(57)【要約】  抗ＣＤ７４免疫複合体と治療薬および／または診断薬を含む組成物が開示される。また、該免疫複合体を製造する方法および診断手順および治療手順において該免疫複合体を使用する方法も開示される。該組成物は、治療法および／または診断法において抗ＣＤ７４免疫複合体組成物を投与するためのキットの一部であり得る。
2007523857.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１以上の脂質、高分子担体、ミセル、ナノ粒子、またはその組合せと結合した１以上の抗ＣＤ７４結合分子を含んでなる免疫複合体、および
１以上のエフェクター
を含んでなる、組成物。
【請求項２】
エマルジョンをさらに含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
リポソームをさらに含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記１以上の抗ＣＤ７４結合分子が１以上の脂質と結合している、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記１以上の抗ＣＤ７４結合分子が１以上の高分子担体と結合している、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記１以上の抗ＣＤ７４結合分子が１以上のミセルと結合している、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記１以上の抗ＣＤ７４結合分子が１以上のナノ粒子と結合している、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記１以上の抗ＣＤ７４結合分子がＬＬ１またはそのフラグメントを含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記１以上の抗ＣＤ７４結合分子が、スルフィド結合、ヒドラゾン結合、ヒドラジン結合、エステル結合、アミド結合、アミノ結合、イミノ結合、チオセミカルバゾン結合、セミカルバゾン結合、オキシム結合、炭素−炭素結合、またはその組合せの１以上により１以上の脂質と結合している、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記結合分子がスルフィド結合により結合している、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ８０、ＣＤ１２６、Ｂ７、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、Ｉａ、ＨＭ１．２４、テネイシン、ＶＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＣＥＡ、ＣＳＡｐ、ＩＬＧＦ、胎盤増殖因子、炭酸脱水酵素ＩＸ、ＩＬ−６およびそれらの組合せからなる群から選択される１以上の抗原に特異的に結合する１以上の付加的結合分子をさらに含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記付加的結合分子が１以上の脂質、高分子担体、ミセル、ナノ粒子、またはその組合せと結合している、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記１以上の脂質が両親媒性である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記１以上の脂質が遠位末端に１以上の求核炭素を含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記１以上の脂質が遠位末端に１以上のマレイミド基を含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
前記１以上の脂質がＰＥＧ−マレイミドを含んでなる、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記１以上の抗ＣＤ７４結合分子が１以上のマレイミド基に連結されている、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１８】
前記１以上の抗ＣＤ７４結合分子が１以上の遊離チオール基により１以上のマレイミド基に連結されている、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１９】
前記１以上の脂質がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項２０】
エフェクターが治療薬または診断薬を含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項２１】
エフェクターが、薬物、プロドラッグ、毒素、酵素、放射性同位元素、免疫調節剤、サイトカイン、ホルモン、結合分子、オリゴヌクレオチド、光線力学剤、またはそれらの混合物を含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項２２】
エフェクターが、アプリジン、アザリビン、アナストロゾール、アザシチジン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブリオスタチン−１、ブスルファン、カリケアマイシン、カンプトテシン、１０−ヒドロキシカンプトテシン、カルムスチン、セレブレックス、クロラムブシル、シスプラチン、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）、ＳＮ−３８、カルボプラチン、クラドリビン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ドセタキセル、ダクチノマイシン、ダウノマイシングルクロニド、ダウノルビシン、デキサメタゾン、ジエチルスチルベストロール、ドキソルビシン、ドキソルビシングルクロニド、エピルビシングルクロニド、エチニルエストラジオール、エストラムスチン、エトポシド、エトポシドグルクロニド、リン酸エトポシド、フロクスウリジン（ＦＵｄＲ）、３’，５’−Ｏ−ジオレオイル−ＦｕｄＲ（ＦＵｄＲ−ｄＯ）、フルダラビン、フルタミド、フルオロウラシル、フルオキシメステロン、ゲムシタビン、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、ヒドロキシ尿素、イダルビシン、イフォスファミド、Ｌ−アスパラギナーゼ、ロイコボリン、ロムスチン、メクロレタミン、酢酸メドロプロゲステロン、酢酸メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、６−メルカプトプリン、メトトレキサート、ミトキサントロン、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトタン、酪酸フェニル、プレドニゾン、プロカルバジン、パクリタキセル、ペントスタチン、ＰＳＩ−３４１、セムスチンストレプトゾシン、タモキシフェン、タキサン、タキソール、プロピオン酸テストステロン、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、テニポシド、トポテカン、ウラシルマスタード、ベルケード、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンクリスチン、リシン、アブリン、リボヌクレアーゼ、オンコナーゼ、ｒａｐＬＲ１、ＤＮアーゼＩ、ブドウ球菌エンテロトキシン−Ａ、アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリア毒、シュードモナス外毒素、およびシュードモナス内毒素、またはその組合せを含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項２３】
エフェクターが、ＦＵｄＲ、ＦＵｄＲ−ｄＯ、またはそれらの混合物を含んでなる、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
１以上の硬酸キレート剤または軟酸キレート剤をさらに含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項２５】
II族金属陽イオン、III族金属陽イオン、IV族金属陽イオン、Ｖ族金属陽イオン、遷移金属陽イオン、ランタニド金属陽イオンもしくはアクチニド金属陽イオン、またはそれらの混合物から選択される陽イオンをさらに含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項２６】
Ｔｃ、Ｒｅ、Ｂｉ、Ｃｕ、Ａｓ、Ａｇ、Ａｕ、Ａｔ、Ｐｂ、またはそれらの混合物から選択される陽イオンをさらに含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項２７】
ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、ＤＴＰＡ、ＴＥＴＡ、Ｔｓｃｇ−Ｃｙｓ、Ｔｓｃａ−Ｃｙｓ、またはそれらの混合物をさらに含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項２８】
エフェクターが核種を含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項２９】
核種が１８Ｆ、３２Ｐ、３３Ｐ、４５Ｔｉ、４７Ｓｃ、５２Ｆｅ、５９Ｆｅ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７５Ｓｅ、７７Ａｓ、８６Ｙ、８９Ｓｒ、８９Ｚｒ、９０Ｙ、９４Ｔｃ、９４ｍＴｃ、９９Ｍｏ、９９ｍＴｃ、１０５Ｐｄ、１０５Ｒｈ、１１１Ａｇ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１４９Ｐｍ、１５３Ｓｍ、１５４−１５８Ｇｄ、１６１Ｔｂ、１６６Ｄｙ、１６６Ｈｏ、１６９Ｅｒ、１７５Ｌｕ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１８９Ｒｅ、１９４Ｉｒ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔ、２１１Ｐｂ、２１２Ｂｉ、２１２Ｐｂ、２１３Ｂｉ、２２３Ｒａ、２２５Ａｃ、またはそれらの混合物を含んでなる、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
エフェクターが酵素を含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項３１】
前記酵素がカルボキシルエステラーゼ、グルクロニダーゼ、カルボキシペプチダーゼ、β−ラクタマーゼ、ホスファターゼ、およびそれらの混合物からなる群から選択される、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
エフェクターが免疫調節剤を含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記免疫調節剤がＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、インターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−γ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、およびそれらの混合物からなる群から選択される、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
エフェクターが、アンギオスタチン、エンドスタチン、バスキュロスタチン、カンスタチン、マスピン、抗ＶＥＧＦ結合分子、抗胎盤増殖因子結合分子、抗血管増殖因子結合分子、およびそれらの混合物からなる群から選択される抗脈管形成薬を含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項３５】
前記抗ＣＤ７４結合分子が１以上の治療薬、診断薬、またはそれらの混合物に結合している、請求項１に記載の組成物。
【請求項３６】
前記抗ＣＤ７４結合分子がヒト化、ヒトもしくはキメラ抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントを含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項３７】
前記ヒト化、ヒトもしくはキメラ抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントが、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）またはそのフラグメントを含んでなる、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
前記ヒト、キメラもしくはヒト化抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントが、
Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、もしくはＦｖを含んでなるフラグメント、またはＦ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、もしくはＦｖの軽鎖および重鎖の一部もしくは全部を用いる融合タンパク質
を含んでなり、そのフラグメントがＣＤ７４と結合する、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３９】
前記融合タンパク質が多価であるか、または多価多重特異性である、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
前記ヒト、キメラもしくはヒト化抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントが、ヒトＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のヒト定常領域で置換されているＩｇＧ１の定常領域をさらに含んでなる、請求項３６に記載の組成物。
【請求項４１】
前記抗ＣＤ７４結合分子が抗ＣＤ７４ダイアボディー、トリアボディー、またはテトラボディーである、請求項１に記載の組成物。
【請求項４２】
疾病または疾患を治療および／または診断するための方法であって、患者に、請求項１に記載の組成物と医薬上許容される賦形剤とを含む治療用および／または診断用組成物を投与することを含んでなる、方法。
【請求項４３】
前記疾病または疾患がＣＤ７４発現悪性疾患である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記疾病または疾患が免疫調節不全性疾患、自己免疫疾患、臓器移植拒絶、および移植片対宿主病からなる群から選択される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４５】
前記ＣＤ７４発現悪性疾患が固形腫瘍、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、Ｂ細胞悪性疾患、およびＴ細胞悪性疾患からなる群から選択される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
前記疾病または疾患が、リンパ腫または白血病以外のＣＤ７４発現悪性疾患である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４７】
前記ＣＤ７４発現悪性疾患が固形腫瘍である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４８】
前記固形腫瘍が黒色腫、癌腫、肉腫、および神経膠腫からなる群から選択される、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記癌腫が腎臓癌、肺癌、腸癌、胃癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、および黒色腫からなる群から選択される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記ＣＤ７４発現悪性疾患が、緩徐進行性Ｂ細胞リンパ腫、急速進行性Ｂ細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病、急性リンパ性白血病、および多発性骨髄腫からなる群から選択されるＢ細胞悪性疾患である、請求項４３に記載の方法。
【請求項５１】
前記組成物が２０〜５０００ｍｇの用量で静脈投与または筋肉内投与される、請求項４２に記載の方法。
【請求項５２】
前記組成物がＬＬ１またはそのフラグメントを含んでなる、請求項４２に記載の方法。
【請求項５３】
前記組成物が、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ３０、抗ＣＤ３３、抗ＣＤ５２、抗ＨＬＡ−ＤＲ、抗ＭＵＣ―１、抗ＴＡＣ、およびそれらの混合物からなる群から選択される１以上の付加的抗体またはそのフラグメントをさらに含んでなる、請求項４２に記載の方法。
【請求項５４】
前記付加的抗体の１以上が、脂質、高分子担体、ミセル、ナノ粒子、またはその組合せの１以上と結合している、請求項４３に記載の方法。
【請求項５５】
エフェクター分子が１以上の薬物、プロドラッグ、毒素、酵素、放射性同位元素、免疫調節剤、サイトカイン、ホルモン、抗体、オリゴヌクレオチド、またはその組合せを含んでなる、請求項４２に記載の方法。
【請求項５６】
エフェクター分子が、アプリジン、アザリビン、アナストロゾール、アザシチジン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブリオスタチン−１、ブスルファン、カリケアマイシン、カンプトテシン、１０−ヒドロキシカンプトテシン、カルムスチン、セレブレックス、クロラムブシル、シスプラチン、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）、ＳＮ−３８、カルボプラチン、クラドリビン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ドセタキセル、ダクチノマイシン、ダウノマイシングルクロニド、ダウノルビシン、デキサメタゾン、ジエチルスチルベストロール、ドキソルビシン、ドキソルビシングルクロニド、エピルビシングルクロニド、エチニルエストラジオール、エストラムスチン、エトポシド、エトポシドグルクロニド、リン酸エトポシド、フロクスウリジン（ＦＵｄＲ）、３’，５’−Ｏ−ジオレオイル−ＦｕｄＲ（ＦＵｄＲ−ｄＯ）、フルダラビン、フルタミド、フルオロウラシル、フルオキシメステロン、ゲムシタビン、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、ヒドロキシ尿素、イダルビシン、イフォスファミド、Ｌ−アスパラギナーゼ、ロイコボリン、ロムスチン、メクロレタミン、酢酸メドロプロゲステロン、酢酸メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、６−メルカプトプリン、メトトレキサート、ミトキサントロン、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトタン、酪酸フェニル、プレドニゾン、プロカルバジン、パクリタキセル、ペントスタチン、ＰＳＩ−３４１、セムスチンストレプトゾシン、タモキシフェン、タキサン、タキソール、プロピオン酸テストステロン、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、テニポシド、トポテカン、ウラシルマスタード、ベルケード、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンクリスチン、リシン、アブリン、リボヌクレアーゼ、オンコナーゼ、ｒａｐＬＲ１、ＤＮアーゼＩ、ブドウ球菌エンテロトキシン−Ａ、アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリア毒、シュードモナス外毒素、およびシュードモナス内毒素、またはその組合せを含んでなる、請求項４２に記載の方法。
【請求項５７】
エフェクターがＦＵｄＲ、ＦＵｄＲ−ｄＯ、またはそれらの混合物を含んでなる、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記組成物が１以上の硬酸キレート剤または軟酸キレート剤をさらに含んでなる、請求項４２に記載の方法。
【請求項５９】
前記組成物が、II族金属陽イオン、III族金属陽イオン、IV族金属陽イオン、Ｖ族金属陽イオン、遷移金属陽イオン、ランタニド金属陽イオンもしくはアクチニド金属陽イオン、またはそれらの混合物から選択される陽イオンをさらに含んでなる、請求項４２に記載の方法。
【請求項６０】
前記組成物が、Ｔｃ、Ｒｅ、Ｂｉ、Ｃｕ、Ａｓ、Ａｇ、Ａｕ、Ａｔ、Ｐｂ、またはそれらの混合物から選択される陽イオンをさらに含んでなる、請求項４２に記載の方法。
【請求項６１】
前記組成物が、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、ＤＴＰＡ、ＴＥＴＡ、Ｔｓｃｇ−Ｃｙｓ、Ｔｓｃａ−Ｃｙｓ、またはそれらの混合物をさらに含んでなる、請求項４２に記載の方法。
【請求項６２】
前記組成物が核種を含んでなる、請求項４２に記載の方法。
【請求項６３】
核種が１８Ｆ、３２Ｐ、３３Ｐ、４５Ｔｉ、４７Ｓｃ、５２Ｆｅ、５９Ｆｅ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７５Ｓｅ、７７Ａｓ、８６Ｙ、８９Ｓｒ、８９Ｚｒ、９０Ｙ、９４Ｔｃ、９４ｍＴｃ、９９Ｍｏ、９９ｍＴｃ、１０５Ｐｄ、１０５Ｒｈ、１１１Ａｇ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１４９Ｐｍ、１５３Ｓｍ、１５４−１５８Ｇｄ、１６１Ｔｂ、１６６Ｄｙ、１６６Ｈｏ、１６９Ｅｒ、１７５Ｌｕ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１８９Ｒｅ、１９４Ｉｒ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔ、２１１Ｐｂ、２１２Ｂｉ、２１２Ｐｂ、２１３Ｂｉ、２２３Ｒａ、２２５Ａｃ、またはそれらの混合物を含んでなる、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記組成物が酵素を含んでなる、請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
前記酵素がカルボキシルエステラーゼ、グルクロニダーゼ、カルボキシペプチダーゼ、β−ラクタマーゼ、ホスファターゼ、およびそれらの混合物を含んでなる、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記組成物が免疫調節剤を含んでなる、請求項６２に記載の方法。
【請求項６７】
前記免疫調節剤がＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、インターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−γ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、またはそれらの混合物を含んでなる、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記組成物が光線力学療法のための１以上の薬剤を含んでなる、請求項４２に記載の方法。
【請求項６９】
