(57)【要約】  本発明は、コンセントリコリド及びそれの誘導体、それらの調製用の工程、それを含有する薬学的組成物、並びに、ヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）に感染することの処置及び予防におけるその使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）
【化１】
2007509080.tif 000012
の化合物及びそれの誘導体であって、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ４のアルキルを表し、
Ｒ２は、Ｈ、ハロゲン、−ＯＨ、ＮＲＲ’、又は−ＮＯ２を表し、
Ｒ及びＲ’は、Ｈ又はＣ１−Ｃ６のアルキルを表し、
Ｒ３は、Ｈ、ハロゲン、−ＯＨ、ＮＲＲ’、又は−ＮＯ２を表し、
Ｒ及びＲ’は、Ｈ又はＣ１−Ｃ６のアルキルを表し、
Ｒ４は、Ｈ、ハロゲン、又は−ＮＯ２を表す、化合物。
【請求項２】
以下の式
【化２】
2007509080.tif 000013
によって表された化合物から選択された、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式（ＩＩ）
【化３】
2007509080.tif 000014
の化合物から選択された、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
式（ＩＩ）
【化４】
2007509080.tif 000015
の化合物を含む抽出物。
【請求項５】
請求項１乃至３のいずれか一項に記載の化合物若しくはそれの誘導体、又は請求項４に記載の抽出物、及び、薬学的に許容可能な担体又は賦形剤を含む薬学的組成物。
【請求項６】
式（Ｉ）の化合物を調製する工程であって、
ａ）雲南（Ｙｕｎｎａｎ）のダルジニアコンセントリカ（Ｄａｌｄｉｎｉａ  ｃｏｎｃｅｎｔｒｉｃａ）の子実体又は有機溶剤を備えたそれらの発酵した液体を抽出すること、
ｂ）式（ＩＩ）
【化５】
2007509080.tif 000016
の化合物を与えるために、シリカゲルのカラムクロマトグラフィーによってａ）からの抽出物を単離すること、
ｃ）式（Ｉ）の化合物を与えるために、式（ＩＩ）の化合物に臭素化、ニトロ化、又はアルキル化を受けさせること
を含む、工程。
【請求項７】
ＨＩＶ感染と関連した健康状態又は疾患の予防／処置用の薬剤の調製用の請求項１乃至３のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項８】
ＨＩＶ感染と関連した健康状態又は疾患の予防／処置用の薬剤の調製用の請求項４に記載の抽出物の使用。
【請求項９】
前記化合物は、
【化６】
2007509080.tif 000017
から選択される、請求項５に記載の組成物。
【請求項１０】
ＨＩＶ感染と関連した健康状態又は疾患の予防／処置用の方法であって、
ＨＩＶに感染した患者へ請求項１乃至３のいずれか一項に記載の化合物及び請求項４に記載の抽出物を投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、コンセントリコリド及びその誘導体、その化合物及びそれの誘導体を調製する工程、コンセントリコリドを含む薬学的組成物及びその誘導体、並びにヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）によって引き起こされる感染の処置及び予防のためのその化合物及びそれの誘導体の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
子嚢菌属の菌類、ダルジニア（Ｄａｌｄｉｎｉａ）及び他のクロサイワイタケ科（Ｘｙｌａｒｉａｃｅａｅ）は、独特の二次代謝産物に豊富なものである。欧州型及び米国型ダルジニア種（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ａｎｄ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｄａｌｄｉｎｉａ  ｓｐ．）は、それぞれ、Ａｌｌｐｏｒｔ  ａｎｄ  Ｂｕ’Ｌｏｃｋ（非特許文献１）及びＡｎｋｅ  ｅｔ  ａｌ．（非特許文献２）によって研究されてきており、それによって、それらの支質及び培養物における特徴的な代謝産物の識別に帰着した。最近では、二つの日本型のダルジニア種（Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｄａｌｄｉｎｉａ  ｓｐ．）が、Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ及びＡｓａｋａｗａ（非特許文献３、非特許文献４、非特許文献５、非特許文献６）によって、徹底的に調査されてきた。２０個より多くの新しい代謝産物が、発見されてきており、且つ、これらの化合物のいくつかは、抗菌性の活性及び殺線虫の活性を含む広い範囲の生物学的な活性を提示する。
【非特許文献１】Ｄ．Ｃ．Ａｌｌｐｏｒｔ，Ｊ．Ｄ．Ｂｕｌｏｃｋ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９５８，４０９０、Ｄ．Ｃ．Ａｌｌｐｏｒｔ，Ｊ．Ｄ．Ｂｕｌｏｃｋ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９６０，６５４
