(57)【要約】  本発明は、新規クラスの化合物、このような化合物を含む医薬組成物、ならびに、このような化合物のｃＳＲＣ、Ｌｃｋ、ＦＧＦＲ３、Ｆｌｔ３、ＴｒｋＢ、Ｂｍｘおよび／またはＰＦＧＦＲαキナーゼ活性が関連する疾患または障害の処置または予防における使用を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2007502776.tif 000080
〔式中：
Ｒ１は水素、ハロ、Ｃ１−６アルキル、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシ、−ＯＸＯＲ５、−ＯＸＲ６、−ＯＸＮＲ５Ｒ６、−ＯＸＯＮＲ５Ｒ６、−ＸＲ６、−ＸＮＲ５Ｒ６および−ＸＮＲ７ＸＮＲ７Ｒ７から選択され；ここで、Ｘは結合、Ｃ１−６アルキレン、Ｃ２−６アルケニレンおよびＣ２−６アルキニレンから選択され；ここで、Ｒ７は、独立して、水素またはＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ５は水素、Ｃ１−６アルキルおよび−ＸＯＲ７から選択され；ここで、Ｘは結合、Ｃ１−６アルキレン、Ｃ２−６アルケニレンおよびＣ２−６アルキニレンから選択され；およびＲ７は、独立して、水素またはＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ６は水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキルＣ０−４アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキルＣ０−４アルキル、Ｃ６−１０アリールＣ０−４アルキルおよびＣ５−１０ヘテロアリールＣ０−４アルキルから選択されるか；または
Ｒ５およびＲ６は、Ｒ５およびＲ６の両方が結合している窒素原子と一体となって、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキルまたはＣ５−８ヘテロアリールを形成し；ここで、Ｒ５およびＲ６により形成されるヘテロシクロアルキルのメチレンはいずれも、所望により−Ｃ(Ｏ)−または−Ｓ(Ｏ)２−で置換されていてよく；
ここで、Ｒ６またはＲ５とＲ６の組み合わせのアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルは、いずれも、所望により、−ＸＮＲ７Ｒ７、−ＸＯＲ７、−ＸＮＲ７Ｒ７、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ７、−ＸＮＲ７Ｃ(Ｏ)Ｒ７、−ＸＯＲ７、−ＸＣ(Ｏ)ＯＲ７、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ７、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ５−１０ヘテロアリール、Ｃ３−１２シクロアルキルおよびＣ６−１０アリールＣ０−４アルキルから独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよく；ここで、Ｒ１のアルキルまたはアルキレンのいずれも、所望により−ＮＲ７Ｃ(Ｏ)−、−Ｃ(Ｏ)ＮＲ７−、−ＮＲ７−、−Ｃ(Ｏ)−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ(Ｏ)−および−Ｓ(Ｏ)２−から選択される２価ラジカルで置換されたメチレンを有してよく；そして、Ｒ６のアルキルまたはアルキレンのいずれも、所望により、Ｃ５−８ヘテロアリール、−ＮＲ７Ｒ７、−Ｃ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ７、−ＮＲ７Ｃ(Ｏ)Ｒ７、ハロおよびヒドロキシから独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよく；ここで、Ｒ７は、独立して、水素またはＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ２は水素、Ｃ６−１０アリールおよびＣ５−１０ヘテロアリールから選択され；ここで、Ｒ２のアリールまたはヘテロアリールはいずれも、所望により、−ＸＮＲ７Ｒ７、−ＸＯＲ７、−ＸＯＲ８、−ＸＣ(Ｏ)ＯＲ７、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ７、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、ハロおよびハロ−置換−Ｃ１−６アルキルから独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されており；ここで、ＸおよびＲ７は上記で定義の通りであり；そしてＲ８はＣ６−１０アリールＣ０−４アルキルであり；
Ｒ３は水素およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ４はＣ３−１２シクロアルキルＣ０−４アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキルＣ０−４アルキル、Ｃ６−１０アリールＣ０−４アルキルおよびＣ５−１０ヘテロアリールＣ０−４アルキルから選択され；ここで、Ｒ４のアルキレンのいずれも、所望により−Ｃ(Ｏ)−、−Ｓ−、−Ｓ(Ｏ)−および−Ｓ(Ｏ)２−から選択される２価ラジカルで置換されたメチレンを有してよく；ここで、Ｒ４の該アリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルは、所望によりハロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、ハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシ、−ＸＲ９、−ＸＯＲ９、−ＸＳ(Ｏ)０−２Ｒ７、−ＸＳ(Ｏ)０−２Ｒ９、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ７、−ＸＣ(Ｏ)ＯＲ７、−ＸＰ(Ｏ)Ｒ７Ｒ７、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ９、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ７ＸＮＲ７Ｒ７、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ７、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ９および−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ７ＸＯＲ７から選択される１個から３個のラジカルで置換されており；ここで、ＸおよびＲ７は上記で定義の通りであり；Ｒ９はＣ３−１２シクロアルキルＣ０−４アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキルＣ０−４アルキル、Ｃ６−１０アリールおよびＣ５−１０ヘテロアリールから選択され；ここで、Ｒ９のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルのいずれも、所望によりＣ１−６アルキル、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ７および−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ７から選択される１個から３個のラジカルで置換されており；ここで、ＸおよびＲ７は上記で定義の通りである。〕
の化合物、およびその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物異性体およびプロドラッグ。
【請求項２】
Ｒ１が水素、ハロ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＯＸＯＲ５、−ＯＸＲ６、−ＯＸＮＲ５Ｒ６、−ＯＸＯＮＲ５Ｒ６、−ＸＲ６、−ＸＮＲ７ＸＮＲ７Ｒ７および−ＸＮＲ５Ｒ６から選択され；ここで、Ｘが結合、Ｃ１−６アルキレン、Ｃ２−６アルケニレンおよびＣ２−６アルキニレンから選択され；
Ｒ５が水素、Ｃ１−６アルキルおよび−ＸＯＲ７から選択され；ここで、Ｘが結合、Ｃ１−６アルキレン、Ｃ２−６アルケニレンおよびＣ２−６アルキニレンから選択され；そしてＲ７が、独立して、水素またはＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ６が水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキルＣ０−４アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキルＣ０−４アルキル、Ｃ６−１０アリールＣ０−４アルキルおよびＣ５−１０ヘテロアリールＣ０−４アルキルから選択され；Ｒ６が水素またはＣ１−６アルキルであるか；または
Ｒ５とＲ６が、Ｒ５およびＲ６の両方が結合している窒素原子と一体となって、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキルまたはＣ５−８ヘテロアリールを形成し；ここで、Ｒ５およびＲ６により形成されるヘテロシクロアルキルのメチレンはいずれも、所望により−Ｃ(Ｏ)−または−Ｓ(Ｏ)２−で置換されていてよく；
ここで、Ｒ６またはＲ５とＲ６の組み合わせのアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルが、所望により、−ＸＮＲ７Ｒ７、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ７、−ＸＯＲ７、−ＸＮＲ７Ｒ７、−ＸＮＲ７Ｃ(Ｏ)Ｒ７、−ＸＯＲ７、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ７、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキルおよびＣ６−１０アリールＣ０−４アルキルから独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよく；ここで、Ｒ１のアルキルまたはアルキレンのいずれも、所望により−ＮＲ７Ｃ(Ｏ)−、−Ｃ(Ｏ)ＮＲ７−、−ＮＲ７−、−Ｏ−から選択される２価ラジカルで置換されたメチレンを有してよく；そしてＲ１のアルキルまたはアルキレンのいずれも、所望により、Ｃ５−８ヘテロアリール、−ＮＲ７Ｒ７、−Ｃ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ７、−ＮＲ７Ｃ(Ｏ)Ｒ７、ハロおよびヒドロキシから独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよく；ここで、Ｒ７が、独立して、水素またはＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ２が水素、Ｃ６−１０アリールおよびＣ５−１０ヘテロアリールから選択され；ここで、Ｒ２のアリールまたはヘテロアリールがいずれも、所望により、−ＸＮＲ７Ｒ７、−ＸＯＲ７、−ＸＯＲ８、−ＸＣ(Ｏ)ＯＲ７、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ニトロ、シアノ、ハロ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシおよびハロ−置換−Ｃ１−６アルキルから独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されており；ここで、ＸおよびＲ７が上記で定義の通りであり；そしてＲ８がＣ６−１０アリールＣ０−４アルキルであり；
Ｒ３が水素であり；そして
Ｒ４がＣ６−１０アリールＣ０−４アルキルおよびＣ５−１０ヘテロアリールＣ０−４アルキルから選択され；ここで、Ｒ４の該アリールまたはヘテロアリールは、ハロ、−ＸＲ９、−ＸＯＲ９、−ＸＳ(Ｏ)２Ｒ７、−ＸＳ(Ｏ)２Ｒ９、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ７、−ＸＣ(Ｏ)ＯＲ７、−ＸＰ(Ｏ)Ｒ７Ｒ７、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ９、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ７ＸＮＲ７Ｒ７、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ７、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ９および−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ７ＸＯＲ７から選択される１個から３個のラジカルで置換されており；ここで、ＸおよびＲ７が上記で定義の通りであり；Ｒ９がＣ３−８ヘテロシクロアルキルＣ０−４アルキルであり；ここで、Ｒ９が所望によりＣ１−６アルキル、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ７および−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ７から選択される１個から３個のラジカルで置換されており；ここで、ＸおよびＲ７が上記で定義の通りである、
請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が水素、ハロ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＯＸＯＲ５、−ＯＸＲ６、−ＯＸＮＲ５Ｒ６、−ＯＸＯＮＲ５Ｒ６、−ＸＲ６および−ＸＮＲ５Ｒ６から選択され；ここで、Ｘが結合、Ｃ１−６アルキレン、Ｃ２−６アルケニレンおよびＣ２−６アルキニレンから選択され；Ｒ５が水素、メチル、ヒドロキシ−エチルおよびメトキシ−エチルから選択され；Ｒ６が水素、フェニル、ベンジル、シクロペンチル、シクロブチル、ジメチルアミノ−プロペニル、シクロヘキシル、２,３−ジヒドロキシ−プロピル、ピペリジニル、アミノ−カルボニル−エチル、メチル−カルボニル−アミノ−エチル、メチル−アミノ−エチル、アミノ−プロピル、メチル−アミノ−プロピル、１−ヒドロキシメチル−ブチル、ペンチル、ブチル、プロピル、メトキシ−エチニル、メトキシ−エテニル、ジメチル−アミノ−ブチル、ジメチル−アミノ−エチル、ジメチル−アミノ−プロピル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル−メチル、ピリジニル−メチル、ゼパン−１−イル、[１,４]オキサゼパン−４−イル、ピペリジニル−エチル、ジエチル−アミノ−エチル、アミノ−ブチル、アミノ−イソプロピル、アミノ−エチル、ヒドロキシ−エチル、２−アセチルアミノ−エチル、カルバモイル−エチル、４−メチル−[１,４]ジアゼパン−１−イル、２−ヒドロキシ−プロピル、ヒドロキシ−プロピル、２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピル、メトキシ−エチル、アミノ−プロピル、メチル−アミノ−プロピル、２−ヒドロキシ−２−フェニル−エチル、ピリジニル−エチル、モルホリノ−プロピル、モルホリノ−エチル、ピロリジニル、ピロリジニル−メチル、ピロリジニル−エチル、ピロリジニル−プロピル、ピラジニル、キノリン−３−イル、キノリン−５−イル、イミダゾリル−エチル、ピリジニル−メチル、フェネチル、テトラヒドロ−ピラン−４−イル、ピリミジニル、フラニル、イソオキサゾリル−メチル、ピリジニル、ベンゾ[１,３]ジオキソール−５−イル、チアゾリル−エチルおよびチアゾリル−メチルから選択されるか；またはＲ５およびＲ６が、Ｒ５およびＲ６の両方が結合している窒素原子と一体となって、ピロリジニル、ピペラジニル、ピペリジニル、イミダゾリル、３−オキソ−ピペラジン−１−イル、[１,４]ジアゼパン−１−イル、モルホリノ、３−オキソ−ピペラジン−１−イル、１,１−ジオキソ−λ６−チオモルホリン−４−イルまたはピラゾリルを形成し；
ここで、Ｒ６またはＲ５とＲ６の組み合わせのアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルは、所望により、メチル−カルボニル、アミノ−メチル、アミノ−カルボニル、メチル−スルホニル、メトキシ、メトキシ−メチル、ホルミル、フルオロ−エチル、ヒドロキシ−エチル、アミノ、ジメチル−アミノ、ヒドロキシ、メチル、エチル、アセチル、イソプロピル、ピロリジニル、ピリミジニル、モルホリノ、ピリジニルおよびベンジルから独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよく；ここで、Ｒ６のアルキルまたはアルキレンのいずれも、所望により−ＮＨＣ(Ｏ)−または−Ｃ(Ｏ)ＮＨ−から選択される２価ラジカルで置換されたメチレンを有してよく；そして、Ｒ６のアルキルまたはアルキレンのいずれも、所望によりアミノ、ハロ、ピペリジニルおよびヒドロキシから選択される１個または２個のラジカルで置換されていてよい、
請求項２記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２が水素、フェニル、チエニル、ピリジニル、ピラゾリル、チアゾリル、ピラジニル、ナフチル、フラニル、ベンゾ[１,３]ジオキソール−５−イル、イソチアゾリル、イミダゾリルおよびピリミジニルから選択され；ここで、Ｒ２のアリールまたはヘテロアリールは所望により、メチル、イソプロピル、ハロ、アセチル、トリフルオロメチル、ニトロ、１−ヒドロキシ−エチル、１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル、ヒドロキシ−エチル、ヒドロキシ−メチル、ホルマミル、メトキシ、ベンジルオキシ、カルボキシ、アミノ、シアノ、アミノ−カルボニル、アミノ−メチルおよびエトキシから独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されている、
請求項２記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ４がフェニル、ベンジル、ピリジニルおよび１−オキソ−インダン−５−イルから選択され；ここで、該フェニル、ベンジル、インダニルまたはピリジニルは、所望によりハロ、アセチル、トリフルオロメチル、シクロプロピル−アミノ−カルボニル、アゼチジン−１−カルボニル、ピペリジニル−カルボニル、モルホリノ、メチル−カルボニル、ピペラジニル、メチル−スルホニル、ピペリジニル−スルホニル、４−メチル−ピペラジニル−カルボニル、ジメチル−アミノ−エチル−アミノ−カルボニル、モルホリノ−カルボニル、モルホリノ−メチル、アミノ−カルボニル、プロピル−アミノ−カルボニル、ヒドロキシ−エチル−アミノ−カルボニル、モルホリノ−エチル−アミノ−カルボニル、４−アセチル−ピペラジン−１−カルボニル、４−アミノ−カルボニル−ピペラジン−１−カルボニル、フェニル−カルボニル、ピロリジニル−１−カルボニル、プロピル−カルボニル、ブチル、イソプロピル−オキシ−カルボニル、シクロヘキシル−カルボニル、シクロプロピル−カルボニル、メチル−スルホニル、ジメチル−ホスフィノイル、４−メチル−ピペラジニル−スルホニル、１−オキソ−インダン−５−イル、オキセタン−３−スルホニル、アミノ−スルホニルおよびテトラヒドロ−ピラン−４−スルホニルで置換されている、