光線力学療法のための前記薬剤が光増感剤である、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記光増感剤がベンゾポルフィリン一酸環Ａ（ＢＤＰ−ＭＡ）、錫エチオプルプリン（ＳｎＥＴ２）、スルホン化アルミニウムフタロシアニン（ＡｌＳＰｃ）およびルテチウムテキサフィリン（Ｌｕｔｅｘ）を含んでなる、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記組成物が１以上の診断薬を含んでなる、請求項４２に記載の方法。
【請求項７２】
前記組成物が診断用核種を含んでなる、請求項４２に記載の方法。
【請求項７３】
前記診断用核種が１８Ｆ、５２Ｆｅ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、８６Ｙ、８９Ｚｒ、９４Ｔｃ、９４ｍＴｃ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、またはそれらの混合物を含んでなる、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記診断用核種が２５〜４０００ｋｅＶのγ粒子および／または陽電子を放射するものである、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記診断薬が陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）を行うために用いられるものである、請求項７１に記載の方法。
【請求項７６】
陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）を行うことをさらに含んでなる、請求項４２に記載の方法。
【請求項７７】
前記診断薬が１以上の画像増強剤を含んでなるものであり、磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）を行うことをさらに含んでなる、請求項７１に記載の方法。
【請求項７８】
前記画像増強剤がガドリニウムイオン、ランタンイオン、マンガンイオン、鉄、クロム、銅、コバルト、ニッケル、フッ素、ジスプロシウム、レニウム、ユウロピウム、テルビウム、ホルミウム、ネオジム、またはそれらの混合物を含んでなる、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記組成物がＸ線またはコンピューター断層撮影法（ＣＴ）のための１以上の放射線不透過剤または造影剤を含んでなる、請求項４２に記載の方法。
【請求項８０】
前記放射線不透過剤または造影剤がバリウム、ジアトリゾエート、エチオド化オイル、クエン酸ガリウム、イオカルム酸、イオセタム酸、ヨーダミド、ヨージパミド、ヨードキサム酸、イオグラミド、イオヘキソール、イオパミドール、イオパン酸、イオプロセム酸、イオセファム酸、イオセル酸、イオスラミドメグルミン、イオセメ酸、イオタスル、イオテトル酸、イオサラム酸、イオトロキシ酸、イオキサグル酸、イオキソトリゾ酸、イポデート、メグルミン、メトリザミド、メトリゾエート、プロピリオドン、塩化タリウム、またはその組合せを含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項８１】
前記組成物が１以上の超音波造影剤を含んでなる、請求項４２に記載の方法。
【請求項８２】
前記超音波造影剤がリポソームまたはデキストランを含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
リポソームがガス充填されている、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
術中手法、血管内手法、腹腔鏡手法、または内視鏡手法を行うことをさらに含んでなる、請求項４２に記載の方法。
【請求項８５】
治療薬、診断薬、またはそれらの混合物を含んでなる付加的組成物を投与することをさらに含んでなる、請求項４２に記載の方法。
【請求項８６】
前記付加的組成物が、
１以上の脂質、高分子担体、ミセル、ナノ粒子、またはその組合せと結合した１以上の抗ＣＤ７４結合分子を含んでなる免疫複合体、および
１以上のエフェクター
を含んでなる、請求項４２に記載の方法。
【請求項８７】
前記抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントが、化学的結合または遺伝的融合によって、治療薬、診断薬、またはそれらの混合物に結合している、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記組成物が、前記付加的組成物の投与前、投与中、投与と同時、または投与後に投与される、請求項８５に記載の方法。
【請求項８９】
前記付加的組成物が１以上の薬物、プロドラッグ、毒素、酵素、放射性同位元素、免疫調節剤、サイトカイン、ホルモン、抗体、オリゴヌクレオチド、またはその組合せを含んでなる、請求項８５に記載の方法。
【請求項９０】
前記付加的組成物が、アプリジン、アザリビン、アナストロゾール、アザシチジン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブリオスタチン−１、ブスルファン、カリケアマイシン、カンプトテシン、１０−ヒドロキシカンプトテシン、カルムスチン、セレブレックス、クロラムブシル、シスプラチン、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）、ＳＮ−３８、カルボプラチン、クラドリビン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ドセタキセル、ダクチノマイシン、ダウノマイシングルクロニド、ダウノルビシン、デキサメタゾン、ジエチルスチルベストロール、ドキソルビシン、ドキソルビシングルクロニド、エピルビシングルクロニド、エチニルエストラジオール、エストラムスチン、エトポシド、エトポシドグルクロニド、リン酸エトポシド、フロクスウリジン（ＦＵｄＲ）、３’，５’−Ｏ−ジオレオイル−ＦｕｄＲ（ＦＵｄＲ−ｄＯ）、フルダラビン、フルタミド、フルオロウラシル、フルオキシメステロン、ゲムシタビン、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、ヒドロキシ尿素、イダルビシン、イフォスファミド、Ｌ−アスパラギナーゼ、ロイコボリン、ロムスチン、メクロレタミン、酢酸メドロプロゲステロン、酢酸メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、６−メルカプトプリン、メトトレキサート、ミトキサントロン、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトタン、酪酸フェニル、プレドニゾン、プロカルバジン、パクリタキセル、ペントスタチン、ＰＳＩ−３４１、セムスチンストレプトゾシン、タモキシフェン、タキサン、タキソール、プロピオン酸テストステロン、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、テニポシド、トポテカン、ウラシルマスタード、ベルケード、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンクリスチン、リシン、アブリン、リボヌクレアーゼ、オンコナーゼ、ｒａｐＬＲ１、ＤＮアーゼＩ、ブドウ球菌エンテロトキシン−Ａ、アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリア毒、シュードモナス外毒素、およびシュードモナス内毒素、またはその組合せを含んでなる、請求項８５に記載の方法。
【請求項９１】
前記付加的組成物がＦＵｄＲ、ＦＵｄＲ−ｄＯ、またはそれらの混合物を含んでなる、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
前記付加的組成物が１以上の硬酸キレート剤または軟酸キレート剤を含んでなる、請求項８５に記載の方法。
【請求項９３】
前記付加的組成物が、II族金属陽イオン、III族金属陽イオン、IV族金属陽イオン、Ｖ族金属陽イオン、遷移金属陽イオン、ランタニド金属陽イオンもしくはアクチニド金属陽イオン、またはそれらの混合物から選択される陽イオンを含んでなる、請求項８５に記載の方法。
【請求項９４】
前記付加的組成物が、Ｔｃ、Ｒｅ、Ｂｉ、Ｃｕ、Ａｓ、Ａｇ、Ａｕ、Ａｔ、Ｐｂ、またはそれらの混合物から選択される陽イオンを含んでなる、請求項８５に記載の方法。
【請求項９５】
前記付加的組成物が、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、ＤＴＰＡ、ＴＥＴＡ、Ｔｓｃｇ−Ｃｙｓ、Ｔｓｃａ−Ｃｙｓ、またはそれらの混合物を含んでなる、請求項８５に記載の方法。
【請求項９６】
前記付加的組成物が核種を含んでなる、請求項８５に記載の方法。
【請求項９７】
前記核種が１８Ｆ、３２Ｐ、３３Ｐ、４５Ｔｉ、４７Ｓｃ、５２Ｆｅ、５９Ｆｅ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７５Ｓｅ、７７Ａｓ、８６Ｙ、８９Ｓｒ、８９Ｚｒ、９０Ｙ、９４Ｔｃ、９４ｍＴｃ、９９Ｍｏ、９９ｍＴｃ、１０５Ｐｄ、１０５Ｒｈ、１１１Ａｇ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１４９Ｐｍ、１５３Ｓｍ、１５４−１５８Ｇｄ、１６１Ｔｂ、１６６Ｄｙ、１６６Ｈｏ、１６９Ｅｒ、１７５Ｌｕ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１８９Ｒｅ、１９４Ｉｒ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔ、２１１Ｐｂ、２１２Ｂｉ、２１２Ｐｂ、２１３Ｂｉ、２２３Ｒａ、２２５Ａｃ、またはそれらの混合物を含んでなる、請求項９６に記載の方法。
【請求項９８】
前記付加的組成物が酵素を含んでなる、請求項８５に記載の方法。
【請求項９９】
前記酵素がカルボキシルエステラーゼ、グルクロニダーゼ、カルボキシペプチダーゼ、β−ラクタマーゼ、ホスファターゼ、またはそれらの混合物を含んでなる、請求項８５に記載の方法。
【請求項１００】
前記付加的組成物が免疫調節剤を含んでなる、請求項８５に記載の方法。
【請求項１０１】
前記免疫調節剤がＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、インターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−γ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、またはそれらの混合物を含んでなる、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
前記付加的組成物が１以上の診断薬を含んでなる、請求項８５に記載の方法。
【請求項１０３】
前記付加的組成物が光線力学療法のための１以上の薬剤を含んでなる、請求項８５に記載の方法。
【請求項１０４】
光線力学療法のための前記薬剤が光増感剤である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
前記光増感剤がベンゾポルフィリン一酸環Ａ（ＢＤＰ−ＭＡ）、錫エチオプルプリン（ＳｎＥＴ２）、スルホン化アルミニウムフタロシアニン（ＡｌＳＰｃ）およびルテチウムテキサフィリン（Ｌｕｔｅｘ）を含んでなる、請求項１０４に記載の方法。
【請求項１０６】
前記付加的組成物が診断用核種を含んでなる、請求項８５に記載の方法。
【請求項１０７】
前記診断用核種が１８Ｆ、５２Ｆｅ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、８６Ｙ、８９Ｚｒ、９４Ｔｃ、９４ｍＴｃ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、またはそれらの混合物を含んでなる、請求項１０６に記載の方法。
【請求項１０８】
前記診断用核種が２５〜４０００ｋｅＶのγ粒子および／または陽電子を放射するものである、請求項１０６に記載の方法。
【請求項１０９】
前記診断薬が陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）を行うために用いられるものである、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１１０】
陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）を行うことをさらに含んでなる、請求項８５に記載の方法。
【請求項１１１】
前記診断薬が１以上の画像増強剤を含んでなるものであり、磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）を行うことをさらに含んでなる、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１１２】
前記画像増強剤がガドリニウムイオン、ランタンイオン、マンガンイオン、鉄、クロム、銅、コバルト、ニッケル、フッ素、ジスプロシウム、レニウム、ユウロピウム、テルビウム、ホルミウム、ネオジム、またはそれらの混合物を含んでなる、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
前記付加的組成物がＸ線またはコンピューター断層撮影法（ＣＴ）のための１以上の放射線不透過剤または造影剤を含んでなる、請求項８５に記載の方法。
【請求項１１４】
前記放射線不透過剤または造影剤がバリウム、ジアトリゾエート、エチオド化オイル、クエン酸ガリウム、イオカルム酸、イオセタム酸、ヨーダミド、ヨージパミド、ヨードキサム酸、イオグラミド、イオヘキソール、イオパミドール、イオパン酸、イオプロセム酸、イオセファム酸、イオセル酸、イオスラミドメグルミン、イオセメ酸、イオタスル、イオテトル酸、イオサラム酸、イオトロキシ酸、イオキサグル酸、イオキソトリゾ酸、イポデート、メグルミン、メトリザミド、メトリゾエート、プロピリオドン、塩化タリウム、またはその組合せを含む、請求項８５に記載の方法。
【請求項１１５】
前記付加的組成物が１以上の超音波造影剤を含んでなる、請求項８５に記載の方法。
【請求項１１６】
前記超音波造影剤がリポソームまたはデキストランを含む、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１７】
リポソームがガス充填されている、請求項１１６に記載の方法。
【請求項１１８】
術中手法、血管内手法、腹腔鏡手法、または内視鏡手法を行うことをさらに含む、請求項８５に記載の方法。
【請求項１１９】
１以上の両親媒性脂質をエフェクターと混合して担体を形成すること、および
その担体を抗ＣＤ７４抗体と接触させること
を含んでなる、担体の製造方法。
【請求項１２０】
前記脂質の１以上がマレイミド基を含んでなる、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
抗体を還元することをさらに含んでなる、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２２】
マレイミド基の１以上を抗ＣＤ７４抗体上の遊離チオール基と反応させることをさらに含んでなる、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２３】
エフェクターが１以上の薬物、プロドラッグ、毒素、酵素、放射性同位元素、免疫調節剤、サイトカイン、ホルモン、抗体、オリゴヌクレオチド、またはそれらの混合物を含んでなる、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２４】
担体を１以上の治療薬または診断薬と混合することをさらに含んでなる、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２５】
請求項１に記載の組成物を含んでなる、キット。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の参照】
【０００１】
本願は、２００３年６月１７日出願の仮特許出願第６０／４７８，８３０号、および２００３年１１月１２日出願の特許出願第１０／７０６，８５２号の優先権を主張するものであり、これらの内容は引用することによりその全開示内容を本明細書の一部とする。
【発明の背景】
【０００２】
従来の治療薬は正常細胞と罹患細胞を識別できないことから、従来の薬剤は正常な増殖細胞および組織に損傷を与え、死滅させることがある。従来の薬剤のこの有害な副作用を軽減するためには、それらの薬剤を罹患細胞または組織へ特異的にターゲッティングすることができる。治療薬を罹患細胞または組織へ特異的にターゲッティングする１つの方法として、抗体またはそのフラグメント、特にモノクローナル抗体などの特異的結合分子の使用によるものがある。
【０００３】
治療薬または診断薬に結合したターゲッティング結合分子（例えば、モノクローナル抗体）を用いれば、このような薬剤を標的細胞または組織（例えば、腫瘍）へ直接送達し、それにより、正常組織の有毒薬剤暴露を制限できる可能性が得られる(Goldenberg, Semin. Nucl. Med., 19:332 (1989))。近年では、抗体に基づく治療法の可能性、および腫瘍関連抗原などの抗原の局在化におけるその精度が、実験室での研究および臨床試験の双方で実証されている（例えば、Thorpe, TIBTECH, 11: 42 (1993); Goldenberg, Scientific American, Science & Medicine, 1: 64 (1994); Baldwin et al., 米国特許第４，９２５，９２２号および同第４，９１６，２１３号; Young, 米国特許第４，９１８，１６３号；同第５，２０４，０９５号; Irie et al., 米国特許第５，１９６，３３７号; Hellstrom et al., 米国特許第５，１３４，０７５号および同第５，１７１，６６５号参照）。腫瘍に関しては、局在化のための腫瘍関連マーカーに対する放射性標識抗体または抗体フラグメントの使用が、治療を目的とした場合よりも大きな成功を収めているが、これは、１つには腫瘍による抗体の取り込みが一般に低く、全注射量のわずか０．０１％〜０．００１％の範囲であるためである(Vaughan et al., Brit. J. Radiol., 60: 567 (1987))。腫瘍への投与量を高めるために放射性標識の濃度を高めても、一般に、これはまた健康な組織の放射性暴露も高めるので、逆効果である。治療薬または診断薬の取り込みを高める方法はそれ自体望ましいものである。
【０００４】
治療薬または診断薬はターゲッティング薬剤としての抗体に直接的に結合させてもよいし、また、これらの薬剤を抗体と間接的に結合させてもよい。担体／薬剤複合体の、罹患細胞または組織への特異的ターゲッティングを得るために抗体を担体と結合させ得る場合には、例えば、リポソーム、ナノ粒子、高分子が治療薬の担体として用いられてきた（例えば、Xu et al., Mol. Cancer. Ter., 1:337-346 (2002); Torchilin, et al., Proc. Nat’l. Acad. Sci., 10: 6039 (2003);米国特許第６，１６５，４４０号；同第５，７０２，７２７号；同第５，６２０，７０８号；同第５，５６５，２１５号；同第６，５３０，９４４号；同第６，５６２，３１８号；同第６，５５８，６４８号；および同第６，３９５，２７６号参照）。しかしながら、このような複合体の細胞への取り込みを促進するためには、その抗原が標的細胞の表面から標的細胞の内部へと迅速に循環するように抗体／抗原パートナーを選択することが重要である。このような抗原の１つが、細胞表面に存在し、最大８×１０６分子／細胞／日という多量の取り込みを示す、腫瘍組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスII抗原定常鎖ＩｉのエピトープであるＣＤ７４である(Hansen et al., Biocllem. J., 320: 293-300 (1996))。ＣＤ７４はＢリンパ球、単球および組織球、ヒトＢリンパ腫細胞系統、黒色腫、Ｔ細胞リンパ腫、および他の種々の腫瘍細胞種の細胞表面に存在する（同上）。
【０００５】
ネズミＬＬ１（ｍＬＬ１またはネズミ抗ＣＤ７４抗体）はＣＤ７４と反応性のある特異的なモノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。細胞表面に結合したＬＬ１はリソソームコンパートメントへと迅速にインターナライズされ、速やかに代謝されるが、これは抗ＣＤ１９および抗ＣＤ２２などの他のｍＡｂよりもはるかに速い（同上）。ＬＬ１のこの固有の特性は免疫療法に伴う上述の困難な点をある程度克服する。
【０００６】
ネズミＬＬ１は、マウス骨髄腫細胞と、ＲａｊｉＢリンパ腫細胞系統（Pawlak-Byczkowska et al., Can. Res., 49: 4568 (1989)ではＥＰＢ−１と呼ばれている）からの調製物で免疫化したＢＡＬＢ／ｃマウス由来の脾細胞とを融合させることにより開発されたものである。ｍＬＬ１の臨床での使用は、他の有望なネズミ抗体のほとんどのものと同じく、ヒトにおいてヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答が生じることにより制限されてきた。９９ｍＴｃで標識したｍＬＬ１  Ｆａｂ’を用いた骨髄画像化研究で明らかにされたように、ＨＡＭＡ応答は一般にｍＬＬ１  Ｆａｂ’の注射後には見られない。Juweid et al., Nuc. Med. Comm. 18: 142-148 (1997)。しかしながら、いくつかの治療用途および診断用途では、全長抗ＣＤ７４  ｍＡｂが好ましい場合がある。この全長抗ＣＤ７４ｍＡｂの使用は、潜在的なアナフィラキシーの問題のためばかりか、循環中の主要な部分の複合体が循環中の抗マウス抗体と複合体を形成し、それらによって隔離されることがあり得るので、このような抗体または抗体複合体の診断上および治療上の有用性を制限するものであり得る。ｍＬＬ１の抗体フラグメントの使用は免疫原性の問題を回避し得るものであるが、完全なＩｇＧが望ましい状況や、治療に、または抗体生存時間の延長に細胞免疫の誘導が意図される状況もある。一般に、ＨＡＭＡ応答は、ネズミ抗ＣＤ７４ｍＡｂの最大限の診断能および治療能を実現することに対する潜在的障害を持っている。従って、キメラ、ヒト化およびヒト抗ＣＤ７４結合分子（例えば、ｍＡｂおよびそのフラグメント、その抗体融合タンパク質およびそのフラグメント、多価および／または多重特異性ｍＡｂおよびそのフラグメント）を含む免疫複合体の開発は、ヒト抗マウス抗体の産生を軽減し、治療および診断に極めて有用である。
【発明の概要】
【０００７】
エフェクター分子（例えば、治療薬または診断薬）と免疫複合体とを含み、この免疫複合体が１以上の担体と結合した抗ＣＤ７４結合分子を含む、組成物が開示される。この担体はエフェクターを送達可能なものであり、より高次の構造を形成し得る分子（脂質または高分子など）を含んでもよいし、またはこの担体はより高次の構造それ自体（ミセル、リポソーム、またはナノ粒子など）であってもよい。このエフェクター分子は抗ＣＤ７４結合分子、担体、またはその双方と共有結合または非共有結合させてよい。一つの実施態様では、この組成物はエマルジョンまたはリポソームを含んでなる。
【０００８】
抗ＣＤ７４結合分子はスルフィド結合、ヒドラゾン結合、ヒドラジン結合、エステル結合、アミド結合、アミノ結合、イミノ結合、チオセミカルバゾン結合、セミカルバゾン結合、オキシム結合、および炭素−炭素結合をはじめとする様々な結合により担体と結合または連結させ得る。スルフィド結合が好ましく、この場合、結合分子はジスルフィド結合を含み、これが還元されて遊離チオール基が得られる。
【０００９】
