(57)【要約】供与可能な一酸化窒素部分およびフリーラジカル清掃性部分を含む、ＡｐｏＡ１の発現を誘導するための化合物。好ましくは、スチルベン、ポリフェノール、フラボノイドおよびイソフラボノイドの一酸化窒素誘導体ならびにそれらの使用方法を、高コレステロール血症、血管酸化的ストレスおよび内皮機能不全を含む疾患に罹患した患者を処置するために提供する。これらの新規化合物は、ＡｐｏＡ１の発現を誘導する能力を同時に有し、それによってＨＤＬの血中レベルを高め、コレステロールの血中レベルを低下させる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＡｐｏＡ１の発現を誘導し、ＨＤＬの血中レベルの増加およびコレステロールの血中レベルの低下を引き起こすための化合物であって、供与可能な一酸化窒素成分およびフリーラジカル清掃性抗酸化分子を含む、化合物。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であって、以下の構造：
【化１】
2007509842.tif 000071
を含むフラボノイド化合物を含み、ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１３およびＲ１４は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ１０またはＲ１３またはＲ１４の少なくとも１つは、ニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【化２】
2007509842.tif 000072
を意味し、
そしてＲは、Ｒ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１は、Ｃ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、該誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２は、Ｃ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、該誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含み；
Ｘは、Ｏ、ＣＲ１３またはＮＲ１３であり得；
Ｙは、ＣＯ［６員環構造を依然として維持しているケトン］、ＣＲ１４またはＮＲ１４であり得；そして
Ｚは、単結合または二重結合であり得る、
化合物。
【請求項３】
薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせて、請求項２に記載のフラボノイド化合物を含む、薬学的組成物。
【請求項４】
患者において心血管疾患、コレステロール関連疾患または脂質関連疾患を処置するための方法であって、処置を必要とする患者に、治療的有効量の請求項２に記載のフラボノイド化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項５】
患者において抗酸化活性を提供しつつＡｐｏＡ１の発現を誘導するための方法であって、該患者に、請求項２に記載のフラボノイド化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項６】
患者において血清コレステロールを減少させるための方法であって、該患者に、請求項２に記載のフラボノイド化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項７】
請求項１に記載の化合物であって、以下の構造：
【化３】
2007509842.tif 000073
を含むイソフラボノイド化合物を含み、ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１３およびＲ１４は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ１０またはＲ１３またはＲ１４の少なくとも１つは、ニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【化４】
2007509842.tif 000074
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１は、Ｃ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、該誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２は、Ｃ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、該誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含み；
Ｘは、Ｏ、ＣＲ１３またはＮＲ１３であり得；
Ｙは、ＣＯ［６員環構造を依然として維持しているケトン］、ＣＲ１４またはＮＲ１４であり得；そして
Ｚは、単結合または二重結合であり得る、
化合物。
【請求項８】
薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせて、請求項７に記載のイソフラボノイド化合物を含む、薬学的組成物。
【請求項９】
患者において心血管疾患、コレステロール関連疾患または脂質関連疾患を処置するための方法であって、処置を必要とする患者に、治療的有効量の請求項７に記載のイソフラボノイド化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１０】
患者において抗酸化活性を提供しつつＡｐｏＡ１の発現を誘導するための方法であって、該患者に、請求項７に記載のイソフラボノイド化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１１】
患者において血清コレステロールを減少させるための方法であって、該患者に、請求項７に記載のイソフラボノイド化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１２】
請求項１に記載の化合物であって、以下の構造：
【化５】
2007509842.tif 000075
を含むスチルベン化合物を含み、ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ１０の少なくとも１つはニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【化６】
2007509842.tif 000076
を意味し、
そしてＲは、Ｒ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１は、Ｃ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、該誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２は、Ｃ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、該誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含み、そして
ここで、Ｘは、単結合、二重結合または三重結合であり得る、
化合物。
【請求項１３】
薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせて、請求項１２に記載のスチルベン化合物を含む、薬学的組成物。
【請求項１４】
患者において心血管疾患、コレステロール関連疾患または脂質関連疾患を処置するための方法であって、処置を必要とする患者に、治療的有効量の請求項１２に記載のスチルベン化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１５】
患者において抗酸化活性を提供しつつＡｐｏＡ１の発現を誘導するための方法であって、該患者に、請求項１２に記載のスチルベン化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１６】
患者において血清コレステロールを減少させるための方法であって、該患者に、請求項１２に記載のスチルベン化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１７】
請求項１に記載の化合物であって、以下の構造：
【化７】
2007509842.tif 000077
を含むカルコン化合物を含み、ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１３およびＲ１４は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ１０，Ｒ１３またはＲ１４の少なくとも１つはニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【化８】
2007509842.tif 000078
を意味し、
そしてＲは、Ｒ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１は、Ｃ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、該誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２は、Ｃ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、該誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含み；
Ｘは、単結合または二重結合であり得；
Ｙは、単結合または二重結合であり得；
Ｚは、ＣＯ［ケトン］、ＣＲ１３またはＮＲ１３であり得る、
化合物。
【請求項１８】
患者において心血管疾患、コレステロール関連疾患または脂質関連疾患を処置するための方法であって、処置を必要とする患者に、治療的有効量の請求項１７に記載の化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１９】
患者において抗酸化活性を提供しつつＡｐｏＡ１の発現を誘導するための方法であって、該患者に、請求項１７に記載の化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項２０】
患者において血清コレステロールを減少させるための方法であって、該患者に、請求項１７に記載の化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項２１】
請求項１に記載の化合物であって、以下の構造：
【化９】
2007509842.tif 000079
を含むポリフェノール化合物を含み、ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ１０の少なくとも１つはニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【化１０】
2007509842.tif 000080
を意味し、
そしてＲは、Ｒ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１は、Ｃ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、該誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２は、Ｃ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、該誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含み、そして
Ｘは、Ｃ、Ｓ、（ＣＯ）、ＳＯ、ＡＫＡケトン、（ＳＯ２）Ｎ、（ＣＯ）Ｃ、（ＣＯ）Ｎ、（ＣＯ）Ｏ、Ｃ−Ｎ［単結合］、Ｃ＝Ｎ［二重結合］、Ｃ−Ｏ、Ｎ−Ｏ、Ｎ−Ｎ［単結合］、またはＮ＝Ｎ［二重結合］であり得る、
化合物。
【請求項２２】
患者において心血管、コレステロールまたは脂質関連疾患を処置するための方法であって、処置を必要とする患者に、治療的有効量の請求項２１に記載の化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項２３】
患者において抗酸化活性を提供しつつＡｐｏＡ１の発現を誘導するための方法であって、該患者に、請求項２１に記載の化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項２４】
患者において血清コレステロールを減少させるための方法であって、該患者に、請求項２１に記載の化合物を投与する工程を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
(発明の分野)
本発明は、食品、医薬品、栄養補給食品への組み込みに適したフラボノイドおよびそれらの誘導体の合成および投与、ならびにこれらを必要とする個体を処置する方法の分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
心血管疾患は、高血圧、冠状動脈性心疾患、脳血管疾患、末梢血管疾患、心不全、リウマチ性心疾患、先天性心疾患および心筋症を含む、心臓および血管の障害の群を特定するのに用いられる総称である。心血管疾患の主な原因は、アテローム性動脈硬化症であり、脂質の蓄積が動脈壁上に沈着する。血中コレステロール値の上昇は、アテローム性動脈硬化症を発症する危険性と高度に相関し、従って、かなりの医学研究が、血中コレステロールを低下させる治療の開発に捧げられてきた。
【０００３】
アテローム性動脈硬化症は、脈管構造内層の正常機能が損なわれる障害である内皮機能不全に関連し、この内皮機能不全は、多数の他の心血管疾患（例えば、狭心症、心筋梗塞および脳血管疾患）の重要な危険因子であるのみならず、アテローム性動脈硬化症の病因に寄与する。内皮機能不全の顕著な特徴としては、酸化的血管ストレスおよび血管収縮の増大、ならびに血中コレステロール値の上昇が挙げられ、これらは全て、互いに促進して心血管疾患の進行を加速させる。疾患の進行を最も首尾よく妨害するために、心血管疾患の多重因果的危険因子に対する改善された治療ストラテジーが必要とされる。
【０００４】
（コレステロール代謝）
コレステロールは、その不溶性に起因して、リポタンパク質と称する脂質およびタンパク質の複合体によって血中で輸送される。低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）は、肝臓から体内の他の組織へのコレステロールの送達を担うと考えられ、従って、一般に「悪玉コレステロール」と呼ばれるようになってきた。ＬＤＬ粒子は、中密度リポタンパク質（ＩＤＬ）から変換され、このＩＤＬ自体は、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）からトリグリセリドを除去することによって生成される。ＶＬＤＬは、肝臓においてトリグリセリドおよびいくつかのアポリポタンパク質から合成され、次いで血流中に直接分泌される。
【０００５】
高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）は、コレステロールを肝外組織から肝臓（ここでコレステロールは異化され、次いでコレステロール逆輸送（ＲＣＴ）と呼ばれるプロセスで排出される）に輸送する主要なキャリア分子であると考えられ、これによって、ＨＤＬは「善玉コレステロール」のあだ名を得ている。この肝臓で生じる排出プロセスにおいて、コレステロールは胆汁酸に変換され、次いで体外に排泄される。
【０００６】
（高脂血症の現在の処置）
現在認可されているコレステロールを低下させる薬物は、正常なコレステロール代謝経路を多数の異なる点で攻撃することによって治療的利点をもたらす。胆汁酸結合樹脂（例えば、コレスチラミン）は、胆汁酸に吸着して体外に排泄され、その結果、胆汁酸へのコレステロールの変換を増大させ、結果的に血中コレステロールを低下させる。樹脂は、血清コレステロールを最大２０％低下させるにすぎず、胃腸の副作用を引き起こし、そしてこれらの樹脂は他の薬物に結合してその排泄を引き起こすため、他の薬物療法と同時に投与することができない。
【０００７】
ナイアシンは、リポタンパク質合成を阻害し、そしてＬＤＬを作製するのに必要なＶＬＤＬ粒子の生成を低下させる。ＨＤＬレベルを増大するのに必要な高濃度で投与されると、顔面紅潮のような重篤な副作用が生じる。
【０００８】
フィブラート（例えば、クロフィブラートおよびフェノフィブラート）は、核ホルモンレセプターのペルオキシソーム増殖因子活性化レセプター（ＰＰＡＲ）ファミリーに属する転写制御因子を活性化すると考えられる。これらの転写制御因子は、ＨＤＬの生成に関与する遺伝子をアップレギュレートし、そしてＬＤＬの生成に関与する遺伝子をダウンレギュレートする。フィブラートは、ＶＬＤＬ画分を減少させることによって血清トリグリセリドを減少させるため、高脂血症を処置するのに用いられる。しかし、フィブラートは、患者における脂質応答の不均質性のため、および冠状動脈性心疾患を発症した患者において観察される効力の欠如のため、高コレステロール血症治療法として米国で認可されていない。同様に、フィブラートの使用は、胃腸癌、胆嚢疾患および非冠動脈疾患死の発生率の増加のような、重篤な副作用を伴う。
【０００９】
スタチンは、ＨＭＧ  ＣｏＡレダクターゼインヒビターとしても公知であり、肝コレステロール合成における律速酵素を阻害することによって、ＶＬＤＬ、ＬＤＬ、およびＩＤＬコレステロールを減少させる。スタチンは、ＨＤＬレベルをごくわずかに増加させるのみであり、多数の肝および腎機能不全の副作用がこれらの薬物の使用に伴う。
【００１０】
エゼチミブは、心血管治療法の新しいクラスにおいて初めて認可された薬物であり、腸におけるコレステロール取り込みを阻害することによって機能する。エゼチミブは、ＬＤＬを低下させるが、ＨＤＬレベルをあまり増加させず、体内で合成されるコレステロールにも、血流中を循環しているかまたはアテローム斑中に存在するコレステロールにも対処しない。コレステロール吸収に影響を及ぼすことも見出されている他の化合物としては、胆汁酸結合剤コレスチラミンおよび植物ステロールが挙げられる。
【００１１】
これらの治療アプローチの開発にもかかわらず、ＨＤＬの血中レベルを増加することはほとんど達成されておらず、そして現在認可されている全ての薬物は、副作用および効力によってそれらの治療有効性が限定されている。結果的に、ＨＤＬを安全に増加させ、従って逆コレステロール輸送速度を増加させてコレステロールの血中レベルを低下させるために、治療アプローチを改善する必要性がある。
【００１２】
（内皮機能不全およびアテローム性動脈硬化症）
内皮機能障害は、アテローム性動脈硬化症の発生初期に生じ、実際には脂質が沈着する前に検出可能である。内皮機能不全は、血管収縮を症候的な特徴とし、高血圧（脳卒中および心筋梗塞のような他の心血管疾患の周知の危険因子である）を引き起こす。研究により、アテローム性動脈硬化症患者における内皮機能低下が、血管拡張を誘導するシグナル伝達分子である一酸化窒素（ＮＯ）のバイオアベイラビリティの低下に、原因として関連づけられている。
【００１３】
ＮＯのバイオアベイラビリティの低下はまた、アテローム性動脈硬化症の病因の一因となる他の機構を活性化する。例えば、ＮＯは、アテローム性動脈硬化症を特徴付ける脂質プラークの発生に必要な工程である、血小板凝集を阻害することが周知である。同様に、ＮＯは、白血球接着（アテローム性動脈硬化症の発症における主要な工程であり、そしておそらく高脂血症の患者における血管酸化的ストレスの増加による結果である）を阻害する、重要な内因性のメディエーターである。粘着白血球は、大量の活性酸素種を放出することによって酸化的ストレスをさらに増大させる。
【００１４】
血管酸化的ストレスの増大および高コレステロール血症は、ＮＯバイオアベイラビリティの低下を引き起こす誘因として、個々に同定されてきた。酸化の増加はまた、アテローム硬化性病変形成の別の誘導因子である、フリーラジカル媒介性の脂質過酸化も引き起こす。要約すれば、これらの３つの主要因子（高コレステロール血症、血管酸化的ストレスおよびＮＯのバイオアベイラビリティの低下）の各々が、他の因子の程度および病理学的重症度を増大させる、正のフィードバックループが存在すると考えられる。
【００１５】
（アテローム性動脈硬化症−内皮機能不全に対する治療法としての一酸化窒素）
ＮＯを供与することが知られている化合物を用いる治療様式は、アテローム性動脈硬化症−内皮機能不全サイクルを破壊するために臨床的に用いられてきたが、成功していない。ＮＯ供与薬によって放出される外因性ＮＯは、ＮＯのみならず強力な酸化剤である過酸化亜硝酸アニオンも生成し、酸化的ストレスをさらに増大させることが証明されてきた。このＮＯ供与体による過酸化亜硝酸の生成、およびそれに続く酸化的ストレスの増大によって引き起こされるＮＯに対する反応性のダウンレギュレーションは、有機硝酸エステルで慢性的に処置された患者において生じることが十分に実証された耐性の基礎をなし得る。ＮＯ供与薬はまた、ＮＯの遊離前にチオール中間体を経ることが必要であると考えられ、チオールのバイオアベイラビリティは、このような酸化的ストレスの状態において顕著に減少させられる。
【００１６】
（抗酸化剤／一酸化窒素併用療法）
ＮＯ供与薬によって引き起こされる血管酸化的ストレスへの悪化を軽減するために、抗酸化剤は、ＮＯ供与体との併用で患者に提供されてきた。いくつかの研究により、抗酸化剤とＮＯ供与体の併用は、高コレステロール血症の被験体において内皮依存性の血管拡張を有意に増大することが示されている。
【００１７】
しかし、これらの結果は、おそらく十分な細胞内投薬量を達成するのが困難であることに起因して、この治療アプローチで内皮依存性の血管拡張の改善が見出せなかったその他の者によって、およびＮＯ供与体処置がアテローム性動脈硬化症の発症のいかなる遅延とも、または活性アテローム性動脈硬化症を発症した患者の平均余命の増加とも、今までのところは相関していないという事実によって、疑問視されている。さらに、ＮＯ供与体もＮＯ供与体／抗酸化剤併用療法もどちらも、アテローム性動脈硬化症−内皮機能不全サイクルの高コレステロール血症の面に直接対処することはない。
【００１８】
ＮＯ供与剤および抗酸化剤と、アテローム性動脈硬化症の基礎となる高コレステロール血症を処置する従来型治療法との併用もまた、次善のアプローチである。なぜなら、現在認可されている薬物は、ＨＤＬの増大を有効に利用して体外にコレステロールを効率的に輸送しないためである。
【００１９】
しかし、好ましい抗酸化剤および／またはＮＯ供与体の併用は、抗酸化剤がＮＯの強力な酸化的副作用を最も有効に相殺するために、抗酸化剤およびＮＯ供与体が確実に体内において同じ位置にかつ同時に存在すると仮定され得る。異なる放出速度を有するいくつかの異なる薬物の組み合わせを用いてこの必要性を満たすことは困難であり、バイオアベイラビリティは、ＮＯが供与体分子から一旦放出されると、細胞環境下におけるＮＯの短い半減期によって悪化される可能性が高い。
【００２０】
（抗酸化剤としてのスチルベン、ポリフェノールおよびフラボノイド）
正常な細胞呼吸によって生成され得る活性酸素種（ＲＯＳ）は、体内における酸化的損傷の主要な原因である。ＲＯＳに対抗する最も有効な方法の１つは、ＲＯＳと結合し、従って細胞内の重要なタンパク質およびＤＮＡにＲＯＳが不適切に結合するのを防ぐ抗酸化化合物を提供することによって、これらの反応基を「一掃する」ことである。ＲＯＳを除去する能力のある非常に有効な抗酸化化合物は、少なくとも１つのフェノール環構造をしばしば含む。フェノール環は、ＲＯＳと共有結合を形成する反応種であり、これによってＲＯＳの強い酸化反応性を無効にする。スチルベン、ポリフェノールおよびフラボノイドは全て、少なくとも２つのフェノール環構造を含み、それによって抗酸化剤として潜在的に有効になる。
【００２１】
（レスベラトロル、他のスチルベンおよびポリフェノール、ならびにプロアポリポタンパク質Ａ１薬剤としてのフラボノイド）
スチルベン、ポリフェノールおよびフラボノイドはまた、それらの抗酸化活性に加えて、高コレステロール血症の処置に有用な活性も有する。例えば、１つの周知のスチルベンである、レスベラトロル（３，４’，５−トリヒドロキシトランススチルベン）（ある植物中に見出される天然に存在するポリフェノール）は、「フレンチパラドックス」と呼ばれる疫学的観察の基礎をなすことが示唆されている。このパラドックスは、フランス人集団では、匹敵する高脂肪食にもかかわらず北米人集団の心血管疾患の発生率の３分の１が罹患するという観察をいう。このフレンチパラドックスは、北米人集団によって消費される赤ワインの量と比較してフランス人集団によって消費される大量の赤ワインと相関している。レスベラトロルは、赤ブドウの皮の中に極めて豊富に存在し、従って赤ワイン中にかなりの量が見出されるが、白ワインまたは他のアルコール飲料中にはほとんど全く存在していない。
【００２２】
レスベラトロルが心血管疾患の発生率を低下させる機構は、依然として、いくつかの競合する仮説を含む多数の論議の的である。レスベラトロルは、強力な抗酸化剤であることが示されており、ＬＤＬ粒子のより低レベルの過酸化を生じ、引き続いてアテローム発生を阻害することが示唆される。レスベラトロルはまた、白血球接着および血小板凝集のインヒビターとして関与している。さらに、レスベラトロルは、ｐ２１およびｐ５３の活性レベルを調節するとされている能力に起因して、可能性のある抗癌療法として研究されている。
【００２３】
レスベラトロルは、抗炎症薬として同定されており、シクロオキシゲナーゼ−１酵素の阻害（特許文献１；非特許文献１；特許文献２を参照のこと）およびプロテインキナーゼ阻害（米国特許出願第００３０１７１４２９号）を含む機構が提唱されている。従って、レスベラトロルは、関節性障害、喘息性障害、乾癬性障害、胃腸障害、眼障害、肺炎症性障害、癌を処置するために、鎮痛薬として、解熱剤として、または血管疾患、中枢神経系障害ならびに細菌、真菌およびウイルス感染に関連する炎症の処置のために、治療的に用いられる可能性を有し得る。
【００２４】
レスベラトロルは、サーチュインを活性化させる化合物として最近記載され、ＳｉｒＴ１と直接相互作用してｐ５３のダウンレギュレーションを引き起こすことによって、寿命を延長することが示唆された。レスベラトロルはまた、アリール炭化水素レセプターをアンタゴナイズし、エストロゲンレセプターをアゴナイズすることも知られており、ＥＲＫ１／２経路の活性化によって、および転写制御因子ｅｇｒ−１の活性の増大によって、活性を仲介することが記載されている。
