(57)【要約】ヒトにおいて継続的かつ周期的なインターフェロン−τ投与に応答するヒトの疾患またはヒトの状態を処置する方法における改良が提供され、この改良は、患者の血清ＩＬ−１０応答に応じて患者に投与される用量を調整する工程に従う。継続的かつ周期的なＩＦＮ−τの投与に対する疾患または状態を有するヒト被験体の処置は、複数の時点における患者の血清ＩＬ−１０レベルをモニタリングし、そして正の治療応答と一致するＩＬ−１０応答を形成するためにＩＦＮ−τの用量を調整することを可能にする最初の処置期間にわたって、患者のＩＬ−１０応答（基線値に対する血清ＩＬ−１０の変化）を比較することによって最適化され得ることが、見出された。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトにおける継続的かつ周期的なインターフェロン−τ投与に応答する、ヒトの疾患またはヒトの状態に関する処置において、改良が、以下：
（ａ）所定の期間にわたる複数の時点の各々において、選択されたインターフェロン−τの治療的に望ましい量を、そのような疾患または状態を有するヒト被験体に投与する工程、
（ｂ）該所定の期間の間の複数の時点の各々において、該被験体中の血清ＩＬ−１０のレベルを測定し、該期間にわたる該被験体におけるＩＬ−１０応答を決定する工程、および
（ｃ）工程（ｂ）において決定されたＩＬ−１０応答に基づいて、該ヒト被験体に投与されるインターフェロン−τの用量を調整し、適切な場合、継続的なインターフェロン−τ投与に対する所望の応答に関する該被験体のＩＬ−１０応答を調整する工程、
を包含する、処置。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、所望のＩＬ−１０応答が達成されるまで、新たに調整した用量の各々で工程（ａ）〜工程（ｃ）を繰り返す工程をさらに包含する、方法。
【請求項３】
患者について決定される未処置の基線ＩＬ−１０値を少なくとも２５％上回る該患者のＩＬ−１０応答を達成するために、前記工程（ｃ）が調整される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
患者について決定される未処置の基線ＩＬ−１０値を少なくとも５０％上回る該患者のＩＬ−１０応答を達成するために、前記工程（ｃ）が調整される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
患者について決定される未処置の基線ＩＬ−１０値を少なくとも１００％上回る該患者のＩＬ−１０応答を達成するために、前記工程（ｃ）が調整される、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記投与する工程が、ヒツジインターフェロン−τまたはウシインターフェロン−τを投与する工程を包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記工程（ａ）において投与されるインターフェロン−τの治療的に望ましい量が、少なくとも約７×１０６単位／ｋｇ体重である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記工程（ａ）において投与されるインターフェロン−τの治療的に望ましい量が、少なくとも約７×１０７単位／ｋｇ体重である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記工程（ａ）が、少なくとも２週間の所定の処置期間にわたる少なくとも３回の時点の各々において、前記ヒト被験体に対して投与する工程を包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記工程（ｂ）が、曲線下面積の計算に基づいて前記処置期間にわたるＩＬ−１０応答レベルを決定する工程を包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記工程（ｂ）が、前記所定の期間の間の複数の時点の各々における前記被験体中の血清ＩＬ−１０のレベルおよび血中ＩＦＮ−γのレベルを測定する工程を包含し、そして該被験体中のＩＬ−１０応答が、ＩＦＮ−γ応答に対する該ＩＬ−１０応答の比として工程（ｂ）において決定される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記工程（ｂ）が、前記所定の期間の間の複数の時点の各々における前記被験体中の血清ＩＬ−１０のレベルおよび血中ＩＬ−１２のレベルを測定する工程を包含し、そして該被験体中のＩＬ−１０応答が、ＩＬ−１２応答に対するＩＬ−１０応答の比として工程（ｂ）において決定される、請求項１０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、ヒトにおけるインターフェロン−τ（ＩＦＮ−τ）投与に応答するヒトの疾患またはヒトの状態の処置を最適化する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
インターフェロン−τ（ＩＦＮ−τ）は、広範な種々の生物学的活性を有することが示されてきた。例えば、ＩＦＮ−τは、抗ウイルス因子および抗増殖因子としての生物学的活性を有し、そして自己免疫障害の処置に用いられてきた。従って、ＩＦＮ−τは、広範な種々の深刻な疾患（例えば、自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症、Ｉ型糖尿病およびエリテマトーデス；細胞増殖障害（種々の癌（例えば、ヘアリーセル白血病、カポジ肉腫、慢性骨髄性白血病、皮膚癌、腎細胞癌、および卵巣癌が挙げられる）；ウイルス性疾患（Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＨＩＶ感染、ＨＴＬＶ−１、およびＨＴＬＶ−ＩＩが挙げられる）が挙げられる）の処置において重量な役割を有する。
【０００３】
処置因子として、ＩＦＮ−τは、他のインターフェロンを上回るいくつかの重要な利点を有する。Ｉ型インターフェロンＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−β、ならびにＩＩ型インターフェロンＩＦＮ−γは、顕著な細胞障害性を示す。これらのインターフェロンによって発揮される有害な毒性作用は、臨床試験および患者の処置において観察され、そしてそれらとしては、インフルエンザに似た症状（例えば、発熱、悪寒および嗜眠；頻脈、悪心、体重減少、白血球減少症、および好中球減少症）が挙げられる（非特許文献１および非特許文献２）。対照的に、ＩＦＮ−τは、インビトロおよびインビボの両方において最小の細胞毒性を示す（例えば、特許文献１を参照のこと）。
【０００４】
さらに、ＩＦＮ−τは、良好な効力および効率を伴う胃腸管からの取り込みのために経口的に投与され得、非経口の注入経路を介する薬物による処置よりも慣習的な経口経路を介する薬物による処置を可能にする。このことは、より良好な患者のコンプライアンスを可能にし、そして患者の不快感を減少させる。この化合物を経口的に送達する能力は、胃腸管におけるタンパク質分解に対する感受性および／または腸からの吸収が相対的に乏しいことに起因して、ポリペプチドの経口的な投与が一般的にできないことを考慮して予期されていなかった。さらに、経口の投与経路は、注入されたＩＦＮ−τに対して、処置された実験動物の血清中の抗ＩＦＮ−τ抗体のレベルを大きく低下させることが見出されていた。特許文献２を参照のこと。
【０００５】
ＩＦＮ−τの所望の特徴に照らして、患者の処置応答を最適化することが望ましく；特に、患者が有効な用量で処置され、そして好ましくはその有効性に関して最適または最適に近い用量で処置されることが約束されることが望まれる。
【特許文献１】米国特許第６，０６０，４５０号明細書
【特許文献２】米国特許第６，３７２，２０６号明細書
【非特許文献１】Ｄｅｇｒｅ，Ｍ．、「Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ」、１９７４年、第１４巻、６９９〜７０３ページ
【非特許文献２】Ｆｅｎｔ，Ｋ．およびＺｂｉｎｄｅｎ，Ｇ．、「Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．」、１９８７年、第８巻、１００〜１０５ページ
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の要旨）
継続的かつ周期的なＩＦＮ−τの投与に対する疾患または状態を有するヒト被験体の処置が、複数の時点における患者の血清ＩＬ−１０レベルをモニタリングし、そして正の治療応答と一致するＩＬ−１０応答を形成するためにＩＦＮ−τの用量を調整することを可能にする最初の処置期間にわたって、患者のＩＬ−１０応答（基線値に対する血清ＩＬ−１０の変化）を比較することによって最適化され得ることが、見出された。従って、ヒトにおける継続的かつ周期的なＩＦＮ−τの投与に応答するヒトの疾患またはヒトの状態を処置する方法における改良が、提供される。
【０００７】
本発明の第１の局面において、ヒトにおける継続的かつ周期的なＩＦＮ−τ投与に応答するヒトの疾患またはヒトの状態を処置する方法における改良が、提供される。本方法は、（ａ）所定の期間にわたる複数の時点の各々において、選択されたＩＦＮ−τの治療的に望ましい量を、そのような疾患または状態を有するヒト被験体に投与する工程を包含する。所定の期間の間の複数の時点の各々において、患者の血清ＩＬ−１０レベルは、最初の処置期間にわたってその被験体中のＩＬ−１０レベルにおける変化を決定するために測定される。測定される血液の変化に基づいて（例えば、そのように決定される血清レベル）、患者について決定される血清ＩＬ−１０の基線値に関連して、ＩＦＮ−τの用量は調整され、適切な場合、継続的なＩＦＮ−τの投与に対する所望の応答に関する被験体のＩＬ−１０応答を調整する。この所望のＩＬ−１０応答は、その基線に対する所定の百分率の増加（例えば、血清ＩＬ−１０レベルの２５％、５０％、または１００％の増加）、またはＩＦＮ−τの投与によって、所定の状態が首尾よく処置されるヒト患者の群における平均的なＩＬ−１０応答であり得る。
