(57)【要約】本発明には、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）または肺気腫（典型的なものは、喫煙による肺気腫）の処置および予防のための方法および組成物が含まれる。より具体的には、本発明は、α１−抗トリプシン（ＡＡＴ）の吸入によるＣＯＰＤまたは肺気腫の処置および予防に関する。種々の実施形態において、処置される個体の肺は、ＡＡＴを酸化し得る少なくとも１つの空気中の物質、例えば、タバコの煙に周期的にさらされる。これらの実施形態のいくつかにおいて、処置される個体は喫煙者である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の処置方法であって：
有効量のグリコシル化されていないα１−抗トリプシン（ＡＡＴ）またはその機能的活性のある部分を、吸入によって、ＣＯＰＤを発症している個体またはＣＯＰＤを発症する危険性がある個体の肺に投与する工程
を包含する、方法。
【請求項２】
前記個体の肺が、ＡＡＴを酸化し得る少なくとも１つの空気中に浮遊している因子に周期的にさらされる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記個体がタバコの煙に周期的にさらされる、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記個体が喫煙者である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記グリコシル化されていないＡＡＴが組換え体ＡＡＴである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記組換え体ＡＡＴがｒＡＡＴである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分が乾燥粉末組成物として投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記乾燥粉末組成物が、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分と、ハライド塩とを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ハライド塩が、１００ｍｇのＡＡＴあたり少なくとも約１０マイクロモルのレベルで存在する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ハライド塩が、１００ｍｇのＡＡＴあたり少なくとも約５０マイクロモルのレベルで存在する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ハライド塩が、１００ｍｇのＡＡＴあたり少なくとも約１００マイクロモルのレベルで存在する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ハライド塩が塩化物である、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
前記塩化物がＮａＣｌである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＡＡＴがｒＡＡＴまたはその機能的活性のある部分である、請求項８に記載の方法。
【請求項１５】
前記乾燥粉末組成物が炭水化物を実質的に含まない、請求項８に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分が液体組成物として投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記液体組成物が、グリコシル化されていないＡＡＴまたはその機能的活性のある部分と、ハライド塩とを含む乾燥組成物から再水和される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ハライド塩が、１００ｍｇのＡＡＴあたり少なくとも約１０マイクロモルのレベルで存在する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ハライド塩が、１００ｍｇのＡＡＴあたり少なくとも約５０マイクロモルのレベルで存在する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ハライド塩が、１００ｍｇのＡＡＴあたり少なくとも約１００マイクロモルのレベルで存在する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記ハライド塩が塩化物である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
前記塩化物がＮａＣｌである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＡＡＴがｒＡＡＴまたはその機能的活性のある部分である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
前記乾燥粉末組成物が炭水化物を実質的に含まない、請求項１７に記載の方法。
【請求項２５】
１日あたり約２００ｍｇを超えないグルコシル化されていないＡＡＴまたはその機能的活性のある部分が投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
１日あたり約１００ｍｇを超えないグルコシル化されていないＡＡＴまたはその機能的活性のある部分が投与される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
任意の単一用量中で約１００ｍｇを超えないグルコシル化されていないＡＡＴまたはその機能的活性のある部分が投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
任意の単一用量中で約５０ｍｇを超えないグルコシル化されていないＡＡＴまたはその機能的活性のある部分が投与される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
任意の単一用量中で約２５ｍｇを超えないグルコシル化されていないＡＡＴまたはその機能的活性のある部分が投与される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
任意の単一用量中で約２０ｍｇを超えないグルコシル化されていないＡＡＴまたはその機能的活性のある部分が投与される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
請求項１に記載の方法であって、有効量の少なくとも１つの第２のプロテアーゼインヒビターまたはその機能的活性のある部分を吸入によって投与する工程をさらに包含する、方法。
【請求項３２】
前記少なくとも１つの第２のプロテアーゼインヒビターが、少なくとも１つのマトリックスメタロプロテアーゼのインヒビターである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記インヒビターが、ＴＩＭＰ−１、ＴＩＭＰ−２、ＴＩＭＰ−３、ＴＩＭＰ−４、およびアイロマスタットからなる群より選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
請求項１に記載の方法であって、有効量の気管支拡張薬またはコルチコステロイドを吸入によって投与する工程をさらに包含する、方法。
【請求項３５】
ＣＯＰＤを処置するためのキットであって、該キットは、
治療上活性のある因子を吸入によって送達するためのデバイス；および
少なくとも一用量のグリコシル化されていないＡＡＴまたはその機能的活性のある部分
を含む、キット。
【請求項３６】
前記送達デバイスがネブライザーである、請求項３５に記載のキット。
【請求項３７】
前記少なくとも一用量のＡＡＴが乾燥組成物であり、前記キットがさらに滅菌の希釈剤を含む、請求項３６に記載のキット。
【請求項３８】
前記送達デバイスが乾燥粉末吸入器である、請求項３５に記載のキット。
【請求項３９】
前記送達デバイスが定量吸入器である、請求項３５に記載のキット。
【請求項４０】
巻きタバコであって、
タバコと
グリコシル化されていないＡＡＴ
とを含む、巻きタバコ。
【請求項４１】
前記グリコシル化されていないＡＡＴが口に最も近いフィルター内に存在する、請求項４０に記載の巻きタバコ。
【請求項４２】
前記グリコシル化されていないＡＡＴが前記タバコと混合される、請求項４０に記載の巻きタバコ。
【請求項４３】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を処置する方法であって：
有効量のグリコシル化されていないα１−抗トリプシン（ＡＡＴ）またはその機能的活性のある部分を、吸入によって、ＣＯＰＤを発症している個体またはＣＯＰＤを発症する危険性がある個体の肺に投与する工程
を包含し、該個体が喫煙経験者である、方法。
【請求項４４】
前記グリコシル化されていないＡＡＴが組換え体ＡＡＴである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記組換え体ＡＡＴがｒＡＡＴである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記組換え体ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分が乾燥粉末組成物として投与される、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記乾燥粉末組成物が、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分とハライド塩とを含む、請求項４６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２００４年３月９日に提出された米国仮特許出願番号６０／５５１，８５６の利益を主張する。その開示は、その全体が参考として本明細書中に援用される。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
慢性閉塞性肺疾患（「ＣＯＰＤ」）は、空気の流れの制限を特徴とする疾患状態であり、完全には改善することはできず、通常は、進行性であり、かつ有害な粒子または気体に対する肺の異常な炎症反応を伴う。Ｇｒｏｂａｌ  Ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅ  ｆｏｒ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  Ｌｕｎｇ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｗｏｒｋｓｈｏｐ  Ｒｅｐｏｒｔ（２００４）（「Ｇｏｌｄ  Ｒｅｐｏｒｔ」）。
【０００３】
ＣＯＰＤは、米国の慢性疾患の罹患率および死亡率の第４位の原因であり（Ｇｏｌｄ  Ｒｅｐｏｒｔ）、世界では第５位の死亡原因である（Ｒａｂｅ，「Ｏｕｔｃｏｍｅ  ｍｅａｓｕｒｅｓ  ｉｎ  ＣＯＰＤ」，Ｐｒｉｍａｒｙ  Ｃａｒｅ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｊ．１３：１７７−１７８（２００４）；Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ，Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｒｅｐｏｒｔ  ２００２）。
【０００４】
１９９３年には、米国では１５７０万人のＣＯＰＤの患者がいると推定され、年間２３９億ドルの経済的負担となっている。英国では、１９９６年にはＣＯＰＤについての直接的な負担はおよそ１４億ドルであり、間接的な負担はおよそ３４億ドルと推定された（Ｇｏｌｄ  Ｒｅｐｏｒｔ  ２００４）。世界中で罹患率が増加しており、２０２０年までに、ＣＯＰＤは、世界中で病気で苦しむ人が多い疾患の第５番目にランク付けされると予想されている。
【０００５】
現在、ＣＯＰＤの処置は、大部分は苦痛を一時的に抑えるものであり、この疾患の進行を明らかに止めるアプローチは存在していない。
【０００６】
通常、ＣＯＰＤの臨床症状には、肺胞の破壊として定義される、肺気腫の組織病理学的証拠が付随する。巻きタバコの喫煙による肺気腫はＣＯＰＤの発症の第一の原因である。
【０００７】
喫煙により誘発される肺気腫は、肺でのプロテアーゼ活性と抗プロテアーゼ活性との間での不均衡に少なくとも一部原因があると推測される。
【０００８】
好中球エラスターゼの主要なインヒビターであるα１−抗トリプシン（ＡＡＴ）が遺伝的に欠損している個体は、たとえ煙曝露（ｓｍｏｋｅ  ｅｘｐｏｓｕｒｅ）されなくても、汎細葉性肺気腫を発症することが知られている。巻きタバコの喫煙は、α１−抗トリプシン（ＡＡＴ）を酸化により不活化することが知られており、煙曝露は、肺において好中球を含むプロテアーゼを分泌する炎症性細胞の数の増加を引き起こし、これによって遺伝的なＡＡＴ欠損を有さない個体の肺において同様のプロテアーゼ−抗プロテアーゼ不均衡を引き起こすことが知られている。Ｃｈｕｒｇら，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｕｌｍ．Ｍｅｄ．１１：１５３−１５９（２００５）に概説されている。
【０００９】
好中球エラスターゼ（ＮＥ）が欠損しているマウスは、喫煙による肺気腫に対しておよそ６０％防御される（Ｓｈａｐｉｒｏ，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｓｔ  Ｍｅｄ．２１：６２１−６３２（２０００）。反対に、ＮＥ＋マウスへのＡＡＴの腹膜投与は、喫煙による肺気腫に対する部分的な防御を提供し、これにより、煙曝露された動物と比較して６３％空間の大きさが減少し、これはＴＮＦ−αの減少と一致する。Ｃｈｕｒｇら，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．１６８：１９９−２０７（２００３）。
【００１０】
これらの結果および同様の結果から、喫煙による肺気腫およびＣＯＰＤ（任意の原因のもの）がＡＡＴの補給によって処置されるという断続的な示唆が長年にわたって導かれてきた。例えば、特許文献１には、ＣＯＰＤを含む肺疾患の症状を、有効量の微結晶性α１−抗トリプシンを吸入によって投与することによって処置するための方法が記載されており、特許請求されている。特許文献２では、ＣＯＰＤを含む種々の疾患をＡＡＴの投与によって処置することが提案されている。特許文献３には、特定の型の肺気腫を有する患者の肺への乾燥粉末の送達を意図されたＡＡＴの処方物が記載されている。
【００１１】
プールされたヒトの血漿に由来する天然のヒトＡＡＴが市販されており、これはα１−抗トリプシンが遺伝的に欠損する患者への静脈内投与が承認されている。一緒に精製されるタンパク質混入物質の存在と、感染性因子の伝染のリスクは、より広い範囲での使用に不利に働くが、組換え体ＡＡＴと操作されたＡＡＴ変異体タンパク質の開発の動機付けとなった。組換え体ＡＡＴは、例えば、酵母の中で（非特許文献１；特許文献４；非特許文献２）、および植物の中で（非特許文献３および非特許文献４）生産されている。
【００１２】
Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅで生産された組換え体ＡＡＴの１つの型であるｒＡＡＴは、アミノ酸末端にあるＮ−アセチルメチオニン残基を除いて、ヒトの血漿ＡＡＴと同じアミノ酸配列を有する。天然のヒトＡＡＴとは異なり、ｒＡＡＴは、グリコシル化はされてない。
【００１３】
酵母でのｒＡＡＴの生産により、収量、コスト、および精製の容易さに関しては一定の利点が提供されるが、グリコシル化されていない酵母由来のｒＡＡＴは、その天然のグリコシル化された対応物よりも熱に対する耐性がかなり低い。非特許文献２。グリコシル化されていないｒＡＡＴはまた、生物学的半減期もはるかに短い。
【００１４】
喫煙による肺気腫に対する部分的な防御は、マウスにおいてはグリコシル化されたヒトＡＡＴを腹腔内に補給することによってもたらされ、そしてＡＡＴがＣＯＰＤに罹患しているかまたはＣＯＰＤの危険性がある患者に対して吸入によって投与されることについての種々の示唆があるにもかかわらず、酸化力のある巻きタバコの煙が同時に存在する状況でのグリコシル化されていない組換え体タンパク質の吸入による、抗プロテアーゼの防御レベルを得る能力は予測できていない。さらに、天然のＡＡＴは、喫煙者の肺において増加している場合が多いマトリックスメタロプロテアーゼによって不活化され；マトリックスメタロプロテアーゼが同時に存在する状況でのグリコシル化されていない組換え体ＡＡＴの吸入による、防御レベルの抗プロテアーゼを得る能力は予測できていない。特に、肺投与によって喫煙者においてプロテアーゼの分解の危険性がある肺間質で防御レベルの抗プロテアーゼ活性を提供できるかどうかは予想できていない。
【特許文献１】米国特許第５，０９３，３１６号明細書
【特許文献２】米国特許第６，４８９，３０８号明細書
【特許文献３】米国特許第５，９９３，７８３号明細書
【特許文献４】米国特許第４，７５２，５７６号明細書
【非特許文献１】Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら，Ｎａｔｕｒｅ，１９８４年，３１２，ｐ．７７−８０
【非特許文献２】Ｔｒａｖｉｓら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９８５年，２６０，ｐ．４３８４−４３８９
【非特許文献３】Ｔｅｒａｓｈｉｍａら，Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１９９９年，５２，ｐ．５１６−２３
