(57)【要約】  本発明は４−変わりクマリン系化合物、合成方法及び応用などに関連させる。こんな化合物は次のとおりの構成式：2007502309.tif 000061，その中でＲは２−ＣＨＯが代わったベンゼン基或いはナフタリンの基或いは窒素雑芳基、或いはＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４替わりクマリン基；Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４はＨ、Ｃ１−１０の炭化水素の基、Ｘ、ＮＯ２、ＯＨ、ＣＮ、ＯＣＨ３、ＣＯＯＣＨ３或いはＯＲ５；Ｒ２とＲ３は−ＯＣＨ２Ｏ−でもいいし；Ｒ５はＨ、Ｃ１−１０の炭化水素の基；Ｘはハロゲンである。こんな化合物ははっきりした抗菌作用がある。こんな化合物は抗菌薬物を作成するのに用いられる。例えば，爪囲炎、爪白癬などの疾病を治療する薬物である。
2007502309.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一類の４−代わったクマリン系化合物で、該化合物は次の構成式を有する：  
2007502309.tif 000045
，その中でＲはＨ、ＣＨＯ、ＯＣＨ３、Ｘ、ＮＯ２、Ｃ１−１０の炭化水素の基、−ＯＣＨ２Ｏ−、ＣＮ或いはＣＯＯＣＨ３基団は単に替わり或いは多替わりの芳基、その中で芳基はベンゼンの基、ナフタリン基或いは窒素雑芳基；或いはＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４が替わったクマリンの基
2007502309.tif 000046
；Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４はＨ、Ｃ１−１０の炭化水素の基、Ｘ、ＮＯ２、ＣＮ、ＯＣＨ３、ＣＯＯＣＨ３或いはＯＲ５；Ｒ５はＨ、Ｃ１−１０の炭化水素の基；Ｘはハロゲン、
その条件は、下記のとおりの化合物が除かれる：
ａ）Ｒが芳基の場合、下記のとおりの化合物は除く：
2007502309.tif 000047
、
2007502309.tif 000048
或
2007502309.tif 000049
，
その中でＲ５＝Ｈ、ＯＨ、ＯＣＨ３、Ｃ１−１０のアルキル基或いはハロゲン，Ｒ６＝Ｈ、ＣＨ３、ＣＨ３Ｏ或いはハロゲン，Ｒ７或いはＲ８＝ＣＨ３Ｏ或いはＯＨ，Ｒ９＝Ｈ、ＣＨ３、ＯＨ或いは−ＯＣＨ２Ｏ−；
ｂ）Ｒがクマリンの基の場合、下記のとおりの化合物は除く：
2007502309.tif 000050
。
【請求項２】
請求項１記載の４−代わりクマリン系化合物において、以下の構成式を有する：
2007502309.tif 000051
2007502309.tif 000052
2007502309.tif 000053
2007502309.tif 000054
2007502309.tif 000055
2007502309.tif 000056
2007502309.tif 000057
2007502309.tif 000058
或
2007502309.tif 000059
。
【請求項３】
請求項１記載の４−代わりクマリン系化合物において、分子式がＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４で替わったクマリンスルホン酸エステルの類化合物を底物にし、２価或いは零価のパラジウム或いは白銅化合物とホスフィンリガンドを触媒で使用し、有機溶剤中和とＺｎの存在下に、６０〜１００℃の温度で、ハロゲン芳香族炭化水素或いはＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４が替わったハロゲンクマリン系化合物或いは別のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４が替わったハロゲンクマリンのスルホン酸エステルの類化合物と反応させて０．５から２０時間で獲得した構成式は
2007502309.tif 000060
のクマリン系化合物、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４で替わったクマリンスルホン酸エステルの類化合物と２価或いは零価のパラジウム或いは白銅化合物、ホスフィンリガンド、Ｚｎとハロゲン芳しい炭化水素或いはＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４が替わったハロゲンクマリン系化合物或いは別のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４が替わったハロゲンクマリンのスルホン酸エステルの類化合物のモル比率は（１）：（０．０５〜１）：（０．０５〜１）：（１〜５）：（１〜１０）、その中でＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４は上記のとおり、ハロゲンは沃素、臭素、塩素であり、芳しい炭化水素はＨ、ＣＨＯ、ＯＣＨ３、Ｘ、ＮＯ２、Ｃ１−１０の炭化水素の基であり、ＣＮ、ＣＯＯＣＨ３が替わったハロゲン芳基或いはハロゲンナフタリンの基或いはハロゲン窒素雑芳基、上記ハロゲン基は臭素或いは沃素原子。
【請求項４】
請求項３記載の４−代わりクマリン系化合物の合成方法であって、前記２価或いは零価のパラジウム或いは白銅化合物は２の（３のベンゼンの基ホスフィン）２のパラジウム塩化（ＰａＣｌ２（ＰＰｈ３）２）、２の（３のベンゼンの基ホスフィン）２のニッケル塩化（ＮｉＣｌ２（ＰＰｈ３）２）、４の（３のベンゼンの基ホスフィン）パラジウム（Ｐａ（ＰＰｈ３）４）、４の（３のベンゼンの基ホスフィン）白銅（Ｎｉ（ＰＰｈ３）４）等
【請求項５】
請求項３記載のクマリン系化合物において、前記ホスフィンリガンドは１，２−二（２のベンゼンの基ホスフィン）エチル、１，３−二（２のベンゼンの基ホスフィン）プロパン、１，４−  二（２のベンゼンの基ホスフィン）ブタン、１，１｀−二（二ベンゼンの基ホスフィン）フェロセン或いは２，２｀−二（二ベンゼン基ホスフィン）バイナプ（ＢＩＮＡＰ）、トリフェニルフォスフィンのいずれかである。
【請求項６】
請求項１記載の４−代わりクマリン系化合物を含み、前記ａ）とｂ）の化合物条件を満たすことを特徴とする真菌抵抗の薬物。
【請求項７】
請求項６記載の薬物であって、爪囲炎、爪白癬などの疾病の治療に用いられることを特徴とする真菌抵抗の薬物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、クマリン系化合物及びその応用にかかわる。当該化合物ははっきりした真菌に抵抗する作用がある。従って、真菌感染および爪囲炎、爪白癬などの病気を治療することに用いられる。
【背景技術】
【０００２】
