(57)【要約】  本発明は、Ｂ細胞枯渇薬剤によって媒介される殺傷に対する感受性をＢ細胞に与えるリンパ系組織に没収されたＢ細胞サブセットの血管内接触を促進することによってＢ細胞枯渇を増やす方法を提供する。血管内接触を促進する一つの方法はインテグリンアンタゴニストの使用によるものである。また、この方法によってＢ細胞疾患の治療方法を提供する。
2007532681.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｂ細胞疾患を患った哺乳動物においてＢ細胞枯渇を増大させる方法において、一又は複数のＢ細胞動員剤と治療的有効量の一又は複数のＢ細胞枯渇剤を哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項２】
哺乳動物がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｂ細胞動員剤がα４インテグリンアンタゴニストである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
α４インテグリンアンタゴニストがα４β１のアンタゴニストである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
α４インテグリンアンタゴニストがα４β７のアンタゴニストである、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
α４インテグリンアンタゴニストが、抗体、又はその生物学的に活性な断片である、請求項３、４又は５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
α４インテグリンアンタゴニストが、ヒト化、ヒト、又はキメラ抗体、又はその生物学的に活性な断片である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
抗体又は抗体断片が、α４サブユニット(ＣＤ-４９ｄ)に結合する、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
α４インテグリンアンタゴニストがナタリズマブである、請求項３に記載の方法。
【請求項１０】
α４インテグリンアンタゴニストが、ハイブリドーマＡＴＣＣ ＣＲＬ-１９１１により産生される抗体ＰＳ／２、又はその生物学的に活性な断片、又はヒト化形態である、請求項３に記載の方法。
【請求項１１】
α４インテグリンアンタゴニストが小分子である、請求項３に記載の方法。
【請求項１２】
小分子アンタゴニストが次の式：
2007532681.tif 000111
[上式中、
ＺはＨ又は低級アルキルであり；
Ａは次のものであり：
2007532681.tif 000112
ここで
Ｂは、シアノアルキル、炭素環又は複素環であって、一又は複数のＲ１置換基で置換されていてもよいもの；ｑは０−３であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は独立して、水素、アルキル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ニトロ、尿素、シアノ、チオ、アルキルチオ、ヒドロキシ、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アリールオキシカルボニルアミノ、アルキルスルフィニル、スルホニル、アルキルスルホニル、アラルキルスルホニル、アリールスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、アルカノイル、アルカノイルアミノ、シクロアルカノイルアミノ、アリール、アリールアルキル、ハロゲン、又はアルキルホスホニルであり、さらにＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、ヒドロキシ、カルボキシル、低級アルコキシカルボニル、低級アルキル、ニトロ、オキソ、シアノ、カルボシクリル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、低級アルキルチオ、低級アルコキシ、低級アルキルアミノ、低級アルカノイルアミノ、低級アルキルスルフィニル、低級スルホニル、低級アルキルスルホニル、低級アルカノイル、アリール、アロイル、ヘテロシクリルカルボニル、ハロゲン及び低級アルキルホスホニルからなる群から選択される０−３の置換基で置換されており；又はＲ１ないしＲ５の２つは共同して、炭素環又は複素環を形成し；
Ｙは、Ｈ、アルコキシ、アルコキシアルコキシ、アリールオキシ、アルキルアミノアルコキシ、ジアルキルアミノアルコキシ、アルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロシクリル又はヘテロアリールアルキルであり、上述したそれぞれは置換されていても未置換であってもよく；
Ｘ１は、Ｈ、Ｃ(Ｏ)ＯＲ、Ｃ(Ｏ)ＮＲａＲｂ、Ｃ(Ｏ)Ｒ、又はＣ(Ｏ)ＳＲであり、ここでＲ、Ｒａ及びＲｂは個々に、水素、又はアルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリールであって、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシル、ニトロ、シアノ、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アリール、アロイル、アリールオキシ、アラルキル、アラルキルオキシ、アリールオキシカルボニル、アラルキルオキシカルボニル、アルキレンジオキシ、低級アルコキシカルボニル、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アルキルチオ、低級アルコキシ、低級アルキルアミノ、低級アルキルスルフィニル、低級スルホニル、低級アルキルスルホニル、低級アルカノイル、低級アルキルホスホニル、アミノスルホニル低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、アルキルスルフィニル低級アルキル、アルキルスルホニル低級アルキル、アルキルチオ低級アルキル、ヘテロアリールチオ低級アルキル、ヘテロアリールオキシ低級アルキル、ヘテロアリールアミノ低級アルキル、ハロ低級アルキル、及びアルコキシ低級アルキルからなる群から選択される０−４の置換基で置換されるものであり；ここで前記ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アリール、アロイル、アリールオキシ、アラルキル、アラルキルオキシ、アリールオキシカルボニル及びアラルキルオキシカルボニルはハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、カルボキシル、ニトロ、シアノ、アルキル及びアルコキシで置換されていてもよく；またここでＲａ及びＲｂはそれらが結合している窒素原子と共同して、０−５のＲ又はＲｄ置換基で置換されたヘテロシクリル又はヘテロアリール基を形成してよく；ここでＲｄは次の構造：
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を有するものであり；
ここでＸ'はＣ(Ｏ)ＮＲａ、Ｃ(Ｏ)又は結合からなる群から選択される二価のリンカーであり；
Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシル、ニトロ、シアノ、又は置換又は未置換のアルキル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アリール、アロイル、アリールオキシ、アルキレンジオキシ、低級アルキルカルボニルアミノ、低級アルケニルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アリールアルキルカルボニルアミノ、低級アルコキシカルボニルアミノ、低級アルキルアミノカルボニルアミノ、アリールアミノカルボニルアミノ、低級アルコキシカルボニル、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アルキルチオ、低級アルコキシ、低級アルキルアミノ、低級アルキルスルフィニル、低級スルホニル、低級アルキルスルホニル、低級アルカノイル、低級アルキルホスホニル、アミノスルホニル低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、アルキルスルフィニル低級アルキル、アルキルスルホニル低級アルキル、アルキルチオ低級アルキル、ヘテロアリールチオ低級アルキル、ヘテロアリールオキシ低級アルキル、ヘテロアリールアミノ低級アルキル、ハロ低級アルキル、アルコキシ低級アルキルであり；ここでＸ１及びＸ２又はＸ３は互いに結合して、ヘテロ環又はヘテロアリール環(類)を形成してよく；又はＸ３とＺは共同してヘテロ二環を形成し；
Ｘ１’、Ｘ２’、Ｘ３’及びＸ４’はそれぞれ独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシル、ニトロ、シアノ、又は置換又は未置換のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アリール、アロイル、アリールオキシ、アルキレンジオキシ、低級アルキルカルボニルアミノ、低級アルケニルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アリールアルキルカルボニルアミノ、低級アルコキシカルボニルアミノ、低級アルキルアミノカルボニルアミノ、アリールアミノカルボニルアミノ、低級アルコキシカルボニル、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アルキルチオ、低級アルコキシ、低級アルキルアミノ、低級アルキルスルフィニル、低級スルホニル、低級アルキルスルホニル、低級アルカノイル、低級アルキルホスホニル、アミノスルホニル低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、アルキルスルフィニル低級アルキル、アルキルスルホニル低級アルキル、アルキルチオ低級アルキル、ヘテロアリールチオ低級アルキル、ヘテロアリールオキシ低級アルキル、ヘテロアリールアミノ低級アルキル、ハロ低級アルキル、アルコキシ低級アルキルである]；
のもの、又はその製薬的に許容可能な塩を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
小分子アンタゴニストが、次の式：
2007532681.tif 000114
[上式中、Ｒ及びＲ'は、表１及び２に列挙された指定のＲ及びＲ'置換基の任意のものを含む]
の化合物を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
小分子アンタゴニストが表３に列挙された化合物の任意の一つである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
Ｂ細胞動員剤がαＬインテグリンアンタゴニストである、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
Ｂ細胞動員剤がαＬβ２インテグリンアンタゴニストである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
αＬインテグリンアンタゴニストが、抗体、又はその生物学的に活性な断片である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
抗体が、ヒト化、ヒト、又はキメラ抗体、又はその生物学的に活性な断片である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
抗体がαＬサブユニット(ＣＤ１１ａ)に結合する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
ＣＤ１１ａ結合抗体が、それぞれ配列番号４９及び５０のＶＬ及びＶＨ配列を含むか、又はエファリツマブである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
αＬインテグリンアンタゴニストが小分子である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２２】
αＬの小分子アンタゴニストが、一又は複数の：
ａ）次の式ＸＩ：
2007532681.tif 000115
[上式中、
Ｃｙは、ヒドロキシル(-ＯＨ)、メルカプト(-ＳＨ)、チオアルキル、ハロゲン(Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ)、オキソ(=Ｏ)、チオ(=Ｓ)、アミノ、アミノアルキル、アミジン(-Ｃ(ＮＨ)-ＮＨ２)、グアニジン(-ＮＨ２-Ｃ(ＮＨ)-ＮＨ２)、ニトロ、アルキル、アルコキシ又はアシルで置換されていてもよい、非芳香族の炭素環又は複素環であり；
Ｘは、ヒドロキシル、メルカプト、ハロゲン、アミノ、アミノアルキル、ニトロ、オキソ又はチオで置換されていてもよく、Ｎ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ又はＳＯ２が挿入されていてもよい二価の炭化水素鎖であり；
Ｙは、ヒドロキシル、メルカプト、ハロゲン、オキソ、チオ、炭化水素、ハロ置換炭化水素、アミノ、アミジン、グアニジン、シアノ、ニトロ、アルコキシ又はアシルで置換されていてもよい炭素環又は複素環であり；
Ｌは、原子手、又はＮ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ又はＳＯ２で置き換えられた一又は複数の炭素原子を有していてもよく、ヒドロキシル、ハロゲン、オキソ又はチオで置換されていてもよい二価の炭化水素であり；又は炭化水素の３つの炭素原子がアミノ酸残基で置き換えられており；
Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、アミノ、Ｏ-炭素環又アルコキシで、アミノ、炭素環又は複素環で置換されていてもよいものであり；
Ｒ２−５は独立して、Ｈ、ヒドロキシル、メルカプト、ハロゲン、シアノ、アミノ、アミジン、グアニジン、ニトロ又はアルコキシであり；又はＲ３及びＲ４は共同して、ヒドロキシル、ハロゲン、オキソ、チオ、アミノ、アミジン、グアニジン又はアルコキシで置換されていてもよい縮合炭素環又は複素環を形成し；
Ｒ６は、炭素環又は複素環で置換されていてもよい炭化水素鎖、又はＨである]
の化合物、又はその塩、溶媒和物及び水和物で、但し、Ｙがフェニルであり、Ｒ２、Ｒ４及びＲ５がＨであり、Ｒ３がＣｌであり、Ｒ１がＯＨである場合、Ｘはシクロヘキシル以外であるもの；又その製薬的に許容可能な塩を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
αＬの小分子アンタゴニストが表４に列挙された化合物の任意の一つを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
α４インテグリンアンタゴニストが、ＶＣＡＭ-１(ＣＤ１０６)に結合する抗体である、請求項３に記載の方法。
【請求項２５】
αＬインテグリンアンタゴニストが、ＩＣＡＭ-１(ＣＤ５４)に結合する抗体である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２６】
アンタゴニストが、ヒトＩｇＧのヒンジ及びＦｃに融合するＶＣＡＭ-１(ＣＤ１０６)のリガンド結合部位を含むイムノアドヘシンである、請求項３に記載の方法。
【請求項２７】
アンタゴニストが、ヒトＩｇＧのヒンジ及びＦｃに融合するＩＣＡＭ-１(ＣＤ５４)のリガンド結合部位を含むイムノアドヘシンである、請求項１５に記載の方法。
【請求項２８】
２つのＢ細胞動員剤を含み、第１の動員剤がαＬインテグリンアンタゴニストであり、第２の動員剤がα４インテグリンアンタゴニストである、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
α４インテグリンがα４β１又はα４β７であり、αＬがαＬβ２である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
αＬインテグリンアンタゴニスト及びα４インテグリンアンタゴニストが、双方とも抗体である、請求項２８又は２９に記載の方法。
【請求項３１】
α４インテグリンアンタゴニストが、ナタリズマブ、又はその生物学的に活性な断片、又はそのヒト化である、請求項２８又は２９に記載の方法。
【請求項３２】
αＬインテグリンアンタゴニストが、抗体エファリツマブ、又はその生物学的に活性な断片、又はそのヒト化である、請求項２８又は２９に記載の方法。
【請求項３３】
αＬインテグリンアンタゴニスト及びα４インテグリンアンタゴニストが、双方とも小分子である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３４】
Ｂ細胞枯渇剤がＢ細胞表面マーカーのアンタゴニストである、請求項１ないし３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
Ｂ細胞表面マーカーがＣＤ２０、ＣＤ２２又はＣＤ５２である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
Ｂ細胞表面マーカーがＣＤ２０である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
Ｂ細胞枯渇剤がＣＤ２０に結合する抗体である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
抗体がリツキシマブである、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
ＣＤ２０に結合する抗体がヒト化抗体である、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
ヒト化抗体が、ヒト化２Ｈ７.ｖ１６、ｖ３１、ｖ１１４、ｖ１３８、ｖ４７７、ｖ５８８、ｖ５１、及びそれぞれ可変軽鎖及び可変重鎖として配列番号２９及び配列番号３０のアミノ酸配列を含む抗体の群から選択される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
抗体がヒト又はキメラ抗体である、請求項３７に記載の方法。
【請求項４２】
Ｂ細胞動員剤及びＢ細胞枯渇剤が、同時に又は逐次に投与される、請求項１ないし４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
第１及び第２のＢ細胞動員剤が同時に投与される、請求項２３ないし２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
一又は複数のＢ細胞動員剤を、Ｂ細胞疾患を患った患者に投与することを含む、ＣＤ２０結合抗体によるＢ細胞枯渇の効率を高める方法。
【請求項４５】
ＣＤ２０結合抗体がリツキシマブである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
ＣＤ２０結合抗体が、ヒト化２Ｈ７.ｖ１６、ｖ３１、ｖ１１４、ｖ１３８、ｖ４７７、ｖ５８８、ｖ５１、及びそれぞれ可変軽鎖及び可変重鎖として配列番号２９及び配列番号３０のアミノ酸配列を含む抗体からなる群から選択される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
Ｂ細胞動員剤がαＬインテグリンアンタゴニストである、請求項４５又は４６に記載の方法。
【請求項４８】
αＬインテグリンアンタゴニストが、エファリツマブ、又はそれぞれ配列番号４９及び５０のＶＬ及びＶＨ配列を含むＣＤ１１ａ結合抗体である、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
２又はそれ以上のＢ細胞動員剤を含み、第１の動員剤がαＬインテグリンアンタゴニストであり、第２の動員剤がα４インテグリンアンタゴニストである、請求項４４ないし４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５０】
α４インテグリンアンタゴニストが、α４β１又はα４β７に結合する抗体である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
αＬインテグリンアンタゴニストが、エファリツマブ、又はそれぞれ配列番号４９及び５０のＶＬ及びＶＨ配列を含むＣＤ１１ａ結合抗体である、請求項４９又は５０に記載の方法。
【請求項５２】
αＬインテグリンアンタゴニスト及びα４インテグリンアンタゴニストが相乗的に作用し、Ｂ細胞枯渇を亢進する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５３】
治療的有効量のＣＤ２０結合抗体、及び少なくとも一のＢ細胞動員剤を、新生物又は悪性腫瘍を患っている患者に投与することを含む、ＣＤ２０が過剰発現したＢ細胞により特徴付けられるＢ細胞新生物又は悪性腫瘍の処置方法。
【請求項５４】
ＣＤ２０結合抗体がリツキシマブである、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
ＣＤ２０結合抗体が、ヒト化２Ｈ７.ｖ１６、ｖ３１、ｖ１１４、ｖ１３８、ｖ４７７、ｖ５８８、ｖ５１、及びそれぞれ可変軽鎖及び可変重鎖として配列番号２９及び配列番号３０のアミノ酸配列を含む抗体からなる群から選択される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】
Ｂ細胞動員剤がαＬインテグリンアンタゴニストである、請求項５３ないし５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
αＬインテグリンアンタゴニストが、エファリツマブ、又はそれぞれ配列番号４９及び５０のＶＬ及びＶＨ配列を含むＣＤ１１ａ結合抗体である、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
α４インテグリンアンタゴニストが、α４β１に結合する抗体又は小分子である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
Ｂ細胞新生物が、非-ホジキンリンパ腫(ＮＨＬ)、小リンパ球性(ＳＬ)ＮＨＬ、リンパ球優位型ホジキン病(ＬＰＨＤ)、濾胞中心細胞(ＦＣＣ)リンパ腫、急性リンパ球性白血病(ＡＬＬ)、慢性リンパ球性白血病(ＣＬＬ)、及び有毛細胞白血病からなる群から選択される、請求項５６に記載の方法。
【請求項６０】
治療的有効量のＣＤ２０結合抗体、及び少なくとも一のＢ細胞動員剤を、自己免疫疾患を患っている患者に投与することを含む、Ｂ細胞調節性自己免疫疾患を軽減する方法。
【請求項６１】
ＣＤ２０結合抗体がリツキシマブである、請求項５９に記載の方法。
【請求項６２】
ＣＤ２０結合抗体が、配列番号３１の軽鎖可変ドメイン配列、及び配列番号３２の重鎖可変ドメイン配列を含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
Ｂ細胞動員剤がαＬインテグリンアンタゴニストである、請求項６０ないし６２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６４】
αＬインテグリンアンタゴニストが、エファリツマブ、又はそれぞれ配列番号４９及び５０のＶＬ及びＶＨ配列を含むＣＤ１１ａ結合抗体である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
Ｂ細胞動員剤が、α４β１に結合する抗体又は小分子である、請求項６０ないし６２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６６】
自己免疫疾患が、関節リウマチ及び若年性関節リウマチ、ループス腎炎を含む全身性エリテマトーデス(ＳＬＥ)、ウェジナー病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、特発性血小板減少性紫斑病(ＩＴＰ)、血栓性血小板減少性紫斑病(ＴＴＰ)、自己免疫性血小板減少症、多発性硬化症、乾癬、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発ニューロパシー、重症筋無力症、ＡＮＣＡ随伴血管炎、真性糖尿病、レイノー症候群、Sjorgen症候群、視神経脊髄炎(ＮＭＯ)、及び糸球体腎炎からなる群から選択される、請求項６０ないし６２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６７】
自己免疫疾患が多発性硬化症である、請求項６４に記載の方法。
【請求項６８】
Ｂ細胞新生物又はＢ細胞調節性自己免疫疾患を患っている患者の脾臓における辺縁帯Ｂ細胞を除去する方法であって、治療的有効量のＣＤ２０結合抗体、及び少なくとも一のＢ細胞動員剤を患者に投与することを含む方法。
【請求項６９】
αＬインテグリンに結合する抗体、及びα４インテグリンに結合する抗体を含有する組成物。
【請求項７０】
α４インテグリンに結合する抗体が、エファリツマブ、又はそれぞれ配列番号４９及び５０のＶＬ及びＶＨ配列を含むＣＤ１１ａ結合抗体である、請求項６９に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
（関連出願）
本出願の特許請求の範囲は、米国特許法１１９条(ｅ)(１)により２００４年４月１６日提出の米国特許出願第６０／５６３，２６３号の優先権を主張するものであり、出典明記により本明細書中にその開示内容が組み込まれる。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、Ｂ細胞殺傷方法に関する。
【０００３】
（発明の背景）
リンパ球は外来の抗原を特異的に認識して、反応する、様々な白血球細胞の一つの集団である。リンパ球の３つの主な分類は、Ｂリンパ球（Ｂ細胞）、Ｔリンパ球（Ｔ細胞）、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。Ｂリンパ球は抗体産生を担い、体液性免疫を供給する細胞である。Ｂ細胞は骨髄内で成熟して、その細胞表面上に抗原結合抗体を発現する。Ｂ細胞がその膜結合性抗体に特異的な抗原と初めて遭遇すると、細胞は速やかに分離し、その子孫はメモリーＢ細胞と「プラズマ細胞」と呼ばれるエフェクター細胞に分化する。メモリーＢ細胞は長い寿命を持ち、本来の親細胞と同じ特異性を有する膜結合性抗体を発現し続ける。プラズマ細胞は、膜結合性抗体を発現する代わりに、分泌型抗体を産生する。分泌された抗体は、体液性免疫の主要なエフェクター分子である。
抗原を含んだ細胞を枯渇させるために受動的に注入された抗体の能力に依存するＢ細胞標的に対する抗体治療法は、Ｂ細胞疾患を治療するために開発された。例えば、ＣＤ２０、ＣＤ２２及びＣＤ５２表面分子を標的とする抗体(Treon 等, 2000, Seminars in Oncology 27(6 suppl 12): 79-85; Juweid, 2003, Current Opinion in Molecular Therapeutics 5(2): 192-198; Cersosimo, 2003, Monoclonal antibodies in the treatment of cancer, Part I, American Journal of Health-System Pharmacy 60(15): 1531-1548; part II in 60(16) 1631-1641)が開発された。
【０００４】
ＣＤ２０抗原（ヒトＢリンパ球制限分化抗原、Ｂｐ３５とも呼ばれる）は正常及び悪性のＢ細胞にのみ発現されるおよそ３５ｋＤの分子量の膜貫通型リン酸タンパク質である。その発現は後期プレＢ細胞出現するＢ細胞の発達中に制御され、未成熟Ｂ及び成熟Ｂリンパ球上に存在する（Valentineら, J. Biol. Chem. 264(19):11282-11287 (1989)；及びEinfeldら, EMBO J. 7(3):711-717 (1988)）。該抗原はまたＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の９０％以上に発現されるが（Andersonら, Blood 63(6):1424-1433 (1984)）、造血幹細胞、プロＢ細胞、正常なプラズマ細胞又は他の正常な組織上には見出されない（Tedderら, J. Immunol. 135(2):973-979 (1985)）。ＣＤ２０は分化及び細胞周期の開始の活性化過程における初期段階を調節し（上掲のTedderら）、おそらくはカルシウムイオンチャネルとして機能する（Tedderら, J. Cell. Biochem. 14D:195 (1990)）。
インテグリンは、細胞-細胞及び細胞-細胞外基質相互作用を媒介しうるヘテロ二量体、膜貫通、細胞接着受容体のファミリーである(Humphries, 等, 1990, TIBS 28:313-320)。インテグリンは、互いにに非共有的に結合するα及びβサブユニットとして知られる２つの無関係なＩ型膜糖タンパク質を含んでなる(Humphries, 上掲)。すべてのα及びβサブユニットは、サブユニットにつき大きな細胞外ドメイン（７００〜１１００残基）、１つの膜貫通ヘリックス及び小さい細胞質ドメイン（３０〜５０残基）を有する(Humphries, 2000, 上掲)。
【０００５】
哺乳動物は、少なくとも２５の異なるレセプターを形成するために集合する少なくとも１９のαサブユニットと８つのβサブユニットを有する(Humphries, 2000, Biochem. Soc. Trans. 28:311-339)。αサブユニットには、αＥ、α１-１１、αＶ、αＩＩＢ、αＬ、αＭ、αＸ及びαＤなどがある (Arnaout 等, 2002, Immunological Reviews 186:125-140)。βサブユニットはβ１−８を含む (Arnaout, 上掲)。インテグリンサブユニットは、異なる組合せと、異なる細胞種類で発現される。α１、α２、αＥ、αＬ、α、αＸ、αＤ及びβ２は、ドメインがインテグリン内に挿入されているから又はフォンビルブラント因子のＡモチーフに相同性を有するので「Ｉドメイン」又は「Ａドメイン」と称される遠位性Ｎ末端細胞外ドメインを共有する(Harris 等, 2000, JBC 275:23409-23412)。Ｉドメインはおよそ２００残基であり、リガンド結合に重要なことが報告された(Harris, 上掲)。
ＣＤ４９ｄ又はＶＬＡ−４のαサブユニットとしても知られるα４は、β１（ＣＤ２９）及びβ７  と作用することが示唆されている(Arnaout, 上掲；Barclay 等, Eds., 1997, The Leukocyte Antigen Facts Book, 2nd Ed, p.262-263)。（また、"the Integrin Page," located at http://integrins. hypermart.net.に開示されるサブユニットと引例も参照のこと）また、α４β１インテグリンは後期抗体-４インテグリン（ＶＬＡ-４）としても知られる(Mousa, 2002, Cur. Opin. Chem. Biol. 6:534-541)。好中球及び血小板を除いて、ＶＬＡ-４インテグリンはほとんどの白血球に発現される(Barclay, 上掲)。それは、リガンドＶＣＡＭ-１、フィブロネクチン、トロンボスポンジン、コラーゲン及びインベーシンと結合する(Plow 等, 2000, JBC 275:21785-21788)。また、α４β７はリンパ球パイエル板接着分子-１（ＬＰＡＭ-１）としても知られている。α４β７は、ほとんどのリンパ節Ｔ及びＢ細胞、ＮＫ細胞及び好酸球に発現し(Barclay, 上掲)、血管細胞接着分子-１（ＶＣＡＭ-１）、粘膜性アドレシン細胞接着分子-１（ＭＡｄＣＡＭ-１）及びフィブロネクチンと結合する(Plow, 上掲)。
【０００６】
ＣＤ１１ａ又はインテグリン白血球機能関連抗原-１（ＬＦＡ-１）のαサブユニットとしても知られるαＬは、β２（ＣＤ１８）に作用してＬＦＡ-１を形成することが知られている(Arnaout, 上掲；Barclay, 上掲, p.156-157)。（また、上掲の"the Integrin Page"とそこに挙げられる文献を参照）、α４と異なり、αＬは「Ｉドメイン」を含有する(Harris, 上掲)。αＬβ２（ＬＦＡ-１）インテグリンは、ヒトのすべての白血球に発現される。それは、少なくとも５つのリガンド、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ-１）、ＣＤ１０２（ＩＣＡＭ-２）、ＣＤ５０（ＩＣＡＭ-３）、ＩＣＡＭ-４及びＩＣＡＭ-５と結合する(Plow, 上掲)。
また、ＩＮＣＡＭ-１１０又はＣＤ１０６とも称されるＶＣＡＭ-１は脈管内皮に主に発現されるが、濾胞及び濾胞間樹状細胞、いくつかのマクロファージ、骨髄間質細胞及び関節、腎臓、筋肉、心臓、胎盤及び脳内の非脈管性細胞集団にも同定された(The Leukocyte Antigen Facts Book, 2nd edition, 編集, Barclay 等 Academic Press, Harcourt Brace & Company, San Diego, CA, 1977)。
【０００７】
様々な疾患、例として多様な炎症及び自己免疫性疾患を治療する際に種々の抗インテグリンを治療的に用いて、インテグリンの白血球輸送における活性を調べた(Mousa, 上掲；Yusuf-Makagiansar 等, 2002, Medicinal Research Reviews 22:146-167; Vincenti, 2002, American Journal of Transplantation 2:898-903)。近年、αＬβ２（ＬＦＡ-１）及びα４β１（ＶＬＡ-４）がマウスの周辺帯（ＭＺ）内のＢ細胞保持に実質的かつ重大に寄与することが報告された(Lu 等, 2002, Science 297:409-412)。LuはＭＺ Ｂ細胞がαＬβ２（ＬＦＡ-１）及びα４β１（ＶＬＡ-４）のレベルが高く、それらはＭＺにおいて発現されるリガンドＩＣＡＭ-１（ＣＤ５４）及びＶＣＡＭ-１（ＣＤ１０６）と結合することを報告した。ＭＺはＩｇＭ＋メモリー細胞内に豊富であり、自己抗原及び細菌性抗原と反応する細胞である。抗α４及び抗αＬブロック抗体で処置されるマウスは、脾臓及び血液から周辺帯Ｂ細胞が失われたことが報告された(Lu, 上掲, p.410-411)。インテグリン機能の阻害による脾臓内の癒着性ＬＴα１β２媒介性隙間(niche)からのＢ細胞の解離は、自己反応の区画又は悪性の細胞を取り除く一手段でありうることが考察された(Lu, 上掲, p.412)。脾臓の区画からＢ細胞を取り除く臨床的意味は不明である；これらの細胞は、一区画から動いて他の区画へ移動するだけでありうる。Ｂ細胞悪性腫瘍では、これらの病原性Ｂ細胞を実際に除去すると、転移を引き起こすか増やしこととなり、疾患を悪化させる可能性がある。
【０００８】
リツキシマブ（リツキサンＴＭ、Genentech, Inc, South San Francisco, CA and Biogen-IDEC, Cambridge, MA; MabtheraR, F.Hoffman-LaRoche, Ltd., Basel, Switzerland）はＣＤ２０分子に対するキメラのモノクローナル抗体である。現在、リツキシマブは、再発又は抵抗性のローグレード(low-grade)又は濾胞性、ＣＤ２０陽性、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫患者の治療に用いられる。リツキシマブで治療される患者の中には、少量の残余Ｂ細胞が血液中にあるものがあることが観察された。抗ＣＤ２０治療によるＢ細胞枯渇のメカニズムは完全に明らかではない。例えば、リツキサンがＢ細胞のアポトーシスを誘発する、または、Ｂ細胞が脾臓に入るＮＫ細胞により殺傷されることが考察された。通常、ＣＤ２０を発現するすべてのＢ細胞が抗ＣＤ２０抗体による殺傷に対して等しく感受性があると思われる。
現在の治療がすべてのＢ細胞を枯渇させるというわけではないので、Ｂ細胞に媒介される疾患を治療するための改良された治療法を開発することが有用である。以下に詳細に記述されるように、本発明はこれらの問題を解決し、他の利点を提供するものである。
【０００９】
（発明の要約）
本発明は、本明細書中の抗ｈＣＤ２０抗体によりＢ細胞が取り除かれるインビボメカニズムの同定ある程度基づく。驚くべきことに、細胞表面上に十分なレベルのＣＤ２０が発現され、抗ＣＤ２０抗体の投与により飽和されたことが確認された場合であっても、組織及び器官、特に脾臓の周辺帯（ＭＺ）の特定のＢリンパ球が抗ヒトＣＤ２０抗体による殺傷に耐性があるということを発見した。面白いことに、組織内の脈管系内からＢ細胞の放出を促進すること及び／又は循環内での滞留を延長させることにより、抗ＣＤ２０抗体による殺害に対するＢ細胞の感受性が生じた。この所見からみて、これらの隔絶されたＢ細胞の血管内接触を向上させる１の方法は、リンパ系組織内の特定の領域にこれらＢ細胞をつなぎ止めるインテグリンのアンタゴニストにより循環内にそれらを流動させることである。
本発明は、Ｂ細胞疾患に罹患している哺乳動物のＢ細胞枯渇を増大させる方法であり、αＬインテグリンアンタゴニスト及び／又はα４インテグリンアンタゴニストなどの一又は複数のＢ細胞流動化薬剤と、抗ＣＤ２０抗体などの治療的有効量の一又は複数のＢ細胞枯渇薬剤が、哺乳動物に投与されることを含む方法を提供する。Ｂ細胞枯渇は、α４及びαＬインテグリンアンタゴニストとＢ細胞枯渇薬剤との組合せが投与されることによって増大されうる。好適な実施態様では、哺乳動物又は患者はヒトである。
また、本発明は、ＣＤ２０結合抗体などの枯渇薬剤によってＢ細胞枯渇の効率を上げる方法であり、少なくとも一のＢ細胞流動化薬剤がＢ細胞疾患に罹患している患者に投与されることを含む方法を提供する。αＬインテグリンアンタゴニスト及びα４インテグリンアンタゴニストは、Ｂ細胞枯渇を上げるために相乗的に作用する。
【００１０】
更に、本発明は、ＣＤ２０などの特異的なマーカーを発現するＢ細胞に特徴があるＢ細胞新生物又は悪性腫瘍の治療方法であり、新生物又は悪性腫瘍に罹患している患者に、ＣＤ２０結合抗体などの治療的有効量の特異的なマーカーを結合する抗体と、αＬインテグリンアンタゴニスト及び／又はα４インテグリンアンタゴニストなどの少なくとも一つのＢ細胞流動化薬剤が投与されることを含む方法を提供する。一実施態様では、Ｂ細胞新生物は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球（ＳＬ）ＮＨＬ、リンパ球優性ホジキン病（ＬＰＨＤ）、濾胞性中心細胞（ＦＣＣ）リンパ腫、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）及びヘアリー細胞白血病からなる群から選択される。一実施態様では、これらの癌を治療するために、抗体が静脈内注入により投与される。投与される用量は、用量当たりおよそ１００ｍｇ／ｍ２からおよそ３７５ｍｇ／ｍ２の範囲である。
本発明の更に別の態様は、Ｂ細胞制御性自己免疫性疾患を緩和する方法であり、自己免疫性疾患患者に、ＣＤ２０結合抗体などの治療的有効量のＢ細胞枯渇薬剤と、αＬインテグリンアンタゴニスト及び／又はα４インテグリンアンタゴニストなどの少なくとも一のＢ細胞流動化薬剤が投与されることを含む方法である。特定の実施態様では、自己免疫性疾患は、関節リウマチ及び若年性慢性関節リウマチ、ループス腎炎を含む全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ヴェゲナー病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、血栓症血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、自己免疫血小板減少、多発性硬化症、乾癬、ＩｇＡネフロパシ、ＩｇＭ多発性神経炎、重症筋無力症、ＡＮＣＡ関連する脈管炎、真正糖尿病、レイノー症候群、シェーグレン症候群、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）及び糸球体腎炎からなる群から選択される。好ましい実施態様では、ＣＤ２０結合抗体は静脈内又は皮下に投与される。好ましい実施態様では、抗体は一用量当たり１０ｍｇ〜５００ｍｇの範囲の用量、特定の実施態様では１００ｍｇ／用量の用量で静脈内に投与される。
【００１１】
加えて、本発明は、Ｂ細胞新生物やＢ細胞制御性自己免疫性疾患に罹患している患者の脾臓及び／又はリンパ系組織の胚中心の周辺帯Ｂ細胞のＢ細胞を枯渇する方法であり、患者に、ＣＤ２０結合抗体などの治療的有効量の枯渇薬剤と、αＬインテグリンアンタゴニスト及び／又はα４インテグリンアンタゴニストなどの少なくとも一つのＢ細胞流動化薬剤が投与されることを含む方法を提供する。
本発明の何れかの方法では、Ｂ細胞流動化薬剤は、αＬインテグリンアンタゴニスト又はα４インテグリンアンタゴニスト、又はこれらの組合せでもよい。一実施態様では、α４インテグリンアンタゴニストはα４β１のアンタゴニストである。代替的実施形態では、アンタゴニストはα４β７のアンタゴニストである。さらに他の実施態様では、アンタゴニストはαＬβ２のアンタゴニストである。
本発明の何れかの方法の異なる実施態様では、αＬ又はα４インテグリンアンタゴニストは、インテグリンあるいはインテグリンのαないしはβサブユニットに結合する抗体、又はインテグリンのリガンドでもよい。ゆえに、ＩＣＡＭ-１（ＣＤ-５４）又はＶＣＡＭ-１（ＣＤ-１０６）を結合する抗体が包含される。同様に、結合してα４又はαＬインテグリンの生物学的活性をブロックする完全長抗体と実質的に同じ木野を有する生物学的に活性な抗体の断片、例えば抗ＣＤ１８Ｆａｂ'２断片Ｈ５２ (Genentech, South San Francisco, CA)）が包含される。流動化薬剤がαＬアンタゴニストである場合、一実施態様では、αＬインテグリンアンタゴニスト抗体はαＬサブユニットを結合する抗体、ＣＤ１１ａ、好ましくは抗体エファリズマブ(efalizumab)(RaptivaTM, Genentech, Inc.)、又はそれぞれ配列番号４９及び５０に記載のＶＬ及びＶＨ配列を含んでなるＣＤ１１ａ結合抗体であって、エファリズマブ又はこれらの抗体の生物学上活性な断片である。流動化薬剤がα４インテグリンアンタゴニストである場合、一実施態様では、アンタゴニストは抗体ナタリズマブ(natalizumab)(TysabriTM, Biogen-IDEC)、又は生物学上活性な抗体の断片（α４サブユニットを結合するもの）である。好ましい実施態様では、抗体は、ヒト化抗体、ヒト抗体、キメラ抗体又はこれらの断片である。
【００１２】
他の実施態様では、αＬ又はα４インテグリンアンタゴニストは小分子である。このようなインテグリンアンタゴニスト小分子が多数知られている。式XIを有する化合物及び特に表４の化合物の何れか一又は複数が、αＬインテグリンアンタゴニスト小分子の実施態様である。式I、II又はIIIを有する化合物の何れか一又は複数、式X及び表１と２に示される置換基の何れかを有する化合物の何れか、及び特に表３の化合物の何れかは、α４インテグリンアンタゴニスト小分子の実施態様である。
更なる実施態様では、αＬ又はα４インテグリンアンタゴニストは、それぞれのリガンドの可溶性の、インテグリン-結合部又は細胞外ドメインを含んでなるイムノアドヘシンでありうる。一実施態様では、イムノアドヘシンは、可溶性の、ヒトＩｇＧ１のヒンジ及びＦｃに融合されたＩＣＡＭ-１（ＣＤ-５４）のαＬリガンド-結合部分である。異なる実施態様では、イムノアドヘシンは、可溶性の、ヒトＩｇＧ１のヒンジ及びＦｃに融合されたＶＣＡＭ-１（ＣＤ-１０６）のα４リガンド-結合部分である。
本発明の何れかの方法では、Ｂ細胞枯渇薬剤は、Ｂ細胞表面マーカー、例えばＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ５４などのアンタゴニストである。好ましい実施態様では、Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ２０である。他の実施態様では、Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ２２である。一実施態様では、Ｂ細胞枯渇薬剤は、ＣＤ２０、好ましくはヒトのＣＤ２０（ｈＣＤ２０）などのＢ細胞表面マーカーを結合する抗体又は抗体断片である。このような抗ＣＤ２０抗体は多く知られており、本明細書中に開示したヒト抗ＣＤ２０抗体、キメラ抗ＣＤ２０抗体、ヒト化抗ＣＤ２０抗体などがある。好ましい実施態様では、抗ｈＣＤ２０抗体はリツキシマブ（リツキサンＴＭ）；それぞれ配列番号２９及び配列番号３０に記載のＶＬ及びＶＨ配列を含んでなるヒト化抗体；本願明細書において提供される配列を含んでなるヒト化抗体２Ｈ７  ｖ３１、ｖ１１４、ｖ１３８、ｖ４７７、ｖ５８８又はｖ５１１、又は生物学上活性な抗体断片、又はそのフコース欠陥変異形である。
【００１３】
一実施態様では、ヒト化２Ｈ７.ｖ５１１は、２０ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ５．８の１０ｍＭ硫酸ヒスチジン、６０ｍｇ／ｍｌスクロース、０．２ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０を含んでなる液体製剤中で提供される。
本発明の何れかの方法では、Ｂ細胞流動化薬剤として抗体、小分子及び／又はイムノアドヘシンの何れかの組合せ、及び／又はＢ細胞枯渇薬剤の何れかの組合せが投与されうる。例えば、Ｂ細胞枯渇薬剤はＣＤ２０を結合する抗体であり、Ｂ細胞流動化薬剤はα４及び／又はαＬインテグリンの一つ以上の小分子アンタゴニストでありうる。
本発明の何れかの方法では、Ｂ細胞流動化剤又は薬剤とＢ細胞枯渇薬剤は、同時に、連続して、又は何れかの順序で同時と連続の間に投与されうる。二以上の流動化薬剤、例えばα４インテグリンアンタゴニストと組み合わせたαＬインテグリンアンタゴニストが用いられる場合、２つの薬剤は、同時に、連続して、又は何れかの順序で同時と連続の間に投与されうる。一実施態様では、第一にＢ細胞を枯渇するために、抗ＣＤ２０抗体が投与され、その後、脾臓、リンパ節、胚中心、腹腔などの臓器に残っているＢ細胞を流動化するために、αＬインテグリンアンタゴニスト又はαＬインテグリンアンタゴニストとα４インテグリンアンタゴニストの組合せが投与され、更に、残りの流動化したＢ細胞を枯渇するために、抗ＣＤ２０結合抗体で繰り返し処置される。
