(57)【要約】  本発明は、粒径５００ｎｍ以下のナノ粒子を含む経口投与用組成物であって、荷電水溶性薬物が対イオン物質に結合した水溶性薬物と対イオン物質との複合体を０．１〜３０重量％、脂質を０．５〜８０重量％、ポリマーを０．５〜８０重量％、及び乳化剤を１〜８０重量％含有し、前記脂質と前記ポリマーとの重量比が１：０．０５〜３の範囲内である経口投与用組成物、およびその製造方法に関するものである。本発明の組成物は、経口投与時の消化管吸収率が高く、ナノ粒子内の薬物封入率が高く、リパーゼに対して安定である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
粒径５００ｎｍ以下のナノ粒子を含む経口投与用組成物であって、荷電水溶性薬物が対イオン物質に結合した水溶性薬物と対イオン物質との複合体を０．１〜３０重量％、脂質を０．５〜８０重量％、ポリマーを０．５〜８０重量％、及び乳化剤を１〜８０重量％含有し、前記脂質と前記ポリマーとの重量比が１：０．０５〜３の範囲内である経口投与用組成物。
【請求項２】
前記水溶性薬物の７０％以上が前記ナノ粒子に封入されている請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記水溶性薬物の８０％以上が、パンクレアチンの存在下に保持されている請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記水溶性薬物が、インスリン、エリスロポエチン、カルシトニン、成長ホルモン、インターフェロン、及びソマトスタチンよりなる群から選択されるタンパク／ペプチド製剤である請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記水溶性薬物が、ヘパリン、セファ系抗生物質、アレンドロン酸ナトリウム、エチドロン酸ナトリウム、及びパミドロン酸ナトリウムよりなる群から選択される水中荷電薬物である請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記対イオン物質が、Ｃ８〜１８の脂肪酸ナトリウム塩、胆汁酸のナトリウム塩、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、及びこれらの混合物よりなる群から選択されるアニオン化合物である請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記脂肪酸ナトリウム塩が、オレイン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、カプロン酸ナトリウム、及びラウリン酸ナトリウムよりなる群から選択される請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記対イオン物質が、カルニチン塩、塩化ベンザルコニウム、セトリミド、及びこれらの混合物よりなる群から選択されるカチオン化合物である請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記水溶性薬物と前記対イオン物質とのモル比が１：０．１〜２０の範囲内である請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記水溶性薬物と前記対イオン物質とのモル比が１：３〜１０の範囲内である請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記脂質と前記ポリマーとの重量比が１：０．２〜１の範囲内である請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記脂質は、モノグリセリド、ジグリセリド、プロピレングリコール脂肪酸エステル、グリセロール脂肪酸エステル、セトステアリルアルコール、セチルアルコール、及びこれらの混合物よりなる群から選択される脂肪族アルコールである請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ポリマーは、メタアクリル酸共重合体、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、セルロースアセテートフタレート、セルラック、キトサン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びその誘導体、エチルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルアルコール、アルギン酸ナトリウム、カルボマー、並びにこれらの混合物よりなる群から選択される請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記乳化剤は、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン共重合体、ポリエチレングリコールアルキルエーテル、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、天然植物油トリグリセリドとポリアルキレンポリオールとのエステル交換生成物、グリセロール脂肪酸エステル、ビタミンＥポリエチレングリコールサクシネート、レシチン、ラウリル硫酸ナトリウム、胆汁酸及びその誘導体、並びにこれらの混合物よりなる群から選択される請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
更に、５０重量％以下の可溶化剤を含有する請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
前記可溶化剤は、Ｃ１〜８アルコール、ジメチルスルホキシド、ジクロロメタン、トルエン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、及び１２−ヒドロキシステアレートよりなる群から選択される請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
更に、０．１〜３０重量％の凍結保護剤を含有する請求項１に記載の組成物。
【請求項１８】
前記凍結保護剤は、グルコース、マンニトール、ソルビトール、トレハロース、アミノ酸、アルブミン、及びこれらの混合物よりなる群から選択される請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記ナノ粒子の粒径は２０〜３００ｎｍの範囲内である請求項１に記載の組成物。
【請求項２０】
