(57)【要約】本発明は、グリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）の活性を阻害するピリミジン誘導体およびピリジン誘導体をヒトまたは動物被験体に投与することによって骨減量を処置または予防する方法、上記化合物を含有する薬学的組成物、ならびに上記化合物および組成物の単独または他の薬学的に活性な薬剤と組み合わせての使用に関する。本発明の化合物の投与によって処置または予防される骨減量としては、オステオペニア、骨粗鬆症、薬物療法、閉経後骨減量、加齢、活動停止、食餌、リウマチ、慢性関節リウマチ、ページェット病、歯周疾患、癌、癌処置、または骨折に関連する骨減量が挙げられるが、それらに限定されない。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトまたは動物被験体の骨減量を処置または予防するための医薬品の製造における式（Ｉ）：
【化１】
2007502300.tif 000023
の化合物またはその薬学的に受容可能なその塩、立体異性体、互変異性体、水和物もしくは溶媒和化合物の使用であって、式中、
Ｗは、任意に置換される炭素または窒素であり、
ＸおよびＹは、独立に、窒素、酸素および任意に置換される炭素からなる群から選ばれ、
Ａは、任意に置換されるアリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、独立に、水素、ヒドロキシル、および任意に置換される低級アルキル、シクロ低級アルキル、アルキルアミノアルキル、低級アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキルカルボニル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選ばれ、Ｒ１′、Ｒ２′、Ｒ３′およびＲ４′は、独立に、水素および任意に置換される低級アルキルからなる群から選ばれ、
Ｒ５およびＲ７は、独立に、水素、ハロ、任意に置換される低級アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アミノ、アミノアルコキシ、アルキルアミノ、アルキルカルボニルアミノ、ヘテロアラルキルカルボニルアミノ、シクロイミド、ヘテロシクロイミド、アミジノ、シクロアミジノ、ヘテロシクロアミジノ、グアニジニル、アリール、ビアリール、ヘテロアリール、ヘテロビアリール、ヘテロシクロアルキルおよびアリールスルホンアミドからなる群から選ばれ、
Ｒ６は、水素、ヒドロキシ、ハロ、カルボキシル、ニトロ、アミノ、アミド、アミジノ、イミド、シアノ、および置換または非置換の低級アルキル、低級アルコキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アラルキルカルボニルオキシ、アルキルアミノカルボニルオキシ、アリールアミノカルボニルオキシ、ホルミル、低級アルキルカルボニル、低級アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アミノアリール、アルキルスルホニル、スルホンアミド、アミノアルコキシ、アルキルアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アルキルアミノカルボニルアミノ、アリールアミノカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、ヘテロアラルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、シクロアミド、シクロチオアミド、シクロアミジノ、ヘテロシクロアミジノ、シクロイミド、ヘテロシクロイミド、グアニジニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、アリールスルホニルおよびアリールスルホンアミドからなる群から選ばれる、
使用。
【請求項２】
前記化合物は、
【化２】
2007502300.tif 000024
である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記骨減量は、オステオペニア、骨粗鬆症、薬物治療、閉経後骨減量、加齢、活動停止、食餌、リウマチ、慢性関節リウマチ、ページェット病、歯周疾患、癌、癌処置または骨折に関連している、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記骨減量は、腰部骨折および脊髄骨折から選ばれる骨折の結果として起こる、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
前記骨減量は、ステロイドの投与の結果として起こる、請求項３に記載の使用。
【請求項６】
前記減量は、多発性骨髄腫、乳癌、前立腺癌および肺癌からなる群から選ばれる癌の結果として起こる、請求項３に記載の使用。
【請求項７】
前記化合物は、骨減量の処置または予防のための少なくとも一つの別の薬剤と組み合わせてさらに投与される、請求項１に記載の使用。
【請求項８】
前記別の薬剤は、エストロゲンまたはカルシウムである、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
前記別の薬剤は、抗吸収剤である、請求項７に記載の使用。
【請求項１０】
前記抗吸収剤は、ラロキシフェン、カルシトニン、アレンドロネート、クロドロネート、エチドロネート、パミドロネート、イバンドロネート、ゾレドロン酸、リセドロネートおよびチルドロネートからなる群から選ばれる、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
前記別の薬剤は、骨形成促進剤である、請求項７に記載の使用。
【請求項１２】
前記骨形成促進剤は、副甲状腺ホルモンである、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
前記使用は、骨形成を促進する、請求項１に記載の使用。
【請求項１４】
式（Ｉ）：
【化３】
2007502300.tif 000025
の化合物または薬学的に受容可能な前記化合物の塩、立体異性体、互変異性体、水和物または溶媒和化合物と、骨減量の処置または予防のための少なくとも一つの別の薬剤とを含む組成物であって、式中、
Ｗは、任意に置換される炭素または窒素であり、
ＸおよびＹは、独立に、窒素、酸素および任意に置換される炭素からなる群から選ばれ、
Ａは、任意に置換されるアリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、独立に、水素、ヒドロキシル、任意に置換される低級アルキル、シクロ低級アルキル、アルキルアミノアルキル、低級アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキルカルボニル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選ばれ、Ｒ′１、Ｒ′２、Ｒ′３およびＲ′４は、独立に、水素および任意に置換される低級アルキルからなる群から選ばれ、
Ｒ５およびＲ７は、独立に、水素、ハロ、任意に置換される低級アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アミノ、アミノアルコキシ、アルキルアミノ、アルキルカルボニルアミノ、ヘテロアラルキルカルボニルアミノ、シクロイミド、ヘテロシクロイミド、アミジノ、シクロアミジノ、ヘテロシクロアミジノ、グアニジニル、アリール、ビアリール、ヘテロアリール、ヘテロビアリール、ヘテロシクロアルキルおよびアリールスルホンアミドからなる群から選ばれ、
Ｒ６は、水素、ヒドロキシ、ハロ、カルボキシル、ニトロ、アミノ、アミド、アミジノ、イミド、シアノ、および置換または非置換の低級アルキル、低級アルコキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アラルキルカルボニルオキシ、アルキルアミノカルボニルオキシ、アリールアミノカルボニルオキシ、ホルミル、低級アルキルカルボニル、低級アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アミノアリール、アルキルスルホニル、スルホンアミド、アミノアルコキシ、アルキルアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アルキルアミノカルボニルアミノ、アリールアミノカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、ヘテロアラルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、シクロアミド、シクロチオアミド、シクロアミジノ、ヘテロシクロアミジノ、シクロイミド、ヘテロシクロイミド、グアニジニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、アリールスルホニルおよびアリールスルホンアミドからなる群から選ばれる、
組成物。
【請求項１５】
前記別の薬剤は、エストロゲンまたはカルシウムである、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記別の薬剤は、抗吸収薬剤である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１７】
前記抗吸収薬剤は、ラロキシフェン、カルシトニン、アレンドロネート、クロドロネート、エチドロネート、パミドロネート、イバンドロネート、ゾレドロン酸、リセドロネート、ジチルドロネートからなる群から選ばれる、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記別の薬剤は、骨形成促進薬剤である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１９】
前記骨形成促進薬剤は、副甲状腺ホルモンである、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
式（１）の化合物は、
【化４】
2007502300.tif 000026
である、請求項１３から１８のいずれかに記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２００３年８月１３日出願の米国特許出願第６０／４９４、８５９号の優先権を主張する。上記仮出願の開示は、参照によって、その全体がすべての目的に関して、本明細書中に完全に記載されているのと同様に、本明細書に参考として援用される。
【０００２】
（発明の背景）
（１．発明の分野）
本発明は、グリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）の活性を阻害するピリミジン誘導体およびピリジン誘導体を、ヒトまたは動物被験体に投与することによって、骨減量を処置または予防する方法に関する。本発明は、さらに、上記化合物を含有する医薬品組成物、ならびに骨形成の促進における前記化合物および組成物の単独または他の薬学的に活性な成分との組み合わせのどちらかでの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
（２．技術水準）
（参考文献）
本節では、以下の文献刊行物が引用される。以下で特定されるすべての刊行物は、各個々の刊行物が具体的にかつ個々にその全体が参考として援用されるのと同じ程度に、それらの全体が本明細書に参考として援用される。
【０００４】
【数１】
2007502300.tif 000002
骨再生、すなわち骨リモデリングは、造血作用において誘導される骨芽細胞および破骨細胞によってそれぞれ実行される骨の生成および骨の吸収事象の両方を含む、骨組織中の継続的プロセスである。オステオペニア、骨粗鬆症、ステロイド誘導骨粗鬆症、歯周疾患、慢性関節リウマチおよびページェット病を含む多数の病状には、骨吸収および破骨細胞性活性に偏るこの均衡の撹乱が関連する。これらの状態を処置するために用いられる一般的な薬物は、抗吸収剤として作用し、これらとしては、ペプチドのカルシトニン、ならびにビスホスフェートのアレンドロネート、クロドロネート、エチドロネート、パミドロネート、チルドロネートおよびリセドロネートを含む。しかし、骨形成または骨の生成を促進するための有効な医薬品はまだ存在しない。骨の生成を直接刺激する薬物の候補は、現在まだ治験段階にある。組換え副甲状腺ホルモンのテリパラタイドは、骨粗鬆症処置のために認可された、骨生成促進（ｐｒｏ−ｂｏｎｅ）作用機序を有する唯一の薬物である。骨形成促進薬剤は、外傷または癌に由来する急性骨減量を含む状態において、骨の生成を開始させる上で特に有用である。
【０００５】
骨形成は、間葉系前駆細胞依存性である。これらの細胞は、骨芽細胞に分化し得るだけでなく、脂肪細胞、筋細胞およびその他の細胞型にも分化し得る（Ａｓａｋｕｒａら、２００１およびC
ａｐｌａｎら、２００１）。Ｗｎｔは、発生過程を含む多くの細胞事象を調節する分泌型シグナル伝達タンパク質のファミリーである。脂肪形成と、他の系統への分化との間には、インビトロおよびインビボで逆数関係が存在し、その結果、骨または筋肉の減量は、同じ組織内の脂肪細胞の数の増加と関連する（Ｎｕｔｔａｌｌら、２０００およびＫｉｒｋｌａｎｄら、２００２）。多分化能間葉系前駆細胞の細胞運命を支配する調節因子の一つの候補は、インビトロで脂肪形成を阻害するＷｎｔ１０ｂである（Ｒｏｓｓら、２０００およびＢｅｎｎｅｔｔら、２００２）。正規のシグナル伝達経路では、分泌されたＷｎｔ類は、ｆｒｉｚｚｌｅｄ受容体およびＬＲＰ補助受容体を介して作用してグリコーゲンシンターゼキナーゼ３を阻害し、β−カテニンを安定化し、Ｔ細胞因子ＴＣＦ／リンパ増殖因子ＬＥＦの転写因子の活性に影響を及ぼす（Ｍｏｏｎら、２００２およびＨｅ、２００３）。正規のＷｎｔシグナル伝達が活性化すると、脂肪細胞変換が阻害され、前駆脂肪細胞中でＷｎｔシグナル伝達が阻害されると、自発性脂肪形成が引き起こされる。内因性阻害Ｗｎｔの最善の候補は、脂肪細胞変換を妨げ、脂肪細胞ではなく前駆細胞において発現するＷｎｔ１０ｂである。ＷＯ第９９／６５８９７号に開示されているＧＳＫ３インヒビターＣＨＩＲ９９０２１、６−［（２−｛［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−メチルイミダゾール−２−イル）ピリミジン−２−イル］アミノ｝エチル）アミノ］ピリジン−３−カルボニトリルは、Ｗｎｔを活性化し、従って脂肪細胞変換を妨げることによって、３Ｔ３−Ｌ１前駆脂肪細胞において、インビトロで、Ｗｎｔシグナル伝達を模倣することが見いだされた（Ｂｅｎｎｅｔｔら、２００２）。
【０００６】
ステロイド誘発骨粗鬆症を促進する上でのグルココルチコイドステロイドの作用の研究によると、キナーゼＧＳＫ３βは、ＧＳＫ３βの活性化によって骨芽細胞の細胞周期を撹乱することによって、この疾患に重要な役割を果たし得ることが示された（Ｓｍｉｔｈら、２００２）。グリコーゲンシンターゼキナーゼ−３としても知られるＧＳＫ３は、αおよびβの二つのアイソフォームが同定されているセリン／トレオニンキナーゼである。ＧＳＫ３β自体が、タンパク質合成、細胞増殖、細胞分化およびアポトーシスから免疫増強にわたる広い範囲の細胞機能に影響を及ぼすＷｎｔおよび成長因子経路に参加しているので、グルココルチコイドがＧＳＫ３βに影響を及ぼす作用機序および特定の経路は不明である。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（発明の要旨）
本発明は、ヒトまたは動物被験体の骨減量を処置または予防するための組成物および方法を提供する。一つの局面では、本発明は、次式（Ｉ）：
【０００８】
【化５】
2007502300.tif 000003
の化合物、あるいはその薬学的に受容可能な塩、立体異性体、互変異性体、水和物または溶媒和物を提供し、式中、
Ｗは、任意に置換される炭素または窒素であり、
ＸおよびＹは、独立に、窒素、酸素、および任意に置換される炭素からなる群から選ばれ、
Ａは、任意に置換されるアリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、独立に、水素、ヒドロキシルおよび任意に置換される低級アルキル、シクロ低級アルキル、アルキルアミノアルキル、低級アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキルカルボニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群から選ばれ、Ｒ１′、Ｒ２′、Ｒ３′およびＲ４′は、独立に、水素および任意に置換される低級アルキルからなる群から選ばれ、
Ｒ５およびＲ７は、独立に、水素、ハロおよび任意に置換される低級アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アミノ、アミノアルコキシ、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、ヘテロアラルキルカルボニルアミノ、シクロイミド、ヘテロシクロイミド、アミジノ、シクロアミジノ、ヘテロシクロアミジノ、グアニジニル、アリール、ビアリール、ヘテロアリール、ヘテロビアリール、ヘテロシクロアルキル、およびアリールスルホンアミドからなる群から選ばれ、
