(57)【要約】【化１】2007530509.tif 000018  本発明は、とりわけ機能的セロトニン受容体活性すなわち強力な５−ＨＴ１Ａアゴニストならびに５−ＨＴ１Ｄ拮抗活性を有する、広範囲の５−ＨＴ受容体に結合する化合物すなわち既知の１−［２Ｈ−１−ベンゾピラン−２−オン−８−イル］ピペラジン誘導体の新規使用に関する。本発明の化合物は疼痛を処置するための医薬品の製造に有用である。本発明は、一般式（１）［式中、記号は記述中に示されるところの意味するところを有する］の化合物に関する。
2007530509.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
疼痛の処置用製薬学的組成物の製造のための、５−ＨＴ１Ｄ受容体拮抗活性を有する化合物の使用。
【請求項２】
疼痛の処置用製薬学的組成物の製造のための、５−ＨＴ１Ａ受容体アゴニスト活性および５−ＨＴ１Ｄ受容体拮抗活性を有する化合物の使用。
【請求項３】
化合物が、一般式（１）：
【化１】
2007530509.tif 000016
［式中：
Ｒ１は、アルキル（１−４Ｃ）、アルコキシ（１−４Ｃ）、ヒドロキシル、アルコキシ（１−４Ｃ）アルキル（１−４Ｃ）、ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニル、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、アミノ、または一若しくは二置換アミノ（式中該置換基はアルキル（１−４Ｃ）若しくはアルキル（１−４Ｃ）カルボニルである）であり、
ｍは値０、１若しくは２を有し、
Ｒ２は、アルキル（１−４Ｃ）、アルコキシ（１−４Ｃ）、ハロゲン若しくはトリフルオロメチルであり、
ｎは、（ｍ＋ｎ）が最低１であるという了解の下で０若しくは１であり、
Ｒ３は水素、アルキル（１−３Ｃ）若しくはアルケニル（２−３Ｃ）であり
Ｒ４はアルキル（１−４Ｃ）であり、および
ｐは値０、１若しくは２を有する］
ならびにその全部の立体異性体および薬理学的に許容できる塩
を有することを特徴とする、請求項１若しくは２のいずれかに記載の使用。
【請求項４】
化合物が、３−アミノ−８−（１−ピペラジニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−２−オンおよびその塩、すなわち、（Ｒ１）ｍが３−ＮＨ２であり、（Ｒ２）ｎ、Ｒ３および（Ｒ４）ｐが水素であり、従って式（２）：
【化２】
2007530509.tif 000017
を有する式（１）の化合物であることを特徴とする、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
化合物が、３−アミノ−８−（１−ピペラジニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−２−オンの一塩酸一水和物であることを特徴とする、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
疼痛が、侵害受容性、神経因性、心因性疼痛を包含する慢性疼痛、ならびに、限定されるものでないが糖尿病性神経障害、神経原性疼痛、中枢痛、体性痛、内臓および癌性疼痛、炎症性疼痛、術後疼痛、慢性腰痛、座骨神経痛、頚部および腰部痛、緊張性頭痛、群発頭痛、慢性日常性頭痛、ヘルペス神経痛およびヘルペス後神経痛、顔面および口腔神経痛、ならびに筋膜疼痛症候群、幻肢痛、断端痛および対麻痺痛、歯痛、オピオイド抵抗性疼痛、心外科手術および乳房切除を包含する外科手術後疼痛、分娩時の疼痛、出産後疼痛、卒中後疼痛、狭心痛、骨盤痛ならびに膀胱炎および外陰前庭炎ならびに精巣痛を包含する尿生殖路疼痛、過敏性腸症候群、月経前症候群痛、火傷若しくは化学傷害または日焼けから生じる疼痛、ならびに骨損傷疼痛を挙げることができる雑多な範疇の疼痛（侵害受容性および神経因性成分）であることを特徴とする、請求項１〜５のいずれかに記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、とりわけ機能的セロトニン受容体活性すなわち強力な５−ＨＴ１Ａアゴニストならびに５−ＨＴ１Ｄ拮抗活性を有する、広範囲の５−ＨＴ受容体に結合する化合物、すなわち既知の１−［２Ｈ−１−ベンゾピラン−２−オン−８−イル］−ピペラジン誘導体の新規使用に関する。本発明はまた、有益な効果を与える医薬品の製造のための本明細書に開示される化合物の使用にも関する。有益な効果は、本明細書に開示されるか、若しくは本明細および当該技術分野の一般的知識から当業者に明らかである。本発明はまた、疾患若しくは状態を処置若しくは予防するための医薬品の製造のための本発明の化合物の使用にも関する。より具体的には、本発明は、本明細書に開示されるか若しくは本明細および当該技術分野の一般的知識から当業者に明らかな疾患若しくは状態の処置のための新たな使用に関する。本発明の態様において、本明細書に開示される特定の化合物は、疼痛のための医薬品の製造に使用される。
【背景技術】
【０００２】
急性疼痛は、個体に可能な傷害を警告するために神経系で誘発される正常な感覚である。慢性疼痛は、当初の損傷若しくは傷害が消失した後に継続する神経系の持続性疼痛シグナルから生じる。慢性疼痛は、いずれかの過去の傷害若しくは身体損傷の証拠の非存在下で発生し得る（いわゆる心因性疼痛）。
【０００３】
多くの異なる型の鎮痛薬が存在する。それらのいずれも完全でなく、また、いずれかの型の疼痛を迅速にかついかなる副作用も伴わずに適切に処置することは、現在利用可能な薬物で可能でない。
【０００４】
本発明は、全部の現在市販されている鎮痛薬の分子作用機序と異なる作用機序をもち、そして従って、既知の鎮痛薬で満足に治療可能でない疼痛状態において治療的価値のある最低１種の化合物を含有する、疼痛の処置のための医薬品を提供するという目的を有した。
【０００５】
驚くべきことに、とりわけ機能的セロトニン受容体活性すなわち強力な５−ＨＴ１Ａアゴニスト、５−ＨＴ１Ｄ拮抗活性ならびに５−ＨＴ７アゴニスト活性（下の受容体結合プロファイルを参照されたい）を有する、広範囲の５−ＨＴ受容体に結合する化合物、３−アミノ−８−（１−ピペラジニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−２−オンの一塩酸一水和物（下で「化合物１」と命名される）が、疼痛の実験的動物モデルで潜在的に活性であることが見出された。該化合物は、１００ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．までの投薬量で与えられる場合に鎮静効果を欠き、また、成長因子の誘導物質として高度に活性であることもまた示された。後者の活性は、神経保護効果、および神経再生に必要とされる脳の可塑性の改善を示し、そしてまた、神経因性疼痛（非特許文献１；および非特許文献２を参照されたい）ならびに糖尿病誘発性疼痛（非特許文献３）における潜在的な治療効果も示す。経口で与えられる場合に、本発明の化合物は良好な生物学的利用能を示し、高い効力および長い作用持続時間をもたらす。
【０００６】
本発明の化合物およびそれらの塩で実現されるところの薬理学的活性は、慢性疼痛障害の処置のための、若しくは有痛性シグナルに対する過剰感作、痛覚過敏、異痛症、高められた疼痛知覚、および疼痛の高められた記憶が存在する他の状態の処置において、新規分類の鎮痛性化合物を表す。
【非特許文献１】Ｐ．Ａｎａｎｄ．、“Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｓｅｎｓｏｒｙ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｅｓ”、Ｐｒｏｇ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．、１４６、４７７−４９２、２００４
