(57)【要約】【化9】                                2007523920.tif 000015 Xはフッ素または塩素原子であり、ピペラジン環の2および5位に位置するメチル基は互いにトランス配列であり、YはNHまたはOであり、R1は水素、クロロ基、ブロモ基、ニトロ基、メチル基またはトリフルオロメチル基から選択され、R2は水素、ハロ基、メチル基、トリフルオロメチル基、メトキシ基またはトリフルオロメトキシ基である、式(I)の化合物、あるいは、医薬的に許容可能なそれらの塩または溶媒化合物（溶媒和物）、それらを含む医薬組成物、ならびに炎症性、自己免疫性、増殖性または過剰増殖性疾患の処置のためのそれらの治療上の使用。
2007523920.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式(I)の化合物
【化１】
2007523920.tif 000012
式中：
Xはフッ素または塩素原子であり；
ピペラジン環の2および5位に位置するメチル基は互いにトランス配列であり；
YはNHまたはOであり；
R1は水素、クロロ基、ブロモ基、ニトロ基、メチル基またはトリフルオロメチル基から選択され；
R2は水素、ハロ基、メチル基、トリフルオロメチル基、メトキシ基またはトリフルオロメトキシ基から選択される、
あるいは、医薬的に許容可能なそれらの塩またはそれらの溶媒化合物（溶媒和物）。
【請求項２】
Xはフッ素原子であり；
YはNHまたはOであり；
R1は水素、クロロ基またはブロモ基から選択され；
R2は水素、クロロ基、ブロモ基、メチル基、トリフルオロメチル基、メトキシ基またはトリフルオロメトキシ基から選択される、請求項1に記載の化合物。
【請求項３】
（トランス）−1−（5−ブロモ−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン；
（トランス）−4−（4−クロロベンジル）−1−（5−クロロ−インドール−2−イル−カルボニル）−2,5−ジメチルピペラジン；
（トランス）−4−（4−フルオロベンジル）−1−（6−メチル−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−2,5−ジメチルピペラジン；
（トランス）−4−（4−フルオロベンジル）−1−（6−トリフルオロメトキシ−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−2,5−ジメチルピペラジン；
（トランス）−1−（5−クロロ−6−メトキシ−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジ；、
（トランス）−1−（5−ブロモ−6−メトキシ−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン；
（トランス）−1−（5−クロロ−6−メチル−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン；
（トランス）−1−（5−ブロモ−6−メチル−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン；
（トランス）−1−（5,6−ジクロロ−インドール−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン；
（トランス）−1−（6−ブロモ−5−クロロ−インドール−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン；
（トランス）−1−（5−ブロモ−6−クロロ−インドール−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン；
（トランス）−1−（5−クロロ−6−トリフルオロメチル−インドール−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン；
（トランス）−1−（5−クロロ−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン；
である、請求項1または2に記載の化合物。
【請求項４】
有機溶媒中、0℃〜120℃の温度にて、式(II)のピペラジン誘導体を、L1が離脱基である式(III)の化合物で処理することによる、
【化２】
2007523920.tif 000013
式(I)の化合物の調製方法。
【請求項５】
治療上有効な量の式(I)の化合物；
【化３】
2007523920.tif 000014
式中：
Xはフッ素または塩素原子であり；
ピペラジン環の2および5位に位置するメチル基は互いにトランス配列であり；
YはNHまたはOであり；
R1は水素、クロロ基、ブロモ基、ニトロ基、メチル基またはトリフルオロメチル基から選択され；
R2は水素、ハロ基、メチル基、トリフルオロメチル基、メトキシ基またはトリフルオロメトキシ基から選択される；
あるいは、医薬的に許容可能なそれらの塩またはそれらの溶媒化合物（溶媒和物）；ならびに、医薬的に許容可能な組成（構成成分）を含有する組成物。
【請求項６】
準腎毒性量のシクロスポリンAを含有する、請求項5に記載の組成物。
【請求項７】
炎症性、自己免疫性、増殖性または過剰増殖性疾患の治療用の薬剤の製造を目的とする、請求項1または2に記載の化合物の使用。
【請求項８】
薬剤が、関節リュウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、炎症性腸疾患、同種移植拒絶反応または喘息の治療用である、請求項7に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規ベンゾフラン−2−イル−カルボニル−およびインドール2−イル−カルボニル−トランス−2,5−ジメチル−ピペラジン誘導体、それらの医薬的に許容可能な塩、それらを含む医薬組成物、ならびにそれらの治療上の使用に関する。
【０００２】
本願発明の他の側面は、炎症性、自己免疫性、増殖性または過剰増殖性疾患の治療方法である。好ましい方法は、関節リュウマチ、アテローム性動脈硬化症、全身性硬化症、多発性硬化症、アルツハイマー病、脳脊髄炎、全身性エリテマトーデス、ギラン・バレー症候群、同種移植拒絶反応、蕁麻疹、血管浮腫、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、アレルギー性接触皮膚炎、薬剤または虫刺されによるアレルギー、全身性アナフィラキシー、直腸炎、炎症性腸疾患または喘息を治療する方法である。
【背景技術】
【０００３】
ケモカインとは、8〜14kDaのたんぱく質からなる小型の分泌型サイトカインであり、保護されるシステイン残基の配列にしたがって、CXC、CC、CおよびCX3Cの4種のグループに分類される。これらは、接着を強化して細胞遊走（細胞移動）へと導く細胞接着分子のアップレギュレーションを促進する。したがって、走化性サイトカインは、白血球サブセットの補充および輸送において重要な役割を演じる。
【０００４】
