(57)【要約】  本発明は、ＴＧＦ−βシグナル伝達経路を阻害するＴＧＦ−β阻害剤［タイプＩのＴＧＦ−β受容体（ＴＧＦβ−Ｒ１）と優先的に結合する分子を包含］を投与することで悪性神経膠腫を治療する方法に関する。そのような阻害剤は好適には非ペプチド低分子であり、それにはキナゾリン誘導体が含まれる。本発明は、また、神経膠腫細胞および他の免疫細胞に対するＴＧＦ−β介在効果を逆転させることでそれらがシグナルを屈折する度合を低くする方法にも関し、この方法は、神経膠腫の細胞または組織をＴＧＦ−β阻害剤にインビボもしくはインビトロで接触させることを含んで成る。
2007517046.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物被験体における悪性神経膠腫を治療する方法であって、前記被験体にＴＧＦβ−Ｒ１キナーゼ受容体と特異的に結合する分子を治療的に有効な量で投与することを含んで成る方法。
【請求項２】
前記神経膠腫が星状細胞腫、上衣細胞腫、乏突起膠腫、混合性神経膠腫、乏突起膠腫および視神経膠腫から成る群から選択される請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記神経膠腫が星状細胞腫である請求項２記載の方法。
【請求項４】
前記星状細胞腫が膠細胞性筋芽細胞腫である請求項３記載の方法。
【請求項５】
前記哺乳動物がヒトである請求項１記載の方法。
【請求項６】
前記ヒトが成人である請求項５記載の方法。
【請求項７】
前記ヒトが子供である請求項６記載の方法。
【請求項８】
前記分子が非ペプチド低分子である請求項１記載の方法。
【請求項９】
前記分子がｐ３８キナーゼが介在する生物学的活性も追加的に阻害する請求項１記載の方法。
【請求項１０】
前記分子がｐ３８キナーゼが介在する生物学的活性に比べてＴＧＦ−β−Ｒ１が介在する生物学的活性を優先的に阻害する請求項１記載の方法。
【請求項１１】
前記分子が式（１）
【化１】
2007517046.tif 000078
［式中、
Ｒ３は、非妨害性置換基であり、
Ｚは、各々、ＣＲ２またはＮであり、ここで、環Ａの中で２以下のＺ位がＮであり、そしてここで、環Ａの中の隣接して位置する２つのＺ位がＮではあることは起こり得ず、
Ｒ２は、各々独立して、非妨害性置換基であり、
Ｌは、リンカーであり、
ｎは、０または１であり、そして
Ａｒ’は、場合により１−３個の非妨害性置換基で置換されていてもよい環式脂肪族、環式複素脂肪族、芳香族または複素芳香族部分の残基である］
で表される化合物またはこれの薬学的に受け入れられる塩もしくはプロドラッグ形態物である請求項１記載の方法。
【請求項１２】
前記化合物がキナゾリン誘導体である請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
Ｚ３がＮでありそしてＺ５−Ｚ８がＣＲ２である請求項１１記載の方法。
【請求項１４】
Ｚ３がＮでありそしてＺ５−Ｚ８の中の少なくとも１つが窒素である請求項１１記載の方法。
【請求項１５】
Ｒ３が場合により置換されていてもよいフェニル部分である請求項１１記載の方法。
【請求項１６】
Ｒ３が２−、４−、５−、２，４−および２，５−置換フェニル部分から成る群から選択される請求項１１記載の方法。
【請求項１７】
アルコキシ（１−６Ｃ）またはハロ
【請求項１８】
前記式（１）で表される化合物が［４−（３−メチル）−ピリジル］−６−クロロ−２−フルオロフェニル−ピリジンまたはこれの薬学的に受け入れられる塩もしくはプロドラッグ形態物である請求項１１記載の方法。
【請求項１９】
前記分子が式（４）
【化２】
2007517046.tif 000079
［式中、
Ａｒは、環員を５−１２員含有する場合により置換されていてもよい芳香族または場合により置換されていてもよい複素芳香族部分（ここで、前記複素芳香族部分はＯ、Ｓおよび／またはＮを１個以上含有する）を表すが、但し前記場合により置換されていてもよいＡｒが
【化３】
2007517046.tif 000080
（ここで、Ｒ５は、Ｈ、アルキル（１−６Ｃ）、アルケニル（２−６Ｃ）、アルキニル（２−６Ｃ）、環員を５−１１員含有する芳香族もしくは複素芳香族部分である）
ではないことを条件とし、
Ｘは、ＮＲ１、ＯまたはＳであり、
Ｒ１は、Ｈ、アルキル（１−８Ｃ）、アルケニル（２−８Ｃ）またはアルキニル（２−８Ｃ）であり、
Ｚは、ＮまたはＣＲ４を表し、
Ｒ２は、各々独立して、非妨害性置換基であり、そして
ｎは、０、１、２、３、４または５である］
で表される化合物またはこれの薬学的に受け入れられる塩もしくはプロドラッグ形態物である請求項１記載の方法。
【請求項２０】
ｎ＞２でありかつＲ２の２個以上が隣接して位置する場合、それらが一緒になって各ヘテロ原子が独立してＯ、ＮまたはＳであってもよいヘテロ原子を１から３個含有する５から７員の非芳香族、複素芳香族または芳香族の環を形成していてもよい請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
前記分子が式（５）
【化４】
2007517046.tif 000081
［式中、
Ｚ５、Ｚ６、Ｚ７およびＺ８は、各々、ＮまたはＣＨであり、ここで、１または２個のＺ５、Ｚ６、Ｚ７およびＺ８がＮであり、そしてここで、隣接して位置する２つのＺ位がＮではあることは起こり得ず、
ｍおよびｎは、各々独立して、０−３であり、
Ｒ１は、ハロ、アルキル、アルコキシまたはハロゲン化アルキルであり、ここで、隣接して位置する２つのＲ１基が一緒になって５−６員の複素環式環を形成していてもよく、
Ｒ２は、非妨害性置換基であり、そして
Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３である］
で表される化合物またはこれの薬学的に受け入れられる塩もしくはプロドラッグ形態物である請求項１記載の方法。
【請求項２２】
悪性神経膠腫関連遺伝子に対するＴＧＦ−β介在効果を逆転させる方法であって、前記遺伝子を含有する細胞を、前記細胞の中に存在するＴＧＦβ−Ｒ１受容体キナーゼと特異的に結合する非ペプチド低分子ＴＧＦ−β阻害剤に接触させることを含んで成る方法。
【請求項２３】
前記細胞が膠芽細胞腫に関連している請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
前記遺伝子が前記細胞の中で過剰発現する請求項２２記載の方法。
【請求項２５】
前記遺伝子が前記細胞の中で発現する度合が不充分である請求項２２記載の方法。
【請求項２６】
前記阻害剤が２種以上の遺伝子の発現に対するＴＧＦ−β介在効果を逆転させる請求項２２記載の方法。
【請求項２７】
前記阻害剤が多様な膠芽細胞腫関連遺伝子の発現に対するＴＧＦ−β介在効果を逆転させる請求項２２記載の方法。
【請求項２８】
前記遺伝子１種または２種以上がＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、ＴＧＦ−βＲＩ、ＴＧＦ−βＲＩＩ、Ｓｍａｄ２、Ｓｍａｄ３、Ｓｍａｄ４、ＩＬ−１０、ＣＤ９５、ＩＬ−６、ＩＩ−１、ＩＧＦ−１、ＶＥＧＦ、ＭＭＰ、ＣＯＸ−２、ＴＩＰＭ、ＰＡＩ−１、ＴＮＦａ、ＩＬ−１１、ＥＧ、およびＦＧＦから成る群から選択される請求項２２記載の方法。
【請求項２９】
前記阻害剤がＳｍａｄ蛋白質、ｐ３８およびＴＡＫ１が介在する生物学的活性も追加的に阻害する請求項２２記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、膠芽細胞腫およびＴＧＦ−βシグナル伝達に関連した他の悪性神経膠腫をトランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦ−β）阻害剤を用いて治療する方法に関する。本発明は、好適には、タイプ１のＴＧＦ−β受容体（ＴＧＦβ−Ｒ１）と特異的に結合するＴＧＦ−β阻害剤を投与することで前記病気および関連した状態を治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
トランスフォーミング増殖因子−ベータ（ＴＧＦ−β）は、細胞の増殖および分化、胚形成および骨形成、細胞外マトリクス形成、血液生成、免疫および炎症反応の多機能調節因子であるファミリーの蛋白質であるＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２およびＴＧＦ−β３を表す（非特許文献１、２）。このスーパーファミリーの他の員には、アクチビン、インヒビン、骨形成蛋白質およびミュラー管抑制物質が含まれる。ＴＧＦ−βは細胞内シグナル伝達経路を開始させることで最終的に細胞周期を調節するか、増殖反応を制御するか、或は細胞外マトリクス蛋白質（外側から入る細胞シグナル伝達、細胞接着、転移および細胞間伝達を仲介する）に関係する遺伝子の発現をもたらす。ＴＧＦ−βは発癌の初期段階では腫瘍抑制因子として働く一方で後期段階では悪性増殖を助長することが知られている（非特許文献３）。
【０００３】
ＴＧＦ−βはこれの生物学的作用を受容体系を通して及ぼすが、そのような受容体系には、細胞内にセリン−トレオニンキナーゼドメイン（これはＳｍａｄファミリーの転写制御因子を通してシグナルを伝達する）を有するタイプ１およびタイプ２の１回膜貫通型ＴＧＦ−β受容体（または受容体サブニットとも呼ばれる）が含まれる。ＴＧＦ−βがタイプＩＩ受容体の細胞外ドメインと結合するとタイプＩＩ受容体（ＴＧＦβ−Ｒ２）によるタイプＩ受容体（ＴＧＦβ−Ｒ１）の燐酸化および活性化が誘発される。その活性化されたＴＧＦβ−Ｒ１が受容体に関連した共転写因子Ｓｍａｄ２／Ｓｍａｄ３を燐酸化することで、それを活性化させるが、それは活性化した状態で細胞質の中のＳｍａｄ４と結合する。そのＳｍａｄ複合体は核の中に転位し、ＤＮＡ結合補因子、例えばＦａｓｔ−１などと結合し、特定遺伝子のエンハンサーおよびサプレッサー領域と結合しそして転写を制御する。そのような遺伝子が発現すると細胞周期制御因子（これは増殖反応を制御する）または細胞外マトリクス蛋白質（これは外側から入る細胞シグナル伝達、細胞接着、転移および細胞内伝達を仲介する）の合成がもたらされる。ＴＧＦ−βシグナル伝達によってまたＭＡＰキナーゼ−ＥＲＫカスケードの如き他のシグナル伝達経路も活性化される。論評に関しては例えば特許文献４および５（これらは引用することによって明らかに本明細書に組み入れられる）を参照のこと。ＴＧＦ−βシグナル伝達経路に関するさらなる情報を例えば非特許文献６、７、８、９に見ることができる。
【０００４】
ヒト膠芽細胞腫患者が手術、放射線療法およびニトロソ尿素が基になった化学療法の標準的治療を受けた場合の平均生存期間は１年そこそこである（非特許文献１０）。そのような腫瘍を治療する代替手段として免疫療法が長年に渡って探求されてきている、と言うのは、ヒト神経膠腫患者は生体外で細胞免疫反応が特に不足していることを示し（非特許文献１１）かつヒト神経膠腫細胞は癌細胞が免疫抑制分子を発現すると言った特性に系列的に関係しているからである。それらには可溶因子、例えばＴＧＦ−β（非特許文献１２）、プロスタグランジン（非特許文献１３）、ＩＬ−１０（非特許文献１４）などばかりでなく細胞表面分子、例えばＣＤ７０（非特許文献１５）またはＨＬＡ−Ｇ（非特許文献１６）なども含まれる。ＴＧＦ−βが悪性神経膠腫の中で示す望ましくない影響はその宿主に免疫抑制を誘発することに限定されず、そのような望ましくない影響には、ＴＧＦ−βが転移および侵襲で果たす決定的な役割が含まれる（非特許文献１７）。
【０００５】
膠芽細胞腫の苛酷さそして長期生存をもたらす満足される治療任意選択が不足していることを鑑み、そのような破壊的病気の治療に適した新規な手段が非常に求められている。
【非特許文献１】ＲｏｂｅｒｔｓおよびＳｐｏｒｎ、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（１９９０）９５：４１９−５８
【非特許文献２】Ｍａｓｓａｇｕｅ他、Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ（１９９０）６：５９７−６４６
【非特許文献３】Ｃｕｉ他、Ｃｅｌｌ（１９９６）８６：５３１−５４２
【非特許文献４】Ｗｈｉｔｍａｎ、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１２：２４４５−６２（１９９８）
【非特許文献５】Ｍｉｙａｚｏｎｏ他、Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０００）７５：１１１−５７
【非特許文献６】Ａｔｔｉｓａｎｏ他、「Ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｔｈｅ  ＴＧＦ−β  ｓｕｐｅｒ−ｆａｍｉｌｙ」、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９６：１６４６−７（２００２）
【非特許文献７】ＢｏｔｔｉｎｇｅｒおよびＢｉｔｚｅｒ、「ＴＧＦ−β  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｒｅｎａｌ  ｄｉｓｅａｓｅ」、Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．１３：２６００−２６１０（２００２）
【非特許文献８】Ｔｏｐｐｅｒ，Ｊ．Ｎ．、「ＴＧＦ−β  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｓｙｓｔｅｍ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ａ  ｃｏｎｔｅｘｔ−ｓｐｅｃｉｆｃ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ」、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ，Ｍｅｄ．１０：１３２−７（２０００）、ｒｅｖｉｅｗ
【非特許文献９】Ｉｔｏｈ他、「Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−β  ｆａｍｉｌｙ」、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２６７：６８５４−６７（２０００）、ｒｅｖｉｅｗ
【非特許文献１０】Ｇｌｉｏｍａ  Ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｔｒｉａｌｉｓｔｓ（ＧＴＭ）Ｇｒｏｕｐ．Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ａｄｕｌｔ  ｈｉｇｈ−ｇｒａｄｅ  ｇｌｉｏｍａ：ａ  ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ｒｅｖｉｅｗ  ａｎｄ  ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ  ｐａｔｉｅｎｔ  ｄａｔａ  ｆｒｏｍ  １２  ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ  ｔｒｉａｌｓ．Ｌａｎｃｅｔ、３５９：１０１１−１０１８（２００２）
【非特許文献１１】Ｒｏｓｚｍａｎ他、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ、１２：３７０−３８４（１９９１）
【非特許文献１２】Ｆｏｎｔａｎａ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３２：１８３７−１８４４（１９８４）
