(57)【要約】【解決手段】  本発明は、ポリマーソーム、可視或いは近赤外放射性剤、及び任意に前記ポリマーソームの表面に関連する標的部位を有する組成物に関するものである。本発明は、疾患の治療、及び画像化方法論におけるそれら組成物の使用にも関する。【選択図】      図１
2007500192.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリマーソームであって、
（ｉ）複数の両親媒性コポリマーと、
（ｉｉ）前記ポリマーソーム膜内に拡散する、少なくとも１つの可視−或いは近赤外−放射性剤と
を有するポリマーソーム。
【請求項２】
請求項１のポリマーソームにおいて、
前記両親媒性コポリマーは、少なくとも１つの疎水性ポリマーと連結した少なくとも１つの親水性ポリマーを有する、両親媒性ブロックコポリマーである。
【請求項３】
請求項２のポリマーソームにおいて、
前記放射性剤は、７００〜１１００ｎｍスペクトル型の光を発光するものである。
【請求項４】
請求項２のポリマーソームにおいて、
少なくとも１つの放射性剤は、ポルフィリン部位を有するものである。
【請求項５】
請求項４のポリマーソームにおいて、
前記放射性剤は、少なくとも２つのポルフィイリン部位を有するものであり、前記ポルフィリン部位は、少なくとも１つの不飽和部位を有する炭化水素架橋によって連結されているものである。
【請求項６】
請求項２のポリマーソームにおいて、
少なくとも１つの放射性剤は、ポルフィセン、ルビリン（ｒｕｂｙｒｉｎ）、ロサリン（ｒｏｓａｒｉｎ）、ヘキサフィリン、サフィリン（ｓａｐｐｈｙｒｉｎ）、クロロフィル、クロリン、フタロシニン、ポルフィラジン、バクテリオクロロフィル、フェオフィチン、テキサフィリン大環状ベース化合物、或いはそれらの金属化誘導体を有するものである。
【請求項７】
請求項２のポリマーソームにおいて、
少なくとも１つの放射性剤は、レーザー色素、フルオロフォア、ルモフォア（ｌｕｍｏｐｈｏｒｅ）、或いはリン光体である。
【請求項８】
請求項７のポリマーソームにおいて、
少なくとも１つの放射性剤は、ｐ−テルフェニル、スルホローダミンＢ、ｐ−クアテルフェリン、ローダミン１０１、カルボスチリル１２４、クレシルバイオレット過塩素酸塩、ｐｏｐｏｐ、ＤＯＤＣヨウ化物、クマリン１２０、スルホローダミン１０１、クマリン２、オキソジン４過塩素酸塩、クマリン３３９、ＰＣＭ、クマリン１、オキサジン１７０過塩素酸塩、クマリン１３８、ナイルブルーＡ過塩素酸塩、クマリン１０６、オキサチン１過塩素酸塩、クマリン１０２、ピリジン１、クマリン３１４Ｔ、スチリル７、クマリン３３８、ＨＩＤＣヨウ化物、クマリン１５１、ＰＴＰＣヨウ化物、クマリン４、クリプトシアニン、クマリン３１４、ＤＯＴＣヨウ化物、クマリン３０、ＨＩＴＣヨウ化物、クマリン５００、ＨＩＴＣ過塩素酸塩、クマリン３０７、ＰＴＴＣヨウ化物、クマリン３３４、ＤＴＴＣ過塩素酸塩、クマリン７、ＩＲ−１４４、クマリン３４３、ＨＤＩＴＣ過塩素酸塩、クマリン３３７、ＩＲ−ＮＯ、クマリン６、ＩＲ−１３２、クマリン１５２、ＩＲ−１２５、クマリン１５３、ホウ素−ジピローメーテル（ｄｉｐｙｒｒｏｍｅｔｈｅｒｅ）、ＨＰＴＳ、フルオレッセイン、ローダミン１１０、２，７−ジクロロフルオレッセイン、ローダミン６５、及びローダミン１９過塩素酸塩、ローダミンｂであるレーザー色素であり、前記レーザー色素は、疎水性置換基の添加によって修飾され、前記レーザー色素は、実質的に前記ポリマーソーム膜内に存在するものである。
【請求項９】
請求項２のポリマーソームにおいて、
少なくとも１つの放射性剤は、少なくとも１つの電子求引性置換基で置換されたジ−カルボシアニン及びトリカルボシアニン色素、クロコニウム色素、チエニレンフェニレンビニレン種である近赤外（ＮＩＲ）放射性種であり、前記放射性種は、疎水性置換基の添加によって修飾され、前記レーザー色素は、実質的にポリマーソーム膜内に存在するものである。
【請求項１０】
請求項２のポリマーソームにおいて、
少なくとも１つの放射性剤は、少なくとも２つの共有結合を有する放射性共役化合物であり、前記化合物をエネルギー源に一時の間さらし、前記化合物が７００〜１１００ｎｍの波長で光を発するようにするために有効な条件下にさらすと、個々に共有結合した部位によって発された光の合計よりも大きい強度を有するものである。
【請求項１１】
請求項２のポリマーソームにおいて、
少なくとも１つの放射性剤は、少なくとも２つの共役結合部位を有する放射性共役化合物であり、前記化合物を前記化合物をエネルギー源に一時の間さらし、前記化合物が７００〜１１００ｎｍの波長で光を発するようにするために有効な条件下にさらすと、個々の前記部位の１つによる発光振動子強度顕性よりも大きい積分発光振動子強度を示すものである。
【請求項１２】
請求項１０或いは１１のポリマーソームにおいて、
放射性種を定義する前記共有結合部位は、少なくとも１つの炭素−炭素結合、炭素−炭素三重結合、或いはそれらの組み合わせによって連結されるものである。
【請求項１３】
請求項１０或いは１１のポリマーソームにおいて、
放射性種を定義する前記共有結合部位は、エチニル、エテニル、アレニル、ブタジニル、ポリビニル、チオフェニル、フラニル、ピロリル、或いはｐ−ジエチリルアレニル架橋剤によって、若しくは、ジエチニル、ジ（ポリイニニル）、ジビニル、ジ（ポリビンビル）、或いはジ（チオフェニル）置換基を有する共役へテロ環によって連結されるものである。
【請求項１４】
請求項１０或いは１１のポリマーソームにおいて、
放射性種を定義する前記共有結合部位は、少なくとも１つのイミン、フェニレン、チオフェン、或いはアミド、エーテル、チオエーテル、エステル、ケトン、スルホン、或いはカルボジイミド基によって連結されているものである。
【請求項１５】
請求項２のポリマーソームにおいて、
前記ポリマーソームは、生体再吸収性である。
【請求項１６】
請求項４のポリマーソームにおいて、
前記ホルフィナート画像化剤は、β−β、メソ−β、或いはメソ−メソ連結トポロジーを特徴とするエチニル−あるいはブタジイニル−架橋マルチ（ポルフィリン）化合物であり、前記ポルフィナート画像化剤は、６００〜１１００ｎｍスペクトル型において発光することができるものである。
【請求項１７】
請求項１６のポリマーソームにおいて、
前記ポルフィリン−ベース画像化剤は、
【化１】
2007500192.tif 000011
に示される式の薬剤であり、
ここにおいて、Ｍは、金属或いはＨ２であり、Ｈ２は大環状の遊離リガンド形を意味しており、
ＲＡ及びＲＢは、それぞれ個別に、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル或いはＣ１〜Ｃ２０ヘテロアルキル、Ｃ６〜Ｃ２０アリル或いはヘテロアリル、Ｃ（ＲＣ）＝Ｃ（ＲＤ）（ＲＥ）、Ｃ＝Ｃ（ＲＤ）、或いはペプチド、ヌクレオシド、或いはサッカライドから成る化学官能基であり、ＲＣ、ＲＤ、及びＲＥはそれぞれ個別に、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル或いはＣ４〜Ｃ２０ヘテロアルキル、アリル或いはヘテロアリル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル或いはヘテロアルケニル、アルキニル或いはＣ２〜Ｃ２０ヘテロアルキニル、トリアルキルシリル、或いはポルフィリナートであり、
ｎは１〜１０の整数である。
【請求項１８】
請求項１７のポリマーソームにおいて、
ｎは、１〜８の整数である。
【請求項１９】
請求項１７のポリマーソームにおいて、
前記ポルフィリン−ベース画像化剤のＭは、亜鉛、マグネシウム、白金、パラジウム、或いはＨ２であり、Ｈ２は、大環状の遊離リガンド形を意味するものである。
【請求項２０】
請求項１７のポリマーソームにおいて、
前記ポリマーソームポルフィリン−ベース画像化剤は、放射性である。
【請求項２１】
請求項１７のポリマーソームにおいて、
前記マルチ（ポルフィリン）画像化剤は、メソ−メソエチン−あるいはブタジエン−架橋結合トポロジーを有するものであり、前記画像化剤は、６００〜１１００ｎｍスペクトル型において発光することができるものである。
【請求項２２】
請求項２のポリマーソームにおいて、
前記ポリマーソームは、１つの両親媒性ブロックコポリマーを有するものである。
【請求項２３】
請求項２のポリマーソームにおいて、
前記両親媒性ブロックコポリマーは、１つの疎水性ポリマーと１つの親水性ポリマーとを有するものである。
【請求項２４】
請求項２のポリマーソームにおいて、
前記両親媒性ブロックコポリマーは、末端親水性ポリマーと１つの疎水性内部ポリマーから成るトリブロックポリマーである。
【請求項２５】
請求項２のポリマーソームにおいて、
前記両親媒性ブロックコポリマーは、２つの親水性ポリマーブロックと２つの疎水性ポリマーブロックから成るテトラブロックポリマーである。
【請求項２６】
末端親水性ポリマーブロック及び内部疎水性ポリマーブロックを有する、請求項２５のポリマーソーム。
【請求項２７】
請求項２のポリマーソームにおいて、
前記両親媒性ブロックコポリマーは、２つの親水性ポリマーブロックと３つの疎水性ポリマーブロックとから成るペンタブロックポリマーである。
【請求項２８】
請求項２のポリマーソームにおいて、
前記両親媒性ブロックコポリマーは、３つの親水性ポリマーブロックと２つの疎水性ポリマーブロックとから成るペンタブロックポリマーである。
【請求項２９】
請求項２のポリマーソームにおいて、
前記両親媒性ブロックコポリマーは、４つの親水性ポリマーブロックと１つの疎水性ポリマーブロックとから成るペンタブロックポリマーである。
【請求項３０】
請求項２のポリマーソームにおいて、
前記両親媒性ブロックコポリマーは、少なくとも６つのブロックを有し、そのうち少なくとも２つは親水性ポリマーブロックである。
【請求項３１】
請求項２のポリマーソームであって、さらに、
少なくとも１つの脂質、リン脂質、ステロイド、コレステロール、単鎖アルコール、ペプチド、或いは界面活性剤を有するものである。
【請求項３２】
請求項２のポリマーソームにおいて、
前記両親媒性ブロックコポリマーは、異なるモノマーを有する２つの鎖を接着することによって製造されるものである。
【請求項３３】
請求項２のポリマーソームにおいて、
前記両親媒性ブロックコポリマーは、フリーラジカル開始反応、アニオン重合、ペプチド合成、或いは転移ＲＮＡを用いたリボソーム合成によって製造されたポリマーを有するものである。
【請求項３４】
請求項２のポリマーソームにおいて、
前記親水性ポリマーは、ポリ（エチレンオキシド）、或いはポリ（エチレングリコール）を有するものである。
【請求項３５】
請求項２のポリマーソームにおいて、
前記親水性ポリマーは、水に可溶である。
【請求項３６】
請求項２のポリマーソームにおいて、
前記親水性ポリマーは、イオン的に重合可能な極性モノマーから選択された重合化ユニットを有するものである。
【請求項３７】
請求項３６のポリマーソームにおいて、
前記イオン的に重合可能な極性モノマーは、アルキルオキシドモノマーを有するものである。
【請求項３８】
請求項３７のポリマーソームにおいて、
前記アルキルオキシドモノマーは、エチレンオキシド、プロピレンオキシド、あるいはそれらのあらゆる組み合わせである。
【請求項３９】
請求項２のポリマーソームにおいて、
前記親水性ポリマーは、ポリ（エチレンオキシド）を有するものである。
【請求項４０】
請求項２のポリマーソームにおいて、
複数の両親媒性のブロックコポリマーにおける前記親水性ポリマーの体積分率は、０．４０以下である。
【請求項４１】
請求項２のポリマーソームにおいて、
前記疎水性ポリマーは、ポリエチルエチレン、ポリ（ブタジエン）、ポリ（β−ベンジル−Ｌ−アスパラギン酸）、ポリ（乳酸）、ポリ（プロピレンオキシド）、ポリ（ε−カプロラクタム）、オリゴ−メタクリル酸、或いはポリスチレンを有するものである。
【請求項４２】
請求項２のポリマーソームにおいて、
前記疎水性ポリマーは、ポリエチルエチレン或いはポリ（ブタジエン）を有するものである。
【請求項４３】
請求項２のポリマーソームにおいて、
前記疎水性ポリマーは、不飽和モノマーから選択された重合化ユニットを有するものである。
【請求項４４】
請求項４３のポリマーソームにおいて、
前記不飽和モノマーは、炭化水素である。
【請求項４５】
請求項２のポリマーソームにおいて、
前記ポリマーソームは、対応するポリエチレンオキシドポリマーブロックとの組み合わせで使用される、疎水性ポリカプロラクトン、ポリ乳酸、ポリグリコリド、或いはポリメチレン炭酸ポリマーブロックを含むものである。
【請求項４６】
請求項１のポリマーソームにおいて、
前記両親媒性ブロックコポリマーは、ポリ（エチレンオキシド）−ポリエチルエチレン、ポリ（エチレンオキシド）−ポリ（ブタジエン）、ポリ（エチレンオキシド）−ポリ（ε−カプロラクトン）、或いはポリ（エチレンオキシド）−ポリ（乳酸）である。
【請求項４７】
治療剤を付加的に有する、請求項２のポリマーソーム。
【請求項４８】
１若しくはそれ以上の異なる放射性種を付加的に有する、請求項２のポリマーソーム。
【請求項４９】
第２の放射体、細胞毒性剤、磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）剤、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）剤、放射性画像化剤、或いは光感作療法（ＰＤＴ）剤の少なくとも１つを付加的に有する、請求項２のポリマーソーム。
【請求項５０】
第２の放射体、細胞毒性剤、磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）剤、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）剤、光感作療法（ＰＤＴ）剤、放射性画像化剤、強磁性剤、或いはフェリ磁性剤の少なくとも１つを付加的に有する、請求項２のポリマーソームであって、
前記放射体或いは薬剤は、水性ポリマーソーム内部の範囲内で区分化されるものであるポリマーソーム。
【請求項５１】
前記水性ポリマーソーム内部の範囲内で区分化された、タンパク質、ペプチド、サッカライド、ヌクレオシド、無機化合物、さらにウイルス、細胞小器官、バクテリア、或いは細胞構成成分などの生体物質、或いは有機化合物を付加的に有する、請求項２のポリマーソーム。
【請求項５２】
ポリマーソームであって、
（ｉ）複数の両親媒性コポリマーと、
（ｉｉ）前記ポリマーソーム膜内に分離される、少なくとも１つの可視−或いは近赤外−放射性剤と、
（ｉｉｉ）前記ポリマーソームの表面に関連した少なくとも１つの標的部位と
を有するポリマーソーム。
【請求項５３】
請求項５２のポリマーソームにおいて、
前記両親媒性コポリマーは、少なくとも１つの疎水性ポリマーと連結した少なくとも１つの親水性ポリマーを有する、両親媒性ブロックコポリマーである。
【請求項５４】
請求項５３のポリマーソームにおいて、
前記放射性剤は、７００〜１１００ｎｍスペクトル型の光を発光するものである。
【請求項５５】
請求項５３のポリマーソームにおいて、
前記画像化剤の少なくとも１つは、ポルフィリン−ベース組成物を有するものである。
【請求項５６】
請求項５３のポリマーソームにおいて、
少なくとも１つの放射性剤は、ポルフィセン、ルビリン（ｒｕｂｙｒｉｎ）、ロサリン（ｒｏｓａｒｉｎ）、ヘキサフィリン、サフィリン（ｓａｐｐｈｙｒｉｎ）、クロロフィル、クロリン、フタロシニン、ポルフィラジン、バクテリオクロロフィル、フェオフィチン、テキサフィリン大環状ベース化合物、或いはそれらの金属化誘導体を有するものである。
【請求項５７】
請求項５３のポリマーソームにおいて、
少なくとも１つの放射性剤は、レーザー色素、フルオロフォア、ルモフォア（ｌｕｍｏｐｈｏｒｅ）、或いはリン光体である。
【請求項５８】
請求項５７のポリマーソームにおいて、
少なくとも１つの放射性剤は、ｐ−テルフェニル、スルホローダミンＢ、ｐ−クアテルフェリン、ローダミン１０１、カルボスチリル１２４、クレシルバイオレット過塩素酸塩、ｐｏｐｏｐ、ＤＯＤＣヨウ化物、クマリン１２０、スルホローダミン１０１、クマリン２、オキソジン４過塩素酸塩、クマリン３３９、ＰＣＭ、クマリン１、オキサジン１７０過塩素酸塩、クマリン１３８、ナイルブルーＡ過塩素酸塩、クマリン１０６、オキサチン１過塩素酸塩、クマリン１０２、ピリジン１、クマリン３１４Ｔ、スチリル７、クマリン３３８、ＨＩＤＣヨウ化物、クマリン１５１．ＰＴＰＣヨウ化物、クマリン４、クリプトシアニン、クマリン３１４、ＤＯＴＣヨウ化物、クマリン３０、ＨＩＴＣヨウ化物、クマリン５００、ＨＩＴＣ過塩素酸塩、クマリン３０７、ＰＴＴＣヨウ化物、クマリン３３４、ＤＴＴＣ過塩素酸塩、クマリン７、ＩＲ−１４４、クマリン３４３、ＨＤＩＴＣ過塩素酸塩、クマリン３３７、ＩＲ−ＮＯ、クマリン６、ＩＲ−１３２、クマリン１５２、ＩＲ−１２５、クマリン１５３、ホウ素−ジピローメーテル（ｄｉｐｙｒｒｏｍｅｔｈｅｒｅ）、ＨＰＴＳ、フルオレッセイン、ローダミン１１０、２，７−ジクロロフルオレッセイン、ローダミン６５、及びローダミン１９過塩素酸塩、ローダミンｂであるレーザー色素であり、前記レーザー色素は、疎水性置換基の添加によって修飾され、前記レーザー色素は、実質的に前記ポリマーソーム膜内に存在するものである。
【請求項５９】
請求項５３のポリマーソームにおいて、
前記放射性剤の少なくとも１つは、インドシアニングリーン、ジ−カルボシアニン及びトリカルボシアニン色素、クロコニウム色素、電子求引性置換基で置換されたチエニレンフェニレンビニレン種であるＮＩＲ放射性種であり、そのような放射性材料は、疎水性置換基の添加によって修飾され、前記レーザー色素は、実質的にポリマーソーム膜内に存在するものである。
【請求項６０】
請求項５３のポリマーソームにおいて、
前記放射性剤の少なくとも１つは、
少なくとも２つの共有結合を有する放射性共役化合物であり、前記化合物をエネルギー源に一時の間さらし、前記化合物が７００〜１１００ｎｍの波長で光を発するようにするために有効な条件下にさらすと、個々に共有結合した部位によって発された光の合計よりも大きい強度を有するものである。
【請求項６１】
請求項５３のポリマーソームにおいて、
少なくとも１つの放射性剤は、少なくとも２つの共役結合部位を有する放射性共役化合物であり、前記化合物を前記化合物をエネルギー源に一時の間さらし、前記化合物が７００〜１１００ｎｍの波長で光を発するようにするために有効な条件下にさらすと、個々の前記部位の１つによる発光振動子強度顕性よりも大きい積分発光振動子強度を示すものである。
【請求項６２】
請求項６０或いは６１のポリマーソームにおいて、
放射性種を定義する前記共有結合部位は、少なくとも１つの炭素−炭素結合、炭素−炭素三重結合、或いはそれらの組み合わせによって連結されるものである。
【請求項６３】
請求項６０或いは６１のポリマーソームにおいて、
放射性種を定義する前記共有結合部位は、エチニル、エテニル、アレニル、ブタジニル、ポリビニル、チオフェニル、フラニル、ピロリル、或いはｐ−ジエチリルアレニル架橋剤によって、若しくは、ジエチニル、ジ（ポリイニニル）、ジビニル、ジ（ポリビンビル）、或いはジ（チオフェニル）置換基を有する共役へテロ環によって連結されるものである。
【請求項６４】
請求項６０或いは６１のポリマーソームにおいて、
放射性種を定義する前記共有結合部位は、少なくとも１つのイミン、フェニレン、チオフェン、或いはアミド、エーテル、チオエーテル、エステル、ケトン、スルホン、或いはカルボジイミド基によって連結されているものである。
【請求項６５】
請求項５３のポリマーソームにおいて、
前記ポリマーソームは、生体再吸収性である。
【請求項６６】
請求項６５のポリマーソームにおいて、
前記ポリマーソームは、対応するポリエチレンオキシドポリマーブロックとの組み合わせで使用される、疎水性ポリカプロラクトン、ポリ乳酸、ポリグリコリド、或いはポリメチレン炭酸ポリマーブロックを含むものである。
【請求項６７】
請求項５３のポリマーソームにおいて、
前記ポリマーソームは、ｉｎ  ｖｉｖｏでの使用に対して、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって認可されたブロックポリマー組成物を含むものである。
【請求項６８】
請求項５３のポリマーソームにおいて、
標的部位は、生物学的部位置と特異的に結合するものである。
【請求項６９】
請求項５３のポリマーソームにおいて、
標的部位は、生理学的条件下で、生物学的位置と特異的に結合するものである。
【請求項７０】
請求項５５のポリマーソームにおいて、
前記ホルフィナート画像化剤は、β−β、メソ−β、或いはメソ−メソ連結トポロジーを特徴とするエチニル−あるいはブタジイニル−架橋マルチ（ポルフィリン）化合物であり、前記ポルフィナート画像化剤は、６００〜１１００ｎｍスペクトル型において発光することができるものである。
【請求項７１】
請求項７０のポリマーソームにおいて、
前記ポルフィリン−ベース画像化剤は、
【化２】
2007500192.tif 000012
に示される式の薬剤であり、
ここにおいて、Ｍは、金属或いはＨ２であり、Ｈ２は大環状の遊離リガンド形を意味しており、
ＲＡ及びＲＢは、それぞれ個別に、Ｈ、アルキル或いはＣ１〜Ｃ２０ヘテロアルキル、Ｃ６〜Ｃ２０アリル或いはヘテロアリル、Ｃ（ＲＣ）＝Ｃ（ＲＤ）（ＲＥ）、Ｃ＝Ｃ（ＲＤ）、或いはペプチド、ヌクレオシド、或いはサッカライドから成る化学官能基であり、ＲＣ、ＲＤ、及びＲＥはそれぞれ個別に、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル或いはＣ４〜Ｃ２０ヘテロアルキル、アリル或いはヘテロアリル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル或いはヘテロアルケニル、アルキニル或いはＣ２〜Ｃ２０ヘテロアルキニル、トリアルキルシリル、或いはポルフィリナートであり、
ｎは１〜１０の整数である。
【請求項７２】
請求項７１のポリマーソームにおいて、
ｎは、１〜８の整数である。
【請求項７３】
請求項７２のポリマーソームにおいて、
前記ポルフィリン−ベース画像化剤のＭは、亜鉛、マグネシウム、白金、パラジウム、或いはＨ２であり、Ｈ２は、大環状の遊離リガンド形を意味するものである。
【請求項７４】
請求項５５のポリマーソームにおいて、
前記ポリマーソームポルフィリン−ベース画像化剤は、放射性である。
【請求項７５】
請求項５５のポリマーソームにおいて、
前記マルチ（ポルフィリン）画像化剤は、メソ−メソエチン−あるいはブタジエン−架橋結合トポロジーを有するものであり、前記画像化剤は、６００〜１１００ｎｍスペクトル型において発光することができるものである。
【請求項７６】
請求５３のポリマーソームにおいて、
前記標的部位は、抗体、抗体断片、或いは所定の受容体結合部位に特異的な物質を有するものである。
【請求項７７】
請求項５６のポリマーソームにおいて、
前記受容体結合部位、或いは標的部位は、受容体特異的ペプチド、炭化水素、タンパク質、脂質、ヌクレオシド、ペプチド核酸、有機化合物、或いはそれらの組み合わせを有するものである。
【請求項７８】
請求項５３のポリマーソームにおいて、
前記ポリマーソームは、１つの両親媒性ブロックコポリマーを有するものである。
【請求項７９】
請求項５３のポリマーソームにおいて、
前記両親媒性ブロックコポリマーは、１つの疎水性ポリマーと１つの親水性ポリマーとを有するものである。
【請求項８０】
請求項５３のポリマーソームにおいて、
前記両親媒性ブロックコポリマーは、末端親水性ポリマーと１つの疎水性内部ポリマーから成るトリブロックポリマーである。
【請求項８１】
請求項５３のポリマーソームにおいて、
前記両親媒性ブロックコポリマーは、２つの親水性ポリマーブロックと２つの疎水性ポリマーブロックから成るテトラブロックポリマーである。
【請求項８２】
末端親水性ポリマーブロック及び内部疎水性ポリマーブロックを有する、請求項８１のポリマーソーム。
【請求項８３】
請求項５３のポリマーソームにおいて、
前記両親媒性ブロックコポリマーは、２つの親水性ポリマーブロックと３つの疎水性ポリマーブロックとから成るペンタブロックポリマーである。
【請求項８４】
請求項５３のポリマーソームにおいて、
前記両親媒性ブロックコポリマーは、３つの親水性ポリマーブロックと２つの疎水性ポリマーブロックとから成るペンタブロックポリマーである。
【請求項８５】
請求項５３のポリマーソームにおいて、
前記両親媒性ブロックコポリマーは、４つの親水性ポリマーブロックと１つの疎水性ポリマーブロックとから成るペンタブロックポリマーである。
【請求項８６】
請求項５３のポリマーソームにおいて、
前記両親媒性ブロックコポリマーは、少なくとも６つのブロックを有し、そのうち少なくとも２つは親水性ポリマーブロックである。
【請求項８７】
請求項５３のポリマーソームであって、さらに、
少なくとも１つの脂質、リン脂質、ステロイド、コレステロール、単鎖アルコール、ペプチド、或いは界面活性剤を有するものである。
【請求項８８】
請求項５３のポリマーソームにおいて、
前記両親媒性ブロックコポリマーは、異なるモノマーを有する２つの鎖を接着することによって製造されるものである。
【請求項８９】
請求項５３のポリマーソームにおいて、
前記両親媒性ブロックコポリマーは、フリーラジカル開始反応、アニオン重合、ペプチド合成、或いは転移ＲＮＡを用いたリボソーム合成によって製造されたポリマーを有するものである。
【請求項９０】
請求項５３のポリマーソームにおいて、
前記親水性ポリマーは、ポリ（エチレンオキシド）、或いはポリ（エチレングリコール）を有するものである。
【請求項９１】
請求項５３のポリマーソームにおいて、
前記親水性ポリマーは、水に可溶である。
【請求項９２】
請求項５３のポリマーソームにおいて、
前記親水性ポリマーは、イオン的に重合可能な極性モノマーから選択された重合化ユニットを有するものである。
【請求項９３】
請求項９２のポリマーソームにおいて、
前記イオン的に重合可能な極性モノマーは、アルキルオキシドモノマーを有するものである。
【請求項９４】
請求項９３のポリマーソームにおいて、
前記アルキルオキシドモノマーは、エチレンオキシド、プロピレンオキシド、あるいはそれらのあらゆる組み合わせである。
【請求項９５】
請求項９０のポリマーソームにおいて、
前記親水性ポリマーは、ポリ（エチレンオキシド）を有するものである。
【請求項９６】