【非特許文献４】Ｈｕａｎｇら，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．，２００１年，１７，ｐ．１２６−３３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
喫煙による肺気腫およびＣＯＰＤを処置する有効な方法に対する必要性が依然として存在する。特に、喫煙による肺気腫およびＣＯＰＤを有するか、またはそれらの危険性がある個体の空気の流れの制限を止めることができるか、またはその進行を遅らせることができる処置に対する継続的必要性が存在する。ヒトの血漿由来の因子の投与には頼らない治療方法に対するさらなる必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
（発明の要旨）
本発明により、第１の局面において、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を処置する方法が提供されることにより、これらの必要性および当該分野での他の必要性が満たされる。
【００１７】
この方法は、有効量のα１−抗トリプシン（ＡＡＴ）（通常はグリコシル化されていないＡＡＴ、またはその機能的活性のある部分）を、吸入によって、ＣＯＰＤを有するかまたはＣＯＰＤを発症する危険性のある個体の肺に投与する工程を包含する。
【００１８】
種々の実施形態において、処置される個体の肺は、ＡＡＴを酸化し得る少なくとも１つの空気中の物質、例えば、タバコの煙に周期的にさらされる。これらの実施形態のいくつかにおいて、処置される個体は喫煙者である。
【００１９】
特定の実施形態において、グリコシル化されていないＡＡＴは、酵母で発現された組換え体ＡＡＴ、例えば、ｒＡＡＴである。
【００２０】
１つのシリーズの実施形態において、グリコシル化されていないＡＡＴまたはその機能的活性のある部分は乾燥粉末組成物として投与される。
【００２１】
特定のこれらの実施形態において、乾燥粉末組成物には、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分、およびハライド塩が含まれる。ハライド塩は、いくつかの実施形態において、１００ｍｇのＡＡＴあたり少なくとも約１０マイクロモルのレベルで存在する。種々の実施形態において、ハライド塩は、１００ｍｇのＡＡＴあたり少なくとも約５０マイクロモルのレベルで存在する。特定の実施形態において、ハライド塩は、１００ｍｇのＡＡＴあたり少なくとも約１００マイクロモルのレベルで存在する。通常は、ハライド塩は塩化物であり、例えば、ＮａＣｌである。
【００２２】
乾燥粉末組成物には、いくつかの実施形態において、炭化水素は実質的には含まれない。
【００２３】
別のシリーズの実施形態において、グリコシル化されていないＡＡＴ、またはその機能的活性のある部分は、例えば、エアゾールのような液体組成物として投与される。
【００２４】
これらの実施形態のいくつかにおいて、液体組成物はグリコシル化されていないＡＡＴ、またはその機能的活性のある部分、およびハライド塩を含む乾燥組成物から再水和される。ハライド塩は、いくつかの実施形態において、１００ｍｇのＡＡＴあたり少なくとも約１０マイクロモルのレベルで存在する。種々の実施形態において、ハライド塩は、１００ｍｇのＡＡＴあたり少なくとも約５０マイクロモルのレベルで存在する。特定の実施形態において、ハライド塩は、１００ｍｇのＡＡＴあたり少なくとも約１００マイクロモルのレベルで存在する。通常は、ハライド塩は塩化物であり、例えば、ＮａＣｌである。
【００２５】
特定のこれらの実施形態において、ＡＡＴは、ｒＡＡＴまたはその機能的活性のある部分である。
【００２６】
投与し得る液体がそれから再水和される乾燥組成物には、特定の実施形態において、炭化水素は実質的には含まれない。
【００２７】
本発明の方法の種々の実施形態において、１日あたり約２００ｍｇ以下のグリコシル化されていないＡＡＴまたはその機能的活性のある部分が投与される。いくつかの実施形態において、１日あたり約１００ｍｇ以下のグリコシル化されていないＡＡＴまたはその機能的活性のある部分が投与される。他の実施形態において、１日あたり約５０ｍｇ以下のグリコシル化されていないＡＡＴまたはその機能的活性のある部分が投与される。
【００２８】
本発明の方法の種々の実施形態において、任意の単一用量中で、約１００ｍｇ以下のグリコシル化されていないＡＡＴまたはその機能的活性のある部分が投与される。いくつかの実施形態において、任意の単一用量中で、約５０ｍｇ以下のグリコシル化されていないＡＡＴまたはその機能的活性のある部分が投与される。なおさらには、任意の単一用量中で、約２５ｍｇ以下のグリコシル化されていないＡＡＴまたはその機能的活性のある部分が投与される。いくつかの実施形態において、任意の単一用量中で、約２０ｍｇ以下のグリコシル化されていないＡＡＴまたはその機能的活性のある部分が投与される。
【００２９】
特定の実施形態において、この方法はさらに、有効量の少なくとも１つの第２のプロテアーゼインヒビターまたはその機能的活性のある部分を、吸入によって投与する工程を包含する。
【００３０】
第２のプロテアーゼインヒビターは、例えば、少なくとも１つのマトリックスメタロプロテアーゼのインヒビターである。第２のプロテアーゼインヒビターは、例えば、ＴＩＭＰ−１、ＴＩＭＰ−２、ＴＩＭＰ−３、ＴＩＭＰ−４、およびアイロマスタットからなる群より選択し得、そしてＴＩＭＰ−１またはその機能的活性のある部分が有用である。
【００３１】
本発明の方法はさらに、有効量の気管支拡張薬またはコルチコステロイドを吸入によって投与する工程を包含する。
【００３２】
別の局面において、本発明によりＣＯＰＤを処置するためのキットが提供される。
【００３３】
キットは、治療活性のある因子を吸入によって送達するためのデバイスと、少なくとも一用量のグリコシル化されていないＡＡＴまたはその機能的活性のある部分とを含む。
【００３４】
いくつかの実施形態において、送達デバイスはネブライザーである。特定のこれらの実施形態において、少なくとも一用量のＡＡＴは乾燥組成物であり、キットにはさらに滅菌の希釈剤が含まれる。
【００３５】
他の実施形態において、送達デバイスは乾燥粉末吸入器である。なお他の実施形態において、送達デバイスは定量吸入器である。
【００３６】
さらなる局面において、本発明により、タバコとグリコシル化されていないＡＡＴを含む巻きタバコが提供される。
【００３７】
グリコシル化されていないＡＡＴは、巻きタバコの口に最も近いフィルター内に入れることができ、また、タバコと混ぜることもできる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３８】
（詳細な説明）
第１の局面において、本発明により、慢性閉塞性肺疾患（「ＣＯＰＤ」）を処置する方法が提供される。
【００３９】
この方法は、有効量のα１−抗トリプシン（ＡＡＴ）またはその機能的活性のある部分を、吸入によって、ＣＯＰＤを有するかまたはＣＯＰＤを発症する危険性のある個体の肺に投与する工程を包含する。
【００４０】
「処置する」によって、現在喫煙している人（「喫煙者」）および喫煙経験者の両方における、全ての臨床的に示されている介入または臨床上認められている介入が意図される。これには、ＣＯＰＤの臨床的および／または組織学的および／または生化学的および／または病理学的症状の発症あるいはその進行の予防；短期続発症および長期続発症の両方を含むＣＯＰＤの臨床的および／または組織学的および／または生化学的および／または病理学的続発症の発症あるいはその進行の予防；ＣＯＰＤの臨床的および／または組織学的および／または生化学的および／または病理学的兆候の処置；疾患の臨床管理；ならびに苦痛緩和が含まれるが、これらに限定はされない。
【００４１】
特定の実施形態において、例えば、この方法により、現在喫煙している人において、ＣＯＰＤの臨床的および／または組織学的および／または生化学的および／または病理学的症状（症状と兆候の両方を含む）の発症あるいは進行の予防がもたらされ、したがって、次の煙曝露の作用と、過去の煙曝露による現在の進行中の作用の両方に対する予防である。他の実施形態において、この方法により、以前に喫煙していた人において、ＣＯＰＤの臨床的および／または組織学的および／または生化学的および／または病理学的症状（症状と兆候の両方を含む）の発症あるいはその進行の予防がもたらされ、したがって、過去の曝露によって引き起こされた現在の進行中の作用に対する防御である。
【００４２】
特定の実施形態において、例えば、この方法により、現在喫煙している人において、短期および長期の続発症を含むＣＯＰＤの臨床的および／または組織学的および／または生化学的および／または病理学的続発症の発症あるいはその進行の予防がもたらされ、したがって、次の煙曝露の作用と、過去の煙曝露による現在の進行中の作用の両方に対する予防である。他の実施形態において、この方法により、以前に喫煙していた人において、短期および長期の続発症を含むＣＯＰＤの臨床的および／または組織学的および／または生化学的および／または病理学的続発症の発症あるいはその進行の予防がもたらされ、したがって、過去の煙曝露によって引き起こされた現在の進行中の作用に対する予防である。
【００４３】
特定の例示的な実施形態において、この方法により、現在喫煙している人または喫煙経験者のいずれにおいても、ＣＯＰＤの臨床症状の処置がもたらされる。
【００４４】
限定的ではない実施例によってはさらに、本発明の方法は、したがって、この方法が、例えば、肺気量測定法によって測定し得る空気の流れの制限の発症または進行を予防するために十分である場合には、喫煙者または喫煙経験者のいずれにおいても、ＣＯＰＤを「処置する」ために有効である。例えば、この方法がＦＥＶ１（１秒間の努力呼気肺活量）の減少またはその進行性の減少を予防するために十分である場合には、この方法は、喫煙者または喫煙経験者においてＣＯＰＤを処置するために有効である。限定的ではない実施例によってはさらに、この方法がＦＶＣ（強制肺活量）の減少または進行性の減少を予防するために十分である場合には、この方法は、喫煙者または喫煙経験者においてＣＯＰＤを処置するために有効である。別の例において、この方法がＦＥＶ１／ＦＶＣの比の減少またはその進行性の減少を予防するために十分である場合には、この方法は、喫煙者または喫煙経験者においてＣＯＰＤを処置するために有効である。
【００４５】
一例として、この方法がＦＥＶ１／ＦＶＣの比の、正常な成人についての予想される最小値である７０％以下への低下またはその進行性の低下を予防するために十分である場合には、この方法は、喫煙者または喫煙経験者においてＣＯＰＤを処置するために有効である。なお別の例としては、本発明の方法は、この方法が動脈血のＰａＯ２の低下または進行性の低下を予防するために十分である場合には、喫煙者または喫煙経験者においてＣＯＰＤを処置するために有効である。本発明の方法はまた、この方法が、例えば、現在喫煙している人または他の実施形態において、喫煙経験者のいずれにおいても、ＰａＣＯ２の上昇またはその進行性の上昇を予防するために十分である場合にも、ＣＯＰＤを処置するために有効である。本発明の方法はまた、この方法が、例えば、喫煙者、または別の実施形態において、喫煙経験者のいずれにおいて、Ｏ２の補給の使用の増加または進行性の増加を予防するために十分である場合にも、ＣＯＰＤを処置するために有効でもある。
【００４６】
本発明の方法は、加えて、またはあるいは、この方法が、−−喫煙者、または他の実施形態において、喫煙経験者においても−−ＣＯＰＤの臨床症状、例えば、運動時の呼吸困難または運動耐容能の低下、慢性咳（咳の頻度として、または咳の期間として測定されるかどうかは問わない）、過剰な痰の生産、または急性気管支炎の発症またはその進行の予防に有効である場合には、それらを処置するためにも有効である。
【００４７】
本発明の方法はまた、加えて、またはあるいは、この方法が、現在喫煙している人または喫煙経験者のいずれにおいても、気管支拡張薬、および／または肺もしくは経口コルチコステロイド（例えば、経口プレドニソロン）の必要性または使用の増加を予防するために有効である場合にも、ＣＯＰＤを処置するために有効である。
【００４８】
また、実施例として、本発明の方法は、この方法が喫煙者または喫煙経験者において、肺気腫または肺での杯細胞の増殖の発症またはその進行の予防に十分である場合には、ＣＯＰＤを処置するために有効である。
【００４９】
さらに実施例として、本発明の方法によって、喫煙者または他の実施形態において、喫煙経験者のいずれにおいても、ＦＥＶ１、ＦＶＣ、またはＦＥＶ１／ＦＶＣの比のいずれかとして測定される空気の流れが改善される、例えば、ＰａＯ２の上昇として測定される酸素の生産が改善される、ＰａＣＯ２の低下として測定されるＣＯ２の排出が改善される、安静時、運動時または呼吸器感染の併発時の呼吸困難が軽減される、あるいは、Ｏ２の補給の使用が減少される場合には、本発明の方法はＣＯＰＤを処置するために有効である。
【００５０】
この方法は、なおさらなる実施例としては、この方法が喫煙者または喫煙経験者の肺の内部の肺の杯細胞の数または密度を、局所的にまたは全体的のいずれかで、減少させるために十分である場合には、ＣＯＰＤを処置するために有効である。
【００５１】
本発明の方法は、この方法が、例えば、−−喫煙者において、または別の実施形態において、喫煙経験者において−−臨床的な測定（例えば、肺気量測定法）によって、または臨床的な症状（例えば、呼吸困難、咳、または痰の生産）によってのいずれかで評価される、ＣＯＰＤの急激な悪化の頻度を低下させるために十分である場合には、ＣＯＰＤを処置するために有効である。
【００５２】
本発明の方法はまた、この方法が、例えば、喫煙者または喫煙経験者において、下部呼吸器の感染の頻度を減少させるために十分である場合にも、ＣＯＰＤを処置するために有効である。
【００５３】
さらに、限定的ではない実施例として、本発明の方法は、現在喫煙している人または喫煙経験者のいずれにおいても、この方法によって、生活の質の尺度、例えば、身体機能、体の痛み、全般的な健康状態、活力、社会的機能、疾患の処置に必要な他の医薬品（例えば、緩和ケア用医薬品または他の医薬品）の用量の減少、疾患の進行が遅くなること、二次感染および／または症状の解消に必要な時間の短縮、ならびに／あるいは患者のより長い期間の生存が改善される場合には、ＣＯＰＤを処置するために有効である。
【００５４】
本発明の方法において使用されるα１−抗トリプシン（ＡＡＴ）は、通常はヒトＡＡＴである。
【００５５】
ヒトＡＡＴの実施形態としては、例えば、ヒトＭ１Ｖ  ＡＡＴ対立遺伝子、ヒトＭ１Ａ  ＡＡＴ対立遺伝子、ヒトＭ２  ＡＡＴ対立遺伝子、ヒトＭ３対立遺伝子、および他の天然のヒトＡＡＴ対立遺伝子のセリンプロテアーゼ阻害活性と配列を、Ｎ末端シグナル配列とともに有するタンパク質、または特定の実施形態において、ヒトＭ１Ｖ  ＡＡＴ対立遺伝子、ヒトＭ１Ａ  ＡＡＴ対立遺伝子、ヒトＭ２  ＡＡＴ対立遺伝子、ヒトＭ３対立遺伝子、および他の天然のヒトＡＡＴ対立遺伝子のセリンプロテアーゼ阻害活性と配列を、Ｎ末端シグナル配列を含まずに有するタンパク質が挙げられる。いくつかの実施形態において、ヒトＡＡＴは、米国特許出願公開番号２００３／００７３２１７（その開示はその全体が参考として本明細書中に援用される）に示されている配列を有する。いくつかの実施形態において、ヒトＡＡＴは、Ｃａｒｒｅｌｌら，Ｎａｔｕｒｅ  ２９８：３２９−３３４（１９８２）に示されている配列を有する。
【００５６】
他の実施形態において、ヒトＡＡＴは、天然のヒト対立遺伝子変異体とは異なるセリンプロテアーゼ阻害活性と一次アミノ酸配列を有するタンパク質である。
【００５７】
ヒトＡＡＴ変異体は、配列の中での１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、および／または置換によって、天然の対立遺伝子の配列とは異なる配列を有し得る。アミノ酸変異体は、通常、上記の対立遺伝子配列の１つに対して、デフォルトパラメーター（マトリックス：ＢＬＯＳＵＭ６２；オープンギャップペナルティー：１１；伸張ギャップペナルティー：１；ギャップｘ＿ドロップオフ：５０；期待値：１０．０；文字列の長さ：３）を用いてｂｌａｓｔｐプログラムを使用してＢＬＡＳＴ  ２  ＳＥＱＵＥＮＣＥＳツールによって報告されるパーセント同一性によって決定すると、少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性がある。その全体が参考として本明細書中に援用される、Ｔａｔｉａｎａら，「Ｂｌａｓｔ  ２  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  −  ａ  ｎｅｗ  ｔｏｏｌ  ｆｏｒ  ｃｏｍｐａｒｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」，ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｌｅｔｔ．１７４：２４７−２５０（１９９９）を参照のこと。このツールは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）ウェブサイトで使用できる。上記の実施形態のいくつかにおいて、ヒトＡＡＴ変異体は、保存的置換によってのみ、天然の対立遺伝子とは異なる。
【００５８】
ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分のアミノ酸配列変異体は、天然のものである場合も、また、合成によって、例えば、以前に単離されたＡＡＴ  ＤＮＡに適切なヌクレオチド変化を導入することによって、もしくは、所望される変異体ポリペプチドの生体外での合成によって調製される場合もある。このような変異体には、成熟ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分のアミノ酸配列の中に１つ以上のアミノ酸の欠失または挿入または置換が含まれる場合がある。