【非特許文献１３】Ｆｏｎｔａｎａ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２９：２４１３−２４１９（１９８２）
【非特許文献１４】Ｈｉｓｈｉｉ他、Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ、３７：１１６０−１１６６（１９９５）
【非特許文献１５】Ｗｉｓｃｈｈｕｓｅｎ他、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、６２：２５９２−２５９９（２００２）
【非特許文献１６】Ｗｉｅｎｄｌ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１６８：４７７２−４７８０（２００２）
【非特許文献１７】Ｗｉｃｋ他、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、２１：３３６０−３３６８（２００１）
【発明の開示】
【０００６】
発明の要約
本発明は、悪性神経膠腫（膠芽細胞腫を包含）を治療するに適した新規な治療手段に関する。本発明は、特に、ＴＧＦ−βシグナル伝達経路阻害剤の員を用いて悪性神経膠腫を治療することに関する。本発明は、具体的には、ＴＧＦβキナーゼ受容体、例えばタイプ１のＴＧＦ−β受容体（ＴＧＦβ−Ｒ１）などと特異的に結合する阻害剤を用いて悪性神経膠腫（膠芽細胞腫を包含）を治療することを包含する。
【０００７】
本発明は、１つの面において、哺乳動物被験体における悪性神経膠腫を治療する方法に関し、この方法は、前記被験体にＴＧＦβキナーゼ受容体を阻害する分子を有効な量で投与することを含んで成る。
【０００８】
特別な態様において、本治療方法で用いる分子は、式（１）
【０００９】
【化１】
2007517046.tif 000003
【００１０】
［式中、
Ｒ３は、非妨害性置換基であり、
Ｚは、各々、ＣＲ２またはＮであり、ここで、環Ａの中でＮであるＺ位の数は２以下であり、そしてここで、環Ａの中の隣接して位置する２つのＺ位がＮではあることは起こり得ず、
Ｒ２は、各々独立して、非妨害性置換基であり、
Ｌは、リンカーであり、
ｎは、０または１であり、そして
Ａｒ’は、場合により１−３個の非妨害性置換基で置換されていてもよい環式脂肪族、環式複素脂肪族、芳香または複素芳香族部分の残基である］
で表される化合物またはこれの薬学的に受け入れられる塩もしくはプロドラッグ形態物である。
【００１１】
別の態様において、本発明の治療で用いる分子は、式（２）
【００１２】
【化２】
2007517046.tif 000004
【００１３】
｛式中、
Ｙ１は、場合によりハロ、アルコキシ（１−６Ｃ）、アルキルチオ（１−６Ｃ）、アルキル（１−６Ｃ）、ハロアルキル（１−６Ｃ）、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｐｈ、−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｐｈ、シアノ、フェニルおよびＣＯ２Ｒ［ここで、Ｒは水素またはアルキル（１−６Ｃ）であり、そしてｍは０−３である］から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよいフェニルまたはナフチルであるか、或は５員もしくは７員の芳香もしくは非芳香環（ここで、この環が含有するＮ、ＯおよびＳから独立して選択されるヘテロ原子の数は３以下である）と縮合しているフェニルであり、
Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４およびＹ５は、独立して、水素、アルキル（１−６Ｃ）、アルコキシ（１−６Ｃ）、ハロアルキル（１−６Ｃ）、ハロ、ＮＨ２、ＮＨ−アルキル（１−６Ｃ）またはＮＨ（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ［ここで、ｎは０−３である］を表すか、或はＹ２、Ｙ３、Ｙ４およびＹ５の中の隣接して位置する対が場合により窒素原子を２個以下の数で含有していてもよい縮合６員芳香環を形成しており、ここで、前記環は場合によりアルキル（１−６Ｃ）、アルコキシ（１−６Ｃ）、ハロアルキル（１−６Ｃ）、ハロ、ＮＨ２、ＮＨ−アルキル（１−６Ｃ）またはＮＨ（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ［ここで、ｎは０−３である］から独立して選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく、そしてＹ２、Ｙ３、Ｙ４およびＹ５の中の残りは水素、アルキル（１−６Ｃ）、アルコキシ（１−６Ｃ）、ハロアルキル（１−６Ｃ）、ハロ、ＮＨ２、ＮＨ−アルキル（１−６Ｃ）またはＮＨ（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ［ここで、ｎは０−３である］を表し、そして
Ｘ１およびＸ２の中の一方はＮでありそしてもう一方はＮＲ６［ここで、Ｒ６は、水素またはアルキル（１−６Ｃ）である］である｝
で表される化合物またはこれの薬学的に受け入れられる塩もしくはプロドラッグ形態物である。
【００１４】
さらなる態様において、本発明の治療方法で用いる分子は、式（３）
【００１５】
【化３】
2007517046.tif 000005
【００１６】
｛式中、
Ｙ１は、場合によりハロ、アルコキシ（１−６Ｃ）、アルキルチオ（１−６Ｃ）、アルキル（１−６Ｃ）、−Ｏ−（ＣＨ２）−Ｐｈ、−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、シアノ、フェニルおよびＣＯ２Ｒ［ここで、Ｒは水素またはアルキル（１−６Ｃ）であり、そしてｎは０、１、２または３である］から成る群から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよいナフチル、アントラセニルまたはフェニルであるか、或はＹ１は、５−７員の芳香もしくは非芳香環式環（ここで、この環式環は場合によりＮ、ＯおよびＳから独立して選択されるヘテロ原子を２個以下の数で含有していてもよい）と縮合しているフェニルを表し、
Ｙ２は、Ｈ、ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−ＰｈまたはＮＨ−アルキル（１−６Ｃ）［ここで、ｎは０、１、２または３である］であり、
Ｙ３は、ＣＯ２Ｈ、ＣＯＮＨ２、ＣＮ、ＮＯ２、アルキルチオ（１−６Ｃ）、−ＳＯ２−アルキル（１−６Ｃ）、アルコキシ（１−６Ｃ）、ＳＯＮＨ２、ＣＯＮＨＯＨ、ＮＨ２、ＣＨＯ、ＣＨ２ＮＨ２またはＣＯ２Ｒ［ここで、Ｒは水素またはアルキル（１−６Ｃ）である］であり、
Ｘ１およびＸ２の中の一方はＮまたはＣＲ’でありそしてもう一方はＮＲ’またはＣＨＲ’［ここで、Ｒ’は、水素、ＯＨ、アルキル（Ｃ−１６）またはシクロアルキル（Ｃ３−７）である］であるか、或はＸ１およびＸ２の中の一方がＮまたはＣＲ’の時にはもう一方がＳまたはＯであってもよい｝
で表される化合物またはこれの薬学的に受け入れられる塩もしくはプロドラッグ形態物である。
【００１７】
更に別の態様において、本発明の治療方法で用いる分子は、式（４）
【００１８】
【化４】
2007517046.tif 000006
【００１９】
［式中、
Ａｒは、環員を５−１２員含有する場合により置換されていてもよい芳香族または場合により置換されていてもよい複素芳香族部分（ここで、前記複素芳香族部分はＯ、Ｓおよび／またはＮを１個以上含有する）を表すが、但し前記場合により置換されていてもよいＡｒが
【００２０】
【化５】
2007517046.tif 000007
【００２１】
（ここで、Ｒ５は、Ｈ、アルキル（１−６Ｃ）、アルケニル（２−６Ｃ）、アルキニル（２−６Ｃ）、環員を５−１１員含有する芳香族もしくは複素芳香族部分である）
ではないことを条件とし、
Ｘは、ＮＲ１、ＯまたはＳであり、
Ｒ１は、Ｈ、アルキル（１−８Ｃ）、アルケニル（２−８Ｃ）またはアルキニル（２−８Ｃ）であり、
Ｚは、ＮまたはＣＲ４を表し、
Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、Ｈまたは非妨害性置換基であり、
Ｒ２は、各々独立して、非妨害性置換基であり、そして
ｎは、０、１、２、３、４または５である］
で表される化合物またはこれの薬学的に受け入れられる塩もしくはプロドラッグ形態物である。１つの態様において、ｎ＞２でありかつＲ２の２個以上が隣接して位置する場合、それらが一緒になって各ヘテロ原子が独立してＯ、ＮまたはＳであってもよいヘテロ原子を１から３個含有する５から７員の非芳香、複素芳香または芳香環を形成していてもよい。
【００２２】
さらなる態様において、本発明の治療方法で用いる分子は、式（５）
【００２３】
【化６】
2007517046.tif 000008
【００２４】
［式中、
Ｚ５、Ｚ６、Ｚ７およびＺ８は、各々、ＮまたはＣＨであり、ここで、１または２個のＺ５、Ｚ６、Ｚ７およびＺ８がＮであり、そしてここで、隣接して位置する２つのＺ位がＮではあることは起こり得ず、
ｍおよびｎは、各々独立して、０−３であり、
Ｒ１は、ハロ、アルキル、アルコキシまたはハロゲン化アルキルであり、ここで、隣接して位置する２つのＲ１基が一緒になって５−６員の複素環式環を形成していてもよく、
Ｒ２は、非妨害性置換基であり、そして
Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３である］
で表される化合物またはこれの薬学的に受け入れられる塩もしくはプロドラッグ形態物である。
【００２５】
別の面において、本発明は、悪性神経膠腫関連遺伝子に対するＴＧＦ−β介在効果を逆転させる方法に関し、この方法は、前記遺伝子を含有する細胞を前記細胞の中に存在するＴＧＦβ−Ｒ１受容体キナーゼと特異的に結合する非ペプチド低分子ＴＧＦ−β阻害剤に接触させることを含んで成る。好適な態様における低分子阻害剤は式（１）−（５）で表される化合物である。
好適な態様の詳細な説明
Ａ．定義
特に明記しない限り、本明細書で用いる技術的および科学的用語は、本発明が属する技術の通常の技術を持つ技術者が通常理解する意味と同じ意味を有する。Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ他、Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、第２版、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（ニューヨーク、ＮＹ  １９９４）およびＭａｒｃｈ、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、第４版、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（ニューヨーク、ＮＹ  １９９２）は、本出願で用いる用語の多くに対する一般的な指針を本分野の技術者に与えるものである。
【００２６】
本明細書で用いる如き用語「悪性神経膠腫」を最も幅広い意味で用い、これは、膠細胞または脳の中の支援細胞の中で始まる脳腫瘍を指す。この用語には、具体的に、これらに限定するものでないが、星状細胞腫、上衣細胞腫、乏突起膠腫、混合性神経膠腫、乏突起膠腫および視神経膠腫が含まれる。
【００２７】
本明細書では用語「膠芽細胞腫」、「多形成膠芽腫」および「ＩＶグレードの星状細胞腫」を互換的に用い、これらは、最も幅広い意味で、脳腫瘍の最も一般的な形態物である侵攻型の悪性神経膠腫ばかりでなくそのような腫瘍によって特徴づけられるか或はそれに関連した状態を記述する用語である。従って、膠芽細胞腫、例えば細胞密度の高い星状細胞腫などは典型的に核および細胞の多形成、高い血管増殖、高い縮瞳数値（場合により壊死を伴う）、顕微的浸潤性病変、高い標識率および他のそのような診断基準によって特徴づけられる。
【００２８】
悪性神経膠腫、例えば膠芽細胞腫などに対する「ＴＧＦ−β介在効果を逆転させる」の言及を本明細書で用いる場合、如何なる場合にも、ＴＧＦ−βが膠芽細胞株に対してか、或はインビボで神経膠腫に対してか、或は悪性神経膠腫（例えば膠芽細胞腫）に関連した遺伝子または蛋白質の発現に対して示す影響（適用可能な場合にはいずれも）をある程度または完全に逆転させる（星状もしくは乏突起膠細胞系統の中枢神経系細胞の正常なサンプルに比べて）ことを意味する。この定義下では完全な逆転（例えば正常な発現レベルに完全に戻る）は必要でないことを強調する（有利ではあるが）。
【００２９】
「治療」は、疾患の発症を防止するか或は病状を改善する意図で実施する診療行為である。従って、「治療」は、治療的処置および予防的または防止的手段の両方を指す。治療を必要としているヒトには、疾患に既にかかっているヒトばかりでなく疾患を予防すべきヒトが含まれる。腫瘍（例えば神経膠腫または膠芽細胞腫）を治療する時の治療薬は、腫瘍細胞の病状を直接的に軽減し得るか、或は腫瘍細胞が他の治療作用物による処置、例えば放射線および／または化学療法などに対して示す感受性をより高くし得る。従って、治療には、これらに限定するものでないが、（１）腫瘍の増殖をある程度抑制すること（増殖を遅らせることおよび完全に増殖を阻止することを包含）、（２）腫瘍細胞の数を少なくすること、（３）腫瘍の大きさを小さくすること、（４）腫瘍細胞が隣接する末梢器官および／または組織に浸潤するのを抑制する（即ち、低下させるか、遅くするか或は完全に阻止する）こと、（５）転移を抑制する（即ち、低下させるか、遅くするか或は完全に阻止する）こと、（６）抗腫瘍免疫反応を増強すること（必ずしもではないが結果として腫瘍の退行または排除がもたらされる可能性がある）、（７）腫瘍に関連した１種以上の症状をある程度軽減し、腫瘍に由来して循環するＴＧＦ−βが原因で起こる全身的免疫抑制を軽減すること、（８）治療後の生存時間を長くすること、および／または（９）治療してから所定時間が経過した時の死亡率を低下させることが含まれる。
【００３０】
癌（悪性神経膠腫、例えば膠芽細胞腫などを包含）の「病状」には、患者の幸福を危うくするあらゆる現象が含まれる。それには、これらに限定するものでないが、細胞の制御不能な異常増殖、転移、隣接する細胞の正常な機能の妨害、サイトカイン（例えばＴＧＦ−β）または他の分泌産物が異常なレベルで放出されること、炎症または免疫反応の抑制または激化、新生組織形成、前悪性、悪性、取り巻いているか或は遠位の組織または器官への侵襲が含まれる。
【００３１】
膠芽細胞腫の治療を言及、例えば本発明の阻害剤を用いる時などに言及する「治療的に有効な量」は、この上で行った「治療」の定義下で挙げた効果の中の１つ以上をもたらし得る量を指す。
【００３２】
タイプ１のＴＧＦ−β受容体に関連した用語「特異的に結合」、「特異的に結合する」、「特異的結合」および文法的に相当する用語を、他の如何なるポリペプチド（ＴＧＦβ−Ｒ２およびｐ３８を包含）と結合するよりも高い親和力でタイプ１のＴＧＦ−β受容体（ＴＧＦβ−Ｒ１）と結合することを指す目的で用いる。特異的結合は典型的にＴＧＦβ−Ｒ１内のユニークなエピトープへの結合を意味する。この結合はＴＧＦβ−Ｒ１によるＴＧＦ−βシグナル伝達を有効に抑制する親和力で起こるべきである。同様な定義が他の標的との「特異的結合」にも当てはまる。
【００３３】