請求項２記載の化合物。
【請求項６】
Ｎ６−(４−メタンスルフィニル−フェニル)−Ｎ２−メチル−Ｎ２−(テトラヒドロ−ピラン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミン；(４−メタンスルホニル−フェニル)−[２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−アミン；１−｛４−[２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ]−フェニル｝−エタノン；[４−(ジメチル−ホスフィノイル)−フェニル]−[２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−アミン；アゼチジン−１−イル−｛４−[２−(４−モルホリン−４−イル−ピペリジン−１−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ]−フェニル｝−メタノン；１−(４−｛２−[メチル−(１−メチル−ピペリジン−４−イル)−アミノ]−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ｝−フェニル)−エタノン；１−｛４−[２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−９−チオフェン−３−イル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ]−フェニル｝−エタノン；(４−メタンスルホニル−フェニル)−[２−(４−モルホリン−４−イル−ピペリジン−１−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−アミン；Ｎ６−(４−メタンスルホニル−フェニル)−Ｎ２−メチル−Ｎ２−(１−メチル−ピペリジン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミン；[２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−(４−モルホリン−４−イル−フェニル)−アミン；Ｎ２−メチル−Ｎ２−(１−メチル−ピペリジン−４−イル)−Ｎ６−(４−モルホリン−４−イル−フェニル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミン；Ｎ２−メチル−Ｎ２−(１−メチル−ピペリジン−４−イル)−Ｎ６−(４−モルホリン−４−イル−フェニル)−９−チオフェン−３−イル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミン；[２−(２,２−ジメチル−モルホリン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−(４−メタンスルホニル−フェニル)−アミン；[２−(２,６−ジメチル−モルホリン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−(４−メタンスルホニル−フェニル)−アミン；[４−(ジメチル−ホスフィノイル)−フェニル]−[２−(２−エチル−モルホリン−４−イル)−９−チオフェン−３−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−アミン；[４−(ジメチル−ホスフィノイル)−フェニル]−[２−(２−フルオロメチル−モルホリン−４−イル)−９−チオフェン−３−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−アミン；[２−(２,６−ジメチル−モルホリン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−[４−(ジメチル−ホスフィノイル)−フェニル]−アミン；[２−(２,６−ジメチル−モルホリン−４−イル)−９−チオフェン−３−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−[４−(ジメチル−ホスフィノイル)−フェニル]−アミン；[４−(ジメチル−ホスフィノイル)−フェニル]−[２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−９−チオフェン−３−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−アミン；[４−(ジメチル−ホスフィノイル)−フェニル]−[２−(３−メチル−ピペリジン−１−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−アミン；Ｎ６−(４−メタンスルホニル−フェニル)−Ｎ２−メチル−Ｎ２−ピリジン−２−イルメチル−９−チオフェン−３−イル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミン；Ｎ２−メチル−Ｎ６−(４−モルホリン−４−イル−フェニル)−Ｎ２−ピリジン−２−イルメチル−９−チオフェン−３−イル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミン；(２−Ａゼパン−１−イル−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル)−[４−(ジメチル−ホスフィノイル)−フェニル]−アミン；Ｎ２−シクロヘキシル−Ｎ６−[４−(ジメチル−ホスフィノイル)−フェニル]−Ｎ２−メチル−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミン；Ｎ６−(４−メタンスルホニル−フェニル)−Ｎ２−メチル−Ｎ２−(テトラヒドロ−ピラン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミン；Ｎ６−(４−メタンスルホニル−フェニル)−Ｎ２−ピリジン−２−イルメチル−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミン；Ｎ２−シクロヘキシル−Ｎ６−(４−メタンスルフィニル−フェニル)−Ｎ２−メチル−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミン；Ｒ−(４−メタンスルフィニル−フェニル)−[２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−アミン；Ｎ６−(４−メタンスルホニル−フェニル)−Ｎ２−メチル−Ｎ２−ピリジン−２−イルメチル−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミン；｛４−[６−(４−メタンスルホニル−フェニルアミノ)−２−(メチル−ピリジン−２−イルメチル−アミノ)−プリン−９−イル]−フェニル｝−メタノール；Ｒ−(４−メタンスルホニル−フェニル)−[２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−アミン；Ｒ−４−[２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ]−ベンゼンスルホンアミド；および｛４−[６−(４−メタンスルホニル−フェニルアミノ)−２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−プリン−９−イル]−フェニル｝−メタノールから選択される、請求項２記載の化合物。
【請求項７】
治療的有効量の請求項１記載の化合物を、薬学的に許容される賦形剤と共に含む、医薬組成物。
【請求項８】
治療的有効量の請求項１記載の化合物を動物に投与することを含む、動物におけるキナーゼ活性の阻害が、疾患の病状および／または総合的症状を防止、阻害または軽減できる疾患を処置する方法。
【請求項９】
キナーゼがｃＳＲＣ、Ｌｃｋ、ＦＧＦＲ３、Ｆｌｔ３、ＴｒｋＢおよびＢｍｘキナーゼ類から選択される、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
動物における、ｃＳＲＣ、Ｌｃｋ、ＦＧＦＲ３、Ｆｌｔ３、ＴｒｋＢおよび／またはＢｍｘのキナーゼ活性が、疾患の病状および／または総合的症状に関与する疾患を処置するための医薬の製造における、請求項１記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は米国仮特許出願：６０／４９５,４０６(２００３年８月１５日出願)；６０／５２４,３５７(２００３年１１月２１日出願)；および６０／５６５,３６７(２００４年４月２６日出願)の優先権を主張する。これらの出願の全部の記載は、引用により、その全体として、かつすべての目的に関して、本出願に包含される。
【０００２】
背景技術
発明の分野
本発明は、新規クラスの化合物、このような化合物を含む医薬組成物、ならびに、このような化合物のｃＳＲＣ、Ｌｃｋ、ＦＧＦＲ３、Ｆｌｔ３、ＴｒｋＢ、Ｂｍｘおよび／またはＰＦＧＦＲαキナーゼ活性が関連する疾患または障害の処置または予防における使用を提供する。
【０００３】
背景
タンパク質キナーゼ類は、様々な細胞過程の調節および細胞機能の制御の維持において中心的役割を担う、タンパク質の大きなファミリーを代表する。これらのキナーゼ類の部分的、非限定的リストは、下記を含む：受容体チロシンキナーゼ類、例えばＦｍｓ様チロシンキナーゼ３(Ｆｌｔ３)、血小板由来増殖因子受容体キナーゼ(ＰＤＧＦ−Ｒ)、幹細胞因子の受容体キナーゼ、ｃ−ｋｉｔ、神経増殖因子受容体、ｔｒｋＢ、および繊維芽増殖因子受容体(ＦＧＦＲ３)；非受容体チロシンキナーゼ類、例えばＡｂｌおよび融合キナーゼＢＣＲ−Ａｂｌ、Ｆｅｓ、ＬｃｋおよびＳｙｋ；およびセリン／スレオニンキナーゼ類、例えばｂ−ＲＡＦ、ＭＡＰキナーゼ類(例えば、ＭＫＫ６)およびＳＡＰＫ２β。異常なキナーゼ活性が、良性および悪性増殖性疾患、ならびに、免疫系および神経系の不適切な活性化に起因する疾患を含む、多くの疾患状態において観察されている。
【０００４】
本発明の新規な化合物は、１個またはそれ以上のタンパク質キナーゼ類の活性を阻害し、したがって、キナーゼ関連疾患の処置に有用であると期待される。
【０００５】
発明の要約
一つの局面において、本発明は、式Ｉ：
【化１】
2007502776.tif 000002
〔式中：
Ｒ１は水素、ハロ、Ｃ１−６アルキル、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシ、−ＯＸＯＲ５、−ＯＸＲ６、−ＯＸＮＲ５Ｒ６、−ＯＸＯＮＲ５Ｒ６、−ＸＲ６、−ＸＮＲ５Ｒ６および−ＸＮＲ７ＸＮＲ７Ｒ７から選択され；ここで、Ｘは結合、Ｃ１−６アルキレン、Ｃ２−６アルケニレンおよびＣ２−６アルキニレンから選択され；ここで、Ｒ７は、独立して、水素またはＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ５は水素、Ｃ１−６アルキルおよび−ＸＯＲ７から選択され；ここで、Ｘは結合、Ｃ１−６アルキレン、Ｃ２−６アルケニレンおよびＣ２−６アルキニレンから選択され；そしてＲ７は、独立して、水素またはＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ６は水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキルＣ０−４アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキルＣ０−４アルキル、Ｃ６−１０アリールＣ０−４アルキルおよびＣ５−１０ヘテロアリールＣ０−４アルキルから選択されるか；または
Ｒ５およびＲ６は、Ｒ５およびＲ６の両方が結合している窒素原子と一体となって、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキルまたはＣ５−８ヘテロアリールを形成し；ここで、メチレンＲ５およびＲ６により形成されるヘテロシクロアルキルのメチレンはいずれも、所望により−Ｃ(Ｏ)−または−Ｓ(Ｏ)２−で置換されていてよく；
ここで、Ｒ６またはＲ５とＲ６の組み合わせのアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルは、いずれも、所望により、−ＸＮＲ７Ｒ７、−ＸＯＲ７、−ＸＮＲ７Ｒ７、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ７、−ＸＮＲ７Ｃ(Ｏ)Ｒ７、−ＸＯＲ７、−ＸＣ(Ｏ)ＯＲ７、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ７、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ５−１０ヘテロアリール、Ｃ３−１２シクロアルキルおよびＣ６−１０アリールＣ０−４アルキルから独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよく；ここで、Ｒ１のアルキルまたはアルキレンのいずれも、所望により−ＮＲ７Ｃ(Ｏ)−、−Ｃ(Ｏ)ＮＲ７−、−ＮＲ７−、−Ｃ(Ｏ)−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ(Ｏ)−および−Ｓ(Ｏ)２−から選択される２価ラジカルで置換されたメチレンを有してよく；そして、Ｒ６のアルキルまたはアルキレンのいずれも、所望により、Ｃ５−８ヘテロアリール、−ＮＲ７Ｒ７、−Ｃ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ７、−ＮＲ７Ｃ(Ｏ)Ｒ７、ハロおよびヒドロキシから独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよく；ここで、Ｒ７は、独立して、水素またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ２は水素、Ｃ６−１０アリールおよびＣ５−１０ヘテロアリールから選択され；ここで、Ｒ２のアリールまたはヘテロアリールは、いずれも、所望により、ＸＮＲ７Ｒ７、−ＸＯＲ７、−ＸＯＲ８、−ＸＣ(Ｏ)ＯＲ７、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ７、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、ハロおよびハロ−置換−Ｃ１−６アルキルから独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されており−；ここで、ＸおよびＲ７は上記で定義の通りであり；そしてＲ８はＣ６−１０アリールＣ０−４アルキルであり；
Ｒ３は水素およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ４はＣ３−１２シクロアルキルＣ０−４アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキルＣ０−４アルキル、Ｃ６−１０アリールＣ０−４アルキルおよびＣ５−１０ヘテロアリールＣ０−４アルキルから選択され；ここで、Ｒ４のアルキレンのいずれも、所望により−Ｃ(Ｏ)−、−Ｓ−、−Ｓ(Ｏ)−および−Ｓ(Ｏ)２−から選択される２価ラジカルで置換されたメチレンを有してよく；ここで、Ｒ４の該アリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルは、所望によりハロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、ハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシ、−ＸＲ９、−ＸＯＲ９、−ＸＳ(Ｏ)０−２Ｒ７、−ＸＳ(Ｏ)０−２Ｒ９、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ７、−ＸＣ(Ｏ)ＯＲ７、−ＸＰ(Ｏ)Ｒ７Ｒ７、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ９、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ７ＸＮＲ７Ｒ７、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ７、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ９および−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ７ＸＯＲ７から選択される１個から３個のラジカルで置換されており；ここで、ＸおよびＲ７は上記で定義の通りであり；Ｒ９はＣ３−１２シクロアルキルＣ０−４アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキルＣ０−４アルキル、Ｃ６−１０アリールおよびＣ５−１０ヘテロアリールから選択され；ここで、Ｒ９のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルのいずれも、所望によりＣ１−６アルキル、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ７および−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ７から選択される１個から３個のラジカルで置換されており；ここで、ＸおよびＲ７は上記で定義の通りである。〕
の化合物、およびそのＮ−オキシド誘導体、プロドラッグ、誘導体、保護された誘導体、個々の異性体および異性体の混合物；ならびにこのような化合物の薬学的に許容される塩および溶媒和物(例えば水和物)を提供する。
【０００６】
第二の局面において、本発明は、式Ｉの化合物またはそのＮ−オキシド誘導体、個々の異性体および異性体の混合物；またはその薬学的に許容される塩を、１個またはそれ以上の適当な賦形剤と共に含む、医薬組成物を提供する。
【０００７】
第三の局面において、本発明は、動物に治療的有効量の式Ｉの化合物またはそのＮ−オキシド誘導体、個々の異性体および異性体の混合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、動物におけるｃＳＲＣ、Ｌｃｋ、ＦＧＦＲ３、Ｆｌｔ３、ＴｒｋＢ、ＰＤＧＦＲαおよび／またはＢｍｘ活性の阻害が、疾患の病状および／または総合的症状を防止、阻害または軽減できる疾患を処置する方法を提供する。
【０００８】
第四の局面において、本発明は、動物における、ｃＳＲＣ、Ｌｃｋ、ＦＧＦＲ３、Ｆｌｔ３、ＴｒｋＢ、ＰＤＧＦＲαおよび／またはＢｍｘ活性が、疾患の病状および／または総合的症状に関与する疾患を処置するための医薬の製造における、式Ｉの化合物の使用を提供する。
【０００９】
第五の局面において、本発明は、式Ｉの化合物およびそのＮ−オキシド誘導体、プロドラッグ誘導体、個々の異性体および異性体の混合物、ならびにその薬学的に許容される塩の製造法を提供する。
【００１０】
発明の詳細な記載
定義
