(57)【要約】  本発明は、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3より、高カルシウム血性の低い、ビタミンＤ受容体（ＶＤＲ）調節活性を有する、新規な、非セコステロイド性の、フェニル−フラン化合物に関する。これらの化合物は、骨の病気や乾癬を治療するのに有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2007512326.tif 000064
［ここで、
ＲとＲ’は、独立にＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4フルオロアルキル、またはＲとＲ’一緒に３から８の炭素原子を有する置換または非置換の飽和または不飽和の炭素環を形成し；
ＲP、ＲP’およびＲFは独立に、水素、ハロ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ2−Ｃ4アルケニル、Ｃ2−Ｃ4アルキニル、Ｃ1−Ｃ4フルオロアルキル、−Ｏ−Ｃ1−Ｃ4アルキル、−Ｓ−Ｃ1−Ｃ4アルキル、−Ｏ−Ｃ1−Ｃ4フルオロアルキル、−ＣＮ、−ＮＯ2、アセチル、−Ｓ−Ｃ1−Ｃ4フルオロアルキル、Ｃ2−Ｃ4アルケニル、Ｃ3−Ｃ4シクロアルキル、およびＣ3−Ｃ4シクロアルケニルから成るグループから選択され；
（Ｌ1）、（Ｌ2）、（Ｌ3）、および（ＬF）は、
【化２】
2007512326.tif 000065
から成るグループから独立に選択される二価の結合基であり、ここで、Ｒ４０はそれぞれ独立に、水素、Ｃ1−Ｃ5アルキル、またはＣ1−Ｃ5フルオロアルキルであり；
Ｘ１は、Ｏ、ＣＨ２、または［Ｈ，ＯＨ］であり；
ＺFは、
【化３】
2007512326.tif 000066
（ここで、Ｒ４とＲ５は、独立に、水素、Ｃ1−Ｃ4アルキル、−Ｏ−Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ2−Ｃ4アルケニル、Ｃ2−Ｃ4アルキニル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、−ＮＨ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）、またはシクロプロピルであり、Ｒ４またはＲ５の１つのみが水素であってもよい）であり；
ＺPは、
メチル、
エチル、
ｎ−プロピル、
１−メチルエチル、
１−メチルプロピル、
２−メチルプロピル、
１，１−ジメチルエチル、
１，１−ジメチルプロピル、
１，２−ジメチルプロピル、
２，２−ジメチルプロピル、
１−ヒドロキシ−２，２−ジメチルプロピル、
１−ヒドロキシ−１，２，２−トリメチルプロピル、
２−ヒドロキシ−２−メチルブトキシ、
２−ヒドロキシ−２−エチルブトキシ、
２−ヒドロキシ−２−エチル−３−メチルブトキシ、
２−ヒドロキシ−２−メチル−３−メチルブトキシ、
２−ヒドロキシ−１，３，３−トリメチルブトキシ、
２−ヒドロキシ−１−エチル−３，３−ジメチルブトキシ、
２−ヒドロキシ−１，２−ジエチルブトキシ
２−ヒドロキシ−２−エチル−１−メチルブトキシ、
３−メチル−３−ヒドロキシペンチル、
３−メチル−３−ヒドロキシペンテニル、
３−メチル−３−ヒドロキシペンチニル、
３−エチル−３−ヒドロキシペンチル、
３−エチル−３−ヒドロキシペンテニル、
３−エチル−３−ヒドロキシペンチニル、
３−エチル−３−ヒドロキシ−４−メチルペンチル、
３−エチル−３−ヒドロキシ−４−メチルペンテニル、
３−エチル−３−ヒドロキシ−４−メチルペンチニル、
３−プロピル−３−ヒドロキシペンチル、
３−プロピル−３−ヒドロキシペンテニル、
３−プロピル−３−ヒドロキシペンチニル、
１−ヒドロキシ−２−メチル−１−（メチルエチル）プロピル、
１−ヒドロキシシクロペンテニル、
１−ヒドロキシシクロヘキセニル、
１−ヒドロキシシクロヘプテニル、
１−ヒドロキシシクロオクテニル、
１−ヒドロキシシクロプロピル、
１−ヒドロキシシクロブチル、
１−ヒドロキシシクロペンチル、
１−ヒドロキシシクロヘキシル、
１−ヒドロキシシクロヘプチル、または
１−ヒドロキシシクロオクチルである］
で表される化合物、またはその製薬的に許容可能な塩誘導体。
【請求項２】
ＺPが、１，１−ジメチルエチル、１，２−ジメチルプロピル、２，２−ジメチルプロピル、１−ヒドロキシ−２，２−ジメチルプロピル、または１−ヒドロキシ−１，２，２−トリメチルプロピルであって、（Ｌ1）、（Ｌ2）、（Ｌ3）が全て結合であり；
ＺFが、
−Ｃ（Ｏ）ＮＨＭｅ、
−Ｃ（Ｏ）ＮＨＥｔ、
−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ｉＰｒ）、
−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ｔＢｕ）、
−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＦ3）、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｍｅ）2、
−Ｃ（Ｏ）ＮＭｅＥｔ、
−Ｃ（Ｏ）ＮＭｅ（ｉＰｒ）、
−Ｃ（Ｏ）ＮＭｅ（ｔＢｕ）、
−Ｃ（Ｏ）ＮＭｅ（ＣＦ3）、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｍｅ）Ｆ、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｅｔ）Ｆ、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ｉＰｒ）Ｆ、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ｔＢｕ）Ｆ、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｅｔ）2、または
−Ｃ（Ｏ）ＮＥｔ（ｉＰｒ）から選択され；
ＺFが、
【化４】
2007512326.tif 000067
である化合物、またはその製薬的に許容可能な塩またはプロドラッグである、請求項１の化合物。
【請求項３】
ＺFが、
−Ｃ（Ｏ）ＮＨＭｅ、
−Ｃ（Ｏ）ＮＨＥｔ、
−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ｉＰｒ）、
−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ｔＢｕ）、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｍｅ）2、
−Ｃ（Ｏ）ＮＭｅＥｔ、
−Ｃ（Ｏ）ＮＭｅ（ｉＰｒ）、
−Ｃ（Ｏ）ＮＭｅ（ｔＢｕ）、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｅｔ）2、または
−Ｃ（Ｏ）ＮＥｔ（ｉＰｒ）から選択される化合物、またはその製薬的に許容可能な塩またはプロドラッグである、請求項２の化合物。
【請求項４】
以下の式Ａ〜Ｊ
【化５】
2007512326.tif 000068
【化６】
2007512326.tif 000069
【化７】
2007512326.tif 000070
によって表される化合物、またはその製薬的に許容可能な塩またはエステルプロドラッグ誘導体。
【請求項５】
ナトリウム塩またはカリウム塩である、請求項１〜４のいずれかに記載の化合物の塩。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれか１つの化合物と、製薬的に許容可能な担体または希釈剤を含有して成る医薬製剤。
【請求項７】
成分（Ａ１）：請求項１〜４のビタミンＤ受容体調節物質；
成分（Ｂ１）：以下のものから成るグループから選択される、１以上の共薬剤：
ａ．エストロゲン、
ｂ．アンドロゲン、
ｃ．カルシウムサプリメント、
ｄ．ビタミンＤ代謝物、
ｅ．チアジド利尿薬、
ｆ．カルシトニン、
ｇ．ビスフォスフォネート、
ｈ．ＳＥＲＭＳ、および
Ｉ．フッ化物；および
成分（Ｃ１）：所望により、担体または希釈剤、
を含む、骨粗鬆症治療のための製剤。
【請求項８】
（Ａ１）対（Ｂ１）の重量比が１０：１〜１：１０００である、請求項７の製剤。
【請求項９】
成分（Ａ２）：請求項１〜４のビタミンＤ受容体調節物質；
成分（Ｂ２）：以下のものから成るグループから選択される、乾癬の治療のための１以上の慣用の共薬剤：
ａ．局所用グルココルチコイド、
ｂ．サリチル酸、
ｃ．未精製コールタール；および、
成分（Ｃ２）：所望により、担体または希釈剤
を含む、乾癬治療のための製剤。
【請求項１０】
（Ａ２）対（Ｂ２）の重量比が、１：１０〜１：１０００００である、請求項９の製剤。
【請求項１１】
請求項１または２または３に記載の少なくとも１つの化合物の医薬的に効果的な量を投与することを含む、にきび、光線性角化症、脱毛症、アルツハイマー病、無重力状態での骨の維持、骨折の治療、乳ガン、ガンの化学予防、クローン病、結腸ガン、Ｉ型糖尿病、拒絶反応、高カルシウム血症、ＩＩ型糖尿病、白血病、多発性硬化症、骨髄異形成症候群、不十分な皮脂分泌、骨軟化症、骨粗鬆症、不十分な真皮の堅さ、不十分な真皮の加湿、乾癬性関節炎、前立腺ガン、乾癬、腎性骨ジストロフィー、リウマチ様関節炎、強皮症、皮膚ガン、全身性エリテマトーデス、マスタード発疱薬による皮膚細胞の損傷、潰瘍性大腸炎、白斑、または皺の病理学的な影響を軽減しまたは予防するための、ほ乳類を処置する方法。
【請求項１２】
乾癬の治療のための請求項１１の方法。
【請求項１３】
骨粗鬆症の治療のための請求項１１の方法。
【請求項１４】
マスタード発疱薬による皮膚細胞の損傷を予防または軽減するためにほ乳類を治療する請求項１１の方法。
【請求項１５】
請求項１〜４のいずれかに記載の少なくとも１つの化合物の医薬的に効果的な量を投与することを含む、良性前立腺肥大症または膀胱ガンの病理学的な影響を軽減しまたは予防するための、ほ乳類を治療する方法。
【請求項１６】
請求項１〜４に記載の化合物の医薬的に効果的な量を、それを必要とするほ乳類に投与する、ビタミンＤ受容体によって仲介される病的状態を治療または予防する方法。
【請求項１７】
にきび、光線性角化症、脱毛症、アルツハイマー病、無重力状態での骨の維持、骨折の治療、乳ガン、ガンの化学予防、クローン病、結腸ガン、Ｉ型糖尿病、拒絶反応、高カルシウム血症、ＩＩ型糖尿病、白血病、多発性硬化症、骨髄異形成症候群、不十分な皮脂分泌、骨軟化症、骨粗鬆症、不十分な真皮の堅さ、不十分な真皮の加湿、乾癬性関節炎、前立腺ガン、乾癬、腎性骨ジストロフィー、リウマチ様関節炎、強皮症、皮膚ガン、全身性エリテマトーデス、マスタード発疱薬による皮膚細胞の損傷、潰瘍性大腸炎、白斑、または皺の病理学的な影響を予防または軽減するためのほ乳類を処置において使用するための、請求項１〜４のいずれかに記載の化合物。
【請求項１８】
良性前立腺肥大症または膀胱ガンの病理学的な影響を予防または軽減するためのほ乳類の処置において使用するための、請求項１〜４のいずれかに記載の化合物。
【請求項１９】
ビタミンＤ受容体によって仲介される病的状態の治療または予防に使用するための、請求項１〜４のいずれかに記載の化合物。
【請求項２０】
実施例のいずれかを参照して明細書中に実質的に記載された、請求項１に記載の化合物。
【請求項２１】
実施例のいずれかを参照して明細書中に実質的に記載された、請求項１記載の化合物の製造方法。
【請求項２２】
分析法および表のいずれかを参照して明細書中に実質的に記載された、ビタミンＤ受容体を仲介するための請求項１記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の背景）
ビタミンＤ3受容体（ＶＤＲ）は、核ホルモン受容体のスーパーファミリーに属するリガンド依存性転写因子の一つである。ＶＤＲタンパク質は、４２７アミノ酸であり、約５０ｋＤａの分子量を有する。ＶＤＲのリガンドである、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3（ビタミンＤのホルモン様活性形態）は、ビタミンＤ受容体（“ＶＤＲ”）として知られる核受容体との相互作用によって仲介される作用を有する。ＶＤＲリガンドである１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3（１α，２５（ＯＨ）2Ｄ3）は、カルシウムとリン酸のホメオスタシスに関連する、また関連しない、両方の幅広い様々な組織と細胞に作用する。
【０００２】
１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3（１α，２５（ＯＨ）2Ｄ3）の様々な系における活性は、幅広い臨床上の応用を示唆する。しかしながら、従来のＶＤＲリガンドの使用は、それらに付属する毒性、すなわち抗カルシウム血症（血清カルシウムの上昇）によって、妨げられる。現在、ロカルトロール（登録商標）という名の医薬（ホフマン−ラ  ロシュの製品）として市場に売り出されている１α，２５（ＯＨ）2Ｄ3は、低カルシウム血症を治療するために、慢性的に腎臓透析を受けている腎臓疾患の患者に対して、および結果的に代謝性骨疾患となった患者に対して投与されている。カルシポトリオール（登録商標）（１α，２５（ＯＨ）2Ｄ3の合成アナログ）のような他の治療薬は、ＶＤＲへの結合親和性と、高カルシウム活性との分離の増大を示す。
【０００３】
近年、１α，２５（ＯＨ）2Ｄ3の化学修飾が、カルシウム流動化効果を減少させるアナログを生産した（Ｒ．Ｂｏｕｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｒｅｖ．１９９５，１６，２００−２５７）。そのようなアナログの一つ、ドボネックス（登録商標）医薬（ブリストル−マイヤーズ  スキッブ社の製品）は、軽度から中程度の乾癬のための原則的な治療として、ヨーロッパやアメリカにおいて、現在使われている（Ｋ．Ｋｒａｇｂａｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１９８８，１１９，２２３−２３０）。
【０００４】
他のビタミンＤ3模倣体は、Ｎａｇｐａｌ，Ｓ．；Ｌｕ，Ｊ．；Ｂｏｅｈｍ，Ｍ．Ｆ．，Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００１，８，１６６１−１６７９による、ビタミンＤアナログ：治療への応用の作用のメカニズム、という文献に記載されている。
【背景技術】
【０００５】
有益な作用とカルシウム上昇（カルシウム血）効果との間の、ある程度の分離は、これらのＶＤＲリガンドとともにもたらされているが、現在までに、その分離は、骨粗鬆症、ガン、白血病、および酷い乾癬などの状況を治療するための、経口投与を可能にするには不十分である。
【０００６】
高カルシウム血症がない場合に、ＶＤＲを介した生物学的効果の恩恵を受けることができる病気の主要なクラスの一つの例は、骨粗鬆症である。骨粗鬆症は、骨量の減少、骨のもろさを導く骨組織の微小構造的な変性、および腰、背骨、手首の骨折の感受性の増加、などによって特徴づけられる、全身性の病気である（世界保健機関  ＷＨＯ  １９９４）。骨粗鬆症は、アメリカ、ヨーロッパおよび日本において、推定７，５００万人の人々に影響している。
【０００７】
過去２、３年以内に、いくつかの再吸収抑制治療が導入された。これらは、ビスフォスフォネート、ホルモン補充療法（ＨＲＴ）、選択的エストロゲン受容体調節物質（ＳＥＲＭ）、およびカルシトニンを含む。これらの治療は、骨の再吸収、骨の形成を減らし、骨密度を増やす。しかしながら、これらの治療の中で、真に骨の量を増加させ、または失った骨構造を回復させるものはない。
【０００８】
高カルシウム血性を減少させる能力を持つ、合成ビタミンＤ受容体（ＶＤＲ）リガンドが合成された。例えば、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3を模倣する、提示されたビスフェニル化合物のクラスが、アメリカ特許番号６，２１８，４３０と、Ｍａｒｃｕｓ  Ｆ．Ｂｏｅｈｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １９９９，Ｖｏｌ  ６，Ｎｏ．５，ｐｇｓ．２６５−２７５による論文；“新規非セコステロイド性ビタミンＤ模倣体は、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3よりカルシウム流動化が少ないＶＤＲ調節活性を発揮する”に記載されている。