【０００８】
種々の実施形態において、この投与する工程は、ヒツジＩＦＮ−τまたはウシＩＦＮ−τを投与する工程を包含し、そしてその化合物は、最初の処置期間において、少なくとも約１０７単位／患者の１日用量で経口的に投与され、そして１０９単位／患者以上と同じ高さ（それぞれ、約０．１ｍｇ／患者〜１０ｍｇ／患者に対応する）であり得る。
【０００９】
最初の処置期間の後、上記方法は、ＩＦＮ−τの、より高い用量またはより低い用量を用いて繰り返され得、この方法は、所望のＩＬ−１０応答によって証明するような治療応答が達成されるか否か、そして、そうでない場合は、この用量は、所望のＩＬ−１０応答の達成を試みるためにどのように調整されるべきであるかを決定するために再び評価されるＩＬ−１０を伴う。本発明の１つの実施形態において、このＩＬ−１０応答は、所定の期間の間の複数の時点において、上記被験体中の血清ＩＦＮ−γおよび／または血清ＩＬ−１２に関する応答に対するＩＬ−１０応答の比によって決定される。
【００１０】
なお他の局面において、この方法は、ヒトにおける継続的かつ周期的なＩＦＮ−τの投与に応答するヒトの疾患またはヒトの状態を処置する方法における改良を包含し、この改良は、最初の処置期間にわたるＩＦＮ−τ投与に対する、患者のＩＦＮ−γ応答（血清ＩＦＮ−γの変化）またはＩＬ−１２応答（血清ＩＬ−１２の変化）を測定する工程、およびＩＦＮ−τの用量を調整する工程によるものであり、適切な場合、継続的なＩＦＮ−τ投与に対する、所望の応答に関する被験体のＩＦＮ−γ応答またはＩＬ−１２応答を調整する。この所望の応答は、基線に対する所定の百分率の減少（例えば、血清ＩＦＮ−γまたはＩＬ−１２レベルの２５％、５０％、または１００％の減少）、またはＩＦＮ−τの投与によって、所定の状態が首尾よく処置されるヒト患者の群における平均的なＩＦＮ−γ応答もしくはＩＬ−１２応答であり得る。この方法は、例えば、多発性硬化症の処置に適用可能である。
【００１１】
本発明のこれらおよび他の目的ならびに特徴は、以下の発明の詳細な説明が添付の図面と組み合わせて読まれる場合に、より明確となる。
【００１２】
（配列の簡単な説明）
配列番号１は、ヒツジインターフェロン−τ（ＩＦＮτ）をコードする合成遺伝子のヌクレオチド配列である。
【００１３】
配列番号２は、成熟ヒツジインターフェロン−τ（ＩＦＮτ；ｏＴＰ−１；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｙ００２８７；ＰＩＤ  ｇ１３５８）のアミノ酸配列に対応する。
【００１４】
配列番号３は、成熟ヒツジＩＦＮτのアミノ酸配列に対応し、ここで、その配列の位置５および位置６におけるアミノ酸残基は、配列番号２の配列に対して改変される
配列番号４は、配列番号３のタンパク質をコードする合成ヌクレオチド配列である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
（発明の詳細な説明）
（Ｉ．定義）
特に明記されない限り、以下の用語は、本明細書中で以下の意味を有する：
「インターフェロン−タウ」（インターフェロン−τ、またはＩＦＮ−τと略される）とは、以下の特性の２つの群の各々に由来する少なくとも１つの特性を有するインターフェロンタンパク質のファミリーのいずれか１つをいう：（ｉ）（ａ）抗黄体融解（ａｎｔｉ−ｌｕｔｅｏｌｙｔｉｃ）特性、（ｂ）抗ウイルス特性、（ｃ）抗細胞増殖特性；および（ｉｉ）α−インターフェロンとの約４５％〜６８％のアミノ酸の相同性および公知のＩＦＮτ配列に対する７０％より高いアミノ酸の相同性（例えば、Ｏｔｔら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｒｅｓ．、１１：３５７（１９９１）；Ｈｅｌｍｅｒら、Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｆｅｒｔ．、７９：８３（１９８７）；Ｉｍａｋａｗａら、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、３：１２７（１９８９）；Ｗｈａｌｅｙら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６９：１０８４６（１９９４）；Ｂａｚｅｒら、ＷＯ  ９４／１０３１３（１９９４））。アミノ酸の相同性は、例えば、初期設定のパラメーターによるＬＡＬＩＧＮプログラムを使用して決定され得る。このプログラムは、配列比較プログラムのＦＡＳＴＡバージョン１．７スイート中に見出される（ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ、ＰＮＡＳ、８５：２４４４（１９８８）；Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１８３：６３（１９９０）；Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎから入手可能なプログラム、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｂｏｘ  ４４０、Ｊｏｒｄａｎ  Ｈａｌｌ、Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｓｖｉｌｌｅ、ＶＡ）。ＩＦＮτ配列は、種々の反芻動物種において同定されており、この動物種としては、ウシ（Ｂｏｖｉｎｅ種、ＨｅｌｍｅｒＳ．Ｄ．、Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｆｅｒｔ．、７９：８３（１９８７）；Ｉｍａｋａｗａ，Ｋ．、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．、１１９：５３２（１９８８））、ヒツジ（Ｏｖｉｎｅ種）、ジャコウウシ（Ｏｖｉｂｏｓ種）、キリン（Ｇｉｒａｆｆａ種、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ５５０５０）、ウマ（Ｅｑｕｕｓ  ｃａｂａｌｌｕｓ）、シマウマ（Ｅｑｕｕｓ  ｂｕｒｃｈｅｌｌｉ、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＣ００５０２７）、カバ（Ｈｉｐｐｏｐｏｔａｍｕｓ種）、ゾウ（Ｌｏｘｏｄｏｎｔａ種）、ラマ（Ｌｌａｍａ  ｇｌａｍａ）、ヤギ（Ｃａｐｒａ種、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＹ３５７３３６、同ＡＹ３５７３３５、同ＡＹ３４７３３４、同ＡＹ３５７３３３、同ＡＹ３５７３３２、同ＡＹ３５７３３１、同ＡＹ３５７３３０、同ＡＹ３５７３２９、同ＡＹ３５７３２８、同ＡＹ３５７３２７）、およびシカ（Ｃｅｒｖｉｄａｅ種）が挙げられるが、これに限定されない。多くのこれらの種についてのＩＦＮτのヌクレオチド配列は、公的データベースおよび／または文献において報告される（例えば、Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ａｎｄ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ．、１８：８０５（１９９８）、Ｌｅａｍａｎ  Ｄ．Ｗ．ら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｒｅｓ．、１２：１（１９９３）、Ｒｙａｎ，Ａ．Ｍ．ら、Ａｎｉｍ．Ｇｅｎｅｔ．、３４：９（１９９６）を参照のこと）。用語「インターフェロン−τ」は、上記に列挙される動物によって例示される任意の反芻動���種由来のＩＦＮ−τタンパク質を包含することを意図し、これらは、上記に列挙される以下の特性の２つの群の各々に由来する少なくとも１つの特性を有する。
【００１６】
「ヒツジＩＦＮ−τ（Ｏｖ  ＩＦＮ−τ）」とは、本明細書中で配列番号２として同定されるアミノ酸配列を有するタンパク質、ならびにタンパク質の活性に大きく影響しない中性アミノ酸置換のような、アミノ酸置換およびアミノ酸改変を有するタンパク質（例えば、本明細書中で配列番号３として同定されるＩＦＮ−τタンパク質）をいう。より一般的には、ヒツジＩＦＮ−τタンパク質は、配列番号２として同定される配列に対して、約８０％の配列相同性を有し、より好ましくは９０％の配列相同性を有するタンパク質である。配列相同性は、例えば、厳密なアミノ酸の比較または多くの市販のプログラムの１つを使用することによって決定される。
【００１７】
状態を「処置する」とは、この状態の症状を軽減し、そして／またはこの状態の重篤度を減少させるのに有効な治療物質を投与することをいう。
【００１８】
「経口」とは、口からの投与または胃もしくは腸への直接投与を含む任意の経路をいい、この直接投与としては、胃投与が挙げられる。
【００１９】
「腸」または「胃腸管」とは、胃の下部開口部から肛門まで達する消化管の部分をいい、小腸（十二指腸、空腸、および回腸）、および大腸（上行結腸、横行結腸、下行結腸、Ｓ状結腸、および直腸）から構成される。
【００２０】
「約７×１０６単位／ｋｇ体重より大きい投薬量」とは、体重７０ｋｇを超えるヒトに対して約５×１０８抗ウイルス単位より多いタンパク質を提供するのに十分なＩＦＮ−τの量をいい、ここでＩＦＮ−τのウイルス活性は、標準的な細胞変性効果阻害アッセイ（例えば、本明細書中の方法に関する節に記載されるアッセイ）を使用して測定される。５×１０８単位より大きい１日投薬量を提供するためのタンパク質の量（すなわち、ｍｇ）は、そのタンパク質の特定の抗ウイルス活性によって変化することが、理解される。ＩＦＮ−τに関する適切な特定の抗ウイルス活性は、約１×１０８抗ウイルス単位／ｍｇ精製タンパク質である。
【００２１】
ＩＦＮ−τの「治療的に望ましい量」は、所望の臨床的指標を達成することが予想されるＩＦＮ−τの量であり、この指標は、例えば、ＩＦＮ−τを用いて同じ状態について処置された他の患者によって示される応答に基づく。
【００２２】
