(57)【要約】  本発明は、抗菌薬、特にアザライドを含むアジュバント組成物であって、抗菌薬がアジュバントとして作用する組成物を記載する。特にアジュバント組成物は、ワクチンアジュバントである。本発明はさらに、（ａ）少なくとも１つの抗原、および（ｂ）少なくとも１つの抗菌薬、特にアザライドを含むいくつかの構成成分を含むワクチンであって、アザライドがアジュバントとして作用するワクチンを記載する。本発明のアジュバント組成物またはワクチンは、病原性作因、癌性細胞またはアレルゲンにより引き起こされる疾患の予防および治療に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
1つまたは複数の抗菌薬を含むアジュバント組成物。
【請求項２】
ヒトワクチンに用いるための、請求項１記載のアジュバント組成物。
【請求項３】
非ヒト動物ワクチンに用いるための、請求項１記載のアジュバント組成物。
【請求項４】
少なくとも2つの構成成分を含み、その2つの構成成分が1ヶ月以内に共存的に投与されるか、または同時投与されるヒトまたは非ヒト動物ワクチンであって、第一構成成分が１つまたは複数の抗菌薬を含むアジュバントであり、そして第二構成成分が１つまたは複数の抗原性作因である前記ワクチン。
【請求項５】
抗菌薬がマクロライド系またはβ−ラクタム系抗生物質である、請求項４記載のワクチン。
【請求項６】
非ヒト動物のためである請求項４記載のワクチンであって、抗菌薬がマクロライド系抗生物質、例えばドラッキンDraxxin（登録商標）の商品名で販売されているツラスロマイシン，あるいはβ−ラクタム系抗生物質、例えばセファロスポリン、例えばセフチオファーであり、そして抗原性作因がM. heamolytica抗原、M. heamolyticaロイコトキシン、M. heamolytica莢膜抗原、M. heamolytica可溶性抗原またはそれらの混合物からなる群からの１つまたは複数から選択される前記ワクチン。
【請求項７】
前記抗菌薬が８ａ−アザライドおよび９ａ−アザライドからなる群から選択される少なくとも１つのアザライドを含み、前記アザライドがアジュバントとして作用する、請求項１記載のアジュバント組成物。
【請求項８】
前記アザライドが次式Ｉ：
【化１】
2007512312.tif 000026
から選択される９ａ−アザライドである、請求項１記載のアジュバント組成物。
【請求項９】
次式ＩＩ：
【化２】
2007512312.tif 000027
の化合物をさらに含む、請求項４記載のアジュバント組成物。
【請求項１０】
（ａ）それぞれ約90％±10％対約10％±10％の比での式ＩおよびＩＩの化合物の混合物；（ｂ）水、ならびに（ｃ）約0.2 mmol〜約1.0 mmol／組成物1 mLの総濃度で存在する１つまたは複数の酸を含む、請求項９記載のアジュバント組成物。
【請求項１１】
抗原と共存的に投与されるかまたは同時投与される請求項７〜１０記載の抗菌性アジュバント組成物のいずれかを含むワクチン。
【請求項１２】
前記９ａ−アザライドが（ａ）（ｉ）それぞれ約90％±10％対約10％±10％の比での式ＩおよびＩＩの化合物の混合物；（ｉｉ）水、ならびに（ｉｉｉ）約0.2 mmol〜約1.0 mmol／組成物1 mLの総濃度で存在する１つまたは複数の酸；ならびに（ｂ）約250〜約750 mg／組成物1 mLの量で存在する１つまたは複数の水混和性補助溶媒を含む組成物である請求項１０記載のアジュバント組成物とともに任意のM. haemolyticaから選択される抗原と共在的に投与されるかまたは同時投与される、請求項１１記載のワクチン。
【請求項１３】
任意のセフチオファーを含むアジュバント組成物とともに任意のM. haemolyticaから選択される抗原のいずれかと共在的に投与されるかまたは同時投与されるワクチン組成物。
【請求項１４】
抗原に対する動物における免疫応答を増強し、増大し、上向き調節し、多様化し、またはそうでなければ助長するための方法であって、動物への抗菌薬の投与を包含する方法。
【請求項１５】
抗菌薬が抗菌薬および抗原の共在的投与の少なくとも１つのアジュバント構成成分であって、抗菌薬が本明細書中に記載された抗菌薬から選択され、そして抗原性作因が本明細書中に記載される、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
抗菌薬が抗菌薬および抗原の同時投与の少なくとも１つのアジュバント構成成分であって、抗菌薬が本明細書中に記載された抗菌薬から選択され、そして抗原性作因が本明細書中に記載される、請求項１４記載の方法。
【請求項１７】
動物における病原性作因、癌性細胞またはアレルゲンにより引き起こされる疾患の防止方法であって、本明細書中および請求項１〜１４に記載されたアジュバント組成物またはワクチンを前記疾患に感受性の動物に投与する過程を包含する方法。
【請求項１８】
請求項１〜１４のアジュバントまたはワクチンをそれを用いるための使用説明書と一緒に含むキットであって、キットの構成成分が抗菌薬または抗原性作因またはその両方を有し、そして前記構成成分が同時投与されるかまたは共在的に投与されるキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の背景
本発明は、抗菌薬、特にアザライドを含むアジュバント組成物であって、抗菌薬またはアザライドがアジュバントとして作用する組成物を提供する。特にアジュバント組成物は、ワクチンアジュバントである。本発明はさらに、（ａ）少なくとも１つの抗原、および（ｂ）少なくとも１つの抗菌薬、例えばアザライドを含むワクチンであって、当該薬がアアジュバントとして作用するワクチンを提供する。本発明のアジュバント組成物またはワクチンは、病原性作因、例えば細菌、例えばマンヘミア・ヘモリチカM. haemolytica、原生動物、蠕虫、ウイルス、真菌、癌性細胞またはアレルゲンにより引き起こされる疾患の予防および治療に有用である。アジュバントとしてのアザライドの使用は、出願人等の本発明まで報告されたことはなかった。
【発明の開示】
【０００２】
発明の要約
本発明は、少なくとも１つの抗菌薬または抗生物質、特にアザライドを含むアジュバント組成物であって、当該薬がアジュバントとして作用する組成物を提供する。当該薬は、治療（例えば抗生物質）特性も提供する。しかしながら、本発明の好ましい実施形態では、当該薬は抗菌性治療特性をほとんど乃至全く提供しない。さらに特定的には、アジュバント組成物はワクチンアジュバントである。本発明はさらに、（ａ）少なくとも１つの抗原、および（ｂ）少なくとも１つの抗菌薬を含む2つの構成成分を有するワクチンであって、抗菌薬がアジュバントとして作用するワクチンを提供する。
【０００３】
本発明に用いるための抗菌薬は、アジュバントとして作用し、即ち、抗原に対する免疫応答を増強し、増大し、上向き調節し、多様化し、またはそうでなければ助長する。多数の抗菌薬、例えば本明細書中に列挙されたものが、本発明に適している。本発明の一実施形態では、アザライドは、以下の式Ｉ：
【化１】
2007512312.tif 000002
を有する15員９ａ−アザライドである。式Ｉの化合物の化学名は、（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，８Ｒ，１０Ｒ，１１Ｒ，１２Ｓ，１３Ｓ，１４Ｒ）−１３−（（２，６−ジデオキシ−３−Ｃ−メチル−３−Ｏ−メチル−４−Ｃ−（（プロピルアミノ）−メチル）−α−Ｌ−リボ−ヘキソピラノシル）オキシ−２−エチル−３，４，１０−トリヒドロキシ−３，５，８，１０，１２，１４−ヘキサメチル−１１−（（３，４，６−トリデオキシ−３−（ジメチルアミノ）−β−Ｄ−キシロ−ヘキソピラノシル）オキシ）−１−オキサ−６−アザシクロペンタデカン−１５−オンである。
【０００４】
本発明の別の実施形態では、アザライドは、アザライドの混合物である。特にアザライドは、９ａ−アザライドの混合物である。さらに特定的には、アザライドは、13−および15員９ａ−アザライドである。さらに特定的には、９ａ−アザライド混合物は、（ａ）上記のような式Ｉの化合物、および（ｂ）式ＩＩ：
【化２】
2007512312.tif 000003
の化合物を含有する。式ＩＩの13員９ａ−アザライドの化学名は、（３Ｒ，６Ｒ，８Ｒ，９Ｒ，１０Ｓ，１１Ｓ，１２Ｒ）−１１−（（２，６−ジデオキシ−３−Ｃ−メチル−３−Ｏ−メチル−４−Ｃ−（（プロピルアミノ）−メチル−α−Ｌ−リボ−ヘキソピラノシル）オキシ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１，２−ジヒドロキシ−１−メチルブチル）−８−ヒドロキシ−３，６，８，１０，１２−ペンタメチル−９−（（３，４，６−トリデオキシ−３−（ジメチルアミノ）−β−Ｄ−キシロ−ヘキソピラノシル）オキシ）−１−オキサ−４−アザシクロトリデカン−１３−オンである。
【０００５】
