(57)【要約】  手術中、特に冠動脈バイパス移植 (CABG) 法中の望ましくない凝固を予防するための医薬の製造のための、式 (I)のボロン酸ならびにその塩、プロドラッグおよびプロドラッグの塩の使用、［式中、Yは、フラグメント −CH(R9)-B(OH)2 とともに、トロンビンの基質結合部位への親和性を有する疎水性部分を含む；および  R9は、1 以上のエーテル結合が介在し、その酸素および炭素原子の総数が3、4、5または6である直鎖アルキル基である、またはR9は、−(CH2)m-W であり、ここでm は 2、3、4または5であり、Wは-OHまたはハロゲン (F、Cl、BrまたはI）である］。
2007528382.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
冠動脈バイパス移植 (CABG) 法中の望ましくない凝固を予防するための医薬の製造のための、式 (I)のボロン酸ならびにその塩、プロドラッグおよびプロドラッグの塩の使用：
【化１】
2007528382.tif 000059
［式中、
Yは、フラグメント −CH(R9)-B(OH)2 とともに、トロンビンの基質結合部位への親和性を有する部分を含む；
R9は、1 以上のエーテル結合が介在し、その酸素および炭素原子の総数が3、4、5または6である直鎖アルキル基である、またはR9は、−(CH2)m-W であり、ここでm は 2、3、4または5であり、Wは-OHまたはハロゲン (F、Cl、BrまたはI）である］。
【請求項２】
R9がアルコキシアルキル基である、請求項１の使用。
【請求項３】
Yが以下を含む、請求項１または２の使用：
構造フラグメント -CH(R9)-B(OH)2に結合したアミノ基、および
該アミノ基に連結し、該構造フラグメントとともに、トロンビンの基質結合部位への親和性を有する疎水性部分。
【請求項４】
ボロン酸が以下の式 (II)を有する、請求項１または２の使用：
【化２】
2007528382.tif 000060
［式中、
Y’は、アミノボロン酸残基 −NHCH(R9)-B(OH)2 とともに、トロンビンの基質結合部位への親和性を有する疎水性部分を含む；および
R9は、1 以上のエーテル結合が介在し、その酸素および炭素原子の総数が3、4、5または6である直鎖アルキル基である、またはR9は、−(CH2)m-W であり、ここでm は 2、3、4または5であり、Wは-OHまたはハロゲン (F、Cl、BrまたはI）である、
ここでY’CO-がトロンビンのS3およびS2結合部位に結合するN末端保護されていてもよいジペプチドの場合、酸中のペプチド結合は鎖内または環内に窒素、酸素または硫黄を含有してもよく、かつハロ、ヒドロキシおよびトリフルオロメチルから選択される置換基で置換されていてもよい C1-C13ヒドロカルビル基により独立してN置換されていてもよい］。
【請求項５】
Y’CO-がトロンビンのS2サブサイトに結合するアミノ酸を含み、該アミノ酸がトロンビンのS3サブサイトに結合する部分とN末端で連結している、請求項３の使用。
【請求項６】
Y’CO-がトロンビンのS3およびS2結合部位に結合するN末端保護されていてもよいジペプチドである、請求項４または５の使用。
【請求項７】
Y’CO-がN末端保護されている、請求項５の使用。
【請求項８】
S3結合アミノ酸残基が(R)-配置であり、S2結合残基が(S)-配置であり、かつフラグメント−NHCH(R9)-B(OH) が(R)-配置である、請求項６または７の使用。
【請求項９】
ボロン酸のトロンビンに対するKiが約100 nM以下である、前記請求項のいずれかの使用。
【請求項１０】
ボロン酸が式 (III)である、請求項１の使用:
【化３】
2007528382.tif 000061
［式中、
Xは、H (NH2を形成する) またはアミノ保護基である；
aa1は、20を超えない炭素原子を含有するヒドロカルビル側鎖を有し、かつ13までの炭素原子を有する少なくとも１の環状基を含むアミノ酸である；
aa2は、4〜6員環を有するイミノ酸である；
R1は、式 -(CH2)s-Z の基であり、ここでsは2、3または4であり、Zは-OH、-OMe、-OEtまたはハロゲン (F、Cl、BまたはI)である］。
【請求項１１】
aa1が、Phe、Dpaおよびそれらの全体的または部分的水素化アナログから、所望によりDpa、Phe、DchaおよびChaから選択される、例えば(R)-Pheまたは(R)-Dpaである、請求項１０の使用。
【請求項１２】
aa2が以下の式 (IV) のイミノ酸： 
【化４】
2007528382.tif 000062
［式中、R11 は -CH2-、-CH2-CH2-、-CH2=CH2-、-S-CH2-、-S-C(CH3)2-または −CH2-CH2-CH2-であり、環が5または6員のとき、その基は１以上の-CH2- 基において1〜3のC1-C3 アルキル基により置換されていてもよい］の残基である、および所望により、aa2が(S)-プロリン残基である、例えばaa1-aa2が(R)-Phe-(S)-Proである、請求項１０または１１の使用。
【請求項１３】
aa1が(R)-配置であり、および／またはaa2が(S)-配置であり、および／またはフラグメント -NH-CH(R1)-B(OH)2が(R)-配置である、請求項１０−１２のいずれかの使用。
【請求項１４】
R1 が2-ブロモエチル、2-クロロエチル、2-メトキシエチル、3-ブロモプロピル、3-クロロプロピルまたは3-メトキシプロピルである、例えば3-メトキシプロピルである、請求項１０−１３のいずれかの使用。
【請求項１５】
X がR6-(CH2)p-C(O)-、R6-(CH2)p-S(O)2-、R6-(CH2)p-NH-C(O)-、またはR6-(CH2)p-O-C(O)-であり、ここでpは0、1、2、3、4、5または6であり、R6はHまたは5〜13員環状基であり、該5〜13員環状基は、ハロゲン、アミノ、ニトロ、ヒドロキシ、C5-C6環状基、C1-C4アルキル、および鎖内にOを含有する、および／または該環状基に鎖内のOを介して連結するC1-C4アルキルから選択される1、2または3の置換基に置換されていてもよく、前記アルキル基はハロゲン、アミノ、ニトロ、ヒドロキシおよびC5-C6環状基から選択される置換基により置換されていてもよい、請求項１０−１４のいずれかの使用、および所望により、該5〜13員環状基が芳香族またはヘテロ芳香族である、例えばフェニルまたは６員ヘテロ芳香族基である、例えばXがベンジルオキシカルボニルである該使用。
【請求項１６】
ボロン酸が以下の式 (VIII)である、請求項１０または１５の使用:
X-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-Mpg-B(OH)2      (VIII)。
【請求項１７】
化合物がコリンまたはアンモニウム塩を含まない、前記請求項のいずれかの使用。
【請求項１８】
化合物がボロン酸の塩基付加塩である、前記請求項のいずれかの使用。
【請求項１９】
医薬がボロン酸とアルカリ金属または強塩基性有機窒素含有化合物(例えばpkb約7以上を有するもの)との塩を含み、所望により強塩基性有機窒素含有化合物がグアニジン、グアニジンアナログまたはアミンである、例えばボロン酸とアルカリ金属、アミノ糖、グアニジン、式 (XI)のアミン:
【化５】
2007528382.tif 000063
［式中、nは1〜6 であり、R2はH、カルボキシラートまたは誘導体化カルボキシラートであり、R3はH、C1-C4アルキル、または天然もしくは非天然のアミノ酸の残基である］との塩、例えばリジン、アルギニンまたはグルカミンとの塩を含む、請求項１８の使用。
【請求項２０】
医薬がボロン酸と金属との塩を含む、請求項１８の使用。
【請求項２１】
金属がアルカリ金属塩、例えばナトリウムまたはリチウムを含む、請求項１９の使用。
【請求項２２】
医薬がペプチドボロン酸に由来するボロネートイオンを含み、一価の負電荷を有する該ボロネートイオンに一致する化学量を有する、請求項１８の使用。
【請求項２３】
医薬が静脈内投与のためのものである、例えば投与用溶液として再構成するための微細固体形態の化合物を含む、前記請求項のいずれかの使用。
【請求項２４】
医薬が (i) 請求項１−２２のいずれかに規定される化合物、および (ii) さらなる医薬活性物質、例えば別の心臓血管処置薬、例えば脂質低下薬、フィブラート、ナイアシン、スタチン、CETP阻害薬、および胆汁酸捕捉薬、抗酸化薬、IIb/IIIa アンタゴニスト、アルドステロン阻害薬、A2受容体アンタゴニスト、A3受容体アゴニスト、ベータブロッカー、アセチルサリチル酸、ループ利尿薬、ACE阻害薬、作用機構の異なる抗血栓薬、抗血小板薬、トロンボキサン受容体および／またはシンテターゼ阻害薬、フィブリノーゲン受容体アンタゴニスト、プロスタサイクリンミメティック、ホスホジエステラーゼ阻害薬、およびADP-受容体 (P2 T) アンタゴニスト、血栓溶解薬、心臓保護薬またはCOX-2阻害薬、を含む、前記請求項のいずれかの使用。
【請求項２５】
冠動脈バイパス移植中の血栓症を予防するための静脈内投与用医薬の製造のための、トロンビンS2およびS3サブサイトに結合可能な疎水性部分にペプチド結合により連結しているトロンビンS1サブサイトに結合可能な中性アミノボロン酸残基を有するボロン酸、またはかかる酸の塩、プロドラッグもしくはプロドラッグの塩である選択的トロンビン阻害薬の使用。
【請求項２６】
先のいずれかの請求項に規定される化合物を体外血流に導入する手段を含む心肺バイパス装置。
【請求項２７】
回路またはその一部が該化合物でコートされている、請求項２６の心肺バイパス回路。
【請求項２８】
手術中、例えば体外血液回路が関与する手術中、の望ましくない凝固または血栓症を予防するための医薬の製造のための、請求項１−１６のいずれかに規定されるボロン酸ならびにその酸付加塩およびプロドラッグから選択される化合物の使用。
【請求項２９】
CABG法中の望ましくない凝固を予防するための方法であって、治療上有効量の請求項１−２２のいずれかに規定される化合物を、かかる方法を受けている患者またはかかる患者につながれた体外血液回路に投与することを含む方法。
【請求項３０】
体外血液回路が関与する手術および体外血液回路が関与しない手術からなる群から選択される方法中の望ましくない凝固を予防する方法であって、治療上有効量の請求項１−１６のいずれかに規定されるボロン酸ならびにその酸付加塩およびプロドラッグからなる群より選択される化合物を、かかる方法を受けている患者またはかかる患者につながれた体外血液回路に投与することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［背景］
本開示は、有機ボロン酸から得られうる医薬上許容される化合物に関する。本開示はまた、前述のクラスの化合物のメンバーの使用、特に手術などに関する使用、に関する。
【０００２】
本開示はさらに、前述の化合物を含有する非経口医薬製剤その他の主題に関する。
【０００３】
ボロン酸化合物
近年、ボロン酸化合物およびその誘導体、例えばエステルが、生物学的活性、特にプロテアーゼの阻害薬または基質としての活性を有することが知られている。プロテアーゼの阻害薬または基質の記述において、P1、P2、P3 などは切断可能ペプチド結合に対してアミノ末端側である基質または阻害薬の残基を意味し、S1、S2、S3 など同族プロテアーゼの対応サブサイトを意味する。参照：Schechter, I. and Berger, A. On the Size of the Active site in Proteases, Biochem.Biophys.Res.Comm., 27:157-162, 1967。トロンビンにおいて、S1 結合部位すなわち「特異性ポケット」は酵素中のよく解明された溝であり、一方、S2 およびS3結合サブサイト (それぞれ、近位および遠位の疎水性ポケットともいう) は疎水性であり、なかでも Pro および (R)-Phe とそれぞれ強く相互作用する。
【０００４】
セリンプロテアーゼ阻害薬に関する医薬研究は、単純なアリールボロン酸からボロペプチドへ、すなわちα-アミノカルボン酸のボロン酸アナログを含有するペプチド、へと移行している。ボロン酸は、しばしばエステルが形成されるよう誘導体化される。Shenvi (EP-A-145441 および US 4499082) は中性側鎖を有するα-アミノボロン酸を含有するペプチドがエラスターゼの効果的な阻害薬であることを開示し、セリンプロテアーゼのボロペプチド阻害薬に関する数多くの特許文献がこれに続く。
【０００５】
セリンプロテアーゼのアミノボロネートまたはペプチドボロネート阻害薬または基質は以下に記載される：
US 4935493
EP 341661
WO 94/25049
WO 95/09859
WO 96/12499
WO 96/20689
Lee S-L et al, Biochemistry 36:13180-13186, 1997
Dominguez C et al, Bioorg. Med. Chem. Lett. 7:79-84, 1997
EP 471651
WO 94/20526
WO 95/20603
WO97/05161
US 4450105
US 5106948
US 5169841
WO 96/25427
US 5288707
WO 96/20698
WO 01/02424。
【０００６】
アミノ酸配列 (R)-Phe-Pro-Argは、フィブリノーゲンのアミノ酸配列を模倣したものであるのだが、かつてはトロンビン阻害薬として最良の配列と考えられていた。この配列は、強固に結合するトロンビンの阻害薬、例えばAc-(R)-Phe-Pro-boroArg (DUP 714)、を形成し、Ki値はピコモル範囲であった (Kettner et al, J. Biol. Chem. 265: 18289-18297, 1990; EP-A-293,881)。
【０００７】
ボロトリペプチドトロンビン阻害薬のP2 Pro残基のN置換グリシンによる置換は、以下に記載されている： Fevig J M et al Bioorg. Med. Chem. 8: 301-306、およびRupin A et al Thromb. Haemost. 78(4):1221-1227, 1997。US 5,585,360 (de Nanteuil et al)も参照。
【０００８】
Matteson D S Chem. Rev. 89: 1535-1551, 1989 が、特にアミノボロン酸およびその誘導体の合成のための中間体としての α-ハロボロン酸エステルの使用について総説している。Matteson は、ピナコールボロン酸エステルの非キラル合成における使用およびピナンジオールボロン酸エステルのキラルコントロールのための使用について述べており、これはアミノおよびアミドボロン酸エステルの合成を含む。
【０００９】
残念なことに、有機ボロン酸は分析的に純粋な形態で得るのが比較的困難である。すなわち、アルキルボロン酸およびそのボロキシンはしばしば空気に敏感である。Korcek et al, J. Chem. Soc. Perkin Trans. 2:242, 1972 は、ブチルボロン酸が空気により容易に酸化されて、1-ブタノールとホウ酸とを生じることを教示する。
【００１０】
ボロン酸の環状エステルとしての誘導体化が酸化に対する抵抗性を提供することが知られている。例えば、Martichonok V et al J. Am. Chem. Soc. 118: 950-958, 1996 によると、ジエタノールアミン誘導体化は可能性あるボロン酸の酸化に対する保護を提供する。米国特許第5681978号 (Matteson DS et al) は、1,2-ジオールおよび 1,3-ジオール、例えばピナコールが、容易に酸化されない安定な環状ボロン酸エステルを形成することを教示する。
【００１１】
WO 02/059131は、安定と記載されるボロン酸化合物を開示する。具体的には、これら化合物は、ボロン酸基が糖、例えばマンニトール、で誘導体化され糖エステルを形成しているある種のボロペプチドおよび／またはボロペプチドミメティックである。
【００１２】
血栓症
止血は、その成分が動的平衡状態にある血液の正常な生理学的状態である。この平衡が例えば血管障害などにより乱れると、ある種の生化学的経路が誘発され、この場合は血栓形成 (凝固)を介して出血が止まる。凝固は、トロンビンのようなタンパク分解酵素が重要な役割を果たす、動的かつ複雑なプロセスである。血液凝固は、チモーゲン活性化の2つのカスケード、すなわち凝固カスケードの外因性および内因性経路のいずれかを通して生じうる。各経路の最後のプロテアーゼはトロンビンであり、これはフィブリノーゲンモノマーのフィブリンポリマーへの重合を触媒する。
【００１３】
血栓症の管理には、一般的に、将来の血栓形成を調節するための抗血小板薬 (血小板凝集の阻害薬) の使用と、新たに形成される凝固塊を溶解するための血栓溶解薬の使用が含まれ、かかる物質のいずれかまたは両方が、抗凝固薬と組み合わされて使用される。抗凝固薬はまた、血栓症を起こしやすいと考えられる患者の処置において予防薬として（予防的に）使用される。
【００１４】
現在のところ、臨床用途において抗凝固薬として最も効果的なクラスの薬物のうちの2つがヘパリンとビタミンK アンタゴニストである。ヘパリンは、アンチトロンビン IIIに結合してその作用を増強する、硫酸化多糖類の明確に定義されない混合物である。アンチトロンビン IIIは、活性化凝固因子 IXa、Xa、XIa、トロンビンおよびおそらくXIIaの天然の阻害薬である (参照： Jaques, Pharmacol. Rev. 31:99-166, 1980)。ビタミンKアンタゴニスト（ワーファリンが最も良く知られたその例である）は、ビタミンK依存性凝固因子 II、VII、IXおよびXのリボソーム後のカルボキシル化を阻害することによって間接的に作用する (参照： Hirsch, Semin. Thromb. Hemostasis 12:1-11, 1986)。血栓症の処置に有効な治療である一方、ヘパリンおよびビタミンKアンタゴニストは残念なことに出血の副作用、ヘパリン誘発血小板減少 (ヘパリンの場合) 、および顕著な患者間変動があり、その結果治療安全域が狭く、また予測不可能である。
【００１５】
それゆえ、ヘパリンに不随する問題を有さない非経口の直接的トロンビン阻害薬が望ましい。
【００１６】
多くの有機ボロン酸化合物は、親油性または疎水性に分類することができる。典型的には、かかる化合物にはとりわけ以下が含まれる：
・全てまたは大部分のアミノ酸が疎水性であるボロペプチド
・少なくとも半分のアミノ酸が疎水性であり、かつ疎水性N末置換基（アミノ保護基）を有するボロペプチド
・疎水性部分に基づく非ペプチド
【００１７】
トロンビンや凝固系の他のセリンプロテアーゼ酵素の直接作用性阻害薬の使用は、これら問題を解決すると期待される。そのため、ボロペプチド、すなわちα-アミノ酸のボロン酸アナログを含有するペプチド、を含む様々なセリンプロテアーゼ阻害薬が試験されている。直接作用性のボロン酸トロンビン阻害薬については本明細書において前述したが、以下の節においてさらに詳細に説明する。
【００１８】
中性P1残基ボロペプチドトロンビン阻害薬
Claeson et al (US 5574014など) および Kakkar et al (WO 92/07869およびUS 5648338を含むファミリーメンバー) は、中性(非荷電) C-末端 (P1) 側鎖、例えばアルコキシアルキル側鎖、を有する親油性トロンビン阻害薬を開示する。
【００１９】
Claeson et al および Kakkar et al のパテントファミリーは、高度に特異的なトロンビン阻害薬である、アミノ酸配列 D-Phe-Pro-BoroMpg [(R)-Phe-Pro-BoroMpg]を含むボロネートエステルを開示する。これら化合物の中で特に、Cbz-(R)-Phe-Pro-BoroMpg-Oピナコール (TRI 50bとしても知られる)が挙げられる。対応の遊離ボロン酸はTRI 50cとして知られる。TRI 50bおよび関連化合物に関するさらなる情報については、以下の文献を参照のこと：
Elgendy S et al., in The Design of Synthetic Inhibitors of Thrombin, Claeson G et al Eds, Advances in Experimental Medicine, 340:173-178, 1993.
Claeson G et al, Biochem J. 290:309-312, 1993
Tapparelli C et al, J Biol Chem, 268:4734-4741, 1993
Claeson G, in The Design of Synthetic Inhibitors of Thrombin, Claeson G et al Eds, Advances in Experimental Medicine, 340:83-91, 1993
Phillip et al, in The Design of Synthetic Inhibitors of Thrombin, Claeson G et al Eds, Advances in Experimental Medicine, 340:67-77, 1993
Tapparelli C et al, Trends Pharmacol. Sci. 14:366-376, 1993
Claeson G, Blood Coagulation and Fibrinolysis 5:411-436, 1994
Elgendy et al, Tetrahedron 50:3803-3812, 1994
Deadman J et al, J. Enzyme Inhibition 9:29-41, 1995
Deadman J et al, J. Medicinal Chemistry 38:1511-1522, 1995.
【００２０】
TRI 50bは、インビボにおける活性本体であるTRI 50cのプロドラッグと考えられる。TRI 50cのトリペプチドは３つのキラル中心を有する。少なくとも商業上有用な阻害活性を有する化合物において、Phe残基は(R)-配置、Proは天然の(S)-配置と考えられる； Mpg残基は、商業上有用な阻害活性を有する異性体において、(R)-配置と考えられる。したがって、活性ある、または最も活性あるTRI 50c立体異性体はR,S,R 配置の考えられ、以下のように表される：
【化１】
2007528382.tif 000003
【００２１】
WO 2004/022072、さらにUSSN 10/659,178およびEP-A-1396270は、トロンビン S2 および S3 サブサイトに結合可能な疎水性部分とペプチド結合により結合しているトロンビン S1 サブサイトに結合可能な中性アミノボロン酸残基を有する、ボロン酸の医薬上許容される塩基付加塩を開示する。第１の態様において、例えば、以下の式 (A）の医薬上許容されるボロン酸の塩基付加塩が開示される：
【化２】
2007528382.tif 000004
［式中、
Yは、アミノボロン酸残基 −NHCH(R9)-B(OH)2 とともに、トロンビンの基質結合部位への親和性を有する疎水性部分を含む；および
R9は、1 以上（例えば1または2）のエーテル結合が介在し、その酸素および炭素原子の総数が3、4、5または6（例えば5）である直鎖アルキル基である、または R9は、−(CH2)m-W であり、ここでmは2、3、4または5（例えば4） であり、Wは-OH またはハロゲン (F、Cl、BrまたはI）である］。R9は、あるサブセットの化合物において、アルコキシアルキル基、例えば、4 炭素原子を含有するアルコキシアルキルである。TRI 50cの塩は例示である。
【００２２】
WO 2004/022071、さらにUSSN 10/659,179およびEP-A-1396269は、医薬上許容される多価 (少なくとも２価) 金属と有機ボロン酸薬物との塩を開示する。かかる塩は既知の化学に基づき説明または予測不可能な改善された安定性レベルを有すること、および既知のメカニズムに基づき説明できない予想外に高くかつ一貫した経口バイオアベイラビリティを有すると示唆されることが記載されている。それゆえかかる塩の経口製剤もまた開示される。
【００２３】
ある特定の塩のクラスには、有機ボロン酸がボロペプチドまたはボロペプチドミメティックを含むものが含まれる。塩として調製することが有益でありうるそのような薬物には、限定はされないが、式 X-(aa)n-B(OH)2［式中、XはHまたはアミノ保護基であり、nは2、3または4 (特に2または3) であり、各aaは独立して天然または非天然の疎水性アミノ酸である］を有するものが含まれる。多価金属塩のあるクラスにおいて、有機ボロン酸は前述の式 (A)である。TRI 50cの塩は例示である。
【００２４】
WO 2004/022070、さらにUSSN 10/658,971およびEP-A-1400245は、特に、ボロン酸、例えば上記式 (A)のボロン酸の医薬上許容される塩基付加塩を含む非経口医薬製剤を開示し、特許請求する。そのような塩は既知の化学に基づき説明または予測不可能な安定性のレベルの改善が見られると記載されている。TRI 50cの塩は例示である。
【００２５】
迅速な抗凝固の発現および迅速な抗凝固の消失
一部の状況下では、その活性の発現および消失を綿密に制御できる抗凝固薬を投与することが望ましい。つまり、いくつかの抗凝固薬は、特定の適応症に対する投与後の活性持続時間が非常に長い；例として、ワルファリンは、活性が治療レベルから低下するのに長時間を要する。これはある治療用途にとっては望ましいこともあるが、例えば一部の外科手術においては全く理想的と言えず、そこでは手術中は抗凝固が望まれるが手術が終わればすぐに事実上正常な抗凝固活性が望ましくなる。長時間薬物は、出血のような深刻な術後の問題を引き起こす可能性があり、それゆえ治療レベルを調節または制御する必要がありうる方法おける使用には適さない。
【００２６】
予想されるように、迅速な作用発現および急速な「スイッチオフ」を示す化合物は、治療的活性レベルが所望される間、継続的に、例えば点滴により、投与される必要があろう。治療活性のレベルは、点滴の投与量または速度を調節することにより制御可能であろう。予想されるように、迅速な作用消失を示す化合物は、患者の受ける投与量または流速を減少することによって比較的すばやく治療レベルを減少させることができるであろう。投与量は、一般的な環境との関係で制御されうる。
【００２７】
また予想されるように、治療レベルの活性がもはや必要でない場合、例えば手術の完了後、または例えば抗凝固薬に対する副作用のような合併症が見られる場合、治療レベルは投与をやめれば迅速に低下するであろう。
【００２８】
緊急の抗凝固薬の投与の場合、短時間の予防手段として、血栓事象を患っている、または患っていることが疑われる患者に抗凝固薬を投与することが望ましいことが多い。かかる緊急の場合、さらに起こりうる血栓事象から患者を保護するため、患者の詳細な検査を行う前に、入院前または入院直後に抗凝固薬を投与しうる。後に患者にとって抗凝固が望ましくないことが判明するような場合、例えば、大量の抗凝固薬が血中に存在すると危険な可能性がある、または緊急の抗凝固薬と適合しない治療が行われる一連の処置（例えば手術）が続けて行われる場合、短時間の活性が非常に望ましい。
【００２９】
抗凝固薬は、体外血液回路が関与する方法、例えば冠動脈バイパス移植(CABG) 手術にとって特に必要である。米国心臓協会によれば、現在500,000以上のCABG手術が毎年米国において行われており、世界中では700,000以上が行われている。現在すべてのCABG手術に使用されている抗凝固薬はヘパリンである。
【００３０】
ヘパリンはかなりの制限があり、例えば出血やヘパリン誘発血小板減少 (HIT)を起こす可能性があり、正確に投与することが難しく、投与量モニタリングが必要である。ヘパリンの体内における半減期は短くないので、術後出血をおこすであろう。結果として、CABG患者は、その凝固レベルを安全な非治療レベルに戻すために、手術中のヘパリンだけでなくその後に拮抗薬を受けなければならない。ヘパリンの拮抗薬プロタミンは、重度の副作用の危険性がある。
【００３１】
プロタミンはヘパリンの拮抗に利用可能な唯一の薬物であるが、これまでFDAに承認されていない。ヘパリンは全身性低血圧および肺高血圧に関連しており、それらはいずれも生命を脅かす合併症へとつながりうる。プロタミンはまた、血小板機能異常症、補体活性化および血栓形成と関連しており、それらの効果はそれぞれ過剰な出血、臓器不全および梗塞を引き起こしうる。
【００３２】
公知の医学雑誌において、プロタミンは、治療費が高く生命を脅かす危険性のある合併症につながりうる有害事象との関連が示されている：
Stephen E Kimmel et al, Mortality and adverse events after protamine administration in patients undergoing cardiopulmonary bypass, Cardiovascular Anaesthesia, 2002, 94, 402-8
J A Carr et al, The heparin protamine interaction, The Journal of Cardiovascular Surgery, 1999, 40, 659-66
Stephen E Kimmel et al, Adverse events after protamine administration in patients undergoing cardiopulmonary bypass: risks and predictors of underreporting, Journal of Clinical Epidemiology, 1998, 51, 1-10
Michael C Mauney et al, Stroke rate is markedly reduced after carotid endarterectomy by avoidance of protamine, Journal of Vascular Surgery, 1995, 22, 264-270.
