(57)【要約】  式(I):2007512301.tif 000071（式中、R1 フルオロ、クロロ、C1−3アルキル及びC1−3アルコキシから選択され、R2−X−はメチル、メトキシメチル及び2007512301.tif 000072から選択され、n は0、1又は2である。）の化合物、又はその塩、プロドラッグ若しくは溶媒和物が記載される。GLK活性剤としての当該化合物の使用、当該化合物を含有する医薬組成物、及び当該化合物の製造方法も記載する。
2007512301.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(I):
【化１】
2007512301.tif 000060
（式中、R1はフルオロ、クロロ、C1-3アルキル及びC1-3アルコキシから選択され、R2-X-はメチル、メトキシメチル及び
【化２】
2007512301.tif 000061
から選択され、nは0、1又は２である。）の化合物、その塩、プロドラッグ又は溶媒和物。
【請求項２】
式(Ia)
【化３】
2007512301.tif 000062
（式中、R1及びnは上記式(I)で定義した通りである。）の請求項１に記載の化合物、その塩、溶媒和物又はプロドラッグ。
【請求項３】
式(Ib)
【化４】
2007512301.tif 000063
（式中、R1及びnは上記式(I)で定義した通りである。）の請求項１に記載の化合物、その塩、溶媒和物又はプロドラッグ。
【請求項４】
式(Ic)
【化５】
2007512301.tif 000064
（式中、R1及びnは上記式(I)で定義した通りである。）の請求項１に記載の化合物、その塩、溶媒和物又はプロドラッグ。
【請求項５】
式(Id)
【化６】
2007512301.tif 000065
（式中、R1及びnは上記式(I)で定義した通りである。）の請求項１に記載の化合物、その塩、溶媒和物又はプロドラッグ。
【請求項６】
下記の
6-[3-{(1S)-1-メチル-2-メトキシ-エトキシ}-5-{3-メチルフェノキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボン酸;
6-[3-{(1S)-1-メチル-2-メトキシ-エトキシ}-5-フェノキシフェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボン酸;
6-[3-{(1S)-1-メチル-2-メトキシ-エトキシ}-5-{3,5-ジフルオロ-フェノキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボン酸;
6-[3-{(1S)-1-メチル-2-メトキシ-エトキシ}-5-{3-フルオロフェノキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボン酸;
6-[3-{(1S)-1-メチル-2-メトキシ-エトキシ}-5-{3-クロロ- 5-フルオロフェノキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボン酸;
6-[3-{(1S)-1-メチル-2-メトキシ-エトキシ}-5-{3-エトキシフェノキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボン酸;
6-[3-{(1S)-1-メチル-2-メトキシ-エトキシ}-5-{4-メトキシフェノキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボン酸;
6-[3-イソプロポキシ-5-{3,5-ジフルオロ-フェノキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボン酸;
6-[3-イソプロポキシ-5-{フェノキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボン酸;
6-[3-イソプロポキシ-5-{3-フルオロ-フェノキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボン酸;及び
6-[3-{4-フルオロフェノキシ}-5-{(1S)-1-メチルプロパ-2-イン-1-イルオキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボン酸
の１以上から選択される化合物、又はその塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれかに記載の式(I)の化合物、又はその塩、溶媒和物若しくはプロドラッグと、薬学的に許容できる稀釈剤若しくはキャリヤーと共に含んでなる医薬組成物。
【請求項８】
医薬として使用するための、請求項１〜６のいずれかに記載の式(I)の化合物、又はその塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ。
【請求項９】
GLKにより介在される疾病、特に２型糖尿病の治療のための医薬の製造のための、請求項１〜６のいずれかに記載の式(I)の化合物、又はその塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ。
【請求項１０】
有効量の請求項１〜６のいずれかに記載の式(I)の化合物、又はその塩、溶媒和物若しくはプロドラッグをGLK媒介疾病、特に糖尿病の治療の必要な哺乳類に投与することによるGLK媒介疾病、特に糖尿病の治療方法。
【請求項１１】
糖尿病及び肥満の同時治療又は予防において使用するための医薬の製造のための、請求項１〜６のいずれかに記載の式(I)の化合物、又はその塩、溶媒和物若しくはプロドラッグの使用。
【請求項１２】
肥満の治療又は予防において使用するための医薬の製造のための、請求項１〜６のいずれかに記載の式(I)の化合物、又はその塩、溶媒和物若しくはプロドラッグの使用。
【請求項１３】
有効量の請求項１〜６のいずれかに記載の式(I)の化合物、又はその塩、溶媒和物若しくはプロドラッグを肥満及び糖尿病の同時治療の必要な哺乳類に投与することによる肥満及び糖尿病の同時治療方法。
【請求項１４】
有効量の請求項１〜６のいずれかに記載の式(I)の化合物、又はその塩、溶媒和物若しくはプロドラッグを肥満の治療の必要な哺乳類に投与することによる肥満の治療方法。
【請求項１５】
請求項１に記載の式(I)の化合物、又はその塩、プロドラッグ若しくは溶媒和物の製造方法であって、
（ａ）  式(IIIa)の酸又はその活性化誘導体と式(IIIb)の化合物との反応
【化７】
2007512301.tif 000066
（式中、P1は水素又は保護基である。）；又は
（ｂ）  式(IIIc)の化合物の脱保護
【化８】
2007512301.tif 000067
（式中、P２は保護基である。）；又は
（ｃ）  式(IIId)の化合物と式(IIIe)の化合物との反応
【化９】
2007512301.tif 000068
（式中、Ｘ１は脱離基であり、Ｘ２はヒドロキシル基であるか、又はＸ１はヒドロキシル基であり、Ｘ２は脱離基であり、そして、P1は水素又は保護基である。）；又は
（ｄ）  式(IIIf)の化合物と式(IIIg)の化合物との反応
【化１０】
2007512301.tif 000069
（式中、Ｘ３は脱離基若しくは有機金属試薬であり、Ｘ４はヒドロキシル基、又はＸ３はヒドロキシル基であり、Ｘ４は脱離基若しくは有機金属試薬であり、そしてP1は水素又は保護基である。）；又は
（ｅ）  式(IIIh)の化合物と式(IIIi)の化合物との反応
【化１１】
2007512301.tif 000070
（式中、Ｘ５は脱離基であり、P1は水素又は保護基である。）
そしてその後、必要の場合、
ｉ）  式(I)の化合物を別の式(I)の化合物に変換し；
