアゼム、メシル酸ドキサゾシン、エナラプリラート、マレイン酸エナラプリル、メシル酸エプロサルタン（ｅｐｒｏｓａｒｔａｎ）、フェロジピン、メシル酸フェノルドパム（ｆｅｎｏｌｄｏｐａｍ）、フォシノプリル（ｆｏｓｉｎｏｐｒｉｌ）ナトリウム、酢酸グアナベンズ、硫酸グアナドレル、塩酸グアンファシン、塩酸ヒドララジン、イルベサルタン（ｉｒｂｅｓａｒｔａｎ）、イスラジピン（ｉｓｒａｄｉｐｉｎｅ）、塩酸ラベタロール、リジノプリル、ロサルタン（ｌｏｓａｒｔａｎ）カリウム、メチルドパ、塩酸メチルドペート、コハク酸メトプロロール、酒石酸メトプロロール、ミノキシジル、塩酸モエキシプリル（ｍｏｅｘｉｐｒｉｌ）、ナドロール、塩酸ニカルジピン、ニフェジピン、ニソルジピン、ニトロプルシドナトリウム、硫酸ペンブトロール（ｐｅｎｂｕｔｏｌｏｌ）、ペリンドプリル  エルブミン（ｐｅｒｉｎｄｏｐｒｉｌ  ｅｒｂｕｍｉｎｅ）、メシル酸フェントラミン、ピンドロール、塩酸プラゾシン、塩酸プロパノロール、塩酸キナプリル、ラミプリル（ｒａｍｉｐｒｉｌ）、テルミサルタン（ｔｅｌｍｉｓａｒｔａｎ）、塩酸テラゾシン、マレイン酸チモロール、トランドラプリル（ｔｒａｎｄｏｌａｐｒｉｌ）、バルサルタン（ｖａｌｓａｒｔａｎ）、塩酸ベラパミルから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗高脂血症薬は、アトルバスタチン（ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ）カルシウム、セリバスタチン（ｃｅｒｉ���ａｓｔａｔｉｎ）ナトリウム、コレスチラミン、塩酸コレスチポール、フェノフィブレート（ｆｅｎｏｆｉｂｒａｔｅ）（微結晶化）、フルバスタチン（ｆｌｕｖａｓｔａｔｉｎ）ナトリウム、ゲムフィブロジル、ロバスタチン、ナイアシン、プラバスタチンナトリウム、シンバスタチンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの種々雑多なＣＶ薬はアブシキシマブ、アルプロスタジル、塩酸アルブタミン（ａｒｂｕｔａｍｉｎｅ）、シロスタゾル（ｃｉｌｏｓｔａｚｏｌ）、重硫酸クロピドグレル（ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ）、ジピリダモール、エプチフィバチド（ｅｐｔｉｆｉｂａｔｉｄｅ）、塩酸ミドドリン（ｍｉｄｏｄｒｉｎｅ）、ペントキシフィリン（ｐｅｎｔｏｘｉｆｙｌｌｉｎｅ）、塩酸チクロピジン（ｔｉｃｌｏｐｉｄｉｎｅ）、塩酸チロフィバン（ｔｉｒｏｆｉｂａｎ）から選択される少なくとも１つであることができる（例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブックの第２１５〜３３６頁を参照にされたい。）
【０１３０】
少なくとも１つの非麻酔性鎮痛薬または解熱薬は、アセトアミノフェン、アスピリン、トリサリチル酸マグネシウムコリン、ジフルニサル、サリチル酸マグネシウムから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの非ステロイド系抗炎症薬は、セレコキシブ（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）、ジクロフェナクカリウム、ジクロフェナクナトリウム、エトドラク（ｅｔｏｄｏｌａｃ）、フェノプロフェンカルシウム、フルビプロフェン（ｆｌｕｂｉｐｒｏｆｅｎ）、イブプロフェン、インドメタシン、インドメタシンナトリウム三水和物、ケトプロフェン、ケトロラクトロメタミン、ナブメトン（ｎａｂｕｍｅｔｏｎｅ）、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、オキサプロジン（ｏｘａｐｒｏｚｉｎ）、ピロキシカム、ロフェコキシブ（ｒｏｆｅｃｏｘｉｂ）、スリンダクから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの麻酔性またはオピオイド系鎮痛薬は、塩酸アルフェンタニル、塩酸ブプレノルフィン、酒石酸ブトルファノール、リン酸コデイン、硫酸コデイン、クエン酸フェンタニル、フェンタニル経皮系、フェンタニル経粘膜系、塩酸ヒドロモルホン、塩酸メペリジン、塩酸メタドン、塩酸モルフィン、硫酸モルフィン、酒石酸モルフィン、塩酸ナルブフィン、塩酸オキシコドン、ペクチン酸オキシコドン、塩酸オキシモルフォン、塩酸ペンタゾシン、塩酸ペンタゾシンおよび塩酸ナロキソン、乳酸ペンタゾシン、塩酸プロポキシフェン、プロポキシフェンナプシレート、塩酸レミフェンタニル（ｒｅｍｉｆｅｎｔａｎｉｌ）、クエン酸サフェンタニル、塩酸トラマドールから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの鎮痛−睡眠薬はクラロール水和物、エスタゾラム、塩酸フルラゼパム、ペントバルビタール、ペントバルビタールナトリウム、フェノバルビタールナトリウム、セコバルビタールナトリウム、テマゼパム、トリアゾラム、ザレプロン（ｚａｌｅｐｌｏｎ）、酒石酸ゾルピデムから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの鎮痙剤は、アセタゾルアミドナトリウム、カルバマゼピン、クロナゼパム、ジカリウムクロラゼペート、ジアゼパム、ジバルプロックスナトリウム、エトスクシミド、ホスフェニトインナトリウム、ガバペンチン、ラモトリジン、硫酸マグネシウム、フェノバルビタール、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、フェニトインナトリウム、フェニトインナトリウム（増量：ｅｘｔｅｎｄｅｄ）、プリミドン、塩酸チアガビン（ｔｉａｇａｂｉｎｅ）、トピラメート（ｔｏｐｉｒａｍａｔｅ）、バルプロ酸ナトリウム、バルプロ酸から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗鬱薬は、塩酸アミトリプチリン、パモ酸アミトリプチリン、アモキサピン（ａｍｏｘａｐｉｎｅ）、塩酸ブプロピオン、臭化水素酸シタロプラム（ｃｉｔａｌｏｐｒａｍ）、塩酸クロミプラミン、塩酸デシプラミン、塩酸ドキセピン、塩酸フルオキセチン、塩酸イミプラミン、パモ酸イミプラミン、ミルタザピン（ｍｉｒｔａｚａｐｉｎｅ）、塩酸ネファゾドン（ｎｅｆａｚｏｄｏｎｅ）、塩酸ノルトリプチリン、塩酸パロキセチン、硫酸フェネルジン、塩酸セルトラリン（ｓｅｒｔｒａｌｉｎｅ）、硫酸トラニルシプロミン、マレイン酸トリミプラミン、塩酸ベンラファキシン（ｖｅｎｌａｆａｘｉｎｅ）から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗不安薬は、アルプラゾラム（ａｌｐｒａｚｏｌａｍ）、塩酸ブスピロン（ｂｕｓｐｉｒｏｎｅ）、クロルジアゼポキシド、塩酸クロルジアゼポキシド、ジカリウムクロラゼペート（ｃｌｏｒａｚｅｐａｔｅ）、ジアゼパム、塩酸ドキセピン、ヒドロキシジンエンボネート、塩酸ヒドロキシジン、パモ酸ヒドロキシジン、ロラゼパム（ｌｏｒａｚｅｐａｍ）、メフロバメート（ｍｅｐｈｒｏｂａｍａｔｅ）、塩酸ミダゾラム（ｍｉｄａｚｏｌａｍ）、オキサゼパムから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗精神薬は、塩酸クロルプロマジン、クロザピン、フルフェナジンデカノエート、フルフェナジンエナンテート、塩酸フルフェナジン、フルフェナジン、ハロペリドール、デカン酸ハロペリドール、乳酸ハロペリドール、塩酸ロキサピン、コハク酸ロキサピン、メソリダジンベシレート（ｍｅｓｏｒｉｄａｚｉｎｅ  ｂｅｓｙｌａｔｅ）、塩酸モリンドン（ｍｏｌｉｎｄｏｎｅ）、オランザピン（ｏｌａｎｚａｐｉｎｅ）、ペルフェナジン、ピモジド（ｐｉｍｏｚｉｄｅ）、プロクロルペラジン（ｐｒｏｃｈｌｏｒｐｅｒａｚｉｎｅ）、フマル酸クェチアピン（ｑｕｅｔｉａｐｉｎｅ）、リスペリドン（ｒｉｓｐｅｒｉｄｏｎｅ）、塩酸チオリダジン、チオチキセン，塩酸チオチキセン、塩酸トリフルオペラジンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの中枢神経系刺激物は、硫酸アンフェタミン、カフェイン、硫酸デキストロアンフェタミン、塩酸ドキサプラム、塩酸メタンフェタミン、塩酸メチルフェニデート、モダフィニル、ペモリン、塩酸フェンテルミンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗パーキンソン病薬は、塩酸アマンタジン、メシル酸ベンズトロフィン、塩酸ビペリデン、乳酸ビペリデン、メシル酸ブロモクリプチン、カルビドパ−レボドパ、エンタカポン（ｅｎｔａｃａｐｏｎｅ）、レボドパ、メシル酸ペルゴリド（ｐｅｒｇｏｌｉｄｅ）、プラミペキソールジヒドロクロライド、塩酸ロピニロール（ｒｏｐｉｎｉｒｏｌ）、塩酸セレジリン、トルカポン（ｔｏｌｃａｐｏｎｅ）、塩酸トリヘキシフェニジルから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの他方面の中枢神経系薬は、塩酸ブプロピオン、塩酸ドネペジル（ｄｏｎｅｐｅｚｉｌ）、ドロペリドール、マレイン酸フルボキサミン（ｆｌｕｖｏｘａｍｉｎｅ）、炭酸リチウム、クエン酸リチウム、塩酸ナラトリプタン（ｎａｒａｔｒｉｐｔａｎ）、ニコチンポラクリレクス（ｐｏｌａｃｒｉｌｅｘ）、ニコチン経皮系、プロポホル（ｐｒｏｐｏｆｏｌ）、安息香酸リザトリプタン（ｒｉｚａｔｒｉｐｔａｎ）、塩酸シブトラミン（ｓｉｂｕｔｒａｍｉｎｅ）一水和物、コハク酸スマトリプタン（ｓｕｍａｔｒｉｐｔａｎ）、塩酸タクリン、ゾルミトリプタン（ｚｏｌｍｉｔｒｉｐｔａｎ）から選択される少なくとも１つであることができる。（例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブックの第３３７〜５３０頁を参照にされたい。）
【０１３１】
少なくとも１つのコリン作用薬（例えば副交感神経作用薬）は、塩化ベタニコール、塩化エドロホニウム、臭化ネオスチグミン、メチル硫酸ネオスチグミン、サリチル酸フィソスチグミン、臭化ピリドスチグミンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗コリン作用薬は、硫酸アトロピン、塩酸ジシクロミン、グリコピロレート（ｇｌｙｃｏｐｙｒｒｏｌａｔｅ）、ヒヨスチアミン、硫酸ヒヨスチアミン、臭化プロパンセリン（ｐｒｏｐａｎｔｈｅｌｉｎｅ）、スコポラミン、スコポラミンブチルブロミド、スコポラミンヒドロブロミドから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのアドレナリン作用薬（交感神経作用薬）は、塩酸ドブタミン（ｄｏｂｕｔａｍｉｎｅ）、塩酸ドーパミン、重酒石酸メタラミノール、重酒石酸ノルエピネフリン、塩酸フェニレフリン、塩酸プソイドエフェドリン、硫酸プソイドエフェドリンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのアドレナリン遮断薬（交感神経遮断薬）は、メシル酸ジヒドロエルゴタミン、酒石酸エルゴタミン、マレイン酸メチセルジド、塩酸プロパラノールから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの筋弛緩剤は、バクロフェン、カリソプロドール、クロルゾキサゾン、塩酸シクロベンザプリン、ダントロレンナトリウム、メトカルバモール、塩酸チザニジン（ｔｉｚａｎｉｄｉｎｅ）から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの神経筋遮断薬はアトラクリウムベシレート、シスアトラクリウムベシレート、塩化ドキサクリウム、塩化ミバクリウム、臭化パンクロニウム、臭化ピペクロニウム、臭化ラパクロニウム、臭化ロクロニウム、塩化スクシニルコリン、塩化ツボクラリン、臭化ベクロニウムから選択される少なくとも１つであることができる。（例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブックの第５３１〜８４頁を参照されたい。）  
【０１３２】
少なくとも１つの抗ヒスタミン薬は、マレイン酸ブロモフェニラミン、塩酸セチリジン（ｃｅｔｉｒｉｚｉｎｅ）、マレイン酸クロロフェニラミン、フマル酸クレマスチン、塩酸シプトヘプタジン、塩酸ジフェンヒドラミン、塩酸フェキソフェナジン（ｆｅｘｏｆｅ
ｎａｄｉｎｅ）、ロラタジン（ｌｏｒａｔａｄｉｎｅ）、塩酸プロメタジン、プロメタジンテオクレート（ｔｈｅｏｃｌａｔｅ）、塩酸トリプロリジンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの気管支拡張薬は、アルブテロール、硫酸アルブテロール、アミノフィリン、硫酸アトロピン、硫酸エフェドリン、エピネフリン、重酒石酸エピネフリン、塩酸エピネフリン、臭化イプラトロピウム、イソプロテレノール、塩酸イソプロテレノール、硫酸イソプロテレノール、塩酸レバルブテロール（ｌｅｖａｌｂｕｔｅｒｏｌ）、硫酸メタプロテレノール、オキシトリフィリン、酢酸ピルブテロール、ザルメテロール  キシナフエート（ｓａｌｍｅｔｅｒｏｌ  ｘｉｎａｆｏａｔｅ）、硫酸テルブタリン、テオフィリンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの去痰薬または鎮咳薬は、ベンゾナテート、リン酸コデイン、硫酸コデイン、デキストラメトロファン（ｄｅｘｔｒａｍｅｔｈｏｒｐｈａｎ）ヒドロブロミド、塩酸ジフェンヒドラミン、グアイフェネシン、塩酸ヒドロモルホンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの他方面の呼吸薬は、アセチルシステイン、ベクロメタゾン  ジプロピオネート、ベラクタント（ｂｅｒａｃｔａｎｔ）、ブデソニド（ｂｕｄｅｓｏｎｉｄｅ）、カルファクタント（ｃａｌｆａｃｔａｎｔ）、クロモリンナトリウム、ドルナーゼ（ｄｏｒｎａｓｅ）アルファ、エポプロステノールナトリウム、フルニソリド、プロピオン酸フルチカゾン（ｆｌｕｔｉｃａｓｏｎｅ）、モンテルカストナトリウム、ネドクロミル（ｎｅｄｏｃｒｏｍｉｌ）ナトリウム、パリビズマブ（ｐａｌｉｖｉｚｕｍａｂ）、トリアムシノロンアセトニド、ザフィルルーカスト、ジロウトン（ｚｉｌｅｕｔｏｎ）から選択される少なくとも１つであることができる。（例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブックの第５８５〜６４２頁を参照されたい。）
【０１３３】
少なくとも１つの制酸薬、吸着薬または抗発張薬は、炭酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、炭酸カルシウム、マガルドレート、水酸化マグネシウム、酸化マグネシウム、シメチコーン、重炭酸ナトリウムから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの消化酵素または胆石溶解薬は、パンクレアチン、パンクレリパーゼ、ウルソジオール（ｕｒｓｏｄｉｏｌ）から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの止瀉薬はアタパルジャイト、次サリチル酸ビスマス、ポリカルボフィルカルシウム、塩酸ジフェノキシレートもしくは硫酸アトロピン、ロペラミド、酢酸オクトレオチド（ｏｃｔｒｅｏｔｉｄｅ）、オピウムチンキ、オピウムチンキ（樟脳処理）から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの緩下薬は、ビソコジル（ｂｉｓｏｃｏｄｙｌ）、ポリカルボフィルカルシウム、カスカラサグラダ、カスカラサグラダ芳香性流エキス剤、カスカラサグラダ流エキス剤、ひまし油、ドキュセートカルシウム、ドキュセートナトリウム、グリセリン、ラクチュロース、クエン酸マグネシウム、水酸化マグネシウム、硫酸マグネシウム、メチルセルロース、鉱物油、ポリエチレングリコールもしくは電解質溶液、車前子（ｐｓｙｌｌｉｕｍ）、センナ、リン酸ナトリウムから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの制吐薬は、塩酸クロルプロマジン、ジメンヒドリネート、メシル酸ドラセトロン（ｄｏｌａｓｅｔｒｏｎ）、ドロナビノール、塩酸グラニセトロン（ｇｒａｎｉｓｅｔｒｏｎ）、塩酸メクリジン、塩酸メトクロプラミド、塩酸オンダンセトロン、ペルフェナジン、プロクロルペラジン、プロクロルペラジンエジシレート（ｅｄｉｓｙｌａｔｅ）、マレイン酸プロクロルペラジン、塩酸プロメタジン、スコポラミン、マレイン酸チエチルペラジン、塩酸トリメトベンザミドから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗潰瘍薬は、シメチジン、塩酸シメチジン、ファモチジン、ランソプラゾール（ｌａｎｓｏｐｒａｚｏｌｅ）、ミソプロストール、ニザチジン、オメプラゾール、ラベプラゾールナトリウム、クエン酸ランチジン（ｒａｎｔｉｄｉｎｅ）ビスマス、塩酸ラニチジン、スクラルフェートから選択される少なくとも１つであることができる。（例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブックの第６４３〜９５頁を参照されたい。）
【０１３４】
少なくとも１つのコルチコステロイドはベタメタゾン、酢酸ベタメタゾンまたはリン酸
ナトリウムベタメタゾン、リン酸ナトリウムベタメタゾン、酢酸コルチゾン、デキサメタゾン、酢酸デキサメタゾン、リン酸ナトリウムデキサメタゾン、酢酸フルドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンシピオネート、リン酸ナトリウムヒドロコルチゾン、コハク酸ナトリウムヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、コハク酸ナトリウムメチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、酢酸プレドニゾロン、リン酸ナトリウムプレドニゾロン、プレドニゾロンテブテート、プレドニゾン、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセテート、トリアムシノロンジアセテートから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのアンドロゲンまたは同化性ステロイドは、ダナゾール、フルオキシメステロン、メチルテストステロン、ナンドロロンデカノエート、ナンドロロンフェンプロピオネート、テストステロン、テストステロンシピオネート、テストステロンエナンタート、テストステロンプロピオネート、テストステロン経皮系から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのエストロゲンまたはプロゲスチンは、エステル化エストロゲン、エストラジオール、エストラジオールシピオネート、エストラジオール／酢酸ノルエチンドロン経皮系、吉草酸エストラジオール、エストロゲン（共役）、エストロピペート（ｅｓｔｒｏｐｉｐａｔｅ）、エチニルエストラジオール、エチニルエストラジオールおよびデソゲストレル（ｄｅｓｏｇｅｓｔｒｅｌ）、エチニルエストラジオールおよびエチノジオールジアセテート、エチニルエストラジオールおよびデソゲストレル、エチニルエストラジオールおよびエチノジオールジアセテート、エチニルエストラジオールおよびレボノルゲストレル（ｌｅｖｏｎｏｒｇｅｓｔｒｅｌ）、エチニルエストラジオールおよびノルエチンドロン、エチニルエストラジオールおよび酢酸ノルエチンドロン、エチニルエストラジオールおよびノルゲスチメート（ｎｏｒｇｅｓｔｉｍａｔｅ）、エチニルエストラジオールおよびノルゲストレル、エチニルエストラジオールおよびノルエチンドロンおよびアセテートおよびフマル酸鉄、レボノルゲストレル、酢酸メドロキシプロゲステロン、メストラノールおよびノルエチンドロン、ノルエチンドロン、酢酸ノルエチンドロン、ノルゲストレル、プロゲステロンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのゴナドトロピンは、酢酸ガニレリックス、酢酸ゴナドレリン、酢酸ヒストレリン（ｈｉｓｔｒｅｌｉｎ）、メノトロピンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗糖尿病薬またはグルカオンはアカルボース、クロロプロパミド、グリメピリド（ｇｌｉｍｅｐｉｒｉｄｅ）、グリピジド（ｇｌｉｐｉｚｉｄｅ）、グルカゴン、グリブリド、インスリン、塩酸メトホルミン、ミグリトール（ｍｉｇｌｉｔｏｌ）、塩酸ピオグリタゾン（ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、レパグリニド（ｒｅｐａｇｌｉｎｉｄｅ）、マレイン酸ロシグリタゾン（ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、トログリタゾンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの甲状腺ホルモンは、レボチロキシン（ｌｅｖｏｔｈｙｒｏｘｉｎｅ）ナトリウム、リオチロニン（ｌｉｏｔｈｙｒｏｎｉｎｅ）ナトリウム、リオトリックス（ｌｉｏｔｒｉｘ）、チロイド（ｔｈｙｒｏｉｄ）から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの甲状腺ホルモンアンタゴニストは、メチマゾール、ヨウ化カリウム、ヨウ化カリウム（飽和溶液）、プロピルチオウラシル、放射性ヨウ素（ヨウ化ナトリウム１３１Ｉ）、強いヨウ素溶液から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの下垂体ホルモンは、コルチコトロピン、コシントロピン、酢酸デスモプレシン、酢酸ロイプロリド、呼吸コルチコトロピン、ソマトレム、ソマトロピン、バソプレッシンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの副甲状腺様薬は、カルシフェジオール（ｃａｌｃｉｆｅｄｉｏｌ）、カルシトニン（ヒト）、カルシトニン（サケ）、カルシトルオール、ジヒドロタキステロール（ｄｉｈｙｄｒｏｔａｃｈｙｓｔｅｒｏｌ）、エチドロネート二ナトリウムから選択される少なくとも１つであることができる。（例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブックの第６９６〜７９６頁を参照されたい。）
