(57)【要約】  製薬的に許容可能な担体中、坑炎症活性を有するカルボキシレートの金属錯体を含む薬学的組成物であって：（１）該組成物は、コロイド構造を有するか、またはヒトまたは動物に投与された際にコロイド構造を形成するか、または水と不混和性であり；（２）該組成物において坑炎症活性を有する該カルボキシレートの総量の８０％以上が、金属錯体の一部として存在し；（３）該金属と錯体化した抗炎症活性を有する該カルボキシレートの１０％未満は、室温で光の無い状態で保存された場合、１２ヵ月にわたり該金属から解離する薬学的組成物であるが、配位子のＤＭＦを含有する金属錯体を含む組成物を除く。本発明はまた、ヒトおよび動物の炎症性病態の治療における該薬学的組成物の使用を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
製薬的に許容可能な担体中、坑炎症活性を有するカルボキシレートの金属錯体を含む薬学的組成物であって：
（１）前記組成物は、コロイド構造を有するか、またはヒトまたは動物に投与された際にコロイド構造を形成するか、または水と不混和性であり；
（２）前記組成物において坑炎症活性を有する前記カルボキシレートの総量の８０％超が、金属錯体の一部として存在し；および
（３）室温で光の無い状態で保存された場合、前記金属と錯体化した抗炎症活性を有する前記カルボキシレートの１０％未満が、１２ヵ月にわたり前記金属から解離するが；配位子のＤＭＦを含有する金属錯体を含む組成物を除外する、薬学的組成物。
【請求項２】
室温で光の無い状態で保存された場合、前記金属と錯体化した抗炎症活性を有する前記カルボキシレートの１０％未満が、１８ヵ月にわたり前記金属から解離する請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
室温で光の無い状態で保存された場合、前記金属と錯体化した抗炎症活性を有する前記カルボキシレートの５％未満が、１８ヵ月にわたり前記金属から解離する請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
抗炎症活性を有する前記カルボキシレートが、ＮＳＡＩＤである請求項１〜３のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項５】
前記金属が、Ｃｕ、Ｚｎ、ＣｏまたはＮｉである請求項１〜４のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項６】
坑炎症活性を有するカルボキシレートの前記金属錯体が、
[Ｃｕ2(Sup)4(ＯＨ2)2]、
[Ｃｕ(Tol)2(ピリジン)2]、
[Ｃｕ2(Tol)4(dmso)2]、
[Ｃｕ(Nap)2(ピリジン)2]、
[Ｃｕ2(Nap)4(dmso)2]、
[Ｃｕ(Ibu)2(ピリジン)2]、
[Ｃｕ2(Ibu)4(dmso)4]、
[Ｃｕ(Ibu)2(イミダゾール)2]、
[Ｃｕ(Ibu)2(２−メチルイミダゾール)2]、
[Ｃｕ2(Ibu)4(カフェイン)2]、
[Ｃｕ2(Ibu)4(メトロニダゾール)2]、
各Ｌが、独立して選択され、カフェインまたはパパベリンである[Ｃｕ2(フルフェン)4Ｌ2]、
各Ｌが、独立して選択され、ニコチン、ニコチンアミドまたはＮ,Ｎ−ジエチルニコチンアミドである[Ｃｕ2(フルフェン)4Ｌ2]、
各Ｌが、独立して選択され、３−ピリジルメタノールまたは水である[Ｃｕ(Nif)2Ｌ2]、
[Ｃｕ2(Nif)4(dmso)2]、
各Ｌが、独立して選択され、水、Ｎ,Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、アセトンまたはジメチルスルホキシドである[Ｃｕ2(Indo)4Ｌ2]、
各Ｌが、独立して選択され、水、エタノール、ジメチルスルホキシドまたはメタノールである[Ｃｕ2(Dic)4Ｌ2]、
およびそれらの混合物、よりなる群から選択される請求項１〜５のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
抗炎症活性を有する前記カルボキシレートが、インドメタシンである請求項１〜５のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項８】
坑炎症活性を有するカルボキシレートの前記金属錯体が、インドメタシンを含有する複核錯体である請求項７に記載の薬学的組成物。
【請求項９】
坑炎症活性を有するカルボキシレートの前記金属錯体が、[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]である請求項８に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
坑炎症活性を有するカルボキシレートの前記金属錯体が、式（１）：
[Ｃｕ(η2−Ｌ1)2Ｌ2]p
（１）
(式中、「η2−Ｌ1」は、式Ｌ1：
【化１】
2007530599.tif 000016
の二座配位子であり：
式中：
Ｒ1は、Ｈまたはハロであり；
Ｒ2は、Ｈ；Ｃ1〜Ｃ6アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり、前記Ｃ1〜Ｃ6アルキル、アルケニルまたはアルキニルが任意に置換できるか；または
【化２】
2007530599.tif 000017
であり、
式中、各Ｒ2Aは、Ｈ、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、シクロアルキルおよびアリールアルキルよりなる群から独立して選択され、前記Ｃ1〜Ｃ6アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、シクロアルキルまたはアリールアルキルが、任意に置換でき；
Ｒ3は、Ｈまたはハロであり；
各Ｒ5は、ハロ、−ＣＨ3、−ＣＮ、−ＯＣＨ3、−ＳＣＨ3および−ＣＨ2ＣＨ3よりなる群から独立して選択され、前記−ＣＨ3、−ＯＣＨ3、−ＳＣＨ3または−ＣＨ2ＣＨ3が、任意に置換でき；および
ｎは、１、２、３、４または５であり；
各Ｌは、独立して選択され、単座配位子であり、
ｐは、前記錯体の電荷である)の単核銅錯体である
請求項１〜５のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
Ｌ1が、Indoである請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
前記組成物が、水性担体または水中油乳濁液におけるミセルから選択されるコロイド構造を有する請求項１〜１１のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
前記組成物が、ヒトまたは動物に投与された場合にコロイド構造を形成する請求項１〜１１のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
坑炎症活性、１種以上の製薬的に許容可能な界面活性剤および水を有するカルボキシレートの金属錯体を含む薬学的組成物であって：
（１）前記組成物は、水性担体中ミセルを含んでなり；
（２）前記組成物において坑炎症活性を有する前記カルボキシレートの総量の８０％超が、金属錯体の一部として存在し；および
（３）室温で光の無い状態で保存された場合、前記金属と錯体化した抗炎症活性を有する前記カルボキシレートの１０％未満が、１２ヵ月にわたり前記金属から解離するが；配位子のＤＭＦを含有する金属錯体を含む組成物を除外する、薬学的組成物。
【請求項１５】
前記１種以上の界面活性剤が、ソルビタン脂肪酸エステル類の界面活性剤およびキャスター油(Caster oil)ポリオキシエチレンの界面活性剤よりなる群から選択される請求項１４に記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
坑炎症活性、１種以上の製薬的に許容可能な油類、１種以上の製薬的に許容可能な界面活性剤および水を有するカルボキシレートの金属錯体を含む薬学的組成物であって：
（１）前記組成物は、水中油乳濁液であり；
（２）前記組成物において坑炎症活性を有する前記カルボキシレートの総量の８０％超が、金属錯体の一部として存在し；および
（３）室温で光の無い状態で保存された場合、前記金属と錯体化した抗炎症活性を有する前記カルボキシレートの１０％未満が、１２ヵ月にわたり前記金属から解離するが；配位子のＤＭＦを含有する金属錯体を含む組成物を除外する、薬学的組成物。
【請求項１７】
前記１種以上の油類が、中鎖トリグリセリドである請求項１６に記載の薬学的組成物。
【請求項１８】
前記１種以上の界面活性剤が、ソルビタン脂肪酸エステル類の界面活性剤およびキャスター油(Caster oil)ポリオキシエチレンの界面活性剤よりなる群から選択される請求項１６または１７に記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
製薬的に許容可能な担体中、坑炎症活性を有するカルボキシレートの金属錯体を含む薬学的組成物であって：
（１）前記組成物は、水と不混和性であり；
（２）前記組成物において坑炎症活性を有する前記カルボキシレートの総量の８０％超が、金属錯体の一部として存在し；および
（３）室温で光の無い状態で保存された場合、前記金属と錯体化した抗炎症活性を有する前記カルボキシレートの１０％未満が、１２ヵ月にわたり前記金属から解離する、薬学的組成物。
【請求項２０】
坑炎症活性、１種以上の製薬的に許容可能な油類、１種以上の製薬的に許容可能な界面活性剤を有するカルボキシレートの金属錯体を含む経口投与用薬学的組成物であって：
（１）ヒトまたは動物に前記組成物の経口投与後、前記組成物が、ヒトまたは動物の消化器系において水性体液と接触して水中油乳濁液を形成するような量で前記１種以上の油類および前記１種以上の界面活性剤が組成物中に存在し；
（２）前記組成物において坑炎症活性を有する前記カルボキシレートの総量の８０％超が、金属錯体の一部として存在し；および
（３）室温で光の無い状態で保存された場合、前記金属と錯体化した抗炎症活性を有する前記カルボキシレートの１０％未満が、１２ヵ月にわたり前記金属から解離するが；配位子のＤＭＦを含有する錯体を含む組成物を除外する、薬学的組成物。
【請求項２１】
前記１種以上の油類が、中鎖トリグリセリドである請求項２０に記載の薬学的組成物。
【請求項２２】
前記１種以上の界面活性剤が、ソルビタン脂肪酸エステル類の界面活性剤およびキャスター油(Caster oil)ポリオキシエチレンの界面活性剤よりなる群から選択される請求項２０または２１に記載の薬学的組成物。
【請求項２３】
成分：                                  量(組成物の重量％)：
坑炎症活性を有するカルボキシレートの
１種以上の金属錯体                        ３〜７
１種以上の溶媒                            ２０〜４０
１種以上の界面活性剤                      ５〜２０
１種以上の増粘剤                          ０〜１５
中鎖トリグリセリド                        ４０〜６０
を含む薬学的組成物。
【請求項２４】
成分：                                  量(組成物の重量％)：
坑炎症活性を有するカルボキシレートの
１種以上の金属錯体                        ３〜７
１種以上の溶媒                            ３０±１０％
１種以上の界面活性剤                      １０±１０％
１種以上の増粘剤                          ５±１０％
中鎖トリグリセリド                        ５０±１０％
を含む請求項２３に記載の薬学的組成物。
【請求項２５】
前記坑炎症活性を有するカルボキシレートが、ＮＳＡＩＤである請求項１３〜２４のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項２６】
前記坑炎症活性を有するカルボキシレートが、インドメタシンである請求項１３〜２４のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項２７】
ヒトまたは動物における炎症病態を治療する方法であって、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の組成物の治療的有効量を前記ヒトまたは動物への投与を含む方法。
【請求項２８】
前記炎症病態が、リウマチ様関節炎、骨関節炎、急性筋骨格障害、下部背痛、および外科処置または非外科処置後の炎症、疼痛または浮腫よりなる群から選択される請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記炎症病態が、乾癬または乾癬性関節炎である請求項２７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００４年３月３０日出願のオーストラリア国仮特許出願第２００４９０１６９４号明細書、標題が「銅錯体」である２００５年３月２４日出願のオーストラリア国仮特許出願、および標題が「銅錯体」である２００５年３月２４日出願の米国仮特許出願による優先権を主張する。
【０００２】
本発明は、炎症病態の治療用薬学的組成物、およびヒトまたは動物における炎症病態においてこのような組成物の使用に関する。本発明の組成物は、金属イオンとカルボキシレート配位子とを含む坑炎症活性を有する錯体を含有する。
【背景技術】
【０００３】
非ステロイド系抗炎症薬(ＮＳＡＩＤ)類は、ヒトまたは動物における種々の炎症病態の治療に使用されている。ＮＳＡＩＤ類は、リウマチ様関節炎、骨関節炎、急性筋骨格障害(腱炎、捻挫および挫傷など)、下部背痛(一般に腰痛と称される)、および外科処置または非外科処置後の炎症、疼痛または浮腫を治療するために使用されている。
【０００４】
しかしながら、多くのＮＳＡＩＤ類は、ヒトまたは動物における有害な効果、特に胃腸管系(ＧＩ)副作用を引き起こす。例えば、インドメタシンは、ＮＳＡＩＤであり、ヒトまたは動物における種々の炎症病態を治療するのに有効である。しかしながら、インドメタシンは、特に経口投与された場合、ヒトまたは動物における重篤な胃腸管系副作用を引き起こす可能性がある。ヒトにおいて、インドメタシンの経口投与は、食道、胃、十二指腸および腸における潰瘍形成を引き起こす可能性があり、致死例が幾つか報告されている。イヌにおいて、インドメタシンの経口投与は、致命的な胃腸管出血を引き起こす。胃腸管系副作用はまた、他の経路によるインドメタシン投与に関しても報告されている。インドメタシンの局所投与は、試験動物の死亡を含む重篤な副作用を引き起こすことも報告されている(「局所投与後のインドメタシンの抗炎症活性」、Amico-Roxas,M.、Mater,M.、Caruso,A.、Puglisi,G.、Bernadini,R.、Rinaldo,G.、European Review for Medical & Pharmacological Sciences、1982年IV、1999年、204頁)。胃腸管系副作用は、座薬によるインドメタシンの投与に関しても報告されている。胃腸管系副作用により、多くのＮＳＡＩＤ類の使用が制限されている。
【０００５】
多くのＮＳＡＩＤ類に関して、ＮＳＡＩＤの金属錯体は、副作用を引き起こすことが少なく、遊離のＮＳＡＩＤと比較して該薬物の取込みを増加させることが判明している。
【０００６】
例えば、インドメタシンのＣｕ(II)錯体であるビス(Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド)テトラキス−μ−(Ｏ,Ｏ’−Indo)二銅(II)([Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2])の経口投与により、インドメタシンよりも胃腸管系副作用が少なくなることが見出されており；また該錯体が、インドメタシンと比較して抗炎症活性を増加させたことが主張されている。胃腸管毒性の減少機構は解明されてはいない。しかしながら、少なくとも部分的にはインドメタシンよりも脂溶性である錯体によって、より最適な錯体の吸収がもたらされるためと考えられる。
【０００７】
Ｃｕ−Algesicの商品名で販売されている錯体[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2]を含有する組成物は、オーストラリア、ニュージーランド、南アフリカおよび他の国々において獣医学診療に使用されている。これらの組成物は、錠剤またはペースト剤の形態である。Ｃｕ−Algesic錠剤は、２ｍｇの錯体および賦形剤のデキストロース(２４.８％)、セルロース(３５％)、トウモロコシ澱粉(２５.６％)、ステアリン酸マグネシウム(４.２７％)、Tixosil(シリカベースの流動性促進剤)(４.２７％)および精製澱粉を含んでなり、該パーセンテージは、組成物の重量パーセントである。Ｃｕ−Algesicペースト剤組成物は、ゲル(ＮａＯＨ溶液(８.５％ｗ／ｖ)および水の添加によりｐＨ約７.０に調整された、carbopol(商標)(カルボキシビニルポリマー)(１％)、Nippasol Ｍ(ｎ−プロピル−４−ヒドロキシベンゾエート、保存剤)(０.５％)からなるゲルであって、該パーセンテージは、組成物の重量パーセントである)に分散された２００ｍｇ／５ｇの該錯体を含む。Ｃｕ−Algesic錠剤およびＣｕ−Algesicペースト剤組成物は、致命的な胃腸管出血を引き起こすことなく、それぞれイヌとウマに経口投与されている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかしながら、ＮＳＡＩＤ類の金属錯体を含有する組成物は、遊離のＮＳＡＩＤを含有する組成物よりも引き起こされる胃腸管系副作用は少ないが、このような組成物も依然としていくらかの胃腸管系副作用をしばしば引き起こすことが判明している。
【０００９】
さらに、Ｃｕ−Algesicペースト剤などＮＳＡＩＤ類の金属錯体を含有する幾つかの組成物は、製造バッチおよび使用前の保存時間に依って種々の量の胃腸管系副作用を伴うことが判明している。
【００１０】
遊離のＮＳＡＩＤを含有する先行技術の組成物またはＮＳＡＩＤの金属錯体を含有する先行技術の組成物よりも引き起こされる胃腸管系副作用の少ないＮＳＡＩＤの金属錯体を含有する組成物を提供することが望ましいと思われる。
【００１１】
Ｃｕ−Algesic錠剤およびＣｕ−Algesicペースト剤に含まれる錯体[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2]は、配位子のＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド(ＤＭＦ)を含有する。この配位子は、ヒトまたは動物に毒性があり、目、皮膚および呼吸器系を刺激し、吐き気、嘔吐ならびに仙痛、肝障害、肝腫、高血圧および皮膚炎を引き起こす。ＤＭＦの毒性により、オーストラリアおよび他の国において販売に関する獣医学組成物および薬学的組成物の承認に責任を負っている規制当局は、獣医学使用または製薬使用に関して、ＤＭＦを含有する組成物を承認していないか、または承認を渋っている。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
第１の態様において、本発明は、
（１）該組成物は、コロイド構造を有するか、またはヒトまたは動物に投与された際にコロイド構造を形成するか、または水と不混和性であり；
（２）該組成物において坑炎症活性を有する該カルボキシレートの総量の８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上が、金属錯体の一部として存在し；および