「継続的なインターフェロン−τ投与に対する所望の応答」とは、患者が、治療的に有効な結果を生じることが予想されるＩＦＮ−τの用量レベルを受容することを示すＩＬ−１０応答をいう。上記所望の応答は、患者の基線ＩＬ−１０値を超える所定の百分率の増加（例えば、処置に応答する際の血清ＩＬ−１０レベルの２５％、５０％、もしくは１００％の増加、またはＩＦＮ−τの投与によって、所定の状態が首尾よく処置されるヒト患者の群における平均的なＩＬ−１０応答）であり得る。
【００２３】
「血清」ＩＬ−１０または「血清」ＩＬ−１２または「血清」ＩＦＮ−γとは、それぞれ、ＩＬ−１０またはＩＬ−１２またはＩＦＮ−γのレベルをいい、このレベルは代表的に、サイトカイン単位／ｍＬ、またはｐｇ／ｍｌで示され、血液由来の分画において測定され、この分画は、代表的には血清分画であるが、他の血液由来の分画（例えば、全血または血漿）を含み得る。
【００２４】
（ＩＩ．処置方法のためのＩＦＮ−τ組成物）
ＩＦＮ−τ（例えば、ヒツジＩＦＮ−τ）を含む治療用組成物は、公の方法によって調製される。ヒツジｌＦＮ−τの１７２アミノ酸の配列は、例えば、米国特許第５，９５８，４０２号に記載され、そしてその相同的なウシｌＦＮ−τの配列は、例えば、Ｈｅｌｍｅｒら、Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｆｅｒｔ．、７９：８３−９１（１９８７）およびＩｍａｋａｗａ，Ｋ．ら、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．、３：１２７（１９８９）に記載される。これらの参考文献によるヒツジＩＦＮτおよびウシのｌＦＮτの配列は、本明細書によって参考として援用される。ヒツジＩＦＮτのアミノ酸配列は、本明細書中に配列番号２として示される。
【００２５】
（Ａ．ＩＦＮ−τの調製および特性）
例えば、受胎産物培養培地中に放出された低分子量タンパク質として調製され得るＩＦＮ−τ（例えば、ヒツジＩＦＮ−τ）は、精製され、そして熱不安定性およびプロテアーゼ感受性の両方であることが示された（Ｇｏｄｋｉｎ、Ｊ．Ｄ．ら、Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｆｅｒｔｉｌ．６５：１４１−１５０（１９８２））。
【００２６】
あるいは、上記タンパク質は、そのＮ末端アミノ酸配列を示す合成オリゴヌクレオチドを用いてヒツジ胚盤胞ライブラリーを探索することによって得られるＩＦＮ−τｃＤＮＡをコード配列として使用する組換え手段によって調製され得る（Ｉｍａｋａｗａ，Ｋ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、３３０：３７７−３７９（１９８７））。数種のｃＤＮＡ配列は、異なるアイソフォームを示し得ることが報告されてきた（Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｈ．Ｊ．ら、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２：６５（１９８９）；Ｋｌｅｍａｎｎ，Ｓ．Ｗ．ら、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１８：６７２４（１９９０）；およびＣｈａｒｌｉｅｒ，Ｍ．ら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．７６：１６１−１７１（１９９１））。全ては、約１ｋｂであり、５８５塩基のオープンリーディングフレームを有し、このオープンリーディングフレームは、２３アミノ酸のリーダー配列および１７２アミノ酸の成熟タンパク質をコードする。並列したアミノ末端およびカルボキシ末端を有する４つの螺旋状の束のようなＩＦＮτの予想される構造は、Ｉ型ＩＦＮのようなその分類をさらに支持する（Ｊａｒｐｅ、Ｍ．Ａ．ら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７：８６３−８６７（１９９４））。組換えヒツジＩＦＮ−τを産生するための方法は、以下の実施例の方法に関する節に提供される。
【００２７】
ＩＦＮ−τは、古典的にＩ型ＩＦＮに関する活性のいくつかを示す（以下の表１を参照のこと）が、一方で、大きな違いが、ＩＦＮ−τと他のＩ型ＩＦＮとの間に存在する。最も顕著な違いは、妊娠における役割であり、それは上記に詳述される。ウイルス性の誘導もまた、異なる。ＩＦＮτを除く全てのＩ型ＩＦＮは、ウイルスおよびｄｓＲＮＡによって容易に誘導される（Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．Ｍ．ら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎ．Ｒｅｖ．１３：４３２−４５２（１９９２））。ＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−βの誘導された発現は、一過性であり、約数時間、持続する。対照的に、一旦誘導されたＩＦＮτの合成は、数日間にわたって維持される（Ｇｏｄｋｉｎら、１９８２）。１個の細胞ベースで、他のＩ型ＩＦＮの３００倍を超えるＩＦＮτが、産生される（Ｃｒｏｓｓ，Ｊ．Ｃ．、およびＲｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．Ｍ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：３８１７−３８２１（１９９１））。
【００２８】
（表１：インターフェロンの概要）
【００２９】
【表１】
2007530452.tif 000002
（Ｂ．ＩＦＮ−τ処方物）
ＩＦＮ−τを含む経口調製物または非経口調製物は、薬学的組成物を調製するための公知の方法によって処方され得る。一般的に、このＩＦＮ−τ治療用組成物は、その組成物の有効な経口投与を促すために、有効量のＩＦＮ−τが、適切な添加剤、キャリアおよび／または賦形剤と組み合わされるように、処方される。例えば、ＩＦＮ−τを含む錠剤およびカプセルは、ＩＦＮ−τ（例えば、凍結乾燥したＩＦＮ−τタンパク質）と添加剤（例えば、薬学的に受容可能なキャリア（例えば、ラクトース、トウモロコシデンプン、微結晶セルロース、スクロース）、結合剤（例えば、α−デンプン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン）、崩壊剤（例えば、カルボキシメチルセルロースカルシウム、デンプン、低置換度ヒドロキシ−プロピルセルロース）、界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ  ８０、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマー）、抗酸化剤（例えば、Ｌ−システイン、亜硫酸ナトリウム、アスコルビン酸ナトリウム）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク）など）とを組み合わせることによって調製され得る。
【００３０】
さらに、本発明のＩＦＮ−τポリペプチドは、固体キャリア、粉状キャリア、または他のキャリア（例えば、ラクトース、サッカロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン（例えば、ジャガイモデンプン、トウモロコシデンプン、ミロペクチン（ｍｉｌｌｏｐｅｃｔｉｎｅ）、セルロース誘導体またはゼラチン）と混合され得、そして滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウムまたはステアリン酸カルシウム）、または錠剤の処方物に圧縮されたポリエチレングリコールワックスもまた含み得る。キャリアまたは希釈剤の数種の層を使用することによって、徐放性を有する錠剤作用が、調製され得る。
【００３１】
経口投与のための液体調製物は、エリキシル、シロップ、または懸濁物の形態（例えば、約０．１重量％〜約３０重量％のＩＦＮ−τ、糖ならびにエタノール、水、グリセロール、プロピレン、グリコールおよび可能な限り従来の性質である他の添加剤の混合物を含む溶液）で作製され得る。
【００３２】
別の適切な処方物は、腸管粘膜によって吸収されるまで胃および腸で残存するためにタンパク質を保護する保護投薬形態である。タンパク質のための保護投薬形態は、当該分野において公知であり、そしてこれらとしては、腸溶コーティングおよび／または粘膜付着性ポリマーコーティングが挙げられる。例示的な粘膜付着性ポリマー処方物としては、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）、カルボキシビニルポリマー、カルボマーなどが挙げられる。腸管、および特に小腸に活性形態のＩＦＮ−τを送達するための経口摂取を介する胃への投与のために設計された投薬形態が、企図される。あるいは、ＩＦＮ−τは、胃の環境および／または腸の環境からのある程度の保護を提供するために、プロテアーゼインヒビターと同時投与されても、ポリマー性物質によって安定化されても、脂質粒子またはポリマー粒子中に被包されてもよい。
【００３３】
（ＩＩＩ．処置方法）
本方法は、ＩＦＮ−τ投与による（例えば、ＩＦＮ−τの患者への経口投与による）処置に応答する患者を処置するための治療方法における改良である。この改良は、ＩＦＮ−τ投与に対する患者の応答が、この処置に応答する患者の血清ＩＬ−１０レベルの変化によってモニタリングされ得るという知見に基づく。上記患者が最初の処置期間の間に所望の血清ＩＬ−１０応答を示す場合、当初の用量は治療有効用量として維持され得る。上記応答が低い場合、このＩＦＮ−τの用量は、所望のＩＬ−１０応答が達成されるまで増加され得る。いくつかの場合において、当初の処置用量が、処置されるべき特定の状態を有するほとんどのヒト患者において所望のＩＬ−１０応答を引き起こすのに十分な用量である場合は特に、医師は、その患者のＩＬ−１０応答を改善しようと努力してこの用量を減少し得る。
【００３４】