ｉｉ）  保護基がある場合それを除去し；
ｉｉｉ）  その塩、プロドラッグ又は溶媒和物を形成する、
請求項１に記載の式(I)の化合物、又はその塩、プロドラッグ若しくは溶媒和物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、インスリン分泌に関してグルコース閾値の減少に導くグルコキナーゼ(glucokinase :GLK)により媒介される疾病又は医学症状の治療又は予防に有用であるベンゾイルアミノピリジルカルボン酸の群に関する。さらに、これらの化合物は肝臓グルコース取込を増加させることにより血中グルコースを低くすることが予期される。このような化合物は２型糖尿病や肥満の治療に有用である可能性がある。本発明は、さらに、前記化合物を含む医薬組成物、及び前記化合物を使用するGLKにより媒介される疾病の治療方法にも関する。
【０００２】
膵臓β細胞及び肝臓実質細胞において、主要血漿細胞膜グルコーストランスポーターはGLUT2である。生理学的グルコース濃度下で、前記細胞膜を横切ってGLUT2がグルコースを運搬する速度は、これらの細胞におけるグルコース取込の全体速度に律速でない。グルコース取込速度は、グルコキナーゼ(GLK)により触媒されるグルコースのグルコース-6-ホスフェート(G-6-P)へのリン酸化反応速度により制限される[1]。GLKはグルコースに対して高(6-10mM)Kmであり、G-6-Pの生理学的濃度により抑制されない[1]。GLK発現は２、３の組織や細胞タイプ、最も顕著には膵臓β細胞や肝臓細胞(hepatocytes)に制限される[1]。これらの細胞では、GLK活性はグルコース利用性に対する律速であり、したがって、グルコース誘導インスリン分泌や肝臓グリコーゲン合成の程度を調節する。これらのプロセスは全身グルコースホメオスタシスの維持に重要であり、双方が糖尿病に機能不全である[2]。
【０００３】
糖尿病の１亜型(sub-type)である若年性２型成人発症型糖尿病(Type 2 maturity-onset diabetes of the young: MODY-2)では、該糖尿病は機能変異のGLK損失により引き起こされる[3, 4]。MODY-2患者の高血糖は、膵臓及び肝臓双方のグルコース利用性欠如よりもたらされる[5]。MODY-2患者の膵臓におけるグルコース利用性傷害はグルコース刺激インスリン分泌について上昇した閾値をもたらす。逆に、GLKの稀活性性変異は家族性インスリン過敏症をもたらすこの閾値を減少させる[6, 7]。MODY-2糖尿病で観察されるGLK活性減少に加えて、肝臓グルコキナーゼ活性も２型糖尿病において低下する[8]。重要なことは、GLKの広範囲又は肝臓選択的過剰発現は、該疾病の食事療法モデル及び一般モデルの双方において糖尿病表現型の発展を防止するか逆転させる[9-12]。さらに、フルクトースによる急性期治療は肝臓グルコース利用の刺激によるグルコース耐性を改善する[13]。この作用は、下記に述べるメカニズムにより肝臓細胞中の細胞質GLK活性のフルクトース誘導上昇により媒介されると思われる[13]。
【０００４】
肝臓GLK活性はGLK調節タンパク質(GLK regulatory protein: GLKRP)との関連により抑制される。GLK/GLKRP複合体はGLKRPに結合するフルクトース-6-ホスフェート(F6P)により安定化され、フルクトース-1-ホスフェート(F1P)による前記糖ホスフェートの置換により不安定化される。F1Pは食餌療法フルクトースのフルクトキナーゼ媒介リン酸化反応により発生する。したがって、GLK/GLKRP複合の完全性及び肝臓GLK活性は、F6Pが吸収後状態で上昇し、一方、F1Pが食後状態で優先するので、栄養状態に依存して調節される。肝臓細胞と対照的に、膵臓β細胞はGLKRPの存在しない場合にGLKを発現する。したがって、β細胞GLK活性はその基質であるグルコースの利用性により専ら調節される。小分子は、直接的又はGLK/GLKRP複合体を不安定にすることによるかのいずれかによりGLKを活性化させ得る。前者の種類の化合物は肝臓及び膵臓の双方でグルコース利用性を刺激することが予測され、一方、後者の化合物は肝臓において専ら作用すると予測される。しかし、いずれかのプロフィールを持つ化合物も、２型糖尿病が双方の組織中でグルコース利用性欠陥により特徴付けられるので、２型糖尿病を治療するのに療法的に利点のあることが予測される。
【０００５】
GLK及びGLKRP並びにKATPチャンネルは視床下部（エネルギーバランスの調節及び食餌摂取のコントロールに重要な脳の領域）のニューロンに発現される[14-18]。これらのニューロンは食欲及び食欲抑制神経ペプチドを発現することが示されており[15, 19, 20]、周囲のグルコース濃度の変化により抑制的又は興奮的のいずれかである視床下部中のグルコース検出ニューロンであると予想されている[17, 19, 21, 22]。グルコースレベルの変化を検出するこれらのニューロンの能力が種々の遺伝的及び実験的誘導肥満モデルに欠けている[23-28]。グルコキナーゼの競合インヒビターであるグルコース類似体の脳室内(icv)注入は痩せたラットの食餌摂取を刺激する[29, 30]。対照的に、グルコースのicv 注入は摂食を抑制する[31]。このように、GLKの小分子活性剤は、GLKの中枢効果により食餌摂取及び体重増加を減少させる。したがって、GLK 活性剤は、糖尿病に加えて、肥満を含む摂食障害を治療するのに療法用途のある可能性がある。視床下部効果は、２型糖尿病の治療のための、グルコースホメオスタシスを正常化するのに肝臓及び／又は膵臓に作用する同じ化合物の効果に相加的又は相乗的であり得る。このようにGLK/GLKRPシステムは（糖尿病及び肥満双方に利点がある）潜在的「糖尿肥満」ターゲットとして記載することができる。
【０００６】
WO0058293 及びWO01/44216 (ロッシュ)では、一連のベンジルカルバモイル化合物をグルコキナーゼ活性剤として記載する。このような化合物がGLKを活性化するメカニズムは、GLK活性がNADH産生に結びつけられる分析（これは次いで光学的に測定される。詳細は実施例Ａに記載されているインビトロ分析を参照されたい）でこのような化合物の直接効果を測定することにより評価される。本発明の化合物は直接GLKを活性化できるか又はGLKRPとGLKとの相互作用を阻止することによりGLKを活性化させることができる。後者のメカニズムは、直接刺激後予測される重篤な低血糖発作を起こさない点でGLKの直接活性剤よりも重要な利点を提供する。本発明の多くの化合物は公知のGLK活性剤と比較して好適な選択性を示すことができる。
【０００７】
WO9622282、WO9622293、WO9622294、WO9622295、WO9749707及びWO9749708は、本発明で開示する化合物に構造的に類似するバソプレシン剤として有用な化合物の製造に使用する多くの中間体を開示する。WO9641795及びJP8143565 (バソプレシン拮抗作用)に、JP8301760 (皮膚損傷防止)に並びにEP619116 (整骨療法)にも構造的に類似する化合物が開示されている。
【０００８】
WO01/12621は、c-JUN N-ターミナルキナーゼのインヒビターとしてイソキサゾリルピリミジン及び関連化合物並びにこのような化合物を含有する医薬組成物を記載する。
Cushman等 [Bioorg Med Chem Lett (1991) 1(4), 211−14]はピリジン含有スチルベン及びアミドの合成並びにプロティン−チロシンキナーゼインヒビターとして、それらの評価を記載する。Rogers等 [J Med Chem (1981) 24(11) 1284−7]はサイクリック−AMPホスホジエステラーゼのインヒビターとしてメソイオンプリノン類似体を記載する。
