(57)【要約】任意の様々な方法で予め処理されたVitis Viniferaブドウからのブドウ種子抽出の方法であって、皮および種子を、ブドウを処理した直後に分離し、これにより、別の任意の処理液体の皮が存在することによって起こる任意の発酵が回避および／または停止される、方法。【選択図】図１
2007508006.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
様々な任意の方法で予め処理されたVitis Viniferaブドウからのブドウ種子抽出の方法であって、ブドウが処理された直後に、皮および種子を分離し、これにより、別の任意の処理液体の皮が存在することによって起こる任意の発酵を回避および／または停止させる、方法。
【請求項２】
前記ブドウを、発酵させない形式のプロセス、例えばブドウジュースの製造から得る、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
有機品種から得る種子のための、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記分離を、一段もしくは多段の振動選別機、または種子用拡散機械によって行う、請求項１から３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記種子を、分離後に乾燥させる、請求項１から４までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記乾燥ステップを、ホットエア乾燥機中で行う、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記乾燥ステップを、３０〜１２０℃の温度で行う、請求項５または６に記載の方法。
【請求項８】
前記乾燥ステップの終わりに、２〜３０％の湿り度が得られる、請求項５から７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
エタノール−水混合物を、抽出溶剤として使用する、請求項１から８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記エタノール−水混合物の重量比が３０：７０である、請求項３に記載の方法。
【請求項１１】
薬剤−液体比が１：１０である、請求項１から１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
抽出ステップを、低パーセンテージ酸素の雰囲気中で行う、請求項１から１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記抽出ステップを、加圧下で行う、請求項１から１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記液体の濃縮を行い（９）、非水相を除く、請求項１から１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記得られた生成物の精製を、クロマトグラフィ（１０）を利用して行う、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
クロマトグラフィによる精製ステップを、ポリスチレン樹脂、例えばXAD-16、XAD-4、DIAION HP-20で行う、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記溶離された成分の濃縮を行う、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記濃縮された溶出物もしくは濃縮装置から得られる任意の生成物を、未精製の生成物を所望する場合には、噴霧乾燥機でまたは別の任意の適切な方法で乾燥する、請求項１から１７に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１から１８のいずれか１項に記載の方法によって得られる、ポリフェノールを高い含有量でかつ単量体物質を低い含有量で含む、ブドウ種子抽出物。
【請求項２０】
緑茶抽出物に混合される、請求項１６に記載の抽出物。
【請求項２１】
グレープシードオイルを製造するための、請求項１から１８のいずれか１項に記載の方法から回収される種子の使用。
【請求項２２】
