(57)【要約】  スペーサーまたはキャリアによってコンジュゲートされた２つ以上のハプテンを含む化合物が開示される。ハプテンは、ジエチレントリアミンペンタアセテート（ＤＴＰＡ）、ヒスタミン−スクシニル−グルタミン（ＨＳＧ）、またはＤＴＰＡおよびＨＳＧの組合せを含むことができる。化合物は、ハプテン、スペーサー／キャリアの１つ以上、またはその両方にコンジュゲートできるエフェクター分子も含む。エフェクター分子は、エステル結合、イミノ結合、アミノ結合、スルフィド結合、チオセミカルバゾン結合、セミカルバゾン結合、オキシム結合、エーテル結合、またはこれらの結合の組合せを含む多数の結合によってコンジュゲートできる。化合物および／または化合物の前駆物質を合成する方法も開示される。
2007528372.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）スペーサー分子によって結合された２つ以上のハプテンと、
（Ｂ）エステル結合、イミノ結合、アミノ結合、スルフィド結合、チオセミカルバゾン結合、セミカルバゾン結合、ヒドラゾン結合、ヒドラジン結合、オキシム結合、エーテル結合、アミド結合またはそれらの組合せの１つ以上を含む結合によって、ハプテンまたはスペーサー分子に結合された１つ以上のエフェクター分子と
を含む化合物。
【請求項２】
結合がエステル結合を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
結合がスルフィド結合を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
結合がヒドラゾン結合を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
結合がシステイン残基、ペニシラミン残基、チオ乳酸残基、またはその誘導体をさらに含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
結合がシステイン残基またはその誘導体を含み、１つ以上のエフェクター分子がエステル結合によってシステイン残基またはその誘導体に結合されている、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
結合がペニシラミン残基またはその誘導体を含み、１つ以上のエフェクター分子がエステル結合によってペニシラミン残基またはその誘導体に結合されている、請求項５に記載の化合物。
【請求項８】
結合がチオ乳酸残基またはその誘導体を含み、１つ以上のエフェクター分子がエステル結合によってチオ乳酸残基またはその誘導体に結合されている、請求項５に記載の化合物。
【請求項９】
ハプテンがハード酸キレート剤、ソフト酸キレート剤、またはその両方を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
ハプテンがＤＴＰＡ、ＨＳＧ、またはその両方を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
ハプテンがＤＴＰＡを含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
１つ以上のハプテンがＤＴＰＡを含み、１つ以上のハプテンがＨＳＧを含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
インジウムカチオンをさらに含む、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１４】
スペーサー分子がペプチドを含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
ペプチドが１つ以上のＤ−アミノ酸を含む、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
ペプチドが３つ以上のアミノ酸を含む、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１７】
ペプチドが１つ以上のリジン残基を含む、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１８】
ペプチドが１つ以上のシステイン残基を含む、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１９】
ペプチドが１つ以上のペニシラミン残基またはその誘導体を含む、請求項１４に記載の化合物。
【請求項２０】
ペプチドが１つ以上のチオ乳酸残基またはその誘導体を含む、請求項１４に記載の化合物。
【請求項２１】
ペプチドが配列Ｒ1−Ｌｙｓ（Ｘ）−Ｒ2−Ｌｙｓ（Ｙ）またはＬｙｓ（Ｘ）−Ｒ2−Ｌｙｓ（Ｙ）−Ｒ1の１つ以上を含み、式中、（Ｘ）および（Ｙ）がコンジュゲートされたハプテンを含み、式中、エフェクター分子がＲ1、Ｒ2、（Ｘ）、または（Ｙ）にコンジュゲートされている、請求項１４に記載の化合物。
【請求項２２】
エフェクター分子が、１つ以上の薬物、プロドラッグ、毒素、酵素、オリゴヌクレオチド、放射性同位体、免疫調節物質、サイトカイン、ホルモン、結合分子、脂質、ポリマー、ミセル、リポソーム、ナノ粒子、またはその組合せを含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項２３】
結合分子が抗体またはその断片を含む、請求項２２に記載の化合物。
【請求項２４】
エフェクター分子が、アプリジン、アザリビン、アナストロゾール、アザシチジン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブリオスタチン−１、ブスルファン、カリケアマイシン、カンプトセシン、１０−ヒドロキシカンプトセシン、カルムスチン、セレブレックス、クロラムブシル、シスプラチン、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）、ＳＮ−３８、カルボプラチン、クラドリビン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ドセタキセル、ダクチノマイシン、ダウノマイシングルクロニド、ダウノルビシン、デキサメタゾン、ジエチルスチルベストロール、ドキソルビシン、２−ピロリノドキソルビシン（２Ｐ−ＤＯＸ）、シアノ−モルホリノドキソルビシン、ドキソルビシングルクロニド、エピルビシングルクロニド、エチニルエストラジオール、エストラムスチン、エトポシド、エトポシドグルクロニド、エトポシドホスフェート、フロクスウリジン（ＦＵｄＲ）、３’，５’−Ｏ−ジオレオイル−ＦｕｄＲ（ＦＵｄＲ−ｄＯ）、フルダラビン、フルタミド、フルオロウラシル、フルオキシメステロン、ゲムシタビン、ヒドロキシプロゲステロンカプロアート、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、Ｌ−アスパラギナーゼ、ロイコボリン、ロムスチン、メクロレタミン、メドロプロゲステロンアセテート、メゲストロールアセテート、メルファラン、メルカプトプリン、６−メルカプトプリン、メトトレキサート、ミトキサントロン、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトタン、フェニルブチラート、プレドニゾン、プロカルバジン、パクリタキセル、ペントスタチン、ＰＳＩ−３４１、セムスチンストレプトゾシン、タモキシフェン、タキサン、タキソール、テストステロンプロピオナート、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、テニポシド、トポテカン、ウラシルマスタード、ベルケード、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンクリスチン、リシン、アブリン、リボヌクレアーゼ、オンコナーゼ、ｒａｐＬＲ１、ＤＮａｓｅＩ、ブドウ球菌エンテロトキシン−Ａ、アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリア毒素、シュードモナスエキソトキシン、シュードモナスエンドトキシン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、干渉ＲＮＡ、またはその組合せを含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項２５】
エフェクター分子がカンプトセシンまたはその誘導体を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項２６】
エフェクター分子がドキソルビシンまたはその誘導体を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項２７】
18Ｆ、32Ｐ、33Ｐ、45Ｔｉ、47Ｓｃ、52Ｆｅ、59Ｆｅ、62Ｃｕ、64Ｃｕ、67Ｃｕ、67Ｇａ、68Ｇａ、75Ｓｅ、77Ａｓ、86Ｙ、89Ｓｒ、89Ｚｒ、90Ｙ、94Ｔｃ、94mＴｃ、99Ｍｏ、99mＴｃ、105Ｐｄ、105Ｒｈ、111Ａｇ、111Ｉｎ、123Ｉ、124Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、142Ｐｒ、143Ｐｒ、149Ｐｍ、153Ｓｍ、154-158Ｇｄ、161Ｔｂ、166Ｄｙ、166Ｈｏ、169Ｅｒ、175Ｌｕ、177Ｌｕ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、189Ｒｅ、194Ｉｒ、198Ａｕ、199Ａｕ、211Ａｔ、211Ｐｂ、212Ｂｉ、212Ｐｂ、213Ｂｉ、223Ｒａ、225Ａｃ、またはその組合せから選択される同位体をさらに含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項２８】
エフェクターが脂質を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項２９】
請求項２８の化合物を含むリポソームまたはミセル。
【請求項３０】
薬物または毒素をさらに含む、請求項２８に記載のリポソームまたはミセル。
【請求項３１】
請求項２８の化合物を含むエマルジョン。
【請求項３２】
薬物または毒素をさらに含む、請求項３１に記載のエマルジョン。
【請求項３３】
患者における疾患または疾患を引き起こす可能性のある状態を治療および／または診断する方法であって、
（Ａ）標的化組織に結合する少なくとも１つのアームおよび標的可能な構築物に結合する少なくとも１つの他のアームを有する結合分子を患者に投与するステップと、
（Ｂ）任意選択により、患者にクリアリング組成物を投与して、組成物に非局在化結合分子を循環から取り除くステップと、
（Ｃ）患者に請求項１に記載の化合物を含む標的可能な構築物を投与するステップと
を含む方法。
【請求項３４】
ハプテンがＤＴＰＡを含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
１つ以上のハプテンがＤＴＰＡを含み、１つ以上のハプテンがＨＳＧを含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
化合物がインジウムカチオンをさらに含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
スペーサーがペプチドを含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３８】
ペプチドが１つ以上のＤ−アミノ酸を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
ペプチドが３つ以上のアミノ酸を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
ペプチドが１つ以上のシステイン残基を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項４１】
ペプチドが１つ以上のペニシラミン残基またはその誘導体を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項４２】
ペプチドが１つ以上のチオ乳酸残基またはその誘導体を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項４３】
ペプチドが１つ以上のリジン残基を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項４４】
ペプチドが配列Ｒ1−Ｌｙｓ（Ｘ）−Ｒ2−Ｌｙｓ（Ｙ）またはＬｙｓ（Ｘ）−Ｒ2−Ｌｙｓ（Ｙ）−Ｒ1の１つ以上を含み、式中、（Ｘ）および（Ｙ）がコンジュゲートされたハプテンを含み、式中、エフェクター分子がＲ1またはＲ2にコンジュゲートされている、請求項３７に記載の方法。
【請求項４５】
結合がエステル結合を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項４６】
結合がスルフィド結合を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項４７】
結合がヒドラゾン結合を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項４８】
エフェクター分子が１つ以上の薬物、プロドラッグ、毒素、酵素、放射性同位体、免疫調節物質、オリゴヌクレオチド、サイトカイン、ホルモン、抗体、またはその組合せを含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項４９】
エフェクター分子がアプリジン、アザリビン、アナストロゾール、アザシチジン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブリオスタチン−１、ブスルファン、カンプトセシン、１０−ヒドロキシカンプトセシン、カルムスチン、セレブレックス、クロラムブシル、シスプラチン、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）、ＳＮ−３８、カルボプラチン、クラドリビン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ドセタキセル、ダクチノマイシン、ダウノマイシングルクロニド、ダウノルビシン、デキサメタゾン、ジエチルスチルベストロール、ドキソルビシン、２−ピロリノドキソルビシン（２Ｐ−ＤＯＸ）、シアノ−モルホリノドキソルビシン、ドキソルビシングルクロニド、エピルビシングルクロニド、エチニルエストラジオール、エストラムスチン、エトポシド、エトポシドグルクロニド、エトポシドホスフェート、フロクスウリジン（ＦＵｄＲ）、３’，５’−Ｏ−ジオレオイル−ＦｕｄＲ（ＦＵｄＲ−ｄＯ）、フルダラビン、フルタミド、フルオロウラシル、フルオキシメステロン、ゲムシタビン、ヒドロキシプロゲステロンカプロアート、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、Ｌ−アスパラギナーゼ、ロイコボリン、ロムスチン、メクロレタミン、メドロプロゲステロンアセテート、メゲストロールアセテート、メルファラン、メルカプトプリン、６−メルカプトプリン、メトトレキサート、ミトキサントロン、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトタン、フェニルブチラート、プレドニゾン、プロカルバジン、パクリタキセル、ペントスタチン、セムスチンストレプトゾシン、タモキシフェン、タキサン、タキソール、テストステロンプロピオナート、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、テニポシド、トポテカン、ウラシルマスタード、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンクリスチン、リシン、アブリン、リボヌクレアーゼ、オンコナーゼ、ｒａｐＬＲ１、ＤＮａｓｅＩ、ブドウ球菌エンテロトキシン−Ａ、アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリア毒素、シュードモナスエキソトキシン、シュードモナスエンドトキシン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、干渉ＲＮＡ、またはその組合せを含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項５０】
エフェクター分子がカンプトセシンまたはその誘導体を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項５１】
エフェクター分子がドキソルビシンまたはその誘導体を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項５２】
化合物が18Ｆ、32Ｐ、33Ｐ、45Ｔｉ、47Ｓｃ、52Ｆｅ、59Ｆｅ、62Ｃｕ、64Ｃｕ、67Ｃｕ、67Ｇａ、68Ｇａ、75Ｓｅ、77Ａｓ、86Ｙ、89Ｓｒ、89Ｚｒ、90Ｙ、94Ｔｃ、94mＴｃ、99Ｍｏ、99mＴｃ、105Ｐｄ、105Ｒｈ、111Ａｇ、111Ｉｎ、123Ｉ、124Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、142Ｐｒ、143Ｐｒ、149Ｐｍ、153Ｓｍ、154-158Ｇｄ、161Ｔｂ、166Ｄｙ、166Ｈｏ、169Ｅｒ、175Ｌｕ、177Ｌｕ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、189Ｒｅ、194Ｉｒ、198Ａｕ、199Ａｕ、211Ａｔ、211Ｐｂ、212Ｂｉ、212Ｐｂ、213Ｂｉ、223Ｒａ、225Ａｃ、またはその組合せから選択される同位体をさらに含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項５３】
エフェクター分子がカルボキシエステラーゼ、グルクロニダーゼ、カルボキシペプチダーゼ、β−ラクタマーゼ、ホスファターゼ、およびその混合物からなる群より選択される酵素を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項５４】
結合分子が抗体またはその断片を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項５５】
抗体またはその断片が多特異性である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
抗体またはその断片が多価である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
抗体またはその断片が二重特異性である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５８】
抗体またはその断片がモノクローナル抗体またはその断片を含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項５９】
抗体またはその断片がヒト、キメラまたはヒト化抗体あるいはヒト、キメラまたはヒト化抗体の断片を含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項６０】
抗体がＭａｂ  ６７９、Ｍａｂ  ７３４、Ｍａｂ  Ｍｕ−９、ＭＮ−１４、またはその組合せを含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項６１】
抗体が融合タンパク質を含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項６２】
抗体がＭａｂ  ６７９、Ｍａｂ  ７３４、Ｍａｂ  Ｍｕ−９、Ｍａｂ  ＭＮ−１４、またはその組合せのＣＤＲを含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項６３】
疾患または状態が悪性疾患、循環器疾患、感染性疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、代謝性疾患、または神経性疾患を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項６４】
疾患または状態が悪性疾患を含み、標的化組織が癌胎児性抗原、テネイシン、上皮成長因子レセプタ、血小板由来増殖因子レセプタ、線維芽細胞増殖因子レセプタ、血管内皮増殖因子レセプタ、ガングリオシド、ＨＥＲ／２ｎｅｕレセプタおよびその混合物からなる群より選択される抗原を含む、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
標的化組織が腫瘍を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項６６】
腫瘍が、結腸特異性抗原−ｐ（ＣＳＡｐ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ４５、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＨＬＡ−ＤＲ、Ｉａ、Ｉｉ、ＭＵＣ  １、ＭＵＣ  ２、ＭＵＣ  ３、ＭＵＣ  ４、ＮＣＡ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＰＡＭ−４、ＴＡＧ−７２、ＥＧＰ−１、ＥＧＰ−２、Ａ３、ＫＳ−１、Ｌｅ（ｙ）、Ｓ１００、ＰＳＭＡ、ＰＳＡ、テネイシン、葉酸レセプタ、ＶＥＧＦ、ＰＩＧＦ、ＩＬＧＦ−１、壊死抗原、ＩＬ−２、ＩＬ−６、Ｔ１０１、ＭＡＧＥ、およびその組合せからなる群より選択される抗原を生成するか、該抗原に関連している、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
標的化組織が多発骨髄腫、Ｂ細胞悪性腫瘍、Ｔ細胞悪性腫瘍、またはその組合せを含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項６８】
Ｂ細胞悪性腫瘍がＢ細胞リンパ腫の無痛形、Ｂ細胞リンパ腫の浸潤形、慢性白血病、多発性骨髄腫、および急性リンパ性白血病からなる群より選択される、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
標的化組織が非ホジキンリンパ腫またはホジキンリンパ腫を含むリンパ腫を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項７０】
標的化組織が固形腫瘍を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項７１】
固形腫瘍がメラノーマ、癌腫、肉腫、神経膠腫、またはその組合せを含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
癌腫が食道癌、胃癌、結腸癌、直腸癌、すい臓癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、膀胱癌、子宮内膜癌、子宮癌、睾丸癌、腎臓癌、副腎癌、肝臓癌、またはその組合せである、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
疾患または状態が循環器疾患を含み、抗体または抗体断片が顆粒球、リンパ球、単球、フィブリン、Ｄ−ダイマーまたはその混合物に対して特異性である、請求項６３に記載の方法。
【請求項７４】
循環器疾患が心筋梗塞、虚血性心疾患、動脈硬化性プラーク、フィブリン塊、塞栓、またはその組合せを含む、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
感染性疾患が感染性疾患、真菌性疾患、寄生虫疾患、ウイルス性疾患、原虫性疾患、マイコプラズマ性、およびその組合せからなる群より選択される、請求項６３に記載の方法。
【請求項７６】
感染性疾患がミクロスポルム、トリコフィトン、エピデルモフィトン、スポロトリックス・シェンキー、クリプトコッカス・ネオフォルマンス、コクシジオイデス・イミチス、ヒストプラスマ・カプスラーツム、ブラストミセス・デルマティティディス、カンジダ・アルビカンス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、狂犬病ウイルス、インフルエンザウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、センダイウイルス、ネコ白血病ウイルス、レオウイルス、ポリオウイルス、ヒト血清パルボ様ウイルス、サルウイルス４０、呼吸器合胞体ウイルス、マウス乳癌ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、デングウイルス、風疹ウイルス、麻疹ウイルス、アデノウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、マウス白血病ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、水疱性口内炎ウイルス、シンドビスウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、イボウイルス、ブルータングウイルス、炭疽菌、ストレプトコッカス・アガラクティエ、レジオネラ・ニューモフィラ、ストレプトコッカス・ピオゲネス、大腸菌、ナイセリア・ゴノレア、ナイセリア・メニンギティディス、ニューモコッカス、ヘモフィルス・インフルエンザＢ、トレポネーマ・パラジウム、ライム病スピロヘータ、シュードモナス・エアルギノサ、マイコバクテリウム・レプレ、ブルセラ・アボルタス、結核菌、破傷風、蠕虫、マラリア原虫、熱帯熱マラリア原虫、三日熱マラリア原虫、トキソプラズマ・ゴンジィ、ランゲル・トリパノソーマ、クルーズ・トリパノソーマローデシア・トリパノソーマ、ブルセイ・トリパノソーマ、マンソン住血吸虫、日本住血吸虫、ウシバベシア、エルメリア・テネラ、回旋糸状虫、熱帯リーシュマニア、旋毛虫、回旋糸状虫、タイレリア・パルバ、胞状条虫、テニア・オビス、無鉤条虫、単胞条虫、メソセストイデス・コルチ、マイコプラズマ・アルスリティディス、マイコプラズマ・ヒオリニス、マイコプラズマ・オーラル、マイコプラズマアルギニニ、アコレプラスマ・ライドラウィー、マイコプラズマ・サリバルム、マイコプラズマ・ニューモニエ、およびその組合せからなる群より選択される病原体によって引き起こされる、請求項６３に記載の方法。
【請求項７７】
自己免疫疾患が急性特発性血小板減少性紫斑病、慢性特発性血小板減少性紫斑病、皮膚筋炎、シドナム舞踏病、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、リウマチ熱、多内分泌腺症候群、水疱性類天疱瘡、真性糖尿病、ヘノッホ・シェーンライン紫斑、溶連菌感染後腎炎、結節性紅斑、高安動脈炎、アジソン病、関節リウマチ、多発性硬化症、サルコイドーシス、潰瘍性大腸炎、多形性紅斑、ＩｇＡネフロパシー、結節性多発性動脈炎、強直性脊椎炎、グッドパスチャー症候群、血栓性血管炎、シェーグレン症候群、原発性胆汁性肝硬変、橋本病、甲状腺亢進、強皮症、慢性活動性肝炎、多発性筋炎／皮膚筋炎、多発性軟骨炎、尋常性天疱瘡、ヴェグナー肉芽腫症、膜性ネフロパシー、筋萎縮性側索硬化症、脊髄癆、巨細胞性動脈炎／多筋痛、悪性貧血、急速進行性糸球体腎炎、乾癬、線維化性肺胞炎、およびその組合せからなる群より選択される、請求項６３に記載の方法。
【請求項７８】
疾患または状態が神経性疾患または代謝性疾患を含み、標的化組織がアミロイド沈着を含む、請求項６３に記載の方法。
【請求項７９】
１つ以上の治療剤または診断剤を投与するステップをさらに含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項８０】
抗体、抗体断片、薬物、プロドラッグ、毒素、酵素、酵素インヒビタ、ヌクレアーゼ、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、オリゴヌクレオチド、免疫調節物質、サイトカイン、キレート剤、ボロン化合物、ウラン原子、光活性剤、放射性核種、およびその組合せから選択される治療剤を投与するステップをさらに含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項８１】
ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、インターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−γ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、およびその混合物からなる群より選択されるサイトカインを投与するステップをさらに含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項８２】
アンギオスタチン、エンドスタチン、バスキュロスタチン、カンスタチン、マスピン、抗ＶＥＧＦ抗体、抗胎盤増殖因子抗体、抗血管増殖因子抗体、およびその混合物からなる群より選択される血管新生阻害剤を投与するステップをさらに含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項８３】
放射性同位体、染料、放射線不透過性物質、造影剤、蛍光化合物、強調剤、およびその組合せから選択される診断剤を投与するステップをさらに含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項８４】