下記工程を包含する請求項１に記載の経口投与用ナノ粒子組成物の製造方法：
（ａ）荷電水溶性薬物を対イオン物質とイオン結合させ、水溶性薬物と対イオン物質との複合体を形成する工程；
（ｂ１）工程（ａ）から得られた複合体に脂質、ポリマー及び可溶化剤を加え、これらを溶解した後、得られた溶液を乳化剤含有水溶液に加えて均質な液相を得るか、又は
（ｂ２）得られた複合体に、脂質及び可溶化剤を加えて溶解した後、得られた溶液をポリマー及び乳化剤含有水溶液に加えて均質な液相を得る工程；及び
（ｃ）工程（ｂ１）または（ｂ２）で得られた混合物から可溶化剤を除去する工程。
【請求項２１】
更に、（ｄ）微小流動化剤を用いて粒径を最小化する工程を含む請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記工程（ａ）において、前記荷電水溶性薬物は、前記水溶性薬物をｐＨ調整剤で処理し、電荷を付与して得られるものである請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記ｐＨ調整剤が、塩酸、リン酸、炭酸、クエン酸、水酸化ナトリウム、リン酸一水素ナトリウム／カリウム、リン酸二水素ナトリウム／カリウム、リン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、及びこれらの混合物よりなる群から選択される請求項２２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、消化管吸収率が高められた水溶性薬物を含有する経口投与用ナノ粒子組成物及びその製造方法に関するものである。より詳しくは、本発明は、脂質及びポリマーで構成されたナノ粒子内の水溶性薬物の封入率が高められ、リパーゼに対して安定な経口投与用ナノ粒子組成物であって、当該ナノ粒子は、水溶性薬物を対イオン物質と結合させた後、脂質、ポリマー、及び乳化剤を加えて製造される組成物、及びその製造方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
生理活性物質のタンパク製剤を含有する水溶性薬物は、消化管内の安定性が低く、腸管壁に対する透過性が低いため、当該薬物については、通常、静脈注射が用いられてきた。しかしながら、静脈注射は、多くの患者の日常生活に不都合を招くため、水溶性薬物を経口投与可能な剤形に製剤化するための多くの努力がなされてきた。
【０００３】
水溶性薬物を経口投与する場合、当該薬物は、ｐＨ及び消化酵素の作用によって化学的に分解され、消化管内での安定性が低下する。そのため、投与された薬物の大部分または一部分しかその作用を発揮することができず、経口投与時の薬理効果を充分発現させることができない。特に、ｐＨの変化によって薬物の溶解性が低下したり、薬物が分解すると、消化管内酵素の作用によって当該薬物の有効性が低下し、生体利用効率は著しく減少する。このような問題を解決するため、当該薬物が外部の化学環境、例えば、ｐＨや消化酵素に曝されないように、生体膜への親和性が高い脂質やポリマーに水溶性薬物を封入する製剤化研究が行われてきた。
【０００４】
当該分野では、例えば、ｗ／ｏエマルジョン、ｗ／ｏ／ｗエマルジョン、リポソームを用いた水溶性薬物用経口投与製剤が知られている。しかしながら、これらは、薬物封入率が不充分で、安定性も低いという欠点を抱えている。
【０００５】
米国特許第６，００４，５３４号には、例えば、ワクチンやアレルゲンなどの水溶性薬物を、そのための標的リポソームを用いることによって特定の組織に向かわせる（targeting）技術が開示されている。しかしながら、上記リポソーム内の薬物封入率は、約３５％と低いという問題点がある。
【０００６】
米国特許第６，１９１，１０５号には、インスリンポリマーをｗ／ｏマイクロエマルジョン製剤に製造する方法が開示されている。しかしながら、ｗ／ｏエマルジョン構造は、一般に、体内への投与時の相転移によって破壊され得るため、水相に溶解した薬物は、油相によって保護されずに生体に直接曝され得る。
【０００７】
米国特許第６，２７７，４１３号には、水溶性薬物が内側の水相に導入されたｗ／ｏ／ｗエマルジョンの製造方法が開示されている。しかしながら、この特許では、製造されたエマルジョンの粒径は、１０〜２０マイクロメーターと非常に大きく、その製造過程で、内側の水相に封入された薬物が外側の水相に放出され易いため、上記エマルジョンの薬物封入率は低い。
【０００８】
韓国特許公開公報第２００２−６６７７６号には、５００ｎｍ以下のモノグリセリド脂質キャリアを用いた経口投与用インスリン製剤が開示されている。しかしながら、このキャリアは、脂質のみから構成されているため、体内リパーゼによって分解され得る。
【０００９】
Journal of Controlled Release 69, p283-295(2000)には、薬物封入率が５０％未満であって、粒径５μｍ以上のインスリン含有ＰＬＧＡマイクロスフェアが開示されている。マイクロメータサイズの粒子は、消化管内に吸収されず、一般に、腸の上皮細胞表面で見出されるのに対し、１００ナノメータサイズの粒子は、マイクロメータサイズの粒子に比べ、消化管内に１５〜２５０倍以上吸収されると報告されている（Pharm. Res. 13(12) p1838-1845(1996)）。従って、５μｍサイズのＰＬＧＡマイクロスフェアは、インスリン封入率が低いだけでなく、ナノメータサイズの粒子に比べ、インスリンを効率的に供給することができない。
【００１０】
更に、米国特許第５，９６２，０２４号には、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート又はメタアクリル酸メチルメタクリレート共重合体のような腸溶性ポリマーを用いて顆粒を製造するか、上記顆粒をコーティングすることによって、ｐＨ６．５以上で薬物を溶出する方法が開示されている。しかしながら、腸溶性ポリマーのみから形成されるマイクロスフェアは、上記ポリマーが消化管内で溶解すると、マイクロスフェア内に封入された薬物が消化管内に曝されるため、消化管内で不安定な薬物を安定化させることができないという短所を抱えている。
【００１１】
一方、水溶性薬物は、脂溶性物質またはポリマーで構成されたキャリアに対する親和性が低いため、そのうちの極く少量のみしか、当該キャリア内に封入されない。従って、当該キャリアへの薬物封入率を高めるために、これらの電荷を除去し、水に対する溶解度を低くするべきである。
【００１２】