この組成物は付加的結合分子（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ５２、ＣＤ８０、ＨＬＡ−ＤＲ、ＭＵＣ１、ＴＡＣ、ＩＬ−６、テネイシン(tensascin)、ＶＥＧＦ、胎盤増殖因子、炭酸脱水酵素ＩＸ、およびそれらの混合物と結合する抗体またはそのフラグメント）を含んでもよい。これらの付加的結合分子は、組成物のいずれの成分（例えば、担体）と共有結合または非共有結合させてもよい。
【００１０】
担体が脂質である場合、その脂質は、エマルジョン、またはミセルもしくはリポソームなどのより高次の構造を形成し得ることが好ましい。例えば、この脂質は両親媒性であってもよい。抗ＣＤ７４結合分子とのコンジュゲーションを容易にするため、この脂質は、求核炭素のような抗ＣＤ７４結合分子と反応し得る１以上の基を含んでもよい（例えば、遠位末端に）。一つの実施態様では、この脂質はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）−マレイミドであり、抗ＣＤ７４結合分子は遊離チオール基を介してマレイミド基と反応する。抗ＣＤ７４結合分子の結合に関して記載したように、マレイミド基は他の担体にも存在してよい。例えば、ナノ粒子が抗ＣＤ７４結合分子の結合のためのマレイミド基を含んでもよい。マレイミド基の他、結合分子の結合のための他の基として、ビニルスルホンが挙げられる。
【００１１】
１以上の治療薬または診断薬を含み得るエフェクターの他、この組成物は、その組成物のいずれかの成分と共有結合、非共有結合、またはそれ以外で結合させ得る付加的な治療薬または診断薬をさらに含んでもよい。例えば、この付加的な治療薬または診断薬は抗ＣＤ７４結合分子と共有結合させ得る。あるいは、この付加的な治療薬または診断薬は担体と共有結合、非共有結合、またはそれ以外で結合させてもよい。
【００１２】
エフェクターは任意の数の治療薬または診断薬を含み得る。例えば、エフェクターとしては、薬物、プロドラッグ、毒素、酵素、放射性同位元素、免疫調節剤、サイトカイン、ホルモン、結合分子（例えば、抗体）、またはオリゴヌクレオチド分子（例えば、アンチセンス分子または遺伝子）が挙げられる。アンチセンス分子としては、ｂｃｌ−２またはｐ５３に相当するアンチセンス分子が挙げられる。エフェクターとしては、アプリジン、アザリビン、アナストロゾール、アザシチジン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブリオスタチン−１、ブスルファン、カリケアマイシン、カンプトテシン、１０−ヒドロキシカンプトテシン、カルムスチン、セレブレックス、クロラムブシル、シスプラチン、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）、ＳＮ−３８、カルボプラチン、クラドリビン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ドセタキセル、ダクチノマイシン、ダウノマイシングルクロニド、ダウノルビシン、デキサメタゾン、ジエチルスチルベストロール、ドキソルビシン、ドキソルビシングルクロニド、エピルビシングルクロニド、エチニルエストラジオール、エストラムスチン、エトポシド、エトポシドグルクロニド、リン酸エトポシド、フロクスウリジン（ＦＵｄＲ）、３’，５’−Ｏ−ジオレオイル−ＦｕｄＲ（ＦＵｄＲ−ｄＯ）、フルダラビン、フルタミド、フルオロウラシル、フルオキシメステロン、ゲムシタビン、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、ヒドロキシ尿素、イダルビシン、イフォスファミド、Ｌ−アスパラギナーゼ、ロイコボリン、ロムスチン、メクロレタミン、酢酸メドロプロゲステロン、酢酸メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、６−メルカプトプリン、メトトレキサート、ミトキサントロン、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトタン、酪酸フェニル、プレドニゾン、プロカルバジン、パクリタキセル、ペントスタチン、ＰＳＩ−３４１、セムスチンストレプトゾシン、タモキシフェン、タキサン、タキソール、プロピオン酸テストステロン、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、テニポシド、トポテカン、ウラシルマスタード、ベルケード、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンクリスチン、リシン、アブリン、リボヌクレアーゼ、オンコナーゼ、ｒａｐＬＲ１、ＤＮアーゼＩ、ブドウ球菌エンテロトキシン−Ａ、アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリア毒、シュードモナス外毒素、およびシュードモナス内毒素、またはその組合せが挙げられる。ある実施態様では、エフェクターはＦＵｄＲ、またはＦＵｄＲ−ｄＯを含む。
【００１３】
この組成物はまた、１以上の硬酸キレート剤または軟酸キレート剤を含み得る。例えば、キレート剤としては、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、ＤＴＰＡ、ＴＥＴＡ、Ｔｓｃｇ−Ｃｙｓ、またはＴｓｃａ−Ｃｙｓが挙げられる。ある実施態様では、これらのキレート剤は、II族金属陽イオン、III族金属陽イオン、IV族金属陽イオン、Ｖ族金属陽イオン、遷移金属陽イオン、ランタニド金属陽イオンもしくはアクチニド金属陽イオン、またはそれらの混合物から選択される陽イオンと複合体を形成し得る。あるいは、これらの陽イオンは、複合体のいずれの成分と共有結合、非共有結合、またはそれ以外で結合させてもよい。ある実施態様では、この組成物は、Ｔｃ、Ｒｅ、Ｂｉ、Ｃｕ、Ａｓ、Ａｇ、Ａｕ、Ａｔ、またはＰｂから選択される陽イオンを含む。
【００１４】
この組成物はまた、核種（例えば、放射性核種）を含んでもよい。この核種は、１８Ｆ、３２Ｐ、３３Ｐ、４５Ｔｉ、４７Ｓｃ、５２Ｆｅ、５９Ｆｅ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７５Ｓｅ、７７Ａｓ、８６Ｙ、８９Ｓｒ、８９Ｚｒ、９０Ｙ、９４Ｔｃ、９４ｍＴｃ、９９Ｍｏ、９９ｍＴｃ、１０５Ｐｄ、１０５Ｒｈ、１１１Ａｇ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１４９Ｐｍ、１５３Ｓｍ、１５４−１５８Ｇｄ、１６１Ｔｂ、１６６Ｄｙ、１６６Ｈｏ、１６９Ｅｒ、１７５Ｌｕ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１８９Ｒｅ、１９４Ｉｒ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔ、２１１Ｐｂ、２１２Ｂｉ、２１２Ｐｂ、２１３Ｂｉ、２２３Ｒａ、または２２５Ａｃをはじめとする多くの核種から選択することができる。
【００１５】
エフェクターが酵素である場合、好適な酵素としては、カルボキシルエステラーゼ、グルクロニダーゼ、カルボキシペプチダーゼ、β−ラクタマーゼ、ホスファターゼ、およびそれらの混合物が挙げられる。エフェクターが免疫調節剤である場合、好適な免疫調節剤としては、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、インターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−γ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、およびそれらの混合物が挙げられる。また、エフェクターとしては、抗脈管形成薬、例えば、アンギオスタチン、エンドスタチン、バスキュロスタチン、カンスタチン、マスピン、抗ＶＥＧＦ結合分子、抗胎盤増殖因子結合分子、または抗血管増殖因子結合分子も挙げられる。
【００１６】
いずれの抗ＣＤ７４結合分子も好適であるが、好ましくは、この抗ＣＤ７４結合分子はＬＬ１またはそのフラグメントであり得る。例えば、モノクローナル抗体の生産は当技術分野で周知のものである。Harlow & Lane (eds), Antibodies. A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, NY参照。しかしながら、ＬＬ１のヒト、キメラ、もしくはヒト化誘導体、またはそのフラグメントが特に好適であり得る。ＬＬ１の誘導体は、引用することによりその全開示内容が本明細書の一部とされる２００２年３月１日出願の米国出願第１０／３７７，１２２号、および同第６０／３６０，２５９号に記載されている。この抗ＣＤ７４結合分子またはそのフラグメントはモノクローナルであり得る。
【００１７】
抗ＣＤ７４結合分子としては、ヒト、キメラ、もしくはヒト化抗ＣＤ７４抗体、またはそのフラグメントが挙げられる。例えば、結合分子はネズミ抗ＣＤ７４ｍＡｂの軽鎖可変領域のＣＤＲを含み得る。ヒト化抗ＣＤ７４抗体またはフラグメントはヒト化ｍＡｂの重鎖可変領域を含んでもよく、これはネズミ抗ＣＤ７４ｍＡｂの重鎖可変領域のＣＤＲを含み得る。ヒト化抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントは、ネズミ抗ＣＤ７４（ｍＬＬ１）の相補性決定領域（ＣＤＲ）とヒト抗体のフレームワーク（ＦＲ）領域とを含む軽鎖および重鎖可変領域を含んでよく、ここで、ヒト化抗ＣＤ７４ｍＡｂの軽鎖可変領域はネズミ抗ＣＤ７４ｍＡｂの軽鎖可変領域のＣＤＲを含み、ヒト化ｍＡｂの重鎖可変領域はネズミ抗ＣＤ７４ｍＡｂの重鎖可変領域のＣＤＲを含む。ヒト化抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントは、ヒト化抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントの軽鎖および重鎖可変領域のＦＲを含み、これはネズミｍＡｂの対応するＦＲに由来する少なくとも１つのアミノ酸で置換されていてもよい。ｍＡｂまたはフラグメントとしては、ヒト化ＩｇＧ１が挙げられる。
【００１８】
抗ＣＤ７４結合分子はキメラ抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントであってもよく、ネズミ抗ＣＤ７４ｍＡｂの軽鎖可変領域を含んでもよい。例えば、キメラ抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントはネズミ抗ＣＤ７４ｍＡｂの重鎖可変領域を含んでもよい。キメラ抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントはまた、ネズミ抗ＣＤ７４ｍＡｂの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み得る軽鎖および重鎖可変領域；ネズミ抗ＣＤ７４ｍＡｂのフレームワーク（ＦＲ）領域；ならびにヒト抗体の軽鎖および重鎖定常領域を含んでもよく、ここで、このキメラｍＡｂの軽鎖可変領域はネズミ抗ＣＤ７４ｍＡｂの軽鎖可変領域のＣＤＲを含み得る。キメラｍＡｂまたはそのフラグメントとしては、キメラＩｇＧ１またはそのフラグメントが挙げられる。
【００１９】
抗ＣＤ７４結合分子がヒト抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントを含む場合、その結合分子はヒト抗ＣＤ７４ｍＡｂの軽鎖可変領域を含み得る。例えば、ヒト抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントは、ネズミ抗ＣＤ７４ｍＡｂの重鎖可変領域のＣＤＲを含み得るヒトｍＡｂの重鎖可変領域を含み得る。別の例では、ヒト抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントは、ヒト抗体の軽鎖および重鎖の可変領域および定常領域を含み得る。ヒトｍＡｂまたはそのフラグメントとしては、ヒトＩｇＧ１が挙げられる。
【００２０】
抗ＣＤ７４結合分子は、その分子またはそのフラグメントとＣＤ−７４との結合がＣＤ７４に特異的な抗体またはそのフラグメントによって遮断されるように選択することができる。あるいは、この結合分子は、ｍＡｂまたはそのフラグメントが培養系のＲａｊｉリンパ腫細胞によってインターナライズされるように選択することもできる。別の実施態様では、ｍＡｂまたはそのフラグメントなどのこの抗ＣＤ７４結合分子は、ネズミＩｇＧ１ｍＡｂのＦｃと反応性のあるヤギ抗血清と架橋した場合に、細胞培養系のＲａｊｉ細胞のアポトーシスを誘導するように選択することができる。
【００２１】
この抗ＣＤ７４結合分子はまた、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、もしくはＦｖを含むフラグメント、またはＦ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、もしくはＦｖの軽鎖および重鎖の一部または全部を用いた融合タンパク質を含んでもよく、従って、このフラグメントはＣＤ７４に結合することができる。この結合分子は、多価、または多価多重特異性となるように選択または設計することができる。これらのフラグメントは二重特異性結合分子またはダイアボディーを形成することができる。一つの実施態様では、この結合分子は、ｍＡｂまたはそのフラグメントのＦｖまたはＦａｂ’を４以上含む融合タンパク質を含む。さらなる実施態様では、この結合分子は、抗ＣＤ７４ｍＡｂまたはそのフラグメントの、１以上のＦｖまたはＦａｂ’と、ＣＤ７４抗原ではない腫瘍細胞マーカーに特異的な抗体に由来する１以上のＦｖまたはＦａｂ’とを含む融合タンパク質を含む。例えば、腫瘍細胞マーカーとしては、ＣＤ１９、ＣＤ２０、またはＣＤ２２などのＢ細胞系抗原が挙げられる。あるいは、腫瘍細胞マーカーとしては、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ５２、ＭＵＣ１、またはＴＡＣが挙げられる。
【００２２】
この抗ＣＤ７４結合分子は、ヒトＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のヒト定常領域で置換されているＩｇＧ１の定常領域を含んでもよい。
【００２３】
また、患者に治療用組成物および／または診断用組成物を投与することを含む、疾病または疾患の治療および／または診断方法も開示される。この治療用組成物および／または診断用組成物は上述のいずれかの組成物を含み、一般には、（１）エフェクター分子（例えば、治療薬または診断薬）；（２）１以上の担体と結合した抗ＣＤ７４結合分子またはそのフラグメント；および（３）医薬上許容される賦形剤を含む組成物である。典型的には、この組成物は２０〜５０００ｍｇの用量で患者に静脈投与または筋肉内投与される。
【００２４】
疾病または疾患は一般にＣＤ７４発現悪性疾患であり、免疫調節不全性疾患、自己免疫疾患、臓器移植拒絶、移植片対宿主病、固形腫瘍、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、Ｂ細胞悪性疾患、またはＴ細胞悪性疾患が挙げられる。Ｂ細胞悪性疾患としては、緩徐進行性Ｂ細胞リンパ腫、急速進行性Ｂ細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病、急性リンパ性白血病、および／または多発性骨髄腫が挙げられる。固形腫瘍としては、黒色腫、癌腫、肉腫、および／または神経膠腫が挙げられる。癌腫としては、腎臓癌、肺癌、腸癌、胃癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、および黒色腫が挙げられる。
【００２５】
一つの実施態様では、この組成物は光線力学療法のための薬剤、例えば、ベンゾポルフィリン一酸環Ａ（ＢＤＰ−ＭＡ）、錫エチオプルプリン（ＳｎＥＴ２）、スルホン化アルミニウムフタロシアニン（ＡｌＳＰｃ）、またはルテチウムテキサフィリン（Ｌｕｔｅｘ）などの光増感剤を含んでもよい。この方法はまた、標的細胞または組織に照射抗原を投与することも含み得る。ある実施態様では、光線力学療法は診断ならびに治療に用いることができる。
【００２６】
この方法は、診断用核種、例えば、１８Ｆ、５２Ｆｅ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、８６Ｙ、８９Ｚｒ、９４Ｔｃ、９４ｍＴｃ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉを含む組成物を投与することを含んでもよい。一般に、この診断用核種は２５〜４０００ｋｅＶのγ粒子および／または陽電子を放射する。
【００２７】
この方法は、陽電子放射型断層撮影法（ＰＥＴ）に使用できる診断薬を含む組成物を投与することを含んでもよい。この方法はそれ自体、陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）を行うことを含んでもよい。
【００２８】
この方法は、１以上の画像増強剤、例えば、ガドリニウムイオン、ランタンイオン、マンガンイオン、鉄、クロム、銅、コバルト、ニッケル、フッ素、ジスプロシウム、レニウム、ユウロピウム、テルビウム、ホルミウム、ネオジム、またはそれらの混合物を含む組成物を投与することを含んでもよい。この方法はそれ自体、磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）などの映像法を行うことを含んでもよい。
【００２９】
この方法は、バリウム、ジアトリゾエート、エチオド化オイル、クエン酸ガリウム、イオカルム酸、イオセタム酸、ヨーダミド、ヨージパミド、ヨードキサム酸、イオグラミド、イオヘキソール、イオパミドール、イオパン酸、イオプロセム酸、イオセファム酸、イオセル酸、イオスラミドメグルミン、イオセメ酸、イオタスル、イオテトル酸、イオサラム酸、イオトロキシ酸、イオキサグル酸、イオキソトリゾ酸、イポデート、メグルミン、メトリザミド、メトリゾエート、プロピリオドン、塩化タリウム、またはその組合せなどの１以上の放射線不透過剤または造影剤を含む組成物を投与することを含んでもよい。この方法は、Ｘ線またはコンピューター断層撮影法（ＣＴ）を行うことを含んでもよい。
【００３０】
この方法は、デキストランまたはリポソーム（例えば、ガス充填されたリポソーム）などの１以上の超音波造影剤を含む組成物を投与することを含んでもよい。この方法は超音波手順を行うことを含んでもよい。
【００３１】
上述の手順に加え、この方法は、免疫複合体または組成物の投与前、投与と同時、または投与後に、術中手法、血管内手法、腹腔鏡手法または内視鏡手法を行うことを含んでもよい。
【００３２】
この方法はまた、治療薬または診断薬を含む第二の、または付加的な組成物を投与することを含んでもよく、この第二の、または付加的な組成物は、第一の組成物の投与前、投与と同時、または投与後に投与される。この第二の、または付加的な組成物は、上述の組成物を含んでもよい。一つの実施態様では、この第二の、または付加的な組成物は、治療薬または診断薬と結合した抗ＣＤ７４結合分子を含む。この治療薬または診断薬は、上述の薬物、プロドラッグ、毒素、酵素、放射性同位元素、免疫調節剤、サイトカイン、ホルモン、抗体、結合分子、オリゴヌクレオチド、キレート剤、陽イオン、治療用核種、光線力学療法のための薬剤、診断用核種、画像増強剤、放射線不透過剤、および／または造影剤を含んでもよい。この方法はまた、ＰＥＴ、ＭＲＩ、Ｘ線、ＣＴ、超音波、術中手法、血管内手法、腹腔鏡手法または内視鏡手法を行うことを含んでもよい。
【００３３】
また、上述の組成物（例えば、１以上の両親媒性脂質をエフェクターと混合して脂質薬物−担体を形成すること、およびその脂質薬物−担体を抗ＣＤ７４抗体分子（例えば、抗体またはそのフラグメント）と接触させることによる抗ＣＤ７４免疫複合体）を製造する方法も開示される。一例としては、この脂質が求核炭素（例えば、マレイミド基内）を含み、結合分子が遊離チオール基（例えば、還元剤で処理されたジスルフィド）を含む。この方法は、この組成物と、その組成物のいずれかの成分と共有結合、非共有結合、またはそれ以外で結合させ得る１以上の治療薬または診断薬とを混合することを含んでよい。
【００３４】
また、上述の組成物のいずれか、または上述の組成物のいずれかを調製するのに十分な成分を含むキットも開示される、一般に、このキットは、それらの組成物の投与に関する説明書、または、適用可能であれば、それらの組成物の調製に関する説明書を含む。
【発明の具体的説明】
【００３５】
定義
以下の説明において、多数の専門用語が使用されており、以下、本明細書の開示の理解を容易にするためにその定義を示す。
【００３６】
本明細書において結合分子は、抗原に特異的に結合し得る任意の分子である。結合分子としては、抗体またはそのフラグメントが挙げられる。抗ＣＤ７４結合分子は、抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントなど、ＣＤ７４抗原に特異的に結合する分子である、他の抗ＣＤ７４結合分子としては、多価分子、多重特異性分子（例えば、ダイアボディー）、融合分子、または天然に存在するか、もしくは組換えにより作出されるその他の分子も挙げられる。
【００３７】
本明細書において抗体とは、全長（すなわち、天然に存在するか、または通常の免疫グロブリン遺伝子フラグメント組換えプロセスにより形成される）免疫グロブリン分子（例えばＩｇＧ抗体）、または抗体フラグメントのような、免疫グロブリン分子の免疫学的に有効な（すなわち、特異的に結合する）部分をいう。
【００３８】
抗体フラグメントとは、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓＦｖなどのような抗体の部分をいう。構造に関係なく、抗体フラグメントは完全な抗体により認識される同じ抗原と結合する。例えば、抗ＣＤ７４モノクローナル抗体フラグメントは、ＣＤ７４のエピトープと結合する。「抗体フラグメント」とはまた、特定の抗原に結合して複合体を形成することにより抗体のように働くいずれの合成または遺伝子操作タンパク質も含む。例えば、抗体フラグメントとしては、重鎖および軽鎖の可変領域からなる「Ｆｖ」フラグメントのような可変領域からなる単離されたフラグメント、軽鎖および重鎖可変領域がペプチドリンカーにより接続されている組換え単鎖ポリペプチド分子（「ｓｃＦｖタンパク質」）、および超過変領域を模倣したアミノ酸残基からなる最小認識ユニットが挙げられる。
【００３９】
キメラ抗体は、１つの種、好ましくは齧歯類の抗体由来の抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む可変ドメインを含み、この抗体分子の定常ドメインはヒト抗体の定常領域に由来する組換えタンパク質である。獣医学領域への適用のためには、このキメラ抗体の定常ドメインは、ネコまたはイヌのような他の種に由来するものであってもよい。
【００４０】
ヒト化抗体は、１つの種、例えば齧歯類抗体由来の抗体のＣＤＲが齧歯類抗体の重鎖および軽鎖の可変鎖からヒト重鎖および軽鎖の可変ドメインに移された組換えタンパク質である。抗体分子の定常ドメインは、ヒト抗体の定常ドメインに由来する。
【００４１】