【０００９】
WO00/26202は抗腫瘍剤として2-アミノ-チアゾール誘導体の製造を記載する。GB 2331748は殺虫性チアゾール誘導体の製造を記載する。WO96/36619は消化管活動用改善剤としてアミノチアゾール誘導体の製造を記載する。US 5466715及びUS 5258407は3,4-二置換フェノール免疫刺激剤の製造を記載する。JP 58069812はベンゾアミド誘導体を含有する低血糖医薬品を記載する。US 3950351は2-ベンズアミド-5-ニトロチアゾールを記載し、Cavier等[Eur J Med Chem − Chim Ther (1978) 13(6), 539−43]はこれらの化合物の生化学的重要性を論じる。
【００１０】
WO03/000262はGLK活性剤としてビニルフェニル誘導体を開示し、WO03/015774はGLK活性剤としてベンズアミド化合物を開示し、そしてWO03/066613はGLK活性剤としてN-フェニル-2-ピリミジナミン誘導体を開示する。
【００１１】
係属中の国際出願番号PCT/GB02/02873 ( WO03/000267)は、酵素グルコキナーゼ(GLK)の活性剤であるベンゾイルアミノピリジルカルボン酸の群を記載する。我々は、驚いたことに、経口投与後に卓越した薬物血漿濃度を示すこれらの化合物のうちの小規模選択化合物を見出したが、これらは水可溶性の改善及び血漿結合レベルの減少する一方でGLK酵素の高能力を維持することによる。これは、この化合サブグループをGLKにより介在される疾病や医学的症状の治療又は防止に特に適しているようにさせる。
【００１２】
したがって、本発明の第１態様では、式(I):
【００１３】
【化１】
2007512301.tif 000003
【００１４】
（式中:  R1はフルオロ、クロロ、C1-3アルキル及びC1-3アルコキシから選択され、R2−X−はメチル、メトキシメチル及び
【００１５】
【化２】
2007512301.tif 000004
【００１６】
から選択され、ｎは０、１又は２である。）の化合物又はその塩、プロドラッグ若しくは溶媒和物を提供する。
式(I)の化合物は本発明の範囲内にある塩を形成できる。医薬的に許容できる塩が好適であるが、例えば、単離するまたは精製する化合物に有用なその他の塩であることもできる。
【００１７】
上記で定義した式(I)の一定の化合物に限り、１又はそれ以上の不斉炭素原子のために光学活性体又はラセミ体で存在でき、本発明はその定義においてGLKを直接的に刺激する又はGLK/GLKRP相互作用を阻止する特性を有するような光学活性体やラセミ体を含むことを了解すべきである。光学活性体の合成は当業界で周知の有機化学の標準技術、例えば、光学活性出発物質からの合成により又はラセミ体の分割により行うことができる。一定の化合物が互変異性体として存在することができ、本発明はGLKを活性化する本発明の化合物の互変異性体のいずれか及び総てにも関するということも了解されるべきである。
【００１８】
式(I)の好適な化合物は、下記のうちのいずれかを適用するものである。すなわち、
(1)  式(I)のベンゾイルアミノ基の３位の基が好ましくは：
【００１９】
【化３】
2007512301.tif 000005
【００２０】
であり；
(2)  R1がクロロ、フルオロ、メチル、エチル、メトキシ及びエトキシから選択され；
(3)  R1がクロロ、フルオロ、メチル及びエチルから選択され；
(4)  R1がクロロ、フルオロ及びメチルから選択され；
(5)   (R1)nがメチル、フルオロ、ジフルオロ及びフルオロ−クロロから選択され；
(6)  (R1)nがメチル、フルオロ、ジフルオロ、フルオロ−クロロ及びフルオロ−メチルから選択され；
(7)   (R1)nが3−メチル、3−フルオロ、3,5−ジフルオロ及び3−フルオロ−5−クロロから選択され；
(8)  nは1であり；
(9)  nは2であり；
(10)  nは2であり、R1は独立してクロロ及びフルオロから選択される。
【００２１】
本発明の別の特徴では、本発明の化合物の下記の好適な群が与えられる。すなわち、
(I)式(Ia)
【００２２】
【化４】
2007512301.tif 000006
【００２３】
（式中、R1及びnは式(I)の化合物中で定義した通りである。）の化合物又はその塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ。
(II)  式(Ib)
【００２４】
【化５】
2007512301.tif 000007
【００２５】
（式中、R1及びnは式(I)の化合物中で定義した通りである。）の化合物又はその塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ。
(III)  式(Ic)
【００２６】
【化６】
2007512301.tif 000008
【００２７】
（式中、R1及びnは式(I)の化合物中で定義した通りである。）の化合物又はその塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ。
(IV)  式(Id)
【００２８】
【化７】
2007512301.tif 000009
【００２９】
（式中、R1及びnは式(I)の化合物中で定義した通りである。）の化合物又はその塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ。
好適な本発明の化合物には下記の１又はそれ以上がある。すなわち、
6-[3-{(1S)-1-メチル-2-メトキシ−エトキシ}-5-{3-メチルフェノキシ }フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボン酸;
6-[3-{(1S)-1-メチル-2-メトキシ−エトキシ}-5-フェノキシフェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボン酸;
6-[3-{(1S)-1-メチル-2-メトキシ−エトキシ}-5-{3,5−ジフルオロ-フェノキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボン酸;
6-[3-{(1S)-1-メチル-2-メトキシ−エトキシ}-5-{3-フルオロフェノキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボン酸;
6-[3-{(1S)-1-メチル-2-メトキシ−エトキシ}-5-{3-クロロ−5−フルオロフェノキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボン酸;
6-[3-{(1S)-1-メチル-2-メトキシ−エトキシ}-5-{3−エトキシフェノキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボン酸;
6-[3-{(1S)-1-メチル-2-メトキシ−エトキシ}-5-{4−メトキシフェノキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボン酸;
6-[3-イソプロポキシ-5-{3,5−ジフルオロ-フェノキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボン酸;
6-[3-イソプロポキシ-5-{フェノキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボン酸;
6-[3-イソプロポキシ-5-{3−フルオロ-フェノキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボン酸;及び
