(57)【要約】  本発明は、（i）全脂肪酸含有量に対して少なくとも１２％のステアリン酸を含有するヒマワリ種子から直接的に入手可能なヒマワリ油であって、ｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の飽和脂肪酸の分布係数αが少なくとも０．３８であることを特徴とする該ヒマワリ油、及び（ii）全脂肪酸含有量に対して少なくとも１２％のステアリン酸を含有するヒマワリ種子から直接的に入手されるヒマワリ油であって、該油中のオレイン酸の含有量がリノール酸の含有量よりも高いときに、ｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の飽和脂肪酸の分布係数αが少なくとも０．２８であることを特徴とする該ヒマワリ油に関する。本発明は、該油を生産するヒマワリの植物と種子及び該油の用途にも関する。
2007523596.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
全脂肪酸含有量に対して少なくとも１２％のステアリン酸を含有するヒマワリ種子から直接的に入手可能なヒマワリ油であって、ｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の飽和脂肪酸の分布係数αが少なくとも０．３８であること、及び該種子が下記の工程 ａ）〜ｊ）を含む方法によって得られることを特徴とする該ヒマワリ油：
ａ）油中の全脂肪酸含有量に対して少なくとも１２％のステアリン酸を含有する油を含む種子を供給し、
ｂ）０．３８よりも大きな分布係数αを示す油を含む種子を供給し、
ｃ）上記の工程 ａ）及び ｂ）で供給される種子から植物を生育させた後、該植物を交配させ、
ｄ）Ｆ１子孫種子を収穫し、
ｅ）Ｆ１子孫種子を蒔いて植物を生育させ、
ｆ）生育した植物を自家受粉させてＦ２種子を実らせ、
ｇ）得られるＦ２種子を、ステアリン酸の含有量が少なくとも１２％であると共に、分布係数αが少なくとも０．３８であるという条件を満たすかどうかを調べる試験に付し、
ｈ）ステアリン酸の含有量及び分布係数αが所望のレベルにある種子を蒔いて植物を生育させ、
ｉ）生育した植物を自家受粉させてＦ３種子を実らせ、
ｊ）随意に、ステアリン酸の含有量及び分布係数αが所望のレベルに固定されるまで上記の工程 ｇ）、ｈ）及び ｉ）を繰り返す。
【請求項２】
ｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の飽和脂肪酸の分布係数αが少なくとも０．４２である
請求項１記載のヒマワリ油。
【請求項３】
ｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の飽和脂肪酸の分布係数αが少なくとも０．４６である
請求項１記載のヒマワリ油。
【請求項４】
全脂肪酸含有量に対するステアリン酸の含有量が少なくとも２０％である請求項１から３いずれかに記載のヒマワリ油。
【請求項５】
全脂肪酸含有量に対して少なくとも１２％のステアリン酸を含有すると共にオレイン酸の含有量がリノール酸の含有量よりも高いヒマワリ種子から直接的に入手されるヒマワリ油であって、ｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の飽和脂肪酸の分布係数αが少なくとも０．２８であること、及び該種子が下記の工程 ａ）〜 ｊ）を含む方法によって得られることを特徴とする該ヒマワリ油：
ａ）油中の全脂肪酸含有量に対して少なくとも１２％のステアリン酸を含有すると共にリノール酸よりもオレイン酸を多く含有する油を含む種子を供給し、
ｂ）０．３８よりも大きな分布係数αを示す油を含む種子を供給し、
ｃ）上記の工程 ａ）及び ｂ）で供給される種子から植物を生育させた後、該植物を交配させ、
ｄ）Ｆ１子孫種子を収穫し、
ｅ）Ｆ１子孫種子を蒔いて植物を生育させ、
ｆ）生育した植物を自家受粉させてＦ２種子を実らせ、
ｇ）得られるＦ２種子を、ステアリン酸の含有量が少なくとも１２％であると共にオレイン酸の含有量がリノール酸の含有量よりも高く、分布係数αが少なくとも０．２８であるという条件を満たすかどうかを調べる試験に付し、
ｈ）ステアリン酸、オレイン酸及びリノール酸の含有量並びに分布係数αが所望のレベルにある種子を蒔いて植物を生育させ、
ｉ）生育した植物を自家受粉させてＦ３種子を実らせ、
ｊ）随意に、ステアリン酸、オレイン酸及びリノール酸の含有量並びに分布係数αが所望のレベルに固定されるまで上記の工程 ｇ）、ｈ）及び ｉ）を繰り返す。
【請求項６】
ｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の飽和脂肪酸の分布係数αが少なくとも０．３２である
請求項５記載のヒマワリ油。
【請求項７】
ｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の飽和脂肪酸の分布係数αが少なくとも０．３６である
請求項５記載のヒマワリ油。
【請求項８】
全脂肪酸含有量に対するステアリン酸の含有量が少なくとも２０％である請求項５から７いずれかに記載のヒマワリ油。
【請求項９】
請求項１から４いずれかに記載の内因性のヒマワリ油を含有する種子を実らせるヒマワリ植物。
【請求項１０】
請求項９記載のヒマワリ植物が実らせるヒマワリ種子。
【請求項１１】
請求項９記載のヒマワリ植物が実らせるヒマワリ種子から得られるヒマワリ油。
【請求項１２】
請求項５から８いずれかに記載の内因性油を含有する種子を実らせるヒマワリ植物。
【請求項１３】
請求項１２記載のヒマワリ植物が実らせるヒマワリ種子。
【請求項１４】
請求項１２記載のヒマワリ植物が実らせるヒマワリ種子から得られるヒマワリ油。
【請求項１５】
全脂肪酸含有量に対して少なくとも１２％のステアリン酸を含有すると共に、ｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の飽和脂肪酸の分布係数αとして少なくとも０．３８を示す内因性油を含む種子を実らせる植物の生育方法であって、下記の工程 ａ）〜 ｊ）を含む該生育方法：
ａ）油中の全脂肪酸含有量に対して少なくとも１２％のステアリン酸を含有する油を含む種子を供給し、
ｂ）０．３８よりも大きな分布係数αを示す油を含む種子を供給し、
ｃ）上記の工程 ａ）及び ｂ）で供給される種子から植物を生育させた後、該植物を交配させ、
ｄ）Ｆ１子孫種子を収穫し、
ｅ）Ｆ１子孫種子を蒔いて植物を生育させ、
ｆ）生育した植物を自家受粉させてＦ２種子を実らせ、
ｇ）得られるＦ２種子を、ステアリン酸の含有量が少なくとも１２％であると共に、分布係数αが少なくとも０．３８であるという条件を満たすかどうかを調べる試験に付し、
ｈ）ステアリン酸の含有量及び分布係数αが所望のレベルにある種子を蒔いて植物を生育させ、
ｉ）生育した植物を自家受粉させてＦ３種子を実らせ、
ｊ）随意に、ステアリン酸の含有量及び分布係数αが所望のレベルに固定されるまで上記の工程 ｇ）、ｈ）及び ｉ）を繰り返す。
【請求項１６】
ステアリン酸を少なくとも１２％含有する油を含む種子を、下記の工程 ａ）〜 ｄ）を含む方法によって供給する請求項１５記載の生育方法：
ａ）ステアリン酸の含有量が１２％未満であるヒマワリの種子を突然変異誘発剤（特に、アジ化ナトリウム）又はアルキル化剤（特に、エチルメタンスルホネート）で処理し、
ｂ）処理した種子から植物を生育させた後、該植物の受粉をおこなって種子を実らせ、
ｃ）得られる種子が所望のステアリン酸含有量を示すかどうかを試験し、
ｄ）随意に、上記の工程 ｂ）及び ｃ）を繰り返す。
【請求項１７】
ｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の飽和脂肪酸の分布係数αが少なくとも０．３８である油を含有する種子を、下記の工程 ａ）〜 ｄ）を含む方法によって供給する請求項１５記載の生育方法：
