(57)【要約】  本発明は、概ね、有効な血管形成阻害量のトロンビン阻害薬を投与することにより患者における血管形成を阻害する方法に関し、トロンビン阻害薬を単独で投与することにより、又はトロンビン阻害薬を抗癌剤又は細胞毒性物質と同時投与することにより、非制御の細胞増殖によりもたらされる疾患状態を処置することに関する。特に、本発明の方法に用いるトロンビン阻害薬は、ヒルディンである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効量のデスルファトヒルディン又はデスルファトヒルディン変異体を含む薬剤製剤を投与することを含む、患者における血管形成を阻害する方法。
【請求項２】
前記血管形成が細胞増殖性疾患に関連する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
細胞増殖性疾患が、副腎皮質癌、膀胱癌、骨の癌、脳腫瘍、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、眼の癌、胆嚢癌、胃癌、頭部及び頸部の癌、咽頭癌、肝臓癌、肺癌、メラノーマ、脊髄増殖性の障害、頸部の癌、非メラノーマ性皮膚癌、卵巣癌、前立腺癌、良性の前立腺過形成、すい臓癌、直腸癌、並びに精巣癌からなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記デスルファトヒルディンの変異体が、ＨＶ１、ＨＶ１修飾の（ａ，ｂ）、ＨＶ２、ＨＶ２修飾の（ａ，ｂ，ｃ）、ＨＶ３、ＨＶ３の修飾型、又はｄｅｓ（Ｖａｌ２）−デスルファトヒルディンである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記デスルファトヒルディンが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．１、２、３、４、又は５である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
薬剤製剤を注射により投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
薬剤製剤を全身性に注射する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
薬剤製剤を局所的に注射する、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
デスルファトヒルディン又はデスルファトヒルディン変異体を細胞毒性物質と同時投与する、請求項２に記載の方法。
【請求項１０】
細胞毒性物質が、代謝拮抗薬、微小管阻害剤、アルキル化剤、プラチナ剤、アントラサイクリン、トポイソメラーゼ阻害薬、又は抗生物質である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
代謝拮抗薬が、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、又はフルダラビンである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
微小管阻害剤が、ビンクリスチン、ビンブラスチン、又はタキサンである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
アルキル化剤が、シクロホスファミド、メルファラン、ビオクロモエチルニトロソ尿素（ｂｉｏｃｈｒｏｍｏｅｔｈｙｌｎｉｔｒｏｓｏｕｒｅａ）、又はヒドロキシ尿素である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
プラチナ剤が、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ＪＭ−２１６、又はＣＩ−９７３である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
アントラサイクリンが、ドキソルビシン、又はダウノルビシンである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
トポイソメラーゼ阻害薬がカンプトセシン又はその誘導体である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１７】
抗生物質がマイトマイシン、イダルビシン、アドリアマイシン、又はダウノマイシンである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１８】
薬剤製剤がリン酸カリウムをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
薬剤製剤が２価又は３価の金属イオンをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
薬剤製剤が糖をさらに含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
薬剤製剤がｉｎ  ｖｉｖｏで持続放出プロファイルをもたらす、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
有効量のデスルファトヒルディン又はデスルファトヒルディン誘導体を含む薬剤製剤を投与することを含む、患者における癌を処置する方法。
【請求項２３】
前記デスルファトヒルディン誘導体が、ＨＶ１、ＨＶ１修飾の（ａ，ｂ）、ＨＶ２、ＨＶ２修飾の（ａ，ｂ，ｃ）、ＨＶ３、ＨＶ３の修飾型、又はｄｅｓ（Ｖａｌ２）−デスルファトヒルディンである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
前記デスルファトヒルディンが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．１、２、３、４、又は５である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２５】
デスルファトヒルディン又はデスルファトヒルディン誘導体を細胞毒性物質と同時投与する、請求項２０に記載の方法。
【請求項２６】
デスルファトヒルディン又はデスルファトヒルディン誘導体と、
細胞毒性物質と、
薬学的に許容できる担体と
を含む、患者における癌を処置するための薬剤製剤。
【請求項２７】
リン酸カリウムをさらに含む、請求項２４に記載の製剤。
【請求項２８】
糖をさらに含む、請求項２５に記載の製剤。
【請求項２９】
薬学的に許容できる溶剤をさらに含む、請求項２４に記載の製剤。
【請求項３０】
有効量のデスルファトヒルディン又はデスルファトヒルディン誘導体を投与することを含む、患者における増殖性の細胞を制御する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、参照としてその全文が本明細書に組み入れられる、２００４年４月１２日出願の米国仮特許出願第６０／５６１７４１号の優先権を主張するものである。
【０００２】
本発明は、概ね、有効な血管形成阻害量のトロンビン阻害薬を投与することにより患者における血管形成を阻害する方法に関し、トロンビン阻害薬を単独で投与することにより、又はトロンビン阻害薬を抗癌剤若しくは細胞毒性物質と同時投与することにより、非制御の細胞の増殖がもたらす疾患状態を処置することに関する。特に、本発明の方法で用いるトロンビン阻害薬は、ヒルディンである。
【背景技術】
【０００３】
循環系は、栄養分、タンパク質、ホルモン、及び生命を維持するのに必要な他の生体分子を輸送する上で重要な役割を果たしている。血管は複雑な網状構造の経路を形成し、循環系の不可欠な構成成分を代表している。哺乳動物の種では、血管内腔の内側表面は内皮細胞からなる。これらの内皮細胞は、内腔の表面を滑らかにし抵抗を低くする。血管の内側表面が滑らかで非粘着性であることは、自由な流動、並びに血液及び血液成分の輸送に重要であり、それによって液体が流動する容易さが増す。内側表面が滑らかでなければ、内側の壁の「付着性の」場所に血栓又は他の妨害物が形成されることにより、血管は塞がれる。完全に、又は部分的でも血管が閉塞すると血流の制限がもたらされ、それにより血管が供給する生存している組織の生存可能性が損なわれる。したがって、内皮細胞は血管の重要な構造上の構成成分を代表し、且つ、血管に滑らかな内側の表面も提供する。
【０００４】
ｉｎ  ｖｉｖｏでの血管の形成は、特殊化した成長因子の形態でもたらされる刺激に反応して起こる。これらの成長因子は、血管に既に存在している細胞に有糸分裂を引き起こす。新しい細胞は、付近の損傷を受けた細胞に置き換わることができ、又は新しい細胞は、新しい血管が形成されるように自身を準備することができる。内皮細胞から血管が成長する過程は、「血管新生」と呼ばれ、他の特徴の中でも組織の血管形成をもたらすものである。