更なる実施態様では、本発明は、２以上の流動化薬剤薬剤、例えばαＬインテグリンアンタゴニストとα４インテグリンアンタゴニストの組合せを含有する組成物を含む。更に、本発明の組成物は、一つ以上のＢ細胞流動化薬剤薬剤と一つ以上のＢ細胞枯渇薬剤を組み合わせて含む。具体的には、αＬインテグリンアンタゴニスト、α４アンタゴニスト、及び抗ＣＤ２０抗体を含有する組成物である。
【００１４】
（実施態様の詳細な説明）
Ａ．定義
本願明細書中で用いられる用語は以下の定義を有するものである：
本願明細書中で用いられるインテグリンの「アンタゴニスト」又は「インヒビター」なる用語は、リガンド、例えばＶＣＡＭ-１、ＭＡｄＣＡＭ-１、ＩＣＡＭ1-５などに対する、インテグリン、例えばα４β１、α１β７又はαＬβ２インテグリンの結合を減弱するか又は予防するか、ないしは脾臓の胚中心及び／又は周辺帯を含むリンパ系組織のＢ細胞の保持を減弱するか又は予防する化合物を意味する。「有効量」とは、少なくとも部分的に結合を阻害するために十分な量であり、抑制的な量であってもよい。
「抗体」なる用語は広義な意味で用いられ、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、多特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、及び所望の生物学的活性ないしは機能を示す抗体断片を具体的に包含する。本発明のポリペプチドを含む抗体は、キメラ、ヒト化又はヒトのものでありうる。本発明のポリペプチドを含む抗体は抗体断片でありうる。そのような抗体及びそれらを生成する方法は以下に詳細に記載する。あるいは、本発明の抗体は本発明のポリペプチドで動物を免疫化して生成することができる。ゆえに、本発明のポリペプチドに直接関係する抗体を包含する。
【００１５】
「抗体断片」には、全長の抗体の一部、一般的にその抗体の抗原結合又は可変領域が含まれる。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ(ａｂ')２及びＦｖ断片；ダイアボディー(diabodies)；直鎖状抗体；単鎖抗体分子；及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が含まれる。「機能的断片」とは、完全長抗体の抗原への結合を実質的に保持し、生物学的活性を有する。
「ＣＤ２０結合抗体」および「抗ＣＤ２０抗体」はここで交換可能に用いられ、抗体が抗原を発現する細胞を標的とした治療薬剤として有効な程度に親和性を持ってＣＤ２０を結合するすべての抗体を包含し、以下に記載のアッセイのネガティブ対照タンパク質などの他のタンパク質と顕著な交差反応を示さない。また、抗体の一アームがＣＤ２０を結合する二重特異性抗体を包含する。このＣＤ２０結合抗体の定義によって前述の抗体の機能的断片（フラグメント）も包含する。ＣＤ２０結合抗体は、例えば１０ｎＭより小さいＫｄでＣＤ２０を結合するであろう。好ましい実施態様では、該結合は７．５ｎＭより小さい、より好ましくは５ｎＭより小さい、さらにより好ましくは１−５ｎＭの間、最も好ましくは１ｎＭより小さいＫｄである。
特定の実施態様では、抗ＣＤ２０抗体はヒトおよび霊長類のＣＤ２０を結合する。特定の実施態様では、ＣＤ２０を結合する抗体はヒト化またはキメラである。ＣＤ２０結合抗体には、リツキシマブ（リツキサン（登録商標））、ｍ２Ｈ７（マウス２Ｈ７）、ｈｕ２Ｈ７（ヒト化２Ｈ７）、限定するものではないが、およびそのすべての機能的変異体、ｈｕ２Ｈ７.ｖ１６(ｖはバージョンを表す)、ｖ３１、ｖ１１４、ｖ１３８、ｖ４７７、ｖ５８８、又はｖ５１１ないしはそれらの生物学的に活性な断片、並びにＡＤＣＣ機能を改善したフコース欠損変異型が含まれる。いくつかのｈｕ２Ｈ７変異型抗体の配列を、Ｎ末端配列の成熟ポリペプチドでは取り除かれるリーダー配列に下線を付けて以下に示す：
【００１６】
ＣＤ２０抗体に関する特許および特許文献には、米国特許第5,776,456号、同第5,736,137号、同第6,399,061号、および同第5,843,439号、並びに米国特許出願公開 US 2002/0197255Al及びUS 2003/0021781A1(Anderson 等)；米国特許第6,455,043B1および国際公報00/09160(Grillo-Lopez, A.)；国際公報00/27428(Grillo-LopezおよびWhite)；国際公報00/27433 (Grillo-LopezおよびLeonard)；国際公報00/44788 (Braslawsky 等)；国際公報01/10462 (Rastetter, W.)；WO01/10461 (RastetterおよびWhite)；国際公報01/10460 (WhiteおよびGrillo-Lopez)；米国出願公開 US2002/0006404および国際公報02/04021 (HannaおよびHariharan)；米国出願公開 US2002/0012665 Alおよび国際公報01/74388 (Hanna, N.)；米国出願公開 US2002/0009444A1,および国際公報01/80884 (Grillo-Lopez, A.)；国際公報01/97858 (White, C.)；米国出願公開 US2002/0128488A1および国際公報02/34790 (Reff, M.);国際公報02/060955 (Braslawsky 等);国際公報02/096948 (Braslawsky 等);国際公報02/079255 (ReffおよびDavies)；米国特許第6,171,586B1,および国際公報98/56418 (Lam 等)；国際公報98/58964 (Raju, S.)；国際公報99/22764 (Raju, S.);国際公報99/51642、米国特許第6,194,551B 1、米国特許第6,242,195B 1、米国特許第6,528,624B 1および米国特許第6,538,124 (Idusogie 等)；国際公報00/42072 (Presta, L.)；国際公報00/67796 (Curd 等)；国際公報01/03734 (Grillo-Lopez 等)；米国出願公開 US 2002/0004587A1および国際公報01/77342 (MillerおよびPresta)；米国出願公開 US2002/0197256 (Grewal, I.)；米国特許出願第6,090,365B 1、6,287,537B 1、6,015,542、5,843,398,および5,595,721、(Kaminski 等)；US Patent Nos. 5,500,362、5,677,180、5,721,108、及び6,120,767(Robinson 等)；US Pat No. 6,410,391B1 (Raubitschek 等)；米国特許第6,224,866B1および国際公報00/20864 (Barbera-Guillem, E.)；国際公報01/13945 (Barbera-Guillem, E.)；国際公報00/67795 (Goldenberg)；国際公報00/74718 (GoldenbergおよびHansen)；国際公報00/76542 (Golay 等)；国際公報01/72333 (WolinおよびRosenblatt)；米国特許第6,368,596B 1 (Ghetie 等)；米国出願公開 US2002/0041847 Al、(Goldenberg, D.)；米国出願公開 US2003/0026801A1 (WeinerおよびHartmann)；国際公報02/102312 (Engleman, E.)が含まれ、これらは出典明記により特別に組み込まれる。また、米国特許第5,849,898および欧州特許第330,191 (Seed 等)；米国特許第4,861,579および欧州特許第332,865A2 (MeyerおよびWeiss)；及び国際公報95/03770 (Bhat 等)を参照のこと。
【００１７】
ＣＤ２０抗体は、そのままの抗体または細胞障害性合成物、例えば放射性同位元素又は毒素などに抱合したものでありうる。このような抗体には、放射性同位元素、イットリウム-９０に連結した抗体ＺｅｖａｌｉｎＴＭ(IDEC Pharmaceuticals, San Diego, CA)、とＩ-131を抱合したＢｅｘｘａｒＴＭ(Corixa, WA)とが含まれる。
ヒト化２Ｈ７変異体には、ＦＲのアミノ酸置換と移植されたＣＤＲに変異を持つ親和性成熟変異体を有するものが含まれる。ＣＤＲ又はＦＲの置換されたアミノ酸は、ドナー又はアクセプタ抗体にあるとは限らない。他の実施態様では、さらに本発明の抗ＣＤ２０抗体は、ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣ機能およびＢ細胞殺傷（またここではＢ細胞枯渇とも称する）の亢進を含むエフェクター機能の改善を導くＦｃ領域のアミノ酸残基変化を含む。Idusogie 等, 上掲(2001)；Shields 等, 上掲に記載のように、特に、３つの突然変異はＣＤＣおよびＡＤＣＣ活性を改良することが同定された：Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ（またここでは３つのＡｌａ突然変異または変異体として意味する；Ｆｃ領域の番号付けはＥＵ番号付けシステムに従う；Kabat 等, 上掲)。
【００１８】
本発明の使用に好適な他の抗ＣＤ２０抗体には、安定して改善する特定の変化を有するものが含まれる。いくつかの実施態様では、キメラ抗ＣＤ２０抗体はマウスＶ領域およびヒトＣ領域を有する。そのようなある特定のキメラ抗ＣＤ２０抗体はリツキサン（登録商標）(リツキシマブ（登録商標）；Genentech, Inc.)である。リツキシマブおよびｈｕ２Ｈ７は補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）および抗体依存性細胞性細胞障害（ＡＤＣＣ）の両方を介してＢ細胞の溶解を媒介しうる。改変したＦｃ領域アミノ酸配列および亢進または減弱したＣ１ｑ結合能を有する抗体変異体は、米国特許第６，１９４，５５１号および国際公報９９／５１６４２に記載されている。それら特許公報の内容は出典明記によって特別にここに組み込まれる。また、Idusogie 等 J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)も参照のこと。
国際公報００／４２０７２(Presta) にＦｃＲへの結合を向上または減弱させたポリペプチド変異型が述べられている。この特許公報の内容はここには文献として特別に組み込まれる。Shields ら J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)も参照のこと。
「自己免疫疾患」は広義の意味で用いられ、一般には、自己組織成分、又はその徴候又は結果として生じるその症状に対する個々の哺乳動物の体液性又は細胞性免疫応答により正常組織又は健康な組織が破壊される哺乳動物の疾患又は症状を意味する。
【００１９】
「癌」、「癌性」及び「悪性」という用語は、典型的には調節されない細胞成長を特徴とする、哺乳動物における生理学的状態を指すか説明する。癌の例には、これらに限定されるものではないが、腺癌、リンパ腫、芽細胞腫、黒色腫、肉腫、及び白血病を含む癌腫が含まれる。このような癌のより特定の例には、扁平細胞癌(squamous cell cancer)、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胃腸癌、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、神経膠芽腫、子宮頸管癌、卵巣癌、肝癌及び肝細胞腫等の肝臓癌、膀胱癌、乳癌、大腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、腎(renal)癌及びウィルムス腫瘍等の腎臓(kidney)癌、基底細胞癌、黒色腫、前立腺癌、産卵口癌、甲状腺癌、精巣癌、食道癌、及び様々なタイプの頭部及び頸部の癌が含まれる。場合によっては、癌は、癌細胞、ＢＬｙＳを発現するか、関連する。いくつかの実施形態では、ここで治療する癌には、リンパ腫、白血病及び骨髄腫、並びにそれらのサブタイプ、例えばバーキットリンパ腫、多発性硬化症、急性リンパ芽球性又はリンパ球性白血病、非ホジキン及びホジキンリンパ腫、並びに急性骨髄性白血病が含まれる。
「細胞外ドメイン」又は「ＥＣＤ」とは、膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインが基本的にないポリペプチドの形態である。
【００２０】
「免疫関連疾患」という用語は、哺乳動物の免疫系の成分が、哺乳動物の病理学的状態の原因であるか、媒介又は寄与するものである疾患を意味する。また、免疫反応の刺激又は介在により疾患の進行に改善された効果が付与される疾患も含まれる。この用語には、自己免疫疾患、免疫媒介炎症疾患、非免疫媒介炎症疾患、感染症、及び免疫欠損症が含まれる。そのうちの一部が免疫又はＴ細胞媒介であり、本発明によって治療することが可能な免疫関連及び炎症性疾患の例には、リウマチ様関節炎、若年型慢性関節炎、脊椎関節症、全身性硬化症（強皮症）、特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）、シェーグレン症候群、全身性血管炎、サルコイドーシス、自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間ヘモグロビン尿症）、自己免疫性血小板減少症（溶血性血小板減少性紫斑病、免疫媒介血小板減少症）、甲状腺炎（バセドウ病、橋本甲状腺炎、若年型リンパ球性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）、糖尿病、免疫媒介腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）、中枢及び末梢神経系の脱髄疾患例えば多発性硬化症、特発性脱髄多発神経障害又はギラン・バレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発神経障害、肝胆道疾患例えば感染性肝炎（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ型肝炎、及び他の非肝親和性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎、炎症性腸疾患等の炎症性及び線維性肺疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）、グルテン過敏性腸疾患、及びウィップル病、水疱性皮膚病を含む自己免疫又は免疫媒介皮膚疾患、多形滲出性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬、アレルギー性疾患例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹、肺の免疫疾患例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎、拒絶反応及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患が含まれる。感染症疾患には、AIDS（HIV感染）、A、B、C、D及びＥ型肝炎、細菌感染症、真菌感染症、原虫感染症及び寄生虫症が含まれる。
【００２１】
ここで使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を意味する。すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在しうる自然に生じる可能な突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原部位に対するものである。更に、異なる決定基(エピトープ)に対する異なる抗体を典型的には含む従来の（ポリクローナル）抗体調製物とは異なり、各モノクローナル抗体は抗原の単一の決定基に対するものである。「モノクローナル」との修飾語句は、実質的に均一な抗体の集団から得たものとしての抗体の性質を表すものであり、抗体が何か特定の方法による生成を必要として構築したものであることを意味するものではない。例えば、本発明において使用されるモノクローナル抗体は、最初にKohler等, Nature, 256:495 (1975)に記載されたハイブリドーマ法によって作ることができ、あるいは組換えＤＮＡ法によって作ることができる（例えば米国特許第４８１６５６７号を参照のこと）。また「モノクローナル抗体」は、例えば、Clackson等, Nature, 352：624-628 (1991)およびMarks等, J. Mol. biol. 222: 581-597 (1991)に記載された技術を用いてファージ抗体ライブラリーから作成することもできる。
【００２２】
「キメラ」抗体（免疫グロブリン）は特定の種由来または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体が持つ配列に一致するまたは類似する重鎖および／または軽鎖の一部を含むものであり、残りの鎖は、所望の生物学的活性を表す限り、抗体断片のように他の種由来または他の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体が持つ配列に一致するまたは類似するものである（米国特許第4,816,567号；およびMorrisonら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855 (1984))。ここで用いるヒト化抗体はキメラ抗体のサブセットである。
ここで用いられる「担体」は、生理学的に許容されうる担体、賦形剤、又は安定化剤を含み、用いられる服用量及び濃度でそれらに曝露される細胞又は哺乳動物に対して非毒性である。生理学的に許容されうる担体は、水性ｐＨ緩衝溶液であることが多い。生理学的に許容されうる担体の例は、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸塩のバッファー；アスコルビン酸を含む酸化防止剤；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン；疎水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリジン；グルコース、マンノース又はデキストランを含む単糖類、二糖類、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；マンニトール又はソルビトール等の糖アルコール；ナトリウム等の塩形成対イオン；及び／又は非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標)、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ(登録商標)を含む。
【００２３】
本発明の「組成物」は、一以上のＢ細胞枯渇薬剤及び／又は一以上のＢ細胞流動化薬剤を含むものであり、場合によっては生理学的に許容可能な担体と組み合わせてもよい。組成物は更に、目標とする症状を治療するための追加の治療薬を含むことができる。いくつかの実施形態では、組成物は、免疫関連疾患の治療薬、及び癌の治療薬から選択される第二の治療薬含む。いくつかの実施形態では、癌の治療薬は、細胞障害剤、化学療法剤、成長阻害剤及び化学療法剤からなる群より選択される。
非ヒト(例えばマウス)抗体の「ヒト化」型は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むキメラ抗体である。大部分において、ヒト化抗体は、レシピエントの高頻度可変領域の残基が、マウス、ラット、ウサギ又は所望の特異性、親和性及び能力を有する非ヒト霊長類のような非ヒト種からの高頻度可変領域の残基（ドナー抗体）によって置換されたヒト免疫グロブリン(レシピエントまたはアクセプター抗体)である。例として、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域(ＦＲ)残基は、対応する非ヒト残基によって置換される。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、もしくはドナー抗体にも見出されない残基を含んでいてもよい。これらの修飾は抗体の特性を更に洗練するために行われる。一般に、ヒト化抗体は、全てあるいは実質的に全ての高頻度可変ループが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、たとえＦＲ領域が結合特性を改善するような一又はそれ以上のアミノ酸置換を含んでも、全てあるいは実質的に全てのＦＲ領域がヒト免疫グロブリン配列のものである、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含む。ＦＲのアミノ酸置換数は一般的にＨ鎖では６個、Ｌ鎖では３個にすぎない。ヒト化抗体は、場合によっては免疫グロブリン定常領域(Ｆｃ)、一般的にはヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部も含む。更なる詳細については、Jones等, Nature 321:522-525 (1986); Riechmann等, Nature 332:323-329 (1988);及びPresta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)を参照のこと。
【００２４】
抗体の「エフェクター機能」とは、抗体のＦｃ領域（天然配列Ｆｃ領域又はアミノ酸配列変異体Ｆｃ領域）に帰する生物学的活性を意味し、抗体のアイソタイプにより変わる。抗体のエフェクター機能の例には、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞障害；Ｆｃレセプター結合性；抗体依存性細胞媒介性細胞障害(ＡＤＣＣ)；貪食作用；細胞表面レセプター（例えば、Ｂ細胞レセプター）のダウンレギュレーション；及びＢ細胞活性化が含まれる。
「抗体依存性細胞障害活性」または「ＡＤＣＣ」は、ある細胞障害性細胞(例えば、ナチュラルキラー(ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）上にあるＦｃレセプター(ＦｃＲ）に結合したＩｇによりその細胞障害性エフェクター細胞が抗原負荷標的細胞に特異的に結合し、続いて細胞毒により標的細胞を死滅するという細胞障害性の形態である。抗体は細胞障害性細胞を武装させ（arm）、完全に死滅することが必要とされる。ＡＤＣＣを媒介する一次細胞であるＮＫ細胞は、ＦＣγＲIIIのみを発現する一方、単球はＦＣγＲI、ＦＣγＲII及びＦＣγＲIIIを発現する。造血性細胞でのＦｃＲの発現は、Ravetch等, Annu.Rev.Immunol., 9:457-92(1991)の４６４頁の表３に要約されている。対象分子のＡＤＣＣ活性を評価するためには、米国特許第５５００３６２号又は第５８２１３３７号に記載されているようなインビトロＡＤＣＣアッセイが実施されうる。そのようなアッセイのための有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー細胞(ＮＫ）細胞を含む。あるいは、又は付加的に、対象分子のＡＤＣＣ活性は、例えばClynes等 .PNAS(USA), 95:652-656(1998)に開示されたような動物モデルにおいて、インビボで評価されてもよい。
【００２５】
処置又は治療のための「哺乳動物」は、哺乳動物に分類される任意の動物を意味し、ヒト、家畜用及び農場用動物、動物園、スポーツ、又はペット動物、例えばイヌ、ウマ、ネコ、ウシなどを含む。ここで好ましくは、哺乳動物はヒトである。
ここで用いる「Ｂ細胞枯渇」は、処置前のレベルと比較して薬剤または抗体処置後に動物またはヒトにおいてＢ細胞レベルが減少することを表す。Ｂ細胞レベルは、全血球計算値を求める、公知のＢ細胞マーカーに対するＦＡＣＳ分析スキャニング及び実験的実施例に示した方法などの公知のアッセイを用いて測定する。Ｂ細胞枯渇は完全または部分的なものであり得る。一実施態様では、ＣＤ２０発現Ｂ細胞の枯渇は少なくとも２５％である。Ｂ細胞枯渇薬剤を投与されている患者では、一般的にＢ細胞は、薬剤が患者体内を循環し、Ｂ細胞が回復する持続時間の間枯渇される。
Ｂ細胞流動化薬剤と組み合わせたＢ細胞枯渇薬剤で治療した後の枯渇されたＢ細胞のレベル又は割合がＢ細胞殺傷（枯渇）薬剤単独で得られたレベルより大きい場合、Ｂ細胞の枯渇が増大したとする。Ｂ細胞の枯渇のレベルは熟練した医療従事者に周知の方法によって測定することができる。Ｂ細胞流動化薬剤で治療した場合又はしなかった場合の血中のＢ細胞の数によってＢ細胞枯渇レベルを測定することができる。Ｂ細胞を定量化する他の例示的な方法として、癌患者を抗ＣＤ２０抗体などのＢ細胞枯渇薬剤で治療した後に、Ｂ細胞の基準となるレベルを得るためにＢ細胞流動化薬剤で治療する前にリンパ節生検を行うことができる。次いで、患者に一以上のＢ細胞流動化薬剤と一緒に、又はＢ細胞枯渇薬剤の再投与の前に投与される。Ｂ細胞枯渇治療計画の２回目の後に、２回目のリンパ節生検を行って残りのＢ細胞を定量した。
【００２６】
本願明細書中で用いられる「Ｂ細胞枯渇薬剤」とは、Ｂ細胞表面カーカーを介してそれに結合するかあるいは他の方法でそれを結合して直接的又は間接的に標的Ｂ細胞を死に至らしめる任意のアンタゴニストである。本明細書中で使用されるように、循環内のＢ細胞は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ又は他のメカニズムによって取り除かれる。Ｂ細胞枯渇薬剤は、抗体又は細胞表面マーカーのリガンドなどの抗体や小分子でありうる。Ｂ細胞枯渇薬剤は、細胞障害性薬剤又は成長阻害性薬剤にコンジュゲートされうる。一実施態様では、Ｂ細胞枯渇薬剤は、ＣＤ20、ＣＤ22又はＣＤ54を結合するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。ＣＤ20結合抗体は以下に開示される。好ましい実施態様では、ＣＤ20結合抗体は、リツキシマブ、又はヒト化2Ｈ7ｖ16又はｈ2Ｈ7ｖ16の変異形である。
本願明細書中で用いられる「Ｂ細胞流動化薬剤」とは、例えば、リンパ系器官及び他のＢ細胞保有組織中のＢ細胞の接着及び保持を阻害することによって、さもなければそれらの組織からのＢ細胞の放出を促進することによって、又はリンパ及び他の器官や組織へのＢ細胞のホーミングを阻害することによって、血液中の哺乳動物のＢ細胞の循環を促進する任意の分子である。ある特定の実施態様では、Ｂ細胞流動化薬剤は、少なくとも脾臓の周辺帯、及び好ましくはリンパ系組織及び脾臓の胚中心及びＭＺ内のＢ細胞保持を阻害する。他の実施態様では、Ｂ細胞流動化薬剤は脾臓へのＢ細胞のホーミングを阻害する。さらに他の実施態様では、前記薬剤は腸へのＢ細胞のホーミングを阻害する。Ｂ細胞流動化薬剤の投与による末梢血中のＢ細胞の増加は、実施例に記述したような公知の方法によって定量化されうる。
「Ｂ細胞疾患」は、Ｂ細胞新生物（例えばＣＤ20陽性Ｂ細胞新生物）、又はＢ細胞制御性自己免疫性疾患ないしは自己免疫関連症状を含む。それらは以下に詳細に開示される。
【００２７】
「補体依存性細胞傷害性」または「ＣＤＣ」は、補体存在下における標的細胞の溶解に関する。古典的補体経路活性化は、同系の抗原に結合される（適当なサブクラスの）抗体に補体系(Ｃ１ｑ）の最初の構成物が結合することによって開始される。補体の活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを、例えばGazzano-Santoroら, J. Immunol. Methods 202:163 (1996)に記載されているように実施することができる。
「単離された」抗体は、その自然環境の成分から同定され分離され及び／又は回収されたものを意味する。その自然環境の汚染成分は、抗体の診断又は治療への使用を妨害しうる物質であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質様又は非タンパク質様溶質が含まれる。好ましい実施態様においては、抗体は、(１)ローリー(Lowry)法により定量して、９５重量％の抗体より多くなるほど、最も好ましくは９９重量％より多くなるまで、(２)スピニングカップシークエネーターを使用することにより、Ｎ末端あるいは内部アミノ酸配列の少なくとも１５の残基を得るのに充分な程度まで、あるいは、(３)クーマシーブルーあるいは好ましくは銀染色を用いた非還元あるいは還元条件下でのＳＤＳ-ＰＡＧＥによる均一性が得られるように充分な程度まで精製される。抗体の自然環境の少なくとも一つの成分が存在しないため、単離された抗体には、組換え細胞内のインサイツの抗体が含まれる。しかしながら、通常は、単離された抗体は少なくとも１つの精製工程により調製される。
【００２８】
「治療的有効量」という用語は、患者または哺乳動物の疾患又は疾病を「寛解」または「治療」するのに効果的な本発明の組成物の量を指す。一般に疾患及び疾病の緩和又は治療は、疾患及び疾病に関連する一以上の症状又は医学的問題を軽減することを伴う。いくつかの実施態様では、それは、哺乳動物のB細胞数が減少する量である。癌の場合、治療的に有効量の薬は癌細胞の数を減じ；腫瘍の大きさを減じ；末梢器官への癌細胞の浸潤を阻害（すなわち、ある程度まで減速、好ましくは停止）し；腫瘍転移を阻害（すなわち、ある程度まで減速及び好ましくは停止）し；腫瘍成長をある程度まで阻害し；及び／又は癌に関連する一又は複数の症状をある程度まで緩和する。薬が存在する癌細胞の成長を妨げ及び／又は死滅させる程度まで、それは、細胞分裂停止及び／又は細胞障害性であり得る。いくつかの実施態様では、本発明の組成物を用いて患者又は哺乳動物の疾患又は疾病の発症又は再発を抑制することができる。例えば、自己免疫性疾患患者では、本発明の組成物を用いて再悪化を抑制ないしは緩和することができる。
【００２９】
「治療すること」または「処置」または「緩和」は、治療的処置および予防薬または予防対策の両方を表し、この目的は標的とした病態または疾患を予防または衰退（減少）することである。本発明の方法に従って本発明のＣＤ２０結合抗体の治療的有効量を取り込んだ後、患者がＣＤ２０陽性癌または自己免疫性疾患がうまく「治療」されれば、患者は特定の疾患の一またはそれ以上の兆候および症状が明らかにおよび／または測定可能な程度に減少または消失する。例えば、癌では、癌細胞数の減少または癌細胞の消失；腫瘍の大きさの減少；腫瘍転移の阻害（すなわち、ある程度の遅延および好ましくは停止）；ある程度の腫瘍成長の阻害；緩解期の延長、および／または特定の癌が関与する一またはそれ以上の症状のある程度の除去；罹患率および死亡率の減少、および生活の質の改善がある。疾患の兆候または症状の減弱は患者が感じ得るものである。癌のすべての兆候の消失を定義するならば、腫瘍の大きさが好ましくは５０％以上、より好ましくは７５％以上減少すると、処置が完全な反応または部分的な反応を達成し得たことになる。患者が疾患の安定を体験するならば、患者も治療されたと考える。好ましい実施態様では、癌患者に１年、好ましくは１５か月後に癌の進行がないことである。疾患の改善および治療の成功を評価するこれらのパラメーターは医師などの適切な当業者に知られたお決まりの手法によって簡単に測定可能である。
【００３０】
「持続的」投与とは、急性の様式に対して持続的な様式で野薬剤の投与を意味するものであり、長期間、初期の治療効果（活性）を維持するためのものである。
「断続的」投与とは、中断しながら連続して行わないが、自然なサイクルで行う治療である。
ここで使用する「細胞障害性剤」なる用語は、細胞の機能阻害または阻止およびまたは細胞破壊をもたらす物質を表す。この用語は、放射性同位体（例として、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、およびＲｅ１８６）、化学療法剤、および真菌、植物、または動物起源の酵素活性毒素などの毒素、またはそれらの断片を含むことを意図する。
【００３１】
「化学療法剤」は、癌などの状態の治療に有用な化学的化合物である。化学療法剤の例には、チオテパ及びシクロスホスファミド(CYTOXAN(登録商標))のようなアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファンのようなスルホン酸アルキル類；ベンゾドーパ(benzodopa)、カルボコン、メツレドーパ(meturedopa)、及びウレドーパ(uredopa)のようなアジリジン類；アルトレートアミン(altretamine)、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド(triethylenethiophosphaoramide)及びトリメチローロメラミン(trimethylolomelamine)を含むエチレンイミン類及びメチラメラミン類；アセトゲニン(acetogenins）(特にブラタシン(bullatacin)及びブラタシノン(bullatacinone)）；カンプトセシン(合成類似体トポテカン（topotecan）を含む）；ブリオスタチン；カリスタチン(callystatin）；ＣＣ-１０６５(そのアドゼレシン(adozelesin)、カルゼレシン(carzelesin)及びバイゼレシン(bizelesin）合成類似体を含む）；クリプトフィシン(cryptophycin）(特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン(dolastatin）；デュオカルマイシン(duocarmycin ）（合成類似体、KW-2189及びCBI-TM1を含む）； エレトロビン(eleutherobin）；パンクラチスタチン(pancratistatin）；サルコディクチン(sarcodictyin）；スポンジスタチン(spongistatin）；クロランブシル、クロルナファジン(chlornaphazine)、チョロホスファミド(cholophosphamide)、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン(novembichin)、フェネステリン(phenesterine)、プレドニムスチン(prednimustine)、トロフォスファミド(trofosfamide)、ウラシルマスタード等のナイトロジェンマスタード；ニトロスレアス(nitrosureas)、例えばカルムスチン(carmustine)、クロロゾトシン(chlorozotocin)、フォテムスチン(fotemustine)、ロムスチン(lomustine)、ニムスチン、ラニムスチン；エネジイン(enediyne) 抗生物質等の抗生物質（例えば、カリケアマイシン(calicheamicin)、特にカリケアマイシンガンマ１Ｉ及びカリケアマイシンオメガＩ１、例えば、Agnew  Chem Intl. Ed. Engl., 33：183-186(1994)を参照のこと；ダイネミシンＡ(dynemicinＡ）を含むダイネミシン(dynemicin）；クロドロネート(clodronate)などのビスホスホネート(bisphosphonates)；エスペラマイシン(esperamicin）； 同様にネオカルチノスタチン発光団及び関連色素蛋白エネジイン(enediyne) 抗生物質発光団）、アクラシノマイシン(aclacinomysins)、アクチノマイシン、オースラマイシン(authramycin)、アザセリン、ブレオマイシン(bleomycins)、カクチノマイシン(cactinomycin)、カラビシン(carabicin)、カルミノマイシン(carminomycin）、カルジノフィリン(carzinophilin)、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン(detorubicin）、６-ジアゾ-５-オキソ-Ｌ-ノルロイシン、ADRIAMYCIN(登録商標)ドキソルビシン (モルフォリノ−ドキソルビシン、シアノモルフォリノ-ドキソルビシン、２-ピロリノ-ドキソルビシン及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン(esorubicin）、イダルビシン、マセロマイシン(marcellomycin）、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン(mitomycins）、マイコフェノール酸(mycophenolic acid)、ノガラマイシン(nogalamycin)、オリボマイシン(olivomycins)、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン(potfiromycin)、ピューロマイシン、クエラマイシン(quelamycin)、ロドルビシン(rodorubicin)、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン(tubercidin)、ウベニメクス、ジノスタチン(zinostatin)、ゾルビシン(zorubicin)；メトトレキセート及び５-フルオロウラシル(５-ＦＵ）のような抗-代謝産物；デノプテリン(denopterin)、メトトレキセート、プテロプテリン(pteropterin)、トリメトレキセート(trimetrexate)のような葉酸類似体；フルダラビン(fludarabine)、６-メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンのようなプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン(azacitidine)、６-アザウリジン(azauridine)、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン(enocitabine)、フロキシウリジン(floxuridine)のようなピリミジン類似体；カルステロン(calusterone)、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン(testolactone)のようなアンドロゲン類；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンのような抗副腎剤；フロリン酸(frolinic acid)のような葉酸リプレニッシャー(replenisher)；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル(eniluracil)；アムサクリン(amsacrine)；ベストラブシル(bestrabucil)；ビサントレン(bisantrene)；エダトラキセート(edatraxate)；デフォファミン(defofamine)；デメコルシン(demecolcine)；ジアジコン(diaziquone)；エルフォルニチン(elfornithine)；酢酸エリプチニウム(elliptinium acetate)；エポチロン(epothilone)；エトグルシド(etoglucid)；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン(lonidamine)；メイタンシン(maytansine)及びアンサマイトシン(ansamitocin)のようなメイタンシノイド(maytansinoid)；ミトグアゾン(mitoguazone)；ミトキサントロン；モピダモール(mopidamol)；ニトラクリン(nitracrine)；ペントスタチン；フェナメット(phenamet)；ピラルビシン；ポドフィリン酸(podophyllinic acid)；２-エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ(登録商標)多糖類複合体(JHS Natural Products, Eugene, OR)；ラゾキサン(razoxane)；リゾキシン(rhizoxin)；シゾフィラン；スピロゲルマニウム(spirogermanium)；テニュアゾン酸(tenuazonic acid)；トリアジコン(triaziquone)；２,２',２''-トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン(trichothecenes)(特に、Ｔ-２トキシン、ベラキュリンＡ(verracurin A)、ロリデンＡ(roridin A)及びアングイデン(anguidine)）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン(mannomustine)；ミトブロニトール；ミトラクトール(mitolactol)；ピポブロマン(pipobroman)；ガシトシン(gacytosine)；アラビノシド（「Ara-C」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えばタキソール(登録商標)パクリタキセル、（Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ）、ABRAXANETM クレモフォール(Cremophor)を含まない、アルブミン設計のナノ粒子形状のパクリタキセル(American  Pharmaceutical  Partners, Schaumberg, Illinois)及びタキソテア(登録商標）ドキセタキセル、（Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France）；クロランブシル；GEMZAR(登録商標)ゲンシタビン(gemcitabine)；６-チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；シスプラチン及びカルボプラチンのようなプラチナ類似体；ビンブラスチン；プラチナ；エトポシド(ＶＰ-１６）；ミトキサントン；ビンクリスチン；NAVELBINE(登録商標)ビノレルビン；ナベルビン(Navelbine)；ノバントロン(novantrone)；テニポ��ド；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；キセローダ(xeloda)；イバンドロナート(ibandronate)；ＣＰＴ-１１；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ２０００；ジフルオロメチロールニチン(ＤＭＦＯ)；レチノイン酸などのレチノイド類；カペシタビン(capecitabine)；並びに上述したものの製薬的に許容可能な塩類、酸類又は誘導体が含まれる。
【００３２】
また、この定義には、腫瘍に対するホルモン作用を調節又は阻害するように働く抗ホルモン剤、抗エストロゲン及び選択的エストロゲンレセプターモジュレーター（ＳＥＲＭ）など、例えばタモキシフェン(NOLVADEX(登録商標)タモキシフェンを含む)、ラロキシフェン(raloxifene)、ドロロキシフェン、４-ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン(trioxifene)、ケオキシフェン(keoxifene)、ＬＹ１１７０１８、オナプリストーン(onapristone)、及びFARESTON*トレミフェン(Fareston)；アロマターゼ酵素を阻害するアロマターゼ阻害物質、それらは副腎でのエストロゲン産生を調節するものであり、例えば４(５)-イミダゾール類、アミノグルテチミド、MEGASE(登録商標)メゲストロールアセテート、AROMASIN(登録商標)エキセメスタン、ホルメスタイン(formestanie)、ファドロゾール、RIVISOR(登録商標)ゾロゾール(vorozole)、FEMARA(登録商標)レトロゾールおよびARIMIDEX(登録商標)アナストロゾール；；及び抗アンドロゲン、例えばフルタミド(flutamide)、ニルタミド(nilutamide)、ビカルタミド、ロイプロリド、及びゴセレリン；並びにトロキサシタビン(troxacitabine)（1,3-ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に不粘着性細胞増殖に関係するシグナル伝達経路の遺伝子の発現を抑制するもの、例えばＰＫＣ−ａｌｐｈａ、ラルフおよびＨ−Ｒａｓ；リボザイム、例えばＶＥＧＦ発現インヒビター（例えばANGIOZYME(登録商標)リボザイム）およびＨＥＲ２発現インヒビター；遺伝子治療ワクチン、例えばALLOVECTIN(登録商標)ワクチン、LEUVECTIN(登録商標)ワクチン及びVAXID(登録商標)ワクチン）などのワクチン；PROLEUKIN(登録商標)ｒＩＬ-２；LURTOTECAN(登録商標)トポイソメラーゼ１インヒビター；ABARELIX(登録商標)rmRH並びに上記のものの製薬的に許容可能な塩類、酸類又は誘導体が含まれる。
【００３３】
ここで用いられる際の「成長阻害剤」は、細胞の成長をインビトロ及び／又はインビボで阻害する化合物又は組成物を意味する。よって、成長阻害剤は、Ｓ期で細胞の割合を有意に減少させるものである。成長阻害剤の例は、細胞周期の進行を（Ｓ期以外の位置で）阻害する薬剤、例えばＧ１停止又はＭ期停止を誘発する薬剤を含む。古典的なＭ期ブロッカーは、ビンカス（ビンクリスチン及びビンブラスチン）、タキソール(登録商標)、及びトポＩＩ阻害剤、例えばドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、及びブレオマイシンを含む。またＧ１停止させるこれらの薬剤は、Ｓ期停止にも波及し、例えば、ＤＮＡアルキル化剤、例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキセート、５-フルオロウラシル、及びアラ-Ｃである。更なる情報は、The Molecular Basis of Cancer, Mendelsohn及びIsrael, 編, Chapter 1, 表題「Cell cycle regulation, oncogene, and antineoplastic drugs」, Murakami等, (WB Saunders: Philadelphia, 1995)、特に１３頁に見出すことができる。