CCケモカインの中で、CCR1、CCR3、CCR4およびCCR5レセプターのリガンドとして知られるMIP-1αおよびRANTESは、関節リュウマチ、炎症性腸疾患および多発性硬化症などの自己免疫疾患に関与している。野生型マウスと比較すると、CCR1ノックアウトマウスでは、EAEモデルのマウスにおける疾患の罹患率が有意に減少することが示されたという事実により、このことは十分に裏付けられている。Karpusらによる研究（J. Immunol. 1995, 155, 5003）では、多発性硬化症である同一モデルにおけるMIP-1αの極めて重要な役割がさらに明らかになっている。MIP-1αに対する抗体が、急性および再発性の麻痺疾患の進行ならびに単核細胞のCNS内への浸潤を抑制することが示されている。
【０００５】
加えて、RANTESが関節リュウマチの病態生理に関与するということについて強力な証拠が存在する。例えば、RANTES mRNAは、関節リュウマチ患者の滑膜組織検体中に検出される（Snowden, N.ら、Lancet、1994, 343, 547）。さらに、ラットにおけるアジュバント誘発性の関節炎モデルにおいて、RANTESに対する抗体が疾患の進行を激減する。
【０００６】
同種移植におけるCCR1の役割に関しては、数多くの研究においてその根拠が示されている。
【０００７】
準腎毒性を提示する量のシクロスポリンAと、CCR1アンタゴニストを用いたケモカイン受容体ブロックとの組み合わせは、固体同種移植後の存命において好ましい効果を示した（Horuk, R.ら、J. Biol. Chem,、2001、276、4199）。
【０００８】
したがって、炎症性ケモカインとこれらの受容体との間の相互作用を阻害する分子は、炎症性、自己免疫性、増殖性または過剰増殖性疾患の治療に有益であると思われる。
【０００９】
関連文献
国際特許出願WO0164676号には、p38キナーゼ阻害剤を（シス）−4（−4−フルオロベンジル）−1−（7−メトキシ−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−2,5−ジメチルピペラジンがクレーム（＝特許請求の範囲と）されている。
【００１０】
【化４】
2007523920.tif 000003
【００１１】
この文献は炎症および心臓疾患の治療に有用な化合物に関するものである。より詳しくは、この文献は（前）炎症性ならびに心臓および腎臓疾患の治療を目的とする化合物に関するものである。その他のベンゾフランに関するクレームや例示は見られない。
【００１２】
米国特許第5,814, 644号には、精神病性障害の治療において有益なドーパミンアンタゴニスト調製用の合成のブロックを構築するものとしてインドール−2−カルボニル誘導体のひとつが開示されている。
【００１３】
【化５】
2007523920.tif 000004
【００１４】
米国特許第4,115,569号および第4,374,990号には、精神治療薬としてベンゾフラン置換体を含むピペラジン誘導体がクレームされている。
発明の記載
今回、式(I)の化合物：
【００１５】
【化６】
2007523920.tif 000005
【００１６】
式中：
Xはフッ素または塩素原子であり；
ピペラジン環の2および5位に位置するメチル基は互いにトランス配列であり；
YはNHまたはOであり；
R1は水素、クロロ基、ブロモ基、ニトロ基、メチル基またはトリフルオロメチル基から選択され；
R2は水素、ハロ基、メチル基、トリフルオロメチル基、メトキシ基またはトリフルオロメトキシ基から選択される；
あるいは、医薬的に許容可能なそれらの塩または溶媒化合物（溶媒和物）；
は、驚くべきことに、ケモカイン受容体CCR1のシグナル伝達の阻害において予期しない効果を有している。
【００１７】
先に定義した式(I)の化合物の中で、
Xはフッ素原子であり；
YはNHまたはOであり；
R1は水素、クロロ基またはブロモ基から選択され；
R2は水素、クロロ基、ブロモ基、メチル基、トリフルオロメチル基、メトキシ基またはトリフルオロメトキシ基から選択される；
化合物の群（グループ）が、式(I)の化合物の好ましい群である。
【００１８】
好ましい化合物に含まれるものは：
（トランス）−1−（5−ブロモ−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン、
（トランス）−4−（4−クロロベンジル）−1−（5−クロロ−インドール−2−イル−カルボニル）−2,5−ジメチルピペラジン、
（トランス）−4−（4−フルオロベンジル）−1−（6−メチル−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−2,5−ジメチルピペラジン、
（トランス）−4−（4−フルオロベンジル）−1−（6−トリフルオロメトキシ−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−2,5−ジメチルピペラジン、
（トランス）−1−（5−クロロ−6−メトキシ−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン、
（トランス）−1−（5−ブロモ−6−メトキシ−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン、
（トランス）−1−（5−クロロ−6−メチル−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン、
（トランス）−1−（5−ブロモ−6−メチル−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン、
（トランス）−1−（5,6−ジクロロ−インドール−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン、
（トランス）−1−（6−ブロモ−5−クロロ−インドール−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン、
（トランス）−1−（5−ブロモ−6−クロロ−インドール−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン、
（トランス）−1−（5−クロロ−6−トリフルオロメチル−インドール−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン、
（トランス）−1−（5−クロロ−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン、である。
【００１９】
前記式(I)における、本願発明の好ましい化合物の例を以下の表1に示す。
【００２０】
【表１−１】
2007523920.tif 000006
【００２１】
【表１−２】
2007523920.tif 000007
【００２２】
定義
本明細書において使用される、「治療（therapy）」および「処置（treatment）」の用語には、病状の低減ならびに予防が含まれる。
【００２３】
特記しない限り：
「ハロ基」または「ハロゲン基」は、フルオロ基、クロロ基、ブロモ基またはヨード基を指す。
「ニトロ基」はラジカル基−NO2を指す。
CHCl3はクロロホルムを指す。
CH2CH2はジクロロメタンを指す。
「トランス」という記述子は、ふたつのメチル基がピペラジン平面上の対辺（相対する側）に存在することを示す。「シス」という記述子は、ふたつのメチル基がピペラジン平面上の同側に存在することを示す。