Ｒ６は、水素、ヒドロキシ、ハロ、カルボキシル、ニトロ、アミノ、アミド、アミジノ、イミド、シアノ、置換または非置換の低級アルキル、低級アルコキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アラルキルカルボニルオキシ、ヘテロアリールカルボニルオキシ、ヘテロアラルキルカルボニルオキシ、アルキルアミノカルボニルオキシ、アリールアミノカルボニルオキシ、ホルミル、低級アルキルカルボニル、低級アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アミノアリール、アルキルスルホニル、スルホンアミド、アミノアルコキシ、アルキルアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アルキルアミノカルボニルアミノ、アリールアミノカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、シクロアミド、シクロチオアミド、シクロアミジノ、ヘテロシクロアミジノ、シクロイミド、ヘテロシクロイミド、グアニジニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、アリールスルホニル、およびアリールスルホンアミドからなる群から選ばれる。
【０００９】
本発明のいくつかの実施形態では、式（ＩＶ）および（Ｖ）、
【００１０】
【化６】
2007502300.tif 000004
の化合物またはそれらの薬学的に受容可能な塩、立体異性体、互変異性体、水和物あるいは溶媒和化合物が提供され、式中、Ｘ、Ｒ１〜Ｒ６およびＲ８〜Ｒ１４は、上記で説明した意味を有し、Ｒ１５は、水素、ニトロ、シアノ、アミノ、アルキル、ハロ、ハロ低級アルキル、アルキルオキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルスルホニルおよびアリールスルホニルからなる群から選ばれる。
【００１１】
本発明の別の局面は、ヒトまたは動物被験体の骨減量を処置または予防する方法を提供し、この方法は、化合物（ＶＩ）または薬学的に受容可能な化合物（ＶＩ）の塩、立体異性体、互変異性体、水和物または溶媒和化合物を含む本明細書に開示される化合物を、このヒトまたは動物被験体に投与する工程を含み、上記化合物（ＶＩ）は、６−［（２−｛［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−メチルイミダゾール−２−イル）ピリミジン−２−イル］アミノ｝エチル）アミノ］ピリジン−３−カルボニトリルであり、式：
【００１２】
【化７】
2007502300.tif 000005
を有する。
【００１３】
本発明の化合物の投与によって処置または予防される骨減量としては、オステオペニア、骨粗鬆症、薬物療法、閉経後骨減量、加齢、活動停止（ｄｉｓｕｓｅ）、食餌、リウマチ、慢性関節リウマチ、ページェット病、歯周疾患、癌、癌処置、または骨折に関連する骨減量が挙げられるが、それらに限定されない。薬物治療療法の一部としてのステロイド投与によって、または癌処置の間の細胞毒性薬剤の使用によって起こる骨減量も、本発明の化合物の投与によって処置または予防される。本発明が意図する骨減量に関連する癌および癌処置は、多発性骨髄腫、乳癌、前立腺癌または肺癌を含む。
【００１４】
本発明のさらに別の局面は、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（Ｖ）または（ＶＩ）を有する本発明の化合物または薬学的に受容可能なそれらの化合物の塩、立体異性体、互変異性体、水和物または溶媒和物を、ヒトまたは動物被験体に投与することによって、骨の生成または骨の成長を増加または促進する方法を提供する。
【００１５】
本発明は、さらに、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（Ｖ）または（ＶＩ）を有する化合物またはそれらの化合物の薬学的に受容可能な塩、立体異性体、互変異性体、水和物または溶媒和物のヒトまたは動物被験体への投与によって、骨折を治癒させる方法を提供する。本明細書に開示される化合物の投与によって、腰または脊柱の骨折を含む任意の骨折を処置し得る。
【００１６】
本発明は、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（Ｖ）または（ＶＩ）を有する化合物またはその薬学的に受容可能な塩、立体異性体、互変異性体、水和物または溶媒和物を、骨減量の処置または予防のための少なくとも一つの別の薬剤と組み合わせて、ヒトまたは動物被験体に投与する工程を含む、ヒトまたは動物被験体の骨減量を処置または予防する方法も提供する。
【００１７】
本発明は、さらに、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（Ｖ）または（ＶＩ）を有する化合物、薬学的に受容可能なそれらの化合物の塩、立体異性体、互変異性体、水和物または溶媒和物と、骨減量の処置または予防のための少なくとも一つの別の薬剤とを含む組成物を提供する。
【００１８】
本発明によってこれらの方法および組成物に使用するために提供される別の薬剤としては、エストロゲン、カルシウム、抗吸収薬剤、ラロキシフェン、カルシトニン、アレンドロネート、クロドロネート、エチドロネート、パミドロネート、イバンドロネート、ゾレドロン酸、リセドロネートおよびチルドロネートが挙げられる。副甲状腺ホルモン、あるいは組換え型または合成副甲状腺ホルモンなどの骨形成促進薬剤も含まれる。
【００１９】
本発明は、骨減量の予防または処置のための医薬品の製造における式（Ｉ）、（ＩＶ）、（Ｖ）または（ＶＩ）を有する化合物または薬学的に受容可能なそれらの化合物の塩、立体異性体、互変異性体、水和物または溶媒和物の使用を提供する。
【００２０】
本発明の方法、化合物および組成物は、糖尿病、アルツハイマー病およびその他の神経変性障害、肥満、アテローム硬化性心血管疾患、本態性高血圧症、多嚢胞性卵巣症候群、エックス症候群、虚血、特に脳虚血、外傷性脳損傷、双極性障害、免疫不全または癌の処置におけるように、ＧＳＫ３活性によって媒介される障害の予防または処置において、単独または薬学的に活性な他の薬剤と組み合わせて使用され得る。
【００２１】
（詳細な説明）
本発明によれば、ヒトまたは動物被験体の骨減量の処置または予防において、グリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）活性の阻害のための化合物、組成物および方法が提供される。一つの局面では、本発明は、式（Ｉ）：
【００２２】
【化８】
2007502300.tif 000006
を有する化合物またはそれらの化合物の薬学的に許容される塩、立体異性体、互変異性体、水和物または溶媒和物を提供し、式中、
Ｗは、任意に置換される炭素または窒素であり、
ＸおよびＹは、独立に、窒素、酸素および任意に置換される炭素からなる群から選ばれ、
Ａは、任意に置換されるアリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、独立に、水素、ヒドロキシルおよび任意に置換される低級アルキル、シクロ低級アルキル、アルキルアミノアルキル、低級アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキルカルボニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群から選ばれ、Ｒ１′、Ｒ２′、Ｒ３′およびＲ４′は、独立に、水素および任意に置換される低級アルキルからなる群から選ばれ、
Ｒ５およびＲ７は、独立に、水素、ハロおよび任意に置換される低級アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アミノ、アミノアルコキシ、アルキルアミノ、アラルキルアミノ、ヘテロアラルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、シクロイミド、ヘテロシクロイミド、アミジノ、シクロアミジノ、ヘテロシクロアミジノ、グアニジニル、アリール、ビアリール、ヘテロアリール、ヘテロビアリール、ヘテロシクロアルキル、およびアリールスルホンアミドからなる群から選ばれ、
Ｒ６は、水素、ヒドロキシ、ハロ、カルボキシル、ニトロ、アミノ、アミド、アミジノ、イミド、シアノおよび置換または非置換の低級アルキル、低級アルコキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アラルキルカルボニルオキシ、アルキルアミノカルボニルオキシ、アリールアミノカルボニルオキシ、ホルミル、低級アルキルカルボニル、低級アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アミノアリール、アルキルスルホニル、スルホンアミド、アミノアルコキシ、アルキルアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アルキルアミノカルボニルアミノ、アリールアミノカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、ヘテロアラルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、シクロアミド、シクロチオアミド、シクロアミジノ、ヘテロシクロアミジノ、シクロイミド、ヘテロシクロイミド、グアニジニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、アリールスルホニル、およびアリールスルホンアミドからなる群から選ばれる。
【００２３】
現時点で好ましい本発明の一つの実施形態では、ＸおよびＹの少なくとも一つは窒素である。このグループの代表的な化合物は、ＸおよびＹの一方が窒素であり、ＸおよびＹの他方が酸素または任意に置換される炭素である化合物を含む。好ましくは、ＸおよびＹはともに窒素である。
【００２４】
構成要素Ａは、３個から１０個の炭素環原子および必要に応じて１つ以上の環ヘテロ原子を有する芳香族環であり得る。従って、一つの実施形態では、Ａは、任意に置換される炭素環アリールであり得る。あるいは、Ａは、例えば置換または非置換のピリジル、ピリミジニル、チアゾリル、インドリル、イミダゾリル、オキサジアゾリル、テトラゾリル、ピラジニル、トリアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、プリニル、ナフチル、ベンゾチアゾリル、ベンゾピリジルおよびベンゾイミダゾリルなどの任意に置換されるヘテロアリールであり、少なくとも一つ、多くても３つを超えない置換基で置換されていてもよい。代表的な置換基は、独立に、例えばニトロ、アミノ、シアノ、ハロ、チオアミド、アミジノ、オキサミジノ、アルコキシアミジノ、イミジノ、グアニジノ、スルホンアミド、カルボキシル、ホルミル、低級アルキル、ハロ低級アルキル、低級アルコキシ、ハロ低級アルコキシ、低級アルコキシアルキル、低級アルキルアミノ低級アルコキシ、低級アルキルカルボニル、低級アラルキルカルボニル、低級ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルチオ、アミノアルキルおよびシアノアルキルからなる群から選ぶことができる。
【００２５】
本発明のいくつかの実施形態では、Ａは、式
【００２６】
【化９】
2007502300.tif 000007
を有し、式中、Ｒ８およびＲ９は、独立に、水素、ニトロ、アミノ、シアノ、ハロ、チオアミド、アミジノ、オキサミジノ、アルコキシアミジノ、イミジノ、グアニジニル、スルホンアミド、カルボキシル、ホルミル、低級アルキル、ハロ低級アルキル、低級アルコキシ、ハロ低級アルコキシ、低級アルコキシアルキル、低級アルキルアミノ低級アルコキシ、低級アルキルカルボニル、低級アラルキルカルボニル、低級ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルチオ、アリールおよびアラルキルからなる群から選ばれる。最も好ましくは、Ａは、ニトロピリジル、アミノニトロピリジル、シアノピリジル、シアノチアゾリル、アミノシアノピリジル、トリフルオロメチルピリジル、メトキシピリジル、メトキシニトロピリジル、メトキシシアノピリジルおよびニトロチアゾリルからなる群から選ばれる。
【００２７】
本発明の他の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４の少なくとも一つは、水素、あるいは、ハロ低級アルキル、ヘテロシクロアミノアルキルおよび低級アルキルアミノ低級アルキルからなる群から選ばれる非置換または置換の低級アルキル；あるいは低級アルキルアミノ低級アルキルである。現時点で好ましい本発明の実施形態は、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は水素であり、Ｒ４は、水素、メチル、エチル、アミノエチル、ジメチルアミノエチル、ピリジルエチル、ピペリジニル、ピロリジニルエチル、ピペラジニルエチルおよびモルホリニルエチルからなる群から選ばれる化合物を含む。
【００２８】
本発明の他の実施形態は、Ｒ５およびＲ７の少なくとも一つは置換および非置換のアリール、ヘテロアリールおよびビアリールからなる群から選ばれる式（Ｉ）の化合物を含む。いくつかの実施形態では、Ｒ５およびＲ７の少なくとも一つは、式（ＩＩＩ）：
【００２９】
【化１０】
2007502300.tif 000008
の置換または非置換の部分であり、式中、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４は、独立に、水素、ニトロ、アミノ、シアノ、ハロ、チオアミド、カルボキシル、ヒドロキシおよび任意に置換される低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルコキシアルキル、ハロ低級アルキル、ハロ低級アルコキシ、アミノアルキル、アルキルアミノ、アルキルチオ、アルキルカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、ヘテロアラルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、アミノカルボニル、低級アルキルアミノカルボニル、アミノアラルキル、低級アルキルアミノアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロへテロアルキル、アラルキル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アラルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシアルキル、アルキルカルボニルオキシアルキル、ヘテロアリールカルボニルオキシアルキル、アラルキルカルボニルオキシアルキル、およびヘテロアラルキルカルボニルオキシアルキルからなる群から選ばれる。
【００３０】
いくつかの実施形態では、本発明は、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１３およびＲ１４は水素であり、かつＲ１２は、ハロ、低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、ハロ低級アルキル、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニルおよびシアノからなる群から選ばれる化合物；Ｒ１１、Ｒ１３およびＲ１４は水素であり、かつＲ１０およびＲ１２は、独立に、ハロ、低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、ハロ低級アルキルおよびシアンからなる群から選ばれる化合物；Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１３およびＲ１４は水素であり、かつＲ１２はヘテロアリールである化合物；Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１３およびＲ１４は水素であり、かつＲ１２はヘテロシクロアルキルである化合物；ならびにＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４の少なくとも一つはハロであり、かつＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４の残りは水素である化合物を提供する。好ましくは、Ｒ５およびＲ７の少なくとも一つは、ジクロロフェニル、ジフルオロフェニル、トリフルオロメチルフェニル、クロロフルオロフェニル、ブロモクロロフェニル、エチルフェニル、メチルクロロフェニル、イミダゾリルフェニル、シアノフェニル、モルホリノフェニルおよびシアノクロロフェニルからなる群から選ばれる。
