(57)【要約】【解決手段】  本発明は、細胞外基質（ＥＣＭ）と治療剤を備えているグラフト材料に着眼している。本発明は、患者身体の損傷又は病変のある組織を治癒するために当該グラフト材料を使用する方法にも着眼している。【選択図】      図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞外基質（ＥＣＭ）と、
少なくとも１つの治療剤と、を備えているグラフト材料。
【請求項２】
前記ＥＣＭは細胞外膠原基質である、請求項１に記載のグラフト材料。
【請求項３】
前記細胞外膠原基質は、コラーゲン、グリコプロテイン、プロテオグリカン、及びグリコサミノグリカンを含んでいる、請求項２に記載のグラフト材料。
【請求項４】
前記ＥＣＭは、小腸粘膜下組織、無細胞真皮、死体筋膜、膀胱無細胞基質、及び羊膜から成る群より選択される、請求項１に記載のグラフト材料。
【請求項５】
前記ＥＣＭは、小腸粘膜下組織である、請求項４に記載のグラフト材料。
【請求項６】
前記小腸粘膜下組織は流動化している、請求項５に記載のグラフト材料。
【請求項７】
前記治療剤は、成長因子、抗生剤、抗ウイルス剤、鎮痛剤、ステロイド系抗炎症剤、非ステロイド系抗炎症剤、抗新生物剤、鎮痙剤、細胞−細胞外基質相互作用モジュレータ、酵素及び酵素阻害物質、抗凝固剤及び／又は抗血栓剤、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡ又はＲＮＡ又はタンパク質合成阻害物質、ポリペプチド、細胞の移動を調整する化合物、増殖と成長を調整する化合物、及び血管拡張剤から成る群より選択される、請求項１に記載のグラフト材料。
【請求項８】
少なくとも２つの治療剤が含まれている、請求項１に記載のグラフト材料。
【請求項９】
前記治療剤は、抗生物質、抗ウィルス剤、及び抗真菌剤である、請求項８に記載のグラフト材料。
【請求項１０】
前記治療剤は、ペニシリン、セファロスポリン、サイクロセリン、バンコマイシン、イミダゾール抗真菌剤、ポリミキシン、アンホテリシンＢ、クロラムフェニコール、テトラサイクリン、リファンピン、エリスロマイシン、クリンダマイシン、リファマイシン、キノロン、スルホンアミド、ジドブジン、アシクロビル、及びミノサイクリンから成る群より選択される、請求項９に記載のグラフト材料。
【請求項１１】
前記少なくとも１つの治療剤は、時間経過に伴い必要に応じて組織に放出される、請求項１に記載のグラフト材料。
【請求項１２】
補助剤を更に含んでいる、請求項１に記載のグラフト材料。
【請求項１３】
添加物を更に含んでいる、請求項１に記載のグラフト材料。
【請求項１４】
前記添加物は、安定剤、増量剤、抗酸化剤、触媒、可塑剤、顔料、及び潤滑剤から成る群より選択される、請求項１３に記載のグラフト材料。
【請求項１５】
組織の治療を促進するための方法において、
治療を要する組織を、細胞外基質（ＥＣＭ）と少なくとも１つの治療剤とを含んでいるグラフト材料とともに接触させる段階、を含んでいる方法。  
【請求項１６】
前記組織は皮膚である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＥＣＭは、小腸粘膜下組織、無細胞皮膚、死体筋膜、膀胱無細胞基質、及び羊膜から成る群より選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＥＣＭは、小腸粘膜下組織である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記小腸粘膜下組織は流動化している、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記治療剤は、成長因子、抗生剤、抗ウイルス剤、ステロイド系抗炎症剤、非ステロイド系抗炎症剤、抗新生物剤、鎮痙剤、細胞−細胞外基質相互作用モジュレータ、酵素及び酵素阻害物質、抗凝固剤及び／又は抗血栓剤、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡ又はＲＮＡ又はタンパク質合成阻害物質、ポリペプチド、細胞の移動を調整する化合物、増殖と成長を調整する化合物、及び血管拡張剤から成る群より選択される、請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞外基質（ＥＣＭ）と治療薬を備えているグラフト材料に着眼している。本発明は、患者身体の損傷又は病変のある組織を治癒するためのグラフト材料の使用方法にも着眼している。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．第１１９条（ｅ）に基づき、２００４年３月３１日出願の米国仮特許出願第６０／５５８，１７５号の恩典を主張すると共に、同仮特許出願を参考文献として本願に援用する。
【０００３】
慢性的又は一時的な創傷を効果的に治すのに不適切な方法及び組成は、保健医療上深刻な問題である。創傷の治癒が巧く行かないと、死亡及び病的状態に陥る可能性が高まる。皮膚の創傷は、皮膚に対する最小限の直接的外傷により生じる、連続した体組織における裂け目と定義される。創傷を被った皮膚が迅速に閉じることが、有効な反応を促進する。
【０００４】
皮膚に対する最も一般的な外傷の１つに熱傷がある。熱傷は、表皮並びに深層の皮膚及び皮下組織の破壊を引き起こす。熱傷を受けた面積が広範に及んでおらず且つ汚染されていなければ、上記組織の殆どは自然な治癒反応により再生することができる。米国では、熱傷は年間２００万件を越える傷害の原因であり、重度の熱傷傷害が原因で毎年１万人以上が死亡している。
【０００５】
糖尿病患者では、重症で生命を脅かすほどの創傷が体の四肢によく見受けられる。慢性糖尿病による足の潰瘍が原因で切断に到ることも多い。そのような創傷の効果的な治療が求められている。
【０００６】
傷害を被った組織及び器官の効果的な修復と再生は、細胞浸潤と代謝支援に必要な血流の早期確立にかかっていることは知られている。損傷又は病変のある組織に置換するために設計される生体材料は、細胞が中に入り込める支持体（すなわち、スカフォード(scaffold)）として機能し、上記必要とされる供給を確立せねばならない（Han ZC 並びに Liu Y, Int. J. Hematol. (１９９９年)）。
【０００７】
これまで、１つの取り組み方として、合成誘導生体適合性ポリマーのスカフォード(scaffold)を、組織及び修復と再生のためのバックボーンとして機能させて、損傷又は病変のある組織を治療する方法があった。それら合成ポリマー・スカフォードは頑丈で、その後の沈着が進むと所定の速度で分解する（又は全く分解しない）ように作ることができる。また、これらの合成スカフォードは、置換対象の天然組織の材料特性を真似て設計される。しかしながら、合成スカフォードを使用する場合、しばしば幾つかの臨床学的合併症に遭遇することになる。
【０００８】
これらの合併症ために、別の取り組み法として、ホスト細胞の成長支援として動物組織から入手した無傷の細胞外基質（ＥＣＭ）を活用して組織の修復と再生を図るという方法もあった。
【０００９】
Badylak他（Badylak他、心臓外科フォーラム#2002-72222 6(2)（２００３年））は、心筋組織の修復に関連してブタＥＣＭスカフォードの使用について研究を行った。Badylak他は、膀胱粘膜下組織（ＵＢＭ）及び小腸粘膜下組織−ＥＣＭ（ＳＩＳ−ＥＣＭ）スカフォードは、共に、外科的移植後に完全に吸収され、心筋、線維性結合組織、脂肪性結合組織、及び軟骨性結合組織を含む結合組織の混合体に置換されることを見い出した。
【００１０】
Bilbo（ＷＯ０２／２２１８４号）は、天然組織である腸コラーゲン（ＩＣＬ）由来の加工された組織基質から作られた、移植対象の患者又はホストとの生体適合性を有する、組織工学による多層人工器官を教示している。
【００１１】
温血脊椎動物の腸の粘膜下組織膜を含む組成物は、組織グラフト材料として使用することができる。その様な組織グラフト組成物は、高い破裂圧力を含む優れた機械的性質と有効間隙率を特徴としており、このおかげで、それら組成物は、血管グラフト並びに結合組織グラフト構造体として有効に使用することができる。そのような用途に使用される場合、グラフト構造体は、グラフト構造体で置換された組織を再成長させる基質として働くのみならず、内生組織のそのような再成長を促進又は誘導する。この改造過程の一般的な事象には、広範に及ぶ迅速な新血管形成、肉芽間葉細胞の増殖、移植された腸の粘膜下組織材料の生分解／再吸収、及び免疫拒絶の無いこと、が含まれる。
【００１２】
患者身体の傷害又は病変のある組織を治癒するための新奇なグラフト材料とそれらグラフト材料を使用する方法を、ここで提案している。
【特許文献１】米国仮特許出願第６０／５５８，１７５号
【特許文献２】国際特許ＷＯ０２／２２１８４号
【特許文献３】国際特許ＷＯ０３／０２１６５号
【特許文献４】米国特許第６，３７９，７１０号
【特許文献５】米国特許第４，５０２，１５９号
【特許文献６】国際特許ＷＯ０４／２２１０７号
【特許文献７】米国特許第６，２０６，９３１号
【特許文献８】米国特許第６，３５８，２８４号
【特許文献９】米国特許第６，６６６，８９２号
【特許文献１０】ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ９７／２２７２７号に基づくＷＯ９８／２５６３７号
【特許文献１１】ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ９７／２２７２９号に基づくＷＯ９８／２６２９１号
【特許文献１２】ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ９７／２３０１０号に基づくＷＯ９８／２５６３６号
【特許文献１３】米国特許第５，５５４，３８９号
【特許文献１４】米国特許第４，９０２，５０８号
【特許文献１５】米国特許出願第０８／９１６，４９０号
【特許文献１６】米国特許第５，７３３，３３７号
【特許文献１７】ＰＣＴ出願／ＵＳ９７／１４８５５号に基づくＷＯ９８／２２１５８号
【特許文献１８】米国特許出願公開番号第２００４０１８００４２号
【特許文献１９】米国特許第５，２８１，４２２号
【特許文献２０】米国特許第５，２７５，８２６号
【特許文献２１】米国特許第５，５１６，５３３号
【特許文献２２】米国特許第６，２６４，９９２号
【特許文献２３】米国特許第２，１２７，９０３号
【特許文献２４】米国特許第５，７１１，９６９号