基としておよび他の基、例えばハロ−置換−アルキルおよびアルコキシの構造要素としての“アルキル”は、直鎖でも分枝鎖でもよい。Ｃ１−４−アルコキシは、メトキシ、エトキシなどを含む。ハロ−置換アルキルは、トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチルなどを含む。
【００１１】
“アリール”は、６個から１０個の環炭素原子を含む単環式または縮合二環式芳香環集合体を意味する。例えば、アリールはフェニルまたはナフチル、好ましくはフェニルであり得る。“アリレン”は、アリール基由来の２価ラジカルを意味する。“ヘテロアリール”は、環員の１個またはそれ以上がヘテロ原子であるアリールと定義する。例えばヘテロアリールは、ピリジル、インドリル、インダゾリル、キノキサリニル、キノリニル、ベンゾフラニル、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、ベンゾ[１,３]ジオキソール、イミダゾリル、ベンゾ−イミダゾリル、ピリミジニル、フラニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピラゾリル、チエニルなどを含む。
【００１２】
“シクロアルキル”は、示した数の環原子を含む飽和または部分的不飽和の、単環式、縮合二環式または架橋された多環式環集合体を意味する。例えば、Ｃ３−１０シクロアルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどを意味する。“ヘテロシクロアルキル”は、示す環炭素の１個またはそれ以上がＯ、Ｎ＝、ＮＲ、Ｃ(Ｏ)、Ｓ、Ｓ(Ｏ)またはＳ(Ｏ)２(ここで、Ｒは水素、Ｃ１−４アルキルまたは窒素保護基である)から選択される部分で置換されている、本明細書で定義のシクロアルキルを意味する。例えば、本明細書で、本発明の化合物を述べるために使用するＣ３−８ヘテロシクロアルキルは、モルホリノ、ピロリジニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピペリジニルオン(piperidinylone)、１,４−ジオキサ−８−アザ−スピロ[４.５]デク−８−イルなどを含む。
【００１３】
“ハロゲン”(またはハロ)は、好ましくはクロロまたはフルオロを意味するが、またブロモまたはヨードであってもよい。
【００１４】
“処置”、“処置し”および“処置する”は、疾患および／またはその附随する症状を軽減または減弱する方法を意味する。本明細書において、“処置する”なる用語は、疾患に罹患するリスクのあるもしくは律環に罹患している疑いのある患者、ならびに病気の患者の処置を含む、予防的または防止的処置ならびに治癒的もしくは疾患抑制的処置の両方を含む。
【００１５】
本明細書で使用する“治癒的”なる用語は、脱制御されたＦｌｔ３受容体チロシンキナーゼ活性が関与する、起こっている症状の処置における効果を意味する。
【００１６】
“予防的”なる用語は、脱制御されているＦｌｔ３受容体チロシンキナーゼ活性が関与する疾患の発症または再発の防止を意味する。
【００１７】
本明細書で使用する“進行の遅延”なる用語は、処置すべき疾患の前段階または初期相にある患者への活性化合物の投与を意味し、ここで、患者は、例えば対応する疾患の前形態にあることが診断されているか、患者は、例えば医学的処置中、または事故に起因する状態で、対応する疾患を発症しそうである状況下にある。
【００１８】
本明細書で使用する“脱制御されたＦｌｔ３受容体チロシンキナーゼ活性が関与する疾患”は、急性骨髄性白血病(ＡＭＬ)、３血球系骨髄異形成を伴うＡＭＬ(ＡＭＬ／ＴＭＤＳ)、急性リンパ芽球性白血病(ＡＬＬ)および骨髄異形成症候群(ＭＤＳ)を含むが、これらに限定されない白血病を含む。この用語はまたＦｌｔ３受容体変異に起因する疾患を特に含む。
【００１９】
好ましい態様の記載
本発明は、新規クラスの化合物、このような化合物を含む医薬組成物、ならびに、このような化合物のｃＳＲＣ、Ｌｃｋ、ＦＧＦＲ３、Ｆｌｔ３、ＴｒｋＢ、ＰＤＧＦＲαおよび／またはＢｍｘキナーゼ活性が関連する疾患または障害の処置または予防における使用を提供する。特に、本化合物は、Ｆｌｔ３およびＦＧＦＲ３受容体キナーゼ類に対して高い効果を示す。
【００２０】
一つの態様において、式Ｉの化合物を参照して：
Ｒ１が水素、ハロ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＯＸＯＲ５、−ＯＸＲ６、−ＯＸＮＲ５Ｒ６、−ＯＸＯＮＲ５Ｒ６、−ＸＲ６、−ＸＮＲ７ＸＮＲ７Ｒ７および−ＸＮＲ５Ｒ６から選択され；ここで、Ｘが結合、Ｃ１−６アルキレン、Ｃ２−６アルケニレンおよびＣ２−６アルキニレンから選択され；
Ｒ５が水素、Ｃ１−６アルキルおよび−ＸＯＲ７から選択され；ここで、Ｘが結合、Ｃ１−６アルキレン、Ｃ２−６アルケニレンおよびＣ２−６アルキニレンから選択され；そしてＲ７が、独立して、水素またはＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ６が水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキルＣ０−４アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキルＣ０−４アルキル、Ｃ６−１０アリールＣ０−４アルキルおよびＣ５−１０ヘテロアリールＣ０−４アルキルから選択され；Ｒ６が水素またはＣ１−６アルキルであるか；または
Ｒ５とＲ６が、Ｒ５およびＲ６の両方が結合している窒素原子と一体となって、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキルまたはＣ５−８ヘテロアリールを形成し；ここで、Ｒ５およびＲ６により形成されるヘテロシクロアルキルのメチレンはいずれも、所望により−Ｃ(Ｏ)−または−Ｓ(Ｏ)２−で置換されていてよく；
ここで、Ｒ６またはＲ５とＲ６の組み合わせのアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルは、所望により、−ＸＮＲ７Ｒ７、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ７、−ＸＯＲ７、−ＸＮＲ７Ｒ７、−ＸＮＲ７Ｃ(Ｏ)Ｒ７、−ＸＯＲ７、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ７、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキルおよびＣ６−１０アリールＣ０−４アルキルから独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよく；ここで、Ｒ１のアルキルまたはアルキレンのいずれも、所望により−ＮＲ７Ｃ(Ｏ)−、−Ｃ(Ｏ)ＮＲ７−、−ＮＲ７−、−Ｏ−から選択される２価ラジカルで置換されたメチレンを有してよく；そしてＲ１のアルキルまたはアルキレンのいずれも、所望により、Ｃ５−８ヘテロアリール、−ＮＲ７Ｒ７、−Ｃ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ７、−ＮＲ７Ｃ(Ｏ)Ｒ７、ハロおよびヒドロキシから独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよく；ここで、Ｒ７は、独立して、水素またはＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ２が水素、Ｃ６−１０アリールおよびＣ５−１０ヘテロアリールから選択され；ここで、Ｒ２のアリールまたはヘテロアリールは所望により、−ＸＮＲ７Ｒ７、−ＸＯＲ７、−ＸＯＲ８、−ＸＣ(Ｏ)ＯＲ７、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ニトロ、シアノ、ハロ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシおよびハロ−置換−Ｃ１−６アルキルから独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されており；ここで、ＸおよびＲ７は上記で定義の通りであり；そしてＲ８がＣ６−１０アリールＣ０−４アルキルであり；
Ｒ３が水素であり；そして
Ｒ４がＣ６−１０アリールＣ０−４アルキルおよびＣ５−１０ヘテロアリールＣ０−４アルキルから選択され；ここで、Ｒ４の該アリールまたはヘテロアリールは、ハロ、−ＸＲ９、−ＸＯＲ９、−ＸＳ(Ｏ)２Ｒ７、−ＸＳ(Ｏ)２Ｒ９、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ７、−ＸＣ(Ｏ)ＯＲ７、−ＸＰ(Ｏ)Ｒ７Ｒ７、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ９、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ７ＸＮＲ７Ｒ７、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ７、−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ９および−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ７ＸＯＲ７から選択される１個から３個のラジカルで置換されており；ここで、ＸおよびＲ７は上記で定義の通りであり；Ｒ９がＣ３−８ヘテロシクロアルキルＣ０−４アルキルであり；ここで、Ｒ９が所望によりＣ１−６アルキル、−ＸＣ(Ｏ)Ｒ７および−ＸＣ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ７から選択される１個から３個のラジカルで置換されており；ここで、ＸおよびＲ７が上記で定義の通りである。
【００２１】
他の態様において、Ｒ１が水素、ハロ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＯＸＯＲ５、−ＯＸＲ６、−ＯＸＮＲ５Ｒ６、−ＯＸＯＮＲ５Ｒ６、−ＸＲ６および−ＸＮＲ５Ｒ６から選択され；ここで、Ｘが結合、Ｃ１−６アルキレン、Ｃ２−６アルケニレンおよびＣ２−６アルキニレンから選択され；Ｒ５が水素、メチル、ヒドロキシ−エチルおよびメトキシ−エチルから選択され；Ｒ６が水素、フェニル、ベンジル、シクロペンチル、シクロブチル、ジメチルアミノ−プロペニル、シクロヘキシル、２,３−ジヒドロキシ−プロピル、ピペリジニル、アミノ−カルボニル−エチル、メチル−カルボニル−アミノ−エチル、メチル−アミノ−エチル、アミノ−プロピル、メチル−アミノ−プロピル、１−ヒドロキシメチル−ブチル、ペンチル、ブチル、プロピル、メトキシ−エチニル、メトキシ−エテニル、ジメチル−アミノ−ブチル、ジメチル−アミノ−エチル、ジメチル−アミノ−プロピル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル−メチル、ピリジニル−メチル、ゼパン−１−イル、[１,４]オキサゼパン−４−イル、ピペリジニル−エチル、ジエチル−アミノ−エチル、アミノ−ブチル、アミノ−イソプロピル、アミノ−エチル、ヒドロキシ−エチル、２−アセチルアミノ−エチル、カルバモイル−エチル、４−メチル−[１,４]ジアゼパン−１−イル、２−ヒドロキシ−プロピル、ヒドロキシ−プロピル、２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピル、メトキシ−エチル、アミノ−プロピル、メチル−アミノ−プロピル、２−ヒドロキシ−２−フェニル−エチル、ピリジニル−エチル、モルホリノ−プロピル、モルホリノ−エチル、ピロリジニル、ピロリジニル−メチル、ピロリジニル−エチル、ピロリジニル−プロピル、ピラジニル、キノリン−３−イル、キノリン−５−イル、イミダゾリル−エチル、ピリジニル−メチル、フェネチル、テトラヒドロ−ピラン−４−イル、ピリミジニル、フラニル、イソオキサゾリル−メチル、ピリジニル、ベンゾ[１,３]ジオキソール−５−イル、チアゾリル−エチルおよびチアゾリル−メチルから選択されるか；またはＲ５およびＲ６は、Ｒ５およびＲ６の両方が結合している窒素原子と一体となって、ピロリジニル、ピペラジニル、ピペリジニル、イミダゾリル、３−オキソ−ピペラジン−１−イル、[１,４]ジアゼパン−１−イル、モルホリノ、３−オキソ−ピペラジン−１−イル、１,１−ジオキソ−λ６−チオモルホリン−４−イルまたはピラゾリルを形成し；
ここで、Ｒ６またはＲ５とＲ６の組み合わせのアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルは、所望により、メチル−カルボニル、アミノ−メチル、アミノ−カルボニル、メチル−スルホニル、メトキシ、メトキシ−メチル、ホルミル、フルオロ−エチル、ヒドロキシ−エチル、アミノ、ジメチル−アミノ、ヒドロキシ、メチル、エチル、アセチル、イソプロピル、ピロリジニル、ピリミジニル、モルホリノ、ピリジニルおよびベンジルから独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよく；ここで、Ｒ６のアルキルまたはアルキレンはいずれも、所望により−ＮＨＣ(Ｏ)−または−Ｃ(Ｏ)ＮＨ−から選択される２価ラジカルで置換されたメチレンを有してよく；そして、Ｒ６のアルキルまたはアルキレンのいずれも、所望により所望によりアミノ、ハロ、ピペリジニルおよびヒドロキシから選択される１個または２個のラジカルで置換されていてよい。
【００２２】
他の態様において、Ｒ２は水素、フェニル、チエニル、ピリジニル、ピラゾリル、チアゾリル、ピラジニル、ナフチル、フラニル、ベンゾ[１,３]ジオキソール−５−イル、イソチアゾリル、イミダゾリルおよびピリミジニルから選択され；ここで、Ｒ２のアリールまたはヘテロアリールは所望により、メチル、イソプロピル、ハロ、アセチル、トリフルオロメチル、ニトロ、１−ヒドロキシ−エチル、１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル、ヒドロキシ−エチル、ヒドロキシ−メチル、ホルマミル、メトキシ、ベンジルオキシ、カルボキシ、アミノ、シアノ、アミノ−カルボニル、アミノ−メチルおよびエトキシから独立して選択される１個から３個のラジカルで置換されている。
【００２３】
他の対応において、Ｒ４はフェニル、ベンジル、ピリジニルおよび１−オキソ−インダン−５−イルから選択され；ここで、該フェニル、ベンジル、インダニルまたはピリジニルは、所望によりハロ、アセチル、トリフルオロメチル、シクロプロピル−アミノ−カルボニル、アゼチジン−１−カルボニル、ピペリジニル−カルボニル、モルホリノ、メチル−カルボニル、ピペラジニル、メチル−スルホニル、ピペリジニル−スルホニル、４−メチル−ピペラジニル−カルボニル、ジメチル−アミノ−エチル−アミノ−カルボニル、モルホリノ−カルボニル、モルホリノ−メチル、アミノ−カルボニル、プロピル−アミノ−カルボニル、ヒドロキシ−エチル−アミノ−カルボニル、モルホリノ−エチル−アミノ−カルボニル、４−アセチル−ピペラジン−１−カルボニル、４−アミノ−カルボニル−ピペラジン−１−カルボニル、フェニル−カルボニル、ピロリジニル−１−カルボニル、プロピル−カルボニル、ブチル、イソプロピル−オキシ−カルボニル、シクロヘキシル−カルボニル、シクロプロピル−カルボニル、メチル−スルホニル、ジメチル−ホスフィノイル、４−メチル−ピペラジニル−スルホニル、１−オキソ−インダン−５−イル、オキセタン−３−スルホニル、アミノ−スルホニルおよびテトラヒドロ−ピラン−４−スルホニルで置換されている。
【００２４】
好ましい式Ｉの化合物は、下記実施例および表１、２および３に詳述する。さらに好ましい例は、下記から選択される：Ｎ６−(４−メタンスルフィニル−フェニル)−Ｎ２−メチル−Ｎ２−(テトラヒドロ−ピラン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミン；(４−メタンスルホニル−フェニル)−[２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−アミン；１−｛４−[２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ]−フェニル｝−エタノン；[４−(ジメチル−ホスフィノイル)−フェニル]−[２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−アミン；アゼチジン−１−イル−｛４−[２−(４−モルホリン−４−イル−ピペリジン−１−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ]−フェニル｝−メタノン；１−(４−｛２−[メチル−(１−メチル−ピペリジン−４−イル)−アミノ]−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ｝−フェニル)−エタノン；１−｛４−[２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−９−チオフェン−３−イル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ]−フェニル｝−エタノン；(４−メタンスルホニル−フェニル)−[２−(４−モルホリン−４−イル−ピペリジン−１−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−アミン；Ｎ６−(４−メタンスルホニル−フェニル)−Ｎ２−メチル−Ｎ２−(１−メチル−ピペリジン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミン；[２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−(４−モルホリン−４−イル−フェニル)−アミン；Ｎ２−メチル−Ｎ２−(１−メチル−ピペリジン−４−イル)−Ｎ６−(４−モルホリン−４−イル−フェニル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミン；Ｎ２−メチル−Ｎ２−(１−メチル−ピペリジン−４−イル)−Ｎ６−(４−モルホリン−４−イル−フェニル)−９−チオフェン−３−イル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミン；[２−(２,２−ジメチル−モルホリン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−(４−メタンスルホニル−フェニル)−アミン；[２−(２,６−ジメチル−モルホリン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−(４−メタンスルホニル−フェニル)−アミン；[４−(ジメチル−ホスフィノイル)−フェニル]−[２−(２−エチル−モルホリン−４−イル)−９−チオフェン−３−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−アミン；[４−(ジメチル−ホスフィノイル)−フェニル]−[２−(２−フルオロメチル−モルホリン−４−イル)−９−チオフェン−３−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−アミン；[２−(２,６−ジメチル−モルホリン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