【００３１】
本発明の他の代表的な実施形態では、式（Ｉ）のＲ６は、例えばアラルキル、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、アミノアラルキル、カルボニルアミノアルキル、アルキルカルボニルアミノアルキル、アリールカルボニルアミノアルキル、アラルキルカルボニルアミノアルキル、アミノアルコキシアルキルおよびアリールアミノアルキルなどの置換アルキル；アルキルアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アルコキシカルボニルアミノ、アリールアルキルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アルキルチオカルボニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、ヘテロアリールアミノアルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノおよびヘテロアラルキルカルボニルアミノなどの置換アミノ；または非置換または置換のアミノカルボニル、アルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルキルオキシカルボニルおよびアルキルアミノアルキルオキシカルボニルなどの置換カルボニルであり得る。他の実施形態では、Ｒ６は、アミジノ、グアニジノ、シクロイミド、ヘテロシクロイミド、シクロアミド、ヘテロシクロアミド、シクロチオアミドおよびヘテロシクロ低級アルキルからなる群から選ばれ得る。さらにまた他の実施形態では、Ｒ６は、例えば、置換または非置換のピリジル、ピリミジニル、チアゾリル、インドリル、イミダゾリル、オキサジアゾリル、テトラゾリル、ピラジニル、トリアゾリル、チエニル、フラニル、キノリニル、ピロロピリジル（ｐｙｒｒｏｌｙｏｐｙｒｉｄｙｌ）、ベンゾチアゾリル、ベンゾピリジル、ベンゾトリアゾリルおよびベンゾイミダゾリルなどのアリールまたはヘテロアリールであり得る。
【００３２】
本明細書で用いられる代表的なヘテロシクロ基は、例えば、下に示すもの（下に示す置換基およびその他の置換基の結合点は左上の結合手による）を含む。本明細書の開示内容によって有機化学および薬化学分野の当業者には自明であるように、これらのヘテロシクロ基は、さらに置換されていてもよく、さまざまな位置で結合されていてもよい。
【００３３】
【化１１】
2007502300.tif 000009
。
【００３４】
代表的なヘテロアリール基は、例えば、下に示すものを含む。本明細書の開示内容によって有機化学および薬化学分野の当業者には自明であるように、これらのヘテロアリール基は、さらに置換されていてもよく、さまざまな位置で結合されていてもよい。
【００３５】
【化１２】
2007502300.tif 000010
。
【００３６】
代表的なシクロイミド基およびヘテロシクロイミド基は、例えば、下に示すものを含む。本明細書の開示内容によって有機化学および薬化学分野の当業者には自明であるように、これらのシクロイミド基およびヘテロシクロイミド基は、さらに置換されていてもよく、さまざまな位置で結合されていてもよい。
【００３７】
【化１３】
2007502300.tif 000011
。
【００３８】
代表的な置換アミジノ基およびヘテロシクロアミジノ基は、例えば、下に示すものを含む。本明細書の開示内容によって有機化学および薬化学分野の当業者には自明であるように、これらのアミジノ基およびヘテロシクロアミジノ基は、さらに置換されていてもよい。
【００３９】
【化１４】
2007502300.tif 000012
。
【００４０】
代表的な置換アルキルカルボニルアミノ基、アルキルオキシカルボニルアミノ基、アミノアルキルオキシカルボニルアミノ基およびアリールカルボニルアミノ基は、例えば、下に示すものを含む。本明細書の開示内容によって有機化学および薬化学分野の当業者には自明であるように、これらの基は、さらに置換されていてもよい。
【００４１】
【化１５】
2007502300.tif 000013
。
【００４２】
代表的な置換アミノカルボニル基は、例えば、下に示すものを含む。本明細書の開示内容によって有機化学および薬化学分野の当業者には自明であるように、これらのヘテロシクロ基は、さらに置換されていてもよい。
【００４３】
【化１６】
2007502300.tif 000014
。
【００４４】
代表的な置換アルコキシカルボニル基は、例えば、下に示すものを含む。本明細書の開示内容によって有機化学および薬化学分野の当業者には自明であるように、これらのアルコキシカルボニル基は、さらに置換されていてもよい。
【００４５】
【化１７】
2007502300.tif 000015
。
【００４６】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、構造式：
【００４７】
【化１８】
2007502300.tif 000016
を有する化合物および薬学的に許容し得るその塩を含み、式中、Ｘ、Ｒ１〜Ｒ６およびＲ８〜Ｒ１４は、上記で説明した意味を有する。現時点で好ましい代表的なこのグループの化合物としては、例えば、［４−（４−イミダゾリルフェニル）ピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、４−［５−イミダゾリル−２−（｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）ピリミジン−４−イル］ベンゼンカルボニトリル、４−［２−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）−５−イミダゾリルピリミジン−４−イル］ベンゼンカルボニトリル、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾリルピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、４−［２−（｛２−［（５−ニトロ−２−ピリジル）アミノ］エチル｝アミノ）−７ａ−ヒドロ−１，２，４−トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］ベンゼンカルボニトリル、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾリルピリミジン−２−イル］アミン、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、６−［（２−｛［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾリルピリミジン−２−イル］アミノ｝エチル）アミノ］ピリジン−３−カルボニトリル、［５−ベンゾトリアゾリル−４−（２，４−ジクロロフェニル）ピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、［２−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）−４−（２，４−ジクロロフェニル）ピリミジン−５−イル］メタン−１−オール、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル）アミノ）ピリミジン−５−イル］メタン−１−オール、２−［２−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）−４−（２，４−ジクロロフェニル）ピリミジン−５−イル］イソインドリン−１，３−ジオン、［５−アミノ−４−（２，４−ジクロロフェニル）ピリミジン−２−イル］｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−モルホリン−４−イルピリミジン−２−イル］アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝｛４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−［５−（トリフルオロメチル）（１，２，３，４−テトラアゾリル）］ピリミジン−２−イル｝アミン、１−［２−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）−４−（２，４−ジクロロフェニル）ピリミジン−５−イル］ピロリジン−２，５−ジオン、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−ピラゾリルピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル）アミン、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−メチルイミダゾリル）ピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（２，４−ジメチルイミダゾリル）ピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、６−［（２−｛［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］アミノ｝エチル）アミノ］ピリジン−３−カルボニトリル、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（モルホリン−４−イルメチル）ピリミジン−２−イル］アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−ピペラジニルピリミジン−２−イル］アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（４−エチルフェニル）−５−イミダゾリルピリミジン−２−イル］アミン、１−［４−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）ピリミジン−５−イル］ヒドロピリジン−２−オン、［５−ベンゾイミダゾリル−４−（２，４−ジクロロフェニル）ピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾリルピリミジン−２−イル］メチルアミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−ピリジル）ピリミジン−２−イル］アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−メチルピペラジニル）ピリミジン−２−イル］アミン、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（２−メチルイミダゾリル）ピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（２−メチルイミダゾリル）ピリミジン−２−イル］アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−フェニルイミダゾリル）ピリミジン−２−イル］アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（２，４−ジメチルイミダゾリル）ピリミジン−２−イル］アミン、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］（２−｛［５−（トリフルオロメチル）（２−ピリジル）］アミノ｝エチル）アミン、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−ピペラジニルピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾリルピリミジン−２−イル］［２−（ジメチルアミノ）エチル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、１−［２−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）−４−（２，４−ジクロロフェニル）ピリミジン−５−イル］−４−メチルピペラジン−２，６−ジオン、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（１−メチルイミダゾール−２−イル）ピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、１−［２−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）−４−（２，４−ジクロロフェニル）ピリミジン−５−イル］−３−モルホリン−４−イルピロリジン−２，５−ジオン、１−［４−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）ピリミジン−５−イル］−４−メチルピペラジン−２，６−ジオン、１−［２−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）−４−（２，４−ジクロロフェニル）ピリミジン−５−イル］−３−（ジメチルアミノ）ピロリジン−２，５−ジオン、｛５−イミダゾール−２−イル−４−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］ピリミジン−２−イル｝｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（１−メチルイミダゾール−２−イル）ピリミジン−２−イル］アミン、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−メチルピペラジニル）ピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（モルホリン−４−イルメチル）ピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−メチルイミダゾール−２−イル）ピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−メチルイミダゾール−２−イル）ピリミジン−２−イル］アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（２−クロロフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］アミン、［４−（２−クロロ−４−フルオロフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾリルピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝（２−ピロリジニルエチル）アミン、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾリルピリミジン−２−イル］（２−モルホリン−４−イルエチル）｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、６−［（２−｛［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−メチルイミダゾール−２−イル）ピリミジン−２−イル］アミノ｝エチル）アミノ］ピリジン−３−カルボニトリル、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（２−クロロ−４−フルオロフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］アミン、［４−（４−エチルフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、［５−（（１Ｅ）−１−アザ−２−モルホリン−４−イルプロプ−１−エニル）−４−（２，４−ジクロロフェニル）ピリミジン−２−イル］｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、Ｎ−［４−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）ピリミジン−５−イル］アセトアミド、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］｛２−［（６−メトキシ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、６−［（２−｛［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾリルピリミジン−２−イル］メチルアミノ｝エチル）アミノ］ピリジン−３−カルボニトリル、６−［（２−｛［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］メチルアミノ｝エチル）アミノ］ピリジン−３−カルボニトリル、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］メチル｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、６−［（２−｛［４−（２−クロロ−４−フルオロフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］アミノ｝エチル）アミノ］ピリジン−３−カルボニトリル、［４−（４−クロロフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（４−クロロ−２−メチルフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（４−ブロモ−２−クロロフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］アミン、６−［（２−｛［４−（４−ブロモ−２−クロロフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリ
ミジン−２−イル］アミノ｝エチル）アミノ］ピリジン−３−カルボニトリル、６−［２−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）−４−（２，４−ジクロロフェニル）ピリミジン−５−イル］−３−ピロリノ［３，４−ｂ］ピリジン−５，７−ジオン、Ｎ−［２−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）−４−（２，４−ジクロロフェニル）ピリミジン−５−イル］−２−（メチルアミノ）アセトアミド、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（４−ブロモ−２−クロロフェニル）−５−（４−メチルイミダゾール−２−イル）ピリミジン−２−イル］アミン、６−［（２−｛［４−（４−ブロモ−２−クロロフェニル）−５−（４−メチルイミダゾール−２−イル）ピリミジン−２−イル］アミノ｝エチル）アミノ］ピリジン−３−カルボニトリル、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（２−クロロ−４−フルオロフェニル）−５−（４−メチルイミダゾール−２−イル）ピリミジン−２−イル］アミンおよび６−［（２−｛［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（５−クロロ−２−オキソヒドロピリジル）ピリミジン−２−イル］アミノ｝エチル）アミノ］ピリジン−３−カルボニトリルが挙げられる。
【００４８】
他の実施形態では、本発明は、構造式：
【００４９】
【化１９】
2007502300.tif 000017
を有する化合物および薬学的に許容し得るそれらの化合物の塩を提供する。式中、Ｘ、Ｒ１〜Ｒ６およびＲ８〜Ｒ１４は、上記で説明した意味を有し、Ｒ１５は、水素、ニトロ、シアノ、アミノ、アルキル、ハロ、ハロ低級アルキル、アルキルオキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルスルホニルおよびアリールスルホニルからなる群から選ばれる。現時点で好ましいこのグループの代表的な化合物としては、例えば［６−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾリル（２−ピリジル）］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［６−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾリル（２−ピリジル）］アミン、６−［（２−｛［６−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾリル−２−ピリジル］アミノ｝エチル）アミノ］ピリジン−３−カルボニトリル、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［６−（２，４−ジクロロフェニル）−５−ニトロ（２−ピリジル）］アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［６−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−メチルイミダゾリル）（２−ピリジル）］アミン、６−［（２−｛［６−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−メチルイミダゾリル）−２−ピリジル］アミノ｝エチル）アミノ］ピリジン−３−カルボニトリルおよび［４−（４−ブロモ−２−クロロフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミンが挙げられる。
【００５０】
好ましい式（Ｉ）の化合物は、次式：
【００５１】
【化２０】
2007502300.tif 000018
を有する化合物（ＶＩ）６−［（２−｛［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−メチルイミダゾール−２−イル）ピリミジン−２−イル］アミノ｝エチル）アミノ］ピリジン−３−カルボニトリルである。
【００５２】
別の局面では、本発明は、薬学的に許容されるキャリアとともにヒト被験体または動物被験体に投与されるとき、ヒト被験体または動物被験体のＧＳＫ３活性を調節するのに有効な量の式Ｉの化合物を含む組成物を提供する。
【００５３】
さらに他の実施形態では、本発明は、ヒト被験体または動物被験体のＧＳＫ３活性を阻害する方法を提供し、前記方法は、ＧＳＫ３を阻害する量の上記式（Ｉ）の化合物を前記ヒト被験体または動物被験体に投与することを含む。
【００５４】
本発明は、さらに、ヒト被験体または動物被験体のＧＳＫ３媒介疾患にかかっているヒトまたは動物被験体を処置する方法を提供し、前記方法は、処置のために有効な量の式（Ｉ）の化合物を単独で、または処置のために活性な他の薬剤と組み合わせて、前記ヒトまたは動物被験体に投与することを含む。
【００５５】
上記を含む本明細書全体を通じて使用される場合、以下の用語は、下記で定義される意味を有する。
【００５６】
本明細書では、「グリコーゲンシンターゼキナーゼ３」と「ＧＳＫ３」とは交換可能に用いられ、ヒトＧＳＫ３βアミノ酸配列（Ｇｅｎｂａｎｋアクセス番号Ｌ３３８０１）の位置５６と位置３４０との間のアミノ酸に対して、６０％を超える配列相同性を有する任意のタンパク質を指す。二つのアミノ酸配列または二つの核酸のパーセント相同性を決定するために、最適に比較し得るようにそれらの配列を並べる（例えば、他方のポリペプチドまたは核酸と最適に整列するように、一方のポリペプチドまたは核酸の配列にギャップを設けてもよい）。次に、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置のアミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。一方の配列のある位置が、他方の配列の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドで占められている場合、これらの分子はその位置で相同である（すなわち、本明細書で用いられるアミノ酸または核酸の「相同性」は、アミノ酸または核酸の「同一性」と等価である）。二つの配列の間のパーセント相同性は、二つの配列が共有する同一な位置の数の関数（すなわち、％相同性＝同一な位置の数／すべての位置の数×１００）である。最初、ＧＳＫ３は、参考として本明細書中に援用されるＷｏｏｄｇｅｔｔら、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１６巻：１７７〜８１頁（１９９１）に記載されているように、グリコーゲンシンターゼのリン酸化によって同定された。ＧＳＫ３キナーゼ活性を阻害することによって、ＧＳＫ３活性の下流の活性は、阻害されることも、活性化されることもある。例えば、ＧＳＫ３活性が阻害されると、グリコーゲンシンターゼは活性化され、グリコーゲン産生の増加を招き得る。ＧＳＫ３はまた、例えば、ｃ−ｊｕｎ、β−カテニンおよびτタンパク質のリン酸化を含むさまざまな他の状況でも、キナーゼとして作用することが知られている。ＧＳＫ３キナーゼ活性の阻害によって、さまざまな生物学的状況でさまざまな効果がもたらされ得ると理解される。しかし、本発明がどのように機能するかに関して、本発明は、いかなる機序の理論によっても限定されない。
【００５７】
本明細書では、「ＧＳＫ３インヒビター」は、下記で概略を説明するＧＳＫ３阻害活性のための無細胞アッセイで測定されるとき、ＧＳＫ３に対して約１００μＭ以下、より代表的には約５０μＭ以下のＩＣ５０を示す化合物を指すために用いられる。「ＩＣ５０」は、酵素（例えばＧＳＫ３）の活性を最大値の二分の一のレベルに低下させるインヒビターの濃度である。本発明の代表的な化合物は、ＧＳＫ３に対して阻害活性を示すことが発見された。本発明の化合物は、無細胞ＧＳＫ３キナーゼアッセイで測定されるとき、好ましくは約１０μＭ以下、より好ましくは約５μＭ以下、さらに好ましくは約１μＭ以下、最も好ましくは約２００ｎＭ以下のＧＳＫ３に対するＩＣ５０を示す。
【００５８】
「任意に置換される」は、一価または二価ラジカルによる水素の置換を指す。適切な置換基としては、例えば、ヒドロキシル、ニトロ、アミノ、イミノ、シアノ、ハロ、チオ、チオアミド、アミジノ、イミジノ、オキソ、オキサミジノ、メトキサミジノ、イミジノ、グアニジノ、スルホンアミド、カルボキシル、ホルミル、低級アルキル、ハロ低級アルキル、低級アルコキシ、ハロ低級アルコキシ、低級アルコキシアルキル、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルチオ、アミノアルキル、シアノアルキルなどが挙げられる。
【００５９】
置換基は、それ自体が置換されていてもよい。置換基上に置換される基は、カルボキシル、ハロ、ニトロ、アミノ、シアノ、ヒドロキシル、低級アルキル、低級アルコキシ、アミノカルボニル、−ＳＲ、チオアミド、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２Ｒまたはシクロアルキルであり得、式中、Ｒは通常、水素、ヒドロキシルまたは低級アルキルである。
【００６０】
置換された置換基が直鎖基を含むとき、置換は、鎖の内部（例えば２−ヒドロキシプロピル、２−アミノブチルなど）または鎖の末端（例えば２−ヒドロキシエチル、３−シアノプロピルなど）のどちらで起こってもよい。置換された置換基は、共有結合した炭素またはヘテロ原子の直鎖、分岐または環状の構造であり得る。
【００６１】
本明細書で用いられる「低級アルキル」は、非置換または置換、例えば一つ以上のハロゲン、ヒドロキシル、または、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ネオペンチル、トリフロロメチル、ペンタフルオロエチルなどを含む他の基で置換されている、１個から１０個の炭素原子を含む分岐鎖または直鎖のアルキル基を指す。
【００６２】
「アルキレニル」は、１個から２０個の炭素原子を有する二価の直鎖または分枝鎖の飽和脂肪族ラジカルを指す。本発明の化合物に使用される代表的なアルキレニル基は、主鎖に１個から約６個の炭素原子を有する低級アルキレニル基である。本明細書では、「アルケニル」は、一つ以上の二重結合および２個から２０個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖または環状のラジカルを指す。本明細書では、「アルキニル」は、一つ以上の三重結合および２個から２０個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖または環状のラジカルを指す。
【００６３】
本明細書で用いられる「低級アルコキシ」は、ＲＯ−を指し、この式において、Ｒは低級アルキルである。低級アルコキシ基の代表的な例としては、メトキシ、エトキシ、ｔ−ブトキシ、トリフルオロメトキシなどが挙げられる。
【００６４】
「シクロアルキル」は、単環または多環の複素環または炭素環アルキル置換基を指す。代表的なシクロアルキル置換基は、３個から８個の骨格（すなわち環）原子を有し、各骨格原子は炭素またはヘテロ原子のどちらかである。本明細書では、用語「ヘテロシクロアルキル」は、環構造中に１個から５個、より代表的には１個から４個のヘテロ原子を有するシクロアルキル置換基を指す。本発明の化合物に使用される適切なヘテロ原子は、窒素、酸素および硫黄である。代表的なヘテロシクロアルキル部分としては、例えば、モルホリノ、ピペラジニル、ピペラジニル（ｐｉｐｅｒａｄｉｎｙｌ）などが挙げられる。炭素環アルキル基は、すべての環原子が炭素であるシクロアルキル基である。本明細書では、用語「多環」は、シクロアルキル置換基とともに用いられるとき、縮合および非縮合アルキル環構造を指す。
【００６５】
本明細書では、「ハロ」は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素のようなハロゲンラジカルを指す。「ハロアルキル」は、一つ以上のハロゲン原子で置換されたアルキルラジカルを指す。用語「ハロ低級アルキル」は、一つ以上のハロゲン原子で置換された低級アルキルラジカルを指す。用語「ハロアルコキシ」は、一つ以上のハロゲン原子で置換されたアルコキシラジカルを指す。用語「ハロ低級アルコキシ」は、一つ以上のハロゲン原子で置換された低級アルコキシラジカルを指す。
【００６６】
「アリール」は、３個から１４個の骨格炭素またはヘテロ原子を有する単環および多環の芳香族基を指し、炭素環アリール基および複素環アリール基の両方を含む。炭素環アリール基は、芳香環のすべての環原子が炭素であるアリール基である。本明細書では、用語「ヘテロアリール」は、芳香環中の環原子として１個から４個のヘテロ原子を有し、環原子の残りは炭素原子であるアリール基を指す。本明細書では、用語「多環」は、アリール置換基とともに用いられるとき、例えば、フェニル基と縮合した複素環構造、すなわち
【００６７】
【化２１】
2007502300.tif 000019
を有するベンゾジオキソゾロ、ナフチルなどのような、少なくとも一つの環状構造が芳香族である縮合および非縮合環状構造を指す。置換基として本発明の化合物に使用されるアリール部分の例としては、フェニル、ピリジル、ピリミジニル、チアゾリル、インドリル、イミダゾリル、オキサジアゾリル、テトラゾリル、ピラジニル、トリアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、プリニル、ナフチル、ベンゾチアゾリル、ベンゾピリジルおよびベンゾイミダゾリルなどが挙げられる。
【００６８】
「アラルキル」は、アリール基で置換されたアルキル基を指す。代表的に、本発明の化合物に使用されるアラルキル基は、アラルキル基のアルキル部分に組み込まれる１個から６個の炭素原子を有する。本発明の化合物に使用される適切なアラルキル基としては、例えば、ベンジル、ピコリルなどが挙げられる。
【００６９】
本明細書では、「アミノ」は、基−ＮＨ２を指す。本明細書では、用語「アルキルアミノ」は、ＲおよびＲ’が、それぞれ独立に水素または低級アルキルから選ばれる、基−ＮＲＲ’を指す。本明細書では、用語「アリールアミノ」は、Ｒがアリールであり、Ｒ’が水素、低級アルキルまたはアリールである、基−ＮＲＲ’を指す。本明細書では、用語「アラルキルアミノ」は、Ｒが低級アラルキルであり、Ｒ’が、水素、低級アルキル、アリールまたは低級アラルキルである、基−ＮＲＲ’を指す。
【００７０】
本明細書では、用語「アリールシクロアルキルアミノ」は、シクロアルキルが二価のシクロアルキル基である、基アリール−シクロアルキル−ＮＨ−を指す。代表的に、シクロアルキルは、３個から６個の骨格原子を有し、必要に応じて、そのうち１個から約４個はヘテロ原子であり得る。用語「アミノアルキル」は、末端がアミノ基で置換されたアルキル基を指す。
【００７１】
用語「アルコキシアルキル」は、ａｌｋ１がアルキレニルまたはアルケニルであり、そしてａｌｋ２がアルキルまたはアルケニルである、基−ａｌｋ１−Ｏ−ａｌｋ２を指す。用語「低級アルコキシアルキル」は、ａｌｋ１が低級アルキレニルまたは低級アルケニルであり、ａｌｋ２が低級アルキルまたは低級アルケニルであるアルコキシアルキルを指す。用語「アリールオキシアルキル」は、基−アルキレニル−Ｏ−アリールを指す。用語「アラルコキシアルキル」は、アラルキルが低級アラルキルである、基−アルキレニル−Ｏ−アラルキルを指す。
【００７２】
本明細書では、用語「アルコキシアルキルアミノ」は、Ｒが、代表的に、水素、低級アラルキルまたは低級アルキルである、基−ＮＲ−（アルコキシルアルキル）を指す。本明細書では、用語「アミノ低級アルコキシアルキル」は、アルコキシアルキルが低級アルコキシアルキルである、アミノアルコキシアルキルを指す。
【００７３】
