(57)【要約】  本発明は、化合物、このような化合物を含む医薬組成物およびこのような化合物を、肝臓Ｘ受容体(ＬＸＲ)の活性と関連する疾患または障害の処置または予防に使用するための方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2007523087.tif 000032
〔式中、
Ｙは、Ｏ、ＮＲ４およびＳから選択され；ここで、Ｒ４は、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、ハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−８ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；
ｎは０、１、２、３および４から選択され；
Ｒ１は、ハロ、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキルおよびハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシ、−ＸＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＸＯＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＸＣ（Ｏ）ＯＲ４、−ＸＯＲ４、−ＸＳ（Ｏ）２Ｒ４、−ＸＳ（Ｏ）Ｒ４、−ＸＳＲ４、−ＸＮＲ４Ｒ８、−ＸＣ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ８、−ＸＮＲ４Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−ＸＮＲ４Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−ＸＮＲ４Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ８、−ＸＮＲ４Ｃ（ＮＲ４Ｒ４）ＮＲ４Ｒ８、−ＸＰ（Ｏ）（ＯＲ４）ＯＲ４、−ＸＯＰ（Ｏ）（ＯＲ４）ＯＲ４、−ＸＳ（Ｏ）２ＮＲ４Ｒ８、−ＸＳ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ８、−ＸＳＮＲ４Ｒ８、−ＸＮＲ４Ｓ（Ｏ）２Ｒ４、−ＸＮＲ４Ｓ（Ｏ）Ｒ４、−ＸＮＲ４ＳＲ４、−ＸＮＲ４Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ８、−および−ＸＣ（Ｏ）ＳＲ４から選択され；ここでＸは、結合またはＣ１−６アルキレンであり；そして、Ｒ４およびＲ８は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、ハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−８ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択されるか；または、Ｒ４およびＲ８は、Ｒ４およびＲ８が結合している窒素原子と一体となってＣ５−１０ヘテロアリールまたはＣ３−８ヘテロシクロアルキルを形成し；ここでＲ４またはＲ４とＲ８の組合せの任意のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルは、所望により、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキルおよびハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシからなる群から独立して選択される１個から４個のラジカルで置換されていてよく；
Ｒ２は、Ｃ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−８ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここで、Ｒ２の任意のアリール−アルキル、ヘテロアリール−アルキル、シクロアルキル−アルキルまたはヘテロシクロアルキル−アルキルは、所望により、ハロ、シアノ−Ｃ０−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、ハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシ、−ＯＸＲ７、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＸＣ（Ｏ）ＯＲ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＸＯＲ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＸＮＲ７Ｒ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＸＳ（Ｏ）０−２Ｒ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＸＮＲ７Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＸＣ（Ｏ）ＸＣ（Ｏ）ＯＲ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ９、−ＯＸＣ（Ｏ）ＯＲ７、−ＯＸＯＲ７、−ＯＸＲ９、−ＸＲ９、−ＯＸＣ（Ｏ）Ｒ９、−ＯＸＳ（Ｏ）０−２Ｒ９および−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＣＲ７［Ｃ（Ｏ）Ｒ８］２から独立して選択される１個から５個のラジカルで置換されていてよく；ここで、Ｘは結合およびＣ１−６アルキレンから選択され、ここで、Ｘの任意のメチレンは、所望により、Ｃ(Ｏ)、ＮＲ７、Ｓ(Ｏ)２およびＯから選択される２価ラジカルで置換でき；Ｒ７およびＲ８は、独立して水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、ハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−８ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；Ｒ９はＣ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここで、Ｒ９の任意のアルキルは、−Ｃ(Ｏ)ＯＲ１０で置換された水素を有してよく；そして、Ｒ７、Ｒ８またはＲ９の任意のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルは、所望により、ハロ、シアノ、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキル、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシ、−ＸＣ(Ｏ)ＯＲ１０、−ＸＯＲ１０、−ＸＲ１１、−ＸＯＲ１１、−ＸＣ（Ｏ）Ｒ１１、−ＸＮＲ１０Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０、−ＸＮＲ１０Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＸＮＲ１０Ｓ（Ｏ）０−２Ｒ１０、−ＸＳ（Ｏ）０−２Ｒ１１、−ＸＣ（Ｏ）Ｒ１０、−ＸＣ（Ｏ）ＮＲ１０Ｒ１１、−ＸＣ（Ｏ）ＮＲ１０ＯＲ１０、−ＸＣ（Ｏ）ＮＲ１０Ｒ１０、−ＸＳ（Ｏ）０−２ＮＲ１０Ｒ１０および−ＸＳ（Ｏ）０−２Ｒ１０から独立して選択される１個から４個のラジカルで置換されていてよく；ここで、Ｒ１０は独立して水素、Ｃ１−６アルキルおよびハロ−置換−Ｃ１−６アルキルから選択され；そして、Ｒ１１は、Ｃ６−１０アリール、Ｃ３−８ヘテロアリール、Ｃ３−１２シクロアルキルおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキルから独立して選択され；
Ｒ３は、１個から３個のＣ１−６アルキルラジカルで置換されていてよいＣ１−１０アルキル、Ｃ１−１０アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−１０アルキル、ハロ−置換−Ｃ１−１０アルコキシおよびＣ３−１２シクロアルキルから選択される。〕
の化合物ならびにその薬学的に許容される得、水和物、溶媒和物、異性体およびプロドラッグ。
【請求項２】
ｎが、０、１、２および３から選択され；ＹがＯであり；
Ｒ１が、ハロ、Ｃ１−６アルキルおよびハロ−置換−Ｃ１−６アルキルから選択され；