6-[3-{4-フルオロフェノキシ}-5-{(1S)-1-メチルプロピ-2-イン-1-イルオキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボン酸
又はその塩、溶媒和物若しくはプロドラッグである。
【００３０】
本発明の化合物はプロドラッグの形体で投与できる。プロドラッグは生化学的前駆体(bioprecursor)又は体内で分解して本発明の化合物を生じる薬学的に許容できる化合物（例えば、本発明の化合物のエステルやアミド、特にインビボで加水分解可能なエステル）である。種々の形体のプロドラックが当業界で公知である。このようなプロドラッグ誘導体の例について、下記を参照されたい。すなわち、
ａ）  H. Bundgaard編、 Design of Prodrugs(Elsevier, 1985) 及びK. Widder 等編、Methods in Enzymology, Vol. 42, p. 309−396(Academic Press, 1985)；
ｂ）  Krogsgaard−Larsen編、A Textbook of Drug Design and Development；
ｃ）  H. Bundgaard著、Chapter 5 “Design and Application of Prodrugs”、p. 113−191 (1991)
ｄ）  H. Bundgaard著、Advanced Drug Delivery Reviews, 8, 1−38 (1992)；
ｅ）  H. Bundgaard等、Journal of Pharmaceutical Sciences, 77, 285 (1988)；並びに
ｆ）  N. Kakeya等、Chem Pharm Bull, 32, 692 (1984)である。
【００３１】
上記で引用した文献の内容を参照として本明細書に含める。
プロドラッグの例は下記の通りである。カルボキシ基又はヒドロキシ基を含む本発明の化合物のインビボ加水分解性エステルであり、例えば、ヒト又は動物の体内で加水分解され親化合物の酸又はアルコールを生成する薬学的に許容できるエステルである。カルボキシについて適切な薬学的に許容できるエステルには、C1〜C6アルコキシメチルエステル、例えば、メトキシメチル、C1〜C6アルカノイルオキシメチルエステル、例えば、ピバロイルオキシメチル、フタリジルエステル、C3〜C8シクロアルコキシカルボニルオキシC1〜C6アルキルエステル、例えば、1−シクロヘキシルカルボニルオキシエチル;1,3−ジオキソレン-2-オニルメチルエステル、例えば、5−メチル−1,3-ジオキソレン-2-オニルメチル;及びC1-6アルコキシカルボニルオキシエチルエステル等がある。
【００３２】
ヒドロキシ基を含有する本発明の化合物のインビボ加水分解性エステルには、ホスフェートエステル（ホスホルアミド環状エステルを含む）のような無機エステル及びα−アシルオキシアルキルエ−テル並びにエステルのインビボ加水分解の結果として分解して親化合物のヒドロキシ基を与える関連化合物等がある。α−アシルオキシアルキルエ−テルの例には、アセトキシメトキシ及び2,2−ジメチルプロピオニルオキシ−メトキシ等がある。ヒドロキシについてインビボ加水分解性形成基の選択には、アルカノイル、ベンゾイル、フェニルアセチル及び置換ベンゾイル並びにフェニルアセチル、アルコキシカルボニル（アルキルカルボネートエステルを与える）、ジアルキルカルバモイル及びN-(ジアルキルアミノエチル)-N-アルキルカルバモイル（カルバメートを与える）、ジアルキルアミノアセチル及びカルボキシアセチル等がある。
【００３３】
本発明の化合物の適切な薬学的に許容できる塩は、例えば、本発明の化合物の酸付加塩であり、充分に塩基性であり、例えば、無機酸若しくは有機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸若しくはマレイン酸との酸付加塩である。さらに、本発明のベンゾキサジノン誘導体の適切な薬学的に許容できる塩は、充分に酸性であり、アルカリ金属塩、例えば、ナトリウム若しくはカリウム塩、アルカリ土類金属塩、例えば、カルシウム若しくはマグネシウム塩、アンモニウム塩又は生理学的に許容できるカチオンを与える有機塩基、例えば、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、ピペリジン、モルホリン若しくはトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミンとの塩である。
【００３４】
本発明の別の特徴は、上述した式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)若しくは(Id)の化合物、又はその塩、溶媒和物若しくはプロドラッグと薬学的に許容できる稀釈剤若しくはキャリアーとを含む医薬組成物である。
【００３５】
本発明の別の態様では、医薬として使用するために上述した式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)若しくは(Id)の化合物を提供する。
さらに、本発明では、GLKにより媒介される疾病、特に２型糖尿病の治療のための製造において使用するための式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)若しくは(Id)の化合物を提供する。
【００３６】
このように使用するために該化合物を医薬組成物として適切に製剤化する。
本発明の別の態様では、式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)若しくは(Id)の化合物、又はその塩、溶媒和物若しくはプロドラッグの有効量をGLK媒介疾病、特に糖病治療の必要なほ乳類に投与することによる、GLK媒介疾病の治療法を提供する。
【００３７】
本発明の化合物又は組成物により治療できる具体的な疾病には、低血糖症の重篤なリスクのない２型真性糖尿病（及び１型を治療する潜在性）における血糖低下、異常脂質血症、肥満、インスリン耐性、メタボリックシンドロームＸ、耐糖能異常等がある。
【００３８】
上記で検討したように、このようなGLK/GLKRP系は潜在的「肥満」標的（糖尿病及び肥満の双方に利点がある）として記載できる。したがって、本発明の別の態様では、糖尿病及び肥満を合わせて治療又は予防するのに使用するための医薬の製造における、式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)若しくは(Id)の化合物、又はその塩、溶媒和物若しくはプロドラッグの使用を提供する。
【００３９】
本発明の別の態様では、肥満の治療又は予防に使用するための医薬の製造における、式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)若しくは(Id)の化合物、又はその塩、溶媒和物若しくはプロドラッグの使用を提供する。
【００４０】
本発明のさらに別の態様では、式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)若しくは(Id)の化合物、又はその塩、溶媒和物若しくはプロドラッグの有効量を肥満及び糖尿病治療の必要なほ乳類に投与することによる、肥満及び糖尿病の同時治療法を提供する。
【００４１】
本発明のさらに別の態様では、式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)若しくは(Id)の化合物、又はその塩、溶媒和物若しくはプロドラッグの有効量を肥満治療の必要なほ乳類に投与することによる、肥満治療法を提供する。
【００４２】