【００５９】
配列変異体には、種々の実施形態において、欠失、挿入、および置換の任意の組み合わせが含まれる場合がある。
【００６０】
典型的な実施形態において、本発明の方法において使用される組成物のヒトＡＡＴ変異体は、デフォルトパラメーターを用いてＢＬＡＳＴＰツールを使用してＮＣＢＩのタンパク質データベースに対して検索配列としてヒトＡＡＴ変異体タンパク質配列全体を使用することによって決定した場合に、任意の他の種由来のＡＡＴオルトログよりも、既知のヒトＡＡＴ対立遺伝子の配列により類似するタンパク質配列を有するであろう。
【００６１】
本発明の方法で使用されるＡＡＴは、例えば、ヒトの血漿から精製し得る。
ＰＲＯＬＡＳＴＩＮ（登録商標）（Ｂａｙｅｒ  Ｃｏｒｐ．）は、正常なヒトドナーからプールされた血漿から精製された天然のグリコシル化されているヒトＡＡＴの滅菌の凍結乾燥された調製物であり、ＡＡＴの先天性欠損および臨床的に明確な汎細葉性肺気腫を有する患者の処置において静脈内投与が承認されている。
【００６２】
ＡＡＴに加えて、ＰＲＯＬＡＳＴＩＮ（登録商標）には、血漿からＡＡＴと一緒に精製されるいくつかのタンパク質が検出可能なレベルで含まれる。これには、α２−プラスミンインヒビター、α１−抗キモトリプシン、Ｃ１エステラーゼインヒビター、抗トロンビンＩＩＩ、ハプトグロビン、アルブミン、α−リポタンパク質、およびＩｇＡが含まれる。ＰＲＯＬＡＳＴＩＮ（登録商標）製品の添付文書（Ｂａｙｅｒ  Ｃｏｒｐ．）；Ｃｏａｎら，Ｖｏｘ．Ｓａｎｇ．４８：３３３−３４２（１９８５）。
【００６３】
ＡＲＡＬＡＳＴ（登録商標）（Ｂａｘｔｅｒ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｃｏｒｐ．から分離したＡｌｐｈａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）は、プールされたヒト血漿から精製された天然のヒトのグリコシル化されているＡＡＴの滅菌の凍結乾燥された調製物であり、これもまた、遺伝性の肺気腫の全身的治療について承認されている。
【００６４】
ＺＥＭＡＩＲＡ（登録商標）（Ａｖｅｎｔｉｓ  Ｂｅｈｒｉｎｇ  ＬＬＣ）は、ＡＡＴの欠損と、肺気腫の臨床的な証拠を有する個体において長期的な増強および維持療法について承認された、プールされたヒト血漿から精製された天然のヒトのグリコシル化されているＡＡＴの滅菌の凍結乾燥された調製物である。
【００６５】
上記の３つのＦＤＡで承認されているヒトＡＡＴの処方物のいずれかを含む天然の供給源から精製されたＡＡＴは、本発明の方法で使用し得るが、組換え体ＡＡＴが現在は好ましく、その理由は、血漿から精製されたＡＡＴは、一緒に精製された血漿タンパク質を含み、そして伝染性の感染性因子を示すからである。
【００６６】
本発明の方法において有用である組換え体ＡＡＴには、典型的な実施形態において、α２−プラスミンインヒビター、α１−抗キモトリプシン、Ｃ１エステラーゼインヒビター、抗トロンビンＩＩＩ、ハプトグロビン、アルブミン、α−リポタンパク質、およびＩｇＡのいずれか１つ以上が、１０％以下、より好ましくは、５％以下、最も好ましくは、１％以下、そしていくつかの実施形態において、０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．２％以下、さらには、０．１％以下（組成物中のタンパク質の重量パーセントとして）含まれる。好ましい実施形態において、本発明の方法で使用されるＡＡＴ組成物には、α２−プラスミンインヒビター、α１−抗キモトリプシン、Ｃ１エステラーゼインヒビター、抗トロンビンＩＩＩ、ハプトグロビン、アルブミン、α−リポタンパク質、またはＩｇＡの１つ以上は全く含まれないであろう。
【００６７】
いくつかの実施形態において、本発明の治療方法で使用されるＡＡＴ組成物には、α２−プラスミンインヒビター、α１−抗キモトリプシン、Ｃ１エステラーゼインヒビター、抗トロンビンＩＩＩ、ハプトグロビン、アルブミン、α−リポタンパク質、およびＩｇＡが１０％以下、５％以下、最も好ましくは、１％以下、そしていくつかの実施形態において、０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．２％以下、さらにいくつかの実施形態において、０．１％以下（組成物中のタンパク質の累積重量パーセントとして）が含まれる。特に好ましい実施形態において、組成物には、α２−プラスミンインヒビター、α１−抗キモトリプシン、Ｃ１エステラーゼインヒビター、抗トロンビンＩＩＩ、ハプトグロビン、アルブミン、α−リポタンパク質、およびＩｇＡのそれぞれは全く含まれない。
【００６８】
種々の実施形態において、本発明の方法で使用される組成物中のＡＡＴ以外の全てのタンパク質の累積重量パーセントは、１０％以下、５％以下、最も好ましくは、１％以下であり、そしていくつかの実施形態において、０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．２％以下であり、さらにいくつかの実施形態において、０．１％以下である。特に好ましい実施形態において、組成物には、ＡＡＴ以外のヒト血漿タンパク質は全く含まれない。いくつかの実施形態において、組成物には、ヒトまたは動物のいずれかのものである、天然のサーファクタントタンパク質または組換え体サーファクタントタンパク質は含まれない。
【００６９】
したがって、本発明の方法において投与される組成物には、タンパク質の重量パーセントとして、通常、ＡＡＴはまたその活性のある部分が、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、なおさらには、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、そしていくつかの実施形態において、なおさらに９９．５％以上が含まれる。
【００７０】
本発明の方法で使用される組換え体ＡＡＴは、任意の当該分野で認識されている宿主細胞、例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）（例えば、Ｋｗｏｎら，Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ．１２４７（２）：１７９−８４（１９９５）を参照のこと））を含む細菌；Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅまたはＰｉｃｈｉａ種を含む酵母のような真菌（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら，Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：７７−８０（１９８４）；Ｋａｎｇら，Ｙｅａｓｔ  １４：３７１−３８１（１９９８）；およびＫｗｏｎら，Ｊ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４２（３）：１９１−５（１９９５）を参照のこと）；植物細胞（例えば、Ｔｅｒａｓｈｉｍａら，Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．５２：５１６−２３（１９９９）およびＨｕａｎｇら，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．１７：１２６−３３（２００１）を参照のこと）、昆虫細胞、または哺乳動物細胞（例えば、Ｇａｒｖｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４：１０５０−４（１９８７）を参照のこと）で調製し得る。これらの開示は、それらの全体が参考として本明細書中に援用される。
【００７１】
本発明の方法で使用されるＡＡＴは、−−血漿由来のものであるか、または組換え体であるかにはかかわらず−−グリコシル化されているものであっても、また、グリコシル化されていないものであっても、いずれでもよい。
【００７２】
「グリコシル化されていない」によって、ＡＡＴタンパク質が、血漿から得られたヒトＡＡＴのＮ結合炭水化物のパターンを有していないことが意図される。典型的な実施形態において、ＡＡＴタンパク質は、翻訳後に付加される糖部分を全て欠いている。他の実施形態において、ＡＡＴタンパク質には糖部分が含まれるが、これは、ヒト血漿から得られるヒトＡＡＴの重量／重量基準での糖含有量の約５０％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、さらには約１％以下である。
【００７３】
グリコシル化されていない組換え体ＡＡＴは、細菌（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）または特定の酵母）のような、発現されたタンパク質をグリコシル化することはない宿主での組換え発現によって、あるいは、１つ以上のグリコシラーゼでグリコシル化する能力のある宿主の中で発現させた組換えによって発現されたタンパク質を処理することによって、得ることができる。グリコシル化されていないＡＡＴはまた、グリコシラーゼでの血漿由来のＡＡＴの処理によって得ることもできる。
【００７４】
例えば、本発明の方法の種々の実施形態において、グリコシル化されていない組換え体ヒトＡＡＴは、例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら，Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：７７−８０（１９８４）（その全体が参考として本明細書中に援用される）に記載されているように、真菌、特に、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのような酵母で生産させることができる。グリコシル化されていない組換え体ヒトＡＡＴは、２００４年８月９日に提出された共有にかかる同時係属中の米国特許出願番号１０／９１４，８６３、およびＷＯ２００５／０１４８２５（これらの開示はそれらの全体が参考として本明細書中に援用される）に詳細に示されている方法にしたがって、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅで効率よく生産させることができる。
【００７５】
本発明の方法で使用されるＡＡＴには、上記に記載される配列のバリエーション以外の、またはそれらに加えて、種々の型の変更または誘導と、変更された（すなわち、自然界には存在しないパターンの）グリコシル化を持たせることができる。
【００７６】
１つのシリーズの実施形態において、例えば、グリコシル化されていないＡＡＴは、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅで発現されたヒト組換え体ＡＡＴである、ｒＡＡＴである。ｒＡＡＴは、アミノ末端にあるＮ−アセチルメチオニン残基を除いて、ヒトの血漿ＡＡＴと同一のアミノ酸配列を有する、３９５アミノ酸のグリコシル化されていないタンパク質である。Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら，Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：７７−８０（１９８４）（その全体が参考として本明細書中に援用される）。
【００７７】
別の実施形態において、ＡＡＴは、アミノ酸末端にＮ−アセチルメチオニン残基を維持しており、３５８位でのバリンのメチオニンでの置換によってｒＡＡＴとは異なる配列を有する、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅで生産された、酸化に対して安定であるグリコシル化されていないＡＡＴであるｒＡＡＴ−ｖａｌである。
【００７８】
本発明の方法のいくつかの実施形態において、ＡＡＴは、プロテアーゼ阻害活性を有する短縮型（断片、一部、またはドメインと同義）であり；このような機能的活性のある部分は、上記のヒトＡＡＴタンパク質の機能的活性のある部分である場合も、また、ヒトＡＡＴタンパク質変異体である場合もある。
【００７９】
種々の実施形態において、本発明の方法で使用されるＡＡＴの機能的活性のある部分は、エラスターゼ、カリクレイン、カテプシン−Ｇ、トリプシン、肥満細胞チマーゼ、およびキモトリプシンからなる群より選択される少なくとも第１のプロテアーゼに対して阻害性である。種々の実施形態において、本発明の方法で使用されるＡＡＴの機能的活性のある部分は、さらに、エラスターゼ、カリクレイン、カテプシン−Ｇ、トリプシン、肥満細胞チマーゼ、およびキモトリプシンからなる群より選択される少なくとも第２のプロテアーゼに対して阻害性である。典型的な実施形態において、ＡＡＴ部分は、ヒト型のそれぞれの酵素に対して阻害性である。いくつかの実施形態において、機能的活性のある部分は、完全なタンパク質よりも小さいプロテアーゼ阻害活性を有する。他の実施形態において、機能的活性のある部分は、全長のタンパク質よりもプロテアーゼの阻害においてより活性が高い。
【００８０】
ＡＡＴの機能的活性のある部分は当該分野で公知であり（Ｓｃｈａｓｔｅｅｎら，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：１７−２６（１９９１）（その開示はその全体が参考として本明細書中に援用される）、ＡＡＴの短縮型および断片は、当該分野の標準的な方法を日常的に行われているように使用することにより、プロテアーゼ阻害活性について容易に評価し得る。例えば、ＡＡＴの一部分は、Ｂｅａｔｔｙら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５５：３９３１（１９８０）（その全体が参考として本明細書中に援用される）によって報告されているようなブタの膵臓エラスターゼ阻害アッセイを使用して、エラスターゼ阻害活性について容易に評価し得る。
【００８１】
特定の実施形態において、ＡＡＴの機能的活性のある部分は、米国特許第６，０６８，９９４号および同第４，７３２，９７３号に、ならびにＡ．Ｈｅｒｃｚ，「Ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ  ｃｌｅａｖａｇｅｓ  ｉｎ  ａｌｐｈａ−ｏｎｅ  ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ  ａｎｄ  ｍｉｃｒｏｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ」，Ｂｉｏｃｈｅｍ，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１２８：１９９−２０３（１９８５）（これらの開示はそれらの全体が参考として本明細書中に援用される）に記載されている部分である。
【００８２】
他の実施形態において、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分は、別のタンパク質またはその一部に融合され、そして、有効量の融合タンパク質が吸入によって投与される。
【００８３】
種々の実施形態において、ＡＡＴだけによって阻害されるものに加えて、融合タンパク質はプロテアーゼも阻害する。いくつかの実施形態において、ＡＡＴに融合されたタンパク質またはその一部は、融合タンパク質に標的化活性を付与する。
【００８４】
特定の実施形態において、融合は、２００１年１２月１８日に提出され、米国特許出願公開番号２００３／００７３２１７として公開された共有にかかる同時係属中の米国特許出願番号１０／０２５，５１４（その開示はその全体が参考として本明細書中に援用される）に記載されているように、別のプロテアーゼインヒビターへの融合である。
【００８５】
例えば、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分は、分泌型の白血球プロテアーゼインヒビター（ＳＬＰＩ）またはその機能的活性のある部分に融合される場合がある。典型的なそのような実施形態において、ＳＬＰＩタンパク質またはその一部はヒトＳＬＰＩである。
【００８６】
ヒトＳＬＰＩのＤＮＡ配列およびアミノ酸配列は、Ｈｅｉｎｚｅｌら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１６０：６１−６７（１９８７）（その全体が参考として本明細書中に援用される）によって報告されている。いくつかの特許に、ＳＬＰＩ、その核酸、および／またはＳＬＰＩの機能的活性のある部分が記載されており（例えば、米国特許第４，７６０，１３０号；同第５，４６４，８２２号；同第４，８４５，０７６号；同第５，６３３，２２７号；同第５，８５１，９８３号；同第５，８７１，９５６号；同第５，９００，４００号；同第６，０１７，８８０号；および同第６，２９１，６６２号（これらの開示はそれらの全体が参考として本明細書中に援用される）、その任意のものを、本発明の方法の実施形態においてＡＡＴ／ＳＬＰＩ融合タンパク質に使用し得る。
【００８７】
ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分がＳＬＰＩの機能的活性のある部分に融合される実施形態において、ＳＬＰＩの機能的活性のある部分は、好中球エラスターゼ、肥満細胞チマーゼ、トリプターゼ、およびキモトリプシンからなる群より選択される少なくとも第１のプロテアーゼに対して阻害性である。
【００８８】
特定の実施形態において、ＡＡＴをコードするタンパク質配列またはその機能的活性のある部分は、そのＣ末端が、ＳＬＰＩまたはその機能的活性のある部分のＮ末端に連結される。他の実施形態において、ＡＡＴをコードするタンパク質配列またはその機能的活性のある部分は、そのＮ末端が、ＳＬＰＩまたはその機能的活性のある部分のＣ末端に連結される。