Ｒ２が、Ｃ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−８ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキルおよびＣ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここで、Ｒ２の任意のアリール−アルキル、ヘテロアリール−アルキルまたはシクロアルキル−アルキルが、所望により、ハロ、ヒドロキシル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、ハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシ、−ＯＸＲ７、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＸＣ（Ｏ）ＯＲ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＸＯＲ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＸＮＲ７Ｒ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＸＳ（Ｏ）０−２Ｒ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＸＮＲ７Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＸＣ（Ｏ）ＸＣ（Ｏ）ＯＲ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ９、−ＯＸＣ（Ｏ）ＯＲ７、−ＯＸＯＲ７、−ＯＸＲ９、−ＸＲ９、−ＯＸＣ（Ｏ）Ｒ９および−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＣＲ７［Ｃ（Ｏ）Ｒ８］２から独立して選択される１個から３個のラジカルにより置換されていてよく；ここで、Ｘが、結合およびＣ１−６アルキレンから選択され；Ｒ７およびＲ８が、独立して水素、シアノ、Ｃ１−６アルキル、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；Ｒ９が、Ｃ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここで、Ｒ９の任意のアルキルが、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０で置換された水素を有してよく；そして、Ｒ９の任意のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルが、所望により、ハロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキル、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシ、−ＸＣ（Ｏ）ＯＲ１０、−ＸＣ（Ｏ）Ｒ１０、−ＸＣ（Ｏ）ＮＲ１０Ｒ１０、−ＸＳ（Ｏ）０−２ＮＲ１０Ｒ１０および−ＸＳ（Ｏ）０−２Ｒ１０から独立して選択される１個から４個のラジカルで置換されていてよく；ここで、Ｒ１０が、独立して水素およびＣ１−６アルキルから選択され；そして、Ｒ３が、所望により１個から３個のＣ１−６アルキルラジカルで置換されていてよいＣ１−１０アルキルおよびＣ３−１２シクロアルキルから選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が、ハロ、メチル、エチルおよびトリフルオロメチルから選択され；そして、Ｒ３が、ｔ−ブチル、メチル−シクロペンチル、１，１−ジメチル−プロピル、１−エチル−１−メチル−プロピルおよびメチル−シクロヘキシルから選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２が、フェニル、ベンゾ［１，３］ジオキソリル、シクロペンチル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシニル、２，３−ジヒドロ−ベンゾフラン、１Ｈ−インダゾリル、１Ｈ−インドリル、ナフチルおよび２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イルから選択され；ここでＲ２の任意のアリール−アルキル、ヘテロアリール−アルキルまたはシクロアルキル−アルキルが、所望により、ハロ、ヒドロキシ、メトキシ、トリフルオロ−メトキシ、ジフルオロ−メトキシ、エテニル、メチル−スルファニル、メチル−カルボニル−アミノ、ホルムアミジル、トリフルオロ−メチル、メチル、フェニル、オキサゾリル、ピラゾリル、ピロリジニル−カルボニル、フェノキシ、フェニル−カルボニル、ピリジニル、１Ｈ−インドリル、ピリミジニル、アミノ−カルボニル、ジメチル−アミノ、チオフェニル、メチル−スルファニル、メチル−ホルムアミジル、メチル−カルボニル、エテニル、フェノキシ、メトキシ−カルボニル、ベンゾキシ、イソプロピル、フラニル、イソプロピルオキシ、［１，３］ジオキソラニルおよびシアノ−メチルから選択される１個から３個のラジカルにより置換されていてよく；ここでＲ２の任意のアリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキル置換基が、所望により、ハロ、メチル、シアノ、カルボキシ、カルボキシ−メチル、シアノ−メチル、メトキシ、カルボニル−メチル、エチル、トリフルオロ−メチル、ヒドロキシ、イソプロピル、メチル−スルホニル−アミノ、ジメチル−アミノ−カルボニル、ジメチル−アミノ、アミノ−スルホニル、クロロ−メチル−カルボニル−アミノ、ジエチル−アミノ−カルボニル、１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソベンゾフラン−５−イル、４−オキソ−ピペリジン−１−イル−カルボニル、ベンジル−ホルムアミジル、モルホリノ−カルボニル、シクロプロピル−ホルムアミジル、イソブチル−ホルムアミジル、エチル−ホルムアミジル、ブトキシ、エトキシ、ベンジル、シクロペンチル−ホルムアミジル、２−メトキシ−プロピオニル、メトキシ−メチル−アミノ−カルボニル、メチル−カルボニル−アミノ、２−オキソ−ピペリジン−１−イル−ブチル、ｔ−ブチル、メチル−スルホニル−アミノ、メトキシ−メチル、ベンゾ−アミノ−カルボニル、メトキシ−カルボニル、メトキシ−カルボニル−エチル、エトキシ−カルボニル、エトキシ−カルボニル−メチル、フェノキシ、ヒドロキシ−メチル、ｔ−ブトキシ−カルボニル、ｔ−ブトキシ−カルボニル−アミノ、フェニル−スルホニル、フェニル、アセチル−アミノ、メチル−スルホニル、メトキシ−カルボニル−アミノ、１−カルボキシ−エチルおよびトリフルオロ−メトキシから選択される１個から３個のラジカルにより置換されていてよい、請求項１記載の化合物。
【請求項５】
治療的有効量の請求項１記載の化合物を薬学的に許容される賦形剤と共に含む、医薬組成物。
【請求項６】
動物における肝臓Ｘ受容体(ＬＸＲ)活性の調節により、疾患の病状および／または総体的症状を予防、阻止または軽減できるものである疾患の処置法であって、該動物に治療的有効量の請求項１記載の化合物を投与することを含む、方法。
【請求項７】
疾患または障害が心臓血管疾患、糖尿病、神経変性疾患および炎症から選択される、請求項６記載の方法。
【請求項８】
動物におけるＬＸＲ活性が疾患の病状および／または総体的症状に関連しているものである疾患または障害であって、心臓血管疾患、糖尿病、神経変性疾患および炎症から選択される疾患の処置用医薬の製造における、請求項１記載の化合物の使用。
【請求項９】
動物におけるＬＸＲ活性の調節により、疾患の病状および／または総体的症状を予防、阻止または軽減できるものである疾患または障害の処置法であって、該動物に治療的有効量の請求項１記載の化合物を投与することを含む、方法。
【請求項１０】
さらに治療的有効量の請求項１記載の化合物を、他の治療的に関連した薬剤と組み合わせて投与することを含む、請求項９記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
関連出願との相互参照
本発明は、２００４年２月１１日出願の米国仮特許出願６０／５４４,１４９に対する優先権の利益を主張する。この出願の全部の記載は、引用により、その全体として、かつすべての目的に関して、本出願に包含される。
【０００２】
発明の背景
発明の分野
本発明は、化合物、このような化合物を含む医薬組成物および、このような化合物を肝臓Ｘ受容体(ＬＸＲ)の活性と関連する疾患または障害の処置または予防に使用する方法を提供する。
【０００３】
背景
肝臓Ｘ受容体(ＬＸＲ)、ＬＸＲαおよびＬＸＲβは、コレステロールおよび胆汁酸を含む数種の重要な脂質の代謝を制御する核受容体である。ＬＸＲβは体内のあちこちに発現されるが、ＬＸＲαは肝臓におよびわずかに腎臓、小腸、脂肪組織、脾臓および副腎で発現される。
【０００４】
ＬＸＲは、ＡＴＰ結合カセットトランスポーター−１(ＡＢＣＡ１)プロモーターに結合し、該遺伝子の発現を増加させてＡＢＣＡ１タンパク質を発現させる。ＡＢＣＡ１は、肝臓外細胞から発生期の高密度リポタンパク質(ＨＤＬ)粒子上へのコレステロール流出の制御に関与する、膜に結合した輸送タンパク質である。ＡＢＣＡ１遺伝子の変異は低レベルのＨＤＬ、ならびに附随するアテローム性動脈硬化症、心筋梗塞および虚血性卒中のような心臓血管疾患の危険性の増大をもたらす。ＬＸＲαおよびβアゴニストは、ＡＢＣＡ１遺伝子発現を増加させ、それによりＨＤＬコレステロールを増加させ、そして結果として、コレステロールの正味の吸収および心臓血管疾患の危険性の両方を減少させる。ＬＸＲアゴニストはまたアポリポタンパク質Ｅ(ａｐｏＥ)およびＡＢＣＧ１のマクロファージ発現を上方制御し、この両方とも細胞コレステロールの流出に関与する。ＡＢＣＡ１、ＡＢＣＧ１および／またはａｐｏＥ発現の上方制御を介したマクロファージコレステロール流出の刺激、ならびにコレステロールエステル伝導タンパク質およびリポタンパク質リパーゼを含む他の標的遺伝子の発現の増加により、ＬＸＲアゴニストは血漿リポタンパク質に作用する。
【０００５】
本発明の新規化合物は、ＬＸＲの活性を調節し、故に、心臓血管疾患、炎症ならびにインスリン抵抗性および肥満のようなグルコース代謝の障害のような、ＬＸＲ関連疾患の処置に有用であることが予測される。
【０００６】
発明の概要
第一の局面において、本発明は式Ｉ：