【００２５】
より最近では、本発明者らは、レスベラトロルが、ＡｐｏＡ−１遺伝子のプロモーター領域中のヌクレオチド配列である部位Ｓによって、推定的に仲介されるアポリポタンパク質Ａ１の転写を増大させる能力を有することを示した（ＰＣＴ／ＣＡ０３／０１２２０）。
【００２６】
部位Ｓ中に見出される配列ＡＧＣＣＣＣＣＧＣは、「Ｅｇｒ−１応答エレメント」コンセンサス配列として記載されている。このモチーフは、ヒトＡＰＯ  ＡＩプロモーターの−１９６から−１７４に及ぶヌクレオチド内に含まれる（非特許文献２）。任意の特定の理論にとらわれずに、部位Ｓ中に含まれることが見出されたこのＡＧＣＣＣＣＣＧＣエレメントは、この配列によってレスベラトロルがその活性を仲介すると提唱される配列であるが、これは他の潜在的に必須のエレメントを排除するものではない。
【００２７】
部位ＳまたはＡＧＣＣＣＣＣＧＣエレメントの任意の約８つの連続塩基を含むヌクレオチド配列は、レポーター遺伝子の発現を調節するために異種プロモーターに作動可能に連結されている場合、エンハンサーエレメントとしての機能を果たすと考えられている。
【００２８】
（スチルベン、フラボノイドおよび他のポリフェノールの治療的使用の欠点）
残念ながら、スチルベン（例えば、レスベラトロル）、および他のポリフェノール、ならびにフラボノイドの治療薬としての使用は、問題を含み得る。
【００２９】
消費者にとってレスベラトロルの最も豊富かつ入手可能な供給源である赤ワインは、多数の十分に実証されている過剰なアルコール消費の悪影響のために、日常的に多量に消費され得ない。すなわち、レスベラトロルの作用は、アルコールが存在しなければ、より良好であるかまたはより安全であり得る。
【００３０】
天然に合成されず、かつ試験のためにまだ記載されていないかまたは入手可能にされていない、潜在的に有益な性質を有する多くのスチルベン、ポリフェノールおよびフラボノイドが作製され得る。このような化合物は、実験室中で作製され、そしてインビトロおよびインビボアッセイで適切に試験されて、ヒト臨床研究で試験される前に有益な治療活性を実証しなければならない。
【００３１】
植物によってしばしば合成されるような、生物学的起源の多数のスチルベン、ポリフェノールおよびフラボノイドが知られている。これらの化合物の多くは、潜在的に有益な性質（例えば、それらの既知のインビトロ抗酸化能力、それらの推定抗癌効力および心血管疾患に対するそれらの明らかな薬効）について試験されている。いくつかのヒト研究がこのような化合物について実施されているが、これらの結果は今までのところは不明確であり、時折矛盾している。例えば、ヒト臨床研究の結果により、アテローム斑サイズのような主要な臨床的指標、または心臓発作のような心血管事象の減少に対する利点の明確な証拠が、まだ実証されていない。例えばウサギまたはラットを用いた動物研究の結果は、ヒト研究の結果と相関していない場合がある。例えば、ヒト研究において、ナリンゲニン（投与された柑橘類の絞り汁中に見出される多くの成分の一例のフラボノイドとして）の投与によりＨＤＬの増加が観察されたがＬＤＬまたはトリグリセリドには影響がないのに対して、ウサギに投与した場合、ナリンゲニンはＬＤＬを減少させるがＨＤＬには影響がないことが見出された。
【００３２】
さらに、心血管疾患の処置においてヒト治療に用いられるナリンゲニンのようなフラボノイド、またはレスベラトロルのようなスチルベン、または他のポリフェノールの適切な投薬量を記載した臨床研究は、現在までのところ存在しない。
【００３３】
（保護基を有する化合物は、より長い血清半減期、効力の改善、毒性の低下および治療結果の改善を受け得る）
必要とする個体に治療薬として投与された化合物は、代表的には排泄前に体内で種々の代謝産物に代謝される。このような代謝産物は、毒性、効力および血清中での残存期間の点で、親化合物としばしば異なる。多くの化合物について、その代謝産物は親化合物ほど有効ではなく、より毒性であり得る。
【００３４】
外因的に投与された治療化合物の代謝において、多数の異なる修飾（例えば、種々の化学的成分の付加または鍵となる基の除去）が起こり得る。インビボで起こる１つの代謝反応は、ヒドロキシル基の除去である。フラボノイド、スチルベン、および他のポリフェノール化合物のコア構造を有する化合物（これらの一酸化窒素供与誘導体が、本発明の化合物を含む）からのヒドロキシル基の除去は、コレステロール代謝に対してポジティブに作用するこれらの化合物の能力を有意に低下させ得る。なぜなら、前述のヒドロキシル基は、このような分子の活性部位の不可欠な部分であるためである。従って、ある機構がヒドロキシル基の保護に利用されてその代謝速度を低下させ、従ってこれらの化合物が体内に残存する時間を増加させる場合、本発明の化合物の投与の薬効を有利に改善する。
【００３５】
実験室化学反応に一般に使用される１つの保護機構は、より大きな分子の修飾されやすい不安定化学基に結合される保護基を使用して、この不安定基の修飾または損失を防ぐことである。保護基は後に除去されて、この分子全体の中の任意の共有結合へ変化することなく、元の分子を回復させ得る。類似の保護形態が、患者に投与されることを目的とする化合物に用いられ得、患者の体内において、活性分子を再構成する公知の反応が起こる可能性が高い。保護基が分子から放出される速度は、薬物が放出される速度に影響を及ぼすように制御され得る。本発明の目的は、体内での半減期が延長され、かつ／または排泄が延期される有効な化合物を提供することである。
【特許文献１】米国特許第６，５４１，０４５号明細書
【特許文献２】米国特許第第６，４１４，０３７号明細書
【非特許文献１】Ｊａｙａｔｉｌａｋｅら、「Ｊ  Ｎａｔ  Ｐｒｏｄ．」、１９９３年１０月、５６（１０）、１８０５〜１０
【非特許文献２】Ｋｉｌｂｏｕｒｎｅら、「ＪＢＣ」、１９９５年、２７０（１２）、７００４〜１０
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００３６】
（心血管治療法の改善の必要性が存在する）
前記を考慮して、血中コレステロールを安全にかつ有効に低下させ得ると同時に、内皮機能不全を減少させ、かつ血管酸化的ストレスを減少させ得る、改善された治療法および化合物の開発の必要性が存在することが明らかである。
【課題を解決するための手段】
【００３７】
（発明の要旨）
本発明の１つの局面は、フリーラジカル清掃性（ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ）抗酸化分子の放出と同時にかつ同じ場所に一酸化窒素を供与する能力を有する新規化合物の種類、およびそれらを用いて処置する方法を提供することである。これらの新規化合物は、ＡｐｏＡ１の発現を誘導する能力を同時に有し、それによってＨＤＬの血中レベルを高め、コレステロールの血中レベルを低下させる。さらに、これらの化合物は、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼを阻害し、ＰＰＡＲ活性を高め、ＡＣＡＴを阻害し、ＡＢＣＡ−１活性を高め、そしてＬＤＬおよびトリグリセリドの血中レベルを低下させる活性を含む、他の有益な活性を有する。これらの化合物の組み合わされた多変量効果は、内皮機能不全を減少させ、血管酸化的ストレスを減少させ、そして高脂血症を減少させるのに用いられ得、これによって、アテローム性動脈硬化症、高血圧、冠動脈疾患、脳血管疾患などのような心血管疾患を処置する。
【００３８】
この発明の種々の局面および原理に従い、下記に従って化合物が提供される。
【００３９】
以下の構造：
【００４０】
【化１１】
2007509842.tif 000002
を含むスチルベン化合物であって、ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ１０の少なくとも１つはニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【００４１】
【化１２】
2007509842.tif 000003
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含み、そして
ここで、Ｘは、単結合、二重結合または三重結合であり得る、スチルベン化合物。
【００４２】
以下の構造：
【００４３】
【化１３】
2007509842.tif 000004
を含むフラボノイド化合物であって、ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１３およびＲ１４は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ１０またはＲ１３またはＲ１４の少なくとも１つはニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【００４４】
【化１４】
2007509842.tif 000005
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含み；
Ｘは、Ｏ、ＣＲ１３またはＮＲ１３であり得；
Ｙは、ＣＯ［６員環構造を依然として維持しているケトン］、ＣＲ１４またはＮＲ１４であり得；そして
Ｚは、単結合または二重結合であり得る、フラボノイド化合物。
【００４５】
以下の構造：
【００４６】
【化１５】
2007509842.tif 000006
を含むイソフラボノイド化合物であって、ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１３およびＲ１４は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ１０またはＲ１３またはＲ１４の少なくとも１つはニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【００４７】
【化１６】
2007509842.tif 000007
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含み；
Ｘは、Ｏ、ＣＲ１３またはＮＲ１３であり得；
Ｙは、ＣＯ［６員環構造を依然として維持しているケトン］、ＣＲ１４またはＮＲ１４であり得；そして
Ｚは、単結合または二重結合であり得る、イソフラボノイド化合物。
【００４８】
以下の構造：
【００４９】
【化１７】
2007509842.tif 000008
を含むカルコン化合物であって、ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１３は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ１０またはＲ１３の少なくとも１つはニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【００５０】
【化１８】
2007509842.tif 000009
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含み；
Ｘは、単結合または二重結合であり得；
Ｙは、単結合または二重結合であり得；そして
Ｚは、ＣＯ［ケトン］、ＣＲ１３またはＮＲ１３であり得るが；
ただし、ＸおよびＹの両方が二重結合であるわけではなく、そしてＺがＣＯであればＹは二重結合ではない、カルコン化合物。
【００５１】
以下の構造：
【００５２】
【化１９】
2007509842.tif 000010
を含むポリフェノール化合物であって、ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ１０の少なくとも１つはニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【００５３】
【化２０】
2007509842.tif 000011
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含み、そして
Ｘは、Ｃ、Ｓ、（ＣＯ）、ＳＯ、ＡＫＡケトン、（ＳＯ２）Ｎ、（ＣＯ）Ｃ、（ＣＯ）Ｎ、（ＣＯ）Ｏ、Ｃ−Ｎ［単結合］、Ｃ＝Ｎ［二重結合］、Ｃ−Ｏ、Ｎ−Ｏ、Ｎ−Ｎ［単結合］、またはＮ＝Ｎ［二重結合］であり得る、ポリフェノール化合物。
【００５４】
さらに、処置を必要とする患者に、治療的有効量の任意の上記化合物を投与する工程を包含する、患者において心血管疾患、コレステロール関連疾患または脂質関連疾患を処置する方法が提供される。患者において抗酸化活性を提供しつつＡｐｏＡ１の発現を誘導するための別の好ましい処置方法は、任意の上記化合物をこの患者に投与する工程を包含する。患者において血清コレステロールを低下させるためのさらに他の好ましい本発明の方法は、任意の上記化合物をこの患者に投与する工程を包含する。
【００５５】
さらに、処置を必要とする患者に、治療的有効量の任意の上記化合物を投与する工程を包含する、患者においてアルツハイマー病、糖尿病、肥満、虚血性再潅流傷害、鬱血性心不全および関連疾患を処置または予防する方法が提供される。低血清レベルのＨＤＬは、アルツハイマー病のリスクの増大と関連する（Ｓｕｒｙａｄｅｖａｒａら、２００３  Ｊ．Ｇｅｒｏｎｔｏｌ  Ａ  Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．５８（９）：Ｍ８５９〜６１）。本発明の化合物は、ＰＰＡＲγ活性を調節することが見出され；ＰＰＡＲγ機能不全は、糖尿病、肥満、虚血性再潅流傷害、鬱血性心不全および関連疾患と関連する（Ｆｅｒｒｅら、２００４  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ５３  補遺１：Ｓ４３〜５０；Ｙｕｅ  ２００３  Ｄｒｕｇｓ  Ｔｏｄａｙ（Ｂａｒｃ）３９（１２）：９４９〜６０）。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５６】
（発明および最良の様式の詳細な説明）
本発明の原理および局面に従って、スチルベン、ポリフェノールおよびフラボノイドならびにそれらの誘導体のＮＯ供与アナログの使用に関して可能性のある作用機構を詳細に特徴づける記述とともに、心血管疾患を処置するための方法および化合物が提供される。可能性のある作用機構を理解することにより、治療的利点をさらに強化するさらに多くの誘導体およびアナログ（これらもまた、本発明の範囲内である）の開発の改善につながり得る。
【００５７】
心血管疾患の病因に影響を及ぼす多くの因子が存在することは明らかである。疾患の発症の３つの主要な面（すなわち、血管酸化的ストレスの増大、一酸化窒素のバイオアベイラビリティの低下および高コレステロール血症）を同時に処置するアプローチが、近代医療に欠如していることも明らかである。従って、本発明は、抗酸化活性、一酸化窒素放出活性、および逆コレステロール輸送を誘導する能力を単一の新規分子中に与えることによって、３つの因子全てに同時に対処する方法論を詳述する。本発明の化合物および処置方法は、一酸化窒素の放出の際に抗酸化能力および一酸化窒素供与が同時に生じるという事実によってさらに有効になり、従って特に好ましい。本発明は、本発明によって企図される化合物のコアを形成するスチルベン、他のポリフェノールおよびフラボノイドのほとんどの任意の部分に、または抗酸化性およびアポリポタンパク質Ａ１転写能力の誘導を保持するか、さもなければ逆コレステロール輸送を増大させるかもしくは血清コレステロールを低下させる活性を有するような化合物の任意の誘導体に、または実際に抗酸化能力および血清コレステロール低下能力の両方を含み、かつ本発明において提供される活性をさらに保持している任意の化合物に有利に結合される、任意のタイプのＮＯ供与部分を提供する。
【００５８】
本発明によって提供される化合物としては、患者に投与されると一酸化窒素を放出する能力がある結合部分を含む、レスベラトロル、他のスチルベン、他のポリフェノール、およびフラボノイドのアナログが挙げられる。このような化合物としては、レスベラトロル、他のスチルベン、他のポリフェノール、およびフラボノイドのアナログが挙げられるがこれらに限定されず、ここで、一酸化窒素供与部分は、有機ニトラート、アルコキシニトラート、ジアゼニウムジオレート、チオニトロキシなどの化学構造のクラスに属する。
【００５９】
本発明の化合物を改変させる正確な機構の理解は、本発明の実施を必要としない。本明細書中に開示される機構は、非限定的であることを意図し、本発明をより良く記述するためにのみ提供される。理論に制限されることはないが、レスベラトロルは、その分子構造（芳香環上に位置する少なくとも１つのヒドロキシル基を有する、少なくとも１つの芳香環構造からなる反応性かつ必須のコア）に起因して、前述の効果を生じると考えられる。天然に存在しているレスベラトロル自体は、具体的には２つの芳香環から構成され、一方の環の３位および５位に位置する２つのヒドロキシルおよび他方の環の４’位に位置する１つのヒドロキシルを含み、そしてこれらの２つの芳香環が２つの炭素原子（それらの原子間に二重結合を有する）によって結合される。少なくとも１つの芳香族環構造を含み、この環に位置する少なくとも１つのヒドロキシル基を有する化合物である、この一般クラスの他の化合物は、レスベラトロルについて記載されたと同じ能力を有し、そして同じ結果を生じると考えられる。
【００６０】
従って、スチルベン（２つの炭素原子によって連結される２つの芳香族環を含む）、他のポリフェノール（窒素、炭素、酸素および硫黄からなる群より独立して選択され、ケトン酸素のような側鎖に独立して置換されていても置換されていなくてもよい、１つ、２つ、または３つの原子によって連結された、２つ以上の、好ましくは２つの芳香族環を含むポリフェノールのような）、ならびにフラボノイド（例えば限定されないが、天然に存在するフラボノイド、例えば限定されないが、ナリンゲニン、ケルセチン、ピセアタンノール、ブテイン、フィセチン、イソリキリチゲニン、およびヘスペリチン）は全て、レスベラトロルについて記載された性質と類似の性質を有する化合物である。結果として、任意のこれらの化合物は、疾患、障害または状態（特に、限定されないが、コレステロール、心血管疾患、高血圧、酸化的損傷、異脂肪血症、アポリポタンパク質Ａ１もしくはアポＢ調節に関連する疾患、障害または状態）の予防または処置に利用される場合、あるいはＨＭＧ  ＣｏＡレダクターゼを阻害するか、ＰＰＡＲ活性を高めるか、ＡＣＡＴを阻害するか、ＡＢＣＡ−１活性を高めるか、ＨＤＬを増加させるか、またはＬＤＬもしくはトリグリセリドを減少させるような、コレステロール代謝の他の面を改変または調節する際に、レスベラトロルと機能的に交換可能であるとみなされ得ることが見出されている。一酸化窒素供与部分が結合されていないフラボノイドは、以前に、強力な血清コレステロール低下活性を有するとして、例えば、米国特許第５，８７７，２０８号、同第６，４５５，５７７号、同第５，７６３，４１４号、同第５，７９２，４６１号、同第６，１６５，９８４号、および同第６，１３３，２４１号に教示されている。
【００６１】
同様に、このクラスの任意のスチルベン、他のポリフェノールおよびフラボノイドは、部位Ｓからの（ＡＧＣＣＣＣＣＧＣエレメントからの）転写を調節するのに利用される場合、あるいは白血球接着もしくは血小板凝集を阻害するか、またはＣＯＸ−１を阻害するのに利用される場合、レスベラトロルと機能的に交換可能であるとみなされ得る。このことは、これらの化合物の全てが、これら化合物の各々の機能または能力について、あるいはインビボでの毒性または効力について、あるいはバイオアベイラビリティについての活性のレベルの点で同一であることを意味するわけではない。これらの化合物は、当業者によって容易に実施され且つ過度の実験を必要としない簡単な試験を通じて、一部の化合物が、他の化合物と比較して改善された能力または機能性を提供し、従って他の化合物よりも治療薬として好ましいことを示す。
【００６２】
同様に、本発明によって改良された基本化合物中に見出されるようなフェノール性ヒドロキシル基は、排泄を促進するグルコロン酸抱合反応および硫酸化反応を受けやすいことが知られている。フェノール性ヒドロキシル基を別の化学基（例えば、硝酸エステル（有機ニトラートまたはＯＮＯ２とも呼ばれる）基、アルコキシニトロオキシ、あるいは逆エステルニトロオキシ（ニトロオキシ基（ｎｉｔｒｏｏｘｙ  ｇｒｏｕｐ）はまたニトロオキシ基（ｎｉｔｒｏ  ｏｘｙ  ｇｒｏｕｐ）とも呼ばれる））でブロックすることによる、これらの反応に対する保護は、体内における分子の半減期をさらに延長し、排泄を延期する。
【００６３】
一例として、３つの推定上重要でありかつ治療的に活性なヒドロキシル基を含むレスベラトロルは、硝酸エステル（ニトラート、ニトロオキシ基、またはＯＮＯ２としても公知であり、時折ニトロキシと呼ばれるが、ＮＯ２と混同すべきではない）アルコキシニトロオキシ基、あるいは体内で経時的にヒドロキシル基に置換されて活性化合物レスベラトロルを再構成する逆エステルニトロオキシ基で、これらのヒドロキシル基を置換することによって保護され得る。一酸化窒素供与基は一定期間にわたって１つずつヒドロキシル基に置換され、１つまたは２つの一酸化窒素供与基を含むレスベラトロル分子は依然として部分的に活性であるため、レスベラトロル活性の体内での実効半減期は増大する。このようなストラテジーにより、ニトラート形態のレスベラトロルは、親のヒドロキシル化形態のレスベラトロルと比較して、より低い用量の使用がさらに可能になり、その結果、患者においてより低い副作用を生じる。明らかに、このようなアプローチはまた、本発明において企図される他のスチルベン、他のポリフェノールおよびフラボノイドにも有効である。なぜなら、これらはまた、分子の活性部位の不可欠な部分を形成し得る１つ以上のヒドロキシル基を含むことが企図されるためである。
【００６４】
本発明は、上記スチルベン、ポリフェノールおよびフラボノイド以外の化合物のニトロオキシ誘導体の合成、組成および処置方法を提供し、ニトロオキシ誘導体が合成されるこの化合物は、芳香族環または芳香族複素環の１つ以上のヒドロキシル基を含み、血清コレステロールレベルを調節することが知られている。芳香族環または芳香族複素環の１つ以上のヒドロキシル基を含み、血清コレステロールレベルを調節することが知られている化合物のクラスの一例としては、スタチンとしても知られるＨＭＧ  ＣｏＡレダクターゼインヒビターが挙げられる。そのニトロオキシ誘導体が本発明において提供される、市販のスタチンとしては、アトルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチン、セリバスタチン、およびロスバスタチンが挙げられる。芳香族環または芳香族複素環の１つ以上のヒドロキシル基を含み、血清コレステロールレベルを調節することが知られているという規定内にある２つの他の化合物は、エゼチミブおよびナイアシンである。従って、エゼチミブおよびナイアシンのニトロオキシ誘導体はまた、本発明において提供される。
【００６５】
（スチルベン、ポリフェノール、フラボノイド、スタチンおよびエゼチミブの一酸化窒素供与誘導体の合成）
有機ニトラート（ニトロオキシ、硝酸エステル、ＯＮＯ２とも呼ばれ、時折「ニトロキシ」と呼ばれるが、ＮＯ２と混同すべきではない）基は、Ｈａｋｉｍｅｌａｈｉの方法（ここで、ニトロオキシ基は、親分子上に存在するヒドロキシル基と置換される）のような公知の方法を用いて化合物に付加され得る（Ｈａｋｉｍｅｌａｈｉら、１９８４．Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ．６７：９０６〜９１５）。
【００６６】
アルコキシニトロキシ基は、例えば、米国特許第５，８６１，４２６号に教示される方法を用いて、化合物に付加され得る。ジアゼニウムジオレートは、例えば、米国特許第４，９５４，５２６号、同第５，０３９，７０５号、同第５，１５５，１３７号、同第５，４０５，９１９号および同第６，２３２，３３６号（これらの全てが、本明細書中に参考として完全に援用される）に教示される方法を含む種々の方法によって、合成され得る。
【００６７】
一酸化窒素供与部分は、スチルベン（例えば、レスベラトロル）、ポリフェノール、またはフラボノイド（例えば、ナリンゲニン）、または本発明中で記載され、提供されるような他の化合物（例えば、スタチンのクラスのメンバー）、あるいは共有結合またはイオン結合を介したそれらの誘導体またはアナログに有利に結合され得る。好ましくは、１つまたは複数の一酸化窒素供与部分は、１つ以上の共有結合によって結合される。一酸化窒素供与部分は、この分子の任意の部分に有利に結合され得る。１つの実施形態において、１つ以上のヒドロキシル基の代わりに一酸化窒素供与部分に置換する。好ましい実施形態において、これらの置換は、ヒドロキシル基の代わりに有機ニトラート基への置換である。別の好ましい実施形態において、これらの置換は、ヒドロキシル基の代わりにエステルまたは逆エステルに結合される有機ニトラート基への置換である。別の好ましい実施形態において、一酸化窒素供与部分は、スチルベン（例えば、レスベラトロル）、フェノール、またはフラボノイド（例えば、ナリンゲニン）、または本発明中で記載され、提供されるような他の化合物（例えば、スタチンのクラスの任意のメンバー）のヒドロキシル基の全て、あるいはそれらのアナログまたは誘導体のヒドロキシル基を置換した。
【００６８】
本発明の化合物の全てについて、フッ化物イオン、塩化物イオン、臭化物イオン、ＣＦ３基、ＣＣｌ３基、ＣＢｒ３、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐した１〜１８個の炭素原子のアルキル鎖、または必要に応じて置換され、必要に応じて分岐した１〜１８個の炭素原子のアルコキシ鎖によるヒドロキシル基の置換もまた企図され、提供される。なぜなら、親化合物のこのような変更は一般的であり、作用機構を変更することなく薬物の薬効を改善することが知られ、かつ当業者によって容易に達成されるためである。
【００６９】
本発明の化合物の全てについて、これらの化合物のアセチル化誘導体もまた企図され、提供される。なぜなら、親化合物のこのような変更は一般的であり、作用機構を変更することなく薬物の薬効を改善することが知られ、かつ当業者によって容易に達成されるためである。アセチル化誘導体としては、エステル、逆エステル、一酸化窒素供与部分（ニトロオキシ基が挙げられるが、これに限定されない）が結合したエステル、および一酸化窒素供与部分（ニトロオキシ基が挙げられるが、これに限定されない）が結合した逆エステルが挙げられる。