ａ）０．３８よりも小さな分布係数を示すヒマワリの種子を突然変異誘発剤（特に、アジ化ナトリウム）又はアルキル化剤（特に、エチルメタンスルホネート）で処理し、
ｂ）処理した種子から植物を生育させた後、該植物の受粉をおこなって種子を実らせ、
ｃ）得られる種子が所望の分布係数α値を示すかどうかを試験し、
ｄ）随意に、上記の工程 ｂ）及び ｃ）を繰り返す。
【請求項１８】
全脂肪酸含有量に対してステアリン酸を少なくとも１２％含有すると共に、リノール酸よりもオレイン酸を多く含有し、さらに、ｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の分布係数αとして少なくとも０．２８を示す内因性油を含む種子を実らせる植物の生育方法であって、下記の工程 ａ）〜 ｊ）を含む該生育方法：
ａ）油中の全脂肪酸含有量に対して少なくとも１２％のステアリン酸を含有すると共に、リノール酸よりもオレイン酸を多く含有する油を含む種子を供給し、
ｂ）０．２８よりも大きな分布係数αを示す油を含む種子を供給し、
ｃ）上記の工程 ａ）及び ｂ）で供給された種子から生育させた植物を交配させ、
ｄ）Ｆ１子孫種子を収穫し、
ｅ）Ｆ１子孫種子を蒔いて植物を生育させ、
ｆ）生育した植物を自家受粉させてＦ２種子を実らせ、
ｇ）得られるＦ２種子を、ステアリン酸の含有量が少なくとも１２％であると共にオレイン酸の含有量がリノール酸の含有量よりも高く、さらに分布係数αが少なくとも０．２８であるという条件を満たすかどうかを調べる試験に付し、
ｈ）ステアリン酸、オレイン酸及びリノール酸の含有量並びに分布係数αが所望のレベルにある種子を蒔いて植物を生育させ、
ｉ）生育した植物を自家受粉させてＦ３種子を実らせ、
ｊ）随意に、ステアリン酸、オレイン酸及びリノール酸の含有量並びに分布係数αが所望のレベルに固定されるまで上記の工程 ｇ）、ｈ）及び ｉ）を繰り返す。
【請求項１９】
ステアリン酸を少なくとも１２％含有する油を含む種子を、下記の工程 ａ）〜 ｊ）を含む方法によって供給する請求項１８記載の植物の生育方法：
ａ）少なくとも１２％のステアリン酸を含有するヒマワリの種子を突然変異誘発剤（特に、アジ化ナトリウム）又はアルキル化剤（特に、エチルメタンスルホネート）で処理し、
ｂ）処理した種子から植物を生育させた後、受粉によって種子を実らせ、
ｃ）得られた種子を、所望のステアリン酸含有量を有するかどうかを調べる試験に付し、
ｄ）リノール酸よりもオレイン酸を多く含有する油を含む種子を供給し、
ｅ）工程 ｃ）の試験に付した種子から生育させた植物及び工程 ｄ）で供給された種子から生育させた植物を交配させ、
ｆ）Ｆ１子孫種子を収穫し、
ｇ）得られる種子から植物を生育させた後、該植物の自家受粉によってＦ２種子を実らせ、
ｈ）得られる種子を、ステアリン酸の含有量が少なくとも１２％であると共にオレイン酸の含有量がリノール酸の含有量よりも高いという条件を満たすかどうかを調べる試験に付し、
ｉ）ステアリン酸、オレイン酸及びリノール酸の含有量が所望のレベルにある種子をまいて植物を生育させ、
ｊ）生育した植物を自家受粉させてＦ３種子を実らせ、
ｋ）随意に、ステアリン酸、オレイン酸及びリノール酸の含有量が所望のレベルに固定されるまで上記の工程 ｈ）、ｉ）及び ｊ）を繰り返す。
【請求項２０】
ｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の飽和脂肪酸の分布係数αが少なくとも０．３８である油を含有する種子を、下記の工程 ａ）〜 ｄ）を含む方法によって供給する請求項１８記載の生産方法：
ａ）０．３８よりも小さな分布係数α値を示すヒマワリ種子を突然変異誘発剤（特に、アジ化ナトリウム）又はアルキル化剤（特に、エチルメタンスルホネート）で処理し、
ｂ）処理した種子から植物を生育させた後、受粉をおこなって種子を実らせ、
ｃ）得られた種子を、所望の分布係数α値を示すかどうかを調べる試験に付し、
ｄ）随意に、上記の工程 ｂ）及び ｃ）を繰り返す。
【請求項２１】
請求項１５から１７いずれかに記載の方法によって得られた第一親植物を、所望の特性を有する第二親植物と交配させることによって得られる雑種植物。
【請求項２２】
第一親植物が請求項９記載の植物である請求項２１記載の雑種植物。
【請求項２３】
請求項９記載の植物である第一親植物を、別の所望の特性を有する請求項９記載の植物である第二親植物と交配させることによって得られる雑種植物。
【請求項２４】
雑種植物が、別の所望の特性を有する請求項９記載の植物である請求項２３記載の雑種植物。
【請求項２５】
請求項１８から２０いずれかに記載の方法によって得られた第一親植物を、所望の特性を有する第二親植物と交配させることによって得られる雑種植物。
【請求項２６】
第一親植物が請求項１２記載の植物である請求項２５記載の雑種植物。
【請求項２７】
請求項１２記載の植物である第一親植物を、別の所望の特性を有する請求項１２記載の植物である第二親植物と交配させることによって得られる雑種植物。
【請求項２８】
雑種植物が、別の所望の特性を有する請求項１２記載の植物である請求項２７記載の雑種植物。
【請求項２９】
請求項２１から２８いずれかに記載の雑種植物の子孫。
【請求項３０】
請求項１から８及び請求項１１から１４いずれかに記載の油であって、食料品を製造するための該油。
【請求項３１】
請求項１から８及び請求項１１から１４いずれかに記載の油を含有する食料品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、全脂肪酸含有量に対して少なくとも１２％のステアリン酸を有すると共に、野生型のヒマワリの種子から得られる油の場合に比べて、トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）分子のｓｎ−１位とｓｎ−３位との間に改変された脂肪酸分布を有するヒマワリの種子から直接的に得られるヒマワリ油に関する。本発明は、以下に説明する特性を有する内因性油を含有するヒマワリの植物と種子にも関する。さらにまた、本発明は、このようなヒマワリ植物の生育方法とヒマワリ油の使用にも関する。
【背景技術】
【０００２】
油脂類は主としてトリグリセリド、即ち、グリセロール主鎖及びグリセロールの３個のヒドロキシル基がエステル化された３種の脂肪酸から構成された分子から成る（ガンストーンら、１９９４年）。油脂類の化学物理的特性及び栄養学的特性は、油脂類の脂肪酸組成及び異なるトリグリセリド種におけるこれらの脂肪酸の分布によって決定される。脂肪酸の３つの立体化学的位置はｓｎ−１，ｓｎ−２及びｓｎ−３と呼ばれている。油脂類が特定の温度条件下で固体状であるということ、又は良好な安定性を示すということは、脂肪酸中の低濃度の二重結合に関連している。脂肪種子中に存在する主要な脂肪酸は、１８個の炭素原子と２個の二重結合を有するリノール酸（１８：２）及び１８個の炭素原子と１個の二重結合を有するオレイン酸（１８：１）であり、これらの脂肪酸は油脂類を室温下では液状にする。大豆やカノラ（canola）等から得られる油は、１８個の炭素原子と３個の二重結合を有するリノレン酸（１８：３）も含有する。この種の脂肪酸は、１個若しくは複数の二重結合を有する不飽和脂肪酸である。植物油は少量の二重結合を含まない飽和脂肪酸、例えば、１６個の炭素原子を有するパルミチン酸（１６：０）、１８個の炭素原子を有するステアリン酸（１８：０）、２０個の炭素原子を有するアラキン酸（２０：０）及び２２個の炭素原子を有するベヘン酸（２２：０）等も含有する。
【０００３】