亜鉛、アルミニウム、ガリウム、ルテチウム、パラジウム、ボロン、ｇａｎｄｏｌｉｎｉｕｍ、ウラン、マンガン、鉄、クロム、銅、コバルト、ニッケル、ジスプロシウム、レニウム、ユーロピウム、テルビウム、ホルミウム、ネオジム、およびその組合せから選択される金属を投与するステップをさらに含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項８５】
クロム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、ネオジム（ＩＩＩ）、サマリウム（ＩＩＩ）、イッテルビウム（ＩＩＩ）、ガドリニウム（ＩＩＩ）、バナジウム（ＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、ホルミウム（ＩＩＩ）、エルビウム（ＩＩＩ）、またはその組合せから選択される常磁性イオンを投与するステップをさらに含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項８６】
診断剤が光線力学療法用の１つ以上の薬剤を含む、請求項８４に記載の方法。
【請求項８７】
診断剤が光増感剤である、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
光増感剤がベンゾポルフィリンモノ酸環Ａ（ＢＤＰ−ＭＡ）、スズエチオプルプリン（ＳｎＥＴ２）、スルホナートアルミニウムフタロシアニン（ＡＩＳＰｃ）およびルテチウムテクサフィリン（Ｌｕｔｅｘ）を含む、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
18Ｆ、32Ｐ、33Ｐ、45Ｔｉ、47Ｓｃ、52Ｆｅ、59Ｆｅ、62Ｃｕ、64Ｃｕ、67Ｃｕ、67Ｇａ、68Ｇａ、75Ｓｅ、77Ａｓ、86Ｙ、89Ｓｒ、89Ｚｒ、90Ｙ、94Ｔｃ、94mＴｃ、99Ｍｏ、99mＴｃ、105Ｐｄ、105Ｒｈ、111Ａｇ、111Ｉｎ、123Ｉ、124Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、142Ｐｒ、143Ｐｒ、149Ｐｍ、153Ｓｍ、154-158Ｇｄ、161Ｔｂ、166Ｄｙ、166Ｈｏ、169Ｅｒ、175Ｌｕ、177Ｌｕ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、189Ｒｅ、194Ｉｒ、198Ａｕ、199Ａｕ、211Ａｔ、211Ｐｂ、212Ｂｉ、212Ｐｂ、213Ｂｉ、223Ｒａ、225Ａｃ、およびその混合物からなる群より選択される治療用または診断用核種を投与するステップをさらに含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項９０】
治療剤が治療用核種を含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項９１】
治療用核種が32Ｐ、33Ｐ、47Ｓｃ、64Ｃｕ、67Ｃｕ、67Ｇａ、90Ｙ、111Ａｇ、111Ｉｎ、123Ｉ、131Ｉ、142Ｐｒ、153Ｓｍ、161Ｔｂ、166Ｄｙ、166Ｈｏ、177Ｌｕ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、189Ｒｅ、211Ａｔ、212Ｐｂ、212Ｂｉ、213Ｂｉ、223Ｒａ、225Ａｃ、またはその混合物を含む、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
治療用核種が７０〜７００ｋｅＶのγ粒子またはポジトロンを放出する、請求項９０に記載の方法。
【請求項９３】
診断剤が診断用核種を含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項９４】
診断用核種が18Ｆ、52Ｆｅ、62Ｃｕ、64Ｃｕ、67Ｃｕ、67Ｇａ、68Ｇａ、86Ｙ、89Ｚｒ、94Ｔｃ、94mＴｃ、99mＴｃ、111Ｉｎ、123Ｉ、124Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、またはその混合物を含む、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
診断用核種が２５〜４０００ｋｅＶのγ粒子および／またはポジトロンを放出する、請求項９３に記載の方法。
【請求項９６】
診断剤がポジトロン放出断層撮影法（ＰＥＴ）を実施するために使用される、請求項７９に記載の方法。
【請求項９７】
ポジトロン放出断層撮影法（ＰＥＴ）を実施するステップをさらに含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項９８】
診断剤が１つ以上の画像強調剤を含み、方法が磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）を実施するステップをさらに含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項９９】
画像強調剤がガドリニウムイオン、ランタンイオン、マンガンイオン、鉄、クロム、銅、コバルト、ニッケル、フッ素、ジスプロシウム、レニウム、ユーロピウム、テルビウム、ホルミウム、ネオジム、またはその混合物を含む、請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
診断剤がＸ線またはコンピュータ断層撮影法（ＣＴ）用の１つ以上の放射線不透過剤または造影剤を含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項１０１】
前記放射線不透過剤または造影剤がバリウム、ジアトリゾアート、エチオダイズド油、ガリウムシトレート、イオカルム酸、イオセタム酸、ヨーダミド、ヨージパミド、ヨードキサム酸、イオグルアミド、イオヘキソール、イオパミドール、イオパノ酸、イオプロセム酸、イオセファム酸、イオセル酸、イオスラミドメグルミン、イオセメト酸、イオタスル、イオテトル酸、イオタラム酸、イオトロクス酸、イオキサグル酸、イオキソトリゾ酸、イポダート、メグルミン、メトリザミド、メトリゾアート、プロピリオドン、塩化第一タリウム、またはその組合せを含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項１０２】
前記診断剤が１つ以上の超音波造影剤を含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項１０３】
前記超音波造影剤がリポソームまたはデキストランを含む、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
リポソームがガス充填されている、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
手術処置、血管内処置、腹腔鏡処置、または内視鏡処置を実施するステップをさらに含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項１０６】
結合分子が経静脈投与され、標的可能な構築物が経口投与される、請求項３３に記載の方法。
【請求項１０７】
１つ以上の窒素位置にてアルキルカルボキシラート基で置換されたポリアルキレンポリアミンを調製する方法であって、
式ＮＨ2−Ｒを有するポリアルキレンポリアミンを、式Ｚ−Ｘ1を有する分子と反応させて、式Ｚ−ＮＨ−Ｒを有する分子（Ｉ）を形成するステップであって、式中、Ｒは、約１〜約２０個の炭素原子を有し、１つ以上の窒素原子を含む直鎖または分岐アルキル基であり、Ｚは、保護基であり、Ｘ1は、離脱基である、ステップと；
分子（Ｉ）を、式：
【化１】
2007528372.tif 000021
（式中、Ｘ2は、離脱基であり、Ａ1およびＡ2は、約１〜約１２個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキル基である）を有する分子（ＩＩ）と反応させて、式：
【化２】
2007528372.tif 000022
（式中、Ｒ内の１つ以上の窒素原子が式：
【化３】
2007528372.tif 000023
を有する分子と場合により置換される）
を有する分子（ＩＩＩ）を形成するステップと；
保護基Ｚを除去して、場合により置換するステップと；
を含む方法。
【請求項１０８】
ポリアルキレンポリアミンが式ＮＨ2−（（ＣＨ2）Ｖ−ＮＨ−（ＣＨ2）W）Y−ＮＨ2を有し、Ｖ、Ｗ、およびＹが約１〜約８であり、同じまたは異なる、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１０９】
ポリアルキレンポリアミンがジエチレントリアミンである、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
保護基Ｚが１つ以上の芳香族基を含む、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１１１】
保護基Ｚが１つ以上のベンゼン環を含む、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
保護基Ｚが式
【化４】
2007528372.tif 000024
を有する、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１３】
Ｚが除去され、１つ以上のカルボニルまたはカルボキシル基を含む置換基によって置換される、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１１４】
分子（ＩＩＩ）をＨ2およびパラジウムと反応させることによって、Ｚが除去され、置換される、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１１５】
分子（ＩＩＩ）ならびにＨ2およびパラジウム、およびグリオキシル酸モノヒドレートと反応させることによって、Ｚが除去され、置換される、請求項１１４に記載の方法。
【請求項１１６】
Ｚが除去され、Ｈによって置換されて、式：
【化５】
2007528372.tif 000025
を有する分子（ＩＶ）を形成する、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１１７】
Ｚが除去されて、式：
【化６】
2007528372.tif 000026
（式中、Ａ3が約１〜約１２個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキル基である）を有する置換基と置換されて、式：
【化７】
2007528372.tif 000027
を有する分子（Ｖ）を形成する、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１１８】
分子（Ｖ）が式：
【化８】
2007528372.tif 000028
を有する、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１１９】
Ｘ1がハロゲン、メシラートまたはトシラートである、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１２０】
Ｘ1がブロミドまたはクロライドである、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
Ｘ2がハロゲン、メシラートまたはトシラートである、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１２２】
Ｘ2がブロミドまたはクロライドである、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２３】
Ａ1が−ＣＨ2−である、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１２４】
Ａ2がｔｅｒｔ−ブチルである、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１２５】
Ｚの除去が分子（ＩＩＩ）にＨ2およびパラジウムを反応させることを含む、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１２６】
分子（ＩＶ）に式：
【化９】
2007528372.tif 000029
を有する分子を反応させて、式：
【化１０】
2007528372.tif 000030
（式中、Ｘ3は離脱基である）
を有する分子（ＶＩ）を形成するステップをさらに含む、請求項１１６に記載の方法。
【請求項１２７】
分子（ＶＩ）が式：
【化１１】
2007528372.tif 000031
を有する、請求項１２６に記載の方法。
【請求項１２８】
分子（ＩＶ）にＨ2およびパラジウムを反応させて、分子（ＶＩ）を形成するステップをさらに含む、請求項１２６に記載の方法。
【請求項１２９】
主に１つのアミン末端に結合した保護基を有するＮ−アルキル化ポリアルキレンポリアミンを調製する方法であって、
第１の反応溶液中で、アミン末端を有するポリアルキレンポリアミンに保護基を含む分子を反応させて、主に１つのアミン末端に結合された保護基を有するポリアルキレンポリアミンを形成するステップと、
主に１つのアミン末端に結合された保護基を有するポリアルキレンポリアミンを第１の反応溶液から抽出するステップと、
第２の反応溶液中で、主に１つのアミン末端に結合した保護基を有するポリアルキレンポリアミンに第１のアルキル化剤を反応させて、主に１つのアミン末端に結合した保護基を有するＮ−アルキル化ポリアルキレンポリアミンを形成するステップと、
主に１つのアミン末端に結合した保護基を有するＮ−アルキル化ポリアルキレンポリアミンを第２の反応溶液から抽出するステップと
を含む方法。
【請求項１３０】
保護基を除去するステップをさらに含む、請求項１２９に記載の方法。
【請求項１３１】
除去が主に１つのアミン末端に結合した保護基を有するＮ−アルキル化ポリアルキレンポリアミンを還元することを含む、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３２】
主に１つのアミン末端に結合した保護基を除去して、保護基のないＮ−アルキル化ポリアルキレンポリアミンを形成するステップと；
保護基のないＮ−アルキル化ポリアルキレンポリアミンに第２の薬剤を反応させて、主に１つのアミン末端に結合した第２のアルキル基を持つＮ−アルキル化ポリアルキレンポリアミンを形成するステップと；
をさらに含む、請求項１２９に記載の方法。
【請求項１３３】
保護基のないＮ−アルキル化ポリアルキレンポリアミンに第２の薬剤を反応させて、主に１つのアミン末端に結合した第２のアルキル基を持つＮ−アルキル化ポリアルキレンポリアミンを形成するステップが、還元アミン化を含む、請求項１３２に記載の方法。
【請求項１３４】
第２の薬剤がアルキル化剤である、請求項１３２に記載の方法。
【請求項１３５】
主に１つのアミン末端に結合した保護基を有するＮ−アルキル化ポリアルキレンポリアミンが、パーアルキル化ポリアミンである、請求項１２９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、その全体が本明細書に組み入れられている、２００４年２月１１に提出された米国特許出願第１０／７７６，４７０号の優先権を請求する。
【背景技術】
【０００２】
癌療法および診断への一般的な手法は、疾患組織に対して抗体または抗体断片を方向付けることを含み、それにより抗体または抗体断片は、診断剤または治療剤に疾患部位を標的とさせることができる。調査されてきたこの方法への１つの具体的な手法は、標的化された疾患組織を特異的に結合する少なくとも１つのアームおよび低分子量ハプテンを特異的に結合する少なくとも１つの他のアームを有するｂｓＡｂの使用を包含する。この方法ではｂｓＡｂを投与して、標的に局在化させ、正常組織を通過させる。少し経ってから、ｂｓＡｂの第２の特異性によって認識される放射性標識低分子量ハプテンを与えると、同じく元の標的に局在化する。
【０００３】
ｂｓＡｂと組合せて使用される低分子量ハプテンが多くの特異的撮像および療法用途を有していても、考えられる各用途のために個々のｂｓＡｂを調製することは実際的ではない。さらにｂｓＡｂ／低分子量ハプテン系の用途は、他の要件がいくつかある。第一に、低分子量ハプテンはｂｓＡｂによって結合されないときは生物系を迅速に通過するように設計されているため、低分子量ハプテンに結合するｂｓＡｂのアームは、高い親和性で結合する必要がある。第二に、非ｂｓＡｂ結合低分子量ハプテンは、非標的組織による摂取および保持を避けるために、生物系を実際に迅速に通過する必要がある。第三に、検出および／または治療剤は、ｂｓＡｂプロトコルでのその利用中は低分子量ハプテンとの結合を維持する必要がある。
【０００４】
この手法により興味深いのは、適切な二重特異性のＡｂを使用してキレート剤および金属キレート錯体を癌に方向付けるｂｓＡｂである。使用されるキレート剤および金属キレート錯体は、放射性であることが多く、放射免疫撮像のために放射性核種を使用する（Ｇｏｏｄｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第４，８６３，７１３号（コバルト−５７の使用について述べている）；Ｂａｒｂｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５，２５６，３９５号および米国特許第５，２７４，０７６号；Ｇｏｏｄｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，３３：１３６６−１３７２（１９９２）；およびＫｒａｎｅｎｂｏｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ（ｓｕｐｐｌ．），５５：５８６４ｓ−５８６７ｓ（１９９５）およびＣａｎｃｅｒ（ｓｕｐｐｌ．）８０：２３９０−２３９７（１９９７）（全てインジウム−１１１の使用について述べている）；およびＢｏｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，６：３７３−３７９，（１９９５）；ａｎｄ  Ｓｃｈｕｈｍａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５５：１１５−１２３（１９９５）（ガリウム−６８の使用について述べている）を参照）。Ａｂはキレート剤および金属キレート錯体に対して産生されるため、それらが最初に対抗して産生された錯体に著しい特異性を有する。実際にＢｏｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．のｂｓＡｂは、キレート剤および金属キレート錯体のエナンチオマー性混合物の単一のエナンチオマーに対する特異性を有する。この大きな特異性は、他の核種（例えば放射免疫療法（ＲＡＩＴ）に有用なイットリウム−９０およびビスマス−２１３、ならびにＭＲＩに有用なガドリニウム）が代替使用のために利用できる試薬中へ直ちに置換できないという点で、１つの態様における欠点であることが判明している。結果として、Ｉ−１３１標識インジウム金属キレート錯体を第２の標的化ステップで使用することによって、非金属であるヨウ素−１３１がＲＡＩＴのために採用されている。この方法の別の欠点により、診断または治療用途に望ましい各薬剤に対して抗体を産生することが必要である。
【０００５】
そのため、癌の撮像および療法のためにプレターゲティング方法がかなりの注目を集めている。エフェクター分子（例えば小型のキャリアに結合された放射性核種または薬物）がターゲティング剤（例えばｂｓＡｂなどの結合分子）に直接結合される直接標的化系とは異なり、プレターゲティング系では、エフェクター分子がターゲティング剤よりも少し後に与えられる。このことは、ターゲティング剤が腫瘍病巣に局在化して、さらに重要なことには体から排出される時間を与える。大半のターゲティング剤が抗体などの結合タンパク質であるため、それらはより小型のエフェクター分子（普通は数分）と比べて、体からはるかに低速で（普通は数日）排出される傾向がある。そのため治療用放射性核種を含む直接ターゲティング系では、体、そして特に非常に脆弱な赤色骨髄は、ターゲティング剤が腫瘍にてそのピークレベルに低速で到達して、体から排出される間ずっと、放射線に暴露されることがある。しかしながらプレターゲティング系では、放射性核種（すなわちエフェクター）は普通、体から非常に迅速に排出される小型の「キャリア」分子、例えばキレートまたはペプチドに結合しており、従って正常組織の暴露は最小限に抑えられる。プレターゲティング系では、小型キャリア分子が腫瘍脈管構造を効率的に横断して、一次ターゲティング剤に結合するため、放射性核種の腫瘍による最大摂取も非常に迅速である。キャリア分子の小さいサイズも、腫瘍内でのより均一な分布を促進することができる。
【０００６】
プレターゲティング方法は多数の異なる方策を使用してきたが、腫瘍抗原およびエフェクター分子を含むキャリア分子上の１つ以上のハプテンを同時認識する、アビジン／ストレプトアビジン−ビオチン認識系または二重特異性抗体をしばしば含む。アビジン／ストレプトアビジン系は非常に多用途であり、複数の形態で使用されてきた。この系において、ストレプトアビジンまたはビオチンと結合した抗体は、一次ターゲティング剤として使用される。これには少し後にエフェクター分子の投与が続き、エフェクター分子はビオチンまたはアビジン／ストレプトアビジンとそれぞれコンジュゲートしていてもよい。別の形態は、３ステップ手法に依存する。（１）最初にビオチンコンジュゲート抗体をターゲティングする；（２）ストレプトアビジン／アビジンによる架橋が続き；（３）そしてビオチンコンジュゲートエフェクターが得られる。これらの系は、エフェクターおよびターゲティング剤が使用される形態に応じてビオチンまたはストレプトアビジン／アビジンと結合可能である限り、各種のエフェクター物質との使用のために容易に変換できる。この種のプレターゲティングは、多くのターゲティング状況で使用される汎用性およびアビジン／ストレプトアビジンとビオチンとの間の高い結合親和性を備え、他の提案された系よりもかなりの利点を有する。しかしながらアビジンおよびストレプトアビジンは外来タンパク質であり、従って免疫原性の場合があり、このことは臨床用途で投与できる回数を制限する。この点でｂｓＡｂは、比較的非免疫原性のヒト化タンパク質として操作できる利点を有する。ｂｓＡｂの結合親和性（通例１０-9〜１０-10Ｍ）は、ストレプトアビジン／アビジン−ビオチン親和性の極めて高い親和性（〜１０-15Ｍ）には匹敵しないが、どちらのプレターゲティング系も一次ターゲティング剤の結合親和性に依存しており、従ってストレプトアビジン／アビジン−ビオチン系のより高い親和性は、ｂｓＡｂプレターゲティング系に勝る実質的な利点を提供しない。しかしながら大半のｂｓＡｂは、一次ターゲットへの結合に利用できるアームを１本のみ有するのに対して、ストレプトアビジン／アビジン−ビオチンプレターゲティング系は通例、ターゲットを結合するために２本のアームを供えたＩｇＧ全体を使用して、このことはターゲット結合を補強する。２価ペプチドを使用することによって、親和性の向上が実現されて、このことは１価ペプチドと比較して、ペプチドのターゲット部位への結合を大幅に改善できる。従ってどちらの系も、優れたターゲティング比を合理的な維持力と共に提供できる。
【０００７】
ｂｓＡｂを用いたプレターゲティングは、エフェクター分子またはエフェクター分子を含有する分子（例えば「標的可能な構築物」として共にエフェクターを備えたキャリア）を認識するために、抗体の１本のアームを必要とする。今日までに報告された大半の放射性核種ターゲティング系は、キレート−金属錯体に対する抗体、例えばインジウム装填ＤＴＰＡに対して方向付けられた抗体または他のキレートに対する抗体に依存してきた。抗体は一般に特定のキレート−金属錯体について選択性であるため、通例、選択されたキレート−金属錯体それぞれについて新しいｂｓＡｂを作成する必要がある。これによりエフェクター分子および抗体によって特に認識されるハプテンを含むキャリア分子を使用することを回避できる。そのためエフェクターおよびハプテンを含むキャリアは、標的可能な構築物として機能する。標的可能な構築物は、抗体が標的可能な構築物上のハプテンを認識するため、プレターゲティング系で異なる抗体を使用せずに異なるエフェクターを構築物中に含むことが可能であるという点で、本来「モジュラー」である。このようにして、エフェクターを含む標的可能な構築物が同一の認識されたハプテンを保持するという条件で、各種のエフェクターをプレターゲティング系で使用できる。
【０００８】
プレターゲティング方法において、エフェクター分子（すなわちターゲティング分子またはキャリア分子）および結合分子（すなわちターゲティング構築物または抗体）は同時に投与されないため、結合分子はエフェクター分子を投与する前に、標的化組織によって内部移行されてはならない。しかしながら、結合分子は２価および二重特異性であるため、結合分子が標的化組織表面上の内部移行レセプタの一部である抗体を認識しても、結合分子の内部移行はエフェクター分子が投与されるまで阻害または遅延される。さらにエフェクター分子が多価である（すなわちそれが結合分子によって認識された２つ以上の部分を含む）場合、エフェクター分子は、架橋された錯体の内部移行を促進するために、標的化組織表面上の２つ以上の結合分子を架橋することができる。エフェクター分子は、標的化組織表面上の内部移行レセプタ（例えば葉酸レセプタ）に結合することによって内部移行を促進する１つ以上の部分も含む。治療剤および診断剤を投与するための組成物の方法は、２００３年１月３１日に提出された米国特許第６０／４４４，３５７号で述べられている。
【０００９】
従って疾患組織に方向付けることが可能であり、次に投与された標的可能な診断または治療コンジュゲート体に特異的に結合できる免疫薬、および二重特異性または多特異性抗体への改変なしに各種の診断剤および治療剤を提供する柔軟なモジュラー系に対する要求が引き続き存在する。我々は、各種のエフェクター物質が調製できる認識系として、ヒスタミン誘導体であるヒスタミン−スクシニル−グリシル（ＨＳＧ）に対して方向付けられた抗体を使用したＪａｎｅｖｉｋ−ｌｖａｎｏｖｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．によって最初に述べられたプレターゲティング系の開発を続けてきた。放射性ヨウ化およびレニウム標識２価ＨＳＧ−含有ペプチドを使用した、優れたプレターゲティングの結果が報告されている。我々は現在の研究において、ハプテンおよび／またはＤＴＰＡなどのキレート剤を含み、90Ｙ、111Ｉｎ、および177Ｌｕはもちろんのこと99mＴｃによって放射性標識するのに適したペプチドを含むようにこの系を拡張した。
【発明の開示】
【００１０】
本明細書では、例えば放射免疫療法（ＲＡＩＴ）での治療用途のための、そして例えば放射免疫検出（ＲＡＩＤ）および磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）での診断用途のための試薬を開示する。本明細書では特に、結合分子（すなわちターゲティング分子）、例えば標的可能な構築物を特異的に結合する少なくとも１本のアームおよび標的化組織を特異的に結合する少なくとも１本の他のアームを有する二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）および二重特異性抗体断片（ｂｓＦａｂ）と共に使用するための、標的可能な分子を開示する。
【００１１】
本明細書で述べる化合物は、スペーサーによってコンジュゲートされた２つ以上のハプテンを含む。ハプテンは、ジエチレントリアミンペンタアセテート（ＤＴＰＡ）、ヒスタミン−スクシニル−グルタミン（ＨＳＧ）、またはＤＴＰＡおよびＨＳＧの組合せを含んでもよい。好ましくは、化合物はＤＴＰＡを含む。１つの実施形態において、化合物はＤＴＰＡおよびＨＳＧを含む。化合物は、標的化組織表面上の１つ以上の結合分子の架橋を促進して架橋錯体の内部移行を促進するために、多価でもよい。化合物は、標的化組織の表面上の内部移行レセプタ（例えば葉酸レセプタ）に結合することによって、内部移行を促進する１つ以上の部分も含んでもよい。
【００１２】
化合物は、ハプテン、スペーサー、またはその両方の１つ以上にコンジュゲートできるエフェクター分子も含む。そのためハプテンおよび／またはスペーサーは、エフェクターに対するキャリア分子として機能できる。エフェクター分子は多数の結合によってコンジュゲートされ、好ましくは、結合は血清中の生理的条件下で安定であるが、結合は標的細胞に局在化しているときの加水分解または標的細胞による内部移行に対して感受性である。例えば結合は、リソソーム内に存在する生理的条件下で酸加水分解を受ける。あるいは特定の結合の加水分解は、標的細胞に局在化する、または標的細胞に内在する１つ以上の酵素によって触媒される。適切な結合は、エステル結合、イミノ結合、アミノ結合、スルフィド結合、チオセミカルバゾン結合、セミカルバゾン結合、オキシム結合、エーテル結合、またはこれらの結合の組合せを含んでもよい。
【００１３】
化合物は金属イオンも含んでもよい。好ましくは、化合物はインジウムカチオンを含む。１つの実施形態において、インジウムなどの金属イオンは、ＤＴＰＡなどのハプテンによってキレート化される。
【００１４】