国際公開第９４／０８５９９号には、インスリンをラウリル硫酸ナトリウムにイオン結合させた複合体を製造する方法が開示されている。この製造方法では、インスリン−ラウリル硫酸ナトリウムの複合体を有機溶媒に溶解した後、上記溶液を肺製剤または坐剤として用いている。しかしながら、経口投与の際、上記薬物は、直接、消化管に曝されるため、安定に維持することができない。
【００１３】
更に、米国特許第５，８５８，４１０号には、水難溶性薬物を粉砕および微小流動化剤の使用によってナノ粒子にする方法が開示されている。しかし、この方法は、タンパク製剤などのように生体内で不安定な水溶性薬物に対しては、薬物が直接、生体内環境に曝されるため、適切でないという欠点を抱えている。
【００１４】
前述したように、タンパク製剤を含有する生体内で不安定な水溶性薬物を経口投与するためには、消化管内リパーゼに対して安定なナノ粒子を設計することと、水溶性薬物は、薬物キャリア内に高収率で封入させることが必要である。これらの目的を達成するための技術要件は、以下のとおりである。
【００１５】
第１に、ナノ粒子内に封入された薬物が消化管内で分解されることなく安定に維持されるためには、脂質ナノ粒子に含まれるポリマーを適切な量にし、ｉｎ  ｖｉｖｏでの安定性を高めるべきである。
【００１６】
第２に、水溶性薬物を改変することによって脂溶性キャリアとの親和性を有するように、水溶性薬物を対イオン物質との複合体に製造した後、これと類似の親和性を有する脂質／ポリマーシステムを選択することにより、脂溶性キャリア内への水溶性薬物の封入率を高めるべきである。
【００１７】
第３に、水溶性薬物と対イオン物質との複合体を含有する脂質／ポリマーのナノ粒子の粒径を最小化すべきである。また、ナノ粒子は、当該ナノ粒子内に薬物が封入され、外部環境に曝されることなく最大限の活性が維持されて体内で吸収されるように、製造されるべきである。
【発明の開示】
【００１８】
本発明者らは、上記の問題点を解決し、前述した技術的課題を満足し得る薬物キャリアを開発するため、広範囲の研究を繰り返してきた。その結果、本発明者らは、水溶性薬物−対イオン物質の複合体、並びに所定比率の脂質及びポリマーなどから、粒径５００ｎｍ以下の経口投与用ナノ粒子組成物を調製することによって、薬物封入率および生体内分解酵素に対する抵抗性が高められることを見出し、本発明を完成した。
【００１９】
本発明の目的は、水溶性薬物と対イオン物質との複合体を含有することによって薬物封入率およびリパーゼに対する抵抗性が高められ、その結果、ｉｎ  ｖｉｖｏでの経口吸収率も高められた経口投与用ナノ粒子組成物、およびその製造方法を提供することにある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
本発明は、粒径５００ｎｍ以下のナノ粒子を含む経口投与用組成物であって、荷電水溶性薬物が対イオン物質に結合した水溶性薬物と対イオン物質との複合体を０．１〜３０重量％、脂質を０．５〜８０重量％、ポリマーを０．５〜８０重量％、及び乳化剤を１〜８０重量％含有し、前記脂質と前記ポリマーとの重量比が１：０．０５〜３の範囲内である経口投与用組成物を提供する。上記脂質と上記ポリマーとの重量比は、好ましくは１：０．２〜１の範囲内である。
【００２１】
更に、本発明は、本発明による経口投与用ナノ粒子組成物の製造方法を提供し、この方法は、下記工程を包含する：（ａ）荷電水溶性薬物を対イオン物質とイオン結合させ、水溶性薬物と対イオン物質との複合体を形成する工程；（ｂ）得られた複合体に、脂質、ポリマー及び可溶化剤を加え、全混合液を溶解した後、得られた溶液を乳化剤含有水溶液に加えて均質な液相を得る工程；（ｃ）工程（ｂ）で得られた混合物から可溶化剤を除去する工程；及び（ｄ）必要に応じて、微小流動化剤を用いて粒径を最小化する工程。
【００２２】
本発明によれば、水溶性薬物は、ナノ粒子組成物内に７０％以上の比率で封入され、パンクレアチン酵素液の存在下に８０％以上の比率で残留され得る。
【００２３】
また、本発明は、（ａ）荷電水溶性薬物を対イオン物質とイオン結合させ、水溶性薬物と対イオン物質との複合体を形成する工程；（ｂ）得られた複合体に脂質及び可溶化剤を加え、全混合液を溶解した後、得られた溶液を、乳化剤およびポリマー含有水溶液に加えて均質な液相を得る工程；（ｃ）工程（ｂ）で得られた混合物から可溶化剤を除去する工程；及び（ｄ）必要に応じて、微小流動化剤を用いて粒径を最小化する工程を包含する、本発明に係る経口投与用ナノ粒子組成物の製造方法を提供する。
【００２４】
以下、本発明をより詳しく説明する。
【００２５】
本発明の経口投与用ナノ粒子組成物は、荷電水溶性薬物が対イオン物質にイオン結合した水溶性薬物と対イオン物質との複合体を０．１〜３０重量％、脂質を０．５〜８０重量％、ポリマーを０．５〜８０重量％、及び乳化剤を１〜８０重量％含有し、前記脂質と前記ポリマーとの重量比が１：０．０５〜３の範囲内であり、粒径５００ｎｍ以下のナノ粒子を含有する。上記脂質と上記ポリマーとの重量比は、１：０．２〜１の範囲内であることが好ましい。
【００２６】
上記水溶性薬物と対イオン物質との複合体は、荷電薬物を対イオン物質と反応させることによって得られる。有効成分として用いられる水溶性薬物は、水溶液中で帯電するものが良く、好ましくは、インスリン、エリスロポエチン、カルシトニン、成長ホルモン、インターフェロン、ソマトスタチンなどのペプチド／タンパク製剤、へパリン、セファ系抗生物質、アレンドロン酸ナトリウム、エチドロン酸ナトリウム、パミドロン酸ナトリウムなどからなる群から選択されるものである。
【００２７】
正に荷電した薬物にイオン結合し得る陰性荷電物質は、オレイン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、カプロン酸ナトリウム、ラウリン酸ナトリウムなどのＣ８〜１８の脂肪酸ナトリウム塩、胆汁酸のナトリウム塩、アルギン酸ナトリウム、及びカルボキシメチルセルロースナトリウムよりなる群から選択されることが好ましい。陰性荷電薬物にイオン結合し得る陽性荷電物質は、カルニチン塩、塩化ベンザルコニウム、セトリミドなどの第４級アンモニウム化合物から選択されることが好ましい。
【００２８】
水溶性薬物と対イオン物質との複合体の含有量は、ナノ粒子組成物の全重量の０．１〜３０重量％であることが好ましい。
【００２９】
水溶性薬物が対イオン物質と複合体を形成すると、水溶性薬物自体の電荷が除去されるか弱められるため、脂溶性キャリアとの親和性が高められる。その結果、水溶性薬物は、脂溶性キャリア内に、より多く封入され得るようになる。下記実験１の表４に示すように、本発明の組成物は、高い薬物封入率を有している。
【００３０】