【００８９】
融合タンパク質の２つのタンパク質の融合には、１つのペプチド結合を用いることができ、また、融合タンパク質の２つのタンパク質の間に融合連結を含んでいる１つ以上のさらなるアミノ酸を存在させることもできる。１つの実施形態において、ＡＡＴとＳＬＰＩの間にメチオニンが存在する。ＡＡＴまたはＳＬＰＩに由来するものではないさらなる配列（単数または複数）が、本発明の融合タンパク質の１つ以上の位置に存在する場合もある。
【００９０】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、有効量のα１−抗トリプシン（ＡＡＴ）／ＳＬＰＩ融合タンパク質を吸入によってＣＯＰＤを発症しているか、またはＣＯＰＤを発症する危険性のある個体の肺に投与する工程を包含する。融合タンパク質には、ＡＡＴの約１位から約３９４位までのアミノ酸と、ＳＬＰＩの約１位から約１０７位までのアミノ酸が含まれる。１つのこのような実施形態において、ＡＡＴの約１位から約３９４位までのアミノ酸のカルボキシ末端が、ＳＬＰＩの約１位から約１０７位までのアミノ酸のアミノ末端に連結される（すなわち、融合タンパク質には、そのアミノ末端からカルボキシ末端の方向に向かって、ＳＬＰＩの約１位から約１０７位までのアミノ酸に融合された、ＡＡＴの約１位から約３９４位までのアミノ酸が含まれる）。別の実施形態において、ＳＬＰＩの約１位から約１０７位までのアミノ酸のカルボキシ末端は、ＡＡＴの約１位から約３９４位までのアミノ酸のアミノ末端に連結される（すなわち、融合タンパク質には、そのアミノ末端からカルボキシ末端の方向に向かって、ＡＡＴの約１位から約３９４位までのアミノ酸に融合された、ＳＬＰＩの約１位から約１０７位までのアミノ酸が含まれる）。
【００９１】
種々の他の実施形態において、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分は、メタロプロテイナーゼインヒビターまたはその機能的活性のある部分に融合され、有効量の融合タンパク質が吸入によって投与される。
【００９２】
いくつかの実施形態において、例えば、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分が、マトリックスメタロプロテアーゼの組織インヒビター（「マトリックスメタロプロテイナーゼの組織インヒビター」と同義）（ＴＩＭＰ）またはその機能的活性のある部分に融合される。
【００９３】
種々の実施形態において、ＴＩＭＰは、ＴＩＭＰ−１、ＴＩＭＰ−２、ＴＩＭＰ−３、およびＴＩＭＰ−４から選択される。全ての４つのヒトＴＩＭＰのアミノ酸配列とヌクレオチド配列は特性決定されている：ＴＩＭＰ−１（Ｄｏｃｈｅｒｔｙら，Ｎａｔｕｒｅ  ３１８：６６−６９、１９８５）；ＴＩＭＰ−２（Ｂｏｏｎｅら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８７：２８００−２８０４）；ＴＩＭＰ−３（Ｗｉｌｄｅら，ＤＮＡ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１３：７１１−７１８）；およびＴＩＭＰ−４（Ｈａｗｋｉｎｓら，米国特許第５，６４３，７５２）。これらの参考文献の開示は、それらの全体が参考として本明細書中に援用される。
【００９４】
ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分がＴＩＭＰの機能的活性のある部分に融合される実施形態において、ＴＩＭＰの機能的活性のある部分は、活性化された間質コラゲナーゼ、９２ｋＤａのＩＶ型コラゲナーゼ、ストロメリシン、ゼラチナーＡおよびＢ、７２ｋＤａのＩＶ型コラゲナーゼ、コラゲナーゼ１、他のゼラチナーゼ、および他のコラゲナーゼからなる群より選択される少なくとも第１のプロテアーゼに対して阻害性である。他の実施形態において、ＴＩＭＰの機能的活性のある部分は、同じ群から選択される少なくとも第２のプロテアーゼに対して阻害性である。
【００９５】
１つのシリーズの実施形態において、例えば、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分は、ＴＩＭＰ−１またはその機能的活性のある部分に融合される。ＴＩＭＰ−１の機能的活性のある部分は、プロテアーゼ阻害活性、標的化活性、またはその両方を有する場合がある。いくつかの実施形態において、標的化活性は、マクロファージ標的化活性である。
【００９６】
種々の実施形態において、ＴＩＭＰ−１のＮ末端部分が使用される。いくつかの実施形態において、最初のメチオニンを含む、したがって、１２７個のアミノ酸（最初のメチオニンとＴＩＭＰ−１のＮ末端の１〜１２６位のアミノ酸）を含むＴＩＭＰ−１断片が使用される。この断片は、本明細書中ではＮ−ＴＩＭＰ  １−１２７（配列番号２２を参照のこと）と記載される。種々の実施形態において、ＴＩＭＰ−１のＮ末端断片は、天然の形態の最初の１２７個のＮ末端アミノ酸である。この後者の断片の１２７番目のアミノ酸は遊離のシステインであり、したがって、ジスルフィド結合を形成させて沈殿させることができ、これは、本発明の融合タンパク質を構築するための１つの方法である。種々の実施形態において、最初のメチオニンを有しており、したがって、１２８個のアミノ酸（最初のメチオニンとＴＩＭＰ−１のＮ末端の１〜１２７位のアミノ酸）を含む、この後者の断片が使用される。この断片は、本明細書中ではＮ−ＴＩＭＰ  １−１２８と記載される（配列番号２４を参照のこと）。
【００９７】
本発明のＡＡＴ−ＴＩＭＰ融合タンパク質において、ＡＡＴはＴＩＭＰのＮ末端に対してＣ末端で連結させることができ、またはＴＩＭＰは、ＡＡＴのＮ末端に対してＣ末端で融合させることができる。２つの部分−−ＡＡＴに由来する部分と、ＴＩＭＰに由来する部分−−の融合は、１つのペプチド結合を用いることができ、また、融合タンパク質の２つのタンパク質の間に融合連結を含んでいる１つ以上のさらなるアミノ酸を存在させることもできる。
【００９８】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、α１−抗トリプシンの約１位から約３９４位までのアミノ酸と、メタロプロテアーゼ−１の組織インヒビターの約１位から約１８４位までのアミノ酸を含む、ＡＡＴ−ＴＩＭＰ１融合タンパク質を投与する工程を包含する。１つのこのような実施形態において、ＡＡＴの約１位から約３９４位までのアミノ酸のカルボキシ末端は、メタロプロテアーゼ−１の組織インヒビターの約１位から約１８４位までのアミノ酸のアミノ末端に連結される（すなわち、融合タンパク質には、そのアミノ末端からそのカルボキシ末端の方向に向かって、メタロプロテアーゼ−１の組織インヒビターの約１位から約１８４位までのアミノ酸に融合された、ＡＡＴの約１位から約３９４位までのアミノ酸が含まれる）。別の実施形態において、メタロプロテアーゼ−１の組織インヒビターの約１位から約１８４位までのアミノ酸のカルボキシ末端が、ＡＡＴの約１位から約３９４位までのアミノ酸のアミノ末端に連結される（すなわち、融合タンパク質には、そのアミノ末端からそのカルボキシ末端の方向に向かって、ＡＡＴの約１位から約３９４位までのアミノ酸に融合された、メタロプロテアーゼ−１の組織インヒビターの約１位から約１８４位までのアミノ酸が含まれる）。
【００９９】
さらに他の実施形態において、本発明の方法は、ＴＩＭＰ−２の機能的活性のある部分に融合されたＡＡＴまたはその機能的活性のある部分を投与する工程を包含する。ＴＩＭＰ−２の機能的活性のある部分は、Ｗｉｌｌｅｎｂｒｏｃｋら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３２：４３３０−４３３７（１９９３）に開示されている部分であり得る。
【０１００】
他の実施形態において、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分は、システインプロテアーゼまたはその機能的活性のある部分に融合される。
【０１０１】
いくつかの実施形態において、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分は、シスタチン、ステフィン、またはキニノゲン、あるいはそれらの機能的活性のある部分に連結される。
【０１０２】
特定の実施形態において、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分は、ペプスタチンまたはその機能的活性のある部分のような、アスパルチルプロテアーゼインヒビターに連結される。
【０１０３】
種々の実施形態において、本発明の方法において有用であるＡＡＴ融合タンパク質の配列は、その全体が参考として本明細書中に援用される、添付の配列表に示される配列のグループから選択される配列を有する。
【０１０４】
種々の実施形態において、融合タンパク質を構成する個々のタンパク質（例えば、ＡＡＴおよびＴＩＭＰ−１）またはその機能的活性のある部分の自然界での配列が、必ずしも融合タンパク質において使用される必要はない。
【０１０５】
このような実施形態において、アミノ酸配列変異体を、融合パートナーまたはそれらの機能的活性のある部分のうちの１つまたは両方について使用し得、これらは通常、デフォルトパラメーター（マトリックス：ＢＬＯＳＵＭ６２；オープンギャップペナルティー：１１；伸張ギャップペナルティー：１；ギャップｘ＿ドロップオフ：５０；期待値：１０．０；文字列の長さ：３）を用いてｂｌａｓｔｐプログラムを使用してＢＬＡＳＴ  ２  ＳＥＱＵＥＮＣＥＳツールによって報告されるパーセント同一性によって決定すると、天然のタンパク質−−例えば、Ｃａｒｒｅｌｌら，Ｎａｔｕｒｅ  ２９８：３２９−３３４，１９８２およびＤｏｃｈｅｒｔｙら，Ｎａｔｕｒｅ  ３１８：６６−６９，１９８５に示されている成熟ヒトＡＡＴまたはＴＩＭＰ−１−−に対して少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する。その全体が参考として本明細書中に援用される、Ｔａｔｉａｎａら，「Ｂｌａｓｔ  ２  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  −  ａ  ｎｅｗ  ｔｏｏｌ  ｆｏｒ  ｃｏｍｐａｒｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」，ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｌｅｔｔ．１７４：２４７−２５０（１９９９）を参照のこと。このツールは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｏｆ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）ウェブサイトで使用できる。
【０１０６】
上記の融合タンパク質の生産は、２００１年１２月１８日に提出され、米国特許出願公開番号２００３／００７３２１７として公開された共有にかかる米国特許出願番号１０／０２５，５１４（その開示はその全体が参考として本明細書中に援用される）において具体的にさらに記載されているように、周知の当該分野で受け入れられている手順によって行われる。
【０１０７】
本発明の方法において、α１−抗トリプシン（ＡＡＴ）またはその機能的活性のある部分は、吸入によってＣＯＰＤを発症している個体またはＣＯＰＤを発症する危険性のある個体の肺に投与される。
【０１０８】
「吸入」は、処置される個体による目的の化合物の吸入により下気道の組織に投与され、それによって化合物が肺に送り込まれる、有効量の化合物を送達する化合物の投与方法を意味する。本明細書中で使用される場合は、「投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」は「送達（ｄｅｌｉｖｅｒｙ）」と同義である。
【０１０９】
吸入（肺投与）により治療活性のある因子を投与するための当該分野で公知の任意の種々の手段を、本発明の方法で使用し得る。
【０１１０】
このような送達方法は当該分野で周知である。例えば、Ｍ．Ｋｅｌｌｅｒ（１９９９））Ｉｎｔ．Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  １８６：８１−９０；Ｍ．Ｅｖｅｒａｒｄ（２００１）Ｊ．Ａｅｒｏｓｏｌ  Ｍｅｄ．１４（Ｓｕｐｐｌ  １）：Ｓ−５９−Ｓ−６４；Ｔｏｇｇｅｒ  ａｎｄ  Ｂｒｅｎｎｅｒ（２００１）Ａｍ．Ｊ．Ｎｕｒｓｉｎｇ  １０１：２６−３２を参照のこと。ジェットネブライザーおよび超音波ネブライザーを含む液体処方物用の市販されているエアロゾル化装置（Ａｅｒｏｓｏｌｉｚｅｒ）が本発明の方法に有用である。液体形態での送達については、液体処方物を直接エアロゾル化し得、そして凍結乾燥された粉末は、再構成の後にエアロゾル化し得る。乾燥粉末形態での送達については、処方物は、凍結乾燥され、粉砕された粉末として調製し得る。さらに、処方物は、過フッ化炭化水素処方物または他の高圧ガスと、定量ディスペンサーを使用して送達し得る。送達デバイスおよび方法については、例えば、米国特許第４，１３７，９１４号；同第４，１７４，７１２号；同第４，５２４，７６９号；同第４，６６７，６８８号；同第５，６７２，５８１号；同第５，７０９，２０２号；同第５，７８０，０１４号；同第５，６７２，５８１号；同第５，９１５，３７８号；同第５，９９７，８４８号；同第６，１２３，０６８号；同第６，１２３，９３６号；同第６，３９７，８３８号（これらの開示はそれらの全体が参考として本明細書中に援用される）を参照のこと。
【０１１１】
特定の実施形態において、例えば、液体を、下気道に吸入させることができる大きさのエアロゾルに変化させるネブライザーが、マスクまたはマウスピースのいずれかと組み合わせて使用される。本発明の方法の特定の実施形態での使用に適するネブライザーは、空気式または超音波式の、連続型または間欠型のいずれかであり得る。本発明の方法での使用に適する種々のネブライザーは、Ａｅｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ．（Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）から市販されている。
【０１１２】
他の実施形態において、当該分野で公知の定量吸入装置（ＭＤＩ）が使用される。なお他の実施形態において、乾燥粉末送達装置もまた公知であり、使用し得る。
【０１１３】
他の実施形態において、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分は、大きさおよび／または形状が巻きタバコとほぼ同じであるデバイスを使用して、肺に送達される。例えば、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分は、米国特許第６，６３７，４３０号；同第６，８１０，８８３号；同第６，５９５，２０９号；同第６，１７８，９６９号；同第６，１７８，９６９号；同第５，７４６，２２７号；同第５，６８７，７４６号；同第５，４４１，０６０号；同第５，２８７，８５０号；同第５，１５９，９４０号；同第５，１１３，８５５号；同第４，８９２，１０９号；同第４，７６５，３４８号；同第４，７３５，２１７号；同第４，３９３，８８４号；および同第４，０８３，３７２号（これらの開示はそれらの全体が参考として本明細書中に援用される）に開示されているデバイスのようなデバイスを使用して送達し得る。
【０１１４】
特定のこれらの実施形態において、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分はタバコと混合される。特定の実施形態において、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分は、デバイスの口と接するフィルターまたは容器部分に存在される。
【０１１５】
用量の投与経路に応じて、ＡＡＴ−−またはその機能的活性のある部分もしくはその融合体（以下の目的については、まとめて「ＡＡＴ」とする）−−は、液体組成物として投与される場合も、また、乾燥組成物として投与される場合もある。
【０１１６】
ＡＡＴの液体組成物は、通常は、凍結している液体組成物を融解させることによって、またはより一般的には、乾燥組成物を再水和（再構成）させることによって、肺（すなわち、吸入）投与のために調製される。
【０１１７】
例えば、本発明の方法での使用に適するＡＡＴの液体組成物は、血漿由来のグリコシル化されているヒトＡＡＴの凍結乾燥された調製物、例えば、ＰＲＯＬＡＳＴＩＮ（登録商標）、ＡＲＡＬＡＳＴ（登録商標）、またはＺＥＭＡＩＲＡ（登録商標）を再水和（再構成）させることによって調製し得る。
【０１１８】
しかし、他の実施形態において、本発明の方法での使用に適するＡＡＴの液体組成物は、組換え体ＡＡＴ、通常は、ヒトＡＡＴ（これには、ｒＡＡＴ、ならびに、ヒトＡＡＴの短縮型および融合体のような、グリコシル化されていないヒトＡＡＴが含まれる）を含む乾燥組成物を再水和（再構成）させることによって調製し得る。
【０１１９】
１つのシリーズの実施形態において、例えば、本発明の方法での使用に適するＡＡＴの液体組成物は、グリコシル化されていない組換え体α１−抗トリプシン（ＡＡＴ）と少なくとも１つのハライド塩を含む乾燥組成物を再水和させることによって調製し得る。組換え体ＡＡＴは、典型的な実施形態において、組換え体であるヒトＡＡＴであり、多くの場合にはｒＡＡＴである。
【０１２０】
１つのシリーズの実施形態において、例えば、乾燥組成物には、１００ｍｇのグリコシル化されていないＡＡＴ（例えば、ヒトＡＡＴ、特に、ｒＡＡＴ）あたり０．１から２０００ミリ等量のハライド塩、１００ｍｇのグリコシル化されていないＡＡＴ（例えば、ヒトＡＡＴ、特に、ｒＡＡＴ）あたり５０〜５００ミリ等量、さらには、１００〜２００ミリ等量のハライド塩が含まれ得る。