スペーサーは１つ以上のアミノ酸を含んでよく、好ましくは、スペーサーは３つ以上のアミノ酸を含む。１つの実施形態において、ペプチドは１つ以上のＤ−アミノ酸を含むことができる（例えば血清中で容易に代謝されないさらに安定な分子を作成するために）。
【００１５】
１つの詳細な実施形態において、スペーサーは、１つ以上のリジン残基および１つ以上のシステイン残基を備えたペプチドを含む。別の実施形態において、スペーサーはペニシラミン部分またはペニシラミンの誘導体である部分を含む。さらなる実施形態において、スペーサーは、チオ乳酸部分またはチオ乳酸の誘導体である部分を含む。
【００１６】
ハプテンおよび／またはエフェクターは、スペーサーの１つ以上の残基にコンジュゲートしてもよい。例えばハプテンは、リジン残基のε−窒素原子、またはシステイン残基の硫黄原子にコンジュゲートしてもよい。別の例において、エフェクターは、ペニシラミン部分またはその誘導体、あるいはチオ乳酸部分またはその誘導体にコンジュゲートされる。好ましくは、エフェクター分子はエステル結合、または対象に投与された後に生理的条件下で加水分解される別の結合によって結合される。
【００１７】
本明細書で使用するように、エフェクター分子は所望の結果を引き起こす任意の分子を含む。そのためエフェクター分子は、薬物、プロドラッグ、毒素、酵素、放射性同位体、免疫調節物質、サイトカイン、ホルモン、核酸配列（例えばアンチセンスヌクレオチドまたは干渉ＲＮＡ）、結合分子（例えば抗体）、またはこれらの種類の分子の組合せを含む。アンチセンスオリゴヌクレオチドおよび干渉ＲＮＡは、Ｋａｌｏｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．２００４  Ｊａｎ；３（１）；Ｔｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  ２００１  Ｆｅｂ；２（３）：２２０−６；Ｄｅａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２００３  Ｄｅｃ  ８；２２（５６）：９０８７−９６；Ｎａｈｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２００３  Ｏｃｔ；３０（５  Ｓｕｐｐｌ  １６）：１４３−９；Ｐａｔｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００３  Ｎｏｖ  １５；６３（２２）：７６７９−８８；Ｄｕｘｂｕｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．２００３  Ｎｏｖ  ２１；３１１（３）７８６−９２；Ｃｒｎｋｏｖｉｃ−Ｍｅｒｔｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２００３  Ｎｏｖ  １３；２２（５１）：８３３０−６；Ｌｉｐｓｃｏｍｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  ２００３；２０（６）：５６９−７６；Ｗａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ  ２００３  Ｏｃｔ  ２５；３６２（９３９３）：１４０１−３；Ｂｅｄｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ  ２００３  Ａｕｇ；１３（４０）：３０１−８；Ｄａｍｍ−Ｗｅｌｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．２００３  Ａｕｇ；１３（４）：２８３−９２；Ｄｕｕｒｓｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．２００３  Ａｕｇ；１３（４）：２６７−７３に開示されており、その全ては参照によりその全体が本明細書に組み入れられている。
【００１８】
エフェクターは、本明細書で述べられているように他のエフェクターを含むことができる高次構造（例えばミセル、リポソーム、またはポリマー構造）を形成できる脂質またはポリマーも含んでもよい。あるいはエフェクターはそれ自体高次構造（例えばミセル、リポソーム、ポリマー構造、および／またはナノ粒子）であってもよい。エフェクターが脂質である場合、脂質コンジュゲート化合物は、本明細書で述べるようにエフェクターのいずれかと結合されるエマルジョンを形成することができる。
【００１９】
治療用エフェクター分子は、細胞毒性薬、例えばアプリジン、アザリビン、アナストロゾール、アザシチジン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブリオスタチン−１、ブスルファン、カリケアマイシン、カンプトセシン、１０−ヒドロキシカンプトセシン、カルムスチン、セレブレックス、クロラムブシル、シスプラチン、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）、ＳＮ−３８、カルボプラチン、クラドリビン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ドセタキセル、ダクチノマイシン、ダウノマイシングルクロニド、ダウノルビシン、デキサメタゾン、ジエチルスチルベストロール、ドキソルビシン、２−ピロリノドキソルビシン（２Ｐ−ＤＯＸ）、シアノ−モルホリノドキソルビシン、ドキソルビシングルクロニド、エピルビシングルクロニド、エチニルエストラジオール、エストラムスチン、エトポシド、エトポシドグルクロニド、エトポシドホスフェート、フロクスウリジン（ＦＵｄＲ）、３’，５’−Ｏ−ジオレオイル−ＦｕｄＲ（ＦＵｄＲ−ｄＯ）、フルダラビン、フルタミド、フルオロウラシル、フルオキシメステロン、ゲムシタビン、ヒドロキシプロゲステロンカプロアート、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、Ｌ−アスパラギナーゼ、ロイコボリン、ロムスチン、メクロレタミン、メドロプロゲステロンアセテート、メゲス−トロールアセテート、メルファラン、メルカプトプリン、６−メルカプトプリン、メトトレキサート、ミトキサントロン、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトタン、フェニルブチラート、プレドニゾン、プロカルバジン、パクリタキセル、ペントスタチン、ＰＳＩ−３４１、セムスチンストレプトゾシン、タモキシフェン、タキサン、タキソール、テストステロンプロピオナート、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、テニポシド、トポテカン、ウラシルマスタード、ベルケード、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンクリスチン、リシン、アブリン、リボヌクレアーゼ、オンコナーゼ、ｒａｐＬＲ１、ＤＮａｓｅＩ、ブドウ球菌エンテロトキシン−Ａ、アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリア毒素、シュードモナスシュードモナスエキソトキシン、シュードモナスエンドトキシン、またはこれらの組合せを含んでもよい。
【００２０】
１つの実施形態において、エフェクター分子は、化合物が対象に投与された後に活性化されるプロドラッグでもよい。例えばプロドラッグは、標的化細胞への局在化および／または標的化細胞による内部移行の後に活性化される。特にプロドラッグは、細胞中の生理的条件（例えばリソソームの酸性環境）によって活性化される。あるいはプロドラッグは、１つ以上の酵素によって活性化される（例えばカルボキシエステラーゼは、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）などのプロドラッグを活性化できる。好ましくは、エフェクター分子はカンプトセシン、ドキソルビシン、あるいはその誘導体および／または類似物質を含み、好ましくは、エフェクター分子はエステル結合によってコンジュゲートされる。ドキソルビシン誘導体および／または類似物質は、２−ピロリノドキソルビシン（２Ｐ−ＤＯＸ）およびシアノ−モルホリノドキソルビシンを含む。
【００２１】
エフェクター分子が水溶性でない場合、好ましくはハプテン、スペーサー（例えばペプチド）、および／または結合の１つ以上がエフェクター分子をさらに水溶性にする。１つの実施形態において、不溶性エフェクター分子はエマルジョンまたはリポソームの一部として投与され、そこでエマルジョンまたはリポソームを形成する脂質を投与した化合物の１つ以上（例えば標的可能な構築物）にコンジュゲートできる。別の実施形態において、ハプテン、スペーサー、および／または結合の１つ以上は、エフェクター分子の毒性を低下させることができる。さらなる実施形態において、ハプテン、スペーサー、および／または結合の１つ以上は、化合物（エフェクター分子を含む）の標的化組織への局在化を促進するが、非標的化化合物（および／またはエフェクター分子）は迅速に排出できる。そのため、エフェクター分子の体内分布は、エフェクターをハプテン、スペーサー、および／または結合の１つ以上にコンジュゲートすることによって変化させることができる。
【００２２】
化合物は同位体も含むことができる。例は、18Ｆ、32Ｐ、33Ｐ、45Ｔｉ、47Ｓｃ、52Ｆｅ、59Ｆｅ、62Ｃｕ、64Ｃｕ、67Ｃｕ、67Ｇａ、68Ｇａ、75Ｓｅ、77Ａｓ、86Ｙ、89Ｓｒ、89Ｚｒ、90Ｙ、94Ｔｃ、94mＴｃ、99Ｍｏ、99mＴｃ、105Ｐｄ、105Ｒｈ、111Ａｇ、111Ｉｎ、123Ｉ、124Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、142Ｐｒ、143Ｐｒ、149Ｐｍ、153Ｓｍ、154-158Ｇｄ、161Ｔｂ、166Ｄｙ、166Ｈｏ、169Ｅｒ、175Ｌｕ、177Ｌｕ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、189Ｒｅ、194Ｉｒ、198Ａｕ、199Ａｕ、211Ａｔ、211Ｐｂ、212Ｂｉ、212Ｐｂ、213Ｂｉ、223Ｒａ、または225Ａｃを含む。同位体は、化合物に共有結合されるか、または同位体は化合物（例えばＤＴＰＡ）に存在するキレート化部分によってキレート化される。
【００２３】
詳細な実施形態において、化合物はペプチド、１つ以上のハプテン、および１つ以上のエフェクター分子を含む。さらにペプチドは、１つ以上の配列Ｒ1−Ｌｙｓ（Ｘ）−Ｒ2−Ｌｙｓ（Ｙ）またはＬｙｓ（Ｘ）−Ｒ2−Ｌｙｓ（Ｙ）−Ｒ1を含んでもよく、ここでＲ1およびＲ2は１つ以上のアミノ酸を含み、（Ｘ）および（Ｙ）は抗原分子、ハプテン、ハード酸キレート剤、およびソフト酸キレート剤から選択される１つ以上のコンジュゲート部分を含む。エフェクター分子は本明細書で述べるように、Ｒ1またはＲ2に存在するハプテンおよび／または１つ以上のアミノ酸に結合することによってコンジュゲートできる。望ましくは、結合は血清中で生理的条件にて安定であるが、結合は、化合物が細胞中で内部移行されるときに加水分解を受ける。例えば結合はリソソームでの酸性条件下で加水分解を受けるか、または結合は酵素（例えばカルボキシルエステラーゼ）によって促進されるように加水分解を受ける。結合は、エステル結合、イミノ結合、アミノ結合、スルフィド結合、チオセミカルバゾン結合、セミカルバゾン結合、オキシム結合、エーテル結合、アミド、およびこれらの結合の組合せを含んでもよい。本明細書で示すように、エフェクター分子は、薬物、プロドラッグ、毒素、酵素、放射性同位体、免疫調節物質、サイトカイン、ホルモン、核酸配列、結合分子、またはこれらの組合せを含んでもよい。
【００２４】
部分はハード酸キレート剤でもよく、そこで化合物はハード酸キレート剤を含み、好ましくは、化合物はＩＩａ族およびＩＩＩａ族金属カチオンからなる群より選択されるカチオンをさらに含む。化合物は上述の１つ以上の同位体も含んでもよい。
【００２５】
１つの実施形態において、部分はＤＴＰＡ、ＨＳＧ、ＤＯＴＡ、ＮＯＴＡ、ＴＥＴＡ、Ｔｓｃｇ−Ｃｙｓ、Ｔｓｃａ−Ｃｙｓ、ニトロロ酢酸、またはこれらの組合せ部分を含む。好ましくは、化合物はＤＴＰＡ、ＨＳＧ、またはＤＴＰＡおよびＨＳＧの組合せを含む。さらに好ましくは、化合物はＤＴＰＡを含む。（Ｘ）および（Ｙ）によって示される部分は同じでも異なっていてもよい。
【００２６】
化合物は、ソフト酸キレート剤も含んでもよい。化合物がソフト酸キレート剤を含む場合、化合物は遷移金属のＢｉ、ランタニド、およびアクチニドからなる群より選択されるカチオンも含むことができる。例えば化合物は、Ｔｃ、Ｒｅ、Ｂｉ、またはこれらのカチオンの組合せを含んでもよい。
【００２７】
特定のアミノ酸またはアミノ酸の種類を含むペプチドを合成することが望ましい。例えば１つの実施形態において、Ｒ2で表される基はチロシンを含んでもよい。また、１つ以上のＤ−アミノ酸を含むペプチドを作成することが望ましい。
【００２８】
疾患または患者に疾患を引き起こす状態を治療および／または診断する方法も開示され、該方法は、（１）標的化組織を結合する少なくとも１つのアームおよび標的可能な構築物を結合する少なくとも１つの他のアームを有する結合分子を患者に投与するステップと；（２）場合により、患者にクリアリング組成物を投与して、該組成物に非局在化結合分子を循環から除去させるステップと；（３）患者に上述の化合物の１つ以上を含む１つ以上の標的可能な構築物を投与するステップとを含むことができる。例えば標的可能な構築物は、（１）１つ以上のハプテンがＤＴＰＡまたはＨＳＧである、スペーサーによって結合された２つ以上のハプテンと；（２）ハプテン、スペーサー、またはその両方の１つ以上にコンジュゲートされた、１つ以上のエフェクター分子と；を含む１つ以上の化合物を含むことができる。１つの実施形態において、標的可能な構築物は、（１）配列Ｒ1−Ｌｙｓ（Ｘ）−Ｒ2−Ｌｙｓ（Ｙ）またはＬｙｓ（Ｘ）−Ｒ2−Ｌｙｓ（Ｙ）−Ｒ1（式中、Ｒ1およびＲ2は１つ以上のアミノ酸を含み、（Ｘ）および（Ｙ）はコンジュゲート部分を含む）の１つ以上を有するペプチドと；（２）ペプチドにコンジュゲートされたエフェクター分子を含む化合物を含む。部分は、抗原分子、ハプテン、ハード酸キレート剤、ソフト酸キレート剤、またはそれらの種類の部分の組合せを含んでいてもよい。
【００２９】
本明細書で使用するように、結合分子（すなわちターゲティング分子）は、抗体または抗体の断片を含んでもよい。特定の適切な抗体または結合分子は、多価および多特異性（例えば二重特異性抗体）であってもよい。結合分子は、モノクローナル抗体またはモノクローナル抗体の断片を含んでもよい。抗体または抗体断片（例えばモノクローナル）は、ヒト、キメラまたはヒト化抗体あるいはヒト、キメラまたはヒト化抗体の断片を含む。特定の適切な抗体の例は、Ｍａｂ  ６７９、Ｍａｂ  ７３４、Ｍａｂ  Ｍｕ−９、ＭＮ−１４、ＲＳ−７、６７９、７３４、またはこれらの抗体の組合せを含んでもよい。結合分子または抗体は、融合タンパク質を含む。ある実施形態において、Ｍａｂ  ６７９、Ｍａｂ  ７３４、Ｍａｂ  Ｍｕ−９、ＭＮ−１４、ＲＳ−７、６７９、または７３４のＣＤＲを含む、抗体、その断片、または結合分子を使用することが望ましい。
【００３０】
本明細書で示すように、標的可能な構築物は、配列Ｒ1−Ｌｙｓ（Ｘ）−Ｒ2−Ｌｙｓ（Ｙ）またはＬｙｓ（Ｘ）−Ｒ2−Ｌｙｓ（Ｙ）−Ｒ1を含むペプチドと、Ｒ1またはＲ2に存在するアミノ酸ならびに／あるいはコンジュゲート部分（Ｘ）および／または（Ｙ）の１つ以上にコンジュゲートされたエフェクター分子とを含んでもよい。好ましくは、エフェクター分子は、エステル結合、アミド結合、および／またはヒドラゾン結合によってコンジュゲートされる。
【００３１】
また本明細書で示すように、エフェクター分子は、所望の結果を引き起こす任意の分子を含んでもよい。例えばエフェクター分子は、１つ以上の薬物、プロドラッグ、毒素、酵素、放射性同位体、免疫調節物質、サイトカイン、ホルモン、核酸配列（例えばアンチセンスヌクレオチドまたは干渉ＲＮＡ）、結合分子、または薬物キャリアとして有用であってよく、上述の種類の分子の投与を促進する分子（例えば高次構造を形成できる脂質またはポリマー、あるいは高次構造自体、例えばミセル、リポソーム、ポリマー構造、および／またはナノ粒子）を含んでよい。エフェクター分子の具体的な例は、本明細書で例示する。特にエフェクター分子は、カンプトセシンまたはカンプトセシンの誘導体（例えばＳＮ−３８、１０−ヒドロキシ−ＣＰＴ、９−アミノ−ＣＰＴ、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）など）を含んでよい。ドキソルビシン、またはその誘導体および／または類似物質は、特に適切なエフェクター分子でもよい。ドキソルビシン誘導体は、Ｎａｇｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９６，９３：２４６４−９に述べられている。抗腫瘍アントラサイクリンは、Ｍｏｎｎｅｒｅｔ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００１  ３６：４８３−９３に述べられているように、特に適切なエフェクター分子であってもよい。エフェクター分子（例えばカンプトセシンおよび／またはドキソルビシン）は、標的可能な構築物にコンジュゲートされ、および／または薬物キャリア、例えばミセル／リポソームまたはエマルジョンと会合されてもよく、薬物キャリアは標的可能な構築物にコンジュゲートされる。
【００３２】
エフェクター分子として選択された酵素に関して、特に適切な酵素は、カルボキシエステラーゼ、グルクロニダーゼ、カルボキシペプチダーゼ、β−ラクタマーゼ、ホスファターゼ、またはこれらの酵素の混合物を含んでもよい。
【００３３】
疾患または状態を治療および／または診断する方法は、各種の疾患または状態を治療／診断するために使用できる。例えば悪性疾患、循環器疾患、感染性疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、代謝性疾患、または神経性疾患、あるいはこれらの疾患または状態の組合せ。
【００３４】
疾患または状態が悪性疾患である場合、結合分子は、癌胎児性抗原、テネイシン、上皮増殖因子レセプタ、血小板由来増殖因子レセプタ、線維芽細胞増殖因子レセプタ、血管内皮増殖因子レセプタ、ガングリオシド、ＨＥＲ／２ｎｅｕレセプタおよびこれらの抗原の混合物からなる群より選択される抗原を含む標的化組織に特異的に結合できる。標的化組織は腫瘍も含んでもよい。結合分子は、結腸特異性抗原−ｐ（ＣＳＡｐ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ４５、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＨＬＡ−ＤＲ、ｌａ、ｌｉ、ＭＵＣ  １、ＭＵＣ  ２、ＭＵＣ  ３、ＭＵＣ  ４、ＮＣＡ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＰＡＭ−４、ＴＡＧ−７２、ＥＧＰ−１、ＥＧＰ−２、Ａ３、ＫＳ−１、Ｌｅ（ｙ）、Ｓ１００、ＰＳＭＡ、ＰＳＡ、テネイシン、葉酸レセプタ、ＶＥＧＦ、ＰＩＧＦ、ＩＬＧＦ−１、壊死抗原、ＩＬ−２、ＩＬ−６、Ｔ１０１、ＭＡＧＥ、およびこれらの抗原の組合せを含む、腫瘍によって生成される、または腫瘍と結合する抗原に特異的に結合してもよい。特に有用な抗原は、結合した抗体の内部移行を促進することができるＣＤ７４およびＥＧＰ−１を含む。ＣＤ７４を認識する抗体にはＬＬ１があり、その使用は、米国特許第６，４５８，９３３号；米国特許第６，３９５，２７６号；米国特許第６，０８３，４７７号；および米国特許第出願第２００３−０１０３９８２号に述べられている。ＥＧＰ−１を認識する抗体にはＲＳ７があり、これは米国特許第１０／３７７，１２１号；米国特許第５，６３５，６０３号；およびＳｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５０，１３３０−１３３６で述べられている。
【００３５】
標的化組織は、多発性ｍｙｌｅｏｍａ、Ｂ細胞悪性腫瘍、またはＴ細胞悪性腫瘍を含んでもよい。特異性Ｂ細胞悪性腫瘍は、Ｂ細胞リンパ腫の無痛形、Ｂ細胞リンパ腫の浸潤形、慢性白血病、多発性骨髄腫、および急性リンパ性白血病を含んでもよい。標的化組織は、非ホジキンリンパ腫またはホジキンリンパ腫などのリンパ腫も含んでもよい。
【００３６】
加えて標的化組織は、固形腫瘍、例えばメラノーマ、癌腫、肉腫、神経膠腫、またはこれらの悪性腫瘍の組合せを含んでもよい。特定の癌腫は、食道癌、胃癌、結腸癌、直腸癌、すい臓癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、膀胱癌、子宮内膜癌、子宮癌、睾丸癌、腎臓癌、副腎癌、肝臓癌、またはこれらの癌腫の組合せを含んでもよい。
【００３７】
疾患または状態は、顆粒球、リンパ球、単球、Ｄ−ダイマー、および／またはフィブリン沈着に関連する循環器疾患も含んでもよい。そのため、結合分子（すなわちターゲティング分子）は、顆粒球、リンパ球、単球、および／またはフィブリン上に存在する抗原に特異的に結合してもよい。特定の循環器疾患または状態は、心筋梗塞、虚血性心疾患、動脈硬化性プラーク、フィブリン塊、塞栓、あるいはこれらの疾患または状態の組合せを含んでもよい。
【００３８】
本方法は、感染性疾患、例えば感染性疾患、真菌性疾患、寄生虫性疾患、ウイルス性疾患、原虫性疾患、マイコプラズマ性、およびこれらの感染性疾患の組合せを治療および／または診断するためにも使用できる。特に感染性疾患は、ミクロスポルム、トリコフィトン、エピデルモフィトン、スポロトリックス・シェンキー、クリプトコッカス・ネオフォルマンス、コクシジオイデス・イミチス、ヒストプラスマ・カプスラーツム、ブラストミセス・デルマティティディス、カンジダ・アルビカンス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、狂犬病ウイルス、インフルエンザウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、センダイウイルス、ネコ白血病ウイルス、レオウイルス、ポリオウイルス、ヒト血清パルボ様ウイルス、サルウイルス４０、呼吸器合胞体ウイルス、マウス乳癌ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、デングウイルス、風疹ウイルス、麻疹ウイルス、アデノウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、マウス白血病ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、水疱性口内炎ウイルス、シンドビスウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、イボウイルス、ブルータングウイルス、炭疽菌、ストレプトコッカスアガラクティエ、レジオネラ・ニューモフィラ、ストレプトコッカス・ピオゲネス、大腸菌、ナイセリア・ゴノレア、ナイセリア・メニンギティディス、ニューモコッカス、ヘモフィルス・インフルエンザＢ、トレポネーマ・パラジウム、ライム病スピロヘータ、シュードモナス・エアルギノサ、マイコバクテリウム・レプレ、ブルセラ・アボルタス、結核菌、破傷風、蠕虫、マラリア原虫、熱帯熱マラリア原虫、三日熱マラリア原虫、トキソプラズマ・ゴンジィ、ランゲル・トリパノソーマ、クルーズ・トリパノソーマ、ローデシア・トリパノソーマ、ブルセイ・トリパノソーマ、マンソン住血吸虫、日本住血吸虫、ウシバベシア、エルメリア・テネラ、回旋糸状虫、熱帯リーシュマニア、旋毛虫、回旋糸状虫、タイレリア・パルバ、胞状条虫、テニア・オビス、無鉤条虫、単胞条虫、メソセストイデス・コルチ、マイコプラズマ・アルスリティディス、マイコプラズマ・ヒオリニス、マイコプラズマ・オーラル、マイコプラズマ・アルギニニ、アコレプラスマ・ライドラウィー、マイコプラズマ・サリバルム、マイコプラズマ・ニューモニエ、およびこれらの病原体の組合せからなる群より選択される病原体によって引き起こされ得る。
【００３９】
本方法は、自己免疫疾患または状態、例えば急性特発性血小板減少性紫斑病、慢性特発性血小板減少性紫斑病、皮膚筋炎、シドナム舞踏病、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、リウマチ熱、多内分泌腺症候群、水疱性類天疱瘡、真性糖尿病、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、溶連菌感染後腎炎、結節性紅斑、高安動脈炎、アジソン病、関節リウマチ、多発性硬化症、サルコイドーシス、潰瘍性大腸炎、多形性紅斑、ＩｇＡネフロパシー、結節性多発性動脈炎、強直性脊椎炎、グッドパスチャー症候群、血栓性血管炎、シェーグレン症候群、原発性胆汁性肝硬変、橋本病、甲状腺亢進、強皮症、慢性活動性肝炎、多発性筋炎／皮膚筋炎、多発性軟骨炎、尋常性天疱瘡、ヴェグナー肉芽腫症、膜性ネフロパシー、筋萎縮性側索硬化症、脊髄癆、巨細胞性動脈炎／多筋痛、悪性貧血、急速進行性糸球体腎炎、乾癬、線維化性肺胞炎、およびこれらの疾患または状態の組合せを治療および／または診断するためにも使用される。
【００４０】
神経性疾患も本方法を使用することによって治療または診断できる。例えば代謝性障害、例えばアミロイドーシスを特徴とする神経性疾患は、標的化組織がアミロイド沈着を含む場合に本方法によって治療または診断できる。
【００４１】
結合分子、場合によりクリアリング剤、および標的可能な分子を投与することに加えて、本方法は、１つ以上の追加の治療剤または診断剤を投与することも含んでもよい。適切な治療剤または診断剤は、結合分子（例えば抗体またはその断片）、薬物、プロドラッグ、毒素、酵素、酵素インヒビタ、ヌクレアーゼ、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、免疫調節物質、サイトカイン、キレート剤、ボロン化合物、ウラン原子、光活性剤、放射性核種、およびこれらの薬剤の組合せを含んでもよい。薬剤は、結合分子、場合によりクリアリング剤、および標的可能な分子の投与の前、投与と同時に、または投与の後に投与される。さらに薬剤は、結合分子、クリアリング剤、および／または標的可能な構築物の１つ以上にコンジュゲートできる。薬剤は、標的可能な構築物などの化合物にコンジュゲートできる、エマルジョンまたはリポソームと組合せて投与することもできる。
【００４２】
１つの実施形態において、治療剤は、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１，インターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−γ、Ｇ−ＣＳＦ、およびＧＭ−ＣＳＦ、ならびにこれらのサイトカインの組合せからなる群より選択されるサイトカインを含む。別の実施形態において、治療剤は、アンギオスタチン、エンドスタチン、バスキュロスタチン、カンスタチン、マスピン、抗−ＶＥＧＦ抗体、抗胎盤増殖因子抗体、抗血管増殖因子抗体、およびこれらの血管新生阻害剤の混合物からなる群より選択される血管新生阻害剤を含む。
【００４３】
本方法は、放射性同位体、染料、放射線不透過性物質、造影剤、蛍光化合物、強調剤、およびこれらの診断剤の組合せから選択される診断剤を投与することを含んでもよい。
【００４４】
さらに金属を治療剤または診断剤として投与することも望ましい。例えば亜鉛、アルミニウム、ガリウム、ルテチウム、パラジウム、ボロン、ガンドリニウム、ウラン、マンガン、鉄、クロム、銅、コバルト、ニッケル、ジスプロシウム、レニウム、ユーロピウム、テルビウム、ホルミウム、ネオジム、これらの金属の組合せを投与できる。
【００４５】
診断手順に有用な常磁性イオンも投与できる。常磁性イオンの例は、クロム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、ネオジム（ＩＩＩ）、サマリウム（ＩＩＩ）、イッテルビウム（ＩＩＩ）、ガドリニウム（ＩＩＩ）、バナジウム（ＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、ホルミウム（ＩＩＩ）、エルビウム（ＩＩＩ）、またはこれらの常磁性イオンの組合せを含む。
【００４６】
治療剤および／または診断剤は、光線力学療法のための１つ以上の薬剤（例えば光増感剤）を含んでもよい。光増感剤は、ベンゾポルフィリンモノ酸環Ａ（ＢＤＰ−ＭＡ）、スズエチオプルプリン（ＳｎＥＴ２）、スルホナートアルミニウムフタロシアニン（ＡＩＳＰｃ）およびルテチウムテクサフィリン（Ｌｕｔｅｘ）を含んでもよい。
【００４７】
18Ｆ、32Ｐ、33Ｐ、45Ｔｉ、47Ｓｃ、52Ｆｅ、59Ｆｅ、62Ｃｕ、64Ｃｕ、67Ｃｕ、67Ｇａ、68Ｇａ、75Ｓｅ、77Ａｓ、86Ｙ、89Ｓｒ、89Ｚｒ，90ｙ、94Ｔｃ、94mＴｃ、99Ｍｏ、99mＴｃ、105Ｐｄ、105Ｒｈ、111Ａｇ、111Ｉｎ、123Ｉ、124Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、142Ｐｒ、143Ｐｒ、149Ｐｍ、153Ｓｍ、154-158Ｇｄ、161Ｔｂ、166Ｄｙ、166Ｈｏ、169Ｅｒ、175Ｌｕ、177Ｌｕ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、189Ｒｅ、194Ｉｒ、198Ａｕ、199Ａｕ、211Ａｔ、211Ｐｂ、212Ｂｉ、212Ｐｂ、213Ｂｉ、223Ｒａ、225Ａｃ、およびこれらの核種の混合物を含む、治療用核種または診断用核種も投与できる。特に適切な治療用核種は、32Ｐ、33Ｐ、47Ｓｃ、64Ｃｕ、67Ｃｕ、67Ｇａ、90Ｙ、111Ａｇ、111Ｉｎ、123Ｉ、131Ｉ、142Ｐｒ、153Ｓｍ、161Ｔｂ、166Ｄｙ、166Ｈｏ、177Ｌｕ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、189Ｒｅ、211Ａｔ、212Ｐｂ、212Ｂｉ、213Ｂｉ、223Ｒａ、225Ａｃ、またはこれらの核種の混合物を含んでもよい。治療用核種は、約７０〜約７００ｋｅＶのエネルギーを有するγ粒子および／またはポジトロンを放出してもよい。