水溶性薬物と対イオン物質との複合体中の、水溶性薬物と対イオン物質とのモル比は、水溶性薬物のイオン数を考慮して調整されるが、１：０．１〜２０であることが好ましく、１：３〜１０であることがより好ましい。
【００３１】
上記脂質は、好ましくは、モノグリセリド、ジグリセリド、プロピレングリコール脂肪酸エステル（カプリオールなど）、グリセロール脂肪酸エステル（ＧＥＬｕｃｉｅｒなど）、セトステアリルアルコール、セチルアルコールなどの脂肪族アルコールから選択される少なくとも一種以上であることが好ましく、ナノ粒子組成物の全重量の０．５〜８０重量％で含有することが好ましく、０．５〜３０重量％で含有することがより好ましい。
【００３２】
上記ポリマーは、好ましくは、メタアクリル酸共重合体、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、セルロースアセテートフタレートなどの腸溶性ポリマー、セルラック、キトサン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びその誘導体、エチルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルアルコール、アルギン酸ナトリウム、及びカルボマーから選択される一種またはそれ以上であることが好ましく、ナノ粒子組成物の全重量に対して０．５〜８０重量％で含まれることが好ましく、０．５〜３０重量％で含まれることがより好ましい。特に、腸溶性ポリマーを用いると、タンパク質のような胃酸に弱い薬物は破壊されることなく、腸溶性ポリマーの組成に応じて選択的に、小腸や大腸に容易に吸収され得る。
【００３３】
上記ポリマーは、水に不溶性であるか、水に溶解されると粘性になるため、脂質ナノ粒子に添加すると、徐々に分解される。その結果、ナノ粒子内に封入された水溶性薬物の溶解をコントロールすることができる。また、上記ポリマーは、脂質ナノ粒子の表面を囲み、脂質分子の間に挿入されるため、ナノ粒子に対する酵素抵抗性が付与される。すなわち、ポリマーの添加は、リパーゼの作用による、ナノ粒子の構成成分である脂質の分解を防止できるため、ナノ粒子の構造が維持され得る。その結果、ナノ粒子内に封入されている水溶性薬物の化学的安定性は、顕著に改善され得る。
【００３４】
ポリマーを脂質ナノ粒子組成物に添加する際、脂質ナノ粒子のサイズは、ポリマーの含有量に応じて変化させることができる。５００ｎｍ以下のナノ粒子を得るためには、脂質とポリマーとの比率を適宜に調節しなければならない。
【００３５】
上記乳化剤は、好ましくは、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン共重合体（商品名：ＰｏｌｏｘａｍｅｒＴＭ）、ポリエチレングリコールアルキルエーテル（商品名：ＢｒｉｊＴＭ）、ポリオキシエチレンヒマシ油（商品名：ＴｗｅｅｎＴＭ）、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（商品名：ＳｐａｎＴＭ）、天然植物油トリグリセリドとポリアルキレンポリオールとのエステル交換生成物(商品名：ＬａｂｒａｆｉｌＴＭ、ＬａｂｒａｓｏｌＴＭ)、グリセロール脂肪酸エステル（商品名：ＰｌｕｒｏｌＴＭ  ｏｌｅｉｑｕｅ）、ビタミンＥポリエチレングリコールサクシネート（ビタミンＥポリエチレングリコールサクシネート）、レシチン、ラウリル硫酸ナトリウム、並びに胆汁酸及びその誘導体から選択される一種またはそれ以上であることが好ましく、ナノ粒子組成物の全重量に対して１〜８０重量％で含まれることが好ましい。上記乳化剤は、３０〜８０重量％で含まれていることがより好ましい。製造された脂質／ポリマーのナノ粒子が水溶液中に分散されているとき、上記乳化剤は、この分散状態を安定化させる。
【００３６】
上記可溶化剤は、Ｃ１〜８アルコール、ジメチルスルホキシド、ジクロロメタン、トルエン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、及び１２−ヒドロキシステアレート（商品名：ＳｏｌｕｔｏｌＴＭ）から選択される一種またはそれ以上であることが好ましい。この可溶化剤は、ナノ粒子の製造中に除去され、結果的に、最終ナノ粒子組成物中に５０重量％以下で存在することが好ましい。更に、上記の可溶化剤単独により、水溶性薬物と対イオン物質との複合体、ポリマー及び脂質などを溶解または分散させることができない場合は、上述した乳化剤を添加すれば、均質な溶液が得られる。
【００３７】
更に、上記組成物は、通常用いられる経口吸収改善剤を０〜２０重量％含有してもよい。上記経口吸収改善剤は、ｐ−糖タンパク質抑制剤、カルニチン塩、キレート化剤などから選択されることが好ましい。
【００３８】
また、本発明の組成物は、０．１〜３０重量％の凍結保護剤で凍結乾燥することが好ましく、粉末に製造した後、カプセルまたは錠剤などの通常の経口用剤型にすることができる。上記凍結保護剤は、グルコース、マンニトール、ソルビトール、トレハロースなどの単糖類、アルギニンなどのアミノ酸、アルブミンなどのタンパク質であることが好ましい。
【００３９】
本発明の経口投与用ナノ粒子組成物は、下記工程を包含するする製造方法によって製造される：（ａ）荷電水溶性薬物を対イオン物質とイオン結合させ、水溶性薬物と対イオン物質との複合体を形成する工程；（ｂ）これに、脂質、ポリマー及び可溶化剤を加え、全混合液を溶解した後、得られた溶液を乳化剤含有水溶液に加えて均質な液相を得る工程；（ｃ）工程ｂ）で得られた混合物から可溶化剤を除去する工程；及び（ｄ）必要に応じて、微小流動化剤を用いて粒径を最小化する工程。
【００４０】
上記工程（ａ）において、水溶性薬物と対イオン物質との複合体は、上記薬物を水または適切な緩衝液に溶解し、薬物含有水溶液を得た後、上記薬物水溶液に対イオン物質を反応させることによって製造される。
【００４１】
上記水溶性薬物と対イオン物質との最適比率は、薬物のイオン数を考慮しつつ、１：０．１〜２０のモル比の範囲内で調節し、上記反応における未反応薬物を分析することによって決定される。このようにして得られた水溶性薬物と対イオン物質との複合体は、水で３回以上洗浄して未反応薬物を除去することが好ましい。
【００４２】
特に、タンパク製剤と対イオン物質との複合体を製造する際には、タンパク製剤に電荷を付与するためにｐＨ調整剤を用いてもよい。ｐＨ調整剤は、塩酸、リン酸、炭酸、クエン酸などの酸性化剤、水酸化ナトリウム、リン酸一水素ナトリウム／カリウム、リン酸二水素ナトリウム／カリウム、リン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウムなどのアルカリ化剤、またはこれらの混合液からなる緩衝液から選択されることが好ましく、薬物の０．１〜１０倍量が用いられ得る。