（３）室温(１８℃〜２５℃)で光の無い状態で保存された場合、該金属と錯体化した抗炎症活性を有する該カルボキシレートの１０％未満が、１２ヵ月にわたり該金属から解離する薬学的組成物であるが；配位子のＤＭＦを含有する金属錯体を含む組成物を除外し、製薬的に許容可能な担体中、坑炎症活性を有するカルボキシレートの金属錯体を含む薬学的組成物を提供する。
【００１３】
第２の態様において、本発明は、
（１）該組成物は、水と不混和性であり；
（２）該組成物において坑炎症活性を有する該カルボキシレートの総量の８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上が、金属錯体の一部として存在し；および
（３）室温(１８℃〜２５℃)で光の無い状態で保存された場合、該金属と錯体化した抗炎症活性を有する該カルボキシレートの１０％未満が、１２ヵ月にわたり該金属から解離する、製薬的に許容可能な担体中、坑炎症活性を有するカルボキシレートの金属錯体を含む薬学的組成物を提供する。
【００１４】
該金属と錯体化した抗炎症活性を有する該カルボキシレートは、室温(１８℃〜２５℃)で光の無い状態で保存された場合、好ましくは１８ヵ月にわたり１０％未満が、より好ましくは１８ヵ月にわたり５％未満が、最も好ましくは２年間にわたり５％未満が該金属から解離する。
【００１５】
本発明者らは、ＮＳＡＩＤの金属錯体など、抗炎症活性を有するカルボキシレートの金属錯体を有する先行技術組成物に見られた胃腸管系副作用は少なくとも一部が、該組成物の調製中、該組成物の保存中、および／または該組成物がヒト患者または動物に投与される際に該錯体から放出される抗炎症活性を有する該遊離カルボキシレートにより引き起こされることを見出している。該錯体から放出された遊離のカルボキシレートは、周囲媒体のｐＨに依存してカルボキシレートイオンまたは非電荷カルボン酸の形態であり得る。本発明者らは、本発明の組成物において、抗炎症活性を有するカルボキシレートの金属錯体は、保存中、およびヒトまたは動物への投与後のある期間、錯体として維持されることを見出し、また本発明の組成物は、金属錯体がより容易に解離されて抗炎症活性を有するカルボキシレートを放出する同じ金属錯体を含有する他の組成物よりも少ない胃腸管系副作用を伴うことを見出している。
【００１６】
本発明者らはまた、驚くべきことに、経口投与以外の経路、例えば、局所適用または注射により投与された場合、本発明の組成物は、抗炎症活性を有する遊離カルボキシレートを含有する組成物よりも胃腸管副作用が少ないが、それらと同様またはより大きな抗炎症性効力を有することを見出した。これは、抗炎症活性を有するカルボキシレートの金属錯体の活性体が、坑炎症活性を有する該遊離カルボキシレート(それを含有する生体液のｐＨに依って該カルボキシレートイオンまたは該カルボン酸として、すなわち、胃内ではカルボン酸として、大部分の他の体液中、組織内および臓器内ではカルボキシレートとして)であるため驚くべきことであり、経口投与以外の経路、例えば、局所適用または注射による投与によりＮＳＡＩＤ類および他のカルボキシレート化合物の投与に伴う胃腸管副作用は、抗炎症活性を有するカルボキシレートの二次的肝循環によって引き起こされると考えられている。
【００１７】
第３の態様において、本発明は、ヒトまたは動物の炎症病態を治療する方法を提供し、該方法は、本発明の第１または第２の態様による組成物の治療的有効量をヒトまたは動物への投与を含む。該動物は、例えば、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ラクダなどであり得る。該組成物を、経口的、局所的、注射、座薬、吸入法または何らかの他の経路により投与できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
抗炎症活性を有するカルボキシレートの金属錯体は(「金属カルボキシレート錯体」)は、少なくとも１種の金属イオンおよび抗炎症活性を有する少なくとも１種のカルボキシレート配位子を含む任意の錯体であり得る。金属カルボキシレート錯体は、抗炎症活性を有する１種以上のカルボキシレート配位子および１種以上の他の配位子を含有できる。本発明の組成物は、２種以上の異なる金属カルボキシレート錯体を含むことができる。
【００１９】
抗炎症活性を有するカルボキシレートは、カルボキシレート基を含んでなり、ヒトまたは動物において抗炎症活性を有する任意の化合物であり得る。典型的に、抗炎症活性を有するカルボキシレートは、ＮＳＡＩＤである。典型的に、金属は、Ｃｕ、Ｚｎ、ＣｏまたはＮｉ、好ましくはＣｕまたはＺｎ、より好ましくはＣｕである。
【００２０】
ＮＳＡＩＤ類の銅錯体の例としては：以下の銅−ＮＳＡＩＤ錯体が挙げられる。
【００２１】
2007530599.tif 000002
【００２２】
本明細書において、カルボキシレート基(例えば、上記に掲げたカルボキシレート化合物のいずれか１つ)を含有する化合物名の略語の末端における「Ｈ」の包含は、化合物の非電荷体を称すために用いられ、また「Ｈ」のない略語は、脱プロトン化アニオン体を称すために用いられる。例えば、「Indo Ｈ」は、インドメタシンの非電荷体を称し、また「Indo」は、インドメタシンの脱プロトン化アニオン体を称す。
【００２３】
ＮＳＡＩＤ類の亜鉛錯体の例としては、一般式[Ｚｎ2(ＮＳＡＩＤ)4Ｌ2]および[Ｚｎ(ＮＳＡＩＤ)2Ｌ2]の錯体が挙げられ、「ＮＳＡＩＤ」は、カルボキシレート基を有する非ステロイド系抗炎症薬であり、Ｌは単座配位子である。かかる錯体の例としては：Synthesis and Characterization of Anti-inflammatory Dinuclear and Mononuclear Zinc Indomethacin Complexesに記載されている、Ｌが、例えば、Ｎ,Ｎ−ジメチルアセトアミド、ピリジンまたは１−メチル−２−ピロリドンである[Ｚｎ2(Indo)4Ｌ2]、およびＬが、例えば、水、アルコールである[Ｚｎ(Indo)2Ｌ2]が挙げられる。[Ｚｎ2(インドメタシン)4Ｌ2](Ｌ＝Ｎ,Ｎ−ジメチルアセトアミド、ピリジンまたは１−メチル−２−ピロリド)および[Ｚｎ(インドメタシン)2(Ｌ1)2](Ｌ1＝エタノール、メタノール)の結晶構造。Zhou,Q.;Hambley,T.W.;Kennedy,B.J.;Lay,P.A.;Turner,P.;Warwick,B.;Biffin,J.R.;Regtop,H.L.Inorg.Chem.2000年、39、3742-3748頁。
【００２４】
ＮＳＡＩＤのコバルト錯体の例としては、一般式[Ｃｏ2(ＮＳＡＩＤ)4Ｌ2]および[Ｃｏ(ＮＳＡＩＤ)2Ｌ2]の錯体が挙げられ、「ＮＳＡＩＤ」は、カルボキシレート基を有する非ステロイド系抗炎症薬であり、Ｌは単座配位子である。かかる錯体の例としては、Ｌが、例えば、アルコールである[Ｃｏ(Indo)2Ｌ2]、およびＬが、例えば、水である[Ｃｏ(Indo)2Ｌ4]が挙げられる。
【００２５】
ＮＳＡＩＤのニッケル錯体の例としては、一般式[Ｎｉ2(ＮＳＡＩＤ)4Ｌ2]および[Ｎｉ(ＮＳＡＩＤ)2Ｌ4]の錯体が挙げられ、「ＮＳＡＩＤ」は、カルボキシレート基を有する非ステロイド系抗炎症薬であり、Ｌは単座配位子である。かかる錯体の例としては、Ｌが、例えば、アルコールである[Ｎｉ2(Indo)4Ｌ2]、およびＬが、例えば、水である[Ｎｉ(Indo)2Ｌ4]が挙げられる。
【００２６】
幾つかの実施形態において、金属カルボキシレート錯体は、配位子Indoを含有する複核錯体である。かかる錯体としては、米国特許第５,４６６,８２４号明細書に記載されている錯体が挙げられる。配位子Indoを含有する複核金属錯体としてはまた、各Ｌが独立して選択され、水、Ｎ,Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、アセトンまたはジメチルスルホキシドである式[Ｃｕ2(Indo)4Ｌ2]の錯体が挙げられる。好ましい錯体は、ｎが結晶水の数である場合、[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]ｎＨ2Ｏである。該結晶水数は、錯体を調製するために使用される技法に依り変化し、典型的には０〜５である。
【００２７】
上記に称された金属カルボキシレート錯体は、当業界に公知の方法によって調製できる。例えば、インドメタシンを有するＣｕ(II)錯体は、米国特許第５,４６６,８２４号明細書に記載されているとおり、またはAnti-inflammatory Copper(II) Complexes with Indomethacinに記載されているとおり調製できる。合成、磁気分光法およびＥＰＲ分光法；Crystal Structure of the N,N-Dimethylformamide Adduct.Weder,J.E.;Hambley,T.W.;Kennedy,B.J.;Lay,P.A.;MacLachlan,D.;Bramley,R.;Delfs,C.D.;Murray,K.S.;Moubaraki,B.;Warwick,B.;Biffin,J.R.;Regtop,H.L.Inorg.Chem.1999年、38,1736-1744頁およびPreparation and Characterization of Dinuclear Copper-Indomethacin Anti-Inflammatory Drugs.Morgan,Y.R.;Turner,P.;Kennedy,B.J.;Hambley,T.W.;Lay,P.A.;Biffin,J.R.;Regtop,H.L.;Warwick,B.Inorg.Chim.Acta2001年、324、150-161頁。
【００２８】
幾つかの実施形態において、金属カルボキシレート錯体は、式（１）：
[Ｃｕ(η2−Ｌ1)2Ｌ2]p
（１）
(式中、「η2−Ｌ1」は、式Ｌ1：
【化１】
2007530599.tif 000003
の二座配位子であり：
式中：
Ｒ1は、Ｈまたはハロ(すなわち、Ｃｌ、Ｆ、ＢｒまたはＩ)であり；
Ｒ2は、Ｈ；Ｃ1〜Ｃ6アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり、該Ｃ1〜Ｃ6アルキル、アルケニルまたはアルキニルは任意に置換でき；または
【化２】
2007530599.tif 000004
であり、
式中、各Ｒ2Aは、Ｈ、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、シクロアルキルおよびアリールアルキルよりなる群から独立して選択され、該Ｃ1〜Ｃ6アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、シクロアルキルまたはアリールアルキルは、任意に置換でき；
Ｒ3は、Ｈまたはハロであり；
各Ｒ5は、ハロ、−ＣＨ3、−ＣＮ、−ＯＣＨ3、−ＳＣＨ3および−ＣＨ2ＣＨ3よりなる群から独立して選択され、該−ＣＨ3、−ＯＣＨ3、−ＳＣＨ3または−ＣＨ2ＣＨ3は、任意に置換でき；および
ｎは、１、２、３、４または５であり；
各Ｌは、独立して選択され、単座配位子であり、
およびｐは、該錯体の電荷である)の単核銅錯体である。
【００２９】
本明細書において、用語の「二座配位子」とは、金属原子に対して２つの配位結合を有する配位子を称す。二座配位子としては、金属原子に対して１つ長くおよび１つ短い結合を有する非対称二座配位子が挙げられる。本明細書において、用語の「単座配位子」とは、金属原子との単配位結合を有する配位子を称す。
【００３０】
Ｒ2が、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、アルケニルまたはアルキニルである場合、該Ｃ1〜Ｃ6アルキル、アルケニルまたはアルキニルは、１つ以上の置換基により置換できる。該１つ以上の置換基は、例えば、ハロ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨおよび−ＮＨ2よりなる群から独立して選択できる。
【００３１】
Ｒ2Aが、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、シクロアルキルまたはアリールアルキルである場合、該Ｃ1〜Ｃ6アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、シクロアルキルおよびアリールアルキルは、１つ以上の置換基により置換できる。該１つ以上の置換基は、例えば、ハロ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨおよび−ＮＨ2よりなる群から独立して選択できる。
【００３２】
Ｒ5が、−ＣＨ3、−ＯＣＨ3、−ＳＣＨ3または−ＣＨ2ＣＨ3、該−ＣＨ3、−ＯＣＨ3、−ＳＣＨ3または−ＣＨ2ＣＨ3である場合、１つ以上の置換基により置換できる。該１つ以上の置換基は、例えば、ハロ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨおよび−ＮＨ2よりなる群から独立して選択できる。
【００３３】
Ｒ1は、典型的にＨである。
【００３４】
Ｒ3は、典型的にＨである。
【００３５】
Ｒ2は、典型的にＣＨ3である。
【００３６】
各Ｒ5は、典型的ハロ(すなわち、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ)であり、ｎは、典型的に１、２または３である。
【００３７】
Ｌ1は、例えば、Indoであり得る。
【００３８】
式（１）において、Ｌはいずれの単座配位子であり得る。Ｌは、製薬的に許容できる配位子であることが好ましい。「製薬的に許容できる配位子」とは、該錯体がヒト患者または動物患者に投与される場合、いずれのまたは実質的な副作用を生じない配位子を意味する。
【００３９】
式（１）において、Ｌは、電荷または非電荷の単座配位子であり得る。各Ｌが、中性配位子である場合、式（１）の錯体は、電荷が中性である(すなわち、ｐは０である)。しかしながら、Ｌがアニオン性配位子である場合、式（１）の錯体は、帯電されている。幾つかの実施形態において、ｐは１−または２−である。
【００４０】
式（１）の錯体は、組成物の成分に溶解された本発明の組成物に存在できるか、または固体形態、例えば、該錯体が結晶であり得る。式（１）の錯体の結晶は、結晶化溶媒および／または結晶化水を含み得る。Ｌがアニオン性配位子である場合、式（１）の錯体の固体は、アニオン性錯体に対する対イオンであるカチオン類を含む。かかる固体としては、以下の式：
Ｙ[Ｃｕ(η2−Ｌ1)2Ｌ2]    (Ｉａ)
および
Ｙ’2[Ｃｕ(η2−Ｌ1)2Ｌ2]    (Ｉｂ)
(式中、η2−Ｌ1およびＬは、式（１）の上記に定義されているとおりであり、Ｙは、２＋電荷を有する対イオンであり、Ｙ’は、１＋電荷を有する対イオンである)を有する固体が挙げられる。
【００４１】
式（１）の錯体は、例えば、溶媒にピロリジンを用いて形成でき、ピロリジンは、生じた錯体中の配位子Ｌを形成する。ピロリジンと同様のドナー強度を有するか、またはピロリジンよりも大きなドナー強度を有する他の配位子もまた、式（１）の錯体を形成できる。式（１）において、Ｌは、例えば、約３０以上の溶媒ドナー数を有する溶媒であり得る。幾つかの実施形態において、式（１）におけるＬは、Ｎ−ヘテロ環式基を含有する配位子である。Ｎ−ヘテロ環式基を含有する配位子としては、ピロリジン、アルキル置換ピロリジン類、プロリン、プロリン誘導体、イミダゾール、置換イミダゾール類またはイミダゾール環(例えば、ベンズイミダゾール)を含有する配位子などのイミダゾール誘導体、ピロール、ピロールを含有する配位子、ニコチンアミド類およびニコチン酸類が挙げられる。幾つかの実施形態において、式（１）におけるＬは、アミン、例えばＮＨ3または有機アミン(例えば、ジエチルアミン)、アルコールまたはアミド(例えば、ジエチルアセトアミド)、またはトリエチルホスフェートなどの強力なドナーである別の配位子である。
【００４２】
式（１）の錯体は、例えば、Ｌ1が上記に定義された式(Ｌ1)の基である式Ｌ1Ｈの化合物と、約３０以上の溶媒ドナー数を有する溶媒中、銅(II)アセテートなどの銅塩との適切な比率の直接反応により調製でき、該溶媒は、生じた錯体中で配位子Ｌを形成する。式（１）の錯体は、約３０以上の溶媒ドナー数を有する溶媒を添加するか、または溶媒ではないが、約３０以上の溶媒ドナー数を有する溶媒と同様の溶媒ドナー数を有する配位子を、より弱いドナー溶媒中のＣｕ(II)およびＬ1の溶液に添加することによっても調製できる。
【００４３】
あるいは、式（１）の錯体は、ピロリジンなどの約３０以上の溶媒ドナー数を有する溶媒中か、または強力なドナーである配位子を含有する溶媒中、[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2]などの複核錯体の再結晶により調製できる。
【００４４】
幾つかの実施形態において、本発明の組成物は、コロイド構造を有する。幾つかの他の実施形態において、該組成物が、意図された投与経路によりヒトまたは動物の身体に投与される場合、コロイド構造を有する組成物が形成されるように該組成物が製剤化される。このような組成物は、典型的に、ヒトまたは動物の体内の水性の生体液と接触する際、例えば、消化管内の水性体液との接触の際にコロイド構造を有する組成物を形成する。
【００４５】
組成物がコロイド系を含む場合、組成物はコロイド構造を有する。コロイド系は、任意の性質(例えば、固体または液体または気体)のコロイドサイズの粒子が、種々の組成物または状態の連続相に分散されている系である。
【００４６】
2007530599.tif 000005
【００４７】
本発明の組成物は、上記に挙げたいずれかのコロイド系を含み得る。好ましい実施形態において、該組成物は、水性担体中のミセルを含むか、もしくは水中油乳濁液であるか、または該組成物がヒトまたは動物の身体に投与される場合、ミセルあるいは水中油乳濁液を形成する。
【００４８】
理論に拘束されることは望まないが、コロイド構造は、酸または他の場合には、錯体相互作用して、錯体を解離させると考えられる他の化合物と金属カルボキシレート錯体とが相互作用することを防ぎ、したがって、解離してカルボキシレート配位子を放出する錯体量を減少させると考えられる。本発明の幾つかの実施形態において、該組成物はコロイド構造を有する。該コロイド構造は、該組成物に存在する幾つかの化合物が、例えば、該組成物の保存中、該錯体と相互作用して錯体を解離できる範囲まで減少させると考えられる。同様に、このような組成物を患者に投与する場合、コロイド構造は、投与後の組成物と接触する幾つかの化合物が、吸収前に錯体と相互作用して錯体を解離できる範囲を制限すると考えられる。例えば、経口投与される組成物に関して、コロイド構造は、胃酸中に存在する該組成物の化合物が、胃腸管を介して吸収される前に錯体と相互作用して錯体を解離できる範囲を制限すると考えられる。同様に、他の経路により投与される組成物に関して、投与後の組成物と接触する化合物、例えば、ペプチド類などのＣｕ(II)の強力なキレート化剤、またはチオール含有生体分子などのＣｕ(II)の還元剤が、錯体と相互作用して錯体を解離できる範囲を制限すると考えられる。本発明の幾つかの実施形態において、該組成物は、コロイド構造を有さないが、意図された投与経路によりヒトまたは動物の体内に該組成物を投与される際に、コロイド構造が形成されるように製剤化される。該組成物が投与される際に形成されるコロイド構造は、投与後の組成物と接触する幾つかの化合物が錯体と相互作用して、錯体を解離できる範囲を制限すると考えられる。
【００４９】
幾つかの実施形態において、該組成物は水と不混合性であり、したがって、水性生体液と不混和性である。理論に拘束されることは望まないが、該組成物と水性体液との不混合性は、ヒトまたは動物にこのような組成物を投与する場合、投与後の組成物と接触する幾つかの化合物が錯体と相互作用して、錯体を解離できる範囲を制限すると考えられる。
【００５０】