ヒト抗体は、抗原刺激に応答して特定のヒト抗体を産生するために「操作された」トランスジェニックマウスから得られる抗体である。この技術では、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子座のエレメントが、内在性重鎖および軽鎖遺伝子座が標的破壊されている胚幹細胞株由来のマウス系統に導入される。このトランスジェニックマウスはヒト抗原に特異的なヒト抗体を合成することができ、このマウスを、ヒト抗体を分泌するハイブリドーマを作製するために使用することができる。トランスジェニックマウスからヒト抗体を得るための方法は、Green et al., Nature Genet. 7:13 (1994), Lonberg et al., Nature 368:856 (1994),およびTaylor et al., Int. Immun. 6:579(1994)に記載されている。完全ヒト抗体はまた、遺伝子または染色体トランスフェクション法ならびにファージディスプレー技術により構築でき、これらは総て当技術分野で公知である。（非免疫ドナー由来の免疫グロブリン可変ドメイン遺伝子レパートリーからのin vitroにおけるヒト抗体およびそのフラグメントの産生に関しては、例えば、McCafferty et al., Nature 348:552-553（1990）を参照。）この技術では、抗体可変ドメイン遺伝子がフレーム内で繊維状バクテリオファージの主要または微量コートタンパク質遺伝子へクローニングされ、機能的抗体フラグメントとしてファージ粒子表面上に提示される。この繊維状粒子はファージゲノムの単鎖ＤＮＡコピーを含み、抗体の機能特性に基づいて選択すれば、それらの特性を示す抗体をコードする遺伝子が選択されることになる。このように、ファージはＢ細胞のいくつかの特性を模倣する。ファージディスプレーはさまざまな形式で行うことが可能であり、総説としては、例えば、Johnson and Chiswell, Current Opinion in Structural Biology 3:5564-571 (1993)を参照されたい。ヒト抗体はまた、in vitro活性化Ｂ細胞により産生させることができる。（引用することによりその全開示内容を本明細書の一部とする、米国特許第５，５６７，６１０号および同第５，２２９，２７５号を参照。）
【００４２】
エフェクターは、選択されたある結果をもたらす原子、分子、または化合物である。エフェクターとしては、本明細書に記載されているような治療薬および／または診断薬が挙げられる。
【００４３】
治療薬は、疾病の治療に有用な原子、分子、または化合物である。治療薬の例としては、抗体、抗体フラグメント、薬物、毒素、酵素、ヌクレアーゼ、ホルモン、免疫調節剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド、キレート剤、ホウ素化合物、光活性薬または色素および放射性同位元素が挙げられる。
【００４４】
診断薬は、疾病の診断に有用な原子、分子、または化合物である。有用な診断薬としては、限定されるものではないが、放射性同位元素、色素（ビオチン−ストレプトアビジン複合体など）、造影剤、蛍光化合物または分子、および磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）のための増強剤（例えば、常磁性イオン）などがある。米国特許第６，３３１，１７５号はＭＲＩ技術およびＭＲＩ増強剤に結合させた抗体の調製について記載しており、その全開示内容は引用することにより本明細書の一部とする。好ましくは、これらの診断薬は放射性同位元素、磁気共鳴映像法で使用する増強剤、および蛍光化合物からなる群から選択される。抗体成分に放射性金属または常磁性イオンを付加するためには、イオンを結合させるための多様なキレート基を付着させた長いテールを有する試薬と反応させる必要があろう。このようなテールは、ポリリシン、多糖、または例えばエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、ポルフィリン、ポリアミン、クラウンエーテル、ビス−チオセミカルバゾン、ポリミキシン、およびこの目的のために有用なことが公知の基といった、キレート基に結合できるペンダント基を有する他の誘導体化または誘導体化可能な鎖であり得る。キレート剤は標準的な化学法を用いてペプチド抗原に結合させる。キレート剤は、通常、免疫反応性の損失が最小で、凝集および／または内部架橋が最小となる分子との結合を形成し得る基により抗体に連結される。キレート剤を抗体に結合させるその他の、もっと特殊な方法および試薬は、１９８９年４月２５日出願の「Antibody Conjugates」と題されたHawthorneの米国特許第４，８２４，６５９号に開示されており、その開示内容は引用することにより本明細書の一部とする。特に有用な金属−キレートの組合せとしては、一般エネルギー範囲６０〜４０００ｋｅＶの診断用同位元素とともに用いられる２−ベンジルＤＴＰＡならびにそのモノメチルおよびシクロヘキシル類似体が含まれる。いくつかの有用な診断用核種として、１８Ｆ、５２Ｆｅ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、８６Ｙ、８９Ｚｒ、９４Ｔｃ、９４ｍＴｃ、９９ｍＴｃ、または１１１Ｉｎが挙げられる。同じキレート剤がマンガン、鉄およびガドリニウムのような非放射性金属と錯化した場合は、本明細書に記載の抗体および担体とともに使用するとＭＲＩに有用である。ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、およびＴＥＴＡのような大環状のキレート剤は種々の金属および放射性金属とともに、最も詳しくは、それぞれガリウム、イットリウム、および銅などの放射性核種とともに用いられる。このような金属−キレート錯体は、環のサイズを目的の金属にあわせて調整することにより極めて安定にすることができる。ＲＡＩＴのための２２３Ｒａなど、安定結合する核種について注目される、大環状ポリエーテルのような他のリング型キレート剤を用いてもよい。
【００４５】
免疫複合体は、結合分子（例えば、抗体成分）と、原子、分子、またはより高次の構造との（例えば、担体、治療薬、または診断薬との）複合体である。この診断薬は放射性または非放射性標識、造影剤（磁気共鳴イメージング、コンピューター断層撮影法または超音波診断法など）を含んでもよく、この放射性核種はγ、β、α、オージェ電子、または陽電子放射性同位元素であり得る。
【００４６】
裸の抗体は、他のいずれの薬剤とも結合していない抗体である。
【００４７】
担体は、標的細胞への薬剤の送達を促進するために治療薬または診断薬と会合させ得る原子、分子、またはより高次の構造物である。担体としては、脂質または高分子（例えば、より高次の構造を形成し得る両親媒性の脂質、またはデキストランのような炭水化物）などの分子、またはミセル、リポソーム、もしくはナノ粒子のような、より高次の構造物それ自体が挙げられる。
【００４８】
本明細書において、抗体融合タンパク質とは、特異性が同じまたは異なる二以上の同じまたは異なる単鎖抗体もしくは抗体フラグメントのセグメントが連結されている、組換え生産された抗原結合分子である。融合タンパク質の価数は、融合タンパク質がある単一の抗原またはエピトープに対していくつの結合腕または結合部位を有しているかを示し、すなわち、一価、二価、三価または多価がある。抗体融合タンパク質が多価であるということは、抗原に対する結合において複数の相互作用を利用できることを意味し、従って、その抗原に結合する結合力が高まる。特異性は、抗体融合タンパク質が何種類の抗原またはエピトープに結合できるかを示し、すなわち、一重特異性、二重特異性、三重特異性、多重特異性などがある。これらの定義を用いると、例えばＩｇＧのような天然の抗体は、結合腕を二本持つために二価であるが、この抗体は１種のエピトープにしか結合しないので一重特異性である。一重特異性多価融合タンパク質は、１種のエピトープに対して一を超える結合部位を有するが、１種のエピトープとしか結合せず、例えば、同じ抗原と反応性のある２つの結合部位を有するダイアボディーである。この融合タンパク質は、単一の抗体成分、または異なる抗体成分の多価もしくは多重特異性の組合せ、または同じ抗体成分の複数のコピーを含んでもよい。この融合タンパク質はさらに抗体または抗体フラグメントおよび治療薬を含んでもよい。このような融合タンパク質に好適な治療薬の例としては、免疫調節剤（「抗体-免疫調節剤融合タンパク質」）および毒素（「抗体-毒素融合タンパク質」）が挙げられる。好ましい１つの毒素としては、リボヌクレアーゼ（ＲＮアーゼ）であり、好ましくは組換えＲＮアーゼである。
【００４９】
多重特異性抗体は、同時に少なくとも２つの異なる構造の標的、例えば２つの異なる抗原、同じ抗原上の２つの異なるエピトープ、またはハプテンおよび／もしくは抗原、もしくはエピトープに結合できる抗体である。１つの特異性は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、骨髄性細胞、形質細胞、および肥満細胞抗原またはエピトープに対するものであろう。もう１つの特異性は、Ｂ細胞上のＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ４６、ＣＤ８０、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ７４、およびＣＤ２２のような、同じ細胞種上の異なる抗原に対するものであり得る。多価抗体は、同じまたは異なる構造の少なくとも２つの標的と同時に結合することができる抗体である。多重特異性多価抗体は、特異性の異なる一を超える結合部位を有する構築物である。例えば、ダイアボディーでは、１つの結合部位は１つの抗原と反応し、もう一方は他の抗原と反応する。
【００５０】
二重特異性抗体は、２つの異なる構造の標的に同時に結合することができる抗体である。二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）および二重特異性抗体フラグメント（ｂｓＦａｂ）は、例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、骨髄性細胞、形質細胞および肥満細胞抗原またはエピトープに特異的に結合する少なくとも１つのアーム、および治療薬または診断薬を担持するターゲッティング可能な複合体に特異的に結合する少なくとも１つの他のアームを有する。分子工学技術を用いて種々の二重特異性融合タンパク質を作製できる。単一の形態においては、二重特異性融合タンパク質は一価であり、例えば１つの抗原に対して単一の結合部位を有するｓｃＦｖと、第二の抗原に対して単一の結合部位を有するＦａｂフラグメントからなる。もう１つの形態においては、この二重特異性融合タンパク質は二価であり、例えば１つの抗原に対して単一の結合部位を有するＩｇＧと第二の抗原に対して２つの結合部位を有する２つのｓｃＦｖからなる。
【００５１】
ナノ粒子とは、１〜１０００ｎｍの範囲の大きさの粒子をいう。一般に、ナノ粒子は生分解性、生体適合性であり、かつ、標的細胞に送達される物質を組み込み得る担体としての働きをする。
【００５２】
キメラ、ヒト化およびヒト抗体をはじめとするモノクローナル抗体の作製
本明細書に記載の免疫複合体および組成物はモノクローナル抗体を含み得る。特定の抗原に対する齧歯類モノクローナル抗体は、当業者に公知の方法により得ることができる。（例えば、Kohler and Milstein, Nature 256:495（1975）, and Coligan et al.(eds.), CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY, VOL. 1, pages 2.5.1-2.6.7（John Wiley & Sons 1991）参照。）
【００５３】
マウス免疫グロブリン可変ドメインのクローニングのための一般的な技術は、例えば、引用することによりその全開示内容が本明細書の一部とされる、Orlandi et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:3833 (1989)に記載されている。キメラ抗体構築のための技術は当業者に周知である。例えば、Leung et al., Hybridoma 13:469 (1994)には、ＬＬ２モノクローナル抗体、抗ＣＤ２２抗体のＶおよびＶＨドメインをコードするＤＮＡ配列をそれぞれのヒトおよびＩｇＧ１定常領域ドメインと組み合わせることでＬＬ２キメラをいかに作製したかが記載されている。この刊行物はまた、ＬＬ２の軽鎖および重鎖可変領域、ＶおよびＶＨのヌクレオチド配列をそれぞれ提供する。ヒト化ＭＡｂを産生する技術は、例えばJones et al., Nature 321:522 (1986), Riechmann et al., Nature 332:323 (1988), Verhoeyen et al., Science 239:1534 (1988), Carter et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 89:4285 (1992), Sandhu, Crit. Rev. Biotech. 12:437 (1992),およびSinger et al., J Immun. 150:2844 (1993)に記載されており、これらはそれぞれ引用することによりその全開示内容が本明細書の一部とされる。
【００５４】
ヒト化抗体および抗体フラグメントは、”Anti-CD20 Antibodies And Fusion Proteins Thereof And Methods Of Use”と題された米国仮特許出願、２００２年２月１４日出願の米国仮出願第６０／３５６，１３２号；２００２年１０月７日出願の米国仮出願第６０／４１６，２３２号；および２００３年２月１４日出願の米国仮特許出願第６０／３６６，７０９号に記載されている。他のヒト化抗体としては、米国特許出願第５，８７４，５４０号に開示されているもののような、クラスIII抗癌胎児性抗原抗体（抗ＣＥＡ抗体）を認識するｈＭＮ−１４抗体；米国特許出願第１０／１１６，１１６号に記載されているもののようなＭｕ−９抗体；２００２年８月１日出願の米国仮特許出願第６０／３９９，７０７号に記載されているもののようなＡＦＰ抗体；２００２年６月１４日出願の米国仮特許出願第６０／３８８／３１３号に記載されているもののようなＰＡＭ４抗体；２００２年３月１日出願の米国仮特許出願第６０／３６０，２２９号に記載されているもののようなＲＳ７抗体；および米国特許第５，７８９，５５４号および同第６，１８７，２８７号、および米国特許出願第０９／７４１，８４３号、同第０９／９８８，０１３号、および米国特許出願第１０／３７７，１２２号に記載されているもののようなＣＤ２２抗体が挙げられ、これらは総て、引用することにより本明細書の一部とされる。
【００５５】
キメラ抗体は、齧歯類抗体のような一種の動物由来のＣＤＲを含む可変ドメインを含む組換えタンパク質であり、抗体分子の残りの部分、すなわち定常ドメインはヒト抗体に由来する。従って、キメラモノクローナル抗体はまた、キメラｍＡｂの可変ドメイン中のマウスＦＲ配列を、１以上の異なるヒトＦＲと置換することによりヒト化することができる。具体的には、マウスＣＤＲをマウス免疫グロブリンの重鎖および軽鎖可変鎖からヒト抗体の相当する可変ドメインに移す。マウスＣＤＲをヒトＦＲに単に移すだけでは、しばしば抗体親和性の低下または損失さえ起こるために、マウス抗体の元の親和性を回復させるためにはさらなる修飾が必要となる。これは、そのエピトープに対して良好な結合親和性を有する抗体を得るために、ＦＲ領域の１以上のヒト残基をマウスの相当部分と置換することにより行うことができる。（例えば、Tempest et al., Biotechnology 9:266（1991）およびVerhoeyen et al., Science 239:1534 (1988)を参照。）さらに、ヒト化、キメラおよびヒトＭＡｂの特定のエピトープに対する親和性は、ＣＤＲの突然変異誘発により高めることができ、その結果、より低用量の抗体が突然変異前の高用量の低親和性ＭＡｂと同等の有効性を示し得る。（例えば、ＷＯ００２９５８４Ａ１を参照。）
【００５６】
完全ヒト抗体、すなわちヒト抗ＣＤ７４  ＭＡｂ、またはヒト化、キメラまたはヒト抗ＣＤ７４抗体との組合せ療法に用いる抗ＣＤ２２、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２３、抗ＣＤ２０、または抗ＣＤ２１  ＭＡｂなどの他のヒト抗体は、トランスジェニック非ヒト動物から得ることができる。（例えば、引用することによりその全開示内容が本明細書の一部とされるMendez et al., Nature Genetics, 15: 146-156 (1997); 米国特許第５，６３３，４２５号参照。）例えば、ヒト抗体はヒト免疫グロブリン遺伝子座を有するトランスジェニックマウスから回収することができる。
【００５７】
操作型結合分子
二重特異性ｍＡｂを作製するためのさらなる最近の方法は、付加的なシステイン残基を有し、その結果、一般的な免疫グロブリンのイソ型よりも強く架橋する操作型組換えｍＡｂを含む。（例えば、FitzGerald et al., Protein Eng. 10(10):1221-1225, (1997)参照。）別のアプローチとしては、必要な二重の特異性を有する２以上の単鎖抗体または抗体フラグメントセグメントを架橋する組換え融合タンパク質を操作するものがある。（例えば、Coloma et al., Nature Biotech. 15:159-163, (1997)参照。）様々な二重特異性融合タンパク質が分子工学を用いて作出できる。１つの形態においては、二重特異性融合タンパク質は一価であり、例えば１つの抗原に対して単一の結合部位を有するｓｃＦｖと、第二の抗原に対して単一の結合部位を有するＦａｂフラグメントからなる。もう１つの形態においては、この二重特異性融合タンパク質は二価であり、例えば１つの抗原に対して２つの結合部位を有するＩｇＧと、第二の抗原に対して２つの結合部位を有する２つのｓｃＦｖからなる。
【００５８】
抗体フラグメントの作製
特定のエピトープを認識する抗体フラグメントは、公知の技術により作製し得る。抗体フラグメントは、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆａｂ'、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓＦｖなどの抗体の抗原結合部分である。他の抗体フラグメントとしては、限定されるものではないが、抗体分子のペプシン消化により作製できるＦ（ａｂ）'２フラグメント、およびＦ（ａｂ'）２フラグメントのジスルフィド結合を還元することにより作製できるＦａｂ'フラグメントが挙げられる。あるいは、所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂ’フラグメントの迅速で容易な同定を可能にするには、Ｆａｂ’発現ライブラリーを構築することができる（Huse et al., 1989, Science, 246:1274-1281）。本標的薬物担体は抗体および抗体フラグメントの双方を包含し得る。
【００５９】
単鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）は、ＶＬドメインおよびＶＨドメインを含んでなる。このＶＬおよびＶＨドメインは組み合わさって標的結合部位を形成している。これらの二つのドメインはペプチドリンカー（Ｌ）によりさらに共有結合されている。ｓｃＦｖ分子は、ＶＬドメインがｓｃＦｖ分子のＮ末端部である場合、ＶＬ−Ｌ−ＶＨ、またはＶＨドメインがｓｃＦｖ分子のＮ末端部である場合、ＶＨ−Ｌ−ＶＬと表される。ｓｃＦｖ分子の作製方法、および好適なペプチドリンカーの設計方法は、米国特許第４，７０４，６９２号、同第４，９４６，７７８号、R. Raag and M. Whitlow,"Single Chain Fvs."FASEB Vol 9:73-80（1995）およびR. E. Bird and B. W. Walker,"Single Chain Antibody Variable Regions,"TIBTECH, Vol 9:132-137(1991)に記載されている。これらの参照文献は引用することにより本明細書の一部とされる。
【００６０】
抗体フラグメントは、例えば、Goldenbergの米国特許第４，０３６，９４５号および同第４，３３１，６４７号、ならびにそこに含まれる参照文献に記載されているような（これらの特許は引用することによりその全開示内容が本明細書の一部とされる）公知の方法により作製できる。また、Nisonoff et al., Arch Biochem. Biophys. 89:230(1960); Porter, Biochem. J 73:119(1959)、Edelman et al., in METHODS IN ENZYMOLOGY VOL. 1, page 422(Academic Press 1967)、および Coligan at pages 2.8. 1-2.8.10および2.10.-2. 10.4.も参照。
【００６１】
抗体フラグメントのもう１つの形態は、単一の相補性決定領域（ＣＤＲ）をコードするペプチドである。ＣＤＲは抗体の可変領域のセグメントであり、抗体が結合するエピトープに対し相補的な構造であり、残りの可変領域よりもさらに変化に富んでいる。従って、ＣＤＲはしばしば超過変領域と呼ばれる。可変領域は３つのＣＤＲを含んでなる。ＣＤＲペプチドは、対象となる抗体のＣＤＲをコードする遺伝子を構築することにより得られる。このような遺伝子は、例えば抗体産生細胞のＲＮＡから可変領域を合成するためのポリメラーゼ連鎖反応を用いて調製される。例えば、Larrick et al., Methods:A Companion to Methods in Enzymology 2:106(1991); Courtenay-Luck,"Genetic Manipulation of Monoclonal Antibodies, "in MONOCLONAL ANTIBODIES:PRODUCTION, ENGINEERING AND CLINICAL APPLICATION, Ritter et al.(eds.), pages 166-179 (Cambridge University Press 1995);およびWard et al.,"Genetic Manipulation and Expression of Antibodies, "in MONOCLONAL ANTIBODIES:PRINCIPLES AND APPLICATIONS, Birch et al., (eds.), pages 137-185（Wiley-Liss, Inc. 1995）参照。
【００６２】
抗ＣＤ７４抗体
本免疫複合体および組成物の抗ＣＤ７４結合分子は、ＣＤ７４抗原に対して特異性を有する特定のネズミＣＤＲを含み得る。例えば、抗ＣＤ７４結合分子はヒト化、キメラまたはヒトｍＡｂであってもよく、ネズミ抗ＣＤ７４  ｍＡｂ（例えば、ネズミ抗ＣＤ７４  ｍＡｂ，ＬＬ１）のＣＤＲのアミノ酸を含み得る。ヒト化、キメラ、およびヒト抗ＣＤ７４  ｍＡｂまたはそのフラグメントは、引用することにより本明細書の一部とされる米国特許出願第１０／３７７，１２２号に記載されている。
【００６３】
