(57)【要約】  本発明は、放射性同位体のレニウム−１８８（Ｒｅ−１８８）で標識した粒子の製造方法、並びに上記方法を実施するためのキットに関する。この種の放射性で標識した粒子は、医学において、特に腫瘍学及び核医学の分野で、腫瘍又は腫瘍の転移の放射線治療のために使用することができる。この方法の場合に、粒子を溶液中に懸濁させて、加熱し、その際、上記溶液は予めｐＨ１〜ｐＨ３のｐＨ値を有し、かつスズ−ＩＩ−塩及びＲｅ１８８過レニウム酸塩を含む。４５分間〜７０分間加熱した後にｐＨ値を高める。ｐＨ値の上昇後に得られる懸濁液は、放射線治療のために患者に直接使用することができる。洗浄工程が行われないことによって、時間の節約と共に、作業者に対する放射線保護が著しく改善される。さらに、ラベリングに必要なスズ−ＩＩ−塩の量は減少し、ラベリング収率は増加する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
有機ポリマー又はバイオポリマーからなる粒子を溶液中に懸濁させて、８０℃〜１００℃に加熱し、その際、上記溶液は予めｐＨ１〜ｐＨ３のｐＨ値を有し、そして次の成分：
ａ．）  水溶性スズ−ＩＩ−塩、
ｂ．）  １０００ＭＢｑ〜６００００ＭＢｑの放射能を有するＲｅ−１８８過レニウム酸塩、
を含むレニウム−１８８で標識した粒子の製造方法において、４５分〜７０分加熱した後に上記ｐＨ値を高め、そしてｐＨ５〜ｐＨ８．５のｐＨ値に調整することを特徴とする、レニウム−１８８で標識した粒子の製造方法。
【請求項２】
ｐＨ値を高めるために、シトラート、アセタート又はタルトラート、好ましくは酒石酸カリウムナトリウムからなる溶液を使用する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
溶液が、２．５−ジヒドロキシ安息香酸、酢酸、クエン酸、マロン酸、グルコン酸、乳酸、ヒドロキシイソ酪酸、アスコルビン酸、酒石酸、コハク酸、上記酸の塩又はグルコヘプトナートから選択される、スズ−ＩＩ−塩を安定化する錯化剤を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
スズ−ＩＩ−塩を安定化する錯化剤として、２．５−ジヒドロキシ安息香酸を使用する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
粒子が１０μｍ〜３０μｍの直径を有する、請求項１〜４のいずれか1つに記載の方法。
【請求項６】
水溶性のスズ−ＩＩ−塩が、処理の開始時に溶液中に１０ｍｍｏｌ／ｌ〜５０ｍｍｏｌ／ｌの濃度で存在する、請求項１〜５のいずれか1つに記載の方法。
【請求項７】
粒子がヒト血清アルブミンからなることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか1つに記載の方法。
【請求項８】
ａ．）  水溶性スズ−ＩＩ−塩のある量と、２．５−ヒドロキシ安息香酸、酢酸、クエン酸、マロン酸、グルコン酸、乳酸、ヒドロキシイソ酪酸、アスコルビン酸、酒石酸、コハク酸、上記酸の塩又はグルコヘプトナートから選択される、スズ−ＩＩ−塩を安定化する錯化剤のある量とを有する第１容器と、
ｂ．）  有機ポリマーからなるか又はバイオポリマーからなる粒子を有する第２容器と、
ｃ．）  固体の形で又は水溶液の形で存在し、そして溶液の形でｐＨ６．５〜ｐＨ８．５のｐＨ値をもたらすシトラート、アセタート又はタルトラートから選択される、ｐＨ値を高めるための物質のある量を有する第３容器と
を含む、レニウム−１８８で標識した粒子を製造するための医療用キット。
【請求項９】
スズ−ＩＩ−塩を安定化する錯化剤が、２．５−ジヒドロキシ安息香酸である、請求項８に記載の医療用キット。
【請求項１０】
ｐＨ値を高めるための物質が酒石酸カリウムナトリウムである、請求項８または９に記載の医療用キット。
【請求項１１】
粒子が１０μｍ〜３０μｍの直径を有する、請求項８〜１０のいずれか1つに記載の医療用キット。
【請求項１２】
キットが患者への１回投与あたり０．０２ｍｍｏｌ〜０．１ｍｍｏｌのスズ−ＩＩ−塩を含む、請求項８〜１１のいずれか1つに記載の医療用キット。
【請求項１３】
粒子がヒト血清アルブミンからなることを特徴とする、請求項８〜１２のいずれか1つに記載の医療用キット。
【請求項１４】
請求項１〜６のいずれか1つに記載の方法によって製造されたレニウム−１８８で標識した粒子。
【請求項１５】
腫瘍、癌腫又はそれらの転移を放射線治療するために、請求項１４に記載のレニウム−１８８で標識した粒子の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、放射性同位体のレニウム−１８８（Ｒｅ−１８８）で標識した粒子の製造方法、並びに上記方法を実施するためのキットに関する。この種の放射性を有する粒子を、医学において、特に腫瘍学及び核医学の分野で、腫瘍の又は腫瘍の転移を放射線治療するために使用することができる。