【０１３５】
少なくとも１つの利尿剤は、アセタゾルアミド、アセタゾルアミドナトリウム、塩酸アミロライド、ブメタニド（ｂｕｍｅｔａｎｉｄｅ）、クロルサリドン、エタクリネートナ
トリウム、エタクリン酸、フロセミド、ヒドロクロロチアジド、インダパミド（ｉｎｄａｐａｍｉｄｅ）、マンニトール、メトラゾン、スピロノラクトン、トルセミド（ｔｏｒｓｅｍｉｄｅ）、トリアムテレン、尿素から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの電解質または代替溶液は、酢酸カルシウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、クエン酸カルシウム、カルシウムグルビオネート、カルシウムグルセプテート、グルコン酸カルシウム、乳酸カルシウム、リン酸カルシウム（二塩基性）、リン酸カルシウム（三塩基性）、ゼキストラン（高分子量）、デキストラン（低分子量）、ヘタスターチ、塩化マグネシウム、硫酸マグネシウム、酢酸カリウム、重炭酸カリウム、塩化カリウム、グコン酸カリウム、リンゲル注入液、リンゲル注入液（乳酸化）、塩化ナトリウムから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの酸性化剤またはアルカリ性化剤は、重炭酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、トロメタミンから選択される少なくとも１つであることができる。（例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブックの第７９７〜８３３頁を参照されたい。）
【０１３６】
少なくとも１つの造血薬は、フマル酸鉄、グルコン酸鉄、硫酸鉄、硫酸鉄（乾燥化）、デキストラン鉄、ソルビトール鉄、多糖−鉄錯体、グルコン酸鉄ナトリウム錯体から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗凝固薬は、アルデパリン（ａｒｄｅｐａｒｉｎ）ナトリウム、ダルテパリン（ｄａｌｔｅｐａｒｉｎ）ナトリウム、ダナパロイド（ｄａｎａｐａｒｏｉｄ）ナトリウム、エノキサパリン（ｅｎｏｘａｐａｒｉｎ）ナトリウム、ヘパリンカルシウム、ヘパリンナトリウム、ワルファリンナトリウムから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの血液誘導体は、アルブミン５％、アルブミン２５％、抗血友病因子、抗−インヒビター凝固複合体、アンチトロンビンＩＩＩ（ヒト）、第ＩＸ因子（ヒト）、第ＩＸ因子複合体、血漿タンパク質画分から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの血栓溶解酵素はアルテプラーゼ（ａｌｔｅｐｌａｓｅ）、アニストレプラーゼ（ａｎｉｓｔｒｅｐｌａｓｅ）、レテプラーゼ（ｒｅｔｅｐｌａｓｅ）（組換え）、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼから選択される少なくとも１つであることができる。（例えばナーシング  ２００１ドラッグハンドブックの第８３４〜６６頁を参照されたい。）
【０１３７】
少なくとも１つのアルキル化剤は、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロフォスファミド、イフォスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ロムスチン、塩酸メクロレタミン、メルファラン、塩酸メルファラン、ストレプトゾシン、テモゾロミド、チオテパから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの代謝拮抗物質は、カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、クラドリビン（ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ）、シタラビン、フロクスウリジン、リン酸フルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、フルオロウラシル、ヒドロキシウレア、メルカプトプリン、メトトレキセート、メトトレキセートナトリウム、チオグアニンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗生物質系抗腫瘍薬は、硫酸ブレオマイシン、ダクチノマイシン、クエン酸ダウノルビシンリポソーム、塩酸ダウノルビシン、塩酸ドキソルビシン、塩酸ドキソルビシンリポソーム、塩酸エピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎｅ）、塩酸イダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ）、マイトマイシン、ペントスタチン、プリカマイシン、バルルビシン（ｖａｌｒｕｂｉｃｉｎ）から選択される少なくとも１つであることができる。ホルモンバランスを改変する少なくとも１つの抗腫瘍薬は、アナストロゾール（ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）、ビカルタミド（ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ）、エストラムスチンリン酸ナトリウム、エグゼメスタン（ｅｘｅｍｅｓｔａｎｅ）、フルタミド（ｆｌｕｔａｍｉｄｅ）、酢酸ゴセレリン、レトロゾール（ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ）、酢酸ロイプロリド、酢酸メゲストロール、ニルタミド（ｎｉｌｕｔａｍｉｄｅ）、クエン酸タモキシフェン、テストラクトン、クエン酸トレミフェン（ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ）から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの他方面の抗腫瘍薬は、アスパラギナーゼ、桿菌カルメット−ゲラン（ＢＣＧ）（生嚢内）、ダカルバジン、ドセタキセル、エトポシド、リン酸エトポシド、塩酸ジェムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、塩酸イリノテカン（ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）、ミトーテン、塩酸ミトザントロン、パクリタキセル、ペガスパルガーゼ（ｐｅｇａｓｐａｒｇａｓｅ）、ポルフィマー（ｐｏｒｆｉｍｅｒ）ナトリウム、塩酸プロカルバジン、リタキシマブ、テニポシド、塩酸トポテカン、トラスツズマブ（ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）、トレチノイン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、酒石酸ビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）から選択される少なくとも１つであることができる。（例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブックの第８６７〜９６３頁を参照されたい。）
【０１３８】
少なくとも１つの免疫抑制剤は、アザチオプリン、バシリキシマブ（ｂａｓｉｌｉｘｉｍａｂ）、シクロスポリン、ダクリズマブ（ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ）、リンパ球免疫グロブリン、マウス−モノクローナル抗体ＣＤ３、マイコフェノレート  モフェチル（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌａｔｅ  ｍｏｆｅｔｉｌ）、塩酸マイコフェノレート  モフェチル、シロリムス（ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、タクロリムス（ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのワクチンまたは毒素は、ＢＣＧワクチン、コレラワクチン、ジフテリアおよび破傷風毒素（吸着）、ジフテリアおよび破傷風毒素および無細胞百日咳ワクチン（吸着）、ジフテリアおよび破傷風毒素および全細胞百日咳ワクチン、ヘモフィルス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉｕｓ）ｂ共役ワクチン、Ａ型肝炎ワクチン（不活化）、Ｂ型肝炎ワクチン（組換え）、インフルエンザウイルスワクチン１９９９−２０００三価型Ａ＆Ｂ（精製表面抗原）、インフルエンザウイルスワクチン１９９９−２０００三価型Ａ＆Ｂ（サブビリオンまたは精製ビリオン）、インフルエンザウイルスワクチン１９９９−２０００三価型Ａ＆Ｂ（全ビリオン）、日本脳炎ウイルスワクチン（不活化）、ライム病ワクチン（組換えＯｓｐＡ）、麻疹およびムンプスおよび風疹ウイルスワクチン（生）、麻疹およびムンプスおよび風疹ウイルスワクチン（弱毒化生）、麻疹ウイルスワクチン（弱毒化生）、髄膜炎菌多糖ワクチン、ムンプスウイルスワクチン（生）、悪疫ワクチン、肺炎球菌ワクチン（多価）、ポリオウイルスワクチン（不活化）、ポリオウイルスワクチン（生、経口、三価）、狂犬病ワクチン（吸着）、狂犬病ワクチン（ヒト二倍体細胞）、風疹およびムンプスウイルスワクチン（生）、風疹ウイルスワクチン（弱毒化生）、破傷風毒素（吸着）、破傷風毒素（流体）、チフスワクチン（経口）、チフスワクチン（非経口）、チフスＶｉ多糖ワクチン、水痘ウイルスワクチン、黄熱病ワクチンから選択される少なくとも１つであることがである。少なくとも１つの抗毒素はまたは抗蛇毒素は、クロゴケグモ抗毒素、ガラガラヘビ科の抗蛇毒素（多価）、ジフテリア抗毒素（ウマ）、Ｍｉｃｒｕｒｕｓ  ｆｕｌｖｉｕｓ抗蛇毒素から選択される少なくとも１つであることがである。少なくとも１つの免疫血清はサイトメガロウイルス免疫グロブリン（静脈内）、Ｂ型肝炎免疫グロブリン（ヒト）、免疫グロブリン筋肉内、免疫グロブリン静脈内、狂犬病免疫グロブリン（ヒト）、呼吸合胞体ウイルス免疫グロブリン静脈内（ヒト）、Ｒｈ０（Ｄ）免疫グロブリン（ヒト）、Ｒｈ０（Ｄ）免疫グロブリン静脈内（ヒト）、破傷風免疫グロブリン（ヒト）、水痘−帯状疱疹免疫グロブリンから選択される少なくとも１つであることがである。少なくとも１つの生物学的応答モディファイヤーは、アルデスロイキン（ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ）、エポエチン  アルファ、フィルグラスチム、注射用の酢酸グラチラマー（ｇｌａｔｉｒａｍｅｒ）、インターフェロン  アルファコン−１、インターフェロン  アルファ−２ａ（組換え）、インターフェロン  アルファ−２ｂ（組換え）、インターフェロン  ベータ−１ａ、インターフェロン  ベータ−１ｂ（組換え）、イ���ターフェロン  ガンマ−１ｂ、塩酸レバミソール、オプレルベキン（ｏｐｒｅｌｖｅｋｉｎ）、サルグラモスチンから選択される少なくとも１つであることができる。（例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブックの第９６４〜１０４０頁を参照されたい。）
【０１３９】
少なくとも１つの目の抗感染薬は、バシトラシン、クロラムフェニコール、塩酸シプロフロキサシン、エリスロマイシン、硫酸ゲンタマイシン、オフロキサシン０．３％、硫酸
ポリミキシンＢ、スルファタミドナトリウム１０％、スルファタミドナトリウム１５％、スルファタミドナトリウム３０％、トブラマイシン、ビダラビンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの目の抗炎症薬は、デキサメタゾン、リン酸ナトリウムデキサメタゾン、ジクロフェナクナトリウム０．１％、フルオロメトロン、フルルビプフェンナトリウム、ケトロラク  トロメタミン、酢酸プレドニゾロン（懸濁液）、リン酸ナトリウムプレドニゾロン（溶液）から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの縮瞳薬は、塩化アセチルコリン、カルバコール（眼内）、カルバコール（局所）、ヨウ化エコチオフェート、ピロカルピン、塩酸ピロカルピン、硝酸ピロカルピンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの散瞳薬は硫酸アトロピン、塩酸シクロペントレート、塩酸エピネフリン、硼酸エピネフリル、塩酸ホマトロピン、塩酸フェニレフリン、スコポラミンヒドロブロミド、トロピカミドから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの目の血管収縮薬は、塩酸ナファゾリン、塩酸オキシメタゾリン、塩酸テトラヒドラゾリンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの他方面の目薬は、塩酸アプラクロニジン（ａｐｒａｃｌｏｎｉｄｉｎｅ）、塩酸ベタキソロール、酒石酸ブリモニジニン（ｂｒｉｍｏｎｉｄｉｎｅ）、塩酸カルテオロール（ｃａｒｔｅｏｌｏｌ）、塩酸ジピベフリン、塩酸ドルゾラミド（ｄｏｒｚｏｌａｍｉｄｅ）、エメダスチン（ｅｍｅｄａｓｔｉｎｅ）ジフマレート、フルオレセインナトリウム、フマル酸ケトチフェン（ｋｅｔｏｔｉｆｅｎ）、ラタノプロスト（ｌａｔａｎｏｐｒｏｓｔ）、塩酸レボブノロール、塩酸メチプラノロール（ｍｅｔｉｐｒａｎｏｌｏｌ）、塩化ナトリウム（高張性）、マレイン酸チモロールから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの耳の薬は、硼酸、過酸化カルバミド、クロラムフェニコール、オレイン酸トリエタノールアミンポリペプチド−縮合物から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの鼻の薬は、ベクロメタゾンジプロピオネート、ブデゾニド（ｂｕｄｅｓｏｎｉｄｅ）、硫酸エフェドリン、塩酸エピネフリン、フルニゾリド、プロピオン酸フルチカゾン（ｆｌｕｔｉｃａｓｏｎｅ）、塩酸ナファゾリン、塩酸オキシメタゾリン、塩酸フェニレフリン、塩酸テトラヒドロゾリン、トリアムシノロンアセトニド、塩酸キシロメタゾリンから選択される少なくとも１つであることができる。（例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブックの第１０４１〜９７頁を参照されたい。）
【０１４０】
少なくとも１つの局所抗感染剤は、アシクロビル、アンフォテリシンＢ、アゼラ酸（ａｚｅｌａｉｃ  ａｃｉｄ）クリーム、バシトラシン、硝酸ブトコナゾール、リン酸クリンダマイシン、クロトリマゾール、硝酸エコナゾール、エリスロマイシン、硫酸ゲンタマイシン、ケトコナゾール、酢酸マフェナイド、メトロニダゾール（局所）、硝酸ミコナゾール、ムピロシン（ｍｕｐｉｒｏｃｉｎｅ）、塩酸ナフチファイン、硫酸ネオマイシン、ニトロフラゾン、ニスタチン、銀スルファジアジン、塩酸テルビナファイン（ｔｅｒｂｉｎａｆｉｎｅ）、テルコナゾール（ｔｅｒｃｏｎａｚｏｌｅ）、塩酸テトラサイクリン、チオコナゾール、トルナフテートから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの殺疥癬虫薬または殺シラミ薬は、クロタミトン、リンダン、ペルメトリン（ｐｅｒｍｅｔｈｒｉｎ）、ピレトリンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの局所コルチコステロイドは、ベタメタゾンジプロピオネート、吉草酸ベタメタゾン、プロピオン酸クロベタゾール、デソニド、デスオキシメタゾン、デキサメタゾン、リン酸ナトリウムデキサメタゾン、ジフロラゾンジアセテート、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルランドレノリド、プロピオン酸フルチカゾン（ｆｌｕｔｉｃａｓｏｎｅ）、ハルシオニド（ｈａｌｃｉｏｎｉｄｅ）、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、酪酸ヒドロコルチゾン、吉草酸ヒドロコルチゾン、モメタゾンフロエート（ｍｏｍｅｔａｓｏｎｅ  ｆｕｒｏａｔｅ）、トリアムシノロンアセトニドから選択される少なくとも１つであることができる。（例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブックの第１０９８〜１１３６頁を参照されたい。）
【０１４１】
少なくとも１つのビタミンまたは無機物は、ビタミンＡ、ビタミンＢ複合体、シアノコバラミン、葉酸、ヒドロキソコバラミン、ロイコボリンカルシウム、ナイアシン、ナイアシンアミド、塩酸ピリドキシン、リボフラビン、塩酸チアミン、ビタミンＣ、ビタミンＤ、コレカルシフェロール、エルゴカルシフェロール、ビタミンＤ類似体、ドキセルカルシフェロール（ｄｏｘｅｒｃａｌｃｉｆｅｒｏｌ）、パリカルシトール（ｐａｒｉｃａｌｃｉｔｏｌ）、ビタミンＥ、ビタミンＫ類似体、フィトナジオン、弗化ナトリウム、弗化ナトリウム（局所）、微量元素、クロム、銅、ヨウ素、マンガン、セレン、亜鉛から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの熱量源は、アミノ酸浸剤（結晶）、デキストロース中のアミノ酸浸剤、電解質とのアミノ酸浸剤、デキストロース中の電解質とのアミノ酸浸剤、肝不全のためのアミノ酸浸剤、高代謝ストレスのためのアミノ酸浸剤、腎不全のためのアミノ酸浸剤、デキストロース、脂肪乳剤、中鎖トリグリセリドから選択される少なくとも１つであることができる。（例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブックの第１１３７〜６３頁を参照されたい。）
【０１４２】