本発明の組成物は、経口用途（例えば、錠剤、ロゼンジ剤、硬カプセル若しくは軟カプセル剤、水性懸濁若しくは油性懸濁剤、エマルション剤、分散性粉末若しくは分散性顆粒剤、シロップ剤又はエリキシール剤として）、局所用途（例えば、クリーム剤、軟膏剤、ゲル剤、又は水性溶液若しくは懸濁若しくは油性溶液若しくは懸濁剤として）、吸入による投与（例えば、微細粉末エアゾール剤又は液体エアゾール剤として）、吹入による投与（例えば、微細粉末剤として）、又は非経口投与（例えば、静脈注射、皮下注射、筋肉内注射若しくは筋肉内投与用の無菌水性又は油性溶液剤として又は直腸投与用の座剤として）に適した形態であることができる。
【００４３】
本発明の組成物は、当業界で周知の慣用医薬賦形剤を使用して慣用手順により得ることができる。したがって、経口用途のための組成物は、例えば、一種以上の着色剤、甘味剤、芳香剤及び／又は防腐剤を含有できる。
【００４４】
錠剤のために適切な薬学的に許容できる賦形剤には、例えば、乳糖、炭酸ナトリウム、燐酸カルシウム若しくは炭酸カルシウムのような不活性稀釈剤、トウモロコシ澱粉若しくはアルギン酸のような顆粒化剤及び崩壊剤、澱粉のような結合剤、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸もしくはタルクのような滑沢剤、パラヒドロキシ安息香酸エチル若しくはプロピルのような防腐剤、並びにアスコルビン酸のような抗酸化等がある。錠剤は、非コーティングか、あるいは胃腸管内で崩壊し、続いて活性成分の吸収を修正するため、あるいは錠剤の安定性及び／又は外観を改善するためにコーティングかのいずれかであることができ、いずれの場合も、当業界で周知の慣用コーティング剤及びコーティング手順を使用できる。
【００４５】
経口用途の組成物は硬ゼラチンカプセル剤の形態であることができ、当該硬カプセル中で活性成分が不活性固体稀釈剤、例えば、炭酸カルシウム、燐酸カルシウム又はカオリンと混合され、あるいは軟ゼラチンカプセル剤であることができ、当該軟カプセル中では、活性成分が水又は落花生油、液体パラフィン若しくはオリーブ油と混合される。
【００４６】
水性懸濁剤は、一般に、微細粉末形態の活性成分と、一種以上の懸濁化剤、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム。ポリビニルピロリドン、トラガントガム若しくはアラビアゴム、分散剤若しくは湿潤剤、例えば、レシチン若しくはアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物（例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン）、若しくはエチレンオキシドと長鎖脂肪アルコールとの縮合生成物、例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール、若しくはエチレンオキシドと脂肪酸及びヘキシトールから誘導される部分エステルとの縮合生成物、例えば、ポリエチレンソルビトールモノオレエート若しくはエチレンオキシドと脂肪酸及びヘキシトール無水物から誘導される部分エステルとの縮合物、例えば、ポリエチレンソルビタンモノオレエートを含有する。水性懸濁剤は、一種以上の防腐剤（例えば、パラヒドロキシ安息香酸エチル若しくはプロピル）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸）、着色剤、芳香剤及び／又は甘味剤（例えば、スクロース、サッカリン若しくはアスパルテーム）も含有できる。
【００４７】
油性懸濁剤は、植物油（例えば、ラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油若しくはココナッツ油）中又は鉱油（例えば、液体パラフィン）中に活性成分を懸濁させることにより製剤化する。油性懸濁剤は、ビーズワックス、固形パラフィン又はセチルアルコールのような粘稠化剤も含有できる。上述したような甘味剤、及び芳香剤を味の良い経口製剤を得るために添加できる。これらの組成物はアスコルビン酸のような抗酸化剤の添加により保存できる。
【００４８】
水の添加による水性懸濁の調製に適した分散性粉末剤及び顆粒剤は、一般に、活性成分と共に分散剤若しくは湿潤剤、懸濁化剤及び一種以上の保存剤を含有する。適切な分散剤若しくは湿潤剤及び懸濁化剤は既に上記したようなものにより例示されている。甘味剤、芳香剤及び着色剤のような追加の賦形剤も存在できる。
【００４９】
本発明の医薬組成物は水中油型エマルションの形態であることもできる。油相は、オリーブ油若しくはラッカセイ油のような植物油又は液体パラフィンのような鉱油、あるいはこれらのいずれかの混合物であることができる。適切な乳化剤は、例えば、アラビアゴムやトラガントゴムのような天然ゴム、大豆、レシチンのような天然ホスファチド、脂肪酸とヘキシトール無水物とから誘導されるエステルや部分エステル（例えば、ソルビタンモノオレエート）及びポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートのような前記部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物であることができる。エマルションも甘味剤、芳香剤及び保存剤を含有できる。
【００５０】
シロップ剤及びエリキシル剤は、グリセリン、プロピレングリコール、ソルビトール、アスパルテーム又はスクロースのような甘味剤と共に製剤化でき、粘滑剤、保存剤、芳香剤及び／又は着色剤も含有できる。
【００５１】
医薬組成物は無菌注射用水性懸濁剤又は油性懸濁剤の形態であることもでき、一種以上の適切な分散剤若しくは湿潤剤及び懸濁化剤を使用して公知の手順にしたがって製剤化できるが、これは既に記載した。無菌注射用製剤は、非毒性非経口用に許容可能な稀釈剤若しくは溶媒、例えば、１，３−ブタンジオール中の無菌注射用溶液又は懸濁剤であることもできる。
【００５２】
吸入により投与するための組成物は、微細固体又は液滴のいずれかを含有するエアゾルとして活性成分を投薬するようにした慣用の加圧エアゾル剤の形態であることができる。揮発性フッ素化炭化水素又は炭化水素のような慣用のエアゾルプロペラントを使用でき、エアゾル器具は慣用にしたがって一定量の活性成分を投薬するようにする。
【００５３】
製剤についてのさらなる情報は、Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990の第５巻25.2章に言及されている。
【００５４】
単一剤形を製造するために一種以上の賦形剤と共に配合する活性成分の量は治療する宿主や特定の投与経路に依存して必然的に変動する。例えば、ヒトに対する経口投与のための製剤は、一般に、例えば、0.5 mg 〜2 gの活性成分と、組成物の総量を基準に5〜98重量％で変動し得る適切で慣用量の賦形剤とを配合して含有する。単位剤形は、一般的に、約1 mg〜約500 mgの活性成分を含有する。投与経路及び用法・用量についてのさらなる情報は、Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990の第５巻、25.3章に言及されている。
【００５５】
式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)又は(Ie)の化合物の治療目的又は予防目的の用量サイズは、動物又は患者の症状の性質及び重篤度、年齢及び性並びに投与経路にしたがって、医薬の周知の原理により、当然に変動し得る。
【００５６】