特に９ａ−アザライド混合物は、（ａ）それぞれ約90％±10％対約10％±10％、好ましくは90±4％対約10％±4％の比での各々上記の式ＩおよびＩＩの化合物の混合物；（ｂ）水、ならびに（ｃ）約0.2 mmol〜約1.0 mmol／組成物1 mLの総濃度で存在する１つまたは複数の酸を含有する組成物である。このような組成物は、（ｉ）式（Ｉ）の化合物；（ｉｉ）水、および（ｉｉｉ）約0.2 mmol〜約1.0 mmol／組成物1 mLの範囲の総濃度の１つまたは複数の酸を含む混合物を約50℃〜約90℃の温度に加熱することにより調製され得る。
【０００６】
さらに特定的には、９ａ−アザライド混合物は、（ａ）（ｉ）それぞれ約90％±10％対約10％±10％、好ましくは90±4％対約10％±4％の比での各々上記の式ＩおよびＩＩの化合物の混合物；（ｉｉ）水、ならびに（ｉｉｉ）約0.2 mmol〜約1.0 mmol／組成物1 mLの総濃度で存在する１つまたは複数の酸；ならびに（ｂ）約250〜約750 mg／組成物1 mLの量で存在する１つまたは複数の水混和性補助溶媒を含有する組成物である。このような組成物は、各々上記の式ＩまたはＩＩの化合物、水ならびに約0.2 mmol〜約1.0 mmol／混合物1 mLの範囲の量の１つまたは複数の酸を含む混合物を約50℃〜約90℃の温度に加熱することにより調製され得るが、この場合、１つまたは複数の水混和性補助溶媒は、約250〜約750 mg／組成物1 mLの量で、加熱過程の前、最中または後に付加される。好ましい実施形態では、水混和性補助溶媒は、加熱過程後に付加される。
【０００７】
本発明によれば、上記の９ａ−アザライド混合物組成物中の式Ｉの化合物の濃度は、加熱過程前には、約50 mg／混合物1 mL〜約500 mg／mLの範囲である。その好ましい実施形態では、濃度は約50 mg/mL〜約200 gm/mLの範囲である。
【０００８】
本発明によれば、上記の９ａ−アザライド混合物組成物中の化合物Ｉおよび化合物ＩＩの第一混合物の濃度は、約50 mg/組成物1 mL〜約200 mg/mLの範囲である。特に上記の９ａ−アザライド組成物中の化合物Ｉおよび化合物ＩＩの第一混合物の濃度は、約75〜約150 mg/組成物1 mL、さらに特定的には約90 mg/mL〜約110 mg/組成物1 mLの範囲である。
【０００９】
混合物のｐＨは、約5.0〜約8.0、さらに特定的には約5.0〜約6.0である。加熱は、約0.5〜約24時間、さらに特定的には約1〜約8時間起こる。
【００１０】
上記の９ａ−アザライド混合物組成物に関する適切な酸の例としては、酢酸、ベンゼンスルホン酸、クエン酸、臭化水素酸、塩酸、Ｄ−およびＬ−乳酸、メタンスルホン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、Ｄ−およびＬ−酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸、アジピン酸、アスパラギン酸、カンファースルホン酸、１，２−エタンジスルホン酸、ラウリル硫酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、３−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、リンゴ酸、ムチン酸、ムチン酸、硝酸、ナフタレンスルホン酸、パルミチン酸、Ｄ−糖酸、ステアリン酸、マレイン酸、マロン酸、フマル酸、安息香酸、コール酸、エタンスルホン酸、グルクロン酸、グルタミン酸、馬尿酸、乳糖酸、リシン酸、マンデル酸、ナパジシル酸、ニコチン酸、ポリガラクツロン酸、サリチル酸、スルホサリチル酸、トリプトファン酸、およびそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。特定的には酸はクエン酸である。さらに特定の実施形態では、クエン酸は、約0.02 mmol〜約0.3 mmol/組成物1 mLの量で存在する。さらに特定的には、酸は、クエン酸および塩酸の混合物である。さらに特定の実施形態では、クエン酸は約0.02 mmol〜約0.3 mmol/組成物1 mLの量で存在し、そして塩酸は約5〜約6の組成物ｐＨを達成するのに十分な量で存在する。
【００１１】
上記の９ａ−アザライド混合物組成物に関する適切な水混和性補助溶媒の例としては、エタノール、イソプロパノール、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールブチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ジエチレングリコールジブチルエーテル、ポリエチレングリコール−300、ポリエチレングリコール−400、プロピレングリコール、グリセリン、２−ピロリドン、Ｎ−メチル２−ピロリドン、グリセロールホルマール、ジメチルスルホキシド、ジブチルセベケート、ポリソルベート80およびそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。特に１つまたは複数の水混和性補助溶媒は、プロピレングリコールである。さらに特定的には、プロピレングリコールは、約450〜約550 mg／組成物1 mLの量で存在する。
【００１２】
別の特定的実施形態では、１つまたは複数の酸は約0.02 mmol〜約0.3 mmol/組成物1 mLの量で存在し、そして塩酸は約5〜約6の組成物ｐＨを達成するのに十分な量で存在する；１つまたは複数の水混和性補助溶媒は、約450〜約550 mg／組成物1 mLの量で存在するプロピレングリコールである；そしてアザライド組成物は、約4 mg/組成物1 mL〜約6 mg/mLの量で存在する酸化防止剤モノチオグリセロールをさらに含む。
【００１３】
セフチオファーは、アジュバントとして特に適しているもう一つの抗生物質である。それは、下記の表８に、そして本明細書中の他の箇所に記載されている。セフチオファーは、種々の塩形態および結晶；例えばナトリウム塩、塩酸塩形態、ならびに無結晶酸形態またはＣＣＦＡとして記載される長期作用バージョンで利用可能である抗生物質である。長期作用形態は、その特性、例えば長期半減期のため、アジュバントとして作用するための薬剤の特に適した形態である。
【００１４】
本明細書中に列挙された各々のおよび全ての抗生物質は、個別に、ならびに1、2、3、4または5つの他の抗菌薬と組合せて、本明細書中の有用なワクチンアジュバントまたはワクチン構成成分として特定的に記載され、特許請求されている。
【００１５】
本発明によれば、抗原は、抗菌薬、特にマクロライド系、特にアザライド系、特にβラクタム、そして特にセフチオファーと組合せて、免疫応答増強、増大、上向き調節、多様化またはそうでなければ助長を引き出す任意の抗原であり得る。特に抗原は、抗原と組合せ得る特異的抗体（単数または複数）の産生を刺激し；および／または抗原は抗原に特異的なリンパ球の生成を刺激し、次に上記リンパ球は、抗原に対して標的化され得るエフェクター機能を調節し、刺激するリンフォカインの産生により、あるいは抗原と特異的に反応し得る細胞の産生により、高原に対して反応し得る。当業者は適切な抗原を容易に確定し得るはずであり、以下を含めた多数の参考文献が実践を導くために利用可能であるClinical Microbiology and Infectious Diseases of the Dog and Cat, Greene, Craig E. 1984. W.B. Saunders Co. Disease of Feedlot Cattle, Jensen, R., and Makay, Donald R. 1965. Lea and Febiger. Virus Infections of Carnivores, Appel, M.J. ed. 1987. Elsevier Science Publishers B.V. Virus Infections of Ruminants, Dinter, Z. and Morein, B. 1990. Elsevier Science Publishers B.V. Veterinary Virology (2nd edition) Fenner, F.J. et al., 1993. Academic Press, Inc. Infectious Diseases. A Treatise of Infectious Processes, Hoeprich, P.D. et al., 1994. J.B. Lippincott Co. Diseases of Swine, Leman, A.D. et al., 1992. Iowa State University Press. Diseases of Poultry, Calnek, B.W. (ed) 1997. Iowa State University Press. Feline and Canine Infectious Diseases, Gaskell, R.M. and Bennett, M. 1996. Blackwell Science Ltd. Diseases and Disorders of Cattle, Blowey, R.W. and Weaver, A.D. 1991. Wolfe Publishing Lts.