本発明のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ抗体またはポリペプチド組成物は、さらに少なくとも１つの適切な、かつ／または有効量の組成物または製薬学的組成物を含んでなることができるが、これら組成物はそのようなモジュレーション、処置または治療が必要な細胞、組織、器官、動物または患者に対する少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディタンパク質または抗体を含んでなり、さらに場合により少なくとも１つのＴＮＦアンタゴニスト（例えば限定するわけではないがＴＮＦ化学物質もしくはタンパク質アンタゴニスト、ＴＮＦモノクローナル抗体もしくはポリクローナル抗体もしくはフラグメント、可溶性ＴＮＦ受容体（例えばｐ５５、ｐ７０もしくはｐ８５）もしくはそのフラグメント、その融合ポリペプチド、または低分子ＴＮＦアンタゴニスト、例えばＴＮＦ結合タンパク質ＩもしくはＩＩ（ＴＢＰ−１もしくはＴＢＰ−ＩＩ）、ネレリモンマブ（ｎｅｒｅｌｉｍｏｎｍａｂ）、インフリキシマブ（ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）、エンテラセプト（ｅｎｔｅｒａｃｅｐｔ）、ＣＤＰ−５７１、ＣＤＰ−８７０、アフェリモマブ（ａｆｅｌｉｍｏｍａｂ）、レネルセプト（ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ）等）、抗リウマチ薬（例えばメトトレキセート、オーラノフィン、オーロチオグルコース、アザチオプリン、エタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）、金チオリンゴ酸ナトリウム、硫酸ヒドロキシクロロキン、レフルノミド（ｌｅｆｌｕｎｏｍｉｄｅ）、スルファザルジン（ｓｕｌｆａｓａｌｚｉｎｅ）、筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド系炎症薬（ＮＡＳＩＤ）、鎮痛剤、麻酔薬、鎮静剤、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬（例えばアミノグリコシド、抗真菌薬、抗寄生生物薬、抗ウイルス薬、カルバペネム、セファロスポリン、フルオロキノロン、マクロライド、ペニシリン、スルホンアミド、テトラサイクリン、他の抗微生物薬）、止痒薬、コルチコステロイド、同化性ステロイド、糖尿病関連薬、無機類、栄養物質、甲状腺薬、ビタミン、カルシウム関連ホルモン、止瀉薬、鎮咳薬、制吐薬、抗潰瘍薬、緩下薬、抗凝固薬、エリスロポエチン（例えばエポエチンアルファ）、フィルグラスチム（ｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）（例えばＧ−ＣＳＦ、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ）、サルグラモスチン（ＧＭ−ＣＳＦ、Ｌｅｕｋｉｎｅ）、免疫感作、免疫グロブリン、免疫抑制薬（例えばバシリキシマブ、シクロスポリン、ダクリズマブ）、成長ホルモン、ホルモン代用薬、エストロゲン受容体モジュレーター、散瞳薬、毛様体筋麻痺薬、アルキル化薬、代謝拮抗物質、有糸分裂インヒビター、放射性薬品、抗鬱薬、抗躁薬、抗精神病薬、抗不安薬、催眠薬、交換神経作用薬、刺激物質、ドネペジル（ｄｏｎｅｐｅｚｉｌ）、タクリン（ｔａｃｒｉｎｅ）、喘息薬物療法、ベータアゴニスト、吸入ステロイド、ロイコトリエンインヒビター、メチルキサンチン、クロモリン、エピネフリンもしくは類似体、ドルナーゼアルファ（Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ）、サイトカインもしくはサイトカインアンタゴニストの少なくとも１つから選択される有効量の少なくとも１つを含んでなる。そのようなサイトカインの非限定的例は、限定するわけではないが任意のＩＬ−１〜ＩＬ−２３を含む。適切な投薬用量は、当該技術分野では周知である。例えばＷｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．、編集、薬理療法ハンドブック（Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ）、第２版、アペルトン  アンド  ランジ（Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ａｎｄ  Ｌａｎｇｅ）、スタムフォード、コネチカット州（２０００）：ＰＤＲ薬局方、タラスコンポケット薬局方（Ｔａｒａｓｃｏｎ  Ｐｏｃｋｅｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ）２０００、豪華版、タラスコン出版社、ローマ  リンダ、カリフォルニア州（２０００）を参照にされたい（それぞれ引用により全部、本明細書に編入する）。
【０１４３】
そのような組成物は、本発明の少なくとも１つの抗体またはポリペプチドに会合した、結合した、同時に配合（ｃｏ−ｆｏｒｍｕｌａｔｅｄ）される、または一緒に投与される毒素分子を含むことができる。毒素は場合により病原性細胞または組織を選択的に殺すように作用することができる。病原性細胞はガン細胞または他の細胞であり得る。そのような毒素は限定するわけではないが、例えば少なくとも１つリシン、ジフテリア毒素、蛇毒または細菌の毒素から選択される毒素の少なくとも１つの機能的な細胞傷害性ドメインを含んで成る精製された、または組換え毒素または毒素フラグメントであることができる。毒素という用語はまた、死を引き起こし得る毒素ショックを含む任意の病理的状態をヒトまたは他の哺乳動物に引き起こす可能性がある自然に存在する変異体または組換え細菌またはウイルスにより生産されるエンドトキシンおよびエキソトキシンの両方を含む。そのような毒素は限定するわけではないが、腸内毒素生産性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の熱不安定エンテロトキシン（ＬＴ）、熱安定性エンテロトキシン（ＳＴ）、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）のサイトトキシン、アエロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）のエンテロトキシン、毒素性ショック症候群毒素−１（ＴＳＳＴ−１）、ブドウ球菌のエンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）、Ｂ（ＳＥＢ）またはＣ（ＳＥＣ）、ブドウ球菌のエンテロトキシン等を含むことができる。そのような細菌には限定するわけではないが、エンテロトキシン生産性の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）株（ＥＴＥＣ）、腸内出血性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）（例えば血清型０１５７；Ｈ７）、ブトウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種（例えば、黄色ブトウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、スタフィロコッカス  ピロゲネス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）種（例えばシゲラ  ジセンテリア（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）、シゲラ  フレキシネリ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｆｌｅｘｎｅｒｉ）、シゲラ  ボイディ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｂｏｙｄｉｉ）およびシゲラ  ソンネイ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｏｎｎｅｉ））、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）種（例えばチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ）、サルモネラ  コレラ−スイス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｃｈｏｌｅｒａ−ｓｕｉｓ）、腸炎菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）、クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）種（例えばクロストリジウム  パーフリンゲンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、クロストリジウム  ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｉｃｉｌｅ）、クロストリジウム  ボツリナム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ））、カンピロバクター種（Ｃａｍｐｈｌｏｂａｃｔｅｒ）種（例えばカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃａｍｐｈｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）、カンピロバクター  フェタス（Ｃａｍｐｈｌｏｂａｃｔｅｒ ｆｅｔｕｓ））、ヘリオバクター（Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ）種（例えば、ヘリオバクター  ピロリ（Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｏｒ ｐｙｌｏｒｉ）、アエロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）種（例えばアエロモナス  ソブリア（Ａｅｒｏ���ｏｎａｓ ｓｏｂｒｉａ）、アエロモナス  ヒドロフィーラ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）、アエロモナス  カビエ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｃａｖｉａｅ）、プレイソモナス  シゲロイデス（Ｐｌｅｉｓｏｍｏｎａｓ ｓｈｉｇｅｌｌｏｉｄｅｓ）、エルシナ  エンテロコリティカ（Ｙｅｒｓｉｎａ ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）、ビブリオス（Ｖｉｂｒｉｏｓ）種（コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏｓ ｃｈｏｌｅｒａｅ）、ビブリオス  パラヘモリチカス（Ｖｉｂｒｉｏｓ ｐａｒａｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）、クレブシエーラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）種、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）およびストレプトコッカイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）を含む。例えばＳｔｅｉｎ、編集、ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ  ＭＥＤＩＣＩＮＥ、第３版、第１〜１３頁、リトル、ブラウン（Ｌｉｔｔｌｅ，Ｂｒｏｗｎ）社、ボストン（１９９０）：Ｅｖａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．、編集、ヒトの細菌感染：疫学および防御（Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎｓ：Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌ）、第２版、第２３９〜２５４、プレナム（Ｐｌｅｎｕｍ）医学誌社、ニューヨーク（１９９０）；Ｍａｎｄｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ，感染性疾患の原理および実際（Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ）、第３版、チャーチルリビングストン（Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ）、ニューヨーク（１９９０）；Ｂｅｒｋｏｗ  ｅｔ  ａｌ．、編集、メルクマニュアル（Ｔｈｅ  Ｍｅｒｋ  Ｍｉａｎｕａｌ）、第１６版、メルク社、ラースウェイ、ニュージャージー州、１９９２；Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ，ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，７６：１２１−１３４（１９９１）；Ｍａｒｒａｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４８：７０５−７１１（１９９０）を参照にされたい（この内容は引用により全部、本明細書に編入する）。
【０１４４】
本発明のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント組成物は、さらに限定するわけではないが希釈剤、結合剤、安定化剤、バッファー、塩、親油性溶媒、保存剤、アジュバント等のような少なくとも１つの任意の適切な補助剤を含んで成ることができる。製薬学的に許容される補助剤が好適である。そのような滅菌溶液の非限定的な例および調製法は、限定するわけではないがＧｅｎｎａｒｏ、編集、レミングトンの製薬科学、第１８版、メルク出版社（イーストン、ペンシルバニア州）１９９０のように当該技術分野では周知である。ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ組成物の投与様式、溶解性および／または安定性に適する製薬学的に許容され得る担体は日常的に、ならびに当該技術分野で周知であるように、または本明細書に記載するように通常に選択され得る。
【０１４５】
本組成物に有用な製薬学的賦形剤および添加剤には、限定するわけではないがタンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質および炭水化物（例えば単糖、二−、三−、四−およびオリゴ糖；アルジトール、アルドン酸、エステル化糖のような誘導化糖；および多糖または糖ポリマーを含む糖類）を含み、これは単独もしくは１〜９９．９９重量もしくは容量％の組み合わせを含め、単独または組み合わせて存在することができる。例示的タンパク質は賦形剤は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、組換えヒト血清アルブミン（ｒＨＡ）のような血清アルブミン、ゼラチン、カゼイン等を含む。緩衝能においても機能し得る代表的なアミノ酸／ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント成分には、アラニン、グリシン、アルギニン、ベタイン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、システイン、リシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパルテーム等を含む。１つの好適なアミノ酸はグリシンである。
【０１４６】
本発明の使用に適する炭水化物賦形剤には、例えばフルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、ソルボース等のような単糖；ラクトース、シュクロース、トレハロース、セルビオース糖の二糖；ラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、澱粉糖の多糖；およびマンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトール、ソルビトール（グルシトール）、ミオイノシトール等のアルジトールを含む。本発明の使用に適する好適な炭水化物賦形剤は、マンニトール、トレハロースおよびラフィノースである。
【０１４７】
ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ組成物は、バッファーまたはｐＨ調整剤を含むこともできる；典型的にはバッファーは有機酸または塩基から調製される塩である。代表的なバッファーには、クエン酸、アスコルビン酸、グルコン酸、カルボン酸、酒石酸、コハク酸、酢酸またはフタル酸の塩のような有機酸塩；Ｔｒｉｓ、トロメタミン塩酸塩またはリン酸バッファーを含む。本組成物の使用に好適なバッファーはクエン酸塩のような有機
酸塩である。
【０１４８】
さらに本発明のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント組成物は、ポリビニルピロリドン、フィコール（ポリマー性糖）、デキストレート（例えば２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンのようなシクロデキストリン）、ポリエチレングリコールのようなポリマー性賦形剤／添加剤、風味剤、抗微生物剤、甘味剤、酸化防止剤、帯電防止剤、表面活性剤（例えば“ＴＷＥＥＮ  ２０”および“ＴＷＥＥＮ  ８０”のようなポリソルベート）、脂質（例えばリン脂質、脂肪酸）、ステロイド（例えばコレステロール）およびキレート化剤（例えばＥＤＴＡ）を含むことができる。
【０１４９】
本発明によるＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ組成物で使用するために適するこれらのおよびさらに知られている製薬学的賦形剤および／または添加剤は当該技術分野では既知であり、例えば「レミングトン：薬学の科学＆実践（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）」、第１９版、ウィリアムス＆ウィリアムス（Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｌｉａｍｓ）、（１９９５）および「医師の卓上レファレンス（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）」、第５２版、メディカル  エコノミックス、モントバレー、ニュージャージー州（１９９８）に列挙され、この開示は引用により全部、本明細書に編入する。好適なキャリアーまたは賦形剤材料は炭水化物（例えば糖およびアルジトール）およびバッファー（例えばクエン酸塩）またはポリマー性剤である。
【０１５０】
製剤
上記のように本発明は安定な製剤を提供し、これは好ましくは食水または選択した塩を含む適当なバッファー、ならびに保存剤を含有する任意選択の保存溶液および製剤、ならびに製薬学的または獣医学的使用に適する多用途保存製剤であり、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントを製薬学的に許容される製剤中に含んで成る。保存製剤は少なくとも１つの既知の保存剤または任意に少なくとも１つのフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、亜硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マンガン（例えばヘキサヒドレート）、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチル等）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンズエトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサール、またはそれらの混合物から成る群から選択される保存剤を水性希釈剤中に含む。適当な濃度または混合物は、０．００１〜５％のような、または限定するわけではないが０．００１、０．００３、０．００５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．３、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９またはこの中の任意の範囲または値のような、当該技術分野で知られているように使用することができる。非限定的な例には、保存剤なし、０．１〜２％  ｍ−クレゾール（例えば０．２、０．３、０．４、０．５、０．９、１．０％）、０．１〜３％ベンジルアルコール（例えば０．５、０．９、１．１、１．５、１．９、２．０、２．５％）、０．００１〜０．５％チメロサール（例えば０．００５、０．０１）、０．００１〜２．０％フェノール（例えば０．０５、０．２５、０．２８、０．５、０．９、１．０％）、０．０００５〜１．０％アルキルパラベン（１つまたは複数）（例えば０．０００７５、０．０００９、０．００１、０．００２、０．００５、０．００７５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０５、０．０７５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．５、０．７５、０．９、１．０％）等を含む。
【０１５１】
上記のように、本発明は包装材料および場合により水性希釈剤中に処方されたバッファーおよび／または保存剤を含む少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントの溶液を含んで成る少なくとも１つのバイアルを含んで成る製品を提供し、ここで該包装材料は、そのような溶液が１、２、３、４、５、６、９、１２、１８、２０、２４、３０、３６、４０、４８、５４、６０、６６、７２時間以上保持できることを示すラベルを含んで成る。本発明はさらに、包装材料、凍結乾燥した少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントを含んで成る第１バイアル、および処方されたバッファーまたは保存剤の水性希釈剤を含んで成る第２バイアルを含んで成る製品を含んで成り、ここで該包装材料は患者が少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントを水性希釈剤中に再構成して、２４時間以上の期間にわたり保持できる溶液を形成することを指導するラベルを含んで成る。