【００４８】
特に適切な診断用核種は、18Ｆ、52Ｆｅ、62Ｃｕ、64Ｃｕ、67Ｃｕ、67Ｇａ、68Ｇａ、86Ｙ、89Ｚｒ、94Ｔｃ、94mＴｃ、99mＴｃ、111Ｉｎ、123Ｉ、124Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、またはこれらの核種の混合物を含んでもよい。診断用核種は、約２５〜約４００ｋｅＶのエネルギーを有するγ粒子および／またはポジトロンを放出してもよい。
【００４９】
診断剤は、撮像方法が実施されるときに有用であってもよい。例えば18Ｆなどの核種は、ポジトロン放出断層撮影法（ＰＥＴ）を実施するために含まれる。あるいは磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）を実施するために有用な画像強調剤が含まれる。画像強調剤は、ガドリニウムイオン、ランタンイオン、マンガンイオン、鉄、クロム、銅、コバルト、ニッケル、フッ素、ジスプロシウム、レニウム、ユーロピウム、テルビウム、ホルミウム、ネオジム、またはこれらの薬剤の混合物を含むことができる。別の実施形態において、Ｘ線またはコンピュータ断層撮影法（ＣＴ）用の１つ以上の放射線不透過剤または造影剤が含まれる。放射線不透過剤または造影剤は、バリウム、ジアトリゾアート、エチオダイズド油、ガリウムシトレート、イオカルム酸、イオセタム酸、ヨーダミド、ヨージパミド、ヨードキサム酸、イオグルアミド、イオヘキソール、イオパミドール、イオパノ酸、イオプロセム酸、イオセファム酸、イオセル酸、イオスラミドメグルミン、イオセメト酸、イオタスル、イオテトル酸、イオタラム酸、イオトロクス酸，イオキサグル酸、イオキソトリゾ酸、イポダート、メグルミン、メトリザミド、メトリゾアート、プロピリオドン、塩化第一タリウム、またはこれらの薬剤の組合せを含んでもよい。
【００５０】
本方法は、リポソームまたはデキストランなどの１つ以上の超音波造影剤を投与することも含んでもよい。リポソームはガス充填される。
【００５１】
治療方法および／または診断方法は、治療方法および／または診断方法の前、それと同時に、またはその後のいずれかに手術処置、血管内処置、腹腔鏡処置、または内視鏡処置を実施することも含んでもよい。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５２】
別途規定しない限り、「ａ」または「ａｎ」は、「１つ以上の」を意味する。
【００５３】
「主に」は、「実質的に」および／または少なくとも９０％を意味する。
【００５４】
概要
本明細書では、治療方法または診断方法で標的可能な構築物として有用である化合物を開示する。標的可能な構築物は、標的可能な構築物を結合する少なくとも１つのアームおよび標的化組織を結合する少なくとも１つの他のアームを有する、二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）または抗体断片（ｂｓＦａｂ）などの結合分子によって特異的に結合される。望ましくは、標的可能な構築物は、認識可能なハプテンの少なくとも２つの単位を有するペプチドを含む。認識可能なハプテンの例は、これに限定されるわけではないが、ＤＴＰＡおよびＨＳＧを含む。標的可能な構築物はエフェクター分子にコンジュゲートされ、エフェクター分子は疾患組織を処置または同定するために有用な各種の薬剤を含む。コンジュゲートされたハプテンおよび／またはエフェクター分子の例は、これに限定されるわけではないが、キレート剤、金属キレート錯体、薬物、酵素、および毒素（例えばリシン、アブリン、リボヌクレアーゼ（例えばＲＮａｓｅ）、ＤＮａｓｅＩ、ブドウ球菌エンテロトキシン−Ａ、アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリア毒素、シュードモナスエキソトキシン、シュードモナスエンドトキシン）を含む。エフェクター分子は、本明細書で述べる他のエフェクター細分子と結合される脂質またはポリマーを含んでもよい。例えば脂質またはポリマーは、ミセル／リポソームまたはポリマー構造などの高次構造を形成してもよい。エフェクター分子は、本明細書で述べるようにエフェクター分子を送達するために使用できるナノ粒子を含んでもよい。
【００５５】
二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）プレターゲティングは、診断用途および治療用途のための潜在的に非免疫原性であり、高度に選択性の代案を表す。本明細書で述べたｂｓＡｂプレターゲティング系は、各種の異なる造影剤または治療剤と使用するために潜在的に開発できるという点で、他のプレターゲティング系に勝るさらに重要な利点を示す。この系の柔軟性は、ＤＴＰまたはＨＳＧに対して作られた抗体の使用およびＤＴＰまたはＨＳＧ残基を含有するペプチドの開発に基づいている。ＤＴＰ含有および／またはＨＳＧ含有ペプチドは合成可能であり、ペプチドがＤＴＰを含有する場合、ペプチドは治療または診断において有用であるキレート化核種、例えば111Ｉｎ、90Ｙ、または177Ｌｕによって標識できる。抗体は、ＤＴＰＡ−111Ｉｎ部分に対して産生されてきた。プレターゲティングでは、選択したペプチドは、これらの抗原を発現する腫瘍のための腫瘍ターゲティング能力を提供するために、抗癌胎児性抗原抗体（抗ＣＥＡ）または抗結腸特異性抗原−ｐ抗体（抗ＣＳＡｐ）のどちらかのＦａｂ’断片によって化学的に安定化された抗ＤＴＰＡ−111Ｉｎ  Ｆａｂ’断片または抗ＨＳＧ  Ｆａｂ’断片を使用して、二重特異性抗体と組合せて使用できる。しかしながら他の抗原標的は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＨＬＡ−ＤＲ、Ｉａ、ＭＵＣ  １、ＭＵＣ  ２、ＭＵＣ  ３、ＭＵＣ  ４、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＰＡＭ−４、ＢｒＥ３、ＴＡＧ−７２（Ｂ７２．３、ＣＣ４９）、ＥＧＰ−１（例えばＲＳ７）、ＥＧＰ−２（例えば１７−１Ａおよび他のＥｐ−ＣＡＭ標的）、Ｌｅ（ｙ）（例えばＢ３）、Ａ３、ＫＳ−１、Ｓ１００、ＩＬ−２、Ｔ１０１、壊死抗原、葉酸レセプタ、血管形成マーカー（例えばＶＥＧＦ）、テネイシン、ＰＳＭＡ、ＰＳＡ、腫瘍関連サイトカイン、ＭＡＧＥおよび／またはその断片などに対する、当分野で既知の多様な腫瘍関連抗原を含んでもよい。組織特異性抗体（例えば骨髄細胞に対する、例えばＣＤ３４、ＣＤ７４など、およびパラチログロブリン抗体など）はもちろんのこと、非悪性疾患組織、例えば血栓のフィブリンおよび／またはＤ−ダイマーに対する抗体、動脈硬化性プラーク（例えばＣＤ７４抗体）のマクロファージ抗原、そしてまた特異性病原体抗体（例えば細菌、ウイルス、および寄生虫に対する）が当分野で周知である。
【００５６】
本明細書で述べるペプチドは、精製の必要を回避する容易な方法で高い特異的活性まで放射性標識することができる。腫瘍を持つヌードマウスのインビボ試験は、放射性標識ペプチドが腫瘍または正常組織において最小限だけ保持されて、体から迅速に排出されることを示した。例えばプレターゲティング系が非常に柔軟性であり、診断撮像および治療上の対象の広範な化合物を使用可能であることを示す、表１〜１２、１４、および１６〜１８を参照。優れた腫瘍による摂取およびターゲティング比を達成することによって、開示されたプレターゲティング系は、多くの用途で使用するに非常に有望である。
【００５７】
哺乳類における標的細胞、組織または病原体を検出および／または治療する方法であって、標的化組織を特異的に結合する少なくとも１つのアームおよび標的可能な構築物を特異的に結合する少なくとも１つの他のアームを含む結合分子（例えば二重特異性抗体または抗体断片）の有効量を投与するステップを含む方法がさらに含まれる。本明細書で使用するように、「病原体」という用語は、これに限定されるわけではないが、真菌（例えばミクロスポルム、トリコフィトン、エピデルモフィトン、スポロトリックス・シェンキー、クリプトコッカス・ネオフォルマンス、コクシジオイデス・イミチス、ヒストプラスマ・カプスラーツム、ブラストミセス・デルマティティディス、カンジダ・アルビカンス）、ウイルス（例えばヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、狂犬病ウイルス、インフルエンザウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、センダイウイルス、ネコ白血病ウイルス、レオウイルス、ポリオウイルス、ヒト血清パルボ様ウイルス、サルウイルス４０、呼吸器合胞体ウイルス、マウス乳癌ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、デングウイルス、風疹ウイルス、麻疹ウイルス、アデノウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、マウス白血病ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、水疱性口内炎ウイルス、シンドビスウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、イボウイルスおよびブルータングウイルス）、寄生虫、細菌（例えば炭疽菌、ストレプトコッカス・アガラクティエ、レジオネラ・ニューモフィラ、ストレプトコッカス・ピオゲネス、大腸菌、ナイセリア・ゴノレア、ナイセリア・メニンギティディス、ニューモコッカス、ヘモフィルス・インフルエンザＢ、トレポネーマ・パラジウム、ライム病スピロヘータ、シュードモナス・エアルギノサ、マイコバクテリウム・レプレ、ブルセラ・アボルタス、結核菌および破傷風毒素）、マイコプラズマ（例えばマイコプラズマ・アルスリティディス、Ｍ．ヒオリニス、Ｍ．オーラル、Ｍ．アルギニニ、アコレプラズマ・ライドラウィー、Ｍ．サリバルム、およびＭ．ニューモニエ）ならびに原生動物（例えば熱帯熱マラリア原虫、三日熱マラリア原虫、トキソプラズマ・ゴンジィ、ランゲル・トリパノソーマ、クルーズ・トリパノソーマ、ローデシア・トリパノソーマ、ブルセイ・トリパノソーマ、マンソン住血吸虫、日本住血吸虫、ウシバベシア、エルメリア・テネラ、回旋糸状虫、熱帯リーシュマニア、旋毛虫、回旋糸状虫、タイレリア・パルバ、胞状条虫、テニア・オビス、無鉤条虫、単胞条虫およびメソセストイデス・コルチ）を含む。米国特許第５，３３２，５６７号を参照。
【００５８】
抗体および抗体断片を含む結合分子も本明細書で開示される。抗体断片は、抗体の抗原結合部分、例えばＦａｂまたはＦ（ａｂ）2などである。抗体断片は、無傷の抗体によって認識される同一の抗原に結合する。例えば抗ＣＤ２２モノクローナル抗体断片は、ＣＤ２２のエピトープに結合する。
【００５９】
「抗体断片」という用語は、特異性抗原に結合して錯体を形成することによって抗体のように作用する合成または遺伝子組換えタンパク質も含む。例えば抗体断片は、重鎖および軽鎖の可変領域からなる単離断片、すなわち「Ｆｖ」断片、重鎖および軽鎖可変領域がペプチドリンカー（「ｓＦｖタンパク質」）によって結合される組換え単鎖ポリペプチド分子、および「超可変領域」を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位を含む。これらのいわゆる「超可変」領域または「相補性決定領域」（ＣＤＲ）の３つが、軽鎖または重鎖の各可変領域に見出される。各ＣＤＲには比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）が隣接している。ＦＲは、可変領域の構造完全性を維持すると考えられる。軽鎖のＣＤＲおよび対応する重鎖のＣＤＲは、抗原−結合部位を形成する。ＣＤＲの「超可変性」は、抗体の特異性の多様性を説明している。
【００６０】
本明細書で使用するように「対象」および「患者」という用語は、これに限定されるわけではないが、ヒトおよび他の霊長類、げっ歯類（例えばマウス、ラット、およびモルモット）、ｌａｇａｍｏｒｐｈｓ（例えばウサギ）、ウシ（例えば畜牛）、ヒツジ（ｏｖｉｎｅ）（例えばヒツジ（ｓｈｅｅｐ）、ヤギ（ｃａｐｒｉｎｅ）（例えばヤギ（ｇｏａｔ））、ブタ（ｐｏｒｃｉｎｅ）（例えばブタ（ｓｗｉｎｅ））、ウマ（ｅｑｕｉｎｅ）（例えばウマ（ｈｏｒｓｅ））、イヌ（ｃａｎｉｎｅ）（例えばイヌ（ｄｏｇ））、ネコ（ｆｅｌｉｎｅ）（例えばネコ（ｃａｔ））、家禽（例えばニワトリ、シチメンチョウ、アヒル、ガチョウ、他の家禽鳥類など）を含むいずれの動物（すなわち脊椎動物および無脊椎動物）ももちろんのこと、これに限定されるわけではないが、有蹄動物（例えばシカ）、クマ、魚類、ｌａｇａｍｏｒｐｈｓ、げっ歯類、鳥類などの動物を含む野生（ｆｅｒａｌ）または野生（ｗｉｌｄ）動物も指す。該用語が特定の年齢または性別に限定されないものとする。従って成年および新生対象は胎児と同様に、オスまたはメスにかかわらず、該用語に含まれる。
【００６１】
抗体に対して標的可能な構築物
記載したように、上述の化合物は標的可能な構築物として使用できる。標的可能な構築物は多様な構造であり得るが、免疫反応の誘発を低下させるだけではなく、ｂｓＡｂターゲティング法の中で使用されるときには迅速なインビボクリアランスのためにも選択されている。疎水性剤は強い免疫反応を誘発させるのに迅速で最良であるが、これに対して親水性剤は迅速なインビボクリアランスにとって好ましく、従って理想的な構築物は、疎水性および親水性品質の両方を所有するであろう。これは一部は、多くの有機エフェクター（例えばカンプトセシンなどの毒素）の固有の疎水性を相殺するために、親水性キレート化剤（例えばＤＴＰＡ）の使用に依存することによって実現される。また、反対の溶解特性を有する標的可能な構築物のサブユニット、例えばその一部が疎水性であり、その一部が親水性であるアミノ酸を含有するペプチドが選択される。本明細書で述べる化合物を合成するために、ペプチドとは別に、炭水化物も使用できるか、または他の適切な分子を使用できる。
【００６２】
標的可能な構築物は、わずか２個のアミノ酸残基（好ましくは２〜１０個のアミノ酸残基）を有するペプチド主鎖（例えばスペーサーとして）を含んでもよく、主鎖はキレート化剤などの他の部分に結合される。標的可能な構築物は、好ましくは５０，０００ダルトン未満の、好都合には約２０，０００ダルトン、１０，０００ダルトンまたは５，０００ダルトン未満の分子量を有し、キレート化剤に結合されるいずれの金属イオンを含む、低分子量構築物である。例えば既知のペプチドＤＴＰＡ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＯＨ（式中、ＤＴＰＡはジエチレントリアミンペンタ酢酸）は、上で記載したように、分子のインジウム−ＤＴＰＡ部に対する抗体を産生するのに使用されてきた。しかしながら非インジウム含有分子、および適切なスクリーニングステップを使用することによって、チロシル−リジンジペプチドに対する新しいＡｂも作成できる。さらに通常は、ペプチドＮ−アセチル−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ2（配列番号１）などの標的可能な構築物の抗原性ペプチドは、４つ以上の残基を有するであろう。
【００６３】
標的可能な構築物のハプテンは、免疫原性認識部分も提供する。ＤＴＰＡまたはＨＳＧハプテンなどのハプテンを使用すると、構築物に対して高い特異性を備えたｂｓＡｂを産生できる。これは、ＤＴＰＡまたはＨＳＧハプテンに対して産生された抗体が既知であり、適切なｂｓＡｂの中に容易に包含させられるためである。従ってハプテンのペプチド主鎖へのカップリングは、ｂｓＡｂまたはｂｓＦａｂによって特異的に認識される標的可能な構築物を生じる。
【００６４】
化合物は、最終ｂｓＡｂ／構築物系によって使用されるときに、標的可能な構築物を認識するｂｓＡｂのアームが完全に特異性であるようにするために、非天然アミノ酸、例えばＤ−アミノ酸をペプチド主鎖構造に包含させる。さらに他の非天然アミノ酸およびペプトイドから構築されたような他の主鎖構造は、化合物中に存在できる。Ｄ−アミノ酸および／またはＬ−アミノ酸の包含は、ペプチドの安定性を制御するためにも使用できる。
【００６５】
免疫原として使用されるペプチドは従来、固相キャリアならびに反復直交脱保護およびカップリングの標準技法を使用して、自動化ペプチドシンセサイザで合成される。後でキレートコンジュゲーションに使用されるペプチド中の遊離アミノ基は、アセチル基などの標準保護基によって好都合に遮断される。そのような保護基は、当業者に既知となるであろう。Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｗｕｔｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９９９（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．）を参照。後で使用するためにペプチドがｂｓＡｂ系内で調製されるとき、インビボカルボキシペプチダーゼ活性を阻害するために、それらは好都合に樹脂から開裂して、対応するＣ末端アミドを産生する。標的可能な構築物を調製する方法は、米国特許出願第０９／３３７，７５６号；第０９／３８２，１８６号；第０９／８２３，７４６号；および第１０／１５０，６５４号に述べられている；その全ては参照により本明細書に組み入れられている。
【００６６】
キレート部分
標的可能な構築物上の親水性キレート部分の存在は、迅速なインビボクリアランスを確実にするのに役立つ。親水性に加えて、キレート剤はその金属結合特性のために選択され、少なくともｂｓＡｂエピトープがキレート剤でないそれらの標的可能な構築物では、金属キレート錯体の認識が必要ないため、自由自在に変更することができる。
【００６７】
金属キレートの特に有用な組合せは、放射線撮像およびＲＡＩＴのための47Ｓｃ、52Ｆｅ、55Ｃｏ、67Ｇａ、68Ｇａ、111Ｉｎ、89Ｚｒ、90Ｙ、161Ｔｂ、177Ｌｕ、212Ｂｉ、213Ｂｉ、および225Ａｃと共に使用される、２−ベンジル−ＤＴＰＡならびにそのモノメチルおよびシクロヘキシル類似物質を含む。同じキレート剤は、ＭＲＩで使用するためにＭｎ、ＦｅおよびＧｄなどの非放射性金属と錯化したときに、本明細書で述べる方法のｂｓＡｂと共に使用できる。ＮＯＴＡ（１，４，７−トリアザ−シクロノナン−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリ酢酸）、ＤＯＴＡ、およびＴＥＴＡ（ｐ−ブロモアセトアミド−ベンジル−テトラエチルアミンテトラ酢酸）などの大環状キレート剤は、各種の金属および放射性金属と共に、たいていはＧａ、ＹおよびＣｕそれぞれの放射性核種と共に使用される。
【００６８】
ＤＴＰＡおよびＤＯＴＡタイプのキレート剤は、リガンドがハード塩基キレート化官能基、例えばカルボキシラートまたはアミン基を含む場合、ハード酸カチオン、特にＩＩａ族およびＩＩＩａ族金属カチオンをキレート化するのに最も有効である。そのような金属キレート錯体は、環サイズを対象の金属に合せて調整することによって非常に安定にすることができる。他の環タイプのキレート剤、例えば大環状ポリエーテルは、ＲＡＩＴのための223Ｒａなどの核種を安定に結合するための対象である。ポルフィリンキレート剤は多数の放射性金属と共に使用され、ｂｓＡｂ依存性免疫光療法のある低温金属錯体としても有用である。また複数の金属イオン、例えば低温イオン、診断放射性核種および／または治療用放射性核種をコンジュゲートするために、１種類を超えるキレート剤を標的可能な構築物に結合させることができる。
【００６９】
標的可能な構築物のキレート化剤に結合できる、特に有用な診断用放射性核種は、これに限定されるわけではないが、110Ｉｎ、111Ｉｎ、177Ｌｕ、18Ｆ、52Ｆｅ、62Ｃｕ、64Ｃｕ、67Ｃｕ、67Ｇａ、68Ｇａ、86Ｙ、90Ｙ、89Ｚｒ、94mＴｃ、94Ｔｃ、99mＴｃ、120Ｉ、123Ｉ、124Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、154-158Ｇｄ、32Ｐ、11Ｃ、13Ｎ、15Ｏ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、51Ｍｎ、52mＭｎ、55Ｃｏ、72Ａｓ、75Ｂｒ、76Ｂｒ、82mＲｂ、83Ｓｒ、あるいは他のγ−、β−、またはポジトロンエミッタを含む。好ましくは、診断用放射性核種は、２５〜１０，０００ｋｅＶの範囲の、さらに好ましくは２５〜４，０００ｋｅＶの範囲の、さらになお好ましくは２０〜１，０００ｋｅＶの範囲の、まださらに好ましくは７０〜７００ｋｅＶの範囲の崩壊エネルギーを含む。有用なポジトロン放出放射性核種の全崩壊エネルギーは、好ましくは＜２，０００ｋｅＶ、さらに好ましくは１，０００ｋｅＶ以下、および最も好ましくは＜７００ｋｅＶである。γ線検出を利用する診断剤として有用な放射性核種は、これに限定されるわけではないが：51Ｃｒ、57Ｃｏ、58Ｃｏ、59Ｆｅ、67Ｃｕ、67Ｇａ、75Ｓｅ、97Ｒｕ、99mＴｃ、111Ｉｎ、114mＩｎ、123Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、169Ｙｂ、197Ｈｇおよび201ＴＩを含む。有用なγ線放出放射性核種の崩壊エネルギーは、好ましくは２０〜２０００ｋｅＶ、さらに好ましくは６０〜６００ｋｅＶ、最も好ましくは１００〜３００ｋｅＶである。
【００７０】
標的可能な構築物のキレート化剤に結合できる特に有用な治療用放射性核種は、これに限定されるわけではないが、111Ｉｎ、177Ｌｕ、212Ｂｉ、213Ｂｉ、211Ａｔ、62Ｃｕ、64Ｃｕ、67Ｃｕ、90Ｙ、125Ｉ、131Ｉ、32Ｐ、33Ｐ、47Ｓｃ、111Ａｇ、67Ｇａ、142Ｐｒ、153Ｓｍ、161Ｔｂ、166Ｄｙ、166Ｈｏ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、189Ｒｅ、212Ｐｂ、223Ｒａ、225Ａｃ、59Ｆｅ、75Ｓｅ、77Ａｓ、89Ｓｒ、99Ｍｏ、105Ｒｈ、109Ｐｄ、143Ｐｒ、149Ｐｍ、169Ｅｒ、194Ｉｒ、198Ａｕ、199Ａｕ、および211Ｐｂを含む。治療用放射性核種は、好ましくは２５〜１０，０００ｋｅＶの範囲の崩壊エネルギーを有する。有用なβ粒子放出核種の崩壊エネルギーは、好ましくは２５〜５，０００ｋｅＶ、さらに好ましくは１００〜４，０００ｋｅＶ、最も好ましくは５００〜２，５００ｋｅＶである。オージェ放出粒子によって実質的に崩壊する放射性核種も好ましい。例えば58Ｃｏ、67Ｇａ、80mＢｒ、99mＴｃ、103mＲｈ、109Ｐｔ、111Ｉｎ、119Ｓｂ、125Ｉ、161Ｈｏ、189mＯｓおよび192Ｉｒ。有用なβ粒子放出核種の崩壊エネルギーは、好ましくは＜１，０００ｋｅＶ、さらに好ましくは＜１００ｋｅＶ、最も好ましくは＜７０ｋｅＶである。α粒子の生成によって実質的に崩壊する放射性核種も好ましい。そのような放射性核種は、これに限定されるわけではないが：152Ｄｙ、211Ａｔ、212Ｂｉ、223Ｒａ、219Ｒｎ、215Ｐｏ、211Ｂｉ、225Ａｃ、221Ｆｒ、217Ａｔ、213Ｂｉおよび225Ｆｍを含む。有用なα粒子放出放射性核種の崩壊エネルギーは、好ましくは２，０００〜９，０００ｋｅＶ、さらに好ましくは３，０００〜８，０００ｋｅＶ、最も好ましくは４，０００〜７，０００ｋｅＶである。
【００７１】
米国特許第５，７５３，２０６号に開示されたようなキレート剤、特にチオセミカルバゾニルグリオキシシステイン（Ｔｓｃｇ−Ｃｙｓ）およびチオセミカルバジニルアセチルシステイン（Ｔｓｃａ−Ｃｙｓ）キレート剤は、ソフト塩基リガンド、特に硫黄またはリン含有リガンドに固く結合されているＴｃ、Ｒｅ、Ｂｉおよび他の遷移金属、ランタニドおよびアクチニドのソフト酸カチオンを結合するために好都合に使用される。それは１種類を超えるキレート剤をペプチドに結合するために有用である（例えばＩｎ（ＩＩＩ）カチオン用のＤＴＰＡなどのハード酸キレート剤、Ｔｃカチオン用のＴｓｃｇ−Ｃｙｓなどのソフト酸キレート剤）。ジ−ＤＴＰＡハプテンに対する抗体は既知であり（Ｂａｒｂｅｔ’３９５、同上）、ｂｓＡｂを形成するためにターゲティング抗体に直ちに結合されるので、疾患組織へ放射性同位体を標的化するためのプレターゲティングプロトコルにて、低温ジ−ＤＴＰＡキレート剤（例えば放射性同位体によってキレート化されない）を含むペプチドおよび放射性同位体を含むキレート剤を使用することが可能である。そのようなペプチドの一例は、Ａｃ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ−Ｃｙｓ）−ＮＨ2（配列番号２）である。このペプチドは、Ｉｎ（ＩＩＩ）を再装填して、次に99MＴｃカチオンで標識することが可能であり、Ｉｎ（ＩＩＩ）イオンはＤＴＰＡによって優先的にキレート化され、Ｔｃカチオンは、チオール含有Ｔｓｃｇ−Ｃｙｓに優先的に結合する。ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、ＴＥＴＡなどの他のハード酸キレート剤はＤＴＰＡ基と置換可能であり、それらに特異的なＭａｂは、抗ジ−ＤＴＰＡ  Ｍａｂを産生するために使用される技法と類似の技法を使用して産生できる。
【００７２】
カチオンの異なるサイズ、キレート環の形態、およびカチオンの好ましい錯体イオン構造に基づいて、２つの異なるハード酸またはソフト酸カチオンに優先的に結合させるために、２つの異なるハード酸またはソフト酸キレート剤をリンカー（例えば異なるキレート環サイズを有する）内に包含できることが認識されるであろう。これによって、一方または両方が放射性であるか、またはＭＲＩ強調にとって有用である、２つの異なる金属をプレターゲティングされたｂｓＡｂによる最終的な捕捉のためにリンカー内に包含させることができる。
【００７３】
キレート剤は、以下の実施例にさらに十分に述べられている標準化学作用を使用して、標的可能な構築物のペプチドに結合される。Ｋａｒａｃａｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１１：８４２−８５４（２０００）；ならびに米国特許出願第０９／３３７，７５６号；第０９／３８２，１８６号；第０９／８２３，７４６号；および第１０／１５０，６５４号も参照；その全てが参照により本明細書に組み入れられている。本明細書で使用する保護基の省略形「Ａｌｏｃ」および「Ｆｍｏｃ」は、基アリルオキシカルボニルおよびフルオレニルメトキシカルボニルを指す。
【００７４】
金属キレートの一般的な調製方法
キレート剤ペプチドコンジュゲート体は、長期間に渡って固体として保存できる。それらは金属結合反応のために単位用量として計量されて、固体、水性または半水性溶液、凍結溶液あるいは凍結乾燥調製物のいずれかとして単位用量で保存される。それらは周知の手順で標識できる。
【００７５】
通例、ハード酸カチオンは、従来の塩の溶液として導入され、ハード酸キレート剤によって、そしておそらくソフト酸キレート剤によって取込まれる。しかしながらソフト酸カチオンの後での添加は、ソフト酸キレート剤によるその結合を引き起こして、その中にキレート化されるいずれのハード酸カチオンに取って代わる。例えば過剰な低温111ＩｎＣｌ3の存在下でも、ソフト酸キレート剤は、99mＴｃ（Ｖ）グルコヘプトナートによって提供された、または塩化第一スズおよび99mＮａ−ＴｃＯ4を用いてインサイチューで産生されたＴｃカチオンによって定量的に標識できる。
【００７６】
186Ｒｅ、188Ｒｅ、213Ｂｉなどの他のソフト酸カチオンならびにＭｎ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｐｂ、Ｃｕ、Ｃｄ、Ａｕ、Ｆｅ、Ａｇ（１価）、ＺｎおよびＨｇ、特に64Ｃｕおよび67Ｃｕの２価または３価カチオンなどは、その一部が放射免疫検出または放射免疫治療に有用であり、類似の方法によってリンカーペプチドに装填できる。レニウムカチオンも過レニウム酸塩および第１スズイオンからインサイチューで産生されるか、あるいは予備還元レニウムグルコヘプタノアートまたは他のトランスキレート剤を使用できる。過レニウム酸塩の還元は、Ｔｃの還元に必要であるよりも多い第１スズイオン（通例、２００ｇ／ｍＬ超の最終濃度）を必要とするため、より高レベルの第１スズイオンがジスルフィド環化ペプチドに存在するような感受性のジスルフィド結合を還元しないようにするために、特別に注意を払う必要がある。レニウムでの放射性標識の間に、99mＴｃで使用するのと同様の手順が使用される。Ｔｓｃｇ−ＣｙｓリガンドのＲｅＯ金属錯体を調製するための１つの方法は、ペプチドをＲｅＯＣｌ3（Ｐ（Ｐｈ3）2と反応させることによるが、ＲｅＯ（エチレンジアミン）2などの他の還元種を使用することも可能である。
【００７７】