請求項９５のポリマーソームにおいて、
複数の両親媒性のブロックコポリマーにおける前記親水性ポリマーの体積分率は、０．４０以下である。
【請求項９７】
請求項５３のポリマーソームにおいて、
前記疎水性ポリマーは、ポリエチルエチレン、ポリ（ブタジエン）、ポリ（β−ベンジル−Ｌ−アスパラギン酸）、ポリ（乳酸）、ポリ（プロピレンオキシド）、ポリ（ε−カプロラクタム）、オリゴ−メタクリル酸、或いはポリスチレンを有するものである。
【請求項９８】
請求項９７のポリマーソームにおいて、
前記疎水性ポリマーは、ポリエチルエチレン或いはポリ（ブタジエン）を有するものである。
【請求項９９】
請求項９７のポリマーソームにおいて、
前記疎水性ポリマーは、エチレン化された不飽和モノマーから選択された重合化ユニットを有するものである。
【請求項１００】
請求項９８のポリマーソームにおいて、
前記エチレン化された不飽和モノマーは、炭化水素である。
【請求項１０１】
請求項５３のポリマーソームにおいて、
前記両親媒性ブロックコポリマーは、ポリ（エチレンオキシド）−ポリエチルエチレン、ポリ（エチレンオキシド）−ポリ（ブタジエン）、ポリ（エチレンオキシド）−ポリ（ε−カプロラクトン）、或いはポリ（エチレンオキシド）−ポリ（乳酸）である。
【請求項１０２】
治療剤を付加的に有する、請求項５３のポリマーソーム。
【請求項１０３】
１若しくはそれ以上の異なる放射性種を付加的に有する、請求項５３のポリマーソーム。
【請求項１０４】
第２の放射体、細胞毒性剤、磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）剤、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）剤、放射性画像化剤、或いは光感作療法（ＰＤＴ）剤の少なくとも１つを付加的に有する、請求項５３のポリマーソーム。
【請求項１０５】
第２の放射体、細胞毒性剤、磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）剤、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）剤、光感作療法（ＰＤＴ）剤、放射性画像化剤、強磁性剤、或いはフェリ磁性剤の少なくとも１つを付加的に有する、請求項５３のポリマーソームであって、
前記放射体或いは薬剤は、水性ポリマーソーム内部の範囲内で区分化されるものであるポリマーソーム。
【請求項１０６】
前記水性ポリマーソーム内部の範囲内で区分化された、タンパク質、ペプチド、サッカライド、ヌクレオシド、無機化合物、さらにウイルス、細胞小器官、バクテリア、或いは細胞構成成分などの生体物質、或いは有機化合物を付加的に有する、請求項５３のポリマーソーム。
【請求項１０７】
組織或いは生物体の生物学的位置へ薬剤を運搬する方法であって、
前記薬剤を有し、（ａ）複数の両親媒性コポリマーと、（ｂ）前記ポリマーソーム膜内に分離される少なくとも１つの可視−或いは近赤外−放射性剤と、（ｃ）前記ポリマーソームの表面に関連した少なくとも１つの標的部位とを有するポリマーソームを前記組織或いは生物体へ投与する工程を有する方法。
【請求項１０８】
請求項１０７の方法において、
前記両親媒性コポリマーは、少なくとも１つの疎水性ポリマーと連結した少なくとも１つの親水性ポリマーを有する、両親媒性ブロックコポリマーである。
【請求項１０９】
請求項１０８の方法において、
前記放射性剤は、ホルフィナート画像化剤である。
【請求項１１０】
請求項１０８の方法であって、さらに、
選択された量の前記ポリマーソームが前記位置に存在する時期を決定する工程と、少なくとも一部の前記薬剤を遊離させる工程と
を有する方法。
【請求項１１１】
請求項１０９の方法において、
前記ホルフィナート画像化剤は、β−β、メソ−β、或いはメソ−メソ連結トポロジーを特徴とするエチニル−あるいはブタジイニル−架橋マルチ（ポルフィリン）化合物であり、前記ポルフィナート画像化剤は、６００〜１１００ｎｍスペクトル型において発光することができるものである。
【請求項１１２】
請求項１０９の方法において、
前記放射性剤は、少なくとも２つのポルフィリン部位を有するものであり、前記ポルフィリン部位は、少なくとも１つの不飽和部位から成る炭化水素架橋によって連結されるものである。
【請求項１１３】
請求項１０８の方法において、
少なくとも１つの放射性剤は、ポルフィセン、ルビリン（ｒｕｂｙｒｉｎ）、ロサリン（ｒｏｓａｒｉｎ）、ヘキサフィリン、サフィリン（ｓａｐｐｈｙｒｉｎ）、クロロフィル、クロリン、フタロシニン、ポルフィラジン、バクテリオクロロフィル、フェオフィチン、テキサフィリン大環状ベース化合物、或いはそれらの金属化誘導体を有するものである。
【請求項１１４】
請求項１０８の方法において、
少なくとも１つの放射性剤は、レーザー色素、フルオロフォア、ルモフォア（ｌｕｍｏｐｈｏｒｅ）、或いはリン光体である。
【請求項１１５】
請求項１１４の方法において、
少なくとも１つの放射性剤は、ｐ−テルフェニル、スルホローダミンＢ、ｐ−クアテルフェリン、ローダミン１０１、カルボスチリル１２４、クレシルバイオレット過塩素酸塩、ｐｏｐｏｐ、ＤＯＤＣヨウ化物、クマリン１２０、スルホローダミン１０１、クマリン２、オキソジン４過塩素酸塩、クマリン３３９、ＰＣＭ、クマリン１、オキサジン１７０過塩素酸塩、クマリン１３８、ナイルブルーＡ過塩素酸塩、クマリン１０６、オキサチン１過塩素酸塩、クマリン１０２、ピリジン１、クマリン３１４Ｔ、スチリル７、クマリン３３８、ＨＩＤＣヨウ化物、クマリン１５１．ＰＴＰＣヨウ化物、クマリン４、クリプトシアニン、クマリン３１４、ＤＯＴＣヨウ化物、クマリン３０、ＨＩＴＣヨウ化物、クマリン５００、ＨＩＴＣ過塩素酸塩、クマリン３０７、ＰＴＴＣヨウ化物、クマリン３３４、ＤＴＴＣ過塩素酸塩、クマリン７、ＩＲ−１４４、クマリン３４３、ＨＤＩＴＣ過塩素酸塩、クマリン３３７、ＩＲ−ＮＯ、クマリン６、ＩＲ−１３２、クマリン１５２、ＩＲ−１２５、クマリン１５３、ホウ素−ジピローメーテル（ｄｉｐｙｒｒｏｍｅｔｈｅｒｅ）、ＨＰＴＳ、フルオレッセイン、ローダミン１１０、２，７−ジクロロフルオレッセイン、ローダミン６５、及びローダミン１９過塩素酸塩、ローダミンｂであるレーザー色素であり、前記レーザー色素は、疎水性置換基の添加によって修飾され、前記レーザー色素は、実質的に前記ポリマーソーム膜内に存在するものである。
【請求項１１６】
請求項１０８の方法において、
少なくとも１つの前記放射性剤は、ジ−カルボシアニン及びトリカルボシアニン色素、クロコニウム色素、電子求引性置換基で置換されたチエニレンフェニレンビニレン種である近赤外（ＮＩＲ）放射性種であり、前記放射性種は、疎水性置換基の添加によって修飾され、前記レーザー色素は、実質的にポリマーソーム膜内に存在するものである。
【請求項１１７】
請求項１０８の方法において、
前記放射性剤の少なくとも１つは、少なくとも２つの共有結合を有する放射性共役化合物であり、前記化合物をエネルギー源に一時の間さらし、前記化合物が７００〜１１００ｎｍの波長で光を発するようにするために有効な条件下にさらすと、個々に共有結合した部位によって発された光の合計よりも大きい強度を有するものである。
【請求項１１８】
請求項１０８の方法において、
前記放射性剤の少なくとも１つは、少なくとも２つの共役結合部位を有する放射性共役化合物であり、前記化合物を前記化合物をエネルギー源に一時の間さらし、前記化合物が７００〜１１００ｎｍの波長で光を発するようにするために有効な条件下にさらすと、個々の前記部位の１つによる発光振動子強度顕性よりも大きい積分発光振動子強度を示すものである。
【請求項１１９】
請求項１０８の方法において、
前記ポルフィナート画像化剤は、
【化３】
2007500192.tif 000013
に示される式の薬剤であり、
ここにおいて、Ｍは、金属或いはＨ２であり、Ｈ２は大環状の遊離リガンド形を意味しており、
ＲＡ及びＲＢは、それぞれ個別に、Ｈ、アルキル或いはＣ１〜Ｃ２０ヘテロアルキル、Ｃ６〜Ｃ２０アリル或いはヘテロアリル、Ｃ（ＲＣ）＝Ｃ（ＲＤ）（ＲＥ）、Ｃ＝Ｃ（ＲＤ）、或いはペプチド、ヌクレオシド、或いはサッカライドから成る化学官能基であり、ＲＣ、ＲＤ、及びＲＥはそれぞれ個別に、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル或いはＣ４〜Ｃ２０ヘテロアルキル、アリル或いはヘテロアリル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル或いはヘテロアルケニル、アルキニル或いはＣ２〜Ｃ２０ヘテロアルキニル、トリアルキルシリル、或いはポルフィリナートであり、
ｎは１〜１０の整数である。
【請求項１２０】
請求項１１１の方法において、
前記標的部位は、抗体、抗体断片、或いは所定の受容体結合部位に特異的な物質を有するものである。
【請求項１２１】
請求項１２０の方法において、、
前記受容体結合部位、或いは標的部位は、受容体特異的ペプチド、炭化水素、タンパク質、脂質、ヌクレオシド、ペプチド核酸、有機化合物、或いはそれらの組み合わせを有するものである。
【請求項１２２】
請求項１１１の方法において、
前記親水性ポリマーは、ポリ（エチレンオキシド）、或いはポリ（エチレングリコール）を有するものである。
【請求項１２３】
請求項１２２の方法において、
前記親水性ポリマーは、ポリ（エチレンオキシド）を有するものである。
【請求項１２４】
請求項１２３の方法において、
複数の両親媒性のブロックコポリマーにおける前記親水性ポリマーの体積分率は、０．４０以下である。
【請求項１２５】
請求項１２２の方法において、
前記疎水性ポリマーは、ポリエチルエチレン、ポリ（１，２−ブタジエン）、ポリ（β−ベンジル−Ｌ−アスパラギン酸）、ポリ（乳酸）、ポリ（プロピレンオキシド）、ポリ（ε−カプロラクタム）、オリゴ−メタクリル酸、或いはポリスチレンを有するものである。
【請求項１２６】
請求項１２５の方法において、
前記疎水性ポリマーは、ポリエチルエチレン、或いはポリ（１，２−ブタジエン）である。
【請求項１２７】
請求項１０８の方法において、
前記両親媒性ブロックコポリマーは、ポリ（エチレンオキシド）−ポリエチルエチレン、ポリ（エチレンオキシド）−ポリ（ブタジエン）、ポリ（エチレンオキシド）−ポリ（ε−カプロラクトン）、或いはポリ（エチレンオキシド）−ポリ（乳酸）である。
【請求項１２８】
請求項１１０の方法において、
前記薬剤は、超音波エネルギーを用いて遊離され、前記ポリマーソームの構造で分散されるものである。
【請求項１２９】
請求項１１０の方法において、
前記薬剤は、光エネルギーを用いて遊離され、前記ポリマーソームの構造で分散されるものである。
【請求項１３０】
請求項１１０の方法において、
前記薬剤は、前記ポリマーソームの重合性組成物の酵素分解エネルギーを用いて遊離されるものである。
【請求項１３１】
生物体あるいは組織における疾患の存在或いは非存在を確定するための方法であって、
ポリマーソームを患者へ投与する工程であって、前記ポリマーソームは、（ａ）複数の両親媒性コポリマーと、（ｂ）前記ポリマーソーム膜内に分離される少なくとも１つの可視−或いは近赤外−放射性剤と、（ｃ）前記ポリマーソームの表面に関連した少なくとも１つの標的部位とを有するものである投与する工程と、
光源、光検出器、或いはその両者と工学的に連結した装置を提供する工程と、
前記生物体或いは組織内の前記ホルフィナート画像化剤の量、或いは分配をモニタリングするように前記装置を作動させる工程と
を有する方法。
【請求項１３２】
請求項１３１の方法において、
前記両親媒性コポリマーは、両親媒性ブロックコポリマーであって、各両親媒性ブロックコポリマーは、少なくとも１つの疎水性ポリマーと連結した少なくとも１つの親水性ポリマーを有するものである。
【請求項１３３】
請求項１３２の方法において、
前記放射性剤は、ホルフィナート画像化剤である。
【請求項１３４】
請求項１３３の方法において、
前記ホルフィナート画像化剤は、β−β、メソ−β、或いはメソ−メソ連結トポロジーを特徴とするエチニル−あるいはブタジイニル−架橋マルチ（ポルフィリン）化合物であり、前記ポルフィナート画像化剤は、６００〜１１００ｎｍスペクトル型において発光することができるものである。
【請求項１３５】
請求項１３４の方法において、
前記ポルフィナート画像化剤は、
【化４】
2007500192.tif 000014
に示される式の薬剤であり、
ここにおいて、Ｍは、金属或いはＨ２であり、Ｈ２は大環状の遊離リガンド形を意味しており、
ＲＡ及びＲＢは、それぞれ個別に、Ｈ、アルキル或いはＣ１〜Ｃ２０ヘテロアルキル、Ｃ６〜Ｃ２０アリル或いはヘテロアリル、Ｃ（ＲＣ）＝Ｃ（ＲＤ）（ＲＥ）、Ｃ＝Ｃ（ＲＤ）、或いはペプチド、ヌクレオシド、或いはサッカライドから成る化学官能基であり、ＲＣ、ＲＤ、及びＲＥはそれぞれ個別に、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル或いはＣ４〜Ｃ２０ヘテロアルキル、アリル或いはヘテロアリル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル或いはヘテロアルケニル、アルキニル或いはＣ２〜Ｃ２０ヘテロアルキニル、トリアルキルシリル、或いはポルフィリナートであり、
ｎは１〜１０の整数である。
【請求項１３６】
請求項１３４の方法において、
前記放射性剤は、少なくとも２つのポルフィリン部位を有するものであり、前記ポルフィリン部位は、少なくとも１つの不飽和部位から成る炭化水素架橋によって連結されるものである。
【請求項１３７】
請求項１３２の方法において、
少なくとも１つの放射性剤は、ポルフィセン、ルビリン（ｒｕｂｙｒｉｎ）、ロサリン（ｒｏｓａｒｉｎ）、ヘキサフィリン、サフィリン（ｓａｐｐｈｙｒｉｎ）、クロロフィル、クロリン、フタロシニン、ポルフィラジン、バクテリオクロロフィル、フェオフィチン、テキサフィリン大環状ベース化合物、或いはそれらの金属化誘導体を有するものである。
【請求項１３８】
請求項１３２の方法において、
少なくとも１つの放射性剤は、レーザー色素、フルオロフォア、ルモフォア（ｌｕｍｏｐｈｏｒｅ）、或いはリン光体である。
【請求項１３９】
請求項１３８の方法において、
少なくとも１つの放射性剤は、ｐ−テルフェニル、スルホローダミンＢ、ｐ−クアテルフェリン、ローダミン１０１、カルボスチリル１２４、クレシルバイオレット過塩素酸塩、ｐｏｐｏｐ、ＤＯＤＣヨウ化物、クマリン１２０、スルホローダミン１０１、クマリン２、オキソジン４過塩素酸塩、クマリン３３９、ＰＣＭ、クマリン１、オキサジン１７０過塩素酸塩、クマリン１３８、ナイルブルーＡ過塩素酸塩、クマリン１０６、オキサチン１過塩素酸塩、クマリン１０２、ピリジン１、クマリン３１４Ｔ、スチリル７、クマリン３３８、ＨＩＤＣヨウ化物、クマリン１５１．ＰＴＰＣヨウ化物、クマリン４、クリプトシアニン、クマリン３１４、ＤＯＴＣヨウ化物、クマリン３０、ＨＩＴＣヨウ化物、クマリン５００、ＨＩＴＣ過塩素酸塩、クマリン３０７、ＰＴＴＣヨウ化物、クマリン３３４、ＤＴＴＣ過塩素酸塩、クマリン７、ＩＲ−１４４、クマリン３４３、ＨＤＩＴＣ過塩素酸塩、クマリン３３７、ＩＲ−ＮＯ、クマリン６、ＩＲ−１３２、クマリン１５２、ＩＲ−１２５、クマリン１５３、ホウ素−ジピローメーテル（ｄｉｐｙｒｒｏｍｅｔｈｅｒｅ）、ＨＰＴＳ、フルオレッセイン、ローダミン１１０、２，７−ジクロロフルオレッセイン、ローダミン６５、及びローダミン１９過塩素酸塩、ローダミンｂであるレーザー色素であり、前記レーザー色素は、疎水性置換基の添加によって修飾され、前記レーザー色素は、実質的に前記ポリマーソーム膜内に存在するものである。
【請求項１４０】
請求項１３２の方法において、
少なくとも１つの前記放射性剤は、ジ−カルボシアニン及びトリカルボシアニン色素、クロコニウム色素、電子求引性置換基で置換されたチエニレンフェニレンビニレン種である近赤外（ＮＩＲ）放射性種であり、前記放射性種は、疎水性置換基の添加によって修飾され、前記レーザー色素は、実質的にポリマーソーム膜内に存在するものである。
【請求項１４１】
請求項１３２の方法において、
前記放射性剤の少なくとも１つは、少なくとも２つの共有結合を有する放射性共役化合物であり、前記化合物をエネルギー源に一時の間さらし、前記化合物が７００〜１１００ｎｍの波長で光を発するようにするために有効な条件下にさらすと、個々に共有結合した部位によって発された光の合計よりも大きい強度を有するものである。
【請求項１４２】
請求項１３２の方法において、
前記放射性剤の少なくとも１つは、少なくとも２つの共役結合部位を有する放射性共役化合物であり、前記化合物を前記化合物をエネルギー源に一時の間さらし、前記化合物が７００〜１１００ｎｍの波長で光を発するようにするために有効な条件下にさらすと、個々の前記部位の１つによる発光振動子強度顕性よりも大きい積分発光振動子強度を示すものである。
【請求項１４３】
請求項１３２の方法において、
前記標的部位は、抗体、抗体断片、或いは所定の受容体結合部位に特異的な物質を有するものである。
【請求項１４４】
請求項１４３の方法において、、
前記受容体結合部位、或いは標的部位は、受容体特異的ペプチド、炭化水素、タンパク質、脂質、ヌクレオシド、ペプチド核酸、或いはそれらの組み合わせを有するものである。
【請求項１４５】
請求項１３４の方法において、
前記親水性ポリマーは、ポリ（エチレンオキシド）、或いはポリ（エチレングリコール）を有するものである。
【請求項１４６】
請求項１４３の方法において、
前記親水性ポリマーは、ポリ（エチレンオキシド）を有するものである。
【請求項１４７】
請求項１４６の方法において、
複数の両親媒性のブロックコポリマーにおける前記親水性ポリマーの体積分率は、０．４０以下である。
【請求項１４８】
請求項１４５の方法において、
前記疎水性ポリマーは、ポリエチルエチレン、ポリ（１，２−ブタジエン）、ポリ（β−ベンジル−Ｌ−アスパラギン酸）、ポリ（乳酸）、ポリ（プロピレンオキシド）、ポリ（ε−カプロラクタム）、オリゴ−メタクリル酸、或いはポリスチレンを有するものである。
【請求項１４９】
請求項１４８の方法において、
前記疎水性ポリマーは、ポリエチルエチレン、或いはポリ（１，２−ブタジエン）である。
【請求項１５０】
請求項１３２の方法において、
前記両親媒性ブロックコポリマーは、ポリ（エチレンオキシド）−ポリエチルエチレン、ポリ（エチレンオキシド）−ポリ（ブタジエン）、ポリ（エチレンオキシド）−ポリ（ε−カプロラクトン）、或いはポリ（エチレンオキシド）−ポリ（乳酸）である。
【請求項１５１】
第２の放射体、細胞毒性剤、磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）剤、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）剤、放射性画像化剤、或いは光感作療法（ＰＤＴ）剤の少なくとも１つを付加的に有する、請求項１３２の方法。
【請求項１５２】
第２の放射体、細胞毒性剤、磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）剤、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）剤、放射性画像化剤、或いは光感作療法（ＰＤＴ）剤の少なくとも１つを付加的に有する、請求項１３２の方法であって、
前記放射体或いは薬剤は、水性ポリマーソーム内部の範囲内で区分化されるものである方法。
【請求項１５３】
診断或いは画像化のｉｎ  ｖｉｖｏ方法であって、
ポリマーソームを生物体内の組織と接触させる工程であって、前記ポリマーソームは、（ａ）複数の両親媒性コポリマーと、（ｂ）前記ポリマーソーム膜内に分離される少なくとも１つの可視−或いは近赤外−放射性剤と、（ｃ）前記ポリマーソームの表面に関連した少なくとも１つの標的部位とを有するものである投与する工程と、
光源、光検出器、或いはその両者と工学的に連結した装置を提供する工程と、
前記組織内の前記ポリマーソームの量をモニタリングするように前記装置を用いる工程と
を有する方法。
【請求項１５４】
請求項１５３の方法において、
前記両親媒性コポリマーは、両親媒性ブロックコポリマーであって、各両親媒性ブロックコポリマーは、少なくとも１つの疎水性ポリマーと連結した少なくとも１つの親水性ポリマーを有するものである。
【請求項１５５】
請求項１５４の方法において、
前記放射性剤は、ホルフィナート画像化剤である。
【請求項１５６】
請求項１５５の方法において、
前記ホルフィナート画像化剤は、β−β、メソ−β、或いはメソ−メソ連結トポロジーを特徴とするエチニル−あるいはブタジイニル−架橋マルチ（ポルフィリン）化合物であり、前記ポルフィナート画像化剤は、６００〜１１００ｎｍスペクトル型において発光することができるものである。
【請求項１５７】
請求項１５６の方法において、
前記ポルフィナート画像化剤は、
【化５】
2007500192.tif 000015
に示される式の薬剤であり、
ここにおいて、Ｍは、金属或いはＨ２であり、Ｈ２は大環状の遊離リガンド形を意味しており、
ＲＡ及びＲＢは、それぞれ個別に、Ｈ、アルキル或いはＣ１〜Ｃ２０ヘテロアルキル、Ｃ６〜Ｃ２０アリル或いはヘテロアリル、Ｃ（ＲＣ）＝Ｃ（ＲＤ）（ＲＥ）、Ｃ＝Ｃ（ＲＤ）、或いはペプチド、ヌクレオシド、或いはサッカライドから成る化学官能基であり、ＲＣ、ＲＤ、及びＲＥはそれぞれ個別に、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル或いはＣ４〜Ｃ２０ヘテロアルキル、アリル或いはヘテロアリル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル或いはヘテロアルケニル、アルキニル或いはＣ２〜Ｃ２０ヘテロアルキニル、トリアルキルシリル、或いはポルフィリナートであり、
ｎは１〜１０の整数である。
【請求項１５８】
請求項１５５の方法において、
前記標的部位は、抗体、抗体断片、或いは所定の受容体結合部位に特異的な物質を有するものである。
【請求項１５９】
請求項１５８の方法において、、
前記受容体結合部位、或いは標的部位は、受容体特異的ペプチド、炭化水素、タンパク質、脂質、ヌクレオシド、ペプチド核酸、或いはそれらの組み合わせを有するものである。
【請求項１６０】
請求項１５６の方法において、
前記親水性ポリマーは、ポリ（エチレンオキシド）、或いはポリ（エチレングリコール）を有するものである。
【請求項１６１】
請求項１６０の方法において、
前記親水性ポリマーは、ポリ（エチレンオキシド）を有するものである。
【請求項１６２】
請求項１６１の方法において、
複数の両親媒性のブロックコポリマーにおける前記親水性ポリマーの体積分率は、０．４０以下である。
【請求項１６３】
請求項１６０の方法において、
前記疎水性ポリマーは、ポリエチルエチレン、ポリ（１，２−ブタジエン）、ポリ（β−ベンジル−Ｌ−アスパラギン酸）、ポリ（乳酸）、ポリ（プロピレンオキシド）、ポリ（ε−カプロラクタム）、オリゴ−メタクリル酸、或いはポリスチレンを有するものである。
【請求項１６４】
請求項１６３の方法において、
前記疎水性ポリマーは、ポリエチルエチレン、或いはポリ（１，２−ブタジエン）である。
【請求項１６５】
請求項１５５の方法において、
前記両親媒性ブロックコポリマーは、ポリ（エチレンオキシド）−ポリエチルエチレン、ポリ（エチレンオキシド）−ポリ（ブタジエン）、ポリ（エチレンオキシド）−ポリ（ε−カプロラクトン）、或いはポリ（エチレンオキシド）−ポリ（乳酸）である。
【請求項１６６】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断方法であって、
ポリマーソームを単離細胞、細胞の混合物、或いは特定の細胞株と接触させる工程であって、前記ポリマーソームは、（ａ）複数の両親媒性コポリマーと、（ｂ）前記ポリマーソーム膜内に分離される少なくとも１つの可視−或いは近赤外−放射性剤と、（ｃ）前記ポリマーソームの表面に関連した少なくとも１つの標的部位とを有するものである投与する工程と、
光源、光検出器、或いはその両者と工学的に連結した装置を提供する工程と、
細胞表面−ポリマーソーム結合をモニタリングするように前記装置を用いる工程と
を有する方法。
【請求項１６７】
請求項１６６の方法において、
前記両親媒性コポリマーは、両親媒性ブロックコポリマーであって、各両親媒性ブロックコポリマーは、少なくとも１つの疎水性ポリマーと連結した少なくとも１つの親水性ポリマーを有するものである。
【請求項１６８】
請求項１６７の方法において、
前記標的部位は、癌細胞を標的とし、前記方法のリアルタイム癌検出に対する使用を可能にするものである。
【請求項１６９】
請求項１６７の方法において、
１以上の放射性剤が用いられ、各放射性剤は、異なる放射形跡（サイン）を有するものであり、さらに前記方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断用の複数の明確なバイオマーカーに対する優れたユニーク組織学的マーカーを製造する工程を有する。
【請求項１７０】
組織学的標識、細胞表面マーカーの分子分類、或いは新規統制治療戦略の開発の誘導するための方法であって、
ポリマーソームを単離細胞、細胞の混合物、或いは特定の細胞株と接触させる工程であって、前記ポリマーソームは、（ａ）複数の両親媒性コポリマーと、（ｂ）前記ポリマーソーム膜内に分離される少なくとも１つの可視−或いは近赤外−放射性剤と、（ｃ）前記ポリマーソームの表面に関連した少なくとも１つの標的部位とを有するものである投与する工程と、
光源、光検出器、或いはその両者と工学的に連結した装置を提供する工程と、
細胞表面−ポリマーソーム結合をモニタリングするように前記装置を用いる工程と
を有する方法。
【請求項１７１】
請求項１７０の方法において、
前記両親媒性コポリマーは、両親媒性ブロックコポリマーであって、各両親媒性ブロックコポリマーは、少なくとも１つの疎水性ポリマーと連結した少なくとも１つの親水性ポリマーを有するものである。
【請求項１７２】
少なくとも２つの共有結合部位を有する、可視−或いは近赤外‐放射性剤の発光特性を調節する方法であって、
前記放射性剤は、重合性物質内に存在し、前記結合部位の少なくとも１つは、補助置換基を有しており、前記置換基のサイズ及び化学的構造は、前記調節を提供するように選択されるものである方法。
【請求項１７３】
請求項１７２の方法において、
前記調節は、定常状態発光波長の調節である。