「胚中心」とは、Ｂ細胞増殖、体細胞性過剰変異及び抗原結合選別が起こるリンパ系の二次濾胞内の微小環境である。
「周辺帯」は、低親和性で、多応答性の抗体を産生するＢ細胞の集団を含む脾臓の領域である。この解剖学的部位のために、周辺帯Ｂ細胞は、しばしば自己抗原を含む抗原に応答するようになる。周辺帯Ｂ細胞は低い活性化閾値を有し、特に自己抗原に応答性であり(Viau 等, 2005, Clin. Immunol., 114: 17-26)、血液由来抗原に応答性である。自己応答性Ｂ細胞は、高親和性自己応答を予防するために、周辺帯に隔離される。
本願明細書中で用いられるように、ポリペプチドの「可溶性」部分とは、水に可溶性で、脂質への親和性をかなり欠く部分（例えば、膜貫通ドメイン又は膜貫通及び細胞質ドメインを欠損するもの）を意味する。
【００３４】
Ｂ．インテグリンサブユニット
１．α４
本明細書中で用いられる場合の「α４」又は「α４ポリペプチド」又は「α４タンパク質」（また、ＣＤ４９ｄ、インテグリンα４サブユニット又はＶＬＡ-４αサブユニットとも称する）は、天然の配列α４の生物活性を有する「天然配列α４ポリペプチド」を包含する。一実施態様では、α４ポリペプチドの生物学的活性は、例えば、β１(ＣＤ２９)又はβ７などのβサブユニットに作用してリンパ系組織の胚中心内の少なくとも固定された周辺帯領域脾臓細胞上のリガンド又は細胞外基質に結合するインテグリンを形成し、それによってＢリンパ球の血管内接触を制限することによって、リンパ系組織の器官又は領域内のＢリンパ球の接着及び保持を促進する。「天然配列」α４ポリペプチドは、天然由来のα４ポリペプチドに対応するのと同じアミノ酸配列を有するポリペプチドを含有する。このような天然配列α４ポリペプチドは、天然から単離するかあるいは組換え及び／又は合成手段によって生産されることができる。「天然配列α４ポリペプチド」なる用語には、ポリペプチドの天然に生じる対立遺伝子変異型、天然に生じるイソ型、天然に生じる変異型（例えば選択的スプライシング型）、及び天然に生じる切断型が含まれる。ヒトα４ポリペプチド配列の例を以下に示す（Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号Ｓ０６０４６）：
2007532681.tif 000003
（残基１−３９はシグナル配列のアミノ酸である。残基４０−１０４８が産物α4インテグリンのアミノ酸である）。
α４は、インテグリンα４β１（ＶＬＡ-４、ＣＤ４９ｄ／ＣＤ２９）を形成するためにβ１と、又は、インテグリンα４β７を形成するためにβ７サブユニットと組み合わさる。
【００３５】
２．β１
本明細書中で用いられる場合の「β１」(ＣＤ２９)又は「β１ポリペプチド」又は「β１タンパク質」は、天然の配列β１の生物活性を有する「天然配列β１ポリペプチド」を包含する。ある好適な実施態様では、本発明のβ１ポリペプチドの生物学的活性は、例えば、α４又はα２などのαサブユニットに作用して少なくとも固定された周辺帯領域脾臓細胞又は胚中心細胞上のリガンド又は細胞外基質に結合するインテグリンを形成し、それによってＢリンパ球の血管内接触を制限することによって、リンパ系組織の器官又は領域内のＢリンパ球の接着及び保持を促進する。「天然配列」β１ポリペプチドは、天然由来のβ１ポリペプチドに対応するのと同じアミノ酸配列を有するポリペプチドを含有する。このような天然配列β１ポリペプチドは、天然から単離するかあるいは組換え及び／又は合成手段によって生産されることができる。「天然配列β１ポリペプチド」なる用語には、ポリペプチドの天然に生じる対立遺伝子変異型、天然に生じるイソ型(例えばＡ−Ｄ)、天然に生じる変異型（例えば選択的スプライシング型）、及び天然に生じる切断型が含まれる。ヒトβ１ポリペプチド配列の例を以下に示す（Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号Ｐ０５５５６）：
2007532681.tif 000004
【００３６】
３．β７
本明細書中で用いられる場合の「β７」又は「β７ポリペプチド」又は「β７タンパク質」は、天然の配列β７の生物活性を有する「天然配列β７ポリペプチド」を包含する。一実施態様では、本発明のβ７ポリペプチドの生物学的活性は、消化管へのα４β７＋リンパ球のホーミングを促進して、それによってＢリンパ球の血管内接触を制限することである。他の実施態様では、β７ポリペプチドの生物学的活性は、例えば、α４などのαサブユニットに作用することによって、脾臓のＭＺなどのリンパ系組織の器官又は領域内のＢリンパ球の接着及び保持を促進することである。「天然配列」β７ポリペプチドは、天然由来のβ７ポリペプチドに対応するのと同じアミノ酸配列を有するポリペプチドを含有する。このような天然配列β７ポリペプチドは、天然から単離するかあるいは組換え及び／又は合成手段によって生産されることができる。「天然配列β７ポリペプチド」なる用語には、ポリペプチドの天然に生じる対立遺伝子変異型、天然に生じるイソ型(例えばＡ−Ｄ)、天然に生じる変異型（例えば選択的スプライシング型）、及び天然に生じる切断型が含まれる。ヒトβ７ポリペプチド配列の例を以下に示す（Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号Ｐ２６０１０）：
2007532681.tif 000005
【００３７】
４．αＬ
本明細書中で用いられる場合の「αＬ」又は「αＬポリペプチド」又は「αＬタンパク質」又は「ＣＤ１１ａ」は、天然の配列αＬ(ＣＤ１１ａ)の生物活性を有する「天然配列αＬポリペプチド」を包含する。一実施態様では、αＬポリペプチドの生物学的活性は、例えば、β２(ＣＤ１８)などのβサブユニットに作用して少なくとも固定された周辺帯領域脾臓細胞又は胚中心細胞上のリガンド又は細胞外基質に結合するインテグリンを形成することによって、リンパ系組織の器官又は領域内のＢリンパ球の接着及び保持を促進することである。αＬβ２(ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８)(ＬＦＡ-１)の他の生物学的活性は、血液から脾臓及びリンパ節へのＢリンパ球のホーミングを促進する際にある。両生物学的活性によりこれらＢリンパ球の血管内接触が制限される。
αＬβ２(ＬＦＡ-１)は、少なくともＣＤ５４（ＩＣＡＭ-１）、ＣＤ１０２（ＩＣＡＭ２）及びＣＤ５０（ＩＣＡＭ-３）と結合する。「天然配列」αＬポリペプチドは、天然由来のαＬポリペプチドに対応するのと同じアミノ酸配列を有するポリペプチドを含有する。このような天然配列αＬポリペプチドは、天然から単離するかあるいは組換え及び／又は合成手段によって生産されることができる。「天然配列αＬポリペプチド」なる用語には、ポリペプチドの天然に生じる対立遺伝子変異型、天然に生じるイソ型、天然に生じる変異型（例えば選択的スプライシング型）、及び天然に生じる切断型が含まれる。ヒトαＬポリペプチド配列の例を以下に示す（ＳＷＩＳＳＰＲＯＴ寄託番号Ｐ２０７０１７；ＥＭＢＬ／ＧＥＮＢＡＮＫ寄託番号Ｙ００７９６）：
2007532681.tif 000006
【００３８】
５．β２
本明細書中で用いられる場合の「β２」(ＣＤ１８)又は「β２ポリペプチド」又は「β２タンパク質」は、天然の配列β２の生物活性を有する「天然配列β２ポリペプチド」を包含する。「天然配列」β２ポリペプチドは、天然由来のβ２ポリペプチドに対応するのと同じアミノ酸配列を有するポリペプチドを含有する。このような天然配列β２ポリペプチドは、天然から単離するかあるいは組換え及び／又は合成手段によって生産されることができる。「天然配列β２ポリペプチド」なる用語には、ポリペプチドの天然に生じる対立遺伝子変異型、天然に生じるイソ型、天然に生じる変異型（例えば選択的スプライシング型）、及び天然に生じる切断型が含まれる。ヒトβ２ポリペプチド配列の例を以下に示す（Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号Ｐ０５１０７）：
2007532681.tif 000007
【００３９】
Ｃ．α４インテグリン
本願明細書中で用いられる「α４インテグリン」なる用語は、α４サブユニットとβサブユニットとを含んでなるヘテロ二量体を意味する。α４インテグリンの例には、α４β１（ＶＬＡ-４又はＶＬＡ-４インテグリン）又はα４β７（ＬＰＡＭ-１又はＬＰＡＭ-１インテグリン）などがある。α４β１（アルファ４ベータ１）は、好中球及び血小板の例外がありうるがほとんどの白血球に発現される；それはまた、非リンパ系組織においても発現される。α４β７（アルファ４ベータ７）はほとんどのリンパ節Ｔ及びＢ細胞、ＮＫ細胞及び好酸球に発現される。α４β１は血液から炎症部位の組織への白血球の移動に関与する。α４β７は、粘膜高内皮小静脈に対するＭＡｄＣＡＭ-１の認識によって消化管へのα４β７＋リンパ球のホーミングに関与する。
α４インテグリンの生物学的活性の例として以下に示す活性の任意の一又はそれらの組合せが含まれる：(１)α４β１のリガンド（例えばＶＣＡＭ-１、フィブロネクチン、トロンボスポンジン、コラーゲン及びインベーシンからなる群から選択される任意の一のリガンド）への結合、(２)α４β７のリガンド(例えば、血管細胞接着分子-１（ＶＣＡＭ-１）、粘膜アドレシン細胞接着分子-１（ＭＡｄＣＡＭ-１）及びフィブロネクチンからなる群から選択した任意の一のリガンド)への結合、及び(３)脾臓の周辺帯などのリンパ系組織の器官又は領域へのＢリンパ球の接着及び保持及び／又はホーミングの促進。
【００４０】
１．α４インテグリンのリガンド
α４インテグリンリガンド（ＶＣＡＭ-１（ＣＤ１０６））は、その細胞外部分の７つのＩｇＳＦ  Ｃ２ドメインを含有する(Barclay 等, 1997, 上掲, 386-387頁)。ＶＣＡＭ-１は、それぞれドメイン１及び４内にα４β１（ＶＬＡ-４）の２つの独立した結合部位を含有する（インテグリン結合部位については例としてVonderheide, 等, 1994, J. Cell Biol. 125:215-222；Jones, 等, 1995, Nature 373: 539-544を参照）。ヒトＶＣＡＭ-１（ＣＤ106）の完全長アミノ酸配列は、上掲のBarclay等の387頁に示され、ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号Ｍ７３２５５又はＳＷＩＳＳＰＲＯＴ  Ｐ１９３２０である。
ヒトＶＣＡＭ-１ポリペプチド配列の例を以下に示す（ＳＷＩＳＳＰＲＯＴ寄託番号Ｐ１９３２０）：
2007532681.tif 000008
（残基１〜２４のシグナル配列；残基２５〜６９８の細胞外ドメイン；残基６９９〜７２０の膜貫通ドメイン；そして、残基７２１〜７３９の細胞質ドメイン）。
【００４１】
α４インテグリンリガンド、ＭＡｄＣＡＭは、その細胞外部分に２つのＩｇＳＦ  Ｃ2ドメインを含有する(Tan 等 1998, Structure 6: 793-801)。ＭＡｄＣＡＭは、α４β７及びＬ-セレクチンのレセプターである(Elangbam 等, 1997, Vet. Pathol., 34: 61-73)。ヒトＭＡｄＣＡＭの完全長アミノ酸配列の例は、ＳＷＩＳＳＰＲＯＴ寄託番号：Ｑ１３４７７で提供される。
2007532681.tif 000009
（残基１〜１８のシグナル配列；残基１９〜３４１の細胞外ドメイン；残基３４２〜３６２の膜貫通ドメイン；そして、残基３６３〜４０６の細胞質ドメイン）。
【００４２】
２．α４インテグリンアンタゴニスト
本願明細書中で用いられる「α４インテグリンアンタゴニスト」なる用語は最も広義の意味で用いられ、α４インテグリンの生物学的活性を部分的に又は完全にブロックする任意の分子である。一実施態様では、α４インテグリンアンタゴニストはα４インテグリンとそのリガンドとの相互作用を部分的に又は完全にブロックし、以下の事象の任意の一ないし組合せを行う：(１)リンパ系の器官又は組織からのリンパ球の放出を促進する及び、さもなければ哺乳動物のＢリンパ球の循環を促進する、(２)天然の配列α４インテグリンシグナル伝達を部分的又は完全にブロックする、阻害するないしは中和する。一実施態様では、α４インテグリンアンタゴニストは、脾臓及び消化管内のＢ細胞接着及び保持を阻害する。より特定の実施態様では、α４β１アンタゴニストは、少なくともリンパ系組織の胚中心又は脾臓の周辺帯内のＢ細胞接着及び保持を阻害する。α４インテグリンの有用なアンタゴニストには、αサブユニットのアンタゴニスト、βサブユニットのアンタゴニスト及びα及びβサブユニット両方のアンタゴニストが含まれる。
好ましい一実施態様では、α４インテグリンアンタゴニストは、α４β１（ＶＬＡ-４）アンタゴニスト、例えば国際公報９９／０６４３２に記載されるものである。他の好ましい実施態様にでは、α４インテグリンアンタゴニストは、α４β７（ＬＰＡＭ-１）アンタゴニスト、例えば米国特許出願第０８／７００７３７号に記載のヒト化ＭＡｂ  ＭＬＮ-02／ＬＤＰ-02又は、米国特許第６,４０７,０６６号に記載のピログルタミン酸誘導体及び関連化合物である。一実施態様では、α４インテグリンアンタゴニストは、二重のα４β１／α４β７アンタゴニスト、例えばＲ-４１１(Hijazi 等, 2004, J. Clin. Pharmacol., 44:1368-1378)又は、米国特許第6,482,849号又はEgger 等, 2002 Jul., J. Pharmacol. Exp. Ther., 302(1):53-62に記載のアンタゴニストである。
一実施態様では、アンタゴニストはα４サブユニットに結合する。他の実施態様では、アンタゴニストは、α４インテグリンのリガンド、例えばリガンド、ＶＣＡＭ-１又はＭＡｄＣＡＭ-１リガンドに結合する。α４インテグリンのアンタゴニスト、例えばα４β１及びα４β７を同時又は連続してともに用いて、哺乳動物のＢリンパ球の循環を促進することができる。α４β１（ＶＬＡ-４）及び／又はα４β７（ＬＰＡＭ-１）の複数の異なるアンタゴニストを同時又は連続してともに用いて、哺乳動物のＢリンパ球の循環を促進することができる。
α４インテグリンアンタゴニストは、抗体、小分子又はイムノアドヘシンでありうる。
【００４３】
３．α４インテグリンの抗体アンタゴニスト
一実施態様では、α４インテグリンアンタゴニストは抗体である。「抗体」なる用語は広義に用いられ、ポリクローナル及びモノクローナル、完全長及び断片、ヒト化、キメラ、二重特異性などの抗体が含まれる。好ましい実施態様では、α４インテグリンアンタゴニストは、α４β１（ＶＬＡ-４）、α４β７（ＬＰＡＭ-１）又はαサブユニット単独を結合する抗体であり、例えば下記の実施例において開示される抗ＣＤ49ｄ抗体などである。
α４インテグリンアンタゴニストである抗体の例として、以前はAntegren (米国特許第6,602,503号、同第5,840,299号及び同第5,730,978号、出展明記により本明細書中に組み込まれる)と称される、Biogen-Idec's TYSABRI(登録商標) (ナタリズマブ(natalizumab))などがある。
他の実施態様では、α４インテグリンアンタゴニストはα４インテグリンのリガンドに結合する抗体、例えば、上記の任意のリガンド、特に抗ＶＣＡＭ-１抗体又は抗ＭＡｄＣＡＭ-１抗体である。例えば、ヒト化ＶＣＡＭ-１抗体、２Ａ２は、Alexion Pharmaceuticals Inc. (New Haven, CT)から入手可能である。
【００４４】
α４β（ＶＬＡ-４）を特異的に結合するヒト化Ａｂｓの例として、以下に示す一つ以上のＶＬ鎖及びＶＨ鎖を含有してなるものを含む。
１)  以下の配列を含有する軽鎖可変領域
2007532681.tif 000010
又は、
2007532681.tif 000011
と、
２)  以下の配列を含有する重鎖可変領域
2007532681.tif 000012
2007532681.tif 000013
又は
2007532681.tif 000014
【００４５】
ＶＬＡ-４に特異的に結合するヒト化抗体の例として以下を含む：
１)  以下の配列を含有する軽鎖可変領域
2007532681.tif 000015
2007532681.tif 000016
又は
2007532681.tif 000017
と、
２)  以下の配列を含有する重鎖可変領域
2007532681.tif 000018
2007532681.tif 000019
2007532681.tif 000020
2007532681.tif 000021
2007532681.tif 000022
又は
2007532681.tif 000023
【００４６】
４．α４インテグリンのイムノアドヘシンアンタゴニスト
他の実施態様では、インテグリンアンタゴニストはイムノアドヘシンである。このようなイムノアドヘシンの例として、α４に結合するα４インテグリンのリガンドの可溶性部分、例えばＶＣＡＭ-１（ＣＤ１０６）及び／又はＭＡｄＣＡＭ-１などのα４インテグリンのリガンドの細胞外ドメイン又はリガンド結合ドメインを含んでなるものである。一実施態様では、イムノアドヘシンアンタゴニストは、ヒトＩｇＧ１などのＩｇＧのＦｃ領域に融合した可溶性リガンド-結合ドメインである。
ＶＣＡＭ-１及びＭＡｄＣＡＭ-１の結合ドメインは当分野において公知である。ＶＣＡＭ-１は、ドメイン１（ＵｎｉＰｒｏｔによるところの残基２５−１０５）内のいくつかの残基（残基３９、４０及び４３）を介して、ドメイン２（ＵｎｉＰｒｏｔによるところの残基１０９−２１２）のいくつかの残基の助力により主にα４β１に結合し；ＶＣＡＭ-１は、ドメイン２内の残基を介して、ドメイン１内の残基の助力により主にα４β７に結合する。(Newham 等, 1997, J. Biol. Chem., 272: 19429-19440)。ＭＡｄＣＡＭ-１は、ドメイン１（ＵｎｉＰｒｏｔによるところの残基２３−１１２）及びドメイン２（ＵｎｉＰｒｏｔによるところの残基１１３−２３１）の両方を介してα４β７に結合する；ＭＡｄＣＡＭ-１残基４０、４１、４２及び４４は完全な結合に必要であり、残基１４３−１５０を除去すると結合が起こらなかった。ＭＡｄＣＡＭ-１はα4β1と十分に結合せず、残基１４３−１５０を除去してもα4β1に結合しなかった。(Newham 等, 1997, 上掲)。α４β１及びα４β７はＶＣＡＭ-１及びＭＡｄＣＡＭ-１を結合することができるにもかかわらず、リガンド選択性がある。α４β１は主にＶＣＡＭ-１のレセプターであり、α４β７は主にＭＡｄＣＡＭ-１のレセプターである。(Newham 等, 1997, 上掲)。
【００４７】
５．α４インテグリンの小分子アンタゴニスト
他の実施態様では、α４インテグリンアンタゴニストは小分子である。α４インテグリンアンタゴニストである小分子の例として、米国特許第６,２３９,１０８号、同第６，４６９，０４７号、同第６，４８２，８４９号及び同第６，７０６，７５３号、公開されたＰＣＴ出願番号国際公報０１／２１５８４及び国際公報０２／１６３１３、及び２００３年５月２０日に出願の米国特許仮出願番号６０／４７２，０７２に開示されたものなどがある。一実施態様では、アンタゴニストは国際公報０１／２１５８４に記載のα４インテグリンアンタゴニストとして列挙される何れか一の小分子であり、以下により詳細に記載する。他の実施態様では、アンタゴニストは、国際公報０１／２１５８４に挙げる何れか一の小分子又は下記の表に示されるものの何れかである。
【００４８】
ａ．化学の定義付け
ここで開示される小分子を定義するために使用する場合、次の化学用語は表示した定義を有する。
単独で使用されるか又はアルキルアミノ、アルキルスルホニル、アルキルチオ等の他の用語の一部として使用される「アルキル」という用語は、特定された炭素原子数を持ち、あるいは数が特定されていない場合には１２まで（１２を含む）の炭素原子を持つ分枝状又は非分枝状で飽和又は不飽和の脂肪族炭化水素基を意味する。「アルキル」は、単独で又他の用語の一部として使用される場合、飽和した炭化水素鎖を意味するが、「アルケニル」及び「アルキニル」等の不飽和炭化水素鎖もまた含む。アルキル基の例には、メチル、エチル、ｎ-プロピル、イソプロピル、ｎ-ブチル、イソ-ブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、ｎ-ペンチル、２-メチルブチル、２,２-ジメチルプロピル、ｎ-ヘキシル、２-メチルペンチル、２,２-ジメチルブチル、ｎ-ヘプチル、３-ヘプチル、２-メチルヘキシル等が含まれる。「低級アルキル」、「Ｃ１-Ｃ６アルキル」及び「１から６の炭素原子のアルキル」という用語は同義語であって、置き換え可能に使用される。好ましい「Ｃ１-Ｃ６アルキル」基はメチル、エチル、１-プロピル、イソプロピル、１-ブチル又はsec-ブチルである。
【００４９】
「置換アルキル」又は「置換Ｃｎ-Ｃｍアルキル」（ここで、ｍ及びｎはアルキル基に含まれる炭素原子の範囲を特定する整数である）という用語は、１、２、３又は４のハロゲン、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、未置換及び置換Ｃ１-Ｃ７アルコキシ、保護されたヒドロキシ、アミノ（アルキル及びジアルキルアミノを含む）、保護されたアミノ、未置換及び置換Ｃ１-Ｃ７アシルオキシ、未置換及び置換Ｃ３-Ｃ７ヘテロシクリル、未置換及び置換フェノキシ、ニトロ、カルボキシ、保護されたカルボキシ、未置換及び置換カルボアルコキシ、未置換及び置換アシル、カルバモイル、カルバモイルオキシ、シアノ、メチルスルホニルアミノ、未置換及び置換ベンジルオキシ、未置換及び置換Ｃ３-Ｃ６カルボシクリル又はＣ１-Ｃ４アルコキシ基により置換された上述のアルキル基を意味する。置換アルキル基は、同一の又は異なる置換基で１回(好ましい)、２回又は３回置換されていてもよい。
【００５０】
上述の置換アルキル基の例には、これらに限られないが；シアノメチル、ニトロメチル、ヒドロキシメチル、トリチルオキシメチル、プロピオニルオキシメチル、アミノメチル、カルボキシメチル、カルボキシエチル、カルボキシプロピル、アルキルオキシカルボニルメチル、アリルオキシカルボニルアミノメチル、カルバモイルオキシメチル、メトキシメチル、エトキシメチル、t-ブトキシメチル、アセトキシメチル、クロロメチル、ブロモメチル、ヨードメチル、トリフルオロメチル、６-ヒドロキシヘキシル、２,４-ジクロロ(ｎ-ブチル)、２-アミノ(イソ-プロピル)、２-カルバモイルオキシエチル等が含まれる。またアルキル基はカルボシクリル基で置換されていてもよい。その例には、シクロプロピルメチル、シクロブチルメチル、シクロペンチルメチル、及びシクロヘキシルメチル基、並びに対応する-エチル、-プロピル、-ブチル、-ペンチル、-ヘキシル基等が含まれる。上述した基の範囲に入る例示的な好ましい基には、置換メチル基、例えば、「置換Ｃｎ-Ｃｍアルキル」基と同じ置換基で置換されたメチル基が含まれる。置換メチル基の例には、ヒドロキシメチル、保護されたヒドロキシメチル（例えばテトラヒドロピラニルオキシメチル）、アセトキシメチル、カルバモイルオキシメチル、トリフルオロメチル、クロロメチル、カルボキシメチル、ブロモメチル及びヨードメチル等の基が含まれる。
【００５１】
「非芳香族」という用語は、芳香族性を定める特性を有していない炭素環又は複素環を意味する。芳香族性では、環は平面で、各環原子における環の平面に対して垂直なｐ-電子軌道を有し、環のｐｉ電子数が(４ｎ＋２)で、ここでｎが整数である(すなわち、ｐｉ電子数が２、６、１０又は１４である)ヒュッケル則を満足させるものでなければならない。ここで提供される非芳香環は、芳香族性に対するこれらの基準の一つ又は全てを満たさないものである。
【００５２】
ここで使用される「アルコキシ」という用語は、飽和、すなわちＯ-アルキルと、不飽和、すなわちＯ-アルケニル及びＯ-アルキニル基を含む。例示的なアルコキシ基は、メトキシ、エトキシ、ｎ-プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ-ブトキシ、t-ブトキシ及び同様の基のような特定された炭素原子数を持つ。「置換アルコキシ」という用語は「置換アルキル」基と同じ置換基で置換されたこれらのアルコキシ基を意味する。
「アシルオキシ」という用語は、ホルミルオキシ、アセトキシ、プロピオニルオキシ、ブチリルオキシ、ペンタノイルオキシ、ヘキサノイルオキシ、ヘプタノイルオキシ等のような特定数の炭素原子を持つカルボアシルオキシ基を示す。「置換アシルオキシ」という用語は「置換アルキル」基と同じ置換基で置換されたこれらのアルコキシ基を意味する。
「アルキルカルボニル」、「アルカノイル」及び「アシル」という用語は、ここでは交換可能に使用され、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、ペンタノイル、ヘキサノイル、ヘプタノイル、ベンゾイル等の特定数の炭素原子を持つ基を包含する。
「アルキルスルホニル」という用語は、基-ＮＨ-ＳＯ２-アルキル、-ＳＯ２-ＮＨ-アルキル、-Ｎ-(ＳＯ２-アルキル)２及び-ＳＯ２-Ｎ(アルキル)２を示す。好ましいアルキルスルホニル基は-ＮＨ-ＳＯ２-Ｍｅ、-ＮＨ-ＳＯ２-Ｅｔ、-ＮＨ-ＳＯ２-Ｐｒ、-ＮＨ-ＳＯ２-ｉＰｒ、-Ｎ-(ＳＯ２-Ｍｅ)２及び-Ｎ-(ＳＯ２-Ｂｕ)２である。
【００５３】
「アミノ」という用語は、第１級(すなわち-ＮＨ２)、第２級(すなわち-ＮＲＨ)及び第３級(すなわち-ＮＲＲ)アミンを示す。好ましい第２級及び第３級アミンはアルキルアミン及びジアルキルアミン、例えばメチルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、イソプロピルアミン、ジメチルアミン、ジエチルアミン、ジプロピルアミン及びジイソプロピルアミンである。
【００５４】
ここで「カルボキシル」とは、遊離酸-ＣＯＯＨ並びにそのエステル、例えばアルキル、アリール及びアラルキルエステルを意味する。好ましいエステルは、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ｉ-ブチル、ｓ-ブチル及びｔ-ブチルエステルである。
単独でまたカルボシクロアルキル基のような複合基中の一部として使用される「カルボシクリル」、「カルボサイクリック」及び「カルボシクロ」という用語は、３から１４の炭素原子、好ましくは３から７の炭素原子を有する単環式、二環式、又は三環式の脂肪族環を意味する。好ましいカルボサイクリック基には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシル基が含まれる。「置換カルボシクリル」及び「カルボシクロ」という用語は、「置換アルキル」基と同じ置換基で置換されたこれらの基を意味する。
「カルボシクロアルキル」基は上で定義されたアルキル基に共有的に結合した上で定義されたカルボシクロ基である。
【００５５】
「複素環」という用語は、少なくとも一の環原子がヘテロ原子(すなわち、Ｎ、Ｏ及びＳ、並びにＳＯ、又はＳＯ２)である５−１６員を有する単環式、二環式又は三環式の環系を意味する。環系は飽和、不飽和、又は部分的に不飽和であり、芳香族(非芳香族と特定されていない限り)であってもよい。例示的な複素環には、ピペリジン、ピペラジン、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、モルホリン、ピラン、ピロール、フラン、チオフェン(チエニル)、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、イソチアゾール、ジチアゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、ジオキサゾール、チアジアゾール、オキサジアゾール、テトラゾール、トリアゾール、チアトリアゾール、オキサトリアゾール、チアジアゾール、オキサジアゾール、プリン及びそのベンゾ縮合誘導体が含まれる。
【００５６】
「で置換されていてもよい」という用語は、別の定義を述べない限り、一又は複数の特定の置換基が、置換された部分に共有的に結合していることを意味すると理解される。１を超える場合、置換基は同一又は異なる基でありうる。
【００５７】
「アルケニル」という用語は、一又は複数の炭素-炭素二重結合を含む示された炭素原子数を有する分岐状又は非分岐状の炭化水素基を意味し、各二重結合は独立してシス、トランス、又は非幾何学的異性体である。「置換アルケニル」という用語は「置換アルキル」基と同じ置換基で置換されたこれらのアルケニル基を意味する。
「アルキニル」という用語は、一又は複数の炭素-炭素三重結合を含む示された炭素原子数を有する分岐状又は非分岐状の炭化水素基を意味する。「置換アルキニル」という用語は「置換アルキル」基と同じ置換基で置換されたこれらのアルキニル基を意味する。
「アルキルチオ」及び「Ｃ１-Ｃ１２置換アルキルチオ」という用語は、アルキルチオ又は置換アルキルチオ基が、示された基又は置換基に結合する点になる硫黄にそれぞれ結合したＣ１-Ｃ１２アルキル及びＣ１-Ｃ１２置換アルキル基を意味する。
「アルキレンジオキシ」基は-Ｏ-アルキル-Ｏ-基であり、ここでアルキルは上述したものである。好ましいアルキレンジオキシ基はメチレンジオキシ及びエチレンジオキシである。
【００５８】
単独で又は他の用語の一部として使用される場合、「アリール」という用語は、示された炭素原子数か、又は数が示されていない場合は１４までの炭素原子を有する、縮合していてもいなくてもよい、ホモ環式芳香族基を意味する。好ましいアリール基には、フェニル、ナフチル、ビフェニル、フェナントレニル、ナフタセニル等が含まれる(例えばLang's Handbook of Chemistry(Dean, J.A.編), 1985, 13版 表7-2参照)。
「アロイル」という用語は、ベンゾイル等の、カルボニルに結合したアリール基を意味する。
【００５９】
「置換フェニル」又は「置換アリール」という用語は、ハロゲン(Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ)、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシ、シアノ、ニトロ、アルキル(好ましくはＣ１-Ｃ６アルキル)、アルコキシ(好ましくはＣ１-Ｃ６アルコキシ)、ベンジルオキシ、カルボキシ、保護されたカルボキシ、カルボキシメチル、保護されたカルボキシメチル、ヒドロキシメチル、保護されたヒドロキシメチル、アミノメチル、保護されたアミノメチル、トリフルオロメチル、アルキルスルホニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、ヘテロシクリルスルホニルアミノ、ヘテロシクリル、アリール、又は他の特定された基から選択される、１、２、３、４又は５、好ましくは１−２、１−３又は１−４の置換基で置換されたフェニル基又はアリール基を示す。これらの置換基中のメチン(ＣＨ)及び／又はメチレン(ＣＨ２)基の一つが次に上述したものと同様の基で置換され得る。「置換フェニル」という用語の例には、限定するものではないが、モノ-又はジ(ハロ)フェニル基、例えば２-クロロフェニル、２-ブロモフェニル、４-クロロフェニル、２,６-ジクロロフェニル、２,５-ジクロロフェニル、３,４-ジクロロフェニル、３-クロロフェニル、３-ブロモフェニル、４-ブロモフェニル、３,４-ジブロモフェニル、３-クロロ-４-フルオロフェニル、２-フルオロフェニル等；モノ-又はジ(ヒドロキシ)フェニル基、例えば４-ヒドロキシフェニル、３-ヒドロキシフェニル、２,４-ジヒドロキシフェニル、それらの保護されたヒドロキシ誘導体等；ニトロフェニル基、例えば３-又は４-ニトロフェニル；シアノフェニル基、例えば４-シアノフェニル；モノ-又はジ(低級アルキル)フェニル基、例えば４-メチルフェニル、２,４-ジメチルフェニル、２-メチルフェニル、４-(イソプロピル)フェニル、４-エチルフェニル、３-(ｎ-プロピル)フェニル等；モノ又はジ(アルコキシ)フェニル基、例えば３,４-ジメトキシフェニル、３-メトキシ-４-ベンジルオキシフェニル、３-メトキシ-４-(１-クロロメチル)ベンジルオキシフェニル、３-エトキシフェニル、４-(イソプロポキシ)フェニル、４-(ｔ-ブトキシ)フェニル、３-エトキシ-４-メトキシフェニル等；３-又は４-トリフルオロメチルフェニル；モノ-又はジカルボキシフェニル又は(保護されたカルボキシ)フェニル基、例えば４-カルボキシフェニル；モノ-又はジ(ヒドロキシメチル)フェニル又は(保護されたヒドロキシメチル)フェニル、例えば３-(保護されたヒドロキシメチル)フェニル又は３,４-ジ(ヒドロキシメチル)フェニル；モノ-又はジ(アミノメチル)フェニル又は(保護されたアミノメチル)フェニル、例えば２-(アミノメチル)フェニル又は２,４-(保護されたアミノメチル)フェニル；又はモノ-又はジ(Ｎ-(メチルスルホニルアミノ))フェニル、例えば３-(Ｎ-メチルスルホニルアミノ))フェニルが含まれる。また、「置換フェニル」という用語は、例えば３-メチル-４-ヒドロキシフェニル、３-クロロ-ヒドロキシフェニル、２-メトキシ-４-ブロモフェニル、４-エチル-２-ヒドロキシフェニル、３-ヒドロキシ-４-ニトロフェニル、２-ヒドロキシ-４-クロロフェニル等の、異なる置換基で二置換されたフェニル基、並びに例えば３-メトキシ-４-ベンジルオキシ-６-メチルスルホニルアミノ、３-メトキシ-４-ベンジルオキシ-６-フェニルスルホニルアミノ等の、異なる置換基で三置換されたフェニル基、及び３-メトキシ-４-ベンジルオキシ-５-メチル-６-フェニルスルホニルアミノ等の、異なる置換基で四置換されたフェニル基も表す。好ましい置換フェニル基には、２-クロロフェニル、２-アミノフェニル、２-ブロモフェニル、３-メトキシフェニル、３-エトキシ-フェニル、４-ベンジルオキシフェニル、４-メトキシフェニル、３-エトキシ-４-ベンジルオキシフェニル、３,４-ジエトキシフェニル、３-メトキシ-４-ベンジルオキシフェニル、３-メトキシ-４-(１-クロロメチル)ベンジルオキシ-フェニル、３-メトキシ-４-(１-クロロメチル)ベンジルオキシ-６-メチルスルホニルアミノフェニル基が含まれる。また、「置換フェニル」という用語は、そこに縮合するアリール、フェニル又はヘテロアリール基を有するフェニル基を表す。また縮合環は、「置換アルキル」基に対して上で特定された置換基の任意のもの、好ましくは１、２又は３のもので置換されてもよい。
【００６０】
「アリールアルキル」という用語は、示された炭素原子数を有するアルキル基に付加された、示された炭素原子数を有する１、２又は３のアリール基を意味し、限定するものではないが、ベンジル、ナフチルメチル、フェネチル、ベンズヒドリル(ジフェニルメチル)、トリチル等を含む。好ましいアリールアルキル基はベンジル基である。
「置換アリールアルキル」という用語は、任意の炭素において、アリール基、好ましくはＣ６-Ｃ１０アリール基で置換されたアルキル基、好ましくはＣ１-Ｃ８アルキル基で、任意のアリール環位置を介してアルキル基に結合され、ハロゲン(Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ)、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシ、アミノ、保護されたアミノ、Ｃ１-Ｃ７アシルオキシ、ニトロ、カルボキシ、保護されたカルボキシ、カルバモイル、カルバモイルオキシ、シアノ、Ｃ１-Ｃ６アルキルチオ、Ｎ-(メチルスルホニルアミノ)又はＣ１-Ｃ４アルコキシから選択される１、２又は３の基がアルキル部に置換されたものを示す。場合によっては、アリール基はハロゲン、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシ、ニトロ、Ｃ１-Ｃ６アルキル、Ｃ１-Ｃ６アルコキシ、カルボキシ、保護されたカルボキシ、カルボキシメチル、保護されたカルボキシメチル、ヒドロキシメチル、保護されたヒドロキシメチル、アミノメチル、保護されたアミノメチル、又はＮ-(メチルスルホニルアミノ)基から選択される１、２、３、４又は５の基で置換されていてもよい。前と同様に、Ｃ１-Ｃ８アルキル部又はアリール部又は双方が二置換されている場合、置換基は同一でも異なっていてもよい。この基は置換アラルコキシ(aralkoxy)基の置換されたアラルキル部分としてまた現れうる。
「置換アラルキル」及び「置換アラルコキシ」基中に生じる場合のこの基の例には、例えば２-フェニル-１-クロロエチル、１-フェニル-１-クロロメチル、１-フェニル-１-ブロモメチル、２-(４-メトキシフェニル)エチル、２,６-ジヒドロキシ-４-フェニル(ｎ-ヘキシル)、５-シアノ-３-メトキシ-２-フェニル(ｎ-ペンチル)、３-(２,６-ジメチルフェニル)ｎ-プロピル、４-クロロ-３-アミノベンジル、６-(４-メトキシフェニル)-３-カルボキシ(ｎ-ヘキシル)、５-(４-アミノメチルフェニル)-３-(アミノメチル)(ｎ-ペンチル)等の基が含まれる。
【００６１】
ここで使用される場合の「カルボキシ-保護基」という用語は、反応が化合物の他の官能基で行われる間、カルボン酸基をブロックし又は保護するためによく使用されるカルボン酸基のエステル誘導体の一つを意味する。このようなカルボン酸保護基の例には、４-ニトロベンジル、４-メトキシベンジル、３,４-ジメトキシベンジル、２,４-ジメトキシベンジル、２,４,６-トリメトキシベンジル、２,４,６-トリメチルベンジル、ペンタメチルベンジル、３,４-メチレンジオキシベンジル、ベンズヒドリル、４,４'-ジメトキシベンズヒドリル、２,２',４,４'-テトラメトキシベンズヒドリル、アルキル、例えばｔ-ブチル又はｔ-アミル、トリチル、４-メトキシトリチル、４,４'-ジメトキシトリチル、４,４',４''-トリメトキシトリチル、２-フェニルプロプ-２-イル、トリメチルシリル、ｔ-ブチルジメチルシリル、フェナシル、２,２,２-トリクロロエチル、β-(トリメチルシリル)エチル、β-(ジ(ｎ-ブチル)メチルシリル)エチル、ｐ-トルエンスルホニルエチル、４-ニトロベンジルスルホニルエチル、アリル、シンナミル、１-(トリメチルシリルメチル)プロピ-１-エン-３-イル及び類似部分が含まれる。使用されるカルボキシ-保護基の種は、誘導体化されたカルボン酸が分子の他の位置に対する続く反応の条件に対して安定であり、分子の残りを壊さないで適切な位置で除去することができる限り、重要ではない。特に、ラネーニッケル等の高度に活性化された金属触媒を使用する還元条件又は強い求核性塩基にカルボキシ-保護分子がさらされないことが重要である。(このような過酷な除去条件は、以下に検討するアミノ-保護基及びヒドロキシ-保護基を除去する場合にも避けられるべきである。)好ましいカルボン酸保護基はアリル及びｐ-ニトロベンジル基である。セファロスポリン、ペニシリン及びペプチド技術において使用される類似したカルボキシ-保護基を、カルボキシ基置換基を保護するために使用することもできる。これらの基のさらなる例は、T.W. Greene及びP.G.M. Wuts,「Protective Groups in Organic Synthesis」、2nd ed., John Wiley & Sons, Inc., New York, N.Y., 1991, 5章；E. Haslam, 「Protective Groups in Organic Chemistry」、J.G.W. McOmie, Ed., Plenum Press, New York, N.Y., 1973, 5章、及びT.W. Greene, 「Protective Groups in Organic Synthesis」、John Wiley & Sons, New York, N.Y, 1981, 5章に見出される。「保護されたカルボキシ」という用語は上記のカルボキシル-保護基の一つで置換されたカルボキシ基を意味する。
【００６２】
ここで使用される場合の「ヒドロキシ-保護基」という用語は、反応が化合物の他の官能基で行われる間、ヒドロキシ基をブロックし又は保護するためによく使用されるヒドロキシ基の誘導体を意味する。このような保護基の例には、テトラヒドロピラニルオキシ、アセトキシ、カルバモイルオキシ、トリフルオロ、クロロ、カルボキシ、ブロモ及びヨード基が含まれる。これらの基のさらなる例は、T.W. Greene及びP.G.M. Wuts,「Protective Groups in Organic Synthesis」、2nd ed., John Wiley & Sons, Inc., New York, N.Y., 1991, 2-3章；E. Haslam, 「Protective Groups in Organic Chemistry」、J.G.W. McOmie, Ed., Plenum Press, New York, N.Y., 1973, 5章、及びT.W. Greene, 「Protective Groups in Organic Synthesis」、John Wiley and Sons, New York, N.Y., 1981に見出される。「保護されたヒドロキシ」という用語は、上記のヒドロキシ-保護基の一つで置換されたヒドロキシ基を意味する。
【００６３】
ここで使用される場合の「アミノ-保護基」という用語は、反応が化合物の他の官能基で行われる間、アミノ基をブロックし又は保護するためによく使用される基の誘導体を意味する。このような保護基の例には、カルバマート、アミド、アルキル及びアリール基、イミン、並びに所望のアミン基を再生するために除去され得る多くのＮ-ヘテロ原子誘導体が含まれる。これらの基のさらなる例は、T.W. Greene及びP.G.M. Wuts,「Protective Groups in Organic Synthesis」、2nd ed., John Wiley & Sons, Inc., New York, N.Y., 1991, 7章；E. Haslam, 「Protective Groups in Organic Chemistry」、J.G.W. McOmie, Ed., Plenum Press, New York, N.Y., 1973, 5章、及びT.W. Greene, 「Protective Groups in Organic Synthesis」、John Wiley and Sons, New York, N.Y., 1981に見出される。「保護されたアミノ」という用語は、上記のアミノ-保護基の一つで置換されたアミノ基を意味する。
【００６４】
「複素環基」、「複素環」、「ヘテロシクリル」又は「ヘテロシクロ」という用語は、単独でまたヘテロシクロアルキル基のような複合基中の一部として使用される場合には、交換可能に使用され、一般に３から約１０の環原子の、示された原子数を有する任意の単環式、二環式又は三環式の飽和又は非芳香的に不飽和な環を意味し、ここで環原子は炭素及び１、２、３又は４の窒素、硫黄又は酸素原子である。典型的には、５員環は０から２の二重結合を有し、６員又は７員環は０から３の二重結合を有し、窒素又は硫黄ヘテロ原子は場合によっては酸化されていてもよく、任意の窒素へテロ原子は場合によっては第４級化されていてもよい。その例には、モルホリニル、ピロリジニル、オキシラニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、２,３-ジヒドロフラニル、２Ｈ-ピラニル、テトラヒドロピラニル、チイラニル、チエタニル、テトラヒドロチエタニル、アジリジニル、アゼチジニル、１-メチル-２-ピロリル、ピペリジニル、及び３,４,５,６-テトラヒドロピペリジニルが含まれる。
【００６５】
「ヘテロシクロアルキル」又は「ヘテロシクロアルケニル」基は上で定義したアルキル又はアルケニル基に共有的に結合された上で定義されたヘテロシクロ基である。
他の定義を記載していない場合、「ヘテロアリール」は、単独でまたヘテロアラルキル基等の複合基中の一部として使用される場合、示された原子数を有する任意の単環式、二環式又は三環式の芳香族環系を意味し、ここで少なくとも１つの環は、窒素、酸素及び硫黄の群から選択される１ないし４のヘテロ原子を有する５員、６員又は７員環であり、好ましくは少なくとも１つのヘテロ原子は窒素である( 上掲のLang's Handbook of Chemistry)。上記ヘテロアリール環の任意のものがベンゼン環に縮合している任意の二環式基も定義に含まれる。窒素又は酸素がヘテロ原子であるヘテロアリールが好ましい。
次の環系は「ヘテロアリール」という用語で示される(置換又は未置換の)ヘテロアリール基の例である：チエニル、フリル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、テトラゾリル、チアトリアゾリル、オキサトリアゾリル、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、ピリダジニル、チアジニル、オキサジニル、トリアジニル、チアジアジニル、オキサジアジニル、ジチアジニル、ジオキサジニル、オキサチアジニル、テトラジニル、チアトリアジニル、オキサトリアジニル、ジチアジアジニル、イミダゾリニル、ジヒドロピリミジル、テトラヒドロピリミジル、テトラゾロ[１,５-ｂ]ピリダジニル及びプリニル、並びにベンゾ-縮合誘導体、例えばベンゾオキサゾリル、ベンゾフリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾイミダゾリル及びインドリル。
【００６６】
硫黄又は酸素原子及び１ないし３の窒素原子を有する５員の複素環系もまた本発明での使用に適している。そのような好ましい基の例には、チアゾリル、特にチアゾール-２-イル及びチアゾール-２-イル-Ｎ-オキシド、チアジアゾリル、特に１,３,４-チアジアゾール-５-イル及び１,２,４-チアジアゾール-５-イル、オキサゾリル、好ましくはオキサゾール-２-イル、及びオキサジアゾリル、例えば１,３,４-オキサジアゾール-５-イル、及び１,２,４-オキサジアゾール-５-イルが含まれる。２ないし４の窒素原子を有する５員環系のさらに好ましい例の基には、イミダゾリル、好ましくはイミダゾール-２-イル；トリアゾリル、好ましくは１,３,４-トリアゾール-５-イル；１,２,３-トリアゾール-５-イル、１,２,４-トリアゾール-５-イル、及びテトラゾリル、好ましくは１Ｈ-テトラゾール-５-イルが含まれる。ベンゾ-縮合誘導体の例の好ましい基は、ベンゾオキサゾール-２-イル、ベンズチアゾール-２-イル及びベンズイミダゾール-２-イルである。