【背景技術】
【０００２】
放射性標識した粒子を用いた腫瘍又は腫瘍の転移の放射線治療は公知である。このために、一般に腫瘍にまで達する血管中にカテーテルが挿入される。従って、上記カテーテルを通して放射性標識した粒子が局所的に腫瘍組織に供給される。この放射性標識した粒子は、腫瘍に侵入する毛細血管系の第１の通路において腫瘍の毛細血管に入り込んだままになることが保証されるサイズを有する。この方法は、標的腫瘍組織中で極めて高い放射性線量を達成し、同時に患者の周囲の組織もしくは他の器官への影響を少なくすることができる。腫瘍組織中での著しく高い放射線量は、例えば、放射性標識した抗体、ペプチド及び他の低分子量化合物を全身的に静脈内投与することによって得られる。
【０００３】
ここ数十年で、特に、相応する粒子のラベリング（標識付け）のために、放射性核種Ｙ−９０、Ｒｅ−１８８及びＨｏ−１６６が使用される。１７時間の比較的短い半減期を有するベータ放射体のＲｅ−１８８は、高い放射性核種線量を用いた治療のため及び同じ患者への複数回の適用に特に適している。
【０００４】
もちろん、Ｒｅ−１８８及び粒子のための今までのラベリング方法は不十分である。
【０００５】
類似した化学元素、例えばテクネチウムの場合に有効に実施可能なラベリング方法は、異なる化学的挙動に基づき、特に異なる酸化還元電位により、Ｒｅ−１８８を用いたラベリングに転用できない。
【０００６】
核医学において放射性核種輸送のための担体材料として使用される粒子は、２０マイクロメーターの平均サイズのヒト血清−アルブミン−マイクロスフェアー（［９９ｍＴｃ］ＨＳＡマイクロスフェアー  Ｂ２０、非特許文献1）が好ましい。このタンパク質粒子は、生体内で分解可能であるため、このマイクロスフェアーは毛細血管を一時的に閉鎖するだけで、患者に複数回注入することができる。テクネチウムのために開発されたラベリング方法を、Ｒｅ−１８８を用いるラベリングに使用する場合、酸化還元電位が異なる故に、５％だけ少ないラベリング収率が達成される。
【０００７】
Ｗｕｎｄｅｒｌｉｃｈらにより記載された方法の欠点は、９０分を超える反応時間の後にほんの７０％〜最大９０％のＲｅ−１８８が粒子に結合していることである。未反応のＲｅ−１８８が患者生体に望ましくない被爆を引き起こさないために、過剰量のＲｅ−１８８は複数回の洗浄により除去しなければならない。この洗浄工程は放射性の液体を直接取り扱う必要があり、従って作業者に高い被爆をもたらす。
【０００８】
Ｗａｎｇ  Ｓ．  Ｊ．ら著の刊行物（非特許文献２）には、同様にＲｅ−１８８により標識したマイクロスフェアーのラベリングする方法は公知である。このマイクロスフェアーはプラスチック樹脂からなる。この方法において、マイクロスフェアーはＲｅ−１８８を標識した後に、同様に上澄液の除去及び食塩溶液中での再懸濁により洗浄しなければならないことが欠点である。この方法で、マイクロスフェアー２０ｍｇのラベリングのために、２００ｍｇのスズ塩と強酸性のｐＨ値が必要となる。この高いスズ量は、患者を付加的に薬理学的危険にさらすという欠点を有する。強酸性のｐＨ値のためにこの方法はタンパク質粒子のためには適していない。とういのはタンパク質が使用される強酸性の０．２Ｎ  ＨＣｌによって加水分解されるからである。
【０００９】
Ｇｒｉｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒ  Ｋ．  Ｇ．らは、Ｒｅ−１８８で標識したヒドロキシアパタイト及び硫黄コロイド（非特許文献３）を記載している。しかしラベリングの際に達成される収率は８０％より少ない。
【００１０】
粒子をＲｅ−１８８でラベリングする公知の方法は時間がかかる。達成されるラベリング収率は使用したベース材料に著しく依存する。
【００１１】
核医学において、診療スタッフにとって粒子をＲｅ−１８８でラベリングすることが容易となる方法が必要である。レニウム−１８８の高い放射線量の取り扱いは、作業者が許容範囲内で被爆を保つために可能な限り短くなければならない。したがって、洗浄工程を行わない方法が所望される。
【非特許文献１】Ｒｏｔｏｐ  Ｐｈａｒｍａｋａ、ドイツ国；Ｗｕｎｄｅｒｌｉｃｈ  Ｇら著、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｓｏｔｏｐｅｓ  ５２  （２０００）  ｐ．  ６３−６８。
【非特許文献２】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １９９８、３９  （１０）  ：  ｐ．  １７５２−１７５７、  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  １９９８、１９  ：  ｐ．４２７−４３３。