【請求項１７４】
請求項１７２の方法において、
前記調節は、前記放射性共役化合物の時間依存性放射動力学の調節である。
【請求項１７５】
請求項１７２の方法において、
前記放射性剤は、メソ−メソ、エチン−或いはブタジエン架橋トポロジー有するマルチ（ポルフィリン）画像化剤であり、前記画像化剤は、６００〜１１００ｎｍスペクトル型において発光することができるものである。
【請求項１７６】
請求項１７２の方法において、
前記放射性剤は、ポルフィセン、ルビリン（ｒｕｂｙｒｉｎ）、ロサリン（ｒｏｓａｒｉｎ）、ヘキサフィリン、サフィリン（ｓａｐｐｈｙｒｉｎ）、クロロフィル、クロリン、フタロシニン、ポルフィラジン、バクテリオクロロフィル、フェオフィチン、テキサフィリン大環状ベース化合物、或いはそれらの金属化誘導体を有するものである。
【請求項１７７】
請求項１７２の方法において、
前記放射性剤は、レーザー色素、フルオロフォア、ルモフォア（ｌｕｍｏｐｈｏｒｅ）、或いはリン光体である。
【請求項１７８】
請求項１７２の方法において、
前記放射性剤は、少なくとも２つの共有結合部位を有し、前記化合物をエネルギー源に一時の間さらし、前記化合物が７００〜１１００ｎｍの波長で光を発するようにするために有効な条件下にさらすと、個々に共有結合した部位によって発された光の合計よりも大きい強度を有するものである。
【請求項１７９】
請求項１７２の方法において、
前記放射性剤は、少なくとも２つの共役結合部位を有し、前記化合物を前記化合物をエネルギー源に一時の間さらし、前記化合物が７００〜１１００ｎｍの波長で光を発するようにするために有効な条件下にさらすと、個々の前記部位の１つによる発光振動子強度顕性よりも大きい積分発光振動子強度を示すものである。
【請求項１８０】
請求項１７２の方法において、
放射性種を定義する前記共有結合部位は、エチニル、エテニル、アレニル、ブタジニル、ポリビニル、チオフェニル、フラニル、ピロリル、或いはｐ−ジエチリルアレニル架橋剤によって、若しくは、ジエチニル、ジ（ポリイニニル）、ジビニル、ジ（ポリビンビル）、或いはジ（チオフェニル）置換基を有する共役へテロ環によって連結されるものである。
【請求項１８１】
請求項１７２の方法において、
前記重合性物質は、複数の両親媒性コポリマーである。
【請求項１８２】
請求項１７２の方法において、
前記放射性共役化合物を有する結合部位の少なくとも１つ上の前記補助置換基は、アルキル、アルコキシ、アリル、或いはエーテルである。
【請求項１８３】
請求項１７２の方法において、
前記放射性共役化合物を有する結合部位の少なくとも１つ上の前記補助置換基は、それぞれ独立して、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｒ’、−Ｏ−（ＣＨ２）−（Ｏ（ＣＨ２））ｘＲ、或いは−Ｏ−（ＣＨ２）ｐＣＲＯＨであり、ｍ及びｐはそれぞれ独立して１〜１０の整数であり、ｘは１〜１２の整数であり、Ｒ’はＣ１〜Ｃ２０アルキル或いはＣ５〜Ｃ２０アリルである。
【請求項１８４】
請求項１７２の方法において、
前記放射性共役化合物を有する結合部位の少なくとも１つ上の前記補助置換基は、アリル或いは置換されたアリルである。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連文献
本出願は、２００３年５月２２日に出願された米国仮出願番号第６０／４７３，１２４号に対して優先権を主張するものある、２００３年７月２５日に出願された米国仮出願第６０／４９０，１７８号及び２００４年２月１２日に出願された米国特許番号第１０／７７７，５５２号に対して優先権を主張するものである。
【０００２】
技術分野
本発明は、ポリマー、造影剤、及び標的部位の組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００３】
天然由来脂質から成るリポソームは、生物体内へ様々な薬剤を運搬するために使用されていた。最近の研究は、いくつかの観点ではリポソームと類似した機能を有する、ポリマーソームなどの合成組成物に向けられていた。脂質のような特定のポリマーシステムは、それらの基礎要素が水性培地（ａｑｕｅｏｕｓ  ｍｅｄｉａｌ）に配置された場合、自然に閉鎖構造を形成する。しかしながらポリマーソームは、少なくとも１つのブロックは疎水性であり、少なくとも１つのブロックは親水性である両親媒性ジブロック及びマルチブロックコポリマーを用いて製造される小胞である。特に、これらのジブロック及びマルチブロックコポリマーは、水性培地に設置された場合、厚肉小胞を形成できる。ポリマーソームは、リポソームに共通した多くの技術（Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｖｏｌ．７３，ｎｏ．２，Ａｐｒｉｌ  ２０，２００１）によって、安定的に調製され得る。フィルム再水和、超音波処理、及び放出などの過程は、多ミクロン巨大小胞、及び１００ナノメートルの直径を有する単分散小胞を産生することができる。
【０００４】
ＰＥＯ−ＰＥＥ（ポリエチレンオキシド−ポリエチルエチレン）或いはＰＥＯ−ＰＢＤ（ポリエチレンオキシド−ポリブタジエン）の特定の小胞は、リポソームと比べて改善された安定性を示す圧肉（例えば、約１００ｎｍ厚）小胞を形成することが知られている。例えば、Ｈｉｌｌｍｅｙｅｒ  ａｎｄ  Ｂａｔｅｓ（Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  １９９６；２９：６９９４〜７００２）によって導入されたＰＥＯ−ＰＥＥジブロックであって、特にＥＯ４０−ＥＥ３７（ＯＥ７と命名され、ＥＯはエチレンオキシドモノマーであり、ＥＥはエチルエチレンモノマーである）は、あらゆる天然脂質膜と比較して非常に厚い膜へ自己組織することが示され、これらは大規模である或いはより頑丈であり、従って、より大きな機械的安定性を示すものである（Ｄｉｓｃｈｅｒ  ＢＭ，Ｗｏｎ  Ｙ−Ｙ，Ｅｇｅ  ＤＳ，  Ｌｅｅ  ＪＣ−Ｍ，Ｂａｔｅｓ  ＦＳ，Ｄｉｓｃｈｅｒ  ＤＥ，Ｈａｍｍｅｒ  ＤＡ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９９；２８４：１１４３〜１１４６）。
【０００５】
それらのポリエチレン−オキシド（ＰＥＯ）頭部基に起因した増大した化学安定性は、生体適合性、血漿における構造整合性、及び長期ｉｎ  ｖｉｖｏ循環時間を生じる"ステルス"様形質を与える（Ｐ．Ｊ．Ｐｈｏｔｏｓ，Ｌ．Ｂａｃａｋｏｖａ，Ｂ．Ｄｉｓｃｈｅｒ，Ｆ．Ｓ．Ｂａｔｅｓ，Ｄ．Ｅ．Ｄｉｓｃｈｅｒ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｊｕｌ  ３１，２００３；９０，３２３〜３３４）。新規ＰＥＯ−ＰＢＤジブロックであるＥＯ２６−ＥＥ４６（ＯＢ２と命名され、ＥＯはエチレンオキシドモノマーであり、ＤＢはブタジエンモノマーである）も、小胞を産生できることが示された。ＯＥ７及びＯＢ２の両方は、あらゆる天然膜形成両親媒性物質よりもはるかに大きい、数ｋＤａを超えた平均分子量を有する。
光学ベースの方法は、それらの優れた潜在的空間解像度、低エネルギー蛍光灯の固有な生物学的安全性、及び安価な移動性励起及び検出源の連続した開発に起因した、新しく魅力的なｉｎ  ｖｉｖｏ画像化モダリティー（様式）を構成する（Ｒ．Ｗｅｉｓｓｌｅｄｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．１９，３１６〜７（２００１））。可視プローブは、生体内顕微鏡観察によって生きた動物の画像化を可能にするが（Ｒ．Ｋ．Ｊａｉｎ，Ｌ．Ｌ．Ｍｕｎｎ，Ｄ．Ｆｕｋｕｍｕｒａ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ．Ｃａｎｃｅｒ．２，２６６〜７６（２００２））、それらの有用性は、過度の光散乱及び光学吸収に起因して、より深いサブ−ミリメーター組織で著しく限定される。可視スペクトルにおける光錯乱は、波長の４乗の逆数（λ−４）で減少し、ヘモグロビンの電子及び水振動性倍音吸収は、近赤外（ＮＩＲ）スペクトルドメイン（７００〜９５０ｎｍ）を超えてそれらの底に近づくので（Ｂ．Ｃｈａｎｃｅ，ｉｎ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｐｓｙ  ａｎｄ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｍａｍｍｏｇｒａｐｈｙ．（１９９８），ｖｏｌ．８３８，ｐｐ．２９〜４５）、ｉｎ  ｖｉｖｏ画像化適用に対するＮＩＲ光を用いたシステムを開発するために相当な努力が費やされた（Ｖ．Ｎｔｚｉａｃｈｒｉｓｔｏｓ，Ａ．Ｇ．Ｙｏｄｈ，Ｍ．Ｓｃｈｎａｌｌ，Ｂ．Ｃｈａｎｃｅ，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ．９７，２７６７〜７２（２０００）  ａｎｄ  Ｒ．Ｗｅｉｓｓｌｅｄｅｒ，Ｖ．Ｎｔｚｉａｃｈｒｉｓｔｏｓ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．９，１２３〜８（２００３））。
【０００６】
ポルフィリン、クロロフィル、プルプリン、テトラピロール、ポリピロール構造に基づいた大員環、及びそれらのメタレート化誘導体などの分子、さらにはフラーレンなどの分子は、腫瘍などの標的組織に対する造影剤として働くことができる。生物体へのこれらの造影剤の投与は、周辺組織に対する多くの病状における前記造影剤の選択的局在化を生じる。特定の波長の光を用いた前記生物体の照射は、前記造影剤による光の吸収を導くことができ、いくつかの場合において、前記造影剤による蛍光或いはリン光を導くことができる。この吸収／発光過程は、前記標的組織と前記周辺組織との間にコントラストを生じさせる。このコントラストの検出は、前記標的化された組織の画像化を可能にする。
【０００７】
標的特異的及び局所的活性ＮＩＲ−放射性プローブの構築において、著しい進歩があった（Ｒ．Ｗｅｉｓｓｌｅｄｅｒ，Ｃ．Ｈ．Ｔｕｎｇ，Ｕ．Ｍａｈｍｏｏｄ，Ａ．Ｂｏｇｄａｎｏｖ，Ｊｒ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．１７，３７５〜８（１９９９）；Ｓ．Ａｃｈｉｌｅｆｕ，Ｒ．Ｂ．Ｄｏｒｓｈｏｗ，Ｊ．Ｅ．Ｂｕｇａｊ，Ｒ．Ｒａｊａｇｏｐａｌａｎ，Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ  ３５，４７９〜４８５（Ａｕｇ，２０００）；Ａ．Ｂｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．１９，３２７〜３１（２００１）；Ａ．Ｚａｈｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．１９，１１４８〜５４（２００１））、適切な感受性を有する造影剤の開発及び運搬には、深部組織における蛍光ベース分子画像化の実現に対する大きな技術的なハードルが残っている。
【発明の開示】
【発明の効果】
【０００８】
いくつかの観点において、本発明は、（ｉ）複数の両親媒性コポリマー、及び（ｉｉ）ポリマーソーム膜内に分散された少なくとも１つの可視−或いは近赤外−放射性因子を有するポリマーソームに関するものである。いくつかの組成物において、前記放射性因子は、好ましくは７００〜１１００ｎｍスペクトル型における光を放つものである。これらの特定の組成物において、前記放射性因子は、ポルフィリン由来構造に基づくものである。
【０００９】
いくつかの実施形態において、本発明は、ｉ）複数の両親媒性ブロックコポリマーであって、各両親媒性ブロックコポリマーは、少なくとも１つの疎水性ポリマーに結合した少なくとも１つの親水性ポリマーを有するものである、両親媒性ブロックコポリマー、及び（ｉｉ）ポリマーソーム膜内に分散された少なくとも１つの可視−或いは近赤外−放射性因子を有するポリマーソームに関するものである。いくつかの組成物において、前記放射性因子は、好ましくは、７００〜１１００ｎｍスペクトル型における光を放つものである。特定のこれらの組成物において、前記放射性因子は、ポリフィリン由来構造に基づくものである。
【００１０】
本発明において有用な特定の放射性因子は、ポリフィセン−、ルビリン−、ロサリン−ヘキサフィリン−、サッフィリン−、クロロフィル−、塩素（クロリン）−、フタロシアニン−、ポルフィラジン−、バクテリオクロロフィル−、フェオフィチン−、或いはテキサフィリン−ベースの大環状ベース構成成分、若しくはそれらのメタレート化誘導体を特徴とするものである。特定の他の組成物において、前記放射性因子は、レーザー色素、フルオロフォア、ルモフォア（ｌｕｍｏｐｈｏｒｅ）、或いはリン光体である。好ましいレーザー色素は、ｐ−テルフェニル、スルホロダミンＢ（ｓｕｌｆｏｒｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｂ）、ｐ−クウェテルフェニル（ｐ−ｑｕａｔｅｒｐｈｅｎｙｌ）、ローダミン１０１、カーボスチリル１２４（ｃｕｒｂｏｓｔｙｒｙｌ  １２４）、クレシルバイオレット過塩素酸、ｐｏｐｏｐ、ＤＯＤＣヨウ素、クマリン１２０、ＰＭＣ、クマリン１、オキサジン１７０過塩素酸、クマリン１３８、ナイルブルーＡ過塩素酸、クマリン１０６、オキサチン１過塩素酸、クマリン１０２、ピリジン１、クマリン３１４Ｔ、スチリル３３８、ＨＩＤＣヨウ素、クマリン１５１、ＰＴＰＣヨウ素、クマリン４、クリプトシアニン、クマリン３１４、ＤＯＴＣヨウ素、クマリン３０、ＨＩＴＣヨウ素、クマリン５００、ＨＩＴＣ過塩素酸、クマリン３０７、ＰＴＴＣヨウ素、クマリン３３４、ＤＴＴＣ過塩素酸、クマリン７、ＩＲ−１４４、クマリン３４３、ＨＤＩＴＣ過塩素酸、クマリン３３７、ＩＲ−ＮＯ、クマリン６、ＩＲ−１３２、クマリン１５２、ＩＲ−１２５、クマリン１５３、ホウ素−ｄｉｐｙｒｒｏｍｅｔｈｅｒｅ、ＨＰＴＳ、フルオレセイン、ローダミン１１０、２，７−ジクロロフルオレセイン、ローダミン６５、及びローダミン１９過塩素酸、ローダミンｂを含み、前記レーザー色素は、疎水性置換基の付加によって修飾され、前記色素を前記ポリマーソーム膜内で実質的に可溶性にするものである。
【００１１】
特定の組成物において、前記放射性因子は、ジ−およびトリカルボシアニン色素、クロコニウム色素、電子求引置換基によって置換されたチエニレンフェニレンビニレン種、などの近赤外（ＮＩＲ）放射性種であり、前記放射性種は、疎水性置換基の付加によって修飾され、前記色素を前記ポリマーソーム膜内で実施知的に可溶性にするものである。
【００１２】
他の組成物において、前記放射性因子は、少なくとも２つの共有結合部位；それによって、前記化合物が波長７００〜１１００ｎｍの間で光を放つようにするのに有効な時間と条件下で、前記化合物をエネルギー源に曝した放射性共役化合物であり、個々の共有結合部位によって、及び／若しくは発光振動子強度よりも大きな、個々の部位の１つによって明らかにされた複合的な発光振動子強度によって放たれた光の合計よりも大きな強度を有するものである。特定のこれらの放射性種において、前記共有結合部位は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合、炭素−炭素三重結合、或いはそれらの組み合わせによって連結されている。いくつかの実施形態において、前記放射性種を定義する前記共有結合部位は、エチニル、エテニル、アレニル、ブタジニル、ポリビニル、チオフェニル、フラニル、ピロリル、或いはｐ−ジエチリルアレニルリンカーによって連結されている、若しくは、ジエチニル、ジ（ポリイニニル）、ジビニル、ジ（ポリビンビル）、或いはジ（チオフェニル）置換基を生じる共役ヘテロ環によって連結されているものである。他の実施形態において、前記放射性種を定義する前記共有結合部位は、少なくとも１つのイミン、フェニレン、チオフェン或いはアミド、エーテル、チオエーテル、エステル、ケトン、スルホン、或いはカルボジイミド基によって連結されている。
【００１３】
特定の組成物において、ポルフィネート造影剤が用いられる。これらの造影剤は、β−β、メソ−β、或いはメソ−メソ結合形態を特徴付ける、エチニル−或いはブタジニル−架橋複合（ポリフィリン）化合物を含み、前記ポルフィネート造影剤は、６００〜１１００ｎｍスペクトル型で発光することができるものである。いくつかのポルフィリンベース造影剤は、以下の化学式：
【００１４】
【化６】
2007500192.tif 000003
【００１５】
ここにおいて、Ｍは金属或いはＨ２であり、Ｈ２は大環状分子の遊離リガンド形態を表し；ＲＡ及びＲＢはそれぞれ個別に、Ｈ、アルキル、若しくはＣ１〜Ｃ２０ヘテロアルキル、Ｃ６〜Ｃ２０アリル或いはヘテロアリルＣ（ＲＣ）＝Ｃ（ＲＤ）（ＲＥ）、Ｃ＝Ｃ（ＲＤ）或いはペプチド、ヌクレオシド或いはサッカライドを有する化学機能基であり、ここでＲＣ、ＲＤ、及びＲＥはそれぞれ個別に、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｃ１〜Ｃ２０アリル或いはＣ４〜Ｃ２０ヘテロアルキル、アリル或いはヘテロアリル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル或いはヘテロアルケニル、アルキニル或いはＣ２〜Ｃ２０ヘテロアルキニル、トリアルキルシリル、或いはポルフィリネートであって、ｎは、１〜１０の整数であるものである。特定の組成物において、ｎは１〜８の整数である。別の組成物において、ｎは１〜４の整数である。いくつかの好ましいポルフィリン−ベース造影剤において、Ｍは、亜鉛、マグネシウム、白金、パラジウム、或いはＨ２であり、Ｈ２は大環状分子の遊離リガンド形態を表している。別の組成物において、Ｍは好ましくは亜鉛である。
【００１６】
いくつかの好ましい実施形態において、前記ポルフィリン−ベース造影剤は、放射性である。特定のマルチ（ポルフィリン）造影剤は、メソ−メソエチン−あるいはブタジエン−架橋結合トポロジーを特徴付け、６００〜１１００ｎｍスペクトル型において発光することができる。
【００１７】
いくつかの好ましい実施形態において、前記ポリマーソームは、生体吸収性である。特定の実施形態において、前記ポリマーソームは、ｉｎ  ｖｉｖｏでの使用のために、米国食品医薬品局によって認可されたブロックポリマー構成成分を含む。
【００１８】
前記ポリマーソームは、単一な両親媒性ブロックコポリマーを有するものである。他の実施形態において、１以上の両親媒性ブロックコポリマーは、前記ポリマーソームに含まれる。特定の実施形態において、両親媒性ブロックコポリマーは、１つの疎水性ポリマーと１つの親水性ポリマーとを有する。他の実施形態において、前記両親媒性ブロックコポリマーは、２つの末端親水性ポリマー及び１つの疎水性ポリマー内部ポリマーからなるトリブロックポリマーである。他の両親媒性ブロックコポリマーは、２つの親水性ポリマーブロック及び２つの疎水性ポリマーブロックからなるテトラブロックポリマーである。特定のテトラブロックは、末端親水性ポリマーブロック及び内部疎水性ポリマーブロックを有する。他の両親媒性ブロックコポリマーは、２つの親水性ポリマーブロック及び３つの疎水性ポリマーブロックからなるペンタブロックポリマーである。他のペンタブロックは、３つの親水性ポリマーブロック及び２つの疎水性ポリマーブロックを有している。他のペンタブロックは、４つの親水性ポリマーブロック及び１つの疎水性ポリマーブロックを有している。他の実施形態において、前記両親媒性ブロックコポリマーは、少なくとも６つのブロックを有しており、それらの少なくとも２つは親水性ポリマーブロックである。
【００１９】
いくつかの好ましい実施形態において、前記親水性ポリマーは、実質的に水に可溶である。特定の好ましい親水性ポリマーは、ポリ（エチレンオキシド）或いはポリ（エチレングリコール）である。
【００２０】
いくつかのポリマーソームは、両親媒性コポリマーを有しており、その親水性ポリマーは、イオン的に重合可能な極性モノマーから選択された重合ユニットを有しているものである。特定のこれらのポリマーソームにおいて、前記イオン的に重合可能な極性モノマーは、アルキルオキシドモノマーを有する。いくつかの実施形態において、前記アルキルオキシドモノマーは、エチレンオキシド、プロピレンオキシド、或いはそれらのあらゆる組み合わせである。いくつかの好ましい実施形態において、前記親水性ポリマーは、ポリ（エチレンオキシド）を有するものである。他の好ましい実施形態において、複数の両親媒性ブロックコポリマーにおける前記親水性ポリマーの体積分率は、０．４０かそれ以下である。
【００２１】
いくつかのポリマーソームは、両親媒性コポリマーを有し、その疎水性ポリマーは、実質的に水に不溶性であるとして特徴付けられる。特定のこれら疎水性ポリマーは、ポリエチルエチレン、ポリ（ε−カプロラクタム）、オリゴ−メタクリル酸、或いはポリスチレンを有する。特定の好ましい実施形態において、前記疎水性ポリマーは、ポリエチルエチレン或いはポリ（ブタジエン）を有するものである。他の組成物は、エチレン的に不飽和なモノマーから選択された重合ユニットの疎水性ポリマーを有するものである。いくつかの実施形態において、前記エチレン的に不飽和なポリマーは、炭水化物である。
【００２２】
特定の実施形態において、前記ポリマーソームは、ポリエチレンオキシドポリマーブロックとの組み合わせで使用される、疎水性ポリカプロラクトン、ポリラクチド、ポリグリコリド、或いはポリメチレン炭酸ポリマーブロックを含む。他の組成物において、前記ポリマーソームは、対応するポリエチレンオキシドポリマーブロックとの組み合わせにおいて使用される、疎水性ポリカプロラクトン、ポリラクチド、ポリグリコリド、或いはポリメチレン炭酸ポリマーブロックを含む。
【００２３】
いくつかのポリマーソームにおいて、前記両親媒性ブロックコポリマーは、ポリマー（エチレンオキシド）−ポリエチルエチレン、ポリ（エチレンオキシド）−ポリ（ブタジエン）、ポリ（エチレンオキシド）−ポリ（ε−カプロラクトン）、或いはポリ（エチレンオキシド）−ポリ（乳酸）である。
【００２４】
いくつかの実施形態において、前記ポリマーソーム膜を有する前記マルチブロックポリマーは、架橋（クロスリンク）され、放射性フルオロフォアはその中に包埋される。他の実施形態において、生物学的実体は、ポリマー、細胞骨格分子、リン酸化、脱リン酸化、アミド化、アセチル化、エノール化を誘導できるシグナル伝達分子、及び他の生物分子の化学的変換を引き起こすことができる酵素を含む、前記ポリマーソームの内部コア内に取り込まれる。他の実施形態において、前記ポリマーソームは、その膜の組成物を通じて、別のポリマーソーム、リポソーム、細胞のそれらを溶解する或いは融合するように設計され、それによってその内容物を前記標的誘導物体の内部コアへ或いは標的誘導物の膜へ移し、融合される前記実体を有する素生物における化学的変換或いは変化に影響を及ぼすものである。
【００２５】
特定のポリマーソームは、ブロックコポリマーではない両親媒性物質を有することができる。これらは、脂質、リン脂質、ステロイド、コレステロール、直鎖アルコール、ペプチド、ヌクレオチド、糖類、或いは界面活性物質を含む。
【００２６】
いくつかのポリマーソームは、両親媒性ポリマーを含み、これは異なるポリマーを有する二本鎖を付着することによって作られる。いくつかの組成物において、前記両親媒性コポリマーは、フリーラジカルイニシエーション（開始）、アニオン重合、ペプチド合成、或いは転移ＲＮＡを用いたリボソーム合成によって作られたポリマーを有する。
【００２７】
いくつかの観点において、本発明は、（ｉ）複数の両親媒性ブロックコポリマーであって、それぞれの前記両親媒性ブロックコポリマーは、少なくとも１つの疎水性ポリマーに結合した少なくとも１つの親水性ポリマーを有するものである、両親媒性ブロックコポリマー、（ｉｉ）ポリマーソーム膜内で分離された少なくとも１つの可視−あるいは近赤外−放射性因子、及び（ｉｉｉ）前記ポリマーソームの表面に関連した少なくとも１つの標的部位を有するポリマーソームに関するものである。特定の実施形態において、前記標的部位は、生物学的位置に特異的に結合する。特定の好ましい実施形態において、前記標的部位は、生理学的条件下において、生物学的位置に特異的に結合する。
【００２８】
いくつかの実施形態において、前記標的部位は、抗体、抗体断片、或いは所定の受容体結合部位に対して特異的な物質を有する。別の実施形態において、前記リガンド、或いは標的部位は、受容体特異的ペプチド、糖、タンパク質、脂質、ヌクレオチド、ペプチド核酸、或いはそれらの組み合わせを有する。更なる実施形態において、前記リガンド或いは標的部位は、有機化合物である。
【００２９】
特定のポリマーソームは、治療剤を付加的に有する。他のポリマーソームは、１若しくはそれ以上の異なる放射性種を付加的に有するものである。いくつかの実施形態において、前記ポリマーソームは、二次エミッター（放射体）、細胞傷害性物質、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）因子、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）因子、放射線画像剤、超音波因子、或いは光線力学的治療（ＰＤＴ）因子を付加的に有する。いくつかの実施形態において、前記ポリマーソームは、二次エミッター、細胞傷害性物質、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）因子、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）因子、放射線画像剤、強磁性因子、或いはフェリ磁性因子の少なくとも１つを付加的に有するものであって、前記エミッター或いは因子は、水溶性ポリマーソーム内部内に区分化されているものである。
【００３０】
本発明は、組織或いは生物体の生物学的位置に因子を送達する方法にも関するものであり、この方法は、前記因子を有し、（ａ）複数の両親媒性ブロックコポリマーであって、それぞれの前記両親媒性ブロックコポリマーは少なくとも１つの疎水性ポリマーと連結した少なくとも１つの親和性ポリマーを有するものである、両親媒性ブロックコポリマー、（ｂ）前記ポリマーソーム膜内に分散された、少なくとも１つの可視−あるいは近赤外−放射性因子、及び（ｃ）前記ポリマーソームに関連した少なくとも１つの標的部位を有する、ポリマーソームを前記組織或いは生物体へ投与する工程を含むものである。
【００３１】