金属キレート錯体を調製する他の方法は、米国特許出願第０９／３３７，７５６号；第０９／３８２，１８６号；第０９／８２３，７４６号；および第１０／１５０，６５４号に述べられている；その全ては参照により本明細書に組み入れられている。
【００７８】
標的可能な構築物、ｂｓＡｂ、および追加の治療剤または診断剤を投与する方法
以下に示す議論の多くが、疾患組織を処置する状況における二重特異性抗体および標的可能な構築物の使用に焦点を当てていることに注目すべきである。しかしながら、参照により本明細書に組み入れられた米国特許第６，１２６，９１６号；第６，０７７，４９９号；第６，０１０，６８０号；第５，７７６，０９５号；第５，７７６，０９４号；第５，７７６，０９３号；第５，７７２，９８１号；第５，７５３，２０６号；第５，７４６，９９６号；第５，６９７，９０２号；第５，３２８，６７９号；第５，１２８，１１９号；第５，１０１，８２７号；および第４，７３５，２１０号で述べられた方法を使用する、正常組織および臓器の処置および／または撮像における標的可能な構築物および二重特異性抗体の使用も考慮される。本明細書で使用するように、「組織」という用語は、これに限定されるわけではないが、卵巣、胸腺、副甲状腺、骨髄または脾臓からの組織を含む組織を指す。正常組織を標的化するときの重要な用途は、子宮内膜症の場合などに、それらが異所性である（すなわちその正常な位置から移動された）ときに、それらを同定および処置することである。
【００７９】
標的可能な構築物および／またはｂｓＡｂは、経静脈的に、経動脈的に、手術中に、内視鏡的に、腹膜内に、筋肉内に、皮下に、胸膜内に、くも膜下腔内に、局所カテーテルを通じた潅流によって、または直接病巣内注射によって、経口的に投与され、連続輸液によって、あるいは単一または複数ボーラスによって、あるいは疾患組織を診断（検出）および治療するために当業者に既知の他の方法によって可能である。さらに標的可能な構築物は、上述したように超音波によって使用するための標的可能な構築物、または他の撮像方式、例えばＸ線、ＣＴ、ＰＥＴ、ＳＰＥＣＴおよび超音波で使用するための他の造影剤にデキストランまたはリポソーム製剤をコンジュゲートさせることを制限なく含む、疾患組織を検出および処置する他の方法のための薬剤を含む。
【００８０】
上述したｂｓＡｂおよび標的可能な構築物の投与は、リンカー部分と結合されている治療剤（すなわちエフェクター）の投与の少し前にｂｓＡｂを投与することによって実施できる。試薬の用量およびタイミングは、当業者が直ちに案出可能であり、利用された試薬の特定の性質に依存する。ｂｓＡｂ−Ｆ（ａｂ’）2誘導体が最初に投与される場合、標的可能な構築物投与前の１〜６日の待ち時間が適切であり得る。ＩｇＧ−Ｆａｂ’ｂｓＡｂコンジュゲート体が一次ターゲティングベクターである場合、リンカー部分の投与の前に３〜１５日の範囲の、より長い待ち期間が指示される。あるいはｂｓＡｂおよび標的可能な構築物は、カクテル形で、または次々に投与することによってのどちらかで、実質的に同時に投与できる。
【００８１】
多種多様の診断試薬および治療試薬は、標的可能な構築物に好都合にコンジュゲートできる。一般に診断剤および治療剤は、同位体、薬物、毒素、オリゴヌクレオチド（例えばアンチセンスオリゴヌクレオチドおよび干渉ＲＮＡ）、サイトカイン、サイトカインとのコンジュゲート体、ホルモン、増殖因子、コンジュゲート体、放射性核種、造影剤、金属、細胞毒性薬、および免疫調節物質を含むことができる。例えばガドリニウム金属は磁気共鳴映像法に使用され、蛍光色素は光線力学療法のためにコンジュゲートさせることができる。その上、造影剤は、ＭＲＩ造影剤、例えばガドリニウムイオン、ランタンイオン、マンガンイオン、鉄、クロム、銅、コバルト、ニッケル、ジスプロシウム、レニウム、ユーロピウム、テルビウム、ホルミウム、ネオジムまたは他の類似の標識、ＣＴ造影剤、および超音波造影剤であり得る。追加の診断剤は、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルデヒドおよびフルオレサミンなどの蛍光標識化合物、ルミノール、イソルミノール、芳香族アクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジニウム塩およびオキサラートエステルを含む化学発光化合物、およびルシフェリン、ルシフェラーゼおよびエクオリンを含む生物発光化合物を含むことができる。例えば90Ｙ、111Ｉｎ、131Ｉ、99mＴｃ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、177Ｌｕ、67Ｃｕ、212Ｂｉ、213Ｂｉ、および211Ａｔを含む放射性核種は、診断剤および／または治療剤としても使用できる。
【００８２】
治療剤は、例えば化学治療薬、例えばビンカ・アルカロイド、アントラサイクリン、エピドフィロ毒素、タキサン、代謝拮抗物質、アルキル化剤、抗生物質、Ｃｏｘ−２インヒビタ、抗分裂物質、血管新生阻害剤およびアポトーシス剤、特にドキソルビシン、メトトレキサート、タキソール、ＣＰＴ−１１、カンプトセシン、そして抗癌剤のこれらおよび他のクラスからのその他も含む。カンプトセシンのポリ−（Ｌ−グルタミン酸）へのコンジュゲートについて述べられている。Ｓｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．ｏｆ  Ｓｃｉ．，２０００；９２２：１３６−５００を参照。免疫コンジュゲート体および抗体融合タンパク質の調製に有用な他の治療剤は、窒素マスタード、アルキルスルホナート、ニトロ尿素、トリアゼン、葉酸類似物質、ＣＯＸ−２インヒビタ、ピリミジン類似物質、プリン類似物質、白金配位錯体、ホルモンなどを含む。適切な治療剤は、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥＳ，１９ｔｈ  Ｅｄ．（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．１９９５）、およびＧＯＯＤＭＡＮ  ＡＮＤ  ＧＩＬＭＡＮ’Ｓ  ＴＨＥ  ＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＢＡＳＩＳ  ＯＦ  ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ，７ｔｈ  Ｅｄ．（ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．１９８５）はもちろんのこと、これらの刊行物の改訂版でも述べられている。他の適切な治療剤、例えば実験薬は当業者に既知である。治療剤は制限なく、他の薬物、プロドラッグおよび／または毒素も含んでもよい。「薬物」、「プロドラッグ」および「毒素」という用語は、本明細書を通じて定義されている。「診断剤」または「診断」という用語は、これに限定されるわけではないが、検出剤、検出、または局在化を含む。治療剤および診断剤は、エマルジョンまたはリポソームを形成できる脂質あるいはポリマー構造を形成できるポリマーと関連付けられる。
【００８３】
標的可能な構築物が診断剤を含むとき、ｂｓＡｂは好ましくは、標的可能な構築物（診断剤を含む）の投与前に投与される。ｂｓＡｂが疾患組織を標的化するために十分な時間が経過した後、診断剤を含む標的可能な構築物（すなわちエフェクター）が投与されるので、撮像が実施できる。腫瘍は、適切な波長の光が送達され、次に収集される各種の構造を直接または間接的に見ることによって、あるいは特殊検出器、例えば放射線プローブまたは蛍光検出器などによって、体腔内で検出可能である。いずれの体部位の病巣も、非イオン化放射線が送達され、これらの構造から再捕捉できる限り、見ることができる。例えば高解像度、非侵襲性の撮像技法であるＰＥＴは、ヒト疾患の描出のために、抗体および標的可能な構築物を用いて使用できる。ＰＥＴでは、ポジトロン消滅崩壊の間に生成される５１１ｋｅＶγ光子が検出できる。Ｘ線、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、ＭＲＩおよびγ撮像（例えば単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ））も、これらの方式によって機能する診断剤の使用を通じて利用できる。上述したように、標的可能な構築物は、２５〜１０，０００ｋｅＶのγ−、β−、α−およびオージェ−粒子および／またはポジトロンを放出する放射性診断剤を含んでもよい。そのような薬剤の例は、これに限定されるわけではないが、18Ｆ、45Ｔｉ、52Ｆｅ、62Ｃｕ、64Ｃｕ、67Ｃｕ、67Ｇａ、68Ｇａ、86Ｙ、89Ｚｒ、94mＴｃ、94Ｔｃ、99mＴｃ、111Ｉｎ、123Ｉ、124Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、154-158Ｇｄおよび175Ｌｕを含む。
【００８４】
本ｂｓＡｂまたはｂｓＦａｂは、米国特許第６，０９６，２８９号；第４，３３１，６４７号；第４，８１８，７０９号；第４，３４８，３７６号；第４，３６１，５４４号；第４，４４４，７４４号；第５，８５１，５２７号で述べられている光線力学療法（ＰＤＴ）の方法で使用できる。ＰＤＴでは、光増感剤、例えばジヘマトポルフィリンエーテルなどのヘマトポルフィリン誘導体が対象に投与される。抗腫瘍活性は例えば６３０ｎｍの光の使用によって開始される。皮膚が日光によってあまり光感作を受けない、より長い波長で有用なものを含めて、代わりの光増感剤が利用できる。そのような光増感剤の例は、これに限定されるわけではないが、ベンゾポルフィリンモノ酸環Ａ（ＢＰＤ−ＭＡ）、スズエチオプルプリン（ＳｎＥＴ２）、スルホナートアルミニウムフタロシアニン（ＡＩＳＰｃ）およびルテチウムテクサフィリン（Ｌｕｔｅｘ）を含む。
【００８５】
加えてＰＤＴでは、光活性化剤を集めた癌の部位を検出するために、診断剤を例えば全身的に注入して、レーザ誘起蛍光を無線カプセルサイズ内視鏡またはカメラを含む内視鏡によって使用できる。例えばこれは、初期肺癌の蛍光気管支鏡の開示に利用されている。Ｄｏｉｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｈｅｓｔ  ７６：３２（１９７９）。別の例において、抗体および抗体断片は、単光子放出で使用できる。例えばＴｃ−９９ｍ標識診断剤は、抗体または抗体断片の投与後に対象に投与できる。次に単光子放出コンピュータ断層画像を生成して、病巣または腫瘍部位を画定するγカメラによって、対象を走査する。
【００８６】
光活性剤または染料は、治療試薬および／または診断試薬として使用できる。例えば治療的に有用な免疫コンジュゲート体は、光活性剤または染料を抗体コンジュゲート体にコンジュゲートさせることによって得られる。蛍光および他のクロモゲン、または染料、例えば可視光に対して感受性であるポルフィリンは、適切な光を病巣に向けることによって病巣を検出および処置するために使用されている。療法では、これは光放射、光療法、または光線力学療法と呼ばれてきた（Ｊｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｔｕｍｏｒｓ  ａｎｄ  Ｏｔｈｅｒ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ（Ｌｉｂｒｅｒｉａ  Ｐｒｏｇｅｔｔｏ  １９８５）；ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｅｒｇｈ，Ｃｈｅｍ．Ｂｒｉｔａｉｎ  ２２：４３０（１９８６））。その上、モノクローナル抗体は、光療法を実施するために光活性化染料とカップリングされている。Ｍｅｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３０：１４７３（１９８３）；ｉｄｅｍ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４５：４３８０（１９８５）；Ｏｓｅｒｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：８７４４（１９８６）；ｉｄｅｍ．，Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．４６：８３（１９８７）；Ｈａｓａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｇ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓ．２８８：４７１（１９８９）；Ｔａｔｓｕｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｓｅｒｓ  Ｓｕｒｇ．Ｍｅｄ．９：４２２（１９８９）；Ｐｅｌｅｇｒｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  ６７：２５２９（１９９１）．しかしながらこれらの初期の研究は、特に抗体断片またはサブ断片を用いた内視鏡療法用途の使用を含んでいなかった。従って免疫コンジュゲート体は、光活性剤または染料を含んでもよい。検出および療法の内視鏡的方法は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられている米国特許第４，９３２，４１２号；第５，５２５，３３８号；第５，７１６，５９５号；第５，７３６，１１９号；第５，９２２，３０２号；第６，０９６，２８９号；および第６，３８７，３５０号に述べられている。
【００８７】
放射線不透過物質および造影物質は、Ｘ線およびコンピュータ断層撮影を強調するために使用され、ヨウ素化合物、バリウム化合物、ガリウム化合物、タリウム化合物などを含む。具体的な化合物は、バリウム、ジアトリゾアート、エチオダイズド油、ガリウムシトレート、イオカルム酸、イオセタム酸、ヨーダミド、ヨージパミド、ヨードキサム酸、イオグルアミド、イオヘキソール、イオパミドール、イオパノ酸、イオプロセム酸、イオセファム酸、イオセル酸、イオスラミドメグルミン、イオセメト酸、イオタスル、イオテトル酸、イオタラム酸、イオトロクス酸、イオキサグル酸、イオキソトリゾ酸、イポダート、メグルミン、メトリザミド、メトリゾアート、プロピリオドン、および塩化第一タリウムを含む。デキストランおよびリポソーム、特にガス充填リポソームを含む、超音波造影物質も使用できる。
【００８８】
免疫調節物質の投与
１つの実施形態において、免疫調整剤、例えばサイトカインは、リンカーによって、または当業者によって既知の他の方法によって標的可能な構築物にコンジュゲートできる。本明細書で使用するように、「免疫調整剤」という用語は、サイトカイン、幹細胞増殖因子、リンホトキシン、例えば腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、および造血因子、例えばインターロイキンｓ（例えばインターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、およびＩＬ−２１）、コロニー刺激因子（例えば顆粒球−コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）および顆粒球マクロファージ−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ））、インターフェロン（例えばインターフェロン−α、−βおよび−γ）、「Ｓ１因子」と呼ばれる幹細胞増殖因子、エリスロポエチンおよびトロンボポイエチンを含む。適切な免疫調整剤部分の例は、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、インターフェロン、ＴＮＦ（例えばＴＮＦ−α）などを含む。
【００８９】
薬物およびプロドラッグの投与
抗癌療法に有用なある細胞毒性薬は、血清中で比較的不溶性である。加えて、一部の細胞毒性薬も、非コンジュゲート形では非常に毒性であり、その毒性はプロドラッグへの変換によってかなり低減される。溶解性の低い薬物の、より溶解性のコンジュゲート体、例えばグルクロニド、親水性酸のエステルまたは親水性アミンへのアミドへの変換は、血清の水相での溶解度と、静脈細胞壁、動脈細胞壁または毛細血管細胞壁を通過して、腫瘍を浸す間質液に達するその能力を改良する。プロドラッグの開裂は、より溶解性の低い薬物を標的部位に沈積させる。そのようなプロドラッグから薬物への変換の多くの例が、Ｈａｎｓｅｎへの米国特許第５，８５１，５２７号に開示されている。
【００９０】
肝臓における芳香族または脂環式アルコール、チオール、フェノールおよびアミンなどのある毒性物質のグルクロニドへの変換は、それらを解毒して、尿により容易に排出させる体の方法である。そのような基質に変換できる１種類の抗腫瘍薬物は、アントラサイクリングリコシドであり、ヒトβ−Ｄ−グルクロニダーゼの基質であることが示されている、エピルビシン、すなわちドキソルビシンの４−エピマー（アドリアマイシン）である。例えばＡｒｃａｍｏｎｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４５：５９９５（１９８５）を参照。より少ない極性基を有する他の類似物質は、より親油性であることが予想され、そのような手法に関してより大きな将来性を示している。芳香族または脂環式アルコール、チオールまたはアミン基を持つ他の薬物または毒素は、そのようなコンジュゲート体生成の候補である。これらの薬物、またはその他のプロドラッグ形は、現在説明している化合物および方法の部位特異的強調法の適切な候補である。
【００９１】
プロドラッグＣＰＴ−１１（イリノテカン）はインビボカルボキシルエステラーゼによって、活性代謝産物ＳＮ−３８に変換される。従って治療方法の一つの用途は、腫瘍およびハプテン（例えばジ−ＤＴＰＡ）に標的化されたｂｓＡｂを使用することであり、ジ−ＤＴＰＡ−カルボキシエステラーゼコンジュゲート体の注入が続く。適切な腫瘍対バックグラウンド局在化比が達成されると、ＣＰＴ−１１が与えられ、腫瘍局在化カルボキシエステラーゼは、腫瘍においてＣＰＴ−１１をＳＮ−３８に変換するよう作用する。その低い溶解度により、活性ＳＮ−３８は腫瘍の付近に残存し、結果として標的化される抗原に対して陰性である隣接する腫瘍細胞に作用を及ぼすであろう。これが方法のさらなる利点である。カルボキシエステラーゼの改良形は、説明されており、開示された化合物および方法の範囲内である。例えばＰｏｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８：２６４６−２６５１（１９９８）およびＰｏｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８：３６２７−３６３２（１９９８）を参照。別の実施形態において、ＣＰＴ−１１は、ＤＴＰＡまたはターゲティング分子を含む標的可能な構築物にコンジュゲートされ、それは腫瘍でのＳＮ−３８に対するＣＰＴ−１１の局在化および活性化をさらに強化できる。
【００９２】
エトポシドは、そのグルクロニドの形成によってかなりの程度まで解毒される、幅広く使用されている制癌剤であり、開示された化合物および方法の範囲内にある。例えばＨａｎｄｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４８：１８２９−１８３４（１９８８）を参照。グルクロニドコンジュゲート体は細胞毒性薬から調製可能であり、ｍＡｂ−グルクロニダーゼコンジュゲート体によってプレターゲティングされた腫瘍のための治療薬として注射できる。例えばＷａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２：４４８４−４４９１（１９９２）を参照。従ってそのようなコンジュゲート体は、本明細書で述べたプレターゲティング手法によっても使用できる。同様に、ダウノマイシンおよびドキソルビシンの誘導体に基づいて設計されたプロドラッグは、カルボキシエステラーゼおよびグルクロニダーゼとの使用について述べられている。例えばＢａｋｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．４０：４０１３−４０１８（１９９７）を参照。本発明の方法の範囲内で使用できるプロドラッグ／酵素対の他の例は、これに限定されるわけではないが、フェノールマスタードのヒドロキシ誘導体のグルクロニドプロドラッグおよびβ−グルクロニダーゼ；フェノールマスタードまたはＣＰＴ−１１およびカルボキシペプチダーゼ；メトトレキサート置換α−アミノ酸およびカルボキシペプチダーゼＡ；６−メルカプトプリンおよびドキソルビシンなどの薬物のペニシリンまたはセファロスポリンコンジュゲート体およびβ−ラクタマーゼ；エトポシドホスフェートおよびアルカリホスファターゼを含む。
【００９３】
酵素およびプロドラッグの同時投与
体の解毒経路を制御することによって、プロドラッグを標的部位で活性化できる、または通常の治療薬の有効性を改良できる酵素は、（例えばスペーサーまたはハプテンにコンジュゲートされた）化合物の成分であってよい。酵素−ハプテンコンジュゲート体は、プレターゲティングｂｓＡｂの投与後に対象に投与でき、標的部位に向けることができる。酵素が標的部位に局在化した後に、標的部位で作用することが既知である細胞毒性薬、またはプレターゲティングされた酵素によりインサイチューで薬物に変換されるそのプロドラッグ形が注入される。薬物は投与後に解毒されて、哺乳類の通常の解毒プロセスを使用して、より毒性の低い中間体、最も一般的にはグルクロニドを形成する。解毒中間体、例えばグルクロニドはプレターゲティングされた酵素によってそのより強い毒性形に再変換され、従って標的部位において強化された細胞毒性を有する。これは薬物の再利用をもたらす。同様に、投与されたプロドラッグは、正常な生体内プロセスを通じて活性薬物に変換できる。プレターゲティングされた酵素は、解毒された薬物を再利用することによって治療の有効性を改善する。この手法は、酵素−薬物対と使用するために採用できる。
【００９４】
代わりの実施形態において、酵素−ハプテンコンジュゲート体を患者への投与前にターゲティングｂｓＡｂと混合できる。酵素−ハプテン−ｂｓＡｂコンジュゲート体が標的部位に局在化するために、そして未結合のコンジュゲート体が循環から排出されるために十分な時間が経過した後に、プロドラッグが投与される。上述したように、次にプロドラッグはプレターゲティングされた酵素によってインサイチューで薬物に変換される。
【００９５】
別の実施形態において、プレターゲティングｂｓＡｂは患者に投与され、標的に局在化されて、実質的に循環から排出される。その後の適切な時間に、プロドラッグ、例えばポリグルタミン酸（ＳＮ−３８−エステル）10を含む標的可能な構築物を与え、それによりプロドラッグを腫瘍標的に特異的に局在化させる。腫瘍内および腫瘍周囲での高い細胞溶解率のために、腫瘍が細胞内源から放出される酵素の量を増加させていることは既知である。当業者はこれらの酵素によって活性化できるプロドラッグを適切に選択することによって、この特徴を活用できる。例えばカルボキシエステラーゼは、腫瘍にて高濃度の遊離ＳＮ−３８を放出するポリグルタミン酸（ＳＮ−３８−エステル）10のエステル結合を開裂させることによって、プロドラッグのポリグルタミン酸（ＳＮ−３８−エステル）10を活性化する。あるいは適切な酵素を腫瘍部位に標的化することもできる。
【００９６】
標的可能な構築物からの開裂後、薬物は腫瘍細胞によって内部移行される。あるいは薬物は、標的での架橋のために無傷の錯体の一部として内部移行できる。標的可能な構築物は、腫瘍結合ｂｓＡｂの内部移行を誘発し、それによってより高いレベルの薬物を内部移行させて治療の有効性を改善できる。
【００９７】
ペプチドキャリアに結合したプロドラッグを含む化合物
ポリアミノ酸、例えばポリリジン、ポリグルタミン酸（Ｅ）およびアスパラギン酸（Ｄ）を含む、各種のペプチドキャリア（例えばスペーサーとして）は、そのＤ−アミノ酸類似物質、およびコポリマー、例えばポリ（Ｌｙｓ−Ｇｌｕ）｛ポリ［ＫＥ］｝を含めて、好都合には１：１０〜１０：１の比でのプロドラッグへのコンジュゲートに非常に適している。ポリ（Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ（配列番号３）（ＫＡＥＹ；５：６：２：１）などの、アミノ酸混合物をベースとするコポリマーも利用できる。規定の分子量のより小型のポリマー性キャリアは、固相ペプチド合成技法によって合成可能であり、鎖長が２〜５０残基のポリペプチドが直ちに生成される。この種の試薬の別の利点は、正確な構造定義以外に、鎖内のある位置に１つまたは任意の所望の数の化学ハンドルを配置する能力である。これらは、各部分の選択したレベルでの認識および治療ハプテンの結合のために後で使用できる。
【００９８】
ポリ（エチレン）グリコール［ＰＥＧ］は、二重特異性抗体プロドラッグ手法のための所望のインビボ特性を有する。ＰＥＧ誘導体の、そのダイマー官能基による所望のインビボ特性および制限された装填能力は、Ｐｏｉａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．によって述べられているような、より大きいハプテン担持能力を有するＰＥＧコポリマーの調製をもたらしている。例えばＰｏｉａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，５：６２１−６３０，１９９４を参照。ＰＥＧを使用すると、化合物のいずれの成分もコンジュゲートできる（リジン残基への薬物またはプロドラッグなど）。例えばＰＥＧ誘導体は、ビス（スクシンイミジル）カーボネート誘導体を生成するために両端で活性化させて、リジンなどの多官能性ジアミンと共重合させることができる。（−Ｌｙｓ（ＣＯＯＨ）−ＰＥＧ−Ｌｙｓ（ＣＯＯＨ）−ＰＥＧ−）n反復単位（式中、リシルカルボキシル基は重合プロセスに関与していない）を含有する、そのような共重合の生成物は、ＳＮ−３８残基の結合に使用できる。ＳＮ−３８残基は、遊離カルボキシル基と反応して、（−Ｌｙｓ−（ＣＯＯＨ）−ＰＥＧ−Ｌｙｓ（ＣＯＯＨ）−ＰＥＧ−）n鎖のＳＮ−３８エステルを生成する。
【００９９】
ハプテンおよび／またはプロドラッグをコンジュゲートするのに使用できる他の合成ポリマーは、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（ＨＭＰＡ）コポリマー、ポリ（スチレン−ｃｏ−マレイン酸／無水物（ＳＭＡ）、ポリ（ジビニルエーテルマレイン酸無水物）（ＤＩＶＥＭＡ）、ポリエチレンイミン、エトキシル化ポリエチレンイミン、星形デンドリマーおよびポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）（ＰＶＰ）を含む。一例として、複数の無水物単位からなるＤＩＶＥＭＡポリマーは、限定された量のＳＮ−３８と反応して、ポリマー主鎖上に薬物の所望の置換比を生じる。残りの無水物基は水性条件下で開いて、遊離カルボキシラート基を生成する。限定された数の遊離カルボキシラート基は、標準水溶性ペプチドカップリング剤（例えば１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドヒドロキシクロライド（ＥＤＣ））を使用して活性化され、遊離アミノ基を保持する認識部分にカップリングされる。後者の例はヒスタミンであり、それに対して過去に抗体が産生されている。
【０１００】
ポリマー／薬物コンジュゲート体の上の例は、プロドラッグＣＰＴ−１１（イリノテカン）の活性代謝産物であるＳＮ−３８の使用を具体化する。ＳＮ−３８は、上の説明で使用された芳香族ヒドロキシル基を有し、エステラーゼ型酵素に対して感受性のアリールエステルを生成する。同様にカンプトセシン類似物質のトポテカンは、化学療法で幅広く使用されており、ＳＮ−３８で述べたのと同様の方法で使用できる利用可能な芳香族ヒドロキシ残基を有し、エステラーゼ感受性ポリマープロドラッグを生成する。カンプトセシンの水溶性誘導体は、参照により本明細書に組み入れられている米国特許第４，９４３，５７９号に述べられている。カンプトセシンのポリ−（Ｌ−グルタミン酸）へのコンジュゲートは説明されている。例えばＳｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９２２：１３６−１５０（２０００）を参照。
【０１０１】
ドキソルビシンは、カンプトセシンファミリについて述べた反応と似た酸触媒反応を使用して、カルボキシラート含有ポリマー性キャリアにカップリングできる芳香族ヒドロキシル基も含有する。同様に、ダウノマイシン、エピルビシンおよびイダルビシンなどのドキソルビシン類似物質も同じ方法でカップリングできる。ドキソルビシンおよびポリマー性キャリアへの化学カップリングのために十分活性であるアミノ「化学ハンドル」を持つ他の薬物は、多数の方法でこれらの遊離アミノ酸を介してキャリア分子に効果的にカップリングすることができる。遊離カルボキシラート基を担持するポリマーは、インサイチューで活性化可能であり（ＥＤＣ）、活性化されたポリマーはドキソルビシンと混合されて、ポリマーの側鎖にアミノ結合を介して薬物を直接結合させる。アミノ含有薬物は、ビス（スクシンイミジル）エステル基との反応後に２個のアミドと同様に２個のアミンを架橋するために、市販の開裂性架橋剤、例えばエチレングリコビス（スクシンイミジルスクシナート）（ＥＧＳ，Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，ロックフォード、イリノイ州）またはビス−［２−（スクシンイミド−オキシカルボニルオキシ）エチル］スルホン（ＢＳＯＣＯＥＳ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ハンツビル、アラバマ州）と混合することによって、アミノ側鎖ポリマーにカップリングすることもできる。これは、これらの基が酵素開裂に対してなお感受性であるときに好都合である。例えば（ドキソルビシン−ＥＧＳ）n−ポリ−リジンは、ＥＧＳ結合鎖内でのジエステル基のエステラーゼなどの酵素による酵素開裂に対してなお感受性である。ドキソルビシンも、確立された手順を使用して各種のペプチド、例えばＨｙＢｎＫ（ＤＴＰＡ）ＹＫ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ2にコンジュゲートできる（ＨｙＢｎ＝ｐ−Ｈ2ＮＮＨＣ6Ｈ4ＣＯ2Ｈ）。Ｋａｎｅｋｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，２：１３３−１４１，１９９１を参照。