【化１】
2007523087.tif 000002
〔式中、
Ｙは、Ｏ、ＮＲ４およびＳから選択され；ここで、Ｒ４は、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、ハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−８ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；
ｎは、０、１、２、３および４から選択され；
Ｒ１は、ハロ、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキルおよびハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシ、−ＸＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＸＯＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＸＣ（Ｏ）ＯＲ４、−ＸＯＲ４、−ＸＳ（Ｏ）２Ｒ４、−ＸＳ（Ｏ）Ｒ４、−ＸＳＲ４、−ＸＮＲ４Ｒ８、−ＸＣ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ８、−ＸＮＲ４Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−ＸＮＲ４Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−ＸＮＲ４Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ８、−ＸＮＲ４Ｃ（ＮＲ４Ｒ４）ＮＲ４Ｒ８、−ＸＰ（Ｏ）（ＯＲ４）ＯＲ４、−ＸＯＰ（Ｏ）（ＯＲ４）ＯＲ４、−ＸＳ（Ｏ）２ＮＲ４Ｒ８、−ＸＳ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ８、−ＸＳＮＲ４Ｒ８、−ＸＮＲ４Ｓ（Ｏ）２Ｒ４、−ＸＮＲ４Ｓ（Ｏ）Ｒ４、−ＸＮＲ４ＳＲ４、−ＸＮＲ４Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ８、−および−ＸＣ（Ｏ）ＳＲ４から選択され；ここで、Ｘは、結合またはＣ１−６アルキレンであり；そして、Ｒ４およびＲ８は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、ハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−８ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択されるか；または、Ｒ４およびＲ８は、Ｒ４およびＲ８が結合している窒素原子と一体となってＣ５−１０ヘテロアリールまたはＣ３−８ヘテロシクロアルキルを形成し；ここでＲ４またはＲ４とＲ８の組合せの任意のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルは、所望により、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキルおよびハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシからなる群から独立して選択される１個から４個のラジカルで置換されていてよく；
【０００７】
Ｒ２は、Ｃ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−８ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここで、Ｒ２の任意のアリール−アルキル、ヘテロアリール−アルキル、シクロアルキル−アルキルまたはヘテロシクロアルキル−アルキルは、所望により、ハロ、シアノ−Ｃ０−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、ハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシ、−ＯＸＲ７、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＸＣ（Ｏ）ＯＲ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＸＯＲ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＸＮＲ７Ｒ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＸＳ（Ｏ）０−２Ｒ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＸＮＲ７Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＸＣ（Ｏ）ＸＣ（Ｏ）ＯＲ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ９、−ＯＸＣ（Ｏ）ＯＲ７、−ＯＸＯＲ７、−ＯＸＲ９、−ＸＲ９、−ＯＸＣ（Ｏ）Ｒ９、−ＯＸＳ（Ｏ）０−２Ｒ９および−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＣＲ７［Ｃ（Ｏ）Ｒ８］２から独立して選択される１個から５個のラジカルで置換されていてよく；ここで、Ｘは結合およびＣ１−６アルキレンから選択され、ここで、Ｘの任意のメチレンは、所望により、Ｃ(Ｏ)、ＮＲ７、Ｓ(Ｏ)２およびＯから選択される２価ラジカルで置換でき；Ｒ７およびＲ８は、独立して水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、ハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−８ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；Ｒ９はＣ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここで、Ｒ９の任意のアルキルは、−Ｃ(Ｏ)ＯＲ１０で置換された水素を有してよく；そして、Ｒ７、Ｒ８またはＲ９の任意のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルは、所望により、ハロ、シアノ、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキル、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシ、−ＸＣ(Ｏ)ＯＲ１０、−ＸＯＲ１０、−ＸＲ１１、−ＸＯＲ１１、−ＸＣ（Ｏ）Ｒ１１、−ＸＮＲ１０Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０、−ＸＮＲ１０Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＸＮＲ１０Ｓ（Ｏ）０−２Ｒ１０、−ＸＳ（Ｏ）０−２Ｒ１１、−ＸＣ（Ｏ）Ｒ１０、−ＸＣ（Ｏ）ＮＲ１０Ｒ１１、−ＸＣ（Ｏ）ＮＲ１０ＯＲ１０、−ＸＣ（Ｏ）ＮＲ１０Ｒ１０、−ＸＳ（Ｏ）０−２ＮＲ１０Ｒ１０および−ＸＳ（Ｏ）０−２Ｒ１０から独立して選択される１個から４個のラジカルで置換されていてよく；ここで、Ｒ１０は独立して水素、Ｃ１−６アルキルおよびハロ−置換−Ｃ１−６アルキルから選択され；そして、Ｒ１１は、Ｃ６−１０アリール、Ｃ３−８ヘテロアリール、Ｃ３−１２シクロアルキルおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキルから独立して選択され；
【０００８】
Ｒ３は、１個から３個のＣ１−６アルキルラジカルで置換されていてよいＣ１−１０アルキル、Ｃ１−１０アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−１０アルキル、ハロ−置換−Ｃ１−１０アルコキシおよびＣ３−１２シクロアルキルから選択される。〕
の化合物；ならびに、そのＮ−オキシド誘導体、Ｓ−オキシド誘導体、プロドラッグ誘導体、被保護誘導体、個々の異性体および異性体混合物；ならびに、このような化合物の薬学的に許容される塩および溶媒和物（例えば、水和物）を提供する。
【０００９】
第二の局面において、本発明は、式Ｉの化合物またはそのＮ−オキシド誘導体、個々の異性体および異性体混合物；またはその薬学的に許容される塩を、１個以上の適当な賦形剤と共に含む、医薬組成物を提供する。
【００１０】
第三の局面において、本発明は、動物におけるＬＸＲ活性の調節により、疾患の病状および／または総体的症状を予防、阻止または軽減できるものである疾患の処置法であって、該動物に治療的有効量の式Ｉの化合物またはそのＮ−オキシド誘導体、個々の異性体および異性体混合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。
【００１１】
第四の局面において、本発明は、動物におけるＬＸＲ活性が疾患の病状および／または総体的症状に関連しているものである疾患の処置用医薬の製造における、式Ｉの化合物の使用を提供する。
【００１２】
第五の局面において、本発明は、式Ｉの化合物およびそのＮ−オキシド誘導体、プロドラッグ誘導体、被保護誘導体、個々の異性体および異性体混合物、ならびにその薬学的に許容される塩の製造法を提供する。
【００１３】
発明の詳細な記載
定義