【００４３】
上記工程（ｂ）〜（ｃ）において、水溶性薬物と対イオン物質との複合体、および脂質を可溶化剤に溶解した後、この溶液をポリマー含有水溶液に入れて上記混合物を撹拌した後、可溶化剤を除去する。この工程において、ポリマーの溶解度を高めるために、酸、アルカリ及び乳化補助剤を０．５〜５０重量％添加してもよく、この混合液を、好ましくは３０〜７０℃に加温してもよい。
【００４４】
上記工程（ｃ）において、上記可溶化剤の揮発性が高いときは、窒素ガスを注入するか、真空蒸発器を用いて除去してもよい。そうでないときは、透析によって除去してもよい。
【００４５】
上記工程（ｄ）において、上記溶液は、微小流動化剤を用い、１００ＭＰａで３〜１０回環化することが好ましい。必要であれば、ナノ粒子の粒径は、加温することによって更に小さくすることができる。加温温度は、３０〜７０℃が好ましい。
【００４６】
本発明の経口投与用組成物を製造する他の方法は、（ａ）荷電水溶性薬物を対イオン物質とイオン結合させ、水溶性薬物と対イオン物質との複合体を形成する工程；（ｂ）これに、脂質、ポリマー及び可溶化剤を加え、全混合液を溶解した後、得られた溶液をポリマーおよび乳化剤含有水溶液に加えて均質な液相を得る工程；（ｃ）工程（ｂ）で得られた混合物から可溶化剤を除去する工程；及び（ｄ）必要に応じて、微小流動化剤を用いて粒径を最小化する工程を包含している。
【００４７】
このようにして得られたナノ粒子組成物は液状であるが、必要であれば、凍結保護剤を加えて凍結乾燥させ、粉末として得ることもできる。上記の凍結保護剤は、凍結乾燥の間、上記組成物に含まれる成分の変性を防止するために用いられる。凍結保護剤は、ナノ粒子組成物の全重量に対して０．１〜３０重量％で用いることが好ましい。上記凍結保護剤は、ラクトース、マンニトール、トレハロースなどの単糖類、アルギニンなどのアミノ酸、アルブミンなどのタンパク質類が好ましい。
【００４８】
上記の方法で得られた液体及び粉末の組成物は、手で振るなどの単純な物理的混合によって、容易に水に分散させることができる。分散系を形成する粒径は、乳化剤や薬物の性質に応じて５００ｎｍ以下であり、従来の経口製剤に比べ、より小さいものである。本発明の経口投与用ナノ粒子組成物の粒径は、２０〜３００ｎｍであることが好ましい。
【００４９】
本発明のナノ粒子粉末組成物は、室温以下で密閉することによって長期間安定に保存することができ、使用前に水を加えて、分散液に製造することができる。
【００５０】
更に、本発明のナノ粒子組成物は、他の吸収改善剤を添加して液剤、懸濁剤、カプセル剤、錠剤などに製剤化することもできる。固体製剤の場合、その経口生体利用効率は、腸用コーティングなどの通常用いられる製剤化技術によって、更に高められる。
【００５１】
以下、本発明を下記実施例に基づいて詳細に説明するが、本発明の範囲は、これらによって何ら限定されるべきではない。
【実施例】
【００５２】
実施例１：インスリン含有経口投与用ナノ粒子組成物の製造
（１）インスリンと対イオン物質との複合体の製造
インスリン（Ｓｉｇｍａ）５０ｍｇをｐＨ３のクエン酸緩衝液２０ｍＬに溶解し、ｐＨ３のクエン酸緩衝液８０ｍＬに溶解したドキュセートナトリウム（Ａｌｄｒｉｃｈ）をインスリン１モルに対して、１：３、１：６、１：９のモル比で加えて反応させ、インスリンと対イオン物質との複合体を得た。反応完了後、上清中のインスリンを米国薬局方に記載のインスリン分析法によって分析し、下記表１の結果を得た。
【００５３】
【表１】
2007517023.tif 000002
【００５４】
上記の表１に示すように、インスリンとドキュセートナトリウムのモル比が１：６以上になると、インスリンの大部分は、上記対イオン物質との複合体を形成した。従って、インスリンと対イオン物質が１：６のモル比で製造された複合体をｐＨ３のクエン酸緩衝液及び水で、それぞれ、３回洗浄した後、次の工程に用いた。
【００５５】
（２）インスリン含有経口投与用ナノ粒子組成物の製造
インスリン−ドキュセートナトリウムの複合体１５ｍｇ、モノオレイン（ＴＣＩ）６０ｍｇをエタノール１０ｍＬに溶解した。この溶液を、キトサン（Ｋｏｒｅａｎ  Ｃｈｉｔｏｓａｎ）２０ｍｇとＰｏｌｏｘａｍｅｒ  ４０７ＴＭ（ＢＡＳＦ）２００ｍｇを含有する水溶液２０ｍＬ中に加え、全混合液を撹拌して均質溶液を得た後、窒素ガスを注入してエタノールを除去した。キトサンの溶解度を高めるため、添加剤として１％のクエン酸を加えた。この脂質／ポリマーナノ粒子を、微小流動化剤であるＥｍｕｌｓｉＦｌｅｘ−Ｃ５ＴＭ（Ａｖｅｓｔｉｎ）を用いて室温で１００ＭＰａのもと、１０回環化させ、インスリン含有経口投与用ナノ粒子組成物を得た。
【００５６】
（３）粒径と分布の測定
上記組成物の粒径および分散度は、得られた液体組成物２００μＬを蒸留水１ｍＬに分散させた後、光子分光分析（ＥＬＳ−８０００ＴＭ、Ｏｔｓｕｋａ  ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ）で測定した。その結果、実施例１の液体組成物の平均粒径は８３．０ｎｍ、分散度は０．３００であった。
【００５７】
比較例１
インスリン−対イオン物質の複合体の代わりにインスリンを用い、ポリマーも微小流動化剤も使用しないこと以外は実施例１と同様にして、液体組成物を製造した。実施例１の方法により、その粒径と分散度を測定した結果、平均粒径は１１７．４ｎｍ、分散度は０．２５１であった。
【００５８】
比較例２
インスリン−対イオン物質の複合体の代わりにインスリンを用い、微小流動化剤を使用しないこと以外は実施例１と同様にして。液体組成物を製造した。実施例１の方法により、その粒径と分散度を測定した結果、平均粒径は２４１．８ｎｍ、分散度は０．０９０であった。
【００５９】
比較例３
実施例１の方法で得られたインスリン−対イオン物質の複合体１５ｍｇとモノオレイン６０ｍｇを５０℃で１時間、超音波分解した後、キトサン２０ｍｇとＰｏｌｏｘａｍｅｒ  ４０７ＴＭを２００ｍｇ含有する１％クエン酸水溶液２０ｍＬに加え、再度、３０分間超音波分解した。次に、微小流動化剤を用いて室温で１００ＭＰａのもと、１０回環化させ、インスリン複合体含有液体組成物を得た。実施例１の方法により、その粒径と分散度を測定した結果、平均粒径は２１１．６ｎｍ、分散度は０．２１３であった。
【００６０】
実施例１ａ