−[４−(ジメチル−ホスフィノイル)−フェニル]−アミン；[２−(２,６−ジメチル−モルホリン−４−イル)−９−チオフェン−３−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−[４−(ジメチル−ホスフィノイル)−フェニル]−アミン；[４−(ジメチル−ホスフィノイル)−��ェニル]−[２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−９−チオフェン−３−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−アミン；[４−(ジメチル−ホスフィノイル)−フェニル]−[２−(３−メチル−ピペリジン−１−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−アミン；Ｎ６−(４−メタンスルホニル−フェニル)−Ｎ２−メチル−Ｎ２−ピリジン−２−イルメチル−９−チオフェン−３−イル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミン；Ｎ２−メチル−Ｎ６−(４−モルホリン−４−イル−フェニル)−Ｎ２−ピリジン−２−イルメチル−９−チオフェン−３−イル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミン；(２−Ａゼパン−１−イル−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル)−[４−(ジメチル−ホスフィノイル)−フェニル]−アミン；Ｎ２−シクロヘキシル−Ｎ６−[４−(ジメチル−ホスフィノイル)−フェニル]−Ｎ２−メチル−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミン；Ｎ６−(４−メタンスルホニル−フェニル)−Ｎ２−メチル−Ｎ２−(テトラヒドロ−ピラン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミン；Ｎ６−(４−メタンスルホニル−フェニル)−Ｎ２−ピリジン−２−イルメチル−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミン；Ｎ２−シクロヘキシル−Ｎ６−(４−メタンスルフィニル−フェニル)−Ｎ２−メチル−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミン；Ｒ−(４−メタンスルフィニル−フェニル)−[２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−アミン；Ｎ６−(４−メタンスルホニル−フェニル)−Ｎ２−メチル−Ｎ２−ピリジン−２−イルメチル−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミン；｛４−[６−(４−メタンスルホニル−フェニルアミノ)−２−(メチル−ピリジン−２−イルメチル−アミノ)−プリン−９−イル]−フェニル｝−メタノール；Ｒ−(４−メタンスルホニル−フェニル)−[２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−アミン；Ｒ−４−[２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ]−ベンゼンスルホンアミド；および｛４−[６−(４−メタンスルホニル−フェニルアミノ)−２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−プリン−９−イル]−フェニル｝−メタノール。
【００２５】
薬理学および有用性
本発明の化合物は、Ｆｌｔ３受容体チロシンキナーゼ類の活性を阻害し、それ自体、ＦＬＴ３活性が疾患の病状および／または総合的症状に関与する疾患または障害の処置に有用である。
【００２６】
Ｆｌｔ３はIII型受容体チロシンキナーゼ(ＲＴＫ)ファミリーのメンバーである。Ｆｌｔ３(ｆｍｓ様チロシンキナーゼ)はまたＦＬｋ−２(胎児肝臓キナーゼ２)としても既知である。Ｆｌｔ３遺伝子の異常な発現が、急性骨髄性白血病(ＡＭＬ)、３血球系骨髄異形成を伴うＡＭＬ(ＡＭＬ／ＴＭＤＳ)、急性リンパ芽球性白血病(ＡＬＬ)および骨髄異形成症候群(ＭＤＳ)を含む、成体および子供の白血病の両方で報告されている。Ｆｌｔ３受容体の活性化変異は、急性骨髄芽球性白血病(ＡＭＬ)の患者の約３５％で見られており、悪い予後と関連する。最も一般的な変異は膜近傍ドメイン内のインフレーム二量体化を含み、さらに患者の５−１０％がアスパラギン８３５で点突然変異を有する。これらの変異の両方がＦｌｔ３のチロシンキナーゼ活性の構造的活性化と関連し、リガンドの非存在下で増殖および生存能シグナルをもたらす。本受容体の変異体形を発現する患者は、治癒の機会が少ないことが示されている。故に、ヒト白血病および骨髄異形成症候群における過活性化(変異)Ｆｌｔ３キナーゼ活性の役割に関する証拠が蓄積している。これにより、現在の治療がほとんど有用性を提供していない、そして、以前に現在利用可能な薬剤での治療および／または幹細胞移植治療が失敗した患者のような、これらの患者の可能性のある治療的アプローチとしてＦｌｔ３受容体の新規阻害剤を探索することを出願人は鼓舞された。
【００２７】
白血病は、一般に骨髄、リンパ節、脾臓または血液および免疫系の他の器官における、未成熟造血細胞のＤＮＡの獲得した(遺伝ではない)遺伝子傷害に起因する。その影響は：加速された増殖および細胞の成熟の遮断であり、正常血液細胞として機能しない“白血病性芽球”と呼ばれる細胞の蓄積をもたらす；そして正常骨髄細胞の産生を失敗させ、赤血球(貧血)、血小板および正常白血球の欠損に至る。芽細胞は通常骨髄により産生され、通常約１％の全骨髄細胞を含む、成熟血液細胞に発達する。白血病においては、芽球は適切に成熟せず、骨髄に蓄積する。急性骨髄性白血病(ＡＭＬ)においては、これらは骨髄芽球と呼ばれ、一方急性リンパ芽球性白血病(ＡＬＬ)では、それらはリンパ芽球として知られる。他の白血病は、混合系統白血病(ＭＬＬ)である。
【００２８】
“３血球系骨髄異形成を伴うＡＭＬ(ＡＭＬ／ＴＭＤＳ)”は、急性白血病に附随する造血不全性像、導入化学療法への乏しい応答、および純粋骨髄異形成症候群で再発する傾向により特徴付けられる白血病の稀な形である。
【００２９】
“骨髄異形成症候群(ＭＤＳ)”は、骨髄が正常に機能することを止め、健康な血液細胞の数の不足をもたらす、血液疾患のグループに関する。血液細胞が多数産生される白血病と比較して、ＭＤＳでは何らかのそしてある場合すべてのタイプの血液細胞が影響を受ける。米国で、毎年少なくとも１０,０００症例が新しく起こる。ＭＤＳと診断された患者の１／３までが、その後急性骨髄性白血病を発症する。この理由のため、本疾患は前白血病と呼ばれることがある。骨髄異形成症候群はまた骨髄異形成性骨髄造血不全(myelodysplasia dysmyelopoiesis)または乏芽球性(oligoblastic)白血病とも呼ばれることがある。ＭＤＳはまた多数の芽細胞が骨髄に残っているとき、くすぶり型白血病とも呼ばれる。
【００３０】
骨髄異形成症候群は、白血病と同様、骨髄の一つの細胞のＤＮＡの遺伝的傷害に起因する。染色体における、ある種の異常が、ＭＤＳ患者で存在する。これらの異常は、転座と呼ばれ、これは、一つの染色体の一部が破壊され、異なる染色体の破壊された部分に結合したときに起こる。同じ欠損が急性骨髄性白血病でもしばしば見られる。しかしながら、ＭＤＳは、患者の血液細胞のすべてが異常であり、すべて同じ障害された幹細胞に由来するため、白血病と異なる。白血病患者においては、骨髄は罹患したおよび健康な血液細胞の混合物を含む。
【００３１】
ＡＭＬおよび進行した骨髄異形成症候群は、現在高用量のシトシンアラビノシドおよびダウノルビシンのような細胞毒性化学療法剤で処置されている。このタイプの患者は約７０％の患者を血液学的緩解に向かわせる。しかしながら、緩解に向かった患者の半数以上が、長期間の化学療法の投与にもかかわらず、後に再発する。最初に緩解に向かわなかった、または緩解した後に再発した患者のほとんどすべてが、最終的に白血病のために死亡する。骨髄移植は、この方法を受けた患者の５０−６０％までを治癒できるが、ＡＭＬまたはＭＤＳの全患者の約１／３のみしか移植を受ける資格がない。標準治療で緩解に向かわなかった患者、後に再発した患者および幹細胞移植の資格のない患者を処置するための、新規で有効な薬剤が緊急に必要である。さらに、有効な新規薬剤は、すべての患者の導入化学療法の改善をもたらすであろうとの合理的な期待を持って、標準化学療法に加えられ得る。
【００３２】
ＦＧＦＲ３は、４個の異なる遺伝子によりコードされる構造的に関連するチロシンキナーゼ受容体のファミリーの一部である。ＦＧＦＲ３遺伝子の異なるドメインでの特異的点変異は、受容体の構造的活性化を導き、常染色体優性骨格疾患、多発性骨髄腫、ならびに膀胱および子宮頸癌の大部分と関連する(Cappellen, et al, Nature, vol.23)。マウスＦＧＦＲ３遺伝子に入れられた活性化変異、および、マウスの活性化ＦＧＦＲ３の成長軟骨板へのターゲティングは、矮小に至る。我々の概念と類似して、マウスにおけるＦＧＦＲ３を標的とした破壊は、長骨および椎骨の過剰生長に至る。加えて、２０−２５％の多発性骨髄腫細胞は、ＦＧＦＲ３に５０−１００kbセントロメアに位置する４ｐ１６上の切断点を伴い、ｔ(４；１４)(ｐ１６.３；ｑ３２.３)染色体転座を有する。多発性骨髄腫の稀な例では、以前に骨格疾患で見られたＦＧＦＲ３の活性化変異が見られ、常にこの染色体転座と附随する。近年、ＦＧＦＲ３ミスセンス体細胞変異(Ｒ２４８Ｃ、Ｓ２４９Ｃ、Ｇ３７２ＣおよびＫ６５２Ｅ)が膀胱癌細胞の大多数でおよび子宮頸癌細胞の幾分かで同定され、およびこれらは実際、新生児期で致死の矮小の形である、致死性異形成の原因である、胚細胞活性化変異と同一である。本発明の化合物は、現在の処置よりもより有効なものとして多発性骨髄腫に、生活を変える膀胱切除を避けることにより膀胱癌に、および将来的な繁殖力を残したいと願う子宮頸癌の患者に、治療的有用性を有し得る。
【００３３】
本発明の化合物は、例えば小細胞肺癌において、腫瘍阻害物質としてだけでなく、非悪性増殖性疾患、例えばアテローム性動脈硬化症、血栓症、乾癬、強皮症および線維症の処置座位として、ならびに幹細胞の保護のために、例えば化学療法剤、例えば５−フルオロウラシルの血液毒性作用と戦うために、および喘息において使用できる。本発明の化合物は、とりわけＰＤＧＦ受容体キナーゼの阻害に応答する疾患の処置に使用できる。
【００３４】
本発明の化合物は、移植の結果として発生する障害、例えば、異種移植、とりわけ組織拒絶反応、例えばとりわけ閉塞性細気管支炎(ＯＢ)、すなわち異種肺移植の慢性拒絶反応の処置に有用な効果を示す。ＯＢのない患者と比較して、ＯＢを有する患者は、気管支肺胞洗浄液における上昇したＰＤＧＦ濃度を示す。
【００３５】
本発明の化合物はまた血管平滑筋細胞移動および増殖が関連する疾患(ＰＤＧＦおよびＰＤＧＦ−Ｒがまたしばしば役割を演ずる場所である)、例えば再狭窄およびアテローム性動脈硬化症にも有効である。これらの血管平滑筋細胞の増殖または移動に対するインビトロおよびインビボでの効果および結果は、本発明の化合物の投与により、およびインビボでの機械的傷害後の血管内膜の肥厚に対する効果の試験により証明できる。
【００３６】
ニューロトロフィン受容体のｔｒｋファミリー(ｔｒｋＡ、ｔｒｋＢ、ｔｒｋＣ)は、神経および非神経組織の生存、増殖および分化を促進する。ＴｒｋＢタンパク質は、小腸および結腸の神経内分泌型細胞、膵臓のアルファ細胞、リンパ節および脾臓の単球およびマクロファージ、および表皮の顆粒層において発現される(ShibayamaおよびKoizumi, 1996)。ＴｒｋＢタンパク質の発現は、ウィルムス腫瘍および神経芽腫の望ましくない進行と関連している。ＴｋｒＢは、さらに、癌の前立腺細胞で発現されるが、正常細胞ではされない。ｔｒｋ受容体の下流のシグナル伝達経路は、Ｓｈｃ、活性化Ｒａｓ、ＥＲＫ−１およびＥＲＫ−２遺伝子、およびＰＬＣ−gammal伝達経路を通るＭＡＰＫ活性化のカスケードに関与する(Sugimoto et al., 2001)。
【００３７】
キナーゼ、ｃ−Ｓｒｃは、多くの受容体の腫瘍形成シグナルを伝達する。例えば、ＥＧＦＲまたはＨＥＲ２／ｎｅｕの腫瘍での過剰発現は、悪性細胞の特性であるが、正常細胞では存在しないｃ−ｓｒｃの構造的活性化に至る。他方、ｃ−ｓｒｃの発現を核マウスは、大理石骨病表現型を示し、ｃ−ｓｒｃの破骨細胞機能における重要な関与と関連疾患への関与の可能性を示唆する。
【００３８】
繊維芽増殖因子受容体３は、骨増殖に負の制御効果を発揮し、軟骨細胞増殖を阻害することが示されている。致死性異形成は、繊維芽増殖因子受容体３の異なる変異が原因であり、一つの変異、ＴＤＩＩ  ＦＧＦＲ３は、構造的チロシンキナーゼ活性を有し、これは転写因子Ｓｔａｔ１を活性化させ、細胞サイクル阻害因子の発現、増殖停止および異常骨発育に至る(Su et al., Nature, 1997, 386, 288-292)。ＦＧＦＲ３はまた多発性骨髄腫型癌でもしばしば発現される。
【００３９】
ＬｃｋはＴ細胞シグナル伝達で役割を担う。Ｌｃｋ遺伝子を欠くマウスは、胸腺細胞を発育させる能力が乏しい。Ｔ細胞シグナル伝達の正のアクティベーターとしてのＬｃｋの機能は、Ｌｃｋ阻害剤がリウマチ性関節炎のような自己免疫性疾患の処置に有用であり得ることを示唆する。
【００４０】
前記によって、本発明さらに、対象に治療的有効量の式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、このような処置を必要とする対象における上記の疾患または障害のいずれかを予防または処置する方法を提供する。上記のすべての使用について、必要な投与量は、投与の形態、処置すべき特定の状態および望む効果に依存して変化するであろう。
【００４１】
投与および医薬組成物
一般に、本発明の化合物は、当分野で既知の任意の通常のおよび許容される方法を介して、単独で、または１個またはそれ以上の治療剤と組み合わせて、治療的有効量を投与する。治療的有効量は、疾患の重症度、対象の年齢および相対的な健康状態、使用する化合物の効果および他の因子に依存して、広範囲に変化し得る。一般に、満足な結果が、約０.０３から２.５mg／体重kgの一日投与量で全身的に得られることが示される。大型哺乳類、例えばヒトにおける指示される一日量は、約０.５mgから約１００mgの範囲であり、簡便には、例えば１日４回までの分割量で、または持続性形で投与する。経口投与のための適当な単位投与形は、約１から５０mg活性成分を含む。
【００４２】
本発明の化合物は、医薬組成物として、任意の慣用の経路により、特に経腸的に、例えば、経口で、例えば、錠剤またはカプセルの形で、または非経腸的に、例えば、注射可能溶液または懸濁液の形で、局所的に、例えば、ローション、ゲル、軟膏またはクリームの形で、または経鼻または坐薬形で投与できる。遊離形または薬学的に許容される塩形の本発明の化合物を、少なくとも１個の薬学的に許容される担体または希釈剤と共に含む医薬組成物は、慣用の方法で、混合、造粒またはコーティング法により製造できる。例えば、経口組成物は、活性成分を、ａ)希釈剤、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロースおよび／またはグリシン；ｂ)滑剤、例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸、そのマグネシウムまたはカルシウム塩および／またはポリエチレングリコール；錠剤についてはまたｃ)結合剤、例えば、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、デンプンペースト、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースおよび／またはポリビニルピロリドン；望むならばｄ)崩壊剤、例えば、デンプン、寒天、アルギン酸またはそのナトリウム塩、または発泡性混合物；および／またはｅ)吸着剤、色素、香味剤および甘味剤と共に含む錠剤またはゼラチンカプセルであり得る。
【００４３】
注射可能組成物は、水性等張溶液または懸濁液であり得て、坐薬は脂肪エマルジョンまたは懸濁液から製造できる。本組成物はまた滅菌してよく、および／またはアジュバント、例えば防腐剤、安定化剤、湿潤剤または乳化剤、溶解促進剤、浸透圧調整用塩および／または緩衝剤を含んでよい。加えて、それらはまた他の治療的に価値のある物質を含み得る。経皮適用のための適当な製剤は、有効量の本発明の化合物と担体を含む。担体は、宿主の皮膚の通過を助けるための、薬理学的に許容される溶媒を含みうる。例えば、経皮デバイスは、裏打ち部材、本化合物を所望により担体と共に含む貯蔵部、所望により該化合物を宿主の皮膚に制御され、かつ予定された速度で長期間にわたり送達するための速度制御和リア、および、該デバイスを皮膚に固定するための手段を含む、バンデージの形である。マトリックス経皮製剤も使用し得る。例えば、皮膚および眼への、局所適用のための適当な製剤は、好ましくは当分野で既知の水溶液、軟膏、クリームまたはゲルである。これはまた可溶化剤、安定化剤、張性増加剤、緩衝剤および防腐剤を含み得る。
【００４４】
本発明の化合物は、治療的有効量で、照射および骨髄移植を含む１個またはそれ以上の治療剤と組み合わせて投与できる(医薬的組み合わせ)。本発明の化合物と組み合わせて使用できる化合物の非限定的例は、シトシンアラビノシド、ダウノルビシン、シクロホスファミド、ＶＰ−１６、ミトキサントロン、ダウノルビシン、シタラビン、メトトレキサート、ビンクリスチン、６−チオグアニン、６−メルカプトプリン、パクリタキセルなどのような細胞毒性化学療法剤、例えばシクロオキシゲナーゼ阻害剤、例えばセレコキシブを含むが、これに限定されない血管形成阻害剤、免疫調節性または抗炎症性物質、例えば、シクロスポリン、ラパマイシン、またはアスコマイシン、またはそれらの免疫抑制性類似体、例えばシクロスポリンＡ(ＣｓＡ)、シクロスポリンＧ、ＦＫ−５０６、ラパマイシン、または同等な化合物、コルチコステロイド、シクロホスファミド、アザチオプリン、メトトレキサート、ブレキナール、レフルノミド、ミゾリビン、ミコフェノール酸、ミコフェノール酸モフェチル、１５−デオキシスペルグアリン、免疫抑制抗体、とりわけ白血球受容体、例えばＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ２５、ＣＤ２８、Ｂ７、ＣＤ４５、ＣＤ５８またはそれらのリガンドに対するモノクローナル抗体、またはＣＴＬＡ４１ｇのような他の免疫調節性化合物である。さらに、本発明の化合物は、著しい相乗的治療を生じさせるために、シグナル伝達の他の阻害剤または他の癌遺伝子標的剤と組み合わせて使用できる。
【００４５】
本発明の化合物を他の治療と組み合わせて投与するとき、併用する化合物の用量は、もちろん、用いる併用剤のタイプ、用いる具体的薬剤、処置している状態などに依存して変化するであろう。
【００４６】
本発明はまたａ)遊離形または薬学的に許容される塩形の本発明の化合物である第一剤、およびｂ)少なくとも１個の併用剤を含む、医薬的組み合わせ、例えばキットも提供する。該キットはまたその投与の指示書を含み得る。
【００４７】