【００７０】
本発明の化合物の全てについて、これらの化合物のリン酸化誘導体もまた企図され、提供される。なぜなら、親化合物のこのような変更は一般的であり、作用機構を変更することなく薬物の薬効を改善することが知られ、かつ当業者によって容易に達成されるためである。
【００７１】
本発明によって企図される化合物のグルコロン酸抱合誘導体もまた、本明細書において企図される。なぜなら、グルコロン酸抱合は、スチルベン、他のポリフェノールおよびフラボノイドの代謝の一部として体内で天然に生じるプロセスであるためである。一旦患者に提供されると、本発明の化合物の多くは体内で修飾され、従って、グルコロン酸抱合形態で体内に存在する。従って、投与前の本発明の化合物へのグルコロン酸の抱合は、インビボ研究によって決定されるように、これらの化合物の機能または治療的有用性を妨げない。結果として、付加的な糖部分が結合した本発明の化合物は、機能的に親化合物に匹敵すると考えられ、従って本発明において提供される。本発明によって企図される任意のスチルベン、ポリフェノールまたはフラボノイド誘導体化合物のグルコロン酸抱合は、例えば、Ｏｔａｋｅの方法（Ｏｔａｋｅら、２００２．Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓｐ．３０（５）：５７６〜５８１）におけるようにヒト肝ミクロソームを用いて達成され得る。
【００７２】
同様に、本発明によって企図される化合物の硫酸化誘導体もまた、本明細書において企図される。なぜなら、硫酸化は、スチルベン、他のポリフェノールおよびフラボノイドの代謝の一部として体内で天然に生じるプロセスであるためである。一旦患者に提供されると、本発明の化合物のいくつかは体内で修飾され、従って、硫酸化形態で体内に存在する。従って、硫酸化は、インビボ研究によって決定されるように、これらの化合物の機能または治療的有用性を妨げない。結果として、硫酸化反応を受けた本発明の化合物は、機能的に親化合物に匹敵すると考えられ、従って本発明において提供される。本発明によって企図される任意のスチルベン、ポリフェノールまたはフラボノイド誘導体化合物の硫酸化は、例えば、Ｖａｒｉｎのイオンエア抽出法（Ｖａｒｉｎら、１９８７．Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１６１：１７６〜１８０）を用いて達成され得る。
【００７３】
本明細書中で記載した化合物の塩（薬学的処方物に好ましい塩を含む）もまた、本発明において提供される。
【００７４】
（本発明によって企図される化合物）
本発明において提供される化合物を、明らかにする目的で、例示的な化学構造で示すが、これは本発明の範囲を下記に列挙した化合物に限定するためではない。用語「ニトロオキシ」が用いられる場合、その意味するものは、硝酸エステル基−ＯＮＯ２である。用語「ヒドロキシル」または「ヒドロキシ」が用いられる場合、その意味するものは、−ＯＨ基である。用語「逆エステル」が用いられる場合、その意味するものは、以下の基：
【００７５】
【化２１】
2007509842.tif 000012
であり、ここで、Ｏ−結合はフラボノイド、スチルベンまたはポリフェノール構造の親化合物への結合であり、
そしてＲはＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、そしてＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得る。
【００７６】
用語「逆エステルニトロオキシ」が用いられる場合、その意味するものは、以下の基：
【００７７】
【化２２】
2007509842.tif 000013
であり、ここで、Ｏ−結合はフラボノイド、スチルベンまたはポリフェノール構造の親化合物への結合であり、
そして、Ｒは、Ｃ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして１つ以上のＯＮＯ２を含む。
【００７８】
本発明は、以下の一般的なスチルベン構造：
【００７９】
【化２３】
2007509842.tif 000014
を有する化合物を提供し、
この構造は、さらに以下の構造に細分され得る：
【００８０】
【化２４】
2007509842.tif 000015
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ１０の少なくとも１つはニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【００８１】
【化２５】
2007509842.tif 000016
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含む。
【００８２】
本発明はまた、以下の一般構造の化合物も提供する：
【００８３】
【化２６】
2007509842.tif 000017
【００８４】
【化２７】
2007509842.tif 000018
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ１０の少なくとも１つはニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【００８５】
【化２８】
2007509842.tif 000019
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含み、
そして、ＸおよびＹは、それぞれ独立して、Ｃ、Ｎ、Ｏであり得、ただし、ＸまたはＹのいずれかがＣである場合、他方はＣではない。
【００８６】
本発明はまた、以下の一般構造の化合物も提供する：
【００８７】
【化２９】
2007509842.tif 000020
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ１０の少なくとも１つはニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【００８８】
【化３０】
2007509842.tif 000021
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含む。
【００８９】
本発明はまた、以下の一般的なポリフェノール構造：
【００９０】
【化３１】
2007509842.tif 000022
を有する化合物も提供し、
この構造は、さらに以下の構造に細分され得る：
【００９１】
【化３２】
2007509842.tif 000023
【００９２】
【化３３】
2007509842.tif 000024
ここで、
ＸはＣまたはＳであり、
そしてＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ１０の少なくとも１つはニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【００９３】
【化３４】
2007509842.tif 000025
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含む。
【００９４】
本発明はまた、以下の一般的なフラボノイド構造：
【００９５】
【化３５】
2007509842.tif 000026
を有する化合物も提供し、
この構造は、さらに以下の構造に細分され得る：
【００９６】
【化３６】
2007509842.tif 000027
【００９７】
【化３７】
2007509842.tif 000028
本発明はまた、以下の一般的なイソフラボノイド構造：
【００９８】
【化３８】
2007509842.tif 000029
を有する化合物も提供し、
この構造は、さらに以下の構造に細分され得る：
【００９９】
【化３９】
2007509842.tif 000030
【０１００】
【化４０】
2007509842.tif 000031
【０１０１】
【化４１】
2007509842.tif 000032
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１５、およびＲ１６は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１３、Ｒ１４、ＯＲ１３、ＯＲ１４、ＯＣＯＲ１３、ＯＣＯＲ１４、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ１２またはＲ１５またはＲ１６の少なくとも１つは、ニトロオキシ、Ｒ１４、ＯＲ１４、またはＯＣＯＲ１４であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【０１０２】
【化４２】
2007509842.tif 000033
を意味し、
そしてＲはＲ１３またはＲ１４であり、
ここで、Ｒ１３はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１４はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含み、
Ｘは、Ｏ、ＣＲ１５またはＮＲ１５であり得；
Ｙは、ＣＯ［６員環構造を依然として維持しているケトン］、ＣＲ１６またはＮＲ１６であり得；そして
Ｚは、単結合または二重結合であり得る。
【０１０３】
本発明はまた、以下の一般的なカルコン構造：
【０１０４】
【化４３】
2007509842.tif 000034
を有する化合物も提供し、
このうちいくつかの構造は、以下の構造によって表される：
【０１０５】
【化４４】
2007509842.tif 000035
【０１０６】
【化４５】
2007509842.tif 000036
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、およびＲ１１は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１３、Ｒ１２、ＯＲ１３、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１３、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ１１の少なくとも１つは、ニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【０１０７】
【化４６】
2007509842.tif 000037
を意味し、
そしてＲはＲ１２またはＲ１３であり、
ここで、Ｒ１３はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含み；そして
ここで、
Ｘは、単結合または二重結合であり得；
Ｙは、単結合または二重結合であり得；そして
Ｚは、ＣＯ［ケトン］、ＣＲ１１またはＮＲ１１であり得る；
本発明において提供されるコレステロール低下化合物の他のＮＯ供与誘導体としては、以下が挙げられる：
本発明はまた、以下の一般式の化合物も提供する：
【０１０８】
【化４７】
2007509842.tif 000038
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ４の少なくとも１つは、ニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【０１０９】
【化４８】
2007509842.tif 000039
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含む。
【０１１０】
本発明はまた、以下の化合物も提供する：
【０１１１】
【化４９】
2007509842.tif 000040
ここで、
Ｒ１は、ニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【０１１２】
【化５０】
2007509842.tif 000041
を意味し、
そしてＲはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含む。
【０１１３】
本発明はまた、以下の化合物も提供する：
【０１１４】
【化５１】
2007509842.tif 000042
ここで、
Ｒ１は、ニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【０１１５】
【化５２】
2007509842.tif 000043
を意味し、
そしてＲはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含む。
【０１１６】
本発明はまた、以下の一般式の化合物も提供する：
【０１１７】
【化５３】
2007509842.tif 000044
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ３の少なくとも１つは、ニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【０１１８】
【化５４】
2007509842.tif 000045
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含む。
【０１１９】
本発明はまた、以下の一般式の化合物も提供する：
【０１２０】
【化５５】
2007509842.tif 000046
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ３の少なくとも１つは、ニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【０１２１】
【化５６】
2007509842.tif 000047
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含む。
【０１２２】
本発明はまた、以下の一般式の化合物も提供する：
【０１２３】
【化５７】
2007509842.tif 000048
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ３の少なくとも１つは、ニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【０１２４】
【化５８】
2007509842.tif 000049
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含む。
【０１２５】
本発明はまた、以下の一般式の化合物も提供する：
【０１２６】
【化５９】
2007509842.tif 000050
ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ３の少なくとも１つは、ニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【０１２７】
【化６０】
2007509842.tif 000051
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含む。
【０１２８】
本発明はまた、以下の一般式の化合物も提供する：
【０１２９】
【化６１】
2007509842.tif 000052
ここで、
Ｒ１、Ｒ２は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル［ＯＨ］、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、臭化物（Ｂｒ）、ヨウ化物（Ｉ）、ニトロオキシ［ＯＮＯ２］、メトキシ［ＯＣＨ３］、エトキシ［ＯＣＨ２ＣＨ３］、フッ化物［Ｆ］、塩化物［Ｃｌ］、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ホスフェート、Ｒ１１、Ｒ１２、ＯＲ１１、ＯＲ１２、ＯＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１２、Ｏ−サルフェート［硫酸共役体］、またはＯ−グルコロニデート［グルコロン（ＡＫＡグルクロン）酸共役体］であり得、ただし、Ｒ１〜Ｒ２の少なくとも１つは、ニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【０１３０】
【化６２】
2007509842.tif 000053
を意味し、
そしてＲはＲ１１またはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１１はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換されかつ必要に応じて分岐し、かつＳ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、そして
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含む。
【０１３１】
本発明はまた、以下の化合物も提供する：
【０１３２】
【化６３】
2007509842.tif 000054
ここで、
Ｒ１は、ニトロオキシ、Ｒ１２、ＯＲ１２、またはＯＣＯＲ１２であり；そして
ここで、ＯＣＯＲは
【０１３３】
【化６４】
2007509842.tif 000055
を意味し、
そしてＲはＲ１２であり、
ここで、Ｒ１２はＣ１−１８、アリール、ヘテロアリールまたはそれらの誘導体であって、この誘導体は、必要に応じて置換され、必要に応じて分岐し、Ｓ、ＮまたはＯによって置換された１つ以上のＣ原子を有し得、かつ１つ以上のＯＮＯ２を含む。
【０１３４】
（スチルベン、ポリフェノールおよびフラボノイドのＮＯ供与誘導体の合成方法）
スチルベン（例えば、レスベラトロル）、ポリフェノール、またはフラボノイド（例えば、ナリンゲニン）、あるいは他の抗酸化剤（血清コレステロールを低下させるかまたは逆コレステロール輸送を活性化するかまたはＨＤＬを増加させる化合物）の一酸化窒素供与アナログまたは誘導体を合成するための多数の方法が存在することは、当業者に容易に明らかである。公知の方法が存在するにもかかわらず、このような化合物は、これまでに記載または合成されていない。好ましくは、このような化合物は、スチルベン（例えば、レスベラトロル）のアナログまたは誘導体、ポリフェノールのアナログまたは誘導体、またはフラボノイド（例えば、ナリンゲニン）のアナログまたは誘導体、あるいは他の抗酸化剤のアナログまたは誘導体（一酸化窒素供与部分に結合された、血清コレステロールを低下させるかまたは逆コレステロール輸送を活性化するかまたはＨＤＬを増加させる化合物）である。最も好ましくは、このような化合物は、スチルベン（例えば、レスベラトロル）、ポリフェノール、またはフラボノイド（例えば、ナリンゲニン）のアナログまたは誘導体、あるいは他の抗酸化剤のアナログまたは誘導体（１つ以上のＯＮＯ２基（硝酸エステル、有機ニトラート、またはニトロオキシ基とも呼ばれる）で親化合物のヒドロキシル基を置換した、血清コレステロールを低下させるかまたは逆コレステロール輸送を活性化するかまたはＨＤＬを増加させる化合物）である。
【０１３５】
本発明によって提供される化合物の例は、天然に存在しているレスベラトロルに存在する３つのヒドロキシル基の代わりに有機ニトラート基に置換されたレスベラトロルである。この化合物は、３，４’，５トリニトロオキシトランススチルベン、または三硝酸レスベラトロル、またはＩＵＰＡＣ命名法を使用して、１，３−ビス−ニトロオキシ−５−［２−（４−ニトロオキシ−フェニル）−ビニル）−ベンゼンと命名される。本発明によって提供されるこのような化合物の別の例は、天然に存在しているナリンゲニンに存在する３つのヒドロキシル基の代わりに有機ニトラート基に置換されたナリンゲニンである。この化合物は、三硝酸ナリンゲニン、またはＩＵＰＡＣ命名法を使用して、５，７−ビス−ニトロオキシ−２−（４−ニトロオキシ−フェニル）−クロマン−４−オンと命名される。本発明によって提供される化合物の別の例は、ナリンゲニンの逆エステルニトロオキシアナログであり、３つのヒドロキシルが置換されたものは、５−ニトロオキシ−ペンタン酸４−［５，７−ビス−（５−ニトロオキシ−ペンタノイルオキシ）−４−オキソ−クロマン−２−イル］−フェニルエステルである。本明細書中に明記されている化合物に限定されるわけではないが、さらに多くの例が、本発明の実施例の項に提供される。
【０１３６】
この反応で用いられるトランス−レスベラトロル原料物質は、Ｂｉｏ−Ｓｔａｔ  Ｌｉｍｉｔｅｄ（Ｓｔｏｃｋｐｏｒｔ，Ｕ．Ｋ．）またはＳｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．，ＵＳＡ）から商業的に入手可能であり、Ｇｏｌｄｂｅｒｇら（１９９５）Ａｍ．Ｊ．Ｅｎｏｌ．Ｖｉｔｉｃ．４６（２）：１５９〜１６５の手順を用いてワインから単離される。あるいは、トランス−レスベラトロルは、米国特許第６，０４８，９０３号に教示されるようにＴｏｐｐｏの方法に従って、またはＭｏｒｅｎｏ−ＭａｎａｓおよびＰｌｅｉｘａｔｓの方法からＷａｔｅｒｈｏｕｓｅによって改変されたＷｉｔｔｉｇ反応によって適切に置換されたフェノールから合成され得る。
【０１３７】
合成反応の材料として用いられるナリンゲニンは、多数の市販の供給源から容易に入手可能であるか、あるいは、過度の実験を必要とせずに柑橘類の絞り汁のような天然源から周知の方法を使用して単離可能な、天然に存在する化合物である。
【０１３８】
（投与）
上記の状態の処置のために、これらの化合物がそれ自体で用いられ得るが、より好ましくは、受容可能なキャリアまたは賦形剤とともに薬学的に受容可能な処方物の形態で存在する。これらの処方物としては、経口、直腸、局所、口腔内および非経口（例えば、皮下、筋肉内、皮内、または静脈内）投与に適した処方物が挙げられるが、任意の所定の場合における最適な投与形態は、処置される状態の程度および重症度ならびに用いられる特定の化合物の性質に依存する。
【０１３９】
経口投与に適した処方物は、カプセル、カシェ剤、トローチ剤、または錠剤のような不連続単位（各々が、所定量の化合物を、粉末または顆粒として；水性または非水性液体中の溶液または懸濁液として；あるいは水中油型または油中水型エマルジョンとして含む）で提示され得る。示されるように、このような処方物は、活性化合物とキャリアまたは賦形剤（１つ以上の副成分を構成し得る）を結合させる工程を包含する、任意の適切な製薬方法によって調製され得る。このキャリアは、処方物の他の成分と相溶性があるという意味で受容可能でなければならず、かつレシピエントにとって有毒であってはならない。このキャリアは、固体であっても液体であっても、または両方であってもよく、好ましくは、０．０５重量％〜９５重量％の活性化合物を含み得る単位用量処方物（例えば、錠剤）として、本化合物とともに処方される。他の化合物を含む、他の薬理学的に活性な物質もまた示され得る。本発明の処方物は、これらの化合物を混合する工程から本質的に成る任意の周知の製薬技術によって調製され得る。
【０１４０】
固体組成物について、従来の無毒性固体キャリアとしては、例えば、薬学的等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルク、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウムなどが挙げられる。薬理学的に投与可能な液体組成物は、例えば、本明細書中に記載されるような活性化合物および任意の薬学的アジュバントを、賦形剤（例えば、水、生理食塩水、水性デキストロース、グリセロール、エタノールなど）中に溶解、分散などし、それによって溶液または懸濁液を形成することによって調製され得る。一般に、適切な処方物は、この活性化合物と液体もしくは微細固体キャリアまたはその両方とを均一にかつ完全に混合し、次いで、必要な場合、その生成物を成形（ｓｈａｐｅ）することによって、有利に調製され得る。例えば、錠剤は、本化合物の粉末または顆粒を、必要に応じて１つ以上の副成分とともに圧縮または成形（ｍｏｌｄ）することによって、調製され得る。圧縮された錠剤は、適切な機械中で易流動性形態の化合物（例えば、必要に応じて結合剤、潤滑剤、不活性な希釈剤および／または界面活性剤／分散剤と混合された粉末または顆粒）を圧縮することによって調製され得る。成形錠剤は、不活性な液体希釈剤で湿潤した粉末状化合物を適切な機械中で成形することによって作製され得る。
【０１４１】
口腔内（舌下）投与に適した処方物としては、化合物を香味基剤（通常、スクロースおよびアカシアまたはトラガカント）中に含むトローチ剤、ならびに本化合物を不活性基剤（例えば、ゼラチンおよびグリセリンまたはスクロースおよびアカシア）中に含む香錠が挙げられる。
【０１４２】
非経口投与に適した本発明の処方物は、本化合物の滅菌水性調製物を含み、これらの化合物は、対象とするレシピエントの血液とほぼ等張である。これらの調製物は、静脈内に投与されるが、投与はまた、皮下、筋肉内、または皮内注射によっても達成され得る。このような調製物は、本化合物を水と混合し、得られた溶液を滅菌しそして血液と等張にすることによって、便利に調製され得る。本発明による注射用組成物は、一般に０．１〜５％ｗ／ｗの活性化合物を含む。
【０１４３】
直腸投与に適した処方物は、単位用量坐薬として提供される。これらは、本化合物を１つ以上の従来の固体キャリア（例えば、カカオバター）と混合し、次いで得られた混合物を成形することによって、調製され得る。
【０１４４】
皮膚への局所投与に適した処方物は、好ましくは軟膏、クリーム剤、ローション、ペースト、ゲル、スプレー、エアロゾル、または油の形態をとる。用いられ得るキャリアおよび賦形剤としては、ワセリン、ラノリン、ポリエチレングリコール、アルコール、およびそれらの２つ以上の組み合わせが挙げられる。この活性化合物は、一般に、組成物の０．１〜１５％ｗ／ｗの濃度（例えば、０．５〜２％）で存在する。
【０１４５】
投与される活性化合物の量は、当然ながら、処置される被験体、被験体の体重、投与様式および処方する医師の判断に依存する。本発明の方法において、投与スケジュールは、一般に、１μｇ〜１０００ｍｇの認知された投薬量でのカプセル化化合物の毎日の投与、または１日に２回の投与を含む。カプセル化によって作用部位への接近が容易になり、かつ活性成分の同時投与が可能になって、理論上は相乗効果が生じる。標準投薬レジメンに従って、医師は、最適投薬量を容易に決定し、且つこのような投薬を達成するために投与を容易に変更し得る。