【０００５】
トロンビンは、腫瘍の転移及び血管形成で役割を果たすことがある。一般的に、腫瘍が直径数ミリメートルを超えて成長するには、腫瘍塊の内側の細胞に循環及び栄養分を提供するために、血管内皮が増殖し、小胞壁を形成しなければならない。トロンビンは、内皮細胞の増殖を誘発するその能力によって、この過程を強化するようである。さらに、トロンビンは、細胞及び血漿の因子が微小血管系から逸脱し、又は微小血管に入るのを防ぐのに重要な、通常の細胞間の内皮細胞の接触を引き離すことが示されている。トロンビンはこれらの接触を引き離すことにより転移を増大することがあるという現在の仮説は、（トロンビン及び他のプロテアーゼを血漿から取り除く）抗−トロンビンＩＩＩのレベルの減少と腫瘍の転移の増大との間の相互関係を実証する研究によって支持されている。
【０００６】
癌細胞は、正常の細胞の増殖を制限する生化学的な制御から逃れられるような方法で突然変異した単一の細胞に由来する。その細胞が成長抑制物質に正常に反応できなくなると、その細胞は増殖し始める。しかし、成長する腫瘍がある直径に到達すると、腫瘍組織の内部及び外部の単純拡散では、もはや酸素及び栄養分を十分に供給せず、廃棄物を十分に除去しない。さらなる成長は血管形成（即ち、既存の血管床からの新しい血管の形成）に依存し、小型の腫瘍は、血管の成長を刺激する因子を生成しなければならない。したがって、血管形成を阻害すると、今度は悪性細胞及び新生物細胞の増殖の低減がもたらされる。
【０００７】
Ｃａｒｎｅｙら、Ｃｅｌｌ、１５巻、１３４１頁（１９７８年）は、高親和性の細胞表面のトロンビン受容体は腫瘍の転移及び血管形成に関与することがあることを仮定している。例えば、トロンビン受容体は、転移の腫瘍細胞から分泌される分子である組織プラスミノーゲンアクチベーターに対する結合部位として働くことができることを、研究は示している。さらに、他の研究は、転移及び血管形成における組織プラスミノーゲンアクチベーターの関与を実証している。このように、プラスミノーゲンアクチベーターの作用の多くは、細胞表面トロンビン受容体とのその相互作用により媒介され得る。Ｃａｒｎｅｙらは、したがって、トロンビン受容体を刺激すると腫瘍の転移を促進するように働くが、受容体を阻害すると転移の活性を低下させることを提唱している。
【０００８】
血管形成は、組織がどのように成長するかの理解をすすめる上での中心的なテーマになっている。上記に述べたように、内皮細胞の増殖は望ましいだけではなく、例えば、子宮内の組織及び器官の形成など、数々の生理学的過程を実行するのに必要でもある。しかし、他のコンテキストでは、血管形成は生物体の全体的な健康に有害であることがある。例えば、腫瘍に血管新生化することにより、血管形成は腫瘍の成長及び転移を可能にし、それによって腫瘍の成長を維持するのに必要な血液及び栄養分を腫瘍に供給し、また、腫瘍細胞が身体の遠位の部分に遊走することができる経路を提供する（Ｆｏｌｋｍａｎ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、４６（２）巻、４６７〜４７３頁（１９８６年））。そこで、明らかに、血管形成を防止し又は低減することは、ある障害及び疾患を処置する上での望ましい目標であり得る。血管形成を阻害し又は低減するその能力について、化合物を試験している。血管の内皮細胞の有糸分裂を選択的に誘発するタンパク質である、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の阻害物質が研究されている。例えば、Ａｉｅｌｌｏらへの米国特許第６２８４７５１号は、ＶＥＧＦの作用を相殺するタンパク質キナーゼＣのβアイソザイムの阻害物質の使用を記載している。マイトマイシンなどの抗生物質も血管形成を阻害することが報告されている。研究者の中には、マイトマイシンを放射線又は化学療法と組み合わせて投与した後の、腫瘍の成長の阻害及び転移の腫瘍の数の減少を報告した者もいる。Ｔａｍａｒｇｏら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、５１（２）巻、６７２〜６７５頁（１９９１年）、及びＴｅｉｃｈｅｒ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、５２（２３）巻、６７０２〜６７０４頁（１９９２年）を参照されたい。Ｂａｃｋｅｒｅらへの米国特許第５８４３９２５号は、ある種のデオキシテトラサイクリンを投与した際の血管形成の阻害を記載している。しかし、これらの血管形成阻害性の化合物の多くは、その抗増殖性の活性をｉｎ  ｖｉｔｒｏで試験されているにすぎない。
【０００９】
したがって、血管形成の阻害物質としてさらなる化合物を同定する必要がある。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、望ましくない血管形成を有する患者に、血管形成を阻害するのに十分な投与量のトロンビン阻害薬を含む組成物を投与することにより、望ましくなく、且つ非制御の血管形成により媒介される疾患及び過程を処置するための方法及び組成物を提供する。一実施形態では、血管形成は細胞増殖性疾患に関連する。特に、本発明は、患者における血管形成依存性の癌を処置する方法を提供する。本発明は、腫瘍の成長を処置し、又は抑制するのに特に有用である。例えば、血管新生前の転移した腫瘍を有するヒト又は動物にデスルファトヒルディン（ｄｅｓｕｌｐｈａｔｏｈｉｒｕｄｉｎ）を投与すると、これらの腫瘍の成長又は拡大を防ぐ。
【００１１】
本発明は、望ましくない血管形成を有する患者に、血管形成を阻害するのに十分な投与量のヒルディンを含む組成物を投与することにより、望ましくなく、且つ非制御の血管形成により媒介される疾患及び過程を処置するための方法及び組成物を提供する。特に、本発明は、患者における血管形成依存性の癌を処置する方法、及び患者における血管形成依存性の癌を治療するための方法を提供する。一実施形態では、血管形成は細胞増殖性疾患に関連している。
【００１２】
本発明は、望ましくない血管形成を有する患者に、血管形成を阻害するのに十分な投与量のデスルファトヒルディンを含む組成物を投与することにより、望ましくなく、且つ非制御の血管形成により媒介される疾患及び過程を処置するための方法及び組成物を提供する。特に、本発明は、患者における血管形成依存性の癌を処置する方法、及び患者における血管形成依存性の癌を治療するための方法を提供する。一実施形態では、血管形成は細胞増殖性疾患に関連している。
【００１３】
本発明は、デスルファトヒルディンを細胞毒性の物質又は抗癌剤と同時投与することを含む、組成物を患者に投与することによる、癌を処置するための方法及び組成物を提供する。本発明は、腫瘍の成長を処置するのに、又は抑制するのに特に有用である。例えば、血管新生前の転移した腫瘍を有するヒト又は動物にデスルファトヒルディンを投与すると、これらの腫瘍の成長又は拡大を防ぐ。
【００１４】
本発明の別の態様は、デスルファトヒルディンを細胞毒性の物質又は抗癌剤と同時投与することを含む、組成物を患者に投与することによる、癌を処置するための方法及び組成物を提供する。
【００１５】
本発明は、抗−血管形成治療又は抗癌治療を必要とする患者を処置するための薬剤製剤をさらに提供し、製剤は、薬学的に許容できる溶剤、薬学的に許容できる担体、及び血管形成を阻害するのに有効な量のデスルファトヒルディンからなる。溶剤は水性でも非水性でもよく、また、有機でも無機でもよい。溶剤を別々の容器に包装してもよく、投与の前にデスルファトヒルディンに加えてもよい。デスルファトヒルディンを凍結乾燥した乾燥製品として調合してもよい。別の一実施形態では、製剤はリン酸カリウムをさらに含む。さらに別の一実施形態では、製剤は糖をさらに含む。さらに別の一実施形態では、製剤は、２価又は３価の金属イオンをさらに含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明は、望ましくない血管形成を有する患者に、血管形成を阻害するのに十分な投与量のトロンビン阻害薬を含む薬剤組成物を投与することによる、望ましくなく、且つ非制御の血管形成により媒介される疾患及び過程を処置するための方法及び組成物を提供する。一実施形態では、血管形成は細胞増殖性疾患に関連している。特に、本発明は、デスルファトヒルディン又はデシルジンを、一緒に又は化学療法の補助剤として投与することを含む、患者における血管形成依存性の癌を処置する方法を提供する。
【００１７】
「細胞増殖性疾患」は、望ましくない細胞の増殖を特徴とするあらゆる病状を意味するものとされる。新生物、癌、及び腫瘍などの病状が含まれる。「細胞増殖性疾患」は、良性のメラノーマ、良性の前立腺過形成、乾癬、及び表皮層内に生じる他の細胞の成長などの、非癌性の病状も含む。
【００１８】