いくつかの実施形態において、本発明は、生物体或いは組織における病状の存在或いは非存在を確認する方法にも関するものであり、この方法は、ポリマーソームを患者へ投与する工程であって、前記ポリマーソームは、（ａ）複数の両親媒性ブロックコポリマーであって、それぞれの前記両親媒性ブロックコポリマーは少なくとも１つの疎水性ポリマーと連結した少なくとも１つの親和性ポリマーを有するものである、両親媒性ブロックコポリマー、（ｂ）前記ポリマーソーム膜内に分散された、少なくとも１つの可視−あるいは近赤外−放射性因子、及び（ｃ）前記ポリマーソームの表面に関連した少なくとも１つの標的部位を有するものである、ポリマーソームを患者へ投与する工程と、光源、光検出器、或いはその両方と任意に連結した装置を提供する工程と、前記生物体或いは組織内のフォアフィネート（ｐｈｏｒｐｈｉｎａｔｏ）造影剤の量或いは分布をモニタリングするために前記装置を作動する工程とを有するものである。
【００３２】
さらなる他の実施形態において、本発明は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断方法に関するものであり、この方法は、単離された細胞、細胞の混合物、或いは特異的な細胞株とポリマーソームを接触させる工程であって、前記ポリマーソームは（ａ）複数の両親媒性ブロックコポリマーであって、それぞれの前記両親媒性ブロックコポリマーは少なくとも１つの疎水性ポリマーと連結した少なくとも１つの親和性ポリマーを有するものである、両親媒性ブロックコポリマー、（ｂ）前記ポリマーソーム膜内に分散された、少なくとも１つの可視−あるいは近赤外−放射性因子、及び（ｃ）前記ポリマーソームの表面に関連した少なくとも１つの標的部位を有するものである、接触させる工程と、光源、光検出器、或いはその両方と任意に連結した装置を提供する工程と、細胞表面−ポリマーソーム結合をモニタリングするために前記装置を使用する工程とを有するものである。
【００３３】
本発明は、少なくとも２つの共有結合部位を有し、前記放射性因子は高分子材料内に存在するものである、可視−或いは近赤外−放射性因子の発光特性を調節する方法にも関するものであり、この方法において、少なくとも１つの結合部位は、補助置換基を有しており、前記置換基のサイズ及び化学構造は、調節を提供するように選択されるものである。いくつかの実施形態において、前記調節は、安定状態発光波長の調節である。他の実施形態において、前記調節は、前記放射性共役化合物の時間依存性発光力学の調節である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３４】
特定の観点において、本発明は、それらの疎水性膜に蛍光団を含む両親媒性のブロックコポリマーから成るポリマーソームに関するものである。好適ないくつかのポリマーソームは、約５０ｎｍ〜約５０μｍまでの範囲の直径を有する。加えて、いくつかの好適な実施形態において、前記ポリマーソーム表面は、選択性を改良するために生物学的部位によって修飾されるものである。これらのポリマーソームは、細胞、体液及び改変新規遺伝子産物のための腫瘍試験片からサンプル物質を探索するためにｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏで使用することができる。前記ポリマーソームおよび少量で存在する生体分子のまれな変異体の間の特異的相互作用は、識別され、前記ポリマーソーム膜から生じるユニークな光学シグナルによって、効果的に単離されることができる。その上、ナノメータサイズのポリマーソームは、近赤外（ＮＩＲ）蛍光団をカプセル化している充分に生体吸収性ポリマーから成っており、独自に発現した／患者特異的バイオマーカを標的とするように修飾されるており、さらに、ｉｎ  ｖｉｖｏでタンパク質の機能及び遺伝子経路、及び前臨床的に活性或いは残存性疾患を標識している細胞の存在をモニタリングするために用いられ得る。
【００３５】
いかなる蛍光性シグナルの振幅（大きさ）は、局所的蛍光団濃度、蛍光団当たりの発光双極子強度、および局所的励起の程度に依存する。このような発光性シグナルは、付加的な非放射性減衰経路を導く発色団−発色団及び発色団−局所的環境の相互作用によって減弱される、若しくは新しい低励起非放射性電子状態を引き起こす。それゆえに、蛍光団光物理学を最適化し、平均蛍光団−蛍光団空間的分離を調節し、適切な大きさのエミッターのペイロードを特異的な部分に送達することは、ｉｎ  ｖｉｖｏ画像化適用のための新規な光ビーコンを設計するときに、同時に取り組まなくてはならない全ての難問である。更に、生体適合性の蛍光団送達プラットフォームは、適切な長期循環時間を有する生理学的に安定であるだけでなく、高度に血管新生化された組織を通過するために小さく変形可能でなくてはならない。本発明の組成物は、これらの要求を達成し、深組織の光学画像化プラットフォームを提供する。
【００３６】
それらの構成成分コポリマー・ブロックの構造に依存して、ポリマーソーム膜は、天然リン脂質から成るリポソームのそれら（３〜４ｎｍ）と比べると、かなり厚い（９〜２２  ｎｍ）（Ｈ．  Ｂｅｒｍｕｄｅｚ，  Ａ．  Ｋ．  Ｂｒａｎｎａｎ，  Ｄ．  Ａ．  Ｈａｍｍｅｒ，  Ｆ．  Ｓ．  Ｂａｔｅｓ，  Ｄ．  Ｅ．  Ｄｉｓｃｈｅｒ，  Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ３５，  Ｏｃｔ  ８，  ２００２；８２０３〜８２０８を参照のこと）。合成小胞のこれらの厚い膜は、莫大な機械的安定度だけではなく、我々がここに説明するように、可溶化するために十分なサイズ、及び大量な疎水性化合物を安定して取り入れるために、充分なサイズを提供する。小胞合成両親媒性の細胞構築ブロックのサイズに従い、いかなるサイズ及び分子量の疎水性化合物は、容易にポリマーソーム膜に取り入れられることができる。大きい（サイズで２ｎｍ以上で、分子量でＩＩｃｄである）疎水性化合物（ポルフィリン・ダイマー、三量体、四量体、五量体のような）は、リン脂質から成る自然の大きさの膜において適応されることができない。
【００３７】
ポリマーソーム
ポリマーソームは、一般的に共有結合性ポリマーブロックの組成物においてとは異なっている２つ以上のポリマーブロックから成る高分子であるブロックコポリマーを用いて構成される。ジブロックコポリマーは、従来、組成物において異なっている２つの共有結合性ポリマーブロックから成る。両親媒性のブロックコポリマーにおいて、２つのブロックは、水との非常に異なる相互作用を有する。両親媒性のジブロックコポリマーは、一般に水に可溶性の１つのブロック、および本質的に水に不溶性な他のブロックを有する。
【００３８】
広範囲の生体分解性及び生物適合性ポリマーは、ポリマーソームのポリマー断片として潜在的に利用されることができる。これらは、以下の「＊」で示されたＦＤＡに承認された生分解性高分子：＊ポリグリコリド（ＰＧＡ）、＊ポリラクチド（ＬＰＬＡおよびＤＰＬＡ）、＊ポリカプロラクトン、＊ポリジオキサノン（ＰＤＳのＰＤＯ）、＊ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＧＡ−ＬＰＬＡ）、＊ポリアンハイドライド、＊ポリオルトエステル、＊ポリ（アミノ酸）及び「偽」−ポリ（アミノ酸）、＊ポリヒドロキシブチレート（ＰＨＢ）、＊ポリヒドロキシバレレート（ＰＨＶ）；ポリシアノアクリレート、ポリホスファゼン、ポリホスホネート、ポリイミノカルボネート、ポリアミン、ポリオレフィン、ポリスチレン、ポリオキシエチレン、熱硬化性樹脂アミノタンパク質、多糖、ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）、ポリ四フッ化エチレン（ＰＴＦＥ）、ポリウレタン、ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）、ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）、ポリエステル、ナイロン、リグニン−ベース生分解性ポリマー、ダイズからの生分解性ポリマー、大豆タンパク質−ベースプラスチック、とうもろこしからの充填剤、合成遺伝子に基づくポリマー、およびポリヒドロキシアルカノエートなどの細菌的に産生されたポリマーを含む。生体分解性ポリマーソームは、いくつかの刊行物において議論されている（Ｍｅｎｇ、ｅｔ．  ａｌ．、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ３６、２００３；３００４．  Ｆ．  Ｎａｊａｆｉ、Ｍ．  Ｎ．  Ｓａｒｂｏｌｏｕｋｉ、Ｂｉｏｍａｔｅｒａｌｓ  ２４、Ｍａｒ，２００３；  １１７５〜１１８２）。
【００３９】
いくつかの実施形態において、前記親水性ポリマーブロックは、グリシンを水から同じ無極性溶媒まで転移するための自由エネルギー変化と関連して、、水から無極性溶媒（例えば、ヘキサン、シクロヘキサン、ペンタンまたはトルエン）まで転移するポジティブ自由エネルギー変化を有する組成物として特徴付けられる（Ｒａｄｚｉｃｋａ、Ａ．&Ｗｏｌｆｅｎｄｅｎ，Ｒ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔ７ｙ  ２６、１６６４（１９８８）を参照のこと）。いくつかの親水性ポリマーは、イオン的に重合された極性ユニットから成る。イオン的に重合されたポリマーは、１若しくはそれ以上のアルキルオキシドモノマーのユニットから誘導されることができる。特定の実施形態において、前記アルキルオキシドモノマーは、エチレンオキシド、プロピレンオキシド、またはそれらの組み合わせでありえる。特に好適な実施形態において、前記親水性ポリマーブロックは、ポリ（エチレンオキシド）から成る。他の実施形態において、多数の両親媒性ブロックコポリマーにおける前記親水性ポリマーの体積分率は、概して約０．４０以下である。
【００４０】
いくつかの実施形態において、前記親水性ポリマーブロックは、ポリアルキレングリコールである。特定の実施形態において、本発明のブロックコポリマーにおける親水性構成成分に適している前記ポリアルキレングリコールは、ポリエチレングリコール、モノアルコキシポリエチレングリコール、モノアシルオキシポリエチレングリコール、またはそれらのいかなる組み合わせである。
【００４１】
特定の好ましい組成物において、前記親水性ポリマー・ブロックの数平均分子量は、２００〜約２０，０００ダルトンの範囲であり、いくつかの実施形態において、好ましくは約１，０００〜約１５，０００ダルトンの範囲である。いくつかの組成物に対して、前記親水性構成成分の含有量は、前記ブロックコポリマーの総重量に基づいて、約４０〜約８０重量パーセントの範囲内であり、いくつかの実施形態において、好ましくは約４０〜約７０重量パーセントの範囲内である。特定の実施形態において、前記親水性構成成分の含有量は、前記ブロックコポリマーの約４０重量パーセント以下でもよい。いくつかの実施形態において、前記両親媒性ブロックと同じ分子量を有する親水性ホモポリマーは、ポリマーソームを形成するために前記両親媒性ブロックコポリマーへ添加され得る。他の実施形態において、前記親水ブロックに対する前記親水性ホモポリマーの重量比じゃ。約２０：８０〜約８０：２０までであり、これは、ホモポリマーおよびブロックの全体的な親水性含有量が、前記ブロックコポリマー及びホモポリマーの総重量に基づいて、約４０〜約８０重量パーセントの範囲内であるもので、いくつかの実施形態において、好ましくは、約４０〜約７０重量パーセントの範囲内である。
【００４２】
特定の実施形態において、前記疎水性ポリマーは、水に不溶解性であるものとして特徴付けられる。いくつかの実施形態において、前記疎水性ポリマーは、グリシンを水から同じ無極性溶媒まで移すための自由エネルギー変化と関連して、水から無極性溶媒（例えば、ヘキサン、シクロヘキサン、ペンタンまたはトルエン）への転移のネガティブ自由エネルギー変化を有する組成物として特徴付けられる（Ｒａｄｚｉｃｋａ、Ａ．&Ｗｏｌｆｅｎｄｅｎ，Ｒ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔ７ｙ  ２６、１６６４（１９８８）を参照のこと）。いくつかの好適な疎水性ポリマーは、ポリエチルエチレン、ポリ（ブタジエン）、ポリ（β−ベンジル−Ｌ−アスパラギン酸塩）、ポリ（乳酸）、ポリ（プロピレンオキシド）、ポリ（ε−カプロラクタム）、オリゴ−メタクリル酸エステル、及びポリスチレンを含む。他の実施形態において、前記疎水性ポリマーは、ｅｔｈｙｌｅｎｉｃａｌｌｙエチレン的に不飽和なモノマー（例えば、ポリ（イソプレン）（「ＰＩ」）およびポリエチレンプロピレン（「ＰＥＰ」））から選択された重合されたユニットから成る。
【００４３】
これらの実施形態において、エチレン的に不飽和なモノマーは、炭化水素である。特定の好適な実施形態において、前記疎水性ポリマーは、ポリエチルエチレンまたはポリ（ブタジエン）から成るものである。
【００４４】
他の実施形態において、前記疎水性ポリマー構成成分は、ポリ乳酸、ポリカプロラクトン、ラクチドおよびグリコリドのコポリマー、ラクチドおよびカプロラクトンのコポリマー、ラクチドおよび１，４−ジオキサン−２−オンのコポリマー、ポリオルトエステル、ポリアンハイドライド、ポリホスファジン、ポリ（アミノ酸）、またはポリカーボネートを含む生体分解性ブロックであってもよい。特定の実施形態において、前記疎水性ポリマー構成成分の分子量は、好ましくは約５００〜約２０，０００ダルトンの範囲内であり、いくつかの好ましい実施形態においては、約１，０００〜、約１０，０００ダルトンの範囲内である。
【００４５】
ポリマーソームは、一般に共有結合性の組成物において、異なっている２つ以上のポリマーブロックから成る高分子であるブロックコポリマーを使用して構成される。特定の実施形態において、前記ポリマーは、水に不溶性であるものこととして特徴付けられるフルオロカーボンブロックを含む。いくつかの実施例において、前記フルオロカーボンポリマーは、グリシンを水から同じ無極性溶媒まで移すための自由エネルギー変化と関連して、フルオロカーボン相から無極性溶媒（例えば、ヘキサン、シクロヘキサン、ペンタンまたはトルエン）まで移すためのネガティブ自由エネルギーと同様に、フルオロカーボン相から水まで移すためのネガティブ自由エネルギー変化を有する組成物として特徴付けられる（Ｒａｄｚｉｃｋａ，Ａ．&Ｗｏｌｆｅｎｄｅｎ，Ｒ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２６，１６６４（１９８８）を参照のこと）。いくつかの好適なフルオロカーボンポリマーは、ポリエチルエチレン、ポリ（ブタジエン）、ポリ（ｐ−ベンジル−Ｌ−アスパラギン酸塩）、ポリ（乳酸）、ポリ（プロピレンオキシド）、ポリ（ｓ−カプロラクタム）、オリゴ−メタクリル酸、およびポリスチレンの全フッ素化された誘導体を含む。他の実施形態において、前記フルオロカーボンポリマーは、高度にフッ素化された不飽和のモノマー（例えば、ポリ（フルオロイソプレン）（「ＰＩ」）およびポリ（フルオロエチレンプロピレン）（「ＰＥＰ」））から選択された重合されたユニットから成る。
【００４６】
いくつかの好ましいポリマーソームは、ポリ（エチレンオキシド）−ポリエチルエチレン、ポリ（エチレンオキシド）−ポリ（ブタジエン）、またはポリ（エチレンオキシド）−ポリ（乳酸）ブロックコポリマーから成るものである。他の  ポリマーソームは、米国特許番号第６，５６９、５２８号に記載された親水性ブロックとしてのポリエチレンイミンおよび疎水性ブロックとしての脂肪族ポリエステルから成るブロックコポリマー、及び米国特許番号第６，０６０、５１８号に記載されたポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロックコポリマーを含む。
【００４７】
ここで用いられたように、ＰＥＯはポリエチレンオキシドであり、ＰＥＥはポリエチルエテンであり、ＰＢまたはＰＢＤはポリブタジエンである。ＰＥＥは、１，２配位のブタジエン反複ユニットの約５０以上のパーセントを含むブタジエンポリマーの触媒性水素化によって、概して提供される。１，２ポリブタジエンの触媒性水素化は、ＪＨ  Ｒｏｓｅｄａｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１０，３５４２（１９８８）及び米国特許番号第５，９５５，  ５４６号）よって記載されている。
【００４８】
特定のＰＥＯ−ＰＥＥ組成物の合成は、図３において例示される。ステップ１において、ブタジエンは架橋されるものである。ステップ２において、ＰＢ−ＯＨは、ＰＥＥ−ＯＨに触媒的に水素化される。ステップ３において、エチレンオキシドは、前記ポリマーのヒドロキシ末端に重合される。水素化ステップ２を省略することによって、ＰＥＯ−ＰＢが産生される。Ｈｉｌｌｍｙｅｒ  ＭＡ，Ｂａｔｅｓ  ＦＳ，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２９，６９９４（１９９６）を参照のこと。
【００４９】
本発明のポリマーソームは、溶解液（純粋のポリマー溶液）及び水性混合溶媒におけるユニークな構造へ自己組織化する。いかなる特定の動作原理にも束縛されず、熱力学（非共有力−イオン結合、水素結合、ファンデルワールス相互作用から生じるエントロピー効果）は、自己組織化のブロックコポリマーをこれらのユニークな構造に動かすと考えられ；前記分子の全ては単層における球にクラスター形成される、例えばラメラ相（ポリマーブロックの交互層）または水の球形（または棒状または虫のような形）ミセルなどの構造は、外側へ向いた親水性部位および内側へ向いた疎水性ドメインを有し、分子量、鎖コンフォメーションおよびポリマーの化学によって変化する。ブロックコポリマーの溶解性は、相対的な混合パラメータである、全体相互作用パラメータＸによって、一般に特徴づけられ；Ｘのより高い値は概して不混和性システム、及び構造化相へ強く分離するためのポリマーのより強い傾向を導くものである。他のパラメータは、小胞膜の各ブロックのブロックコポリマー−体積分率の組成物である。ポリマーによって形成される物質の相は、全体のポリマー分子量、ブロック組成物、ポリマーコンフォメーション、混合パラメータｙ、温度および溶媒に複雑に依存する。ポリマーシステムの相様式は、合成的および物理的化学者にとって大きな関心を引くものであり、レオメトリ、光学顕微鏡検査、クリオ−透過電顕法（クリオ−ＴＥＭ）、Ｘ線散乱および中性子散乱を含むテクニックを使用して、一般に調査される。例えば、ＪＨ  Ｒｏｓｅｄａｌｅ  ａｎｄ  Ｆ．Ｂａｔｅｓ，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  １９９０  ２３：２３２９〜２３３８，Ｈａｊｄｕｋ  ＤＡ，Ｋｏｓｓｕｔｈ  ＭＢ，Ｈｉｌｌｍｙｅｒ  ＭＡ，Ｂａｔｅｓ  ＦＳ，Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．Ｂ  １９９８；１０２：４２６９〜４２７６  ａｎｄ  Ｈｉｌｌｍｙｅｒ  ＭＡ，Ｂａｔｅｓ  ＦＳ，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  １９９６；２９：６９９４〜７００２を参照のこと。
【００５０】
Ｃｉｓリン脂質およびいくつかのポリマーソームの構造上の性質は、表１において示される。
【００５１】
【表１】
2007500192.tif 000004
【００５２】
ここにおいて、Ｍｎは、数平均分子量であり、ｆｈｙｄｒｏｐｈｉｏｉｃは親水体積分率であり、Ｄｃｏｒｅは疎水性コア厚である。より詳細は、Ｈ．Ｂｅｒｍｕｄｅｚ，Ａ．Ｋ．Ｂｒａｎｎａｎ，Ｄ．Ａ．Ｈａｍｍｅｒ，Ｆ．Ｓ．Ｂａｔｅｓ，Ｄ．Ｅ．Ｄｉｓｃｈｅｒ，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ３５，Ｏｃｔ  ８，２００２；８２０３〜８２０８を参照のこと。現在有効なポリマーソーム剤形において利用される付加ポリマーブロックは、Ｍｅｎｇ，ｅｔ．ａｌ．，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ３６，２００３；３００４に記載されている。
【００５３】
生物学的細胞は、脂質膜によって囲まれ、これら膜の物質力価は、下にある細胞骨格によって強化される。生細胞において、細胞骨格は、下にある皮質張力を生成し、これは最小印加張力に達するまで変形を防ぐものである。ポリマー二重層がその後強いポリマーネットワークを形成するために架橋される場合、更なる模倣細胞におけるポリマーソームの靭性および安定性を調整することが可能である。不飽和ポリ（１，２ブタジエン）−ｂ−ポリ（エチレンオキシド（ＯＢ））ポリマーを用いて、ポリマーソームは、架橋可能なポリマーの濃度が十分に高い場合、小胞を不全にすることを必要とする臨界張力を著しく増加することができる固体ネットワークを形成するために架橋され得る。１００％架橋可能なＯＢポリマーによってできた小胞は、ＯＥ−７流動性小胞より１００倍大きな臨界張力を有する。膜の力価は、１０％以上の％架橋可能なポリマーによって単調増加している力価を有する、膜の架橋可能なポリマーのパーセンテージを変えることによって調整されることができる。架橋ポリマーソームは、乾燥され、破裂しないように再水和し、割れのない大きい剪断に抵抗する。従って、ポリマー合成化学によって、リン脂質を用いて調査され得るものより、非常に広範囲の小胞物質性質を探索することが可能になる。更なる議論のために、例えば、Ｂ．Ｍ．Ｄｉｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＪｏｕＹｔａａｌ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｂ  １０６，Ｍａｒ  ２１，２００２；２８４８〜２８５４を参照のこと。
【００５４】
ＥＯ４０−ＥＥ３７（ＯＥ７）およびＥＯ２６−ＢＤ４６（ＯＢ２）は、Ｈｉｌｌｍｙｅｒ  ＭＡ，Ｂａｔｅｓ  ＦＳ，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２９，６９９４（１９９６）に従って合成した。これらの組成物の合成は、他のジブロック組成物を図示するものである。ポリマー分子量の分配は、ポリスチレン標準液に対して、クロロホルムのゲル浸透クロマトグラフィ（ＧＰＣ）によって決定されることができて、数平均および重量対数（ｗｅｉｇｈｔ−ｔｏ−ｎｕｍｂｅｒ）平均分子量によって特定される。生体膜を形成する天然脂質に対するこれらの合成ポリマーの重要な特徴は、それぞれの分子量分配の範囲である。ホスファチジルコリンは、総脂質重量による約２０％を占めるこの膜の優性的なリン脂質であり、スフィンゴミエリン、ホスホエタノールアミン、及びその他がこれにが続く。しかし、あらゆる所定のリン脂質における２つの脂肪酸鎖は、非常に異なり、飽和した１６−炭素鎖から高度に不飽和の２４−炭素鎖まで変動する。結果としては、ホスホエタノールアミン構成成分を有する測定されたホスファチジルコリンのためにここで算出された天然由来の膜の有限多分散は、Ｍｗ／Ｍｎ〜１．００１であるということである。
【００５５】
このＭｗ／Ｍｕは、他の特徴付けられていないリン脂質だけでなくコレステロール（膜の重量の約２０％）も無視して、必須膜タンパク質（それ自身の膜−形成両親媒性物質ではない）を組み込んだ下界である。それにも関わらず、標準測度の幅ｗ＝（Ｍｗ／Ｍｎ−１）１／２は、ＯＥ７分子量分布が、その平均によって正規化したことを示し、図示された天然リン脂質分配の幅の約１０倍である。ｗの不同性にも関わらず、ＯＥ７は、小胞に自己−組織化への強い傾向を有する。
【００５６】
ポリマーソームは、多くの純粋のリポソームシステムとは異なるが、単にリポソームとして高分子をカプセル化することができるが、ポリマーソームは、ほとんど表面（ｉｎ−ｓｕｒｆａｃｅ）温熱の転換を呈しない。特に、ポリマーソームの亜細胞は、加圧滅菌をしのぐ。血漿の懸濁液は、小胞安定性に対する即時の副作用を有しおらず、巨大ポリマーソームが直接的な長期接触に適用されたときに、貪食細胞の接着も刺激も見られない。さらに、過剰なポリマーソームと共に延長された期間培養された場合、増殖細胞は影響を受けない。
【００５７】
特定の作動原理によって束縛されることなく、米国特許番号第５，９５５、５４６号にて説明されたように、ポリマーソームの安定性は、産物の相互作用パラメータ（Ｘ）、および重合度の統計区分長さ縮尺値（Ｎ）の値が増加するにつれて増加する。一般的に、ＸＮの値は、約１５以上であり、一般的に約２０以上、より一般的には約２５以上に維持される。同様に、ジブロックコポリマーのＸＮの値が減少するにつれて、ポリマーソームは安定性において減少する。ＸＮは概して温度とは逆に変化するので、ポリマーソームは不安定になるように設計されていることがあり、それによって特定の温度でそれらの因子内容物を放出する。
【００５８】
特定の好ましい実施形態において、前記ポリマーソーム膜の疎水成分は、特に大きく（サイズで２ナノメートル以上、ＭＷでは１ｋＤ以上）、リポソーム膜に適していない疎水性化合物（ポルフィリンダイマー、トリマー、四量体、五量体など）を適用することが可能である。
【００５９】
ポリマーソームの調製
ポリマーソームは、当業者にとって公知の多くの方法によっ調製し処理した。これらの方法は、リポソームの調製において共通して実践される技術に類似したものであって、フィルム再水和、音波処理、エクストルージョン、機械的振盪、凍結乾燥、凍結融解、マイクロ乳化処理、溶媒撒布、ｐＨ−起因性小胞形成、イオン／酵素／リガンド起因性融合、水−有機相、二重乳化、逆相蒸発、および洗浄性可溶化技術を含む（Ｒ．Ｒ．Ｃ．Ｎｅｗ，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ．Ｄ．Ｒｉｃｋｗｏｏｄ、Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ、Ｅｄｓ．、Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  Ｓｅｒｉｅｓ；オックスフォード大学出版、オックスフォード、英国、１９９７を参照）。ＯＥ７およびＯＢ２の巨大小胞は、再水和されたフィリン（ｆｉｌｉｎｓ）またはバルク状コポリマーから自発的に出芽する。ＯＥ７の電気形成（そこにおいて、薄膜はクロロホルム蒸発によって２つの平行の白金線の上に形成される）は、一般的に、ＳＯＰＣ（３Ｖ、１〜１０Ｈｚ）のようなリン脂質のために使われるよりいくぶん高い振幅（１０Ｖ、１０Ｈｚ）の振動電圧を必要とし、前記出芽過程を促進する。電気形成におけるより高い駆動電圧の必要性は、より高い層状粘性を示すようである。これは、Ｄｉｓｃｈｅｒ（Ｂ．Ｍ．）；Ｗｏｎ，Ｙ．Ｙ．；Ｅｇｅ，Ｄ．Ｓ．；Ｌｅｅ，Ｊ．Ｃ．；Ｂａｔｅｓ，Ｆ．Ｓ．；Ｄｉｓｃｈｅｒ，Ｄ．Ｅ．；Ｈａｍｍｅｒ，Ｄ．Ａ．，Ｓｃｉｅｔａｃｅ  ２８４，１１４３〜１１４６（１９９９）において記載されている、ソートの中の浸透圧的に誘導された小胞形変化の比較的遅い動的において明らかにされる。