真菌感染はよくある病気と多発病気なので、人間の健康に危害が大きい。この何十年来臨床で抗生物質、ホルモン、腫瘍抵抗薬、免疫抑制剤等の薬物が広く使用され、また、臓器移植などの大型手術の展開、ＡＩＤＳ病気の流行、２００３年上期のＳＡＲＳを含めて、深さ部真菌の発病率とこれにより引き起こされた死亡率が大幅に増えている。臨床は切に需要が高まっており、低毒性の抗真菌薬物が必要となる。しかし、現状では臨床に選択できる抗真菌薬物の品種は限られている。
【０００３】
近年、ゾール系化合物は抗真菌新薬研究のホットスポットとなっている。それぞれの大きい製薬会社はとても大きい関心を持っており、フィザー社（米）が開発したボリコナゾールは２００２年に国際市場に出ている。シェリング・プラウのＰｏｓａｃｏｎａｚｏｌｅもまもなく市場に出る。これらの薬物にはその長所があるけれども、毒性が比較的に大きく或いはある真菌の無効が存在し、生物利用度が高くない等の問題があるので需要を満足させるのが難しい。総合的な性能がいっそう優れた新型抗真菌薬物を開発するのは我が国の国民健康事業を保障することに対して、重大な意味を持っている。
【０００４】
クマリンはチオルトーヒドロキシ桂皮酸の内エステルに属し、クマリンは傘形科、豆科、ヘンルーダ科、キク科、ユキノシタ科、沈丁花科などの植物および微生物代謝の産物中に幅広く存在している。ただし、動物世界にはほとんど存在しない。クマリンは植物のそれぞれの部分での含有量の多い順から少ない順に：果実＞根はし＞枝と幹＞葉。１９８０年までに、すでに見つかったクマリン系化合物は大体８００個くらいある。
【０００５】
フランノクマリン（ｆｕｒａｎｏｃｏｕｍａｒｉｎ）は伝統的薬物として長期に用いられており、インドの神話書籍《Ａｔｈａｒａ  Ｖｅｄａ》にはＰｓｏｒａｌｅａ  ｃｏｒｙｌｉｆｏｌｉａで樹木中から取り出したパスタ状の薬で白斑症を治療したことが記載されている。古代エジプト人は以前にＡｍｍｉ  ｍａｊｕｓでなまずを治療したことがある。第１のフランノクマリンと５−“メトキシル補骨脂素（５−ｍｅｔｈｏｘｙｐｓｏｒａｌｅｎ）は１８３８年Ｋａｌｂｒｕｎｎｅｒ（Ｓｃｏｔｔ，  Ｂ.Ｒ.；Ｐａｔｈａｋ，  Ｍ.Ａ.；Ｍｏｈｎ，  Ｇ.Ｒ.  Ｍｕｔａｔ.  Ｒｅｓ.，  １９７６，  ３９，  ２９.）香気があるレモン油の中から分離して獲得した。
【０００６】
クマリン系化合物は広範な生物活性を持っている。例えば：抗凝血（ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｎｔ），動物ホルモン（ｅｓｔｒｏｇｅｎｉｃ），抗皮膚敏感な活性（ｄｅｒｍａｌ  ｐｈｏｔｏｓｅｎｓｉｔｉｚｉｎｇ  ａｃｔｉｖｉｔｙ），抗菌（ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ），血管拡張（ｖａｓｏｄｉｌａｔｏｒ），軟体動物を殺す薬（ｍｏｌｌｕｓｃａｃｉｄａｌ），駆虫薬（ａｎｔｈｅｌｍｉｎｔｉｃ），鎮静剤と催眠薬（ｓｅｄａｔｉｖｅ  ａｎｄ  ｈｙｐｎｏｔｉｃ），痛苦止め剤と温度を下げる剤（ａｎａｌｇｅｓｉｃ  ａｎｄ  ｈｙｐｏｔｈｅｒｍａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）（（ａ）．Ｓｏｉｎｅ，  Ｔ.Ｏ.  Ｊ.Ｐｈａｒｍ.  Ｓｃｉ.，  １９６４，  ５３，  ２３１．  （ｂ）．Ｅｄｅｌｓｏｎ，  Ｒ．Ｌ．  Ｓｃｉ．  Ａｍ．，  １９８８，  Ａｕｇｕｓｔ，  ６８．  （ｃ）．  Ｄｉｎｉ，  Ａ．；  Ｒａｍｕｎｄｏ，  Ｅ．；  Ｓａｔｕｒｎｉｎｏ，  Ｐ．；  Ｓｔａｇｎｏ，  ｄ’Ａｌｃｏｎｔｒｅｓ，  Ｉ．    Ｂｏｌｌ．  Ｓｏｃ．  Ｉｔａｌ．  Ｂｉｏｌ．  Ｓｐｅｒ．，  １９９２，  Ｕｎｉｖ．  Ｌｏｄｚ．）。事実上、クマリン系化合物は広い生物活性を持っているので、“薬学上の多芸多才”と呼ばれている。（ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｒｏｍｉｓｃｕｉｔｙ）（Ｈｏｕｌｔ，  Ｊ．Ｒ．；  Ｐａｙａ，  Ｍ．  Ｇｅｎ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，  １９９６，  ２７，  ７１３．）。比較的目立つ生理学の効果は：黄曲かび毒素（ａｆｌａｔｏｘｉｎ）の急性レバー毒性と発癌性（ａｃｕｔｅ  ｈｅｐａｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ），双香豆アルコール（ｄｉｃｏｕｍａｒｏｌ）の抗凝血性（Ｒｏｃｈａ，  Ｌ．；  Ｍａｒｓｔｏｎ，  Ａ．；  Ｋａｐｌａｎ，  Ｍ．；  Ｓｔｏｅｃｋｌｉ−Ｅｖａｎｓ，  Ｈ．；  Ｔｈｕｌｌ，  Ｕ．；  Ｔｅｓｔａ，  Ｂ．；  Ｈｏｓｔｅｔｔｍａｎｎ，  Ｋ．  Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍ．，  １９９４，  ３６，  １３８１．）、新生黴素（ｎｏｖｏｂｉｏｃｉｎ）とｃｏｕｍｅｒｍｙｃｉｎ  Ａ１の抗生物質活性にあり、いくつかの線形フランノクマリンは細胞での光敏性は生物化学界の大きな興味を引き起こして、ＤＮＡの片鱗の交差接続を協力している。以下、いくつかの化合物の結合と生理活性を示す。（Ｓｔｕｄ．  Ｎａｔ．  Ｐｒｏｄ．  Ｃｈｅｍ．，  ２０００，  ３３  （Ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（Ｐａｒｔ  Ｄ），  ３５０．）
【０００７】
2007502309.tif 000003
Ｄｉｃｏｕｍａｒｏｌ（抗凝血性）
2007502309.tif 000004
Ｈｅｒｎｉａｒｉｎ（抗真菌性）              Ｓｃｏｐｏｌｅｔｉｎ（抗真菌性）
2007502309.tif 000005
Ｗａｒｆａｒｉｎ  ｓｏｄｉｕｍ  ｓａｌｔ（抗凝血剤）    Ａｙａｐｉｎ（抗凝血剤）
2007502309.tif 000006
Ｃｏｌｕｍｂｉａｎａｄｉｎ                  Ａｆｌａｔｏｘｉｎ  Ｂ２（抗血清）
（カルシウムイオンの吸収を誘導）
【０００８】
クマリン系化合物が植物中に存在している広範性とその優良な生理活性で、その中の多くの化合物は薬物として用いられ、従って化学者、薬学家と生物学者の強烈な興味を起こしている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
しかし、現状では低毒性で抗真菌作用を有するクマリン系化合物の品種が限られている課題があった。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
発明の概要
本発明はクマリン化合物、合成方法及びその応用にかかわる。当該化合物は次の構造式を持っている。
2007502309.tif 000007