【０１０２】
１つの好ましい実施形態において、ＤＴＰＡがプレターゲティングされたｂｓＡｂのために認識部分を形成するＤＴＰＡ−ペプチド−ドキソルビシンコンジュゲート体を形成するために、アミン残基およびキレート化剤、例えばＤＴＰＡを含むキャリアにカップリングされたカンプトセシン、カンプトセシンの誘導体、またはドキソルビシンを含む治療用コンジュゲート体を合成できる。好ましくは、キャリアはチロシル−リジンジペプチド、（例えばＴｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ2）を含み、さらに好ましくは、それはなおＬｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ2を含む。ビス−ＤＰＴＡ含有ペプチドにコンジュゲートされたドキソルビシンフェニルヒドラゾンは、治療の状況では特に好ましい。
【０１０３】
メトトレキサートも、ドキソルビシンで述べた方法と同様の方法で活性化カルボキシラート含有ポリマーへカップリングするために利用可能なアミノ基を有する。それはアミノ基含有ポリマーへのカップリングのために活性化できる、２個のグルタミルカルボキシル基（αおよびγ）も有する。メトトレキサートの遊離カルボキシラート基はインサイチューで活性化可能であり（ＥＤＣ）、活性化薬物はアミノ含有ポリマーと混合されて、ポリマーの側鎖にアミド結合によって直接結合される。過剰な未反応または交差反応薬物は、サイズ排除またはイオン交換クロマトグラフィーを使用してポリマー−薬物コンジュゲート体から直ちに分離される。
【０１０４】
メイタンシノイドおよびカリケアミシン（例えばエスペラマイシン）は、化学操作に有用な単一のチオールを含む種を生成するために開裂できる混合ジスルフィドおよびトリスルフィド結合を含有する。チオメイタンシノイドまたはチオエスペラマイシンは、ペプチダーゼによる開裂に感受性であるマレイミドペプチドなどの架橋剤と最初に反応する。次にペプチドのＣ末端は活性化されて、ポリリジンなどのアミノ含有ポリマーにカップリングされる。
【０１０５】
化合物の脂質へのコンジュゲート
上述の化合物（例えば標的可能な構築物およびその成分）および結合分子（例えばｂｓＡｂ）は、（１）エフェクター（例えば薬物）を送達可能な脂質；（２）エフェクター（例えば薬物）を送達できる、高次構造を形成できる分子（例えば両親媒性脂質またはポリマー）；および／または（３）エフェクターを送達できる高次構造（例えばミセル、リポソーム、ポリマー構造、またはナノ粒子）にコンジュゲートされる。リポソーム、ミセル、およびエマルジョンの形成は、当分野で既知である（例えばＷｒｏｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ，１２３５：２９６（１９９５）；Ｌｕｎｄｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５１：１０９９−１１０５（１９９９）；Ｌｕｎｄｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．，２０５：１０１−１０８（２０００）；Ｌｕｎｄｂｅｒｇ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，８３：７２−７５（１９９４）；Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．，１：３３７−３４６（２００２）；Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１００：６０３９−６０４４（２００３）；米国特許第５，５６５，２１５号；米国特許第６，３７９，６９８号；および米国特許出願第２００３／００８２１５４号を参照）。薬剤送達または撮像に有用であるポリマー、シリカ、または金属から形成されたナノ粒子またはナノカプセルも同様に説明されている（例えばＷｅｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｔｏ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１１：２１５−２１７（２０００）；米国特許第５，６２０，７０８号；米国特許第５，７０２，７２７号；および米国特許第６，５３０，９４４号を参照）。
【０１０６】
ターゲティング分子が脂質にコンジュゲートされている場合、脂質は、好ましくはミセルまたはリポソームなどのエマルジョンまたは高次構造を形成できる。例えば脂質は両親媒性（例えばリン脂質）である。標的可能な構築物へのコンジュゲートを促進するために、脂質は、求核炭素などの標的可能な構築物と（例えば末端にて）反応できる１つ以上の基を含有できる。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）−マレイミドは適切な脂質であり、それによってマレイミドは、標的可能な構築物上に（例えば還元システイン残基に）存在する遊離チオール基と反応できる。マレイミド基は、標的可能な構築物または結合分子をコンジュゲートするために、本明細書に述べるように他のキャリア上にも存在できる。例えばナノ粒子は、標的可能な構築物をコンジュゲートするためにマレイミド基を含有できる。マレイミド基に加えて、標的可能な構築物または結合分子をコンジュゲートするための他の基は、米国特許第６，３０６，３９３号で述べられているように、ビニルスルホンを含むことができる。脂質のコンジュゲートした標的可能な構築物は、本明細書で述べたエフェクター分子（例えば疎水性薬物）を含むことができるエマルジョンまたはリポソームを形成することができる。
【０１０７】
治療剤または診断剤用の標的化キャリアを形成するための抗体または結合分子の脂質へのコンジュゲートについて説明されている（例えばＢｅｎｄａｓ，Ｂｉｏｄｒｕｇｓ，１５：２１５−２２４（２００１）；Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．，１：３３７−３４６（２００２）；Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１００：６０３９−６０４４（２００３）；Ｂａｌｌｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｒｅｓ．，８：２９９−３３５（１９９８）；Ｌｕｎｄｂｅｒｇ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．，１０９：７３−８１（１９９４）；Ｌｕｎｄｂｅｒｇ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４９：１６−２１（１９９７）；Ｌｕｎｄｂｅｒｇ，Ａｎｔｉ−ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，１３：４５３−４６１（１９９８）を参照）。米国特許第６，３０６，３９３号；米国特許出願第１０／３５０，０９６号；米国特許出願第０９／５９０，２８４号；１９９９年６月９日に提出された米国特許出願第６０／１３８，２８４号；および２００３年６月１７日に提出された米国特許出願第６０／４７８，８３０号も参照。これらの参考文献は全て参照により本明細書に組み入れられている。結合分子（すなわちターゲティング分子）を脂質にコンジュゲートするために使用された同一の化学作用を利用して、標的可能な構築物を脂質にコンジュゲートできる。
【０１０８】
薬物装填エマルジョンの調製
脂質コンジュゲート分子は、薬物などのエフェクターを含むエマルジョンまたはリポソームを形成できる。エマルジョンは、２つの主要な部分：（１）油性コア（例えばトリグリセリド）；および（２）油性コアを安定化する乳化剤（例えばリン脂質）から構成される。トリオレイン（ＴＯ）、卵黄ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、コレステロール（ＣＨＯＬ）、８−ヒドロキシ−１，３，６−ピレントリスルホナート（ＨＰＴＳ）、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート（ソルビタン８０）、メトキシポリエチレングリコール（ＰＥＧ平均分子量２０００）、オレオイルクロライド、３−（４，５−ジメチルジアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）およびＤＬ−ジチオトレイトール（ＤＴＴ）は、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（セントルイス、ミズーリ州）などの市販元から入手した。ポリ（エチレングリコール）−マレイミド−Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミジルエステル（ＭＡＬ−ＰＥＧ2000−ＮＨＳ）は、Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  Ｅｕｒｏｐｅ（ヘンスヘーデ、オランダ）から購入できる。［3Ｈ］コレステリルオレオイルエーテル（ＣＯＥ）および［14Ｃ］ジパルミトイルホスファチジルコリンは、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｐｌｃ（アマシャム、英国）より得た。ＰＥＧ鎖の末端にマレイミド基を有するジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）のＰＥＧ2000誘導体（ＤＰＰＥ−ＰＥＧ−ＭＡＬ）は、ＮＨＳ−ＰＥＧ−ＭＡＬ  ２５ｍｏｌをＤＰＰＥ  ２３ｍｏｌおよびクロロホルム中のトリエチルアミン５０ｍｏｌと４０℃にて６時間反応させることによって合成される。生成物は、分取シリカゲルＴＬＣによって精製できる。
【０１０９】
ミクロン以下の脂質エマルジョンは、他で詳細に述べたように調製できる（Ｌｕｎｄｂｅｒｇ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，８３：７２−７５（１９９４）；Ｌｕｎｄｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．，１３４：１１９−１２７（１９９６）；２００３年６月１７日に提出された米国特許出願第６０／４７８，８３０号；米国特許第６，３０６，３９３号を参照）。薬物装填エマルジョンは、ＴＯ、ＥＰＣ、ポリソルベート８０、ＤＰＰＥ−ＰＥＧ2000−ＭＡＬ、およびエフェクター（例えば薬物ＦＵｄＲ−ｄＯ）を２：２：０．８：０．６：０．３（重量／重量）の比で含む。成分をストック溶液からバイアルに分配して、減圧下で溶媒を乾燥するまで蒸発させた。ホスフェート緩衝食塩水（ＰＢＳ）を添加して、混合物を５０℃まで加熱し；ボルテックスで３０秒間混合して；Ｂｒａｎｓｏｎプローブソニケータで２分間超音波処理した。
【０１１０】
薬物装填リポソームは、ＥＰＣ、ＤＰＰＥ−ＰＥＧ2000−ＭＡＬ、ＦＵｄＲ−ｄＯ１：０．２：０．１（重量／重量）から構成される。ＥＰＣ、ＣＨＯＬ、ＤＰＰＥ−ＰＥＧ2000−ＭＡＬの比は２：０．５：０．４が適切である。乾燥脂質フィルムを２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび１４０ｍＭ  ＮａＣｌ緩衝液（ｐＨ７．４）（適切な場合には３５ｍＭ  ＨＰＴＳを含有する）中で水和させて；次に５回の凍結解凍サイクルを受けさせて、Ｂｒａｎｓｏｎプローブソニケータで２分間超音波処理した。［14Ｃ］ＤＰＰＣを含めることによって、リン脂質濃度を定量する。
【０１１１】
脂質薬物キャリアの標的可能な構築物へのコンジュゲート
上述の化合物（すなわち標的可能な構築物）または結合分子の脂質薬物キャリアへのカップリングは、マレイミド（ＭＡＬ）基をキャリア表面のＰＥＧ末端および標的可能な構築物または結合分子上の遊離チオール基、または他の適切な基と反応させることによって実施できる。標的可能な構築物または結合分子がジスルフィド基を含有する場合、０．２Ｍトリス緩衝液（ｐＨ６．５）中での５０ｍＭジチオトレイトールとの４℃での１時間に渡るカップリング反応の前に、遊離チオール基を供給するためにジスルフィド基を還元することができる。還元した分子は、５０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝０．９％食塩水（ｐＨ５．３）で平衡にしたＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５スピンカラムを使用して過剰なジチオトレイトールから分離できる。コンジュゲートは、ＨＥＰＥＳ緩衝食塩水（ｐＨ７．４）中で室温にてアルゴン雰囲気下で１６時間に渡って実施できる。過剰なマレイミド基は、２ｍＭ  ２−メルカプトエタノールで３０分間に渡って遮断可能であり、その後、過剰なＡｂおよび２−メルカプトエタノールをＳｅｐｈａｒｏｓｅ  ＣＬ−４Ｂカラムで除去できる。コンジュゲートしたリポソームをカラムの空隙体積付近で収集して、０．２２μｍ滅菌フィルタを通過させて、４℃で保存できる。カップリング効率は、フルオレセイン標識された標的可能な構築物または結合分子の使用によって概算できる。
【０１１２】
組合せ治療および診断方法のための化合物
なお他の実施形態において、治療薬またはプロドラッグポリマーのインビボ標的への二重特異性抗体定方向送達は、組合せ化学療法および放射免疫療法が実現されるように、放射性核種の二重特異性抗体送達と組合せることができる。各エフェクター（例えば核種および薬物）は、標的可能な構築物とコンジュゲートするか、または非共有結合して、同時に投与されるか、あるいは核種は第１の標的可能な構築物の一部として投与可能であり、薬物は後のステップで第２の標的可能な構築物の一部として与えられる。１つの実施形態において、１つのプロドラッグおよび１つの核種を含有するペプチドが構築される。例えばトリペプチドＡｃ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＮＨ2は、標的可能な構築物のキャリア部分として使用でき、それによりＳＮ−３８はアリールエステルとしてγグルタミルカルボキシル基に結合して、同時にキレートはアミドとしてイプシロンアミノ基に結合して、錯体Ａｃ−Ｇｌｕ（ＳＮ−３８）−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（キレート）−ＮＨ2を生成する。次にキレートは撮像および治療の目的で、111Ｉｎ、90Ｙ、153Ｓｍ、177Ｌｕおよび89Ｚｒを含む各種の金属によって放射性標識できる。金属キレート錯体は、標的可能な構築物上で認識されたハプテンを示すことができるため、抗体は、選択した金属キレート錯体を十分に高い親和性で認識および結合するように設計できる。一般にこの親和性（ｌｏｇ  Ｋａ）は６〜１１である。ポリマーペプチドは、上記のより既知組成の低分子量の試薬と同様に直ちに投与可能であり、実際に好ましい。また３置換ポリマー、例えばポリ［Ｇｌｕ（Ｓｎ−３８）10−Ｌｙｓ（Ｙ−９０−キレート）n（ヒスタミン−スクシナート）mは、認識剤は放射免疫治療剤と無関係であるように使用可能であり、ｎおよびｍは整数である。プロドラッグは、腫瘍部位に存在するカルボキシルエステラーゼによって、または第２の標的可能な構築物を使用して部位に標的化されるカルボキシエステラーゼによって活性化できる。
【０１１３】
あるいは併用療法は、化学療法および放射免疫治療剤を別のステップで投与することによって達成できる。例えばＣＥＡ腫瘍を発現している患者には、ＣＥＡに特異的に結合する少なくとも１つのアームおよびそのハプテンが錯体である標的可能な構築物を特異的に結合する少なくとも１つの他方のアームを備えたｂｓＡｂ（例えばインジウム−ＤＴＰＡまたはイットリウム−ＤＯＴＡ）が投与される。後に患者は、コンジュゲート体（例えばインジウム−ＤＴＰＡ−β−グルクロニダーゼまたはイットリウム−ＤＯＴＡ−β−グルクロニダーゼを含む標的可能な構築物によって治療される。ｂｓＡｂおよび酵素局在化および排除に十分な時間の後、Ａｃ−Ｃｙｓ（カンプト−ＣＯＣＨ2）−Ｌｙｓ（インジウム−ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（インジウム−ＤＴＰＡ）−ＮＨ2またはＡｃ−Ｇｌｕ（ＳＮ−３８）−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（Ｙ−９０−ＤＯＴＡ）−ＮＨ2を含む第２の標的可能な構築物が与えられる。第２の標的可能な構築物は、第１の標的可能な構築物にすでに結合された腫瘍におけるｂｓＡｂのために、腫瘍に局在化する。標的部位に局在化された第１の標的可能な構築物は、Ａｃ−Ｃｙｓ（ＣＰＴ）−Ｌｙｓ（インジウム−ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（インジウム−ＤＴＰＡ）−ＮＨ2またはＡｃ−Ｇｌｕ（ＳＮ−３８）−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（Ｙ−９０−ＤＯＴＡ）−ＮＨ2に作用して、ＣＰＴまたはＳＮ−３８を遊離させる。プロドラッグおよびそのそれぞれの酵素両方の標的部位への局在化は、酵素が基質を限定しないにして、活性薬物の生成を強化する。この実施形態は、当分野で現在実施されている現在のプロドラッグ方法の顕著な改善を構成する。
【０１１４】
前に与えた標的可能な構築物の一部として送達された後に、プロドラッグポリマーを後のステップで投与する別の利点は、放射線および薬物療法の相乗効果は操作する、従って最大化することができる。ＲＡＩＴ後に放射線による損傷のために、腫瘍がより「漏出性」となることが仮定される。これによりポリマープロドラッグは腫瘍内へより完全に深く進入できる。これにより改良された化学療法をもたらされる。
【０１１５】
あるいはＲＡＩＴ治療剤は、標的可能な構築物ではなく、ｂｓＡｂに結合できる。例えばＹ−９０−ＤＯＴＡにコンジュゲートされた抗ＣＥＡ×抗ＤＴＰＡ  ｂｓＡｂは、ＣＥＡ発現腫瘍を持つ患者に最初に投与できる。この例では、抗インジウム−ＤＴＰＡ抗体がイットリウムＤＯＴＡキレートに結合しないという点で、ある抗キレートｍａｂの選択性の利点が得られる。Ｙ−９０−ＤＯＴＡ−抗ＣＥＡ×抗インジウムＤＴＰＡが腫瘍にて最大限となり、非標的組織から実質的に排出された後に、インジウムＤＴＰＡグルクロニダーゼのコンジュゲート体が注射され、ＣＥＡ腫瘍部位に特異的に局在化する。次に患者にポリ（Ｇｌｕ）（ＳＮ−３８）10などのポリマープロドラッグを注射する。後者は腫瘍にて選択的に開裂されて、モノマーＳＮ−３８を活性化して、化学療法を前に投与されたＲＡＩＴと正しく組合せる。
【０１１６】
抗体
標的部位にて抗原に対して特異性の少なくとも１つの結合部位および抗体酵素コンジュゲート体の酵素成分に対して特異性の少なくとも１つの他の結合部位を持つ二重特異性抗体または抗体断片は、本方法において使用できる。そのような抗体は、注射の前に酵素を結合可能であり、それにより酵素を抗体に共有結合的にコンジュゲートさせる必要がなくなる。あるいは、抗体を注射して標的部位に局在化させることが可能であり、非標的化抗体が哺乳類の循環系から実質的に除去された後に、酵素は、十分な量の酵素が局在化抗体または抗体断片に到達して、それを結合して抗体酵素コンジュゲート体をインサイチューで形成できる量および経路で注射できる。
【０１１７】
本明細書で開示する方法は、２０００年７月２５日に提出された特許出願第６０／２２０，７８２号に述べられているように、少なくとも３つの異なる標的結合部位を有する多価標的結合タンパク質の使用も検討する。多価標的結合タンパク質は、化学リンカーによって複数のＦａｂ様断片を架橋することによって作成できる。米国特許第５，２６２，５２４号；第５，０９１，５４２号およびＬａｎｄｓｄｏｒｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒｏ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６：６７９−８３（１９８６）を参照。多価標的結合タンパク質も、単一のポリペプチドを形成するために複数の単鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）を共有結合することによって作成されている。米国特許第５，８９２，０２０号を参照。基本的にｓｃＦｖ分子の凝集体である多価標的結合タンパク質は、米国特許第６，０２５，１６５号および第５，８３７，２４２号に開示されている。ｓｃＦｖ分子３個を含む３価標的結合タンパク質は、Ｋｒｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  １０（４）：４２３−４３３（１９９７）に述べられている。
【０１１８】
クリアリング剤
ｂｓＡｂおよび標的可能な構築物の用量の間で与えられるクリアリング剤を使用できる。新規な機械的作用のクリアリング剤、すなわちｂｓＡｂの疾患ターゲティングアームに対して標的化されたグリコシル化抗イディオタイプＦａｂ’断片が本明細書で述べた方法によって使用できることが発見されている。抗ＣＥＡ（ＭＮ−１４Ａｂ）×抗ペプチドｂｓＡｂが投与されて、疾患標的にて最大限まで結合する。残存ｂｓＡｂを排除するために、Ｗ１２と呼ばれるＭＮ−１４への抗イディオタイプＡｂが好ましくはグリコシル化Ｆａｂ’断片として投与される。クリアリング剤は、ｂｓＡｂに１価方法で結合するのに対して、その追加されたグリコシル残基は錯体全体を腎臓に向け、そこで迅速な代謝が起こる。次に標的可能な構築物と結合する治療剤または診断剤を対象に投与する。ｂｓＡｂのＭＮ−１４アームに対してＷＩ２Ａｂは高い親和性を有し、排除機構は、ＷＩ２−Ｆａｂ’が１価部分であるために架橋に関与しないので開示された他の機構とは異なる（Ｇｏｏｄｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｂｉｄを参照）。クリアリング剤およびその使用は、米国特許第６，６６７，０２４号；米国特許第６，４６８，５３０号；米国特許第６，３８７，３５０号；米国特許第６，０９６，２８９号；米国特許第５，９２２，３０２号；米国特許第５，７３６，１１９号；米国特許第５，６９８，４０５号；米国特許第５，６９８，１７８号；米国特許第５，６８６，５７８号；および米国特許第５，５２５，３３８号に述べられており；その全ては参照によりその全体が本明細書に組み入れられている。
【０１１９】
キット
化合物は、本明細書で開示した方法を実施することによって、患者の疾患組織の治療または同定に使用するために適切なキットとして包装できる。キットは最低限、本明細書の化合物の１つ以上を含む（例えば標的可能な構築物または標的可能な分子として）。キットは、１つ以上の結合分子（例えばターゲティング分子としての抗体またはその断片）および／または１つ以上のクリアリング剤も含むことができる。キットは、疾患組織の同定または治療を促進する器具も含むことができる。例はこれに限定されるわけではないが使用器具、例えば注射器を含む。キットは、疾患組織を同定または治療するために必要な溶液も含むことができる。キットは、説明書および／または説明付きのラベルも含むことができる。
【０１２０】
抗体を産生する方法
ペプチド主鎖および／またはハプテンに対するＡｂは、Ａｂ産生のための周知の方法によって生成される。例えば免疫原は、免疫応答性動物に注射できる。免疫原は、ＫＬＨにコンジュゲートされたペプチド（例えばフロイント完全アジュバント中の（ペプチド）n−ＫＬＨ（式中、ＫＬＨはキーホールリンペットヘモシアニンであり、ｎ＝１−３０である））を含むことができる。最初の注射の後にフロイント不完全アジュバントに懸濁させた同じ免疫原の注射を２回続けて、これらの注射の後に次の抗原（すなわちペプチド）の静脈内ブーストを続けてもよい。抗原の静脈ブーストの３日後、脾臓細胞を収集して、Ｓｐ２／０−Ａｇ１４骨髄腫細胞と融合させた。次に生じたクローンの培養上清は、定方向結合ＥＬＩＳＡを使用して抗ペプチド反応性について分析した。生成されたＡｂの精細な特異性マッピングは、元の抗原／ペプチドのペプチド断片を使用して分析できる。これらの断片は、自動化ペプチドシンセサイザを使用して直ちに調製できる。Ａｂ産生では、酵素欠乏ハイブリドーマを単離して融合細胞系の選択を可能にする。この技法は、リンカーを含むキレート、例えばＩｎ（ＩＩＩ）−ＤＴＰＡキレートの１つ以上に対して抗体を産生させることにも使用できる。Ｉｎ（ＩＩＩ）−ジ−ＤＴＰＡに対するモノクローナルマウス抗体が既知である（Ｂａｒｂｅｔ’３９５同上）。
【０１２１】
本化合物および方法で使用される抗体は、マーカー物質としての各種の細胞表面または細胞内腫瘍関連抗原に対して特異性である。これらのマーカーは、腫瘍によって産生された物質であるか、あるいは細胞質、核、あるいは各種のオルガネラまたは細胞内構造のいずれかにおいて腫瘍部位に、腫瘍細胞表面に、または腫瘍細胞内に蓄積する物質である。そのような腫瘍関連マーカーは特に、Ｈｅｒｂｅｒｍａｎ，「Ｉｍｍｕｎｏｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ」，ｉｎ  Ｆｌｅｉｓｈｅｒ  ｅｄ．，「Ｔｈｅ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ」，ｐａｇｅ  ３４７（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｓ，１９７９）および米国特許第４，１５０，１４９号；第４，３６１，５４４号；および第４，４４４，７４４号によって開示されているマーカーである。Ｔｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．への米国特許第５，９６５，１３２号、Ｔｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．への米国特許第６，００４，５５４号、Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．への米国特許第６，０７１，４９１号、Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．への米国特許第６，０１７，５１４号、Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．への米国特許第５，８８２，６２６号、Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．への米国特許第５，０１９，３６８号、Ｔｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．への米国特許第６，３４２，２２１号、米国特許出願第０９／３３７，７５６号；第０９／３８２，１８６号；第０９／８２３，７４６号；第１０／１５０，６５４号も参照、その全てが参照により本明細書に組み入れられている。
【０１２２】
腫瘍関連マーカーは、Ｈｅｒｂｅｒｍａｎ，同上によって、腫瘍胎児抗原、胎盤抗原、発癌性または腫瘍ウイルス関連抗原、組織関連抗原、臓器関連抗原、異所性ホルモンおよび正常抗原またはその変種を含む多数の種類に分類されてきた。場合により、腫瘍関連マーカーのサブユニット、例えばヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）のβサブユニットまたは癌胎児性抗原（ＣＥＡ）のγ領域は、米国特許第４，３６１，６４４号および第４，４４４，７４４号に開示されているように、非腫瘍物質に対しての交差反応性が大幅に低下した抗体の産生を刺激してより高い腫瘍特異性を有する抗体を産生するのに好都合に使用される。腫瘍脈管構造（例えばＶＥＧＦ）の、腫瘍壊死（Ｅｐｓｔｅｉｎ特許）の、膜レセプタ（例えば葉酸レセプタ、ＥＧＦＲ）の、膜貫通抗原（例えばＰＳＭＡ）の、癌遺伝子生成物のマーカーも、抗体または抗体断片の適切な腫瘍関連標的として作用できる。腫瘍細胞上で豊富に発現される正常細胞構成要素のマーカー、例えばＢ細胞錯体抗原（Ｂ細胞悪性腫瘍上のＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、およびＨＬＡ−ＤＲ）も、ある腫瘍細胞によって発現されたサイトカイン（例えばＴ細胞悪性腫瘍内のＩＬ−２レセプタ）と同様に、本明細書で使用される抗体および抗体断片の適切な標的である。本明細書で使用される抗体および抗体断片によって標的化できる他の周知の腫瘍関連抗原は、これに限定されるわけではないが、ＣＥＡ、ＣＳＡｐ、ＴＡＧ−７２、ＭＵＣ−１、ＭＵＣ−２、ＭＵＣ−３、ＭＵＣ−４、ＥＧＰ−１、ＥＧＰ−２、ＢｒＥ３、ＰＡＭ−４、ＫＣ−４、Ａ３、ＫＳ−１、ＰＳＭＡ、ＰＳＡ、テネイシン、Ｔ１０１、Ｓ１００、ＭＡＧＥ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ７４、ＩＦＧ、ＩＬＧ−１、およびＩＬ−６を含む。