【００６０】
使用された方法に依存して、小胞形成のために使用されたブロックコポリマーの溶液は、純水から２５０ｍＭショ糖液または生理学的ＰＢＳまで変動することができる。単層小胞が電気形成された調剤において優位であるにも関わらず、拡張エッジ差異も呈する多層小胞は、様々な方法で形成される傾向を有する。０．１ｍｍの直径の孔を有するフィルターと通した小胞のパスは、音波処理および凍結融解の有無に関わらず使用され、内容物を保持したまま非常に狭い小胞サイズの分散を生成することができる。複数層のポリマーソーム、すなわち、より大きいポリマーソーム内のより小さいポリマーソームも、これらの方法によって調製される。
【００６１】
様々な方法によって調製されたポリマーソーム間の機械的性質における特定の類似に起因して、更なるプロセス分別は、長期安定性のような特徴付けにおいてなされなかった。普段の観察と同様に公式な研究において、希薄懸濁液におけるポリマーソームは、１ヵ月以上それらの含有量および安定サイズ分布を維持することが観察された。対照的に、同じ条件の下で懸濁されたＳＯＰＣ小胞は、一日、名目上、ｔｌ／２〜１０〜２０時間のうちにそれらの位相差を失うこと見出された。フローリー相互作用エネルギーＸ及び一つの鎖長Ｎの成生物に従い層状相のようなコポリマー構造の安定性がかなり認められるので、ポリマーソームは、機械的により安定なだけでなく、それらは同じＸを与えられた、脂質より非常に低い重大なミセル化（ｍｉｃｅｌｌｉｚａｔｉｏｎ）濃度（ＣＭＣ）を有するということが予想できた。
【００６２】
特定の実施形態において、本発明の前記ブロックコポリマー集合体は、架橋を有することができる。架橋性は、ポリマーソーム構造を安定させることができる。例えば、Ａｈｍｅｄら（Ｌａｎｇｍｕｉｒ  １９，６５０５（２００３））は、ラングミュアは、親水性ポリ（エチレンオキシド）および架橋可能な疎水性ポリブタジエンから成る両親媒性のジブロックを研究した。架橋可能な組成物は、特定の実施形態の非架橋可能な組成物と混ぜ合わせられることができる。架橋ブロックコポリマーから成る小胞は、脱水され、ポリマーソーム構造を障害を生じさせずに再水和された。Ｄｉｓｃｈｅｒ、ｅｔ．ａｌ，Ｊ  Ｐｌａｙｓ．Ｃｈｅｍ．Ｂ，１０６，２８４８（２００２）を参照のこと。この特徴は、最終用途（例えば画像化、診断および治療）におけるポリマーソーム組成物の産生、貯蔵、及び使用において有利である。
【００６３】
標的部位
特定の細胞タイプ、組織或いは位置に対してポリマーソームを向けることができる標的部位を利用することによって、本発明のポリマーソームは、より効果的で、差別的で選択的になる。"標的部位"という用語は、前記ポリマーソームに、特定の位置、細胞タイプ、器官、疾患組織、または他の標的細胞部位を標的にさせる、或いは向させるのに役立つ官能基として定義される。いくつかの好適な実施形態において、前記標的部位は、抗体、細胞表面受容体リガンド、ホルモン、脂質、糖、デキストラン、アルコール、胆汁酸、脂肪酸、アミノ酸、ペプチドまたは核酸である。前記標的部位は、当業者にとって公知の連結化学技術を使用して、両親媒性ブロックコポリマーに接着され得る。いくつかの実施形態において、前記標的部位は、ブロックコポリマーと共有結合している。いくつかの実施形態において、前記標的部位は、親水性ポリマーに結合される。他の実施形態において、前記標的部位は、例えばイオン力などの非共有結合相互作用によって、またはファンデルワールス力によってポリマーソームと関連する。特定の好適な実施形態において、前記標的部位は、抗体、抗体フラグメント、または受容体結合部位或いは物質から成る。他の実施形態において、前記受容体結合部位或いは物質は、受容体特異的ペプチド、糖またはタンパク質から成る。たとえば、親水ブロックの末端ヒドロキシルは、ビオチン−リシン（ビオサイチン）（アビジンでコーティングされたポリマーコロイドに特異的粘着性を与える生物学的に誘導された基）によって修飾されることができる。この官能性化ポリマーは、それ自体上に、或いは小胞を形成する非修飾ブロックコポリマーと混合された場合に、小胞を形成する。
【００６４】
ブロックコポリマーソームの表層を修飾するための１つの戦略は、図４に示される。いくつかの実施形態において、水溶性ポリエチレンオキシドの末端は、化学修飾に対する位置特異性、および表面との物理的相互作用に対する置換リガンドの利用可能性に起因して、置換のための最も魅力的な位置である。多数の化学変換は、末端アルコールで開始することが可能である（例えば、Ｓｔｒｅｉｔｗｅｉｓｅｒ  Ａ、Ｈｅａｔｈｃｏｃｋ  ＣＨ、Ｋｏｓｏｗｅｒ  ＥＭ
．Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｍａｃｍｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．（１９９２）を参照）。例えば、アクリロニトリルおよびその後のプロトン化とのＰＥＯ−ＯＨの反応は、末端基を第一級アミンへ転換する。反応条件は、概して全体的な高分子化学と互換性を持ち、そのような反応のいくつかは、以下に記載されたブロックコポリマーへの適用のために最適化される。多種多様な化学官能基に生体分子を接着するための技術は、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎら（Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｌｉｇａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．（１９９２））によって整理されている。
【００６５】
前記標的部位は、連結基によって任意にポリマーソームに接着される。適切な連結基は、ポリマーソーム／造影剤に対するいかなる有害効果も及ぼすことなしに、所望の程度の耐屈曲性を提供するものである。
【００６６】
造影剤
本発明のポリマーソーム組成物は、前記ポリマーソーム膜内に散在する少なくとも１つの可視−或いは近赤外−放射剤から成る。特定の実施形態において、前記放射剤は、７００〜１１００ｎｍスペクトル型の光を発する。他の実施形態において、少なくとも１つの放射剤は、ポルフィリン部位から成る。他の放射剤は、ポルフィセン−（ｐｏｒｐｈｙｃｅｎｅ−）、ルビリン−（ｒｕｂｙｒｉｎ−）、ロサリン−（ｒｏｓａｒｉｎ−）、ヘキサフィリン−（ｈｅｘａｐｈｙｒｉｎ−）、サフィリン−（ｓａｐｐｈｙｒｉｎ−）、クロロフィル−（ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌ−）、クロリン−（ｃｈｌｏｒｉｎ−）、フタロシニン−（ｐｈｔｈａｌｏｃｙｎｉｎｅ−）、ポルフィラジン−（ｐｏｒｐｈｙｒａｚｉｎｅ−）、バクテリオクロロフィル−（ｂａｃｔｅｒｉｏｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌ−）、フェオフィチン−（ｐｈｅｏｐｈｙｔｉｎ−）、或いはテキサフィリン−大環状ベースの構成成分、若しくはそれらの金属化誘導体を含む。
【００６７】
前記放射剤は、特定の実施形態において、レーザ染料、蛍光団、ルモフォア（ｌｕｍｏｐｈｏｒｅ）、またはリン光体であってもよい。本発明に従ったレーザ染料は、いかなる有機化合物、無機化合物、またはレーザー光線を当てる能力を有する配位化合物である。適切なレーザ染料は、Ｂｉｒｇｅ、ＲＲ、Ｄｕａｒｔｅ、ＦＪ、コダック光学製品、コダックＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＪＪ−１６９Ｂ（Ｋｏｄａｋ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ、ＮＹ（１９９０）で見られる染料を含む。代表的なレーザ染料は、ｐ−テルフェニル、スルホローダミンＢ、ｐ−第４級フェニル（ｐ−ｑｕａｔｅｒｐｈｅｎｙｌ）、ローダミン１０１、ｃｕｒｂｏｓｔｙｒｙｌ  １２４、クレシルバイオレット過塩素酸塩、ｐｏｐｏｐ、ＤＯＤＣヨウ素、クマリン１２０、スルホローダミン１０１、クマリン２、オキソジン４過塩素酸塩、クマリン３３９、ＰＣＭ、クマリン１、オキサジン１７０過塩素酸塩、クマリン１３８、ナイル青Ａ過塩素酸塩、クマリン１０６、オキサチン１過塩素酸塩、クマリン１０２、ピリジン１、３１４Ｔクマリン、スチリル７、クマリン３３８、ＨＩＤＣヨウ素、クマリン１５１、ＰＴＰＣヨウ素、クマリン４、クリプトシアニン、クマリン３１４、ＤＯＴＣヨウ素、クマリン３０、ＨＩＴＣヨウ素、クマリン５００、ＨＩＴＣ過塩素酸塩、クマリン３０７、ＰＴＴＣヨウ素、クマリン３３４、ＤＴＴＣ過塩素酸塩、クマリン７、ＩＲ−１４４、クマリン３４３、ＨＤＩＴＣ過塩素酸塩、クマリン３３７、ＩＲ−ＮＯ、クマリン６、ＩＲ−１３２、クマリン１５２、ＩＲ−１２５、クマリン１５３、ホウ素−ジピローメーテル（ｄｉｐｙｒｒｏｍｅｔｈｅｒｅ）、ＨＰＴＳ、フルオレッセイン、ローダミン１１０、２，７−ジクロロフルオレセイン、ローダミン６５、及びローダミン１９過塩素酸塩、ローダミンｂを含み、前記レーザ染料は、疎水性置換基の添加によって修飾され、前記レーザー染料は実質的に、ポリマーソーム膜の範囲内に散在されるものである。
【００６８】
いくつかの実施形態において、前記放射剤は、ジ−カルボシアニン、及びトリカルボシアニン染料、クロコニウム染料、またはチエニレンフェニレンエビニレン（ｔｈｉｅｎｙｌｅｎｅｐｈｅｎｙｌｅｎｅｖｉｎｙｌｅｎｅ）種のような、電子求引性置換基で置換されている近赤外（ＮＩＲ）放射性種であり、前記放射性種は、疎水性置換基の添加によって修飾され、前記ＮＩＲ染料は、実質的にポリマーソーム膜の範囲内で分散しているものである。
【００６９】
疎水性部位、及びそれらを様々な化学構造に接着するための手段は、当業者にとって周知である。いくつかの実施形態において、前記疎水性置換基は、親油基である。親油基は、アルキル基、脂肪酸、脂肪族アルコール、ステロイド、ワックス、脂溶性ビタミンを含む。他の親油性置換基は、グリセリド、グリセリルエーテル、リン脂質、およびテルペンを含む。
【００７０】
電子供与性および電子求引性基の多くの例は、当業者に周知である（例えば、Ｇｏｒｄｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔ’ｓ  Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ&Ｓｏｎｓ，１９７２を参照）。代表的な電子求引性基は、適切に置換されたアルキルおよびアリール基（例えばハロアルキル基）、Ｎ−（アルキル）３＋、Ｓ−（アルキル）２＋、ＮＨ３＋、ＮＯ２、ＳＯ２−（アルキル）、ＣＮ、Ｓ０２−（アリール）、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、シクロペンタジエニル、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）−（アルキル）、ＣＨＯ、およびヘテロ環（例えば、Ｎ、Ｎ’−ジエチルチオチオバルビツール酸、３−フェニル−５−イソオキサゾロン、キノン、４−ピリジル、および３−ピリジル基など）を含む。
【００７１】
特定の好ましい実施形態において、前記造影剤は、ポリマーソーム膜の範囲内に分散されている。いくつかの造影剤に対して、疎水性置換基の前記造影剤への接着は、膜の範囲内で分散を改良するものである。そのような基の同定及び接着は、当業者の能力の範囲内である。
【００７２】
熟練した当業者は、多種多様なダイマー、トリマー、オリゴマー  または本発明のポルフィリン含有化合物から調合されることができるポリマーを理解するであろう。例えば、いくらか線形のポリマー鎖が形成され得、前記ポリマーの一部は、一般式（ＰＮ）ｒで表され、ここにおいてＰＮはポルフィリンユニットであり、ｒは少なくとも２である。更なる実施形態において、鎖状ポリマー鎖は、以下の：
【００７３】
【数１】
2007500192.tif 000005
【００７４】
一般式を有し、ここにおいてＱＬは連結基でり、ＰＮはポルフィリンユニットであり、ｈ、１およびｓは、それぞれ個別に少なくとも１から選択される。例えば、そのようなポリマーの一部は、以下の：
【００７５】
【数２】
2007500192.tif 000006
【００７６】
一般式を有し、ここにおいてＰＮｌおよびＰＮ２はそれぞれ個別に選択されたポルフィリンユニットであり、ＱＬ１およびＱＬ２はそれぞれ個別に選択された連結基であり、１’、ｌ"、ｓ’及びｓ"は少なくとも１である。これらの基本的な線形ポリマー鎖は、ポリマーの一部が以下の一般式を有するように架橋されるものであり：
【００７７】
【数３】
2007500192.tif 000007
【００７８】
ここにおいて、ＱＨは連結基であり、ｈ、ｕ、及びｖはそれぞれ個別に少なくとも１から選択されるものである。これらの架橋重合体の一部は、以下の公式：
【００７９】
【数４】
2007500192.tif 000008
【００８０】
を有し、ここにおいてＰＮ３はポルフィリンユニットであり、ＱＨ１およびＱＨ２はそれぞれ個別に選択された連結基であり、ｈ’、ｈ"、ｕ’、及びｕ"は少なくとも１である。
【００８１】
本発明のポルフィリンオリゴマーは、ポルフィリンの範囲内で含まれる官能性に反応性を有する官能性を含んでいる第２の化合物と、置換されたポルフィリンを接触させることによって一般的に形成される。いくつかの実施形態において、前記ポルフィリンは、好ましくはオレフィン炭素−炭素二重結合、炭素−炭素三重結合、または他の反応官能性を含む。前記接触する工程は、それぞれの反応官能性間に共有結合を形成するのに効果的な条件の下で実行されなければならない。いくつかの実施形態において、ポルフィリン含有ポリマーは、好ましくは、例えば、ジブロム化ポルフィリンユニットの金属−仲介性クロスカップリングによって形成される。また、ポルフィリン含有ポリマーは、周知の末端アルキンカップリング化学を使用して合成されることができる（例えば、Ｐａｔａｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｒｏｕｐｓ，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  Ｃ，Ｐａｒｔ  １，ｐｐ．５２９〜５３４，Ｗｉｌｅｙ，１９８３；Ｃａｄｉｏｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｃｅｔｙｌｅｎｅｓ，ｐｐ．５９７〜６４７，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，１９６４；及びＥｇｌｉｎｔｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９６３，４，２２５を参照のこと）。認識されるように、上述された前記第２の化合物は、本発明の置換ポルフィリン、或いはアクリレートモノマのような他の部位である。従って、多種多様なコポリマー構造は、本発明のポルフィリンによって合成されることができる。慎重な置換基選択を通じて、本発明のポルフィリンは、これに限定されるものではないが、ポリアセチレン、ポリアクリレート、ポリオレフィン、ポリエーテル、ポリウレタン、ポリカーボネート、ポリアニリン、ポリピロール、およびポリチオフェンを含む公知技術のいかなる高分子マトリックスにも組み込まれることができる。例えば、蛍光性ポルフィリンは、末端−キャッピング基のようなポリマーに、または疎水性、親水性、或いは上述したフッ化ポリマーブロックの構成成分として組み込まれることができる。
【００８２】
いくつかの実施形態において、前記ポリマーソーム放射性構成成分は、（ポルフィリン）並列（フォルフィネート）亜鉛（ＩＩ）（ＰＺｎ）大環状分子フレームワークに直接連結する円筒状に対称な架橋ユニットを特徴とする、オリゴ（ポルフィリン）構造モチーフから派生する。この様式のＰＺｎ−ｔｏ−ＰＺｎ  接続性は、実質的に基底状態及び励起状態発色団間（ｉｎｔｅｒｃｈｒｏｍｏｐｈｏｒｅ）電子的相互作用を調整し、可視性及び近赤外（ＮＩＲ）スペクトルドメイン（６００〜９５０ｎｍ）の大きいウィンドウ以上のこれらの発色団の蛍光放射エネルギーの予測可能な同調を可能にする。
【００８３】
エチン−精密ポルフィリン（直接ポルフィリン周辺付加される１、２、及び複数のアセチレンユニットを有するポルフィリン）は、そのような種類の発色団を表す。これらの種は、エチニルおよびブタジニル架橋を経て連結される共役大環状分子の配列に、合成的移行機構を提供し；これらの種は、異常に大きい基底状態電子的相互作用を呈し、記録励起子カップリングを示し、大量の発色団から成る生物学的な光捕獲アンテナシステムに共通した光電子工学の特性を有する。ＰＺｎ−ｔｏ−ＰＺｎ部位の共役長を増加することは、低エネルギー可視性／ＮＩＲ吸収オシレータ強度を増強し、吸収及び対応する放射最大が赤系統のスペクトルへと変動する。更なる詳細のために、Ｖ．Ｓ．−Ｙ．Ｌｉｎ，Ｓ．Ｇ．ＤｉＭａｇｎｏ，Ｍ．Ｊ．Ｔｈｅｒｉｅｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６４，１１０５〜１１１１（ＭＡＹ  ２０，１９９４）；Ｖ．Ｓ．−Ｙ．Ｌｉｎ，Ｍ．Ｊ．Ｔｈｅｒｉｅｎ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ−ａ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  １，６４５〜６５１（ＤＥＣ，１９９５）；Ｋ．Ｓｕｓｕｍｕ，Ｍ．Ｊ．Ｔｈｅｒｉｅｎ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  １２４，８５５０〜８５５２（ＪＵＬ  ２４，２００２）；及びＩ．Ｖ．Ｒｕｂｔｓｏｖ，Ｋ．Ｓｕｓｕｍｕ，Ｇ．Ｉ．Ｒｕｂｔｓｏｖ，Ｍ．Ｊ．Ｔｈｅｒｉｅｎ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  １２５，２６８７〜２６９６（ＭＡＲ  ５，２００３）を参照のこと。
【００８４】
図１は、メソ−メソエチン−架橋連結トポロジーを有するこれらの多重結合ポルフィリン化合物のサブセットを表示したものである。これらのジ−、トリ−、テトラ−、及びペンタ−ＰＺｎ構造（それぞれＰＺｎ２〜ＰＺｎ５構造）は、ポリマーソームマトリックスの範囲内で７２３、８０９、８６７および９００ｎｍのピーク発光波長にわたる。主要なＮＩＲ蛍光団（ＮＩＲＦ）に関して、光学画像化に対する必要事項は、ＰＺｎ２〜ＰＺｎ５が大きいＮＩＲエミッション双極子強度および実質的な放射性速度定数（ｋｒ）を有するだけではなく；それらも低エネルギー、理想的には容易なＮＩＲ励起に適している高振動子強度吸収性転換を呈することは留意されるものである。(Ｋ．Ｓｕｓｕｍｕ，Ｍ．Ｊ．Ｔｈｅｒｉｅｎ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  １２４，８５５０〜８５５２(ＪＵＬ  ２４，２００２))。本願明細書において説明される厚いポリマーソームは、大きい共役ＮＩＲ蛍光団部位を適応させることが可能である。
【００８５】
特定の実施形態において、前記ポルフィン化画像化剤は、β−β、メソ−β、或いはメソ−メソ結合を有する、エチニル−或いはブタジニル−架橋化ビス或いはトリス（ポルフィン化）亜鉛化合物である。いくつかの好適な実施形態において、前記ポルフィン化画像化剤は、６００〜９５０ｎｍスペクトル型において放射することができる。いくつかの有用なホルフィナート画像化剤は、図２に示される。図２において表される前記画像化剤は、ポルフィリン環上のさまざまな位置で付属された「Ｐｈ」或いはフェニル基を示している。本発明に有用ないくつかの組成物において、１若しくはそれ以上のフェニル基は、置換される。いくつかの実施形態において、置換基は、Ｃ１〜Ｃｌ２アルキル、Ｃ１〜Ｃｌ２ペルフルオロアルキル、Ｃ２〜Ｃ７アルケニル、ハロゲン、ポリエーテル、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ＣＮ、−ＮＯ２、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノ、アルキル基につき１〜６の炭素原子を有するジアルキルアミノ、チオ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルチオ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルスルフィニル、Ｃ１〜Ｃ６アルキルスルホニル、Ｃ２〜Ｃ７アルコキシカルボニル、アルキルカルボニル、トリフルオロアルコキシ、ベンジルニトリル、またはベンゾイルであり得る。特定の好適な実施形態において、前記置換基は、Ｃ１〜Ｃｌ２直鎖または分枝アルキルである。他の好適な実施形態において、前記置換基は、Ｃ１〜Ｃｌ２分枝アルキルである。適切なポリエーテル置換基は、以下の公式を含み：
【００８６】
【化７】
2007500192.tif 000009
【００８７】
ここにおいてｘは１〜約１０である。いくつかの実施形態において、ｘは１または２である。
【００８８】
いくつかの実施形態において、放射剤は、少なくとも２つの共有結合部位から成る放射共役化合物であり；それにより、一時の間、前記化合物をエネルギー源にさらし、前記化合物が７００〜１１００ｎｍ間の波長で光を発させるのに効果的な条件下では、個々の共有結合部位により発される光の和より大きい光度である。他の実施形態において、前記放射剤は、少なくとも２つの共有結合部位から成る放射共役化合物であり；それにより、一時の間、前記化合物をエネルギー源にさらし、前記化合物が７００〜１１００ｎｍ間の波長で光を発するために効果的な条件下において、個々の部位のいづれかによるエミッション振動子強度顕性より大きい積分放射性振動子強度を呈するものである。
【００８９】
特定の有用な画像化剤は、Ｖ．Ｓ．−Ｙ．Ｌｉｎ，Ｓ．Ｇ．ＤｉＭａｇｎｏ，Ｍ．Ｊ．Ｔｈｅｒｉｅｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６４，１１０５〜１１１１（ＭＡＹ  ２０，１９９４）；Ｖ．Ｓ．−Ｙ．Ｌｉｎ，Ｍ．Ｊ．Ｔｈｅｒｉｅｎ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ−ａ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  １，６４５〜６５１（ＤＥＣ，１９９５）；Ｋ．Ｓｕｓｕｍｕ，Ｍ．Ｊ．Ｔｈｅｒｉｅｎ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  １２４，８５５０〜８５５２（ＪＵＬ  ２４，２００２）；及びＩ．Ｖ．Ｒｕｂｔｓｏｖ，Ｋ．Ｓｕｓｕｍｕ，Ｇ．Ｉ．Ｒｕｂｔｓｏｖ，Ｍ．Ｊ．Ｔｈｅｒｉｅｎ，．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  １２５，２６８７〜２６９６（ＭＡＲ  ５，２００３）に記載されている。
【００９０】
本発明は、少なくとも２つの共有結合部位から成る可視性或いは近赤外放射性剤の放射特性を調節する方法にも関し、前記放射性剤は、高分子剤の範囲内であるものであり、ここにおいて、前記結合部位の少なくとも１つは、補助置換基を有しており、前記置換基のサイズおよび化学的構成は前記調節を提供するように選択されるものである。いくつかの実施形態において、前記調節は、定常状態放射性波長においてである。他の実施形態において、前記調節は、前記放射性共役化合物の時間依存性放射性動力学においてである。この調整は、予測可能な方法おいてなされ得る。理論によって束縛されることなく、前記電子共役は、線形ポルフィリン−オリゴマからの放射性の正確な波長を決定すると考えられる。所定のオリゴマーの個々のモノマーユニットが同一表面である場合（すなわち、モノマー間の二面角が、０或いは１８０度である）、前記電子雲の完全な非局在化は前記モノマーユニットを交差して存在し、基底状態及び励起状態の間のバンドギャップ（エネルギー相違）が減少する。その結果、ポルフィリンオリゴマーの最低エネルギー吸光度および放射性状態は、その個々のモノマーユニットの和未満であり、その対応する蛍光放射は、より低いエネルギー（波長は、前記ポルフィリンモノマーの放射と比較して赤方偏移である）である。ポルフィリンモノマーが直線系列（例えば、ポルフィリンダイマー、トリマー、四量体または五量体）の組み合わせである場合、連続した長いオリゴマーのバンドギャップは、各同一平面のモノマーユニットの添加によって、更に減少し；前記オリゴマーの発光波長は、対応してさらに赤方偏移される。一連のエチニル−及びブタジニル−架橋ビス−、トリス−、及びペンタ（ポルフィネート）亜鉛発色団の発光および吸光度波長は以前、有機溶液における方法によって合理的に調節されることが示された。（Ｌｉｎ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒｉｅｎ，Ｃｈｅｍ  Ｅｕｒ．Ｊ．１９９５，１，Ｎｏ．９を参照のこと）。前記オリゴマーバックボーンは、溶液における所定のフルオロフォアの電気共役度及び特異的吸光度／発光特性を調節するために、架橋アルキン、さらには様々なポリフィリンモノマー間の連結位を変換することによって、調節された（図２を参照）。
【００９１】
蛍光−発光の正確な波長調整における別のレベルの調節は、その局部膜環境においてポリマー鎖を有するポリマーソーム−組み込みポルフィリン−オリゴマーの相互作用に基づいていた。本願明細書において説明されたように、近ＩＲ放射性ポルフィリン−オリゴマーは、うまくポリマー双層小胞の疎水性膜に嵌入されることができる。様々なポリマーソーム−組み込みオリゴマーからの発光データによって、前記共役長および置換立体電子効果は、発光波長を決定するだけでなく（有機溶液に基づくデータにおいて前もって決定された様に）、ポリマーソーム膜を定義する前記高分子マトリックスを有する、放射性材料の補助置換基の相互作用の特性も決定することが示された。例えば、フェニールが２，６または３，５位で置換されるかどうかに依存して、蛍光団を囲んでいるポリマー鎖を有する異なる局所相互作用が生じる。構造的に、２，６位での置換は、ポルフィリンの平面の上下に位置している置換基を生じるが、３，５位の置換は、共役のポルフィリンオリゴマー軸から離れて配置されている置換基を有する（図１３を参照）。