分子式がＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４で置換したクマリンスルホン酸エステル類の化合物を底物（基底）にし、２価或いは零価のパラジウム或いは白銅化合物とホスフィンリガンドを触媒として使用する。有機溶剤中和Znの存在下に、６０〜１００℃の温度で、ハロゲン芳香族炭化水素或いはＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４で置換したハロゲンクマリン系化合物或いは別のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４で置換したハロゲンクマリンのスルホン酸エステル類の化合物と反応させて０．５から２０時間で獲得する。本発明のクマリン系化合物は確実な抗真菌作用があるので、爪囲炎、爪白癬などの疾病を治療するのに用いることができる。
発明内容
本発明の目的は一種クマリン系化合物を提供することにある。
本発明の目的はまた上記の一種クマリン系化合物の合成法を提供することにある。
本発明の他の目的は一種クマリン系化合物の応用を提供することにある。
本発明のクマリン系化合物は次のような構成式を有する。
2007502309.tif 000008
その中でＲはＨ、ＣＨＯ、ＯＣＨ３、Ｘ、ＮＯ２、Ｃ１−１０の炭化水素の基、−ＯＣＨ２Ｏ−、ＣＮ或いはＣＯＯＣＨ３基団の置換的芳基、その中で芳基はベンゼン基、ナフタリン基或いは窒素雑芳基；或いはＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４が置換したクマリンの基
2007502309.tif 000009
；Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４はＨ、Ｃ１−１０の炭化水素の基、Ｘ、ＮＯ２、ＣＮ、ＯＣＨ３、ＣＯＯＣＨ３或いはＯＲ５；Ｒ５はＨ、Ｃ１−１０の炭化水素の基；Ｘはハロゲン。
その条件は、下記のとおりの化合物を除く。
ａ）Ｒが芳基の場合、下記のとおりの化合物は除かれる。
2007502309.tif 000010
、
2007502309.tif 000011
或いは
2007502309.tif 000012
，
その中でＲ５＝Ｈ、ＯＨ、ＯＣＨ３、Ｃ１−１０のアルキル基或いはハロゲン，Ｒ６＝Ｈ、ＣＨ３、ＣＨ３Ｏ或いはハロゲン，Ｒ７或いはＲ８＝ＣＨ３Ｏ或いはＯＨ，Ｒ９＝Ｈ、ＣＨ３、ＯＨ或いは−ＯＣＨ２Ｏ−；
ｂ）Ｒがクマリンの基の場合、下記のとおりの化合物は除かれる。
2007502309.tif 000013
本発明に係る化合物は以下の通りである。
2007502309.tif 000014
2007502309.tif 000015
2007502309.tif 000016
2007502309.tif 000017
2007502309.tif 000018
2007502309.tif 000019
2007502309.tif 000020
2007502309.tif 000021
或いは
2007502309.tif 000022
。
本発明の化合物の合成方法は次のとおりに分類して描写される：
分子式がＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４で置換したクマリンスルホン酸エステル類の化合物を底物にし、２価或いは零価のパラジウム化合物（又は白銅化合物）とホスフィンリガンドを触媒として使用する。そして、有機溶剤中にこの触媒とＺｎが存在する場合に、６０〜１００℃の温度で、ハロゲン芳香族炭化水素或いはＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４が置換したハロゲンクマリン系化合物或いは別のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４が置換したハロゲンクマリンのスルホン酸エステル類の化合物と０．５〜２０時間反応させて獲得した。
このクマリン系化合物構成式は
2007502309.tif 000023
この化合物において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４で置換したクマリンスルホン酸エステル類の化合物、２価或いは零価のパラジウム（或いは白銅）化合物、ホスフィンリガンド、Ｚｎ、ハロゲン芳しい炭化水素或いはＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４が置換したハロゲンクマリン系化合物（又は別のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４が置換したハロゲンクマリンのスルホン酸エステル類の化合物）のモル比率は（1）：（０．０５〜１）：（０．０５〜１）：（１〜５）：（１〜１０）。その中でＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４
は上記のとおり、ハロゲンは沃素、臭素、塩素であり、芳しい炭化水素はＨ、ＣＨＯ、ＯＣＨ３、Ｘ、ＮＯ２、Ｃ１−１０の炭化水素の基、ＣＮ、ＣＯＯＣＨ３が置換したハロゲン芳基或いはハロゲンナフタリンの基或いはハロゲン窒素ヘテロ芳香基。
言い換えれば、本発明の方法は、底物はハロゲン芳しい炭化水素或いはＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４が置換したハロゲンクマリン化合反応できるだけでなく、底物は偶然の一致反応もできる。
上記の反応中、２価或いは零価のパラジウム或いは白銅化合物は２の（３のベンゼンの基ホスフィン）２の塩化パラジウム（ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２）、２の（３のベンゼンの基ホスフィン）２の塩化ニッケル（ＮｉＣｌ２（ＰＰｈ３）２）、４の（３のベンゼンの基ホスフィン）パラジウム（Ｐｄ（ＰＰｈ３）４）、４の（３のベンゼンの基ホスフィン）白銅（Ｎｉ（ＰＰｈ３）４）等である。述べたホスフィンリガンドは１，２−二（２のベンゼンの基ホスフィン）エチル、１，３−二（２のベンゼンの基ホスフィン）プロパン、１，４−二（２のベンゼンの基ホスフィン）ブタン、１，１｀−二（二ベンゼンの基ホスフィン）フェロセン或いは２，２｀−二（二ベンゼン基ホスフィン）バイナプ（ＢＩＮＡＰ）、トリフェニルフォスフィンであり、その中でＸはハロゲン沃素、臭素、塩素である。述べた有機溶剤はベンゼン、トルエン、石油エーテル、四塩化炭素、酸化テトラメチレンのいずれかである。
本発明の方法は次の典型的反応式で表示できる。
2007502309.tif 000024
述べた真菌感染を治療する薬物の調製に用いられている１種のクマリン系化合物の構造式は次のとおりである。
2007502309.tif 000025
その中でＲはＨ、ＣＨＯ、ＯＣＨ３、Ｘ、ＮＯ２、Ｃ１−１０の炭化水素基、−ＯＣＨ２Ｏ−、ＣＮ或いはＣＯＯＣＨ３基団は単替わり或いは多替わり芳基，その中で芳基はベンゼン基、ナフタリン基或いは窒素雑芳基であり；或いはＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４が置換したクマリン基
2007502309.tif 000026