【０１５２】
本発明に従い使用する少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントは、哺乳動物細胞または導入遺伝子調製物を含む組換え手段により生産できるか、または本明細書に記載し、または当該技術分野で既知の他の生物起源から精製することができる。
【０１５３】
本発明の生成物中の少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントの量の範囲は、湿潤／乾燥系である場合、構成時に約１．０μｇ／ｍｌ〜約１０００ｍｇ／ｍｌの濃度を生じる量を含むが、より低および高濃度も操作可能であり、そして意図する送達賦形剤に依存し、例えば溶液組成は経皮用パッチ、肺、経粘膜または浸透圧もしくはマイクロポンプ法とは異なるだろう。
【０１５４】
好ましくは水性希釈剤は場合によりさらに製薬学的に許容できる保存剤を含んで成る。好適な保存剤には、フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチル等）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンズエトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサール、またはそれらの混合物から成る群から選択されるものを含む。製剤中に使用する保存剤の濃度は、抗−微生物効果を生じるために十分な濃度である。そのような濃度は選択した保存剤に依存し、そして当業者により容易に決定される。
【０１５５】
他の賦形剤、例えば張性調整剤、バッファー、酸化防止剤、保存強化剤を場合により、そして好ましくは希釈剤に加えることができる。グリセリンのような張性調整剤は既知の濃度で通常に使用される。生理学的に耐容されるバッファーは好ましくは改善されたｐＨ制御を提供するために加える。製剤は約ｐＨ４〜約ｐＨ１０のような広いｐＨ範囲を網羅することができ、そして好ましい範囲は約ｐＨ５〜約ｐＨ９、そして最も好ましくは約６．０〜約８．０の範囲である。好ましくは本発明の製剤は約６．８から約７．８の間のｐＨを有する。好適なバッファーにはリン酸バッファー、最も好ましくはリン酸ナトリウム、特にリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）を含む。
【０１５６】
Ｔｗｅｅｎ  ２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）、Ｔｗｅｅｎ  ４０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート）、Ｔｗｅｅｎ  ８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレート）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８（ポリオキシエチレン  ポリオキシプロピレン  ブロック  コポリマー）およびＰＥＧ（ポリエチレングリコール）、あるいはポリソルベート２０もしくは８０、またはポリオキサマー１８４もしくは１８８、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（商標）ポリリス（ｐｏｌｙｌｓ）、他のブロック  コポリマーのような非イオン性表面活性剤のような製薬学的に許容される可溶化剤、およびＥＤＴＡおよびＥＧＴＡのようなキレーターのような他の添加剤を、凝集を減らすために製剤または組成物に場合により加えることができる。これらの添加剤は製剤を投与するためにポンプまたはプラスチック容器が使用される場合に特に有用である。製薬学的に許容される表面活性剤の存在は、タンパク質が凝集する傾向を緩和する。
【０１５７】
本発明の製剤は、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントおよびフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチル等）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンズエトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサールまたはそれらの混合物から成る群から選択される保存剤を水性希釈剤中で混合することを含んで成る方法により調製することができる。少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントおよび保存剤を水性希釈剤中で混合することは、通例の溶解および混合手順を使用して行う。適切な製剤を調製するために、例えば所望の濃度のタンパク質および保存剤を提供するために十分な量で、バッファー溶液中の計測した量で少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントをバッファー溶液中の所望の保存剤と合わせる。この方法の変法は当業者により認識されているだろう。例えば加える成分の順序、さらなる添加剤を使用するのかどうか、製剤が調製される温度およびｐＨは、濃度および使用する投与手段のために至適化され得るすべての因子である。
【０１５８】
特許請求する製剤は、透明溶液として、または水、保存剤および／または賦形剤、好ましくはリン酸バッファーおよび／または食塩および選択した塩を水性希釈剤中に含む第２バイアルで再構成する凍結乾燥した少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントのバイアルを含んで成る２個のバイアルの状態で患者に提供することができる。単一溶液のバイアルまたは再構成が必要な２個のバイアルのいずれも複数回、再使用され、そして患者処置の単回または多回サイクルを満たし、そしてこれにより現在利用できるものより都合よい処置法を提供することができる。
【０１５９】
特許請求する製品は、すぐに、そして２４時間以上の期間にわたり投与するために有用である。したがってここで特許請求する製品は、患者に重要な利点を提供する。本発明の製剤は場合により約２〜約４０℃の温度で安全に保存され、そして長期間にわたりタンパク質の生物活性を保持することができ、すなわちその溶液が６、１２、１８、２４、３６、４８、７２または９６時間以上の期間にわたり保持でき、かつ／または使用できることを示す包装ラベルを付すことを可能とする。保存希釈剤を使用する場合、そのようなラベルは１〜１２カ月、半年、１年半および／または２年までの少なくとも１つの使用を含むことができる。
【０１６０】
本発明の少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントの溶液は、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントを水性希釈剤中で混合することを含んで成る方法により調製することができる。混合は通例の溶解および混合手順を使用して行う。適当な希釈剤を調製するためには、例えば所望の濃度のタンパク質および場合により保存剤またはバッファーを提供するために十分な量で、水またはバッファー中で計測した少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント量を合わせる。この方法の変法は当業者により認識されているだろう。例えば加える成分の順序、さらなる添加剤を使用するかどうか、製剤が調製される温度およびｐＨは、濃度および使用する投与の手段のために至適化され得るすべての因子である。
【０１６１】
特許請求する製品は、透明溶液として、または水性希釈剤を含む第２バイアルで再構成する凍結乾燥した少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントの第１バイアルを含んで成る２個のバイアルとして患者に提供することができる。単一溶液のバイアルまたは再構成が必要な２個のバイアルのいずれかは複数回
、多数回再使用することができ、そして患者処置の単回または多回サイクルを満たし、そしてこれにより現在利用できるものより都合よい処置法を提供する。  
【０１６２】
特許請求する製品は、薬局、医院または他のそのような研究所および施設に、透明溶液または水性希釈剤を含む第２バイアルで再構成する凍結乾燥した少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントの第１バイアルを含んで成る２個のバイアルを提供することより、患者に間接的に提供することができる。この場合、透明溶液は１リットルまで、またはそれより大きなサイズであることができ、大きなリザーバーを提供して、そこからより小さいバイアルに移すために、より少量の少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント溶液が１または多数回引き出され、そして薬局または医院により使用者および／または患者に提供され得る。  
【０１６３】
これらの単一バイアル系を含んで成る認識されているデバイスは、Ｈｕｍａｊｅｃｔ（商標）、ＮｏｖｏＰｅｎ（商標）、Ｂ−Ｄ（商標）Ｐｅｎ、ＡｕｔｏＰｅｎ（商標）およびＯｐｔｉＰｅｎ（商標）のような溶液送達用のペン型注入デバイスを含む。２個のバイアル系を含んで成る認識されているデバイスは、ＨｕｍａｔｒｏＰｅｎ（商標）のような再構成された溶液を送達するためのカートリッジ中で、凍結乾燥された薬剤を再構成するためのペン−注入系を含む。
【０１６４】
ここで特許請求する製品には包装材料を含む。包装材料は管理会社が必要とする情報に加えて、製品を使用できる条件を提供する。本発明の包装材料は、２つのバイアルの湿潤／乾燥製品について、患者が水性希釈剤中で少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントを再構成して溶液を形成し、そして２〜２４時間以上の期間にわたり溶液を使用するための使用説明を提供する。単一バイアルの溶液製品については、ラベルはそのような溶液が２〜２４時間以上にわたり使用できることを示す。ここで特許請求する製品は、ヒトの医薬品としての使用に有用である。
【０１６５】
本発明の製剤は少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントおよび選択されたバッファー、好ましくは食塩または選択した塩を含むリン酸バッファーを混合することを含んで成る方法により調製することができる。少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントおよびバッファーを水性希釈剤中で混合することは、通例の溶解および混合法を使用して行う。適当な製剤を調製するためには、例えば所望の濃度のタンパク質およびバッファーを提供するために十分な量で、水またはバッファー中の計測した量の少なくとも１つＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントを、水中の所望の緩衝剤と合わせる。この方法の変法は当業者により認識されているだろう。例えば加える成分の順序、さらなる添加剤を使用するかどうか、製剤が調製される温度およびｐＨは、濃度および使用する投与の手段のために至適化され得るすべての因子である。
【０１６６】
特許請求する安定な、または保存された製剤は、透明溶液として、または水性希釈剤中に保存剤またはバッファーおよび賦形剤を含む第２バイアルで再構成する凍結乾燥した少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントのバイアルを含んで成る２個のバイアルとして患者に提供することができる。単一溶液のバイアルまたは再構成が必要な２個のバイアルのいずれも多数回、再使用することができ、そして単回または複数のサイクルで患者を処置するために十分であり、すなわち現在利用できるものよりも都合良い処置法を提供することができる。
【０１６７】
本明細書に記載する安定な、または保存された製剤または溶液のいずれかの中の少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントは、本
発明に従いＳＣまたはＩＭ注射；経皮、肺、経粘膜、インプラント、浸透圧ポンプ、カートリッジ、マイクロポンプまたは当業者により、あるいは当該技術分野で周知であるような他の手段を含む種々の送達法を介して患者に投与することができる。
【０１６８】
治療的応用
ミメティボディに関する本発明は、細胞、組織、器官、動物または患者の、限定するわけではないが、貧血、癌の処置に関連する貧血、放射線療法もしくは化学療法に関連する貧血、ウイルスもしくは細菌の処置に関する貧血、腎性貧血、早熟の貧血（ａｎｅｍｉａ
ｏｆ  ｐｒｅｍａｔｕｒｉｔｙ）、小児および／または成人の癌に付随する貧血、リンパ腫、骨髄腫、多発性骨髄腫に関連する貧血、ＡＩＤＳに付随する貧血を含む貧血の少なくとも１つをモジュレートまたは処置する方法、選択的手術を待つ、術前もしくは術後の自己血液供与、自己血液供与もしくは輸血、周術期管理を受けた、または受けていない患者、周期性好中球減少症もしくはコストマン症候群（先天性顆粒球減少症）、末期腎疾患、透析に関連する貧血、慢性腎不全、先天性低形成貧血のような原発性造血疾患、サラセミアメジャー、または鎌状赤血球症、鎌状赤血球症の血管閉塞性合併症の同時処置を提供する。Ｆｕｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ  １９９２；９０：７１６−７２８，Ｇｏｌｄｂｅｒｇ  Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９８８；２４２：１４１２−１４１５；Ｐａｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ  Ｈｅｍａｔｏｌ．１９８４；１２：８２５−８３０；Ｅｌｒｓｌｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ．１９６８；１２２：２３０−２３５；Ｅｒｓｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ  Ｃｌｉｎ  Ｌａｂ  Ｓｃｉ．１９８０；１０：２５０−２５７；Ｊａｃｏｂｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８５；３１３：８０６−８１０；Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １９８５；８２：７５８０−７５８４；Ｌａｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．１９８６；８３：６９２０−６９２４；Ｇｏｌｄｗａｓｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９７４；２４９；４２０２−４２０６；Ｅａｖｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．１９７８；５２：１１９６−１２１０；Ｓａｗｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．１９８９；７４：１０３−１０９；Ｗｉｎｅａｒｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ．１９８６；２：１１７５−１１７８；Ｅｓｃｈｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．１９８７；３１６：７３−７８；Ｅｓｃｈｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ．１９８９；１１１：９９２−１０００（それぞれ引用により全部、本明細書に編入する）。
【０１６９】
本発明のミメティボディは、例えば慢性感染、炎症プロセス、放射療法および細胞増殖抑制性薬剤処置により誘導される非腎性状態の貧血にも使用することができ、そして非腎性貧血の患者において有望な結果が報告された。例えばＡｂｅｌｓ  ＲＩ  ａｎｄ  Ｒｕｄｎｉｃｋ  ＳＡ  エリスロポエチン：進化する臨床的応用（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ；ｅｖｏｌｖｉｎｇ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ）。Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  １９：８４２−５０（１９９１）；Ｇｒａｂｅｒ
ＳＥ  ａｎｄ  Ｋｒａｎｔｚ  ＳＢ  エリスロポエチン：生物学および臨床的使用（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ；Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｕｓｅ）。Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ／Ｏｎｃｏｌ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒ．３：３６９−４００（１９８９）；Ｊｅｌｋｍａｎ  Ｗ  ａｎｄ  Ｇｒｏｓｓ  ＡＪ（編集）エリスロポエチン（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ）。Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｂｅｒｌｉｎ  １９８９；Ｋｏｕｒｙ  ＭＪ  ａｎｄ  Ｂｏｎｄｕｒａｎｔ  ＭＣ  エリスロポエチン作用の分子メカニズム（Ｔｈｅ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ  ａｃｔｉｏｎ）。Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２１０：６４９−６３（１９９２）；Ｋｒａｎｔｚ  ＳＢ  エリスロポエチン（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ）。Ｂｌｏｏｄ  ７７：４１９−３４（１９９１）；Ｔａｂｂａｒａ  ＩＡ  エリスロポエチン。生物学および臨床的応用（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ．Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）。Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １５３：２９８−３０４（１９９３）を参照にされたい（それぞれ引用により全部、本明細書に編入する）。
【０１７０】
また本発明は、細胞、組織、器官、動物または患者の貧血または血液細胞関連状態をモジュレートまたは処置する方法も提供し、ここで該貧血または血液細胞関連状態は、限定するわけではないが少なくとも１つの免疫関連疾患、心血管疾患、感染性疾患、悪性疾患および／または神経疾患を含む少なくとも１つに関連する。そのような方法は場合により、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントを含んでなる有効量の少なくとも１つの組成物もしくは製薬学的組成物を、そのようなモジュレーション、処置または治療が必要な細胞、組織、器官、動物または患者に投与することを含んでなることができる。
【０１７１】