【非特許文献２】Ｒ．Ｗａｎｇら、“Ｇｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ  ｎｏｒｍａｌｉｚｅｓ  ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｉｎｊｕｒｅｄ  ｄｏｒｓａｌ  ｒｏｏｔ  ｇａｎｇｌｉｏｎ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ａｎｄ  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ  ｐａｉｎ”、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、１２１、８１５−８２４、２００３
【非特許文献３】Ｊ．Ａ．Ｃｈｒｉｓｔｉａｎｓｏｎら、“Ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｎ  ｄｉａｂｅｔｅｓ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｈｙｐｏａｌｇｅｓｉａ  ｉｎ  ｍｉｃｅ”、Ｊ．Ｐａｉｎ、４、４９３−５０４、２００３
【発明の開示】
【０００７】
［発明の要約］
本発明は、一般式（１）
【０００８】
【化１】
2007530509.tif 000003
【０００９】
［式中：
Ｒ１は、アルキル（１−４Ｃ）、アルコキシ（１−４Ｃ）、ヒドロキシル、アルコキシ（１−４Ｃ）アルキル（１−４Ｃ）、ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニル、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、アミノ、または一若しくは二置換アミノ（式中該置換基はアルキル（１−４Ｃ）若しくはアルキル（１−４Ｃ）カルボニルである）であり、
ｍは値０、１若しくは２を有し、
Ｒ２は、アルキル（１−４Ｃ）、アルコキシ（１−４Ｃ）、ハロゲン若しくはトリフルオロメチルであり、
ｎは、（ｍ＋ｎ）が最低１であるという了解の下で０若しくは１であり、
Ｒ３は水素、アルキル（１−３Ｃ）若しくはアルケニル（２−３Ｃ）であり
Ｒ４はアルキル（１−４Ｃ）であり、および
ｐは値０、１若しくは２を有する］
の化合物、
ならびにその薬理学的に許容できる塩およびプロドラッグ
に関する。
【００１０】
［発明の詳細な記述］
とりわけ機能的セロトニン受容体活性すなわち強力な５−ＨＴ１Ａアゴニストならびに５−ＨＴ１Ｄ拮抗活性を有する、広範囲の５−ＨＴ受容体に結合する化合物、１−［２Ｈ−１−ベンゾピラン−２−オン−８−イル］−ピペラジン誘導体は、元は抗うつ薬として
開発された（欧州特許第ＥＰ  ０  ６５０  ９６４号明細書）。５−ＨＴ１Ｄ拮抗作用の存在は治療的価値があると考えられる。５−ＨＴ１Ｄ受容体は神経末端のシナプス前に位置し、そして５−ＨＴの放出に対する負の調節の影響を有する。従って、これらの受容体の阻害はその末端からの５−ＨＴの放出を高める。シナプス前５−ＨＴ１Ｄ拮抗作用の付加的な存在は、５−ＨＴ取り込み阻害剤の投与後に観察されるところの類似の効果をもたらすことができる。５−ＨＴ１Ｄ拮抗作用が５−ＨＴ１Ａアゴニズムと組合せられる場合に、後者の活性が強化される。
【００１１】
上の論法は本発明の化合物の鎮痛活性に妥当であることがありそうであるということは、抗偏頭痛薬として開発された原型の５−ＨＴ１Ｄアゴニスト、スマトリプタンを用いた相互作用試験により示された。偏頭痛はしばしばそれ自身を頭部の耐え難いほどの疼痛として発現するという事実にもかかわらず、「疼痛」および「偏頭痛」は、間違いなく同義でない。選択的抗偏頭痛薬としての「トリプタン類」の開発まで、該障害は古典的鎮痛薬に対し完全に抵抗性であった。逆もまた当てはまる。すなわち、「トリプタン類」は鎮痛性でない。スマトリプタンは「ホットプレート」試験（下を参照されたい）で完全に不活性であることが見出された。驚くべきことに、しかしながら、スマトリプタンは化合物１の鎮痛効果をほぼ完全に阻害することが見出され（下を参照されたい）、この化合物の５−ＨＴ１Ｄ拮抗作用がその鎮痛活性において重要な役割を演じていることを明瞭に示す。
【００１２】
上述された相互作用試験の結果に基づけば、５−ＨＴ１Ｄ受容体拮抗活性のみを有する化合物が疼痛の処置で価値があることもまたありそうである。
【００１３】
式（１）を有する全部の化合物、ラセミ化合物、ジアステレオマーの混合物および個々の立体異性体が本発明に属する。従って、潜在的に非対称の炭素原子上の置換基がＲ配置若しくはＳ配置のいずれかである化合物が本発明に属する。
【００１４】
上で挙げられた化合物のプロドラッグは本発明の範囲にある。プロドラッグは、それ自体不活性であるがしかし１種若しくはそれ以上の活性代謝物に変換される治療薬である。プロドラッグは、親薬物分子の利用性に対するいくつかの障壁を克服するのに使用される、薬物分子の生物可逆的誘導体である。これらの障壁は、限定されるものでないが、溶解性、浸透性、安定性、全身前（ｐｒｅｓｙｓｔｅｍｉｃ）代謝およびターゲッティングの限界を挙げることができる（Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ、１９９４、ＩＳＢＮ  ０−８５１８６−４９４−５、Ｆ．Ｄ．Ｋｉｎｇ編、ｐ．２１５；Ｊ．Ｓｔｅｌｌａ、“Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ａｓ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ”、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ、１４（３）、２７７−２８０、２００４；Ｐ．Ｅｔｔｍａｙｅｒら、“Ｌｅｓｓｏｎｓ  ｌｅａｒｎｅｄ  ｆｒｏｍ  ｍａｒｋｅｔｅｄ  ａｎｄ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  ｐｒｏｄｒｕｇｓ”、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、４７、２３９３−２４０４、２００４）。プロドラッグ、すなわち、いずれかの既知の経路によりヒトに投与される場合に式（１）を有する化合物に代謝される化合物は、本発明に属する。とりわけ、これは、一級若しくは二級アミノ若しくはヒドロキシ基をもつ化合物に関する。こうした化合物は、限定されるものでないがアミジン、エナミン、マンニッヒ塩基、ヒドロキシルメチレン誘導体、Ｏ−（アシルオキシメチレンカルバメート）誘導体、カルバメート、エステル、アミド若しくはエナミノンを挙げることができる、投与後に容易に除去される付加的な基が存在する式（１）を有する化合物を生じさせるように有機酸と反応させ得る。
【００１５】
製薬学的に許容できる塩は、当該技術分野で公知の標準的手順を使用して、例えば本発明の化合物を適する酸、例えば塩酸のような無機酸若しくは有機酸と混合することにより得ることができる。有効成分およびそれらの塩は、標準的方法によって組成物、例えば液体および固体の担体物質のような補助物質を使用して、丸剤、錠剤、コーティング錠剤、
カプセル剤、散剤、注入液体などに加工し得る。
【００１６】
（Ｒ２）ｎおよび（Ｒ４）ｐが水素であり、Ｒ３が上で示されたところの意味するところを有し、そして（Ｒ１）ｍが、ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニル、アミノ、および置換基がアルキル（１−４Ｃ）若しくはアルキル（１−４Ｃ）カルボニルである一若しくは二置換アミノよりなる群から選択される３位の置換基である、式（１）を有する化合物がとりわけ好ましい。
【００１７】