【特許文献２５】米国特許出願第０８／９１６，４９０号
【特許文献２６】米国特許第６，３５８，２８４号
【特許文献２７】米国特許第５，１７６，９９６号
【特許文献２８】米国特許第５，２６４，５６４号
【特許文献２９】米国特許第５，２５６，７７５号
【特許文献３０】米国特許第５，２０８，０３６号
【特許文献３１】ＰＣＴ出願番号第ＷＯ９６／２０６９８号
【非特許文献１】Han ZC 並びに Liu Y, Int. J. Hematol.(１９９９年)
【非特許文献２】Badylak他、心臓外科フォーラム#2002-72222 6(2)（２００３年）
【非特許文献３】HoddeJ.,組織工学8(2);295-308（２００２年）
【非特許文献４】１７ネイチャーバイオテクノロジー誌１０８３（１９９９年１１月）
【非特許文献５】Medalie他、ASAIO J.42:M455(１９９６年)
【非特許文献６】Isch他、J. Pediatr. Surg. 36:266(２００１年)
【非特許文献７】Chaplin他、Newrosurgery 45:320(１９９９年)
【非特許文献８】Inoue並びにLleon, J. Reconstr. Microsurg. 12:307（１９９６年）
【非特許文献９】Walden他、Ann. Plast. Surg. 45:162（２０００年）
【非特許文献１０】Dalla他、J. Pediatr. Surg. 45:162（２０００年）
【非特許文献１１】Medalie他ASAIO J. 42:M455（１９９６年）
【非特許文献１２】Carbone他、J. Urol. 165:1605（２００１年）
【非特許文献１３】Meezan他、Life Sci. 17:1721（１９７５年）
【非特許文献１４】Badylak他、J. Pediatr. Surg. 35:1097(２０００年)
【非特許文献１５】Merguerian他、BJU Int.85:894（２０００年）
【非特許文献１６】Wefer他、J. Urol. 165:1755（２００１年）
【非特許文献１７】Reddy他、J. Urol. 164:936（２０００年）
【非特許文献１８】Badylak他、J.Pediatr. Surg. 35:1097（２０００年）
【非特許文献１９】Aplin他、J. Cell Sci.79:119（１９８５年）
【非特許文献２０】Lei他、Biol. Reprod.60:176号（１９９９年）
【非特許文献２１】Meinert他、J. Obstet. Gynecol. 184:679（２００１年）
【非特許文献２２】Avila他、Cornea 20:414（２００１年）
【非特許文献２３】Young他、Fertil. Steril. 55:624（１９９１年）
【非特許文献２４】Gene Therapy andNeuroscience Applications Ed. Cplitt and Loewy, Academic Press, San Diego （１９９５年）
【非特許文献２５】Sambrook, Fritsch及びManiatis著、Molecular Cloning A Laboratory Manual、第２版（Cold Spring Harbor Laboratory Press１９８９年）、第１６章及び１７章
【非特許文献２６】Goodman & Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics, 第９版
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
或る実施形態では、本発明は、細胞外基質（ＥＣＭ）と少なくとも１つの治療薬とを備えているグラフト材料を包含している。グラフト材料のＥＣＭは、細胞外膠原基質であるのが望ましい。グラフト材料に含まれる治療薬としては、成長因子、抗生剤、抗真菌剤、鎮痛剤、抗ウイルス剤、ステロイド性抗炎症剤、非ステロイド性抗炎症剤、抗新生物剤、鎮痙剤、細胞−細胞外基質相互作用モジュレータ、酵素及び酵素阻害物質、抗凝固剤及び／又は抗血栓剤、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡ又はＲＮＡ又はタンパク質合成阻害物質、ポリペプチド、細胞の移動、増殖、及び／又は成長を調整する化合物、及び血管拡張剤が挙げられる。
【００１４】
別の実施形態では、本発明は、組織の治癒を促進するための方法である。この方法は、治療を必要とする組織をグラフト材料と接触させる段階を含んでいる。グラフト材料は、ＥＭＣと少なくとも１つの治療薬を含んでいる。グラフト材料のＥＣＭは、細胞外膠原基質であることが望ましい。グラフト材料に含まれる治療薬としては、成長因子、抗生剤、抗真菌剤、鎮痛剤、抗ウイルス剤、ステロイド性抗炎症剤、非ステロイド性抗炎症剤、抗新生物剤、鎮痙剤、細胞−細胞外基質相互作用モジュレータ、酵素及び酵素阻害物質、抗凝固剤及び／又は抗血栓剤、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡ又はＲＮＡ又はタンパク質合成阻害物質、ポリペプチド、細胞の移動、増殖、及び／又は成長を調整する化合物、及び血管拡張剤が挙げられる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
なお、本発明は、特定の方法論、プロトコル、細胞系、動物種又は属、構造体、又は上記試薬に限定されるものではなく、本発明は様々に適用できるものと理解されたい。また、ここで使用している用語論は特定の実施形態を説明することだけを目的としたものであり、本発明の範囲を限定するものではなく、本発明の範囲は特許請求の範囲によってのみ限定されるものであることも併せて理解されたい。
【００１６】
なお、本明細書及び特許請求の範囲で使用する場合、単数形の「或る」及び「当該、前記」には、特に明記しない限り、複数の対象物への言及が含まれることに注目されたい。従って、例えば、「或る細胞」という場合は、１つ又はそれ以上の細胞への言及であり、当業者には既知のそれらの等価物を包含する。
【００１７】
特に定義しない限り、ここで使用する全ての技術及び科学用語は、本発明が属する分野における当業者が一般に理解しているのと同じ意味を持つ。ここで説明しているものと同様又は等価な方法、装置、及び材料は、何れも本発明の実施又は試験に使用することができるが、好適な方法、装置、及び材料をこれより説明する。
【００１８】
本発明では、患者身体の損傷又は病変のある組織を治癒すると共に治療薬を患者に送り込むためのグラフト材料、及びそれらグラフト材料を使用する方法を記載している。
【００１９】
或る実施形態では、本発明は、細胞外基質（ＥＣＭ）と少なくとも１つの治療薬を含んでいるグラフト材料を考えている。
【００２０】
別の実施形態では、本発明は、組織の治癒を促進する方法を考えている。この方法は、治療を必要としている組織をグラフト材料と接触させる段階を含んでいる。グラフト材料は、ＥＣＭと少なくとも１つの治療薬を含んでいる。
【００２１】
本発明のグラフト材料を使用することの１つの利点は、例えば、グラフト材料による治療を必要としている患者身体の一部の創傷清拭を繰り返し行う必要が少なくなることである。
【００２２】
用語の定義
「グラフト」は、体の一部を修復するためにドナーからレシピエントに移植される組織又は器官の一部であり、患者がドナーでもあると同時にレシピエントでもあるという場合もある。例えば、グラフトは、破壊された組織に置換されるか、何も無かったところに新しい組織を生成する。
【００２３】
「生体適合性」という用語は、使用を意図している生体内環境において実質的に無害であって、且つ患者の生理系に実質的に拒絶されない（即ち、非抗原性である）、或る種の細胞外基質材料のようなものをいう。これは、国際標準化機構（ＩＳＯ）標準、第１０９９３号及び／又は米国薬局方（ＵＳＰ）２３及び／又は米国食品医薬品局（ＦＤＡ）ブルーブック備忘録第Ｇ９５−１の「国際標準化機構ＩＳＯ−１０９９３の使用、医療装置の生物学的評価、第１部：評価と試験」に記載されている生体適合性試験に合格する材料の能力によって測定することができる。通常、この試験では、材料の毒性、伝染力、発熱性、刺激の可能性、反応性、溶血作用、発癌性、及び／又は免疫原性が測定される。生体適合性構造体又は材料は、患者の大多数に導入した場合でも、目だって悪い生体反応又は応答が長く続いたり更に激しさを増すような事態は起こさないはずであり、手術又は生体器官への異物の移植に伴ってよく起こる軽度の一過性の炎症とは区別される。
【００２４】
「生体分解性の」及び「生体侵食性の」という用語は、使用を意図している生体内環境に置かれた場合に、生体組織に通常存在する状態の下で代謝又は排泄される成分に最終的には溶解してしまうグラフト材料、移植片、被覆、又は包帯のようなものをいう。代表的な実施形態では、生態分解又は生体侵食の速度及び／又は程度は、予測可能なやり方で制御される。
【００２５】
「治療用化合物」又は「治療薬」は、患者身体の損傷又は病変のある組織の治癒に有効な化合物又は薬剤を意味する。
【００２６】
「治癒する」という用語は、患者身体の損傷又は病変のある組織を、置換、修復、治癒、又は治療することを意味する。
【００２７】
「核酸」という用語は、リボヌクレオチド又はデオキシヌクレオチドの何れかのヌクレオチドのポリマー形態、又は上記何れかのヌクレオチドの変性形態をいう。上記用語は、等価物として、ヌクレオチド類似体から形成されたＲＮＡ又はＤＮＡの何れかの類似体を含み、また上記実施形態に適用可能なものとして、一本鎖（センス又はアンチセンスなど）及び二本鎖のポリヌクレオチドを含むものと理解されたい。
【００２８】
ここで同義的に使用されている「ポリペプチド」という用語及び「タンパク」及び「ペプチド」という用語は、アミノ酸のポリマーをいう。
【００２９】
「治療上有効な量」という用語は、治療を必要とする対象に投与された場合に、治療を有効にするのに十分なモジュレータ、薬剤、又は他の分子の量をいう。治療上有効な量は、治療対象者及び治療対象となる病状、対象者の体重と年齢、病状の重症度、投与法などにより様々であり、当業者には容易に決められるものである。
【００３０】
ここで使用する「組織」という用語は、特定機能の性能に結び付けられた同様に特化された細胞の集合体をいう。組織は、結合組織（例えば、骨組織又は骨の様な硬質形態）並びに他の筋肉又は骨格組織を含む、硬組織及び軟組織の両方を含む全ての種類の生物組織を包含する。或る好適な実施形態では、組織は皮膚である。
【００３１】