用語「ポリヌクレオチド」は、これを単数形または複数形で用いる時、一般に、ポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチドのいずれかを指し、これは未修飾のＲＮＡもしくはＤＮＡまたは修飾されたＲＮＡもしくはＤＮＡであり得る。従って、本明細書で定義する如きポリヌクレオチドには、これらに限定するものでないが、例えば１本鎖もしくは２本鎖ＤＮＡ、１本鎖および２本鎖領域を含有するＤＮＡ、１本鎖および２本鎖ＲＮＡ、および１本鎖および２本鎖領域を含有するＲＮＡ、ＤＮＡとＲＮＡを含有するハイブリッド分子（これは１本鎖であってもよいか或はより典型的には２本鎖であってもよいか、或は１本鎖領域と２本鎖領域を含有していてもよい）が含まれる。加うるに、本明細書で用いる如き用語「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡもしくはＤＮＡまたはＲＮＡとＤＮＡの両方を含有する３本鎖領域も指す。そのような領域の中のストランドは同じ分子に由来するか或は異なる分子に由来するものであってもよい。そのような領域は、当該分子の中の１種以上が有する全領域を含有していてもよいが、より典型的には、当該分子の中の数種が有する１領域のみを含有していてもよい。三重螺旋領域を有する分子の中の１種はしばしばオリゴヌクレオチドである。用語「ポリヌクレオチド」には、具体的に、修飾された塩基を１個以上含有するＤＮＡおよびＲＮＡが含まれる。従って、安定性または他の理由で修飾を受けたバックボーンを有するＤＮＡまたはＲＮＡは「ポリヌクレオチド」である、と言うのは、本明細書ではその用語を意図するからである。その上、通常ではない塩基、例えばイノシンなど、または修飾を受けた塩基、例えばトリチウム化塩基などを含有するＤＮＡまたはＲＮＡも本明細書で定義する如き用語「ポリヌクレオチド」の範囲内に含める。用語「ポリヌクレオチド」は、一般に、未修飾ポリヌクレオチドが化学、酵素および／または代謝による修飾を受けた形態物ばかりでなくウイルスおよび細胞（単純細胞および複雑型細胞を包含）の特徴であるＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態物を包含する。
【００３４】
用語「オリゴヌクレオチド」は比較的短いポリヌクレオチドを指し、それには、これらに限定するものでないが、１本鎖デオキシリボヌクレオチド、１本鎖もしくは２本鎖リボヌクレオチド、ＲＮＡ：ＤＮＡハイブリッドおよび２本鎖ＤＮＡが含まれる。オリゴヌクレオチド、例えば１本鎖ＤＮＡプローブオリゴヌクレオチドなどの合成はしばしば化学的方法、例えば市販の自動化オリゴヌクレオチド合成装置などを用いて行われる。しかしながら、オリゴヌクレオチドの製造では他のいろいろな方法も使用可能であり、それにはインビトロ組換え型ＤＮＡ介在技術およびＤＮＡを細胞および有機体の中で発現させることによる方法が含まれる。
【００３５】
用語「識別的に発現した遺伝子」、「識別的遺伝子発現」およびこれらの同義語を互換的に用いるが、この用語は、試験サンプルの中で発現が活性化されて正常または対照サンプルの中で起こる発現に比べて発現レベルが高いか或は低い遺伝子を指す。本発明の目的で、「識別的遺伝子発現」は所定遺伝子の正常なサンプル中で起こる発現と試験サンプル中で起こる発現の間の差が少なくとも約２．５倍、好適には少なくとも約４倍、より好適には少なくとも約６倍、最も好適には少なくとも約１０倍の時に存在すると見なす。
【００３６】
本明細書で用いる如き用語「阻害剤」は、天然のＴＧＦ−β分子の生物学的機能を阻害する能力を有する分子、例えばＴＧＦβ−Ｒ１受容体と特異的に結合する非ペプチド低分子などを指す。従って、用語「阻害剤」をＴＧＦ−βおよびこれの受容体が示す生物学的役割に関連して定義する。
【００３７】
本明細書で用いる如き用語「優先的に阻害する」は、「優先的に阻害される」標的への阻害効果の方が他の如何なる標的への阻害効果よりも有意に大きいことを意味する。従って、ＴＧＦ−β−Ｒ１キナーゼをｐ３８キナーゼと比べた時の優先的な阻害に関して、この用語は、当該阻害剤がＴＧＦ−β−Ｒ１キナーゼが介在する生物学的活性、例えば腫瘍の転移活性、腫瘍の増殖、壊死などをｐ３８キナーゼが介在する生物学的活性よりも有意に阻害することを意味する。受容体を優先的に阻害することに関する阻害度の差は多様であり得るが、一般に少なくとも約２倍、より好適には少なくとも約５倍、更により好適には少なくとも約１０倍である。
【００３８】
治療目的の用語「哺乳動物」は哺乳動物として分類分けされる動物のいずれかを指し、それには、ヒト、高等霊長類、家畜および農場の動物、および動物園、スポーツまたはペット動物、例えば犬、猫、牛、馬、羊、豚、山羊、兎などが含まれる。哺乳動物は好適にはヒトである。
【００３９】
「頭蓋内」は、頭蓋内または脊髄の遠位末端または遠位末端近くを意味し、それには骨髄、脳幹、橋、小脳および大脳が含まれる。
【００４０】
手術または放射線または他の作用物のような１種以上のさらなる治療処置「と組み合わせて」の投与には、同時（並列）およびいずれかの順の逐次的投与が含まれる。好適な順の中の１つは手術の後に放射線に続く化学療法である。化学療法には、例えば静脈内ロムスチンまたは白金、経口カルムスチン、ニトロソ尿素、ビスクロロエチルニトロソ尿素（ＢＣＮＵ）、テモゾロマイドまたはプロカルバジン、ＣＣＮＵ、ビンクリスチン（ＰＣＶ）、放射線増感薬剤などを用いた組み合わせ化学療法および単一薬剤細胞毒性化学療法が含まれる。放射線療法には、再放射線治療および手術後の放射線治療、ガンマナイフまたは線形加速器を用いた放射線外科、低線量のパーマネントシード近接照射療法、高線量のステレオスタティック近接照射療法が含まれる。
【００４１】
本発明の特別な面では、本発明のＴＧＦ−β−Ｒ１キナーゼ阻害剤を他のＩＧＦ−β阻害剤と組み合わせてもよく、そのような阻害剤には、例えばアンチセンス戦略［Ｆａｋｈｒａｉ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９３：２９０９−２９１４（１９９６）］、フリンファミリーのＴＧＦ−β−プロセシングプロテアーゼの阻害剤および他の薬剤、例えばトランシラスト（ｔｒａｎｓｉｌａｓｔ）［Ｐｌａｔｔｅｎ他、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、９３：５３−６１（２００１）］などが含まれる。本発明は、更に、本発明のＴＧＦβ−Ｒ１阻害剤と他の酵素の阻害剤の組み合わせ治療も包含し、そのような酵素には、チロシンキナーゼ、ファルネシルトランスフェラーゼおよびマトリクスメタロプロテイナーゼが含まれる。そのような阻害剤の例には、これらに限定するものでないが、メタロプロテイナーゼ阻害剤であるマリマスタット（ｍａｒｉｍａｓｔａｔ）が含まれる。
【００４２】
本明細書で用いる如き「非妨害性置換基」は、本明細書に示す式で記述される如き化合物がＴＧＦ−β活性を阻害する能力を定性的に損なわないままにする置換基である。従って、そのような置換基は阻害度を変えない置換基であり得る。しかしながら、当該化合物がＴＧＦ−β活性を阻害する能力を保持する限り、そのような置換基も「非妨害性」として分類分けする。「非妨害性置換基」は、好適には、それの存在によってある化合物が有するＴＧＦ−β阻害能力が実質的に壊されない置換基である。
【００４３】
本明細書で用いる如き「ヒドロカルビル残基」は、炭素と水素のみを含有する残基を指す。そのような残基は脂肪もしくは芳香、直鎖、環式、分枝、飽和もしくは不飽和であってもよい。ヒドロカルビル残基は、この置換残基の炭素および水素員に加えてヘテロ原子を含有していてもよい（このことを示す場合には）。従って、そのようなヘテロ原子を含有するとして具体的に示す場合、そのようなヒドロカルビル残基はまたカルボニル基、アミノ基、ヒドロキシル基なども含有していてもよいか、或はヒドロカルビル残基の「重鎖」の中にヘテロ原子を含有していてもよい。
【００４４】
本明細書で用いる如き用語「アルキル」、「アルケニル」および「アルキニル」には直鎖および分枝鎖および環式の一価置換基が含まれる。その例にはメチル、エチル、イソブチル、シクロヘキシル、シクロペンチルエチル、２−プロペニル、３−ブチニルなどが含まれる。そのようなアルキル、アルケニルおよびアルキニル置換基は典型的にＣを１−１０個（アルキル）またはＣを２−１０個（アルケニルまたはアルキニル）含有する。それらは好適にはＣを１−６個（アルキル）またはＣを２−６個（アルケニルまたはアルキニル）含有する。ヘテロアルキル、ヘテロアルケニルおよびヘテロアルキニルも同様に定義されるが、それらはバックボーン残基の中にＯ、ＳもしくはＮヘテロ原子またはこれらの組み合わせを１−２個含有していてもよい。
【００４５】
本明細書で用いる如き「アシル」は、カルボニル基を通して追加的残基と連結しているアルキル、アルケニル、アルキニルおよび関連ヘテロ形態物の定義を包含する。
【００４６】
「芳香族」部分または「アリール」部分は、単環式もしくは縮合二環式部分、例えばフェニルまたはナフチルなどを指し、また、「複素芳香族」はＯ、ＳおよびＮから選択されるヘテロ原子を１個以上含有する単環式もしくは縮合二環式環系を指す。ヘテロ原子の含有が許されるのは５員環ばかりでなく６員環への含有である。従って、典型的な芳香系には、ピリジル、ピリミジル、インドリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾトリアゾリル、イソキノリル、キノリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾフラニル、チエニル、フリル、ピロリル、チアゾリル、オキサゾリル、イミダゾリルなどが含まれる。電子が環系全体に渡って分布している意味で芳香の特徴を有する如何なる単環系も縮合環である二環系も前記定義に含まれる。そのような環系が含有する環員原子の数は典型的に５−１２である。
【００４７】
同様に、「アリールアルキル」および「ヘテロアルキル」は、炭素鎖を通して別の残基と連結している芳香族および複素芳香族系を指し、それには、Ｃ数が典型的に１−６またはＣ数が１−８の置換もしくは非置換の飽和もしくは不飽和炭素鎖またはこれらのヘテロ形態物が含まれる。そのような炭素鎖はまたカルボニル基を含有していてもよく、従って、それらはアシルもしくはヘテロアシル部分として置換可能である。
Ｂ．本発明を実施する様式
本発明の阻害剤は、膠芽細胞腫および他の悪性神経膠腫の発生、増殖または拡散に関連したＴＧＦ−β経路の中の１員以上が示す生物学的活性を阻害することを特徴とする。好適な態様において、本発明の阻害剤はＴＧＦ−β受容体が介在する生物学的反応を阻害する。別の好適な態様において、本発明の阻害剤はタイプ１のＴＧＦ−β受容体が介在する生物学的反応、特にマトリクス産生をタイプ２のＴＧＦ−β受容体介在細胞増殖に影響を与えることなく選択的に阻害する。
【００４８】
好適な更に別の態様において、本発明の化合物はｐ３８キナーゼに比べてＴＧＦ−βＲ１キナーゼを優先的に阻害する。
本発明の化合物
本発明は、少なくともある程度ではあるが、ＴＧＦ−βシグナル伝達経路の中の１員以上が示す生物学的機能を阻害することによって神経膠腫（膠芽細胞腫を包含）を治療することができることを驚くべきことに見いだしたことが基になっている。本発明の阻害剤には、これらに限定するものでないが、有機低分子、ペプチド、ポリペプチド（抗体および抗体フラグメントを包含）、アンチセンスポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチドデコイ分子などが含まれる。特定態様において、本発明の阻害剤は、大きさが一般に約１，０００ダルトン未満の有機低分子（非ペプチド低分子）である。好適な非ペプチド低分子の分子量は約７５０ダルトン未満、より好適には約５００ダルトン未満、更により好適には３００ダルトン未満である。
【００４９】
好適な態様における化合物は、式
【００５０】
【化７】
2007517046.tif 000009
【００５１】
［式中、
Ｒ３は、非妨害性置換基であり、
Ｚは、各々、ＣＲ２またはＮであり、ここで、環Ａの中でＮであるＺ位の数は２以下であり、そしてここで、環Ａの中の隣接して位置する２つのＺ位がＮではあることは起こり得ず、
Ｒ２は、各々独立して、非妨害性置換基であり、
Ｌは、リンカーであり、
ｎは、０または１であり、そして
Ａｒ’は、場合により１−３個の非妨害性置換基で置換されていてもよい環式脂肪族、環式複素脂肪族、芳香族または複素芳香族部分の残基である］
で表される化合物またはこれの薬学的に受け入れられる塩である。
【００５２】
本明細書において、より好適な態様における有機低分子は、キナゾリンの誘導体およびキナゾリンの２位および４位に相当する位置に必須置換基を含有する関連化合物である。一般にキナゾリン核が好適ではあるが、また、本発明の範囲内の代替物も以下に示す。好適な態様ではＺ３がＮおよびＣＨであり、好適な態様ではＺ５−Ｚ８がＣＲ２である。しかしながら、Ｚ５−Ｚ８の各々がまたＮであってもよいが、但し前記を条件とする。従って、基本的キナゾリン型環系に関して好適な態様には、本質的にキナゾリンおよびＺ５−Ｚ８の全部ばかりでなくＺ３がＮまたはＣＨのいずれかである態様が含まれる。また、Ｚ３がＮでありそしてＺ５またはＺ８のいずれかまたはＺ５とＺ８の両方がＮでありそしてＺ６およびＺ７がＣＨまたはＣＲ２である態様も好適である。Ｒ２がＨ以外の場合、ＣＲ２が６位および／または７位に存在するのが好適である。従って、例として、本発明の範囲内のキナゾリン誘導体には、芳香環が非妨害性置換基（Ｒ３）（これは更に置換されていてもよい）として２位に結合しているキナゾリン核を含有する化合物が含まれる。
【００５３】
キナゾリンの４位に相当する位置に存在する置換基ＬＡｒ’に関して、Ｌは存在するか或は存在せず、置換基Ａｒ’から環Ｂの間に２−８Å、好適には２−６Å、より好適には２−４Åの距離を与えているリンカーである。この距離は、Ｌの一結合価が結合している環Ｂの中の環炭素からこのリンカーのもう一方の結合価が結合しているＡｒ’環式部分の原子までの測定距離である。前記Ａｒ’部分はまた環Ｂと直接結合していてもよい（即ち、ｎが０の場合）。Ｌの態様は、限定するものでないが、典型的には、式Ｓ（ＣＲ２２）ｍ、−ＮＲ１ＳＯ２（ＣＲ２２）ｌ、ＮＲ１（ＣＲ２２）ｍ、ＮＲ１ＣＯ（ＣＲ２２）ｌ、Ｏ（ＣＲ２２）ｍ、ＯＣＯ（ＣＲ２２）ｌ、および
【００５４】
【化８】
2007517046.tif 000010
【００５５】
［式中、ＺはＮまたはＣＨであり、ｍは０−４であり、そしてｌは０−３、好適にはそれぞれ１−３および１−２である］で表される態様である。Ｌは、好適には、−ＮＲ１−を環Ｂと直接結合させている。Ｒ１の好適な態様はＨであるが、Ｒ１はまたアシル、アルキル、アリールアシルまたはアリールアルキルであってもよく、ここで、前記アリール部分は１−３個の基、例えばアルキル、アルケニル、アルキニル、アシル、アリール、アルキルアリール、アロイル、Ｎ−アリール、ＮＨ−アルキルアリール、ＮＨ−アロイル、ハロ、ＯＲ、ＮＲ２、ＳＲ、−ＳＯＲ、−ＮＲＳＯＲ、−ＮＲＳＯ２Ｒ、−ＳＯ２Ｒ、−ＯＣＯＲ、−ＮＲＣＯＲ、−ＮＲＣＯＮＲ２、−ＮＲＣＯＯＲ、−ＯＣＯＮＲ２、−ＲＣＯ、−ＣＯＯＲ、−ＳＯ３Ｒ、−ＣＯＮＲ２、ＳＯ２ＮＲ２、ＣＮ、ＣＦ３、およびＮＯ２［ここで、Ｒは、各々独立して、Ｈまたはアルキル（１−４Ｃ）である］などで置換されていてもよく、そのような置換基は、好適には、アルキル（１−６Ｃ）、ＯＲ、ＳＲまたはＮＲ２［ここで、ＲはＨまたは低級アルキル（１−４Ｃ）である］である。より好適には、Ｒ１はＨまたはアルキル（１−６Ｃ）である。そのような置換基の中に含まれている如何なるアリール基も更に例えばアルキル、アルケニル、アルキニル、ハロ、ＯＲ、ＮＲ２、ＳＲ、−ＳＯＲ、ＳＯ２Ｒ、−ＯＣＯＲ、−ＮＲＣＯＲ、−ＮＲＣＯＮＲ２、−ＮＲＣＯＯＲ、−ＯＣＯＮＲ２、−ＲＣＯ、−ＣＯＯＲ、ＳＯ２Ｒ、ＮＲＳＯＲ、ＮＲＳＯ２Ｒ、−ＳＯ３Ｒ、−ＣＯＮＲ２、ＳＯ２ＮＲ２、ＣＮ、ＣＦ３、またはＮＯ２［ここで、Ｒは、各々独立して、Ｈまたはアルキル（１−４Ｃ）である］などで置換されていてもよい。