【０００９】
骨形成を刺激し、骨の質を回復し、高カルシウム血症の結果として伴う不利のない他の病気の治療のための、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3を模倣する、別の、または改良された医薬を用いる、改良された治療法の必要性が依然としてある。
【００１０】
（発明の要旨）
式“（Ａ）”の核を有する新規化合物が、ビタミンＤ受容体（ＶＤＲ）調節物質として効果的であることが見出された。
【化１】
2007512326.tif 000002
【００１１】
ＶＤＲ調節活性を有する本発明化合物は、式（Ｉ）によって表される。
【化２】
2007512326.tif 000003
【００１２】
ここで、変更可能なＲ、Ｒ’、ＲP、ＲP’、Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3、ＺP、ＲF、ＬFおよびＺFは、下記の通りに定義される。発明者は、ここに記載された化合物が、減少したカルシウム流動性（高カルシウム血性）効果とともに、１α，２５（ＯＨ）2Ｄ3の価値のある細胞分化、および抗増殖性効果を示すことを発見した。
【００１３】
別の側面では、本発明は、医薬的に許容できる担体および／または補助的な試薬と組んで、単独でまたは組み合わせて、医薬的に効果的な量の式Ｉの化合物、または医薬的に許容できる塩またはプロドラッグを含む、医薬的組成物を目的としている。
【００１４】
本発明のもう一つの側面は、式Ｉの化合物を調製するために適切な、新規な化学的中間体である。
【００１５】
本発明のもう一つの側面は、ビタミンＤ受容体リガンドに対して応答性である病気の状態を治療する、または妨げるための、本発明化合物の使用である。
【００１６】
本発明のもう一つの側面は、医薬的に効果的な量の式Ｉの化合物を、それを必要とするほ乳類へ投与することにより、にきび、光線性角化症、脱毛症、アルツハイマー病、良性前立腺肥大症、膀胱ガン、無重力状態での骨の維持、骨折の治療、乳ガン、ガンの化学予防、クローン病、結腸ガン、Ｉ型糖尿病、拒絶反応、高カルシウム血症、ＩＩ型糖尿病、白血病、多発性硬化症、骨髄異形成症候群、不十分な皮脂分泌、骨軟化症、骨粗鬆症、不十分な真皮の堅さ、不十分な真皮の加湿、乾癬性関節炎、前立腺ガン、乾癬、腎性骨ジストロフィー、リウマチ様関節炎、強皮症、皮膚ガン、全身性エリテマトーデス、マスタード発疱薬による皮膚細胞の損傷、潰瘍性大腸炎、白斑、または皺などの予防および治療である。
【００１７】
本発明のもう一つの側面は、ビタミンＤ受容体によって仲介される病気の状態を治療または予防するための、式Ｉの化合物の使用である。
【００１８】
（発明の詳細な記載）
Ｉ．定義
“接着”という用語は、炎症のプロセスの結果として生じる、新たな繊維状の組織の形成による、通常は分離した表面の異常な結合を意味する。
【００１９】
“膿瘍”という用語は、被包性の細菌、リンパ球、マクロファージなどに由来する膿瘍形成に対して、宿主に感染しやすくさせる、外科、外傷、または病気にしばしば関連する合併症を意味する。
【００２０】
“アルケニル”という用語は、例えば、ビニル、１−プロペニル、および１−シクロヘキセニルなどの、結合の位置が炭素−炭素二重結合のところにある脂肪族官能基を意味する。アルケニル基は、直鎖、分枝鎖、環状、またはその組み合わせでもよく、および所望により置換されていてもよい。適切なアルケニル基は、２から約２０の炭素原子を有する。
【００２１】
“アルコキシ”という用語は、Ｒが所望により置換されていてもよい脂肪族または芳香族官能基である、−ＯＲを意味する。メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、およびフェノキシなどが、アルコキシ基の例である。
【００２２】
“アルキル”という用語は、直鎖、分枝鎖、環状、およびそのいずれかの組み合わせを含む、飽和脂肪族官能基を意味する。アルキル基は、さらに“一級”、“二級”、および“三級”アルキル基に分けられる。一級アルキル基では、結合の炭素原子が、ゼロ（メチル）または１つの有機ラジカルで置換されている。二級アルキル基では、結合の炭素原子が２つの有機ラジカルで置換されている。三級アルキル基では、結合の炭素原子が３つの有機ラジカルで置換されている。
【００２３】
“シクロアルキル”という用語は、シクロプロパニル、シクロブタニル、およびシクロペンチルなどの有機ラジカルを含む。
【００２４】
“シクロアルケニル”という用語は、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、およびシクロヘキセニルなどの有機ラジカルを含む。
【００２５】
“Ｃ1−Ｃ5フルオロアルキル”という用語は、フッ素を含むアルキル基を意味し、−ＣＦ3、−ＣＨＦ2、−ＣＨ2Ｆ、−ＣＦ2ＣＦ3、−ＣＨＦＣＦ3、−ＣＨ2ＣＦ3、−ＣＨ2ＣＨＦ2、−ＣＨ2ＣＨ2Ｆなどの有機ラジカルを含み、−ＣＦ3がより好ましい。
【００２６】
“活性成分”という用語は、（ｉ）式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、（ｉｉ）本発明に提示されたいずれかの例の生成物、または（ｉｉｉ）Table １、２、３、または４のいずれかの列によって同定される化合物；または塩または先の化合物のプロドラッグ誘導体、のいずれかによって代表される本発明化合物を意味する。
【００２７】
“カルボキサミド”という用語は、以下の式：
【化３】
2007512326.tif 000004
（ここで、Ｒ４とＲ５は、それぞれ独立して、水素、Ｃ1−Ｃ4アルキル、−Ｏ−Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ2−Ｃ4アルケニル、Ｃ２−Ｃ4アルキニル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、−ＮＨ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）、またはシクロプロピルであり、但しＲ４またはＲ５のうちの１つのみが水素であってよい）
で示される基を意味する。
【００２８】
略語“Ｍｅ”はメチルを意味する。
【００２９】
略語“Ｅｔ”はエチルを意味する。
【００３０】
略語“ｉＰｒ”は１−メチルエチルを意味する。
【００３１】
略語“ｔＢｕ”は１，１−ジメチルエチルを意味する。
【００３２】
符号“−（ＣＨ２）２−”は、−ＣＨ2−ＣＨ2−と同意義である。
【００３３】
いずれかの構造式中の１価の符号“−Ｏ”は、ヒドロキシル基（−ＯＨ）である。
【００３４】
“Ｃ1-3アルキル”という用語は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、およびイソプロピルから選択されるアルキル基を意味する。
【００３５】
“分枝したＣ3−Ｃ5アルキル”という用語は、１−メチルエチル；１−メチルプロピル；２−メチルプロピル；１，１−ジメチルエチル；１，１−ジメチルプロピル；１，２−ジメチルプロピル；または２，２−ジメチルプロピルから選択されるアルキル基である。好ましい分枝したＣ3―Ｃ5アルキル基は、２−メチルプロピル、および１，１−ジメチルエチルであり、１，１−ジメチルエチル基が最も好ましい。
【００３６】
“アルケニル”という用語は、結合の位置が炭素−炭素二重結合、例えばビニル、１−プロペニル、および１−シクロヘキセニルである、脂肪族官能基を意味する。アルケニル基は、直鎖、分枝鎖、環状、またはその組み合わせであり、および所望により置換されていてもよい。適切なアルケニル基は、２から約２０の炭素原子を有する。
【００３７】
“Ｃ1−Ｃ5アルキル”という用語は、直鎖、分枝鎖、および環状、およびそのいずれかの組み合わせを含む、飽和の脂肪族官能基を意味する。アルキル基は、さらに“一級”、“二級”および“三級”アルキル基に分けられる。一級アルキル基では、結合の炭素原子が、ゼロ（メチル）または１つの有機ラジカルで置換されている。二級アルキル基では、結合の炭素原子が、２つの有機ラジカルで置換されている。三級アルキル基では、結合の炭素原子が３つの有機ラジカルで置換されている。Ｃ1−Ｃ5アルキル基の例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、１−メチルエチル；ｎ−ブチル、１−メチルプロピル、２−メチルプロピル；１，１−ジメチルエチル；ｎ−アミル、１，１−ジメチルプロピル；１，２−ジメチルプロピル；および２，２−ジメチルプロピルである。
【００３８】
“シクロアルキル”という用語は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルなどの有機ラジカルを含む。
【００３９】
“シクロアルケニル”という用語は、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、およびシクロヘキセニルなどの有機ラジカルを含む。
【００４０】
“Ｃ1−Ｃ5フルオロアルキル”という用語は、フッ素を含むアルキル基を意味し、−ＣＦ3、−ＣＨＦ2、−ＣＨ2Ｆ、−ＣＦ2ＣＦ3、−ＣＨＦＣＦ3、−ＣＨ2ＣＦ3、−ＣＨ2ＣＨＦ2、−ＣＨ2ＣＨ2Ｆなどの有機ラジカルを含み、−ＣＦ3がより好ましい。
【００４１】
略語“Ｍｅ”はメチルを意味する。
【００４２】
略語“Ｅｔ”はエチルを意味する。
【００４３】
略語“ｉＰｒ”は１−メチルエチルを意味する。
【００４４】
略語“ｔＢｕ”は１，１−ジメチルエチルを意味する。
【００４５】
“末端ヒドロキシアルキル”という用語は、
３−メチル−３−ヒドロキシペンチル、
３−メチル−３−ヒドロキシペンテニル、
３−メチル−３−ヒドロキシペンチニル、
３−エチル−３−ヒドロキシペンチル、
３−エチル−３−ヒドロキシペンテニル、
３−エチル−３−ヒドロキシペンチニル、
３−エチル−３−ヒドロキシ−４−メチルペンチル、
３−エチル−３−ヒドロキシ−４−メチルペンテニル、
３−エチル−３−ヒドロキシ−４−メチルペンチニル、
３−プロピル−３−ヒドロキシペンチル、
３−プロピル−３−ヒドロキシペンテニル、
３−プロピル−３−ヒドロキシペンチニル、
１−ヒドロキシ−２−メチル−１−（メチルエチル）プロピル、
１−ヒドロキシ−２，２−ジメチルプロピル、
１−ヒドロキシ−１，２，２−トリメチルプロピル、
１−ヒドロキシシクロアルケニル、および
１−ヒドロキシシクロアルキル、
から選択される官能基を意味する。
【００４６】
“３−メチル−３−ヒドロキシペンチル”という用語は、下記の構造式を持つラジカルを意味する：
【化４】
2007512326.tif 000005
【００４７】
“３−メチル−３−ヒドロキシペンテニル”という用語は、下記の構造式を持つラジカル（シスとトランス異性体両方）を意味する：
【化５】
2007512326.tif 000006
【００４８】
“３−メチル−３−ヒドロキシペンチニル”という用語は、下記の構造式を持つラジカルを意味する：
【化６】
2007512326.tif 000007
【００４９】
“３−エチル−３−ヒドロキシペンチル”という用語は、下記の構造式を持つラジカルを意味する：
【化７】
2007512326.tif 000008
【００５０】
“３−エチル−３−ヒドロキシペンテニル”という用語は、下記の構造式を持つラジカルを意味する：
【化８】
2007512326.tif 000009
【００５１】
“３−エチル−３−ヒドロキシペンチニル”という用語は、下記の構造式を持つラジカルを意味する：
【化９】
2007512326.tif 000010
【００５２】
“３−プロピル−３−ヒドロキシペンチル”という用語は、下記の構造式を持つラジカルを意味する：
【化１０】
2007512326.tif 000011
【００５３】
“３−プロピル−３−ヒドロキシペンテニル”という用語は、下記の構造式を持つラジカルを意味する：
【化１１】
2007512326.tif 000012
【００５４】
“３−プロピル−３−ヒドロキシペンチニル”という用語は、下記の構造式を持つラジカルを意味する：
【化１２】
2007512326.tif 000013
【００５５】
“３−エチル−３−ヒドロキシ−４−メチルペンチル”という用語は、下記の構造式を持つラジカルを意味する：
【化１３】
2007512326.tif 000014
【００５６】
“３−エチル−３−ヒドロキシ−４−メチルペンテニル”という用語は、下記の構造式を持つラジカルを意味する：
【化１４】
2007512326.tif 000015
【００５７】
“３−エチル−３−ヒドロキシ−４−メチルペンチニル”という用語は、下記の構造式を持つラジカルを意味する：
【化１５】
2007512326.tif 000016
【００５８】
“１−ヒドロキシ−２−メチル−１−（メチルエチル）プロピル”という用語は、下記の構造式を持つラジカルを意味する：
【化１６】
2007512326.tif 000017
【００５９】
“１−ヒドロキシ−２，２−ジメチルプロピル”という用語は、下記の構造式を持つラジカルを意味する：
【化１７】
2007512326.tif 000018
【００６０】
“１−ヒドロキシ−１，２，２−トリメチルプロピル”という用語は、下記の構造式を持つラジカルを意味する：
【化１８】
2007512326.tif 000019
【００６１】
“１−ヒドロキシシクロアルケニル”という用語は、１−ヒドロキシシクロペンテニル、１−ヒドロキシシクロヘキセニル、１−ヒドロキシシクロヘプテニル、または１−ヒドロキシシクロオクテニルから選択されるラジカルを意味する。
【００６２】
“ヒドロキシシクロアルキル”という用語は、下記の一般的な構造式を持つラジカルを意味する：
【化１９】
2007512326.tif 000020
ここで、ｗは１から６の整数であり、ヒドロキシラジカルが環のいずれかの炭素原子上に置換されている。
【００６３】
“１−ヒドロキシシクロアルキル”という用語は、下記の一般的な構造式を持つラジカルを意味する：
【化２０】
2007512326.tif 000021
１−ヒドロキシシクロアルキルラジカルの例は、１−ヒドロキシシクロプロピル、１−ヒドロキシシクロブチル、１−ヒドロキシシクロペンチル、１−ヒドロキシシクロヘキシル、１−ヒドロキシシクロヘプチル、１−ヒドロキシシクロオクチル、である。
【００６４】
略語“Ｍｅ”はメチルを意味する。
【００６５】
略語“Ｅｔ”はエチルを意味する。
【００６６】
略語“ｉＰｒ”は１−メチルエチルを意味する。
【００６７】
略語“ｎＰｒ”はｎ−プロピルを意味する。
【００６８】
略語“３Ｍｅ３ＯＨ−Ｐｅｎｔｙｌ”は３−メチル−３−ヒドロキシペンチルを意味する。
【００６９】
略語“３Ｍｅ３ＯＨ−Ｐｅｎｔｅｎｙｌ”は３−メチル−３−ヒドロキシペンテニルを意味する。
【００７０】
略語“３Ｍｅ３ＯＨ−Ｐｅｎｔｙｎｙｌ”は３−メチル−３−ヒドロキシペンチニルを意味する。
【００７１】
略語“３Ｅｔ３ＯＨ−Ｐｅｎｔｙｌ”は３−エチル−３−ヒドロキシペンチルを意味する。
【００７２】
略語“３Ｅｔ３ＯＨ−Ｐｅｎｔｅｎｙｌ”は３−エチル−３−ヒドロキシペンテニルを意味する。
【００７３】
略語“３Ｅｔ３ＯＨ−Ｐｅｎｔｙｎｙｌ”は３−エチル−３−ヒドロキシペンチニルを意味する。
【００７４】
略語“３Ｐｒ３ＯＨ−Ｐｅｎｔｙｌ”は３−プロピル−３−ヒドロキシペンチルを意味する。
【００７５】
略語“３Ｐｒ３ＯＨ−Ｐｅｎｔｅｎｙｌ”は３−プロピル−３−ヒドロキシペンテニルを意味する。
【００７６】
略語“３Ｐｒ３ＯＨ−Ｐｅｎｔｙｎｙｌ”は３−プロピル−３−ヒドロキシペンチニルを意味する。
【００７７】
略語“３Ｅｔ３ＯＨ４Ｍｅ−Ｐｅｎｔｙｌ”は３−エチル−３−ヒドロキシ−４−メチルペンチルを意味する。
【００７８】