本明細書では、用語「アミノカルボニル」は、基−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２を指す。本明細書では、「置換アミノカルボニル」は、Ｒが低級アルキルであり、Ｒ’が、水素または低級アルキルである、基−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ’を指す。本明細書では、用語「アリールアミノカルボニル」は、Ｒがアリールであり、Ｒ’が水素、低級アルキルまたはアリールである、基−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ’を指す。本明細書では、「アラルキルアミノカルボニル」は、Ｒが低級アラルキルであり、Ｒ’が水素、低級アルキル、アリールまたは低級アラルキルである、基−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ’を指す。
【００７４】
本明細書では、「アミノスルホニル」は、基−Ｓ（Ｏ）２−ＮＨ２を指す。本明細書では、「置換アミノスルホニル」は、Ｒが、低級アルキルであり、Ｒ’が水素または低級アルキルである、基−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲＲ’を指す。本明細書では、用語「アラルキルアミノスルホニルアリール」は、アラルキルが低級アラルキルである、基−アリール−Ｓ（Ｏ）２−ＮＨ−アラルキルを指す。
【００７５】
「カルボニル」は、二価の基−Ｃ（Ｏ）−を指す。
【００７６】
一般に、「カルボニルオキシ」は、基−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−を指す。このような基としては、エステル類−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒが挙げられ、この式において、Ｒは、低級アルキル、シクロアルキル、アリールまたは低級アラルキルである。一般に、本明細書では、用語「カルボニルオキシシクロアルキル」は「カルボニルオキシカルボシクロアルキル」および「カルボニルオキシヘテロシクロアルキル」の両方を指し、すなわち、ここでＲは、それぞれカルボシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルである。本明細書では、用語「アリールカルボニルオキシ」は、基−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−アリールを指し、この式において、アリールは、単環または多環のカルボシクロアリールまたはヘテロシクロアリールである。本明細書では、用語「アラルキルカルボニルオキシ」は、アラルキルが、低級アラルキルである、基−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−アラルキルを指す。
【００７７】
本明細書では、用語「スルホニル」は、基−ＳＯ２−を指す。「アルキルスルホニル」は、Ｒが、アルキルである、構造−ＳＯ２Ｒ−の置換スルホニルを指す。本発明の化合物に使用されるアルキルスルホニル基は、代表的に、主鎖構造中に１個から６個の炭素原子を有する低級アルキルスルホニル基である。従って、本発明の化合物に使用される通常のアルキルスルホニル基としては、例えばメチルスルホニル（すなわちこの場合Ｒは、メチルである）、エチルスルホニル（すなわちこの場合Ｒは、エチルである）、プロピルスルホニル（すなわち、この場合Ｒはプロピルである）などが挙げられる。本明細書では、用語「アリールスルホニル」は、基−ＳＯ２−アリールを指す。本明細書では、用語「アラルキルスルホニル」は、基−ＳＯ２−アラルキルを指し、この式において、アラルキルは、低級アラルキルである。本明細書では、用語「スルホンアミド」は−ＳＯ２ＮＨ２を指す。
【００７８】
本明細書で用いられる用語「カルボニルアミノ」は、二価の基−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−を指し、この式において、カルボニルアミノ基のアミド窒素の水素原子は、低級アルキル、アリールまたは低級アラルキル基で置換されていてもよい。このような基としては、カルバミン酸エステル（−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ）およびアミド−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒのような部分が挙げられ、これらの式において、Ｒは、直鎖または分岐鎖の低級アルキル、シクロアルキル、またはアリールまたは低級アラルキルである。用語「低級アルキルカルボニルアミノ」は、アルキルカルボニルアミノを指し、ここでＲは、その主鎖構造中に１個から約６個の炭素原子を有する低級アルキルである。用語「アリールカルボニルアミノ」は基−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒを指し、ここでＲはアリールである。同様に、用語「アラルキルカルボニルアミノ」はカルボニルアミノを指し、ここでＲは低級アラルキルである。
【００７９】
本明細書で用いられる用語「グアニジノ」または「グアニジル」は、グアニジンＨ２Ｎ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２から導かれる部分を指す。このような部分としては、形式二重結合を有する窒素原子（グアニジンの「２」−位置、例えばジアミノメチレンアミノ（Ｈ２Ｎ）２Ｃ＝ＮＨ−）に結合する部分、および形式単結合を有する窒素原子（グアニジンの「１」−位置および／または「３」−位置、例えばＨ２Ｎ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ−）のどちらかに結合する部分が挙げられる。これらの窒素の任意のものにおける水素原子は、低級アルキル、アリールまたは低級アラルキルなどの適切な置換基で置換され得る。
【００８０】
本明細書で用いられる用語「アミジノ」は、部分Ｒ−Ｃ（＝Ｎ）−ＮＲ’−（ラジカルは「Ｎ１」窒素にある）およびＲ（ＮＲ’）Ｃ＝Ｎ−（ラジカルは「Ｎ２」窒素にある）を指し、これらの式において、ＲおよびＲ’は、水素、低級アルキル、アリールまたは低級アラルキルであり得る。
【００８１】
用語「骨減量」は、骨無機質密度の減量が存在する任意の状態を指す。
【００８２】
用語「抗再吸収薬剤」は、ビスホスホネート類、選択的エストロゲンレセプタ調節因子（ＳＥＲＭ）、エストロゲン類、ＲＡＮＫＬ（核因子ＮＦ−κＢリガンドのレセプタアクチベータ）拮抗物質、ανβ３拮抗物質、ｓｃｒインヒビター、カテプシンＫインヒビターおよびカルシトニンのような再吸収インヒビターを指す。
【００８３】
用語「骨形成促進薬剤」は、骨形成を刺激する化合物およびペプチドを指す。骨形成促進薬剤は、テリパラタイド（Ｔｅｒｉｐａｒａｔｉｄｅ）のような組換え副甲状腺ホルモンを含む。
【００８４】
本発明の化合物は、本明細書で説明する方法、あるいは当該分野で周知の他の方法を用いて容易に合成され得る。本発明の化合物は、米国特許第６，４１７，１８５号、同第６，４８９，３４４号、ＰＣＴ  ＷＯ９９／６５８９７号明細書およびＷＯ０２／２０４９５号明細書に記載されている方法によって、合成され得る。
【００８５】
例えば、参考として本明細書中に援用されるＤ．Ｊ．Ｂｒｏｗｎ，”Ｔｈｅ  Ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅｓ”第５４巻、Ｗｉｌｅｙ（１９９４）には、非常に広範な置換基を有するピリミジン類の合成が包括的に解説されている。本明細書で説明する化合物は、溶液相技法および樹脂利用（すなわち固相）技法の両方を用いて合成された。
【００８６】
本発明のピリミジン系化合物は、カルボニル含有誘導体とＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（ＤＭＦＤＭＡ）との反応によって、溶液中で容易に合成され得る。生成する中間体エナミノケトンを、次に有機溶媒、およびナトリウムエトキシド、ナトリウムメトキシド、水酸化ナトリウムまたは炭酸セシウムのような適切な塩基の存在下、さまざまな温度でグアニジンと反応させてピリミジンを得る。この方法は、すべて参考として本明細書中に援用されるＭｅｎｏｚｚｉら、Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍ．，２４：１６６９（１９８７）、Ｐ．Ｓｃｈｅｎｏｎｅら、Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍ．，２７：２９５（１９９０）、Ｒ．Ｐａｕｌら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３６：２７１６（１９９３）およびＪ．Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎら、Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍ．，３２９：３７１（１９９６）に、概略的に記載されている。
【００８７】
この反応スキームに適するカルボニル含有出発試薬は、例えばβ−ケトエステル、アルキルアリールケトン、β−ケトスルホン、α−ニトロケトン、β−ケトニトリル、デスオキシベンゾイン、アリールヘテロアリールメチルケトンなどを含む。カルボニル含有出発試薬は、購入しても、あるいは既知の方法を用いて合成してもよい。
【００８８】
例えば、β−ケトエステルは、参考として本明細書中に援用されるＲ．Ｊ．Ｃｌａｙ  ら、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９９２：２９０（１９９２）に記載されている方法によって、トリエチルアミンの存在下、酸塩化物またはその他の活性カルボン酸とマロン酸エチルカリウムとの反応によって容易に合成され得る。あるいは、所望のβ−ケトエステルは、参考として本明細書中に援用されるＳｉｒｃａｒら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２８：１４０５（１９８５）に記載されている方法に従って、水素化ナトリウムなどの適切な塩基で適切なメチルケトンを脱プロトンした後、炭酸ジエチルとの縮合によって合成され得る。
【００８９】
同様に、β−ケトスルホンおよびα−ニトロケトンは、参考としてともに本明細書に援用されるＮ．Ｓ．Ｓｉｍｐｋｉｎｓ、”Ｓｕｌｐｈｏｎｅｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，”Ｐｅｒｇａｍｏｎ（１９９３）（β−ケトスルホン）、およびＭ．Ｊｕｎｇら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５２：４５７０（１９８７）（α−ニトロケトン）に記載されている方法のような既知の方法を用いて調製され得る。β−ケトニトリルは、α−ハロケトンとシアン化ナトリウムまたはカリウムとの反応によって、容易に調製され得る。
【００９０】
基質が二重に活性されたカルボニル化合物（例えばβ−ケトエステル、β−ケトスルホン、β−ケトニトリルなど）のとき、代表的に、一段目の縮合は、ＴＨＦのような溶媒中、小過剰のＤＭＦＤＭＡを用いて７０〜８０℃にて、数時間で実行される。
【００９１】
メチルケトンのような一つの活性化基で活性化された基質が関与するときには、多くの場合、高温（９０〜１００℃）で長時間（例えば一晩）、ＤＭＦＤＭＡを溶媒として用いる。縮合反応の完了後、溶媒および過剰のＤＭＦＤＭＡを減圧で除去する。得られた固体またはオイルを適切な溶媒に溶解し、等モル量のグアニジンおよび塩基と一緒に加熱する。
【００９２】
エステルが生成したら、得られたピリミジンのアルカリ性または酸性の加水分解によって、対応するカルボン酸を得る。次に、さらに、この酸をさまざまなアルコールまたはアミンとカップリングして、さまざまなエステルまたはアミド誘導体を得ることができる。
【００９３】
本発明の化合物の合成に使用されるグアニジン類は、購入しても、あるいは、対応するアミンを、例えばベンゾトリアゾールカルボキサミニジニウム４−メチルベンゼンスルホナートなどのグアニジノ転移試薬と反応させることによって合成し得る。このグアニジノ転移試薬は、参考として本明細書中に援用されるＡ．Ｒ．Ｋａｔｒｉｚｋｙら、１９９５，Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２５：１１７３（１９９５）に記載されている。従って、例えば、ベンゾトリアゾールカルボキサミニジニウム４−メチルベンゼンスルホナートを、アセトニトリル中室温で一晩、アミンおよび一当量のジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）と等モル量で反応させ、ジエチルエーテルを添加するとグアニジニウム４−メチルベンゼンスルホナートが得られる。窒素複素環アリールを含むアミンは、例えばエチレンジアミンまたはプロピレンジアミンなどの適切なジアミンによりハロ置換窒素複素環アリールの求核置換によって調製され得る。これらのジアミンは、約２５℃〜１２５℃の範囲の反応温度での反応溶媒に用いるために特に適している。本明細書に記載する実施例に、具体的なアミンの調製法を示してある。
【００９４】
その他の既知の合成方法を用いて、本発明の化合物を調製され得る。例えば、５−アリール２−アミノピリミジンは、参考として本明細書中に援用されるＲ．Ｍ．Ｗａｇｎｅｒ  ａｎｄ  Ｃ．Ｊｕｔｚ，Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒｉｃｈｔｅ，ｐ．２９７５（１９７１）に記載されている方法に従って、グアニジンをビナミジニウム塩と反応させることによって調製され得る。
【００９５】
同様に、アニリンを２，４−ジクロロピリミジンと反応させることによって、４−アニロ−２−クロロピリミジンを合成され得る。同じように、アニリンを、２，４−ジクロロピリミジンで処理して、４−アニロ−２−クロロピリミジンを得ることができる。さらに第二のアミンで置換すれば、２−アミノ−４−アニリノピリミジンが得られる。
【００９６】
溶液相合成法に加えて、特に並列合成およびコンビナトリアル合成方法論の場合に、固体支持体（樹脂ベースのものを含む）合成法を用いてもまた、本発明の化合物を合成され得る。例えば、四置換ピリミジン類の合成は、例えばＲｉｎｋアミド樹脂（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）などの適切な樹脂のアミノ基に、例えば４−ホルミル安息香酸などの芳香族カルボン酸アルデヒドを充填することによって開始される（「樹脂法Ａ」）。β−ケトエステルをＫｎｏｅｖｅｎａｇｅｌ縮合させて、不飽和中間体を生成させ、この中間体を、適切な塩基（例えば炭酸カリウム）の存在下で１Ｈ−ピラゾール−１−カルボキサミジン塩酸塩（Ａｌｄｒｉｃｈ）と反応させ得る。次に、中間体ジヒドロピリミジンをベンゼン中で２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）によって酸化し、樹脂に結合したピリミジンとされ得る。最後に、１−メチルピロリドン（ＮＭＰ）またはその他の適切な溶媒中でアミンとともに加熱することによってピラゾロ部分を置換した後、酸開裂によって所望のピリミジンを得る。この合成方法を用いて、ピリミジン環の４−位に置換基を有するピリミジン類を生成され得る。
【００９７】
樹脂法Ｂを用いて、６−位が置換されていないピリミジン類を合成され得る。参考として本明細書中に援用されるＫ．Ｎｇｕら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，３８：９７３（１９９７）に概略的に記載されている方法によって、市販のＳａｓｒｉｎ樹脂（Ｂａｃｈｅｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｋｉｎｇ  ｏｆ  Ｐｒｕｓｓｉａ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）のようなヒドロキシメチル樹脂をジクロロメタン中のトリフェニルホスフィンジブロミドで処理して、樹脂上のヒドロキシメチル基をブロモメチル基に変換する。次に、ＮＭＰ中の第一アミンとの反応（室温または７０〜８０℃）によって、臭素を置換する。次に、このアミンを、アセチル基を含有する適切な芳香族化合物とカップリングさせる。カップリングは、ＮＭＰ中でＰｙＢＯＰ（登録商標）（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）および４−メチルモルホリンを用いて実行され得る。
【００９８】
生成するピリミジンにアミノ酸残基を導入するために、樹脂法Ｂを用いることもできる。例えば、標準的なペプチド合成の条件および方法を用いて、アミノ樹脂を、９−フルオレニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＣ）で保護したアミノ酸にカップリングされ得る。４−アセチル安息香酸とさらにカップリングした後、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタールと反応させ、次にグアニジンで環化させると、アミノ酸残基を組み込んだピリミジン誘導体が得られる。