「癌」は、血管形成依存性の癌及び腫瘍、即ち、その成長（体積及び／又は質量の拡大）に、血液を供給する血管の数及び密度の上昇を必要とする腫瘍を意味する。
【００１９】
本明細書で用いる「処置する」及び「処置」は、症状の重症度及び／又は頻度の低減、症状及び／又は根底をなす原因の除去、症状及び／又はその根底をなす原因の出現の予防、並びに損傷の改善又は矯正を意味する。したがって、例えば、患者を「処置する」は、感受性の個体における特定の障害又は有害な生理学的事象の予防、及び、障害又は疾患の退縮を阻害し又は引き起こすことによる臨床的に徴候のある個体の処置に関する。したがって、例えば、抗−血管形成療法を必要とする患者を「処置する」本方法は、抗−血管形成療法に反応性である病状、疾患、又は障害の予防も、臨床的に徴候のある個体における抗−血管形成療法に反応性である病状、疾患、又は障害の処置も包含している。
【００２０】
「退縮」は、腫瘍の質量及び大きさの減少を意味する。
【００２１】
本明細書で用いる「患者」は、本発明の薬剤製剤及び方法から利益を得ることができる、哺乳動物の、好ましくはヒトの個体を意味する。現在記載している薬剤製剤及び方法から利益を得ることができる哺乳動物の型に制限はない。
【００２２】
本明細書で用いる薬剤の「有効量」又は「治療上有効な量」は、望ましい治療効果をもたらすのに十分な量の薬剤を意味する。さらに、薬剤の「有効な血管形成阻害量」は、少なくとも部分的に血管形成を阻害するのに十分な量の薬剤である。もちろん、望ましくない効果、例えば副作用が、望ましい治療効果とともに表れることがある。したがって、開業医は、好適な「有効量」が何であるかを決定する上で、潜在的な利点と潜在的な危険性とのバランスをとる。以下に指摘するように、必要とされる正確な量は、対象の種、年齢、及び全身状態、投与方法などに応じて、対象によって異なる。したがって、正確な「有効量」を特定することは可能ではない。しかし、あらゆる個体の症例における好適な「有効量」又は「有効な血管形成阻害量」は、ルーチンの実験のみを用いて当業者が決定することができる。
【００２３】
Ｉ．薬剤製剤
本発明の一態様は、血管形成を阻害するのに有効な量のトロンビン阻害薬、及び薬学的に許容できる担体を含む、抗−血管形成治療を必要とする患者を処置するための薬剤製剤を提供することである。
【００２４】
Ａ．有効物質
過去数年に、ヒルディンの変異体をコードするｃＤＮＡ及び合成の遺伝子が、クローンされ、それだけには限定されないが大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）及び酵母菌などの微生物の宿主で発現されている。酵母（出芽酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、ＴＹ１４５６系菌株）の発現産物は、Ｔｙｒ６３の硫酸モノエステル基を欠いており、したがって、「デスルファトヒルディン」と呼ばれていたが、これらは天然の硫酸化したヒルディンとほぼ同じ生物学的活性を示すことがわかった。デスルファトヒルディン変異体のＨＶ１は、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）で（欧州特許第１５８５６４号、及び第１６８３４２号）、並びに出芽酵母で（欧州特許第１６８３４２号、第２００６５５号、第２２５６３３号、第２５２８５４号、及び第３４１２１５号）発現されている。同様に、デスルファトヒルディンＨＶ２は、大腸菌で（欧州特許第１５８５６４号）、及び出芽酵母で（欧州特許第２００６５５号、ＰＣＴ出願第８６／０１２２４号）発現されており、ｄｅｓ−（Ｖａｌ）２−デスルファトヒルディンは大腸菌で（欧州特許第１５８９８６号）発現されている。
【００２５】
本発明によると、「ヒルディン」は、デスルファトヒルディン、ヒルディン変異体若しくはデスルファトヒルディン変異体、又はそれらの突然変異体を含むものとされ、それぞれ、文献に、特に、デスルファトヒルディン又はその突然変異体をコードするＤＮＡを含む形質転換された微生物系統から得ることができるデスルファトヒルディン化合物又はその変異体に記載されている。このようなデスルファトヒルディンは、例えば、デスルファトヒルディン変異体ＨＶ１、ＨＶ１修飾の（ａ，ｂ）、ＨＶ２、ＨＶ２修飾の（ａ，ｂ，ｃ）、ＨＶ３、ＨＶ３の修飾型、及びｄｅｓ（Ｖａｌ２）−デスルファトヒルディンである。ヒルログ、及び低分子量のペプチドベースのトロンビン阻害薬などの合成の形態も含まれる。
【００２６】
好ましいデスルファトヒルディンは、式Ｉ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）を有するものであり、
【化１】
2007532646.tif 000002
［式中、
ａ）２７、３６、及び４７のＸａａは、それぞれ、Ｌｙｓであり、５１のＸａａはＨｉｓであり、６２のＸａａはペプチド残基Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ（ＨＶ１）であり、或いは、
ｂ）２７のＸａａはＩｌｅ又はＧｌｕであり、３６、４７、５１、及び６２のＸａａは、ａ）（ＨＶ１修飾のａ）で定義したとおりであり、或いは、
ｃ）３６のＸａａはＩｌｅ又はＧｌｕであり、２７、４７、５１、及び６２のＸａａはａ）（ＨＶ１修飾のａ）で定義したとおりであり、或いは、
ｄ）４７のＸａａはＩｌｅ又はＧｌｕであり、２７、３６、５１、及び６２のＸａａはａ）（ＨＶ１修飾のａ）で定義したとおりであり、或いは、
ｅ）５１のＸａａはＬｅｕ又はＡｓｐであり、２７、３６、４７、及び６２のＸａａはａ）（ＨＶ１修飾のａ）で定義したとおりであり、或いは、
ｆ）６２のＸａａは、Ｇｌｕ−Ｔｙｒ、Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ、Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ、Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ、Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ、Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ、Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ、Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ、Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ、及びＧｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇからなる群から選択され、２７、３６、４７、及び５１のＸａａはａ）（ＨＶ１修飾のｂ）で定義したとおりであり］
或いは、式ＩＩ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）を有し、
【化２】
2007532646.tif 000003
或いは式ＩＩＩ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）を有し、
【化３】
2007532646.tif 000004
［式中、
ａ）４７のＸａａはＡｓｎであり、６３のＸａａはＴｙｒ（ＨＶ２）であり、或いは、
ｂ）４７のＸａａはＬｙｓ、Ａｒｇ、又はＨｉｓであり、６３のＸａａはＴｙｒ（ＨＶ２修飾のａ）であり、或いは、
ｃ）６３のＸａａはＧｌｕ又はＡｓｐであり、４７のＸａａはＡｓｎ（ＨＶ２修飾のｂ）である
］
或いは式ＩＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）を有し、
【化４】
2007532646.tif 000005
或いは式Ｖ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５）を有する。
【化５】
2007532646.tif 000006
【００２７】
ＨＶ３及びＨＶ３の変異体は、一次構造のＮ末端のアミノ酸を１若しくは２個、又はＣ末端のアミノ酸を１８、１０、９、６、４、又は２個短くすることを特徴とする。
【００２８】
特に好ましいデスルファトヒルディン化合物は、Ｘａａ基がａ）で定義したとおりである式Ｉの化合物、又は４７のＸａａがＬｙｓであり６３のＸａａがＴｙｒである式ＩＩＩの化合物である。
【００２９】
最も好ましいヒルディンは、２７、３６、及び４７のＸａａがそれぞれＬｙｓであり、５１のＸａａがＨｉｓであり、６２のＸａａがペプチド残基Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎである式Ｉを有するデスルファトヒルディンＨＶ１である。
【００３０】