【実施例】
【０１４６】
以下の実施例は、本発明の理解を助けるために示されるものであり、本明細書中に記載され且つ特許請求される発明を具体的に限定すると解釈されるべきではない。処方の変更または実験計画のわずかな変更を含む、現在公知であるかまたは後に開発される等価の化合物の置き換えを含む、当業者の範囲内である本発明のこのような変法は、本明細書中に組み込まれる発明の範囲内にあるとみなされるべきである。
【０１４７】
本明細書中で提供される全ての実施例について、他に断りのない限り、用語「本化合物（ｔｈｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）」または「本化合物（ｔｈｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」とは、本発明において提供される任意の化合物をいう。
【０１４８】
（実施例１：１，３−ビス−ニトロオキシ−５−［２−（４−ニトロオキシ−フェニル）−ビニル）−ベンゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５−［（Ｅ）−２−（４−ヒドロキシ−フェニル）−ビニル］−ベンゼン−１，３−ジオール（別名：レスベラトロル；３，４’，５トリヒドロキシトランススチルベン）の溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物（１，３−ビス−ニトロオキシ−５−［（Ｅ）−２−（４−ニトロオキシ−フェニル）−ビニル）−ベンゼン）および部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１４９】
（実施例２：四硝酸ピセアタンノールの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの１，２−ベンゼンジオール，４−（２−（３，５−ジヒドロキシフェニル）エテニル）−（Ｅ）−（別名：ピセアタンノール）の溶液に、２５℃にて、４ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物（四硝酸ピセアタンノール）および部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１５０】
（実施例３：四硝酸ブテインの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの３，４，２’，４’−テトラヒドロキシカルコン（別名：ブテイン）の溶液に、２５℃にて、４ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である四硝酸ブテインおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１５１】
（実施例４：三硝酸イソリキリチゲニンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの４，２’，４’−トリヒドロキシカルコン（別名：イソリキリチゲニン）の溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である三硝酸イソリキリチゲニンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１５２】
（実施例５：四硝酸フィセチンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの３，７，３’，４’−テトラヒドロキシフラボン（別名：フィセチン）の溶液に、２５℃にて、４ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である四硝酸フィセチンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１５３】
（実施例６：五硝酸ケルセチンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの３，５，７，３’，４’−ペンタヒドロキシフラボン（別名：ケルセチン）の溶液に、２５℃にて、５ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である五硝酸ケルセチンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１５４】
（実施例７：Ｎ−（３，５−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−Ｎ’−（４−ニトロオキシ−フェニル）−ヒドラジンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５−［Ｎ’−（４−ヒドロキシ−フェニル）−ヒドラジノ］−ベンゼン−１，３−ジオールの溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物であるＮ−（３，５−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−Ｎ’−（４−ニトロオキシ−フェニル）−ヒドラジンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１５５】
（実施例８：１，３−ビス−ニトロオキシ−５−（４−ニトロオキシ−フェニルジスルファニル）−ベンゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５−（４−ヒドロキシ−フェニルジスルファニル）−ベンゼン−１，３−ジオールの溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である１，３−ビス−ニトロオキシ−５−（４−ニトロオキシ−フェニルジスルファニル）−ベンゼンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１５６】
（実施例９：１，３−ビス−ニトロオキシ−５−（４−ニトロオキシ−フェニルペルオキシ）−ベンゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５−（４−ヒドロキシ−フェニルペルオキシ）−ベンゼン−１，３−ジオールの溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である１，３−ビス−ニトロオキシ−５−（４−ニトロオキシ−フェニルペルオキシ）−ベンゼンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１５７】
（実施例１０：１，３−ビス−ニトロオキシ−５−（４−ニトロオキシ−フェニルスルファニルメチル）−ベンゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５−（４−ヒドロキシ−フェニルスルファニルメチル）−ベンゼン−１，３−ジオールの溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である１，３−ビス−ニトロオキシ−５−（４−ニトロオキシ−フェニルスルファニルメチル）−ベンゼンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１５８】
（実施例１１：Ｎ−（３，５−ビス−ニトロオキシ−フェニル−Ｏ−（４−ニトロオキシ−フェニル）−ヒドロキシルアミンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５−（４−ヒドロキシ−フェノキシアミノ）−ベンゼン−１，３−ジオールの溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物であるＮ−（３，５−ビス−ニトロオキシ−フェニル−Ｏ−（４−ニトロオキシ−フェニル）−ヒドロキシルアミンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１５９】
（実施例１２：ベンジル−（４−ニトロオキシ−フェニル）−アミンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの４−ベンジルアミノ−フェノールの溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物であるベンジル−（４−ニトロオキシ−フェニル）−アミンを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１６０】
（実施例１３：２−（サリチリデンアミノ）フェノールジニトラートの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの２−（サリチリデンアミノ）フェノールの溶液に、２５℃にて、２ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である２−（サリチリデンアミノ）フェノールジニトラートおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、いずれかのヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１６１】
（実施例１４：（２，４−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−（２−ニトロオキシ−フェニル）−ジアゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの４−（２−ヒドロキシ−フェニラゾ）−ベンゼン−１，３−ジオール（別名：１，３−ベンゼンジオール，４−（（２−ヒドロキシフェニル）アゾ）−）の溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である２，４−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−（２−ニトロオキシ−フェニル）−ジアゼンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１６２】
（実施例１５：ビス−（２，２’−ニトロオキシ−フェニル）−ジアゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌのビス−（２，２’−ヒドロキシ−フェニル）−ジアゼン（別名：１−ヒドロキシ−２−（２−ヒドロキシフェニラゾ）ベンゼン）の溶液に、２５℃にて、２ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物であるビス−（２，２’−ニトロオキシ−フェニル）−ジアゼンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、いずれかのヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１６３】
（実施例１６：Ｎ−（３−ニトロオキシ−フェニル）−ベンゼンスルホンアミドの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌのＮ−（３−ヒドロキシ−フェニル）−ベンゼンスルホンアミド（別名：Ｎ−（３−ヒドロキシフェニル）ベンゼンスルホンアミド）の溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物であるＮ−（３−ニトロオキシ−フェニル）−ベンゼンスルホンアミドを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１６４】
（実施例１７：Ｎ−（４−ニトロオキシ−フェニル）−ベンゼンスルホンアミの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌのＮ−（４−ヒドロキシ−フェニル）−ベンゼンスルホンアミド（別名：Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）ベンゼンスルホンアミド）の溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物であるＮ−（４−ニトロオキシ−フェニル）−ベンゼンスルホンアミドを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１６５】
（実施例１８：３，３’，４，５’−テトラニトロオキシビベンジルの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの３，３’，４，５’−テトラヒドロキシビベンジルの溶液に、２５℃にて、４ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である３，３’，４，５’−テトラニトロオキシビベンジルおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１６６】
（実施例１９：１−ベンジルオキシ−２−ニトロオキシ−ベンゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの２−ベンジルオキシ−フェノールの溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物である１−ベンジルオキシ−２−ニトロオキシ−ベンゼンを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１６７】
（実施例２０：安息香酸３−ニトロオキシ−フェニルエステルの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの安息香酸３−ヒドロキシ−フェニルエステル（別名：レゾルシノールモノベンゾエート）の溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物である安息香酸３−ニトロオキシ−フェニルエステルを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１６８】
（実施例２１：２−ニトロオキシ−安息香酸フェニルエステルの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの２−ヒドロキシ−安息香酸フェニルエステル（別名：サリチル酸フェニル）の溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物である２−ニトロオキシ−安息香酸フェニルエステルを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１６９】
（実施例２２：２−ニトロオキシ−Ｎ−（４−ニトロオキシ−フェニル）−ベンズアミドの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの２−ヒドロキシ−Ｎ−（４−ヒドロキシ−フェニル）−ベンズアミド（別名：オサルミド）の溶液に、２５℃にて、２ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である２−ニトロオキシ−Ｎ−（４−ニトロオキシ−フェニル）−ベンズアミドおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、いずれかのヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１７０】
（実施例２３：２−ニトロオキシ−Ｎ−（３−ニトロオキシ−フェニル）−ベンズアミドの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの２−ヒドロキシ−Ｎ−（３−ヒドロキシ−フェニル）−ベンズアミドの溶液に、２５℃にて、２ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である２−ニトロオキシ−Ｎ−（３−ニトロオキシ−フェニル）−ベンズアミドおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、いずれかのヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１７１】
（実施例２４：３，４，５−トリス−ニトロオキシ−Ｎ−フェニル−ベンズアミドの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの３，４，５−トリヒドロキシ−Ｎ−（（Ｚ）−１−メチレン−ブタ−２−エニル）−ベンズアミド（別名：ガラニリド）の溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である３，４，５−トリス−ニトロオキシ−Ｎ−フェニル−ベンズアミドおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１７２】
（実施例２５：１−（２，４−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−２−フェニル−エタノンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの１−（２，４−ヒドロキシ−フェニル）−２−フェニル−エタノン（別名：ベンジル２，４−ジヒドロキシフェニルケトン）の溶液に、２５℃にて、２ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である１−（２，４−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−２−フェニル−エタノンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、いずれかのヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１７３】
（実施例２６：１，２−ビス−ニトロオキシ−３−フェノキシ−ベンゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの３−フェノキシ−ベンゼン−１，２−ジオールの溶液に、２５℃にて、２ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である１，２−ビス−ニトロオキシ−３−フェノキシ−ベンゼンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、いずれかのヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１７４】
（実施例２７：１，２−ビス−ニトロオキシ−３−（２−ニトロオキシ−フェノキシ）−ベンゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの３−（２−ヒドロキシ−フェノキシ）−ベンゼン−１，２−ジオールの溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である１，２−ビス−ニトロオキシ−３−（２−ニトロオキシ−フェノキシ）−ベンゼンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１７５】
（実施例２８：１−ニトロオキシ−２−フェノキシ−ベンゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの２−フェノキシ−フェノールの溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物である１−ニトロオキシ−２−フェノキシ−ベンゼンを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１７６】
（実施例２９：５，５スルフィニルビスレゾルシノールテトラニトラートの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５，５スルフィニルビスレゾルシノールの溶液に、２５℃にて、４ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である５，５−スルフィニルビスレゾルシノールテトラニトラートおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１７７】
（実施例３０：１，３−ベンゼンジオール４，４’−チオビステトラニトラートの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの１，３−ベンゼンジオール４，４’−チオビスの溶液に、２５℃にて、４ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である１，３−ベンゼンジオール４，４’−チオビステトラニトラートおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１７８】
（実施例３１：フェノール２，２’チオビスジニトラートの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌのフェノール２，２’チオビスの溶液に、２５℃にて、２ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物であるフェノール２，２’チオビスジニトラートおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、いずれかのヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１７９】
（実施例３２：１−ベンジル−２，４−ビス−ニトロオキシ−ベンゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの４−ベンジル−ベンゼン−１，３−ジオール（別名：１，３ベンゼンジオール３−フェニルメチル）の溶液に、２５℃にて、２ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である１−ベンジル−２，４−ビス−ニトロオキシ−ベンゼンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、いずれかのヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１８０】
（実施例３３：２−ベンジル−１，４−ビス−ニトロオキシ−ベンゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの２−ベンジル−ベンゼン−１，４−ジオール（別名：１，４ベンゼンジオール４−フェニルメチル）の溶液に、２５℃にて、２ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である２−ベンジル−１，４−ビス−ニトロオキシ−ベンゼンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、いずれかのヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１８１】
（実施例３４：（２，３，４−トリス−ニトロオキシ−フェニル）−（３，４，５−トリス−ニトロオキシ−フェニル）−メタノンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの（２，３，４−トリヒドロオキシ−フェニル）−（３，４，５−トリヒドロキシ−フェニル）−メタノン（別名：ＥＸＩＦＯＮＥ）の溶液に、２５℃にて、６ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である（２，３，４−トリス−ニトロオキシ−フェニル）−（３，４，５−トリス−ニトロオキシ−フェニル）−メタノンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１８２】
（実施例３５：（２−ニトロオキシ−フェニル）−フェニル−アミンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの２−フェニルアミノ−フェノールの溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物である（２−ニトロオキシ−フェニル）−フェニル−アミンを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１８３】
（実施例３６：２−（３，５−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−６−ニトロオキシ−４Ｈ−クロメンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５−（６−ヒドロキシ−４Ｈ−クロメン−２−イル）−ベンゼン−１，３−ジオールの溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である２−（３，５−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−６−ニトロオキシ−４Ｈ−クロメンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１８４】
（実施例３７：２−（３，５−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−６−ニトロオキシ−１，４−ジヒドロ−ナフタレンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５−（６−ヒドロキシ−１，４−ジヒドロ−ナフタレン−２−イル−）−ベンゼン−１，３−ジオールの溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である２−（３，５−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−６−ニトロオキシ−１，４−ジヒドロ−ナフタレンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１８５】