上記複素環系のさらに適切な特定の例は、１ないし３の窒素原子と、場合によっては硫黄又は酸素原子を有する６員環系である。このような例には、ピリジル、例えばピリド-２-イル、ピリド-３-イル、及びピリド-４-イル；ピリミジル、好ましくはピリミド-２-イル及びピリミド-４-イル；トリアジニル、好ましくは１,３,４-トリアジン-２-イル及び１,３,５-トリアジン-４-イル；ピリダジニル、特にピリダジン-３-イル、及びピラジニルが含まれる。ピリジン-Ｎ-オキシド及びピリダジン-Ｎ-オキシド及びピリジル、ピリミド-２-イル、ピリミド-４-イル、ピリダジニル及び１,３,４-トリアジン-２-イル基が好ましい基である。置換されていてもよい複素環系に対する置換基と、上で検討した５員及び６員環系のさらなる例は、W. Druckheimerらの米国特許第４２７８７９３号に見出すことができる。
【００６７】
「ヘテロアリール」の特に好ましい基には；１,３-チアゾール-２-イル、４-(カルボキシメチル)-５-メチル-１,３-チアゾール-２-イル、４-(カルボキシメチル)-５-メチル-１,３-チアゾール-２-イルのナトリウム塩、１,２,４-チアジアゾール-５-イル、３-メチル-１,２,４-チアジアゾール-５-イル、１,３,４-チアゾール-５-イル、２-メチル-１,３,４-トリアゾール-５-イル、２-ヒドロキシ-１,３,４-トリアゾール-５-イル、２-カルボキシ-４-メチル-１,３,４-トリアゾール-５-イルのナトリウム塩、２-カルボキシ-４-メチル-１,３,４-トリアゾール-５-イル、１,３-オキサゾール-２-イル、１,３,４-オキサジアゾール-５-イル、２-メチル-１,３,４-オキサジアゾール-５-イル、２-(ヒドロキシメチル)-１,３,４-オキサジアゾール-５-イル、１,２,４-オキサジアゾール-５-イル、１,３,４-チアジアゾール-５-イル、２-チオール-１,３,４-チアジアゾール-５-イル、２-(メチルチオ)-１,３,４-チアジアゾール-５-イル、２-アミノ-１,３,４-チアジアゾール-５-イル、１Ｈ-テトラゾール-５-イル、１-メチル-１Ｈ-テトラゾール-５-イル、１-(１-(ジメチルアミノ)エチ-２-イル)-１Ｈ-テトラゾール-５-イル、１-(カルボキシメチル)-１Ｈ-テトラゾール-５-イル、１-(カルボキシメチル)-１Ｈ-テトラゾール-５-イルのナトリウム塩、１-(メチルスルホン酸)-１Ｈ-テトラゾール-５-イル、１-(メチルスルホン酸)-１Ｈ-テトラゾール-５-イルのナトリウム塩、２-メチル-１Ｈ-テトラゾール-５-イル、１,２,３-トリアゾール-５-イル、１-メチル-１,２,３-トリアゾール-５-イル、２-メチル-１,２,３-トリアゾール-５-イル、４-メチル-１,２,３-トリアゾール-５-イル、ピリド-２-イル-Ｎ-オキシド、６-メトキシ-２-(ｎ-オキシド)-ピリダジ-３-イル、６-ヒドロキシピリダジ-３-イル、１-メチルピリド-２-イル、１-メチルピリド-４-イル、２-ヒドロキシピリミド-４-イル、１,４,５,６-テトラヒドロ-５,６-ジオキソ-４-メチル-アス-トリアジン-３-イル、１,４,５,６-テトラヒドロ-４-(ホルミルメチル)-５,６-ジオキソ-アス-トリアジン-３-イル、２,５-ジヒドロ-５-オキソ-６-ヒドロキシ-アストリアジン-３-イル、２,５-ジヒドロ-５-オキソ-６-ヒドロキシ-アス-トリアジン-３-イルのナトリウム塩、２,５-ジヒドロ-５-オキソ-６-ヒドロキシ-２-メチル-アストリアジン-３-イルのナトリウム塩、２,５-ジヒドロ-５-オキソ-６-ヒドロキシ-２-メチル-アス-トリアジン-３-イル、２,５-ジヒドロ-５-オキソ-６-メトキシ-２-メチル-アス-トリアジン-３-イル、２,５-ジヒドロ-５-オキソ-アス-トリアジン-３-イル、２,５-ジヒドロ-５-オキソ-２-メチル-アス-トリアジン-３-イル、２,５-ジヒドロ-５-オキソ-２,６-ジメチル-アス-トリアジン-３-イル、テトラゾロ[１,５-ｂ]ピリダジン-６-イル及び８-アミノテトラゾロ[１,５-ｂ]ピリダジン-６-イルが含まれる。
【００６８】
「ヘテロアリール」の別の基には；４-(カルボキシメチル)-５-メチル-１,３-チアゾール-２-イル、４-(カルボキシメチル)-５-メチル-１,３-チアゾール-２-イルのナトリウム塩、１,３,４-チアゾール-５-イル、２-メチル-１,３,４-トリアゾール-５-イル、１Ｈ-テトラゾール-５-イル、１-メチル-１Ｈ-テトラゾール-５-イル、１-(１-(ジメチルアミノ)エチ-２-イル)-１Ｈ-テトラゾール-５-イル、１-(カルボキシメチル)-１Ｈ-テトラゾール-５-イル、１-(カルボキシメチル)-１Ｈ-テトラゾール-５-イルのナトリウム塩、１-(メチルスルホン酸)-１Ｈ-テトラゾール-５-イル、１-(メチルスルホン酸)-１Ｈ-テトラゾール-５-イルのナトリウム塩、１,２,３-トリアゾール-５-イル、１,４,５,６-テトラヒドロ-５,６-ジオキソ-４-メチル-アス-トリアジン-３-イル、１,４,５,６-テトラヒドロ-４-(２-ホルミルメチル)-５,６-ジオキソ-アス-トリアジン-３-イル、２,５-ジヒドロ-５-オキソ-６-ヒドロキシ-２-メチル-アス-トリアジン-３-イルのナトリウム塩、２,５-ジヒドロ-５-オキソ-６-ヒドロキシ-２-メチル-アス-トリアジン-３-イル、テトラゾロ[１,５-ｂ]ピリダジン-６-イル、及び８-アミノテトラゾロ[１,５-ｂ]ピリダジン-６-イルが含まれる。
「低級アルキル」を形成するアルキルのような用語と共に使用される場合の「低級」という用語は、例えば１〜６の炭素原子を含むことを意味する。
【００６９】
「製薬的に許容可能な塩」には、酸付加塩と塩基付加塩の双方が含まれる。「製薬的に許容可能な酸付加塩」は、フリーの塩基の生物学的効果と性質を保持し、生物学的に又は他の形で所望されないものではない塩を意味するものであり、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、炭酸、リン酸等から生成され、有機酸は、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロン酸(maloneic acid)、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、アスパラギン酸、アスコルビン酸、グルタミン酸、アントラニル酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、エンボン酸、フェニル酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ-トルエンスルホン酸、サリチル酸等の有機酸の脂肪族、脂環式、芳香族、アリール脂肪族(araliphatic)、複素環式、カルボキシル及びスルホンクラスのものから選択される。
「製薬的に許容可能な塩基付加塩」には、無機塩基、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウムの塩等から誘導されるものが含まれる。特に好ましくは、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、カルシウム及びマグネシウムの塩である。製薬的に許容可能な無毒の有機塩基から誘導される塩には、第１級、第２級及び第３級アミン、自然に生じる置換アミンを含む置換アミン、環状アミン及び塩基性イオン交換樹脂、例えばイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２-ジエチルアミノエタノール、トリメタミン、ジシクロヘキシルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン(hydrabamine)、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペリジン(piperizine)、ピペリジン(piperidine)、Ｎ-エチルピペリジン、ポリアミン樹脂等が含まれる。特に好ましい無毒性有機塩基はイソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、トリメタミン、ジシクロヘキシルアミン、コリン及びカフェインである。
【００７０】
ｂ．α４インテグリンアンタゴニスト−式Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩ
本発明の方法に有用なα４インテグリンの小分子アンタゴニストには、国際公開第０１／２１５８４号に記載されているような、式Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩ：
2007532681.tif 000024
[上式中、
ＺはＨ又は低級アルキルであり；
Ａは次の構造：
2007532681.tif 000025
を有することができ、
ここで、
Ｂは、シアノアルキル、炭素環又は複素環であって、一又は複数のＲ１置換基で置換されていてもよいもの；ｑは０−３であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は独立して、水素、アルキル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ニトロ、尿素、シアノ、チオ、アルキルチオ、ヒドロキシ、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アリールオキシカルボニルアミノ、アルキルスルフィニル、スルホニル、アルキルスルホニル、アラルキルスルホニル、アリールスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、アルカノイル、アルカノイルアミノ、シクロアルカノイルアミノ、アリール、アリールアルキル、ハロゲン、又はアルキルホスホニルであり、さらにＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、ヒドロキシ、カルボキシル、低級アルコキシカルボニル、低級アルキル、ニトロ、オキソ、シアノ、カルボシクリル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、低級アルキルチオ、低級アルコキシ、低級アルキルアミノ、低級アルカノイルアミノ、低級アルキルスルフィニル、低級スルホニル、低級アルキルスルホニル、低級アルカノイル、アリール、アロイル、ヘテロシクリルカルボニル、ハロゲン及び低級アルキルホスホニルからなる群から選択される０−３の置換基で置換されており；又はＲ１ないしＲ５の２つは共同して、炭素環又は複素環を形成し；
ＹはＨ、アルコキシ、アルコキシアルコキシ、アリールオキシ、アルキルアミノアルコキシ、ジアルキルアミノアルコキシ、アルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロシクリル又はヘテロアリールアルキルであり、上述したそれぞれは置換されていても未置換であってもよく；
Ｘ１は、Ｈ、Ｃ(Ｏ)ＯＲ、Ｃ(Ｏ)ＮＲａＲｂ、Ｃ(Ｏ)Ｒ、又はＣ(Ｏ)ＳＲであり、ここでＲ、Ｒａ及びＲｂは、個々に、水素、又はアルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリールであって、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシル、ニトロ、シアノ、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アリール、アロイル、アリールオキシ、アラルキル、アラルキルオキシ、アリールオキシカルボニル、アラルキルオキシカルボニル、アルキレンジオキシ、低級アルコキシカルボニル、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アルキルチオ、低級アルコキシ、低級アルキルアミノ、低級アルキルスルフィニル、低級スルホニル、低級アルキルスルホニル、低級アルカノイル、低級アルキルホスホニル、アミノスルホニル低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、アルキルスルフィニル低級アルキル、アルキルスルホニル低級アルキル、アルキルチオ低級アルキル、ヘテロアリールチオ低級アルキル、ヘテロアリールオキシ低級アルキル、ヘテロアリールアミノ低級アルキル、ハロ低級アルキル、及びアルコキシ低級アルキルからなる群から選択される０−４の置換基で置換されるものであり；ここで前記ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アリール、アロイル、アリールオキシ、アラルキル、アラルキルオキシ、アリールオキシカルボニル及びアラルキルオキシカルボニルはハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、カルボキシル、ニトロ、シアノ、アルキル及びアルコキシで置換されていてもよく；またここでＲａ及びＲｂはそれらが結合している窒素原子と共同して、０−５のＲ又はＲｄ置換基で置換されたヘテロシクリル又はヘテロアリール基を形成してよく；ここでＲｄは次の構造：
2007532681.tif 000026
を有するものであり；
ここでＸ'はＣ(Ｏ)ＮＲａ、Ｃ(Ｏ)又は結合からなる群から選択される二価のリンカーであり；
Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシル、ニトロ、シアノ、又は置換又は未置換のアルキル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アリール、アロイル、アリールオキシ、アルキレンジオキシ、低級アルキルカルボニルアミノ、低級アルケニルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アリールアルキルカルボニルアミノ、低級アルコキシカルボニルアミノ、低級アルキルアミノカルボニルアミノ、アリールアミノカルボニルアミノ、低級アルコキシカルボニル、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アルキルチオ、低級アルコキシ、低級アルキルアミノ、低級アルキルスルフィニル、低級スルホニル、低級アルキルスルホニル、低級アルカノイル、低級アルキルホスホニル、アミノスルホニル低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、アルキルスルフィニル低級アルキル、アルキルスルホニル低級アルキル、アルキルチオ低級アルキル、ヘテロアリールチオ低級アルキル、ヘテロアリールオキシ低級アルキル、ヘテロアリールアミノ低級アルキル、ハロ低級アルキル、アルコキシ低級アルキルであり；ここでＸ１及びＸ２又はＸ３は互いに結合して、ヘテロ環又はヘテロアリール環(類)を形成してよく；又はＸ３とＺは共同してヘテロ二環を形成し；
Ｘ１’、Ｘ２’、Ｘ３’及びＸ４’はそれぞれ独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシル、ニトロ、シアノ、又は置換又は未置換のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アリール、アロイル、アリールオキシ、アルキレンジオキシ、低級アルキルカルボニルアミノ、低級アルケニルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アリールアルキルカルボニルアミノ、低級アルコキシカルボニルアミノ、低級アルキルアミノカルボニルアミノ、アリールアミノカルボニルアミノ、低級アルコキシカルボニル、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アルキルチオ、低級アルコキシ、低級アルキルアミノ、低級アルキルスルフィニル、低級スルホニル、低級アルキルスルホニル、低級アルカノイル、低級アルキルホスホニル、アミノスルホニル低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、アルキルスルフィニル低級アルキル、アルキルスルホニル低級アルキル、アルキルチオ低級アルキル、ヘテロアリールチオ低級アルキル、ヘテロアリールオキシ低級アルキル、ヘテロアリールアミノ低級アルキル、ハロ低級アルキル、アルコキシ低級アルキルである]；
の化合物又はその製薬的に許容可能な塩が含まれる。
【００７１】
本発明の化合物は一又は複数の不斉炭素原子を含む。従って、化合物はジアステリオマー、エナンチオマー又はそれらの混合物として存在し得る。上述した合成法は、出発物質又は中間生成物として、ラセミ化合物、ジアステリオマー又はエナンチオマーを使用してよい。ジアステリオマー性化合物はクロマトグラフィー又は結晶化法により分離され得る。同様に、エナンチオマー混合物は、同じ技術又は当該分野で公知の他の技術を使用して分離され得る。各不斉炭素原子はＲ又はＳ配置で存在し、これらの配置の双方が本発明の範囲内である。Ｓ配置を有する化合物が好ましい。
【００７２】
好ましい一実施態様では、構造ＩにおけるＸ１は、残りの変数Ａ、Ｚ、Ｙ、Ｘ２、Ｘ３及びＸ４が上述した定義の任意のものを有するＣ(Ｏ)ＯＲ、Ｃ(Ｏ)Ｒ、又はＣ(Ｏ)ＳＲ、より好ましくはＣ(Ｏ)ＮＲａＲｂである。Ｘ１基は好ましくは環の結合点に対してパラ位にあるが、また好ましくはメタ位にあってもよい。ＲａとＲｂは、好ましくはそれらが結合している窒素原子と共同して、０−５のＲ置換基で置換された５員又は６員のヘテロシクリル又はヘテロアリール基を形成してもよい。ヘテロシクリル又はヘテロアリール環系は、好ましくは一つの窒素原子を含むが、該環系に他の窒素又は酸素原子を含んでいてもよい。ヘテロ環系は縮合ヘテロシクリル又はヘテロアリール環、又はその双方の組合せを含んでいてもよく、その環は置換されていても未置換でもよい。
適切な特定のヘテロシクリル及びヘテロアリール基の代表例は：
2007532681.tif 000027
である。
【００７３】
また、Ｒ、Ｒａ及びＲｂは非環式、例えば水素又はアルキル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリールであって、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシル、ニトロ、シアノ、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アリール、アロイル、アリールオキシ、アルキレンジオキシ、低級アルコキシカルボニル、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アルキルチオ、低級アルコキシ、低級アルキルアミノ、低級アルキルスルフィニル、低級スルホニル、低級アルキルスルホニル、低級アルカノイル、低級アルキルホスホニル、アミノスルホニル低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、アルキルスルフィニル低級アルキル、アルキルスルホニル低級アルキル、アルキルチオ低級アルキル、ヘテロアリールチオ低級アルキル、ヘテロアリールオキシ低級アルキル、ヘテロアリールアミノ低級アルキル、ハロ低級アルキル、アルコキシ低級アルキルからなる群から選択される０−４の置換基で置換され；場合によっては上述したように置換されたものである。好ましい基は、置換又は未置換の低級アルキル、低級アルケニル、アリール、及びアリール低級アルキルである。
このようなＲ、Ｒａ及びＲｂ基の代表例のいくつかを以下に示す：
2007532681.tif 000028
【００７４】
好ましい実施態様では、Ａは次の構造(ＩＸ)：
2007532681.tif 000029
[ここで、好ましくは、Ｒ１、Ｒ５又はＲ１及びＲ５の双方が水素ではない]
を有することができる。つまり、好ましいＡ基はオルト置換ベンゾイル基である。特に好ましいオルト置換基は、クロロ、ブロモ、アミノ及びヒドロキシである。Ｒ１及び／又はＲ５に加えて、ベンゾイルのフェニル環は、好ましくはＲ２、Ｒ３又はＲ４に１又は２の付加的な置換基を有する。好ましいＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５には、それぞれ置換されていても未置換であってもよいニトロ、ハロゲン(Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ)、アミノ、アリール、低級アルキル、低級アルキルチオ、低級アルコキシ、低級アルキルアミノ、低級アルキルスルフィニル、低級アルキルスルホニル、低級アルカノイル、及び低級アルキルホスホニルが含まれる。
構造Ａ(ＩＸ)の代表例のいくつかには：
2007532681.tif 000030
が含まれる。
【００７５】
Ｙは、好ましくはＯＨ、又はエステル、又はその製薬的に許容可能なカルボン酸塩である。好ましいエステルは、置換又は未置換のアルキル、アルケニル、アリール、及びアリールアルキルエステルである。
Ｚは好ましくは水素である。
好ましいＸ２、Ｘ３及びＸ４には、ハロゲン、アルキル、アミノ、アルキルアミノ、及びアルキルカルボニルアミノが含まれ、アルキル基は置換されていても未置換であってもよい。構造Ｉを有する化合物の場合は、Ｘ２及びＸ３はより好ましくは水素である。構造ＩＩを有する化合物の場合は、Ｘ２、Ｘ３及びＸ４はより好ましくは水素である。
【００７６】
特定の実施態様では、式Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩのＸ１は、それが依存するカルボニルと組み合わされた場合に、Ｒ置換基と称される以下の表１に示す基の任意の一つとすることができる。特定の実施態様では、Ａは、Ｒ'置換基と称される表１に示す任意の基である。
【００７７】
ｃ．式Ｘの好ましい化合物
特定のα４インテグリンアンタゴニストには、表１及び２に示されるＲ及びＲ'置換基を有する以下の式Ｘのもの、並びに表３に示す特定の化合物が含まれる。
2007532681.tif 000031
【００７８】
表１．式ＸのＲ及びＲ'置換基
2007532681.tif 000032
2007532681.tif 000033
2007532681.tif 000034
2007532681.tif 000035
2007532681.tif 000036
2007532681.tif 000037
2007532681.tif 000038
2007532681.tif 000039
2007532681.tif 000040
2007532681.tif 000041
2007532681.tif 000042
2007532681.tif 000043
2007532681.tif 000044
2007532681.tif 000045
2007532681.tif 000046
2007532681.tif 000047
2007532681.tif 000048
2007532681.tif 000049
2007532681.tif 000050
2007532681.tif 000051
【００７９】
他のα４インテグリンの小分子アンタゴニストには、以下の表に列挙されているものが含まれる。
2007532681.tif 000052
2007532681.tif 000053
【００８０】
ｄ．特定のα４インテグリンの小分子アンタゴニスト
α４インテグリンの小分子アンタゴニストの特定かつ代表的な例を、以下の表３に列挙する：
2007532681.tif 000054
2007532681.tif 000055
2007532681.tif 000056
2007532681.tif 000057
2007532681.tif 000058
2007532681.tif 000059
2007532681.tif 000060
2007532681.tif 000061
2007532681.tif 000062
2007532681.tif 000063
2007532681.tif 000064
2007532681.tif 000065
2007532681.tif 000066
2007532681.tif 000067
2007532681.tif 000068
2007532681.tif 000069
2007532681.tif 000070
2007532681.tif 000071
2007532681.tif 000072
2007532681.tif 000073
2007532681.tif 000074
2007532681.tif 000075
【００８１】
Ｄ．αＬインテグリン
ここで使用される場合の「αＬインテグリン」という用語は、αＬサブユニットとβサブユニットを含むヘテロダイマーを意味する。αＬインテグリンの一例には、αＬβ２サブユニット(ＬＦＡ-１又はＬＦＡ-１インテグリン)が含まれる。αＬインテグリンの生物活性の例には、次の活性の任意の一つ又は組合せが含まれる：(１)(例えば、ＣＤ５４(ＩＣＡＭ-１)、ＣＤ１０２(ＩＣＡＭ-２)、ＣＤ５０(ＩＣＡＭ-３)、ＣＤ２４２(ＩＣＡＭ-４)、及びＩＣＡＭ-５(テレセファリン(telecephalin))の任意の一つ等の)ＬＦＡ-１のリガンドへの結合、及び(２)器官、又は固定化脾臓、又はリンパ節細胞へのＢリンパ球の付着の促進。
【００８２】
１．αＬインテグリンのリガンド
一実施態様では、αＬβ２(ＬＦＡ-１)のリガンドはＩＣＡＭ-１(ＣＤ-５４)である。ヒトＩＣＡＭ-１(ＣＤ-５４)ポリペプチド配列の例を以下に示す(SWISSPROT受入番号P05362)：
2007532681.tif 000076
残基１〜２７はシグナル配列を含み、残基２８〜４８０は細胞外ドメインを含み、残基４８１〜５０３は膜貫通ドメインを含み、残基５０４〜５４２は細胞質ドメインを含む。
【００８３】
一実施態様では、αＬβ２(ＬＦＡ-１)等のαＬインテグリンのリガンドはＩＣＡＭ-２(ＣＤ-１０２)である。ヒトＩＣＡＭ-２(ＣＤ-１０２)ポリペプチド配列の例を以下に示す(GenBank受入番号CAG46633, EMBL受入番号CR541834.1)：
2007532681.tif 000077
残基１〜２１はシグナル配列を含み、残基２２〜２２４は細胞外ドメインを含み、残基２２４〜２４８は膜貫通ドメインを含み、残基２４９〜２７５は細胞質ドメインを含む。
【００８４】
一実施態様では、αＬβ２(ＬＦＡ-１)等のαＬインテグリンのリガンドはＩＣＡＭ-３(ＣＤ-５０)である。ヒトＩＣＡＭ-３(ＣＤ-５０)ポリペプチド配列の例を以下に示す(SWISSPROT受入番号P32942)：
2007532681.tif 000078
残基１〜２９はシグナル配列を含み、残基３０〜４８５は細胞外ドメインを含み、残基４８６〜５１０は膜貫通ドメインを含み、残基５１１〜５４７は細胞質ドメインを含む。
【００８５】
一実施態様では、αＬβ２(ＬＦＡ-１)等のαＬインテグリンのリガンドはＩＣＡＭ-４である。ヒトＩＣＡＭ-４ポリペプチド配列の例を以下に示す(SWISSPROT受入番号Q14773)：
2007532681.tif 000079
残基１〜２２はシグナル配列を含み、残基２３〜２４０は細胞外ドメインを含み、残基２４１〜２６１は膜貫通ドメインを含み、残基２６２〜２７１は細胞質ドメインを含む。
【００８６】
一実施態様では、αＬβ２(ＬＦＡ-１)等のαＬインテグリンのリガンドはＩＣＡＭ-５である。ヒトＩＣＡＭ-５ポリペプチド配列の例を以下に示す(SWISSPROT受入番号Q9UMF0)：
2007532681.tif 000080
残基１〜３１はシグナル配列を含み、残基３２〜８３５は細胞外ドメインを含み、残基８３６〜８５６は膜貫通ドメインを含み、残基８５７〜９２４は細胞質ドメインを含む。
【００８７】
２．αＬインテグリンアンタゴニスト
ここで使用される場合の「αＬインテグリンアンタゴニスト」という用語は広義に使用され、αＬインテグリンの生物活性を、部分的又は全体的にブロックする任意の分子を含む。一実施態様では、αＬインテグリンアンタゴニストは、αＬインテグリンとそのリガンドとの相互作用及び次の事象の任意の一つ又は組合せを部分的又は全体的にブロックする：(１)哺乳動物においてＢリンパ球の循環を促進する、(２)天然配列αＬインテグリンのシグナル伝達を部分的又は全体的にブロック、阻害又は中和する。一実施態様では、αＬインテグリンアンタゴニストは、脾臓又はリンパ節へのＢ細胞の付着を阻害する。より特定の実施態様では、αＬインテグリンアンタゴニストは、脾臓及びリンパ節の胚中心及び／又は周辺帯へのＢ細胞の付着を阻害する。
αＬインテグリン及びα４インテグリンのアンタゴニストは、哺乳動物におけるＢリンパ球の循環を促進させるために、単独で、又は同時に又は逐次に、一緒に使用することができる。一実施態様では、αＬインテグリンとα４インテグリンの複数の異なるアンタゴニストは、哺乳動物におけるＢリンパ球の循環を促進させるために、単独で、又は同時に又は逐次に、一緒に使用することができる。アンタゴニストはαＬインテグリン、αＬサブユニット、又はαＬインテグリンのリガンドに結合可能である。
適切なαＬインテグリンアンタゴニストには、αＬインテグリンとリガンド、例えばＩＣＡＭ-１(ＣＤ-５４)との相互作用を阻害する任意の化合物が含まれる。αＬインテグリンアンタゴニストは、小分子、ペプチド、タンパク質、イムノアドヘシン、抗αＬ抗体、又はその断片であってよく、例えばαＬβ２(ＬＦＡ-１)アンタゴニストであってよい。これらの用語は、αＬサブユニット(ＣＤ１１ａ)又はβサブユニット、例えばβ２(ＣＤ１８)又はその双方のいずれかに対するアンタゴニストを意味する。好ましくはアンタゴニストは、αＬ(ＣＤ１１ａ)サブユニット又はユニットとしてαＬインテグリンに対するか又はこれらに結合する。
【００８８】
３．αＬインテグリンの抗体アンタゴニスト
αＬアンタゴニストは、αＬインテグリン、αＬサブユニットに結合するか、又は例えばαＬインテグリンのリガンドに結合する抗体とすることができる。αＬサブユニット(ＣＤ１１ａ)に結合する抗体には、例えば抗体ＭＨＭ２４(Hildrethら, 1983, Eur. J. Immunol. 13：202-208)、ＩｇＧ１抗体Ｒ３.１(Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc., Ridgefield, CT)、２５-３(又は２５.３)、Oliveら, 1986：Feldmann, 編, Human T Cell Clones. A new Approach to Immune Regulation, Clifton, NJ, Humana, 173頁)に引用されているような、Immunotech, Franceから入手可能なＩｇＧ１、ＫＢＡ(ＩｇＧ２ａ)(Nishimuraら, 1987, Cell. Immunol. 107：32；Nishimuraら, 1985, 同上 94：122)、Ｍ７／１５(ＩｇＧ２ｂ)(Springerら, 1982, Immunol. Rev. 68：171)、ＩＯＴ１６(Vermot Desrochesら, 1991, Scand. J. Immunol. 33：277-286)、ＳＰＶＬ７(Vermot Desrochesら, 上掲)、及びＭ１７／４(ＩｇＧ２ａ)で、ハイブリドーマ受託番号ＴＩＢ−２１７を有しＡＴＣＣから入手可能であるものが含まれる。好ましい抗ＣＤ１１ａ抗体は、ヒト化抗体エファリツマブ(RaptivaＴＭ；Genentech, CA)である。他の好ましい抗ＣＤ１１ａ抗体には、米国特許第６０３７４５４号に記載されているヒト化抗体が含まれる。また、抗ＣＤ１１ａ抗体がＴ細胞枯渇抗体でないこと、抗ＣＤ１１ａ抗体の投与がＴ-細胞の循環レベルを低減させないことが、一般的に好ましい。
【００８９】
一実施態様では、ヒト化抗ＣＤ１１ａ抗体は、
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASKTISKYLAWYQQKPGKAPKLLIYSGSTLQSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSLQPEDFATYYCQQHNEYPLTFGQGTKVEIK (配列番号４９)
のＶＬ配列、及び
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYSFTGHWMNWVRQAPGKGLEWVGMIHPSDSETRYNQKFKDRFTISVDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGIYFYGTTYFDYWGQGTLVTVSS(配列番号５０)
のＶＨ配列を含むものである。
他の実施態様では、抗ＣＤ１１ａ抗体は、
DVQITQSPSYLAASPGETISINCRASKTISKYLAWYQEKPGKTNKLLIYSGSTLQSGIPSRFSGSGSGTDF TLTISSLEPEDFAMYYCQQHNEYPLTFGTGTKLELK (配列番号５１)
のＭＨＭ２４ ＶＬ配列、及び
EVQLQQPGAELMRPGASVKLSCKASGYSFTGHWMNWVRQRPGQGLEWIGMIHPSDSETRLNQKFKDKATLTVDKSSSSAYMQLSSPTSEDSAVYYCARGIYFYGTTYFDYWGQGTTLTVSS 
(配列番号５２)
のＭＨＭ２４ ＶＨ配列を含むものである。
【００９０】
βサブユニットに結合する抗体の例には、抗ＣＤ１８抗体、例えばＭＨＭ２３(Hildrethら, 上掲)、Ｍ１８／２(ＩｇＧ２ａ)(Sanches-Madridら, 1983, J. Exp. Med. 158：586)、Ｈ５２(Feketeら, 1990, J. Clin. Lab Immunol. 31：145-149)、Ｍａｓ１９１ｃ(Vermot Desrochesら, 上掲)、ＩＯＴ１８(Vermot Desroches, 上掲)、６０.３(Taylorら,1988, Clin. Exp. Immunol. 71：324-328)、及び６０.１(Campanaら, 1986, Eur. J. Immunol. 16：537-524)が含まれる。また米国特許第５９９７８６７号を参照のこと。
【００９１】
抗体を含む、適切なαＬβ２(ＬＦＡ-１)結合分子の他の例は、例えば上掲のHutchingsら、国際公開第９８／５１３４３号、国際公開第９１／１８０１１号、国際公開第９１／１６９２８号、国際公開第９１／１６９２７号、カナダ国特許出願第２，００８，３６８号、国際公開第９０／１５０７６号、国際公開第９０／１０６５２号、国際公開第９０／１３２８１号、国際公開第９３／０６８６４号、国際公開第９３／２１９５３号、欧州特許第３８７６６８号、欧州特許第３７９９０４号、欧州特許第３４６０７８号、米国特許第５９３２４４８号、米国特許第５６２２７００号、米国特許第５５９７５６７号、米国特許第５０７１９６４号、米国特許第５００２８６９号、米国特許第５７３０９８３号、オーストラリア国特許出願第８８１５５１８号、仏国特許第２７００４７１Ａ号、欧州特許第２８９９４９号、欧州特許第３６２５２６号、及び欧州特許第３０３６９２号に記載されている。
また、αＬβ２(ＬＦＡ-１)アンタゴニストには、例えば一又は複数のＩＣＡＭ-１、ＩＣＡＭ-２、ＩＣＡＭ-３、ＩＣＡＭ-４及びＩＣＡＭ-５に対する抗体を含む、αＬβ２(ＬＦＡ-１)とそのレセプターの相互作用を阻害する抗体が含まれる。このような抗体は、商業的に入手可能なもの、例えばBoehringer Ingelheim Pharmaceuticals(Ridgefield, CT)及びPerlan Therapeutics Inc.(San Diego, CA)から入手可能な抗ＩＣＡＭ-１抗体エンリモマブ(enlimomab)(ＢＩＲＲ-１)、及び１Ａ６；及びICOS Corp.(Bothell, WA)から入手可能な抗ＩＣＡＭ-３抗体ＩＣＭ３である。
【００９２】
４．αＬインテグリンのイムノアドヘシンアンタゴニスト
さらなる他の実施態様では、インテグリンアンタゴニストはイムノアドヘシンである。このようなイムノアドヘシンの例は、ＩＣＡＭ-１、ＩＣＡＭ-２、ＩＣＡＭ-３、ＩＣＡＭ-４及びＩＣＡＭ-５等の、αＬインテグリンのリガンドの細胞外ドメイン、又はリガンド結合ドメイン等、αＬに結合するαＬインテグリンのリガンドの可溶性部分を含むものである。
ＩＣＡＭリガンドの結合ドメインは知られている。ＩＣＡＭ-１はドメイン１(Universal Protein Resource catalog(UniProt)の残基４１−１０３)においてＬＦＡ-１(ＣＤ１１ａ)に結合する。例えば、Bellaら, 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95：4140-4145を参照のこと。ＩＣＡＭ-２はドメイン１(UniProtの残基４１−９８)において、ＬＦＡ-１(ＣＤ１１ａ)及びＭＡＣ-１(ＣＤ１１ｂ)に結合する。例えば、上掲のBellaら, 1998；及びHermandら, 2000, J. Biol. Chem. 275：26002-26010を参照のこと。ＩＣＡＭ-３はドメイン１(UniProtの残基４６-１０３)においてＬＦＡ-１(ＣＤ１１ａ)に結合し、ＭＡＣ-１(ＣＤ１１ｂ)に結合しない。例えば、上掲のBellaら, 1998；及び上掲のHermandら, 2000を参照のこと。ＩＣＡＭ-４はドメイン１(UniProtの残基６２−１２４)においてＬＦＡ-１(ＣＤ１１ａ)に結合する(上掲のHermandら, 2000)。ＩＣＡＭ-５はドメイン１(UniProtの残基４８−１３０)においてＬＦＡ-１(ＣＤ１１ａ)に結合する。例えば、Tianら, 2000,  Eur. J. Immunol., 30：810-818を参照のこと。
特に本発明のインテグリン又はインテグリンサブユニットのアンタゴニストは、タンパク質、特に抗体及びその機能的断片、ペプチド、イムノアドヘシン及び小分子を含む。抗体はヒト化、ヒト、又はキメラ体、又はこれらの断片とすることができる。
【００９３】
５．αＬインテグリンの小分子アンタゴニスト
一実施態様では、αＬインテグリンアンタゴニストは小分子である。αＬインテグリンアンタゴニストである小分子の例には、国際公開第９９／４９８５６号及び国際公開第０２／０５９１１４号に開示されているものが含まれる。一実施態様では、アンタゴニストは、以下に詳細に記載する式(ＩＸ)を有する国際公開第０２／０５９１１４号に列挙された小分子の任意の一つである。他の実施態様では、アンタゴニストは、国際公開第０２／０５９１１４号に列挙されており、表４に示されている小分子(すなわち、４、５、３５、１７、１０、１２、１３、１４、４１、４４、６、１５、３６、３７、３８、４０、４２、９、３及び５１の番号が付された化合物)の任意の一つである。
【００９４】
ａ．式ＸＩ
Ｂ細胞動員剤には、次の式ＸＩ：
2007532681.tif 000081
[上式中、
Ｃｙは、ヒドロキシル(-ＯＨ)、メルカプト(-ＳＨ)、チオアルキル、ハロゲン(例えばＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ)、オキソ(=Ｏ)、チオ(=Ｓ)、アミノ、アミノアルキル、アミジン(-Ｃ(ＮＨ)-ＮＨ２)、グアニジン(-ＮＨ２-Ｃ(ＮＨ)-ＮＨ２)、ニトロ、アルキル、アルコキシ又はアシルで置換されていてもよい、非芳香族の炭素環又は複素環であり；
Ｘは、ヒドロキシル、メルカプト、ハロゲン、アミノ、アミノアルキル、ニトロ、オキソ又はチオで置換されていてもよく、Ｎ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ又はＳＯ２が挿入されていてもよい二価の炭化水素鎖であり；
Ｙは、ヒドロキシル、メルカプト、ハロゲン、オキソ、チオ、炭化水素、ハロ置換炭化水素、アミノ、アミジン、グアニジン、シアノ、ニトロ、アルコキシ又はアシルで置換されていてもよい炭素環又は複素環であり；
Ｌは、原子手、又はＮ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ又はＳＯ２で置き換えられた一又は複数の炭素原子を有していてもよく、ヒドロキシル、ハロゲン、オキソ又はチオで置換されていてもよい二価の炭化水素であり；又は炭化水素の３つの炭素原子がアミノ酸残基で置き換えられており；
Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、アミノ、Ｏ-炭素環又アルコキシで、アミノ、炭素環又は複素環で置換されていてもよいものであり；
Ｒ２−５は独立して、Ｈ、ヒドロキシル、メルカプト、ハロゲン、シアノ、アミノ、アミジン、グアニジン、ニトロ又はアルコキシであり；又はＲ３及びＲ４は共同して、ヒドロキシル、ハロゲン、オキソ、チオ、アミノ、アミジン、グアニジン又はアルコキシで置換されていてもよい縮合炭素環又は複素環を形成し；
Ｒ６は、炭素環又は複素環で置換されていてもよい炭化水素鎖、又はＨである]
のαＬインテグリンアンタゴニスト化合物を含むαＬインテグリンアンタゴニスト、及びその塩、溶媒和物及び水和物で、但し、Ｙがフェニルであり、Ｒ２、Ｒ４及びＲ５がＨであり、Ｒ３がＣｌであり、Ｒ１がＯＨである場合、Ｘはシクロヘキシル以外であるもの；又その製薬的に許容可能な塩を含む。
Ａ、Ｚ、Ｙ、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３及びＸ４は、一般的なもの及び好ましいものの双方で、上述したものである。
【００９５】
Ｃｙは３−５員環とすることができる。他の実施態様では、Ｃｙは、ヒドロキシル、メルカプト、ハロゲン(好ましくはＦ又はＣｌ)、オキソ(=Ｏ)、チオ(=Ｓ)、アミノ、アミジン、グアニジン、ニトロ、アルキル又はアルコキシで置換されていてもよい５-又は６-員の非芳香族複素環とすることができる。Ｃｙは、ヒドロキシル、オキソ、 チオ、Ｃｌ、Ｃ１−４アルキル(好ましくはメチル)、又はＣ１−４アルカノイル(好ましくはアセチル、プロパノイル又はブタノイル)で置換されていてもよい５-員の非芳香族複素環とすることができる。非芳香族複素環は、一又は複数のヘテロ原子(Ｎ、Ｏ又はＳ)を有することができ、ヒドロキシル、オキソ、メルカプト、チオ、メチル、アセチル、プロパノイル又はブチルで置換されていてもよい。特定の実施態様では、非芳香族複素環は、メチル又はアセチルで置換されていてもよい、少なくとも一の窒素原子を有する。特定の好ましい実施態様において、非芳香族複素環は、ヒドロキシ、オキソ、メルカプト、チオ、アルキル又はアルカノイルで置換されていてもよい、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、オキサゾリジン、チアゾリジンからなる群から選択される。最も好ましい実施態様では、Ｃｙは、テトラヒドロフラン-２-イル、チアゾリジン-５-イル、チアゾリジン-２-オン-５-イル、及びチアゾリジン-２-チオン-５-イル、及びシクロプロパピロリジンからなる群から選択される非芳香族複素環である。他の好ましい実施態様では、Ｃｙはヒドロキシル、メルカプト、ハロゲン、オキソ、チオ、アミノ、アミジン、グアニジン、アルキル、アルコキシ又はアシルで置換されていてもよい３-６員の炭素環である。特定の実施態様において、炭素環は飽和又は部分的に不飽和である。特定の実施態様では、Ｃｙはシクロプロピル、シクロプロペニル、シクロブチル、シクロブテニル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル及びシクロヘキセニルからなる群から選択される炭素環である。
【００９６】
Ｘは、Ｎ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ又はＳＯ２で置き換えられた一又は複数の炭素原子を有していてよく、またヒドロキシル、メルカプト、ハロゲン、アミノ、アミノアルキル、ニトロ、オキソ又はチオで置換されていてもよい、二価のＣ１−５炭化水素リンカーである。好ましい実施態様では、Ｘは少なくとも一の炭素原子を有する。置き換え(replacements)及び置換(substitutions)は、炭化水素鎖の内部又は一端又は両端において、アミド部分(-ＮＲＣ(Ｏ)-又は-Ｃ(Ｏ)ＮＲ-)を形成してもよい。他の部分は、スルホンアミド(-ＮＲＳＯ２-又は-ＳＯ２ＮＲ)、アシル、エーテル、チオエーテル及びアミンを含む。特に好ましい実施態様では、Ｘは基-ＣＨ２-ＮＲ６-Ｃ(Ｏ)-であり、ここでそのカルボニル-Ｃ(Ｏ)-部分はＣｙに隣接しており(すなわち共有的に結合)、Ｒ６はアルキル、すなわちメチル、より好ましくはＨである。
Ｙは、ヒドロキシル、メルカプト、ハロゲン、オキソ、チオ、炭化水素、ハロ置換炭化水素、アミノ、アミジン、グアニジン、シアノ、ニトロ、アルコキシ又はアシルで置換されていてもよい炭素環又は複素環である。特定の実施態様では、Ｙはハロゲン又はヒドロキシルで置換されていてもよいアリール又はヘテロアリールである。特に好ましい実施態様では、Ｙは、フェニル、フラン-２-イル、チオフェン-２-イル、ハロゲン(好ましくはＣｌ)又はヒドロキシルで、好ましくはメタ位が置換されたフェニルである。
【００９７】
Ｌは、Ｎ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ又はＳＯ２で置き換えられた一又は複数の炭素原子を有していてもよく、ヒドロキシル、ハロゲン、オキソ又はチオで置換されていてもよい二価の炭化水素であり；又は炭化水素の３つの炭素原子がアミノ酸残基で置き換えられている。好ましくは、Ｌは１０未満の原子長さ、好ましくは５以下の原子長さ、最も好ましくは５又は３の原子長さである。特定の実施態様では、Ｌは、-ＣＨ=ＣＨ-Ｃ(Ｏ)-ＮＲ６-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＮＲ６-Ｃ(Ｏ)-、-Ｃ(Ｏ)-ＮＲ６-ＣＨ２-、-ＣＨ(ＯＨ)-(ＣＨ２)２-、-(ＣＨ２)２-ＣＨ(ＯＨ)-、-(ＣＨ２)３-、-Ｃ(Ｏ)-ＮＲ６-ＣＨ(Ｒ７)-Ｃ(Ｏ)-ＮＲ６-、-ＮＲ６-Ｃ(Ｏ)-ＣＨ(Ｒ７)-ＮＲ６-Ｃ(Ｏ)-、-ＣＨ(ＯＨ)-ＣＨ２-Ｏ-、及び-ＣＨ(ＯＨ)-ＣＦ２-ＣＨ２-からなる群から選択され、ここで各Ｒ６は独立して、Ｈ又はアルキルであり、Ｒ７はアミノ酸側鎖である。好ましいアミノ酸側鎖には自然に生じない側鎖、例えばフェニル、又は自然に生じる側鎖が含まれる。好ましい側鎖は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ａｌａ、Ｇｌｎ及びＡｓｎからのものである。好ましい実施態様では、Ｌは-ＣＨ=ＣＨ-Ｃ(Ｏ)-ＮＲ６-ＣＨ２-であり、ここでその-ＣＨ=ＣＨ-部分は、Ｙに隣接(すなわち共有的に結合)している。他の好ましい実施態様では、Ｌは-ＣＨ２-ＮＲ６-Ｃ(Ｏ)-であり、そのメチレン部分(-ＣＨ２-)はＹに隣接している。
【００９８】
Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、アミノ、Ｏ-炭素環又アルコキシで、アミノ、炭素環又は複素環で置換されていてもよいものである。好ましい実施態様では、Ｒ１は、フェニル等の炭素環で置換されていてもよい、Ｃ１−４アルコキシ、フェニル、Ｈである。特定の実施態様では、Ｒ１はＨである。他の特定の実施態様では、Ｒ１はメトキシ、エトキシ、プロピルオキシ、ブチルオキシ、イソブチルオキシ、ｓ-ブチルオキシ、ｔ-ブチルオキシ、フェノキシ又はベンジルオキシである。他の特に好ましい実施態様では、Ｒ１はＮＨ２である。特に好ましい実施態様では、Ｒ１はエトキシである。他の特に好ましい実施態様では、Ｒ１はイソブチルオキシである。他の特に好ましい実施態様では、Ｒ１はアミノで置換されたアルコキシ、例えば２-アミノエトキシ、Ｎ-モルホリノエトキシ、Ｎ,Ｎ-ジアルキルアミノエトキシ、第４級アンモニウムヒドロキシアルコキシ(例えば、トリメチルアンモニウムヒドロキシエトキシ)である。
【００９９】
Ｒ２−５は独立して、Ｈ、ヒドロキシル、メルカプト、ハロゲン、シアノ、アミノ、アミジン、グアニジン、ニトロ又はアルコキシであり；又はＲ３及びＲ４は共同して、ヒドロキシル、ハロゲン、オキソ、チオ、アミノ、アミジン、グアニジン又はアルコキシで置換されていてもよい縮合炭素環又は複素環を形成する。特定の実施態様では、Ｒ２及びＲ３は独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩである。他の特定の実施態様では、Ｒ４及びＲ５は双方ともＨである。他の特定の実施態様では、Ｒ２及びＲ３の一方はハロゲンであり、他方は水素又はハロゲンである。特に好ましい実施態様では、Ｒ３はＣｌであり、Ｒ２、Ｒ４及びＲ５はそれぞれＨである。他の特に好ましい実施態様では、Ｒ２及びＲ３は双方ともＣｌであり、Ｒ４及びＲ５は双方ともＨである。
Ｒ６は、炭素環又は複素環で置換されていてもよい複素環鎖、又はＨである。好ましい実施態様では、Ｒ６はＨ又はアルキル、すなわちメチル、エチル、プロピル、ブチル、ｉ-ブチル、ｓ-ブチル又はｔ-ブチルである。特定の実施態様では、Ｒ６はＨである。
【０１００】
ｂ．好ましい式ＸＩａ-ｆ
好ましい実施態様において、本発明の化合物は次の一般式(ＸＩａ)-(ＸＩｆ)：
2007532681.tif 000082
[上式中、Ｃｙ、Ｙ、Ｌ及びＲ１−６は上述したものである]
を有する。特に好ましい実施態様では、式(ＩＸａ)-(ＩＸｆ)の化合物に星印(＊)でマークされた炭素原子はキラルである。特定の実施態様では、炭素原子はＲ-配置を有する。他の好ましい実施態様では、炭素原子はＳ-配置を有する。
【０１０１】
ｃ．特定のαＬの小分子アンタゴニスト
特定のαＬの小分子アンタゴニストには、以下の表４に示すものが含まれる。
2007532681.tif 000083
2007532681.tif 000084
2007532681.tif 000085
2007532681.tif 000086
2007532681.tif 000087
【０１０２】
Ｅ．Ｂ細胞枯渇薬剤
上記のＢ細胞枯渇薬剤は表面のマーカー又は抗原を介してＢ細胞を標的とし、直接的に又は間接的にＢ細胞の死を引き起こすアンタゴニスト分子である。一般に、そのようなＢ細胞枯渇薬剤はＢ細胞表面マーカー又は抗原に結合する。例えば、Ｂ細胞枯渇薬剤は抗Ｂ細胞表面抗原抗体であってもよい。そのようなＢ細胞枯渇薬剤の例には、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２及び抗ＣＤ５２、例えば抗ＣＤ２０抗体、ナチルザマブ(natiluzamab)などがある。
【０１０３】
１．Ｂ細胞表面マーカー及び抗原
ここで「Ｂ細胞表面マーカー」又は「Ｂ細胞表面抗原」とは、Ｂ細胞の表面に発現する抗原であり、結合すべきアンタゴニストの標的となることができる。例示的Ｂ細胞表面上マーカーには、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ５３、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤｗ７８、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤｗ８４、ＣＤ８５及びＣＤ８６白血球表面上マーカー、例えば、The Leukocyte Antigen Facts Book, 2nd Edition. 1997, 編集 Barclay 等 Academic Press, Harcourt Brace & Co., New Yorkに記載のものが含まれる。他のＢ細胞表面マーカーには、CD180 (RP105)、FcRH2 (IRTA4)、CD79A (Igα)、C79B (Igβ)、B cellCR2、CD196 (CCR6)、CD72 (Lyb-2)、P2X5、HLA-DOB、CD185 (CXCR5)、CD23 (FcεRII)、BR3、Btig、NAG14、SLGC16270、FcRH1 (IRTA5)、CD307 (IRTA2)、ATWD578、FcRH3、FcRH1 (IRTA1)、FcRH6、CD269 (BCMA)などがある。
あるＢ細胞表面抗原は、「ＣＤ２０」抗原であり、末梢血又はリンパ系器官に由来するＢ細胞の９０％以上の表面にみられる３５ｋＤａの非グルコシル化リンタンパク質である。ＣＤ２０は初期のプレＢ細胞の発生の間に発現し、プラズマ細胞分化まで残る。ＣＤ２０は正常Ｂ細胞だけでなく悪性のＢ細胞上にも存在する。ＣＤ２０を意味する文献中での他の名称には、「Ｂリンパ球限定抗原(B-lymphocyte-restricted antigen)」及び「Ｂ１」及び「Ｂｐ３５」などがある。ＣＤ２０抗原は、例としてClark等 PNAS (USA) 82:1766 (1985)に記載されている。ヒトＣＤ２０のアミノ酸配列は、The Leukocyte Antigen Facts Book, Barclay 等 上掲, 182頁、及びEMBL Genbank 寄託番号 X12530及びSwissprot P11836に示される。
【０１０４】
他の特定のＢ細胞表面抗原は、ＢＬ-ＣＡＭ又はＬｙｂ８としても知られる「ＣＤ２２」抗原である。およそ１３０ｋＤ（還元型）から１４０ｋＤ（非還元型）の分子量を有するタイプ１インテグラル膜糖タンパク質である。それはＢリンパ球の細胞質及び細胞膜に発現される。ＣＤ２２抗原は、Ｂ細胞リンパ球分化の初めにＣＤ１９抗原とおよそ同じ段階で現れる。他のＢ細胞マーカーと異なり、ＣＤ２２膜発現は成熟Ｂ細胞（ＣＤ２２＋）とプラズマ細胞（ＣＤ２２−）の間の後期分化段階に限定される。ＣＤ２２抗原は、例えば、Wilson 等 J. Exp. Med. 173: 137 (1991)及びWilson 等 J. Immunol. 150:5013 (1993)において記述されている。
他の特定のＢ細胞表面抗原は、ＢＲ３(ＢＬｙＳ(ＢＡＦＦ)レセプター３又はＢＡＦＦ-Ｒとしても知られる)である。ＴＮＦファミリーメンバーＢＡＦＦはＢＲ３のリガンドである (Patel 等, 2004, J. Biol. Chem., 279: 16727-16735；Thompson 等, 2001, Science, 293, Issue 5537, 2108-2111)。
Ｂ細胞表面抗原結合抗体、例えば本明細書中に記載の抗体の「機能的断片」は、それ自体が由来する原型の全長分子と実質的に同じ親和性で抗原、例えばＣＤ２０への結合を維持する断片であり、インビトロ又はインビボアッセイにより測定されるＢ細胞を枯渇するなどの生物学的活性を示す。
【０１０５】
２．Ｂ細胞枯渇抗体
Ｂ細胞枯渇抗体、例えば抗ＣＤ２０結合抗体及びヒト化ＣＤ２０結合抗体などの生物活性は、ヒトＢ細胞マーカー、例えばヒトＣＤ２０への抗体結合、より好ましいことにはヒト及び他の霊長類のＣＤ２０などのＢ細胞マーカー（カニクイザル、アカゲザル、チンパンジーを含む）への結合を少なくとも含む。有用な抗体は、１×１０−８より低いＫｄ値、好ましくは１×１０−９より低いＫｄ値でＢ細胞抗原に結合する。このような抗体で処置していない適当なネガティブ対照と比較して、好ましくは少なくとも２０％のＢ細胞をインビボで死滅又は枯渇する抗体が有用でありうる。Ｂ細胞の枯渇はＡＤＣＣ、ＣＤＣ又は他のメカニズムの一又は複数の結果である。
ここで言う疾患治療のある実施態様では、特定のエフェクター機能又はメカニズムが他のものよりも望まれ、Ｂ細胞枯渇抗体、例えば抗ＣＤ２０抗体のある変異形（例としてヒト化抗ＣＤ２０抗体、２Ｈ７及びキメラ抗ＣＤ２０抗体、リツキシマブ）がＡＤＣＣなどの生物学的機能を達成するために好ましい。
ここで言う「リツキシマブ」又は「リツキサン(登録商標)」なる用語は、一般的にＣＤ２０抗原に対する遺伝学的に操作したキメラのマウス／ヒトモノクローナル抗体を指し、米国特許第５，７３６，１３７号では「Ｃ２Ｂ８」と命名されるものであり、ＣＤ２０を結合する能力を保持する該抗体の断片を含みうる。
【０１０６】
ａ．抗ＣＤ２０抗体
ＣＤ２０抗体の例には以下のものが含まれる：現在では「リツキシマブ」（「リツキサン（登録商標）」）と呼称される「Ｃ２Ｂ８」(米国特許第５，７３６，１３７号）；「Ｙ２Ｂ８」又はIDEC Pharmaceuticals, Inc.から市販されている「Ibritumomab Tiuxetan」(ゼバリン(登録商標))と命名されるイットリウム-[90]-標識２Ｂ８マウス抗体(米国特許第５，７３６，１３７号、1993年6月22日に寄託番号HB11388でＡＴＣＣに寄託されている)；場合によっては「１３１Ｉ-Ｂ１」抗体(ヨードＩ131Tositumomab、BEXXARＴＭ)を生成するために１３１Ｉで標識した「Tositumomab」とも呼称されるマウスＩｇＧ２ａ「Ｂ１」(米国特許第５，５９５，７２１号を参照)；マウスモノクローナル抗体「１Ｆ５」(Press等 Blood 69(2):584-591 (1987)及びその変異形、例えば「フレームワークパッチ」又はヒト化１Ｆ５(国際公報０３／００２６０７, Leung, S)；ＡＴＣＣ寄託番号ＨＢ-９６４５０)；マウス２Ｈ７及びキメラ２Ｈ７抗体(米国特許第５，６７７，１８０号)；ヒト化２Ｈ７(国際公報2004/056312 (Lowman 等)及び前述のもの) ；ＨＵＭａｘ-ＣＤ２０ＴＭ、Ｂ細胞の細胞膜のＣＤ２０分子を標的とした完全ヒト、高親和性抗体(Genmab, Denmark；例としてGlennie及びvan de Winkel, Drug Discovery Today 8: 503-510 (2003)及びCragg 等, Blood 101: 1045-1052 (2003)を参照)；国際公報2004/035607 (Teeling 等)に記載のヒトモノクローナル抗体；米国公開公報2004/0093621 (Shitara 等)に記載のＦｃ領域に結合した複合体Ｎ-グリコシド結合糖鎖を有する抗体；国際公報2004/103404 (Watkins 等, Applied Molecular Evolution)に記載のＡＭＥ-１３３ＴＭなどの抗体のＡＭＥシリーズなどのＣＤ２０結合分子；Ａ２０抗体又はその変異形、例えばキメラ又はヒト化Ａ２０抗体(それぞれcA20、hA20) (米国公開特許2003/0219433、Immunomedics)；及びInternational Leukocyte Typing Workshopより入手可能なモノクローナル抗体Ｌ２７、Ｇ２８-２、９３-１Ｂ３、Ｂ-Ｃ１又はＮＵ-Ｂ２(Valentine等, Leukocyte Typing III (McMichael, 編集, 440頁, Oxford University Press (1987))。本明細書中の好適なＣＤ２０抗体はキメラ、ヒト化又はヒトＣＤ２０抗体、より好ましくはリツキシマブ、ヒト化２Ｈ７、キメラないしはヒト化Ａ２０抗体(Immunomedics)、及びHUMAX-CD20TM ヒトＣＤ２０抗体 (Genmab)である。
【０１０７】
各々のこれら抗体において、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ番号付けシステムによれば残基４４７）は、例えば、ポリペプチドの精製中に、又はポリペプチドをコードする核酸を遺伝子操作する組換えによって取り除かれてもよい。したがって、本明細書中のＦｃ領域を有する抗体又はイムノアドヘシンなどのポリペプチドを含有してなる組成物は、Ｋ４４７又はすべてのＫ４４７が除去されたポリペプチド、又はＫ４４７残基を有するポリペプチドと有さないポリペプチドの混合を含みうる。ゆえに、以下に示す完全長Ｈ鎖配列はＫ４４７を含むが、以下の抗体の組成物がＨ鎖内のＫ４４７を欠いた抗体を含んでいてもよい。
マウス抗ヒトＣＤ２０抗体であるｍ２Ｈ７はＶＨ配列：
2007532681.tif 000088
及び、ＶＬ配列：
2007532681.tif 000089
を有する。
【０１０８】
単に本明細書中では、「ヒト化２Ｈ７ｖ.１６」は、可変軽鎖配列：
2007532681.tif 000090
及び、可変重鎖配列：
2007532681.tif 000091
を含有してなる完全抗体又は抗体断片を意味する。
【０１０９】
ヒト化２Ｈ７ｖ.１６抗体が完全抗体の場合、ｖ１６軽鎖アミノ酸配列：
2007532681.tif 000092
及び、ｖ１６重鎖アミノ酸配列：
2007532681.tif 000093
を含有することが好ましい。
【０１１０】
バージョン１６をベースとした他のすべての変異形のＶ領域は、以下の表に示すアミノ酸置換の位置を除いてｖ１６のアミノ酸配列を有する。特に明記しない限り、２Ｈ７変異形はｖ１６と同じＬ鎖を有する。
2007532681.tif 000094
【０１１１】
前述のヒト化２Ｈ７ｖ.１６ｍＡｂの変異形のいくつかの配列は以下の通りである：
上記の配列番号：３１と同じＬ鎖配列と以下のＨ鎖アミノ酸配列を有する２Ｈ７ｖ.３１：
2007532681.tif 000095
以下のＨ鎖アミノ酸配列を有する２Ｈ７ｖ.１３８：
2007532681.tif 000096
及び、以下のＬ鎖アミノ酸配列を有するｖ１３８：
2007532681.tif 000097
【０１１２】
上記の配列番号：４４であるｖ１３８のＬ鎖配列と以下のＨ鎖アミノ酸配列を有する２Ｈ７ｖ.１１４：
2007532681.tif 000098
２Ｈ７ｖ.１３８のＬ鎖配列（配列番号：４４）と以下のＨ鎖アミノ酸配列を有する２Ｈ７ｖ.４７７：
2007532681.tif 000099
２Ｈ７ｖ.１３８のＬ鎖配列（配列番号：４４）と以下のＨ鎖アミノ酸配列を有する２Ｈ７ｖ.５１１：
2007532681.tif 000100
以下のＶＬ配列を有するそれぞれバージョン１１４、１１５、１１６、１３８、４７７、５１１：
2007532681.tif 000101
【０１１３】
ｂ．抗ＣＤ２２抗体、Ｂ細胞枯渇抗体など
また、Ｂ細胞枯渇抗体には、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＢＲ３及びＣＤ８０に拮抗する抗体及び結合リガンドなどがある。例として、抗ＣＤ２２抗体LyphoCideTM、別名epratuzumab (Immunomedics, Inc., Morris Plains, NJ)）；BAFF-R (CT) BR3 Blocking Peptide (QED Bioscience, Inc., San Diego, CA)；抗ＣＤ２３抗体、ＩＤＥＣ-１５２、霊長類化抗体(Biogen IDEC, Cambridge, MA)、抗ＣＤ８０抗体、ＤＥＣ-１１４、霊長類化抗体(Biogen IDEC, Cambridge, MA)；などがある。
【０１１４】
キメラ及びヒト化のＡ２０抗体は米国仮特許出願2003/0219433に記載の以下の配列を有する。ｃＡ２０抗ＣＤ２０抗体は、ＶＬ配列：
2007532681.tif 000102
及び、ＶＨ配列：
2007532681.tif 000103
を有する。
あるｈＡ２０抗ＣＤ２０抗体は、ＶＬ配列：
2007532681.tif 000104
及び、ＶＨ１配列：
2007532681.tif 000105
を有する。
【０１１５】
選択的ｈＡ２０ＶＨ１は、以下の配列を有する。
2007532681.tif 000106
ヒト化(ＦＲ-パッチ)１Ｆ５抗体は、米国仮特許出願2003/0040606に記載の配列を有する。
あるｈｕ１Ｆ５抗ＣＤ２０抗体は、ＶＬ配列：
2007532681.tif 000107
及び、ＶＨ配列：
2007532681.tif 000108
を有する。
【０１１６】
選択的ｈｕ１Ｆ５抗ＣＤ２０抗体は、ＶＬ配列：
2007532681.tif 000109
及び、ＶＨ配列：
2007532681.tif 000110
を有する。
【０１１７】
Ｆ．治療方法
本発明の方法は、自己免疫性疾患及び関連症状を含む多くの悪性及び非悪性疾患、及びＢ細胞リンパ球及び白血病を含む癌の治療に有用である。例えば、骨髄の幹細胞（Ｂ細胞前駆細胞）はＣＤ２０抗原を欠いており、ＣＤ２０アンタゴニストでの治療後に健康なＢ細胞が生成され、数か月で正常レベルに戻る。
【０１１８】
１．自己免疫疾患及び関連症状
自己免疫性疾患又は自己免疫関連症状には、関節炎（関節リウマチ（例えば急性の関節炎、慢性の関節リウマチ、痛風性関節炎、急性の痛風性関節炎、慢性炎症性関節炎、変形性関節症、感染性関節炎、ライム関節炎、増殖的な関節炎、乾癬の関節炎、椎骨関節炎及び若年性発症関節リウマチ、骨関節炎、関節炎慢性化、関節炎変形、関節炎慢性原発、反応性関節炎、及び強直性脊椎炎）、炎症性過剰増殖性皮膚病、乾癬、例えばプラーク乾癬、滴状乾癬、膿疱性乾癬及び爪乾癬）、アトピー性疾患を含むアトピー、例えば花粉症及びジョブ症候群、皮膚炎、例として接触皮膚炎、慢性接触皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、アレルギー性接触皮膚炎、ヘルペス状の皮膚炎及び過敏性皮膚炎、Ｘ連鎖性過剰ＩｇＭ症候群、蕁麻疹、例えば慢性アレルギー性蕁麻疹及び慢性特発性蕁麻疹、例として慢性自己免疫蕁麻疹、多発性筋炎／皮膚筋炎、若年性皮膚筋炎、中毒性上皮性表皮壊死症、強皮症（全身強皮症を含む）、硬化症、例えば全身性硬化症、多発性硬化症（ＭＳ）、例えば脊椎-眼(spino-optical) ＭＳ）、一次進行性ＭＳ（ＰＰＭＳ）及び再発性寛解ＭＳ（ＲＲＭＳ）、進行性全身性硬化症、アテローム性動脈硬化、動脈硬化症、硬化症汎発、失調性硬化症、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（例えばクローン病、自己免疫性胃腸疾患、大腸炎、例えば潰瘍性大腸炎、大腸性潰瘍、微細な大腸炎、膠原性大腸炎、大腸ポリープ、壊死性全腸炎及び経壁の大腸炎）及び自己免疫炎症性腸疾患）、膿皮症壊疽、結節性紅斑、原発性硬化性胆管炎、上強膜炎、呼吸窮迫症候群、例として成人性又は急性の呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、髄膜炎、葡萄膜の全部又は一部の炎症、虹彩炎、脈絡膜炎、自己免疫血液疾患、リウマチ様脊椎炎、突発性聴力障害、ＩｇＥ媒介性疾患、例えばアナフィラキシー及びアレルギー性鼻炎及びアトピー性鼻炎、脳炎、例えばラスマッセンの脳炎及び辺縁及び／又は脳幹脳炎、ブドウ膜炎、例として、前部ブドウ膜炎、急性前ブドウ膜炎、肉芽腫ブドウ膜炎、非顆粒性ブドウ膜炎、水晶体抗原性ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎又は自己免疫ブドウ膜炎、ネフローゼ症候群を有する又は有さない糸球体腎炎（ＧＮ）、例として、慢性又は急性の糸球体腎炎、例として原発性ＧＮ、免疫性ＧＮ、膜性ＧＮ（膜性ネフロパシ）、特発性膜性ＧＮ又は特発性膜性ネフロパシ、膜又は膜性増殖性ＧＮ（ＭＰＧＮ）（タイプＩ及びタイプＩＩを含む）、急速進行性ＧＮ、アレルギー性症状及び応答、アレルギー性反応、湿疹、例としてアレルギー性又はアトピー性湿疹、喘息、例えば喘息気管支炎、気管支喘息及び自己免疫喘息、Ｔ細胞の浸潤を伴う症状及び慢性炎症反応、妊娠中の胎児のＡＢＯ式血液型など外来性抗原に対する免疫反応、慢性肺炎症性疾患、自己免疫心筋炎、白血球粘着力欠損、ループス、例としてループス腎炎、ループス脳炎、小児ループス、非腎性ループス、腎外ループス、ジスコイドループス、脱毛症ループス、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、例えば皮膚ＳＬＥ又は亜急性の皮膚ＳＬＥ）、全身性エリテマトーデス、新生児期ループス症候群（ＮＬＥ）及び紅班性狼瘡汎発、若年性開始型（Ｉ型）真正糖尿病、例として小児インシュリン依存性真正糖尿病（ＩＤＤＭ）、成人発症���真正糖尿病（ＩＩ型糖尿病）、自己免疫性糖尿病、特発性の尿崩症、サイトカイン及びＴリンパ球によって媒介される急性及び遅発性過敏症と関係する免疫応答、結核、サルコイドーシス、肉芽腫症、例としてリンパ腫肉芽腫症、ヴェゲナーの肉芽腫症、無顆粒球症、脈管炎、例として血管炎（例えば大脈管脈管炎（リウマチ性多発性筋痛及び巨細胞（高安）動脈炎を含む）、中脈管脈管炎（川崎病及び結節性多発動脈炎／結節性動脈周囲炎を含む）、微小多発動脈炎、ＣＮＳ脈管炎、壊死、皮膚性又は過敏性血管炎、全身壊死性脈管炎及びＡＮＣＡ関連の脈管炎、例として、チャーグ-ストラウス脈管炎又は症候群（ＣＳＳ））、側頭動脈炎、無形成性貧血、自己免疫無形成性貧血、クームズ陽性貧血症、ダイアモンドブラックファン貧血症、溶血性貧血又は免疫溶血性貧血、例として自己免疫溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、悪性貧血（貧血症悪性熱）、アジソン病、純粋な赤血球貧血症又は形成不全（ＰＲＣＡ）、第ＶＩＩＩ因子欠損症、血友病Ａ、自己免疫好中球減少症、汎血球減少症、白血球減少症、白血球血管外遊出を伴う疾患、ＣＮＳ炎症性疾患、多器官損傷症候群、例えば敗血症、外傷又は出血の二次症状、抗原-抗体複合体関連疾患、抗糸球体基底膜疾患、抗リン脂質抗体症候群、アレルギー性神経炎、ベーチェット又はベーチェット病、カールスマン症候群、グッドパスチャー症候群、レイノー症候群、シェーグレン症候群、スティーブンスジョンソン症候群、類天疱瘡、例えば水疱性類天ぽうそう及び類天疱瘡皮膚、天疱瘡（尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、ペンフィグス粘液膜類天疱瘡及び天疱瘡エリテマトーデスを含む）、自己免疫多腺性内分泌障害、ライター病又は症候群、免疫複合体腎炎、抗体媒介性腎炎、多発性神経炎、慢性神経障害、例えばＩｇＭ多発性神経炎又はＩｇＭ媒介性神経障害、血小板減少（例えば心筋梗塞患者によるもの）、例えば血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、輸血後紫斑病（ＰＴＰ）、ヘパリン誘発性血小板減少及び自己免疫性又は免疫媒介性血小板減少、例えば慢性及び急性のＩＴＰを含む特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、自己免疫性精巣炎及び卵巣炎を含む精巣及び卵巣の自己免疫性疾患、一次甲状腺機能低下症、副甲状腺機能低下症、自己免疫内分泌性疾患、例えば甲状腺炎、例えば自己免疫性甲状腺炎、橋本病、慢性甲状腺炎（橋本甲状腺炎）又は亜急性の甲状腺炎、自己免疫甲状腺性疾患、特発性甲状腺機能低下症、グレーブ病、自己免疫多腺性症候群、例として多腺性症候群（又は、多腺性内分泌障害症候群）、腫瘍随伴症候群、例として神経系新生物関連症候群、例えばランバート-イートン筋無力症症候群又はイートン―ランバート症候群、スティッフマン又はスティッフマン症候群、脳脊髄炎、例として、アレルギー性脳脊髄炎又は脳脊髄炎性アレルギー及び実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）、重症筋無力症、例えば胸腺腫関連の重症筋無力症、小脳性退化、神経ミオトニ、眼球クローヌス又は眼球クローヌス筋硬直症候群（ＯＭＳ）及び感覚系神経障害、多病巣性運動神経障害、シーハン症候群、自己免疫肝炎、慢性肝炎、類狼瘡肝炎、巨細胞肝炎、慢性活動性肝炎又は自己免疫慢性活動性肝炎、リンパ系間隙間質性肺炎（ＬＩＰ）、閉塞性細気���支炎（非移植）対ＮＳＩＰ、ギラン‐バレー症候群、ベルガー病（ＩｇＡネフロパシ）、特発性ＩｇＡネフロパシ、線状ＩｇＡ皮膚病、原発性胆管萎縮症、肺線維症、自己免疫腸疾患症候群、セリアック病、コエリアック病、脂肪便症（グルテン腸疾患）、抵抗性スプルー、特発性スプルー、クリオグロブリン血症、アミロトロフィック側索硬化症（ＡＬＳ；筋萎縮性側索硬化症(Lou Gehrig's disease)）、冠状動脈疾患、自己免疫性耳疾患、例として、自己免疫内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫聴力障害、眼球クローヌス筋硬直症候群（ＯＭＳ）、多発性軟骨炎、例として、抵抗性又は再発性多発性軟骨炎、肺胞状蛋白症、アミロイドーシス、強膜炎、非癌性リンパ球増多症、一次リンパ球増多症、これにはモノクローナルＢ細胞リンパ球増多症（例えば良性モノクローナル免疫グロブリン症及び未同定の有意なモノクローナルガーモパチィ(monoclonal garnmopathy of undetermined significance)、ＭＧＵＳ）が含まれる、末梢性神経障害、腫瘍随伴症候群、チャネル病、例として、癲癇、片頭痛、不整脈、筋疾患、難聴、盲目、周期性麻痺及びＣＮＳのチャネル病、自閉症、炎症性ミオパシ、局所性分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、内分泌性眼障害、ブドウ膜網膜炎、脈絡網膜炎、自己免疫性肝臓病、線維症、多内分泌性不全、シュミット症候群、副腎炎、胃萎縮、初老期痴呆、脱髄性疾患、例として、自己免疫脱髄性病及び慢性炎症性脱髄性多発性神経炎、糖尿病性ネフロパシ、ドレスラー症候群、円形脱毛症、ＣＲＥＳＴ症候群（石灰沈着、レイノー現象、食道運動障害、強指症及び毛細管拡張症）、雌雄自己免疫性不妊性、混合性結合組織病、シャーガス病、リウマチ熱、再発性中絶、農夫肺、多形性紅斑、心切開術後症候群、クッシング症候群、愛鳥家肺、アレルギー性肉芽腫性脈管炎、良性リンパ球血管炎、アルポート症候群、肺胞炎、例えばアレルギー性肺胞炎及び繊維化肺胞炎、間隙肺疾患、輸血反応、ハンセン病、マラリア、リーシュマニア症、キパノソミアシス(kypanosomiasis)、住血吸虫症、蛔虫症、アスペルギルス症、サンプター症候群、カプラン症候群、デング熱、心内膜炎、心内膜心筋線維形成、広汎性間隙肺線維形成、割込み肺線維形成、肺線維形成、特発性の肺線維形成、嚢胞性線維症、眼内炎、持久性隆起性紅斑、胎児赤芽球症、好酸性筋膜炎(eosinophilic faciitis)、シャルマン症候群、フェルティー症候群、フィラリア(flariasis)、毛様体炎、例えば慢性毛様体炎、ヘテロ慢性毛様体炎、虹彩毛様体炎（急性又は慢性）又はＦｕｃｈの毛様体炎）、ヘーノホ-シェーンライン紫斑病、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染、エコーウィルス感染、心筋症、アルツハイマー病、パルボウィルス感染、風疹ウィルス感染、種痘後症候群、先天性風疹感染、エプスタインバーウイルス感染、耳下腺炎、エヴァンの症候群、自己免疫性腺機能不全、シドナム舞踏病、連鎖球菌感染後腎炎、閉塞性血栓性血管炎(thromboangitis ubiterans)、甲状腺中毒症、脊髄癆、脈絡膜炎、巨細胞多発性筋痛、内分泌性眼疾患(endocrine ophthamopathy)、慢性過敏性肺炎、乾性角結膜炎、流行性角結膜炎、特発性腎臓症候群、微小変化ネフロパシ、良性家族性及び乏血-再灌流障害、網膜自己免疫、関節炎症、気管支炎、慢性閉塞性気道疾患、珪肺症、アフタ、アフタ性口内炎、動脈硬化症疾患、アスペルミオジェネース(aspermiogenese)、自己免疫性溶血、ベック病、クリオグロブリン血症、デュピュイトラン拘縮、水晶体過敏性眼内炎、腸炎アレルギー、結節性紅斑、leprosum、特発性顔麻痺、慢性疲労症候群、リウマチ性熱、ハンマンリッチ病、感覚器性(sensoneural)聴力障害、血色素尿症発作(haemoglobinuria paroxysmatica)、性機能低下、回腸炎領域、白血球減少症、単核細胞増加症感染、横移動脊髄炎、一次特発性の粘液水腫、ネフローゼ、眼炎symphatica、精巣炎肉芽腫症、膵炎、多発性神経根炎急性、膿皮症壊疽、Ｑｕｅｒｖａｉｎ甲状腺炎、後天性脾臓萎縮、抗精子抗体による不妊性、非悪性胸腺腫、白斑、ＳＣＩＤ及びエプスタインバーウイルス−関連疾患、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、寄生虫病、例としてリーシュマニア(Lesihmania)、毒性ショック症候群、食中毒、Ｔ細胞の浸潤を伴う症状、白血球-粘着力欠損、サイトカイン及びＴリンパ球に媒介される急性及び遅発性過敏症関連免疫応答、白血球血管外遊出を伴う疾患、多器官損傷症候群、抗原-抗体複合体媒介性疾患、抗糸球体基底膜疾患、アレルギー性神経炎、自己免疫多腺性内分泌障害、卵巣炎、原発性粘液水腫、自己免疫萎縮性胃炎、交感性眼炎、リウマチ性疾患、混合性結合組織病、ネフローゼ症候群、膵島炎、多内分泌性不全、末梢性神経障害、自己免疫多腺性症候群Ｉ型、成人発症型特発性副甲状腺機能低下症（ＡＯＩＨ）、完全脱毛症、拡張型心筋症、後天性表皮水疱症（ＥＢＡ）、ヘモクロマトーシス、心筋炎、ネフローゼ症候群、原発性硬化性胆管炎、化膿性又は非化膿性副鼻腔炎、急性又は慢性副鼻腔炎、篩骨、正面、上顎骨又は蝶形骨副鼻腔炎、好酸球性関連疾患、例えば好酸球増加症、肺浸潤好酸球増加症、好酸球増加症-筋肉痛症候群、レフラー症候群、慢性好酸性肺炎、熱帯肺好酸球増加症、気管支肺炎アスペルギルス症、アスペルギローム又は好酸球性を含有する肉芽腫、アナフィラキシー、血清陰性脊椎関節炎疹、多内分泌性自己免疫性疾患、硬化性胆管炎、強膜、上強膜、慢性皮膚粘膜カンジダ症、ブラットン症候群、乳児期の一過性低ガンマグロブリン血症、ウィスコット‐アルドリッチ症候群、毛細血管拡張性運動失調、膠原病と関係する自己免疫疾患、リウマチ、神経病学的疾患、リンパ節炎、虚血性再灌流疾患、血圧応答の減退、血管機
能不全、antgiectasis、組織損傷、心血管乏血、痛覚過敏、脳虚血、及び脈管化を伴う疾患、アレルギー性過敏症疾患）糸球体腎炎、再灌流障害、心筋又は他の組織の再灌流損傷、急性炎症性成分を有する皮膚病、急性化膿性髄膜炎又は他の中枢神経系炎症性疾患、眼性及び眼窩の炎症性疾患、顆粒球輸血関連症候群、サイトカイン誘発性毒性、ナルコレプシ、急性重症炎症、慢性で難治性炎症、腎盂炎、肺線維症、糖尿病性網膜症、糖尿病性大動脈疾患、動脈内過形成、消化性潰瘍、弁膜炎、及び子宮内膜症などがある。
【０１１９】
２．癌、ＣＤ２０＋癌
Ｂ細胞新生物又は悪性腫瘍は、Ｂ細胞抗原又は表面マーカー、例えばＣＤ２０の発現に特徴がある。例えば、ＣＤ２０陽性癌は細胞表面上にＣＤ２０を発現する細胞の異常増幅を含むものである。ＣＤ２０陽性Ｂ細胞腫瘍には、リンパ球優性ホジキン病(LPHD)を含むＣＤ２０陽性ホジキン病；非ホジキンリンパ腫(NHL)；濾胞性中心細胞リンパ腫(FCC)；急性リンパ性白血病(ALL)；慢性リンパ球性白血病(CLL)；ヘアリー細胞白血病が含まれる。非ホジキンリンパ腫には、低程度／濾胞性非ホジキンリンパ腫(NHL)、小リンパ球性リンパ腫(SLL)、中程度／濾胞性ＮＨＬ、中程度びまん性ＮＨＬ、高程度免疫芽細胞ＮＨＬ、高程度リンパ芽球性NHL、高程度小正円形細胞(non-cleaved cell)ＮＨＬ、厖大な病気のＮＨＬ、プラズマ細胞様リンパ球性リンパ腫、外套細胞リンパ腫、エイズ関連リンパ腫およびワルデンストロームマクログロブリン血症が含まれる。これらの癌の再発治療を含む。ＬＰＨＤは頻回の放射線又は化学療法にもかかわらず再発する傾向にあるホジキン型の疾患であり、ＣＤ２０陽性悪性細胞の特徴がある。ＣＬＬはリンパ球といわれる成熟B細胞の４つの主要な白血病Ａ癌のうちの一つである。ＣＬＬは血液、骨髄およびリンパ球組織における細胞の進行性蓄積が顕在化する。無痛性のリンパ腫は発育が遅く、平均的な患者は寛解と再発を数多く繰り返した後に６から１０年生存する不治の疾患である。
【０１２０】
特定の実施態様では、本明細書中に記載したようなＢ細胞枯渇を増大する治療法は、Ｂ細胞新生物又は悪性腫瘍、例えば非ホジキンリンパ腫(NHL)、リンパ球優性ホジキン病(LPHD)、小リンパ球性リンパ腫(SLL)、慢性リンパ球性白血病、リウマチ様関節炎、および若年性関節リウマチ、ループス腎炎を含む全身性紅斑性狼瘡(SLE)、ヴェゲナー病、炎症性腸疾患、特発性血小板減少性紫斑病(ITP)、抗血栓性血小板減少性紫斑病(TTP)、自己免疫性血小板減少症、多発性硬化症、乾癬、IgA腎症、IgM多発性神経炎、重症筋無力症、脈管炎、糖尿病、レーノー症候群、シェーグレン症候群、および腎炎の治療に有用である。
Ｂ細胞枯渇の望ましいレベルは疾患による。例えば、ＣＤ２０陽性癌の治療では、Ｂ細胞の枯渇を最大にすることが望ましい。ゆえに、ＣＤ２０（又は他のＢ細胞表面抗原ないしはマーカー）陽性Ｂ細胞新生物の治療には、例えば、腫瘍成長（サイズ）、癌性細胞種類の増殖、転移及び／又は他の徴候及び特定の癌の症状をモニターすることによって当分野の医師によって評価される疾患の進行を少なくとも予防するために十分な程度のＢ細胞が枯渇されることが望ましい。好ましくは、少なくとも２か月、より好ましくは３か月、さらにより好ましくは４か月、より好ましくは５か月、さらにより好ましくは６か月以上の間の疾患の進行を予防するために十分な程度のＢ細胞枯渇である。より好ましい実施態様では、少なくとも６か月、より好ましくは９か月、より好ましくは１年、より好ましくは２年、より好ましくは３年、さらにより好ましくは５年以上の寛解期間を増やすために十分な程度のＢ細胞枯渇である。最も好ましい実施態様では、Ｂ細胞枯渇は疾患を治癒させるために十分な程度である。好ましい実施態様では、癌患者のＢ細胞枯渇は治療前の基準レベルの少なくとも約７５％、より好ましくは８０％、８５％、９０％、９５％、９９％及びさらに１００％である。
【０１２１】
３．自己免疫性疾患
自己免疫性疾患の治療では、Ｂ細胞枯渇薬剤、例えばＣＤ２０結合抗体の用量を調整することによって、個々の患者の疾患及び／又は症状の重症度に従いＢ細胞枯渇の程度を調整することが望ましい。Ｂ細胞枯渇は完全又は部分的でもよい。初期治療ではすべてのＢ細胞枯渇が望ましいが、継続治療では、部分的な枯渇のみを達成するために用量を調整してもよい。一実施態様では、Ｂ細胞枯渇は少なくとも２０％であり、すなわち、標的とする、例えばＣＤ２０陽性Ｂ細胞が治療前の基準レベルと比較して８０％以下残っている。他の実施態様では、Ｂ細胞枯渇は、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％以上である。好ましくは、Ｂ細胞枯渇は、疾患の進行を停止する、より好ましくは治療下にある特定の疾患の徴候及び症状を緩和する、更により好ましくは疾患を治癒するのに十分な程度である。
腫瘍治療の効率または効果を評価するパラメータが適当な疾患で医師に知られている。一般に、医師は特定の疾患の徴候及び症状の減弱を求めるであろう。パラメータは疾患の進行の中央値時間、緩解、疾患の安定時間を含む。
【０１２２】
以下に示す文献は、リンパ腫およびＣＬＬ、その診断、治療および治療効果を評価するための標準的な医療手順について記載している。Canellos GP, Lister, TA, Sklar JL: The Lymphomas.  W.B.Saunders Company, Philadelphia, 1998、van Besien K及びCabanillas, F: Clinical Manifestations, Staging and Treatment of Non-Hodgkin's Lymphoma, Chap. 70, 1293-1338頁, : Hematology , Basic Principles and Practice, 3rd ed. Hoffman 等 (編集). Churchill Livingstone, Philadelphia, 2000、及びRai, K及びPatel, D:Chronic Lymphocytic Leukemia, Chap. 72, 1350-1362頁, : Hematology , Basic Principles and Practice, 3rd ed. Hoffman等(編集). Churchill Livingstone, Philadelphia, 2000。
自己免疫または自己免疫関連疾患の治療の効率および成功率を評価するためのパラメータは、適当な疾患で医師に知られている。一般に、医師は特定の疾患の徴候及び症状の減弱を求めるであろう。以下は、実施例の方法による。
【０１２３】
一実施態様では、本発明の方法及び組成物は、関節リウマチ(ＲＡ)の治療に有用である。ＲＡは多関節の炎症、軟骨の減少、骨侵食により関節の破壊および最終的に関節機能の減退をもたらす特徴がある。加えて、ＲＡは全身性疾患であるため、他の組織、例として肺、眼及び骨髄に影響しうる。
Ｂ細胞抗原結合抗体などのＢ細胞枯渇薬剤、例えばＣＤ２０結合抗体とインテグリン抗体などのＢ細胞流動化薬剤を、初期ＲＡ（すなわち、メトトレキセート(ＭＴＸ)未処理）患者の一次治療として、又は例えばＭＴＸもしくはシクロフォスファミドと組み合わせて用いることができる。他の実施態様では、Ｂ細胞枯渇薬剤の併用、例えば抗ＣＤ２０抗体と、例えば抗体を含む抗α４及び／又は抗αＬアンタゴニストなどのＢ細胞流動化薬剤を、疾患変更抗リウマチ剤及び／又はメトトレキセート抵抗性を示す患者の二次療法としての治療に、例えばメトトレキセートと併用して使用することができる。これらの薬剤、例えばヒト化ＣＤ２０結合抗体及びインテグリン抗体は、関節リウマチの炎症と関係する疼痛の低減、構造的損傷の遅延、関節損傷を予防及びコントロールするため、更に通常、中等度から重度の関節リウマチの徴候及び症状を低減するために有用である。関節リウマチ患者は、ＲＡ治療に用いられる他の薬剤（以下の併用療法を参照）の前、後又は同時に、Ｂ細胞枯渇薬剤、例えばヒト化抗ＣＤ２０抗体、及びＢ細胞流動化薬剤、例えば抗インテグリン抗体で治療されうる。一実施態様では、既に疾患変更抗リウマチ剤の効かなかった患者及び／又はメトトレキセート単独に十分応答しなかった患者は抗ＣＤ２０抗体などのＢ細胞枯渇薬剤で治療される。他の実施態様では、抗インテグリン抗体に加えて、患者は、ヒト化抗ＣＤ２０結合抗体、抗ＣＤ２０結合抗体とシクロホスファミド、又は抗ＣＤ２０結合抗体とメトトレキセートが投与される。
【０１２４】
関節リウマチの治療効果を評価するある方法は、American College of Rheumatology (ACR)診断基準に基づくものであり、圧痛および腫大した関節の改善の割合を測定するものである。関節リウマチ患者は、無抗体治療（例として、治療前の基準）またはプラセボ治療と比較して例としてＡＣＲ２０（２０パーセントの改善）でスコア付けをする。抗体治療の効果を評価する他の方法は、Ｘ線画像、例として骨の侵食および関節腔の狭小化等の構造的傷害のスコア付けに用いられる鋭Ｘ線スコアを含む。また、患者は、治療期間中または治療後にHealth Assessment Questionnaire [HAQ]スコア、AIMSスコア、SF-36に基づいて能力障害の予防または改善の評価をすることができる。ＡＣＲ２０診断基準は、圧痛（痛み）関節数と腫大関節数の両方に２０％の改善があり、５つの追加測定のうち少なくとも３つに２０％の改善があることを含む。
１．視覚的類似尺度（ＶＡＳ）による患者の痛み評価
２．疾患活動性の患者の全体評価（ＶＡＳ）
３．疾患活動性の医師の全体評価（ＶＡＳ）
４．Health Assessment Questionnaireにより測定した能力障害の患者の自己評価、および
５．急性期反応、ＣＲＰまたはＥＳＲ
ＡＣＲ５０および７０も同様に定義する。好ましくは本発明の抗ＣＤ２０結合抗体などのＢ細胞枯渇薬剤を少なくともＡＣＲ２０のスコア、好ましくは少なくともＡＣＲ３０、より好ましくは少なくともＡＣＲ５０、さらにより好ましくは少なくともＡＣＲ７０、最も好ましくは少なくともＡＣＲ７５より高いスコアに達する用量を患者に投与する。
【０１２５】
乾癬性関節炎は特異的で明瞭なＸ線撮影像的特徴を有する。乾癬性関節炎の関節侵食および関節腔狭小化も同様にシャープ(sharp)スコアにより評価しうる。本明細書中に記載のヒト化抗ＣＤ２０結合抗体などのＢ細胞枯渇薬剤は関節傷害の予防だけでなく疾患の兆候および疾病の症状の減弱に利用可能である。
さらに、本発明の他の側面では、ヒト化抗ＣＤ２０結合抗体などのＢ細胞枯渇薬剤の治療的有効量をＳＬＥ患者に投与することによるループスまたはＳＬＥの治療方法である。ＳＬＥＤＡＩスコアでは疾患の活動性を数量で表す。ＳＬＥＤＡＩは疾患活動性に相関することが知られている２４の臨床および治験の荷重指数であり、０−１０３の数的範囲である。例としてBryan Gescuk & John Davis, “Novel therapeutic agent for systemic lupus erythematosus” Current Opinion in Rheumatology 2002, 14:515-521を参照。二本鎖ＤＮＡに対する抗体は、血清クレアチニン、尿蛋白、または尿中の血液で顕著に生成され増加することで定義される腎性発赤および他のループスの症状を引き起こすと信じられている。代わりに、または加えて、抗核抗体および二本鎖ＤＮＡに対する抗体のレベルで患者をモニターする。ＳＬＥ治療は高用量の副腎皮質ステロイドおよび／またはシクロホスファミド(HDCC)を含む。
【０１２６】
脊椎関節症は関節疾患のグループであり、硬直性脊椎炎、乾癬性関節炎、クローン病を含む。治療成果は、確認された患者および医師の全体的評価測定方法によって決定しうる。
様々な医薬が乾癬治療に用いられる；疾患重症度に関連して治療が異なる。より軽度な感染患者は一般的に局所治療、例として局所ステロイド、アンスラリン(anthralin)、カルシポトリエン(calcipotriene)、クロベタゾール(clobetasol)、およびタザロテン(tazarotene)が、全身的（メトトレキセート、レチノイド、シクロスポリン、ＰＵＶＡおよびＵＶＢ）治療を行うと思われる中度および重症乾癬患者では疾患の管理に有効である。タールも利用される。これらの治療は、安全性の考慮、時間のかかる投与計画、または不便な治療過程を複合して有する。さらに、いくつかは高価な設備および設置のための場所を必要とする。全身性医薬は、高血圧、高脂血症、骨髄抑制、肝疾患、腎疾患、および消化器系不調を含む様々な副作用を引き起こしうる。また、光線療法の使用は皮膚癌の発症を増加させうる。局所療法の使用に伴う不便および不快感に加え、光線療法および全身性治療は患者を処置および非処置の周期におき、その副作用のために生涯曝露をモニターする必要がある。
乾癬の治療効果は、医師の包括的評価(ＰＧＡ)変化、および乾癬領域および重症度指数(ＰＡＳＩ)スコア、乾癬症状評価(ＰＳＡ)を含む臨床兆候および疾患の症状の変化をモニターし、基礎となる症状と比較することによって評価する。特定の時点で経験した掻痒の程度を表すために用いられる視覚的類似尺度の処置を通して定期的に患者を測定する。
【０１２７】
４．用量
当業の医師によく知られた治療効能および用量に関する因子次第で、毒素および副作用を最小限にする一方で治療効能を有効にする用量で本発明のＢ細胞枯渇薬剤およびＢ細胞流動化薬剤を投与するであろう。
ＣＤ２０陽性新生物の治療では、例えば、腫瘍成長（サイズ）、癌性細胞種類の増殖、転移及び／又は他の徴候及び特定の癌の症状をモニターすることによって当分野の医師によって評価される疾患の進行を少なくとも予防するために十分な程度のＢ細胞が枯渇されることが望ましい。好ましくは、少なくとも２か月、より好ましくは３か月、さらにより好ましくは４か月、より好ましくは５か月、さらにより好ましくは６か月以上の間の疾患の進行を予防するために十分な程度のＢ細胞枯渇である。より好ましい実施態様では、少なくとも６か月、より好ましくは９か月、より好ましくは１年、より好ましくは２年、より好ましくは３年、さらにより好ましくは５年以上の寛解期間を増やすために十分な程度のＢ細胞枯渇である。最も好ましい実施態様では、Ｂ細胞枯渇は疾患を治癒させるために十分な程度である。好ましい実施態様では、癌患者のＢ細胞枯渇は治療前の基準レベルの少なくとも約７５％、より好ましくは８０％、８５％、９０％、９５％、９９％及びさらに１００％である。
【０１２８】
ＣＤ２０陽性癌または自己免疫疾患の治療のための治療的有効量は、約２５０ｍｇ／ｍ２〜約４００ｍｇ／ｍ２  または５００ｍｇ／ｍ２、好ましくは約２５０〜３７５ｍｇ／ｍ２の範囲とする。一実施態様では、用量範囲は、２７５〜３７５ｍｇ／ｍ２である。ＣＤ２０陽性Ｂ細胞腫瘍の治療の一実施態様では、抗体は３００〜３７５ｍｇ／ｍ２の範囲で投与する。Ｂ細胞リンパ腫、例として非ホジキンリンパ腫患者の治療のための特定の実施態様では、本発明の抗ＣＤ２０抗体およびヒト化抗ＣＤ２０抗体は１０ｍｇ／ｋｇまたは３７５ｍｇ／ｍ２の用量で患者に投与するであろう。一実施態様では、リツキシマブが７〜１５ｍｇ／ｋｇの用量範囲で投与されうる。ＮＨＬ治療のある用量投与計画では、治療の初めの１週間は10mg/kgの用量当たり抗体組成物一用量で投与し、２週間の間隔の後、同量の第二用量抗体を投与する。一般に、ＮＨＬ患者は１年に１度リンパ腫の再発によってこのような治療を受けるが、このような治療は繰り返される。他の用量投与計画では、低程度ＮＨＬ患者は４週間、ヒト化２Ｈ７の型、好ましくはｖ１６（週当たり３７５ｍｇ／ｍ２）を、続く５週目には抗体＋ＣＨＯＰ（シクロフォスファミド、ドキソルビシン(doxorubicin)、ビンクリスチンおよびプレドニゾン）またはＣＶＰ（シクロフォスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン）化学療法を３追加投与過程、３週ごとに３周期で投与する。
【０１２９】
関節リウマチ治療の一実施態様では、ヒト化抗ＣＤ２０抗体の用量範囲は２回の用量で１２５ｍｇ／ｍ２（約２００ｍｇ／用量と当量）〜６００ｍｇ／ｍ２、例として第１日目に初期用量２００ｍｇ、その後第１５日目には２００ｍｇの第二用量を投与する。異なる実施態様では、用量は１用量当たり２５０ｍｇ、２７５ｍｇ、３００ｍｇ、３２５ｍｇ、３５０ｍｇ、３７５ｍｇ、４００ｍｇ、４２５ｍｇ、４５０ｍｇ、４７５ｍｇ、５００ｍｇ、５２５ｍｇ、５５０ｍｇ、５７５ｍｇ、６００ｍｇである。