本発明の別の一態様は、［Ｌｅｕ１，Ｔｈｒ２］−６３−デスルファトヒルディン又はレピルディン（ｌｅｐｉｒｕｄｉｎ）としても記載されている、ヒルディン変異体のレフルダン、即ちＬｅｕ−ヒルディンに関し、欧州特許第ＥＰ−Ｂ０３２４７１２号の配列番号４、及び式ＶＩ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）で記載される。
【化６】
2007532646.tif 000007
【００３１】
さらなる実施形態は、遅効性作用を有するヒルディン変異体（例えば、欧州特許第ＥＰ０３４５６１６号に記載されているＰＥＧ−ヒルディン）に関する。本発明の別の一実施形態は、天然のイソ型又は変異体に比べて、Ｎ末端及び／又はＣ末端で切断されているヒルディン及びヒルディン変異体に関する。本発明の別の一実施形態では、ヒルディンの変異体は、ヒルディンの天然のイソ型に対し８０％又はそれを超える相同性（アミノ酸同一性）を有する。
【００３２】
本発明に用いられるヒルディンは、合成で、例えば、化学的に、若しくは好ましくはリコンビナント技術により、又はヒルからの分離により調製することができる。
【００３３】
本発明によると、「突然変異体」は、単一の又は複数の突然変異により天然のヒルディン又はデスルファトヒルディンと異なる抗血栓の活性を表すタンパク質（突然変異タンパク質）を意味する（欧州特許第３５２２２７号、及び３５２２２８号を参照されたい）。当技術分野で周知の方法、例えば、部位特異的突然変異誘発により調製することができる前記の突然変異体をコードするＤＮＡは、クローンされ大腸菌及び出芽酵母などの微生物の宿主で発現される。
【００３４】
或いは、本発明により利用することができるヒルディンは、ヒルディンフラグメント（即ち、カルボキシル末端のアミノ酸の少なくとも最後の８個を有するもの、例えば、ヒルディンにおける既知の配列の最後のＣ末端アミノ酸からなるフラグメント）、ヒルディンの生合成類似体（例えば、１０から１２個までのアミノ酸を有するもの、いくつかは市販されている）、タンパク質ＮＡＰｃ２、及び低分子量のペプチドベースのトロンビン阻害薬である。
【００３５】
好ましいトロンビン阻害薬は、低分子量のペプチドベースのトロンビン阻害薬を含む。「低分子量のペプチドベースのトロンビン阻害薬」は、ペプチド結合が１から４個の、及び／又は分子量が１０００未満のトロンビン阻害薬を含むことが当業者には理解され、ＣｌａｅｓｓｏｎのＢｌｏｏｄ  Ｃｏａｇｕｌ．Ｆｉｂｒｉｎ（１９９４年）５巻、４１１頁による再考に記載されているもの、並びに、米国特許第４３４６０７８号、国際特許出願ＷＯ第９３／１１１５２号、ＷＯ第９５／２３６０９号、ＷＯ第９５／３５３０９号、ＷＯ第９６／２５４２６号、ＷＯ第９４／２９３３６号、ＷＯ第９３／１８０６０号、及びＷＯ第９５／０１１６８号、並びに欧州特許第６４８７８０号、第４６８２３１号、第５５９０４６号、第６４１７７９号、第１８５３９０号、第５２６８７７号、第５４２５２５号、第１９５２１２号、第３６２００２号、第３６４３４４号、第５３０１６７号、第２９２８８１号、第６８６６４２号、第６６９３１７号、及び第６０１４５９号に開示されたものを含む。
【００３６】
好ましい低分子量のペプチドベースのトロンビン阻害薬には、集合的に「ガトラン」で知られるものが含まれる。言及することができる詳しいガトランには、ＨＯＯＣ−ＣＨ２−（Ｒ）Ｃｈａ−Ｐｉｃ−Ｎａｇ−Ｈ（イノガトランで知られる、国際特許公開ＷＯ第９３／１１１５２号及びその中の略語のリストを参照されたい）、並びにＨＯＯＣ−ＣＨ２−（Ｒ）Ｃｇｌ−Ａｚｅ−Ｐａｂ−Ｈ（メラガトランで知られる、国際特許公開ＷＯ第９４／２９３３６号及びその中の略語のリストを参照されたい）が含まれる。特に好ましいトロンビン阻害薬には、メラガトラン及びキシメラガトランが含まれる。他の銀の誘導体が、本発明に有用であることもある。
【００３７】
トロンビンの触媒部位を阻害し、α−トロンビンのアニオン結合性非活性部位（ＡＢＥ）に対する特異性を示す、新規なクラスの合成ペプチドがデザインされている。これらのペプチドは、「ヒルログ」と呼ばれ、（ｉ）制限されたＡｒｇ−Ｐｒｏの切れやすい結合を有する有効部位特異性配列、（ｉｉ）長さ６から１８Ａのグリシル残基のポリマー性のリンカー、及び（ｉｉｉ）それだけには限定されないが、Ｈｉｒｕｌｏｇ−１［（Ｄ−Ｐｈｅ）−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−（Ｇｌｙ）４−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ］、合成のＣ末端ヒルディンペプチドＳ−Ｈｉｒ５３−６４、ペンタペプチド（Ｄ−Ｐｈｅ）−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ、及びビバリルジンなどの、ヒルディンＣ末端におけるもののようなＡＢＥ認識配列からなる。
【００３８】
本発明に用いられるヒルディン化合物は、遊離の形態であることもできるが、それらの塩の形態でもあることができる。いくつかのアミノ酸残基に遊離のアミノ基が含まれるので、化合物は酸付加塩の形態であることができる。適切な酸付加塩は、特に、従来の治療上許容できる酸との薬理学的に許容できる塩である。代表的な無機の酸は、ハロゲン化水素酸（塩酸など）、及び、硫酸、リン酸、及びピロリン酸でもある。代表的な有機の酸には、特に、アレーンスルホン酸（例えば、ベンゼンスルホン酸、又はｐ−トルエンスルホン酸）、又は低級アルケンスルホン酸（例えば、メタンスルホン酸）、並びに、酢酸、乳酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リンゴ酸、酒石酸、アスコルビン酸、及びクエン酸などのカルボン酸がある。しかし、本発明に用いる化合物は、いくつかのアミノ酸残基に遊離のカルボキシル基も含み、このカルボキシル基がペプチド全体に酸性の特徴を与えるので、これらは無機の又は有機の塩基との塩の形態、例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、若しくはマグネシウム塩、又はアンモニア若しくは薬理学的に許容できる有機の含窒素塩基に由来するアンモニウム塩でもあることもできる。しかし、これらは同時に遊離のカルボキシル基及び遊離のアミノ基を含むので、分子内塩の形態であることもできる。薬理学的に許容できる塩が好ましい。「薬学的に許容できる塩」は、特定の化合物の遊離の酸及び塩基の生物学的有効性を維持し、生物学的に又は他の方法で望ましくなくない塩である。
【００３９】
ヒルディンを含む投与形態を開発する上での１つの問題点は、水溶液及び粉末形態で安定性が劣ることである。ヒルディンを、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）、ＭＯＮＯ  Ｑ法、又はＰＲＯＰＡＸ法などの、クロマトグラフィー方法により分析する場合に、見うけられる安定性は低い。
【００４０】
ＲＰ−ＨＰＬＣ法：ＬｉＣｈｒｏＣＡＲＴ  １２５−４カラムを用いる（Ｍｅｒｃｋ  ＬｉＣｈｒｏｓｐｈｅｒ  １００ＲＰ−１８．５ｍｕ．ｍ）。溶剤Ａは、アセトニトリル／水（１０：９０）（ｖ：ｖ）中０．５％酢酸アンモニウム、溶剤Ｂは、アセトニトリル／水（２５：７５）中０．５％酢酸アンモニウムである。溶離は、流速０．５ｍｌ／分を用いて４５℃で行う。２成分の溶離はゼロ時間に溶剤Ｂ２３％で開始し、２４分後に溶剤Ｂ４６％に到達する線形勾配である。溶剤Ｂ７０％で２分後に、カラムを溶剤Ｂ２３％で７分間平衡にする。
【００４１】
ＭＯＮＯ  Ｑ法：ヒルディンの安定性を、Ｍｏｎｏ−Ｑカラム（粒子サイズ１０μｍ、５．５ｘ５０ｍｍ、Ｐｈａｒｍａｃｉａより購入）を用いて、ＦＰＬＣ（微細タンパク質液体クロマトグラフィー）により分析することができる。この方法は、ＢａｓｅｌのＣｉｂａ−Ｇｅｉｇｙが開発した。溶剤Ａは、Ｈ２Ｏ中５０ｍＭ  ＨＣＯＯＮＨ４、ｐＨ４．５、溶剤Ｂは、Ｈ２Ｏ中５０ｍＭ  ＨＣＯＯＮＨ４、ｐＨ３．５である。溶離は、流速１．４ｍｌ／分を用いて、室温（２２℃）で行う。最初の５分間の２成分の溶離は、一定流速の２０％Ｂで、その後２０％Ｂから７５％Ｂに１０分で線形勾配を掛け、１００％Ｂで２分間、その後カラムを２分間、２０％Ｂの開始時の条件で平衡にする。
【００４２】
ＰＲＯＰＡＣ  ＭＥＴＨＯＤ：ヒルディンを分析するために最近発表された方法も用いることができる（Ｔｕｏｎｇ，Ａら、「リコンビナントのヒルディンの脱アミド化形態のキャラクタリゼーション（Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｄｅａｍｉｄａｔｅｄ  Ｆｏｒｍｓ  ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｈｉｒｕｄｉｎ）」、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３１巻、８２９１〜８２９９頁（１９９２年）。この方法では、ＤｉｏｎｅｘからのＰｒｏＰａｃＰＡ１陰イオン交換カラム（内径２５０ｘ４ｍｍ）を用いる。溶剤Ａは、２０ｍＭ、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．０であり、溶剤Ｂは、Ａ中に０．５ＭのＮａＣＬである。２８％で５分間定組成溶離の後、２８％Ｂから５４％Ｂに流速１．３ｍｌ／分で６０分で線形勾配を掛ける。