【非特許文献２】Ｈ．Ａｎｋｅ，Ｍ．Ｓｔａｄｌｅｒ，Ａ．Ｍａｙｅｒ，Ｏ．Ｓｔｅｒｎｅｒ，Ｃａｎ．Ｊ．Ｂｏｔ．，１９９５，７３，８０２
【非特許文献３】Ｍ．Ｓｔａｄｌｅｒ，Ｈ．ｗｏｌｌｗｅｂｅｒ，Ａ．Ｍｕｈｌｂａｕｅｒ，Ｔ．Ｈｅｎｋｅｌ，Ｙ．Ａｓａｋａｗａ，Ｔ．Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ，Ｙ．Ｍ．Ｊｕ，Ｊ．Ｄ．Ｒｏｇｅｒｓ，Ｈ．Ｇ．Ｗｅｔｚｓｔｅｉｎ，Ｈ．Ｗ．Ｔｉｃｈｙ，Ｍｙｃｏｔａｘｏｎ  ２００１，７７，３７９
【非特許文献４】Ｍ．Ｓ．Ｂｕｃｈａｎａｎ，Ｔ．Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ，Ｓ．Ｔａｋａｏｋａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９６，４２，１７３、Ｄ．Ｎ．Ｑｕａｎｇ，Ｔ．Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ，Ｍ．Ｔａｎａｋａ，Ｍ．Ｂａｕｍｇａｒｔｎｅｒ，Ｍ．Ｓｔａｄｌｅｒ，Ｙ．Ａｓａｋａｗａ．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００２，６１，３４５
【非特許文献５】Ｍ．Ｂｕｃｈａｎａｎ，Ｔ．Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ，  ａｎｄ  Ｙ．Ａｓａｋａｗａ，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９５，４０，１３５
【非特許文献６】Ｍ．Ｓ．Ｂｕｃｈａｎａｎ，Ｔ．Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ，ａｎｄ  Ｙ．Ａｓａｋａｗａ，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９６，４１，８２１．５−９
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
発明者は、Ｌｉｊｉａｎｇ  ｏｆ  Ｙｕｎｎａｎで収集された中国型のダルジニアコンセントリカ（Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｄａｌｄｉｎｉａ  ｃｏｎｃｅｎｔｒｉａ）からの骨格としてのベンゾフランラクトンを有する新規な化合物を発見してきており、その化合物は、コンセントリコリドＡ（ｃｏｎｃｅｎｔｒｉｃｏｌｉｄｅ  Ａ）と名付けられる。
【０００４】
そのコンセントリコリドは、良好な抗融合の生物学的な活性を提示する。それは、ＨＩＶが正常な細胞に入ることを予防し、ＨＩＶの増殖を阻害し、且つ、人の免疫系の破壊を遅延させる。それに応じて、そのコンセントコリドを、ＨＩＶ感染の予防及び処置のために使用することができる。
【０００５】
本発明は、第一の態様において、一般式（Ｉ）
【０００６】
【化７】
2007509080.tif 000002
の化合物又はそれの誘導体に関する。
【０００７】
ここで、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ４のアルキルを表し、
Ｒ２は、Ｈ、ハロゲン、−ＯＨ、ＮＲＲ’、又は−ＮＯ２を表し、
ここでＲ及びＲ’は、Ｈ又はＣ１−Ｃ６のアルキルを表し、
Ｒ３は、Ｈ、ハロゲン、−ＯＨ、ＮＲＲ’、又は−ＮＯ２を表し、
ここでＲ及びＲ’は、Ｈ又はＣ１−Ｃ６のアルキルを表し、
Ｒ４は、Ｈ、ハロゲン、又は−ＮＯ２を表す。
【０００８】
本発明は、別の態様において、活性な処方成分として、一般式（Ｉ）の化合物又はそれの誘導体並びに薬学的に許容可能な担体又は賦形剤を含む薬学的組成物に関する。
【０００９】
また、本発明は、
ａ）雲南（Ｙｕｎｎａｎ）からのダルジニアコンセントリカ（Ｄａｌｄｉｎｉａ  ｃｏｎｃｅｎｔｒｉｃａ）の子実体又は有機溶剤を備えたそれの発酵した液体を抽出すること、
ｂ）式（ＩＩ）
【００１０】
【化８】
2007509080.tif 000003
の化合物を与えるために、シリカゲルのカラムクロマトグラフィーによってその抽出物を分離すること、
ｃ）式（Ｉ）の化合物を与えるために、式（ＩＩ）の化合物に臭素化、ニトロ化、又はアルキル化を受けさせること
を含む、一般式（Ｉ）の化合物又はそれの誘導体を調製するための工程に関する。
【００１１】
本発明は、また、ＨＩＶ感染と関連した健康状態又は疾患の処置／予防用の医薬の製造に式（Ｉ）の化合物の使用に関する。
【００１２】
本発明は、さらに、ＨＩＶに感染した患者へ式（Ｉ）の化合物又はそれの誘導体を投与することを含む、ＨＩＶ感染と関連した健康状態又は疾患の予防／処置のための方法に関する。
【００１３】
本発明は、さらに、その抽出物が、式（ＩＩ）
【００１４】
【化９】
2007509080.tif 000004
の化合物を含有するという点で特徴付けられる、雲南からのダルジニアコンセントリカの抽出物に関する。
【００１５】
本発明は、さらに、活性な処方成分として、ダルジニアコンセントリカの抽出物及び薬学的に許容可能な担体又は賦形剤を含む、薬学的組成物に関するが、ここで、ダルジニアコンセントリカの抽出物は、式（ＩＩ）のコンセントリコリドを含有する。
【００１６】
本発明は、さらに、ＨＩＶ感染と関連した健康状態又は疾患の予防／処置用の生産物の調製用のダルジニアコンセントリカの抽出物の使用に関する。
【００１７】