微小流動化剤を使用しないこと以外は実施例１と同様にして、液体組成物を製造した。実施例１の方法により、その粒径と分散度を測定した結果、平均粒径は２３４．３ｎｍ、分散度は０．２９１であった。
【００６１】
実施例２：インスリン含有経口投与用ナノ粒子粉末製剤の製造
実施例１で得られた経口投与用ナノ粒子液体製剤を固形化するに当たり、ナノ粒子のサイズの上昇を最小化するため、経口投与用ナノ粒子液体製剤に５％のマンニトールを加えた。次に、この液体製剤を異なる凍結乾燥条件で固形化した後、水に分散させ、その粒径を測定した。この結果を下記表２に示す。
【００６２】
【表２】
2007517023.tif 000003
【００６３】
上記の表２に示すように、粒径の変化を最小化するためには、＜０℃の条件下で凍結乾燥を行なうことが好ましい。
【００６４】
経口投与用ナノ粒子の液体製剤にマンニトールを０．５％、１％、２％、４％、及び５％の比率で加えた後、−２５℃で６時間、引き続き、２０℃で６時間、固形化させた。このようにして得られた固体を水に分散させた後、実施例１の方法により、その粒径を測定した。この結果を下記表３に示す。
【００６５】
【表３】
2007517023.tif 000004
上記の測定結果より、凍結保護剤の濃度が約５％のとき、粒径の変化を最も小さくすることができた。
【００６６】
実施例３：インスリン含有経口投与用ナノ粒子製剤の製造２
実施例１において、ドキュセートナトリウムの代わりにラウリル硫酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ）を１：７の比率で用い、インスリンと対イオン物質との複合体を得た。このインスリンと対イオン物質との複合体、モノ−オレイン、ポリエチレングリコール２０００を、それぞれ、１５ｍｇ、４５ｍｇ、９０ｍｇ秤量し、１０ｍＬのエタノールに溶解した。同様の操作により、インスリン含有経口投与用ナノ粒子組成物を製造した。
【００６７】
実施例１の方法により、その粒径を測定した結果、平均粒径は１２１ｎｍ、分散度は０．３１４であった。
【００６８】
実施例４：インスリン含有経口投与用ナノ粒子組成物の製造３
モノオレインの代わりにＬａｂｒａｆａｃＴＭ（Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ）を用いたこと以外は実施例１と同様にして、インスリン含有経口投与用ナノ粒子組成物を製造した。実施例１の方法により、その粒径を測定した結果、平均粒径は１２９．４ｎｍ、分散度は０．２２７であった。
【００６９】
実施例５：インスリン含有経口投与用ナノ粒子組成物の製造４
キトサンの代わりにＥｕｄｒａｇｉｔＴＭ（Ｒｏｈｍ）とＥｕｄｒａｇｉｔ  ＳＴＭ（Ｒｏｈｍ）の１:１の混合物６０ｍｇを用いたこと以外は実施例１と同様にして、インスリン含有経口用ナノ粒子組成物を製造した。実施例１の方法により、その粒径を測定した結果、平均粒径は１９４．２ｎｍ、分散度は０．１２８であった。
【００７０】
比較例４
モノオレインも微小流動化剤も用いないこと以外は実施例５と同様にして、液体製剤を製造した。実施例１の方法により、その粒径を測定した結果、平均粒径は３５０．９ｎｍ、分散度は０．００９であった。
【００７１】
実施例６：セフトリアキソン含有経口投与用ナノ粒子の製造
（１）セフトリアキソンと対イオン物質との複合体の製造
セフトリアキソン（Ｈａｗｏｎ  ｆｉｎｅ  ｃｈｅｍｉｃａｌ）１００ｍｇを蒸留水２０ｍＬに溶解し、セフトリアキソンに対し、塩化ベンザルコニウム（Ｓｉｇｍａ）を１：２のモル比で秤量し、蒸留水に溶解した後、４℃で反応を行った。その上清を採取し、セフトリアキソンを米国薬局方に記載のセフトリアキソン分析法によって分析した。その結果、９９．９％のセフトリアキソンが対イオン物質との複合体を形成していることが分かった。
【００７２】
（２）セフトリアキソン含有経口用液体製剤の製造
セフトリアキソンと対イオン物質との複合体１２０ｍｇ、モノ−オレイン６０ｍｇ、およびＥｕｄｒａｇｉｔ  ＬＴＭとＥｕｄｒａｇｉｔ  ＳＴＭとの１：１の混合物３０ｍｇを１５ｍＬのエタノールに溶解した。この溶液をＬａｂｒａｓｏｌＴＭ（Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ）３７５ｍｇ、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ  ４０７ＴＭ  ３００ｍｇを含有する水溶液３０ｍＬに入れ、全混合液を撹拌し、均質溶液を得た。実施例１の操作と同様にして、セフトリアキソン含有経口投与用ナノ粒子製剤を製造した。実施例１の方法により、その粒径を測定した結果、平均粒径は１９９．０ｎｍ、分散度は０．１３５であった。
【００７３】
比較例５
セフトリアキソンと対イオン物質との複合体の代わりにセフトリアキソンを使用し、ポリマーも微小流動化剤も使用しないこと以外は実施例６と同様にして、液体製剤を製造した。実施例１の方法により、その粒径と分散度を測定した結果、平均粒径は１４９．４ｎｍ、分散度は０．１２４であった。
【００７４】
実施例７：セフトリアキソン含有経口投与用ナノ粒子製剤の製造
セフトリアキソン−対イオン物質の複合体２４０ｍｇ、ＣａｐｒｙｏｌＴＭ(Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ）１２００ｍｇをエタノール１５ｍＬに溶解した。この溶液を、ＬａｂｒａｓｏｌＴＭ  ２４０ｍｇ、キトサン３０ｍｇ、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ  ４０７ＴＭ  ３００ｍｇを含有する水溶液３０ｍＬに加え、全混合液を撹拌した。次に、実施例1と同様にして、セフトリアキソン含有経口投与用ナノ粒子製剤を製造した。キトサンの溶解度を高めるため、添加剤として、クエン酸を３００ｍｇ加えた。実施例１の方法により、その粒径を測定した結果、平均粒径は２９０．１ｎｍ、分散度は０．１９７であった。
【００７５】
実験１：薬物封入率の測定
上記の実施例１及び１ａ〜７、並びに比較例１〜５で製造した液体製剤５００μＬを蒸留水５００μＬに分散させた。次に、この分散液をＣｅｎｔｒｉｃｏｎ  ＹＭ−３０ＴＭ（分画分子量：３０，０００、Ｍｉｌｉｐｏｒｅ）に入れ、１５００ｇの相対遠心力で６０分間遠心分離した。上記のようにして分離した濾液中の薬物を分析し、ナノ粒子中の薬物封入効率を算出した。その結果を下記表４に示す。
【００７６】
【表４】
2007517023.tif 000005
【００７７】
実験２：酵素分解性の評価−プロテアーゼ／リパーゼであるパンクレアチンによる分解