この方法はまた、最初の処置期間の間にＩＦＮ−γレベルに関する患者の血清ＩＬ−１２レベルをモニタリングし、ＩＦＮ−γに関する患者の血清ＩＬ−１２応答を決定する工程を包含し得る。本発明に従って、両方のサイトカインは、少なくともいくつかの疾患状態（例えば、多発性硬化症）において、ＩＦＮ−τ投与に対して応答性である（代表的に、この処置期間にわたって減少する）ことが示された。ＩＦＮ−γに関して測定されたＩＬ−１２応答は、ＩＦＮ−τの投与に対する患者の応答性の測定として独立して使用されてもよいし、代表的にはＩＬ−１０応答／ＩＬ−１２応答の比またはＩＬ−１０応答／ＩＦＮ−γ応答の比としてＩＬ−１０応答を示すことによって、ＩＬ−１０応答を精緻化するために使用されてもよい。
【００３５】
特に上記化合物のより高い用量において統計学的に有意に増加したＩＬ−１０応答が、ＩＦＮ−τ投与に応じて観察されない場合、および統計学的に有意に減少したＩＬ−１２応答またはＩＦＮ−γ応答が、観察されない場合、医師は、その患者が代替療法またはＩＦＮ−τおよびさらなる処置因子を含む療法を受けるべきことを決定し得る。
【００３６】
（Ａ．基本的処置方法）
上記処置方法が意図される患者または個体は、継続的かつ周期的な（ｐｅｒｉｏｄ）ＩＦＮ−Ｉ投与に応答する疾患状態を有する患者または個体である。「ＩＦＮ−τ投与に応答する」疾患または状態は、この状態の存在、進行、または症状が、ＩＦＮ−τの投与に際して変化する疾患または状態である。本明細書中に記載される方法は、ＩＦＮ−τを、好ましくは、ＩＦＮ−τを投与する工程後の選択された期間において測定される血清ＩＬ−１０レベルの増加によって証明されるような、ＩＦＮ−τ処置に免疫応答性である被験体の胃および／または腸に投与するための経口投与可能な投薬形態で提供する工程を包含し、この血清ＩＬ−１０レベルの増加は、血清ＩＬ−１０の基線値と比較される。
【００３７】
ＩＦＮ−τは、例えば、抗ウイルス因子、抗増殖因子としての生物学的活性を有し、そして自己免疫障害の処置における生物学的活性を有する（例えば、米国特許第５，９５８，４０２号；同第５，９４２，２２３号；同第６，０６０，４５０号；同第６，３７２，２０６号を参照のこと）。従って、インターフェロン−τ投与に応答する疾患または状態の例としては、例えば、自己免疫疾患、炎症性疾患、ウイルス感染症、増殖性疾患および異常増殖性（ｈｙｐｅｒｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ）疾患、ならびに免疫学的に媒介される疾患が挙げられる。ＩＦＮ−τ投与に応答し、したがって本発明に適する特定の疾患状態は、以下に与えられる。
【００３８】
（Ａ１．免疫系障害の処置）
本発明の方法は、免疫系過敏症に関する状態を処置するために有益である。４つの型の免疫系過敏症が存在する（Ｃｌａｙｍａｎ，Ｃ．Ｂ．編、ＡＭＥＲＩＣＡＮ  ＭＥＤＩＣＡＬ  ＡＳＳＯＣＩＡＴＩＯＮ  ＥＮＣＹＣＬＯＰＥＤＩＡ  ＯＦ  ＭＥＤＩＣＩＮＥ、Ｒａｎｄｏｍ  Ｈｏｕｓｅ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．、（１９９１））。Ｉ型、または即時型／アナフィラキシー型の過敏症は、アレルゲン（例えば、花粉）に対する応答における肥満細胞の脱顆粒に起因し、そしてこの過敏症としては、喘息、アレルギー性鼻炎（枯草熱）、蕁麻疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）（蕁麻疹（ｈｉｖｅｓ））、アナフィラキシーショック、およびアレルギー性質の他の疾患が挙げられる。ＩＩ型または自己免疫過敏症は、身体自体の細胞上の感知された「抗原」に対して方向付けられる抗体に起因する。ＩＩＩ型過敏症は、種々の組織にとどまりかつさらなる免疫応答を活性化する抗原／抗体免疫複合体の形成に起因し、そしてこの過敏症は、血清病、アレルギー性肺胞隔炎、および時として追加免疫ワクチン接種（ｂｏｏｓｔｅｒ  ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ）後に形成される広い腫脹のような状態を引き起こす。ＩＶ型過敏症は、感作されたＴ細胞からのリンホカインの放出に起因し、これは、炎症性の反応を生じる。例としては、接触性皮膚炎、麻疹の発疹、および特定の薬物に対する「アレルギー」反応が挙げられる。
【００３９】
一般的に、特定状態が一部の個体において過敏症を生じ得る機構はよく理解されていないが、遺伝的因子および外因的因子の両方に関連し得る。例えば、細菌、ウイルスまたは薬物は、自己免疫障害についての遺伝的素因を既に有する個体における自己免疫応答の引き金となる役割を果たし得る。いくつかの型の過敏症の発生率は、他の過敏症に相関し得ることが示唆されている。例えば、特定の一般的なアレルギーを有する個体は、自己免疫障害に対して、より感受性であることが提唱されている。
【００４０】
自己免疫障害は、主に特定の器官または組織に限定される自己免疫障害、および全身に影響する自己免疫障害に、大まかにグループ分けされ得る。器官特異的な障害の例（冒される器官を伴う）としては、多発性硬化症（神経突起上のミエリン被覆）、Ｉ型糖尿病（膵臓）、橋本甲状腺炎（甲状腺（ｔｈｙｒｏｉｄ  ｇｌａｎｄ））、悪性貧血（胃）、アジソン病（副腎）、重症筋無力症（神経筋接合部におけるアセチルコリンレセプター）、慢性関節リウマチ（関節）、ブドウ膜炎（眼）、乾癬（皮膚）、ギヤン−バレー症候群（神経細胞）およびグレーブス病（甲状腺（ｔｈｙｒｏｉｄ））が挙げられる。全身性自己免疫疾患としては、全身性エリテマトーデスおよび皮膚筋炎が挙げられる。別の自己免疫障害は、シェーグレン症候群であり、ここで白血球は、分泌腺（ｍｏｉｓｔｕｒｅ−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  ｇｌａｎｄ）を攻撃する。シェーグレン症候群の特徴的な症状は、ドライアイおよび口の渇きであるが、シェーグレン症候群は全身性疾患であり、多くの器官に影響を及ぼす。
【００４１】
過敏性障害の他の例としては、喘息、湿疹、座瘡、局所的な皮膚炎、接触性皮膚炎、他の湿疹様皮膚炎、脂漏性皮膚炎、鼻炎、扁平苔癬、天疱瘡（Ｐｅｍｐｌｕｇｕｓ）、水疱性類天疱瘡、表皮水疱症、蕁麻疹（ｕｒｉｔｃａｒｉｓ）、血管性水腫、脈管炎（ｖａｓｃｕｌｉｔｉｄｅｓ）、紅斑、皮膚の好酸球増加症、円形脱毛症、アテローム硬化症、原発性胆汁性肝硬変およびネフローゼ症候群が挙げられる。関連した疾患としては、腸の炎症（例えば、セリアック病、直腸炎、好酸球増加性胃腸炎、肥満細胞症、炎症性腸疾患、クローン病および潰瘍性大腸炎）、および食物関連性アレルギーが挙げられる。強直性脊椎炎は、自己免疫の炎症性疾患の別の例であり、脊椎の関節および骨のいくつかまたは全てが１つに融合する
本発明の方法に従うＩＦＮ−τによる処置の最適化は、自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症、Ｉ型（インスリン依存性）糖尿病、エリテマトーデス、筋萎縮性側索硬化症、クローン病、慢性関節リウマチ、口内炎、喘息、ブドウ膜炎、アレルギー、乾癬、強直性脊椎炎、重症筋無力症、グレーブス病、橋本甲状腺炎、シェーグレン症候群、および炎症性腸疾患）を有する被験体に対して特に有益である。
【００４２】
（Ａ２．ウイルス感染）
本発明の方法は、ウイルス感染に関連する疾患または状態の処置を最適化するために適用され得る。ＩＦＮ−τの抗ウイルス活性は、ＩＦＮ−αに通常付随する毒性効果を伴わない幅広い治療用途を有し、そしてＩＦＮ−τは、細胞に対する悪影響なしにその治療活性を発揮する。ＩＦＮ−τに関する細胞毒性の相対的な欠如は、ＩＦＮ−τをインビボの治療因子として非常に有益にし、そしてＩＦＮ−τを、ほとんどの他の公知である抗ウイルス因子および全ての他の公知であるインターフェロンとは別に位置付ける。
【００４３】
ウイルス感染は、ＲＮＡウイルスまたはＤＮＡウイルスに起因し得る。経口投与されるＩＦＮ−τによって処置され得る特定のウイルス性疾患の例としては、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、非Ａ型肝炎、非Ｂ型肝炎、非Ｃ型肝炎、エプスタイン−バーウイルス感染、ＨＩＶ感染、ヘルペスウイルス（ＥＢ、ＣＭＬ、単純ヘルペス）、パピローマウイルス、ポックスウイルス、ピコルナウイルス、アデノウイルス、ライノウイルス、ＨＴＬＶ  Ｉ、ＨＴＬＶ  ＩＩ、およびヒトロタウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４４】
（Ａ３．細胞増殖障害）
ＩＦＮ−τは、強力な抗細胞増殖活性を示す。従って、本発明の方法は、被験体の処置を最適化するために適用され得、制御されない細胞の増殖を阻害するか、妨害するかまたは遅らせる。
【００４５】
経口投与されるＩＦＮ−τによって処置され得るヒトの細胞増殖障害の例としては、肺大細胞癌、結腸腺癌、皮膚癌（基底細胞癌および悪性黒色腫）、腎腺癌、前骨髄球性白血病、Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、乳腺癌、ステロイド感受性の腫瘍（ｓｔｅｒｏｉｄ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｔｕｍｏｒ）、ヘアリー細胞白血病、カポジ肉腫、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、表在性膀胱癌、卵巣癌、および神経膠腫が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４６】
（Ａ４．他の障害）
インターフェロン−τ投与に応答する疾患または状態のさらなる例としては、例えば、以下が挙げられる：神経学的な疾患（例えば、アルツハイマー病および自閉症）；肺線維症および肝線維症を含む線維性疾患；脳卒中、器官移植に由来する拒絶反応；ならびに慢性気管支炎および気腫を含む慢性閉塞性肺疾患。
【００４７】
（Ｂ．最初の処置用量および調製された処置用量）