【００３３】
ヘパリンを取り巻く問題の結果、低分子量ヘパリン (LMWH) 例えば、ロブノックス（lovenox）、および五糖類、例えばアリクストラが、現在様々な血栓症手術、心血管手術、整形外科手術、および転移性疾患の管理に使用されている。しかしながら、プロタミンはLMWHの拮抗薬としてそれほど効果的でなく、合成ヘパリン様五糖類に対して効果がない。それゆえ、手術中に血栓症または望ましくない凝固を予防するために使用可能であり、かつプロタミンの副作用を有する拮抗薬を必要としない抗凝固薬が必要とされている。
【００３４】
［本開示の概要］
本開示は、ボロン酸およびその誘導体、ならびにかかる化合物の使用に関する。新規方法、使用および化合物が提供される。
【００３５】
本開示は、ある局面において、トロンビンの阻害方法であって、それを必要とする被験体に非経口的に治療上有効量の本明細書に開示されるボロン酸化合物、例えばトロンビン S2 および S3 サブサイトに結合可能な疎水性部分と連結している中性トロンビンP1ドメインを有するボロン酸の医薬上許容される塩基付加塩、を投与することを含む方法に関する。ボロン酸化合物は、例えば、遊離酸、酸付加塩、塩基付加塩またはプロドラッグの形態であってよい。
【００３６】
本開示の態様は、手術中、例えば体外血液回路が関与する方法中、の血栓症または望ましくない凝固の予防に関する。体外血液回路の例は、心肺バイパス回路である。
【００３７】
本開示に関与する外科手術の例は、冠動脈バイパス移植 (CABG) 法である。冠動脈バイパス移植は、冠動脈の閉塞をバイパスする方法である。CABGの間、患者は、手術中に心臓を停止できるように心肺バイパス機につながれるか、あるいは心肺バイパス機が施されうる。本発明は、とりわけ、心肺バイパス機の使用を伴うCABG法および伴わないCABG法の両方に関する。本発明はそれゆえ、CABG法中の凝固の予防または体外血液回路が関与するいずれかの外科手術に使用するための、開示化合物を含有する製剤に関する。
【００３８】
さらに開示されるのは、血栓症、特に手術中の体外血液回路における血栓症を予防するための医薬を製造するための、本明細書に記載のボロン酸化合物の使用である。ある態様において、医薬は非経口、特に静脈内投与用である。あるいは、医薬は、外科手術を受けている患者の体外血流に直接投与されうる。
【００３９】
ある態様において、本開示のボロン酸化合物は、CABG中の望ましくない凝固を予防するための医薬の製造に使用される。別の態様において、遊離酸、酸付加塩またはプロドラッグ（塩の形態であるか否かによらない）であるボロン酸化合物は、手術中の望ましくない凝固、例えば体外血液回路が関与する手術における凝固、を予防するための医薬の製造に使用される。
【００４０】
本開示は、本明細書に記載のボロン酸化合物でコートされた（あるいは、該化合物と関連する、例えば該化合物が組み込まれた）心肺バイパス回路を包含する。
【００４１】
本開示はさらに、体外血液回路が関与する外科手術中に開示化合物を投与する方法に関し、かかる手術として体外血液回路を伴うCABG法が例示される。本方法は、治療上有効量の化合物を投与する工程を含む。化合物は、体外血流に直接投与してもよいし、患者に直接、例えば静脈内点滴により、投与してもよい。
【００４２】
本明細書の実施例は、静脈内投与の終了から約30分以内に活性本体の血漿濃度が耐容可能な程度に低いレベルまで戻ることを示唆する。
【００４３】
本開示に関係するボロン酸はトロンビン阻害薬であり、例えば式 (I)のボロン酸、並びにその塩、プロドラッグおよびプロドラッグの塩である：
【化３】
2007528382.tif 000005
［式中
Yは、フラグメント -CH(R9)-B(OH)2とともに、トロンビンの基質結合部位への親和性を有する部分を含む；および
R9は、1 以上（例えば1または2）のエーテル結合が介在し、その酸素および炭素原子の総数が3、4、5または6（例えば5）である直鎖アルキル基である、または R9は、-(CH2)m-W であり、ここでmは2、3、4または5（例えば4）であり、Wは-OH またはハロゲン (F、Cl、BrまたはI）である］。R9は、あるサブセットの化合物において、アルコキシアルキル基、例えば4の炭素原子を含有するアルコキシアルキルである。
【００４４】
いくつかの態様において、Yは、
構造フラグメント -CH(R9)-B(OH)2に結合したアミノ基、および
該アミノ基に連結し、かつ該構造フラグメントとともに、トロンビンの基質結合部位への親和性を有する疎水性部分、
を含む。
【００４５】
化合物は、特に塩基付加塩に関して、以下により詳細に記載される。しかしながら、本明細書に開示される方法、使用および物は、以下に開示される塩に限定されず、本明細書に開示されるボロン酸またはその塩もしくはプロドラッグのいずれを使用してもよい（プロドラッグ自身は、所望により、プロドラッグの塩の形態である）。言うまでもなく、塩はプロドラッグと同様に医薬上許容されるものである。一般的に、プロドラッグは、加水分解により遊離ボロン酸を放出することができるボロン酸誘導体でありうる。プロドラッグとしては、エステル、例えばアルカノールの残基とのエステルが挙げられ、ここでアルカノールは例えばC1-C4 アルカノール、例えばメタノールまたはエタノールである。また挙げられるのは環状誘導体であり、利用可能なホウ素の2つの価(遊離酸の2つの-OH基に対する結合に相当する) が原子鎖の各末端と結合し、すなわちホウ素が環の一部となる。このような環状誘導体は、式 (I)の酸の場合以下のように示すことができ、これは本明細書に開示の他の式の酸について準用され改変される：
【化４】
2007528382.tif 000006
［式中、VおよびWはヘテロ原子 (例えば、独立にN、O、およびSから選択される) であり、弓状線は直鎖または分岐の原子鎖を表し、ホウ素由来の2つの結合の間の鎖の長さは、重要ではないが、ある場合には4、5または6でありうる］）。前述のように、ホウ素で両端が終わる鎖 (環形成鎖) は、直鎖であっても分岐していてもよく、例えば1以上の分岐側鎖を有していてもよい；複数の分岐側鎖が存在する場合、その少なくとも一部が一緒になって環を形成してもよく、それは例えばピナンジオールエステルの場合である。
【００４６】
それゆえ、特定の環状誘導体は、ジオールにより形成される環状エステルである。ジオールの種類は重要ではない。好適なジオールとしては、隣接する炭素原子上または別の炭素で置換された炭素原子上で置換されたヒドロキシ基を有する脂肪族および芳香族化合物が挙げられる。つまり、好適なジオールには、鎖または環において少なくとも2つの結合炭素原子が介在する少なくとも2つのヒドロキシ基を有する化合物が含まれる。あるクラスのジオールは、ちょうど2つのヒドロキシ基により置換された炭化水素を含む。このようなジオールの1つはピナコールであり、もう1つはピナンジオールである; また、ネオペンチルグリコール、1,2-エタンジオール、1,2-プロパンジオール、1,3-プロパンジオール、2,3-ブタンジオール、1,2-ジイソプロピルエタンジオール、5,6-デカンジオール、および1,2-ジシクロヘキシルエタンジオールが挙げられる。
【００４７】
プロドラッグは、WO 02/059131および対応のUS 6699835 (前述)に記載されるような糖誘導体であってもよい。したがって、ボロネート基は、糖、例えば単糖または二糖によりエステル化されていてよい。糖は、還元糖、例えばマンニトールまたはソルビトールであってよい: それはWO 02/059131に教示される個々の糖または糖のクラスであってもよい。例えばWO 02/059131に教示されるように、ボロン酸、糖 (または他のジオール)、および水を組み合わせ、続いて凍結乾燥してもよい。
【００４８】
塩は、酸付加塩または塩基付加塩であってよい。
【００４９】
ある局面において、本開示は、トロンビンS2およびS3サブサイトに結合可能な疎水性部分に連結したトロンビンS1サブサイトに結合可能な中性アミノボロン酸残基を有するボロン酸の塩基付加塩に関する。例として、ボロン酸、例えば以下の式 (II)のボロン酸、の医薬上許容される塩基付加塩を含む、非経口医薬製剤が開示される：
【化５】
2007528382.tif 000007
［式中、
Y’は疎水性部分を含み、アミノボロン酸残基 −NHCR(R9)-B(OH)2 とともに、トロンビンの基質結合部位への親和性を有する；および
R9は前述のとおりである］。
【００５０】
本開示は、トロンビン阻害薬の疎水性ボロン酸の塩基付加塩である活性成分を含む製品を含む。そのような阻害薬は疎水性アミノ酸を含んでもよく、このクラスのアミノ酸には、その側鎖がヒドロカルビル、鎖内に酸素を含み、および／または鎖内の酸素により分子の残りの部分と連結するヒドロカルビル、またはヘテロアリール、あるいは前記の基のいずれかをヒドロキシ、ハロゲンまたはトリフルオロメチルで置換したものであるアミノ酸が含まれる。代表的な疎水性側鎖には、アルキル、アルコキシアルキル、少なくとも1つのアリールまたはヘテロアリールで置換されたアルキルおよびアルコキシアルキル、アリール、ヘテロアリール、少なくとも1つのアルキルで置換されたアリール、および少なくとも1つのアルキルで置換されたヘテロアリールが含まれる。環置換されていないか、または先の文で挙げた部分の1つにより環置換されたプロリンおよび他のイミノ酸もまた疎水性である。
【００５１】
一部の疎水性側鎖は、1〜20の炭素原子を含み、例えば1、2、3または4炭素原子を有する非環状部分を含む。環状基を含む側鎖は、必ずではないが典型的には、5〜13員環を含み、多くの場合フェニルまたは1または2のフェニルで置換されたアルキルである。
【００５２】
疎水性非ペプチド部分を含む阻害薬が含まれ、その部分は、典型的には前述のような疎水性アミノ酸の側鎖を形成しうる部分に基づく。
【００５３】
疎水性化合物は、例えば、1つのアミノ基および／または1つの酸性基 (例えば、-COOH、-B(OH)2)を含んでも良い。通常、疎水性化合物は、いずれのタイプの極性基も複数は含まない。
【００５４】
本開示は、疎水性ボロン酸トロンビン阻害薬またはその塩もしくはプロドラッグが関与する、またはそれを含む、物、方法および用途を含み、それゆえ、log Pで表される1-n-オクタノールと水との間の分配係数が生理学的pHおよび25℃において1.0より大きいペプチドボロン酸、並びにその塩およびプロドラッグを含む。いくつかの有用なペプチドボロン酸は、分配係数が少なくとも1.5である。有用な疎水性ペプチドボロン酸のあるクラスは、分配係数が5以下である。
【００５５】
文献において、水溶液中のボロネートが「三角形型（trigonal）」B(OH)2 を形成するのか「四面体型（tetrahedral）」 B(OH)3- ホウ素種を形成するかについての議論があるが、NMRの結果は、ボロン酸の第１のpKaより下のpHでは主なホウ素種は中性 B(OH)2であることを示していると思われる。十二指腸ではpHが6〜7のようであり、それゆえここでは三角形型種が優勢と思われる。いずれの場合においても、表示 B(OH)2 には、四面体型と三角形型のホウ素種が含まれ、本明細書全体を通して三角形型ホウ素種を示す表示は四面体型種をも包含する。この表示はさらに、無水形態のボロン酸基を含みうる。
【００５６】
化合物、例えば塩は、溶媒和物、特に水和物の形態であってもよい。
【００５７】
塩基付加塩は、ボロン酸が1つ脱プロトン化した酸性塩を含むか、または実質的に前記酸性塩からなっていてもよい。本開示はそれゆえ、主に(50 mol %を超える) 一価の負電荷を有する化合物におけるボロネート基と一致する金属/ボロネート化学量を有する化合物を含む。
【００５８】
塩は、例えば実施例 33の方法で測定した場合、少なくとも約90%、例えば約95%以上の純度を有する。医薬製剤の場合、かかる塩形態は、医薬上許容される希釈剤、賦形剤、または担体と組み合わされうる。
【００５９】
TRI 50c の塩は、TRI 50c エステルを介して得られる。しかしながら、TRI 50c エステルへの、つまりTRI 50cへの公知の合成経路は、1以上の不純物を生じる。以下に「高純度」合成」と題して記載する塩の製造方法（本願の優先日の時点で非公知）は1以上の不純物を生じ、非常に高純度な塩は得られない。さらに、この塩は高純度で得るのが非常に難しいことがわかった。つまり、適用した精製技術では高純度の塩を産生することができなかった。HPLCは、公知のTRI 50c エステル合成および「高純度」合成」と題して記載する塩調製技術を介して製造される塩を精製するのに、工業的規模で使用可能でない。言い換えれば、TRI 50c 塩の治療上の利益を、それを必要とする人に提供するためには、塩は工業的に適度に純粋な形態にて取得可能でなければならず、その純粋な形態は過度に高価な精製技術を使用せずに達成できなければならない。
【００６０】
前記の塩の非経口製剤もまた本明細書において提供される。特に、例えば注射または点滴による投与前に水溶液として再構成される粒子状物質（例えば塩基付加塩を含む該物質）のように固相に活性成分（例えば塩基付加塩）を含む、静脈内投与用製剤、すなわち静脈内投与に適する製剤が提供される。
【００６１】
本開示のさらなる局面によれば、抗トロンビン活性が必要とされる症状の処置方法が提供され、該方法は、治療上有効量の本明細書に記載のボロン酸、例えば式 (II)のボロン酸、の医薬上許容される塩基付加塩の体外血流への投与、例えば手術中の投与、を含む。
【００６２】
本開示のさらなる局面および態様は、以下の明細書中に記載され、また特許請求される。
【００６３】
本明細書に記載の塩には、ボロン酸と強塩基との反応により得られうる(その反応により得られる産物の特性を有する) 産物が含まれ、本明細書中の用語 「塩」 はそのように解されるべきである。したがって、開示化合物に関する用語「塩」は、その化合物が個別的なカチオンおよびアニオンを含むことを必ずしも意味するのではなく、ボロン酸と塩基との反応により取得しうる産物を包含すると解すべきである。本開示は、多かれ少なかれ配位化合物の形態にある産物を包含する。このように、本開示は、開示のボロン酸と強塩基との反応により得られうる(その反応により得られる産物の特性をもつ) 産物、ならびにかかる産物の、予防を含む治療的使用を提供する。
【００６４】
本開示はその塩の調製方法に関して限定されないが、塩が開示のボロン酸に由来するボロネート種および対イオンを含むことを条件とする。かかるボロネート種は、いかなる平衡形態にあるボロネートアニオンであってもよい。用語「平衡形態」は、平衡反応式で表示されうる同じ化合物の異なる形態を意味する (例えば、ボロン酸無水物と平衡状態にあるボロン酸および様々なボロネートイオンと平衡状態にあるボロン酸)。ボロネートは固相において無水物を形成でき、また開示のボロネート塩は固相においてボロン酸平衡種としてボロネート無水物を含みうる。塩が、対イオンを含む塩基とボロン酸との反応により調製される必要はない。さらに、本開示は、間接的にかかる酸／塩基反応により調製されたとみなすことができる塩産物、ならびにかかる間接的調製により得られうる(かかる間接的調製により得られた産物の特性をもつ) 塩を含む。可能な間接的調製の例として、塩の最初の回収後、それを精製および／または処理して、その物理化学的性質を改変する、例えば、固体形態または水和物形態、あるいはその両方を改変する方法が挙げられる。
【００６５】
いくつかの態様において、塩のカチオンは一価である。
【００６６】
いくつかの態様において、塩は無水種を含む；あるいは無水種を基本的に含まない。
【００６７】
本開示のさらなる局面および態様は、以下の説明および請求項に示される。かかるものとしてさらに含まれるのは、本明細書に記載の塩である。
【００６８】
本明細書の記載および請求項を通して、単語「含む」および「含有する」ならびにその変形、例えば、「含んでいる」および「含み」は、「含むが、限定されない」を意味し、他の部分、添加物、要素、整数、または工程を排除する意図ではない（排除しない）。
【００６９】
本願は、有機ボロン酸の安定性 (脱ホウ素化に対する抵抗性) が、塩、例えば金属塩の形態にて提供されることにより増大され得ることを示すデータを含む。一回の実験において、TRI 50c のアンモニウム塩は乾燥に際して分解されてアンモニアを産出したようであり、一方、コリン塩は脱ホウ素化された不純物への迅速な分解を示した。これら１回限りの観察を再現する実験は行っていないが、アンモニウムおよびコリン塩を除外したサブクラスが提供される。塩は、酸塩であってもよい。いずれにせよ、この安定化技術は、本開示の一部を形成し、中でも、「背景」に記載の有機ボロン酸および「背景」に示す公知文献に記載の有機ボロン酸に適用可能である。
【００７０】
［一部の実施例の詳しい説明］
用語集
下記の用語および略号を本明細書で使用する：
ボロン酸の塩に用いる表現「酸塩」は、三角形で表される酸基 -B(OH)2 の１つの OH 基が脱プロトン化されている塩を意味する。すなわち、ボロネート基が一価の負電荷を有し、-B(OH)(O-) または [-B(OH)3]- で表される塩は、酸塩である。この表現は、ボロン酸とカチオンのモル比が約 n：1 である n 価を有するカチオンの塩を包含する。実際的には、観測される化学量は厳密に n:1 でないが、概念的に n:1 化学量に一致する。例えば、カチオンの観測質量は n:1 化学量について計算された質量と異なりうるが、約10%を超えて異なることはなく、例えば、約7.5%以下である；ある場合において、カチオンの観測質量は、計算質量と約1%未満異なりうる。計算質量は、好適には、三角形型形態のボロネートに基づく。(原子レベルで、化学量的に酸塩と一致する塩は、平均して単一の脱プロトン状態に近いプロトン付加状態の混合物にてボロネートを含む可能性があり、かかる「混合」塩は用語「酸塩」に含まれる)。酸塩の例は、モノナトリウム塩およびヘミカルシウム塩である。
【００７１】
α-アミノボロン酸すなわち Boro(aa) は、CO2 基が BO2 で置換されたアミノ酸を意味する。
【００７２】
用語「アミノ基保護部分」は、ペプチドまたはアミノ酸のアミノ基、特にＮ末端アミノ基を誘導体化するのに使用されるいかなる基をも意味する。かかる基には、限定でないが、アルキル、アシル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニルおよびスルホニル部分が含まれる。しかしながら、用語「アミノ基保護部分」を、有機合成において一般的に使用される特定の保護基に限定する意図はなく、また容易に解裂する基に限定する意図でもない。
【００７３】
「医薬上許容される」なる句は、正当な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などの問題または合併症なしにヒトまたは動物の組織と接触させて使用するのに適し、合理的な利益／危険性の比に見合う、化合物、材料、組成物および／または投与形態を意味するものとして、本明細書において使用される。
【００７４】
「トロンビン阻害薬」なる表現は、正当な薬理学的判断の範囲内で、トロンビンの阻害薬として潜在的または顕在的に医薬上有用なものを意味し、また医薬上活性な種を含み、トロンビン阻害薬として記述され、推奨され、または認められている物質をも意味する。かかるトロンビン阻害薬は選択的であってよく、すなわち、正当な薬理学的判断の範囲内で、他のプロテアーゼに比してトロンビンに選択的と見なされるものであってもよい。用語「選択的トロンビン阻害薬」は、医薬上活性な種を含み、かつトロンビン阻害薬として記述され、推奨され、または認められている物質を意味する。
【００７５】
用語「ヘテロアリール」は、少なくとも1つ(例えば、1、2または3つ) の環内ヘテロ原子を有し、共役環内二重結合系を有する環系を意味する。用語「ヘテロ原子」には、酸素、硫黄および窒素が含まれるが、硫黄は時にあまり好ましくない。
【００７６】
「天然アミノ酸」は、以下から選択されるの中性 (疎水性または極性)、正荷電および負荷電アミノ酸から選択されるL-アミノ酸 (またはその残基) を意味する：
疎水性アミノ酸：
A = Ala = アラニン
V = Val = バリン
I = Ile = イソロイシン
L = Leu = ロイシン
M = Met = メチオニン
F = Phe = フェニルアラニン
P = Pro = プロリン
W = Trp = トリプトファン
極性 (中性または非荷電) アミノ酸
N = Asn = アスパラギン
C = Cys = システイン
Q = Gln = グルタミン
G = Gly = グリシン
S = Ser = セリン
T = Thr = トレオニン
Y = Tyr = チロシン
正荷電 (塩基性) アミノ酸
R = Arg = アルギニン
H = His = ヒスチジン
K = Lys = リシン
負荷電 アミノ酸
D = Asp = アスパラギン酸
E = Glu  = グルタミン酸。
【００７７】
ACN = アセトニトリル
アミノ酸 = α-アミノ酸
酸付加塩 = 遊離塩基(例えば、ペプチドのN末端アミノ基のようなアミノ基)への無機酸または有機酸の付加により調製される塩
塩基付加塩 = 遊離酸(この場合、ボロン酸) への無機塩基または有機塩基の付加により調製される塩
Cbz = ベンジルオキシカルボニル
Cha = シクロヘキシルアラニン (疎水性非天然アミノ酸)
荷電 (薬物または薬物分子のフラグメント、例えばアミノ酸残基に用いられる) = アミノ、アミジノまたはカルボキシ基の場合のように、生理学的pHにおいて電荷を有すること
Dcha = ジシクロヘキシルアラニン (疎水性非天然アミノ酸)
Dpa = ジフェニルアラニン (疎水性非天然アミノ酸)
薬物 = 医薬上有用な物質、インビボ活性本体またはプロドラッグ
Mpg = 3-メトキシプロピルグリシン (疎水性非天然アミノ酸)
多価 = 少なくとも二価、例えば二または三価
中性 (薬物または薬物分子のフラグメント、例えばアミノ酸残基に用いられる) = 非荷電 = 電荷を生理学的pHにおいて有さない
Pinac = ピナコール = 2,3-ジメチル-2,3-ブタンジオール
ピナンジオール = 2,3-ピナンジオール = 2,6,6-トリメチルビシクロ [3.1.1] ヘプタン-2,3-ジオール
Pip = ピペコリン酸
室温 = 25℃±2℃
強塩基 =  ボロン酸と反応するのに十分高いpKbをもつ塩基。好適にはかかる塩基はpKb 7以上、例えば7.5以上、例えば約8以上である
THF = テトラヒドロフラン
Thr = トロンビン
【００７８】
換算係数
特記なき限り、本明細書においては以下の換算係数をモルとグラム質量の間の変換および他の同様の計算に使用する：
・TRI 50cの分子量は三角形型形態に関して決定する (分子量 525.4)
・TRI 50c モノナトリウム塩の分子量は一水和物に基づき計算する (C27H35BN3O7)Na H2O (分子量 565.39)。
【００７９】
化合物
本開示は、トロンビンS2およびS3サブサイトに結合可能な疎水性部分に連結したトロンビンS1サブサイトに結合可能な中性アミノボロン酸残基を有するボロン酸に関する。本開示はまた、かかる酸のプロドラッグ (例えば、エステル) および塩、特に塩基付加塩に関する。本開示は、上記式 (I)の酸および以下の式 (II)によって表されるサブクラスの酸を含む：
【化６】
2007528382.tif 000008
［式中、
Y’は疎水性部分を含み、Y’CO-は、フラグメント −NHCR(R9)-B(OH)2 とともに、トロンビンの基質結合部位への親和性を有する；および
R9は、1 以上のエーテル結合が介在し、その酸素および炭素原子の総数が3、4、5または6（例えば5）である直鎖アルキル基である、またはR9は、-(CH2)m-W であり、ここでmは 2、3、4または5（例えば4）であり、Wは-OH またはハロゲン (F、Cl、BrまたはI）である］。１以上のエーテル結合 (-O-) が介在する直鎖アルキルの例として、アルコキシアルキル (介在１つ) およびアルコキシアルコキシアルキル (介在２つ) がある。R9は、化合物のあるサブセットにおいてアルコキシアルキル基、例えば、4の炭素原子を含有するアルコキシアルキルである。
【００８０】
ここで式 (I)に戻ると、典型的には、Y-は、トロンビンのS2サブサイトに結合するアミノ酸残基 (天然または非天然)を含み、このアミノ酸残基はトロンビンのS3サブサイトに結合する部分にＮ末端で結合している。Y-は、式 Z3-Z2-CO-［式中、-Z2-CO-はトロンビンのS2サブサイトに親和性を有するアミノ酸残基であり、Z3はトロンビンのS3サブサイトに親和性を有する部分である］であってよい。
【００８１】
ボロン酸は、構造フラグメント -CH(R9)-B(OH)2 と部分Yの間に結合を含んでもよく、あるいはY内部に１および／または複数の結合、例えば、Z3-Z2結合を含んでもよく、Z3-Z2 結合は、窒素原子を -NH- または -NR14- ［式中、R14は、鎖内および／または環内に窒素、酸素または硫黄を含んでもよく、かつハロ、例えばF、または官能基、例えばヒドロキシ、から選択される置換基によって置換されていてもよいC1-C13ヒドロカルビル基である］として含む。ヒドロカルビル基は、1〜4の炭素原子を含みうる; それはアルキルであってもよく、あるいは前記窒素原子に結合した-CH2- およびそのハロゲン化変異体、特にフッ素化変異体、例えば -CF2-、から選択される部分を含んでもよい。
【００８２】
式 (I)の酸のあるクラスにおいて、Y- は、トロンビンのS3およびS2結合部位に結合する、N末端が保護されていてもよいジペプチド残基であって、その酸におけるペプチド結合は独立にR14 基によりN置換されていてもよい。N末端保護基は、存在する場合、上記定義の基 X (水素以外) でありうる。多くの場合、酸はN置換ペプチド結合を含まない。N置換ペプチド結合が存在するとき、置換基はしばしば1C〜6Cヒドロカルビル、例えば飽和ヒドロカルビルである; N置換基はいくつかの態様において環、例えばシクロアルキルを含み、例えばシクロペンチルであってよい。あるクラスの酸は、N末端保護基 (例えば、X 基) および非置換ペプチド結合を有する。
【００８３】
Y- がジペプチド残基 (N末端が保護されているか否かによらない) の場合、S3結合アミノ酸残基は(R)-配置であり得、および／またはS2結合残基は(S)-配置であり得る。フラグメント−NHCH(R9)-B(OH) は(R)-配置であり得る。しかし、本開示はこれらの配座のキラル中心に限定されない。
【００８４】
化合物のあるクラスにおいて、P3 (S3結合) アミノ酸および／または P2 (S2結合) アミノ酸の側鎖は、下記式AまたはBの基から選択される水素以外の部分である：
【化７】
2007528382.tif 000009
［式中、
a は 0 または 1 である;
e は 1 である;
b および d は、独立に、0、または (b+d) が 0 〜 4 もしくは場合により (b+e) が 1 〜 4 となるような整数である;
c は 0 または 1 である;
D は O または S である;
Eは、H、C1-C6 アルキル、または通常最大14 員を含む飽和または非飽和環状基、特に5-6員環 (例えば、フェニル) もしくは8-14員の縮合環系 (例えば、ナフチル) であり、このアルキルまたは環状基は、C1-C6 トリアルキルシリル、-CN、-R13、-R12OR13、-R12COR13、-R12CO2R13 および -R12O2CR13から独立に選択される最大3つの基 (例えば、1つの基) により置換されていてもよく、ここでR12 は -(CH2)f- であり、R13は -(CH2)gH であり、あるいは、非水素原子が炭素原子および環内ヘテロ原子からなり、数が 5 〜 14 であり、かつ環系 (例えば、アリール基) ならびに所望によりアルキルおよび／またはアルキレン基を含有する部分により置換されていてもよく、ここでfおよびgはそれぞれ独立に0〜10であり、特にg は少なくとも 1 であり(なお、-OHも置換基として挙げられる)、ただし、(f+g) は10を超えず、より具体的には6を超えず、より一層具体的には 1、2、3または4 であり、また、置換基が前記のような環系を含有する部分である場合、またはEが C1-C6 トリアルキルシリルである場合、置換基は１つしか存在しない）；E1、E2 および E3 は、それぞれ独立に -R15 および -J-R15 から選択され、ここでJ は5-6員環であり、R15 は C1-C6 トリアルキルシリル、-CN、-R13、-R12OR13、-R12COR13、-R12CO2CR13、-R12O2CR13、および１または２のハロゲン(例えば、後者の場合、ジクロロフェニルである-J-R15 部分が形成される) から選択され、R12およびR13はそれぞれ上記で定義したR12部分およびR13部分である (ある種の酸において、E1、E2およびE3はR13基を含有し、gは0または1である)）；式 (A) または (B) の部分では、いずれの環も炭素環または芳香族環、あるいはその両者であり、炭素原子に結合している１以上のいずれの水素原子もハロゲン、特にFで置換されていてよい。