【００４３】
ヒルディンの安定性を増すためにリン酸カリウムを用いることができる（米国特許第６４３６９０１Ｂ１号）。或いは、本発明の一実施形態は、ヒルディン、リン酸カリウム、及び糖を含む凍結乾燥した薬剤組成物を提供する。本発明の凍結乾燥の組成物は、成分の水溶液を形成し、次いでそれを従来の方法で凍結乾燥することにより生成することができる。
【００４４】
リン酸カリウムは、リン酸水素二カリウムであることが好ましい。これを凍結乾燥する前の溶液に、０．１から０．５のモル濃度、好ましくは０．１から０．３のモル濃度で用いることができる。
【００４５】
適切な糖には、それだけには限定されないが、マンニトール、トレハロース、ショ糖、ソルビトール、フルクトース、グルコース、マルトース、ラクトース、及びデキストランが含まれる。好ましい糖は、マンニトール及びトレハロースである。凍結乾燥する前の溶液中の糖の量は、５から５０％（ｗ／ｖ）の、好ましくは５から２０％（ｗ／ｖ）の濃度を生成するほどであってよい。
【００４６】
凍結乾燥する前の溶液は、等張であることが好ましい。凍結乾燥する前の溶液のｐＨは、４から１０、好ましくは６から９、最も好ましくは６．５から８であってよい。所望により、凍結乾燥する前に、例えばクエン酸を加えることにより、クエン酸バッファーを溶液に加えることができる。クエン酸のモル濃度は、０．１から０．５、好ましくは０．１から０．３であってよい。
【００４７】
凍結乾燥の前の溶液中のヒルディンの濃度は、０．１から５００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは２０から２５０ｍｇ／ｍｌであることができる。
【００４８】
凍結乾燥した製品は長時間安定であり、冷蔵貯蔵の必要はない。さらに、製品を水に再溶解した後、得られた溶液も長時間安定であるが、溶液の安定性は凍結乾燥した粉末の安定性ほど良好ではない。
【００４９】
凍結乾燥した製品を再溶解することにより生成した溶液を、標準のアンプル、プレフィルドダブルチャンバーシリンジ、又はマルチ投与系の製造に用いることができる。溶液は、もちろん、即時に投与に用いることもできる。
【００５０】
本発明の化合物は、「薬学的に許容できるプロドラッグ」の形態、即ち、生理学的条件下で、又は加溶媒分解により、特定の化合物又はそのような化合物の薬学的に許容できる塩に転換することができる化合物であってよい。プロドラッグは、当技術分野で周知のルーチンの技術を用いて同定することができる。様々な形態のプロドラッグが、当技術分野で知られている。このようなプロドラッグ誘導体の例として、例えば、ａ）「プロドラッグのデザイン（Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ）」、Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編集、（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、１９８５年）、及び「酵素学における方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）」、４２巻、３０９〜３９６頁、Ｋ．Ｗｉｄｄｅｒら編集（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９８５年）；ｂ）「薬物デザイン及び開発のテキスト（Ａ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）」、Ｋｒｏｇｓｇａａｒｄ−Ｌａｒｓｅｎ、及びＨ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編集、第５章「プロドラッグのデザインと応用（Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ）」、Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ、１１３〜１９１頁（１９９１年）；ｃ）Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ「上級薬物送達再考（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ）」、８巻、１〜３８頁（１９９２年）；ｄ）Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、７７巻、２８５頁（１９８８年）；及びｅ）Ｎ．Ｋａｋｅｙａら、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．、３２巻、６９２頁（１９８４年）を参照されたく、これらは各々、本明細書に参照として特に組み入れられる。
【００５１】
製剤中のデスルファトヒルディンの量は、時間をかけて、例えば、数日間、数週間、又は数ヶ月の期間にわたり繰返し投与することができる、比較的低い有効な１回単位投与量であることが好ましい。もちろん、あらゆる単位投与量における実際の量及び投与スケジュールは、患者、及び血管形成の阻害に反応する病状、疾患又は障害の型などの、数々の要因に依存する。しかし、デスルファトヒルディンの量は、血管形成を阻害するのに有効な量であるが、血管形成の阻害の結果としての細胞死と対照的な、直接の細胞毒性の機序による実質的な細胞死を引き起こすのには不十分である。デスルファトヒルディンのコンテクストでは、必要とされる量は、少なくとも部分的に、新しい血管の形成を阻害する。
【００５２】
好ましくは、有効な血管形成阻害量のデスルファトヒルディンは、患者の体重１ｋｇあたり約０．０００１ｍｇから約２００ｍｇのデスルファトヒルディン、より好ましくは、患者の体重１ｋｇあたり約０．０００１ｍｇから約１２０ｍｇのデスルファトヒルディン、さらにより好ましくは、患者の体重１ｋｇあたり約０．０００１ｍｇから約１５ｍｇのデスルファトヒルディン、さらにいっそうより好ましくは、患者の体重１ｋｇあたり約０．５ｍｇから約１５ｍｇのデスルファトヒルディン、最も好ましくは患者の体重１ｋｇあたり約１ｍｇから約１３ｍｇのデスルファトヒルディンに相当する。重量パーセントに関しては、製剤は、好ましくは約０．０００１重量％から約１０重量％、より好ましくは約０．００１重量％から約１重量％、最も好ましくは約０．０１重量％から約０．５重量％の量のデスルファトヒルディンを含む。
【００５３】
Ｂ．溶剤
化合物、又は薬学的に許容できる塩、若しくはｉｎ  ｖｉｖｏで切断できるそのプロドラッグをヒトを含めた哺乳動物の治療的処置（予防的処置を含む）に用いるために、これを通常、薬剤組成物として標準の薬剤上の手法により調合する。本発明の一実施形態によると、デスルファトヒルディン、又はデスルファトヒルディン変異体、又は上記に薬学的に許容できる溶剤又は担体と関連して定義した、薬学的に許容できるその塩又はｉｎ  ｖｉｖｏで切断できるそのプロドラッグを含む薬剤組成物が提供される。「薬学的に許容できる」溶剤又は担体は、生物学的に又は他の方法で望ましくなくない材料からなる薬剤上の媒体を意味し、即ち、その材料は、それが含まれる薬剤製剤のあらゆる他の成分と心身に有害な方法でいかなる望ましくない生物学的効果又は相互作用を引き起こさずにデスルファトヒルディンとともに個体に投与することができる。
【００５４】
適切な溶剤には、以下に限定されないが、アルコール、例えば、１−ブタノール、２−ブタノール、３−メチル−１−ブタノール、２−メチル−１−プロパノール、及びエタノールなどの１価のアルコール、並びにプロピレングリコールなどの多価アルコール；エチルエーテル；ギ酸エチル；酢酸エチル；酢酸メチル；酢酸イソブチル；酢酸イソプロピル；メチルエチルケトン；ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）；１，１−ジメチルオキシメタン；２，２−ジメチルオキシプロパン；ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）などが含まれる。溶剤は、有機溶剤でも、無機の溶剤でもよい。さらに、溶剤は水性でも非水性でもよい。当業者であれば容易に理解できるが、溶剤の選択は、望ましい溶解性、デスルファトヒルディンの性質、及び望ましい放出の特性に依存する。
【００５５】