本発明の幾つかの実施形態において、該組成物は、水性担体中のミセルを含むか、または水中油乳濁液の形態である。このような組成物が、ヒトまたは動物に、例えば、経口的に、局所的に、注射により、目などに投与される場合、該組成物は、典型的に投与後のある時間コロイド構造を維持する。好ましくは経口投与または局所投与される組成物では、コロイド構造は、該組成物の投与後、金属カルボキシレート錯体の大部分、例えば７０％超、８０％超または９０％超が、金属錯体として身体により吸収される上で十分な時間維持される。
【００５１】
該組成物が、水性担体中にミセルを含む場合、該組成物は、典型的に水および水性担体中にミセルを形成する上で有効な１種以上の界面活性剤のある量を含む。水性担体中にミセルを形成でき、意図された投与経路により投与される場合に製薬的に許容可能であり、該組成物が室温(１８℃〜２５℃まで)で光の無い状態で１２ヶ月間保存される際に、金属カルボキシレート錯体と相互作用して金属と錯体化されて抗炎症を有する１０％以上のカルボキシレートを金属から解離させることのない任意の界面活性剤を使用できる。
【００５２】
一実施形態において、本発明は、坑炎症活性を有するカルボキシレートの金属錯体、１種以上の製薬的に許容可能な界面活性剤および水を含む薬学的組成物を提供し、
（１）該組成物は、水性担体中ミセルを含んでなり；
（２）該組成物において坑炎症活性を有する該カルボキシレートの総量の８０％以上が、金属錯体の一部として存在し；および
（３）室温(１８℃〜２５℃まで)で光の無い状態で保存された場合、該金属と錯体化した抗炎症活性を有する該カルボキシレートの１０％未満が、１２ヵ月にわたり該金属から解離する薬学的組成物であるが；
配位子としてＤＭＦを含有する金属錯体を含む組成物は除外される。
【００５３】
ミセル溶液の形態での組成物の例は、ポリビニルアルコール(１４ｍｇ ｍＬ-1)およびポビドン(６ｍｇ ｍＬ-1)を含有する水性ミセル中、１％ｗ／ｖ[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含む眼科用製剤である。本組成物において、該ポリビニルアルコールは、溶媒として作用して錯体および眼潤滑剤を溶解し、該ポビドンは、溶媒およびコロイド安定化剤として作用する。
【００５４】
該組成物が、水中油乳濁剤の形態である場合、該組成物は、１種以上の油類、１種以上の界面活性剤および水を含む。典型的に、金属カルボキシレート錯体は、水中油乳濁剤の油相に溶解する。幾つかの実施形態において、該組成物は、金属カルボキシレート錯体を油相に溶解させるために油溶解性溶媒を含む。該油、界面活性剤および水は、水中油乳濁液を形成でき、意図された投与経路により投与される場合に製薬的に許容可能であり、該組成物が室温(１８℃〜２５℃まで)で光の無い状態で１２ヶ月間保存される場合、金属と錯体化される抗炎症を有する１０％以上のカルボキシレートを金属から解離させる金属カルボキシレート錯体と相互作用しない任意の油、界面活性剤および水の組み合わせであり得る。
【００５５】
一実施形態において、本発明は、坑炎症活性を有するカルボキシレートの金属錯体、１種以上の製薬的に許容可能な油類、１種以上の製薬的に許容可能な界面活性剤および水を含む薬学的組成物を提供し、
（１）該組成物は、水中油乳濁液の形態であり；
（２）該組成物において坑炎症活性を有する該カルボキシレートの総量の８０％以上が、金属錯体の一部として存在し；および
（３）室温(１８℃〜２５℃まで)で光の無い状態で保存された場合、該金属と錯体化した抗炎症活性を有する該カルボキシレートの１０％未満が、１２ヵ月にわたり該金属から解離するが；
配位子のＤＭＦを含有する金属錯体を含む組成物は除外される。
【００５６】
幾つかの実施形態において、該組成物は金属カルボキシレート錯体を油に溶解させる溶媒をさらに含む。
【００５７】
本発明の好ましい実施形態において、該組成物は、坑炎症活性有するカルボキシレートの金属錯体、１種以上の製薬的に許容可能な油類、１種以上の製薬的に許容可能な界面活性剤を含む経口投与用組成物であって、
（１）該１種以上の油類および該１種以上の界面活性剤は、ヒトまたは動物に該組成物の経口投与後、該組成物が、ヒトまたは動物の消化器系において水性体液と接触して水中油乳濁液を形成するような量で組成物中に存在し；
（２）該組成物において坑炎症活性を有する該カルボキシレートの総量の８０％超、好ましくは９０％超、より好ましくは９５％超が、金属錯体の一部として存在し；および
（３）室温(１８℃〜２５℃まで)で光の無い状態で保存された場合、該金属により錯体化された抗炎症活性を有する該カルボキシレートの１０％未満が、１２ヵ月にわたり該金属から解離する組成物であるが；配位子のＤＭＦを含有する金属錯体を含む組成物は除外される。
【００５８】
上記の好ましい実施形態による組成物は、組成物中の金属カルボキシレート複合体の溶解度を増加させるために１種以上の溶媒または可溶化成分を任意にさらに含むことができる。該溶媒は、例えば、テトラグリコール(ＩＵＰＡＣ命名：２−[２−[(テトラヒドロ−２−フラニル)メトキシ]エトキシ]エタノール；別の名称；２−[２−(テトラヒドロフルフリルオキシ)エトキシ]エタノール；テトラヒドロフルフリルジエチレングリコールエーテル)または他のグリコフロール類(テトラヒドロフルフリルポリエチレングリコールエーテル類としても知られている)、ポリエチレングリコール類、グリセロール、プロピレングリコール、または他の製薬的に許容可能なグリコール類であり得る。可溶化成分の例は、ポリビニルアルコール／ポビドン混合物である。該組成物は、Aerosil ２００、クレーまたは別の無機充填剤などの増粘剤をさらに含むこともできる。このような組成物は、例えば、以下の量における以下の成分を含むことができる：
成分：                                        量(組成物の重量％)：
坑炎症活性を有するカルボキシレートの
１種以上の金属錯体                            ３〜７
１種以上の溶媒(例えば、グリコフロール)        ２０〜４０
１種以上の界面活性剤                          ５〜２０
１種以上の増粘剤                              ０〜１５
中鎖トリグリセリド                            ４０〜６０
【００５９】
好ましい組成物は、以下の量における以下の成分を含む：
成分：                                        量(組成物の重量％)：
坑炎症活性を有するカルボキシレートの
１種以上の金属錯体                            ３〜７
１種以上の溶媒(例えば、テトラグリコール)      ３０±１０％
１種以上の界面活性剤                          １０±１０％
１種以上の増粘剤                              ５±１０％
中鎖トリグリセリド                            ５０±１０％
【００６０】
このような組成物の例は：
[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]錯体                    ５.５重量％
テトラグリコール                              ３０重量％
Termul １２８４                               １０重量％
Aerosil ２００                                ５重量％
中鎖トリグリセリド                            １００重量％まで
からなる組成物である。
【００６１】
発明者らは、本組成物の経口投与が、Indo Ｈまたは[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]錯体の粉末の形態における等モル量のIndoの経口投与に比較して、胃腸管副作用を大いに減少させることを見出している。この組成物はまた、先行技術のＣｕ−Algesic錠剤またはＣｕ−Algesicペーストの形態における等モル量のIndoの経口投与よりも引き起こされる胃腸管副作用が少ない。
【００６２】
本発明の組成物の使用に好適な油類としては、製薬的に許容可能な植物油類または鉱油類が挙げられる。好適な油類としては、限定はしないが：トリグリセリド類、特に中鎖トリグリセリド類、中鎖および長鎖トリグリセリド類の組み合わせ、トリグリセリド類と魚油との組み合わせ；大豆油、サフラワー(safflower)油、ヒマワリ油などの植物油類；ミリスチン酸イソプロピル；およびパラフィン類が挙げられる。このような油類は、経口投与、注射投与、または局所投与での使用に好適である。
【００６３】
経口投与用または局所投与用組成物の使用に好適な界面活性剤としては、限定はしないが、ソルビタン脂肪酸エステル群の界面活性剤が挙げられる。かかる界面活性剤は、オレイン酸、ラウリン酸、パルミチン酸およびステアリン酸などの脂肪酸類のモノ−、トリ−、または部分エステル類を含む。かかる界面活性剤としては：
トリオレイン酸ソルビタン      (Ｓｐａｎ ８５)、
モノオレイン酸ソルビタン      (Ｓｐａｎ ８０)、
トリステアリン酸ソルビタン    (Ｓｐａｎ ６５)、
モノステアリン酸ソルビタン    (Ｓｐａｎ ６０)、
モノパルミチン酸              (Ｓｐａｎ ４０)、および
モノラウリン酸ソルビタン      (Ｓｐａｎ ２０)、
が挙げられる。
【００６４】
他の好適な界面活性剤としては、マクロゴール(ポリオキシエチレン)エステル類およびエーテル類が挙げられる。これらの界面活性剤としては、限定はしないが、Termul １２８４などのキャスター油(Caster oil)ポリオキシエチレン群の界面活性剤が挙げられる。この群の界面活性剤は、キャスター油(Caster oil)エトキシレートを含む。
【００６５】
このクラスにおける他の好適な界面活性剤としては：
ポリオキシエチレン(２０)  モノラウリン酸ソルビタン(ツイーン２０)
ポリオキシエチレン（４）  モノラウリン酸ソルビタン(ツイーン２１)、および
ポリオキシエチレン(２０)  モノオレイン酸ソルビタン(ツイーン８０)
などのポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類群の界面活性剤が挙げられる。
【００６６】
本発明の幾つかの実施形態において、該組成物は、水と不混和性である。かかる組成物は、疎水性の製薬的に許容可能な担体中、金属カルボキシレート錯体を含む。
【００６７】
したがって、本発明は、疎水性の製薬的に許容可能な担体中、坑炎症活性を有するカルボキシレートの金属錯体を含む薬学的組成物を提供し、
（１）該組成物において坑炎症活性を有する該カルボキシレートの総量の８０％以上が、金属錯体の一部として存在し；および
（２）室温(１８℃〜２５℃まで)で光の無い状態で保存された場合、該金属と錯体化した抗炎症活性を有する該カルボキシレートの１０％未満が、１２ヵ月にわたり該金属から解離する。
【００６８】
該疎水性担体は、意図された投与経路により製薬的に許容可能であり、室温(１８℃〜２５℃まで)で光の無い状態で１２ヵ月間保存した場合、該錯体と相互作用して該金属と錯体化した抗炎症活性を有する該カルボキシレートの１０％超を、該金属から解離させることのない任意の疎水性担体であり得る。経口投与用または局所投与用組成物に好適な疎水性担体としては、限定はしないが、トリグリセリド類、好ましくは中鎖トリグリセリド類などの油類、大豆油、サフラワー(safflower)油およびヒマワリ油などの植物油類、ミリスチン酸イソプロピルおよびパラフィン類が挙げられる。
【００６９】
該組成物に存在する坑炎症活性を有する該カルボキシレートの総量の８０％超、好ましくは９０％超、より好ましくは９５％超が、金属錯体の一部として存在し、該組成物を室温で光の無い状態で１２ヵ月間保存した場合、該金属と錯体化した抗炎症活性を有する該カルボキシレートの１０％未満が、該金属から解離することが、本発明の特徴である。これらの特徴を有する本発明の組成物は、好適な製薬的に許容可能な担体を選択することにより調製できる。金属錯体の形態で組成物に存在するカルボキシレート量は、ＥＰＲ分光法など、当業界に公知の方法を用いて当業者により容易に測定できる。
【００７０】
本発明の組成物用の担体は、室温で光の無い状態で１２ヵ月間保存した場合、該金属カルボキシレート錯体と反応して該金属と錯体化した抗炎症活性を有する該カルボキシレートの１０％超を、該金属から解離させると思われるいずれの成分または成分の組み合わせも該組成物には含有しないように選択される。
【００７１】
ペプチド類、ある一定のカルボキシレートドナーなどの強力なキレート化配位子、ビタミンＣおよびＥなどの還元剤、グルタミン含有種またはシステイン含有種などのチオレート基は、金属カルボキシレート錯体を解離させ得る。したがって、本発明による組成物は、ペプチド類、カルボキレートドナー類、還元剤およびチオレート基を含まないか、または実質的に無いことが好ましい。強酸および強塩基は、金属カルボキシレート錯体を解離させ得るので、該組成物は、強酸性または強塩基性でないことが好ましい。
【００７２】
幾つかの経口用薬学的組成物に含まれる成分は、カルボキシビニルポリマーである。カルボキシビニルポリマー(商品名carbopol(商標)で販売)は、先行技術のＣｕ−Algesicペーストに含まれる。カルボキシビニルポリマーは、増粘剤などとして種々の目的のために薬学的組成物に使用される。本発明者らは、抗炎症活性およびカルボキシビニルポリマーを有するカルボキシレートの金属錯体を含有する薬学的組成物の調製および保存中に、種々の量の抗炎症性カルボキシレートが、該錯体から解離して品質管理への信頼を失わせるため、本発明による組成物は、カルボキシビニルポリマーを含まないか、または実質的に無いことが好ましいことを見出した。
【００７３】
同様に、ビタミンＥは、目または皮膚における損傷組織を修復するのに役立つものとして、多くの局所眼科用組成物および他の局所用組成物に含まれる。しかしながら、ビタミンＥは、還元剤であり、金属カルボキシレート錯体を解離させるので、本発明による組成物は、ビタミンＥを含まないか、または実質的に無いことが好ましい。
【００７４】
該組成物をコーティングするか、またはカプセルにカプセル化する場合、コーティングまたはカプセルは、該組成物を室温で光の無い状態で１２ヵ月間保存した場合、該金属カルボキシレート錯体と相互作用して該金属と錯体化した抗炎症活性を有する該カルボキシレートの１０％超を、解離させることのないように選択される。例えば、ソフトゲルゼラチンカプセルは、Ｃｕをコーティング材料に封鎖することが示されており、それ故、本発明の組成物は、ソフトゲルゼラチンカプセルとカプセル化しないことが好ましい。
【００７５】
本発明の組成物は、製薬的に許容可能な担体と一緒に金属カルボキシレート錯体を含む。本明細書に用いられる「製薬的に許容可能な担体」は、製薬的に許容可能な溶媒であり、該金属カルボキシレート錯体をヒトまたは動物に送達させるために薬剤または媒体を懸濁させる。担体は、液体であっても固体であってもよく、意図され計画された投与様式により選択される。担体は、生物学的に、または他に望ましくないものではないという意味で製薬的に「許容可能な」ものでなければならず、すなわち、該担体は、何らかのまたは実質的な副作用を引き起こすことなく有効成分と共にヒトまたは動物に投与できる。
【００７６】
本発明の組成物は、経口投与、直腸投与、経鼻投与、局所(頬側および舌下など)投与、眼科投与、膣投与または非経口(皮下、筋肉内、静脈内および経皮内)投与に好適なものを含む。該組成物は、単位剤形で好都合に提供でき、製薬業界で周知の方法により調製できる。かかる方法は、該金属カルボキシレート錯体と担体とを組み合わせるステップを含む。水中油乳濁液または水性担体中ミセルを含む本発明の組成物は、水中油乳濁液または水性担体中ミセルを含む組成物調製するために当業界に公知の方法により調製できる。
【００７７】
典型的に該担体は、２種以上の成分からなる。一般に、本発明の組成物は、有効成分と担体とを均一かつ密接に組み合わせ、次いで必要ならば製造物を形状化することにより調製される。典型的に、該金属カルボキシレート錯体および担体を作製する１種以上の成分は、任意の順序で混合できる。しかしながら、成分は、組成物の調製中に解離する該金属カルボキシレート錯体の量を最少にする様式で混合することが好ましい。例えば、該組成物の調製中に該金属カルボキシレート錯体と強酸または強塩基との接触は避けることが好ましい。該成分が、該金属カルボキシレート錯体を水性系のミセルを含む担体に添加することにより調製される場合、該金属カルボキシレート錯体と該担体との混合物を、ミセルに組み込む前に錯体の解離を最少にするために、担体への錯体の添加の際に音波処理できる。
【００７８】
経口投与用の本発明の組成物は、粘稠ペースト、液剤、錠剤、カプセル剤、咀嚼組成物の形態で、または経口投与に好適な任意の他の形態であり得る。所望ならば、該組成物は、当業界に公知の技法により好適な軟カプセル剤または硬カプセル剤にカプセル化できる。
【００７９】
経口使用の組成物は、製薬的に優れて口当たりのよい製剤を製造するために甘味剤、崩壊剤、潤沢剤、風味剤、着色剤および保存剤の群から選択される１種以上の試剤を含むことができる。
【００８０】
咀嚼組成物は、例えば、該金属カルボキシレート錯体、１種以上の風味剤、ベース製剤、１種以上の保存剤、１種以上のｐＨ調節剤、１種以上の乾燥剤および１種以上の充填剤を含むことができる。ベース製剤は、該組成物が咀嚼され、嚥下される際、該組成物が胃腸管内で乳濁液を形成するように油(類)および界面活性剤(類)を含むことができる。ベース製剤は、例えば、実施例３に記載されたＭＣＴペースト製剤を含むことができる。ウマ用の咀嚼組成物に関して、そのベースは、アルファ化澱粉、ゼラチン、小麦粉および水を含むことができる。例えば、ウマ用の咀嚼組成物は、該金属カルボキシレート錯体、風味剤、ベース(アルファ化澱粉、ゼラチン、小麦粉および水)、およびリン酸、塩、糖、ソルビトールおよび／またはグリセロール、ソルビン酸および／またはソルビン酸カリウム、安息香酸、プロピオン酸およびマルトデキストリンなど他の成分を含むことができる。イヌ用の咀嚼組成物は、該金属カルボキシレート錯体、肉乳濁液、酸味料(例えば、リン酸)、１種以上の坑真菌剤(例えば、安息香酸およびソルビン酸)、糖または糖アルコール、および塩を含むことができる。
【００８１】
局所適用のための本発明の組成物は、従来の水中油乳濁液、油中水乳濁液、または局所適用に好適な水不混和性製薬担体中、該金属カルボキシレート錯体を含むことができる。かかる担体としては、例えば、潤滑剤、セトマクロゴールクリームＢＰ、羊毛脂軟膏ＢＰまたは乳化軟膏ＢＰを挙げることができる。かかる担体は、乳濁液の形態であるか、または水と不混和性である。
【００８２】
局所適用の組成物の例は、乳化クリーム中、[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]または[Ｚｎ(Indo)2(ＯＨ2)2]として０.５〜２％ｗ／ｗのIndoを含む組成物であり、該乳化クリームは：
セトマクロゴール乳化ワックス          １５ｇ
液体パラフィン                        １０ｇ
白色ワセリン                          １０ｇ
クロロクレゾール                      ０.１ｇ
プロピレングリコール                  ５ｍｌ
精製冷却水                            １００ｇまで
からなる。
【００８３】
本組成物は、水中油乳濁液である。セトマクロゴール乳化ワックスは界面活性剤(乳化剤)であり、パラフィン類の組み合わせは乳濁液の油相を形成し、クロロクレゾール(４−クロロ−３−メチルフェノール)は保存物であり、プロピレングリコールは溶媒である。