本発明はまた、細胞、組織、器官、動物または患者の癌／感染性疾患をモジュレートまたは処置する方法も提供し、それらは限定するわけではないが少なくとも１つの急性または慢性細菌感染、細菌、ウイルスおよび真菌感染を含む急性および慢性寄生性または感染性プロセス、ＨＩＶ感染／ＨＩＶニューロパシー、髄膜炎、肝炎、敗血性関節炎、腹膜炎、肺炎、咽頭蓋炎、大腸菌０１５７：ｈ７、溶血性尿毒症症候群／血栓性血小板減少性紫斑症、マラリア、デング出血熱、リーシュマニア症、らい病、毒素性ショック症候群、ストレプトコッカス筋炎、ガス壊疽、結核症、細胞内トリ結核菌、カリニ肺炎、骨盤炎症状疾患、精巣炎／精巣上体炎、レジオネラ属、ライム病、インフルエンザ、エプスタイン−バールウイルス、ウイルス随伴血球貧食症候群、ウイルス性脳炎／無菌髄膜炎等を含む；（ｉｉ）白血病、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、Ｂ−細胞、Ｔ−細胞またはＦＡＢ  ＡＬＬ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ芽球性白血病（ＣＬＬ）、ヘアリーセル白血病、骨髄異形性症候群（ＭＤＳ）、リンパ腫、ホジキン病、悪性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、カポジ肉腫、結腸直腸癌、膵臓癌、鼻咽頭癌、悪性組織球症、悪性の新生物随伴症候群／高カルシウム血症、充実性腫瘍、腺癌、肉腫、悪性黒色腫等；あるいは（ｉｉｉ）神経変性疾患、多発性硬化症、偏頭痛、ＡＩＤＳ痴呆複合体、多発性硬化症および急性横断脊髄炎のような脱髄疾患；皮質脊髄系の損傷のような錐体外路および小脳障害；脳幹神経節または小脳障害のような障害；ハンチントン舞踏病および老年舞踏病のような運動亢進の運動障害；ＣＮＳドーパミン受容体を遮断する薬剤により誘導されるような薬剤が誘導する運動障害；パーキンソン病のような運動低下の運動障害；進行性核上麻痺；小脳の構造的損傷；脊髄性運動失調、Ｆｒｉｅｄｒｅｉｃｈ運動失調、小脳皮質性萎縮症、多系統変性症（Ｍｅｎｃｅｌ、Ｄｅｊｅｒｉｎｅ−Ｔｈｏｍａｓ、Ｓｈｉ−ＤｒａｇｅｒおよびＭａｃｈａｄｏ−Ｊｏｓｅｐｈ）のような旧小脳変性；全身性障害（レフサム病、無β−リポ蛋白血症、運動失調、毛細管拡張症およびミトコンドリア多系統障害）；多発性硬化症、急性横断脊髄炎のような脱髄コア（ｄｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｎｇ  ｃｏｒｅ）障害；および神経性筋肉萎縮症のような運動単位の障害（筋萎縮側索硬化症、乳児脊髄性筋萎縮症および若年性脊髄性筋萎縮症のような前角細胞変性）；アルツハイマー病；中年のダウン症候群；びまん性Ｌｅｗｙ小体病；Ｌｅｗｙ小体病型の老年痴呆；ヴェルニッケ−コルサコフ症候群；慢性アルコール依存症；クロイツフェルト−ヤコブ病；亜急性硬化性汎脳炎、Ｈａｌｌｅｒｒｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病；および拳闘化痴呆等を含む。そのような方法は場合により少なくとも１つのＴＮＦ抗体または特定部分またはバリアントを含んで成る有効量の組成物または製薬学的組成物を、そのようなモジュレーション、処置または治療が必要な細胞、組織、器官、動物または患者に投与することを含んで成ることができる。例えばメルクマニュアル（Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ）、第１６版、メルク＆カンパニー（Ｍ���ｒｃｋ  ＆  Ｃｏｍｐａｎｙ）、ラーウェイ、ニュージャージー州（１９９２）の参照にされたい。
【０１７２】
そのような方法は場合により、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントを含んで成る有効量の少なくとも１つの組成物または製薬学的組成物を、そのようなモジュレーション、処置または治療が必要な細胞、組織、器官、動物または患者に投与することを含んで成ることができる。
【０１７３】
また本発明は、細胞、組織、器官、動物または患者の、限定するわけではないが少なくとも１つの心失神（ｃａｒｄｉａｃ  ｓｔｕｎ）症候群、心筋梗塞、うっ血性心不全、発作、虚血性発作、出血、動脈硬化症、アテローム硬化症、糖尿病性動脈硬化性疾患、高血圧症、動脈性高血圧症、腎血管性高血圧症、失神、ショック、心血管系梅毒、心不全、肺性心、原発性肺高血圧症、心律動異常、心房異所性拍動、心房粗動、心房細動（持続的または発作性）、無秩序もしくは多病巣性心房性頻拍、規則的な細いＱＲＳ心房頻拍、特異的な不整脈、心室細動、ヒス束不整脈、房室ブロック、脚ブロック、心筋虚血性疾患、冠状動脈疾患、狭心症、心筋梗塞、心筋症、拡張型うっ血性心筋症、拘束型心筋症、弁心臓（ｖａｌｖｕｌａｒ  ｈｅａｒｔ）疾患、心内膜炎、心膜疾患、心腫瘍、大動脈および末梢動脈瘤、大動脈切開、大動脈の炎症、腹部大動脈およびその分枝の閉塞、末梢脈管障害、閉塞性大動脈障害、末梢アテローム硬化症、閉塞性血栓血管炎、機能的末梢動脈障害、Ｒａｙｎａｕｄ現象および疾患、先端チアノーゼ、先端紅痛症、静脈疾患、静脈血栓症、拡張蛇行静脈、動静脈瘻、リンパ水腫、脂肪浮腫、不安定狭心症、再潅流損傷、ポストポンプ症候群、虚血的再潅流損傷等を含む少なくとも１つの心血管疾患を、モジュレートまたは処置するための方法も提供する。そのような方法は場合により、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントを含んで成る有効量の組成物または製薬学的組成物を、そのようなモジュレーション、処置または治療が必要な細胞、組織、器官、動物または患者に投与することを含んで成る。
【０１７４】
本発明の任意の方法は、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントを含んで成る有効量の組成物または製薬学的組成物を、そのようなモジュレーション、処置または治療が必要な細胞、組織、器官、動物または患者に投与することを含んで成る。そのような方法は場合よりさらにそのような免疫疾患を処置するために同時投与または併用療法を含んで成ることができ、ここで該少なくとも１つＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ、それらの特定部分またはバリアントの投与は、さらに事前、同時および／または後に、少なくとも１つのＴＮＦアンタゴニスト（例えば限定するわけではないが、ＴＮＦ抗体もしくはフラグメント、可溶性ＴＮＦ受容体もしくはフラグメント、それらの融合タンパク質、または低分子ＴＮＦアンタゴニスト）、抗リウマチ薬、筋弛緩剤、麻薬、非−ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛剤、麻酔薬、鎮静剤、局所麻酔薬、神経筋遮断剤、抗菌剤（例えばアミノグルコシド、抗菌・カビ剤、駆虫剤、抗ウイルス剤、カルバペネム（ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ）、セファロスポリン、フルオロルキノロン（ｆｌｕｒｏｒｑｕｉｎｏｌｏｎｅ）、マクロライド、ペニシリン、スルホンアミド、テトラサイクリン、他の抗微生物剤）、止痒剤、コルチコステロイド、同化性ステロイド、糖尿病関連薬、無機類、栄養、甲状腺剤、ビタミン、カルシウム関連ホルモン、止冩薬、鎮咳剤、制吐剤、抗潰瘍剤、緩下剤、抗凝血剤、エリスロポエチン（例えばエポエチン  アルファ）、フィルグラスチム（ｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）（例えばＧ−ＣＳＦ、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ）、サルグラモスチン（ＧＭ−ＣＳＦ、Ｌｅｕｋｉｎｅ）、免疫感作、免疫グロブリン、免疫抑制薬（例えばバシリキシマブ、シクロスポリン、ダクリズマブ）、成長ホルモン、ホルモン代用薬、エストロゲン受容体モジュレーター、散瞳薬、毛様体筋麻痺薬、アルキル化薬、代謝拮抗物質、有糸分裂インヒビター、放射性薬品、抗鬱薬、抗躁薬、抗精神病薬、抗不安薬、催眠薬、交換神経作用薬、刺激物質、ドネゼピル、タクリン、喘息薬物療法、ベータアゴニスト、吸入ステロイド、ロイコトリエンインヒビター、メチルキサンチン、クロモリン、エピネフリンもしくは類似体、ドルナーゼアルファ（Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ）、サイトカインもしくはサイトカインアンタゴニストから選択される少なくとも１つを投与すること含んでなる。適切な投薬用量は、当該技術分野では周知である。例えばＷｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．、編集、薬理療法ハンドブック（Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ）、第２版、アペルトン  アンド  ランジ（Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ａｎｄ  Ｌａｎｇｅ）、スタムフォード、コネチカット州（２０００）：ＰＤＲ薬局方、タラスコンポケット薬局方（Ｔａｒａｓｃｏｎ  Ｐｏｃｋｅｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ）２０００、豪華版、タラスコン出版社、ローマ  リンダ、カリフォルニア州（２０００）を参照にされたい（それぞれ引用により全部、本明細書に編入する）。
【０１７５】
またミメティボディは、自己骨髄培養のようにエクスビボで使用することもできる。簡単に説明すると、骨髄を化学療法前の患者から取り出し、そして場合によりミメティボディと組み合わせて、場合により１以上のさらなるサイトカインと組み合わせてＴＰＯおよび／またはＥＰＯで処理する。次いで処理した骨髄を化学療法後の患者に戻し、骨髄の回復を急ぐ。加えてＴＰＯは単独で、およびＥＰＯミメティボディおよび／またはＥＰＯと組み合わせて、骨髄もしくは末梢血前駆細胞（ＰＢＰＣ）のエクスビボ拡張に使用することができる。化学療法の処置前に、骨髄を幹細胞因子（ＳＣＦ）またはＧ−ＣＳＦで刺激して、初期前駆細胞を末梢循環に放出することができる。これらの前駆細胞は場合により集められ、そして末梢血から濃縮され、次いでカルチャー中で場合により１もしくは複数の他のサイトカイン（限定するわけではないがＳＣＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−６もしくはＩＬ−１１）と組み合わせたＴＰＯおよびミメティボディで処理されて、高密度の巨核球カルチャーに分化、そして増殖させ、これは場合により高投与化学療法後の患者に戻される。骨髄のエクスビボ処置用のＴＰＯ用量は、１００ｐｇ／ｍｌ〜１０ｎｇ／ｍｌ、好ましくは５００ｐｇ／ｍｌ〜３ｎｇ／ｍｌの範囲となるだろう。ミメティボディの用量は、０．１単位／ｍｌ〜２０単位／ｍｌ、好ましくは０．５単位／ｍｌ〜２単位／ｍｌまたはこの中の任意の範囲もしくは値で使用することができるＥＰＯに対する活性に等しい。
【０１７６】
本発明の組成物、併用療法、同時投与、デバイスおよび／または方法に適するＴＮＦアンタゴニスト（さらに本発明の少なくとも１つの抗体、それらの特定部分およびバリアントを含む）には、限定するわけではないが、抗−ＴＮＦ抗体、それらのリガンド結合フラグメント、およびＴＮＦに特異的に結合する受容体分子；サリドマイド、テニダップ（ｔｅｎｉｄａｐ）、ホスホジエステラーゼインヒビター（例えばペントキシフィリンおよびロリプラム（ｒｏｌｉｐｒａｍ））、Ａ２ｂアデノシン受容体アゴニストおよびＡ２ｂアデノシン受容体エンハンサーのようなＴＮＦ合成、ＴＮＦの放出またはその標的細胞に対する作用を防止および／または阻害する化合物；マイトジェン活性化タンパク質（ＭＡＰ）キナーゼインヒビターのようなＴＮＦ受容体シグナル伝達を防止および／または阻害する化合物；メタロプロティナーゼインヒビターのような膜ＴＮＦ開裂を遮断および／または阻害する化合物；アンギオテンシン転換酵素（ＡＣＥ）インヒビター（例えばカプトプリル）のようなＴＮＦ活性を遮断および／または阻害する化合物；およびＭＡＰキナーゼインヒビターのようなＴＮＦ生産および／または合成を遮断および／または阻害する化合物を含む。
【０１７７】
本明細書で使用する「腫瘍壊死因子抗体」、「ＴＮＦ抗体」、「ＴＮＦα抗体」またはフラグメント等は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｓｉｔｕおよび／または好ましくはｉｎ  ｖｉｖｏでＴＮＦα活性を低下させ、遮断し、阻害し、排除し、または妨害する。例えば本発明の適当なＴＮＦヒト抗体はＴＮＦαに結合することができ、そして抗−ＴＮＦ抗体、それらの抗原結合フラグメント、およびＴＮＦαに特異的に結合するそれらの特定した変異体またはドメインを含む。適当なＴＮＦ抗体またはフラグメントは、ＴＮＦ  ＲＮＡ、ＤＮＡまたはタンパク質合成、ＴＮＦ放出、ＴＮＦ受容体シグナル伝達、膜ＴＮＦ開裂、ＴＮＦ活性、ＴＮＦ生産および／または合成を低下させ、遮断し、排除し、妨害し、防止し、および／または阻害することもできる。
【０１７８】
キメラ抗体ｃＡ２は、Ａ２と命名された高親和性の中和マウス抗−ヒトＴＮＦαＩｇＧ抗体の抗原結合可変領域、およびヒトＩｇＧ１カッパ免疫グロブリンの定常領域から成る。ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域は同種抗体エフェクター機能を向上させ、循環血清半減期を上昇させ、そして抗体の免疫原性を低下させる。キメラ抗体ｃＡ２のアビディティおよびエピトープ特異性は、マウス抗体Ａ２の可変領域に由来する。特定の態様では、マウス抗体Ａ２の可変領域をコードする核酸の好適な供給源はＡ２ハイブリドーマ細胞株である。
【０１７９】
キメラＡ２（ｃＡ２）は、天然のおよび組換えヒトＴＮＦαの両方の細胞傷害効果を用量依存的様式で中和する。キメラ抗体ｃＡ２および組換えヒトＴＮＦαの結合アッセイから、キメラ抗体ｃＡ２の親和性定数を１．０４×１０１０Ｍ−１と算出した。モノクローナル抗体の特異性および親和性を競合阻害により決定する好適な方法は、Ｈａｒｌｏｗ，ｅｔ  ａｌ．，抗体：ア  ラボラトリーマニュアル（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）、コールドスプリングハーバーラボラトリー出版、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク、１９８８；Ｃｏｌｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．編集、免疫学における現在のプロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）、グリーネ出版アソシエイツ  アンド  ウィリー  インターサイエンス（Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ）、ニューヨーク、（１９９２−２００２）；Ｋｏｚｂｏｒ  ｅｔ
ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，４；７２−７９（１９８３）；Ａｕｓｕｂｅｌ
ｅｔ  ａｌ．編集、分子生物学における現在のプロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）、ウィリー  インターサイエンス（  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ）、ニューヨーク、（１９８７−２００２）；およびＭｕｌｌｅｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，９２：５８９−６０１（１９８３）に見いだすことができ、これらは引用により全部、本発明に編入する。
【０１８０】
特定の態様では、マウスモノクローナル抗体Ａ２はｃ１３４Ａと命名された細胞株により生産される。キメラ抗体ｃＡ２はｃ１６８Ａと命名された細胞株により生産される。
【０１８１】
さらに本発明に使用することができるモノクローナル抗−ＴＮＦ抗体の例は、従来技術により記載されている（例えば米国特許第５，２３１，０２４号明細書；Ｍｏｅｌｌｅｒ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ２（３）：１６２−１６９（１９９０）；米国特許出願第０７／９４３，８５２号明細書（１９９２年９月１１日に出願）；Ｒａｔｈｊｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第９１／０２０７８号パンフレット（１９９１年２月２１日に公開）；Ｒｕｂｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第０２１８８６８号パンフレット（１９８７年４月２２日に公開）；Ｙｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，欧州特許出願公開第０２８８０８８号明細書（１９８８年１０月２６日）；Ｌｉａｎｇ，ｅｔ．ａｌ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１３７：８４７−８５４（１９８６）；Ｍｅａｇｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ６：３０５−３１１（１９８７）；Ｆｅｎｄｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ６：３５９−３６９（１９８７）；Ｂｒｉｎｇｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ６：４８９−５０７（１９８７）；およびＨｉｒａｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．９６：５７−６２（１９８７）を参照にされたい（これらの参考文献は引用により全部、本明細書に編入する）。
【０１８２】
ＴＮＦ受容体分子
本発明に有用な好適なＴＮＦ受容体分子は、ＴＮＦαに高親和性で結合するものであり（例えばＦｅｌｄｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．、国際公開第９２／０７０７６号パンフレット（１９９２年４月３０日公開）；Ｓｃｈａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ６１：３６１−３７０（１９９０）；およびＬｏｅｔｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ６１：３５１−３５９（１９９０）を参照にされたい、これらは引用により全部、本明細書に編入する）、そして場合により低い免疫原性を有するものである。特に５５ＫＤａ（ｐ５５  ＴＮＦ−Ｒ）および７５ｋＤａ（ｐ７５  ＴＮＦ−Ｒ）ＴＮＦ細胞表面受容体が本発明に有用である。受容体またはそれらの機能的部分の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含んで成るこれらの受容体の短縮された形態も（例えばＣｏｒｃｏｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２３：８３１−８４０（１９９４）を参照にされたい）、本発明に有用である。ＥＣＤを含んで成るＴＮＦ受容体の短縮化形は、尿および血清中に３０ｋＤａおよび４０ｋＤａのＴＮＦα阻害結合タンパク質として検出された（Ｅｎｇｅｌｍａｎｎ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１５３１−１５３６（１９９０））。ＴＮＦ受容体多量体分子およびＴＮＦ免疫受容体融合分子、およびそれらの誘導体およびフラグメントまたは部分は、本発明の方法および組成物に有用なＴＮＦ受容体分子のさらなる例である。本発明で使用できるＴＮＦ受容体分子は、症状の良好から優れた緩和および低い毒性で長期間、患者を処置するためのそれらの能力が特徴である。低い免疫原性および／または高い親和性、ならびに他の不確定な特性は、達成される治療的結果に寄与し得る。
【０１８３】
本発明に有用なＴＮＦ受容体多量体分子は、１もしくは複数のポリペプチドリンカーまたはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のような他の非ペプチドリンカーを介して連結された２以上のＴＮＦ受容体のＥＣＤの全てまたは機能的部分を含んで成る。多量体分子はさらに多量体分子を発現させるために、分泌されるタンパク質のシグナルペプチドを含んで成ることができる。これらの多量体分子およびそれらの生産法は、米国特許出願第０８／４３７，５３３号明細書（１９９５年５月９日出願）に記載され、その内容は引用により全部、本明細書に編入する。
【０１８４】
本発明の方法および組成物に有用なＴＮＦ免疫受容体融合分子は、１もしくは複数の免疫グロブリン分子の少なくとも一部および１もしくは複数のＴＮＦ受容体の全てまたは機能的部分を含んで成る。これらの免疫受容体融合分子は、単量体またはヘテロ−もしくはホモ−多量体として集成することができる。この免疫受容体融合分子は、一価または多価であることができる。そのようなＴＮＦ免疫受容体融合分子の例は、ＴＮＦ受容体／ＩｇＧ融合タンパク質である。ＴＮＦ免疫受容体融合分子およびそれらの生産法は従来技術に記載されている（Ｌｅｓｓｌａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：２８８３−２８８６（１９９１）；Ａｓｈｋｅｎａｚｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１０５３５−１０５３９（１９９１）；Ｐｅｐｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７４：１４８３−１４８９（１９９１）；Ｋｏｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：２１５−２１９（１９９４）；Ｂｕｔｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ６（６）：６１６−６２３（１９９４）；Ｂａｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２０４０−２０４８（１９９４）；Ｂｅｕｔｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５，４４７，８５１号明細書；および米国特許出願第０８／４４２，１３３号明細書（１９９５年５月１６日に出願）、これら各々は引用により全部、本明細書に編入する）。免疫受容体融合分子の生産法も、Ｃａｐｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許第５，１１６，９６４号明細書；Ｃａｐｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許第５，２２５，５３８号明細書；およびＣａｐｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３７：５２５−５３１（１９８９）に見いだすことができ、これらの参考文献は引用により全部、本明細書に編入する。