【００１６】
適切な抗原の例も、本明細書中に記載されている。特に抗原は、M. haemolytica抗原、M. haemolytica可溶性抗原（各々本明細書中に記載されているような）、あるいはその混合物であり得る（例えばOne Shot（登録商標）抗原（Pfizer, Inc., New Yorkから市販されている））。
【００１７】
本発明は、抗原に対する免疫応答を増強し、増大し、上向き調節し、多様化し、またはそうでなければ助長するための方法であって、本発明のアジュバント組成物またはワクチンアジュバントの投与を包含する方法を提供する。
【００１８】
本発明は、抗原に対する免疫応答を増強し、増大し、上向き調節し、多様化し、またはそうでなければ助長するための方法であって、本発明のワクチンの投与を包含する方法を提供する。
【００１９】
本発明はさらに、病原性作因、癌性細胞またはアレルゲンにより引き起こされる疾患の治療方法であって、本発明のアジュバント組成物またはワクチンアジュバントを投与する過程を包含する方法を提供する。
【００２０】
本発明はさらに、病原性作因、癌性細胞またはアレルゲンにより引き起こされる疾患の治療方法であって、本発明のワクチンを投与する過程を包含する方法を提供する。
【００２１】
本発明はさらに、病原性作因、癌性細胞またはアレルゲンにより引き起こされる疾患の防止方法であって、本発明のアジュバント組成物またはワクチンアジュバントを投与する過程を包含する方法を提供する。
【００２２】
本発明はさらに、病原性作因、癌性細胞またはアレルゲンにより引き起こされる疾患の防止方法であって、本発明のワクチンを投与する過程を包含する方法を提供する。
【００２３】
本発明のアジュバント組成物またはワクチンアジュバントは、病原性作因、癌性細胞またはアレルゲンにより引き起こされる疾患の予防的処置のための薬剤の製造に用いられ得る。
【００２４】
本発明のワクチンは、病原性作因、癌性細胞またはアレルゲンにより引き起こされる疾患の予防的処置のための薬剤の製造に用いられ得る。
【００２５】
本発明のワクチンは、病原性作因、癌性細胞またはアレルゲンにより引き起こされる疾患の治療的処置のための薬剤の製造に用いられ得る。
【００２６】
本発明は、ここでは、ヒトおよび非ヒト動物ワクチンの両方を記載する。
アジュバント組成物は、１つまたは複数の抗菌薬を含み得る。ヒトまたは非ヒト動物ワクチンは、少なくとも2つの構成成分を含み得るが、2つの構成成分は、共在的に投与されるか、または口内で同時投与され、この場合、第一構成成分は１つまたは複数の抗菌薬を含むアジュバントであり、そして第二構成成分は１つまたは複数の抗原性作因である。
【００２７】
アジュバントが抗菌薬であり、抗菌薬がマクロライド系抗生物質であるアジュバントを伴うワクチン。非ヒト動物のためであるワクチンであって、抗菌薬がドラッキンDraxxin（登録商標）またはツラスロマイシンであり、そして抗原性作因がM. heamolytica抗原、M. heamolyticaロイコトキシン、M. heamolytica莢膜抗原、M. heamolytica可溶性抗原またはそれらの混合物からなる群からの１つまたは複数から選択されるワクチン。
【００２８】
上記９ａ−アザライドが（ａ）（ｉ）それぞれ約90％±10％対約10％±10％の比での式ＩおよびＩＩの化合物の混合物；（ｉｉ）水、ならびに（ｉｉｉ）約0.2 mmol〜約1.0 mmol／組成物1 mLの総濃度で存在する１つまたは複数の酸；ならびに（ｂ）約250〜約750 mg／組成物1 mLの量で存在する１つまたは複数の水混和性補助溶媒を含む組成物である請求項１０記載のアジュバント組成物とともに任意のM. haemolyticaから選択される抗原と共在的に投与されるかまたは同時投与されるワクチン中に用いられ得るアジュバント組成物。
【００２９】
抗原と共在的に投与されるかまたは同時投与される本明細書に記載された抗菌性アジュバント組成物のいずれかを含むワクチン。
【００３０】
抗原に対する動物における免疫応答を増強し、増大し、上向き調節し、多様化し、またはそうでなければ助長するための方法であって、動物への抗菌薬の投与を包含する方法。
【００３１】
抗菌薬が抗菌薬および抗原の共在的または同時的投与の少なくとも１つのアジュバント構成成分であって、抗菌薬が本明細書中に記載された抗菌薬から選択され、そして抗原性作因が本明細書中に記載されているワクチン。
【００３２】
動物における病原性作因、癌性細胞またはアレルゲンにより引き起こされる疾患の防止方法であって、本明細書中に記載されたアジュバント組成物またはワクチン上記疾患に感受性の動物に投与する過程を包含する方法。ワクチンまたはキットを作製するための本明細書中に記載された種類の薬剤の調製。疾患に対して動物に予防接種するためのワクチンまたはキットのこのような調製の使用。
【００３３】
本明細書中に記載されたアジュバントまたはワクチンをそれを用いるための使用説明書と一緒に含むキットであって、キットの構成成分が抗菌薬または抗原性作因またはその両方を有し、そして上記構成成分が同時投与されるかまたは共在的に投与されるキット。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３４】
本発明の詳細な説明
定義
本明細書中で用いる場合、「a」または「an」という冠詞は、それが言及される対象の単数形態および複数形態の両方を指す。
【００３５】
本明細書中で用いる場合、「アジュバント」という用語は、別記しない限り、抗原に対する免疫応答（例えば体液性または細胞性免疫応答）を増強し、増大し、上向き調節し、多様化し、またはそうでなければ助長する任意の物質または物質の混合物を指す。
【００３６】
「抗原」または「抗原性作因」という用語は、別記しない限り、免疫適格性ヒトまたは動物に導入された場合に、体液性および／または細胞媒介性免疫応答を刺激する任意の作因を指す。抗原は、純粋物質、物質の混合物、または粒状物質（例えば細胞、細胞断片、または細胞由来断片）、あるいは生、通常は弱毒化生物体またはウイルスであり得る。適切な抗原の例としては、タンパク質、糖タンパク質、リポタンパク質、ペプチド、炭水化物／多糖、リポ多糖、毒素、ウイルス、細菌、真菌および寄生生物が挙げられるが、これらに限定されない。その他の適切な抗原としては、抗原の最小構成成分、例えば抗原決定基、エピトープまたはペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。さらにその他の適切な抗原としては、米国特許第5,855,894号に記載されたものが挙げられる。抗原は、ネイティブ（天然に発現されるかまたは作られる）、合成であり得るし、あるいは当業者に周知の組換えＤＮＡ法により得られる。
【００３７】
「抗菌薬」という用語は、微生物（例としては、例えばM. haemolytica、原生動物、蠕虫、ウイルス、真菌、癌性細胞またはアレルゲン）の繁殖または増殖を殺害するかまたは抑制する任意の作因を指す。それは、内部および外部投与のために有用であるよう宿主に対して十分に非毒性である化学物質である。抗菌薬の例は、以下で詳細に提供され、めいめいされるが、しかし本発明は、本明細書中に記載されるかまたは後に発見された任意のこのような作因も含む。抗菌薬の特定の一型は、アジュバントとして特に有用である構成物質であり、それらはアザライドである。別の好ましい抗菌薬は、βラクタム、特にセフチオファー、より特定的には長期作用性セフチオファーである。抗菌薬の投与時機または持続期間は、その効力および抗菌的使用のための投与期間に関連する。典型的には、それは、約1週間±2〜3日の間に1〜3回投与される。好ましい実施形態では、1回のみの投与抗生物質アジュバントが必要とされる。さらに好ましい実施形態では、1投与は、ワクチン構成成分としてほぼ同時に、同一注射器または塗薬器で、施され得るし、あるいは他の構成成分またはワクチンとほぼ同時に別個の注射器または塗薬器で投与され得る。種々の実施形態では、時機は、ほぼ同時、約1〜2時間または1〜10日からのどこかであり得るし、約1、2、3、4、5、6、7、8時間、あるいは約1、2、3、4、5、6、7、8、9または10日内の特定の期間が、特定的に且つ個別に、本明細書中に記載され、特許請求されている。抗菌薬の投与時間の長さを、当業者は容易に確定し得るに違いない。
【００３８】