生体内にはリパーゼが存在するため、脂質からなるナノ粒子がリパーゼに対して安定であれば、脂質ナノ粒子内に封入されたインスリンは外部に曝されることもなく、プロテアーゼによって分解されることもない。上記の実施例および比較例の製剤について、タンパク質および脂質の分解酵素であるパンクレアチンに対するｉｎ  ｖｉｖｏでの安定性を調べた。
【００７８】
上記の実施例１、１ａ及び３〜５、並びに比較例１〜４で製造した液体製剤５ｍＬを０．００６７％パンクレアチン含有緩衝液ｐＨ７．４（ＵＳＰ等級）１５ｍＬに加え、３７℃で０、１、３及び５時間反応させた。次に、インスリンの残量を測定し、下記表５に示した。
【００７９】
【表５】
2007517023.tif 000006
【００８０】
上記の表４および表５に示すように、インスリン−対イオン物質との複合体、及び脂質／ポリマーを含有する実施例１〜５の製剤は、薬物封入率も酵素安定性も高かった。これに対し、脂質のみを含有する比較例１の製剤、およびポリマーのみを含有する比較例４の製剤は、酵素安定性が極めて低く、５時間後のパンクレアチンに対するインスリンの安定性は２０％未満であった。
【００８１】
特に、インスリン−対イオン物質の複合体からではなく、インスリンから製造された比較例１及び２のナノ粒子製剤は、薬物封入率が低かった。ポリマーを含有する比較例２の製剤は、表５に示すように、ポリマーを含有しない比較例１の製剤に比べ、酵素安定性が高かった。
【００８２】
ナノ粒子製剤の製造において、微小流動化剤のみを用いて製造した比較例３の製剤は、まず、エタノールのような可溶化剤を用い、次に、微小流動化剤を用いて製造した実施例１の製剤に比べ、インスリン−対イオン物質の複合体の封入率も低く、酵素安定性も低かった。微小流動化剤を用いずに可溶化剤を用いて製造した実施例１ａのナノ粒子製剤は、実施例１の製剤のように、薬物封入率も酵素安定性も高かった。
【００８３】
上記に示すように、インスリン−対イオンの複合体からではなくインスリンから製造したナノ粒子製剤は、薬物封入率が低かったのに対し、脂質とポリマーとからなるナノ粒子製剤は、酵素安定性が高かった。更に、薬物封入率及び酵素安定性がより高いナノ粒子製剤を得るためには、微小流動化剤の使用だけでは不充分であり、可溶化剤を用いたナノ粒子製剤を前もって製造することが必要である。
【００８４】
結論として、薬物−対イオン物質の複合体を形成した後、脂質とポリマーからなるキャリア内に上記複合体を封入して製造される本発明のナノ粒子製剤は、薬物封入率に優れているだけでなく、リパーゼおよびプロテアーゼに対する安定性にも非常に優れていることが確認された。
【００８５】
実験３：動物への有効性の評価１
実施例１で製造した経口投与用ナノ粒子液体製剤を用い、動物実験を行なった。
【００８６】
（１）糖尿病の誘発
体重が約１８０〜２２０ｇのＳｐａｒａｑｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ系雄性正常ラットに、ストレプトゾシン（Ｓｉｇｍａ）４５ｍｇ／ｋｇを二日間隔で２回腹腔内注射し、１型糖尿病のラットを得た。一週間後、このラットを１２時間絶食させた後、血液を採血して血糖値を測定した。その結果、血糖値が３００ｍｇ／ｄＬ以上のラットを１型糖尿病ラットとみなして、次の実験に供した。血糖値は、Ｇｌｕｃｏｔｒａｎｄ２ＴＭ（Ｒｏｃｈｅ）を用いて測定した。
【００８７】
（２）経口投与用ナノ粒子液体製剤に含まれるインスリン生理活性の測定
実施例１で製造したナノ粒子液体製剤２ｍＬを生理食塩水２ｍＬに分散し、３ＩＵ／ｋｇのインスリン濃度で１型糖尿病ラットに筋肉内注射した。
【００８８】
比較群として、ｐＨ７．４の緩衝液に希釈したインスリンを、３ＩＵ／ｋｇのインスリン濃度で１型糖尿病ラットに筋肉内注射した。一定時間の間隔で、血液を尾静脈から集めた。
【００８９】
本発明の経口投与用ナノ粒子液体製剤とインスリン溶液の生理活性を比較すると、図２に示すように、本発明のナノ粒子液体製剤では、インスリンの生理活性がそのまま保持されていることが確認された。従って、本発明の液体製剤を用い、以下の動物実験を行なった。
【００９０】
（３）経口投与用ナノ粒子液体製剤の消化管内吸収試験
１）血糖値の測定
１型糖尿病ラットをエーテルで麻酔し、開腹した。その小腸を取出し、盲腸上部の５ｃｍ上方に、インスリン含有液体製剤を２０ＩＵ／ｋｇの濃度で投与した。次に、切開部分を縫合し、糖尿病ラットを動かし、自由に水を飲ませた。
【００９１】
試験群として、実施例１、比較例１及び実施例１ａの製剤を用いた。比較例１の製剤は、インスリン−対イオン物質の複合体もポリマーも含有しないナノ粒子製剤であるため、実施例１の製剤と比較すると、薬物封入率も酵素安定性も低かった。実施例１ａの製剤は、薬物封入率と酵素安定性は高いが、微小流動化剤を用いていないため、実施例１の製剤に比べ、ナノ粒子製剤のサイズがより大きかった。比較群１として、インスリン含有リン酸緩衝液ｐＨ７．４を２０ＩＵ／ｋｇの容量で実施例１と同様のルートで投与した。比較群２として、インスリン注射液を０．２ＩＵ／ｋｇの容量で皮下注射した。
【００９２】
薬物投与後、０、０．５、１、１．５、２、３、５及び７時間目に、尾静脈から血液を採取し、血糖値を測定した。投与前の初期値を１００％として血統値を測定した。
【００９３】
図３に示すように、実施例１の製剤を投与すると、血糖値は約７３％減少したのに対し、比較例１の製剤を投与すると、血糖値の低下は殆ど見られなかった。更に、微小流動化剤の使用を省略して製造した実施例１ａの製剤の血糖値減少面積は、実施例１の約７０％であった。
【００９４】
上記に示すように、インスリン−対イオンの複合体でなく脂質キャリアにのみインスリンを封入したナノ粒子製剤では、ｉｎ  ｖｉｖｏで血糖値減少作用は殆ど見られなかった。また、血糖値減少作用は、脂質ナノ粒子製剤の製造時に微小流動化剤を用いて粒径を減少させることによって約４０％上昇した。
【００９５】
図４に示すように、実施例１の製剤を投与すると、インスリン０．２ＩＵ／ｋｇを皮下注射した場合と極めて類似する血糖値減少作用が見られた。
【００９６】
２）血中インスリン濃度の測定
血糖値は、上記の方法により測定した。実験群として、実施例１、比較例１及び実施例１ａを使用し、対照群として、インスリンを含有しない経口投与用ナノ粒子液体製剤を実施例１と同様のルートで投与した。比較群には、インスリン注射液を０．２ＩＵ／ｋｇの容量で皮下注射した。
【００９７】