抗ＣＤ７４抗体がヒト化されている場合、それはネズミ抗ＣＤ７４  ｍＡｂの軽鎖可変領域のＣＤＲ（例えば、アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＬＶＨＲＮＧＮＴＹＬＨ（配列番号１）を含むＣＤＲ１；アミノ酸配列ＴＶＳＮＲＦＳ（配列番号２）を含むＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＳＱＳＳＨＶＰＰＴ（配列番号３）を含むＣＤＲ３）を含み得る。このヒト化抗ＣＤ７４抗体またはフラグメントは、ヒト化ｍＡｂの重鎖可変領域を含んでよく、それはネズミ抗ＣＤ７４  ｍＡｂの重鎖可変領域のＣＤＲ（例えば、アミノ酸配列ＮＹＧＶＮ（配列番号４）を含むＣＤＲ１；アミノ酸配列ＷＩＮＰＮＴＧＥＰＴＦＤＤＤＦＫＧ（配列番号５）を含むＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＳＲＧＫＮＥＡＷＦＡＹ（配列番号６）を含むＣＤＲ３）を含み得る。このヒト化抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントは、ネズミ抗ＣＤ７４（ｍＬＬ１）の相補性決定領域（ＣＤＲ）とヒト抗体のフレームワーク（ＦＲ）領域を含む軽鎖および重鎖可変領域を含んでもよく、ここで、このヒト化抗ＣＤ７４  ｍＡｂの軽鎖可変領域はネズミ抗ＣＤ７４  ｍＡｂの軽鎖可変領域のＣＤＲ（例えば、アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＬＶＨＲＮＧＮＴＹＬＨ（配列番号１）を含むＣＤＲ１；アミノ酸配列ＴＶＳＮＲＦＳ（配列番号２）を含むＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＳＱＳＳＨＶＰＰＴ（配列番号３）を含むＣＤＲ３）を含み、このヒト化  ｍＡｂの重鎖可変領域はネズミ抗ＣＤ７４  ｍＡｂの重鎖可変領域のＣＤＲ（例えば、アミノ酸配列ＮＹＧＶＮ（配列番号４）を含むＣＤＲ１；アミノ酸配列ＷＩＮＰＮＴＧＥＰＴＦＤＤＤＦＫＧ（配列番号５）を含むＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＳＲＧＫＮＥＡＷＦＡＹ（配列番号６）を含むＣＤＲ３）を含み得る。ヒト化抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントは、ネズミｍＡｂの対応するＦＲに由来する少なくとも１つのアミノ酸で置換されていてもよいヒト化抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントの軽鎖および重鎖可変領域のＦＲを含んでもよい。一つの実施態様では、この置換アミノ酸は、図３ＢのｃＬＬ１Ｖｋ配列のネズミ軽鎖可変領域のアミノ酸残基２、３、４、４６、８７および１００、ならびに図３ＡのｃＬＬ１ＶＨ配列のネズミ重鎖可変領域のアミノ酸残基５、３７、３８、４６、６８、９１および９３から選択され得る。別の実施態様では、このｍＡｂまたはそのフラグメントは図４Ａの重鎖可変領域と図４Ｂの軽鎖可変領域とを含んでなる。さらなる実施態様では、このｍＡｂまたはそのフラグメントはヒト抗体の軽鎖および重鎖定常領域またはその一部を含んでなる。このｍＡｂまたはフラグメントはヒト化ＩｇＧ１を含み得る。
【００６４】
この抗ＣＤ７４結合分子がキメラ抗ＣＤ７４抗体を含む場合、このキメラ抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントはネズミ抗ＣＤ７４  ｍＡｂの軽鎖可変領域（例えば、アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＬＶＨＲＮＧＮＴＹＬＨ（配列番号１）を含むＣＤＲ１；アミノ酸配列ＴＶＳＮＲＦＳ（配列番号２）を含むＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＳＱＳＳＨＶＰＰＴ（配列番号３）を含むＣＤＲ３）を含み得る。別の実施態様では、このキメラ抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントはネズミ抗ＣＤ７４  ｍＡｂの重鎖可変領域（例えば、アミノ酸配列ＮＹＧＶＮ（配列番号４）を含むＣＤＲ１；アミノ酸配列ＷＩＮＰＮＴＧＥＰＴＦＤＤＤＦＫＧ（配列番号５）を含むＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＳＲＧＫＮＥＡＷＦＡＹ（配列番号６）を含むＣＤＲ３）を含み得る。さらなる実施態様では、このキメラ抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントはネズミ抗ＣＤ７４  ｍＡｂの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み得る軽鎖および重鎖可変領域；ネズミ抗ＣＤ７４  ｍＡｂのフレームワーク（ＦＲ）領域；ならびにヒト抗体の軽鎖および重鎖定常領域を含んでよく、ここで、このキメラｍＡｂの軽鎖可変領域はネズミ抗ＣＤ７４  ｍＡｂの軽鎖可変領域のＣＤＲ（例えば、アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＬＶＨＲＮＧＮＴＹＬＨ（配列番号１）を含むＣＤＲ１；アミノ酸配列ＴＶＳＮＲＦＳ（配列番号２）を含むＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＳＱＳＳＨＶＰＰＴ（配列番号３）を含むＣＤＲ３）を含み、このキメラｍＡｂの重鎖可変領域はネズミ抗ＣＤ７４  ｍＡｂの重鎖可変領域のＣＤＲ（例えば、アミノ酸配列ＮＹＧＶＮ（配列番号４）を含むＣＤＲ１；アミノ酸配列ＷＩＮＰＮＴＧＥＰＴＦＤＤＤＦＫＧ（配列番号５）を含むＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＳＲＧＫＮＥＡＷＦＡＹ（配列番号６）を含むＣＤＲ３）を含み得る。あるいは、このキメラｍＡｂまたはそのフラグメントは図２Ａの重鎖可変領域と図２Ｂの軽鎖可変領域とを含み得る。このキメラｍＡｂまたはそのフラグメントはキメラＩｇＧ１またはそのフラグメントを含み得る。
【００６５】
この抗ＣＤ７４結合分子がヒト抗ＣＤ７４抗体である場合、このヒト抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントはヒト抗ＣＤ７４  ｍＡｂの軽鎖可変領域（例えば、アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＬＶＨＲＮＧＮＴＹＬＨ（配列番号１）を含むＣＤＲ１；アミノ酸配列ＴＶＳＮＲＦＳ（配列番号２）を含むＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＳＱＳＳＨＶＰＰＴ（配列番号３）を含むＣＤＲ３）を含み得る。一つの実施態様では、このヒト抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントは、ヒトｍＡｂの重鎖可変領域を含んでもよく、これはネズミ抗ＣＤ７４  ｍＡｂの重鎖可変領域のＣＤＲ（例えば、アミノ酸配列ＮＹＧＶＮ（配列番号４）を含むＣＤＲ１；アミノ酸配列ＷＩＮＰＮＴＧＥＰＴＦＤＤＤＦＫＧ（配列番号５）を含むＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＳＲＧＫＮＥＡＷＦＡＹ（配列番号６）を含むＣＤＲ３）を含み得る。別の実施態様では、このヒト抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントはヒト抗体の軽鎖および重鎖可変領域および定常領域を含んでよく、ここで、このヒト抗ＣＤ７４  ｍＡｂの軽鎖可変領域のｈｕＣＤ７４  ＣＤＲは、アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＬＶＨＲＮＧＮＴＹＬＨ（配列番号１）を有するＣＤＲ１；アミノ酸配列ＴＶＳＮＲＦＳ（配列番号２）を有するＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＳＱＳＳＨＶＰＰＴ（配列番号３）を有するＣＤＲ３を含んでよく、ここで、このヒトｍＡｂの重鎖可変領域はネズミ抗ＣＤ７４  ｍＡｂの重鎖可変領域のＣＤＲ（例えば、アミノ酸配列ＮＹＧＶＮ（配列番号４）を含むＣＤＲ１；アミノ酸配列ＷＩＮＰＮＴＧＥＰＴＦＤＤＤＦＫＧ（配列番号５）を含むＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＳＲＧＫＮＥＡＷＦＡＹ（配列番号６）を含むＣＤＲ３）を含み得る。このヒトｍＡｂまたはそのフラグメントはヒトＩｇＧ１を含み得る。
【００６６】
多重特異性および多価抗体
本免疫複合体および組成物の抗ＣＤ７４結合分子、ならびに併用療法に用いるために異なる特異性を有するその他の結合分子はまた、多重特異性抗体（ＣＤ７４エピトープまたは抗原に対する少なくとも１つの結合部位と、ＣＤ７４または別の抗原上の別のエピトープに対する少なくとも１つの結合部位とを含んでなる）および多価抗体（エピトープまたは抗原に対する複数の結合部位を含んでなる）も含んでよく、あるいは、これらの抗体は多価および多重特異性の双方であってもよい。
【００６７】
本免疫複合体または組成物の好ましい結合分子は、本明細書に記載のようなヒト化、キメラ、ヒトまたはネズミ抗ＣＤ７４  ｍＡｂまたはそのフラグメントの４以上のＦｖまたはＦａｂ’を含む融合タンパク質である。さらに、別の好ましい抗体融合タンパク質は、本明細書に記載のようなヒト化、キメラ、ヒトまたはネズミ抗ＣＤ７４  ｍＡｂまたはそのフラグメントのｍＡｂまたはそのフラグメントの１以上のＦｖまたはＦａｂ’、ならびにＣＤ７４抗原ではない腫瘍細胞マーカーに特異的な別の抗原に対して特異的な抗体に由来する１以上のＦｖまたはＦａｂ’を含む。例えば、この非ＣＤ７４抗原はＣＤ７４発現細胞により発現されるものであってよく、Ｂ細胞系抗原（例えば、Ｂ細胞悪性疾患の治療のためのＣＤ１９、ＣＤ２０、またはＣＤ２２）から選択される腫瘍マーカーが挙げられる。この非ＣＤ７４抗原はまた、黒色腫などにおけるＳ１００のような、他の種類の悪性疾患を引き起こす他のＣＤ７４陽性細胞で発現されるものであってもよい。さらに、この腫瘍細胞マーカーはＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ５２  ＭＵＣ１およびＴＡＣからなる群から選択される非Ｂ細胞系抗原であってもよい。
【００６８】
本明細書ではまた、開示されている免疫複合体および組成物を製造するのに有用な二重特異性または多重特異性抗体も開示され、ここでは、抗ＣＤ７４  ｍＡｂまたはそのフラグメントまたは抗体融合タンパク質が、癌マーカー物質、感染性病原生物の表面のエピトープ、または血液もしくはその他の体液中の有害物質に特異的な抗体または抗体フラグメントに連結されている。これらの二重特異性および多重特異性抗体は、種々の有害物質のクリアランスを誘導する方法において特に有用であり、ここでは、二重特異性抗体は、病原生物などの有害物質に対する少なくとも１つの特異性と、引用することによりその全開示内容が本明細書の一部とされる、”Therapeutic Using a Bispecific Antibody”と題された、１９９９年５月１９日出願の米国特許出願第０９／３１４，１３５号に詳細に記載されているようなＣＤ７４、ＨＬＡクラスII可変鎖（Ｉｉ）に対する少なくとも１つの特異性を有する。
【００６９】
本明細書に開示されている免疫複合体および組成物はまた、抗ＣＤ７４多価抗体を含み得る。この多価標的結合タンパク質は第一および第二のポリペプチドの会合によって構築され得る。この第一のポリペプチドは、好ましくは免疫グロブリン軽鎖可変領域ドメインである第一の免疫グロブリン様ドメインと共有結合されている第一の単鎖Ｆｖ分子を含んでなる。第二のポリペプチドは、好ましくは免疫グロブリン重鎖可変領域ドメインである第二の免疫グロブリン様ドメインと共有結合されている第二の単鎖Ｆｖ分子を含んでなる。これら第一および第二の単鎖Ｆｖ分子は各々標的結合部位を形成し、これら第一および第二の免疫グロブリン様ドメインは会合して第三の標的結合部位を形成する。
【００７０】
ダイアボディー、トリアボディーおよびテトラボディー
本明細書で開示されている免疫複合体および組成物はまた、機能的二重特異性単鎖抗体（ｂｓｃＡｂ）（ダイアボディーとも呼ばれる）も含み得る。（例えば、引用することにより本明細書の一部とされるMack et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 92: 7021-7025, 1995参照。）例えば、ｂｓｃＡｂは組換え法によりグリシン−セリンリンカーを介して２つの単鎖Ｆｖフラグメントを結合することで作製する。問題の２つの抗体のＶＬ鎖（ＶＬ）およびＶＨ鎖（ＶＨ）ドメインは、標準的ＰＣＲ法により単離される。次に、それぞれのハイブリドーマから得られたｃＤＮＡのＶＬおよびＶＨは、二段階の融合ＰＣＲにおいて結合されて単鎖フラグメントを形成する。第一のＰＣＲステップでは（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ１）３リンカーを導入し、第二のステップではＶＬおよびＶＨアンプリコンを結合させる。次いでそれぞれの単鎖分子を細菌発現ベクターへクローニングする。増幅後に単鎖分子の一つを切り出して問題の第二の単鎖分子を含む他のベクターへサブクローニングする。得られたｂｓｃＡｂフラグメントを真核細胞発現ベクターへサブクローニングする。機能性タンパク質の発現は、そのベクターをチャイニーズハムスター卵巣細胞へトランスフェクトすることにより得られる。二重特異性融合タンパク質も同様の方法で調製される。二重特異性単鎖抗体および二重特異性融合タンパク質は薬物担体を調製するのに使用できる。
【００７１】
例えば、ヒト化、キメラ、またはヒト抗ＣＤ７４モノクローナル抗体を、抗原特異的ダイアボディー、トリアボディー、およびテトラボディーを作製するために使用することができる。この単一特異性ダイアボディー、トリアボディー、およびテトラボディーは選択的に標的抗原に結合し、分子上の結合部位数が増加すると標的細胞に対する親和性が高まり、所望の位置における滞留時間が長くなるのが観察される。ダイアボディーに関しては、５つのアミノ酸残基のリンカーによりヒト化ＣＤ７４  ｍＡｂのＶKポリペプチドに連結されたヒト化ＣＤ７４  ｍＡｂのＶＨポリペプチドを含んでなる２つの鎖が利用される。各々の鎖はヒト化ＣＤ７４ダイアボディーの１／２を形成する。トリアボディーの場合、ヒト化ＣＤ７４  ＭＡｂのＶＫポリペプチドにリンカーは介さずに連結されたヒト化ＣＤ７４  ＭＡｂのＶＨポリペプチドを含んでなる３つの鎖が利用される。各々の鎖はｈＣＤ７４トリアボディーの１／３を形成する。
【００７２】
より最近では、二重特異性を有する四価タンデムダイアボディー（ｔａｎｄａｂと呼ばれる）も報告されている(Cochlovius et al., Cancer Researchm (2000) 60:4336-4341)。この二重特異性ｔａｎｄａｂは同一の２つのポリペプチドの二量体であり、それぞれが２つの異なる抗体の４つの可変ドメインを含み（ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２、ＶＬ２）、これは自己会合に際してそれぞれの２つの異なる特異性のための２つの可能性のある結合部位の形成を容易にする方向に連結されている。
【００７３】
結合した多価および多重特異性抗ＣＤ７４抗体
別の実施態様では、結合した多価抗ＣＤ７４抗体を、免疫複合体または組成物を製造するために使用できる。第一または第二のポリペプチドのＮ末端またはＣ末端のいずれかにさらなるアミノ酸残基を付加してもよい。これらのさらなるアミノ酸残基は、ペプチドタグ、シグナルペプチド、サイトカイン、酵素（例えば、プロドラッグ活性化酵素）、ホルモン、シュードモナス外毒素のようなペプチド毒素、ペプチド薬、細胞傷害性タンパク質またはその他の機能的タンパク質を含み得る。本明細書において、機能的タンパク質は生物機能を有するタンパク質である。
【００７４】
一つの実施態様では、薬物、毒素、放射性化合物、酵素、ホルモン、細胞傷害性タンパク質、キレート剤、サイトカインおよびその他の機能的薬剤を、多価標的結合タンパク質と、好ましくはその多価標的結合タンパク質のアミノ酸残基の側鎖、例えば、アミン基、カルボキシル基、フェニル基、チオール基またはヒドロキシル基との共有結合によって結合させてもよい。例えば、ジイソシアネート、ジイソチオシアネート、ビス（ヒドロキシスクシンイミド）エステル、カルボジイミド、マレイミド−ヒドロキシスクシンイミドエステル、グルタルアルデヒドなど、種々の通常のリンカーをこの目的に使用できる。薬剤と多価タンパク質とのコンジュゲーションは、タンパク質のその標的に対する結合特異性および親和性に著しい影響を及ぼさないことが好ましい。本明細書において機能的薬剤とは、生物機能を有する薬剤である。好ましい機能的薬剤は細胞傷害剤である、
【００７５】
さらにその他の実施態様では、二重特異性抗体によりin vivo標的へと向けられる治療薬またはプロドラッグポリマーの送達は、放射性核種の二重特異性抗体送達と組み合わせることができ、これにより化学療法と放射免疫療法の組合せが達成される。各治療薬はターゲッティング可能な複合体に結合させて同時に投与できるか、または核種は第一のターゲッティング可能な複合体の一部として与えることもできるし、薬物はその後の工程で第二のターゲッティング可能な複合体の一部として与えることもできる。
【００７６】
別の実施態様では、細胞傷害剤は高分子担体と結合させてもよく、この高分子担体は次に、多価標的結合タンパク質と結合させてもよい。この方法に関しては、引用することにより本明細書の一部とされるRyser et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 75: 3867-3870, 1978,米国特許第４，６９９，７８４号および米国特許第４，０４６，７２２号参照。コンジュゲーションは、多価結合タンパク質の結合特異性または親和性に著しい影響を及ぼさないことが好ましい。
【００７７】
治療および診断のためのヒト化、キメラおよびヒト抗体の使用
ヒト化、キメラおよびヒトモノクローナル抗体、すなわち、本明細書に記載の抗ＣＤ７４  ｍＡｂおよびその他のＭＡｂは、本明細書に記載のような免疫複合体および組成物を利用する治療法および診断法で用いるために好適である。従って、これらの免疫複合体または組成物には、裸のヒト化、キメラおよびヒト抗体、または担体、治療薬、もしくは診断薬と結合した抗体が含まれる。これらの免疫複合体は多面的療法として投与され得る。例えば、この免疫複合体または組成物を投与する前、投与すると同時、または投与した後に付加的な治療薬または診断薬を投与してもよい。
【００７８】
免疫複合体の効力は、この抗ＣＤ７４免疫複合体を１以上の他の結合分子で（すなわち、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ８０、ＣＤ１２６、Ｂ７、ＭＵＣ１、Ｉａ、テネイシン、ＨＭ１．２４、またはＨＬＡ−ＤＲ、好ましくは、成熟型ＨＬＡ−ＤＲ二量体のような特定の抗原に対するｍＡｂを、抗ＣＤ７４の１以上の免疫複合体で、または列挙したこれら抗原に対する抗体で）補足することにより増強することができる。好ましいＢ細胞関連抗原としては、ヒトＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ７４、ＣＤ８０、およびＣＤ５抗原に相当するものが含まれる。好ましいＴ細胞抗原としては、ヒトＣＤ４、ＣＤ８およびＣＤ２５（ＩＬ−２受容体）抗原に相当するものが含まれる。ＨＬＡ−ＤＲ抗原に相当するものはＢ細胞疾患およびＴ細胞疾患の双方の治療に使用できる。特に好ましいＢ細胞抗原は、ヒトＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ７４、ＣＤ８０、およびＨＬＡ−ＤＲ抗原に相当するものである。特に好ましいＴ細胞抗原は、ヒトＣＤ４、ＣＤ８およびＣＤ２５抗原に相当するものである。ＣＤ４６は、補体依存性溶解（ＣＤＣ）を遮断する癌細胞の表面上の抗原である。好ましい悪性黒色腫関連抗原は、ＭＡＲＴ−１、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２およびｇｐ１００に相当するものである。さらに、好ましい多発性骨髄腫関連抗原は、ＭＵＣ１およびＣＤ３８に相当するものである。
【００７９】
この補足的結合分子は裸のままであっても、脂質、高分子、薬物、毒素、免疫調節剤、ホルモン、酵素、および治療用放射性核種をはじめとする担体、治療薬、または診断薬と結合させてもよい。この補足的結合分子は、抗ＣＤ７４免疫複合体とともに、同時、逐次、または提案されている投与計画に従って投与すればよい。
【００８０】
さらに、本明細書では、Ｂ細胞リンパ腫およびその他の疾病または疾患における診断用途または治療用途の免疫複合体の投与を意図する。本明細書で記載する免疫複合体は、担体と結合した結合分子を含んでなる分子である。この免疫複合体は組成物を形成するために使用でき、この組成物は治療薬または診断薬をさらに含み、その診断薬または治療薬を保持し得るペプチドを含んでいてもよい。免疫複合体は結合分子の免疫反応性を保持している（すなわち、その抗体部分は、コンジュゲーション後にコンジュゲーション前とほぼ同じ、またはわずかに低下しただけのコグネイト抗原と結合する能力を有する）。免疫複合体は、好適ないずれかの第二の分子（例えば、脂質、タンパク質、炭水化物（より高次の構造を形成し得る）、またはリポソーム、ミセル、および／もしくはナノ粒子などのより高次の構造物それ自体）と結合した結合分子を含み得る。ある特定のエフェクターの送達を促進するためには、抗ＣＤ７４抗体と、より高次の構造を形成し得る１以上の分子（例えば、両親媒性脂質）とを結合させるのが望ましい場合がある。両親媒性分子はまた、水溶液中で限られた溶解度しか示さないエフェクターの送達を助けるのに望ましい場合もある。
【００８１】
多様な診断薬および治療薬が、本明細書に記載のような免疫複合体および組成物を形成するために使用できることが有利である。治療薬としては、例えば、ビンカアルカロイド、アントラサイクリン、エピドフィロトキシン、タキサン、代謝拮抗剤、アルキル化剤、抗生物質、ＣＯＸ−２阻害剤、抗有糸分裂剤、抗脈管形成剤およびアポトーシス剤、特にドキソルビシン、メトトレキサート、タキソール、ＣＰＴ−１１、カンプトテカン、およびこれらまたは他のクラスの抗癌剤に由来する他のものなどのような化学療法薬が挙げられる。免疫複合体および抗体融合タンパク質の製造のために有用なその他の癌化学療法薬としては、ナイトロジェンマスタード、スルホン酸アルキル、ニトロソ尿素、トリアゼン、葉酸類似体、ＣＯＸ−２阻害剤、ピリミジン類似体、プリン類似体、プラチナ錯体、ホルモンなどが挙げられる。好適な化学療法薬は、REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES、19th Ed.(Mack Publishing Co. 1995)およびGOODMAN AND GILMAN’S THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS, 7th Ed.(MacMillan Publishing Co. 1985)、ならびにこれらの刊行物の改訂版に記載されている。試験薬剤など、他の好適な化学療法薬も当業者に知られている。
【００８２】
さらに、ＤＴＰＡ、ＤＯＴＡ、ＴＥＴＡまたはＮＯＴＡのようなキレート剤は、本明細書に記載されるような組成物の１以上の成分と結合させることができる。あるいは、検出可能な標識（例えば、蛍光分子）を含む好適なペプチド、または細胞傷害剤（例えば、重金属または放射性核種）を、本明細書に記載されるような組成物のさらなる成分と共有結合、非共有結合、またはその他で結合させることもできる。例えば、治療上有用な免疫複合体は、光活性薬または色素を本明細書に記載されるような組成物に組み込むことにより得ることができる。蛍光色素のような蛍光組成物、および他の色素原、または可視光線に感受性のあるポルフィリンのような色素は、好適な光線を病巣に当てることにより病巣の検出および処置に使用されてきた。治療においては、これは光線照射、光線療法または光線力学療法と呼ばれている（Jori et al. (eds.), PHOTODYNAMIC THERAPY OF TUMORS AND OTHER DISEASES（Libreria Progetto 1985）; van den Bergh, Chem. Britain 22:430（1986））。さらに、光線療法を行うため、モノクローナル抗体が光活性化色素と結合させられてきた。Mew et al., J. Immunol. 130:1473(1983);前掲, Cancer Res. 45:4380 (1985); Oseroff et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83:8744 (1986);前掲, Photochem. Photobiol. 46:83 (1987); Hasan et al., Prog. Clin. Biol. Res. 288:471 (1989); Tatsuta et al., Lasers Surg. Med. 9:422 (1989); Pelegrin et al., Cancer 67:2529（1991）。内視鏡適用も意図される。検出および治療の内視鏡的方法は、引用することによりその全開示内容が本明細書の一部とされる米国特許第４，９３２，４１２号；同第５，５２５，３３８号；同第５，７１６，５９５号；同第５，７３６，１１９号；同第５，９２２，３０２号；同第６，０９６，２８９；および同第６，３８７，３５０号に記載されている。よって、本明細書では、光活性薬または色素を含んでなる抗ＣＤ７４免疫複合体組成物の治療的使用が意図され、本診断／治療法は光活性薬または色素を含んでなる抗ＣＤ７４免疫複合体組成物の診断的使用または治療的使用を含み得る。