基ならびに他の基、例えばハロ−置換−アルキルおよびアルコキシの構成要素としての“アルキル”は、直鎖または分枝鎖のいずれかであり得る。Ｃ１−６アルコキシは、メトキシ、エトキシなどを含む。ハロ−置換アルキルは、トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチルなどを含む。
【００１４】
“アリール”は、６個から１０個の環炭素原子を含む、単環式または縮合二環式芳香環集合体である。例えば、アリールは、フェニルまたはナフチルであり得、好ましくはフェニルである。“アリーレン”は、アリール基由来の２価基を意味する。“ヘテロアリール”は、アリールについて定義の通りであり、ここで、環員の１個以上がヘテロ原子である。例えばヘテロアリールは、ピリジル、インドリル、インダゾリル、キノキサリニル、キノリニル、ベンゾフラニル、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、ベンゾ[１,３]ジオキソール、イミダゾリル、ベンゾ−イミダゾリル、ピリミジニル、フラニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピラゾリル、チエニルなどを含む。“Ｃ６−１０アリールＣ０−４アルキル”は、アルキレン基を介して接続している、上記で定義の通りのアリールである。例えば、Ｃ６−１０アリールＣ０−４アルキルは、フェネチル、ベンジルなどを含む。
【００１５】
“シクロアルキル”は、示す環原子数を含む、飽和または部分的不飽和、単環式、縮合二環式または架橋多環式環集合体を意味する。例えば、Ｃ３−１０シクロアルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどを含む。“ヘテロシクロアルキル”は、示す環炭素の１個以上が−Ｏ−、−Ｎ＝、−ＮＲ−、−Ｃ(Ｏ)−、−Ｓ−、−Ｓ(Ｏ)−または−Ｓ(Ｏ)２−（ここで、Ｒは水素、Ｃ１−４アルキルまたは窒素保護基である。）で置換されている以外、本明細書で定義の通りのシクロアルキルである。例えば、本発明の化合物を記載するために本明細書で使用するＣ３−８ヘテロシクロアルキルは、モルホリノ、ピロリジニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピペリジニロン、１,４−ジオキサ−８−アザ−スピロ[４.５]デク−８−イルなどを含む。
【００１６】
“ハロゲン”(またはハロ)は、好ましくはクロロまたはフルオロを意味するが、ブロモまたはヨードであってもよい。
【００１７】
ＬＸＲ受容体に関連する“調節”は、ＬＸＲ受容体およびＬＸＲ経路と関連するその生物学的活性の活性化（例えば、標的遺伝子の転写制御）を意味する。ＬＸＲ受容体の調節は、上方制御（すなわち、アゴナイズ、活性化または刺激）または下方制御（すなわち拮抗、阻止または抑制）であり得る。ＬＸＲモジュレーターの作用形態は、直接的、例えば、リガンドとしてＬＸＲ受容体への結合を介するものであり得る。該調節はまた、間接的、例えば、他の方法でＬＸＲ受容体と結合しそして活性化する他の分子への結合および／またはその修飾を介してであってもよい。故に、ＬＸＲの調節は、ＬＸＲアゴニストリガンドの生物活性（すなわち、ＬＸＲ受容体と結合および／または活性化するその能力）の変化、またはリガンドの細胞レベルの変化を含む。
【００１８】
“処置”、“処置する”および“処置し”は、疾患および／またはその随伴症状の軽減もしくは減退法を意味する。
【００１９】
好ましい態様の記載
本発明は、ＬＸＲ活性の調節により、疾患の病状および／または総体的症状を予防、阻止または軽減できるものである疾患の処置のための、化合物、組成物および方法を提供し、該方法は、動物に治療的有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む。
【００２０】
一つの態様において、ｎは、０、１、２および３から選択される、式Ｉの化合物に関する。
【００２１】
他の態様において、Ｒ１は、ハロ、Ｃ１−６アルキルおよびハロ−置換−Ｃ１−６アルキルから選択される。
【００２２】
他の態様において、Ｒ２は、Ｃ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−８ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキルおよびＣ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここでＲ２の任意のアリール−アルキル、ヘテロアリール−アルキルまたはシクロアルキル−アルキルは、所望により、ハロ、ヒドロキシル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、ハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシ、−ＯＸＲ７、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＸＣ（Ｏ）ＯＲ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＸＯＲ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＸＮＲ７Ｒ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＸＳ（Ｏ）０−２Ｒ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＸＮＲ７Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＸＣ（Ｏ）ＸＣ（Ｏ）ＯＲ８、−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ９、−ＯＸＣ（Ｏ）ＯＲ７、−ＯＸＯＲ７、−ＯＸＲ９、−ＸＲ９、−ＯＸＣ（Ｏ）Ｒ９および−ＯＸＣ（Ｏ）ＮＲ７ＣＲ７［Ｃ（Ｏ）Ｒ８］２から独立して選択される１個から３個のラジカルにより置換されていてよく；ここで、Ｘは、結合およびＣ１−６アルキレンから選択され；Ｒ７およびＲ８は、独立して、水素、シアノ、Ｃ１−６アルキル、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；Ｒ９は、Ｃ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここで、Ｒ９の任意のアルキルは、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０で置換された水素を有していてよく；そして、Ｒ９の任意のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルは、所望により、ハロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキル、ハロ−置換−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−６アルコキシ、−ＸＣ（Ｏ）ＯＲ１０、−ＸＣ（Ｏ）Ｒ１０、−ＸＣ（Ｏ）ＮＲ１０Ｒ１０、−ＸＳ（Ｏ）０−２ＮＲ１０Ｒ１０および−ＸＳ（Ｏ）０−２Ｒ１０から独立して選択される１個から４個のラジカルで置換されていてよく；ここで、Ｒ１０は、独立して、水素およびＣ１−６アルキルから選択され；そして、Ｒ３は、所望により１個から３個のＣ１−６アルキルラジカルで置換されていてよいＣ１−１０アルキルおよびＣ３−１２シクロアルキルから選択される。
【００２３】
他の態様において、Ｒ１は、ハロ、メチル、エチルおよびトリフルオロメチルから選択され；そして、Ｒ３は、ｔ−ブチル、メチル−シクロペンチル、１，１−ジメチル−プロピル、１−エチル−１−メチル−プロピルおよびメチル−シクロヘキシルから選択される。
【００２４】
さらなる態様において、Ｒ２は、フェニル、ベンゾ［１，３］ジオキソリル、シクロペンチル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシニル、２，３−ジヒドロ−ベンゾフラン、１Ｈ−インダゾリル、１Ｈ−インドリル、ナフチルおよび２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イルから選択され；ここで、Ｒ２の任意のアリール−アルキル、ヘテロアリール−アルキルまたはシクロアルキル−アルキルは、所望により、ハロ、ヒドロキシ、メトキシ、トリフルオロ−メトキシ、ジフルオロ−メトキシ、エテニル、メチル−スルファニル、メチル−カルボニル−アミノ、ホルムアミジル、トリフルオロ−メチル、メチル、フェニル、オキサゾリル、ピラゾリル、ピロリジニル−カルボニル、フェノキシ、フェニル−カルボニル、ピリジニル、１Ｈ−インドリル、ピリミジニル、アミノ−カルボニル、ジメチル−アミノ、チオフェニル、メチル−スルファニル、メチル−ホルムアミジル、メチル−カルボニル、エテニル、フェノキシ、メトキシ−カルボニル、ベンゾキシ、イソプロピル、フラニル、イソプロピルオキシ、［１，３］ジオキソラニルおよびシアノ−メチルから選択される１個から３個のラジカルにより置換されていてよく；ここで、Ｒ２の任意のアリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキル置換基は、所望により、ハロ、メチル、シアノ、カルボキシ、カルボキシ−メチル、シアノ−メチル、メトキシ、カルボニル−メチル、エチル、トリフルオロ−メチル、ヒドロキシ、イソプロピル、メチル−スルホニル−アミノ、ジメチル−アミノ−カルボニル、ジメチル−アミノ、アミノ−スルホニル、クロロ−メチル−カルボニル−アミノ、ジエチル−アミノ−カルボニル、１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソベンゾフラン−５−イル、４−オキソ−ピペリジン−１−イル−カルボニル、ベンジル−ホルムアミジル、モルホリノ−カルボニル、シクロプロピル−ホルムアミジル、イソブチル−ホルムアミジル、エチル−ホルムアミジル、ブトキシ、エトキシ、ベンジル、シクロペンチル−ホルムアミジル、２−メトキシ−プロピオニル、メトキシ−メチル−アミノ−カルボニル、メチル−カルボニル−アミノ、２−オキソ−ピペリジン−１−イル−ブチル、ｔ−ブチル、メチル−スルホニル−アミノ、メトキシ−メチル、ベンゾ−アミノ−カルボニル、メトキシ−カルボニル、メトキシ−カルボニル−エチル、エトキシ−カルボニル、エトキシ−カルボニル−メチル、フェノキシ、ヒドロキシ−メチル、ｔ−ブトキシ−カルボニル、ｔ−ブトキシ−カルボニル−アミノ、フェニル−スルホニル、フェニル、アセチル−アミノ、メチル−スルホニル、メトキシ−カルボニル−アミノ、１−カルボキシ−エチルおよびトリフルオロ−メトキシから選択される１個から３個のラジカルにより置換されていてよい。