ジェネンテク及びバイオジェンＩｄｅｃ臨床調査は、１０ｍｇの少量から１ｇ用量までの抗ＣＤ２０（ｈｕ２Ｈ７.ｖ１６及びリツキシマブ）の用量を用いて、自己免疫性疾患の治療の治療的有効性を評価した（リツキシマブ研究についての背景の項目；及び国際公報０４／０５６３１２、実施例１６を参照）。一般に、この臨床調査では、約２週間の間隔をおいて２回用量の抗体が投与された。臨床調査において調べられる投薬計画の例には、関節リウマチにおけるヒト化ＣＤ２０抗体２Ｈ７.ｖ１６を２×１０ｍｇ（１用量１０ｍｇを２回の意味；７０ｋｇ、身長６７インチの患者では総用量〜１０．１ｍｇ／ｍ２）、２×５０ｍｇ（７０ｋｇ、身長６７インチの患者では総用量５５ｍｇ／ｍ２）、２×２００ｍｇ（７０ｋｇ、身長６７インチの患者では総用量２２０ｍｇ／ｍ２）、２×５００ｍｇ（７０ｋｇ、身長６７インチの患者では総用量〜５５０ｍｇ／ｍ２）及び２×１０００ｍｇ（７０ｋｇ、身長６７インチの患者では総用量〜１１００ｍｇ／ｍ２）；そして、リツキサンは、２×５００ｍｇ（７０ｋｇ、身長６７インチの患者では総用量〜５５０ｍｇ／ｍ２）、２×１０００ｍｇ（７０ｋｇ、身長６７インチの患者では総用量〜１１００ｍｇ／ｍ２）がある。これらの各用量では、循環Ｂリンパ球の実質的枯渇は、抗体の第一用量の投与後に観察された。
【０１３０】
一実施態様では、自己免疫性疾患を有する患者の自己免疫性疾患の本治療方法及び本Ｂ細胞枯渇方法では、ヒト化２Ｈ７抗体は、０．１ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲の一定用量で投与される。本出願人は、３００ｍｇ未満、更には１０ｍｇの一定用量で、実質的なＢ細胞枯渇が達成されることを明らかにした。ゆえに、異なる実施態様における本Ｂ細胞枯渇及び本治療方法では、ｈｕ２Ｈ７.ｖ５１１抗体は、０．１、０．５、１、５、１０、１５、２０  ２５、３０、４０、５０、７５、１００、１２５、１５０、２００又は２５０ｍｇの用量で投与される。部分的又は短期間のＢ細胞の枯渇を目的とするならば、低用量、例えば２０ｍｇ、１０ｍｇ又はより低用量を用いてもよい。
疾患によって、α４及びαＬ抗体などの抗インテグリン抗体が、およそ１ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇの用量範囲で患者に投与されうる。異なる実施態様では、用量範囲は、１〜１５ｍｇ／ｋｇ、１〜１０ｍｇ／ｋｇ、２〜１０ｍｇ／ｋｇ、３〜１０ｍｇ／ｋｇである。特定の実施態様では、各α４及びαＬ抗体は、およそ５ｍｇ／ｋｇで投与される。
一般的な計画として、非経口的に投与される場合の１用量当たりのα４又はαＬインテグリンの小分子アンタゴニストの初期治療有効量は、１日当たりおよそ０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ患者体重量の範囲、好ましくはおよそ０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ患者体重量の範囲である。用いられる化合物の典型的な初期範囲は０．３〜１５ｍｇ／ｋｇ／日である。経口単位用量形態、例えば錠剤及びカプセルは、およそ２５からおよそ１０００ｍｇの本発明の化合物を含有することが好ましい。
疾患の治療において、本発明のＢ細胞流動化薬剤及び枯渇薬剤は疾患において医師によって決定されるように持続的または間欠的に患者に投与する。
静脈注入または皮下中により薬剤を投与している患者は副作用、例として熱、寒気、灼熱感、無力症、および頭痛を経験する。このような副作用を軽減または最大限小さくするために、治療的用量に続いて初期調整用量の抗体を患者に投与する。調整用量はより多くの用量に耐えるように治療用量より少ないであろう。
【０１３１】
５．投与経路
本発明の方法に用いたアンタゴニスト及び抗体は医療従事者に公知の方法、例としてボーラスまたは一定期間中の継続注入、皮下的、筋肉内、動脈内、腹腔内、肺内、脳脊髄内、動脈血管内、滑膜内、クモ膜下腔内、病巣内、または吸入（例えば鼻腔内）、一般的には静脈内または皮下的投与でヒト患者に投与される。
一実施態様では、ヒト化２Ｈ７抗体及び／又はヒト化抗α４β１抗体、ナタリズマブ(natalizumab)は注入溶媒として０．９％塩化ナトリウム溶液の静脈注入により投与する。
【０１３２】
６．混合療法
上述のＢ細胞腫瘍の治療に一またはそれ以上の治療薬、例として多剤投与での化学療法剤と組み合わせてＢ細胞流動化薬剤及びＢ細胞枯渇薬剤、特に本発明のＣＤ２０結合抗体で患者を治療する。Ｂ細胞流動化薬剤及びＢ細胞枯渇薬剤、例えばＣＤ２０結合抗体は連続的、同時、または化学療法剤と交代して、または他の治療に応答しないときに投与しうる。標準的なリンパ腫治療の化学療法は、シクロホスファミド、シタラビン(cytarabine)、メルファラン、ミトキサントロン(mitoxantrone)＋メルファランを含む。ＣＨＯＰは非ホジキンリンパ腫治療の最も一般的な化学療法投与の一つである。ＣＨＯＰ投与に用いられる薬剤は以下のとおりである：シクロホスファミド(ブランド名シトキサン(cytoxan)、ネオサル(neosar)); アドリアマイシン(ドキソルビシン/ヒドロキシドキソルビシン); ビンクリスチン(オンコビン); および、プレドニゾロン(時々デルタゾン(Deltasone)またはオラソン(Orasone)と呼ばれる)。特定の実施態様では、ＣＤ２０結合抗体などのＢ細胞枯渇薬剤及びα４又はαＬインテグリンアンタゴニストなどのＢ細胞流動化薬剤が以下の化学療法剤、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、およびプレドニゾロンの一またはそれ以上を組み合わせて必要とする患者に投与される。特定の実施態様では、リンパ腫患者（例として非ホジキンリンパ腫）は本発明の抗ＣＤ２０抗体及び抗α４β１抗体をＣＨＯＰ(シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾン)療法と組み合わせて治療する。他の実施態様では、癌患者は本発明のヒト化ＣＤ２０結合抗体及び小分子α４及び／又はαＬインテグリンアンタゴニストをＣＶＰ(シクロホスファミド、ビンクリスチン、およびプレドニゾン)化学療法と組み合わせて治療する。特定の実施態様では、ＣＤ２０陽性ＮＨＬ患者は、ヒト化２Ｈ７．ｖ１６及びナタリズマブをＣＶＰと組み合わせて治療する。ＣＬＬ治療の特定の実施態様では、ＣＤ２０結合抗体及びインテグリンアンタゴニストはフルドラビンおよびシトキサンの一または両方での化学療法と組み合わせて投与する。
【０１３３】
上述の自己免疫疾患または自己免疫関連症状の治療に、Ｂ細胞枯渇薬剤、例えばＣＤ２０結合抗体及びα４及び／又はαＬインテグリンアンタゴニストを第二治療剤、例として免疫抑制剤と組み合わせて、例として多剤投与計画で患者を処置する。Ｂ細胞枯渇薬剤は、Ｂ細胞流動化薬剤と連続的、同時、何れか前後させて投与されうるし、免疫抑制剤と連続的、同時、何れか前後させて投与されうるし、他の治療に応答しないときに投与されうる。免疫抑制剤は分野常用と同じまたはより少ない用量で投与することが可能である。好適な免疫抑制剤は治療する疾患の型だけでなく患者の病歴を含めて多くの因子によるであろう。
【０１３４】
補助療法のためにここで用いられる「免疫抑制剤」は、患者の免疫系を抑制又はマスクするために作用する物質を意味する。このような薬剤には、サイトカイン生成を抑制する、自己抗原発現を下方制御又は抑制する、あるいはＭＨＣ抗原をマスクする物質を含む。このような薬剤の例は、グルココルチコステロイド、例えばプレドニゾン、メチルプレドニソロン、及びデキサメタゾンなどのステロイド；２-アミノ-６-アリール-５-置換ピリミジン（米国特許第４６６５０７７号参照）；アザチオプリン（アザチオプリンに抵抗性の場合はシクロホスファミド）、ブロモクリプチン；グルタルアルデヒド（米国特許第４１２０６４９号に記載されているように、ＭＨＣ抗原をマスクする）；ＭＨＣ抗原及びＭＨＣ断片に対する抗イディオタイプ抗体；シクロスポリンＡ；抗インターフェロン-γ、-β又は-α抗体を含むサイトカイン又はサイトカインレセプターアンタゴニスト、抗腫瘍壊死因子-α抗体、抗腫瘍壊死因子-β抗体、抗インターロイキン-２抗体及び；抗ＩＬ-２レセプター抗体；抗Ｌ３Ｔ４抗体；異種性抗リンパ球グロブリン；全Ｔ抗体、好ましくは抗ＣＤ３又は抗ＣＤ４／ＣＤ４ａ抗体；ＬＦＡ-３結合ドメインを持つ可溶性ペプチド（１９９０年７月２６日に公開された国際公開９０／０８１８７）；ストレプトキナーゼ；ＴＧＦ-β；ストレプトドルナーゼ；宿主からのＲＮＡ又はＤＮＡ；ＦＫ５０６；ＲＳ-６１４４３；デオキシスペルグアリン(deoxyspergualin)；ラパマイシイン(rapamycin)；Ｔ細胞レセプター（米国特許第５１１４７２１号）；Ｔ細胞レセプター断片（Offner等, Science, 251: 430-432 (1991)；国際公開９０／１１２９４；及び国際公開９１／０１１３３）；及びＴ１０Ｂ９等のＴ細胞レセプター抗体（欧州特許第３４０１０９号）を含む。
【０１３５】
関節リウマチ治療に、抗ＣＤ２０抗体などのＢ細胞枯渇薬剤とα４及び／又はαＬインテグリンアンタゴニストなどのＢ細胞流動化薬剤を以下の薬剤のうちの一またはそれ以上と組み合わせて患者を治療する：疾患変更性抗リウマチ薬(ＤＭＡＲＤ)(例えばメトトレキセート)、ＮＳＡＩまたはＮＳＡＩＤ（非ステロイド性抗炎症薬）、HUMIRAＴＭ（アダリムマブ(adalimumab)；Abbott Laboratories）、ARAVA(登録商標)（レフノミド(leflunomide)）、REMICADE(登録商標)（インフリキシマブ(infliximab)；Centocor Inc., of Malvern, Pa）、ENBREL（エターナルセプト(etanercept)；Immunex, WA）、COX-2阻害剤。一般にＲＡに用いられるＤＭＡＲＤは、ヒドロキシクロロクイン(hydroxycloroquine)、スルファサラジン、メトトレキサート、レフルノミド、エターナルセプト、インフリキシマブ、アザチオプリン、Ｄペニシラミン、ゴールド(Gold)（経口）、ゴールド（筋注）、ミノサイクリン、シクロスポリン、ブドウ球菌タンパク質A免疫吸着である。アダリムマブ(adalimumab)はＴＮＦαに結合するヒトモノクローナル抗体である。インフリキシマブはＴＮＦαに結合するキメラモノクローナル抗体である。エターナルセプトはヒトＩｇＧ１のＦｃ領域に結合するヒト７５ｋＤ(p75)腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）の細胞外リガンド結合部位からなる「イムノアドヘシン」融合タンパク質である。ＲＡの従来治療は、例として“Guidelines for the management of rheumatoid arthritis” Arthritis & Rheumatism 46(2): 328-346 (February, 2002)を参照。特定の実施態様では、ＲＡ患者を本発明のＣＤ２０抗体をメトトレキセート(MTX)と組み合わせて治療する。ＭＴＸの例示的用量は、約７．５−２５ｍｇ／ｋｇ／ｗｋである。ＭＴＸは経口および皮下的ににより投与される。
【０１３６】
硬直性脊椎炎、乾癬性関節炎およびクローン病の治療には、抗ＣＤ２０抗体などのＢ細胞枯渇薬剤とα４及び／又はαＬインテグリンアンタゴニストなどのＢ細胞流動化薬剤を、例としてRemicade(登録商標) (インフリキシマブ； Centocor Inc., of Malvern, Paより)、ENBREL (エターナルセプト；Immunex, WA)と組み合わせて患者を治療する。
ＳＬＥの治療には高用量副腎皮質ステロイドおよび／またはシクロスファミド(HDCC)を含む。
乾癬治療には、抗ＣＤ２０抗体などのＢ細胞枯渇薬剤とα４及び／又はαＬインテグリンアンタゴニストなどのＢ細胞流動化薬剤を、局所的治療、例として局所的ステロイド、アンスラリン、カルシポトリエン、およびタザロテン、またはメトトレキセート、レチノイド、シクロスポリン、ＰＵＶＡおよびＵＶＢ治療と組み合わせて患者を治療する。一実施態様では、乾癬患者はシクロスポリンに続いてまたは同時にＣＤ２０結合抗体で治療する。
【０１３７】
７．治療的剤形
本発明に使用される抗ＣＤ２０抗体などのＢ細胞枯渇薬剤とα４及び／又はαＬインテグリンアンタゴニストなどのＢ細胞流動化薬剤の治療的剤形は、薬剤又は小分子アンタゴニスト、例えば所望の純度を有する抗体を選択的に薬剤的許容可能な担体、賦形剤、安定剤と混合して凍結乾燥の剤形または液状溶液の形態の貯蔵に適するものである(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980))。許容可能な担体、賦形剤、又は安定化剤は、用いられる用量及び濃度で受容者に非毒性であり、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸などのバッファー；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；防腐剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロライド；ヘキサメトニウムクロライド；ベンズアルコニウムクロライド；ベンズエトニウムクロライド；フェノール；ブチル又はベンジルアルコール；メチル又はプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３-ペンタノール；及びｍ-クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、又はリシン等のアミノ酸；グルコース、マンノース、又はデキストリンを含む単糖類、二糖類、及び他の炭水化物ＥＤＴＡ等のキレート剤、スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ-タンパク質錯体）又はトゥイーン(TWEEN)（商品名）、プルロニクス(PLURONICS)（商品名）、及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤を含む。
【０１３８】
例示的抗ＣＤ２０抗体の剤形は国際公報98/56418に記載されており、参考としてここに組み込まれる。他の剤形は液状の多用量剤形であり、２−８℃で２年間の最小限の貯蔵期間を持つように抗ＣＤ２０抗体40 mg/mL、25 mM 酢酸塩、150 mMロレハロース、0.9% ベンジルアルコール、pH 5.0の0.02% ポリソルベート20 を含むものである。目的の他の抗ＣＤ２０剤形は、10mg/mLの抗体、9.0 mg/mL塩化ナトリウム、7.35 mg/mL クエン酸ナトリウム二水和物、0.7mg/mLポリソルベート80、および注入用の滅菌水を含むpH 6.5のものである。さらに、他の液状医薬剤形は、約ｐＨ４．８〜約ｐＨ５．５、好ましくはｐＨ５．５の１０−３０ｍＭ酢酸ナトリウム、約０．０１−０．１％ｖ／ｖ量の界面活性剤としてのポリソルベート、約２−１０％ｗ／ｖ量のトレハロース、保存剤としてのベンジルアルコール（米国特許第６１７１５８６）を含む。凍結乾燥剤形は国際公報９７／０４８０１に記載されるように、皮下的投与に適する。そのような凍結乾燥剤形は適当な希釈剤で高いタンパク質濃度に再編成されるかもしれない、また再編成された剤形はここで治療される哺乳動物に皮下注射されうる。
【０１３９】
ヒト化２Ｈ７変異体の一抗体剤形には、ｐＨ５．８の１０ｍＭヒスチジン、６％ショ糖、０．０２％ポリソルベート２０中の抗体１２−１４ｍｇ／ｍＬなどがある。特定の実施態様では、２Ｈ７変異体および特に２Ｈ７．ｖ１６は、ｐＨ５．８の１０ｍＭヒスチジン硫酸塩、６０ｍｇ／ｍｌショ糖、０．２ｍｇ／ｍｌポリソルベート２０、および注入用の滅菌水中の抗体２０ｍｇ／ｍＬである。
小分子インテグリンアンタゴニストの例示的剤形は、例えば国際公報02/059114に開示されている。
また、ここでの剤形は治療を特異的に示すために必要な一以上の活性化合物、好ましくはお互い負に作用しない相補的活性を持つものを含みうる。例として、さらに細胞障害性剤、化学療法剤、サイトカインまたは免疫抑制剤（例として、シクロスポリンまたはＴ細胞結合抗体、例としてＬＦＡ-１に結合するもの等のＴ細胞作用性のもの）を提供することが望まれる。そのような多剤の有効量は剤形が存在する抗体量、疾患または疾病または治療の型、および上述した他の因子に依存する。これらは一般に同じ用量およびここに示した投与経路またはここで用いられる用量の１〜９９％量で用いられる。
【０１４０】
また、活性成分は、例としてコアセルべーション技術または界面重合化により調製したマイクロカプセル、例として、個々のコロイド状のドラッグデリバリーシステム（例として、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）またはマクロエマルジョン中のヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ(メチルメタサイクリン)マイクロカプセル中に包まれているかもしれない。このような技術は、Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)に開示されている。
持続性徐放剤が調製される。持続性徐放剤の好適な例は、アンタゴニストを含む固形疎水性ポリマーの準透過性基質を含むものであり、基質は、造形品、例としてフィルム、またはマイクロカプセルの形である。持続性徐放基質の例として、ポリエステル、ヒドロゲル(例えば、ポリ(2ヒドロキシエチル-メタクリレート)、またはポリ(ビニルアルコール))、ポリ乳酸(米国特許3773919), L-グルタミン酸およびエチルＬグルタミン酸の共重合体、非分解性のエチレンビニール酢酸塩、分解性の乳酸グリコール酸共重合体、例としてLUPRON DEPOTＴＭ(乳酸-グリコール酸共重合体およびロイプロリド酢酸塩で構成された注入可能ミクロスフェア)、およびポリD-(-)-3ヒドロキシブチリン酸を含む。
インビボ投与に用いる剤形は無菌でなければならない。これは滅菌濾過膜を通す濾過によって容易く達成できる。
【０１４１】
Ｇ．製造品およびキット
本発明の他の実施態様は、自己免疫性疾患又はＣＬＬなどの癌の治療に有用な材料を含む製造品である。製造品は、少なくとも１つの容器とラベルまたは容器上にあるまたは容器に付属するパッケージ挿入物を含む。好適な容器は、例としてボトル、バイアル、シリンジ等を含む。容器はガラス又はプラスチックなどの様々な材料から形成されうる。少なくとも１つの容器は、症状の治療に有効な組成物を収容し、無菌のアクセスポートを有し得る（例えば、容器は皮下注射針による穴あきストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであってよい）。２つの治療組成物が製造品中に提供されてもよい。第一組成物中の少なくとも一の活性剤はＣＤ２０結合抗体などのＢ細胞枯渇薬剤である。少なくとも１のα４又はαＬインテグリンアンタゴニストなどのＢ細胞流動化薬剤、例えばαＬ及びα４インテグリンに結合する抗体を含有する第二又は第二及び第三の組成物は一又は複数の別々の容器に内包されてもよい。あるいは、インテグリンアンタゴニスト組成物は別々の製造品にパッケージされてもよい。ラベルまたはパッケージ挿入物は、組成物が特定の症状の治療のために使用されることを示している。さらに、ラベルまたはパッケージ挿入物は組成物の患者への投与についての説明を含むであろう。パッケージ挿入物は治療的製造品の商用パッケージに含まれる慣例的な説明書を示しており、効能、使用法、用量、投与法、禁忌および／または医薬製品に関する警告についての情報を含む。加えて、さらに製造品は、薬学的に許容可能な緩衝液、例として注射用静菌水(BWFI)、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液、およびブドウ糖溶液を含む容器を含んでもよい。さらに、商業的および消費者視点で望まれる他の材料、他の緩衝液、希釈剤、フィルタ、針、およびシリンジを含みうる。
【０１４２】
Ｈ．抗体生成
１．モノクローナル抗体 
モノクローナル抗体は、Kohler等, Nature, 256:495 (1975)により最初に記載されたハイブリドーマ法を用いて作製でき、又は組換えＤＮＡ法(米国特許第４，８１６，５６７号)によって作製することができる。 
ハイブリドーマ法においては、マウス又はその他の適当な宿主動物、例えばハムスターを上記のように免疫し、免疫化に用いられたタンパク質と特異的に結合する抗体を産生する、又は産生することのできるリンパ球を導き出す。別法として、リンパ球をインビトロで免疫することもできる。次に、リンパ球を、ポリエチレングリコールのような適当な融合剤を用いて骨髄腫細胞と融合させ、ハイブリドーマ細胞を形成させる(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, 59-103頁(Academic Press, 1986))。 
【０１４３】
このようにして調製されたハイブリドーマ細胞を、融合していない親の骨髄腫細胞（融合パートナーとも表す）の増殖または生存を阻害する一又は複数の物質を好ましくは含む適当な培地に蒔き、増殖させる。例えば、親の骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ(ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ)を欠失するならば、ハイブリドーマのための選択培地は、典型的には、ＨＧＰＲＴ−欠失細胞の増殖を妨げる物質であるヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジンを含有するであろう(ＨＡＴ培地)。
【０１４４】
好ましい融合パートナー骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定な高レベルの発現を支援し、融合していない親細胞を選択する選択培地に対して感受性である細胞である。これらの中でも、好ましい骨髄腫細胞株は、マウス骨髄腫株、例えば、ソーク・インスティテュート・セル・ディストリビューション・センター、サンディエゴ、カリフォルニア、ＵＳＡより入手し得るＭＯＰＣ−２１およびＭＰＣ−１１マウス腫瘍、及び、ＳＰ−２および類縁体、例としてアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション、ロックヴィル、メリーランド、ＵＳＡより入手し得るＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞由来のものである。ヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株もまたヒトモノクローナル抗体の産生のために開示されている（Kozbor, J.Immunol., 133:3001 (1984)；Brodeur等, Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,51-63頁、(Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)）。 
【０１４５】
ハイブリドーマ細胞が生育している培地を、抗原に対するモノクローナル抗体の産生について検定する。好ましくは、ハイブリドーマ細胞により産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降又はインビトロ結合検定、例えばラジオイムノアッセイ(ＲＩＡ)又は酵素結合免疫吸着検定(ＥＬＩＳＡ)によって測定する。 
モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Munsonら, Anal. Biochem., 107:220 (1980)に記載されているスカッチャード分析により決定できる。
所望の特異性、親和性、及び／又は活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が確定された後、該クローンを限界希釈法によりサブクローニングし、標準的な方法により増殖させることができる(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, 59-103頁(Academic Press, 1986))。この目的に対して好適な培地は、例えば、Ｄ−ＭＥＭ又はＲＰＭＩ−１６４０培地を包含する。また、そのハイブリドーマ細胞は、例えばマウス内の細胞に腹腔内注入するなどして、動物において腹水症腫瘍としてインビボで増殖させることができる。 
【０１４６】
サブクローンにより分泌されたモノクローナル抗体は、例えばアフィニティークロマトグラフィー（例としてプロテインＡまたはプロテインＧセファロースを用いることによる）、またはイオン交換クロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析などのような常套的な抗体精製法により、培地、腹水、又は血清から好適に分離される。 
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、常法を用いて(例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードしている遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを用いることにより)即座に単離され配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好ましい供給源となる。ひとたび分離されたならば、ＤＮＡを発現ベクター中に入れ、ついでこれを、この状況以外では抗体タンパク質を産生しない大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣(ＣＨＯ)細胞、又は骨髄腫細胞のような宿主細胞中に形質移入し、組換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成を獲得することができる。抗体をコードするＤＮＡの細菌内組み換え発現に関する文献には、Skerraら, Curr. Opinion in Immunol., 5:256-262 (1993) および Pluckthun, Immunol. Revs., 130:151-188 (1992)がある。
【０１４７】
更なる実施態様において、抗体又は抗体断片は、McCafferty等, Nature, 348:552-554 (1990)に記載された技術を使用して産生される抗体ファージライブラリから単離することができる。Clackson等, Nature, 352:624-628 (1991)及び Marks等, J.Mol.Biol., 222:581-597 (1991)は、ファージライブラリを使用したマウス及びヒト抗体の単離をそれぞれ記述している。続く刊行物は鎖シャッフリングによる高親和性(ｎＭ範囲)のヒト抗体の生産、並びに非常に大きなファージライブラリを構築するための方策としてコンビナトリアル感染とインビボ組換え(Waterhouse等, Nuc.Acids.Res., 21:2265-2266 (1993))を記述している。従って、これらの技術はモノクローナル抗体の単離に対する伝統的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ法に対する実行可能な別法である。 
【０１４８】
キメラまたは融合抗体ポリペプチドを生成するために抗体をコードするＤＮＡを修飾する、例えば、相同的マウス配列をヒト重鎖及び軽鎖定常部のコード化配列（ＣＨおよびＣＬ）に置換することにより(米国特許第４，８１６，５６７号；およびMorrison等, Proc.Nat.Acad.Sci. USA, 81:6851(1984))、又は免疫グロブリンコード化配列に非免疫グロブリンポリペプチド（非相同ポリペプチド）のコード化配列の全て又は一部を共有結合させることにより、修飾することができる。 このような非免疫グロブリンポリペプチドは、抗体の定常部を置換し、又は抗体の１個の抗原結合部位の可変部を置換して、抗原に対する特異性を有する１個の抗原結合部位、及び異なる抗原に対する特異性を有するもう一つの抗原結合部位を含むキメラ二価抗体を作り出す。 
【０１４９】
２．ヒト化抗体 
非ヒト抗体のヒト化方法は、当分野で示されている。好ましくは、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源から導入された一又は複数のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基はしばしば「移入」残基と呼ばれ、これは典型的には「移入」可変ドメインから取られている。ヒト化は、本質的にはウィンターと共同研究者の方法(Jones等, Nature, 321:522-525 (1986); Riechmann等, Nature, 332:323-327 (1988); Verhoeyen等, Science, 239:1534-1536 (1988))に従って、ヒト抗体の対応配列を高頻度可変領域配列に置換することにより、実施することができる。従って、このような「ヒト化」抗体は、未処理のヒト可変ドメインより実質上小さい部分が非ヒト種由来の対応配列によって置換されているキメラ抗体である(米国特許第４，８１６，５６７号)。実際、ヒト化抗体は、典型的には、幾つかの高頻度可変領域残基及びことによると幾つかのＦＲ残基が、齧歯類抗体の類似部位からの残基によって置換されているヒト抗体である。 
【０１５０】
ヒト化抗体の作成に使用される軽鎖と重鎖両方のヒト可変ドメインの選択は、ヒト治療の使用を目的とする場合に、抗原性およびＨＡＭＡ反応（ヒト抗マウス抗体）を低下させるために非常に重要である。いわゆる「ベストフィット」法によれば、齧歯類抗体の可変ドメインの配列を既知のヒト可変ドメイン配列の全ライブラリーに対してスクリーニングする。齧歯類の配列に最も近いヒトＶドメイン配列を同定して、ヒト化抗体のためのヒトフレームワーク(ＦＲ)として受け入れる(Sims等, J.Immunol., 151:2296 (1993)；Chothiaら, J.Mol.Biol., 196:901 (1987))。もう一つの方法は、軽鎖又は重鎖の特定のサブグループの全てのヒト抗体のコンセンサス配列由来の特定のフレームワークを使用するものである。同じフレームワークを幾つかの異なるヒト化抗体に使用することができる(Carter等, Proc.Natl.Acad.Sci. USA, 89:4285 (1992)；Presta等, J.Immunol., 151:2623 (1993))。 
【０１５１】
更に、抗体は、抗原に対する高親和性及び他の望ましい生物学的性質を保持したままヒト化することが重要である。この目的を達成するため、好ましい方法によれば、親配列及び様々な概念的ヒト化生成物を、親およびヒト化配列の三次元モデルを用いて分析する工程によって、ヒト化抗体を調製する。三次元免疫グロブリンモデルは一般に利用でき、当業者には良く知られている。選ばれた候補免疫グロブリン配列の可能な三次元コンホメーション構造を例示し表示するコンピュータープログラムが利用できる。これらの表示を調べることにより、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能な役割の分析、すなわち、候補免疫グロブリンがその抗原を結合させる能力に影響を及ぼす残基の分析が可能となる。このようにしてレシピエント及び移入配列からのＦＲ残基を選択し、結びつけることができ、所望の抗体の特性、例えば標的抗原に対する親和性の増加が達成される。一般に、高頻度可変領域残基は、直接的かつ最も実質的に抗原結合への影響に関与する。
ヒト化抗体は抗体断片、例としてＦａｂであり、免疫複合体を生成するために一またはそれ以上の細胞障害性剤と選択的にコンジュゲートしている。またはヒト化抗体は完全長抗体、例として完全長ＩｇＧ１抗体であり得る。
【０１５２】
３．ヒト抗体およびファージディスプレイ方法論
ヒト化の別法として、ヒト抗体を生成することができる。例えば、内因性の免疫グロブリン産生がなくともヒト抗体の全レパートリーを免疫化することで産生することのできるトランスジェニック動物(例えば、マウス)を作ることが現在は可能である。例えば、キメラ及び生殖系列突然変異体マウスにおける抗体重鎖結合領域(ＪＨ)遺伝子の同型接合欠損が内因性抗体産生の完全な阻害をもたらすことが記載されている。このような生殖系列突然変異体マウスにおけるヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子列の転移は、抗原投与時にヒト抗体の産生をもたらす。Jakobovitsら, Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 90:2551 (1993)；Jakobovitsら, Nature 362:255-258 (1993); Bruggemannら, Year in Immuno., 7:33 (1993)；及び米国特許第５５４５８０６号、同５５６９８２５号、同５５９１６６９号（すべてのＧｅｎＰｈａｒｍ）、同５５４５８０７号、および国際公報９７／１７８５２を参照されたい。
【０１５３】
別法として、ファージディスプレイ技術(McCaffertyら, Nature 348：552-553(1990))を、非免疫化ドナーからの免疫グロブリン可変(Ｖ)ドメイン遺伝子レパートリーから、インビトロでヒト抗体及び抗体断片を産出させるために使用することができる。この技術によれば、抗体Ｖドメイン遺伝子は、繊維状バクテリオファージ、例えばＭ１３またはｆｄの主要又は少数コートタンパク質遺伝子のいずれかにおいてイン-フレームをクローンし、ファージ粒子の表面において機能的抗体断片として表示される。繊維状粒子がファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含むので、抗体の機能特性に基づいた選択により、これらの特性を示す抗体をコードする遺伝子の選択がなされる。よって、ファージはＢ細胞の特性のいくつかを模倣している。ファージディスプレイは多様な形式で行うことができる；例えばJohnson, Kevin S. 及びChiswell, David J., Current Opinion in Structural Biology 3：564-571(1993)を参照のこと。Ｖ-遺伝子セグメントのいくつかの供給源がファージディスプレイのために使用可能である。Clacksonら, Nature, 352：624-628(1991)は、免疫化されたマウス脾臓から得られたＶ遺伝子の小ランダム組合せライブラリからの抗-オキサゾロン抗体の異なった配列を単離した。非免疫化ヒトドナーからのＶ遺伝子のレパートリーを構築することができ、多様な列の抗原(自己抗原を含む)に対する抗体を、Marksら, J. Mol. Biol. 222：581-597(1991)、又はGriffithら, EMBO J. 12：725-734(1993)に記載の技術に本質的に従って単離することができる。また、米国特許第５５６５３３２号及び同５５７３９０５号を参照のこと。
先に述べたように、ヒト抗体はインビトロで活性化されたＢ細胞により生成される（米国特許第５５６７６１０号および同第５２２９２７５号）。
【０１５４】
４．抗体断片
ある状況では抗体全体より抗体断片を用いることに有用性がある。断片がより小さければ早く通過できるので、固形腫瘍へより接近しやすいであろう。
抗体断片を生産するために様々な技術が開発されている。伝統的には、これらの断片は、未処理の抗体のタンパク分解性消化を介して誘導されていた(例えば、Morimoto等, Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992)；及びBrennan等, Science, 229:81(1985)を参照のこと)。しかし、これらの断片は現在は組換え宿主細胞により直接生産することができる。Ｆａｂ、ＦｖおよびＳｃＦｖ抗体断片はすべて大腸菌で発現して分泌されるので、大量の抗原断片を容易に生成することができる。抗体断片は上述した抗体ファージライブラリーから単離することができる。別法として、Ｆａｂ'-ＳＨ断片は大腸菌から直接回収することができ、化学的に結合してＦ(ａｂ')２断片を形成することができる(Carter等, Bio/Technology 10:163-167(1992))。他のアプローチ法では、Ｆ(ａｂ')２断片を組換え宿主細胞培養から直接単離することができる。エピトープ残基に結合するサルベージレセプターを含むインビボでの半減期が長いＦａｂおよびＦ(ａｂ')２断片は米国特許第５８６９０４６号に述べられている。抗体断片の生産のための他の方法は当業者には明らかであろう。他の実施態様では、選択抗体は単鎖Ｆｖ断片(ｓｃＦＶ)である。国際公開第９３／１６１８５号；米国特許第５５７１８９４号；及び米国特許第５５８７４５８号を参照のこと。ＦｖおよびｓＦｖは定常領域を欠損している無処理の結合部位を有する種のみである；故に、インビボで用いる際に非特異性結合を減らすのに好適である。ｓＦｖ融合タンパク質はｓＦｖのアミノ末端またはカルボキシル末端のいずれかでエフェクタータンパク質の融合が起こって構築されるものである。上述のAntibody Engineering, ed. Borrebaeckを参照。また、抗体断片は、例えば米国特許第５６４１８７０号に記載されているような「線形抗体」であってもよい。このような線形抗体断片は単一特異性又は二重特異性であってよい。
【０１５５】
５．二重特異性抗体 
二重特異性抗体は、少なくとも二つの異なる抗原に対する結合特異性を有する。例示的な二重特異性抗体は二つの異なるＣＤ２０タンパク質エピトープに結合しうる。このような他の抗体はＣＤ２０結合部位と他のタンパク質の結合部位を併せ持つであろう。または、抗ＣＤ２０アームはリンパ球上のトリガー分子、例としてＴ細胞レセプター分子(例として、CD3)、ＩｇＧのＦｃレセプター分子 (FcgR)、例として FcgRI (CD64)、FcgRII (CD32) およびFcgRIII (CD16)、または NKG2D もしくは他のＮＫ細胞活性化リガンドに結合するアームを併せ持ち、ＣＤ２０発現細胞への細胞性防御機構を局在化する。二重特異性抗体はＣＤ２０を発現する細胞へ細胞障害性剤を局在化するために用いることができる。これらの抗体はＣＤ２０結合アームおよび細胞障害性剤（例として、サポリン、抗インターフェロンα、ビンカ・アルカロイド、リシンＡ鎖、メトトレキセート、または放射性同位体ハプテン）結合アームを有する。二重特異性抗体は全長抗体又は抗体断片(例えばＦ(ａｂ')２二重特異性抗体)として調製することができる。
国際公報９６／１６６７３では二重特異性抗ＥｒｂＢ２／抗ＦｃγＲＩＩＩ抗体を詳述しており、米国特許第５８３７２３４では二重特異性抗ＥｒｂＢ２／抗ＦｃγＲＩ抗体について開示されている。二重特異性抗ＥｒｂＢ２／Ｆｃα抗体は国際公報９８／０２４６３に示されている。米国特許第５８２１３３７号は二重特異性抗ＥｒｂＢ２／抗ＣＤ３抗体について教示している。
【０１５６】
二重特異性抗の作製方法は当分野において既知である。全長二重特異性抗体の伝統的な組換え産生は二つの免疫グロブリン重鎖-軽鎖対の同時発現に基づき、ここで二つの該鎖は異なる特異性を持っている(Millstein等, Nature, 305:537-539 (1983))。免疫グロブリン重鎖及び軽鎖が無作為に取り揃えられているため、これらのハイブリドーマ(四部雑種)は１０個の異なる抗体分子の可能性ある混合物を産生し、そのうちただ一つが正しい二重特異性構造を有する。通常、アフィニティークロマトグラフィー工程により行われる正しい分子の精製は、かなり煩わしく、生成物収率は低い。同様の方法が国際公報93/08829号及びTraunecker等,EMBO J., 10:3655-3659 (1991)に開示されている。 
【０１５７】
異なったアプローチ法によると、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン（抗原−抗体結合部位）を、免疫グロブリン不変ドメイン配列と融合させる。該融合は好ましくは、少なくともヒンジの一部、ＣＨ２及びＣＨ３領域を含む免疫グロブリン重鎖定常部との融合である。軽鎖の結合に必要な部位を含む第一の重鎖定常領域(ＣＨ１)を、融合の少なくとも一つに存在させることが望ましい。免疫グロブリン重鎖の融合、そして、望まれるならば免疫グロブリン軽鎖をコードしているＤＮＡを、別個の発現ベクター中に挿入し、適当な宿主生物に同時形質移入する。これにより、作製に使用される三つのポリペプチド鎖の等しくない比率が最適な収率を提供する態様において、三つのポリペプチドフラグメントの相互の割合の調節に大きな融通性が与えられる。しかし、少なくとも二つのポリペプチド鎖の等しい比率での発現が高収率をもたらすとき、又は、その比率が特に重要性を持たないときは、２または３個全てのポリペプチド鎖のためのコード化配列を一つの発現ベクターに挿入することが可能である。 
【０１５８】
このアプローチ法の好適な実施態様において、二重特異性抗体は、第一の結合特異性を有する一方のアームにハイブリッド免疫グロブリン重鎖、及び他方のアームにハイブリッド免疫グロブリン重鎖-軽鎖対(第二の結合特異性を提供する)を含む。二重特異性分子の半分しか免疫グロブリン軽鎖がないことで容易な分離法が提供されるため、この非対称的構造は、所望の二重特異性化合物を不要な免疫グロブリン鎖の組み合わせから分離することを容易にすることが分かった。このアプローチ法は、国際公報９４／０４６９０に開示されている。二重特異性抗体を作製する更なる詳細については、例えばSureshら, Methods in Enzymology, 121:210 (1986)を参照されたい。
米国特許第５７３１１６８号に記載された他のアプローチ法によれば、一対の抗体分子間の境界面を操作することにより組換え細胞培養から回収するヘテロ二量体のパーセントを最大にすることができる。好適な境界面は抗体定常ドメインのＣＨ３ドメインの少なくとも一部を含む。この方法では、第１抗体分子の境界面からの一又は複数の小さいアミノ酸側鎖がより大きな側鎖(例えばチロシン又はトリプトファン)と置換される。大きな側鎖と同じ又はより小さいサイズの相補的「キャビティ」を、大きなアミノ酸側鎖を小さいもの(アラニン又はスレオニン)と置き換えることにより第２の抗体分子の界面に作り出す。これにより、ホモ二量体のような不要の他の最終産物に対してヘテロ二量体の収量を増大させるメカニズムが提供される。 
【０１５９】
二重特異性抗体は、架橋した又は「ヘテロ複合体抗体」もまた含む。例えば、ヘテロ複合体の抗体の一方はアビジンに結合され、他方はビオチンに結合され得る。そのような抗体は、例えば、不要の細胞に対する免疫系細胞を標的とするため(米国特許第４，６７６，９８０号)、及びＨＩＶ感染の治療のため(国際公報９１／００３６０，国際公報９２／２０３７３，  及びＥＰ０３０８９)に提案された。ヘテロ複合体抗体は、任意の簡便な架橋法を用いて作製することができる。好適な架橋剤は当該分野において良く知られており、幾つかの架橋技術と共に米国特許第４６７６９８０号に開示されている。 
抗体断片から二重特異性抗体を産生する技術もまた文献に記載されている。例えば、化学結合を使用して二重特異性抗体を調製することができる。Brennanら, Science, 229:81 (1985) は、無処理の抗体をタンパク分解性に切断してＦ(ａｂ')２断片を産生する手順を記述している。これらの断片は、ジチオール錯体形成剤、亜砒酸ナトリウムの存在下で還元して近接ジチオールを安定化させ、分子間ジスルフィド形成を防止する。産生されたＦａｂ'断片はついでチオニトロベンゾアート(ＴＮＢ)誘導体に転換される。Ｆａｂ'-ＴＮＢ誘導体の一つを、次にメルカプトエチルアミンによる還元でＦａｂ'-チオールに再転換し、他のＦａｂ'-ＴＮＢ誘導体の等モル量と混合して二重特異性抗体を形成する。生成した二重特異性抗体は、酵素の選択的固定化用の薬剤として使用することができる。
【０１６０】
二重特異性抗体を形成するために科学的に結合して大腸菌からＦａｂ'-ＳＨ断片を直接回収することが近年の進歩により容易になった。Shalabyら, J. Exp. Med., 175: 217-225 (1992)では、完全ヒト化二重特異性抗体Ｆ(ａｂ')２分子の生成について述べている。それぞれのＦａｂ'断片は別々に大腸菌から分泌され、二重特異性抗体を形成するためにインビトロで科学的に直接結合されやすい。故に、ヒト胸部腫瘍標的に対するヒト細胞障害性リンパ球の溶解性活性トリガーと同様に、形成された二重特異性抗体はＥｒｂＢ２レセプターを過剰発現する細胞および正常ヒトＴ細胞に結合することが可能であった。
組換え細胞培養から直接的に二重特異性抗体断片を作成し分離する様々な方法もまた記述されている。例えば、二重特異性抗体はロイシンジッパーを用いて生成されている。Kostelnyら, J.Immunol. 148(5):1547-1553 (1992)。Ｆｏｓ及びＪｕｎタンパク質からのロイシンジッパーペプチドを、遺伝子融合によって二つの異なった抗体のＦａｂ'部分に結合させる。抗体ホモダイマーをヒンジ領域で還元してモノマーを形成し、ついで再酸化して抗体ヘテロダイマーを形成する。この方法は、抗体ホモダイマーの生産にも用いることができる。Hollingerら, Proc.Natl.Acad.Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)に記載の「ダイアボディ」技術は、二重特異性抗体断片を作成するための別のメカニズムを提供した。断片は、同一鎖上の二つのドメイン間の対形成を可能にするには短すぎるリンカーによって軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と結合している重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。従って、一つの断片のＶＨ及びＶＬドメインは他の断片の相補的ＶＬ及びＶＨドメインと強制的に対形成し、それによって二つの抗原結合部位を形成する。単鎖Ｆｖ(ｓＦｖ)ダイマーの使用によって、二重特異性抗体断片を製造する他の方策も報告されている。Gruberら, J.Immunol. 152:5368 (1994)を参照されたい。
二価より多い抗体も考えられる。例えば、三重特異性抗体を調製することができる。Tutt等 J.Immunol. 147:60(1991)。
【０１６１】
６．多価抗体 