「アザライド」という用語は、別記しない限り、糖（単数または複数）置換窒素含有大環状ラクトン環により特性化される化合物のクラスを指す。適切なアザライドの例としては、８ａ−および９ａ−アザライドおよびそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。特にアザライドは、８ａ−アザライド、９ａ−アザライドまたはそれらの混合物である。適切な８ａ−アザライドの例としては、米国特許第6,054,434号に記載されたものが挙げられるが、これらに限定されない。適切な９ａ−アザライドの例としては、米国特許第6,339,063号および第6,514,945号に記載されたものが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３９】
「莢膜抗原」という用語は、別記しない限り、細菌莢膜の表面で実行される抗原、通常は事実上多糖のいずれかを指す。例えば莢膜抗原は、文献中に記載されているようなM.(P.) haemolyticaからの可溶性莢膜多糖であり得る（例えばInzana, T.J., “Capsules and Virulence in the HAP Group of Babteria” Can J of Vet Research, 54: S22-S27 (1990)；およびAdlam et al., “Purification, characterization and immunological properties of the serotype-specific capsular polysaccharide of Pasteurella haemolytica (serotype A1) organisms” J Gen Microbiol, 130: 2415-2426 (1984)参照）。
【００４０】
「セフチオファー」という用語は、セファロスポリン型の抗菌性抗生物質を指す。全てのセファロスポリンは本明細書中で特許請求され、記載されている。本発明の処方物中のセファロスポリンの濃度は、約1 mg/ml〜500 mg/mlの間で変わり得る。好ましくは例えば塩酸セフチオファーに関しては、濃度は約50 mg/mlである。概して、濃度に関する上限は、油組成物が注射するには粘度が高すぎるようになる時間により確定される。抗生物質塩酸セフチオファーの投与の投与量および方式に関するさらなる情報は、米国特許第4,902,683号（この記載内容は、参照により本明細書中で援用される）に含入されている。
【００４１】
12.5 mg/mlの濃度での塩酸セフチオファー処方物も利用可能である。抗生物質がセフチオファーまたはその製薬上許容可能な塩である場合、本発明の組成物中の好ましい濃度範囲は、約1〜約1000 mg/ml、さらに好ましくは約5〜約750 mg/ml、さらに好ましくは約10〜約100 mg/mlである。セフチオファー以外の抗細菌薬に関しては、抗細菌的に等価である適切な濃度範囲は、公表済みデータに基づいて当業者により確定され得る。
【００４２】
セフチオファーは、いくつかの形態、ナトリウム塩、ＨＣｌおよび遊離酸ならびに多形体で利用可能な強力な抗生物質であり、塩および形態は全て、本明細書中で特許請求されている。本発明の目的のために、最も好ましいのは、結晶遊離酸（ＣＣＦＡ）である。患者の血漿中のセフチオファー代謝産物の所望レベルは、約0.2 μg/mlに、またはそれより高く保持されると言及される。本発明の一実施形態では、持続性ビヒクルＣＣＦＡの1回用量は、投与後少なくとも3日間、好ましくは少なくとも約4日間、さらに好ましくは少なくとも約5日間、約0.2 μg/mlまたはそれより高く、血漿中のセフチオファー代謝産物レベルを保持する（ＣＣＦＡの持続性送達）。持続性送達の程度に関する比較は、等価の生物活性剤を用いてなされる。即ち、ナトリウム塩対ナトリウム塩および遊離塩基対遊離塩基である。持続性送達は、濃度対時間プロフィールが3つの別個の相（即ち、漸増濃度相、プラトー相および濃度枯渇相）を有することを要する同一用語に関する調節的定義と特定的に一致されるべきである。持続性送達という用語は上記の調節性定義を包含し得るが、しかし本明細書中で定義されるように送達を持続される組成物が3つの別個の相を保有する必要はないとして、それに限定されるよう意図されない（例えば組成物は漸増濃度相および長時間に亘る濃度枯渇相を有し得る）。投与されるべき本発明の組成物の濃度は、患者に対する毒性問題を引き起こすことなく、疾患を治療するかまたは予防するために必要な治療利益を提供するための量および持続期間で、生物活性剤を送達するものである。選択される特定量は、当業者の技術の範囲内であるとみなされる。例えばＣＣＦＡが生物活性剤として選択される場合、それは、約0.5〜約10.0 mgのＣＣＦＡ／患者の体重1 ｋｇを、好ましくは約4.4ないし6.6 mg／ウシ1 kgおよび5.0〜7.5 mg／ブタ1 kgの範囲を含む筋肉内または皮下投与のための単位剤形で投与される。補充のために必要な範囲で、米国特許第5,721,359号および米国特許第6,074,657号に記載されているような投薬量が、参照により本明細書中で援用される。
【００４３】
「共在的投与」という用語は、別記しない限り、本発明の他の構成成分、例えばワクチンの投与の一定期間内での、本発明の一構成成分、例えばアジュバントの投与を指す。動物における2つの構成成分の投与部位は、任意の適切な投与の部位および経路であり得る。典型的には、期間は10日またはそれ未満、さらに好ましくは1週間＋または−2〜3日、さらに好ましくは2、3、4、5、6日である。種々の実施形態では、期間は約2〜10日のどこかであり、約2、3、4、5、6、7、8、9または10日の特定期間が特に記載される。構成成分は、1、2またはそれ以上の注射器で投与され得る。
【００４４】
「同時投与」という用語は、別記しない限り、本発明の他の構成成分、例えばワクチンの投与の一定期間内での、本発明の一構成成分、例えばアジュバントの投与を指す。動物における2つの構成成分の投与部位は、任意の適切な投与の部位および経路であり得る。典型的には、2つの構成成分の期間は、ほぼ動じであるかまたは1時間以内であり得る。種々の実施形態では、期間は約0、1または2時間のどこかであるが、特定的に記載され、特許請求されているのは同一日中の約1、2、3、4、5、6、7または8時間であり、各々の考え得る期間が特定的且つ個別的に記載され、特許請求される。期間は、2つの構成成分の同時投与に関しては1日までであり得る。構成成分は、1、2またはそれ以上の注射器または塗薬器で投与され得る。さらに好ましくは、構成成分は1時間以内に1または2つの注射器で投与され得る。さらに好ましいのは、ほぼ同時にである。2つの構成成分は、同一のまたは異なる注射器中に存在し得る。
【００４５】
「キット」という用語は、特定の目的のための、ここではヒトまたは動物を免疫感作するための、物品の任意の組またはコレクションを指す。それは、このようなキットのための容器を含みそして指し得る。それは、バイアルおよび使用説明書または手引きを含めた物質のパッケージ組を指し得る。それは、1つまたは複数部で存在し、キット部は別個の領域のパッケージに分割され得る。特定のキットを含有するかまたは作り上げる１つまたは複数のパッケージが存在し得る。
【００４６】
「ロイコトキシン」という用語は、別記しない限り、白血球に対して毒性の任意の化合物を指す。例えばロイコトキシンは、文献中で教示されるような活発に増殖中のマンヘミアMannheimia（パスツレラPasteurella） ヘモリチカhaemolyticaにより産生される可溶性毒素であり得る（例えば米国特許第5,055,400号；カナダ国特許出願第91000097号；およびGentry et al., “Neutralizing monoclonal antibodies to P. haemolytica leukotoxin affinity-purify the toxin from crude culture supernatants” Microbial Pathogenesis, 10: 411-417 (1991)参照）。「ロイコトキソイド」は、不活性化ロイコトキシンを記述するために用いられる用語である。あるいはロイコトキシンは、外毒素または細胞毒素として他の識別名により文献中で言及される。
【００４７】
「可溶性抗原」という用語は、別記しない限り、可溶性状態で存在するかまたは存在し得る任意の供給源からの任意の抗原（単数または複数）を指す。例えば可溶性抗原は、ロイコトキシンおよび莢膜抗原、例えばグルコプロテアーゼおよびノイラミンダーゼ以外のM.（P.）haemolyticaの増殖中に脱粒される可溶性抗原であり得る（例えばReggie et al., “Molecular Studies of Ssal, a Serotype-Specific Antigen of Pasteurella haemolytica A1”, Infection and Immunity, Vol. 59 No. 10 3398-3406 (1991)参照）。