脂肪酸の種類及びトリグリセリド分子中での位置に応じて、不飽和脂肪酸は健康に対して有益であり、飽和脂肪酸は健康に対して無益若しくは有害である。これに対して、一部の熱帯性植物油及び動物油は短鎖若しくは中鎖を有する脂肪酸、例えば、炭素原子数が１２のラウリン酸（１２：０）及び炭素原子数が１４のミリスチン酸（１４：０）を含有しており、ミリスチン酸は健康に対して最も有害である。パルミチン酸やステアリン酸は温帯性植物油中に含まれる一般的な飽和脂肪酸である（下記の表１参照）。健康に対して、パルミチン酸は僅かに有害であると考えられており、ステアリン酸は無益であると考えられている。
【０００４】
しかしながら、トリグリセリド分子中の脂肪酸の位置に依存する第二の特性を考慮することが非常に重要である。飽和長鎖脂肪酸は、グリセロール分子の中央の位置（ｓｎ−２）に結合している場合には、あまり有害ではない。脂肪の消化中、膵臓リパーゼはグリセロール分子のｓｎ−１位とｓｎ−３位に存在する脂肪酸を加水分解する。中央の位置に存在する脂肪酸はグリセロール分子に結合した状態を維持してモノグリセリドを形成し、該モノグリセリドは洗浄特性を有し、完全に同化される。一方、ｓｎ−１位とｓｎ−３位から遊離した脂肪酸はカルシウム若しくはマグネシウムと結合して不溶性の金属塩を形成するので、これらの金属塩の腸内吸収は非常に困難となる。この結果、これらの塩類は排出される。下記の表１に示すように、パーム油を除く植物油中の全ての飽和脂肪酸はｓｎ−２位には存在しない。このため、この種の脂肪酸は、ココア脂等の場合のようにパルミチン酸を高濃度で含有するか、又はオリーブ油等の場合のようにパルミチン酸を中濃度で含有するが、コレステロールの濃度に対して悪影響は及ぼさない。
【０００５】
【表１】
2007523596.tif 000003
【０００６】
食品工業においては、多数の食料調製品のために良好な安定性を有する可塑性若しくは固体状の脂肪（例えば、動物脂肪）が必要とされている。ベーカリー、ペーストリー、マーガリン及びスプレッドに対しては固体状脂肪が必要である。一方、油をたっぷり使用する揚げ物食品工業においては、熱酸化に対して耐性がある液状油が要求される。８０年代には、栄養学の専門家の推薦と消費者の要求に応じて、食品工業において使用される油脂は、動物脂肪から植物油に変換された。このような植物油は、食料調製品に使用するために適した特性を有していない。このような油は、部分的な水素化及び／又はエステル交換によって化学的に変性されなければならない。水素と重金属触媒を使用する水素化反応によって不飽和脂肪酸の二重結合の濃度を低減させることができる。この反応中においては、飽和脂肪酸が増加するが、同時に、人工的な脂肪酸のシス異性体とトランス異性体が増量する。トランス異性体は、不飽和脂肪酸ではあるが、飽和脂肪酸に類似する物理的特性を有する。これらのトランス脂肪酸の主要な問題点は、コレステロールの濃度の点で動物由来の飽和脂肪酸よりも有害であるだけでなく、一部の必須脂肪酸の欠乏又はある種の癌（例えば、女性の乳癌）をもたらすことである。
【０００７】
化学的なエステル交換反応によって、トリグリセリド分子内での全脂肪酸の再分布がもたらされる。その後の精留によって、飽和トリグリセリドに富む留分を得ることができる。この処理によって、健康に有益な植物油は、多数の飽和脂肪酸がｓｎ−２位に存在する健康に有害な脂肪（例えば、ラード）へ変換される。この油は低密度の悪性コレステロールを増加させる。結局、植物油を化学的に変性させるために使用されるこれらの処理方法は、植物油の特性を健康に対して有害なものへ変換させる点で、健康に対して特に有益性をもたらす手段ではない。
【０００８】
以上の科学技術的データと栄養学的データを考慮するならば、最良油は、飽和脂肪酸としてステアリン酸（好ましくは、ｓｎ−１位とｓｎ−３位を介してグリセロール主鎖に結合したステアリン酸）を高濃度で含有すると共に、不飽和脂肪酸として、３つのｓｎ位置に結合したオレイン酸若しくはリノール酸を含有する天然の植物油である。
【０００９】
脂肪酸を生産するいくつかのヒマワリ突然変異体系統が選択され、突然変異誘発プログラム後に固定されている（オソリオら、１９９５年）。これらの突然変異体の一部のものは、種子油中に高濃度の飽和脂肪酸を含有する。即ち、ＣＡＳ−３はステアリン酸を少なくとも２６％含有し、ＣＡＳ−４及びＣＡＳ−８はステアリン酸を少なくとも中程度の濃度（１２〜１６％）で含有する。該突然変異体及び生化学的研究と組換え技術によって選択された別の突然変異体（例えば、ＣＡＳ−２９〜ＣＡＳ−３１）は広範囲の胚形質蓄積（germplasm collection）をもたらす（以下の表２参照）。
【００１０】
【表２】
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【００１１】
これらの突然変異体の遺伝学的特性決定によれば、次のことが示されている。即ち、改変された脂肪酸濃度の遺伝は配偶体遺伝であって、該遺伝は減数遺伝子座における対立遺伝子によって制御され、これによって、少数の戻し交配サイクルにおいて標的となる同系交配系統への適当な転移がもたらされる。又、これらの突然変異体の特性の一時的な空間的発現（spatial expression）の研究によれば次のことが示されている。即ち、突然変異体の特性は、種子の形成中においてのみ発現され、生育温度によってはほとんど影響されず、又、植物組織中においては発現されない。これらのヒマワリの突然変異体系統は、アラビドプシスやカノラの高ステアリン酸突然変異体において見られるような付随的な負の効果はもたらさない。
【００１２】
植物トリグリセリドはグリセロール−３−Ｐ経路（ケネディー経路）によって生産される。最初は、アシル−ＣｏＡエステルによるｓｎ−１位とｓｎ−２位におけるグリセロール３−ホスフェートの２つのアシル化がおこなわれ、それぞれグリセロール３−ホスフェートアシルトランスフェラーゼ（ＧＰＡＴ）酵素及びリソホスファチデートアシルトランスフェラーゼ（ＬＰＡＡＴ）酵素によってホスファチデートが生産される（図１参照）。次いで、ホスファチデートはホスファチデートホスフォヒドロラーゼによる加水分解によってジグリセリドに変化し、該ジグリセリドはアシル−ＣｏＡによってさらにアシル化されてトリグリセリドに変化する［ジグリセリドアシルトランスフェラーゼ（ＤＡＧＡＴ）によって触媒される反応］。最後の酵素はトリグリセリドの生合成のみに関与する。アシルトランスフェラーゼ類は脂肪酸の立体化学的分布を調整する。
【００１３】
ヒマワリの突然変異体におけるトリグリセリド組成の研究過程においては、３８種の異なる分子種が見出されている（フェルナンデス−モヤら、２０００年）。しかしながら、予想外なことには、高ステアリン酸系統によって合成されたトリグリセリドは、一般的には全ての油に対して適用されると考えられていたウァンダー・ウァル理論（１９６０年）から予測されるようなｓｎ−１位とｓｎ−３位におけるランダム分布を示さなかった。この例外的な分布の原因となる酵素は、アシル−ＣｏＡプール（ｐｏｏｌ）とグリセロール−３−Ｐからトリグリセリドを合成したアシルトランスフェラーゼである。植物系におけるトリグリセリド合成においては、飽和脂肪酸はグリセロール分子のｓｎ−２位には結合しないということを考慮するならば（アルバレス−オルテガら、１９９７年）、このような効果をもたらす特殊な酵素はグリセロール−３Ｐアシルトランスフェラーゼ及び／又はジギリセリドアシルトランスフェラーゼでなければならない。
【００１４】