処置の開始において、患者の血清ＩＬ−１０の基線レベルならびに必要に応じて、血清ＩＬ−１２および／または血清ＩＦＮ−γ基線値が、決定される。以下の実施例に示されるように、これは、最初のＩＦＮ−τ投与前（または投与と同時）（すなわち、患者が非誘導状態にあるとき）に、単一の血液測定を行うことによってなされ得る。あるいは、この基線値は、処置の開始前の数日間にわたって多くの血液測定を行うことによって決定され、処置前の測定されたサイトカインのレベルの変動を確立し得る。次いでこれらの値が用いられ、例えば、実施例１に記載される曲線下面積アプローチを使用して基線値を確立する。実際の血液測定は、実施例に記載されるように、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２およびＩＦＮ−γをアッセイするための市販のイムノアッセイキットまたは他の診断キットによって行われ得る。
【００４８】
ＩＬ−１０ならびに必要に応じて、ＩＬ−１２およびＩＦＮ−γの確立された基線値を用いて、患者は、代表的には経口形態によって、選択されたレベルのＩＦＮ−τにおいて最初の処置におかれる。代表的に、最初の用量は、約０．１ｍｇ／日〜１０ｍｇ／日（それぞれ、約１．４×１０５単位／ｋｇ体重および１．４×１０７単位／ｋｇ体重に対応する）までか、またはそれより高い範囲であり得る。この用量は、本明細書中で、治療的に望ましい用量といわれ、そして取り組むべき疾患の処置において治療的に有効である任意に選択された用量（例えば、上記される用量の中間範囲、または少なくともある程度の患者において示された用量に対応する用量）であり得る最初の処置用量を示す。
【００４９】
この最初の用量は、代表的には２週間〜４週間の最初の処置期間にわたって投与され、この期間の間に、患者のＩＬ−１０応答（および／またはＩＬ−１２応答もしくはＩＦＮ−γ応答）がモニタリングされる。測定された応答に基づいて、上記化合物の用量は、維持されるか、増加されるか、または減少され、所望の応答のためにＩＬ−１０応答を調整する。ＩＬ−１０応答に基づく用量調整の詳細は、以下の節Ｂに議論され、これは特に、実施例２〜実施例４に関連する。さらなるＩＬ−１２応答またはＩＦＮ−γ応答に基づく用量調整の詳細は、節Ｃで議論される。
【００５０】
（Ｂ１．ＩＬ−１０応答に基づく処置用量の調整）
ＩＬ−１０は、種々の免疫系細胞の機能の調節に関連し、この細胞としては、リンパ系細胞および骨髄性細胞が挙げられる。ＩＬ−１０は、例えば、マクロファージ、Ｔ細胞およびナチュラルキラー細胞のエフェクター効果に関する強力なサプレッサであり、そしてサイトカイン合成の活性化およびマクロファージの数種のアクセサリー細胞機能の遮断を介して作用すると考えられる［Ｍｏｏｒｅ，Ｋ．Ｗ．ら、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：１６５−９０（１９９３）］。多種多様な疾患または状態は、インターロイキン−１０療法の利点であり得るか、またはそうでなければＩＬ−１０と関連し得ることが、示されるかまたは示唆された。このような疾患または状態の例としては、例えば、神経学的な疾患、免疫学的な疾患、自己免疫疾患、およびウイルス性疾患が挙げられる。
【００５１】
例えば、経口経路によるＩＦＮ−τの投与、および被験体の腸管に対する投与を包含するようなＩＦＮ−τの投与後、血液サンプルが採取され得、次いでその血清ＩＬ−１０レベルが、投与後の選択された時点において、本発明の方法に従い被験体において測定され得る。例えば、血清ＩＬ−１０レベルは、最初の投与後１日目、２日目、３日目、４日目または５日目に測定されても、最初の投与後に日毎（ｄａｉｌｙ  ｂａｓｉｓ）で測定されてもよい。複数回の投与が提供される場合、血清ＩＬ−１０は、種々の時点において同様に測定され得、この時点としては、各投与、または日毎もしくは週毎（ｗｅｅｋｌｙ  ｂａｓｉｓ）が挙げられる。血清ＩＬ−１０レベルを測定するための方法としては、市販の酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）キットの使用が挙げられる。
【００５２】
次いでＩＦＮ−τの投与後に測定された血清ＩＬ−１０レベルは、被験体において誘導されていない血清ＩＬ−１０レベルと比較され、最初の処置用量に対する患者のＩＬ−１０応答を決定する。「誘導されていない血清ＩＬ−１０レベル」によって、ＩＦＮ−τ投与に従うかまたはそれを介した、被験体における血清ＩＬ−１０の誘導前の血清ＩＬ−１０のレベルが意味される。上記誘導されていないレベルは、以下の実施例に示される通り、処置の開始前かまたは実質的に処置の開始と同時に採取された単一の血液サンプルから決定されてもよいし、処置前の時点において、種々の時点（例えば、数日毎）に採取された多くの血液サンプルから決定されてもよい。
【００５３】
誘導されていない血清ＩＬ−１０レベルは、変化し得るが、その変化は約１ｐｇ／ｍＬ〜約５ｐｇ／ｍＬの間であり得る。誘導された血清ＩＬ−１０レベルは、代表的には約１０ｐｇ／ｍＬまたは約２０ｐｇ／ｍＬより高くない。実施例のデータから読み取れる通り、患者の処置に対する応答は、代表的に、ＩＬ−１０レベルを上昇させ、この上昇は、一般的に、少なくとも２５％の増加であり、この増加は、ＩＬ−１０レベルの統計学的に大きな増加を示す。疾患状態および投与されるべきＩＦＮ−τの用量に依存して、２５％〜５０％のＩＬ−１０応答が望まれ、そしてそれは、１００％以上であり得る。あるいは、所望のＩＬ−１０応答は、ＩＦＮ−τを用いて所定の状態を首尾よく処置されたヒト患者の群において観察されるＩＬ−１０応答によって決定され得る。すなわち所定の用量にて首尾よく処置された患者の群に関して、所望のＩＬ−１０応答は、この群の平均的なＩＬ−１０応答であり得る。
【００５４】
一旦、最初の処置期間に対する患者のＩＬ−１０応答が決定されると、ＩＦＮ−τの用量は、維持され得、増加され得、または減少され得て、継続的なＩＦＮ−τ投与に対する所望の応答のために被験体のＩＬ−１０応答を調整する。次いでこの調整は、第２の同様の長さの処置期間の間にモニタリングされ得、この第２の期間に対して決定されるＩＬ−１０応答を有する。第２のＩＬ−１０応答に基づいて、投与されるＩＦＮ−τの用量は、再び調整されて、所望のＩＬ−１０応答の終点を達成し得るか、または維持され得る。
【００５５】
これらの最初の処置期間のいずれかの間に、ＩＦＮ−τは、代表的に、例えば、２〜４週間の期間、１日に１回、１日に２回または１日に３回投与され、この期間にわたって血清ＩＬ−１０レベルは、数回モニタリングされる（例えば、３〜４日毎）。一旦、所望のＩＬ−１０応答が達成されると、この処置は、疾患状態が解消するか、または必要に応じて疾患の経過を制御するまで、持続用量レベルにて継続され得る。
【００５６】
実施例２は、多発性硬化症の制御のために、ＩＦＮ−τによって処置される患者の群に適用される方法を示す。各々５人の患者の３つの群は、それぞれ、表２に示される通り、２８日間の最初の処置期間にわたって、患者１人につき０．２ｍｇ（群Ｉ）、０．６ｍｇ（群ＩＩ）、および１．８ｍｇ（群ＩＩＩ）の選択された１日量を与えられた。（１ｍｇのＩＦＮ−τは、約１×１０８抗ウイルス単位である）。血清ＩＬ−１０は、１日目、４日目、８日目、１５日目、および２９日目にモニタリングされ、これらは、図１Ａ、図１Ｂ、および図１Ｃの３つの群に示されるレベルをそれぞれ有した。各患者のＩＬ−１０応答は、実施例１に記載される曲線下面積の計算によって決定され、この結果は、実施例２の表３に示される。
【００５７】
（表２：ＭＳ患者群）
【００５８】
【表２】
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表３からの結果は、最も良好な最初の処置用量が、１．８ｍｇ／日であることを示し、５人の患者のうち４人において約１．５以上のＩＬ−１０応答を生じたが、２つのより低い用量においてはそれぞれ１人だけが、約１．５以上のＩＬ−１０応答を生じた。従って、このレベルから用量を減少させることは、ＩＬ−１０応答を増強させることは予期されず、そして最初に１．８ｍｇ／１日用量を受容する患者が少なくとも約１．５のＩＬ−１０応答を示さない場合、この用量は、ＩＬ−１０応答を高めるために増加されるべきであり、減少されるべきではない。
【００５９】
実施例３に詳述される第２の研究において、ＨＣＶを有する患者は、１日に合計で１ｍｇ（群Ｉ）、３ｍｇ（群ＩＩ）、および９ｍｇ（群ＩＩＩ）のＩＦＮ−τの１日用量によって３つの群に分けられて処置され、そして１日に合計で１ｍｇ（群Ｉ）、３ｍｇ（群ＩＩ）、および９ｍｇ（群ＩＩＩ）のＩＦＮ−τの１日量を毎日投与され、ここでこの用量は、１日に３回投与される（すなわち、０．３３ｍｇ、１ｍｇ、および３ｍｇの個々の用量で、８４日間にわたって投与される）。血清ＩＬ−１０レベルは、１日目、３日目、８日目、１５日目、２２日目、２９日目、４３日目、７１日目、および８５日目にモニタリングされ、そして図３Ａ〜図３Ｃにプロットされた。各群におけるＩＬ−１０応答は、実施例１にあるように、処置の最初の２８日間について計算され、その結果は、実施例３の表７に示された。
【００６０】
表３中のＩＬ−１０応答のデータから理解され得るように、少なくとも約２のＩＬ−１０応答（すなわち、１００％の増加）が、３ｍｇ／日または９ｍｇ／日のＩＦＮ−τのいずれかを受容するヒトＨＣＶ患者において予想され得、これは各群における６人の患者のうち４人に見られ、最も低い用量の群（１ｍｇ／日）には見られなかった。従って、３ｍｇ／日の用量は、良好な最初の用量であり、１．８ｍｇ／日の好ましい開始用量を示したＭＳ患者についての上記のデータと一致する。患者が強いＩＬ−１０応答（例えば、基線に対して少なくとも１００％のＩＬ−１０の増加）を示す場合、その用量は、延長された処置にわたって維持されるか、またはいくぶん減少されさえし、ＩＬ−１０応答が、若干のより低い用量（例えば、２ｍｇ／日）において見られるか否かを決定する。最も高い用量においてさえ、幾人かの患者が良好なＩＬ−１０応答を達成しないことは、これらの患者が、ＩＦＮ−τ処置に対してあまり応答せず、従って、特にＩＬ−１２またはＩＦＮ−γにおいて大きな変化が同じ処置期間にわたって観察されない場合、第２の抗ウイルス処置因子に供されるかまたは代替的に別の療法に切り替えられることを示し得る。
【００６１】
（Ｃ．ＩＦＮ−γ応答）