本明細書で使用する“併用投与”または“組み合わせ投与”などの用語は、選択した治療剤の単独の患者への投与を包含することを意図し、薬剤を必ずしも同じ投与経路でまたは同時に投与するものではない処置レジメンを包含することを意図する。
【００４８】
本明細書で使用する“医薬的組み合わせ”は、１個以上の活性成分の活性成分の混合または組み合わせによりもたらされる製品を意味し、活性成分の固定されたおよび固定されていない組み合わせの両方を包含する。“固定された組み合わせ”なる用語は、活性成分、例えば式Ｉの化合物と併用剤が、両方とも患者に同時に単独の物または用量として投与されるものを意味する。“固定されていない組み合わせ”なる用語は、活性成分、例えば式Ｉの化合物と併用剤が、両方とも患者に別々の物として、同時に、併用してまたは特別な時間制限なしに連続して投与され、このような投与が患者の体内で２種の化合物の治療的に有効なレベルを提供するものを意味する。後者はまたカクテル療法、たとえば、３種またはそれ以上の活性成分の投与にも適用される。
【００４９】
本発明の化合物の製造法
本発明はまた本発明の化合物の製造法を含む。記載の反応において、官能基、例えばヒドロキシ基、アミノ基、イミノ基、チオまたはカルボキシ基を、これらが最終産物において望まれるとき、それらの望まない反応への参加を避けるために保護する必要があり得る。慣用の保護基を、標準的な技術に従って使用でき、例えば、T.W. Greene and P. G. M. Wuts in “Protective Groups in Organic Chemistry”, John Wiley and Sons, 1991を参照のこと。
【００５０】
Ｒ５が水素である式Ｉの化合物は、下記反応スキームＩの通りに進行して、製造できる：
【化２】
2007502776.tif 000003
〔式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、発明の要約において、式Ｉについて定義した通りであり、ＰＧは窒素保護基(例えば、テトラヒドロ−ピラン−２−イルなど)を意味し、そしてＺはハロ基、例えばヨードまたはクロロ、好ましくはクロロを意味する。〕。
【００５１】
式３の化合物は、式２の化合物とＮＨＲ３Ｒ４を適当な溶媒(例えば、エタノール、ブタノール、ＴＨＦなど)の存在下、適当な塩基(例えば、ＤＩＥＡ、Ｎａ２ＣＯ３など)を使用して反応させることにより製造できる。式４の化合物は、式３の化合物と、Ｒ１Ｈを、適当な溶媒(例えば、ＤＭＥ、エタノール、ブタノール、ＴＨＦなど)の存在下、所望により適当な触媒(例えば、パラジウム触媒など)の存在下、適当な塩基(例えば、ＤＩＥＡ、Ｎａ２ＣＯ３など)を使用して反応させることにより製造できる。式Ｉの化合物は、最初に適当な溶媒(例えば、ＭｅＯＨなど)中、適当な触媒(例えばｐ−ＴＳＡなど)の存在下、保護基(ＰＧ)を除去することにより、製造できる。反応を、さらに、脱保護した式４の化合物をＲ２Ｙ(式中、Ｙはハロ基、例えばヨード、ブロモまたはクロロを意味する)と反応させることにより進める。本反応は、適当な溶媒(例えば、ＤＭＦ、ジオキサンなど)の存在下、適当な塩基(例えば、リン酸カリウムなど)を使用して、約７０〜約１１０℃の温度範囲で進行させ、完了するのに２４時間ほどかかり得る。
【００５２】
式Ｉの化合物は、下記反応スキームIIの通りに進行して、製造できる：
【化３】
2007502776.tif 000004
〔式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、発明の要約において、式Ｉについて定義した通りであり、ＰＧは窒素保護基(例えば、テトラヒドロ−ピラン−２−イルなど)を意味し、そしてＺはハロ基、例えばヨードまたはクロロ、好ましくはクロロを意味する。〕。
【００５３】
式３の化合物は、式２の化合物とＮＨＲ３Ｒ４を、適当な溶媒(例えば、エタノール、ブタノール、ＴＨＦなど)の存在下、適当な塩基(例えば、ＤＩＥＡ、Ｎａ２ＣＯ３など)を使用して反応させることにより製造できる。式５の化合物は、最初に適当な溶媒(例えば、ＭｅＯＨなど)中、適当な触媒(例えばｐ−ＴＳＡなど)の存在下、保護基(ＰＧ)を除去することにより、製造できる。反応を、さらに脱保護した式３の化合物とＲ２Ｂ(ＯＨ)２を、適当な溶媒(例えば、ジオキサン、塩化メチレンなど)および適当な触媒(例えば酢酸銅など)の存在下、適当な塩基(例えば、ピリジン、ＴＥＡなど)を使用して反応させることにより進める。反応は、約２０〜約８０℃の温度範囲で進行させ、完了するのに１６８時間ほどかかり得る。式Ｉの化合物は、式５の化合物とＲ１Ｈを、適当な溶媒(例えば、ブタノール、エタノールなど)の存在下、適当な塩基(例えば、ＤＩＥＡ、Ｎａ２ＣＯ３など)を使用して反応させることにより、製造できる。
【００５４】
式Ｉの化合物は、下記反応スキームIIIの通りに進行して、製造できる：
【化４】
2007502776.tif 000005
〔式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、発明の要約において、式Ｉについて定義した通りであり、そしてＺはハロ基、例えばヨードまたはクロロ、好ましくはクロロを意味する。〕。
【００５５】
式７の化合物は、式６の化合物とＲ２Ｂ(ＯＨ)２を、適当な溶媒(例えば、ジオキサン、塩化メチレンなど)および適当な触媒(例えば酢酸銅など)の存在下、適当な塩基(例えば、ピリジン、ＴＥＡなど)を使用して反応させることにより製造できる。反応は、約２０〜約８０℃の温度範囲で進行させ、完了するのに１６８時間ほどかかり得る。式５の化合物は、式７の化合物とＮＨＲ３Ｒ４を、適当な溶媒(例えば、ＤＭＥ、エタノール、ブタノール、ＴＨＦなど)の存在下、所望により適当な触媒(例えば、パラジウム触媒など)と共に、適当な塩基(例えば、ＤＩＥＡ、Ｎａ２ＣＯ３など)を使用して反応させることにより製造できる。式Ｉの化合物は、式５の化合物とＲ１Ｈを、適当な溶媒(例えば、ブタノール、エタノール、ＴＨＦなど)の存在下、適当な塩基(例えば、ＤＩＥＡ、Ｎａ２ＣＯ３など)を使用して反応させることにより、製造できる。
【００５６】
本発明の化合物の製造のためのさらなる方法
本発明の化合物は、薬学的に許容される酸付加塩として、遊離塩基形の化合物と、薬学的に許容される無機または有機酸を反応させることにより、製造できる。別法として、本発明の化合物の薬学的に許容される塩基付加塩を、遊離酸形の化合物と、薬学的に許容される無機または有機塩基を反応させることにより、製造できる。あるいは、本発明の化合物の塩形は、塩形の出発物質または中間体を塩湯することにより、製造できる。
【００５７】
本発明の化合物の遊離酸または遊離塩基形は、対応する塩基付加塩または酸付加塩形から、各々製造できる。例えば酸付加塩形の本発明の化合物は、対応する遊離塩基に、適当な塩基(例えば、水酸化アンモニウム溶液、水酸化ナトリウムなど)で処理することにより変換できる。塩基付加塩形の本発明の化合物は、対応する遊離酸に、適当な酸(例えば、塩酸など)で処理することにより、変換できる。
【００５８】
酸化されていない形の本発明の化合物は、本発明の化合物のＮ−オキシド形から、還元剤(例えば、硫黄、二酸化硫黄、トリフェニルホスフィン、水素化ホウ素リチウム、水素化ホウ素ナトリウム、リン・トリクロライド、トリブロマイドなど)で、適当な不活性有機溶媒(例えばアセトニトリル、エタノール、水性ジオキサンなど)中、０〜８０℃で処理することにより、製造できる。
【００５９】
本発明の化合物のプロドラッグ誘導体は、当分野の当業者に既知の方法により製造できる(例えば、さらなる詳細は、Saulnier et al., (1994), Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Vol. 4, p. 1985参照)。例えば、適当なプロドラッグは、誘導体ではない本発明の化合物と、適当なカルバミル化剤(例えば、１,１−アシルオキシアルキルカルバノクロリデート、パラ−ニトロフェニルカーボネートなど)を反応させることにより製造できる。
【００６０】
本発明の化合物の保護された誘導体は、当分野の当業者に既知の手段により製造できる。保護基の創成およびそれらの除去に適用できる技術の詳述は、T. W. Greene, “Protecting Groups in Organic Chemistry”, 3rd edition, John Wiley and Sons, Inc., 1999参照。
【００６１】
本発明の化合物は、(例えば、水和物)として、簡便に製造できるか、または本発明の工程中に形成する。本発明の化合物の水和物は、水性／有機溶媒混合物から、ジオキシン、テトラヒドロフランまたはメタノールのような有機溶媒を使用して、再結晶させることにより、簡便に製造できる。
【００６２】
本発明の化合物は、その個々の立体異性体として、本化合物のラセミ混合物を、光学活性の分離剤と反応させ、ジアステレオ異性体化合物の対を形成させ、ジアステレオマーを分離し、光学的に純粋なエナンチオマーを回収することにより製造できる。エナンチオマーの分離は本発明の化合物の共有結合したジアステレオマー誘導体を使用しても行うことができる、分離可能な複合体が好ましい(例えば、結晶ジアステレオマー塩)。ジアステレオマーは、異なる物理特性(例えば、融点、沸点、溶解度、反応性など)を有し、これらの差異を利用して容易に分離できる。ジアステレオマーはクロマトグラフィーにより、または好ましくは、溶解度の差異に基づく分割／分離技術により、分割できる。光学的に純粋なエナンチオマーを、次いで、解離剤と共に、ラセミ化をもたらさない任意の実際的手段により回収する。化合物の立体異性体のそのラセミ混合物からの分離に適用できる技術のさらなる詳細な記載は、Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, “Enantiomers, Racemates and Resolutions”, John Wiley And Sons, Inc., 1981参照。
【００６３】
要約すると、式Ｉの化合物は、下記を含む方法により製造できる：
(ａ)反応スキームＩ、IIおよびIIIのもの、例えば式５の化合物とＲ１Ｈを、反応スキームIIまたはIIIに従いカップリングさせ；そして
(ｂ)所望により本発明の化合物を薬学的に許容される塩に変換し；
(ｃ)所望により塩形の本発明の化合物を非塩形に変換し；
(ｄ)所望により酸化されていない形の本発明の化合物を薬学的に許容されるＮ−オキシドに変換し；
(ｅ)所望によりＮ−オキシド形の本発明の化合物を、その酸化されていない形に変換し；
(ｆ)所望により本発明の化合物の個々の異性体を、異性体混合物から分離し；
(ｇ)所望により誘導体化されていない本発明の化合物を薬学的に許容されるプロドラッグ誘導体に変換し；そして
(ｈ)所望により本発明の化合物のプロドラッグ誘導体を誘導体化されていない形に変換する。
【００６４】
出発物質の製造を特に記載していない限り、該化合物は既知であるか、当分野で既知の方法に準じて製造できるか、または後記の実施例の通りに製造できる。
【００６５】
当業者は、上記の変換が本発明の化合物の製造法の単なる代表であり、他の既知の方法を同様に使用できることを認めるであろう。
【００６６】
実施例
下記実施例は代表的化合物の製造の詳細な記載を提供し、説明のために提供するが、本発明を限定するために提供するものではない。
【００６７】
実施例１
｛４−[２−(４−アミノ−シクロヘキシルアミノ)−９−フェニル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ]−フェニル｝−ピペリジン−１−イル−メタノン
【化５】
2007502776.tif 000006
ピペリジン(１８.０ｇ、２１１.８mmol)のジクロロメタン(３６０mL)溶液に、０℃で４−ニトロベンゾイルクロライド(１８.６ｇ、１００mmol)を、注意深く数回に分けて添加する。反応混合物を室温で１０分撹拌し、その後それをＨＣｌ(１％、２×２００mL)溶液および水(３００mL)で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させる。溶媒の蒸発後、(４−ニトロ−フェニル)−ピペリジン−１−イル−メタノン(２３.２ｇ、９９％)を得て、直接水素化に使用する(１.０ｇの１０％Ｐｄ／Ｃの４００mLのエタノール溶液)。触媒の濾過およびエタノールの蒸発後、(４−アミノ−フェニル)−ピペリジン−１−イル−メタノン(１９.６ｇ、９６％)を得る。
【００６８】
２,６−ジクロロプリン(１８.８０ｇ、１００mmol)、３,４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン(１２.６２ｇ、１５０mmol)、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物(１.９０ｇ、１０mmol)および無水ジクロロメタン(２００mL)の混合物を室温で４時間撹拌する。濾過後、それをＮａ２ＣＯ３(１０％水性、１００mL)、水(１００mL)で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させる。溶媒の蒸発、続く酢酸エチル(５mL)およびヘキサン(６０mL)での滴定により沈殿ができ、それを濾過すると、２,６−ジクロロ−９−(テトラヒドロ−ピラン−２−イル)−９Ｈ−プリン(２４.０１ｇ、８８％)が得られる。
【００６９】
２,６−ジクロロ−９−(テトラヒドロ−ピラン−２−イル)−９Ｈ−プリン(５.４４ｇ、２０mmol)、(４−アミノ−フェニル)−ピペリジン−１−イル−メタノン(４.０８ｇ、２０mmol)、ジイソプロピルエチルアミン(２４mmol)およびエタノール(１００mL)の混合物を、２４時間還流する。次いで、ｔｒａｎｓ−１,４−シクロヘキサンジアミン(６.８４ｇ、６０mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(２４mmol)を添加し、混合物をさらに２４時間還流する。エタノール蒸発後に得た油状残渣を酢酸エチル(２５０mL)および水(２００mL)で処理する。水性相を酢酸エチル(２×１００mL)で抽出し、合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させる。蒸発後、得られた油状残渣をｐ−トルエンスルホン酸一水和物(３.８０ｇ、２０mmol)のメタノール(１００mL)溶液で、５５℃で４時間処理し、反応を脱保護が完了するまでモニターする。
【００７０】
ジイソプロピルエチルアミンを添加して、混合物を中和する。得られた油状残渣を、カラムクロマトグラフィー(ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ＝９：１、次いでＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ(〜７Ｎ  アンモニア)＝９：１含有)に付し、２−(４−アミノ−シクロヘキシルアミノ)−６−[４−(ピペリジン−１−カルボニル)−フェニルアミノ]−９Ｈ−プリン(６.５０ｇ、７５％)を得る。
【００７１】
上記の通り製造した２−(４−アミノ−シクロヘキシルアミノ)−６−[４−(ピペリジン−１−カルボニル)−フェニルアミノ]−９Ｈ−プリン(８６.８mg、０.２mmol)、ヨウ化銅(Ｉ)(３８.２mg、０.２mmol)およびリン酸カリウム(１７０mg、０.８mmol)の混合物を含むバイアルを脱気し、乾燥窒素を再充填する。Ｎ,Ｎ'−ジメチルエチレンジアミン(３５.３mg、４３μL、０.４mmol)およびヨードベンゼン(４０.８mg、０.２mmol)のＤＭＦ(７００μL)溶液を添加し、混合物を８８℃で一晩撹拌する。ＡｃＯＨ−ＭｅＯＨ(１：１０、１.５mL)を添加して、混合物を中和し、続いてシリンジフィルターを通して濾過する。カラムクロマトグラフィー(ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ＝９：１、次いでＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ(〜７Ｎ  アンモニア含有)＝９：１)により、｛４−[２−(４−アミノ−シクロヘキシルアミノ)−９−フェニル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ]−フェニル｝−ピペリジン−１−イル−メタノンを固体として得る；1H NMR 400 MHz(CD3OD)d 8.03(s, 1H), 7.90-7.95(m, 2H), 7.75-7.65(m, 2H), 7.50-7.42(m, 2H), 7.38-7.30(m, 3H), 3.80-3.50(m, 5H), 2.83-2.73(m, 1H), 2.15-2.05(m, 2H), 1.95-1.90(m, 2H), 1.70-1.40(m, 6H), 1.40-1.20(m, 4H);MS m/z 511.3(M+1)。
【００７２】
実施例２
[４−(２−クロロ−９−フェニル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)−フェニル]−ピペリジン−１−イル−メタノン
【化６】
2007502776.tif 000007
２,６−ジクロロ−９−(テトラヒドラ−ピラン−２−イル)−９Ｈ−プリン(１０ｇ、３６.６mmol)、(４−アミノ−フェニル)−ピペリジン−１−イル−メタノン(７.４８ｇ、３６.６mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(９.５ｇ、７３.５mmol)のエタノール(１１０ml)中の混合物を一晩還流する。混合物を室温に冷却し、真空で濃縮して、[４−(２−クロロ−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)−フェニル]−ピペリジン−１−イル−メタノン(１４.７ｇ、９１％)を暗黄色固体として得る。
【００７３】
[４−(２−クロロ−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)−フェニル]−ピペリジン−１−イル−メタノン(１０ｇ、２２.７mmol)およびｐ−トルエンスルホン酸一水和物(０.８６ｇ、４.５mmol)の混合物のメタノール(１００mL)溶液を、２時間、５０℃で撹拌する。混合物を室温に冷却し、メタノールに懸濁する。沈殿を回収し、酢酸エチルで洗浄して、[４−(２−クロロ−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)−フェニル]−ピペリジン−１−イル−メタノン(７.６９ｇ、９５％)を薄黄色固体として得る。
【００７４】