本発明に従って、式（Ｉ）の化合物又はそれの誘導体は、好ましくは、以下の式
【００１８】
【化１０】
2007509080.tif 000005
によって表された化合物から、より好ましくは、式（ＩＩ）の化合物から、選択される。
【００１９】
本発明に従って、式（Ｉ）の化合物又はそれの誘導体は、それの光学的な立体異性体、好ましくは、式（ＩＩＩ）によって表される立体異性体を含む。
【００２０】
本発明に従って、用語“式（Ｉ）の化合物の誘導体”は、薬学的に許容可能な塩、立体異性体、式（Ｉ）の化合物の水和物又は溶媒和物を意味する。
【００２１】
本発明に従って、この発明に関係した化合物は、薬化学で通常使用される生理学的に許容可能な塩を含む、様々な有機酸及び無機酸と塩を形成する。また、このような塩は、この発明に含まれる。このような塩を形成するために使用される典型的な無機酸の例は、塩酸、硝酸、硫酸、リン酸などを含む。典型的な有機酸の例は、一脂肪酸（mono-aliphatic  acids）及び二脂肪酸（bi-aliphatic  acids）、フェニルで置換されたアルカン酸（alkanoic  acids）、ヒドロキシアルカン酸、並びに、ヒドロキシアルカン二酸（hydroxyalkandioic  acids）、芳香族酸、脂肪族スルホン酸及び芳香族スルホン酸などを含む。薬学的に許容可能な塩は、酢酸塩、フェニル酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、アクリル酸塩、アスコルビン酸塩、安息香酸塩（benoates）、クロロ安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩（dinitrobenoates）、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、メチル安息香酸塩（methylbenzoates）、ｏ−アセトキシ安息香酸、ナフタレン−２−安息香酸塩（naphthalense-2-banzoates）、臭化物塩、イソ酪酸塩（isobytyrates）、フェニル酪酸塩、β−ヒドロキシ酪酸塩、ブチン−１，４−二酸塩、カプロン酸塩、カプリル酸塩、塩化物、桂皮酸塩、クエン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グリコール酸塩（glycollates）、ヘプタン酸、馬尿酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、ヒドロキシマレイン酸、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、ニコチン酸塩、イソニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、フタル酸塩、テレフタル酸塩（teraphthalates）、リン酸塩、一水素リン酸塩、二水素リン酸塩、メタリン酸、ピロリン酸塩、プロピオール酸塩、プロピオン酸塩、フェニルプロピオン酸塩、サリチル酸塩、セバシン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、ピロ硫酸塩、亜硫酸塩、亜硫酸水素塩、スルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−ブロモフェニルスルホン酸塩、クロロベンゼンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、酒石酸塩などを含む。好適な塩は、塩酸塩である。
【００２２】
本発明に従って、式（ＩＩ）の化合物は、ダルジニア種（Ｄａｌｄｉｎｉａ  ｓｐ．）の菌類の材料から調製される。ダルジニア種の細分した菌類の材料は、有機溶剤（例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、アセトン、酢酸エチル、クロロホルム、ジエチルエーテル、ｔ−ブチル＝メチル＝エーテル、テトラヒドロフラン、アセトニトリル）で抽出され、その抽出物は、固体の担体に濃縮されると共に吸着される。その固体の担体は、土壌の天然の鉱石（例えば、カオリン、粘土、滑石、石粉、水晶、モンモリロナイト）及び土壌の合成鉱物（例えば、シリカ、アルミナ、ケイ酸塩）又は吸着剤の樹脂（例えば、フェノール−ホルムアルデヒド樹脂若しくはポリアミド樹脂）を含む。吸着された抽出物は、極性を増加させるための混合した溶剤を使用する、勾配溶離にかけられるが、その溶離は、濃縮されると共にシリカゲルカラムでさらに精製される。
【００２３】
あるいは、式（ＩＩ）の化合物は、有機溶剤（例えば、酢酸エチル、ジエチルエーテル、クロロホルム、塩化メチレン、ブタノール）でダルジニアコンセントリカの発酵した液体の培養物を抽出すること、土壌の天然の鉱物（例えば、カオリン、粘土、滑石、石粉、水晶、モンモリロナイト）及び土壌の合成鉱物（例えば、シリカ、アルミナ、ケイ酸塩）又は吸収体の樹脂（例えば、フェノール−ホルムアルデヒド樹脂若しくはポリアミド樹脂）を含む固体の担体でその抽出物を濃縮すると共に吸収すること、並びに、その吸収された抽出物を勾配溶離にかけること、その溶離剤を濃縮すると共にシリカゲルカラムで精製することによって、調製される。
【００２４】