【００８５】
ある例において、a は 0 である。a が 1 の場合、c は 0 でありうる。特定の例において、(a+b+c+d) および (a+b+c+e) は 4 以下であり、特に 1、2 または 3 である。 (a+b+c+d) は 0 であってもよい。
【００８６】
E、E1、E2、および E3 のための例示の基には、例えば、フェニル、ナフチル、ピリジル、キノリニルおよびフラニルなどの芳香族環；シクロヘキセニルなどの非芳香族不飽和環；シクロヘキシルなどの飽和環が含まれる。Eは、芳香族環および非芳香族環の両方を含有する縮合環系、例えばフルオレニルでありうる。E、E1、E2 および E3 基のあるクラスは芳香族 (ヘテロ芳香族を含む) 環、特に芳香族6員環である。ある化合物において、E1 は H であり、一方、E2 および E3 は H でない；これらの化合物において、E2 および E3 基の例はフェニル (置換または非置換) および C1-C4 アルキル、例えばメチルである。
【００８７】
あるクラスの態様において、Eは、C1-C6 アルキル、(C1-C5 アルキル)カルボニル、カルボキシC1-C5アルキル、アリール (ヘテロアリールを含む)、特に5員または好ましくは6員のアリール (例えば、フェニルまたはピリジル) またはアリールアルキル (例えば、アリールメチルまたはアリールエチルであり、アリールはヘテロ環であってもよく、好ましくは6員である) である置換基を含有する。
【００８８】
別のクラスの態様において、Eは、OR13 ［式中、R13は6員環、例えば芳香族環 (例えば、フェニル) であってよい］であるが、あるいは、かかる6員環で置換されたアルキル (例えば、メチルまたはエチル) である置換基を含有する。
【００８９】
式AまたはBの部分のあるクラスは、Eが置換されていてもよい、特に 2位または 4位で -R13 または -OR13により置換されていてもよい芳香族6員環であるものである。
【００９０】
本開示は、P3 および／または P2 側鎖 が、1 または 2 の水素がハロゲン、例えば、FまたはCl、で置換されている環状基を含む塩を含む。
【００９１】
本開示は、式 (A) または (B) の側鎖が以下の式 (i)、(ii) または (iii) であるか、あるいは (ii)の一方または両方のフェニル環または(iii)のフェニル環がシクロヘキシルまたはシクロヘキセニルにより置換されているその変異体である、塩のクラスを含む。
【化８】
2007528382.tif 000010
［式中、q は 0 〜 5、例えば、0、1、または2であり、各 Tは独立に、水素、1、2、または 3 のハロゲン (例えば、FまたはCl)、-SiMe3、-CN、-R13、-OR13、-COR13、-CO2R13、または -O2CR13 である］。構造 (ii) および (iii) のいくつかの態様において、Tは、フェニル基の4位にあり、-R13、-OR13、-COR13、-CO2R13 または-O2CR13 であり、R13は C1-C10 アルキルであり、特に C1-C6 アルキルである。あるサブクラスにおいて、Tは -R13 または -OR13 であり、例えば、fおよびgは各々独立に 0、1、2、または 3 である；このサブクラスの一部の側鎖基においてTは-R12OR13 であり、R13は H である。
【００９２】
あるクラスの部分において、側鎖は式 (i) であり、各 Tは独立にR13またはOR13であり、R13はC1-C4アルキルである。これらの化合物の一部においてR13は分枝アルキルであり、他のものにおいて直鎖である。ある部分においては、炭素原子数は 1 〜 4 である。
【００９３】
ジペプチドフラグメント(ジペプチドはN末端が保護されていてもいなくてもよい)であるY- 基の多くにおいて、P3アミノ酸は上記の式 (A) または (B) の側鎖を有し、P2残基はイミノ酸である。
【００９４】
したがって、本開示は、中性のP1(S1結合) 部分を有するトロンビン阻害薬、特に選択的トロンビン阻害薬である有機ボロン酸の塩基付加塩、例えば金属塩を含む医薬を含む。トロンビンのS3、S2およびS1部位に結合する部分についてのさらなる情報は下記を参照：例えば Tapparelli C et al, Trends Pharmacol. Sci. 14: 366-376, 1993; Sanderson P et al, Current Medicinal Chemistry, 5: 289-304, 1998; Rewinkel J et al, Current Pharmaceutical Design, 5:1043-1075, 1999; および Coburn C Exp. Opin. Ther. Patents 11(5): 721-738, 2001。開示のトロンビン阻害性塩は、先の文に挙げた文献に記載されるS3、S2およびS1親和性基を有するものに限定されない。塩基付加塩として存在するかわりに、有機ボロン酸は遊離酸、酸付加塩またはプロドラッグ (例えば、エステル)として存在してもよい。
【００９５】
ボロン酸は、トロンビンに対するKiが約100 nM以下、例えば約20 nM以下でありうる。
【００９６】
式 (I) の酸のあるサブセットは、以下の式 (III) の酸を含む。
【化９】
2007528382.tif 000011
［式中、XはN末端アミノ基に結合している部分であり、HであってNH2 を形成してもよい］。X の種類は重要でなく、前述の特定の X 部分であってよい。一例として、ベンジルオキシカルボニルが挙げられる。
【００９７】
ある例において、Xは、R6-(CH2)p-C(O)-、R6-(CH2)p-S(O)2-、R6-(CH2)p-NH-C(O)- または R6-(CH2)p-O-C(O)- ［式中、p は 0、1、2、3、4、5または6であり (なかでも0、1および2が好ましい)］、R6は、Hまたは5〜13員環状基であり、該5〜13員環状基は１以上（例えば1、2、3、4または5）のハロゲン（例えばF）により、例えば少なくとも4位で置換されていてもよく、および／またはヒドロキシ、C5-C6 環状基、C1-C4 アルキル、および鎖内にOを含む、および／または該環状基に鎖内のOを介して連結するC1-C4 アルキル、から選択される 1、2 または 3 の置換基により置換されていてもよく、前記アルキル基は、ハロゲン、アミノ、ニトロ, ヒドロキシおよび C5-C6 環状基から選択される置換基により置換されていてもよい。特に、Xは R6-(CH2)p-C(O)- または R6-(CH2)p-O-C(O)- であり、これら部分においてp は 0、1、または 2 であり、R6はフェニルまたはフルオロフェニルでありうる。前記 5 〜 13員環状基は、しばしば芳香族またはヘテロ芳香族、例えば、6員の芳香族またはヘテロ芳香族基である。多くの場合、この基は置換されていない。
【００９８】
例示的な X 基は、 (2-ピラジン) カルボニル、(2-ピラジン) スルホニル、および特にベンジルオキシカルボニルまたはベンジルメチルカルボニルである。
【００９９】
aa1は、20以下の炭素原子 (例えば、15まで、所望により13までのC 原子) を含有するヒドロカルビル側鎖を有し、かつ13までの炭素原子を有する少なくとも１の環状基を含むアミノ酸残基である。ある例において、aa1 の環状基は5または6員環である。例えば、aa1 の環状基はアリール、特にフェニルである。典型的には、aa1 側鎖中に１または２の環状基が存在する。ある種の側鎖は、1または2の5-または6-員環で置換されたメチルを含むか、またはかかるメチルからなる。
【０１００】
より具体的には、aa1は、Phe、Dpaまたは全体的または部分的に水素化されたそのアナログである。全体的水素化アナログは ChaおよびDChaである。
【０１０１】
aa2は、4〜6員環を有するイミノ酸残基である。あるいは、aa2は、C3-C13ヒドロカルビル基、例えばC3-C6ヒドロカルビル環を含むC3-C8ヒドロカルビル基により N置換されたGlyである；ヒドロカルビル基は飽和していてもよく、例えば、例示的 N置換基はシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルである。１以上の不飽和結合を含有するヒドロカルビル基としては、フェニル、およびフェニルで置換されたメチルまたはエチル、例えば、2-フェニルエチルおよび β,β-ジアルキルフェニルエチルが挙げられる。
【０１０２】
別の選択肢としては、aa2は、C3-C13ヒドロカルビル基、例えばC3-C6ヒドロカルビル環を含むC3-C8ヒドロカルビル基によりN置換されたGly(すなわち H2N-CH2-CH2-COOH)のβ-アミノ酸アナログである;ヒドロカルビル基は飽和していてもよく、例えば、例示的 N置換基はシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルである。１以上の不飽和結合を含有するヒドロカルビル基としては、フェニル、およびフェニルで置換されたメチルまたはエチル、例えば、2-フェニルエチルおよび β,β-ジアルキルフェニルエチルが挙げられる。
【０１０３】
本開示は、aa2が、4〜6員の炭素環を有するβ-アミノ酸の残基であって、その炭素環の１つの炭素原子が硫黄で置換されてもよく、かつその環形成炭素原子がカルボキシル基に対してα−またはβ-である炭素原子を含む (すなわち、β-アミノ酸が1位でカルボキシにより置換され、2位でアミノにより置換され、かつもう1つ別の位置でS原子を含みうる4〜6員の炭素環を含む）化合物のクラスを含む。
【０１０４】
例示的クラスの化合物は、aa2が下記式 (IV) のイミノ酸残基であるものを含む：
【化１０】
2007528382.tif 000012
［式中、R11 は -CH2-、-CH2-CH2-、-CH=CH-、-S-CH2- または −CH2-CH2-CH2-であり、環が5または6員のとき、その基は１以上の-CH2-基において1〜3のC1-C3 アルキル基により置換されていてもよく、例えばR11基 -S-C(CH3)2- を形成する］。これらのイミノ酸のうち、アゼチジン-2-カルボン酸、特に (s)-アゼチジン-2-カルボン酸、およびより具体的にはプロリンが例示される。
【０１０５】
さらに挙げられるのは、aa2が以下の式 (XXVI)のβ-アミノ酸であるものである:
【化１１】
2007528382.tif 000013
［式中、R11 は先に定義したとおりである］。
【０１０６】
ある態様において、aa2は、N置換イミノ酸またはβ-アミノ酸の残基である。
【０１０７】
上記からわかるように、非常に好ましいもののクラスは、aa1-aa2がPhe-Pro であるものからなる。他の好ましいクラスにおいては、aa1-aa2はDpa-Pro である。他のものにおいては、aa1-aa2がCha-ProまたはDcha-Proである。もちろん、Proが (s)-アゼチジン-2-カルボン酸により置換された対応物のクラスも含まれる。
【０１０８】
R9は上記に定義されたものであり、式 -(CH2)s-Z の部分 R1 であり得る。整数sは 2、3 または 4 であり、Wは、-OH、-OMe、-OEt、またはハロゲン (F、Cl、I、または、好ましくはBr) である。 特に例示的な Z 基は -OMe および-OEt、特に-OMe である。ある例においてsは全Z基について3であり、実際、開示の全化合物について3である。特定の R1 基は、2-ブロモエチル、2-クロロエチル、2-メトキシエチル、4-ブロモブチル、4-クロロブチル、4-メトキシブチルおよび、特に3-ブロモプロピル、3-クロロプロピル、および 3-メトキシプロピルである。最も好ましくは、R1は3-メトキシプロピルである。2-エトキシエチルが別の好ましい R1 基である。
【０１０９】
したがって、ある具体的クラスの酸は、式 X-Phe-Pro-Mpg-B(OH)2、特に Cbz-Phe-Pro-Mpg-B(OH)2を有するものである；また含まれるのは、Mpg が別のR1基を有する残基で置換され、および／または Pheが Dpaまたは別のaa1残基で置換された、これらの化合物のアナログである。さらに含まれるのは、Cbzがベンジルメチルカルボニル (Ph-Et-CO-)で置換された化合物である。
【０１１０】
酸の aa1 部分は好ましくはR配置である。aa2部分は好ましくは (S)-配置である。特に好ましい化合物はaa1が (R)-配置で、aa2が (S)-配置である。キラル中心 −NH-CH(R1)-B- は好ましくは (R)-配置である。市販製剤は (R,S,R) 配置のキラル中心を有すると思われ、例えばCbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH の塩の場合である：
【化１２】
2007528382.tif 000014
【０１１１】
好ましい態様において、本開示の様々な局面は、前記の酸の医薬上許容される塩基付加塩に関する。
【０１１２】
本開示は、Cbz-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-boroMpg-OH (および式 X-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-boroMpg-OHの他の化合物) の塩基付加塩を含み、これは少なくとも純度 90% 、例えば、少なくとも純度95% である。
【０１１３】
広い意味において、本明細書に記載の塩基付加塩は、上記の有機ボロン酸と強塩基、例えば、塩基性金属化合物との反応産物に対応すると考えることができる；しかし、塩は、かかる反応の結果である産物に限定されず、別の経路でも得ることができる。
【０１１４】
それゆえ、塩基付加塩は、本明細書に開示のボロン酸と強塩基とを接触させることより取得可能である。すなわち、本開示は式 (I) の酸と強塩基との反応産物の特性を有するもの (合成物) を包含する。塩基は医薬上許容されるものである。
【０１１５】
適当な塩として、金属、例えば一価または二価の金属の塩や、より強い有機塩基が挙げられ、例えば以下である：
１．アルカリ金属；
２．二価、例えばアルカリ土類金属塩；
３．グループIII金属；
４．強塩基性有機窒素含有化合物の塩、この化合物には以下が含まれる：
４Ａ.  グアニジンおよびそのアナログの塩
４Ｂ.  強塩基性アミン（例えば(i) アミノ糖および (ii) 他のアミンが含まれる）の塩。
【０１１６】
上記の塩について、特に例示されるのはアルカリ金属、特に Na および Li である。また例示されるのはアミノ糖である。
【０１１７】
具体的な塩は酸ボロネートの塩であるが、実際のところ、酸塩は非常に少量の二重に脱プロトンされたボロネートを含有することがある。用語「酸ボロネート」は、B-OH 基のひとつが脱プロトン化された三角形型  B(OH)2 基、およびそれと平衡状態にある対応する四面体型基を意味する。酸ボロネートは単一の脱プロトン化に一致する化学量を有する。
【０１１８】
本開示は、それゆえ、下記式 (V) で表すことができる塩を含む物（組成物）を含む：
【化１３】
2007528382.tif 000015
［式中、Yn+ は強塩基から得られうる医薬上許容されるカチオンであり、aa1、aa2、X およびR1は上記に定義のとおりである］。さらに含まれるのは、R1 が別の R9 基で置換されたものである。
【０１１９】
あるクラスの塩の溶解度は、実施例に記載のように25mg/mlで溶解して測定した場合に約 10 mM 以上、例えば、少なくとも約 20mM である。特にさらに、その溶解度は、実施例に記載のように溶解 50mg/ml で溶解して測定した場合に少なくとも約 50mM である。
【０１２０】
本開示は、式 「(ボロネート-)n カチオンn+」である（これにより表示されうる）塩に一致する観測化学量を有するボロン酸 (I) の塩を含む。かかる塩のあるクラスは下記式により表示される：
[Cbz-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-Mpg-B(OH)(O-)]M+
［式中、 M+ は一価カチオン、特にアルカリ金属カチオンを表す］。明らかなように、上記の表示はものの概念的な表示であって、その観測化学量は文言どおりでなく厳密には 1:1 でない。いずれにせよ、ある特定の塩は Cbz-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-Mpg-B(OH)2 のモノナトリウム塩 (TGN 255) である。上記式において、三角形型に表示されたボロネートは、同じように、三角形型、四面体型または三角形／四面体混合型であるボロネートを表す。
【０１２１】
特に例として下記を含む物がある：
(i) (a) 式 (VIII)：X-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-Mpg-B(OH)2［式中、Xは H またはアミノ保護基、特に Cbz）の酸、(b) そのボロネートアニオン、および(c) 前記のいずれの平衡形態（例えば、無水物）から選択される種；および
(ii) 前記の種と組み合わされる n 価のイオン、ここでこの種およびイオンは、概念的な種：イオンの化学量 n:1 に一致する観測化学量を有する］。あるクラスの塩において、n は 1 である。
【０１２２】
次に対イオンを考察する：
1. 一価金属、特にアルカリ金属の塩
好適なアルカリ金属には、リチウム、ナトリウムおよびカリウムが含まれる。これらはすべてかなり可溶性である。リチウムおよびナトリウムがその高い溶解度からみて例示される。なかでもリチウムおよび特にナトリウムの塩は、カリウムに比して驚くほど高い溶解度を有する。ナトリウムが多くの場合最も使用される。アルカリ金属の混合物を含有する塩は本開示に包含される。
【０１２３】
本開示は、式 (VI) の塩：
【化１４】
2007528382.tif 000016
［式中、M+はアルカリ金属イオンであり、aa1、aa2、XおよびR1は上記の定義のとおりである］、およびボロネート基の両ヒドロキシ基が塩の形態である塩 (好ましくは、もう一つの同じM+基との塩) 、ならびにかかる塩の混合物である。R1が他のR9基で置換されたものも含まれる。
【０１２４】
２．二価、例えばアルカリ土類金属（グループII金属）塩
二価金属の一例はカルシウムである。他の好適な二価金属はマグネシウムである。亜鉛もまた包含される。二価金属は通常、好ましい一価ボロネート部分を得るために、ボロン酸：金属の比が実質的に２：１にて使用される。二価金属の混合物、例えばアルカリ土類金属の混合物を含有する塩も包含される。
【０１２５】
さらなる開示は、式 (VII) で表されうる塩：
【化１５】
2007528382.tif 000017
［式中、M2+は二価金属カチオン、例えばアルカリ土類金属または亜鉛カチオンであり、aa1、aa2'、XおよびR9は上記定義のとおりである］、およびボロネート基の両ヒドロキシ基が脱プロトン化されている塩、ならびにかかる塩の混合物を含むもの（合成物）である。上記のように、ボロネートは四面体型種を含みうる。
【０１２６】
３．グループIII金属
好適なグループIII金属には、アルミニウムまたはガリウムが含まれる。グループIII金属の混合物を含む塩も包含される。
【０１２７】
本開示は、式(VIII) の塩：
【化１６】
2007528382.tif 000018
［式中、うち、M3+はグループIII金属イオンであり、aa1、aa2、XおよびR9は上記定義のとおりである］、およびポロネート基の両ヒドロキシ基は脱プロトン化されている塩、ならびにかかる塩の混合物を含むものを含む。上記のように、ボロネートは四面体種を含みうる。
【０１２８】
４. 強塩基性有機窒素含有化合物
本開示は、上記で定義のペプチドボロン酸と強有機塩基との反応により得られうる（その反応により得られる産物の特性を有する）産物を含む。有機塩基の好ましい２クラスについて下記のセクション4Aおよび4Bで述べる。特に好ましいのは酸塩 (２つのボロン酸の −OH 基のうち１つが脱プロトン化されているもの) である。最も一般的には、塩は単一のタイプの有機対イオンを含有するが (微量の混入物は無視する)、本開示は、有機対イオンの混合物を含有する塩を包含する；あるサブクラスにおいて、異なる対イオンはすべて、下記のセクション 4A ファミリーに入るか、または場合により下記のセクション4Bファミリーに入る。別のサブクラスにおいて、塩は、すべてが同じファミリー (4Aまたは4B) に由来するわけでない有機対イオンの混合物を含む。
【０１２９】
好適な有機塩基には、pKbが7以上、例えば7.5以上、例えば8以上の範囲のものが含まれる。親油性が低い[例えば、少なくとも１つの極性官能基 (例えば、1、2または3のかかる基)、例えばヒドロキシ、を有する] 塩基が好ましい；したがって、アミノ糖がひとつの好ましいクラスの塩基である。
【０１３０】
４Ａ. グアニジンおよびそのアナログ
グアニジノ化合物 (グアニジン) は、原則的にグアニジノもしくは置換グアニジノ基を有する可溶性かつ医薬上許容される化合物、または置換もしくは非置換のグアニジンアナログであり得る。好適な置換基には、アリール (例えば、フェニル)、アルキルまたはエーテルもしくはチオエーテル結合が介在するアルキルがあり、これら置換基は、典型的には1〜6、特にメチルまたはエチルの場合のように 1、2、3または4の炭素原子を含有する。グアニジノ基は、例えば末端窒素上に、1、2、3または4の置換基を有し得るが、通常は1または2 の置換基を有する。あるクラスのグアニジンはモノアルキル化されている；他のクラスはジアルキル化されている。グアニジンアナログの例としてチオグアニジンおよび 2-アミノピリジンがある。非置換グアニジノ基を有する化合物、例えばグアニジンおよびアルギニンは、ある特定のクラスを形成する。
【０１３１】
本開示は、グアニジン類の混合物を含有する塩を包含する。
【０１３２】
具体的なグアニジノ化合物は、L-アルギニンまたは L-アルギニンアナログ、例えば、D-アルギニン、あるいはホモアルギニンまたはアグマチン[(4-アミノブチル)グアニジン]の D- または好ましくは L- 異性体である。次に好ましいアルギニンアナログは、例えばNG-ニトロ-L-アルギニンメチルエステルや、拘束（constrained）グアニジン類似体、特に 2-アミノピリミジン、例えば5,6,7,8-テトラヒドロ-2,6-キナゾリンジアミンなどの2,6-キナゾリンジアミンである。グアニジノ化合物はペプチドであってもよく、例えばアルギニンを含有するジペプチドである。このジペプチドの１つは L-チロシル-L-アルギニンである。
【０１３３】
いくつかの特定のグアニジノ化合物は下記式 (VII) の化合物である：
【化１７】
2007528382.tif 000019
［式中、nは1〜6、例えば少なくとも 2、例えば 3 以上であり、多くの場合 5 を超えない］。特に、nは3、4または5である。R2はHまたはカルボキシラートもしくは誘導体化カルボキシラートであり、例えば、エステル (例えば、C1-C4 アルキルエステル) またはアミドを形成する。R3はH、C1-C4 アルキル、または天然もしくは非天然のアミノ酸 (例えばチロシン) の残基である。式 (IV) の化合物は通常 L-配置である。式 (IV) の化合物はアルギニン (n=3、R2=カルボキシル、R3=H) およびアルギニン誘導体またはアルギニンアナログである。
【０１３４】
本開示は、下記式 (IX) の塩：
【化１８】
2007528382.tif 000020
［式中、aa1、aa2、XおよびR1は上記の定義のとおりであり、G+ はグアニジノ基を含む医薬上許容される有機化合物またはそのアナログのプロトン化形態である］、およびボロネート基の両ヒドロキシ基が(好ましくはもう一つの同一の G+ 基との)塩の形態である塩、ならびにかかる塩の混合物を含むものを包含する。R1が別の R9 基で置換されたものもまた包含される。
【０１３５】
4B. 強塩基性アミン
本開示は、上記に定義されたペプチドボロン酸とアミンである強有機塩基との反応により得られうる産物 (該反応により得られた産物の特性を有する産物) を含む。このアミンは、原則的にいずれの可溶性かつ医薬上許容されるアミンであってもよい。
【０１３６】
予測されるように、望ましいクラスのアミンには単一のアミン基に加えて極性官能基を有するものが含まれ、なぜならかかる化合物は他のものよりも親水性であり、それゆえにより可溶性だからである。ある種の塩において、１または複数のさらなる官能基の各々はヒドロキシである。いくつかのアミンは1、2、3、4、5または6のさらなる官能基、特にヒドロキシ基を有する。ある例示的クラスのアミンにおいて、(アミノ基＋ヒドロキシ基)：炭素原子の比率は1:2 〜1:1であり、後者の比率が特に好ましい。１以上のさらなる極性官能基を有するこれらのアミンは、アミノ基および（１または複数の）さらなる極性基により置換された炭化水素、特にアルカン、であり得る。アミノ基は置換されていても非置換であってもよく、アミノ置換基を除き、極性塩基は、例えば、10までの炭素原子を含有してもよい；通常、かかる炭素原子は３以上、例えば、4、5または6である。アミノ糖はこのカテゴリーの極性塩基に含まれる。
【０１３７】
本開示は、下記式 (X)の塩：
【化１９】
2007528382.tif 000021
［式中、aa1、aa2、X およびR1は上記の定義のとおりであり、A+は医薬上許容されるアミンのプロトン化形態である］、およびボロネート基の両ヒドロキシ基が(好ましくはもう１つの同一の A+ 基との)塩の形態である塩、ならびにかかる塩の混合物を含むものを包含する。かかるもののあるクラスにおいて、A+は下記のセクション4B(i)に記載されるアミンのプロトン化形態である；別のクラスにおいて、A+は下記のサブセクション4B(ii)に記載されるアミンのプロトン化形態である。R1 が別の R9 基で置換されたものもまた包含される。
【０１３８】
アミン塩基の例示的な２つのクラスについて下記のサブセクション4B(i)および4B(ii)で述べる。特に好ましいのは酸塩 (２つのボロン酸 −OH 基の１つが脱プロトン化されている) である。最も一般的には、この塩は単一のタイプのアミン対イオンを含有するが (微量の汚染物は無視する)、本発明はアミン対イオンの混合物を含有する塩を包含する；あるサブクラスにおいて、異なる対イオンがすべて下記のセクション4B(i) ファミリーに入るか、または場合により下記のサブセクション4B(ii)ファミリーに入る。別のサブクラスにおいて、この塩は、すべてが同じファミリー (4B(i)または4B(ii)) に由来するのではない有機対イオンの混合物を含む。
【０１３９】
4B(i) アミノ糖
アミノ糖の種類は本発明において重要でない。好ましいアミノ糖には、開環の糖、特にグルカミンが含まれる。環状アミノ糖も有用である。あるクラスのアミノ糖は N非置換であり、別の好ましいクラスは１または２ (例えば、１)の N置換基によりN置換されている。好適な置換基は、例えば、限定でないが、1〜12の炭素原子を含有するヒドロカルビル基である；この置換基はアルキルもしくはアリール部分またはその両者を含みうる。例示的置換基は、C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7およびC8アルキル基、特にメチルおよびエチルであり、なかでもメチルが好ましい。データによると、アミノ糖、特に N−メチル−D−グルカミンが驚くべき高い溶解性を有する。
【０１４０】
最も好ましいアミノ糖はN−メチル−D−グルカミンである：
【化２０】
2007528382.tif 000022
【０１４１】
4B(ii) 他のアミン類
他の好適なアミンには、側鎖がアミノ基で置換された(天然または非天然の)アミノ酸、特にリシンが含まれる。
【０１４２】
いくつかのアミンは下記式 (XI) の化合物である：
【化２１】
2007528382.tif 000023
［式中、n、R2およびR3は式 (IV) について定義されたものである］。式 (VI) の化合物は通常L-配置である。式 (VI) の化合物はリシン (n=4；R2=カルボキシル；R3=H) およびリシン誘導体またはリシンアナログである。最も好ましいアミンは L-リシンである。