【非特許文献３】Ｎｕｋｌｅａｒｍｅｄｉｚｉｎ  １９９７、３６  ：  ｐ．７１−７５。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明の課題は、レニウム−１８８で粒子をラベリングするための簡単な方法、並びに上記方法を実施するためのキットを提供することである。特に、上記方法及び上記キットを用いて、作業者の被爆を減らし、上記方法を実施する場合に費やされる時間を短縮しなければならない。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明によれば、上記課題は、粒子をまず酸性溶液中に懸濁し、ついで加熱し、所定の時間加熱した後にｐＨ値を高めることによる、レニウム−１８８（Ｒｅ−１８８）で標識した粒子の製造方法によって解決される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
上記溶液は、この場合、ｐＨ１〜ｐＨ３のｐＨ値を有し、そして次の成分を有する：
ａ）  スズ−ＩＩ−塩及び
ｂ）  Ｒｅ−１８８−過レニウム酸塩。
【００１５】
好ましい反応容量は、この工程で１〜５ｍｌ、特に好ましくは２ｍｌ〜４ｍｌ、殊に好ましくは３ｍｌである。公知のＲｅ−ジェネレータは２ｍｌの最少溶出容量を生じる。上記反応容量により本発明による方法の場合に、Ｒｅ−ジェネレータの全部の溶出物を利用できるのが有利である。
【００１６】
３０〜２４０分間、好ましくは４５〜７０分間加熱した後に、ｐＨ値が高められる。この場合、ｐＨ値をｐＨ５より高く、好ましくはｐＨ６．５〜ｐＨ８．５に調整する。
【００１７】
驚くべきことに、加熱後の時点でｐＨ値を増加させることにより、Ｒｅ−１８８による粒子のラベリングの収率は９５％より多くまで高められた。このように達成された、Ｒｅ−１８８による粒子の有効なラベリングにより、最終生成物の後処理はもはや必要なくなる。特に洗浄工程は行う必要がない。ｐＨ値の上昇後に得られる懸濁液は、放射線治療のために患者に直接使用することができる。
【００１８】
全体の反応時間は、先行技術と比較して明らかに短縮される。洗浄工程を行わないために、時間の短縮と共に、作業者のための放射線保護も改善される。というのは注射可能な生成物を得るために、より少ない操作を必要とするからである。
【００１９】
この方法を用いて、Ｗｕｎｄｅｒｌｉｃｈら（２００１）により以前に記載されたラベリングを著しく超えた、５００ＭＢｑ／ｍｇと比べて２５００ＭＢｑ／ｍｇの比放射能（粒子の標識）が達成される。
【００２０】
ｐＨ値の増加は、緩衝溶液、好ましくはアセタート溶液、シトラート溶液又はタートレート溶液、特に好ましくは酒石酸カリウム−ナトリウム溶液の添加により行われる。
【００２１】
上記緩衝溶液は、加熱された溶液に添加した後に好ましくは１５ｍｍｏｌ／ｌ〜５０ｍｍｏｌ／ｌ、特に好ましくは２５ｍｍｏｌ／ｌの最終濃度を有する。
【００２２】
上記スズ−ＩＩ−塩は、好ましくは水溶性のスズ−ＩＩ−塩、例えばＳｎＣｌ２×２Ｈ２Ｏ又はＳｎＦ２であり、これは、方法の開始まで溶液中で１０ｍｍｏｌ／ｌ〜５０ｍｍｏｌ／ｌの濃度で存在し、特に好ましくは１７ｍｍｏｌ／ｌの濃度で存在する。
【００２３】
この方法により、まず過レニウム酸（perrhenate）（ＲｅＯ４−）として酸化数(Oxidationstufe)＋ＶＩＩで存在するＲｅ−１８８がスズ−ＩＩ−塩の還元作用によって還元される。それにより、酸化数＋４の形のＲｅ−１８８の酸化物（ＲｅＯ２×Ｈ２Ｏ）は、形成される難溶性の水酸化スズと一緒にマイクロスフェアー上に析出する。このように共沈着により生じた層は約１μｍの厚さを有する。
【００２４】
本発明による方法により、ラベリングに必要なスズ−ＩＩ−塩の量は、先行技術（Ｗａｎｇら）に比べて１０分の１に減少させることができる。マイクロスフェアー１０ｍｇあたりスズ（ＩＩ）塩１０ｍｇ〜１２ｍｇの量は、意外にもマイクロスフェアーのラベリングのために十分であることが判明した。
【００２５】
スズ−ＩＩ−塩は水溶液中で加熱の際に比較的不安定であるため、この溶液にはスズ−ＩＩ−塩を安定化する錯化剤が添加される。このような錯化剤は、好ましくは有機カルボン酸、特に好ましくは２．５−ジヒドロキシ安息香酸（ゲンチシン酸）である。さらに好ましい錯化剤は、酢酸、クエン酸、マロン酸、グルコン酸、乳酸、ヒドロキシイソ酪酸、アスコルビン酸、酒石酸、コハク酸、上記酸の塩又はグルコヘプトナートである。スズ−ＩＩ−塩を安定化する錯化剤は、溶液中で好ましくは１５ｍｍｏｌ／ｌ〜３０ｍｍｏｌ／ｌ、特に好ましくは２０ｍｍｏｌ／ｌの濃度を有する。
【００２６】
ゲンチシン酸を使用するのが有利である、それというのもゲンチシン酸はラジカル捕捉剤であり、従って調製剤中で放射線保護剤として作用するためである。さらに、ゲンチシン酸は医薬品用添加物として既に認可されている。
【００２７】
溶液の加熱は、沸点未満の温度で、８０℃〜１００℃の範囲内の温度で行われるのが好ましい。
【００２８】