本発明は、とりわけ、化合物３−アミノ−８−（１−ピペラジニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−２−オンおよびその塩、すなわち（Ｒ１）ｍが３−ＮＨ２であり、（Ｒ２）ｎ、Ｒ３および（Ｒ４）ｐが水素であり、従って式（２）：
【００１８】
【化２】
2007530509.tif 000004
【００１９】
を有する式（１）の化合物に関する。
【００２０】
下で「化合物１」と称される、３−アミノ−８−（１−ピペラジニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−２−オンの一塩酸一水和物がとりわけ好ましい。
【００２１】
本発明の化合物は、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で経口投与後に活性であり、そして、それらの独特の薬理学的プロファイルは、疼痛の処置においてそれらをとりわけ有用にする。
【００２２】
本明細書で使用されるところの疼痛という用語は全部の型の疼痛を指す。好ましくは、該用語は、侵害受容性、神経因性、心因性疼痛を包含する全部の型の慢性疼痛、ならびに雑多な範疇の疼痛（侵害受容性および神経因性成分）を指す。これは、とりわけ、限定されるものでないが糖尿病性神経障害、神経原性疼痛、中枢痛、体性痛、内臓および癌性疼痛、炎症性疼痛、術後疼痛、慢性腰痛、座骨神経痛、頚部および腰部痛、緊張性頭痛、群発頭痛、慢性日常性頭痛、ヘルペス神経痛およびヘルペス後神経痛、顔面および口腔神経痛、ならびに筋膜疼痛症候群、幻肢痛、断端痛および対麻痺痛、歯痛、オピオイド抵抗性疼痛、心外科手術および乳房切除を包含する外科手術後疼痛、分娩時の疼痛、出産後疼痛、卒中後疼痛、狭心痛、骨盤痛ならびに膀胱炎および外陰前庭炎ならびに精巣痛を包含する尿生殖路疼痛、過敏性腸症候群、月経前症候群痛、火傷若しくは化学傷害または日焼けから生じる疼痛、ならびに骨損傷疼痛を挙げることができる。
【００２３】
侵害受容性疼痛の亜型は体性痛および内臓痛である。
【００２４】
体性痛は、炎症性疼痛、術後疼痛、慢性腰痛、頚部および腰部痛、群発頭痛、歯痛、分娩時の疼痛、出産後疼痛、火傷若しくは化学傷害または日焼けから生じる疼痛、ならびに骨損傷疼痛を包含する。
【００２５】
内臓痛は、癌性疼痛、心外科手術を包含する外科手術後疼痛、狭心痛、骨盤痛ならびに
膀胱炎および外陰前庭炎ならびに精巣炎を包含する尿生殖路疼痛、ならびに月経前疼痛症候群を包含する。
【００２６】
神経因性疼痛の亜型は、糖尿病性神経障害、癌性疼痛、神経原性疼痛、中枢痛、座骨神経痛、ヘルペス神経痛、ヘルペス後神経痛、顔面および口腔神経痛、幻肢痛、断端痛および対麻痺痛、オピオイド抵抗性疼痛、乳房切除を包含する外科手術後疼痛ならびに卒中後疼痛である。
【００２７】
心因性疼痛の亜型は慢性日常性頭痛および緊張性頭痛である。
【００２８】
雑多な範疇の疼痛の亜型は、癌性疼痛、筋膜症候群および緊張性頭痛である（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｙ  Ｍ、Ｐａｓｅｒｏ  Ｃ．Ｐａｉｎ：Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｐ１９  セントルイス：Ｍｏｓｂｙ  １９９９；Ｍｅｒｓｋｅｋ  ＨとＢｏｇｄｕｋ（編）Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｐａｉｎ、第２版、ＩＡＳＰ  Ｔａｓｋ  Ｆｏｒｃｅ  ｏｎ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ、ｐ２０９−２１４、ＩＡＳＰ  Ｐｒｅｓｓ、シアトル  １９９４；Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ、第１４部、第１６７章、Ｐａｉｎ、第１７版  Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ  １９９９）。
【００２９】
好ましい一適応症は、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、すなわち有痛性の便秘若しくは下痢、ガス発生（ｇａｓｓｉｎｅｓｓ）および膨脹（ｂｌｏａｔｉｎｇ）を伴う痙攣性の腹痛に至る腸の一般的な障害である。ＩＢＳの原因は既知でないが、しかし、それはしばしば感情的葛藤すなわちストレスにより引き起こされると考えられている。ＩＢＳは、結腸を検査する場合に疾患の兆候が存在しないために機能性障害と呼ばれる。
【００３０】
製薬学的製剤
本発明の化合物は、液体若しくは固体の担体物質のような補助物質を使用する通常の方法によって投与に適する形態にもたらし得る。本発明の製薬学的組成物は、腸に、経口で、非経口で（筋肉内若しくは静脈内に）、直腸にまたは局所に（ｌｏｃａｌｌｙ）（局所に（ｔｏｐｉｃａｌｙ））投与しうる。それらは溶液、散剤、錠剤、カプセル剤（マイクロカプセル剤を包含する）、軟膏剤（クリーム剤若しくはゲル剤）または坐剤の形態で投与し得る。こうした製剤に適する賦形剤は、製薬学的に通例の液体若しくは固体の増量剤および希釈剤、溶媒、乳化剤、滑沢剤、着香料、着色料ならびに／若しくは緩衝物質である。挙げられうる頻繁に使用される補助物質は、炭酸マグネシウム、二酸化チタン、乳糖、マンニトールおよび他の糖若しくは糖アルコール、タルク、乳タンパク質、ゼラチン、デンプン、セルロースおよびその誘導体、魚肝油、ヒマワリ、ラッカセイ若しくはゴマ油のような動物および植物油、ポリエチレングリコール、ならびに例えば滅菌水および一価若しくはグリセロールのような多価アルコールのような溶媒である。
【００３１】
使用しうる製薬学的組成物の型は、限定されるものでないが、錠剤、咀嚼可能な錠剤、カプセル剤、溶液、非経口溶液、坐剤、懸濁剤、ならびに本明細書に開示されるか若しくは本明細および当該技術分野の一般的知識から当業者に明らかな他の型を挙げることができる。本発明の態様において、本発明の製薬学的組成物の成分の１種若しくはそれ以上を充填した１個若しくはそれ以上の容器を含んでなる製薬学的パック若しくはキットが提供される。使用説明書、または製薬学的製品の製造、使用若しくは販売を規制する政府機関により指示された形態の通知のような多様な文書資料（ｗｒｉｔｔｅｎ  ｍａｔｅｒｉａｌ）がこうした容器（１個若しくは複数）に付随し得、この通知はヒト若しくは家畜の投与についての製造、使用若しくは販売の機関による承認を反映する。
【００３２】
薬理学的アッセイのプロトコル
慢性狭窄性神経傷害：神経因性疼痛モデル
これらの試験の目的は、末梢単ニューロパシーのＢｅｎｎｅｔｔとＸｉｅのモデル（Ｇ．Ｊ．ＢｅｎｎｅｔとＹ−Ｋ．Ｘｉｅ、“Ａ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｍｏｎｏｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ  ｉｎ  ｒａｔ  ｔｈａｔ  ｐｒｏｄｕｃｅｓ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ｏｆ  ｐａｉｎ  ｓｅｎｓａｔｉｏｎ  ｌｉｋｅ  ｔｈｏｓｅ  ｓｅｅｎ  ｉｎ  ｍａｎ”、Ｐａｉｎ、３３、８７−１０７、１９８８を参照されたい）で試験物質の潜在的鎮痛特性を評価することである。
【００３３】
試験デザイン
雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（およそ２５０ｇ：Ｈａｒｌａｎ、英国、若しくは他の公認の供給元）。観察者は処置群に対し盲検化する。
【００３４】
５処置群（ｎ＝１０ラット／群）；ベヒクル対照、参照物質および試験物質の３投薬群。２日の基礎試験、末梢単ニューロパシーを誘発するための外科手術、ならびに術後（ＰＯ）第１０および１１日の行動試験を使用するニューロパシーの発症のモニタリング。ＰＯ第１２日に開始し１４日間の慢性の皮下薬物投与（１日２回注入、若しくは浸透圧ミニポンプを介する連続注入のいずれかによる）、および機械的異痛についての投与後４時点での行動試験。