【００５６】
Ａｒ’は、アリール、ヘテロアリール（６−５員の縮合ヘテロアリールを包含）、環式脂肪もしくは環式複素脂肪である。Ａｒ’は、好適にはフェニル、２−、３−もしくは４−ピリジル、インドリル、２−もしくは４−ピリミジル、ベンゾイミダゾリル、インドリルであり、好適には、各々が、場合により、場合により置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、Ｎ−アリール、ＮＨ−アロイル、ハロ、ＯＲ、ＮＲ２、ＳＲ、−ＯＯＣＲ、−ＮＲＯＣＲ、ＲＣＯ、−ＣＯＯＲ、−ＣＯＮＲ２、ＳＯ２ＮＲ２、ＣＮ、ＣＦ３、およびＮＯ２［ここで、Ｒは、各々独立して、Ｈまたはアルキル（１−４Ｃ）である］から成る群から選択される基で置換されていてもよい。
【００５７】
より好適には、Ａｒ’はインドリル、６−ピリミジル、３−もしくは４−ピリジル、または場合により置換されていてもよいフェニルである。
【００５８】
Ａｒ’が場合により置換されていてもよいフェニルである態様の場合の置換基には、これらに限定するものでないが、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルキルアリール、アロイル、Ｎ−アリール、ＮＨ−アルキルアリール、ＮＨ−アロイル、ハロ、ＯＲ、ＮＲ２、ＳＲ、−ＳＯＲ、−ＳＯ２Ｒ、−ＯＣＯＲ、−ＮＲＣＯＲ、−ＮＲＣＯＮＲ２、−ＮＲＣＯＯＲ、−ＯＣＯＮＲ２、ＲＣＯ、−ＣＯＯＲ、−ＳＯ３Ｒ、−ＣＯＮＲ２、ＳＯ２ＮＲ２、ＣＮ、ＣＦ３、およびＮＯ２［ここで、Ｒは、各々独立して、Ｈまたはアルキル（１−４Ｃ）である］が含まれる。好適な置換基には、ハロ、ＯＲ、ＳＲおよびＮＲ２［ここで、ＲはＨ、メチルまたはエチルである］が含まれる。このような置換基はフェニル環が有する５つの位置の全部を占めていてもよいが、好適には１−２つの位置、好適には１つの位置を占めていてもよい。Ａｒ’の態様には、置換もしくは非置換フェニル、２−、３−もしくは４−ピリジル、２−、４−もしくは６−ピリミジル、インドリル、イソキノリル、キノリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾフラニル、ピリジル、チエニル、フリル、ピロリル、チアゾリル、オキサゾリル、イミダゾリルおよびモルホリニルが含まれる。Ａｒ’の１つの態様として、３−もしくは４−ピリジル、特に置換されていない形態物の４−ピリジルが特に好適である。
【００５９】
アリール部分、特にフェニル部分のいずれも、５−７員の炭素環式もしくは複素環式脂肪環を一緒に形成する２個の置換基を含有していてもよい。
【００６０】
従って、キナゾリンの４位に相当する環Ｂの位置に存在する置換基の好適な態様には、２−（４−ピリジル）エチルアミノ、４−ピリジルアミノ、３−ピリジルアミノ、２−ピリジルアミノ、４−インドリルアミノ、５−インドリルアミノ、３−メトキシアニリニル、２−（２，５−ジフルオロフェニル）エチルアミノなどが含まれる。
【００６１】
Ｒ３は、一般に、Ｏ、ＳおよびＮから選択されるヘテロ原子の数が０−５のヒドロカルビル残基（１−２０Ｃ）である。Ｒ３は、好適には、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールアルキルであり、これらは各々が置換されていないか或は１−３個の置換基で置換されている。そのような置換基はハロ、ＯＲ、ＮＲ２、ＳＲ、−ＳＯＲ、−ＳＯ２Ｒ、−ＯＣＯＲ、−ＮＲＣＯＲ、−ＮＲＣＯＮＲ２、−ＮＲＣＯＯＲ、−ＯＣＯＮＲ２、ＲＣＯ、−ＣＯＯＲ、−ＳＯ３Ｒ、ＮＲＳＯＲ、ＮＲＳＯ２Ｒ、−ＣＯＮＲ２、ＳＯ２ＮＲ２、ＣＮ、ＣＦ３、およびＮＯ２［ここで、Ｒは、各々独立して、Ｈまたはアルキル（１−４Ｃ）である］を包含する群から独立して選択され、そしてアリールまたはヘテロアリール部分のいずれに関しても、前記基には更にアルキル（１−６Ｃ）またはアルケニルもしくはアルキニルも含まれる。Ｒ３の好適な態様（キナゾリンの２位に相当する位置に存在する置換基）には、場合により１−２個の置換基、好適にはハロ、アルキル（１−６Ｃ）、ＯＲ、ＮＲ２およびＳＲ（ここで、Ｒは、この上で定義した通りである）で置換されていてもよいフェニル部分が含まれる。従って、キナゾリンの２位に存在させるに好適な置換基には、フェニル、２−ハロフェニル、例えば２−ブロモフェニル、２−クロロフェニル、２−フルオロフェニルなど、２−アルキル−フェニル、例えば２−メチルフェニル、２−エチルフェニルなど、４−ハロフェニル、例えば４−ブロモフェニル、４−クロロフェニル、４−フルオロフェニルなど、５−ハロフェニル、例えば５−ブロモフェニル、５−クロロフェニル、５−フルオロフェニルなど、２，４−もしくは２，５−ハロフェニル（ここで、異なる位置に存在するハロ置換基は同じまたは異なってもよい）、例えば２−フルオロ−４−クロロフェニル、２−ブロモ−４−クロロフェニル、２−フルオロ−５−クロロフェニル、２−クロロ−５−フルオロフェニルなどが含まれる。Ｒ３の他の好適な態様にはシクロペンチルまたはシクロヘキシル部分が含まれる。
【００６２】
この上に示したように、Ｒ２は、この上で定義した如き非妨害性置換基である。
【００６３】
また、Ｒ２も、各々独立して、Ｏ、ＳおよびＮから選択されるヘテロ原子の数が０−５のヒドロカルビル残基（１−２０Ｃ）である。Ｒ２は、好適には、独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アシルまたはこれらのヘテロ形態物であるか、或はアリール、アリールアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールアルキルであり、これらは各々が置換されていないか或はアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルキルアリール、アロイル、Ｎ−アリール、ＮＨ−アルキルアリール、ＮＨ−アロイル、ハロ、ＯＲ、ＮＲ２、ＳＲ、−ＳＯＲ、−ＳＯ２Ｒ、−ＯＣＯＲ、−ＮＲＣＯＲ、−ＮＲＣＯＮＲ２、−ＮＲＣＯＯＲ、ＮＲＳＯＲ、ＮＲＳＯ２Ｒ、−ＯＣＯＮＲ２、ＲＣＯ、−ＣＯＯＲ、−ＳＯ３Ｒ、ＮＲＳＯＲ、ＮＲＳＯ２Ｒ、−ＣＯＮＲ２、ＳＯ２ＮＲ２、ＣＮ、ＣＦ３、およびＮＯ２［ここで、Ｒは、各々独立して、Ｈまたはアルキル（１−４Ｃ）である］から成る群から独立して選択される１−３個の置換基で置換されている。前記置換基上のアリールまたはアロイル基は更に例えばアルキル、アルケニル、アルキニル、ハロ、ＯＲ、ＮＲ２、ＳＲ、−ＳＯＲ、−ＳＯ２Ｒ、−ＯＣＯＲ、−ＮＲＣＯＲ、−ＮＲＣＯＮＲ２、−ＮＲＣＯＯＲ、−ＯＣＯＮＲ２、ＲＣＯ、−ＣＯＯＲ、−ＳＯ３Ｒ、−ＣＯＮＲ２、ＳＯ２ＮＲ２、ＣＮ、ＣＦ３、およびＮＯ２［ここで、Ｒは、各々独立して、Ｈまたはアルキル（１−４Ｃ）である］などで置換されていてもよい。より好適には、Ｒ２上の置換基をＲ４、ハロ、ＯＲ４、ＮＲ４２、ＳＲ４、−ＯＯＣＲ４、−ＮＲＯＣＲ４、−ＣＯＯＲ４、Ｒ４ＣＯ、−ＣＯＮＲ４２、−ＳＯ２ＮＲ４２、ＣＮ、ＣＦ３、およびＮＯ２［ここで、Ｒ４は、各々独立して、Ｈ、または場合により置換されていてもよいアルキル（１−６Ｃ）、または場合により置換されていてもよいアリールアルキル（７−１２Ｃ）であり、そして２個のＲ４または前記アルキルもしくはアリールアルキル上の２個の置換基が一緒になって５−７員の縮合脂肪環を形成していてもよい］から選択する。
【００６４】
Ｒ２は、また、これ自身、ハロ、ＯＲ、ＮＲ２、ＳＲ、−ＳＯＲ、−ＳＯ２Ｒ、−ＯＣＯＲ、−ＮＲＣＯＲ、−ＮＲＣＯＮＲ２、−ＮＲＣＯＯＲ、ＮＲＳＯＲ、ＮＲＳＯ２Ｒ、−ＯＣＯＮＲ２、ＲＣＯ、−ＣＯＯＲ、−ＳＯ３Ｒ、ＮＲＳＯＲ、ＮＲＳＯ２Ｒ、−ＣＯＮＲ２、ＳＯ２ＮＲ２、ＣＮ、ＣＦ３、およびＮＯ２［ここで、Ｒは、各々独立して、Ｈまたはアルキル（１−４Ｃ）である］から成る群から選択されてもよい。
【００６５】
Ｒ２で表されるより好適な置換基は、この上に挙げた如きＡｒ’またはＲ３が含有するフェニル部分に関して挙げた如き置換基である。隣接して位置する２個のＣＲ２が一緒になって原子数が５−７の炭素環式もしくは複素環式縮合脂肪環を形成していてもよい。好適なＲ２置換基は式Ｒ４、−ＯＲ４、ＳＲ４またはＲ４ＮＨ−、特にＲ４ＮＨ−［ここで、Ｒ４は、この上で定義した通りである］で表される置換基である。特に、Ｒ４が置換されているアリールアルキルであるケースが好適である。式（１）で表される化合物の具体例を以下の表１−３に示す。表１に挙げる化合物は全部がキナゾリン環系を有し（Ｚ３はＮであり）、この場合、Ａ環は置換されていない（Ｚ５−Ｚ８はＣＨを表す）。Ｂ環の置換基を以下の表に挙げる。
【００６６】
【表１】
2007517046.tif 000011
【００６７】
【表２】
2007517046.tif 000012
【００６８】
【表３】
2007517046.tif 000013
【００６９】
表２に挙げる化合物は、示すようにキナゾリン核の修飾形を含有する。表２に示す化合物は全部、Ｚ３がＮでありそしてＺ６およびＺ７がＣＨを表す式（１）の態様である。全てのケースで、リンカーＬは存在していてＮＨである。
【００７０】
【表４】
2007517046.tif 000014
【００７１】
環ＡがＺ６またはＺ７の所にＣＲ２を含有していてＲ２がＨではない追加的化合物を調製した。これらの化合物は全部、ＬがＮＨでありそしてＡｒ’が４−ピリジルであるキナゾリン誘導体であり、これらを表３に示す。
【００７２】
【表５】
2007517046.tif 000015
【００７３】
本発明の化合物（１）のさらなる代表的構造を以下の表４に示す。
【００７４】
【表６】
2007517046.tif 000016
【００７５】
【表７】
2007517046.tif 000017
【００７６】
【表８】
2007517046.tif 000018
【００７７】
【表９】
2007517046.tif 000019
【００７８】
【表１０】
2007517046.tif 000020
【００７９】
【表１１】
2007517046.tif 000021
【００８０】
【表１２】
2007517046.tif 000022
【００８１】
【表１３】
2007517046.tif 000023
【００８２】
【表１４】
2007517046.tif 000024
【００８３】
この上で行った開示から明らかであろうように、本発明の方法で用いるに有用な式（１）で表される化合物の多くはキナゾリン誘導体であるが、本発明は、キナゾリン以外の核、例えばピリジン、ピリミジンなどの核を持つ置換基（この上でキナゾリン誘導体に関して考察したそれらの如き）を有する式（１）で表される化合物の使用も包含する。式（１）で表される化合物はまた２００３年３月９日付けで公開されたＰＣＴ公開番号ＷＯ  ００／１２４９７（これの開示は引用することによって明らかに全体が本明細書に組み入れられる）にも開示されている。
【００８４】
本発明の方法で用いるに適した別の群の化合物は、下記の式（２）
【００８５】
【化９】
2007517046.tif 000025
【００８６】
｛式中、
Ｙ１は、場合によりハロ、アルコキシ（１−６Ｃ）、アルキルチオ（１−６Ｃ）、アルキル（１−６Ｃ）、ハロアルキル（１−６Ｃ）、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｐｈ、−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｐｈ、シアノ、フェニルおよびＣＯ２Ｒ［ここで、Ｒは水素またはアルキル（１−６Ｃ）であり、そしてｍは０−３である］から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよいフェニルまたはナフチルであるか、或は５員もしくは７員の芳香もしくは非芳香環（ここで、この環が含有するＮ、ＯおよびＳから独立して選択されるヘテロ原子の数は３以下である）と縮合しているフェニルであり、
Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４およびＹ５は、独立して、水素、アルキル（１−６Ｃ）、アルコキシ（１−６Ｃ）、ハロアルキル（１−６Ｃ）、ハロ、ＮＨ２、ＮＨ−アルキル（１−６Ｃ）またはＮＨ（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ［ここで、ｎは０−３である］を表すか、或はＹ２、Ｙ３、Ｙ４およびＹ５の中の隣接して位置する対が場合により窒素原子を２個以下の数で含有していてもよい縮合６員芳香環を形成しており、ここで、前記環は場合によりアルキル（１−６Ｃ）、アルコキシ（１−６Ｃ）、ハロアルキル（１−６Ｃ）、ハロ、ＮＨ２、ＮＨ−アルキル（１−６Ｃ）またはＮＨ（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ［ここで、ｎは０−３である］から独立して選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく、そしてＹ２、Ｙ３、Ｙ４およびＹ５の中の残りは水素、アルキル（１−６Ｃ）、アルコキシ（１−６Ｃ）、ハロアルキル（１−６Ｃ）、ハロ、ＮＨ２、ＮＨ−アルキル（１−６Ｃ）またはＮＨ（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ［ここで、ｎは０−３である］を表し、そして
Ｘ１およびＸ２の中の一方はＮでありそしてもう一方はＮＲ６［ここで、Ｒ６は、水素またはアルキル（１−６Ｃ）である］である｝
で表される化合物またはこれの薬学的に受け入れられる塩もしくはプロドラッグ形態物である。
【００８７】
式（２）で用いる如き破線で示す二重結合は、前記化合物が互変異性環形態物を取り得ることを示している。式（２）で表される化合物およびこれらの製造に関するさらなる情報が２００２年５月２３日付けで公開されたＷＯ  ０２／４０４６８（これの開示は引用することによって明らかに全体が本明細書に組み入れられる）に開示されている。
【００８８】
本発明の方法で用いるに適した更に別の群の化合物は、下記の式（３）
【００８９】
【化１０】
2007517046.tif 000026
【００９０】
｛式中、
Ｙ１は、場合によりハロ、アルコキシ（１−６Ｃ）、アルキルチオ（１−６Ｃ）、アルキル（１−６Ｃ）、−Ｏ−（ＣＨ２）−Ｐｈ、−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、シアノ、フェニルおよびＣＯ２Ｒ［ここで、Ｒは水素またはアルキル（１−６Ｃ）であり、そしてｎは０、１、２または３である］から成る群から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよいナフチル、アントラセニルまたはフェニルであるか、或はＹ１は、５−７員の芳香もしくは非芳香環式環（ここで、この環式環は場合によりＮ、ＯおよびＳから独立して選択されるヘテロ原子を２個以下の数で含有していてもよい）と縮合しているフェニルを表し、
Ｙ２は、Ｈ、ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−ＰｈまたはＮＨ−アルキル（１−６Ｃ）［ここで、ｎは０、１、２または３である］であり、
Ｙ３は、ＣＯ２Ｈ、ＣＯＮＨ２、ＣＮ、ＮＯ２、アルキルチオ（１−６Ｃ）、−ＳＯ２−アルキル（１−６Ｃ）、アルコキシ（１−６Ｃ）、ＳＯＮＨ２、ＣＯＮＨＯＨ、ＮＨ２、ＣＨＯ、ＣＨ２ＮＨ２またはＣＯ２Ｒ［ここで、Ｒは水素またはアルキル（１−６Ｃ）である］であり、
Ｘ１およびＸ２の中の一方はＮまたはＣＲ’でありそしてもう一方はＮＲ’またはＣＨＲ’［ここで、Ｒ’は、水素、ＯＨ、アルキル（Ｃ−１６）またはシクロアルキル（Ｃ３−７）である］であるか、或はＸ１およびＸ２の中の一方がＮまたはＣＲ’の時にはもう一方がＳまたはＯであってもよい｝