構造活性の関連性
先行技術および参照文献の化合物
（シス）−4−（4−フルオロベンジル）−1−7−メトキシ−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−2,5−ジメチルピペラジン、4−（4−フルオロベンジル）−1−（インドール−2−イル−カルボニル）−ピペラジン、4−（4−クロロベンジル）−1−（ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−ピペラジン、（トランス）−4−（4−フルオロベンジル）−1−（7−メトキシ−ベンゾフラン2−イル−カルボニル）−2,5−ジメチルピペラジンは、先行技術および参照文献の化合物に含まれるが、以降本明細書では、それぞれ化合物A、B、CおよびDと称する。化合物Aは、国際特許出願WO 0164676号に記載されている。化合物Cは、米国特許第4,115,569号に記載されている。化合物BおよびDは参照化合物であり、本願発明によるものではない。
【００２４】
【化７】
2007523920.tif 000008
【００２５】
先行技術である化合物AおよびCならびに参照化合物BおよびDと比較すると、本願発明の化合物は、Ca2+フラックスアッセイにおいて非常により強力な阻害剤である。化合物の改善された効力は、他の中においては以下の構造上の特徴と関連付けられる。
【００２６】
1.     Ca2+フラックスアッセイのナノモル領域における活性を得るためには、ベンジルピペラジン部分のp−部位におけるクロロ基または好ましくはフルオロ基の導入が不可欠である。Xを例えばアルキル、水素といった他の官能基で置換すると、効力および親和性が減少する。
2.     2,5−位のふたつのメチル基はトランス配置にある。水素を用いた置換によるトランス−2,5−位のメチル基の交換（replecement）および幾何学的配置をシス−2,5−置換へと変化させることにより、Ca2+フラックスアッセイ中の化合物の効力が急激に減少する。
3.     R1は、クロロ基、ブロモ基、メチル基、ニトロ基またはトリフルオロメチル基などのMR（molrefractory）値が5.0≦MR≦9.0の基でなければならない。
4.     ベンゾフランおよびインドール環系における4位および7位を置換してはならない。
【００２７】
上記1, 2, 3および4による特徴を組み合わせることで、本願発明は驚くべき予測しない効力を有する化合物を提供する（表2を参照のこと）。
【００２８】
本願発明の化合物は望ましい薬物速度論的特性を示した。
【００２９】
MRの概念およびその値に関する定義は、以下の2つの文献より入手することができる：
Hansch, C., and Leo, A., In Exploring QSAR：Fundamentals and Applications in Chemistry and Biology. ACS, Washingron,  DC 1995.
Hansch, C., Leo, A., and Hoekman, D., In Exploring QSAR：Hydrophobic, Electronic, and Steric Constants. ACS, Washingron,  DC 1995.
化合物の調製
さらに、本願発明は、以下に示す方法による、式(I)の化合物を調製する方法を提供するものである。
方法：
【００３０】
【化８】
2007523920.tif 000009
【００３１】
式Iの化合物は、Xが式(I)において定義される式(II)のピペラジン誘導体を、L1が（例えば、塩化物などのハロゲン化物、ヒドロキシル、ベンゾトリアゾール−1−イル−エステル、イソ尿素基といった）離脱基であり、Y, R1およびR2が式(I)において定義される式(III)の化合物で処理することにより調製され得る。本願発明の工程は、CH2Cl2またはCHCl3中において、例えば0℃またはそれ以上、例えば20〜120℃などの温度にて簡便に実施することができる。
【００３２】
もっとも好ましいものは、クロロホルム中の式(II)のアミン誘導体を、過剰のモル量のカルボジイミド、例えばN−シクロヘキシルカルボジイミド、N’−メチルポリスチレンおよび1−ヒドロキシベンゾトリアゾールの存在下で、過剰のモル量の、L1が水酸基である式(III)の化合物で処理する工程である。
反応混合物は、電子レンジ（Personal Chemistry社製のSmith Synthesiser）にて、通常は60〜150℃の範囲の温度で、通常100〜1000秒の範囲の時間で攪拌する。これらの状況下において、99％を上限として収量が改善される。式(II)の化合物は、例えば、Tabiaら、J. Med. Chem. 1999, 42, 2870、に記載されている、既知のプロトコルにより入手することが可能である。式(II)の範疇に含まれる化合物は、該文献と概ね同様の方法により調製することが可能である。式(III)の化合物は、商業的に入手することが可能であるが、あるいは実施例1、実施例2および実施例4に記載されている。式(III)の範疇に含まれる化合物は、該文献と概ね同様の方法により調製することが可能である（Hodegesら、J. Med. Chem. 1981, 24, 1184；Hinoら、Chem. Pharm. Bull. 1990, 38, 59）が、あるいは実施例1、実施例2および実施例4に記載されている。
【００３３】
本願発明では、例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、リン酸、炭酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、酒石酸、シュウ酸、メタンスルホン酸、p−トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸ならびにその他などの酸を用いたジメチルピペラジン誘導体の酸付加化合物をも使用することが可能である。その他の好適な塩の一覧は、Remington’s Pharmaceutical Sciences、第17版、Mack Publishing Company社（Easton, PA）、1985年、第1418ページ、に掲載されている。
【実施例１】
【００３４】
5−ブロモ−1−ベンゾフラン−2−カルボン酸
ブタノール（200ml）中に、5−ブロモサリチルアルデヒド（20ｇ、98.5mmol）および臭化マロン酸ジエチル（95％、37g、148mmol）を含む溶液に対し、炭酸カリウム（27.5g、197mmol）を加えた。混合液を4時間還流し、室温となるようにした。炭酸カリウムをろ去すると共に、真空にて溶媒を除去した。残渣をCH2Cl2と1MのH2SO4水溶液との間に供した。有機層を乾燥し濃縮して油とした。この油を10％のKOH/EtOH（125ml）で処理し、45分間還流した。反応混合物を濃縮し、2MのH2SO4水溶液（350ml）を加えて、混合物を90℃まで加温した。室温に冷却した後、生成物は沈殿し、これをEtOH/H2O（4：1）中で再結晶化した（収量：6.6g、28％）。
1HNMR: δ (DMSO-d6) 13.55 (bs, 1H), 7.97 (d, 1H), 7.67 (d, 1H), 7.60 (m, 2H).