略語“３Ｅｔ３ＯＨ４Ｍｅ−Ｐｅｎｔｅｎｙｌ”は３−エチル−３−ヒドロキシ−４−メチルペンテニルを意味する。
【００７９】
略語“３Ｅｔ３ＯＨ４Ｍｅ−Ｐｅｎｔｙｎｙｌ”は３−エチル−３−ヒドロキシ−４−メチルペンチニルを意味する。
【００８０】
略語“１ＯＨ２Ｍｅ１ＭｅＥｔ−Ｐｒｏｐｙｌ”は１−ヒドロキシ−２−メチル−１−（メチルエチル）プロピルを意味する。
【００８１】
“Ｃ1−Ｃ5アルキル”という用語は、以下のものから成る官能基から選択されるアルキル置換基を意味する：メチル；エチル；プロピル；１−メチルエチル；１−メチルプロピル；２−メチルプロピル；１，１−ジメチルエチル；１，１−ジメチルプロピル；１，２−ジメチルプロピル；および２，２−ジメチルプロピル。好ましい官能基は、２−メチルプロピルと１，１−ジメチルエチルであり、１，１−ジメチルエチル基が最も好ましい。
【００８２】
結合を表している実線に交差している点線記号
【化２１】
2007512326.tif 000022
は、その記号の付いた結合が、他の構造との結合の位置であることを意味している。
【００８３】
“ほ乳類”という用語は、人間を含んでいる。
【００８４】
“ハロ”という用語は、フッ素、塩素、臭素、およびヨウ素を意味する。
【００８５】
“製薬的に許容可能な塩”という用語は、例えばナトリウムやカリウムなどの、治療用の化合物に従来から使われた、無毒な陰イオンまたは陽イオンを意味する。
【００８６】
本発明化合物：
本発明化合物は、式Ｉ：
【化２２】
2007512326.tif 000023
［ここで、
ＲとＲ’は、独立にＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4フルオロアルキル、またはＲとＲ’一緒に３から８の炭素原子を有する置換または非置換の飽和または不飽和の炭素環を形成し；
ＲP、ＲP’およびＲFは独立に、水素、ハロ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ2−Ｃ4アルケニル、Ｃ2−Ｃ4アルキニル、Ｃ1−Ｃ4フルオロアルキル、−Ｏ−Ｃ1−Ｃ4アルキル、−Ｓ−Ｃ1−Ｃ4アルキル、−Ｏ−Ｃ1−Ｃ4フルオロアルキル、−ＣＮ、−ＮＯ2、アセチル、−Ｓ−Ｃ1−Ｃ4フルオロアルキル、Ｃ2−Ｃ4アルケニル、Ｃ3−Ｃ4シクロアルキル、およびＣ3−Ｃ4シクロアルケニルから成るグループから選択され；
（Ｌ1）、（Ｌ2）、（Ｌ3）、および（ＬF）は、
【化２３】
2007512326.tif 000024
から成るグループから独立に選択される二価の結合基であり、ここで、Ｒ４０はそれぞれ独立に、水素、Ｃ1−Ｃ5アルキル、またはＣ1−Ｃ5フルオロアルキルであり；
Ｘ１は、Ｏ、ＣＨ２、または［Ｈ，ＯＨ］であり；
ＺFは、
【化２４】
2007512326.tif 000025
（ここで、Ｒ４とＲ５は、独立に、水素、Ｃ1−Ｃ4アルキル、−Ｏ−Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ2−Ｃ4アルケニル、Ｃ2−Ｃ4アルキニル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、−ＮＨ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）、またはシクロプロピルであり、Ｒ４またはＲ５の１つのみが水素であってもよい）であり；
ＺPは、
メチル、
エチル、
ｎ−プロピル、
１−メチルエチル、
１−メチルプロピル、
２−メチルプロピル、
１，１−ジメチルエチル、
１，１−ジメチルプロピル、
１，２−ジメチルプロピル、
２，２−ジメチルプロピル、
１−ヒドロキシ−２，２−ジメチルプロピル、
１−ヒドロキシ−１，２，２−トリメチルプロピル、
２−ヒドロキシ−２−メチルブトキシ、
２−ヒドロキシ−２−エチルブトキシ、
２−ヒドロキシ−２−エチル−３−メチルブトキシ、
２−ヒドロキシ−２−メチル−３−メチルブトキシ、
２−ヒドロキシ−１，３，３−トリメチルブトキシ、
２−ヒドロキシ−１−エチル−３，３−ジメチルブトキシ、
２−ヒドロキシ−１，２−ジエチルブトキシ
２−ヒドロキシ−２−エチル−１−メチルブトキシ、
３−メチル−３−ヒドロキシペンチル、
３−メチル−３−ヒドロキシペンテニル、
３−メチル−３−ヒドロキシペンチニル、
３−エチル−３−ヒドロキシペンチル、
３−エチル−３−ヒドロキシペンテニル、
３−エチル−３−ヒドロキシペンチニル、
３−エチル−３−ヒドロキシ−４−メチルペンチル、
３−エチル−３−ヒドロキシ−４−メチルペンテニル、
３−エチル−３−ヒドロキシ−４−メチルペンチニル、
３−プロピル−３−ヒドロキシペンチル、
３−プロピル−３−ヒドロキシペンテニル、
３−プロピル−３−ヒドロキシペンチニル、
１−ヒドロキシ−２−メチル−１−（メチルエチル）プロピル、
１−ヒドロキシシクロペンテニル、
１−ヒドロキシシクロヘキセニル、
１−ヒドロキシシクロヘプテニル、
１−ヒドロキシシクロオクテニル、
１−ヒドロキシシクロプロピル、
１−ヒドロキシシクロブチル、
１−ヒドロキシシクロペンチル、
１−ヒドロキシシクロヘキシル、
１−ヒドロキシシクロヘプチル、または
１−ヒドロキシシクロオクチルである］
で表されるビタミンＤ受容体調節物質またはその製薬的に許容し得る塩またはプロドラッグ誘導体である。
【００８７】
本発明の好ましい化合物は、ＺPが、１，１−ジメチルエチル、１，２−ジメチルプロピル、２，２−ジメチルプロピル、１−ヒドロキシ−２，２−ジメチルプロピル、および１−ヒドロキシ−１，２，２−トリメチルプロピルであって、（Ｌ1）、（Ｌ2）、（Ｌ3）が全て結合である（すなわち、ＺPが、核となる構造のフェニル環に直接結合している）ものである。
【００８８】
好ましい化合物は、
−Ｃ（Ｏ）ＮＨＭｅ、
−Ｃ（Ｏ）ＮＨＥｔ、
−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ｉＰｒ）、
−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ｔＢｕ）、
−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＦ3）、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｍｅ）2、
−Ｃ（Ｏ）ＮＭｅＥｔ、
−Ｃ（Ｏ）ＮＭｅ（ｉＰｒ）、
−Ｃ（Ｏ）ＮＭｅ（ｔＢｕ）、
−Ｃ（Ｏ）ＮＭｅ（ＣＦ3）、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｍｅ）Ｆ、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｅｔ）Ｆ、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ｉＰｒ）Ｆ、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ｔＢｕ）Ｆ、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｅｔ）2、
−Ｃ（Ｏ）ＮＥｔ（ｉＰｒ）または、
−Ｃ（Ｏ）ＮＥｔ（ｔＢｕ）から選択されたＺFを有するものである。
【００８９】
他の好ましい化合物は、
−Ｃ（Ｏ）ＮＨＭｅ、
−Ｃ（Ｏ）ＮＨＥｔ、
−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ｉＰｒ）、
−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ｔＢｕ）、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｍｅ）2、
−Ｃ（Ｏ）ＮＭｅＥｔ、
−Ｃ（Ｏ）ＮＭｅ（ｉＰｒ）、
−Ｃ（Ｏ）ＮＭｅ（ｔＢｕ）、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｅｔ）2、
−Ｃ（Ｏ）ＮＥｔ（ｉＰｒ）または、
−Ｃ（Ｏ）ＮＥｔ（ｔＢｕ）から選択されたＺFを有するものである。
【００９０】
好ましいカルボキサミド基ＺFは、
【化２５】
2007512326.tif 000026
である。
【００９１】
本発明の好ましい化合物は、以下の式Ａ〜Ｋによって表される：
【化２６】
2007512326.tif 000027
【化２７】
2007512326.tif 000028
【化２８】
2007512326.tif 000029
【００９２】
（実施例）
一般的な実験条件：
出発原料／中間体は、別に示していなければ、先行する実験の中間体に由来する化合物である。
【００９３】
全ての反応は、別に示していなければ、窒素／アルゴン雰囲気下で、反応容器内で撹拌し、室温にて行った。
【００９４】
濃縮は、室温から約７０℃までで、真空下（０．０５から１ｍｍＨｇ）で行った。
【００９５】
別に示していなければ、ＭｇＳＯ4／Ｎａ2ＳＯ4で乾燥した有機層を、５から１５ｍの乾燥剤とともに溶液を撹拌し、濾過することによって乾燥剤を除き、無水の濾液が得られたものと定義する。
【００９６】
類似の多段階の反応手順については、収量は、最終段階のものか、示した多段階の全体のものとして与えられる。
【００９７】
溶液を、２５から７５℃の範囲で、減圧下で“濃縮”した。ｉｎ  ｖａｃｕｏ−２５−７５℃；０．０５から１ｍｍ
【００９８】
別に示していなければ、“残留物はクロマトグラフィーに付した”とは、混合産物の１０から１００の比率のシリカゲルを使用して、中程度の窒素圧力（フラッシュクロマトグラフィー）、または中圧クロマトグラフィーシステムを用いた、残留物のシリカゲルクロマトグラフィーとして定義する。
【００９９】
薄層クロマトグラフィーは、シリカゲルプレートで、ＵＶおよび／または適切な染色液を用いて行った。
【０１００】
ＮＭＲスペクトルは、３００または４００ＭＨｚの分光器を用いて得られた。
【０１０１】
ＮＭＲ−ＮＭＲスペクトルが同定した構造と一致していることを示す。
【０１０２】
ＨＲＭＳ−高分解能マススペクトル
【０１０３】
ＥＳ−ＭＳ−エレクトロスプレーマススペクトル
【０１０４】
略語：
Ａｑ−水溶性
ｄ−日
ｅｑ−当量
ｈ−時間
ｍ−分
ｓａｔｄ−飽和した
ｄｉｓｐ−分散
ｑｕａｎｔ−定量的な
ｒｔは保持時間を表す（ＲＴとの混同を最小化するために両方とも小文字にする）
ＲＴ−室温
【０１０５】
化学的定義：
ＢｎＢｒ−臭化ベンジル
ＣＨ２Ｃｌ２−ジクロロメタン
ＣＨ３ＣＮ−アセトニトリル
ＤＩＢＡｌＨ−水素化ジイソブチルアルミニウム
ＤＭＡＰ−４−（ジメチルアミノ）ピリジン
ＤＭＦ−Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ−ジメチルスルホキシド
ＤＰＰＢ−１，４−ビス（ジフェニルフォスフィノ）ブタン
ＤＰＰＦ−ジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルフォスフィノ）フェロセン
ＥＤＣＩ−３−エチル−１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］カルボジイミド塩酸塩
Ｅｔ３Ｎ−トリエチルアミン
ＥｔＭｇＢｒ−エチル臭化マグネシウム
ＥｔＯＡｃ−酢酸エチル
ＥｔＯＨ−エタノール
Ｈ２ＮＣＨ２ＣＯ２Ｍｅ−メチルグリシン
Ｈｅｐｔ−ヘプタン
Ｈｅｘ−ヘキサン
ＨＮ（ＯＭｅ）Ｍｅ−Ｎ−メチル−Ｏ−メチルヒドロキシルアミン
ＨＮＭｅ２−ジメチルアミン
ＨＡＴＵ−Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム
ＨＯＡＴ−７−アザ−１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＯＢＴ−１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
Ｋ２ＣＯ３−炭酸カリウム
ＫＯＨ−水酸化カリウム
ＬＡＨ−水素化リチウムアルミニウム
ＬＩＨＭＤＳ−リチウムヘキサメチルジシラジド
ｍＣＰＢＡ−メタクロロ過安息香酸
ＭｅＩ−臭化メチル
ＭｅＯＨ−メタノール
ＮａＢＨ４−水素化ホウ素ナトリウム
ＭｇＳＯ４−硫酸マグネシウム
ＮａＨ−水素化ナトリウム
ＮａＨＣＯ３−炭酸水素ナトリウム
ＮａＩ−臭化ナトリウム
Ｎａ２ＳＯ４−硫酸ナトリウム
ＮＨ４Ｃｌ−塩化アンモニウム
ＮＭＯ−４−メチルモルフォリン  Ｎ−オキシド
ＮＭＰ−Ｎ−メチルピロリジン−２−オン
Ｎａ−Ｓ−Ｒ３−アルキルメルカプチドナトリウム
ＰＢｒ３−三臭化リン
Ｐｄ（ＤＰＰＦ）−ジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルフォスフィノ）フェロセン］パラジウム
Ｐｄ（ＯＡｃ）２−酢酸（ＩＩ）パラジウム
Ｐｄ（ＴＰＰ）４−テトラキストリフェニルフォスフィンパラジウム
Ｐｄ−Ｃ−パラジウム炭素
（ＰｈＯ）２Ｐ（Ｏ）Ｎ３−ジフェニルリンアジド
ｐＴＳＡ−パラトルエンスルホン酸
Ｐｙｒ−ピリジン
Ｒｅｄ−Ａｌ−水素化ビス（２−メトキシエトキシ）アルミニウムナトリウム
Ｒ２ＭｇＢｒ−アルキル臭化マグネシウム
Ｒ３ＭｇＢｒ−アルキル臭化マグネシウム
Ｒ５ＭｇＢｒ−アルキル臭化マグネシウム
Ｒ２Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２−アルキルスルホンアミド
ＴＢＡＦ−フッ化テトラブチルアンモニウム
ＴＢＳＣｌ−塩化ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル
ｔＢｕＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｂｒ−１−ブロモピナコロン
Ｔｆ２Ｏ−トリフルオルメタンスルホン酸無水物
ＴＦＡ−トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ−テトラヒドロフラン
ＴＰＡＰ−過ルテニウム酸テトラプロピルアンモニウム
Ｚｎ（ＯＴｆ）２−トリフルオロメタンスルホン酸亜鉛
【０１０６】
本発明化合物−塩、立体異性体、およびプロドラッグ
式Ｉによって表された化合物の塩は、本発明のさらなる側面である。熟練した当業者はまた、式Ｉの化合物のファミリーが酸性または塩基性の要素を含んでいて、および本発明が、それの製薬的に許容可能な塩を含んでいるということを正しく評価するだろう。
【０１０７】
本発明化合物が酸性または塩基性の官能基を持つというそれらの実例において、様々な塩が、より水に溶けやすく、および元の化合物より生理的に適切であるものを形成するかもしれない。代表的な製薬的に許容可能な塩は、以下を含むがこれに限定されない、リチウム、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム、亜鉛、などといった、アルカリ、およびアルカリ土類の塩である。ナトリウムとカリウムの塩は、特に好ましい。塩は、酸を塩基とともに溶液中で処理することによって、または酸をイオン交換樹脂にさらすことによって、遊離型の酸から便利に調製される。例えば、式Ｉの化合物上のカルボキシル酸置換は、−ＣＯ2Ｈとして選択され、および塩は、相当するナトリウムおよびカリウム塩をもたらすために、適切な塩基（例えば、ＮａＯＨ、ＫＯＨ）との反応によって形成することができる。
【０１０８】