【０１２１】
乾燥組成物の典型的な実施形態において、ハライド塩は、１００ｍｇのＡＡＴあたり少なくとも約１０マイクロモル、１００ｍｇのＡＡＴあたり少なくとも約５０マイクロモル、１００ｍｇのＡＡＴあたり少なくとも約１００マイクロモル、さらには、１００ｍｇのＡＡＴあたり少なくとも約２００マイクロモルのレベルで存在する。いくつかの実施形態において、ハライド塩は、１００ｍｇのＡＡＴあたり約２００マイクロモルのレベルで存在する。
【０１２２】
通常は、ハライド塩は、１００ｍｇのＡＡＴあたり約２０００ミリモルを超えないレベルで、１００ｍｇのＡＡＴあたり約１５００ミリモル、１００ｍｇのＡＡＴあたり約１０００ミリモル以下、１００ｍｇのＡＡＴあたり約１００ミリモル以下、１００ｍｇのＡＡＴあたり約１０ミリモル以下、さらには、１００ｍｇのＡＡＴあたり約１ミリモル以下のレベルで存在する。
【０１２３】
特定の実施形態において、ハライド塩は、１００ｍｇのＡＡＴあたり約１００〜５００マイクロモルのレベルで、乾燥組成物中に存在する。
【０１２４】
ハライド塩は、例えば、塩化物、臭化物、またはヨウ化物であり得る。陽イオンは、例えば、Ｎａ＋、Ｋ＋、または他の一価もしくは二価の陽イオンである。
【０１２５】
特定の実施形態において、ハライド塩はＮａＣｌである。種々のこのような実施形態において、本発明の乾燥組成物には、ｒＡＡＴとＮａＣｌが含まれる。
【０１２６】
特定のこれらの実施形態において、ＮａＣｌは、１００ｍｇのｒＡＡＴあたり少なくとも約１０マイクロモル、１００ｍｇのｒＡＡＴあたり５０マイクロモル、さらには、１００ｍｇのｒＡＡＴあたり少なくとも約１００マイクロモルのレベルで存在する。いくつかの実施形態において、ＮａＣｌは、１００ｍｇのｒＡＡＴあたり約１０００ミリモル以下、１００ｍｇのｒＡＡＴあたり約５００ミリモル以下、さらには、１００ｍｇのｒＡＡＴあたり約２５０ミリモル以下のレベルで存在する。種々の実施形態において、ＮａＣｌは、１００ｍｇのｒＡＡＴあたり約２００マイクロモルのレベルで存在する。
【０１２７】
乾燥組成物には、グリコシル化されていないＡＡＴと少なくとも１種のハライド塩に加えて、複数の成分が含まれる場合がある。
【０１２８】
いくつかの実施形態において、組成物にはさらに、少なくとも１つの還元剤が含まれる。少なくとも１つの還元剤は、例えば、ジチオスレイトール、システイン、グルタチオン、およびＮ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）からなる群より選択し得る。
【０１２９】
特定の実施形態において、還元剤はＮＡＣである。
【０１３０】
ＮＡＣは、例えば、１００ｍｇのＡＡＴあたり少なくとも約１マイクロモル、１００ｍｇのＡＡＴあたり少なくとも約１０マイクロモル、さらには、１００ｍｇのＡＡＴあたり少なくとも約１００マイクロモルのレベルで存在し得る。ＮＡＣは、通常、そのような実施形態において、１００ｍｇのＡＡＴあたり約１０００マイクロモル以下、１００ｍｇのＡＡＴあたり約５００マイクロモル以下、さらには、１００ｍｇのＡＡＴあたり約１００マイクロモル以下のレベルで存在する。
【０１３１】
組成物には、加えてまたは代わりに、例えば、アスコルビン酸またはＬ−Ｍｅｔのような抗酸化剤が、例えば、５０ｍｇ／ｍｌのＡＡＴへと再構成された際に１０ｍＭまでの量で、さらに含まれる場合がある。
【０１３２】
組成物には、加えてまたは代わりに、それから組成物が乾燥される溶液のｐＨの緩衝化に有用であり、組成物がその後に再水和された液体組成物のｐＨの緩衝化に有用である物質がさらに含まれる場合がある。
【０１３３】
緩衝液の量は、５０ｍｇ／ｍｌのＡＡＴとするような脱イオン水中での組成物の例示的な再水和の際に、再構成された溶液が、少なくとも約６．０、約６．１、約６．２、約６．３、約６．４、約６．５、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９、さらには約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、またはそれ以上のｐＨを有するような量であり得る。いくつかの実施形態において、緩衝液の量は、５０ｍｇ／ｍｌのＡＡＴとするような脱イオン水中の組成物の例示的な再水和の際に、再構成された溶液が、約７．５以下、約７．４以下、約７．３以下、約７．２以下、約７．１以下、約７．０以下、さらには、約６．９以下、約６．８以下、またさらには、約６．７以下、約６．６以下、あるいは約６．５以下のｐＨを有するような量である。
【０１３４】
例えば、組成物にはさらに、リン酸塩、クエン酸塩、ヒスチジン、またはそれらの混合物が、いくつかの実施形態において、５０ｍｇ／ｍｌのＡＡＴとするような例示的な再構成の際に、５〜５０ｍＭ、好ましくは、１０〜２０ｍＭの量で含まれる場合がある。
【０１３５】
いくつかの実施形態において、組成物にはさらに、乳酸、アスコルビン酸、マレイン酸、シュウ酸、マロン酸、リンゴ酸、コハク酸、グルコン酸、およびグルタミン酸の１つ以上を含む、クエン酸以外の有機酸（および有機酸の塩）が含まれる。
【０１３６】
いくつかの実施形態において、組成物にはさらに、グリコシル化されていないＡＡＴと少なくとも１種のハライド塩に加えて、１つ以上の界面活性剤または他の表面活性剤が含まれる場合がある。
【０１３７】
本発明の乾燥組成物にはさらに、キレート化剤（例えば、ＥＤＴＡ）、好ましくは、組成物のハライド塩の陽イオンまたは陰イオンのいずれをも有意にはキレート化することはない型のものであり、そのような量のキレート化剤が含まれる場合がある。
【０１３８】
種々の実施形態には、通常、遊離の糖（すなわち、組成物のＡＡＴに共有結合されていない糖）は含まれない。
【０１３９】
したがって、投与される液体組成物がそれから再水和される乾燥組成物の典型的な実施形態では、ガラクトース、Ｄ−マンノース、およびソルボースのような単糖；乳糖およびトレハロースのようなニ糖；２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンのようなシクロデキストリン；ならびに、ラフィノース、マルトデキストリン、およびデキストランのような多糖；ポリエチレングリコールのような多価高分子；ならびに、イノシトール、リビトール、ガラクシチトール、およびリビトールのようなアルジトールのいずれか１つ以上が、重量パーセント基準で、０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．２％以下、さらには、０．１％以下、０．０５％以下、さらに、約０．０１％以下含まれる。本発明の好ましい実施形態において、乾燥組成物には遊離の糖は全く含まれない。
【０１４０】
グリコシル化されていないＡＡＴに糖部分が全く含まれないいくつかの実施形態において、乾燥組成物には、任意の糖または炭水化物が、重量パーセント基準で、約０．５％以下、約０．４％以下、約０．３％以下、約０．２％以下、さらには、約０．１％以下、約０．０５％以下、さらに、約０．０１％以下含まれる。いくつかの実施形態において、組成物には検出可能な糖または炭水化物は全く含まれない。
【０１４１】
本発明のＡＡＴ組成物にはまた、当該分野で公知であるように、肺投与に適切な賦形剤と他の成分もまた含まれる場合がある。保存剤が、状況に応じて、組成物の完全性を維持するために、本発明で使用される組成物に含められる。
【０１４２】
本発明の組成物には、グリコシル化されていないＡＡＴと少なくとも１種のハライド塩に加えて、１つ以上の物質が含まれる場合があるが、典型的な実施形態には、通常、残留水分量、粒子の大きさ、再水和の容易さ、および安定性を含む所望される物理的形態を得るために不可欠なわずか数種のそのようなさらなる成分が含まれる。
【０１４３】
種々の実施形態において、組成物は滅菌性である。これは、例えば、滅菌の濾過膜に通過させる濾過によって、容易に得られる。
【０１４４】
以下にさらに記載されるように、本発明の方法で有用な乾燥組成物は、凍結乾燥および噴霧乾燥を含む種々の公知の技術によって簡単に調製される。
【０１４５】
調製される手段にはかかわらず、乾燥組成物には、典型的な実施形態において、例えば、乾燥組成物の無水メタノールでの抽出の際に簡単に行われるＫａｒｌ  Ｆｉｓｃｈｅｒ電量分析法によって評価した場合には、約５％以下の残留水分量が含まれる。
【０１４６】
種々の実施形態において、乾燥組成物には、約４．５％以下、約４％以下、約３．５％以下、約３％以下、約２．５％以下、約２．０％以下、約１．５％以下、約１％以下の残留水分量が含まれる。特定の実施形態において、乾燥組成物には、約０．９％以下、約０．８％以下、約０．７％以下、約０．６％以下、約０．５％以下、そしてさらに、いくつかの実施形態において、約０．４％以下の残留水分量が含まれる。
【０１４７】
使用前に再水和するように−−例えば、滅菌水、生理食塩水、デキストロース溶液、Ｄ５生理食塩水、またはリンガー溶液のような臨床的に許容される滅菌性の希釈剤の添加によって−−意図される乾燥組成物の実施形態において、粒子の大きさの範囲は、以下にさらに記載される乾燥粉末の吸入による投与のために意図される実施形態における大きさの範囲よりも大きい場合がある。
【０１４８】
液体組成物になるように再水和されることが意図される実施形態において、例えば、１０μｍまで、２０μｍまで、３０μｍまで、４０μｍまで、さらには５０μｍまで、またはそれ以上の中央粒径（ＭＭＤ）を有する粒子が有用であり得る。
【０１４９】
投与の前に液体組成物になるように再水和されることが意図される実施形態において、乾燥組成物は易溶性である。
【０１５０】
いくつかの実施形態において、例えば、固形分の少なくとも８０％が、十分な脱イオン水（または注射用滅菌水）の添加後１時間以内に、室温で溶解し、５０ｍｇ／ｍｌの名目上のＡＡＴ濃度が得られる。他の実施形態において、固形分の少なくとも８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、そしてさらには、８６％、８７％、８８％、８９％も、なおさらには、９０％もが、５０ｍｇ／ｍｌの名目上のＡＡＴ濃度を生じるために十分な容量の脱イオン水の添加により１時間以内に溶解する。本発明の好ましい実施形態において、固形分の少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、さらには、９５％、９６％も、またはそれ以上が、５０ｍｇ／ｍｌの名目上のＡＡＴ濃度を生じるために十分な脱イオン水の添加により１時間以内に溶解する。
【０１５１】
典型的な実施形態において、本発明の乾燥組成物は、５０℃で３ヶ月間、またはそれと同等の条件下での保存後の再水和の際に、最初のプロテアーゼ阻害活性の少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、さらには、少なくとも約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、および約８９％を保持する。特定の実施形態において、本発明の乾燥組成物は、５０℃で３ヶ月間、またはそれと同等の条件下での保存後の再水和の際に、最初のプロテアーゼ阻害活性の少なくとも９０％、さらには、９１％、９２％、９３％、９４％の、そして最も好ましい実施形態において、さらに少なくとも約９５％またはそれ以上を保持する。
【０１５２】
最初の活性の保持の割合（安定性）は、例えば、発色基質を使用する生体外でのエラスターゼ阻害アッセイのような当業者に公知のアッセイを使用して評価し得る。例えば、Ｂｅａｔｔｙら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５５：３９３１（１９８０）（その全体が参考として本明細書中に援用される）によって報告されたブタの膵臓エラスターゼ阻害アッセイを参照のこと。
【０１５３】
種々の実施形態において、乾燥組成物は、≦５℃で２年間、またはそれと同等の条件下での保存後の再水和の際に、最初のセリンプロテアーゼ阻害活性の少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、さらには、少なくとも約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、および約８９％を保持する。特定の実施形態において、≦５℃で２年間、またはそれと同等の条件下での保存後の再水和の際に、最初のセリンプロテアーゼ阻害活性の少なくとも９０％、さらに、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％の、そして最も好ましい実施形態において、さらに、少なくとも約９５％またはそれ以上の保持を示す。
【０１５４】
好ましい実施形態において、乾燥組成物は、≦５℃で２年以上、さらには、≦５℃で３年間の間、最初のセリンプロテアーゼ阻害活性の少なくとも９０％を保持する。
【０１５５】
種々の実施形態において、乾燥組成物は低いＡＡＴ変性レベルを示す。変性は、凝集の形成の評価によってモニターし得、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）ＨＰＬＣ法を使用して単量体の割合（％）として有効な変性していないＡＡＴが報告される。
【０１５６】
典型的な実施形態において、ＡＡＴは、５０℃で３ヶ月間、またはそれと同等の条件下での保存後に、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、さらには、少なくとも約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、および約８９％の単量体を保持する。いくつかの実施形態において、５０℃で３ヶ月間、またはそれと同等の条件下での保存後に、少なくとも約９０％、さらには、少なくとも約９１％、約９２％、約９３％、約９４％の、そして最も好ましい実施形態において、さらに少なくとも約９５％またはそれ以上の単量体を保持する。
【０１５７】
典型的な実施形態において、ＡＡＴは、≦５℃で２年間、またはそれと同等の条件下での保存後に、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、さらには、少なくとも約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、および約８９％の単量体を保持する。特定の実施形態において、ＡＡＴは、≦５℃で２年間、またはそれと同等の条件下での保存後に、少なくとも約９０％、さらに、少なくとも約９１％、約９２％、約９３％、約９４％の、そして最も好ましい実施形態において、さらに少なくとも約９５％またはそれ以上の単量体を保持する。
【０１５８】
上記の乾燥組成物は、グリコシル化されていないＡＡＴと少なくとも１種のハライド塩を含む液体組成物を、残留水分含有量が約２％以下になるまで十分に乾燥させることによって調製し得る。
【０１５９】
典型的な実施形態において、液体組成物は、約２．０％以下、約１．９％以下、約１．８％以下、約１．７％以下、約１．６％以下、約１．５％以下、約１．４％以下、約１．３％以下、約１．２％以下、約１．１％以下、さらには、約１．０％以下の残留水分量となるまで十分に乾燥され、種々の実施形態において、さらに低い残留水分量を有する。このような実施形態では、約０．９％以下、約０．８％以下、約０．７％以下、約０．６％以下、さらには、約０．５％以下、あるいはさらに低い残留水分量を有する場合もある。
【０１６０】
広く理解されているように、液体組成物中に存在するグリコシル化されていないＡＡＴは、得られる乾燥組成物中に存在するとして上記に記載された種のいずれであってもよく、これには、グリコシル化されていないヒトＡＡＴ、例えば、ｒＡＡＴ、ヒトＡＡＴの機能的活性のある部分、ならびに、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分と、ＳＬＰＩ、ＴＩＭＰ−１、ＴＩＭＰ−２、ＴＩＭＰ−３、ＴＩＭＰ−４、システインプロテアーゼインヒビター、およびアスパルチルプロテアーゼインヒビターからなる群より選択されるプロテアーゼインヒビター、またはそれらの機能的活性のある部分を含むタンパク質のようなＡＡＴ融合タンパク質（グリコシル化されているもの、およびグリコシル化されていないものの両方）が含まれる。
【０１６１】
典型的な実施形態において、グリコシル化されていないＡＡＴは、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも３０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも３５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも４０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも４５ｍｇ／ｍｌ、さらには、少なくとも約５０ｍｇ／ｍｌ、またはなおそれ以上の濃度で、乾燥される液体組成物中に存在する。特定の実施形態において、グリコシル化されていないＡＡＴは、少なくとも６０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも７０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも８０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも９０ｍｇ／ｍｌ、さらには１００ｍｇ／ｍｌまたはそれ以上の濃度で、乾燥されることが意図される液体組成物中に存在する。
【０１６２】
通常、グリコシル化されていないＡＡＴは、約２００ｍｇ／ｍｌ以下の濃度で、より典型的には、１００ｍｇ／ｍｌまたはそれ以下、さらには、７５ｍｇ／ｍｌまたはそれ以下の濃度で、乾燥されることが意図される液体組成物中に存在する。
【０１６３】
