(57)【要約】  本発明は、新規な非晶質、結晶質、水和、および溶媒和の形態のスミラゲニン、薬用または食用グレードのスミラゲニンおよびその誘導体の製造におけるそれらの使用を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書で定義される結晶型Ｉ、ＩＩＩ、ＩＩＩＡ、Ｖ、ＶＩ、およびＶＩＩのうち１以上を有するスミラゲニン。
【請求項２】
請求項１において、
結晶型Ｉを有するスミラゲニン。
【請求項３】
請求項１において、
結晶型ＩＩを有するスミラゲニン。
【請求項４】
請求項１において、
結晶型ＩＩＩＡを有するスミラゲニン。
【請求項５】
請求項１において、
結晶型Ｖを有するスミラゲニン。
【請求項６】
請求項１において、
結晶型ＶＩを有するスミラゲニン。
【請求項７】
請求項１において、
結晶型ＶＩＩを有するスミラゲニン。
【請求項８】
スミラゲニンチャネル水和物。
【請求項９】
スミラゲニン一水和物。
【請求項１０】
１：１以外の水和化学量論のスミラゲニン水和物。
【請求項１１】
スミラゲニンイソプロピルアルコール溶媒和物。
【請求項１２】
非晶質スミラゲニン。
【請求項１３】
請求項１ないし１２のいずれかにおいて、
別の型のスミラゲニンを実質的に含まないおよび／または他のステロイド系サポゲニンおよび／またはステロイド系サポニンを実質的に含まない材料。
【請求項１４】
請求項１ないし１３のいずれかにおいて、
少なくとも約５０質量％の純度を有する材料。
【請求項１５】
請求項１ないし１４のいずれかにおいて、
少なくとも約９０質量％の純度を有する材料。
【請求項１６】
請求項１ないし１５のいずれかにおいて、
少なくとも約９５質量％の純度を有する材料。
【請求項１７】
請求項１ないし１６のいずれかにおいて、
キログラムスケールで製造された実質的に純粋な単離形態である材料。
【請求項１８】
請求項１１において、
共沸蒸留によって体積を減少させた比較的純度の低いスミラゲニンのイソプロピルアルコール溶液からの沈殿によって、キログラムスケールで製造された、実質的に純粋な単離形態で存在する、スミラゲニンイソプロピルアルコール溶媒和物。
【請求項１９】
スミラゲニンと溶媒和物を形成しない無水ＩＰＡ相容性有機溶媒中で実質的に純粋なスミラゲニンイソプロピルアルコール（ＩＰＡ）溶媒和物の溶液の結晶化によって得られる、結晶質の薬用または食用グレードの無水非溶媒和スミラゲニン。
【請求項２０】
請求項１９において、
明細書で定義される結晶型ＩまたはＩＩＩを有するスミラゲニン。
【請求項２１】
請求項１９または２０において、
キログラムスケールで製造されたスミラゲニン。
【請求項２２】
請求項１９ないし２１のいずれかにおいて、
非バッチ式方法によって製造されたスミラゲニン。
【請求項２３】
請求項１９ないし２１のいずれかにおいて、
スミラゲニンと溶媒和物を形成しない前記無水ＩＰＡ相容性有機溶媒がアセトンを含むスミラゲニン。
【請求項２４】
請求項１ないし２３のいずれかに記載の材料を、１以上の請求項１ないし２３のいずれかに記載のその他の材料、他の型のスミラゲニン、その他の生物学的に活性な材料、および生物学的に不活性な材料から選ばれる１以上の成分との混合物として含む組成物。
【請求項２５】
請求項２４において、
前記他の型のスミラゲニンが存在する場合、該他の型のスミラゲニンが明細書で定義される結晶型ＩＩである組成物。
【請求項２６】
請求項２４または２５において、
薬剤、食品、サプリメント食品または飲料として使用される組成物。
【請求項２７】
請求項１ないし２３のいずれかにおいて、
薬剤、食品、サプリメント食品または飲料として使用される材料。
【請求項２８】
請求項２４ないし２６のいずれかに記載の組成物の製造方法であって、
請求項１ないし２３のいずれかに記載の材料を、１以上の請求項１ないし２３のいずれかに記載のその他の材料、他の型のスミラゲニン、その他の生物学的に活性な材料、および生物学的に不活性な材料から選ばれる１以上の成分と混合することを含む方法。
【請求項２９】
請求項１ないし２５のいずれかに記載の材料または組成物の、薬剤、食品、サプリメント食品または飲料の製造における使用。
【請求項３０】
請求項２９において、
前記薬剤、前記食品、前記サプリメント食品または前記飲料が、高い血中コレステロール値、肥満および糖尿病肥満症候群、認知機能障害および関連する症状、非認識的な神経変性、非認識的な神経筋変性、運動感覚神経変性、ならびに認識的な神経または神経筋の損傷がない場合における受容体の損失から選ばれる症状を治療するためのものである使用。
【請求項３１】
高い血中コレステロール値、肥満および糖尿病肥満症候群、認知機能障害および関連する症状、非認識的な神経変性、非認識的な神経筋変性、運動感覚神経変性、ならびに認識的な神経または神経筋の損傷がない場合における受容体の損失から選ばれる症状に罹患しているかまたは罹患しやすいヒトまたはヒト以外の動物を治療するための方法であって、有効な量の請求項１ないし２３のいずれかに記載の材料または組成物を前記ヒトまたはヒト以外の動物に投与することを含む方法。
【請求項３２】
請求項３１において、
前記動物がヒトである方法。
【請求項３３】
薬用または食用グレードのスミラゲニンまたはその誘導体を得るための方法であって、
前記方法の少なくとも１つの工程が、請求項１ないし２５のいずれかに記載の材料を製造することを含む方法。
【請求項３４】
請求項３３において、
前記材料を単離乾燥固体の物理的形態または結晶スラリー等の液体媒質内で製造する方法。
【請求項３５】
請求項３３または３４において、
前記スミラゲニンを無水非溶媒和スミラゲニンとして製造する方法。
【請求項３６】
請求項３３ないし３５のいずれかにおいて、
得られた薬用または食用グレードのスミラゲニンまたはその誘導体を薬剤、食品、サプリメント食品または飲料に調合する方法。
【請求項３７】
非晶質型と、明細書で定義される結晶型Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＩＩＡ、Ｖ、ＶＩ、およびＶＩＩとの間でスミラゲニンを調節するための方法であって、
任意に水の存在下において、適当な有機溶媒または混合溶媒中の第１の型のスミラゲニンの溶液から調節された型のスミラゲニンを沈殿させ、前記調節された型のスミラゲニンを得ることを含む方法。
【請求項３８】
請求項３７において、
前記非晶質型と、明細書で定義される前記結晶型Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＩＩＡ、およびＶとの間で前記スミラゲニンを調節する方法。
【請求項３９】
請求項３７または３８において、
前記調節された型のスミラゲニンが、請求項１ないし２３のいずれかに記載の材料を含む方法。
【請求項４０】
無水物、二水和物、および中間体レべルの間でスミラゲニンの水和レべルを調節するための方法であって、
任意に水の存在下において、適当な有機溶媒または混合溶媒中のスミラゲニンの溶液から第１の型のスミラゲニンを沈殿または結晶化させ、前記調節された水和レべルのスミラゲニンを得ることを含む方法。
【請求項４１】
請求項４０において、
前記調整された型のスミラゲニンが、請求項１ないし１０、１２ないし１７、および１９ないし２３のいずれかに記載の材料を含む方法。
【請求項４２】
請求項３３ないし４１のいずれかにおいて、
最初は得られた前記材料からスミラゲニン誘導体を製造する方法。
【請求項４３】
請求項４２において、
前記誘導体がスミラゲニンプロドラッグである方法。
【請求項４４】
請求項３３ないし４１のいずれかに記載の方法によって製造されたスミラゲニン。
【請求項４５】