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４はＨ、Ｃ１−１０の炭化水素基、Ｘ、ＮＯ２、ＣＮ、ＯＣＨ３、ＣＯＯＣＨ３或いはＯＲ５；Ｒ５はＨ、Ｃ１−１０の炭化水素基；Ｘはハロゲン，請求項１で述べたａ）とｂ）の化合物条件が存在していない。
【発明の効果】
【００１１】
本願発明のクマリン系化合物によれば、爪囲炎、爪白癬等に対し抗菌作用を有している。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
次の実施例を通じて発明を理解するのに役立つが、本発明の内容を制限するものではない。
【実施例１】
【００１３】
４−（４，５，６−トリメトキシ−２−ベンズアルデヒド）クマリン（１）の合成
2007502309.tif 000027
底物４−クマリンメタンスルホン酸エステル（１〜１００ｍｍｏｌ）、ＮｉＣｌ２（ＰＰｈ３）２（０．２〜２０ｍｍｏｌ）、ＰＰｈ３（０．４〜４０ｍｍｏｌ）、活性化の亜鉛粉（３〜３００ｍｍｏｌ）を、１０〜１０００ミリリットル（ｍｌ）の乾燥した反応の瓶にいっしょに入れて、４〜４００ｍｌの無水のトルエンを入れ，オイルバスの温度が９０℃に達してから、４〜４００ｍｌの無水のトルエンに溶解した３，４，５−トリメトキシ２沃素ベンズアルデヒド（１〜１００ｍｍｏｌ）を自動注射器でゆっくりと滴って加え、０．５〜２０時間攪拌した後に、自然に温度を下げて室温に達すると、反応瓶に４〜４００ｍｌ  ５％の稀塩酸と４〜４００ｍｌ二塩素メタン（ＣＨ２Ｃｌ２）を入れて、１時間攪拌し、沈殿した後に、ＣＨ２Ｃｌ２で水性相（３×１０〜１０００ｍｌ）を抽出し、その後飽和重曹水溶液（ａｑ  ＮａＨＣＯ３）と飽和塩化ナトリウム水溶液（ｂｒｉｎｅ）を用いて順次有機相（１０〜１０００ｍｌ）を洗い、有機相を収集してから、無水の硫酸ナトリウムで２時間乾燥し、濾過し、濃縮させて、残余物を縦方向にレイヤ分析して産物（４−（４，５，６−トリメトキシ−2−ベンズアルデヒド）クマリン（１））を得た。この産物の収量（ｙｉｅｌｄ）７１％；
《産物の特徴データ》
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  d：  ９．７０（ｓ，  ＣＨＯ，  １Ｈ），  ７．５６（ｓ，  Ｐｈ，  １Ｈ），  ７．４５−７．０３（ｍ，  Ｐｈ，  ４Ｈ），  ６．４１（ｓ，  ＣＨ，  １Ｈ），  ４．０２（ｓ，  ＯＭｅ，  ３Ｈ），  ３．９９（ｓ，  ＯＭｅ，  ３Ｈ），  ３．７３（ｓ，  ＯＭｅ，  ３Ｈ）；
ＥＩ−ＭＳ  （ｍ／ｚ，  ％）：  ３４１（Ｍ＋＋１，  １００），  ３４０（Ｍ＋，  ９１．４０），  ３２５（７６．８６），  ２９７（４７．７０），  ２８２（２３．６４），  ２８１（３４．４２），  ２３７（２２．７２），  １５５（１７．４６）；
IR (KBr, cm-1)：  ３００７，  ２９８７，  ２９４１，  １７２６，  １６７７，  １６０３，  １５８７，  １５６２，  １４８４，  １３６５，  １３３１；
ＨＲＭＳ．  Ｃ１９Ｈ１６Ｏ６，計算値：  ３４０．０９４６９；  実測値：  ３４０．０９５６１．
【実施例２】
【００１４】
４−（３−メトキシルベンゼン基）クマリン（２）の合成
2007502309.tif 000028
底物４−クマリンメタンスルホン酸エステル（１〜１００ｍｍｏｌ）、ＮｉＣｌ２（ＰＰｈ３）２（０．２〜２０ｍｍｏｌ）、ＰＰｈ３（０．４〜４０ｍｍｏｌ）、活性化の亜鉛粉（３〜３００ｍｍｏｌ）を１０〜１０００ミリリットル（ｍｌ）の乾燥した反応の瓶にいっしょに入れて、４〜４００ｍｌの無水のトルエンを入れ，オイルバスの温度が９０℃に達してから、４〜４００ｍｌの無水のトルエンに溶解した３−メトキシル２−沃素ベンゼン（１〜１００ｍｍｏｌ））を自動注射器でゆっくりと滴って加え、０．５〜２０時間攪拌した後に、自然に温度を下げて室温に達すると、反応瓶に４〜４００ｍｌ  ５％の稀塩酸と４〜４００ｍｌ二塩素メタン（ＣＨ２Ｃｌ２）を入れて、１時間攪拌し，沈殿した後に、ＣＨ２Ｃｌ２で水性相（３×１０〜１０００ｍｌ）を抽出し、その後、飽和重曹水溶液（ａｑ  ＮａＨＣＯ３）と飽和塩化ナトリウム水溶液（ｂｒｉｎｅ）を用いて順次、有機相（１０〜１０００ｍｌ）を洗い、有機相を収集してから、無水の硫酸ナトリウムで２時間乾燥し、濾過し、濃縮させて、残留物を縦方向にレイヤ分析して生成物（４−（３−メトキシルベンゼン基）クマリン（２））を析出し，その収量は７０％であった。
《産物の特徴データ》
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  d：  ７．５６−７．０５（ｍ，  Ｐｈ，  ６Ｈ），  ６．９９（ｓ，  Ｐｈ，  １Ｈ），  ６．４０（ｓ，  ＣＨ，  １Ｈ），  ３．８７（ｓ，  ＯＭｅ，  ３Ｈ）  ｐｐｍ；
ＥＩ−ＭＳ  （ｍ／ｚ，  ％）：  ２６３（Ｍ＋＋１，  １９．７０），  ２６２（Ｍ＋，  １００），  ２６１（Ｍ＋−１，  ２０．３１），  ２０５（９．３８），  １８４（１３．９８），  １８３（６４．６２），  １０８（２２．７８），  １０７（１２．５３）；
ＩＲ  （ＫＢｒ，  ｃｍ−１）：  ３０６８，  ２８４６，  １７５５，  １７２０，  １５９６，  １５８３，  １５５８，  １４７０，  １４３０，  ８７５，  ８０３，  ７７９，  ７６７，  ７５２，  ７００；
ＨＲＭＳ．  Ｃ１６Ｈ１２Ｏ３，計算値：  ２５２．０７８１４；  実測値：  ２５２．０７５０７．
【実施例３】
【００１５】
４−（４，６−ジメトキシ（ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ）−２−ベンズアルデヒド）クマリン（３）の合成
同上の操作で、収量は６７％であった。
2007502309.tif 000029
《産物の特徴データ》
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  d：  ９．８０（ｓ，  ＣＨＯ，  １Ｈ），  ７．２３−７．０３（ｍ，  Ｐｈ，  ３Ｈ），  ７．０１（ｓ，  Ｐｈ，  Ｊ＝６．６Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．８３（ｓ，  Ｐｈ，  １Ｈ），  ６．５０（ｓ，  Ｐｈ，  １Ｈ），  ６．３７（ｓ，  ＣＨ，  １Ｈ），  ３．８８（ｓ，  ＯＭｅ，  ３Ｈ），  ３．７６（ｓ，  ＯＭｅ，  ３Ｈ）  ｐｐｍ；
ＥＩ−ＭＳ  （ｍ／ｚ，  ％）：  ３１１（Ｍ＋＋１，  ２０．３３），  ３１０（Ｍ＋，  １００），  ２８２（３２．６４），  ２８１（２３．５９），  ２６７（１９．９４），  ２６２（２３．０４），  ５７（２４．１３），  ４３（１９．９２）；
ＩＲ  （ＫＢｒ，  ｃｍ−１）：  ３０９１，  ２８７４，  １７２９，  １６８９，  １６００，  １５６４，  １４４９，  １３４９，  １３６１，  １３２６，  １２９０；