その他の1−ベンゾフラン−2−カルボン酸は同様に得ることが可能である。
【実施例２】
【００３５】
5,6−ジクロロ−1−インドール−2−カルボン酸
氷冷した3,4−ジクロロトルエン（10.0g、62.1mol）および硫酸（96〜98％、50ml）の混合物に、反応温度が15℃を超えないように激しく撹拌しながら硝酸（100％、2.87ml、68.3mmol）を一滴ずつ添加した。添加後に反応混合物を室温に到達させて、さらに60分間撹拌した。反応混合物を250mlの氷上に注ぎ、生成沈殿物を吸引ろ過により単離して、水洗し，真空下で乾燥し、最終的にヘプタンで再結晶化した（4,5−ジクロロ−2−ニトロトルエンの収量：4.4g、34％）。
1HNMR: δ (CDCl3) 8.10 (s, 1H); 7.65 (s, 1H); 2.57 (s, 3H).
CCl4（15ml）中に、4,5−ジクロロ−2−ニトロトルエン（2.0g、9.7mmol）を含む溶液に対し、N−ブロモスクシンイミド（2.6g、15mmol）およびBz2O2（50mg）を加えた。混合液を120時間還流し、室温に到達するようにした。反応混合物を2回水洗し、乾燥させ、濃縮して、約70％の4,5−ジクロロ−2−ニトロベンジルブロマイドおよび30％の4,5−ジクロロ−2−ニトロベンジルジブロマイドからなる、収量3.54gの粗製物とした。この混合物を1,4−ジオキサン（35ml）および水（35ml）の混合液にけん濁し、CaCO3（6.2g、62mmol）を加えて、反応混合物を18時間還流した。反応混合物を室温に到達するようにした後、乾燥するまで濃縮した。CH2Cl2（50ml）中に残留物を含むけん濁液に対し、固形物が消失するまで2MのHCl水溶液を加えた。水層をCH2Cl2で抽出し、結合した有機層を乾燥し濃縮した。粗製物をトルエンに溶解し、シリカゲル60およびヘプタン／酢酸エチル（19：1→4：1）を使用したフラッシュ・クロマトグラフィーで精製した（4,5−ジクロロ−2−ニトロベンジルアルコールの収量：1.15g、53％）。
1HNMR: δ (CDCl3) 8.27 (s, 1H); 7.98 (s, 1H); 5.02 (s, 2H).
CHCl3（20ml）中に、4,5−ジクロロ−2−ニトロベンジルアルコール（1.15g、5.2mmol）を含む溶液にMnO2（4.0g、47mmol）を加えた。反応混合物を18時間還流した後、室温に到達させた。反応混合物をセリット（Celite）でろ過して濃縮した（4,5−ジクロロ−2−ニトロベンズアルデヒドの収量：1.0g、87％）。
1HNMR: δ (CDCl3) 10.20 (s, 1H); 8.07 (s, 1H); 7.84 (s, 1H).
ベンゼン（25ml）中に、4,5−ジクロロ−2−ニトロベンズアルデヒド（0.85g、3.85mmol）および（カルベトキシメチレン）−triphenylphophorane（1.84g、5.55mmol）を含む溶液を3時間還流した。反応混合物を室温に到達させ、その次に濃縮した。粗製物をシリカゲル60およびトルエンを使用したフラッシュ・クロマトグラフィーで精製した（エチル（シス、トランス）−4,5−ジクロロ−2−ニトロ桂皮酸の収量：1.01g、90％）。
【００３６】
亜リン酸トリエチル（2ml）中に、エチル（シス、トランス）−4,5−ジクロロ−2−ニトロ桂皮酸（1.01g、3.48mmol）を溶解した。この溶液を125℃にて、亜リン酸トリエチル（2ml）中に一滴ずつ加えた。添加後に温度を145℃へと上昇させ、この温度にて反応混合物を二時間放置した。反応混合物を室温に到達させてから濃縮した。粗製物をシリカゲル60およびヘプタン／トルエン（10：1→5：1→1：1→0：1）を使用したフラッシュ・クロマトグラフィーで精製した（エチル−5,6−ジクロロインドール−2−カルボキシレートの収量：0.18g、20％）。
1HNMR: δ (CDCl3) 8.90 (bs, 1H); 7.81 (s, 1H); 7.57 (s, 1H); 7.16 (s, 1H); 4.48 (q, 2H); 1.45 (t, 3H).
エタノール（99％、5ml）中に、エチル−5,6−ジクロロインドール−2−カルボキシレート（0.16g、0.64mmol）を含む溶液に1MのNaOH水溶液（5ml）を加えた。反応混合物を5時間還流した後、室温に到達させた。エタノールを蒸留により除去し、水溶性の残渣を1MのHCl水溶液を用いて酸性化した。沈殿生成物をろ過により採取し、水洗して真空下にて乾燥させた（5,6−ジクロロインドール−2−カルボン酸の収量：0.14g、96％）。
1HNMR: δ (DMSO-d6) 13.26 (bs, 1H), 12.06 (s, 1H), 7.94 (s, 1H); 7.60 (s, 1H); 7.07 (s, 1H); 7.07 (d, 1H).
その他のインドール−2−カルボン酸は同様の方法にて得ることが可能である。
【実施例３】
【００３７】
3.1（トランス）−1−（5−ブロモ−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン
CHCl3中の、（トランス）−1−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン（220mg、1.0mmol）、5−ブロモ−1−ベンゾフラン−2−カルボン酸）（342mg、1.5mmol）、1−ヒドロキシベンゾトリアゾール（200mg、1.5mmol）およびN−シクロヘキシルカルボジイミド，N’−メチルポリスチレン（167g、ローディングが1.8mmol/gのレジンが3.0mmol）混合物を、電子レンジ内にて110℃にて5分間加熱した。混合物を室温に到達させて、TBD−メチルポリスチレン（1000mg、ローディングが2.9mmol/gのレジンが3mmol）を加えて、この混合物を一晩撹拌した。両レジンをろ去してCHCl3およびEtOAcで洗浄した。ろ液を真空にて濃縮し、残渣をフラッシュ・カラムクロマトグラフィー（トルエン→トルエン：EtOAc、20：1→トルエン：EtOAc、1：1）に供し、表題の生成物を93％の収量として得た。
1HNMR: δ (CDCl3) 7.78 (d, 1H), 7.48 (dd, 1H), 7.38 (d, 1H), 7.33 (dd, 2H), 7.19 (s, 1H), 7.01 (dd, 2H), 4.63 (bs, 1H), 4.14 (bs, 1H), 3.62 (m, 2H), 3.46 (d, 1H), 3.08 (bs, 1H), 2.79 (dd, 1H), 2.30 (d, 1H), 1.43 (d, 3H), 1.06 (d, 3H).