本発明をもたらした研究においては、ＴＡＧのｓｎ−１位とｓｎ−３位における飽和脂肪酸の相対的分布を計算する数学的係数アルファＳ（αＳ）が開発された。αＳの値は０〜０．５の範囲にあり、「０」は、これらの位置の一方には飽和脂肪酸が存在しないことを意味し、「０．５」は、両方の位置における飽和脂肪酸含量が等しいことを意味する。トリグリセリド分布がウァンダー・ウァルの理論に従うならば、αの値は０．５であり、異なる脂肪酸がトリグリセリド分子中に均一に分布する。このことは、ｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の飽和脂肪酸分布の場合には非常に重要である。何故ならば、これらの位置の一方により多くの飽和脂肪酸が存在するならば、αは０．５よりも小さな値になり、ジ飽和（disaturated）トリグリセリドの量は、理論的に予測される量よりも少なくなる。このことが、本発明者がヒマワリ油（主として、ステアリン酸の含有量が１２％よりも高いヒマワリ油）において見出した知見である。スプレッド、マーガリン、ショートニング、ベーカリー及びペーストリー等のための可塑性脂肪を調製するのに有利なジ飽和トリグリセリドの最大量は、α＝０．５のときに得られる。トリグリセリド分子中のｓｎ−１位とｓｎ−３位における飽和脂肪酸分布においてαがこの値よりも小さくなるほど、該油はこれらの特別な食品用原料としては一層不適当となる。従って、特定の用途に対しては、ＴＡＧのｓｎ−１位とｓｎ−３位における飽和脂肪酸の有利な相対的分布を示すヒマワリの突然変異体は、α値の計算に基づいて選択することができる。
【００１５】
この係数は、トリグリセリドの全飽和脂肪酸組成（Ｓ）及びｓｎ−２位における飽和脂肪酸組成（Ｓ２）［これらの２つのファクターはアルバレス−オルテガらによる方法（１９９７年）によって計算することができる］並びにトリグリセリド分子種の組成［このファクターはフェルナンデス−モヤらによる方法（２０００年）によって計算することができる］を知ることによって計算された。
【００１６】
ＴＡＧの各々の位置（Ｓ１，Ｓ２及びＳ３）における飽和脂肪酸と不飽和脂肪酸の百分率（ＳとＳ２の関数）を以下の表３に示す。
【表３】
2007523596.tif 000005
【００１７】
ＴＡＧの異なるサブクラス、即ち、トリ飽和サブクラス（ＳＳＳ）、ジ飽和サブクラス（ＳＵＳ）、モノ飽和サブクラス（ＳＵＳ）及びトリ不飽和サブクラス（ＵＵＵ）の百分率は、通常は下記の式（i）〜（iv）用いて計算される：
【００１８】
【数１】
2007523596.tif 000006
【００１９】
表３に記載のＳ１、Ｓ２、Ｓ３、Ｕ１、Ｕ２及びＵ３の値を用いることにより、分布係数αは下記の推論によって計算することができる。
【００２０】
ａ）トリ飽和ＴＡＧ種（ＳＳＳ）に関する式（i）中のＳ１、Ｓ２及びＳ３に表３に記載の対応する値を代入することによって次式（v）を得る：
【数２】
2007523596.tif 000007
【００２１】
式（i）を書き換えた式Ｓ１Ｓ２Ｓ３−１００００ＳＳＳ（％）＝０に式（v）のＳ１Ｓ２Ｓ３値を代入すると次式が得られる：
【数３】
2007523596.tif 000008
この式におけるαの値はａｘ２＋ｂｘ＋ｃ＝０の形式の二次方程式（ａ＝−ｂであるために、この方程式は簡単化される）の解として、次式から求めることができる：
【数４】
2007523596.tif 000009
【００２２】
上記の二次方程式において、ａ＝−９Ｓ２Ｓ２＋６ＳＳ２２−Ｓ２３であり、ｂ＝９Ｓ２Ｓ２−６ＳＳ２２＋Ｓ２３であり、ｃ＝１００００ＳＳＳ（％）であり、又、ＳＳＳ（％）は種子／油中のトリ飽和ＴＡＧの全量を示す。
【００２３】
ｂ）ジ飽和ＴＡＧ種（ＳＵＳ）に関する式（ii）中のＳ１、Ｓ２、Ｓ３、Ｕ１、Ｕ２及びＵ３に表３に記載の対応する値を代入することによって次式（vi）〜（viii）を得る：
【数５】
2007523596.tif 000010
【００２４】
式（ii）を書き換えた式（Ｕ１Ｓ２Ｓ３＋Ｓ１Ｕ２Ｓ３＋Ｓ１Ｓ２Ｕ３）−１００００ＳＵＳ（％）＝０に式（vi）、（vii）及び（viii）における対応する値をそれぞれ代入すると、αに関する二次方程式が得られる：
【数６】
2007523596.tif 000011
この式におけるαの値はａｘ２＋ｂｘ＋ｃ＝０の形式の二次方程式（ａ＝−ｂであるために、この方程式は簡単化される）の解として、次式から求めることができる：
【数７】
2007523596.tif 000012
【００２５】
上記の二次方程式において、ａ＝６００ＳＳ２−１８ＳＳ２２＋２７Ｓ２Ｓ２−９００Ｓ２−１００Ｓ２２＋３Ｓ２３であり、ｃ＝３００ＳＳ２−１００Ｓ２２−１００００ＳＵＳ（％）であり、又、ＳＵＳ（％）は種子／油中のジ飽和ＴＡＧの全量を示す。
【００２６】
ｃ）モノ不飽和ＴＡＧ種（ＳＵＵ）に関する式（iii）中のＳ１、Ｓ２、Ｓ３、Ｕ１、Ｕ２及びＵ３に表３に記載の対応する値を代入することによって次式（ix）〜（xi）を得る：
【数８】
2007523596.tif 000013
【００２７】
式（iii）を書き換えた式（Ｓ１Ｕ２Ｕ３＋Ｕ１Ｓ２Ｕ３＋Ｕ１Ｕ２Ｓ３）−１００００ＳＵＵ（％）＝０に式（ix）、（x）及び（xi）における対応する値をそれぞれ代入すると、αに関する二次方程式が得られる：
【数９】
2007523596.tif 000014
この式におけるαの値はａｘ２＋ｂｘ＋ｃ＝０の形式の二次方程式（ａ＝−ｂであるために、この方程式は簡単化される）の解として、次式から求めることができる：
【数１０】
2007523596.tif 000015
【００２８】
上記の二次方程式において、ａ＝−１２００ＳＳ２＋１８ＳＳ２２−２７Ｓ２Ｓ２＋１８００Ｓ２＋２００Ｓ２２−３Ｓ２３であり、ｃ＝−６００ＳＳ２＋２００Ｓ２２＋３００００Ｓ−１００００ＳＵＵ（％）であり、又、ＳＵＵ（％）は種子／油中のモノ飽和ＴＡＧの全量を示す。
【００２９】
ｄ）トリ不飽和ＴＡＧ種（ＵＵＵ）に関する式（iv）中のＵ１、Ｕ２及びＵ３に表３に記載の対応する値を代入することによって次式（xii）を得る：
【数１１】
2007523596.tif 000016
【００３０】
式（iv）を書き換えた式Ｕ１Ｕ２Ｕ３−１００００ＵＵＵ（％）＝０に式（xii）におけるＵ１Ｕ２Ｕ３の値を代入すると、αに関する二次方程式が得られる：
【数１２】
2007523596.tif 000017
この式におけるαの値はａｘ２＋ｂｘ＋ｃ＝０の形式の二次方程式（ａ＝−ｂであるために、この方程式は簡単化される）の解として、次式から求めることができる：
【数１３】
2007523596.tif 000018
【００３１】
上記の二次方程式において、ａ＝６００ＳＳ２−６ＳＳ２２＋９Ｓ２Ｓ２−９００Ｓ２−１００Ｓ２２＋Ｓ２３であり、ｃ＝３００ＳＳ２−１００Ｓ２２−３０００Ｓ＋１００００００−１００００ＵＵＵ（％）であり、又、ＵＵＵ（％）は種子／油中のトリ不飽和ＴＡＧの全量を示す。
【００３２】
ＴＡＧ種のＧＬＣによる測定における実験誤差による偏差を避けるために、ＳＳＳから計算されるα値（αＳＳＳ）、ＳＵＳから計算されるα値（αＳＵＳ）、ＳＵＵから計算されるα値（αＳＵＵ）及びＵＵＵから計算されるα値（αＵＵＵ）の加重平均値「αＳ」を次式によって定義した：
【数１４】
2007523596.tif 000019
【００３３】
トリグリセリド分子のｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の飽和脂肪酸のランダム分布においては、各々の飽和脂肪酸の５０％は各々の位置に存在すべきであり、この条件は、最大量のＳＵＳトリグリセリド分子（この場合、Ｓは飽和脂肪酸を示し、Ｕは不飽和脂肪酸を示す）を得るためには最適である。図２は、ヒマワリ油中の種々のＴＡＧ種の割合を示すもので、ｓｎ−１位とｓｎ−３位との間にランダム分布が発生すると、飽和脂肪酸が増加することが理解される。図２に示す曲線は、αの値を０．５とし、ｓｎ−２位のヒマワリ飽和脂肪酸の含有量としてはアルバレス−オルテガらによる文献（１９９７年）に記載の値を用いると共に、前記の式（i）、（ii）、（iii）及び（iv）における全飽和脂肪酸量の値を増加させることによって描いた曲線である。
【００３４】