元素分析．    Ｃ１８Ｈ１４Ｏ５，計算値：  Ｃ，  ６９．６７；  Ｈ，  ４．５５；  実測値：  Ｃ，  ６９．５８；  Ｈ，  ４．３７．
【実施例４】
【００１６】
４−（５，６−ジメトキシ−２−ベンズアルデヒド）クマリン（４）の合成
同上の操作で，収量は７２％であった。
2007502309.tif 000030
《産物の特徴データ》
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  d：  ９．６９（ｓ，  ＣＨＯ，  １Ｈ），  ７．８６（Ｐｈ，  １Ｈ），  ７．５４（Ｐｈ，  １Ｈ），    ７．４５（Ｐｈ，  １Ｈ），  ７．２２−７．１６（Ｐｈ，  ２Ｈ），  ７．０１（Ｐｈ，  １Ｈ），  ６．４０（ｓ，  ＣＨ，  １Ｈ），  ４．０５（ｓ，  ＯＭｅ，  ３Ｈ），  ３．７０（ｓ，  ＯＭｅ，  ３Ｈ）  ｐｐｍ；
ＥＩ−ＭＳ  （ｍ／ｚ，  ％）：  ３１０（Ｍ＋，  ７０．５０），  ２９６（１９．６８），  ２９５（１００），  ２６７（４６．５１），  ２５２（２９．３７），  ２５１（３４．８４），  ２３６（２１．９１），  １３９（２７．８３）；
ＩＲ  （ＫＢｒ，  ｃｍ−１）：  ３０８８，  ２９４７，  ２８３７，  ２７３３，  １７２９，  １６９５，  １６８３，  １６０４，  １５８４，  １５６６；
元素分析．  Ｃ１８Ｈ１４Ｏ５，計算値：  Ｃ，  ６９．６７；  Ｈ，  ４．５５；  実測値：  Ｃ，  ６９．８６；  Ｈ，  ４．５７．
【実施例５】
【００１７】
（５）の合成
同上の操作で，収量は８３％であった。
2007502309.tif 000031
《産物の特徴データ》
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  d：  ８．０８（ｄ，  ＣＨ，  Ｊ＝２．１Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．６４（ｓ，  Ｐｈ，  １Ｈ），  ７．５４（ｄ，  Ｐｈ，  Ｊ＝７．５Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．５１（ｄ，  Ｐｈ，  Ｊ＝７．５Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．４２−７．２１（ｍ，  Ｐｈ，  ４Ｈ），  ６．４５（ｄ，  ＣＨ，  Ｊ＝２．１Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．９３（ｓ，  ＯＭｅ，  ３Ｈ）  ｐｐｍ；
１３Ｃ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  d：  １７５．１２，  １６０．６７，  １５７．８４，  １５４．０８，  １５３．９０，  １５１．４５，  １４８．０５，  １３２．４１，  １２７．０２，  １２４．９１，  １２４．５２，  １２０．９０，  １２０．０３，  １１８．９５，  １１７．７０，  １１７．４５，  １０５．４５，  ５６．２８  ｐｐｍ；
ＥＩ−ＭＳ  （ｍ／ｚ，  ％）：  ３２０（Ｍ＋，  ４．２６），  ２９２（１０．００），  ２７７（３４．８９），  ２６２（９２．１３），  １８３（６９．８７），  １０５（１００），  ７１（４９．３６），  ６９（４０．６４）；
ＩＲ  （ＫＢｒ，  ｃｍ−１）：  ３０７８，  ２９６３，  １７２０，  １６４９，  １６１０，  １４８８，  １４４６，  １３３４，  １２７１；
ＨＲＭＳ．  Ｃ１９Ｈ１２Ｏ５，計算値：  ３２０．０６８４８；  実測値：  ３２０．０７３３９．
【実施例６】
【００１８】
４−（２−ナフタリンのメチルアルデヒド）クマリン（６）の合成
同上の操作で，収量は６３％であった。
2007502309.tif 000032
《産物の特徴データ》
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  d：  １０．０６（ｓ，  ＣＨＯ，  １Ｈ），  ８．６３−６．８２（ｍ，  Ｐｈ，  １０Ｈ），  ６．５６（ｓ，  ＣＨ，  １Ｈ）  ｐｐｍ；
１３Ｃ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  d：  １９０．０９，  １５９．３４，  １５３．３４，  １５０．９９，  １３５．７８，  １３２．４９，  １３０．５５，  １２９．３５，  １２８．４３，  １２７．７８，  １２６．７１，  １２６．１５，  １２４．６３，  １２４．１７，  １２２．４４，  １２０．１３，  １１８．２８，  １１７．０６，  １１６．５０，  １１６．３２  ｐｐｍ；
ＥＩ−ＭＳ  （ｍ／ｚ，  ％）：  ３００（Ｍ＋，  ６３．０３），  ２７１（３０．５０），  ２１５（２９．１０），  １１８（１００），  ９０（４３．２５），  ８９（４５．８１），  ６３（２７．８０），  ４６（９２．０８）；
ＩＲ  （ＫＢｒ，  ｃｍ−１）：  ３０６８，  ２８５５，  １７２８，  １６８７，  １６０６，  １５６２，  １４５２；
ＨＲＭＳ．  Ｃ２０Ｈ１２Ｏ３，計算値：  ３００．０８０６４；  実測値：  ３００．０８３５７．
【実施例７】
【００１９】
４−（３−Ｎナフタリン基）クマリン（７）の合成
同上の操作で，収量は３０％であった。
2007502309.tif 000033
《産物の特徴データ》
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  d：  ９．４２（ｓ，  ＮＣＨ，  １Ｈ），  ８．１３（ｄ，  Ｐｈ，  Ｊ＝８．２Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．７３−７．４６（ｍ，  Ｐｈ，  ５Ｈ），  ７．１３−７．０１（ｍ，  Ｐｈ，  ２Ｈ），  ６．５５（ｓ，  ＣＨ，  １Ｈ）  ｐｐｍ；
１３Ｃ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  d：  １６０．５０，  １５４．００，  １３２．６３，  １３２．２４，  １３２．０７，  １３１．７７，  １２８．６７，  １２８．６０，  １２８．５４，  １２８．４９，  １２８．４７，  １２８．４５，  １２７．２６，  １２４．７０，  １２４．６９，  １２４．５１，  １１７．９０，  １１７．５８  ｐｐｍ；
ＥＩ−ＭＳ  （ｍ／ｚ，  ％）：  ２７４（Ｍ＋＋１，  ２３．３３），  ２７３（Ｍ＋，  ８４．２３），  ２７２（Ｍ＋−１，  １００），  ２５６（４９．３１），  ２４５（２２．６９），  ２４４（２６．３７），  ２１６（３１．９０），  １８９（２８．３７）；