特定の実施形態において、組成物がそれから乾燥される液体組成物には、３０〜７０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは、４０〜６０ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは、約５０ｍｇ／ｍｌの濃度でグリコシル化されていないＡＡＴが含まれる。
【０１６４】
少なくとも１種のハライド塩は、本発明の得られる乾燥組成物中に存在するとして上記に記載されたハライド塩のいずれであってもよく、これにはＮａＣｌが含まれる。
【０１６５】
典型的な実施形態において、乾燥の前には、少なくとも１種のハライド塩が、少なくとも約１ｍＭ、約５ｍＭ、１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、さらには、少なくとも約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭの濃度、およびさらに高い濃度（１００ｍＭ、１１０ｍＭ、１２０ｍＭ、１３０ｍＭ、１４０ｍＭ、１５０ｍＭ、１６０ｍＭ、１７０ｍＭ、１８０ｍＭ、１９０ｍＭ、２００ｍＭ、またはそれ以上が含まれる）で液体組成物中に存在する。種々の実施形態において、ハライド塩は、約３００ｍＭ以下、通常は、約２５０ｍＭ以下、約２００ｍＭ以下、約１５０ｍＭ以下、約１００ｍＭ以下、またはさらに低い濃度で最初の溶液中に存在する。特定の特に有用な実施形態において、組成物がそれから乾燥される溶液には、ハライド塩が、５０〜１５０ｍＭの濃度、より好ましくは、７５〜１２５ｍＭ、最も好ましくは、約１００ｍＭの濃度で含まれる。
【０１６６】
いくつかの実施形態において、少なくとも１種のハライド塩が、液体組成物中に、少なくとも１１０ｍＭ、少なくとも１２０ｍＭ、少なくとも１３０ｍＭ、少なくとも１４０ｍＭ、少なくとも１５０ｍＭ、少なくとも１６０ｍＭ、少なくとも１７０ｍＭ、少なくとも１８０ｍＭ、少なくとも１９０ｍＭ、さらには少なくとも約２００ｍＭ、少なくとも約２５０ｍＭ、少なくとも約３００ｍＭ、少なくとも約３５０ｍＭ、少なくとも約４００ｍＭ、少なくとも約４５０ｍＭ、少なくとも約５００ｍＭの濃度、またはそれ以上の濃度で存在する。
【０１６７】
通常は、少なくとも１種のハライド塩は、液体組成物中に、約５００ｍＭ以下、約４５０ｍＭ以下、約４００ｍＭ以下、約３５０ｍＭ以下、さらには、約３００ｍＭ以下の濃度で存在する。いくつかの実施形態において、少なくとも１種のハライド塩が、液体組成物中に、約２５０ｍＭ以下、約２００ｍＭ以下、約１５０ｍＭ以下、さらには、いくつかの例においては約１００ｍＭ以下の濃度で存在する。
【０１６８】
いくつかの実施形態において、液体組成物のｐＨは緩衝化され、乾燥組成物は、少なくとも６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、さらには少なくとも７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、または７．５のｐＨとなるように緩衝化された、グリコシル化されていないＡＡＴと少なくとも１種のハライド塩を含む溶液を乾燥させることによって調製される。種々の実施形態において、乾燥される溶液は、約７．５以下、約７．４以下、約７．３以下、約７．２以下、約７．１以下、さらには、約７．０以下、約６．９以下、約６．８以下、約６．７以下、約６．６以下、あるいは約６．５以下のｐＨとなるように緩衝化される。本発明の好ましい実施形態において、本発明の組成物は、６．６〜７．０、より好ましくは、６．７〜６．９、最も好ましくは、６．８±０．１のｐＨになるように緩衝化された溶液から乾燥される。
【０１６９】
緩衝液は、いくつかの実施形態において、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、またはそれらの組み合わせであり得る。
【０１７０】
上記の乾燥組成物の記載から理解されるように、乾燥組成物がそれから調製される液体組成物にはさらに、還元剤、例えば、ジチオスレイトール、システイン、グルタチオン、およびＮ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）からなる群より選択される還元剤、ならびに／または、抗酸化剤が含まれる場合がある。
【０１７１】
本明細書中の上記の本発明の乾燥組成物の記載からも理解されるように、典型的な実施形態において、乾燥組成物がそれから調製される液体組成物には、遊離の糖および／またはＡＡＴタンパク質から共有結合によってぶら下がっている糖を含む検出可能な糖は含まれず、ＡＡＴ以外のヒトの血清タンパク質（例えば、α２−プラスミンインヒビター、α１−抗キモトリプシン、Ｃ１エステラーゼインヒビター、抗トロンビンＩＩＩ、ハプトグロビン、アルブミン、α−リポタンパク質、およびＩｇＡ）は含まれない。
【０１７２】
組換えによって発現されたグリコシル化されていないＡＡＴ（例えば、ｒＡＡＴ）が使用される実施形態において、乾燥される液体組成物には、例えば、６０℃または６５℃での加熱によるか、あるいは、溶媒界面活性剤混合物および／またはナノ濾過を用いた処理によるウイルスの不活化は必要ない。乾燥とその後の再水和の後にそれらから得られた溶液にもまた、その必要はない。
【０１７３】
表１Ａ、表１Ｂ、および表１Ｃには、凍結乾燥または噴霧乾燥によってうまく乾燥させることができる例示的なＡＡＴ処方物が示される。これはその後、（ｉ）液体投与で使用されるように（例えば、ネブライザーによる投与、またはエアロゾル化される定用量吸入装置による投与）再構成されるか、あるいは、（ｉｉ）本発明の方法での乾燥粉末の吸入により投与される用量に直接使用される。
【０１７４】
【表１Ａ】
2007528409.tif 000002
【０１７５】
【表１Ｂ】
2007528409.tif 000003
【０１７６】
【表１Ｃ】
2007528409.tif 000004
。
【０１７７】
他の実施形態において、乾燥組成物にはさらに、ＡＡＴに加えて糖が含まれる。
【０１７８】
このような実施形態において、乾燥ＡＡＴ組成物には、通常、簡単な炭水化物（例えば、単糖、ニ糖、または三糖）が含まれる。炭水化物は、数ある中でも、無定形の抗凍結剤および凍結防止剤としての機能を果たし、したがって、室温での保存が容易になる。炭水化物は肺組織と適合するように選択され、再水和の後にネブライザーによって投与される処方物については、ネブライザーによる投与と適合するように選択される。種々の炭水化物を、特定の別の処方物において使用し得る。他の適切な炭水化物としては、乳糖、スクロース、ラフィノース、およびマルトデキストリンが挙げられるが、これらに限定はされない。なお他の処方物には、ソルボースまたはガラクトースのような単糖、あるいは、キシリトールまたはマンニトールのようなアルジトールが含まれる。
【０１７９】
これらの実施形態において、乾燥前の液体処方物中での炭水化物の濃度は、一般的には、約１ｍｇ／ｍｌから約５０ｍｇ／ｍｌまでの範囲であり、他の例において、約１０ｍｇ／ｍｌから約５０ｍｇ／ｍｌの範囲である。種々の処方物には、少なくとも１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、または４５ｍｇ／ｍｌの炭水化物が含まれるが、一般的には、約５０ｍｇ／ｍｌ以下である。
【０１８０】
糖を含まないか、または糖を含むかにはかかわらず、乾燥組成物は、当該分野で周知の方法を使用する液体組成物の乾燥、例えば、凍結乾燥；噴霧乾燥；凍結乾燥と、その後の凍結乾燥物を微粉化するための粉砕；冷たい表面上への噴霧、その後の凝華と微粉化させた粉末の回収；真空オーブンの中での、または溶液が凍結しない温度に維持した遠心分離蒸発装置の中での凍結していない溶液の蒸発乾燥と、その後の粉砕；噴霧コーティング；噴霧凍結乾燥；流動層乾燥機；超臨界流体乾燥機；凝集；押し出し成型、ならびにそれらの組み合わせを使用して、液体組成物を乾燥させることによって調製し得る。例えば、Ｍａａら，「Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｐｏｗｄｅｒｓ：ｐａｒｔｉｃｌｅ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ」，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１：２８３−３０２（２０００）（その開示はその全体が参考として本明細書中に援用される）を参照のこと。
【０１８１】
凍結乾燥は、本発明の方法において、直接使用するためのＡＡＴ、またはその後再水和されて液体として使用されるＡＡＴを調製するために有用であり得る。凍結乾燥は、乾燥組成物が使用前に再水和されることが意図される実施形態において、格別の用途が見出されている。
【０１８２】
タンパク質の凍結乾燥方法は当該分野で公知である。例えば、Ｃａｒｐｅｎｔｅｒら，「Ｒａｔｉｏｎａｌ  ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ｓｔａｂｌｅ  ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ：ｔｈｅｏｒｙ  ａｎｄ  ｐｒａｃｔｉｃｅ」，Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３：１０９−１３３（２００２）；Ｃａｒｐｅｎｔｅｒら，「Ｒａｔｉｏｎａｌ  ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ｓｔａｂｌｅ  ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ：ｓｏｍｅ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｄｖｉｃｅ」，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．１４（８）：９６９−７５（１９９７）；Ｒａｙら，（ｅｄｓ．），Ｆｒｅｅｚｅ−Ｄｒｙｉｎｇ／Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ：ａ  Ｓｅｒｉｅｓ  ｏｆ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋｓ  ａｎｄ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ），Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ（２ｎｄ  ｒｅｖ．  ＆  ｅｘ．ｅｄｉｔｉｏｎ，２００４）（ＩＳＢＮ：０８２４７４８６８９）（これらの開示がそれらの全体が参考として本明細書中に援用される）を参照のこと。
【０１８３】
凍結乾燥装置は市販されている。
【０１８４】
例えば、凍結乾燥は、３つのストッパー棚と外部冷却機を備えたＧｅｎｅｓｉｓ  Ｐｉｌｏｔ−ｓｃａｌｅ  Ｖｉｒｔｉｓ  １２ＸＬ  ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｒを使用して行うことができる。傾斜率、棚の温度、時間、および減圧のようなパラメーターは、Ｖｉｒｔｉｓ  Ｃｏｍｐａｎｙによって提供されるＷｉｚａｒｄ制御システムソフトウェアによる４つの利用可能な熱電温度計を使用して記録されるサイクルの実行と生成物の温度になるようにプログラムし得る。
【０１８５】
凍結乾燥サイクルは、以下の表２に示されるように、無定形の処方物に通常使用されるものであることが有用であり得る。
【０１８６】
【表２】
2007528409.tif 000005
。
【０１８７】
このような凍結乾燥サイクルは、生成物の温度を、本発明の典型的な処方物の崩壊温度（ＮａＣｌの共晶融点）よりも十分に低い−３０℃付近で維持する、−１５℃の棚温度で行われる最初の乾燥を含む保存的サイクルである。このサイクルにおいて、水分量は、二次乾燥温度を１０時間の間４０℃に上昇させることによって最小にされる。
【０１８８】
生産規模の凍結乾燥装置もまた、市販されている。
【０１８９】
噴霧乾燥もまた、本発明の調製方法において有効に使用し得、少なくとも一用量のＡＡＴが乾燥粉末の吸入により投与される実施形態に特段の用途がある。
【０１９０】
噴霧乾燥には、通常、３工程のプロセスが含まれ、これによって乾燥粒子処方物が得られる。このプロセスは、高圧ガスを使用して細かい液滴の噴霧を生じるように供給された液体を噴霧することによって開始され、その後、液滴の水分量を蒸発させることによって液滴を乾燥させるために媒体が加熱される。最終的な粒子は乾燥粉末の形態であり、生成物として回収される。気体と過剰な細塵が排出される。これらの工程は、３つの構成要素：ノズルの形のアトマイザー；乾燥室；およびサイクロンおよびポットとして知られている回収システムを使用して行われる。
【０１９１】
噴霧乾燥機は市販されている。例えば、本発明の方法での噴霧乾燥は、Ｂuｃｈｉ（登録商標）ｓｐｒａｙ  ｄｒｉｅｒ  Ｂ−１９１またはＢ−２９０（Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．）を使用して有効に行うことができる。
【０１９２】
噴霧乾燥は、状況に応じて、その後さらに乾燥される場合があり、また、状況によっては、凝集される場合もある。噴霧乾燥は、例えば、米国特許第５，７８０，０１４号；同第６，２５８，３４１号；同第６，３０９，６７１号、および同第６，５８９，５６０号、ならびに、欧州特許第ＥＰ  ０９４１０６７  Ｂ１（それらの開示はそれらの全体が参考として本明細書中に援用される）に記載されているように有効に行うことができる。
【０１９３】
噴霧コーティングもまた、本発明の方法で使用される乾燥ＡＡＴ組成物を調製するために行うことができ、これは標準的な技術を使用して行うことができる。例えば、その全体が参考として本明細書中に援用されるＭａａら，「Ｓｐｒａｙ−ｃｏａｔｉｎｇ  ｆｏｒ  ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｐｏｗｄｅｒ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ：ｂｅｙｏｎｄ  ｔｈｅ  ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ  ｓｃａｌｅ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ」，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．２１（３）：５１５−２３（２００４）を参照のこと。
【０１９４】
乾燥ＡＡＴ組成物は、ネブライザーによる投与かまたは定量吸入器によりエアロゾル化によって用量を投与するためには、滅菌の希釈剤−−例えば、滅菌水、生理食塩水、Ｄ５、Ｄ５生理食塩水、またはリンガー溶液−−の添加によって液体形態に再構成され得る。
【０１９５】
乾燥ＡＡＴ組成物は、あるいは、乾燥粉末吸入器による用量の投与に直接使用される場合もある。
【０１９６】
他の実施形態において、ＡＡＴは、米国特許第５，７８０，０１４号；同第５，９９３，７８３号；同第６，２５８，３４１号；同第６，３０９，６７１号；および同第６，５８９，５６０号、ならびに対応する欧州特許第ＥＰ  ０９４１０６７  Ｂ１（これらの開示はそれらの全体が参考として本明細書中に援用される）のいずれか１つに従う乾燥粉末の吸入のために処方される。
【０１９７】
液体のエアロゾルとして送達されるか、または乾燥粉末として送達されるかにはかかわらず、吸入の際のＡＡＴ粒子の大きさは、約５μｍ以下のＭＭＡＤ（空気力学的中央径）が有用であるが、約６μｍ、約７μｍ、約８μｍ、さらには、約９μｍ、約１０μｍのＭＭＡＤ、あるいはそれ以上の大きさの粒子を含む、約５μｍより大きいＭＭＡＤの粒子を使用し得る。種々の実施形態において、約４μｍ以下のＭＭＡＤ、約３μｍ以下のＭＭＡＤの粒子が有用であり、さらには、約２μｍ以下のＭＭＡＤ、約１．９μｍ以下のＭＭＡＤ、約１．８μｍ以下のＭＭＡＤ、約１．７μｍ以下のＭＭＡＤ、約１．６μｍ以下のＭＭＡＤ、さらには、約１．５μｍ以下のＭＭＡＤの粒子、あるいはそれより小さいものを使用し得る。いくつかの実施形態において、約１．４μｍ以下のＭＭＡＤ、約１．３μｍ以下のＭＭＡＤ、約１．２μｍ以下のＭＭＡＤ、約１．１μｍ以下のＭＭＡＤ、さらには、約１．０μｍ以下のＭＭＡＤの粒子、あるいはそれより小さいものが有効である。乾燥粒子については、ＭＭＡＤの決定は、カスケードインパクタを使用して有効に行われる。
【０１９８】
種々のこのような実施形態において、少なくとも約０．５μｍ、少なくとも約０．６μｍ、少なくとも約０．７μｍ、少なくとも約０．８μｍ、少なくとも約０．９μｍ、またはさらに、少なくとも約１μｍのＭＭＡＤ、少なくとも約２μｍのＭＭＡＤ、さらには、少なくとも約３μｍのＭＭＡＤの粒子、あるいはそれより大きい粒子であり得る。通常は、粒子は、乾燥粉末の吸入により投与される用量については、１μｍから５μｍのＭＭＡＤの範囲である。
【０１９９】
種々の実施形態において、約５μｍ以下のＭＭＤ（中央粒径）が有用であり得る。他のこのような実施形態において、約４μｍ以下のＭＭＤ、約３μｍ以下のＭＭＤであることが有効であり、さらには、約２μｍ以下のＭＭＤ、約１μｍ以下のＭＭＤ、約０．９μｍ以下のＭＭＤ、約０．８μｍ以下のＭＭＤ、約０．７μｍ以下のＭＭＤ、約０．６μｍ以下のＭＭＤ、さらには、約０．５μｍ以下のＭＭＤ、あるいはそれよりも小さいものであり得る。種々のこのような実施形態において、少なくとも約０．５μｍのＭＭＤ、少なくとも約０．６μｍのＭＭＤ、少なくとも約０．７μｍのＭＭＤ、少なくとも約０．８μｍのＭＭＤ、少なくとも約０．９μｍのＭＭＤ、少なくとも約１μｍのＭＭＤ、少なくとも約２μｍのＭＭＤ、さらには、少なくとも約３μｍのＭＭＤ、あるいは、それより大きいものであり得る。通常、粒子は、１μｍから５μｍのＭＭＤの範囲である。乾燥粒子の実施形態については、ＭＭＤの決定は、遠心分離沈殿技術（例えば、Ｈｏｒｉｂａ  Ｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｓｉｚｅ  Ａｎａｌｙｚｅｒ−−モデルＣＡＰＡ−７００を使用して）有効に行うことができる。
