(57)【要約】本発明は、特に活動に関して、全身性エリテマトーデスを含む炎症性疾患または炎症性状態を有する患者の診断および／またはモニタリングに関する。本開示は、網状赤血球上の補体経路成分のレベルを用いて、慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態の急性エピソードの発生を診断、モニタリング、あるいは予測することができるという驚くべき発見を提示する。本発明は、個体由来の網状赤血球上の補体経路成分のレベルを決定し、（ｂ）この補体経路成分のレベルを補体経路成分のコントロールレベルと比較することによって、その個体における慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態の急性炎症性エピソードを診断あるいはモニタリングするための方法を提供する。
2007532885.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体における慢性の炎症性疾患または炎症性状態の急性炎症性エピソードを診断またはモニタリングするための方法であって、該方法は、
（ａ）該個体由来の網状赤血球における補体経路成分のレベルを決定する工程、および
（ｂ）該補体経路成分レベルを補体経路成分のコントロールレベルと比較する工程であって、該補体経路成分のコントロールレベルからの差は、該個体が該慢性の炎症性疾患または炎症性状態の急性炎症性エピソードを有することを示す、工程
を包含する、方法。
【請求項２】
１より多くの前記補体経路成分のレベルが、決定され、そしてコントロールに対して比較される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記補体経路成分のレベルが、該補体経路成分に対して特異的な抗体を使用して決定される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記補体経路成分Ｃ４ｄのレベルが決定される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記慢性の炎症性疾患または炎症性状態が、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、Ｃ型肝炎感染、鎌状赤血球貧血、移植の合併症、および妊娠の合併症からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記慢性の炎症性疾患または炎症性状態が、ＳＬＥである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記補体経路成分Ｃ４ｄのレベルが決定される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記補体経路成分Ｃ４ｄのレベルが、該補体成分Ｃ４ｄに対して特異的な抗体を使用して決定される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記Ｃ４ｄ抗体が、標識されている、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記Ｃ４ｄ抗体が、フローサイトメトリー分析を使用して検出される、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
個体における慢性の炎症性疾患または炎症性状態の急性炎症性エピソードを予測する方法であって、該方法は、
（ａ）該個体由来の網状赤血球における補体経路成分のレベルを決定する工程、および
（ｂ）該補体経路成分のレベルを補体経路成分のコントロールレベルと比較する工程であって、該補体経路成分のコントロールレベルからの差は、該個体が該慢性の炎症性疾患または炎症性状態の急性炎症性エピソードを有することを示す、工程
を包含する、方法。
【請求項１２】
１より多くの前記補体経路成分のレベルが、決定され、そしてコントロールに対して比較される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記補体経路成分のレベルが、該補体経路成分に対して特異的な抗体を使用して決定される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記補体経路成分Ｃ４ｄのレベルが、決定される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記慢性の炎症性疾患または炎症性状態が、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、Ｃ型肝炎感染、鎌状赤血球貧血、移植の合併症、および妊娠の合併症からなる群より選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記慢性の炎症性疾患または炎症性状態が、ＳＬＥである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記補体経路成分Ｃ４ｄのレベルが決定される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記補体経路成分Ｃ４ｄのレベルが、該補体経路成分Ｃ４ｄに対して特異的な抗体を使用して決定される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記Ｃ４ｄ抗体が、標識されている、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記Ｃ４ｄ抗体が、フローサイトメトリー分析を使用して検出される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
個体における慢性の炎症性疾患または炎症性状態の急性炎症性エピソードを診断、モニタリング、または予測するためのキットであって、該キットは、補体経路成分に対して特異的な抗体と、補体経路成分のコントロールレベルに対して該補体経路成分のレベルを比較するための手段とを備え、ここで、該補体経路成分のコントロールレベルからの差は、該個体が該慢性の炎症性疾患または炎症性状態の急性炎症性エピソードを有することを示す、キット。
【請求項２２】
前記慢性の炎症性疾患または炎症性状態が、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）である、請求項２１に記載のキット。
【請求項２３】
前記抗体が、蛍光標識されている、請求項２１に記載のキット。
【請求項２４】
前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項２１に記載のキット。
【請求項２５】
個体における慢性の炎症性疾患または炎症性状態の急性炎症性エピソードを診断、モニタリング、または予測するためのコンピューター読み取り媒体であって、該コンピューター読み取り媒体は、
（ａ）網状赤血球の表面に沈着する補体経路成分の決定に対応するデータを受容するためのコード；
（ｂ）個体の網状赤血球の表面上に沈着する補体経路成分についての参照値を検索するためのコード；
（ｃ）該（ａ）におけるデータを該（ｂ）における参照値と比較するためのコード
を含む、コンピューター読み取り媒体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本出願は、米国仮特許出願第６０／５６０，９８６号（２００４年４月９日出願）の利益を主張し、そして、米国仮特許出願第６０／５７９，６２１号（２００４年６月１４日出願）の利益を主張する。上記仮特許出願の両方は、あらゆる目的のために、本明細書においてその全体が参考として援用される。
【０００２】
（連邦政府による援助を受けた研究開発下でなされた発明に対する権利に関する記載）
本発明は、ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈに与えられた助成金番号ＲＯ１  ＨＬ−０７４３３５、ＲＯ１  ＡＲ−４６７６４０２、ＲＯ１  ＡＲ−４６５８８、ＮＣＲＲ／ＧＣＲＣ  ＭＯ１−ＲＲ−０００５６、Ｋ２４  ＡＲ−０２２１３、Ｋ２３  ＡＲ−０５１０４４のもとで、政府の支援によってなされた。政府は、本発明に一定の権利を有する。
【０００３】
（発明の分野）
本発明は、全身性エリテマトーデスを含む炎症性疾患あるいは炎症性状態を有する患者の診断および／またはモニタリングに関係し、特に疾患の急性段階の診断に関するものであって、本発明にはこの行為を達成するための方法およびキットが含まれる。本開示は、網状赤血球上の補体経路成分のレベルを用いて、慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態の急性エピソードの発現を診断、モニタリング、あるいは予測することができるという驚くべき発見を提示する。
【０００４】
（発明の背景）
本発明は、炎症性疾患あるいは炎症性状態の急性エピソードを有する患者の診断および／またはモニタリングに関係する。一部の実施形態において、この炎症性疾患あるいは炎症性状態は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）である。本発明はまた、ＳＬＥを含む炎症性疾患あるいは炎症性状態の急性エピソードの始まりを予測するための手段を提供する。
【背景技術】
【０００５】
炎症性疾患あるいは炎症性状態を有する患者の治療の際、疾患活動のモニタリングもまた、問題をはらんでいる。慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態は、しばしば、一連の発赤（ｆｌａｒｅ）、あるいは疾患の急性期に進行し、その後沈静化する。しかし、時間と共に、こうした発赤が不可逆的な器官損傷を導くことがあり得る。このような損傷を最小にするため、疾患発赤のより早期のより正確な検出は、適切な処置を促すだけでなく、不必要な介入の頻度を減らす。調査の観点から、個々の器官系において、あるいは一般検査として、「炎症の範囲」あるいは疾患活動を等しく説明する能力は、非常に価値ある検査手段となる。さらに、疾患活動の測定値を、治療試験における反応変数として用いることができる。このように、ＳＬＥを含めた炎症性疾患あるいは炎症性状態の急性段階を診断あるいは予測する信頼性の高い方法が必要とされている。本発明はこれら等の必要性を満たすものである。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の概要）
この開示は、（ａ）個体由来の網状赤血球上の補体経路成分のレベルを決定し、（ｂ）この補体経路成分のレベルを補体経路成分のコントロールレベルと比較することによって、その個体における慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態の急性炎症性エピソードを診断あるいはモニタリングするための方法を提供する。ここで補体経路成分のコントロールレベルとの差異は、その個体が慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態の急性炎症性エピソードを有していることを示す。１より多くの補体成分のレベルを決定し、コントロールレベルと比較することができる。例えば、補体経路成分の比を決定し、コントロールとなる補体経路成分レベルの比と比較することができる。一部の実施形態では、補体経路成分に特異的な抗体を使用して、その補体経路成分のレベルを決定することができる。一実施形態では、補体経路成分Ｃ４ｄのレベルが決定される。
【０００７】
この開示する方法を使用して、例えば全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、Ｃ型肝炎感染、鎌状赤血球貧血、移植の合併症、ならびに妊娠の合併症など、複数の慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態の急性炎症状態を診断あるいはモニタリングすることができる。
【０００８】
一実施形態では、ＳＬＥの急性エピソードが診断される。例えば、ＳＬＥの急性エピソードを診断あるいはモニタリングするために、網状赤血球上の補体経路成分Ｃ４ｄのレベルを決定してコントロール由来の網状赤血球上の補体成分Ｃ４ｄのレベルと比較することができる。補体成分Ｃ４ｄのレベルは、Ｃ４ｄに特異的な抗体を使用して決定することができる。標識したＣ４ｄ抗体を使用することができ、一部の実施形態では、フローサイトメトリー分析を用いてこのＣ４ｄ抗体を検出する。
【０００９】
本開示はまた、（ａ）個体由来の網状赤血球上の補体経路成分のレベルを決定し、（ｂ）この補体経路成分のレベルを補体経路成分のコントロールレベルと比較することによって、その個体における慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態の急性炎症性エピソードの発生を予測するための方法を提供する。ここで補体経路成分のコントロールレベルとの差異は、その個体が、慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態の急性炎症性エピソードを有していることを示す。１より多くの補体成分のレベルを決定し、コントロールレベルと比較することができる。例えば、補体経路成分の比を決定し、コントロールとなる補体経路成分レベルの比と比較することができる。一部の実施形態では、補体経路成分に特異的な抗体を使用して、その補体経路成分のレベルを決定することができる。一実施形態では、補体経路成分Ｃ４ｄのレベルが測定される。