油のα係数はＴＡＧ分子の３つのｓｎ位における脂肪酸組成を化学的に分析することによっても計算することができる。この分析は、ラークソとクリスティによって提案された方法（１９９０年）又はタカギとアンドウによって提案された方法（１９９１年）に従っておこなうことも可能である。又、これらの方法によれば、当該分子の３つの位置における脂肪酸の含有量を知ることはできるが、このためには多量の試料を必要とし、本発明に係る方法の場合のように、雑種種子のような少量の試料には適用できない。このような場合、当該式は次のように表される：
【数１５】
2007523596.tif 000020
【００３５】
本発明者は、実存するヒマワリ油に含まれるＴＡＧのこのような分布について検討した。予想されたように、得られたデータによれば次のことが判明した。即ち、飽和脂肪酸（Ｓ）は主として通常のヒマワリ油及び高飽和ヒマワリ油中のグリセロール分子のｓｎ−１位とｓｎ−３位に位置し、ｓｎ−２位には非常に少量の飽和脂肪酸が位置する。この位置おける主要な脂肪酸はオレイン酸とリノール酸であり、このことは予想された通りであり、又、アルバレス−オルテガらによるデータ（１９９７年）とも一致する。しかしながら、アシル基は、１，３−ランダム、２−ランダム理論（ウァンダー・ウァル、１９６０年）に従って分布しなかった。飽和脂肪酸（パルミチン酸、ステアリン酸）は均一には分布しなかった。これらの結果は従来のデータ（レスケら、１９９７年）、即ち、主としてステアリン酸の含有量が、市販のヒマワリの場合に比べて（４．８％）増加するときには（１１％）、飽和脂肪酸の位置はｓｎ−１位よりもｓｎ−３位のほうが優位になるということを示すデータと一致する。
【００３６】
ステアリン酸の含有量とオレイン酸／リノール酸比が異なるヒマワリ油における高オレイン酸から高リノール酸までのＴＡＧ分布を図３に示す。次のことが判明した。即ち、１，３−ランダム、２−ランダム理論を適用することによってｓｎ−２位の組成と全脂肪酸含有量の測定値に基づいて異なる飽和脂肪酸含有量に対して予測されたヒマワリのＴＡＧ種群（ＳＳＳ，ＳＵＳ，ＳＵＵ及びＵＵＵ）の理論値は、分析された種子において測定されたＴＡＧ組成とは異なる。ＴＡＧ組成はＧＬＣによって決定し、これらのＴＡＧ種のデータは不飽和度によって分類した（フェルナンデス−モヤら、２０００年）。
【００３７】
図３から明らかなように、ヒマワリの飽和脂肪酸はＴＡＧに関しては非対称分布を示し、ＳＵＵに対して得られる値は予測値よりも常に高く、又、ＳＵＳとＵＵＵに対して得られる値は、ｓｎ−１位とｓｎ−３位における非特異的分布によって予測される値よりも低くなる。
【００３８】
これらの結果は、ステアリン酸の含有量が高いヒマワリの突然変異体のＴＡＧ種［該種はリノール酸と１種の飽和脂肪酸を、１，３−ランダム、２−ランダム理論（フェルナンデス−モヤら、２０００年）による予測値よりも多く含有する］に関する従来の結果とも一致する。ＴＡＧ種のＳＵＵの増加とＵＵＵの減少は、油中のステアリン酸の全量と直接的な相関性があった。
【００３９】
対照及び高ステアリン酸突然変異体系統におけるｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の分布係数（α）の計算値を以下の表４に示す。表４から明らかなように、分布係数αは、リノール酸の含有量がオレイン酸の含有量よりも高い場合には常に０．１９〜０．３７の範囲にあり、一方、オレイン酸の含有量がリノール酸の含有量よりも高い場合には０．１５〜０．２７の範囲にある。従って、０．３８よりも高い分布係数を示すヒマワリ油が要請されている。
【００４０】
【表４】
2007523596.tif 000021
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００４１】
本発明は、全脂肪酸含有量に対してステアリン酸を少なくとも１２％（好ましくは、少なくとも２０％）のステアリン酸を含有するユマワリ種子から直接的に得られるヒマワリ油であって、ＴＡＧ分子のｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の飽和脂肪酸の分布係数αとして少なくとも０．３８（好ましくは、少なくとも０．４２，最も好ましくは、少なくとも０．４６）の値を示すヒマワリ油を提供するためになされたものである。
【００４２】
ハワワリ油中のオレイン酸の含有量がリノール酸の含有量よりも高くなると共に、全脂肪酸含有量に対するステアリン酸の含有量が少なくとも１２％（好ましくは少なくとも２０％）になると、ＴＡＧ分子のｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の飽和脂肪酸の分布係数αは少なくとも０．２８（好ましくは、少なくとも０．３２，最も好ましくは少なくとも０．３６）となる。
【００４３】
本発明は、上記の特性を有するヒマワリ種子から入手可能な内因性油を含有する種子を実らせるヒマワリ植物、及び該ヒマワリ植物によって生産されるヒマワリ種子を提供する。
【００４４】
本発明の別の目的は、全脂肪酸含有量に対して少なくとも１２％のステアリン酸を含有すると共に、ＴＡＧ分子のｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の飽和脂肪酸の分布係数αとして、オレイン酸の含有量がリノール酸の含有量よりも高いときに少なくとも０．３８又は０．２８の値を示す内因性油を含有する種子を実らせる植物の生育方法を提供することである。
【００４５】
本発明のさらに別の目的は、ｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の飽和脂肪酸の上記分布係数を示すと共に、その他の望ましい特性を有する雑種植物とその子孫を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００４６】
本発明は、全脂肪酸含有量に対して少なくとも１２％のステアリン酸を含有するヒマワリ種子から直接的に入手可能なヒマワリ油であって、ｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の飽和脂肪酸の分布係数αが少なくとも０．３８であること、及び該種子が下記の工程 ａ）〜 ｊ）を含む方法によって得られることを特徴とする該ヒマワリ油に関する：
ａ）油中の全脂肪酸含有量に対して少なくとも１２％のステアリン酸を含有する油を含む種子を供給し、
ｂ）０．３８よりも大きな分布係数αを示す油を含む種子を供給し、
ｃ）上記の工程 ａ）及び ｂ）で供給された種子から植物を生育させた後、該植物を交配させ、
ｄ）Ｆ１子孫種子を収穫し、
ｅ）Ｆ１子孫種子を蒔いて植物を生育させ、
ｆ）生育した植物を自家受粉させてＦ２種子を実らせ、
ｇ）得られるＦ２種子を、ステアリン酸の含有量が少なくとも１２％であると共に、分布係数αが少なくとも０．３８であるという条件を満たすかどうかを調べる試験に付し、
ｈ）ステアリン酸の含有量及び分布係数αが所望のレベルにある種子を蒔いて植物を生育させ、
ｉ）生育した植物を自家受粉させてＦ３種子を実らせ、
ｊ）随意に、ステアリン酸の含有量及び分布係数αが所望のレベルに固定されるまで上記の工程 ｇ）、ｈ）及び ｉ）を繰り返す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４７】
ｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の飽和脂肪酸の分布係数αは好ましくは少なくとも０．４２，より好ましくは少なくとも０．４６である。
【００４８】