「ベクター」という用語は、結びついている別の核酸を輸送することができる核酸をいう。ここで使用する１つのタイプのベクターは、エピソーム、即ち、染色体外複製が可能な核酸である。他のベクターとしては、結びついている核酸の自動複製及び発現を行えるベクターがある。作動的に結びついている遺伝子の発現を誘導することのできるベクターをここでは「発現ベクター」と称する。一般に、ＤＮＡ組み換え技術に有用な発現ベクターは、環状二本鎖ＤＮＡ分子を指す「プラスミド」の形態であることが多く、これはベクター形態では染色体に結合することはない。プラスミドが最も一般的に使用されているベクターの形態であることから、本明細書では、「プラスミド」と「ベクター」を同義的に使用している。しかしながら、本開示は、これ以降に当技術分野で知られることになる、等価な機能を供する発現ベクターのその様な他の形態も含むものとする。
【００３２】
「条件」という用語は、対象に有害な生物学的結果を生じさせる傷害、疾病、疾患、又は効果をいう。
【００３３】
本願で使用する「患者」、「対象」及び「レシピエント」という用語は、あらゆる哺乳類、特にヒト、を指す。
【００３４】
治療を目的とした「哺乳類」は、人間、並びに、犬、馬、猫、牛、豚、羊など、家庭内及び農場の動物、動物園、スポーツ、又はペット用動物を含め、哺乳類として分類されるあらゆる動物をいう
【００３５】
。
細胞外基質（ＥＣＭ）
本発明では、グラフト材料は、細胞外基質と少なくとも１つの治療薬を含んでいる。
グラフト材料を対象の体に適用する場合、グラフト材料内のＥＣＭは改造されて、治療薬を送り出すと共に内生組織の細胞成長を誘発する。グラフト材料内のＥＣＭは、内生組織の成長を促進及び／又は誘発するためにマトリクスとして機能し、生体改造過程を経験する。この生体改造過程に関係する一般的な事象としては、広い範囲に及ぶ迅速な新血管形成、肉芽間葉細胞の増殖、移植された純化腸粘膜下組織材料の生分解／再吸収、及び免疫反応の無いこと、が含まれる。治療薬は、生体内に所望の生物学的効果（例えば、細胞分割、移動、又はアポトーシスの刺激又は抑制、免疫反応の刺激又は抑制、抗ウイルス活性など）を生み出すことにより治癒過程を前進させる。
【００３６】
研究により、温血脊椎動物粘膜下組織の様なＥＣＭ材料は、下部泌尿器、体壁、腱、靭帯、骨、心臓血管組織、及び中枢神経系を含む多くの生体内微環境への移植の後、ホスト組織増殖と組織構造の生体改造及び再生を誘起する能力のあることが分かった。移植が行われると、細胞の浸潤と迅速な新血管形成が観察され、粘膜下組織材料は生体改造されて、部位特定構造と機能的特性を備えたホスト置換組織になる。これは、例えば、グリコサミノグリカン、グリコプロテイン、プロテオグリカン、及び／又は、形質転換成長因子−α、形質転換成長因子−β、及び／又は線維芽細胞成長因子２（塩基性）を含む成長因子、を含む粘膜下組織の構成要素の１つ又はそれ以上の結果として起こる。
【００３７】
ＥＣＭは、組織の非細胞部分であり、残留細胞の分泌するタンパク質と炭水化物構造で構成されている。ＥＣＭは、組織の構造要素として働く。細胞外基質は、各種方法で分離され処理される。組織源から採取されてグラフト材料に作られると、ＥＣＭは、自然発生ポリマースカフォード、バイオスカフォード(bioscaffold)、バイオマトリクス、ＥＣＭスカフォード(ECM scaffold)、細胞外基質材料（ＥＣＭＭ）、又は自然発生バイオポリマーと呼ばれる。ＥＣＭ材料は、下記の幾つかの異なる身体系から採取されるが、どれもグラフト材料に加工されると類似性を共有する。特に、源動物から取り出された後は最小限の加工しか施されないため、天然状態と殆ど同じ構造と組成が維持される。ホスト細胞が取り除かれ、スカフォードを無細胞的に移植して、損傷のある組織を置換又は修復すると共に治療薬を組織に送り込む。
【００３８】
グラフト材料を調製する際に使用するＥＣＭは、コラーゲン基質を含め市販されている各種基質から選択してもよいし、各種天然コラーゲン源から調製してもよい。これら自然発生ＥＣＭの例には、組織粘膜下組織、無細胞真皮、死体筋膜、膀胱無細胞基質グラフト、及び羊膜（詳しくは、Hodde J.,組織工学8(2);295-308（２００２年）を参照）が含まれる。また、本発明のグラフト材料を調製する際に使用するものとして、温血脊椎動物の腎被膜由来のコラーゲン基材の細胞外基質を選択してもよい。温血脊椎動物の腎被膜由来の細胞外基質は、ＷＯ０３／０２１６５号に記載されており、その開示内容を参考文献としてここに援用する。
【００３９】
肝基底膜から取り出した、別のタイプのＥＣＭが、米国特許第６，３７９，７１０号に記載されており、同特許を参考文献としてここに援用する。ＥＣＭは、米国特許第４，５０２，１５９号に記載されているように、心膜から取り出してもよく、同特許も参考文献としてここに援用する。
【００４０】
異種生体材料の他に、自己組織も採取することができる。また、エラスチン又はエラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）なども、生物活性ＥＣＭとして潜在的な可能性がある。もう１つの代替案は、採取した天然の弁組織の様な同種移植片を使用することである。そのような組織は、凍結保存状態で市販されている。
【００４１】
或る例では、本発明に従って使用するためのＥＣＭには、保存性の高いコラーゲン、グリコプロテイン、プロテオグリカン、及びグリコサミノグリカン、及び／又は、形質転換成長因子−α、形質転換成長因子−β、及び／又は線維芽細胞成長因子２（塩基性）を含む成長因子を、それらの天然の構成及び天然の濃度を備えたまま有する膠原基質が含まれる。別の事例では、膠原基質には、温血脊椎動物の粘膜下組織由来の組織、例えば小腸粘膜下組織（ＳＩＳ）が含まれる。粘膜下組織は、例えば、豚、牛、羊、又は他の温血脊椎動物を含む、食肉製造用として飼育されている動物から採取された各種脊椎動物器官（腸組織など）から得ることができる。
【００４２】
ブタ哺乳類の様な温血脊椎動物からの未熟な粘膜下組織も使用することができる。未熟な粘膜下組織は、ＷＯ０４／２２１０７号に記載されており、同特許の開示内容を参考文献としてここに援用する。
【００４３】
ホスト細胞を取り除いた後、スカフォードを無細胞的に移植して、損傷のある組織を置換又は修復すると共に、例えば治療薬を組織に送り込む。
【００４４】
グラフト材料のＥＣＭは、例えば、組織粘膜下組織である。「組織粘膜下組織」又は「粘膜下組織」とは、動物の消化管、呼吸器、泌尿器、及び生殖器官の大部分の粘膜の下に発現するコラーゲンを含んだ結合組織の層をいう。組織粘膜下組織はＥＣＭの好適な源である。望ましいタイプのＥＣＭである、純粋な組織粘膜下組織については、これまでも米国特許第６，２０６，９３１号、同第６，３５８，２８４号、及び同第６，６６６，８９２号に、損傷又は病変のあるホスト組織の修復を強化する生体適合性を有する非血栓性材料として記載されている。米国特許第６，２０６，９３１号、同第６，３５８，２８４号、及び同第６，６６６，８９２号を、参考文献としてここに援用する。粘膜下組織は、腸から誘導することができる。粘膜は、ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ９７／２２７２７号に基づくＷＩＰＯ公開、ＷＯ９８／２５６３７号に記載されているように脊椎動物肝組織から、又はＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ９７／２２７２９号に基づくＷＩＰＯ公開、ＷＯ９８／２６２９１号に記載されているように消化管粘膜から、又はＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ９７／２３０１０号に基づくＷＩＰＯ公開、ＷＯ９８／２５６３６号に記載されているように胃粘膜から、又は米国特許第５，５５４，３８９号に記載されているように膀胱粘膜から誘導することもでき、上記全文献の開示内容を明示的にここに援用する。
【００４５】
粘膜下組織は、温血脊椎動物の望ましくは腸から、更に望ましくは小腸から、即ち小腸粘膜下組織（ＳＩＳ）から誘導される。ＳＩＳは、インディアナ州ウエストラファイエットのCook Biotech社から市販されている。好適な小腸粘膜下組織は、代表的には、筋層と少なくとも粘膜の管腔部分の両方から剥離した粘膜下組織膜を含んでいる。或る例では、粘膜下組織は、粘膜下組織膜と、粘膜筋と細胞層を含んでいる粘膜の基底部と、を含んでいる。腸粘膜下組織の調製は、米国特許第４，９０２，５０８号に記載されており、組織粘膜下組織の調製は、米国特許出願第０８／９１６，４９０号に記載されており、両特許文献を参考文献としてここに援用する。粘膜下組織の調製は、米国特許第５，７３３，３３７号並びに１７ネイチャーバイオテクノロジー誌１０８３（１９９９年１１月）、１９９８年５月２８日付けのＷＩＰＯ公開、ＷＯ９８／２２１５８号、これはＰＣＴ／ＵＳ９７／１４８５５号の出願公開であるが、そこにも記載されている。また、実質的に無菌状態の純度の高い剥離された組織粘膜下組織膠原基質を得るための方法は、これまでにも、米国特許出願、公開番号第２００４０１８００４２号に記載されており、その開示内容を参考文献としてここに援用する。
【００４６】
実質的に滅菌され且つ加工を最小限に留めた組織粘膜下組織が製造するため、組織粘膜下組織源の剥ぎ取りは、殺菌又は滅菌されたケーシング機械を使用することにより実施されるのが望ましい。適したケーシング機械は、スエーデンのゴトボルグのAB Stridhs Maskiner社から市販されている、型番３−Ｕ−４００Stridhs Universal Machine for Hog Casingである。加工の結果として、測定された生物負担量は、最小即ち実質的にゼロである。組織粘膜下組織源を剥離するには、例えば、手で剥離することを含め、他の手段を採用することもできる。
【００４７】
この方法では、脊椎動物の腸の部分は、ブタ、羊、又は牛から採取されることが望ましく、先ず縦方向に拭い取る動作を使って軽く研削して、漿膜及び筋層として識別される外層と、最も内側の層、すなわち粘膜の管腔部分の両方を取り出す。粘膜下組織は、水又は生理食塩水ですすぎ、随意的に殺菌して、水和した又は脱水した状態で保管される。筋層と粘膜の少なくとも管腔部分との両方から粘膜下組織膜を剥離して、粘膜下組織をすすぐことにより、粘膜下組織として規定された無細胞基質を得る。靭帯及び腱グラフトを形成するためのその様な材料の使用と操作処理、並びに内生結合組織の成長を誘導するためにそのような粘膜下組織構造を更に一般的に使用することは、１９９４年１月２５日発行の米国特許第５，２８１、４２２号に記載され主張されており、その開示内容を参考文献としてここに援用する。