【００４８】
「ツラスロマイシン」という用語は、別記しない限り、（ａ）（ｉ）それぞれ約90％±4％対約10％±4％の比での上記の各々式ＩおよびＩＩの化合物の混合物；（ｉｉ）水、ならびに（ｉｉｉ）約0.2 mmol〜約1.0 mmol／組成物1 mLの総濃度で存在する１つまたは複数の酸；ならびに（ｂ）約250〜約750 mg／組成物1 mLの量で存在する１つまたは複数の水混和性補助溶媒を含有する９ａ−アザライド混合物組成物を指す。
【００４９】
「ワクチン」という用語は、別記しない限り、動物またはヒトにおける能動免疫の刺激に適した抗原または免疫原性物質の任意の調製物を指す。ワクチンアジュバントの抗菌薬または組成物、特に本発明のアザライド組成物またはワクチンアジュバントは、このような調製物中に用いられ得る。
【００５０】
上記のようなワクチンアジュバントの抗菌薬または組成物、特に本発明のアザライドは、市販されているか、あるいは当該技術分野で既知の有機化学反応および技法を用いることにより、例えば上記の方法により、調製され得る。例えば上記のような式Ｉのアザライドは、上記のような式ＩＩのアザライドのトランスラクトン化反応から生成され得る。同様に、式ＩＩのアザライドは、式Ｉのアザライドのトランスラクトン化反応から生成され得る。式ＩおよびＩＩのアザライドの混合物は、水溶液中での平衡時に、式Ｉまたは式ＩＩの化合物から得られる。式Ｉのアザライドの生成方法は、国際公告WO 98/56802に記載されている。式ＩＩのアザライドの生成方法は、米国特許第6,514,945号に記載されている。アザライドの他の調製方法は、米国特許第6,054,434号および第6,339,063号に、ならびに下記の実施例組中に記載された方法に記載されている。
【００５１】
本発明のワクチンは、当該技術分野で既知の任意の手段により、例えば下記の実施例１に記述された手法により調製され得る。特にワクチンは、各々本明細書中で上記されたような、少なくとも１つのアザライドを少なくとも１つの抗原と組合せることにより調製され得る。さらに特定的には抗原は凍結乾燥形態であり、そして使用直前にアジュバントとして作用する少なくとも１つのアザライド溶液で再構成される。あるいは固体（例えば粉末）アザライド（例えば式ＩまたはＩＩの化合物）は、水性抗原と組合されて、ワクチンを生成する。
【００５２】
本発明のアジュバント組成物、ワクチンアジュバントまたはワクチンは、付加的作用物質をさらに含み得る。例えば付加的抗原が存在し得る。例えば本発明のアジュバント組成物、ワクチンアジュバントまたはワクチンは、パスツレラ・ムルトシダ、ヘモフィルス・ソムナス、クロストリジウム属、マイコプラズマ属、ウシ呼吸器合胞体ウイルス、ウシウイルス性下痢ウイルスおよび／またはウシ３型パラインフルエンザウイルスまたは任意のその他の感染性作因あるいはそれらの誘導体からの抗原の組合せを含有し得る。本発明のアジュバント組成物、ワクチンアジュバントまたはワクチンは、癌細胞からの抗原またはアレルゲンに関連し、それらに由来し、またはそれらと同一である抗原（単数または複数）も含有し得る。
【００５３】
本発明のアジュバント組成物、ワクチンアジュバントまたはワクチンは、約0.01 mg〜約10 mg／組成物1 mLの量で存在する１つまたは複数の酸化防止剤をさらに含み得る。特に１つまたは複数の酸化防止剤は、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、メタ亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸、エリソルビン酸、アセチルシステイン、システイン、モノチオグリセロール、チオグリコール酸、チオ乳酸、チオ尿素、ジチオトレイトール、ジチオエリトレイトール、ノルジヒドログアイアレン酸、没食子酸プロピル、α−トコフェロール、およびそれらの混合物からなる群から選択される。さらに特定的には、１つまたは複数の酸化防止剤は、モノチオグリセロールである。別の特定の実施形態では、モノチオグリセロールは、約4 mg/mL〜約6 mg/組成物1 mLの量で存在する。
【００５４】
本発明のアジュバント組成物、ワクチンアジュバントまたはワクチンは、約0.01〜約10 mg／組成物1 mLの量で１つまたは複数の防腐剤をさらに含み得る。適切な防腐剤の例としては、塩化ベンズアルコニウム、塩化ベンゼトニウム、安息香酸、ベンジルアルコール、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン、安息香酸ナトリウム、フェノールおよびそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。当業者に理解され得るように、防腐剤の存在または不存在は、抗原によっている。例えば抗原が生細菌抗原である場合には、防腐剤は添加されない。
【００５５】
本発明のアジュバント組成物、ワクチンアジュバントまたはワクチンは、付加的非抗菌薬アジュバント、特に非抗菌性および非アザライド系アジュバントをさらに含み得る。適切な非微生物性および非アザライド系アジュバントとしては、当該技術分野で既知のものが挙げられる。
【００５６】
本発明のアジュバント組成物は、付加的アジュバントを任意に含有し得るワクチン処方物の一部として投与され得る。あるいは本発明のアジュバント処方物は、本発明のアジュバント組成物以外のアジュバントである「付加的アジュバント」を任意に含有し得るワクチンの他に、即ち別個に、投与され得る。投与方式に関係なく、抗菌薬、特にアザライドは、アジュバントとして作用し、またはアジュバント作用を提供する、即ち抗原に対する免疫応答の増強、増大、上向き調節、多様化またはそうでなければ助長を引き出す。
【００５７】
本発明のアジュバント組成物、ワクチンアジュバントまたはワクチンは、疾患に感受性であるヒトまたは動物への治療的有効量のアジュバント組成物またはワクチンの投与により、病原性作因、癌性細胞またはアレルゲンにより引き起こされるヒトまたは動物における疾患を予防するかまたは治療するために用いられ得る。
【００５８】
本発明によれば、病原性作因は、任意の病原性作因、例えば細菌、原生動物、蠕虫、ウイルスおよび真菌であり得るが、これらに限定されない。このような病原性作因により引き起こされる動物における疾患としては、ウシ呼吸器疾患、ブタ呼吸器疾患、肺炎、パスツレラ症、コクシジウム症、アナプラスマ症および感染性角膜炎が挙げられるが、これらに限定されない。したがって本発明のアジュバント組成物およびワクチンアジュバントを用いて、特に、ウシ呼吸器疾患、ブタ呼吸器疾患、肺炎、パスツレラ症、コクシジウム症、アナプラスマ症および感染性角膜炎を予防または治療し得る。
【００５９】
本発明によれば、癌性細胞は、当該技術分野におけるいずれかの型の癌性細胞であり得る。本発明によれば、アレルゲンは、当該技術分野で既知のいずれかのアレルゲンであり得る。
【００６０】
本発明のアジュバント組成物、ワクチンアジュバントまたはワクチンは、治療を必要とするヒトおよび非ヒト動物、例えば家畜動物および飼育動物の両方、例えばウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウサギ、ネコ、イヌおよびその他の哺乳類（これらに限定されない）を予防または治療するために用いられ得る。本発明のアジュバント組成物、ワクチンアジュバントまたはワクチンは、ヒトを予防または治療するためにも用いられ得る。当業者に理解されるように、投与されるべき本発明のアジュバント組成物および／またはワクチンは、予防または治療されるべき患者に基づいて選択される。したがって当業者に理解されるように、動物の予防または治療のために用いられる本発明のアジュバント組成物、ワクチンアジュバントまたはワクチンは、ヒトの予防または治療のために用いられる本発明のアジュバント組成物、ワクチンアジュバントまたはワクチンとは異なり得る。
【００６１】
アジュバント組成物、ワクチンアジュバントまたはワクチンは、口腔、筋肉内、静脈内、皮下、眼内、非経口的、局所的、膣内または直腸経路により投与され得る。ウシ、ブタまたはその他の飼育動物への投与のためには、アジュバント組成物またはワクチンアジュバントは、食餌中に、または水薬組成物として経口的に投与され得る。特にアジュバント組成物、ワクチンアジュバントまたはワクチンは、筋肉内、静脈内または皮下に注射される。
【００６２】