【００１０】
この開示する方法を使用して、例えば全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、Ｃ型肝炎感染、鎌状赤血球貧血、移植の合併症、ならびに妊娠の合併症など、複数の慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態の急性炎症状態の発生を予測することができる。
【００１１】
一実施形態では、ＳＬＥの急性エピソードが予測される。例えば、ＳＬＥの急性エピソードを予測するために、網状赤血球上の補体経路成分Ｃ４ｄのレベルを決定してコントロール由来の網状赤血球上の補体成分Ｃ４ｄのレベルと比較することができる。補体成分Ｃ４ｄのレベルは、Ｃ４ｄに特異的な抗体を使用して決定することができる。標識したＣ４ｄ抗体を使用することができ、一部の実施形態では、フローサイトメトリー分析を用いてこのＣ４ｄ抗体を検出する。
【００１２】
本開示は、個体における慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態の急性炎症性エピソードを診断、モニタリング、あるいは予測するためのキットについて記述し、これを可能にする。このキットは、補体経路成分に特異的な抗体および、この補体経路成分のレベルと補体経路成分のコントロールレベルとを比較するための手段を含むことができる。補体経路成分のコントロールレベルとの差異は、その個体が慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態の急性炎症性エピソードを有していることを示す。一部の実施形態では、ＳＬＥの急性炎症性エピソードが、診断、モニタリング、あるいは予測される。抗体は蛍光標識することができ、一部の実施形態では、モノクローナル抗体が使用される。
【００１３】
本開示はまた、個体における慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態の急性炎症性エピソードを診断、モニタリング、あるいは予測するための、コンピューター読み取り媒体を提供する。このコンピューター読み取り媒体は、（ａ）網状赤血球上の補体経路成分の決定に対応するデータを受け入れるためのコード、（ｂ）個体の網状赤血球上の補体経路成分に対する参照値を検索するためのコード、および（ｃ）（ａ）のデータと（ｂ）の参照値とを比較するためのコードを含むことができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
（発明の詳細な説明）
（序論）
本発明の方法によって、ＳＬＥを含む慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態の急性エピソードの診断および／またはモニタリングが可能となる。この開示は、網状赤血球上の補体経路成分のレベルを用いて、慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態の急性エピソードの発生を診断、モニタリング、あるいは予測することができるという驚くべき発見を提示する。慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態（例えばＳＬＥ）の急性エピソードは、重大な健康問題であるため、これらの状態を比較的正確かつ早期に診断する必要がある。同様に、炎症性疾患あるいは炎症性状態の急性エピソードの発生をモニタリングあるいは予測する能力は、非常に重要である。
【００１５】
本発明は、網状赤血球上の補体経路成分のレベルの決定を包含する。一部の実施形態では、補体経路成分Ｃ４ｄが決定される。
【００１６】
本発明の方法は一部、未成熟赤血球（即ち網状赤血球）の表面上に沈着するＣ４ｄのレベルが、慢性炎症状態であるＳＬＥに起因する急性炎症性エピソードに対する診断マーカーとして役立つものであり得るという、発明者らの発見に基づく。
【００１７】
慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態の急性エピソードの発生あるいは予測される発生を診断する際に、サンプル中の網状赤血球の補体経路成分のレベルを決定する。この決定したものを次に、慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態を有していない個体、あるいは慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態の急性期にない個体の網状赤血球上にある補体経路成分の量と比較する。例えば、Ｃ４ｄなどの補体経路成分のレベルは、ＳＬＥ患者の網状赤血球上で決定することができる。決定したものは次に、ＳＬＥを有していない個体あるいはＳＬＥの急性期にない個体の網状赤血球上にある補体経路成分のレベルと比較して、ＳＬＥの急性エピソードあるいは発赤の発生を診断、モニタリング、あるいは予測する。
【００１８】
慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態の急性エピソードを有する患者の疾患活動をモニタリングする際に、同じ決定を患者の血液サンプルにて行い、続いて過去に同一の患者から採取したサンプル中の網状赤血球表面上に存在する補体経路成分の量の決定値と比較する。
【００１９】
本発明の別の用途は、ヒト疾患の過程で補体活性化をモニタリングすることである。現在の技術水準にある方法は、可溶性の補体成分Ｃ３および／またはＣ４の血清濃度もしくは血漿濃度の測定に依存している。しかし、この方法には不適切な点があることが判明している。例えば、Ｃ３ならびにＣ４は親分子であり、補体カスケードの活性化への前駆体である。Ｃ３ならびにＣ４の肝臓合成ならびに肝臓外合成の増加は、補体カスケード活性化の過程でのＣ３ならびにＣ４の異化作用の増加と平衡を保つことができ、その結果血清濃度において変化が誤って導かれるかあるいは変化が欠如する。さらに、Ｃ４の遺伝的欠失がよく証明されており、この欠失は合成能の欠如に起因するＣ４の血清／血漿濃度の異常な低下に帰結するが、このＣ４の血清／血漿濃度の異常な低下は、補体活性化の過程でＣ４の消費が増加したことに起因すると誤って解釈され得る。この開示で記載される発明は、Ｃ３ｄ、Ｃ４ｄ、ならびに網状赤血球等のような循環血液細胞の表面に接着する他のものなど、補体活性化のタンパク質産物の測定を基礎としている。これによって、反応物に対する活性化産物のレベルをモニタリングし、先に記載した可溶性Ｃ３ならびにＣ４の測定に潜在する弱点を除くことが可能となる。このように、補体経路活性化を診断あるいはモニタリングするために、網状赤血球上の補体経路成分のレベルを測定し、補体経路成分のコントロールレベルと比較することができる。
【００２０】
（定義）
この開示で使用する「炎症性疾患あるいは炎症性状態」は、個体において炎症の増大を引き起こす任意の免疫疾患あるいは免疫状態を指す。炎症性疾患あるいは炎症性状態はまた、個体において炎症の増加を引き起こす任意の感染症あるいは感染状態を指す。一部の実施形態において、炎症性疾患あるいは炎症性状態は、「慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態」である。慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態は、数週間、数ヶ月、あるいはそれ以上の期間の後も消散しない炎症状態である。慢性の炎症性状態は、急性炎症状態に続くことがあり得るか、あるいは一部の疾患あるいは状態に関しては、急性の炎症性疾患あるいは炎症性状態が存在することなく発生し得る。炎症性疾患あるいは炎症性状態には以下が含まれる。：全身性エリテマトーデス（狼瘡あるいはＳＬＥ）、慢性関節リウマチ、脈管炎（ならびにヴェグナー肉芽腫症のようなその特殊なもの。）、強皮症、筋炎、血清病、移植片拒絶、鎌状赤血球貧血、痛風、子癇前症などの妊娠の合併症、多発性硬化症、心臓血管疾患、Ｃ型肝炎感染のような感染症、など。また、これらの疾患あるいは状態の各々を、慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態として記載することができる。
【００２１】
この開示で使用される「急性炎症性エピソード」は、免疫反応の増大を指す。急性炎症の症状には、赤み、発熱、腫張、痛み、ならびに関節動作不全等の機能不全が含まれる。慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態の急性炎症性エピソードは、以下の点で慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態の典型的症状と異なる。急性炎症反応中に、肝臓は、血流内で検出される急性期タンパク質あるいは急性期反応物を合成する場合が多い。急性期反応物の存在によって、急性炎症状態が体内で発生していることが示されるが、これらは特定の急性炎症性エピソードに関する診断的特徴ではない。急性期反応物には、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）；α１‐アンチトリプシン；α１‐アンチキモトリプシン；α２‐マクログロブリン；ならびにフィブリノーゲン、フィブリン、プロトロンビン、トロンビン、第ＶＩＩＩ因子ならびにプラスミノーゲンなどの凝固因子；補体タンパク質、ならびに血清アミロイドタンパク質が含まれる。さらに、急性炎症性エピソードの過程で、例えば好中球ならびにマクロファージなどの局所的炎症性細胞が、多数のサイトカイン類を血流内に放出し、その最も顕著なものはＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、ならびにＴＮＦ‐αである。
【００２２】
「リアルタイム診断」は、炎症あるいは急性炎症症状が発生している間の急性炎症性エピソードの診断を指す。網状赤血球は赤血球に成熟する前のわずか１〜２日間しか存在しないため、網状赤血球上のマーカーのモニタリングはリアルタイム診断を提供する。
【００２３】
この開示で使用する「網状赤血球」は、未成熟な赤血球を指す。網状赤血球は通常、個体から血液サンプルを採取することによって得られる。一部の実施形態では、網状赤血球は個体の血液サンプルから単離される。
【００２４】
この開示で使用する「補体経路あるいは補体系」は、高度に調節された様式で相互作用して多数の体液性免疫ならびに炎症のエフェクター機能を提供し、それによって細菌ならびに真菌感染に対する主要な防御機構として働く、３０以上の機能的に関係するタンパク質の複合ネットワークを指す。このタンパク質系は、古典経路（抗体存在下）、あるいは第２経路（抗体非存在下）、およびレクチン経路という３つの別個の経路を介して、外来の生物による進入に対して作用する。活性化されると、各経路内のタンパク質は、反応を始動させた外来抗原を根絶するために意図された様々な機能を果たす複数分子複合体への経時的自己集合に関係するカスケードを形成する。補体経路の概説については、ＳｉｍおよびＴｓｉｆｔｓｏｇｌｏｕ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３２：２１−２７（２００４）を参照する。
【００２５】
古典経路は通常、外来の粒子に抗体が結合することによって誘発される。これは、Ｃ１、Ｃ４、Ｃ２と称される、古典経路独特のいくつかの成分から構成される。連続的に、Ｃ１ｑが抗原抗体複合体に結合してＣ１ｒおよびＣ１ｓ（両方ともセリンプロテアーゼである。）が活性化され、活性化されたＣ１ｓがＣ４およびＣ２を切断して、それぞれＣ４ａとＣ４ｂ、ならびにＣ２ａとＣ２ｂが生じる。フラグメントＣ４ｂおよびＣ２ａは集合してＣ４ｂ２ａを形成し、これはタンパク質Ｃ３を切断してＣ３ａとＣ３ｂにして、古典経路の活性化は完了する。フラグメントＣ４ｂおよびＣ３ｂは、第Ｉ因子によってさらに分解される。この因子はＣ４ｂを切断してＣ４ｄを作り、さらにＣ３ｂを切断してｉＣ３ｂ、続いてＣ３ｄを作る。このように、補体古典経路の活性化によって、Ｃ４ｄ、ｉＣ３ｂ、ならびにＣ３ｄなどの多数のフラグメントが、免疫複合体上あるいは他の標的表面上へ沈着することが可能となる。当該標的には、例えばリンパ球ならびに他の白血球、赤血球、ならびに血小板など、血液中を循環する細胞が含まれる。
【００２６】
第２補体経路の活性化は、Ｃ３ｂ（あるいはＣ３ｉ）が、例えば微生物の細胞壁あるいは他の表面成分に結合したときに開始される。次に、第２経路のタンパク質Ｂ因子が細胞に結合したＣ３ｂに結合してＣ３ｂＢを形成する。次に、Ｄ因子がＢ因子を切断してＢｂおよびＢａとし、Ｃ３ｂＢｂを作る。続いて、プロペルジンと呼ばれる血清タンパク質がＢｂに結合してＣ３ｂＢｂＰを形成し、これはＣ３を分解してＣ３ａとＣ３ｂにするＣ３転化酵素として機能する。
【００２７】
レクチン補体経路は、マンナン結合レクチンあるいはマンナン結合タンパク質（ＭＢＰ）によって仲介される。ＭＢＰは、多数の微生物炭水化物にて認められるマンノース基に結合するタンパク質である。ＭＢＰは、古典補体経路におけるＣ１ｑと機能的に等価であるようである。レクチン経路の活性化は、ＭＢＰが微生物炭水化物のマンノース基に結合した時に開始される。次に、ＭＡＳＰ１ならびにＭＡＳＰ２（古典経路におけるＣ１ｒならびにＣ１ｓと機能的に等価。）と呼ばれる、さらに２つのレクチン経路タンパク質がＭＢＰに結合する。このＭＡＳＰ１／ＭＡＳＰ２／ＭＢＬ複合体は、古典補体経路のＣ１と類似する活性を持つ酵素を形成し、これはＣ４およびＣ２を切断し、Ｃ３を分解してＣ３ａとＣ３ｂにするＣ３転化酵素であるＣ４ｂＣ２ａを作ることができる。このＣ３転化酵素は、補体経路成分を切断し、活性化して膜攻撃複合体（ＭＡＣ）を形成する。このＭＡＣは、細菌細胞壁に孔を形成し、細菌細胞を溶解させる。