多価抗体は、抗体が結合する抗原を発現する細胞により、二価抗体よりも早くインターナリゼーション(及び／又は異化)されうる。本発明の抗体は、３又はそれ以上の結合部位を有する多価抗体(ＩｇＭクラス以外のもの)であり得(例えば四価抗体)、抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組換え発現により素速く生成することができる。多価抗体は二量化ドメインと３又はそれ以上の抗原結合部位を有する。好ましい二量化ドメインはＦｃ領域又はヒンジ領域を有する(又はそれらからなる)。このシナリオにおいて、抗体はＦｃ領域と、Ｆｃ領域のアミノ末端に３又はそれ以上の抗原結合部位を有しているであろう。ここで、好ましい多価抗体は３ないし８、好ましくは４の抗原結合部位を有する(又はそれらからなる)。多価抗体は少なくとも１つのポリペプチド鎖(好ましくは２つのポリペプチド鎖)を有し、ポリペプチド鎖(類)は２又はそれ以上の可変ドメインを有する。例えば、ポリペプチド鎖(類)はＶＤ１-(Ｘ１)ｎ−ＶＤ２−(Ｘ２)ｎ−Ｆｃを有し、ここでＶＤ１は第１の可変ドメインであり、ＶＤ２は第２の可変ドメインであり、ＦｃはＦｃ領域のポリペプチド鎖の１つであり、Ｘ１及びＸ２はアミノ酸又はポリペプチドを表し、ｎは０又は１である。例えば、ポリペプチド鎖(類)は：ＶＨ-ＣＨ１-柔軟なリンカー-ＶＨ-ＣＨ１-Ｆｃ領域鎖；又はＶＨ-ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１−Ｆｃ領域鎖を有し得る。ここで多価抗体は、好ましくは少なくとも２つ(好ましくは４つ)の軽鎖可変ドメインポリペプチドをさらに有する。ここで多価抗体は、例えば約２〜約８の軽鎖可変ドメインポリペプチドを有する。ここで考察される軽鎖可変ドメインポリペプチドは軽鎖可変ドメインを有し、あるいはＣＬドメインをさらに有する。
【０１６２】
７．宿主細胞の選択及び形質転換
ここに記載の組み換えｍＡｂ、イムノアドヘシン及び本明細書中に記載の他のポリペプチドアンタゴニストをクローニングあるいは発現させるために適切な宿主細胞は、原核生物、酵母、又は高等真核生物細胞である。この目的にとって適切な原核生物は、限定するものではないが、真正細菌、例えばグラム陰性又はグラム陽性生物体、例えばエシェリチアのような腸内菌科、例えば大腸菌、エンテロバクター、エルウィニア(Erwinia)、クレブシエラ、プロテウス、サルモネラ、例えばネズミチフス菌、セラチア属、例えばセラチア・マルセスキャンス及び赤痢菌属、並びに桿菌、例えば枯草菌及びバシリ・リチェフォルミス(licheniformis)(例えば、１９８９年４月１２日に公開された ＤＤ２６６７１０に開示されたバシリ・リチェニフォルミス４１Ｐ)、シュードモナス属、例えば緑膿菌及びストレプトマイセス属を含む。一つの好適な大腸菌クローニング宿主は大腸菌２９４(ＡＴＣＣ３１４４６)であるが、他の大腸菌Ｂ、大腸菌Ｘ１７７６(ＡＴＣＣ３１５３７)及び大腸菌Ｗ３１１０(ＡＴＣＣ２７３２５)のような株も好適である。これらの例は限定するものではなく例示的なものである。
【０１６３】
完全長抗体、抗体断片、および抗体融合タンパク質は細菌内で生成することができ、特にグリコシル化およびＦｃエフェクター機能は必要でない、例として、治療的抗体が細胞障害性剤（例として、毒素）にコンジュゲートして、その免疫コンジュゲートが腫瘍細胞破壊に効果的である場合など。全長抗体は循環中で半減期が長い。大腸菌での生成がより早くよりコスト効率がよい。大腸菌における抗体断片およびポリペプチドの発現方法について、発現および分泌を最適化する転写開始領域（ＴＩＲ）およびシグナル配列を記載している米国特許第5,648,237号 (Carterら.)、同第5,789,199号(Jolyら)、および同第5,840,523号 (Simmonsら)を参照のこと。これらの特許文献はここ文献として組み込まれる。発現後、可溶性分画の大腸菌ペーストから抗体を単離し、例としてアイソタイプによるプロテインＡまたはＧカラムにより精製しうる。例としてＣＨＯ細胞での発現抗体精製工程と同様にして最終的精製を行う。
【０１６４】
原核生物に加えて、糸状菌又は酵母菌のような真核微生物は、ＣＤ２０抗体などの抗体コードベクターのための適切なクローニング又は発現宿主である。サッカロミセス・セレヴィシア、又は一般的なパン酵母は下等真核生物宿主微生物のなかで最も一般的に用いられる。しかしながら、多数の他の属、種及び菌株も、一般的に入手可能でここで使用できる、例えば、シゾサッカロマイセスポンベ；クルイベロマイセス宿主、例えばＫ.ラクティス、Ｋ．フラギリス(ＡＴＣＣ１２４２４)、Ｋ.ブルガリカス(ＡＴＣＣ１６０４５)、Ｋ．ウィッケラミイ(ＡＴＣＣ２４１７８)、Ｋ.ワルチイ(ＡＴＣＣ５６５００)、Ｋ．ドロソフィラルム(ＡＴＣＣ３６９０６)、Ｋ．サーモトレランス、及びＫ．マルキシアナス；ヤローウィア(ＥＰ４０２２２６)；ピチアパストリス(ＥＰ１８３０７０)；カンジダ；トリコデルマ・リーシア(ＥＰ２４４２３４)；アカパンカビ；シュワニオマイセス、例えばシュワニオマイセスオクシデンタリス；及び糸状真菌、例えばパンカビ属、アオカビ属、トリポクラジウム、及びコウジカビ属宿主、例えば偽巣性コウジ菌及びクロカビが使用できる。
【０１６５】
例えばグリコシル化ＣＤ２０結合抗体の発現に適切な宿主細胞は、多細胞生物から誘導される。無脊椎動物細胞の例としては植物及び昆虫細胞が含まれる。多数のバキュロウィルス株及び変異体及び対応する許容可能な昆虫宿主細胞、例えばスポドプテラ・フルギペルダ(毛虫)、アエデス・アエジプティ(蚊)、アエデス・アルボピクトゥス(蚊)、ドゥロソフィラ・メラノガスター(ショウジョウバエ)、及びボンビクス・モリが同定されている。トランスフェクションのための種々のウィルス株、例えば、オートグラファ・カリフォルニカＮＰＶのＬ-１変異体とボンビクス・モリ ＮＰＶのＢｍ-５株が公に利用でき、そのようなウィルスは本発明においてここに記載したウィルスとして使用でき、特にスポドプテラ・フルギペルダ細胞の形質転換に使用できる。
綿花、コーン、ジャガイモ、大豆、ペチュニア、トマト、及びタバコのような植物細胞培養を宿主として利用することができる。
【０１６６】
しかしながら、脊椎動物細胞におけるものが最も興味深く、培養(組織培養)中での脊椎動物細胞の増殖は常套的な手順になっている。有用な哺乳動物宿主株化細胞の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株 (ＣＯＳ-７, ＡＴＣＣ ＣＲＬ１６５１);ヒト胚腎臓株（２９３又は懸濁培養での増殖のためにサブクローン化された２９３細胞、Graham等, J. Gen Virol., 36:59 (1977)）；ハムスター乳児腎細胞(ＢＨＫ, ＡＴＣＣ ＣＣＬ１０)；チャイニーズハムスター卵巣細胞／-ＤＨＦＲ(ＣＨＯ, Urlaub等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216 (1980));マウスのセルトリ細胞（ＴＭ４, Mather, Biol. Reprod., 23:243-251 (1980)）;サルの腎細胞 (ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ７０); アフリカミドリザルの腎細胞(ＶＥＲＯ-７６, ＡＴＣＣ ＣＲＬ-１５８７); ヒト子宮頸癌細胞 (ＨＥＬＡ, ＡＴＣＣ ＣＣＬ２); イヌ腎細胞 (ＭＤＣＫ, ＡＴＣＣ ＣＣＬ３４); バッファローラット肝細胞 (ＢＲＬ３Ａ, ＡＴＣＣ ＣＲＬ１４４２); ヒト肺細胞 (Ｗ１３８, ＡＴＣＣ ＣＣＬ７５); ヒト肝細胞 (Ｈｅｐ Ｇ２, ＨＢ８０６５); マウス乳房腫瘍細胞 (ＭＭＴ０６０５６２, ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１);ＴＲＩ細胞（Mather等, Annals N.Y. Acad. Sci., 383:44-68 (1982)）；ＭＲＣ５細胞;ＦＳ４細胞；及びヒト肝癌株(ＨｅｐＧ２)である。
宿主細胞は、Ｂ細胞枯渇薬剤、例えばＣＤ２０結合抗体やインテグリンアンタゴニスト抗体生産のために発現又はクローニングベクターで形質転換され、プロモーターを誘導し、形質転換体を選択し、又は所望の配列をコードしている遺伝子を増幅するために適切に修飾された常套的栄養培地で培養される。
【０１６７】
８．宿主細胞の培養
本発明の抗体を産生するために用いられる宿主細胞は種々の培地において培養することができる。市販培地の例としては、ハム(Ｈａｍ)のＦ１０(シグマ)、最小必須培地((ＭＥＭ),(シグマ)、ＲＰＭＩ-１６４０(シグマ)及びダルベッコの改良イーグル培地((ＤＭＥＭ),シグマ)が宿主細胞の培養に好適である。また、Ham等, Meth. Enz. 58:44 (1979), Barnes等, Anal. Biochem. 102:255 (1980), 米国特許第４７６７７０４号；同４６５７８６６号；同４９２７７６２号；同４５６０６５５号；又は同５１２２４６９号；国際公開第９０／０３４３０号；国際公開第８７／００１９５号；又は米国再発行特許第３０９８５号に記載された何れの培地も宿主細胞に対する培地として使用できる。これらの培地には何れもホルモン及び／又は他の成長因子(例えばインシュリン、トランスフェリン、又は表皮成長因子)、塩類(例えば、塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム及びリン酸塩)、バッファー(例えばＨＥＰＥＳ)、ヌクレオチド(例えばアデノシン及びチミジン)、抗生物質(例えば、ＧＥＮＴＡＭＹＣＩＮTM薬)、微量元素(最終濃度がマイクロモル範囲で通常存在する無機化合物として定義される)及びグルコース又は等価なエネルギー源を必要に応じて補充することができる。任意の他の必要な補充物質もまた当業者に知られている適当な濃度で含むことができる。培養条件、例えば温度、ｐＨ等々は、発現のために選ばれた宿主細胞について過去に用いられているものであり、当業者には明らかであろう。
【０１６８】
９．精製
組換え技術を用いる場合、抗体は細胞内、細胞膜周辺腔に生成され、又は培地内に直接分泌される。抗体が細胞内に生成された場合、第１の工程として、宿主細胞か溶解された断片の何れにしても、粒子状の細片が、例えば遠心分離又は限外濾過によって除去される。Carter等, Bio/Technology 10: 163-167 (1992)は、大腸菌の細胞膜周辺腔に分泌された抗体の単離方法を記載している。簡単に述べると、細胞ペーストを、酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡ、及びフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）の存在下で約３０分間解凍する。細胞細片は遠心分離で除去できる。抗体が培地に分泌された場合は、そのような発現系からの上清を、一般的には先ず市販のタンパク質濃縮フィルター、例えばＡｍｉｃｏｎ又はＰｅｌｌｉｃｏｎの限外濾過装置を用いて濃縮する。ＰＭＳＦなどのプロテアーゼ阻害剤を上記の任意の工程に含めて、タンパク質分解を阻害してもよく、また抗生物質を含めて外来性の汚染物の成長を防止してもよい。
【０１６９】
細胞から調製した抗体組成物は、例えば、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、及びアフィニティークロマトグラフィーを用いて精製でき、アフィニティクロマトグラフィーが好ましい精製技術である。アフィニティーリガンドとしてのプロテインＡの適合性は、抗体中に存在する免疫グロブリンＦｃ領域の種及びアイソタイプに依存する。プロテインＡは、ヒトγ１、γ２、又はγ４重鎖に基づく抗体の精製に用いることができる（Lindmark等, J. immunol. Meth. 62: 1-13 (1983)）。プロテインＧは、全てのマウスアイソタイプ及びヒトγ３に推奨されている（Guss等, EMBO J. 5: 16571575 (1986)）。アフィニティーリガンドが結合されるマトリクスはアガロースであることが最も多いが、他の材料も使用可能である。孔制御ガラスやポリ(スチレンジビニル)ベンゼン等の機械的に安定なマトリクスは、アガロースで達成できるものより早い流速及び短い処理時間を可能にする。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸＴＭ樹脂（J.T. Baker, Phillipsburg, NJ）が精製に有用である。イオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカでのクロマトグラフィー、ヘパリンでのクロマトグラフィー、アニオン又はカチオン交換樹脂上でのＳＥＰＨＡＲＯＳＥＴＭクロマトグラフィー（ポリアスパラギン酸カラム）、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ-ＰＡＧＥ、及び硫酸アンモニウム沈殿法も、回収される多価抗体に応じて利用可能である。
予備的精製工程に続いて、目的の抗体および混入物を含む混合液をｐＨ約２．５−４．５、好ましくは低塩濃度（例として、約０−０．２５Ｍ塩）の溶出緩衝液を用いて低ｐＨ疎水性作用クロマトグラフィを行う。
【０１７０】
１０．抗体コンジュゲート
抗体は細胞障害性剤、例として毒素または放射性同位体とコンジュゲートしうる。ある実施態様では、毒素はカリケアマイシン、メイタンシノイド、ドラスタチン、アウリスタチンＥおよびその類似体または誘導体が好ましい。
【実施例】
【０１７１】
実験的実施例
これらの実験的実施例は説明するためのものであり、本発明の範囲を限定するものではない。
実施例１
ｈＣＤ２０  Ｔｇ発現のマウスモデルの生成
ヒトＣＤ２０（ｈＣＤ２０）ゲノム座を発現するマウスモデル（ｈＣＤ２０Ｔｇ＋＋マウス）を開発して、細胞表面抗原をターゲティングすることによって細胞を取り除く治療的ｍＡｂの機能のインビボメカニズムを分析した。２つの独立した細菌性人工染色体（ＢＡＣ）を、ｈＣＤ２０を発現する複数のトランスジェニック創始系統を生成するためにＦＶＢマウスの胚盤胞に注入した。ｈＣＤ２０発現を後代に伝えた２匹の創始マウスを用いてより詳細な分析を行った。両創始系統はｈＣＤ２０発現の同一パターンを示すので、１の創始系統のみからのデータを本明細書に示す。
ｈＣＤ２０トランスジェニック（ｈＣＤ２０  Ｔｇ＋）マウスの循環リンパ球のサブ集団をＦＡＣＳにより分析し、図１（左上パネル）に示すように、末梢性リンパ球においてＣＤ３及び抗原Ｂ２２０の発現に従って特徴付けした。左上パネルの各々の集団はｈＣＤ２０発現について分析したものである；ＣＤ３−Ｂ２２０＋（右上パネル）、ＣＤ３＋Ｂ２２０−（右下パネル）及びＣＤ３−Ｂ２２０−細胞（左下パネル）。
【０１７２】
末梢血液細胞の分析により、ｈＣＤ２０がＢ２２０＋Ｂ細胞（図１）の循環時にのみ発現されることが示された。ｈＣＤ２０  Ｔｇ＋／＋マウスの発現レベルは、平均蛍光強度（ＭＦＩ）によって測定したところ、ヒト循環Ｂ細胞のもののおよそ５０％であった。ｈＣＤ２０発現は末梢性Ｂ２２０−細胞では検出されなかった。ｈＣＤ２０の発現は、Ｔｇ−同腹仔では検出されなかった（図１の陰を付けたところ）。
Ｂ細胞が骨髄で発生するので、Ｂ細胞発生の間のｈＣＤ２０発現を分析した。図２の上部に示すように、ｈＣＤ２０は未成熟Ｂ細胞で容易に検出され、ＣＤ４３−Ｂ２２０ｌｏＩｇＭ＋とされた（図３参照）。更に、ｈＣＤ２０は脾臓で上方制御されており、周縁帯（ＭＺ）Ｂ細胞上で最も高レベルのｈＣＤ２０発現が検出された（図２、中列）。免疫組織化学法をＴｇ＋マウス及びＴｇ−マウスで行い、ｈＣＤ２０発現を分析した。Ｔｇ＋マウス及びＴｇ−マウスからの脾臓を、ＩｇＭ（緑）、ｈＣＤ２０（赤）又はＣＤ３（青）について染色した。脾臓組織の免疫組織化学（ＩＨＣ）分析により、Ｂ細胞領域の中でＩｇＭとｈＣＤ２０染色が同じ局性を示した（データは示さない）。ｈＣＤ２０染色は、ＩＨＣ分析のＩｇＭｈｉ染色プラズマ細胞とも、ＦＡＣＳ分析のシンデカン１＋プラズマ細胞とも同じ局性を示さなかった。ｈＣＤ２０は、腹膜のＢ１及びＢ２  Ｂ細胞、成熟リンパ節Ｂ細胞及びパイエル板胚中心（ＧＣ）Ｂ細胞で検出された（図２、下列）。したがって、これらのトランスジェニックマウスのｈＣＤ２０発現は、質的にヒト及びマウスと同じＣＤ２０発現のパターンであった。
【０１７３】
実施例２
抗ＣＤ２０抗体を用いた治療によるインビボでのＢ細胞の枯渇
この研究では、抗ｈＣＤ２０抗体を用いた治療によって引き起こされるＢ細胞枯渇は、Ｂ細胞が属した細胞性区画に従って異なった動態を示した。
１．抗ｈＣＤ２０ＭＡｂ治療
抗ｈＣＤ２０  ｍＡｂ治療の生物学的結果を分析するために、ｈＣＤ２０  Ｔｇ＋マウスに、単回用量の．１ｍｇの対照マウスＩｇＧ２ａ（非特異的抗体）、又は、リツキサン（登録商標）、２Ｈ７、Ｂ１及び１Ｆ５を含んだパネル抗ｈＣＤ２０  ｍＡｂを腹膜内投与した。リツキサン（登録商標）、２Ｈ７及び１Ｆ５は、ＣＤ２０の第二細胞外ドメイン内に位置する対応するエピトープを結合する；Ｂ１は異なるが重なり合うエピトープを結合する。Ｂ１を有するＢ細胞のインキュベーションにより、膜ラフトへＣＤ２０の移動を示さなかった。マウスＦｃレセプタ（ＦｃＲ）に対するマウスＩｇＧ２ａの結合がヒトＦｃＲに対するリツキサン（登録商標）のヒトＩｇＧ１主鎖の結合に最も対応するので、すべての抗ＣＤ２０  ｍＡｂをマウスＩｇＧ２ａ主鎖について調べた。
【０１７４】
２．循環Ｂ細胞の枯渇。
治療されたマウス及び対照マウスの末梢血に存在するＢ細胞をＦＡＣＳによって分析した。Ｂ細胞の亜集団はＣＤ２３及びＣＤ２１の発現によって同定された。図４に示すように、各々の抗ｈＣＤ２０  ｍＡｂは、末梢性Ｂ細胞の枯渇を引き起こした（図中の○）。末梢性Ｂ細胞の枯渇は、治療的ｍＡｂの循環血清半減期と相関した（データは示さない）。
抗ｈＣＤ２０抗体ｍ２Ｈ７で治療されるｈＣＤ２０  Ｔｇ＋マウスの末梢血は、処置後第６日、第６週及び第１４週目に分析した。図５の第６日目に示されるように、抗ｈＣＤ２０での処置により循環Ｂ細胞が減少した（図５左）。処置後第６週後に、抗ｈＣＤ２０  ｍＡｂが血清中に検出されなくなったら（＜１ｍｇ／ｍｌ）、再びＢ細胞を循環内でＦＡＣＳ分析により検出した（図５、中央）。その後、１４週目に示されるように、循環Ｂ細胞は処置前のレベルにまで正常化した（図５右）。初期Ｂ細胞祖先集団内のｈＣＤ２０発現の欠如と同じく（図２参照）、骨髄内のＣＤ２０＋未成熟及び成熟再循環Ｂ細胞のみが減少した（図中の○）。
【０１７５】
３．血液、リンパ節、腹腔内のＢ細胞の枯渇
血液、リンパ節及び腹腔からのＢ細胞枯渇の動態を、上記のｍ２Ｈ７抗ｈＣＤ２０  ＭＡｂで治療されるｈＣＤ２０  Ｔｇ＋マウスにおいて分析した。結果を図６に示す。末梢性Ｂ細胞の枯渇と同様に、３時間、２日目及び２１日目の血液（上列）、リンパ節（中列）及び腹腔（下列）におけるＢ細胞の存在を分析したところ、抗ｈＣＤ２０  ｍＡｂを用いた治療により、ｈＣＤ２０  Ｔｇ＋マウスのリンパ節及び腹腔からＢ２２０＋細胞の枯渇が生じたことが示された（図６）。面白いことに、枯渇の動態はこれらの３つの区画間で異なった。循環Ｂ細胞の９０％以上が抗ｈＣＤ２０  ｍＡｂの静脈内（ＩＶ）投与後３時間以内に枯渇する（上列）一方で、リンパ節Ｂ細胞は抗ｈＣＤ２０  ｍＡｂのＩＶないしは腹膜内（ＩＰ）の何れかの投与後２日以内で減少し（中列）、抗ｈＣＤ２０ｍＡｂのＩＰ投与に反して、腹膜のＢ細胞は枯渇が９０％を超えるには約２１日を必要とした（下列）。腹膜のＢ細胞がリンパ節Ｂ細胞よりゆっくり再循環するので、枯渇の異なる動態はリンパ球循環の動態に対応する。
【０１７６】
実施例３
Ｂ細胞サブセット感受性の階層構造
実施例３により、Ｂ細胞サブセットが抗ＣＤ２０抗体治療の際にＢ細胞枯渇に対して異なる感染性を示すことが示される。
１．脾臓のＢ細胞枯渇
実施例１に示したトランスジェニックマウス（ｈＣＤ２０  Ｔｇ＋マウス）を、対照ＩｇＧ２又は抗ｈＣＤ２０ｍＡｂで治療した。処置後４日目に脾臓を採取し、Ｂ２２０、ＩｇＭ、ＣＤ２１及びＣＤ２３染色について分析して、ＣＤ２１ｈｉＣＤ２３＋濾胞性（ＦＯ）Ｂ細胞又はＣＤ２１ｈｉＣＤ２３−辺縁帯（ＭＺ）Ｂ細胞を特徴付けた（図７）。図８に示すように、各サブセットのＢ細胞を定量化した。
抗ｈＣＤ２０ｍＡｂによって完全に枯渇された循環成熟Ｂ細胞とは対照的に（図３、４、５及び６参照）、およそ３３％のＢ２２０＋脾細胞が、抗ｈＣ２０  ｍＡｂ治療に耐性を示した（図７）。脾臓のＢ細胞サブセットの分析により、濾胞性（ＦＯ）Ｂ細胞が有意に枯渇される（９０％より大きい枯渇）一方、ＣＤ２１ｈｉＣＤ２３−ＭＺ  Ｂ細胞が抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ治療により大きな耐性を表したことが明らかとなった。ＭＺ  Ｂ細胞のおよそ５０％は、抗ｈＣＤ２０  ｍＡｂ療法後のままであった（図８）。
【０１７７】
抗ｈＣＤ２０ｍＡｂで治療されたマウスから単離したＢ２２０＋脾細胞を、ＦＩＴＣ−抗マウスＩｇＧ２ａｍＡｂ（結合した抗ｈＣＤ２０ｍＡｂを検出するため）又は、抗ｈＣＤ２０ｍＡｂの付加の後に、ＦＩＴＣ−抗マウスＩｇＧ２ａ  ｍＡｂ（発現されるＣＤ２０の総量を検出するため）の何れかを用いて耐性脾臓Ｂ細胞上でエクスビボ分析した。ｈＣＤ２０がＦＯ  Ｂ細胞と比較してＭＺにおいて高レベルに発現されるので、耐性はＭＺ  Ｂ細胞におけるｈＣＤ２０発現の欠損によるものではなく（図８）、耐性脾臓Ｂ細胞上のＣＤ２０が抗ｈＣＤ２０ｍＡｂインビボ投与によりほぼ飽和状態であるので、耐性は治療的ｍＡｂの接触性の欠損によるものでもない（図９）。
さらに耐性の脾臓周辺帯Ｂ細胞より目ざましいことには、パイエル板内に存在する胚中心（ＧＣ）Ｂ細胞は抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ治療に対して最も大きな耐性を示した。成熟Ｂ２２０＋ＣＤ３８ｈｉＢ細胞が確実に減少する一方で、図１０に示すように、Ｂ２２０＋ＣＤ３８ｌｏ  ＧＣ  Ｂ細胞は抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ治療に耐性を示した。
パイエル板内ＧＣ Ｂ細胞上に観察されるものに及んでは、ヒツジ赤血球（ＳＲＢＣ）での免疫化によって生成される脾臓ＧＣ Ｂ細胞を耐性について試験した。マウスはＳＲＢＣで免疫化して、ＧＣ形成を誘発した。免疫化後８日目にＧＣが最大に形成されるので、マウスは０．２ｍｇの対照ＩｇＧ２ａ又は抗ｈＣＤ２０ｍＡｂをにて８日目に処置した。脾臓ＧＣ  Ｂ細胞を特徴化し、Ｂ２２０及びＰＮＡ（ナンキンマメ凝集素）染色によって定量化した。ナンキンマメ凝集素はＧＣ  Ｂ細胞を染色する。
【０１７８】
図１１に示すように、非免疫化マウスは、Ｂ２２０＋ＰＮＡ＋ＧＣ  Ｂ細胞を発生させなかった（図中の○）。ＳＲＢＣ免疫マウスは、抗ｈＣＤ２０  ｍＡｂ殺傷に耐性を示すＰＮＡ＋ＧＣ  Ｂ細胞（右図中の○）を発生させた（図１１下列）。パイエル板耐性又は脾臓ＧＣ  Ｂ細胞は共に感受性成熟循環Ｂ細胞より高いレベルでｈＣＤ２０を発現したので、耐性はｈＣＤ２０発現に非依存性である（図２）；ＧＣ細胞へのｍＡｂ結合とは無関係に、インビボ回復されたＧＣ  Ｂ細胞はｍＡｂの投与により飽和した；さらに、治療用量又は治療の継続期間と無関係であった（データは示さない）。したがって、本願明細書中のデータは、抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ治療に対する感受性の階層が脾臓に存在することを示唆する：濾胞性（最も感受性が高い）Ｂ細胞＞周辺帯Ｂ細胞＞胚中心（最も耐性がある）Ｂ細胞。
ＭＺ Ｂ細胞の耐性を更に試験したところ、トランスジェニックマウスを、長期に枯渇した１５週間の間抗ｈＣＤ２０抗体の対照で処置した（ＩＰ、０．１ｍｇ／２週）。脾臓Ｂ細胞（Ｂ２２０＋）はＣＤ２１及びＣＤ２３の表面発現に特徴があり、ＦＯ及びＭＺ  Ｂ細胞の数を定量化した（ｎ＝３）。加えて、抗ｈＣＤ２０  ｍＡｂの高用量をトランスジェニックマウスに投与した。脾臓Ｂ細胞を処置後４週間分析した（ｎ＝４）。
【０１７９】
マウス当たり最大１０ｍｇの抗ｈＣＤ２０ｍＡｂの投与（ＮＨＬ患者のためのリツキサン（登録商標）の４週コースの累積の１５倍に相当）（図１３）でも、４か月間の抗ｈＣＤ２０  ＭＡｂ０．１ｍｇ隔週継続投与によってもＭＺ  Ｂ細胞の枯渇は大きくならなかった（図１２）。
抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ処置マウスは低減されてはいるが免疫原及び細菌に対して免疫応答を実質的に備えていたので、処置されたトランスジェニックマウスの残存する耐性Ｂ細胞は機能していた（図１４及び図１５）。第７週及び第１０週目に、トランスジェニック動物に、対照又は抗ｈＣＤ２０  ｍＡｂ（０．２ｍｇ／用量、ＩＰ）の２回用量を投与した。マウスを、第１週目ににキーホールリンペットヘモシアニン（ＮＰ-ＫＬＨ）とコンジュゲートした（４-ヒドロキシ-３-ニトロフェニル）アセチルによって免疫化し（ＳＣ）、第１１週目に再免疫化した。ＮＰ特異的なＩｇレベルをＥＬＩＳＡによって第１２週目に検定した。データは図１４に示す。ここで、pre-bleedはＮＰ-ＫＬＨで免疫化する前に採取した試料を意味する。
図１５は、細菌抗原に対するＴ非依存性免疫応答を示す。図６に示すように、対照又はα-ｈＣＤ２０ｍＡｂの２回ＩＰ用量（マウス当たり０．２ｍｇ）の処置後３週間に、末梢及び腹膜のＢ１細胞は完全に枯渇した。Ｔ非依存性応答は、熱不活性化肺炎レンサ球菌の投与後４日目に単離した抗原(Ａｇ)特異的プラズマ芽球についてのＦＡＣＳ分析（左図）によって評価した。Ａｇ特異的プラズマ芽球の数は平均±標準誤差（ｎ＝４）として定量化した。シンデカン-１はプラズマ芽球とプラズマ細胞を染色する。
【０１８０】
実施例４
血管内接触によるＢ細胞枯渇の亢進
本実施例は、周辺帯Ｂ細胞の流動化により抗ｈＣＤ２０  ｍＡｂ枯渇に対するこれらの細胞の感受性が亢進されることを示す。
抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ治療に対する感受性の階層は、ネガティブ調節細胞表面タンパク質の発現や、細胞内抗アポトーシス因子、ＭＺ及びＧＣ微小環境によって生じる生存因子及び／又は必須のエフェクター機能への接触によって、固有の耐性を反映しうる。ＭＺ  Ｂ細胞の耐性増大への微小環境の貢献度を評価するために、ＭＺ  Ｂ細胞を、抗αＬ及び抗α４インテグリンｍＡｂを同時投与することによって、血管構造内へ流動させた。
マウス（ｈＣＤ２０  Ｔｇ＋）を実験開始の３日前（−３日目）に対照ＩｇＧ２ａにて前処理し、細胞性輸送に対するＩｇＧの非特異的影響を最小化した。第０日目に、マウスを、０．２ｍｇの対照ＩｇＧ２ａ又は抗ｈＣＤ２０ｍＡｂで処置した。第２日目に、マウスに、抗ＣＤ１１ａ（Ｍ１７）及び抗α４インテグリン（ＰＳ／２）ｍＡｂをそれぞれ０．１ｍｇずつ、静脈内注射した。抗インテグリンｍＡｂの投与後１．５及び６時間に、血液試料を分析した。図１６に示すように、ＭＺ  Ｂ細胞（ＣＤ２１ｈｉＣＤ２３ｌｏｗ）は、抗αインテグリンｍＡｂによって流動化し、抗ｈＣＤ２０  ｍＡｂによって枯渇した。血液中のＭＺ  Ｂ細胞（ＣＤ２１ｈｉＣＤ２３ｌｏ）の絶対数を定量して、図１７に示す。ＣＤ２１ｈｉＣＤ２３ｌｏＭＺ  Ｂ細胞の流動化により、これらの細胞は抗ＣＤ２０ｍＡｂ媒介性枯渇に対する感受性が高められた。例として図１６のパネル２及び５、パネル３及び６；及び図１７を参照。
【０１８１】
治療されたマウスの脾臓Ｂ細胞のＦＡＣＳ分析は、ＭＺ Ｂ細胞内で付随的に減少したことを示した（データは示さない）。脾臓の総Ｂ２２０＋細胞の定量化では、αＬアンタゴニスト（抗ＣＤ１１ａ  ｍＡｂ）と抗ＣＤ２０ｍＡｂの組合せにより抗ＣＤ２０  ｍＡｂ単独（図１８）より良好なＢ細胞枯渇が生じたが、達成した枯渇の範囲はＣＤ２０ｍＡｂとαＬ及びα４ｍＡｂの両方を組み合わせるとより大きい（図１８）ことが示された。αＬ及びα４アンタゴニストは相乗的に働き、循環内のＢ細胞数を増やす。ある一つのメカニズムによるものではないが、循環内のＢ細胞のこの増加は、Ｂ細胞流動化とのＢ細胞ホーミングによるものであるようだ。
脾臓の免疫組織化学分析により、抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ単独で周縁洞外のＭＺ  Ｂ細胞の相対的な耐性と比較して、（データは示さない）抗インテグリンと抗ｈＣＤ２０ｍＡｂとを併用して治療するとＭＯＭＡ-１染色周縁洞の外のＭＺ Ｂ細胞が優先して枯渇されることが確認された。ＭＯＭＡ-１は、ＦｃをＭＺから分離するマクロファージのサブセットを染色するために用いた。
濾胞（ＦＯ）にＢ細胞を流動させるために、抗インテグリンｍＡｂ反応混液を２５ｍｇのリポポリサッカリド（ＬＰＳ）に換える以外は上記の通りにマウスを処置して、ＭＺ Ｂ細胞を流動化した。処置細胞及び対照細胞のＦＡＣＳ分析は、ＬＰＳ処置により濾胞内のＭＺ Ｂ細胞に流動化が生じたことを示した（図１９）。
【０１８２】
図１８に示されるような血管構造へのＭＺ Ｂ細胞の流動化とは対照的に、ＬＰＳを投与した濾胞へのＭＺからの細胞の流動化は、ＭＺ Ｂ細胞の枯渇を引き起こさなかった（図１９）。総合して、これらのデータは、ＭＺ  Ｂ細胞が抗ｈＣＤ２０  ｍＡｂ処置に本質的に影響されやすく、血管構造へのＢ細胞の輸送が効果的なＢ細胞枯渇のために必須であることを示唆する。
対照ＩｇＧ、抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ、抗ｈＣＤ２０及び抗インテグリンｍＡｂ又は抗ｈＣＤ２０  ｍＡｂで処置したマウスからの脾臓組織の免疫組織化学とＬＰＳを比較した。ＬＰＳ処置では、ＩｇＭ染色細胞は、この拡大した濾胞内のメタロ親和性抗原-１（ＭＯＭＡ-１）染色境界内にみられた（データは示さない）。
化合物Ａ（スフィンゴシン１-リン酸塩レセプターアゴニスト）を用いて成熟リンパ節Ｂ細胞が循環に戻るのを防止し、これがＢ細胞枯渇を阻害する場合は評価した。マウスは、媒介物対照又はスフィンゴシン１-リン酸レセプター（Ｓ１ＰＲ）アゴニスト（化合物Ａ）で処置し、抗ｈＣＤ２０ｍＡｂで再免疫化した。
【０１８３】
ｈＣＤ２０  Ｔｇ＋マウスを、媒介物対照又は化合物Ａ（１０ｍｇ／ｋｇ、６時間毎）にて経口強制飼養した。対照又は抗ｈＣＤ２０  ｍＡｂ（０．５ｍｇ、ＩＰ）の一回量を、化合物Ａの第一服用の２時間後に投与した。２０時間目にリンパ節（図２０パネル１及び２）及び血液（図２０、パネル３及び４）から単離したリンパ球を定量し、平均±標準誤差（ｎ＝４）で表した。
リンパ節から循環へのリンパ球出口上のＳ１ＰＲアゴニストの阻害効果と一致して、化合物Ａで処置されたマウスにおいてＢ細胞及びＴ細胞は有意に減少していた（図２０、パネル３及び４）。媒介物処置マウスにおいてリンパ節Ｂ細胞が抗ｈＣＤ２０  ｍＡｂによって確実に枯渇される一方で、リンパ節Ｂ細胞は化合物Ａがある場合には、抗ｈＣＤ２０  ｍＡｂによって枯渇されなかった（図２０、パネル１及び２）。総合して、このデータは、効果的な枯渇のためには、Ｂ細胞が循環に接触することが必要であることを裏付けるものである。
【０１８４】
実施例５
Ｂ細胞枯渇における肝臓及び脾臓の役割
細網内皮系（ＲＥＳ）がアポトーシス細胞及び免疫複合体のクリアランスに重大な形態を示すので、Ｂ細胞枯渇に対する肝臓及び脾臓の貢献を調べた。肝臓の貢献を評価するために、門脈及び肝動脈を結紮した。結紮は、マウスを偽物にさらすか又は門脈及び肝動脈を締めつけた直後に、対照又は抗ｈＣＤ２０（０．２ｍｇ）ｍＡｂをＩＶ注射することによって結紮した。抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ投与の１０分後に、ＦＡＣＳプロット線に示すように、末梢血をＢ２２０＋ＩｇＭ＋Ｂ細胞について分析した。
脾臓の貢献を評価するために、マウスは、偽脾臓摘出をを行うか（図２３下列）又は脾臓摘出を行って（図２４下列）、Ｂ細胞枯渇について分析した。最適以下の抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ（５μｇ）で処置した３時間後と１日後に、血液を分析した。高用量の抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ（０．１ｍｇ）の場合に、Ｂ細胞枯渇の相違が検出された。抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ処置後のＢ細胞のクップァー細胞による食作用を調べた。マウスを０．１ｍｇの対照ＩｇＧ（左上）又は抗ｈＣＤ２０ｍＡｂにて処置した。投与から１５分後、肝臓を採取して、Ｂ細胞及びマクロファージのそれぞれＢ２２０及びＦ４／８０染色を分析した。４匹の対照及び抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ処置マウスからの共存下のＢ２２０＋及びＦ４／８０＋細胞を定量化した。
門脈及び肝動脈の結紮により、抗ｈＣＤ２０ｍＡｂの枯渇能力は有意に減少した（図２１及び２２）。対照的に、脾臓摘出されたマウスは、脾臓摘出されたマウスのＢ細胞数減少の二次的効果と思われるＢ細胞枯渇の増進（図２３及び２４）を示した。
肝臓の組織学的試験は処置されたマウスのＦ４／８０＋染色マクロファージ内にＢ２２０＋染色Ｂ細胞が共に局在していることを示した（図２５）。これは、クップァー細胞がＢ２２０＋Ｂ細胞を包含することを示唆する。したがって、ＲＥＳの機能と一致して、肝臓はＢ細胞枯渇に重要な役割を表す。
【０１８５】
結論
これらのデータにより、抗ｈＣＤ２０ｍＡｂによってＢ細胞が取り除かれるというインビボメカニズムが確認された。抗ｈＣＤ２０ｍＡｂの投与に応じて、ｍＡｂは急速にＣＤ２０＋Ｂ細胞を結合し、循環ｍＡｂ結合Ｂ細胞は細網内皮系（ＲＥＳ）で急速にクリアランスされる。それは、抗ｈＣＤ２０ｍＡｂでコートされてリンパ系組織に存在するＢ細胞が、血管構造に接触して標的Ｂ細胞をＲＥＳ内のエフェクター細胞に運搬するために有益である。これは、循環Ｂ細胞と比較して、ゆっくりと再循環する腹膜及びリンパ節Ｂ細胞の枯渇にはより長期間必要とすることの説明がつく。同様に、脾臓及びＢ細胞サブセットを蓄えた組織に観察される感受性の階層は、ＭＺ及びＧＣ  Ｂ細胞の循環の低下を反映するものである。さらに、リンパ球流動化又はリンパ球排出の阻害の結果であるＢ細胞枯渇の増大能又は抑制能により、それぞれＢ細胞殺傷の際の血管接触が重要であると言える。
本明細書中の実施例は、抗ＣＤ２０抗体及び一又は複数のインテグリンアンタゴニストを用いた併用療法は大きな相乗効果を示して、以前は試されなかったか枯渇されなかったＢ細胞サブセットを枯渇することによってＢ細胞の枯渇が亢進するという驚くべき結果をもたらした。
【０１８６】
参考文献
本明細中で列挙した参考文献には、特許、公開された出願及び他の出版物が含まれ、出典明記により本明細書中に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【０１８７】
【図１】ｈＣＤ２０トランスジェニック（ｈＣＤ２０Ｔｇ＋）マウスの循環リンパ球の細胞集団におけるｈＣＤ２０の発現を図示する。リンパ球集団はＢ２２０及びＣＤ３の表面発現に特徴がある。
【図２】Ｂ細胞発生中及びリンパ組織におけるｈＣＤ２０の表面発現。骨髄（上列）、脾臓（中列）及び他のリンパ器官（下列）におけるＢ細胞前駆細胞及びサブセットをｈＣＤ２０発現について分析した。
【図３】対照又は抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ（２Ｈ７）で処置したｈＣＤ２０Ｔｇ＋マウスの骨髄からのＢ２２０及びＣＤ４３発現に特徴があるＢ細胞集団の枯渇を示す（左図）。また、Ｂ細胞の集団に検出されたｈＣＤ２０の定量化を示す（右図）。
【図４】抗ＣＤ２０抗体で処置したｈＣＤ２０Ｔｇ＋マウスの末梢血からの抗ｈＣＤ２０ｍＡｂによるＢ細胞の枯渇を示す。
【図５】抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ処置後のＢ細胞の枯渇と過多を示す。
【図６】抗ｈＣＤ２０抗体で処置したｈＣＤ２０Ｔｇ＋マウスの血液、リンパ節及び腹腔におけるＢ細胞枯渇の異なる動態を示す。
【図７】０．５ｍｇの抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ（下列）又は対照ＩｇＧ２ａ（上列）で処置したトランスジェニックマウスからの脾臓Ｂ細胞の感受性を示す。
【図８】図７に示すマウスの脾臓におけるＦＯ及びＭＺ  Ｂ細胞枯渇の数を示す。
【図９】耐性脾臓Ｂ細胞における抗ｈＣＤ２０ｍＡｂによるＣＤ２０の飽和を示す。
【図１０】抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ枯渇に対するパイエル板ＧＣ  Ｂ細胞の耐性を示す。パイエル板Ｂ細胞を対照ＩｇＧ２ａ（上列）又は抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ（下列）で処理したマウスから単離し、Ｂ２２０及びＣＤ３８染色により特徴付けした。対照処置マウス（白バー）及び抗ｈＣＤ２０ＭＡｂ処置マウス（黒バー）からの成熟及びＢＣ  Ｂ細胞を定量した（右図）。
【図１１】抗ｈＣＤ２０ｍＡｂによる枯渇に対する脾臓ＧＣ  Ｂ細胞の耐性を示す。
【図１２】対照又は抗ｈＣＤ２０  ｍＡｂで１５週間にわたり処置した（０．１ｍｇ／２週間、ＩＰ）後の周辺帯Ｂ細胞の枯渇を示す。
【図１３】高用量の抗αｈＣＤ２０  ｍＡｂ投与によるＢ細胞の枯渇を示す。用量は示すとおりである。
【図１４】ｈＣＤ２０  ｍＡｂ処置後のＢ細胞免疫応答、特に実施例３にて説明したように、一次免疫応答を示す。
【図１５】熱不活性化肺炎レンサ菌投与後４日目のＢ細胞枯渇マウスから単離した抗原（Ａｇ）特異的プラズマ芽球のＦＡＣＳ分析（左図）によって評価されるように、細菌性抗原に対するＴ非依存性免疫応答を示す。
【図１６】血管構造内への周辺帯Ｂ細胞の流動化が抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ枯渇に対するＭＺ  Ｂ細胞の感受性を亢進することを示すＦＡＣＳプロット線。
【図１７】流動化薬剤にて処置したマウスの血液中のＭＺ  Ｂ細胞（ＣＤ２１ｈｉＣＤ２３ｌｏ）の定量の結果を示す。
【図１８】抗ｈＣＤ２０  ｍＡｂ単独及び流動化薬剤と併用して処置したマウスの脾臓の総Ｂ２２０＋細胞量を示すグラフ。
【図１９】２５ｍｇのリポポリサッカリド（ＬＰＳ）及び抗ｈＣＤ２０ｍＡｂで処置したマウスからの細胞のＦＡＣＳプロット線を示す。
【図２０】媒介物対照又は化合物Ａで処置されたｈＣＤ２０  Ｔｇ＋マウスのリンパ球の量を図示する。２０時間目でのリンパ節（パネル１及び２）と血液（パネル３及び４）から単離したリンパ球を定量し、平均±＋標準誤差（ｎ＝4）として表した。
【図２１】実施例５により詳細に記述するように、肝臓がＢ細胞枯渇に必要なことを示す。マウスを偽物処置（左図）又は、門脈及び肝動脈の結紮（右図）をした後に対照又は抗ｈＣＤ２０（０．２ｍｇ）ｍＡｂをすぐにＩＶ注射した。
【図２２】実施例５に記載の偽物処置マウス又は結紮処置マウスからの血液におけるＢ細胞の量を示す。抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ処置マウスから単離したすべての細胞は、ｍＡｂインビボ投与により飽和された。
【図２３】実施例５により詳細に記述するように、脾臓がＢ細胞枯渇に必要でないことを示す。マウスに偽脾臓摘出（最上列）又は脾臓摘出（下列）を施し、Ｂ細胞枯渇について分析した。
【図２４】実施例５に示す偽脾臓摘出マウス又は脾臓摘出マウスの末梢血におけるＢ細胞の割合を定量し、平均±標準誤差として表した。
【図２５】実施例５により詳細に記述するように、クップァー細胞がＢ２２０＋Ｂ細胞を包み込むことを示す。マウスは、０．１ｍｇの対照ＩｇＧ（左上）又は抗ｈＣＤ２０ｍＡｂで処置した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
2007532681.tif 000133
【図１９】
2007532681.tif 000134
【図２０】
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【図２１】
2007532681.tif 000136
【図２２】
2007532681.tif 000137
【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【誤訳訂正書】
【提出日】平成19年3月1日(2007.3.1)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１７】
ＣＤ２０抗体は、そのままの抗体または細胞障害性合成物、例えば放射性同位元素又は毒素などに抱合したものでありうる。このような抗体には、放射性同位元素、イットリウム-９０に連結した抗体ＺｅｖａｌｉｎＴＭ(IDEC Pharmaceuticals, San Diego, CA)、とＩ-131を抱合したＢｅｘｘａｒＴＭ(Corixa, WA)とが含まれる。
ヒト化２Ｈ７変異体には、ＦＲのアミノ酸置換と移植されたＣＤＲに変異を持つ親和性成熟変異体を有するものが含まれる。ＣＤＲ又はＦＲの置換されたアミノ酸は、ドナー又はアクセプタ抗体にあるとは限らない。他の実施態様では、さらに本発明の抗ＣＤ２０抗体は、ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣ機能およびＢ細胞殺傷（またここではＢ細胞枯渇とも称する）の亢進を含むエフェクター機能の改善を導くＦｃ領域のアミノ酸残基変化を含む。特に、３つの突然変異はＣＤＣおよびＡＤＣＣ活性を改良することが同定された：Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ、またここでは３つのＡｌａ突然変異または変異体として意味する(Idusogie 等, 上掲(2001)；Shields 等, 上掲に記載のように、Ｆｃ領域の番号付けはＥＵ番号付けシステムに従う；Kabat 等, 上掲)。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５９】
「置換フェニル」又は「置換アリール」という用語は、ハロゲン(Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ)、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシ、シアノ、ニトロ、アルキル(好ましくはＣ１-Ｃ６アルキル)、アルコキシ(好ましくはＣ１-Ｃ６アルコキシ)、ベンジルオキシ、カルボキシ、保護されたカルボキシ、カルボキシメチル、保護されたカルボキシメチル、ヒドロキシメチル、保護されたヒドロキシメチル、アミノメチル、保護されたアミノメチル、トリフルオロメチル、アルキルスルホニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、ヘテロシクリルスルホニルアミノ、ヘテロシクリル、アリール、又は他の特定された基から選択される、１、２、３、４又は５、好ましくは１−２、１−３又は１−４の置換基で置換されたフェニル基又はアリール基を示す。これらの置換基中のメチン(ＣＨ)及び／又はメチレン(ＣＨ２)基の一つ又は複数が上述したものと同様の基で順に置換され得る。「置換フェニル」という用語の例には、限定するものではないが、モノ-又はジ(ハロ)フェニル基、例えば２-クロロフェニル、２-ブロモフェニル、４-クロロフェニル、２,６-ジクロロフェニル、２,５-ジクロロフェニル、３,４-ジクロロフェニル、３-クロロフェニル、３-ブロモフェニル、４-ブロモフェニル、３,４-ジブロモフェニル、３-クロロ-４-フルオロフェニル、２-フルオロフェニル等；モノ-又はジ(ヒドロキシ)フェニル基、例えば４-ヒドロキシフェニル、３-ヒドロキシフェニル、２,４-ジヒドロキシフェニル、それらの保護されたヒドロキシ誘導体等；ニトロフェニル基、例えば３-又は４-ニトロフェニル；シアノフェニル基、例えば４-シアノフェニル；モノ-又はジ(低級アルキル)フェニル基、例えば４-メチルフェニル、２,４-ジメチルフェニル、２-メチルフェニル、４-(イソプロピル)フェニル、４-エチルフェニル、３-(ｎ-プロピル)フェニル等；モノ又はジ(アルコキシ)フェニル基、例えば３,４-ジメトキシフェニル、３-メトキシ-４-ベンジルオキシフェニル、３-メトキシ-４-(１-クロロメチル)ベンジルオキシフェニル、３-エトキシフェニル、４-(イソプロポキシ)フェニル、４-(ｔ-ブトキシ)フェニル、３-エトキシ-４-メトキシフェニル等；３-又は４-トリフルオロメチルフェニル；モノ-又はジカルボキシフェニル又は(保護されたカルボキシ)フェニル基、例えば４-カルボキシフェニル；モノ-又はジ(ヒドロキシメチル)フェニル又は(保護されたヒドロキシメチル)フェニル、例えば３-(保護されたヒドロキシメチル)フェニル又は３,４-ジ(ヒドロキシメチル)フェニル；モノ-又はジ(アミノメチル)フェニル又は(保護されたアミノメチル)フェニル、例えば２-(アミノメチル)フェニル又は２,４-(保護されたアミノメチル)フェニル；又はモノ-又はジ(Ｎ-(メチルスルホニルアミノ))フェニル、例えば３-(Ｎ-メチルスルホニルアミノ))フェニルが含まれる。また、「置換フェニル」という用語は、例えば３-メチル-４-ヒドロキシフェニル、３-クロロ-ヒドロキシフェニル、２-メトキシ-４-ブロモフェニル、４-エチル-２-ヒドロキシフェニル、３-ヒドロキシ-４-ニトロフェニル、２-ヒドロキシ-４-クロロフェニル等の、異なる置換基で二置換されたフェニル基、並びに例えば３-メトキシ-４-ベンジルオキシ-６-メチルスルホニルアミノ、３-メトキシ-４-ベンジルオキシ-６-フェニルスルホニルアミノ等の、異なる置換基で三置換されたフェニル基、及び３-メトキシ-４-ベンジルオキシ-５-メチル-６-フェニルスルホニルアミノ等の、異なる置換基で四置換されたフェニル基も表す。好ましい置換フェニル基には、２-クロロフェニル、２-アミノフェニル、２-ブロモフェニル、３-メトキシフェニル、３-エトキシ-フェニル、４-ベンジルオキシフェニル、４-メトキシフェニル、３-エトキシ-４-ベンジルオキシフェニル、３,４-ジエトキシフェニル、３-メトキシ-４-ベンジルオキシフェニル、３-メトキシ-４-(１-クロロメチル)ベンジルオキシ-フェニル、３-メトキシ-４-(１-クロロメチル)ベンジルオキシ-６-メチルスルホニルアミノフェニル基が含まれる。また、「置換フェニル」という用語は、そこに縮合するアリール、フェニル又はヘテロアリール基を有するフェニル基を表す。また縮合環は、「置換アルキル」基に対して上で特定された置換基の任意のもの、好ましくは１、２又は３のもので置換されてもよい。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８７】