以下に示す化合物は同様の方法にて調製することが可能である。
【００３８】
3.2（トランス）−1−（5−クロロ−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−4−（4−クロロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン
1HNMR: δ (CDCl3) 7.62 (d, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.33 (m, 1H), 7.29 (m, 4H), 7.19 (d, 1H), 4.63 (bs, 1H), 4.14 (bs, 1H), 3.54 (m, 3H), 3.08 (bs, 1H), 2.80 (dd, 1H), 2.29 (d, 1H), 1.43 (d, 3H), 1.06 (d, 3H).
3.3（トランス）−4−（4−フルオロベンジル）−1−（5−ニトロ−インドール−2−イル−カルボニル）−2,5−ジメチルピペラジン
1HNMR: δ (CDCl3) 9.67 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.20 (d, 1H), 7.49 (d, 1H), 7.35 (dd, 2H), 7.04 (dd, 2H), 6.92 (s, 1H), 4.81 (m, 1H), 4.33 (d, 1H), 3.57 (m, 3H), 3.15 (bs, 1H), 2.82 (dd, 1H), 2.35 (d, 1H), 1.51 (d, 3H), 1.07 (d, 3H).
3.4（トランス）−4−（4−フルオロベンジル）−1−（5−ニトロ−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−2,5−ジメチルピペラジン
1HNMR: δ (CDCl3) 8.60 (d, 1H), 8.32 (dd, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.34 (m, 3H), 7.02 (dd, 2H), 4.61 (bs, 1H), 4.15 (bs, 1H), 3.56 (m, 3H), 3.11 (bs, 1H), 2.82 (dd, 1H), 2.33 (d, 1H), 1.46 (d, 3H), 1.08 (d, 3H).
3.5（トランス）−4−（4−フルオロベンジル）−1−（7−メトキシ−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−2,5−ジメチルピペラジン（参照化合物D）
1HNMR: δ (CDCl3) 7.34 (dd, 2H), 7.27 (s, 1H), 7.20 (m, 2H), 7.01 (dd, 2H), 6.87 (dd, 1H), 4.69 (bs, 1H), 4.20 (bs, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.62 (m, 2H), 3.46 (d, 1H), 3.07 (bs, 1H), 2.80 (dd, 1H), 2.30 (d, 1H), 1.43 (d, 3H), 1.07 (d, 3H).
3.6（トランス）−1−（5−ブロモ−インドール−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン
1HNMR: δ (CDCl3) 10.17 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.36 (m, 4H), 7.04 (dd, 2H), 6.70 (d, 1H), 4.86 (m, 1H), 4.38 (d, 1H), 3.56 (m, 3H), 3.13 (bs, 1H), 2.81 (dd, 1H), 2.33 (d, 1H), 1.49 (d, 3H), 1.05 (d, 3H).
3.7（トランス）−4−（4−フルオロベンジル）−1−（5−メチル−インドール−2−イル−カルボニル）−2,5−ジメチルピペラジン
1HNMR: δ (CDCl3) 9.54 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.36 (m, 3H), 7.12 (d, 1H), 7.04 (dd, 2H), 6.70 (d, 1H), 4.88 (m, 1H), 4.40 (d, 1H), 3.56 (m, 3H), 3.12 (bs, 1H), 2.81 (dd, 1H), 2.46 (s, 3H), 2.32 (d, 1H), 1.49 (d, 3H), 1.06 (d, 3H).
3.8（トランス）−1−（5−クロロ−インドール−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン
1HNMR δ (CDCl3) 9.40 (s, 1H); 7.61 (d, 1H); 7.36 (d, 1H); 7.34 (dd, 2H); 7.23 (dd, 1H); 7.03 (m, 2H); 6.69 (d, 1H); 4.82 (m, 1H); 4.34 (d, 1H); 3.56 (m, 3H); 3.12 (m, 1H); 2.80 (dd, 1H); 2.32 (dd, 1H); 1.48 (d, 3H); 1.05 (d, 3H).
3.9（トランス）−4−（4−クロロベンジル）−1−（5−クロロ−インドール−2−イル−カルボニル）−2,5−ジメチルピペラジン
1HNMR δ (CDCl3) 9.35 (s, 1H); 7.61 (d, 1H); 7.35 (d, 1H); 7.32 (dd, 4H); 7.23 (dd, 1H); 6.69 (d, 1H); 4.81 (m, 1H); 4.34 (d, 1H); 3.56 (m, 3H); 3.12 (m, 1H); 2.80 (dd, 1H); 2.32 (dd, 1H); 1.48 (d, 3H); 1.05 (d, 3H).
3.10（トランス）−4−（4−クロロベンジル）−1−（5−ニトロ−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−2,5−ジメチルピペラジン
1HNMR δ (CDCl3) 8.60 (d, 1H); 8.33 (dd, 1H); 7.62 (d, 1H); 7.36 (dd, 1H); 7.31 (dd, 4H); 4.61 (m, 1H); 4.12 (m, 1H); 3.56 (m, 3H); 3.11 (m, 1H); 2.82 (dd, 1H); 2.32 (dd, 1H); 1.46 (d, 3H); 1.08 (d, 3H).
3.11（トランス）−1−（5−ブロモ−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−4−（4−クロロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン
1HNMR δ (CDCl3) 7.79 (d, 1H); 7.49 (dd, 1H); 7.39 (d, 1H); 7.31 (dd, 4H); 7.20 (d, 1H); 4.63 (m, 1H); 4.14 (m, 1H); 3.55 (m, 3H); 3.09 (m, 1H); 2.80 (dd, 1H); 2.30 (d, 1H); 1.44 (d, 3H); 1.07 (d, 3H).