活性化モレキュラー・シーブ(４.２ｇ)のジオキサン(３５mL)中の懸濁液に、[４−(２−クロロ−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)−フェニル]−ピペリジン−１−イル−メタノン(４ｇ、１１.２mmol)、フェニルボロン酸(２.７３ｇ、２２.４mmol)、酢酸銅(３.０５ｇ、１６.８mmol)およびピリジン(３.５４ｇ、４４.８mmol)を添加する。混合物を室温で一晩撹拌し、次いで４０℃で５時間加熱する。混合物を室温に冷却し、ＴＨＦ(５０mL)で希釈し、セライトを通して濾過し、メタノールで洗浄する。濾液を減圧下濃縮し、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー(ＭｅＯＨ／ジクロロメタン＝１／５０)で精製して、[４−(２−クロロ−９−フェニル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)−フェニル]−ピペリジン−１−イル−メタノン(３.８９ｇ、８０％)を黄色固体として得る；1H NMR 400 MHz(CDCl3)d 8.17(s, 1H), 8.06(s, 1H), 7.93(d, 2H, J=8.8 Hz), 7.69(d, 2H, J=8.8 Hz), 7.58(d, 2H, J=8 Hz), 7.49(t, 3H, J=7.2 Hz), 7.41(d, 1H, J=7.2 Hz), 2.93-2.90(m, 4H), 2.18-1.96(m, 2H), 1.58-1.53(m, 4H), 1.35-1.29(m, 2H);MS m/z 433.2(M+1)。
【００７５】
実施例３
｛４−[２−(３−ジメチルアミノ−ピロリジン−１−イル)−９−フェニル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ]−フェニル｝−ピペリジン−１−イル−メタノン
【化７】
2007502776.tif 000008
[４−(２−クロロ−９−フェニル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)−フェニル)]−ピペリジン−１−イルメタノン(１２９mg、０.３mmol)および３−(ジメチルアミノ)−ピロリジン(１０３mg、０.９mmol)の混合物の１−ブタノール(０.６mL)溶液を１２時間、１２０℃で撹拌する。混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮する。残渣をフラッシュカラムクトマトグラフィー(ＭｅＯＨ／ジクロロメタン＝１／５０)で精製し、｛４−[２−(３−ジメチルアミノ−ピロリジン−１−イル)−９−フェニル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ]−フェニル｝−ピペリジン−１−イル−メタノン(７３.３mg、４９％)を、暗ピンク色固体として得る；1H NMR 400 MHz(MeOH-d4)d 8.22(s, 1H), 7.95(d, 2H, J=8.4 Hz), 7.83(d, 2H, J=7.6 Hz), 7.53(t, 2H, J=7.6 Hz), 7.43(d, 1H, J=7.6 Hz), 7.40(d, 2H, J=8.8 Hz), 4.04-3.96(m, 1H), 3.94-3.83(m, 1H), 3.70-3.36(m, 6H), 2.95(s, 6H), 2.51-2.46(m, 1H), 2.25-2.19(m, 1H), 1.78-1.47(m, 6H);MS m/z 511.3(M+1)。
【００７６】
実施例４
４−(２−イミダゾール−１−イル−９−フェニル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)−フェニル]ピペリジン−１−イル−メタノン
【化８】
2007502776.tif 000009
石英反応容器(２mL)に[４−(２−クロロ−９−フェニル−９Ｈ−プリン−６−イル−アミノ)−フェニル)]−ピペリジン−１−イルメタノン(４３mg、０.１mmol)およびイミダゾール(２０.４mg、０.３mmol)のＮＭＰ(０.３mL)溶液を添加する。反応容器を次いでマイクロ波反応器(Emrys optimizer)の空洞に入れ、３０分、２００℃で照射する。粗反応混合物を分取ＨＰＬＣで精製し、トリフルオロ酢酸塩の４−(２−イミダゾール−１−イル−９−フェニル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)−フェニル]ピペリジン−１−イル−メタノン(１８.７mg)を薄黄色固体として得る；1H NMR 400 MHz(MeOH-d4)d 9.52(s, 1H), 8.58(s, 1H), 8.26(s, 1H), 7.91(d, 2H, J=6.8 Hz), 7.86(d, 2H, J=8.8 Hz), 7.65(m, 3H), 7.56(d, 1H, J=7.6 Hz), 7.51(d, 2H, J=8.8 Hz), 3.70-3.49(m, 4H), 1.77-1.60(m, 6H);MS m/z 465.3(M+1)。
【００７７】
実施例５
｛４−[９−フェニル−２−(キノリン−３−イルアミノ)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ]−フェニル｝−ピペリジン−１−イル−メタノン
【化９】
2007502776.tif 000010
試験管に[４−(２−クロロ−９−フェニル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)−フェニル)]−ピペリジン−１−イルメタノン(４３mg、０.１mmol)、３−アミノキノリン(２１.６mg、０.１５mmol)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(０)(７mg、０.００８mmol)、２−(ジ−ｔ−ブチルホスフィノ)ビフェニル(８.９mg、０.０３mmol)、リン酸カリウム(１００mg、０.４７mmol)を入れ、排気し、窒素で再充填する。ＤＭＥ(０.７mL)を、窒素下添加する。反応混合物を８５℃で１６時間撹拌する。得られた薄褐色懸濁液を室温に冷却し、分取ＨＰＬＣで精製して、トリフルオロ酢酸塩の｛４−[９−フェニル−２−(キノリン−３−イルアミノ)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ]−フェニル｝−ピペリジン−１−イル−メタノン(２４.５mg)を黄色固体として得る；1H NMR 400 MHz(MeOH-d4)d 9.29(d, 1H, J=2.4 Hz), 9.13(d, 1H, J=2.0 Hz), 8.18(s, 1H), 7.92(d, 1H, J=8.4 Hz), 7.81-7.70(m, 7H), 7.58(t, 2H, J=8.0 Hz), 7.48(t, 1H, J=7.2 Hz), 7.30(d, 2H, J=8.4 Hz), 3.87-3.35(m, 4H), 1.80-1.43(m, 6H);MS m/z 541.3(M+1)。
【００７８】
実施例６
Ｎ２−(４−アミノ−シクロヘキシル)−Ｎ６−(４−モルホリン−４−イル−フェニル)−９−フェニル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミン
【化１０】
2007502776.tif 000011
モレキュラー・シーブ(４Ａ、１２.０ｇ)を、真空下で一晩１５０℃で乾燥させ、室温に冷却する。次いで、２−フルオロ−６−クロロ−プリン(６.０ｇ、３５mmol)、フェニルボロン酸(８.３ｇ、７０mmol)、酢酸銅(９.０ｇ、５２mmol)およびトリエチルアミン(１９mL、１４０mmol)を添加し、乾燥ジオキサン(１００mL)中で混合する。反応混合物を、室温で２日間乾燥管を付属させて撹拌する。反応完了後、反応混合物を塩化メチレン(２００mL)で希釈し、セライトパッドを通して濾過し、塩化メチレン(２００mL)で洗浄する。有機相を合わせ、溶媒をロータリーエバポレーションにより除去する。粗生成物をヘキサン／酢酸エチル(２：１)を溶離剤として使用してフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、２−フルオロ−６−クロロ−９−フェニル−９Ｈ−プリン(２.１ｇ、２４％)を、明黄色固体として得る、MS m/z 249.1(M+1)。
【００７９】
２−フルオロ−６−クロロ−９−フェニル−９Ｈ−プリン(５０mg、０.２０mmol)、４−モルホリン−４−イル−フェニルアミン(３９mg、０.２２mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(３５μL、０.２mmol)を１−ブタノール(０.４mL)中で混合する。反応物を８０℃で２時間撹拌し、その後ｔｒａｎｓ−１,４−シクロヘキサンジアミン(６８mg、０.６mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(７０μL、０.４mmol)を添加する。反応混合物を１１０℃で一晩撹拌する。溶媒をロータリーエバポレーションにより除去する。粗混合物をＤＭＳＯに再溶解し、ＨＰＬＣで精製して、トリフルオロ酢酸塩のＮ２−(４−アミノ−シクロヘキシル)−Ｎ６−(４−モルホリン−４−イル−フェニル)−９−フェニル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミンを白色粉末として得る；1H NMR 400 MHz(DMSO-d6)δ 9.29(s, 1H), 8.23(s, 1H), 7.84(t, 4H, J=9.4 Hz), 7.51(t, 2H, J=8.0 Hz), 7.35(t, 1H, J=7.2 Hz), 6.84(d, 2H, J=9.2 Hz), 6.48(d, 1H, J=7.2 Hz), 3.71(t, 4H, J=4.8 Hz), 3.57(s, 1H), 3.01(t, 4H, J=4.8 Hz), 1.93(d, 2H, J=12 Hz), 1.77(d, 2H, J=11.2 Hz), 1.24(m, 4H), 0.90(t, 1H, J=7.2 Hz);MS m/z 485.3(M + 1)。
【００８０】
実施例７
Ｎ２−(４−アミノ−シクロヘキシル)−Ｎ６−[３−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−９−フェニル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミン
【化１１】
2007502776.tif 000012
１−クロロ−３−ニトロ−ベンゼン(１.０ｇ、７mmol)を１−メチル−ピペラジン(２.０mL)と混合し、反応をを蓋し、１９０℃で２時間撹拌する。反応後、過剰な１−メチル−ピペラジンをロータリーエバポレーションにより除去して、粗生成物を黄色油状物として得る。粗生成物をシリカゲルフラッシュカラムにより精製し、１.２ｇの１−メチル−４−(３−ニトロ−フェニル)−ピペラジン(収率７８％)を得る。
【００８１】
１−メチル−４−(３−ニトロ−フェニル)−ピペラジン(１.２ｇ、５.４mmol)をメタノール(５０mL)に溶解し、Ｐｄ／Ｃ(５％、１２０mg)を溶液に添加する。水素バルーンをフラスコに付ける。溶液を、一晩、室温で撹拌する。反応完了後、Ｐｄ／Ｃを濾過し、濾液を集め、ロータリーエバポレーションにより濃縮し、３−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニルアミンを得る。
【００８２】
２−フルオロ−６−クロロ−９−フェニル−９Ｈ−プリン(５０mg、０.２０mmol)、３−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニルアミン(４２mg、０.２２mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(３５μL、０.２mmol)を１−ブタノール(０.４mL)中で根号する。反応物を８０℃で２時間で撹拌し、その後ｔｒａｎｓ−１,４−シクロヘキサンジアミン(６８mg、０.６mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(７０μL、０.４mmol)を添加する。反応混合物を１１０℃で一晩撹拌する。溶媒をロータリーエバポレーションにより除去し、粗生成物をＤＭＳＯに再溶解し、ＨＰＬＣで精製して、Ｎ２−(４−アミノ−シクロヘキシル)−Ｎ６−[３−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−９−フェニル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミンを白色粉末として得る；1H NMR 400 MHz(DMSO-d6)δ 9.12(s, 1H), 8.16(s, 1H), 7.78(d, 2H, J=6.0Hz), 7.58(d, 1H, J=7.6 Hz), 7.42(m, 2H), 7.24(m, 2H), 7.00(t, 1H, J=8.0 Hz), 6.48(m, 2H), 3.53(s, 1H), 3.25(m, 4H), 3.01(t, 4H, J=4.8 Hz), 2.09(s, 3H), 1.74(m, 2H), 1.66(s, 2H), 0.92(m, 4H), 0.79(t, 1H, J=7.2 Hz);MS m/z 498.3(M+1)。
【００８３】
実施例８
１−｛４−[２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ]−フェニル｝−エタノン
【化１２】
2007502776.tif 000013
１−(４−アミノ−フェニル)−エタノン(１.０ｇ、７.４mmol)を２−フルオロ−６−クロロ−９−(テトラヒドロ−ピラン−２−イル)−９Ｈ−プリン(１.９０ｇ、７.４mmol)、ジイソプロピルエチルアミン(１.５４mL、８.９mmol)およびｎ−ブタノール(５０mL)と混合する。反応物を９５℃で１４時間撹拌する。室温に冷却し、溶媒を除去した後、粗生成物をＭｅＯＨ／ＤＣＭ(５％：９５％)を使用したフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、１−｛４−[２−フルオロ−９−(テトラヒドロ−ピラン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ]−フェニル｝−エタノン白色固体２.４９ｇを得る。
【００８４】
１−｛４−[２−フルオロ−９−(テトラヒドロ−ピラン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ]−フェニル｝−エタノン(１００mg、０.２８mmol)を２−メチル−モルホリンＨＣｌ塩(５８mg、０.４５mmol)、ジイソプロピルエチルアミン(１２１μL、０.７０mmol)および５mL  ｎ−ブタノールと混合する。反応物を１００℃で１４時間撹拌する。冷却し、溶媒を除去した後、粗生成物をＥＡ／ヘキサン(１：１)を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、１−｛４−[２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−９−(テトラヒドロ−ピラン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ]−フェニル｝−エタノン黄色固体１１５mgを得る。
【００８５】
１−｛４−[２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−９−(テトラヒドロ−ピラン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ]−フェニル｝−エタノン(１１５mg、０.２６mmol)を１０mL  エタノールに溶解し、２００μL  ＴＦＡと混合する。反応物を６０℃で２時間撹拌する。室温に冷却し、溶媒およびＴＦＡを完全に除去した後、粗生成物をヨウ化銅(Ｉ)(５０mg、０.２６mmol)およびリン酸カリウム(２２０mg、０.８mmol)と混合し、脱気し、乾燥窒素を再充填する。Ｎ,Ｎ'−ジメチルエチレンジアミン(４６mg、０.５２mmol)およびヨード−チアゾール(５３mg、０.２６mmol)のＤＭＦ(４mL)溶液を添加し、混合物を９０℃で１４時間撹拌する。室温に冷却後、ＡｃＯＨ−ＭｅＯＨ(１：１０、１.６mL)を添加して、混合物を中和し、続いてシリンジフィルターを通して濾過する。溶媒除去後、粗生成物をＤＭＳＯに溶解し、分取ＨＰＬＣ精製して、薄色固体１−｛４−[２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ]−フェニル｝−エタノン７１mgを得る。1H NMR 600 MHz(DMSO-d6)δ 10.21(s, 1H), 9.26(d, 1H, J=2.2), 8.60(s, 1H), 8.27(d, 1H, J=2.0Hz), 8.07(d, 2H, J=8.8 Hz), 7.95(d, 2H, J=8.8 Hz), 4.50(dd, 2H, J=3.0 Hz), 3.95(dd, 1H, J=2.6Hz), 3.59(m, 2H), 3.04(m, 1H), 2.72(m, 1H), 2.54(s, 3H), 1.22(d, 3H, J=6.2Hz);MS m/z 436.2(M+1)。
【００８６】
実施例９
(４−メタンスルホニル−フェニル)−[２−(４−モルホリン−４−イル−ピペリジン−１−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−アミン
【化１３】
2007502776.tif 000014
４−メタンスルホニル−フェニルアミン(１.２７ｇ、７.４mmol)を２−フルオロ−６−クロロ−９−(テトラヒドロ−ピラン−２−イル)−９Ｈ−プリン(１.９０ｇ、７.４mmol)、ジイソプロピルエチルアミン(１.５４mL、８.９mmol)およびｎ−ブタノール５０mLと混合する。反応物を９５℃で１４時間撹拌する。室温に冷却し、溶媒を除去した後、粗生成物をＭｅＯＨ／ＤＣＭ(７％：９３％)を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、[２−フルオロ−９−(テトラヒドロ−ピラン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]−(４−メタンスルホニル−フェニル)−アミン白色固体２.７５ｇを得る。
【００８７】
[２−フルオロ−９−(テトラヒドロ−ピラン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]−(４−メタンスルホニル−フェニル)−アミン(１１０mg、０.２８mmol)を４−ピペリジン−４−イル−モルホリン(７６mg、０.４５mmol)、ジイソプロピルエチルアミン(１２１μL、０.７０mmol)および５mL  ｎ−ブタノールと混合する。反応物を１００℃で１４時間撹拌する。冷却し、溶媒を除去した後、粗生成物をＥＡ／ヘキサン(６：４)を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、(４−メタンスルホニル−フェニル)−[２−(４−モルホリン−４−イル−ピペリジン−１−イル)−９−(テトラヒドロ−ピラン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]−アミン黄色固体１４５mgを得る。
【００８８】