【００８４】
局所用組成物の別の例は、羊毛脂中、０.５〜２％ｗ／ｗの[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]からなる組成物である。本組成物は、水と不混和性である。
【００８５】
局所投与用組成物の別の例は、
成分                                  量(組成物の重量％)
油相
ミリスシン酸イソプロピル              ９.２０
Arlacel  １６５                       ８.００
ＧＭＳ(ＮＳＥ)                        ３.００
セチルアルコール                      ３.００
Nipastat                              ０.１０
錯体                                  ０.２５
水相
水                                    ７１.３５
ＰＥＧ  ４００                        ５.００
香料                                  ０.１０
１００.００
を含む組成物である。
【００８６】
本組成物は、各相の成分を混合することによって油相と水相とを別個に調製し、次いで水相を油相に６５℃で加えることによって調製できる。あるいは、該組成物は、加熱しながらＰＥＧ４００に錯体を溶解し、これを油相に加えて均一になるまで迅速に混合し、次いで水と香料を加えて再度均一になるまで迅速に混合することによって調製できる。
【００８７】
非経口投与用組成物は、ヒトまたは動物に体内に注射される場合、または水と不混和性であるミセルまたは乳濁液を形成するために適合させた滅菌乳濁液および滅菌水性または非水性組成物(非静脈内注射用または点滴用)の形態の組成物を含む。
【００８８】
皮下注射用または筋肉内注射用の本発明の組成物の例は、以下の成分を含む組成物である：
成分：                                    量(組成物の重量％)：
抗炎症活性を有するカルボキシレートの
１種以上の金属錯体                        １〜７
１種以上の溶媒(例えば、グリコフロール)    １０〜５０
中鎖トリグリセリド                        １００まで
【００８９】
該組成物は、以下のとおり調製できる：
１.溶媒をミキサーに加えて、攪拌しながら加熱する。
２.金属錯体を加えて溶解する。溶解するまで攪拌してから、熱源を取り外す。
３.Delios Ｖ ＭＣＴ油を攪拌しながら加える。均一になるまで１５分間攪拌してから、冷却する。
【００９０】
このような組成物の例は、以下の成分を含む組成物である：
成分：                                量：
[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]錯体            ４０ｍｇ
テトラグリコール                      ３００.０ｍｇ
Delios Ｖ ＭＣＴ油                    適量１.０ｇ
【００９１】
テトラグリコールは溶媒である；Delios\nＶ\nＭＣＴ油は中鎖トリグリセリド油である。
【００９２】
この組成物は、単相油であり、水に不混和性である暗緑色油の外観を呈した。
【００９３】
静脈内注射用または点滴用の本発明の組成物の例は、以下の成分を含む組成物である：
油相
成分：                                    量(油相の重量％)：
抗炎症活性を有するカルボキシレートの
１種以上の金属錯体                        １〜７
１種以上の溶媒(例えば、グリコフロール)    １０〜５０
中鎖トリグリセリド                        １００まで
【００９４】
水相
等張性塩化ナトリウム溶液
油相は以下のとおり調製できる：
１.溶媒をミキサーに加えて、攪拌しながら加熱する。
２.金属錯体を加えて溶解する。溶解するまで攪拌してから、熱源を取り外す。
３.Delios Ｖ ＭＣＴ油を攪拌しながら加える。均一になるまで１５分間攪拌してから、冷却する。
【００９５】
次に油相を、(１〜３ｍＬ油相)：(２５〜５０ｍＬ水相)の比率で水相と混合し、「Effect of Degassing on the Formation and Stability of Surfactant-Free Emulsion and Fine Teflon Dispersion」Pashley,R.M.、J.Phys.Chem.B2003年、107、1714-1720頁に記載されたとおり、乳濁液を一連の凍結−解凍脱気サイクルを経て調製する。
【００９６】
静脈内注射用または点滴用の組成物の別の例は、以下の量で以下の成分を含む組成物である：
油相
成分：                                    量(油相の重量％)：
抗炎症活性を有するカルボキシレートの
１種以上の金属錯体                        ３〜７
１種以上の溶媒(例えば、グリコフロール)    ２０〜４０
１種以上の界面活性剤                      ５〜２０
油                                        ４０〜６０
【００９７】
水相
等張性溶液
該組成物は、典型的に５〜３０重量％の油相および７０〜９５重量％の水相を含有する。典型的に油は、中鎖トリグリセリドまたは大豆油である。界面活性剤は、例えば、ツイーン８０または大豆レシチンであり得る。
【００９８】
ＮＳＡＩＤの金属錯体を含有する本発明の組成物において、典型的に該組成物におけるＮＳＡＩＤの総量の９０％超、好ましくは９５％超が、金属錯体の形態で存在する。
【００９９】
本発明の組成物は、金属カルボキシレート錯体に加えて１種以上の製薬的に有効な成分を含むことができる。
【０１００】
典型的に該金属カルボキシレート錯体は、組成物の約０.１重量％〜約２０重量％を構成している。
【０１０１】
本発明はまた、ヒトまたは動物における炎症病態を治療する方法を提供し、該方法は、本発明の第１または第２の態様に従って組成物の治療的有効量を該ヒトまたは動物に投与することを含む。該組成物は、経口的、局所的、注射により、座薬により、吸入または幾つかの他の経路により投与できる。
【０１０２】
炎症病態は、例えば、リウマチ様関節炎、骨関節炎、急性筋骨格障害(腱炎、捻挫および挫傷など)、下部背痛(一般に腰痛と称される)、または外科処置または非外科処置後の炎症、疼痛または浮腫を挙げることができる。炎症病態はまた、乾癬または乾癬関節炎であり得る。
【０１０３】
該ヒトまたは動物は、本発明の組成物による治療を必要とする疾患または病態をもつヒトまたは動物のいずれかであり得る。動物は、典型的に哺乳動物であり、非ヒト霊長類または非霊長類であり得る。哺乳動物は、例えば、イヌまたはネコなどのコンパニオン動物、またはウマ、ポニー、ロバ、ラバ、ラマ、アルパカ、ブタ、ウシまたはヒツジなどの家畜、または動物園動物であり得る。
【０１０４】
好適な哺乳動物としては、霊長類種、げっ歯類種、ウサギ目種、クジラ類種、食肉類種、奇蹄類種および偶蹄類種のメンバーが挙げられる。
【０１０５】
例えば、偶蹄類は、９系統群にわたって分布した凡そ１５０の生物種を含む：ブタ類(Suidae)、ペッカリー類(Tayassuidae)、カバ類(Hippopotamidae)、ラクダ類(Camelidae)、マメジカ類(Tragulidae)、ジラフ類およびオカピ(Giraffidae)、シカ類(Cervidae)、プロングホーン(Antilocapridae)、およびウシ、ヒツジ、ヤギならびにレイヨウ(Bovidae)を含む。これら動物の多くは、種々の国々で飼育動物として用いられている。より重要なことに、ヤギ、ヒツジ、ウシおよびブタなどの多くの経済的に重要な動物は、極めて類似した生物学を有しており、高度のゲノム相同性を共有している。
【０１０６】
奇蹄類種は、ウマおよびロバを含んでなり、双方とも経済的に重要であり、極めて近縁である。
【０１０７】
本明細書に用いられる用語の「治療的有効量」とは、所望の治療的応答を生じる上で、例えば、炎症病態の予防または治療するのに有効な量を意味する。具体的な「治療的有効量」は、治療を受ける特定の病態、ヒトまたは動物の身体状態、治療を受けるのはヒトか動物か、治療を受ける動物の種類、治療期間、併用療法(もしあれば)の性質、および使用される具体的な組成物などの因子によって変わり得る。投与される用量および投与経路は、担当医または獣医師に一任される。
【０１０８】
本明細書において、略語の「py」はピリジンを称し、「Pyrro」はピロリジンを称し、「dmso」はジメチルスルホキシドを称し、および「ＤＭＦ」はＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミドを称す。
【０１０９】
本明細書において用語の「ハロ」とは、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードを称す。
【０１１０】
本明細書において、単独または「アリールアルキル」などの化合物の語句で用いられる用語の「アルキル」とは、直鎖、分枝鎖またはモノ−あるいはポリ−環式アルキルを称す。直鎖および分枝鎖アルキルの例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、アミル、イソ−アミル、sec−アミル、１,２−ジメチルプロピル、１,１−ジメチルプロピル、ヘキシル、４−メチルフェニル、１−メチルフェニル、２−メチルフェニル、３−メチルフェニル、１,１−ジメチルブチル、２,２−ジメチルブチル、３,３−ジメチルブチル、１,２−ジメチルブチル、１,３−ジメチルブチル、１,２,２−トリメチルプロピル、および１,１,２−トリメチルプロピルが挙げられる。環式アルキルの例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルが挙げられる。
【０１１１】
本明細書において、用語の「シクロアルキル」とは、３個から１２個の炭素を有する飽和単環式または多環式アルキルを称す。
【０１１２】
本明細書において用語の「アルケニル」とは、直鎖、分枝鎖または環式アルケニルを称す。アルケニルは、好ましくはＣ2〜Ｃ20アルケニル、より好ましくはＣ2〜Ｃ6アルケニルを称す。アルケニルの例としては、ビニル、アリル、１−メチルビニル、ブテニル、イソブテニル、３−メチル−２−ブテニル、１−ペンテニル、シクロペンテニル、１−メチルシクロペンテニル、１−ヘキセニル、３−ヘキセニル、シクロヘキセニル、１−ヘプテニル、３−ヘプテニル、１−オクテニル、シクロオクテニル、１−ノネニル、２−ノネニル、３−ノネニル、１−ドデシル、３−ドデシル、１,３−ブタジエニル、１,４−ペンタジエニル、１,３−シクロペンタジエニル、１,３−ヘキサジエニル、１,４−ヘキサジエニル、１,３−シクロヘキサジエニル、１,４−シクロヘキサジエニル、１,３−シクロヘプタジエニル、１,３,５−シクロヘプタトリエニルおよび１,３,５,７−シクロオクタテトラエニルが挙げられる。
【０１１３】
本明細書において用語の「アルキニル」とは、直鎖、分枝鎖または環式アルキニルを称し、好ましくはＣ2〜Ｃ20アルキニル、より好ましくはＣ2〜Ｃ6アルキニルを称す。
【０１１４】
本明細書において、単独または「アリールアルキル」などの化合物の語句で用いられる用語の「アリール」とは、単環、多環、共役または縮合芳香族炭化水素または芳香族ヘテロ環式環系の基を称す。アリールの例としては、フェニル、ナフチルおよびフリルが挙げられる。該アリールが、ヘテロ環式芳香族環系を含む場合、該芳香族ヘテロ環式環系は、環内にＮ、ＯおよびＳから独立して選択される１個〜４個のヘテロ原子および９個までの炭素原子を含有することができる。
【０１１５】
本明細書において用語の「アリールアルキル」とは、アリール基で置換されたアルキルを称す。アリールアルキルの例は、ベンジルである。
【０１１６】
本発明は、以下の非限定的な実施例を参照として下に記載される。広く記載された本発明の精神または範囲から逸脱することなく以下の実施例に示されるように、多数の変更および／または改変が、本発明に対して成され得ることが当業者によって認識されるであろう。したがって、実施例は、全ての点で例示的なものとして考えるべきであって、拘束するものではない。
【実施例】
【０１１７】
実施例１−[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]錯体の調製
[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]錯体は、Anti-Inflammatory Dinuclear Copper(II) Complexes with Indomethacinに記載されているとおり調製できる。合成、磁気分光法およびＥＰＲ分光法；Crystal Structure of the N,N-Dimethylformamide Adduct.Weder,J.E.;Hambley,T.W.;Kennedy,B.J.;Lay,P.A.;MacLachlan,D.;Bramley,R.;Delfs,C.D.;Murray,K.S.;Moubaraki,B.;Warwick,B.;Biffin,J.R.;Regtop,H.L.Inorg.Chem.1999年、38,1736〜1744頁、またはより好ましくは、下記のとおりである。
【０１１８】
水(０.７５ｍｌ)中、Ｃｕ(II)アセテート一水和物(０.０２８ｇ、０.１４０ｍｍｏｌ)を、エタノール(１.７５ｍｌ)に溶解させたインドメタシン(０.１ｇ、０.２８ｍｍｏｌ)に室温で滴下により加えた。酢酸銅溶液を加える前に、エタノールを緩和に温めて(約４０℃)インドメタシンの溶解を助けた。水中のＣｕ(II)アセテート一水和物を添加すると、明緑色錯体が、直ちに溶液から降下した。この沈殿物をろ過し、水で洗浄し、乾燥した。分光学的分析により、それが[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]錯体であったことを示され、ＥＰＲ分光法により、それが＞９９％の二量体であることが示された。
【０１１９】
[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]錯体の結晶サイズおよび着色を、光学顕微鏡によりチェックした。該結晶は、色が緑色であり、星様形状および直径が５０〜１００ミクロンを有することが判明した。このサイズは、他で報告された合成法により調製された[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]の結晶よりも大きかった(少なくとも１桁の大きさで)。
【０１２０】
実施例２−ビス(η2−Ｏ,Ｏ’−Indo)ビス(ピロリジン)銅(II)−２−ピロリジン一水和物、[Ｃｕ(Indo)2(Pyrro)2]・２Pyrro・Ｈ2Ｏの調製
[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2]は、Biochemical Veterinary Research Pty Ltd.(ＢＶＲ)により提供され、ＤＭＦより２回の再結晶により精製された。
【０１２１】
淡青色板状からなる結晶を、溶媒としてのピロリジン中、[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2]の再結晶により成長させた。元素分析、測定値：Ｃ,５９.９１；Ｈ,６.３２；Ｎ,７.８４；Ｃｕ,６.０１％。ＣｕＣ54Ｈ68Ｃｌ2Ｎ6Ｏ9に関する理論値：Ｃ,６０.１５；Ｈ,６.３６；Ｎ,７.８０；Ｃｕ,５.８４％。
【０１２２】
結晶解析により、結晶は、ビス(η2−Ｏ,Ｏ’−Indo)ビス(ピロリジン)銅(II)−２−ピロリジン一水和物、[Ｃｕ(Indo)2(Pyrro)2]・２Pyrro・Ｈ2Ｏの結晶であることを示している。この錯体は、非対称二座配位子として結合しているカルボキシレートの第２の「カルボニル」酸素からの弱い軸外れの二次的配位による四座標平面四角形結合を有する、正方晶的に歪んだ正八面体として記載できる。単核Ｃｕは、Ｃｕ−Ｎ２.０５１（２）Åで２つのピロリジン窒素原子に対してトランス平面四角形配列において、また、Ｃｕ−Ｏ（１）１.９７１９(１４)Åで２つのIndo配位子の各々からカルボキシレート酸素原子に対する１つの短結合を介して結合されている。遠隔カルボキシレート酸素原子は、弱い相互作用を示すＣｕ…Ｏ（２）＝２.５６９６(１６)ÅでＣｕ原子に結合している。Ｏ（１）−Ｃｕ（１）−Ｎ（２）の角度は９３.２２(７)°である。
【０１２３】
実施例３−ＭＣＴペースト組成物
動物またはヒトへの経口投与に好適な本発明の組成物は、下記のとおり調製された。
【０１２４】
該組成物は、以下の成分を含んだ：
成分：                                    量：
[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]錯体                ５５.０ｍｇ
テトラグリコール                          ３００.０ｍｇ
Termul １２８４                           １００.０ｍｇ
Aerosil ２００                            ５０.０ｍｇ
Delios Ｖ ＭＣＴ油                        適量１.０ｇ
【０１２５】
Delios Ｖ ＭＣＴ油は中鎖トリグリセリド油である。Aerosil ２００は、シリカベースの流動促進剤である。
【０１２６】
組成物は、以下のとおり調製した：
１.テトラグリコールをミキサーに加えて、攪拌しながら７５℃に加熱する。
２.銅インドメタシン錯体を加えて溶解する。溶解するまで攪拌してから、熱源を取り外す。
３.Delios Ｖ ＭＣＴ油を攪拌しながら加える。
４.Termul １２８４を攪拌しながら加える。
５.バルクがまだ熱いうちに、Aerosil ２００を混合渦に慎重にゆっくりと加える。均一になるまで１５分間攪拌してから、冷却する。
【０１２７】
該組成物は、単一相ペーストであり、暗緑色ペーストの外観とテクスチャーを有した。この組成物が水と接触すると、該組成物は水中油乳濁液を形成する。
【０１２８】
この製剤を、ヒトまたは動物に経口投与すると、該組成物は、消化管内で水中油乳濁液を形成する。
【０１２９】
この組成物は、動物またはヒトの炎症を治療するために経口投与できる。
【０１３０】
上記に定義された式（１）の単核錯体などの他の金属カルボキシレート錯体を含有する同様なＭＣＴペースト組成物を、同様な手順により調製できる。
【０１３１】
実施例４−製薬製剤における[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]の電子常磁性共鳴(ＥＰＲ)分光学的特性
[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]錯体の解離により、Indoを含有しないＣｕ(II)モノマーの形成が生じ、Indoの単核および二核Ｃｕ(II)錯体では互いに異なるＥＰＲを有する。[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]の合成は、少量の単量体(典型的に５％以下)を含有する生成物を生じ得る。このように、[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含有する組成物は、少量のIndo含有Ｃｕ(II)単量体を含んでも含まなくてもよい。しかしながら、二量体の解離として、Indoを含有しないＣｕ(II)単量体の形成を生じ、錯体[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]の量と比較してIndoを含有しない生じたＣｕ(II)単量体の相対量は、[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]錯体を含有する薬学的組成物中の[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]錯体の解離量、したがって組成物中の遊離インドメタシン量の表示を提供することができる。