3.12（トランス）−4−（4−フルオロベンジル）−1−（5−メチル−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−2,5−ジメチルピペラジン
1HNMR δ (CDCl3) 7.51 (d, 1H); 7.34 (dd, 2H); 7.31 (s, 1H); 7.23 (d, 1H); 7.12 (d, 1H); 7.02 (t, 2H); 4.67 (bs, 1H); 4.21 (bd, 1H); 3.63 (d, 1H); 3.58 (bs, 1H); 3.46 (d, 1H); 3.08 (bs, 1H); 2.80 (dd, 1H); 2.49 (s, 3H); 2.29 (d, 1H); 1.43 (d, 3H); 1.07 (d, 3H).
3.13（トランス）−4−（4−フルオロベンジル）−1−（6−メチル−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−2,5−ジメチルピペラジン
1HNMR δ (CDCl3) 7.42 (s, 1H); 7.38 (d, 1H); 7.34 (dd, 2H); 7.20 (m, 2H); 7.02 (t, 2H); 4.68 (bs, 1H); 4.20 (bd, 1H); 3.63 (d, 1H); 3.59 (bs, 1H); 3.51 (d, 1H); 3.08 (bs, 1H); 2.79 (dd, 1H); 2.32 (s, 3H); 2.29 (d, 1H); 1.43 (d, 3H); 1.06 (d, 3H).
3.14（トランス）−4−（4−フルオロベンジル）−1−（6−トリフルオロメトキシ−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−2,5−ジメチルピペラジン
1HNMR δ (CDCl3) 7.51 (m, 2H); 7.28 (dd, 2H); 7.25 (m, 2H); 7.02 (t, 2H); 5.23 (bs, 1H); 4.15 (bs, 1H); 3.63 (d, 1H); 3.58 (bs, 1H); 3.47 (d, 1H); 3.09 (bs, 1H); 2.80 (dd, 1H); 2.31 (d, 1H); 1.44 (d, 3H); 1.07 (d, 3H).
3.15（トランス）−1−（5−クロロ−6−メトキシ−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン
1HNMR δ (CDCl3) 7.63 (s, 1H); 7.34 (dd, 2H); 7.17 (s, 1H); 7.06 (s, 1H); 7.00 (t, 2H); 4.66 (bs, 1H); 4.19 (bd, 1H); 3.95 (s, 3H); 3.63 (d, 1H); 3.59 (bd, 1H); 3.47 (d, 1H); 3.08 (bs, 1H); 2.80 (dd, 1H); 2.30 (d, 1H); 1.43 (d, 3H); 1.07 (d, 3H).
3.16（トランス）−1−（5−ブロモ−6−メトキシ−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン
1HNMR δ (CDCl3) 7.81 (s, 1H); 7.34 (dd, 2H); 7.16 (s, 1H); 7.04 (s, 1H); 7.02 (t, 2H); 4.65 (bs, 1H); 4.19 (bd, 1H); 3.95 (s, 3H); 3.62 (d, 1H); 3.58 (bd, 1H); 3.47 (d, 1H); 3.08 (bs, 1H); 2.80 (dd, 1H); 2.30 (d, 1H); 1.43 (d, 3H); 1.07 (d, 3H).
3.17（トランス）−4−（4−フルオロベンジル）−1−（6−メトキシ−5−ニトロ−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−2,5−ジメチルピペラジン
1HNMR δ (CDCl3) 8.17 (s, 1H); 7.34 (dd, 2H); 7.24 (s, 1H); 7.17 (s, 1H); 7.02 (t, 2H); 4.62 (bs, 1H); 4.13 (bs, 1H); 3.63 (d, 1H); 3.59 (bs, 1H); 3.47 (d, 1H); 3.10 (bs, 1H); 2.80 (dd, 1H); 2.32 (d, 1H); 1.44 (d, 3H); 1.07 (d, 3H).
3.18（トランス）−1−（5−クロロ−6−メチル−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン
1HNM δ (CDCl3) 7.62 (s, 1H); 7.38 (s, 1H); 7.34 (dd, 2H); 7.17 (s, 1H); 7.00 (t, 2H); 4.63 (bs, 1H); 4.16 (bs, 1H); 3.63 (d, 1H); 3.58 (bd, 1H); 3.46 (d, 1H); 3.08 (bs, 1H); 2.79 (dd, 1H); 2.49 (s, 3H); 2.30 (d, 1H); 1.43 (d, 3H); 1.06 (d, 3H).
3.19（トランス）−1−（5−ブロモ−6−メチル−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン
1HNMR δ (CDCl3) 7.82 (s, 1H); 7.40 (s, 1H); 7.34 (dd, 2H); 7.16 (s, 1H); 7.02 (t, 2H); 4.63 (bs, 1H); 4.15 (bs, 1H); 3.62 (d, 1H); 3.59 (bs, 1H); 3.46 (d, 1H); 3.08 (bs, 1H); 2.79 (dd, 1H); 2.51 (s, 3H); 2.29 (d, 1H); 1.43 (d, 3H); 1.06 (d, 3H).
3.20（トランス）−1−（5,6−ジクロロ−インドール−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン
1HNMR δ (CDCl3) 9.31 (bs, 1H); 7.72 (s, 1H); 7.54 (s, 1H); 7.34 (dd, 2H); 7.03 (t, 2H); 6.67 (d, 1H); 4.79 (bs, 1H); 4.31 (bd, 1H); 3.63 (d, 1H); 3.58 (bs, 1H); 3.47 (d, 1H); 3.12 (bs, 1H); 2.79 (dd, 1H); 2.32 (d, 1H); 1.47 (d, 3H); 1.05 (d, 3H).