治療目的又は予防目的のための式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)又は(Ie)の化合物を使用するに際し、一般に、例えば、0.5 mg〜75 mg／kg体重の範囲の１日用量が投与される（必要の場合、分割して与えられる）ように投薬される。概して、非経口経路を使用するときにより低い用量が投与される。したがって、例えば、静脈注射の場合、例えば、0.5 mg〜30 mg／kg体重の範囲の用量が一般に使用される。同様に、吸入による投与の場合、例えば、0.5 mg〜25 mg／kg体重の範囲の用量が使用される。しかし、経口投与が好適である。
【００５７】
本明細書中で記載するGLK活性の上昇は、単独療法として又は一種以上の他の物質と組み合わせて、及び／又は治療されるべき徴候についての治療として適用されることができる。このような共同治療は、治療の個々の成分の同時、逐次又は別個の投薬により達成できる。同時治療は単一の錠剤又は別の錠剤であることができる。例えば、真性糖尿病の治療において、療法は下記の主要治療カテゴリーを含むことができる。すなわち、
１）  インスリン及びインスリン類似体；
２）  スルホニルウレア（例えば、グリペンクラミド、グリピジド）、プランジアルグルコース調節剤（例えば、レパグリニド、ナテグリニド）を含むインスリン分泌促進剤；
３）  インクレチン作用を改良する薬剤（例えば、ジペプチジルペプチダーゼＩＶインヒビター、及びGLP-1アゴニスト）；
４）  ＰＰＡＲγアゴニスト（例えば、ピオグリタゾン及びロジグリタゾン）、並びにＰＰＡＲα及びＰＰＡＲγ活性を合わせた薬剤を含むインスリン感作薬剤；
５）  肝臓グルコースバランスを調節する薬剤（例えば、メトホルミン、フルコース1,6ビスホスホターゼインヒビター、グリコーゲンホスホリラーゼインヒビター、グリコーゲンシンターゼキナーゼインヒビター）；
６）  腸からグルコースの吸収を減少させるようにした薬剤（例えば、アカルボース）；
７）  腎臓によるグルコースの再吸収を防止する薬剤（SGLTインヒビター）；
８）  延長した低血糖症の合併症を治療するようにした薬剤（例えば、アルドースレダクターゼインヒビター）
９）  抗肥満薬（例えば、シブトラミン及びオルリスタット）；
１０）  HMG-CoAレダクターゼインヒビター（例えば、スタチン）、PPARαアゴニスト（フィブレート、例えば、ゲムフィブロジル）、胆汁酸抑制薬（コレスチラミン）、コレステロール吸収インヒビター（植物スタノール、合成インヒビター）、胆汁酸吸収抑制剤（IBATi）並びにニコチン酸及び類似体（ナイアシン及び遅放出製剤）のような抗−脂質異常剤；
１１）  βブロッカー（例えば、アテノロール、インデラル）、ＡＣＥインヒビター（例えば、リシノプリル）、カルシウム拮抗剤（例えば、ニフェジピン）、アンギオテンシン受容体拮抗剤（例えば、カンデサルタン）、αアンタゴニスト及び利尿剤（例えば、フロセミド、ベンズチアジド）のような高血圧剤；
１２）  抗ストロムボティックス(antithrombotics)、繊維素溶解活性剤及び抗血小板薬のようなホメオスタシス調節剤；トロンビン拮抗薬；Ｘａ因子阻害剤；ＶＩＩ因子阻害剤）；抗血小板薬（例えば、アスピリン、クロピドグレル）；抗凝血剤（ヘパリン及び低分子量類似体、ヒルジン）並びにワルファリン；
１３）  グルカゴンの作用と拮抗する薬剤；そして
１４）  非ステロイド性抗炎症薬（例えば、アスピリン）及びステロイド性抗炎症薬（例えば、コルチゾン）のような抗炎症剤である。
【００５８】
本発明の別の態様では、下述する実施例中の最終生成物、その塩、溶媒和物及びプロドラッグとして生成した個々の化合物が提供される。
本発明の化合物、又はその塩は、かかる化合物又は構造的に関連する化合物の製造に適用しうる公知のいずれかの方法により調製できる。官能基は慣用の方法を使用して保護したり脱保護したりすることができる。例えば、基を保護するアミノ基やカルボキシル基のような保護基の例（並びに、形成及び究極的脱保護）については、T.W. Greene 及び P.G.M. Wuts, “Protective Groups in Organic Synthesis”, Second Edition, John Wiley & Sons, New York, 1991を参照。
【００５９】
式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)又は(Id)の化合物の合成方法を本発明の別の特徴として与える。したがって、本発明の別の態様では、式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)又は(Id)の化合物の製造方法が与えられ、当該方法は、
（ａ）  式(IIIa)の酸又はその活性化誘導体と式(IIIb)の化合物とを反応させ
【００６０】
【化８】
2007512301.tif 000010
【００６１】
（式中、Ｐ１は水素又は保護基である。）；
又は
（ｂ）  式(IIIc)の化合物の脱保護
【００６２】
【化９】
2007512301.tif 000011
【００６３】
（式中、Ｐ２は保護基である。）；又は
（ｃ）  式(IIId)の化合物と式(IIIe)の化合物との反応
【００６４】
【化１０】
2007512301.tif 000012
【００６５】
（式中、Ｘ１は脱離基であり、Ｘ２はヒドロキシル基であり、又はＸ１はヒドロキシル基であり、Ｘ２は脱離基であり、Ｐ１は水素若しくは保護基である。）；又は
（ｄ）  式(IIIf)の化合物と式(IIIg)の化合物との反応
【００６６】
【化１１】
2007512301.tif 000013
【００６７】
（式中、Ｘ３は脱離基若しくは有機金属試薬であり、Ｘ４はヒドロキシル基であり、又はＸ３はヒドロキシル基であり、Ｘ４は脱離基若しくは有機金属試薬であり、そしてＰ１は水素若しくは保護基である。）；又は
（ｅ）  式(IIIh)の化合物と式(IIIi)の化合物との反応
【００６８】
【化１２】
2007512301.tif 000014
【００６９】
（式中、Ｘ５は脱離基であり、Ｐ１は水素又は保護である。）、その後、必要の場合
ｉ）  式(I)の化合物を別の式(I)の化合物に変換し；
ｉｉ）  保護基を除き；
ｉｉｉ）  その塩、プロドラッグ若しくは溶媒和物を形成する。
【００７０】
プロセス（ａ）〜（ｅ）の適切な脱離基は当業者に周知であり、例えば、（メシレート基やトシレート基のような）活性化ヒドロキシ脱離基及びフルオロ、クロロ若しくはブロモのようなハロ脱離基等がある。
【００７１】
式(IIIa)〜(IIIi)の化合物は商業的に入手でき、又は当業界で公知の都合の良い方法により及び／又は本明細書の実施例に例証したようにして製造できる。一般に、求核置換若しくは触媒化方法により、場合により、適当な塩基の存在下でアリール−Ｏ結合又はアルキル−Ｏ結合を形成できる。
【００７２】
上記反応についての特定の反応条件は下記の通りである。ここで、Ｐ１が保護基であるとき、Ｐ１は好ましくはＣ１−４アルキル、例えば、メチル又はエチルである。
プロセス（ａ）−アミノ基とカルボン酸とのカップリング反応でアミドを形成することは当業界で周知である。例えば、
（ｉ）  DCM、クロロホルム若しくはDMFのような適当な溶媒中室温でDMAPの存在下、EDACを用いて行うカルボジイミドカップリング反応のような、適切なカップリング反応を使用すること
（ｉｉ）  メチレンクロリドのような適当な溶媒の存在下、オキサリルクロリドを用いる反応によるカルボキシル基を酸クロリドに活性化する反応。次いで、酸クロリドをクロロホルム若しくはDCMのような適当な溶媒中０℃〜室塩でトリエチルアミン若しくはピリジンのような塩基の存在下で式(IIIb)の化合物と反応させることができる。
【００７３】
プロセス（ｂ）−脱保護反応は当業界で周知である。Ｐ１の例にはＣ１−６アルキル及びベンジル等がある。ここで、Ｐ１がＣ１−６アルキルの場合、THF/水のような適当な溶媒中水酸化ナトリウムの共存下で反応を行うことができる。
【００７４】