製剤に存在する溶剤の量は、腫瘍の型（固形又は軟部）、デスルファトヒルディンの溶解性、選択した溶剤、及び製剤の望ましい形態（例えば、溶液、懸濁液など）に応じて変化する。当業者であれば、薬剤製剤における溶剤の好適な量を決定する際に、そのような要因を日常的に考慮する。したがって、薬剤製剤に含まれる溶剤の量は、当業者であれば不必要な実験を行わずに確立することができる。一実施形態では、製剤に含まれる溶剤の量は、製剤の約０．０１重量％から約５０重量％（ｖ／ｖ）である。
【００５６】
一実施形態では、デスルファトヒルディン（場合により溶剤とともに）を、担体、即ち、それだけには限定されないが、塩化ナトリウム溶液（例えば、通常の食塩水）、デキストロース溶液、乳酸加Ｒｉｎｇｅｒ溶液、水、又はそれらの混合物などの溶液に加える。担体は、賦形剤、並びに、希釈剤、洗剤、着色剤、湿潤剤又は乳化剤、ｐＨ緩衝剤、保存剤などの他の添加物を含むことができる。デスルファトヒルディン、溶剤、及びあらゆるさらなる成分を担体に加え、混合する。
【００５７】
Ｃ．製剤
本発明の薬剤製剤は、用いられる特殊な形態に関して制限されない。本発明の好ましい送達形態の非制限的なリストには、溶液剤、懸濁剤、分散剤、乳化剤、及びマイクロスフェアーなどの制御放出製剤が含まれる。全身の投与には、溶液剤及び懸濁剤が好ましい。局所投与には、あらゆる送達形態、例えば、溶液剤、懸濁剤、分散剤、乳化剤、又はマイクロスフェアーを用いることができる。
【００５８】
一般的に、薬剤製剤は１つ又は複数のさらなる構成成分を含むことができる。このようなさらなる構成成分には、例えば、抗微生物剤、バッファー、抗酸化剤、等張化剤、及び洗剤が含まれる。抗微生物剤は、特に複数回投与製剤（即ち、複数回投与バイアル用の製剤）において微生物の増殖を抑止するのに用いられる。適切な抗微生物剤には、硝酸フェニル水銀、チメロサール、塩化ベンゼトニウム、塩化ベンザルコニウム、フェノール、クレゾール、クロロブタノール、及びそれらの組合せが含まれる。バッファーは、主に、製剤のｐＨの変化によりもたらされる潜在的な化学的劣化に対して溶液を安定化するために用いられる。適切なバッファーには、クエン酸、酢酸、及びリン酸の酸性塩が含まれる。多くの薬物は酸化による劣化を受けやすいので、保存のために抗酸化剤を用いる。抗酸化剤の例には、重亜硫酸ナトリウム、アセトン重亜硫酸ナトリウム、ホルムアルデヒドナトリウム、スルホキシル酸塩、チオ尿素、アスコルビン酸、エチレンジアミン四酢酸のナトリウム塩、及び不活性ガス（例えば、窒素）中の貯蔵が含まれる。等張化剤は、得られた製剤が、生理学的状態に比べて過度に低張又は高張にならないことを確実にするために張性を制御するために用いる。等張化剤の例には、電解質（例えば、塩化ナトリウム）、及び単糖類又は二糖類（例えば、単糖類の例としてデキストロース）が含まれる。洗剤の例には、例えば、陰イオン性洗剤、非イオン性洗剤、例えば、ポリオキシエチレン化ソルビタン（ＩＣＩ  Ａｍｅｒｉｃａｓ社から、ＴＷＥＥＮ（商標）の名称で入手可能）；ソルビタンエステル；ポリソルベート、ポリオキシエチレンエーテル（例えば、ミシガン州、Ｍｉｄｌａｎｄ、Ｕｎｉｏｎ  Ｃａｒｂｉｄｅ社からＴＲＩＴＯＮ（商標）の名称で入手可能）；陽イオン性及び両性イオン性洗剤；並びにこれらの組合せが含まれる。
【００５９】
有効物質ではないさらなる構成成分の量は、選択した溶剤、製剤の望ましい形態、及び他の要因に応じて変化する。当業者であれば、そのような要因を日常的に考慮する。したがって、あらゆる特定のさらなる構成成分の量は、当業者が不必要な実験を行わずに確立することができる。典型的には、あらゆるそのような構成成分の量は、製剤全体の１０体積％を超えないことが好ましい。
【００６０】
本発明の組成物は、経口の使用に（例えば、錠剤、ロゼンジ剤、硬又は軟カプセル剤、水性の又は油性の懸濁剤、乳剤、分散可能な粉末剤又は顆粒剤、シロップ剤又はエリキシル剤として）、局所の使用に（例えば、クリーム剤、軟膏剤、ゲル剤、又は水性の若しくは油性の溶液剤若しくは懸濁剤）、吸入による投与に（例えば、微粉末、又は液体エアロゾル）、吸入による投与に（例えば、微粉末）、或いは非経口投与に（例えば、静脈内、皮下、若しくは筋肉内投与のための滅菌した水性の若しくは油性の溶液、又は直腸投与のための坐剤）、適切な形態であることができる。例えば、経口の使用を意図した組成物は、例えば、１つ又は複数の着色料、甘味料、着香料、及び／又は保存料を含むことができる。
【００６１】
錠剤の製剤に適する薬学的に許容できる賦形剤には、例えば、ラクトース、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、又は炭酸カルシウムなどの不活性の希釈剤；コーンスターチ又はアルギン酸などの顆粒化剤及び崩壊剤；デンプンなどの結合剤；ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、又はタルクなどの滑沢剤；ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチル又はプロピルなどの保存剤、並びにアスコルビン酸などの抗酸化剤を含む。錠剤の製剤は、その崩壊性、及び引き続き消化管内での有効成分の吸収を変更し、或いはその安定性及び／又は外観を改善するために、いずれの場合も当技術分野でよく知られている従来のコーティング剤及び手順を用いて、非コーティングでもコーティングされていてもよい。
【００６２】
経口的に使用するための組成物は、有効成分が不活性の固体の希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、又はカオリンと混合されている硬ゼラチンカプセルの形態でもよく、有効成分が水、又はピーナッツ油、液体パラフィン、若しくはオリーブ油などの油と混合されている軟ゼラチンカプセルとしてでもよい。
【００６３】
水性の懸濁剤は、微粉末の形態の有効成分を、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴム、及びアラビアゴムなどの懸濁化剤；レシチン、又はアルキレン酸化物と脂肪酸との濃縮生成物（例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン）などの分散剤又は湿潤剤；或いは、エチレンオキサイドと長鎖脂肪族アルコールとの濃縮生成物、例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール（ｈｅｐｔａｄｅｃａｅｔｈｙｌｅｎｅｏｘｙｃｅｔａｎｏｌ）、或いはエチレンオキサイドと、脂肪酸及びモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトールなどのヘキシトールに由来する部分エステルとの濃縮生成物、或いはエチレンオキサイドと、脂肪酸及びヘキシトール無水物に由来する部分エステルとの濃縮生成物、例えばモノオレイン酸ポリエチレンソルビタンの１つ又は複数とともに含む。水性懸濁液は、１つ又は複数の保存料（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチル若しくはプロピル）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸）、着色料、着香料、及び／又は甘味料（例えば、ショ糖、サッカリン、又はアスパルテーム）も含むことができる。
【００６４】
油性の懸濁剤は、有効成分を植物油（例えば、落花生油、オリーブ油、ゴマ油、若しくはココナッツ油）又は鉱物油（例えば、液体パラフィン）に懸濁することにより調合することができる。油性懸濁剤は、ミツロウ、固形パラフィン、又はセチルアルコールなどの増粘剤も含むことができる。上記に述べたような甘味料、及び着香料を加えて、味のよい経口の調製物を提供することができる。これらの組成物は、アスコルビン酸などの抗酸化剤を加えることにより貯蔵することができる。
【００６５】
水の添加による水性懸濁液の調製に適する分散可能な粉末剤及び顆粒剤は、一般的に、分散剤又は湿潤剤、懸濁化剤、及び１つ又は複数の保存剤とともに有効成分を含む。適切な分散剤又は湿潤剤、又は懸濁化剤は、既に上記に言及したものにより例示される。甘味料、着香料、及び着色料などのさらなる賦形剤も、存在することができる。
【００６６】
本発明の薬剤組成物は、水中油型の乳剤の形態であることもできる。油相は、オリーブ油若しくは落花生油などの植物油、又は、例えば、液体パラフィン若しくはこれらのあらゆる混合などの鉱物油であることができる。適切な乳化剤は、例えば、アラビアゴム若しくはトラガカントガムなどの天然に存在するゴム、ダイズ豆、レシチン、脂肪酸及びヘキシトール無水物に由来するエステル若しくは部分エステル（例えば、モノオレイン酸ソルビタン）などの天然に存在するホスファチド、並びに、前記の部分エステルのエチレンオキサイドとの濃縮生成物、例えばモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンであることができる。乳剤は、甘味料、着香料、及び保存料も含むことができる。