請求項１９または２０に記載の抽出物の、食品添加物もしくはインテグレータとしての使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Vitis Vinifera（ヨーロッパブドウ）種のブドウ種子抽出の方法に関し、特に、ブドウの搾りカスからポリフェノール物質を抽出する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ブドウ種子抽出は、通常、ワインの製造プロセスで生じたブドウの搾りカスに対して行われ、この抽出により、いくつかの重要な分子、例えばポリフェノールを得ることができる。
【０００３】
ポリフェノールは、食品中のインテグレータ（サプリメント）または添加物として有用であり、よって、高濃度および高純度のものが得られるようにかつ比較的低コストでその製造が行われることが重要である。原料に関連するいくつかの要因およびこの要因が植物中のポリフェノールの品質および量に与える影響は、以前から研究の対象となっている。この要因とは、例えば、ストレスの誘導（Cantos, E, 2001; Rivero RM 2001）、熟度（Lattanzio V, 2001; Gooding PS, 2001; Kennedy JA, 2000; Chevalier T, 1999; Murata M, 1997; Joy RW 4th, 1995）および品種（Chang S, 2000; Sanoner P, 1999）等である。
【０００４】
しかし、これまで、重要な要因、例えば、目的の物質種をさらに分離するために使用される発酵物質から誘導されるアルコールの存在（原料を処理する前の貯蔵による発酵、またはブドウ種子の場合には、ワイン醸造から誘導されるアルコール残渣による）の影響に対しては、十分な理解がなされていなかった。
【０００５】
別の未調査の要因は、有機品種から得られるポリフェノールの品質と量との相関関係である。
【０００６】
有機品種中に存在する合成物質は比較的少なく、この有機品種には、熟度、品種および病原体からのストレス等の上記要因が同時に存在しているものもある。特定の品種から得られる有機ブドウジュースは、ポリフェノールの単量体、特に、ブドウ種子中での主たる２つの単量体成分であるカテキンおよびエピカテキンについて低含有量を示す。
【０００７】
単量体濃度が低いことによって、有機品種から得られるブドウジュースは、単量体、例えば緑茶抽出物を多量に含む市販の製品よりも良い特性を有しており、また同時に、不都合な副作用も回避される。
【０００８】
ポリフェノールは、植物マトリクス内で、単量体の形態で、または低分子のポリマー−オリゴマー（ＬＷＭＰ）としておよび高分子のポリマー（ＨＷＭＰ）として見出すことができる。また、抽出技術は、得られる最終生成物の品質に大きな影響を与えうる。
【０００９】
例えば、植物マトリクスからのポリフェノールの抽出は、温度、ｐＨの変化等の要因によって調整される（Garcia LA, 1985; Molinelli A, 2002; Scalia S, 1999）。抽出によて得られた生成物の品質および量は、用いられる抽出方法によって変化する（Saucier C, 2001; Wu J 2002）。
【００１０】
消費に変異原性リスクを伴う品種もある（NLM(2000a) CCRIS(Chemical Carcinogenesis Research Information System), National Library of Medicine, Bethesda, MD, searched July 2000 [Record Nos. 1960, 3256, 6855, 7097, 7127]）ので、重要な要因は、全ての抽出段階中で特定の単量体成分について制御されている必要がある。
【００１１】
ブドウ種子からのポリフェノールの抽出に対する利点および発展形態は、いくつかの特許で試みられている。Yokohamaらによる米国特許第４３２０２００号明細書は、ブドウのような自然産物からアントシアニジン色素を、温度８５℃以上で原料を亜硫酸塩と混合することによって得る方法を開示している。Hiltonらによる米国特許第４３２０００９号明細書は、ポリフェノール抽出物をブドウの皮から得る方法であって、水性の抽出物を調製し、さらにイオン交換樹脂に吸収させ溶離させるステップを経て、必要であれば紙もしくはシリカ薄層ゲルでクロマト分離させる方法の発展形態に関する。
【００１２】
上記方法によって、ポリフェノールの濃度の低いものが得られる。Shrikhandらによる米国特許第４４５２８２２号明細書は、ブドウの搾りカスもしくは別の源からアントシアニンを抽出することに関し、この場合、二酸化硫黄で抽出を行い、続いて酵素で処理して抽出物中に存在する固体物質を除去する。Crosbyらによる米国特許第４４８１２２６号明細書は、抽出物を安定化させるためにタンニン酸を使用することを開示している。Langstonらによる米国特許第４５００５５６号明細書は、ブドウの搾りカスをＨ２ＳＯ３で処理して錯体を形成することを開示しており、その回収プロセスで、非イオン吸収体によって液体抽出物を処理し、錯体を吸収させる。