（実施例３８：２−（３，５−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−６−ニトロオキシ−１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５−（６−ヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イル）−ベンゼン−１，３−ジオールの溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である２−（３，５−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−６−ニトロオキシ−１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１８６】
（実施例３９：５，７−ビス−ニトロオキシ−２−（４−ニトロオキシ−フェニル）−クロマン−４−オンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５，７−ジヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−フェニル）−クロマン−４−オン（別名：ナリンゲニン）の溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である５，７−ビス−ニトロオキシ−２−（４−ニトロオキシ−フェニル）−クロマン−４−オンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１８７】
（実施例４０：５，７−ビス−ニトロオキシ−２−（４−ニトロオキシ−フェニル）−クロメン−４−オンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５，７−ジヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−フェニル）−クロメン−４−オン（別名：アピゲニン）の溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である５，７−ビス−ニトロオキシ−２−（４−ニトロオキシ−フェニル）−クロメン−４−オンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１８８】
（実施例４１：５，７−ビス−ニトロオキシ−３−（４−ニトロオキシ−フェニル）−クロメン−４−オンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５，７−ジヒドロキシ−３−（４−ヒドロキシ−フェニル）−クロメン−４−オン（別名：ゲニステイン）の溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である５，７−ビス−ニトロオキシ−３−（４−ニトロオキシ−フェニル）−クロメン−４−オンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１８９】
（実施例４２：２−（３，４−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−３，４，５，７−テトラキス−ニトロオキシ−クロマンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの２−（３，４−ジヒドロキシ−フェニル）−クロマン−３，４，５，７−テトラオール（別名：ロイコシアニドール）の溶液に、２５℃にて、６ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である２−（３，４−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−３，４，５，７−テトラキス−ニトロオキシ−クロマンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１９０】
（実施例４３：６−ヒドロキシ−７−ニトロオキシ−３−（４−ニトロオキシ−フェニル）−クロマン−４−オンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの６，７−ジヒドロキシ−３−（４−ヒドロキシ−フェニル）−クロマン−４−オン（別名：６，７，４’−トリヒドロキシイソフラボン）の溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である６−ヒドロキシ−７−ニトロオキシ−３−（４−ニトロオキシ−フェニル）−クロマン−４−オンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１９１】
（実施例４４：Ｑｕｒａｃｏｌ  Ｂテトラニトラートの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌのＱｕｒａｃｏｌ  Ｂの溶液に、２５℃にて、４ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物であるＱｕｒａｃｏｌ  Ｂテトラニトラートおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１９２】
（実施例４５：１−（４−ヒドロキシ−２，６−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−３−（４−ニトロオキシ−フェニル）−プロパン−１−オンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの３−（４−ヒドロキシ−フェニル）−１−（２，４，６−トリヒドロキシ−フェニル）−プロパン−１−オン（別名：フロレチン）の溶液に、２５℃にて、４ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である１−（４−ヒドロキシ−２，６−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−３−（４−ニトロオキシ−フェニル）−プロパン−１−オンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１９３】
（実施例４６：１−ニトロオキシ−４−（（Ｚ）−３−フェニル−アリル）−ベンゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの４−（（Ｚ）−３−フェニル−アリル）−フェノール（別名：４（−３−フェニル−２−プロペニル）−，（Ｅ）−フェノール）の溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物である１−ニトロオキシ−４−（（Ｚ）−３−フェニル−アリル）−ベンゼンを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１９４】
（実施例４７：１−ニトロオキシ−４−（（Ｅ）−３−フェニル−プロペニル）−ベンゼンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの４−（（Ｅ）−３−フェニル−プロペニル）−フェノールの溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物である１−ニトロオキシ−４−（（Ｅ）−３−フェニル−プロペニル）−ベンゼンを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１９５】
（実施例４８：５，６，７−トリス−ニトロオキシ−２−フェニル−クロメン−４−オンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５，６，７−トリヒドロキシ−２−フェニル−クロメン−４−オン（別名：バイカレイン）の溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である５，６，７−トリス−ニトロオキシ−２−フェニル−クロメン−４−オンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１９６】
（実施例４９：四硝酸ルチンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの２−（３，４−ジヒドロキシ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３−［（２Ｓ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−メチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ］−クロメン−４−オン（別名：ルチン）の溶液に、２５℃にて、４ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である２−（３，４−ビス−ニトロオキシ−フェニル）−５，７−ビス−ニトロオキシ−３−［（２Ｓ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−メチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ］−クロメン−４−オン（四硝酸ルチン）および部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１９７】
（実施例５０：５−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）−７−（２−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−４−クロマノンジニトラートの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの５−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）−７−（２−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−４−クロマノン（別名：ナリンギン）の溶液に、２５℃にて、２ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である５−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）−７−（２−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−４−クロマノンジニトラートおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、いずれかのヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１９８】
（実施例５１：（Ｅ）−（３Ｓ，５Ｒ）−７−［３−（４−フルオロ−フェニル）−１−イソプロピル−１Ｈ−インドール−２−イル］−１，３，５−トリス−ニトロオキシ−ヘプタ−６−エン−１−オンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの（Ｅ）−（３Ｓ，５Ｒ）−７−［３−（４−フルオロ−フェニル）−１−イソプロピル−１Ｈ−インドール−２−イル］−３，５−ジヒドロキシ−ヘプタ−６−エン酸（別名：フルバスタチン；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）の溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である（Ｅ）−（３Ｓ，５Ｒ）−７−［３−（４−フルオロ−フェニル）−１−イソプロピル−１Ｈ−インドール−２−イル］−１，３，５−トリス−ニトロオキシ−ヘプタ−６−エン−１−オンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０１９９】
（実施例５２：５−（４−フルオロ−フェニル）−２−イソプロピル−４−フェニル−１−（（３Ｒ，５Ｒ）−３，５，７−トリス−ニトロオキシ−７−オキソ−ヘプチル）−１Ｈ−ピロール−１−イル］−３−カルボン酸フェニルアミドの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの（３Ｒ，５Ｒ）−７−［２−（４−フルオロ−フェニル）−５−イソプロピル−３−フェニル−４−フェニルカルバモイル−ピロール−１−イル］−３，５−ジヒドロキシ−ヘプタン酸（別名：アトルバスタチン；Ｐａｒｋｅ−Ｄａｖｉｓ）の溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である５−（４−フルオロ−フェニル）−２−イソプロピル−４−フェニル−１−（（３Ｒ，５Ｒ）−３，５，７−トリス−ニトロオキシ−７−オキソ−ヘプチル）−１Ｈ−ピロール−１−イル］−３−カルボン酸フェニルアミドおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２００】
（実施例５３：（Ｅ）−（３Ｒ，５Ｓ）−７−［４−（４−フルオロ−フェニル）−２，６−ジイソプロピル−５−メトキシメチル−ピリジン−３−イル］−１，３，５−トリス−ニトロオキシ−ヘプタ−６−エン−１−オンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの（Ｅ）−（３Ｒ，５Ｓ）−７−［４−（４−フルオロ−フェニル）−２，６−ジイソプロピル−５−メトキシメチル−ピリジン−３−イル］−３，５−ジヒドロキシ−ヘプタ−６−エン酸（別名：セリバスタチン；Ｂａｙｅｒ）の溶液に、２５℃にて、３ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である（Ｅ）−（３Ｒ，５Ｓ）−７−［４−（４−フルオロ−フェニル）−２，６−ジイソプロピル−５−メトキシメチル−ピリジン−３−イル］−１，３，５−トリス−ニトロオキシ−ヘプタ−６−エン−１−オンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２０１】
（実施例５４：（Ｓ）−２−メチル−酪酸（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，８Ｓ，８ａＲ）−７−メチル−３−ニトロオキシ−８−（（４Ｒ，６Ｒ）−３，５，７−トリス−ニトロオキシ−７−オキソ−ヘプチル）−１，２，３，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−ナフタレン−１−イルエステルの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの（２Ｒ，４Ｒ）−３，５−ジヒドロキシ−７−［（１Ｓ，２Ｓ，６Ｓ，８Ｓ，８ａＲ）−６−ヒドロキシ−２−メチル−８−（（Ｓ）−２−メチル−ブチリルオキシ）−１，２，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−ナフタレン−１−イル］−ヘプタン酸（別名：プラバスタチン；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）の溶液に、２５℃にて、４ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である（Ｓ）−２−メチル−酪酸（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，８Ｓ，８ａＲ）−７−メチル−３−ニトロオキシ−８−（（４Ｒ，６Ｒ）−３，５，７−トリス−ニトロオキシ−７−オキソ−ヘプチル）−１，２，３，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−ナフタレン−１−イルエステルおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、任意のヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２０２】
（実施例５５：２，２−ジメチル−酪酸（１Ｓ，３Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，８ａＲ）−３，７−ジメチル−８−［２−（（２Ｒ，４Ｒ）−４−ニトロオキシ−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−エチル］−１，２，３，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−ナフタレン−１−イルエステルの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの２，２−ジメチル−酪酸（１Ｓ，３Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，８ａＲ）−８−［２−（（２Ｒ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−エチル］−３，７−ジメチル−１，２，３，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−ナフタレン−１−イルエステル（別名：シンバスタチン；Ｍｅｒｃｋ）の溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物である２，２−ジメチル−酪酸（１Ｓ，３Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，８ａＲ）−３，７−ジメチル−８−［２−（（２Ｒ，４Ｒ）−４−ニトロオキシ−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−エチル］−１，２，３，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−ナフタレン−１−イルエステルを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２０３】
（実施例５６：（Ｓ）−２−メチル−酪酸（１Ｓ，３Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，８ａＲ）−３，７−ジメチル−８−［２−（（２Ｒ，４Ｒ）−４−ニトロオキシ−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−エチル］−１，２，３，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−ナフタレン−１−イルエステルの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの（Ｓ）−２−メチル−酪酸（１Ｓ，３Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，８ａＲ）−８−［２−（（２Ｒ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−エチル］−３，７−ジメチル−１，２，３，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−ナフタレン−１−イルエステル（別名：ロバスタチン；Ｍｅｒｃｋ）の溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物である（Ｓ）−２−メチル−酪酸（１Ｓ，３Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，８ａＲ）−３，７−ジメチル−８−［２−（（２Ｒ，４Ｒ）−４−ニトロオキシ−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−エチル］−１，２，３，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−ナフタレン−１−イルエステルを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２０４】
（実施例５７：Ｎ−［４−（４−フルオロ−フェニル）−６−イソプロピル−５−（（Ｅ）−（３Ｒ，５Ｒ）−３，５，７−トリス−ニトロオキシ−７−オキソ−ヘプタ−１−エニル）−ピリミジン−２−イル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの（Ｅ）−（３Ｒ，５Ｒ）−７−［４−（４−フルオロ−フェニル）−６−イソプロピル−２−（メタンスルホニル−メチル−アミノ）−ピリミジン−５−イル］−３，５−ジヒドロキシ−ヘプタ−６−エン酸（別名：ロスバスタチン；Ａｓｔｒａ−Ｚｅｎｅｃａ）の溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物であるＮ−［４−（４−フルオロ−フェニル）−６−イソプロピル−５−（（Ｅ）−（３Ｒ，５Ｒ）−３，５，７−トリス−ニトロオキシ−７−オキソ−ヘプタ−１−エニル）−ピリミジン−２−イル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２０５】
（実施例５８：ニトロオキシ−ピリジン−３−イル−メタノンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌのニコチン酸（別名：ナイアシン）の溶液に、２５℃にて、１ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。ニトロ化生成物であるニトロオキシ−ピリジン−３−イル−メタノンを、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２０６】
（実施例５９：（Ｓ）−１−（４−フルオロ−フェニル）−３−［（Ｓ）−３−（４−フルオロ−フェニル）−３−ニトロオキシ−プロピル］−４−（４−ニトロオキシ−フェニル）−アゼチジン−２−オンの調製）
５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の、１ｍｍｏｌの（Ｓ）−１−（４−フルオロ−フェニル）−３［（Ｓ）−３−（４−フルオロ−フェニル）−３−ヒドロキシ−プロピル］−４−（４−ヒドロキシ−フェニル）−アゼチジン−２−オン（別名：エゼチミブ；Ｍｅｒｃｋ）の溶液に、２５℃にて、２ｍｍｏｌのＳＯＣｌ（ＮＯ３）またはＳＯ（ＮＯ３）２を添加する。１時間後、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）を添加し、この溶液を水で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートする。完全にニトロ化された生成物である（Ｓ）−１−（４−フルオロ−フェニル）−３−［（Ｓ）−３−（４−フルオロ−フェニル）−３−ニトロオキシ−プロピル］−４−（４−ニトロオキシ−フェニル）−アゼチジン−２−オンおよび部分的にニトロ化された生成物（ここで、いずれかのヒドロキシル基が、独立してＯＮＯ２基に置換される）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２０７】
（実施例６０：本発明の化合物をグルコロン酸抱合するための方法）
本実施例は、本発明のグルコロン酸抱合された化合物を調製する方法を記載する。この特定の実施例において、最終容量５００μＬの、１０ｍＭのＭｇＣｌ２を含む５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．８）中の、実施例１のように調製したジニトロ化バージョンのレスベラトロルである３，４’−ニトロオキシ−５−ヒドロキシレスベラトロル（５０〜１０００μＭ）、および１０μＬのヒト腸ミクロソーム、２５μＬの結腸ミクロソームまたは１０μＬの肝臓ミクロソーム（それぞれ、２００、４００、２００μｇのタンパク質）、２０μＬの組換えＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（４００μｇのタンパク質）を、３７℃で５分間プレインキュベートする。反応を、１ｍＭの５’−ジホスホグルクロン酸の添加によって開始する。これらの反応混合物を、３７℃で６０分間インキュベートする。これらのサンプルを氷上で冷却し、ｏａｓｉｓ  Ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ−新油性  Ｂａｌａｎｃｅ  １ｃｃ  Ｃ１８抽出カートリッジ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）を使用する固相抽出に供す。これらのカートリッジを１ｍＬのメタノールで洗浄し、そして１ｍＬの水で平衡化する。０．５ｍＬのサンプルをロードした後、これらのカートリッジを５％メタノールで洗浄し、そして２ｍＬの１００％メタノールで溶出する。このメタノール溶出物をＮ２ガス下で４０℃にて乾燥し、そしてこのサンプルを、ＨＰＬＣ分析のために２５０μＬの移動相中に再び融解する。
【０２０８】
（実施例６１：本発明の化合物を硫酸化するための方法）
本実施例は、本発明の硫酸化化合物を調製する方法を記載する。この特定の実施例において、実施例１のように調製したレスベラトロル，３，４’−ニトロオキシ−５−ヒドロキシレスベラトロルのジニトロ化バージョンを、前述のイオン対抽出方法（Ｖａｒｉｎら１９８７、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１６１：１７６〜１８０）を用いて、スルホトランスフェラーゼ酵素によって硫酸化する。代表的な反応混合物は、総容量１００μＬの、８ｍＭジチオスレイトールおよび０．０６２５％ウシ血清アルブミンを含む３３ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）中に、０．１〜２００μＭの３，４’−ニトロオキシ−５−ヒドロキシレスベラトロル、１μＭの［３５Ｓ］ＰＡＰＳ、および２．５μＬのプールされたヒト肝臓サイトゾル（５０μｇのタンパク質）、２．５μＬのヒト空腸サイトゾル（３０μｇ）、Ｃａｃｏ−２サイトゾル（２２５μｇ）または０．２５μＬの組換えスルホトランスフェラーゼを含む。これらのサンプルを３７℃で３０分間インキュベートし、これらの反応を、１０μＬの２．５％酢酸、２０μＬの０．１μＭ硫酸水素テトラブチルアンモニウムおよび５００μＬの酢酸エチルの添加によって終結させる。混合および遠心分離を経た後、この４００μＬの酢酸エチル抽出物を、生分解性計数シンチラント（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）の添加後に、液体シンチレーション計数に供する。