【００９９】
例えば６−位にカルボキサミドフェニル基を有し、５−位に水素を有するピリミジンは、Ｒｉｎｋアミド樹脂（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）などのアミノ（すなわち−ＮＨ２）含有樹脂から調製され得る（「樹脂法Ｃ」）。
【０１００】
本発明の化合物はまた、２，４−ジアミノピリミジン類を調製する樹脂法Ｄに従って調製され得る。樹脂に結合したアミンを、２，４−ジクロロピリミジンと反応させて、樹脂に結合した６−アミノ−２−クロロピリミジンを得る。樹脂に結合したアミンは、任意の適切な第一アミンから誘導され得るが、通常、アニリン類は適当でない。第二アミンによる置換および樹脂からの生成物の切断によって、２，４−ジアミノピリミジンが得られる。二番目の置換については、非保護ヒドロキシ基などの他の官能基を含有し得る第一または第二アミンが適する。得られるジクロロピリミジンは、例えば５−位をエステル基でさらに置換し得る。２，４−ジクロロピリミジンの代わりに２，６−ジクロロピリジンを用いて、２，６−ジアミノピリジンを製造し得る。
【０１０１】
樹脂法Ｅを用いて、２，６−ジアミノピリジンを製造され得る。この方法は、求電子試薬として２，６−ジクロロピリジンが用いられ、最終生成物が２，６−ジアミノピリジンである点を除けば、樹脂法Ｄに類似している。
【０１０２】
樹脂法Ｆを用いて、本発明の５−アミノ置換化合物を合成され得る。樹脂に結合されたアミンをハロメチルアリールケトンと反応させる。得られる樹脂に結合されたアミノメチルケトンを、次に、ＤＭＦＤＭＡ（無溶媒）で処理した後、グアニジンを用いて環化し、２，５−ジアミノ−６−アリールピリミジンを得る。
【０１０３】
樹脂法Ｇを用いて、５−位にカルボキシル基を有する本発明の化合物を合成され得る。
【０１０４】
本発明のＧＳＫ３インヒビター化合物は、例えばクロマトグラフィー、結晶化などのような、既知の方法を用いて精製され得る。
【０１０５】
好ましくは、本発明の化合物は、少なくとも一つの他の種類のキナーゼと比較して、相対的に実質的に選択的な阻害活性を示す。本明細書で用いられる用語「選択的」は、少なくとも一つの他の種類のキナーゼと比べて、相対的に大きなＧＳＫ３に対する阻害の能力を指す。好ましくは、本発明のＧＳＫ３インヒビターは、少なくとも二つの他の種類のキナーゼと比べて、ＧＳＫ３に対して選択的である。ＧＳＫ３以外のキナーゼのキナーゼ活性アッセイは、一般に知られている。例えば、参考として本明細書中に援用されるＨａｖｌｉｃｅｋら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４０：４０８〜１２（１９９７）を参照すること。ＧＳＫ３選択性は、以下によって定量化され得る：ＧＳＫ３選択性＝ＩＣ５０（他のキナーゼ）÷ＩＣ５０（ＧＳＫ３）、ここで、ＩＣ５０（他のキナーゼ）＞ＩＣ５０（ＧＳＫ３）のとき、ＧＳＫ３インヒビターはＧＳＫ３に対して選択的である。従って、ＧＳＫ３に選択的なインヒビターは、ＧＳＫ３以外のキナーゼの阻害と比べると１倍より大きなＧＳＫ３選択性を示す。本明細書で用いられる用語「他のキナーゼ」は、ＧＳＫ３以外のキナーゼを指す。一般に、このような選択性は、無細胞アッセイで測定される。
【０１０６】
代表的に、本発明のＧＳＫ３インヒビターは、別のキナーゼと比べると、少なくとも約２倍（すなわち、ＩＣ５０（他キナーゼ）÷ＩＣ５０（ＧＳＫ３））のＧＳＫ３選択性を示し、より代表的には少なくとも約５倍の選択性を示す。通常、本発明のＧＳＫ３インヒビターは、少なくとも一つの他キナーゼと比べると、少なくとも約１０倍、望ましくは少なくとも約１００倍、さらに好ましくは少なくとも約１０００倍のＧＳＫ３選択性を示す。
【０１０７】
ＧＳＫ３阻害活性は、一般に、当業者に公知のアッセイだけでなく、本明細書で説明するアッセイを用いて容易に検出され得る。ＧＳＫ３の特異的インヒビターを同定するための方法の例は、無細胞ＧＳＫ３キナーゼアッセイおよび細胞ベースのＧＳＫ３キナーゼアッセイの両方を含む。無細胞ＧＳＫ３キナーゼアッセイは、ポリペプチドＧＳＫ３との直接相互作用によって作用するインヒビターを検出し、一方、細胞ベースのＧＳＫ３キナーゼアッセイは、ＧＳＫ３それ自体との直接の相互作用か、あるいはＧＳＫ３発現または成熟した活性なＧＳＫ３を産生するために必要な翻訳後プロセッシングとの干渉か、のどちらかによって機能するインヒビターを同定し得る。
【０１０８】
一般に、無細胞ＧＳＫ３キナーゼアッセイは、（１）ペプチド基質、放射標識ＡＴＰ（例えば、ともにＡｍｅｒｓｈａｍ，Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ  Ｈｅｉｇｈｔｓ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓから入手し得るγ３３Ｐ−ＡＴＰまたはγ３２Ｐ−ＡＴＰなど）、マグネシウムイオン、および必要に応じて一つ以上のインヒビター候補物質と一緒にＧＳＫ３を培養し；（２）前記混合物を、ある時間培養して、ＧＳＫ３活性による放射標識リン酸のペプチド基質中への取り込みを行なわせ；（３）前記酵素反応ミックスの全体または一部を、別の容器、代表的にはペプチド基質上のアンカーリガンドに結合され得る均一な量の捕獲リガンドを含むマイクロタイターウェルに移し；（４）洗浄して未反応の放射標識ＡＴＰを除いた後；（５）各ウェルに残っている３３Ｐまたは３２Ｐの量を定量することによって容易に実行され得る。この量は、ペプチド基質に取り込まれた放射標識リン酸の量を表す。阻害作用は、ペプチド基質中への放射標識リン酸の取り込み量の減少として観測される。
【０１０９】
無細胞アッセイに用いられる適切なペプチド基質は、適切な量のＡＴＰの存在下でＧＳＫ３によってリン酸化され得る任意のペプチド、ポリペプチドまたは合成ペプチド誘導体であってよい。適切なペプチド基質は、ＧＳＫ３のさまざまな天然タンパク質基質の配列の部分に基づいてもよく、また、スペーサ配列およびアンカーリガンドを含むＮ−末端およびＣ−末端修飾物または拡張物を含んでもよい。従って、ペプチド基質は、大きなポリペプチド中の一部であってもよく、ＧＳＫ３によるリン酸化のために設計された単離されたペプチドであってもよい。
【０１１０】
例えば、引用によって本明細書に組み込まれるＷａｎｇら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２２０：３９７〜４０２（１９９４）に記載されているＣＲＥＢ  ＤＮＡ結合タンパク質中のＳＧＳＧ−結合ＣＲＥＢペプチド配列のようなＤＮＡ結合タンパク質ＣＲＥＢの部分配列にもとづいて、ペプチド基質を設計し得る。Ｗａｎｇらが報告したアッセイでは、ＣＲＥＢペプチドのＳＸＸＸＳモチーフ中のＣ−末端セリンを、ｃＡＭＰ依存性プロテインキナーゼ（ＰＫＡ）で酵素的に予備リン酸化している。この工程は、前記モチーフ中のＮ−末端セリンをＧＳＫ３でリン酸化され得るようにするために必要である。あるいは、同じＳＸＸＸＳモチーフを有し、Ｎ−末端アンカーリガンドも含有するが、Ｃ−末端セリンを予備リン酸化して合成した、修飾ＣＲＥＢペプチド基質を使用し得る（Ｃｈｉｒｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＰＴＹ  Ｌｔｄ．，Ｃｌａｙｔｏｎ，Ａｕｓｔｒａｌｉａからこのような基質が市販されている）。ペプチド合成時にＳＸＸＸＳモチーフ中の第二のセリンをリン酸化することによって、別個の工程として残基をＰＫＡで酵素的にリン酸化する必要はなくなり、アンカーリガンドを組み込むことによって、ＧＳＫ３との反応の後のペプチド基質の捕捉が容易になる。
【０１１１】
一般に、キナーゼ活性アッセイに用いられるペプチド基質は、ＧＳＫ３によってリン酸化され得る一つ以上の部位、および他のキナーゼによってリン酸化され得るがＧＳＫ３によってリン酸化することはできない一つ以上の他部位を有し得る。従って、ＧＳＫ３によってリン酸化され得るモチーフを作り出すために、これらの他部位を予備リン酸化され得る。本明細書では、用語「予備リン酸化」は、その基質ペプチドを用いてキナーゼアッセイを実行する前の、放射標識していないフォスフェートによる基質ペプチドのリン酸化を指す。このような予備リン酸化は、ペプチド基質の合成の間に簡便に実行され得る。
【０１１２】
ＳＧＳＧ−結合ＣＲＥＢペプチドは、ビオチンなどのアンカーリガンドに結合させ得、この場合、Ｃ末端近傍のＰとＹとの間のセリンが予備リン酸化される。本明細書で用いられる用語「アンカーリガンド」は、ペプチド基質と結合して捕捉リガンドへのペプチド基質の捕捉を容易にし、洗浄工程の間ペプチド基質をそのまま保持する機能を果たすが、未反応の放射標識ＡＴＰの除去は可能なリガンドを指す。アンカーリガンドの例は、ビオチンである。本明細書では、用語「捕捉リガンド」は、高い親和性でアンカーリガンドと結合し得、固体構造物に固定化されている分子を指す。固定化された捕捉リガンドの例としては、例えば、アビジンまたはストレプトアビジンで被覆したマイクロタイターウェルまたはアガロースビーズが挙げられる。さらに、捕捉リガンドを担持するビーズを、シンチレーション物質と結合させて捕捉された放射標識基質ペプチドを検出するための手段を提供してもよく、あるいは、後の工程で捕捉されたペプチドに、シンチレーション物質を加えてもよい。
【０１１３】
捕捉された放射性元素標識化ペプチド基質は、公知の方法を用いてシンチレーションカウンターで定量され得る。限られた比率（例えば２０％未満）の上記ペプチド基質だけしかリン酸化されない条件で酵素反応が実行された場合、シンチレーションカウンターで検出される信号は、ＧＳＫ３活性に比例する。反応時にインヒビターが存在する場合、ＧＳＫ３活性は低下し、従って、もっと少量の放射性元素標識化リン酸しかペプチド基質中に取り込まれない。そのため、より低いシンチレーション信号が検出される。その結果、ＧＳＫ３阻害活性は、反応時にインヒビターが存在しないネガティブコントロールで観測されるシンチレーションシグナルと比較したシンチレーションシグナルの低下として、検出される。
【０１１４】
代表的には、細胞ベースのＧＳＫ３キナーゼ活性アッセイは、例えば、遺伝子発現の調節制御配列を含む、ＧＳＫ３をコードする遺伝子およびその基質をコードする遺伝子で形質転換された細胞など、ＧＳＫ３およびＧＳＫ３基質の両方を発現し得る細胞を利用する。細胞ベースのアッセイを実行するにあたっては、本発明の化合物の存在下で、上記遺伝子を発現し得る細胞をインキュベートする。細胞を溶菌し、例えば、ＳＤＳ  ＰＡＧＥ上で移動度を非リン酸化形と比較して観測することによって、または基質のリン酸化形に特異的な抗体によって認識される基質の量を決定することによって、リン酸化形の基質の割合を測定する。基質のリン酸化の量は、化合物の阻害活性の尺度である。すなわち、阻害は、インヒビターをまったく存在させないで実行したアッセイと比較したリン酸化の減少として検出される。細胞ベースのアッセイで検出されるＧＳＫ３阻害活性は、例えば、ＧＳＫ３の発現の阻害に起因することもあり得、あるいはＧＳＫ３のキナーゼ活性の阻害によることもあり得る。
【０１１５】
従って、細胞ベースのアッセイを用いて、例えば、ｔａｕタンパク質リン酸化の阻害、インシュリンシグナル伝達の増強など、ＧＳＫ３阻害が関与する活性を特異的にアッセイし得る。例えば、微小管関連タンパク質ｔａｕのアルツハイマー様リン酸化を阻害するＧＳＫ３インヒビターの能力を評価するために、細胞に、ヒトＧＳＫ３βおよびヒトｔａｕタンパク質を一緒にトランスフェクトした後、一つ以上の候補インヒビターと一緒にインキュベートし得る。この種類のアッセイに、さまざまな哺乳動物細胞系統および発現ベクターを用い得る。例えば、参考として本明細書中で援用される、Ｓｔａｍｂｏｌｉｃら，１９９６，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，６：１６６４〜６８に記載されているプロトコルによるヒトＧＳＫ３β発現プラスミドと、早期ＳＶ４０プロモーター下にヒトｔａｕタンパク質コード配列を含むｐＳＧ５などの発現プラスミドとの両方を、ＣＯＳ細胞に形質移入させ得る。参考として本明細書中で援用される、Ｇｏｅｄｅｒｔら，ＥＭＢＯ  Ｊ．，８：３９３〜３９９（１９８９）も参照すること。ｔａｕのアルツハイマー様リン酸化は、細胞を溶菌した後、例えば、Ｐｏｌｙｍｅｄｃｏ  Ｉｎｃ．（Ｃｏｒｔｌａｎｄ  Ｍａｎｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）から入手できるＡＴ８などの特異抗体を用いて、容易に検出し得る。
【０１１６】
同じように、細胞ベースのグリコーゲンシンターゼ活性アッセイを用いて、グリコーゲンシンターゼを活性化させることによってインシュリンシグナル伝達を強化するＧＳＫ３インヒビター化合物の能力を容易に確認し得る。このアッセイは、野生型インシュリン受容体を過剰発現（約１００，０００結合部位／細胞）するＣＨＯ−ＨＩＲＣ細胞系統など、グリコーゲンシンターゼ活性を増加させることによってインシュリン刺激に応答する細胞を使用する。ＣＨＯ−ＨＩＲＣ細胞系統は、参考としてともに本明細書に援用される、Ｍｏｌｌｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６５：１４９７９〜１４９８５（１９９０）およびＭｏｌｌｅｒら、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，４：１１８３〜１１９１（１９９０）に記載されている方法に従って、生成させ得る。このアッセイは、さまざまな濃度の本発明の化合物の存在下、培地中で血清欠乏ＣＨＯ−ＨＩＲＣ細胞をインキュベートした後、インキュベート期間の終わりに溶菌することによって、実行し得る。グリコーゲンシンターゼ活性は、Ｔｈｏｍａｓら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２５：４８６〜４９９（１９６８）に記載されている方法に従って、溶菌液中で検出し得る。Ｔｈｏｍａｓらの上記文献に記載されている方法に従って、それぞれの試料について、最大グリコーゲンシンターゼ活性百分率として、グリコーゲンシンターゼ活性を計算し、候補ＧＳＫ３インヒビターの濃度の関数としてプロットする。当業者に周知である慣用的曲線適合方法を用いて、４パラメータＳ字形曲線をあてはめることによって、グリコーゲンシンターゼ活性をその最大レベルの半分に増加させた候補ＧＳＫ３インヒビターの濃度（すなわちＥＣ５０）を、計算し得る。
【０１１７】
ＧＳＫ３インヒビターは、例えば、当業者に周知の方法を用いるなどして、インビボ活性を容易にスクリーニングし得る。例えば、２型糖尿病の動物モデルのグルコース耐性を向上させる能力を検出することによって、２型糖尿病の処置に処置活性の可能性を有する候補化合物を容易に同定し得る。詳しくは、糖尿病マウス（例えばＫＫ、ｄｂ／ｄｂ、ｏｂ／ｏｂ）または糖尿病ラット（例えばＺｕｃｋｅｒ  Ｆａ／ＦａまたはＧＫ）のどちらかで、グルコースボーラスの投与に先立って、いくつかの経路の任意のものを用いて、候補化合物を投与し得る。候補化合物およびグルコースの投与に続いて、あらかじめ選定した時間間隔で血液試料を採血して、血清グルコースおよびインシュリンレベルを評価する。高い分泌レベルの内因性インシュリンがない状況でのグルコース排出の改善は、インシュリン感作として考えられ得、化合物の効力を示し得る。
【０１１８】
本発明の化合物は、無機酸または有機酸から誘導される塩の形で用い得る。これらの塩としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、二グルコン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩およびウンデカン酸塩が挙げられるが、それらに限定されない。また、塩基性窒素含有基は、ハロゲン化低級アルキル（塩化メチル、塩化エチル、塩化プロピル、塩化ブチル、臭化メチル、臭化エチル、臭化プロピル、臭化ブチル、およびヨウ化メチル、ヨウ化エチル、ヨウ化プロピルおよびヨウ化ブチルなど）、硫酸ジアルキル（硫酸ジメチル、硫酸ジエチル、硫酸ジブチルおよび硫酸ジアミルなど）、長鎖ハロゲン化物（塩化デシル、塩化ラウリル、塩化ミリスチル、塩化ステアリル、、臭化デシル、臭化ラウリル、臭化ミリスチル、臭化ステアリル、およびヨウ化デシル、ヨウ化ラウリル、ヨウ化ミリスチルおよびヨウ化ステアリルなど）、ハロゲン化アラルキル（臭化ベンジルおよび臭化フェネチルなど）などのような試薬で四級化し得る。その結果、水溶性生成物、油溶性生成物または水分散可能生成物、または油分散可能生成物を取得し得る。
【０１１９】