【００２８】
この開示で使用する「補体経路成分」には、例えば、Ｃ１、Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３などの、古典補体経路、第２補体経路、ならびにレクチン補体経路のタンパク質、およびこれらのフラグメント（例えばＣ１ｑ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、Ｃ４ａ、Ｃ４ｂ、Ｃ２ａ、Ｃ２ｂ、Ｃ４ｂＣ２ａ、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ４ｃ、Ｃ４ｄ、ｉＣ３ｂ、ｉＣ４ｂ、Ｃ３ｄ、Ｃ３ｉ、Ｃ３ｄｇ）が含まれる。さらに、Ｃ５、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１ｉｎｈ、ＭＡＳＰ１、ＭＡＳＰ２、ＭＢＬ、ＭＡＣ、ＣＲ１、ＤＡＦ、ＭＣＰ、Ｃ４結合タンパク質（Ｃ４ＢＰ）、タンパク質Ｈ因子、Ｂ因子、Ｃ３ｂＢ、Ｄ因子、Ｂｂ、Ｂａ、Ｃ３ｂＢｂ、プロペルジン、Ｃ３ｂＢｂ、ＣＤ５９、Ｃ３ａＲ、Ｃ５ａＲ、Ｃ１ｑＲ、ＣＲ２、ＣＲ３、ならびにＣＲ４、加えて、この開示に具体的に列挙されていない他の補体経路成分、受容体、およびリガンドが含まれる。
【００２９】
この開示で使用する「補体経路成分のコントロールレベル」は、一部の実施形態において、慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態に罹患していない個体に由来する細胞上の補体経路成分のレベルを指す。コントロールレベルもまた、個体の一集団を分析することによって決定することができる。他の実施形態では、補体経路成分のコントロールレベルは、慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態を有しているが、その疾患の急性期にはない個体に由来する。一部の実施形態において補体経路成分のコントロールレベルは、診断が求められる個体あるいは疾患をモニタリングされている個体と、同一の個体に由来するが、別の時点で得られる。また、補体経路成分のコントロールレベルは、コンピューター読み取り媒体にて、補体経路成分に関する参照値として使用することができる。
【００３０】
この開示で使用する「コントロールレベルとの差異」は、当業者が用いる統計分析法によって判定される、統計的に有意な差異を指す。コントロールレベルとの差異は、補体経路成分のコントロールレベルと、診断あるいは他の情報が求められる個体に由来する補体経路成分のレベル（すなわち、実験レベル）との間の、統計的に有意な差異を指す。当業者は、多くの方法が、差異が統計的に有意であるか否かを判定するために利用可能であり、使用される特定の方法が本発明を制限するものではないことを、理解する。
【００３１】
この開示で使用する「全身性エリテマトーデス」、「ＳＬＥ」、あるいは「狼瘡」は、多臓器が関与する始原型の自己免疫疾患である。この抗自己反応は、様々な核ならびに細胞質の細胞成分に対する自己抗体によって特徴づけられる。これらの自己抗体はそれぞれの抗原に結合し、循環して最終的には組織に沈着する免疫複合体を形成する。この免疫複合体の沈着とその結果生じる補体系の活性化が、慢性炎症ならびに組織損傷を引き起こす。
【００３２】
ＳＬＥは、一連の発赤あるいは疾患の急性期へと進行し、その後沈静する。ＳＬＥ発赤の症状は、患者間で、また同一の患者においてでさえも著しく異なるものであり、これには、倦怠感、発熱、対称性関節痛、ならびに光過敏性（短時間日光に当たった後、発疹を発症する）が含まれる。ＳＬＥの他の症状には、脱毛、粘膜の潰瘍、胸痛および滑膜炎を導く心臓ならびに肺内層の炎症、滑液の疼痛性炎症が含まれる。狼瘡では赤血球、血小板、ならびに白血球が標的となり得、貧血ならびに出血問題に帰着する。より重篤な場合、免疫複合体の沈着ならびに血管の慢性炎症が、腎臓の関与、場合によっては透析あるいは腎臓移植を必要する腎不全を導くことがあり得る。血管は、ＳＬＥにおける自己免疫の反応の主要な標的であるため、早発卒中ならびに心臓疾患は珍しくない。しかし、時間経過と共に、これらの発赤が不可逆的な器官損傷を導くことがあり得る。
【００３３】
この開示で使用する「全身性硬化症あるいは強皮症」は、炎症ならびに線維症、および血管、皮膚、消化管、肺、心臓、ならびに腎臓の変性変化によって特徴づけられる結合組織の慢性疾患である。強皮症は障害を起こし、かつ生存を脅かす疾患である。強皮症を有する患者の分類のための判断基準が開発されている（Ｍａｓｉ  ＡＴ，Ｒｏｄｎａｎ  ＧＰ，Ｍｅｄｓｇｅｒ  ＴＡ  Ｊｒ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ（ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ）．Ａｒｔｈ  Ｒｈｅｕｍ  １９８０；２３：５８１−５９０）。これらの判断基準は調査研究において多数の患者を記述するために意図されたもので、個々の患者を診断するためのものではない。主要な判断基準は、指に隣接する任意の部位における強皮症的皮膚変化（皮膚の肥厚）である。任意の２つあるいは３つのより副次的な判断基準［強指症（指を含む皮膚肥厚）、指点食瘢痕（ｄｉｇｉｔａｌ  ｐｉｔｔｉｎｇ  ｓｃａｒ）、両基底肺間質線維症（ｂｉｂａｓｉｌａｒ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ）］が追加されると、診断の感度は上昇する。しかし、明らかに強皮症を有する個体の１０％近くがこれらの判断基準を満たさない（Ｍｅｄｓｇｅｒ  ＴＡ  Ｊｒ．Ｃｏｍｍｅｎｔ  ｏｎ  ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ｓｔｕｄｙ．：Ｂｌａｃｋ  ＣＭ，．Ｍｙｅｒｓ  ＡＲ，ｅｄｓ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｔｏｐｉｃｓ  ｉｎ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ：Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｇｏｗｅｒ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，１９８５：１６−１７）。
【００３４】
ある時点での強皮症患者の現状あるいはその患者の疾患の「重篤度」は、不可逆的な変化あるいは「損傷」と、潜在的に可逆的な変化あるいは「活動」とのいくつかの組み合わせを表す。疾患初期の炎症は、後の線維症ならびに瘢痕を導く。もし炎症活動を正確に検出することができれば、早期の介入によって将来的な不可逆的損傷を予防することができる場合がある。しかし、臨床医が疾患活動から疾患損傷を区別するのは困難であることが多い。一部これは、活性の臨床的証拠が極度に繊細であり得るからである。加えて、信頼性の高い炎症の検査マーカーが存在しない。個々の患者、および臨床試験の両方において、疾患の自然暦を評価する際、ならびに介入の有効性を測定する際、疾患損傷および疾患活動の横断的かつ縦断的検査が必須である。この障害の概要は、Ｍｅｄｓｇｅｒ  ＴＡ  Ｊｒ．Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ（ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ）：ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｓｐｅｃｔｓ．Ｋｏｏｐｍａｎ  ＷＪ，ｅｄ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ａｌｌｉｅｄ  Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．１３ｔｈ  ｅｄ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｅａ  ａｎｄ  Ｆｅｂｉｇｅｒ，１９９７：１４３３−１４６４にて、確認することができる。
【００３５】
この開示で使用される「肝炎」という語は、一般に、肝臓の炎症によって特徴づけられる疾患あるいは状態に関係する。「Ｃ型肝炎」という語は、より具体的に、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）による感染に関係する。Ｃ型肝炎ウイルスの宿主への進入は、通常、非経口的手段によるものであり、典型的には血液と血液とが接触することによってこの進入が成立する。多くの例において、ＨＣＶによる感染は慢性的なものであり、重篤な肝機能不全や死を導くことがあり得る。Ｃ型肝炎ウイルス感染の症状には、腹痛、食欲不振、肝硬変、自己免疫合併症、肝癌、クリオグロブリン血症、不安感、関節炎、腹水（胃領域における膨満）、霧視（ｂｌｕｒｒｅｄ  ｖｉｓｉｏｎ）、悪寒、暗色尿、性欲減退、うつ、眩暈感、皮膚乾燥、浮腫（手足ならびに脚部の腫脹）、過剰出血、ガス過剰、眼ならびに視角の異常（霧視あるいはドライアイ）、疲労、発熱、インフルエンザ様症状、胆石、灰色、黄色、白色、あるいは淡色の便、頭痛、肝臓痛（肝臓領域における疼痛あるいは不快感）、のぼせ、消化不良、関節の炎症、不眠症、過敏症、痒み、黄疸（眼および／または皮膚の黄変）、関節痛、腎臓疾患、扁平苔癬（皮膚疾患）、気分の変化あるいは動揺、物忘れ、精神的混乱、月経異常、筋肉疼痛、吐き気、神経障害、発疹／赤班、手掌紅斑、リウマチ様症状、熱あるいは寒冷過敏性、睡眠障害、治癒あるいは回復の遅延、日光過敏症（晩発性皮膚ポルフィリン症）、唾液腺炎（唾液腺の炎症）、疾患／インフルエンザに対する羅病性、発汗、眩暈、嘔吐、水分貯留、衰弱、体重増加、体重減少、が含まれるがこれらに限定されない。
【００３６】
この開示で使用するＨＣＶ感染の「自己免疫合併症」は、患者体内の自己免疫反応の活性化に関係し、これはＨＣＶの急性エピソードである。この反応は一般に肝臓に関係し、疲労、微熱、ならびに黄疸を引き起こすが、肝臓外組織に関係する場合もあり、他の症状：無月経（月経期の欠如）、血性の下痢（潰瘍性大腸炎に起因する。）、腹痛、関節炎、発疹、貧血、糸球体腎炎（腎疾患の一形態）、ドライアイ、角結膜炎、モーレン潰瘍、ならびに口渇、を引き起こす。
【００３７】
この開示で使用する「クリオグロブリン血症」は、一般に、血中にクリオグロブリンという免疫グロブリンを有する状態を指す。クリオグロブリン血症もまた、ＨＣＶの急性エピソードである。低温で、これらのクリオグロブリンはゲルとなり、血管の炎症を引き起こす場合がある。
【００３８】
また、ＨＣＶ急性エピソードの診断は、特殊な治療法を用いるこの疾患の処置に関連し得る。この開示で使用する、Ｃ型肝炎感染に対する「特殊な治療」には、インターフェロン、リバビリン、ならびにＰＥＧインターフェロンを含む抗ウイルス薬の投与が含まれるが、これらに限定されない。
【００３９】
この開示で使用する「鎌状赤血球貧血」は、例えばヘモグロビンＳ（鎌状ヘモグロビン）ならびにＨｂＣ、ＨｂＤ、ＨｂＯ−Ａｒａｂなどのヘモグロビンタンパク質における異常によって引き起こされる遺伝病を指す。また、鎌状赤血球貧血という語には、鎌状赤血球ｂ０サラセミア、ヘモグロビンＳＣ病、あるいは鎌状赤血球ｂ＋サラセミアが含まれる。鎌状赤血球貧血は、変異の存在に関して患者のＤＮＡを配列決定することによって診断することができる。鎌状赤血球貧血における赤血球は、円盤型で脆弱かつ柔軟性に欠けるものとなり、例えば関節痛ならびに他の骨疼痛、ならびに疲労、息切れ、心拍数増加、成長および成熟期遅延、感染症の罹患性、下肢の潰瘍（青年期ならびに成人にて）、黄疸、骨痛、腹痛発作、発熱など、この疾患の様々な症状を導く。
【００４０】
鎌状赤血球貧血は、損傷した赤血球が分解した場合（溶血発作）、あるいは脾臓が肥大して赤血球を捕捉した場合、（脾性分画症性発症）、あるいはある種の感染によって骨髄が赤血球の産生を停止した場合（無形成性発症）に、生命を脅かすもの、あるいは急性のものとなることがあり得る。発症が繰り返されることで、腎臓、肺、骨、眼、ならびに中枢神経系に損傷が引き起こされることがあり得る。また血管閉塞ならびに臓器損傷によって、急性疼痛性のエピソードが引き起こされることがあり得る。生存中のある時点でほぼ全ての患者に発生する、これらの疼痛性発症は、数時間あるいは数日間継続することがあり得、背中の骨、ならびに長骨、胸部に影響を及ぼす。
【００４１】
この開示で使用する「移植手順」は、例えば心臓あるいは肺、腎臓、角膜、肝臓などの臓器、あるいは細胞の、供与者から受容者への移植を指す。好ましい実施形態において、供与者はヒトであり、かつ受容者はヒトである。一部の実施形態において移植処置とは骨髄移植であり、ここでは健康な骨髄が、供与者から、骨髄の機能を失った受容者、あるいは白血病などの血球細胞に関係する疾患を有する受容者に移植される。
【００４２】
「移植の合併症」には、移植片拒絶、対宿主移植片病（ＧＶＤＨ）、ならびに感染が含まれ、移植手順の急性エピソードである。移植手順の合併症に伴う、網状赤血球上の補体経路成分の変化の同定は、より有効でより標的化した治療介入を導き得るか、あるいは移植手順の成果を予測するために利用され得る。
【００４３】