ＩＦＮ−γは、炎症誘発性のサイトカインであり、そしてＩＦＮ−γのアップレギュレーションは、自己免疫状態（例えば、多発性硬化症および関節炎）に罹患する患者の不快感の増加に相関する。例えば、インターフェロン−β（ＩＦＮ−β）による多発性硬化症の処置の間に、ＩＦＮ−γを分泌する細胞の頻度は、ＩＦＮ−β処置の最初の２ヶ月の間に増加し、そしてこのＩＦＮ−γの血清レベルの増加は、おそらく、患者がＩＦＮ−βによる処置の間に経験する顕著な「インフルエンザに似た」症状に寄与することが報告された。他のＩ型インターフェロンによる処置に対するＩＦＮ−τの１つの利点は、副作用を実質的に減少させ、そしてこのことは、特定の疾患状態の処置において、ＩＦＮ−τ処置の間の基線値よりも実際に低いＩＦＮ−γの血液レベルに反映される。
【００６２】
従って、本方法は、単独かまたはＩＬ−１０応答を計算する工程においてのいずれかで、患者のＩＦＮ−γ応答を使用する工程を企図し、ＩＦＮ−τ処置に対する患者の応答を決定する。ＩＦＮ−γの応答が、ＩＬ−１０応答の決定において使用される場合、ＩＬ−１０応答は、実施例２および実施例３で議論されるように、ＩＬ−１０応答／ＩＦＮ−γ応答の比として決定され得る。これらの実施例において記載されるように、患者の血液ＩＦＮ−γレベルは、特に多発性硬化症のような特定の疾患状態のためのＩＦＮ−τ処置に対する応答に、同調するようである。
【００６３】
（Ｄ．ＩＬ−１２応答）
ＩＬ−１２は、炎症誘発性のサイトカインであり、そしてこれは、例えば、多発性硬化症の病因に寄与することが報告される（ＭＳ；Ｆｉｌｓｏｎら、Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１０６（２）：１２７（２００３））。ＭＳ患者は、代表的に、減少したＩＬ−１０レベルおよび増加したＩＬ−１２レベルを示し、そしてこれらのサイトカインのレベルは、その疾患状態に相関することが、さらに公知である［ｖａｎ  Ｂｏｘｅｌ−Ｄｅｚａｉｒｅら、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．、４５：６９５（１９９９）］。ウイルス感染に関連して、高いＩＬ−１２レベルはまた、Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓの細菌コロニー形成に悪影響を及ぼすことが示された［Ｃａｒｔｅｒら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３５（２）：２３３（２００４）］。
【００６４】
ＩＦＮ−γ応答を伴う場合、ＩＬ−１２レベルは、ＩＦＮ−τ処置の間に減少し得、この処置はＩＦＮ−τ処置に対する患者の応答をモニタリングするために使用され得るさらに別のサイトカイン応答を提供することが、本発明によって見出された。上記の通り、ＩＬ−１２応答は、単独かまたはＩＬ−１０と組み合わせて使用され得、ここでＩＬ−１０応答は、ＩＬ−１０応答／ＩＬ−１２応答の比として計算される。
【００６５】
本発明は、特定の方法および実施形態と共に記載されるが、種々の改変および変形は、特許請求される方法から逸脱することなく行われ得ることが理解される。
【実施例】
【００６６】
（ＩＶ．実施例）
ここで、上記される発明を例示する特定の実施例に対する参照がなされる。この実施例は、好ましい実施形態を例示するために提供され、そしてそれによって本発明の範囲に対する限定は意図されないことが、理解されるべきである。さらに、本明細書中に引用される全ての文書は、当該分野の技術水準を示し、そしてその全体が参考として本明細書に援用される。
【００６７】
（材料および方法）
（Ａ．ＩＦＮτの産生）
１つの実施形態において、合成ＩＦＮτ遺伝子を、ＩＦＮτアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列の隣接部分を含むオリゴヌクレオチドをライゲーションすることによる標準的な分子的方法を使用して作製した（Ａｕｓｕｂｅｌら、前出、１９８８）。使用したＤＮＡ配列は、配列番号１または配列番号４のいずれかであっても、Ｉｍａｋａｗａ，Ｋ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、３３０：３７７−３７９、（１９８７）に示されるような配列であってもよい。得られたＩＦＮτポリヌクレオチドコード配列は、位置１６〜５３１（１７２アミノ酸のコード配列）に存在し得る。
【００６８】
１つの実施形態において、全長合成遺伝子ＳｔｕＩ／ＳＳｔＩフラグメント（５４０ｂｐ）は、改変型ｐＩＮ  ＩＩＩ  ｏｍｐ−Ａ発現ベクター中にクローニングされ得、そしてＥ．ｃｏｌｉのコンピテントＳＢ２２１株中に形質転換され得る。ＩＦＮτタンパク質の発現のために、発現ベクターを保有する細胞を、アンピシリンを含むＬ−ブロス中で、０．１〜１のＯＤ（５５０ｎｍ）になるまで増殖させ、ＩＰＴＧ（イソプロピル−１−チオ−ｂ−Ｄ−ガラクトシド）によって３時間誘導し、そして遠心分離によって収集した。可溶性の組換えＩＦＮ−τは、超音波処理または浸透圧性細胞分画（ｏｓｍｏｔｉｃ  ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ）によって細胞から遊離され得る。
【００６９】
酵母における発現のために、５’末端および３’末端に、それぞれ、ＳｔｕＩ制限酵素認識部位およびＳａｃＩ制限酵素認識部位を含むＰＣＲプライマーを用いるポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ；Ｍｕｌｌｉｓ，Ｋ．Ｂ．、１９８７年７月２８日に発行された米国特許第４，６８３，２０２号；Ｍｕｌｌｉｓ，Ｋ．Ｂ．ら、１９８７年７月２８日に発行された米国特許第４，６８３，１９５号）を使用して、ＩＦＮτ遺伝子を増幅し得る。増幅したフラグメントを、ＳｔｕＩおよびＳａｃＩＩによって消化し、そしてｐＢＬＵＥＳＣＲＩＰＴ＋（ＫＳ）のＳａｃＩＩ部位およびＳｍａＩ部位にライゲーションして、ｐＢＳＹ−ＩＦＮτを作製した。プラスミドｐＢＳＹ−ＩＦＮτを、ＳａｃＩＩおよびＥｃｏＲＶによって消化し、そして合成ＩＦＮτ遺伝子を含むフラグメントを単離した。酵母発現ベクターｐＢＳ２４Ｕｂ（Ｅｃｋｅｒ，Ｄ．Ｊ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：７７１５−７７１９（１９８９））を、ＳａｌＩによって消化した。平滑末端を、Ｔ４  ＤＮＡポリメラーゼを使用して作製した。このベクターＤＮＡを、フェノール沈殿およびエタノール沈殿によって抽出した（ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ、第２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ（１９８９）のＳａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ら）。回収したプラスミドを、ＳａｃＩＩによって消化し、アガロースゲル電気泳動によって精製し、そしてｐＢＳＹ−ＩＦＮτから単離したＳａｃＩＩ−ＥｃｏＲＶフラグメントにライゲーションした。得られた組換えプラスミドを、ｐＢＳ２４Ｕｂ−ＩＦＮτと名付けた。
【００７０】
この組換えプラスミドｐＢＳ２４Ｕｂ−ＩＦＮτを、Ｅ．ｃｏｌｉ中に形質転換した。ＩＦＮτ挿入物を含む組換えクローンを単離し、そして制限酵素分析によって同定した。ＩＦＮτコード配列を、ｐＢＳ２４Ｕｂ−ＩＦＮτから単離し、そしてアルコールオキシダーゼ（ＡＯＸ１）プロモーターを含むＰｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）中にクローニングした。次いでこのベクターを使用して、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ  ＧＳ１１５  Ｈｉｓ−宿主細胞を形質転換し、そしてタンパク質を、製造業者の説明書に従って発現させた。このタンパク質を、培地中に分泌させ、そして連続的なＤＥＡＥ−セルロースおよびヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーによって、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび銀染色によって決定されるような電気泳動的に均質性になるまで精製した。
【００７１】
（Ｂ．特定の抗ウイルス活性を決定する抗ウイルスアッセイ）
抗ウイルス活性を、標準的な細胞変性効果アッセイを使用して評価した（Ｆａｍｉｌｌｅｔｔｉ，Ｐ．Ｃ．ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、７８：３８７−３９４（１９８１）；Ｒｕｂｉｎｓｔｅｉｎ，Ｓ．ら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．、３７：７５５−７５８（１９８１））。手短には、ＩＦＮτの希釈物を、Ｍａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙウシ腎臓（ＭＤＢＫ）細胞と一緒に３７℃にて１６〜１８時間インキュベートした。インキュベーションの後、ウイルスの複製の阻害を、水疱性口内炎ウイルスをチャレンジ（ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）として使用する細胞変性効果アッセイにおいて決定した。１抗ウイルス単位（Ｕ）は、単層の破壊を５０％減少させた。本明細書中に記載した研究に関して、ＩＦＮτは、約１×１０８抗ウイルスＵ／ｍｇタンパク質の、特定の活性を有した。
【００７２】
（実施例１）
（サイトカインレベルの決定）
この実施例は、患者中のＩＬ−１０応答を決定するための１つの方法を例示する。上記で議論されるように、ＩＬ−１０応答は、血清ＩＬ−１０レベルが、ＩＦＮ−τ投与の結果として患者において変化した程度の目安である。この実施例に記載した方法において、ＩＬ−１０応答は、任意の処置の非存在下において同じ期間にわたって予想される血清ＩＬ−１０のレベル（すなわち、基線ＩＬ−１０レベル）に対する最初の処置期間わたる血清ＩＬ−１０レベルについての、曲線下面積（ＡＵＣ）の比として計算される。
【００７３】