【０２００】
乾燥粉末粒子は、さらに、例えば、米国特許第５，７８０，０１４および同第５，９９３，７８３号（それらの開示はそれらの全体が参考として本明細書中に援用される）に記載されるように、吸入器による送達を容易にするためにさらに凝集される場合がある。このような実施形態において、凝集物は、約１μｍ〜約５μｍの粒子径（ＭＭＡＤ）を有する構成粒子に分散される場合がある。
【０２０１】
本発明の方法には、有効量のα１−抗トリプシン（ＡＡＴ）またはその機能的活性のある部分もしくは融合体を、ＣＯＰＤを発症しているかまたはＣＯＰＤを発症する危険性のある個体に投与することが含まれる。種々の実施形態において、個体は脊椎動物である。特定のこれらの実施形態において、個体は哺乳動物である。哺乳動物には、家畜、競技用動物、ペット、霊長類、ウマ、イヌ、ネコ、マウス、およびラットが含まれるが、これらに限定はされない。しかし、典型的な実施形態において、個体はヒトである。
【０２０２】
本発明の種々の実施形態において、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分は、その肺がＡＡＴを酸化し得る少なくとも１つの空気中に浮遊している因子に周期的にさらされる個体に投与される。例えば、特定の実施形態において、個体は、受動喫煙またはタバコ製品の喫煙により直接のいずれかで、タバコの煙に周期的にさらされる。特定の実施形態において、個体は巻きタバコを吸う。
【０２０３】
適切な投与レジュメ、すなわち、ＡＡＴの用量、タイミング、および反復は、種々の実施形態において、ＡＡＴが、以下に記載されるような他の有効成分と組み合わせて投与されるかどうか、使用される処方物（特に、処方物が液体であるかまたは乾燥粉末であるかどうか）、ＡＡＴが防御の目的で（予防と同義）投与されるか、または治療の目的で投与されるかどうか、処置または予防されるＣＯＰＤの型および重篤度（肺気腫が潜在しているかまたは肺気腫が潜在していないか）、以前の治療、患者の臨床的な病歴および薬剤に対する応答、遺伝的要因（ＡＡＴ欠損が公知である）、および個体が医師の治療を受けている場合には掛かりつけの医師の判断によって、投与されるＡＡＴタンパク質（例えば、グリコシル化されているか、またはグリコシル化されていない、全体であるかその機能的活性のある部分もしくは融合体であるかどうかにはかかわらず）の任意の１つ以上の特性に応じて様々である。
【０２０４】
単一用量のＡＡＴが投与される場合も、また、反復用量のＡＡＴが投与される場合もある。
【０２０５】
数日間またはそれ以上の期間にわたる反復投与については、条件に応じて、処置は、所望される疾患の症状の抑制が生じるまで、あるいは、十分なレベルのＡＡＴおよび他の有効成分（使用される場合）によって、治療効果が得られる、および／または処置される個体がさらされる環境条件下でＣＯＰＤまたは肺気腫のリスクを低下されるまで行われる。いくつかの実施形態において、投与レジュメは、喫煙者のＣＯＰＤのリスクを下げるように設計される。
【０２０６】
「喫煙者」は、本明細書中で使用される場合は、タバコの煙にさらされる（時折であるか、または頻繁にであるかにはかかわらず、そしてタバコ製品の直接の使用の結果であるか、または受動喫煙によるタバコの煙の吸入の結果であるかにはかかわらず）個体である。「喫煙経験者」は、過去にタバコの煙にさらされていた（時折であるか、または頻繁にであるかにはかかわらず、そしてタバコ製品の直接の使用の結果であるか、または受動喫煙によるタバコの煙の吸入の結果であるかにはかかわらず）個体である。
【０２０７】
いくつかの実施形態において、投与レジュメは、喫煙者または喫煙経験者の肺気腫のリスクを下げるように設計される。確立されたＣＯＰＤ（肺気腫が潜在しているもの、または肺気腫が潜在していないもの）の処置の場合には、治療の進行は、従来技術とアッセイによって容易にモニターし得る。
【０２０８】
例えば、喫煙者におけるＣＯＰＤまたは肺気腫の予防の場合には、処置は、無期限に続けられ、例えば、タバコの煙にさらされ続ける限りは続けられる。
【０２０９】
投与レジュメは、時間と共に変更し得、ＣＯＰＤまたは肺気腫、あるいはこれらの併発を生じるまたはこれらを悪化される環境要因にさらされることによる、疾患の進行、一時的な回復、または悪化にしたがって調節し得る。
【０２１０】
本発明の種々の実施形態において、ＡＡＴ（またはその機能的活性のある部分もしくは融合体）の一日量は、少なくとも約１ｍｇ、少なくとも約２ｍｇ、少なくとも約３ｍｇ、少なくとも約４ｍｇ、少なくとも約５ｍｇ、少なくとも約６ｍｇ、少なくとも約７ｍｇ、少なくとも約８ｍｇ、少なくとも約９ｍｇ、少なくとも約１０ｍｇ、少なくとも約１５ｍｇ、少なくとも約２０ｍｇ、少なくとも約２５ｍｇ、少なくとも約３０ｍｇ、少なくとも約４０ｍｇ、少なくとも約５０ｍｇ、少なくとも約６０ｍｇ、少なくとも約７０ｍｇ、少なくとも約８０ｍｇ、少なくとも約９０ｍｇ、少なくとも約１００ｍｇ、少なくとも約１１０ｍｇ、少なくとも約１２０ｍｇ、少なくとも約１３０ｍｇ、少なくとも約１４０ｍｇ、少なくとも約１５０ｍｇ、少なくとも約１６０ｍｇ、少なくとも約１７０ｍｇ、少なくとも約１８０ｍｇ、少なくとも約１９０ｍｇ、少なくとも約２００ｍｇ、少なくとも約２１０ｍｇ、少なくとも約２２０ｍｇ、少なくとも約２３０ｍｇ、少なくとも約２４０ｍｇ、少なくとも約２５０ｍｇ、少なくとも約２６０ｍｇ、少なくとも約２７０ｍｇ、少なくとも約２８０ｍｇ、少なくとも約２９０ｍｇ、少なくとも約３００ｍｇ、少なくとも約３１０ｍｇ、少なくとも約３２０ｍｇ、少なくとも約３３０ｍｇ、少なくとも約３４０ｍｇ、少なくとも約３５０ｍｇ、少なくとも約３６０ｍｇ、少なくとも約３７０ｍｇ、少なくとも約３８０ｍｇ、少なくとも約３９０ｍｇ、少なくとも約４００ｍｇ、さらに、少なくとも約４１０ｍｇ、少なくとも約４２０ｍｇ、少なくとも約４３０ｍｇ、少なくとも約４４０ｍｇ、少なくとも約４５０ｍｇ、少なくとも約４６０ｍｇ、少なくとも約４７０ｍｇ、少なくとも約４８０ｍｇ、少なくとも約４９０ｍｇ、少なくとも約５００ｍｇである。いくつかの実施形態において、ＡＡＴの一日量は、少なくとも約５１０ｍｇ、少なくとも約５２０ｍｇ、少なくとも約５３０ｍｇ、少なくとも約５４０ｍｇ、少なくとも約５５０ｍｇ、少なくとも約５６０ｍｇ、少なくとも約５７０ｍｇ、少なくとも約５８０ｍｇ、少なくとも約５９０ｍｇ、少なくとも約６００ｍｇ、少なくとも約６１０ｍｇ、少なくとも約６２０ｍｇ、少なくとも約６３０ｍｇ、少なくとも約６４０ｍｇ、少なくとも約６５０ｍｇ、またはそれ以上である。
【０２１１】
いくつかの実施形態において、ＡＡＴ（またはその機能的活性のある部分もしくは融合体）の一日量は、約７００ｍｇ以下、約６９０ｍｇ以下、約６８０ｍｇ以下、約６７０ｍｇ以下、約６６０ｍｇ以下、約６５０ｍｇ以下、約６４０ｍｇ以下、約６３０ｍｇ以下、約６２０ｍｇ以下、約６１０ｍｇ以下、約６００ｍｇ以下、いくつかの実施形態において、さらに、約５９０ｍｇ以下、約５８０ｍｇ以下、約５７０ｍｇ以下、約５６０ｍｇ以下、約５５０ｍｇ以下、約５４０ｍｇ以下、約５３０ｍｇ以下、約５２０ｍｇ以下、約５１０ｍｇ以下、約５００ｍｇ以下、約４９０ｍｇ以下、約４８０ｍｇ以下、約４７０ｍｇ以下、約４６０ｍｇ以下、約４５０ｍｇ以下、約４４０ｍｇ以下、約４３０ｍｇ以下、約４２０ｍｇ以下、約４１０ｍｇ以下、約４００ｍｇ以下、さらにいくつかの実施形態においてはそれ以下である。
【０２１２】
種々の実施形態において、ＡＡＴ（またはその機能的活性のある部分もしくは融合体）の一日量は、液体溶液中、または乾燥粉末として、約１ｍｇから約６５０ｍｇ、または約５ｍｇから約２００ｍｇ、または約５ｍｇから約１００ｍｇ、または約１０ｍｇから約８０ｍｇ、または約２５ｍｇから約７０ｍｇ、または約６５ｍｇである。１つの実施形態において、ＡＡＴの一日量は約６５ｍｇである。
【０２１３】
ＡＡＴがＴＩＭＰまたはＳＬＰＩとの融合タンパク質の一部として存在する実施形態において、投与量は、ＴＩＭＰまたはＳＬＰＩ部分のさらなる存在を考慮して調節し得る。
【０２１４】
当業者に明らかであるように、肺投与により送達（「吸入による」と同義）されるＡＡＴの一用量の大きさは、使用されるＡＡＴの形態（すなわち、液体または乾燥粉末）、おそらくは、吸入される容量、および液体の場合には、ＡＡＴの溶解性に応じて様々である。
【０２１５】
本発明の方法の種々の実施形態において、少なくとも１つの個々の用量は、少なくとも約０．０５ｍｇ、少なくとも約０．１ｍｇ、少なくとも約０．２ｍｇ、少なくとも約０．３ｍｇ、少なくとも約０．４ｍｇ、少なくとも約０．５ｍｇ、少なくとも約０．６ｍｇ、少なくとも約０．７ｍｇ、少なくとも約０．８ｍｇ、少なくとも約０．９ｍｇ、少なくとも約１．０ｍｇ、少なくとも約１．１ｍｇ、少なくとも約１．２ｍｇ、少なくとも約１．３ｍｇ、少なくとも約１．４ｍｇ、少なくとも約１．５ｍｇ、少なくとも約１．６ｍｇ、少なくとも約１．７ｍｇ、少なくとも約１．８ｍｇ、少なくとも約１．９ｍｇ、少なくとも約２ｍｇ、少なくとも約３ｍｇ、少なくとも約４ｍｇ、少なくとも約５ｍｇ、少なくとも約６ｍｇ、少なくとも約７ｍｇ、少なくとも約８ｍｇ、少なくとも約９ｍｇ、少なくとも約１０ｍｇ、少なくとも約１５ｍｇ、少なくとも約２０ｍｇ、少なくとも約２５ｍｇ、少なくとも約３０ｍｇ、少なくとも約４０ｍｇ、少なくとも約５０ｍｇ、少なくとも約６０ｍｇ、少なくとも約７０ｍｇ、少なくとも約８０ｍｇ、少なくとも約９０ｍｇ、少なくとも約１００ｍｇ、少なくとも約１１０ｍｇ、少なくとも約１２０ｍｇ、少なくとも約１３０ｍｇ、少なくとも約１４０ｍｇ、少なくとも約１５０ｍｇ、少なくとも約１６０ｍｇ、少なくとも約１７０ｍｇ、少なくとも約１８０ｍｇ、少なくとも約１９０ｍｇ、少なくとも約２００ｍｇ、少なくとも約２１０ｍｇ、少なくとも約２２０ｍｇ、少なくとも約２３０ｍｇ、少なくとも約２４０ｍｇ、少なくとも約２５０ｍｇ、少なくとも約２６０ｍｇ、少なくとも約２７０ｍｇ、少なくとも約２８０ｍｇ、少なくとも約２９０ｍｇ、少なくとも約３００ｍｇ、少なくとも約３１０ｍｇ、少なくとも約３２０ｍｇ、少なくとも約３３０ｍｇ、少なくとも約３４０ｍｇ、少なくとも約３５０ｍｇ、少なくとも約３６０ｍｇ、少なくとも約３７０ｍｇ、少なくとも約３８０ｍｇ、少なくとも約３９０ｍｇ、少なくとも約４００ｍｇ、さらに、少なくとも約４１０ｍｇ、少なくとも約４２０ｍｇ、少なくとも約４３０ｍｇ、少なくとも約４４０ｍｇ、少なくとも約４５０ｍｇ、少なくとも約４６０ｍｇ、少なくとも約４７０ｍｇ、少なくとも約４８０ｍｇ、少なくとも約４９０ｍｇ、少なくとも約５００ｍｇである。いくつかの実施形態において、ＡＡＴの一日量は、少なくとも約５１０ｍｇ、少なくとも約５２０ｍｇ、少なくとも約５３０ｍｇ、少なくとも約５４０ｍｇ、少なくとも約５５０ｍｇ、少なくとも約５６０ｍｇ、少なくとも約５７０ｍｇ、少なくとも約５８０ｍｇ、少なくとも約５９０ｍｇ、少なくとも約６００ｍｇ、少なくとも約６１０ｍｇ、少なくとも約６２０ｍｇ、少なくとも約６３０ｍｇ、少なくとも約６４０ｍｇ、少なくとも約６５０ｍｇ、またはそれ以上である。
【０２１６】
本発明の方法の種々の実施形態において、少なくとも１つの個々の用量は、約７００ｍｇ以下、約６９０ｍｇ以下、約６８０ｍｇ以下、約６７０ｍｇ以下、約６６０ｍｇ以下、約６５０ｍｇ以下、約６４０ｍｇ以下、約６３０ｍｇ以下、約６２０ｍｇ以下、約６１０ｍｇ以下、約６００ｍｇ以下、いくつかの実施形態において、さらに、約５９０ｍｇ以下、約５８０ｍｇ以下、約５７０ｍｇ以下、約５６０ｍｇ以下、約５５０ｍｇ以下、約５４０ｍｇ以下、約５３０ｍｇ以下、約５２０ｍｇ以下、約５１０ｍｇ以下、約５００ｍｇ以下、約４９０ｍｇ以下、約４８０ｍｇ以下、約４７０ｍｇ以下、約４６０ｍｇ以下、約４５０ｍｇ以下、約４４０ｍｇ以下、約４３０ｍｇ以下、約４２０ｍｇ以下、約４１０ｍｇ以下、約４００ｍｇ以下、さらにいくつかの実施形態においてはそれ以下である。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの個々の用量は、約３００ｍｇ以下、約２００ｍｇ以下、約１００ｍｇ以下、約５０ｍｇ以下、約２０ｍｇ以下、約１２ｍｇ以下、約８ｍｇ以下、約６ｍｇ以下、約４ｍｇ以下、約２ｍｇ以下、いくつかの実施形態において、さらに約１．０ｍｇ以下、約０．５ｍｇ以下、およびさらに、いくつかの実施形態において、約０．１ｍｇ以下である。
【０２１７】
特定の実施形態において、ＡＡＴ（またはその機能的活性のある部分もしくは融合体）は自己投与される。個体、例えば、喫煙者は、例えば、朝にＡＡＴ処方物を投与し得、また、１日を通じて周期的に投与し得、また、タバコの煙への各曝露の前に投与することもできる。用量の大きさを、ＡＡＴの投与頻度およびタイミングを考慮して調節できること、ならびに、一日量が、タバコの煙に対する予想される曝露および曝露の型（例えば、受動的であるかまたは能動的であるか）に基づいて、使用される送達システム（例えば、乾燥粉末処方物に必要な投与量は異なる場合があり、例えば、液体のネブライザーでの投与量よりも、例えば少なく、定量吸入器での投与量にもまた調節が必要である場合がある）に基づいて、そして他のリスク因子（例えば、ＣＯＰＤまたは肺気腫についての遺伝的危険因子、あるいは、職業上の危険因子および／または大気汚染への曝露のような他の環境的な危険因子）があるかないかに基づいて、ある程度は、個体または医師によって決定し得ることは、当業者には容易に明らかであろう。
【０２１８】
種々の実施形態において、単一用量および／または一日量に上限が設けられることが望ましい場合がある。個体による過剰摂取の可能性を防ぐために、肺に投与される薬剤および他の物質の自己投与を制限するかまたは調節する投与デバイスもまた当該分野で周知である。
【０２１９】
投与頻度は、１日１回、１日２回、または１日３回から、１日２回、１日４回、１日６回、１日８回、あるいは１日に８回以上であり得る。いくつかの実施形態において、投与頻度は、１日１回から１日６回、または１日１回から１日４回、あるいは、１日１回、または１日２回である。投与頻度は、処置または予防全体を通じて決定し、調節し得、一般的には（必ずしもそうではないが）、症状および臨床所見の処置および／または抑制および／または緩和および／または遅延に基づく。ＣＯＰＤ（肺気腫が潜在しているかもの、または肺気腫が潜在していないもの）の予防の場合には、ＣＯＰＤまたは肺気腫の可能性を増大させる環境条件にさらされた個体において、投与頻度は、曝露の頻度および／または重篤度に基づいて調節し得る。
【０２２０】
本発明の１つの実施形態において、喫煙者は、タバコの喫煙または受動喫煙への曝露の頻度に応じた頻度で、本発明の処方物を自己投与する。投与量の大きさおよび頻度は、上記で議論された要因に応じて、医師の判断で決定され得る。
【０２２１】
いくつかの実施形態において、本発明の方法にはさらに、有効量の少なくとも１つの第２のプロテアーゼインヒビターまたはその機能的活性のある部分を、吸入によって肺に投与することが含まれる。
【０２２２】
いくつかの実施形態において、第２のプロテアーゼインヒビターは、メタロプロテアーゼ、例えば、マトリックスメタロプロテアーゼの、インヒビターである。いくつかの実施形態において、インヒビターは、ＳＬＰＩ、ＴＩＭＰ−１、ＴＩＭＰ−２、ＴＩＭＰ−３、およびＴＩＭＰ−４からなる群より選択される。別の実施形態において、インヒビターはアイロマスタットである。
【０２２３】
いくつかの実施形態において、第２のプロテアーゼインヒビターまたはその機能的活性のある部分は、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分と同じ処方物において投与される。
【０２２４】
他の実施形態において、第２のプロテアーゼインヒビターまたはその機能的活性のある部分は、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分を含む組成物とは別の組成物において投与される。これらの後者の実施形態のいくつかにおいて、投与スケジュールは、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分の投与のための投与スケジュールと同じである。他のこれらの実施形態において、第２のプロテアーゼインヒビターは、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分に使用されるスケジュールとは異なる投与スケジュールで投与される。
【０２２５】
いくつかの実施形態において、本発明の方法にはさらに、ＣＯＰＤの１つ以上の症状を緩和する少なくとも１つの第１の活性のある因子を投与することが含まれる。
【０２２６】
少なくとも第１の活性のある因子は、いくつかの実施形態において、気管支拡張薬であり得る。
【０２２７】
いくつかの実施形態において、気管支拡張薬は、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分もしくは融合体と同じ処方物において投与される。他の実施形態において、気管支拡張薬は、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分もしくは融合体を含む組成物とは別の組成物において投与される。これらの後者の実施形態のいくつかにおいて、気管支拡張薬は、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分もしくは融合体の投与のための投与スケジュールと同じ投与スケジュールで吸入によって投与される。他のこれらの実施形態において、気管支拡張薬は、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分もしくは融合体に使用されるスケジュールとは異なる投与スケジュールで投与される。種々の実施形態において、気管支拡張薬は経口投与される。