【０１３２】
錯体[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含有する種々の組成物のサンプル中のＣｕ(II)単量体の相対量は、下記のとおり測定される。試験された組成物は、「Ｃｕ−Algesic錠剤」([Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含有)、「Ｃｕ−Algesic顆粒剤」([Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含有)、「Ｃｕ−Algesicペースト」([Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含有)であり、本発明の３つの成分、すなわち、「Ｃｕ−Algesic ＭＣＴペースト」(すなわち、実施例３に記載されたとおり調製された組成物)、「Ｃｕ−Algesic 眼軟膏剤」(涙潤滑油(白色ワセリン５７.３％、鉱油(液体パラフィン)４２.５％、保存剤として１,１,１−トリクロロ−２−メチル−２−プロパノール(０.５％)を含有するラノリンアルコール類０.２％)中１％ｗ／ｗの[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2])および「Ｃｕ−Algesic点眼剤」(ポリビニルアルコール(１４ｍｇ／ｍｌ)およびポビドン(６ｍｇ／ｍｌ)の水性ミセル中１％ｗ／ｗの[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2])である。
【０１３３】
「Ｃｕ−Algesic錠剤」は、該錠剤が[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2]錯体ではなくて[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含んだこと以外、先行技術のＣｕ−Algesic錠剤と同じであった。
【０１３４】
「Ｃｕ−Algesic顆粒剤」は、該顆粒剤が[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2]錯体ではなくて[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含んだこと以外、先行技術の「Ｃｕ−Algesic顆粒剤」(Aerosil(２.５％ｗ／ｗ)およびヒマ糖(９６.５％)の混合物中１％ｗ／ｗのＣｕ Indo)を調製するために用いられる先行技術の顆粒剤と同じであった。
【０１３５】
本実施例で用いられた「Ｃｕ−Algesicペースト」製剤は、carbopolゲル(パーセントは、組成物の重量パーセントであり、ＮａＯＨ溶液(８.５％ｗ／ｖ)および水の添加により約ｐＨ７.０に調整された、carbopol(商標)(カルボキシビニルポリマー)(１％)、Nippasol Ｍ(ｎ−プロピル−４−ヒドロキシベンゾエート、保存剤)(０.５％)を含むcarbopolゲル)中[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]錯体を含んだ。この組成物は、[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2]錯体を含有する先行技術のＣｕ−Algesicペーストを調製するために用いられたものと同じ方法を用いてＢＶＲにより調製された。
【０１３６】
Ｃｕ−Algesic 眼軟膏剤は、錯体[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]と担体とを混合することにより調製された。
【０１３７】
Ｃｕ−Algesic 点眼剤は、錯体[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]と水性ミセル担体とを混合して、該錯体のミセル内への迅速な溶解を確実にするために該混合物を音波処理することにより調製された。
【０１３８】
各々の組成物に関して、[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]錯体の解離以外にＣｕ(II)単量体の他の可能な発生源はなかった。
【０１３９】
ＥＰＲ分光法
標準ＥＲ４１２０ Ｘバンドキャビティー、ＥＭＸ ０３５Ｍ ＮＭＲガウスメーター、ＥＭＸ ０３２Ｔフィールドコントローラー、ＥＭＸ ０８１磁気電源、Bruker ＥＭＸ ０４８Ｔマイクロ波ブリッジコントロールおよびＢＶＴ２０００可変温度ユニットならびにOxford Instruments Ｅ９００連続流クリオスタット(低温データ回収用)を備えたBruker ＥＭＸ ＥＰＲ分光器を用いて、[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含有する組成物の低温(４−１１０Ｋ)ＸバンドＥＰＲスペクトルを、Ｘバンド周波数(約９.５ＧＨｚ)で測定した。０.４７ｍＭ未満のＣｕ(II)を含有する[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]のサンプルの低温ＸバンドＥＰＲＣｕ(II)スペクトルは、Hewlett Packard ５３５２Ｂマイクロ波周波数カウンター、Bruker ＥＲ ０８５Ｃ磁気電源、Bruker ＥＲ ０３２磁場コントロール、Bruker ＥＲ ０２３ＭシグナルチャネルおよびBruker ＥＳＰ １６００−１０４８マイクロ波ブリッジコントローラーを備えたBruker ＥＳＰ ３００分光器を用いて測定した。
【０１４０】
サンプルの最初の総Ｃｕ(II)含量に対するＣｕ(II)単量体含量のパーセントを定量化するために用いられたＣｕ(II)単量体スペクトルは全て４Ｋで回収した。データ回収のため、１００μＬの溶液サンプルまたは約２０ｍｇのペーストサンプルを、石英ＥＰＲ管(外径２ｍｍ、内径１.５ｍｍ)に入れた。ペーストサンプルは、ＥＰＲ管に挿入する前に、ポリエチレン管に入れた。サンプルの最初の総Ｃｕ(II)含量に対するＣｕ(II)単量体含量は、溶液サンプル／ペーストサンプルのＣｕ(II)単量体スペクトルの二重積分(ＤＩ)を決定し、これを、ＣｕＣｌ2検量線と比較することにより、ＷＩＮＥＰＲデータ解析プログラム(９６０８０１；Bruker：Franzen Analytik ＧｍｂＨ、1990〜1996)を用いて算出した。ＣｕＣｌ2検量線用サンプルは、Ｂグレードの容積計量用ガラス器具を用い、Milli−Ｑ水中で調製した。ＥＰＲ分光法に好適なガラス化サンプルを作製するために、ＣｕＣｌ2検量線用サンプルに、グリセリン(２０％ｗ／ｗ)を加えた。サンプルのスペクトルに対する空の共振器キャビティーおよびポリエチレンのサンプルホルダーの負の寄与を確認するために、Ｃｕ(II)検量実験の前に、空の共振器キャビティーおよびポリエチレンのペーストサンプルホルダーのスペクトルを記録した。Ｃｕ(II)単量体スペクトルに冠するシグナル飽和の不在は、マイクロ波力の減少したマイクロ波の平方根により、シグナル強度の減少を検証することによってチェックした(Weber,R.T.,EMX User's Manual;Bruker Instruments社、Billerica、1995年)。
【０１４１】
結果
スピントリプレット状態によるＣｕ(II)二量体に関する特有な共鳴は、スピンハミルトニアンパラメーターＨ⊥(５００Ｇ)、Ｈｚ１(約４７２０Ｇ)、およびＨｚ２(約５９８０Ｇ)を特徴とする。Ｃｕ(II)単量体フラクションによる３３００Ｇにおける小さな共鳴もまた、ｇ‖シグナル(Ｈｚ１、およびＨｚ２)各々の７本線(限定不良)Ｃｕ超微細カップリング遷移と共に見られる(Weder、J.E.;Hambley,T.W.;Kennedy,B.J.;Lay,P.A.;MacLachlan,D.;Bramley,R.;Delfs,C.D.;Murray,K.S.;Moubaraki,B.;Warwick,B.;Biffin,J.R.;Regtop,H.L.Inorg/Chem.1999年、38、1736〜1744頁)。４Ｋまで冷却すると、Ｃｕ(II)単量体共鳴は増加し、Ｃｕ(II)二量体共鳴(Ｈ⊥、Ｈｚ１、およびＨｚ２)は、該二量体のＥＰＲシグナルを有さない反磁性基底状態集団の増加により、消失する。したがって、該二量体および何らかの反磁性不純物の存在をチェックするために、１００〜７０００Ｇ領域におけるサンプルのＸバンドＥＰＲ分光法を実施した。
【０１４２】
該組成物中のＣｕ総量のパーセンテージとして表されるサンプル中のＣｕ(II)単量体の量が表１に示されている。固体状態におけるＣｕ−Algesic錠剤またはＣｕ−Algesic顆粒剤に関しては、定量的結果は得られなかったが、同じ条件下の溶液サンプルおよびペーストサンプルによるＥＰＲスペクトルの比較により、これらの組成物におけるＣｕ(II)含量は、ほとんど全てが二量体の形態であることが示された。
【０１４３】
本発明の３種の組成物(Ｃｕ−Algesic ＭＣＴペースト、Ｃｕ−Algesic眼軟膏およびＣｕ−Algesic点眼剤)は全て、１０％未満のＣｕ(II)単量体フラクションを含有した(表１)。ＢＶＲ Ｐｔｙ社により提供された[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]錯体を含有するcarbopolペースト製剤は、製剤過程時およびその後の該二量体の分解により、かなりの率のＣｕ(II)単量体(総Ｃｕの８０％)を含有した。本発明者によって新鮮に調製されたcarbopolペースト製剤の他のサンプルは、低量のＣｕ(II)単量体(総Ｃｕの２０〜３０％)を有した。単量体の量の変動は、制御困難な製造過程時の因子および製造後の貯蔵時間の長さによるものと思われる。
【０１４４】
【表１】
2007530599.tif 000006
【０１４５】
実施例５  ラットにおける有効性ならびに安全性：種々の製薬製剤の比較
本実施例では、抗炎症剤としての試験サンプルおよび試験組成物の評価、および急性胃腸管潰瘍を誘発するそれらの能力に関する一連のインビボ試験において、下記の固体状態の試験サンプルおよび試験組成物の有効性ならびに安全性を比較した。
【０１４６】
試験サンプル
サンプルＩ＝ＣＭＣ(２％)溶液に懸濁させた固体状態Indo Ｈ
サンプルＦ＝ＣＭＣ(２％)溶液に懸濁させた固体状態[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]
サンプルＭ＝ＣＭＣ(２％)溶液ＣＭＣ(２％)溶液に懸濁させた微粉化形態における固体状態[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2]
【０１４７】
ＣＭＣ(２％)溶液は、カルボキシメチルセルロース(ＣＭＣ)の２％(重量／容積)水性溶液である。
【０１４８】
上記サンプルは、固体状態として下述されており、該錯体が固体形態であることを意味している。
【０１４９】
試験組成物
サンプルＦをcarbopolゲル担体(carbopol、保存剤、水およびｐＨを約７.０に調整する上で十分な量のＮａＯＨからなる担体)と混合することによって、carbopolペースト中に[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含有する新鮮調製組成物を調製した。この組成物は、先行技術のＣｕ−Algesicペーストに類似しているが、[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2]錯体ではなく、[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]錯体を含有した。
【０１５０】
ＭＣＴペースト中に[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含有する組成物は、実施例３に記載されているとおりに調製した。
【０１５１】
ＭＣＴペースト中に[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2]を含有する組成物は、実施例３に記載されている方法と同じように調製されたが、[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]の替わりに[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2]を用いた。
【０１５２】
本実施例において、微粉化化合物とは、該化合物が、超臨界流体ＧＡＳ法として知られている方法を用いて製造されたことを意味する(Warwick,B.;Dehghani,F.;Foster,N.R.;Biffin,J.R.;Regtop,H.L.Micronization of Copper Indomethacin Using Gas Antisolvent Processes.Ind.Eng.Chem.Res.2002年、41、1993〜2004)。
【０１５３】
試験サンプルおよび試験組成物は、炎症モデルのカラゲナン誘発足浮腫モデルにおいて、炎症を抑制するそれらの能力に関して試験し、また、下記の胃腸管潰瘍形成モデルにおいても試験した。
【０１５４】
方法
サンプル
carbopolペースト中に[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含有する該組成物は、各実験用に新鮮調製され、典型的には、ＥＰＲ分光法によって示されるとおり、二量体からＣｕ(II)への２０％〜３０％のみの分解を示した(実施例４)。
【０１５５】
動物
これらの試験を通して、体重２００〜２５０ｇのＳＤラットを用いた(シドニー大学の実験動物施設により供給)。ラットは、ポリプロピレンのケージ内に入れ、標準的な実験用ラット固形飼料(Purina Rat Chow、Ralston Purina、米国、ミズーリ州、セントルイス)および水道水を自由に取らせた。ラットは、１２時間明暗サイクル、周囲温度および周囲湿度における薬学部の動物管理施設に入れた。該実験動物プロトコルは、１９９９年７月、シドニー大学の動物倫理委員会により、承認番号Ｌ２４／７−９９／３／２９７２で承認されている。
【０１５６】
胃腸管潰瘍形成
胃の損傷を評価するため、ラット(ｎ＝１群当たり４)に、水は自由に取らせて、一晩絶食させてから、経口胃管により試験サンプルまたは試験組成物を経口投与した(非麻酔)。対照には、ＣＭＣ(２％)溶液を投与した。投与３時間後、ラットに麻酔を施し、胃を切除して、大弯曲部に沿って切開により開いた。胃をすすぎ、１時間、１０％ホルムアルデヒドに浸してから、肉眼による胃損傷の程度を調べて判定した。該損傷を、肉眼による潰瘍形成面積の総和(ｍｍ2)として報告する。
【０１５７】
小腸に対する損傷の評価前および評価時、ラット(ｎ＝４)に食料と水を自由に取らせた。経口胃管により、ラットに試験サンプルまたは試験組成物を経口投与した(非麻酔)。対照には、ＣＭＣ(２％)溶液を投与した。投与２４時間後、小腸全体を切除し、水で小腸の内容物を洗い流した。トライツ靭帯の１０ｃｍ遠位から回盲接合部までの小腸全体を調べ、損傷を、肉眼による潰瘍形成面積の総和(ｍｍ2)として報告する。
【０１５８】
胃腸管潰瘍形成の評価において、投与されたＭＣＴまたはcarbopolペースト組成物の総容量は、１投与当たり、０.５ｇ以下であった。
【０１５９】
カラゲナン誘発足浮腫の抑制 
経口胃管により、ラットに試験サンプルまたは試験組成物を経口投与した(非麻酔)。対照集団には、ＣＭＣ(２％)溶液のみを投与した。ＮＳＡＩＤ(または媒体)投与１時間後、後ろ足(ｎ＝３)の足底領域へのカラゲナン(０.１ｍＬ、等張生理食塩水中２重量／容積％)注射によって、炎症を誘発させた(Winter,C.A.;Flataker,L.,Pharmacol.Exp. Ther.1965年、150、165〜171頁)。投与前ならびにカラゲナン注射の３時間後および５時間後に、デジタルキャリバーを用いて、腹側背側足蹠において、足の厚さを測定した。カラゲナン注射ｎ＝３および５時間後における足の厚さ(Δｍｍ)に関する測定パラメーターの変化(ΔＰ)は以下によって与えられる：
ΔＰ＝Ｐｔ＝ｎ−Ｐｔ＝０      (Ｉ)
処置による測定パラメーター(Ｐ)の３時間または５時間での抑制パーセント(抑制％)は、ｎ＝３または５時間での対照群と処置群との間のＰの値の増加％の差として与えられ、Ｐの値の増加％は、以下によって与えられる：
[(Ｐｔ＝ｎ−Ｐｎ＝０)÷Ｐｎ＝０]・１００      (II)
【０１６０】
統計解析 
カラゲナンに誘発された足浮腫および胃腸管潰瘍形成の抑制に関する全てのデータは、平均(±ｓｅｍ)の標準誤差として表される。対照群と処置群との間の比較は、一元配置分散分析法を用い、続いて、GraphPad Instat統計プログラムを用いたスチューデント−ニューマン−クールスのｔ検定によって行った。全ての解析で、５％未満の関連確率(Ｐ値)(Ｐ値＜０.０５)を有意と考えた。０.０５のＰ値閾を有する２つの処置群比較のための実験のパワーの算出は、GraphPad StatMateプログラム(GraphPad Instat;WIN95/NT用3.01版、GraphPad Software社、1998年)を用いて測定した。
【０１６１】
結果 
急性ＧＩ潰瘍形成 
種々の組成物による平均(±ｓｅｍ)急性胃小腸潰瘍形成(ｍｍ2)のデータを表２に示す。固体状態のIndo Ｈ(サンプルＩ)の経口投与(１０ｍｇｋｇ−)により、胃(２８.０±１.７ｍｍ2、Ｐ＜０.０１)および小腸(１７７.０±４.４ｍｍ2、Ｐ＜０.００１)に、対照集団(胃で、０.２５±０.２５ｍｍ2、小腸で、０.５±０.５ｍｍ2)に比較して、有意な出血病巣が誘発された。急性胃損傷(ｍｍ2)の評価において、対照ラットと固体状態[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2](サンプルＦ)処置ラットとの間に有意な潰瘍形成(Ｐ＞０.０５)は見られなかったが、急性腸潰瘍形成の評価において、対照と固体状態[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2](サンプルＦ)処置との間には、有意な潰瘍形成が見られた(６１.０±３４.５ｍｍ2、Ｐ＜０.０１)。しかしながら、固体状態Indo Ｈ(サンプルＩ)に比較して、固体状態[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2](サンプルＦ)の投与後には、腸の潰瘍形成に、Ｐ＜０.００１で有意な減少が見られた。組成物の胃および小腸の粘膜潰瘍形成効果が、図１と図２にそれぞれ示されている。
【０１６２】
対照的に、約１１ｍｇｋｇ-1(１０ｍｇｋｇ-1で投与されたIndo Ｈと等力)で投与された固体状態微粉化[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2](サンプルＭ)は、対照ラットに比較して、胃に有意な胃疾患を生じさせた(Ｐ＜０.００１、４９.７±ｍｍ2)が、小腸では生じさせなかった(Ｐ＞０.０５、８.７±２.９ｍｍ2)。また、固体状態微粉化[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2](サンプルＭ)は、固体状態Indo Ｈ(サンプルＩ)(２８.０±１.７ｍｍ2、Ｐ＜０.０１)または固体状態[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2](サンプルＦ)(７.８±２.７ｍｍ2、Ｐ＜０.０５)よりも有意に大きな胃疾患(４９.０±６.７ｍｍ2)を生じさせた。