3.21（トランス）−1−（6−ブロモ−5−クロロ−インドール−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン
1HNMR δ (CDCl3) 9.38 (bs, 1H); 7.73 (s, 1H); 7.72 (s, 1H); 7.34 (dd, 2H); 7.03 (t, 2H); 6.66 (d, 1H); 4.78 (bs, 1H); 4.31 (bd, 1H); 3.63 (d, 1H); 3.58 (bs, 1H); 3.47 (d, 1H); 3.12 (bs, 1H); 2.79 (dd, 1H); 2.32 (d, 1H); 1.47 (d, 3H); 1.05 (d, 3H).
3.22（トランス）−1−（5−ブロモ−6−クロロ−インドール−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン
1HNMR δ (CDCl3) 9.60 (bs, 1H); 7.89 (s, 1H); 7.57 (s, 1H); 7.35 (dd, 2H); 7.03 (t, 2H); 6.66 (s, 1H); 4.79 (bs, 1H); 4.32 (bd, 1H); 3.63 (d, 1H); 3.59 (bs, 1H); 3.47 (d, 1H); 3.12 (bs, 1H); 2.80 (dd, 1H); 2.33 (d, 1H); 1.47 (d, 3H); 1.05 (d, 3H).
3.23（トランス）−1−（5−クロロ−6−トリフルオロメチル−インドール−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン
1HNMR δ (CDCl3) 9.93 (bs, 1H); 7.82 (s, 1H); 7.75 (s, 1H); 7.35 (dd, 2H); 7.03 (t, 2H); 6.72 (d, 1H); 4.80 (bs, 1H); 4.33 (bd, 1H); 3.67 (bs, 1H); 3.64 (d, 1H); 3.48 (d, 1H); 3.13 (bs, 1H); 2.81 (dd, 1H); 2.34 (d, 1H); 1.49 (d, 3H); 1.05 (d, 3H).
【実施例４】
【００３９】
4.1（トランス）−1−（5−クロロ−ベンゾフラン−2−イル−カルボニル）−4−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン
塩化チオニル（4ml）中に5−クロロ−1−ベンゾフラン−2−カルボン酸（827mg、4.2mmol）を含む溶液を、一晩還流した。真空にて溶媒を除去し、定量的収量の5−クロロ−1−ベンゾフラン−2−塩化カルボニルを得た。
【００４０】
CH2CL2（5ml）中に（トランス）−1−（4−フルオロベンジル）−2,5−ジメチルピペラジン（712mg、3.2mmol）およびトリエチルアミン（506ml、5mmol）を含む氷冷溶液に、CH2Cl2（2ml）中に5−クロロ−1−ベンゾフラン−2−塩化カルボニル（4.2mmol）を含む溶液を一滴ずつ添加した。反応混合物を室温にて一晩撹拌し、0.5MのNaOH水溶液で洗浄した。有機層を乾燥し、濃縮し、そしてフラッシュ・カラムクロマトグラフィー（CHCl3/MeOH；1：0→10：1）に供することにより、表題の化合物を1.05g（82％）得た。
1HNMR: δ (CDCl3) 7.59 (d, 1H), 7.40 (d, 1H), 7.31 (m, 3H), 7.17 (d, 1H), 6.99 (dd, 2H), 4.61 (bs, 1H), 4.12 (bs, 1H), 3.60 (m, 2H), 3.44 (d, 1H), 3.06 (bs, 1H), 2.77 (dd, 1H), 2.28 (d, 1H), 1.41 (d, 3H), 1.04 (d, 3H).
薬理学的手法
インビトロアッセイ
競合的アフィニティーバインディングアッセイにおいて、CCR1受容体に対する化合物の結合親和性は、CCR1受容体から125I−Mip−1αを置換する能力を測定することにより特定することが可能である。
【００４１】
CCR1受容体におけるMIP−1αの結合は、細胞内のカルシウムレベルの上昇をもたらす。本願発明の化合物がCCR1受容体の生物学的反応を阻害する能力は、Ca2+フラックスアッセイにおいて特定される。
【００４２】
インビトロにおける  競合的アフィニティーバインディングアッセイ
試薬および解法：
1.     Screen Ready（登録商標）ターゲット：クローン化されたヒトCCR1ケモカイン受容体であって、CHO細胞において発現され、96ウェルのFlash Plate「TM」上にコート（被覆）されている（Perkin Elmer社、カタログ番号（Cat  ＃）6120525）。
2.     リガンド：Perkin Elmer社製の125I−MIP−1α（比活性度は2200Ci/mmol）を、H2O中で25μCi/mlに再構成した。
3.     アッセイバッファー：50mM HEPES、1mM CaCl2、5mM MgCl2、0.2％BSA、pH7.4。
4.     MIP−1α（Peprotech EC Ltd.社、カタログ番号（Cat＃）300-08）。
5.     本願発明の化合物をDMSOに溶解した。段階希釈を行ない、10種の濃度の各化合物をモニターして線量曲線を作成し、これからIC50値を特定した。
【００４３】
試験（アッセイ）方法：
Plash Plate「TM」上にコート（被覆）された皮膜を125I−MIP−1αとともに、様々な濃度の化合物の存在または非存在下にて、環境温度で一時間インキュベートした。各ウェルの放射活性を、マイクロプレートシンチレーションカウンターで特定した。1250倍非ラベル化MIP−1αの存在下、非特異的結合を特定した。Screen Ready（登録商標）ターゲットのメーカー指示書に従ってアッセイを実施した。このアッセイを実施した場合、本願発明の化合物はCCR1受容体に対する親和性を示した。
【００４４】
インビトロにおけるヒト単球上のCa2+フラックスアッセイ
試薬および解法：
1.     細胞培養：
a) THP-1（ATCC カタログ番号TIB202）
b) 細胞培養培地：Ultraglutamine1を含み、10％（V/V）ウシ胎児血清を添加したRPMI 1640。この培地は、これより「成長培地」と称する。
2.     アッセイバッファー：HBSS（ハンクス平衡塩溶液）、20mM HEPES、1mM CaCl2、1mM MgCl2、2.5mM  プロベネシド、pH7.4。