【００１３】
次に、吸収相を水で処理して、糖、有機酸および固体粒子等の水溶性の材料を除去する。
【００１４】
さらに、錯体を、酸性化した有機溶剤で吸収相から溶離し、溶離によって、最終的にはアントシアンが重合する。
【００１５】
この方法で使用される溶剤は、好ましくは、錯体を分解し、ＨＳＯ３からアントシアンを遊離させる、少量の鉱酸で酸性化された１００％エタノールである。Fordによる米国特許第５１４１６１１号明細書では、制御された多孔性および表面を有するポリアミド樹脂を使用し、ポリフェノール物質を抽出物から取り出す。ブドウ種子中に含まれるほとんどのフラボノイド物質を抽出するには、特に分子の群のいくつかを選択しなくてはならない場合には、極めて正確な分離を可能にする技術が必要とされる。
【００１６】
とりわけ有用なのは、Indenaの特許（Frangiらによる米国特許第５４８４５９４号明細書）であり、これによれば、選択的なポリフェノールの抽出が可能となり、不都合な副作用をもたらす単量体の大部分が除去される。
【００１７】
この方法では、溶剤、例えばアセトンおよびメタノール（第１溶剤として）、エチルアセテート、メチレンクロライドおよびジクロロエタンの使用により、プロシアニジンオリゴマーを多く含有する抽出物が得られる。
【００１８】
この方法の主な欠点は、
−  溶剤の使用により、多くの有用なプロアントシアニジンの抽出ができないこと、
−  手順には、濾過、インキュベーション等の多くのステップが必要であり、極めて時間がかかりかつ集中的な作業を要すること、
−  公害問題および産業衛生上の問題を引き起こす可能性のある発ガン性の塩素化された溶剤を使用すること、および
−  共沸混合物を形成せずにアセトン、メタノールまたはアセテートを完全に除去することが不可能であること、である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
現在のところ、抽出プロセスはみな、皮および種子の両方を含むブドウの搾りカスから出発する。これを脱アルコール剤に通し、全てのマトリクスについてアルコールを除去する。
【００２０】
このプロセスの廃棄物は乾燥機へと送られ、この乾燥機で湿り度（水分含有量）約４％程度に低下させ、分離篩または種子分離装置で、種子から皮を分離する。しかし、このプロセスにはいくつかの欠点があり、それは、脱アルコールプロセス中にポリフェノールが抽出されること、乾燥機の通過による単量体成分が増大することである。
【００２１】
この最後の処理は、通常、製造時間を短縮しコストを低減するために、高温で短時間で行われる。上記プロセスで使用される種子の品質が低いことによって、種子は、乾燥機の燃料源として使用されることが多く、または不飽和油の含有量が高いので、シードオイルの製造に使用されることが多い。これまでのところ、ブドウ種子からポリフェノールを選択的に生産し、単量体の含有量を低減する実用的なプロセスはない。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
上記の課題は、本発明によって見事に解決される。本発明は、何らかの方法で処理されたブドウ種子において抽出を行う方法であって、処理の直後に、かつ何らかの発酵プロセスが起こる前に種子および皮を分離することを特徴とする方法である。本発明の第２の重要な態様は、上記方法によって得られる、ポリフェノール含有量が高くかつ単量体物質の含有量が低い抽出物である。さらに、本発明の生成物は、添加物もしくは栄養インテグレータとして使用することができる。最後に、本発明は、抽出プロセス廃棄物から得られる種子の、シードオイルを製造するための使用に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
本発明の詳細な説明を、添付図面を参照して以下に示す。
【００２４】
本発明で提案する抽出方法は、現在、種子処理の最大の実施場である、近代の工業規模の蒸留場で用いられているものとは異なる経路（図２参照）で行われる。ワイン醸造プロセス、ブドウジュース製造またはブドウの形態を別法で処理することによって得られた発酵したブドウまたは未発酵のブドウの搾りカス（１）を、基本成分（皮、種子およびその他（rasp））に分離する（２）。
【００２５】
この段階で用いられる最適な機器は、一段もしくは多段の振動選別機または種子用選別機械であってよい。