【０１６３】
ＭＣＴペーストまたはcarbopolペースト中に[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含有する組成物は、固体状態微粉化[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ2)2](サンプルＭ)に比較して、生じさせる胃潰瘍形成は有意に少なかった(Ｐ＜０.００１)。[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]および[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]のＭＣＴペーストの腸保護効果は、固体状態Indo Ｈに比較して、Ｐ値＜０.００１できわめて有意な、結論的に腸のより小さな潰瘍形成(ｍｍ2)によって顕著である。また、[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]のＭＣＴペーストは、腸潰瘍形成に対して、サンプルＦの固体状態形態よりもより大きな保護を提供し、固体状態サンプルＦに比較して、[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]のＭＣＴペーストでは、腸潰瘍形成(ｍｍ2)の有意な減少が見られた(Ｐ＜０.０１)。固体状態Indo Ｈは、固体状態サンプルＦまたはサンプルＭに比較して、小腸における潰瘍形成性が有意により大きく(Ｐ＜０.００１)、固体状態サンプルＭは、固体状態サンプルＦに比較して、小腸において、潰瘍形成が有意により小さい(Ｐ＜０.００１)。ＭＣＴペースト製剤がcarbopolペースト中の同じ錯体に比較して、１桁の大きさで(対照レベルまで)小腸の潰瘍形成を減少させる事実は、carbopolペースト中では、二量体の分解により、２０％超の遊離Indoが放出されることと一致する。これにより、イヌなどの感受性種において、特に、Ｃｕ(II)二量体の８０％までをＣｕ(II)の単量体および遊離Indoに分解したcarbopolペーストのいくつかに比較すると、ＭＣＴペーストは、安全性の点ではるかに優れたものになる。これらの高分解製剤は、試験しなかったが、はるかに少量の遊離Indoが放出される場合にＧＩ毒性が増加することから明らかなように、それらは、ＧＩ毒性を大きく増加させたと考えられる。
【０１６４】
さらなるＧＩ潰瘍形成実験
製剤中の銅錯体分解の有害効果を例示するために、ＭＣＴペーストまたはカルボキシメチルセルロース(ＣＭＣ)の２％(重量／容量)水性溶液中、Indo(１０ｍｇｋｇ-1)および／またはＣｕの等価用量で、Indo Ｈ、Ｃｕアセテート、ＣｕアセテートとIndo Ｈの物理的混合物および[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2]の胃毒性を試験した。ＭＣＴペースト製剤は、実施例３に記載したとおりに調製したが、[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]の替わりにIndo Ｈ、Ｃｕアセテート、ＣｕアセテートとIndo Ｈの物理的混合物または[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2]を用いた。胃毒性は上記のとおり試験した。これらの実験の結果は図３に示してある。０.５ｍＬのＭＣＴペースト中のIndo Ｈ、またはＣｕアセテートとIndo Ｈの物理的混合物は、０.５ｍＬの２％(重量／容量)ＣＭＣ溶液中のこれらの化合物よりも有意により大きな胃損傷を生じさせた(Ｐ＜０.０１)ことは明らかである。しかし、ＭＣＴペースト中の[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2]、または０.５ｍＬの２％(重量／容量)ＣＭＣ溶液中のＣｕアセテート、または０.５ｍＬのＭＣＴペースト中混合で処置したラットには、対照に比較して、有意な胃潰瘍形成はなかった。さらに、０.５ｍＬのＭＣＴペースト中のIndo ＨまたはＣｕアセテートとIndo Ｈの物理的混合物は、ＣＭＣ中の同じ試験サンプルよりもよりＧＩ毒性が大きかったが、[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2]の場合は反対で、ＣＭＣ製剤に比較して、ＭＣＴ製剤ではＧＩ毒性がより小さかった。
【０１６５】
Ｃｕ錯体溶液の毒性を試験するためにデザインされたさらなる実験において、[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2]錯体をＤＭＦに溶解させ、胃毒性を評価した。対照(ＤＭＦのみ)では、試験した２匹のラットの各々に、１ｍｍ2の胃潰瘍形成が見られたが、一方、ＤＭＦ単独、または２％ＣＭＣ含有ＤＭＦ中の[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2](１０ｍｇｋｇ-1用量のIndo)は、大量の潰瘍形成(それぞれ、＞２００ｍｍ2と１００ｍｍ2)を生じさせた。非コロイド溶液中、[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]などの他の錯体を用いても同様な結果が予想されると考えられる。この実験の結果は、本発明の組成物中よりも溶液中の金属カルボキシレート錯体の投与は、胃液に接触した際のそれらの急速な分解により、該錯体を高ＧＩ毒性にすることを実証している。
【０１６６】
担体としてＤＭＦを用いたさらなる実験ならびに上記のＣＭＣ製剤およびＭＣＴ製剤におけるＣｕおよびIndoの種々の形態の比較を、シドニー大学の動物倫理委員会によって、２００２年６月３日および２００３年１２月５日に、それぞれ、Ｌ０７／６−２００２／２／３５７５およびＬ０７−１／２００４／３／３８４６の承認番号で承認された動物プロトコルの下で実施した。
【０１６７】
カラゲナンに誘発された足浮腫の抑制
カラゲナン(０.１ｍＬの２％溶液)の足底注射により、急性の後足炎症を誘発させ、ラットの足直径の変化(Δｍｍ)によって測定すると、足浮腫の時間依存性の増加が生じた。最高の炎症応答は、注射３時間後に見られた(図４、５、および６)。カラゲナン注射の３時間および５時間後に、対照群の間に足浮腫の変化(Δｍｍ)における有意差(Ｐ＞０.０５)は見られなかった。
【０１６８】
ＣＭＣ(２％)溶液中のIndo Ｈ(１０ｍｇｋｇ-1)によるラットの処置は、対照集団に比較して、足直径の変化(Δｍｍ)を抑制し、対照集団に比較した足直径の変化の抑制％は、３時間および５時間において、それぞれ、２１(８)％および２５(６)％であった(表３および図７)。同様に、サンプルＦから調製した[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2](１１ｍｇｋｇ-1)のcarbopolおよびＭＣＴのペーストは、３時間および５時間において、対照集団に比較した足直径の変化の抑制パーセントは、前者では、２８(３)％(３時間)および２７(４)％(５時間)、後者では、２２(１０)％(３時間)および２８(８)％(５時間)であった(表２および図７)。ラットの足直径の変化における抑制％の値が大きいほど、該処置の抗炎症効果は大きい。カラゲナン注射の３時間および５時間後に、[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]のＭＣＴペーストによる処置(Ｐ＜０.０５)またはcarbopolペーストによる処置(Ｐ＜０.００１)の結果として、対照に比較した足直径の変化(Δｍｍ)に有意差があった(図７)。この結果は、２種の組成物における遊離Indoに相対的な異なる量のＣｕ(II)二量体に関わらず、carbopolペーストとＭＣＴペーストの双方が抗炎症効果を引き出したことを示している。
【０１６９】
ＣＭＣ(２％)溶液処置群においては、対照集団とIndo Ｈ(１０ｍｇｋｇ-1)との間に、有意差が見られた。しかし、カラゲナン注射の３時間および５時間後に、ラットの足直径の変化によって評価したＭＣＴペースト処置およびcarbopolペースト処置ならびにＣＭＣ(２％)溶液中Indo Ｈ処置の抗炎症有効性(抑制％)の間に有意差は見られなかった(Ｐ＜０.０５)。これらの処置の抗炎症有効性のプロット(浮腫の抑制％により表された)を図７に示してある。
【０１７０】
考察および結論
本試験により、上記治療的用量の非微粉化の固体状態[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2](サンプルＦ)は、元のＮＳＡＩＤ(Indo Ｈ)の等モル用量よりも胃と腸の双方において、有意に毒性が少なく、該錯体は、Indo Ｈと同様な有意な抗炎症効果を提供することが示された。さらに、該製薬製剤の性質は該錯体のＧＩ保護効果の程度に影響を及ぼし、本発明のＧＩ保護組成物への該錯体の組み込みは、Indo Ｈに比較して、ＧＩ毒性の有意な減少をさらに大きくした。薬剤の有効性および毒性だけでなく、その薬物動態を考慮した場合、製剤化が重要であることは知られている。炎症治療用の多くのＮＳＡＩＤｓの最終的な有用性は、その副作用によって制限されているため、本明細書に記載されたような副作用の最少化は、炎症治療用のＮＳＡＩＤｓの臨床適用における重要なステップである。
【０１７１】
粒子の形状が表面積に影響し得るため、固体状態微粉化[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2](サンプルＭ)の投与後、固体状態の工業グレード[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2](サンプルＦ)に比較して、ラットの胃におけるＧＩ毒性増強の最もありそうな原因は、投与用量の表面積増大によるサンプルＭから遊離Indo Ｈへの分解の増加である。サンプルＭの投与用量の表面積増大は、従来の工業グレード法から製造された工業グレード凝集体(サンプルＦ)に比較して、超臨界流体ＧＡＳシステムによって製造された微粉化粒子の平均表面積がより小さいことの結果である。サンプルＦに比較して、サンプルＭの表面積(μｍ2)と粒子サイズの円状率パラメーター(Ｐ＜０.００１)の双方の値に有意差があった。
【０１７２】
固体状態微粉化[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2](サンプルＭ)の急性胃毒性は、おそらく、ペーストおよび製剤内の錯体安定性によって与えられる保護的な胃でのバリアにより、ＭＣＴペースト組成物への該粒子の製剤化によって有意に減少した。
【０１７３】
carbopolペーストに比較して、ＭＣＴ中では、IndoのＣｕ(II)二量体錯体が保持されるが、カラゲナン誘発の足浮腫の３時間および５時間において、ＭＣＴペースト処置とcarbopolペースト処置の抗炎症有効性の間には、双方の処置群におけるラットの足直径の変化(Δｍｍ)によって評価した際、有意差は見られなかった(Ｐ＞０.０５)。これは、処置の有効性、製剤間での等価血漿および組織濃度の達成を識別する上で十分な感度が不足しているか、または上記治療用量の投与が有効最高抗炎症用量に近いことによると考えられる。それにも関わらず、サンプルＦのＭＣＴ(２％Ｃｕ(II)単量体含量)ペーストとcarbopol(２０％〜３０％のＣｕ(II)単量体含量)ペーストの双方が、対照群に比較して、等力の抗炎症活性を提供した。
【０１７４】
小腸におけるＮＳＡＩＤｓの急性の直接的毒性は、固体状態のIndo Ｈ(サンプルＩ)の投与後に見られた、対照集団に比較して高い有意性の腸潰瘍形成によって顕著である。本試験により、固体状態のIndo Ｈに比較して、固体状態の[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]の、腸における高い有意性の潰瘍を発生させにくい活性が確認された(Ｐ値＜０.００１)。この結果は、Ｃｕ(II)錯体として与えられた場合、Indo Ｈによる潰瘍性損傷に変化がないという他者による初期の報告と反対である(Boyle,E.;Freeman,P.C.;Goudie,A.C.;Mangan,F.R.;Thomson,M.,J.Pharm.Pharmac.1976年、28、865〜868頁)。さらに、[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]錯体を、[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]の粉末投与形態として動物に投与するのではなく、ＭＣＴペーストに製剤化した場合、小腸保護のさらなる増大があった。胃内での[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]の不安定は、潰瘍を発生させにくいIndoのＣｕ錯体の、遊離Indo Ｈ(胃と腸双方に有意な潰瘍発生性の副作用を有する)への分解を防ぐために、避けた方が良い。これは、工業グレードの固体状態[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]に比較して、微粉化固体状態[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2]によって生じた胃疾患の増大によって実証されており、これは、ＭＣＴペーストへの製剤化によって寛解した。該錯体が経口投与の際に胃液に接触すると、直ちに、そして完全に反応するＤＭＦ中に溶解させた該錯体の極めて高いＧＩ毒性からも、胃内での酸触媒分解から該錯体を保護する必要性が強調される。
【０１７５】
Indoの固体状態微粉化[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2]錯体の投与は、固体状態Indo Ｈまたは固体状態[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]よりも、小腸において生じる毒性が有意により少なく、これは、Ｃｕ(II)二量体錯体の崩壊後、遊離Indo Ｈの胃からの吸収増大による可能性が考えられる。ＧＩ粘膜損傷による薬物の生物利用能増大は、他にも、例えば、５−メトキシサリチレートなどの「浸透性増強剤」の投与後に報告されている(Peters,G.E.;Hutchinson,I.E.F.;Hyde,R.;McMartin,C.;Metcalfe,S.B.J.Pharm.Sci.1987年、76、857頁)。固体状態Indo Ｈに比較しての微粉化固体状態[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2]の急性胃毒性は、おそらく、Indo Ｈ(粒子サイズ２２６±１９μｍ2)に比較して、[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2]の微粉化投与(粒子サイズ２.９８±１.２４μｍ2)の、表面積増大によるものであった。
【０１７６】
微粉化[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2]の投与に伴う急性胃疾患によって、さらに、獣医学的製剤の薬剤的性質の特性化の重要性およびＧＩ管におけるＣｕ(II)錯体の保持の確実性が強調される。他者によって報告されているように(Sorenson,J.R.J.、Prog.Med.Chem.1989年、26、437〜568頁)、元のＮＳＡＩＤに比較して、IndoのＣｕ(II)錯体がＧＩ毒性を生じにくいことは、現在の研究によって確認されているが、カラゲナン誘発のラット足浮腫の結果によって、Indo Ｈに比較してのＣｕ−Indo錯体の抗炎症有効性の増大を検証することはできない。
【０１７７】
要約すると、Indoの金属錯体を含有する該組成物の性質は、飽和状態における該錯体の抗炎症有効性に対して大きな効果を有しているとは思えないが、ＧＩ毒性に対しては、劇的な効果を有している。微粉化[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2]錯体は、その広い表面積が胃内において、遊離Indo Ｈへの酸誘導分解を促進するため、Indo Ｈと同様にＧＩ毒性が高い。より大型の結晶では、誘発する潰瘍形成はかなり少ないが、最も大きなＧＩ保護は、本発明の組成物(ＭＣＴペースト中の[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2])によって得られる。該錯体のわずか２０％〜３０％の解離を含有する新鮮carbopolペーストとＭＣＴペーストとの間に胃保護における差はないが、小腸毒性においては、carbopolペーストよりもＭＣＴペーストに、１桁の大きさで減少があり、これはおそらく、carbopolペーストにおける遊離インドメタシンの濃度増加によると考えられる。さらに、carbopolペーストにおける製剤時およびそのすぐ後でのＣｕ−Indo二量体の分解は、該ペーストの色の視覚的変化および二量体含量のＥＰＲ分光法測定によって見られるように、バッチ間で大きな変動を示す。この分解により、該組成物中の遊離Indo増加に至り、これが、特に、イヌなどの遊離Indo Ｈに感受性の種にとって、carbopolペーストの製薬製剤としての好適性を低下させる。二量体の分解が最も少ない(２０％〜３０％)carbopol製剤であっても、carbopolペーストは、ＭＣＴペースト組成物よりもＧＩ毒性がより大きい。Ｃｕ(II)二量体の８０％まで分解し、遊離Indoを連続的に放出するcarbopolバッチは、Indoのみによる同様な製剤とほぼ同じＧＩ毒性であると考えられる。
【０１７８】
該錯体の完全性を維持する重要性は、２％ＣＭＣまたはＭＣＴペーストにおけるIndo(１０ｍｇｋｇ-1)および／またはＣｕの等価用量におけるIndo Ｈ、Ｃｕアセテート、ＣｕアセテートとIndo Ｈの物理的混合物および[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2]のＧＩ毒性に関するデータの比較において示される。これらの結果は、適切な製剤における銅塩とIndo Ｈとの物理的混合物は、Indo錯体の胃保護効果を付与することができないことを明らかに示している。実際、該物理的混合物は、Indo Ｈ単独よりもよりＧＩ毒性であった。これによって、Ｃｕ錯体の完全性が維持される製剤を有するのみならず、該製剤は、薬物が吸収される前に、その酸触媒分解を防ぐため、経口服用の際に十分に安定でなければならないという要件が強調される。したがって、carbopolペースト製剤(２０％〜８０％)の工場製造バッチでは、金属錯体の分解量にかなりの変動があり、より分解したサンプルで処置した動物に有害反応をもたらすため、本発明の組成物は、carbopolペースト製剤よりも優れている。
【０１７９】
これらの結果はまた、例えば、ＣＭＣ中で製剤化した薬物の送達よりも優れたものにしている本発明のＭＣＴペースト組成物および類似の組成物の他の面も示している。ＣＭＣに懸濁させた該錯体は、ＭＣＴペースト製剤よりも胃保護性が小さい。ＣＭＣは、胃での酸分解から該薬物を保護する能力がより小さいためである。これは、高治療用量におけるＭＣＴペースト製剤中の[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]錯体は、Indo Ｈの等価用量の胃毒性のおよそ８％のみを有するが、一方、ＣＭＣ中懸濁液の毒性は、Indoが遊離Indo Ｈに対して該錯体の形態で送達された場合、５０％減少するだけであるという事実によって示される。このことは、ＭＣＴペースト製剤において送達された[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]錯体のほとんど全てが完全な状態で吸収され、一方、ＣＭＣに懸濁液させた該錯体のおよそ半分が吸収される前に分解することを示している。