製薬的に許容可能な塩の定義のうちに含まれるのは、本発明化合物と塩を形成するのに十分な塩基性を持つ窒素を含んだ塩基に由来する、例えば、アンモニウム、四級アンモニウム、およびアミンカチオンなどの、相対的に無毒で、本発明化合物に無機または有機の塩基を添加してできた塩である（例えば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ，ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ，”Ｊ．Ｐｈａｒ．Ｓｃｉ．，６６：１−１９（１９９７）を参照）。さらに、本発明化合物の塩基性官能基は、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、重酒石酸塩、ホウ酸塩、臭化物、カンシル酸塩、炭酸塩、塩化物、コリン塩、クラブラン酸塩、クエン酸塩、塩化物、クロロプロカイン塩、コリン塩、ジエタノールアミン塩、二塩酸塩、ビスフォスフォネート塩、エデテート、エジシレート、エストレート、エシレート、エチレンジアミン塩、フッ化物、フマル酸塩、グルセプテート、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリラサニレート、ヘキシレソルシネート、ヒドラバミン塩、臭化物、塩化物、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物、イソチオ酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マルセート、マンデル酸塩、メグルミン塩、メシル酸塩、メシビエート、メチル臭化物、メチル硝酸塩、メチル硫酸塩、ムケート、ナプシレート、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモエート、パントテン酸塩、リン酸塩、ポリガラクトロネート、プロカイン塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、塩基性酢酸塩、琥珀酸塩、硫酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクレート、トシル酸塩、トリフルオロ酢酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、および吉草酸塩などの塩を形成するために、適切な有機または無機の酸と反応するかもしれない。
【０１０９】
本発明の一部の化合物は、一つまたはそれ以上の不斉中心を持ち、およびしたがって光学活性体が存在するかもしれない。同様に、化合物がアルケニルまたはアルケニレン基を含む場合は、化合物のシスとトランス異性体の可能性が存在する。ラセミ混合物と同様にシスとトランス異性体の混合物も含めて、Ｒ−とＳ−の異性体およびその混合物を、本発明によって熟慮される。さらなる不斉炭素原子が、アルキル基などの置換基に存在しうる。全てのそうした異性体は、その混合物も同様に、本発明に含まれることを目的としている。もし特定の異性体が望まれるのであれば、不斉中心を含み、既に分割された出発原料を用いた立体特異的な反応を使うことによる、またはもう一つの方法として、立体異性体の混合物へと導き、およびその後で既知の方法によって分割するという方法による、よく知られた技術の方法によって調製できる。例えば、キラルカラムが、そのような場合に使われるかもしれない。キラルカラムは、ダイセル化学工業より、以下の商標で同定されるものとして売られている：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＡＤ、ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＡＳ、ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＯＤ、ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＯＪ、ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＯＡ、ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＯＢ、ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＯＣ、ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＯＦ、ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＯＧ、ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＯＫ、およびＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＣＡ−１。
【０１１０】
別の従来型の方法によって、ラセミ混合物を、ある他の化合物の単一なエナンチオマーと反応させてもよい。これは、ラセミ型をジアステレオマーの混合物へと変える。これらのジアステレオマーは、異なった融点、沸点、および溶解性を持つので、結晶化などの従来型の方法によって分離できる。
【０１１１】
本発明はまた、式Ｉの化合物の混合物においても具体化する。
【０１１２】
プロドラッグは、化学的に、または代謝的に切断されやすい官能基を持ち、加溶媒分解によって、または生理的条件下で、ｉｎ  ｖｉｖｏで医薬的に活性な本発明化合物になるような、本発明化合物の誘導体である。本発明化合物の誘導体は、その酸性および塩基性の誘導体の型の両方において活性を有するが、酸性の誘導体は、しばしば溶解性、組織適合性、またはほ乳類体内の遅れた放出などにおいて有利点を得る（Ｂｕｎｄｇａｒｄ，Ｈ．，Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，ｐｐ．７−９，２１−２４，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ  １９８５を参照）。プロドラッグが酸誘導体を含むことは、当業者にはよく知られていて、例えば、元の酸性化合物と適切なアルコールとの反応によって調製されるエステル、または元の酸性化合物と適切なアミンとの反応によって調製されるアミドなどがある。
【０１１３】
本発明の新規化合物を含む医薬製剤
本発明の医薬製剤は、本発明化合物（式Ｉの化合物）の治療上効果的な量を、製薬的に許容可能な担体または希釈剤と合わせる（例えば、混合する）ことによって調製した。この医薬製剤は、よく知られ、かつすぐに利用可能な材料を用いて、既知の手法によって調製される。
【０１１４】
本発明の配合を作るにあたって、式Ｉの化合物は、たいてい担体と混合されるか、担体によって希釈されるか、または、カプセルか、袋状か、紙か、または他の入れ物の形で担体内に入れられる。担体が希釈剤としての役割を果たす場合、それは運び手として作用する、固体、半固体、または液体の素材であるだろうし、または錠剤、丸薬、粉末、トローチ、エリクシル、懸濁液、乳濁液、溶液、シロップ剤、エアロゾル（固体または液体媒体中のものとして）、または、例えば化合物の重量の１０％までを含む軟膏、などの形態でありうる。本発明化合物は、好ましくは、投与の前に製剤化する。
【０１１５】
本発明化合物はまた、経皮貼布に含まれた適切な製剤によっても、供給することができる。もう一つの方法として、本発明化合物は、舌下投与によって患者に供給することができる。
【０１１６】
医薬製剤のために、過去の研究で知られている、いずれかの適切な担体が使われうる。そのような製剤において、担体は、固体、液体、または固体と液体の混合物であるかもしれない。固体の製剤は、粉末、錠剤、およびカプセルを含む。固体の担体は、人工香味料、潤滑剤、可溶化剤、懸濁剤、結合剤、錠剤崩壊剤、およびカプセルに包む素材などとしても働く、一つまたはそれ以上の物質である。
【０１１７】
経口投与のための錠剤は、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム、などの適切な賦形剤と一緒に、トウモロコシ、デンプン、またはアルギン酸などの崩壊剤、および／または、例えば、ゼラチン、またはアカシアといった結合剤、およびステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、またはタルクといった潤滑剤を含むかもしれない。
【０１１８】
粉末においては、担体は、きれいに分かれた活性成分と混合剤の中で、きれいに分かれた固体である。錠剤においては、式Ｉの化合物は、適切な割合において必要な結合性能を持ち望みの形や大きさに詰まった担体と、混合される。粉末と錠剤は、好ましくは、本発明の新規化合物の約１から約９９重量パーセントを含む。適切な固体担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、砂糖ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、およびココアバターである。
【０１１９】
無菌の液体の製剤は、懸濁液、乳濁液、シロップ剤、およびエリクシルを含む。
【０１２０】
活性成分は、滅菌水、無菌有機溶媒、または両方の混合物などの、製薬的に許容可能な担体に溶解、または懸濁することができる。化合物は、しばしば適切な有機溶媒、例えば水性プロピレングリコールに溶解する。他の成分は、水性デンプン、またはカルボキシメチルセルロースナトリウム溶液、または適切な油状物中に、本発明化合物をきれいに分けて分散させることによって、作ることができる。
【０１２１】
本発明化合物を使うための方法
多くの病気の状態が、式Ｉの化合物を用いた治療によって恩恵を受ける。それは以下の病気の状態を含み、しかしそれに限定されない：
異常なカルシウム調節によって特徴づけられる病気の状態
異常な細胞増殖によって特徴づけられる病気の状態
異常な細胞分化によって特徴づけられる病気の状態
異常な免疫応答によって特徴づけられる病気の状態
異常なに外皮の状況よって特徴づけられる病気の状態
神経変性の状況よって特徴づけられる病気の状態
ビタミンＤへの感受性によって特徴づけられる病気の状態
過剰増殖性の障害によって特徴づけられる病気の状態。
【０１２２】
式ＩとＩＩの化合物の治療によって恩恵を受ける特異的な病気の状態、それは以下のものを含む、しかしそれに限定されない：
にきび
光線性角化症
脱毛症
アルツハイマー病
良性前立腺肥大症
膀胱ガン
無重力状態での骨の維持
骨折の治療
乳ガン
ガンの化学予防
クローン病
結腸ガン
Ｉ型糖尿病
拒絶反応
高カルシウム血症
ＩＩ型糖尿病
白血病
多発性硬化症
骨髄異形成症候群
不十分な皮脂分泌
骨軟化症
骨粗鬆症
不十分な真皮の堅さ
不十分な真皮の加湿
乾癬性関節炎
前立腺ガン
乾癬
腎性骨ジストロフィー
リウマチ様関節炎
強皮症
皮膚ガン
全身性エリテマトーデス
マスタード発疱薬による皮膚細胞の損傷
潰瘍性大腸炎
白斑
皺
【０１２３】
特に好ましいのは、式Ｉの化合物の治療上効果的な量のほ乳類（人間を含む）への投与による、乾癬や骨粗鬆症の治療である。“医薬的に効果的な量”による、とは、人間を含むほ乳類における病気の状態の有害な効果を、予防、除去、または減少する、式Ｉに相当する医薬の量を意味する。
【０１２４】
治療上の、または予防上の効果を得るために、本発明によって投与される化合物の特異的な量は、もちろん、例えば、投与された化合物、投与の経路、および治療される条件などを含めた、その状況を取り巻く特異的な環境によって決定することができる。典型的な一日の投与量は、本発明の活性化合物の体重あたりの、典型的に約０．０００１ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙから約５０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの範囲の、医薬的に効果的な量を含みうる。好ましくは、本発明化合物の量は、体重あたりの０．０００１から５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙであるだろう。
【０１２５】
本発明の好ましい化合物（例えば、式Ｉによる）、またはこれらの化合物を含む医薬製剤は、ほ乳類への投与のための、単位剤形中にある。単位剤形は、カプセルまたは錠剤それ自身、またはこれらのいずれかの適切な数量である。組成物の単位投与量中の活性成分の量は、特に関連する治療によっては、約０．０００１から約１０００ミリグラムまたはそれ以上で変化し、または調整することができる。患者の年齢や状況に依存して、投与量に対して日常的な変動をさせる必要があることは、好ましい。投与量はまた、投与の経路にも依存するだろう。本発明化合物は、経口、エアロゾル、直腸、経皮、舌下、皮下、静脈、筋肉内、および鼻腔内などを含む、様々な経路によって投与することができる。特に好ましいのは、本発明化合物を含む、軟膏型の製剤を用いた、乾癬の治療である。軟膏製剤は、必要に応じて、典型的には一日１から６回適用される。
【０１２６】
乾癬の治療は、好ましくは、治療上効果的な量の本発明化合物を含む、クリーム、油状物、乳濁液、ペースト、または軟膏の形態の製剤による局所適用とともに行われる。膏薬療法の製剤は、活性成分の、０．５から０．００００５重量パーセント、好ましくは０．０５から０．０００５重量パーセント、および最も好ましくは０．０２５から０．００１を含む。
【０１２７】
例えば、乾癬の治療と予防におけるＶＤＲ調節物質の運び手として有用な、２つの半個体の局所用の調合薬は、以下の通りである：
ポリエチレングリコール軟膏  アメリカ薬局方（ｐ．２４９５）
以下のようにポリエチレングリコール軟膏を調製すること：
ポリエチレングリコール３３５０    ４００ｇ
ポリエチレングリコール４００      ６００ｇ
計                              １０００ｇ
２つの成分を水浴上で６５℃に加熱する。冷却し、凝固するまで撹拌する。もし、より堅い調製が望まれるならば、ポリエチレングリコール４００の１００ｇまでを、等量のポリエチレングリコール３３５０と交換する。
親水性軟膏  アメリカ薬局方（ｐ．１２１６）
以下のように親水性軟膏を調製すること：
メチルパラベン          ０．２５ｇ
プロピルパラベン        ０．１５ｇ
ラウリル硫酸ナトリウム  １０ｇ
プロピレングリコール    １２０ｇ
ステアリルアルコール    ２５０ｇ
白色ワセリン            ２５０ｇ
精製水                  ３７０ｇ
計                  約１０００ｇ
【０１２８】
ステアリルアルコールと白色ワセリンは、蒸気浴上で溶解し、約７５℃まで加熱する。他の成分は、予め水に溶解しておいて加え、７５℃に加熱し、その混合物を凝固するまで撹拌する。
【０１２９】
上記の活性成分製剤のそれぞれについて、全体の軟膏の重量の、０．５から０．００００５重量パーセント、好ましくは０．０５から０．０００５重量パーセント、および最も好ましくは０．０２５から０．００１重量パーセント、の量を、加熱の工程の間に加える（情報源：アメリカ薬局方２４、アメリカ薬局方会議１９９９）。
【０１３０】
骨粗鬆症の従来の治療法は、（Ｉ）エストロゲン、（ＩＩ）アンドロゲン、（ＩＩＩ）カルシウムサプリメント、（Ｉｖ）ビタミンＤ代謝物、（ｖ）チアジド利尿薬、（ｖＩ）カルシトニン、（ｖＩＩ）ビスフォスフォネート、（ｖＩＩＩ）選択的エストロゲン受容体調節物質（ＳＥＲＭｓ）、および（Ｉｘ）フッ化物、を含んでいる（ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ  Ｐｕｂｌ．によって出版された、ハリソンのＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、１３th  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９４，ＩＳＢＮ０−０７−０３２３７０−４，ｐｇｓ．２１７２−７７；参考文献によってその中に盛りこまれているものの中の開示、を参照）。これらの従来型の治療法のいずれかの組み合わせは、ここに教示された式Ｉの化合物を用いた治療の方法と、組み合わせて使用することができる。例えば、骨粗鬆症の治療の方法において、本発明のビタミンＤ受容体調節化合物（例えば、式Ｉによって定義したような）は、従来型の治療法とともに、別々にまたは同時に投与することができる。また別の方法として、本発明のビタミンＤ受容体調節化合物は、下記に示すような骨粗鬆症の治療のための製剤中に、従来型の治療薬と組み合わせることができる。
【０１３１】
下記のものから構成される骨粗鬆症を治療するための製剤：
成分（Ａ１）：
式（Ｉ）によって表されたビタミンＤ受容体調節物質、またはそれの製薬的に許容可能な塩またはそれのプロドラッグ誘導体；
成分（Ｂ１）：
下記のグループから選択される骨粗鬆症治療のための従来型の、１以上の共薬剤
ａ．エストロゲン、
ｂ．アンドロゲン、