【００４８】
剥離に続き、粘膜下組織には、プロピレンオキシド又はエチレンオキシド処理及び気体プラズマ殺菌を含む従来の殺菌技法を使用して殺菌処理を施す。純化された粘膜下組織の機械的強度、構造、及び生物向性に悪影響を及ぼさない殺菌技法が好適である。好適な殺菌技法には、グラフトをエチレンオキシド処理又は気体プラズマ殺菌に曝すことも含まれる。通常、純化された粘膜下組織には、２つ又はそれ以上の殺菌処理が施される。純化された粘膜下組織に例えば化学処理によって殺菌を施した後、この基質構造をプラスチック又は箔ラップで包み、電子ビーム又はガンマ放射殺菌技法を使用して再度殺菌する。
【００４９】
好適な粘膜下組織は、次の表１に記載の低汚染レベルで特徴付けられる。表１の汚染レベルは、所与のＥＣＭ試料個々について又は組み合わせについて見ることができる。表１の略語は次の通りであり、ＣＦＵ／ｇ＝グラム当たりのコロニー形成単位；ＰＦＵ／ｇ＝グラム当たりのプラーク形成単位；μｇ／ｍｇ＝ミリグラム当たりのマイクログラム；ｐｐｍ／ｋｇ＝キログラム当たりの１００万分の１、である。
【００５０】
【表１】
2007532153.tif 000003
【００５１】
純化された粘膜下組織は、多くのやり方で更に処理され、本発明のグラフト材料に組み入れるのに適したＥＣＭを提供する。
【００５２】
なお、粘膜下組織の細砕形態は、内生組織の成長を誘発するという粘膜下組織の能力を失うことなく調製できるものと理解されたい。細砕された粘膜下組織組成物は、腸粘膜下組織の溶液又は懸濁液又は粉末として調製され、機械的に手に入れた粘膜下組織又は酵素的に処理された粘膜下組織を備えている。或る事例では、粘膜下組織は機械的又は酵素的に処理され、実質的に均一で均質な溶液を形成する。別の事例では、粘膜下組織には、トリプシン又はペプシンの様なプロテアーゼ又は他の適切な酵素で、組織を溶解して実質的に均質な溶液を形成するのに十分な期間、処理が施される。
【００５３】
腸粘膜下組織開始材料は、引き裂き、切断、粉砕、剪断などにより、機械的に細砕される。粘膜下組織の片々の懸濁液を高速（高剪断）ブレンダで処理して脱水処理を施すことにより、また必要に応じて、遠心分離して上澄みの余剰水分を移すことによっても良好な結果が得られるが、凍結又は凍結乾燥状態の粘膜下組織を細砕するのが好ましい。得られた流体状の腸粘膜下組織を乾燥させて粘膜下粉末を形成する。その後、水和して、即ち、水と結合させ、又は生理食塩水及び随意的に他の薬学的に許容可能な賦形剤で緩衝して、腸粘膜下組織組成物を、２５℃で約２ｃｐｓから３００，０００ｃｐｓの粘度を有する流体として形成する。より高い粘度の粘膜下組織組成物は、ゲル又はペーストの粘度を有する。流動化した組成物は、電離放射線を照射するなどの当技術で認められている殺菌技法を使用して殺菌される。腸粘膜下組織の流体形態を調製することは、米国特許第５，２７５，８２６号、同第５，５１６，５３３号、及び同第６，２６４，９９２号に記載されており、その開示内容を参考文献としてここに援用する。
【００５４】
腸粘膜下組織は、粘膜下組織の粉末形態であってもよい。或る事例では、粘膜下組織の粉末形態は、腸粘膜下組織を液体窒素下で細砕することにより調製され、最大粒径が０．０１ｍｍから１ｍｍの範囲の粒子を生成する。次いで粒子組成物を一晩凍結乾燥して、再度細砕し、随意的には殺菌して、実質的に無水の粒子組成物を形成する。別の例では、粘膜下組織の粉末形態は、粘膜下組織の懸濁液又は溶液を乾燥させることにより、流体状粘膜下組織から形成される。
【００５５】
腸粘膜下組織の固体及び流体の両形態は、迅速な新血管形成、肉芽間葉細胞の増殖、粘膜下組織の再吸収、及び免疫拒絶を起こさないことを含め、内生改造過程を誘発することが分かっている。生体内では、粘膜下組織は、接触しているか又は置換対象の細胞／組織の増殖と成長を誘導するために効果的であることが分かっている。
【００５６】
また、米国特許第２，１２７，９０３号及び同第５，７１１，９６９号に記載の技術を使用して、２つ又はそれ以上の組織粘膜下組織部分を組み合わせることにより表面積の大きな構造体を形成することもでき、上記両特許を参考文献としてここに援用する。この様に、複数の組織粘膜下組織条片を、例えば、脱水条件下で条片の重なり合った部分を押し付けることにより互いに融合させて、構造体を形成するのに使用された個々の条片それぞれの平坦な表面よりも広い表面積を有する全体的に平坦な構造体を形成することができる。
【００５７】
上記処理手法の変型を使用して、グラフト材料のポリマーシートに組み込まれる粘膜下組織を生成することができる。例えば、組織粘膜下組織の源組織、例えば胃、腸全体、牛の子宮などは、部分的に剥離させ、消毒又は殺菌剤で処理し、その後で組織粘膜下組織の完全な剥離を施す。例示的に説明すると、付着している腸間膜層及び／又は腸全体の漿膜層は、消毒剤で処理する前に取り除いて、その後にまだ付着している組織を組織粘膜下組織から剥離させる。上記工程の後に、追加の消毒処理工程、例えば、酵素的な殺菌及び／又は核酸除去を、行っても行わなくてもよい。代わりに、組織粘膜下組織源は、消毒剤又は他のその様な薬剤で最小限の処理を施してから、筋層及び粘膜から組織粘膜下組織を剥離して、その後、所望の汚染レベルを得るために完全な消毒処理を実施する。この工程でのこの様な変型又は修正の全てが考慮されている。
【００５８】
米国特許出願第０８／９１６，４９０号に記載されているように、純化された粘膜下組織を調節して、純化された粘膜下組織の粘弾性を変えることができる。純化された粘膜下組織は、伸縮、化学処理、酵素処理、又は基質構造を他の環境因子に曝すことによって調節される。或る実施形態では、純化された組織粘膜下組織の条片は、２０％以下の歪みまで縦及び／又は横方向に引き伸ばすことにより調節される。歪みは、荷重を掛けた後の材料の長さの増加率である。
【００５９】
別の実施形態では、純化された粘膜下組織は、ＥＣＭが形成された純化された粘膜下組織の長さよりも長くなるまで、材料を長手方向に引き伸ばすことにより調節される。引き伸ばしにより基質を調整する１つの方法は、純化された粘膜下組織に所与の荷重を３から５サイクル加えることを含んでいる。各サイクルは、材料に５秒間荷重を加えた後、１０秒間弛緩状態に置くことから成る。３から５サイクルで、引き伸ばし調節された材料が生成される。純化された粘膜下組織は、元の大きさに直ちに戻るわけではなく、「引き伸ばされた」寸法のままである。随意的に、純化された粘膜下組織は、横寸法を引き伸ばすことにより前もって調節してもよい。
【００６０】
或る実施形態では、純化された粘膜下組織は、予測最終荷重の５０％を使って引き伸ばされる。「最終荷重」とは、基質構造を損傷すること無く、純化された粘膜下組織に掛けることのできる最大荷重である（即ち、組織のブレイクポイント）。最終荷重は、材料の源及び厚さに基づいて、純化された粘膜下組織の所与の条片について予測することができる。従って、引き伸ばしによって基質構造を調節する１つの方法は、予測最終荷重の５０％を純化された粘膜下組織に３から１０サイクルに亘って加えることを含んでいる。各サイクルは、材料に５秒間荷重を加えた後、１０秒間弛緩状態に置くことから成る。その結果得られた調節済み純化粘膜下組織は、生じた歪みが３０％未満であり、普通は歪みが約２０％から約２８％である。或る好適な実施形態では、調節済み純化粘膜下組織は、歪みがわずか２０％である。得られた調節済み純化粘膜下組織は、以下の様式で使用することができる。調節工程並びに他の関連工程については、米国特許第６，３５８，２８４号に記載されており、同特許を参考文献としてここに援用する。
【００６１】
グラフト材料のＥＣＭは、例えば、無細胞真皮である。無細胞真皮は、細胞を取り除いた後に残っている正常な真皮組織構造から構成されている。他の自然発生生体ポリマーと同様に、無細胞真皮はコラーゲン、タイプＩが豊富である。無細胞真皮は、天然真皮のタイプＩＶ及びタイプＶＩＩコラーゲン組成を高レベルで保有している（Medalie他、ASAIO J.42:M455(１９９６年)）。コラーゲンの他に、真皮のエラスチン含有量も処理中保持され、好ましいエラスチン特性を備えたグラフト構造が得られる（Isch他、J. Pediatr. Surg. 36:266（２００１年））。
【００６２】
無細胞真皮は、豚又は人の死体皮膚から採取される。例えば、無細胞真皮は、Chaplin他（Chaplin他、Neurosurgery 45:320(１９９９年)）に従って調製される。簡単に言えば、表皮は、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）に皮膚を浸すことにより取り除く。皮膚の線維芽細胞と上皮細胞は、エチレンジアミンテトラアセテート（ＥＤＴＡ）を含んでいるデオキシコール酸内で材料を培養することにより取り除く。次いで、真皮は、マルトデキストリンとジナトリウム−ＥＤＴＡの組み合わせを用いて凍結保護を施し、使用時まで凍結乾燥される（Chaplin他、Neurosurgery 45:320(１９９９年)）。無細胞組織グラフトとして移植された場合、無細胞真皮は、修復された血管構造に内皮細胞を形成し（Inoue and Lleon, J. Reconstr. Microsurg. 12:307（１９９６年））、過剰な傷の収縮を阻止し（Walden他、Ann. Plast. Surg. 45:162（２０００年））、ホスト細胞の合体と移植部位への毛細管の成長を支援する（Dalla他、J. Pediatr. Surg. 45:162（２０００年）；及びMedalie他ASAIO J. 42:M455（１９９６年））。
【００６３】
グラフト材料のＥＣＭは、例えば、死体筋膜である。大腿筋膜張筋は、脚の側方側で骨盤を膝に取り付けている結合組織の厚い帯である。その臀部における筋肉成分は、厚い結合組織に接合しており、腸脛靭帯（ＩＴ靭帯）に引張力を掛けることにより、股関節と膝関節を安定化させ落ち着かせる働きをしている。ＩＴ靭帯、即ち大腿筋膜張筋の遠位部分は、本発明のグラフト材料のＥＣＭ用に採取される。
【００６４】
その天然状態では、大腿筋膜張筋は細胞外基質組織により一体に保持されているタイプ１コラーゲン繊維の重くて平行な束から構成されている。線維の束の間には線維芽細胞、神経、及び腱に栄養を供給する血管がある。死体筋膜は、エタノール抽出の後、抗生剤で高圧洗浄して得られる。次いで、抽出組織を凍結乾燥して、ガンマ照射を用いて最後に殺菌する。術中に、グラフト材料は使用前に生理食塩水に浸漬してもどす（Carbone他、J. Urol. 165:1605（２００１年））