【００８３】
また、本明細書に記載されるような抗ＣＤ７４免疫複合体組成物中の診断薬としての放射性および非放射性薬剤の使用も意図される。好適な非放射性診断薬は、磁気共鳴映像法、コンピューター断層撮影法または超音波法に好適な造影剤である。磁気造影剤としては、本明細書に記載の抗体とともに用いる場合、例えば、マンガン、鉄およびガドリニウムなどの非放射性金属を、２−ベンジル−ＤＴＰＡならびにそのモノメチルおよびシクロヘキシル類似体を含む金属−キレートの組合せと錯化されたものが挙げられる。（引用することによりその全開示内容が本明細書の一部とされる、２００１年１０月１０日出願の米国特許出願第０９／９２１，２９０号参照。）
【００８４】
さらに、抗ＣＤ７４免疫複合体組成物は、画像診断法に有用な放射性同位元素または陽電子放射体を含んでもよい。好適な放射性同位元素としては、６０〜４，０００ｋｅＶのエネルギー範囲のものが挙げられる。好適な放射性同位元素としては、１８Ｆ、５２Ｆｅ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、８６Ｙ、８９Ｚｒ、９４Ｔｃ、９４ｍＴｃ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉなどが挙げられる。（例えば、画像化目的としては、引用することによりその全開示内容が本明細書の一部とされ、１８Ｆ、６８Ｇａ、９４ｍＴｃを開示している、発明者G. L. Griffiths and W. J. McBrideの”Labeling Targwting Agents with Gallium-68”と題された米国特許出願（米国仮特許出願第６０／３４２，１０４号）参照。）
【００８５】
シュードモナス外毒素のような毒素も、本明細書に記載されるような抗ＣＤ７４免疫複合体組成物中に存在してよい。例えば、毒素は錯化してもよいし、本明細書に記載の抗ＣＤ７４抗体の抗体融合タンパク質の治療薬部分としてもよい。他の毒素としては、リシン、アブリン、リボヌクレアーゼ（ＲＮアーゼ）、ＤＮアーゼＩ、ブドウ球菌エンテロトキシン−Ａ、アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリア毒、シュードモナス外毒素、およびシュードモナス内毒素が挙げられる。（例えば、Pastan et al., Cell 47:641(1986)、およびGoldenberg, CA-A Cancer Journal for Clinicians 44:43(1994)参照。本明細書で用いるのに好適なさらなる毒素は当業者に公知であり、引用することによりその全開示内容が本明細書の一部とされる米国特許第６，０７７，４９９号に開示されている。）
【００８６】
また、サイトカインなどの免疫調節剤も、本明細書に記載されるような、投与される抗ＣＤ７４免疫複合体組成物中に存在してもよい。例えば、免疫調節剤は、結合させるか、または抗体融合タンパク質の治療薬部分とするか、または抗ＣＤ７４免疫複合体組成物の一部として投与してもよい。好適なサイトカインとしては、限定されるものではないが、以下に記載するようにインターフェロンおよびインターロイキンが挙げられる。
【００８７】
免疫複合体の作製
本明細書に記載の免疫複合体は、抗体と、脂質、炭水化物、タンパク質、またはその他の原子および分子とを連結することにより作製することができる。例えば、本明細書に記載の結合分子は本明細書に記載の１以上の担体（例えば、脂質、高分子、リポソーム、ミセル、またはナノ粒子）と結合させて免疫複合体を形成することができ、この免疫複合体は共有結合、非共有結合、またはその他のいずれかで治療薬または診断薬に組み込むことができる。さらに、本明細書に記載の結合分子のいずれかを本明細書に記載の１以上の治療薬または診断薬、または付加的な担体とさらに結合させることもできる。一般に、１つの治療薬または診断薬を各結合分子に結合させることもできるが、１を超える治療薬または診断薬を同じ結合分子に結合させることもできる。本明細書で意図される抗体融合タンパク質は２以上の抗体またはそのフラグメントを含んでなり、この融合タンパク質を含んでなる抗体の各々は本明細書に記載の１以上の担体と結合させ得る。さらに、この抗体融合タンパク質の１以上の抗体は１以上の治療薬または診断薬を結合して有していてもよい。さらにこの治療薬は同じである必要はなく、異なる治療薬であってもよい。例えば、本明細書に記載の組成物は薬物および放射性同位元素を含んでもよい。
【００８８】
例えば、ＩｇＧは１３１Ｉで放射標識し、脂質と結合させることができ、その結果、このＩｇＧ−脂質複合体はリポソームを形成することができる。このリポソームは１以上の治療薬または診断薬（例えば、ＦＵｄＲ−ｄＯのような薬物）を組み込むことができる。あるいは、担体の他、ＩｇＧを１３１Ｉ（例えば、チロシン残基において）および薬物（例えば、リシン残基のεアミノ基において）と結合させてもよく、この担体は付加的な治療薬または診断薬を組み込み得る。治療薬および診断薬は結合分子と共有結合させることができる（例えば、結合分子上の還元ジスルフィド基、炭水化物側鎖、または他のいずれかの反応性基と結合させることができる）。
【００８９】
担体、治療薬、または診断薬は、ジスルフィド結合の形成を介して還元された抗体成分のヒンジ領域に結合させることができる。あるいは、ペプチドを、Ｎ−スクシニル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）のようなヘテロ二官能性架橋剤を用いて抗体成分に結合させることができる。Yu et al., Int. J. Cancer 56 : 244(1994)。このような結合に関する一般的な技術は当技術分野で周知である。（例えば、Wong, CHEMISTRY OF PROTEIN CONJUGATION AND CROSS-LINKING (CRC Press 1991); Upeslacis et al.,"Modification of Antibody by Chemical Methods, "in MONOCLONAL ANTIBODIES: PRINCIPLES AND APPLICATIONS, Birch et al.(eds), pages 187-230（Wiley-Liss, Inc. 1995）; Price, "Production and Characterization of Synthetic Peptide-Derived Antibodies, "in MONOCLONAL ANTIBODIES: PRODUCTION, ENGINEERING AND CLINICAL APPLICATION, Ritter et al.(eds.), pages 60-84（Cambridge University Press 1995）参照。）あるいは、担体、治療薬、または診断薬は抗体のＦｃ領域の炭水化物部分を介して結合させることもできる。この炭化水素基は、チオール基に結合している同じペプチドの付加量を増大させるためにも使用できるし、あるいはこの炭化水素部分は異なるペプチドに結合させるためにも使用できる。
【００９０】
ペプチドを、抗体の炭水化物部分を介して抗体成分と結合させる方法は当業者に公知である。（例えば、Shih et al., Int. J. Cancer 41: 832(1988); Shih et al., Int. J. Cancer 46: 1101(1990);およびShih et al.,米国特許第５，０５７，３１３号参照、これらは総て、引用することによりその全開示内容が本明細書の一部とされる。）同じ化学法を用いて、１以上の抗ＣＤ７４結合分子を１以上の担体、治療薬、または診断薬と結合させることもできる。この一般法は、酸化された炭水化物部分をを有する抗体成分を、少なくとも一つの遊離アミンを有し、かつ、複数のペプチドが負荷されている担体ポリマーと反応させることを含む。この反応の結果、最初のシッフの塩基（イミン）結合が生じ、これは第二級アミンへと還元することで安定化されて最終的な複合体を形成することができる。
【００９１】
このＦｃ領域は、抗ＣＤ７４結合分子が抗体フラグメントであるならば存在しなくてもよい。しかしながら、炭水化物部分は全長抗体または抗体フラグメントの軽鎖可変領域へ導入することができる。（例えば、Leung et al., J. Immunol. 154: 5919(1995); Hansen et al.,米国特許第５，４４３，９５３号（１９９５）、Leung et al.,米国特許第６，２５４，８６８号参照、これらは総て、引用することによりその全開示内容が本明細書の一部とされる。）操作された炭水化物部分は、担体、または治療薬、または診断薬を結合させるのに使用できる。
【００９２】
担体（脂質、リポソーム、ミセル、高分子、およびナノ粒子）
リポソームおよびミセルの形成は当技術分野で公知のものである。（例えば、Wrobel et al., Biochimica et Biophysica Acta, 1235: 296 (1995); Lundberg et al., J. Pharm. Pharmacol., 51: 1099-1105 (1999); Lundberg et al., Int. J. Pharme., 205:101-108 (2000); Lundberg, J. Pharm. Sci., 83:72-75 (1994); Xu et al., Molec. Cancer Ther., 1:337-346 (2002); Torchilin et al., Proc. Nat’l. Acad. Sci., 100:6039-6044 (2003)；米国特許第５，５６５，２１５号；同第６，３７９，６９８号；および同第２００３／００８２１５４号参照。）薬物送達または画像化に有用な、高分子、シリカまたは金属からなるナノ粒子またはナノカプセルも同様に記載されている。（例えば、West et al., Applications of Nanotechnology to Biotechnology, 11:215-217 (2000)；米国特許第５，６２０，７０８号；同第５，７０２，７２７号；および同第６，５３０，９４４号参照。）
【００９３】
免疫リポソーム
抗体または結合分子とリポソームとのコンジュゲーションによる、治療薬または診断薬のための標的担体の形成はすでに記載されている。（例えば、Bendas, Biodrugs, 15:215-224 (2001); Xu et al., Molec. Cancer Ther., 1:337-346 (2002); Torchilin et al., Proc. Nat’l. Acad. Sci., 100:6039-6044 (2003); Bally, et al., J. Liposome Res., 8:299-335 (1998); Lundberg, Int. J. Pharm., 109:73-81 (1994); Lundberg, J. Pharm. Pharmacol., 49:16-21 (1997); Lundberg, Anti-cancer Drug Design, 13:453-461 (1998)参照。）また、１９９９年６月９日出願の米国特許第６，３０６，３９３号；米国特許出願第１０／３５０，０９６号；同第０９／５９０，２８４号、および同第６０／１３８，２８４号参照。これらは総て、引用することにより本明細書の一部とされる。
【００９４】
医薬上許容される賦形剤
これらの免疫複合体または組成物は、１以上の医薬上好適な賦形剤、１以上の付加的成分またはこれらのある組合せを含み得る。
【００９５】
本明細書で開示される免疫複合体または組成物は医薬上有用な組成物を調製するための公知の方法に従って調剤することができ、これにより免疫複合体または組成物は混合物中で医薬上好適な賦形剤と合わさる。滅菌リン酸緩衝生理食塩水は医薬上好適な賦形剤の一例である。他の好適な賦形剤は当業者に周知である。（例えば、Ansel et al., PHARMACEUTICAL DOSAGE FORMS AND DRUG DELIVERY SYSTEMS, 5th Edition （Lea & Febiger 1990）、およびGennaro(ed.), REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 18th Edition (Mack Publishing Company 1990)およびそれらの改訂版を参照。）
【００９６】
本明細書で開示される免疫複合体または組成物は、例えばボーラス注射または点滴による静脈内投与のために調剤できる。注射用処方物は、例えばアンプルのような単位投与形、または保存剤を加えた複数用量容器で提供することができる。この組成物は油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルジョンの形態をとってもよく、沈殿防止剤、安定剤および／または分散剤のような処方剤を含むことができる。あるいは、その活性成分は、使用前に例えば滅菌パイロジェンフリー水のような好適なビヒクルで構成するための粉末形態であってもよい。
【００９７】
さらなる製薬法を用いて、治療複合体または診断複合体または裸の抗体の作用の持続時間を制御してもよい。徐放性製剤は、免疫複合体または裸の抗体と複合体を形成する、または吸着する高分子の使用により調製できる。例えば、生分解性高分子としては、ポリ（エチレン−ｃｏ−酢酸ビニル）のマトリックスおよびステアリン酸二量体とセバシン酸の重合無水コポリマーのマトリックスが挙げられる。Sherwood et al., Bio/Technology 10: 1446（1992）。このようなマトリックスからの免疫複合体または抗体の放出速度は、免疫複合体または抗体の分子量、マトリックス内の免疫複合体、抗体の量、および分散粒子の大きさによって異なる。Saltzman et al., Biophys. J. 55: 163（1989）; Sherwood et al., 前掲。他の固体投与形は、Ansel et al., PHARMACEUTICAL DOSAGE FORMS AND DRUG DELIVERY SYSTEMS, 5th Edition（Lea & Febiger 1990）、およびGennaro（ed.）、REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 18th Edition（Mack Publishing Company 1990）、およびそれらの改訂版に記載されている。
【００９８】
また、これらの免疫複合体または組成物は、哺乳類に皮下投与または他の非経口経路でも投与できる。さらに、投与は点滴でも単回または複数回のボーラス注射によってもよい。一般に、ヒトにおいては、投与される免疫複合体、融合タンパク質または裸の抗体の用量は、患者の年齢、体重、身長、性別、全身の健康状態、および過去の病歴といった因子によって異なる。通常、免疫複合体または免疫複合体を含む組成物は、単回の静脈点滴として約１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量でレシピエントに与えるのが望ましいが、状況によってはより低い、またはより高い用量を投与してもよい。この用量は必要に応じで繰り返してもよく、例えば、１週間に１回の投与を４〜１０週間、好ましくは１週間に１回の投与を８週間、そしてより好ましくは、１週間に１回の投与を４週間繰り返してもよい。また、１週間おきの投与を数ヶ月といったように、低い頻度で投与してもよい。用量および日程を適宜調節して、種々の非経口経路により投与してよい。
【００９９】
治療目的では、治療上有効な量の免疫複合体、または免疫複合体を含む組成物を哺乳類に投与する。ヒト以外の動物被検体も意図されるが、本明細書に記載の治療法および診断法に好適な被検体は通常ヒトである。抗体製剤は、投与される量が生理学上有意であれば、「治療上有効量」で投与されると言われる。薬剤は、その存在が受容哺乳類の生理に検出可能な変化をもたらす場合に、生理学上有意である。特に、抗体製剤は、その存在が抗腫瘍応答を誘発する、または自己免疫疾患病態の徴候および症状を軽減する場合に生理学上有意である。生理学上有意な作用はまた、受容哺乳類における体液性および／または細胞性免疫応答の誘発であってもよい。
【０１００】
治療法
本明細書では、ＣＤ７４発現悪性疾患の治療のための基本組成物としての免疫複合体、または免疫複合体を含む組成物の使用を意図し、疾病または疾患は、免疫調節不全性疾患、自己免疫疾患、臓器移植拒絶、および移植片対宿主病からなる群から選択される。ＣＤ７４発現悪性疾患は、固形腫瘍、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、Ｂ細胞悪性疾患および／またはＴ細胞悪性疾患からなる群から選択される。固形腫瘍は黒色腫、癌腫および肉腫からなる群から選択され、癌腫は腎臓癌、肺癌、腸癌、胃癌および黒色腫からなる群から選択される。Ｂ細胞悪性疾患は緩徐進行性Ｂ細胞リンパ腫、急速進行性Ｂ細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病、急性リンパ性白血病、および多発性骨髄腫、Ｂ細胞性疾患およびその他の疾患からなる群から選択される。特に、本明細書に記載の組成物は、種々の自己免疫疾患ならびに緩徐進行性Ｂ細胞リンパ腫、急速進行性Ｂ細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病、急性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、およびワルデンストロームマクログロブリン血症の治療に有用である。例えば、ヒト化抗ＣＤ７４抗体成分および免疫複合体は、緩徐進行性および急速進行性非ホジキンリンパ腫の双方の治療に使用できる。
【０１０１】
より具体的には、Ｂ細胞悪性疾患の治療方法は、Ｂ細胞関連の悪性疾患を有する被験体に、医薬上許容される担体、治療薬、および抗ＣＤ７４結合分子を含む免疫複合体（例えば、ヒト化、キメラ、またはヒト抗ＣＤ７４  ｍＡｂまたはそのフラグメントまたは抗体融合タンパク質）を含んでなる治療用組成物を投与することを含み、このＢ細胞悪性疾患はリンパ腫または白血病である。より具体的には、Ｂ細胞悪性疾患は緩徐進行性Ｂ細胞リンパ腫、急速進行性Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病、または急性リンパ性白血病である。この免疫複合体、または免疫複合体を含んでなる組成物は２０〜２０００ｍｇの用量で静脈内または筋肉内投与される。本方法はさらに、Ｂ細胞悪性疾患の治療に用いられる１以上の付加的な治療薬または診断薬の投与前、投与と同時、または投与後に免疫複合体または組成物を投与することを含む。この付加的薬剤は、治療薬または診断薬をはじめ、本明細書に記載されるような付加的免疫複合体を含み得る。治療薬は裸の抗体、免疫調節剤、ホルモン、細胞傷害剤、酵素、および／または少なくとも１つの免疫調節剤、放射性標識、ホルモン、酵素または細胞傷害剤と結合した抗体、またはそれらの組合せを含み得る。免疫調節剤は好ましくはサイトカインであり、細胞傷害剤は好ましくは薬物または毒素である。裸の抗体として、または補足的免疫複合体として組み合わせて投与される抗体は、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ８０、ＣＤ１２６、Ｂ７、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、Ｉａ、ＨＭ１．２４、テネイシン、およびＨＬＡ−ＤＲ、（好ましくは、成熟型ＨＬＡ−ＤＲ二量体）、ＶＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＣＥＡ、ＣＳＡｐ、ＩＬＧＦ、胎盤増殖因子、炭酸脱水酵素ＩＸ、ＩＬ−６またはその組合せと反応性があるものが好ましい。
【０１０２】
また、本明細書では、リンパ腫または白血病以外のＣＤ７４抗原陽性悪性疾患を有する被験体に、（１）抗ＣＤ７４結合分子と担体の免疫複合体；（２）エフェクター；および（３）医薬上許容される賦形剤を含む医薬組成物を投与することを含む悪性疾患の治療も意図される。この免疫複合体または組成物は２０〜５０００ｍｇの用量で静脈内または筋肉内に投与される。さらに、この免疫複合体は、少なくとも１つの付加的な治療薬または診断薬の投与前、投与と同時、または投与後に投与してよい。上記および本明細書を通じて記載されるような治療薬としては、免疫調節剤、ホルモン、細胞傷害剤、または結合分子（裸のままか、または少なくとも１つの免疫調節剤、放射性標識、酵素、ホルモン、細胞傷害剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはそれらの組合せと結合しているもの、ここで、免疫調節剤は好ましくはサイトカインであり、細胞傷害剤は好ましくは薬物または毒素である）を含み得る。治療薬または診断薬は本明細書で開示された組成物または免疫複合体を含み得る。抗体を、Ｂ細胞悪性疾患ではない悪性疾患を処置するために治療用組成物および／または診断用組成物と組み合わせて投与する場合、それは、処置する悪性疾患を含む細胞によって発現されるＣＤ７４以外の腫瘍マーカーと反応性があるべきであり、この抗体は医薬上許容されるビヒクル中に処方すべきである。悪性黒色腫関連抗原のために投与できる抗体の例は、ＭＡＲＴ−１、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２およびｇｐ１００と反応性のあるものである。さらに、多発性骨髄腫関連抗原に対する好ましい抗体は、ＭＵＣ１およびＣＤ３８と反応性のあるものである。
【０１０３】
処置用組成物は少なくとも１つの免疫複合体を含み、これは通常、ヒト化、キメラまたはヒトモノクローナル抗ＣＤ７４抗体を単独、または他のヒト化、キメラ、またはヒト抗体などの他の抗体と組み合わせて含む。特に、免疫複合体が完全ヒト抗体を含む併用療法も意図される。
【０１０４】
これらの組成物はまた、エフェクターとして免疫調節剤を含んでもよい。本明細書において「免疫調節剤」としては、サイトカイン、幹細胞増殖因子、リンホトキシン（腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）など）、および造血因子［インターロイキン（例えば、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、およびＩＬ−２１）など］、コロニー刺激因子（例えば、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ））、インターフェロン（例えば、インターフェロン−α、−βおよび−γ）、「Ｓ１因子」と呼ばれる幹細胞増殖因子、エリスロポエチン、トロンボポエチンまたはそれらの組合せが挙げられる。好適な免疫調節剤部分の例としては、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、およびそれらの組合せ、ならびにインターフェロン−、ＴＮＦ−などが挙げられる。免疫調節剤は組成物中に存在してもよいし、あるいはまた、免疫調節剤は治療用組成物および／または診断用組成物の投与前、投与と同時、または投与後に投与することもできる。上述のように、抗ＣＤ７４抗体をまた免疫調節剤に結合させてもよい。免疫調節剤はまた、異なる抗原と結合する１以上の抗体からなるハイブリッド抗体と結合させてもよい。