請求項１ないし２３および４４のいずれかに記載の材料をエステル化することを含む、スミラゲニンプロドラッグの製造方法。
【請求項４６】
請求項４３または４５に記載の方法によって得られたスミラゲニンプロドラッグ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な非晶質型および結晶質型スミラゲニンおよびその水和物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ある種の有機化合物は、当該化合物、化合物の溶媒和物、化合物の水和物またはそれらの組み合わせを含むことができる多数の異なる同質異像型または結晶特性で結晶化することができることが証明されている。あるいは、化合物、溶媒和物または水和物は非晶質固体として沈殿する場合もある。
【０００３】
医薬製品の安定性と生物学的可用性は、同質異像型に応じて異なる場合がある。したがって、結晶型の選択は医薬の開発にとって重要である（Ｂｒｉｔｔａｉｎ，Ｐｈａｒｍ．Ｔｅｃｈ．ｐｐ．５０〜５２，１９９４；Ｙｕら，Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，１，ｐｐ．１１８〜１２７，１９９８；Ｂｙｒｎら，Ｃｈｅｍ．Ｍａｔｅｒ．６，ｐｐ．１１４８〜１１５８，１９９４；Ｂｙｒｎら，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，１２，ｐｐ．９４５〜９５４，１９９５；Ｈｅｎｋら，Ｐｈａｒｍ．Ｉｎｄ．５９，ｐｐ．１６５〜１６９，１９９７）。
【０００４】
スミラゲニンは、下記式で表されるＡ／Ｂ−シスステロイド系サポゲニンである。
【０００５】
【化１】
2007534736.tif 000002
【０００６】
スミラゲニンおよびその誘導体は、ヒト医学および獣医学ならびにヒトおよびヒト以外の動物の非治療的処置において貴重な治療剤であることが証明されている。例えば、米国特許第３８９０４３８号（高い血中コレステロール値に対するスミラゲニンおよび４−置換フェノキシイソブチル酸化合物の使用（ｕｓｅ  ｏｆ  ｓｍｉｌａｇｅｎｉｎ  ａｎｄ  ｃｅｒｔａｉｎ  ４−ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  ｐｈｅｎｏｘｙｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｈｉｇｈ  ｂｌｏｏｄ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｌｅｖｅｌｓ））、米国特許第４６８０２８９号（肥満および糖尿病肥満症候群に対するスミラゲニンの使用（ｕｓｅ  ｏｆ  ｓｍｉｌａｇｅｎｉｎ  ａｇａｉｎｓｔ  ｏｂｅｓｉｔｙ  ａｎｄ  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｏｂｅｓｉｔｙ  ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ））、米国特許第６２５８３８６号（認知機能障害と関連する症状に対するスミラゲニンの使用（ｕｓｅ  ｏｆ  ｓｍｉｌａｇｅｎｉｎ  ａｇａｉｎｓｔ  ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｌｌｉｅｄ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ））、ＷＯ−Ａ−０１／２３４０６、ＷＯ−Ａ−０１／２３４０７、ＷＯ−Ａ−０１／２３４０８、ＷＯ−Ａ−０１／４９７０３（認知機能障害および関連する症状に対するスミラゲニン誘導体の使用（ｕｓｅ  ｏｆ  ｓｍｉｌａｇｅｎｉｎ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｌｌｉｅｄ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ））、ＷＯ−Ａ−０２／０７９２２１、ＷＯ−Ａ−０３／０８２８９３（非認識的な神経変性、非認識的な神経筋変性、運動感覚神経変性、および認識的な神経または神経筋の損傷がない場合における受容体の損失（ｕｓｅ  ｏｆ  ｓｍｉｌａｇｅｎｉｎ  ａｎｄ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｔｈｅｒｅｏｆ  ａｇａｉｎｓｔ  ｎｏｎ−ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，  ｎｏｎ−ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，  ｍｏｔｏｒ−ｓｅｎｓｏｒｙ  ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｌｏｓｓ  ｏｆ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｂｓｅｎｃｅ  ｏｆ  ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ，  ｎｅｕｒａｌ  ｏｒ  ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ））を参照のこと。
【０００７】
主要な論文（Ｍａｒｋｅｒら，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．６５，ｐｐ．１１９９〜１２０９，１９４３，ｐ．１２０７）では、スミラゲニンアセテートが１１０℃、１３０℃、１５２℃で溶解する同質異像型を示すことが報告されている。多くの供給源から得られたスミラゲニンの融点は常に１８３〜１８５℃の範囲であった。しかしながら、再結晶溶媒については記載されておらず、上記論文はスミラゲニンの同質異像型については言及していない。
【０００８】
Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．ｐｐ．２５２５〜２５３２，１９４０において、Ｍａｒｋｅｒらは、アルコールから結晶化させたスミラゲニンについて、１８３〜１８５℃の融点を報告している。
【０００９】
Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．６４，ｐｐ．８１８〜８２２，１９４２において、Ｍａｒｋｅｒらは、アセトンから結晶化させたスミラゲニンについて１７０〜１８０℃の融点を報告している。
【００１０】
Ａｓｋｅｗらは、アセトンからのスミラゲニンの分別結晶化（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ  ｃｒｙｓｔａｌｌｉｓａｔｉｏｎ）によって、１８３〜１８４℃の融点を有する長く滑らかな針状結晶が得られることを報告している。また、スミラゲニンはメタノールから結晶化させた場合に水和物を形成するようであることも報告している（Ａｓｋｅｗら，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．ｐｐ．１３９９〜１４０３，１９３６）。しかしながら、この観察を支持する証拠は提示されておらず、関連化合物に関する以前の論文に単に言及しているに過ぎない（Ｐｏｗｅｒら，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，１０５，ｐｐ．２０１〜２１９，１９１４）。
【００１１】
Ｓｃｈｅｅｒらは、エタノール水溶液からスミラゲニンを結晶化させ、１８７〜１８８℃の融点を観察しているが、水和物の形成については言及していない（Ｓｃｈｅｅｒら，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，１１，ｐｐ．６４１〜６４６，１９５５）。