で表される化合物またはこれの薬学的に受け入れられる塩もしくはプロドラッグ形態物である。
【００９１】
式（３）で表される化合物およびこれらの製造方法に関するさらなる詳細が２０００年１０月１９日付けで公開されたＷＯ  ００／６１５７６（これの開示は引用することによって全体が明らかに本明細書に組み入れられる）に開示されている。
【００９２】
さらなる態様において、本発明のＴＧＦ−β阻害剤は、下記の式（４）
【００９３】
【化１１】
2007517046.tif 000027
【００９４】
［式中、
Ａｒは、環員を５−１２員含有する場合により置換されていてもよい芳香族または場合により置換されていてもよい複素芳香族部分（ここで、前記複素芳香族部分はＯ、Ｓおよび／またはＮを１個以上含有する）を表すが、但し前記場合により置換されていてもよいＡｒが
【００９５】
【化１２】
2007517046.tif 000028
【００９６】
（ここで、Ｒ５は、Ｈ、アルキル（１−６Ｃ）、アルケニル（２−６Ｃ）、アルキニル（２−６Ｃ）、環員を５−１１員含有する芳香もしくは複素芳香部分である）
ではないことを条件とし、
Ｘは、ＮＲ１、ＯまたはＳであり、
Ｒ１は、Ｈ、アルキル（１−８Ｃ）、アルケニル（２−８Ｃ）またはアルキニル（２−８Ｃ）であり、
Ｚは、ＮまたはＣＲ４を表し、
Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、Ｈまたは非妨害性置換基であり、
Ｒ２は、各々独立して、非妨害性置換基であり、そして
ｎは、０、１、２、３、４または５である］
で表される化合物またはこれの薬学的に受け入れられる塩もしくはプロドラッグ形態物である。１つの態様において、ｎ＞２でありかつＲ２の２個以上が隣接して位置する場合、それらが一緒になって各ヘテロ原子が独立してＯ、ＮまたはＳであってもよいヘテロ原子を１から３個含有する５から７員の非芳香、複素芳香または芳香環を形成していてもよい。
【００９７】
好適な態様において、Ａｒは、環員を５−９員含有する場合により置換されていてもよい芳香族または場合により置換されていてもよい複素芳香族部分（ここで、この複素芳香部分はＮを１個以上含有する）を表すか、或は
Ｒ１は、Ｈ、アルキル（１−８Ｃ）、アルケニル（２−８Ｃ）またはアルキニル（２−８Ｃ）であるか、或は
Ｚは、ＮまたはＣＲ４を表し、ここで、
Ｒ４は、Ｈ、アルキル（１−１０Ｃ）、アルケニル（２−１０Ｃ）またはアルキニル（２−１０Ｃ）、アシル（１−１０Ｃ）、アリール、アルキルアリール、アロイル、Ｏ−アリール、Ｏ−アルキルアリール、Ｏ−アロイル、ＮＲ−アリール、ＮＲ−アルキルアリール、ＮＲ−アロイル、またはこれらのいずれかのヘテロ形態物、ハロ、ＯＲ、ＮＲ２、ＳＲ、−ＳＯＲ、−ＮＲＳＯＲ、−ＮＲＳＯ２Ｒ、−ＳＯ２Ｒ、−ＯＣＯＲ、−ＮＲＣＯＲ、−ＮＲＣＯＮＲ２、−ＮＲＣＯＯＲ、−ＯＣＯＮＲ２、−ＣＯＯＲ、−ＳＯ３Ｒ、−ＣＯＮＲ２、−ＳＯ２ＮＲ２、−ＣＮ、−ＣＦ３、または−ＮＯ２［ここで、Ｒは、独立して、Ｈまたはアルキル（１−１０Ｃ）、または前記アルキルのハロもしくはヘテロ原子含有形態物であり、これらは各々が場合により置換されていてもよい］である。好適には、Ｒ４は、Ｈ、アルキル（１−１０Ｃ）、ＯＲ、ＳＲまたはＮＲ２［ここで、Ｒは、Ｈまたはアルキル（１−１０Ｃ）であるか或はＯ−アリールである］であるか、或は
Ｒ３は、Ｒ４と同じ様式で定義され、かつ好適な形態物も同様であるが、Ｒ３は独立して具体化されるか、或は
Ｒ２は、各々独立して、アルキル（１−８Ｃ）、アルケニル（２−８Ｃ）、アルキニル（２−８Ｃ）、アシル（１−８Ｃ）、アリール、アルキルアリール、アロイル、Ｏ−アリール、Ｏ−アルキルアリール、Ｏ−アロイル、ＮＲ−アリール、ＮＲ−アルキルアリール、ＮＲ−アロイル、またはこれらのいずれかのヘテロ形態物、ハロ、ＯＲ、ＮＲ２、ＳＲ、−ＳＯＲ、−ＮＲＳＯＲ、−ＮＲＳＯ２Ｒ、−ＮＲＳＯ２Ｒ２、−ＳＯ２Ｒ、−ＯＣＯＲ、−ＯＳＯ３Ｒ、−ＮＲＣＯＲ、−ＮＲＣＯＮＲ２、−ＮＲＣＯＯＲ、−ＯＣＯＮＲ２、−ＣＯＯＲ、−ＳＯ３Ｒ、−ＣＯＮＲ２、ＳＯ２ＮＲ２、−ＣＮ、−ＣＦ３、または−ＮＯ２［ここで、Ｒは、各々独立して、Ｈまたは低級アルキル（１−４Ｃ）である］である。好適には、Ｒ２は、ハロ、アルキル（１−６Ｃ）、ＯＲ、ＳＲまたはＮＲ２［ここで、Ｒは、Ｈまたは低級アルキル（１−４Ｃ）、より好適にはハロである］であるか、或はｎは０−３である。
【００９８】
Ａｒで表される芳香族もしくは複素芳香族部分上の任意の置換基には、アルキル（１−１０Ｃ）、アルケニル（２−１０Ｃ）、アルキニル（２−１０Ｃ）、アシル（１−１０Ｃ）、アリール、アルキルアリール、アロイル、Ｏ−アリール、Ｏ−アルキルアリール、Ｏ−アロイル、ＮＲ−アリール、ＮＲ−アルキルアリール、ＮＲ−アロイル、またはこれらのいずれかのヘテロ形態物、ハロ、ＯＲ、ＮＲ２、ＳＲ、−ＳＯＲ、−ＮＲＳＯＲ、−ＮＲＳＯ２Ｒ、−ＳＯ２Ｒ、−ＯＣＯＲ、−ＮＲＣＯＲ、−ＮＲＣＯＮＲ２、−ＮＲＣＯＯＲ、−ＯＣＯＮＲ２、−ＣＯＯＲ、−ＳＯ３Ｒ、−ＣＯＮＲ２、−ＳＯ２ＮＲ２、−ＣＮ、−ＣＦ３、および／または−ＮＯ２［ここで、Ｒは、各々独立して、Ｈまたは低級アルキル（１−４Ｃ）である］が含まれる。好適な置換基には、アルキル、ＯＲ、ＮＲ２、Ｏ−アルキルアリールおよびＮＨ−アルキルアリールが含まれる。
【００９９】
一般に、置換基に含まれるアルキル、アルケニル、アルキニル、アシルまたはアリール基のいずれもこれ自身が場合により追加的置換基で置換されていてもよい。そのような置換基の性質は主置換基自身に関して挙げたそれと同様である。
【０１００】
式（４）で表される代表的な化合物を以下の表５に挙げる。
【０１０１】
【表１５】
2007517046.tif 000029
【０１０２】
【表１６】
2007517046.tif 000030
【０１０３】
【表１７】
2007517046.tif 000031
【０１０４】
【表１８】
2007517046.tif 000032
【０１０５】
【表１９】
2007517046.tif 000033
【０１０６】
【表２０】
2007517046.tif 000034
【０１０７】
【表２１】
2007517046.tif 000035
【０１０８】
【表２２】
2007517046.tif 000036
【０１０９】
【表２３】
2007517046.tif 000037
【０１１０】
【表２４】
2007517046.tif 000038
【０１１１】
【表２５】
2007517046.tif 000039
【０１１２】
【表２６】
2007517046.tif 000040
【０１１３】
【表２７】
2007517046.tif 000041
【０１１４】
【表２８】
2007517046.tif 000042
【０１１５】
【表２９】
2007517046.tif 000043
【０１１６】
【表３０】
2007517046.tif 000044
【０１１７】
【表３１】
2007517046.tif 000045
【０１１８】
【表３２】
2007517046.tif 000046
【０１１９】
【表３３】
2007517046.tif 000047
【０１２０】
【表３４】
2007517046.tif 000048
【０１２１】
【表３５】
2007517046.tif 000049
【０１２２】
【表３６】
2007517046.tif 000050
【０１２３】
【表３７】
2007517046.tif 000051
【０１２４】
【表３８】
2007517046.tif 000052
【０１２５】
【表３９】
2007517046.tif 000053
【０１２６】
【表４０】
2007517046.tif 000054
【０１２７】
【表４１】
2007517046.tif 000055
【０１２８】
【表４２】
2007517046.tif 000056
【０１２９】
【表４３】
2007517046.tif 000057
【０１３０】
【表４４】
2007517046.tif 000058
【０１３１】
【表４５】
2007517046.tif 000059
【０１３２】
【表４６】
2007517046.tif 000060
【０１３３】
【表４７】
2007517046.tif 000061
【０１３４】
【表４８】
2007517046.tif 000062
【０１３５】
【表４９】
2007517046.tif 000063
【０１３６】
【表５０】
2007517046.tif 000064
【０１３７】
【表５１】
2007517046.tif 000065
【０１３８】
【表５２】
2007517046.tif 000066
【０１３９】
【表５３】
2007517046.tif 000067
【０１４０】
【表５４】
2007517046.tif 000068
【０１４１】
本発明の方法で用いるに適したさらなるＴＧＦ−β阻害剤は、式（５）
【０１４２】
【化１３】
2007517046.tif 000069
【０１４３】
［式中、
Ｚ５、Ｚ６、Ｚ７およびＺ８は、各々、ＮまたはＣＨであり、ここで、１または２個のＺ５、Ｚ６、Ｚ７およびＺ８がＮであり、そしてここで、隣接して位置する２つのＺ位がＮではあることは起こり得ず、
ｍおよびｎは、各々独立して、０−３であり、
Ｒ１は、ハロ、アルキル、アルコキシまたはハロゲン化アルキルであり、ここで、隣接して位置する２つのＲ１基が一緒になって５−６員の脂肪複素環式環を形成していてもよく、
Ｒ２は、非妨害性置換基であり、そして
Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３である］
で表される化合物またはこれの薬学的に受け入れられる塩である。
【０１４４】
前記式（５）で表される化合物は、キナゾリン誘導体およびキナゾリンの２位および４位に相当する位置に必須置換基を含有する関連化合物である。前記式（５）で表される化合物は好適にはプテリジンまたはピリドピリミジン核を含有する。プテリジンおよび８−ピリドピリミジン核が好適である。従って、１つの態様において、Ｚ５およびＺ８はＮでありそしてＺ６およびＺ７はＣＨである。しかしながら、全てのケースで、各Ｚ５−Ｚ８の中の少なくとも１つはＮでなければならない。Ｒ１に好適な態様はハロ、好適にはＦ、Ｃｌ、ＩまたはＢｒ、最も好適にはＣｌまたはＦ、ＮＲ２、ＯＨまたはＣＦ３である。
【０１４５】
キナゾリンの２位に相当する位置に必須フェニル置換基を含有する。
【０１４６】
キナゾリンの４位に相当する位置に必須−ＮＲ３−４’−ピリジル置換基を含有するが、これは場合により非妨害性置換基を０−４個含有していてもよい、即ち（Ｒ２）ｎ［ここで、ｎは０−４である］を含有していてもよい。前記ピリジル基は好適には置換されていない、即ちｎは０である。前記ピリジル部分が置換されている場合、好適には、アルキル基、例えばメチルまたはエチルなど、またはハロ基、好適にはブロモまたはヨードなどで置換されており、ここで、これらの各々が置換されている位置は好適にはピリジルがキナゾリン誘導体の核と結合している位置に対してオルソ位である。別の態様において、ｎは１であり、そしてＲ３はメチルであり、これは好適には１’または２’位に位置する。
【０１４７】
Ｒ１置換基１個または２個以上には、好適には、かさ高さが最小限の基、例えばハロ、低級アルキル、低級アルコキシおよび低級アルキルハライド基などが含まれる。そのような基には、好適には、１個以上のハロ、例えばＣｌ、Ｆ、ＢｒおよびＩなど［ハロ基が２個以上存在する場合、それらは同じまたは異なってもよい］、ハライドを１−３個含有するハロゲン化アルキル、好適にはハロゲン化メチル、更により好適にはトリフルオロメチル、ＯＨ、Ｒ［これは低級アルキル、好適にはＣ１−６、より好適にはＣ１−３アルキル、更により好適にはメチル、エチル、プロピルまたはイソプロピル、最も好適にはメチルである］、ＯＲ［ここで、Ｒは、この上で定義した通りであり、ＯＲは、好適にはメトキシ、エトキシ、イソプロポキシ、メチルフェニルオキシである］が含まれる。隣接して位置する２個のＲ基が一緒になって２−フェニルと縮合している脂肪もしくは複素脂肪環を形成していてもよい。縮合環が存在する場合、好適には、それは５員もしくは６員、好適には５員でありかつＮ、ＳまたはＯ、好適にはＯの如きヘテロ原子を１個以上含有する。前記縮合環は好適にはフェニル環の４位および５位の所でフェニルと縮合している１，３ジオキソランである。
【０１４８】
２−フェニル基と結合しているＲ１基１個または２個以上は、フェニル環の可能な如何なる位置に結合していてもよい。Ｒ１基は、好適には、フェニルがキナゾリン誘導体核に結合している位置に対してメタ位に結合している。また、フェニルが２個の基で置換されている好適な態様において、前記基はフェニルがキナゾリン誘導体と結合している位置に対してオルソおよびメタ位に結合、より好適には隣接していないオルソとメタ位に結合している。他の態様には、前記基がオルソまたはメタ位に位置する態様が含まれる。基が２個存在する場合、フェニルの両方のメタ位または隣接するオルソとメタ位の所が置換されていることが考えられる。別法として、２個の基が縮合環を形成していてもよく、好適には、フェニルがキナゾリン誘導体と結合している位置に対してメタとパラ位に結合している縮合環を形成していてもよい。また、フェニルが置換されていないことも考えられる。
【０１４９】
ピリドピリミジンを核として含有する化合物では、これらの６−もしくは７−異性体が存在、即ち窒素がピリドピリミジンの６位もしくは７位に存在する場合、そのフェニルは好適には置換されていないか、或は好適にはハロ置換基、好適には塩素を１個含有し、これは、好適には、フェニルがピリドピリミジン部分と結合している位置に対してメタ位に結合している。
【０１５０】
前記式（５）で表される化合物において、好適には、前記フェニルは置換されており、好適にはハロ、より好適には１個または２個のハロ、更により好適にはフェニルがピリドピリミジン部分と結合している位置に対してメタもしくはパラ位がクロロでか或は両方のメタ位がジクロロで置換されているか、或はより好適には、フルオロ、好適にはジフルオロ、好適にはフェニルがピリドピリミジン部分と結合している位置に対してオルソおよびメタ位がジフルオロで置換されているか、或はより好適には、ブロモ、好適にはフェニルがピリドピリミジン部分と結合している位置に対してメタ位がブロモで置換されているか、或はより好適には、ヨード、好適にはフェニルがピリドピリミジン部分と結合している位置に対してメタ位がヨードで置換されている。
【０１５１】
８−ピリドピリミジンを含有する化合物の別の好適な態様では、フェニル基が異なる２個以上のハロ置換基で置換、好適には二置換されており、好適にはフルオロおよびクロロを含有し、より好適には、フェニルがピリドピリミジン部分と結合している位置に対してオルソおよびメタ位（隣接していない）が二置換されており、より好適には、フルオロがピリドピリミジン部分と結合しているフェニルに対してオルソ位に位置しそしてクロロがメタ位に位置するか、或は好適には、クロロとブロモで二置換、好適にはフェニルがピリドピリミジン部分と結合している位置に対してオルソおよびメタ位（隣接していない）がフルオロとブロモで二置換されており、より好適には、フルオロがフェニルがピリドピリミジン部分と結合している位置に対してオルソ位に位置しそしてブロモがメタ位に位置する。
【０１５２】
８−ピリドピリミジンを含有する化合物における別の好適な態様では、フェニル基が置換、好適には２つ以上の位置が置換されており、好適にはアルコキシまたはアリールアリールオキシ、好適にはメトキシ、エトキシ、イソプロポキシまたはベンゾキシで置換されており、好適には、フェニルがピリドピリミジン部分と結合している位置に対してオルソまたはメタ位が置換されている。