ＩＲ  （ＫＢｒ，  ｃｍ−１）：  ２９２５，  １７５２，  １７２３，  １６０５，  １５６０，  １５０１，  １４４８，  １３６０，  ７５７；
ＨＲＭＳ．計算値Ｃ１８Ｈ１１ＮＯ２：  ２７３．０７９００；実測値：  ２７３．０８１２０．
【実施例８】
【００２０】
６−メチル−４−（４−メトキシル−２−ベンズアルデヒド）クマリン（８）の合成
同上の操作で，収量は８５％であった。
2007502309.tif 000034
《産物の特徴データ》
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  d：  ９．８２（ｓ，  ＣＨＯ，  １Ｈ），  ７．５８（ｓ，  Ｐｈ，  １Ｈ），  ７．３２−７．２９（ｍ，  Ｐｈ，  ４Ｈ），  ６．８１（ｓ，  Ｐｈ，  １Ｈ），  ６．３３（ｓ，  ＣＨ，  １Ｈ），  ３．９４（ｓ，  ＯＭｅ，  ３Ｈ），  ２．２６（ｓ，  ＣＨ３，  ３Ｈ）  ｐｐｍ；
ＥＩ−ＭＳ  （ｍ／ｚ，  ％）：  ２９４（Ｍ＋，  ９．０９），  ２６８（２５．３７），  ２５６（２０．２３），  ２４０（２１．８０），  ２２５（３３．９７），  １９９（１００），  ２１２（１９．８４），  １０５（５１．００）；
ＩＲ  （ＫＢｒ，  ｃｍ−１）：  ３４４２，  ２９２７，  ２８５０，  １７２６，  １６０６，  １５７２，  １４８７，  １４２３，  １２８０，  １２５１；
ＨＲＭＳ．  計算値Ｃ１８Ｈ１４Ｏ４：  ２９４．０８９２１；  実測値：  ２９４．０８５１７．
【実施例９】
【００２１】
（９）の合成
同上の操作で，収量は９０％であった。
2007502309.tif 000035
《産物の特徴データ》
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  d：  ９．７０（ｓ，  ＣＨＯ，  １Ｈ），  ７．５４−７．３０（ｍ，  Ｐｈ，  ５Ｈ），  ６．８０（ｓ，  ＣＨ，  １Ｈ），  ６．３９（ｄ，  ＣＨ２，  Ｊ＝１５Ｈｚ，  ２Ｈ）  ｐｐｍ；
ＥＩ−ＭＳ  （ｍ／ｚ，  ％）：  ３１２（Ｍ＋，  ７０．６２），  ２８４（８３．７７），  ２８３（２６．３３），  ２７０（２８．０３），  ２６９（１００），  ２５６（４４．５９），  ２５５（２０．６２），  １７０（２４．３３）；
ＩＲ  （ＫＢｒ，  ｃｍ−１）：  ３０７５，  ２９１３，  ２８６１，  １７２５，  １６８２，  １６１０，  １５７１，  １５０４，  １４８２，  １４４０，  １３６９，  １２６８，  １２５３；
ＨＲＭＳ．  Ｃ１８Ｈ１１ＦＯ４，計算値：  ３１２．０４３４０；実測値：  ３１２．０３８５２．
【実施例１０】
【００２２】
（１０）４，４´−両クマリン（１０）の合成
2007502309.tif 000036
乾燥させた１０ｍｌ反応瓶中に高純度のアルゴンを通し、０．５ｍｍｏｌの底物０．１ｍｍｏｌ  ＮｉＣｌ２（ＰＰｈ３）２，０．２ｍｍｏｌ  ＰＰｈ３，１．５ｍｍｏｌ活性化の亜鉛粉末、３ｍｌ乾燥したトルエンを入れ、細心の注意をして空気を引き抜き、高純度のアルゴンを通し、２度このように繰り返して、できるだけ体系中の酸素を除去する。温度を高めて（９０ｏＣ）攪拌し、反応を観察し、反応が終わった後に、室温まで冷却する。その後、３ｍｌ  ５％稀塩酸、３ｍｌ  ＣＨ２Ｃｌ２を入れて体系が清澄透明になるまで激しく攪拌する。その後にＣＨ２Ｃｌ２で水性相を抽出し、有機相を合併し、ＮａＨＣＯ３水溶液、水、ｂｒｉｎｅで有機相を洗い、乾燥、濃縮、シリカゲル（３００−４００目）で縦方向にレイヤ解析して純化する。
《産物の特徴データ》
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  d：  ７．６４（ｄ，  Ｐｈ，  Ｊ＝９．０Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．４８（ｄ，  Ｐｈ，  Ｊ＝９．０Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．２２（ｍ，  Ｐｈ，  １Ｈ），  ６．５０（ｓ，  ＣＨ，  １Ｈ）  ｐｐｍ；
ＥＩ−ＭＳ  （ｍ／ｚ，  ％）：  ２９０（Ｍ＋，  ３８．５２），  ２６３（２３．１４），  ２６２（１００），  ２４５（４４．２８），  ２３４（３１．４８），  ２１８（２４．６３），  ２０５（３７．６０），  １７６（２３．２２）；
ＩＲ  （ＫＢｒ，  ｃｍ−１）：１９７３，  １８５４，  １７２０，  １６０４，  １５６０，  １４８７，  １３７６，  １３５７；
ＨＲＭＳ．計算値Ｃ１８Ｈ１０Ｏ４：  ２９０．０５７９１．  実測値：  ２９０．０５６７０．
【実施例１１】
【００２３】
（１１）４，４´−両（７−メチル）クマリン（１１）の合成
同上の操作で，収量は３８％であった。
2007502309.tif 000037
《産物の特徴データ》
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  d：  ７．４３（ｄ，  Ｐｈ，  Ｊ＝８．４Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．３７（ｄ，  Ｐｈ，  Ｊ＝８．４Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．９８（ｓ，  Ｐｈ，  １Ｈ），  ６．４４（ｓ，  ＣＨ，  １Ｈ），  ２．３１（ｓ，  ＣＨ３，  ３Ｈ）  ｐｐｍ；
ＥＩ−ＭＳ  （ｍ／ｚ，  ％）：  ３１８（Ｍ＋，  ３８．８５），  ２９１（２１．４８），  ２９０（１００），  ２７５（３２．５２），  ２７３（６７．８８），  ２６２（１９．２３），  ２６１（１９．０１），  ２４６（２６．３８）；
ＩＲ  （ＫＢｒ，  ｃｍ−１）：１９７３，  １７２４，  １６１３，  １５７３，  １５６０，  １４８９，  １４１８，  １１８０，  １１３０，  ９３５，  ８１４；
ＨＲＭＳ．計算値Ｃ２０Ｈ１４Ｏ４：  ３１８．０８９２１．  実測値：  ３１８．０８９７５．
【実施例１２】
【００２４】
（１２）４，４´−両（６−フッ素）クマリン（１２）の合成
同上の操作で，収量は２２％であった。
2007502309.tif 000038
《産物の特徴データ》
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ，  ｄ−ＤＭＳＯ）  d：  ７．８６（ｄ，  Ｐｈ，  Ｊ＝７．５Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．５５（ｓ，  Ｐｈ，  １Ｈ），  ７．０９（ｄ，  Ｐｈ，  Ｊ＝８．１Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．９５（ｓ，  ＣＨ，  １Ｈ）  ｐｐｍ；