【００１２】
Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，７７，ｐｐ．３０８６〜３０８９，１９５５において、Ｗａｌｌらは、天然源からのスミラゲニンのサンプルは１８８〜１８９℃の融点を有するが、サルササポゲニンの異性化で生じたサンプルでは、アセトンまたはアセトン水溶液によって１８２〜１８５℃を超える温度に融点を上昇させることはできなかったと述べている。また、水和物の形成については言及されていない。合成材料および天然材料の赤外線（ＩＲ）スペクトルは同一だった。しかしながら、粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）パターンは同一ではなかった。これらの差は同質異像に帰せられてはおらず、ＸＲＰＤパターンは提示されていない。著者らは、結晶構造に依存するスミラゲニンの所定の特性にサルササポゲニンの著しい影響があったと結論付けている。
【００１３】
Ｗａｌｌら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９８，ｐｐ．５３３〜５４３，１９５２）は、スミラゲニンの融点が１８４℃であったと報告している。しかしながら、再結晶溶媒については記載されていない。上記論文は、偏光ディスクを有するコフラー（Ｋｏｆｌｅｒ）顕微鏡融点装置を使用することによって、結晶型または結晶特性を観察することができると報告している。同質異像については言及されていないが、融点に対する不純物の影響については言及されている。Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，７７，ｐｐ．１２３０〜１２３７，１９５４において、Ｗａｌｌらはスミラゲニンの融点が１８３℃であったと報告している。
【００１４】
Ｃａｌｌｏｗら（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ  ７７，ｐ．１６７２，１９５５）は、アセトンからのスミラゲニンの再結晶によって、１５７〜１６０℃の融点を有する結晶が得られたと報告している。
【００１５】
Ｐａｒｓｏｎｓら（Ｈｅｎｒｙ  Ｆｏｒｄ  Ｈｏｓｐ．Ｍｅｄ．Ｂｕｌｌ．，１２，ｐｐ．８７〜１２０，１９６４）は、ＸＲＰＤによるスミラゲニンの特定の結晶型について記載している。提示されたデータから、この型が本明細書に記載された型のいずれかに対応すると結論付けることはできない。
【００１６】
米国特許第３１６９９５９号（１９６５）では、ヘプタンから結晶化させたスミラゲニンについて１７８〜１８０℃の融点が報告されている。
【００１７】
Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，８，ｐｐ．１５２３〜１５３１，１９６９において、Ｂｌｕｎｄｅｎらは、アセトンから結晶化させたスミラゲニンについて１８１〜１８２℃の融点を報告している。
【００１８】
Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．，４４，ｐｐ．４４１〜４４７，１９８１において、Ｂｌｕｎｄｅｎらは、アセトンから結晶化させたスミラゲニンについて１８６℃の融点を報告している。
【００１９】
植物源からの比較的純粋なスミラゲニンおよび他のサポゲニンの抽出を補助するために、結晶質中間錯体を使用することが提案されている。したがって、例えば、米国特許第５０１７５６２号には、サポニン含有植物であるアガーベ（ａｇａｖｅ）、ユッカ（ｙｕｃｃａ）、紅露（ｄｉｏｓｃｏｒｅａ）、キラヤ（ｑｕｉｌｌａｊａ）、ウマゴヤシ（ｍｅｄｉｃａｇｏ）、およびグアーガム（ｃｙａｍｏｐｓｉｓ）から誘導され、脂肪および非サポニン系糖質を実質的に含有せず、加水分解によってスミラゲニンおよび他のサポゲニンを生成する結晶質サポニン含有錯体について記載されている。
【００２０】
上述した従来技術の刊行物の開示内容は、参照によって本願の開示内容の一部をなすものとする。
【００２１】
療法における所望の投与経路によっては、スミラゲニンの安定性および水溶性を改良または少なくとも制御して、所望の生物学的可用性プロファイルを得ることが望ましい場合がある。また、スミラゲニンの安定性および水溶性を制御することができれば、製造または精製プロセスの一助となる。
【００２２】
原則として、有機化合物の同質異像型の水溶性は必ずしも全ての型で同じではない。したがって、特定の結晶型または結晶特性を使用することによって、水溶性を有益に制御することができる。スミラゲニン等の難水溶性の化合物の場合、同質異像型を調節することによって水溶性を僅かに調節するだけでも有用な処理または生物学的利点が得られる。
【００２３】
我々は市販のスミラゲニンを調査した結果、市販のスミラゲニンは、我々がＩＩ型と特徴付けた特定の結晶型を有することを見出した。
【００２４】
図１は、リサーチ・プラス社から入手した市販のスミラゲニンのサンプルからλ＝１．５４０６オングストロームで得られたＸＲＰＤパターンを示す。これはＩＩ型結晶質スミラゲニンの例である。この結晶型の５〜５０°の２θ範囲におけるＸＲＰＤパターンの強度を、表Ａの下部の「ＩＩ型」という見出しを付けた欄に示す。これらのデータは規則的な間隔の２θ値での強度であり、図面とともに使用する。これらのデータから、ブラッグの式を使用することによってｄ間隔を容易に計算することができる。この目的のために、約２０個の最も強いピークが結晶型の特性であると通常考えることができるが、結晶学の標準的なプラクティスに合わせるものとする。
【００２５】
本発明は、さらに少なくとも３種類のスミラゲニンの結晶型が存在するという我々の驚くべき知見に基づくものである。それらの結晶型の２つは通常は無水であり、Ｉ型およびＩＩＩ型とした。また、我々は、ＩＩＩ型は結晶構造が異なる（ＩＩＩＡ型）および／または水和レべルが異なる（スミラゲニン半水和物またはスミラゲニン二水和物）少なくとも１つの異型で存在し得ることを見出した。さらに、驚くべきことに、我々は、スミラゲニンが結晶質一水和物を形成し得ることを見出した。我々は、この一水和物の典型的な結晶型をＶ型とした。さらに、驚くべきことに、我々は、スミラゲニンが、変動するスミラゲニン：水化学量論を有する結晶質チャネル水和物を形成し得ることを見出した。我々は、このチャネル水和物の典型的な結晶型をＶＩ型とした。また、スミラゲニンは結晶ではない型（非晶質型）で得ることができることも見出した。従来技術は、スミラゲニンの非晶質型については記載していない。
【００２６】
さらに、我々は、イソプロピルアルコールを使用して形成されたスミラゲニンの結晶質溶媒和物を特定した。我々はこのイソプロピルアルコール溶媒和物の典型的な結晶型をＶＩＩ型とした。
【００２７】
驚くべきことに、我々は、ヘキサンまたはヘプタン中での溶媒媒介転移によってＩＩ型スミラゲニンを一水和物に転化させることができることを見出した。また、我々は、アセトン水溶液、テトラヒドロフラン水溶液、エタノール水溶液中での溶媒媒介転移を含む別のプロセスによって一水和物を得ることができることを見出した。カールフィッシャー分析によって測定された水分は約３〜６％ｗ／ｗの範囲だった。熱重量分析（ＴＧＡ）による分析によって、水の質量が４％の範囲であることを確認した。
【００２８】
さらに、我々は、再結晶に使用される有機溶媒を制御することによって、新規な非晶質型と結晶型との間だけではなく、それらと既知のＩＩ型との間の遷移を制御するための方法を見出した。
【００２９】