【０１５３】
８−ピリドピリミジンを含有する化合物における別の態様では、フェニル基が好適にはアルキル、好適にはメチルで置換されており、好適にはフェニルがピリドピリミジン部分と結合している位置に対してメタ位が置換されている。
【０１５４】
８−ピリドピリミジンを含有する化合物における別の好適な態様では、２個以上の置換基が一緒になって縮合環を形成していてもよい。そのような縮合環は好適にはジオキソラン環、より好適には１，３−ジオキソラン環であり、これはフェニルがピリドピリミジン部分と結合している位置に対してメタおよびパラ位の所でフェニルと縮合している。
【０１５５】
８−ピリドピリミジンを含有する化合物における別の好適な態様では、フェニル基が異なる２個以上の置換基で置換、好適には二置換、好適にはクロロとメトキシで二置換されており、好適にはフェニルがピリドピリミジン部分と結合している位置に対してオルソとメタ位（隣接しない）が二置換されており、より好適には、メトキシがフェニルがピリドピリミジン部分と結合している位置に対してオルソ位に位置しそしてクロロがメタ位に位置するか、或は好適には、フルオロとメトキシで二置換されており、好適にはフェニルがピリドピリミジン部分と結合している位置に対してオルソとメタ位（隣接する）が二置換されており、より好適には、フルオロがフェニルがピリドピリミジン部分と結合している位置に対してオルソ位に位置しそしてメトキシがメタ位に位置する。
【０１５６】
加うるに、プテリジン核を含有する式（５）で表される化合物では、フェニル基が好適にはフェニルがプテリジン部分と結合している位置に対してオルソ、メタまたはパラ位に少なくとも１個のハロ置換基を含有する。より好適な態様において、フェニル基はフェニルがプテリジン部分と結合している位置に対してオルソまたはメタ位にクロロ基を１個含有するか、或はフェニルがプテリジン部分と結合している位置に対してオルソ、メタまたはパラ位にフルオロ基を１個含有するか、或はフェニルがプテリジン部分と結合している位置に対してメタ位にブロモまたはヨードを１個含有する。別の好適な態様において、フェニル基はハロ基を２個含有、好適にはジフルオロ、好適にはフェニルがプテリジン部分と結合している位置に対してオルソとメタ位（隣接しない）が二置換されており、好適にはジクロロ、好適にはフェニルがプテリジン部分と結合している位置に対してオルソとメタ位（隣接する）が二置換されており、好適にはフルオロとクロロ、好適にはフェニルがプテリジン部分と結合している位置に対してオルソとメタ位（隣接するか或は隣接しない）が二置換されており、好適には、フルオロがオルソ位に位置しそしてクロロがいずれかのメタ位に位置し、更により好適には、クロロが隣接しないメタ位に位置するか、或は好適には、クロロとブロモが好適にはフェニルがプテリジン部分と結合している位置に対してオルソとメタ位（隣接しない）に位置する置換基であり、好適には、フルオロがオルソ位に位置しそしてブロモが隣接しないメタ位に位置する。
【０１５７】
プテリジンを含有する化合物における別の好適な態様では、フェニル基が置換、好適には１つ以上の位置が置換、好適には１つの位置が置換、より好適にはアルコキシ、更により好適にはメトキシで置換、好適にはフェニルがプテリジン部分と結合している位置に対してオルソまたはメタ位が置換されている。プテリジンを含有する化合物における別の態様では、フェニルが好適にはハロアルキル、好適にはトリフルオロメチルで置換、好適にはフェニルがプテリジン部分と結合している位置に対してメタ位が置換されている。
【０１５８】
プテリジンを含有する式（５）で表される化合物の別の好適な態様では、フェニル基が２個以上の異なる置換基、好適には２個の置換基で置換、好適にはハロとハロアルキルで二置換、より好適にはフルオロとトリフルオロメチルで二置換、好適にはフェニルがプテリジン部分と結合している位置に対してオルソとメタ位（隣接しない）が二置換されており、より好適には、フルオロがフェニルがプテリジン部分と結合している位置に対してオルソ位に位置しそしてトリフルオロメチルがメタ位に位置する。
【０１５９】
この上に示した定義に従い、Ｒ２は非妨害性置換基である。好適には、Ｒ２は、独立して、Ｈ、ハロ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アシル、またはこれらのヘテロ形態物である。より好適には、Ｒ２は低級アルキル（１−３Ｃ）、ハロ、例えばＢｒ、Ｉ、ＣｌまたはＦなどである。更により好適には、Ｒ２はメチル、エチル、ブロモ、ヨードまたはＣＯＮＨＲである。最も好適には、Ｒ２はＨである。
【０１６０】
下記の条件を式（５）で表される化合物に適用する：
Ｚ５−Ｚ７がＣＨでありそしてＺ８がＮの時には、Ｒ１は２−フルオロでも２−クロロでもなくかつフェニルが非置換でもなく、
Ｚ５およびＺ８がＮでありそしてＺ６およびＺ７がＣＨの時には、フェニルが置換されており、そして
Ｚ５がＮでありそしてＺ６−Ｚ８がＣＨの時には、フェニルが置換されている。
【０１６１】
式（５）で表される代表的な化合物を以下の表６に挙げる。
【０１６２】
【表５５】
2007517046.tif 000070
【０１６３】
【表５６】
2007517046.tif 000071
【０１６４】
【表５７】
2007517046.tif 000072
【０１６５】
【表５８】
2007517046.tif 000073
【０１６６】
【表５９】
2007517046.tif 000074
【０１６７】
【表６０】
2007517046.tif 000075
【０１６８】
【表６１】
2007517046.tif 000076
【０１６９】
【表６２】
2007517046.tif 000077
【０１７０】
本明細書に示すＴＧＦ−β阻害剤を、また、被験体に投与された時に本化合物を放出するように考案した「プロドラッグ」の形態物で供給することも可能である。プロドラッグ形態物のデザインは本技術分野で良く知られており、当該化合物が含有する置換基に依存する。例えば、スルフヒドリル含有置換基を担体と結合させておくことができ、その担体は、これが内因性酵素、即ち当該被験体の中の個々の受容体または場所を標的にする酵素などによって除去されるまで本化合物を生物学的に不活性なままにする担体である。
【０１７１】
この上に示した化合物が有する置換基のいずれかがキラル中心を含有する場合（数種が実際に含有する）、そのような化合物に、これらのあらゆる立体異性体形態物を、単離された立体異性体形態物および立体異性体形態物の混合物の両方として包含させる。
【０１７２】
式（１）−（５）で表される化合物は、これらの薬学的に受け入れられる酸付加塩の形態物で供給可能であり、そのような塩には、無機酸、例えば塩酸、硫酸、臭化水素酸または燐酸などの塩、または有機酸、例えば酢酸、酒石酸、こはく酸、安息香酸、サリチル酸などの塩が含まれる。式（１）−（５）で表される化合物にカルボキシル部分が存在する場合、そのような化合物をまた薬学的に受け入れられるカチオンとの塩として供給することも可能である。
【０１７３】
式（１）−（５）で表される化合物を、また、被験体に投与された時に本化合物を放出するように考案した「プロドラッグ」の形態物で供給することも可能である。プロドラッグ形態物のデザインは本技術分野で良く知られており、式（１）−（５）で表される化合物が含有する置換基に依存する。例えば、スルフヒドリル含有置換基を担体と結合させておくことができ、その担体は、これが内因性酵素、即ち当該被験体の中の個々の受容体または場所を標的にする酵素などによって除去されるまで本化合物を生物学的に不活性なままにする担体である。
【０１７４】
式（１）−（５）で表される化合物が有する置換基のいずれかがキラル中心を含有する場合（数種が実際に含有する）、そのような化合物に、これらのあらゆる立体異性体形態物を、単離された立体異性体形態物および立体異性体形態物の混合物の両方として包含させる。
本発明の化合物の合成
本発明の化合物を合成する方法は一般に本技術分野で公知である。このように、式（１）で表される化合物の合成は２００３年３月９日付けで公開されたＷＯ  ００／１２４９７に記述されている如く実施可能である。式（２）で表される化合物の合成方法は２００２年５月２３日付けで公開されたＷＯ  ０２／４０４６８に開示されている。式（３）で表される化合物の合成は例えば２０００年１０月１９日付けで公開されたＷＯ  ００／６１５７６に記述されている如く実施可能である。式（４）で表される化合物の合成は例えばＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ０３／２８５９０に記述されている。式（５）で表される化合物の合成は例えば米国出願番号６０／５０７，９１０に記述されている如く実施可能である。加うるに、本発明の範囲内の代表的な化合物は更に米国出願番号６０／４５８，９８２にも記述されている。この章に引用した資料全部の開示は全体が引用することによって明らかに本明細書に組み入れられる。
本化合物の活性
本発明の方法で用いるに有用な化合物は、これらがＴＧＦ−βを阻害する能力を有することで識別可能である。有用な化合物を識別するに適した検定は例えば下記の如く実施可能である：化合物の希釈および反応体の調製を毎日新しく実施する。化合物をＤＭＳＯ原液で所望検定濃度の２倍に希釈し、検定における最終的ＤＭＳＯ濃度を１％に等しいか或はそれ以下に保つ。ＴＧＦβ−Ｒ１を緩衝液＋ＤＴＴで所望の検定濃度の４倍に希釈すべきである。ＡＴＰを４倍量の反応用緩衝液に入れて希釈してもよく、そしてガンマ−３３Ｐ−ＡＴＰを６０μＣｉ／ｍＬの量で添加してもよい。
【０１７５】
検定は例えば２０μｌの化合物溶液に酵素を１０μｌ添加することなどで実施可能である。可能なプロトコルとして、ＡＴＰ混合物を１０μｌ添加することで反応を開始させる。最終的検定条件に２０ｍＭのＭＯＰＳ（ｐＨ７）中１０ｕＭのＡＴＰ、１７０ｎＭのＴＧＦβ−Ｒ１および１ＭのＤＴＴを含める。この反応物を室温で２０分間インキュベートする。ホスホセルロース製の９６穴フィルタープレートを穴１個当たり１５μｌの０．２５Ｍ  Ｈ３ＰＯ４で前以て湿らせておいて、これに前記反応混合物を２３μｌ移すことで、反応を停止させる。５分後、前記穴を７５ｍＭ  Ｈ３ＰＯ４で４回そして９５％のエタノールで１回洗浄する。前記プレートを乾燥させ、シンチレーションカクテルを各穴に加えた後、これらの穴にＰａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔミクロプレートシンチレーションカウンターを用いた計数を受けさせる。
【０１７６】
別法として、化合物がカゼイン基質の燐酸化を抑制する能力を測定することでそれの評価を行うことも可能である。検定を下記の如く実施することができる：化合物の希釈および反応体の調製を毎日新しく実施する。化合物をＤＭＳＯ原液で所望検定濃度の２倍に希釈し、検定における最終的ＤＭＳＯ濃度を１％に等しいか或はそれ以下に保つ。ＴＧＦβ−Ｒ１キナーゼを緩衝液＋ＤＴＴで所望の検定濃度の４倍に希釈すべきである。ＡＴＰおよびカゼインを４倍量の反応用緩衝液に入れて希釈してもよく、そしてガンマ−３３Ｐ−ＡＴＰを５０μＣｉ／ｍＬの量で添加してもよい。
【０１７７】
可能なプロトコルに従い、検定は２０μｌの化合物溶液に酵素を１０μｌ添加することで実施可能である。カゼイン／ＡＴＰ混合物を１０μｌ添加することで反応を開始させる。最終的検定条件に２０ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ７．５）中２．５μＭのＡＴＰ、１００μＭのカゼイン、６．５ｎＭのＴＧＦ  Ｒ１キナーゼおよび１ＭのＤＴＴを含める。この反応物を室温で４５分間インキュベートする。ホスホセルロース製の９６穴フィルタープレートを穴１個当たり１５μｌの０．２５Ｍ  Ｈ３ＰＯ４で前以て湿らせておいて、これに前記反応混合物を２３μｌ移すことで、反応を停止させる。５分後、前記穴を７５ｍＭ  Ｈ３ＰＯ４で４回そして９５％のエタノールで１回洗浄する。前記プレートを乾燥させ、シンチレーションカクテルを各穴に加えた後、これらの穴にＰａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔミクロプレートシンチレーションカウンターを用いた計数を受けさせる。ある化合物が前記酵素を阻害する能力の決定では、前記化合物の存在下で得たカウント数を正の対照（化合物の存在無し）および負の対照（酵素の存在無し）のそれと比較することで決定を行う。
治療方法
本発明に従って治療することができる悪性神経膠腫には、これらに限定するものでないが、成人および子供の両方における星状細胞腫、上衣細胞腫、乏突起膠腫および混合性神経膠腫が含まれる。
【０１７８】
最も普通の神経膠腫である星状細胞腫は、星状細胞と呼ばれる脳細胞の中で始まり、そして脳の大部分の中で起こり得る（時には脊髄の中でも）が、それらは最も一般的には大脳の中に見られる。星状細胞腫は成人および子供の両方に発症するが、より一般的には成人に発症する。子供または若い成人では脳の基部に存在する星状細胞腫がより一般的である。膠芽細胞腫が特に星状細胞腫の攻撃的な形態物であり、これはまたタイプＩＶの星状細胞腫とも呼ばれる。
【０１７９】
上衣細胞腫は、脳の中の脳脊髄液が産生されかつ貯蔵される通路を内張りしている細胞である上衣細胞の中で始まる脳腫瘍である。それらは稀な種類の神経膠腫であり、脳または脊髄の如何なる部分にも見られるが、最も一般的には大脳の中に見られる。上衣細胞腫は脳脊髄液によって脳から脊髄に拡散し得る。あらゆる年齢の人（子供を包含）が上衣細胞腫を発症し得る。
【０１８０】
乏突起膠腫は乏突起膠細胞（これは神経インパルスを伝達する細胞に支援および栄養を与える）と呼ばれる脳細胞の中で始まる。この種類の腫瘍は一般に大脳に見られかつ成人および子供の両方に発症し得る。
【０１８１】
混合性神経膠腫は、２種以上の脳細胞の脳腫瘍であり、そのような細胞には、星状細胞、上衣細胞および／または乏突起膠細胞の細胞が含まれる。混合性神経膠腫に最も一般的な部位は大脳であるが、他の神経膠腫と同様に、それらは脳の他の部分にも拡散し得る。この種類の腫瘍は成人および子供の両方に起こり得る。
【０１８２】
乏突起膠腫は比較的稀な脳腫瘍であり、これは乏突起膠細胞と呼ばれる膠細胞から発生する。悪性形態物の乏突起膠腫および悪性の混合性星状細胞腫−乏突起膠腫が存在し、これらの治療は両方ともが多形成膠芽細胞腫と全く同様に行われる。
【０１８３】
視神経膠腫は、目と脳視覚中心の間の伝達を行う神経またはその近くに見られる。これは特に神経線維腫症にかかっている人に一般的である。
【０１８４】
本発明で用いるに有用な化合物およびこれらの関連した化合物を投与する様式、調製および投薬量は治療すべき神経膠腫の種類およびひどさ（グレード）、治療すべき個々の被験体および医者の判断に依存し、調製は投与様式に依存する。
【０１８５】
膠芽細胞腫の現在の治療は、手術に続く放射線および／または化学療法を包含する。
【０１８６】
本発明の化合物の投与を便利にはこれを適切な薬学的賦形剤と一緒に配合して錠剤、カプセル、シロップなどを生じさせることによる経口投与で行う。経口投与に適した製剤に、また、緩衝剤、風味剤などの如き少量成分を含有させることも可能である。そのような製剤に入れる活性材料の量は典型的に製剤全体の約５％−９５％の範囲内であるが、担体に応じて幅広く変えることができる。適切な担体には、スクロース、ペクチン、ステアリン酸マグネシウム、ラクトース、落花生油、オリーブ油、水などが含まれる。
【０１８７】