【０１２３】
好ましい二重特異性抗体は、ＭＡｂ  Ｍｕ−９のＦｖおよびＭＡｂ  ７３４のＦｖ、ＭＡｂ  ＭＮ−１４のＦｖおよびＭＡｂ  ７３４のＦＶ、ＭＡｂ  ＲＳ−７のＦｖおよびＭＡｂ  ７３４のＦｖ、ＭＡｂ  Ｍｕ−９のＦｖおよびＭＡｂ  ６７９のＦｖ、ＭＡｂ  ＲＳ−７のＦｖおよびＭＡｂ  ６７９のＦｖ、またはＭＡｂ  ＭＮ−１４のＦｖおよびＭＡｂ  ６７９のＦｖ、ならびにそのヒト、キメラ化またはヒト化対応物を含むものである。モノクローナル抗体ＭＮ−１４は、そのキメラ化およびヒト化対応物と同様に、米国特許第５，８７４，５４０号に開示されている。Ｍｕ−９または６７９のＣＤＲの１つ以上を含む二重特異性抗体も好ましい。特に適切な二重特異性抗体は、ＬＬ２×７３４、ＬＬ２×６７９、ＰＡＭ４×７３４、ＰＡＭ４×６７９、ＬＬ１×７３４、およびＬＬ１×６７９を含んでもよい。抗体は、クラス−ＩＩＩ抗ＣＥＡ抗体および６７９のＦｖを含む、融合タンパク質または二重特異性抗体でもよい。クラス−ＩＩＩ抗ＣＥＡを含むクラス−ＩＩＩ抗体は、米国特許第４，８１８，７０９号で詳細に説明されている。
【０１２４】
本発明は決して以下の実施例に限定されないが、以下の実施例によってさらに説明される。
【実施例１】
【０１２５】
１）２０−Ｏ−クロロアセチルカンプトセシンの合成
２０−Ｏ−クロロアセチルカンプトセシンは説明されている。米国特許第４，９４３，５７９号を参照。カンプトセシン（１．０ｇｍ）をＣＨＣｌ3  ４０ｍＬに溶解させた。クロロ酢酸無水物（１．２当量）、ピリジン（１．０当量）およびＤＭＡＰ（０．１当量）をこの混合物に添加して、次に２時間還流させた。反応混合物に目に見える変化がなければ、続いてクロロ酢酸無水物（１．２当量）およびピリジン（１．０当量）をさらに添加して、混合物をさらに２時間還流させた。ＨＰＬＣは反応が起こっていることを示した。追加量のクロロ酢酸無水物（２．１当量）およびピリジン（４．３当量）を添加して、反応混合物をさらに２時間還流させた。ＨＰＬＣは反応が完了したことを示した。Ｈ2Ｏ  ６５ｍＬ、次に０．１Ｎ  ＮａＯＨ溶液、次にさらなるＨ2Ｏ  ６５ｍＬで洗浄することによって、混合物をワークアップした。有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、次に濾過して、最後に減圧下で除去した。黄色沈殿が形成した。ＨＰＬＣは１つの生成物を示した。ＥＳＭＳの結果は、ＭＨ+：４２５を示した。乾燥後の最終収量：１．１７８ｇ（２．７７２×１０-3ｍｏｌ、９６．５％）。
【実施例２】
【０１２６】
ＩＭＰ  ２７４、Ａｃ−Ｃｙｓ（カンプト−ＣＯＣＨ2）−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ2の合成
ＩＭＰ  ２７４ペプチド（図１を参照）は、Ｋａｒａｃａｙ  ｅｔ．ａｌ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１１：８４２−８５４（２０００）によって述べられたのと同様のプロトコルを使用して合成した。ＩＭＰ  ２２２、（Ａｃ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ2）（３８．１ｍｇ）および２０−Ｏ−クロロアセチルカンプトセシン１１．７ｍｇ（１．０当量）をそれぞれ別個にＤＭＦ  １５０μＬに溶解させた。２つの量を合せて撹拌した。ピリジン（１００μＬ）を添加して、反応溶液にアルゴンをパージして、パラフィルムで密封した。１．５時間後にＨＰＬＣによってわずかな変化が認められた。次にＤＩＥＡ（５０ｍＬ）を反応混合物に添加した。ＨＰＬＣは、２時間後に反応が完了に達したことを示している。分取カラムを使用して反応混合物を精製して、画分をＥＳＭＳによる分析に回した（ＭＨ+：１７２１）。４つの画分がＲＴ〜７．１分を有する純生成物を示す。最終収量：２２．２ｍｇ（１．２９０×１０-5ｍｏｌ、４６．９％）。同様に当分野で周知の化学作用を使用して、図２〜４に示すようにＩＭＰ  ２７４の誘導体を合成できる。
【実施例３】
【０１２７】
ＩＭＰ  ２７４標識キット
標識キットはＤＩ  Ｈ2Ｏ  ８０ｍＬにクエン酸（０．４１４ｇｍ）、ＨＰＣＤ（５．００７４ｇｍ）を溶解させて作成した。次にこの混合物をｐＨ４．２５に調整して、その後、ＩＭＰ  ２７４（０．００２１ｇｍ）を添加した。容量をＤＩ  Ｈ2Ｏの十分量によって１００ｍＬとして、０．２２μｍフィルタを通じて濾過したこの溶液の分割量１ｍＬを凍結乾燥バイアルに添加し、次に真空下で凍結させ、乾燥させて密栓した。
【実施例４】
【０１２８】
ＩＭＰ  ２７４ペプチド標識
ＩＭＰ  ２７４  Ｉｎ−１１１標識キットをＤＩ水０．５ｍＬに溶解させた。溶液１１０μＬを除去して、酸で洗浄したエッペンドルフ管に入れた。Ｉｎ−１１１  １．８ｍＣｉ（好ましくはＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ製）をエッペンドルフ管に添加した。溶液を室温にて２０分間インキュベートして、１．０×１０-4Ｍ  Ｉｎ（ＩＩＩ）溶液（０．１Ｍ  ＮａＯＡｃ  ｐＨ４．５）２５０μＬを添加した。冷インジウムを含有する溶液を室温にて３０分間インキュベートした。分割量１４０μＬを除去して、ＰＢＳまたは食塩水によって血清密栓バイアル内で７．０ｍＬまで希釈した。
【実施例５】
【０１２９】
インビトロ試験調合緩衝液中でのＩｎ2−ＩＭＰ  ２７４キットの安定性
インビトロ試験用の、ＩＭＰ  ２７４  １ｍｇを含有する凍結乾燥キットを調製した。キットは、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（賦形剤および安定剤）、緩衝液、およびＤＴＰＡ部分との錯体を形成するための冷インジウムを含有している。反復凍結解凍サイクル後の安定性を試験するために、キットを解凍した；分割量を取出して、逆相ＨＰＬＣ、サイズ排除ＨＰＬＣ（希釈および操作なしで）によって試験した。溶液はＷａｔｅｒｓ  ４．６×２５０ｍｍ  ＸＴｅｒｒａ  ＲＰ  Ｃ18  ５μｍカラムを使用して試験した。ＵＶを２２０ｎｍにて監視し、ＨＰＬＣ条件は次の通りであった：流速１ｍＬ／分、線形勾配３０分間に渡って１００％  Ａ（水中で０．１％ＴＦＡ）〜１００％  Ｂ（９０％  ＣＨ3ＣＮ、１０％水、０．１％ＴＦＡ）。ペプチドは、調合緩衝液中での安定性を示した。図７および８を参照。
【実施例６】
【０１３０】
ＩＭＰ  ２７４標識および安定性試験
ＩＭＰ  ２７４を111Ｉｎで標識した。標識した後、このタンパク質を、ヒトおよびヌードマウス血清中での安定性について２４時間の期間に渡って試験した。試験は、ヒト血清（ｔ1/2＝４時間）およびマウス血清（ｔ1/2＝１８時間）両方の存在下で、ペプチドが安定性変化を受けることを示している。ＩＭＰ  ２７４は、ヒト化抗体ｍ７３４ｘｈＭＮ１４との結合についても試験した。試験は逆相およびサイズ排除ＨＰＬＣシステムの両方で分析した。
【実施例７】
【０１３１】
ＩＭＰ  ２７４標識：個別に完了したマウスおよびヒト標識
111ＩｎＣｌ3（３１μＬおよび２１μＬ）をＤＩ  Ｈ2Ｏ  ５００μＬにそれぞれ添加した。これらの量をＩＭＰ  ２７４の調製バイアルに添加して、約２０分間静置した。それぞれに冷酢酸インジウム緩衝液（１．０×１０-4Ｍ、０．５Ｍ  ＮａＯＡｃ、ｐＨ６．５）９００μＬをさらに添加して、さらに４５分間静置した。各バイアルの総容量は１４３１μＬおよび１４２１μＬであり、ＩＭＰ  ２７４の１．２２０×１０-8モルのモル量は、マウス血清試験では８．５２６×１０-6Ｍ、ヒト血清試験では８．５８６×１０-6Ｍの濃度を生じた。
【実施例８】
【０１３２】
ＩＭＰ  ２７４マウスおよびヒト血清の安定性
１つの標識ペプチド混合物５０μＬを、新しいマウス血清４５０μＬと、もう１つを新しいヒト血清４５０μＬと合せた。これらをボルテックスにかけて、３７℃の一定温度に置いた。０時間〜２３時間の間で各種の時点にてＨＰＬＣによって安定性についてサンプルを分析した。放射クロマトグラムは、標識ペプチドが経時的に変化したことを示す（図９および１０）。溶液５００μＬでのペプチド５０μＬの希釈は、両方の混合物の濃度をマウス実験では８．５２６×１０-7Ｍ、ヒト血清実験では８．５８６×１０-7Ｍまで変化させた。
【実施例９】
【０１３３】
抗体およびマウス血清のＩＭＰ  ２７４への添加
111Ｉｎ−ＩＭＰ  ２７４（１０μＬ）を抗体（抗体／ペプチド比〜２２：１）３μＬおよび０．９％食塩水２９０μＬに添加した。混合物をボルテックスにかけて、サイズ排除ＨＰＬＣで分析した（図１１）。
【実施例１０】
【０１３４】
抗体およびヒト血清のＩＭＰ  ２７４への添加
111Ｉｎ−ＩＭＰ  ２７４（１６μＬ）を抗体（抗体／ペプチド比〜２３：１）１０μＬおよび０．９％食塩水２４μＬに添加した。混合物ボルテックスにかけて、サイズ排除ＨＰＬＣで分析した（図１２）。
【実施例１１】
【０１３５】
ＩＭＰ  １５６（Ａｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ＤＴＰＡ−ＮＨ2）の合成
樹脂上のペプチドは、樹脂をカップリング当たりアミノ酸６当量と反応させて合成した。活性化剤は、ジイソプロピルカルボジイミドおよびＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾールであった。カップリングは室温にて一晩実施した。樹脂（Ａｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−Ｔｙｒ（Ｂｕｔ）−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）ＮＨ−Ｓｉｅｂｅｒアミド樹脂２．１０９ｇ（〜７×１０-4ｍｏｌ））をＣＨ2Ｃｌ2  ２×４０ｍＬで洗浄した。トリブチルスズヒドリド５ｍＬを樹脂に添加した。ピペリジン２ｍＬを酢酸１ｍＬで洗浄すると、混合物は高温となり、結晶が形成した。結晶をＣＨ2Ｃｌ2  ４０ｍＬに溶解させて、Ｐｄ［Ｐ（Ｐｈ3）］4  ０．７２９ｇと混合した。この溶液を樹脂混合物に添加して、室温にて１．５時間撹拌した。開裂溶液を樹脂から排出させた。次に樹脂を、新しいＡｌｏｃ開裂試薬を用いた２回目の１時間処理によって処理した。樹脂は、ＣＨ2Ｃｌ2  ４０ｍＬポーション×３、ＤＭＦによる２５％ピペリジン溶液  ５０ｍＬポーション×２、ＮＭＰ、ＩＰＡ、ＮＭＰ、ＩＰＡ、×ＮＭＰ４  ＩＰＡ  ４０ｍＬポーションで洗浄した。ＤＴＰＡテトラ−ｔ−ブチルエステル３．６７９ｇ（５．９５×１０-3ｍｏｌ）をＮＭＰ  ２０ｍＬに溶解させて、ジイソプロピルカルボジイミド１ｍＬおよびＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾールモノヒドレート０．９９１ｇと混合した。この溶液を室温にて１０分間インキュベートして、次に樹脂に添加した。ＤＴＰＡを室温にて１５時間に渡って樹脂と反応させた。次に樹脂をＮＭＰ、ＩＰＡ、ＮＭＰ、ＩＰＡ、ＩＰＡ（樹脂はニンヒドリン陰性であった）、ＮＭＰ４×、４×ＣＨ2Ｃｌ2  ４０ｍＬポーションで洗浄して、続いて窒素流の下で乾燥させた。ペプチドは、ＴＦＡ  １４ｍＬ、トリイソプロピルシラン０．５ｍＬ、アニソール０．５ｍＬを含有する溶液による３時間の処理によって樹脂から開裂させた。粗ペプチドをエーテル中に沈殿させて、遠心分離によって回収して、室温にて真空中で乾燥させた。粗ペプチドをＴＦＡに１．５時間再懸濁させて、ペプチドからの保護基の開裂を終了させた。ペプチドを０．１％  ＴＦＡ緩衝液を用いた逆相ＨＰＬＣによって精製して、凍結乾燥の後に純生成物０．５４ｇを得た（ＥＳＭＳ  ＭＨ+１３７７）。
【実施例１２】
【０１３６】
ＩＭＰ  ２２２（Ａｃ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ2の合成
Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−Ｔｙｒ（Ｂｕｔ）−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＮＨ−Ｓｉｅｂｅｒアミド樹脂（５．１４８ｇ、〜１．０×１０-2ｍｏｌ）をカラムに添加して、ＮＭＰ  ５０ｍＬですすいで、次に２回目のＮＭＰ  ５０ｍＬポーションの添加によって膨潤させた。Ｎ2ガスを添加して、樹脂に〜３０分間に渡って通気した（すなわちカラムに通気した）。溶液を除去して、２５％ピペリジン／ＮＭＰ  ４０ｍＬを添加した。カラムに４分間通気して、溶液を除去した。２回目の２５％ピペリジン／ＮＭＰ  ４０ｍＬポーションを添加した。カラムにさらに１５分間通気して、溶液を除去した。樹脂をＮＭＰ、ＩＰＡ、ＮＭＰ、ＩＰＡ、そして次に４×ＮＭＰ  ５０ｍＬポーションですすいだ。Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）ＯＨ（５．８６０ｇ）、およびＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１．５３５ｇ）をどちらもＮＭＰ〜３５ｍＬに溶解させた。ジイソプロピルカルボジイミド（１．６ｍＬ）を添加した。試薬が溶解した後に、溶液を樹脂に添加して、Ｎ2ガスを使用してカラムに〜１８時間通気した。溶液を除去して、樹脂をＮＭＰ、ＩＰＡ、ＮＭＰ、ＩＰＡ、そして次に４×ＮＭＰ  ５０ｍＬポーションですすいだ。２５％ピペリジン／ＮＭＰ溶液を添加した。再びカラムにＮ2ガスで４分間通気して、溶液を除去した。これを再度、２５％ピペリジン／ＮＭＰ溶液を用いて１５分間に渡って反復して、溶液を除去した。樹脂は、ＮＭＰ、ＩＰＡ、ＮＭＰ、ＩＰＡ、そして次に４×ＮＭＰ  ５０ｍＬポーションによってすすいだ。酢酸無水物（４．８ｍＬ）をＮＭＰ  ４０ｍＬに添加して、次にジイソプロピルエチルアミン（８．９ｍＬ）を添加した。この溶液を樹脂に添加して、カラムにＮ2ガスによって〜２時間通気した。樹脂をＮＭＰ、ＩＰＡ、ＮＭＰ、ＩＰＡ、そして次に４×ＮＭＰ  ５０ｍＬポーションですすいだ。次に樹脂をＣＨ2Ｃｌ2 ２×５０ｍＬですすいだ。トリブチルスズヒドリド（５ｍＬ）を樹脂に添加した。テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１．０９５ｇ）、氷酢酸（２ｍＬ）、ピペリジン（４ｍＬ）およびＣＨ2Ｃｌ2  〜５５ｍＬの以前に混合した溶液も樹脂に添加した。カラムにＮ2ガスを〜２時間通気して、溶液を除去した。トリブチルスズヒドリド（５ｍＬ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１．００１ｇ）、氷酢酸（２ｍＬ）、ピペリジン（４ｍＬ）およびＣＨ2Ｃｌ2〜５５ｍＬを用いて手順を反復した。カラムにＮ2ガスを〜１時間通気して、溶液を除去した。樹脂をＮＭＰ、ＩＰＡ、ＮＭＰ、ＩＰＡ、そして次に４×ＮＭＰ  ５０ｍＬポーションですすいだ。テトラｔ−ブチルエステル  ＤＴＰＡ（７．０８７ｇ）をＮＭＰ〜２５ｍＬに溶解させた。この溶液にＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１．７１５ｇ）およびジイソプロピルカルボジイミド（１．８ｍＬ）を添加した。カラムにＮ2ガスを〜１８時間通気して、溶液を除去した。樹脂をＮＭＰ、ＩＰＡ、ＮＭＰ、ＩＰＡ、そして次に４×ＮＭＰ  ５０ｍＬポーションですすいだ。これにＣＨ2Ｃｌ2  ３×５０ｍＬでのすすぎが続いた。樹脂をＮ2ガスの低速パージによって〜３０分間乾燥させた。ペプチドを樹脂から開裂させて、トリフルオロ酢酸６０ｍＬ、アニソール２ｍＬ、および���リイソプロピルシラン２ｍＬからなる事前に混合した溶液の添加によって脱保護した。カラムにＮ2ガスを〜２時間通気し、溶液を除去して、上清を回収した。樹脂をトリフルオロ酢酸２５ｍＬのさらなる量ですすいで、これも同様に回収した。上清を５０ｍＬ  ポリエチレン遠心管に注入した（管につき〜１０ｍＬ）。それぞれへのジエチルエーテル４０ｍＬの添加により、溶液からペプチドが沈殿して、ボルテックスおよび約５分間の遠心分離が続いた。上清をデカンテーションして、手順をさらに２回反復した。残った粗ペプチドを真空下で一晩乾燥させた。粗ペプチドをトリフルオロ酢酸約１０ｍＬに溶解させて、不完全な開裂のためにＨＰＬＣによって監視した。ジエチルエーテルを使用する沈殿手順を〜２時間後に反復した。全ての乾燥粗ペプチドを合せて、脱イオン水８ｍＬに溶解させた。ペプチド溶液をＷａｔｅｒｓ  ＲＣＭ（登録商標）分取カラムに装填して、移動相Ａ（ＤＩ  Ｈ2Ｏ中０．１％  ＴＦＡ）およびＢ（９０％アセトニトリル／１０％  ＤＩ  Ｈ2Ｏ中の０．１％ＴＦＡ）を使用して、１００％／０％〜７０％／３０％の勾配を用いて、６５ｍＬ／分-1にて８０分間に渡り精製した。画分番号７、８、９および１０は、分析ＨＰＬＣによって純物質を含有していた。画分を凍結し、凍結乾燥させて、総量で純物質５２１．４ｍｇを得た。サンプルをＥＳＭＳ分析に回すと、各画分についてＭＨ+：１３３３および［Ｍ−Ｈ］-：１３３１を示した。
【実施例１３】
【０１３７】
ブロモアセチルドキソルビシンの合成
ドキソルビシンヒドロクロライド０．９９９３ｇ（１．７２×１０-3ｍｏｌ）をＤＭＦ  １０ｍＬに溶解させて、ピリジン０．５ｍＬと混合した。溶液を氷浴で冷却した。ブロモアセチルブロミド１６０μＬ（１．８４×１０-3ｍｏｌ）を反応混合物に添加した。ジイソプロピルエチルアミン０．６ｍＬを３．５時間後に添加した。ＨＰＬＣ分析は、ほとんど開始物質を示したため、エーテルを混合することによって開始物質が沈殿した。沈殿物をエーテル  ２×３０ｍＬポーションで洗浄して、真空オーブン内で室温にて乾燥させた。ドキソルビシンをＤＭＦ  １０ｍＬに再溶解させた。ジイソプロピルエチルアミン１ｍＬを添加して、さらなるブロモアセチルブロミド２５０μＬ（２．８７×１０-3ｍｏｌ）の添加を続けた。溶液を１７分間混合して、エーテル６０ｍＬで沈殿させた。赤色固体沈殿物をさらにエーテル６０ｍＬポーション×３で洗浄した。赤色沈殿物をＣＨ3ＣＮ  １０ｍＬに再懸濁させて、エーテル５０ｍＬ中に注入することによって沈殿させて、赤色粉末を得た。赤色粉末を遠心分離によって回収して、エーテル３×６０ｍＬポーションによって再度洗浄した。次に粗生成物をＣＨＣｌ3に溶解させて、１５０ｍＬ焼成ガラス漏斗に３／４まで充填したフラッシュシリカに入れることによって、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーで精製した。シリカをエーテル、クロロホルム、９５：５  クロロホルム／メタノール×４、９０：１０  クロロホルム／メタノール×２  ２００ｍＬポーションで溶出させた。生成物は、２回目（０．１３９０ｇ）および３回目（０．２８１６ｇ）の９５：５  クロロホルム／メタノール画分であった。
【実施例１４】
【０１３８】
ＩＭＰ  ２２５の合成
ブロモアセチルドキソルビシン（０．０７１４ｇ、１．０８×１０-4ｍｏｌ）をＩＭＰ  ２２２  ０．１３３３ｇ（１．００×１０-4ｍｏｌ）と混合して、ＤＭＦ  １．０ｍＬに溶解させた。カリウムバイカーボネート０．４５４４ｇをＨ2Ｏ  １ｍＬに懸濁させて、次にＤＭＦ溶液に添加して、これを少し温めた。反応混合物を室温にて一晩インキュベートした。反応混合物を５０ｍＬ遠心管内のエーテル３０ｍＬに注入した。管の内容を混合して、エーテル層をデカンテーションした。２回目のエーテル３０ｍＬポーションを用いて、エーテル洗浄を反復した。次に溶液を１Ｍ  ＨＣｌによって酸性化して、Ｗａｔｅｒｓ  １９×３００ｍｍ  Ｐｒｅｐ  Ｎｏｖａ−Ｐａｋ  ＨＲＣ１８  ６μｍ  ６０AカラムでのＨＰＬＣによって２回に分けて精製した。勾配を流速２５ｍＬ／分にて、１００％  ０．１％水中ＴＦＡ（緩衝液Ａ）にて開始し、線形勾配を使用して、８０分間に渡って５０：５０緩衝液Ａ：Ｂ（緩衝液Ｂは９０％  ＣＨ3ＣＮ  ０．１％ＴＦＡ、１０％  Ｈ2Ｏである）まで進めた。所望の生成物を含有する画分を回収し、凍結乾燥して、所望の生成物０．０８９５ｇ（収率４７％）を得た（ＥＳＭＳ  ＭＨ+１９１６）。ＩＭＰ  ２２５の化学構造については図５を参照。
【実施例１５】
【０１３９】
ＩＭＰ  ２９４の合成（Ｉｎ2標識ＩＭＰ  ２２５）
Ｈ2Ｏ  １５ｍＬにクエン酸０．３８６ｇを溶解させて、０．１Ｍクエン酸緩衝液を調製した。１Ｍ  ＮａＯＨの添加により緩衝溶液をｐＨ３．６０に調整して、溶液を２０ｍＬまで希釈した。ペプチド０．２９３ｇ（１．５３×１０-5ｍｏｌ、１００ｍｏｌ％）をＩｎＣｌ3  ０．０１２８ｇ（５．７９×１０−５ｍｏｌ、３７８ｍｏｌ％）と混合して、クエン酸緩衝液５ｍＬに溶解させた。反応溶液を室温で一晩インキュベートして、次にＷａｔｅｒｓ  １９×３００ｍｍ  Ｐｒｅｐ  Ｎｏｖａ−Ｐａｋ  ＨＲＣ１８  ６μｍ  ６０ÅカラムでのＨＰＬＣによって精製した。勾配を流速２５ｍＬ／分にて、９０％緩衝液Ａ（上で定義した通り）および１０％緩衝液Ｂ（上で定義した通り）にて開始し、線形勾配を使用して、８０分間に渡って６０：４０  緩衝液Ａ：Ｂまで進めた。所望の生成物を含有する画分を回収して、凍結乾燥させて、所望の生成物０．０１６０ｇ（収率４９％）を得た（ＥＳＭＳ  ＭＨ-２３１８）。
【実施例１６】
【０１４０】
ＩＭＰ  ２９５の合成（Ｉｎ2標識ＩＭＰ  １５６）
ペプチドであるＩＭＰ  １５６  ０．１２９９ｇ（９．４３×１０-5ｍｏｌ、１００ｍｏｌ％）を０．０７４０ｇ（３．３４×１０-4ｍｏｌ、３５５ｍｏｌ％）と混合して、ｐＨ３．６の０．１Ｍクエン酸緩衝液５ｍＬに溶解させた。反応溶液を室温にて〜４時間インキュベートして、次にＷａｔｅｒｓ  １９×３００ｍｍ  Ｐｒｅｐ  Ｎｏｖａ−Ｐａｋ  ＨＲＣ１８  ６μｍ  ６０AカラムでのＨＰＬＣによって精製した。勾配は流速２５ｍＬ／分にて、１００％緩衝液Ａ（上で定義した通り）にて開始し、線形勾配を使用して、８０分間に渡って５０：５０緩衝液Ａ：Ｂまで進めた。所望の生成物を含有する画分を回収して、凍結乾燥させて、所望の生成物０．１０９５ｇ（収率７３％）を得た（ＥＳＭＳ  ＭＨ-１５９８）。
【実施例１７】
【０１４１】
２５℃におけるＰＢＳ中でのＩＭＰ  ２９４およびＩＭＰ  ２９５の安定性
Ｎａ2ＨＰＯ4  ２．５３５ｇ、ＮａＨ2ＰＯ4．Ｈ2Ｏ  ０．４５０ｇ、ＮａＣｌ  ４．３９１ｇを混合して、Ｈ2Ｏで５００ｍＬまで希釈することによって、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）溶液を調製した。ＩＭＰ  ２９４のストック溶液は、ペプチド０．００１１ｇをＰＢＳ  ５．００ｍＬに溶解させることによって調製した。ストック溶液の２．０ｍＬ分割量を除去し、ＰＢＳ  ４．９ｍＬと混合して、ＩＭＰ  ２９４（Ｉｎ2ＩＭＰ  ２２５）のＰＢＳによる３×１０-5Ｍ溶液を得た。ＩＭＰ  ２９５のストック溶液は、ペプチド０．００１１ｇをＰＢＳ  ５．００ｍＬに溶解することによって調製した。ストック溶液の２．０ｍＬ分割量を除去し、ＰＢＳ  ７．２ｍＬと混合して、ＩＭＰ  ２９５（Ｉｎ2ＩＭＰ  １５６）のＰＢＳによる３×１０-5Ｍ溶液を得た。Ｗａｔｅｒｓ  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ＨＰＬＣのオートインジェクタで２５℃にてサンプルをインキュベートした。２５℃で加熱したＷａｔｅｒｓ  Ｘｔｅｒｒａ（商標）ＲＰ18  ５μｍ  ４．６×２５０ｍｍカラム、部品番号Ｗ１０８９１Ｒ  ０１５を使用して、逆相ＨＰＬＣによってサンプルを分析した。カラムの流速は１ｍＬ／分であり、ＰＤＡ検出器を用いて２２０ｎｍにて溶出液を監視した。線形勾配を使用して、１００％緩衝液Ａから開始し、３０分に渡って１００％緩衝液Ｂまで進めた。注射（１００μｌ）は１週間に渡って毎日実施した。図１３ＡおよびＢを参照。
【実施例１８】
【０１４２】
ＩＭＰ  ２２４の合成
ペプチドであるＩＭＰ  ２２１（Ｈ2Ｎ−ＮＨ−Ｃ6Ｈ4−ＣＯ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ2  ＭＨ+１３２２、Ｆｍｏｃ  ＳＰＰＳより作成）を含有するフェニルヒドラジン０．０５９６ｇの量を、ＤＭＦ３ｍＬ中でドキソルビシンヒドロクロライド０．０２４５ｇと混合した。反応溶液を暗所で室温にて反応させた。４時間後、追加のＩＭＰ  ２２１  ０．０２６３ｇを添加して、反応を一晩続けた。次に反応混合物全体をＷａｔｅｒｓ  Ｎｏｖａ−Ｐａｋ（３−４０×１００ｍｍセグメント、６μｍ、６０Ａ）分取カラムでＨＰＬＣによって精製して、８０：２０〜６０：４０緩衝液Ａ：Ｂの勾配で４０分間に渡って溶出させた（緩衝液Ａ＝０．３％  ＮＨ4ＯＡｃ、緩衝液Ｂ＝  ９０％  ＣＨ3ＣＮ中０．３％ＮＨ4ＯＡｃ）。生成物を含有する画分を合せ、凍結乾燥させて、所望の生成物０．０４５３ｇを得て、これをＥＳＭＳ  ＭＨ+１８４７によって確認した。ＩＭＰ  ２２４の化学構造については図６を参照。
【実施例１９】
【０１４３】
ＩＭＰ  ２２４キット調合物
実施例１４のペプチドをＩｎ−１１１標識のキットへ調合した。２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン５．０１４ｇ、およびクエン酸０．５９８ｇを８５ｍＬ中に含有する溶液を調製した。１  Ｍ  ＮａＯＨの添加によって溶液をｐＨ４．２０に調整して、水１００ｍＬに希釈した。ペプチドＩＭＰ  ２２４  ０．００１０ｇの量を緩衝液１００ｍＬに溶解させて、１ｍＬの分割量を２ｍＬ凍結乾燥バイアル内へ０．２２μｍ  Ｍｉｌｌｅｘ  ＧＶフィルタを通じて滅菌濾過して、直ちに凍結および凍結乾燥させた。
【実施例２０】
【０１４４】
ＩＭＰ  ２２４キットのＩｎ−１１１標識
Ｉｎ−１１１を水０．５ｍＬに溶解させて、凍結乾燥したキットに注入した。キット溶液を室温にて１０分間インキュベートして、次に０．５Ｍ  ＮａＯＡｃおよび２．５６×１０-5Ｍ冷インジウムを含有するｐＨ７．２緩衝液０．５ｍＬを添加した。
【実施例２１】
【０１４５】
ＩＭＰ  ２２４キットのインビトロ安定性
ＩＭＰ  ２２４キットを上述のようにＩｎ−１１１  ２．５２  ｍＣｉで標識した。分割量（０．１５ｍＬ、３７０  μＣｉ）を取出して、ｐＨ４．０の０．５Ｍクエン酸緩衝液０．９ｍＬ、ｐＨ５．０の０．５Ｍクエン酸緩衝液０．９ｍＬ、およびｐＨ７．５の０．５Ｍリン酸緩衝液０．９ｍＬと混合した。標識ペプチドの安定性を逆相ＨＰＬＣによって追跡した。ＨＰＬＣ条件：Ｗａｔｅｒｓ  Ｒａｄｉａｌ−Ｐａｋ  Ｃ−１８  Ｎｏｖａ−Ｐａｋ  ８×１００ｍｍ、流速３ｍＬ／分、勾配：１０分間に渡って１００％  Ａ＝０．３％  ＮＨ4ＯＡｃ〜１００％  Ｂ＝９０％  ＣＨ3ＣＮ、０．３％  ＮＨ4ＯＡｃ。安定性の結果を表１に示す。
【表１】
2007528372.tif 000003
【実施例２２】
【０１４６】
ＣＡＬＵ−３腫瘍担持ヌードマウスにおけるＩｎ−１１１−標識ＩＭＰ  ２７４およびＩ−１２５−標識ｈＲＳ−７×ＭＡｂ  ７３４の体内分布ならびにｈＲＳ−７×ＭＡｂ  ７３４によるプレターゲティング
ヌードマウス７０匹にＣＡＬＵ−３細胞を移植した。これらのマウスを使用して、腫瘍を発現するＥＧＰ−１を用いたプレターゲティング実施の可能性を考察した。二重特異性抗体Ｉ−１２５  ｈＲＳ−７×７３４の腫瘍結合およびインビボクリアランスを、２、４、２４および４８時間の時点を使用して評価した。加えて、我々はＩ−１２５  ｈＲＳ−７×７３４を用いたプレターゲティング実験を実施した。プレターゲティング実験では、ペプチドＩｎ−１１１／Ｉｎ  ＩＭＰ  ２７４を、二重特異性抗体ｈＲＳ−７×７３４注射の１６および２４時間後に注射した。プレターゲティング試験の動物は、ペプチド注射の３および２４時間後に殺処分した。第３グループの動物は、Ｉｎ−１１１／Ｉｎ  ＩＭＰ  ２７４ペプチドのみを投与された。これらの動物は、ペプチド注射の１、３、６および２４時間後に殺処分された。通例、各時点でマウス５匹を使用した。以下の組織を秤量およびカウントした：腫瘍、肝臓、脾臓、腎臓、肺、血液、胃、小腸、大腸、心臓および尿。
【０１４７】
抗体排出グループ：少なくとも３５匹の動物に、二重特異性抗体Ｉ−１２５  ｈＲＳ−７×７３４を含有する溶液１００μＬ（５μＣｉ、１５μｇ、１．５×１０-10ｍｏｌ）を注射した。抗体排除グループの動物２０匹をそれぞれ動物５匹の５グループに分けて、注射の２、４、２４および４８時間後に殺処分した。
【０１４８】
プレターゲティンググループ：プレターゲティンググループの動物３０匹をそれぞれ動物約５匹の６グループに分けた。約２４時間後、Ｉ−１２５標識二重特異性抗体を別の動物１０匹に注射して、ペプチド１００μＬ（１０μＣｉ、１．５×１０-11ｍｏｌ）をこれらの動物１０匹に抗体注射の４時間後に注射した。動物をペプチド注射の３および２４時間後に殺処分した。約２４時間後、ペプチド１００μＬ（１０μＣｉ、１．５×１０-11ｍｏｌ）を、抗体注射の２４時間後に動物１０匹に注射した。動物はペプチド注射の３および２４時間後に殺処分した。約４８時間後、動物１０匹にペプチド１００μＬを注射した。ペプチド注射の３時間および２４時間後に、各時点にて動物５匹を殺処分した。
【０１４９】
ペプチド単独グループ：試験開始の約２４時間後、ペプチド１００μＬ（１０μＣｉ、１．５×１０-11ｍｏｌ）を動物１５匹に注射した。動物を３グループに分けて、ペプチド注射の１、３、６および２４時間後に殺処分した。試験の結果を表２〜９にまとめる。