驚くべきことに、そして有利には、我々は、所定の有機溶媒からのスミラゲニンの沈殿または結晶化によってスミラゲニンの有機溶媒和物が得られるわけではないことを見出した。しかしながら、所定の状況においてイソプロピルアルコール溶媒和物（半溶媒和物であると考えられる）を得ることができ、これは新たに認められた材料である。
【００３０】
したがって、スミラゲニンのこれらの新規な型および関連する方法によって、薬用または食用グレードのスミラゲニンの製造の制御性を高めることができ、改良された送達特性および生物学的可用性を有する薬用または食用グレードのスミラゲニンを製造することができるようになる。
【発明の開示】
【００３１】
本発明の第１の態様によれば、本明細書で定義される結晶型Ｉ、ＩＩＩ、ＩＩＩＡ、Ｖ、ＶＩ、およびＶＩＩのうち１以上を有するスミラゲニンが提供される。
【００３２】
本発明の第１の態様の実施例によれば、本明細書で定義される結晶型Ｉ、ＩＩＩ、ＩＩＩＡ、およびＶのうち１以上を有するスミラゲニンが提供される。
【００３３】
本発明の第２の態様によれば、任意に結晶質であるスミラゲニン半水和物が提供される。
【００３４】
本発明の第３の態様によれば、任意に結晶質であるスミラゲニン一水和物が提供される。
【００３５】
本発明の第４の態様によれば、任意に結晶質であるスミラゲニン二水和物が提供される。
【００３６】
本発明の第５の態様によれば、任意に結晶質であるスミラゲニンチャネル水和物（ｃｈａｎｎｅｌ  ｈｙｄｒａｔｅ）が提供される。
【００３７】
本発明の第６の態様によれば、非晶質スミラゲニンが提供される。
【００３８】
本発明の第７の態様によれば、任意に結晶質であるスミラゲニンイソプロピルアルコール溶媒和物が提供される。この材料は、共沸蒸留によって体積を減少させた比較的純度の低いスミラゲニンのイソプロピルアルコール溶液からの沈殿によって製造することができる。
【００３９】
本発明の第８の態様によれば、アセトン等のスミラゲニンと溶媒和物を形成しない無水ＩＰＡ相容性有機溶媒中での実質的に純粋なスミラゲニンイソプロピルアルコール（ＩＰＡ）溶媒和物の溶液からの結晶化によって得られる、結晶質の薬用または食用グレードの無水非溶媒和スミラゲニンが提供される。スミラゲニンは、本明細書で定義される結晶型ＩまたはＩＩＩであってもよい。
【００４０】
本発明の結晶質または非晶質材料は、他の型のスミラゲニンを実質的に含まない状態および／または他のステロイド系サポゲニンおよび／またはステロイド系サポニンを実質的に含まない状態で存在することができる。
【００４１】
本発明の結晶質または非晶質材料は、少なくとも約５０質量％の純度、例えば少なくとも約７０質量％の純度、例えば少なくとも約８０質量％の純度、例えば少なくとも約８５質量％の純度、例えば少なくとも約９０質量％の純度、例えば少なくとも約９５質量％の純度、例えば少なくとも約９７質量％の純度、例えば少なくとも約９８質量％の純度で好ましくは存在することができる。本発明の材料は、必要に応じて、１以上の本発明に係る他の材料、他の型のスミラゲニン、他の生物学的に活性な物質、生物学的に非活性な材料、またはそれらの組み合わせとの混合物として存在していてもよい。他の型のスミラゲニンは、存在している場合には結晶型ＩＩであってもよい。
【００４２】
本発明によって提供されるスミラゲニンの新規な型は、特に安定性と取り扱い性の点で既知の型よりも多くの利点を有する。これらの利点は、市販のスミラゲニン組成物の製造、精製、調合、および保管段階の１以上および／または所望の薬理効果を達成するための組成物からヒトまたはヒト以外の動物の患者へのスミラゲニンの送達に当てはまる。
【００４３】
また、本発明は、任意に水の存在下における、好ましくは適当な有機溶媒または混合溶媒中のスミラゲニンの溶液からのスミラゲニンの沈殿、あるいは、適当な有機溶媒または混合溶媒中でのスミラゲニンの結晶化による本発明の材料の製造方法、前記材料を含む薬剤、食品、および飲料、前記薬剤、食品、および飲料の製造方法、前記材料の薬剤、食品、および飲料の製造における使用、前記薬剤、食品、および飲料のヒトおよび獣医学、ならびにヒトおよびヒト以外の動物の非治療的処置における使用を提供する。
【００４４】
また、本発明は、薬用または食用グレードのスミラゲニンまたはその誘導体を得るための方法であって、該方法の少なくとも１つの工程が、本発明に係る型の１以上を有するスミラゲニンを製造することを含む方法を提供する。スミラゲニンは、任意の適当な水和レべルおよび適当な物理的形態（例えば、単離乾燥固体または結晶スラリー等の液体媒質内）で製造することができる。
【００４５】
得られる薬用または食用グレードのスミラゲニンまたはその誘導体は、適当な薬剤、食品または飲料の形態に調合することができる。
【００４６】
また、本発明は、Ｉ型、ＩＩ型、ＩＩＩ型、ＩＩＩＡ型、Ｖ型、ＶＩ型、およびＶＩＩ型（例えば、Ｉ型、ＩＩ型、ＩＩＩ型、ＩＩＩＡ型、およびＶ型）の間でスミラゲニンの結晶型を調節するための方法、非晶質型と結晶質型との間でスミラゲニンの型を調節するための方法、スミラゲニンの水和レべルを調節するための方法、スミラゲニンのイソプロピルアルコール溶媒和物を形成するための方法、ならびに、水和物、溶媒和物、非水和物、非溶媒和物のうち２以上の間でスミラゲニンの型を調節するための方法を提供する。
【００４７】
本明細書で使用される「結晶化」、「再結晶」等の用語は、所望の結晶型または結晶特性、混合物またはその他の組み合わせを形成するために好適なあらゆる方法を意味し、限定されない。例えば、シード形成（ｓｅｅｄｉｎｇ）および／または核生成の有無に関わらず、結晶スラリー化、結晶析出、およびその他の溶媒媒介結晶転移（ｓｏｌｖｅｎｔ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｒｙｓｔａｌ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ）は全て、本明細書で使用される「結晶化」、「再結晶」等の用語に含まれる。
【００４８】
したがって、本発明に係る材料は、実質的に純粋な単離形態で好都合に存在することができる。材料はキログラムスケールで好適に製造することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４９】
［結晶型Ｉ］
本明細書で使用される「結晶型Ｉ」という用語は、実質的に図２に示すＸＲＰＤパターンを有するスミラゲニンの結晶型を意味する（λ＝１．５４０６オングストローム）。
【００５０】
本明細書で使用される「実質的に示すＸＲＰＤパターン」という表現は、特に、図面の特徴ピークに対応する２θまたはｄ間隔のピークを有するＸＲＰＤパターンを意味する。この目的のために、５〜５０°の２θ範囲における約２０個の最も強いピークを結晶型の特性または特徴であると通常考えることができるが、結晶学の標準的なプラクティスに合わせるものとする。
【００５１】
この結晶型の５〜５０°の２θ範囲におけるＸＲＰＤピークの強度を、後述する表Ａの「Ｉ型」という見出しを付けた欄に示す。これらのデータは、規則的な間隔の２θ値での強度であり、図面とともに使用される。これらのデータから、ブラッグの式を使用することによってｄ間隔を容易に計算することができる。
【００５２】
Ｉ型材料は、市販のスミラゲニンのアセトンからの再結晶によって製造することができる。あるいは、Ｉ型材料は、アセトン、より好ましくはアセトニトリル中でのＩＩ型またはＩＩＩ型材料の溶媒媒介転移（ｓｏｌｖｅｎｔ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ）によって製造することができる。
【００５３】
カールフィッシャー分析、示差走査熱量測定、および熱重量分析によって、我々が得た結晶型Ｉは水和されておらず、溶媒和していないことを確認した。