【００６７】
シロップ剤及びエリキシル剤は、グリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール、アスパルテーム、又はショ糖などの甘味料と調合することができ、粘滑薬、保存料、着香料、及び／又は着色料も含むことができる。
【００６８】
薬剤組成物は、上記で言及した好適な分散剤若しくは湿潤剤、及び懸濁化剤の１つ又は複数を用いて周知の手順に従い調合することができる、滅菌の注射可能な、水性又は油性の懸濁剤の形態であることもできる。滅菌の注射可能な調製物は、非毒性の非経口的に許容できる希釈剤又は溶剤中の滅菌の注射可能な溶液又は懸濁液、例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液であることもできる。
【００６９】
坐剤の製剤は、有効成分を、通常の温度では固体であるが直腸の温度では液体であり、したがって直腸で溶けて薬物を放出する、適切な非刺激性の賦形剤と混合することにより調製することができる。適切な賦形剤には、例えば、ココアバター、及びポリエチレングリコールが含まれる。
【００７０】
クリーム剤、軟膏剤、ゲル剤、及び水性又は油性の溶液又は懸濁液などの局所用の製剤は、一般的に、有効成分を、従来の、局所用に許容できる担体又は希釈剤と、当技術分野ではよく知られている従来の手順を用いて得ることができる。
【００７１】
吸入による投与のための組成物は、平均の直径が、例えば、３０μｍ又はそれよりはるかに小さい粒子を含む微粉末の形態であることができ、粉末自体は、有効成分を単独で、又はラクトースなどの生理学的に許容できる担体の１つ若しくは複数で希釈して含んでいる。吸入のための粉末は、その後、周知の薬剤であるクロモグリク酸ナトリウムの吸入のために使用するようなターボ吸入器装置で使用するために、例えば、１から５０ｍｇの有効成分を含むカプセルに好都合に維持される。
【００７２】
吸入による投与のための組成物は、微粉末の固体を含むエアロゾル、又は液滴のいずれかとして有効成分を分配するように配置された、従来の加圧エアロゾルの形態であることができる。揮発性のフッ素化炭化水素又は炭化水素などの従来のエアロゾルの噴射剤を用いることができ、計量された量の有効成分を分配するために、エアロゾルの装置を好都合に配置する。
【００７３】
製剤に関するさらなる情報は、本明細書に参照として特に組み入れられる、「総合薬物化学（Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉａｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」（編集委員長、Ｃｏｒｗｉｎ  Ｈａｎｓｃｈ）、Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、１９９０年、の第５巻、２５．２章を参照されたい。
【００７４】
１つ又は複数の賦形剤と組み合わせて単回投与量形態を生成する本発明の化合物の量は、処置する宿主及び投与の詳しい経路に応じて必然的に変化する。例えば、ヒトへの経口投与を意図した製剤は、例えば、全組成物の約５から約９８重量％に変化することがある、適切且つ好都合な量の賦形剤と混ぜ合わせた０．５ｍｇから２ｇのデスルファトヒルディンを含むことができる。投与量単位形態は、一般に、有効成分を約１ｍｇから約５００ｍｇ含む。投与経路及び投与量レジームに関するさらなる情報は、本明細書に参照として特に組み入れられる、「総合薬物化学（Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉａｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」（編集委員長、Ｃｏｒｗｉｎ  Ｈａｎｓｃｈ）、Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、１９９０年、の第５巻、２５．３章を参照されたい。
【００７５】
本発明の薬剤製剤は、持続性放出の製剤であることができる。本明細書で用いる「持続性放出」は、長時間にわたり薬物の徐々の放出をもたらす薬物製剤であり、引き続き長時間にわたり望ましい部位に一定の薬物レベルをもたらすことが必然的ではないが好ましい薬物製剤である。即ち、製剤は、即時放出又は非持続性放出の製剤に比べて、長時間にわたりデスルファトヒルディンを放出する。例えば、一実施形態では、本発明の薬剤製剤は約４時間から約２４時間の時間にわたり、デスルファトヒルディンを放出する。
【００７６】
持続性放出製剤は、一般的に、時間をかけてデスルファトヒルディンの放出を遅らせ、又は制御するようにデザインされた１つ又は複数の構成成分を含む。本発明は、構成成分又は構成成分類が薬学的に許容できるのであれば、持続性放出をもたらすのに用いられる特定の構成成分に関して制限されるものではない。好ましい持続性放出の構成成分には、多糖類、多糖類の塩、多糖類のマイクロスフェアー、デキストリン、ゴム、セルロース、ゲル、シリコン、リポソーム、及びこれらの組合せが含まれる。持続性放出の構成成分が多糖類であることが特に好ましい。適切な多糖類の例には、それだけには限定されないが、キチン（ポリ−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン）、キトサン（脱アセチルしたキチン）、及びこれらの組合せが含まれる。例えば、糖の分子を付加又は除去することにより（即ち、担体の平均分子量を増大又は低減することにより）形成された誘導体を含めた、これらの担体の誘導体も企図される。一実施形態では、担体の平均分子量の重量は、約５００ダルトンから約１０００００ダルトンであり、より好ましくは約１００００ダルトンから約６００００ダルトンである。
【００７７】
持続性放出をもたらす構成成分は、デスルファトヒルディンに共有結合することができ、それによって持続性放出の抱合体を提供する。例えば、キチンはデスルファトヒルディンに共有結合することができる。これらの抱合体を生成するための方法は、当業者にはよく知られており、関係のある文章及び文献に詳しく記載されている。
【００７８】
持続性放出をもたらす構成成分及び構成成分類の量は、製剤が単回投与を含むことを意図するのか又は複数回投与を含むことを意図するのか、及び得られた製剤の注射可能性（例えば、粘度）などのいくつかの要因に依存する。さらに、薬剤製剤を投与する標的の部位の環境に照らして、量を考慮しなければならない。例えば、低密度の器官、例えば、前立腺、脳、及び膀胱には粘度の低い製剤を与えるのが望ましいが、高密度の組織、例えば、固形腫瘍及び乳癌は粘度の高い薬剤製剤を与えるのが望ましい。当業者であれば、持続性放出製剤を提供する上で、これら及び他の要因を考慮する。
【００７９】
一般的に、製剤における持続性放出の構成成分の全量は、全製剤の約０．０１％ｗ／ｖから約５０％ｗ／ｖの間であることが好ましい。生体適合性の担体が、約０．５％ｗ／ｖから約３０％ｗ／ｖの量で存在することが特に好ましい。
【００８０】
ＩＩ．処置の方法
本発明は、効果的な血管形成阻害量のデスルファトヒルディンを患者に投与することを含む、それを必要とする患者における血管形成を阻害するための方法も提供する。この方法を用いて、少なくとも部分的に血管形成を阻害することにより処置することができる病状、疾患、又は障害に罹患している患者を処置する。一般的に、新生物性の疾患、即ち、細胞増殖性疾患に罹患している患者が、本組成物の投与により利益を受ける。一般的に、細胞増殖性の疾患には、肉腫、癌腫、リンパ腫、及び悪性のメラノーマだけではなく、非癌性のメラノーマ、及び急速に分裂する細胞により引き起こされる他の良性の増殖も含まれる。
【００８１】
本発明が適する細胞増殖性疾患の非限定的な例として、副腎皮質癌、膀胱癌、骨の癌、脳腫瘍、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、眼の癌、胆嚢癌、胃癌、頭部及び頸部の癌、咽頭癌、肝臓癌、肺癌、メラノーマ、骨髄腫などの脊髄増殖性の障害、骨髄腫、頸部の癌、非メラノーマ性皮膚癌、卵巣癌、前立腺癌、すい臓癌、直腸癌並びに精巣癌が含まれる。本発明が処置するのに特に良好に適している疾患には、脳腫瘍、膀胱癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、直腸癌、頭部及び頸部の癌、肝臓癌、肺癌、骨髄腫、前立腺癌、及び卵巣癌からなる群から選択されるこれらの疾患が含まれる。
【００８２】