【０２０９】
（実施例６２：ＡＣＡＴ阻害の決定）
ＡＣＡＴのインヒビターとしての本発明の化合物の活性は、公知の方法（例えば、米国特許第６，１６５，９８４号に教示され、以下に要約される方法）によって決定され得る。
【０２１０】
まず、ラットを断頭によって屠殺し、それらの肝臓を切除する。１ｇの各肝臓を、５ｍＬの均質化培地（０．１ＭのＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ７．４）、０．１ｍＭのＥＤＴＡおよび１０ｍＭのβ−メルカプトエタノール）中でホモジナイズする。このホモジネートを３，０００×ｇで１０分間、４℃で遠心分離し、得られた上清を１５，０００×ｇで１５分間、４℃で遠心分離して、上清を得る。この上清を超遠心管（Ｂｅｃｋｍａｎ）の中に入れ、１００，０００×ｇで１時間、４℃で遠心分離して、ミクロソームのペレットを得、これらのペレットを、次に３ｍＬの均質化培地中に懸濁し、１００，０００×ｇで１時間、４℃で遠心分離する。得られたペレットを、１ｍＬの均質化培地中に懸濁する。得られた懸濁液中のタンパク質の濃度をローリー法によって決定し、次いで４〜８ｍｇ／ｍＬに調整する。得られた懸濁液を、超低温フリーザー（Ｂｉｏｆｒｅｅｚｅｒ、Ｆｏｒｍａ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．）中で保存する。
【０２１１】
アセトン中の１ｍｇ／ｍＬコレステロール溶液６．６７μＬを、アセトン中の１０％  Ｔｒｉｔｏｎ  ＷＲ−１３３９（Ｓｉｇｍａ  Ｃｏ．）６μＬと混合し、次いで、アセトンを、窒素ガスを用いてエバポレーションによってこの混合物から除去する。得られた混合物に蒸留水を添加して、コレステロールの濃度を３０ｍｇ／ｍＬに調整する。
【０２１２】
得られたコレステロール水溶液１０μＬに、１０μＬの１Ｍ  ＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ７．４）、５μＬの０．６ＭＭウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、１０μＬの（工程１）で得られたミクロソーム溶液および５５μＬの蒸留水を添加する（合計９０μＬ）。この混合物を、水浴中で３７℃にて３０分間プレインキュベートする。
【０２１３】
１０μＬの（１−１４Ｃ）オレオイル−ＣｏＡ溶液（０．０５μＣｉ、最終濃度：１０μＭ）を、このプレインキュベートした混合物に添加し、得られた混合物を、水浴中で３７℃にて３０分間インキュベートする。この混合物に、５００μＬのイソプロパノール：ヘプタン混合物（４：１（ｖ／ｖ））３００μＬのヘプタンおよび２００μＬの０．１Ｍ  ＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ７．４）を添加し、そしてこの混合物をボルテックスを用いて激しく混合し、次いで室温で２分間静置する。
【０２１４】
得られた上清２００μＬをシンチレーションボトルの中に入れ、これに４ｍＬのシンチレーション液（Ｌｕｍａｃ）を添加する。この混合物を、液体シンチレーションカウンターを用いて、放射能についてアッセイする。ＡＣＡＴ活性を、タンパク質１ｍｇ当たり１分間に合成されるオレイン酸コレステリルのピコモルとして算出する（ｐｍｏｌ／分／ｍｇタンパク質）。本発明の化合物を投与したラット群で観測されるＡＣＡＴ活性は、コントロール群のＡＣＡＴ活性よりも低い。
【０２１５】
（実施例６３：ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの阻害の決定）
本発明の化合物によるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの阻害能力は、公知の方法（例えば、米国特許第５，８７７，２０８号に教示される方法）を用いて決定され得る。この方法を以下に要約する。
【０２１６】
ラットを断頭によって屠殺し、それらの肝臓を切除し、直ちに氷冷の均質化培地（５０ｍＭのＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ７．０）、０．２Ｍスクロース、２ｍＭジチオスレイトール（ＤＴＴ））中に置く。これらの肝臓を、均質化培地（２ｍＬ培地／肝臓１ｇ）中で、Ｗａｒｉｎｇブレンダーを用いて１５秒間ホモジナイズする（Ｐｏｔｔｅｒ−Ｅｌｖｅｈｊｅｍ型ガラスホモジナイザー中で、電動テフロン（登録商標）乳棒を用いて３ストローク）。このホモジネートを１５，０００×ｇで１０分間遠心分離し、得られた上清を１００，０００×ｇで７５分間遠心分離して、ミクロソームのペレットを得、これらのペレットを、次に５０ｍＭ  ＥＤＴＡを含む均質化培地中に再懸濁し、１００，０００×ｇで６０分間遠心分離する。このミクロソームを含む上清を、酵素源として使用する。
【０２１７】
ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの活性は、下記の通り、Ｓｈａｐｉｒｏらの方法（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ，３７０，３６９〜３７７（１９７４））に従って、放射標識した１４Ｃ  ＨＭＧ−ＣｏＡを使用することによって決定される。
【０２１８】
（工程１）で得られたミクロソームを含む上清中の酵素を、３７℃で３０分間活性化させる。反応チューブに、２０μＬのＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼアッセイ緩衝液（０．２５Ｍ  ＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ７．０）、８．７５ｍＭ  ＥＤＴＡ、２５ｍＭ  ＤＴＴ、０．４５Ｍ  ＫＣｌおよび０．２５ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ）、５μＬの５０ｍＭ  ＮＡＤＰＨ、５μＬの放射標識した１４Ｃ  ＨＭＧ−−ＣｏＡ（０．０５μＣｉ／チューブ、最終濃度１２０μＭ）、および１０μＬの活性化ミクロソーム酵素（０．０３〜０．０４ｍｇ）を添加し、この混合物を３７℃で３０分間インキュベートする。この混合物に１０μＬの６Ｍ  ＨＣｌを添加することによって反応を終結させ、この混合物を３７℃で１５分間インキュベートして、生成物を完全にラクトン化させる。沈殿を、１０，０００×ｇで１分間遠心分離することによって除去し、そしてこの上清を、Ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  ６０Ｇ  ＴＬＣプレート（Ａｌｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗａｒｋ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）にアプライし、次いで、ベンゼン：アセトン（１：１，ｖ／ｖ）で展開する。適切な領域を、使い捨てカバーガラスを用いて削り取り、１４５０  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ液体シンチレーションカウンター（Ｗａｌｌａｃｏｙ，フィンランド）を用いて放射能をアッセイする。酵素活性を、タンパク質１ｍｇ当たり１分間に合成されるメバロン酸のピコモルとして算出する（ｐｍｏｌ／分／ｍｇタンパク質）。コントロールラットは、比較的高いＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ活性を示すが、本発明の化合物を給餌したラットで観測されるＨＭＧ−ＣｏＡ活性は、コントロール群の活性よりも低い。
【０２１９】
（実施例６４：本発明の化合物によるＰＰＡＲの活性化の決定）
ＰＰＡＲγおよびＰＰＡＲαの活性を変更する、本発明の化合物の能力は、以前に米国特許第６，３６９，０９８号に教示された、下記のようないくつかの公知の方法によって決定される。
【０２２０】
（ＮＦ−κＢ活性化の阻害に基づいてＰＰＡＲγおよびＰＰＡＲαの活性を変更する化合物をスクリーニングする方法）
本発明の化合物を、ＮＦ−κＢの活性を阻害する能力について試験する。ヒト内皮細胞および血管平滑筋細胞（ＶＳＭＣ）は、ＰＰＡＲγおよびＰＰＡＲαの両方を発現することが知られている（Ｎｅｖｅ  ＢＰら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，６０：１２４５〜１２５０（２０００））。あるいは、健常なドナーまたは哺乳類細胞株（例えば、ＰＰＡＲαおよび／またはＰＰＡＲγ発現ベクターでトランスフェクトされたＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞株）から単離されたヒト末梢Ｔリンパ球が、これらの実験に用いられ得る。これらの選択された細胞型の１つは、以下の１つ以上で刺激される：フィトヘマグルチニン／ホルボール−１２−ミリステート−１３−アセテート（ＰＨＡ／ＰＭＡ）、ＴＮＦ−α、インターフェロン−γまたはＮＦ−κＢを活性化する他の因子。ＮＦ−κＢの活性化は、前述のものと類似の電気泳動移動度シフトアッセイによって決定される（Ｒｏｓｓｉ  Ａら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，９４：７４６〜５０（１９９７））。同じ細胞を、５マイクロモルの本発明の化合物と共にＮＦ−κＢのアクチベーターの添加前に２時間プレインキュベートすることにより、これとは別に本化合物の非存在下で観測されたＮＦ−κＢの活性化が阻害される。
【０２２１】
（ＮＦＡＴ活性化の阻害に基づいてＰＰＡＲγおよびＰＰＡＲαの活性を変更する化合物をスクリーニングする方法）
健常なドナーまたは哺乳類細胞株（例えば、ＰＰＡＲαおよび／またはＰＰＡＲγ発現ベクターでトランスフェクトされたＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞株）から単離されたヒト末梢Ｔリンパ球は、ＰＨＡ／ＰＭＡ、ＴＮＦ−α、インターフェロン−γまたはＮＦＡＴを活性化する他の因子の１つ以上で刺激される。ＮＦＡＴの転写活性化は、Ｙａｎｇら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．；２７５：４５４１〜４（２０００））によって記載されたものと類似の電気泳動移動度シフトアッセイによって決定される。同じ細胞を、５マイクロモルの本発明の化合物と共にＮＦＡＴのアクチベーターの添加前に２時間プレインキュベートすることにより、これとは別に本化合物の非存在下で観測されたＮＦＡＴの活性化が阻害される。
【０２２２】
（ＩＬ−２生成の阻害に基づいてＰＰＡＲγおよびＰＰＡＲαの活性を変更する化合物をスクリーニングする方法）
単離されたヒトＴリンパ球または哺乳類細胞株（例えば、ＰＰＡＲαおよび／またはＰＰＡＲγ発現ベクターでトランスフェクトされたＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞株）は、ＰＨＡ／ＰＭＡ、ＴＮＦ−α、インターフェロン−γまたはＩＬ−２遺伝子発現の誘導を活性化するいくつかの他の因子の１つ以上で刺激される。ＩＬ−２の生成を、Ｙａｎｇら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７５：４５４１〜４（２０００））によって記載されるように、Ｅｎｄｏｇｅｎキット（Ｗｏｌｂｕｍ）を用い、細胞由来の上清中のＩＬ−２の濃度を測定して決定する。同じ細胞を、５マイクロモルの本発明の化合物と共にＩＬ−２生成のアクチベーターの添加前に１２時間プレインキュベートすることにより、これとは別に本化合物の非存在下で観測されたＩＬ−２生成の活性化が阻害される。
【０２２３】
（実施例６５：本発明の化合物のＡＢＣＡ−１活性化能力を決定する方法）
この試験は、米国特許第６，５４８，５４８号に教示されるような公知の方法を用いて、ＡＢＣＡ−１遺伝子発現に対する本発明の化合物の有効性を実証する。手短に言えば、ｐＧＬ３ルシフェラーゼレポーターベクター系（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）を用いて組換えプラスミドを作製し、ＡＢＣＡ−１プロモーターの制御下でレポーター遺伝子発現を測定する。
【０２２４】
プラスミドｐＧＬ３−Ｂａｓｉｃ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．；カタログ番号Ｅ１７５１）を、プロモーターのないルシフェラーゼ遺伝子を含む、コントロールプラスミドとして使用する。ＡＢＣＡ−１プロモーターおよびルシフェラーゼ遺伝子を含む、レポーター構築物を、ＡＢＣＡ−１遺伝子の５’フランキング領域由来のゲノムフラグメント（ｈＡＰＲ１  ５’プロモーター、配列番号３のヌクレオチド１０８０〜１６４３に相当する）をＧＬ３−ＢａｓｉｃプラスミドのＳａｃＩ部位にクローニングすることによって作製し、プラスミドＧＬ−６ａを生成する。次に、プラスミドＧＬ−６ａを、ＳｐｅＩおよびＡｃｃ６５Ｉで消化する。配列番号３のヌクレオチド１〜１５３４に相当するＡＢＣＡ−１ゲノム配列を示す、λサブクローンから切り取ったＢｓｉＷＩ−ＳｐｅＩフラグメントを、この消化によって生成した残りのベクター／ＡＢＣＡ−Ｉプロモーターフラグメントにライゲーションする。得られたプラスミド（ｐＡＰＲ１）は、１．７５ｋｂのヒトＡＢＣＡ−１プロモーター配列の転写調節下で、ルシフェラーゼレポーター遺伝子をコードする。
【０２２５】
コントロールプラスミドまたはｐＡＰＲ１プラスミドを、１０％ウシ胎仔血清を含むＤＭＥＭ中で維持されたＲＡＷ２６４．７細胞のコンフルエント培養物中にトランスフェクトする。１２ウェル皿の各ウェルを、ｐＧＬ３−Ｂａｓｉｃ、ｐＧＬ３−ＰｒｏｍｏｔｅｒまたはｐＡＰＲ１  ＤＮＡ（１μｇ）のいずれか、ルシフェラーゼプラスミドＤＮＡ（１μｇ）、および１２μＬのＧｅｎｅｐｏｒｔｅｒ試薬（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．；カタログ番号Ｔ２０１００７）を用いて、５時間トランスフェクトする。さらに、０．１μｇのｐＣＭＶβプラスミドＤＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆ．，カタログ番号６１７７−１）を、トランスフェクション効率についてのコントロールとして添加する。５時間後、この培地を、アセチル化ＬＤＬ（１００μｇ／ｍＬ）を含むかまたは含まない無血清ＤＭＥＭ／ＢＳＡに交換し、２４時間インキュベートする。
【０２２６】
トランスフェクションの後、各ウェル中の細胞を、７０μＬの１×細胞溶解試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．，カタログ番号Ｅ３９７１）中に溶解し、１回の凍結融解サイクルに供し、そしてこの溶解物を、１２，０００ｇで５分間の遠心分離によって清澄にする。遠心分離後、１００μＬのルシフェラーゼアッセイ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．；カタログ番号Ｅ１５０１）を、１０μＬの溶解物に添加する。各溶解物のルシフェラーゼ活性を、ルミノメーターを用いて光単位として測定する。さらに、各溶解物のβ−ガラクトシダーゼ活性を、Ｇａｌａｃｔｏ−ｌｉｇｈｔキット中に提供される化学発光アッセイ試薬を用い、製造業者の説明書に従って測定する（Ｔｒｏｐｉｘ  Ｉｎｃ．，Ｂｅｄｆｏｒｄ，Ｍａｓｓ．：カタログ番号ＢＬ１００Ｇ）。各溶解物についての正規化ルシフェラーゼ活性は、ルシフェラーゼ活性値を、決定したβ−ガラクトシダーゼ値で割ることによって決定し、相対的光単位として記録する。
【０２２７】
本発明の化合物は、このアッセイにおいて、ＡＢＣＡ−１遺伝子発現の増加を実証する。
【０２２８】
（実施例６６：ヒトアポリポタンパク質Ａ１タンパク質発現の測定）
この研究は、ヒト腸細胞株であるＣａＣＯ２細胞、またはヒト肝細胞株であるＨｅｐ  Ｇ２細胞において、内因性ＡＰＯ  ＡＩ遺伝子によって発現されるアポリポタンパク質Ａ１タンパク質のレベルに対する本発明の化合物の影響を測定する。本発明の化合物を、適切な溶媒中に溶解し、次いで血清を含む細胞培養培地中のＣａＣＯ２またはＨｅｐ  Ｇ２細胞に与え、そして３７℃で１２、２４、３６または４８時間、組織培養インキュベーターに戻す。細胞を無血清培地でリンスした後に、これらの細胞を固定し、溶解し、そしてアポリポタンパク質Ａ１の存在を、市販のヒトアポリポタンパク質Ａ１抗体（例えば、マウス抗ヒトアポリポタンパク質Ａ１抗体、Ｉｎｔｒａｃｅｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ  ＬＬＣ，Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，ＭＤ，ＵＳＡ）を用いて検出する。溶媒のみで処理した細胞における発現の存在量と比較して、本発明の化合物で処理した細胞についてのアポリポタンパク質Ａ１タンパク質発現の存在量の差異を観測する。アポリポタンパク質発現を調節する活性の検出のための各化合物の最適濃度を、２倍濃度段階で約０．１ピコモルから約１００ミリモルまでの範囲の種々の濃度の各化合物を用いて実験を繰り返すことによって決定する。細胞に結合する抗体の検出の増加は、アポリポタンパク質Ａ１発現の増加を誘導する化合物を明らかにする。
【０２２９】
（実施例６７：ＡｐｏＡ−１プロモーター誘導の測定）
ＣａＣＯ２またはＨｅｐ  Ｇ２細胞を、有効濃度の本発明の化合物に曝露する。これらの細胞を、標準技術を使用して、トランスフェクション効率をモニターするｐＲＳＶ−Ｂガラクトシダーゼと共にレポーター構築物ｐＡＩ．４７４−Ｌｕｃを用いて、トランスフェクトする。このｐＡＩ．４７４−Ｌｕｃは、従来の分子生物学技術を用いて作製された構築物であり、ホタルルシフェラーゼ（Ｌｕｃ）であるレポーター遺伝子と融合させたラットＡＰＯ  ＡＩプロモーターヌクレオチド−４７４〜−７を含む（米国特許出願第１０／２２２，０１３号）。本発明の化合物を、適切な溶媒（例えば、ＤＭＳＯ）中に溶解し、次いで培地に１６時間添加する。処理の終わりに、これらの細胞を収集し、ルシフェラーゼ活性を、市販のルシフェラーゼアッセイを用いて標準的なプロトコールで測定する。これらの細胞に３６時間曝露された使用済み培地もまた、ＡＰＯ  ＡＩタンパク質の含有量についてウェスタンブロット分析を用いてアッセイする。細胞溶解物または使用済み培地中のルシフェラーゼ活性の増大は、本発明の化合物がアポリポタンパク質Ａ１発現の誘導活性を有することを示す。
【０２３０】
（実施例６８：ＡＧＣＣＣＣＣＧＣ配列エレメント誘導の測定）
ＣａＣＯ２またはＨｅｐ  Ｇ２細胞を、有効濃度の本発明の化合物に曝露する。これらの細胞を、まず、標準技術を使用して、トランスフェクション効率をモニターするｐＲＳＶ−Ｂガラクトシダーゼと共に、プロモーター（例えば、チミジンキナーゼ（ＴＫ）プロモーター）に作動可能に連結され、レポーター遺伝子（例えば、ルシフェラーゼ、ＣＡＴ、またはアポリポタンパク質Ａ１遺伝子）に作動可能に連結された、エンハンサーエレメント（Ｋｉｌｂｏｕｒｎｅら、ＪＢＣ，２７０（１２）：７００４〜７０１０，１９９５）として作用する９つのヌクレオチド、５’−ＡＧＣＣＣＣＣＧＣ−３’の１つ以上のコピーを含むレポーター構築物でトランスフェクトする（米国特許出願第１０／２２２，０１３号に教示のとおり）。次いで、本発明の化合物を、適切な溶媒（例えば、ＤＭＳＯ）中に溶解し、次いで培地に１６時間添加する。処理の終わりに、これらの細胞を収集し、レポーター遺伝子活性を、市販の標準アッセイを用いて測定する。レポーター遺伝子活性の増大または低下は、本発明の化合物が、ｅｇｒ−１応答エレメントを含むと考えられる、９つのヌクレオチド配列５’−ＡＧＣＣＣＣＣＧＣ−３’を含むプロモーターからの転写を調節する能力を有することを示す。従って、本発明の化合物は、ｅｇｒ−１の活性に関連する状態、疾患または障害の処置に有用である。
【０２３１】
（実施例６９：リングテストを用いた、本化合物の血管拡張活性の測定）
標準的な単離された血管輪調製物を用いて、本発明において提供される化合物の効力を立証する。ニュージーランド白ウサギ由来の胸部大動脈輪を、ＰＨ７．４緩衝液中に３７℃で懸濁し、各々に１０グラムの前負荷をかける。２時間の平衡の後、これらの環輪をノルエピネフィリンで前収縮させる。これらの器官浴に、連続的に増加する濃度で本発明の化合物を添加することによって誘導される弛緩のグラムを測定して、各化合物についての用量反応曲線を作成する。ニトロプルシドナトリウムおよびトリニトログリセリンを、ポジティブコントロールとして用いる。
【０２３２】
血管拡張活性はまた、Ｒｅｙｎｏｌｄｓらによって記載される方法（Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒａｐ．２５２，９１５，１９９０）に従って調製される組織において、エピネフリンによって誘導される収縮の阻害を測定することによって、単離されたラット大動脈において決定される。
【０２３３】
本発明の化合物の添加によって誘導される弛緩の増加は、高血圧（例えば、心血管疾患）に関連する多数の障害の処置または予防のための、本化合物の血管拡張活性および有用性を実証する。
【０２３４】
（実施例７０：ＮＯ供与の測定）
一酸化窒素放出剤としての本発明の化合物の有用性を実証するために、本発明の化合物を、適切な溶媒およびリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中に溶解し、３７℃の水浴中でインキュベートする。ＮＯ放出速度を、不活性窒素ガスで溶液を流し、次いで新しく生成したＮＯを化学発光検出器中に取り込み、そして次の４〜７分間にわたって生成されるシグナルを統合することによって、定期的に測定する。ネガティブコントロール（同じ化合物のニトロ化バージョンよりもむしろ、例えばヒドロキシル化バージョンである、潜在的に適切なネガティブコントロール）と比較して増加したＮＯ放出は、高血圧に関連する障害、疾患もしくは状態（例えば、心血管疾患）の処置または予防としての、本化合物のＮＯ放出活性および有用性を実証する。
【０２３５】
（実施例７１：抗酸化剤有効性の測定）
本発明の化合物の抗酸化性能は、刊行された色素ベースのカラーアッセイ（ＦＯＸアッセイ，Ｚａｄｅｈ，「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」，３００，５８（１９９９）を参照のこと）を用い、銅触媒自己酸化による低密度リポタンパク質のヒドロキシ過酸化物の程度を測定することによって、実証される。ＬＤＬおよび硫酸銅のみを含み、試験物質を含まないサンプルは、試験物質を含む同一の混合物との比較のためのポジティブコントロールの役割を果たす。
【０２３６】
リン酸緩衝化生理食塩水（ｐＨ７．４）中のヒト低密度リポタンパク質（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ  Ｌ２１３９）を、硫酸銅と混合する。２５℃または３７℃にて空気に開放して有効量の本発明の化合物とインキュベーションすることによって酸化を引き起こし、この混合物を、ＦＯＸアッセイにおけるヒドロペルオキシドの測定のために、インキュベーションの時間０および３〜２０時間の間にサンプリングする。サンプルを、マイクロタイタープレートリーダー中で読み取る。ＦＯＸアッセイによって測定されるように、ヒドロペルオキシドの減少は、本発明の化合物の抗酸化活性、および酸化に関連する障害、疾患もしくは状態の処置または予防のためのこれらの化合物の有用性あるいは抗酸化剤の投与による恩恵を明らかにする。抗酸化剤の処置によって恩恵を受ける状態の例は、心血管疾患である。
【０２３７】
（実施例７２：ＬＤＬ酸化アッセイによる抗酸化活性の測定）
Ｅｓｔｅｒｂａｕｅｒの方法（Ｅｓｔｅｒｂａｕｅｒ，Ｈ．，Ｓｔｒｉｅｇｌ，Ｇ．，Ｐｕｈｌ，Ｈ．，Ｒｏｔｈｅｎｅｄｅｒ，Ｍ．，「Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  ｏｆ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｏｘｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｌｏｗ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ」，Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ，１９８９；６（１）：６７〜７５）は、以下のように一部改変して用いられ得る：
本化合物を、適切な可溶化剤と共に、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ，０．１５ＭのＮａＣｌ−０．０５ＭのＮａリン酸緩衝液−ｐＨ７．４）中に溶解する。正確な濃度を書き留める（約３０〜６０μｇ／ｍＬの測定される抽出物）。この溶液の１００μＬを、９００μＬの酸化緩衝液（８ｍＬのＰＢＳ中の、ヒトＬＤＬ（ｄ＝１．０１９〜１．０６３ｇ／ｍＬである、１２０μＬの５ｍｇ／ｍＬ溶液、ＰｅｒＩｍｍｕｎｅ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍｄ．から購入）および硫酸銅（２０μＬの１０ｍＭ水溶液）で作製される）に添加する。１００μＬのＰＢＳおよび９００μＬの酸化緩衝液で作製される盲検サンプルも調製する。次いで、各溶液を１ｃｍ石英キュベットに移し、このキュベットをサーモスタット（３７℃）内に配置する。ＨＰ−８４５２Ａダイオードアレイ分光光度計が、５分毎に測定を行って、２３４ｎｍ（ＯＤ２３４）で光学濃度を測定する。酸化の遅延時間を、この光学濃度曲線の一次導関数の極大として算出する。アスコルビン酸含む標準を、各アッセイに利用する。
【０２３８】
（実施例７３：ＨＤＬ、ＬＤＬ、ＶＬＤＬおよびトリグリセリドレベルの測定および比較）