【表２】
2007528372.tif 000004
【表３】
2007528372.tif 000005
【表４】
2007528372.tif 000006
【表５】
2007528372.tif 000007
【表６】
2007528372.tif 000008
【表７】
2007528372.tif 000009
【表８】
2007528372.tif 000010
【表９】
2007528372.tif 000011
【実施例２３】
【０１５０】
ＧＷ−３９腫瘍担持ヌードマウスおよびｈＭＮ−１４×ｍ７３４によってプレターゲティングしたＧＷ−３９腫瘍担持ヌードマウスにおけるＩｎ−１１１標識ＩＭＰ  ２７４の生体内分布
Ｉｎ−１１１標識ＩＭＰ  ２７４の生体内分布をＧＷ−３９腫瘍担持ヌードマウスにおいて決定して、表１０にまとめた。ｈＭＮ−１４×ｍ７３４によってプレターゲティングしたＧＷ−３９腫瘍担持ヌードマウスにおけるＩｎ−１１１標識ＩＭＰ  ２７４の生体内分布を表１１に示す。
【表１０】
2007528372.tif 000012
【表１１】
2007528372.tif 000013
【実施例２４】
【０１５１】
ＧＷ−３９腫瘍担持ヌードマウスおよびｈＭＮ−１４×ｍ７３４によってプレターゲティングしたＧＷ−３９腫瘍担持ヌードマウスにおけるＩｎ−１１１−標識ＩＭＰ  ２２５の生体内分布
Ｉｎ−１１１−標識ＩＭＰ  ２２５の生体内分布をＧＷ−３９腫瘍担持ヌードマウスにおいて決定して、表１２にまとめた。ｈＭＮ−１４×ｍ７３４によってプレターゲティングしたＧＷ−３９腫瘍担持ヌードマウスにおけるＩｎ−１１１−標識ＩＭＰ  ２２５の生体内分布を表１３に示す。
【表１２】
2007528372.tif 000014
【表１３】
2007528372.tif 000015
【実施例２５】
【０１５２】
ＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるＩＭＰ  ２２４の生体内体内分布
キットを水０．５ｍＬ中のＩｎ−１１１  ４００μＣｉで再構成した。Ｉｎ−１１１キット溶液を室温にて１０分間インキュベートして、次にｐＨ７．２の０．５Ｍアセテート緩衝液を含有する冷インジウム１．５ｍＬで希釈した。標識ペプチドを飽和ＮａＣｌ中でＩＴＬＣによって分析した。バラのＩｎ−１１１は、ＩＴＬＣストリップの上部２０％に位置していた。
【０１５３】
各マウスにＩｎ−１１１標識ペプチド１００μＬ（２０μＣｉ）を注射した。動物に麻酔をかけ、３０分、１時間、２時間、４時間、および２４時間にて、時点ごとにマウス３匹を使用して殺処分した。血液、筋肉、肝臓、肺、腎臓、脾臓、大腸、小腸、胃、尿および尾を回収してカウントした。生体内分布試験の結果を表１４に示す。
【表１４】
2007528372.tif 000016
【実施例２６】
【０１５４】
ＩＭＰ  ２２４のインビボ安定性および排除
キットを水０．５ｍＬ中のＩｎ−１１１  ４  ｍＣｉで再構成した。Ｉｎ−１１１キットを室温にて１０分間インキュベートして、次にｐＨ７．２の０．５Ｍアセテート緩衝液を含有する冷インジウム０．５ｍＬで希釈した。標識ペプチドを飽和ＮａＣｌ中でＩＴＬＣによって分析した。バラのＩｎ−１１１は、ＩＴＬＣストリップの上部２０％に位置していた。
【０１５５】
各マウスにＩｎ−１１１標識ペプチド１００μＬ（４００  μＣｉ）を注射した。動物に麻酔をかけ、３０分および１時間にて、時点ごとに動物２匹を使用して殺処分した。血清および尿サンプルを回収して、氷上で保存し、ＨＰＬＣ分析のためにできるだけ早く氷上へ送った。尿サンプルのＨＰＬＣ（サイズ排除クロマトグラフィーによる）は、Ｉｎ−１１１標識ペプチドがなお抗体に結合できることを示した。逆相ＨＰＬＣ分析は、放射性標識ペプチドが尿中に無傷で排泄されたことを示した。血清中に残存する活性の量は低すぎて、検出器の感度が悪いために逆相ＨＰＬＣによって分析できなかった。ドキソルビシンは〜９５％肝胆汁性排除を有する。従ってビスＤＴＰＡペプチドを加水分解可能な方法で結合することによって、〜１００％腎排泄をもたらすように薬物の生体内分布が変化する。このことは、全ての非標的化薬物が無傷で迅速に排泄されるために、薬物の毒性をはるかに低くする。排除結果を表１５に示す。
【表１５】
2007528372.tif 000017
【実施例２７】
【０１５６】
ＩＭＰ  ２２４およびＩＭＰ  ２２５を用いたプレターゲティング実験
ペプチド１０マイクログラムを含有するＩＭＰ  ２２４の凍結乾燥キットを使用した。キットを２ｍＬバイアル中で凍結乾燥させて、滅菌水１ｍＬによって再構成した。０．５ｍＬ分割量を除去して、Ｉｎ−１１１  １．０  ｍＣｉと混合した。Ｉｎ−１１１キット溶液を室温にて１０分間インキュベートして、次に０．１ｍＬを除去して、滅菌バイアル内でアセテート緩衝液ＢＭ  ８−１２を含有する冷インジウム１．９ｍＬで希釈した。標識ペプチドを飽和ＮａＣｌ中でＩＴＬＣによって分析した。バラのＩｎ−１１１は、ＩＴＬＣストリップの上部２０％に位置していた。
【０１５７】
ＧＷ３９腫瘍異種移植片を持つ雌ヌードマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ  ＮＣＲＮＵ、３〜４週齢）をプレターゲティング実験に使用した。腫瘍は０．３〜０．８ｇであった。各動物にＩ−１２５標識抗体Ｆ６×７３４−Ｆ（ａｂ’）2  １００ミクロリットル（５Ｃｉ、１５ｇ、１．５×１０-10ｍｏｌ）を注射した。
【０１５８】
７２時間後、各マウスにＩｎ−１１１標識ペプチド１００Ｌ（１０Ｃｉ）を注射した。動物に麻酔をかけて、１時間、４時間および２４時間にて、時点ごとにマウス５匹を使用して殺処分した。腫瘍、血液、筋肉、肝臓、肺、腎臓、脾臓、大腸、小腸、胃、尿および尾を回収してカウントした。
【０１５９】
ペプチド１１マイクログラムを含有する、ＩＭＰ  ２２５  ＮＨ2−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｃｙｓ（Ｄｏｘ−ＣＯＣＨ2）−Ａｃ（配列番号４）ＭＮａ+１９３８）の凍結乾燥キットを使用して実験を反復した。生体内分布結果を表１６〜１８にまとめる。
【表１６】
2007528372.tif 000018
【表１７】
2007528372.tif 000019
【表１８】
2007528372.tif 000020
【実施例２８】
【０１６０】
Ｄａｕｄｉ細胞を接種したＳＣＩＤマウスにおけるプレターゲティング
ＳＣＩＤマウスにＤａｕｄｉ（バーキットリンパ腫）細胞を接種して、播種性疾患を生じさせた。マウスの１グループは、１、３、７、および９日目に投与したＬＬ２×７３４の腹腔内注射４回を受けた。これに２、４、８、および１０日目のＩＭＰ−２２５の腹腔内注射４回が続いた。対照グループ（ＩＭＰ−２２５なし）には、２、４、８、および１０日目にＩＭＰ−２２５を与えた。図１４Ａを参照。生存の終点としてのマウスの麻痺の徴候を毎日観察した。生存パーセントの中央値を計算して、Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒプロットを使用して解析した（ｌｏｇ−ｒａｎｋ解析）。図１４Ｂを参照。
【実施例２９】
【０１６１】
ＤＴＰＡの合成
ＤＴＰＡを、図１５および１６に示した概略図に概説するように合成できる。
【０１６２】
３ステップ法
ａ．Ｎ−（２−（（５−ジベンゾスベリル）アミノ）エチル）−１，２−エタンジアミン、３の合成：ジエチレントリアミン１、３５０ｍＬを１０００ｍｌ  ３口フラスコに注入して、窒素を流した。溶液を氷／塩浴で３℃まで冷却した。保護基前駆物質５−クロロジベンゾスルベラン２（１５．０１７ｇ、６．５７×１０-2ｍｏｌ）を、１５分の期間に渡って窒素の陽圧下で反応混合物に少しずつゆっくりと添加した。反応物を磁気的に撹拌して、１８時間に渡って室温までゆっくりと加温した。次に反応物を氷浴で冷却して、水３５０ｍＬをゆっくり添加した（温度を５０℃以下に維持して）。反応混合物を４×ＣＨ2Ｃｌ2  １００ｍＬで抽出した。有機層を合せて、Ｈ2Ｏ  １００ｍＬ×２で洗浄した。次に有機抽出物をＮａ2ＳＯ4上で乾燥させて、濾過して、回転蒸発器で濃縮して、黄色油状生成物１９．２５８ｇ（収率９９％）を得た。ＥＳＭＳ  ＭＨ+２９６。
【０１６３】
ｂ．Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”−テトラ（（ｔｅｒｔ−ブトキシ−カルボニル）メチル）−Ｎ”−（２−（（５−ジベンゾスベリル）アミノ）エチル）−１，２−エタンジアミン５の合成：粗Ｎ−（２−（（５−ジベンゾスベリル）アミノ）エチル）−１，２−エタンジアミン３、５３ｇ（１．８×１０-1ｍｏｌ）をアセトニトリル９０ｍＬに溶解させて、窒素下に置いた。ジイソプロピルエチルアミン７１ｍＬ（５．４９×１０-1ｍｏｌ、８３６Ｍ％）を添加して、溶液を氷浴で冷却した。Ｔｅｒｔ−ブチルブロモアセテート４、４２ｍＬ（２．４８×１０-1ｍｏｌ、４４６  Ｍ％）を滴加して、反応物を窒素下で一晩撹拌するときにゆっくりと加温した。翌日、さらに１５ｍＬ（４．０６×１０-2ｍｏｌ、６２  Ｍ％）を添加した。反応物を室温にて一晩撹拌した。次に反応混合物を回転蒸発器で濃縮した。粗生成物をエチルアセテート２００ｍＬと混合して、飽和ナトリウムバイカーボネート１００ｍＬ×２および５０ｍＬ×２で抽出した。有機溶液をＮａ2ＳＯ4上で乾燥させ、濾過して、回転蒸発器で濃縮し、粗生成物５６ｇをコハク色油として得た。
【０１６４】
ｃ．１−ｔｅｒｔ−ブチルヒドロキシ３，６，９−トリス（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル）−３，６，９−トリアザウンデカンニ酸７の合成：粗Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”−テトラ（ｔｅｒｔ−ブトキシ−カルボニル）メチル）−Ｎ”−（２−（（５−ジベンゾスベリル）アミノ）エチル）−１，２−エタンジアミン５を、グリオキシル酸モノヒドレート３６．５４１．ｇ（３．９７×１０-1ｍｏｌ、６０４  ｍｏｌ％）と混合して、メタノール５０ｍｌに溶解させた。パーボトルを窒素で洗い、触媒１．７２１ｇ（１０％炭素担持パラジウム）を添加した。２日後、触媒０．９９９ｇをさらに添加した。混合物を５０  ＰＳＩ  Ｈ2下に置き、逆相ＨＰＬＣによって判定されるように反応が完了するまで（５日）、室温にてパーシェイカーで振とうした。反応混合物をセライトで濾過して、触媒を除去した。セライトをメタノールで洗浄した。濾液を回転蒸発器で減圧下にて濃縮した。粗生成物をエーテル２００ｍｌに溶解させ、Ｈ2Ｏ  １００ｍｌおよびＨ2Ｏ  ５０ｍｌで洗浄した。次に有機層を１  Ｍクエン酸５０ｍＬポーション×２で抽出した。クエン酸抽出物は３層を形成した。底の２層をエーテル層から分離した。ヘキサン１００ｍＬをエーテル層に添加して、有機層を１  Ｍクエン酸５０ｍＬさらにで抽出した。次に合せたクエン酸抽出物をヘキサン１００ｍＬで抽出した。水抽出物およびクエン酸抽出物を合せて、Ｎａ2ＣＯ3によって〜ｐＨ８．０まで慎重に中和した。塩基性化溶液をエチルアセテート２００ｍＬ×２で抽出した。有機抽出物をＮａ2ＳＯ4上で乾燥させ、濾過して、回転蒸発器で減圧下にて濃縮した。粗生成物をグリオキシル酸２６．３０２ｇ、ジイソプロピルエチルアミン２５ｍＬ、１０％Ｐｄ／Ｃ  ２．１４７ｇ、およびＭｅＯＨ  ５０ｍＬと混合した。混合物を５０  ＰＳＩ  Ｈ2下で２日間振とうした。反応混合物をセライトで濾過して、次に回転蒸発器で減圧下にて濃縮した。粗生成物をエチルアセテート２００ｍＬに溶解させて、飽和ＮａＨＣＯ3  １００ｍＬ×２で抽出した。有機層を１Ｍ  ＮａＨ2ＰＯ4  １００ｍＬで洗浄して、Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させた。反応混合物を濾過および濃縮して、粗生成物２２．２ｇを黄色油として得た。６００ｍＬ焼成ガラス漏斗に３／４まで充填したフラッシュシリカのパッドに粗生成物を注入して、溶媒の勾配を用いて溶出させることによって、粗生成物を精製した。漏斗を１００％ヘキサン×４、７５：２５ヘキサン／エチルアセテート×４、１：１  ヘキサン／エチルアセテート×４、２５：７５ヘキサン／エチルアセテート×４、１００％エチルアセテート×４、１００％  ＣＨＣｌ3×４、および９５：５  ＣＨＣｌ3／ＭｅＯＨ×７の２００ｍＬポーションで溶出した。油状コハク色生成物１７．６４８ｇ（収率４５％）を９５：５  ＣＨＣｌ3／ＭｅＯＨ画分中に見出した（３〜７）。
【０１６５】
４ステップ法
ａ．Ｎ−（２−（（５−ジベンゾスベリル）アミノ）エチル）−１，２−エタンジアミン、３の合成。ジエチレントリアミン１’２５０ｍＬを、磁気撹拌棒を装備した１リットル３口丸底フラスコに入れた。溶液を窒素雰囲気下に置き、氷浴で４℃まで冷却した。５−クロロジベンゾスベラン２１２．１０８ｇ（５．２９×１０-2ｍｏｌ）を１０分間に渡って少しずつ添加した。反応物を室温までゆっくりと加温して、２．５日間撹拌した。次に反応物を氷浴で冷却して、水３５０ｍＬを添加した。溶液をＣＨ2Ｃｌ2  １００ｍＬ×４で抽出した。有機層を合せて、水１００ｍＬ×２で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して、回転蒸発器で濃縮して、粗生成物１５．２６８ｇ（収率９７．８％）を油として得た。
【０１６６】
ｂ．Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”−テトラ（（ｔｅｒｔ−ブトキシ−カルボニル）メチル）−Ｎ”−（２−（（５−ジベンゾスベリル）アミノ）エチル）−１，２−エチレンジアミン５の合成：前の反応物３からの粗生成物全体をアセトニトリル７５ｍＬに溶解させた。ジイソプロピルエチルアミン６８ｍＬを反応溶液に添加して、窒素で洗い、氷浴で冷却した。ｔｅｒｔ−ブチルブロモアセテート４’４０ｍＬ（２．７１×１０-1、５２３ｍｏｌ  ％）を反応溶液に滴加して、溶液を一晩撹拌しながら室温までゆっくりと加温した。翌日、反応を完了させるために、さらにｔｅｒｔ−ブチルブロモアセテート４、７．５ｍＬを添加した。反応物を室温にてさらに１日撹拌して、次に減圧下にて回転蒸発器で濃縮した。エチルアセテート２００ｍＬを添加して、飽和ナトリウムバイカーボネート溶液１００ｍＬ×３を用いて抽出を実施した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮してコハク色油を得た。次に油を回転蒸発器で８０℃、高真空下にてさらに濃縮して、粗生成物４０．９３８ｇをコハク色油として得た。
【０１６７】
ｃ．Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”−テトラ（（ｔｅｒｔ−ブトキシ−カルボニル）メチル）−Ｎ”−（２−（アミノ）エチル）−１，２−エタンジアミンの合成。粗生成物４０．８７３ｇをメタノール４０ｍＬに溶解させて、５００ｍＬパー水素添加ボトルに入れた。次にクエン酸１０．５０５ｇを添加して、ボトルを窒素でパージした。次に触媒１０％活性炭担持パラジウム１．５５１ｇをパーボトルに添加した。次に混合物を５０  ＰＳＩ  Ｈ2下でパーシェイカーに入れた。５０  ＰＳＩ  Ｈ2下で２日間振とうした後に水素添加はほぼ完了したが、パーシェイカーから除去する前に反応物をさらに２日間進めさせた。反応混合物をセライトで濾過した。濾液を回転蒸発器で濃縮させ、次にジエチルエーテル２００ｍＬに溶解させた。溶液を飽和ＮａＨＣＯ3溶液３００ｍＬと慎重に混合した。エーテル層およびバイカーボネート層を分離した。バイカーボネート層をエーテル５０ｍＬ×２で逆抽出した。エーテル層を合せ、ヘキサン３００ｍＬと混合した。次に有機層を１  Ｍクエン酸５０ｍＬ×３で抽出した。クエン酸抽出物を合せて、１：１エーテル／ヘキサン溶液１００ｍＬポーション×２で抽出した（微量のスベランを除去するために）。炭酸ナトリウム１６．３２２ｇを、エチルアセテート１００ｍＬを含むクエン酸溶液の水層の上にゆっくりと添加した。ｐＨがｐＨ紙によってｐＨ８に調整されるまで、炭酸ナトリウムをさらに添加した。次に溶液をエチルアセテート１００ｍＬ×３で抽出した。エチルアセテート抽出物を合せて、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶液を濾過して、回転蒸発器で濃縮して、粗生成物２１．７５５ｇ（収率７５％）を黄色油として得た。粗生成物をエーテル２５ｍＬに溶解させて、６００ｍＬ焼成ガラス漏斗に３／４まで充填したフラッシュシリカのパッドに入れた。漏斗を１００％ヘキサン×４、９：１  ヘキサン／エチルアセテート×４、７５：２５  ヘキサン／エチルアセテート×４、５０：５０  ヘキサン／エチルアセテート×８、２５：７５  ヘキサン／エチルアセテート×４、１００％エチルアセテート×４  ２００ｍＬポーションで溶出させた。生成物は、７５：２５  ヘキサン／エチルアセテートから１００％エチルアセテートの画分全てに存在するように思われる。ＨＰＬＣは、７５：２５  ヘキサン／エチルアセテート画分において、最初の３回の５０：５０  エチルアセテート／ヘキサン画分と同様に、不純物のレベル上昇を示している。これらの画分は、物質約５．９ｇを含有している。生成物を含有する残りの画分を合せて、油状生成物１１．３３２ｇ（ＭＨ+５６０、収率３９％）を得た。
【０１６８】
ｄ．１−ｔｅｒｔ−ブトキシ３，６，９−トリス（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル）−３，６，９−トリアザウンデカン二酸８の合成。前の反応物からの精製生成物１１．３３２ｇをメタノール４０ｍＬに溶解させて、窒素雰囲気下の５００ｍＬパーボトル内に入れた。溶液にグリオキシル酸モノヒドレート６、１３．８１３ｇを、続いて１０％活性炭担持パラジウム１．１０２ｇを添加した。ボトルを５０  ＰＳＩ  Ｈ2下でパーシェイカーに置いた。混合物をＨ2下で一晩振とうして、翌日試験した分割量は、反応が〜９０％完了したことを明らかにした。反応混合物に新しい触媒０．６８５ｇを加えて、５０ＰＳＩ  Ｈ2下の水素添加器にさらに３日間戻した。次に反応溶液をセライトで濾過して、回転蒸発器で濃縮し、エチルアセテート２００ｍＬに溶解させ、エチルアセテート２００ｍＬに溶解させた。エチルアセテート溶液を飽和ＮａＨＣＯ3溶液１７５ｍＬと慎重に混合した。有機層を水１００ｍＬで洗浄して、続いて１Ｍ  ＮａＨ2ＰＯ4  １００ｍＬで、最後に飽和ＮａＣｌ  １００ｍＬで洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して、回転蒸発器上で濃縮して、黄色油１０．４４４ｇ（収率８４％）を得た。
【実施例３０】
【０１６９】
ＤＴＰＡの活性化およびコンジュゲート
ＤＴＰＡ  ５ｇをメタノール中の１．０Ｍテトラブチルアンモニウムヒドロキシド４０ｍＬに溶解させた。メタノールを高真空下で除去して、粘性油を得た。油をＤＭＦ５０ｍＬに溶解させて、揮発性溶媒を回転蒸発器で高真空下にて除去した。ＤＭＦ処理をさらに２回反復した。次に粘性油をＤＭＦ  ５０ｍｌに溶解させ、ＨＢＴＵ  ５ｇと混合した。次に活性化ＤＴＰＡ溶液の分割量８ｍｌを樹脂に添加して、これをボルテックスで１４時間に渡って混合した。カイザー試験を使用して樹脂がアミンに対して陰性の評価を与えるまで、ＤＴＰＡ処理を反復した。あるいはＤＴＰＡテトラ−ｔ−ブチルエステルは、ＤＩＣおよびＨＢＴＵなどの従来のカップリング剤と共に使用できる（Ａｒａｎｏ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．１９９６  Ａｕｇ  ３０；３９（１８）：３４５１−６０を参照）。
【実施例３１】
【０１７０】
カルボキシエステラーゼのジ−ＤＴＰＡ−ペプチドへのコンジュゲート
ｐＨ８．０の０．２Ｍリン酸緩衝液中のカルボキシエステラーゼ（５ｍｇ）を５倍モル過剰の架橋剤スルホスクシンイミジル−［４−マレイミドメチル］−シクロヘキサン−１−カルボキシラート（スルホ−ＳＭＣＣ）で処理する。室温にて２時間撹拌した後、１ｍＭ  ＥＤＴＡを含有するｐＨ７の０．１Ｍリン酸緩衝液で平衡にしたＧ−２５  Ｓｅｐｈａｄｅｘのスピンカラムを使用して、活性化酵素を低分子量汚染物質から分離する。テトラペプチドＮ−アセチル−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ2（配列番号１）（１０倍モル過剰）を活性化酵素に添加して、スピンカラムで使用したのと同じ緩衝液に溶解させる。室温にて１時間撹拌した後、ペプチドカルボキシエステラーゼコンジュゲート体は、ｐＨ６．０の０．２５Ｍ酢酸緩衝液を用いたＧ−２５  Ｓｅｐｈａｄｅｘでのスピンカラムクロマトグラフィーによって、未反応ペプチドから精製する。コンジュゲートの成功は、コンジュゲート体の分割量のインジウム−１１１標識、およびサイズ排除ＨＰＬＣによる分析によって証明される。
【実施例３２】
【０１７１】
カルボキシエステラーゼ−ＤＴＰＡコンジュゲート体の調製
ウサギ肝臓カルボキシエステラーゼ（ＳＩＧＭＡ；タンパク質含有量〜１７ｍｇ）バイアル２個をｐＨ７．７の０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液２．２ｍｌで再構成して、２５倍モル過剰のＣＡ−ＤＴＰＡと、後者の新たに調製したＤＭＳＯによるストック溶液（〜２５ｍｇ／ｍｌ）を使用して混合する。コンジュゲート混合物中のＤＭＳＯの最終濃度は３％（体積／体積）である。１時間のインキュベーションの後、混合物を２個の５ｍＬスピンカラム（ｐＨ７．３の０．１Ｍリン酸ナトリウム中のＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ５０／８０）で予備精製して、過剰な試薬およびＤＭＳＯを除去する。ｐＨ６．８の０．２Ｍリン酸ナトリウムを４ｍｌ／分で使用して、溶出液をＴＳＫ  ３０００Ｇ  Ｓｕｐｅｌｃｏカラムで精製する。コンジュゲート体を含有する画分をＣｅｎｔｒｉｃｏｎ−１０（商標）濃縮器で濃縮して、ｐＨ６．５の０．１Ｍ酢酸ナトリウムを用いて緩衝液交換する。回収：０．９ｍｌ、４．１１ｍｇ／ｍｌ（３．７ｍｇ）。標準条件を使用した分析用ＨＰＬＣ分析は、ライン内ＵＶ検出を用いて、９５：５比で、保持時間９．３分を持つ主ピークと、１０．８分における副ピークを明らかにした。酵素分析は、未修飾カルボキシエステラーゼに匹敵する１１５酵素単位／ｍｇタンパク質を示した。未修飾およびＤＴＰＡ−修飾ＣＥのマススペクトル分析（ＭＡＬＤＩモード）はどちらも１．５に近い平均ＤＴＰＡ置換比を示す。放射性インジウムでスパイクした既知の過剰なインジウムを使用する金属結合アッセイは、２回の実験でのＤＴＰＡ：酵素比が１．２４および１．４１であることを確認した。カルボキシエステラーゼ−ＤＴＰＡを、１２．０ｍＣｉ／ｍｇの特異的活性にてＩｎ−１１１アセテートによって標識して、次に過剰な非放射性インジウムアセテートで処理し、最後に１０ｍＭ  ＥＤＴＡで処理して、過剰な非放射性インジウムを除去した。ＨＰＬＣおよびＩＴＬＣ分析による包含は、９７．７％である。ＨＰＬＣサンプルを２０−倍過剰の二重特異性抗体ｈＭＮ−１４  Ｆａｂ’×７３４  Ｆａｂ’で完全に錯化し、生じた生成物をＷＩ２（ｈＭＮ−１４に対する抗−ＩＤ）でさらに錯化し、後者は二重特異性抗体に対して８０−倍モル過剰である。
【０１７２】
本明細書で引用した全ての特許および他の参考文献は、本明細書が関係する当業者の技術レベルを示し、あたかも各参考文献が、参照によりその全体が組み入れられているかのように、いずれの表および図を含めてその全体が参照により組み入れられている。
【０１７３】
当業者は、本発明がそれに固有の目的および利点と同様に、記載した目的および利点を得るために十分適していることを直ちに認識するであろう。好ましい実施形態をここで代表するような本明細書で述べた方法、変化、および化合物／組成物は一例であり、本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。本明細書の変更および他の用途が当業者に思い浮かぶであろうし、それらは本発明に含まれる。
【０１７４】
本明細書で開示された発明には、本発明の範囲および精神から逸脱することなく多様な置換および改良を行えることが、直ちに当業者に明らかになるであろう。例えば各種の異なる結合対は、各種異なる治療剤および診断剤と同様に利用できる。従ってそのような追加の実施形態は、本発明の範囲内である。
【０１７５】
本明細書で例示的に説明した本発明は、本明細書で具体的に開示されていない、１つまたは複数の要素、１つまたは複数の制限の非存在下で適切に実施できる。従って、例えば本明細書の各例において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」および「なる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」という用語のいずれも、他の２つの用語のどちらかと置き換えることができる。利用された用語および表現は、制限の用語ではなく、説明の用語として使用され、そのような用語および表現の使用が表示および説明した特徴の同等物またはその一部を除外するという意図はないが、各種の改良が本発明の範囲内にあり得ることが認識される。従って、本発明は好ましい実施形態および任意の特徴によって具体的に開示されてきたが、本明細書で開示した概念の改良および変形が当業者に委ねられることと、そのような改良および変形が本発明の範囲内であることを理解すべきである。
【０１７６】
加えて、本発明の特徴または態様がマーカッシュグループまたは代わりの他のグループ分けによって説明されている場合、当業者は、それにより本発明がマーカッシュグループまたは他のグループの個々の構成要素または構成要素のサブグループによっても説明されることを認識するであろう。
【０１７７】
または、反対に記載しない限り、実施形態で各種の数値が与えられている場合、追加の実施形態は、２つの異なる値を範囲の終点として使用することによって説明される。そのような範囲も、説明した発明の範囲内である。
【図面の簡単な説明】
【０１７８】
【図１】Ｂｉｓ  Ｉｎ3+ＩＭＰ  ２７４の構造の概略図である。
【図２】Ｂｉｓ  Ｉｎ3+ＩＭＰ  ２７４のＳＮ−３８類似物質／誘導体の構造の概略図である。
【図３】ペニシラミン結合によってシステインにコンジュゲートされたＳＮ−３８を持つＢｉｓ  Ｉｎ3+ＩＭＰ  ２７４のＳＮ−３８類似物質／誘導体の構造の概略図である。
【図４】ヒンダードエステル結合によってシステインにコンジュゲートされたＳＮ−３８を持つＢｉｓ  Ｉｎ3+ＩＭＰ  ２７４のＳＮ−３８類似物質／誘導体の構造の概略図である。
【図５】ＩＭＰ  ２２５の構造の概略図である。
【図６】Ｂｉｓ  Ｉｎ3+ＩＭＰ  ２２４の構造の概略図である。
【図７】保存後のＩｎ3+ＩＭＰ  ２７４のＨＰＬＣ分析（逆相）の図示である。
【図８】保存後のＩｎ3+ＩＭＰ  ２７４のＨＰＬＣ分析（サイズ排除）の図示である。
【図９Ａ】マウス血清でインキュベートしたＩｎ3+ＩＭＰ  ２７４のＨＰＬＣ分析（逆相）の図示である。
【図９Ｂ】マウス血清でインキュベートしたＩｎ3+ＩＭＰ  ２７４のＨＰＬＣ分析（逆相）の図示である。
【図１０Ａ】ヒト血清でインキュベートしたＩｎ3+ＩＭＰ  ２７４のＨＰＬＣ分析（逆相）の図示である。
【図１０Ｂ】ヒト血清でインキュベートしたＩｎ3+ＩＭＰ  ２７４のＨＰＬＣ分析（逆相）の図示である。
【図１１】ｂｓＡｂ  ７３４ＸｈＭＮ１４を含有するマウス血清でインキュベートしたＩｎ3+ＩＭＰ  ２７４のＨＰＬＣ分析（サイズ排除）の図示である。
【図１２】ｂｓＡｂ  ７３４ＸｈＭＮ１４を含有するヒト血清でインキュベートしたＩｎ3+ＩＭＰ  ２７４のＨＰＬＣ分析（サイズ排除）の図示である。
【図１３】１週間に渡るＩＭＰ  ２９４（Ａ）およびＩＭＰ  ２９５（Ｂ）の安定性の図示である。サンプルは、第０、１、２、３、６、および７日に分析した。
【図１４】Ｄａｕｄｉ（バーキットリンパ腫細胞）を接種したＳＣＩＤマウスでのＬＬ２ｘ７３４二重特異性抗体およびＩＭＰ−２２５ペプチドを使用したプレターゲティング実験の結果を示す。
【図１５】３ステップ方法を用いてＤＴＰＡ前駆物質およびＤＴＰＡを合成する方法の概略図である。
【図１６】４ステップ方法を用いてＤＴＰＡ前駆物質およびＤＴＰＡを合成する方法の概略図である。
【図１】
2007528372.tif 000032
【図２】
2007528372.tif 000033
【図３】
2007528372.tif 000034
【図４】
2007528372.tif 000035
【図５】
2007528372.tif 000036
【図６】
2007528372.tif 000037
【図７】
2007528372.tif 000038
【図８】
2007528372.tif 000039
【図９Ａ】
2007528372.tif 000040
【図９Ｂ】
2007528372.tif 000041
【図１０Ａ】
2007528372.tif 000042
【図１０Ｂ】
2007528372.tif 000043
【図１１】
2007528372.tif 000044
【図１２】
2007528372.tif 000045
【図１３】
2007528372.tif 000046
【図１４】
2007528372.tif 000047
【図１５】
2007528372.tif 000048
【図１６】
2007528372.tif 000049