【００５４】
［結晶型ＩＩ］
本明細書で使用される「結晶型ＩＩ」という用語は、実質的に図１に示すＸＲＰＤパターンを有するスミラゲニンの結晶型を意味する（λ＝１．５４０６オングストローム）。
【００５５】
本明細書で使用される「実質的に示すＸＲＰＤパターン」という表現は、特に、図面の特徴ピークに対応する２θまたはｄ間隔のピークを有するＸＲＰＤパターンを意味する。この目的のために、５〜５０°の２θ範囲における約２０個の最も強いピークを結晶型の特性または特徴であると通常考えることができるが、結晶学の標準的なプラクティスに合わせるものとする。
【００５６】
この結晶型の５〜５０°の２θ範囲におけるＸＲＰＤピークの強度を、表Ａの「ＩＩ型」という見出しを付けた欄に示す。これらのデータは、規則的な間隔の２θ値での強度であり、図面とともに使用される。これらのデータから、ブラッグの式を使用することによってｄ間隔を容易に計算することができる。
【００５７】
ＩＩ型材料はリサーチ・プラス社（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｌｕｓ，Ｉｎｃ．）から入手した市販のスミラゲニンである。
【００５８】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、ＴＧＡ、残留溶媒、およびカールフィッシャー分析によって、材料は水和されておらず、溶媒和もしていないことを確認した。
【００５９】
［結晶型ＩＩＩ］
本明細書で使用される「結晶型ＩＩＩ」という用語は、実質的に図３に示すＸＲＰＤパターンを有するスミラゲニンの結晶型を意味する（λ＝１．５４０６オングストローム）。
【００６０】
本明細書で使用される「実質的に図に示すＸＲＰＤパターン」という表現は、特に、図面の特徴ピークに対応する２θまたはｄ間隔のピークを有するＸＲＰＤパターンを意味する。この目的のために、５〜５０°の２θ範囲における約２０個の最も強いピークを結晶型の特性または特徴であると通常考えることができるが、結晶学の標準的なプラクティスに合わせるものとする。
【００６１】
この結晶型の５〜５０°の２θ範囲におけるＸＲＰＤピークの強度を表Ａの「ＩＩＩ型」という見出しを付けた欄に示す。これらのデータは、規則的な間隔の２θ値での強度であり、図面とともに使用される。これらのデータから、ブラッグの式を使用することによってｄ間隔を容易に計算することができる。
【００６２】
ＩＩＩ型材料は、メチルｔ−ブチルエーテル、アセトン、メチルイソブチルケトン、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、およびトルエンを使用した市販のスミラゲニンの溶媒媒介転移によって製造することができる。ブタノンまたは５０％エタノール水溶液を使用した市販のスミラゲニンの溶媒媒介転移によって、結晶型ＩＩＩおよびＶの混合物を得た。
【００６３】
これらのデータは、様々な溶媒を使用した溶媒媒介転移によって結晶型ＩＩを結晶型ＩＩＩに転化させることができることを示している。
【００６４】
カールフィッシャー分析、示差走査熱量測定、および熱重量分析によって、我々が得た結晶型ＩＩＩは水和されておらず、溶媒和もしていないことを確認した。
【００６５】
［結晶型ＩＩＩＡ］
本明細書で使用される「結晶型ＩＩＩＡ」という用語は、実質的に図４に示すＸＲＰＤパターンを有するスミラゲニンの結晶型を意味する（λ＝１．５４０６オングストローム）。
【００６６】
本明細書で使用される「実質的に示すＸＲＰＤパターン」という表現は、特に、図面の特徴ピークに対応する２θまたはｄ間隔のピークを有するＸＲＰＤパターンを意味する。この目的のために、５〜５０°の２θ範囲における約２０個の最も強いピークを、結晶型の特性または特徴であると通常考えることができるが、結晶学の標準的なプラクティスに合わせるものとする。
【００６７】
ブラッグの式を使用することによって、図４の情報からｄ間隔を容易に計算することができる。
【００６８】
ＩＩＩＡ型材料は、ジメチルホルムアミドを使用した市販のスミラゲニンの溶媒媒介転移によって製造することができる。
【００６９】
［結晶型Ｖ］
本明細書で使用される「結晶型Ｖ」という用語は、実質的に図５に示すＸＲＰＤパターンを有するスミラゲニンの結晶型を意味する（λ＝１．５４０６オングストローム）。
【００７０】
本明細書で使用される「実質的に示すＸＲＰＤパターン」という表現は、特に、図面の特徴ピークに対応する２θまたはｄ間隔のピークを有するＸＲＰＤパターンを意味する。この目的のために、５〜５０°の２θ範囲における約２０個の最も強いピークを、結晶型の特性または特徴であると通常考えることができるが、結晶学の標準的なプラクティスに合わせるものとする。
【００７１】
この結晶型の５〜５０°の２θ範囲におけるＸＲＰＤピークの強度を表Ａの「Ｖ型」という見出しを付けた欄に示す。このデータから、ブラッグの式を使用することによって、ｄ間隔を容易に計算することができる。
【００７２】
Ｖ型材料は、市販のスミラゲニンのエタノール、テトラヒドロフラン、ヘキサンまたは水性アセトンからの再結晶によって比較的純粋な状態で製造することができる。水性アセトンにおけるアセトン／水の比率は、例えば約０．５：１（体積比）から約２５：１（体積比）、例えば約１：１（体積比）から約２０：１（体積比）、例えば約２：１（体積比）から約１９：１（体積比）の範囲で大きく異なっていてもよい。
【００７３】
ブタノンまたは５０％エタノール水溶液中での市販のスミラゲニンの溶媒媒介転移によって、結晶型ＩＩＩおよびＶの混合物を得た。
【００７４】
ジクロロメタン中での市販のスミラゲニンの溶媒媒介転移によって、結晶型ＩＩおよびＶの混合物を得た。
【００７５】
水性アセトン、水性テトラヒドロフランまたは水性エタノール中での市販のスミラゲニンの溶媒媒介転移によって、結晶型Ｖ（一水和物）を得た。いずれの場合も、媒質中の溶媒に対する水の比率は大きく異なっていてもよい。得られる結晶性材料の純度は、水性アセトンを使用した場合には、別の媒質を使用した場合と比較して高いように思われる。
【００７６】
カールフィッシャー分析、ＤＳＣ（図６）、およびＴＧＡ（図７）によって、我々が得た結晶型Ｖは、スミラゲニンの一水和物であることを確認した。
【００７７】
［結晶型ＶＩ］
本明細書で使用される「結晶型ＶＩ」という用語は、実質的に図８および図１５に示すＸＲＰＤパターンを有するスミラゲニンの結晶型を意味する（λ＝１．５４０６オングストローム）。
【００７８】
本明細書で使用される「実質的に図に示すＸＲＰＤパターン」という表現は、特に、図面の特徴ピークに対応する２θまたはｄ間隔のピークを有するＸＲＰＤパターンを意味する。この目的のために、２〜２８°の２θ範囲における約２０個の最も強いピークを結晶型の特性または特徴であると通常考えることができるが、結晶学の標準的なプラクティスに合わせるものとする。
【００７９】
この結晶型の２〜２８°の２θ範囲におけるＸＲＰＤピークの強度は、図８および図１５から得ることができる。有意なピークの２θおよびｄ間隔ならびに有意なピークの最も強いピークに対する強度を表Ｂに示す。
【００８０】
ＶＩ型材料は、市販のスミラゲニンのメタノールからの再結晶によって、比較的純粋な状態で製造することができる。
【００８１】
ＤＳＣ（図９）、ＴＧＡ（図１０）、および蒸気収着（図１１）分析は、我々が得た結晶型ＶＩが、変動するスミラゲニン：水化学量論を示し、適当な分子サイズを有する溶媒とチャネル溶媒和物を形成する可能性のあるスミラゲニンのチャネル水和物であることを示唆している。周知の通り、チャネル水和物は、分子の結晶格子が完全または部分的に水（または溶媒）分子を収容することができる空隙を取り囲むチャネルまたはケージを形成している水和物である。特定の時点におけるスミラゲニン：水の化学量論（モル）比は、水分子が通常は空隙に自由に出入りすることができるため、周囲環境の湿度等の要因に依存する。