化合物または投薬ビヒクル単独を、１．５％カルボキシメチルセルロース／０．２％Ｔｗｅｅｎ−２０（投薬ビヒクル）中の経口胃管栄養法によって、固形飼料を与えた雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットまたは雌性肥満Ｚｕｃｋｅｒラットに、７日間午前中に毎日投与する。動物を毎日計量し、この研究の間中、齧歯類用固形飼料および水を自由に摂取できるようにする。眼窩血サンプルを、６時間絶食後の初回投薬前に、そしてまた７回目の投薬後に得る。７回目の投薬後、動物を夕方に屠殺し、血清を、総コレステロールおよびトリグリセリド、リポタンパク質コレステロールプロフィール、ＶＬＤＬ＋ＬＤＬコレステロールの総合（アポＢ含有リポタンパク質コレステロールまたは非ＨＤＬコレステロールとも呼ばれる）、ＨＤＬコレステロール、およびＶＬＤＬ＋ＬＤＬコレステロールの比に対するＨＤＬコレステロールの比についてアッセイする。
【０２３９】
（実施例７４：本化合物の投与に応答する、ヒトにおけるＨＤＬ、ＬＤＬ、ＶＬＤＬおよびトリグリセリドレベルの測定および比較）
本発明の化合物を、ヒト被験体に毎日投与する。他の食餌摂取をモニターし、個体間の定常性を維持する。血液サンプルを、０日目（本化合物の投与を開始する前）、および週１回で３〜６ヶ月間採取する。血清を、総コレステロールおよびトリグリセリド、リポタンパク質コレステロールプロフィール、ＶＬＤＬ＋ＬＤＬコレステロールの総合（アポＢ含有リポタンパク質コレステロールまたは非ＨＤＬコレステロールとも呼ばれる）、ＨＤＬコレステロール、ＨＤＬ２およびＨＤＬ３コレステロール画分、ならびにＶＬＤＬ＋ＬＤＬコレステロールの比に対するＨＤＬコレステロールの比について、ＶＡＰ試験（Ａｌｔｈｅｒｏｔｅｃｈ  Ｉｎｃ，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）のような、ヒト血液の小サンプルからこれらのパラメータを再現可能に測定し得る標準的な市販のコレステロール試験を使用してアッセイする。あるいは、ＨＤＬ２およびＨＤＬ３を、Ｋｕｌｋａｒｎｉの方法（Ｋｕｌｋａｒｎｉら、１９９７．Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．３８：２３５３〜６４）またはＧｉｄｅｚの方法（Ｇｉｄｅｚら、１９８２．Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．２３：１２０６〜２３）によって、血液から測定し得る。このような血液検査において決定されるように、総ＨＤＬを増加させるか、ＨＤＬ２を増加させるか、総ＬＤＬを減少させるか、ＶＬＤＬを減少させるか、トリグリセリドを減少させるか、あるいはＨＤＬ／総コレステロール比またはＨＤＬ／ＬＤＬ比を増加させる本発明の化合物は、コレステロールまたは脂質関連障害の処置に有用である。
【０２４０】
（実施例７５：プロテオグリカン結合不良ＬＤＬを用いたアテローム硬化性病変サイズの測定）
核酸構築物を用いて、プロテオグリカン結合不良ＬＤＬを発現するマウスを産生し得る。これらのトランスジェニックマウスは、１．２％コレステロール、０．５％胆汁酸塩、および２０％脂肪を含む食餌を１７週間与えられる。次いで、これらのマウスを屠殺し、大動脈を灌流固定し、正面手順（ｅｎ  ｆａｃｅ  ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ）（大動脈全体をピンで平らに留め、スダンＩＶで染色し、形態計測画像解析システム（Ｉｍａｇｅ−１／ＡＴ）で解析して、アテローム性動脈硬化症の程度を定量化する）で分析する。
【０２４１】
（実施例７６：生存動物における高血圧の低下の測定）
圧力変換器を、ヘパリン添加生理食塩水を含むカテーテルを介して右頸動脈に連結させる。平均動脈圧および心拍数を記録する。これらのラットを、３５ｍｇ／ｋｇ体重の初回量で、必要な場合にはより少量の注射を追加して、ネンブタールで麻酔する。本化合物を、薬学的キャリア（例えば、Ａｂｂｏｔｔの５％デキストロースＵＳＰ）中に溶解し、右大腿静脈中のカテーテルを介してラットに注射する。用いられ得るポジティブコントロールとしては、ニトロプルシドナトリウムおよびＮａＮＯ２が挙げられ、一方、ＮａＮＯ３は、ネガティブコントロールとして用いられ得る。結果より、本発明において提供される化合物は、血圧を有意に低下させる、強力な抗高血圧薬であることが示される。血圧低下のピーク値には、注射後短時間（例えば、約１分）で到達すべきであり、そして血圧は、その後すぐに再び上昇を開始し、約１０〜１５分以内で完全に回復すべきである。
【０２４２】
（実施例７７：高コレステロールのウサギにおける動脈損傷後の再狭窄の程度の低下の測定）
米国特許第５，５９５，９７４号に記載され、Ｇｏｏｄｍａｎによって米国特許第６，０２２，９０１号にさらに記載されるような、Ｔｏｍａｒｕの手順を用いて、高コレステロールのウサギにおいて再狭窄を予防するための本発明の化合物の有用性を評価し得る。
【０２４３】
（実施例７８：ヒトにおける再狭窄の予防における使用）
Ｔａｒｄｉｆら（１９９７），Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊ．Ｍｅｄ．３３７（６）：３６５〜６７の手順を、Ｇｏｏｄｍａｎによって米国特許第６，０２２，９０１号に記載されるように実行し得るが、ただし、トランス−レスベラトロルの代わりに、本発明者らの化合物を試験する。
【０２４４】
（実施例７９：血小板抗凝集活性の測定）
血小板抗凝集活性を、Ｂｅｒｔｅｌｅら（Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２０，５１７，１９８３）によって記載される方法に従って、トロンビンによって刺激されるヒト血小板について、インビトロで評価し得る。
【０２４５】
（実施例８０：ウサギにおけるＡＤＰ誘導性の血小板凝集に対する影響の測定）
血小板凝集試験：ウサギ血液を、シリコン被覆シリンジを用いてウサギから心臓穿刺によってサンプリングする。この血液を、３．８％クエン酸ナトリウムと９：１で混合し、１，０００ｒｐｍで６分間回転させる。１ｍＬの血小板に富む血漿を、シリコン被覆した２ｍＬセルに移して混合し、分光光度計で透過率（Ｔｉ）を読み取る。０．０２ｍＬのＡＤＰ（１０μＭ）を添加し、攪拌し、そして血小板を含む血漿の透過率を１分間に１回読み取り、最大透過率（Ｔｍ）を１０分以内に得る。この血液サンプルを、３０００ｒｐｍで４５分間回転させ、透過率を読み取る。
【０２４６】
（実施例８１：インビボにおけるコラーゲン誘導性の血小板減少症に対する影響の測定）
雄性ラット（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ，ＣＲＬ：ＣＤ（ＳＤ），４００〜４５０ｇ）を、ペンタバルビタールナトリウム（６５ｍｇ／ｋｇ，Ｖｅｔ  Ｌａｂｓ，Ｌｉｍｉｔｅｄ，Ｉｎｃ．，Ｌｅｎｅｘａ，ＫＡ）で麻酔する。切開を２箇所行って、両方の頚静脈を露出させる。薬物注入ポンプ（Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ，Ｓｏｕｔｈ  Ｎａｔｉｃｋ，Ｍａｓｓ．）および１９ｇ．バタフライを備える５ｃｃシリンジを用いて、試験化合物またはビヒクルを、０．３９ｍＬ／分の速度で３分間、左頚静脈中に注入する。化合物／ビヒクル注入の２分後、コラーゲン（６０μｇ／ｋｇ）（Ｈｅｌｅｎａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｅａｕｍｏｎｔ，ＴＸ）を、右頚静脈中に１ｍＬシリンジを用いて注射する。体腔を開き、大静脈を血液サンプリングのために露出させる。コラーゲン注射の１分後、化合物の注入を停止し、血液を、４．５％ＥＤＴＡ／トリス（０．１Ｍ）（ｐＨ７．３５）＋１５０μＭインドメタシンを０．３ｍｇ含む３ｃｃシリンジを用いて、大静脈からサンプリングする（３０秒以内に）。この血液を１２６×ｇで１０分間遠心分離することによって、血小板に富む血漿（ＰＲＰ）を調製する。５μＬのＰＲＰを、クールター計数器中の２０ｍＬのＩｓｏｔｏｎ．ＲＴＭ．ＩＩＩ中で計数する。コラーゲン誘導性凝集の阻害パーセントは、処置動物において計数された血小板の数を、コラーゲンを投与されていない動物についての数、およびビヒクルとコラーゲンを投与された動物からの数と比較することによって、算出する。効力の評価は、コラーゲン誘導性の血小板減少の阻害に基づく。
【０２４７】
（実施例８２：インビボにおける抗乾癬効果の測定）
本発明の化合物を含む局所処方物を、乾癬に罹患しているヒト患者の患部に投与する。本発明の化合物を全く含まないコントロール処方物を、この患者の類似の部位に適用する。本化合物の有効性を、投与の３日後および７日後に、コントロール処方物が適用された部位と比較して、本化合物が適用された部位での炎症の改善および増殖細胞の減少を分析することによって決定する。
【０２４８】
（実施例８３：プロテインキナーゼ阻害の測定）
本発明の化合物を、放射標識したＡＴＰ、適切なプロテインキナーゼおよび適切な基質と、適切な緩衝液中で混合する。インキュベーションの後、濾紙上にスポットして反応を停止し、シンチレーションカウンターを用いて、コントロールと比較した場合の基質に対するＡＴＰ添加における相違を定量化し、プロテインキナーゼの阻害量を測定する。
【０２４９】
（実施例８４：好中球活性化の阻害の測定）
本発明の化合物を、Ｔｕｄａｎのプロトコール（Ｔｕｄａｎ．１９９９．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５８：１８６９〜８０）を用いて試験する。この試験は、クリスタルによって、およびｆＭＬＰのような化学誘引物質によって引き起こされる好中球の活性化を阻害する、試験化合物の能力を実証する。
【０２５０】
（実施例８５：ＴＰＡ誘導性炎症の阻害の測定）
本発明の化合物を、Ｍａｒｋｓの改変方法（Ｍａｒｋｓら、１９７６．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．３６：２６３６）によって試験して、１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール−１３−アセテート（ＴＰＡ）の適用によって誘導される炎症に対する本化合物の有効性を実証する。本化合物をマウスの耳に適用し、続いてＴＰＡを適用する。４時間後、マウスの耳の生検穿孔を秤量して水腫を測定し、化合物を投与していない他方の耳の生検穿孔と比較する。
【０２５１】
（実施例８６：ＣＯＸ−１阻害の測定）
本発明の化合物を、Ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｏｕｄｅｒａａの方法（Ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｏｕｄｅｒａａ、１９８２．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．８６：６０）によって試験する。この反応を、０．１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ７．４）、１．０ｍＭフェノール、０．０１ｍＭヘミン、およびＣＯＸ−１酵素中に試験化合物を含む混合物へのアラキドン酸の添加によって惹起する。
【０２５２】
（実施例８７：カラゲナン誘導性炎症の阻害の測定）
本発明の化合物を、Ｗｉｓｔａｒラットにおいて、Ｓｌｏｗｉｎｇの方法（Ｓｌｏｗｉｎｇら、１９９４．Ｊ．ＷｒｈｎｏｐｈＥＭｘｏｌ．４３：９）によって試験する。動物は、尾部にフロイントアジュバントの皮内注射を受ける。７日後、試験化合物を投与し、続いて一時間後に、左後足に生理食塩水溶液中のカラゲナンの懸濁液を投与する。足の体積をウォータープレチスモグラフィーによって測定し、コントロールと比較する。
【０２５３】
（実施例８８：発癌化学予防活性の測定）
Ｃ３Ｈ／１０Ｔ１／２クローン８細胞（ＡＴＣＣ）を、Ｍｏｎｄａｌの方法（Ｍｏｎｄａｌら，１９７６．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．３６：２２５４〜２２６０）によって、本発明の化合物で処理する。培養中の細胞を、３−メチルコラントレンで２４時間処理し、続いて新鮮な培地中で５日間インキュベーションして洗浄する。続いて、ＴＰＡを、試験化合物を含むかまたは含まない培地に添加する。コンフルーエンシーに達した７週間後に、メタノールでの固定およびギムザでの染色により、ＩＩ型およびＩＩＩ型形質転換病巣を明らかにし、これらの病巣をスコア付けして、試験化合物による２段階形質転換の阻害の有効性を実証する。
【０２５４】
（実施例８９：ヒドロキシル基（単数または複数）をニトロオキシ基（単数または複数）に置換する前に、スチルベン、ポリフェノールおよびフラボノイドを含む本発明の化合物のフッ化物誘導体を合成する方法）
本発明の化合物の１つ以上のヒドロキシル基をフッ化物に置換して、治療薬としての本化合物の有用性を改善することが所望され得るため、ＣｒａｍｅｒおよびＣｏｆｆｍａｎの方法（ＣｒａｍｅｒおよびＣｏｆｆｍａｎ，１９６１，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２６：４１６４）に基づいて、フッ化物を芳香環に結合されたヒドロキシル基に置換する方法を記載する実施例を、ここに提供する。このような手順は、当業者による過度の実験なしに、本発明の任意の化合物について、任意のヒドロキシル基をフッ化物に置換するのに直ちに役立つ。本実施例に記載されるフッ素化のための条件は、本発明の化合物のいくつかにとってやや過酷であるため、収率は、本化合物をフッ素化よりもむしろ基礎的要素で構築することによって改善され得る。化合物が、ヒドロキシル基の代わりにフッ化物を有する場合、および他のヒドロキシル基の代わりに１つ以上のニトロオキシ基を有する場合（例えば、実施例１〜５９の場合のように）、フッ化物付加反応をまず完了させ、ニトロオキシ付加反応を次に行うべきである。
【０２５５】
以下の反応は、レスベラトロルのフッ化物誘導体の合成を記載する。
【０２５６】
４００ｍＬ容量のステンレス鋼で裏打ちしたオートクレーブを、２５０ミリモルの５−［（Ｅ）−２−（４−ヒドロキシ−フェニル）−ビニル］−ベンゼン−１，３−ジオール（別名：レスベラトロル）で満たし、そして排出する。５００ミリモルのフッ化オキシテトラ硫黄（ｓｕｌｆｕｒ  ｏｘｙｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｉｄｅ）を導入し、この反応混合物を、１５０℃で９時間、振盪および加熱する。ガス状の生成物（主に、フッ化スルフリル）を、−４９℃〜−４４℃で蒸留する。残留物を、５％水酸化ナトリウム水溶液で洗浄し、そして水で洗浄する。蒸留の際に、この液体は、完全におよび部分的にフッ素化された生成物である、３−フルオロ−５−［（Ｅ）−２−（４−ヒドロキシ−フェニル）−ビニル］−フェノール、５−［（Ｅ）−２−（４−フルオロ−フェニル）−ビニル］−ベンゼン−１，３−ジオール、４−［（Ｅ）−２−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−ビニル］−フェノール、および１，３−ジフルオロ−５−［（Ｅ）−２−（４−フルオロ−フェニル）−ビニル−ベンゼンを含む混合物を含むことが見出される。これらの種々の生成物を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２５７】
レスベラトロルのフッ化物誘導体の単離後、本化合物は、実施例１〜５９に記載されるように、ニトロオキシ基を含むようにさらに改変され得る。この方法を、本発明の任意の化合物へのフッ化物の付加のために、過度の実験なしに実施する。
【０２５８】
（実施例９０：−（ＣＯ）ＮＨ−を含む連結基によって連結された２つの芳香環を含むポリフェノールの合成方法）
本発明で企図されるポリフェノール化合物としては、連結基によって互いに連結される２つの芳香環を含む化合物が挙げられ、この連結基は、以下の基を含む：
【０２５９】
【化６５】
2007509842.tif 000056
以下の一般式のポリフェノール化合物は、容易に入手可能な開始試薬から、この反応によって容易に合成される。
【０２６０】
【化６６】
2007509842.tif 000057
ここで、ＸはＮＨであり、
Ｒ１〜１０は、それぞれ独立して、ＨまたはＯＨから選択される。
【０２６１】
本発明のこれらの化合物は、中間化合物として有用であり、これらの化合物から、続いて、実施例１〜５９に記載されるようなニトロオキシ誘導体、ならびに、さらに改変されて、ホスフェート、フッ化物、エステル基、および他の改変を含み得るニトロオキシ誘導体が合成され得る。例示的な中間化合物であるＮ−（３，５−ジヒドロキシ−フェニル）−４−ヒドロキシ−ベンズアミドは、そのニトロオキシ誘導体の続いての調製に有用であり、以下の方法によって合成される。
【０２６２】
乾燥ＤＭＦ（１５ｍＬ）中の４−ヒドロキシ−安息香酸（６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＥＤＣＩ（９ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（９ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１２ｍｍｏｌ）を添加する。室温で２４時間攪拌した後、５−アミノ−ベンゼン−１，３−ジオールを滴下し、この反応を、室温にてアルゴン下で４８時間継続させる。次いで、水（３００ｍＬ）を添加し、この混合物を５分間攪拌する。次いで、この生成物を酢酸エチル（５×５０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物をブライン（４０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして溶媒を除去する。生成物であるＮ−（３，５−ジヒドロキシ−フェニル）−４−ヒドロキシ−ベンズアミドの精製は、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって達成される。
【０２６３】
あるいは、５−アミノ−ベンゼン−１，３−ジオールの代わりに５−アミノメチル−ベンゼン−１，３−ジオールを用いてこの反応を行うことによって、Ｎ−（３，５−ジヒドロキシ−ベンジル）−４−ヒドロキシ−ベンズアミドの合成が生じる。この合成は、本実施例の一般式について、ＸがＮＨＣＨ２である化合物の合成方法を実証する。同様に、実証されるように、フェノールのアルキル基に対する改変は、得られた生成物のリンカーに対する同じ改変をもたらす。
【０２６４】
例えば、フッ素化、臭素化、塩素化、またはアセチル化アリール基による、あるいは複素環式芳香族のアリール基による、あるいはＣ１−１８アルキル基による、あるいは二環式アリール基などによる、この合成の記載において提供されるアミノ試薬に連結されるＲ基の置換（すなわち、５−アミノ−ベンゼン−１，３−ジオールのベンゼン１，３−ジオール基の置換）は、当業者に明らかなように、適切に改変された生成物を生じる。
【０２６５】
この方法によって合成される生成物は、ＮＯを供与する本発明のニトロオキシ誘導体化合物の合成に有用な中間化合物として、有利に使用され得る。
【０２６６】
（実施例９１：−Ｃ−ＮＨ−を含む連結基によって連結される２つの芳香環を含むポリフェノールの合成方法）
本発明で企図されるポリフェノール化合物としては、連結基によって互いに連結される２つの芳香環を含む化合物が挙げられ、この連結基は、窒素原子に単結合された炭素原子を含む。以下の一般式のポリフェノール化合物は、容易に入手可能な開始試薬から、この反応によって容易に合成される。
【０２６７】
【化６７】
2007509842.tif 000058
ここで、ＸはＣＨ２であり、かつＹはＮＨであるか、またはＸはＮＨであり、かつＹはＣＨ２であって、
Ｒ１〜１０は、それぞれ独立して、ＨまたはＯＨから選択される。
【０２６８】
本発明のこれらの化合物は、中間化合物として有用であり、これらの化合物から、続いて、実施例１〜５９に記載されるようなニトロオキシ誘導体、ならびに、さらに改変されて、ホスフェート、フッ化物、エステル基、および他の改変を含み得るニトロオキシ誘導体が合成され得る。例示的な中間化合物である５−（４−ヒドロキシ−ベンジルアミノ）−ベンゼン１，３−ジオールは、そのニトロオキシ誘導体の調製に有用であり、以下の方法によって合成される。
【０２６９】
５−アミノ−ベンゼン−１，３−ジオール（１．５ｍｍｏｌ）を、ベンゼン（４０ｍＬ）中の４−ヒドロキシ−ベンズアルデヒド（１．５ｍｍｏｌ）に添加し、そしてこの混合物を、ディーン・スタークトラップを用いて２４時間アルゴン下で加熱還流する。次いで、この反応混合物を濃縮してベンゼンを完全に除去し、残渣をメタノール（１５ｍＬ）中に再溶解する。攪拌しながら、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（３ｍｍｏｌ）を３０分の間に３回に分けて添加し、この反応混合物を室温でさらに１時間攪拌する。次いで、この反応混合物に、３７％ＨＣｌを含むＮａＣｌの飽和溶液（１００ｍＬ）を添加する。この反応混合物を、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、そして濃縮して、５−（４−ヒドロキシ−ベンジルアミノ）−ベンゼン１，３−ジオールの粗生成物を生じ、これはさらに、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製される。
【０２７０】
あるいは、４−ヒドロキシ−ベンズアルデヒドの代わりに４−ヒドロキシ−フェニル−アセトアルデヒドを用いてこの反応を行うことによって、５−［２−（４−ヒドロキシ−フェニル）−エチルアミノ］−ベンゼン−１，３−ジオールの合成が生じる。この合成は、本実施例の一般式について、Ｘが（ＣＨ２）２であり、かつＹがＮＨである化合物の合成方法を実証する。同様に、実証されるように、フェノールのアルキル基に対する改変は、得られた生成物のリンカーに対する同じ改変をもたらす。
【０２７１】
この方法によって合成される生成物は、ＮＯを供与する本発明のニトロオキシ誘導体化合物の合成に有用な中間化合物として、有利に使用され得る。
【０２７２】
（実施例９２：−ＣＯ−連結基によって連結される２つの芳香環を含むポリフェノールの合成方法）
本発明で企図されるポリフェノール化合物としては、連結基によって互いに連結される２つの芳香環を含む化合物が挙げられ、この連結基は、酸素原子に単結合された炭素原子を含む。以下の一般式のポリフェノール化合物は、容易に入手可能な開始試薬から、この反応によって容易に合成される。
【０２７３】
【化６８】
2007509842.tif 000059
ここで、ＸはＣＨ２であり、かつＹは酸素であって、
Ｒ１〜１０は、それぞれ独立して、ＨまたはＯＨから選択される。
【０２７４】
本発明のこれらの化合物は、中間化合物として有用であり、これらの化合物から、続いて、実施例１〜５９に記載されるようなニトロオキシ誘導体、ならびに、さらに改変されて、ホスフェート、フッ化物、エステル基、および他の改変を含み得るニトロオキシ誘導体が合成され得る。例示的な中間化合物である５−（４−ヒドロキシ−フェノキシメチル）−ベンゼン１，３−ジオールは、そのニトロオキシ誘導体の調製に有用であり、以下の方法によって合成される。
【０２７５】
固体のｔｅｒｔ−ブチルクロロジメチルシラン（２５ｍｍｏｌ）を、乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）中の４−ヒドロキシ−ベンズアルデヒド（１７ｍｍｏｌ）およびイミダゾール（４２．５ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、アルゴン下で添加する。４時間後、この反応混合物を水中に注ぎ込み、エーテルで抽出する。これらの有機抽出物を水およびブラインで洗浄し、乾燥し、そして着色油状物になるまで濃縮する。溶離剤として２０％−酢酸エチル−ヘキサンを用い、シリカゲルのパッドを通して濾過することによって、シリルエーテル４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−ベンズアルデヒドを生じる。塩化メチレン（１００ｍＬ）中の４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−ベンズアルデヒド（１４ｍｍｏｌ）およびｍ−クロロ過安息香酸（２０ｍｍｏｌ）の溶液を、還流下で２時間加熱し、次いで室温で一晩放置する。次いで、この反応混合物をエーテル中に抽出し、続いてこれらの有機層を、水酸化ナトリウム水溶液（１Ｍ）、水およびブラインで洗浄し、乾燥し、そして減圧下でエバポレートして、固体を得る。これをシリカゲル上で前吸着させ、次いで、シリカゲルのプラグを通して急速濾過に供す。得られた、メタノール（７０ｍＬ）中のギ酸塩である４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−フェニルギ酸エステルの溶液を、炭酸カリウム（１０ｍｍｏｌ）に添加する。２０分後、１−ブロモメチル−３，５−ビス−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−ベンゼン（１４ｍｍｏｌ、上記４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−フェニルギ酸エステルについては、本質的に同じシラニル保護方法によって調製される）を添加する。６時間後、この反応混合物の体積を減少させ、水を添加し、そしてこの溶液を、塩酸水溶液（１Ｍ）で酸性化する。これをエーテルで抽出し、このエーテル抽出を、Ｐｅａｒｓｏｎの方法（Ｐｅａｒｓｏｎら，１９６７  Ｊ  Ｏｒｇ  Ｃｈｅｍ  ３２：２３５８）によって実施する。２〜８０％酢酸エチル−ヘキサンを溶離剤として用い、勾配溶離ドライカラムクロマトグラフィーによって１，３−ビス−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−５−［４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−フェノキシメチル］−ベンゼンを生成する。テトラヒドロフラン中の１，３−ビス−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−５−［４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−フェノキシメチル］−ベンゼンを、テトラ−ｎ−ブチルフッ化アンモニウム三水和物で処理する。３．５時間後、水およびエーテルを添加する。この水層を塩酸水溶液（１Ｍ）で酸性化し、そしてエーテルで再抽出する。次いで、有機抽出をＰｅａｒｓｏｎの方法で行う。シリカゲルのプラグを通して濾過し（２０％−酢酸エチル−ヘキサン）、油状物を生成する。この油状物を、アセトン−ドライアイス浴中で冷却しながらヘキサンで粉砕した後に、結晶化させる。塩化メチレンヘキサンからの再結晶により、生成物である５−（４−ヒドロキシ−フェノキシメチル−）−ベンゼン１，３−ジオールが得られ、この生成物を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーに���ってさらに精製する。