本発明に従って、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物は、ヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）の感染によって引き起こされる後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の処置に適切なものである。それら化合物を、菌類から直接的に単離する又は全合成若しくは半合成によって得ることができる。本発明に従って全ての化合物は、それらがヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）によって引き起こされる感染を処置することに使用されるとき、別々に又は薬学的組成物の形態で使用される。また、本発明は、ヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）によって引き起こされる感染の処置のためのダルジニア種の抽出物の使用に関連する。それら抽出物は、式（ＩＩ）の化合物を含むと共に、ＨＩＶによって引き起こされる感染の処置に適切なものである他の化合物又は調合物との組み合わせで使用されることができる。
【００２５】
さらに、ダルジニア種の抽出物を、上の有機溶媒を使用する従来の抽出ステップによって、得ることができる。様々な純度の等級の抽出物を、使用することができる。その抽出物における式（ＩＩ）の化合物の含有率は、０．０１重量％から２重量％の範囲に、好ましくは、０．１重量％から１重量％の範囲にある。
【００２６】
また、本発明は、ヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）によって引き起こされる感染の処置のためのダルジニア種の菌類の使用に関する。それら菌類は、好ましくは、細分した子実体又は支質及び培養物の形態にある。細分した菌類を、ＨＩＶによって引き起こされた感染の処置のために他の化合物又は調合物と一緒に使用することができる。
【００２７】
式（Ｉ）又は（ＩＩ）の一つ以上の化合物は、錠剤（tables）又は他の経口的な投薬の形態へ、賦形剤、希釈剤、又は担体と一緒に圧縮されるか、又は、筋肉内の又は静脈内の注射用の薬学的な投薬の形態として若しくは徐放性の投薬の形態などとして処方される。
【００２８】
薬学的な調合物は、当技術において知られた手順によって、調製される。特に、本発明に従って化合物を、通常の賦形剤、希釈剤、又は担体で調合すると共に錠剤、カプセル、懸濁液、粉末などに形成することができる。賦形剤、希釈剤、及び担体の例は、（デンプン、糖類、マンニトール、及び、ケイ素の誘導体のような）充填剤及び増量剤、（カルボキシメチルセルロール、他のセルロース誘導体、アルギン酸塩又はエステル、ゼラチン、及びポリビニルピロリドンのような）結合剤、（グリセロールのような）加湿剤、（パラフィンのような）緩開放剤、（第四級アンモニウム塩のような）再吸収促進剤、（セチルアルコール、モノステアリン酸グリセロールのような）界面活性剤、（カオリン及びベントナイトのような）吸着性担体、及び、（滑石、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、及び、固体のポリエチルグリコールのような）潤滑剤を含む。
【００２９】
本発明に従った化合物を、筋肉内の、皮下の、又は、静脈内の注射用の投薬の形態のような非経口的な投薬の形態として、又は、徐放性の投薬の形態などとして、処方することができる。調合物を、それらが、ある時間の期間にわたって腸管の特定の部分で活性な処方成分を解放するように、構成することができる。被覆剤、外被、及び保護の基剤を、重合体の材料又はワックスから作ってもよい。
【００３０】
ヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）によって引き起こされる感染の処置用の式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物の特定の服用量は、疾患の重症度、体重、年齢、性別、投与の経路、及び、臨床家の具体的な診断のような、多くの因子に依存性するものである。一般に、許容された且つ有効な日々の薬用量は、０．１ｍｇ／人／日から１０００ｍｇ／人／日、好ましくは、５０ｍｇ／人／日から２００ｍｇ／人／日までである。このような服用量は、毎日一回から三回まで、投与される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３１】
以下の例は、本発明をさらに記載するために、使用されるが、しかし、どんな点においても本発明を限定しない。
【００３２】
例１  コンセントコリドＡの調製
ダルジニアコンセントリカの乾燥した且つ細分された子実体（７５０ｇ）を、それぞれ室温においてＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ（１：１，体積／体積）及びＭｅＯＨで三回抽出した。その有機相を、組み合わせ、且つ、深い褐色の且つクリームの粗抽出物（６０ｇ）を与えるために、真空中で蒸発させた。
【００３３】
その抽出物を、８０個〜１００個の網目のシリカゲルと混合し、且つ、１５個のフラクションを与えるために、引き続いてＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ（１００：０，９５：５，９０：１０，体積／体積）で溶離するシリカゲルクロマトグラフィーにかけた。（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９５：５，９ｇ）で溶離させた）フラクション８を、引き続いて石油エーテル／アセトン（９９：１，９５：５，９０：１０，８０：２０，体積／体積）で溶離するシリカゲルクロマトグラフィーにかけた。９９：１の石油エーテル／アセトンで溶離したフラクションから直接的に得られたのは、１２０ｍｇのコンセントリコリドＡであった。