【００２５】
好ましい式Ｉの化合物は、下記実施例および表Ｉに詳述する。
【００２６】
薬理学および有用性
本発明の化合物は、ＬＸＲの活性を調節し、それ自体、ＬＸＲ活性が疾患の病状および／または総体的症状に関連しているものである疾患または障害の処置に有用である。本発明は、さらに、ＬＸＲ活性が疾患の病状および／または総体的症状に関連しているものである疾患または障害の処置用医薬の製造において使用するための、本発明の化合物を提供する。ＬＸＲ介在疾患または状態は、炎症、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、高コレステロール血症、高脂血症およびインスリン抵抗性、II型糖尿病、および肥満を含むグルコース恒常性の障害を含む心臓血管疾患を含む。
【００２７】
リポタンパク質代謝は、肝臓からの超低密度リポタンパク質(ＶＬＤＬ)としてのトリグリセリドとコレステロールに富む粒子の産生、これらのリポタンパク質粒子の血漿内での修飾(ＶＬＤＬから中間密度(ＩＤＬ)ないし低密度リポタンパク質(ＬＤＬ))ならびに粒子の血漿からの、また肝臓による排泄から成る。この過程は、トリグリセリドおよび遊離コレステロールの体細胞への輸送を提供する。逆コレステロール輸送は、過剰のコレステロールが肝外組織から肝臓に戻る機構と提案される。
【００２８】
本工程は、高密度リポタンパク質(ＨＤＬ)コレステロールにより行われる。肝臓からのリポタンパク質産生(ＶＬＤＬ、ＨＤＬ)、(全て)血漿内での粒子の修飾ならびにその後の肝臓への排泄のための回帰の組み合わせが血漿中の定常状態コレステロール濃度に寄与する。本発明の化合物は、動脈からのコレステロール流出の増加により、コレステロール輸送を増加させる。本発明は、逆コレステロール輸送増加用医薬の製造のための、本発明の化合物の使用を含む。加えて、本発明は、コレステロール吸収阻害用化合物ならびに正味のコレステロール吸収を阻害するための医薬の製造用の本発明の化合物の使用を提供する。
【００２９】
本発明の化合物はまた、炎症および神経変性疾患または神経学的障害の予防または処置に有用であり得る。従って、本発明はまた炎症の予防または処置法ならびに神経変性疾患もしくは神経学的障害、特にニューロン変性、神経傷害もしくは可塑性の障害により特徴付けられる神経変性疾患もしくは障害またはＣＮＳの炎症の予防または処置法を提供する。脳におけるニューロン変性、炎症、コレステロールおよび脂質異常により特徴付けられ、故に、ニューロンの増殖および／または修復により利益を受ける具体的疾患または状態は、卒中、アルツハイマー病、前頭側頭認知症(タウオパチー)、末梢神経障害、パーキンソン病、レビー小体型認知症、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症および多発性硬化症およびニーマン・ピック病を含む。ニューロン変性および／または可塑性の障害により特徴付けられる疾患または状態は、統合失調症および鬱病のような精神医学的疾患を含む。神経傷害により特徴付けられる疾患または状態は、外傷を含む脳および／または脊髄傷害と関連する状態を含む。加えて、本発明の化合物は、リウマチ性関節炎、骨関節症、乾癬、喘息などのような炎症性要素を伴う様々な疾患の処置に使用できる。
【００３０】
ＬＸＲアゴニストは糖耐性を改善し、そしてｇｌｕｔ４発現を増加させる（２００２年１２月２３日出願の米国仮特許出願６０／４３６,１１２；２００３年１２月２２日出願の米国特許出願１０／７４５,３３４）。肝臓および脂肪組織においてグルコース代謝に係わる遺伝子の協調した制御が存在する。肝臓において、ＬＸＲアゴニストは、肝臓糖新生に重要な数個の遺伝子の発現、例えば、ＰＧＣ−１α、ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ（ＰＥＰＣＫ）、およびグルコース−６−ホスファターゼ発現を阻害する。これらの糖新生遺伝子の阻止は、肝臓グルコース利用を促進させるグルコキナーゼの誘導を伴う。脂肪組織においてｇｌｕｔ４  ｍＲＮＡレベルがＬＸＲアゴニストにより上方制御されること、および３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞におけるグルコース取り込みがインビトロで増加することも発見された。
【００３１】
これらに発見に一致して、本発明は、本発明の化合物を対象に投与することにより、対象の細胞内のｇｌｕｔ４発現を促進させる方法を提供する。本発明はまた、糖尿病および肥満または高血糖のような関連障害を、これらの疾患の症状を軽減するための有効量の本発明の化合物を対象に投与することにより、処置する方法を提供する。例えば、II型糖尿病は本発明の方法により処置され得る。細胞によるインスリンおよびグルコース取り込みを増加することにより、本発明の化合物の投与はまた、インスリン障害(例えば、抵抗性、不活性または欠乏)および／または細胞への不十分なグルコース輸送により特徴付けられる他の疾患を処置できる。
【００３２】
本発明の化合物はまた、肝臓糖新生に重要な役割を有する多くの遺伝子の発現レベルを制御する。従って、本発明はさらに、このような遺伝子(例えば、ＰＧＣ−１およびＰＥＰＣＫ)の発現を調節することによる、対象の糖新生を減少させる方法を提供する。
【００３３】
膵臓において、ＬＸＲ活性化は、膵臓β細胞におけるグルコースおよび脂質代謝の調節を介してインスリン分泌を刺激し、ＬＸＲの抗糖尿病作用の他の機構を示唆する。ＬＸＲモジュレーターは、故に、糖耐性を、膵臓からのインスリン分泌の増加により制御する。
【００３４】
前記によって、本発明は、さらに、このような処置を必要とする対象における、前記のいずれかの疾患または障害を予防または処置する方法であって、該対象に治療的有効量(下記“投与および医薬組成物”参照)の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法を提供する。上記使用の全てに関して、必要な投与量は投与の形態、処置すべき特定の状態および所望の効果に依存して変化するであろう。
【００３５】
投与および医薬組成物
一般に、本発明の化合物は、単独で、または１種以上の治療剤との組み合わせで、当分野で既知の通常の許容される形態のいずれかを介して、治療的有効量で投与される。治療的有効量は、疾患の重症度、対象の年齢および総体的健康、使用する化合物の効力および他の因子に従って広範囲で変化し得る。一般に、十分な結果が、約０.０３から２.５mg／体重kgの１日投与量で漸進的に得られることが示される。大型哺乳類、例えばヒトでの指示される１日投与量は、約０.５mgから約１００mgであり、簡便には、例えば１日４回までの分割用量でまたは徐放性形態で投与する。経口投与用の適当な単位投与形態は、約１から５０mg活性成分を含む。
【００３６】
本発明の化合物は、医薬組成物として任意の慣用の経路で、特に経腸的に、例えば、経口で、例えば、錠剤またはカプセルの形で、または非経腸的に、例えば、注射用溶液または懸濁液の形で、局所的に、例えば、ローション、ゲル、軟膏またはクリームの形で、または鼻腔内にまたは坐薬形態でまたは吸入形態で投与できる。遊離形または薬学的に許容される塩形の本発明の化合物を少なくとも１個の薬学的に許容される担体または希釈剤と共に含む医薬組成物は、混合、造粒またはコーティング法のような慣用法により製造できる。例えば、経口組成物は、活性成分を、ａ)希釈剤、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロースおよび／またはグリシン；ｂ)滑剤、例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸、そのマグネシウムもしくはカルシウム塩および／またはポリエチレングリコール；錠剤についてはまたｃ)結合剤、例えば、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、デンプンペースト、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースおよび／またはポリビニルピロリドン；所望によりｄ)崩壊剤、例えば、デンプン、寒天、アルギン酸もしくはそのナトリウム塩、または起沸性混合物；および／またはｅ)吸収剤、着色剤、香味剤および甘味剤と共に含む、錠剤またはゼラチンカプセルであり得る。注射用組成物は、水性等張性溶液または懸濁液であってよく、そして坐薬は、脂肪エマルジョンまたは懸濁液から製造できる。本組成物は滅菌してよくおよび／またはアジュバント、例えば防腐剤、安定化剤、湿潤剤または乳化剤、溶解促進剤、浸透圧調整用塩および／または緩衝剤を含んでよい。加えて、それらはまた他の治療的に価値ある物質を含み得る。経皮投与用の適当な製剤は、有効量の本発明の化合物と担体を含む。担体は、宿主の皮膚を介した通過を助けるための薬理学的に許容される溶媒を含む。例えば、経皮デバイスは、裏打ち部材、化合物を所望により担体と共に含む貯蔵部、化合物を宿主の皮膚に制御されかつ予定された速度で長時間にわたり送達するための速度制御バリア、および該デバイスを宿主の皮膚に固定するための手段を含む、バンデージの形である。マトリックス経皮製剤も使用できる。例えば、皮膚および眼への、局所投与用の製剤は、好ましくは当分野で既知の水性溶液、軟膏、クリームまたはゲルである。このようなものは、可溶化剤、安定化剤、張性増加剤、緩衝剤および防腐剤を含むことができる。