【０１８５】
ＴＮＦ受容体分子の機能的均等物、誘導体、フラグメントまたは領域とは、本発明に使用することができる（例えば高親和性でＴＮＦに結合し、そして低い免疫原性を有する）、ＴＮＦ受容体分子に機能的に似ている十分なサイズおよび配列のＴＮＦ受容体分子の部分、またはＴＮＦ受容体分子をコードするＴＮＦ受容体分子の配列の部分を称する。ＴＮＦ受容体分子の機能的均等物には、本発明に使用することができるＴＮＦ受容体分子に機能的に似ている修飾ＴＮＦ受容体分子も含む（例えば高い親和性でＴＮＦαに結合し、そして低い免疫原性を有する）。例えばＴＮＦ受容体分子の機能的均等物は、“ＳＩＬＥＮＴ”コドンまたは１もしくは複数のアミノ酸置換、欠失または付加（例えば１つの酸性アミノ酸の別の酸性アミノ酸への置換；または同じかまたは異なる疎水性アミノ酸をコードする１コドンの、疎水性アミノ酸をコードする別のコドンへの置換）を含むことができる。Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．、分子生物学における現在のプロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）、グリーネ出版アソシエイツ  アンド  ウィリー  インターサイエンス、ニューヨーク、（１９８７−２００２）を参照にされたい。
【０１８６】
サイトカインには限定するわけではないが既知のすべてのサイトカインを含む。例えばＣｏｐｅｗｉｔｈＣｙｔｏｋｉｎｅｓ．ｃｏｍを参照にされたい。サイトカインアンタゴニストには、限定するわけではないが任意の抗体、フラグメントまたは模造物、任意の可溶性受容体、フラグメントまたは模造物、任意の低分子アンタゴニスト、またはそれらの組み合わせを含む。
【０１８７】
本発明の任意の方法はタンパク質が媒介する障害を処置するための方法を含んで成ることができ、この方法は少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントを含んで成る有効量の組成物または製薬学的組成物を、そのようなモジュレーション、処置または治療が必要な細胞、組織、器官、動物または患者に投与することを含んで成る。そのような方法は任意にさらにそのような免疫疾患を処置するための同時投与または併用療法を含んで成ることができ、ここで該少なくとも１つＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ、それらの特定部分またはバリアントの投与は、さらに事前に、同時におよび／または後に、ＩＬ−３、ＩＬ−６およびＩＬ−１１；幹細胞因子；Ｇ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦのような少なくとも１つのサイトカインから選択される少なくとも１つを投与することを含んでなる。
【０１８８】
典型的には病的状態の処置は少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ組成物の有効量または投薬用量を投与することにより行われ、これは組成物中に含まれる比活性に依存して投与あたり全部で、平均して、範囲で少なくとも約０．０１から５００ミリグラムの少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント／患者１キログラム、そして好ましくは単回または多回投与あたり少なくとも約０．１〜１００ミリグラムのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント／患者体重である。あるいは効果的な血清濃度は、単回または多回投与あたり０．１〜５０００μｇ／ｍｌの血清濃度を含んで成ることができる。適当な投薬用量は医師が知っており、そしてもちろん特定の疾患状態、投与する組成物の比活性、および処置を受ける特定の患者に依存する。場合により所望する治療的量を達成するために、繰り返し投与、すなわち特定の監視され、または計量された用量の反復個別投与を提供することが必要となり、ここで個別投与は所望の毎日の用量または効果が達成されるまで繰り返される。  
【０１８９】
好適な用量は任意に、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９および／または３０ｍｇ／ｋｇ投与、あるいはそれらの任意の範囲、値または画分を含むことができ、あるいは単回または多回投与あたり０．１、０．５、０．９、１．０、１．１、１．２、１．５、１．９、２．０、２．５、２．９、３．０、３．５、３．９、４．０、４．５、４．９、５．５、５．９、６．０、６．５，６．９、７．０、７．５、７．９、８．０、８．５、８．９、９．０、９．５、９．９、１０、１０．５、１０．９、１１、１１．５、１１．９、２０、１２．５、１２．９、１３．０、１３．５、１３．９、１４．０、１４．５、４．９、５．０、５．５、５．９、６．０、６．５、６．９、７．０、７．５、７．９、８．０、８．５、８．９、９．０、９．５、９．９、１０、１０．５、１０．９、１１、１１．５、１１．９、１２、１２．５、１２．９、１３．０、１３．５、１３．９、１４、１４．５、１５、１５．５、１５．９、１６、１６．５、１６．９、１７、１７．５、１７．９、１８、１８．５、１８．９、１９、１９．５、１９．９、２０、２０．５、２０．９、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９６、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００および／または５０００μｇ／ｍｌ血清濃度あるいはそれらの任意の範囲、値または画分の血清濃度を達するために含むことができる。
【０１９０】
あるいは投与する投薬用量は、特定の薬剤の薬物動態学的特性、およびその投与の様式および経路；受容体の年齢、健康および体重；症状の性質および程度、現行処置の種類、処置の頻度、および所望する効果のような既知の因子に大変依存し得る。通常、有効成分の投薬用量は、体重１キログラムあたり約０．１〜１００ミリグラムとなり得る。多くは投与あたり１キログラムにつき０．１〜５０、そして好ましくは０．１〜１０ミリグラム、あるいは徐放性形態が所望の効果を得るために効果的である。
【０１９１】
非限定的な例として、ヒトまたは動物の処置は、１日あたり０．５、０．９、１．０、１．１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０または１００ｍｇ／ｋｇのような０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇの本発明の少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントを１回に、または周期的用量として、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０日に少なくとも１回、あるいは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０週に少なくとも１回、あるいはそれらを組み合わせて、単回、注入または反復投与を使用して提供することができる。
【０１９２】
内部投与に適する剤形（組成物）は、一般に単位または容器あたり約０．０００１ミリグラム〜約５００ミリグラムの有効成分を含む。これらの製薬学的組成物では、有効成分は通常、組成物の総重量に基づき約０．５〜９５重量％の量で存在するだろう。
【０１９３】
非経口投与には、ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントは溶液、懸濁液、乳液または凍結乾燥粉末として製剤することができ、一緒にまたは別に製薬学的に許容される非経口賦形剤が提供される。そのような賦形剤の例は、水、塩水、リンゲル溶液、デキストロース溶液および５％ヒト血清アルブミンである。リポソームおよび固定油のような非水性賦形剤を使用することもできる。賦形剤または凍結乾燥粉末は、等張性（例えば塩化ナトリウム、マンニトール）および化学的安定性（例えばバッファーおよび保存剤）を維持するための添加剤を含むことができる。製剤は既知のまたは適当な技術で滅菌される。
【０１９４】
適当な製薬学的キャリアーは、この分野の標準的な参考書である最新版のレミングトンの製薬科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、Ａ．Ｏｓｏｌに記載されている。
【０１９５】
治療的投与
本発明に従い多くの既知の、および開発された様式を、本発明の少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントを投与するために使用することができる。肺投与を以下の記載で使用するが、他の投与様式を本発明に従い使用して適切な結果を得ることができる。
【０１９６】
本発明のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディは、溶液、乳液、コロイドもしくは懸濁液として、または粉末として、吸入または本明細書に記載し、もしくは当該技術分野で既知の他の様式により投与するために適する種々のデバイスおよび方法を使用することにより担体中で送達することができる。
【０１９７】
非経口製剤および投与
非経口投与用の製剤は、通常の賦形剤として滅菌水または塩水、ポリエチレングリコールのようなポリアルキレングリコール、植物起源の油、水素化ナフタレン等を含むことができる。注入用の水性または油性懸濁液は、既知の方法に従い適当な乳化剤または加湿剤および沈殿防止剤を使用して調製することができる。注入用の薬剤は、水溶液または溶媒中の滅菌された注入可能溶液または懸濁液のような非毒性で、非経口投与可能な希釈剤であることができる。使用可能な賦形剤または溶剤として、水、リンゲル溶液、等張性塩水等を利用できる；通例の溶媒、または沈殿防止溶媒として、滅菌された非揮発性油を使用することができる。これらの目的のために、任意の種類の非揮発性油および脂肪酸を使用でき、それらには天然または合成または半合成の脂肪油または脂肪酸；天然または合成または半合成のモノ−もしくはジ−またはトリ−グリセリドを含む。非経口投与は当該技術分野で知られており、そして限定するわけではないが通例の注入手段、米国特許第５，８５１，１９８号明細書に記載されたガスで圧縮した、針を含まない注入デバイス、および米国特許第５，８３９，４４６号明細書に記載されたレーザーパーホレーターデバイスを含む（これらの明細書は引用により全部、本明細書に編入する）。
【０１９８】
代替送達  
本発明はさらに少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントの、非経口的、皮下、筋肉内、静脈内、ボーラス、膣、直腸、頬内、舌下、鼻内または経皮による投与に関する。タンパク質，ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント組成物は、非経口（皮下、筋肉内もしくは静脈内）投与、特に液体溶液もしくは懸濁液の状態で使用するために；膣または直腸投与、特にクリームおよび坐薬のような半固体形で使用するために；頬内、または舌下投与、特に錠剤またはカプセル形態で；あるいは鼻内、特に粉末、点鼻またはエーロゾルまたは特定薬剤（ｃｅｒｔａｉｎ  ａｇｅｎｔ）の形態で；あるいは皮膚構造をモディファイし、または経皮パッチ中の薬剤濃度を上げるためのジメチルスルフォキシドのような化学的エンハンサー（Ｊｕｎｇｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、「薬剤の浸透強化（Ｄｒｕｇ  Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ  Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ）」；Ｈｓｉｅｈ，Ｄ．Ｓ．、編集、第５９−９０頁（マルセルデッカー（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ）社、ニューヨーク  １９９４、引用により全部、本明細書に編入する）を用いて、またはタンパク質およびペプチドを含む製剤の皮膚上への適用を可能にする酸化剤（国際公開第９８／５３８４７号パンフレット）を用いて、または電気穿孔のような一過性の輸送路を作るために電場を適用して、またはイオン導入法のような皮膚を通る荷電した薬剤の移動性を上げるために、またはソノホレシス（ｓｏｎｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）のような超音波を適用して（米国特許第４，３０９，９８９号および同第４，７６７，４０２号明細書）、経皮的に、特にゲル、軟膏、ローション、懸濁液またはパッチ送達系で使用するために調製することができる（上記の刊行物および特許は引用により全部、本明細書に編入する）。
【０１９９】
肺／鼻投与
肺投与には、好ましくは少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは
特定部分またはバリアント組成物は、肺または洞のより低い気道に到達するために効果的な粒子サイズで送達される。本発明に従い、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントは吸入による治療薬の投与について当該技術分野で既知の種々の吸入または鼻デバイスにより送達することができる。エーロゾル化した製剤を患者の洞腔または肺胞に沈積させることができるこれらのデバイスには、定量吸入器、ネブライザー、乾燥粉末ジェネレーター、噴霧器等を含む。ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントを肺または鼻投与に向けるための適当な他のデバイスも当該技術分野では既知である。すべてのそのようなデバイスは、エーロゾル中のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントを分配するための投与に適する製剤に使用することができる。そのようなエーロゾルは、溶液（水性または非水性の両方）または固体粒子のいずれかから成ることができる。Ｖｅｎｔｏｌｉｎ（商標）定量吸入器のような定量呼入器は、多くは推進ガスを使用し、そして吸息中の作動が必要である（例えば国際公開第９４／１６９７０号、同第９８／３５８８８号パンフレットを参照にされたい）。Ｔｕｒｂｕｈａｌｅｒ（商標）（アストラ：Ａｓｔｒａ）、Ｒｏｔａｈａｌｅｒ（商標）（グラクソ：Ｇｌａｘｏ）、Ｄｉｓｋｕｓ（商標）（グラクソ）、Ｓｐｉｒｏｓ（商標）呼入器（ジュラ：Ｄｕｒａ）、インハーレセラピューティクス（Ｉｎｈａｌｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）により販売されているデバイスおよびＳｐｉｎｈａｌｅｒ（商標）粉末呼入器（フィソンス：Ｆｉｓｏｎｓ）のような粉末吸入器は、混合粉末の呼吸作動を使用する（米国特許第４６６８２１８号明細書  アストラ、欧州特許第２３７５０７号明細書  アストラ、国際公開第９７／２５０８６号パンフレット  グラクソ、国際公開第９４／０８５５２号パンフレット  ジュラ、米国特許第５４５８１３５号明細書  インハーレ、国際公開第９４／０６４９８号パンフレット  フィソンス、すべて引用により本明細書に編入する）。ＡＥＲｘ（商標）アラディギム（Ａｒａｄｉｇｍ）、Ｕｌｔｒａｖｅｎｔ（商標）ネブライザー（マリンクロッド：Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ）、およびＡｃｏｒｎＩＩ（商標）ネブライザー（マークエスト  メディカル  プロダクツ：Ｍａｒｑｕｅｓｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）（米国特許第５４０４８７１号明細書  アラディギム、国際公開第９７／２２３７６号パンフレット）のようなネブライザー（上記技術文献は引用により全部、本明細書に編入する）は、溶液からエーロゾルを生成するが、定量吸入器、乾燥粉末吸入器等は、小さい粒子のエーロゾルを生成する。市販されている吸入器デバイスのこれらの具体的例は、本発明の実施に適する具体的なデバイスの代表例であり、そして本発明の範囲を限定するものではない。好ましくは少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントを含んで成る組成物は、乾燥粉末吸入器または噴霧器により送達される。本発明の少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントを投与するための吸入デバイスの幾つかの望ましい特徴がある。例えば吸入デバイスによる送達は有利には、信頼性があり、再現性があり、そして正確であることである。吸入デバイスは場合により、良好な呼吸適性のために小さい乾燥粒子（例えば約１０μｍ未満、好ましくは約１〜５μｍ）を送達することができる。
【０２００】
噴霧としてのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント組成物の投与
ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント組成物タンパク質を含む噴霧は、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントの懸濁液または溶液を、加圧下のノズルを通すことにより生成することができる。ノズルのサイズおよび形状、かける圧力および液体供給速度は、所望の出力および粒子サイズを達成するために選択することができる。電気噴霧は例えば毛細管またはノズル供給部に連結した電場により生成できる。有利には噴霧器により送達される少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント組成物タンパク質の粒子は、約１０μｍ未満、好ましくは約１〜約５μｍの範囲、そして最も好ましくは約２μｍ〜３μｍの粒子サイズを有する。
【０２０１】
噴霧器で使用するために適当な少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント組成物タンパク質の製剤は、典型的には水溶液中、１ｍｌの溶液あたり約１ｍｇ〜約２０ｍｇの濃度で少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント組成物タンパク質を含む。製剤は賦形剤、バッファー、張性調整剤、保存剤、表面活性剤および好ましくは亜鉛のような作用物質（ａｇｅｎｔ）を含むことができる。製剤はまた、ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント組成物タンパク質を安定化するために、バッファー、還元剤、バルクタンパク質または炭水化物のような賦形剤または作用物質を含むこともできる。ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント組成物タンパク質を製剤するために有用なバルクタンパク質には、アルブミン、プロタミン等を含む。ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント組成物タンパク質を製剤するために有用な典型的な炭水化物には、シュクロース、マンニトール、ラクトース、トレハロース、グルコース等を含む。ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント組成物タンパク質製剤は、エーロゾルを形成する溶液の噴霧化により引き起こされるＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント組成物タンパク質の表面が誘導する凝集を下げ、または防止することができる表面活性剤を含むこともできる。ポリオキシエチレン脂肪酸エステルおよびアルコールおよびポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステルのような種々の通例の表面活性剤を使用することができる。量は一般に製剤の０．００１から１４重量％の間である。本発明の目的に特に好適な表面活性剤は、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレート、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０等である。ミメティボディまたは特定部分またはバリアントのようなタンパク質の製剤のために、当該技術分野で既知のさらなる作用物質も製剤に含むことができる。