ラベリングすべき粒子は、好ましくは球形であるかもしくはほぼ球形である。マイクロスフェアーといわれるこの種の粒子は、好ましくは上記マイクロスフェアーが通常の血管を通して輸送される程度に十分に小さい直径を有するが、毛細血管中に留まるのに十分に大きい直径を有する。上記マイクロスフェアーは、好ましくは１０μｍ〜１００μｍ、特に好ましくは１５μｍ〜３０μｍの直径を有する。
【００２９】
上記粒子は、好ましくは有機ポリマー又はバイオポリマーからなる。本発明の１つの実施態様において、上記粒子は生体分解性でないポリマー、好ましくは弱いカチオン交換樹脂（例えば、ＢＩＯ−ＲＥＸ  ７０、  ＢｉｏＲａｄ、ドイツ国）、ポリアクリル、ポリメチルメタクリラート（ＰＭＭＡ、例えば、Ｈｅｒａｅｕｓ  Ｋｕｌｚｅｒ社、ドイツ国）、メタクリラートコポリマー（例えば、Ｍａｃｒｏ  Ｐｒｅｐ、ＢＩＯＲＡＤ、ドイツ国）、又はポリビニルホルムアルデヒド（例えば、Ｄｒｉｖａｌｏｎ  Ｎｙｃｏｍｅｄ−Ａｍｅｒｓｈａｍ、ドイツ国）からなる。
【００３０】
特に好ましい粒子は、しかしながら、ヒトの身体中で代謝されかつ分解される材料からなるマイクロスフェアーであるため、上記粒子は適用後にほんの一時的に毛細血管を塞ぐ。これが粒子の複数回の適用を有利に可能にする。このような分解可能な粒子の好ましい例は、ヒト血清アルブミン（［９９ｍＴｃ］ＨＳＡマイクロスフェアーＢ２０、Ｒｏｔｏｐ  Ｐｈａｒｍａｋａ、Ｒａｄｅｂｅｒｇ、ドイツ国）からなるマイクロスフェアーである。この［９９ｍＴｃ］ＨＳＡマイクロスフェアーＢ２０をはテクネチウム−９９ｍによるラベリングに使用することは既に認可されている。
【００３１】
多様な生体分解性材料からなる粒子を用いた対照試験は、ヒト血清アルブミンからなるマイクロスフェアーが本発明による方法において意外にも明らかに高いＲｅ−１８８ラベリング収率を示し、かつ、同様に生体分解する他の材料よりも高い生体内安定性を達成した。巨大凝集アルブミン（ＭＡＡ、Ｎｙｃｏｍｅｄ−Ａｍｅｒｓｈａｍ、ドイツ国）からなる粒子、コラーゲン粒子（Ａｎｇｉｏｓｔａｔ、Ｒｅｇｉｏｎａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、ＵＳＡ）及びポリラクタート粒子（ＰＬＡ、Ｍｉｃｒｏｍｏｄ、ドイツ国）を用いたラベリング収率は明らかにより低かった。
【００３２】
上記粒子は、ラベリングの場合に、ミリリットル当たり有利に２〜３百万個の粒子、好ましくは２．５百万個の粒子の濃度で、又はミリリットル当たり０．５〜１０百万個の粒子の濃度で存在する。
【００３３】
ラベリングのために使用されたベータ放射体のレニウム−１８８は、対応する放射性核種ジェネレータ（Ｏａｋ  Ｒｉｄｇｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、  ＴＮ、ＵＳＡ又はＳｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧ、ドイツ国）の購入後に、実際に数ヶ月にわたり無制限に提供され、そして同じ患者への特に高い放射線量及び複数の適用による治療に適する。この種のジェネレータにおいて、Ｒｅ−１８８は０．９％食塩溶液の導入により過レニウム酸塩（Ｒｅ−１８８の酸化数ＶＩＩ）の形で溶出される。こうして得られたＲｅ−１８８ジェネレータ溶出物は、好ましくは１０００ＭＢｑ〜６００００ＭＢｑ、好ましくは１００００〜２００００ＭＢｑの放射能を有している。
【００３４】
本発明による方法を用いて得られた比放射能（粒子の負荷）は、好ましくは１５００〜３０００ＭＢｑ／ｍｇであった。この比放射能は、患者に応じたＲｅ−１８８ジェネレータ溶出物の使用量によって所望の治療的放射線量に有利に調整することができる。
【００３５】
従って本発明による方法は、治療範囲内にある放射能によるマイクロスフェアーのラベリングに最適である。それにより及び上記方法工程の上記の簡素化によって、医療用キットの開発も有利に行うことができる。
【００３６】
本発明の別の課題は、本発明による方法を実施するための医療用キットである。レニウム−１８８で標識したマイクロスフェアーを製造するためのこのキットは次の成分を有する：
ａ）  それぞれ粉末の形又は溶液の形の水溶性スズ−ＩＩ−塩及びスズ−ＩＩ−塩を安定化する錯化剤のある量を有する第１容器、
ｂ）  ヒト血清アルブミンからなるマイクロスフェアーを有する第２容器、並びに
ｃ）  粉末又は溶液の形の、ｐＨ値を高めるための物質又は溶液を有する第３容器。
【００３７】
このｐＨ値を高めるための物質は、固体又は水溶液の形で存在し、溶液の形でｐＨ６．５〜ｐＨ８．５のｐＨ値をもたらす。
【００３８】
これらの成分は別々容器に分けられているのが好ましい。上記キットは、この実施態様の場合に、患者への投与ごとに、３つ容器の少なくとも１つずつを有している。
【００３９】