本発明の目的のために、治療的有効量は、抗原に対する免疫応答を増強し、増大し、上向き調節し、多様化し、またはそうでなければ助長する量である。特に、治療的有効量は、病原性作因、癌性細胞またはアレルゲンにより引き起こされる疾患に感受性の動物における免疫を誘導する量である。当業者に理解されるように、治療的有効量は、症例毎に変わり、そして確定される。考慮されるべき因子は、適正投薬量を確定するために以下に略記されたものと同一である。例えば治療的有効量は、ウシにおいて本発明に従って作製される種々のアジュバント組成物またはワクチン製剤を試験し、そしてM.（P.） haemolyticaを用いて攻撃誘発試験される場合に、統計学的有意数のウシにおける免疫を誘導した組成物またはワクチン製剤を選択することにより、容易に確定され得る。ワクチン誘導性免疫は、当業者に既知であるような死亡率の低減または非存在、臨床徴候の非存在または最小臨床徴候、特徴的肺病変の低減または完全排除により示される実験的攻撃誘発に対する抵抗性により測定され得る。
【００６３】
典型的には、用いられるべき抗菌薬の投薬量および量は、当業者により確定され得る。より強力で且つより長く持続する抗菌薬は、より短い半減期を有するかまたはより低効力である抗生物質と同様に多い量を必要としない。用いられるべきこのようなアジュバントの量およびその投与頻度も、本文書中の他の箇所に記載されている。唯一の且つ本発明を限定しない例として、抗菌薬、アザライドの一型のための特定の推奨投薬量がここでは提供される。
【００６４】
特にアザライド系アジュバント組成物またはワクチンアジュバントは、同時投与であれ、共在的投与であれ、そして特にドラッキン（登録商標）は、約0.01 mgの化合物の平衡混合物／体重1 kg（mg/kg）〜約20 mg/kgの範囲の投薬量で投与され得る。さらに特定的には、アジュバント組成物またはワクチンアジュバントは、同時投与であれ、共在的投与であれ、約1 mg/kg〜約10 mg/kgの範囲の投薬量で投与され得る。さらに特定的には、アジュバント組成物またはワクチンアジュバントは、同時投与であれ、共在的投与であれ、約1.25 mg/kg〜約5.0 mg/kgの範囲の投薬量で投与され得る。
【００６５】
セフチオファーは、本文書中に記載された目的に特に適している別の抗生物質である。それは、以下の表８に、および本明細書中の他の箇所に列挙されており、「定義」の節の「セフチオファー」の項目下で特に且つ特定的に記載されている。セフチオファーは、種々の塩形態および結晶（例えばナトリウム塩、塩酸塩形態、ならびに結晶遊離酸形態またはＣＣＦＡとして記載される長期作用バージョン）中に利用可能である抗生物質である。長期作用形態は、その特性、例えば長期半減期のため、アジュバントとして作用するための特に適切な薬剤形態である。
【００６６】
セフチオファーに関してはいくつかの名称および式が提供される。塩酸セフチオファーの構造式を以下に示す：
【化３】
2007512312.tif 000004
【００６７】
この化合物は、７−［２−（２−アミノ−１，３−チアゾール−４−イル）−２−メトキシイミノ］アセトアミド］−３−［（フル−２−イルカルボニル）チオメチル］−３−セフェム−４−カルボン酸の結晶塩酸塩である。このセファロスポリン遊離酸化合物は、一般名セフチオファーにより既知である。その調製は、米国特許第4,902,683号（Amin等, 1990年2月20日）（この記載内容は、参照により本明細書中で援用される）に記載されている。
【００６８】
セフチオファー遊離酸の構造式は、以下の式ＩＩである：
【化４】
2007512312.tif 000005
【００６９】
この化合物は、セフチオファーの結晶遊離酸形態である。その調製は、国際公開WO 94/20505号（Dunn等, 1994年9月15日）（この記載内容は、参照により本明細書中で援用される）に記載されている。
【００７０】
アジュバント組成物またはワクチンアジュバントは、同時投与であれ、共在的投与であれ、間欠的にまたは1回用量として、投与され得る。投薬量および治療の長さの変動は、治療されている被験者の種、体重および症状、アジュバント組成物およびワクチンに対する個々の応答、ならびに選択される特定の投与経路によって起こり得る、と当業者は容易に認識する。いくつかの場合、上記の範囲の下限より低い投薬量レベルが治療的に有効であり、一方、他の場合には、より高い用量がいかなる有害副作用も引き起こさずに用いられ得るが、但し、このようなより高い用量は、1日を通しての投与のために先ずいくつかの小用量に分割される。その後のストレスまたは曝露が起こりそうな場合はいつでも、ブースター投与が望ましいと考えられる。アジュバント組成物またはワクチンアジュバントの投与様式は、同時投与であれ、共在的投与であれ、アジュバント組成物を、同時投与であれ、共在的投与であれ、宿主に送達する任意の適切な経路であり得る。皮下投与又は筋肉内注射による投与が好ましい。
【００７１】
以下の実施例は、本発明の組成物および方法をさらに例示する。本発明は、以下に提示される実施例の特定の詳細に限定されない、と理解されるべきである。
【実施例】
【００７２】
実施例１
ワクチン調製および治療
特許満了市販マンヘミア・ヘモリチカワクチン（ワン・ショット（登録商標）、Pfizer, Inc., New Yorkから市販）抗原を、これらの試験におけるモデル抗原として用いた。ワン・ショット（登録商標）アジュバント、滅菌水またはツラスロマイシンを用いて、この抗原を再構成した。生理食塩水を陰性対照として用いた。血清学により、ならびにM. haemolyticaの病毒性単離物を用いた攻撃誘発試験により、ワクチン効力を評価した。1日目に平均体重478ポンドの仔ウシ40頭を、試験に登録した。ロイコトキシンに対する低抗体力価を有することに基づいて、仔ウシを選択した。処置試験群を表１に示す。
【００７３】
【表１】
2007512312.tif 000006
【００７４】
この試験は、市販マンヘミア・ヘモリチカワクチン（ワン・ショット（登録商標））中のアジュバントをツラスロマイシンと置き換えることにより、９ａ−アザライド・ツラスロマイシンのアジュバント特性を評価するよう意図された。
【００７５】
0日目に、各動物の頚部左側に皮下注射した。2 ml用量の生理食塩溶液を、Ｔ01における各動物に投与した。ワン・ショット（登録商標）マンヘミア（パスツレラ）・ヘモリチカ  バクテリン・トキソイド（Bacterin-Toxoid）をワン・ショット（登録商標）アジュバント中で再構成し、Ｔ02仔ウシに投与した。ワクチンを滅菌水を用いて再構成して、Ｔ03動物に投与した。ワン・ショット（登録商標）マンヘミア（パスツレラ）・ヘモリチカ  バクテリン・トキソイド（Bacterin-Toxoid）をツラスロマイシン中で再構成した。1日目のＴ04における仔ウシの平均体重は、471.1ポンドであった。5.3 mlの容積のツラスロマイシンを用量あたりで用いてワクチンを再構成し、Ｔ04における各仔ウシに投与した。
【００７６】
これらの試験のために、動物を、無作為完全ブロック設計当たりの処置に割り振った。遮断因子は、試験開始前に得られたロイコトキシン血清学力価に基づいた。血清学データを、時間点で要約した。分析前に、力価値に対数変換｛1n（n + 1）｝を適用した。時間点および処置間の有意の（Ｐ≦0.05）処置効果または相互作用効果に関して試験後に、パラメーター概算値の線状組合せを先験的対比で用いた。各時間点で、処置間の比較を行なった。5％レベルの有意（Ｐ≦0.05）を用いて、統計学的差を査定した。平均値の各々に関する95％信頼区間も算定した。力価値に関して、各サンプリング時点での幾何平均を、1n（力価値+ 1）の最小二乗平均から算定した。
【００７７】
実施例２
予防接種後血清学知見
予防接種後に、血清抗ロイコトキシン抗体をモニタリングした（表２；図１参照）。予防接種後、ＩｇＧの抗ロイコトキシン平均抗体レベル（ng）（Confer, et al., “Serum antibody responses of cattle to iron-regulated outer membrane proteins of Pasteurella haemolytica A1” Vet Immunol Immunopathol Vol. 47, pp 101-110 (1995)参照）は、対照と比較してＴ02およびＴ04の両方において有意に増大し、そして試験全体を通して高いままであった（Ｐ≦0.05）。14および21日目に、Ｔ04平均抗ロイコトキシン抗体は、Ｔ02における値より有意に高かった（Ｐ≦0.05）。平均抗体レベルは、残りの試験の間、Ｔ02と比較してＴ04においては高いままであったが、しかし2群間の差は低減した。Ｔ01における抗ロイコトキシン抗体のレベルは、試験中は相対的に変化しなかった。Ｔ03における抗体レベルは、サンプリング日のいずれに関してもＴ01レベルと有意に異ならなかった（Ｐ＞0.05）。