(４−メタンスルホニル−フェニル)−[２−(４−モルホリン−４−イル−ピペリジン−１−イル)−９−(テトラヒドロ−ピラン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]−アミン(１４５mg、０.２６mmol)を１０mL  エタノールに溶解し、２００μL  ＴＦＡと混合する。反応物を６０℃で２時間撹拌する。室温に冷却し、溶媒およびＴＦＡを完全に除去した後、粗生成物をヨウ化銅(Ｉ)(５０mg、０.２６mmol)およびリン酸カリウム(２２０mg、０.８mmol)と混合し、脱気し、乾燥窒素を再充填する。Ｎ,Ｎ'−ジメチルエチレンジアミン(４６mg、０.５２mmol)およびヨード−チアゾール(５３mg、０.２６mmol)のＤＭＦ(４mL)溶液を添加し、混合物を９０℃で１４時間撹拌する。室温に冷却後、ＡｃＯＨ−ＭｅＯＨ(１：１０、１.６mL)を添加して、混合物を中和し、続いてシリンジフィルターを通して濾過する。溶媒除去後、粗生成物をＤＭＳＯに溶解し、分取ＨＰＬＣで精製して、白色固体(４−メタンスルホニル−フェニル)−[２−(４−モルホリン−４−イル−ピペリジン−１−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−アミン９５mgを得る。1H NMR 400 MHz(DMSO-d6)δ 10.44(s, 1H), 9.41(s, 1H), 8.72(s, 1H), 8.40(d, 1H, J=2.4 Hz), 8.31(d, 2H, J=8.8 Hz), 8.01(d, 2H, J=8.0 Hz), 4.86(d, 2H, J=12.8 Hz), 3.71(s, 4H), 3.52(m, 4H), 3.33(s, 3H), 3.15(t, 2H, J=12.0 Hz), 2.06(d, 2H, J=11.2 Hz), 1.55(m, 2H);MS m/z 541.3(M+1)。
【００８９】
実施例１０
Ｎ６−(４−メタンスルホニル−フェニル)−Ｎ２−ピリジン−２−イルメチル−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミン
【化１４】
2007502776.tif 000015
２−フルオロ−６−クロロプリン(１７.２６ｇ、１００mmol)、３,４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン(１２.６２ｇ、１５０mmol)およびｐ−トルエンスルホン酸一水和物(１.９０ｇ、１０mmol)の混合物を無水ジクロロメタン(２００mL)に溶解し、室温で４時間撹拌する。反応混合物を濾過し、Ｎａ２ＣＯ３(１０％水性溶液、１００mL)および水(１００mL)で洗浄し、有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させる。溶媒の蒸発により油状物を得て、それを酢酸エチル(１０mL)およびヘキサン(６０mL)でトリチュレートし、それにより沈殿が形成される。生成物、２−フルオロ−６−クロロ−９−(テトラヒドロ−ピラン−２−イル)−９Ｈ−プリン、を濾過により回収する。
【００９０】
【化１５】
2007502776.tif 000016
２−フルオロ−６−クロロ−９−(テトラヒドロ−ピラン−２−イル)−９Ｈ−プリン(２.５６ｇ、１０mmol)、４−(メチルチオ)アニリン(１.３９ｇ、１０mmol)およびＤＩＥＡ(１.９３ｇ、１５mmol)の混合物のエタノール(２０ml)溶液を、一晩、７８℃で撹拌する。混合物を室温に冷却する。溶媒の蒸発、続くカラムクロマトグラフィー(ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ、１０％から３０％)により、[２−フルオロ−９−(テトラヒドロ−ピラン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]−(４−メチルスルファニル−フェニル)−アミンを白色固体として得る。
【００９１】
上記で得た化合物(３.３３ｇ、９.２５mmol)のＤＣＭ(１０ml)溶液に、３−クロロペルオキシ安息香酸(６.２２ｇ、７７％最大、２７.８mmol)を少しずつゆっくり添加する(氷浴上)。添加後、混合物を室温でさらに２時間撹拌。混合物をＤＣＭ(５０ml)で希釈し、懸濁液を飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３(５０ml)および飽和ＮａＨＣＯ３(５０ml×２)で、有機相が透明になるまで洗浄する。有機層をさらに水(５０ml)および塩水(５０ml)で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させる。溶媒の蒸発、続くカラムクロマトグラフィー(ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ、３０％から７０％)により、[２−フルオロ−９−(テトラヒドロ−ピラン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]−(４−メチルスルホニル−フェニル)−アミンを薄黄色固体として得る。
【００９２】
【化１６】
2007502776.tif 000017
２−フルオロプリン基質(４.６ｇ、１１.８mmol)および２−(アミノメチル)ピリジン(１５.０ｇ)の混合物を、８４℃で油浴中、一晩加熱する。混合物を酢酸エチル(２００mL)および水(２００mL)に分配する。有機相をＮＨ４Ｃｌ(２×１５０mL、飽和水性溶液)および水(２００mL)で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させる。溶媒の蒸発により、粗生成物を得て、それを、次反応にさらに精製することなく使用する。
【００９３】
【化１７】
2007502776.tif 000018
上記で得た化合物(１.９３ｇ、４.０２mmol)をｐ−トルエンスルホン酸一水和物(９５０mg、５.０mmol)と、メタノール(２０mL)中で、６０℃で出発物質が検出されなくなるまで撹拌する(ＴＬＣまたはＬＣ−ＭＳでモニター)。トリエチルアミン(１.０mL)を添加する。反応混合物を室温に冷却すると沈殿が形成され、それを濾過により回収して、脱保護された生成物を得る。
【００９４】
【化１８】
2007502776.tif 000019
脱保護された２,６−二置換プリン(１.９８ｇ、５.０mmol)、ＣｕＩ(４７５mg、２.５０mmol)およびＫ３ＰＯ４(３.１８ｇ、１５mmol)をフラスコ中で合わせる(アルゴンで再充填)。ｔｒａｎｓ−Ｎ,Ｎ'−ジメチルシクロヘキサン−１,２−ジアミン(３５５mg、２.５０mmol)および４−ブロモチアゾール(９３２mg、８８％純粋、５.０mmol)のＤＭＦ(９.０mL)溶液を添加し、混合物を８８℃で一晩撹拌する。混合物を室温に冷却後、酢酸(１.０mL)を添加し、混合物をシリンジフィルター(ＤＭＦで洗浄)を通して濾過する。濾液を逆相分取ＬＣ−ＭＳ(アセトニトリル／水／ＴＦＡ勾配１０−９０％ＣＨ３ＣＮで７.５分、Ultro 120 5μM C18Q, 75x30mmID)で精製する。回収した生成物の水／ＭｅＣＮ溶液を蒸発させてアセトニトリルを除去する。ＮａＨＣＯ３(飽和水性溶液)を添加して、ｐＨを９に上げる。ＤＣＭを生成物の抽出に使用し、有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させる。溶媒の蒸発により、生成物を遊離塩基の、Ｎ６−(４−メタンスルホニル−フェニル)−Ｎ２−ピリジン−２−イルメチル−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミンを白色粉末として得る；1H NMR 400 MHz(d-DMSO )δ 10.21(s, 1H), 9.26(s, 1H), 8.53-7.70(m, 9H), 7.42(d, 1H, J=8.0 Hz,), 7.24(t, 1H, J=6.0 Hz), 4.67(d, 2H, J=5.6 Hz), 3.17(s, 3H);MS m/z 479.3(M+1)。
【００９５】
実施例１１
Ｒ−(４−メタンスルホニル−フェニル)−[２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−アミン
【化１９】
2007502776.tif 000020
Ｎ−ベンジルエタノールアミン(９.０６ｇ、６０mmol)を(Ｒ)−(＋)−プロピレンオキシド(６.９６ｇ、９９％、１２０mmol)と、密封試験管中、４５℃で一晩撹拌する。過剰なプロピレンオキシドの真空での蒸発により、ジオール残渣を得て、それを次段階に直接使用する。
【００９６】
ジオールをジオキサン(６０mL、無水)に溶解する。ＫＯＨ(１０.０８ｇ、１８０mmol)およびトリス(３,６−ジオキサヘプチル)アミン(２００mg、０.６２mmol)を添加し、混合物を０℃に冷却し、その後トシルクロライド(１２.５８ｇ、６６mmol、６０mL  無水ジオキサン中)を滴下する。反応混合物を０℃で４５分撹拌し、その後それを室温に温め、さらに４時間撹拌する。反応混合物を濾過し、濾液を真空で蒸発させる。ＨＣｌ(２Ｎ、２００mL)を生成物に添加し、得られた酸性水性溶液を酢酸エチル(１５０mL×２)で洗浄し、溶液を０℃に冷却し、ＮａＯＨの添加により中和する。生成物を次いで酢酸エチルで抽出する。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発に付す。残渣をクロマトグラフィー処理(５〜２０％酢酸エチルのＤＣＭ溶液)し、環化生成物(６.６６ｇ)を得る。
【００９７】
遊離塩基を下記の通りＨＣｌ塩に変換し、再結晶する：上記で得た遊離塩基をＨＣｌ(エーテル中２Ｍ、５０mL)で処理し、蒸発に付して、ＨＣｌ塩を得る。塩(６.０ｇ)を酢酸エチル(１２０mL)と混合し、加熱還流する。ＥｔＯＨを、注意深く、全固体が溶解するまで滴下する。次いで、それを室温に冷却し、一晩冷蔵庫に静置する。得られた沈殿を濾過して、純粋生成物(２.８ｇ)を得る。
【００９８】
再結晶した塩(１.３５ｇ、５.９４mmol)のエタノール(３０mL)溶液を、１０％Ｐｄ／Ｃ(０.２０ｇ)で、加圧下(５５psi)、室温で一晩水素化する。混合物をセライト(ＥｔＯＨで洗浄)を通して濾過し、濾液を蒸発させて油状物を得る。エーテルの添加、続く蒸発により、Ｒ−２−メチルモルホリン塩酸塩を固体として得る。
【００９９】
【化２０】
2007502776.tif 000021
２−フルオロプリン基質(４.６ｇ、１１.８mmol)、Ｒ−２−メチルモルホリン塩酸塩(１.７８ｇ、１２.９mmol)およびＤＩＥＡ(３.７８ｇ、２９.４mmol)の混合物のエタノール(２０ml)溶液を一晩還流する。エタノールを蒸発させ、残渣をＤＣＭ(１００ml)に再溶解する。それを飽和ＮａＨＣＯ３(５０ml)、水(５０ml)、塩水(５０ml)で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させる。溶媒の蒸発、続くカラムクロマトグラフィー(ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ、３０％から５０％)により、Ｒ−４−メタンスルホニル−フェニル)−[２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−９−(テトラヒドロ−ピラン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]−アミンを薄褐色固体として得る。
【０１００】
【化２１】
2007502776.tif 000022
上記で得た化合物(１.９０ｇ、４.０２mmol)をｐ−トルエンスルホン酸一水和物(３８０mg、２.０mmol)と、メタノール(２０mL)中、６０℃で、出発物質が検出されなくなるまで撹拌する(ＴＬＣまたはＬＣ−ＭＳでモニター)。トリエチルアミン(０.５mL)を添加し、エタノールを蒸発させる。カラムクロマトグラフィー(ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０から５％)により、脱保護生成物を得る。
【０１０１】
【化２２】
2007502776.tif 000023
２,４−ジブロモチアゾール(５.００ｇ、２０.７mmol)を、アルゴンを３回再充填しているフラスコに入れる。無水エーテル(８２mL)を添加し、溶液を−７８℃に冷却する。ｎ−ブチルリチウム(シクロヘキサン中２.５Ｍ、１０.０mL)を添加し、反応を混合物を９０分、−７８℃で撹拌し、その後ＨＣｌ／エーテル溶液(２.０ｍ×１５mL)でクエンチする。反応混合物を室温に温める。混合物をＮａＨＣＯ３(飽和水性溶液、６０mL)で洗浄し、有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させる。蒸発後、４−ブロモチアゾールを粗生成物として得る。
【０１０２】
【化２３】
2007502776.tif 000024
脱保護された２,６−二置換プリン(１.４４ｇ、３.７１mmol)、ＣｕＩ(３５２mg、１.８６mmol)およびＣｓ２ＣＯ３(３.６２ｇ、３.０当量)をフラスコ(予めアルゴンで再充填)中で合わせる。ｔｒａｎｓ−Ｎ,Ｎ'−ジメチルシクロヘキサン−１,２−ジアミン(２６４mg、１.８６mmol)および４−ブロモチアゾール(６９１mg、８８％純粋、３.７１mmol)のＤＭＦ(８.０mL)溶液を添加し、混合物を８８℃で、一晩撹拌する。混合物を室温に冷却後、酢酸(１.０mL)を添加し、混合物をシリンジフィルター(ＤＭＦで洗浄)を通して濾過する。濾液を逆相分取ＬＣ−ＭＳ(アセトニトリル／水／ＴＦＡ勾配１０−９０％ＣＨ３ＣＮ、７.５分、Ultro 120 5μM C18Q, 75x30mmID)で精製する。回収した生成物の水／ＭｅＣＮ溶液を蒸発させてアセトニトリルを除去する。ＮａＨＣＯ３(飽和水性溶液)を添加して、ｐＨを９に上げる。ＤＣＭを生成物の抽出に使用し、有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させる。溶媒の蒸発により、Ｒ−(４−メタンスルホニル−フェニル)−[２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−アミン遊離塩基／白色粉末を得る；1H NMR 400 MHz(CDCl3 )δ 9.69(s, 1H), 8.87(d, 1H, J=2.4 Hz), 8.83(s, 1H), 8.26(d, 1H, J=2.4 Hz), 8.07(d, 2H, J=8.8 Hz), 7.95(d, 2H, J=8.8 Hz), 4.53(t, 2H, J=10.8 Hz), 4.10-4.07(m, 1H), 3.74-3.65(m, 2H), 3.25-3.10(m, 1H), 3.08(s, 3H), 2.90-2.84(m, 1H), 1.33(d, 3H, J=6.4 Hz);MS m/z 472.3(M+1)。
【０１０３】
実施例１２
１−(４−｛２−[メチル−(１−メチル−ピペリジン−４−イル)−アミノ]−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ｝−フェニル)−エタノン
【化２４】
2007502776.tif 000025
１−(４−アミノ−フェニル)−エタノン(１.０ｇ、７.４mmol)を２−フルオロ−６−クロロ−９−(テトラヒドロ−ピラン−２−イル)−９Ｈ−プリン(１.９０ｇ、７.４mmol)、ジイソプロピルエチルアミン(１.５４mL、８.９mmol)およびｎ−ブタノール５０mLと混合する。反応物を９５℃で１４時間撹拌する。室温に冷却し、溶媒を除去した後、粗生成物をＭｅＯＨ／ＤＣＭ(５％：９５％)を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、１−｛４−[２−フルオロ−９−(テトラヒドロ−ピラン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ]−フェニル｝−エタノン白色固体２.４９ｇを得る。
【０１０４】
１−｛４−[２−フルオロ−９−(テトラヒドロ−ピラン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ]−フェニル｝−エタノン(１００mg、０.２８mmol)をメチル−(１−メチル−ピペリジン−４−イル)−アミン(５８mg、０.４５mmol)、ジイソプロピルエチルアミン(１２１μL、０.７０mmol)および５mL  ｎ−ブタノールと混合する。反応物を１００℃で１４時間撹拌する。冷却し、溶媒を除去した後、粗生成物をＥＡ／ヘキサン(１：１)を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、１−｛４−[２−[メチル−(１−メチル−ピペリジン−４−イル)−アミノ]−９−(テトラヒドロ−ピラン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ]−フェニル｝−エタノン黄色固体１１５mgを得る。
【０１０５】
１−｛４−[２−[メチル−(１−メチル−ピペリジン−４−イル)−アミノ]−９−(テトラヒドロ−ピラン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ]−フェニル｝−エタノン(１１５mg、０.２６mmol)を１０mL  エタノールに溶解し、２００μL  ＴＦＡと混合する。反応物を６０℃で２時間撹拌する。室温に冷却し、溶媒およびＴＦＡを完全に除去した後、粗生成物をヨウ化銅(Ｉ)(５０mg、０.２６mmol)およびリン酸カリウム(２２０mg、０.８mmol)と混合し、脱気し、乾燥窒素を再充填する。Ｎ,Ｎ'−ジメチルエチレンジアミン(４６mg、０.５２mmol)およびヨード−チアゾール(５３mg、０.２６mmol)のＤＭＦ(４mL)溶液を添加し、混合物を９０℃で１４時間撹拌する。室温に冷却後、ＡｃＯＨ−ＭｅＯＨ(１：１０、１.６mL)を添加して、混合物を中和し、続いてシリンジフィルターを通して濾過する。溶媒除去後、粗生成物をＤＭＳＯに溶解し、分取ＨＰＬＣで精製して、薄色固体１−(４−｛２−[メチル−(１−メチル−ピペリジン−４−イル)−アミノ]−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ｝−フェニル)−エタノンを得る：1H NMR 400 MHz(DMSO-d6)δ 10.22(s, 1H), 9.28(d, 1H, J=2.3), 8.61(s, 1H), 8.25(d, 1H, J=2.1Hz), 8.12(d, 2H, J=8.7 Hz), 7.98(d, 2H, J=8.7 Hz), 3.57(m, 4H), 3.21(t, 1H, J=4.6Hz), 3.10(s, 3H), 2.79(d, 3H, J=4.6Hz), 2.55(s, 3H), 2.00(m, 4H)(MS m/z 463.3(M+1)。
【０１０６】
上記実施例に記載の方法を繰り返し、適当な出発物質を使用して、表１、２および３に示す下記の式Ｉの化合物が得られる。
【０１０７】
【表１】
2007502776.tif 000026
【表２】
2007502776.tif 000027
【表３】
2007502776.tif 000028
【表４】
2007502776.tif 000029
【表５】
2007502776.tif 000030
【表６】
2007502776.tif 000031
【表７】
2007502776.tif 000032
【表８】
2007502776.tif 000033
【表９】
2007502776.tif 000034
【表１０】
2007502776.tif 000035
【表１１】
2007502776.tif 000036