【００３５】
手順：
ラットはバッチ（各バッチに各処置群のメンバーを伴う）で準備し、そして、行動試験および投薬は、各バッチについて外科手術後に固定した間隔で行う。行動試験（下を参照されたい）を、外科手術前の２日間に全ラットで実施して基礎値を確立する。末梢単ニューロパシーをその後、４本の緩く狭窄する結紮を右総座骨神経の周囲に無菌条件下で置くことにより誘発する。動物は、行動試験を再開する前に最低４日間、外科手術から回復させる（Ｂ．ＬｙｎｎとＳ．Ｅ．Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ、“Ｐｒｉｍａｒｙ  ａｆｆｅｒｅｎｔ  ｕｎｉｔｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｈａｉｒｙ  ｓｋｉｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒａｔ  ｈｉｎｄ  ｌｉｍｂ”、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２３８、２９−４３、１９８２）。
【００３６】
行動試験を術後（ＰＯ）第１０日に再開し、そして第１１日に反復して異痛の発生をモニターする。薬物処置はＰＯ第１２日（最大の行動変化に対応する時間点）から、若しくは試験プロトコルに定義されるとおり実施し、そして行動試験の時間経過を実施する。冒された指の自己切断のいずれかの兆候を示す動物は終了させる。（特定のプロトコルで使用される行動試験の結果により決定されるところの）末梢単ニューロパシーを発症しないいかなる動物も試験で使用しない。
【００３７】
行動試験：
機械的異痛試験：動物を金網ケージに入れ、そして一連のＶｏｎ  Ｆｒｅｙフィラメントを後足の足底表面に下から適用する。フィラメントは昇順（最も弱い力で開始する）で適用し、そして、同側および反対側双方の後足の後退の閾値を評価する。後退の閾値は、反射後退応答（すなわち短い足の動き）を導き出すための２種若しくはそれ以上の連続したｖｏｎ  Ｆｒｅｙフィラメントの最小の力であると定義する。
【００３８】
結果の解析：
標準的な統計学的方法を使用して、試験物質に関係する効果を評価する。データは、均一性、および適切なように適用されるパラメトリック若しくはノンパラメトリックいずれかの方法について解析する。
【００３９】
脊髄神経の結紮：神経因性疼痛モデル
ＫｉｍとＣｈｕｎｇ（Ｐａｉｎ  １９９２、５０：３５５−３６３）によるラットでの
神経因性疼痛試験（Ｃｈｕｎｇ試験）：ラットの脊髄神経のきつい結紮は、痛覚過敏、異痛および自発痛を伴い、そして従ってヒトにおける末梢性神経因性疼痛のモデルを構成する。抗痛覚過敏薬は、疼痛過敏症のこれらの慢性兆候を低下させる。ラット（１８０〜２２０ｇ）を麻酔（ペントバルビタールナトリウム４０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）し、そしてＬ４−Ｓ２レベルでの切開を実施して左Ｌ５およびＬ６脊髄神経を露出させる。結紮を各神経の周囲できつく結ぶ。創傷をその後縫合する。ラットは５００００ＩＵのペニシリンの筋肉内（ｉ．ｍ．）注入を受領し、そして回復させる。慢性状態が完全に導入される外科手術の最低２週間後に、ラットに、非病変および病変双方の後足の熱的および触覚刺激を連続して受けさせる。熱刺激については、装置は、上昇されたガラス製床の上に置いた６個の個別のＰｌｅｘｉｇｌａｓ製の箱（１７×１１×１３ｃｍ）よりなる。ラットを箱に入れ、そして１０分間自由に慣らさせる。その後、移動式の赤外放射源（設定２０）の焦点を非病変および病変後足の下に合わせ、そして足の後退の待ち時間を自動的に記録する。足の後退が反射放射を中断し、そしてカウンタおよび光源のスイッチを切る。組織損傷を予防するため、反応が示されない場合は試験を４５秒後に終了する。触覚刺激のためには、動物を格子床上の反転させたＰｌｅｘｉｇｌａｓ製の箱（１７×１１×１３ｃｍ）の下に入れる。電子的ｖｏｎ  Ｆｒｅｙプローブの先端をその後、増大する圧を伴い非病変および病変後足に適用し、そして足の後退を誘発するのに必要とされる力を自動的に記録する。この手順を３回実施し、そして足あたりの平均の力を計算して、動物あたりの基礎スコアを提供する。薬物処置を受領する前に、全動物に触覚刺激を受けさせかつそれらの疼痛応答に基づいてマッチさせた処置群に割り当てることができる。
【００４０】
ｉｎ  ｖｉｖｏ電気生理学：炎症性疼痛のモデル
ｉｎ  ｖｉｖｏ電気生理学は、（閾値を使用する行動試験と異なり）閾値超の刺激に対する脊髄ニューロンの感覚応答を直接見る強力な手段であり、そして、従って臨床的な疼痛状態により関係する。
【００４１】
雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（２００〜２５０ｇ）を２〜３％ハロタン（６６％Ｎ２Ｏおよび３３％Ｏ２中）で麻酔し、そしてその後１．８％ハロタンで維持する。動物の中核体温を、加熱ブランケットに接続した直腸温度計プローブを使用してモニターする。実験の終了時に、動物を麻酔薬の過剰投与で殺す。椎弓切除を実施して脊髄のＬ４−Ｌ５区分を露出させ、そして、パリレン被覆タングステン電極を、Ｅｐｓｏｎのステッパー装置を使用して後角中に下降させる。記録部位の深さは、マイクロドライブの示度から示される。細胞外の記録は、有害および無害双方の刺激（ピンチおよび接触）に応答するそれらの能力により同定される、後足の皮膚からのＣおよびＡ線維入力を受領する単一の後角ニューロンから行う。ニューロンの応答は、同側の後足のニューロンの受容野の中心に、Ｃ線維で惹起される活動に必要とされる閾値電流の３倍で与えた経皮的電気刺激により導き出す。１０分間隔で、連続１６刺激（０．５Ｈｚの２ｍ秒幅のパルス）よりなる試験を実施し、そして刺激後ヒストグラムを構築する。これらの惹起された応答を、待ち時間に従って、Ａβ線維で惹起された活動（刺激後０〜２０ｍ秒）；Ａδ線維で惹起された活動（２０〜９０ｍ秒）；Ｃ線維で惹起された活動（９０〜３００ｍ秒）およびニューロンの後放電（３００〜８００ｍ秒）に分離する。該連続の最初の刺激により惹起されたニューロン応答は「入力」と称され、そして、この刺激により惹起された活動電位（９０〜８００ｍ秒）の数よりなる。ワインドアップ、すなわち反復刺激により導き出される高められたニューロン応答の尺度を、１６刺激により生じられる活動電位（９０〜８００ｍ秒）の総数と、入力×１６との間の差違として定量する。従って、ワインドアップの尺度は、高められたＣ線維で惹起される応答、およびワインドアップが発生する際に生成される後放電の双方を包含する。ｖｏｎ  Ｆｒｅｙ毛（１〜７５ｇ）および熱（３０〜４８℃）もまた、天然の機械的および熱刺激に対する応答を定量するのに使用する。
【００４２】
試験は、各試験で惹起されたニューロン応答が１０％未満だけ異なるまで１０分間隔で実施する。最後の３試験の結果をその後平均して、各パラメータの対照値を生じる。
【００４３】
（５０μｌ容量の）化合物の累積用量をその後、露出させた脊髄に、５０μｌ容量の薬物を保持した、椎弓切除により形成した「ウェル」中で適用する。ニューロン応答を各投与後６０分間追跡し、その後、溶液を除去し得かつ次の用量を適用し得る。同様に、全身性の効果を、０．２ｍｌの皮下注入を使用して測定し得る。
【００４４】
データは、薬物の各用量について６０分の時間経過を伴い、薬物前の対照値のパーセントとして示す。用量応答曲線を生成させるため、各ニューロンに対する各用量の最大の効果を平均する。データは平均±ｓ．ｅ．ｍ．として提示する。各経路に１０ニューロンが必要とされる。正常動物での（上の試験により決定されるところの最も有効な経路による）該化合物の効果を用いて、カラギーナン炎症の３時間後に見られるものとで比較を行う。従って、合計３０回の実験（動物あたり１ニューロン）を行い、また、各試験は１日持続する。