本化合物をまた注射で投与することも可能であり、注射には静脈内、筋肉内、皮下、関節内、腹腔内または頭蓋内注射が含まれる。そのような使用に典型的な製剤は、等張性媒体、例えばハンク液またはリンゲル液などに入れることで生じさせた液状製剤である。
【０１８８】
一般に、適切な如何なる製剤も使用可能である。本技術分野で公知の製剤の概論がＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、最新版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡに見られる。このマニュアルを参考にすることが本技術分野で常規のことである。
【０１８９】
本発明の化合物の投薬量は数多くの要因に依存し、それは患者から患者で異なる。しかしながら、１日当たりの経口投薬で一般に総体重１ｋｇ当たり０．００１−１００ｍｇ、好適には体重１ｋｇ当たり０．０１−５０ｍｇ、より好適には約０．０１ｍｇ−１０ｍｇ用いることになるであろうと考えている。しかしながら、このような投薬計画は治療すべき個々の腫瘍、患者の年齢、性および全体的状態および医者の判断に応じて変わるであろう。
【０１９０】
本発明で用いるに有用な化合物は個々の活性材料としてか或は異なる数種の化合物の混合物として投与可能であることを注目すべきである。加うるに、本ＴＧＦ−β阻害剤は単一の治療薬としてか或は他の治療薬との組み合わせとして使用可能である。本化合物と有効に組み合わせることができる薬剤には、天然もしくは合成コルチコステロイド、特にプレドニゾンおよびこれの誘導体、悪性神経膠腫の発症もしくは進行に関連した免疫系の細胞もしくは遺伝子を標的にするモノクローナル抗体、および細胞分裂、蛋白質合成またはｍＲＮＡ転写または翻訳を阻害する低分子阻害剤、または免疫細胞の分化または活性化を阻害する阻害剤が含まれる。
【０１９１】
本発明の化合物は特に放射線療法、他の化学療法薬の投与、免疫療法もしくはステロイド療法、骨髄移植および他の治療任意選択を医者が決定する任意の組み合わせおよび順で包含し得る治療計画の一部として投与可能である。
【０１９２】
この上に示したように、本発明の化合物はヒトに使用可能であるが、それらはまたヒト以外の哺乳動物被験体を治療する時の獣医用途にも有効である。
【０１９３】
以下の非限定実施例から本発明のさらなる詳細が明らかになるであろう。
【実施例】
【０１９４】
ＴＧＦ−β阻害剤をインビトロおよびインビボで用いて神経膠腫の増殖を抑制
ＴＧＦβ−Ｒ１キナーゼ阻害剤、特に表ＩＩに化合物番号７９として示す阻害剤がマウスＳＭＡ−５６０およびヒトＬＮ−３０８神経膠細胞の増殖および免疫原性そして同系ＶＭ／Ｄｋマウスにおける頭蓋内ＳＭＡ−５６０神経膠腫の生体内増殖およびそれに対する免疫反応に対して示す効果を試験した。
材料および方法
細胞株および反応体
化合物番号７９はＳｃｉｏｓ  Ｉｎｃ．が開発したＴＧＦ−βＲ１キナーゼ阻害剤である。フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）はＢｉｏｃｈｒｏｍ（ベルリン、ドイツ）から提供されたものであった。［メチル−３Ｈ］チミジンをＡｍｅｒｓｈａｍ（Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ、ドイツ）から入手した。５１ＣｒをＮｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ（ボストン、ＭＡ）から購入した。ヒト組換え型ＴＧＦ−β１およびＴＧＦ−β２をＰｅｐｒｏｔｅｃｈ（ロンドン、ＵＫ）から入手した。マウスＩＬ−２はＰｅｐｒｏｔｅｃｈ（ロンドン、ＵＫ）から提供されたものであった。中和パン−アンチ−ＴＧＦ−β抗体をＲ  ＆  Ｄ（Ｗｉｅｓｂａｄｅｎ、ドイツ）から購入した。ヒト悪性神経膠腫細胞株ＬＮ−３０８をＮ．ｄｅ  Ｔｒｉｂｏｌｅｔ（Ｃｅｎｔｒｅ  Ｈｏｓｐｉｔａｌｉｅｒ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｉｒｅ  Ｖａｕｄｏｉｓ、Ｌａｕｓａｎｎｅ、スイス）が快く提供してくれた。マウス神経膠腫株ＳＭＡ−５６０をＤ．Ｄ．Ｂｉｇｎｅｒ（Ｄｕｋｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ、Ｄｕｒｈａｍ、ＮＣ）が快く提供してくれた。ＣＣＬ６４ミンク肺上皮細胞をＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）から入手した。
細胞培養
神経膠腫細胞およびＣＣＬ６４細胞をＬ−グルタミン（Ｇｉｂｃｏ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｐａｉｓｌｅｙ、ＵＫ）を２ｍＭとＦＣＳ（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ  ＫＧ、ベルリン、ドイツ）を１０％とペニシリン（１００ＩＵ／ｍｌ）／ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）（Ｇｉｂｃｏ）を補充しておいたＤＭＥＭに入れて維持した。神経膠腫細胞の増殖および生存をクリスタルバイオレット、ＬＤＨ放出（Ｒｏｃｈｅ、Ｍａｎｎｈｅｉｍ、ドイツ）およびトリパンブルー色素排除検定で検査した。コロニー形成を評価する目的で５００個のＳＭＡ−５６０細胞を６穴プレート（９．４ｃｍ２）に接種した。目に見える細胞生成が生じた後、細胞数が＞２０のコロニーの数を数えた。
【０１９５】
ヒトＰＢＭＣを健康な供与体から密度勾配遠心分離（Ｂｉｏｃｏｌｌ、Ｂｉｏｃｈｒｏｍ  ＫＧ）で単離した。接着および示差遠心分離を用いて単球を激減させることで抹消血液のリンパ球（ＰＢＬ）を得た。精製Ｔ細胞を得る目的で、ＬｙｍｐｈｏＫｗｉｋ  Ｔ（商標）試薬（Ｏｎｅ  Ｌａｍｂｄａ  Ｉｎｃ．、Ｃａｎｏｇａ  Ｐａｒｋ、ＣＡ）を用いて前記ＰＢＭＣからＢ細胞および単球を激減させた。この集団の純度は抗−ヒトＣＤ３−ＰＥ抗体を用いたフローサイトメトリーで＞９７％であることを確かめた（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、ドイツ）。ＰＢＬを照射を受けさせておいたＲＰＭＩ８８６６支持細胞上で１０日間培養することでヒトポリクローナルＮＫ細胞の集団を得た［Ｖａｌｉａｎｔｅ他、Ｃｅｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４５：１８７−１９８（１９９２］。ＤＸ５モノクローナル抗体と結合させておいた磁気ビードを相当するカラムシステム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｂｅｒｇｉｓｃｈ  Ｇｌａｄｂａｃｈ、ドイツ）と一緒に用いた正の選択をＶＭ／Ｄｋマウスの脾細胞に受けさせることでマウスＮＫ細胞を調製した後、使用前の少なくとも１０日間に渡ってマウスＩＬ−２（５０００Ｕ／ｍｌ）と一緒に培養した。ヒトポリクローナルＮＫ細胞培養物、ヒトＰＢＬ、ヒトＴ細胞およびマウスＮＫ細胞をＦＣＳを１５％とＬ−グルタミンを２ｍＭとピルビン酸ナトリウムを１ｍＭとβ−メルカプトエタノールを５０μＭとペニシリン（１００ＩＵ／ｍｌ）／ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）を補充しておいたＲＰＭＩ  １６４０に入れて増殖させた。
ＴＧＦ−βバイオアッセイ
ＣＣＬ６４バイオアッセイを用いて生体活性ＴＧＦ−βの濃度を測定した。簡単に述べると、１０４個のＣＣＬ６４細胞を９６穴プレートに２４時間接着させ、培地全部を血清が入っていない培地と交換した後、細胞を組換え型ＴＧＦ−β１／２または神経膠腫細胞培養物の上澄み液（血清を含有しない培地で希釈しておいた）に７２時間接触させた。７２時間の時にクリスタルバイオレットによる染色で増殖を評価した。血清が入っていない培地に４８時間維持した濃密な培養物から神経膠腫細胞の上澄み液を収穫しそして熱で処理（５分間、８５℃）することで潜在的ＴＧＦ−βを活性化させた［Ｌｅｉｔｌｅｉｎ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１６６：７２３８−７２４３（２００１）］。
イムノブロット解析
燐酸化Ｓｍａｄ２（ｐ−Ｓｍａｄ２）蛋白質濃度の濃度分析を１２％のアクリルアミドゲルを用いたイムノブロットで実施したが、ここでは、蛋白質を１レーン当たり２０μｇ用いた。ブロットをＰＶＤＦ膜（Ａｍｅｒｓｈａｍ、Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ、ドイツ）に移した後、スキムミルクを５％とＴｗｅｅｎ  ２０を０．０５％入れておいたＰＢＳ中で前記ブロットにブロッキングを受けさせ（ｂｌｏｃｋｅｄ）、そしてそれをｐ−Ｓｍａｄ２抗体（２μｇ／ｍｌ）と一緒にして４℃で一晩インキュベートした。西洋ワサビペルオキシダーゼと結合させておいた二次抗体（Ｓｉｇｍａ）および強化化学発光（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を用いて蛋白質帯の可視化を達成した。特異的Ｓｍａｄ２／３抗体（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて全Ｓｍａｄ２／３濃度を評価した。
溶解試験
ＨＬＡ−Ａ２−不適合ＰＢＬまたはＴ細胞（１０７個／２５ｃｍ２のフラスコ）を照射（３０Ｇｙ）を受けさせておいた１０６個の神経膠腫細胞と一緒にして５日間共培養した。５１Ｃｒ（５０μＣｉ、９０分）を用いて神経膠腫細胞標的に標識を付けた後、その共培養物から収穫したエフェクターＰＢＬと一緒にエフェクター：標識（Ｅ：Ｔ）比が１００：１から３：１になるようにインキュベートした（１０４個／穴）。ＮＰ４０（１％）を添加することで最大５１Ｃｒ放出量を測定した。４時間後、上澄み液をＬｕｍａ−Ｐｌａｔｅ（商標）−９６（Ｐａｃｋａｒｄ、Ｄｒｅｉｅｉｃｈ、ドイツ）に移して、測定を実施した。５１Ｃｒの放出パーセントを下記の如く計算した：１００ｘ（［実験的放出量−自然発生的放出量］／［最大放出量−自然発生的放出量］）。
サイトカイン放出
免疫エフェクター細胞によるＩＬ−１０、ＴＮＦ−αおよびＩＦＮ−γ放出の評価を相当する抗−ヒト捕捉（ｃａｐｔｕｒｅ）抗体（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）で被覆されているマルチスクリーン−ＨＡ９６穴プレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｅｓｃｈｂｏｒｎ、ドイツ）を用いたＥｌｉｓｐｏｔ検定で実施した。簡単に述べると、５ｘ１０４個の神経膠腫細胞を１０５個、２．５ｘ１０５個または５ｘ１０５個のＨＬＡ−Ａ２−不適合ＰＢＬ（刺激を前以て５日間受けさせておいた）と一緒に２４時間共培養した。２回蒸留しておいた水を用いて細胞を取り出した後、ビオチニル化抗体とストレプトアビジン−アルカリ性ホスファターゼ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて、捕捉されたサイトカインを可視化した。Ｅｌｉｓｐｏｔ読み取り装置（ＡＩＤ、Ｓｔｒａβｂｅｒｇ、ドイツ）を用いて斑点の数を数えた。同様にして、新しく単離した脾細胞にもＩＦＮ−γ放出量に関する検定を生体外実験で抗−マウス捕捉ＩＦＮ−γ抗体および相当するビオチニル化二次抗体（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて受けさせた。
フローサイトメトリー
細胞解離用溶液（Ｓｉｇｍａ）を用いて、接着している神経膠腫細胞を非酵素的に脱離させた。固定しておいた透過性神経膠腫細胞（７０％のエタノール）を用いて細胞周期分析を実施した。ＲＮＡをＲＮＡ分解酵素Ａ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）で消化させた。ＤＮＡをヨウ化プロピジウム（５０μｇ／ｍｌ）で染色した。
動物実験
ＶＭ／ＤｋマウスをＴＳＥ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ（Ｂｅｒｋｓｈｉｒｅ、ＵＫ）から購入した。あらゆる実験で６−１２週齢のマウスを用いた。実験をドイツ動物保護法に従って実施した。あらゆる頭蓋内手順を実施する前にマウスが７−８匹の群に麻酔をかけた後、定位固定装置（Ｓｔｏｅｌｔｉｎｇ、Ｗｏｏｄ  Ｄａｌｅ、ＩＬ）の中に入れた。ブレグマの横２ｍｍの所の頭蓋骨にバーホールを開けた。Ｈａｍｉｌｔｏｎシリンジ（Ｈａｍｉｌｔｏｎ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、ドイツ）の針を３ｍｍの深さにまで導入した。５ｘ１０３個のＳＭＡ−５６０細胞［Ｓｅｒａｎｏ他、Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．、５１：５３−６４（１９８０）］を体積が２μｌのＰＢＳに入れて再懸濁させた後、右線条体の中に注入した。３日後、前記マウスに化合物番号７９を脱イオン水に１ｍｇ／ｍｌの量で溶解させて飲ませた。これらのマウスを毎日観察し、そして生存率実験では、神経学的症状を発症した時点で屠殺するか或は他の実験で示すように屠殺した。
生体外免疫エフェクター検定
腫瘍細胞を注入してから１０日後に神経膠腫を有するマウスを屠殺した。脾細胞を単離して、この上に記述した如き２４時間のＩＦＮ−γＥｌｉｓｐｏｔ検定で用いた。その上、前記細胞にＩＬ−２（５０００Ｕ／ｍｌ）による刺激を１０日間受けさせることでＬＡＫ細胞を生じさせて、これらを標的としてのＳＭＡ−５６０神経膠腫細胞に対する５１Ｃｒ放出検定で用いた。
統計学的分析
実験を通常は少なくとも３回実施したが、同様な結果がもたらされた。有意さをスチューデントｔ検定で検定した。両側ｔ検定を用いてＰ値を引き出す。
結果
化合物番号７９はインビトロでＴＧＦ−β１およびＴＧＦ−β２の阻害剤である
ＣＣＬ６４ミンク肺上皮細胞は０．５ｎｇ／ｍｌのＥＣ５０濃度でヒトＴＧＦ−β１およびＴＧＦ−β２の増殖阻害効果に感受性を示す。組換え型ＴＧＦ−βの阻害効果ばかりでなくＴＧＦ−β含有神経膠腫細胞上澄み液の阻害効果も特異的ＴＧＦ−β抗体［Ｌｅｉｔｌｅｉｎ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：７２３８−７２４３（２００１）、データは示されていない］によって無効になる。ここでは、ＣＣＬ６４バイオアッセイを用いて化合物番号７９がＴＧＦ−β拮抗特性を有することを立証した。化合物番号７９はＴＧＦ−β１またはＴＧＦ−β２（１０ｎｇ／ｍｌ）が介在する増殖阻害を濃度依存様式で回復させ、ＥＣ５０濃度は０．０３μＭの範囲内であった（図１Ａ）。同様に、血清を含有しないＳＭＡ−５６０またはＬＮ−３０８神経膠腫細胞上澄み希釈液が介在する増殖阻害を同じ濃度の化合物番号７９が無効にした（図１Ｂ）。
化合物番号７９は神経膠腫細胞におけるＴＧＦ−β依存シグナル伝達を無効にする
次に、化合物番号７９がマウスおよびヒト神経膠腫細胞に対して示す生物学的効果をインビトロで試験した。ＴＧＦ−βがＣＣＬ６４バイオアッセイで増殖阻害効果を妨害するに要した濃度では、いずれの細胞株の増殖に対しても効果がなかった。しかしながら、濃度を高くして１μＭにすると、両方の細胞株とも増殖が中程度阻害された（図２Ａ）。増殖の阻害は増殖が妨害されたことに関係していたが、実際の細胞死には関係していなかった、と言うのは、ＬＤＨ放出もトリパンブルー色素排除検定も化合物番号７９が１μＭ以下の濃度で神経膠腫細胞に対して７２時間で細胞毒性効果を示すことを明らかにしなかった。０．０１、０．１または１μＭの化合物番号７９に接触させてから４８時間後に実施したフローサイトメトリーによる細胞周期分析では、いずれの細胞株においても特定種の細胞周期が阻止されることは明らかにならなかった（データは示していない）。その上、化合物番号７９は神経膠腫細胞の生存度を血清欠如に反応して調節することもなかった（データは示していない）。しかしながら、化合物番号７９は細胞の全Ｓｍａｄ２／３濃度を変えることなくＳｍａｄ２の燐酸化を妨害することが立証されたことで、内因性もしくは外因性ＴＧＦ−βが伝達するシグナルが阻害されることを確かめた（図２Ｂ）。注目すべきは、未処置の神経膠腫細胞ではｐＳｍａｄの燐酸化はほとんど検出されなかったが、また、そのシグナルも化合物７９によって無効になることはなかった。