この開示で使用する「妊娠」という語は、一般に、その体内に出産前の幼体を含有している状態に関係する。通常、妊娠は受胎から出産まで滞りなく進行する。しかし、妊娠には合併症を伴う場合があり、この合併症には以下の１つ以上が含まれるが、これらに限定されない。：胎児の出生時欠損、子宮外妊娠、出血、流産、羊水消失、妊娠姓糖尿病、トキソプラズマ症、Ｂ群連鎖球菌関連、ＲＨ病、産科性胆汁うっ滞（ｃｈｏｌｅｓｔａｔｉｓ）、高血圧、子宮脱、つわり、妊娠性高血圧症、前置胎盤、胎児切迫、枯死卵、妊娠悪阻、異常分娩、類線維腫、ならびに子癇前症。これらの合併症は、網状赤血球上の補体経路成分のレベルを決定することによって診断、あるいはモニタリング、予測することのできる妊娠の急性エピソードである。この開示で使用する「子癇前症」あるいは「妊娠中毒症」あるいは「妊娠性高血圧」は、妊娠中の腫脹、血圧上昇、ならびに尿中タンパク質の発生を指す。子癇前症の症状には、以下が含まれるが、これらに限定されない。：浮腫、１週間に２ポンドを超える体重増加、頭痛、尿排出減少、悪心、吐き気、顔面膨張、高血圧、興奮、視力変化、腹痛。子癇前症は、全身性エリテマトーデス（「狼瘡」あるいは「ＳＬＥ」とも呼ばれる。）ならびに抗リン脂質症候群（ａｎｔｉ−ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ；「抗リン脂質症候群（ａｎｔｉｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）」あるいは「ＡＰＳ」とも呼ばれる。）を含む、特定の自己免疫疾患に関連する。この開示で使用される「抗リン脂質症候群」あるいは「ＡＰＳ」は、身体がリン脂質を外来のものと認識し、これらに対する抗体を産生する自己免疫疾患を指す。ＡＰＳはしばしば、反復性の妊娠喪失を有する女性の約５人に１人に存在する、抗リン脂質抗体による妊娠中の胎児喪失に関係する。これの原因はわかっていないが、母体内で血塊ができることに起因する可能性がある。
【００４４】
妊娠中の合併症は、特に狼瘡ならびにＡＰＳなどの自己免疫疾患に伴うものは、類似した症状を示すものが多いので、診断が困難であることが多い。さらに、狼瘡妊娠に伴う合併症は特に、これらが漠然としたものでありかつ、複数の様態で疾患が患者に存在するため、他の妊娠の合併症と識別することが困難であることが多い。「抗体」は、免疫グロブリン遺伝子あるいはこれのフラグメントに由来するフレームワーク領域を含み、抗原を特異的に結合かつ認識するポリペプチドを指す。判明している免疫グロブリン遺伝子には、κ、λ、α、γ、δ、ε、ならびにμという定常領域遺伝子に加えて、無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が含まれる。軽鎖はκあるいはλのいずれかに分類される。重鎖はγ、μ、α、δ、あるいはεに分類され、順にこれらが、それぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥという免疫グロブリンクラスを規定する。典型的には、抗体の抗原結合領域は、結合特異性および結合親和性において最も重要である。
【００４５】
典型的な免疫グロブリン（抗体）構造ユニットは、４量体から成る。各４量体は２つの同一のポリペプチド鎖対から構成され、各対は、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤ）と１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤ）とを有する。各鎖のＮ末端は、抗原認識を主に担う、約１００から１１０以上のアミノ酸の可変領域を規定する。可変軽鎖（ＶＬ）ならびに可変重鎖（ＶＨ）という語は、それぞれこれらの軽鎖ならびに重鎖を指す。
【００４６】
抗体は、例えば、インタクト免疫グロブリン、あるいは、様々なペプチド分解酵素で分解されることによってできた、多数のよく特徴づけられたフラグメントとして存在する。即ち、例えばペプシンは、ヒンジ領域内のジスルフィド結合下で抗体を分解して、それ自体がジスルフィド結合によってＶＨ−ＣＨ１に結合した軽鎖であるＦａｂの２量体であるＦ（ａｂ）’２を作る。このＦ（ａｂ）’２は、穏やかな条件下で還元されてヒンジ領域内のジスルフィド結合を壊し得、これによってＦ（ａｂ）’２の２量体はＦａｂ’単量体に変わる。このＦａｂ’単量体は、実質的に、ヒンジ領域の部分を有するＦａｂである（Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｐａｕｌ  ｅｄ．３ｄ  ｅｄ．１９９３）を参照）。様々な抗体フラグメントが、インタクト抗体の分解に関して定義されているが、当業者は、化学的にあるいは組換えＤＮＡ法の利用によって当該フラグメントが新規合成され得ることを理解する。このように、この開示で使用する抗体という語には、全抗体を改変することによって作られる抗体フラグメント、あるいは組換えＤＮＡ法を用いて新規合成された抗体フラグメント（例えば一本鎖Ｆｖ）、もしくはファージディスプレイライブラリを用いて同定される抗体フラグメント（例えばＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４（１９９０）を参照）もまた含まれる。
【００４７】
例えば組換え抗体、モノクローナル抗体、あるいはポリクローナル抗体など、抗体の調製には、当分野で公知の数多くの方法を利用することができる（例えばＫｏｈｌｅｒ  ＆  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７（１９７５）；Ｋｏｚｂｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ４：７２（１９８３）；Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，ｐｐ７７−９６，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．（１９８５）；Ｃｏｌｉｇａｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９９１）；Ｈａｒｌｏｗ  ＆  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９８８）；ならびにＧｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ（２ｄ  ｅｄ．１９８６）を参照）。例えばモノクローナル抗体をコードする遺伝子をハイブリドーマからクローン化して組換えモノクローナル抗体を産生するのに使用することができるなど、対象となる抗体の重鎖ならびに軽鎖をコードする遺伝子を、細胞からクローニングすることができる。ハイブリドーマあるいは形質細胞から、モノクローナル抗体の重鎖ならびに軽鎖をコードする遺伝子ライブラリを作製することもできる。重鎖遺伝子産物ならびに軽鎖遺伝子産物のランダムな組み合わせによって、様々な抗原特異性を待つ抗体の大きなプールが作られる（例えばＫｕｂｙ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（３ｒｄ  ｅｄ．１９９７）を参照）。単鎖抗体あるいは組換え抗体を作製する技法（米国特許第４，９４６，７７８号、同第４，８１６，５６７号）を採用して、本発明のポリペプチドに対する抗体を作ることができる。また、遺伝子導入マウスあるいは他の哺乳類などの他の生物体を使用して、ヒト化抗体あるいはヒト抗体を発現させることもできる（例えば米国特許第５，５４５，８０７号、同第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，６６１，０１６号、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６−８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８１２−１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８４５−５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８２６（１９９６）；ならびにＬｏｎｂｅｒｇ  ＆  Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３（１９９５）を参照）。あるいは、ファージディスプレイ法を用いて、選択した抗原に特異的に結合する抗体ならびにヘテロマーＦａｂフラグメントを同定することができる（例えばＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４（１９９０）；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）を参照する）。また、二重特異性の（すなわち、２つの異なる抗原を認識することがで��る）抗体を作製することができる（例えばＷＯ  ９３／０８８２９、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５−３６５９（１９９１）；ならびにＳｕｒｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １２１：２１０（１９８６）を参照）。また抗体は、ヘテロ結合体（例えば、２つの共有結合的に結合した抗体）、あるいは免疫毒素であることができる（例えば米国特許第４，６７６，９８０号、ＷＯ  ９１／００３６０；ＷＯ  ９２／２００３７３；ならびにＥＰ  ０３０８９を参照）。
【００４８】
一実施形態において、抗体は「エフェクター」部分に結合している。エフェクター部分は多数の分子であることができ、これには診断検査にて使用するための放射活性標識あるいは蛍光標識などの標識部分が含まれる。
【００４９】
抗体に「特異的に（あるいは選択的に）結合する」、あるいは抗体に対して「特異的（あるいは選択的）免疫反応性がある」という語句は、タンパク質あるいはペプチドを指す場合に、しばしばタンパク質ならびに他の生物性物質の異種集合体において、そのタンパク質の存在について確定的な結合反応を指す。即ち、設定した免疫分析状態の下で、特異的な抗体は、バックグラウンドの２倍以上、より典型的にはバックグラウンドの１０から１００倍より大きく、特定のタンパク質に結合する。当該状態下での抗体への特異的な結合には、特定のタンパク質に対する特異性に関して選択された抗体が必要とされる。例えば、補体経路成分、あるいは白血球のマーカー、もしくはこれらの多型改変体、対立遺伝子、相同分子種ならびに保存的に改変された改変体、もしくはこれらのスプライシング改変体、もしくはこれらの部分に対して惹起されたポリクローナル抗体を選別して、補体経路成分あるいは白血球のマーカーに対して特異的な免疫反応性があり、他のタンパク質には特異的な免疫反応性がないポリクローナル抗体のみを得ることができる。他の分子と交差反応する抗体を除くことによって、この選別を達成し得る。様々な免疫アッセイ様式を用いて、特定のタンパク質に対して特異的な免疫反応性のある抗体を選別し得る。例えば、一タンパク質に対して特異的な免疫反応性のある抗体を選択するために、固相ＥＬＩＳＡ免疫アッセイは日常的に用いられている（特異的な免疫反応性を判定するのに使用することのできる免疫アッセイの様式ならびに条件の記述については、例えばＨａｒｌｏｗ  ＆  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９８８）を参照）。
【００５０】
「抗原」は、抗体によって認識され、結合される分子であり、例えばペプチド、炭水化物、有機分子、あるいは糖脂質ならびに糖タンパク質などのさらに複雑な分子がある。抗体結合の標的となる抗原の部分は抗原決定基であり、１つの抗原決定基に対応する小さな官能基はハプテンと呼ばれる。
【００５１】
「標識」は、分光的、光化学的、生化学的、免疫化学的、あるいは化学的な手段によって検出可能な組成物である。例えば、有用な標識には、３２Ｐ、１２５Ｉ、蛍光色素、高電子密度試薬、酵素（例えばＥＬＩＳＡにて一般的に使用されるもの。）、ビオチン、ジゴキシゲニン、あるいはハプテンならびにタンパク質（これらには、抗血清もしくはモノクローナル抗体を利用できる）が含まれる（例をあげると、例えば放射活性標識あるいは蛍光標識を抗体内に取り込ませることによって、補体経路成分あるいは白血球マーカーに対して特異的な抗体が検出可能となり、これらを使用して、標識した抗体に対して特異的な反応性を示す、補体経路成分あるいは白血球マーカーを検出することができる）。また、標識した二次抗体を使用して、補体経路成分あるいは白血球のマーカーに対して特異的な抗体を検出することができる。
【００５２】
「接触させる」あるいは「接触」という語は、この開示において、以下の語と交換可能なものとして使用される。：組み合わせる、加える、混合する、通過させる、共にインキュベートする、〜上を流れる、その他。
【００５３】
「免疫アッセイ」という語は、ある抗原に特異的に結合する抗体を使用するアッセイである。免疫アッセイは、抗原を単離、標的、および／または定量するために、特定の抗体の特異的結合特性を利用するということによって、特徴づけられる。
【００５４】
両方の例において、「決定、あるいは決定する」ならびに「量（ｑｕａｎｔｉｔｙ）」についていう場合、物質の量（ａｍｏｕｎｔ）あるいは量（ｑｕａｎｔｉｔｙ）の両方が含まれることが意図される。例えばＣ４ｄとＣ３ｄなど、１つより多くの補体経路成分を測定する場合、「決定、あるいは決定する」ならびに「量」は、さらにまたはあるいは、例えばＣ４ｄのＣ３ｄに対する比など、第１の補体経路成分の第２の補体経路成分に対する比を意味する。