【０２０２】
ネブライザーによるＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント組成物の投与
ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント組成物タンパク質は、ジェットネブライザーまたは超音波ネブライザーのようなネブライザーにより投与することができる。典型的にはジェットネブライザーでは、圧縮空気源を使用して開口部を通る高速エアジェットを作成する。ガスがノズルを越えて膨張すると低圧領域が作成され、これが液体リザーバーに連結された毛細管を通ってＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント組成物タンパク質の溶液を引き出す。毛細管からの液流は、管から出る時に不安定なフィラメントおよび液滴に剪断され、エーロゾルを作成する。ある範囲の形状、流速、およびそらせ型を使用して、上記のジェットネブライザーから所望の性能特性を達成することができる。超音波ネブライザーでは、高周波電気エネルギーを使用して、典型的には圧電変圧器を使用して、振動的、機械的エネルギーを作成することができる。このエネルギーを直接的に、またはカップリング流体を通すいずれかでＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント組成物タンパク質の製剤に伝え、ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント組成物タンパク質を含むエーロゾルを作成する。有利にはネブライザーにより送達されるＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント組成物タンパク質の粒子は、約１０μｍ未満、好ましくは約１μｍ〜約５μｍの範囲、そして最も好ましくは約２μｍ〜３μｍの粒子サイズを有する。
【０２０３】
ジェットまたは超音波のいずれのネブライザーを用いても、使用するために適当な少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントの製剤は、典型的には、１ｍｌの溶液あたり約１ｍｇ〜約２０ｍｇの濃度の少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントタンパク質で水溶液中にＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント組成物タン
パク含む。製剤は賦形剤、バッファー、張性調整剤、保存剤、表面活性剤および好ましくは亜鉛のような作用物質を含むこともできる。また製剤は、バッファー、還元剤、バルクタンパク質または炭水化物のような、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント組成物タンパク質を安定化するための賦形剤または作用物質も含むこともできる。少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント組成物タンパク質を製剤するために有用なバルクタンパク質には、アルブミン、プロタミン等を含む。少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントを製剤するために有用な典型的な炭水化物には、シュクロース、マンニトール、ラクトース、トレハロース、グルコース等を含む。少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント製剤はエーロゾルを形成する溶液の噴霧化により引き起こされる少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントの表面が誘導する凝集を下げ、または防止することができる表面活性剤を含むこともできる。ポリオキシエチレン脂肪酸エステルおよびアルコールおよびポリオキシエチレンソルビタル脂肪酸エステルのような種々の通例の表面活性剤を使用することができる。量は一般に製剤の０．００１から４重量％の間の範囲である。本発明の目的に特に好適な表面活性剤は、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレート、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０等である。ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントタンパク質のようなタンパク質の製剤のために当該技術分野で既知のさらなる作用物質も製剤に含むことができる。
【０２０４】
定量吸入器によるＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント組成物の投与
定量吸入器（ＭＤＩ）では、推進剤、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント、および任意の賦形剤または他の添加剤を、液化圧縮ガスを含む混合物としてキャニスターに含む。定量バルブの作動は好ましくは、約１０μｍ以下、好ましくは約１μｍ〜約５μｍ、そして最も好ましくは約２μｍ〜３μｍの範囲のサイズの粒子を含むエーロゾルとして混合物を放出する。所望のエーロゾル粒子サイズは、ジェット−ミル（ｊｅｔ−ｍｉｌｌｉｎｇ）、噴霧乾燥、臨界点縮合等を含む当業者に既知の様々な方法により生成されるＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント組成物タンパク質の製剤を使用することにより得られる。好適な定量吸入器には、３Ｍまたはグラクソにより製造され、そしてヒドロフルオロカーボン推進剤を採用するものを含む。
【０２０５】
定量吸入器デバイスを用いて使用するための少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントの製剤は、一般に少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントを含む細かく分割した粉末を、懸濁液として非水性媒質中に、例えば表面活性剤により推進剤に懸濁して含む。推進剤は、トリクロロフルオロメタン、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタノールおよび１，１，１，２−テトラフルオロエタン、ＨＦＡ−１３４ａ（ヒドロフルオロアルカン−１３４ａ）、ＨＦＡ−２２７（ヒドロフルオロアルカン−２２７）等を含むクロロフルオロカーボン、ヒドロクロロフルオロカーボン、ヒドロフルロカーボンまたは炭化水素のような、この目的に使用される任意の通例の材料であることができる。好ましくは推進剤はヒドロフルオロカーボンである。表面活性剤は、推進剤中の懸濁液として少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントを安定化するために、化学分解等に対して活性剤を保護する等のために選択することができる。適当な表面活性剤にはソルビタントリオレート、ダイズ  レシチン、オレイン酸等を含む。場合により溶液エーロゾルは、エタノールのような溶媒を使用することが好ましい。タンパク質のようなタンパク質の製剤に当該技術分野で既知のさらなる作用物質を、製剤に含むこともできる。
【０２０６】
当業者は、本発明の方法を本明細書に記載していないデバイスを介して少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアント組成物を肺投与することにより達成できることを認識しているだろう。
【０２０７】
粘膜製剤および投与
粘膜表面を通して吸収させるために、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントを投与する組成物および方法には、複数のミクロン以下の粒子、粘膜接着性高分子、生物活性ペプチドおよび水性の連続相を含んで成る乳液を含み、これは乳液粒子の粘膜接着を達成することにより粘膜表面を通る吸収を促進する（米国特許第５，５１４，６７０号明細書）。本発明の乳液の適用に適する粘膜表面には、角膜、結膜、頬、舌、鼻、膣、肺、胃、腸および直腸経路の投与を含む。膣または直腸投与用の製剤、例えば坐薬は、賦形剤として例えばポリアルキレングリコール、ワセリン、カカオ脂等を含むことができる。鼻内投与用の製剤は固体であることができ、そして賦形剤として例えばラクトースを含み、または点鼻の水性もしくは油性溶液であることができる。頬内投与には賦形剤は糖、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、糊化（ｐｒｅｇｅｌｉｎａｔｅｄ）澱粉等を含む（米国特許第５，８４９，６９５号明細書）。
【０２０８】
経口製剤および投与
経口用の製剤は、腸壁の透過性を人工的に上げるための補助剤（例えばレゾルシノールおよびポリオキシエチレンオレイルエーテルおよびｎ−ヘキサデシルポリエチレンエーテルのような非イオン性表面活性剤）の同時投与、ならびに酵素的分解を阻害するための酵素阻害剤（例えば膵臓トリプシンインヒビター、ジイソプロピルフルオロホスフェート（ＤＦＦ）およびトラシロール）の同時投与に依存する。経口投与用の固体型剤形の活性成分化合物を、シュクロース、ラクトース、セルロース、マンニトール、トレハロース、ラフィノース、マルチトール、デキストラン、澱粉、寒天、アルギネート、キチン、キトサン、ペクチン、トラガカントガム、アラビアガム、ゼラチン、コラーゲン、カゼイン、アルブミン、合成もしくは半合成ポリマーおよびグリセリドを含む少なくとも１つの添加剤と混合することができる。またこれらの剤形は他の種類（１つまたは複数）の添加剤、例えば不活性な希釈剤、ステアリン酸マグネシウム、パラベンのような潤滑剤、ソルビン酸、アスコルビン酸、アルファ−トコフェロールのような保存剤、システインのような酸化防止剤、崩壊剤、結合剤、増粘剤、緩衝剤、甘味料、風味剤（ｆｌａｖｏｒｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、香料等も含むことができる。
【０２０９】
錠剤およびピルはさらに腸溶性コート調製物に加工することができる。経口投与用の液体調製物には、医学的使用が可能な乳液、シロップ、エリキシル、懸濁液および溶液調製物を含む。これらの調製物は該分野で通常使用されている不活性希釈剤、例えば水を含むことができる。インスリンおよびヘパリンの薬剤送達系としてリポソームも記載された（米国特許第４，２３９，７５４号明細書）。さらに最近では、混合アミノ酸（プロテイノイド）の人工ポリマーの微小球も、薬剤を送達するために使用された（米国特許第４，９２５，６７３号明細書）。さらに米国特許第５，８７９，６８１号および同第５，５，８７１，７５３号明細書に記載された担体化合物も生物学的に活性な作用物質を経口で送達するために使用され、そして当該技術分野で既知である。
【０２１０】
経皮製剤および投与
経皮投与には、少なくとも１つのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントを、リポソームまたはポリマー性ナノ粒子、マイクロ粒子、マイクロカプセルまたは微小球（特に言及しない限り、集合的にマイクロ粒子と呼ぶ）のような送達デバイスにカプセル化する。多数の適当なデバイスが知られており、それらにはポリ乳酸
、ポリグリコール酸およびそれらのコポリマーのようなポリヒドロキシ酸、ポリオルトエステル、ポリ無水物およびポリホスファゼンのような合成ポリマー、ならびにコラーゲン、ポリアミノ酸、アルブミンおよび他のタンパク質、アルギネートおよび他の多糖およびそれらの組み合わせのような天然ポリマーから作られたマイクロ粒子を含む（米国特許第５，８１４，５９９号明細書）。
【０２１１】
持効性（ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ）投与および製剤
本発明の化合物を個体に長期間、例えば単回投与で１週間から１年の期間送達することがしばしば望ましい。種々の緩効性、貯蔵またはインプラント剤形を利用することができる。例えば剤形は、体液中での溶解度が低い化合物の製薬学的に許容される非毒性塩、例えば（ａ）リン酸、硫酸、クエン酸、酒石酸、タンニン酸、パモ酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレン  モノ−もしくはジ−スルホン酸、ポリガラクツロン酸等のような多塩基性酸との酸付加塩；（ｂ）亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウム等のような多価金属カチオン、または例えばＮ，Ｎ’−ジベンジル−エチレンジアミンまたはエチレンジアミンから形成される有機カチオンとの塩；あるいは（ｃ）（ａ）および（ｂ）の組み合わせ、例えばタンニン酸亜鉛塩を含むことができる。さらに本発明の化合物は、または好ましくは今ちょうど記載したような比較的不溶性の塩をゲル、例えば注入に適するゴマ油を含む例えばモノステアリン酸アルミニウムゲルに配合することができる。特に好適な塩は、亜鉛塩、タンニン酸亜鉛塩、パモ酸塩等である。注入用の別の種類の緩効性貯蔵製剤は、例えば米国特許第３，７７３，９１９号明細書に記載されているようなポリ乳酸／ポリグリコール酸ポリマーのような緩効分解型の非毒性、非抗原性ポリマー中にカプセル化するために分散した化合物または塩を含む。化合物または好ましくは上記の比較的不溶性の塩は、特に動物で使用するために、コレステロールマトリックスシラスティック（ｓｉｌａｓｔｉｃ）ペレット中に配合することもできる。さらなる緩効性の、貯蔵またはインプラント製剤、例えばガスまたは液体リポソームが技術文献で知られている（米国特許第５，７７０，２２２号明細書および「徐放性および放出制御薬剤送達系（Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）」、Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  編集、マルセルデッカー社、ニューヨーク、１９７８）。
【０２１２】
本発明を一般的に記載してきたが、これは具体的説明により提供され、そして限定を意味しない以下の実施例を参照することにより、より容易に理解できるだろう。
【実施例】
【０２１３】
実施例１：哺乳動物細胞中でのＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディのクローニングおよび発現
典型的な哺乳動物発現ベクターは、ｍＲＮＡの転写の開始を媒介する少なくとも１つのプロモーター要素、ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントのコード配列および転写の終結および転写産物のポリアデニル化に必要なシグナルを含む。さらなる要素にはエンハンサー、Ｋｏｚａｋ配列およびＲＮＡスプライシングのための供与および受容部位により挟まれた介在配列を含む。高度に効率的な転写はＳＶ４０に由来する初期および後期プロモーター、レトロウイルス、例えばＲＳＶ、ＨＴＬＶＩ、ＨＩＶＩに由来する長い末端反復配列（ＬＴＲＳ）、およびサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の初期プロモーターにより達成され得る。しかし細胞要素（例えばヒトアクチンプロモーター）も使用することができる。本発明の実施に使用するために適当な発現ベクターには、例えばｐＩＲＥＳ１ｎｅｏ、ｐＲｅｔｒｏ−Ｏｆｆ、ｐＲｅｔｒｏ−Ｏｎ、ＰＬＸＳＮまたはｐＬＮＣＸ（クロンテック  ラボズ（Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ  Ｌａｂｏｓ）、パロアルト、カリフォルニア州）、ｐｃＤＮＡ３．１（＋／−）、ｐｃＤＮＡ／Ｚｅｏ（＋／−）またはｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｙｇｒｏ（＋／−）（インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））、ＰＳＶＬおよびＰＭＳＧ（ファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ウプサラ、スウェーデン）、ｐＲＳＶｃａｔ（ＡＴＣＣ３７１５２）、ｐＳＶ２ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ３７１４６）およびｐＢＣ１２ＭＩ（ＡＴＣＣ６７１０９）のようなベクターを含む。使用できた哺乳動物宿主細胞には、ヒトＨｅｌａ  ２９３、Ｈ９およびＪｕｒｋａｔ細胞、マウスＮＩＨ３Ｔ３およびＣ１２７細胞、Ｃｏｓ１、Ｃｏｓ７およびＣＶ１、ｑｕａｉｌＱＣ１−３細胞、マウスＬ細胞およびチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を含む。
【０２１４】
あるいは遺伝子は染色体に組み込まれた遺伝子を含む安定な細胞株で発現させることができる。ｄｈｆｒ、ｇｐｔ、ネオマイシンまたはハイグロマイシンのような選択可能なマーカーを用いたコートランスフェクションにより、トランスフェクトした細胞の同定および単離が可能となる。
【０２１５】
トランスフェクトした遺伝子は、大量のコードされたＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントを発現させるために増幅することもできる。ＤＨＦＲ（ジヒドロ葉酸レダクターゼ）マーカーは、数百またはさらに数千の目的遺伝子のコピーを持つ細胞株を開発するために有用である。別の有用な選択マーカーは、酵素グルタミンシンターゼ（ＧＳ）（Ｍｕｒｐｈｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２２７：２７７−２７９（１９９１）；Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６９−１７５（１９９２））である。これらのマーカーを使用して、哺乳動物細胞を選択培地で成長させ、そして最高の耐性を持つ細胞を選択する。これらの細胞株は、染色体に組み込まれた増幅した遺伝子（１つまたは複数）を含む。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）およびＮＳＯ細胞は、ＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントの生産によく使用される。
【０２１６】
発現ベクターｐＣ１およびｐＣ４は、ラウス肉腫ウイルスの強力なプロモーター（ＬＴＲ）（Ｃｕｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：４３８−４４７（１９８５））に加えてＣＭＶ−エンハンサーのフラグメント（Ｂｏｓｈａｒｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ４１：５２１−５３０（１９８５））を含む。多クローニング部位、例えば制限酵素開裂部位であるＢａｍＨＩ、ＸｂａＩおよびＡｓｐ７１８は、目的遺伝子のクローニングを容易にする。ベクターは３’イントロンに加えて、ラットのプレプロインスリン遺伝子のポリアデニル化および終結シグナルを含む。
【０２１７】
ＣＨＯ細胞中でのクローニングおよび発現