【００６５】
グラフト材料のＥＣＭは、例えば、膀胱無細胞基質でもよい。膀胱無細胞基質グラフト（ＢＡＭＧ）は、１９７５年に初めて文献に記載があるが（Meezan他、Life Sci. 17:1721（１９７５年））、これは、ＳＩＳ生体材料体を備えている粘膜下組織と類似している膀胱の層に由来する。天然の膀胱では、膀胱粘膜下組織は粘膜下構造を支え、線維芽細胞により分泌及び維持されている。ＥＣＭの正常な機能は、膀胱壁を完全な状態に保つ結合組織構造を維持すると共に、異なるタイプ粘膜下細胞の成長と分化を支援することである。しかしながら、外側筋肉層から容易に分離される腸の粘膜下組織とは異なり、膀胱の粘膜下組織は筋肉質の膀胱壁にぴったりと付着している。両層を機械的に完全に分離するのは面倒で難しいことが判明しているので、膀胱粘膜下組織を筋肉無しの状態にする試みでは、水酸化ナトリウム、デスオキシコール酸ナトリウム(sodium desoxycholate)、ドデシル硫酸ナトリウム(sodium dodecyl sulfate)（ＳＤＳ）、又はデオキシリボヌクレアーゼの様な化学薬品及び／又は酵素剤による手法を使うことが多い（Badylak他、J. Pediatr. Surg. 35:1097(２０００年)；Merguerian他、BJU Int.85:894（２０００年）；Wefer他、J. Urol. 165:1755（２００１年）；Reddy他、J. Urol. 164:936（２０００年））。
或る処理方法では、膀胱全体をトリス-EDTA(Tris-EDTA)溶液に４８時間浸した後で、トリトン-X(Triton-X)を含有するトリス-塩化カリウム−EDTA(Tris-potassium choloride-EDTA)溶液に更に浸す。その後、膀胱をSorenson社のリン酸緩衝液ですすぎ、これにデオキシリボヌクレアーゼとリボヌクレアーゼを加えて１晩培養して細胞質と核材料を取り除き、Tris及びSDSを含有する溶液中に更に抽出する。次いで、抽出された膀胱をエタノールに沈めて、残っているSDSを取り除き、リン酸緩衝液で洗浄して、使用するまでは、冷蔵された生理食塩水で保存する（Reddy他、J. Urol. 164:936（２０００年））。
【００６６】
代わりに、膀胱粘膜下組織は、ＳＩＳの場合に使用される方法に従って、無細胞化及び殺菌処理してもよい(Badylak他、J.Pediatr. Surg. 35:1097（２０００年）)。膀胱層を機械的に分離して、得られた粘膜下組織を水で徹底的にすすいで細胞を溶解させる。粘膜下細胞は過酢酸で処理して、水とリン酸緩衝生理食塩水を順次入れ替えながらすすいでｐＨを中性にする。次いで２．５-mRadガンマ照射を使用して殺菌し、使用まで冷蔵保存する。
【００６７】
グラフト材料のＥＣＭは、例えば羊膜でもよい。羊膜は妊娠中に胎児を包み込む袋を形成している。羊膜は、極めて頑丈で、組織の厚さは２μｇから５μｇであり、幾つかの組織修復用途でグラフト材料として使用される。天然状態では、羊膜の上皮組織は、比較的細胞の無い基底膜ＥＣＭの上に乗った単一の細胞層で構成されている（Aplin他、J. Cell Sci.79:119（１９８５年））。このＥＣＭは、希薄層と、線維コラーゲン、タイプＩとＩＩＩ及び基底層コラーゲン、タイプＩＶを含む幾つかのタイプのコラーゲンで形成される稠密緻密層と、から成る微小基礎構造から構成されている（Aplin他、J. Cell Sci.79:119（１９８５年）及びLei他、Biol. Reprod.60:176号（１９９９年））。少なくとも１つのプロテオグリカン、デコリンが、当面の羊膜に同定されており（Meinert他、J. Obstet. Gynecol. 184:679（２００１年））、グリコサミノグリカン・ヒアルロン酸（Meinert他、J. Obstet. Gynecol. 184:679（２００１年））を有している。表皮性成長因子、幾つかの形質転換成長因子イソ型、塩基性線維芽細胞成長因子、ケラチノサイト成長因子、及びヘパトサイト成長因子を含む幾つかの成長因子も同定されており、加工された組織基質に維持されていることが報告されている。
【００６８】
羊膜を、分娩時に得て、ペニシリン、ストレプトマイシン、アンホテリシンＢ、及びクリンダマイシンを含有する生理食塩水を用いて血液を洗い流す（Avila他、Cornea 20:414（２００１年））。羊膜を、鈍的切開により絨毛膜から分離し、滅菌水で洗浄し、トリプシン１０％溶液に３時間浸して、細胞を溶解する。次いで、膜をガンマ照射で殺菌し、臨床使用されるまで凍結する（Young他、Fertil. Steril. 55:624（１９９１年））。
【００６９】
治療薬
本発明によれば、グラフト材料は少なくとも１つの治療薬を含んでいる。
先に述べたようにグラフト材料に含まれる治療薬は、生体内で所望の生物学的効果（例えば、細胞分割、移動、又はアポトーシスの刺激又は抑制、免疫反応の刺激又は抑制、抗ウイルス活性など）を発揮することができる。
【００７０】
適した治療薬としては、成長因子、抗生剤、抗ウイルス剤、鎮痛剤、ステロイド系及び非ステロイド系抗炎症剤、抗新生物剤、チャネルブロッカーを含む鎮痙剤、細胞成長阻害物質及び抗接着分子を含む細胞−細胞外基質相互作用モジュレータ、酵素及び酵素阻害物質、抗凝固剤及び／又は抗血栓剤、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡ又はＲＮＡ又はタンパク質合成阻害物質、細胞の移動、増殖及び／又は成長を調整する化合物、血管拡張剤、及び組織への傷害の治療に一般に使用されている他の薬剤を挙げることができる。
【００７１】
上記治療薬の組み合わせも使用することができる。
【００７２】
治療薬は、例えば、細胞又は組織の様々な特定の内方成長を強化又は排除する物質である。その様な物質としては、例えば、骨誘導物質、脈管形成物質、分裂促進物質、又は類似の物質があり、それらには、例えば、ＴＧＦ−アルファ、ＴＧＦ−ベータ−１、ＴＧＦ−ベータ−２、ＴＧＦ−ベータ−３の様な形質転換成長因子（ＴＧＦ）、例えば、酸性及び塩基性の線維芽細胞成長因子（ａＦＧＦとｂＦＧＦ）の様な線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、血小板由来内皮細胞成長因子（ＰＤ−ＥＣＧＦ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−アルファ）、腫瘍壊死因子ベータ（ＴＮＦ−ｂ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）；結合組織活性化ペプチド（ＣＴＡＰ）、例えば、ＢＭＰ−１、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−３ＭＰ−４、ＢＭＰ−５、ＢＭＰ−６、ＢＭＰ−７、ＢＭＰ−８、ＢＭＰ−９の様な骨形成因子、例えば、ＩＧＦ−Ｉ及びＩＧＦ−ＩＩの様なインスリン様成長因子（ＩＧＦ）、エリスロポエチン、ヘパリン結合成長因子（ｈｂｇｆ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）、顆粒球/マクロファージＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）、一酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、筋肉形態形成因子（ＭＭＰ）、インヒビン（例えば、インヒビンＡ、インヒビンＢ）、成長分化因子（例えば、ＧＤＦ−１）、アクティビン（例えば、アクティビンＡ、アクティビンＢ、アクティビンＡＢ）、アンギオゲニン(angiogenin)、アンギオテンシン、アンギオポエチン、アンギオトロピン、抗脈管形成アンチトロンビン（ａａＡＴ）、心房ナトリウム排泄因子（ＡＮＦ）、ベータセルロース、エンドスタチン；内皮細胞由来成長因子（ＥＣＤＧＦ）、内皮細胞成長因子（ＥＣＧＦ）、内皮細胞成長阻害剤、内皮単球活性ポリペプチド（ＥＭＡＰ）、内皮細胞生存維持因子、エンドセリン（ＥＴ）、内皮種由来移動因子（ＥＤＭＦ）、脈管細胞増殖の心臓由来阻害剤、造血成長因子、エリスロポエチン（Ｅｐｏ）、インターフェロン（ＩＦＮ）、インターロイキン（ＩＬ）、オンコスタチンＭ、胎盤成長因子（ＰＩＧＦ）、ソマトスタチン、トランスフェリン、トロンボスポンジン、血管活性腸管ペプチド、及びそのような成長因子の生物活性類似体、断片、及び誘導体が含まれる。
【００７３】
代表的な実施形態では、治療剤は、成長因子、脈管形成因子、抗炎症剤の様な線維芽細胞組織の内方成長を選択的に阻害する化合物、及び形質転換（癌性）細胞の成長と増殖を選択的に阻害する化合物である。上記因子は、グラフト材料のＥＣＭ内又はその周囲に含まれている細胞の成長と機能を制御するために使用され、例えば、血液の内方成長、及び／又はグラフト材料の周りの線維組織の堆積と編成を制御するために使用される。
【００７４】
治療薬は、例えば、ポリヌクレオチドである。治療薬として有用なポリヌクレオチドの例としては、限定するわけではないが、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ及び組み換え核酸；裸ＤＮＡ、ｃＤＮＡ及びＲＮＡ；ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ又はＲＮＡ；オリゴヌクレオチド；アプトメリックオリゴヌクレオチド；リボザイム；アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＲＮＡ又はＤＮＡを含む）；アンチセンスＲＮＡをコード化するＤＮＡ；ｔＲＮＡ又はｒＲＮＡ分子をコード化するＤＮＡ（即ち、欠陥があるか欠損したな内在分子に置換するもの）；二本鎖小干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）；ポリヌクレオチドペプチド結合オリゴ（ＰＮＡ）；環状又は直鎖ＲＮＡ；環状一本鎖ＤＮＡ；自己複製ＲＮＡ；ｍＲＮＡ転写産物；例えば、ハンマーヘッド、ヘアピン、デルタ肝炎ウイルス、及び生体内で特定のＲＮＡ配列を狙う及び／又は切断するグループＩイントロンを含む触媒性ＲＮＡ；更にここで定義する、治療用タンパク質又はポリペプチドをコード化するポリヌクレオチド；例えば、ＤＮＡ／ＤＮＡハイブリッド、ＲＮＡ／ＲＮＡハイブリッド、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッド、ＤＮＡ／ペプチドハイブリッド、及びＲＮＡ／ペプチドハイブリッドを含むキメラ核酸；ＤＮＡ凝縮剤；及び非伝染性ベクターの核酸（即ち、プラスミド）及びウイルスベクターの核酸を含む、遺伝子／ベクター系（即ち、核酸の取り込みと発現を許容するあらゆる媒体）、を含む核酸及び核酸の断片が挙げられる。