【００４５】
ホルマリン足試験：炎症性疼痛のモデル
Ｗｈｅｅｌｅｒ−Ａｃｅｔｏら（Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １９９１、１０４：３５−４４）によるマウス若しくはラットでのホルマリン足試験：動物に、５％ホルマリン（マウスについて２５μｌ、ラットについて５０μｌ）の足底内注入を後左足に与える。この処置は対照動物で認識可能な後ずさり応答を誘発する。後ずさりの数を、ホルマリンの注入直後に開始する１０分間（早期）、および、注入２０分後に開始してマウスで５分間若しくはラットで１５分間、計数する。
【００４６】
カラギーナン浮腫試験：炎症性疼痛のモデル
ラットでのカラギーナン浮腫試験はＷｉｎｔｅｒらにより記述されたもの（Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．１９６２、１１１：５４４−５４７）に従う。すなわち、右後足の下表面への溶液（０．０５ｍｌ生理学的生理的食塩水中足あたり０．７５ｍｇ）。２時間後、ラットに、炎症を起こしていないおよび炎症を起こした双方の後足の熱的および触覚刺激を連続的に受けさせる。熱刺激のため、装置（Ｕｇｏ  Ｂａｓｉｌｅ、参照：７３７１）は、上昇されたガラス製床上に置いた６個の個別のＰｌｅｘｉｇｌａｓ製の箱（１７×１１×１３ｃｍ）よりなる。ラットを箱に入れ、そして１０分間自由に慣れさせる。その後、移動式の赤外放射源（設定２０）の焦点を、炎症を起こしていないおよび炎症を起こした後足の下に合わせ、そして足の後退の待ち時間を自動的に記録する。足の後退が反射放射を中断し、そしてカウンタおよび光源のスイッチを切る。組織損傷を予防するため、反応が示されない場合は試験を４５秒後に終了する。触覚刺激のためには、動物を格子床上の反転させたＰｌｅｘｉｇｌａｓ製の箱（１７×１１×１３ｃｍ）の下に入れる。電子的ｖｏｎ  Ｆｒｅｙプローブの先端をその後、増大する圧を伴い、炎症を起こしていないおよび炎症を起こした後足に適用し、そして足の後退を誘発するのに必要とされる力を自動的に記録する。この手順を３回実施し、そして足あたりの平均の力を計算して、動物あたりの基礎スコアを提供する。３．５時間後に頸椎への強打により動物を殺し、そして後足を切片にしかつ秤量する。足重量の増大（浮腫）は炎症を示す。この後者の手順はマウスにもまた適用し得る。
【００４７】
酵母高温試験：炎症性疼痛のモデル
Ｔｅｏｔｉｎｏら（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９６３、６：２４８）によるマウス若しくはラットでの酵母高温試験：動物を最初に、直腸プローブを使用して直腸温度について測定する。それらにその後酵母懸濁液（５１２ｍｇ／ｋｇ  ｓ．ｃ．）を注入する。８時間後に試験物質を投与する。マウスは、試験物質投与直前、ならびに６０および１２０分後に再度、直腸温度について測定する。
【００４８】
ラットでの結腸直腸膨満：内臓痛のモデル
実験手順：
動物（雌性Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット、体重：２０８〜２５７ｇ、群あたり５〜７匹）を、水への自由な到達を伴い、実験前２４時間絶食させる。酢酸（０．６％、１．５ｍｌ）を結腸（肛門に対し１０ｃｍ近位）に注入する。５０分後、５ｃｍ長（６〜７ｍｌ体積）のゴム風船を直腸で下降結腸に挿入し、そして取り付けたチューブをラットの尾にテープで止めることにより固定する。風船の圧を１００ｍｂａｒに１０分間設定する。この時間の腹部収縮の数を目視により記録する。実験は、１０回以上の腹部収縮を伴い結腸直腸膨満に応答する動物でのみ継続する。これらの動物は、有効成分若しくはベヒクル（水中１０％Ａｒｌａｔｏｎｅ  Ｇ、１０％エタノール（９６％））の単回皮下投与を受領し、そして、結腸直腸膨満のプロトコルを投与３０、６０、９０および１２０分後に反復する。
【００４９】
データ解析：
結果は平均±ＳＤで示す。物質若しくはベヒクルの投与後３０、６０、９０および１２０分の腹部収縮の数、ならびに平均値（３０〜１２０分）を、対応のある両側ｔ検定により前値（時間０）と比較する。ｐ＜０．５の値を統計学的に有意と解釈する。
【００５０】
さらに、収縮の総対数（前値の％）を各動物について計算し、そして群の平均値を生じる。
【００５１】
神経保護活性：成長因子の誘導
本発明の化合物（３ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．）若しくはベヒクルを１日１回３週間投与する（処置群あたりｎ＝８動物）。最後の投与の２４時間後に動物を（ＣＯ２／Ｏ２麻酔を使用して）殺し、脳を取り出しかつ切開する。ＲＮＡを個々の脳サンプルから抽出し、そして成長因子ＢＤＮＦおよびＧＤＮＦの誘導を定量的ＰＣＲにより測定する。全ＲＮＡをＴｒｉｚｏｌ法（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で脳片から単離する。ｃＤＮＡを、逆転写酵素Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  ＩＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して２μｇの全ＲＮＡ（第一鎖緩衝液中、ＤＮアーゼ（Ａｍｂｉｏｎ）で３０分間前処理する）で開始して作成する。リアルタイムＰＣＲによるｍＤＮＡの定量は、ＰＣＲの初期周期は標的の増幅の指数的増大を特徴とするという観察結果を利用する。ＰＣＲ産物の蓄積を、Ｓｙｂｅｒｇｒｅｅｎ  ＩＩを使用して測定する。プライマーは、ソフトウェアパッケージＰｒｉｍｅｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して設計する。ハウスキーピング遺伝子オルニチン脱炭酸酵素（ＯＤＣ＿ｅｘ８）およびα−チューブリン（ＴＵＢＡ）の発現レベルを、正規化のためおよび良好なｃＤＮＡ合成の対照として使用する。
【００５２】
ホットプレート試験：急性疼痛のモデル
ＥｄｄｙとＬｅｌｍｂａｃｈ（Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．１９５３、１０７：３８５−３９３）によるマウス若しくはラットでのホットプレート試験：マウス若しくはラットを、Ｐｌｅｘｉｇｌａｓ製の筒（高さ：１３ｃｍ；直径：１９ｃｍ）により囲まれた、マウスについて５４℃若しくはラットについて５２℃に維持された高温金属プレート上に載せる。最初の足なめ（ｆｏｏｔ−ｌｉｃｋ）までの待ち時間を測定する（最大：３０秒）。
【００５３】
尾動かし（ｔａｉｌ  ｆｌｉｃｋ）試験：急性疼痛のモデル
Ｄ’ＡｍｏｕｒとＳｍｉｔｈ（Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．１９４１、７２：７４−７９）によるに従うマウス若しくはラットでの尾動かし試験：動物の尾を熱光源によって加熱する。動物がその尾を後退させる前の待ち時間を測定する（最大：マウスについて１５秒、ラットについて３０秒）。
【００５４】
フェニルブタゾン／酢酸もがき試験：急性疼痛のモデル
マウスでのフェニルベンゾキノンおよび酢酸もがき試験はＨｅｎｄｅｒｓｈｏｔらにより記述された方法（Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．１９５９、１２５：２３７−２４０）に従う。すなわち、マウスにフェニルベンゾキノン（ＰＢＱ）（１．２５ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）若しくは酢酸（０．５％  ｉ．ｐ．）を注入する。この処置は対照動物で認識可能なもがき応答を誘発する。もがきの数を、ＰＢＱ若しくは酢酸の注入５分後に開始して１０分間計数する。