薬物投与後、０、０．５、１、１．５、２、３及び５時間目に尾静脈から血液を採取し、インスリン分析キット（Ｃｏａｔ−ａ−ｃｏｕｎｔＴＭ、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｃｏｒｏｐｒａｔｉｏｎ）を用いて血中インスリン濃度を測定した。
【００９８】
図５に示すように、インスリンを含有しない対照群では、血中インスリン濃度は２０μＩＵ／ｍＬ以下であるのに対し、実施例１の製剤では、血中最大濃度は約１７０μＩＵ／ｍＬであり、インスリン吸収率は非常に高かった。インスリン−対イオンの複合体でなく脂質キャリアのみにインスリンが封入された比較例１の製剤では、最大血中濃度時に、約１５μＩＵ／ｍＬのインスリンのみが吸収された。微小流動化剤を用いない実施例１ａの製剤では、最大血中濃度時に、約７０μＩＵ／ｍＬのインスリンのみが吸収された。更に、初期インスリン濃度に関連した時間によるインスリン増加面積（ＡＵＣ）を比較すると、実施例１の製剤は、実施例１ａの製剤に比べて約１４０％増加した。これは、時間による血液濃度減少面積と比較した結果と類似している。
【００９９】
ポリマー含有脂質キャリアに封入されたインスリン−対イオンの複合体、および更には、高圧モホジナイザーを用いた粒径の減少は、１型糖尿病ラットのインスリン吸収率を高めるために非常に効果的であることが分かった。
【０１００】
図６に示すように、実施例１の製剤の投与は、初期の糖尿病患者に適用されるインスリン容量である０．２ＩＵ／ｋｇを皮下注射したものと類似の血中インスリン濃度プロファイルを示した。
【０１０１】
実験４：動物に対する有効性の評価２
実施例６及び実施例７、並びに比較例５で製造したセフトリアキソン含有経口投与用ナノ粒子液体製剤を用い、動物実験を行った。
【０１０２】
（１）経口投与用ナノ粒子液体製剤の消化管内吸収実験
１）血糖値の測定
正常ラット（Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ、雄、体重約２００ｇ）をエーテルで麻酔し、開腹した。その十二指腸を取出し、セフトリアキソン含有ナノ粒子液体製剤をセフトリアキソンとして４０ｍｇ／ｋｇの容量で投与した。
【０１０３】
試験群として、実施例６および実施例７、並びに比較例５の製剤を用いた。比較例５の製剤は、セフトリアキソン−対イオンの複合体もポリマーも含有しないため、実施例６に比べ、薬物封入率も低く、薬物の溶出を制御することができなかった。
【０１０４】
薬物投与後、０、０．５、１、１．５、２、３及び４時間目に尾静脈から血液を採取し、米国薬局方に記載のセフトリアキソン分析法によって分析した。血液は、３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した後、同量のアセトニトリルを入れて前処理した。
【０１０５】
比較群１として、水に溶解したセフトリアキソンを４０ｍｇ／ｋｇの容量で、実施例６と同じルートで投与した。
【０１０６】
比較群２として、生理食塩水に溶解したセフトリアキソンを２０ｍｇ／ｋｇの容量で静脈注射した。
【０１０７】
図７および図８に示すように、実施例６および７の製剤を投与したときの生体利用効率を静脈注射と比較すると、それぞれ、２２．８％、３５．１％であった。これに対し、セフトリアキソン水溶液を投与した比較群１では、セフトリアキソンは、ｉｎ  ｖｉｖｏで殆ど吸収されなかった。セフトリアキソンを脂質にのみ封入させて投与した比較例５の製剤は、本実施例の製剤が投与された群に比べ、最大血中濃度も低く、生体利用効率も約１２．４％に過ぎなかった。実施例６および７の製剤では、比較例５の製剤を投与したときよりも、セフトリアキソンの血中濃度が、より緩やかに減少した。特に、セフトリアキソンを静脈注射した比較群２に比べ、初期の薬物濃度は低かったが、１．５時間後における薬物の血中濃度は、より高く維持されていた。この結果から、本発明の組成物は、注射剤に比べ、初期の高い血中濃度からの副作用を軽減し、且つ、薬効をより長時間持続できると考えられる。
【０１０８】
上記に示すように、本発明の組成物は、ナノ粒子内の水溶性薬物の封入率が高く、生体内のリパーゼ／プロテアーゼから薬物が保護されるため、消化管内吸収率も非常に高く、高い血中薬物濃度を示している。
【産業上の利用可能性】
【０１０９】
上述したように、本発明の経口投与用ナノ粒子組成物は、ナノ粒子における水溶性薬物の封入率が高く、消化管内酵素から不安定な薬物が保護されるため、消化管膜への吸収率も高い。その結果、水溶性薬物の帯電によってその経口吸収が制限されている当該水溶性薬物の生体利用効率を高めることが可能な薬物デリバリーシステムとして、非常に有用である。
【図面の簡単な説明】
【０１１０】
【図１】図１は、実験２において、有効成分としてインスリンを含有する本発明の経口投与用ナノ粒子組成物のパンクレアチン（プロテアーゼ／リパーゼ）に対する安定性を示すグラフである。
【図２】図２は、実験３（２）において、有効成分としてインスリンを含有する本発明の経口投与用ナノ粒子組成物を１型糖尿病ラットに腸内投与した後の相対的血糖値を示すグラフである。
【図３】図３は、実験３（３）１）において、有効成分としてインスリンを含有する本発明の経口投与用ナノ粒子組成物を１型糖尿病ラットに腸内投与した後の相対的血糖値を示すグラフである。
【図４】図４は、実験３（３）１）において、有効成分としてインスリンを含有する本発明の経口投与用ナノ粒子組成物を１型糖尿病ラットに腸内投与した後の相対的血糖値を示すグラフである。
【図５】図５は、実験３（３）２）において、有効成分としてインスリンを含有する本発明の経口投与用ナノ粒子組成物を１型糖尿病ラットに腸内投与した後のインスリン濃度を示すグラフである。
【図６】図６は、実験３（３）２）において、有効成分としてインスリンを含有する本発明の経口投与用ナノ粒子組成物を１型糖尿病ラットに腸内投与した後のインスリン濃度を示すグラフである。
【図７】図７は、実験４（１）１）において、有効成分としてセフトリアキソンを含有する本発明の経口投与用ナノ粒子組成物を正常ラットの十二指腸に投与した後のセフトリアキソン濃度を示すグラフである。
【図８】図８は、実験４（１）１）において、有効成分としてセフトリアキソンを含有する本発明の経口投与用ナノ粒子組成物を正常ラットの十二指腸に投与した後のセフトリアキソン濃度を示すグラフである。
【図１】
2007517023.tif 000007
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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2007517023.tif 000016