【００７５】
在る代表的な実施形態では、キメラ核酸には、例えば、キメラ分子の位置を、体内、細胞内、又は細胞膜上の或る位置に方向決めするペプチド標的配列（即ち、膜転位配列（ＭＴＳ））に結合する核酸が含まれる。
【００７６】
別の実施形態では、核酸は、多種多様な細胞型式で発現する構成ハウスキーピング遺伝子、又はその断片に融合する。
【００７７】
或る実施形態では、非ウイルス方法により誘導されたポリヌクレオチドは、ナノキャップ（例えば、ナノ粒子ＣａＰＯ４）、コロイド金、ナノ粒子合成ポリマー、及び／又はリポソームと配合され又は結びつく。或る実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＱＤＯＴＴＭプローブ（www.qdots.com）と結びつく。
【００７８】
他の実施形態では、治療薬として有用なポリヌクレオチドは、ヌクレアーゼ、例えば、エクソヌクレアーゼ及び／又はエンドヌクレアーゼなど、に対する抵抗を高めるように改質されており、従って生体内での安定性が高まる。代表的な改質は、限定するわけではないが、核酸のホスホラミデート、ホスホチオエート、及びメチルホスホネート類似体が挙げられる（米国特許第５，１７６，９９６号、同第５，２６４，５６４号、及び同第５，２５６，７７５号）。
【００７９】
或る実施形態では、治療薬はベクター内に含まれるポリヌクレオチドである。本発明による使用に適したベクターとしては、例えば、アデノウイスルベクター、単体ヘルペスベクター、乳頭腫ベクター、アデノ随伴ベクター、レトロウイルスベクター、仮性狂犬病ベクター、アルファ−ヘルペスウィルスベクターなどの様なウイルスベクター又はウイルス源から誘導されたベクターが挙げられる。ウイルスベクター、特に非複製細胞を改質するのに適したウィルスベクター、及びその様なベクターを対象とするポリヌクレオチドの発現と組み合わせてどの様に使用するかということについての全体的検討は、ウイルスベクターという本、Gene Therapy and Neuroscience Applications Ed. Caplitt and Loewy,
Academic Press, San Diego （１９９５年）に記載されている。
【００８０】
ベクターは、例えば、非伝染性ベクター又はプラスミドでもよい。適した非伝染性ベクターは、限定するわけではないが、バクテリア内でのベクターの伝播を促進する真核配列と、真核細胞で発現される１つ又はそれ以上の真核転写単位の双方を含む哺乳類発現ベクターを含む。ｐｃＤＮＡ／ａｍｐ、ｐｃＤＮＡ／ｎｅｏ、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐＳＶ２ｇｐｔ、ｐＳＶ２ｎｅｏ、ｐＳＶ２−ｄｈｆｒ、ｐＴｋ２、ｐＲＳＶｎｅｏ、ｐＭＳＧ、ｐＳＶＴ７、ｐｋｏ−ｎｅｏ、及びｐＨｙｇ由来のベクターは、真核細胞のトランスフェクションに適した哺乳類発現ベクターの例である。上記ベクターの幾つかは、原核細胞と真核細胞の両方での複製と薬物耐性選択をやり易くするために、ｐＢＲ３２２の様なバクテリアプラスミドからの配列で改質される。真核細胞にタンパク質を一過性に発現させるために、代わりに、ウシ乳頭腫ウイルス（ＢＰＶ−１）又はエプスタイン・バールウイルス（ｐＨＥＢｏ、ｐＲＥＰ由来及びｐ２０５）の様なウイルスの誘導体を使用してもよい。プラスミドの調製とホスト器官の形質転換に採用される各種方法は、当技術では周知である。原核細胞と真核細胞の両方に適した他の発現システム並びに一般的な組み換え手法については、Sambrook, Fritsch及びManiatis著、Molecular Cloning A Laboratory Manual、第２版（Cold Spring Harbor Laboratory Press１９８９年）第１６章及び１７章に記載されている。
【００８１】
治療薬は、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、又はタンパク質合成の阻害薬であってもよい。
【００８２】
治療薬は、例えば、生体内で生物学的効果を発揮する他の生物学的活性分子であってもよい。本発明のグラフト材料であるＥＣＭと共に使用されるそれら治療薬としては、抗生剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、鎮痛剤、ステロイド系及び非ステロイド系抗炎症剤、抗新生物剤、チャネルブロッカーを含む鎮痙剤、細胞成長阻害物質及び抗接着分子を含む細胞−細胞外基質相互作用モジュレータ、酵素及び酵素阻害物質（アンギオテンシン変換酵素阻害剤化合物）、抗凝固剤及び／又は抗血栓剤、ＤＮＡ、ＲＮＡ、又はタンパク質合成阻害物質、細胞の移動、増殖及び／又は成長を調整する化合物、血管拡張剤、及び組織への傷害の治療に一般に使用されている他の薬剤を挙げることができる。上記治療薬の例と詳細な説明は、GoodmanとGilmanによるThe Pharmacological Basis of Therapeutics、第９版に記載されている。
【００８３】
抗生剤の具体例としては、限定するわけではないが、アミノペニシリン（アンピシリン、アモキシシリン及びそれらのコンジナー）を含むペニシリン；セファロスポリン；サイクロセリン；バンコマイシン；ポリミキシン(polymyxin)；アンホテリシンＢ(amphotericin B)；クロラムフェニコール；テトラサイクリン（クロルテトラサイクリン(Chlortetracycline)、オキシテトラサイクリン(Oxytetracycline)、デメクロサイクリン(Demeclocycline)、メタサイクリン(Methacycline)、ドキシサイクリン(Doxyclyclie)及びミノサイクリン(Minocycline)）；マクロライド（エリスロマイシン(Erythromycin)、クラリスロマイシン(Clarithromycin)、アジスロマイシン(Azithromycin)）；クリンダマイシン；リファマイシン；キノロン；スルホンアミド；リファンピン（ＲＩＦＡＤＩＮ、ＲＩＭＡＣＴＡＮＥ）を含むリファマイシン；エタンブト(ethambuto)；及び他の入手可能な抗生剤が挙げられる。
【００８４】
例えば、細菌又は真菌感染の予防及び治療には、スルファジアジン銀（商品名：Silvadene、SSD、SSD AF、Thermazene）、サルファ剤を使用することができる。
【００８５】
全身及び局所抗真菌剤の具体例としては、アンホテリシンＢ、フルシトシン(flucytozine)、イミダゾールとトリアゾール、ケトコナゾール、イトラコナゾール、フルコナゾール、シクロピロックスオラミン、ハロプロジン、トルナフテート、ナフチフィン、テルビナフィン、及びポリエン抗真菌抗生物質（ナイスタチン）が挙げられる。
【００８６】
抗ウイルス剤の具体例としては、限定するわけではないが、抗レトロウイルス剤（ジダノシン、スタブジン、ザルシタビン、ジドブジン）、抗ヘルペスウィルス剤（アシクロビル、ファムシクロビル、フォスカーネット、トリフルリジン、ビダラビル）、及び他の抗ウイルス剤（アマンタジン、インターフェロンアルファ、リバビリン、リマンタジン）が挙げられる。
【００８７】
非ステロイド系抗炎症剤の具体例としては、限定するわけではないが、サリチル酸誘導体（アスピリン、サリチル酸ナトリウム）、パラ−アミノフェノール誘導体（アセトアミノフェン）、インドール及びインデン酢酸（インドメタシン）、ヘテロアリル酢酸（トルメチン）、アリールプロピオン酸（イブプロフェン、ナプロキセン、ケトプロフェン）、アントラニル酸(anthanilic acid)（メフェナム酸）、エノール酸（ピロキシカム、フェニルブタゾン）、及びアルカノン（ナブメトン）が挙げられる。
【００８８】
抗新生物剤の具体例としては、限定するわけではないが、アルキル化剤（ナイトロジェンマスタード、トリアゼン）；代謝拮抗剤（葉酸類似体、ピリミジン類似体）；天然産物（抗生物質、酵素）；ホルモン及び拮抗物質（プロゲスチン、エストロゲン、アンドロゲン）、及び他の雑多な薬剤（副腎皮質刺激抑制剤、置換尿素）が挙げられる。
【００８９】
血小板凝集阻害剤、即ち抗凝固化合物及び／又は抗血栓剤の具体例としては、プロスタサイクリン、ヘパリン、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、組織プラスミノーゲン活性化剤（ＴＰＡ）及びアニソイル化プラスミノーゲン活性剤（ＴＰＡ）、及びアニソイル化プラスミノーゲン−ストレプトキナーゼ活性剤複合体（ＡＰＳＡＣ）が挙げられる。
【００９０】
代表的な血栓溶解剤は、組織プラスミノゲン活性剤、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、及びヘパリンである。
【００９１】
チャネルブロッカーの具体例としては、カルシウムチャネルブロッキング薬が挙げられる。
【００９２】
細胞間相互作用モジュレータの具体的な例としては、インターロイキン、血小板由来成長因子、酸及び塩基性線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、形質転換成長因子β（ＴＧＦ−ベータ）、表皮性成長因子（ＥＧＦ）、インスリン様成長因子、及びそれらに対する抗体が挙げられる。
【００９３】
核酸の具体例としては、遺伝子及びｃＤＮＡコード化タンパク質、発現ベクター、アンチセンス、及び遺伝子発現を調整又は阻止するために使用することのできるリボザイムの様な他のオリゴヌクレオチドが挙げられる。
【００９４】
他の生物活性剤の具体例としては、改質された細胞外基質化合物又はそれらのレセプタと、脂肪性及びコレステロール捕捉剤が挙げられる。
【００９５】
或る種の実施形態では、治療剤は、例えば、抗生剤及び抗炎症剤を含む、小さな有機分子を含む薬学的な化合物又は製剤である。
【００９６】
治療剤は、例えば、サイトカイン、インターフェロン、及びインターロイキンの様なタンパク質、ポエチン、コロニー刺激因子を含ませるための被覆と組み合わせて使用してもよい。選択用受容体に結合させると炎症を抑制できることが分かっているSialyl Lewisを含む炭水化物であってもよい。
【００９７】