本発明の特に好ましい実施態様で、ｐＨ値を高めるために、アセタート、シトラート又はタルトラート、好ましくは酒石酸カリウム−ナトリウムが使用される。患者への投与ごとに、上記キットは、好ましくはｐＨ値を高めるための物質０．１ｍｍｏｌ〜０．２ｍｍｏｌ、特に好ましくは酒石酸カリウム−ナトリウム×４Ｈ２Ｏ  ３０ｍｇ〜５０ｍｇを含む。
【００４０】
このスズ−ＩＩ−塩は、好ましくは水溶性スズ−ＩＩ−塩であり、例えば塩化スズ（ＩＩ）二水和物又はＳｎＦ２である。患者への投与ごとに、上記キットは、好ましくは水溶性スズ−ＩＩ−塩０．０２ｍｍｏｌ〜０．１ｍｍｏｌ、特に好ましくは塩化スズ（ＩＩ）二水和物５ｍｇ〜２０ｍｇを含む。
【００４１】
水溶液中のスズ−ＩＩ−塩は加熱時に比較的不安定であるため、上記キットは、好ましくは他の成分としてスズ−ＩＩ−塩を安定化する錯化剤を含む。このような錯化剤は、好ましくは有機カルボン酸又は有機カルボン酸の塩である。上記錯化剤は、容器（ａ．）中で、スズ−ＩＩ−塩と一緒に含有されている。
【００４２】
特に好ましいスズ−ＩＩ−塩を安定化する錯化剤は、２．５−ジヒドロキシ安息香酸（ゲンチシン酸）である。さらに有利な錯化剤は、アセタート、シトラート、マロナート、グルコナート、マレアート、ラクタート、ヒドロキシイソブチラート、ピロホスファート、アスコルバート、酒石酸カリウム−ナトリウム又はグルコヘプトナートである。患者への投与ごとに、上記キットは、好ましくはスズ−ＩＩ−塩１Ｍｏｌ当たりスズ−ＩＩ−塩を安定化する錯化剤０．５〜２Ｍｏｌ、特に好ましくは１Ｍｏｌを含む。これは、ゲンチシン酸５ｍｇ〜２０ｍｇの量に相当する。
【００４３】
上記キットは、他の成分として標識すべき粒子も含む。この粒子は、好ましくは球形であるかもしくはほぼ球形である。この種の粒子のマイクロスフェアーは、好ましくは上記マイクロスフェアーが通常の血管を通過して輸送される程度に十分に小さい直径を有するが、毛細血管中で捉えられるほど十分に大きい直径を有する。好ましくは、上記マイクロスフェアーは１０μｍ〜５０μｍ、特に有利に１０μｍ〜３０μｍの直径を有する。
【００４４】
上記キット中には、好ましくは０．５〜１０百万個、特に好ましくは１〜５百万個、好ましくは１〜２百万個の粒子を付加的な容器（ｂ．）中に含む。
【００４５】
上記粒子は、好ましくはヒト体内で代謝されかつ分解される材料からなるため、上記粒子は適用時に毛細血管をほんの一時的に塞ぐ。それによって、この粒子の複数回の適用も有利に可能となる。この種の分解可能な粒子についての好ましい例は、ヒト血清アルブミン（［９９ｍＴｃ］ＨＳＡマイクロスフェアーＢ２０  Ｒｏｔｏｐ  Ｐｈａｒｍａｋａ、Ｒａｄｅｂｅｒｇ、ドイツ国）からなるマイクロスフェアーである。この［９９ｍＴｃ］ＨＳＡマイクロスフェアーＢ２０を、テクネチウム９９ｍによるラベリングで使用することは既に認可されている。
【００４６】
上記粒子はキット中に、好ましくは濃縮された水性懸濁液又はアルコール性懸濁液として含まれている。上記粒子の分散性を高めるために、これらの懸濁液に、非イオン性界面活性剤が有利に添加される。好ましくは、ポリエチレンタイプの非イオン性界面活性剤、例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）  ８０）が使用される。
【００４７】
上記非イオン性界面活性剤は、好ましくは懸濁液中で粒子１ｍｇ当たり０．１５ｍｇ〜０．３ｍｇの量で含まれる。
【００４８】
レニウム−１８８で標識したマイクロスフェアーの製造のために、スズ−ＩＩ−塩及びスズ−ＩＩ−塩を安定化する錯化剤が、第１容器中で滅菌水に溶かされ、これを、マイクロスフェアーを有する第２容器に添加し、かつ上記マイクロスフェアーを上記溶液中に懸濁させる。この懸濁液に、放射性レニウム−１８８を有するジェネレータ溶出物を添加し、上記懸濁液を８０〜１００℃で加熱する。４５分〜７０分加熱した後に、この懸濁液を第３容器中に存在する物質と混合することによりｐＨ値を高めるために上記ｐＨ値をｐＨ５〜ｐＨ８．５に調整した。上記懸濁液は有利に体温にまで冷却され、洗浄工程なしに患者に直接投与することができる。
【００４９】
本発明は、本発明による方法を用いてもしくは本発明によるキットを用いて製造された粒子、及び癌腫又はその転移の放射線治療のためのその使用にも関している。
【００５０】
本発明の別の構成要素は、上記粒子を用いた腫瘍、癌腫又はそれらの転移の放射線治療する方法である。上記方法の場合に、本発明による方法で、上記のようなレニウム−１８８で標識した粒子が製造される。癌腫に達する局所的血管中にカテーテルが挿入される。上記カテーテルを通して、放射性標識した粒子の懸濁液を、ｐＨ５〜ｐＨ８．５のｐＨ値に調整（粒子の中間的洗浄は行わない）した後に局所的に腫瘍組織に供給される。上記放射性標識した粒子は、腫瘍に侵入する毛細血管系の第１の通路において腫瘍の毛細血管に留まることが保証される大きさを有する。好ましくは、このために上記粒子は１０μｍ〜５０μｍ、特に有利に１０μｍ〜３０μｍの直径を有する。