【００３７】
本発明の化合物を、治療的有効量で１種以上の治療剤と組み合わせて投与できる(薬学的組み合わせ剤)。例えば、心臓血管、炎症性および／または神経変性疾患の処置において、相乗効果が使用する他の物質と起こり得る。このような化合物の例は、フィブラート、ＴＺＤ、メトホルミンなどを含む。本発明の化合物を他の治療剤と組み合わせて投与するとき、併用投与する化合物の投与量は、もちろん、用いる併用剤、用いる具体的薬剤、処置すべき状態などに依存して変化するであろう。
【００３８】
本発明はまた、ａ)本明細書に記載の本発明の化合物である第一剤を遊離形または薬学的に許容される塩形で、およびｂ)少なくとも１個の併用剤を含む、医薬的組み合わせ剤、例えばキットを提供する。本キットはその投与のための指示書を含み得る。
【００３９】
本明細書で用いる“併用投与”または“組み合わせ投与”などの用語は、選択した治療剤の単独の患者への投与を含むことを意味し、薬剤を必ずしも同じ投与経路でまたは同時に投与するものではない処置レジメンを含むことを意図する。
【００４０】
本明細書で使用する“医薬的組み合わせ剤”は、２個以上の活性成分の混合または組み合わせに由来する製品を意味し、そして活性成分の固定されたおよび固定されていない組み合わせの両方を含む。用語“固定された組み合わせ”は、活性成分、例えば式Ｉの化合物と併用剤を、両方とも患者に同時に、１個の物または投与の形態として投与することを意味する。用語“固定されていない組み合わせ”は、活性成分、例えば式Ｉの化合物と併用剤を、両方とも患者に、別々の物として、同時に、一緒にまたは具体的時間制限なしに連続的に投与することを意味し、ここで、このような投与は患者体内で２個の化合物の治療的有効レベルを提供する。後者はカクテル療法、例えば３個以上の活性成分の投与にも適用される。
【００４１】
本発明の化合物の製造法
本発明はまた、本発明の化合物の製造法を含む。記載の反応において、官能基、例えばヒドロキシ、アミノ、イミノ、チオまたはカルボキシ基を、これらが最終生成物において望まれるときに、反応への望まない参加を避けるために、保護する必要があるかもしれない。慣用の保護基を、標準実務に従い使用でき、例えば、T.W. Greene and P. G. M. Wuts in “Protective Groups in Organic Chemistry”, John Wiley and Sons, 1991を参照のこと。
【００４２】
式Ｉの化合物は、下記反応スキームＩの通りに進行して製造できる：
【化２】
2007523087.tif 000003
【００４３】
〔式中、Ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、発明の概要において式Ｉで定義した通りである。〕。式Ｉの化合物は、適当な溶媒（例えば、ジクロロメタンなど）および適当な塩基（例えば、ジイソプロピルエチルアミンなど）の存在下で、式２の化合物と式３の化合物を反応させることにより製造する。反応は、約１０から約４０℃の温度で行い、完了まで２０時間かかる。
【００４４】
本発明の化合物の製造のための付加的工程
本発明の化合物は、遊離塩基形の化合物と薬学的に許容される無機または有機酸を反応させることにより、薬学的に許容される酸付加塩として製造できる。あるいは、本発明の化合物の薬学的に許容される塩基付加塩を、遊離酸形の化合物と、薬学的に許容される無機または有機塩基を反応させることにより製造できる。あるいは、塩形の本発明の化合物を、出発物質または中間体の塩を使用して製造できる。
【００４５】
本発明の化合物の遊離酸または遊離塩基は、各々対応する塩基付加塩または酸付加塩から製造できる。例えば酸付加塩形の本発明の化合物を、適当な塩基(例えば、水酸化アンモニウム溶液、水酸化ナトリウムなど)で処理することにより、対応する遊離塩基に変換できる。塩基付加塩形の本発明の化合物は、対応する遊離酸から、適当な酸(例えば、塩酸など)で処理することにより変換できる。
【００４６】
酸化されていない形の本発明の化合物を、本発明の化合物のＮ−オキシドから、適当な不活性有機溶媒（例えばアセトニトリル、エタノール、水性ジオキサンなど）中、０から８０℃で、還元剤（例えば、硫黄、二酸化硫黄、トリフェニルホスフィン、リチウムボロハイドライド、水素化ホウ素ナトリウム、リン三塩化物、三臭化物など）で処理することにより、製造できる。
【００４７】
本発明の化合物のプロドラッグ誘導体は、当業者に既知の方法により製造できる(例えば、さらなる詳細は、Saulnier et al., (1994), Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Vol. 4, p. 1985参照)。例えば、適当なプロドラッグを、誘導体化されていない本発明の化合物と、適当なカルバミル化剤(例えば、１,１−アシルオキシアルキルカーボンクロリデート、パラ−ニトロフェニルカーボネートなど)を反応させることにより製造できる。
【００４８】
本発明の化合物の被保護誘導体は、当業者に既知の手段により製造できる。保護基の創成およびそれらの除去に適応できる技術の詳述は、T. W. Greene, “Protegting Groups in Organic Chemistry”, 3rd edition, John Wiley and Sons, Inc., 1999に見ることができる。
【００４９】
本発明の化合物は簡便には溶媒和物(例えば、水和物)として製造し、または本発明の工程中のそれが形成される。本発明の化合物の水和物は、簡便には、水性／有機溶媒混合物から、ジオキシン、テトラヒドロフランまたはメタノールのような有機溶媒を使用して、再結晶することにより製造できる。
【００５０】
本発明の化合物は、本化合物のラセミ混合物を光学活性分解剤と反応させ、ジアステレオ異性体化合物の対を形成させ、ジアステレオマーを分離し、そして光学的に純粋なエナンチオマーを回収することにより、個々の立体異性体として製造できる。エナンチオマーの分割は、本発明の電子対を共有するジアステレオマー誘導体を使用して行うことができるが、解離可能複合体が好ましい（例えば、結晶ジアステレオマー塩）。ジアステレオマーは異なる物理的特性（例えば、融点、沸点、溶解性、反応性など）を有し、これらの差異を利用して容易に分離できる。ジアステレオマーは、クロマトグラフィー、または好ましくは、溶解性の差異に基づく分離／分割技術により、分離できる。光学的に純粋なエナンチオマーを次いで、分解剤と共に、ラセミ化をもたらさない任意の実際的手段により回収する。ラセミ混合物の分割は、キラルＨＰＬＣを使用して行い得る。化合物の立体異性体の、そのラセミ混合物からの分割に適用できる技術のさらなる詳述は、Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, “Enantiomers, Racemates and Resolution”, John Wiley And Sons, Inc., 1981に見ることができる。
【００５１】
要約すると、式Ｉの化合物は下記を含む工程により製造できる：
(ａ)反応スキームＩのもの；そして
(ｂ)所望により本発明の化合物の薬学的に許容される塩への変換；
(ｃ)所望により塩形の本発明の化合物の塩ではない形への変換；
(ｄ)所望により酸化されていない本発明の化合物の薬学的に許容されるＮ−オキシドへの変換；
(ｅ)所望によりＮ−オキシド形の本発明の化合物の酸化されていない形への変換；
(ｆ)所望により本発明の化合物の個々の異性体の異性体混合物からの分割；
(ｇ)所望により誘導体化されていない本発明の化合物の薬学的に許容されるプロドラッグ誘導体への変換；そして
(ｈ)所望によりプロドラッグ誘導体の本発明の化合物の誘導体化されていない形への変換。
【００５２】
出発物質の製造が特に記載されていない限り、該化合物は既知であるか、当分野で既知のもしくは下記実施例に記載の通りの方法に準じて製造できる。
【００５３】
当業者は、上記の変換が本発明の化合物を製造するための方法の単なる代表であって、他の既知の方法を同様に使用できることを認識しよう。
【００５４】
実施例
本発明を、さらに、本発明の式Ｉの化合物の製造を説明する下記実施例により例示するが、それにより限定しない。
【００５５】
実施例１
Ｔｅｒｔ−ブチル２−（２，４，６−トリフルオロ−Ｎ−（３−ヒドロキシフェニル）ベンザミド酢酸塩
【化３】
2007523087.tif 000004
【００５６】