3.     Fluo−4AM（Molecular Probes、カタログ番号F−14201）
4.     Pluronic（プルロニック）「TM」F−127（Molecular Probes、カタログ番号P−6867）
5.     本願発明の化合物をDMSOに溶解した。段階希釈を行ない、9種の濃度の各化合物をモニターして線量曲線を作成し、これからIC50値を特定した。
6.     MIP−1α（Peprotech EC Ltd、カタログ番号300−08）
7.     Victor2 1420（Perkin Elmer）
8.     MicroliteTM2+（Dynex、カタログ番号7572）
試験（アッセイ）方法：
THP−1細胞を、T−75cm2フラスコ内にて、37℃、5％CO2中にて成長培地中で培養（grow）した。細胞を遠心分離により採取し、アッセイバッファー中に再けん濁した。次に細胞を、5μMのFluo−4および0.02％のプルロニック酸（最終濃度）とともに37℃、5％CO2中にて30分間ロードした。アッセイバッファーを用いて洗浄することにより、過剰の染料を除去した。細胞を再けん濁し、化合物を含むMicroliteプレートに105細胞／ウェルを添加して、次に37℃、5％CO2中にて15分間インキュベートした。次に細胞をMIP−1αで刺激し、細胞内のフリーのCa2+濃度をVictor2で測定した。このアッセイで測定した際に、本願発明の化合物は、THP−1細胞におけるMIP−1αが仲介するCa2+の流動を阻害する能力を示した。
【００４５】
インビボにおける、マウスでの生物学的活性
雌マウス（SJL/N Tac）に対して、カセットあたり5または6種の化合物（通常投与量：1mg/kg/化合物）を含む、0.5％N, N’−ジメチルアセトアミド（DMA）および15％スルホブチルエーテルβ−シクロデキストリン（Captisol「TM」）含有溶液を、静脈内または経口にて単回投与した。血液サンプルは、各投与の24時間後までタイムポイントおよび投与群毎に一匹のマウスから採取した。各化合物の処方投与量および血漿濃度はLC−MS／MSにより特定した。薬物速度論的パラメータを、WinNonlin Professional（バージョン4.0.1）を使用した非コンパートメント解析により特定した。消失速度定数λを、血漿濃度対数−時間曲線の最終ターミナルスロープの線形回帰分析により推定した。血漿濃度−時間曲線よりも下の領域では、線形／対数の台形公式を用いてAUC0-tを算出した。Cz／λとして推定される残りの領域を用いてAUCinfを算出した。最終タイムポイントにおける計算血漿濃度Czは、回帰方程式より得られた。経口でのバイオアベイラビリティ（生物学的利用能）（F）は次のように計算された：
Foral＝（AUCinf,po／AUCinf,iv）・（Doseiv／Dosepo）
薬力学的試験
Horuk, R.およびNg, H. Med. Res. Rev. 2000, 20, 155ならびにHoruk, R. Methods, 2003, 29, 369、およびこれらの文献中の参照文献において説明される手順を用いて、本願発明による化合物の、炎症性、自己免疫性、増殖性または過剰増殖性疾患、例えば、関節リュウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、炎症性腸疾患または喘息の治療を目的とする治療効力を示した。
【００４６】
すなわち、本願発明の態様のひとつにおいて、炎症性、自己免疫性、増殖性または過剰増殖性疾患の治療に用いられる、式Iの化合物を含む組成物が提供される。
【００４７】
本願発明の化合物とシクロスポリンAの組み合わせによる相乗効果もまた、該参照文献に記載の方法を用いることにより示される。すなわち、本願発明の態様のひとつにおいて、式Iの化合物を含む組成物と準腎毒性量のシクロスポリンAとの組み合わせが提供される。競合的アフィニティーバインディングアッセイおよびCa2+フラックスアッセイにおいて説明される方法を用いて、Ca2+フラックス（IC50Ca）を阻害する能力に関して、本願発明の様々な化合物の試験が行なわれた。いくつかの実施例および化合物A、B、CおよびDの結果を表2に示すが、ここでは全てのIC50値はnM（ナノモル）で示されている。表2は発明を例示するものであり、その範囲を限定するものではない。
【００４８】
【表２】
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【００４９】
脚注：全ての2,5−ジメチルピペラジン誘導体はラセミ混合物として合成されるとともに試験に供された。
【００５０】
本願発明の化合物は、マウスにおいて、経口でのバイオアベイラビリティ（生物学的利用能）を示した。インビボにおけるバイオアベイラビリティアッセイにおいて説明される方法を用いて、各化合物のノミナル投与量である1mg/kgの投与後の、これらのクリアランス（CL；L／時間／kg）、血漿における半減期（t1/2；時間）および経口でのバイオアベイラビリティ（F；％）に関して、本願発明の様々な化合物の試験が行なわれた。いくつかの実施例の結果を表3に示す。表3は発明を例示するものであり、その範囲を限定するものではない。
【００５１】
【表３】
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【００５２】
投与
有効量の式(I)の化合物は、通常の投与経路によるこのような治療を必要とする患者に投与され、有効量の活性成分および適切な通常の医薬組成物として処方されることが好ましい。このような組成物は、例えば、溶液、けん濁液、乳剤、錠剤、カプセルおよび粉末といった経口投与用の調製剤、非経口投与用の滅菌溶液、直腸投与用の座薬、あるいは局所製剤などの様々な剤型を取ることが可能である。
【００５３】
好適な製剤処方の選択および調製に関する従来の方法は、例えば、Pharmaceuticals-The Science of Dosage Form Design（医薬品−剤型デザインの科学）、M. B. Aulton、Churchill Livingstone、1988に記載されている。
【００５４】
RA（関節リュウマチ）治療における好適な一日の投与量は、0.005mg／kg〜約10mg／kg体重の間、好ましくは0.025mg／kg〜2mg／kg体重の間で、治療対象となるそれぞれの病状、各患者の年齢および体重、ならびに各患者の薬剤へのレスポンスに依存して変動すると考えられる。正確な個別投与量および一日投与量は、医師の指導の下による標準的医療指針に基づいて決定される。
【国際調査報告】
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