ｃ．カルシウムサプリメント、
ｄ．ビタミンＤ代謝物、
ｅ．チアジド利尿薬、
ｆ．カルシトニン、
ｇ．ビスフォスフォネート、
ｈ．ＳＥＲＭ、および
Ｉ．フッ化物；および
成分（Ｃ１）：所望により、担体または希釈剤。
典型的に、有用な製剤は、（Ａ１）と（Ｂ１）の重量比が１０：１から１：１０００、および好ましくは１：１から１：１００であるものである。
【０１３２】
乾癬のための組み合わせ治療法
乾癬のための従来型の治療法は、局所的なグルココルチコイド、サリチル酸、未加工のコールタール、紫外線、およびメトトレキセートを含む（ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ  Ｐｕｂｌ．によって出版された、ハリソンのＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、１３th  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９４，ＩＳＢＮ０−０７−０３２３７０−４，ｐｇｓ．２１７２−７７を参照）。これらの従来型の治療法のいずれか１つまたはその組み合わせが、ここで教示されている式Ｉの化合物を用いた治療の方法と組み合わせて使用することができる。例えば、骨粗鬆症を治療する方法においては、本発明のビタミンＤ受容体調節化合物（例えば、式Ｉによって定義したような）は、従来型の治療法と別々に、または同時に、局所的に投与することができる。別の方法としては、本発明のビタミンＤ受容体調節化合物は、下記に示すような、骨粗鬆症の治療のために局所的に適用された製剤における、従来型の治療薬と組み合わせることができる。
【０１３３】
下記のものから構成される乾癬を治療するための製剤：
成分（Ａ２）：式（Ｉ）に表されたビタミンＤ受容体調節物質、またはそれの医薬的に適用可能な塩、またはそれのプロドラッグ誘導体；
成分（Ｂ２）：下記のグループから選択される乾癬治療のための従来型の、１以上の共薬剤
ａ．局所的なグルココルチコイド、
ｂ．サリチル酸、または
ｃ．未加工のコールタール。
成分（Ｃ２）：所望により、担体または希釈剤。
典型的に、有用な製剤は、（Ａ２）と（Ｂ２）の重量比が１：１０から１：１０００００、および好ましくは１：１００から１：１００００であるものである。
【０１３４】
一般的な手順
【化２９】
2007512326.tif 000030
【０１３５】
【化３０】
2007512326.tif 000031
【０１３６】
【化３１】
2007512326.tif 000032
【０１３７】
【化３２】
2007512326.tif 000033
【０１３８】
一般的な手順
スキームＩ．フラン−２−カルボン酸に対して、窒素雰囲気下、ジエチルエーテルまたはＴＨＦ中で、−８０から０℃の間で、リチウムジイソプロピルアミン（２から２．５当量）が加える。置換されたケトンを加え、混合物を、１から４８時間の間、室温にする。この混合物を、エーテルと水で処理してカルビノールＡを得る。カルビノールＡは、オルト置換フェノール（０．９から５当量）とルイス酸、例えば、三フッ化ホウ素・エチルエ−テル錯塩（０．０１から１０当量）と、０℃から室温にて、３０分から４８時間反応させる。反応は、エーテルと水で処理し、真空下で過剰のフェノールを除去し、ジアリルメタンＢを得る。ジアリルメタンＢは、アルキルクロロホルメートやトリアルキルアミンなどの塩基とともに活性化し、続いて置換された一級または二級アミンの処理によって、アミドＣを得る。アミドＣは、極性な非プロトン性溶媒中、水酸化ナトリウムまたは炭酸カリウムなどの塩基の存在下、α−ハロケトンでアルキル化し、アミドＤを得る。アミドＤの、低分子量アルコール中での、ナトリウムまたは水素化ホウ素リチウムまたは水素化シアノリチウムによる還元は、二級のカルビノールＥを、ラセミ体として得る。ラセミ体は、もちろん、例えばＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤカラム上のキラルクロマトグラフィーによって、エナンチオマーへと分割することができる。
【０１３９】
スキームＩＩ．別の方法として、ジアリルメタンＢのエステルは、一般的に、以下のようにして調製できる：フラニルカルボン酸は、アルキル臭素化マグネシウムまたはアルキルリチウム（２．０から２．５当量）と、０℃から室温にて、エーテルまたはＴＨＦ溶媒中で、３０分から４８時間反応させ、ｔｅｒｔ−カルビノールＦを得る。ｔｅｒｔ−カルビノールＦは、アルキルリチウム試薬（１．９から２．５当量）との、―８０℃から０℃での、１０分以上の時間から２時間までの反応で脱プロトン化し、それから過剰量の二酸化炭素ガスを混合物に吹き込み、混合物を３０分から４８時間の間、室温になるまで放置される。混合物を水とエーテルによって反応終了とされ、カルボン酸Ａを得る。カルボン酸Ａは、同時に、脱水され、塩化水素、塩化臭素といったハロゲン化水素と飽和アルコールとともに加熱し、Ｚ／Ｅ−オレフィンＧを得る。オレフィンＧは、カルビノールＡのように、ルイス酸、例えば三フッ化ホウ素・エチルエ−テル錯塩（０．０１から５当量）の存在下、オルト置換フェノールによってアルキル化して、Ｂのエステルを得、それは、ナトリウム、カリウム、またはリチウムとともにアルコール中で、室温から還流下で水酸化物Ｂへとケン化する。
【０１４０】
スキームＩＩＩ．４−ヒドロキシ−３−アルキル安息香酸エステルに対して、アルキルハロゲン化マグネシウムを、スキームＩＩの生成物Ｆの反応と同様の条件で加え、ｔｅｒｔ−カルビノールＨを得る。フェノール性Ｈ中間体は、α−ハロケトンまたはα−ハロエステルと、スキームＩの生成物Ｄの反応と同様の条件で反応させ、中間体Ｉを得る。Ｉを、三フッ化ホウ素・エチルエ−テル錯塩のようなルイス酸の存在下、置換または無置換のフランと、室温にて３０分から６０時間反応させることにより、ジアリルメタンＪを得る。ジアリルメタンＪは、過剰量のグリニヤール試薬と、スキームＩＩの生成物Ｆの反応と同様にして反応させると、中間体ｔｅｒｔ−カルビノールＫが得られる。カルビノールＫの、スキームＩＩの生成物Ａと同様の反応による、アルキルリチウムでの処理により、酸Ｌを得る。酸Ｌは、ＤＭＦなどの極性非プロトン性溶媒中で、ＥＤＣＩ／ＨＯＡＴなどの結合試薬の存在下、一級または二級アミンと結合させることによって、アミドＭを得る。
【０１４１】
スキームＩＶ：炭素が結合したアクチレンカルビノールＳの合成はまた、スキームＩＶに記載されている。出発原料Ｎは、スキームＩＩＩの中間体Ｈと置換または無置換のフランから、ルイス酸の存在下、スキームＩＩＩの生成物Ｊの合成と同様に製造する。フランＮは、クロロカーボン溶媒とトリアルキルアミン塩基中、３０分以上４８時間まで、トリフルオルメタンスルホン酸無水物と反応させ、トリフラートＯを得る。そのトリフラートＯは、フッ化セシウムまたはトリアルキルアミンのような塩基の存在下、ＤＭＦまたはアセトニトリル／水溶媒中、３０分以上４８時間まで、室温から１１０℃までの間、パラジウムとともにＴＭＳ−アセチレンと結合させ、アセチレンＰを製造する。アセチレンＰは、脱プロトン化し、ジアルキルケトンまたはアルデヒドと反応させ、二級またはｔｅｅｒｔ−カルビノールＱを製造する。カルビノールＱは、スキームＩＩＩの酸ＬとアミドＭの場合と同様の反応を用いて、中間体Ｒ、およびアミドＳを製造する。
【０１４２】
スキームＶ．ビスピナコロンＴは、ヨウ化カリウム（０．０１から０．１０当量）、炭酸カリウム（４から５当量）、およびシアノメタンの存在下、ジアリルＢと塩化ｔ−ブチルカルボニル（２．０から２．５当量）を、還流で約２から約６時間反応させることによって形成する。ビスピナコロンＴは、メタノール／水混合物のような適切な溶媒の存在下、水酸化ナトリウム（４から６当量）のような適切な塩基で脱アルキル化して、ピナコロン酸Ｕを得る。Ｎ−アルキルアミドＶは、ピリジンのような適切な塩基の存在下、ピナコロン酸Ｕを塩化チオニルで活性化させ、続いて、適切な有機溶媒中で適切なアルキルアミンと反応させることによって、調製することができる。
【０１４３】
実施例１
３’−［４−（２−オキソ−３，３−ジメチルブトキシ）−３−メチルフェニル］−３’−［５−ジメチルアミノカルボニル−２−フラニル］ペンタンの調製。
【化３３】
2007512326.tif 000034
【０１４４】
Ａ．３’−［５−カルボキシ−２−フラニル］−３’−ヒドロキシペンタン
【化３４】
2007512326.tif 000035
ＴＨＦ（９８０ｍＬ）中、イソプロピルアミン（４４．８ｍＬ，０．３２ｍｏｌ）の溶液に対して、ヘキサン中、１．６Ｍのｎ−ブチルリチウム（２００ｍＬ，０．３２ｍｏｌ）を、−１５から−８℃で撹拌しながら加える。この混合物を、ＴＨＦ（６４０ｍＬ）で希釈し、−７４℃に冷却する。ＴＨＦ（３２０ｍＬ）中の２−フランカルボン酸（１７．９２ｇ，０．１６ｍｏｌ）を、温度を−７０から−７７℃で維持するように加える。３０分の冷却後、ＴＨＦ（２０ｍＬ）中、３−ペンタノン（１５．１５ｇ，０．１７６ｍｏｌ）を、温度を−７０℃より低く保ちつつ、滴加し、それから反応混合物を室温にまで昇温させる。混合物を、水を用いて反応停止し、ＴＨＦのほとんどを真空下の蒸発によって除去する。水性残留物はジエチルエーテル（２ｘ２００ｍＬ）で抽出し、５Ｎ  ＨＣｌで酸性にする。生成物はジエチルエーテル（３ｘ６００ｍＬ）で抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮し、表題の化合物を油状物として（３１．３ｇ，９９％未精製物）得、それをそのまま使用する。
【０１４５】
Ｂ．３’−［４−ヒドロキシ−３−メチルフェニル］−３’−［５−カルボキシ−２−フラニル］ペンタン
【化３５】
2007512326.tif 000036
３’−［５−カルボキシ−２−フラニル］−３’−ヒドロキシペンタン（５．９４ｇ，３０ｍｍｏｌ）と、オルト−クレゾール（１９．４４ｇ，１８０ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（３０ｍＬ）溶液に対して、室温にて、窒素雰囲気下、三フッ化ホウ素・エチルエ−テル錯塩（１．５ｍＬ，１２ｍｍｏｌ）を加える。この混合物を、５時間撹拌し、ジエチルエーテル（１００ｍＬ）と飽和炭酸ナトリウム（１００ｍＬ）の間で分配する。水層をもう一度ジエチルエーテル（１００ｍＬ）で洗浄する。合わせたエーテル層を、飽和炭酸ナトリウム（２ｘ３０ｍＬ）で２回抽出し、合わせた水層を、５Ｎ  ＨＣｌでｐＨ〜２まで酸性にする前に、ジエチルエーテル（２ｘ５０ｍＬ）で洗浄した。生成物は、ジエチルエーテル（２ｘ１００ｍＬ）中で抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空下で蒸発させて油状物を得る。残留物は、酢酸エチルとイソオクタンから結晶化し、表題の生成物を白色結晶（５．３３ｇ，６２％）として得る。
1Ｈ  ＮＭＲ（重クロロホルム）  δ  ９．１２（ｓ，１Ｈ），７．１３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），６．８０（ｓ，１Ｈ），６．７５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），６．６８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），６．３６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），２．０６（ｓ，３Ｈ），１．９７（ｑ，４Ｈ，Ｊ＝７．０），０．６０（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）．
ＥＳ／ＭＳ：２８９．０（Ｍ＋１）。
【０１４６】
Ｃ．３’−［４−ヒドロキシ−３−メチルフェニル］−３’−［５−ジメチルアミンカルボニル−２−フラニル］ペンタン
【化３６】
2007512326.tif 000037
ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の３’−［４−ヒドロキシ−３−メチルフェニル］−３’−［５−カルボキシ−２−フラニル］ペンタン（０．７５ｇ，２．６ｍｍｏｌ）に対して、トリ−ｎ−ブチルアミン（０．６７ｍＬ，２．８６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を氷浴中で冷却する。その冷却した溶液に対して、クロロギ酸イソブチル（０．３７２ｍＬ，２．８６ｍｍｏｌ）を滴加し、５分間撹拌する。その混合物に対して、２．０Ｍのジメチルアミンのメタノール溶液（７．８ｍＬ，１５．６ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温にまで上げ、３０分間撹拌する。この混合物を、真空下で蒸発させ、残留物を、水（１００ｍＬ）とジエチルエーテル（１００ｍＬ）との間に分配する。有機層を、飽和炭酸水素ナトリウム（２ｘ３０ｍＬ）；飽和食塩水（３０ｍＬ）；０．３Ｎ  ＨＣｌ（３ｘ３０ｍＬ）；および飽和食塩水（１０ｍＬ）で順次洗浄する。有機層を、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空下で蒸発させて、表題の生成物を油状物として（５３８ｍｇ，６６％）得る。
【０１４７】
Ｄ．３’−［４−（２−オキソ−３，３−ジメチルブトキシ）−３−メチルフェニル］−３’−［５−ジメチルアミノカルボニル−２−フラニル］ペンタン
アセトニトリル（１５ｍＬ）中の３’−［４−ヒドロキシ−３−メチルフェニル］−３’−［５−ジメチルアミンカルボニル−２−フラニル］ペンタン（０．５３ｇ，１．７ｍｍｏｌ）に対して、１−クロロピナコロン（０．２３ｍＬ，１．７６ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１．１６ｇ，８．４ｍｍｏｌ）、および触媒ヨウ化カリウム（１４ｍｇ，０．０８ｍｍｏｌ）を加える。この混合物を、還流で４５分間加熱し；室温にまで冷却し；および真空下で蒸発させる。残留物を、塩化メチレンと水の間で分配し、水層をもう一度塩化メチレンで抽出する。合わせた有機層を、無水の硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空下で蒸発させて、油状物を得る。残留物をヘキサンから結晶化して、表題の化合物（０．４１ｇ，５９％）を得る。
1Ｈ  ＮＭＲ（重クロロホルム）  δ  ６．９２（ｍ，２Ｈ），６．８４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），６．６２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），６．４１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．０Ｈｚ），５．０７（ｓ，２Ｈ），２．９２（ｓ，６Ｈ），２．１５（ｓ，３Ｈ），２．００（ｑ，４Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），１．１６（ｓ，９Ｈ），０．６１（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）．
ＥＳ／ＭＳ：４１４．２（Ｍ＋１）。
【０１４８】
実施例２
３’−［４−（２−ヒドロキシ−３，３−ジメチルブトキシ）−３−メチルフェニル］−３’−［５−ジメチルアミノカルボニル−２−フラニル］ペンタンの調製。
【化３７】
2007512326.tif 000038
３’−［４−（２−オキソ−３，３−ジメチルブトキシ）−３−メチルフェニル］−３’−［５−ジメチルアミノカルボニル−２−フラニル］ペンタン（０．３２ｇ，０．７９ｍｍｏｌ）と、水素化ホウ素ナトリウム（３０ｍｇ，０．７９ｍｍｏｌ）を、室温にてメタノール（３０ｍＬ）中で混合し、室温にて一晩撹拌する。アセトン（１ｍＬ）を加え、混合物を真空下で蒸発させる。残留物を、塩化メチレンと水で分配し、水層を塩化メチレンでさらに２回抽出する。合わせた有機抽出液は、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空下で蒸発させ、表題の生成物を無色の油状物（０．３２５ｇ，９９％）として得る。