薬学的に受容可能な酸付加塩を形成させるために使用し得る酸の例としては、無機酸（塩酸、硫酸およびリン酸など）、および有機酸（シュウ酸、マレイン酸、コハク酸およびクエン酸など）が、挙げられる。塩基付加塩は、式（Ｉ）の化合物の最終的な単離および精製の間に、インサイチュで調製され得るか、あるいは個別にカルボン酸部分を、薬学的に受容可能な金属カチオンの水酸化物、炭酸塩もしくは炭酸水素塩などの適切な塩基、またはアンモニアまたは有機一級アミン、有機二級アミンまたは、有機三級アミンと反応させることによって調製され得る。薬学的に受容可能な塩としては、アルカリ金属系カチオンおよびアルカリ土類金属系カチオン（ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウムの塩など）、ならびに非毒性のアンモニウム、四級アンモニウムおよびアミンカチオン（アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなどを含むがそれらに限定されない）が挙げられるが、それらに限定されない。塩基付加塩の形成に有用なその他の代表的な有機アミンとしては、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジンなどが挙げられる。
【０１２０】
本発明の化合物は、経腸投与経路、非経口投与経路、吸入投与経路および局所投与経路を含むさまざまな方法で、投与し得る。例えば、適切な投与様式は、経口投与、皮下投与、経皮投与、経粘膜投与、イオン導入投与、脳内投与、静脈内投与、動脈内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、鼻腔内投与、髄腔内投与、硬膜下投与、直腸内投与などが挙げられる。
【０１２１】
本発明の他の実施形態によれば、本発明のＧＳＫ３インヒビター化合物を、薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤と一緒に含む組成物が、提供される。
【０１２２】
薬学的に受容可能な適切な賦形剤としては、プロセッシング試薬、薬物送達調節剤および薬物送達促進剤（例えば、リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、単糖類、二糖類、澱粉、ゼラチン、セルロース、メチルセルロース、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、デキストロース、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、ポリビニルピロリジノン、低融点ワックス、イオン交換樹脂などなど）、ならびにそれらのうちの任意の二つ以上の組み合わせが挙げられる。参考として本明細書中で援用される「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ（１９９１）には、薬学的に受容可能なその他の適切な賦形剤が記載されている。
【０１２３】
本発明のＧＳＫ−３インヒビター化合物を含む薬学的組成物は、例えば溶液、懸濁液または乳化液を含む、意図される任意の投与方法に適する形であってよい。通常、溶液、懸濁液および乳化液を調製するにあたっては、液体キャリアが用いられる。本発明の実施に用いるために企図される液体キャリアとしては、水、食塩水、薬学的に受容可能な有機溶媒（単数または複数）、薬学的に受容可能な油状物または脂肪など、ならびにそれらの二つ以上の混合物が挙げられる。液体キャリアは、可溶化剤、乳化剤、栄養剤、緩衝剤、防腐剤、懸濁剤、増粘剤、粘度調整剤、安定剤など、薬学的に受容可能な他の適切な賦形剤を含み得る。適当な有機溶媒としては、例えば、エタノールなどの一価アルコール、およびグリコールなどの多価アルコールが挙げられる。適切な油としては、例えば、ダイズ油、ココナッツ油、オリーブ油、ベニバナ油、綿実油などが挙げられる。非経口投与の場合、キャリアはまた、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピルなどの、油状エステルであってよい。本発明の組成物はまた、微粒子、マイクロカプセル、リポソームカプセル化物など、ならびにそれらの任意の二つの組み合わせあってよい。
【０１２４】
本発明の化合物は、所望により、従来の非毒性の薬学的に受容可能なキャリア、補助剤およびビヒクルを含有する投与単位処方物として、経口投与、非経口投与、舌下投与、吸入スプレーによる投与、直腸投与、または局所投与し得る。局所投与には、経皮パッチまたはイオン泳動装置のような、経皮投与の使用もまた、含むことがある。本明細書で用いられる用語、非経口は、皮下注射、静脈内注射、静脈内注入、筋肉内注射、筋肉内注入、胸骨内注射または胸骨内注入の技法を含む。
【０１２５】
注射用調製物（例えば、無菌の注射用水性懸濁物または注射用油性懸濁物）は、適当な分散剤または湿潤剤と、懸濁剤とを用いる、当該分野で公知の技術に従って、処方し得る。無菌の注射用調製物はまた、非毒性の非経口使用で許容される希釈剤または溶媒（例えば１，３−プロパンジオールの溶液）のように、無菌の注射用溶液または懸濁液であってよい。使用し得る許容されるビヒクルおよび溶媒には、水、リンゲル液および等張食塩水溶液がある。さらに、無菌の不揮発性油が、通常、溶媒または懸濁媒体として使用される。このために、合成モノグリセリドまたは合成ジグリセリドを含む任意の非刺激性不揮発性油を、使用し得る。さらに、オレイン酸などの脂肪酸が、注射用薬物の調製に使用される。
【０１２６】
本薬物の直腸投与のための坐剤は、本薬物を、常温では固体であるが、直腸の温度では液体となり、従って直腸中で溶けて本薬物を放出する適切な非刺激性賦形剤（カカオバターおよびポリエチレングリコールなど）と混合することによって、調製し得る。
【０１２７】
経口投与のための固体剤形は、カプセル、錠剤、丸薬、粉末及び顆粒を包含し得る。そのような固体剤形中で、活性化合物は、スクロース、ラクトースまたは澱粉などの、少なくとも一つの不活性な希釈剤と混合してもよい。そのような剤形はまた、通常の実施の場合のように、不活性希釈剤以外の追加物質（例えば、ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤）を含み得る。カプセル、錠剤および丸剤の場合、剤形はまた、緩衝剤を含み得る。錠剤及び丸剤は、さらに腸溶コーティングを用いて調製してもよい。
【０１２８】
経口投与のための液体剤形は、水などの当該分野で一般に用いられる不活性な希釈剤を含む、薬学的に受容可能なエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップおよびエリキシル剤を包含し得る。そのような組成物はまた、補助剤（湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、シクロデキストリン、および甘味料、香味料および芳香剤など）を含み得る。
【０１２９】
さらに他の実施形態によれば、本発明は、ヒト被験体または動物被験体におけるＧＳＫ３活性を阻害するための方法を提供し、上記方法は、被験体に、その被験体におけるＧＳＫ３活性を阻害するために有効な量の構造（Ｉ）、（ＩＶ）、（Ｖ）または（ＶＩ）を有するＧＳＫ３インヒビター化合物（またはそのような化合物を含む組成物）を投与する工程を包含する。他の実施形態は、ヒト被験体または動物被験体における細胞またはＧＳＫ３媒介疾患を処置するための方法を提供し、この方法は、その細胞または被験体におけるＧＳＫ３活性を阻害するために有効な量の本発明の化合物または組成物を、上記細胞、ヒト被験体または動物被験体に投与する工程を包含する。好ましくは、被験体は、ヒト被験体または非ヒト動物被験体である。ＧＳＫ３活性の阻害は、コントロール標準と比較して、または予測されるＧＳＫ３活性と比較して、ＧＳＫ３活性の検出可能な抑制を含む。
【０１３０】
本発明の化合物の有効量は、一般的には、本明細書で説明するアッセイの任意のものによって、当業者にとって公知である他のＧＳＫ３キナーゼ活性アッセイによって、またはＧＳＫ３媒介疾患に罹患している被験体の症状の改善を検知することによって、ＧＳＫ３活性を検出できるように阻害するのに十分な任意の量を含む。
【０１３１】
本発明によって処置し得るＧＳＫ３媒介疾患は、ＧＳＫ３活性がかかわっているか、あるいは処置される疾患において特徴として欠損した経路を介するシグナル伝達がＧＳＫ３の阻害によって強化される、任意の生物学的障害または医学的障害を包含する。このような状態または疾患は、異常なＧＳＫ３活性を原因とするものであってもよく、あるいは異常なＧＳＫ３活性を特徴とするものであってもよい。代表的なＧＳＫ３媒介疾患としては、例えば、２型糖尿病、アルツハイマー病およびその他の神経変性疾患、肥満、アテローム性動脈硬化症性心血管疾患、本態性高血圧症、多嚢胞性卵巣症候群、エックス症候群、虚血（特に脳虚血）、外傷性脳損傷、双極性障害、免疫不全、癌などが、挙げられる。
【０１３２】
本発明による被験体の首尾よい処置によって、医学的障害または生物学的障害に罹患している被験体の症状の軽減または緩和が誘起され、例えば、その障害の進行を停止させ、あるいはその障害を予防する結果となる。従って、例えば、糖尿病の処置は、患者のグルコースレベルまたはＨｂＡ１ｃレベルを低下させ得る。同じように、アルツハイマー病の処置は、例えば、痴呆の進行速度の低下を測定することによって検出される、疾患の進行速度の低下をもたらし得る。
【０１３３】
一個の剤形をつくるためにキャリア物質と組み合わされる活性成分の量は、処置を受ける宿主および特定の投与様式によって変化する。しかし、任意の特定の患者のための具体的な投薬量レベルは、使用される特定の化合物の活性、年齢、体重、総合的な健康状態、性別、食餌、投与回数、投与経路、排出速度、薬物の組み合わせ、および処置を受けている特定の疾患の重篤さを含む、さまざまな要因に依存することが、理解される。所定の状況の処置に有効な量は、慣用的な実験によって容易に決定され得、通常の臨床医師の技術および判断の範囲内にある。
【０１３４】
本発明のためには、処置に有効な用量は、一般的には、約０．１ｍｇ／ｋｇ／日から約１００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ／日から約２０ｍｇ／ｋｇ／日、最も好ましくは約２ｍｇ／ｋｇ／日から約１０ｍｇ／ｋｇ／日の本発明のＧＳＫ３インヒビター化合物であり、これは、単回投与または複数回投与で投与され得る。
【０１３５】
本発明の化合物はまた、リポソームの形態で投与してもよい。当該分野で公知であるように、一般に、リポソームは、リン脂質またはその他の脂質物質から誘導される。リポソームは、水性媒質中に分散した単層または多層の水和液晶によって形成される。リポソームを形成し得る任意の非毒性、生理許容性、代謝性の脂質を用いてもよい。リポソーム形態の本組成物は、本発明の化合物に加えて、安定剤、防腐剤、賦形剤などを含有してもよい。好ましい脂質は、天然および合成の両方の、リン脂質およびホスファチジルコリン（レシチン）である。リポソームを形成させる方法は、当該分野では公知である。例えば、Ｐｒｅｓｃｏｔ編、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ＸＩＶ巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，ｐ．３３（１９７６）以下を参照すること。
【０１３６】
本発明の化合物は、単独の活性な医薬品として投与してもよいが、一方、障害の処置に用いられる一つ以上の他の薬剤と一緒に用いてもよい。本発明の化合物と組み合わせた２型糖尿病の処置に有用な代表的な薬剤としては、例えば、インシュリン、トログリタゾン、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン、グリピジド、メトホルミン、アカルボースなどが挙げられる。本発明の化合物と組み合わせたアルツハイマー病の処置に有用な代表的な薬剤としては、例えば、ドネペジル、タクリンなどが挙げられる。本発明の化合物と組み合わせた双極性障害の処置に有用な代表的な薬剤としては、例えば、リチウム塩、バルプロエートなどが挙げられる。本発明の化合物と組み合わせた脳卒中の処置に有用な代表的な薬剤は、例えば、組織プラスミノーゲン活性化因子である。
【０１３７】
本発明の化合物と組み合わせてさらなる活性薬剤を用いた場合、参考として本明細書中で援用されるｔｈｅ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ＰＤＲ）５３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９９９）に示される処置量で、または当業者に公知の処置に有用な量で、上記さらなる活性薬剤を一般に使用し得る。
【０１３８】
本発明の化合物および他の処置のために活性な薬剤は、推奨されている最高臨床投薬量以下の投薬量で投与し得る。本発明の組成物中の活性化合物の投与量レベルは、投与の経路、疾患の重篤さおよび患者の応答によって、所望の処置応答が得られるように変化させ得る。上記組み合わせは、別々の組成物として投与してもよく、あるいは両方の薬剤を含む単一の剤形として投与してもよい。組み合わせとして投与された場合、これらの処置薬剤は、同じ時間または別々の時間に投与される別々の組成物として処方してもよいし、あるいは、処置薬剤は、単一の組成物として投与してもよい。
【０１３９】
本発明の上記の局面および他の局面は、以下の代表的な実施例によってさらによく理解し得る。
【実施例】
【０１４０】
（実施例１）
Ｗｎｔ１０ｂが脂肪生成をインビボで阻害するかどうかを決定するために、本発明者らは、脂肪酸結合タンパク質４（ＦＡＢＰ４）プロモーターの制御下でＷｎｔ１０ｂを発現するトランスジェニックマウスを創った。三種類の創始系統において、類似の表現型が認められる。ＦＡＢＰ４−Ｗｎｔ１０ｂ創始世代（Ｃ５７ＢＬ／６  Ｘ  ＳＪＬ）Ｆ２を、Ｃ５７ＢＬ／６に戻し交配し、Ｎ２世代からＮ４世代の子孫を、実験に用いた。ＦＡＢＰ４プロモーター由来のＷｎｔ１０ｂは、白色脂肪組織および褐色脂肪組織ならびに骨髄において選択的に発現される。雄および雌のＦＡＢＰ４−Ｗｎｔ１０ｂマウスは、野生型同腹子と比較して、体重が増加した。代謝分析によって、野生型マウスとＦＡＢＰ４−Ｗｎｔ１０ｂマウスとでは食物摂取量は同程度であるが、ＦＡＢＰ４−Ｗｎｔ１０ｂマウスの酸素消費量は７．４％少なかったことが、明らかになった。組織重量の測定によって、ＦＡＢＰ４−Ｗｎｔ１０ｂの体質量の増加は、ほとんど、体毛を含む皮膚の重量が重いこと（８週齢で野生型雄の３．９±０．３ｇに対して、トランスジェニック雄の６．０±０．６ｇ）にのみ起因することが明らかになった。皮膚の表皮層および筋肉層は極めて正常に見えるが、一方、脂肪細胞の欠如および皮下組織の減少と同時に真皮層の劇的な膨張が、ＦＡＢＰ４−Ｗｎｔ１０ｂマウスでは観測される。従って、真皮中で、Ｗｎｔ１０ｂは、コラーゲン分泌細胞の増殖を刺激し、脂肪生成を阻害する。
【０１４１】
皮膚の脂肪細胞数の減少に加えて、ＦＡＢＰ４−Ｗｎｔ１０ｂマウスは、低脂肪の餌を与えたとき（４４％減少、Ｐ＜０．０５）も、高脂肪の餌を与えたとき（４６％低下、Ｐ＜０．０１）も、二重エネルギーＸ線吸光光度定量法によって評価される全体脂肪が少ない。同じように、Ｂ系統のＦＡＢＰ４−Ｗｎｔ１０ｂマウスは、低脂肪の餌を与えたとき（４０％減少、Ｐ＜０．０６）も、高脂肪の餌を与えたとき（４７％減少、Ｐ＜０．００１）も、精巣上体脂肪体が小さく、類似の結果が腎周脂肪組織でも認められる。野生型マウスとＦＡＢＰ４−Ｗｎｔ１０ｂマウスとの間で、Ｃ／ＥＢＰα、ＰＰＡＲγなどの脂肪細胞マーカーの発現は同じであるように見える。しかし、ＦＡＢＰ４−Ｗｎｔ１０ｂマウスは、脂肪組織が少なくなるとともに、野生型マウスと比較して血清レプチン量が少ない（２．０ｎｇ／ｍｌ対３．９ｎｇ／ｍｌ、Ｐ＜０．０１）。脂肪組織発達の阻止にもかかわらず、２ヶ月齢または６ヶ月齢のＦＡＢＰ４−Ｗｎｔ１０ｂマウスの肝臓、筋肉または膵臓β細胞への脂質の蓄積は認められない。ＦＡＢＰ４−Ｗｎｔ１０ｂマウスは、脂肪組織と全身インシュリン抵抗性との間の十分確実な関係（Ｋａｈｎら、２０００）と矛盾なく、８週齢でグルコース耐性およびインシュリン感受性の改善を示す。さらに、ＦＡＢＰ４−Ｗｎｔ１０ｂマウスは、高脂肪の餌を２０週間与えることによって引き起こされるグルコース不耐性に抵抗する。従って、Ｗｎｔ１０ｂは、白色脂肪組織の成長を阻害し、食餌によって誘起される肥満およびグルコース不耐性に対して保護する。
【０１４２】
Ｗｎｔ１０ｂの発達的な役割をさらに検討するために、本発明者らは、Ｗｎｔ１０ｂのオープンリーディングフレームを取り除いたマウスを創った。新生Ｗｎｔ１０ｂヌルマウスは、予測されるメンデル頻度で発生し、成長または生殖上の明らかな欠陥を示さない。共通遺伝子系ＦＶＢバックグラウンドでは、Ｗｎｔ１０ｂ−／−マウスおよび野生型マウスは、同程度の量の精巣上体脂肪組織を有し、脂肪組織の膨張は、非調節脂肪生成によってではなく、摂食増加および／または全身エネルギー消費減少の結果として起こることを明白に示す。しかし、Ｗｎｔシグナル伝達を阻害するとＣ２Ｃ１２筋芽細胞内で自発性脂肪形成が起こり、加齢とともに脂肪細胞分化の増加と軌を一にして、筋芽細胞中のＷｎｔ１０ｂ  ｍＲＮＡが減少する（Ｔａｙｌｏｒ−Ｊｏｎｅｓら、２００２）ので、本発明者らは、脂肪形成と筋形成との間のスイッチとしてのＷｎｔ１０ｂを検討した。本発明者らは、衛星細胞が活性化され、野生型マウスでは迅速に増殖して分化して筋繊維を再生させる（Ｐａｖｌａｔｈら、１９９８）、凍結損傷モデルを利用した。しかし、Ｗｎｔ１０ｂ−／−マウスでは、活性化した筋芽細胞は、脂質を蓄積し、脂肪細胞マーカーＦＡＢＰ４を発現する。脛骨筋をカルジオトキシンで傷つけると、類似の結果が観察される。衛星細胞の脂肪形成は、Ｗｎｔ１０ｂ−／−マウスに高脂肪の餌を与えたときにだけ観察され、このことは、脂肪形成を行なわせる刺激も必要なことを示唆する。