化合物番号７９はインビトロで神経膠腫細胞に対する同種免疫反応を増強する
次の一連の実験は、化合物番号７９が培養ヒト神経膠腫細胞に対する同種免疫細胞反応を回復させるか否かを試験するように考案した実験であった。ＨＬＡ−Ａ２−不適合ＰＢＬまたは精製Ｔ細胞を照射を受けさせておいた神経膠腫細胞と一緒に化合物番号７９の存在有り無しで共培養した時、次の４時間の５１Ｃｒ放出検定において、それらを化合物番号７９に前以て接触させておくと、それらが示す溶解活性が有意に向上した（図３Ａ）。中和ＴＧＦ−β抗体（１０μｇ／ｍｌ、２日毎に添加）を用いた時にも同様な効果を得た（データは示していない）。プライミングを神経膠腫細胞の存在下で実施すると、ＨＬＡ−不適合ＰＢＬによるＩＦＮ−γの放出が強力に抑制された。化合物番号７９はＩＦＮ−γ放出をＬＮ−３０８細胞の存在無しに前以て培養しておいたＰＢＬのそれに匹敵するレベルにまで回復させた（図３Ｂ）。ＴＮＦ−αでも同様な結果を得た（図３Ｃ）。それとは対照的に、ＬＮ−３０８細胞と一緒に共培養するとＩＬ−１０の放出が刺激され、そして化合物番号７９は、刺激を受けさせていない培養物および神経膠腫細胞によるプライミングを受けさせておいた培養物の両方とも、それらから生じた免疫エフェクター細胞によるＩＬ−１０の放出量を低下させた（図３Ｄ）。
【０１９６】
ポリクローナルＮＫ細胞がＬＮ−３０８標的に対して示す溶解活性を外因性ＴＮＦ−βが強力に阻害し、そして化合物番号７９がＴＮＦ−β介在阻害を除去した（図３Ｅ）。同様に、ＬＮ−３０８細胞上澄み液もＮＫ細胞の活性を阻害し、そしてこの阻害もまた化合物番号７９（図３Ｆ）または中和ＴＮＦ−β抗体（データは示していない）によって妨害された。
化合物番号７９はＳＭＡ−５６０を頭蓋内に入れることで実験的に神経膠腫を持たせた同系マウスの生存を長くする
化合物番号７９を飲料水に入れて（１ｍｇ／ｍｌ）投与した時にそれが示す治療効果を同系ＳＭＡ−５６０マウス神経膠腫実例（Ｆｒｉｅｓｅ他、２００３）で評価した。マウスを化合物番号７９で処置しておくと神経学的症状の発症が遅れ（データは示していない）、そして平均生存率が媒体で処置しておいた動物における生存率が１８．６±２．１日（中央値１８）であるのに比較して２５．１±６．５日（中央値２３）にまで長くなった（図４）（ｐ＝０．００４、ｔ検定）。３０日目の生存率は化合物番号７９で処置した動物では２９％であったが、対照動物では０％であった。
化合物番号７９はインビボでＳＭＡ−５６０神経膠腫細胞に対する免疫反応を調節する
化合物番号７９による処置を開始してから７日後に収穫した脾細胞がＩＦＮ−γを放出するか否かに関するＥｌｉｓｐｏｔ検定で背景に比べて増加したのは、化合物番号７９で処置しておいた動物では５匹中３匹であったが、対照動物では５匹中１匹のみであることが分かった（図４Ｂ）。その上、化合物番号７９で処置した動物の脾細胞から生じたＬＡＫ細胞は標的としてのＳＭＡ−５６０に対して向上した溶解活性を示した（図４Ｃ）。
考察
ＴＮＦ−βが示す生物学的効果に対して拮抗作用を及ぼすことがいろいろな種類の癌（悪性神経膠腫を包含）を防除しようとする時の主要な手段の１つになってきている。抗−ＴＮＦ−β手段に関する現在の理論的根拠には、それが転移および侵襲［Ｗｉｃｋ他、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、２１：３３６０−３３６８（２００１）］、転移［Ｙａｎｇ他、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、１０９：１６０７−１６１５（２００２）］および腫瘍関連免疫抑制［ＷｅｌｌｅｒおよびＦｏｎｔａｎａ、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．、２１：１２８−１５１（１９９５）；ＧｏｒｅｌｉｋおよびＦｌａｖｅｌｌｉ、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２：４６−５３（２００２）］で果たす推定的役割が含まれる。実験的神経膠腫で評価されたＴＧＦ−βが基になった治療手段は全部が今までのところそれらを臨床に移すことに関して制限があると思われる。アンチセンスオリゴヌクレオチドは所望作用部位への搬送の点で重大な問題を有する。同じことが遺伝子治療手段、例えばデコリン遺伝子を移送することが基になった遺伝子治療手段［Ｓｔａｎｄｅｒ他、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．、５：１１８７−１１９４（１９９８）］などにも当てはまる。ＴＧＦ−βの生体活性をＴＧＦ−βプロセシングのレベルで制限することを目的としたフリン様プロテアーゼ阻害［Ｌｅｉｔｌｅｉｎ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：７２３８−７２４３（２００１）］は現在のところ受け入れられる特異性で達成される可能性はない、と言うのは、いろいろな分子がそのような酵素で処理される必要があるからである［Ｔｈｏｍａｓ，Ｇ．、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．３：７５３−７６６（２００２）］。生体活性ＴＧＦ−βが標的細胞集団に到達し得る前にそれを捕捉する作用を示す可溶ＴＧＦ−β受容体フラグメントを用いると結果として特異性がより高くなる可能性がある［Ｙａｎｇ他、上記；Ｍｕｒａｏｋａ他、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０９：１５５１−１５５９（２００２）］。理論的には、細胞を細胞内シグナル伝達のレベルでＴＧＦ−βの作用から保護するように考案した特定の低分子がそのような効果を模擬するようにすべきである。
【０１９７】
ここで、そのような候補品薬剤の１つである化合物番号７９がマウスおよびヒト神経膠腫細胞に対してインビトロおよびインビボで示す活性を特徴づける。ヒトＬＮ−３０８細胞は重要なＴＧＦ−β合成に系列的関係があることからそれを選択した（Ｆｏｎｔａｎａ他、上記；Ｌｅｉｔｌｅｉｎ他、上記）。同系ＶＭ／Ｄｋマウスの中に移植したＳＭＡ−５６０細胞は、齧歯類の神経膠腫の免疫治療に最良のモデルに相当する［Ｓｅｒａｎｏ他、Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．、５１：５３−６４（１９８０）］。この実験で化合物番号７９はＣＣＬ６４ミンク肺上皮検定においてＴＧＦ−β１およびＴＧＦ−β２の効力のある拮抗薬であること（図１Ａ）と神経膠腫細胞ＳＮがそのような細胞の増殖に対して示す阻害効果を無効にすること（図１Ｂ）を立証した。
【０１９８】
化合物番号７９は神経膠腫細胞に対して細胞毒性を示さず、増殖を抑制したのは濃度をより高くした時でも中程度のみである（図２Ａ）。それに関して、ＴＧＦ−βがＳＭＡ−５６０細胞に対して負の増殖制御効果を有することは立証されていない［Ａｓｈｌｅｙ他、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、１５：３０２−３０９（１９９８）］。ＴＧＦ−βは化合物７９に敏感な様式でＳｍａｄ２の燐酸化を急速に誘発し（図２Ｂ）、このことは、神経膠腫細胞内のＴＧＦ−βシグナル伝達が構成的に無効になることはないことを示しているが、神経膠腫細胞増殖の調節で役割を果たしていない可能性がある。その上、化合物番号７９で処置した神経膠腫細胞ではＴＧＦ−βによるオートクリンおよびパラクリンシグナル伝達に拮抗作用が生じることで、化合物番号７９のような薬剤はまた神経膠腫細胞における転移および侵襲［Ｗｉｃｋ他、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、２１：３３６０−３３６８（２００１）］の効力のある阻害剤でもあり得ることが予測される。
【０１９９】
次に行う研究では、化合物番号７９は所望の免疫調節効果を有することでＴＧＦ−βの生体活性を低下させる結果として神経膠腫細胞の免疫原生の向上をもたらすはずであることに焦点を当てた。ヒトＰＢＬおよび精製Ｔ細胞に神経膠腫細胞による刺激を化合物番号７９の存在下で前以て受けさせておくと、それらがＬＮ−３０８神経膠腫細胞標的に対して示す溶解活性が向上した（図３Ａ）。化合物番号７９で処置した細胞では、それと並列して炎症性サイトカイン、例えばＩＦＮ−γおよびＩＦＮ−αなどの放出量が多くなりかつ免疫抑制性サイトカインＩＬ−１０の放出量が低下することが起こった（図３Ｂ−Ｄ）。化合物番号７９は、同様に、ＴＧＦ−β１またはＬＮ−３０８  ＳＮと一緒に共培養したポリクローナルＮＫ細胞培養物が示す溶解活性も回復させた（図３Ｅ−Ｆ）。
【０２００】
化合物番号７９は、ＳＭＡ−５６０神経膠腫を持たせたマウスの生存平均期間を有意に長くした（図４Ａ）。用量規定毒性には到達しなかったが、飲料水を用いたのではより多い投薬量で投与することはできなかった、と言うのは、化合物番号７９が示す溶解度は比較的劣っているからであり、このことは、化合物番号７９または関連薬剤がそのような神経膠腫モデルで示す治療効果を更に向上させることができることを示唆している。如何なる特別な理論にも機構にも限定するものでないが、化合物番号７９が示す治療効果には神経膠腫細胞の転移および侵襲（Ｗｉｃｋ他、上記）の阻害または抗神経膠腫免疫反応の促進（ＷｅｌｌｅｒおよびＦｏｎｔａｎａ、上記）が介在する可能性がある。後者の裏付けで、神経膠腫を持たせたマウスを化合物７９で処置した時に得た脾細胞を生体外で分析した結果、ＩＦＮ−γの放出量が高くなるばかりでなくＬＡＫ活性の向上が１０日間培養した後でも失われないことが分かった（図４Ｂ、Ｃ）。
【０２０１】
このデータは、化合物番号７９または関連分子が神経膠腫の治療である役割を果たすことを強力に示唆している。ＴＧＦ−βの生体利用度を制限する目的で、そのようなＴＧＦ−βＲ１拮抗薬による全身的治療を局所的手段、例えばＴＧＦ−βアンチセンスオリゴヌクレオチドなどと良好に組み合わせることができるであろう。
【０２０２】
本明細書の全体に渡って引用した文献は全部引用することによって明らかに本明細書に組み入れられる。本発明の具体的な態様を言及することで本発明を記述してきたが、本分野の技術者は本発明の真の精神および範囲から逸脱しない限りいろいろな変更を行ってもよくかつ相当物に置き換えてもよいことを理解するはずである。加うるに、個々の状況、材料、組成物、方法などに適合させる目的でいろいろな修飾を行うことも可能である。そのような修飾形は全部添付請求項の範囲内である。
【図面の簡単な説明】
【０２０３】
【図１】ＴＧＦ−β阻害剤（表２に示す化合物番号７９）は組換え型および神経膠腫由来ＴＧＦ−ｂ１およびＴＧＦ−ｂ２が示す増殖阻害効果を防止する（Ａ）。ＣＣＬ６４細胞をヒト組換え型ＴＧＦ−ｂ１（黒記号）またはＴＧＦ−ｂ２（白記号）（１０ｎｇ／ｍｌ）に化合物番号７９の存在無しまたはそれの濃度を高くしながら７２時間接触させた（Ｂ）。ＣＣＬ６４細胞を血清を含有していなくて熱で活性化させた神経膠腫細胞ＳＮを含有（１：１）させておいた培地の中に化合物番号７９の存在有り無しで７２時間維持した。クリスタルバイオレット検定で増殖を評価した（平均およびＳＤ、ｎ＝３）。
【図２】化合物番号７９は神経膠腫細胞の中のオートクリンＴＧＦ−βシグナル伝達を無効にする（Ａ）。前記細胞を９６穴プレートに１０４個の細胞／穴になるように接種した後、血清を含有しない培地の中で化合物番号７９の存在有り無しで４８時間培養した。４８時間の時に［メチル−３Ｈ］−チミジンを添加することで増殖を評価した（＊ｐ＜０．０５、ｔ検定）（Ｂ）。未処置の神経膠腫細胞または化合物番号７９（１μＭ）に前以て２４時間接触させておいた細胞またはＴＧＦ−ｂ２（５ｎｇ／ｍｌ）または両方に１時間接触させておいた細胞から得た溶解物をｐ−Ｓｍａｄ２または全Ｓｍａｄ２／３の濃度に関して評価した。前記抗体はそれぞれｐ−Ｓｍａｄ２およびＳｍａｄ２と３の全体に特異的であることを注目されたい。
【図３】化合物番号７９が同種抗−神経膠腫免疫反応を調節する時にＴＧＦ−β拮抗作用が関係する（Ａ）。照射を受けさせておいたＬＮ−３０８細胞と一緒に化合物番号７９（１μＭ）の存在無し（白記号）または存在有り（黒記号）で前以てインキュベートしておいたＰＢＬ（四角）または精製Ｔ細胞（三角）がＬＮ−３０８標的に対して示す溶解活性を５１Ｃｒ放出検定で測定した（Ｂ−Ｄ）。照射を受けさせておいたＬＮ−３０８細胞の存在無し（左）または存在有り（右）でＰＢＬを５日間培養した。その培養物に化合物番号７９（１μＭ）を含有させる（黒棒）か或は含有させなかった（白棒）。次に、そのようなエフェクター細胞を照射を受けさせていない新鮮なＬＮ−３０８細胞と一緒に化合物番号７９の存在無しに２４時間共培養した。ＩＦＮ−γ（Ｂ）、ＴＮＦ−α（Ｃ）またはＩＬ−１０（Ｄ）の放出量をＥｌｉｓｐｏｔ検定で評価した。データをエフェクター細胞５ｘ１０５個当たりのサイトカイン産生細胞数として表す（ｎ＝３、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、ｔ検定、化合物番号７９が示した効果）（Ｅ、Ｆ）。ポリクローナルＮＫ細胞培養物をＴＮＦ−β１（５ｎｇ／ｍｌ）（Ｅ）または希釈（１：４）した神経膠腫細胞（ＳＮ）（Ｆ）に化合物番号７９（１μＭ）の有り無しで４８時間接触させた後、それらをＬＮ−３０８細胞を標的として用いた５１Ｃｒ放出検定でエフェクターとして用いた。この検定では化合物番号７９単独もＴＮＦ−β抗体単独もＮＫ細胞の活性に対して全く効果を示さなかった（データは示していない）。
【図４】化合物番号７９は、実験的同系ＳＭＡ−５６０神経膠腫の増殖をインビボで抑制しかつ免疫活性化を助長する（Ａ）。ＶＭ／Ｄｋマウスに５ｘ１０３個のＳＭＡ−５６０細胞を頭蓋内注入で与えた。３日後に化合物番号７９による処置を開始して、生存率を監視した（Ｂ）。前記動物をＡの場合と同様に処置したが、脾細胞を得る目的で１０日目に屠殺した。２４時間の時のＩＦＮ−γ放出量をＥｌｉｓｐｏｔで評価した。データを１０６個のエフェクター細胞当たりのサイトカイン産生細胞数として表す（Ｃ）。脾細胞にＩＬ−２による刺激を１０日間受けさせることでＬＡＫ細胞を生じさせた。それらが示す溶解活性の測定をＳＭＡ−５６０を標的細胞として用いた５１Ｃｒ放出で実施した（媒体：白四角、化合物番号７９：黒四角）（＊ｐ＜０．０５、ｔ検定）。
【図１Ａ−Ｂ】
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【図２Ａ−Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３Ａ−Ｆ】
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【図４】
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【国際調査報告】
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