【０２７６】
この方法によって合成される生成物は、ＮＯを供与する本発明のニトロオキシ誘導体化合物の合成に有用な中間化合物として、有利に使用され得る。
【０２７７】
（実施例９３：−Ｃ＝Ｎ−を含む連結基によって連結された２つの芳香環を含むポリフェノールの合成方法）
本発明で企図されるポリフェノール化合物としては、連結基によって互いに連結される２つの芳香環を含む化合物が挙げられ、この連結基は、窒素原子に二重結合された炭素原子を含む。以下の一般式のポリフェノール化合物は、容易に入手可能な開始試薬から、この反応によって容易に合成される。
【０２７８】
【化６９】
2007509842.tif 000060
ここで、ＸはＣＨであり、かつＹはＮであるか、またはＸはＮであり、かつＹはＣＨであって、
Ｒ１〜１０は、それぞれ独立して、ＨまたはＯＨから選択される。
【０２７９】
本発明のこれらの化合物は、中間化合物として有用であり、これらの化合物から、続いて、実施例１〜５９に記載されるようなニトロオキシ誘導体、ならびに、さらに改変されて、ホスフェート、フッ化物、エステル基、および他の改変を含み得るニトロオキシ誘導体が合成され得る。例示的な中間化合物である５−｛［（Ｅ）−４−ヒドロキシ−フェニルイミノ］−メチル｝−ベンゼン１，３−ジオールは、そのニトロオキシ誘導体の調製に有用であり、以下の方法によって合成される。
【０２８０】
トルエン（５ｍＬ）中の３，５−ジヒドロキシ−ベンズアルデヒド（１ｍｍｏｌ）および４−アミノ−フェノール（１ｍｍｏｌ）の溶液を、ディーン・スターク装置中で１６時間、加熱還流する。溶媒を真空中で除去した後、生成物である５−｛［（Ｅ）−４−ヒドロキシ−フェニルイミノ］−メチル｝−ベンゼン１，３−ジオールをメタノールから再結晶させ、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによってさらに精製する。
【０２８１】
この方法によって合成される生成物は、ＮＯを供与する本発明のニトロオキシ誘導体化合物の合成に有用な中間化合物として、有利に使用され得る。
【０２８２】
（実施例９４：−Ｃ＝Ｃ−を含む連結基によって連結された２つの芳香環を含むスチルベン（およびジヒドロスチルベン）の一般的な合成方法）
本発明で企図されるスチルベン化合物としては、連結基によって互いに連結される２つの芳香環を含む化合物が挙げられ、この連結基は、別の炭素原子に二重結合された炭素原子を含む。以下の一般式のスチルベン化合物は、容易に入手可能な開始試薬から、この反応によって容易に合成される。
【０２８３】
【化７０】
2007509842.tif 000061
ここで、ＸはＣＨであり、かつＹはＣＨであって、
Ｒ１〜１０は、それぞれ独立して、ＨまたはＯＨから選択される。
【０２８４】
本発明のこれらの化合物は、中間化合物として有用であり、これらの化合物から、続いて、実施例１〜５９に記載されるようなニトロオキシ誘導体、ならびに、さらに改変されて、ホスフェート、フッ化物、エステル基、および他の改変を含み得るニトロオキシ誘導体が合成され得る。例示的な中間化合物であるレスベラトロル（別名：５［（Ｅ）−２−（４−ヒドロキシ−フェニル）−ビニル］−ベンゼン１，３−ジオール）は、そのニトロオキシ誘導体の調製に有用であり、以下の方法によって合成される。
【０２８５】
封管中の３，５−ジヒドロキシ−ベンジル−ブロミド（１０ｍｍｏｌ）および亜リン酸トリメチル（３０ｍｍｏｌ）の混合物を、油浴中で８時間、１８０℃で加熱する。この混合物を冷却した後、過剰の亜リン酸トリメチルを真空中で除去する。残渣を短いフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して、生成物である（３，５−ジヒドロキシ−ベンジル）−ホスホン酸ジメチルエステルを得る。２ｍＬのＣＨ２ＣＬ２中の粉末化したばかりのＫＯＨ（２ｍｍｏｌ）、１８−クラウン−６（０．１ｍｍｏｌ）も含む、十分に攪拌した懸濁液中の（３，５−ジヒドロキシ−ベンジル）−ホスホン酸ジメチルエステルに、芳香族アルデヒドである４−ヒドロキシ−ベンズアルデヒド（１ｍｍｏｌ）を室温で添加する。混合物を６時間攪拌した後、この混合物を１５ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、水（１０ｍＬ）およびブライン（２×１０ｍＬ）で洗浄する。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、そして真空中で濃縮する。残渣を２ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中に溶解する。この溶液に、ジラード試薬Ｔ（０．５ｍｍｏｌ）およびＡｃＯＨ（５ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を室温で２時間攪拌する。不溶性の物質を濾過して除き、濾液を真空中で濃縮し、そして残渣を１５ｍＬのＥｔＯＡｃ中に溶解する。この溶液をブライン（３×１０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、そして溶媒を真空中で除去して、レスベラトロルをＥおよびＺ異性体の混合状態で得る。ヘプタン（５ｍＬ）中のこの混合物の溶液に、触媒量のヨウ素を添加し、次いで、１２時間加熱還流する。この反応混合物を２０ｍＬのエーテルで希釈し、そして飽和亜硫酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）およびブライン（２×１０ｍＬ）で洗浄する。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、そして真空中で濃縮して、所望のＥ−レスベラトロルを得る。
【０２８６】
この方法は、本発明によって企図されるＮＯを供与するニトロオキシ誘導体化合物の合成のための中間化合物である、任意のスチルベン化合物を合成するのに有利に使用される。
【０２８７】
ジヒドロスチルベンは、連結基の２つの炭素原子間に単結合を有することが異なる、対応するスチルベンの誘導体であり、スチルベン親化合物から有利に合成され得る。一般的な方法は以下の通りである。
【０２８８】
エタノール（１２０ｍＬ）中のスチルベン（１ｍｍｏｌ）を、木炭（６０ｍｇ）上で１０％パラジウムの存在下で１８〜２４時間、４０ｐｓｉで水素化する。この触媒を、セライトパッドを通して濾過することによって除去し、そしてこの濾液から溶媒をエバポレートして、ジヒドロスチルベン誘導体を得る。
【０２８９】
この方法は、本発明によって企図されるＮＯを供与するニトロオキシ誘導体化合物の合成のための中間化合物である、任意のジヒドロスチルベン化合物を合成するのに有利に使用される。
【０２９０】
（実施例９５：本発明のリン酸誘導体化合物の合成方法）
リン酸基は、血清中における化合物の代謝および半減期を変更し得るため、本発明のいくつかの化合物について、ヒドロキシル基の代わりにリン酸基に置換することが有利であり得る。この例に限定されないが、一例として、レスベラトロルのリン酸誘導体の合成（フッ化物、エステルおよびニトロオキシ基（すなわち、ニトレート基または硝酸エステル基）によって他のヒドロキシル基が置換されると、有利に生じる）が、本明細書中に記載される。
【０２９１】
まず、レスベラトロルの単一ニトロオキシ置換誘導体（例えば、３−［（Ｅ）−２−（４−ヒドロキシ−フェニル）−ビニル］−５−ニトロオキシ−フェノール）を合成し、単離し、そして実施例１に記載されるように精製する。無水アセトニトリル（３０ｍＬ）中の単一ニトロオキシ置換誘導体（４ｇ）およびＮ，Ｎ−（ジメチルアミノ）ピリジン（０．２ｇ）を、−１０℃に冷却し、そして四塩化炭素（５当量）およびＤＩＥＡ（２当量）を添加する。この混合物を−１０℃にてアルゴン下で３０分間攪拌し、ジベンジルホスフェート（１当量）を添加し、そしてこの溶液を１２時間攪拌し、次いで、０．５Ｍリン酸２水素カリウム中に注ぎ込む。この混合物を酢酸エチルで抽出し、この有機相から真空中で溶媒を除去して、着色油状物を得る。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（４：１ヘキサン−酢酸エチル）に供し、リン酸エステル生成物を着色油状物として回収する。
【０２９２】
無水ジクロロメタン中のリン酸エステル生成物の溶液（１５ｍＬ）に、０℃でブロモトリメチルシラン（２当量）を添加し、この混合物を２時間攪拌する。水（１０ｍＬ）を添加し、この溶液を１時間攪拌し、酢酸エチルで洗浄し、そしてこの水相を白色固体になるまで凍結乾燥させる。この固体のエタノール中の溶液（３０ｍＬ）に、ナトリウムメトキシド（０．６ｇ）を添加し、この懸濁液を１２時間攪拌する。溶媒を真空中で除去し、得られた着色油状物を水中に溶解する。この溶液を酢酸エチルで洗浄し、次いで凍結乾燥して、リン酸基、ヒドロキシル基およびニトロオキシ基を有するレスベラトロルの誘導体の混合物を含む、高収率、高純度の無色固体を得る。所望の誘導体（単数または複数）を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって単離および精製する。
【０２９３】
この合成プロセスは、本発明の任意の化合物について、ヒドロキシル基の代わりにホスフェートに置換するのに有利に用いられ得る。
【０２９４】
（実施例９６：本発明のアセチル誘導体化合物の合成方法）
特定のアセチルは、親油性度を変更し得、従って血清中における化合物の代謝速度および半減期を改変し得るため、本発明のいくつかの化合物について、ヒドロキシル基の代わりにアセチル基に置換することが有利であり得る。例えば、レスベラトロルの１つ以上のヒドロキシル基を置換して、レスベラトロルのアセテート誘導体を形成すると、血清中における代謝速度が低下し、半減期が延長される。レスベラトロルのアセテート誘導体の合成（１つ以上のニトレート（すなわち、ＯＮＯ２、または硝酸エステル）基の付加前、そして所望の場合にはリン酸基の付加前であるが、フッ素添加の後に、有利に生じる）が、本明細書中に記載される。
【０２９５】
レスベラトロル（０．５ミリモル）を、乾燥ジクロロメタン（５ｍＬ）中に溶解する。過剰の乾燥ピリジンを添加し、続いて１ミリモルの無水酢酸を添加する。得られた溶液を、室温で５時間攪拌する。反応混合物を濃縮し、ジクロロメタン（２０ｍＬ）中に再溶解する。有機層を、塩化水素溶液（０．１Ｍ、１０ｍＬ）、炭酸水素ナトリウム（飽和、１０ｍＬ）、およびブラインで洗浄する。この有機層を、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮して、１つ、２つ、または３つ全てのヒドロキシル基がアセテートで置換された、高い収率および純度のレスベラトロルアセテート誘導体の混合物を生じた。これらの種々の生成物を、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製および単離する。
【０２９６】
アセテート誘導体はまた、ハロゲン化アセチル（例えば、塩化アセチル）または活性アセテート（例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）を用いて合成される。本発明の化合物の他のエステルは、無水酢酸を別の活性エステルまたは酸ハロゲン化物に置き換えて、同じ手順を用いて同様に合成される。本発明によって企図される任意の化合物上の任意のヒドロキシル基と置き換わり得るエステルの例は、以下の式：
【０２９７】
【化７１】
2007509842.tif 000062
によって記載され、ここで、Ｒは、Ｃ１−１８、アリール、ヘテロアリール、および必要に応じて置換されるそれらの誘導体であってもよい。
【０２９８】
実施例１〜５９に記載されるようなニトロ化合成工程は、アセテート誘導体の合成ならびにシリカゲル上でのクロマトグラフィーによる単離および精製の後に、有利に実施され得る。
【０２９９】
（実施例９７：ニトロオキシ誘導体を合成するための中間化合物として用いられ、本発明によって企図される全ての化合物である、本発明の化合物のメトキシおよびエトキシ誘導体の合成方法）
メトキシ基およびエトキシ基は新油性であることが知られ、従って、薬物の活性を低下させることなくインビボにおけるその半減期を改変し得るため、Ｒ基として示されるメトキシ（ＯＣＨ３）またはエトキシ（ＯＣＨ２ＣＨ３）基を有することが、本発明のいくつかの化合物にとって有利であり得る。アリール炭化水素の（例えば、ベンゼン、フェノールなどの）多数のメトキシおよびエトキシ誘導体が公知であり、市販の供給源から容易に入手可能であるか、あるいは、周知の方法によって容易に合成可能である。従って、スチルベン類の化合物、および他のポリフェノール類の化合物を作製するための基礎的要素は、容易に入手可能であり、そして実施例９０〜９４におけるように利用され得る。従って、本願中で定義されるようなポリフェノールおよびスチルベンは、これらのＲ基が独立して、必要に応じてメトキシ（ＯＣＨ３）またはエトキシ（ＯＣＨ２ＣＨ３）を含み得るように合成され得る。
【０３００】
（実施例９８：本発明の化合物の抗真菌活性の実証方法）
本発明の殺真菌性化合物は、米国特許第６，１６５，９９８号に教示されるような方法を用いて立証される。手短に言えば、約１０６個のＣ．ａｌｂｉｃａｎｓ細胞またはＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ細胞を、２５μｇ／ｍＬの本発明の殺真菌性化合物に４５分間曝露することにより、検出可能なコロニー形成単位を全く残さない。
【０３０１】
さらに、本発明の殺真菌性化合物は、全身性カンジダ症のためのマウスモデルにおいて有効である。本発明の殺真菌性化合物は、処置されたマウスの平均生存時間および中央生存時間を延長する。これらの化合物は腹腔内投与され、経口投与されたポジティブコントロール化合物であるフルコナゾールによって生じた生存パターンと類似の生存パターンを生じる。本発明の殺真菌性化合物およびフルコナゾールの両方は、処置された動物の腎臓由来の回復可能なコロニーを減少させる。本発明の殺真菌性化合物はまた、慢性全身性カンジダ感染症に罹患したマウスに経口投与される場合にも有効である。経口投与される化合物は、生存時間、治癒パーセントおよび腎臓負荷量によって測定されるように、効力においてフルコナゾールと類似している。本発明の殺真菌性化合物はまた、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓのフルコナゾール耐性株によって引き起こされる全身性カンジダ症に対しても有効である。
【０３０２】
（実施例９９：本発明の化合物の抗癌活性の実証方法）
本発明の化合物の抗癌活性を、米国特許第５，１４５，８３９号に教示されるように、以下の癌の動物モデルを用い、本発明の化合物で処置することによって、実証する。
【０３０３】
リンパ腫ＹＣ８（腹水形態）を有するＯ  ＢＡＬＢ  Ｃマウスおよびエールリッヒ腹水細胞を有するスイスマウス（２０〜２２グラム、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ育種）を、無作為に１０匹１組に分配する。各組に、それぞれ以下を投与する：
組Ｉ  コントロール。腫瘍細胞およびＮａＣｌ等張液（０．２ｍＬ／マウス、２回／日、腹腔内経路）
組ＩＩ：腫瘍細胞を有するマウスに、本発明の化合物を０．２ｍＬ／マウス、２回／日、腹腔内投与する
組ＩＩＩ：腫瘍細胞を有するマウスに、本発明の化合物：０．２ｍＬ／マウス、２回／日、腹腔内経路で投与し、かつ化学療法薬を腹腔内投与する
組ＩＶ：腫瘍細胞を有するマウスに、本発明の化合物：０．２ｍＬ／マウス、２回／日、筋肉内投与する。
【０３０４】
腹水腫瘍細胞を、これらの細胞を１５〜２０日間保有しているマウスから、滅菌培地中に採取する。０．１ｍＬの腹水懸濁液を、１０ｍＬの緩衝化溶液（ｐＨ７．２）：（ＮａＣｌ  ７．２ｇ／Ｌ；ＮＡ２ＨＰＯ４  ４．３ｇ／ＬおよびＫＨ２ＰＯ４  ０．４ｇ／Ｌ）と混合する。細胞の数を決定し（Ｍａｌａｓｓｅｚ細胞によって）、そして細胞懸濁液を、細胞数がほぼ４０．０００〜５０．０００／ｍＬになるように希釈する。０．１ｍＬのこの懸濁液を、組Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩのマウスに腹腔内経路によって、そして組ＩＶのマウスに筋肉内経路によって、直ちに注射する。
【０３０５】
腫瘍細胞の注射の４８時間後：組ＩＩのマウスに、３７℃に加熱し、ミリポア上で濾過した本発明の化合物を、連続５日間処置し（腹腔内）；組ＩＩＩのマウスを、本発明の化合物と抗生物質の１つとの混合物で連続５日間処置（腹腔内）し；組Ｉのマウス（コントロール）に、等張液のみを連続５日間投与（腹腔内）し；組ＩＶのマウスに、本発明の化合物を連続１５日間投与（筋肉内）する。マウスを、処置の休止後、１または２ヶ月間観察する。健康状態の良好な生存体のみを考慮する。従って、本発明の化合物は、この試験において実証されるように、抗癌剤として有用である。
【０３０６】
（実施例１００：本発明の化合物の抗糖尿病活性の実証方法）
本発明の化合物の血糖降下活性を、米国特許第６，４１０，５９６号に教示される方法を用いて実証する。この試験は、Ｃ５７ＢＬ／ｋｓ糖尿病（ｄｂ／ｄｂ）マウス（すなわち、インシュリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）の当該分野で認められているモデル）において血漿グルコースレベルを低下させる本発明の化合物の活性を実証する。
【０３０７】
（実施例１０１：本発明の化合物の抗ウイルス活性の実証方法）
（マウスインフルエンザモデルにおけるロブスタフラボン（Ｒｏｂｕｓｔａｆｌａｖｏｎｅ）のインビボ評価）
インビボ実験を実施して、本発明の化合物が、特定病原体除去ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて実験的に引き起されるインフルエンザウイルス感染に対して有効であることを実証する。これらの実験は、本質的に米国特許第６，３９９，６５４号の実施例１１に教示されるように、ロブスタフラボンの代わりに本発明の化合物を用いて実施される。
【０３０８】
（実施例１０２：５−ニトロオキシ−ペンタン酸４−［５，７−ビス−（５−ニトロオキシ−ペンタノイルオキシ）−４−オキソ−クロマン−２−イル］−フェニルエステルの調製）
【０３０９】
【化７２】
2007509842.tif 000063
（５−ニトロオキシ−ペンタン酸の合成）
アセトニトリル中の５−ブロモ−ペンタン酸（１８０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、硝酸銀（２５５ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）の混合物を、４０℃で攪拌する。反応を薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によってモニターする。反応の完了後、ジクロロメタンを添加し、この混合物を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮する。この粗生成物をカラムクロマトグラフィーによって精製する。
【０３１０】
【化７３】
2007509842.tif 000064
（（２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イル）５−ニトロオキシ−ペンタノエートの合成）
ジクロロメタン中の５−ニトロオキシ−ペンタン酸（１６３ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（１７３ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ、２８８ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）の混合物を、室温にてＮ２下で攪拌する。反応をＴＬＣによってモニターする。反応の完了後、ジクロロメタンを添加し、この混合物を水で洗浄する。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮する。この残渣をカラムクロマトグラフィーによって精製する。
【０３１１】
【化７４】
2007509842.tif 000065
（ナリンゲニンの逆エステルニトロオキシアナログの合成）
アセトニトリル中のナリンゲニン（７５８ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、（２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イル）５−ニトロオキシ−ペンタノエート（１．３ｇ、５ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（６４６ｍｇ、５ｍｍｏｌ）の混合物を、室温または４０℃にてＮ２下で攪拌する。反応をＴＬＣによってモニターする。反応の完了後、ジクロロメタンを添加し、この混合物をＨＣｌ水溶液（０．１Ｎ）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、および水で洗浄する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮する。この粗生成物をカラムクロマトグラフィーによって精製する。
【０３１２】
あるいは、この生成物を、別の活性化カルボン酸アナログ（酸塩化物、無水物、など）を用いて作製する。
【０３１３】
逆エステルニトロオキシ誘導体は、本発明によって企図される全ての化合物について、本方法によって合成され得る（例えば、ナリンゲニンについて提供される合成方法は、実施例１〜５９の任意の出発化合物に適用され得、これは、引き続いて、この出発化合物のニトロオキシ誘導体よりもむしろ、この出発化合物の逆エステルニトロオキシ誘導体を生じる）。
【０３１４】
（方法１：「逆エステルニトロオキシ」化合物の合成のための推奨方法論）
【０３１５】
【化７５】
2007509842.tif 000066
（方法２：「逆エステルニトロオキシ」化合物の合成のための推奨方法論）
【０３１６】
【化７６】
2007509842.tif 000067
（実施例１０３：５−ニトロオキシ−ペンタン酸４−［５，７−ビス−（５−ニトロオキシ−ペンタノイルオキシ）−４−オキソ−クロマン−２−イル］−フェニルエステルの代替の調製）
【０３１７】
【化７７】
2007509842.tif 000068
（（２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イル）５−ブロモ−ペンタノエートの合成）
ジクロロメタン中の５−ブロモ−ペンタン酸（１８０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（１７３ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ、２８８ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）の混合物を、室温にてＮ２下で攪拌する。反応をＴＬＣによってモニターする。反応の完了後、ジクロロメタンを添加し、この混合物を水で洗浄する。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮する。この残渣をカラムクロマトグラフィーによって精製する。
【０３１８】
【化７８】
2007509842.tif 000069
（活性化５−ブロモ−ペンタン酸アナログを用いたナリンゲニンのトリ−（５−ブロモ−ペンタノエート）の合成）
アセトニトリル中のナリンゲニン（２７２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、（２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イル）５−ブロモ−ペンタノエート（１．３９ｇ、５ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（６４６ｍｇ、５ｍｍｏｌ）の混合物を、室温または４０℃にてＮ２下で攪拌する。反応をＴＬＣによってモニターする。反応の完了後、ジクロロメタンを添加し、この混合物をＨＣｌ水溶液（０．１Ｎ）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、および水で洗浄する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮する。この粗生成物をカラムクロマトグラフィーによって精製する。
【０３１９】
あるいは、この生成物を、別の活性化カルボン酸アナログ（酸塩化物、無水物、など）を用いて作製する。
【０３２０】
【化７９】
2007509842.tif 000070
（ナリンゲニンの逆エステルニトロオキシアナログの合成）
ナリンゲニンのトリ−（５−ブロモ−ペンタノエート）（７５８ｍｇ、１ｍｍｏｌ）および硝酸銀（８５０ｍｇ、５ｍｍｏｌ）を、４０℃にてアセトニトリル中で攪拌する。反応をＴＬＣによってモニターする。反応の完了後、ジクロロメタンを添加し、この混合物を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮する。この粗生成物をカラムクロマトグラフィーによって精製する。
【０３２１】
逆エステルニトロオキシ誘導体は、本発明によって企図される全ての化合物について、本方法によって合成され得る（例えば、ナリンゲニンについて提供される合成方法は、実施例１〜５９の任意の出発化合物に適用され得、これは、引き続いて、この出発化合物のニトロオキシ誘導体よりもむしろ、この出発化合物の逆エステルニトロオキシ誘導体を生じる）。
【国際調査報告】
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