1Ｈ  ＮＭＲ（重クロロホルム）  δ  ７．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．３Ｈｚ），６．９２（ｍ，２Ｈ），６．７３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），６．２６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），５．３０（ｓ，１Ｈ），４．０８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），３．８６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），３．８４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），３．０４（ｓ，６Ｈ），２．２０（ｓ，３Ｈ），２．０４（ｍ，４Ｈ），１．０３（ｓ，９Ｈ），０．７２（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）．
ＥＳ／ＭＳ：４１６．２（Ｍ＋１）。
【０１４９】
実施例３および実施例４
３’−［４−（２−ヒドロキシ−３，３−ジメチルブトキシ）−３−メチルフェニル］−３’−［５−ジメチルアミノカルボニル−２−フラニル］ペンタンのエナンチオマーの調製。
【化３８】
2007512326.tif 000039
３’−［４−（２−ヒドロキシ−３，３−ジメチルブトキシ）−３−メチルフェニル］−３’−［５−ジメチルアミノカルボニル−２−フラニル］ペンタンのラセミ混合物（実施例２（３００ｍｇ））を、４０：６０のイソプロピルアルコール／ヘキサンの溶媒を用いて、ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤカラム上でクロマトグラフィーに付し、エナンチオマー１（実施例３（１１０ｍｇ，３７％））とエナンチオマー２（実施例４（１１０ｍｇ，３７％））を得る。
【０１５０】
エナンチオマー１、実施例３
ＨＰＬＣ：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ（４．６Ｘ２５０  ｍｍ）；  ０．１％  ＴＦＡ／４０％  ＩＰＡ／６０％  ｈｅｐｔａｎｅ；  １ｍｌ／ｍ（流速）；  Ｒｔ＝５．６ｍ
ＮＭＲは実施例２のものに等しい。
【０１５１】
エナンチオマー２、実施例４
ＨＰＬＣ：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ（４．６Ｘ２５０  ｍｍ）；  ０．１％  ＴＦＡ／４０％  ＩＰＡ／６０％  ｈｅｐｔａｎｅ；  １ｍｌ／ｍ（流速）；  Ｒｔ＝８．６ｍ
【０１５２】
実施例５
３’−［４−（２−オキソ−３，３−ジメチルブトキシ）−３−（２−ブチル）フェニル］−３’−［５−ジメチルアミノカルボニル−フラン−２−イル］ペンタンの調製。
【化３９】
2007512326.tif 000040
【０１５３】
Ａ．３−（２−フラニル）ペンタン−３−オール
【化４０】
2007512326.tif 000041
フラン酸２−メチル（１０．０ｇ，７９ｍｍｏｌ）を、窒素雰囲気下でＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶解する。エチル臭素化マグネシウム（エーテル中３．０Ｍ，５５ｍＬ，１６６ｍｍｏｌ）を、最初に室温にて加える。反応物を−３０℃まで冷却し、残っているエチルグリニヤールを加える。混合物を、室温にて一晩撹拌する。飽和炭酸水素ナトリウム溶液（１０ｍＬ）を、撹拌している溶液に加え、続いてジエチルエーテル（１００ｍＬ）と水（５０ｍＬ）を加える。有機層を分離し、水で洗浄する。エーテル層を、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空下で蒸発させて、１０．７ｇの油状物を得、これはさらなる精製をしないで使用する。
1Ｈ  ＮＭＲ  （重クロロホルム）  δ  ７．３７（ｓ，１Ｈ），６．３１（ｄ，１Ｈ），６．１８（ｄ，１Ｈ），１．８３（ｍ，４Ｈ），０．８８（ｔ，６Ｈ）。
【０１５４】
Ｂ．３−（５−カルボキシ−２−フラニル）ペンタン−３−オール
【化４１】
2007512326.tif 000042
３−（２−フラニル）ペンタン−３−オール（３．０ｇ，１９ｍｍｏｌ）を、窒素雰囲気下でＴＨＦ（２０ｍＬ）に加える。その溶液を撹拌し、−７８℃に冷却する。Ｓｅｃ−ブチルリチウム（シクロヘキサン３１ｍＬ中１．３Ｍ，４１ｍｍｏｌ）を、温度を−５５℃より低く調整しながら滴加する。添加を完了したら、氷浴を取り外し、溶液を、１８時間撹拌しながら、ゆっくりと室温にまで暖める。この混合物を−４８℃に冷却し、ＣＯ２ガスを溶液に吹き込む。高粘度の黄色ペーストが生じ、温度は−１０℃へと上げられる。水（５０ｍＬ）を加え、その溶液を室温にて３０分間撹拌する。酢酸エチルを加え、続いて水を加え、ｐＨを１Ｎ  ＨＣｌで１に調節する。有機層を分離し、水層を捨てた。有機層を１Ｎ  ＮａＯＨに加え、抽出する。水層のｐＨは、１Ｎ  ＨＣｌで１に調節し、続いてＥｔＯＡｃを添加する。有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空下で蒸発させて２．７グラムの油状物を得る。
1Ｈ  ＮＭＲ  （重クロロホルム）  δ  ８．５−１０．０（ｂｒ，１Ｈ），７．２２（ｄ，１Ｈ），６．４０（ｄ，１Ｈ），１．８８（ｍ，５Ｈ），１．８０（ｔ，６Ｈ）。
【０１５５】
Ｃ．Ｚ／Ｅ−３−（５−メトキシカルボニル−２−フラニル）ペント−２−エン
【化４２】
2007512326.tif 000043
３−（５−カルボキシ−２−フラニル）ペンタン−３−オール（２００ｍｇ，１．１ｍｍｏｌ）をメタノール（２０ｍＬ）に溶解する。ＨＣｌ（ガス）を３０秒間、溶液中に吹き込む。その反応物を、室温にて２０分間、反応しないで、撹拌する。その溶液を６０℃で２時間加熱する。溶液を濃縮し、水を加え、続いて固体のＮａＨＣＯ３をｐＨが塩基性になるまで加える。酢酸エチルを加え、溶液を抽出する。有機層を水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過する。濾液は２１３ｍｇのオレンジ色の油状物へと濃縮し、それをそのまま使用する。
1Ｈ  ＮＭＲ（重クロロホルム）  δ  ６．３５（ｑ，０．９５Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｅ−Ｉｓｏｍｅｒ），５．７２（ｑ，０．０５Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｚ−Ｉｓｏｍｅｒ）。主要な異性体のメチル二重線（１．８３ｐｐｍ）の照射は、主要な異性体のメチレン四重線（２．４０ｐｐｍ）と同様に、主要な異性体のビニルプロトン（６．３５ｐｐｍ）にも、明らかな核オーバーハウザー効果を生み出したことから、主要な異性体はＥであると確認した。
【０１５６】
Ｄ．３’−［４−ヒドロキシ−３−（２−ブチル）フェニル］−３’−［５−メトキシカルボニル−フラン−２−イル］ペンタン
【化４３】
2007512326.tif 000044
２−（２−ブチル）フェノール（３．７５ｇ，２５ｍｍｏｌ）中の、Ｚ／Ｅ−３−（５−メトキシカルボニル−２−フラニル）ペント−２−エン（０．９７ｇ，５ｍｍｏｌ）に対して、塩化メチレン（０．５ｍＬ）に溶解した三フッ化ホウ素・エチルエ−テル錯塩（２１３ｍｇ，１．５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温にて９日間撹拌する。混合物をジエチルエーテルと水との間に分配し、有機層をさらに二回水で洗浄し、一回飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させる。溶媒は真空下で蒸発させ、残留物を、ヘキサン中４％の酢酸エチルから、ヘキサン中６％の酢酸エチルの段階グラジエントとともに、１２ｇのシリカゲル上でクロマトグラフィーに付し、表題の化合物（１．１２ｇ，６５％）を得る。
1Ｈ  ＮＭＲ  （重クロロホルム）  δ  ７．１０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），６．９３（ｓ，１Ｈ），６．８２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），６．２２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），４．５６（ｓ，１Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），２．９１（ｍ，１Ｈ），１．９７−２．１９（ｍ，４Ｈ），１．５９（ｍ，２Ｈ），１．１９（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．８２（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），０．６９（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ）．
ＥＳ／ＭＳ：３４５．３（Ｍ＋１），３４３．３（Ｍ−１）。
【０１５７】
Ｅ．３’−［４−ヒドロキシ−３−（２−ブチル）フェニル］−３’−［５−カルボキシル−フラン−２−イル］ペンタン
【化４４】
2007512326.tif 000045
メタノール（５ｍＬ）中の、３’−［４−ヒドロキシ−３−（２−ブチル）フェニル］−３’−［５−メトキシカルボニル−フラン−２−イル］ペンタン（０．２ｇ，０．６ｍｍｏｌ）に対して、５Ｎ  ＮａＯＨ（２３２ｕＬ，１１．２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を、蓋のないフラスコ中で、７０℃で１．５時間加熱する。水を蒸発したメタノールの代わりに、断続的に加える。混合物を室温にまで冷却し、５Ｎ  ＨＣｌを用いて、ｐＨ試験紙で酸性になるのを確認する。生成物を、塩化メチレンで抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して、表題の化合物（０．１６５ｇ，８７％）を得る。
1Ｈ  ＮＭＲ  （重クロロホルム）  δ  ６．９３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），６．８２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），６．６４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），６．２６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），４．５６（ｓ，１Ｈ），２．９１（ｍ，１Ｈ），１．９７−２．１９（ｍ，４Ｈ），１．５９（ｍ，２Ｈ），１．１８（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．８２（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），０．６９（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）。
精密分子量：３３１．１９２，Ｃ２０Ｈ２７Ｏ４についての計算値：３３１．１９０９。
【０１５８】
Ｆ．３’−［４−ヒドロキシ−３−（２−ブチル）フェニル］−３’−［５−ジメチルアミノカルボニル−フラン−２−イル］ペンタン
【化４５】
2007512326.tif 000046
ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中の、３’−［４−ヒドロキシ−３−（２−ブチル）フェニル］−３’−［５−カルボキシル−フラン−２−イル］ペンタン（０．１６４ｇ，０．５ｍｍｏｌ）に対して、ＥＤＣＩ（１２０ｍｇ，０．６ｍｍｏｌ）、ＤＭＦに溶解した０．５Ｍ  ＨＯＡｔ（１．２４ｍＬ，０．６ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２５０ｍｇ，２．５ｍｍｏｌ）、およびジメチルアミン塩酸塩（５０ｍｇ，０．６ｍｍｏｌ）を加える。この混合物を室温にて６４時間撹拌し、塩化メチレンと飽和炭酸水素ナトリウムの間で分配する。有機層を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させる。残留物を、ヘキサン中２０％酢酸エチルから、ヘキサン中２５％酢酸エチルの段階グラジエントを用いた、４ｇのシリカゲル上でのクロマトグラフィーに付し、表題の化合物（８０ｍｇ，４５％）を得る。
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ｍＨｚ，重クロロホルム）  δ  ７．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），６．９２（ｓ，１Ｈ），６．７９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），６．６３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），６．２４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），４．９１（ｓ，１Ｈ），３．０３（ｓ，６Ｈ），２．９２（ｍ，１Ｈ），１．９７−２．０５（ｍ，４Ｈ），１．５２−１．６３（ｍ，２Ｈ），１．１８（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），０．８２（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），０．７０（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）。
ＬＣ／ＭＳ：３５８．３（Ｍ＋１），３５６．３（Ｍ−１）。
【０１５９】
Ｇ．３’−［４−（２−オキソ−３，３−ジメチルブトキシ）−３−（２−ブチル）フェニル］−３’−［５−ジメチルアミノカルボニル−フラン−２−イル］ペンタン
実施例１Ｄと同様の手順を用いて、３’−［４−ヒドロキシ−３−（２−ブチル）フェニル］−３’−［５−ジメチルアミノカルボニル−フラン−２−イル］ペンタン（８０ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ）は、１−クロロピナコロンと反応させ、表題の化合物（９０ｍｇ，９０％）を油状物として得、最終的に表題の化合物（８０ｍｇ，４５％）を得る。
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ｍＨｚ，重クロロホルム）  δ  ７．０１（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），６．９７（ｓ，１Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．２５（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），４．８２（ｓ，２Ｈ），３．０３（ｓ，６Ｈ），３．１４（ｍ，１Ｈ），１．９８−２．１２（ｍ，４Ｈ），１．４８−１．６４（ｍ，２Ｈ），１．２５（ｓ，９Ｈ），１．１７（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），０．８１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），０．７０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ）。
ＥＳ／ＭＳ：４５６．３（Ｍ＋１）。
【０１６０】
上記と同様の手順により、以下の実施例の製造を行った：
【化４６】
2007512326.tif 000047
【表１】