【００３４】
あるいは、ダルジニアコンセントリカの液体の培養物（８０Ｌ）を、室温においてＥｔＯＡｃで五回抽出した。組み合わせた有機相を、深い茶色の且つクリームの粗抽出物（２４ｇ）を与えるために、真空中で蒸発させた。その粗抽出物を、８０個〜１００個の網目のシリカゲルと混合し、且つ、１５個のフラクションを与えるために、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ（１００：０，９５：５，９０：１０，体積／体積）で溶離するシリカゲルクロマトグラフィーにかけた。（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９５：５，１．７ｇで溶離することによって得られた）フラクション８を、石油エーテル／アセトン（９９：１，９５：５，９０：１０，８０：２０，体積／体積）で溶離するシリカゲルクロマトグラフィーにかけた。９９：１の石油エーテル／アセトンで溶離したフラクションから直接的に得られたのは、１７３ｍｇのコンセントリコリドＡであった。
【００３５】
コンセントコリドＡは、以下の物理化学的な且つ波のスペクトルのデータ（date）：淡黄色の針状結晶体、融点８９〜９０℃（石油エーテル／アセトン）；［α］Ｄ２１．９＝−５９．２３°（ｃ０．４８，ＭｅＯＨ）；ＥＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  （相対強度）：２０２［Ｍ］＋（２０），１７３（１００），１４５（４８）；ＨＲ−ＴＯＦ−ＭＳ  ｍ／ｚ：２２５．０５２６（［Ｍ＋Ｎａ］＋，２２５．０５２７  Ｃ１２Ｈ１０Ｏ３Ｎａについての計算値）；ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ  ｎｍ：２２６（ｌｏｇ  ε  ４．０８），２５６．５（３．８８），２９７（３．６３）；ＩＲνＫＢｒｍａｘｃｍ−１：１７５７，１６４１，１５３４，１４３７を有する。
【００３６】
コンセントコリドの１Ｈ−及び１３Ｃ−NMRのデータ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ単位のδ，Ｈｚ単位のＪ）
【００３７】
【表１】
2007509080.tif 000006
【００３８】
（Ｘ線回折分析の結果）
Ｃ１２Ｈ１０Ｏ３，Ｍ  ２０２，三斜晶系，空間群Ｐ１：ａ＝７．７２８（１），ｂ＝８．２８９（１），ｃ＝９．０４３（１）Å；α＝１０６．４５０（５）°，β＝９６．３２１（６）°，γ＝１０８．９４６（６）°；Ｖ＝５１２．３６（３）Å３，Ｚ＝２。最終的な信頼できる因子Ｒｆ＝０．０７３及びＲｗ＝０．０６６（ｗ＝１／σ｜Ｆ｜２）合計で１３６９回の反射を、黒鉛で単色化された（monochromated）ＭｏＫα走査放射を備えたＭＡＣ−ＤＩＰ−２０３０Ｋ回折計で、ω走査モードにおいて記録した。その構造を、直接的方法のＳＨＥＬＸＳ８６によって解釈した。それの格子回折パターンを図７に示した。
【００３９】
例２
コンセントコリドＡからの２，３−ジブロモ−２，３−ジヒドロコンセントコリド（Ｂ）の調製
６０ｍｇのコンセントコリド（Ａ，０．３０ｍｍｏｌ）を、２ｍｌのＣＨＣｌ３に溶解させ、６５ｍｇの臭素（０．４１ｍｍｏｌ）を、１ｍｌのＣＨＣｌ３に溶解させた。その臭素の溶液を、Ａの溶液へ滴状に添加し、且つ、１２０時間の間、室温で攪拌した。その生成物を、淡黄色の針状結晶体を与えるために、濃縮したが、それを、４７．２％の収率で５０．８ｍｇのＢを得るために、再結晶させた。その生成物は、ＨＰＬＣで二本のピークを示したが、それらは、一対の光学異性体（Ｂ１及びＢ２）であることが識別される。
【００４０】
淡黄色の針状結晶体の化合物Ｂを、コンセントコリドＡ及び臭素の付加反応によって、生成させた。ＥＩ−ＭＳスペクトルは、その分子（molecular）が二つの原子を含有することを暗示する、１：２：１の相対強度で３６４、３６２、及び３６０における三本の同位体のピークを示した。コンセントコリドＡとの比較によって、ちょうど、二つの臭素原子の分子量の差があるが、二つの臭素原子の存在をさらに証明する。１Ｈ−ＮＭＲスペクトルにおいて、互いに結合した二つのオレフィンの水素［δ７．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７），７．１９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７）］が、観察された。結合定数Ｊ＝７．７に基づいて、２位及び３位で起こった臭素の付加反応を示唆する、フェニル環における水素であることが、推測される。ＨＭＢＣにおいて、δＨ７．７９を、Ｃ−３、５Ａ、及び８Ａに関係づけ、且つ、δＨ７．１９を、Ｃ−３Ａ、４、５Ａ、及び８Ａに関係付けたが、その付加反応がフラン環で起こったことをさらに証明した。従って、Ｂの構造を、２，３−ジブロモ（dibromine  omo）−２，３−ヒドロコンセントリコリドであることを決定した。ＢのＨＰＬＣは、臭素の付加反応が、臭素オニウムイオン機構であったので、二つの臭素原子が、オレフィンの炭素を攻撃するために反対の方向をとったことで、二本のピークがあることを示した。その付加反応の生成物は、一対の光学異性体であるはずである、すなわち、Ｂは、実際には、混合物であったが、ここで、それら二つの化合物の構造は、それぞれ、（２Ｓ，３Ｓ）−２，３−ジブロモ−２，３−ヒドロコンセントコリド（Ｂ１）及び（２Ｒ，３Ｒ）−２，３−ジブロモ−２，３−ヒドロコンセントコリド（Ｂ２）であった。