【００９２】
いくつかの実施形態において、前記置換は、フルオロフォア−ペンダントアリール環補助置換基の２，３、４，５または６位の少なくとも１つで形成されるものである。他の形態において、前記アリール環補助置換基における置換は、３位及び５位の両方でなされるものである。特定の他の組成物において、前記置換は、２位及び６位でなされるものである。
【００９３】
特定の実施形態において、そのような置換は、ポルフィリン−オリゴマーの各々のユニットに形成されるものである。他の実施形態において、ユニットの一部は、前記置換から成る。いくつかの組成物に対して、前記置換基は、全ての同じものである。他の組成物において、前記置換基は、オリゴマーの範囲内で１つのサブユニットから別のものまで変化させることができる。
【００９４】
ポリマー膜のオリゴマ−種の結果生じるシリンドリカル様形態を有する２，６位置換は、個々のモノマー間の電子的相互作用が還元されるように、ポリマー鎖を有するその補助置換基の相互作用の性質に起因した、ポリマーソーム膜のその共役軸についてのオリゴマーの撚りを生じる。この撚りの結果は、オリゴマー基底および励起状態間のバンドギャップを増加し、発光のエネルギー（発光波長の青方偏移）が全体的に増加する。一方、３，５位置換は、異なる補助置換基−ポリマー鎖相互作用を促進し、その結果、膜のポリマー鎖との相互作用によって前記ポルフィリン−オリゴマーの平坦化を生じ、遊離有機溶液における同じ化合物で観察されたものと比較して、前記オリゴマーの各モノマーユニットは、より同一平面上配置に存在し、有意に電子的に共役（バンドギャップを下げる）であるように見える。この相互作用の結果は、各３，５−置換オリゴマーは、遊離有機溶液の同じフルオロフォアを比較して、ポリマーソームの赤方偏移発光を有する。
【００９５】
吸光度の正確な調整およびポリマーソーム−組み込みフルオロフォアの放射状態は、個々のモノマーユニットのフェニル環の同じ位置を離れて、異なるＲ−基を有するオリゴマーを設計することによって完成され得る。一般に、Ｒ基（及び、フェニル環を離れたそれらの位置）は、理論的な方法で、発色団共役軸をねじるように選択可能であり、従って、集合体の光学的性質を静的に制御することができる。しかし、局所的環境において、フルオロフォアとのそれらの相互作用の正確な特性を変化するように、ポリマー鎖を操作することによって、理論的な方法で、所定のポリマーソーム−組み込みポルフィリン−オリゴマーにおける個々のモノマー間の電子共役を動的に変えることができる。
【００９６】
さまざまな線形のオリゴマーの分子構造、および個々のモノマー間の二面角計測に基づいて（Ｌｉｎ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒｉｅｎ，Ｃｈｅｍ  Ｅｕｒ．Ｊ．１９９５，１，Ｎｏ．９を参照のこと。）、エチン−連結は、２つのポルフィリンモノマーを所定の配向に効果的に固定する一方、ブタジエン連結は、大幅な再配向を可能にすること、明白である。さらに、メソ−メソ連結されたオリゴマは、メソ−ベータ連結（大幅な可変性）、或いはベータ−ベータ連結されたポルフィリン（最大数のオリゴマーに対するユニークな電子的共役配列）と比べて、より潜在的に豊富な個々の単量配置を有する。
【００９７】
いくつかの実施形態において、好適な構造は、ベータ−ベータ連結されたオリゴマーであり：例えば、トリス（ポルフィナート）亜鉛は、発色団を共役している（図２、構造番号７を参照）。水溶液（室温で）のこのオリゴマに対して、各ポルフィリンモノマーは、別のものに対して９０度で配向し、従って、完全に電子的に非共役である：この状態は、水溶液に見られるより高いエネルギー（６３４ｎｍ）発光バンドと一致するものである。しかしながら、ブタジエン−連結に起因して、個々のモノマーユニットの移動は妨げられず、前記モノマーは、より多くの同一平面において電子的に共役した配向にすることができ、ここにおいて前記オリゴマーの発光バンドは続いて赤方偏移し：これは、例えば、水溶液のベータ−ベータ連結したブタジエントリマーに見られる７００ｎｍ発光バンドと一致するものである。モノマーユニットのこの潜在的な再配列は、ポリマーソームの疎水性膜のフルオロフォアの周囲の局所的ポリマー鎖による操作に対して観念的に適している。
【００９８】
いくつかの実施形態において、前記置換基は、それぞれ個別に、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍＣ０２Ｒ’、−Ｏ（ＣＨ２）−（Ｏ（ＣＨ２））Ｘ、或いは−Ｏ−（ＣＨ２）ｐＣＯＨであり、ｍおよびｐは、それぞれ個別に１〜１０の整数であり、ｘは１〜１２の整数であり、Ｒ’はＣ１〜Ｃ２０アルキルである。特定の実施形態において、前記置換基は、以下で示される部位の１つである。
【００９９】
【化８】
2007500192.tif 000010
【０１００】
様々な３，５−置換、及び２，６−置換ポルフィリン−オリゴマーに対する発光スペクトルの偏移は、図１２〜１６に示されている。各々の場合において、記載されたポルフィリン−オリゴマーの発光データは、ＴＨＦ水溶液において、ＯＢ２  ポリマーソームの膜の範囲内で示される。
【０１０１】
定義
ここで用いられたように、「アルキル」という用語は、単独、或いは他の基の一部として使用されることを問わず、置換或いは非置換の脂肪族炭化水素鎖を言及し、これに限定されるものではないが、１〜２０、いくつかの実施形態においては１〜１２の炭素原子を含有する直線および枝分れ鎖を含み、明示的に特定されない限り、いくつかの好ましい実施形態においては１〜６の炭素原子を含有する直線および分岐鎖を含むものである。例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｉ−ブチル、およびｔ−ブチルは、「アルキル」という用語に含まれる。「アルキル」の定義内に具体的に含まれるのは、任意に置換された脂肪族の炭化水素鎖である。前記定義において用いられているように、炭素数は、炭素バックボーンおよび炭素分岐を言及するが、置換基（例えば、アルコキシ置換やその同等物）の炭素原子は含まない。
【０１０２】
ここで用いられたように、「アルケニル」という用語は、単独で或いは他の基の一部として用いられるかを問わず、置換或いは非置換の脂肪族炭化水素鎖を言及し、これに限定されるものではないが、２〜２０の炭素原子を有する直線および分岐鎖を含み、いくつかの実施形態においては、２〜８の炭素原子を有し、少なくとも１つの二重結合を含むものである。好ましくは、前記アルケニル部位は、１或いは２つの二重結合を有する。そのようなアルケニル部位は、ＥまたはＺコンフォメーションの中に存在し、本発明の化合物は、両方のコンフォメーションを含む。「アルケニル」の定義内に具体的に含まれるのは、任意に置換されたそれらの脂肪族炭化水素鎖である。アルケニルへ接着した、ヘテロ原子（例えばＯ、ＳまたはＮ−Ｒｌ）は、二重結合に結合される炭素原子に接着されるべきではない。
【０１０３】
ここで用いられたように、「アリール」は、芳香族５〜１３員環のモノ炭素環或いは二炭素環（例えばフェニールまたはナフチル）を言及する。好ましくは、アリール部位を含んでいる基は、環において５〜７の炭素原子を有する単環式である。フェニールは、１つの好適なアリールである。いくつかの実施形態において、フェニール部位は、任意にＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ７アルケニル、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、−ＣＮ、−ＮＯ２、アミノ、ＣＣ１〜Ｃ６アルキルアミノ、アルキル基につき１〜６の炭素原子のジアルキルアミノ、チオ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルチオ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルスルフィニル、Ｃ１〜Ｃ６アルキルスルホニル、Ｃ２〜Ｃ７アルコキシカルボニル、２〜７の炭素原子のアルキルカルボニル、トリフルオロアルコキシ、ベンジルニトリル、またはベンゾイルと置換される。
【０１０４】
ここで用いられたように、「ヘテロアリール」は、それぞれ個別に窒素、酸素、或いは硫黄であってもよい１〜５のヘテロ原子を有するモノ環式環或いは二環式環を含んでいる芳香族５〜１３員環炭素を意味する。好ましくは、ヘテロアリール部位を含んでいる基は、環において５〜７員環を有する単環式であり、ここにおいて１〜２の環員環はそれぞれ個別に窒素、酸素、または硫黄から選択されるものである。アリールまたはヘテロアリール部位を含んでいる基は、以下に定義されたように置換される、または非置換である。ヘテロアリールの例は、これに限定されるものではないが、チエニル、スチリル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、インドリル、インダゾリル、ベンゾフラニル、イソベンゾフラニル、ベンゾチエニル、イソベンゾチエニル、キノリル、イソキノリル、キノキサリニルまたはキナゾリニルを含む。
【０１０５】
「ハロゲン」という用語は、ブロム、塩素、フッ素、及び、ヨウ素を含む。
【０１０６】
ここで用いられたように、「アルコキシ」という用語は、Ｒ−Ｏ−基を言及し、ここにおいてＲは、ここに定義されているように、アルキル基である。
【０１０７】
「ペルフルオロアルキル」という用語は、ここで定義されたように、各水素原子はフッ素原子によって置換された、アルキル基を言及する。
【０１０８】
ここにおいて用いられたように、「ペプチド」という用語は、ペプチド結合によって連結される２若しくはそれ以上のアミノ酸（ここにおいて定義されたように）から成る線形化合物を意味する。
【０１０９】
ここにおいて用いられた「脂質」という用語は、実質的に有機溶液には可溶であるが、水溶液には不溶である有機化合物として定義される。例としては、脂肪、ワックス、ステロイド、リン脂質、カロチノイドおよびキサントフィルを含む。
【０１１０】
ここにおいて用いられたように、「リン脂質」は、グリセロール、或いはスフィンゴシンバックボーン、脂肪酸側鎖およびリン酸化アルコール末端基を有する両親媒性の脂質を言及する。リン脂質は、グリセロ脂質、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリンおよびスフィンゴ脂質スフィンゴミエリンを含む。
【０１１１】
ここにおいて用いられたように、「ステロイド」という用語は、３つの６員環炭素原子と１つの５員環炭素原子とを有する特徴的な複員環構造を有する、多数の有機化合物を意味している。ステロイドは、多くのホルモン、アルカロイドおよびビタミンを含む。
【０１１２】
ここにおいて用いられたように、「界面活性剤」は、それが溶かされる液状の表面張力を下げる組成物を言及している。界面活性剤は、有機溶媒および水性溶媒の両方に可溶性である疎水性及び親水性構成成分を含む。セッケンは、界面活性剤の一例である。
【０１１３】
「生体再吸収性」という用語は、化学反応によって分解される場合に、他の化学種の合成のための構成ブロックとして生体細胞によって使用される、或いは廃棄物として排泄される置換基を導く分子を言及する。
【０１１４】
リポソームに添加される任意の材料を記載するためにここで用いられたような、「単鎖アルコール」は、ヒドロキシル基（ＯＨ）で終わる分子を言及し、その残りの部分はいかなる数の炭素或いは水素原子の炭化水素テールであるものである。
【０１１５】
方法
近赤外（ＮＩＲ）プローブの利用は、癌予防／検出戦略において魅力的であり、その理由としては：（ｉ）光散乱は、ＮＩＲスペクトル領域のＢ−１に基づいて最小限の散乱に近づけるために、波長の第４の出力（Ｘ−４）の逆数を有する可視領域において減少する；及び（ｉｉ）ＮＩＲスペクトルドメインは、ヘモグロビンおよび水の吸収が最小である実質的な光学ウィンドウを特徴とする。本発明の画像化剤は、全ての光学方法が、表面腫瘍だけでなく、小さい表面下腫瘍も同様に検出することを可能にする高度発光性ＮＩＲプローブである。即時のホルフィナート剤は、ｉｎ  ｖｉｖｏで高差異画像化および超感受性検出を提供することができる大きい発光双極子強度フルオロフォアであるので、これは可能である。
【０１１６】
加えて、多くのポルフィリンフルオロフォアは、本発明のポリマーソームにおいて添加されることができる。１００ｎｍポリマーソームが前記フルオロフォアの約１５００コピーを保つように、添加依存性はポリマーソームサイズと相関する。５００ｎｍポリマーソームは、前記フルオロフォアの約４０，０００枚の複写を保つ。１μｍポリマーソームは蛍光団の約１５０，０００枚の複写を保つ。このように、本発明の組成物は、強い蛍光シグナルに連結する高ローディング機能を提供する。さらに、小胞のこれらの大きいコピー数での大きい（>２．２ｎｍ／２つのＫＤ）、疎水蛍光団の取込みは、厚いポリマーソーム膜のためになし遂げられてリン脂質から成る天然膜において可能なだけではない。
【０１１７】
ポルフィリンおよび関連した大員環の合成に関連する合成的な方法論は、触媒的に金属が媒介する交差カップリング反応によるポルフィリン末端の容易な合成を可能にする。例えば、Ｄｉｍａｇｎｏ  ＳＧ，Ｌｉｎ  ＶＳ−Ｙ，Ｔｈｅｒｉｅｎ  ＭＪ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１５，２５１３（１９９３）；Ｄｉｍａｇｎｏ  ＳＧ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＲＡ，Ｔｈｅｒｉｅｎ  ＭＪ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５９，６９４３（１９９４）；及びＨｙｓｌｏｐ  ＡＧ、Ｋｅｔｔｅｔｔ  ＭＡ，Ｉｏｖｉｎｅ  ＰＭ，Ｔｈｅｒｉｅｎ  ＭＪ．Ｓｕｚｕｋｉ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１２０，１２６７６（１９９８）。
【０１１８】
幾つかの観点において、1若しくはそれ以上の付加的なイメージング物質が、本発明で使われることができる。たとえば、いくつかのこれらの物質は、セカンダリ・エミッタ、細胞毒性物質、核磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）試薬、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）物質、または光感作療法（ＰＤＴ）物質などである。これらの物質は当業者にとって周知である。これらの化合物はポリマーソームに組み込まれるために、親水性であるか（水性の内部に存在する）か疎水性（厚い膜に存在する）でありえる。本発明は、上述したセカンダリ・エミッタに限られていない。電磁スペクトル（非常に低エネルギーのマイクロ波に対する、及びさらに低いエネルギー高周波音波に対する超高エネルギーＸ線から）においてどこにでも吸収することができるかまたはエネルギーを発することができる化合物は、本発明と互換性を持つ。
【０１１９】
核磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）試薬は、概して正磁性である金属イオンである。
一部の実施形態において、前記物質はＴ１加重画像化に役立ってもよく、２６の原子番号または５７〜７０の原子番号を有するランタニドイオンの元素のイオンであってもよい。幾つかのの実施形態において、金属はＧｄ、Ｄｙ、Ｔｂ、Ｈｏ、ＥｒまたはＦｅイオンであることが好ましい。これらの金属は、キレート部分と関連することができる。これらのキレート化剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）およびジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）を含む。これらのキレート基は、当業者にとって周知である。たとえば、これらのキレート化剤は、アミン、カルボキシル、スルフヒドリルまたはフェニル基のような官能基に対する結合を含む、様々な方法によって、分子と共有結合的に結合する。ほかの用途において、前記物質は超磁気性の酸化鉄のようなＴ２加重画像法に役立ってもよい。考慮される全ての化合物は、ポリマーソームに親水性でありえる（水性の内部に存在する）か取込みのために疎水性でありえる（厚い膜に存在する）。
【０１２０】
陽電子放出部分は、また、当業者において周知である。これらは、１１Ｃ−及び１８Ｆラベル化部分を含む。光力学的治療剤もまた当業者において周知である。これらの物質は、ポルフィリンのような感光性の組成物である。
【０１２１】
他のポリマーソームはさらに１若しくはそれ以上の異なる放射する種から成っている。一部の実施形態において、前記ポリマーソームはさらに、放射線学の造影剤を含む。一部の実施形態において、ポリマーソームはさらに、セカンダリ・エミッタ、細胞毒性物質、核磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）試薬、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）剤、光感作療法（ＰＤＴ）、超音波剤、放射線学の造影剤、強磁性体剤、またはフェリ磁性物質のうちの少なくとも1つから成る。ここで、前記エミッタまたは物質は水性ポリマーソーム内部の範囲内で区分される。
【０１２２】
超音波剤は、過フッ化炭化水素またはエコー輝度を引き起こす重い相を有するもの全てを含む。
【０１２３】
鉄（ｆｅｒｒｏ−）又はフェリ磁性（Ｆｅｒｒｉｍａｇｎｅｔｉｃ）化合物は、磁鉄鉱、ガンマ−Ｆｅ２Ｏ３、Ｆｅ３Ｏ４、マンガンフェライト、コバルトフェライトおよびニッケルフェライトのような鉄、磁気性酸化鉄を含む。
【０１２４】
多くの放射性ヌクレオシドが当業者に周知である。しばしば、有機的に結合したヨウ素のような、生理学的に受け入れられるヨウ素に基づく化合物が利用される。さらに、フルオロカーボンもまた、放射線学の造影剤として使用されている。たとえば、米国特許第３，９７５，５１２号公報、および第４，９８７，１５４号公報を参照のこと。別の好ましい金属放射性核種は、９０Ｙ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、４７Ｓｃ、６７Ｇａ、５１Ｃｒ、１７７ｍＳｎ、６７Ｃｕ、１７９Ｔｍ、９７Ｒｕ、１８８Ｒｅ、１７７Ｌｕ、１９９Ａｕ、２０３Ｐｂ、及び１４１Ｃｅを含む。
【０１２５】
一部の実施形態において、本発明は、組織または有機体の生物学的な位置に物質を輸送する方法に関し、前記組織又は有機体に対して前記物質を有するポリマソームを登用する工程を含み、（ａ）各ブロック共重合体が少なくとも１つの疎水性ポリマーに結合した少なくとも１つの親水性ポリマーを有する複数の両親媒性のブロック共重合体；（ｂ）フォルフィナート造影剤；及び（ｃ）ポリマソームの表面に関連した少なくとも１つの標的部分、を含むものである。特定の実施形態において、前記物質は治療薬である。治療薬は、疾患治療を援助する組成物である。前記援助は、前記物質の直接作用によってまたは前記物質が行う有機体の範囲内で管理された他の物質またはメカニズムが疾病状態を処理するのを助ける間接作用によってあることがありえる。一部の好ましいな実施形態において、前記物質は薬学的組成物である。さらに別の実施形態において、前記は化学療法剤である。さらに他の実施形態において、前記物質はは放射性医薬品である。さらに他の実施形態において前記物質は、例えばビールス、オルガネラ、バクテリアまたは細胞の成分などの生物学的実体である。
【０１２６】
本発明の組成物および方法は、前記物質の生物学的利用能を改良するために用いてもよい。一部の場合においては、前記物質は、従来の手段で投与される場合、有毒、無効、耐性に乏しい、又は禁忌であっても良い。本発明の組成物および方法は、また、浸透移行性療法に不適当である特異的の部位に、投与用量を投与するために用いてもよい。たとえば1つの身体または器官系を治療するために体系的に投与され多くの物質は、別の身体または器官系において副作用を引き起こす。この種の副作用は、投与用量、時間の長さ、有効性、その他を制限してもよい。
【０１２７】
エネルギー源は放射するポリマーソームをゆがめるかまたは分裂させるために利用されることができる。そして、少なくとも一部の剤の放出に結果としてなる。
若干の実施例において、本質的に、剤の全部がリリースされることは、望ましい。
特定の実施例の彼治療薬が、ポリマーソーム.の構造を分裂させるために超音波的エネルギーを使用して自由にされることができる。まだ他の実施例において、治療薬はポリマーソームの構造を分裂させるために光エネルギーを使用して自由にされる。ポリマーソームは、また、加温によって分裂することができる。好ましくは、加温はポリマーソームに対する局在性である。まだ他の実施例の、ポリマーソームが化学反応で分裂することができること、それは例（ポリマー成分の酵素的分解）のために含む。この種のプロセスに関係しているエンザイムは位置する外部であってもよいポリマーソームに放射するまたは、その水溶の範囲内で内部を実装した。
【０１２８】
一部の観点において、本発明は生物または組織において、疾病状態の有無を確認する方法に関するものであり：
患者に対するポリマーソームを投与する工程において、前記ポリマソームは（ａ）複数の両親媒性のブロック共重合体から成るポリマーソーム、各両親媒性ブロック共重合体が少なくとも１つの疎水性ポリマーに結合した少なくとも１つの親水性ポリマーを有する、複数の両親媒性のブロック共重合体；（ｂ）少なくとも一つのホルフィナート造影剤;（ｃ）ポリマーソームの表層と関連した少なくとも1の目的部分;を含む前記投与する工程と、
光源、光検出器、またはその両方に光学的に結合する機器を提供する工程と、
有機体または組織の範囲内でホルフィナート造影剤の量または分配を監視する機器を操作する工程と、を含む。
【０１２９】
光源が、位置の放射する探触子の存在を決定するために関心領域を照らすために使われることができる。光学上透過的コンテナにおいて維持されるいつの試験管内の細胞培養が照らされるか、または、いつの軟組織が外科と関連して例えばさらされるか、光源は直接関心領域を照らすことができる、または、隣接したか上に横たわっている軟組織（例えば骨組織、硬膜、黒皮、器官、筋など）で間接的に関心領域を照らすことは利用されることができる。本発明において使用される光源は、高か低強さ線源であってもよい。放出光は、軽い連続波法（ＣＷ）、時間-分解された（ＴＲ）光または両方のＣＷおよびＴＲ光でありえる。
【０１３０】
好ましい照度線源は高強さ線源、広域スペクトルおよび非染色の線源を含む。そして、軽いハロゲン電球（レーザー）がダイオード、などを発する。選択された波長の上下に、全ての波長を選択的に通過するためのカットオフ濾過器は、使用されることができる。たとえば、約６９５ナノメートルの下で全ての波長を除外するカットオフ濾過器が使用され得る。
【０１３１】
一部の実施形態において、内因性の光学信号が関連するデータを得るために好適な波長は、たとえば、約４５０ナノメートル〜約２５００ｎｍ、最も好ましくは近赤外スペクトルの約７００ナノメートル〜約２５００ｎｍ、さらにより好ましくは約６００〜約９００ｎｍの波長含む。一般的に、より長い波長は、セルまたは組織の表面の下、または例えば皮膚、骨、硬膜、及び皮質活動など他の物質の下の位置の細胞又は組織状況を検出するために使用される。前記光源は、いかなる適切な手段にもよる目的領域に対する定方向であってもよい。一部の用途に対して、光ファイバーの使用は好ましい。ある好ましい実施態様は、Ｄ．Ｃ．安定化電源供給（例えばＬａｍｂｄａ社によって市場に出されるもの）によって制御されたビームスプリッタ使用している光ファイバーのらせん構造を介して光源を提供する。
【０１３２】
本発明の光学検波法は、また、有効に非持続性の照度および検出技術を使用することができる。例えば、短いパルス（時間領域）、パルス時間、および振幅を調整した（周波数領域）照度線源が適切な検出器と連動して使用され得る（例えば、Ｙｏｄｈ，Ａ．およびＣｈａｎｃｅ，Ｂ.，Ｐｈｙｓｉｃｓ  Ｔｏｄａｙ（Ｍａｒｃｈ  １９９５）を参照）。周波数領域照度線源は、概して隣接した化学元素に関して１８０℃位相外れで調整される各々の化学元素を有する多重ソース化学元素（例えばレーザダイオード）の配列から成る（Ｃｈａｎｃｅ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，９０：３４２３−３４２７（１９９３））。２つの直交面において４若しくはそれ以上の化学元素を含む二次元の配列は、二次元の局在情報を得るために使用されることができる。この種のテクニックは、米国特許第４，９７２，３３１号公報および第５，１８７，６７２号公報に記載されている。
【０１３３】
一部の観点において、本発明は生物または組織において、疾病状態の有無を確認する方法に関するものであり：
患者に対するポリマーソームを投与する工程において、前記ポリマソームは（ａ）複数の両親媒性のブロック共重合体であり、前記両親媒性ブロック共重合体がそれぞれ少なくとも１つの疎水性ポリマーに結合した少なくとも１つの親水性ポリマーを有する、前記複数の両親媒性のブロック共重合体；（ｂ）少なくとも一つのホルフィナート造影剤;（ｃ）ポリマーソームの表層と関連した少なくとも1の目的部分;を含む前記投与する工程と、
光源、光検出器、またはその両方に光学的に結合する機器を提供する工程と、
有機体または組織の範囲内でホルフィナート造影剤の量または分配を監視する機器を操作する工程と、を含む。
【０１３４】
本発明はまた、ｉｎ  ｖｉｖｏ（生体内）における診断的または画像化の方法に関し、
生物内においてポリマーソームが組織と接触する工程であって、前記ポリマソームは（ａ）複数の両親媒性のブロック共重合体であり、前記両親媒性ブロック共重合体がそれぞれ少なくとも１つの疎水性ポリマーに結合した少なくとも１つの親水性ポリマーを有する、前記複数の両親媒性のブロック共重合体；（ｂ）少なくとも一つのホルフィナート造影剤;（ｃ）ポリマーソームの表層と関連した少なくとも1の目的部分;を含む前記投与する工程と、
光源、光検出器、またはその両方に光学的に結合する機器を提供する工程と、