【０１４３】
別の好適なアミンは窒素含有ヘテロ環である。少なくとも通常、かかるヘテロ環状化合物は脂環状である。あるクラスのヘテロ環状化合物は N置換であり、別の好ましいクラスはN非置換である。ヘテロ環は、ピペリジン、ピペラジンおよびモルホリンのように 6つの 環形成原子を含有しうる。あるクラスのアミンには、極性置換基、特にヒドロキシにより、例えば 1、2 または 3 回置換された、N-含有ヘテロ環が含まれる。
【０１４４】
本開示はそれゆえ、１以上 (例えば、1、2、3、4、5 または 6) の極性置換基、特にヒドロキシを１つのアミン基に加えて有する、アミノ糖以外のアミンを含む。かかる化合物は (アミノ基＋ヒドロキシ基)：炭素原子の比率が1:2〜1:1であり、後者の比率が特に好ましい。
【０１４５】
本開示は、混合の塩、すなわちボロペプチド部分および／または対イオンの混合物を含有する塩を含むが、単一の塩が好ましい。
【０１４６】
固体形態の塩は、溶媒、例えば水を含有しうる。塩が実質的に無水であるクラスのものも含まれる。塩が水和物であるクラスもまた含まれる。
【０１４７】
塩基付加塩と同様に酸付加塩もまた挙げられる。酸付加塩の例には以下が含まれる：アセタート、アジパート、アルギナート、アスパルタート、ベンゾアート、ベンゼンスルホナート、ビスルファート、ブチラート、シトラート、カンフルラート（camphorate）、カンフルスルホナート（camphorsulfonate）、シクロペンタンプロピオナート、ジグルコナート、ドデシルスルファート、エタンスルホナート、フマラート、グルコヘプタノアート、グリセロホスファート、ヘミスルファート、ヘプタノアート、ヘキサノアート、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、2-ヒドロキシエタンスルホナート、ラクタート、マレアート、メタンスルホナート、2-ナフタレンスルホナート、ニコチナート、オキサラート、パモアート、ペクチナート（pectinate）、ペルスルファート（persulfate）、3-フェニルプロピオナート、ピクラート（picrate）、ピバラート（pivalate）、プロピオナート、スクシナート、タートラート（tartrate）、チオシアナート、トシラートおよびウンデカノアート。
【０１４８】
新規ボロン酸
本開示は、血栓症の処置、例えば予防、に有用な、新規ボロン酸およびその誘導体を提供する。この新規な酸には、下記の式 (IA)を有するものが含まれる:
【化２２】
2007528382.tif 000024
［式中、
Yは、フラグメント −CH(R9)-B(OH)2 とともに、トロンビンの基質結合部位への親和性を有し、かつβ-アミノ酸の残基を含むトロンビンP2ドメインを含む；および
R9は、1以上（例えば1または2）のエーテル結合が介在し、その酸素および炭素原子の総数が3、4、5または6（例えば5）である直鎖アルキル基である、またはR9は、-(CH2)m-W であり、ここでmは 2、3、4または5（例えば4）であり、Wは-OH またはハロゲン (F、Cl、BrまたはI）である］。R9は、化合物のあるサブセットにおいて、アルコキシアルキル基、例えば、4 炭素原子を含有するアルコキシアルキルである。
【０１４９】
β-アミノ酸はトロンビンのS2サブサイトに親和性を有し、β-アミノ酸であってもβ-イミノ酸であってもよい。
【０１５０】
β-アミノ酸は、C3-C13ヒドロカルビル基、例えば、C3-C6ヒドロカルビル環を含むC3-C8ヒドロカルビル基によりN置換されたGly(すなわち H2N-CH2-CH2-COOH)のβ-アミノ酸アナログであってよい;ヒドロカルビル基は飽和していてもよく、例えば例示的な N置換基は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルである。1以上の不飽和結合を含有するヒドロカルビル基としては、フェニルおよびフェニルにより置換されたメチルまたはエチル、例えば、2-フェニルエチル、並びにβ, β-ジアルキルフェニルエチルが挙げられる。
【０１５１】
本開示は、β-アミノ酸が、4〜6員環の炭素環であって、１つの炭素原子が硫黄で置換されていてもよく、かつその環形成炭素原子がカルボキシル基に対してα-およびβ-である炭素原子を含む炭素環を有するβ-アミノ酸の残基である化合物のクラスを含む(すなわち、このβ-アミノ酸は、1位がカルボキシルにより、2位がアミノにより置換され、かつ他の１つの位置がS原子を含有してもよい4〜6員環の炭素環を含む）。
【０１５２】
β-アミノ酸としては、下記の式 (XXVI)のβ-アミノ酸もまた挙げられる:
【化２３】
2007528382.tif 000025
［式中、R11は上記定義のとおりである］。
【０１５３】
一部の態様において、β-アミノ酸は、N置換イミノ酸またはN置換β-アミノ酸の残基である。
【０１５４】
本開示には、aa2がここに開示するβ-アミノ酸である上記式 (II)の酸が含まれる。
【０１５５】
この新規な酸は、本明細書において先に開示されるように、酸、塩、プロドラッグ、またはプロドラッグの塩の形態であってよい。それらは例えば、エステル、塩基付加塩、または酸付加塩である。エステルは、前述のジオール、例えば、ピナコール、ピナンジオール、または糖、例えばマンニトールまたはソルビトール、のエステルであってよい。
【０１５６】
この酸およびその誘導体は、単独で、または医薬上許容される希釈剤、賦形剤、または担体と組み合わせて、医薬製剤として提供することができる。本開示は製剤のタイプについて拘束されず、経口投与のための製剤、例えば錠剤、カプセル、顆粒、または粉末であってよい。製剤は再構成可能製剤であってもよい。錠剤またはカプセルは、腸溶性コーティングされていても、されていなくてもよい。
【０１５７】
非経口製剤としては、静脈内投与用製剤(例えば、等張溶液) または液体の静脈内投与用製剤として再構成するための粉末/顆粒が挙げられる。非経口製剤は、微細粉末、例えば凍結乾燥粉末、を含んでも良く、所望により適した賦形剤、例えば等張剤を含んでもよい。
【０１５８】
化合物は、疾患の処置において、例えば本明細書に記載の適応またはトロンビン阻害が有益な他のいずれかの適応について、トロンビンを阻害するために投与することができる。
【０１５９】
新規化合物の態様の他の構造的および機能的特性は、本明細書に開示の製剤、方法、および使用に用いられる化合物に関して本明細書に記載されるとおりである。
【０１６０】
新規化合物は、選択肢を提供する。意図されるように、少なくとも一部の態様において、化合物は、少なくとも広い意味において、効力または特異性あるいはその両方がTRI 50cと比較して維持または改善されている。
【０１６１】
少なくとも一部の態様において、化合物はバイオアベイラビリティが維持または増強されている。新規化合物の医薬的有用性に寄与しうる他の性質には、例えば製剤の保存安定性または簡便性が含まれる。
【０１６２】
2-アミノ-シクロアルキルカルボン酸の合成は、WO 98/03540に記載される。
【０１６３】
合成方法およびその産物
１．ペプチド／ペプチドミメティックの合成
例えばCbz-D-Phe-Pro-BoroMpg-Oピナコールを含むボロペプチドの合成は、当業界で周知であり、Claeson et al (US 5574014 など) および Kakkar et al (WO 92/07869 および US 5648338 を含むファミリーメンバー) を含む前述の先行技術文献に記載されている。また、Elgendy et al Adv. Exp. Med. Biol. (USA) 340:173-178, 1993; Claeson, G. et al Biochem.J. 290:309-312, 1993; Deadman et al J. Enzyme Inhibition 9:29-41, 1995, および Deadman et al J. Med. Chem. 38:1511-1522, 1995 にも記載されている。
【０１６４】
キラルなB-末端炭素での S またはR配置の立体選択的合成は、確立された技術 (Elgendy et al Tetrahedron. Lett. 33:4209-4212, 1992; WO 92/07869 および US 5648338 を含むファミリーメンバー) により、 (+) または (-) ピナンジオールをキラル・ディレクターとして用いて (Matteson et al J. Am. Chem. Soc. 108:810-819, 1986; Matteson et al, Organometallics. 3:1284-1288, 1984)実施できる。他の方法は、必要なアミノボロネート中間体 (例えば、Mpg-BOピナコール) を溶融し、選択的に所望の (R)-異性体を得て、それをその分子の残りの部分を形成するジペプチド部分 (例えば、Cbz-(R)-Phe-(S)-Pro、これはCbz-D-Phe-L-Pro と同じである）と結合させる。
【０１６５】
ボロペプチドは、最初にボロン酸エステルの形態、特にジオールとのエステルの形態にて合成してもよい。かかるジオールエステルは、次に記載のペプチドボロン酸に変換することができる。
【０１６６】
２．エステルの酸への変換
Cbz-(R)-Phe-Pro-BoroMpg-Oピナコールなどのペプチドボロン酸エステルを加水分解して、対応する酸をつくることができる。
【０１６７】
例えば式 (I) のペプチドボロン酸のジオールエステルを酸に変換する新しい技術は、ジオールエステルをエーテル、特にジアルキルエーテルに溶解すること、この溶解したジオールをジオールアミン、例えばジアルカノールアミンと反応させ、産物沈澱物を形成させること、沈殿物を回収すること、それを極性有機溶媒に溶解すること、およびこの溶解した産物を水性媒体、例えば水性酸と反応させ、ペプチドボロン酸を形成させることを含む。このボロン酸は、反応から得られる混合物の有機層から、例えば溶媒を減圧下蒸発または蒸留などにより除去することによって、回収することができる。ジオールエステルとジオールアミンとの反応は、例えば、還流下において実施することができる。
【０１６８】
ジオールの種類は重要でない。好適なジオールとして、隣接炭素原子上または他の炭素により置換された炭素原子上で置換されたヒドロキシ基を有する脂肪族および芳香族化合物が挙げられる。すなわち、好適なジオールには、鎖内または環内に少なくとも２つの結合した炭素原子により隔てられた少なくとも２つのヒドロキシ基を有する化合物が含まれる。あるクラスのジオールには、丁度２つのヒドロキシル基で置換された炭化水素が含まれる。かかるジオールの１つはピナコールであり、他のものはピナンジオールである。また、ネオペンチルグリコール、1,2-エタンジオール、1,2-プロパンジオール、1,3-プロパンジオール、2,3-ブタンジオール、1,2-ジイソプロピルエタンジオール、5,6-デカンジオールおよび 1,2-ジシクロヘキシルエタンジオールが挙げられる。
【０１６９】
ジアルキルエーテルのアルキル基は好ましくは 1、2、3または4 つの炭素原子を有し、それらアルキル基は同一であっても異なっていても良い。エーテルの１例はジエチルエーテルである。
【０１７０】
ジアルカノールアミンのアルキル基は、好ましくは 1、2、3または4 つの炭素原子を持ち、それらアルキル基は同一であっても異なっていても良い。ジアルカノールアミンの１例はジエタノールアミンである。ジエタノールアミン／ボロン酸の反応産物は水中にて室温で加水分解し、加水分解の速度は酸または塩基の添加で促進されうる。
【０１７１】
極性有機溶媒は好ましくはCHCl3である。他の例は、一般的にはポリハロゲン化アルカン、および酢酸エチルである。原則として、アルコール以外のいかなる極性有機溶媒も許容される。
【０１７２】
水性酸は、好適にはpH 1程度の強無機酸、例えば、塩酸である。 
【０１７３】
酸との反応後、反応混合物を好適なように、例えば NH4Cl または別の緩和な塩基で洗浄する。
【０１７４】
具体的な操作の例は下記のとおりである。
1. 選択したペプチドボロン酸のピナコールまたはピナンジオールエステルをジエチルエーテルに溶解する。
2. ジエタノールアミンを添加し、混合物を40℃で還流する。
3. 沈殿産物を採取し(ろ過し)、ジエチルエーテルまたはアルコール以外の別の極性有機溶媒で (通常数回) 洗浄し、乾燥する (例えば、減圧下蒸発による)。
4. 乾燥産物をアルコール以外の極性有機溶媒、例えば、CHCl3に溶解する。水性の酸または塩基、例えば塩酸 (pH 1) を添加し、混合物を、例えば 約 1 時間室温で攪拌する。
5. 有機層を採取し、NH4Cl 溶液で洗浄する。
6. 有機溶媒を留去し、残渣の固体産物を乾燥する。
【０１７５】
上記の方法は、ペプチドボロン酸の「ジオールアミン付加体」と便宜的に言うことができるもの、特にジエタノールアミンの付加体、を形成し、かかる付加体はそれ自体本開示に含まれる。
【０１７６】
明らかなように、上記の技術は有機ボロン酸産物を回収する方法の例を含み、その方法は、可溶性形態の有機ボロン酸と２つのヒドロキシ基および１つのアミノ基を有する化合物 (すなわち、ジオールアミン) とを含む溶解混合物を溶媒中に提供すること、有機ボロン酸とジオールアミンとを反応させ、またはそれらの反応を起こさせ、沈殿物を形成させること、およびこの沈殿物を回収することを含む。可溶性形態の有機ボロン酸は、上記のようにジオールエステルであってよい。溶媒は、上記のようにエーテルであってよい。有機ボロン酸は本明細書に挙げた有機ボロン酸の１つであってよく、例えば、式 (I) または (III) のものであってよい。本段落に記載の方法は新規であり開示の１局面を形成する。回収方法はろ過である。
【０１７７】
ジオールアミンと可溶性形態の有機ボロン酸との反応は、高い温度で、例えば還流下において好適に実施できる。
【０１７８】
本開示の別の局面は、以下を含む有機ホウ素種を回収する方法である：
エーテルに可溶性の形態の有機ボロン酸、例えば、式 (III) の化合物のような薬物を提供すること；
エーテル中において可溶性形態の溶液を形成すること；
この溶液をジアルカノールアミンと組み合わせ、ジアルカノールアミンと可溶性形態の有機ボロン酸とを反応させ、またはそれらの反応を起こさせ、不溶性沈殿物を形成させること；
この沈殿物を回収すること。
【０１７９】
先の段落における用語「可溶性」は、反応媒体中において沈殿産物よりも実質的により可溶性である種を意味する。変法においては、エーテルをトルエンまたは別の芳香族溶媒に置き換える。
【０１８０】
上記のジエタノールアミン沈澱技術は別の新規方法の例であり、この方法はエーテル溶液からペプチドボロン酸のピナコールまたはピナンジオールエステルを回収する方法であって、ジエタノールアミンを溶液中に溶解し、沈殿物を形成させること、または沈殿物の形成を起こさせること、およびこの沈殿物を回収することを含む。本開示は、ピナコールまたはピナンジオール以外の別のジオールを用いる変法も包含する。
【０１８１】
沈殿した物質、例えば「付加体」は、例えば酸と接触させることにより、遊離の有機ボロン酸に変換できる。酸は、例えば、上記のような水性無機酸などの水性酸であってよい。沈殿物は、酸との接触の前に、例えば有機溶媒中に溶解してもよい。
【０１８２】
本開示は、それゆえ、有機ボロン酸を製造する方法を提供し、この方法はそのジオールアミン反応産物を有機ボロン酸に変換することを含む。
【０１８３】
上記の２つの段落に記載される方法から得られる酸は、多価金属との酸の塩に変換することができ、その塩は次いで非経口投与形態の医薬組成物に製剤化することができる。
【０１８４】
３．塩の合成
３．１  塩基付加塩
一般的に、塩基付加塩は、適当なペプチドボロン酸を所望の塩の形成に適する強塩基と接触させることにより調製することができる。金属塩の場合、水酸化金属は好適な塩基であり(あるいは、例えば、金属カルボナートが用いられこともある) （酸を適当な金属アルコキシド (例えば、メトキシド) と接触させる方が好都合な場合もある）、この目的では対応するアルカノールが好適な溶媒である。有機塩基との塩は、ペプチドボロン酸を有機塩基自体と接触させることにより調製することができる。例示的な塩として酸塩 (１つの BOHのプロトン置換) が挙げられ、一価カチオンとの酸塩をつくるために、酸と塩基とを実質的に等モル量で反応させることが好適である。一般的に、したがって、通常の酸：塩基のモル比は実質的にn:1であり、n は塩基のカチオン価である。
【０１８５】
ある操作において、ペプチドボロン酸の水混和性有機溶媒、例えばアセトニトリルやアルコール (例えば、エタノール、メタノール、イソプロパノールなどのプロパノールまたは他のアルカノール) の溶液を、塩基の水溶液と組み合わせる。酸と塩基とを反応させ、塩を回収する。反応は典型的には周囲の温度 (例えば、温度15〜30℃、例えば15〜25℃) で実施するが、より高い温度、例えば最大で反応混合物の沸点までの温度を用いることができ、しかしより一般的にはより低い温度、例えば最大で40℃または50℃までの温度を用いる。反応混合物は放置してもよく、振盪 (通常は攪拌) してもよい。
【０１８６】
酸と塩基とを反応させる時間は重要でないが、反応混合物を少なくとも１時間置くのが望ましいことがわかっている。１〜２時間が通常好適であるが、より長い反応も用いることができる。
【０１８７】
塩は、反応混合物から、いずれかの好適な方法、例えば蒸発や沈澱により回収することができる。沈澱は、塩の溶解度が限られる混和性溶媒を過剰に添加することにより実施できる。ある好ましい技術においては、反応混合物を吸気乾燥することで塩を回収する。塩は、その後精製するのが好ましく、例えば、得られる液体をろ過前に再溶解し、それを吸気乾燥などにより乾燥する。再溶解には、水、例えば蒸留水を用いることができる。塩は次いで、残った水を除去するために好適な溶媒、好都合には酢酸エチルまたはTHF中に再溶解することにより、さらに精製することができる。精製操作は、周囲の温度 (すなわち、15〜30℃、例えば15〜25℃) またはやや高い温度、例えば40℃もしくは50℃を超えない温度にて実施することができる；例えば、塩を水および／または溶媒に、加温ありまたはなしで、例えば37℃で、撹拌することにより溶解することができる。
【０１８８】
また、本開示の塩および他のペプチドボロン酸塩を乾燥する方法もまた含まれ、これは、これらの塩を有機溶媒、例えば酢酸エチルまたはTHFに溶解し、ついで吸引などにより蒸発乾固することを含む。
【０１８９】
一般的に、塩の精製における使用に好ましい溶媒は、酢酸エチルまたはTHF、または他の有機溶媒である。
【０１９０】
Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH の塩を合成する一般的な操作は下記の通りである：
Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH (20.00g、38.1mM) をアセトニトリル (200ml) に室温で攪拌して溶解する。この液に必要な塩基（蒸留水溶液 (190ml) ）を添加する；塩基は一価カチオンにつき 0.2M の溶液として添加する。得られる澄明液を、例えば通常の時間、いずれの場合も１−２時間、放置するか攪拌する。反応は、典型的には周囲の温度 (例えば、15〜30 ℃、例えば15〜25℃) で実施するが、あるいは温度を上げることもできる (例えば、30 ℃、40℃または 50℃まで)。ついで反応混合物を37℃を超えない温度で減圧下吸気乾燥すると、典型的には白色のもろい固体または油状/粘着性の液体が得られる。この油状／粘着性の液体を必要最少量の蒸留水 (200 ml〜4 L) に、典型的には加温して (例えば、30-40℃まで)、通常 2 時間までで再溶解する。この溶液を、好適には濾紙により、ろ過し、再び37℃を超えない溶液温度で吸気乾燥し、凍結乾燥する。得られた産物を一晩減圧で乾燥すると、通常白色のもろい固体が得られる。産物が油状または粘着性の固体である場合、それを酢酸エチルに溶解し、吸気乾燥し、白色固体としての産物を生産する。白色固体は、典型的には粗い無定形の粉末である。
【０１９１】
上記の一般的操作の変形においては、アセトニトリルを他の水混和性有機溶媒、とりわけ、上記したようなアルコール、特にエタノール、メタノール、イソプロパノールなどのプロパノールで置換する。
【０１９２】
ボロン酸塩が塩形成のために選択された反応媒体に溶けにくく、対応する酸および塩基からの直接的調製が好都合でない場合、その溶けにくい塩は、反応媒体により溶けやすい塩から調製することができる。
【０１９３】
また、本開示の塩基付加塩を製造するためのボロン酸の使用が提供される。さらに、本開示の化合物を調製する方法も含まれ、この方法は、ボロン酸、例えば式 (I)、(II) または (III) のボロン酸を、かかる塩をつくることができる塩基と接触させることを含む。
【０１９４】
３．２  酸付加塩
通常、酸付加塩は、適当なボロペプチド (例えば、ボロン酸またはエステルその他のプロドラッグ)を所望の塩の形成に適する酸と接触させることにより、調製することができる。
【０１９５】
４．立体異性体の分離
ペプチドボロン酸エステルまたは合成中間体アミノボロネートの立体異性体は、例えば、いずれの既知の方法によっても分割することができる。具体的には、ボロン酸エステルの立体異性体はHPLCで分割することができる。
【０１９６】
５．「高純度」合成
既存の刊行物は、有機ボロン酸がC-B結合の酸化により分解されることを教示している。例えば、Wu et al（上記参照）を参照。TRI 50cの塩に関する初期の研究では、これらの塩がC-B結合の切断によって生じたことが明らかな不純物 Iと呼ばれるホウ素を含まない不純物を含み、この塩および／または中間体はその調製の際やや不安定であることが確認されている。あるクラスの塩は、このような分解に対して遊離酸よりも著しく安定である。
【０１９７】
これらの初期のTRI 50c塩は、本明細書の実施例５および９に記載されている一般法により製造されたものである。不純物 Iは以下の構造を有する：
【化２４】
2007528382.tif 000026
【０１９８】
実施例５および９の一般的操作に従って製造される塩の相対的キラル純度は、TRI 50bと呼ばれるTRI 50cのピナコールエステルをHPLCにより分割し、このようにして分割したTRI 50bを塩に変換することにより達成される。このようなHPLC操作は通常の商業的な薬物生産には適さない。
【０１９９】
「アミノボロネート法」と題して要約した先行技術の合成をTRI 50cまたはそのエステルの合成に適用すると、下記の不純物 IVが形成されることがわかった：
【化２５】
2007528382.tif 000027
【０２００】
TRI 50cから不純物 IVを分離する試みは成功していない。同じことが、TRI 50cの塩およびエステルならびに対応する不純物 IVの塩およびエステルについても言える。このような先行技術の合成を用いる限り、不純物 IVの存在を回避できる精製技術はなかった。
【０２０１】
とりわけ、本明細書の本節に記載される合成方法は、有機ボロン酸化合物におけるC-B結合切断の制御、ならびにTRI 50cおよびその他の有機ボロン酸のキラル的に純粋な塩を商業的規模で得るという課題に対処する。これに関して、C-B結合は、多くの溶媒、とりわけ水や例えば水性の酸および塩基、の存在下で起こる非酸化的メカニズムにより切断されるようであることが分かった。
【０２０２】
キラル選択的沈殿を用いると、有機ボロン酸を高純度で回収することができる。
【０２０３】
このように、C-B結合の切断（したがって、具体的には不純物 Iの生成）は、下記により制御することができる：
・処理に溶媒が必要であり、アセトニトリルが必要な溶媒力を持っている場合には、アセトニトリルを選択すること（特に、アセトニトリルは、極性溶媒が望ましいかまたは必要な方法において選択される）、
・水との過度の接触を避けること。
【０２０４】
それゆえ、TRI 50c塩の産生に関して、本開示は以下の特徴のうち１つ、２つまたは３つを含む方法を含む：
（i）ジエタノールアミンを用い、必ずしも必要ではないが便宜的に、出発物質としてエステル、例えばピナコールエステル、の形態のTRI 50cを用いるキラル選択的沈殿による、TRI 50cの（R,S,S）および（R,S,R）エピマーの分割；
（ii）C-B結合の切断の制御のための、TRI 50cジエタノールアミンエステル、例えばかかる沈殿によって得られるエステル、の加水分解時間および／または条件の制御；
（iii）TRI 50cと塩基とを反応させて塩を形成するための、TRI 50c、例えばかかる加水分解によって得られるTRI 50c、のための溶媒としてのアセトニトリルの使用。別の好ましい溶媒は、テトラヒドロフランでありうる。
【０２０５】
任意または独立の４つめの特徴としては、TRI 50c塩は、アセトニトリルを用いた共沸乾燥により乾燥することができる。
【０２０６】
C-B結合の切断は求核性のメカニズムにより起こりうると考えられることから、本開示は求核的攻撃の機会が最小限とされた方法を含む。
【０２０７】
上記４つの特徴、またはそのいずれか１つ、２つもしくは３つは、他のボロン化合物、特に、式 (I)の酸およびそれらの誘導体（例えば、エステルおよび塩）の製造および処理に適用することができる。
【０２０８】
よって、本開示は、ある局面において、式 (I)のボロン酸のジアステレオマーを選択的沈殿により分割するためのジエタノールアミンの使用を提供する。出発物質は、ボロン酸のジエタノールアミンエステルを形成することができる酸（Ｉ）またはその誘導体でありうる。この沈殿により、(R)-配置のキラル中心C*を有する酸が沈殿物として選択される。この沈殿物を回収し、対応するボロン酸またはその塩に変換することができる。この塩は医薬製剤とすることができる。
【０２０９】
キラル純度および収率を至適化するためには、ジエタノールアミンを、(R)-配置のキラル中心C*を有するボロン酸の最初の当量を基準として約1.25±0.1当量の量で用いればよい。
【０２１０】
最初のボロン酸または酸誘導体は、例えば、(R)-配置のキラル中心C*を有する分子50%〜60%と、(S)-配置のキラル中心C*を有する分子40%〜50%を含みうる。
【０２１１】
本方法は、医薬としてのボロン酸 (I)およびその誘導体、特に塩、の商業化への道を拓くものである。それゆえ、ボロン酸 (I)およびその誘導体を用いる商業的規模の産物および活性が提供される。
【０２１２】
ある態様において、以下を含む、式 (I)のボロン酸のジアステレオマーを分離する方法が提供される：
ジエチルエーテル溶液中において、（A）ボロン酸 (I)およびそのエステルから選択されるボロン酸種（このボロン酸種には(R)-配置のキラル中心C*を有する分子と(S)-配置のキラル中心C*を有する分子が含まれる）と、（B）ジエタノールアミン（このジエタノールアミンはキラル中心C*が(R)-配置であるボロン酸種を基準として約1.25±0.1当量の量である）とを組み合わせ、混合して混合物を形成させること；
沈殿物が形成されるまで、このボロン酸種とジエタノールアミンを反応させること、またはそれらの反応を起こさせること；および
その沈殿を回収すること。
【０２１３】
出発物質がエステルである場合、それはボロン酸と、その唯一の可能性ある電子供与性ヘテロ原子が酸素（ボロン酸エステルでは、エステル官能基の酸素に相当する）であるアルコール類からなる群から選択されるアルコールとのエステルであってよい。
【０２１４】
いくつかの方法では、このジエタノールアミンは、キラル中心C*が(R)-配置であるボロン酸種を基準として約1.2〜1.3当量の量である。
【０２１５】
ボロネート種がボロン酸とジオールのエステル、特に、立体障害のないジオールである方法が含まれる。例示的ジオールとしては、ピナコール、ネオペンチルグリコール、1, 2-エタンジオール、1, 2-プロパンジオール、1, 3-プロパンジオール、2, 3-ブタンジオール、1, 2-ジイソプロピルエタンジオール、または5, 6-デカンジオールが挙げられる。特定のジオールはピナコールである。
【０２１６】
このボロン酸種とジエタノールアミンの反応は、混合物を加熱して高温とすることにより起こさせることができ、例えば、混合物を、例えば少なくとも１０時間還流させればよい。
【０２１７】
沈殿物は濾過により回収することができる。回収した沈殿はジエチルエーテルで洗浄すればよい。回収した沈殿を、洗浄を行う場合にはその後、CH2Cl2およびCHCl3から選択される溶媒に溶解し、得られた溶液をジエチルエーテルと合わせることにより再沈殿させることができる。特定の溶媒はCH2Cl2である。
【０２１８】