【００４１】
２，３−ジブロモ−２，３−ジヒドロコンセントコリド（Ｂ１及びＢ２）
淡黄色の針状結晶体（石油エーテル／アセトン）
ＥＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ（相対強度）：３６４［Ｍ１］＋（０．５），３６２［Ｍ２］＋（１．０），３６０［Ｍ３］＋（０．５），２８４  （７），２８２（１３），２８０（３１），２７８（７），２０２（２０），１７３（１００），１４５（５０），１１７（７），８９（１２）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：８７．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７），７．１９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７），７．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．８），５．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．２），５．４６（１Ｈ，ｍ），２．１４（１Ｈ，ｍ），１．８６（１Ｈ，ｍ），１．０６（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４）；１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６６．６，１６６．６，１５３．９，１５３．９，１５３．８，１５３．８，１３１．６，１３１．５，１２８．１，１２８．０，１１７．１，１１７．１，１１２．２，１１２．０，９０．１，９０．０，８２．８，８２．８，５０．９，５０．８，２７．８，２７．７，９．１，９．０。
【００４２】
例３
２，３−ジブロモ−２，３−ジヒドロコンセントコリド（Ｂ）からの３−ブロモコンセントコリド（Ｃ）の調製
３２ｍｇのＢ（０．０９ｍｍｏｌ）を、２ｍｌのメタノールに溶解させ、その溶液に、水酸化カリウムの１ｍｌの飽和メタノール溶液を添加した。その混合物を、８時間の間、室温で攪拌した。その反応溶液を、メタノール中の１％の塩酸でｐＨ７．０まで中和し、且つ、少量の水で希釈し、且つ、クロロホルムで抽出した。その抽出物を、粗生成物を得るために、乾燥させた。その粗生成物を、４７．５％の収率で１１．８ｍｇの淡黄色の針状結晶体Ｃを与えるために、再結晶させた。
【００４３】
淡黄色の針状結晶体の化合物Ｃを、Ｂの脱離反応の生成物として得た。ＥＩ−ＭＳスペクトルは、一つの臭素原子の存在を暗示する、１：１の相対強度で２８２及び２８０に二本の分子イオンピークを示した。三個のオレフィンの水素の信号［δ７．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０），７．８０（１Ｈ，ｓ），７．３４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０）］が、１Ｈ−ＮＭＲで観察された。それら信号をＡのもの［δ７．７４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２，Ｈ−２），６．８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２，Ｈ−３），７．８６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．３，３．６，Ｈ−４），７．２４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３，Ｈ−５）］と比較すると、脱離したものは、Ｈ−３であった。ＨＭＢＣは、δＨ  ７．８０（１Ｈ，ｓ）及びＣ−３、３Ａ、８Ｂの関連性のあるピークがあったことを示したが、その化合物の構造が３−ブロモコンセントコリドであったことをさらに証明する。
【００４４】
３−ブロモコンセントコリド（Ｃ）
淡黄色の針状結晶体（石油エーテル／アセトン）；融点８８〜８９℃；Ｅ１−ＭＳ  ｍ／ｚ  （相対強度）：２８２［Ｍ１］＋（２０），２８０［Ｍ２］＋（２１），２５３［Ｍ１−Ｃ２Ｈ５］＋（８０），２５１［Ｍ２−Ｃ２Ｈ５］＋（１００），２２５（５２），２２３（６８）；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０），７．８０（１Ｈ，ｓ），７．３４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０），５．５６（１Ｈ，ｍ），２．１８（１Ｈ，ｍ），１．８４（１Ｈ，ｍ），０．９９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４）；１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６７．２，１４９．５，１４９．２，１４４．１，１２８．８，１２６．５，１１６．８，１１１．６，９８．３，８２．９，２７．８，８．７；２Ｄ−ＮＭＲ。