【０２２８】
種々の実施形態において、気管支拡張薬は、ＣＯＰＤの処置において現在臨床的に使用されている気管支拡張薬から選択される。気管支拡張薬は、例えば、表３に列挙される薬から選択し得る。
【０２２９】
【表３】
2007528409.tif 000006
。
【０２３０】
本明細書中で使用される場合は、用語「イプラトロピウム」および「チオトロピウム」には、ＣＯＰＤまたは肺気腫に罹患している患者において所望される気管支拡張作用を生じることができる、イプラトロピウムまたはチオトロピウムの任意の形態が含まれるが、これらに限定はされない。これには、イプラトロピウムまたはチオトロピウムの、互変異性の形態、光学異性体の形態、立体異性体の形態、無水物、酸付加塩、塩基塩、溶媒和物、類似体および誘導体の全てが含まれるが、これらに限定はされない。本発明において、イプラトロピウムまたはチオトロピウムの許容される塩としては、臭化物、塩化物、およびヨウ化物のようなハライド塩が挙げられるが、これらに限定はされない。本発明の１つの実施形態において、イプラトロピウムまたはチオトロピウムの好ましい塩は臭化物である。
【０２３１】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つの第１の活性のある因子は、コルチコステロイドである。
【０２３２】
いくつかの実施形態において、コルチコステロイドは、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分もしくは融合体と同じ処方物において投与される。他の実施形態において、コルチコステロイドは、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分もしくは融合体を含む組成物とは別の組成物において投与される。これらの後者の実施形態のいくつかにおいて、コルチコステロイドは、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分もしくは融合体の投与のための投与スケジュールと同じ投与スケジュールで吸入によって投与される。他のこれらの実施形態において、コルチコステロイドは、ＡＡＴまたはその機能的活性のある部分もしくは融合体に使用される投与スケジュールとは異なる投与スケジュールで投与される。種々の実施形態において、コルチコステロイドは経口投与される。
【０２３３】
種々の実施形態において、コルチコステロイドは、ＣＯＰＤの処置において現在臨床的に使用されているコルチコステロイドから選択される。コルチコステロイドは、例えば、表４に列挙される薬から選択し得る。
【０２３４】
【表４】
2007528409.tif 000007
。
【０２３５】
本発明の方法の種々の実施形態において有用なコルチコステロイドとしては、例えば、二プロピオン酸ベクロメタゾン、トリアムシノロンアセトニド、プロピオン酸フルチカゾンが挙げられる。種々の実施形態において、コルチコステロイドの組み合わせが使用される。
【０２３６】
他の実施形態において、この方法にはさらに、粘液の調節のための１種以上の粘液溶解薬／去痰薬、および存在する場合には、感染の管理のための抗生物質の投与が含まれる。
【０２３７】
他の実施形態において、この方法にはさらに、アラキドン酸経路の種々の工程の、またはそれらの同族受容体とのその経路の代謝物の相互作用の、１つ以上のインヒビターを投与することが含まれる。
【０２３８】
例えば、種々の実施形態において、本発明の方法にはさらに、１つ以上のロイコトリエンの合成または活性に影響を与える物質が含まれる。
【０２３９】
いくつかの実施形態において、例えば、この物質は、ロイコトリエンの合成のインヒビターである。種々のこれらの実施形態において、この物質は、５−リポオキシゲナーゼのインヒビターである、多数のこれらの後者の実施形態において、この物質は、ジレウトン（ＺＹＦＬＯ）である。特定の実施形態において、この物質は経口投与される。
【０２４０】
他の実施形態において、この物質はロイコトリエン受容体アンタゴニストである。いくつかのこれらの実施形態において、この物質はモンテルカスト（ＳＩＮＧＵＬＡＩＲ）であり、システイニルロイコトリエンＣｙｓＬＴ１受容体を阻害する選択的ロイコトリエン受容体アンタゴニスト、またはザフィルルカスト（ＡＣＣＯＬＡＴＥ）、合成の選択的ペプチドロイコトリエン受容体アンタゴニストである。種々の実施形態において、この物質は経口投与される。
【０２４１】
いくつかの実施形態において、この物質は、ホスホジエステル４（ＰＤＥ４）のインヒビターである。特定のこれらの実施形態において、この物質は、ロフルミラスト（ＤＡＸＡＳ）である。他の実施形態において、インヒビターは、シロミラストである。さらに他の実施形態において、インヒビターはＢＡＹ  １９−８００４である。いくつかの例示的な実施形態において、ＰＤＥ４インヒビターは経口投与される。
【０２４２】
他の実施形態において、本発明の方法にはさらに、クロモリンまたはネドクロミルを投与することが含まれる。特定の実施形態において、この物質は吸入によって投与される。
【０２４３】
本発明の方法で使用されるプロテアーゼインヒビター組成物は、当該分野で公知であるかまたは当業者に明らかである任意の適切な容器の中に提供される場合がある。組成物は、例えば、上記の投与量の単位投与量形態で、または多用量のこれらの投与量で、例えば、当該分野で一般的である、ネブライザー、定量吸入器、および乾燥粉末吸入器のような吸入送達用デバイスでの使用のために調製し得る。例えば、米国特許第４，１３７，９１４号；同第４，１７４，７１２号；同第４，５２４，７６９号；同第４，６６７，６８８号；同第５，７８０，０１４号；同第５，６７２，５８１号；同第５，９１５，３７８号；および同第５，９９７，８４８号（これらの開示はそれらの全体が参考として本明細書中に援用される）を参照のこと。
【０２４４】
別の局面において、本発明により、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を処置するためのキットが提供される。
【０２４５】
このキットには、本発明の方法で使用される少なくとも１つの組成物の少なくとも一用量が含まれる。特定の実施形態において、例えば、キットには、少なくとも一用量のＡＡＴ、その機能的活性のある部分、またはＡＡＴもしくはその機能的活性のある部分を含む融合体が含まれる。特定のこれらの実施形態において、融合体にはＳＬＰＩまたはその機能的活性のある部分が含まれ、他の実施形態において、融合体にはＴＩＭＰ−１またはその機能的活性のある部分が含まれる。
【０２４６】
種々の実施形態において、キットにはさらに、少なくとも一用量を吸入によって送達するための少なくとも１つのデバイスが含まれる。
【０２４７】
例えば、キットには、組成物のエアロゾル化に適するネブライザーが含まれる場合がある。他の実施形態において、キットには、定量吸入器が含まれる。さらに他の実施形態において、キットには乾燥粉末吸入器が含まれる。１以上の用量を送達デバイスに予め充填し得、また、別々にパッケージすることもできる。
【０２４８】
ネブライザーを含む実施形態において、１以上の用量は乾燥のものであり得、キットにはさらに、乾燥している組成物を再水和するために使用される滅菌の希釈液が含まれる。滅菌の希釈液は通常、アンプルまたはバイアルのような、滅菌性を維持する容器に別々にパッケージされる。種々の実施形態において、希釈剤は、滅菌水、生理食塩水、デキストロース溶液、Ｄ５生理食塩水、およびリンガー溶液を含む群より選択される。
【０２４９】
定量吸入器を含む実施形態において、定量吸入器には、少なくとも一用量の本発明の組成物をあらかじめ充填し得る。通常、定量吸入器には、複数の用量があらかじめ充填される。特定の他の実施形態において、定量吸入器には、定量吸入器にかみ合うような寸法のカートリッジの中に通常存在する複数の用量の組成物が別々にパッケージされる。
【０２５０】
乾燥粉末吸入器を含む実施形態において、定量吸入器には、１以上の用量の乾燥組成物を予め充填し得、他の実施形態において、１以上の用量の乾燥粉末が別々にパッケージされる。
【０２５１】
本発明のキットの種々の実施形態にはさらに、含まれる組成物の使用のための説明書のセットが含まれる。説明書により、本発明の組成物の投与方法、示唆される投与量、およびＣＯＰＤまたは肺気腫を促進する環境条件（例えば、喫煙または大気汚染）に対する曝露の種々レベルについてのスケジュール、予防措置、期待される結果、不適切な使用に関する警告などに関する情報を使用者に提供し得る。説明書は任意の形態であってよく、例えば、別個の添付文書、または容器もしくはパッケージングに貼り付けられた表示として提供される。説明書には、本明細書中に記載される方法の任意のものについての説明が含まれる。
【０２５２】
いくつかの実施形態において、説明書により、ＣＯＰＤまたは肺気腫の予防または処置における、吸入によるＡＡＴの使用が指示される。いくつかの実施形態において、説明書により、ＣＯＰＤの予防または処置における、吸入によるＡＡＴの使用が指示される。いくつかの実施形態において、説明書により、肺気腫の予防または処置における、吸入によるＡＡＴの使用が指示される。
【０２５３】
いくつかの実施形態において、キットにはさらに、ＣＯＰＤの処置のための上記の１つ以上のさらなる物質が含まれ、これには、１つ以上の気管支拡張薬、１つ以上のコルチコステロイド、および／または１つ以上の粘液溶解薬、去痰薬、抗生物質が含まれる。
【０２５４】
別の局面において、本発明により、巻きタバコのフィルターが提供される。巻きタバコのフィルターは、喫煙の際に吸入によってＡＡＴまたはその機能的活性のある部分もしくは融合体を送達するように構成される。医薬品の送達のための巻きタバコのフィルターは公知である。米国特許第６，７８９，５４６号；同第６，１４５，５１１号；同第５，４７２，００２号（これらの開示はそれらの全体が参考として本明細書中に援用される）を参照のこと。
【０２５５】
種々の実施形態において、ＡＡＴを、フィルター内に均一に染み込ませる。他の実施形態において、ＡＡＴは不均一に存在し、１つ以上の分離している小胞、チャンバー、ビーズ、または他の高濃度の容器に含まれる。
【０２５６】
種々の実施形態において、ＡＡＴタンパク質は、上記ＡＡＴタンパク質、上記機能的活性のある部分、または上記融合体のいずれかである。１つのシリーズの実施形態において、ＡＡＴタンパク質は組換え体である。いくつかの実施形態において、組換え体ＡＡＴはグリコシル化されていない。いくつかのこれらの後者の実施形態において、グリコシル化されていない組換え体ＡＡＴはｒＡＡＴである。
【０２５７】
フィルターは、巻きタバコとは物理的に別である場合があり、巻きタバコには、合法的に消費される可燃物、例えば、タバコと、それに係合可能ものが含まれるか、あるいは、フィルターが可燃物を含む巻きタバコに一体化される場合もある。
【０２５８】
ＡＡＴは、上記のように、喫煙の間に有効量を送達するために十分な量でフィルターに含まれる。
【０２５９】
さらに別の局面において、本発明により、タバコとＡＡＴを含む組成物が提供される。この組成物は巻きタバコとして形作られ得る。
【０２６０】
種々の実施形態において、ＡＡＴタンパク質は上記のＡＡＴタンパク質、機能的活性のある部分、上記の融合体のいずれかである。１つのシリーズの実施形態において、ＡＡＴタンパク質は組換え体である。いくつかの実施形態において、組換え体ＡＡＴタンパク質はグリコシル化されていない。これらの後者の実施形態のいくつかにおいて、グリコシル化されていない組換え体ＡＡＴはｒＡＡＴである。
【０２６１】
本発明は、以下の実施例によってさらに説明され、これらの実施例は、例示のために示され、限定のために示されない。
【実施例】
【０２６２】
（実施例１）
本実施例は、確立されたモデルである、巻きタバコの喫煙による肺気腫のマウスモデルにおける肺気腫の指標の予防において、肺送達によって投与されるＡＡＴの効力を示す。
【０２６３】
処置グループ：
５つのグループの成体マウス（開始時で１２週齢）について試験した。
【０２６４】
グループ１の動物（３２匹の動物）を、コントロールの煙を吸わせない動物とした。
【０２６５】
グループ２〜５の動物は、６ヶ月の間、６日／週で、１日あたり２本の巻きタバコに曝露させた。
【０２６６】
グループ２の動物（３２匹の動物）には、エアロゾル化したビヒクル緩衝液（１０ｍＭのＮａＣｌ、２０ｍＭのリン酸ナトリウム、５ｍＭのＮ−アセチルシステイン、１ｍＭのクエン酸ナトリウム、ｐＨ７．４；１０ｍｌ／５匹の動物）を投与し、その後、タバコの煙を吸わせた。
【０２６７】
グループ３の動物（３２匹の動物）には、低用量のエアロゾル化したｒＡＡＴ（ビヒクル緩衝液中で１．１５ｍｇ／ｍｌ；１０ｍｌ／５匹の動物；用量１）を投与し、その後、煙を吸わせた。
【０２６８】
グループ４の動物（３２匹の動物）には、中程度の用量のエアロゾル化したＡＡＴ（ビヒクル緩衝液中で５．７５ｍｇ／ｍｌ；１０ｍｌ／５匹の動物；用量２）を投与し、その後、煙を吸わせた。
【０２６９】
グループ５の動物（３２匹の動物）には、高用量のエアロゾル化したＡＡＴ（ビヒクル緩衝液中で１１．５ｍｇ／ｍｌ；１０ｍｌ／５匹の動物；用量３）を３０分かけて投与し、その後、煙を吸わせた。
【０２７０】
ビヒクル（グループ２）または薬剤を送達するために、動物（一度に５匹）を薬剤送達デバイスに入れ、ここで、５匹に別々に等用量のＡＡＴを、それぞれにエアロゾル化した液体として送達した。１０ｍＬの滅菌の生理食塩水または薬剤をネブライザーに入れ、各グループの５匹の動物に送達した。送達は、ネブライザーが乾燥するまで（約３０分間）行った。
【０２７１】
ネブライザー（Ａｅｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）によっては、３〜４μｍのＭＭＡＤの粒子が、９０％の効率で生産された。ネブライザーにより投与された薬剤のおよそ６％が動物の呼吸ゾーンに送達され、呼吸ゾーンに入った薬剤の約５％が、肺深部に堆積し、全体としておよそ０．２７％の効率と推定される。
【０２７２】
各処置グループにおいて、３つの時点で分析を行った：１週間、３ヶ月、および６ヶ月。試験の１週間後、３ヶ月後、および６ヶ月後、各グループからそれぞれ、１０匹の動物、１０匹の動物、および１２匹の動物を屠殺し、肺および肺サンプルについて分析作業を行った（下記を参照のこと）。
【０２７３】
分析：
各動物において、右肺を摘出し、固定／膨張に使用し、形態計測の試験のためにパラフィンに包埋してｍｅａｎ  ｌｉｎｅａｒ  ｉｎｔｅｒｃｅｐｔ（Ｌｍ）を決定した。ｍｅａｎ  ｌｉｎｅａｒ  ｉｎｔｅｒｃｅｐｔは、肺胞の壁間の距離であり、これは、プロテアーゼ（例えば、エラスターゼ）によって肺構造が崩壊されると大きくなる。
【０２７４】
左肺は、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）して、炎症性細胞の型、マクロファージ、および好中球のレベルを決定した。これらは、形態によってカウントした。ＢＡＬサンプルは、左肺の０．５ｍＬの洗浄処理を使用して回収した。
【０２７５】
結果
以下の表（表５）には、６ヶ月の時点での、Ｌｍ（未処置の喫煙者と比較した増大の減少の割合として）、処置した動物と未処置の動物の肺の中のマクロファージおよび好中球についての結果をまとめる。
【０２７６】
【表５】
2007528409.tif 000008
。
【０２７７】
以下の表（表６）には、マトリックスメタロプロテアーゼ９（ＭＭＰ９）活性のアッセイについての結果をまとめる。
【０２７８】
【表６】
2007528409.tif 000009
。
【０２７９】
この実施例では、肺気腫についての立証されている原因である巻きタバコの煙に慢性的にさらされた動物において、ＡＡＴの吸入による肺気腫の指標の有意な減少が明らかにまった。
【０２８０】
具体的には、データは、エアロゾル化されたｒＡＡＴが、巻きタバコの煙に対する慢性的曝露の設定においてもなお、生物学的活性を維持することを示した。データはまた、吸入されたｒＡＡＴは喫煙によって誘導された炎症性細胞の流入を正常化し得、気腔の拡大を緩和し得ることも明らかにした。気腔の拡大を有意に阻害するには、肺胞に送達された低いμｇ量のｒＡＡＴで十分である。驚くべきことに、さらに多量のｒＡＡＴの吸入は、これらの実験においては良くなかった。これらの所見により、好中球エラスターゼが喫煙による肺の損傷の原因である鍵となるプロテアーゼであることが確認された。
【０２８１】
データはさらに、進行性の肺気腫を有する喫煙経験者において、吸入によるｒＡＡＴの標的化された送達により、全ての全身的な安全性の問題を回避し得、薬剤の必要量を減少させることができることを示唆する。
【０２８２】
本明細書中で引用された全ての刊行物、特許、および特許出願は、個々の刊行物、特許、または特許出願が参照により引用されていると具体的かつ個々に示されている場合と同程度に、全ての目的のためにそれらの全体が参考として本明細書中に援用される。
【０２８３】
本明細書中で使用される場合は、単数形の不定冠詞および定冠詞「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」には、他の場所で明確に示されていない限りは、複数形についての言及も含まれる。例えば、「１つの症状（ａ  ｓｙｍｐｔｏｍ）には、１つ以上の症状が含まれる。
【０２８４】
本明細書中に記載される実施例および実施形態は、説明の目的のためのものにすぎず、その様々な改変または変更が当業者に示唆され、本出願の精神および範囲、ならびに添付の特許請求の範囲の範囲に含まれることが理解される。
【配列表】
2007528409000001.app
【国際調査報告】
2007528409.tif 000010
2007528409.tif 000011