ＥＩ−ＭＳ  （ｍ／ｚ，  ％）：  ３２９（Ｍ＋＋３，  １９．８３），  ３２８（Ｍ＋＋２，  １００），  ３２６（Ｍ＋，  １４．１０），  ３１０
（１７．４８），  ２９９（１６．１４），  ２９８（１３．８９），  ２５８（１３．１０），  ２５７（５０．７４）；
ＩＲ  （ＫＢｒ，  ｃｍ−１）：  ３０５３，  ２９２５，  １７６６，  １７２１，  １５６８，  １４８５，  １４３０，  １２６３，  １２２６，  １１８９，  １１７０，  ９４２，  ９２６，  ８２０；
ＨＲＭＳ．計算値Ｃ２４Ｈ６Ｆ２Ｏ４：  ３２６．０３９０６．  実測値：  ３２６．０３６６７．
【実施例１３】
【００２５】
（１３）４，４´−両（７−メトキシル）クマリン（１３）の合成
同上の操作で，収量は５５％であった。
2007502309.tif 000039
《産物の特徴データ》
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  d：  ７．６５（ｄ，  Ｐｈ，  Ｊ＝９．３Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．３８（ｄ，  Ｐｈ，  Ｊ＝８．１Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．８４（ｓ，  Ｐｈ，  １Ｈ），  ６．２７（ｓ，  ＣＨ，  １Ｈ），  ３．８８（ｓ，  ＯＭｅ，  ３Ｈ）  ｐｐｍ；
１３Ｃ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  d：  １６３．０６，  １６１．５５，  １５６．１２，  １４３．７４，  １３２．３８，  １３２．２５，  １２９．０２，  １２８．８５，  １２８．６９，  １１３．３０，  １１２．８８，  １１２．７６，  １０１．０４，  ５６．０３  ｐｐｍ；
ＩＲ  （ＫＢｒ，  ｃｍ−１）：  １７２１，  １７０６，  １６１４，  １５５８，  １５０６，  １４６５，  １４００，  １３５３，  １２８４，  １２３４。
【実施例１４】
【００２６】
（１４）  ４，４´−両（７，８−ベンゼン基）クマリン（１４）の合成
同上の操作で，収量は６３％であった。
2007502309.tif 000040
《産物の特徴データ》
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  d：  ８．６６（ｄ，  Ａｒ，  Ｊ＝７．５Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．８９−７．５７（ｍ，  Ａｒ，  ４Ｈ），  ７．１５（ｄ，  Ａｒ，  Ｊ＝６．６Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．６２（ｓ，  ＣＨ，  １Ｈ）  ｐｐｍ；
ＥＩ−ＭＳ  （ｍ／ｚ，  ％）：  ３９０（Ｍ＋，  ６９．９５），  ３６３（３０．４２），  ３６２（１００），  ３４５（３１．５２），  ３１８（３０．２２），  ３０５（３２．６７），  ２７６（３７．３８），  １３８（３８．３２）；
ＩＲ  （ＫＢｒ，  ｃｍ−１）：  １７２０，  １６３２，  １５４８，  １５０２，  １４６９，  １３７６，  １３５５，  １３２７。
【実施例１５】
【００２７】
本発明の化合物の一つである４，４´−バイイソフラケシディンを用いて江蘇恒瑞医薬株式会社が体外抗真菌活性をテストした結果は次のとおりである。
2007502309.tif 000041
４，４´−バイイソフラケシディン抗真菌感染の生理活性のテストで、レボフロキサシンなどの抗生物質は明らかな活性を現さなかった。ところが、本発明の化合物４，４´−バイイソフラケシディンは表葡萄球菌に対して抗菌活性があった。比較的敏感な菌株のＭＩＣの値は１２８μｇ／Ｌ。白い数珠菌にも制菌作用を呈し、１０μｇ／ｍｌの濃度下にその静菌作用圏は約１０ｍｍである。
【実施例１６】
【００２８】
体内保護実験
実験方法
１．実験菌液の調製
試験菌の２〜３個単一菌落（株）を選んでＳａｂｏｕｒａｕｄ液体培養基中に接種して、３７ｏＣで１８時間培養し、５％の滅菌イースト液を適当に希釈して備えた。
２．最小致死菌量（ＭＬＤ）の測定
３．健康な昆明種小鼠を用いて、体重が１８〜２２グラムで、ランダムなグループに分ける。それぞれの鼠に０．５ｍｌの実験菌を感染させた後に連続７日観察しながら小鼠の死亡数を記録した。小鼠の１００％死亡を引き起こす最低菌量を最小致死菌量（ＭＬＤ）とする。この菌量を体内保護試験の感染菌量に設定する。
４．薬液の調合
試験用の薬は全部０．５％のＣＭＣで調合し、フルコナゾール、４，４´−バイイソフラケシディンで必要な濃度に調合する。
５．感染及び治療実験方法
実験動物を性別、体重によってランダムに平均的にグループを分けた。それぞれは１０個の小鼠で、雌雄半々、それぞれ小鼠の腹腔に０．５ｍｌの感染菌液を注射した。感染前２時間と感染後の４時間にそれぞれの小鼠に濃さの異なるフルコナゾールと４，４´−バイイソフラケシディンを、薬量として０．５ｍｌ／回、２０ｇで服用させた。同時に、感染比較組を設けて、感染後７日以内の死んだ小鼠数を記録した。Ｂｌｉｓｓ法によって半数有効用量のＥＤ５０と９５％の可信限度を計算した。
実験結果
フルコナゾール、４，４´−バイイソフラケシディンによる白いカンジダ（ｃａｎｄｉｄａ）菌０２−６の感染した小鼠に対する体内保護作用は、Ｂｌｉｓｓ法に従って半数有効用量ＥＤ５０及び９５％可信限度を計算した。
【表１】
2007502309.tif 000042
【００２９】
結論
４，４´−バイイソフラケシディンは小鼠体内に白いカンジダ菌０２−６の感染にある程度の保護作用があった。投薬量は２００ｍｇ／ｋｇの場合、生存率は７０％であった。４，４´−バイイソフラケシディンによる小鼠体内の白いカンジダ菌の感染体内保護作用はフルコナゾールと基本的に同じであった。
【実施例１７】
【００３０】
体外薬敏（アレルギー）ＭＩＣ試験
方法：それぞれのテストの菌を生理食塩水で菌液を作成し、濁り（湿菌濃度）が２．０ＭｃＦ  ｍｇ／ｍｌ以上の菌液になるように希釈し、再び生理食塩水で１００倍に希釈し、ＲＰＭＩ  １６４０を用いて１０倍に希釈し、得られたサンプルを２倍希釈し、９６の穴を設けた培養板中で７２−９６時間だけ培養する。軽く振動を与え、４９０ｎｍの波長で光電の比色をする。
試験菌：イースト、白いカンジダ菌０１−５、０１−１、０２−６、白いカンジダ菌ＣＭＣＣ、黒曲黴、新型クリプトコックス菌、赤クリプトコックス菌、疣状毛菌。
結果（ＭＩＣ）は次の表のとおりであった。
【表２】
2007502309.tif 000043
【００３１】
結論：４，４´−バイイソフラケシディンは白いカンジダ菌についての抗菌活性は弱い。ＭＩＣは１２８、＞１２８μｇ／ｍｌ、黴中の黒曲黴、新型クリプトコックス菌、赤クリプトコックス菌、疣状毛菌について抗菌活性がある。ＭＩＣ値は各１２８，６４，１６，１２８μｇ／ｍｌ、その抗菌の強さはフルコナゾールと基本的に同じであった。