2007512326.tif 000048
【表２】
2007512326.tif 000049
【表３】
2007512326.tif 000050
【０１６１】
実施例１４
３’−［４−（２−ヒドロキシ−２−エチルブトキシ）−３−メチルフェニル］−３’−［５−ジメチルアミノカルボニル−２−フラニル］ペンタンの調製。
【化４７】
2007512326.tif 000051
【０１６２】
Ａ．３’−（４−ヒドロキシ−３−メチル−フェニル）−３’−ペンタノール
【化４８】
2007512326.tif 000052
２００ｍＬのＴＨＦ中の、４−ヒドロキシ−３−メチル安息香酸メチル（２１．８ｇ，０．１３ｍｏｌ）に対して、窒素雰囲気下、室温にて、１．０Ｍのエチル臭素化マグネシウム（４３３ｍＬ，０．４３ｍｏｌ）を滴加する。この混合物を、６４時間撹拌し、希炭酸水素ナトリウム溶液で反応を止める。混合物を、ジエチルエーテルで５回（５ｘ）トリチュレーションし、合わせた有機層を、希炭酸水素ナトリウムで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空下で乾燥させて、表題の化合物（２７ｇ，９９％）を得る。
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ｍＨｚ，重クロロホルム）  δ  ７．２９（ｓ，１Ｈ），７．０４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．７２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．７４（ｓ，１Ｈ），３．７５（ｓ，１Ｈ），２．２６（ｓ，３Ｈ），１．８２（ｍ，４Ｈ），０．７６（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，６Ｈ）。
ＥＳ／ＭＳ：１９３．２（Ｍ−１）。
【０１６３】
Ｂ．３’−（４−メトキシカルボニルメトキシ−３−メチル−フェニル）−３’−ペンタノール
【化４９】
2007512326.tif 000053
２０ｍＬのアセトニトリル中の、３’−（４−ヒドロキシ−３−メチル−フェニル）−３’−ペンタノール（１．５ｇ，７．７ｍｍｏｌ）に対して、臭素化酢酸メチル（０．７３ｍＬ，７．７ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（４．２６ｇ，３１ｍｍｏｌ）、および触媒ヨウ化カリウム（〜０．１ｇ）を加える。この混合物を、８０℃で６時間加熱する。混合物を冷却し、溶媒を真空下で蒸発させる。残留物を、ジエチルエーテルと水の間で分配する。有機層を、水で４回（４ｘ）洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で蒸発させて、表題の化合物（２．０６ｇ，９９％）を得る。
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ｍＨｚ，重クロロホルム）  δ  ７．１４（ｓ，１Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．６４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．６４（ｓ，２Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ），１．８０（ｍ，４Ｈ），０．７６（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１６４】
Ｃ．３’−（４−メトキシカルボニルメトキシ−３−メチル−フェニル）−３’−（２−フラニル）ペンタン
【化５０】
2007512326.tif 000054
フラン（２５ｍＬ）中の、３’−（４−メトキシカルボニルメトキシ−３−メチル−フェニル）−３’−ペンタノール（２．０ｇ，７．７ｍｍｏｌ）に対して、室温にて窒素雰囲気下、三フッ化ホウ素・エチルエ−テル錯塩（０．３９ｍＬ，０．３ｍｍｏｌ）を加える。この混合物を４時間撹拌し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液によって反応を止める。生成物をジエチルエーテルで抽出し、水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空下で蒸発させる。残留物を、ヘキサン中０から１０％の酢酸エチルのグラジエントで、４０ｇのシリカゲル上でクロマトグラフィーに付し、表題の化合物を含む画分（１．３ｇ，５３％）を得る。
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ｍＨｚ，重クロロホルム）  δ  ７．２８（ｓ，１Ｈ），６．９５（ｓ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．５９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．６１（ｓ，２Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），２．２４（ｓ，３Ｈ），１．９６−２．１２（ｍ，４Ｈ），０．６７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ）。
ＥＳ／ＭＳ：３１７．１（Ｍ＋１）。
【０１６５】
Ｄ．３’−［４−（２−ヒドロキシ−２−エチルブトキシ）−３−メチルフェニル］−３’−［２−フラニル］ペンタン
【化５１】
2007512326.tif 000055
１０ｍＬのジエチルエーテル中の、３’−（４−メトキシカルボニルメトキシ−３−メチル−フェニル）−３’−（２−フラニル）ペンタン（１．３ｇ，４．１ｍｍｏｌ）に対して、１Ｍのエチル臭素化マグネシウム（１０．２ｍＬ，１０．２ｍｍｏｌ）を滴加し、混合物を一晩撹拌する。この混合物を、飽和炭酸水素ナトリウム溶液によって反応を止め、ジエチルエーテルで５回（５ｘ）トリチュレーションする。合わせた有機層を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空下で蒸発させて表題の化合物（１．３３ｇ，９４％）を得る。
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ｍＨｚ，重クロロホルム）  δ  ７．２９（ｓ，１Ｈ），６．９３（ｍ，２Ｈ），６．７２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），６．２９（ｓ，１Ｈ），６．１８（ｓ，１Ｈ），３．７９（ｓ，２Ｈ），２．２０（ｓ，３Ｈ），１．１６−２．１２（ｍ，４Ｈ），１．６６（ｍ，４Ｈ），０．９３（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，６Ｈ），０．６７（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，６Ｈ）。
ＥＳ／ＭＳ：３４５．３（Ｍ＋１），３６２．３（Ｍ＋ＮＨ４）。
【０１６６】
Ｅ．３’−［４−（２−ヒドロキシ−２−エチルブトキシ）−３−メチルフェニル］−３’−［５−カルボキシ−２−フラニル］ペンタン
【化５２】
2007512326.tif 000056
１０ｍＬのシクロヘキサンと２ｍＬのジエチルエーテル中、０から５℃で窒素雰囲気下の、３’−［４−（２−ヒドロキシ−２−エチルブトキシ）−３−メチル−フェニル］−３’−［２−フラニル］ペンタン（１．３ｇ，３．８ｍｍｏｌ）に対して、１．３Ｍのｓｅｃ−ブチルリチウム（６．５ｍＬ，８．５ｍｍｏｌ）を加える。５分後、過剰量の二酸化炭素ガスを吹き込み、混合物を２時間撹拌する。混合物をジエチルエーテルと水の間で分配する。水層を６Ｎ  ＨＣｌで酸性にし、生成物をジエチルエーテルへと抽出する。エーテル層を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空下で蒸発させて、表題の化合物（０．６６ｇ，４４％）を得、それをそのまま使用する。
ＥＳ／ＭＳ：３８７．３  Ｍ−１），４０６．３（Ｍ＋ＮＨ４）。
【０１６７】
Ｆ．３’−［４−（２−ヒドロキシ−２−エチルブトキシ）−３−メチルフェニル］−３’−［５−ジメチルアミノカルボニル−２−フラニル］ペンタン
ＤＭＦ（２ｍＬ）中で、３’−［４−（２−ヒドロキシ−２−エチルブトキシ）−３−メチルフェニル］−３’−［５−カルボキシ−２−フラニル］ペンタン（０．６６ｇ，１．７ｍｍｏｌ）に対して、ＥＤＣＩ（０．３８ｇ，２．０ｍｍｏｌ）、０．５Ｍ  ＨＯＡＴのＤＭＦ溶液（３．４ｍＬ，１．７ｍｍｏｌ）、および２ＭジメチルアミンのＴＨＦ溶液（１．７ｍＬ，３．４ｍｍｏｌ）を加える。混合物を室温にて２時間撹拌し、ジエチルエーテルと飽和炭酸水素ナトリウムとの間に分配する。有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空下で蒸発させる。残留物を、ヘキサン中、５から３０％の酢酸エチルのグラジエントで、１０ｇのシリカゲル上でクロマトグラフィーに付し、表題の化合物を含む画分（０．１６ｇ，２３％）を得る。
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ｍＨｚ，重クロロホルム）  δ  ７．００（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），６．９３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｓ，１Ｈ），６．７０（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），６．２５（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），３．７９（ｓ，２Ｈ），３．０４（ｓ，６Ｈ），２．１９（ｓ，３Ｈ），２．０６（ｍ，４Ｈ），１．６７（ｍ，４Ｈ），０．９３（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，６Ｈ），０．７０（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，６Ｈ）。
ＥＳ／ＭＳ：４１６．３（Ｍ＋１），４３３．３（Ｍ＋ＮＨ４）。
【０１６８】
【表４】
2007512326.tif 000057
【０１６９】
【表５】
2007512326.tif 000058
【０１７０】
【表６】
2007512326.tif 000059
【０１７１】
【表７】
2007512326.tif 000060
【０１７２】
表１、２、３、および４の説明
試験化合物番号とは、対応する実施例の番号の生成物を意味する。
【０１７３】
表のセル中の数字の間のスラッシュマーク“／”は、異なった実験結果が得られた場合に別記している。
【０１７４】
対照実験は、以下に定義した２文字の符号を付けた化合物を用いて行った。
【０１７５】
“ＡＡ”＝１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3
【０１７６】
“ＢＢ”＝３−（４−｛１−エチル−１−［４−（２−ヒドロキシ−３，３−ジメチル−ブトキシ）−３−メチル−フェニル］−プロピル｝−２−メチル−フェノキシ）−プロパン−１，２−ジオール
【０１７７】
“ＣＣ”＝１−（４−｛１−［４−（３，３−ジメチル−２−オキソ−ブトキシ）−３−メチル−フェニル］−シクロヘキシル｝−２−メチル−フェノキシ）−３，３−ジメチル−ブタン−２−オン
【０１７８】
“ＤＤ”＝下記の式によって表される化合物：
【化５３】
2007512326.tif 000061
【０１７９】
“ＥＥ”＝下記の式によって表される化合物：
【化５４】
2007512326.tif 000062
【０１８０】
“ＦＦ”＝カルシポトリオール（下記の構造式によって表される）：
【化５５】
2007512326.tif 000063
【０１８１】
２．ＲＸＲ−ＶＤＲヘテロ二量体化（ＳａＯＳ−２細胞）試験は、下記の“検定”部分に記載されている。
【０１８２】
３．ＶＤＲ  ＣＴＦ（Ｃａｃｏ−２細胞）試験は、下記の“検定”部分に記載されている。
【０１８３】
４．ＯＣＮプロモーター試験は、下記の“検定”部分に記載されている。
【０１８４】
５．マウス高カルシウム血症試験は、下記の“検定”部分に記載されている。
【０１８５】
６．ケラチン生成細胞増殖検定は、下記の“検定”部分に記載されている。
【０１８６】
７．ＩＬ−１０検定は、下記の“検定”部分に記載されている。
【０１８７】
検定方法
検定方法の使用：
骨粗鬆症や他の関連疾病のための、本発明の新規な化合物の評価は、試験結果の複数を用いて行った。複数の検定の使用は、（Ｉ）ビタミンＤ受容体に対する高い活性、および（ＩＩ）高カルシウム血症の予防をまた本発明の側面である病気の治療の方法の有用性を完成させるに違いない、という２つの特性を合わせたものであるから、必要とされる。下記の試験のいくつかは、他の試験と関連していると信じられ、化合物の関連する特性を評価する。その結果として、化合物を、もし、全部ではないを上記の試験の容認基準のほとんどにかなうのであれば、本発明の実用における有用性があると考えられるかもしれない。
【０１８８】
乾癬のための本発明の新規な化合物の評価は、ケラチン生成細胞増殖検定と、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣｓ）におけるＩＬ−２生産の阻害やＩＬ−１０生産の刺激などを測定する他の検定と組み合わせて用い、行った。
【０１８９】
検定方法の簡単な説明、使用、および合否基準
１．ＲＸＲ−ＶＤＲヘテロ二量体化検定：
この検定は、試験化合物のＶＤＲ活性を提供する。この検定では、低いＥＣ50値を持つ化合物が望ましい。ＥＣ50値が低いほど、化合物がＶＤＲアゴニストとしてより活性であろう。望ましい検定結果は、ＥＣ50値を６００ｎＭと同じか、それより低い値である。好ましい検定結果は、２５０ｎＭより小さく、最も好ましくは１５０ｎＭより小さい。
【０１９０】
２．Ｃａｃｏ−２細胞同時トランスフェクション検定
Ｃａｃｏ−２細胞検定は、高カルシウム血症の望ましくない状況の指標である。この同時トランスフェクション検定は、ＶＤＲリガンドのｉｎ  ｖｉｖｏの高カルシウム血症活性の代理検定である。この検定では、試験化合物が高いＥＣ50値を持つのが望ましい。化合物のＥＣ50値が高いほど、ｉｎ  ｖｉｖｏでの高カルシウム血性は低くなるだろう。望ましい検定結果は、ＥＣ50値が３００ｎＭと同じか、それより大きい値である。好ましい検定結果は、１０００ｎＭより大きい値である。
【０１９１】
３．ＯＣＮ（オステオカルシン）プロモーター検定
ＯＣＮプロモーター検定は、骨粗鬆症のための指標でありマーカーである。望ましい検定結果は、ＥＣ50値が３２５ｎＭと同じか、それより小さい値である。好ましい検定結果は、５０ｎＭより小さい値である。
【０１９２】
４．マウス高カルシウム血症検定
マウス高カルシウム血症検定は、毒性と選択性のための６日間の高カルシウム血症試験である。許容可能な試験結果は、３００μｇ／ｋｇ／ｄａｙより大きいレベルである。好ましい検定結果は、１０００μｇ／ｋｇ／ｄａｙより大きいレベルである。
【０１９３】
５．ケラチン生成細胞増殖検定
この検定は、乾癬の治療を指示するものである。許容可能な試験結果は、ＩＣ50値が３００ｎＭと同じか、それより小さい値である。好ましい検定結果は、ＩＣ50値が１００ｎＭより小さい値である。
【０１９４】
６．ＩＬ−１０誘導検定
これは、乾癬、膿瘍、および接着のための、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの効果的な検定である。乾癬は、ケラチン生成細胞と免疫細胞の両方に関連している。ＩＬ−１０は、抗炎症性かつ免疫抑制性であるから、ユニークなサイトカインである。この検定は、ＶＤＲＭをＰＢＭＣｓ（末梢血単核細胞）におけるアゴニストとして機能することができるか否かを教えてくれる。より小さいＥＣ50値を持つ化合物を、ＰＢＭＣｓにおけるより良いアゴニストになるだろうから、より小さいＥＣ50値がこの検定では望ましい。許容可能な試験結果は、ＥＣ50値が２００ｎＭより小さい値である。好ましい検定結果は、ＥＣ50値が１００ｎＭより小さい値である。