さらに本発明は、全脂肪酸含有量に対して少なくとも１２％のステアリン酸を含有するヒマワリ種子から直接的に入手されるヒマワリ油であって、該油中のオレイン酸の含有量がリノール酸の含有量よりも高いときに、ｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の飽和脂肪酸の分布係数αが少なくとも０．２８であること、及び該種子が下記の工程 ａ）〜 ｊ）を含む方法によって得られることを特徴とする該ヒマワリ油に関する：
ａ）油中の全脂肪酸含有量に対して少なくとも１２％のステアリン酸を含有すると共にリノール酸よりもオレイン酸を多く含有する油を含む種子を供給し、
ｂ）０．３８よりも大きな分布係数αを示す油を含む種子を供給し、
ｃ）上記の工程 ａ）及び ｂ）で供給された種子から植物を生育させた後、該植物を交配させ、
ｄ）Ｆ１子孫種子を収穫し、
ｅ）Ｆ１子孫種子を蒔いて植物を生育させ、
ｆ）生育した植物を自家受粉させてＦ２種子を実らせ、
ｇ）得られるＦ２種子を、ステアリン酸の含有量が少なくとも１２％であると共にオレイン酸の含有量がリノール酸の含有量よりも高く、分布係数αが少なくとも０．２８であるという条件を満たすかどうかを調べる試験に付し、
ｈ）ステアリン酸、オレイン酸及びリノール酸の含有量並びに分布係数αが所望のレベルにある種子を蒔いて植物を生育させ、
ｉ）生育した植物を自家受粉させてＦ３種子を実らせ、
ｊ）随意に、ステアリン酸、オレイン酸及びリノール酸の含有量並びに分布係数αが所望のレベルに固定されるまで上記の工程 ｇ）、ｈ）及び ｉ）を繰り返す。
【００４９】
好ましくは、ｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の分布係数αは少なくとも０．３２、より好ましくは少なくとも０．３６である。
【００５０】
本発明は、前記の内因性油を含有する種子から生育されるヒマワリ植物及び該植物によって生産される種子にも関する。
【００５１】
さらにまた、本発明は、全脂肪酸含有量に対して少なくとも１２％のステアリン酸を含有すると共に、ｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の飽和脂肪酸の分布係数αとして少なくとも０．３８を示す内因性油を含む種子を実らせる植物の生育方法であって、下記の工程 ａ）〜ｊ）を含む該生育方法にも関する：
ａ）油中の全脂肪酸含有量に対して少なくとも１２％のステアリン酸を含有する油を含む種子を供給し、
ｂ）０．３８よりも大きな分布係数αを示す油を含む種子を供給し、
ｃ）上記の工程 ａ）及び ｂ）で供給された種子から植物を生育させた後、該植物を交配させ、
ｄ）Ｆ１子孫種子を収穫し、
ｅ）Ｆ１子孫種子を蒔いて植物を生育させ、
ｆ）生育した植物を自家受粉させてＦ２種子を実らせ、
ｇ）得られるＦ２種子を、ステアリン酸の含有量が少なくとも１２％であると共に、分布係数αが少なくとも０．３８であるという条件を満たすかどうかを調べる試験に付し、
ｈ）ステアリン酸の含有量及び分布係数αが所望のレベルにある種子を蒔いて植物を生育させ、
ｉ）生育した植物を自家受粉させてＦ３種子を実らせ、
ｊ）随意に、ステアリン酸の含有量及び分布係数αが所望のレベルに固定されるまで上記の工程 ｇ）、ｈ）及び ｉ）を繰り返す。
【００５２】
ステアリン酸を少なくとも１２％含有する油を含む種子は、下記の工程 ａ）〜 ｄ）を含む方法によって生産される：
ａ）ステアリン酸の含有量が１２％未満であるヒマワリの種子を突然変異誘発剤（特に、アジ化ナトリウム）又はアルキル化剤（特に、エチルメタンスルホネート）で処理し、
ｂ）処理した種子から植物を生育させた後、受粉をおこなって種子を生産させ、
ｃ）得られる種子が所望のステアリン酸含有量を示すかどうかを試験し、
ｄ）随意に、上記の工程 ｂ）及び ｃ）を繰り返す。
【００５３】
ｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の飽和脂肪酸の分布係数αとして少なくとも０．３８を示す油を含有する種子は、下記の工程 ａ）〜 ｄ）を含む方法によって生産される：
ａ）０．３８よりも小さな分布係数αを示すヒマワリ種子を突然変異誘発剤（特に、アジ化ナトリウム）又はアルキル化剤（特に、エチルメタンスルホネート）で処理し、
ｂ）処理した種子から植物を生育させた後、該植物の受粉をおこなって種子を生産させ、
ｃ）得られる種子が所望の分布係数α値を示すかどうかを試験し、
ｄ）随意に、上記の工程 ｂ）及び ｃ）を繰り返す。
【００５４】
本発明の別の実施態様においては、本発明は、全脂肪酸含有量に対してステアリン酸を少なくとも１２％含有すると共に、リノール酸よりもオレイン酸を多く含有し、さらに、ｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の分布係数αとして少なくとも０．２８を示す内因性油を含む種子を実らせる植物の生育方法であって、下記の工程 ａ）〜 ｊ）を含む該生育方法に関する：
ａ）油中の全脂肪酸含有量に対して少なくとも１２％のステアリン酸を含有すると共に、リノール酸よりもオレイン酸を多く含有する油を含む種子を供給し、
ｂ）０．２８よりも大きな分布係数αを示す油を含む種子を供給し、
ｃ）上記の工程 ａ）及び ｂ）で供給された種子から生育させた植物を交配させ、
ｄ）Ｆ１子孫種子を収穫し、
ｅ）Ｆ１子孫種子を蒔いて植物を生育させ、
ｆ）生育した植物を自家受粉させてＦ２種子を実らせ、
ｇ）得られるＦ２種子を、ステアリン酸の含有量が少なくとも１２％であると共にオレイン酸の含有量がリノール酸の含有量よりも高く、さらに分布係数αが少なくとも０．２８であるという条件を満たすかどうかを調べる試験に付し、
ｈ）ステアリン酸、オレイン酸及びリノール酸の含有量並びに分布係数αが所望のレベルにある種子を蒔いて植物を生育させ、
ｉ）生育した植物を自家受粉させてＦ３種子を実らせ、
ｊ）随意に、ステアリン酸、オレイン酸及びリノール酸の含有量並びに分布係数αが所望のレベルに固定されるまで上記の工程 ｇ）、ｈ）及び ｉ）を繰り返す。
【００５５】
ステアリン酸を少なくとも１２％含有する油を含む種子は、下記の工程 ａ）〜 ｊ）を含む方法によって得ることができる：
ａ）少なくとも１２％のステアリン酸を含有するヒマワリの種子を突然変異誘発剤（特に、アジ化ナトリウム）又はアルキル化剤（特に、エチルメタンスルホネート）で処理し、
ｂ）処理した種子から植物を生育させた後、該植物の受粉によって種子を実らせ、
ｃ）得られる種子を、所望のステアリン酸含有量を有するかどうかを調べる試験に付し、
ｄ）リノール酸よりもオレイン酸を多く含有する油を含む種子を供給し、
ｅ）工程 ｃ）の試験に合格した種子から生育させた植物及び工程 ｄ）で供給された種子から生育させた植物を交配させ、
ｆ）Ｆ１子孫種子を収穫し、
ｇ）得られた種子から植物を生育させた後、該植物の自家受粉によってＦ２種子を実らせ、
ｈ）得られた種子を、ステアリン酸の含有量が少なくとも１２％であると共にオレイン酸の含有量がリノール酸の含有量よりも高いという条件を満たすかどうかを調べる試験に付し、
ｉ）ステアリン酸、オレイン酸及びリノール酸の含有量が所望のレベルにある種子を蒔いて植物を生育させ、
ｊ）生育した植物を自家受粉させてＦ３種子を実らせ、
ｋ）随意に、ステアリン酸、オレイン酸及びリノール酸の含有量が所望のレベルに固定されるまで上記の工程 ｈ）、ｉ）及び ｊ）を繰り返す。
【００５６】
ｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の飽和脂肪酸の分布係数αとして少なくとも０．３８を示す油を含有する種子は、下記の工程 ａ）〜 ｄ）を含む方法によって得られる：
ａ）０．３８よりも小さな分布係数α値を示すヒマワリの種子を突然変異誘発剤（特に、アジ化ナトリウム）又はアルキル化剤（特に、エチルメタンスルホネート）で処理し、
ｂ）処理した種子から植物を生育させた後、該植物の受粉をおこなって種子を実らせ、