【００５１】
この方法は、有利に、標的腫瘍組織中で極めて高い放射性線量を達成し、同時に患者の周囲の組織もしくは他の器官への影響を少なくすることができる。腫瘍組織中で、例えば、放射性標識した抗体、ペプチド及び他の低分子量化合物を全身的に静脈内投与する場合よりも著しく高い放射線量（１００〜１５０Ｇｙ）が達成される。
【００５２】
ヒト血清アルブミンからなるマイクロスフェアーの使用は、粒子が生体内で分解されるという利点を有する。上記マイクロスフェアーは、従って適用時にほんの一時的に毛細血管を塞ぐ。したがって複数回の適用も可能である。
【００５３】
粒子の適用は、好ましくは動脈への注入により行われる。このために、注入溶液（例えば滅菌された等張食塩水）２０ｍｌ〜１００ｍｌ、好ましくは５０ｍｌ中で好ましくは０．５〜１０百万個、特に好ましくは１〜５百万個、殊に好ましくは１〜２．５百万個の粒子（１〜２０ｍｇ、有利に３〜１０ｍｇに相当）が懸濁され、そして注入される。
【００５４】
上記マイクロスフェアーは、好ましくは２００時間より長い、特に８日〜１５日の範囲内の生物学的半減期で分解される。このマイクロスフェアーの生物学的半減期は、従って、Ｒｅ−１８８の生物学的半減期の範囲内にある。好ましくは、Ｒｅ−１８８のマイクロスフェアーへの固定化により、上記Ｒｅ−１８８は適用箇所に固定される（数日にわたって、９０％より多くがそこに留まる）。
【００５５】
本発明による方法によりＲｅ−１８８で標識したマイクロスフェアーは、特に有利に肝癌の治療及び他の癌腫の肝臓転移の治療のために適している。
【００５６】
次の実施例を用いて本発明を詳細に説明する：
【実施例１】
【００５７】
Ｒｅ−１８８を有する粒子のラベリングは、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）マイクロスフェアーのラベリングを用いて次のように説明する：
２．５−ジヒドロキシ安息香酸（ゲンチシン酸）９．３ｍｇを注射用水２ｍｌに溶かし、引き続き１１．４ｍｇのＳｎＣｌ２  Ｈ２Ｏを添加し、この溶液をキット瓶中でヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）マイクロスフェアー（ＭＳ  Ｂ２０、Ｒｏｔｏｐ  Ｐｈａｒｍａｋａ、Ｒａｄｅｂｅｒｇ、ドイツ国）と一緒に滅菌濾過した。上記瓶中の上記粒子を懸濁させ、更なるキット−瓶ＭＳ  Ｂ２０に、引き続き第３の瓶に移した。第３の瓶中で、次いで１．５Ｍｉｏの粒子ＭＳ  Ｂ２０が得られた。これに、０．９％のＮａＣｌ中に溶かした滅菌濾過されたＲｅ−１８８過レニウム酸塩（１００００〜２００００ＭＢｑ）１ｍｌを添加した。粒子を有するこのキット−瓶を、加熱ブロック中に立て、これを９５℃で５５分間振盪した。その後で、滅菌濾過した０．６ｍｌの酒石酸ＫＮａ溶液（４２ｍｇ／ｍｌ）を添加し、ヒーターをスイッチオフした。５分間さらに振盪した後、この調製物を注射することができる。
【００５８】
こうして標識した粒子のラベリング収率（放射化学的純度）は９５％以上であった。
【実施例２】
【００５９】
粒子（この場合、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）マイクロスフェアー）をＲｅ−１８８でラベリングするための有利なキットは、表１中に記載された内容物を有する３つの瓶からなる：
【００６０】
【表１】
2007523062.tif 000002
【００６１】
＊＊  最高純度窒素は保護ガスとして使用した。
【００６２】
このキットは、患者の治療のために作られている。
【実施例３】
【００６３】
実施例２によるキットを用いて、粒子（この場合ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）マイクロスフェアー）を次のラベリング工程によって標識した。
【００６４】
上記キット瓶１の成分（２．５−ジヒドロキシ安息香酸−ゲンチシン酸）及び塩化スズ（ＩＩ）二水和物）を、発熱物質不含の滅菌注射用水２ｍｌで溶かし、キット瓶２中でＨＳＡマイクロスフェアーＡ２０に添加した。上記溶液の添加後に、圧力補償のために同じ体積の窒素を、注射器を用いて瓶１及び２から抜き取られた。ゴム栓を濡らしながら軽く振盪することにより、ＨＳＡマイクロスフェアーは懸濁した。発熱物質不含の、滅菌及び等張された塩化ナトリウム溶液中の［１８８Ｒｅ］過レニウム酸ナトリウム（１８８Ｒｅ−ジェネレータ溶出物（１００００〜２００００ＭＢｑ）、体積：１ｍｌ）を、鉛のシールド中に存在する瓶２に移した。１８８Ｒｅ−ジェネレータ溶出物の添加の後に、圧力補償のために同じ体積の窒素を瓶２から取り出した。
【００６５】
反応のために、この瓶２を加熱振盪装置中で、９５℃で５５分間振盪した。この瓶２を振盪器から取り出し、瓶３（酒石酸Ｋ／Ｎａ溶液）から０．６ｍｌを瓶２に移した。上記溶液の添加の後に、圧力補償のために同じ体積の窒素を瓶２から取り出した。ゴム栓を濡らしながら軽く振盪することにより、［１８８Ｒｅ］ＨＳＡマイクロスフェアーは懸濁した。