図１２Ｅは、どのようにしてこの値が決定されるのかを示す。図中のＩＬ−１０レベルは、１日目〜２８日目にわたって１．８ｍｇの１日経口用量を受容するＭＳ患者（図１Ｃの患者３０２）から採取される。２９日目において、この処置は、中止される。ＩＬ−１０応答についてのＡＵＣは、処置された患者中のＩＬ−１０測定値によって規定される総曲線下面積である。基線値は、処置が開始される際（または処置の開始前）に採取される初期値によって規定される曲線下面積として計算され得、そして１日目〜２９日目の同じ期間にわたって検討され、そして得られる長方形の面積として計算される。あるいは、この基線値は、処置前に多くのＩＬ−１０測定値を採取し、そして基線値についてＡＵＣ値を計算することによって真の曲線下面積として計算され得る。後者の場合において、基線のＡＵＣおよびＩＬ−１０のＡＵＣは、２つのＡＵＣの比を採る前に同じサンプル採取期間（例えば、２８日間）に対して補正される必要がある。
【００７４】
ＩＬ−１０応答曲線に関して、ＡＵＣは、台形規則を使用して容易に計算され得る。台形規則においては、測定される面積を複数の台形に分け、そして台形の全ての面積の合計を決定して、そして曲線下面積を表す。この方法は、例えば、ウェブサイトｗｗｗ．ｂｏｏｍｅｒ．ｏｒｇ／ｃ／ｐ３／ｃ０２／ｃ０２１０．ｈｔｍｌ上に詳述される。これらの計算を実施する工程において、図１Ｅにおける処置後の点についての曲線下面積を求めた（全ての曲線下面積値は、ｐｇ日／ｍｌの単位である）。基線のＡＵＣを、上記のように、示される基線の長方形の面積として単純に計算した。次いでＩＬ−１０応答を、２つの値の比として計算した。
【００７５】
さらに、ＩＬ−１０応答は、ＩＬ−１２および／またはＩＦＮ−γの血清レベルにおける患者の応答に対するＩＬ−１０応答の比として計算され得る。この場合において、ＩＬ−１２応答またはＩＦＮ−γ応答は、まさにＩＬ−１０応答を計算するために記載したものと同じ方法によって計算される。一旦、この２つの応答の値が計算されると、ＩＬ−１０応答は、ＩＬ−１０応答／ＩＬ−１２またはＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ応答の比として計算される。以下の２つの実施例において、ＩＬ−１０／ＩＦＮ−γのように示されるＩＬ−１０応答が、報告される。
【００７６】
（実施例２）
（ＭＳ患者における最初の処置ＩＬ−１０レベルの応答）
この実施例は、ＩＦＮτの最初の処置用量と２８日間の最初の処置期間にわたって測定されたＩＬ−１０応答との間の、代表的な関係を示す。この研究におけるヒト患者は、多発性硬化症を有し、そしてこれらの患者を、ＩＦＮτによって処置する試験に登録した。１５人の患者を、無作為に３つの処置群（上記の表２を参照のこと）に分け：群Ｉの患者に、ＩＦＮτを１日あたり０．２ｍｇ（２×１０７Ｕ／日）の投薬量で経口的に与え、群ＩＩの患者に、ＩＦＮτを１日あたり０．８ｍｇ（８×１０７Ｕ／日）の投薬量で経口的に与え；そして群ＩＩＩの患者に、ＩＦＮτを１日あたり１．８ｍｇ（１．８×１０８Ｕ／日）の投薬量で経口的に与え、各群の患者は、２９日間、毎日１回の１日量を受容した。
【００７７】
ＩＦＮτによる処置の前に、検診日および１日目（１）において、血液サンプルを、各被験体から採取し、基線血清サイトカイン濃度を決定した。処置を、１日目における血液採取後の各患者にＩＦＮτを経口的に投与することによって開始した。投与前に、ＩＦＮτ（配列番号３）のバイアル、および注射器を、２℃〜８℃に維持した冷蔵庫内に保持した。薬剤の自己投与前に、患者は、１つのバイアルおよび１つの注射器を冷蔵庫から取り出した。キャップを、注射器の先端部から取り外し、そしてその注射器の先端部を、薬剤のビンの中にいれて、１日目に診察室で説明された通りに、その注射器の中に適切な容量を引き抜いた。その注射器の先端部を、口の中にいれ、そして注射器の内容物を、プランジャーを押下げることによって口の中に入れて空にした。次いで患者は嚥下し、そして所望の場合、コップ１杯の水を飲むことを許された。患者は、彼らの日記カード（ｄｉａｒｙ  ｃａｒｄ）にデータおよび用量が投与された時間を記入した。
【００７８】
（Ａ．ＩＬ−１０のＡＵＣ／基線のＡＵＣによって測定されたＩＬ−１０応答）
血液サンプルを、この研究の１日目、４日目、８日目、１５日目、２９日目、および５７日目において、各患者から採取した。このサンプルを、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｇｅｎｚｙｍｅ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓ）を使用することによってＩＬ−１０濃度について分析した。ＩＬ−１０レベルを、図１Ａ〜図１Ｃ（ＩＬ−１０）に示すように、グラフにプロットし、そして各患者についての曲線下面積（ＡＵＣ）を、実施例１に記載したように計算した。この結果を、表３に示す。
【００７９】
（表３．３つの異なる用量におけるＭＳ患者中のＩＬ−１０応答）
【００８０】
【表３】
2007530452.tif 000004
この表から、第１に、最も高いＩＬ−１０応答は、約１．５およびそれより高い範囲にあり、これは、基線より約５０％高いことが理解され得る。これらの応答は、最も高い用量において、５人の患者のうち４人において観察され、そして２つのより低い用量では、それぞれ１人の患者において観察され、これは、１日に１．８ｍｇの最も高い用量が、最初の処置期間に対して良好な開始用量であることを示す。別の方法から考えると、このレベルからの用量の減少は、ＩＬ−１０応答を上昇させることが期待できず、そして最初に１．８ｍｇ／１日量を受容する患者が少なくとも約１．５のＩＬ−１０応答を示さない場合、その用量は、ＩＬ−１０応答を高めるために増加されるべきであり、減少されるべきではない。
【００８１】
（Ｂ．ＩＬ−１０応答／ｌＦＮ−γによって測定されたＩＬ−１０応答）
血液ＩＦＮ−γレベルをまた、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｇｅｎｚｙｍｅ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓ）を使用し、同じ時点で、同じ患者において測定した。ＩＦＮ−γのレベルを、図２Ａ〜図２Ｃ（ＩＦＮ−γ）に示すように、グラフにプロットし、そして各患者についての曲線下面積（ＡＵＣ）を、実施例１に記載したように計算した。この結果を、表４に示す。
【００８２】
（表４．３つの異なる用量におけるＭＳ患者中のＩＦＮ−γ応答）
【００８３】
【表４】
2007530452.tif 000005
表４は、ＩＦＮ−τ投与によるＩＦＮ−γの減少、または最初の処置レベルに対するＩＦＮ−γレベルの有意でない変化のいずれかを、全体として示す。
【００８４】
例えば、以下の表５に与えられるように、ＩＦＮ−γ応答に対するＩＬ−１０応答の比としてＩＬ−１０応答を示すことによって、最適なＩＦＮ−τ用量についてのさらなる情報を与えるＩＦＮ−γレベルの変化の使用が、達成され得る。この測定基準を使用して、最初の処置用量に対するＩＬ−１０応答は、ＩＬ−１０応答の増加によって達成され、そしてこの値は、ＩＦＮ−γ応答の減少によって上昇され得る。
【００８５】
（表５．３つの異なる用量におけるＭＳ患者中のＩＦＮ−γ応答）
【００８６】
【表５】
2007530452.tif 000006
（実施例３）
（ＨＣＶ患者における最初の処置ＩＬ−１０レベルの応答）
この実施例は、活性なＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染と診断された患者に対する本発明の方法の適用を示す。患者の３つの群についての投薬計画を、表６に示す。
【００８７】
（表６．組換えＯｖ−ＩＦＮ−τの患者用量投与）
【００８８】
【表６】
2007530452.tif 000007
試験物質のバイアルおよび注射器の全てを、２℃〜８℃に維持した冷蔵庫内に保持した。薬剤の自己投与前に、患者は、１つのバイアルおよび１つの注射器を冷蔵庫から取り出した。キャップを、注射器の先端部から取り外し、そしてその注射器の先端部を、薬剤のビンの中にいれて、１日目に診察室で説明された通りに、その注射器の中に適切な容量を引き抜いた。
【００８９】
その注射器の先端部を、口の中にいれ、そして注射器の内容物を、プランジャーを押下げることによって口の中に入れて空にした。次いで患者はその試験物質を嚥下した。所望の場合、その患者は、コップ一杯の水を飲むことを許された。患者は、彼らの日記カードにデータおよび試験物質の用量が投与された時間を記入した。上記の工程を、約８時間の間隔を空けて、１日に３回繰り返した：朝に１回、正午に１回、および夕方に１回。処置は、８５日で中止したがＩＬ−１０のモニタリングは、１６９日まで継続した。
【００９０】
（Ａ．ＩＬ−１０のＡＵＣ／基線のＡＵＣによって測定されたＩＬ−１０応答）
血液サンプルを１６９日間の試験期間にわたって規定の間隔で採取した。このサンプルを、製造業者の説明書に従い、ＥＬＩＳＡキット（Ｇｅｎｚｙｍｅ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓ）を使用して、血清中のＩＬ−１０レベルについて分析した。Ｃ型肝炎のウイルス力価（逆転写ポリメラーゼ連鎖反応を使用する）、２’，５’−オリゴアデニレートシンテターゼ（ＯＡＳ）の血液レベル、およびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）の血清濃度もまた決定した。この結果は、本明細書中に報告されない。ＩＬ−１０のレベルを、図３Ａ〜図３Ｃに示すように、グラフにプロットし、各患者についての曲線下面積（ＡＵＣ）を、実施例１に記載したように計算した。この結果を、表７に示す。実施例１に記載したように、ＡＵＣの計算を１日目〜２９日目の期間について行い、この期間は、処置の開始から始めて４週間の期間である。
【００９１】
（表７：３つの異なる用量におけるＨＣＶ患者中のＩＬ−１０応答）
【００９２】
【表７】
2007530452.tif 000008