回収した沈殿物は、好適には加水分解により、式 (I)の酸に変換することができ、例えば、この沈殿物をハロ炭化水素類やそれらの組み合わせなどから選択される有機溶媒に溶解すること、得られた溶液をpH 3未満の水性酸などの水性液とともに攪拌し、それにより溶解した沈殿物を式 (I)の酸に変換すること、および蒸発により式 (I)の酸を回収することにより、式 (I)の酸に変換することができる。有機溶媒はCH2Cl2またはCHCl3である。特定の溶媒はCH2Cl2である。一部の方法では、有機溶媒をさらに回収した式 (I)の酸から蒸発させる。
【０２１９】
本開示は、ボロン酸 (I)のエステル、特にジエタノールアミンエステルが、C-B結合の切断を制御する様式により加水分解される方法を含む。特に、これには、選択された温度にて加水分解時間を制限することが含まれる。ジエタノールアミンエステルの加水分解の場合、その加水分解は好適には、室温以下の温度で、約30分を超えない時間、例えば約20分を超えない時間、所望により約20分で行われる。
【０２２０】
このように、２つ前の段落で述べた回収沈殿物は、水性酸、特に２％塩酸または同様のpHの他の無機酸を用い、およそ室温以下で約30分未満にて加水分解すればよい。好適には、この沈殿物を非求核有機溶媒（例えば、ハロ炭化水素またはハロ炭化水素混合物、例えばCH2Cl2）に溶解し、得られた溶液を前述のような時間にて水性酸と接触させる。これにより、この沈殿物が加水分解されて式 (II)の遊離酸が形成され、これは有機溶媒中に留まる。この有機溶媒を水性媒体から分離した後、蒸発させると、固体の式Ｉの酸を得ることができる。
【０２２１】
式 (II)の酸、例えば前段に記載のように得られた酸、を乾燥させる方法が含まれる。あるクラスの方法では、式 (II)の酸が有機溶媒中に存在する場合に、その溶媒を吸湿性の固体と接触させることにより式 (II)の酸を乾燥する。
【０２２２】
式 (II)の酸が有機溶媒中に存在する場合に、式 (II)の酸を水性アンモニウム塩で洗浄する方法も含まれる。
【０２２３】
キラル的に純粋なボロン酸は、医薬上許容されるその塩基付加塩に変換することができ、その変換は、特に、その酸をアセトニトリルに溶解すること、得られた溶液を医薬上許容される塩基の水溶液または懸濁液と組み合わせること、およびその塩基と酸を反応させること、またはそれらの反応を起こさせること、次いで蒸発乾固により蒸発残渣を得ることによる。酸と塩基を反応させる、またはそれらの反応を起こさせる工程は、酸のアセトニトリル溶液と塩基の水溶液または懸濁液との組み合わせを35℃以下、多くの場合30℃以下、例えば25℃以下の温度で撹拌することを含んでも良い；至適温度は室温であり、その反応時間は約２時間が適当である。これらの方法は、さらに以下を含んでも良い：
（ｉ）蒸発残渣をアセトニトリルに溶解し、得られた溶液を蒸発乾固すること、および
（ｉｉ）乾燥蒸発残渣を得るために必要な回数、工程（ｉ）を繰り返すこと。
【０２２４】
一部の方法では、乾燥蒸発残渣をアセトニトリルまたはテトラヒドロフランに溶解して溶液を形成させ、この溶液をジエチルエーテルと脂肪族または環状脂肪族溶媒との3:1〜1:3 v/v混合物と組み合わせ（例えば、塊が形成しないように十分遅い速度でゆっくり添加し）、沈殿を形成させる（この溶液はジエチルエーテル／（環状）脂肪族溶媒混合物に（溶液：混合物）1:5〜1:15 v/vの比率で添加する）。この沈殿物を回収し、一部または実質的に全部の残留溶媒を回収した沈殿物から温度を35℃以下に維持しつつ、例えば減圧下で除去する。乾燥プロセスの最初の温度が約10℃であり、そのプロセス中に35℃まで昇温する方法が含まれる。脂肪族または環状脂肪族溶媒は６、７または８個の炭素原子を有してよい；溶媒はアルカン、例えばｎ−アルカン、例えばn-ヘプタンであってよい。周囲温度で行える反応もあり、例えば15〜30℃、例えば20〜30℃であってもよく、場合によって周囲温度は室温であってもよい。
【０２２５】
本発明により生産された塩は、微量の脂肪族または環状脂肪族溶媒を含むことがあり、それは例えば、0.1％未満、特に0.01％未満、例えば約0.005％の量である。
【０２２６】
塩を製造する方法において、塩基は、ｎ価のカチオンを含み、約n：1の化学量（ボロン酸：塩基）で用られうる。特定の方法では、塩基はアルカリ金属またはアルカリ土類金属塩基、例えば、アルカリ金属水酸化物またはアルカリ土類金属水酸化物である。塩基の一例として、水酸化ナトリウムが挙げられる。別の塩基としては、水酸化カルシウムが挙げられる。本開示は、塩基が水酸化ナトリウムであり、乾燥蒸発残渣をアセトニトリルに溶解する方法を含む。本開示は、塩基が水酸化カルシウムであり、乾燥蒸発残渣をテトラヒドロフランに溶解する工程を含む。
【０２２７】
本開示は、式 (II)のボロン酸が（例えばそのエステルとして）得られる方法に限定されない。しかし、本発明のあるクラスでは、式 (II)の酸は式−(CH2)s-O-R3［式中、R3はメチルまたはエチルであり、sは独立に2、3または4である］のR1基を有し、この式 (II)の酸は式 (XXV)：
(HO)2B-(CH2)s-O-R3          (XXV)
の中間体を経て調製され、この中間体はホウ酸エステルと好適な１−メタロアルコキシアルカンとの間の反応により製造される。
【０２２８】
本開示の新規な局面は、式 (XXV)の中間体を含む。
【０２２９】
式 (XXV)の中間体は、アルコキシアルカンが式-(CH2)s-O-R3である場合、１−メタロアルコキシアルカンとホウ酸エステルとを反応させて式 (XXV)の化合物を形成させることにより、製造することができる。
【０２３０】
理解されるように、上記方法は、式RZ-O-RY-B(OH)2で表されうるアルコキシアルキルボロン酸を製造する一般法を提供する。かかるアルコキシアルキルボロン酸はアミノボロネートに変換することができ、このアミノボロネートをアミノ基において誘導体化して別の部分へ連結するアミド結合を作成することができる。言い換えれば、アミノボロネートをボロペプチドに変換することができる。以下、本方法を、限定されるものではないが、式 (XXV)の化合物を例に挙げて記載する。
【０２３１】
この反応の出発物質はメタロアルコキシアルカン、例えば、式Hal-(CH2)s-O-R3［式中、Halはハロゲンである］の１−ハロアルコキシアルカンとホウ酸エステルとから得られるグリニャール試薬であってよい。金属は、特にはマグネシウムである。別の金属としてリチウムがあり、この場合、この金属試薬は１−ハロアルコキシアルカンとブチルリチウムとを反応させることにより製造することができる。この方法がハロアルコキシアルカンからの金属試薬の調製を含む場合、ハロアルコキシアルカンはクロロアルコキシアルカンであってよい；対応するブロモ化合物も使用できる。グリニャール試薬を製造するには、マグネシウムをハロアルコキシアルカンと反応させてもよい。
【０２３２】
好適なボロン酸エステルは、１-または２-官能性アルコール（例えば、EtOH、MeOH、BuOH、ピナコール、グリコール、ピナンジオールなど）のエステルである。例えば、このエステルは式B(ORa)(ORb)(ORc) ［式中、Ra、RbおよびRcはC1-C4アルキルであり、互いに同じであってもよい］のエステルであってよい。
【０２３３】
アルコキシアルカン種としてメトキシプロパンを例に挙げて示される式 (XXV)の中間体を製造するための例示的方法は次の通りである：
【化２６】
2007528382.tif 000028
【０２３４】
この反応は有機溶媒、例えばTHF中で好適に行われる。上記のアルコキシアルキルボロン酸の製造方法では、不純物 IV（上記参照）、またはそのアナログ（この場合、最終産物はTRI 50cまたはその誘導体（塩、エステルなど）ではない）の生成が回避される。それゆえ、この方法は、不純物 IVの混入がないTRI 50c、そのエステルおよび塩を製造するための、および、ホウ素に対するα−がアルコキシアルキル基によって置換されており、かつ不純物 IVに類似する不純物の混入がない他のアミノボロン酸を製造するための、ユニークな経路を提供する。
【０２３５】
アルコキシアルキルボロン酸、すなわち、式RZ-O-RY-B(OH)2で表すことができる化合物は、当業界で公知の方法などいずれの好適な方法によってもアミノボロン酸化合物、例えばボロペプチド、へと変換することができる。アルコキシアルキルボロン酸からアミノボロネートを製造するため、およびアミノボロネートをペプチドボロネートに変換するための反応式は、本明細書の実施例の冒頭でTRI 50cの合成を例に挙げて説明している。この反応式は、例えば、ジエタノールアミン沈殿とその後の工程を除いてもよい、および／または試薬の置換を行ってもよいなど、所望により改変することができる。例えば、ピナコールを他のジオールに置き換えてもよい。ＬＤＡは非求核性の強塩基であり、別のこのような塩基で置換可能である。他の例としては、限定されるものではないが、リチウムジイソプロピルアミド、リチウム２，２，６，６−テトラメチルピペリジン、１−リチウム４−メチルピペラジド、１，４−ジリチウムピペラジド、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド、ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド、カリウムビス（トリメチルシリル）アミド、塩化イソプロピルマグネシウム、塩化フェニルマグネシウム、リチウムジエチルアミド、およびカリウムtert−ブトキシドが挙げられる。これらの反応はいずれの好適な溶媒中で行ってもよい；実施例においてn-ヘプタンを用いている場合には、それは別の不活性な非極性溶媒、例えば別の脂肪族または環状脂肪族溶媒、例えばアルカン、例えばｎ−アルカンで置き換えてもよい。
【０２３６】
以上から明らかなように、上記の方法は、記載のような有機ボロン酸の製造に用いることができる。連続する工程を一回の操作として、または同じ場所において行う必要はない；この通りに行ってもよいし、あるいは種々のプロセス（合成全体の種々の部分）を時間および／または空間的に分けてもよい。特定の最終産物としての塩は、例えばTRI 50cの、モノナトリウム、モノリチウム、ヘミカルシウムおよびヘミマグネシウム塩である。
【０２３７】
一般に、この反応は、非求核性溶媒を用いて好適に行うことができる。求核性溶媒が存在する場合、例えばジエタノールアミンエステルの加水分解の場合には、最小限の接触が好ましい。
【０２３８】
高純度産物
本開示の「高純度産物」には、とりわけ、開示の方法により得られる（開示の方法により得られる産物の特性を有する）、ボロン酸、ジエタノールアミンエステルおよび塩が含まれる。また、開示の方法により直接的または間接的に得られる産物も含まれる。
【０２３９】
本発明の特定の産物は、式 (II)のボロン酸の塩基付加塩であって、本明細書に記載の方法により調製された場合にこの塩についてキラル純度を有するものである。他の産物は、式 (II)のボロン酸の塩基付加塩であって、本明細書に記載の方法により製造された場合にこの塩について純度を有するものである。
【０２４０】
産物の実体は、これまでの説明と以下の例から明らかであろう。さらに、本開示の産物は請求項に記載する。特に注目すべきは実施例３８のデータであり、これは本発明の方法がHPLCにより検出可能な不純物を含まない最終産物の塩を達成できることを明確に示す。他の例では、塩は実質的に不純物を含まず、逆相（RP）HPLC％ピーク面積として、例えば少なくとも98％の純度、より通常には少なくとも99％の純度、例えば少なくとも99.5％の純度である。塩は、逆相（ＲＰ）HPLC％ピーク面積として、少なくとも99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％または99.9％の純度でありうる。好適なRP HPLC操作は、実施例３８の参考文献１および／または参考文献２および／または参考文献３に従う。また、少なくとも実質的に不純物 Iおよびアナログを含まない産物、不純物 IVおよびアナログを含まない産物、ならびに微量の非極性溶媒、例えばn-ヘプタンを含む産物も含まれる。微量の非極性溶媒とは、GC-ヘッドスペースクロマトグラフィーによって測定した場合、0.2％、0.1％、0.05％、0.01％または0.005％未満でありうる。
【０２４１】
また、410ppm未満のアセトニトリルを含む塩も含まれる。
【０２４２】
10,000ppm、5000ppm、1000ppm、または500ppmの不純物を含む塩もある。
【０２４３】
開示の化合物の使用
開示の化合物はトロンビン阻害薬である。それらはしたがって、トロンビンを阻害するのに有用である。それゆえ、例えば心筋梗塞の二次事象の治療および予防において、止血を制御するため、特に凝固を阻害するための能力を有する化合物が提供される。化合物の医学的用途は、予防 (血栓症の処置および血栓症の発症を防ぐことを含む) の場合も、治療 (血栓症の再発または二次的血栓性事象を防ぐことを含む) の場合もある。
【０２４４】
化合物は、抗血栓形成薬が必要なときに使用することができる。さらに、式（III) のボロン酸化合物を含むこれら化合物は、このクラスが治療または予防として動脈血栓症を処置するのに有用である点で、有益であることがわかった。開示の化合物は、したがって、ヒトを含む動物の血液および組織における血栓症および高凝固性の処置または予防に適用される。用語「血栓症」には、中でも、萎縮性血栓症、動脈血栓症、心臓血栓症、冠血栓症、クリ−プ血栓症、感染性血栓症、腸間膜血栓症、胎盤性血栓症、増殖性血栓症、外傷性血栓症および静脈血栓症が含まれる。
【０２４５】
ある方法において、開示化合物は手術における血栓症の予防に使用される。特に、本発明の化合物は、CABG手術中の血栓症の予防に使用される。したがって、本開示は、CABG手術中の体外循環回路における血栓症を予防するための医薬を包含する。前述のように、本明細書に開示される化合物は、心肺バイパス機の使用を伴わないCABG中にも使用されうる。
【０２４６】
特に、本明細書に記載の化合物は、体外血液回路が関与する方法、例えば冠動脈バイパス移植 (CABG) 手術のような外科手術、における血栓症の予防に有用である。本開示の化合物は、心肺バイパス機に組み込まれても良く、あるいは外部から体外血液回路へ投与してもよい。より一般的には、それらは患者へ静脈内点滴（infusion）により投与すればよい。 
【０２４７】
本発明の化合物は、静脈内に、または体外血流を介して投与してもよく、あるいは迅速な作用発現を可能とする他のいずれの手段により投与してもよい。化合物の投与は、治療効果レベルを必要に応じて上昇または低下できるように、理想的に制御される。
【０２４８】
高凝固性が血栓塞栓性疾患をもたらしうることが知られている。開示の化合物で治療または予防しうる静脈血栓塞栓症の例として、静脈の閉塞、肺動脈の閉塞 (肺塞栓症)、深静脈血栓症、癌および癌化学療法に関連する血栓症、タンパク質 C 欠乏、タンパク質 S 欠乏、アンチトロンビン III 欠乏および因子 V ライデンなどの血栓形成性疾患に伴う血栓症、ならびに全身性エリテマトーデス (炎症性結合組織疾患) などの獲得性血栓形成性障害に起因する血栓症が挙げられる。また、静脈血栓塞栓症について、開示の化合物は内在カテーテルの開通性を保持するのに有用である。
【０２４９】
開示の化合物で処置または予防しうる心原性血栓塞栓症の例として、血栓塞栓性卒中 (脳への血液供給の減少に関連する神経性障害を起こす分離した血栓)、動脈細動に関連する心原性血栓塞栓症 (上部の心室筋肉原線維の迅速で不規則なれん縮)、機械的心臓弁などの補てつ心臓弁に関連する心原性血栓塞栓症および心疾患に関連する心原性血栓塞栓症が挙げられる。
【０２５０】
動脈血栓症が関与する症状の例として、不安定狭心症 (冠状動脈起源の胸部における激しい収縮性疼痛)、心筋梗塞 (不十分な血液供給からくる心筋細胞の死)、虚血性心疾患 (血液供給の(動脈狭窄などによる)障害による局所的虚血)、経皮経管冠動脈形成の間または後の再閉塞、経皮経管冠動脈形成の後の再狭窄、冠状動脈バイパス移植の閉塞および閉塞性脳血管疾患がある。また、動脈-静脈 (混合) 血栓症について、開示の抗血栓性化合物は、動脈-静脈シャントの開通性を維持するのに有用である。
【０２５１】
高凝固性および血栓塞栓性疾患に関連する他の症状として、遺伝性または獲得性のヘパリン補因子 II の欠乏、循環抗ホスホリピド抗体 (ループス性抗凝固物)、ホモシスチン血症、ヘパリン誘導性血小板減少症およびフィブリン溶解異常を挙げることができる。
【０２５２】
開示のトロンビン阻害薬は、このように、上記のすべて障害の治療的および予防的処置に適応される。
【０２５３】
ある方法において、開示の化合物は、WO 00/41715 で他のトロンビン阻害薬について記載されているように、化合物を透析液中に提供して血液透析による患者の処置に使用する。したがって、本開示は、開示の化合物を含む透析液および透析濃縮液、ならびに低分子量のトロンビン阻害薬を含有する透析液の使用を含む、透析処置を必要とする患者の透析による処置方法を含む。また、開示の抗血栓性化合物を透析液中に提供する、患者の透析による処置のための医薬の製造における開示の抗血栓性化合物の使用を含む。
【０２５４】
別の方法において、開示の化合物は、WO 01/41796 で他のトロンビン阻害薬について記載されているように、望ましくない細胞増殖に対抗するために使用される。望ましくない細胞増殖は、典型的には望ましくない過形成細胞増殖、例えば、平滑筋細胞、特に血管平滑筋細胞の増殖である。開示の化合物は、特に内膜過形成の処置に適用を有し、この過形成の要素のひとつが平滑筋細胞の増殖である。再狭窄が新生内膜過形成により起こると思われる；したがって、本開示との関連において、内膜過形成は再狭窄を含む。
【０２５５】
開示の化合物は、虚血性障害の処置にも関する。特に、それら化合物は、 WO 02/36157 で他のトロンビン阻害薬について記載されるように、非弁性動脈細動 (NVAF) の患者またはそのおそれのある患者のおける虚血性障害の処置（治療的または予防的）に使用し得る。虚血性障害は、身体の一部への血流が結果として制限される状態である。この用語は、血液、組織および／または臓器における血栓症および高凝固性を含むと理解される。挙げうる特定の用途には、虚血性心臓疾患、心筋梗塞、腎臓や脾臓などでの全身性塞栓事象の予防および処置があり、さらに、特にNVAFの患者またはそのおそれのある患者のおける、脳血栓症、脳塞栓症および／または非脳血栓症もしくは塞栓症に関連する脳虚血を含む脳の虚血の予防および処置(換言すると、血栓性もしくは虚血性卒中および一次的虚血性発作の処置 (治療的または予防的) )が挙げられる。
【０２５６】
開示の化合物はまた、WO 03/007984 において他のトロンビン阻害薬について記載されるように、リウマチ性／関節炎性障害の処置にも関する。すなわち、開示の化合物は、慢性関節炎、リウマチ性関節炎、骨関節炎または硬直性脊椎炎の処置に使用できる。 
【０２５７】
さらに、開示の化合物は、血栓症、経皮経管血管形成 (PTA) および冠状バイパス手術の後の再閉塞 (すなわち、血栓症) の予防：顕微手術および一般的な血管手術後の再血栓症の予防に使用できると期待される。さらなる適応として、細菌、多発外傷、中毒などの機構による散在性血管内凝固の治療的および／または予防的処置；血液が体内で血管移植、血管ステント、血管カテーテル、機械的および生物学的補綴弁などの医療機器などの異物に接触するときの抗凝固処置；血液が心肺マシンや血液透析を用いる心血管系手術中などに体外で医療器具に接触するときの抗凝固処置がある。
【０２５８】
開示の化合物はさらに、高凝固性の症候なく望ましくないほど過剰のトロンビンが存在する症状、例えば、アルツハイマー病などの神経変性疾患、の処置に適用される。凝固プロセスに対する効果に加えて、トロンビンは、多数の細胞 (好中球、繊維芽細胞、内皮細胞、平滑筋細胞など) を活性化することが知られている。それゆえ、開示の化合物はまた、突発性および成人性呼吸困難徴候、放射線または化学療法後の肺繊維症、敗血病ショック、敗血病、浮腫や急性または慢性の動脈硬化症、例えば冠状動脈疾患、脳動脈疾患、末梢動脈疾患を含む炎症応答、再灌流障害および経皮経管血管形成 (PTA) 後の再狭窄などの治療的および／または予防的処置に有用であり得る。
【０２５９】
化合物は膵炎の処置にも有用でありうる。
【０２６０】
本明細書に記載の化合物はさらに、血小板凝固促進活性を阻害するのに有用であると考える。本開示はまた、動脈血栓症の、またはそのおそれのある哺乳動物、特にヒト患者に、本明細書に記載のボロン酸化合物を投与することにより血小板凝固促進活性を阻害する方法を提供する。さらに、血小板凝固促進活性を阻害するための医薬の製造におけるかかる化合物の使用を提供する。
【０２６１】
開示の化合物の血小板凝固促進活性阻害薬としての使用は、本明細書に記載のボロン酸が動脈血栓症および静脈血栓症の阻害に効果的であると示唆されるとの観測から予想される。
【０２６２】
動脈血栓症が関与する適応には、急性冠症候群 (特に、心筋梗塞および不安定狭心症)、脳血管血栓症、および動脈細動、心臓弁疾患、動脈−静脈シャント、内在のカテーテルまたは冠状ステントの結果として生じる末梢の動脈閉塞および動脈血栓症が含まれる。したがって、別の態様において、本発明は、開示の化合物を哺乳動物、特にヒト患者に投与することを含む、この適応の群から選ばれる疾患または症状を処置する方法を提供する。本開示は、開示の化合物を含むコーティングを有する冠状ステントなどの動脈インプラントのような動脈環境において使用するための化合物を含む。
【０２６３】
開示の化合物は、動脈血栓症または動脈血栓症が関与する症状または疾患のおそれのある個体を予防的に処置するためにも、あるいは治療的に処置するためにも使用できる(血栓症の再発または二次的血栓性事象の予防を含む)。
【０２６４】
したがって、本開示は、上記の障害を予防的または治療的に処置するための本明細書に記載の選択性トロンビン阻害薬 (例えば、有機ボロン酸の塩基付加塩) の使用ならびにその医薬製剤および医薬製剤の製造における使用を含む。
【０２６５】
投与および医薬製剤
化合物は、例えばその薬物が抗血栓形成活性を有する場合、ホストに投与して抗血栓形成効果を得ることができる。ヒトなどの大きな動物の場合、化合物を単独で、あるいは医薬上許容される希釈剤、賦形剤または担体と併せて投与できる。用語「医薬上許容される」はヒトおよび動物を目的とする許容性を含み、とりわけヒト医薬としての使用に対する許容性が好ましい。
【０２６６】
本明細書に記載の化合物は、手術中の血栓症を予防する目的で、静脈内点滴により投与することができる。それら化合物はそれゆえ、手術に伴って点滴にて投与されうる。
【０２６７】
本開示の化合物は、いずれかの心臓血管処置薬と組み合わせてもよい、および／または共投与してもよい。多数の心臓血管処置薬が市販、臨床開発、および前臨床開発の段階にあり、これらは併用薬物療法により心臓血管障害を予防するために、本開示の化合物とともに使用するよう選択できる。かかる物質は、限定でないが、下記のいくつかの主要なカテゴリーから選択される１以上の物質でありうる： 脂質低下薬、例えばIBAT (回腸の Na+／胆汁酸共輸送体) 阻害薬、フィブラート、ナイアシン、スタチン、CETP (コレステリルエステル輸送タンパク質) 阻害薬、および胆汁酸捕捉薬、抗酸化薬、例えばビタミンＥおよびプロブコール、IIb/IIIa アンタゴニスト (例えば、アブシキシマブ、エプチフィバチド、チロフィバン)、アルドステロン阻害薬 (例えば、スピロラクトンおよびエポキシメクスレノン)、アデノシンA2受容体 アンタゴニスト (例えば、ロサルタン)、アデノシンA3受容体アゴニスト、ベータブロッカー、アセチルサリチル酸、ループ利尿薬、ならびに ACE (アンギオテンシン変換酵素) 阻害薬。
【０２６８】
本開示の化合物はまた、作用機構が異なる抗血栓薬、例えば抗血小板薬、アセチルサリチル酸、チクロピジン、クロピドグレル、トロンボキサン受容体および／またはシンテターゼ阻害薬、プロスタサイクリンミメティック、およびホスホジエステラーゼ阻害薬、ならびにADP-受容体 (P2 T) アンタゴニスト、と組み合わせてもよい、および／または共投与してもよい。
【０２６９】
本開示の化合物はさらに、血栓性疾患、特に心筋梗塞の処置において、血栓溶解薬、例えば組織プラスミノーゲンアクチベーター (天然、組換え、または改変型)、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、プロウロキナーゼ、アニソイル化プラスミノーゲン-ストレプトキナーゼアクチベーター複合体 (APSAC)、動物唾液腺プラスミノーゲンアクチベーターなどと組み合わせることができる、および／または共投与することができる。
【０２７０】
本開示の化合物は、心臓保護薬（cardioprotectant）、例えばアデノシンA1またはA3受容体アゴニストと組み合わせてもよい、および／または共投与してもよい。
【０２７１】
本発明はまた、開示の化合物と NSAID、例えば COX-2 阻害薬とで患者を処置することを含む、患者における炎症性疾患を処置する方法を提供する。かかる疾患には、限定でないが、腎炎、全身性エリテマトーデス、リウマチ性関節炎、糸球体腎炎、脈管炎およびサルコイドーシスが含まれる。すなわち、開示の抗血栓性化合物は NSAID と組み合わせることができる、および／または共投与することができる。
【０２７２】
本開示の医薬組成物中の活性成分の実際の投与量レベルは、特定の患者、組成物および投与様式について所望の治療応答を達成するのに有効である活性化合物の量(本明細書では「治療的有効量」という)を得るように、変更されうる。選択される投与量レベルは、特定の化合物の活性、処置しようとする症状の重篤度、ならびに処置しようとする患者の症状および医学的前歴に依存する。しかし、所望の治療効果を得るのに必要とされるよりも低いレベルで化合物の投与を開始し、所望の効果が得られるまで段階的に投与量を増加することは、当技術分野の範囲内にある。
【０２７３】
さらなる局面において、本明細書に記載の化合物を含む非経口製剤が提供される。この製剤は化合物単独からなっていてもよく、またはさらなる成分を含んでいてもよく、特に化合物は、医薬上許容される希釈剤、賦形剤または担体、例えば本製剤を実質的に本製剤が投与される被験体の体内、例えばヒト血漿、と等張とするための等張剤、組み合わせることができる。製剤は即時使用可能形態または投与前に再構成を必要とする形態でありうる。
【０２７４】
本開示の製剤および投与形態には、活性成分が塩基付加塩のもの、特にアルカリ金属塩、例えば、リチウム、ナトリウム、またはカリウム塩であるものが挙げられ、このうち、特定の塩としてはナトリウム塩が挙げられる。別のクラスの製剤は、開示のボロン酸のアミノ糖塩、例えばN−メチル−D−グルカミン塩を含む。本段落に挙げた塩は水溶液として、典型的には１種以上の添加剤、例えば等張剤および／または抗酸化剤を含有する水溶液として投与することができる。これらの塩の好適な保存方法は、固体形態、例えば乾燥粉末であり、投与前に投与溶液とするものである。
【０２７５】
以上から理解されるように、経口製剤に好適な製品の形態の、式 (II) のボロン酸のモノアルカリ金属またはヘミアルカリ土類金属塩を含む医薬品が提供される。この塩は凍結乾燥物であってもよい。
【０２７６】
現在のところ考えられているのは、TRI 50cまたはその誘導体 (例えば塩基付加塩)を非経口投与、例えば静脈内投与する場合、活性化合物 (例えば塩) は、例えば、TRI 50c として計算して0.5〜2.5mg/Kgの量にて、例えば最大72時間かけて投与すればよい。他のいずれの形態の酸 (遊離酸、塩またはプロドラッグ)も、同様のモル量で投与すればよい。本開示は、かかる量または投与計画での投与に限定されず、先の文に記載の範囲外の投与量および投与計画を包含する。
【０２７７】