【実施例１８】
【００３２】
細菌回復突然変異試験
《新薬（西洋医学で用いる薬剤）臨床前研究ガイドルール総編（薬学、薬理学、毒理学）》中の急変実験の要求に従って、５、５０、５００、１０００、５０００μｇ／皿の５個の薬量の組を設定し、Ｓ９のない実験システムの中で、４，４´−バイイソフラケシディンについてテストをした。結果としては、高薬量（５０００／μｇ／皿）の４，４´−バイイソフラケシディンは、ＴＡ９７、ＴＡ９８、ＴＡ１００、ＴＡ１０２の各菌株の細菌の成長を抑制できる。そのほかの４個の薬量は各菌株の菌落数の増加或いは抑制が見られなかった。尚、本実験の条件で、４，４´−バイイソフラケシディンは高薬量の時、細菌の成長を抑制する作用があり、そのほかの薬量はマウスサルモネラ菌の各菌株を変化させる作用がなかった。
【実施例１９】
【００３３】
４，４´−バイイソフラケシディンの哺乳動物細胞のＣＨＬの染色体の変異を誘発する試験
ＣＨＬの細胞を用いて４，４´−バイイソフラケシディンの誘変作用を評価する。先に一般的方法によってＩＣ５０を求めて、それを最高の濃度の薬量に設定し、再び０．５倍で順次稀釈し、全部で３個の薬剤組を設ける。実験は−Ｓ９の実験系で行う。４，４´−バイイソフラケシディンのＩＣ５０は２４８μｇ／ｍｌであり、その薬剤量は、６２、１２４、２４８μｇ／ｍｌに設定され、この薬物を細胞培養器に入れて２４時間、直接的に作用させる。４，４´−バイイソフラケシディンがＣＪＬの細胞に対して誘変作用の有無を観察する。結果として、この試験の条件の下で、−Ｓ９の実験系中で、４，４´−バイイソフラケシディンの高薬量（２４８μｇ／ｍｌ）を用いた場合の変異率は１２％であり、中薬量と低薬量の変異率は１％であった。この二つの組の変異率は用量相関関係を顕示していなかった。２度重複して試験を行った結果は相似していた。従って、この実験条件の下に、４，４´−バイイソフラケシディンは比較的に高薬量の場合は弱い変異誘起物質と考える。
【実施例２０】
【００３４】
４，４´−バイイソフラケシディンの小鼠の髄マイクロ核実験
ＩＣＲ小鼠７０匹を選んで、ランダムの７組、それぞれ１０匹、雌雄半々に分けた。小鼠に一回で４，４´−バイイソフラケシディンをＭＴＤ＞５０００ｍｇ／ｋｇを胃に詰め込む。最高用量は５０００ｍｇ／ｋｇを選んで、全部で５０００、２５００、１２５０、６２５ｍｇ／ｋｇの４個の用量組、１個の陰性と１個の陽性を照合組として設ける。毎日１回胃に詰め込み、２日続ける。最後の投薬した２４時間後に見本を取って、鏡検する。結果として、本実験条件に下に、４，４´−バイイソフラケシディン化合物は小鼠の髄赤血球マイクロ核率増加を誘発する作用がない。
【実施例２１】
【００３５】
毒性試験
４，４´−バイイソフラケシディンは抗真菌作用を持っているので、細菌回復突然変異の試験中で高用量の時、菌の成長を抑制する作用がある。それ自身の薬効学作用に符合する。ＣＨＬの染色体の変異試験で、比較的高い用量の時だけ弱い誘発活性を示す。必要に応じて、さらに試験して確定できる。
【００３６】
小鼠の急毒性のテスト結果として４，４´−バイイソフラケシディンのＬＤ５０は測定したが存在していなかった。最大耐受量がＭＴＤ＞５ｇ／ｋｇであることが測定できた（１４匹の小鼠を１４日観察して死亡は２匹）。毒性が弱いことを示している。
【００３７】
本発明者は同時にフルコナゾールのＬＤ５０が約１．６ｇ／ｋｇとなることを測定した（４匹の小鼠を１４日観察して、２匹死亡）。この結果、４，４´−バイイソフラケシディンの毒性はフルコナゾールより約３倍小さい。最も重要なのは小鼠の髄赤血球マイクロ核率増加を誘発する作用が無いことである。従って、４，４´−バイイソフラケシディンは毒性がフルコナゾールより小さく、抗真菌作用が比較的強い新型化合物と思われる。
【実施例２２】
【００３８】
肝毒性について抗真菌化合物「４，４’−Ｂｉｉｓｏｆｒａｘｉｄｉｎ」とフルコナゾール（Ｆｌｕｃｏｎａｚｏｌｅ）との比較研究
試験の目的：
抗真菌化合物「４，４’−Ｂｉｉｓｏｆｒａｘｉｄｉｎ」とフルコナゾール（Ｆｌｕｃｏｎａｚｏｌｅ）とに対して肝毒性を比較して評価し、薬物の更なる開発のために根拠を提供する。
試験方法及び試験結果：
急性毒性試験
化合物「４，４’−Ｂｉｉｓｏｆｒａｘｉｄｉｎ」とフルコナゾール（Ｆｌｕｃｏｎａｚｏｌｅ）との急性毒性に対して共に評価を行い、毒性反応及び死亡状況を観察し、取りあえずＩＣＲ小鼠に両化合物のそれぞれＬＤ５０を飲ませることを試し、そして比較を行う。
そして、ＩＣＲ小鼠が化合物「４，４’−Ｂｉｉｓｏｆｒａｘｉｄｉｎ」を一回飲んだ後、１４日続いて観察した結果として、明らかな毒性を出現しなかった。また、死亡（０／１０）も出現しなかった。即ち、ＭＴＤ＞５ｇ／ｋｇである。ところが、ＩＣＲ小鼠がフルコナゾール（Ｆｌｕｃｏｎａｚｏｌｅ）を一回飲んだ後、元気が弱まり、動きが少なくなり、四肢の力が無くなった。更に、投薬約５時間（５ｈ）後、ある動物は口で呼吸するのを始め、死亡し、ＬＤ５０は約１．６ｇ／ｋｇ（２／４）である。
肝毒性の比較
ＩＣＲ小鼠に同等の薬剤量の化合物「４，４’−Ｂｉｉｓｏｆｒａｘｉｄｉｎ」とフルコナゾール（Ｆｌｕｃｏｎａｚｏｌｅ）（１．６ｇ／ｋｇ）とをそれぞれ飲ませ、投薬後４時間（４ｈ）及び２４時間（２４ｈ）、それぞれ血を採り、そして血清を分離し、肝臓の機能指標のａｓｐａｒａｔｅ  ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ｔｅｓｔ  （ＡＳＴ）  及びａｌａｎｉｎｅ  ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ｔｅｓｔについて測定を行った。
結果として、投薬後４時間（４ｈ）、ＣＷＷ組には小鼠の異常は殆ど無かった。しかし、フルコナゾールを飲んだ組の小鼠では、４匹の中３匹は元気が弱まり、動きが少なくなり、四肢の力が無くなった。２匹を選んで解剖を行って血清を測定した結果、ＡＬＴ、ＡＳＴレベルはＣＷＷ組のより明らかに高かった。更に、投薬２４時間（２４ｈ）後、フルコナゾール組に残った２匹小鼠の中１匹（１／２）のＡＳＴレベルが相対的に高く、他の１匹のＡＬＴ、ＡＳＴレベルが高まっていないと見られた。また、化合物「４，４’−Ｂｉｉｓｏｆｒａｘｉｄｉｎ」組の小鼠に対して、投薬４時間及び２４時間後、血清ＡＬＴ、ＡＳＴレベル両方とも異常なし。尚、ＩＣＲ小鼠が化合物「４，４’−Ｂｉｉｓｏｆｒａｘｉｄｉｎ」（１．６ｇ／ｋｇ）を飲んだ場合、明らかな肝毒性がなかった。ところが、同等の薬剤量でフルコナゾール（Ｆｌｕｃｏｎａｚｏｌｅ）（１．６ｇ／ｋｇ）を飲んだ場合、肝毒性を有し、特に、投薬４時間後毒性が明らかに出現した。
これらの比較は、下記のテーブルによって表されている。
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【国際調査報告】
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