【０１８０】
外錯体がＣＭＣペースト製剤およびＭＣＴペースト製剤において送達される際の毒性の絶対差がより小さいことの基礎になっている理由は、該薬物の送達において、ＭＣＴペースト製剤がＣＭＣよりも優れていることにある。これは、２種の製剤における該薬物の効力によって示され、したがって、Indo Ｈは、ＭＣＴペースト製剤およびＣＭＣ製剤において送達される場合、同様な有効性(最高抗炎症効果)を有するが、効力(すなわち、最高有効性の５０％を生じる濃度、ＥＤ５０値により測定)は、ＣＭＣ(２.８±１.７ｍｇｋｇ-1のＥＤ５０)に対し、ＭＣＴペースト(１ｍｇｋｇ-1のＥＤ５０)でより優れている。したがって、ＭＣＴペースト製剤中のIndo Ｈおよび[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]は、ＣＭＣ製剤におけるよりもはるかに効率的に吸収され、これにより、ＣＭＣ製剤に比較して、ＭＣＴペースト製剤におけるIndo Ｈの胃毒性ははるかに高くなる。したがって、ＭＣＴペースト製剤の場合のようなコロイド状乳濁液としての胃内薬物安定化は、効力の増大(治療用量の低下)および毒性低下という二重に望ましい特徴をもたらす。このような製剤から生じる治療ウィンドーの大きな増大により、Indo Ｈなどの強力なＮＳＡＩＤｓの使用を制限していた望ましくない副作用の多くが除外される。
【０１８１】
理論に拘束されることは望まないが、本実施例の結果により実証された、銅インドメタシン錯体を含有する本発明の経口投与組成物に関する、Indoの経口投与に比較したＧＩ毒性の顕著な減少は、高い安全性を付与する下記の３つの別個の付加的寄与によるものと、本発明者は考えた。
(ｉ)  本発明の組成物は、該錯体が解離する前に、銅インドメタシン錯体の少なくともいくらかが胃腸管に吸収される結果をもたらし、したがって、本発明の組成物は、初期ＧＩ毒性の原因となる、粘膜におけるＣＯＸ−１酵素との相互作用に利用される遊離Indo／Indo Ｈの量を最少化する。
(ii)  Indoの金属錯体は、Indoよりも親油性であり、したがって、銅インドメタシン錯体は、Indo Ｈよりも容易に吸収され、これが、粘膜におけるＣＯＸ−１酵素と相互作用する時間をより少なくさせる結果となる。
(iii)  Indoの銅錯体における銅の血管形成性により、創傷治癒が促進され、したがって、抗潰瘍発生効果を提供するが、Indo Ｈ単独は、事実上、血管形成を遅延させ、したがって、潰瘍形成を促進する。したがってIndo Ｈは、Indoの二次循環からの潰瘍形成を促進するが、銅は、修復を助け、Indoの二次循環からの潰瘍形成を防ぐ。
【０１８２】
【表２】
2007530599.tif 000007
【０１８３】
【表３】
2007530599.tif 000008
【０１８４】
実施例６−Ｃｕ−Algesic Forteペースト：生物学的同等性試験
本実施例は、本発明の組成物(試験組成物Ｂ)と、インドメタシンの同じ金属錯体を含有する先行技術のＣｕ−Algesicペースト製剤と同様の組成物(試験組成物Ａ)におけるインドメタシンの生物学的利用能を比較した。試験組成物Ａおよび試験組成物Ｂの双方は、錯体[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含有した。試験組成物Ｂは、実施例３に記載されたとおり調製された組成物(ＭＣＴペースト製剤)であった。試験組成物Ａは、carbopolペースト中に錯体を含む組成物であった。試験組成物Ａは、先行技術のＣｕ−Algesicペースト製剤と同様の組成物であるが、錯体[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含有する。先行技術のＣｕ−Algesicペースト製剤は、carbopolペースト中に錯体[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2]を含有し、動物治療のためにオーストラリアにおいて使用される市販のペースト製剤である。先行技術のＣｕ−Algesicペースト製剤は、有効ではあるが、その有効性と耐容性に変動性がある。
【０１８５】
１.１サンプル分析および統計解析
Centre for Heavy Metals Research、School of Chemistry、シドニー大学。
【０１８６】
１.２試験場所／試験施設
Rural Veterinary Centre、シドニー大学 Large Animal Hospital、Werombi Rd.、Werombi。
【０１８７】
１.３試験スケジュール
実験開始日：
２７／１１／０１(第１回処置)
１７／１２／０１(第２回処置)
実験終了日：
２５／１２／０１(最終サンプリング時期)
１５／５／０２(最終サンプル分析)
【０１８８】
２.材料と方法
２.１試験デザイン
試験デザインは、産業生物学的同等性ガイダンスに関するＦＤＡガイダンスに基づいた。
【０１８９】
２.１.１処置群
４頭のウマの２群
【０１９０】
２.１.２実験デザイン／ブロッキング：
２つのペースト、試験組成物Ａおよび試験組成物Ｂを、以下の表に略述したように無作為クロスオーバーデザインを用いる実験で投与した：
ウマ          処置期間１          処置期間２
１                Ａ                  Ｂ
２                Ａ                  Ｂ
３                Ａ                  Ｂ
４                Ａ                  Ｂ
５                Ｂ                  Ａ
６                Ｂ                  Ａ
７                Ｂ                  Ａ
８                Ｂ                  Ａ
【０１９１】
２.１.３洗い出し期間
投与量の９９.９％を身体から排泄させるために血漿中の半減期の１０倍の洗い出し期間を推奨するＦＤＡガイドラインに基づいて、２０日の洗い出し期間を用いた。
【０１９２】
２.１.４無作為化および割付法
ウマを、各群に無作為に割付けた。
【０１９３】
２.１.５盲検化
実験は、血液採取のみを含むため、分析者だけを盲検化し、血清サンプルチューブは、ウマ番号だけで標識された。
【０１９４】
２.２動物の選択および識別
２.２.１動物の詳細
５歳と８歳との間の年齢の８頭の標準的飼育のメスウマを、実験に用いた。
【０１９５】
２.２.２動物の調製
全てのウマは、試験７日前に駆虫処置および破傷風予防を施した。
【０１９６】
２.３動物のハウジングと管理
２.３.１ハウジングと管理
ウマは、安全パイプフェンスのある４ダートヤード内に対で入れた。ウマを、２０日の洗い出し期間パドックに戻した。ウマを第２の処置期間前夜に該ヤード内に入れた。
【０１９７】
２.３.２飼育
全てのウマは、実験期間中にわたって飼料(干し草)と水を自由に取らせた。ウマに、試験前夜に給餌し、薬物投与２日の各日に薬物投与直後、給餌した。
【０１９８】
２.３.３動物の管理
獣医またはRural Vet Centreのスタッフ
【０１９９】
２.３.４試験からの対象除外
投薬を必要とする病気または外傷を発生したウマは、試験から除外すべきであったが、試験から除外しなければならないウマはいなかった。
【０２００】
２.３.５併用療法
他の投薬、特にＮＳＡＩＤ類は認められなかった。
【０２０１】
２.３.６所有者の同意
ウマは、Rural Vet Centreにより所有された。
【０２０２】
２.４処置
試験組成物Ａ
有効成分：                              銅インドメタシン
製剤：
銅インドメタシン                        ４０.０ｇ／ｋｇ
Carbopol                                １０.０ｇ／ｋｇ
ヒドロキシ安息香酸メチル                ３.０ｇ／ｋｇ
ヒドロキシ安息香酸プロピル              １.０ｇ／ｋｇ
飲用水                                  １ｋｇまで適量添加
試験組成物Ｂ
有効成分：                              銅インドメタシン
製剤：
銅インドメタシン                        ５５.０ｇ／ｋｇ
テトラグリコール                        ３００.０ｇ／ｋｇ
Termul １２８４                         １００.０ｇ／ｋｇ
Aerosil                                 ５０.０ｇ／ｋｇ
Delios(ＭＣＴ)                          １ｋｇまで適量添加
【０２０３】
２.４.３薬物投与
投与措置：０.８ｍｇ／ｋｇ、体重に基づき用量を算出
投与経路：経口
洗い出し期間：２０日
【０２０４】
２.５試験サンプル
２.５.１血液サンプル採取
試験日の朝に、針カテーテルおよびＴポート上の１４ゲージを左頚静脈に入れ、急速固化、接着剤および縫合により固着させた。カテーテルをヘパリン化生理食塩水で洗い流した。
【０２０５】
２０ｍｌの血液サンプル(０時間)を、該ペーストの投与直前に採取し、２本の血清管に入れた。さらにサンプルを、１時間間隔で１８時間、次いで２時間間隔で２４時間まで(０、１、２、３、...１８、２０、２４)採取した。各採取時間後、カテーテルをヘパリン化生理食塩水で洗い流した。２４時間の採取後にカテーテルを取り外し、さらにサンプルを、各試験組成物の投与後、４８、９６および１９２時間に静脈穿刺により無菌的に採取した。２０ｍｌアリコート(１本の血液充満管)を、ウマＩＤ番号／名称、サンプリング時間(０、１時間など)および日付を標識した血清管に各サンプリング時間で採取した。サンプル採取時間は、データシートに記録し、各時点を頭文字で記入した。
【０２０６】
２０日の洗い出し期間は、ウマをパドックに戻した。ウマを、第２の処置前夜にヤードに入れた。試験日の朝にカテーテルを右頸静脈に入れた。表に要約されているとおり、第１の処置期間で試験組成物Ａを投与されたウマは、第２の処置期間で試験組成物Ｂを投与され、第１の処置期間で試験組成物Ｂを投与されたウマは、試験組成物Ａを投与された。血液サンプルは、同じ時間間隔で採取し、血清は無菌的に回収し、アッセイ用に凍結させた。
【０２０７】
２.５.２サンプルの取り扱い
全ての血清サンプルは、直ちに３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離器で回転させて、血清を標識標本管に無菌的に回収し、アッセイまで凍結させた。
【０２０８】
サンプルは、分析のためにシドニー大学、School of Chemistryに輸送されるまでフリーザー中の安全な位置に保存された。
【０２０９】
２.６サンプル分析、ＨＰＬＣ
２.６.１材料および試剤
標品用のインドメタシン、内部基準用のメフェナム酸およびアセメタシンは、製薬グレードのもの(Sigma Pharmaceuticals)であった。メタノールおよびアセトニトリルは、ＨＰＬＣグレードのもの(Aldrich)であった。酢酸は、分析用グレード(Aldrich)であった。精製水は、Milli−Ｑ試剤水システム(Millipore)を用いて得られた。
【０２１０】
２.６.２勾配ＨＰＬＣ分析
この分析は、Diode-Array ＵＶ／ＶＩＳ検出器を備えたHewlett-Packard ＨＰＬＣ Series ＨＰ１１００で実施された。分離は、５μｍＲＰ−ＺＯＲＢＡＸ  ＸＤＢ−Ｃ１８、５μｍＯＤＳガードカラム(Hewlett-Packard)を具備した(２５０×４.６ｍｍＩ.Ｄ)カラム(Hewlett-Packard)を用いて達成された。流速は１ｍｌ／分であり、モニタリング波長は２５４ｎｍと２７０ｎｍであった。６０％〜８５％までの溶媒Ｂの直線的勾配を、２２分かけて実施した(溶媒Ａ：水中０.５％酢酸；溶媒Ｂ：アセトニトリルとメタノールとの１：１混液中０.５％酢酸)。
【０２１１】
２.６.３サンプル調製
ｐＨ３.５に緩衝されたウマの血清サンプル(１ｍｌ)を、５ｍｌのアセトニトリルを用いて３０００ｇでの遠心分離により除タンパクした。上澄液を、窒素流下で蒸発乾固し、移動相(１００μｌ)で再構成し、２０μｌのアリコートを注入した。
【０２１２】
２.６.４検量線
血漿中インドメタシンに関する検量線は、５、１０、２０、５０、１００、２００、５００、１０００、１５００および２０００ｎｇ／ｍｌの公知の濃度を有するブランクのウマ血漿をスパイクすることにより作図された。インドメタシンの典型的な検量線は、式ｙ＝６.８８６３６ｅ−１ｘ＋２.０９５２０ｅ−１(ｒ＝０.９９９１８)により記載された。式中、ｙは、検体のＩ.Ｓ.に対するピーク面積分配量を表し、ｘは、ｎｇ／ｍｌでの血漿濃度に相当する。
【０２１３】
２.６.５品質管理
品質管理は、各ウマ血漿サンプルのＨＰＬＣ分析時に１０、１００、１０００ｎｇ／ｍｌの濃度で実施した。
【０２１４】
２.７統計解析
データを解析し、非コンパートメントモデルを用いて、WinNonlin版１ソフトウェアによるＡＵＣ値を判定した。時間に対する血漿濃度の面積は、０時間〜２４時間、０時間〜４８時間、０時間〜９６時間、または０時間〜１９２時間の線形／対数台形近似法により推定された。
【０２１５】
全てのウマにおいてインドメタシンの濃度は、２４時間後ベースライン濃度に到達した。したがって、以後の全ての検討は、２４時間時点までのデータの解析に基づいている。このデータの統計解析は、ＦＤＡガイドラインによるスチューデントのｔ検定を用い、またこのタイプのデータセットにより適切であるノンパラメトリック検定法を用いて実施された。解析は、２種の試験組成物(ＡおよびＢ)の各々に関するＡＵＣを比較することを含み、生物学的同等性のためには、各製剤のＡＵＣ間の非有意差を必要とする。
【０２１６】
３.結果と考察
全てのウマに関するデータは、１〜９時間にピーク濃度が生じるインドメタシン濃度の複数ピークを有するパターンを示し、２４時間後にベースライン濃度に到達した。かなりのウマ間の変動が、特にＡＵＣ値において見られ、胃からの薬物の取込みが変動することを示唆している。ウマ間の変動パターンは、２種の薬物について同様であることは注目すべきことであり、この変動性が、動物によるものであり、外部変数によるものではないことを示唆している。
【０２１７】
スチューデントのｔ検定を用いて、各製剤間の平均値を分析すると、試験組成物ＡおよびＢに関するＡＵＣ値間の差異は、９５％の信頼水準で(または９０％の信頼水準で)有意でないことが判明している。これにより、個々のウマに関するこれらの値に一貫した傾向はない。
【０２１８】
個々のウマに関する差異に的を絞ったノンパラメトリック検定法を用いると、これらの差異も有意ではない。これの強調により、極めてゼロに近い−４７である差異のモードであること、また、その差異が４頭のウマに関してはポジティブで、４頭に関してはネガティブであるという事実によってこれが強調される。
【０２１９】
このように、これらの結果は、等量の活性剤を送達する２種の製剤に一貫している。
【０２２０】
製品の活性は、ウマにより吸収される有効成分量に依存する。等量の有効成分が吸収されるので、２種の製剤の薬理活性は等しい。
【０２２１】
各製剤に関するＡＵＣ間で統計的な有意差が無いことは、製品が生物学的同等性であることを意味している。
【０２２２】
３.１ＡＵＣ結果
2007530599.tif 000009
【０２２３】
３.２スチューデントのｔ検定
独立ｔ検定
ＡＵＣ Ａの平均値とＡＵＣ Ｂの平均値は等しいか？
【０２２４】
平均差＝−９７１.７５(ＡＵＣ Ａの平均値マイナスＡＵＣ Ｂの平均値)差の９５％信頼区間：−３９９６.２〜２０５２.７
【０２２５】
ｔ＝１４度の自由度を有する０.６８９２。
両側Ｐ値は０.５０２０であり、有意でないと考えられる。
【０２２６】
検定：標準偏差は等しいか？
ｔ検定は、それらの欄が等しいＳＤを有する集団に由来することを仮定する。
以下の算出は、その仮定を検定する。
【０２２７】
Ｆ＝１.９６２
Ｐ値は、０.１９６９である。
この検定は、２つのＳＤ間差が有意でないことを示唆している。
【０２２８】
３.３データの要約
2007530599.tif 000010
【０２２９】
３.４ ノンパラメトリック検定法
ウィルコクソン・サインド・ランクス検定
2007530599.tif 000011
【０２３０】
2007530599.tif 000012
【０２３１】
実施例７−筋肉内注射および皮下注射による炎症の処置
方法論
試験組成物
皮下注射および筋肉内注射用に、ＭＣＴ油中、[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]錯体を含む組成物が調製された。
【０２３２】
該組成物は、以下の成分を含んだ：
成分：                                  量：
[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]錯体              ４０ｍｇ
テトラグリコール                        ３００.０ｍｇ
Delios Ｖ ＭＣＴ油                      適量１.０ｇ
【０２３３】
テトラグリコールは溶媒である；Delios Ｖ ＭＣＴ油は中鎖トリグリセリド油である。
【０２３４】
該組成物は以下のとおり調製された：
１.テトラグリコールをミキサーに加えて、攪拌しながら７５℃に加熱する。
２.銅インドメタシン錯体を加えて溶解する。溶解するまで攪拌してから、熱源を取り外す。
３.Delios Ｖ ＭＣＴ油を攪拌しながら加える。
均一になるまで１５分間攪拌してから、冷却する。
【０２３５】
該組成物は、単相油であり、水に不混和性である暗緑色油の外観を呈した。
【０２３６】
該組成物は、ＥＰＲ分光法により示されたとおり二量体[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]の一部として組成物中に＞９５％のIndoを含有した(実施例４)。
【０２３７】
比較のため、ＭＣＴ油中、[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]の代りにIndo Ｈを用いてIndo Ｈを含有する同様の組成物を同じ方法により調製した。
【０２３８】
動物
これらの試験に用いられたＳＤラット(体重２００〜２５０ｇ)は、シドニー大学の実験動物施設により供給された。動物をポリプロピレンケージ内に入れ、標準的実験室ラット用固形飼料(Purina Rat Chow、Ralston Purina、ミズーリ州セントルイス)と水道水を自由に取らせた。動物を、１２時間の明暗サイクルで周囲温度と湿度において薬学部の動物管理施設に入れた。実験動物のプロトコルは、シドニー大学の動物倫理委員会、承認番号Ｌ０７／１−０４／３／３８４６により承認された。
【０２３９】
インビボ抗炎症活性および胃毒性
４匹のラット群を、全ての試験に使用した。全ての用量は、Indoの等濃度として算出された。ラットを２４時間絶食させるが水を自由に取らせ、胃毒性試験を除いて、ラットに飼料と水を自由に取らせた。皮下注射および筋肉内注射では、ラットに、１２５〜２００μＬ容量の試験組成物(ＭＣＴ油中のIndo Ｈまたは[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2])を注射した。対照の同齢集団には、等しい容量のニートＭＣＴを注射した。皮下注射は背面下部に施され、筋肉内注射は、右後大腿筋肉内に施された。炎症は、製剤の注射投与１時間後に、カラゲナン(０.１ｍＬ、等張生理食塩水中１％ｗ／ｖ)の後足の足底領域への注射により誘発させた。
【０２４０】