３−アミノフェノール（４．５８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１５ｍＬ）に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４．５８ｍｍｏｌ）およびブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（４．５８ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、５０℃にて２時間撹拌する。酢酸エチルおよび水を反応混合物に添加して、層を分離する。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、そして溶媒を蒸発させる。ｔｅｒｔ−ブチル２−（３−ヒドロキシフェニルアミノ）酢酸塩を得、それをさらなる精製なしに次工程に用いる。
【００５７】
前工程で得られたｔｅｒｔ−ブチル２−（３−ヒドロキシフェニルアミノ）酢酸塩のＣＨ２Ｃｌ２溶液（１５ｍＬ）に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（９．１６ｍｍｏｌ）を添加し、次いで２，４，６−トリフルオロベンゾイルクロライド（９．１６ｍｍｏｌ）を滴下する。反応混合物を室温にて１２時間撹拌する。濃縮およびＤＭＳＯに再溶解後、残渣を分取ＬＣＭＳ（１０から９０％ＣＨ３ＣＮ）により精製し、ｔｅｒｔ−ブチル２−（２，４，６−トリフルオロ−Ｎ−（３−ヒドロキシフェニル）ベンザミド）酢酸塩を得る：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.06 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 6.78 (s, 2H), 6.69 (d, J = 8 Hz, 1H), 6.48 (t, J = 8 Hz, 2H), 5.85 (bs, 1H), 4.42 (s, 2H), 1.49 (s, 9H); MS: (ES＋) 382.1 (M+1)＋。
【００５８】
実施例２
Ｔｅｒｔ−ブチル２−（Ｎ−（３−（２，６−ジメトキシフェニル）フェニル）−２，６−ジフルオロベンザミド）酢酸塩
【化４】
2007523087.tif 000005
【００５９】
３−ブロモアニリン（６９．８ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液２００ｍＬに、窒素雰囲気下で、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（６９．８ｍｍｏｌ）を添加し、次いで２，６−ジフルオロベンゾイルクロライド（６９．８ｍｍｏｌ）を滴下する。反応混合物を、室温で５時間撹拌する。ＴＬＣ（ヘキサン：酢酸エチル＝８：２）および分析ＬＣＭＳ（２０から１００％ＣＨ３ＣＮ）により、出発物質から生成物への完全な変換が示される。水を反応混合物に添加し、層を分離する。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、そして溶媒を蒸発させる。生成物、Ｎ−（３−ブロモフェニル）−２，６−ジフルオロベンズアミドを、さらに精製することなしに次工程に用いる。
【００６０】
Ｎ−（３−ブロモフェニル）−２，６−ジフルオロベンズアミドのＤＭＦ溶液２００ｍＬに、室温および窒素雰囲気下で、油分散中６０％のＮａＨ（１０４．７ｍｍｏｌ）をゆっくり添加し、反応混合物を３０分間攪拌する。ブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（１０４．７ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で撹拌する。１２時間後、反応は、ＴＬＣ（ヘキサン：酢酸エチル＝８：２）および分析ＬＣＭＳ（２０から１００％ＣＨ３ＣＮ）により完了している。酢酸エチルおよび水を反応混合物に添加し、層を分離する。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、そして溶媒を蒸発させる。粗物質を、自動カラムクロマトグラフィー（ヘキサンおよび酢酸エチルの勾配）により精製し、ｔｅｒｔ−ブチル２−（Ｎ−（３−ブロモフェニル）−２，６−ジフルオロベンザミド）酢酸塩を得る：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.36 (bs, 1H), 7.20 (m, 1H), 7.07( m, 2H), 6.96 (t, J = 8 Hz, 1H), 6.62 (td, J1 = 8 Hz, J2 = 1.2 Hz), 4.32 (s, 2H), 1,39 (s, 9H); MS: (ES＋) 448.0 (M+23)＋。
【００６１】
Ｔｅｒｔ−ブチル２−（Ｎ−（３−ブロモフェニル）−２，６−ジフルオロベンザミド）酢酸塩（０．５５ｍｍｏｌ）を、２，６−ジメトキシフェニルボロン酸（６．１３ｍｍｏｌ）およびＰｄ（Ｐｈ３Ｐ）４（０．０２４ｍｍｏｌ）と共に混合する。固形混合物に、窒素下、Ｎａ２ＣＯ３  ２Ｍ（０．８３ｍＬ）を添加し、次いでＤＭＦ（５．６ｍＬ）を添加する。反応混合物を室温で１時間撹拌し、その後、８５℃で１２時間加熱する。反応混合物を、自動カラムクロマトグラフィー（ヘキサンおよび酢酸エチルの勾配）により精製し、ｔｅｒｔ−ブチル２−（Ｎ−（３−（２，６−ジメトキシフェニル）フェニル）−２，６−ジフルオロベンザミド）酢酸塩を得る：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.19 (m, 6H), 6.69 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 6.58 (d. J = 8.4 Hz, 2H), 4.46 (s, 2H), 3.64 (s, 6H), 1,48 (s, 9H); MS: (ES＋) 484.1 (M+23)＋。
【００６２】
実施例３
Ｔｅｒｔ−ブチル２−（２，６−ジフルオロ−Ｎ−（３−（４−カルボキシベンジルオキシ）フェニル）ベンザミド）酢酸塩
【化５】
2007523087.tif 000006
【００６３】
３−アミノフェノール（６．９８ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液２０ｍＬに、窒素雰囲気下で、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（６．９８ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、２，６−ジフルオロベンゾイルクロライド（６．９８ｍｍｏｌ）を滴下する。反応混合物を室温で５時間撹拌し、生成物２，６−ジフルオロ−Ｎ−（３−ヒドロキシフェニル）ベンズアミドを、分取ＨＰＬＣにより精製する：1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.68 (s, 1H), 9.55 (bs, 1H), 7.57 (m, 1H), 7.28 (m, 1H), 7.23 (m, 2H), 7.12 (t, J = 8 Hz, 1H), 7.05 (m, 1H), 6.54 (m, 1H)。
【００６４】
２，６−ジフルオロ−Ｎ−（３−ヒドロキシフェニル）ベンズアミド（０．９ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ溶液４ｍＬを、炭酸カリウム（１．３６ｍｍｏｌ）およびメチル４−（ブロモメチル）ベンゾエートで処理する。反応混合物を８０℃で４８時間加熱する。溶媒を蒸発させ、自動カラムクロマトグラフィー（ヘキサンおよび酢酸エチルの勾配）で精製して、Ｏ−アルキル化生成物である２，６−ジフルオロ−Ｎ−（３−（４−カルボメトキシベンジルオキシフェニル）ベンズアミドを得る。
【００６５】
２，６−ジフルオロ−Ｎ−（３−（４−カルボメトキシベンジルオキシフェニル）ベンズアミド（０．６１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液４ｍＬに、まず油分散中６０％ＮａＨ（０．７３ｍｍｏｌ）およびその３０分後、ブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．６７ｍｍｏｌ）を添加する。反応物を、室温で１２時間撹拌する。反応混合物のＬＣＭＳ分析（１０から９０％ＣＨ３ＣＮ）は、反応が完了したことを示す。ＤＭＦを蒸発させ、粗ｔｅｒｔ−ブチル２−（２，６−ジフルオロ−Ｎ−（３−（４−カルボメトキシベンジルオキシ）フェニル）ベンザミド）酢酸塩を、最後にＭｅＯＨ４ｍＬに溶解し、そしてＬｉＯＨ  ３Ｍ（１．９５ｍｍｏｌ）で処理する。反応混合物を、分取ＬＣＭＳ（１０から９０％ＣＨ３ＣＮ）により精製し、ｔｅｒｔ−ブチル２−（２，６−ジフルオロ−Ｎ−（３−（４−カルボキシベンジルオキシ）フェニル）−ベンザミド）酢酸塩を得る：1H NMR (400 MHz, CDCl３) δ 8.12 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.46 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.13 (m, 2H), 6.91 (m, 2H), 6.81 (m, 1H), 6. 70 (m, 2H), 5.05 (s, 2H), 4.45 (s, 2H), 1.51 (s, 9H); MS: (ES＋) 498.1 (M+1)＋。
【００６６】
上記実施例の方法を繰り返し、適当な出発物質を使用して、表１および表２に同定する通りの、式Ｉの化合物を得る。
【００６７】
【表１】
2007523087.tif 000007