【０１４３】
本発明者らはまた、褐色脂肪組織（ＢＡＴ）の発達におけるＷｎｔ１０ｂの役割も検討した。ＢＡＴは、齧歯類、ヒト幼児および潜在的にはヒト成人において、適応性発熱のために必須である（ＬｏｗｅｌｌおよびＳｐｉｅｇｅｌｍａｎ，２０００）。野生型マウスでは、肩甲骨間領域において、胸椎から脊柱にかけて、暗赤色に染色される結節部付き組織として、大きなＢＡＴ集積が観察される。褐色脂肪細胞ではミトコンドリアが増量し、トリアシルグリセロールで満たされた多室小液胞を含む。対照的に、ＦＡＢＰ４−Ｗｎｔ１０ｂマウス由来の肩甲骨間部組織は、組織学的に白色脂肪細胞に類似し、トリアシルグリセロールで満たされた大きな単室性液胞および変位した核を有する、細胞を含む。脂肪小滴の拡大は、ＢＡＴの発達または機能が低下した他のマウスモデルで観察される（Ｅｎｅｒｂａｃｋら、１９９７、Ｔｈｏｍａｓら、１９９７、Ｍｏｉｔｒａら、１９９８およびＳｈｉｍｏｍｕｒａら、１９９８）。ＦＡＢＰ４−Ｗｎｔ１０ｂマウスの肩甲骨間部組織の特徴をさらに明らかにするために、さまざまな脂肪細胞マーカーの発現を検討した。ＦＡＢＰ４−Ｗｎｔ１０ｂマウスは、白色脂肪組織に類似する肩甲骨間部組織を有するが、脂肪形成転写因子であるＣ／ＥＢＰαおよびＰＰＡＲγ、ならびに脂肪細胞脂肪酸結合タンパク質であるＦＡＢＰ−４は、発現しない。さらに、ＰＧＣ−１α、ＰＧＣ−１β、ＵＣＰ−１およびβ３−アドレナリン受容体などの重要な褐色脂肪細胞遺伝子の発現（ＬｏｗｅｌｌおよびＳｐｉｅｇｅｌｍａｎ  ２０００、Ｒｏｓｅｎら  ２０００）もまた、著しく減少する。最後に、ＦＡＢＰ４−Ｗｎｔ１０ｂマウスは、４℃に置かれるとコア体温を持続することができず、７２時間以内に温度調節機能を失う。以上を総合すると、これらのデータから、Ｗｎｔ１０ｂは、ＢＡＴの発達および機能を妨害することが分かる。
【０１４４】
骨髄中で、Ｗｎｔシグナル伝達は、間葉系前駆細胞が脂肪細胞に分化するか、あるいは骨芽細胞に分化するかを決定し得る。Ｗｎｔ１０ｂは脂肪形成および脂肪組織発達を阻害するが、一方、標準的なＷｎｔシグナル伝達の活性化は、骨芽細胞生成および骨形成を刺激する（Ｂａｉｎら２００３、Ｇｏｎｇら  ２００１、Ｂｏｙｄｅｎら  ２００２）。しかし、骨発達に関与する内因性Ｗｎｔは、まだ特定されていない。従って、本発明者らは、ＦＡＢＰ４−Ｗｎｔ１０ｂヌルマウスおよびＷｎｔ１０ｂヌルマウスの骨格表現型を検討した。
【０１４５】
コンピュータ顕微断層撮影によるＦＡＢＰ４−Ｗｎｔ１０ｂマウスの分析によって、内皮質骨区画全体の至る所で広範な骨梁の存在が明らかになった。この骨表現型は、雌雄の両方に存在し、１０週齢で早くも観察される。遠位大腿骨の骨梁骨体積分率（ＢＶ／ＴＶ）は、野生型コントロール群と比較して約４倍増加（１５．８％対３．７％、Ｐ＜０．００１）し、遠位骨幹端骨梁は、数の増加（Ｔｂ．Ｎ．、４．７１対１．４３、Ｐ＜０．００１）、厚みの増加（Ｔｂ．Ｔｈ．、０．０３３対０．０２４ｍｍ、Ｐ＜０．０５）、および間隔の接近（Ｔｂ．Ｓｐ．、０．１９ｍｍ対０．９５ｍｍ、Ｐ＜０．００１）を示した（表１）。３ｃｍの中皮質セグメントの分析によると、骨断面積、皮質厚さ、および曲げモーメントの増加が明らかになったが、骨梁含量が高いために、骨幹分析は複雑になった。４点屈曲法による機械的試験によると、ＦＡＢＰ４−Ｗｎｔ１０ｂマウスの大腿骨は、野生型同腹子と比較して、終局荷重の増加（４２．８Ｎ対３２．０Ｎ、Ｐ＜０．０１）および剛性の増加（３２６．６Ｎ／ｍｍ対２３５．４Ｎ／ｍｍ、Ｐ＜０．０１）を示した。ＦＡＢＰ４−Ｗｎｔ１０ｂマウスは、脛骨、上腕骨および椎骨の骨が増加しているので、Ｗｎｔ１０ｂの効果は、大腿骨に限定されない。ＦＡＢＰ４−Ｗｎｔ１０ｂマウスの骨梁の増加は、Ｗｎｔ１０ｂが間葉系前駆体の発達を脂肪形成から骨芽細胞形成の方へとシフトさせるという仮説を、強く支持する。骨の発達の増加は、部分的には、血清レプチンの減少によるものであり得る（Ｔａｋｅｄａら、２００２）が、グリコーゲンシンターゼキナーゼ３インヒビター（ＣＨＩＲ９９０２１）によるＷｎｔシグナル伝達の活性化によって、二分化能ＳＴ２細胞の骨芽細胞形成および無機化が増加することを考慮すると、Ｗｎｔシグナル伝達の直接的な効果の可能性が高い（図１Ｂ）。
【０１４６】
表１．Ｗｎｔ１０ｂは、ＦＡＢＰ４−Ｗｎｔ１０ｂマウスの骨の生成および強度を増加させる。文献（Ｈａｎｋｅｎｓｏｎら、２０００）に記載の方法によって、野生型（ｎ＝６）マウスおよびＦＡＢＰ４−Ｗｎｔ１０ｂ（ｎ＝６）マウスの遠位大腿骨のコンピュータ顕微断層撮影を実行し、ＧＥ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＭｉｃｒｏｖｉｅｗのソフトウェアＳｔｅｒｅｏｌｏｇｙ機能によって解析した。図１Ａの下の図の強調部分に対応する１ｍｍ３の部分を分析した。Ｓｅｒｖｏｈｙｄｒａｕｌｉｃ  Ｔｅｓｔｉｎｇ  ｍａｃｈｉｎｅ（８１０  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  Ｔｅｓｔ  Ｓｙｓｔｅｍ、Ｅｄｅｎ  Ｐｒａｉｒｉｅ，ＭＮ）を用いて、文献（Ｈａｎｋｅｎｓｏｎら、２０００）記載の方法によって大腿骨の物性を評価した。
【０１４７】
【表１】
2007502300.tif 000020
内因性のＷｎｔ１０ｂが骨芽細胞形成を刺激するどうかを決定するために、本発明者らは、Ｗｎｔ１０ｂ−／−マウスの骨発達を検討した。遠位骨幹端大腿骨の分析によって、雄のＷｎｔ１０ｂ−／−マウスで骨体積分率は３０％減少する（表２）。量および骨梁数も、同程度減少する（表２）。雌のＷｎｔ１０ｂ−／−マウスでも、類似の結果が観測される。以上を総合すると、Ｗｎｔ１０ｂトランスジェニックマウスからの結果およびヌルマウスからの結果は、Ｗｎｔ１０ｂが骨発達を調節するという強力な証拠を提供する。
【０１４８】
表２．Ｗｎｔ１０ｂ−／−マウスの骨質量および骨梁数は減少した。野生型（ｎ＝８）マウスおよびＷｎｔ１０ｂ−／−（ｎ＝８）マウスの遠位大腿骨のコンピュータ顕微断層撮影を、文献（Ｈａｎｋｅｎｓｏｎら、２０００）に記載されるように実行し、ＧＥ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＭｉｃｒｏｖｉｅｗソフトウェアのＳｔｅｒｅｏｌｏｇｙ機能によって解析した。
【０１４９】
【表２】
2007502300.tif 000021
ＦＡＢＰ４プロモーターからのＷｎｔ１０ｂの発現によって、脂肪組織の発達が阻害され、骨の生成および骨の強度は増加する。ＦＡＢＰ４−Ｗｎｔ１０ｂマウスは、食餌によって誘起される肥満に抵抗性となり、グルコース耐性の改善を示す。Ｗｎｔ１０ｂ欠損によって、骨梁体積は減少し、活性化した筋芽細胞を、筋形成ではなく脂肪形成に誘導する。これらの結果は、多能性間葉系前駆細胞に関して、Ｗｎｔ１０ｂは、脂肪形成と、これに代わる骨芽細胞分化または筋細胞分化などの細胞運命との間のスイッチを支配していることを、示している。
【０１５０】
（実施例２）
（ＶＩ）  ６−［（２−｛［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−メチルイミダゾール−２−イル）ピリミジン−２−イル］アミノ｝エチル）アミノ］ピリジン−３−カルボニトリルの合成）
【０１５１】
【化２２】
2007502300.tif 000022
（１．  １−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（４−メチルイミダゾール−２−イル）エタン−１−オンの合成）
ジクロロメタン（２５ｍｌ）中の２，４−ジクロロベンゾイルクロリドの溶液（７．２４Ｍ）を、ジクロロメタン（７５ｍｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（Ｈｕｅｎｉｇの塩基）（３４ｍｌ）中の２，４ジメチルイミダゾールの撹拌溶液（０．８０Ｍ）に、２０分間かけて滴下して加えた。添加の間、水浴を用いて反応混合物を冷却した。次に、反応混合物を加熱して５時間還流した。反応物の色は、暗くなることがある。減圧下、生成物から溶媒を除去して、得られた固体を真空中で１時間乾燥した。
【０１５２】
乾燥したこの固体（上記で説明した）に、氷酢酸と濃ＨＣｌ水溶液との溶液（体積／体積２：１、１２０ｍｌ）を加えた。次に、この混合物を還流下で約９０分間撹拌した。ロータリーエバポレータで酢酸を除去した。冷却後、固体残留物に蒸留水（２００ｍｌ）およびトルエン（１００ｍｌ）を加え、３０分間強く撹拌した。固体をろ別し、蒸留水５０ｍｌですすいでから廃棄した。ろ液を分液ロートに移した。有機層を捨てた後、水層をトルエン（２×１００ｍｌ）で洗浄した。水層を大きなビーカー（２Ｌ）に移し、イソプロピルエーテル（５０ｍｌ）で希釈した。この混合物を撹拌しながら、慎重に重炭酸ナトリウムを加えて塩基性（ｐＨ７〜８）にし、粘着性の白色固体を生成させた。ジクロロメタン（２００ｍｌ）を加え、１０分間撹拌を続けた。有機層を分離し、水層をジクロロメタン（１００ｍｌ）でもう一度抽出した。有機層を合せ、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１００ｍｌ）、蒸留水（１００ｍｌ）、ブライン（１００ｍｌ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥してろ過し、真空中で乾固して、１−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（４−メチルイミダゾール−２−イル）エタン−１−オンを収率４６％で得た。
【０１５３】
（２．  （２Ｚ）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−３−（ジメチルアミノ）−２−（４−メチルイミダゾール−２−イル）−プロプ−２−エン−１−オンの合成）
１−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（４−メチルイミダゾール−２−イル）エタン−１−オン（０．３３Ｍ）とＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド−ジメチルアセタール（ＤＭＦＤＭＡ）（２５ｍｌ）との混合物を、７０〜７５℃で２．５時間撹拌した。次に、減圧下でＤＭＦＤＭＡを留去し、高真空下で数時間乾固して、淡い橙赤色の固体を定量的な収率で得た。このエナミノン生成物（２Ｚ）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−３−（ジメチルアミノ）−２−（４−メチルイミダゾール−２−イル）プロプ−２−エン−１−オンは、通常それ以上精製せずに用いた。
【０１５４】
（３．  ６−［（２−アミノエチル）アミノ］ピリジン−３−カルボニトリルの合成）
アセトニトリル（１２０ｍｌ）およびエチレンジアミン（８５ｍｌ）中の２−クロロ−５−シアノピリジンの混合物（０．６０Ｍ）を、アルゴン下７５〜８０℃で一夜（約１６時間）撹拌した。減圧下で、エチレンジアミンを除去した後、真空で２〜３時間乾固した。残留溶液を、１Ｍ水酸化ナトリウム溶液（約１００ｍｌ）で塩基性にした。この水溶液を、塩化ナトリウムで飽和させ、酢酸エチル９５％とメタノール５％との溶液（３×１５０ｍｌ）およびアセトニトリル９５％とメタノール５％との溶液（３×１５０ｍｌ）で抽出した。有機抽出液を合せて、飽和塩化ナトリウム溶液（２×７０ｍｌ）で抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過して減圧下で濃縮した。粗製の白色から褐色の固体を、エーテル（２×５０ｍｌ）で粉砕し、真空で一夜乾燥して、６−［（２−アミノエチル）アミノ］ピリジン−３−カルボニトリルを収率７８％で得た。
【０１５５】
（４．  アミノ｛２−［（５−シアノ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝カルボキサミジン塩酸塩の合成）
６−［（２−アミノエチル）アミノ］ピリジン−３−カルボニトリル（０．４７Ｍ）、１Ｈ−ピラゾール−１−カルボキサミジン塩酸塩（０．４７Ｍ）およびアセトニトリル（１２０ｍｌ）の混合物を、７５〜８０℃で約２４時間撹拌した。冷却時に、ろ過して沈殿物を集めた。白色の固体を、アセトニトリル（２×１００ｍｌ）、エチルエーテル（３×１００ｍｌ）で十分に洗浄し、減圧下で一夜乾固して、アミノ｛２−［（５−シアノ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝カルボキサミジンをＨＣｌ塩として収率８２％で得た。
【０１５６】
（５．  ６−［（２−｛［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−メチルイミダゾール−２−イル）ピリミジン−２−イル］アミノ｝エチル）アミノ］ピリジン−３−カルボニトリルの合成）
無水エタノール（１５ｍｌ）中に溶かしたナトリウムエトキシドの溶液（０．５８Ｍ）を、（２Ｚ）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−３−（ジメチルアミノ）−２−（４−メチルイミダゾール−２−イル）−２−プロペン−１−オン（０．４１Ｍ）、アミノ｛２−［（５−シアノ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝カルボキサミジン塩酸塩（０．４３Ｍ）および無水エタノール（２０ｍｌ）の攪拌混合物に、加えた。次に、この反応混合物を７５〜８０℃まで２．５時間加熱した。冷却時に、反応混合物を酢酸エチル（４００ｍｌ）で希釈し、飽和水ＮａＨＣＯ３（１００ｍｌ）、蒸留水（２×１００ｍｌ）、ブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過して濃縮した。粗生成物（約５０％純度）を、シリカゲル上でフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。カラムは、酢酸エチル対ヘキサンの１：１で開始した後、速く移動する不純物がすべて除かれるまで酢酸エチルで行なった。生成物は、酢酸エチル中１．５％のメタノールで溶出させた。酢酸エチル中の５％メタノールを溶媒系として用いるＴＬＣによって、カラムをモニターする。生成物は、長波長領域でＵＶ活性を有し、非染色ＴＬＣプレート上で青く「輝く」。適切な画分を濃縮した。オフホワイトの固体を減圧下で一夜乾燥し、６−［（２−｛［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−メチルイミダゾール−２−イル）ピリミジン−２−イル］アミノ｝エチル）アミノ］ピリジン−３−カルボニトリルを２８％の収率で得た。
【０１５７】
ＨＰＬＣ  ２０．７分（＞９９％純度）
ＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝４６５．３（Ｃ２２Ｈ１８Ｃ１２Ｎ８＋Ｈ＝４６５）。
【図面の簡単な説明】
【０１５８】
上記の要旨および詳細な説明を参照すると、添付の図面とともに参照するとき、前述の局面および本発明の付随する利点の多くは、さらに容易に理解される。
【図１】図１Ａ。Ｗｎｔ１０ｂは、海綿質および骨形成を増加させる。文献（Ｈａｎｋｅｎｓｏｎら、２０００）記載の方法によって、野生型およびＦＡＢＰ４−Ｗｎｔ１０ｂマウスの大腿骨の顕微コンピュータ断層撮影（上の写真）を実施した。強調したボックス区域（下の写真）の骨幹端小柱の三次元再構成。図１Ｂ。文献（ＨａｎｋｅｎｓｏｎおよびＢｏｒｎｓｔｅｉｎ、２００２）記載の方法によって、多分化能ＳＴ２細胞を誘導して骨形成を行なわせた。０日目および２日目に、細胞をＤＭＳＯ（コントロール）または３μＭのＣＨＩＲ９９０２１、６−［（２−｛［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−メチルイミダゾール−２−イル）ピリミジン−２−イル］アミノ｝エチル）アミノ］ピリジン−３−カルボニトリル（Ｃｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＣＡ）で処理した。１０日目に、鉱化作用識別用のアリザリンレッド−Ｓで細胞を染色した。
【図１】
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【国際調査報告】
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