【表１２】
2007502776.tif 000037
【表１３】
2007502776.tif 000038
【表１４】
2007502776.tif 000039
【表１５】
2007502776.tif 000040
【表１６】
2007502776.tif 000041
【表１７】
2007502776.tif 000042
【表１８】
2007502776.tif 000043
【表１９】
2007502776.tif 000044
【表２０】
2007502776.tif 000045
【表２１】
2007502776.tif 000046
【表２２】
2007502776.tif 000047
【表２３】
2007502776.tif 000048
【０１０８】
表１の要素を組み合わせて式Ｉの化合物を形成し、例えば、化合物１３の要素を組み合わせて、下記構造：
【化２５】
2007502776.tif 000049
を有するＮ２−(１−ベンジル−ピペリジン−４−イル）−９−フェニル−Ｎ６−[４−(ピペリジン−１−スルホニル）−フェニル]−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミンを形成する。
【０１０９】
同様に、表２の要素を組み合わせて式Ｉの化合物を形成する。例えば、化合物４２５の要素を組み合わせて、下記構造：
【化２６】
2007502776.tif 000050
を有する(４−｛２−[２−(４メチル−チアゾール−５−イル)−エトキシ]−９−チオフェン−３−イル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ｝−フェニル)−ピペリジン−１−イル−メタノンを形成する。
【０１１０】
【表２４】
2007502776.tif 000051
【表２５】
2007502776.tif 000052
【表２６】
2007502776.tif 000053
【表２７】
2007502776.tif 000054
【０１１１】
【表２８】
2007502776.tif 000055
【表２９】
2007502776.tif 000056
【表３０】
2007502776.tif 000057
【表３１】
2007502776.tif 000058
【表３２】
2007502776.tif 000059
【表３３】
2007502776.tif 000060
【表３４】
2007502776.tif 000061
【表３５】
2007502776.tif 000062
【表３６】
2007502776.tif 000063
【表３７】
2007502776.tif 000064
【表３８】
2007502776.tif 000065
【表３９】
2007502776.tif 000066
【表４０】
2007502776.tif 000067
【表４１】
2007502776.tif 000068
【表４２】
2007502776.tif 000069
【表４３】
2007502776.tif 000070
【表４４】
2007502776.tif 000071
【表４５】
2007502776.tif 000072
【表４６】
2007502776.tif 000073
【表４７】
2007502776.tif 000074
【表４８】
2007502776.tif 000075
【表４９】
2007502776.tif 000076
【表５０】
2007502776.tif 000077
【表５１】
2007502776.tif 000078
【０１１２】
表３の要素を組み合わせて式Ｉの化合物を形成し、例えば、化合物６０５の要素を組み合わせて、下記構造：
【化２７】
2007502776.tif 000079
を有する[２−(２−メチル−モルホリン−４−イル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル]−[４−(テトラヒドロ−ピラン−４−スルホニル)−フェニル]−アミンを形成する。
【０１１３】
アッセイ
本発明の化合物の、脱制御されたＦｌｔ３および／またはＦＧＦＲ３受容体チロシンキナーゼ活性が関連する疾患の処置における効果を、下記薬理学的試験(実施例１０から１３)の結果により説明する。これらの実施例は本発明を、その範囲をいかなる方法でも限定することなく、説明する。
【０１１４】
実施例１３
Ｆｌｔ−３：生成および活性の測定
活性を、種々の濃度の阻害剤の存在下または非存在下で、γ−３３Ｐ−ＡＴＰからの３３Ｐの適当な基質への取り込みを測定することにより、アッセイする。
【０１１５】
精製したＧＳＴ−Ｆｌｔ−３でのチロシンタンパク質キナーゼアッセイを、キナーゼ緩衝液(３０mM  Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ(ｐＨ７.５)、３mM  ＭｎＣｌ２、１５mM  ＭｇＣｌ２、１.５mM  ＤＴＴ、１５μM  Ｎａ３ＶＯ４、７.５mg／ml  ＰＥＧ、０.２５μM  ポリ−ＥＹ(Ｇｌｕ、Ｔｙｒ)、１％ＤＭＳＯ(最高濃度の化合物で)、１０μM  ＡＴＰおよびγ−３３Ｐ−ＡＴＰ(０.１μＣｉ))中に５００ｎｇの酵素を含む、最終容量４０μLで行う。２個の溶液を作る：１０nLの第一溶液は、Ｆｌｔ−３酵素および阻害剤を含む。第二溶液は、基質(ポリ−ＥＹ)、ＡＴＰ、およびγ−３３Ｐ−ＡＴＰを３０nLのキナーゼ緩衝液中に含む。両方の溶液を、予め７０％エタノールで湿らせ、１Ｍ  Ｔｒｉｓ(７.４)で濯いだ９６ウェルＰＶＤＦフィルタープレート(Millipore, Bedford, MA, USA)中で混合する。反応物を室温で２０分インキュベートし、０.１％リン酸で停止させ、次いで、真空マニホルドを使用してプレートを濾過し、基質を膜に結合させる。次いで、プレートを５回０.１％リン酸で洗浄し、Packard TopCount  ９６ウェルアダプタープレートにマウントし、５０μLのMicroscint TM(Packard)を各ウェルに添加して、その後計数する。
【０１１６】
ＩＣ５０値を、８濃度(１：３希釈、１μMから０.０００５μM)の各化合物(デュプリケート)の阻害割合の直線回帰分析により計算する。このアッセイにおいて、本発明の化合物は０.１nMから２μMの範囲のＩＣ５０を有する。
【０１１７】
一般的技術は、可能性のある阻害剤の、増殖を変異Ｆｌｔ３に依存する細胞に対する効果と、増殖を変異Ｆｌｔ３に依存しない細胞に対する効果の比較を含む。異なる活性を有する化合物(Ｆｌｔ３＋細胞系およびＦｌｔ３−細胞系で１０倍以上の感受性の差異)をさらなる試験に選択する。
【０１１８】
最初のスクリーニングに使用する細胞系は、適当なＦｌｔ３  ｃＤＮＡを発現するレトロウイルスで感染させた後に、変異または野生型(非変異)Ｆｌｔ３を過剰発現するように操作したＢａ／Ｆ３細胞のサブラインである。親細胞系である、Ｂａ／Ｆ３は、増殖をインターロイキン−３に依存し、ＩＬ−３が奪われたとき、細胞は急速に増殖を止めて、死ぬ。レトロウイルスはＦｌｔ３をレトロウイルスＬＴＲから、およびｎｅｏ遺伝子をＩＲＥＳ部位から発現する。Ｂａ／Ｆ３細胞をＧ４１８で選択し、Ｆｌｔ３の発現について、蛍光活性化細胞選別(ＦＡＣＳ)により分析する。２個の異なるＦｌｔ３変異の細胞系を使用する。一方の変異体は、エクソン１１によりコードされる膜近傍ドメイン内に１４アミノ酸二量体化を有するＦｌｔ−３であり、特異的二量体化は....ＶＤＦＲＥＹＥＹＤＬＫＷＥＦ....(命名、Ｂａ／Ｆ３−Ｆｌｔ３−ＩＴＤ)である。第二の変異体は、８３５位のアスパラギンからチロシンに変換する点変異を有する(命名Ｂａ／Ｆ３−Ｆｌｔ３−Ｄ８３５Ｙ)。両方の変異とも、Ｆｌｔ−３キナーゼ活性化に至り、ＩＬ−３非依存性となり、発現細胞はＩＬ−３非存在下で増殖する。野生型Ｆｌｔ３を発現するＢａ／Ｆ３細胞を同様に産生し、“コントロール”細胞系として使用する。親(非感染)細胞系、および野生型“コントロール”細胞系は、増殖をＩＬ−３に依存したままである。
【０１１９】
Ｂａ／Ｆ３細胞(−コントロール、−Ｆｌｔ３−ＩＴＤ、または−Ｆｌｔ３−Ｄ８３５Ｙ)を、３０mL  培養中５００,０００細胞／mLまで、培養培地として１０％ウシ胎児血清添加ＲＰＭＩ  １６４０で培養する。コントロール細胞用の(しかし変異−Ｆｌｔ３細胞用ではない)培地は、ＩＬ−３供給源としてのＷＥＨＩ−３Ｂ細胞系由来の１０％条件培地を含む。各化合物の１０mM“ストック”溶液をジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)中に産生する。次いで、希釈を１０％ウシ胎児血清添加ＲＰＭＩ  １６４０で行い、典型的に１nMから１０μMの範囲の最終薬剤濃度を作る。同様の希釈をＤＭＳＯで行い、媒体コントロールとして作用する。化合物添加４８時間後、細胞を増殖速度および細胞毒性についてアッセイする。
【０１２０】
Ｙｏ−Ｐｒｏ−１アイオダイド(Molecular Probes)を細胞に、ＮａＣｌ／Ｎａ−クエン酸緩衝液中２.５μMの最終濃度で添加する。細胞をＹｏ−Ｐｒｏと、１０分、室温でインキュベートし、次いで、細胞毒性の決定について蛍光計で読む。次に、細胞をＮＰ４０／ＥＤＴＡ／ＥＧＴＡ緩衝液で溶解し、室温で９０分インキュベートし、増殖の決定について読む。
【０１２１】
野生型コントロールＢａ／Ｆ３細胞よりもＢａ／Ｆ３−Ｆｌｔ３−ＩＴＤ細胞に選択的により毒性である化合物を、さらにＦｌｔ３−Ｄ８３５Ｙ発現細胞に対して試験する。
【０１２２】
さらに、α−Ｆｌｔ３抗体を使用して、様々な濃度の化合物に暴露する前および後にＦｌｔ３タンパク質を免疫沈降させる。免疫沈降したタンパク質をナトリウムドデシル硫酸ポリアクリルアミドゲルで分離し、電気泳動的にＰＶＤＦ膜に移し、α−ホスホ−５９１Ｙ−Ｆｌｔ３抗体で免疫ブロットする。このアッセイは、化合物が受容体の変異形の特徴であるＦｌｔ３の“自己リン酸化”レベルを低下させるかどうかを測定する。
【０１２３】
本発明の化合物は、典型的に、Ｆｌｔ３−ＩＴＤに対してナノモル濃度で抗増殖活性を示すが、コントロール−Ｆｌｔ３に対しては１０μMまで無毒性である。本発明の化合物はまた細胞Ｆｌｔ−３の自己リン酸化活性をナノモル濃度で減少させる。
【０１２４】
遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物は、価値のある薬理学的特性を、例えば、本明細書に記載のインビトロ試験で示唆されるように、示す。例えば、式Ｉの化合物は、好ましくは、上記のアッセイで、Ｆｌｔ３に対して、１×１０−１０から２×１０−６Ｍの範囲、好ましくは１００nM未満のＩＣ５０を示す。例えば、｛４−[２−(４−アミノ−シクロヘキシルアミノ)−９−チオフェン−３−イル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ]−フェニル｝−ピペリジン−１−イル−メタノンは、実施例１４のアッセイで５nMのＩＣ５０を示し、実施例１３に記載のアッセイで、７nMのＩＣ５０を示す。
【０１２５】
実施例１５
ＦＧＦＲ３：活性の測定
活性を、様々な濃度の阻害剤の存在下および非存在下、ＨＴＲＦを使用したペプチド基質のリン酸化の測定によりアッセイする。
【０１２６】
精製したＦＧＦＲ３(Upstate)でのチロシンタンパク質キナーゼアッセイを、０.２５μg／mLの酵素のキナーゼ緩衝液(３０mM  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌｐＨ７.５、１５mM  ＭｇＣｌ２、４.５mM  ＭｎＣｌ２、１５μM  Ｎａ３ＶＯ４および５０μg／mL  ＢＳＡ)、および基質(５μg／mL  ビオチン−ポリ−ＥＹ(Ｇｌｕ、Ｔｙｒ)(CIS-US, Inc.)および３μM  ＡＴＰ)を含む、最終容量１０μLで行う。２種の溶液を作る：キナーゼ緩衝液中にＦＧＦＲ３酵素を含む５μlの第一溶液を、最初に３８４型Proxiplate(登録商標)(Perkin-Elmer)に分配し、続いて５０nLのＤＭＳＯに溶解した化合物を添加し、次いでキナーゼ緩衝液中に基質(ポリ−ＥＹ)およびＡＴＰを含む５nLの第二溶液を各ウェルに添加した。反応物を室温で１時間インキュベートし、３０mM  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌｐＨ７.５、０.５Ｍ  ＫＦ、５０mM  ＥＴＤＡ、０.２mg／mL  ＢＳＡ、１５μg／mL  ストレプトアビジン−ＸＬ６６５(CIS-US, Inc.)および１５０ng／mL  クリプタート接合抗−ホスホチロシン抗体(CIS-US, Inc.)を含む１０μLのＨＴＲＦ混合物により停止させる。１時間、室温でインキュベーションし、ストレプトアビジン−ビオチン相互作用をさせた後、時間分解蛍光シグナルをAnalyst GT(Molecular Devices Corp.)で読む。
【０１２７】
ＩＣ５０値を、１２濃度(１：３希釈、１０μMから０.０５nM)の各化合物(デュプリケート)の阻害割合の直線回帰分析により計算する。このアッセイにおいて、本発明の化合物は、０.１nMから２μMの範囲のＩＣ５０を有する。
【０１２８】
実施例１６
一般的技術は、可能性のある阻害剤の、増殖を変異Ｆｌｔ３に依存する細胞に対する効果と、増殖を変異Ｆｌｔ３に依存しない細胞に対する効果の比較を含む。異なる活性を有する化合物(Ｆｌｔ３＋細胞系およびＦｌｔ３−細胞系で１０倍以上の感受性の差異)をさらなる試験に選択する。
【０１２９】
最初のスクリーニングに使用する細胞系は、ＴＥＬ−ＦＧＦＲ３  ｃＤＮＡを発現するレトロウイルスで感染させた後に、ＴＥＬ−ＦＧＦＲ３融合物を過剰発現するように操作したＢａ／Ｆ３細胞のサブラインである。親細胞系、Ｂａ／Ｆ３増殖をインターロイキン−３(ＩＬ−３)に依存し、ＩＬ−３が奪われたとき、細胞は急速に増殖を止めて、死ぬ。対照的に、ＦＧＦＲ３過剰発現Ｂａ／Ｆ３細胞において、ＴＥＬ−ＦＧＦＲ３融合物はリガンド非依存的ＦＧＦＲ３二量体化、続くＦＧＦＲ３キナーゼ活性化を導き、これにより過剰発現Ｂａ／Ｆ３細胞はＩＬ−３非存在下で増殖する。
【０１３０】
野生型Ｂａ／Ｆ３および形質転換したＢａ／Ｆ３(−ＴＥＬ−ＦＧＦＲ３)細胞を、８００,０００細胞／mLまで、、培養培地として１０％ウシ胎児血清添加ＲＰＭＩ  １６４０で培養する。コントロール細胞のための培地は、１０ng／mlの組み換えＩＬ−３(R&D Research)を含む。各化合物の１０mM“ストック”溶液をジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)中に産生する。ＤＭＳＯで希釈して、典型的に０.０５nMから１０μMの範囲の最終薬剤濃度を作る。化合物添加４８時間後、細胞を増殖速度および細胞毒性についてアッセイする。AlamarBlue(登録商標)(TREK Diagnostic Systems)を細胞に、細胞培養培地中１０％の最終濃度で添加する。細胞をAlamarBlue(登録商標)と、４時間、３７℃組織培養インキュベーター組織培養インキュベーター中で培養し、増殖の測定について蛍光リーダーで読む。
【０１３１】
さらに、様々な濃度の活性化合物に暴露した後の、過剰発現Ｂａ／Ｆ３融解物中のリン酸化ＴＥＬ−ＦＧＦＲ３タンパク質レベルを、抗−リン酸化−ＦＧＦＲ３抗体で免疫部ロッドしたウェスタンブロットで測定する。このアッセイは、化合物が受容体の変異体の特徴であるＦＧＦＲ３の“自己リン酸化”レベルを低下させるかどうかを測定する。
【０１３２】
本発明の化合物は、典型的にＴＥＬ−ＦＧＦＲ３に対してナノモル濃度で抗増殖活性を示すが、野生型Ｂａ／Ｆ３に対して、１０μMまで無毒性である。本発明の化合物はまた細胞ＴＥＬ−ＦＧＦＲ３の自己リン酸化をナノモル濃度で減少させる。
【０１３３】
実施例１７
Upstate KinaseProfilerＴＭ−放射−酵素結合アッセイ
本発明の化合物を、一群のキナーゼ類(キナーゼの部分的、非限定的リストは：ｃＳＲＣ、Ｌｃｋ、ＦＧＦＲ３、Ｆｌｔ３、ＴｒｋＢおよびＰＦＧＦＲαを含む)の個々のメンバーを阻害する能力について試験する。化合物を、最終濃度１０μMのデュプリケートで、この一般的プロトコールに従って試験する。キナーゼ緩衝液組成および基質が、“Upstate KinaseProfilerＴＭ”パネルに含まれる異なるキナーゼ類に関して変わることは注意すべきである。キナーゼ緩衝液(２.５μL、１０×−必要時ＭｎＣｌ２含有)、活性キナーゼ(０.００１−０.０１単位；２.５μL)、特異的またはポリ(Ｇｌｕ４−Ｔｙｒ)ペプチド(５−５００μMまたは.０１mg／ml)のキナーゼ緩衝液およびキナーゼ緩衝液(５０μM；５μL)を、氷上でエッペンドルフ中で混合する。Ｍｇ／ＡＴＰ混合物(１０μL；６７.５(または３３.７５)mM  ＭｇＣｌ２、４５０(または２２５)μM  ＡＴＰおよび１μＣｉ／nL  [γ−３２Ｐ]−ＡＴＰ(３０００Ｃｉ／mmol))を添加し、反応を物を約３０℃で約１０分インキュベートする。反応混合物を、２cm×２cm  Ｐ８１(ホスホセルロース、正荷電ペプチド基質について)またはWhatman No. 1(ポリ(Ｇｌｕ４−Ｔｙｒ)ペプチド基質について)紙片上にスポットする(２０μL)。アッセイ試験を４回、各５分、０.７５％リン酸で、および１回アセトンで５分洗浄する。アッセイ紙片をシンチレーションバイアルに移し、５ml  シンチレーションカクテルを添加し、ペプチド基質への３２Ｐ取り込み(cpm)をBeckmanシンチレーションカウンターで計数する。阻害パーセントを各反応について計算する。
【０１３４】
式Ｉの化合物は、１０μMの濃度で、好ましくは５０％より大きい、好ましくは６０％より大きい、さらに好ましくは７０％より大きい阻害パーセントを、ｃＳＲＣ、Ｌｃｋ、ＦＧＦＲ３、Ｆｌｔ３、ＴｒｋＢおよびＰＦＧＦＲαキナーゼ類に対して示す。例えば：
(ｉ)化合物５３９、Ｎ２−メチル−Ｎ２−(１−メチル−ピペリジン−４−イル)−Ｎ６−(４−モルホリン−４−イル−フェニル)−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミンは、下記の阻害プロフィールを示す：Ｂｍｘ(９０％)、ｃ−Ｓｒｃ(９７％)、Ｌｃｋ(９９％)、Ｆｌｔ３(１００％)、Ｒｓｋ１(８２％)およびＴｒｋＢ(９９％)；
(ii)化合物５５４(実施例１０)、Ｎ６−(４−メタンスルホニル−フェニル)−Ｎ２−ピリジン−２−イルメチル−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−２,６−ジアミン、は、下記の阻害プロフィールを示す：Ａｂｌ(９８％)、Ｂｍｘ(８６％)、ｃ−Ｓｒｃ(９９％)、Ｌｃｋ(９５％)、Ｆｌｔ３(１００％)、ＦＧＦＲ３(９８％)およびＴｒｋＢ(９９％)；および
(iii)化合物５０３、(４−メタンスルホニル−フェニル)−(２−モルホリン−４−イル−９−チアゾール−４−イル−９Ｈ−プリン−６−イル)−アミン、は、下記の阻害プロフィールを示す：Ａｂｌ(８１％)、Ｂｍｘ(７１％)、ｃ−Ｓｒｃ(９８％)、Ｌｃｋ(９９％)、Ｆｌｔ３(９９％)、ＴｒｋＢ(９９％)
【０１３５】
本明細書に記載の実施例および態様は、説明の目的のためのみであり、それに照らして種々の修飾または変化が当分野の当業者には示唆され、それは出願の精神および視野の範囲内であり、添付の特許請求の範囲内であることは、理解されるべきである。ここで引用したすべての刊行物、特許および特許出願は、すべての目的のために本明細書に引用して包含する。
【国際調査報告】
2007502776.tif 000081