【００７８】
抗全細胞抗体もモニタリングした（表３および図２）。7および14日目に、ＩｇＧのＴ02およびＴ04平均全細胞抗体レベル（ng）は、Ｔ01と比較して有意に高かった（Ｐ≦0.05）。Ｔ04に関する平均抗体レベルは、残りの試験の間、Ｔ01平均より有意に高いままであった（Ｐ≦0.05）。14および21日目に、Ｔ04平均抗体レベルは、Ｔ02からの値より有意に高かった（Ｐ≦0.05）。抗ロイコトキシン抗体レベルで観察されたように、Ｔ02およびＴ04全細胞抗体レベル間の差は、残りの試験の間、有意に低減した。Ｔ01における平均抗体レベルは、試験中、有意に増大した。Ｔ03における全細胞抗体レベルは、サンプリング日のいずれに関してもＴ01と有意に異ならなかった（Ｐ＞0.05）。
【００７９】
【表２】
2007512312.tif 000007
【００８０】
【表３】
2007512312.tif 000008
【００８１】
実施例３
攻撃誘発後臨床観察
予防接種攻撃誘発のために、試験34日目に、各仔ウシの右および左尾方肺葉への経胸腔注射により、マンヘミア・ヘモリチカ（オクラホマ州菌株）の病毒性培地5 mlを投与した（培地10 ml／仔ウシ）。接種物は、約5.6×108 ＣＦＵ／ｍｌを含有した。
【００８２】
臨床スコア（付録２）を、33日目の攻撃誘発の前に、ならびに試験期間中毎日1回、査定した。これらのスコアは、姿勢および呼吸労力の査定を反映した。査定の各々に関して臨床スコア＞1を少なくとも1つ有する攻撃誘発後日の最小二乗平均パーセンテージを、表４に要約する。平均パーセンテージは姿勢に関しては群において異ならなかったが、しかしＴ04は最低であった（Ｐ＞0.05）。＞０の呼吸労力スコアを有する日のパーセンテージは、他の群と比較した場合、Ｔ04では有意に低かった（Ｐ≦0.05）。
【００８３】
【表４】
2007512312.tif 000009
【００８４】
各群に関する肺硬化の平均パーセンテージを、表５に要約する。Ｔ０１における動物１頭は、攻撃誘発投与の結果としての肺出血のため、攻撃誘発直後に死亡した。したがってその肺病変データを、分析から除外した。Ｔ03における動物1頭は、重症肺炎の結果、37日目に死亡したことが判明したが、しかし剖検し、その肺データを、他の動物からのデータと一緒に分析した。処置群間に有意差は認められなかった（Ｐ＞0.05）。Ｔ02およびＴ04はともに、対照と比較してより少ない肺病変を有したが、一方、Ｔ03は病変増大を示した。
【００８５】
【表５】
2007512312.tif 000010
【００８６】
攻撃誘発後、全群における動物が、呼吸器疾患の典型的症候を示した。完全ワクチンまたは抗原＋ツラスロマイシンを摂取中の群は、対照群と比較して、より少ない肺病変を有した。アジュバントなしで抗原だけを摂取中の群は、他の群と比較して、肺病変増大を示した。ツラスロマイシンはワン・ショット（登録商標）ワクチン中のアジュバントを効果的に置き換えると思われたが、これは、ツラスロマイシンのアジュバント機能を実証する。
【００８７】
【表６】
2007512312.tif 000011
【００８８】
結論
実施例１〜４に例示したように、Ｔ04は、より高い抗体産生、より良好な姿勢および呼吸作用、ならびにより少ない肺病変（これら全てが抗原に対する免疫応答の指標である）により示されるようなＴ02より良好とまではいかないが、同じように良好であった。ツラスロマイシンのアジュバント特性のさらなる確証は、Ｔ03結果に対してＴ04結果を比較することにより例示される。さらなる確証は、Ｔ01およびＴ03抗体結果に見出され、これらは同量の時間を上回るものを示し（Ｔ02およびＴ04と比較して）、抗体産生の変化はほとんどないし全く認められなかった。
【００８９】
実施例５
アザライド調製
組成物1 mL当たり100 mgの化合物ＩおよびＩＩの平衡混合物を含有する注射用製剤組成物1000リットルを、以下のように調製した。
【００９０】
約400リットルの注射用水（United States Pharmacopeia（USP）/Pharmacopoeia Europa（Ph. Eur.）等級）を、ステンレス・スチール調合容器に付加した。窒素（United States National Formulary（NF）/Ph. Eur.等級）を水を通して発泡させて、撹拌を開始した。製造全体を通して調合容器中での溶液の酸素曝露を低減するためのオーバーレイとしても、窒素（NF/Ph. Eur.等級）を用いた。最終サンプリングおよび容積点検中を除いて、製造全体を通して溶液を撹拌した。19.2 kgの無水クエン酸（USP/Ph. Eur.等級）を、水に付加した。その結果生じた混合物を、酸が溶解するまで撹拌した。7.8 kgの濃塩酸（NF/Ph. Eur.等級）を混合物に付加し、分散させた。99:1を超える比率の化合物Ｉおよび化合物ＩＩ約97％および１つまたは複数の不純物約3％を含有する混合物103.0 kgを、約1時間の期間に亘って撹拌混合物に付加した。溶液に付加された化合物Ｉおよび化合物ＩＩの総量は、約100.0 kgであった。化合物Ｉ、化合物ＩＩおよび１つまたは複数の不純物の混合物の溶解が完全に生じるまで、撹拌を約1時間継続した。溶解が完全に生じた後、約1時間、撹拌を継続した。その結果生じた溶液のｐＨを、合計0.25 kgの濃塩酸（NF/Ph. Eur.等級）を多数回に分けて付加することにより、7.0±0.3に調整した。化合物Ｉおよび化合物ＩＩの平衡を、高温で達成した。溶液の温度を、約15分掛けて、60±3℃に上げた。溶液を、約120分間、60±3℃に保持した。この期間の終了時に、化合物Ｉ対化合物ＩＩの比は、ＨＰＬＣにより確定した場合、約90:10であった。次に溶液を、約45分掛けて、約25℃に冷却した。500 kgのプロピレングリコール（USP/Ph. Eur.等級）を溶液に付加し、分散させた。窒素（NF/Ph. Eur.等級）を、溶液を通して発泡させた。5.0 kgのモノチオグリセロール（NF等級）を溶液に付加し、分散させた。10.5 kgの濃塩酸（NF/Ph. Eur.等級）を混合物に付加し、分散させた。溶液のｐＨを、約0.85 kgの濃塩酸（NF/Ph. Eur.等級）を多数回に分けて付加することにより、5.4±0.3に調整した。注射用の十分量の水（USP/Ph. Eur.等級）を付加して、最終容積を1000リットルとした。その結果生じた組成物は、組成物1 mL当たり100 mgの化合物ＩおよびＩＩの平衡混合物、組成物1 mL当たり500 mgのプロピレングリコール、組成物1 mL当たり5.0 mgのモノチオグリセロール、および組成物1 mL当たり19.2 mg（0.100 ミリモル）のクエン酸を含有した。
【００９１】
組成物を、0.2ミクロンのMillipore Milligard（Millipore, Corporation, Billerica, Massachusetts, USA）プレ・フィルターを通してステンレス・スチール受容タンク中に濾過し、約60時間保持した。冗長0.2μ  Millipore Durapore（Millipore SA, Molsheim France）滅菌フィルターを通して濾過することにより、組成物を滅菌した。122℃で45分間、湿潤加熱オートクレーブ処理することにより、滅菌フィルターを滅菌した。滅菌前、および溶液の濾過のために使用された後に、沸点および拡散試験方法の両方を用いて、保全性に関してフィルターを検査した。20 mLフリントＩ型ガラス血清バイアル（Saint Gobain des Jonqueres, Mers les Bains, France）を滅菌し、350℃の設定値で乾燥加熱トンネル中で脱発熱化した。最小曝露時間は、31分であった。Daikyoフルオロ樹脂−Ｄ（Daikyo-Seiko, Tokyo, Japan）で被覆された20 mmクロロブチルゴム栓を、洗浄により脱発熱化して、124℃で60分間、湿潤加熱オートクレーブ処理することにより滅菌した。1444の20mLバイアルの各々を、滅菌条件下で20.6 mLの結果的に生じた組成物で充填した。各バイアルは、化合物ＩおよびＩＩの平衡混合物2.06 gを含入した。バイアル・ヘッドスペースを窒素でフラッシュし、バイアルを栓および適切なアルミニウム・オーバーシール（Helvoet Pharma, Alken, Belgium）で密封した。500 mLフリントＩ型ガラス血清バイアル（Saint Gobain des Jonqueres, Mers les Bains, France）を滅菌し、350℃の設定値で乾燥加熱トンネル中で脱発熱化した。最小曝露時間は、38分であった。Daikyoフルオロ樹脂−Ｄ（Daikyo-Seiko, Tokyo, Japan）で被覆された32 mmクロロブチルゴム栓を、洗浄により脱発熱化して、124℃で60分間、湿潤加熱オートクレーブ処理することにより滅菌した。1537の500mLバイアルの各々を、滅菌条件下で510 mLの結果的に生じた組成物で充填した。各バイアルは、化合物ＩおよびＩＩの平衡混合物51.0 gを含入した。バイアル・ヘッドスペースを窒素でフラッシュし、バイアルを栓および適切なアルミニウム・オーバーシール（Helvoet Pharma, Alken, Belgium）で密封した。