【００５５】
（網状赤血球上の補体経路成分のレベルの決定）
本発明は、患者から得た血液サンプルをもとに、サンプル中の網状赤血球上の補体経路成分のレベルを決定するためのアッセイの実施に関係する。例えばＣ４ｄレベルなど、補体経路成分のレベルに関するアッセイは、ＰＣＴ／ＵＳ０２／２８９１０にて開示されており、これは、あらゆる目的のため、参考として本開示において援用される。
【００５６】
血液サンプルは患者から得、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）で処理して成分の活性化を抑制する。サンプルは常温あるいは冷温状態下で保存する。アッセイは４８時間以内に実施することが好ましい。
【００５７】
一部の実施形態では、ＦＡＣＳを用いて網状赤血球を単離する。この方法は、網状赤血球がより成熟した赤血球よりも高量のＲＮＡを有するという観察結果に基づいている。「ＦＡＣＳ」という語は、蛍光活性化細胞選別を指し、その細胞の対象とする特定の分子の含量に従って細胞を選別する技法である。対象とする分子は、ある種の細胞、あるいは細胞のある状態に対して特異的なものであることができる。対象となる分子は、蛍光色素を直接結合することによって、あるいは、蛍光標識した二次分子（例えば、蛍光標識され、かつその対象とする分子に特異的に結合する抗体あるいはレクチンなど）に結合させることによって、蛍光標識することができる。このように、網状赤血球に特異的なマーカーあるいはＲＮＡ量を用いて、血液サンプル中の他の細胞、特に成熟赤血球から網状赤血球を単離することができる。好ましい実施形態において、ＲＮＡは蛍光色素を用いる染色によって検出され、網状赤血球は蛍光に基づいて成熟赤血球から選別される。ＲＮＡを染色するための蛍光色素には、チアゾールオレンジ、ならびにオーラミンＯが含まれ得る。別の好ましい実施形態では、網状赤血球は、トランスフェリン受容体抗体への結合に基づいて単離あるいは検出される。網状赤血球を単離するための方法ならびに、網状赤血球のＦＡＣＳ単離にて使用することができるマーカーは、当業者に公知であり、かつＲｉｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ａｎａｌ．１５：２６７−２９４（２００１）（あらゆる目的のために参考として本開示において援用される）にて確認される。
【００５８】
また、網状赤血球は、例えば、トランスフェリン受容体など網状赤血球に特異的な細胞表面マーカーを使用することによって、ＦＡＣＳ以外の方法を用いて単離することができる。概説すると、患者から血液サンプルを得、白血球を除去する。残った血液細胞を洗浄し、続いて、トランスフェリン受容体抗体でコーティングしたビーズと共にインキュベートする。これを洗浄して結合しない細胞を除去し、続いて自家血漿を加えてビーズから分離する。この方法は、Ｌａｃｈ−Ｔｒｉｆｉｌｉｅｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：７５４９−７５５４（１９９９）にて開示されており、これは、あらゆる目的のために参考として本開示において援用される。また、網状赤血球は比濁法を用いて単離することができる。
【００５９】
補体経路成分のレベルの決定は、フローサイトメトリー、網状赤血球溶解物を使用するＥＬＩＳＡ、放射免疫アッセイ、比濁法など、多数の方法によって行われ得る。本発明の一実施形態で補体成分Ｃ４ｄのレベルの決定は、フローサイトメトリーを用いて行われ、２つの分子それぞれに対し特異的なポリクローナルあるいはモノクローナル抗体を使用する直接的あるいは間接的免疫蛍光法によって得られた測定値を用いる。Ｃ４ｄなどの補体成分に対する抗体は、例えばＱｕｉｄｅｌ  Ｃｏｒｐ．から、市販されている。
【００６０】
抗体を使用して補体経路成分のレベルを測定する方法は、当業者に公知である。例えば、ＣＲ１ならびにＣ４ｄに関するこの種のアッセイの開発は、Ｆｒｅｙｓｄｏｔｔｉｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．ｖｏｌ．１３５，２００５（１９９１）にて記載されている。そのアッセイは、ＣＲ１ならびに、赤血球上のタンパク質断片Ｃ４ｄおよびＣ３ｄに関するフローサイトメトリー分析であり、比較的高量あるいは比較的低量のＣＲ１を有する個体の同定を可能にするものとして記載された。
【００６１】
（慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態の急性エピソードの診断あるいはモニタリング）
慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態の急性エピソードを有する患者の診断は、補体経路成分の決定値を、例えば正常個体、あるいは急性炎症状態が存在しない時の慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態を有する個体などのコントロール被験体の網状赤血球表面上に典型的に存在する、これらの実体の量に関する基準値あるいは基準値範囲と比較することによって達成される。炎症性疾患あるいは炎症性状態の急性エピソードの診断の実例を実施例１にて提供する。正常個体において、Ｃ４ｄは、ＳＬＥを有する個体と比較して、コントロール個体の網状赤血球の表面上に比較的低レベルで存在する。間接免疫蛍光法を用いるフローサイトメトリー測定を用いると、健常個体における網状赤血球上のＣ４ｄの蛍光強度中央値（ＭＦＩ）は、０から４．６８（中央値１．０８、ＳＤ＝０．８１）の範囲であった。反対に、ＳＬＥを有する個体は、幅広いスペクトルの網状赤血球結合Ｃ４ｄ（Ｒ−Ｃ４ｄ）レベル（蛍光強度中央値（ＭＦＩ）＝５．０５；ＳＤ＝８．５３；範囲：０から６６．８１）を有していた。網状赤血球Ｃ４ｄレベルは、個々のＳＬＥ患者ごとに著しく変動しており、網状赤血球Ｃ４ｄレベルの増加は、疾患活動の増大に伴うものであった。
【００６２】
本発明の方法の大きな特徴は、患者の疾患活動をモニタリングすることが可能な点である。赤血球の寿命は約１２０日であり、網状赤血球は、例えば骨髄を離れて約０〜２日後の未成熟赤血球である。よって、このアッセイあるいは方法の大きな特徴は、目下発生している、あるいは過去０〜２日間あるいはせいぜい１週間以内に発生した炎症性疾患あるいは炎症性状態の活動を示す、もしくは反映するということである。また、この方法を用い、網状赤血球表面上の補体経路成分の増加を検出することによって、慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態の急性エピソードの発生を予測することが可能である。
【００６３】
（キット）
疾患活動を診断あるいはモニタリングあるいは予測するためのアッセイを行うためのキットは、本発明の一部分である。上記キットは、この開示で記載する方法を実行するのに必要な任意の様々な試薬を利用する。免疫蛍光アッセイを用いる例として、キットは一般に、補体経路成分に対して特異的なモノクローナル抗体と蛍光部分との結合体を含有する。また、補体経路成分に対して特異的なポリクローナル抗体を利用することもできる。また、このキットは、特にフローサイトメトリーあるいはＦＡＣＳ法にて使用するために、網状赤血球を検出あるいは単離するための試薬を含むことができる。また、このキットは、例えば抗トランスフェリン抗体など、網状赤血球を単離するための抗体結合ビーズを含有することができる。また、このキットは、補体経路成分のコントロールレベルあるいは当該コントロールレベルを決定する手段を含有することができる。さらに、このキットは、例えば緩衝液、放射標識抗体、比色分析用試薬、ならびに使用説明書など、この種のアッセイを実行するのに必要な場合のある他の物を含有する。
【００６４】
これらの方法ならびにキットにて使用するための抗体は、公知である。例えば、抗Ｃ４ｄ抗体は、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ（＃Ａ２１３）のＱｕｉｄｅｌ  Ｃｏｒｐ．から入手可能であり、Ｒｏｇｅｒｓ，Ｊ．，Ｎ．Ｃｏｏｐｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ８９：１００１６−１００２０，１９９２；Ｓｃｈｗａｂ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ  ７０７（２）：１９６  １９９６；Ｇｅｍｍｅｌｌ，Ｃ．Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｍａｔｅｒ  Ｒｅｓ  ３７：４７４−４８０，１９９７；ならびにＳｔｏｌｔｚｎｅｒ，Ｓ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈ  １５６：４８９−４９９，２０００に全般的な記述がある。
【００６５】
あるいは、補体経路成分値の決定は、多数の、ＥＬＩＳＡなどの標準測定法を用いて実行され得る。蛍光標識の代わりに、放射性標識ならびに比色標識など、他の種類の標識を使用し得る。当該他の種類のアッセイを用いる場合、キットは、放射性ヨウ素、アビジン、ビオチン、あるいはパーオキシダーゼのような酵素などの適切な標識を結合した、補体経路成分に特異的なモノクローナル抗体あるいはポリクローナル抗体を含有する。
【００６６】
一部の実施形態では、１つより多くの、網状赤血球上の補体経路成分の決定が行われ、この決定は、ＳＬＥの急性エピソードを含む急性炎症状態を診断あるいはモニタリングあるいは予測するために利用される。
【００６７】
（自動化およびコンピュータソフトウエア）
先に記載した、網状赤血球上の補体経路成分の決定、ならびに診断法ならびに疾患活動のモニタリング法あるいは予測法は、手作業で実行することができるが、便利上自動化システムおよび／または自動化装置を使用して実行されることが多く、ここで血液サンプルは自動的に分析されて必要な決定が行われ、例えばコントロールレベルなどの、基準値あるいは参照値との比較が、この目的に適したコンピュータソフトウエアを使用して自動的に行われる。
【００６８】
このように、一側面において本発明は、個体の慢性の炎症性疾患あるいは炎症性状態の急性エピソードを診断する、あるいはモニタリングするための方法を包含し、この方法は以下を包含する：（ａ）網状赤血球を含有する、個体に由来する血液サンプルにおいて、このサンプル中の網状赤血球表面上に沈着する補体経路成分を自動的に決定する工程、および（ｂ）上記決定値を、網状赤血球上の、それぞれの補体経路成分に関する参照値と自動的に比較する工程。
【００６９】
例えばＳＬＥの急性エピソードの診断などのための、本発明の方法にて使用するためのコンピュータソフトウエアあるいはコンピューター読み取り媒体は、以下を含有する。：
（１）：以下を含む、コンピューター読み取り媒体：
（ａ）網状赤血球表面に沈着する、例えばＣ４ｄなどの補体経路成分の決定値に対応するデータを受けるためのコード。；
（ｂ）個体の網状赤血球表面に沈着する、例えばＣ４ｄなどの補体経路成分の参照値を検索するためのコード。；ならびに
（ｃ）（ａ）のデータと（ｂ）の参照値とを比較するためのコード。
【００７０】
本発明の実施形態では、１つ以上の参照値を、デジタルコンピューターに関係するメモリ内に保存し得る。補体経路成分のレベルの決定値に相応するデータを（例えば適切な分析機器等から）得た後、デジタルコンピューターは、補体経路成分のデータを１つ以上の適切な参照値と比較し得る。この比較が行われた後、デジタルコンピューターは、補体経路成分決定値に相応するデータが、例えばＳＬＥなどの慢性炎症疾患あるいは状態の急性エピソードに関係するか否かを自動的に判定し得る。
【００７１】
当業者は、急性ＳＬＥエピソードを含む急性炎症性エピソードの診断のために、網状赤血球上の１つより多くの補体経路成分のレベルを分析するよう、コンピュータプログラムを改変することが可能であることを理解する。また当該分析を利用して、急性ＳＬＥエピソードを含む急性炎症性エピソードの発生を予測することができる。
【００７２】
従って、本発明の一部の実施形態は、デジタルコンピューターが実行するコンピュータコードによって具体化される場合がある。デジタルコンピューターは、任意の、Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）ベースのオペレーションシステムのような標準的なあるいは専門のオペレーションシステムを使用する、超小型、小型、あるいは大型フレームのコンピューターである場合がある。コードは、任意の適切なコンピューター読み取り媒体上に保存され得る。コンピューター読み取り媒体の例には、磁気、電子、あるいは光学製の、ディスク、テープ、スティック、チップなど等が含まれる。またコードは、当業者によって、Ｃ、Ｃ＋＋などの任意の適切なコンピュータプログラム言語で書き込まれ得る。
【００７３】
以下の実施例は、説明のみのために提供されるものであって、限定のためではない。当業者は、様々な重要でない変数が、本質的に同一の結果を得るために変更あるいは改変され得ることを、容易に理解する。
【実施例】
【００７４】
（実施例１：ＳＬＥを有する患者は、網状赤血球表面上のＣ４ｄレベルが増加している。）