「引渡可能な成長因子等価物（略してＤＧＦＥ）」、即ち細胞又は組織のための成長因子を使用してもよく、それらは、成長因子、サイトカイン、インターフェロン、インターロイキン、タンパク質、コロニー刺激因子、ジベレリン、オーキシン、及びビタミンを含み、更に、ペプチド断片又は上記物質の他の活性断片を含み、更に、ベクター、即ち、形質転換又は一過性の発現によるかは問わず標的細胞内でその様な因子を合成することのできる核酸構造を含み、更に、天然の信号分子、アンチセンス、及び三重螺旋核酸などを含め、組織内でその様な因子の合成を刺激又は抑制するエフェクター、を含むものと広く解釈される。代表的なＤＧＦＥは、ＶＥＧＦ、ＥＣＧＦ、ｂＦＧＦ、ＢＭＰ、及びＰＤＧＦ、及びそれらのＤＮＡコード化である。
【００９８】
治療薬は、例えば、酸化防止活性（即ち、活性酸素を破壊又はその形成を阻止する）を有する薬剤であってもよく、それらは、例えば癒着予防に有効である。例を挙げると、スーパーオキシドジスムターゼが挙げられ、又は他のタンパク質薬剤としては、カタラーゼ、ペルオキシダーゼ、及びチトクロムＰ４５０、グルタチオン・ペルオキシダーゼ、及び他の天然又は変性ヘムタンパク質のような、一般的なオキシダーゼ又は酸化酵素が挙げられる。
【００９９】
治療薬は、例えば、鎮痛薬であってもよい。鎮痛薬は、痛みの緩和又は痛みの抑制に使用され、特に熱傷の治療に使用される。鎮痛薬の例としては、限定するわけではないが、先に述べた非ステロイド系抗炎症剤、並びにモルヒネ、メサドン、コデイン、エトルフィン、ナロキソン他の様なオピオイドを挙げることができる。
【０１００】
治療薬は、例えば、哺乳類ストレス反応タンパク質、又は熱ショックタンパク質７０（ｈｓｐ７０）及びｈｓｐ９０の様な熱ショックタンパク質、又は、ストレス反応タンパク質又は熱ショックタンパク質発現を阻害又は抑制するように作用するそれら刺激物質、例えばフラボノイドであってもよい。
【０１０１】
治療剤（即ち、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、小分子、薬剤など）は、例えば、組織内の細胞への運搬、及び／又は細胞の取り込みをやり易くする物質と混和させ、又はそれらに封入してもよい。
【０１０２】
或る実施形態では、ポリヌクレオチドは、核酸を細胞に導入するのに役立つカチオン脂質と混和され、それらカチオン脂質としては、限定するわけではないが、ジアシルグリセロールに結合するモノカチオンコリンのヘッド基で構成されるLIPOFECTINTM(DOTMA)（Epstein他に対する米国特許第５，２０８，０３６号）；リポスペルミンヘッド基(lipospermine head group)を持つ合成カチオン脂質であるTRANSFECTAMTM（DOGS）（ウィスコンシン州マジソン、Promega社）；DMRIE及びDMRIE.HP（カリフォルニア州ラホヤ、Vical社）；DOTAPTM  （インジアナ州インジアナポリス、Boehringer Mannheim 社）、及びLipofectamine（DOSPA）（メリーランド州ゲイサーズバーグ、Life Technology社）が挙げられる。
【０１０３】
他の実施形態では、治療薬（即ち、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、小分子、薬剤など）は、哺乳類組織への浸透及び哺乳類細胞による取り込みを促進するマイクロスフィア又はナノスフィアと混和され又はそれらに封入される。各種実施形態では、マイクロスフィア又はナノスフィアには、随意的に他の分子が結合していてもよい。上記改質には、例えば、マイクロスフィア又はナノスフィアに、特定の組織又は細胞を狙って結合する能力、投与部位にそれらが保持されるようにする能力、組み込まれた生物活性剤を保護する能力、抗血栓効果を発揮する能力、凝集を阻害する能力、及び／又はマイクロスフィアの放出特性を変えるする能力、を与えてもよい。そのような表面改質を施したマイクロスフィアの製造については、Levy他のＰＣＴ出願番号第ＷＯ９６／２０６９８号に論じられており、その開示内容を参考文献としてここに援用する。
【０１０４】
代表的な実施形態では、レセプタ特定分子をマイクロスフィア内に又はその上に組み込んでレセプタ特定粒子取り込みを仲介させることが望ましく、その様なレセプタ特定分子としては、例えば、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤなどの様な抗体、又はそれらの諸部分又はサブセット、細胞因子、細胞面レセプタ、ＭＨＣ又はＨＬＡマーカー、ウイルスエンベロプタンパク質、ペプチド、又は小さな有機リガンド、それらの誘導体など、が挙げられる。
【０１０５】
治療薬（即ち、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、小分子、薬剤、細胞など）は、例えば、哺乳類細胞への運搬、又は哺乳類細胞による取り込みを促進し、骨伝導特性を提供し、質量輸送に影響を及ぼす粒子と、混和させ又は複合体を形成させてもよい。適した粒子としては、ヒドロキシアパタイト（ＨＡ）の様な生体セラミクス、又はモノ-、ジ-、オクタ-、アルファ-トリ-、ベータ-トリ-、又はテトラ-カルシウム・ホスフェート、フルオロアパタイト、カルシウムサルフェート、カルシウムフルオライド、及びそれらの混合物の様な他のカルシウム含有化合物；酸化カルシウム、二酸化シリコン、酸化ナトリウム、五酸化リン、及びそれらの混合物の様な酸化金属を備えている生物活性ガラス；などが挙げられる。或る代表的な実施形態では、骨誘導及び／又は骨伝導特性を提供することから、ヒドロキシアパタイトが生体セラミック材料として使用されている。粒子の粒径は、約０．１ｎｍから約１００ｎｍが望ましく、約２ｎｍから約５０ｎｍであれば更に望ましい。
【０１０６】
治療薬は、例えば、日数、週数、月数、又は年数に基づき、ＥＣＭが分解され又は侵食されるにつれて、制御された放出が行われるように調合してもよい。或る代表的な実施形態では、ＥＣＭの分解は、ＥＣＭの分解及び／又は侵食の速度を、落とすか（例えばペプチド、タンパク質、又は化学プロテアーゼ、例えばアプロチニン、を介して）、又は上げるか（例えば、プロテアーゼで）する作用物質により調整される。代わりに、治療剤は、ＥＣＭに取り付けられ、又は組み込まれたマイクロスフィア組成物を含んでいてもよい。この実施形態では、ＥＣＭは、治療剤の時間放出効果を作り出すために分解する必要はない。放出特性は、マイクロスフィアの大きさと物理的特性で決まる。
【０１０７】
治療剤は、例えば、安定剤、増量剤、酸化防止剤、触媒、柔軟剤、顔料、潤滑剤の様な補助剤及び添加剤を、その様な成分が本治療薬の意図される目的に対する有用性を損なわない範囲で、含んでいてもよい。
【０１０８】
グラフト材料の調製
本発明のグラフト材料は、治療剤を傷害の部位に送り込むために、治療剤を伴って調製される。
【０１０９】
治療剤は、例えば、グラフト材料調製の際に、ＥＣＭに組みこまれるか、又はＥＣＭに共有結合される。代わりに、治療剤は、例えば、浸漬、噴霧、塗装、又は他のやり方で治療剤をＥＣＭに塗布することにより、ＥＣＭの調製後にＥＣＭに添加してもよい。例えば、図１は、グラフト材料１０がＥＣＭ１１を備えている概略図である。治療剤１２は、ＥＣＭ１１の一方の側に噴霧することにより塗布されている。
【０１１０】
各種実施形態では、治療剤は、ＥＣＭの所望の箇所に直接塗布されるか、又は患者に用いる前に事前塗布される。
【０１１１】
グラフト材料は、傷害部位を覆うように皮膚に接着される平坦な膜でもよいし、プラグや楔の様な３−Ｄ構造体であってもよい。別の例では、グラフト材料は、固体シート、ストリップ、ゲル、又は粉末の形態である。
【０１１２】
グラフト材料は、様々な創傷に用いるのに適した標準的な形態で供給して、そのまま用いてもよいし、特定の適用部位に用いる前に切断、成形、又は何らかの方法で付形してもよい。代わりに、グラフト材料は、特定の傷害、病変、傷痕、創傷、又は創傷の種類に合わせて特別に設定した形態で製造してもよい。
【０１１３】
グラフト材料は、局所的用途に使用してもよい。代わりに、グラフト材料全体を使用してもよい。
【０１１４】
或る実施形態では、グラフト材料は、患者身体上の部位へ用いる用意が整った湿潤状態の材料として提供されている。別の実施形態では、グラフト材料は、乾燥状態の材料として供給され、体に用いる際に又は前に再水和される。
【０１１５】
本発明の更に別の実施形態では、治療剤は、流動化したＳＩＳの様な流動化したＥＣＭと混和させて、ＥＣＭと所望の治療剤を含んでいる実質的に均質なグラフト材料溶液を形成している。この事例では、流動化したグラフト材料は、その後患者の体に用いられる。
【０１１６】
本発明の別の実施形態では、治療剤は、最初に流動化したＳＩＳの様な流動化したＥＣＭと混和させて、ＥＣＭと所望の治療剤を含んでいる実質的に均質なグラフト材料を形成する。次いで、患者に用いる前に、流動化したグラフト材料を乾燥させる。流動化した又は細砕した小腸粘膜下組織を調製する方法については、後述の実施例１で説明している。
【０１１７】
図２は、ＥＣＭ１５を備えているグラフト材料１３の概略図であり、治療剤１６は、治療剤を流動化したＥＣＭと混和して、当該グラフト材料を乾燥させることにより、ＥＣＭ１５に組み込まれている。治療剤は、ＥＣＭの表面上に層１４を形成している。
【０１１８】
ある種の実施形態では、グラフト材料は、治療剤を所望の場所に送り出すことができるように、治療剤を伴って調製されている。治療剤は、医療処置に対する補助物（例えば、抗生剤）としてか、又は治療の主要物質（例えば、局所的に投与される遺伝子）として、被覆に含まれている。各種治療剤が使用され、その中には、ヒアルロン酸の様な受動的機能物質並びに成長ホルモンの様な能動的作用物質が含まれる。本発明のグラフト材料の治療剤の具体的な事例については、先に説明済みである。
【０１１９】
治療法
本発明の方法は、患者身体の損傷又は病変のある組織の治癒に有用である。
【０１２０】
本発明に従って形成され使用されるグラフト材料は、患者身体の損傷又は病変のある組織上に載置されると、新しい内生組織の支持と成長のために迅速に血管が発達する基質として機能すると同時に、その様な治療を必要とする患者身体の障害又は病変のある部位に治療薬を送り込む機能を果たす。次いで、グラフト材料は改造され（吸収され、自家分化組織に置換され）、グラフト材料が載置部位で関係付けられる組織の特徴的な造形を作り出す。
【０１２１】