【００５５】
フロイントのアジュバント試験：慢性炎症性疼痛のモデル
Ｗｈｉｔｅｌｅｙ（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、Ｗｉｌｅｙ、ニューヨーク、５．５、１９９９）によるラットでの慢性炎症性疼痛試験（フロイントのアジュバント試験）：ラットでのフロイントのアジュバントの注入は疼痛を伴う多発性関節炎の慢性の臨床兆候を誘発する。第１日に、ラットを秤量し、そしてミコバクテリウム  ブチリクム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ）（フロイントのアジュバント）の懸濁液を尾の近位１／４に皮内注入する（０．１ｍｌ鉱物油中１ｍｇ）。擬似対照は鉱物油の類似の注入を受領する。慢性状態が完全に導入される第１８日にラットを再度秤量し、そして炎症の臨床症状について評価する。それらにその後双方の後足の熱的および触覚刺激を連続して受けさせる。臨床兆候について、各足を５点尺度（０〜４）に従って、および尾を４点尺度（０〜３）に従って、炎症について評価する（すなわち動物あたり１９の最大スコア）。熱刺激について、装置（Ｕｇｏ  Ｂａｓｉｌｅ、参照：７３７１）は、上昇されたガラス製床上に置いた６個の個別のＰｌｅｘｉｇｌａｓ製の箱（１７×１１×１３ｃｍ）よりなる。ラットを箱に入れ、そして１０分間自由に慣れさせる。その後、移動式の赤外放射源（設定２０）の焦点を各足の下に合わせ、そして足の後退の待ち時間を自動的に記録する。足の後退が反射放射を中断し、そしてカウンタおよび光源のスイッチを切る。組織損傷を予防するため、反応が示されない場合は試験を４５秒後に終了する。触覚刺激のためには、動物を格子床上の反転させたＰｌｅｘｉｇｌａｓ製の箱（１７×１１×１３ｃｍ）の下に入れる。電子的ｖｏｎ  Ｆｒｅｙプローブ（Ｂｉｏｓｅｂ、型式１６１０）の先端をその後、増大する圧を伴い各後足に適用し、そして足の後退を誘発するのに必要とされる力を自動的に記録する。この手順を３回実施し、そして足あたりの平均の力を計算して、動物あたりの基礎スコアを提供する。薬物処置を受領する前に、全動物に触覚刺激を受けさせかつそれらの疼痛応答に基づいてマッチさせた処置群に割り当てることができる。
【００５６】
受容体結合実験
受容体結合データは、十分に報告された標準的手順を使用して、ＣＥＲＥＰ（１２８，ｒｕｅ  Ｄａｎｔｏｎ，９２５００  Ｒｕｅｉｌ−Ｍａｌｍａｉｓｏｎ，フランス）若しくはＳｏｌｖａｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｂ．Ｖ．により得た。例えば５−ＨＴ１Ａ受容体に対する親和性は、ラット前頭皮質ホモジェネート中のその特異的結合部位から［３Ｈ］−２−（ジ−ｎ−プロピルアミノ）−８−ヒドロキシテトラリン（［３Ｈ］−８−ＯＨ−ＤＰＡＴ）を置き換える本発明の化合物の能力を試験することにより測定した。この試験は、Ｇｏｚｌａｎらにより記述された方法（Ｎａｔｕｒｅ、３０５、（１９８３）、１４０〜１４２ページ）に基づく。
【００５７】
用量
セロトニン受容体に対する本発明の化合物の親和性を上述されたとおり測定した。式（１）の所定の化合物について測定された結合親和性から、理論上の最低有効用量を推定し得る。測定されたＫｉ値の２倍に等しい化合物の濃度で、受容体の１００％が該化合物により占有されることがありそうである。その濃度を患者１ｋｇあたりの化合物のｍｇに変換することは、理想的な生物学的利用能を仮定すれば、理論上の最低有効用量を生じる。薬物動態、薬動力学および他の考慮が、実際に投与される用量をより高い若しくは低い値に変えうる。便宜上投与される投薬量は、０．００１〜１０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ患者体重である。
【００５８】
実施例
【実施例１】
【００５９】
合成の間に使用される分析方法
核磁気共鳴（ＭＮＲ）分光学
ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＭ４００分光計若しくはＶａｒｉａｎ  ＶＸＲ４００Ｓ分光計で記録した。化学シフト（δ）は内部標準としてのＴＭＳから低磁場のｐｐｍで報告した。１０〜５０ｍｇのサンプルを重水溶媒、通常はＣＤＣｌ３若しくはＤＭＳＯ−ｄ６／ＣＤＣｌ３（４：１  ｖ／ｖ）混合物）に溶解した。溶媒はサンプルの完全な溶解を確実にするように選択した。自由誘導減衰は一般に以下の条件下で室温で得られた：
デジタル分解能：０．２Ｈｚ
掃引幅：１８ｐｐｍ
パルス幅：２０度
パルス反復時間：４．５秒、若しくは完全な緩和に必要とされる場合はそれ以上
搬送周波数：６．０ｐｐｍ
取得数：１２８、若しくは必要な場合はそれ以上。０．５％シグナル強度のＣ−１３サテライトシグナルが明瞭に見えるべきである。
【００６０】
ＮＭＲは相対含量の測定方法として使用した。
【００６１】
滴定法（塩化物および水の定量）
電位差滴定のため、Ｍｅｔｒｏｈｍ型式Ｅ６３６（スイス）を使用した。
【００６２】
電位差滴定の塩化物定量を、塩化物を測定するためにこの合成で使用した。滴定は組合せ銀電極および硝酸銀滴定液を用いて実施した。該方法は、それが異なる電極電位に基づきヨウ化物および臭素と塩化物を識別し得るために、塩化物に特異的である。
【００６３】
カール・フィッシャーによる測定のためのボルタン滴定は、米国薬局方の方法に従ってＭｅｔｒｏｈｍ  ６３３ＫＦ（Ｍｅｔｒｏｈｍ、スイス）装置を使用して実施した。
【実施例２】
【００６４】
３−アミノ−８−（１−ピペラジニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−２−オンおよびその一塩酸一水和物（化合物１）の合成
【００６５】
段階１：ニトロ化
第一段階は、５−ブロモ−２−ヒドロキシ−３−ニトロベンズアルデヒド（２＊）を生じる５−ブロモ−２−ヒドロキシベンズアルデヒド（１＊）のニトロ化であった。
【００６６】
【化３】
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【００６７】
３．７５リットルの酢酸（９８％）中の１．０ｍｏｌの５−ブロモ−２−ヒドロキシベンズアルデヒド（１＊）の溶液を、約６０℃まで混合物を加熱することに際して生じさせた。１．５ｍｏｌの濃硝酸（１３７ｇ＝９７ｍｌ）をおよそ１時間でゆっくりと添加した。添加の完了後に攪拌を６５℃でさらなる１０分間継続した。溶液をその後４５℃に冷却し、そして生成物を４リットルの水の添加により沈殿させた。最低３時間攪拌した後に、生成物をフィルター上で収集し、そして母液のｐＨがおよそ６になるまで水で洗浄した。物質を遠心分離により可能な限り多く乾燥する。粗生成物を還流および攪拌下に８００ｍｌのアセトンに溶解した。４００ｍｌのアセトンを蒸留により除去した。２０℃に冷却した後に混合物を３時間攪拌した。沈殿物をフィルター上で収集し、そして石油エーテル４０〜６５℃で洗浄した。固形物を４０℃の空気流中で一夜乾燥した。最後に、粗物質（ｃｒｕｄｅ）（２＊）をアセトンから再結晶して、ＮＭＲ分析により示されるところの９８％の純度を伴う最終生成物を生じた。
【００６８】
５−ブロモ−２−ヒドロキシベンズアルデヒド（１＊）は、その特徴的な化学シフト、δ９．８４ｐｐｍにより同定され；５−ブロモ−２−ヒドロキシ−３−ニトロベンズアルデヒド（２＊）はδ１０．４ｐｐｍの特徴的な化学シフトを有した。
【００６９】
この段階の全体的な収率はおよそ６０％（粗物質対粗物質（ｃｒｕｄｅ  ｏｎ  ｃｒｕｄｅ））であった。
【００７０】
段階２：エルレンマイヤー縮合
第二段階は、Ｎ−（６−ブロモ−８−ニトロ−２−オキソ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル）アセトアミド（３＊）を生じるための、５−ブロモ−２−ヒドロキシ−３−ニトロベンズアルデヒド（２＊）のＮ−アセチルグリシンとのエルレンマイヤー縮合であった。