【００８２】
［結晶型ＶＩＩ］
本明細書で使用される「結晶型ＶＩＩ」という用語は、実質的に図１２および図１６に示すＸＲＰＤパターンを有するスミラゲニンの結晶型を意味する（λ＝１．５４０６オングストローム）。
【００８３】
本明細書で使用される「実質的に示すＸＲＰＤパターン」という表現は、特に、図面の特徴ピークに対応する２θまたはｄ間隔のピークを有するＸＲＰＤパターンを意味する。この目的のために、２〜２８°の２θ範囲における約２０個の最も強いピークを、結晶型の特性または特徴であると通常考えることができるが、結晶学の標準的なプラクティスに合わせるものとする。
【００８４】
この結晶型の２〜２８°の２θ範囲におけるＸＲＰＤピークの強度は、図１２および図１６から得られる。有意なピークの２θおよびｄ間隔ならびに有意なピークの最も強いピークに対する強度を表Ｃに示す。
【００８５】
ＶＩＩ型材料は、スミラゲニンのイソプロピルアルコール（ＩＰＡ）からの結晶化によって、比較的純粋な状態で製造することができる。その後、材料を必要に応じて熟成することができる（例えば、周囲温度で例えば少なくとも約２４時間、例えば少なくとも約４８時間）。その後、ＶＩＩ型材料を必要に応じてアセトンから再結晶して、実質的に純粋な状態の無水溶媒和スミラゲニンを得ることができる。ＤＳＣ（図１３）およびＴＧＡ（図１４）は、我々が得た結晶型ＶＩＩがスミラゲニンの半ＩＰＡ溶媒和物であることを示している。
【００８６】
ＶＩＩ型材料は、スミラゲニンを精製して薬用または食用グレードのスミラゲニンを製造する際の潜在的に重要な中間物質である。特定の理論に拘束されることは望まないが、比較的純度の低いスミラゲニンのイソプロピルアルコール溶液は、溶液から水を効率的に除去するために共沸蒸留するために特に使いやすいと考えられる。蒸留後に還元溶液から沈殿させたスミラゲニンのＩＰＡ溶媒和物は、スミラゲニンと溶媒和物を形成しない、アセトン等の無水ＩＰＡ相容性有機溶媒を使用して、薬用または食用グレードの無水非溶媒和スミラゲニンとして好適に再結晶させることができる。
【００８７】
したがって、一実施形態では、ＶＩＩ型材料は、実質的に純粋に単離された形態、好ましくは乾燥された形態であることができ、体積を減少させ、水あるいはその他の不純物を除去するために、好ましくは予め蒸留された比較的純度の低いスミラゲニンのイソプロパノール溶液から沈殿によって製造することができる。最も好ましくは、ＶＩＩ型材料の製造方法は、（少なくともキログラム単位のＶＩＩ型材料を得る）工業規模で行われる。好ましくは、スミラゲニンと溶媒和物を形成しない、アセトン等の無水ＩＰＡ相容性有機溶媒を使用して、ＶＩＩ型材料から無水非溶媒和スミラゲニンを薬用または食用グレードに再結晶させる。ＶＩＩ型材料またはスミラゲニンのその他の中間物質の形態の形成段階形態を含むスミラゲニンの製造または精製において、硫酸マグネシウム等の固体吸湿性物質を使用して、スミラゲニンまたはスミラゲニンを含む混合物から水を除去する必要がないことがさらに好ましい。
【００８８】
ＷＯ−Ａ−２００４／０３７８４５の実施例２，６，７は、イソプロピルアルコール（２−プロパノール）からの再結晶によってスミラゲニンを精製するための実験室規模のバッチ式手順を記載している。しかしながら、これらの実施例はいずれも、沈殿した材料がスミラゲニンのＩＰＡ溶媒和物、ましてや半ＩＰＡ溶媒和物であるとは記載していない。それらの実施例、ＶＩＩ型材料の保護範囲から自明な主題、その製造方法、およびその使用の開示を排除するために必要な限りにおいて、そのような開示（特にイソプロピルアルコールを使用した初期純度の低いスミラゲニンの精製の開示）を本願は放棄するものである。特に、本発明に係るＶＩＩ型材料は、キログラム単位で製造された実質的に純粋な単離形態でＶＩＩ型材料を含むことができる。上述したように、この材料は、共沸蒸留後に還元ＩＰＡ溶液から沈殿させ、スミラゲニンと溶媒和物を形成しない、アセトン等の無水ＩＰＡ相容性有機溶媒を使用して薬用または食用グレードの無水非溶媒和スミラゲニン（例えば、キログラム規模で製造される実質的に純粋な単離状態のＩ型またはＩＩＩ型）として好適に再結晶させることができる。
【００８９】
［非晶質型］
非晶質型は非晶質である。我々は、非晶質スミラゲニンが、結晶型への転化に関して潜在的に有用な水溶性および安定性を有することを見出した。これらの特性によって、従来の結晶型と比較して改善されたスミラゲニンの製造、調合、保管、および生物学的可用性が得られる。
【００９０】
我々が製造した非晶質スミラゲニンは、結晶構造に特徴的なピークを示さないＸＲＰＤパターンを有する。
【００９１】
［誘導体］
本明細書で使用される「誘導体」という用語は、特に、スミラゲニンの公知の生物学的活性に関連して認めた従来技術の特許文献（米国特許第３８９０４３８号、米国特許第４６８０２８９号、米国特許第６２５８３８６号、ＷＯ−Ａ−０１／２３４０６、ＷＯ−Ａ−０１／２３４０７、ＷＯ−Ａ−０１／２３４０８、ＷＯ−Ａ−０１／４９７０３、ＷＯ−Ａ−０２／０７９２２１、ＷＯ−Ａ−０３／０８２８９３）に定義され、説明された化合物を意味する。そのような誘導体としては、薬学的に許容し得るスミラゲニンのプロドラッグおよびその薬学的に許容し得る塩が挙げられる。
【００９２】
特に、スミラゲニンのプロドラッグとしては、カチレート（エトキシカルボニルオキシ）、アセテート、スクシネート、プロピオネート、ブチレート、バレレート、イソバレレート、カプロレート、イソカプロンレート、ジエチルアセテート、オクタノエート、デナノエート、ラウレート、ミリステート、パルミテート、ステアレート、ベンゾエート、フェニルアセテート、フェニルプロピオネート、シンナメート、ｐ−ニトロベンゾイルオキシ、３，５−ジニトロベンゾイルオキシ、ｐ−クロロベンゾイルオキシ、２，４−ジクロロベンゾイルオキシ、ｐ−ブロモベンゾイルオキシ、ｍ−ブロモベンゾイルオキシ、ｐ−メトキシベンゾイルオキシ、フタルイル、グリシネート、アラニネート、バリネート、フェニルアラニネート、イソロイシネート、メチオニネート、アルギニネート、アスパルテート、システイネート、グルタミネート、ヒスチジネート、リジネート、プロリネート、セリネート、スレオニネート、トリプトファネート、チロシネート、フマレート、およびマレエート等の３位カルボキシレートエステルが挙げられる。
【００９３】
「薬学的に許容し得る塩」とは、比較的毒性が少ない本発明の化合物の無機酸および有機酸添加塩ならびに塩基添加塩を意味する。これらの塩は、化合物の最終的な単離および精製時にｉｎ  ｓｉｔｕで調製することができる。特に、酸添加塩は、遊離塩基の形態である精製化合物を適当な有機酸または無機酸と反応させ、形成された塩を単離することによって調製することができる。例えば、Ｓ．Ｍ．バージら（Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ，ｅｔ  ａｌ．），「薬剤塩（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔ）」，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，６６，１〜１９頁，１９７７年を参照されたい。当該文献は、この参照によって本願の開示に含まれるものとする。また、塩基添加塩は、酸の形態である精製化合物を適当な有機塩基または無機塩基と反応させ、形成された塩を単離することによって調製することができる。塩基添加塩は、薬学的に許容し得る金属塩およびアミン塩を含む。適当な酸添加塩の例としては、塩酸、硫酸、リン酸、および硝酸から選ばれる酸を使用して形成された塩が挙げられる。適当な塩基添加塩の例としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、および水酸化アンモニウムから選ばれる塩基を使用して形成された塩が挙げられる。