プロセス（ｃ）−式(IIId)及び(IIIe)の化合物を、DMFやTHFのような適当な溶媒中で、水素化ナトリウムやカリウムtert−ブトキシドのような塩基と共に、０〜１００℃の温度で、場合により、パラジウム(II)アセテート、炭素上パラジウム、銅(II)アセテートや銅(I)ヨーダイドのような金属触媒を使用して、反応させることができる。あるいは、式(IIId)及び(IIIe)の化合物を、THFやDCMのような適当な溶媒中で、トリフェニルホスフィンのような適切なホスフィンやジエチルアゾジカルボキシレートのようなアゾジカルボキシレートと共に反応させることができる。
【００７５】
プロセス（ｄ）−式(IIId)及び(IIIe)の化合物を、DMFやTHFのような適当な溶媒中で、水素化ナトリウムやカリウムtert−ブトキシドのような塩基と共に、０〜１００℃の温度で、場合により、パラジウム(II)アセテート、炭素上パラジウム、銅(II)アセテートや銅(I)ヨーダイドのような金属触媒を使用して、反応させることができる。
【００７６】
プロセス（ｅ）−式(IIIh)の化合物と式(IIIi)の化合物との反応を、DMFのような極性溶媒又はTHFのような非極性溶媒中で、水素化ナトリウムやカリウムtert−ブトキシドのような強塩基と共に、０〜１００℃の温度で、場合により、パラジウム(II)アセテート、炭素上パラジウム、銅(II)アセテートや銅(I)ヨーダイドのような金属触媒を使用して、行うことができる。
【００７７】
製造プロセスの間、分子内の官能基について保護基を使用することに利点があり得る。問題の保護基の除去のために必要に応じて文献に記載されているようなあるいは熟達した化学者に公知のいずれかの都合の良い方法により保護基を除去でき、このような方法は、分子内のどこかの基について可及的に少ない妨害で保護基を除去するように選択される。
【００７８】
保護基の特定の例は便宜上以下に示すが、ここで、「低級」とは、適用される基が好ましくは１〜４個の炭素原子を有することを意味する。これらの例が網羅的でないことが了解されよう。保護基の除去方法の特定例が下記のように与えられる場合、これらは同様に網羅的ではない。保護基及び特定的に挙げない脱保護方法の使用は、勿論、本発明の範囲内である。
【００７９】
カルボキシ保護基はエステル形成性脂肪族若しくは芳香族アルコールの残基又はエステル形成性シラノールの残基であることができる（前記アルコール又はシラノールは好ましくは１〜２０個の炭素原子を含有する）。カルボキシ保護基の例には直鎖又は分岐鎖（１-１２Ｃ）アルキル基（例えば、イソプロピル、ｔ−ブチル）；低級アルコキシ低級アルキル基（例えば、メトキシメチル、エトキシメチル、イソブトキシメチル）;低級脂肪族アシルオキシ低級アルキル基(例えば、アセトキシメチル、プロピルニルオキシメチル、ブチリルオキシメチル、ピバロイルオキシメチル);低級アルコキシカルボニルオキシ低級アルキル基(例えば、1−メトキシカルボニルオキシエチル、1−エトキシカルボニルオキシエチル);アリール低級アルキル基(例えば、p−メトキシベンジル、o−ニトロベンジル、p−ニトロベンジル、ベンズヒドリル及びフタリジル);トリ(低級アルキル)シリル基(例えば、トリメチルシリル及びt−ブチルジメチルシリル);トリ(低級アルキル)シリル低級アルキル基(例えば、トリメチルシリルエチル);並びに(2−6C)アルケニル基(例えば、アリル及びビニルエチル)等である。
【００８０】
カルボキシル保護基の除去のために特に適切な方法には、例えば、酸−、金属−又は酵素的−触媒加水分解等がある。
ヒドロキシ保護基の例には、低級アルケニル基(例えば、アリル);低級アルカノイル基(例えば、アセチル);低級アルコキシカルボニル基(例えば、t−ブトキシカルボニル);低級アルケニルオキシカルボニル基(例えば、アリルオキシカルボニル);アリール低級アルコキシカルボニル基(例えば、ベンゾイルオキシカルボニル、p−メトキシベンジルオキシカルボニル、 o−ニトロベンジルオキシカルボニル、 p−ニトロベンジルオキシカルボニル);トリ低級アルキル/アリールシリル基 (例えば、トリメチルシリル、t−ブチルジメチルシリル、t−ブチルジフェニルシリル);アリール低級アルキル基(例えば、ベンジル)基;及びトリアリール低級アルキル基(例えば、トリフェニルメチル)等がある。
【００８１】
アミノ保護基の例には、ホルミル、アラルキル基(例えば、ベンジル、及び置換ベンジル、例えば、p−メトキシベンジル、ニトロベンジル及び2,4−ジメトキシベンジル、及びトリフェニルメチル);ジ−p−アニシルメチル及びフリルメチル基;低級アルコキシカルボニル(例えば、t−ブトキシカルボニル);低級アルケニルオキシカルボニル(例えば、アリルオキシカルボニル);アリール低級アルコキシカルボニル基(例えば、ベンジルオキシカルボニル、p−メトキシベンジルオキシカルボニル、o−ニトロベンジルオキシカルボニル、p−ニトロベンジルオキシカルボニル、;トリアルキルシリル(例えば、トリメチルシリル及びt−ブチルジメチルシリル);アルキリデン(例えば、メチリデン);ベンジリデン及び置換ベンジリデン基等がある。
【００８２】
ヒドロキシ及びアミノ保護基を除去するための適切な方法には、例えば、酸−、塩基、金属−若しくは酵素的−触媒化加水分解、又はo−ニトロベンジルオキシカルボニルのような基のための光分解的加水分解、又はシリル基のためのフロオライドイオンを用いる加水分解等がある。
【００８３】
アミド基のための保護基の例には、アラールコキシメチル(例えば、ベンジルオキシメチル及び置換ベンジルオキシメチル);アルコキシメチル(例えば、メトキシメチル及びトリメチルシリルエトキシメチル);トリアルキル/アリールシリル(例えば、トリメチルシリル、t−ブチルジメチルシリル、t−ブチルジフェニルシリル);トリアルキル/アリールシリルオキシメチル(例えば、t−ブチルジメチルシリルオキシメチル、t−ブチルジフェニルシリルオキシメチル); 4−アルコキシフェニル(例えば、4−メトキシフェニル); 2,4−ジ(アルコキシ)フェニル(例えば、2,4−ジメトキシフェニル); 4-アルコキシベンジル(例えば、4−メトキシベンジル);  2,4−ジ(アルコキシ)ベンジル(例えば、2,4-ジ(メトキシ)ベンジル);並びにアルカ−１−エニル(例えば、アリル、ブタ−１−エニル及び置換ビニル、例えば、２−フェニルビニル)等がある。
【００８４】
アラールオキシメチル基は、アミド基と適当なアラールコキシメチルクロリドと反応させることによりアミド上に導入でき、触媒水素化により除去できる。アルコキシメチル、トリアルキル/アリールシリル及びトリアルキル/シリルオキシメチル基は、アミドと適当なクロリドとを反応させることにより導入でき、酸を用いて、又は、シリル含有基の場合にフルオライドイオンを用いて除去することができる。アルコキシフェニル及びアルコキシベンジル基は、適切なハライドを用いるアリールレーション又はアルキレーションにより都合良く導入でき、硝酸セリウムアンモニウムを用いる酸化により除去できる。最後に、アルカ−１−エニル基はアミドと適切なアルデヒドとを反応させることにより導入でき、酸を用いて除去できる。
【００８５】
下記の実施例は例証目的のためであり、本出願の範囲を限定することを意図していない。各例示化合物は本発明の特定の独立した態様である。下記の非限定実施例では、別に特記しない限り、
（ｉ）  蒸発は真空下ロータリーエバポレーションにより行い、濾過により乾燥剤のような残留固体の除去後に仕上げを行い；
（ｉｉ）  操作は室温、すなわち、１８〜２５℃の範囲で、アルゴンや窒素のような不活性ガスの雰囲気下で行い；
（ｉｉｉ）  収率は例証のためにのみ示し、必ずしも得られる最大を示すものではなく；