【０１０５】
本明細書で意図される多面的療法はさらに、付加的結合分子（裸の抗体、融合タンパク質、または免疫複合体の形態の、例えば、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２１、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ８０、抗ＣＤ２３、抗ＣＤ４６またはＨＬＡ−ＤＲ、好ましくは、成熟型ＨＬＡ−ＤＲ二量体）で補足した、抗ＣＤ７４結合分子を含む免疫複合体を用いた免疫療法を含む。さらに、本明細書に記載されるようなミセル、リポソーム、またはナノ粒子は、抗ＣＤ７４結合分子に加えて結合分子を含み得る。有用な抗体は、上記で示した抗原決定基上の少なくとも１つのエピトープを認識するポリクローナル、モノクローナル、キメラ、ヒトまたはヒト化抗体であり得る。例えば、抗ＣＤ１９および抗ＣＤ２２抗体は当業者に公知である。（例えば、引用することによりその全開示内容が本明細書の一部とされるGhetie et al., Cancer Res. 48:2610 (1988); Hekman et al., Cancer Immunol. Immunother. 32:364 (1991); Longo, Curr. Opin. Oncol. 8:353 (1996)および米国特許第５，７９８，５５４号および同第６，１８７，２８７号参照。）
【０１０６】
多面的療法の別の形態では、被験体は標準的な癌化学療法と組み合わせて抗ＣＤ７４免疫複合体を受容する。例えば、「ＣＶＢ」（１．５ｇ／ｍ２シクロホスファミド、２００〜４００ｍｇ／ｍ２エトポシド、および１５０〜２００ｍｇ／ｍ２カルムスチン）が非ホジキンリンパ腫の処置に用いられる投与計画である。Patti et al., Eur. J. Haematol. 51:18 (1993)。他の好適な併用化学療法計画も当業者に周知である。（例えば、Freedman et al.,”Non-Hodgkin’s Lymphomas,” in CANCER MEDICINE, VOLUME 2, 3rd Edition, Holland et al. (eds. ), pages 2028-2068 (Lea & Febiger 1993)参照。）一例として、中悪性度の非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の治療のための第一世代化学療法計画としては、Ｃ−ＭＯＰＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、プロカルバジンおよびプレドニゾン）およびＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾン）が含まれる。有用な第二世代化学療法計画は、ｍ−ＢＡＣＯＤ（メトトレキサート、ブレオマイシン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、デキサメタゾンおよびロイコボリン）であり、好適な第三世代計画はＭＡＣＯＰ−Ｂ（メトトレキサート、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン、ブレオマイシンおよびロイコボリン）である。さらなる有用な薬物としては、酪酸フェニルおよびブリオスタチン−１が挙げられる。好ましい多面的療法では、化学療法薬とサイトカインの双方を、抗体、免疫複合体または融合タンパク質とともに投与する。これらのサイトカイン、化学療法薬および抗体または免疫複合体はいずれの順序で投与してもよく、または一緒に投与してもよい。
【０１０７】
好ましい実施態様では、ＮＨＬは、連続４週間毎週または隔週、２００〜４００ｍｇ／ｍ２の用量でヒト化抗ＣＤ７４免疫複合体（例えば、治療エマルジョン）の１週間に１回として４回の点滴（２〜８時間にわたる静注）によって処置し、必要に応じて次月または次年も繰り返す。また、ＮＨＬは半月に１回として４回の上記のような点滴で処置し、ただし、抗ＣＤ７４免疫複合体の点滴前、点滴と同時、または点滴後のいずれかに１時間の静脈点滴として与える同日、３６０ｍｇ／ｍ２の用量でのエプラツズムＡｂ（抗ＣＤ２２ヒト化抗体）と組み合わせることも好ましい。さらに、上記のような抗ＣＤ７４免疫複合体の１週間に１回として４回の点滴を、イットリウム−９０（９０Ｙの用量は、数週間または数ヶ月に１回以上の注入として５〜３５ｍＣｉ／ｍ２の間）などの治療用同位元素で放射性標識したＣＤ２２  ｍＡｂの１回以上の注入と組み合わせて投与するのも好ましい。
【０１０８】
さらに、本明細書で意図される治療用組成物は、異なる非遮断ＣＤ７４エピトープに対するモノクローナル抗ＣＤ７４免疫複合体の混合物またはハイブリッド分子を含み得る。よって、本明細書では、少なくとも２つのＣＤ７４エピトープと結合するモノクローナル抗ＣＤ７４免疫複合体の混合物を含んでなる治療用組成物が意図される。さらに、本明細書に記載の免疫複合体は、ＣＤＲ配列が異なる抗ＣＤ７４抗体の混合物を含み得る。
【０１０９】
上述のように、これらの免疫複合体は、Ｂ細胞リンパ腫および白血病、およびその他のＢ細胞性の疾病または疾患、ならびに罹患または関連している悪性細胞がＣＤ７４と反応性のあるその他の悪性疾患の処置に使用できる。例えば、抗ＣＤ７４免疫複合体は、免疫調節不全性疾患および関連の自己免疫疾患［免疫介在血小板減少症（急性特発性血小板減少性紫斑病および慢性特発性血小板減少性紫斑病など）、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、多発性硬化症、シドナム舞踏病、重症筋無力症、全身性紅斑性狼瘡、狼瘡腎炎、リウマチ熱、多腺性症候群、水疱性類天疱瘡、糖尿病、ヘノッホ−シェンライン紫斑病、溶連菌感染後腎炎、結節性紅斑、高安動脈炎、アジソン病、慢性関節リウマチ、サルコイドーシス、潰瘍性大腸炎、多形性紅斑、ＩｇＡ腎症、結節性多発性動脈炎、強直性脊椎炎、グッドパスチャー症候群、閉塞性血栓血管炎、原発性胆汁性肝硬変、橋本甲状腺炎、甲状腺中毒症、硬皮症、慢性活動性肝炎、多発性筋炎／皮膚筋炎、多発性軟骨炎、尋常性天疱瘡、ウェゲナー肉芽腫、膜性腎症、筋萎縮性側索硬化症、脊髄ろう、巨細胞性動脈炎／多発性筋痛、悪性貧血、急速進行性糸球体腎炎および繊維性肺胞炎などのクラスIII自己免疫疾患を含む］を治療するのに使用できる。
【０１１０】
特に、ヒト化、キメラまたはヒト抗ＣＤ７４  ｍＡｂまたはそのフラグメントまたはその抗体融合タンパク質を含む免疫複合体は、これらの自己免疫疾患の１以上を有する被験体に投与される。本明細書で開示される抗ＣＤ７４免疫複合体は、引用することによりその全開示内容が本明細書の一部とされる、”Immunotherapy of Autoimmune Disorders using Antibodies that Target B-Cells,”と題された、２０００年６月９日出願の米国特許出願第０９／５９０，２８４号に開示されている自己免疫疾患の治療方法に特に有用である。好ましくは、この抗ＣＤ７４免疫複合体は２０〜５０００ｍｇの用量で静脈内または筋肉内に投与される。さらに、抗ＣＤ７４免疫複合体は少なくとも１つの治療薬または診断薬の投与前、投与中、または投与後に投与される。上記および本明細書を通じて記載されるような治療薬としては、抗体、免疫調節剤、ホルモン、酵素、細胞傷害剤、少なくとも１つの免疫調節剤、放射性標識、ホルモン、酵素もしくは細胞傷害剤と結合した抗体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはそれらの組合せが挙げられ、ここで、免疫調節剤はサイトカインであり、細胞傷害剤は好ましくは薬物または毒素である。治療薬は本明細書に記載されるような免疫複合体を含み得る。裸の抗体として、または補足的免疫複合体として組み合わせて投与し得る抗体としては、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ８０、ＣＤ１２６、Ｂ７、ＭＵＣ１、Ｉａ、ＨＭ１．２４、テネイシン、および成熟型ＨＬＡ−ＤＲ、好ましくは、成熟型ＨＬＡ−ＤＲ二量体と反応性のある抗体を医薬上許容されるビヒクル中に処方したものが挙げられる。
【０１１１】
診断法
リンパ腫、白血病、骨髄腫、その他のＣＤ−７４発現悪性疾患、免疫調節不全性疾患、自己免疫疾患およびそれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つの疾病を診断する、またはその疾病を有することが疑われる被験体において疾病を診断する方法も提供され、その方法は、（１）担体と結合した少なくとも１つの抗ＣＤ７４結合分子を含む免疫複合体、（２）診断薬、および（３）医薬上許容される賦形剤を含む診断上有効量の組成物をその被験体に投与することを含む。この診断薬は、組成物の１以上の成分と共有結合、非共有結合、またはその他で結合させてよい。有用な診断薬は放射性同位元素（その放射性同位元素の光子はラジオシンチグラフィーまたはＰＥＴにより検出される）、またはＭＲＩにより検出できる金属、またはリポソームまたはガス充填リポソーム（このリポソームは超音波走査装置により検出できる）を含んでもよい。この免疫複合体はそれ自体リポソームを形成してもよく、かつ／または診断薬は第二のリポソームを含んでなってもよい。
【０１１２】
この免疫複合体の標的細胞へのインターナリゼーションの後に、引用することにより本明細書の一部とされるPirker et al., J. Clin. Invest., 76:1261 (1985)の手順に本質的に従い、蛍光標識を行うことができる。
【０１１３】
これに関連して、骨癌をスクリーニング／診断するための方法がJuweid et al., 1999に記載されており、本明細書で開示される免疫複合体から利益を得ることができよう。よって、９９ｍＴｃ標識ヒト化またはキメラ抗ＣＤ７４  ｍＡｂ免疫複合体を含んでなる方法が意図される。
【実施例】
【０１１４】
実施例１  ＦＵｄＲ−ｄＯを担持する抗ＣＤ７４免疫リポソームの作製
トリオレイン（ＴＯ）、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、コレステロール（ＣＨＯＬ）、８−ヒドロキシ−１，３，６−ピレントリスルホネート（ＨＰＴＳ）、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ソルビタン８０）、メトキシポリエチレングリコール（平均分子量２０００）、塩化オレオイル、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）およびＤＬ−ジチオトレイトール（ＤＴＴ）はSigma Chemical Co. (St. Louis, MO)から入手した。ポリ（エチレングリコール）−マレイミド−Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミジルエステル（ＭＡＬ−ＰＥＧ２０００−ＮＨＳ）はShearwater Polymers Europe (Enschede, The etherlands)から購入した。［３Ｈ］コレステリルオレオイルエーテル（ＣＯＥ）および［１４Ｃ］ジパルミトイルホスファチジルコリンはAmersham International plc (Amersham, UK)から入手した。ＰＥＧ鎖の遠位端にマレイミド基を有するＤＰＰＥのＰＥＧ２０００誘導体（ＤＰＰＥ−ＰＥＧ−ＭＡＬ）は、クロロホルム中、４０℃で６時間、２５μｍｏｌのＮＨＳ−ＰＥＧ−ＭＡＬを２３μｍｏｌのＤＰＰＥおよび５０μｍｏｌのトリエチルアミンと反応させることにより合成した。この生成物を分取シリカゲルＴＬＣにより精製した。３’，５’−Ｏ−ジオレオイル−ＦＵｄＲ（ＦＵｄＲ−ｄＯ）は、ジメチルアセトアミド中、１０μｍｏｌのＦＵｄＲに２０μｍｏｌの塩化オレオイルおよび５０μｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを加えることにより合成した。この混合物を４０℃で一晩インキュベートした後、この混合物に水を加え、ＦＵｄＲの脂肪酸誘導体をクロロホルムで抽出した。プロドラッグは、溶出剤としてクロロホルム／メタノール（９５：５）を用いる分取シリカゲルＴＬＣにより精製した。
【０１１５】
American Type Culture Collection (Rockville, MD)から入手したバーキットリンパ腫細胞系統ＲａｊｉおよびＲａｍｏｓ、Ｊｕｒｋａｔ急性リンパ芽球性白血病Ｔ細胞ならびにＨＬ−６０骨髄単球性白血病細胞を、１０％熱不活化ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ  １６４０培地中で増殖させた。細胞は３７℃で維持し、空気中５％のＣＯ２を通じた。
【０１１６】
抗ＣＤ７４Ａｂ、ＬＬ１はImmunomedics, Inc. (Morris Plains, NJ)から入手した。これを定量のためフルオレセイン（ＦＩＴＣ）で標識した。
【０１１７】
ミクロン以下の脂質エマルジョンを他所に詳細に記載されているように作製した。（Lundberg, J. Pharm. Sci., 83:72-75 (1994); Lundberg et al., Int. J. Pharm., 134:119-127 (1996)参照。）薬物を付加したエマルジョンの組成は、ＴＯ、ＥＰＣ、ポリソルベート８０、ＤＰＰＥ−ＰＥＧ２０００−ＭＡＬ、ＦＵｄＲ−ｄＯ  ２：２：０．８：０．６：０．３（ｗ／ｗ）であった。これらの成分を原液からバイアルへ分注し、減圧下で溶媒を蒸発させて乾固させた。リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）を加え、混合物を５０℃に加熱し、３０秒間ボルテックスで混合し、２分間Ｂｒａｎｓｏｎプローブ音波装置で音波処理した。
【０１１８】
薬物を付加したリポソームはＥＰＣ、ＤＰＰＥ−ＰＥＧ２０００−ＭＡＬ、ＦＵｄＲ−ｄＯ  １：０．２：０．１（ｗ／ｗ）からなるものとした。ＨＰＴＳ封入リポソームを含む実験では、組成はＥＰＣ、ＣＨＯＬ、ＤＰＰＥ−ＰＥＧ２０００−ＭＡＬ  ２：０．５：０．４であった。必要な場合には、この脂質薬物担体を微量の［３Ｈ］ＣＯＥで標識した。乾燥させた脂質フィルムを２５ｍＭのＨＥＰＥＳおよび１４０ｍＭのＮａＣｌバッファー（ｐＨ７．４）（適当であれば３５ｍＭのＨＰＴＳを含有）中で水和し、凍結−解凍を５回行った後、２分間Ｂｒａｎｓｏｎプローブ音波装置で音波処理した。リン脂質濃度は［１４Ｃ］ＤＰＰＣにより定量した。
【０１１９】
ＬＬ１と脂質薬物担体とのカップリングは、担体表面の遠位ＰＥＧ末端のマレイミド（ＭＡＬ）基とＡｂ上の遊離チオール基との間の反応により行った。カップリング反応の前にＬＬ１を、０．２Ｍのトリスバッファー（ｐＨ６．５）中で４℃にて２時間、５０ｍＭのジチオトレイトールを用いて還元した。この還元されたＡｂを、５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝０．９％生理食塩水（ｐＨ５．３）で平衡化したセファデックスＧ−２５スピンカラムを用いることにより、過剰量のジチオトレイトールから分離した。コンジュゲーションは、アルゴン下、室温にて１６時間、ＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）中で行った。過剰量のマレイミド基を２ｍＭの２−メルカプトエタノールで３０分間ブロッキングし、その後、セファロースＣＬ−４Ｂカラムで過剰量のＡｂと２−メルカプトエタノールを除去した。免疫リポソームをカラムのボイド容量付近で回収し、０．２２μｍ無菌フィルターを通し、４℃で保存した。カップリング効率はフルオレセイン標識ＬＬ１の使用により評価した。
【０１２０】
実施例２  抗ＣＤ７４免疫リポソームの細胞内取り込みと代謝
薬物担体の細胞内取り込みを調べるため、交換不可マーカー［３Ｈ］ＣＯＥを含有する脂質薬物担体を用いた。インキュベーションが完了した後、細胞を冷ＰＢＳで３回十分に洗浄し、液体シンチレーション計数により放射活性を測定した。低ｐＨコンパートメントへのリポソームのインターナリゼーションを調べるため、ｐＨ感受性プローブＨＰＴＳを用いた。ＨＰＴＳは、低ｐＨ値では４０３極大のピークと高ｐＨ値では４５４極大のピークの２つの主要な蛍光励起極大を示すが、蛍光は４１３ｎｍでｐＨ依存的となる（等吸収点）。（Straubinger, et al., Biochemistry, 29:4929-4939 (1990)参照。）ＨＰＴＳ−リポソームの細胞内酸性コンパートメントへのインターナリゼーションを調べるため、４５４ｎｍと４１３ｎｍの間の蛍光の比を用いることができる。ＨＰＴＳ−リポソームをＨＥＰＥＳバッファー中で８０μＭリン脂質まで希釈し、３７℃で培養皿（４×１０６細胞）に加えた。６時間のインキュベーションの後、細胞を冷ＰＢＳで２回洗浄し、２０℃、攪拌キュベット内で蛍光を測定した。２つの励起波長（４１３および４５４ｎｍ）において５１０ｎｍ発光でピークの高さを測定し、適当なバックグラウンド蛍光に対して補正した。
【０１２１】
図５は、結合ＬＬ１を含む脂質薬物担体および結合ＬＬ１を含まない脂質薬物担体の濃度依存的な細胞会合を示す。結合ＬＬ１を含む、および含まない脂質薬物担体の会合は濃度依存的である。図５は、バーキットリンパ腫細胞Ｒａｊｉが、非標的調製物に比べてＬＬ１脂質薬物担体複合体と旺盛な相互作用を示すことを示している。非転移性化合物［３Ｈ］ＣＯＥで標識されたＬＬ１エマルジョン複合体は、Ｒａｊｉ培養細胞による非コンジュゲートエマルジョンよりも約５０倍速く取り込まれた。この免疫エマルジョンの迅速かつ旺盛な取り込みは、標準的なインキュベーション条件下で、加えた調製物の約３０％が２４時間後に細胞と会合した事実により示される。これに対して、結合Ａｂを含まないエマルジョンの会合は約０．６％であった。Ｒａｍｏｓ細胞の取り込み値は著しく低いが、それでも非複合エマルジョンの場合よりもＬＬ１複合体の場合の方が約３０倍高い。標的担体の時間依存的会合は２４時間までは明瞭に直線であるが、インキュベーション時間が長くなると、曲線が傾いた。
【０１２２】
実施例３  免疫複合体の特異性
調製物の細胞特異性をＨＬ−６０細胞とＪｕｒｋａｔ細胞について試験した。図５の下のパネル参照。２４時間後に得られた細胞の会合は両細胞種の１〜２％の間であり、コンジュゲートとプレーンエマルジョンとの間に明らかな違いはなかった。この程度の細胞会合は明らかに非特異的な取り込みを表す。相互作用の特異性は、エマルジョンＥＰＣ当たりのＬＬ１の量に対する、［３Ｈ］ＣＯＥ標識ＬＬ１エマルジョンの細胞会合を測定することによりさらに調べた。図６参照。これらの実験は、ＬＬ１エマルジョンの会合がＬＬ１の濃度に依存していたことを示した。また、免疫エマルジョンと細胞との相互作用の特異性を置換実験により調べた。図７は、遊離のＬＬ１がＬＬ１エマルジョン複合体と効果的に競合し、高濃度では、細胞会合は実際になくなる。これらの発見は、ＬＬ１が脂質薬物担体と結合した後もその免疫反応性を保持することを強く示唆する。
【０１２３】
実施例４  ＨＰＴＳ含有免疫リポソームのエンドサイトーシス
ＬＬ１リポソーム複合体の細胞内の運命を、ｐＨ感受性プローブＨＰＴＳの使用によって調べた。ｐＨ変化に伴うプローブのスペクトルシフトにより、それは封入された色素の取り込みおよび運命の有用なマーカーとなる。図８は、ＨＰＴＳ付加ＬＬ１リポソームの濃度依存的な細胞会合を示す。ＬＬ１リポソームの低ｐＨコンパートメントへのインターナリゼーションは、蛍光比λｅｘ４５４／４１３によって示される。ｐＨ値６．５に相当する０．６に近い値が得られた。この値は他の筆者がＨＰＴＳ免疫リポソームを用いて得た値に近い。Kirpotin, et al., Biochemistry 36 (1997) 66-75; Lopes de Menezes,et al., J. Liposome Res. 9 (1999) 199-228参照。リガンドを含まないＨＰＴＳリポソームでは０．８に近い値が得られたが、これはｐＨ値約７．０に相当する。Lundberg, et al., Int. J. Pharm. 205 (2000) 101-108参照。よって、ＬＬ１薬物担体複合体はリソソームに送達され、リソソームによって代謝される可能性が極めて高いと思われる。
【０１２４】
実施例５  細胞傷害性アッセイ
結合ＬＬ１を含む、また、含まない遊離型ＦＵｄＲおよびＦＵｄＲ−ｄＯ付加エマルジョンおよびリポソームのin vitro細胞傷害性の比較を、テトラゾリウム色素ＭＴＴを用いた増殖アッセイによりＲａｊｉヒトＢ細胞リンパ腫系統にて行った。（Mosmann, J. Immun. Meth., 65:55-63(1983)参照。）はじめに４×１０５細胞を２４穴プレートにプレーティングし、薬物を含有する調製物とともに培養した。対照実験は、遊離ＬＬ１と薬物フリーエマルジョンおよびリポソームを含んだ。細胞を、湿度９５％、５％ＣＯ２の雰囲気下、３７℃で２４時間培養した。２４時間時点で細胞を２回洗浄した後、新しい培地に移し、さらに４８時間培養した。培養が終了したところで、テトラゾリウム色素を加え、生じた還元生成物を遠心分離し、ＥｔＯＨ：ＤＭＳＯ１：１に溶解し、５７０ｎｍで読みとった。
【０１２５】
Ｒａｊｉリンパ腫細胞にて、ＬＬ１コンジュゲートエマルジョンおよびリポソームでのＦＵｄＲ−ｄＯの細胞傷害性の活性を試験し、非コンジュゲート薬物担体の活性と比較した。図９参照。遊離ＦＵｄＲ（ＰＢＳ中）の結果も記録した。この細胞を種々の調製物とともに２４時間培養した後、新しい培地でさらに４８時間培養した。用量応答曲線から、ＦＵｄＲ−ｄＯがリポソームの場合よりもエマルジョンでいくらか効果が大きいことが分かる。しかしながら、ＬＬ１エマルジョンとＬＬ１リポソームの双方で、投与したＦＵｄＲ−ｄＯの活性はＦＵｄＲの場合よりも優っていた。ＦＵｄＲ−ｄＯ付加ＬＬ１エマルジョン、ＬＬ１リポソーム、エマルジョンおよびリポソームで得られたＩＣ７０値はそれぞれ０．４５、１．２５、５．３および７．３μＭであった。対応するＦＵｄＲの値は４．３５μＭと算出された。ＬＬ１エマルジョン、ＬＬ１リポソームおよびＦｕｄＲのＩＣ５０値はそれぞれ２．５、５．３および７．０μＭであった（プレーンエマルジョンおよびリポソームのＦＵｄＲ−ｄＯはこのレベルに達しなかった）。
【０１２６】
本研究に用いたプロドラッグＦＵｄＲ−ｄＯは、脂質薬物担体での投与に有利ないくつかの特徴を示す。それは両親媒性で、それぞれ脂質エマルジョンおよびリポソームリン脂質単層と二重層に位置する。このことはこの薬物担体調製物を極めて便宜なものとし、すなわち、これらの成分はまさに一緒に混合され、音波処理される。大規模生産により適した別法としては、高圧ホモジナイゼーションの使用であろう。
【０１２７】
プロドラッグの標的細胞への部位特異的送達のための必要条件は、薬物担体中でのプロドラッグの安定した補足である。担体から細胞へのＦＵｄＲ−ｄＯの非特異的な移行は実際には測定されなかったが、ＬＬ１コンジュゲート調製物の細胞傷害活性がはるかに高いことは、薬物の細胞への非特異的な移行が比較的低いことを示唆する。このようなある程度の表面移行はおそらく、Koning et al., Biochim. Biophys. Acta 1420 (1999) 153-167の研究による知見を裏付けるものであろう。彼らは、インターナリゼーションを伴わないジパルミトイル−ＦＵｄＲ免疫リポソームが、抗体を含まないリポソームよりも効率的に標的細胞へプロドラッグを送達できることを見出した。
【０１２８】