【００７１】
【化４】
2007530509.tif 000006
【００７２】
１．０ｍｏｌの５−ブロモ−２−ヒドロキシ−３−ニトロベンズアルデヒド（２＊）、１．０ｍｏｌのＮ−アセチルグリシンおよび１．０ｍｏｌの無水酢酸ナトリウムの混合物に、８００ｍｌのＮ−メチル−２−ピロリドンを添加する。混合物を攪拌しかつ５０℃に加熱した。その後、２．２ｍｏｌの無水酢酸をおよそ３０分で反応容器に流し込んだ。反
応混合物を１００℃に加熱した。加熱する間に、反応混合物はしばらく均一になり；その直後に固形物が形成され、攪拌を厄介にした。１００℃で４時間加熱した後に混合物を８０℃に冷却し、そして１，１００ｍｌの酢酸（９８％）を添加した。その後、混合物の攪拌は容易になった。次に、混合物を室温に冷却しそして６０分間攪拌した。沈殿物をフィルター上で収集し、そして６２５ｍｌの酢酸（８０％）で２回、９００ｍｌの水で５回、および３００ｍｌのアセトンで１回洗浄した。生成物を４０℃の空気流中で２４時間乾燥し、そしてＮＭＲ分析により示されるところの９８％の純度を有した。
【００７３】
５−ブロモ−２−ヒドロキシ−３−ニトロベンズアルデヒド（２＊）はδ１０．４ｐｐｍの特徴的なシフトを有し；Ｎ−（６−ブロモ−８−ニトロ−２−オキソ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル）アセトアミド（３＊）の特徴的な化学シフトはδ８．７２ｐｐｍであった。
【００７４】
この段階の全体的な収率はおよそ８０％（粗物質対粗物質）であった。
【００７５】
段階３：還元
第三の段階は、Ｎ−（６−ブロモ−８−ニトロ−２−オキソ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル）アセトアミド（３＊）のＮ−（８−アミノ−２−オキソ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル）アセトアミド（４＊）への触媒的水素化であった。
【００７６】
【化５】
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【００７７】
１．０ｍｏｌのＮ−（６−ブロモ−８−ニトロ−２−オキソ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル）アセトアミド（３＊）、５０ｇの１０％炭上パラジウムペースト（６１％水を含有する）、１．０ｍｏｌの炭酸カリウムおよび１５リットルのエタノールの混合物を６０℃に加熱した。この温度で、出発原料を１４００ｒｐｍで４ｂａｒの過度の圧力で水素で還元した。反応の完了（１時間）後に、濾過助材を使用する濾過により触媒を除去し、そして４．５リットルのメチルエチルケトン（ＭＥＫ）で洗浄した。濾液を２リットルに濃縮し、そして、溶媒をエタノールからＭＥＫに変えるために２．３リットルのＭＥＫを添加し、２リットルの溶媒混合物を常圧で蒸留分離し、そして２リットルのＭＥＫを添加した。これを４回反復した。その後、５リットルのＭＥＫおよび２．６リットルの水を添加し、そして混合物を攪拌した。層を分離した。上層を常圧でおよそ３．５リットルまで濃縮した。残渣を２５℃に冷却した。この冷却の間に生成物が結晶した。その後、混合物を−１０℃に冷却しかつ２時間攪拌した。固形物を濾過し、そして８００ｍｌのヘキサンで３回洗浄した。生成物を一定重量まで乾燥（５０℃、２０ｃｍＨｇ、Ｎ２）した。
【００７８】
Ｎ−（６−ブロモ−８−ニトロ−２−オキソ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル）アセトアミド（３＊）はδ８．７２ｐｐｍの特徴的な化学シフトを有し；Ｎ−（８−アミノ−２−オキソ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル）−アセトアミド（４）のものはδ８．５５ｐｐｍであった。
【００７９】
この段階の全体的な収率はおよそ７０％（粗物質対粗物質）であった。
【００８０】
段階４：ピペラジン環系の構築
段階４は、Ｎ−（８−（１−ピペラジニル）−２−オキソ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル−）アセトアミド（５＊）を生じる、Ｎ−（８−アミノ−２−オキソ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル）−アセトアミド（４＊）のビスクロロエチルアミンでのアルキル化であった。
【００８１】
【化６】
2007530509.tif 000008
【００８２】
２．５リットルのモノクロロベンゼン、１．０ｍｏｌのＮ−（８−アミノ−２−オキソ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル）−アセトアミド（４＊）および１．２ｍｏｌのビスクロロエチルアミン塩酸塩の混合物を窒素下還流に加熱した。モノクロロベンゼンの一部（０．５リットル）を蒸留分離した。この混合物を１０日間還流した。反応をＨＰＬＣにより追跡した。反応後に混合物を２０℃に冷却し、そして一夜攪拌した。固体の生成物をフィルター上で収集し、そして３６０ｍｌのモノクロロベンゼンで１回および３６０ｍｌのエタノールで３回洗浄した。生成物を真空中５０℃で乾燥した。
【００８３】
粗生成物の半分を３リットルの水に溶解した。１８ｇのセライトおよび５０ｇの炭の添加後に混合物を室温で１時間攪拌した。濾過後に、溶液を水の蒸留により濃縮した。その間、粗生成物の第二の半分を上述されたとおり処理した。合わせた水性溶液の総容量が約１．５リットルになった場合に蒸留を停止し、そして混合物を室温に冷却した。その後、１２５ｇの重炭酸ナトリウムを一部分ずつ添加した。１５℃で１．５時間攪拌した後に、形成された沈殿物をフィルター上で収集した。３６０ｍｌの水および２７０ｍｌのエタノールで２回洗浄した後に、生成物を真空中５０℃で乾燥した。
【００８４】
Ｎ−（８−アミノ−２−オキソ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル）−アセトアミド（４＊）はδ８．５５ｐｐｍの特徴的な化学シフトを有し；Ｎ−（８−（１−ピペラジニル）−２−オキソ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル−）アセトアミド（５＊）のものはδ８．５７ｐｐｍであった。
【００８５】
この段階の全体的な収率はおよそ５０％（粗物質対粗物質）であった。
【００８６】
段階５：アミド加水分解
段階５は塩酸を使用するＮ−（８−（１−ピペラジニル）−２−オキソ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル−）アセトアミド（５＊）のアミド官能基の加水分解であった。これは３−アミノ−８−（１−ピペラジニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−２−オンの三塩酸塩（６＊）をもたらした。
【００８７】
【化７】
2007530509.tif 000009
【００８８】
２．９リットルの濃塩酸を、１．０ｍｏｌのＮ−（８−（１−ピペラジニル）−２−オキソ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル−）アセトアミド（５＊）および１．４リットルの無水エタノールの懸濁液に室温で約１０分で添加した。この添加の間に温度が４０℃に上昇した。添加後に混合物を５０℃の温度で１．５時間攪拌した。混合物を２０℃に冷却し、そして結晶化が開始した後に１．４リットルの無水エタノールを添加した。その後、混合物を２０℃で１時間、および０℃で２時間攪拌した。結晶を濾過により単離し、そして０．６リットルのアセトンで２回洗浄した。単離された生成物を真空中（４０℃、２００ｍｍＨｇ、Ｎ２、２４時間）で乾燥した。