【００２６】
本発明の方法によれば、主たるプロセス直後に分離を行い、これにより、ポリフェノールの濃度を低めるいかなる発酵も回避されまたはブロックされる。
【００２７】
このようにして、脱アルコールプロセスもしくは保護のための乾燥を省くことができるので、この方法により経済的な利点が得られるのは明らかである。
【００２８】
また、種子（３）は既に分離されているので、この分離プロセスは必要ではないことも明らかである。
【００２９】
処理された皮（４）は、別の用途に利用することができる。
【００３０】
必要であれば、皮を脱アルコール剤に通す。分離された種子（３）は、乾燥機（５）によって処理することができる。
【００３１】
ホットエア乾燥機は、燃焼排気の排出および炭化水素または他の有機もしくは無機源による汚染を回避できるので、有用である。
【００３２】
乾燥プロセスは、３０〜１２０℃の温度で、材料の湿り性が、２〜３０％に達するまで、または発酵プロセスもしくは製品の別の形の劣化をもたらす細菌、酵母菌もしくは別の微小生物体の成長を抑制することのできる他の任意の値に達するまで行うのが望ましい。
【００３３】
直ちに抽出を行う場合には、乾燥ステップを省くことができる（６）。得られた種子（７）は、グレープシードオイルまたは種子の粒もしくは粉末からの抽出物の製造を含む、別のあらゆる用途に利用することができる。単量体含有量の低い抽出物を製造するために、対象となる分子を植物マトリクスから抽出できる任意の溶剤を、抽出混合物として使用するのが望ましい。その場合、薬剤−液体比１：１０の水：エタノール（例えば３０：７０）の混合物が好ましく、溶剤の飽和抽出能が得られる。
【００３４】
抽出処理は、低酸素の条件および高圧下で行うことができる。次に、液体を、除去された種子から分離する。種子は、グレープシードオイルの製造を含む別の任意の用途に利用することができる。
【００３５】
続いて液体を濃縮し（９）、非水相を除去し、得られた生成物を、XAD-16、XAD-4もしくはDIAION HP-20等のポリスチレン樹脂を利用したクロマトグラフステップ（１０）によって精製することができる。未精製の生成物が必要である場合には、溶出物もしくは濃縮器からの生成物を、溶離液を回収するもしくは製品を濃縮する濃縮ステップに通し、続いて、噴霧乾燥もしくは微細な粒子を得ることのできる別の任意のプロセスによってさらに乾燥（１１）することが望ましい。ポリフェノール含有量が高く、単量体含有量が低い生成物は、それ自体で上述の用途のために利用でき、特に本発明によれば、このような抽出物は、食品および飲料の添加物および栄養インテグレータの調製に役立てることができる。このような生成物は、遺伝毒性作用のない単量体を多量に含む緑茶抽出物と混合することもできる。
【００３６】
実施例：有機（biologic）赤ブドウジュースの製造のために利用された圧搾フィルタを用いて得られたブドウの搾りカスを、両面分離装置（double face separator）により７２時間分離を行った。
【００３７】
このようにして得られた種子を、高温空気流乾燥機で、６０℃以下で約４時間、湿り度７％となるまで乾燥させた。
【００３８】
続いて、得られた種子を、薬剤−溶剤比１：３のエタノール−水混合物（７０：３０）で、温度４０〜５０℃で１時間の４サイクルで処理した。
【００３９】
上記処理により得られた残った種子を、濾過篩を利用して除去し、液相を濃縮してエタノールを除いた。
【００４０】
回収したエタノールは、さらなる抽出のために再利用することができた。
【００４１】
一次抽出物を含む水相を、噴霧乾燥機に装填し、全ポリフェノール（没食子酸等量についてFolin法の類の分析による）として３５％未満含有する一次生成物を得ることができた。あるいは、この生成物を、HP-20 Supelcoといった樹脂を利用して精製することができ、続いてエタノールにより７０％で溶離することができた。
【００４２】
得られた液体を濃縮し、噴霧乾燥機に装填し、全ポリフェノールについて７０％を超える精製された生成物が得られた。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】本発明により得られた抽出物のＨＰＬＣ−ＵＶクロマトグラムである。
【図２】本発明による抽出プロセスのブロック図である。
【図１】
2007508006.tif 000003
【図２】
2007508006.tif 000004
【国際調査報告】
2007508006.tif 000005
2007508006.tif 000006
2007508006.tif 000007