ｃ）得られる種子を、所望の分布係数α値を示すかどうかを調べる試験に付し、
ｄ）随意に、上記の工程 ｂ）及び ｃ）を繰り返す。
【００５７】
本発明は、上記の方法によってもたらされる第一の親植物及び所望の特性を有する第二の親植物を交配させることによって得られる雑種植物、並びに該雑種植物の子孫にも関する。第二の親植物は、上記の方法によって得られる植物であってもよい。
【００５８】
本発明は、食料品の製造における上記油の使用及び該油を用いて調製される食料品若しくは該油を含有する食料品にも関する。
【００５９】
さらにまた、本発明は、従来のヒマワリ系統の場合よりも優れたα分布を示す新規なタイプのヒマワリの突然変異体にも関する。従って、該突然変異体は、現在入手し得る系統と比較した場合、マーガリンやスプレッド等の製造において、より優れた特性を発揮する油をもたらす（図３参照）。マーガリンを製造するための最良のトリグリセリドは飽和−不飽和−飽和型（ＳＵＳ）のもの、特に飽和−オレイン酸不飽和−飽和型（ＳＯＳ）のトリグリセリドである。
【００６０】
上記の技術的方法によって得られる新規な突然変異体系統（ＣＡＳ−３６と命名された）はＡＴＣＣに寄託されており、その登録番号はＰＴＡ−５０４１である。この突然変異体は、ランダム理論による最良のＴＡＧ分布を示す。一部のＣＡＳ−３６植物の種子から得られた油に関するデータを以下の表５に示す。
【００６１】
【表５】
2007523596.tif 000022
【００６２】
米国特許第６４７５５４８号明細書には、国際公報ＷＯ９５／２０３１３号に記載された未処理油から調製した対照となるスプレッド製品及び国際公報ＷＯ９５／２０３１３号に開示された油のステアリン留分から調製したマーガリンを比較したデータが記載されている。ステアリン留分から調製したスプレッドは、冷蔵庫の温度に近い温度における良好な塗布性、口腔内での適度な融解性及び安定性を示した。この種の脂肪ブレンドが、水素化脂肪のような非天然成分を含有しない既知の高品質脂肪配合物の性能と類似の性能を示すことは明らかである。
【００６３】
スプレッドの調製時の問題点を解決するために、ステアリン留分をスプレッドの脂肪相中へ添加できることは明らかである。例えば、米国特許第４４３８１４９号明細書には、バター脂肪を７０％未満含有する脂肪相を用いてスプレッドを調製することが記載されている。この製品は過度に柔らかいコンシステンシーを示す。しかしながら、脂肪のステアリン留分を使用すると、低コストで、塗布性のより高い製品が得られた。米国特許第６４７５５４８号明細書には、液状植物油又はスプレッドを製造するのに適したトリグリセリド脂肪の調製法が教示されている。トリグリセリド脂肪のこの調製法においては、少なくとも１２重量％のステアリン酸残基と少なくとも４０重量％のオレイン酸残基を含む高ステアリン高オレインヒマワリ油（ＨＳＨＯＳＦ）を湿式精留若しくは乾式精留に付した後、ステアリン留分を捕集して得られたものが使用されている。さらに、上記の特許明細書には、脂肪ブレンドのステアリン留分が、出発原料であるＨＳＨＯＳＦを精留の標準的条件下での湿式精留若しくは乾式精留に付すことによって得られることが教示されている。３０重量％よりも多くのＳＵＳトリグリセリドと４０重量％よりも少ないＳＵＵトリグリセリドを含有する留分を捕集すべきであり、又、固体状脂肪の最初の２５重量％が結晶化したときに精留を停止すべきである。
【００６４】
本発明は、ＨＳＨＯＳＦを湿式精留若しくは乾式精留に付した後にステアリン留分を捕集することによるトリグリセリド脂肪の製造方法においても適用することができる。特に、全脂肪酸含有量に対して少なくとも１２％のステアリン酸を含有するＨＳＨＯＳＦを用いるトリグリセリド脂肪の製造法の特徴は、ｓｎ−１位とｓｎ−３位との間の脂肪酸の分布係数αが少なくとも０．２８である該ヒマワリ油を湿式精留若しくは乾式精留に付してステアリン留分を捕集する点にある。
【００６５】
図１は、トリグリセリドの生合成経路を模式的に示す。
図２は、α値が０．５のときに飽和脂肪酸含有量を増加させた場合のヒマワリＴＡＧ種の理論的分布を示すグラフである。各ＴＡＧ種に対する凡例は図中に示す。
図３は、オレイン酸とステアリン酸の含有量が高い形質を分離する種子中のトリグリセリド（ＴＡＧ）の分布と飽和脂肪酸の含有量との関係を示すグラフである。理論的分布（対照）は曲線で示し、種々の油試料の分布は符号で示す。この場合の各ＴＡＧ種に対する凡例は図中に示す。
【実施例】
【００６６】
本発明を以下の実施例によってさらに説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。
【００６７】
前置き
本発明は、異なるトリグリセリド分子種における飽和脂肪酸の分布が野生型の種子の場合に比べて改良されたヒマワリ種子の生産方法に関する。この方法には、トリグリセリドの生合成に含まれる遺伝子形質中に１又は複数の突然変異体を誘発するのに十分な時間にわたって十分な濃度の突然変異誘発剤を用いて親種子を処理する工程が含まれる。この方法によって、ＳＵＳ型のトリグリセリド種の生産が増大すると共に、ＳＵＵ型のものが低減する。この種の突然変異誘発剤としては、アジ化ナトリウム及びアルキル化剤（例えば、エチルメタンスルホネート等）が例示されるが、これらの誘発剤と同様又は類似の効果をもたらすその他の突然変異誘発剤を使用してもよい。
【００６８】
これらの突然変異させた種子を発芽させた後、子孫を発生させる。系統（line）中の形質を増加させるために、子孫を交配又は自己増殖させる。子孫の種子を集めて分析する。無秩序若しくはほとんど無秩序なトリグリセリド形質を有する種子を交配によって他の系統へ変換させ、形質を転移させる。所望により、系統中の形質の同型接合性を固定させるために、発芽、栽培及び自己増殖をおこなう付加的なサイクルを実施し、交配をおこなって種子を集める。
【００６９】
実施例１においては、突然変異誘発剤としてエチルメタンスルホネートを使用した。０．４よりも高いα値を示すヒマワリ系統が得られた。突然変異させた元のヒマワリの親系統はＣＡＳ−１０である。この系統は、サンフラワー・コレクション・オブ・インスチツト・デラグラサ、ＣＳＩＣ（セルビヤ、スペイン）から入手したものである。この系統の油のα値は０．３８よりも小さい。ここで使用した高オレイン酸物質は、ロシアの研究者によって研究開発されたオレイン酸系統（α値：０．１５〜０．２７）から誘導した（シャルダトフ、１９７６年）。
【００７０】
ここで使用したオレイン酸とステアリン酸の含有量の高い物質は、高オレイン酸系統と突然変異体ＣＡＳ−３（ＡＴＣＣに登録番号７７５９６８で寄託されている突然変異体）との交配物から、次の特許文献に記載の方法に従って選択することによって誘導した：ＷＯ−００７４４７０（発明の名称：オレイン酸とステアリン酸の含有量の高い植物、種子及び油）。以下の実施例においては、オレイン酸よりもリノール酸の含有量が高いか、又はリノール酸よりもオレイン酸の量が高い油であって、α値の高い油をもたらす植物の生育方法を記載した。
【００７１】
実施例１
種子を、エチルメタンスルホネート（ＥＭＳ）の７０ｍＭ水溶液を用いる突然変異処理に付した。この処理は、室温で振盪させながら２時間おこなった（６０ｒｐｍ）。この突然変異処理の終了後、ＥＭＳ溶液を廃棄し、次いで処理した種子を水道水のもとで１６時間洗浄した。
【００７２】
処理した種子を畑で発芽させ、生育した植物を自家受粉させた。収穫した植物から集めた種子を使用して、トリグリセリド分布の点で改良された新規なヒマワリ系統を選択した。Ｒ．ガルセス及びＭ．マンチャによる方法（１９９３年）を利用する種子の脂肪酸組成並びにフェルナンデス−モヤらによる方法（２０００年）を利用するトリグリセリド組成は、気液クロマトグラフィーによって決定した。
【００７３】