全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）は、予測不能な多臓器発赤（すなわちこの疾患の急性期）によって特徴づけされる疾患である。血清Ｃ３ならびにＣ４、ならびに可溶性成分活性化産物の測定をＳＬＥの過程のモニタリングに利用するのには、限界のあることが示されている。しかし、有意なレベルのＣ４由来のリガンドがＳＬＥ患者の赤血球の表面上に沈着している。赤血球Ｃ４ｄ（Ｅ−Ｃ４ｄ）の測定は、ＳＬＥに関する有用な診断検査であると判断され、そして所与の患者におけるＥ−Ｃ４ｄレベルの変動は、疾患活動の変化を反映するということが見出された。
【００７５】
網状赤血球は赤血球の最も未熟な形態であり（産生後０〜２日目）、疾患活性期に骨髄から現れた場合、直ちに、高レベルのＣ４由来の活性化産物に暴露され、これを獲得する。故に、任意の時点で循環する網状赤血球表面上のＣ４由来活性化産物のレベルを検査することで、ＳＬＥ患者の現在の、ならびに差し迫った疾患活動に対する即座の手掛かりが得られる。ＳＬＥ患者（ｎ＝２５６）ならびに健常コントロール（ｎ＝１１６）の網状赤血球上のＣ４ｄを測定するため、二色フローサイトメトリー分析を実施した。図１のグラフならびに表１にて示した結果は、ＳＬＥ患者では、網状赤血球結合Ｃ４ｄ（Ｒ−Ｃ４ｄ）が幅広い範囲で検出されたが（蛍光強度中央値（ＭＦＩ）＝５．０５；ＳＤ＝８．５３；範囲：０から６６．８１）、他のＡＤを有する患者（ＭＦＩ＝１．５１；ＳＤ＝１．３５；範囲：０から６．９０）あるいは健常コントロール（ＭＦＩ＝１．０８；ＳＤ＝０．８１；範囲：０から４．６８）ではそのようではなかったことを示していた。横断的に比較すると、ＳＬＥ患者の平均Ｒ−Ｃ４ｄレベルは、他のＡＤを有する患者（ｐ＜０．０００１）あるいは健常コントロール（ｐ＜０．０００１）よりも高かった。
【００７６】
（表１：ＳＬＥ患者、他の疾患を有する患者、ならびに健常コントロール由来の、Ｒ−Ｃ４蛍光強度中央値）
【００７７】
【表１−１】
2007532885.tif 000003
【００７８】
【表１−２】
2007532885.tif 000004
【００７９】
【表１−３】
2007532885.tif 000005
【００８０】
【表１−４】
2007532885.tif 000006
【００８１】
【表１−５】
2007532885.tif 000007
【００８２】
【表１−６】
2007532885.tif 000008
【００８３】
【表１−７】
2007532885.tif 000009
【００８４】
【表１−８】
2007532885.tif 000010
図２は、ＳＬＥ患者個々のＦＡＣＳデータの例を提供する。Ｃ４ｄレベルは左図に示し、一致するアイソタイプコントロールを右図に示す。赤血球はペレット化させ、ＰＢＳＢで洗浄し、抗Ｃ４ｄもしくはコントロール抗体による染色のために分注した。二色フローサイトメトリー分析を実施して、ＳＬＥ患者の網状赤血球上のＣ４ｄを測定した。モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を１０μｇ／ｍｌの濃度で赤血球に加えた。ＲＮＡ結合色素を加えて、赤血球から網状赤血球を判別した。細胞を４℃で２０分間インキュベートし、冷却したＰＳＣＢ＋０．２％アジ化ナトリウムで洗浄した。Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手した、二次抗体となる、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）結合ヤギ抗マウスＩｇＧ（＃１１５−０９６−０６２）を、１０μｇ／ｍｌの濃度で細胞に加えた。細胞はインキュベートして洗浄し、ＰＳＳＢ＋０．２％アジ化ナトリウム中に再懸濁してＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を使用するフローサイトメトリーによって分析した。免疫グロブリンの細胞に対する非特異的な結合は、アイソタイプコントロール抗体ＭＯＰＣ２１（ＡＴＣＣから入手。）を使用する同一の分析を並行して行うことで決定した。網状赤血球に対する抗Ｃ４ｄ結合は、４分割した図の右上部分にて示されている。３人のＳＬＥ患者からの結果を示し、Ｃ４ｄ染色された網状赤血球は９３％、４７．８％、ならびに１４．５％である。コントロールは網状赤血球への抗体結合を示さず、これはＣ４ｄ抗体の結合が特異的なものであることを示している。
【００８５】
このＲ−Ｃ４レベルを他のＳＬＥ診断法と比較した。結果を表２に示す。最も一般的に用いられている２つの方法は、全身性狼瘡疾患活動指数（Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  Ｌｕｐｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ；ＳＬＥＤＡＩ）（Ｂｏｍｂａｒｄｉｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈ  Ｒｈｅｕｍ  ３５：６３０−４０（１９９２））ならびに全身性狼瘡活動指標（Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  Ｌｕｐｕｓ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｍｅａｓｕｒｅ；ＳＬＡＭ）（Ｌｉａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈ  Ｒｈｅｕｍ  ３２：１１０７−１８（１９８９））である。ＳＬＥＤＡＩには、９つの器官系を代表する２４の項目が含まれている。変数は、病歴、理学的検査、および検査室検査によって得る。各項目は、関係する器官の重篤度に基づいて１から８まで得点される。例えば、口腔潰瘍は２点とされ、発作は８点とされる。ＳＬＥＤＡＩに含まれる検査値には、白血球数、血小板数、尿検査、血清Ｃ３、Ｃ４、ならびに抗ｄｓＤＮＡが含まれる。合計最大得点は１０５となる。ＳＬＡＭには、１１の器官系を代表する３２項目が含まれる。項目は、有無だけを得点するのではなく、重篤度に基づいて１点から３点まで段階分けされる。ＳＬＡＭの合計最大得点は８６となる。ＳＬＥＤＡＩとＳＬＡＭの両方とも、確証された信頼性の高いものであって、時間経過に伴う変化に対する感度のあることが示されており（Ｌｉａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．）、調査手順ならびに臨床試験において幅広く利用されている。これらの指数は、ＳＬＥの疾患活動の新たに提唱される血漿マーカーあるいは炎症マーカーの価値を試験するのに、特に有用である。
【００８６】
（表２：Ｒ−Ｃ４およびＳＬＥ疾患活動）
【００８７】
【表２】
2007532885.tif 000011
１６４人のＳＬＥ患者の統計分析によって、Ｒ−Ｃ４ｄレベルは、ＳＬＥＤＡＩおよびＳＬＡＭを用いて判定する臨床的疾患活動に相関することが示された。例えば表２を参照。特に、Ｒ−Ｃ４ｄ＞４．５の患者（最高四分位）は、Ｒ−Ｃ４ｄ＜１．１の患者（最低四分位）と比較して、有意に高いＳＬＥＤＡＩ（ｐ＝０．００００３）ならびにＳＬＡＭ（ｐ＝０．００２）を有した。このように、Ｃ４由来のリガンドを保有する網状赤血球は、ＳＬＥ疾患活動の「即時メッセンジャー」として役立ち、疾患の差し迫った発赤を予測することができる。
【００８８】
（実施例２：網状赤血球上のＣ４ｄレベルは、疾患の発赤を予測することができる）
また、予測検査によって、健常コントロールのＲ−Ｃ４ｄレベルは、時間経過によらず著しく安定しているが、個々のＳＬＥ患者内では、Ｒ−Ｃ４ｄレベルが著しく変動していたことが示された。さらに、疾患活動の増大がＲ−Ｃ４ｄの増加を伴っていた。
【００８９】
患者ＤＣは、５０歳の白人女性で、１９７６年にＳＬＥと診断された。彼女の疾患は、関節炎、頬の発疹、発熱、胸膜炎、白血球減少症、血小板減少症、＋ＡＮＡ、ｄｓＤＮＡ、ＳＳＡ、ＳＳＢ、スミス、ならびに血清Ｃ４の恒常的低レベルによって発現した。２００２年２月１３日、彼女は最近疲労が始まったことを医院へ訴えた。彼女に他の症状はなく、理学的検査は正常であった。彼女の血清Ｃ３は正常で血清Ｃ４は低かったが、それまでの値と著しく異なるわけではなかった。彼女は健康な様子であったが、彼女の疲労の増大がウイルス感染に起因するのか、あるいはＳＬＥ発赤に起因するのかは、不明であった。彼女の定期検査値は、この判別を行うのに役に立たなかった。また、彼女は、ＲＢＣの最も若い分画上のＣ４ｄレベルが高く、これは目下補体が活性化されており、ＳＬＥ発赤の可能性のあることを示唆していた。例えば図３を参照。２ヵ月後、この患者は医院を訪れ、疲労の悪化ならびに倦怠感と共に、重篤な関節痛および関節の腫脹を訴えた。これらはＳＬＥ発赤に一致する症状である。抗炎症剤を処置したにも係わらず、これは２００２年７月１０日の通院まで続いた。この面談時に、６８％の彼女の網状赤血球がその表面に存在するＣ４ｄを有しており、彼女の赤血球の全ての分画が高レベルのＣ４ｄを有していた。これは狼瘡の目下の活動、ならびにそれまで（その前１２０日間）の活動を示している。より強力な治療を始めると、これに応じて彼女の関節痛ならびに疲労は顕著に改善された。２００２年８月１日までに、彼女の気分は良くなり、２６％の網状赤血球のみが表面Ｃ４ｄを有していた。このケースは、網状赤血球が、狼瘡疾患活動の即時メッセンジャーとして、あるいは炎症活動のリアルタイム診断のために、どれほど役立つものであるかを例証している。
【００９０】
（実施例３：Ｒ−Ｃ４ｄレベルとＳＬＥ疾患活動との相関、大規模調査）
（方法）
（調査参加者）
調査参加者は全て１８歳以上であり、文書によるインフォームドコンセントが行われた。性別あるいは人種による排除は行わなかった。Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄ（ピッツバーグ大学施設倫理委員会）は、この調査を承認した。
【００９１】
ＳＬＥ患者：１９８２年（Ｔａｎ  ＥＭ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ，２５：１２７１−１２７７（１９８２））もしくは１９９７年（Ｈｏｃｈｂｅｒｇ  ＭＣ，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ，４０：１７２５（１９９７））のＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ改定基準を満たすＳＬＥの持続性患者を、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ  Ｌｕｐｕｓ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｃｅｎｔｅｒ（ピッツバーグ大学狼瘡診断治療センター）への定期通院の間に、この調査へ動員した。患者で妊娠している者は除いた。患者らの定期治療の一部として、全ての患者は、１人の医師（ＳＭもしくはＡＫ）による問診あるいは理学的検査を受けた。これらの医師は、網状赤血球／赤血球結合補体についての結果を知らされていなかった。疾患活動は、全身性狼瘡活動指標（ＳＬＡＭ）（Ｌｉａｎｇ  ＭＨ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ，３２：１１０７−１１１８（１９８９））および、全身性エリテマトーデス疾患活動指数（ＳＬＥＤＡＩ）（Ｂｏｍｂａｒｄｉｅｒ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ，３５：６３０−６４０（１９９２））の、紅斑性狼瘡におけるエストロゲンの安全性の全国調査（ＳＥＬＥＮＡ）版を用いて、通院時に評価した。
【００９２】
他の疾患を有する患者：無作為に選んだ、１１の他の、リウマチ性疾患、炎症・自己免疫疾患、あるいは血液学的疾患を有する患者を動員した、これには、強皮症（ｎ＝４３）、筋炎（ｎ＝３０）、シェーグレン症候群（ｎ＝１６）、慢性関節リウマチ（ｎ＝３２）、ヴェグナー肉芽腫症（ｎ＝５）、Ｃ型肝炎（ｎ＝３）、脈管炎（ｎ＝２）、原発性レイノー現象（ｎ＝４）、血友病（ｎ＝１）、乾癬性関節炎（ｎ＝２）、および抗リン脂質症候群（ｎ＝１）が含まれていた。診断は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ（ピッツバーグ大学医療センター）にて、この患者らに治療に当たっている様々な外来患者施設の準専門医が確認した。
【００９３】
健常コントロール：健常コントロールは、ピッツバーグ大学内での宣伝紙配布を通じて動員された。彼らの健康状態を確認するため、参加者は、明白な医学的状態を問う短い質問紙に回答した。
【００９４】
（網状赤血球ならびに赤血球のフローサイトメトリー特性）