【００８９】
Ｎ−（８−（１−ピペラジニル）−２−オキソ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル−）アセトアミド（５＊）はδ８．５７ｐｐｍの特徴的な化学シフトを有し；３−アミノ−８−（１−ピペラジニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−２−オンの三塩酸塩（６＊）はδ６．７７ｐｐｍの特徴的な化学シフトを有した。
【００９０】
この段階の全体的な収率はおよそ８５％（粗物質対粗物質）であった。
【００９１】
段階６：部分的中和
最後の段階すなわち第６のものは、所望の生成物、すなわち化合物１すなわち３−アミノ−８−（１−ピペラジニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−２−オンの一塩酸一水和物（７＊）を製造するための重炭酸ナトリウムでの三塩酸塩（６＊）の部分的中和であった。
【００９２】
【化８】
2007530509.tif 000010
【００９３】
３．５リットルのエタノール中の１．０ｍｏｌの三塩酸塩（６＊）の懸濁液に、２．８リットルの水中の２．２ｍｏｌの重炭酸ナトリウムの溶液を約３０分で添加した。温度は２０℃と２５℃との間であった。懸濁液をその後３時間攪拌した。反応混合物を濾過し、そしてその後、１．１リットルの水、１．１リットルのエタノールおよび１．１リットルのヘキサンで洗浄した。単離された粗生成物を真空中で乾燥（４０℃、２００ｍｍＨｇ、Ｎ２、２４時間）した。
【００９４】
乾燥した生成物（１ｍｏｌ）を、還流温度まで加熱することにより９リットルのメタノールに溶解した。溶液は完全に澄明にはならなかった。２０℃まで冷却した後に混合物を濾過した。３００ｍｌの水および１５０ｍｌのメタノールを濾液に添加し、その後約３リットルの溶媒混合物を常圧で蒸留した。完全な手順をもう１モルの乾燥した生成物を用いて反復した。その後、合わせた画分を蒸留により約１２リットルの容量まで濃縮した。６リットルのエタノールの添加後に、６リットルの溶媒混合物を常圧での蒸留により除去した。混合物をその後０℃に冷却しそして２時間攪拌した。沈殿物をフィルター上で収集し、そして７５０ｍｌのアセトンで２回洗浄した。生成物を真空下で乾燥（４０℃、２００ｍｍＨｇ、Ｎ２、２４時間）し、そしてその後微粉砕、および必要な場合は超微粉砕することにより均質にした。
【００９５】
３−アミノ−８−（１−ピペラジニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−２−オンの三塩酸塩（６＊）はδ６．７７ｐｐｍの特徴的な化学シフトを有し；最終生成物すなわち化合物１のものはδ６．７ｐｐｍであった。
【００９６】
この段階の全体的な収率はおよそ８５％（粗物質対粗物質）であった。
【００９７】
化合物１すなわち３−アミノ−８−（１−ピペラジニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−２−オンの一塩酸一水和物は、分子式Ｃ１３Ｈ１８ＣｌＮ３Ｏ３および２９９．５の分子量を有した。純粋な生成物（９９．８％、ＮＭＲ）は白色ないし帯黄色粉末であった。その塩化物含量は滴定法により測定されたところの１１．７％（質量対質量）であった。カール・フィッシャー水アッセイ滴定により測定されたその水分含量は６．５％（質量対質量）であった。
【実施例３】
【００９８】
化合物１の製剤
経口（ｐ．ｏ．）投与のため：ガラスチューブ中の所望の量（０．５〜１５ｍｇ）の化合物１に数個のガラスビーズを加え、そして物質を２分間ボルテックス攪拌することにより微粉砕した。水中１％メチルセルロースの溶液１ｍｌの添加後に、化合物を１０分間ボルテックス攪拌することにより懸濁した。１ｍｇ／ｍｌより上（ｕｐ  ａｎｄ  ａｂｏｖｅ）の濃度のため、懸濁液中の残存する粒子を、超音波浴を使用することによりさらに懸濁した。
【００９９】
腹腔内（ｉ．ｐ．）投与のため：ガラスチューブ中の所望の量（０．５〜１５ｍｇ）の固体の化合物１に数個のガラスビーズを加え、そして固形物を２分間ボルテックス攪拌することにより微粉砕した。水中１％メチルセルロースおよび５％マンニトールの溶液１ｍｌの添加後に、化合物を１０分間ボルテックス攪拌することにより懸濁した。最後にｐＨを７に調節した。
【実施例４】
【０１００】
薬理学的試験結果
ラットでの結腸直腸膨満：内臓痛のモデル
酢酸での感作後の結腸直腸膨満（上に示されたプロトコルによる）は、全群で匹敵する数の腹部収縮をもたらした。最低用量の化合物１（０．１μｍｏｌ／ｋｇ）は、水中１０％Ａｒｌａｔｏｎｅ  Ｇ、１０％エタノール（９６％）に溶解し、そして投与後９０分に内臓過敏症を低下させた。対照群では匹敵するベヒクルを試験した（水中２０％Ａｒｌａｔｏｎｅ  Ｇ、２０％エタノール（９６％））。反復する結腸直腸膨満プロトコルの間の腹部収縮の数の有意の減少は観察されなかった。化合物１は、皮下投与９０分後に、３と１０μｍｏｌ／ｋｇとの間の用量範囲の酢酸での感作後の結腸直腸膨満による腹部収縮の数の有意の阻害を表した。この投与に使用したベヒクルは実験プロトコルを妨害しなかった。
【０１０１】
成長因子の誘導
化合物１での処置は、視床、線条体、前頭前皮質、側座核および海馬中のＧＤＮＦおよびＢＤＮＦのＲＮＡレベルを増大させた（表を参照されたい）
定量的ＰＣＲにより測定されるところの化合物１での処置による成長因子のＲＮＡの調節。データはベヒクル処置に比較した増大の倍数として表す。
【０１０２】
【表１】
2007530509.tif 000011
【０１０３】
ホットプレート試験：急性疼痛のモデル
化合物１および他の化合物を腹腔内投与３０分後にホットプレートで試験した。方法の記述は上に示す。
【０１０４】
【表２】
2007530509.tif 000012
【０１０５】
上の表に示されるデータから、モルヒネはホットプレートから動物自身を除去する動物の待ち時間をほぼ倍加することが明らかである（妥当な鎮痛効果）。化合物１は、モルヒネと同じくらい、しかしはるかにより低用量で有効である。選択的５−ＨＴ１Ｄアゴニスト、スマトリプタンは１０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．という非常に高用量で不活性であるが、しかし、その用量で、それは化合物１の鎮痛効果にほぼ完全に拮抗する（Ｐ値＝０．０００１、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定）。
【０１０６】
化合物１はまたマウスでのこの試験でも経口で活性である。すなわちそのＥＤ５０は３．２ｍｇ／ｋｇ（ｐ．ｏ．）である。
【０１０７】
酢酸もがき試験：急性疼痛のモデル
化合物１はこの試験で活性である。すなわちそのＥＤ５０は１．８２ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．である。
【０１０８】
化合物１の受容体結合プロファイル
下の表に収集した結合データは、十分に報告された標準的手順を使用して、ＣＥＲＥＰ（１２８，ｒｕｅ  Ｄａｎｔｏｎ，９２５００  Ｒｕｅｉｌ−Ｍａｌｍａｉｓｏｎ，フランス）若しくはＳｏｌｖａｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｂ．Ｖ．のいずれかにより得られた。
【０１０９】
【表３】
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【０１１０】
【表４】
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【０１１１】
【表５】
2007530509.tif 000015
【国際調査報告】
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