さらに、デスルファトヒルディンの抗癌剤又は細胞毒性物質との同時投与は、本発明の範囲内に含まれる。そのような薬剤には、それだけには限定されないが、好適には代謝拮抗薬（例えば、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、フルダラビン）、微小管阻害剤（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、パクリタキセル、ドセタキセルなどのタキサン）、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、メルファラン、ビオクロモエチルニトロソ尿素（ｂｉｏｃｈｒｏｍｏｅｔｈｙｌｎｉｔｒｏｓｏｕｒｅａ）、ヒドロキシ尿素）、プラチナ剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ＪＭ−２１６、ＣＩ−９７３）、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン、ダウノルビシン）、抗生物質（例えば、マイトマイシン、イダルビシン、アドリアマイシン、ダウノマイシン）、トポイソメラーゼ阻害薬（例えば、エトポシド、カンプトセシン）、又はあらゆる他の細胞毒性の物質（リン酸エストラムスチン、プレドニムスチン）が含まれる。様々な抗癌薬物と組み合わせて用いられるデスルファトヒルディンは、癌細胞に著しく増強された細胞毒性作用を生じることができ、したがって治療効果の上昇をもたらすことが予想される。特に、薬物を単独で用いる処置レジメンに比べて、より低濃度の抗癌薬物を利用して大幅に上昇した成長阻害作用を得ることができる。したがって、大量の投与量の抗癌薬物を単独で用いる時に通常観察されるよりも、抗癌薬物に関連する有害な副作用が大幅に低減される治療法を提供する可能性がある。これらの同時投与する抗癌剤の可能な投与量範囲は、約０．１から２０ｍｇ／ｋｇ／日である。
【００８３】
「同時投与」は、２つ以上の薬剤（即ち、デスルファトヒルディン、及び１つ若しくは複数のさらなる抗癌剤若しくは細胞毒性物質）を、患者又は対象に投与するあらゆる投与経路に言及することを意味する。例えば、薬剤を一緒に投与してもよく、互いの前又は後に投与してもよい。薬剤を異なる経路により投与してもよく、例えば１つの薬剤は静脈投与し第２の薬剤を筋肉内に、静脈内に、又は経口で投与してもよい。両方の薬剤が体内で有効な濃度を達成できるのに十分な方法で投与されるのであれば、薬剤を同時に投与しても、逐次に投与してもよい。薬剤は、例えば単一の錠剤などの、混合物であってもよい。逐次投与では、１つの薬剤が他の薬剤の投与の直後でもよく、薬剤を一時的に投与してもよく、即ち、あるときに１つを投与し他方を後に続けて、典型的には１週間内に投与することができる。適切な同時投与レジメンの例は、デスルファトヒルディンを投与した０．５から７日後に細胞毒性物質を投与する。
【００８４】
本発明によると、本発明の治療用組成物を患者に投与する適切な方法は、組成物を患者に送達するのに適するｉｎ  ｖｉｖｏの投与のあらゆる経路を含む。好ましい投与の経路は、予防し若しくは処置する病状のタイプ、及び／又は標的の細胞の個体数に応じて、当業者であれば明らかであろう。ｉｎ  ｖｉｖｏの投与の好ましい方法には、それだけには限定されないが、静脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、結節内投与、冠内投与、動脈内投与（例えば、頸動脈内へ）、皮下投与、経皮送達、気管内投与、関節内投与、脳室内投与、吸入（例えば、エアロゾル）、頭蓋内、脊髄内、眼内、鼻腔内、経口の、気管支の、直腸の、局所の、経膣の、尿道の、肺の投与、カテーテルの含浸、及び組織内への直接注射が含まれる。
【００８５】
非経口投与は、あらゆる数々の方法で行うことができるが、シリンジ、カテーテル、又は同様の装置の使用を用いて、本明細書に記載する製剤の非経口投与を行うことが好ましい。デスルファトヒルディンが血流全体にわたり実質的に移動するように、製剤を全身的に注射することができる。
【００８６】
さらに、製剤を、標的の部位に局所的に注射することもでき、即ち、血管形成の阻害が望ましい身体の特定の部分に注射することができる。注射による局所投与の利点は、全身をデスルファトヒルディンに曝露することを制限し、又は避けることである。このコンテクストでは、局所投与は、部分的な投与、例えば、その部分に供給している血管への送達による身体の部分に向ける製剤の投与を含むことに注意されたい。局所送達は直接、即ち、腫瘍内に向けることができる。局所送達は、殆ど直接、即ち、病巣内の又は腹腔内に向けることもでき、即ち、デスルファトヒルディンが望ましい薬理学的活性を表すように腫瘍に十分接近している場所に、殆ど直接であってもよい。したがって、局所送達が望ましい場合には、薬剤製剤を病巣内に、腫瘍内に、又は腹腔内に送達することが好ましい。
【００８７】
現在記載している薬剤製剤を局所送達することにより、より高濃度のデスルファトヒルディンを標的部位に維持できるとされている。標的部位に高濃度を直接送達することにはいくつかの利点がある。第１に、デスルファトヒルディンが局在するので、全身性の曝露が最小に起こるので患者に対する毒性の潜在性がより少ない。第２に、より高濃度の薬物に標的部位が曝露されるので、薬物の有効性が向上する。第３に、送達が比較的速いので、薬物が確実に溶解し、確実にデスルファトヒルディンが標的部位に到達する前に、殆ど又は全く分解しない。第４に、この方法は比較的非侵襲性であり、これは、脳腫瘍、肝臓腫瘍、及びすい臓腫瘍などの切除不能な腫瘍に理想的である。
【００８８】
局所投与では、本発明の薬剤製剤が、正確な位置づけを確実にするために、コンピューター断層撮影法（ＣＴ）、超音波、又は同様の方法の助けで標的の場所に向けることが好ましい。最初の投与量を投与した後、すぐに、又はある期間の後、患者に他の投与量を投与することができる。このような投与計画は、病状、障害、又は疾患の性質、患者の体力、製剤の期待された効果などを考慮に入れれば、当業者により容易に決定される。
【００８９】
投与されたデスルファトヒルディンの量は、もちろん、処置する対象、対象の体重、投与の方法、及び処方する医師の判断に依存する。しかし、投与するデスルファトヒルディンの量は、有効な血管形成阻害量である。好ましくは、デスルファトヒルディンを約０．０００１ｍｇ／ｋｇから約２００ｍｇ／ｋｇ（患者の体重１ｋｇあたりの薬物のミリグラム）で、より好ましくは約０．０００１ｍｇ／ｋｇから１２０ｍｇ／ｋｇで、さらにより好ましくは約０．０００１ｍｇ／ｋｇから約１５ｍｇ／ｋｇで、さらにいっそうより好ましくは約０．５ｍｇ／ｋｇから約１５ｍｇ／ｋｇで、最も好ましくは約１ｍｇ／ｋｇから約１３ｍｇ／ｋｇの量で投与する。患者の反応に応じて、この範囲内でさらなる投与量を投与することができる。
【００９０】
デスルファトヒルディンの治療上の、又は予防上の目標に対する投与量のサイズは、よく知られている医薬の原則にしたがって、病状の性質及び重症度、動物又は患者の年齢及び性別、及び投与の経路によって、当然変化する。例えば、この方法は、本明細書に記載する１つ又は複数の組成物の、１時間ごとの投与、毎日の投与、毎週の投与、又は毎月の投与の少なくとも１つを含むことができる。
【００９１】
この出願全体を通して、様々な特許は番号により引用され、出版物は著者及び日付により引用されている。本明細書に記載され主張される本発明の日付の時点で当業者に知られる最新技術をより完全に記載するために、これらの特許の開示、及び出版物は、これにより、この出願にその全文が参照として組み入れられる。
【００９２】
前述した記載は、本発明の原則を例示するものにすぎないと考えられる。さらに、当業者であれば多くの変更態様及び修正は容易に生じるので、本発明を、上記に記載したとおりに示す正確な構成及び過程に限定することは望ましくない。したがって、全ての適切な変更態様及び均等物が、以下の特許請求の範囲により規定される本発明の範囲内に含まれるように講じられることがある。本明細書、及び以下の特許請求の範囲で用いられる「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「包含する（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「包含している（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「包含する（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」は、述べられている特徴、整数、構成成分、又はステップの存在を明記することが意図されるが、１つ又は複数の他の特徴、整数、構成成分、ステップ、又はそれらの群の存在又は付加を除外するものではない。
【配列表】
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【国際調査報告】
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