【００６６】
瓶中の調製物をさらに５分間室温で振盪装置を使用しながら反応させ、その後で上記調製物を注射することができる。この標識した［１８８Ｒｅ］ＨＳＡマイクロスフェアーＢ２０の懸濁液は、所望の濃度に応じて、注射のために塩化ナトリウム溶液を用いて希釈することができる。この［１８８Ｒｅ］ＨＳＡマイクロスフェアー懸濁液はラベリング後の２時間まで使用可能であった。
【実施例４】
【００６７】
実施例２によるキットを次のように製造した：
１５０本の瓶１のバッチのために、１．３９５ｇのゲンチシン酸（２．５−ジヒドロキシ安息香酸）と１．７１０ｇの塩化スズ（ＩＩ）二水和物とを、注射用水１５０ｍｌ中に溶かした。上記溶液を１５０本の瓶に分配し、凍結乾燥した。
【００６８】
２００本の瓶２のバッチのために、２．０ｇのＨＳＡマイクロスフェアーＡ２０（Ｒｏｔｏｐ  Ｐｈａｒｍａｋａ  ＧｍｂＨ、ドイツ国）と０．４８ｇのＴｗｅｅｎ（登録商標）  ８０とを
−  ３６０ｍｌのアセトン
−  ４０ｍｌの苛性ソーダ液（０．１ｍｏｌ／ｌ）
−  ４０ｍｌの塩酸（０．１ｍｏｌ／ｌ）
−  ２４０ｍｌのエタノール（無水）
からなる溶液中に懸濁させた。上記懸濁液を少量の染料ベンガルピンクを添加した。上記懸濁液を真空中で４００ｍｌにまで濃縮し、２００本の瓶に分配した。引き続き、真空乾燥によってアセトンとエタノールとを除去した。
【００６９】
１５０本の瓶３のバッチのために、６．３ｇの酒石酸カリウムナトリウムを注射用水１５０ｍｌ中に溶かした。上記溶液を１５０本の瓶に分配した。
【実施例５】
【００７０】
実施例１からの工程に応じて、多様な材料からなる粒子をＲｅ−１８８で標識した：
Ｓ１  弱いポリアクリル−カチオン交換樹脂（ＢＩＯ−ＲＥＸ  ７０、ＢＩＯＲＡＤ、ドイツ国）、
Ｓ２  ポリメチルメタクリラート（ＰＭＭＡ、Ｈｅｒａｅｕｓ  Ｋｕｌｚｅｒ、ドイツ国）、
Ｓ３  メチルアクリラートコポリマー（Ｍａｃｒｏ  Ｐｒｅｐ  Ｑ、ＢＩＯＲＡＤ、ドイツ国）、
Ｓ４  ポリビニルホルムアルデヒド（Ｄｒｉｖａｌｏｎ  Ｎｙｃｏｍｅｄ−Ａｍｅｒｓｈａｍ、ドイツ国）、
Ｓ５  巨大凝集アルブミン（ＭＡＡ、Ｎｙｃｏｍｅｄ−Ａｍｅｒｓｈａｍ、ドイツ国）、
Ｓ６  ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ  Ｂ２０、ＲＯＴＯＰ  Ｐｈａｒｍａｋａ  ＧｍｂＨ、ドイツ国）、
Ｓ７  コラーゲン粒子（Ａｎｇｉｏｓｔａｔ、Ｒｅｇｉｏｎａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、ＵＳＡ）、
Ｓ８  ポリラクタート粒子（ＰＬＡ、Ｍｉｃｒｏｍｏｄ、ドイツ国）
それぞれ２〜３ｍｇの粒子（約０．５百万の粒子に相当）を使用した。
【００７１】
ラベリングの前及び後に、ＩＳＯ  １３３２３−１による粒子サイズの分布を個々の粒子の光散乱で測定した。粒子を含まない水中に希釈した後に、上記粒子を順番に流量キュベットの測定区域中で測定した。上記粒子の粒度分布をＩＳＯ  ９２７６−２に従って面積に対する分布に換算した。なぜならばこれはラベリングされた粒子表面上でのＲｅ−１８８の分布をより良好に特性決定するからである。
【００７２】
表２中には、ＩＳＯ  １９９８による積算分布（Ｑ２）の値を示し、この値は面積に対する全分布の９０％を示した。
【００７３】
このラベリング収率は、ラベリング後に粒子懸濁液の遠心分離し、上澄液と沈殿物との放射線をガンマ試料チェンジャー（Ｃｏｂｒａ  ＩＩ、Ｐａｃｋａｒｄ、ＵＳＡ）中で測定した。
【００７４】
【表２】
2007523062.tif 000003
【００７５】
Ｒｅ−１８８でラベリングした後に、生体分解性ＨＳＡマイクロスフェアーＢ２０（顕微鏡により球として認識可能）は１５μｍと３７μｍ（平均値２１μｍ）の間でほとんど変化しない分布を示した。
【００７６】
これとは対照的に、巨大凝集ＨＳＡ（ＭＡＡ）はラベリング後により幅広い粒子分布を示した。これは、ＭＡＡ粒子が丸いマイクロスフェアーとしてではなく、不規則な例えば海綿状の形で存在することによる。ＭＡＡ粒子は高温で安定ではなく、比較的大きな表面積に基づき、生体内でより急速に酵素により攻撃を受けかつ分解される。
【００７７】
Ｄｒｉｖａｌｏｎ（Ｓ４）、Ａｎｇｉｏｓｔａｔ（Ｓ７）及びＰＬＡ（Ｓ８）粒子は、同様に必要な高い反応温度でのラベリングを克服できず、つまり微細な材料が増加し、粒度分布は明らかに広範囲になってしまう。それにもかかわらず、全ての粒子調製物におけるラベリングはインビトロでは安定である。
【００７８】
インビトロ安定性を試験するために、標識した粒子試料をヒト血漿と共にインキュベーションした。３７℃で３時間インキュベートし、室温で２４及び４８時間インキュベートした後に、遠心分離後のＲｅ−１８８の粒子への付着及びガンマ試料チェンジャー（Ｃｏｂｒａ  ＩＩ、Ｐａｃｋａｒｄ、ＵＳＡ）放射性測定を試験した。