左後足(側部つち骨まで)を、実施例５に記載された水で満たされた容器に浸すことにより、足容量を投与前およびカラゲナン注射３時間後に測定した。足容量測定直後、２４時間絶食動物は安楽死させ、胃を切除し、より大きな湾曲に沿った切開により開いた。胃を洗浄し、肉眼的胃毒性の程度を判定するために調べ、肉眼的潰瘍形成面積(ｍｍ2)の総和として報告される。
【０２４１】
インビボ小腸毒性
４匹のラット群は、全ての試験に用いられる、アッセイ時に飼料と水に自由にアクセスさせることを除いて、上記のとおり同様に処置した。投与２４時間後に、小腸全体を切除し、腸管内容物を放出させるために水で洗い流した。腸管を、Treitzの靭帯に対して１０ｃｍ遠位から回盲接合部まで調べ、毒性は、肉眼的潰瘍形成面積(ｍｍ2)の総和として報告される。
【０２４２】
統計解析
２群間で平均値を比較するためにスチューデントｔ検定を用い、２群を超える間で平均値を比較する比較のために、反復測定のＡＮＯＶＡに次いでBonferroni補正を用いた。データは、平均値±標準誤差として表される。全て報告されたＰ値は、両側であり、Ｐ＜０.０５は、統計的に有意であると考えられた。
【０２４３】
結果
皮下注射
ＭＣＴ油中の[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含有する組成物に関する用量応答データの結果は、ＭＣＴ油中に[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含有するＭＣＴ油組成物に関して小腸毒性の見られなかった最高用量でＭＣＴ中のIndo Ｈを含有する比較のためのデータと一緒に表４に掲げられている。全ての用量での注射部位において、ひりひり感、腫脹、発赤、または他の副作用を示すラットはいなかった。
【０２４４】
【表４】
2007530599.tif 000013
【０２４５】
全ての用量は、IndoがIndo Ｈの形態で送達され示された１例を除いて、[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]の形態で送達されるIndoの量として投与される。
【０２４６】
該処置療法は、最大有効性に関して最適されていなかったが、この投与様式は、凡そ５〜７.５ｍｇ ｋｇ-1のIndo(組成物中のIndoの量)をプラトーとする強力な抗炎症効果を有することが明らかである。これらの濃度において、絶食ラットにおける急性胃潰瘍、または二次的循環による腸管潰瘍として、[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含有する組成物によって誘発される胃腸管毒性はない。対照として、Indo Ｈ単独を含有する組成物は、７.５ｍｇ／ｋｇで４匹全てのラットに小腸潰瘍形成をもたらし、[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含有する組成物の１０ｍｇ／ｋｇのIndoで見られたものよりも大きな潰瘍形成をもたらした。ラットを絶食させなかった場合、極めて高用量の２０ｍｇ／ｋｇのIndo([Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含有する組成物を用いて投与)でも、胃副作用の全てが容易に予防できたが、これらの高濃度での小腸潰瘍形成はかなりあった。
【０２４７】
筋肉内注射
ラット足浮腫に対する右後大腿筋肉への筋肉内注射の結果を、表５に示す。
【０２４８】
【表５】
2007530599.tif 000014
【０２４９】
予備的なデータのみが得られており、ＭＣＴ油中[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含有する組成物は、皮下注射後に見られたものと同様な有効性および安全性プロフィルを有するが、炎症処置の有効性は、用量応答曲線のプラトー領域においてより高い。また、[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]およびIndo Ｈを含有する組成物は、同様の有効性を有するが、ＭＣＴ油中[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含有する組成物は、ＧＩ毒性が低かったことに注目されたい。５ｍｇ ｋｇ-1および１０ｍｇ ｋｇ-1のIndo Ｈでは、ＭＣＴ油中にIndo Ｈを含有する組成物のＧＩ毒性は、ＭＣＴ油中[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含有する組成物として送達される場合のIndo用量の２倍で見られたＧＩ毒性と同等であった。
【０２５０】
考察
ＭＣＴ油中、錯体[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含有する組成物の皮下投与および筋肉内投与は双方とも、かなりの有効性があり、後者の投与様式がより有効である。この結果から、遊離IndoまたはIndo Ｈを含有する組成物と比較して、錯体が本発明の組成物中で安定化される場合の安全性態様の改善が実証され、このことにより、二次的循環により誘導されたＧＩ毒性のためにIndo Ｈで制限されている処置療法の道が開かれる。該組成物が、Ｃｕ塩およびIndo Ｈの物理的混合物として送達されるか、または該組成物が、該錯体を解離させて遊離Indoを放出させる場合は、Indo Ｈの毒性作用と同様な毒性作用が予想される。
【０２５１】
実施例８−局所用クリーム剤による炎症の処置
方法論
全てのラット実験は、以下の変更以外は、実施例７に概説されるとおり実施した。
【０２５２】
インビボ抗炎症活性および胃毒性
局所投与に関して、ラットを、[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2](「Ｃｕ Indo」)、[Ｚｎ(Indo)2(ＯＨ2)2](「ＺｎIndo」)、Indo Ｈ、または乳化クリーム剤中で完全に混合された[Ｃｕ2(ＯＡｃ)4(ＯＨ2)2]とIndo Ｈとの物理的混合物の等しいIndoおよびＣｕ用量を含有する試験組成物により処置された(下記参照)。該組成物の０.２ｇ量を、各動物の右後足に塗り、３時間間隔で静かに１分間マッサージした。炎症は、カラゲナン(０.１ｍＬ、等張生理食塩水中１％ｗ／ｖ)の注射により後足の足底領域に最終的な局所適用で誘発させた。
【０２５３】
局所適用の組成物は、[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2](「Ｃｕ Indo」)、[Ｚｎ(Indo)2(ＯＨ2)2](「ＺｎIndo」)、Indo Ｈ、または乳化クリーム剤中で完全に混合された[Ｃｕ2(ＯＡｃ)4(ＯＨ2)2]とIndo Ｈとの物理的混合物の等しいIndoおよびＣｕ用量として送達される０.５〜２重量％のIndoを含む組成物であり、該乳化クリーム剤は：
セトマクロゴール乳化ワックス            １５ｇ
液体パラフィン                          １０ｇ
白色ワセリン                            １０ｇ
クロロクレゾール                        ０.１ｇ
プロピレングリコール                    ５ｍｌ
精製冷却水                              １００ｇまで
からなった。
【０２５４】
【表６】
2007530599.tif 000015
【０２５５】
[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含有する局所用製剤は、２％製剤でかなりの小腸潰瘍形成が見られるのみで、はるかに安全かつより有効であったが、一方、Indo Ｈでは１％製剤でもかなりの腸管潰瘍形成があり、さらに１匹のラットは明らかな腸管出血があったことを表６は示している。[Ｚｎ2(Indo)2(ＯＨ2)2]を含有する製剤もまた、Indo Ｈを含有する組成物と比較すると、より高い有効性を生じ、ＧＩ毒性を減少させた。１％当量の製剤におけるＣｕ錯体よりも幾らか有効性が低く、より毒性であるが、０.５％の低用量での有効性の点では、Indo Ｈを含有する製剤および[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含有する製剤の双方よりも勝っている。[Ｃｕ2(ＯＡｃ)4(ＯＨ2)2]とIndo Ｈとの物理的混合物を含有する組成物は、[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含有する組成物と同様の有効性を有するが、両製剤が、同じ量のIndo(１重量％)およびＣｕを含んだ場合、該混合物を含有する組成物は、Indo Ｈ単独よりもさらにＧＩ毒性があった。このデータは、Indo ＨとＣｕアセテートとの物理的混合物が、Indo Ｈ単独よりもさらにＧＩ毒性があることから、ＣｕおよびＺｎ錯体は、吸収されるまではクリーム剤中で完全状態で留まっているという仮説を強く支持している。
【０２５６】
考察
Indo Ｈの局所適用は、治療的に活性である局所適用から生じる重篤な小腸毒性のため稀である。この問題はまた、生命を脅かす腸管出血の発生と、Indo Ｈを含有する組成物の局所適用に関する有効性の急速な低下との間の極めて狭い治療ウィンドウがある本実施例でも例証されている。対照的に、Ｃｕ−IndoまたはＺｎ−Indoを含有する組成物は、当量の治療的用量ではるかに優れた治療ウィンドウ、より高い有効性およびはるかに低い毒性を有する。それらはまた、[Ｃｕ2(ＯＡｃ)4(ＯＨ2)2]とIndo Ｈとの物理的混合物を含有する当量の組成物よりもかなり低いＧＩ毒性であった。これらの結果は、獣医およびヒト適用に関する薬物の安全かつ有効な送達のために、水に不混和性であるコロイド状乳濁剤または組成物中の錯体を可溶化および安定化させる本発明の局所用製剤の重要性を立証している。
【０２５７】
該治療ウィンドウは、イヌまたはウマなどのより大型の動物、またはヒトに対して拡張されることも注目すべきである。というのは、所与の皮膚領域に対する同じ適用は、体重が増すと動物またはヒトに対してはるかに低用量(ｍｇ ｋｇ-1で)となり、それ故、このような適用が、イヌ、さらに特にヒトおよびウマに使用される場合、ＧＩ毒性はかなり減じられる。
【０２５８】
実施例９−眼科用製剤の有効性と安全性
インドメタシンは、眼副作用(角膜沈着および網膜障害)を引き起こし得るが、錯体としてのインドメタシンの送達は、はるかに安全な送達様式を提供する可能性がある。
【０２５９】
眼科投与に関する本発明の種々の組成物を調製できるが、３種を下記に例示する。
【０２６０】
組成物１(「Ｃｕ−Algesic点眼剤」)は、ポリビニルアルコール(１４ｍｇ ｍＬ-1)およびポビドン(１４ｍｇ ｍＬ-1)の水性ミセル中、１％ｗ／ｖ[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]からなる。
【０２６１】
組成物２(「Ｃｕ−Algesic眼軟膏」)は、１,１,１−トリクロロ−２−メチル−２−プロパノール(０.５％)を含有する涙潤滑油(白色ワセリン、５７.３％、鉱油(液体ワセリン)４２.５％、ラノリンアルコール類０.２％)中、１重量％[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]からなる。この組成物は水に不混和性である。白色ワセリンおよび液体パラフィンの比率は、適用に依って種々の厚み度を有する軟膏を提供するために変わり得る。
【０２６２】
組成物３は、[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2](０.１２５重量％)、テトラグリコール(０.８７５重量％)、Cremophore ＥＬ(１重量％)、ＭＣＴ油(４８重量％)および白色パラフィンゼリーＢＰ(５０重量％)からなる。この組成物は水に不混和性である。
【０２６３】
本発明の組成物の眼科適用の有効性および安全性の例として、０.５ｍＬの組成物３を、１０頭のウマの眼に局所適用したが、副作用は見られなかった。
【０２６４】
組成物３は、下記のとおり臨床的にも使用された。
【０２６５】
重篤な結膜炎を有して誕生した子ウマを、従来の眼科用抗生物質の軟膏で処置したが、病態は、ヒポフィオン(hypophyon)(前房中の膿、眼は白色の外観を有した)に進行した。０.５ｍＬの組成物３の眼軟膏を、１日１回該眼に局所適用すると、該眼は、１０日で正常に回復した。
【０２６６】
０.５ｍＬの組成物３の眼軟膏を、２頭のブドウ膜炎(眼内のブドウ膜の炎症)を有するウマの眼に１日１回局所適用した。この病態の徴候は、通常、眼の膨潤かつ有痛性であるが、双方の場合とも、炎症は、組成物３による処置７日後に消滅した。
【０２６７】
処置による副作用は、治療を受けたいずれのウマにも見られず、視力は明らかに正常に回復した。
【０２６８】
上記に示された結果により、該軟膏が安全に使用できること、また、子ウマの場合、従来の療法では治療不可能で、安楽死させなければならない子ウマに生じる重篤な眼科病態の治療に極めて有効であるという予備的な立証が示された。
【０２６９】
本発明の以下の請求項および前述の説明において、専門用語または必要な意味を表すために文脈上別に必要とする場合を除いて、語句の「含む」または「含む」または「含んでいる」などの変形は、包括的な意味で、すなわち、記述された特徴の存在を明示するために用いられるものであって、本発明の種々の実施形態におけるさらなる特徴の存在または追加を除外するものではない。
【図面の簡単な説明】
【０２７０】
【図１】ＣＭＣ(２％)溶液(対照)；ＣＭＣ(２％)溶液に懸濁させた固体状態のIndo Ｈ(１０ｍｇ ｋｇ-1)(Ｉ)；ＣＭＣ(２％)溶液に懸濁させた固体状態の[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2](１１ｍｇ ｋｇ-1)(Ｆ)；ＣＭＣ(２％)溶液に懸濁させた固体状態の[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2](１１ｍｇ ｋｇ-1)(Ｍ)；[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2](１１ｍｇ ｋｇ-1)を含有するcarbopolペースト(Ｃａｒｂ(Ｆ))；[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2](１１ｍｇ ｋｇ-1)を含有するＭＣＴペースト(ＭＣＴ(Ｆ))；および[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2](１１ｍｇ ｋｇ-1)を含有するＭＣＴペースト(ＭＣＴ(Ｍ))の経口投与後のラットにおける胃粘膜の潰瘍発生作用を示すグラフである。データは、１治療群当り４匹のラット間の平均値±標準誤差(ｍｍ2)として提供される。治療群と対照との間で有意差が見られる(Ｐ＜０.０５(*)、Ｐ＜０.０１(**)、およびＰ＜０.００１(***))。
【図２】ＣＭＣ(２％)溶液(対照)；ＣＭＣ(２％)溶液に懸濁させた固体状態のIndo Ｈ(１０ｍｇ ｋｇ-1)(Ｉ)；ＣＭＣ(２％)溶液に懸濁させた固体状態の[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2](１１ｍｇ ｋｇ-1)(Ｆ)；ＣＭＣ(２％)溶液に懸濁させた固体状態の[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2](１１ｍｇ ｋｇ-1)(Ｍ)；[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2](１１ｍｇ ｋｇ-1)を含有するcarbopolペースト(Ｃａｒｂ(Ｆ))；[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2](１１ｍｇ ｋｇ-1)を含有するＭＣＴペースト(ＭＣＴ(Ｆ))；および[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2](１１ｍｇ ｋｇ-1)を含有するＭＣＴペースト(ＭＣＴ(Ｍ))の経口投与後のラットにおける小腸における粘膜の潰瘍発生作用を示すグラフである。データは、１治療群当り４匹のラット間の平均値±標準誤差(ｍｍ2)として提供される。対照と治療群との間で有意差が見られる(Ｐ＜０.０１(**)、Ｐ＜０.００１(***))。
【図３】０.５ｍＬの２％(ｗ／ｖ)ＣＭＣ溶液に懸濁させるか、または０.５ｍＬのＭＣＴペーストに混合された、ＭＣＴペースト(対照)(ａ)；Indo Ｈ(１０ｍｇ／ｋｇ)(ｂ)；または等モルのIndoおよび／またはＣｕ−アセテートのＣｕ用量(ｃ)；Ｃｕ−アセテートおよびIndo Ｈの物理的混合物(ｄ)；または[Ｃｕ2(Indo)4(ＤＭＦ)2](ｅ)の経口投与後のラットにおける肉眼的胃腸管潰瘍形成を示すグラフである。結果は、平均値±標準誤差として表される。Ｐ＜０.０１での有意差：*、対照から；**、ＣＭＣおよび対照から；番号、Indo Ｈから。
【図４】[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2](１１ｍｇ ｋｇ-1)を含有するcarbopolペーストおよび対照を予め経口投与されたラットにおいて、カラゲナンによるラットの足に誘発された浮腫形成後５時間にわたり測定された時間に対する足の直径変化(Δｍｍ)を示すグラフである。データは、１治療群当り３匹のラット間の５時間にわたり測定された時間に対する足の直径変化(Δｍｍ)の平均値(±標準誤差)として提供される。対照とcarbopol治療動物との間で有意差が見られた(Ｐ＜０.００１(***))。
【図５】[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2](１１ｍｇ ｋｇ-1)を含有するＭＣＴペーストおよび対照を予め経口投与されたラットにおいて、カラゲナンによるラットの足に誘発された浮腫形成後５時間にわたり測定された時間に対する足の直径変化(Δｍｍ)を示すグラフである。データは、１治療群当り３匹のラット間の５時間にわたり測定された時間に対する足の直径変化(Δｍｍ)の平均値(±標準誤差)として提供される。Ｐ＜０.０５(*)で対照とＭＣＴペースト治療動物との間で有意差が見られた。
【図６】ＣＭＣ(２％)溶液中のIndo Ｈ(１０ｍｇ ｋｇ-1)および対照を予め経口投与されたラットにおいて、カラゲナンによるラットの足に誘発された浮腫形成後５時間にわたり測定された時間に対する足の直径変化(Δｍｍ)を示すグラフである。データは、１治療群当り３匹のラット間の５時間にわたり測定された時間に対する足の直径変化(Δｍｍ)の平均値(±標準誤差)として提供される。Ｐ＜０.００１(***)で対照とＭＣＴペースト治療動物との間で有意差が見られた。
【図７】ＣＭＣ(２％)溶液中のIndo Ｈ(１０ｍｇ ｋｇ-1)、および[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2]を含有するＭＣＴペースト、または[Ｃｕ2(Indo)4(ＯＨ2)2](１１ｍｇ ｋｇ-1)を含有するcarbopolペーストを予め経口投与されたラットにおいて、カラゲナンによるラットの足に誘発された浮腫形成後５時間にわたり測定された時間に対する足の直径変化(Δｍｍ)を示すグラフである。データは、対照群に比して１治療群当り３匹のラット間の５時間にわたり測定された足の直径における抑制％の平均値(±標準誤差)として提供される。Ｐ＞０.０５で治療群間で浮腫の抑制％で有意差は見られなかった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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2007530599.tif 000026
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