前記組織内におけるある位置で前記ポリマソームの量を監視するための機器を使用する工程と、を含む。
【０１３５】
本発明は限定を意図するものではないが以下の実施例によって実証される。
【実施例１】
【０１３６】
ＯＥ７合成
ポリエチレンオキシド−ポリエチルエチレン（ＥＯ４０−ＥＥ３７、数平均分子量であるＭｎは約３９００ｇ／モル  ＥＯ＝０．３９８の体積分率、多分散基準
がＭｗ／Ｍｎ〜１．１０）は、Ｈａｊｄｕｋ  ＤＡ，Ｋｏｓｓｕｔｈ  ＭＢ，Ｈｉｌｌｍｙｅｒ  ＭＡ，Ｂａｔｅｓ  ＦＳ，Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ，Ｂ１０２，４２６９（１９９８），Ｈ．Ｅ．Ｗａｒｒｉｎｅｒ，Ｓ．Ｈ．Ｊ．Ｉｄｚｉａｋ，Ｎ，Ｌ．Ｓｌａｃｋ，Ｐ．Ｄａｖｉｄｓｏｎ，Ｃ，Ｒ，Ｓａｆｉｎｙａ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７１，９６９（１９９６），Ｍ．Ａ．Ｈｉｌｌｍｙｅｒ  ａｎｄ  Ｆ．Ｓ．Ｂａｔｅｓ，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ２９，６９９４（１９９６）；及びＭ．Ａ．Ｈｉｌｌｍｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７１：９７６（１９９６）の方法によって、合成して特徴づける。
【実施例２】
【０１３７】
ＯＢ２合成
ＯＢ２、ポリエチレンオキシド−ポリブタジエン（ＥＯ２６−ＢＤ４６、数平均分子量、Ｍｎ、約３６００ｇ／モル、ＥＯ＝０．２８の体積分率）は、Ｍ．Ａ．Ｈｉｌｌｍｙｅｒ  ａｎｄ  Ｆ．Ｓ．Ｂａｔｅｓ，Ｍａｃｒｏｍｏｋｅｃｕｌｅｓ  ２９，６９９４（１９９６）の方法によって合成した。
【実施例３】
【０１３８】
ＯＢ１８合成
ＯＢ１８、ポリエチレンオキシド−ポリブタジエン（ＥＯ８０−ＢＤ１２５、数平均分子量、約１０，４００ｇ／モル、ＥＯ＝０．２９の体積分率）はＭ．Ａ．Ｈｉｌｌｍｙｅｒ  ａｎｄ  Ｆ．Ｓ．  Ｂａｔｅｓ，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ２９，６９９４（１９９６）の方法によって合成した。
【実施例４】
【０１３９】
ＯＢ２１合成
ＯＢ１８、ポリエチレンオキシド−ポリエチレンエチレン（ＥＯ４０−ＥＥ３７、Ｍｎ約３９００、ＥＯの体積分率０．３９）はＭ．Ａ．Ｈｉｌｌｍｙｅｒ  ａｎｄ  Ｆ．Ｓ．  Ｂａｔｅｓ，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ２９，６９９４（１９９６）の方法によって合成して特徴づけた。
【実施例５】
【０１４０】
Ａ．一般的な小胞の調整
ポリマーソーム調整は、電子形成（Ｄｉｓｃｈｅｒ  ＢＭ，Ｗｏｎ  Ｙ−Ｙ，Ｅｇｅ  ＤＣ，Ｌｅｅ  ＪＣ−Ｍ，Ｂａｔｅｓ  ＦＳ，Ｄｉｓｃｈｅｒ  ＤＥ，Ｈａｍｍｅｒ  ＤＡ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８４，１１４３（１９９９）参照）、フィルム再水和またはバルク状再水和のいくつかの技術のうちの1つによって達成できる。
【０１４１】
Ｂ．薄膜再水和によるポリマーソーム膜のＮＩＲＦ取込み
それらの高分子膜の範囲内で散在性のポルフィリンに基づくＮＩＲＦを所有するポリマーソームは、薄膜再水和によって調合されることができる。塩化メチレン中、１００μＬの１ｍＭ  ＰＥＯ３０−ＰＢＤ４６ジブロック共重合体（Ｐ２９０３−ＢｄＥＯ、Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｏｕｒｃｅ  Ｉｎｃ，Ｄｏｒｖａｌ，Ｑｕｅｂｅｃ  Ｃａｎａｄａ）及びＮＩＲＦ種（ＰＺｎ２−ＰＺｎ５）の１ｍＭの水溶液の５μＬは、ガラス製の小びんの内部の肉上のまたは粗くなるテフロンの表面上に一様に被覆した後、１２時間以上減圧の下で溶媒をエバポレートした。ショ糖液（２５０−３００ｍＯｓＭ）の添加および２４時間６０℃の加温によって、ガラス（またはテフロン）から溶液へのＮＩＲ放射ポリマーソーム自発的な巨大な発芽（５〜２０μｍ）をもたらす。
【実施例６】
【０１４２】
バルク状再水和によるポリマーソーム膜のＮＩＲＦの取り込み
バルク状再水和に対して、数ミリグラムの固体ポリマーとポルフィリンをショ糖液１ｍｌに置いて一晩撹拌可能である。
【実施例７】
【０１４３】
小胞サイズの減少
小さな小胞、適切に狭い大きさ分布（１００〜２００ｎｍの直径範囲内）を有する小さな小胞が、小単層リポソームを考案するために使用されたものと類似の方法（超音波処理、凍結融解抽出、及び押し出し成型）を介して調整することができる。
【実施例８】
【０１４４】
超音波処理と凍結融解による小胞サイズの減少
前記超音波方法は、水溶液と乾燥薄膜製剤（Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標）に均一に堆積したポリマーとＮＩＲＦ種）を含む検体バイアルを超音波浴槽におき、３０分間一定に撹拌することを含む。凍結融解のいくつかの（ｘ３〜５）サイクルの後、検体バイアルを液体窒素に置く（３００ｎｍの中型のＮＩＲ−放射するポリマーソームの溶液を含む）。一旦液体窒素からのバブリングが静まると、前記バイアルはその後５６℃の水浴へ移す。
【実施例９】
【０１４５】
押し出し成型による小胞サイズの減少
小さな（１００ｎｍ直径）の単一分散懸濁液の押し出し成型は、水溶液の導入によってステンレス鋼、加圧された窒素ガスに接続しているシリンダに進行する。小胞水溶液はシリンダの底で円形の鋼篩で支えられるポリカーボネート０．１μｍの濾過器（Ｏｓｍｏｎｉｃｓ，Ｌｉｖｅｒｍｏｒｅ，ＣＡ）に強引に通される。ここで、小胞水溶液はエクストルージョンの後、集められる。この手順は繰り返され、そして、小胞の大きさ分布は動的光散乱（ＤｙｎａＰｒｏ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｓｖｉｌｌｅ，ＶＡ）で測定される。
【実施例１０】
【０１４６】
ＮＩＲ−放射性ポリマーソームの顕微鏡検査
巨大な（５〜２０μｍ）ＮＩＲ−放射性ポリマーソームは、上述した（小胞の外部及び内部の水溶液は２９０ｍＯｓＭショ糖と同一である）方法によって作る。小胞溶液を３０：７０に希釈し、ＰＢＳと浸透性をあわせる。２００μＬの得られる溶液をカスタム・フィットしたチャンバーに置く。前記チェンバーは、７５×２５×１ｍｍの無地の顕微鏡用スライド（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｇｌａｓｓ  Ｗｏｒｋｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｇｌａｓｓｗａｒｅ  Ｄｅｏｔ，Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ；Ｍｏｄｅｌ  ２９４７）、高真空グリースで付着した、２つの平行５×２５×２ｍｍのテフロン・スペーサ、および１８×１８ｍｍの顕微鏡カバースリップ（Ｆｉｓｈｅｒｂｒａｎｄ，Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）によって構成される。前記小胞水溶液を含むチェンバーはそれから逆コンフォーカル顕微鏡のサンプル台に配置した後、ＮＩＲ−放射性ポリマーソームがカバーガラスに定着するために画像化の前に２０分間を割り当てた。
【０１４７】
５〜２０μｍのＮＩＲ−放射性ポリマーソームのコンフォーカル顕微鏡像を走査している蛍光は、６５０ｎｍの放出フィルター（アルゴンレーザを介したλ＝４８８ｎｍの励起）を備えたＲａｄｉａｎｃｅ２０００  Ｍｕｌｔｉ−ｐｈｏｔｏｎ  Ｃｏｎｆｏｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を使用して得られた。図９は、ＮＩＲＦ  ＰＺｎ３に基づくから傾向放出が示される。ＮＩＲＦから9つの蛍光放射を差異のために修飾されたＰＺｎ３に基づくＮＩＲ放射するポリマーソームおよびＡｄｏｂｅ  Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐソフトウエアを使用している光沢と想像する。
【実施例１１】
【０１４８】
ポリマーソーム膜におけるポルフィリンに基づく近赤外線蛍光プローブ（ＮＩＲＦＳ）の光物理学的研究
中型（３００ｎｍ）のＮＩＲＦ取り込み放射性小胞は、薄膜再水和および音波処理によって生成し、小胞水溶液の電子吸収および蛍光分光光度的研究は、取込み効率および蛍光性質上のデータを得るために実施した。ポリマーソーム膜において分散したＰＺｎ２−ＰＺｎ５に対する吸収吸光係数（ε，Ｍ−１ｃｍ−１）の計算は、ベールの法則測定に従った。
【０１４９】
まず、放射性小胞水溶液は１０ｎｍの石英光学セルに置き、各膜取り込みＮＩＲＦ種に対する電子スペクトルを、Ｃａｒｙ１４の分光光度計（オンラインＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ，Ｂｏｇａｒｔ，ＧＡ）の光学に基づくＯＬＩＳ  ＵＶ／Ｖｉｓ／ＮＩＲ分光光度法系に記録した。その後、各小胞水溶液２ｍＬはガラス製の小びんへ移し、液体窒素で凍結させた。次に、凍結溶液を２４時間凍結乾燥し（ＦｒｅｅＺｏｎｅ４．５Ｌ  Ｂｅｎｃｈｔｏｐ  Ｆｒｅｅｚｅ  Ｄｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｌａｂｃｏｎｃｏ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｋａｎｓａｓ  Ｃｉｔｙ，ＭＯ；Ｍｏｄｅｌ７７５００）、小胞を破壊したポリマーをとＮＩＲＦ種を乾燥した。
【０１５０】
その後、乾燥検体をＴＨＦに溶解し、それらの吸収スペクトルを記録した。元のＮＩＲ−放射性ポリマーソーム水溶液におけるポリマーおよびＮＩＲＦ種の濃度は、この有機溶媒中で以前に測定した吸収に対して、ＴＨＦ中におけるのＮＩＲＦ吸収スペクトルを比較することよって算出した。これらのデータは、ポリマーソーム膜に取り入れられるＮＩＲＦ種に対するε吸収を決定するために用いた。この手順は、各々のＰＺｎ２−ＰＺｎ５に基づくポリマーソーム剤形に対して１０回繰り返し、報告した吸収ε値はこれらの吸光係数決定のための平均値を表す。個々の値は一般的に報告された数の１０％未満で変化した。
【実施例１２】
【０１５１】
ポリマーソーム膜におけるポルフィリンに基づくＮＩＲＦｓの蛍光分光法
ＮＩＲ−放射性ポリマーソームの蛍光スペクトルは、二相のＳ−およびＴ−チャネル配位を利用したＳｐｅｘ  Ｆｌｕｏｒｏｌｏｇ−３の分光光度計（Ｊｏｂｉｎ  Ｙｖｏｎ  Ｉｎｃ，Ｅｄｉｓｏｎ，ＮＪ）、およびＰＭＴ／ＩｎＧａＡｓ／Ｅｘｔｅｎｄｅｄ−ＩｎＧａＡｓ検出器を用いることによって得られた; 各検体に対して５１０ナノメートルの励起波長を使用した。発光スペクトルは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｕｒｅａｕ  ｏｆ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓによって供給される調整された光源のスペクトル出力を用いて修正した。蛍光スペクトルは、比較ピーク発光波長およびスペクトルの幅を強調するために表示した。古い（３〜５日）水溶液からの発光を検討によって、これらの構造が極めて安定しており、一定かつ安定な蛍光によって証明されたように、ＮＩＲＦ漏出または破壊がないことを明らかにした。
【実施例１３】
【０１５２】
ポリマーソームにおけるポルフィリンに基づくＮＩＲＦｓの膜ローディングの最適範囲の決定
ポリマー：ポルフィリンに基づくＮＩＲＦ種（ＰＺｎ１−ＰＺｎ３およびＰＺｎ５）の様々な比におけるテフロンに沈殿した薄膜製剤は、末端が４−ヒドロキシベンゾアートで修飾されたＯＢ−２様ポリマーの原液（ＣＨ２Ｃｌ２中１ｍＭ）、および複合化ポルフィリンに基づくＮＩＲＦ種（ＣＨ２Ｃｌ２の１ｎｍ）の単一水溶液のさまざまな量から作った。薄膜は、ブロック共重合体およびポルフィリンに基づくＮＩＲＦ種を以下の比で結合することによって、Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標）に沈殿させて作った。
【０１５３】
１．１：１  ＮＩＲＦに対するポリマー（２０μＬポリマー溶液と２０μＬポルフィリン溶液）
２．５：１  ＮＩＲＦに対するポリマー（１００μＬポリマー溶液と２０μＬポルフィリン溶液）
３．１０：１  ＮＩＲＦに対するポリマー（２００μＬポリマー溶液と２０μＬポルフィリン溶液）
４．１５：１  ＮＩＲＦに対するポリマー（３００μＬポリマー溶液と２０μＬポルフィリン溶液）
５．２０：１  ＮＩＲＦに対するポリマー（４００μＬポリマー溶液と２０μＬポルフィリン溶液）
６．２５：１  ＮＩＲＦに対するポリマー（５００μＬポリマー溶液と２０μＬポルフィリン溶液）
７．３０：１  ＮＩＲＦに対するポリマー（６００μＬポリマー溶液と２０μＬポルフィリン溶液）
８．４０：１  ＮＩＲＦに対するポリマー（８００μＬポリマー溶液と２０μＬポルフィリン溶液）
９．５０：１  ＮＩＲＦに対するポリマー（１０００μＬポリマー溶液と２０μＬポルフィリン溶液）
【０１５４】
小胞に対する１つのポリマーは、４ｍＬの水の薄膜の再水和によって、各々のこれらの剤形から生成された（水性ポリマーソーム中、約５μＭ濃度のＮＩＲＦをもたらす）。膜統合されたＮＩＲＦsの研究が導かれた吸収および蛍光分光光度的は、材料を始めているポリマー、ポリマーソーム膜のＮＩＲＦsの取込み効率および異なる大きさを設定されたポルフィリンに基づくＮＩＲＦs（ポリマーの比の関数としての全て）を積んでいるポリマーソームの親族蛍光強度からポリマーソームの得率上のデータを得た：ＮＩＲＦ種は、テフロン（登録商標）上の薄膜として沈澱した。実験は、各々のユニークな剤形のためのｎ＝５地質サンプルによって行われた。
【０１５５】
吸収スペクトルは、ポリマー、すなわちＮＩＲＦのさまざまな薄い剤形の再水和によって形成されるポリマーソームの各々の水性サンプルのために得られた。改質ポリマーのＵＶ吸光度（λ＝２５５ｎｍ）を監視し、そして、Ｂｅｅｒｓ法則計算からこれらの種の水溶液濃縮の決定に見込まれるポルフィリンの可視／ＮＩＲ吸光度（Ａ＝εｃｄにおいてＡは吸光度、ｃは濃度、εは吸光度減衰係数、及びｄは光度長）。ここでポリマー両方のポリマーに対するε（λ＝２５５ｎｍにおいて２４，４００）および蛍光団（Ｖ．Ｓ．−Ｙ．Ｌｉｎ，Ｓ．Ｇ．Ｄｉｍａｇｎｏ，Ｍ．Ｊ．Ｔｈｅｒｉｅｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６４，１１０５−１１１１（Ｍａｙ  ２０，１９９４）；Ｖ．Ｓ．−Ｙ．Ｌｉｎ，Ｍ．Ｊ．Ｔｈｅｒｉｅｎ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ−ａ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  １，６４５−６５１（ＤＥＣ，１９９５）；Ｋ．Ｓｕｓｕｍｕ，Ｍ．Ｊ．Ｔｈｅｒｉｅｎ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  １２４，８５５０８５５２（ＪＵＬ２４，２００２）；及びＩ．Ｖ．Ｒｕｂｔｓｏｖ，Ｋ．Ｓｕｓｕｍｕ，Ｇ．Ｉ．Ｒｕｂｔｓｏｖ，Ｍ．Ｊ．Ｔｈｅｒｉｅｎ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  １２５，２６８７−２６９６（ＭＡＲ  ５，２００３）））は既知であった。このデータは、テフロン（登録商標）に置かれるポリマー：ＮＩＲＦの比の関数として、水溶液のポリマーソームの得率上の情報を与えた（ポリマー材料を始める既知量に、水溶液のポリマーのこの算出量を比較することによるは、フィルムに沈澱した。その上、ポリマーの比の関数としてのポリマー：ＮＩＲＦソーム膜の種の取込みテフロンに置かれるＮＩＲＦは、ＮＩＲＦ材料を始める既知量から、同様に算出された。最後に、有することはポリマーの比の関数として、水溶液のポリマーおよびＮＩＲＦ種の濃縮を決定したＴｅｆｌｏｎ（登録商標）に沈澱してポリマー：ＮＩＲＦのモル比として直ちにポリマーソームの範囲に膜ローディングを与える。
【０１５６】
蛍光スペクトルは、ポリマー：ＮＩＲＦのさまざまな薄膜剤形の再水和によって形成されるポリマーソームの水性サンプルのために得られた。ポリマー：色素の最適比は、各々のユニークなＮＩＲＦ種に対して、膜−ローディングで算出したＮＩＲＦの程度まで、膜取り込みポリマーソーム水溶液の蛍光強度を比較して算出し、これは最大限に放射するポリマーソームを生むために薄膜再水和のために使われなければならない。この値は、ＮＩＲＦ取り込みポリマーソームの水性サンプルからのカウント数を測定して、ポリマーの最も蛍光性の剤形：所定のＮＩＲＦ種のためのフルオロフォアの比によってこの値を分けることによって、正規化相対的な蛍光として表される。
【実施例１４】
【０１５７】
ポリマーソーム対リポソームのＮＩＲＦsの比較膜ローディング
テフロン上に堆積するフィルムが脂質：ＮＩＲＦのモル比が１００：１より多く含む限り、薄膜再水和と音波処理によって、ベンチマーク・ポルフィリン・モノマーＰＺｎ１は、約０．５〜１％モル濃度でＳＯＰＣリポソームにおいてロードされることができる（図１２Ａ）。同様にＳＯＰＣおよびＰＺｎ２の薄膜から形成されるリポソーム水溶液の吸収スペクトルは、リポソーム膜においてこのようなより大きいＮＩＲＦの限界結合を示した（図１２Ｂ）。これらの結果は、脂質：ＮＩＲＦのモル比が１００：１を上回る場合のテフロン・フィルムからＰＺｎ２の取り込みを示すものであるが、前記吸収スペクトルは、脂質：ＮＩＲＦモル比がより高い（５００：１)薄膜剤形から作られるリポソーム溶液に対しては増加しなかった。特に、ポリマーソームにおいてＰＺｎ２が関与する類似の実験とは対照的に、ＳＯＰＣリポソーム（脂質およびＰＺｎ２の薄膜剤形から形成される）の水溶液の電子吸収スペクトルは、有機溶媒におけるこのＮＩＲＦのスペクトルに類似しておらず、それらはこのＮＩＲＦが一様な膜分散であるよりむしろ会合体形成と一致しているようである。
【０１５８】
ＰＺｎ３−ＰＺｎ５が関与する類似の実験は、より大きいＮＩＲＦsに対するＳＯＰＣリポソーム（脂質：ＮＩＲＦが５００：1のモル比でさえ堆積する薄膜剤形の再水和によって調合した）中への取り込みを示さなかった。対照的に、各ＮＩＲＦ種（ＰＺｎ１−ＰＺｎ５）は、２０：１のモル比で沈澱したポリマーおよびＮＩＲＦの薄膜から、効果的にかつほとんど等しくＮＩＲ放射性ポリマーソームを取り入れた（約５％の膜ローディング）（図９）。全てのリポソームおよびポリマーソーム剤形に対して、動的光散乱および位相差顕微鏡法は、小胞の存在を示した。
【０１５９】
図５は、本来はテフロン上の薄膜として堆積したポリマー：蛍光プローブのモル比の関数としてのポルフィリンに基づく蛍光プローブを伴うポリマーソームのローディングを（ポリマーソーム水溶液におけるポリマー：染料のモル比として表す）示す。
【０１６０】
図６は、テフロン上に薄膜として堆積したポリマー：ＮＩＲＦ種のモル比の関数として、ポルフィリンに基づくＮＩＲＦｓのポリマーソーム膜内に組み込まれる効果を示す。
【０１６１】
図７は、テフロン上に薄膜として堆積したポリマー：ポルフィリンに基づくＮＩＲＦ種のモル比の関数として、水溶液中（使用したポリマーの全量のモル％として）のポリマーソームの収率を示す。
【０１６２】
図８は、膜ローディングの関数として、ＮＩＲＦを取り込んだポリマーソームの相対的な蛍光（ポリマーソーム膜を構成しているポリマー：ポルフィリンに基づくＮＩＲＦ種のモル比）示す。
【０１６３】
図９は、ポリマーソーム対リポソーム膜のＮＩＲＦsの膜ローディングの比較研究からの結果を示す。
【実施例１５】
【０１６４】
トレシル化ブロック共重合体の合成
エチレンオキシド阻害剤をトレシル化するために使用したプロトコールは、Ｎｉｌｓｓｏｎ，Ｋ&Ｍｏｓｂａｃｈ，Ｋ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｉｇｙ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １２，１１９−１２８（１９９０）；及びＤｅｌｇａｄｏ，Ｃ，；Ｆｒａｎｃｉｓ，Ｇ．Ｅ．&Ｆｉｓｃｈｅｒ，Ｄ．Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍ  ９，２４９−３０４（１９９２）から採用した。ＯＥ−２１は０℃でジクロロメタンに溶解した。ピリジンおよびトレシルクロライドの混合物は滴下して添加し、そして、室温で９０分反応させた。有機溶媒をエバポレートし、ピリジンがＵＶ分光測光の下で検出されなくなるまで、生成物は無水メタノールと塩酸を使用して沈殿させた。ＮＭＲ（溶媒としてクロロホルム−ｄ）は、ブロック共重合体のトレシル化を確認するために用いた。ＯＥ−２１のＮＭＲスペクトルは、Ｍ．Ａ．ＨｉｌｌｍｙｅｒおよびＦ．Ｓ．Ｂａｔｅｓ，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ２９，６９９４（１９９６）において立証される。純粋なＯＥ−２１のＮＭＲスペクトルは、０．８ｐｐｍ（一重項）、１．１ｐｐｍ（一重項）、１．３ｐｐｍ（ダブレット）および３．６５−３．８０（マルチプル・ピーク）でピークを有する;純粋なトレシルクロライドは、４．４ｐｐｍ（三重項）で、ピークを有する。トレシル化されたＯＥ−２１のポリマーのＮＭＲスペクトルは、純粋なＯＥ−２１および純粋なトレシルクロライドの位置でピークを有した。
【実施例１６】
【０１６５】
ポリマソームの機能化及び形成
接着実験のためのビオチン化ポリマーソームのは、無水のメタノール中、４℃で一晩、２：１の過剰のビオチンと５０μｇのトレシル化されたポリマーを反応して形成した。ポリマーの薄膜はエバポレーションによって小びんの底部に置かれ、ポリマソームは１ｍＬ（３００ｍＯｓｍ）のショ糖液（浸透圧計Ｍｏｄｅｌ３３００、Ａｄｖａｎｃｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｎｏｒｗｏｏｄ，ＭＡ）と再水和によって形成された。過剰なビオサイチン分子は、Ｓｌｉｄｅ−ａ−Ｌｙｚｅｒダイアリシス・カセット式がＰｉｅｒｃｅ（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）から購入した1つのＯＫのＭＷカットオフを用いて、外液のダイアリシスによって除去された。小胞水溶液は、シリンジおよび有する透析カセットに注入し、カセットを可溶中性リジンを含むイソ-浸透圧性ＰＢＳ水溶液で満たされるビーカーに浸し、ビオチンおよびアビジンの平衡解離定数が１０００分の１以下になるまで遊離ビオサイチンの濃度を減らした（ＫＤ＝１０〜１４Ｍ）。その後小胞が透析から除去されて、接着またはバルク状アビジン吸着計測のために直ちに使われた。
【０１６６】
水溶液からアビジンの吸着を測定するビオチン化された小胞は、ＰＢＳ中、過剰のアビジン−ローダミン  イソチオシアネートと共に一晩インキュベートした。過剰アビジンは、きれいなＰＢＳに対して１００ＫのＭＷカットオフ・膜の透析によって除去された。得られた検体は、コンフォーカル顕微鏡検査によって撮像された。
【０１６７】
コンフォーカル実験のためのＡｌｅｘａ−Ｂｉｏｔｉｎポリマーソームは、無水のメタノール中、４℃で一晩、２：１の過剰のＡｌｅｘａ−Ｂｉｏｔｉｎと共にポリマーをトレシル化して反応することによって形成された。前記ポリマーは乾燥して、クロロホルムに再溶解し、過剰のＡｌｅｘａ−Ｂｉｏｔｉｎを除去するためにＰＢＳで３回連続洗浄した。Ａｌｅｘａ−Ｂｉｏｔｉｎポリマーは、クロロホルム中、変更されていないポリマーと様々な比で混合し、均等膜に乾燥した。前記フィルムは、形ベシクルに３００のｍＯｓｍショ糖によって再水和された。この水溶液は、差異をイメージングのために用意するためにその後イソ-浸透圧性ＰＢＳで薄められた。
【実施例１７】
【０１６８】
ポルフィリン化画像化剤の合成
ポルフィリン画像化剤は、米国特許第５，３７１，１９９号公報、第５，４９３，０１８号公報、第５，５９９，９２４号公報、第５，７５６，７２３号公報、第５，７８３，３０６号公報、第５，８１７，８３０号公報、第５，８５６，５１５号公報、第５，９５５，６０３号公報、第５，９８６，０９０号公報、及び第６，１００，３９２号公報において教示される方法によって、一般に合成される。
【実施例１８】
【０１６９】
ＮＩＲ放射性ポリマーソームの共焦点及びｉｎ  ｓｉｔｕ蛍光画像化
膜散在ＮＩＲＦ ＰＺｎ３を特徴としている５〜２０μｍポリマー小胞共焦点顕微鏡画像を走査は図１０Ａで示される。蛍光（λｅｍｍａｘ＝８０９ナノメートル）画像は、６５０ナノメートル長通過放射性フィルターを備えているＢｉｏＲＡＤ  Ｒａｄｉａｎｃｅ  ２０００−ＭＰ  Ｃｏｎｆｏｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ  Ｓｙｓｔｅｍによって得られ、蛍光が小胞膜だけから起こることを立証した。小胞の内部の水性中心部および外液は同一（２９０のｍＯｓＭショ糖）であった点に注目すべきである。図１０Ｂは、ｉｎ  ｓｉｔｕにおける５ｍＬのＰＺｎ３に基づくＮＩＲ放射性ポリマーソーム溶液を含んでいる１０ｍＬサンプルチューブの蛍光画像を示す。水溶液は、ＰＥＯ−ＰＢＤ共重合及びＰＺｎ３の薄膜再水和の後、単一分散、動的光散乱によって測定される直径１００ナノメートルの小胞を得るための標準的な加工（超音波／凍結融解抽出／押し出し成型）によって調整した。前記水溶液の蛍光画像は、ＣＣＤカメラを備えているＸｅｎｏｇｅｎ  Ｉｖｉｓ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍおよび特異的なＮＩＲ励起および蛍光検出のための適切なフィルターによって得られた。
【実施例１９】
【０１７０】
マイクロピペット吸引