通院時に、各調査参加者について３ｍｌの血液サンプルを、抗凝集剤としてＥＤＴＡを含有するＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）試験管に採取し（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）、採取した同じ日に検査のために使用した。リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）で全血球を洗浄してＰＢＳで稀釈し、間接免疫蛍光染色のために分注した。ヒトＣ４ｄに特異的なマウスモノクローナル抗体（Ｃ４のＣ４ｄ含有フラグメントと反応する。Ｑｕｉｄｅｌ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、あるいはアイソタイプが一致するコントロールＭＯＰＣ２１を、１０μｇ／ｍｌの濃度で細胞懸濁液に加えた。フィコエリトリン（ＰＥ）結合抗マウスＩｇＧヤギＦ（ａｂ’）２（Ｃａｐｐｅｌ）を、１０μｇ／ｍｌの濃度で使用した。抗体染色の後、細胞懸濁液を、網状赤血球同定のためのチアゾールオレンジ（ＲｅｔｉｃＣｏｕｎｔＴＭ  試薬；Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）と共に、あるいはビヒクルコントロールとしてＰＢＳと共に、インキュベートした。染色された細胞を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーターならびにＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウエア（両方ともＢｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を使用するフローサイトメトリーによって分析した。赤血球は、前方側方散乱特性に基づいて、電子工学的に選別した。網状赤血球は、前方側方散乱特性およびＲｅｔｉｃＣｏｕｎｔＴＭ染色陽性に基づいて、電子工学的に選別した。網状赤血球あるいは赤血球表面上のＣ４ｄレベルは、蛍光強度中央値比（Ｃ４ｄ特異的蛍光中央値とアイソタイプコントロールの蛍光強度中央値との差：ＳＭＦＩ）として表した。
【００９５】
（統計分析）
平均、中央値、標準偏差、ならびに範囲を含む記述統計値を、連続的データに関して計算し、頻度分布をカテゴリ変数に関して判定した。３つのグループの調査参加者（ＳＬＥ患者、他の疾患を有する患者、ならびに健常コントロール）の、Ｒ−Ｃ４ｄおよびＥ−Ｃ４ｄにおける差を、クラスカル−ウォリス検定によって比較し、続いてウィルコクソンの順位和検定によって、２つの調査グループ間それぞれの統計的有意差を判定した。スピアマン順位相関法を用いて、Ｒ−Ｃ４ｄならびにＥ−Ｃ４ｄの、ＳＬＡＭならびにＳＬＥＮＡ−ＳＬＥＤＡＩによって測定した疾患活動との関連性を判定した。ウィルコクソンの順位和検定を用いて、異なるＲ−Ｃ４ｄならびにＥ−Ｃ４ｄレベルを有するＳＬＥ患者の、第１四分位グループと他の四分位グループとの間の、ＳＬＡＭあるいはＳＬＥＮＡ−ＳＬＥＤＡＩスコアの有意差を分析した。傾向に関するχ２検定を用いて、四分位グループのＲ−Ｃ４ｄレベルと、ＳＬＥの特異的臨床的発現および血清学的発現の存在との間の関連性を評価した。様々な検定の統計的有意性を、Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）用Ｉｎｔｅｒｃｏｏｌｅｄ  ＳＴＡＴＡ  ７．０（Ｃｏｌｌｅｇｅ  Ｓｔａｔｉｏｎ，ＴＸ）を使用する両側仮説検定で評価した。ｐ＜０．０５での差異を有意とみなした。
【００９６】
（結果）
（調査参加者の特性）
調査集団は、ＳＬＥ患者１５６人、健常コントロール１５９人、および他の免疫仲介疾患あるいは炎症疾患、血液疾患を有する患者１４０から構成された。ＳＬＥ参加者の平均年齢は４３．７８＋／−１２．１８であり、その８２．７％が白人系で、９５．５％が女性であった。ＳＬＥ患者の他の人口統計的特性ならびに臨床的特性を表３に示す。このグループには、新規発症患者と長期にわたり疾患を有する患者との両方が含まれ、ＳＬＡＭならびにＳＥＬＥＮＡ−ＳＬＥＤＡＩスコアにて反映されているように、疾患活動は幅広く、関係する器官は広範囲にわたっている。健常コントロール参加者の平均年齢は４３．５５＋／−１３．４５であり、その８５％が白人系で、９１％が女性であった。他の疾患グループの調査参加者は、平均年齢が５２．２０＋／−１３．８１であり、その９３％が白人系で、７９．６％が女性であった。
【００９７】
（表３  全身性エリテマトーデスを有する患者１５６人の臨床的特性）
【００９８】
【表３】
2007532885.tif 000012
ａ  平均値±ＳＤ、範囲として記した値。
ｂ  個々の患者がＳＬＥと診断されて以来、臨床的発現が存在していれば、臨床的発現を陽性とした。特に記載のない限り、記載したものの発現の陽性履歴を有する患者の割合（％）。
ｃ  調査通院の時点での、抗ｄｓＤＮＡ陽性の患者の割合（％）、もしくは血清Ｃ３あるいはＣ４が正常レベルより低い割合（％）（ｎ＝１５５）。
ｄ  ＳＬＡＭ（全身性狼瘡活動指標）およびＳＥＬＥＮＡ−ＳＬＥＤＡＩ（全身性エリテマトーデス疾患活動指数の、紅斑性狼瘡におけるエストロゲンの安全性の全国調査版）。
ｅ  調査通院時点でのＳＬＡＭおよびＳＬＥＤＡＩスコア。
【００９９】
（調査参加者における、網状赤血球上のＣ４ｄレベルの比較）
本発明者らが行った以前の研究（Ｍａｎｚｉ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．，５０：３５９６−３６０４（２００４））ならびに他の者が行った以前の研究（Ｔｉｅｌｅｙ  ＣＡ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２７６：７１３−７１５（１９７８）；Ａｔｋｉｎｓｏｎ  ＪＰ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ，５：６５−７６（１９８８））は、赤血球表面上に、補体活性化産物であるＣ４ｄが存在することを示している。疾患活動の生物マーカーとしてのＲ−Ｃ４ｄの潜在力を評価するため、本発明者らは最初に、網状赤血球上のＣ４ｄ沈着を実証する。２色フローサイトメトリー分析を使用し、本発明者らは、健常個体、ＳＬＥ患者、ならびに他の疾患を有する患者の網状赤血球上に存在するＣ４ｄを試験して比較するための横断的研究をいった。初期の研究によって、全ての健常コントロールおよび大半の他の疾患を有する患者の、網状赤血球上にて検出することのできたＣ４ｄ（Ｒ−Ｃ４ｄ）は、変動があるものの一般には低レベルであることが示された（図４Ａおよび表２）。反対に、多くのＳＬＥ患者の網状赤血球上では、著しく高レベルのＣ４ｄが検出された（図４Ａ）。Ｒ−Ｃ４ｄ特異的蛍光中央値レベルを全調査集団に関してまとめると、ＳＬＥ患者の平均Ｒ−Ｃ４ｄ量（５．５０＋／−９．０１；範囲０−６６．８１）は、健常コントロール（ｐ＜０．０００１）あるいは他の疾患を有する患者（ｐ＜０．０００１）にて認められる値よりも、有意に高かった（表４）。
【０１００】
（表４  ＳＬＥ患者、他の疾患を有する患者、ならびに健常コントロールにおける、網状赤血球結合Ｃ４ｄレベルと赤血球結合Ｃ４ｄレベル＊との比較）
【０１０１】
【表４】
2007532885.tif 000013
＊  示したデータは、Ｃ４ｄ特異的蛍光強度中央値（ＳＭＦＩ）を表す。
ａ  ウィルコクソン順位和検定によって分析した、ＳＬＥ患者と他の疾患の患者との間の差異。
ｂ  ウィルコクソン順位和検定によって分析した、ＳＬＥ患者と健常コントロールとの間の差異。
【０１０２】
縦断的研究によって示されたように、健常コントロールならびに他の疾患の患者では、Ｒ−Ｃ４ｄレベルは比較的一定に留まっていた。図４Ｂは、代表的な健常コントロールならびに他の疾患の患者それぞれから得られた結果をまとめてあり、数日、数ヶ月、ならびに数年に渡ってＲ−Ｃ４ｄレベルはかなり類似していた。しかし、ＳＬＥ患者の内のかなりの割合のＲ−Ｃ４ｄレベルは、時間経過と共に著しく変動した（図１Ｃならびに１Ｄ）。
【０１０３】
（Ｒ−Ｃ４ｄレベルとＳＬＥ疾患活動との相関）
広範囲に疾患活動を呈する本発明者らのＳＬＥ患者集団によって、１回の通院の間に、Ｒ−Ｃ４ｄの疾患活動を反映する能力を判定することができた。ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩ（ｒ＝０．４５、ｐ＜０．００００１）との相関は、ＳＬＡＭ（ｒ＝０．２３、ｐ＝０．００３）よりも高かったが、両方の疾患活動指数とも、Ｒ−Ｃ４ｄと有意に関連していた。さらなる分析のため、本発明者らは、最低レベルのＲ−Ｃ４ｄを有する最下位四分位にある患者とともに、Ｒ−Ｃ４ｄレベルに従ってこのＳＬＥ調査研究参加者をランク付けして、４つの増加グループに分別した。調査通院時の各患者の疾患活動は、ＳＥＬＥＮＡ−ＳＬＥＤＡＩおよび  ＳＬＡＭ疾患活動指数を用いて判定した（表５）。また、狼瘡疾患活動を反映する可能性のある他の検査値（例えば抗ｄｓＤＮＡ、全血算定、血清補体レベルなど）も、Ｒ−Ｃ４ｄの四分位との関係にて調べた。
【０１０４】
（表５  Ｒ−Ｃ４ｄと、Ｅ−Ｃ４ｄとＳＬＥ疾患活動との間の相関）
【０１０５】
【表５】
2007532885.tif 000014
ａ  第１四分位対第２四分位；ウィルコクソン順位和検定
ｂ  第１四分位対第３四分位；ウィルコクソン順位和検定
ｃ  第１四分位対第４四分位；ウィルコクソン順位和検定
ｄ  傾向に関するχ２乗検定によって分析した増加傾向の有意性
Ｎ．Ｓ．：有意差なし
全てのＳＬＥ患者の疾患活動スコアをまとめると、ペアワイズ比較において、ＳＥＬＥＮＡ−ＳＬＥＤＡＩスコアの中央値は、４つのグループ間で有意に異なっていた（ｐ＝０．０２２；ｐ＝０．０００１；ｐ＝０．００００２）（表５）。また、ＳＬＡＭスコア中央値も、４つのグループ間で異なっていたが、その差異は、最も高レベルのＲ−Ｃ４ｄを有する最高四分位のＳＬＥ患者と、最も低レベルのＲ−Ｃ４ｄを有する最低四分位のＳＬＥ患者との間でのみ、統計的に有意なものであった（ｐ＜０．０２）。またＲ−Ｃ４ｄはまた、抗ｄｓＤＮＡ（ｐ＝０．００７）、貧血（ｐ＜０．０２５）、ならびに血小板減少症（ｐ＜０．０１６）を含む特定の疾患変数に有意に相関することが認められた。
【０１０６】
比較すると、Ｅ−Ｃ４ｄは、Ｒ−Ｃ４ｄ（ｒ＝０．４６、ｐ＜０．００００１）ほど強くはないが、ＳＥＬＥＮＡ−ＳＬＥＤＡＩと有意に関連していた（ｒ＝０．３７、ｐ＜０．００００１）。Ｅ−Ｃ４ｄはＳＬＡＭとは有意に相関していなかった（ｒ＝０．１４、ｐ＝０．０７）。Ｅ−Ｃ４ｄレベルに従って順位づけしたＳＬＥ患者の、疾患活動スコアをまとめ、この結果も表５に示す。
【０１０７】
（実施例３：Ｒ−Ｃ４ｄレベルとＳＬＥ疾患活動との相関、症例研究）
健常コントロールおよび他の疾患を有する患者のＲ−Ｃ４ｄレベルは低く、時間が経過しても安定していた（図４Ｂ）。反対に、ＳＬＥを有する患者では３つのパターンが観察された。第１グループの患者のＲ−Ｃ４ｄは、安定して低レベルであった（図４Ｃ）。第２グループ患者のＲ−Ｃ４ｄレベルは最初の通院時には有意に上昇していたが、その後の通院時には減少していた（図４Ｃ）。第３グループ患者のＲ−Ｃ４ｄレベルは時間経過と共に（９〜２６ヶ月）変動した。
【０１０８】
次の４つの症例報告を提示し、Ｒ−Ｃ４ｄがＳＬＥの臨床過程に伴って変動する能力を実証する。これらの例示的な例において、Ｒ−Ｃ４ｄ測定値を、ＳＬＥを有する患者の臨床的治療において用いられる２つの「判断基準となる」研究室試験：２つの疾患活動指数であるＳＬＡＭおよびＳＬＥＤＡＩによる血清Ｃ４ならびにｄｓＤＮＡ抗体の力価、および全身性炎症の非特異的測定値であるＥＳＲと比較する。さらに、本発明者らは、Ｅ−Ｃ４ｄの有用性をＲ−Ｃ４ｄと比較する。
【０１０９】
症例Ａ：患者ＪＮは１９歳の白人女性であり、２００２年４月にＳＬＥと診断された。彼女のＳＬＥは、炎症性関節炎、発疹、脱毛、口腔潰瘍、疲労、発熱、抗核抗体［１：３２０、均質型］、抗二本鎖ＤＮＡ抗体［５０；正常＜２］、抗カルジオリピン抗体［ＩｇＧ、２９］の存在、およびＥＳＲの若干の上昇［２８ｍｍ／時；正常０〜２０］として顕れていた。彼女は自分の薬物適用（ヒドロキシクロロキンおよびメトトレキサート）に従わず、２００２年１１月の最初の調査通院時に５ｍｇ／日のプレドニゾンを摂取したのみであった（図５Ａ）。この通院時に、彼女は疲労を訴え、活発な関節炎と口腔潰瘍の形跡があった。彼女の研究室試験が示したのは、血清Ｃ４が未検出［＜１０］、ＥＳＲが若干の上昇［２５ｍｍ／時］、ならびに抗ｄｓＤＮＡ［５０］であり、Ｒ−Ｃ４レベル［１１］およびＥ−Ｃ４ｄレベル［３３］は両方とも上昇していた。この患者は、ヒドロキシクロロキンおよびメトトレキサートの適用を再開した。ＪＮは、２００２年１２月に、高熱と頭痛を伴って救急室に入り、この時、彼女の血清Ｃ４は依然未検出でＥＳＲは２０ｍｍ／時に減少していた。反対に、Ｒ−Ｃ４ｄ［２９］およびＥ−Ｃ４ｄ［４７］は両方とも顕著に上昇しており、これは疾患活動の増大を示唆している。抗ｄｓＤＮＡは測定しなかった。彼女は入院した。感染に関する完全な評価は陰性であった。彼女は治療を変更することなく退院した。２００３年１月１０日、ＪＮは新たな蛋白尿、腎不全の発症、および全身症状悪化のため入院した。腎臓生検の後、糸球体間質性糸球体腎炎という診断が示された。この時点で、血清Ｃ４は検出可能レベルまで上昇し「１１」、抗ｄｓＤＮＡ力価は１０に減少した。両方の研究室試験とも狼瘡活動改善の可能性、あるいは活動変化のないことを示唆するものであった。反対に、この時点までに、Ｅ−Ｃ４ｄ［７９］とＲ−Ｃ４ｄ［５２］は顕著に上昇し、これは、臨床的印象および腎臓生検と一致して、疾患の拡大を示唆するものであった。３日間適用量１０００  ｍｇのソルメドロール、続いて経口的にプレドニゾン、ヒドロキシクロロキン、およびマイコフェノレートモフェチル（ＣｅｌｌＣｅｐｔ）を用いる集中治療の後、ＪＮの状態は改善されて血清クレアチンレベルは減少し［１．２から０．７ｍｇ／ｄＬ］、発熱および関節痛は消散した。２００３年１月２９日までに、彼女のＥ−Ｃ４ｄは有意には変化しなかったが［７９から７７］、Ｒ−Ｃ４ｄレベルは５２から２４に減少した。反対に血清Ｃ４は低いままであって有意には変化しなかった［１２］。Ｅ−Ｃ４ｄ［７７］、ＥＳＲ［４２］は上昇し、かつＣ４が異常［１２］であったにもかかわらず、臨床的印象は改善されて、介入に対して応答し、これはＲ−Ｃ４ｄの顕著な減少と一致した。彼女へのプレドニゾン投与量を減らした。この印象は２００３年３月３１日に確認され、この時点でこの患者は症状がない状態に回復した。この時点までに、Ｒ−Ｃ４ｄおよびＥ−Ｃ４ｄは、それぞれ１１および１９に減少した。しかし、Ｃ４は依然１５と低く、抗ｄｓＤＮＡは１０に上昇していた。これは１月１０日の発赤のピーク時に認められた値と同じであった。