プロドラッグの概念は、標的細胞に曝された際に活性化される薬理学上不活性な化合物を含む。この点で、ＦＵｄＲ−ｄＯは良好なプロドラッグの基準を満たし得る。ＦＵｄＲ脂肪酸エステルは細胞の、明らかにリソソームにおいて速やかに加水分解されることが示されている。同書参照。親薬物ＦＵｄＲの効率的な細胞内遊離も、ＦＵｄＲ−ｄＯの高い細胞傷害性効力により間接的に裏付けられる。
【０１２９】
このin vitro研究は、ターゲッティングリガンドとしてのＬＬ１を含む脂質薬物担体の使用による抗癌薬物の部位特異的送達のための可能性を示している。また、いくつかの最近の研究は、脂質薬物担体は、結合リガンドを伴わなくとも、in vivoにおいて親油性および両親媒性薬物用の投与ビヒクルとしての利点を与え得る。Constantinides et al., Pharm. Res. 17 (2000) 175-182; Perkins et al., Int. J. Pharm. 200 (2000) 27-39; Bom et al., J. Controlled Release 74 (2001) 325-333;およびMaranhao et al., Cancer. Chemother. Pharmacol. 49 (2002) 487-498参照。
【０１３０】
このような好ましい効果の説明は、薬物の半減期が延び、耐性が向上するので、高用量が投与できることであると思われる。ヌードマウスを用いた最近のin vivo研究では、Ｒａｍｏｓ異種移殖片に対するＬＬ１の特異的Ａｂ局在を示した。Shih et al., Cancer Immunol. Immunother. 49 (2000) 208-216参照。本研究では、親薬物に比べて標的化プロドラッグの細胞傷害性の活性の向上を示す。免疫リポソームは一般に、非標的化薬物に比べて低いか、同等の活性を示すが、in vivo実験ではやはり効力の向上を示す。Moase et al., Biochim. Biophys. Acta 1510 (2001) 43-55; Lopes de Menezes et al., Cancer Res. 58 (1998) 3320-3330参照。
【０１３１】
本明細書に挙げられている総ての特許およびその他の参照文献は、本発明が属する分野の熟練者の水準の指標となり、表や図面を含めその全開示内容が、各参照文献が個々に引用することによりその全開示内容が本明細書の一部とされる場合と同程度に、引用することにより本明細書の一部とされる。
【０１３２】
当業者ならば、本発明が、記載の目的および利点、ならびにそれらに内在するものを得るために十分適合されることが容易に分かるであろう。本明細書において現在のところ好ましい実施態様の代表例として記載されている方法、変数および組成物は例であって、本発明の範囲を限定するものではない。そこにおける変化およびその他の使用は当業者には明らかであり、それらは本発明の範囲内にある。
【０１３３】
本発明の範囲および精神から逸脱することなく、本明細書に開示される発明に様々な置換および改変を行えることは当業者には容易に明らかとなろう。例えば、種々の異なる結合対、ならびに種々の異なる治療薬および診断薬を使用できる。よって、このようなさらなる実施態様は、本発明の範囲内にある。
【０１３４】
本明細書に適宜例として記載される発明は、本明細書で具体的に開示されていないいずれの要素および制限もなく実施可能である。よって、例えば、本明細書の各例では、「〜を含んでなる」、「本質的に〜からなる」、および「〜からなる」という用語はいずれも、他の２つの用語に置き換えることができる。用いられている用語および表現は説明のための用語として用いられているのであって、限定のための用語として用いられているのではなく、示され、記載されている特徴またはその一部と等価なものを排除するこのような用語および表現の使用を意図するものではないが、本発明の範囲内で種々の改変が可能であることが認識される。よって、本発明は好ましい実施態様および任意の特徴によって具体的に開示されているが、本明細書に開示される概念の改変および変更は当業者が細分類可能であり、このような改変および変更は本発明の範囲内にあるものとする。
【０１３５】
さらに、本発明の特徴または態様はＭａｒｋｕｓｈ記法または代用の他の記法の用語で記載されているが、当業者ならば、本発明が、Ｍａｒｋｕｓｈ基またはその他の基の個々のメンバーまたはメンバーの亜群に関してもそれによって記載されていることが分かるであろう。
【０１３６】
また、特に断りのない限り、種々の数値は具体例のために示されているが、さらなる具体例は、ある範囲の終点としての２つの異なる値をとることにより記載される。このような範囲もまた、記載の発明の範囲内にある。
【図面の簡単な説明】
【０１３７】
【図１】ネズミＬＬ１重鎖および軽鎖可変領域のＤＮＡ配列およびアミノ酸配列。図１Ａは、ＬＬ１ＶＨのＤＮＡおよびアミノ酸配列。図１Ｂは、ＬＬ１ＶｋのＤＮＡ配列およびアミノ酸配列を示す。対応するＤＮＡ配列によりコードされるアミノ酸配列は、ヌクレオチド配列の下に一文字コードで示されている。ヌクレオチド配列の番号は右側にある。ＣＤＲ領域のアミノ酸残基は太字と下線で示されている。上記のアミノ酸残基のナンバリングによって示されるように、アミノ酸残基にはＫａｂａｔのＩｇ分子のナンバリングが用いられている。特定の数字に続き一文字でナンバリングされている残基は、Ｋａｂａｔナンバリング法によって定義されている挿入残基を示す。ある文字でナンバリングされている残基の頭につく数字は同じである。例えば、図１において残基８２Ａ、８２Ｂおよび８２Ｃは、８２Ａ、ＢおよびＣで示される。
【図２】キメラＬＬ１（ｃＬＬ１）重鎖および軽鎖可変領域のＤＮＡ配列およびアミノ酸配列。（米国特許出願第１０／３７７，１２２号参照。）図２Ａは、ｃＬＬ１ＶＨのＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す。図２Ｂは、ｃＬＬ１Ｖｋの二本鎖ＤＮＡ配列およびアミノ酸配列を示す。対応するＤＮＡ配列によりコードされるアミノ酸配列は一文字コードで示されている。ＣＤＲ領域のアミノ酸残基は太字と下線で示されている。ヌクレオチドおよびアミノ酸のナンバリングについては、図１の場合と同じである。
【図３】ヒト抗体、ｃＬＬ１およびｈＬＬ１の軽鎖および重鎖可変領域のアミノ酸配列のアライメント。図３Ａは、ヒト抗体ＲＦ−ＴＳ３、ｃＬＬ１およびｈＬＬ１のＶＨアミノ酸配列アライメントを示し、図３Ｂは、ヒト抗体ＨＦ−２１／２８、ｃＬＬ１およびｈＬＬ１のＶｋアミノ酸配列アライメントを示す。点は、ヒト抗体における対応する残基と一致するｃＬＬ１の残基を示す、四角で囲んだ領域はＣＤＲ領域を示す。ｃＬＬ１のＮ末端およびＣ末端残基（下線）の双方は用いる足場ベクターによって固定されており、ヒト抗体とは比較しない。図１同様、ＫａｂａｔのＩｇ分子ナンバリング法が用いられている。
【図４】ヒト化ＬＬ１（ｈＬＬ１）重鎖および軽鎖可変領域のＤＮＡ配列およびアミノ酸配列。図４ＡはｈＬＬ１ＶＨのＤＮＡ配列およびアミノ酸配列を示し、図４Ｂは、ｈＬＬ１ＶｋのＤＮＡ配列およびアミノ酸配列を示す。対応するＤＮＡ配列によりコードされるアミノ酸配列は一文字コードで示されている。ＣＤＲ領域のアミノ酸残基は太字と下線で示されている。図１Ａおよび図１Ｂ同様、アミノ酸残基に関してはＫａｂａｔのＩｇ分子ナンバリング法が用いられている。
【図５】３７℃で２４時間インキュベーションした際の、［３Ｈ］コレステリルオレオイルエーテル（ＣＯＥ）標識、標的化および非標的化薬物担体エマルジョンの、濃度依存的細胞内会合。Ａ．上のパネル。Ｒａｊｉ細胞をＬＬ１コンジュゲートエマルジョン（●）および非コンジュゲートエマルジョン（○）で処理した。Ｒａｍｏｓ細胞をＬＬ１−コンジュゲートエマルジョン（▼）および非コンジュゲートエマルジョン（▽）で処理した。Ｂ．下のパネル。ＨＬ−６０細胞ををＬＬ１コンジュゲートエマルジョン（●）および非コンジュゲートエマルジョン（○）で処理した。Ｊｕｒｋａｔ細胞をＬＬ１コンジュゲートエマルジョン（▼）および非コンジュゲートエマルジョン（▽）で処理した。（平均±ＳＥ，ｎ＝４）
【図６】３７℃で２４時間インキュベーションした際の、［３Ｈ］ＣＯＥ標識ＬＬ１エマルジョンの細胞内会合とエマルジョン卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）についてのＬＬ１の量（平均±ＳＥ，ｎ＝４）。
【図７】種々の濃度の遊離ＬＬ１の存在下での、［３Ｈ］ＣＯＥ標識ＬＬ１エマルジョンの置換曲線。平均±ＳＥ，ｎ＝４）
【図８】３７℃で６時間インキュベーションした際の、８−ヒドロキシ−１，３，６−ピレントリスルホン化（ＨＰＴＳ）含有ＬＬ１リポソームの濃度依存的会合をλ＝４１３ｎｍ（●）およびλ＝４５４ｎｍ（○）で測定したもの。（平均±ＳＥ，ｎ＝３）
【図９】ＦＵｄＲ−ｄＯに関する用量応答曲線。Ａ．上のパネル。Ｒａｊｉリンパ腫細胞をＦＵｄＲ−ｄＯ含有ＬＬ１コンジュゲートエマルジョンで処理（●）；ＦＵｄＲ−ｄＯ含有非コンジュゲートエマルジョンで処理（○）；または比較としてＰＢＳ中遊離ＦＵｄＲで処理した（▼）。Ｂ．下のパネル。Ｒａｊｉリンパ腫細胞をＦＵｄＲ−ｄＯ含有ＬＬ１コンジュゲートリポソームで処理（●）；ＦＵｄＲ−ｄＯ含有非コンジュゲートリポソームで処理（○）；または比較としてＰＢＳ中遊離ＦＵｄＲで処理した。（平均±ＳＥ，ｎ＝４）
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【手続補正書】
【提出日】平成19年3月29日(2007.3.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１以上の脂質、高分子担体、ミセル、ナノ粒子、またはその組合せと結合した１以上の抗ＣＤ７４結合分子を含んでなる免疫複合体、および
１以上のエフェクター
を含んでなる、組成物。
【請求項２】
エマルジョンをさらに含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
リポソームをさらに含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記１以上の抗ＣＤ７４結合分子が１以上の脂質と結合している、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記１以上の抗ＣＤ７４結合分子が１以上の高分子担体と結合している、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記１以上の抗ＣＤ７４結合分子が１以上のミセルと結合している、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記１以上の抗ＣＤ７４結合分子が１以上のナノ粒子と結合している、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記１以上の抗ＣＤ７４結合分子がＬＬ１またはそのフラグメントを含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記１以上の抗ＣＤ７４結合分子が、スルフィド結合、ヒドラゾン結合、ヒドラジン結合、エステル結合、アミド結合、アミノ結合、イミノ結合、チオセミカルバゾン結合、セミカルバゾン結合、オキシム結合、炭素−炭素結合、またはその組合せの１以上により１以上の脂質と結合している、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記結合分子がスルフィド結合により結合している、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ８０、ＣＤ１２６、Ｂ７、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、Ｉａ、ＨＭ１．２４、テネイシン、ＶＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＣＥＡ、ＣＳＡｐ、ＩＬＧＦ、胎盤増殖因子、炭酸脱水酵素ＩＸ、ＩＬ−６およびそれらの組合せからなる群から選択される１以上の抗原に特異的に結合する１以上の付加的結合分子をさらに含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記付加的結合分子が１以上の脂質、高分子担体、ミセル、ナノ粒子、またはその組合せと結合している、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記１以上の脂質が両親媒性である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記１以上の脂質が遠位末端に１以上の求核炭素を含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記１以上の脂質が遠位末端に１以上のマレイミド基を含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
前記１以上の脂質がＰＥＧ−マレイミドを含んでなる、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記１以上の抗ＣＤ７４結合分子が１以上のマレイミド基に連結されている、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１８】
前記１以上の抗ＣＤ７４結合分子が１以上の遊離チオール基により１以上のマレイミド基に連結されている、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１９】
前記１以上の脂質がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項２０】
エフェクターが治療薬または診断薬を含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項２１】
エフェクターが、薬物、プロドラッグ、毒素、酵素、放射性同位元素、免疫調節剤、サイトカイン、ホルモン、結合分子、オリゴヌクレオチド、光線力学剤、またはそれらの混合物を含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項２２】
エフェクターが、アプリジン、アザリビン、アナストロゾール、アザシチジン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブリオスタチン−１、ブスルファン、カリケアマイシン、カンプトテシン、１０−ヒドロキシカンプトテシン、カルムスチン、セレブレックス、クロラムブシル、シスプラチン、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）、ＳＮ−３８、カルボプラチン、クラドリビン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ドセタキセル、ダクチノマイシン、ダウノマイシングルクロニド、ダウノルビシン、デキサメタゾン、ジエチルスチルベストロール、ドキソルビシン、ドキソルビシングルクロニド、エピルビシングルクロニド、エチニルエストラジオール、エストラムスチン、エトポシド、エトポシドグルクロニド、リン酸エトポシド、フロクスウリジン（ＦＵｄＲ）、３’，５’−Ｏ−ジオレオイル−ＦｕｄＲ（ＦＵｄＲ−ｄＯ）、フルダラビン、フルタミド、フルオロウラシル、フルオキシメステロン、ゲムシタビン、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、ヒドロキシ尿素、イダルビシン、イフォスファミド、Ｌ−アスパラギナーゼ、ロイコボリン、ロムスチン、メクロレタミン、酢酸メドロプロゲステロン、酢酸メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、６−メルカプトプリン、メトトレキサート、ミトキサントロン、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトタン、酪酸フェニル、プレドニゾン、プロカルバジン、パクリタキセル、ペントスタチン、ＰＳＩ−３４１、セムスチンストレプトゾシン、タモキシフェン、タキサン、タキソール、プロピオン酸テストステロン、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、テニポシド、トポテカン、ウラシルマスタード、ベルケード、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンクリスチン、リシン、アブリン、リボヌクレアーゼ、オンコナーゼ、ｒａｐＬＲ１、ＤＮアーゼＩ、ブドウ球菌エンテロトキシン−Ａ、アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリア毒、シュードモナス外毒素、およびシュードモナス内毒素、またはその組合せを含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項２３】
エフェクターが、ＦＵｄＲ、ＦＵｄＲ−ｄＯ、またはそれらの混合物を含んでなる、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
１以上の硬酸キレート剤または軟酸キレート剤をさらに含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項２５】
II族金属陽イオン、III族金属陽イオン、IV族金属陽イオン、Ｖ族金属陽イオン、遷移金属陽イオン、ランタニド金属陽イオンもしくはアクチニド金属陽イオン、またはそれらの混合物から選択される陽イオンをさらに含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項２６】
ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、ＤＴＰＡ、ＴＥＴＡ、Ｔｓｃｇ−Ｃｙｓ、Ｔｓｃａ−Ｃｙｓ、またはそれらの混合物をさらに含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項２７】
エフェクターが核種を含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項２８】
核種が１８Ｆ、３２Ｐ、３３Ｐ、４５Ｔｉ、４７Ｓｃ、５２Ｆｅ、５９Ｆｅ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７５Ｓｅ、７７Ａｓ、８６Ｙ、８９Ｓｒ、８９Ｚｒ、９０Ｙ、９４Ｔｃ、９４ｍＴｃ、９９Ｍｏ、９９ｍＴｃ、１０５Ｐｄ、１０５Ｒｈ、１１１Ａｇ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１４９Ｐｍ、１５３Ｓｍ、１５４−１５８Ｇｄ、１６１Ｔｂ、１６６Ｄｙ、１６６Ｈｏ、１６９Ｅｒ、１７５Ｌｕ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１８９Ｒｅ、１９４Ｉｒ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔ、２１１Ｐｂ、２１２Ｂｉ、２１２Ｐｂ、２１３Ｂｉ、２２３Ｒａ、２２５Ａｃ、またはそれらの混合物を含んでなる、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
エフェクターが酵素を含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項３０】
エフェクターが免疫調節剤を含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項３１】
前記免疫調節剤がＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、インターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−γ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、およびそれらの混合物からなる群から選択される、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
エフェクターが、アンギオスタチン、エンドスタチン、バスキュロスタチン、カンスタチン、マスピン、抗ＶＥＧＦ結合分子、抗胎盤増殖因子結合分子、抗血管増殖因子結合分子、およびそれらの混合物からなる群から選択される抗脈管形成薬を含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記抗ＣＤ７４結合分子が１以上の治療薬、診断薬、またはそれらの混合物に結合している、請求項１に記載の組成物。
【請求項３４】
前記抗ＣＤ７４結合分子がヒト化、ヒトもしくはキメラ抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントを含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項３５】
前記ヒト化、ヒトもしくはキメラ抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントが、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）またはそのフラグメントを含んでなる、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
前記ヒト、キメラもしくはヒト化抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントが、
Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、もしくはＦｖを含んでなるフラグメント、またはＦ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、もしくはＦｖの軽鎖および重鎖の一部もしくは全部を用いる融合タンパク質
を含んでなり、そのフラグメントがＣＤ７４と結合する、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３７】
前記融合タンパク質が多価であるか、または多価多重特異性である、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
前記ヒト、キメラもしくはヒト化抗ＣＤ７４抗体またはそのフラグメントが、ヒトＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のヒト定常領域で置換されているＩｇＧ１の定常領域をさらに含んでなる、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３９】
前記抗ＣＤ７４結合分子が抗ＣＤ７４ダイアボディー、トリアボディー、またはテトラボディーである、請求項１に記載の組成物。
【請求項４０】
１以上の両親媒性脂質をエフェクターと混合して担体を形成すること、および
その担体を抗ＣＤ７４抗体と接触させること
を含んでなる、担体の製造方法。
【請求項４１】
前記脂質の１以上がマレイミド基を含んでなる、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
マレイミド基の１以上を抗ＣＤ７４抗体上の遊離チオール基と反応させることをさらに含んでなる、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
エフェクターが１以上の薬物、プロドラッグ、毒素、酵素、放射性同位元素、免疫調節剤、サイトカイン、ホルモン、抗体、オリゴヌクレオチド、またはそれらの混合物を含んでなる、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
担体を１以上の治療薬または診断薬と混合することをさらに含んでなる、請求項４０に記載の方法。
【請求項４５】
請求項１に記載の組成物を含んでなる、キット。
【国際調査報告】
2007523857.tif 000016