マイクロピペット吸引は、Ｅｖａｎｓ，Ｅ．；Ｎｅｅｄｈａｍ，Ｄ．Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．９１，４２１９〜４２２８（１９８７）；Ｂｏ，Ｌ．；Ｗａｕｇｈ，Ｒ。Ｅ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．５５，５０９〜５１７（１９８９）；Ｂｏｚｉｃ，Ｂ．；Ｓｖｅｔｉｎａ，Ｓ．；Ｚｅｋｓ，Ｂ．；Ｗａｕｇｈ．Ｒ．Ｅ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．６１，９６３〜９７３（１９９２）；Ｗａｕｇｈ，Ｒ．Ｅ．；Ｓｏｎｇ，Ｊ．；Ｓｖｅｔｉｎａ，Ｓ．；Ｚｅｋｓ，Ｂ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．６１，９７４〜９８２（１９９２）；Ｈｅｉｎｒｉｃｈ，Ｖ．；Ｗａｕｇｈ，Ｒ．Ｅ．Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．２４，５９５〜６０５（１９９６）；Ｅｖａｎｓ，Ｅ．Ａ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．４８，１７５〜１８３（１９８５）；Ｅｖａｎｓ，Ｅ．Ａ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．４８，１８４〜１９２（１９８５）；Ｅｖａｎｓ，Ｅ．；Ｂｅｒｋ，Ｄ．；Ｌｅｕｎｇ，Ａ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．５９，８３８〜８４８（１９９１）；Ｅｖａｎｓ，Ｅ．；Ｂｅｒｋ，Ｄ．；Ｌｅｕｎｇ，Ａ．；Ｍｏｈａｎｄａｓ，Ｎ．Ｂｉｏｏｈｙｓ．Ｊ．５９，８４９〜８６０（１９９１）；Ｂｅｒｋ，Ｄ．；Ｅｖａｎｓ，Ｅ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．５９，８６１〜８７２（１９９１）；Ｅｖａｎｓ，Ｅ．；Ｌｅｕｎｇ，Ａ．Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １９８４  ９８，１２０１〜１２０８（１９８４）；Ｎｏｐｐｌ−Ｓｉｍｓｏｎ  Ｄ．Ａ．；Ｎｅｅｄｈａｍ，Ｄ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．７０，１３９１〜１４０１（１９９６）；Ｋｉｍ，Ｄ．Ｈ．；Ｋｌｉｂａｎｏｖ，Ａ．Ｌ．；Ｎｅｅｄｈａｍ，Ｄ．Ｌａｎｇｍｕｉｒ  １６，２８０８〜２８１７（２０００）；Ｅｖａｎｓ，Ｅ．；Ｋｌｉｎｇｅｎｂｅｒｇ  Ｄ．Ｊ．；Ｒａｗｉｃｚ，Ｗ．；Ｓｚｏｋａ，Ｆ．Ｌａｎｇｍｕｉｒ  １２，３０３１〜３０３７（１９９６）；Ｂｅｒｍｕｄｅｚ  Ｈ；Ｂｒａｎｎａｎ  Ａ．Ｋ．；Ｈａｍｍｅｒ  Ｄ．Ａ．；Ｂａｔｅｓ  Ｆ．Ｓ．；Ｄｉｓｃｈｅｒ  Ｄ．Ｅ．Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒｅｓ  ３５  ８２０３〜８２０８（２００２）；及びＬｅｅ  Ｊ．Ｃ．−Ｍ．；Ｓａｎｔｏｒｅ  Ｍ．；Ｂａｔｅｓ  Ｆ．Ｓ．；ＤｉｓｃｈｅｒＤ．Ｅ．Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ３５  ３２３〜３２６（２００２）に詳細に記載されている。簡潔には、マイクロピペット、ホウ珪酸ガラス管（Ｆｒｉｅｄｒｉｃｈ  ａｎｄ  Ｄｉｍｍｏｃｋ，  Ｍｉｌｖｉｌｌｅ，  ＮＪ）は、ニードル／ピペット電極製作器（モデル７３０、Ｄａｖｉｄ  Ｋｏｐｆ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，  Ｔｕｊｕｎｇａ，  ＣＡ）  を使用してなされて、チップに平滑で扁平な縁を与えるガラスビーズを使用してマクロ鍛錬した。マイクロピペットの内径は、１μｍ〜最高６μｍの範囲で使用した。前記マイクロピペットの内径は、コンピュータ画像化ソフトウエアを使用して測定した。マイクロピペットは、ポリマーソームおよびマイクロスフェア（スーパーアビジン被覆マイクロスフェア、Ｂａｎｇｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｆｉｓｈｅｓ，  ＩＮ）を持ち上げ、張力をポリマーソーム膜に適用するために用いた。マイクロピペットは、ＰＢＳ溶液で満たされ、２つの吸引ステーションに接続した。各々の吸引ステーションは、Ｎｉｋｏｎ  Ｄｉａｐｈｏｔ倒立顕微鏡上���置き、各々のステーションは、モノメーター、２つのＶａｌｉｄｙｎｅ圧力変換器（モデルＤＰ  １５−３２及びＤＰ  １０３−１４，Ｖａｌｉｄｙｎｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．，Ｎｏｒｔｈｒｉｄｇｅ，  ＣＡ）、２つのデジタルの圧力読み出し装置（モデルＷＲ−６，  Ｎａｒｉｓｈｉｇｅ，  Ｔｏｋｙｏ，  Ｊａｐａｎ）、及びＭｅｌｌｅｓＧｒｉｏｔ  ミリマニピュレータ（コースｘ，ｙ，ｚ，対照）を備えていた。吸引圧力は、モノメーターに接続しているシリンジによって適用された。ポリマーソーム弛緩性を作るために、実験は、３５０ｍＯｓｍの重量オスモル濃度を有したＰＢＳ溶液において実行された。前記溶液の重量オスモル濃度は、オスモメーターを使用して測定された。ショ糖およびＰＢＳ溶液は異なる密度および屈折率を有するので、ポリマーソーム堆積物は、位相差またはＨｏｆｆｉｎａｎオプティクスで視覚化する。
【実施例２０】
【０１７１】
接着実験  
接着実験は、顕微鏡カバーガラス（１８ｍｍ（幅）×１８ｍｍ（長さ）、（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）））及びマイクロスライド（Ｃｏｍｉｎｇ  Ｇｌａｓｓ  Ｗｏｒｋ（Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ））から作られるチェンバー（図３）内部で実行された。再使用可能なチェンバーフレームは、２つのマイクロスライド（２５ｘ３２ｍｍ）を一緒に接続するために金属クリップを使用することによって製造した。清潔なチェンバーは、カバーガラスを狭いストリップ（５ｘ１８ｍｍ）に切って、それらを少量の減圧グリースを有する場所に取り付けることによって各々の実験のために調合された。カバーガラスは、チェンバーのシーリングおよびフロアを形成する。
チェンバーの体積はほぼ４０μｌである。マイクロピペットがチェンバーの内部コンパートメントを分析できるように、チェンバーの側面は開いていた。各々のマイクロピペットのチップは、マイクロピペットのチップに吸い込まれた対象の非特異的接着を防ぐために、０．５の重量％ＢＳＡ水溶液において３０秒浸漬させた（１ｍｌ蒸留水において０．００５ｇのＢＳＡ）。前記チェンバーの表面は、マイクロスフェア／ポリマーソーム水溶液に導入する前に、０．５％のＢＳＡ水溶液で被覆し、小胞のガラス壁への非特異的接着を妨げた。ポリマーソームおよびマイクロスフェアは、同軸上に各々に直面して取り付けた２つのマイクロピペットを使用して採取した。前記ポリマーソームおよびマイクロスフェア対と接触させた後、前記ポリマーソーム上の張力は、前記接触ゾーンを形成するように段階的に減少した。表面は、前記ポリマーソーム表面リガンドであるビオサイチンがマイクロスフェアのスーパーアビジン（ｓｕｐｅｒａｖｉｄｉｎ）上の相補性表面基に結合することができるように、１５分間平静に保った。１５分後、前記ポリマーソーム上の張力を、段階的に増加させ、そのイベントは光学ビデオ顕微鏡検査を使用して記録した。前記ポリマーソームおよびマイクロスフェアがもはや付着しなかった張力は、臨界張力として分類された。実験は、ビデオＣＣＤカメラ（モデル４９１５，Ｃｏｈｕ  Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）およびソニーＳＶＯ−９５００ＭＤ  ＶＴＲ（Ｓｏｎｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，ＮＪ）を使用して記録した。分析のための画像は、次の分析のためにＮａｔｉｏｎａｌ  ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓからのＩＭＡＱソフトウエアを使用して、記録されたテープから、その後読み出した。画像解析は、Ｓｃｉｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，ＭＤ）からのコンピューターソフトウェア（Ｓｃｉｏｎ  Ｉｍａｇｅ）を経て実行した。
【実施例２１】
【０１７２】
機能的小胞の形成及びビオサイチンの表面濃度の調節
最終的な小胞構造への官能化ポリマーの取込みは、蛍光性ビオチンによって官能化されたポリマーを使用した一連の実験において検討した。組織的にビオチンの表面濃度を変化させるために、前記官能化ポリマーは、均一なポリマーフィルムを形成するように乾燥する前に、クロロホルムにおける非官能化ポリマーと混合した。Ａｌｅｘａフルーア４８８ビオサイチン官能化ＯＢ−１８（ＯＢ−１８ｂ）ポリマーは、０％、１０％、２０％、５０％、８０％および１００％のＯＢ−１８ｂ（質量によって）の濃度で、ＯＢ−２またはＯＢ−１８と混合させた。結果として生じるポリマーソームは、ポリマーソームへの官能化ポリマーの相対的な取込みを査定するために、コンフォーカル顕微鏡検査を使用して画像化された。各々の系列は、レーザ強度または検出器感受性変動の作用を最小にするために同じ機械セッティングを用いて配列的に分析した。蛍光の量は、その水性コアにおいて検出されたいかなる蛍光を超える、各ポリマーソームのピーク強度を測定することによって定量した。エッジ光度は、添加された修飾ＯＢ  １８の量に比例して増加し、これは、ビオチンの表面濃度は、小胞を形成するために使用されたフィルムのポリマーの濃度を変えることによって効果的に変化させることができることを示している。ポリマーソームへの自己集合するためのブロックコポリマーの能力は、ビオサイチン、トレシルクロライドまたはローダミンでの修飾によって影響を受けるようには見えなかった。
【実施例２２】
【０１７３】
バルク水溶液から官能化ポリマーソームへのアビジンの吸着
アビジンへ結合するための、ポリマーソーム表面上のビオチンの能力を評価するために、ビオチン標識ポリマーソームは、可溶性Ａｌｅｘａフルーア４８８共役ストレプトアビジンと共にインキュベートし、次にコンフォーカル顕微鏡検査によって画像化した。
非トレシル化ポリマーを使用してたネガティブ対照サンプルにより、非修飾ポリマーソーム表面への、Ａｌｅｘａフルーア４８８共役ストレプトアビジンの非特異的接着は存在しないことが示された。ＯＢ−１８およびＯＢ−２ポリマーソームの表面での蛍光量は、ビオチン化ＯＢ−１８の量が増加するように定量した。
２つの系列は、１００％のＯＢ−１８ｂサンプルの強度によって、お互いに関して規準化した。どちらの系列の蛍光性強度の平均量が、１０モルの％より上に変化することはなかった。ＯＢ−１８またはＯＢ−２ポリマーソームのＯＢ−１８ｂによって作られる小胞への、バルク水溶液からのアビジンの吸着によって得られた蛍光の量における識別可能な相違はなかった。
【実施例２３】
【０１７４】
接着の分類
ビオチン化ポリマーソームとスーパーアビジン被覆マイクロスフェアとの間の接着を測定するために、粘着型を識別することが必要である。接触領域は自発的に形成し、接触を剥がすために必要な張力は接触領域が減少するにつれて増加するので、ビオチン標識ポリマーソームは、動力学的に捕捉されたシステムとしてスーパーアビジン−被覆マイクロスフェアに結合する。接触距離は、前記ポリマーソームがマイクロスフェアと接触した場所の２つのエッジ点間の線形の距離として測定した。ピーリング実験の前に、前記ビオサイチン−被覆ポリマーソームは、スーパーアビジン−被覆マイクロスフェアと接触させた。ポリマーソーム上の張力は、前記ポリマーソームが前記マイクロスフェアに接着するように段階的に減少し；マイクロピペットは、ポリマーソームとの接着から離し、前記ポリマーソームは１５分間、定常状態に結合させた。１つのマイクロピペットが静的にスーパーアビジン−被覆マイクロスフェアを保つと共に、他のマイクロピペットは、ちょうど前記ポリマーソームに触れるように動かした。吸引圧力が増加するにつれて、前記ポリマーソームは、投影長さの増加と共にマイクロピペットに吸引された。前記ポリマーソームが初めに吸引されると、接着している膜の小部分は、小さい張力を有するマイクロスフェアとの接触から剥がされる。接触距離のこの初期減少の後、小胞膜に適用される張力が増加するにつれて、前記接触距離は臨界張力に達するまでゆっくり減少した。臨界張力では、前記ポリマーソーム及び前記マイクロスフェアに接続している全てのビオチン−アビジン結合は離れ、前記接触距離は、単一の接触点まで減少し、離れる。このシステムは、平衡システムとは基本的に異なるように働き、前記接触を形成するために必要な力は、接触を離すために必要とされる力に本質的には等しい。従って、接着の適切な測定基準は、接着エネルギーよりむしろ臨界張力である。現在の実験において、ポリマーソームが初めに拡散を通じてスーパーアビジン−被覆マイクロスフェアに接着する場合であっても、それは前記ポリマーソームを前記マイクロスフェアに保持することの原因となる接触領域の範囲内で形成されたビオサイチンおよびアビジン間の結合である。非修飾ポリマーソームでの類似実験は、わずかな印加張力によって速く減少する前記ポリマーソームとマイクロスフェアとの間の接触領域を生じる。接着実験が過剰な可溶性ビオチンを用いて繰り返される場合、類似した結果が観察され、それは前記接着が特にアビジン−ビオチン結合に起因することを示すものである。
【実施例２４】
【０１７５】
臨界張力の測定
ビオチン化ポリマーソームの様々な組成物は、ＯＢ−１８ｂと、ＯＢ−２或いはＯＢ−１８を異なるパーセンテージで混合することによって製造した。ＯＢ−２がＯＢ−１８より非常に短いので、２つの異なる膜は、前記ポリマーソームおよびマイクロスフェア間の次の接着に影響を及ぼすような異なる分子表面トポグラフィーを生じると仮定された。
純粋なＯＢ−１８において官能化ＯＢ−１８（ＯＢ−１８ｂ）を用いた場合：基底膜から間隔をおいて配置されるビオチンの有利な提示が見られない。ＯＢ−２において官能化ＯＢ−１８を用いた場合：ＯＢ−２およびＯＢ−１８ポリマーの鎖長の相違は、ＯＢ−１８上の接着分子がより短いＯＢ−２表面ブラシを越えて延長される表面トポグラフィーを補助する。ポリマーソーム及びマイクロスフェアを離すことが必要である前記臨界張力は、前記ポリマー混合物のビオチン化ＯＢ−１８のポリマーのモル％に対してプロットされた。ＯＢ−１８膜から生じたポリマーソームの臨界張力は、ＯＢ−１８ｂの１０モル％までのビオチン化ポリマー濃度で増加する。前記臨界張力は、ＯＢ−１８ｂが１０モル％を越えて増加するようには増加せず、これはアビジン結合が飽和であることを示唆するものである。ビオチン化ＯＢ−１８がＯＢ−２（黒印）と混合された場合、最大が５５モル％の  ＯＢ−１８ｂの近くに達するまで、ビオチン化ＯＢ−１８のパーセンテージが増加するにつれて、前記臨界張力は増加する。ビオチン化ＯＢ−１８の更なる増加は、前記膜が純粋なＯＢ−１８ｂである限り、より低い臨界張力を生じる。ＯＢ−１８ｂがＯＢ−２を混ぜ合わせられるときに、接着プラトーはこのシステムにおいては観察されず、ＯＢ−１８ｂがＯＢ−２と混合させた場合に測定された前記臨界張力は、ＯＢ−１８ｂがＯＢ−１８と混合させた場合に比べて大きい。いくつかのネガティブ対照実験は、測定された臨界張力がユニークで再生可能なことを確実にするために実行された。Ａｌｅｘａフルーア４８８ビオサイチンによって修飾されたポリマーソームの臨界張力は、上記で報告された結果とは見分けがつかなかった。トレシル化ポリマーおよびアビジン被覆マイクロスフェアから生じたポリマーソームの間での接着は観察されなかった。非反応性トレシル基がビオチン化小胞の接着を共有する、または補足するという可能性を除外するために、ビオチン化ポリマーソームは、残留トレシル基をキャップするようにエタノールアミンと反応させた。エタノールアミンでキャップされた小胞から測定した臨界張力は、エタノールアミンキャッピングのない同じ濃度でのサンプルの標準偏差範囲内であった。表面トポロジー、膜組成、またはビオチンの提示は、表面へのポリマーソームの接着において重要な役割を演ずると考えられる。
【実施例２５】
【０１７６】
官能化ポリマーソームのテザー形成
官能化ポリマー小胞の膜からのテザー形成は、ＯＢ−２のＯＢ−１８ｂの低濃度を有する小胞の臨界張力を測定しようとした場合に、観察されたが；テザー形成は、純粋のＯＢ−１８のＯＢ−１８ｂと同じ濃度を有する小胞、或いは基底膜として使用したポリマーに関係なくＯＢ−１８ｂポリマーのより高い濃度を有する小胞からからは観察されなかった。
安定テザー形成は、ＯＢ−２における４モル％のＯＢ−１８ｂで、高度に再生可能であった。吸引圧力は、マイクロピペットを通じて前記ポリマーソーム膜に元々適用されており；前記吸引圧力は、その後減少させ、前記ポリマーソームは、マイクロピペットから解離させた。前記ポリマーソームは、前記ビオチン化ポリマーソームおよび前記スーパーアビジン−被覆マイクロスフェアの間で形成されたテザーによって、アビジン被覆マイクロスフェアへ引かれた。ポリマーソームが総容積の保護のためにスーパーアビジン−被覆マイクロスフェアの方へ引き寄せられるにつれて、前記テザー直径は増加する。
【実施例２６】
【０１７７】
ＮＩＲＦｓ含有官能化ポリマーソーム
ポリマーソームは、少なくとも一部のブロックコポリマーが実施例に記載されたように官能化される以外は、実施例５に記載されたように一般に形成した。
【実施例２７】
【０１７８】
腫瘍内のＮＩＲ−放射性ポリマーソームの検出
生動物の腫瘍の範囲内の深部からシグナルを生成する、ＮＩＲ−放射性ポリマーソームの蛍光画像は、Ｉｖｉｓ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍを使用して得られ（Ｘｅｎｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ；１００系列）、これは、白色光励起、ＣＣＤカメラ−ベース蛍光検出器（Ｉｖｉｓ  ７７  ＳＩ６２０ＥＥＶ）、およびＮＩＲ−放射性インドシアニングリーンに対して適切なフィルターセット（バンド通過励起７０５〜７６５ｎｍで発光８０５〜８８０ｎｍ）を備えている。画像は、ＮＩＲ−放射性ポリマーソーム水溶液の直接的な腫瘍注入の後、３０、３５、４５、６０、１２０分で撮影した。
【０１７９】
２０μｇ以下のＮＩＲ−放射性ポリマーソーム（５モル％ＰＺｎ３を添加）は、９Ｌの神経膠腫−関連フィッシャーラットの２ｃｍ直径の皮下腫瘍の中央に導入された。
バンド通過励起（７０５〜７６５ｎｍ）および発光フィルター（８０５〜８８０ｎｍ）の両者は、ＮＩＲＦ  ＰＺｎ３には最適でなかった；それにも関わらず、高い比率の蛍光シグナル−バックグラウンドが得られ、これは小胞からの統合発光の半分に対応するものである。生動物の蛍光画像は、図１０に表した。前記シグナル強度は、次の１．５時間で撮影された連続画像の間、定常的なままだった。
【実施例２８】
【０１８０】
低温光学画像システムを介した、注入された腫瘍の高解像度３Ｄ蛍光スキャン
低温３Ｄ蛍光スキャンは、（実施例２３にて説明したように）腫瘍内の深部から発光しているＮＩＲ−放射性ポリマーソームのより大きい空間解像度を提供するように使用した。スナップ凍結−固定技術は、組織の代謝状態を制御し、次の蛍光計測のために定常的にしておくために用い；これは、最大空間解像度を提供するためにシグナル−ノーズ比を改良するのと同様に、その代謝状態を保存するために組織を凍らせるのに必要である。
動物は、５分間、事前に冷却したイソペンタン（−１５０℃）において浸漬し、その後液体窒素（−１９６℃）へ移した。次に腫瘍は、外科的に切り取り、エタノール−グリセリン水の混合物に包埋させ（凍結点：−３０°Ｃ）、３Ｄ表面スキャン光学システムを介した高解像度蛍光画像化のために低温で配置した。
【０１８１】
光学スキャンシステムは、専門寒冷ミラー型（６５０ＤＲＸＲＵ、Ｒ：３００／６００ｎｍＴ：７００〜９００ｎｍ、Ｃｈｒｏｍａ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏｒｐ）、７８０ｎｍレーザダイオードＮＩＲ励起源（３０ＭＷ、Ｓｈａｒｐ  Ｃｏｒｐ．）、及び特異的なＮＩＲ励起（８２０＋／−５ｍｎ（Ｏｍｅｇａ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｉｎｃ））および発光（８３０＋／−１０  ｎｍ，ｏ．ｄ．>５．５，Ｏｍｅｇａ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｉｎｃ）のためのフィルターを装備したＰＭＴ検出器（Ｒ９２８，Ｈａｍａｍａｔｓｕ  Ｉｎｃ）を用いた。凍った腫瘍サンプルは、機械加工された平面であり、腫瘍実質の上表面から、注入されたＮＩＲ−放射性ポリマーソームの集団を含有しているサンプル領域を通過して１００〜２００μごとに画像化した。２つのステップモータは、２Ｄ画像の投影に対するＸ、Ｙ平面において前記組織表面（表面に対する繊維束の溶解末端から７０μｍ）の上をスキャンするために光ファイバ束を作動する。各画素の解像度は、８０ｘ  ８０Ｒｍ２である。腫瘍領域の１．０２４ｘ  １．０２４ｃｍ２をカバーした１２８ｘ１２８ステップで、スキャニングを実行した。２つの他のステップモータは、Ｘ、Ｚ平面のサンプルチェンバーの移動を調節し、フライス加工及び計測のためのその指定された位置に組織サンプルを運搬する。Ｚ方向の解像度は、組織サンプルの厚さに対応する１０μｍである。蛍光シグナルは、自動的にデジタル化されて、ＰＣに記録され、３Ｄ腫瘍画像は、ＭＡＴＬＡＢソフトウエアによって生成された。
【０１８２】
注入後の２時間の間隔の間、濃密な腫瘍実質を介したこれら３００ｎｍ−サイズのポリマーソームの拡散は限定される。
【０１８３】
全ての特許、刊行物および本願明細書において引用される他の文書は、それらの全体の開示はこの参照により組み込まれるものである。
【図面の簡単な説明】
【０１８４】
【図１】図１は、ポリマーソーム膜へのいくつかの有用なポルフィリン−ベース近赤外フルオロフォア（ＮＩＲＦｓ）の取り込みを図示したものである。図式Ａは、メソ−メソエチン架橋結合トポロジーを保有する、これらの多重結合ポルフィリン化合物のサブセットの負荷に適合するためのポリマーソームの能力を図示したものであり、ポリマーソームマトリックス内のこれらのジ−、トリ−、テトラ−、及びペンタ−ＰＺｎ構造（ＰＺｎ２−ＰＺｎ５、図式Ｃも参照）は、それぞれ７２３、８０９、８６７、及び９００ｎｍのピーク発光波長に及ぶ。しかしながら、図式Ｂは、従来の細胞或いはリン脂質から成るリポソーム膜における大きなＰＺｎ２−ＰＺｎ５種の負荷問題を説明したものである。
【図２】図２は、複数の共役ポルフィリンアレイの電子吸収スペクトルを示したものである。様々なモードのＰＺｎ−ＰＺｎ連結は、基底状態及び励起状態発色団（ｉｎｔｅｒｃｈｒｏｍｏｐｈｏｒｅ）電子相互作用を実質的に調節し、これは、可視及びＮＩＲスペクトルドメインのラージウィンドウを越えた（６００〜９５０ｎｍ）これらの発光団の蛍光発光エネルギーの予測可能な同調を可能にするものである。
【図３】図３は、ＰＥＯ−ＰＥＥを作成するための合成経路を示したものである。
【図４】図４は、ポリマーソームを官能化するための合成方法を図示したものである。
【図５】図５は、ポリマー：Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標）上に薄いフィルムとして堆積されたポルフィリン−ベースＮＩＲＦ種のモル比に依存した、水溶液におけるポリマーソームの収率（使用されたポリマーの総量のモル％として）を示したものである。
【図６】図６は、ポリマー：Ｔｅｆｌｏｎ上に薄いフィルム製剤として堆積されたポルフィリン−ベースＮＩＲＦ種のモル比として、ポルフィリン−ベースＮＩＲＦｓのポリマーソーム膜への取り込み能率を図示したものである。
【図７】図７は、テフロン上の薄いフィルム形成として堆積したポリマー：色素モル比の機能としての、ポルフィリン−ベースＮＩＲＦＳ（水性ポリマーソーム溶液におけるポリマー：色素のモル比）ポリマーソームのローディングを図示したものである。
【図８】図８は、膜ローディングの機能（ポリマー：前記ポリマーソーム膜を有するポルフィリン−ベースＮＩＲＦ種のモル比）としての、ＮＩＲＦ−取り込みポリマーソームの相対的な蛍光を示したものである。
【図９】図９は、ポリマーソームにおける疎水性ＮＩＲＦｓ対リポソームの膜ローディングの比較実験を示したものである。ＮＩＲＦ種の一定量に対して、ポリマーソームは、ＳＯＰＣリポソームよりも著しく高いモル画分での二重層巻くにおいてより小さいＮＩＲＦｓＰＺｎ１及びＰＺｎ２を取り込むことができる。さらに、それらは、より大きな共役ＮＩＲＦｓＰＺｎ３−ＰＺｎ５を取り込むことができる。（Ａ）基準ポルフィリンモノマーＰＺｎ１のＳＯＰＣ対ポリマー膜ローディング。（Ｂ）ＮＩＲＦ  ＰＺｎ２のＳＯＰＣ対ポリマー膜ローディング。
【図１０】図１０Ａは、膜拡散ＮＩＲＦ  ＰＺｎ３を使った５〜２０μｍポリマー小胞のスキャン共焦点顕微鏡画像を示したものである。図１０Ｂは、５ｍＬのＰＺｎ３−ベース水溶性ＮＩＲ−放射性ポリマーソーム溶液を含有する１０ｍＬサンプルチューブのｉｎ  ｓｉｔｕ蛍光画像を示したものである。
【図１１】図１１Ａは、Ｘｅｎｏｇｅｎ  Ｉｖｉｓ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍを用いて得られたような、９Ｌの神経膠腫−関連フィッシャーラットの腫瘍内に位置したＮＩＲ−放射性ポリマーソームからの蛍光のｉｎ  ｖｉｖｏ画像を示したものである。図１１Ｂは、低温光学画像化システムを介して得られた同じ腫瘍の高解像度３Ｄ蛍光スキャン画像を示したものである。
【図１２】図１２は、発光調節において用いられ得る補助置換基を有する放射性ポルフィリン部位を示したものである。
【図１３】図１３は、放射性ポリマーソームの発光波長調整を示したものである。
【図１４】図１４は、置換基の位置を調節することによる蛍光発光の調整を示したものである。
【図１５】図１５は、置換基の位置を調節することによる蛍光発光の調整を示したものである。
【図１６】図１６は、ＮＩＲ−放射性ポリマーソームにおける蛍光波長調節を示したものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
2007500192.tif 000028
【図１４】
2007500192.tif 000029
【図１５】
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【図１６】
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【国際調査報告】
2007500192.tif 000032