心血管手術または心臓手術の場合、例えば冠動脈バイパス移植(心肺バイパスあり、またはなし) または 弁修復または置換の場合、患者は多大な血栓形成性刺激を受け、比較的高レベルの抗凝固が必要となる。抗凝固の量は、活性凝固時間 (ACT)により測定することができる。イヌでTRI 50c モノナトリウム塩を用いて行われた実験において、外科的介入を開始する前にACTが＞300秒であるべきことがわかった。活性凝固時間 (ACT) は、心臓手術中の抗凝固の程度を評価するため一般的パラメーターとして使用される。抗血栓性ボロン酸塩の投与設計では、化合物のボーラス投与を例えば1分かけて25 mgのTRI 50c モノナトリウム塩で開始し、続いて1時間あたり約100-300 mgのTRI 50c モノナトリウム塩、例えば約160 mg/時間まで、の速度で点滴することが好適であることがわかった。他の塩、例えばカルシウム塩の場合に留意すべきは、この投与速度は、前述の換算係数を用いて、約0.044 ミリモルのTRI 50cのボーラス投与、続いて約0.18-0.53 ミリモル／時間のTRI 50c、例えば約0.28 ミリモル／時間まで、の点滴にほぼ等しいように容易に計算できることである。約0.18-0.53ミリモル／時間の速度でのTRI 50cの投与はそれゆえ、CPBまたは心臓手術、例えばCPBあり、またはなしのCABG、の設計において、他のTRI 50c化合物(例えば塩)および同様の効力を有する他のボロン酸(例えば、塩基付加塩として投与されるもの)に好適であると考えられる。無論、投与速度は臨床判断により、例えば患者の体重その他の因子を考慮して調節されうるものであり、それゆえ投与速度約0.1-0.75 ミリモル／時間も挙げられる。効力が異なる場合、つまり(Ki値が5-25nMの範囲外の場合)、投与速度はそれにしたがい調節されうる。本開示は、かかる量および投与計画における投与に限定されず、本段落に記載の範囲外の投与量および投与計画も包含する。
【０２７８】
血栓形成性刺激が低い場合、TRI 50cモノナトリウム塩は、より低速度で、例えば50 mg/時間以下、例えば約20〜約50 mg/時間にて成人患者に静脈内投与(実際、通常は体外血液回路へ投与）されると考えられ、これはおよそ0.035-0.089ミリモルのTRI 50c／時間に等しい。約0.089ミリモルのTRI 50c／時間まで、例えば約0.035-0.089ミリモルのTRI 50c／時間の速度での投与は、それゆえ、CIHDその他の断続的アフェレーシス法時において他のTRI 50c塩および同様の効力(TRI 50cのKi= 7-22nM)を有する他のボロン酸の塩に好適と考えられる。無論、点滴速度は臨床医の臨床判断において、例えば患者の体重その他の因子を考慮して調節されうるものであり、それゆえ、点滴速度約0.125ミリモル／時間まで、例えば約0.025-0.125ミリモル/時間も挙げられる。効力が異なる場合、つまり(Ki値が5-25nMの範囲外の場合)、投与速度はそれにしたがい調節されうる。CIHDにおいて過剰の水を血液中に添加することを避けるため、比較的濃縮された溶液を点滴することが好ましく、例えば、少なくとも35mMの濃度(活性ボロニル種、例えばTRI 50cおよびその対応ボロネートイオンの濃度として)が好ましいと考えられるが、より低い濃度、例えば18mMも排除されない。かかる量および投与計画における投与に限定されず、本段落に記載の範囲外の投与量および投与計画も包含する。
【０２７９】
通常、腎不全または腎疾患の場合には、抗凝固中に添加される水分ができるだけ少ないことが望ましい。それゆえ考えられるのは、比較的可溶性の抗血栓薬、例えばナトリウム塩またはボロン酸とアミノ糖 (例えば N−メチル−D−グルカミン)との反応産物を、CIHDの場合に使用することである。静脈内抗凝固に関与する他の方法は注射または点滴される水の量にそれほど敏感でない場合もあり、因子のバランスにおいてより可溶性の低い化合物が好ましいこともある。したがって、例えば、そのような場合、二価金属、例えばカルシウムまたは亜鉛、の塩を投与することが安定性の理由から好ましい。マグネシウムは別の医薬上許容される二価金属である。三価金属もまた挙げられる。
【０２８０】
前段落で述べた添加水の容量にそれほど敏感でない方法または場合の例には以下が含まれる：
・手術、例えば心血管または心臓手術(例えばCPBあり、またはなしのCABG)、CPBが関与する手術、整形外科手術、例えば人工股関節全置換術、人工膝関節置換術、主要股関節または膝関節手術（major hip or knee surgery）;血栓症の危険性の高い患者における通常の手術、例えば癌のための腹部または骨盤手術；
・静脈血栓閉塞性事象(例えば深部血管血栓症および／または肺塞栓症) の予防。例として、血栓事象を患う、または患っていると疑われる患者；および3日以上寝たきりの患者、ならびに急性心不全、急性呼吸器不全、感染を有する患者が含まれる。
・内在カテーテルを介して化学療法を受けている患者における静脈血栓閉塞性事象の予防
・下肢動脈再建術(バイパス、動脈内膜切除、経腔的血管形成術など)を受けている患者における血栓閉塞性事象の予防。
・静脈血栓閉塞性事象の処置。
・他の心血管薬、例えばアスピリン (アセチルサリチル酸; アスピリンはドイツにおける登録商標である)、血栓溶解薬 (例えば以下を参照)、抗血小板薬 (例えば以下を参照)と組み合わせての、急性冠症候群(例えば、不安定狭心症、非Q波心筋虚血/梗塞)における心血管事象の予防。
・アセチルサリチル酸、血栓溶解薬 (例えば以下を参照)と組み合わせての、急性心筋梗塞の患者の処置
・腎不全または腎障害時を除く前述の適応に関して使用される他の急性期処置。
【０２８１】
好ましくは、塩は、迅速な作用発現と短い作用時間を有しうるものであり、したがって、患者の血小板凝固レベルを迅速に、例えば投与終了後30分以内で、安全なレベルまで戻すことが可能である。
【０２８２】
非経口製剤は、１以上の経路で投与することができ、例えば、静脈内、皮下、皮内および点滴である特定の例は静脈内である。本明細書に開示の製剤は、シリンジ、注射器、固体製剤用のプランジャー、ポンプなどの非経口投与技術で認められている器具を用いて、投与できる。製剤はまた、例えばCABG術中に、体外血液回路に直接投与することもできる。
【０２８３】
非経口投与用の液体投与形態としては、溶液、懸濁液、リポソーム製剤、または油性もしくは水性媒体中のエマルションが挙げられる。この液体投与形態は、活性化合物に加え、他の化合物を含んでもよい。この非経口製剤には所望により、等張剤（製剤を被験体の体、例えば、ヒト血漿と実質的に等張にするため）、例えば塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、デキストロース、マンニトールおよび／またはグリセロール、を加えてもよい。医薬上許容される緩衝剤をpHの制御のため添加してもよい。この非経口製剤には所望により、増粘剤または粘度調整剤、例えば、周知のセルロース誘導体（例えば、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチルセルロース）、ゼラチンおよび／またはアカシアを加えてもよい。
【０２８４】
本開示の塩基付加塩は、酸を含まない水溶液に溶解される場合、pH 7付近に保持されるpH制御条件下で溶解される場合よりも、より可溶性であることがわかった。特に、約pH 7で最大濃度約20mg/mlのコントロール溶液と比較して、pHを制御しない場合、約pH 9.5において驚くほど濃縮された溶液(TRI 50c モノナトリウム塩の場合最大約600mg/ml)を形成できることがわかった。
【０２８５】
非経口投与用の固体投与形態には固体および半固体形態が包含されてよく、ペレット、粉末、顆粒、パッチ、およびゲルが含まれる。このような固形投与形態では、活性化合物を通常、少なくとも１種類の不活性な医薬上許容される賦形剤または担体と混合する。
【０２８６】
開示の塩は微細固体形態の固体として提供してもよく、例えば、粉砕または微粉化してもよい。
【０２８７】
製剤はまた、抗酸化剤および／または保存剤を含んでもよい。抗酸化剤としては、チオール誘導体（例えば、チオグリセロール、システイン、アセチルシステイン、シスチン、ジチオエリスレイトール、ジチオスレトール、グルタチオン）、トコフェロール、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、亜硫酸塩（例えば、硫酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、アセトン重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム）およびノルジヒドログアイアレチン酸が挙げられる。好適な保存剤は、例えば、フェノール、クロロブタノール、ベンジルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、塩化ベンザルコニウムおよび塩化セチルピリジニウムでありうる。
【０２８８】
非経口製剤は、大容量非経口剤（LVP）として、例えば100 mlより多い、より具体的には約250 mlの、活性化合物液体製剤として提供してもよい。LVPの例としては点滴バッグがある。あるいは、非経口製剤は、小容量非経口剤（SVP）として、例えば100 ml以下の活性化合物液体製剤として提供してもよい。SVPの例としては溶液入りバイアル、再構成用バイアル、注射用充填済みシリンジおよびデュアルチャンバーシリンジデバイスがある。
【０２８９】
開示の製剤には、その塩がアルカリ金属塩、例えば、リチウム、ナトリウムまたはカリウム塩であるものが含まれ、このうち、特定の塩としてはナトリウム塩が挙げられる。別のクラスの製剤は、開示のボロン酸のアミノ糖塩、例えば、N-メチル−D-グルカミン塩を含有する。本段落で挙げられている塩は水溶液として投与してよく、それは典型的には1以上の添加剤、例えば、等張剤および／または抗酸化剤を含有する。これらの塩の好適な保存方法は固体形態、例えば乾燥粉末であり、投与前に投与溶液とされるものである。
【０２９０】
本明細書で開示される製剤のあるクラスに静脈内投与製剤がある。静脈内投与製剤では、活性化合物は、残りの部分を形成する非経口製剤に許容される担体とともに、種々の濃度で存在しうる。特に、担体は、水、特にパイロジェンフリー水であるか、または水性ベースのものである。特に、このような非経口製剤の担体は、等張剤、例えば塩化ナトリウム溶液を含む水溶液である。
【０２９１】
「水性ベースの」とは、製剤が水、または水と水混和性有機溶媒からなる溶媒を含み、同時に開示の塩を溶解した形態で含有することを意味し、この溶媒は1以上の他の物質、例えば、抗酸化剤および／または等張剤がその中に溶解されている場合もある。有機補助溶媒としては、当技術分野で一般に用いられている水混和性溶媒、例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール 300、ポリエチレングリコール 400およびエタノールが挙げられる。好ましくは、有機補助溶媒は、単一の投与形態で提供するには活性成分が治療上有効な量で水に十分溶けない場合にのみ用いる。前述のように、本開示は、水からなる溶媒を含む、開示のボロン酸、例えばTRI 50c、のアルカリ金属塩の製剤を包含する。
【０２９２】
本製剤中の活性化合物の溶解度は、製剤の濁度が50 NTU未満、例えば20 NTU未満、例えば10 NTU未満となるようなものであればよい。
【０２９３】
非経口製剤は生理的pHまたはその付近のpHで投与するのが望ましい。高pH（すなわち、8を超える）または低pH（すなわち、5未満）での製剤による投与は望ましくないと考えられる。特に、製剤はpH 6.0〜7.0、例えばpH 6.5で投与されると考えられる。
【０２９４】
非経口製剤をパッケージングする場合、空気のパージを行ってもよい。非経口製剤は、滅菌容器、例えばバイアル中に、溶液、懸濁液、ゲル、エマルション、固体または粉末としてパッケージングしてもよい。このような製剤は即時使用可能形態、または投与前に再構成を必要とする形態のいずれで保存してもよい。
【０２９５】
本開示の非経口製剤は容器にパッケージングしてもよい。容器は、非経口製剤と無反応または実質的に無反応な材料からなるものを選択すればよい。ガラス容器またはプラスチック容器、例えば、プラスチック点滴バッグが使用できる。容器系に関して考慮することは、溶液を紫外線分解から保護するということである。所望により、酸化鉄を用いたアンバーガラスまたは容器に合った不透明カバーにより適宜紫外線保護を提供することができる。
【０２９６】
プラスチック点滴バッグなどのプラスチック容器は、比較的軽量で破損しにくく、それゆえにより保存が容易なことから有益である。これは特に大容量非経口剤の場合にあてはまる。
【０２９７】
静脈内投与製剤は活性化合物を担体と合わせることにより調製できる。製剤を混合した後、例えば既知の方法を用いて、これを滅菌してもよい。製剤が滅菌されれば、それをそのまま投与するか、あるいは保存のためにパッケージング、特に遮光パッケージ（例えば、瓶またはプラスチックパーケージ）にパッケージングする。しかし、保存寿命を長くするためには、開示の塩を溶液で保存するのではなく、例えば凍結乾燥物などの乾燥固体、特に微粉形態として保存すればよいと考えられる；このことはもちろん、静脈内投与製剤だけでなく他の非経口製剤にも当てはまる。
【０２９８】
静脈内投与製剤は上記のように大容量非経口剤の形態をとっても、小容量非経口剤の形態をとってもよい。
【０２９９】
ある特定の形態において、本開示は一回投与単位を製造するための物、特にキットに関する。これらの物（キット）は各々、活性化合物（所望により、添加剤、例えば、抗酸化剤、保存剤、および場合により等張剤と組み合わされる）を含む第一の容器と、担体／希釈剤（例えば、所望により１以上の添加剤、例えば、等張剤を含有する水）を含む第二の容器の双方を含んでよい。このような物の例としては、シングルおよびマルチチャンバー（例えば、デュアルチャンバー）充填済みシリンジが挙げられる；例示的な充填済みシリンジはVetter GmbH, Ravensburg, Germanyから入手できる。このようなデュアルチャンバーシリンジまたはバイナリーシリンジは、一方のチャンバーに、活性化合物を含む、または活性化合物からなる粉末調製物を含み、もう一方のチャンバーに本明細書で開示したような好適な担体または希釈剤を含む。この２つのチャンバーは固体と液体が混合されて最終溶液が形成されるように統合される。
【０３００】
本明細書で開示されている製剤のあるクラスには、活性ある塩（または活性物質の組み合わせ）が皮下または皮内注射できる非経口製剤に製剤化されている皮下また皮内製剤（例えば、注射用製剤）が含まれる。この投与用製剤は、活性ある塩と液体担体とを含む。
【０３０１】
皮下または皮内注射される非経口製剤に用いられる担体は、水性担体（例えば、通常には添加剤、例えば、抗酸化剤および／または等張剤を含有する水）または非水性担体（ここでも１以上の添加剤を配合し得る）であってよい。このような非経口製剤のための非水性担体としては、高精製オリーブ油が挙げられる。
【０３０２】
活性化合物と担体は、典型的には、例えばミキサーにて混合する。製剤を混合した後、好ましくはこれを紫外線照射などで滅菌する。製剤が滅菌されれば、それをそのまま投与するか、あるいは保存のためにパッケージングする。しかし、保存寿命を長くするためには、開示の塩を液体製剤で保存するのではなく、乾燥固体として保存すればよいと考えられる。
【０３０３】
皮下インプラントを製造するには、この活性ある塩を、使用時に徐々に腐食または分解される１以上のポリマー、例えば、シリコンポリマー、エチレンビニルアセテート、ポリエチレンまたはポリプロピレンなどと共に適宜製剤化すればよい。
【０３０４】
経皮製剤は、マトリックスまたは膜の形態で、あるいは油中またはヒドロゲル中の流体または粘稠な製剤として、あるいは圧縮粉末ペレットとして、製造することができる。経皮パッチは、皮膚に適合する接着剤、例えばポリアクリレート、シリコン接着剤またはポリイソブチレン、ならびにホイル、例えばポリエチレン、ポリプロピレン、エチレンビニルアセテート、塩化ポリビニル、塩化ポリビニリデンまたはポリエステルなどでできたホイル、および保護ホイル、例えばポリエステル、またはシリコンもしくはフルオロポリマーでコーティングされたペーパーでできた剥離可能な保護ホイル、を含んでよい。経皮溶液またはゲルの調製には、水または有機溶媒またはその混合物を用いてよい。さらに、経皮ゲルは、１以上のゲル化剤または増粘剤、例えばシリコン、トラガカント、デンプンもしくはデンプン誘導体、セルロースもしくはセルロース誘導体、またはポリアクリル酸もしくはその誘導体などを含んでもよい。経皮製剤はまた、胆汁酸塩もしくはその誘導体、および／またはリン脂質など、皮膚からの吸収を促進する１以上の物質を適宜含んでよい。経皮製剤は、例えば、B W Barry, “Dermatological Formulations, Percutaneous Absorption”, Marcel Dekker Inc., New York--Basel, 1983、またはY W Chien, “Transdermal Controlled Systemic Medicatios”, Marcel Dekker Inc., New York--Basel, 1987 などに開示されている方法に従って調製することができる。
【０３０５】
以上から、即時使用可能な水性非経口製剤へと再構成するのに好適な、乾燥微粒子形態の式（II）のボロン酸のアルカリ金属塩、特にナトリウム塩を含む医薬が提供されることが理解できるであろう。アルカリ金属塩は好適には酸塩である。アルカリ金属塩は小容量非経口単位投与形態であってよい。アルカリ金属塩は、例えば乾燥粉末形態など、大容量非経口剤として再構成するのに好適な形態で提供されてもよい。一例として、等張剤、特に塩化ナトリウムを含有する液体静脈内投与製剤（溶液）として再構成するための乾燥粉末形態の式（II）のボロン酸、特にTRI 50c、のナトリウム塩がある。非経口製剤に用いられる乾燥粉末形態の塩は凍結乾燥物であってよい。再構成された溶液は注射または点滴によって投与できる。
【０３０６】
［実施例］
実施例１−４は前置き的な説明である。
装置
下記の実施例１−４の操作においては、標準的な実験室用ガラス器具と、必要に応じて空気に敏感な試薬を取り扱い移すのに適当な特殊な装置とを用いた。
【０３０７】
すべてのガラス器具を使用前に140-160℃で少なくとも4時間加熱し、ついで乾燥器中にて、または熱を集めて乾燥窒素蒸気を注入することにより、冷却する
【０３０８】
溶媒
実施例１−４の操作において使用する有機溶媒はすべて乾燥している。好適には、使用の前にナトリウムワイヤーで乾燥する。
【０３０９】
乾燥
実施例１−４の操作の乾燥操作において、産物の乾燥度 (有機溶媒についての乾燥度を含む) を乾燥時の重量損失を観察することにより試験する。下記の操作を行って乾燥時の損失を測定した：サンプルを減圧乾燥機に入れ、40℃、100 mbarで 2 時間乾燥した。乾燥時の重量低下が出発物質の全重量の0.5%未満になったときに、産物が乾燥されていると考える。
【０３１０】
実施例１−４は、下記の反応式のパフォーマンス、および得られる TRI 50c のナトリウム塩およびカルシウム塩への変換について述べる。
【化２７】
2007528382.tif 000029
LDA = リチウムジイソプロピルアミド
LiHMDS = リチウムヘキサメチルジシラザン、リチウムビス (トリメチルシリル) アミドともいう
【０３１１】
実施例１  TRI 50B の合成
工程１：Z-DIPIN B
操作 A
17.8 g (732.5 mmole) マグネシウムターニング（turning）、0.1 g (0.4 mmole) ヨウ素および 127 ml 乾燥 テトラヒドロフランを入れ加熱還流する。ついで、66 g (608 mmole) 1-クロロ-3-メトキシプロパンの 185 ml 乾燥テトラヒドロフランの溶液 15 ml を加え、激しい反応が始まるまで還流下撹拌する。最初の発熱が終わった後、1-クロロ-3-メトキシプロパン液を徐々に加え、すべてのマグネシウムが消費されるまで、緩やかな還流を維持する。反応の終了後、反応混合物を周囲温度まで冷まし、徐々に 64.4 g (620 mmole) トリメチルボラートの 95 ml 乾燥テトラヒドロフラン溶液に加える；後者の溶液を 0 ℃以下に冷やし、反応中に熱くなる場合には、反応混合物を十分にゆっくりと加えて、この溶液の温度を -65 ℃以下に保持しなければならない。添加が完了したら、反応混合物を約 0 ℃まで温め、さらに 60 分間攪拌する。22.4 ml 硫酸の 400 ml 水溶液をゆっくりと添加し、温度を 20 ℃以下に保つ。この層を放置し、各フェーズに分ける。水層を３回 200 ml tert.-ブチルメチルエーテルで洗浄する。合わせた有機層を放置し、この液体から分離した水をさらに除く。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、蒸発により乾燥する。蒸発残渣から沈殿固体をろ過し、濾液を 175 ml トルエンに溶解する。34.8 g (292 mmole) ピナコールをこの溶液に入れ、周囲温度で 10 時間以上攪拌する。この溶液を蒸発により乾燥し、475 ml n-ヘプタンに溶解し、290 ml 炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で３回洗浄する。n-ヘプタン溶液を蒸発により乾燥し、蒸発残渣を蒸留し、Bp 40-50 ℃、0.1-0.5 mbar でその画分を回収する。
沸点：40-50 ℃/ 0.1-0.5 mbar
収量：40.9 g (70%) Z-DIPIN B (油状)
【０３１２】
操作 B
17.8 g (732.5 mmole) マグネシウムターニング、0.1 g (0.4 mmole) ヨウ素および 127 ml 乾燥 テトラヒドロフランを入れ加熱還流する。ついで、66 g (608 mmole) 1-クロロ-3-メトキシプロパンの 185 ml 乾燥テトラヒドロフラン溶液 15 ml を加え、激しい反応が始まるまで還流下撹拌する。最初の発熱が終わった後、1-クロロ-3-メトキシプロパン溶液を徐々に添加し、緩やかな還流を維持する。反応終了後、反応混合物を周囲温度にまで冷やし、徐々に 64.4 g (620 mmole) トリメチルボラート の 95 ml 乾燥テトラヒドロフラン溶液に添加し、この溶液の温度を-65 ℃以下に保持する。添加が完了したら、反応混合物を約 0 ℃まで暖め、さらに 60 分間攪拌する。22.4 ml 硫酸の 400 ml 水溶液を温度 20 ℃以下に保つように徐々に添加する。有機溶媒を減圧蒸留で除去する。300 ml n-ヘプタンを蒸発残渣の水溶液に入れ、34.8 g (292 mmole) ピナコールを添加する。２層混合物を周囲温度で 2 時間以上攪拌する。層を放置した後、水層を分離する。300 ml n-ヘプタンを水溶液に入れ、２層混合物を周囲温度で 2 時間以上攪拌する。層を放置した後、水層を分離する。有機層を合わせ、200 ml の水で１回洗浄し、200 ml 飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、 さらに200 ml の水で２回洗浄する。ついで n-ヘプタン溶液を蒸発により乾燥し、蒸発残渣を蒸留し、Bp 40-50 ℃、0.1-0.5 mbar で画分を回収する。
沸点：40-50 ℃/ 0.1-0.5 mbar
収量：40.9 g (70-85%) Z-DIPIN B (油状)
【０３１３】
工程２： Z-DIPIN C
16.6 g (164 mmole) ジイソプロピルアミンおよび 220 ml テトラヒドロフランを入れ、-30 〜 -40℃に冷却する。この溶液に 41.8 g (163 mmole) n-ブチルリチウム（n-ヘプタン溶液中25%）を加え、0 〜 -5 ℃で１時間攪拌する。この新しく調製したリチウムジイソプロピルアミド溶液を -30 ℃に冷却し、27.9 g (139 mmole) Z-DIPIN B の120 ml テトラヒドロフランおよび 35.5 g (418 mmole) ジクロロメタン溶液に温度 −60〜−75 ℃で添加する。この溶液を前記温度で30分攪拌し、480 ml (240 mmole) 0.5N 無水塩化亜鉛(II) テトラヒドロフラン溶液または 32.5 g (240 mmole) 無水固体塩化亜鉛(II) を添加する。−65 ℃で１時間攪拌した後、反応混合物を周囲温度にまで温め、さらに 16-18 時間攪拌する。反応混合物を蒸発乾固し (すなわち、溶媒が除去されるまで)、385 ml n-ヘプタンを加える。反応混合物を 150 ml 5% 硫酸、190 ml 飽和炭酸水素ナトリウム溶液、および 180 ml 飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄する。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、蒸発により乾燥する (すなわち、溶媒が除去されるまで)。油状残渣を次の工程に精製することなしに移す。
収量：19 g (55%) Z-DIPIN C
【０３１４】
工程３：Z-DIPIN D
23.8 g (148 mmole) ヘキサメチルジシラザンの 400 ml テトラヒドロフラン溶液に -15 ℃で 34.7 g (136 mmole) n-ブチルリチウム（n-ヘプタン中25%）を加え、１時間攪拌する。この溶液を -55 ℃まで冷却し、30.6 g (123 mmole) Z-DIPIN C （290 ml テトラヒドロフランおよび35 ml テトラヒドロフランに溶解）をこの新たに調製した LiHMDS 溶液に添加する。この溶液を周囲温度まで温め、12 時間攪拌する。反応混合物を蒸発により乾燥し、蒸発残渣を 174 ml n-ヘプタンに溶解し、170 ml 水および 75 ml 飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄する。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、完全に蒸発乾固する (すなわち、溶媒が除去されるまで)。油状残渣を 100 g n-ヘプタンに溶解する。この溶液を、さらなる乾燥なしに次の工程に用いる。
収量：32.2 g (70%) Z-DIPIN D
【０３１５】
工程４：Z-DIPIN (TRI50b、粗製)
26.6 g (71 mmole) Z-DIPIN D （82.6 g n-ヘプタン中）を 60 ml n-ヘプタンで希釈し、-60 ℃まで冷却し、10.5 g (285 mmole) 塩酸を入れる。ついで、反応混合物を吸気し、窒素を導入し、その間温度を約20 ℃ずつ上昇させ周囲温度とする。溶媒を油状沈殿物から除き、60 ml の新鮮な n-ヘプタンで数回置き換える。油状残渣を 60 ml テトラヒドロフランに溶解する (溶液 A)。
【０３１６】
別のフラスコに 130 ml テトラヒドロフラン、24.5 g (61.5 mmole) Z-D-Phe-Pro-OH および 6.22 g (61.5 mmole) N-メチルモルホリンを入れ、−20 ℃に冷却する。この溶液に 8.4 g (61.5 mmole) イソブチルクロロホルマートの20 ml テトラヒドロフラン溶液を加え、30 分間攪拌し、ついで溶液 A を−25 ℃で加える。添加が完了したら、16 ml (115 mmole) までトリエチルアミンを加え、pH 試験紙で測定して pH を 9-10 に調節する。反応混合物を周囲温度まで暖め、3 時間、窒素下で攪拌する。溶媒を蒸発により乾燥し、蒸発残渣を 340 ml tert.-ブチルメチルエーテル (t-BME) に溶解する。Z-DIPIN の t-BME 溶液を175 ml 1.5% 塩酸で２回洗浄する。合わせた酸性洗液を 175 ml t-BME で再洗浄する。あわせた有機層を 175 ml 水、175 ml 飽和炭酸水素ナトリウム溶液、175 ml 25% 塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過する。この溶液をさらなる精製なしに次の工程に用いる。
収量: 29.9 g (80%) Z-DIPIN
【０３１７】
実施例２
TRI 50D (TRI 50C のジエタノールアミン付加体) の合成
本実施例で使用する出発材料は、実施例１で得られた TRI 50b (「Z-DIPIN」) の溶液である。この溶液をさらに精製することなしに TRI 50d の合成に供する。Z-DIPIN の t-BME 溶液 (7.0 g (11.5 mmole) (R,S,R) TRI50b を含有、Z-DIPIN のHPLC結果 に基づき計算) を蒸発乾固し、蒸発残渣を 80 ml ジエチルエーテルに溶解する。1.51 g (14.4 mmole) ジエタノールアミンを添加し、混合物を少なくとも10 時間加熱還流すると、その間に沈殿産物が生じる。この懸濁液を 5-10 ℃まで冷却し、ろ過し、ろ過残渣をジエチルエーテルで洗浄する。
【０３１８】
キラルおよび化学的純度を改善するために、湿ったろ過物 (7 g) を 7 ml ジクロロメタンに溶解し、0-5 ℃に冷却し、42 ml ジエチルエーテルの添加により産物を沈澱せしめ、ろ過する。単離された湿った産物を35℃にて減圧下または少なくとも4時間乾燥する。