【表２】
2007523087.tif 000008
【表３】
2007523087.tif 000009
【表４】
2007523087.tif 000010
【表５】
2007523087.tif 000011
【００６８】
【表６】
2007523087.tif 000012
【表７】
2007523087.tif 000013
【表８】
2007523087.tif 000014
【表９】
2007523087.tif 000015
【表１０】
2007523087.tif 000016
【表１１】
2007523087.tif 000017
【表１２】
2007523087.tif 000018
【表１３】
2007523087.tif 000019
【表１４】
2007523087.tif 000020
【表１５】
2007523087.tif 000021
【表１６】
2007523087.tif 000022
【表１７】
2007523087.tif 000023
【表１８】
2007523087.tif 000024
【表１９】
2007523087.tif 000025
【表２０】
2007523087.tif 000026
【表２１】
2007523087.tif 000027
【表２２】
2007523087.tif 000028
【表２３】
2007523087.tif 000029
【表２４】
2007523087.tif 000030
【表２５】
2007523087.tif 000031
【００６９】
アッセイ１−転写アッセイ
トランスフェクションアッセイを使用して、本発明の化合物のＬＸＲの調節転写活性を調節する能力を評価する。簡単に言うと、ＬＸＲαまたはＬＸＲβいずれかのリガンド結合ドメイン(ＬＢＤ)に融合した酵母ＧＡＬ４のＤＮＡ結合ドメインを含むキメラタンパク質のための発現ベクターを、一過性トランスフェクションを介して、哺乳類細胞に、ルシフェラーゼ遺伝子がＧＡＬ４結合部位の制御下であるレポータープラスミドと共に挿入する。ＬＸＲモジュレーターへの暴露により、ＬＸＲ転写活性が変化し、そしてこれをルシフェラーゼレベルの変化によりモニターできる。トランスフェクトされた細胞がＬＸＲアゴニストに暴露されたとき、ＬＸＲ依存性転写活性が増加し、ルシフェラーゼレベルが上昇する。
【００７０】
２９３Ｔヒト胎児由来腎臓細胞(８×１０６)を、実験開始２日前に、１７５cm２フラスコに、１０％ＦＢＳ、１％ペニシリン／ストレプトマイシン／Fungizome、ＤＭＥＭ培地中に播種する。キメラタンパク質のトランスフェクション混合物を、ＧＡＬ４−ＬＸＲＬＢＤ発現プラスミド(４μg)、ＵＡＳ−ルシフェラーゼレポータープラスミド(５μg)、Fugene(３：１比；２７μL)および無血清培地(２１０μL)を使用して調製する。トランスフェクション混合物を、２０分、室温でインキュベートする。細胞をＰＢＳ(３０mL)で洗浄して回収し、次いでトリプシン(０.０５％；３mL)を使用して解離させる。トリプシンをアッセイ培地(ＤＭＥＭ、リポタンパク質欠損胎児ウシ血清(５％)、スタチン(例えばロバスタチン７.５μM)、およびメバロン酸(１００μM))(１０mL)の添加により不活性化する。細胞を、１：１０希釈を使用して計数し、細胞濃度を１６０,０００細胞／mLに調整する。細胞をトランスフェクション混合物(２５０μlのトランスフェクション混合物あたり１０mLの細胞)と混合し、さらに３０分、室温で、定期的な倒置による混合をしながらインキュベートする。細胞(５０μl／ウェル)を次いで３８４白色、立方体底(solid-bottom)、ＴＣ処理プレートで培養する。細胞をさらに３７℃、５.０％ＣＯ２で２４時間インキュベートする。１２点連続希釈物(対数の半分の連続希釈)を、１μMの化合物濃度で開始して、各試験化合物についてＤＭＳＯ中で調製する。試験化合物(５００nl)を、アッセイプレート中の細胞の各ウェルに添加し、細胞を３７℃、５.０％ＣＯ２で２４時間インキュベートする。細胞溶解／ルシフェラーゼアッセイ緩衝液Bright-GloＴＭ(２５％；２５μl；Promega)を各ウェルに添加する。さらに５分、室温でインキュベーション後、ルシフェラーゼ活性を測定する。
【００７１】
粗蛍光値を、それを、各プレートに存在するＤＭＳＯコントロールで割ることにより標準化する。標準化データを、ＸＬｆｉｔ３を使用して可視化し、用量応答曲線を、４パラメーターロジスティックモデルまたはシグモイド一部位用量応答方程式(ＸＬｆｉｔ３.０５の方程式２０５)を使用して適合させる。ＥＣ５０を、化合物が最大値と最低値の間の応答を誘発する濃度と定義する。相対的効果(または効果％)を、既知のＬＸＲモジュレーターについて得た最大値の化合物、(３−｛３−[(２−クロロ−３−トリフルオロメチル−ベンジル)−(２,２−ジフェニル−エチル)−アミノ]−プロポキシ｝−フェニル)−酢酸により誘発される応答と比較することにより計算する。
【００７２】
アッセイ２−ＦＲＥＴコアクティベーター動員アッセイ
ＦＲＥＴアッセイを使用して、本発明の化合物がＬＸＲリガンド結合ドメイン（ＬＢＤ）に直接結合し、そしてＬＸＲの転写活性を増強するタンパク質（例えばコアクティベーター）の動員を促進する能力を評価する。この無細胞アッセイは、ＬＸＲ ＬＢＤと、その精製を簡単にするための標識（例えばＧＳＴ、Ｈｉｓ、ＦＬＡＧ）から成る組み換え融合タンパク質、および、ステロイド受容体コアクティベーター１（ＳＲＣ−１）のような、転写コアクティベータータンパク質のドメインと相互作用する核受容体由来の合成ビオチニル化ペプチドを使用する。一つの形式で、標識したＬＢＤ融合タンパク質を、ユーロピウムと結合したＬＢＤ標識に対する抗体(例えばＥＵ標識抗ＧＳＴ抗体)を使用して標識でき、そしてコアクティベーターペプチドをストレプトアビジンに結合したアロフィコシアニン(ＡＰＣ)で標識できる。ＬＸＲに対するアゴニスト存在下、コアクティベーターペプチドがＬＸＲ ＬＢＤにより動員され、ＥＵとＡＰＣ部分を近接させる。３４０nMでの光での複合体の励起により、ＥＵはエネルギーを吸収し、ＡＰＣ部分に伝達し、６６５nmでの発光をもたらす。エネルギー伝達がないとき(ＥＵ−ＡＰＣ近接なしを示す)、ＥＵは６１５nmで発光する。故に、発光される６６５対６１５nm光の比率が、コアクティベーターペプチド動員の、故に、ＬＸＲ ＬＢＤに結合するアゴニストの強度の指標である。
【００７３】
融合タンパク質、ＬＸＲαについてアミノ酸２０５−４４７(Genbank NM_005693)およびＬＸＲβについてアミノ酸２０３−４６１(βについてNM_007121)が、pGEX4T-3(27-4583-03 Amersham Pharmacia Biotech)のＳａｌ１およびＮｏｔ１部位でフレーム内でクローン化された。ビオチニル化ペプチド配列は、ＳＲＣ−１(アミノ酸６７６から７００)：ビオチン−ＣＰＳＳＨＳＳＬＴＥＲＨＫＩＬＨＲＬＬＱＥＧＳＰＳＣ−ＯＨ由来であった。
【００７４】
ＦＲＥＴ緩衝液(５０mM  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７.５、５０mM  ＫＣｌ、１mM  ＤＴＴ、０.１％ＢＳＡ)中に、親混合物(５nM  ＧＳＴ−ＬＸＲ−ＬＢＤ、５nM  ビオチニル化ＳＲＣ−１ペプチド、１０nM  ＡＰＣ−ストレプトアビジン(Prozyme Phycolink ストレプトアビジンAPC, PJ25S)、および５nM  ＥＵ抗ＧＳＴ抗体)を調製する。３８４ウェルプレートの各ウェルに、２０μLのこの親混合物を添加する。最終ＦＲＥＴ反応物：５nM  融合タンパク質、５nM  ＳＲＣ−１ペプチド、１０nM  ＡＰＣ−ストレプトアビジン、５nm  ＥＵ抗ＧＳＴ抗体(PerkinElmer AD0064)。試験化合物を、対数の半分で希釈し、ＤＭＳＯ中１２点連続希釈物を、１mMの濃度で開始し、１００nLの化合物を、アッセイウェル中５μM−２８ｐＭの最終濃度となるよう、親混合物に移す。プレートを、室温で３時間インキュベートし、蛍光共鳴エネルギー移動を読む。結果を１０００倍したＡＰＣ蛍光対ＥＵ蛍光比として示す。
【００７５】
６６５nm対６１５nmの比を、データ分析を容易にするために１０００倍する。ＤＭＳＯ値を、背景を担うために、比率から引く。データをＸＬｆｉｔ３を使用して可視化し、用量応答曲線を、４パラメーターロジスティックモデルまたはシグモイド一部位用量応答方程式(ＸＬｆｉｔ３.０５の方程式２０５)を使用して適合させる。ＥＣ５０を、化合物が最大値と最低値の間の応答を誘発する濃度と定義する。相対的効果(または効果％)を、参照ＬＸＲモジュレーターについて得た最大値の化合物により誘発される応答と比較することにより計算する。
【００７６】
遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物は、例えば、本明細書に記載のインビトロ試験により示される通り、価値ある薬理学的特性を示す。本発明の化合物は、ＬＸＲβの転写アッセイについて、０．００１μＭから１．５μＭの範囲のＥＣ５０を有し、２０％から１５０％の範囲の効果％を示す。本明細書に詳述した実施例および態様は説明のためだけであり、それに照らした様々な修飾または変化が当業者には示唆され、本発明の精神および範囲ならびに添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれるべきであることは、理解される。ここで引用する全ての刊行物、特許および特許出願は、引用により、その全体として、本明細書に包含される。
【国際調査報告】
2007523087.tif 000033
2007523087.tif 000034