０．４２のα値を示す第１植物を選択した。子孫を５世代にわたって栽培したところ、α値は増加し、新規な遺伝子形質は種子の遺伝子物質中において安定に固定された。この系統はＣＡＳ−３６と命名され、そのリノール酸の含有量はオレイン酸の含有量よりも高い。α値の最小値及び最大値はそれぞれ０．３８及び０．５である。
【００７４】
以下の表６には、数種類のＣＡＳ−３６植物から得られた種子の分析データの一部及び提案されている式に従ってα値を計算するために必要なデータを示す。
【００７５】
【表６】
2007523596.tif 000023
【００７６】
実施例２
表２に示したものに類似するオレイン酸とステアリン酸の含有量の高い系統のヒマワリ種子からヒマワリ植物を生育させた。ヒマワリ種子「ＣＡＳ−３６」からもヒマワリ植物を生育させた。これらの系統を交配させた。十分な量の種子を収穫するために、これらの植物の受粉は、人工受粉によって促進させた。オレイン酸とステアリン酸の含有量が高い系統（又は、これと逆の系統）からＦ１種子を生産させ、該種子を収穫した。α値が０．２８よりも高く、ステアリン酸の量が高くて、オレイン酸の量がリノール酸よりも高いＦ２種子を選択した。これによって本発明による油を得ることはできるが、その生産量は制限される。従って、これらのα値を示す種子を確実にもたらす固定した同系交配系統が望ましい。
【００７７】
オレイン酸とステアリン酸の含有量が高いこの種の同型の固定同系交配系統を交配させることによって、雑種種子（hybrid seed）を生産させることができ、該雑種種子は、本発明による所望の油の形質を確実にもたらすＦ２種子を生産する。このためには、Ｆ１種子を蒔いて植物を生育させた後、隔離した条件下で自家受粉させることによってＦ２種子を生産させる。Ｆ２種子は、α値に関する試験に供した。上記形質を確実に示すこの種の種子の残余のサンプルを用いて植物を生育させることによってＦ３種子を実らせた。自家受粉過程、スクリーニング過程及び選択過程を繰り返すことによって、全ての系統が０．２８よりも高いα値であって、０．５若しくはほぼ０．５に近いα値を示す固定された同型系統がもたらされる。
【００７８】
形質が固定されるならば、類似の高オレイン酸系統を交配させることによって、以下の表７に示すような形質を有する雑種種子を生産させることができる。本発明によれば、上記の油を抽出することができるヒマワリの植物と種子は生物工学的方法を用いることによって得られた。上記のα値は遺伝される形質であって、生育条件によって左右されない。
【００７９】
【表７】
2007523596.tif 000024
【００８０】
実施例３
表２に示したようなリノール酸とステアリン酸の含有量の高い系統、例えばＣＡＳ−３、ＣＡＳ−３０又はその他のリノール酸とステアリン酸の含有量の高い系統のヒマワリ種子からヒマワリ植物を生育させた。ヒマワリ種子「ＣＡＳ−３６」からもヒマワリ植物を生育させた。これらの系統を交配させた。十分な量の種子を収穫するために、これらの植物の受粉は、人工受粉によって促進させた。リノール酸とステアリン酸の含有量が高い系統（又は、これと逆の系統）からＦ１種子を生産させ、該種子を収穫した。α値が０．３８よりも高く、ステアリン酸の量が高くて、リノール酸の量がオレイン酸よりも高いＦ２種子を選択した。
【００８１】
これによって本発明による油を得ることはできるが、その生産量は制限される。従って、これらのα値を示す種子を確実にもたらす固定した同系交配系統が望ましい。オレイン酸とステアリン酸の含有量が高いこの種の同型の固定同系交配系統を交配させることによって雑種種子を生産させることができ、該雑種種子は、本発明による所望の油の形質を確実にもたらすＦ２種子を生産する。このためには、Ｆ１種子を蒔いて植物を生育させた後、隔離した条件下で自家受粉させることによってＦ２種子を生産させる。Ｆ２種子は、α値に関する試験に供した。
【００８２】
上記形質を確実に示すこの種の種子の残余のサンプルを用いて植物を生育させることによってＦ３種子を実らせた。自家受粉過程、スクリーニング過程及び選択過程を繰り返すことによって、全ての系統が０．３８よりも高いα値であって、０．５若しくはほぼ０．５に近いα値を示す固定された同型系統がもたらされる。
【００８３】
形質が固定されるならば、リノール酸とステアリン酸の含有量の高い類似系統を交配させることによって、以下の表８に示すような形質を有する雑種種子を生産させることができる。本発明によれば、上記の油を抽出することができるヒマワリの植物と種子は生物工学的方法を用いることによって得られた。上記のα値は遺伝される形質であって、生育条件によって左右されない。
【００８４】
【表８】
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【００８５】
引用文献のリスト
１．Ｒ．アルベレス−オルテガ、Ｓ．カルチサン、Ｅ．マルチネス−フォルセ及びＲ．ガルセス、（１９９７年）、「高飽和脂肪酸ヒマワリ突然変異体からの極性又は非極性種子脂質群の特性決定」、リピド、第３２巻、第８３３頁〜第８３７頁
２．Ｃ．Ｋ．チョウ（１９９２年）、「食品中の脂肪酸とその健康への影響」、マーセル・デッカー、ニューヨーク
３．Ｖ．フェルナンデス−モヤ、Ｅ．マルチネス−フォルセ、及びＲ．ガルセス（２０００年）、「高飽和ヒマワリ（ヘリアンサス・アンヌウス）突然変異体からのトリアシルグリセロール種の同定」、Agric. Food Chem.、第４８巻、第７６４頁〜第７６９頁
４．Ｒ．ガルセス及びＭ．マンチャ（１９９３年）、「新鮮な植物組織からの脂質の１段階抽出及び脂肪酸メチルエステルの調製」、Anal. Biochem.、第２１１巻、第１３９頁〜第１４３頁
５．Ｆ．Ｄ．ガンストーン、Ｊ．Ｌ．ハワード及びＦ．Ｂ．パドレイ（１９９４年）、ザ・リピド・ハンドブック、チャップマン＆ホール（ロンドン）
６．Ｐ．ラークソ及びＷ．Ｗ．クリストル（１９９０年）、「キラルジアシルグリセロール誘導体のクロマトグラフィー解析：トリアシル−ｓｎ−グリセロールの立体特異的解析における可能性」、リピド、第２５巻、第３４９頁〜第３５３頁
７．Ｊ．オソリオ、Ｊ．フェルナンデス−マルチネス、Ｍ．マンカ及びＲ．ガルセス（１９９５年）、「油中に飽和脂肪酸を高濃度で含有する突然変異体ヒマワリ」、Crop Sci.、第３５巻、第７３９頁〜第７４２頁
８．Ｊ．レスケ、Ｊ．ジーブレヒト及びＪ．ハゼブレッド（１９９７年）、「遺伝的に変性されたヒマワリ油と大豆油におけるトリアシルグリセロールの組成と構造」、J. Am. Oil Chem. Soc.、第７４巻、第９８９頁〜第９９８頁
９．Ｔ．タカギ及びＹ．アンドウ（１９９１年）、「キラルＨＰＬＣによるトリアシル−ｓん−グリセロールの立体特異的分析」、リピド、第２６巻、第５４２頁〜第５４７頁
１０．Ｒ．Ｊ．ファンデアワール（１９６０年）、「膵臓リパーゼ加水分解ノ「データに基づく脂肪中の飽和及び不飽和アシル基の分布の計算」、J. Am. Oil Chem. Soc.、第３７巻、第１８頁〜第２０頁
１１．Ｋ．Ｔ．ソルダトフ（１９７６年）、「ヒマワリの品種改良における化学的突然変異誘発性」、第３５２頁〜第３５７頁、In： Proc.、第７版、国際ヒマワリ協会、フラールディンゲン（オランダ）
【図面の簡単な説明】
【００８６】
【図１】トリグリセリドの生合成経路を示す模式図である。
【図２】ヒマワリ油中の飽和脂肪酸の量とＴＡＧ種の量との関係を示す理論的なグラフである。
【図３】ステアリン酸の含有量とオレイン酸／リノール酸比が異なるヒマワリ油における高オレイン酸から高リノール酸までのＴＡＧ分布を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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