【００９４】
［薬剤、食品、サプリメント食品、飲料］
本発明によれば、組成物は、上述した材料を、１以上のその他の上述した材料、他の型のスミラゲニン、その他の生物学的に活性な材料、および生物学的に不活性な材料から選ばれる１以上の成分との混合物として含むことができる。
【００９５】
組成物は、上述した材料を、１以上のその他の上述した材料、他の型のスミラゲニン、その他の生物学的に活性な材料、および生物学的に不活性な材料から選ばれる１以上の成分と混合することによって製造することができる。
【００９６】
本発明によれば、材料または組成物（例えば、薬剤、食品、サプリメント食品または飲料）は、高い血中コレステロール値、肥満および糖尿病肥満症候群、認知機能障害および関連する症状、非認識的な神経変性、非認識的な神経筋変性、運動感覚神経変性、ならびに認識的な神経または神経筋の損傷がない場合における受容体の損失から選ばれる症状を治療するために使用することができる。
【００９７】
さらに、本発明は、高い血中コレステロール値、肥満および糖尿病肥満症候群、認知機能障害および関連する症状、非認識的な神経変性、非認識的な神経筋変性、運動感覚神経変性、ならびに認識的な神経または神経筋の損傷がない場合における受容体の損失から選ばれる症状に罹患しているかまたは罹患しやすいヒトまたはヒト以外の動物（例えばヒト）を治療するための方法であって、有効な量の上述した材料または組成物をヒトまたはヒト以外の動物に投与することを含む方法を提供する。
【００９８】
本発明にしたがって調製された活性物質は、ヒトまたはヒト以外の動物の患者に対する投与のために適当な組成物形態に調合することができる。組成物は、活性物質のみからなっていてもよく、あるいは、活性物質と、投与形態および投与量に応じて、保存剤、充填剤、分解剤、保湿剤、乳化剤、懸濁剤、甘味料、調味料、香料、抗菌剤、抗かび剤、潤滑剤、および調合剤等の１以上の薬学的に許容し得る担体、希釈剤、補助剤、賦形剤とを含むこともできる。
【００９９】
組成物は、例えば、薬剤組成物（薬剤）、食品、サプリメント食品、または飲料であってもよい。
【０１００】
本明細書で使用される「食品」、「サプリメント食品」、および「飲料」という用語は、これらの用語の通常の意味を有し、薬剤に限定されるものではない。所望の組成物形態に応じて、適当な薬用または食用グレードの成分を使用することができる。
【０１０１】
適当な組成物形態および投与量の詳細については、米国特許第３８９０４３８号、米国特許第４６８０２８９号、米国特許第６２５８３８６号、ＷＯ−Ａ−０１／２３４０６、ＷＯ−Ａ−０１／２３４０７、ＷＯ−Ａ−０１／２３４０８、ＷＯ−Ａ−０１／４９７０３、ＷＯ−Ａ−０２／０７９２２、およびＷＯ−Ａ−０３／０８２８９３を参照されたい。
【０１０２】
［実施例および図面の詳細な説明］
本発明を限定するものではない本発明のさらなる例として、以下の非限定的な実施例を記載し、図面を参照して説明する。
【０１０３】
（出発材料）
リサーチ・プラス社（Ｒｅｓｅａｃｈ  Ｐｌｕｓ  Ｉｎｃ．）およびステラロイズ社（Ｓｔｅｒａｌｏｉｄｓ  Ｉｎｃ．）から市販のスミラゲニンのサンプルを購入した。
【０１０４】
サンプルをＸＲＰＤによって分析し、我々の命名法におけるＩＩ型と定義した。リサーチ・プラス社から購入したサンプルをＤＳＣおよびＴＧＡによって調べた結果、無水物であることが判明した。
【０１０５】
（実施例１）
｛結晶型Ｉ｝
Ａ．アセトンからの結晶化
スミラゲニン（１０．０ｇ）をアセトン（２５０ｍｌ）中に懸濁させ、混合物を加熱還流した。得られた溶液からデカンテーションによって未溶解固体を取り除き、再び加熱還流して透明な溶液を得た。溶液を約３．５時間かけて２９℃まで自然冷却させ、さらに氷／水バッチで２℃まで冷却した。得られた固体を濾過によって回収し、冷却（５℃）したアセトン（５０ｍｌ）で洗浄し、真空オーブン内で３日間乾燥させて、純粋なスミラゲニン７．４ｇを得た。得られたスミラゲニンは、ＸＲＰＤによって我々の命名法におけるＩ型であることが判明した。
Ｂ．アセトニトリルからの結晶化
スミラゲニン（１．０５ｇ）のアセトニトリル（１０ｍｌ）懸濁液を周囲温度で一昼夜撹拌した。得られた固体を濾過によって回収し、真空オーブン内で８０℃で乾燥し、Ｉ型スミラゲニン（０．９２ｇ、収率：８８％）を得た。
【０１０６】
（実施例２）
｛結晶型ＩＩ｝
ＰＣＴ／ＧＢ２００３／００１７８０（ＷＯ−Ａ−２００４／０３７８４５）に記載された方法にしたがって、ジオスゲニンの立体特異的還元（ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）によってスミラゲニンを製造した。
得られたスミラゲニンをＸＲＰＤで分析したところ、パターンは図１に示すパターンと実質的に同様であることが判明した。この結果に基づき、得られた材料は、我々の命名法におけるＩＩ型であることが判明した。
【０１０７】
（実施例３，４）
｛結晶型ＩＩＩ｝
《実施例３》
スミラゲニン（１０．０ｇ）をアセトン（２５０ｍｌ）中に懸濁させ、混合物を加熱還流した。得られた溶液を約１５分間かけて２℃まで冷却し、固体を濾過によって回収し、冷却（５℃）したアセトン（２５０ｍｌ）で洗浄し、真空オーブン内で約２４時間乾燥し、純粋なスミラゲニン８．１ｇを得た。得られたスミラゲニンは、ＸＲＰＤによって我々の命名法におけるＩＩＩ型であることが判明した。
【０１０８】
《実施例４》
スミラゲニン（２００ｍｇ；ＩＩ型）をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（４ｍｌ）に懸濁させ、懸濁液を約４８時間撹拌した。固体を濾過によって回収し、乾燥してスミラゲニン４０ｍｇを得た。得られたスミラゲニンは、ＸＲＰＤ、ＤＳＣ、およびＴＧＡによって、我々の命名法におけるＩＩＩ型であることが判明した。
【０１０９】
（実施例５，６）
｛結晶型Ｖ｝
《実施例５》
スミラゲニン（２０ｇ）のアセトン（２００ｍｌ）懸濁液に水（２００ｍｌ）を添加し、混合物を約２時間撹拌した。得られた固体を濾過によって回収し、真空オーブン内で４０℃で約２４時間乾燥し、スミラゲニン２０．５ｇを得た。得られたスミラゲニンは、ＸＲＰＤによって我々の命名法におけるＶ型であることが判明した。カールフィッシャー分析により測定された水分は４．４％だった。
【０１１０】
《実施例６》
スミラゲニン（２００ｍｇ；ＩＩ型）をヘキサン（１０ｍｌ）に懸濁させ、懸濁液を約４８時間撹拌した。固体を濾過によって回収し、乾燥してスミラゲニン８０ｍｇを得た。得られたスミラゲニンは、ＸＲＰＤ、ＤＳＣ、およびＴＧＡによって我々の命名法におけるＶ型であることが判明した。
【０１１１】
（実施例７）
スミラゲニン（５００ｍｇ；ＩＩ型）をテトラヒドロフラン（２ｍｌ）に懸濁させ、懸濁液を約４８時間撹拌した。固体を濾過によって回収し、乾燥してスミラゲニン８０ｍｇを得た。得られたスミラゲニンは、ＸＲＰＤ、ＤＳＣ、およびＴＧＡによって我々の命名法におけるＶ型であることが判明した。
【０１１２】
（実施例８，９）
再結晶溶媒としてブタノン（実施例８）または５０％水性エタノール（実施例９）を使用したスラリー結晶化によって、スミラゲニン（リサーチ・プラス社）を再結晶させた。再結晶させた材料をＸＲＰＤによって分析した結果、いずれの場合も、我々の命名法におけるＩＩＩ型およびＶ型の混合物であることが判明した。