例えば、本発明のグラフト材料の都合のよい特性により、グラフト材料を使った治療を必要とする患者身体の一部を繰り返し清拭する必要性が減る。
【０１２２】
或る実施形態では、本発明は、組織の治癒を促進する方法を包含している。当該方法は、治癒する必要のある組織を、ＥＣＭと少なくとも１つの治療剤を備えているグラフト材料に接触させる段階を含んでいる。
【０１２３】
治療剤は特定の機能を有することが多い。例えば、本発明のグラフト材料に含まれる治療剤の量は、グラフト材料が載置される部位で内生組織の成長を促進するのに有効な量である。グラフト材料に含まれる治療剤の治療上有効な量は、一日につき体重１キログラム当たり約０．１ミリグラム（ｍｇ／ｋｇ／日）から約１００ｍｇ／ｋｇ／日まで、変わると予想される。
【０１２４】
ヒトの損傷又は病変のある組織を治療する技術分野の当業者であれば、ヒトを治療するためにグラフト材料に組み込む治療剤の用量は分かるはずである。一般に、有効な治療薬の量は、その様な治療を必要とする体表面積に基づいて調整される。
【０１２５】
本発明の治療剤の治療上有効な量は、医師又は獣医（担当臨床医）により容易に決定される。用量は、患者の要件、治療対象の症状の重傷度、及び採用された特定の作用物質によって変わる。用量を決める際には、担当臨床医は多くの要因を考慮するが、それら考慮すべき要素としては、限定するわけではないが、治療対象の具体的な組織；特定の作用物質の薬力学的特性；治療の所望の時間的進行；哺乳類の種；その大きさ、年齢、及び一般的健康状態；関与する特定の疾患；疾患の程度又は関与の度合い又は重傷度；個々の患者の反応；投与される特定の化合物；投与形態；投与される調合物の生物学的利用能特性；選択された用量処方計画；併用療法の種類；他の関連状況、が挙げられる。
【０１２６】
或る実施形態では、患者身体の損傷又は病変のある部分は、ＥＣＭ基質と少なくとも１つの治療剤を含んでいるグラフト材料のパッチを載置することにより修復される。
【０１２７】
別の実施形態では、ここで開示しているグラフト材料は、生体分化可能な創傷包帯又はバンドエイドを製作するのに使用されている。創傷包帯は、創傷治療用包帯、組織シーラント（即ち、組織又は器官を出入りする血液、尿、空気などの様な流体又は気体に曝されないようにするために組織又は器官をシールするもの）、及び／又は細胞成長スカフォードとして使用される。各種実施形態では、創傷包帯は、傷害のある組織を保護し、湿潤環境を維持し、水分に対する透過性を有し、適用が容易で、頻繁な交換を必要とせず、毒性が無く、非抗原性であり、微生物制御を維持し、及び／又は有効な化治療剤を創傷部位に送り込む。
【０１２８】
ここに説明するグラフト材料に従って使用される生体吸収可能なシーラント及び接着剤の例としては、例えば、Focal社により製造されているFOCALSEAL（登録商標） (キセノン光ワンドを用いた光重合を必要とする生体分解可能なエオシン-PEG-ラクチドヒドロゲル)；Adventis-Bering社により製造されているBERIPLAST（登録商標）；CanvaTec社（Bristol-Meyers-Squibb社）により製造されているVIVOSTAT（登録商標）；Baxter社により製造されているSEALAGENTM；CyoLife社により製造されているFIBRX（登録商標）（ウイルス非活性化ヒトフィブリノゲン及び抑制化ヒトトロンビンを含有）；Baxter社により製造されているTISSEEL（登録商標） (天然凝固経路の最終段階からのプラズマ誘導物から成る線維糊であり、溶解可能なフィブリノゲンは固体線維に変化している)  とTISSUCOL（登録商標）；Omrix Biopharm社により製造されているQUIXIL（登録商標）（生物活性成分とトロンビン）；Cohesion社（コラーゲン社）により製造されるPEG-コラーゲン共重合体；Davis & Geck社により製造されているHYSTOACRYL  BLUE（登録商標）(ENBUCRILATE)(シアノアクリレート)；Closure Medical社(TriPoint Medical社)により製造されているNEXACRYLTM(N-ブチルシアノアクリレート)、NEXABONDTM、NEXABONDTMS/C、及びTRAUMASEALTM（シアノアクリレートを主材とした製品）；Dermabond社(Ethicon社)により製造されている、2-オクチルシアノアクリレートから成るDERMABONDTM；Medi-West Pharma社により製造されているTISSUEGLU（登録商標）；及び３M社により製造されているn-ブチルシアノアクリレートから成るVETBONDTMが挙げられる。
【０１２９】
創傷包帯は、神経修復、器官修復、皮膚修復、脈管修復、筋肉修復、及び眼科用途を含む軟組織修復に使用される。代表的な実施形態では、創傷包帯は、例えば、真皮及び表皮の面、吻合、縫合、ステープル、穿刺、切開、裂傷、又は組織の付着成長の部位の表面、の様な面を治療するのに使用される。
【０１３０】
代表的な実施形態では、創傷包帯は、組織の被覆又は密閉が求められるあらゆる症状に関連して使用される。例えば、体液を停止又はできる限り少なくすることができ；骨盤及び腹部、心膜、脊髄及び硬膜、腱及び腱鞘の癒着を含め、術後の癒着を予防するためにバリアを用いることができる。創傷包帯は、切開、擦過傷、熱傷、炎症、及び体の外表面に対する被覆を用いることが必要とされる他の症状を修復又は治癒する際に、露出した皮膚を治療するのに有用である。本発明のグラフト材料は、皮膚を治療するのに使用されるのが望ましい。
【０１３１】
或る事例では、熱傷は本発明のグラフト材料を用いて治療され、グラフト材料は、ＥＣＭと、スルファジアジン銀、抗生物質、又は鎮痛剤、及び／又は上記作用物質の組み合わせのような治療剤と、を含んでいる。
【０１３２】
各事例では、患者身体の損傷又は病変のある組織を治療、置換、又は治癒するための損傷包帯として使用される本発明のグラフト材料には、適切な治療剤が含まれている。
【０１３３】
本発明を、更に、以下の実験例により説明するが、これは本発明を限定するものではない。本出願全体を通して引用した全ての文献、特許、及び公開出願を、参考文献としてここに援用する。
【０１３４】
実施例
実施例１：流動化したグラフト材料を調製する方法
流動化したグラフト材料は、腸粘膜下組織の溶液又は懸濁液として調製される。腸粘膜下組織開始材料は、引き裂き、切断、粉砕、剪断などにより細砕されるか、又は、組織が溶解して実質的に均質な粘膜下組織溶液を形成する十分な期間、トリプシン又はペプシンの様なプロテアーゼで消化させる。
【０１３５】
試料を底が平らなステンレス鋼容器に入れて、液体窒素を容器に導入し、試料を凍結して、更に細砕するために調製する。
【０１３６】
次いで、凍結した粘膜下組織試料を細砕して粗い粘膜下組織粉末にする。このような処置は、例えば、凍結した試料の頂部に円筒状の真鋳インゴットを載せて手動アーバプレスで行う。インゴットは、試料とプレス機のアーバの間の接触面として働く。通常、粘膜下組織試料を凍結状態に保つためには、それに周期的に液体窒素を加える必要がある。
【０１３７】
代わりに、粘膜下組織の懸濁液は、高速（高速剪断）ブレンダで処理して脱水し、必要に応じて、遠心分離して上澄みの余剰水分を捨てて行ってもよい。粘膜下組織の粉末が出来上がる。その後、粘膜下組織の粉末を、例えば、緩衝生理食塩水と治療剤を組み合わせたものを使って再水和し、所望の粘度、例えば２５℃で約２から約３００，０００ｃｐｓの粘度の流体化した組織のグラフト材料を形成する。
【０１３８】
より粘度の高いグラフト材料は、ゲル又はペースト粘性を有する。
【０１３９】
グラフト材料は、次いで、電離放射線に曝すなど当技術で認められている殺菌技法を使用して殺菌される。
【０１４０】
実施例２：創傷を治療する方法
ＳＩＳと抗生物質を含んでいるグラフト材料を使用して、全層皮膚創傷を治療する。グラフト材料は、ＳＩＳのシートであり、グラフト材料を噴射することにより一方の側に抗生物質が塗布されている。
【０１４１】
第２度の熱傷、裂傷、引き裂き、及び剥離を含む皮膚創傷、癌性増殖部又は自家移植片皮膚供給部の切除による外科的切除創傷、並びに静脈性潰瘍、糖尿病、圧力（床ずれ）及び他の慢性潰瘍の様な皮膚潰瘍は、ＳＩＳと治療剤を備えているグラフト材料を用いて管理される。
【０１４２】
グラフト材料を創傷に適用する前に、創傷層に適用のための前処理を施す。
【０１４３】
グラフト処置が必要な熱傷創傷を持つ患者を選択する。グラフト材料は、抗生剤を含んでいる側が創傷に面するようにして、切開された創傷層に直接載せる。
【０１４４】
グラフトが移植される熱傷創傷部位に、標準的な実施法に従って治療する前に清拭などの前処理を施して、皮膚の熱傷領域が完全に切開されるようにする。切開された層は、清潔で臨床学的に非感染となる。
【０１４５】
外科的切開を受ける患者には局所的麻酔をかける。術前領域を、抗菌／殺菌皮膚クレンザー（Hibiclens（登録商標））で洗浄して、通常の生理食塩水ですすぐ。皮膚に深い部分的な創傷を入れて、癌性でない限り、その皮膚をどこか他の場所に移植する。グラフト材料を、創傷層に当てて殺菌包帯を当てる。
【０１４６】
何れの創傷の事例でも、処置対象の創傷の検査、洗浄、包帯交換などの際に、適切な創傷の手当てが患者に施される。
【０１４７】
創傷を本発明のグラフト材料で治療すると、清拭を繰り返す必要が少なくなる。
【０１４８】
治療部位の状態の完全な記録が、全ての処置、必要な薬物治療、包帯交換の頻度、及び観察できたこと全てを文書に保存される。創傷層は外部環境から保護され、湿潤した状態に保たれ、創傷の管理と治癒が助長される。
【０１４９】
上記詳細な説明は、本発明を限定するものではなく説明を目的としたものであり、本発明の精神と範囲を定義するのは、特許請求の範囲と全ての等価物であると理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【０１５０】
【図１】本発明のグラフト材料の概略図であり、ＥＣＭを整えた後、ＥＣＭに治療剤が添加される。
【図２】グラフト材料の概略図であり、グラフト材料のＥＣＭに治療薬が組み込まれている。
【図１】
2007532153.tif 000004
【図２】
2007532153.tif 000005
【国際調査報告】
2007532153.tif 000006
2007532153.tif 000007
2007532153.tif 000008
2007532153.tif 000009
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