収量: 5.5 g (80%) Tri50d
融点: 140-145℃
【０３１９】
実施例３
TRI 50C のナトリウム塩の調製
実施例２の1.5 kg (2.5 mole) TRI50d を 10.5 L ジクロロメタンに溶解する。11 L 2% 塩酸を添加し、混合物を最大 30 分間 (所望により約 20 分間) 室温で攪拌する。沈殿物が有機層に形成される。攪拌後、その層を放置し、分離する。水層を2.2 L ジクロロメタンで２回再洗浄する。合わせた有機層を625 g 塩化アンモニウムの 2.25 L 水溶液で洗浄する。(塩化アンモニウムは水性抽出物のpHを約 pH 1-2 〜約 pH 4-5 の範囲内に緩衝するが、これは強い酸性状態がペプチド結合を切断する可能性があるためである)。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、濾液を蒸発により乾燥する。遊離ボロン酸のアッセイを(実施例３８の RP HPLC 法により最大 30 分間 (所望により約 20 分間) 室温において)行い、酸から塩への変換のための溶媒および塩基の量を計算する。2.5 mol の遊離酸を得たら、蒸発残渣を 5 L アセトニトリルに溶解し、100 g (2.5 mole) 水酸化ナトリウム溶液を 5% 水溶液 2.2 Lとして加える。この溶液を２時間、周囲温度 (すなわち 15-30 ℃、最適には室温) で攪拌し、ついで 35℃を超えない温度で減圧下(約 10 mmHg) 蒸発せしめる。蒸発残渣を再び 3.5 L の新しいアセトニトリルに溶解し、蒸発により乾燥し、微量の水を除く。蒸発残渣が乾燥したら、それを 3 L アセトニトリル (あるいは 6L THF) に溶解し、徐々に 32 L n-ヘプタンと 32 L ジエチルエーテルの混合物に加える。添加は、産物が塊となったり固着したりするのを避けるよう十分にゆっくりと行い、30 分間以上をかけて実施する。沈殿産物を濾取し、n-ヘプタンで洗浄し、減圧下、最初は温度約 10 ℃、ついで約35℃まで温度を上げて乾燥させる。
収量: 1.0 kg (70%) TRI 50c ナトリウム塩
【０３２０】
実施例４
TRI 50C のカルシウム塩の調製
実施例２の 1.5 kg (2.5 mole) TRI 50d を 10.5 L ジクロロメタンに溶解する。11 L 2% 塩酸を加え、混合物を最大 30 分間 (所望により約 20 分間) 室温で攪拌する。攪拌後、その層を放置し、分離する。水層を2.2 L ジクロロメタンで２回洗浄する。合わせた有機層を 625 g 塩化アンモニウムの 2.25 L 水溶液で洗浄する。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、濾液を蒸発により乾燥する。遊離ボロン酸のアッセイを行い、酸から塩への変換のための溶媒および塩基の量を計算する。2.5 mol の遊離酸を得たら、蒸発残渣を 5 L アセトニトリルに溶解し、93 g (1.25 mole) 水酸化カルシウム懸濁液（ 1 L 水中）を添加する。溶液を２時間、周囲温度 (すなわち15-30℃、最適には室温) で攪拌し、減圧下(約 10 mmHg)、最初は約10 ℃で、ついで35℃を超えない温度まで上げて蒸発せしめる。蒸発残渣を再び 3.5 L の新しいアセトニトリルに溶解し、蒸発乾固し、微量の水を除く。蒸発残渣が乾燥したら、それを 6 L テトロヒドロフランに溶解し、徐々に 32 L n-ヘプタンと 32 L ジエチルエーテルの混合物に添加する。添加は、産物が塊になったり固着したりするのを避けるよう十分にゆっくりと行い、30 分間以上をかけて実施する。沈殿した産物を濾取し、n-ヘプタンで洗浄し、減圧下(約 10 mmHg)で35℃以下の温度で乾燥させる。
収量: 0.98 kg (70%) TRI 50c カルシウム塩
【０３２１】
実施例１−４の操作はスケールアップでき、注意深く操作すると、高純度の塩が産生される。ジエタノールアミン沈澱工程において、(R,S,R) TRI 50b 1当量に対し 1.25 当量のジエタノールアミンを使用することが重要である。ジエタノールアミンエステルの加水分解においては、水性酸との過度に長い接触を避けることが重要である。同様に、TRI 50b はZ-DIPIN A に対するグリニヤール反応を経て合成される。
【０３２２】
実施例５
TRI 50B の TRI 50C への別の変換法
ここで記載の合成操作および続く合成例は、一般的に窒素下でなされ、市販の乾燥溶媒を使用する。
【０３２３】
1. ラセミ TRI 50bの HPLC 精製により得られた約 300 g の TRI 50b を約 2.5 L のジエチルエーテルに溶解した。様々なバッチの TRI 50b は、85%〜95% 以上の範囲の R,S,R 異性体純度を有すると推定される。
2. 約 54 ml のジエタノールアミンを添加し (全TRI 50b 含量に対して1:1の化学量)、混合物を40℃で還流した。
3. 沈殿産物を回収し、数回ジエチルエーテルで洗い、乾燥した。
4. 乾燥産物を CHCl3 に溶解した。塩酸 (pH 1) を添加し、混合物を約１時間室温で攪拌した。
5. 有機層を回収し、NH4Cl 液で洗浄した。
6. 有機溶媒を留去し、残渣固体産物を乾燥した。
典型的収量：約 230 g
【０３２４】
実施例６
TRI 50C リチウム塩の調製
実施例５の方法で得られたCbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH (20.00g、38.1mM) を室温で攪拌しながらアセトニトリル (200ml) に溶解する。この溶液に LiOH を 0.2M 水溶液（蒸留水中） (190ml)として加える。得られる澄明の溶液を 2 時間室温で攪拌し、37 ℃を超えない温度で減圧下にて吸気し乾燥する。得られる油状／粘着性の液体を、必要ならば約20 分間緩やかに加熱して、 500ml の蒸留水に再び溶解する。この溶液を濾紙でろ過し、再び37 ℃を超えない溶液温度で吸気乾燥する。得られた産物を一晩減圧下乾燥すると、通常白色のもろい固体が得られる。
ついで、この塩を一定重量までシリカで減圧下乾燥した (72 h)。
収量 17.89g
ミクロ分析
【表１】
2007528382.tif 000030
【０３２５】
実施例７
TRI 50C リチウム塩の UV/可視スペクトル
実施例６の操作から得られた塩のUV/可視スペクトルを蒸留水中で 20 ℃で 190nm 〜 400nm で記録した。塩は λmax が 210 および 258nm であった。乾燥塩の重量を、吸光係数（extinction coefficient）の計算のために測定した。λmax 258nm を使用した。吸光係数は以下の式により計算した：
A = εcl、A は吸光度
C は濃度
l は UV セルの経路長
ε は吸光係数
吸光係数：451
【０３２６】
実施例８
TRI 50C リチウム塩の水溶解度
本実施例に使用した塩は、実施例６に記載の方法の改変法を用いて製造した。この改変法は、出発物質として 100mg の TRI 50c を使用した点、水に再溶解した産物を凍結乾燥により乾燥した点、およびろ過を0.2μmのろ紙により行った点が記載の方法と異なる。塩は約85% の R,S,R 異性体を含有すると考えられる。
【０３２７】
最大水溶解度を調べるために、25mg の乾燥塩を水中で37℃で振盪し、このサンプルをろ過し、UV スペクトルを測定した。塩は不溶性物質の白色残渣を残した。リチウム塩は比較的可溶性であったので、上記と同様にして 50mg/ml で再溶解した。
25mg/mlで溶解したときの溶解度：43mM (23 mg/ml)
50mg/mlで溶解したときの溶解度：81mM (43 mg/ml)
【０３２８】
実施例９
TRI 50C ナトリウム塩の調製
実施例５の方法により得られたCbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH (20.00g、38.1mM) を室温で攪拌しながらアセトニトリル (200ml) に溶解する。この溶液に NaOH を 0.2M 溶液（蒸留水中）(190ml)として加える。得られる澄明の溶液を 2 時間室温で攪拌し、37 ℃を超えない温度で減圧下吸気乾燥する。得られる油状／粘着性の液体を、15-20 分間緩やかに加熱して500ml 蒸留水に再び溶解する。この溶液を濾紙でろ過し、再び37 ℃を超えない溶液温度で吸気乾燥する。得られた産物を一夜減圧下乾燥すると、通常、白色のもろい固体が得られる。産物は、残った水のために油状または粘着性の固体として存在しうるので、その場合これを酢酸エチルに溶解し、吸気乾燥すると、産物が白色固体として得られる。
ついで、この塩を一定重量までシリカで減圧下乾燥した (72 h)。
収量：50% 以上
ミクロ分析：
【表２】
2007528382.tif 000031
【０３２９】
実施例１０
TRI 50C ナトリウム塩の UV/可視スペクトル
実施例９の操作から得られたナトリウム塩のUV/可視スペクトルを蒸留水中で 20 ℃で 190nm 〜 400nm で記録した。塩は λmax が 210 および 258nm であった。乾燥塩の重量を、吸光係数の計算のために測定した。λmax 258nm を使用した。吸光係数は以下の式により計算した：
A = εcl、A は吸光度
C は濃度
l は UV セルの経路長
ε は吸光係数
吸光係数：415
【０３３０】
実施例１１
TRI 50C ナトリウム塩の水溶解度
本実施例に使用する塩は、実施例９に記載の方法の改変法を用いて製造した。改変法は出発物質として 100mg の TRI 50c を使用した点、水に再溶解した産物を凍結乾燥により乾燥した点、およびろ過を0.2μm のろ紙により行った点が、記載の方法と相違する。塩は約 85% の R,S,R 異性体を含有すると考えられる。
【０３３１】
最大水溶解度を調べるために、25mgの乾燥塩を水中で37℃で振盪し、このサンプルをろ過し、UV スペクトルを測定した。塩は不溶性物質の白色残渣を残した。ナトリウム塩は比較的可溶性であったので、上記と同様にして50mg/mlで再溶解した。
25mg/mlで溶解したときの溶解度：44mM (25 mg/ml)
50mg/mlで溶解したときの溶解度：90mM (50 mg/ml)
【０３３２】
実施例１２
TRI 50C カリウム塩の調製
実施例５の方法により得られたCbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH (20.00g、38.1mM) を室温で攪拌しながらアセトニトリル (200ml) に溶解する。この溶液に KOH を 0.2M 溶液（蒸留水中） (190ml)として加える。得られる澄明の溶液を 2 時間室温で攪拌し、37 ℃を超えない温度で減圧下吸気乾燥する。得られる油状／粘着性の液体を、1L 蒸留水に37℃まで約 2 時間温め再び溶解する。この溶液を濾紙でろ過し、再び37 ℃を超えない溶液温度で吸気乾燥する。得られた産物を一晩減圧下乾燥すると、通常白色のもろい固体が得られる。
収量：14.45 mg
ついで、この塩を一定重量までシリカで減圧下乾燥した (72 h)。
ミクロ分析：
【表３】
2007528382.tif 000032
【０３３３】
実施例１３
TRI 50C カリウム塩の UV/可視スペクトル
実施例１２の操作から得られたカリウム塩のUV/可視スペクトルを蒸留水中で 20 ℃で 190nm 〜 400nm で記録した。TRI 50C および塩は λmax が 210 および 258nm であった。乾燥塩の重量を、吸光係数の計算のために測定した。λmax 258nm を使用した。吸光係数は以下の式を用いて計算した：
A = εcl、A は吸光度
C は濃度
l は UV セルの経路長
ε は吸光係数
吸光係数：438
【０３３４】
実施例１４
TRI 50C カリウム塩の水溶解度
本実施例に使用する塩は、実施例１２に記載の方法の改変法を用いて製造した。改変法は、出発物質として 100mg の TRI 50c を使用した点、水に再溶解した産物を凍結乾燥により乾燥した点、およびろ過を0.2μm ろ紙を用いて行った点が記載の方法と相違する。塩は約 85% の R,S,R 異性体を含有すると考えられる。
【０３３５】
最大水溶解度を調べるために、25mg の乾燥塩を水中で37℃で振盪し、サンプルをろ過し、UV スペクトルを測定した。塩は不溶性物質の白色残渣を残した。
25mg/mlで溶解したときの溶解度：29mM (16 mg/ml)
【０３３６】
実施例１５
TRI 50C 亜鉛塩の調製
水酸化亜鉛の相対的溶解度は、この水酸化物を用いて実施例６の操作により対応の TRI 50c 塩を調製すると均質の塩が形成されないものであった。したがって、新しい方法を開発して、本実施例および次の実施例に記載のように、亜鉛塩を製造した。
【０３３７】
TRI 50c ナトリウム塩 (2.24g、4.10mM) を蒸留水 (100ml) に室温で溶解し、塩化亜鉛のTHF液(4.27ml、0.5M) を攪拌しながら注意深く加えた。すぐに形成する白色沈殿物を濾取し、蒸留水で洗浄した。この固体を酢酸エチルに溶解し、蒸留水 (2 x 50ml) で洗浄した。有機溶液を吸気乾燥し、生じた白色固体を乾燥器中シリカで 3 日間、ミクロ分析の前に乾燥した。収量 1.20g。
【０３３８】
1H NMR 400MHz, δH(CD3OD) 7.23-7.33 (20H, m, ArH), 5.14 (4H, m, PhCH2O), 4.52 (4H, m, αCH), 3.65 (2H, m), 3.31 (12H, m), 3.23 (6H, s, OCH3), 2.96 (4H, d, J 7.8Hz), 2.78 (2H, m), 2.58 (2H, m), 1.86 (6H, m), 1.40 (10H, m).
【０３３９】
13C NMR 75MHz δC(CD3OD) 178.50, 159.00, 138.05, 137.66, 130.54, 129.62, 129.50, 129.07, 128.79, 128.22, 73.90, 67.90, 58.64, 58.18, 56.02, 38.81, 30.06, 28.57, 28.36, 25.29．
FTIR (KBr disc) νmax (cm-1) 3291.1, 3062.7, 3031.1, 2932.9, 2875.7, 2346.0, 1956.2, 1711.8, 1647.6, 1536.0, 1498.2, 1452.1, 1392.4, 1343.1, 1253.8, 1116.8, 1084.3, 1027.7, 916.0, 887.6, 748.6, 699.4, 595.5, 506.5.
【０３４０】
実施例１６
TRI 50C アルギニン塩の調製
実施例５の方法により得られたCbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH (20.00g、38.1mM) を室温で攪拌しながらアセトニトリル (200ml) に溶解する。この溶液にアルギニンを 0.2M 溶液（蒸留水中） (190ml)として加える。得られる澄明の溶液を 2 時間室温で攪拌し、37 ℃を超えない温度で減圧下にて吸気乾燥する。得られる油状／粘着性の液体を、2L 蒸留水に37℃まで約 2 時間温め再び溶解する。溶液を濾紙でろ過し、再び37 ℃を超えない溶液温度で吸気乾燥する。得られた産物を一晩減圧下乾燥すると、通常白色のもろい固体が得られる。
ついで、塩を一定重量までシリカで減圧下乾燥した (72 h)。
収量：10.54 g
【０３４１】
ミクロ分析
【表４】
2007528382.tif 000033
【０３４２】
実施例１７
TRI 50C アルギニン塩の UV/可視スペクトル
実施例１５の操作から得られた塩のUV/可視スペクトルを蒸留水中で 20 ℃で 190nm 〜 400nm で記録した。TRI 50C および塩は λmax が 210 および 258nm であった。乾燥塩の重量を、吸光係数の計算のために測定した。λmax 258nm を使用した。吸光係数は以下の式で計算した：
A = εcl、A は吸光度
C は濃度
l は UV セルの経路長
ε は吸光係数
吸光係数：406
【０３４３】
実施例１８
TRI 50C アルギニン塩の水溶解度
本実施例に使用した塩は、実施例１６に記載の方法の改変法を用いて製造した。改変法は、出発物質として 100mg の TRI 50c を使用した点、水に再溶解した産物を凍結乾燥により乾燥した点、ろ過を0.2μm ろ紙により行った点が記載の方法と相違する。塩は約85% の R,S,R 異性体を含有すると考えられる。
【０３４４】
最大水溶解度を調べるために、25mgの乾燥塩を水中で37℃で振盪し、このサンプルをろ過し、UV スペクトルを測定した。塩は不溶性物質の白色残渣を残した。
25mg/mlで溶解したときの溶解度：14mM (10 mg/ml)
【０３４５】
実施例１９
TRI 50C リシン塩の調製
実施例５の方法により得られたCbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH (20.00g、38.1mM) を室温で攪拌しながらアセトニトリル (200ml) に溶解する。この溶液にL-リシンを 0.2M 溶液（蒸留水中） (190ml)として加える。得られる澄明の溶液を 2 時間室温で攪拌し、37 ℃を超えない温度で減圧下吸気乾燥する。得られる油状/粘着性の液体を、3L 蒸留水に37℃まで約 2 時間温め再び溶解する。この溶液を濾紙でろ過し、再び37 ℃を超えない溶液温度で吸気乾燥する。得られた産物を一晩減圧下乾燥すると、通常白色のもろい固体が得られる。この産物は油状または粘着性の固体として存在することがあり（残ったの水のため）、その場合、続いてそれを酢酸エチルに溶解し、吸気乾燥し、白色固体として産物を得る。
ついで、塩を一定重量までシリカで減圧下乾燥した (72 h)。
収量：17.89 g
【０３４６】
ミクロ分析
【表５】
2007528382.tif 000034
【０３４７】
実施例２０
TRI 50C リシン塩の UV/可視スペクトル
実施例１９の操作から得られた塩のUV/可視スペクトルを蒸留水中で 20 ℃で 190nm 〜 400nm で記録した。TRI 50C および塩は λmax が 210 および 258nm であった。乾燥塩の重量を、吸光係数の計算のために測定した。λmax 258nm を使用した。吸光係数は以下の式により計算した：
A = εcl、A は吸光度
C は濃度
l は UV セルの経路長
ε は吸光係数
吸光係数：437
【０３４８】
実施例２１
TRI 50C リシン塩の水溶解度
本実施例に使用した塩は、実施例１９に記載の方法の改変法を用いて製造した。改変法は、出発物質として 100mg の TRI 50c を使用した点、水に再溶解した産物を凍結乾燥により乾燥した点、およびろ過を0.2μm ろ紙により行った点が記載の方法と相違する。塩は約 85% の R,S,R 異性体を含有すると考えられる。
【０３４９】
最大水溶解度を調べるために、25mgの乾燥塩を水中で37℃で振盪し、サンプルをろ過し、UVスペクトルを測定した。塩は不溶性物質の白色残渣を残した。
25mg/mlで溶解したときの溶解度：13mM (8.6 mg/ml)
【０３５０】
実施例２２
TRI 50C の N−メチル−D−グルカミン塩の調製
実施例５の方法により得られたCbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH (20.00g、38.1mM) を室温で攪拌しながらアセトニトリル (200ml) に溶解する。この溶液にN−メチル−D−グルカミンを 0.2M 溶液（蒸留水中） (190ml)として加える。得られる澄明の溶液を 2 時間室温で攪拌し、37 ℃を超えない温度で減圧下吸気乾燥する。得られる油状/粘着性の液体を、500ml蒸留水に約 20 分間軽く温めながら再び溶解する。この溶液を濾紙でろ過し、再び37 ℃を超えない溶液温度で吸気乾燥するか、あるいは凍結乾燥する。得られた産物を一晩減圧下乾燥すると、通常白色のもろい固体が得られる。
塩を一定重量までシリカで減圧下乾燥した (72 h)。
収量：21.31 g
【０３５１】
ミクロ分析
【表６】
2007528382.tif 000035
【０３５２】
実施例２３
TRI 50C のN−メチル−D−グルカミン塩の UV/可視スペクトル
実施例２２の操作から得られた塩のUV/可視スペクトルを蒸留水中で 20 ℃で 190nm 〜 400nm で記録した。TRI 50C および塩は λmax が 210 および 258nm であった。乾燥塩の重量を、吸光係数の計算のために測定した。λmax 258nm を使用した。吸光係数は以下の式により計算した：
A = εcl、A は吸光度
C は濃度
l は UV セルの経路長
ε は吸光係数
吸光係数：433
【０３５３】
実施例２４
TRI 50C N−メチル−D−グルカミン塩の水溶解度
本実施例に使用した塩は、実施例２２に記載の方法の改変法を用いて製造した。改変法は、出発物質として 100mg の TRI 50c を使用した点、水に再溶解した産物を凍結乾燥により乾燥した点、およびろ過を0.2μm ろ紙により行った点が記載の方法と相違する。塩は約 85% の R,S,R 異性体を含有すると考えられる。
【０３５４】
最大水溶解度を調べるために、25mgの乾燥塩を水中で37℃で振盪し、このサンプルをろ過し、UV スペクトルを測定した。塩は完全に溶解したように見られた。この塩は比較的可溶性であったので、上記と同様にして 50mg/ml で再溶解した。
25mg/mlで溶解したときの溶解性：35mM (25 mg/ml)
50mg/mlで溶解したときの溶解性：70mM (50 mg/ml)
【０３５５】
実施例２５
TRI 50C アルギニン塩の別法による調製
ややモル過剰の L-アルギニンを 0.2-0.3mmol TRI 50c の酢酸エチル溶液（10 ml）に加えると、アルギニン塩が簡単に形成される。溶媒を１時間後に蒸発せしめ、残渣を２回ヘキサンで倍散し、過剰のアルギニンを除去する。
【０３５６】
実施例２６
TRI 50C カルシウム塩の第１調製法
実施例５の方法で得られたCbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH (20.00g、38.1mM) を室温で攪拌しながらアセトニトリル (200ml) に溶解する。この溶液に Ca(OH)2 を 0.1M 溶液（蒸留水中） (190ml)として加える。得られる澄明の溶液を 2 時間室温で攪拌し、37 ℃を超えない温度で減圧下にて吸気乾燥する。得られる産物は白色のもろい固体である。
ついで、塩を一定重量までシリカで減圧下乾燥した (72 h)。
収量 17.69g
【０３５７】
実施例２７
TRI 50C カルシウム塩の別法の第２調製法
50.0 TRI 50c (95.2 mmol) を 250ml アセトニトリルに攪拌しながら室温で溶解し、ついで氷浴で冷やした。この氷冷溶液に3.5 g (47.6 mmol) 水酸化カルシウムの水性懸濁液 100 ml を滴下し、2.5 時間室温で攪拌し、ろ過し、得られた混合物を、35 ℃を超えない温度で蒸発により乾燥した。澄明の淡黄色油状残渣を 200 ml アセトンに再溶解し、蒸発により乾燥した。アセトンでの再溶解操作をもう一回繰り返し、無色泡状物を得た。
【０３５８】
この泡状物を 100 ml アセトンに再溶解し、濾過し、1100 ml 石油エーテル 40/60 および 1100 ml ジエチルエーテルの氷冷溶液に滴下した。得られた無色の沈澱を濾取し、石油エーテル 40/60 で２回洗浄し、高い減圧下で乾燥すると、無色固体49.48 g (92%) が得られたが、これはHPLC 測定によると純度 99.4% であった。
【０３５９】
実施例２８
TRI 50C カルシウム塩の UV/可視スペクトル
実施例２６の操作から得られた塩の UV/可視スペクトルを蒸留水中で 20 ℃で 190nm 〜 400nm で記録した。TRI 50C および塩は λmax が 210 および 258nm であった。ついで、乾燥塩の重量を吸光係数の計算のために測定した。λmax 258nm を使用した。吸光係数は以下の式により計算した：
A = εcl、A は吸光度
C は濃度
l は UV セルの経路長
ε は吸光係数
吸光係数：955
【０３６０】
実施例２９
TRI 50C カルシウム塩の水溶解度
本実施例に使用した塩は、実施例２７に記載の方法の改変法を用いて製造した。改変法は、出発物質として100mgのTRI 50cを使用した点、水に再溶解した産物を凍結乾燥により乾燥した点、およびろ過を0.2μm ろ紙によりを行った点が記載の方法と相違する。塩は約 85% の R,S,R 異性体を含有すると考えられる。
【０３６１】
最大水溶解度を調べるために、25mgの乾燥塩を水中で37℃で攪拌し、このサンプルをろ過し、UV スペクトルを測定した。塩は不溶性物質の白色残渣を残した。
25mg/mlで溶解したときの溶解度：5mM (5 mg/ml)
【０３６２】
実施例３０
TRI 50C カルシウム塩のインビトロ活性
TRI 50C カルシウム塩をヒトα-トロンビンの阻害薬として、アミド分解アッセイ（J,Deadman et al, J. Med. Chem. 38: 15111-1522, 1995, TRI 50b について Ki 値 7nM を報告する）により評価した。
【０３６３】
ヒトα-トロンビンの阻害は、それゆえ、３種の異なる濃度の色素原基質 S-2238 の酵素触媒加水分解の阻害により測定した。
【０３６４】
200 μl のサンプルまたは緩衝液および 50 μl の S-2238 を37℃で１分間インキュベートし、50μlのヒトα-トロンビン(0.25 NIHμ/ml) を加えた。阻害および非阻害反応の初速度を 4.5nm で記録した。吸光度の増加を Lineweaver および Burke の方法にしたがいプロットした。Km および見かけ Km を測定し、この関係を用いて Ki を計算した。
2007528382.tif 000036
【０３６５】
使用した緩衝液は、0.1M リン酸ナトリウム、0.2 NaCl、0.5% PEG および 0.02% アジ化ナトリウムを含有し、オルトリン酸で pH 7.5 に調節した。
【０３６６】
サンプルは DMSO に溶解した化合物からなる。
【０３６７】
Ki 測定についてのさらなる記述は、Dixon, M and Webb, E. C., ”Enzymes”, third edition, 1979, Academic Press,（出典明示により本明細書の一部とする）を参照のこと。
【０３６８】
TRI 50c カルシウム塩が Ki 10nM を有することを観測した。
【０３６９】
実施例３１
TRI 50C のマグネシウム塩の調製
TRI 50c (1.00g、1.90mM) をメタノール (10ml) に溶解し、室温で攪拌した。この溶液にマグネシウムメトキシド (Mg(CH3O)2) のメタノール液 (1.05m、l7.84 %) を加えた。この溶液を２時間室温で攪拌し、ろ過し、吸気して5ml とした。ついで水 (25ml) を加え、溶液を吸気乾燥して、白色固体を得た。これをミクロ分析にかける前に 72 時間シリカで乾燥した。収量 760mg。
【０３７０】
1H NMR 300MHz, δH(CD3C(O)CD3) 7.14-7.22 (20H, m),6.90 (2H,m),4.89 (4H, m, PhCH2O), 4.38 (2H,m), 3.40 (2H, br s),2.73-3.17 (20H, 広い非分割多重項), 1.05-2.10 (16H, 広い非分割多重項)
【０３７１】
13C NMR 75MHz δC(CD3C(O)CD3) 206.56, 138.30, 130.76, 129.64, 129.31, 129.19, 129.09, 128.20, 128.04, 74.23, 73.55, 67.78, 58.76, 56.37, 56.03, 48.38, 47.87, 39.00, 25.42, 25.29．
FTIR (KBr disc) νmax (cm-1) 3331.3, 3031.4, 2935.3, 2876.9, 2341.9, 1956.1, 1711.6, 1639.9, 1534.3, 1498.1, 1453.0, 1255.3, 1115.3, 1084.6, 1027.6, 917.3, 748.9, 699.6, 594.9, 504.5, 467.8.