【００７９】
標識した粒子のインビトロ安定性の結果は表３にまとめた：
【００８０】
【表３】
2007523062.tif 000004
【００８１】
全ての粒子調製物のインビトロ安定性は十分であるということができる。なぜならばＲｅ−１８８の７５〜９０％は４８時間後になお粒子と結合して存在しているからである*（表３）。
【００８２】
多様な粒子の生体内分布は、インビボでＷｉｓｔｅｒラットへの静脈内注射によって試験した。その際、良好な血流供給を有する腫瘍に対するモデルとしてその肺を使用した。
【００８３】
２０ＭＢｑのＲｅ−１８８でラベリングした粒子の注射の後に、粒子の生体内分布を４８時間にわたりガンマカメラ（Ｐｉｃｋｅｒ  ＣＸ  ２５０）のもとで通常の各医療の画像撮影技術を用いて調査した。ガンマカメラ−調査の終了後に、動物を殺し、選択された器官を取り出し、その放射能を全体の動物に比べて及び注射した活性に比べてガンマカウンタで測定した。
【００８４】
標識した粒子の肝臓及び肺中のインビボ生体内分布は（それぞれ全体の器官中の注射した用量の％で示して）、材料あたり、（ｎ＝３〜６）の生後８週間のＷｉｓｔｅｒラットの尾の静脈に注射後４８時間で測定した。
【００８５】
多様な粒子調製物の生体内安定性を測定するために、尺度として肺中の生物学的半減期（Ｔｂ  １／２）を使用し、４５時間〜２００時間を越えるまでの値を提供した。２００時間の生物学的半減期は、この場合Ｒｅ−１８８について１５．４時間の有効半減期に相当した。５有効半減期（つまり７７時間）の後に、本来の放射能の約３％しか体内に存在せず、そして治療的に作用することができるので、得られる安定性は満足できるものとみなすことができる。
【００８６】
インビボ生体内分布及び生体内安定性の結果を表４にまとめた：
【００８７】
【表４】
2007523062.tif 000005
【００８８】
この生体内分布試験は、調製剤Ｓ１〜Ｓ３及びＳ６についての生体内安定性において極めて良好であることを示し、肺中で放射能の極めて遅い低下によって、及び非標的器官中で最小の放射線吸収によって特徴づけられる（例えば肝臓、Ｓ２の場合を除く、表４）。Ｓ２は、ベース材料において既に比較的高い微細成分を有し、上記微細成分は肝臓中での粒子の高濃度化を生じたが、そこでは、その粒子は同様に試験期間中、留まり、そして変化がない。
【００８９】
小さい粒子（＜１０μｍ、例えば試料Ｓ２）は、肝臓及び脾臓中の細網内皮系（ＲＥＳ）に集まった。ラベリングプロセスにおいて微細材料が形成される場合に、上記微細材料は静脈内注射（ｉ．  ｖ．）後にこの器官中に見られた（試料Ｓ４、Ｓ７及びＳ８）。これらの粒子は、つまりヒトの動脈内腫瘍治療に適していないが、生物学的半減期は比較的長かった（＞１２０時間）。
【００９０】
ＭＡＡ−巨大凝集物（Ｓ５）もまたその比較的低い生物学的半減期（４５．４時間）のために、ヒトの動脈内腫瘍治療に適さない。
【００９１】
粒子に満足に固定結合されていない長寿命のベータ放射体（Ｙ−９０）を適用する場合、Ｍａｎｔｒａｖａｄｉ  １９８１  によって報告された致命的な医学的結果（Ｍａｎｔｒａｖａｄｉ  ＲＶ、  Ｓｐｉｇｏｓ  ＤＧ、  Ｔａｎ  ＷＳ、  Ｆｅｌｉｘ  ＥＬ著．  Ｉｎｔｒａａｒｔｅｒｉａｌ  ｙｔｔｒｉｕｍ−９０  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｉｃｍａｌｉｇｎａｎｃｙ．  Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ  １９８１  ；  １４２  ：  ７８３−７８６）と比べて、短寿命の放射体のＲｅ−１８８でラベルされている粒子の適用は著しく危険が少ない。粒子から遊離したＲｅ−１８８は、つまり生命に重要な器官中に高濃度化されず、短時間で腎臓を経由して排泄される。Ｒｅ−１８８調製物を使用する更なる利点は、医者の要求に、長く待たせることなく、魅力的なコストで答えることができるように、現在の放射線各種ジェネレータをＲｅ−１８８調製物の製造のために常に使用することができる。
【００９２】
多様な粒子材料を用いたこの比較試験の結果は、次のようにまとめることができる：
本発明による方法を用いて、多様な粒子材料を高い収率でＲｅ−１８８を用いて標識することができ、かつ体内放射線治療の適用に有望な方法で使用することができる。
【００９３】
Ｒｅ−１８８で標識したＨＳＡマイクロスフェアーＢ２０は、特に粒子の生体適合性、その均一なサイズ及び生成物の高い生体内安定性のために、血管を通して選択的にカテーテルを挿入することによる局所的腫瘍治療に最も魅力的な核医学療法である。
【国際調査報告】
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