【００４５】
例４
コンセントコリドＡからの２，５−ジニトロコンセントコリド（Ｄ）の調製
５０ｍｇのＡ（０．２５ｍｍｏｌ）を、１ｍｌのＣＨＣｌ３に溶解させ、その溶液に添加したのは、冷却状態での１．５ｍｌの濃硫酸であったと共に、攪拌と共に添加したのは、滴状の１ｍｌの硝酸であった。その混合物を、３０分間の間、室温で攪拌し、且つ、次に、粉砕した氷に注入した。残存した酸を、炭酸ナトリウムを使用することによって、取り除いた。その混合物を、少量の水で希釈し、且つ、クロロホルムで抽出した。その抽出物を、粗生成物を得るために、乾燥させ、それを、４４％の収率で３１．８ｍｇの淡黄色の針状結晶体Ｄを与えるために、再結晶させた。
【００４６】
２，５−ジニトロコンセントコリド（Ｄ）
淡黄色の針状結晶体（石油エーテル／アセトン）；融点２０３〜２０５℃；ＥＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ（相対強度）：２９２［Ｍ］＋（２５），２６３［Ｍ−Ｃ２Ｈ５］＋（１００）；ＨＲ−ＴＯＦ−ＭＳ  ｍ／ｚ：Ｃ１２Ｈ８Ｎ２Ｏ７（［Ｍ＋Ｎａ］−３１５．０２２０，Ｃ１２Ｈ８Ｎ２Ｏ７Ｎａについての計算値３１５．０２２９）；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ８．９８（１Ｈ，ｓ），７．９６（１Ｈ，ｓ），６．１３（１Ｈ，ｍ），２．２９（１Ｈ，  ｍ），１．７７（１Ｈ，ｍ），０．９１（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４）；１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６３．９，１５５．３，１４９．７，１４７．１，１４０．９，１２８．２，１２６．８，１１４．６，１０６．９，８４．１，２６．３，９．１。
【００４７】
処方において、“活性な処方成分”は、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物を意味する。
【００４８】
例５：ゼラチンカプセル
硬質のゼラチンカプセルを、以下の方法を使用して調製した。
【００４９】
【表２】
2007509080.tif 000007
それら処方成分を、ブレンドし、ふるいを通じて通過させ、且つ、硬質のゼラチンカプセルに充填した。
【００５０】
例６：コンセントコリドカプセル
【００５１】
【表３】
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例７：錠剤
【００５２】
【表４】
2007509080.tif 000009
上記の組成物を、ブレンドし、且つ、錠剤へ圧縮した。
【００５３】
各々が０．１−１０００ｍｇの活性な処方成分を含有する錠剤を、以下のように組成した。
【００５４】
例８：錠剤
【００５５】
【表５】
2007509080.tif 000010
その活性な処方成分、デンプン、及びセルロースを、ふるいを通じて通過させ、且つ、混合した。その混合物に添加したのは、溶液を形成するためのポリビニルピロリドンであった。その溶液を、薬学的な顆粒を生成させるために、ふるいを通じて通過させた。それら顆粒を、５０−６０℃で乾燥させ、且つ、ふるいを通じて通過させた。ふるいを通じて通過させたカルボキシメチルセルロースナトリウム及び酢酸マグネシウムを、混合し、且つ、錠剤に圧縮した。
【００５６】
各々が５ｍｌの薬用量当たり０．１−１０００ｍｇの有効な処方成分を含有する懸濁液を、以下のように作った。
【００５７】
例９：懸濁液
【００５８】
【表６】
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【００５９】
その有効な処方成分を、ふるいを通じて通過させ、且つ、均一なペーストを形成するためにカルボキシメチルセルロースナトリウム及びシロップと混合した。安息香酸溶液、香料添加剤、及び着色剤を、攪拌と共に水を使用して、希釈し、且つ、次に、その薬学的なペーストを添加し、且つ、その要求された容積まで水で均衡させた。
【００６０】
生物学的な活性の分析
材料及び方法
試薬及び化学薬品
ＭＴＴ（３，（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム＝ブロミド）を、Ａｍｒｅｓｃｏから購入した。ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）を、Ｓｅｒｖａから購入した。ＡＺＴ（３Ｐ−アジド−３Ｐ−デオキシチミジン）を、Ｓｉｇｍａから購入した。ＤＭＦ（Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミン（N,N’-Dimethyl  formamine））を、Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ（中国）から購入した。
【００６１】
培養物の媒体
１０％のウシ胎児血清（ギブコ）、２ｍＭのＬ−グルタミン、１０ＭのｍＨＥＰＥＳ、５０μＭの２−メルカプトエタノール、１００，０００ＩＵのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイセス硫酸塩が供給された完成したＲＰＭＩ−１６４０媒体
【００６２】
化合物
試験する化合物は、コンセントコリドＡであった。陽性対照：ＡＺＴ、逆転写酵素阻害剤の一つ、及び、Ｔ２０、融合阻害剤の一つ、を使用した。