２．αＬインテグリンアンタゴニスト
ここで使用される場合の「αＬインテグリンアンタゴニスト」という用語は広義に使用され、αＬインテグリンの生物活性を、部分的又は全体的にブロックする任意の分子を含む。一実施態様では、αＬインテグリンアンタゴニストは、αＬインテグリンとそのリガンドとの相互作用を部分的又は全体的にブロックし、以下の任意の一つ又は組合せの事象を起こす：(１)哺乳動物においてＢリンパ球の循環を促進する、(２)天然配列αＬインテグリンのシグナル伝達を部分的又は全体的にブロック、阻害又は中和する。一実施態様では、αＬインテグリンアンタゴニストは、脾臓又はリンパ節へのＢ細胞の付着を阻害する。より特定の実施態様では、αＬインテグリンアンタゴニストは、脾臓及びリンパ節の胚中心及び／又は周辺帯へのＢ細胞の付着を阻害する。
αＬインテグリン及びα４インテグリンのアンタゴニストは、哺乳動物におけるＢリンパ球の循環を促進させるために、単独で、又は同時に又は逐次に、一緒に使用することができる。一実施態様では、αＬインテグリンとα４インテグリンの複数の異なるアンタゴニストは、哺乳動物におけるＢリンパ球の循環を促進させるために、単独で、又は同時に又は逐次に、一緒に使用することができる。アンタゴニストはαＬインテグリン、αＬサブユニット、又はαＬインテグリンのリガンドに結合可能である。
適切なαＬインテグリンアンタゴニストには、αＬインテグリンとリガンド、例えばＩＣＡＭ-１(ＣＤ-５４)との相互作用を阻害する任意の化合物が含まれる。αＬインテグリンアンタゴニストは、小分子、ペプチド、タンパク質、イムノアドヘシン、抗αＬ抗体、又はその断片であってよく、例えばαＬβ２(ＬＦＡ-１)アンタゴニストであってよい。これらの用語は、αＬサブユニット(ＣＤ１１ａ)又はβサブユニット、例えばβ２(ＣＤ１８)又はその双方のいずれかに対するアンタゴニストを意味する。好ましくはアンタゴニストは、αＬ(ＣＤ１１ａ)サブユニット又はユニットとしてαＬインテグリンに対するか又はこれらに結合する。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７０】
１０．抗体コンジュゲート
抗体は細胞障害性剤、例として毒素または放射性同位体とコンジュゲートしうる。ある実施態様では、毒素はカリケアマイシン、メイタンシノイド、ドラスタチン、アウリスタチンＥおよびその類似体または誘導体である。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７３】
実施例２
抗ＣＤ２０抗体を用いた治療によるインビボでのＢ細胞の枯渇
この研究では、抗ｈＣＤ２０抗体を用いた治療によって引き起こされるＢ細胞枯渇は、Ｂ細胞が属した細胞性区画に従って異なった動態を示した。
１．抗ｈＣＤ２０ＭＡｂ治療
抗ｈＣＤ２０  ｍＡｂ治療の生物学的結果を分析するために、ｈＣＤ２０  Ｔｇ＋マウスに、単回用量の０．１ｍｇの対照マウスＩｇＧ２ａ（非特異的抗体）、又は、リツキサン（登録商標）、２Ｈ７、Ｂ１及び１Ｆ５を含んだパネル抗ｈＣＤ２０  ｍＡｂを腹膜内投与した。リツキサン（登録商標）、２Ｈ７及び１Ｆ５は、ＣＤ２０の第二細胞外ドメイン内に位置する対応するエピトープを結合する；Ｂ１は異なるが重なり合うエピトープを結合する。Ｂ１を有するＢ細胞のインキュベーションにより、膜ラフトへＣＤ２０の移動を示さなかった。マウスＦｃレセプタ（ＦｃＲ）に対するマウスＩｇＧ２ａの結合がヒトＦｃＲに対するリツキサン（登録商標）のヒトＩｇＧ１主鎖の結合に最も対応するので、すべての抗ＣＤ２０  ｍＡｂをマウスＩｇＧ２ａ主鎖について調べた。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７９】
マウス当たり最大１０ｍｇの抗ｈＣＤ２０ｍＡｂの投与（ＮＨＬ患者のためのリツキサン（登録商標）の４週コースの累積の１５倍に相当）（図１３）でも、４か月間の抗ｈＣＤ２０  ＭＡｂ０．１ｍｇ隔週継続投与によってもＭＺ  Ｂ細胞の枯渇は大きくならなかった（図１２）。
抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ処置マウスは低減されてはいるが免疫原及び細菌に対して免疫応答を実質的に備えていたので、処置されたトランスジェニックマウスの残存する耐性Ｂ細胞は機能していた（図１４及び図１５）。第７週及び第１０週目に、トランスジェニック動物に、対照又は抗ｈＣＤ２０  ｍＡｂ（０．２ｍｇ／用量、ＩＰ）の２回用量を投与した。マウスを、第１週目ににキーホールリンペットヘモシアニン（ＮＰ-ＫＬＨ）とコンジュゲートした（４-ヒドロキシ-３-ニトロフェニル）アセチルによって免疫化し（ＳＣ）、第１１週目に再免疫化した。ＮＰ特異的なＩｇレベルをＥＬＩＳＡによって第１２週目に検定した。データは図１４に示す。ここで、pre-bleedはＮＰ-ＫＬＨで免疫化する前に採取した試料を意味する。
図１５は、細菌抗原に対するＴ非依存性免疫応答を示す。図６に示すように、対照又は抗-ｈＣＤ２０ｍＡｂの２回ＩＰ用量（マウス当たり０．２ｍｇ）の処置後３週間に、末梢及び腹膜のＢ１細胞は完全に枯渇した。Ｔ非依存性応答は、熱不活性化肺炎レンサ球菌の投与後４日目に単離した抗原(Ａｇ)特異的プラズマ芽球についてのＦＡＣＳ分析（左図）によって評価した。Ａｇ特異的プラズマ芽球の数は平均±標準誤差（ｎ＝４）として定量化した。シンデカン-１はプラズマ芽球とプラズマ細胞を染色する。
【手続補正書】
【提出日】平成18年12月20日(2006.12.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項４０】
ヒト化抗体が、ヒト化２Ｈ７.ｖ１６、ｖ３１、ｖ１１４、ｖ１３８、ｖ４７７、ｖ５８８、ｖ５１１、及びそれぞれ可変軽鎖及び可変重鎖として配列番号２９及び配列番号３０のアミノ酸配列を含む抗体の群から選択される、請求項３９に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項４６】
ＣＤ２０結合抗体が、ヒト化２Ｈ７.ｖ１６、ｖ３１、ｖ１１４、ｖ１３８、ｖ４７７、ｖ５８８、ｖ５１１、及びそれぞれ可変軽鎖及び可変重鎖として配列番号２９及び配列番号３０のアミノ酸配列を含む抗体からなる群から選択される、請求項４４に記載の方法。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項５５】
ＣＤ２０結合抗体が、ヒト化２Ｈ７.ｖ１６、ｖ３１、ｖ１１４、ｖ１３８、ｖ４７７、ｖ５８８、ｖ５１１、及びそれぞれ可変軽鎖及び可変重鎖として配列番号２９及び配列番号３０のアミノ酸配列を含む抗体からなる群から選択される、請求項５３に記載の方法。
【手続補正書】
【提出日】平成19年3月1日(2007.3.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｂ細胞疾患を患った哺乳動物においてＢ細胞枯渇を増大させるための医薬であって、一又は複数のＢ細胞動員剤と治療的有効量の一又は複数のＢ細胞枯渇剤を含んでなる医薬。
【請求項２】
哺乳動物がヒトである、請求項１に記載の医薬。
【請求項３】
Ｂ細胞動員剤がα４インテグリンアンタゴニストである、請求項１に記載の医薬。
【請求項４】
α４インテグリンアンタゴニストがα４β１のアンタゴニストである、請求項３に記載の医薬。
【請求項５】
α４インテグリンアンタゴニストがα４β７のアンタゴニストである、請求項３に記載の医薬。
【請求項６】
α４インテグリンアンタゴニストが、抗体、又はその生物学的に活性な断片である、請求項３、４又は５のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項７】
α４インテグリンアンタゴニストが、ヒト化、ヒト、又はキメラ抗体、又はその生物学的に活性な断片である、請求項６に記載の医薬。
【請求項８】
抗体又は抗体断片が、α４サブユニット(ＣＤ-４９ｄ)に結合する、請求項６に記載の医薬。
【請求項９】
α４インテグリンアンタゴニストがナタリズマブである、請求項３に記載の医薬。
【請求項１０】
α４インテグリンアンタゴニストが、ハイブリドーマＡＴＣＣ ＣＲＬ-１９１１により産生される抗体ＰＳ／２、又はその生物学的に活性な断片、又はヒト化形態である、請求項３に記載の医薬。
【請求項１１】
α４インテグリンアンタゴニストが小分子である、請求項３に記載の医薬。
【請求項１２】
小分子アンタゴニストが次の式：
2007532681.tif 000141
[上式中、
ＺはＨ又は低級アルキルであり；
Ａは次のものであり：
2007532681.tif 000142
ここで
Ｂは、シアノアルキル、炭素環又は複素環であって、一又は複数のＲ１置換基で置換されていてもよいもの；ｑは０−３であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は独立して、水素、アルキル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ニトロ、尿素、シアノ、チオ、アルキルチオ、ヒドロキシ、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アリールオキシカルボニルアミノ、アルキルスルフィニル、スルホニル、アルキルスルホニル、アラルキルスルホニル、アリールスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、アルカノイル、アルカノイルアミノ、シクロアルカノイルアミノ、アリール、アリールアルキル、ハロゲン、又はアルキルホスホニルであり、さらにＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、ヒドロキシ、カルボキシル、低級アルコキシカルボニル、低級アルキル、ニトロ、オキソ、シアノ、カルボシクリル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、低級アルキルチオ、低級アルコキシ、低級アルキルアミノ、低級アルカノイルアミノ、低級アルキルスルフィニル、低級スルホニル、低級アルキルスルホニル、低級アルカノイル、アリール、アロイル、ヘテロシクリルカルボニル、ハロゲン及び低級アルキルホスホニルからなる群から選択される０−３の置換基で置換されており；又はＲ１ないしＲ５の２つは共同して、炭素環又は複素環を形成し；
Ｙは、Ｈ、アルコキシ、アルコキシアルコキシ、アリールオキシ、アルキルアミノアルコキシ、ジアルキルアミノアルコキシ、アルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロシクリル又はヘテロアリールアルキルであり、上述したそれぞれは置換されていても未置換であってもよく；
Ｘ１は、Ｈ、Ｃ(Ｏ)ＯＲ、Ｃ(Ｏ)ＮＲａＲｂ、Ｃ(Ｏ)Ｒ、又はＣ(Ｏ)ＳＲであり、ここでＲ、Ｒａ及びＲｂは個々に、水素、又はアルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリールであって、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシル、ニトロ、シアノ、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アリール、アロイル、アリールオキシ、アラルキル、アラルキルオキシ、アリールオキシカルボニル、アラルキルオキシカルボニル、アルキレンジオキシ、低級アルコキシカルボニル、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アルキルチオ、低級アルコキシ、低級アルキルアミノ、低級アルキルスルフィニル、低級スルホニル、低級アルキルスルホニル、低級アルカノイル、低級アルキルホスホニル、アミノスルホニル低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、アルキルスルフィニル低級アルキル、アルキルスルホニル低級アルキル、アルキルチオ低級アルキル、ヘテロアリールチオ低級アルキル、ヘテロアリールオキシ低級アルキル、ヘテロアリールアミノ低級アルキル、ハロ低級アルキル、及びアルコキシ低級アルキルからなる群から選択される０−４の置換基で置換されるものであり；ここで前記ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アリール、アロイル、アリールオキシ、アラルキル、アラルキルオキシ、アリールオキシカルボニル及びアラルキルオキシカルボニルはハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、カルボキシル、ニトロ、シアノ、アルキル及びアルコキシで置換されていてもよく；またここでＲａ及びＲｂはそれらが結合している窒素原子と共同して、０−５のＲ又はＲｄ置換基で置換されたヘテロシクリル又はヘテロアリール基を形成してよく；ここでＲｄは次の構造：
2007532681.tif 000143
を有するものであり；
ここでＸ'はＣ(Ｏ)ＮＲａ、Ｃ(Ｏ)又は結合からなる群から選択される二価のリンカーであり；
Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシル、ニトロ、シアノ、又は置換又は未置換のアルキル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アリール、アロイル、アリールオキシ、アルキレンジオキシ、低級アルキルカルボニルアミノ、低級アルケニルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アリールアルキルカルボニルアミノ、低級アルコキシカルボニルアミノ、低級アルキルアミノカルボニルアミノ、アリールアミノカルボニルアミノ、低級アルコキシカルボニル、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アルキルチオ、低級アルコキシ、低級アルキルアミノ、低級アルキルスルフィニル、低級スルホニル、低級アルキルスルホニル、低級アルカノイル、低級アルキルホスホニル、アミノスルホニル低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、アルキルスルフィニル低級アルキル、アルキルスルホニル低級アルキル、アルキルチオ低級アルキル、ヘテロアリールチオ低級アルキル、ヘテロアリールオキシ低級アルキル、ヘテロアリールアミノ低級アルキル、ハロ低級アルキル、アルコキシ低級アルキルであり；ここでＸ１及びＸ２又はＸ３は互いに結合して、ヘテロ環又はヘテロアリール環(類)を形成してよく；又はＸ３とＺは共同してヘテロ二環を形成し；
Ｘ１’、Ｘ２’、Ｘ３’及びＸ４’はそれぞれ独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシル、ニトロ、シアノ、又は置換又は未置換のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アリール、アロイル、アリールオキシ、アルキレンジオキシ、低級アルキルカルボニルアミノ、低級アルケニルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アリールアルキルカルボニルアミノ、低級アルコキシカルボニルアミノ、低級アルキルアミノカルボニルアミノ、アリールアミノカルボニルアミノ、低級アルコキシカルボニル、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アルキルチオ、低級アルコキシ、低級アルキルアミノ、低級アルキルスルフィニル、低級スルホニル、低級アルキルスルホニル、低級アルカノイル、低級アルキルホスホニル、アミノスルホニル低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、アルキルスルフィニル低級アルキル、アルキルスルホニル低級アルキル、アルキルチオ低級アルキル、ヘテロアリールチオ低級アルキル、ヘテロアリールオキシ低級アルキル、ヘテロアリールアミノ低級アルキル、ハロ低級アルキル、アルコキシ低級アルキルである]；
のもの、又はその製薬的に許容可能な塩を含む、請求項１１に記載の医薬。
【請求項１３】
小分子アンタゴニストが、次の式：
2007532681.tif 000144
[上式中、Ｒ及びＲ'は、表１及び２に列挙された指定のＲ及びＲ'置換基の任意のものを含む]
の化合物を含む、請求項１２に記載の医薬。
【請求項１４】
小分子アンタゴニストが表３に列挙された化合物の任意の一つである、請求項１２に記載の医薬。
【請求項１５】
Ｂ細胞動員剤がαＬインテグリンアンタゴニストである、請求項１に記載の医薬。
【請求項１６】
Ｂ細胞動員剤がαＬβ２インテグリンアンタゴニストである、請求項１５に記載の医薬。
【請求項１７】
αＬインテグリンアンタゴニストが、抗体、又はその生物学的に活性な断片である、請求項１５に記載の医薬。
【請求項１８】
抗体が、ヒト化、ヒト、又はキメラ抗体、又はその生物学的に活性な断片である、請求項１７に記載の医薬。
【請求項１９】
抗体がαＬサブユニット(ＣＤ１１ａ)に結合する、請求項１７に記載の医薬。
【請求項２０】
ＣＤ１１ａ結合抗体が、それぞれ配列番号４９及び５０のＶＬ及びＶＨ配列を含むか、又はエファリツマブである、請求項１７に記載の医薬。
【請求項２１】
αＬインテグリンアンタゴニストが小分子である、請求項１５に記載の医薬。
【請求項２２】
αＬの小分子アンタゴニストが、一又は複数の：
ａ）次の式ＸＩ：
2007532681.tif 000145
[上式中、
Ｃｙは、ヒドロキシル(-ＯＨ)、メルカプト(-ＳＨ)、チオアルキル、ハロゲン(Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ)、オキソ(=Ｏ)、チオ(=Ｓ)、アミノ、アミノアルキル、アミジン(-Ｃ(ＮＨ)-ＮＨ２)、グアニジン(-ＮＨ２-Ｃ(ＮＨ)-ＮＨ２)、ニトロ、アルキル、アルコキシ又はアシルで置換されていてもよい、非芳香族の炭素環又は複素環であり；
Ｘは、ヒドロキシル、メルカプト、ハロゲン、アミノ、アミノアルキル、ニトロ、オキソ又はチオで置換されていてもよく、Ｎ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ又はＳＯ２が挿入されていてもよい二価の炭化水素鎖であり；
Ｙは、ヒドロキシル、メルカプト、ハロゲン、オキソ、チオ、炭化水素、ハロ置換炭化水素、アミノ、アミジン、グアニジン、シアノ、ニトロ、アルコキシ又はアシルで置換されていてもよい炭素環又は複素環であり；
Ｌは、原子手、又はＮ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ又はＳＯ２で置き換えられた一又は複数の炭素原子を有していてもよく、ヒドロキシル、ハロゲン、オキソ又はチオで置換されていてもよい二価の炭化水素であり；又は炭化水素の３つの炭素原子がアミノ酸残基で置き換えられており；
Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、アミノ、Ｏ-炭素環又アルコキシで、アミノ、炭素環又は複素環で置換されていてもよいものであり；
Ｒ２−５は独立して、Ｈ、ヒドロキシル、メルカプト、ハロゲン、シアノ、アミノ、アミジン、グアニジン、ニトロ又はアルコキシであり；又はＲ３及びＲ４は共同して、ヒドロキシル、ハロゲン、オキソ、チオ、アミノ、アミジン、グアニジン又はアルコキシで置換されていてもよい縮合炭素環又は複素環を形成し；
Ｒ６は、炭素環又は複素環で置換されていてもよい炭化水素鎖、又はＨである]
の化合物、又はその塩、溶媒和物及び水和物で、但し、Ｙがフェニルであり、Ｒ２、Ｒ４及びＲ５がＨであり、Ｒ３がＣｌであり、Ｒ１がＯＨである場合、Ｘはシクロヘキシル以外であるもの；又その製薬的に許容可能な塩を含む、請求項２１に記載の医薬。
【請求項２３】
αＬの小分子アンタゴニストが表４に列挙された化合物の任意の一つを含む、請求項２１に記載の医薬。
【請求項２４】
α４インテグリンアンタゴニストが、ＶＣＡＭ-１(ＣＤ１０６)に結合する抗体である、請求項３に記載の医薬。
【請求項２５】
αＬインテグリンアンタゴニストが、ＩＣＡＭ-１(ＣＤ５４)に結合する抗体である、請求項１５に記載の医薬。
【請求項２６】
アンタゴニストが、ヒトＩｇＧのヒンジ及びＦｃに融合するＶＣＡＭ-１(ＣＤ１０６)のリガンド結合部位を含むイムノアドヘシンである、請求項３に記載の医薬。
【請求項２７】
アンタゴニストが、ヒトＩｇＧのヒンジ及びＦｃに融合するＩＣＡＭ-１(ＣＤ５４)のリガンド結合部位を含むイムノアドヘシンである、請求項１５に記載の医薬。
【請求項２８】
２つのＢ細胞動員剤を含み、第１の動員剤がαＬインテグリンアンタゴニストであり、第２の動員剤がα４インテグリンアンタゴニストである、請求項１に記載の医薬。
【請求項２９】
α４インテグリンがα４β１又はα４β７であり、αＬがαＬβ２である、請求項２８に記載の医薬。
【請求項３０】
αＬインテグリンアンタゴニスト及びα４インテグリンアンタゴニストが、双方とも抗体である、請求項２８又は２９に記載の医薬。
【請求項３１】
α４インテグリンアンタゴニストが、ナタリズマブ、又はその生物学的に活性な断片、又はそのヒト化である、請求項２８又は２９に記載の医薬。
【請求項３２】
αＬインテグリンアンタゴニストが、抗体エファリツマブ、又はその生物学的に活性な断片、又はそのヒト化である、請求項２８又は２９に記載の医薬。
【請求項３３】
αＬインテグリンアンタゴニスト及びα４インテグリンアンタゴニストが、双方とも小分子である、請求項２８に記載の医薬。
【請求項３４】
Ｂ細胞枯渇剤がＢ細胞表面マーカーのアンタゴニストである、請求項１ないし３３のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項３５】
Ｂ細胞表面マーカーがＣＤ２０、ＣＤ２２又はＣＤ５４である、請求項３４に記載の医薬。
【請求項３６】
Ｂ細胞表面マーカーがＣＤ２０である、請求項３５に記載の医薬。
【請求項３７】
Ｂ細胞枯渇剤がＣＤ２０に結合する抗体である、請求項３６に記載の医薬。
【請求項３８】
抗体がリツキシマブである、請求項３７に記載の医薬。
【請求項３９】
ＣＤ２０に結合する抗体がヒト化抗体である、請求項３７に記載の医薬。
【請求項４０】
ヒト化抗体が、ヒト化２Ｈ７.ｖ１６、ｖ３１、ｖ１１４、ｖ１３８、ｖ４７７、ｖ５８８、ｖ５１、及びそれぞれ可変軽鎖及び可変重鎖として配列番号２９及び配列番号３０のアミノ酸配列を含む抗体の群から選択される、請求項３９に記載の医薬。
【請求項４１】
抗体がヒト又はキメラ抗体である、請求項３７に記載の医薬。
【請求項４２】
Ｂ細胞動員剤及びＢ細胞枯渇剤が、同時に又は逐次に投与される、請求項１ないし４１のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項４３】
第１及び第２のＢ細胞動員剤が同時に投与される、請求項２３ないし２９のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項４４】
一又は複数のＢ細胞動員剤を含んでなる、Ｂ細胞疾患を患った患者においてＣＤ２０結合抗体によるＢ細胞枯渇の効率を高めるための医薬。
【請求項４５】
ＣＤ２０結合抗体がリツキシマブである、請求項４４に記載の医薬。
【請求項４６】
ＣＤ２０結合抗体が、ヒト化２Ｈ７.ｖ１６、ｖ３１、ｖ１１４、ｖ１３８、ｖ４７７、ｖ５８８、ｖ５１、及びそれぞれ可変軽鎖及び可変重鎖として配列番号２９及び配列番号３０のアミノ酸配列を含む抗体からなる群から選択される、請求項４４に記載の医薬。
【請求項４７】
Ｂ細胞動員剤がαＬインテグリンアンタゴニストである、請求項４５又は４６に記載の医薬。
【請求項４８】
αＬインテグリンアンタゴニストが、エファリツマブ、又はそれぞれ配列番号４９及び５０のＶＬ及びＶＨ配列を含むＣＤ１１ａ結合抗体である、請求項４７に記載の医薬。
【請求項４９】
２又はそれ以上のＢ細胞動員剤を含み、第１の動員剤がαＬインテグリンアンタゴニストであり、第２の動員剤がα４インテグリンアンタゴニストである、請求項４４ないし４８のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項５０】
α４インテグリンアンタゴニストが、α４β１又はα４β７に結合する抗体である、請求項４９に記載の医薬。
【請求項５１】
αＬインテグリンアンタゴニストが、エファリツマブ、又はそれぞれ配列番号４９及び５０のＶＬ及びＶＨ配列を含むＣＤ１１ａ結合抗体である、請求項４９又は５０に記載の医薬。
【請求項５２】
αＬインテグリンアンタゴニスト及びα４インテグリンアンタゴニストが相乗的に作用し、Ｂ細胞枯渇を亢進する、請求項５０に記載の医薬。
【請求項５３】
新生物又は悪性腫瘍を患っている患者においてＣＤ２０を発現するＢ細胞により特徴付けられるＢ細胞新生物又は悪性腫瘍の治療のための医薬であって、治療的有効量のＣＤ２０結合抗体、及び少なくとも一のＢ細胞動員剤を含んでなる医薬。
【請求項５４】
ＣＤ２０結合抗体がリツキシマブである、請求項５３に記載の医薬。
【請求項５５】
ＣＤ２０結合抗体が、ヒト化２Ｈ７.ｖ１６、ｖ３１、ｖ１１４、ｖ１３８、ｖ４７７、ｖ５８８、ｖ５１、及びそれぞれ可変軽鎖及び可変重鎖として配列番号２９及び配列番号３０のアミノ酸配列を含む抗体からなる群から選択される、請求項５３に記載の医薬。
【請求項５６】
Ｂ細胞動員剤がαＬインテグリンアンタゴニストである、請求項５３ないし５５のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項５７】
αＬインテグリンアンタゴニストが、エファリツマブ、又はそれぞれ配列番号４９及び５０のＶＬ及びＶＨ配列を含むＣＤ１１ａ結合抗体である、請求項５６に記載の医薬。
【請求項５８】
α４インテグリンアンタゴニストが、α４β１に結合する抗体又は小分子である、請求項５７に記載の医薬。
【請求項５９】
Ｂ細胞新生物が、非-ホジキンリンパ腫(ＮＨＬ)、小リンパ球性(ＳＬ)ＮＨＬ、リンパ球優位型ホジキン病(ＬＰＨＤ)、濾胞中心細胞(ＦＣＣ)リンパ腫、急性リンパ球性白血病(ＡＬＬ)、慢性リンパ球性白血病(ＣＬＬ)、及び有毛細胞白血病からなる群から選択される、請求項５６に記載の医薬。
【請求項６０】
治療的有効量のＣＤ２０結合抗体、及び少なくとも一のＢ細胞動員剤を含んでなる、Ｂ細胞調節性自己免疫疾患を軽減する医薬。
【請求項６１】
ＣＤ２０結合抗体がリツキシマブである、請求項５９に記載の医薬。
【請求項６２】
ＣＤ２０結合抗体が、配列番号３１の軽鎖可変ドメイン配列、及び配列番号３２の重鎖可変ドメイン配列を含む、請求項６０に記載の医薬。
【請求項６３】
Ｂ細胞動員剤がαＬインテグリンアンタゴニストである、請求項６０ないし６２のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項６４】
αＬインテグリンアンタゴニストが、エファリツマブ、又はそれぞれ配列番号４９及び５０のＶＬ及びＶＨ配列を含むＣＤ１１ａ結合抗体である、請求項６３に記載の医薬。
【請求項６５】
Ｂ細胞動員剤が、α４β１に結合する抗体又は小分子である、請求項６０ないし６２のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項６６】
自己免疫疾患が、関節リウマチ及び若年性関節リウマチ、ループス腎炎を含む全身性エリテマトーデス(ＳＬＥ)、ウェジナー病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、特発性血小板減少性紫斑病(ＩＴＰ)、血栓性血小板減少性紫斑病(ＴＴＰ)、自己免疫性血小板減少症、多発性硬化症、乾癬、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発ニューロパシー、重症筋無力症、ＡＮＣＡ随伴血管炎、真性糖尿病、レイノー症候群、Sjorgen症候群、視神経脊髄炎(ＮＭＯ)、及び糸球体腎炎からなる群から選択される、請求項６０ないし６２のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項６７】
自己免疫疾患が多発性硬化症である、請求項６４に記載の医薬。
【請求項６８】
Ｂ細胞新生物又はＢ細胞調節性自己免疫疾患を患っている患者の脾臓における辺縁帯Ｂ細胞を除去するための医薬であって、治療的有効量のＣＤ２０結合抗体、及び少なくとも一のＢ細胞動員剤をふくんでなる医薬。
【請求項６９】
αＬインテグリンに結合する抗体、及びα４インテグリンに結合する抗体を含有する医薬。
【請求項７０】
α４インテグリンに結合する抗体が、エファリツマブ、又はそれぞれ配列番号４９及び５０のＶＬ及びＶＨ配列を含むＣＤ１１ａ結合抗体である、請求項６９に記載の医薬。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
一実施態様では、ヒト化２Ｈ７.ｖ５１１は、２０ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ５．８の１０ｍＭ硫酸ヒスチジン、６０ｍｇ／ｍｌスクロース、０．２ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０を含んでなる液体製剤中で提供される。
本発明の何れかの方法では、Ｂ細胞流動化薬剤(Ｂ細胞流動化剤、Ｂ細胞動員剤、B cell mobilizing agent)として抗体、小分子及び／又はイムノアドヘシンの何れかの組合せ、及び／又はＢ細胞枯渇薬剤の何れかの組合せが投与されうる。例えば、Ｂ細胞枯渇薬剤(Ｂ細胞枯渇剤、B cell depleting agent)はＣＤ２０を結合する抗体であり、Ｂ細胞流動化薬剤はα４及び／又はαＬインテグリンの一つ以上の小分子アンタゴニストでありうる。
本発明の何れかの方法では、Ｂ細胞流動化剤又は薬剤とＢ細胞枯渇薬剤は、同時に、連続して、又は何れかの順序で同時と連続の間に投与されうる。二以上の流動化薬剤、例えばα４インテグリンアンタゴニストと組み合わせたαＬインテグリンアンタゴニストが用いられる場合、２つの薬剤は、同時に、連続して、又は何れかの順序で同時と連続の間に投与されうる。一実施態様では、第一にＢ細胞を枯渇するために、抗ＣＤ２０抗体が投与され、その後、脾臓、リンパ節、胚中心、腹腔などの臓器に残っているＢ細胞を流動化するために、αＬインテグリンアンタゴニスト又はαＬインテグリンアンタゴニストとα４インテグリンアンタゴニストの組合せが投与され、更に、残りの流動化したＢ細胞を枯渇するために、ＣＤ２０結合抗体で繰り返し処置される。
更なる実施態様では、本発明は、２以上の流動化薬剤、例えばαＬインテグリンアンタゴニストとα４インテグリンアンタゴニストの組合せを含有する組成物を含む。更に、本発明の組成物は、一つ以上のＢ細胞流動化薬剤と一つ以上のＢ細胞枯渇薬剤を組み合わせて含む。具体的には、αＬインテグリンアンタゴニスト、α４アンタゴニスト、及び抗ＣＤ２０抗体を含有する組成物である。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
（実施態様の詳細な説明）
Ａ．定義
本願明細書中で用いられる用語は以下の定義を有するものである：
本願明細書中で用いられるインテグリンの「アンタゴニスト」又は「インヒビター」なる用語は、リガンド、例えばＶＣＡＭ-１、ＭＡｄＣＡＭ-１、ＩＣＡＭ1-５などに対する、インテグリン、例えばα４β１、α４β７又はαＬβ２インテグリンの結合を減弱するか又は予防するか、ないしは脾臓の胚中心及び／又は周辺帯を含むリンパ系組織のＢ細胞の保持を減弱するか又は予防する化合物を意味する。「有効量」とは、少なくとも部分的に結合を阻害するために十分な量であり、抑制的な量であってもよい。
「抗体」なる用語は広義な意味で用いられ、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、多特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、及び所望の生物学的活性ないしは機能を示す抗体断片を具体的に包含する。本発明のポリペプチドを含む抗体は、キメラ、ヒト化又はヒトのものでありうる。本発明のポリペプチドを含む抗体は抗体断片でありうる。そのような抗体及びそれらを生成する方法は以下に詳細に記載する。あるいは、本発明の抗体は本発明のポリペプチドで動物を免疫化して生成することができる。ゆえに、本発明のポリペプチドに直接関係する抗体を包含する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
本発明の「組成物」は、一以上のＢ細胞枯渇薬剤(Ｂ細胞枯渇剤、B cell depleting agent)及び／又は一以上のＢ細胞流動化薬剤(Ｂ細胞流動化剤、Ｂ細胞動員剤、B cell mobilizing agent)を含むものであり、場合によっては生理学的に許容可能な担体と組み合わせてもよい。組成物は更に、目標とする症状を治療するための追加の治療薬を含むことができる。いくつかの実施形態では、組成物は、免疫関連疾患の治療薬、及び癌の治療薬から選択される第二の治療薬含む。いくつかの実施形態では、癌の治療薬は、細胞障害剤、化学療法剤、成長阻害剤及び放射線療法剤からなる群より選択される。
非ヒト(例えばマウス)抗体の「ヒト化」型は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むキメラ抗体である。大部分において、ヒト化抗体は、レシピエントの高頻度可変領域の残基が、マウス、ラット、ウサギ又は所望の特異性、親和性及び能力を有する非ヒト霊長類のような非ヒト種からの高頻度可変領域の残基（ドナー抗体）によって置換されたヒト免疫グロブリン(レシピエントまたはアクセプター抗体)である。例として、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域(ＦＲ)残基は、対応する非ヒト残基によって置換される。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、もしくはドナー抗体にも見出されない残基を含んでいてもよい。これらの修飾は抗体の特性を更に洗練するために行われる。一般に、ヒト化抗体は、全てあるいは実質的に全ての高頻度可変ループが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、たとえＦＲ領域が結合特性を改善するような一又はそれ以上のアミノ酸置換を含んでも、全てあるいは実質的に全てのＦＲ領域がヒト免疫グロブリン配列のものである、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含む。ＦＲのアミノ酸置換数は一般的にＨ鎖では６個、Ｌ鎖では３個にすぎない。ヒト化抗体は、場合によっては免疫グロブリン定常領域(Ｆｃ)、一般的にはヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部も含む。更なる詳細については、Jones等, Nature 321:522-525 (1986); Riechmann等, Nature 332:323-329 (1988);及びPresta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)を参照のこと。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
本願明細書中で用いられる「Ｂ細胞枯渇薬剤(Ｂ細胞枯渇剤、B cell depleting agent)」とは、Ｂ細胞表面カーカーを介してそれに結合するかあるいは他の方法でそれを結合して直接的又は間接的に標的Ｂ細胞を死に至らしめる任意のアンタゴニストである。本明細書中で使用されるように、循環内のＢ細胞は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ又は他のメカニズムによって取り除かれる。Ｂ細胞枯渇薬剤は、抗体又は細胞表面マーカーのリガンドなどの抗体や小分子でありうる。Ｂ細胞枯渇薬剤は、細胞障害性薬剤又は成長阻害性薬剤にコンジュゲートされうる。一実施態様では、Ｂ細胞枯渇薬剤は、ＣＤ20、ＣＤ22又はＣＤ54を結合するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。ＣＤ20結合抗体は以下に開示される。好ましい実施態様では、ＣＤ20結合抗体は、リツキシマブ、又はヒト化2Ｈ7ｖ16又はｈ2Ｈ7ｖ16の変異形である。
本願明細書中で用いられる「Ｂ細胞流動化薬剤」とは、例えば、リンパ系器官及び他のＢ細胞保有組織中のＢ細胞の接着及び保持を阻害することによって、さもなければそれらの組織からのＢ細胞の放出を促進することによって、又はリンパ及び他の器官や組織へのＢ細胞のホーミングを阻害することによって、血液中の哺乳動物のＢ細胞の循環を促進する任意の分子である。ある特定の実施態様では、Ｂ細胞流動化薬剤は、少なくとも脾臓の周辺帯、及び好ましくはリンパ系組織及び脾臓の胚中心及びＭＺ内のＢ細胞保持を阻害する。他の実施態様では、Ｂ細胞流動化薬剤は脾臓へのＢ細胞のホーミングを阻害する。さらに他の実施態様では、前記薬剤は腸へのＢ細胞のホーミングを阻害する。Ｂ細胞流動化薬剤の投与による末梢血中のＢ細胞の増加は、実施例に記述したような公知の方法によって定量化されうる。
「Ｂ細胞疾患」は、Ｂ細胞新生物（例えばＣＤ20陽性Ｂ細胞新生物）、又はＢ細胞制御性自己免疫性疾患ないしは自己免疫関連症状を含む。それらは以下に詳細に開示される。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
α４β１（ＶＬＡ-４）を特異的に結合するヒト化Ａｂｓの例として、以下に示す一つ以上のＶＬ鎖及びＶＨ鎖を含有してなるものを含む。
１)  以下の配列を含有する軽鎖可変領域
2007532681.tif 000146
又は、
2007532681.tif 000147
と、
２)  以下の配列を含有する重鎖可変領域
2007532681.tif 000148
2007532681.tif 000149
又は
2007532681.tif 000150
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８３】
一実施態様では、αＬβ２(ＬＦＡ-１)等のαＬインテグリンのリガンドはＩＣＡＭ-２(ＣＤ-１０２)である。ヒトＩＣＡＭ-２(ＣＤ-１０２)ポリペプチド配列の例を以下に示す(GenBank受入番号CAG46633, EMBL受入番号CR541834.1)：
2007532681.tif 000151
残基１〜２１はシグナル配列を含み、残基２２〜２２４は細胞外ドメインを含み、残基２２５〜２４８は膜貫通ドメインを含み、残基２４９〜２７５は細胞質ドメインを含む。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１００
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１００】
ｂ．好ましい式ＸＩａ-ｆ
好ましい実施態様において、本発明の化合物は次の一般式(ＸＩａ)-(ＸＩｆ)：
2007532681.tif 000152
[上式中、Ｃｙ、Ｙ、Ｌ及びＲ１−６は上述したものである]
を有する。特に好ましい実施態様では、式(ＸＩａ)-(ＸＩｆ)の化合物に星印(＊)でマークされた炭素原子はキラルである。特定の実施態様では、炭素原子はＲ-配置を有する。他の好ましい実施態様では、炭素原子はＳ-配置を有する。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４０】
また、活性成分は、例としてコアセルべーション技術または界面重合化により調製したマイクロカプセル、例として、個々のコロイド状のドラッグデリバリーシステム（例として、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）またはマクロエマルジョン中のヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ(メチルメタサイクリン)マイクロカプセル中に包まれているかもしれない。このような技術は、Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)に開示されている。
持続性徐放剤が調製される。持続性徐放剤の好適な例は、アンタゴニストを含む固形疎水性ポリマーの準透過性基質を含むものであり、基質は、造形品、例としてフィルム、またはマイクロカプセルの形である。持続性徐放基質の例として、ポリエステル、ヒドロゲル(例えば、ポリ(2ヒドロキシエチル-メタクリレート)、またはポリ(ビニルアルコール))、ポリ乳酸(米国特許3773919), L-グルタミン酸およびエチルＬグルタミン酸の共重合体、非分解性のエチレンビニール酢酸共重合体、分解性の乳酸グリコール酸共重合体、例としてLUPRON DEPOTＴＭ(乳酸-グリコール酸共重合体およびロイプロリド酢酸塩で構成された注入可能ミクロスフェア)、およびポリD-(-)-3ヒドロキシブチリン酸を含む。
インビボ投与に用いる剤形は無菌でなければならない。これは滅菌濾過膜を通す濾過によって容易く達成できる。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図面の簡単な説明
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図面の簡単な説明】
【０１８７】
【図１】ｈＣＤ２０トランスジェニック（ｈＣＤ２０Ｔｇ＋）マウスの循環リンパ球の細胞集団におけるｈＣＤ２０の発現を図示する。リンパ球集団はＢ２２０及びＣＤ３の表面発現に特徴がある。
【図２】Ｂ細胞発生中及びリンパ組織におけるｈＣＤ２０の表面発現。骨髄（上列）、脾臓（中列）及び他のリンパ器官（下列）におけるＢ細胞前駆細胞及びサブセットをｈＣＤ２０発現について分析した。
【図３】対照又は抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ（２Ｈ７）で処置したｈＣＤ２０Ｔｇ＋マウスの骨髄からのＢ２２０及びＣＤ４３発現に特徴があるＢ細胞集団の枯渇を示す（左図）。また、Ｂ細胞の集団に検出されたｈＣＤ２０の定量化を示す（右図）。
【図４】抗ＣＤ２０抗体で処置したｈＣＤ２０Ｔｇ＋マウスの末梢血からの抗ｈＣＤ２０ｍＡｂによるＢ細胞の枯渇を示す。
【図５】抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ処置後のＢ細胞の枯渇と過多を示す。
【図６】抗ｈＣＤ２０抗体で処置したｈＣＤ２０Ｔｇ＋マウスの血液、リンパ節及び腹腔におけるＢ細胞枯渇の異なる動態を示す。
【図７】０．５ｍｇの抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ（下列）又は対照ＩｇＧ２ａ（上列）で処置したトランスジェニックマウスからの脾臓Ｂ細胞の感受性を示す。
【図８】図７に示すマウスの脾臓におけるＦＯ及びＭＺ  Ｂ細胞枯渇の数を示す。
【図９】耐性脾臓Ｂ細胞における抗ｈＣＤ２０ｍＡｂによるＣＤ２０の飽和を示す。
【図１０】抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ枯渇に対するパイエル板ＧＣ  Ｂ細胞の耐性を示す。パイエル板Ｂ細胞を対照ＩｇＧ２ａ（上列）又は抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ（下列）で処理したマウスから単離し、Ｂ２２０及びＣＤ３８染色により特徴付けした。対照処置マウス（白バー）及び抗ｈＣＤ２０ＭＡｂ処置マウス（黒バー）からの成熟及びＢＣ  Ｂ細胞を定量した（右図）。
【図１１】抗ｈＣＤ２０ｍＡｂによる枯渇に対する脾臓ＧＣ  Ｂ細胞の耐性を示す。
【図１２】対照又は抗ｈＣＤ２０  ｍＡｂで１５週間にわたり処置した（０．１ｍｇ／２週間、ＩＰ）後の周辺帯Ｂ細胞の枯渇を示す。
【図１３】高用量の抗αｈＣＤ２０  ｍＡｂ投与によるＢ細胞の枯渇を示す。用量は示すとおりである。
【図１４】ｈＣＤ２０  ｍＡｂ処置後のＢ細胞免疫応答、特に実施例３にて説明したように、一次免疫応答を示す。
【図１５】熱不活性化肺炎レンサ菌投与後４日目のＢ細胞枯渇マウスから単離した抗原（Ａｇ）特異的プラズマ芽球のＦＡＣＳ分析（左図）によって評価されるように、細菌性抗原に対するＴ非依存性免疫応答を示す。
【図１６】血管構造内への周辺帯Ｂ細胞の流動化が抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ枯渇に対するＭＺ  Ｂ細胞の感受性を亢進することを示すＦＡＣＳプロット線。
【図１７】流動化薬剤にて処置したマウスの血液中のＭＺ  Ｂ細胞（ＣＤ２１ｈｉＣＤ２３ｌｏ）の定量の結果を示す。
【図１８】抗ｈＣＤ２０  ｍＡｂ単独及び流動化薬剤と併用して処置したマウスの脾臓の総Ｂ２２０＋細胞量を示すグラフ。
【図１９】２５ｍｇのリポポリサッカリド（ＬＰＳ）及び抗ｈＣＤ２０ｍＡｂで処置したマウスからの細胞のＦＡＣＳプロット線を示す。
【図２０】媒介物対照又は化合物Ａで処置されたｈＣＤ２０  Ｔｇ＋マウスのリンパ球の量を図示する。２０時間目でのリンパ節（パネル１及び２）と血液（パネル３及び４）から単離したリンパ球を定量し、平均±＋標準誤差（ｎ＝4）として表した。
【図２１】実施例５により詳細に記述するように、肝臓がＢ細胞枯渇に必要なことを示す。マウスを偽物処置（左図）又は、門脈及び肝動脈の結紮（右図）をした後に対照又は抗ｈＣＤ２０（０．２ｍｇ）ｍＡｂをすぐにＩＶ注射した。
【図２２】実施例５に記載の偽物処置マウス又は結紮処置マウスからの血液におけるＢ細胞の量を示す。抗ｈＣＤ２０ｍＡｂ処置マウスから単離したすべての細胞は、ｍＡｂインビボ投与により飽和された。
【図２３】実施例５により詳細に記述するように、脾臓がＢ細胞枯渇に必要でないことを示す。マウスに偽脾臓摘出（最上列）又は脾臓摘出（下列）を施し、Ｂ細胞枯渇について分析した。
【図２４】実施例５に示す偽脾臓摘出マウス又は脾臓摘出マウスの末梢血におけるＢ細胞の割合を定量し、平均±標準誤差として表した。
【図２５】実施例５により詳細に記述するように、クップァー細胞がＢ２２０＋Ｂ細胞を包み込むことを示す。マウスは、０．１ｍｇの対照ＩｇＧ又は抗ｈＣＤ２０ｍＡｂで処置した。
【国際調査報告】
2007532681.tif 000153
2007532681.tif 000154
2007532681.tif 000155
2007532681.tif 000156
2007532681.tif 000157