このデータは、少なくとも約２（すなわち、１００％の増加）のＩＬ−１０応答が、３ｍｇ／日または９ｍｇｓ／日のＩＦＮ−τのいずれかを受容するヒトＨＣＶ患者において予想され得ることを示し、このことは各群における６人の患者のうち４人に見られ、最も低い用量の群（１ｍｇ／日）には見られなかった。従って、３ｍｇ／日の用量は、良好な最初の用量であり、１．８ｍｇ／日の好ましい開始用量を示す上記のデータと一致する。患者が、強いＩＬ−１０応答（例えば、基線に対して少なくとも１００％のＩＬ−１０の増加）を示す場合、その用量は、延長された処置にわたって維持されるか、またはいくぶん減少されさえし、ＩＬ−１０応答が、若干のより低い用量（例えば、２ｍｇ／日）において見られるか否かを決定する。最も高い用量においてさえ、幾人かの患者が良好なＩＬ−１０応答を達成しないことは、これらの患者がＩＦＮ−τ処置に対してあまり応答しないことの指標であり、従って、これらの患者は、第２の抗ウイルス処置因子に供され得る。
【００９３】
（Ｂ．ＩＬ−１０応答／ｌＦＮ−γによって測定されたＩＬ−１０応答）
血清ＩＦＮ−γレベルをまた、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｇｅｎｚｙｍｅ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓ）を使用し、同じ時点で、同じ患者において測定した。ＩＦＮ−γのレベルを、図４Ａ〜図４Ｃ（ＩＦＮ−γ）に示すように、グラフにプロットし、そして各患者についての曲線下面積（ＡＵＣ）を、実施例１に記載したように計算した。この結果を、表８に示す。
【００９４】
（表８．３つの異なる用量におけるＨＣＶ患者中のＩＦＮ−γ応答）
【００９５】
【表８】
2007530452.tif 000009
表８は、ＩＦＮ−τ投与によるＩＦＮ−γのわずかな増加、または最初の処置レベルに対するＩＦＮ−γレベルの有意でない変化のいずれかを、全体として示す。ＩＦＮ−γに対するＩＬ−１０応答の比として計算し、上記の２つの表中の値から決定したＩＬ−１０応答を、表９に示す。
【００９６】
（表９．３つの異なる用量におけるＨＣＶ患者中のＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ応答）
【００９７】
【表９】
2007530452.tif 000010
（実施例４）
（Ｃ型肝炎によって感染された患者に対する１日２回のＩＦＮτの投与）
Ｃ型肝炎によって感染された５人の患者を、研究のために募った。この患者を、実施例３の方法に従いＩＦＮτによって処置し、各患者は、１日２回で７．５ｍｇ、合計で１５ｍｇ（１．５×１０９Ｕ）の１日量を受容した。第１の用量を、朝（朝食前）に摂取した。第２の用量を、少なくとも夕食後３時間空けて摂取した。この処置期間を、８４日間続けた。
【００９８】
血液サンプルを、１１３日間の試験期間にわたって規定した間隔で採取した。このサンプルを、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｇｅｎｚｙｍｅ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓ）を使用して、血清中のＩＬ−１０レベル、ＩＬ−１２レベル、およびＩＦＮ−γレベルについて分析した。この結果を、この５人の患者の各々について、図７Ａ（ＩＬ−１０）、図７Ｂ（ＩＦＮ−γ）、および図８Ａ〜図８Ｅ（ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、およびＩＦＮ−γ）に示す。
【００９９】
（表１０．空腹状態下において７．５ｍｇのインターフェロン−τを用いて１日２回処置されたＣ型肝炎ウイルスを有する患者におけるインターロイキン−１０のレベル、インターフェロン−γのレベルおよびそれらの比）
【０１００】
【表１０】
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このデータは、空腹は、ＨＣＶ患者においてＩＬ−１０応答を有意に改善せず、そしてこの応答に、より大きい変動性をもたらし得ることを示す。
【図面の簡単な説明】
【０１０１】
【図１−１】図１Ａ〜１Ｂは、多発性硬化症を罹患し、そしてＩＦＮ−τによって経口的に処置されたヒト患者中のＩＬ−１０血清レベルを、１日間〜２８日間、０．２ｍｇのＩＦＮ−τ（図１Ａ）および０．６ｍｇのＩＦＮ−τ（図１Ｂ）によって毎日処置された患者群Ｉ、患者群ＩＩ、ならびに患者群ＩＩＩに対する時間（日）の関数として、ｐｇ／ｍＬで示すグラフである。
【図１−２】図１Ｃは、多発性硬化症を罹患し、そしてＩＦＮ−τによって経口的に処置されたヒト患者中のＩＬ−１０血清レベルを、１日間〜２８日間、１．８ｍｇのＩＦＮ−τ（図１Ｃ）によって毎日処置された患者群Ｉ、患者群ＩＩ、ならびに患者群ＩＩＩに対する時間（日）の関数として、ｐｇ／ｍＬで示すグラフである。図１Ｄは、１日間〜２８日間、０．２ｍｇのＩＦＮ−τ（菱形、群Ｉ）、０．６ｍｇのＩＦＮ−τ（四角、群ＩＩ）および１．８ｍｇのＩＦＮ−τ（三角、群ＩＩＩ）によって毎日処置された試験群Ｉ、試験群ＩＩ、ならびに試験群ＩＩＩの各々におけるヒト患者の平均ＩＬ−１０血清レベル（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図１−３】図１Ｅは、本発明の１つの実施形態に従ってＩＬ−１０応答を決定するための、曲線下面積の計算を示す。
【図２−１】図２Ａ〜図２Ｂは、多発性硬化症を罹患し、そしてＩＦＮ−τによって経口的に処置されたヒト患者中のＩＦＮ−γ血清レベルを、１日間〜２８日間、０．２ｍｇのＩＦＮ−τ（図２Ａ）および０．６ｍｇのＩＦＮ−τ（図２Ｂ）によって毎日処置された患者群Ｉ、患者群ＩＩ、ならびに患者群ＩＩＩに対する時間（日）の関数として、ｐｇ／ｍＬで示すグラフである。
【図２−２】図２Ｃは、多発性硬化症を罹患し、そしてＩＦＮ−τによって経口的に処置されたヒト患者中のＩＦＮ−γ血清レベルを、１日間〜２８日間、１．８ｍｇのＩＦＮ−τ（図２Ｃ）によって毎日処置された患者群Ｉ、患者群ＩＩ、ならびに患者群ＩＩＩに対する時間（日）の関数として、ｐｇ／ｍＬで示すグラフである。図２Ｄは、１日間〜２８日間、０．２ｍｇのＩＦＮ−τ（菱形、群Ｉ）、０．６ｍｇのＩＦＮ−τ（四角、群ＩＩ）および１．８ｍｇのＩＦＮ−τ（三角、群ＩＩＩ）によって毎日処置された試験群Ｉ、試験群ＩＩ、ならびに試験群ＩＩＩの各々におけるヒト患者の平均ＩＮＦ−γ血清レベル（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図３−１】図３Ａ〜図３Ｂは、Ｃ型肝炎を罹患し、そしてＩＦＮ−τによって経口的に処置されたヒト患者中のＩＬ−１０血清レベルを、０．３３ｍｇのＩＦＮ−τによって１日３回、毎日処置された試験群Ｉにおける６人の患者（図３Ａ）、および１．０ｍｇのＩＦＮ−τによって１日３回、毎日処置された試験群ＩＩにおける６人の患者（図３Ｂ）に対する時間（日）の関数として、ｐｇ／ｍＬで示すグラフである。
【図３−２】図３Ｃは、Ｃ型肝炎を罹患し、そしてＩＦＮ−τによって経口的に処置されたヒト患者中のＩＬ−１０血清レベルを、３ｍｇのＩＦＮ−τによって１日３回、毎日処置された試験群ＩＩＩにおける６人の患者（図３Ｃ）についての時間（日）の関数として、ｐｇ／ｍＬで示すグラフである。図３Ｄは、血清ＩＬ−１０レベルの増加の百分率を、試験群Ｉ（菱形、１日３回０．３３ｍｇ）、試験群ＩＩ（四角、１日３回１ｍｇ）、および試験群ＩＩＩ（三角、１日３回３ｍｇ）に対する時間の関数として示す、図３Ａ〜図３Ｃの試験群Ｉ、試験群ＩＩ、および試験群ＩＩＩについての概略プロットである。
【図４−１】図４Ａ〜図４Ｂは、Ｃ型肝炎を罹患し、そしてＩＦＮ−τによって経口的に処置されたヒト患者中のＩＦＮ−γ血清レベルを、０．３３ｍｇのＩＦＮ−τによって１日３回、毎日処置された試験群Ｉにおける６人の患者（図４Ａ）、および１．０ｍｇのＩＦＮ−τによって１日３回、毎日処置された試験群ＩＩにおける６人の患者（図４Ｂ）に対する時間（日）の関数として、ｐｇ／ｍＬで示すグラフである。
【図４−２】図４Ｃは、Ｃ型肝炎を罹患し、そしてＩＦＮ−τによって経口的に処置されたヒト患者中のＩＦＮ−τ血清レベルを、３ｍｇのＩＦＮ−τによって１日３回、毎日処置された試験群ＩＩＩにおける６人の患者（図４Ｃ）についての時間（日）の関数として、ｐｇ／ｍＬで示すグラフである。図４Ｄは、平均血清ＩＦＮ−γレベルを、試験群Ｉ（菱形、１日３回０．３３ｍｇ）、試験群ＩＩ（円、１日３回１ｍｇ）、および試験群ＩＩＩ（三角、１日３回３ｍｇ）に対する時間の関数として示す、図４Ａ〜図４Ｃの試験群Ｉ、試験群ＩＩ、および試験群ＩＩＩについての概略プロットである。
【図５】図５Ａ〜図５Ｂは、Ｃ型肝炎を罹患し、そしてＩＦＮ−τによって経口的に処置されたヒト患者中のＩＬ−１０血清レベル（図５Ａ）およびＩＦＮ−γ血清レベル（図５Ｂ）を、時間（日）の関数として、ｐｇ／ｍＬで示すグラフであり、ここで７．５ｍｇ用量のＩＦＮ−τが、空の胃に対して１日２回与えられた。
【図６−１】図６Ａ〜図６Ｂは、図５Ａ〜図５Ｂに関して記載されるように処置された６人の患者についての、ＩＬ−１０血清レベル（菱形）、ＩＦＮ−γ血清レベル（四角）、およびＩＬ−１２血清レベル（三角）を示す。
【図６−２】図６Ｃ〜図６Ｄは、図５Ａ〜図５Ｂに関して記載されるように処置された６人の患者についての、ＩＬ−１０血清レベル（菱形）、ＩＦＮ−γ血清レベル（四角）、およびＩＬ−１２血清レベル（三角）を示す。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図１−３】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図５】
2007530452.tif 000021
【図６−１】
2007530452.tif 000022
【図６−２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2007530452.tif 000028
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