ベクターｐＣ４をＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントの発現に使用する。プラスミドｐＣ４は、プラスミドｐＳＶ２−ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ寄託番号３７１４６）の誘導体である。プラスミドはマウスＤＨＦＲ遺伝子をＳＶ４０初期プロモーターの制御下に含む。これらのプラスミドでトランスフェクトしたジヒドロ葉酸活性を欠くチャイニーズハムスター卵巣または他の細胞は、細胞を化学療法剤であるメトトレキセートを補充した選択培地（例えばアルファマイナスＭＥＭ、ライフテクノロジーズ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ゲチスバーグ、メリーランド州）中で成長させることにより選択することができる。メトトレキセート（ＭＴＸ）に対して耐性の細胞中でＤＨＦＲ遺伝子の増幅が十分に示された（例えば、Ｆ．Ｗ．Ａｌｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５３：１３５７−１３７０（１９７８）；Ｊ．Ｌ．Ｈａｍｌｉｎ  ａｎｄ  Ｃ．Ｍａ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １０９７：１０７−１４３（１９９０）；およびＭ．Ｊ．Ｐａｇｅ  ａｎｄ  Ｍ．Ａ．Ｓｙｄｅｎｈａｍ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：６４−６８（１９９１）を参照にされたい）。ＭＴＸの濃度を上昇させて成長させた細胞は、ＤＨＦＲ遺伝子の増幅の結果として目的酵素であるＤＨＦＲの過剰生産により薬剤への耐性を生じる。第２遺伝子がＤＨＦＲ遺伝子に連結されている場合、これは通常、同時に増幅され（ｃｏ−ａｍｐｌｉｆｉｅｄ）、そして過剰に発現される。当該技術分野では、この取り組みを使用して１，０００コピー以上の増幅した遺伝子（１つまたは複数）を持つ細胞株を発生できることが知られている。続いてメトトレキセートを離脱する時、宿主細胞の１もしくは複数の染色体（１つまたは複数）に組み込まれた増幅された遺伝子を含む細胞株が得られる。
【０２１８】
プラスミドｐＣ４は目的遺伝子を発現するために、ラウス肉腫ウイルスの長い末端反復配列（ＬＴＲ）の強力なプロモーター（Ｃｕｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：４３８−４４７（１９８５））に加えて、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の前初期遺伝子のエンハンサーから単離されたフラグメント（Ｂｏｓｈａｒｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ４１：５２１−５３０（１９８５））を含む。プロモーターの下流は、遺伝子の組み込みを可能とするＢａｍＨＩ、ＸｂａＩおよびＡｓｐ７１８制限酵素開裂部位である。これらのクローニング部位の後に、プラスミドはラットのプレプロインスリン遺伝子の３’イントロンおよびポリアデニル化部位を含む。他の高効率プロモーター、例えばヒトｂ−アクチンプロモーター、ＳＶ４０初期および後期プロモーターまたは他のレトロウイルス（例えばＨＩＶおよびＨＴＬＶＩ）に由来する長い末端反復配列も発現に使用することができる。クロンテックのＴｅｔ−ＯｆｆおよびＴｅｔ−Ｏｎ遺伝子発現系および同様な系は、哺乳動物細胞中で調節された様式でＥＰＯを発現させるために使用できる（Ｍ．Ｇｏｓｓｅｎ，ａｎｄ  Ｈ．Ｂｕｊａｒｄ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：５５４７−５５５１（１９９２））。ｍＲＮＡのポリアデニル化には、他のシグナル、例えばヒト成長ホルモンまたはグロビン遺伝子に由来するシグナルも使用することができる。染色体に組み込まれた目的の遺伝子を持つ安定な細胞株は、ｇｐｔ、Ｇ４１８またはハイグロマイシンのような選択可能マーカーを用いたコ−トランスフェクションでも選択できる。始めに１より多くの選択可能なマーカー（例えばＧ４１８に加えてメトトレキセート）を使用することが有利である。
【０２１９】
プラスミドｐＣ４を制限酵素で消化し、そして次いでウシの腸ホスファターゼを使用して当該技術分野で既知の手法により脱リン酸化する。次いでベクターを１％アガロースゲルから単離する。
【０２２０】
本発明のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディのＨＣおよびＬＣ領域に対応する、完全なＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディまたは特定部分またはバリアントをコードするＤＮＡ配列を、既知の方法の工程に従い使用する。適切なヒト定常領域（すなわちＨＣおよびＬＣ領域）をコードする単離された核酸もこの構築物に使用される。
【０２２１】
単離された可変および定常領域をコードするＤＮＡおよび脱リン酸化ベクターは、次いでＴ４  ＤＮＡリガーゼで連結される。次いで大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＨＢ１０１またはＸＬ−１ブルー細胞を形質転換し、そしてプラスミドｐＣ４中に挿入されたフラグメントを含む細菌が、例えば制限酵素分析を使用して確認される。
【０２２２】
活性なＤＨＦＲ遺伝子を欠くチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞をトランスフェクションに使用する。５μｇの発現プラスミドｐＣ４を０．５μｇのプラスミドｐＳＶ２−ｎｅｏを用いてリポフェクチンを使用してコ−トランスフェクトする。プラスミドｐＳＶ２ｎｅｏは、Ｇ４１８を含む抗生物質群に対する耐性を付与する酵素をコードするＴｎ５に由来するドミナント選択性マーカーであるｎｅｏ遺伝子を含む。この細胞を、１μｇ／ｍｌのＧ４１８を補充したアルファマイナスＭＥＭにまく。２日後、細胞をトリプシン処理し、そして１０、２５または５０ｎｇ／ｍｌのメトトレキセートに加えて１μｇ／ｍｌのＧ４１８を補足した、ハイブリドーマクローニングプレート（グレイナー（Ｇｒｅｉｎｅｒ）、独国）中のアルファマイナスＭＥＭにまく。約１０〜１４日後、１つのクローンをトリプシン処理し、そして異なる濃度のメトトレキセート（５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、４００ｎＭ、８００ｎＭ）を使用して６−ウェルのペトリ皿または１０ｍｌのフラスコにまく。最高濃度のメトトレキセートで成長するクローンを、さらにより高濃度のメトトレキセート（１ｍＭ、２ｍＭ、５ｍＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ）を含む新たな６−ウェルプレートに移す。１００〜２００ｍＭ濃度で成長するクローンが得られるまで、同じ手順を繰り返す。所望の遺伝子産物の発現を例えばＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエスタンブロットにより、または逆相ＨＰＬＣ分析により分析する。
【０２２３】
実施例２：本発明のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディの非限定的例
背景：ＥＭＰ−１（ＥＰＯ模倣ペプチド−１）は、ヒトのエリスロポエチン（ＨｕＥＰＯ）とは配列相同性が無いが、（二量体として）ＥＰＯ受容体を活性化する能力を持つ２０個のアミノ酸ペプチドである（Ｗｒｉｇｈｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｓｃｉｅｎｃｅ，ｖｏｌ．２７３，４５８−４６３）。しかしその比較的低い活性（ＨｕＥＰＯよりも１０，０００〜１００，０００倍低い）、および短い半減期（５０％血清中、８時間のエクスビボ半減期、インビボの半減期は未知）により、その治療薬としての用途には欠陥がある。ゆえにその効力を乱すことなく、しかも可能であるならば向上させる、より長い半減期をペプチドに与えることが必要であった。このために、ペプチドの二量体化を安定化させることにより、または半減期を増すためにペプチドに、より大きな構造を包含させることにより、ＥＭＰ−１の活性を上げる試みが数回にわたりなされてきた。Ｗｒｉｇｈｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．１５，１２６１−６５）は、ビオチン標識化ＥＭＰ−１とストレプトアビジンと合わせて、二量体化を安定化させた。彼らはインビトロの細胞増殖アッセイで１００倍の活性増加を見た。また彼らは、抗−ビオチン抗体を使用してペプチド二量体を安定化したが、活性にわずか１０倍の上昇が見られただけであった。同じ著者がＥＭＰ−１の化学的に定められた二量体形を調製した。この場合、活性に１００倍の上昇がインビボで見られた。別のグループはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）への共有結合を介してＥＭＰ−１の活性を向上させようとした（Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｃｈｅｍ．＆  Ｂｉｏ．，ｖｏｌ．４（１２），９３９−５０）。彼らは１０００倍までの効力の増加を報告したが、その構築物はマウスで免疫原性であることが分かった（抗体はペプチドに向けられた）（Ｄａｎａ  Ｊｏｈｎｓｏｎ，私信）。Ｋｕａｉ  ｅｔ  ａｌ．（２０００，Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｒｅｓ．，ｖｏｌ．５６，５９−６２）はＥＭＰ−１ペプチドをプラスミノーゲンアクチベーターインヒビター１（ＰＡＩ−１）の配列に挿入した。この骨組み（ｓｃａｆｆｏｌｄ）へのＥＭＰ−１の挿入は、二量体化を安定化させ、そして半減期も上昇させると考えられた。インビボのアッセイでは、この構築物の効力がＥＭＰ−１単独よりも２５００倍高いようであった。これらの実験では異なるインビトロアッセイおよびインビボモデルを使用し、そして報告された効力は互いに比較できず、または結果を本明細書に提示できないことに注意すべきである。
【０２２４】
本発明のＥＰＯ模倣ヒンジコアミメティボディ
本発明の具体的な、非限定的例は、ＥＭＰ−ヒンジコアミメティボディ構築物であり、ここでＶは自然に存在するＨＣまたはＬＣ抗体の最初の数個のＮ−末端アミノ酸であり、Ｐは生物活性ＥＭＰ−１ペプチドの単一コピーであり、そしてＬはＧｌｙ−ＳｒまたはＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ柔軟性リンカーの直列反復であり、Ｈはヒンジコア領域であり、そしてＣＨ２＆ＣＨ３はＩｇＧ１アイソタイプのサブクラスである。この構造はＥＭＰ−１ペプチドを束縛するが、集成されるホモ二量体の一部としてペプチドの二量体化が安定化されるように十分な柔軟性を可能とすると考えられる。これを支持するように、インビトロの細胞増殖アッセイでのＥＭＰ−ヒンジコアの活性は、ＥＭＰ−１ペプチドよりも約５００倍高く、そして組換えＨｕＥＰＯ（ｒＨｕＥＰＯ）と実質的に同じである。さらにこの構築物の半減期は、ｒＨｕＥＰＯまたはＥＭＰ−１ペプチド単独の多数倍となり、そしてＩｇＧに類似すると期待される。等しい活性単位を与えた時、ＥＭＰ−ヒンジコアミメティボディで処置した正常なマウスは、ｒＨｕＥＰＯで処置したマウスに比べて有意に高い最大ヘマトクリットを一貫して達成し、そして上昇したレベルは長期間維持さ
れる。この構築物は細胞から効率的に分泌され、そして正しくフォールディングされるようであり；第１世代のミメティボディに付随する問題を克服する。
【０２２５】
上記の基本的構造に加えて、潜在的に好ましい生物学的特性を持つバリアントを記載する。これらには自己結合（ｓｅｌｆ−ａｓｓｏｃｉａｔｅ）に対する減少した傾向、減少した免疫エフェクター機能または減少した免疫原性を有することができる構築物を含む。生物学的に活性なペプチドの改善された立体配置、および血液脳関門をわたる移動のような望ましい特性を付与する他の修飾も構想する。提案されるバリアントおよび修飾は多くの様式で組み合わせて、望ましい活性を有する構築物を得ることができる。
【０２２６】
組換えＤＮＡ法を使用して、ＥＭＰ−１ペプチドを免疫グロブリンシグナルペプチドとヒトＪ配列との間の中間ベクターに挿入した。これは、ベクター中に存在する制限部位にコンパチブルな末端を持つ相補的な合成オリゴヌクレオチドを使用して行った。これらのオリゴヌクレオチドは、シグナルペプチダーゼコンセンサス部位（ＱＩＱ）、ＥＭＰ−１ペプチド（配列番号２）およびＧＳもしくはＧＧＧＳのいずれかからなる柔軟性リンカーのコード配列を含んだ。次いで上記の機能的要素を含有する制限フラグメントを発現ベクターに転移した。このベクターは抗−ＣＤ４免疫グロブリンプロモーターおよびエンハンサー、およびヒトＩｇＧ１ヒンジコア配列、およびＩｇＧ１ヒンジコア領域の部分、ＣＰＰＣＰ（図３６Ｃに示す配列番号６６の１０９−１１３）、ＨＣ定常領域２（ＣＨ２）および定常領域３（ＣＨ３）、ならびにプラスミドの複製および細菌中での選択および哺乳動物細胞中で安定な発現の選択に必要な要素のコード配列を含んだ。
【０２２７】
このプラスミドを直線状とし、そして電気穿孔によりＮＳＯマウス骨髄腫細胞株に導入した。耐性細胞を選択し、そしてＥＭＰ−ヒンジコアミメティボディの高発現体を培養上清のＥＬＩＳＡアッセイにより同定した。細胞培養上清から構築物の精製は、標準的なプロテインＡアフィニティークロマトグラフィーにより行った。精製した産物を変性および還元の両条件下でＳＤＳ−含有ポリアクリルアミドゲルに通すことにより、精製した産物の予想されるサイズを確認した。精製したタンパク質の同一性は、質量分析およびＮ−末端シークエンシングによりさらに確認した。
【０２２８】
ＥＭＰ−ヒンジコアミメティボディのアミノ酸配列を以下に示す（図１）。機能的ドメインはペプチドコード配列の上に注記する。３個のアミノ酸シグナルペプチドコンセンサス配列は、自然に存在する免疫グロブリンの最初の３個のアミノ酸に相当する。これら３個のアミノ酸は小胞体中でシグナルペプチダーゼによるシグナルペプチドの効率的除去に貢献すると考えられる。この配列はＥＭＰ−１コード配列の直後である。次の６個のアミノ酸と合わせたＥＭＰ−１配列の２つのＣ−末端アミノ酸は、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ反復を特徴とする柔軟性リンカーを形成する。ヒトの連結（Ｊ）領域配列が続く。Ｊ配列はさらに柔軟性を提供して、ＥＭＰ−１二量体が正しい立体配置となることを可能とし、そして二量体が免疫グロブリンの球状構造から突出し、そして２つのＥＰＯ受容体の間の開裂に貫通できるようにする。ＨＣヒンジ領域もＪ領域の直後でこの構築物に含まれる。ＩｇＧ１ヒンジ領域（強調した）には３個のシステインがある。第１は通常、免疫グロブリン軽鎖（ＬＣ）と対をなし、そして第２の２つは２つのＨＣ間の鎖内結合に参加する。配列の残りはＣＨ２＆ＣＨ３領域からなり、これはタンパク質の嵩（ｂｕｌｋ）を構成する。免疫グロブリンが長い血清半減期を有すると考えられている１つの理由は、免疫グロブリンが、飲作用を受けた免疫グロブリンを細胞外空間に戻すことにより血清半減期を延ばすＦｃＲｎに結合する能力を有するからである。ＦｃＲｎの結合部位は、ＣＨ２およびＣＨ３領域の連結部に重なる（Ｓｈｅｉｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，ｖｏｌ，２７６（９），６５９１−６６０４）。
【０２２９】
重要な機能的ドメインを示すＥＭＰ−ヒンジコアミメティボディのペプチド配列
【０２３０】
【表５】
2007507225.tif 000009
【０２３１】
【表６】
2007507225.tif 000010
【０２３２】
２つのＩｇＧ重鎖は細胞のプロセッシング中にヒンジ領域に位置するシステイン間のジスルフィド結合を介して集成され、ホモ二量体を形成することは良く知られている。これは修飾したペプチド間でも起こり、集成されたＥＭＰ−ヒンジコアミメティボディ構築物を形成すると予想される。加えて、ＥＭＰ−１ペプチド中の２つのシステイン間の鎖内ジスルフィド結合も形成されると予想される。予想されるＥＭＰ−ヒンジコアミメティボディの構造は２つのＥＭＰ−１ペプチドを含む。ペプチドのこの空間的配列は、Ｎ−末端で隣接する配列の柔軟性と一緒にペプチドが生物活性二量体を形成することを可能とするはずである。
【０２３３】
ＥＭＰ−ヒンジコアミメティボディの活性は、最初にインビトロの生物活性アッセイで試験された。このアッセイについて、急性巨核芽球白血病の患者に由来するＥＰＯ依存的ＵＴ−７／ＥＰＯ細胞株が使用された（Ｋｏｍａｔｓｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｂｌｏｏｄ，ｖｏｌ．８２（２），４５６−４６４）。これらの細胞は、ｒＨｕＥＰＯを補充した培地から離脱後４８〜７２時間で、プログラムされた細胞死を受ける。ｒＨｕＥＰＯの不存在下で２４時間インキュベーションした細胞は、ｒＨｕＥＰＯまたはＥＰＯアゴニストで処置すれば救済することができる。ＥＭＰ−ヒンジコアミメティボディをｒＨｕＥＰＯ無しで欠乏した細胞に加え、そして細胞の生存能を、生きている細胞により代謝されて測定することができる吸収を持つ生成物を生じるテトラゾリウム化合物のＭＴＳ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６ＡｑｕｅｏｕｓＯｎｅ溶液、プロメガ（Ｐｒｏｍｅｇａ））を使用して処置から４８時間後に測定した。典型的なアッセイの結果は、一般にモル基準でＥＭＰ−ヒンジコアミメティボディの効力が、ＥＭＰ−１ペプチドよりも５００倍大きく、そしてｒＨｕＥＰＯよりも５倍低いことを示した。加えてこれら同じ細胞をＥＭＰ−ヒンジコアミメティボディで刺激し、そしてチロシンリン酸化パターンが、細胞溶解物をポリアクリルアミドゲルに流すことにより視覚化された。ＥＭＰ−ヒンジコアミメティボディにより表されるパターンはｒＨｕＥＰＯに類似し、ＥＭＰ−ヒンジコアミメティボディがこれら細胞に作用するメカニズムがｒＨｕＥＰＯと同様であることを示す。
【０２３４】
インビボ実験を正常なマウスで行ってＥＭＰ−ヒンジコアミメティボディの半減期をｒＨｕＥＰＯの半減期と比較し、そしてそれらの赤血球生成に及ぼす効果を比較した。マウスに等しく投与した時、ＥＭＰ−ヒンジコアミメティボディはより高い最大応答を与え、そして応答はｒＨｕＥＰＯに比べて長かった。
【０２３５】
ｒＨｕＥＰＯおよびＥＭＰ−ヒンジコアミメティボディの両血清濃度は、ＥＬＩＳＡにより測定した。ＥＭＰエンジコアミメティボディのおよその半減期は、ｒＨｕＥＰＯの少なくとも数倍であった。
【０２３６】
ＩｇＧ１中の下のヒンジ領域中の２つのリシン（Ｌ）残基、Ｌ２３４＆Ｌ２３５のアラニン（Ａ）への突然変異は、免疫グロブリンが補体依存的な細胞傷害性（ＣＤＣ）および抗体依存的ナ細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を媒介する能力を排除することが示された（Ｈｅｚｅｒｅｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，ｖｏｌ．７５（２４），１２１６１−６８）。予備実験では、ＥＭＰ−ヒンジコアミメティボディはＥＰＯ受容体を発現する細胞の補体分解（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｌｙｓｉｓ）を媒介しないことが示された。これは赤血球前駆細胞上に見いだされる受容体数が低いことによるかもしれない。さらにヘマトクリットの有意な上昇により示される赤血球前駆細胞のインビボ拡大は、免疫エフェクター機能とは無関係な機能の可能性を支持している。しかしエフェクター機能に関連する影響が観察されなくても、これらの突然変異を予防的段階として導入することは興味深い。
【０２３７】
免疫エフェクター機能の媒介に低下をもたらす別の修飾は、グリコシル化結合部位の除去である。これは２９７（Ｎ２９７）位のアスパラギンのグルタミン（Ｑ）への突然変異により達成することができる。さらなる変化は、任意にトレオニン（Ｔ）を代替アミノ酸に置き換えてＯ−グリコシル化を減少または修飾させることを含み、例えばＴ３４またはＴ４７のＩｇＧ１サブクラスの無グリコシル化形（Ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ  ｖｅｒｓｉｏｎ）への置き換えは、免疫エフェクター機能のよくないメディエーターとなることが知られている（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｉｍｍｏｌ．Ｒｅｖ．，ｖｏｌ．１６３，５０−７６）。
利点：新規構築物である上記のＥＭＰ−ヒンジコアミメティボディは、生物活性ペプチド
ＥＭＰ−１を提示する代替法を提供する。この構築物の活性はｒＨｕＥＰＯの範囲にあり、そしてインビボの半減期はＩｇＧの半減期に類似する。さらに提案する修飾は、ＥＭＰ−ヒンジコアミメティボディの新規特徴と組み合わせて、そしてそれに加えて、ＥＭＰ−ヒンジコアミメティボディ構築物の用途を強化すると期待される。
【０２３８】
本発明が前述の記載および実施例に特に記載した以外にも実施できることは明確であろう。
【０２３９】
本発明の多くの修飾および変更が上記の教示に照らして可能であり、したがって本発明の範囲内である。
【配列表】
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【国際調査報告】
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2007507225.tif 000120
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