【０１１０】
症例Ｂ：患者ＭＨは４０歳のアフリカ系アメリカ人女性であり、１９９０年にＳＬＥと診断されたが薬物適用歴はなかった。彼女は耳感染および関節炎悪化のため、２００２年５月の１回目の調査通院の２、３週間前に入院した。１回目の調査通院時までに、彼女の症状は４０ｍｇ／日のプレドニゾンによって改善した。Ｅ−Ｃ４ｄの顕著な上昇［９０］および中程度に高いＲ−Ｃ４ｄレベル［２９］を検出し、これは最近の発赤と一致する。治療に対する反応は、２００２年７月の次の通院時に、Ｅ−Ｃ４ｄレベルおよびＲ−Ｃ４ｄレベルが有意に減少していたことによって確認された。２００３年４月の３回目の調査通院時、ＭＨは関節炎の悪化および皮膚発疹を体験していた。彼女は、これ以前の２ヶ月間、全ての薬物適用には従っていなかったと報告した。その時点で、彼女のＲ−Ｃ４ｄレベルはその前の通院時と比較して有意に上昇しており、これは彼女が発赤を報告したことに一致する。この発赤は、デポメドロール注射、続く経口メドロールによって処置され、成功した。彼女は、その後数ヶ月間、全ての症状が顕著に消散したと報告し、これはＲ−Ｃ４ｄレベルが正常範囲にあることと一致した（図５Ｂ）。
【０１１１】
症例Ｃ：患者ＣＭは、１９９７年にＳＬＥと診断された３８歳のアフリカ系アメリカ人女性であり、円盤状病変、関節炎、および抗リン脂質抗体症候群が顕れていた。２００２年４月、ＣＭは、２週間に渡る多発関節炎が顕れる発赤の病歴があったことを報告した。これは、メドロール用量パックで処置した。この患者は、２００２年５月の１回目の調査通院時までに顕著に改善したと報告し、彼女はその後継続して無症状であった（図５Ｃ）。抗ｄｓＤＮＡは依然陽性であり、かつ血清Ｃ４は異常に低いにもかかわらず、Ｒ−Ｃ４ｄレベルは治療に反応して減少し、１６ヶ月の無症状期の間継続して低かった。
【０１１２】
症例Ｄ：患者ＭＫは、１９８５年にＳＬＥと診断された３８歳の白人系女性であり、頬の発疹、光過敏性、関節炎および胸膜炎が顕れていた。２０ヶ月に渡る５回の調査通院の間、彼女は無症状のままであった。血清Ｃ４レベルは異常、かつ抗ｄｓＤＮＡ陽性は変動していたにもかかわらず、Ｒ−Ｃ４ｄレベルは正常なままであった（図５Ｄ）。
【０１１３】
上記の発明は、明確な理解を目的とした説明および例示のために、一部詳細に記述したが、本発明の教示を考慮して、添付の特許請求の範囲の精神または範囲から逸脱しない一定の変更および改変が本発明になされ得ることは、当業者には容易に明白である。
【０１１４】
本明細書中に引用される全ての出版物および特許出願は、それぞれ個々の出版物または特許出願が個々に詳細に参考として援用されることが示されるように、本明細書中に参考として援用される。
【図面の簡単な説明】
【０１１５】
【図１】図１は、ＳＬＥを有する患者ならびに健常コントロールに関する蛍光中央値をプロットするグラフを提供する。Ｒ−Ｃ４は、網状赤血球表面上のＣ４ｄレベルを指す。ＳＬＥ患者についての値を左側に示し、健常コントロールについての値を右側に示す。
【図２】図２は、３個体のＳＬＥ患者各々に由来する２色フローサイトメトリーデータを提供する。Ｃ４ｄレベルを右図に示し、一致するアイソタイプのコントロールを左図に示す。２色フローサイトメトリーは、標識した抗Ｃ４ｄ抗体（Ｙ軸）と標識した抗トランスフェリン受容体抗体（Ｘ軸）とを使用して実行した。Ｃ４ｄ陽性の網状赤血球は、パネルの右上四分割区に示される。３人のＳＬＥ患者からの結果を示す。網状赤血球の９３％、４７．８％、ならびに１４．５％がＣ４ｄ染色を呈した。コントロール抗体は網状赤血球に結合せず、これはこのＣ４ｄ抗体結合が特異的なものであることを示す。
【図３】図３は、２００２年２月（上段）、２００２年７月（中段）、２００２年８月（下段）の、３つの時点での、ＳＬＥ患者由来の網状赤血球上のＣ４ｄレベルを示すデータを提供する。例えば赤血球ならびに網状赤血球などの未分画赤血球のＣ４ｄ染色を左列に示す。中列は、それぞれの時点での、標識抗Ｃ４ｄ抗体（Ｙ軸）および標識抗トランスフェリン受容体抗体（Ｘ軸）を使用する２色フローサイトメトリーを示す。Ｃ４ｄ陽性の網状赤血球は、パネルの右上四分割区に示される。右列は、それぞれの時点での、赤血球ならびに網状赤血球上のＣ４ｄレベルの比較を示す。赤血球と網状赤血球は密度勾配遠心法によって分離した。最も日数のたった細胞が分画１に最初に溶出される。網状赤血球は分画１５に溶出する最も若い細胞と共に確認される。縦軸は細胞表面上のＣ４ｄレベルを示す。
【図４Ａ】図４Ａ−Ｄは、ＳＬＥ患者では網状赤血球Ｃ４ｄレベルが著しく上昇しており、時間経過ともに変動することを示している。（Ａ）ＳＬＥ患者由来の網状赤血球は、他の疾患を有する患者あるいは健常コントロール由来の網状赤血球よりも、有意に高いレベルのＣ４ｄを有している。Ｙ軸で示すのは、１５６人のＳＬＥ患者、１４０人の他の疾患の患者、ならびに１５９人の健常コントロールの網状赤血球についての、Ｃ４ｄ特異的蛍光強度中央値である。（Ｂ）Ｒ−Ｃ４ｄレベルは、健常コントロールおよび他の疾患を有する患者では、時間が経過しても依然安定している。３回あるいは４回の異なる調査通院時に検査した、７人の健常コントロールならびに１６人の非ＳＬＥ自己免疫疾患患者（強皮症１名、炎症性筋障害７名、シェーグレン症候群１名、慢性関節リウマチ６名、ならびに抗リン脂質抗体症候群１名）の、Ｒ−Ｃ４ｄレベルを示す。（ＣおよびＤ）Ｒ−Ｃ４ｄレベルは、ＳＬＥを有する患者のかなりの割合において変動する。３回から５回までの異なる調査通院時に検査した、ＳＬＥを有する６４人の患者のＲ−Ｃ４ｄレベルが示される。３７人の患者では、Ｒ−Ｃ４ｄは安定して低かった。９人の患者では、Ｒ−Ｃ４ｄは最初の通院時に上昇していたがその後の通院時には減少した。Ｒ−Ｃ４ｄの著しい変動が１８人の患者に認められた。図５Ａ〜Ｄに示した症例研究のために、異なるＲ−Ｃ４ｄのパターンを有する代表的な患者を選択した。
【図４Ｂ】図４Ａ−Ｄは、ＳＬＥ患者では網状赤血球Ｃ４ｄレベルが著しく上昇しており、時間経過ともに変動することを示している。（Ａ）ＳＬＥ患者由来の網状赤血球は、他の疾患を有する患者あるいは健常コントロール由来の網状赤血球よりも、有意に高いレベルのＣ４ｄを有している。Ｙ軸で示すのは、１５６人のＳＬＥ患者、１４０人の他の疾患の患者、ならびに１５９人の健常コントロールの網状赤血球についての、Ｃ４ｄ特異的蛍光強度中央値である。（Ｂ）Ｒ−Ｃ４ｄレベルは、健常コントロールおよび他の疾患を有する患者では、時間が経過しても依然安定している。３回あるいは４回の異なる調査通院時に検査した、７人の健常コントロールならびに１６人の非ＳＬＥ自己免疫疾患患者（強皮症１名、炎症性筋障害７名、シェーグレン症候群１名、慢性関節リウマチ６名、ならびに抗リン脂質抗体症候群１名）の、Ｒ−Ｃ４ｄレベルを示す。（ＣおよびＤ）Ｒ−Ｃ４ｄレベルは、ＳＬＥを有する患者のかなりの割合において変動する。３回から５回までの異なる調査通院時に検査した、ＳＬＥを有する６４人の患者のＲ−Ｃ４ｄレベルが示される。３７人の患者では、Ｒ−Ｃ４ｄは安定して低かった。９人の患者では、Ｒ−Ｃ４ｄは最初の通院時に上昇していたがその後の通院時には減少した。Ｒ−Ｃ４ｄの著しい変動が１８人の患者に認められた。図５Ａ〜Ｄに示した症例研究のために、異なるＲ−Ｃ４ｄのパターンを有する代表的な患者を選択した。
【図４Ｃ】図４Ａ−Ｄは、ＳＬＥ患者では網状赤血球Ｃ４ｄレベルが著しく上昇しており、時間経過ともに変動することを示している。（Ａ）ＳＬＥ患者由来の網状赤血球は、他の疾患を有する患者あるいは健常コントロール由来の網状赤血球よりも、有意に高いレベルのＣ４ｄを有している。Ｙ軸で示すのは、１５６人のＳＬＥ患者、１４０人の他の疾患の患者、ならびに１５９人の健常コントロールの網状赤血球についての、Ｃ４ｄ特異的蛍光強度中央値である。（Ｂ）Ｒ−Ｃ４ｄレベルは、健常コントロールおよび他の疾患を有する患者では、時間が経過しても依然安定している。３回あるいは４回の異なる調査通院時に検査した、７人の健常コントロールならびに１６人の非ＳＬＥ自己免疫疾患患者（強皮症１名、炎症性筋障害７名、シェーグレン症候群１名、慢性関節リウマチ６名、ならびに抗リン脂質抗体症候群１名）の、Ｒ−Ｃ４ｄレベルを示す。（ＣおよびＤ）Ｒ−Ｃ４ｄレベルは、ＳＬＥを有する患者のかなりの割合において変動する。３回から５回までの異なる調査通院時に検査した、ＳＬＥを有する６４人の患者のＲ−Ｃ４ｄレベルが示される。３７人の患者では、Ｒ−Ｃ４ｄは安定して低かった。９人の患者では、Ｒ−Ｃ４ｄは最初の通院時に上昇していたがその後の通院時には減少した。Ｒ−Ｃ４ｄの著しい変動が１８人の患者に認められた。図５Ａ〜Ｄに示した症例研究のために、異なるＲ−Ｃ４ｄのパターンを有する代表的な患者を選択した。
【図４Ｄ】図４Ａ−Ｄは、ＳＬＥ患者では網状赤血球Ｃ４ｄレベルが著しく上昇しており、時間経過ともに変動することを示している。（Ａ）ＳＬＥ患者由来の網状赤血球は、他の疾患を有する患者あるいは健常コントロール由来の網状赤血球よりも、有意に高いレベルのＣ４ｄを有している。Ｙ軸で示すのは、１５６人のＳＬＥ患者、１４０人の他の疾患の患者、ならびに１５９人の健常コントロールの網状赤血球についての、Ｃ４ｄ特異的蛍光強度中央値である。（Ｂ）Ｒ−Ｃ４ｄレベルは、健常コントロールおよび他の疾患を有する患者では、時間が経過しても依然安定している。３回あるいは４回の異なる調査通院時に検査した、７人の健常コントロールならびに１６人の非ＳＬＥ自己免疫疾患患者（強皮症１名、炎症性筋障害７名、シェーグレン症候群１名、慢性関節リウマチ６名、ならびに抗リン脂質抗体症候群１名）の、Ｒ−Ｃ４ｄレベルを示す。（ＣおよびＤ）Ｒ−Ｃ４ｄレベルは、ＳＬＥを有する患者のかなりの割合において変動する。３回から５回までの異なる調査通院時に検査した、ＳＬＥを有する６４人の患者のＲ−Ｃ４ｄレベルが示される。３７人の患者では、Ｒ−Ｃ４ｄは安定して低かった。９人の患者では、Ｒ−Ｃ４ｄは最初の通院時に上昇していたがその後の通院時には減少した。Ｒ−Ｃ４ｄの著しい変動が１８人の患者に認められた。図５Ａ〜Ｄに示した症例研究のために、異なるＲ−Ｃ４ｄのパターンを有する代表的な患者を選択した。
【図５Ａ】図５Ａ〜Ｄは、Ｒ−Ｃ４ｄが変動し、ＳＬＥの臨床的過程を反映することを例証する。各々の代表的なＳＬＥ患者由来の網状赤血球Ｃ４ｄ（Ｒ−Ｃ４ｄ）ならびに赤血球Ｃ４ｄ（Ｅ−Ｃ４ｄ）の経時的検査値を示す。グラフパネル内の各点近くにに示される数字は、Ｃ４ｄ特異的蛍光強度中央値である。付加的な病歴および他の検査結果に関しては実施例４を参照のこと。正常検査値は、血清Ｃ４濃度が２０〜５９ｍｇ／ｄＬ、ＥＳＲが０〜２０ｍｍ／時、抗−ｄｓＤＮＡは用いた検査の種類に応じて＜２あるいは＜１：１０である。
【図５Ｂ】図５Ａ〜Ｄは、Ｒ−Ｃ４ｄが変動し、ＳＬＥの臨床的過程を反映することを例証する。各々の代表的なＳＬＥ患者由来の網状赤血球Ｃ４ｄ（Ｒ−Ｃ４ｄ）ならびに赤血球Ｃ４ｄ（Ｅ−Ｃ４ｄ）の経時的検査値を示す。グラフパネル内の各点近くにに示される数字は、Ｃ４ｄ特異的蛍光強度中央値である。付加的な病歴および他の検査結果に関しては実施例４を参照のこと。正常検査値は、血清Ｃ４濃度が２０〜５９ｍｇ／ｄＬ、ＥＳＲが０〜２０ｍｍ／時、抗−ｄｓＤＮＡは用いた検査の種類に応じて＜２あるいは＜１：１０である。
【図５Ｃ】図５Ａ〜Ｄは、Ｒ−Ｃ４ｄが変動し、ＳＬＥの臨床的過程を反映することを例証する。各々の代表的なＳＬＥ患者由来の網状赤血球Ｃ４ｄ（Ｒ−Ｃ４ｄ）ならびに赤血球Ｃ４ｄ（Ｅ−Ｃ４ｄ）の経時的検査値を示す。グラフパネル内の各点近くにに示される数字は、Ｃ４ｄ特異的蛍光強度中央値である。付加的な病歴および他の検査結果に関しては実施例４を参照のこと。正常検査値は、血清Ｃ４濃度が２０〜５９ｍｇ／ｄＬ、ＥＳＲが０〜２０ｍｍ／時、抗−ｄｓＤＮＡは用いた検査の種類に応じて＜２あるいは＜１：１０である。
【図５Ｄ】図５Ａ〜Ｄは、Ｒ−Ｃ４ｄが変動し、ＳＬＥの臨床的過程を反映することを例証する。各々の代表的なＳＬＥ患者由来の網状赤血球Ｃ４ｄ（Ｒ−Ｃ４ｄ）ならびに赤血球Ｃ４ｄ（Ｅ−Ｃ４ｄ）の経時的検査値を示す。グラフパネル内の各点近くにに示される数字は、Ｃ４ｄ特異的蛍光強度中央値である。付加的な病歴および他の検査結果に関しては実施例４を参照のこと。正常検査値は、血清Ｃ４濃度が２０〜５９ｍｇ／ｄＬ、ＥＳＲが０〜２０ｍｍ／時、抗−ｄｓＤＮＡは用いた検査の種類に応じて＜２あるいは＜１：１０である。
【図１】
2007532885.tif 000015
【図２】
2007532885.tif 000016
【図３】
2007532885.tif 000017
【図４Ａ】
2007532885.tif 000018
【図４Ｂ】
2007532885.tif 000019
【図４Ｃ】
2007532885.tif 000020
【図４Ｄ】
2007532885.tif 000021
【図５Ａ】
2007532885.tif 000022
【図５Ｂ】
2007532885.tif 000023
【図５Ｃ】
2007532885.tif 000024
【図５Ｄ】
2007532885.tif 000025
【国際調査報告】
2007532885.tif 000026