【０１１３】
（実施例１０）
｛結晶型ＩＩＩＡ｝
再結晶溶媒としてジメチルホルムアミドを使用したスラリー結晶化によって、スミラゲニン（リサーチ・プラス社）を再結晶させた。
【０１１４】
再結晶させた材料をＸＲＰＤによって分析した。この結果に基づき、得られた材料は、我々の命名法におけるＩＩＩＡ結晶型であることが判明した。
【０１１５】
（実施例１１）
｛結晶型ＶＩ（スミラゲニンチャネル水和物）｝
スミラゲニン（２６０ｍｇ）を丸底フラスコに秤量し、メタノール（１０ｍｌ）を添加した。内容物を７０℃に加熱して完全に溶解させ、室温まで自然冷却させ、室温で６０分間撹拌した。固体を濾過によって回収し、約２．５時間乾燥した。
【０１１６】
粉末Ｘ線回折パターンを図８に示し、示差走査熱量測定トレースを図９に示し、熱重量分析を図１０に示す。
【０１１７】
ＤＳＣトレースは、５０℃まで弱く広い吸熱遷移（ｅｎｄｏｔｈｅｒｍｉｃ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ）を示し、１２０℃で発熱遷移（ｅｘｏｔｈｅｒｍｉｃ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ）を示し、１８８℃で最終的な高エネルギー融解遷移（ｍｅｌｔｉｎｇ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ）を示している。ＴＧＡ分析によって、初期吸熱は水の損失に関連しており、１２１℃での遷移は溶媒の損失に関連していないことを確認した。カールフィッシャー滴定によるサンプルの分析によって、溶媒は水であることを確認した。
【０１１８】
蒸気収着調査（図１１を参照）は、サンプルは吸湿性であり、高い湿度にて最大９％の水（約２モル等量の水；すなわち二水和物）を吸着し、低い湿度にて可逆的に水を失うことを示している。このことは、この型が周囲の温度および湿度に応じて変動するスミラゲニン：水化学量論を有するチャネル水和物であることを示唆している。
【０１１９】
（実施例１２）
｛結晶型ＶＩＩ（スミラゲニンＩＰＡ−溶媒和物）｝
スミラゲニン（１５０ｍｇ）をイソプロピルアルコール（ＩＰＡ）（５ｍｌ）に添加し、混合物を７０℃に加熱して溶解させた。透明な溶液を２時間かけて４０℃まで自然冷却させたところ、沈殿が突然発生した。混合物を６５℃まで再加熱して材料を溶解させ、溶液を４５℃に再冷却し、４５℃で１５分間保持し、４０℃に冷却し、４０℃で２時間保持した。次に、スラリーを室温まで冷却し、室温で週末の間熟成した。その後、固体を濾過によって回収し、約３時間乾燥させた。
【０１２０】
粉末Ｘ線回折パターンを図１２に示し、示差走査熱量測定トレースを図１３に示し、熱重量分析を図１４に示す。
【０１２１】
ＤＳＣは４０〜１４０℃の間で広い吸熱を示しており、これはサンプルからのＩＰＡの損失と一致する。このことは、スミラゲニンの半ＩＰＡ溶媒和物と一致する６．３％のＩＰＡがサンプルに存在することを示すＴＧＡ分析によって確認された。ＩＰＡは、ＤＳＣにおいて約４０℃以上で失われているため、ＩＰＡは結晶に緩く拘束されているようである。
【０１２２】
（実施例１３）
｛非晶質スミラゲニン｝
スミラゲニン（１０ｇ）を温度制御加熱マントルを使用して融点まで加熱し、完全な溶融液体が形成されるまで保持した。溶融物を約１５０ｍｌの液体窒素を含むデュアーに注ぎ入れた。サンプルをデカンテーションによってガラスビーカーに回収し、液体窒素を自然蒸発させた。次に、サンプルをガラス瓶に移し、乾燥窒素でフラッシュさせ、密閉した。有意な回折線の欠如を示すＸＲＰＤパターンに基づき、サンプルは非晶質スミラゲニンであることが判明した。
【０１２３】
［表Ａ］
５〜５０°の２θ範囲における規則的な間隔でのスミラゲニン結晶型Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、およびＶのＸＲＰＤ強度（λ＝１．５４０６オングストローム）
【表Ａ】
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【０１２４】
［表Ｂ］
ＶＩ型スミラゲニン（スミラゲニンチャネル水和物）の図１５において矢印で示す有意なＸＲＰＤピークの２θおよびｄ間隔。また、最も強いピークの強度に対する割合（％）としての各ピークの相対強度を示す（λ＝１．５４０６オングストローム、２θ範囲＝２．４°〜２７．５°）。測定は２５℃（室温）で行われた。
【表Ｂ】
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【０１２５】
［表Ｃ］
ＶＩＩ型スミラゲニン（スミラゲニンＩＰＡ溶媒和物）の図１６において矢印で示す有意なＸＲＰＤピークの２θおよびｄ間隔。また、最も強いピークの強度に対する割合（％）としての各ピークの相対強度を示す（λ＝１．５４０６オングストローム、２θ範囲＝２．４°〜２７．５°）。測定は２５℃（室温）で行われた。
【表Ｃ】
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【０１２６】
以上、本発明を限定することなく概括的に説明した。当業者に容易に明らかになるであろう変更および変形は、本願および本願の特許付与後の範囲に含まれる。
【図面の簡単な説明】
【０１２７】
【図１】結晶型ＩＩ（従来技術）である市販のスミラゲニンのサンプルから得られたＸＲＰＤパターン（λ＝１．５４０６オングストローム）を示す。
【図２】結晶型ＩであるスミラゲニンのサンプルのＸＲＰＤパターン（λ＝１．５４０６オングストローム）を示す。
【図３】結晶型ＩＩＩであるスミラゲニンのサンプルのＸＲＰＤパターン（λ＝１．５４０６オングストローム）を示す。
【図４】結晶型ＩＩＩＡであるスミラゲニンのサンプルのＸＲＰＤパターン（λ＝１．５４０６オングストローム）を示す。
【図５】結晶型ＶであるスミラゲニンのサンプルのＸＲＰＤパターン（λ＝１．５４０６オングストローム）を示す。
【図６】結晶型ＶであるスミラゲニンのサンプルのＤＳＣトレースを示し、サンプルが一水和物であることを示している。
【図７】結晶型ＶであるスミラゲニンのサンプルのＴＧＡを示し、サンプルが一水和物であることを示している。
【図８】結晶型ＶＩであるスミラゲニンのサンプル（スミラゲニンチャネル水和物であると考えられる）のＸＲＰＤパターン（λ＝１．５４０６オングストローム）を示す。
【図９】結晶型ＶＩであるスミラゲニンのサンプルのＤＳＣトレースを示す。
【図１０】結晶型ＶＩであるスミラゲニンのサンプルのＴＧＡを示す。
【図１１】結晶型ＶＩであるスミラゲニンのサンプルの蒸気収着グラフを示す。
【図１２】結晶型ＶＩＩであるスミラゲニンイソプロピルアルコール（ＩＰＡ）溶媒和物のサンプルのＸＲＰＤパターン（λ＝１．５４０６オングストローム）を示す。
【図１３】結晶型ＶＩＩであるスミラゲニンＩＰＡ溶媒和物のサンプルのＤＳＣトレースを示す。
【図１４】結晶型ＶＩＩであるスミラゲニンＩＰＡ溶媒和物のサンプルのＴＧＡを示し、サンプルが半ＩＰＡ溶媒和物であることを示している。
【図１５】結晶型ＶＩであるスミラゲニンのサンプルのＸＲＰＤパターン（λ＝１．５４０６オングストローム）を示し、有意なピークを矢印で示している。
【図１６】結晶型ＶＩＩであるスミラゲニンＩＰＡ溶媒和物のサンプルのＸＲＰＤパターン（λ＝１．５４０６オングストローム）を示し、有意なピークを矢印で示している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【国際調査報告】
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