【０３７２】
実施例３２
TRI 50Cの溶解度
実施例５の操作で得られた TRI 50c のUV/可視スペクトルおよび溶解度を、塩について前述したようにして得た。TRI 50c の溶解度は、50mg/ml で溶解したとき、8mM (4mg/ml)であった。
【０３７３】
実施例３３
(R,S,R) TRI 50Cのナトリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩および亜鉛塩についての分析
下記の塩を、ボロネート：金属の化学量 n:1（n は金属の価）を用い、実施例８、１１、１４、１８、２１、２４および２９に記載の塩の調製に用いたものより高いキラル純度の (R,S,R) TRI 50c を使用して調製した。
【０３７４】
【表７】
2007528382.tif 000037
【０３７５】
【表８】
2007528382.tif 000038
【０３７６】
【表９】
2007528382.tif 000039
【０３７７】
【表１０】
2007528382.tif 000040
【０３７８】
注：三角形型の酸ボロネートをミクロ分析の計算に使用する。実施例１１で試験した塩の方がキラル純度が低いので、実施例１１の方がナトリウム塩の溶解度が低く報告されたと思われる。
【０３７９】
結論
亜鉛塩、カルシウム塩およびマグネシウム塩は、それぞれ１の金属イオンに対して２分子の TRI 50c の化学量でもって調製した。カルシウム塩およびマグネシウム塩に見られる値は、この1:2化学量について計算したものと近く、それに一致する。亜鉛塩については、過剰の亜鉛が見られた；しかし、亜鉛塩はかなりの割合で酸ボロネートを含む。ナトリウム塩は、１の金属イオンに対して１分子の TRI 50c の化学量でもって調製した。ナトリウム塩にみられる値は、この 1:1 化学量で計算したものに近く、それに一致する。
【０３８０】
実施例３４
安定性
乾燥の前後における TRI 50c ならびにそのナトリウム塩およびリシン塩についてのアッセイ
１．結果の表
【表１１】
2007528382.tif 000041
【０３８１】
酸の純度は乾燥処理により低下したが、塩の純度はあまり影響を受けなかった；ナトリウム塩の純度は有意に低下しなかった。しかし、応答因子が大きく相違すると、実際の不純レベルは低下するであろう。
【０３８２】
２．分析操作
２.１. サンプルの調製
TRI 50c およびその Na、Li および Lys 塩を HPLC バイアル中に秤量し、乾燥器中でリン酸ぺントキシドとともに１週間保存した。サンプル分析のために、5 mg の乾燥および非乾燥材料を 5 ml 容量フラスコに秤量し 1 mL アセトニトリルに溶解し、ミネラル不含水で 5 mL とした。
【０３８３】
３．データの評価
定量評価は HPLC-PDA 法により行った。
【０３８４】
４. 分析パラメーター
４.１. 装置およびソフトウエアー
オートサンプラー                Waters Alliance 2795
ポンプ                          Waters Alliance 2795
カラムオーブン                  Waters Alliance 2795
検出                            Waters 2996 diode array, MS-ZQ single quad
ソフトウエアーバージョン        Waters Millennium  Release 4.0
【０３８５】
４.２.  静止相
分析カラム ID                    S71
材料                             X-Terra（商標） MS C18、5μm
サプライアー                     Waters, Eschborn, Germany
大きさ                           150 mm x 2.1 mm (長さ、内直径)
【０３８６】
４.３.  動相
水相：A: H2O + 0.1%
有機相：C: ACN
勾配条件：
【表１２】
2007528382.tif 000042
【０３８７】
本実施例は、開示の塩、特に金属塩、例えばアルカリ金属塩が、酸、特にTRI 50c より安定であることを示す。
【０３８８】
実施例３５
TRI 50c マグネシウム塩のトロンビン阻害薬としてのインビトロアッセイ
トロンビンアミド分解アッセイ
TRI 50c マグネシウム塩（TRI 1405) をトロンビンアミド分解アッセイで試験した。
【０３８９】
試薬：
アッセイ緩衝液：
100mM リン酸ナトリウム
200mM NaCl (11.688g/l)
0.5% PEG 6000 (5g/l)
0.02% アジ化ナトリウム
pH 7.5
【０３９０】
色素原基質 S2238 を 4mM にて水に溶解した (25mg + 10ml)。5μM にてアッセイで使用するために、アッセイ緩衝液で 50μM まで希釈した (S2238 は H-D-Phe-Pip-Arg-pNA)。
【０３９１】
HTI から Cambridge Bioscience 経由でトロンビンを取得し、アッセイ緩衝液で 1mg/ml のアリコートとした。アッセイ緩衝液で 100n/ml に希釈し、ついでアッセイに使用するためにさらに１／３にした。
【０３９２】
アッセイ：
100μl アッセイ緩衝液
50μl 5μg/ml トロンビン
20μl 媒体または化合物溶液
5 分間、37 ℃
20μl 50μM S2238
405nm、37 ℃で 10 分間読み、Vmax を記録
【０３９３】
結果および考察
本アッセイにおいて、TRI 50c のマグネシウム塩は外部対照としての TRI 50b と同じ活性を示す。
【０３９４】
実施例３６
TRI 50c ナトリウム塩の静脈内投与
TRI 50c ナトリウム塩の薬物動態 (PK) および薬力学 (PD) をビーグル犬に静脈内投与後に調べた。
【０３９５】
PD を自動凝固測定器でトロンビン時間および APTT として決定した。血漿濃度は LCMS/MS 法で測定した。
【０３９６】
TRI 50c ナトリウム塩 (108.8g) を 0.9% 塩化ナトリウム (100ml) に溶解し、1.0 mg/kg (1.0 mg/kg、30 秒)を静脈内投与した。血液サンプルを 3.8% クエン酸三ナトリウム (1+8) に投与前および投与後 2、5、10、20、30 分、ついで 1、2、3、4、6、8、12、24 時間で採取した。血漿を遠心で調製し、分析まで-20 ℃で保存した。
【０３９７】
結果
ナトリウム塩はよく耐容され、試験の全期間中有害事象はなかった。
【０３９８】
雄および雌の犬の応答は薬物動態 C max: 2 分で類似していた（トロンビン時間が基準時の 14.3 秒から 154 秒に上昇した)。トロンビン時間は投与１時間で 26 秒であった。
【０３９９】
投与量 1.0 mg/kg i.v. でナトリウム塩投与を受けた犬において、APTT とトロンビン凝血時間との間の治療可能比が特に良好であった。トロンビン凝血時間は投与２分後に基準時の 10.8 倍に（14.3 秒から 154.4 秒に）上昇し、一方 APTT の上昇は 1.3 倍に（投与後 19 秒から 25 秒に)過ぎなかった。
【０４００】
実施例３７
TRI 50cカルシウム塩の残留n-ヘプタン
実施例１および３の方法にしたがって製造した塩をヘッドスペースガスクロマトグラフィーによって試験した。データを下記に示す：
【表１３】
2007528382.tif 000043
【表１４】
2007528382.tif 000044
【表１５】
2007528382.tif 000045
【０４０１】
実施例３８
HPLCクロマトグラム
実施例１、２および３の方法で製造したTRI 50cモノナトリウム塩および実施例１、２および４の方法で製造したTRI 50cヘミカルシウム塩を、HPLCクロマトグラフィーにより分析した。
【０４０２】
１．方法
１．１  装置およびソフトウエア
オートサンプラー            Waters Alliance 2795
ポンプ                      Waters Alliance 2795
カラムオーブン              Waters Alliance 2795
検出                        Waters 2996 diode array, MS-ZQ single quad
ソフトウエア・バージョン    Waters Millennium 4.0
【０４０３】
１．２  静止相
分析カラム ＩＤ                    S-71
材料                               XTerra（商標） MS C18, 5μm
供給元                             Waters, Eschborn, Germany
寸法                               150 mm x 2.1 mm (長さ,ＩＤ)
プレ-カラムＩＤ                    プレ-カラムは使用しない
【０４０４】
Xterra MS C18, ５μm は、2002/2003年にWaters Corporation, 34 Maple Street, Milford, MA 01757, US および地方の営業所で供給されたカラム充填材である。それは、５μm サイズ、１２５Å孔サイズおよび１５.５％炭素添加の球状粒子からなるハイブリド有機／無機粒子を含む。
【０４０５】
１．３  動相
水相：        A:H2O+0.1% HCOOH
有機相：      C:ACN
H2O= H2O（Ultra Clear water purification systemによる）
ACN= 勾配等級アセトニトリル
勾配条件
【表１６】
2007528382.tif 000046
【０４０６】
１．４  機器のパラメーター
流速                        0.5 mL/分
温度                        40±5℃
HPLCコントロール        Waters Millennium Release 4.0
計算                        Waters Millenium 4.0
【０４０７】
２．  パラメーター
２．１  波長/保持時間/応答因子
表：保持および検出パラメーター（k' F：0.5 mL/分, t0 = 0.9 mL/分)
【表１７】
2007528382.tif 000047
【０４０８】
２．２  直線性
直線範囲4000-10μg/mL (検出UV 258 nm)
【表１８】
2007528382.tif 000048
【０４０９】
直線方程式パラメーター：
Y   = 6.75e+002X - 8.45e+003
r   = 0.99975
r2  = 0.99950
【０４１０】
直線範囲10−0.10μg/mL (検出SIR m/z 508.33)
表：直線データ SIR 508.33
【表１９】
2007528382.tif 000049
【０４１１】
方程式パラメーター
Y  = 2.27e+007X + 1.69e+006
r  = 0.99958
r2 = 0.99916
【０４１２】
２．３  定量限界
定量限界を、シグナル対ノイズ比基準、S/N＞19を用いて決定した。
ＵＶ258 nm：10μg/mL
Ｍ／ｚ 508.3:0.1 μg/mL
【０４１３】
２．４  精度
【表２０】
2007528382.tif 000050
【０４１４】
２．５  ロバスト性
表：ロバスト性データ；標準 250μg/mL水溶液 (＜1％ ACN含有)
【表２１】
2007528382.tif 000051
【０４１５】
引用文献
１．ICH HARMONISED TRIPARTITE GUIDELINE.  TEXT ON VALIDATION OF ANALYTICAL PROCEDURES Recommended for Adoption at Step 4 of the ICH Process on 27 October 1994 by the ICH Steering Committee
２．FDA Reviewer Guidance.  Validation of chromatographic methods.  Center forDrug Evaluation and Research.  Nov. 1994
３．USP 23.  <621> Chromatography
４．L. Huber.  Validation of analytical Methods.  LC-GC International Feb. 1998
５．Handbuch Validierung in der Analytik.  Dr. Stavros Kromidas (Ed.) Wiley-VCH Verlag. 2000.  ISBN 3-527-29811-8
【０４１６】
３．結果
３．１  サンプル名：TRI 50cモノナトリウム塩
注入容量：10μL
名前        保持時間        面積            面積            ピーク高
(分)          ％            [μAU's]            μAU
TRI 50c      12.136      100.0000        604.27228          32.05369
【０４１７】
３．２  サンプル名：TRI 50c ヘミカルシウム塩
注入容量：１０μL
名前            保持時間        面積          面積          ピーク高
(分)            ％        [μAU's]          μAU
TRI 50c          12.126        100.0000    597.11279        32.29640
【０４１８】
開示の方法を、C-B結合分解産物を実質的に含まない塩、特にHPLCにより、具体的には実施例３８の方法により検出しうる量でこのような産物を含有しない塩を得るために使用した。開示の方法を、不純物 Iを実質的に含まない塩、特にHPLCにより、具体的には実施例３８の方法により検出しうる量で不純物 Iを含まない塩を得るために使用した。開示の方法を、実質的に不純物 IVを含まない塩、特にHPLCにより、具体的には実施例３８の方法により検出しうる量の不純物 IVを含有しない塩を得るために使用した。
【０４１９】
実施例３９
ジアステレオマー過剰の決定
TRI 50b粗製物は、３つのキラル中心を含む。そのうち２つは鏡像異性的に純粋なアミノ酸((Ｒ)-Phe および(Ｓ)-Pro)の使用によって固定される。３番目のキラル中心は合成中に形成される。好ましいエピマーは、所望のTRI 50b、異性体Ｉ（R,S,R-TRI 50b）である。TRI 50bの両エピマーは、HPLC方法によって明確にベースライン分離され、TRI 50bのジアステレオマー過剰(de)を決定できる。
【０４２０】
TRI 50dはHPLC純度決定のために用いた条件下では安定でなかったが、サンプル調製時にTRI 50cに迅速に分解するので、TRI 50dとTRI 50cは同じHPLCトレースを示す。
【０４２１】
TRI 50cの２つの異性体は、HPLCにおいてベースライン分離されないが、両異性体は明確に認識できる。これは、TRI 50b粗製物 (両異性体の混合物)をフェニルボロン酸でTRI 50c粗製物に変換した場合に明らかとなる。TRI 50cの両異性体は、前述のTRI 50b粗製物におけるのとほぼ同じ関係でHPLCにおいて観察される。
【０４２２】
TRI 50b粗製物からのTRI 50dの合成の際、一つのジアステレオ異性体のみが沈殿する。この場合、HPLCは、TRI 50cについて１つのピークのみを示し、そこに非常に小さなフロンティングが観察される。ジクロロメタン/ジエチルエーテルから沈殿させると、このフロンティングが効率的に除去される。異性体IIの除去レベルは、このHPLC方法によって定量できない。したがって、再沈殿前のサンプルと１〜２回再沈殿させたサンプルとをピナコールでエステル化し、得られたTRI 50bのサンプルをHPLCにより分析した。こうして、95.4％の de (ジアステレオマー過剰）を、粗製物サンプルについて決定した。再沈殿したサンプルは99.0％の de を生じ、最終的に２回再沈殿したサンプルは99.5％の de を示した。
【０４２３】
これらの結果は明らかに、異性体Iは沈殿しやすく、一方異性体IIは溶液中に残ることを示す。
【０４２４】
実施例４０
ヒトへの静脈内投与
試験プロトコール
TGN 255、すなわちTRI 50cのモノナトリウム塩を、18人の健常男性被験体に単回静脈内投与として静脈内投与した(無作為二重盲検プラセボ試験)。試験は3つの群から構成され、各群男性6人であった。各群5人の男性に活性成分を与え、1人にプラセボを与えた。
【０４２５】
I.V.投与量の合計は以下である：
・82mg (7mg 静脈内ボーラス (30秒間)、続いて点滴、25mg/h、3時間)。
・130mg (10mg 静脈内ボーラス (30秒間) 続いて点滴、40mg/h、3時間) 。
・120mg (点滴、40mg/h、3時間) 。
【０４２６】
試験結果
1)  いずれの安全性評価においても臨床的に有意な結果は検出されなかった。24時間の試験期間中いずれのいずれの投与量のTGN 255についても一般または心血管性の副作用は観察されなかった。
【０４２７】
2)  TGN 255の体内動態は、点滴終了後30分以内に生じる短い分布相を伴うパターンにしたがい、最終的全除去半減期約4時間にて血漿から除去された。
【０４２８】
3)  TGN 255の静脈内点滴により、トロンビン時間 (TT)の迅速かつ用量依存的な増加が誘導された。点滴の中断後30分以内に臨床的に有意な抗凝固が期待できないレベルまでの低下が見られた。
【０４２９】
実施例４１
僧帽弁の修復
静脈内の直接的トロンビン 阻害薬 TGN 255 (TRI 50c モノナトリウム塩) を低温CPBを受けているイヌにおいて評価した。意識のあるイヌにおける用量範囲研究に続いて、6匹のビーグルをCPBにつなぎ、模擬僧帽弁修復を行った。トロンビン凝固時間 (TT)、活性化部分トロンボプラスチン時間(APTT)、活性凝固時間 (ACT)、エカリン（ecarin）凝固時間 (ECT)、全血トロンビン凝固時間、血小板数および機能試験を含む動的凝固マーカーの範囲を測定した。さらに、手術前および手術後の心エコー図および手術中の血液消失を評価した。TGN 255は、バイパスおよび手術中ほとんど出血なく優れた凝固を示した。TGN 255の半減期が短いことは手術付近および手術後の期間にとって有利であり、それゆえTGN 255はCPB中に拮抗薬の必要なく臨床的抗凝固を提供する能力を有する。心エコー検査により、バイパス法後の心臓機能は良好であることが示された。本研究の結果は、TGN 255が冠動脈バイパス設定に非常に適する抗凝固薬プロファイルを提供することを示す。その予測可能な抗凝固効果および制御された作用時間のため、TGN 255はオンポンプおよびオフポンプの冠動脈バイパス法における将来性を有する。
【０４３０】
実施例４２  比較安定性
TRI 50c ナトリウム塩およびTRI 50cナトリウム塩カルシウム塩の安定性を、同様の設計および条件の研究により調べた。いずれの研究でも、活性医薬成分は、グリップで密閉される二重バックに入れ、PE/PPスクリューキャップで閉まるシリンダー内部に保存した。この包装は水分の移動が可能であり、本研究は水分および酸素のこれらTRI 50c塩の安定性に対する作用を調べられるよう設計した。
【０４３１】
6ヶ月保存後に観察された結果を以下の表にまとめる。
【表２２】
2007528382.tif 000052
【０４３２】
考察
本実施例のデータは、ボロン酸のカルシウム塩が対応のナトリウム塩よりも安定であることを示す。同じ利点が亜鉛によって提供されうると考えられる。
＊                ＊                ＊                    
【０４３３】
以上から明らかなように、本開示は医薬目的に有用であり、かつ以下の1以上の特徴を有するボロン酸塩を提供する：(1) 改善された加水分解安定性; (2) 改善された脱ホウ素化に対する安定性；および(3)先行技術に示されていないいずれかの事象。
【０４３４】
医薬組成物のための活性成分の選択は複雑な作業であり、生物学的性質 (バイオアベイラビリティを含む) だけでなく、処理、製剤化および保存に望ましい物理化学的性質も考慮する必要がある。バイオアベイラビリティ自身は様々な因子に依存し、それには通常インビボ安定性、溶媒和特性および吸収特性が含まれ、それらは各々潜在的に複数の物理的、化学的および／または生物学的挙動に依存する。
【０４３５】
本開示は以下の項の主題を含む：
１．冠動脈バイパス移植 (CABG) 法中の血栓症または望ましくない凝固を予防するための医薬の製造のための、式 (I)のボロン酸およびその塩、プロドラッグならびにプロドラッグの塩から選択される化合物の使用：
【化２８】
2007528382.tif 000053
［式中、
Yは、アミノボロン酸残基 −NHCH(R9)-B(OH)2 とともに、トロンビンの基質結合部位への親和性を有する疎水性部分を含む；
R9は、1 以上のエーテル結合が介在し、その酸素および炭素原子の総数が3、4、5または6である直鎖アルキル基である、またはR9は、−(CH2)m-W であり、ここでm は 2、3、4または5であり、Wは-OHまたはハロゲン (F、Cl、BrまたはI）である］。
【０４３６】
２．R9がアルコキシアルキルである、項１の使用。
【０４３７】
３．YCO-が、トロンビンのS2サブサイトに結合するアミノ酸を含み、該アミノ酸がトロンビンのS3サブサイトに結合する部分にＮ末端で結合している、項１または２の使用。
【０４３８】
４．Y-が、トロンビンのS3およびS2結合部位に結合するN末端保護されていてもよいジペプチド残基であり、酸中のペプチド結合が、鎖内および／または環内に窒素、酸素または硫黄を含有してもよく、かつハロ、ヒドロキシおよびトリフルオロメチルから選択される置換基で置換されていてもよい C1-C13ヒドロカルビル基により独立してN置換されていてもよい、項１または２の使用。
【０４３９】
５．該ジペプチドがN末端保護されており、酸中のすべてのペプチド結合が非置換である、項４の使用。
【０４４０】
６．S3結合アミノ酸残基がR-配置であり、S2結合残基がS-配置であり、かつフラグメント−NHCH(R9)-B(OH) がR-配置である、項４または５の使用。
【０４４１】
７．ボロン酸のトロンビンに対するＫｉが約100 nM以下である、項１−６のいずれかの使用。
【０４４２】
８．ボロン酸のトロンビンに対するＫｉが約20 nM以下である、項７の使用。
【０４４３】
９．ボロン酸が以下の式 (II)である、項１の使用：
【化２９】
2007528382.tif 000054
［式中、
Xは、H (NH2 を形成する) またはアミノ保護基である；
aa1は、20を超えない炭素原子を含有するヒドロカルビル側鎖を有し、かつ13までの炭素原子を有する少なくとも１の環状基を含むアミノ酸である；
aa2は、4〜6員環を有するイミノ酸である；
R1は、式 -(CH2)s-Z の基であり、ここでsは2、3または4であり、Zは-OH、-OMe、-OEtまたはハロゲン (F、Cl、BまたはI)である］。
【０４４４】
１０．aa1が Phe、Dpaおよびそれらの全体的または部分的水素化アナログから選択される、項９の使用。
【０４４５】
１１．aa1が Dpa、Phe、DchaおよびChaから選択される、項９の使用。
【０４４６】
１２．aa1が R-配置である、項９−１１のいずれかの使用。
【０４４７】
１３．aa1が (R)-Phe (すなわち、D-Phe) または (R)-Dpa (すなわち、D-Dpa) である、項９の使用。
【０４４８】
１４．aa1が (R)-Phe である、項９の使用。
【０４４９】
１５．aa2が以下の式 (IV)のイミノ酸残基である、項９−１４のいずれかの使用：
【化３０】
2007528382.tif 000055
［式中、R11は -CH2-、-CH2-CH2-、-S-CH2-、-S-C(CH3)2-または−CH2-CH2-CH2-であり、環が5または6員のとき、その基は１以上の-CH2-基において1〜3のC1-C3 アルキル基により置換されていてもよい］。
【０４５０】
１６．aa2がS-配置である、項１５の使用。
【０４５１】
１７．aa2が(S)-プロリン残基である、項１５の使用。
【０４５２】
１８．aa1-aa2が (R)-Phe-(S)-Pro (すなわち、D-Phe-L-Pro) である、項９の使用。
【０４５３】
１９．R1が2-ブロモエチル、2-クロロエチル、2-メトキシエチル、3-ブロモプロピル、3-クロロプロピルまたは3-メトキシプロピルである、項９から１８のいずれかの使用。
【０４５４】
２０．R1が3-メトキシプロピルである、項９−１８のいずれかの使用。
【０４５５】
２１．XがR6-(CH2)p-C(O)-、R6-(CH2)p-S(O)2-、R6-(CH2)p-NH-C(O)-、またはR6-(CH2)p-O-C(O)- ［式中、ｐは0、1、2、3、4、5または6であり、R6はHまたは5〜13員環状基であり、該5〜13員環状基は、ハロゲン、アミノ、ニトロ、ヒドロキシ、C5-C6環状基、C1-C4アルキル、および鎖内にOを含有する、および／または該環状基に鎖内のOを介して連結するC1-C4アルキルから選択される１、２または３の置換基に置換されていてもよく、前記アルキル基はハロゲン、アミノ、ニトロ、ヒドロキシおよびC5-C6環状基から選択される置換基により置換されていてもよい］である、項９−２０のいずれかの使用。
【０４５６】
２２．該5〜13員環状基が芳香族またはヘテロ芳香族である、項２１の使用。
【０４５７】
２３．該5〜13員環状基がフェニルまたは６員ヘテロ芳香族基である、項２２の使用。
【０４５８】
２４．XがR6-(CH2)p-C(O)-またはR6-(CH2)p-O-C(O)-であり、ｐが0または1である、項９−２０のいずれかの使用。
【０４５９】
２５．Ｘがベンジルオキシカルボニルである、項９−２０のいずれかの使用。
【０４６０】
２６．ボロン酸が以下の式 (VIII)である、項９の使用：
X-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-Mpg-B(OH)2          (VIII)。
【０４６１】
２７．化合物が塩基付加塩である、項１−２６のいずれかの使用。
【０４６２】
２８．塩がボロン酸に由来するボロネートイオンおよび一価対イオンを含む、項２７の使用。
【０４６３】
２９．塩がペプチドボロン酸とアルカリ金属または強塩基性有機窒素含有化合物、例えばグアニジンアナログまたはアミン、との塩を含む、項２７の使用。
【０４６４】
３０．塩がボロン酸と金属との塩である、項２７の使用。
【０４６５】
３１．塩がボロン酸とアルカリ金属、アミノ糖、グアニジン、または以下の式 (XI) のアミンとの塩を含む、項２７の使用：
【化３１】
2007528382.tif 000056
［式中、nは1〜6 であり、R2はH、カルボキシラートまたは誘導体化カルボキシラートであり、R3はH、C1-C4アルキル、または天然もしくは非天然のアミノ酸の残基である］。
【０４６６】
３２．塩がボロン酸とグアニジンまたは以下の式 (XI) のアミンとの塩を含む、項２７の使用：
【化３２】
2007528382.tif 000057
［式中、nは1〜6 であり、R2はH、カルボキシラートまたは誘導体化カルボキシラートであり、R3はH、C1-C4アルキルまたは天然もしくは非天然のアミノ酸の残基である］。
【０４６７】
３３．塩がボロン酸のグアニジン塩を含む、項３２の使用。
【０４６８】
３４．塩がボロン酸と L-アルギニンまたは L-アルギニンアナログとの塩を含む、項３３の使用。
【０４６９】
３５．L-アルギニンアナログが、D-アルギニンまたはホモアルギニンの D-もしくはL- 異性体、アグマチン[(4-アミノブチル)グアニジン]、NG-ニトロ-L-アルギニンメチルエステルまたは2-アミノピリミジンである、項３４の使用。
【０４７０】
３６．塩がボロン酸と以下の式 (VII) のグアニジンとの塩を含む、項３３の使用：
【化３３】
2007528382.tif 000058
［式中、nは1〜6であり、R2はH、カルボキシラートまたは誘導体化カルボキシラートであり、R3はH、C1-C4 アルキルまたは天然もしくは非天然のアミノ酸の残基である］。
【０４７１】
３７．nが2、3または4である、項３６の使用。
【０４７２】
３８．誘導体化カルボキシラートがC1-C4アルキルエステルまたはアミドを形成する、項３６または３７の使用。
【０４７３】
３９．式 (VII) の化合物がL-配置である、項３６−３８のいずれかの使用。
【０４７４】
４０．塩がペプチドボロン酸のL-アルギニン塩を含む、項３３の使用。
【０４７５】
４１．塩がボロン酸と式 (IX) のアミンとの塩を含む、項３２の使用。
【０４７６】
４２．n が 2、3 または 4 である、項４１の使用。
【０４７７】
４３．誘導体化カルボキシラートがC1-C4アルキルエステルまたはアミドを形成する、項４１または４２の使用。
【０４７８】
４４．式 (IX) のアミンが L-配置である、項４１−４３のいずれかの使用。
【０４７９】
４５．ボロン酸のL-リシン塩を含む、項４１の使用。
【０４８０】
４６．塩がボロン酸のアルカリ金属塩を含む、項２７の使用。
【０４８１】
４７．アルカリ金属がカリウムである、項４６の使用。
【０４８２】
４８．アルカリ金属がナトリウムである、項４６の使用。
【０４８３】
４９．アルカリ金属がリチウムである、項４６の使用。
【０４８４】
５０．塩がボロン酸のアミノ糖塩を含む、項２７の使用。
【０４８５】
５１．アミノ糖が開環糖である、項５０の使用。
【０４８６】
５２．アミノ糖がグルカミンである、項５１の使用。
【０４８７】
５３．アミノ糖が環状アミノ糖である、項５０の使用。
【０４８８】
５４．アミノ糖がN非置換である、項５０−５３のいずれかの使用。
【０４８９】
５５．アミノ糖が１または２の置換基によりN置換されている、項５０−５３のいずれかの使用。
【０４９０】
５６．置換基または各置換基がヒドロカルビル基である、項５５の使用。
【０４９１】
５７．置換基または各置換基がアルキルおよびアリール部分からなる群より選択される、項５５の使用。
【０４９２】
５８．置換基または各置換基が、C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7およびC8アルキル基からなる群より選択される、項５７の使用。
【０４９３】
５９．単一の N置換基が存在する、項５５−５８のいずれかの使用。
【０４９４】
６０．グルカミンが N−メチル−D−グルカミンである、項５０の使用。
【０４９５】
６１．塩が、ペプチドボロン酸から誘導されるボロネートイオンを含み、一価の負電荷を有するボロネートイオンに一致する化学量を有する、項２７−６０のいずれかの使用。
【０４９６】
６２．塩が酸塩（すなわち、１つのB-OH基がプロトン化されたままの塩）から実質的になる、項２７−６０のいずれかの使用。
【０４９７】
６３．塩が、ペプチドボロン酸に由来するボロネートイオンおよび対イオンを含み、かつ単一のタイプの対イオンを有する塩から実質的になる、項２７−６２のいずれかの使用。
【０４９８】
６４．冠動脈バイパス移植術中の抗凝固薬として使用するための医薬の製造のための、項１−６３のいずれかに規定される化合物の使用。
【０４９９】
６５．心肺バイパス機がその方法または手術中に使用されない、前述のいずれかの項の使用。
【０５００】
６６．心肺バイパス機がその方法または手術中に使用される、前述のいずれかの項の使用。
【０５０１】
６７．患者における手術中の望ましくない凝固または血栓症を予防する方法であって、患者または患者につながれた体外血液回路に項１−２６のいずれかに規定されるボロン酸んらびにその酸付加塩およびプロドラッグから選択される化合物を投与することを含む方法。
【０５０２】
６８．化合物が静脈内投与される、項６７の方法。
【国際調査報告】
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