【００６３】
細胞及びウィルス
Ｃ８１６６及びＨＩＶ−１ＩＩＩＢに慢性的に感染したＨ９細胞が、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｕｎｃｉｌ（ＭＲＣ）、ＡＩＤＳ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｐｒｏｊｅｃｔ，ＵＫによって供与された。全ての細胞及びウィルスは、通常の方法によって、貯蔵され、且つ、蘇生させられた。
【００６４】
例１
Ｃ８１６６細胞におけるコンセントコリドＡの細胞毒性
Ｃ８１６６は、ＨＩＶ−１についての宿主細胞の一つであった。１００μｌの４×１０５個／ｍｌの細胞を、マイクロタイタープレート上に接種し、１００μｌの様々な濃度のコンセントコリドを、添加し、且つ、７２時間の間、５％ＣＯ２の加湿した雰囲気において３７℃で温置した。細胞の毒性を、ＭＴＴ比色分析によって分析した。そのプレートを、５９５／６３０ｎｍ（ＯＤ５９５／６３０ｎｍ）で、Ｂｉｏ−Ｔｅｋ  ＥＬｘ８００ＥＬＩＳＡ読取装置において読み取った。５０％の細胞毒性の濃度（ＣＣ５０）を、以下のように計算した。
【００６５】
細胞生存度％＝（ＯＤｅｘｐ−ＯＤｂｌａｎｋ）／（ＯＤｃｏｎｔｒｏｌ−ＯＤｂｌａｎｋ）×１００。
【００６６】
それら結果を図１及び２に示した。
【００６７】
例２
正常な細胞とＨＩＶ−１に感染した細胞との間の融合におけるコンセントコリドＡの妨害
ＨＩＶに感染した細胞を、正常なＴリンパ球の細胞と共同で培養したとき、感染した細胞に発現した外部の外被の糖タンパク質ｇｐ１２０が、細胞の融合及び融合細胞の形成の後に続き、感染してないＣＤ４＋細胞における細胞のＣＤ４受容体に束縛された。このサイトへの標的の化合物は、融合細胞の形成を阻害するであろう。このように、この方法を、それら化合物が、ウィルスと宿主細胞との間の結合及び融合に効果を有するか否かを検出するために、使用することができるであろう。例１におけるコンセントコリドＡを、９６個のウェルのマイクロタイタープレート、各々の勾配における３個の繰り返されたウェル、ウェル当たり１００μｌにおいて、五倍に希釈した。化合物が無い陰性対照のウェル及びＴ−２０陽性対照のウェルを、セットした。そして、対数的な成長期間における５０μｌのＣ８１６６細胞（６×１０５個／ｍｌ）及び５０μｌのＨＩＶ−１に慢性的に感染したＨ９細胞（２×１０５個／ｍｌ）を、各々のウェルにおいて添加した。そのプレートを、２４時間の間、３７℃及び５％ＣＯ２での加湿した培養器において培養し、且つ、融合細胞の形成を、コンセントコリドＡがウィルス及び細胞の融合の過程を妨害するか否かを推理するために、顕微鏡下で観察した。それら結果は、図３及び４に示すようなものであった。
【００６８】
例３
ＨＩＶ−１に架線したＣ８１６６細胞におけるコンセントコリドＡの細胞変成効果（ＣＰＥ）の阻害の分析
対応する濃度の例１からのコンセントコリドＡを含有する１００μｌの培養物の媒体へ添加したのは、Ｃ８１６６細胞（４×１０５個／ｍｌ）及び０．０６の感染多重度（multiplicity  of  infection）（Ｍ．Ｏ．Ｉ）におけるＨＩＶ−１ＩＩＩＢであった。最終的な体積は、２００μｌであった。ＡＺＴを、陽性の薬物の対照として使用した。それらプレートを、３７℃及び５％ＣＯ２で加湿した培養器において温置した。３日の培養の後に、細胞変成効果を、倒立顕微鏡の下で各々のウェルにおける融合細胞の数を計数することによって、測定した。ＥＣ５０（５０％の有効濃度）は、５０％の融合細胞の形成を阻害する化合物の濃度であった。細胞変成効果（ＣＰＥ）阻害％＝（１−融合細胞の数ｅｘｐ／融合細胞の数ｃｏｎｔｒｏｌ）×１００。それら結果は、図５及び６に示すようなものであった。
【００６９】
結論
データは、コンセントコリドが、低い細胞毒性及び生体外でＨＩＶ−１に対する良好な活性を提示することを、実証した。選択された指標（selected  index）（Ｓ．Ｉ．）は、２２２である。コンセントコリドの標的のサイトは、おそらく、ＨＩＶと細胞との間の結合及び融合である。そのため、ＨＩＶと細胞との間の結合及び融合を妨害する小さい分子化合物として、コンセントコリドＡは、顕著な有意性を有する。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１】Ｃ８１６６細胞におけるコンセントリコリドＡ又はＩＩの細胞毒性（ＣＣ５０は、７６．６６μｇ／ｍｌである。）
【図２】Ｃ８１６６細胞におけるＡＺＴの細胞毒性（ＣＣ５０は、２５８．８８μｇ／ｍｌである。）
【図３】ＨＩＶ−１と細胞との間における結合及び融着におけるコンセントリコリドＡ又はＩＩの妨害（ＥＣ５０は、０．８３μｇ／ｍｌである。）
【図４】ＨＩＶ−１に感染した細胞の融着におけるＴ２０の妨害（ＥＣ５０は、６．０２μｇ／ｍｌである。）
【図５】ＨＩＶ−１の細胞変成効果（ＣＰＥ）におけるコンセントリコリドＡ又はＩＩの阻害（ＥＣ５０は、０．３１μｇ／ｍｌである。）
【図６】ＨＩＶ−１の細胞変成効果（ＣＰＥ）におけるＡＺＴの阻害（ＥＣ５０は、０．０９２μｇ／ｍｌである。）
【図７】本発明に従ったコンセントリコリドＡの格子回折パターン
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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