【００９２】
付加的抗菌薬
上に提示した実施例のほかに、多数のその他の抗菌薬が本発明の抗菌薬構成成分として用いるのに適しており、本明細書により以下で特定的に記載される。下記の作用物質に関して、作用物質の量およびその投与継続期間は、容易に確定され得る。短期間の有効性を有する抗菌薬は、典型的にはより頻繁に、且つより長い持続時間で投与される必要がある。より長い半減期を有する抗菌薬は、低頻度で投与され得る。動物およびヒトの両方に関して以下で提示される投薬量範囲は、アジュバントのための有効用量に関する指針を提供する。グラム陽性およびグラム陰性抗生物質はともに、この記述に含まれる。
【００９３】
【表７】
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【００９４】
【表８】
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【００９５】
【表９】
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【００９６】
【表１０】
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【００９７】
表１０
リンコサミド、プレウロムチリウム、クロラムフェニコールおよびマクロライド
リンコサミド−リンコマイシン、クリンダマイシンおよびピルリマイシン
プレウロムチリン−チアムリン、バルネムリン
クロラムフェニコール、チアフェニコールおよびフロルフェニカル
マクロライド−エリスロマイシン、チラシン、スピラマイシン、チルミコシン、ロキシスロマイシン、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、ケトライド、ならびに上記のツラスロマイシン。
【００９８】
【表１１】
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【００９９】
【表１２】
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【０１００】
表１３
フルオロキノロン
エンロフロキサシン    イヌ、ネコ、ニワトリ、シチメンチョウ、肉牛、ウマ、ブタ
オルビフロキサシン    イヌ、ネコ
ジフロキサシン        イヌ、ニワトリ、シチメンチョウ
ダノフロキサシン      ウシ、ブタ
マルボフロキサシン    イヌ、ネコ、ブタ、ウシ
サラフロキサシン      ニワトリ、シチメンチョウ
【０１０１】
典型的にヒトに向けられる抗菌薬
表１４
特に、アミカシン、ゲンタマイシン、スペクチノマイシン、トブラマイシン、イミペネム、メロペネム、セファドロキシル、セファゾリン、セファレキシン、セファクロル、セフォテタン、セフォキシチン、セフプロジル、セルロキシメ、ロラカルベフ、セフジニル、セフィキシメ、セフォペラゾン、セフォタキシメ、フェフポドキシメ、セフタジジメ、セフチブテン、セフトゾキシメ、セフトリアキソン、セフェピメ、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、ジリスロマイシン、ペニシリンＧ、クロキサシリン、ジクロキサシリン、ナフシリン、オキサシリン、アモキシシリン、アモキシシリン、アンピシリン、メズロシリン、ピペラシリン、ナリジキシン酸、シプロフロキサシン、エノキサシン、ロメフロキサシン、ノルフロキサシン、オフロキサシン、レボフロキサシン、スパルフロキサシン、アラトロフロキサシン、ガチフロキサシン、モキシフロキサシン、トリメトプリム、スルフィソキサゾール、スルファメトキサゾール、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、テトラサイクリン、アズトレオナム、クロラムフェニコール、クリンダマイシン、キヌプリスチン、ホスホマイシン、メトロニダゾール、ニトロフラントイン、リファムピン、トリメソプリムおよびバンコマイシンを開示する。これらは全て既知である。それらは、商業的に入手し得るし、あるいはPHYSICIANS’ DESK REFERENCE, the 53rd Edition (1999)および米国食品医薬品局のOrange bookに引用された参考文献に従って調製され得る。
【０１０２】
「グラム陽性抗生物質」という用語は、グラム陽性細菌生物に対して活性である抗菌薬を指す。「グラム陰性抗生物質」という用語は、グラム陰性細菌生物に対して活性である抗菌薬を指す。
【０１０３】
【表１３】
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【０１０４】
【表１４】
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【０１０５】
【表１５】
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【０１０６】
【表１６】
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【０１０７】
グラム陽性およびグラム陰性生物により引き起こされる感染性疾患と闘うに際しては、グラム陰性生物に対して活性である他の抗生物質と組合せて、式Ｉの化合物を用い得る。このようなグラム陰性抗生物質の例は、表２に列挙されている。グラム陰性抗生物質のいくつかは、グラム陽性生物に対する活性も有する。
【０１０８】
【表１７】
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【０１０９】
【表１８】
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【０１１０】
【表１９】
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【０１１１】
【表２０】
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【０１１２】
表１５および１６において、「Ｌｏ用量」という用語は、本発明の組合せ療法に関する推奨低投薬量を意味する。それは、治療中の各被験者の要件および細菌感染の重症度によって、さらに低く調整され得る。考え得る最低投薬量は、本発明の式Ｉの化合物と組合せた場合、0.1 mgであり得る。「Ｈｉ用量」という用語は、組合せ療法における推奨最高投薬量を意味する。それは、米国食品医薬品局標準に従って、以後、変更され得る。「Ｓｔｄ用量」という用語は、本発明の組合せ療法に関する推奨標準投薬量を意味する。それは、治療中の各被験者の要件および細菌感染の重症度によって、さらに低く調整され得る。特定の抗生物質は、1つより多い推奨投薬量範囲を有し得る。
【０１１３】
本出願中に引用された全ての出版物、例えば発行済み特許、特許出願および季刊誌（これらに限定されない）は、その記載内容が参照により本明細書中で援用される。
【０１１４】
開示された実施形態を参照しながら本発明を説明してきたが、しかし詳述した特定の実験は本発明の例示に過ぎないことを、当業者は容易に理解するであろう。本発明の本質を逸脱しない限り種々の修正がなされ得る、と理解されるべきである。したがって本発明は添付の特許請求の範囲によってのみ限定される。
【図面の簡単な説明】
【０１１５】
【図１】図１は、処置群の各々に関する幾何平均抗ロイコトキシン抗体力価を示す。
【図２】図２は、処置群の各々に関する最小二乗平均抗全細胞抗体力価を示す。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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