【０１９５】
７．他の化合物検定の標準
別の骨粗鬆症の治療のための、本発明化合物の効果の測定法は、以下のように計算される実数比である：
（高カルシウム血症を誘導するのに必要なしきい値の量）÷（骨の効果に必要なしきい値の量）
【０１９６】
別の乾癬の治療のための、本発明化合物の効果の測定法は、以下のように計算される実数比である：
（高カルシウム血症を誘導するのに必要なしきい値の量）÷（ケラチン生成細胞の増殖を誘導するのに必要なしきい値の量）
上記の比において、しきい値の量は、用量反応曲線のデータから決定される。
【０１９７】
８．ＣａＴ１（カルシウムトランスポーター１）検定
ＣａＴ１検定は、高カルシウム血症の望ましくない状況の指標である。化合物のＥＣ50値が高いほど、ｉｎ  ｖｉｖｏでの高カルシウム血性が低いだろう。望ましい検定結果は、ＥＣ50値が５００ｎＭと同じか、それより大きい値である。好ましい検定結果は、１０００ｎＭより大きい値である。
【０１９８】
検定方法の詳細
（１）ＲＸＲ−ＶＤＲヘテロ二量体化検定のための材料と方法
トランスフェクション方法：
・ＦｕＧＥＮＥ  ６  トランスフェクション試薬（ロシュ  カタログ番号１８１４４４３）
生育培地：
・Ｄ−ＭＥＭ高グルコース（ギブコＢＲＬ  カタログ番号１１０５４−０２０）、１０％ＦＢＳ、１％抗生物質−抗カビ物質（Ａｂ−Ａｍ）
加熱不活性化ＦＢＳ（ギブコＢＲＬ  カタログ番号１００９２−１４７）
Ａｂ−Ａｍ（ギブコＢＲＬ  カタログ番号１５２４０−０６２）
細胞：
・生育培地中、Ｔ−１５２ｃｍ2培養フラスコ内でＳａＯｓ−２細胞を生育させる。
・密度を５から６ｘ１０5細胞／ｍｌに維持する
・一週間に二度、１：３で細胞を継代する
・トリプシンＥＤＴＡ（ギブコＢＲＬ  カタログ番号２５３００−０２０）を加え、培養する
・平板培地に細胞を再懸濁し、生育培地に移す。
洗浄培地：
・ＨＢＳＳ低グルコース、フェノールレッドなし（ギブコＢＲＬ  カタログ番号１４１７５−０９５）、１％Ａｂ−Ａｍ
平板培地：
・Ｄ−ＭＥＭ低グルコース、フェノールレッドなし（ギブコＢＲＬ  カタログ番号１１０５４−０２０）、１％Ａｂ−Ａｍ
Ｄ−ＭＥＭ
タンパク除去したＦＢＳ（ハイクローン  カタログ番号ＳＨ３００６８．０３  ロット番号ＡＨＭ９３７１）
Ａｂ−ＡＭ
トランスフェクション／処理培地：
・Ｄ−ＭＥＭ低グルコース、フェノールレッドなし、のみ
Ｔ−１５２ｃｍ2培養フラスコ：
・細胞生育のためにＣｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏａｓｔｅｒ  Ｔ−１５２ｃｍ2培養フラスコ（カタログ番号４３０８２５）を使用
平板ウェルプレート：
・細胞をプレーティングするのに、ウェルプレートを使用
・処理培地を無菌的に作るのに、深いウェルプレートを使用。
ルシフェラーゼ検定試薬：
・プロメガ製Ｓｔｅａｄｙ−Ｇｌｏルシフェラーゼ試薬（カタログ番号Ｅ２５５０）を使用、それは以下のものから成る：
ａ．Ｅ２５３３検定基質、凍結乾燥産物、および
ｂ．Ｅ２５４３検定バッファー。
・室温にて解凍する
・保存する
【０１９９】
１日目：細胞のプレーティング
細胞の収穫
培養フラスコから培地を吸引し、細胞をＨＢＳＳで洗い、および吸引する。
トリプシンを加え、培養する。
細胞が分離したように見えたら、生育培地中で細胞を再懸濁する。
細胞を継代するために、新しい生育培地とともに、新しいフラスコに移す。
ウェルプレートにプレーティングし、さらに２つのプレートにプレーティングする。
Ａ．細胞の計数
細胞懸濁物を、ピペットを使って混合する。
細胞を計数するのに、血球計数器を使う。
血球計数器のチャンバー上に細胞懸濁物を乗せる。
細胞を数える。
プレート接種：
Ｄ−ＭＥＭ低グルコース中１０％タンパクを除去したＦＢＳ、フェノールレッドなし、１％Ａｂ−Ａｍからなるプレーティング培地を使う。
１４枚のプレートに、１６５μｌ／ウェルでプレーティング。
無菌のフラスコ中で、プレーティング培地に細胞懸濁液を加える。
混合する。
細胞をウェルごとに加える。
細胞を培養器中に置く。
細胞は、トランスフェクションの前に、約７５％集密的であるべきである。
【０２００】
２日目：トランスフェクション
工程１：ＤＮＡと培地
ＤＮＡを混合するために、単純なＤＭＥＭ培地を試験管に加える。
レポーター遺伝子ｐＦＲ−ＬＵＣを加える。
Ｇａｌ４−ＲＸＲ−ＤＥＦとＶＰ１６−ＶＤＲ−ＬＢＤを加える。
工程２：ＦｕＧＥＮＥと培地
ＦｕＧＥＮＥを混合するために、単瞬なＤＭＥＭ培地を地検感に準備する。
ＦｕＧＥＮＥ  ６トランスフェクション試薬を加える。
インキュベートする。
工程３：ＦｕＧＥＮＥ、ＤＮＡおよび培地の複合体
工程２のＦｕＧＥＮＥ培地複合体を、工程１のＤＮＡ培地複合体に加える。
インキュベートする。
工程４：ＦｕＧＥＮＥ、ＤＮＡ、および培地複合体をウェルプレートへ
工程３のＦｕＧＥＮＥ−ＤＮＡ−培地複合体を、それぞれのプレートに加える。
インキュベートする。
【０２０１】
３日目：投薬
処理の準備
トランスフェクションの時間の間、放置しておく。
ＤＭＳＯ中の化合物のストック溶液を作る。
全ての化合物が溶解するまでボルテックスする。
Ｄ−ＭＥＭ（低グルコース−フェノールレッドなし）中に、さらに希釈する。
全ての化合物について、４連で、最終体積を得るように加える。
インキュベートする。
【０２０２】
４日目：ルシフェラーゼ検定
薬剤処理の後でプレートを読む
全てのウェルから培地の部分を除去し、残り物をそのままにしておく。
Ｓｔｅａｄｙ−Ｇｌｏルシフェラーゼ試薬混合物を、ウェルごとに加える。
インキュベートする。
それぞれのウェルを、発光カウンター、パッカード製のＴｏｐ  Ｃｏｕｎｔ  ＮＸＴを使って計数する。バックグラウンドを減らすために、プレート間の遅れを設定する。
【０２０３】
（２）Ｃａｃｏ−２細胞検定のための材料と方法：
１０％のチャーコール処理ＦＢＳ（ハイクローン、ローガン、ユタ州）を含むフェノールレッドなしのＤＭＥＭ（インビトロジェン、カールスバッド、カリフォルニア州）中で生育したＣａｃｏ−２細胞は、Ｆｕｇｅｎｅ  ６試薬（ロシュ  ダイアグノスティクス、インディアナポリス、インディアナ州）を用いて、トランスフェクションした。細胞（５０００／ウェル）は、９６ウェルプレート中に、トランスフェクションの１８時間前にプレーティングした。細胞は、Ｇａｌ−４応答性レポーターｐＦＲＬｕｃ（１５０ｎｇ，ストラタジーン、ラホーヤ、カリフォルニア州）と受容体発現ベクターｐＧａｌ４−ＶＤＲ−ＬＢＤ（１０ｎｇ）とで、Ｆｕｇｅｎｅ  ６試薬（０．２μｌ／ｗｅｌｌ）とともに、トランスフェクションした。ＤＮＡ−Ｆｕｇｅｎｅ複合体は、その混合物を室温にて３０分間インキュベートすることによって形成した。細胞は、５時間にわたって、３連でトランスフェクションされ、トランスフェクションの１８時間後に、様々な濃度のＶＤＲリガンド（０．０１から１０，０００ｎＭの濃度範囲）で処理した。ルシフェラーゼ活性は、Ｓｔｅａｄｙ−Ｇｌｏ試薬キット（プロメガ、マジソン、ウィスコンシン州）を使って、製造者の仕様書に従って、定量した。
【０２０４】
（３）ＯＣＮプロモーター検定の材料と方法
ＶＤＲリガンドによるオステオカルシンの活性化は、ルシフェラーゼレポーター遺伝子
と融合させた、ラットのオステオカルシンプロモーターを安定して発現している、ラット骨芽細胞様細胞株ＲＧ−１５（ＲＯＳ  １７／２．８）において評価した。安定な細胞株は、以前に報告された通りに確立した（Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｏｓｔｅｏｃａｌｃｉｎ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｉｎｖｏｌｖｅｓ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ａ−  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ｃ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｐａｔｈｗａｙｓ．Ｂｏｇｕｓｌａｗｓｋｉ，Ｇ．，Ｈａｌｅ，Ｌ．Ｖ．，Ｙｕ，Ｘ．−Ｐ．，Ｍｉｌｅｓ，Ｒ．Ｒ．，Ｏｎｙｉａ，Ｊ．Ｅ．，Ｓａｎｔｅｒｒｅ，Ｒ．Ｆ．，Ｃｈａｎｄｒａｓｅｋｈａｒ，Ｓ．Ｊ  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．  ２７５，９９９−１００６，２０００）。集密的なＲＧ−１５細胞は、５％ＦＢＳ、３００μｇ／ｍｌのＧ４１８を含むＤＭＥＭ／Ｆ−１２培地（３：１）中で維持され、３７℃で、５％ＣＯ2／９５％空気の雰囲気下でトリプシン処理（０．２５％トリプシン）され、および白色不透明の９６−ウェル細胞培養プレートにプレーティングした（２５０００細胞／ウェル）。２４時間後、細胞（ＤＭＥＭ／Ｆ−１２培地＋２％ＦＢＳ中）は、ＤＭＳＯに溶解した、様々な濃度の化合物で処理した。最終のＤＭＳＯ濃度は、０．０１％（ｖ／ｖ）であった。４８時間の処理の後、培地を除去し、細胞は５０μｌの溶解バッファー（ルシフェラーゼレポーター検定システム、ロシュ  ダイアグノスティクス、インディアナポリス、インディアナ州）で溶解され、およびべーリンガーマンハイムのルシフェラーゼレポーター遺伝子検定キットを使って、製造者の仕様書に従って、ルシフェラーゼ活性が検定した。
【０２０５】
（４）マウス高カルシウム血症検定のための材料と方法
離乳したばかりの、ウィルス−抗体を持たない、生後５から６週間のメスのＤＢＦマウス（ハーラン、インディアナポリス、インディアナ州）を全ての実験において使用する。動物を、実験の飼育器の条件に２日間順応させる。マウスは、自由に食べ物（１．２％Ｃａと０．９％Ｐを加えたＴＤ５００１、テクラッド、マジソン、ウィスコンシン州）と水にアクセスでき、１２時間の明／暗サイクル中、２２℃で維持する。動物を、グループあたり４から５匹のマウスのグループに分ける。１０％エタノールと９０％ゴマ油中に調製した、異なった量の試験化合物をチューブによる栄養補給を介して６日間、経口的にマウスに対して投与する。さらに、１α−２５（ＯＨ）2Ｄ3  ０．５μｇ／ｋｇ／ｄを、ポジティヴコントロールとして、一つグループのマウスに与えた。血清中のイオン化したカルシウムを、Ｃｉｂａ−Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃａ＋＋／ＰＨ分析器（モデル６３４、キロン  ダイアグノスティクス社、東ウォルポール、マサチューセッツ州）により、イソフルラン麻酔の下、最後の投与から６時間後に評価する。グループごとに異なる生データは、有意レベルがＰ＜０．０５であるような、フィッシャーの保護最小有意差（ＰＬＳＤ）を用いた、分散分析（ＡＮＯＶＡ）によって評価する。
【０２０６】
（５）ケラチン生成細胞増殖検定：
ＫＥＲｔｒ細胞（ＡＴＣＣより入手した、レトロウイルスベクターで形質転換したヒトの皮膚のケラチン生成細胞）を、ＥＧＦ（ライフ  テクノロジーズ、ロックビル、メリーランド州）不在下、ウシ下垂体抽出物を添加したケラチン生成細胞無血清培地１００μｌ中において、９６ウェルの平底プレートにプレーティングし（３０００細胞／ウェル）、３７℃で２日間培養した。細胞は、様々な濃度のＶＤＲリガンド（３連の、１０，０００ｎＭから０．１ｎＭまでの２倍の連続希釈）で処理し、ＥＧＦ不在下１００μｌ中のウシ下垂体抽出物を添加したケラチン生成細胞無血清培地に溶解し、３７℃で７２時間インキュベートした。ＢｒｄＵ（５−ブロモ−２’−デオキシウリジン）取り込みをＤＮＡ複製の測定（細胞増殖ＥＬＩＳＡキット、ロシュ  ダイアグノスティクス、インディアナポリス、インディアナ州）として分析し、吸光度４０５ｎｍで測定した。効力値（ＩＣ50値）は、最大半量の応答を導き出す化合物の濃度（ｎＭ）として決定した。
【０２０７】
（６）ヒトＩＬ−１０誘導検定の材料と方法
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣｓ）の単離：
Ａ．ヒトの血液５０ｍＬを回収し、培地、ＲＰＭＩ−１６４０で希釈する。
Ｂ．フィコールで滅菌して遠心管を準備する。
Ｃ．遠心管に希釈した血液を加える。
Ｄ．遠心する。
Ｅ．最上層を捨て、中間層から細胞を回収する。
Ｆ．全ての細胞を４本の遠心管に分け、培地を加える。
Ｇ．遠心する。
Ｈ．培地を吸引除去し、再懸濁する。
Ｉ．全ての細胞を回収する。
Ｊ．１２００ｒｐｍで１０分間遠心する。
Ｋ．２％ＦＢＳを加えたＲＰＭＩ−１６４０中に再懸濁し、細胞を数える。
ＰＢＭＣの刺激：
Ｌ．ＤＭＳＯに溶かしたＴＰＡを準備する。
Ｍ．ＰＨＡを水に溶解する。
Ｎ．ＴＰＡ／ＰＨＡ処理したＰＢＭＣｓをウェルプレートにプレーティングする。
Ｏ．インキュベートする。
処理：
Ｐ．単純なＲＰＭＩ−１６４０培地に希釈した全ての化合物を調製する。
Ｑ．希釈した化合物を加える。
Ｒ．インキュベートする。
サンプル回収と検定：
Ｓ．遠心により全ての細胞を除去し、免疫学的検定法によって、ＩＬ−１０について上清を検定する。
Ｔ．抗ヒトＩＬ−１０抗体で覆われたビーズを使い、製造者（リンコ  リサーチ社、セント・チャールズ、ミズーリ州）による記述のとおりに、ＩＬ−１０検定を行う。
【０２０８】
（７）ＣａＴ１検定
１０％ウシ胎仔血清（インビトロジェン、カールスバッド、カリフォルニア州）を添加したＤＭＥＭ（高グルコース、２５ｍＭ  Ｈｅｐｅｓバッファー添加、インビトロジェン、カールスバッド、カリフォルニア州）中に維持した、ヒト結腸ガン細胞株である、Ｃａｃｏ−２細胞を全体積１００μｌ／ウェルで９６ウェルプレート中に、１ウェルあたり５５００細胞でプレーティングする。細胞は、カルシウムトランスポーター、ＣａＴ１を発現する小さな腸細胞へと分化するように、６日間９６ウェルプレート中に保持する。プレーティング後３日目に、古い培地を除去し、新しい培地（１５０μｌ／ウェル）に置き換える。６日目に、古い培地を除去し、細胞は、ＤＭＥＭ（低グルコース、フェノールレッド非添加；インビトロジェン、カールスバッド、カリフォルニア州）中、１０％のチャーコール処理ウシ胎仔血清（ハイクローン、ローガン、ユタ州）を含む処理培地（１８０μｌ／ウェル）の中に保持する。細胞は、処理培地（２０μｌ／ウェル）中に調製した、様々な濃度のＶＤＲリガンド（０．０１ｎＭから１０，０００ｎＭの濃度範囲）で処理する。処理の２４時間後、全ＲＮＡを製造者（キアゲン、バレンシア、カリフォルニア州）によって記載した通りのＲＮｅａｓｙ  ９６法によって調製する。ＲＮＡを逆転写し、製造者（アプライド  バイオシステムズ、フォスターシティー、カリフォルニア州）の使用説明書に従って、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ７９００ＨＴ  配列検出システムを用いた定量的ＲＴ−ＰＣＲによって、ヒトＣａＴ１とＧＡＰＤＨ（対照）のメッセージについて増幅する。最適化したプライマーのペアと、ヒトＣａＴ１とＧＡＰＤＨ遺伝子のプローブは、市販のもの（アプライド  バイオシステムズ、フォスターシティー、カリフォルニア州）を購入する。３８４ウェルＴａｑｍａｎ  ＰＣＲプレート中の、それぞれの２０μｌの定量的ＲＴ−ＰＣＲの反応液は、順方向と逆方向のプライマー（９００ｎＭ）、Ｔａｑｍａｎプローブ（２００ｎＭ）、全ＲＮＡ（９６ウェル培養プレートのそれぞれのウェルからの４μｌ）、および１０μｌのＴａｑｍａｎユニバーサルＰＣＲマスターミックス（ロシュ  ダイアグノスティクス、インディアナポリス、インディアナ州）から成る。反応液は、４８℃で３０分間インキュベートし、つづいて９５℃で１０分、および４０サイクルのＰＣＲ（９５℃で１５秒間、その後６０℃で１分間）へと移行する。ＧＡＰＤＨは、内部標準として使用し、そのプライマーとプローブのセットは市販のもの（アプライド  バイオシステムズ、フォスターシティー、カリフォルニア州）を購入する。
【国際調査報告】
2007512326.tif 000071
2007512326.tif 000072