（ｉｖ）  式(I)の最終生成物の構造は核（通常、プロトン）磁気共鳴（ＮＭＲ）及びマススペクトル法により確認した。プロトン磁気共鳴ケミカルシフト値はデルタスケールで測定し、ピーク多重性は、s、シングレット; d、ダブレット; t、トリプレット; m、マルチプレット; br、ブロード; q、クウォールテット, quin、クインテットを示し；
（ｖ）  中間体は、通常、十分に特徴付けしてなく、純度は薄層クロマトグラフィー(TLC)、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)、赤外分析(IR)又はNMR分析により評価し；そして、
（ｖｉ）  Biotageカートリッジは予め充填したシリカカートリッジ(40g〜400g)を意味し、biotageポンプ及びフラクションコレクター装置を使用して溶離した、Biotage UK Ltd, Hertford, Herts, UK。
【００８６】
略語
DCM                    ジクロロメタン
DMAP                  4-(N,N-ジメチルアミノ) ピリジン
DMSO                  ジメチルスルホキシド;
DMF                    ジメチルホルムアミド;
EDAC                  1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩;
HPLC                  高速9+液体クロマトグラフィー
HPMC                  ヒドロキシプロピルメチルセルロース;
LCMS                  液体クロマトグラフィー/マススペクトル;
RT                      室温;及び
THF                    テトラヒドロフラン。
【００８７】
下記の標準製造に関して製造を記載する。
方法Ａ−エステル加水分解
THF (2-4 mL)中のエステル(0.2 mmol)溶液に水中(2-4 mL)の水酸化リチウム一水和物 (2.5当量)又は水酸化ナトリウム(5.0当量)を加えた。得られた混合物を周囲温度で２〜４時間攪拌した。反応のｐＨを７．０未満に調整し、THFを真空下除去し水(8 mL)と置換した。得られた固体を濾過し、水洗し、乾燥して所望の酸を得た。必要に応じて、得られた酸をアセトニトリルで粉砕化し、次いで、濾過し、得られた固体を乾燥し、不純物を除いた。
【００８８】
方法Ｂ−ボロン酸カップリング
DCM (5〜10 mL)中のフェノール化合物(0.5 mmol)、ボロン酸(2当量)、銅(II)アセテート(1〜2当量)、トリエチルアミン(5当量)及び新たに活性化した4A分子篩(1 g)の溶液を周囲温度、周囲雰囲気下、２〜６日間攪拌した。必要に応じ、追加のDCMを加え、所望の溶媒量を維持し、そして追加の試薬を加えて所望の生成物への転換を促進した。反応混合物を濾過し、真空下DCMを除去し、残留油状物を酢酸エチル及び塩酸(1〜2 N)間で分配した。酢酸エチル層を分離し、炭酸水素ナトリウム水溶液、ブラインで洗い、乾燥し(MgSO4)、蒸発させて残渣を得、それをシリカ上で溶離液としてイソ−ヘキサン中の１０〜４０％酢酸エチルを用いてクロマトグラフィーに付し、所望のエステルを得た。
【００８９】
方法Ｃ−ボロン酸合成
−７８℃でエーテル(25 mL)中のブロミド(10 mmol)の溶液に、ヘキサン(11 mmol)中のｎ−ブチルリチウムの１．６Ｍ溶液を加えた。得られた反応混合物を−７８℃で１０分間攪拌し、トリ−イソプロピルボレート(11mmol)を加え、反応混合物を−７８℃で３０分間攪拌した。反応混合物を周囲温度にし、さらに３０分間攪拌し、水(20 mL)を用いて冷却した。水相を分離し、エーテル(25 mL)で洗い、濃塩酸でｐＨ１に酸性化した。得られた固体を濾過し、水洗し、乾燥して所望のボロン酸を得た。
【００９０】
（実施例１）
6-[3-{(1S)-1-メチル-2-メトキシ-エトキシ}-5-{3-メチルフェノキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボン酸
【００９１】
【化１３】
2007512301.tif 000015
【００９２】
方法Ａにしたがって、対応するエステルであるメチル6-[({3-{[(1S)-1-メチル-2-(メチルオキシ)エチル]オキシ}-5-[(3-メチルフェニル)オキシ]フェニル}カルボニル)アミノ]ピリジン-3-カルボキシレートから実施例１の化合物を製造した。 
【００９３】
【数１】
2007512301.tif 000016
【００９４】
実施例１と同様の方法を使用して、適切なエステルを使用して実施例１．１〜１．６も製造した。
【００９５】
【表１】
2007512301.tif 000017
【００９６】
実施例１の製造用中間体を下記のようにして製造した。
メチル6-[3-{(1S)-1-メチル-2-メトキシ−エトキシ}-5-{3-メチルフェノキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボキシレート
【００９７】
【化１４】
2007512301.tif 000018
【００９８】
実施例１の製造用の適切なエステルを方法Ｂにしたがってメチル6-{[(3-ヒドロキシ-5-{[(1S)-1-メチル-2-(メチルオキシ)エチル]オキシ}フェニル)カルボニル]アミノ}ピリジン-3-カルボキシレート及び3-メチルフェニルボロン酸から製造した。
m/z 451 (M+H)+。
【００９９】
実施例１．１〜１．６の製造用の適切なエステルも製造した。
【０１００】
【表２】
2007512301.tif 000019
【０１０１】
使用したボロン酸は商業的に入手するか又は方法Ｃにしたがって商業的に入手できる物質から合成した。メチル6-{[(3-ヒドロキシ-5-{[(1S)-1-メチル-2-(メチルオキシ)エチル]オキシ}フェニル)カルボニル]アミノ}ピリジン-3-カルボキシレートを下記に記載する通りにして製造した。
【０１０２】
メチル6-[3-{(1S)-1-メチル-2-メトキシ-エトキシ}-5-ヒドロキシフェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボキシレート
【０１０３】
【化１５】
2007512301.tif 000020
【０１０４】
THF (85 mL)中のメチル6-[({3-{[(1S)-1-メチル-2-(メチルオキシ)エチル]オキシ}-5-[(フェニルメチル)オキシ]フェニル}カルボニル)アミノ]ピリジン-3-カルボキシレート(0.038 mol)の攪拌下の溶液にメタノール(85 mL)を加えた。チャコール上のパラジウム触媒(10% w/wのもの1.7g)をアルゴン雰囲気下で加え、得られた懸濁液を一夜周囲温度で水素の雰囲気中で攪拌した。セライトにより触媒を濾過して除き、THFで洗い、ろ液を蒸発させて黄褐色固体を得た。これをエーテルにより粉末化して所望の化合物を得た（収率７２％）
【０１０５】
【数２】
2007512301.tif 000021
【０１０６】
メチル6-[3-{(1S)-1-メチル-2-メトキシ-エトキシ}-5-{ベンジルオキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボキシレート
【０１０７】
【化１６】
2007512301.tif 000022
【０１０８】
DMF (1 mL)を含有するDCM (250 mL)中の3-{[(1S)-1-メチル-2-(メチルオキシ)エチル]オキシ}-5-[(フェニルメチル)オキシ]安息香酸(75.9 mmol)の攪拌下の溶液に、オキサリルクロリドをアルゴン(151.7 mmol)下で滴加し、得られた溶液を４時間攪拌した。次いで、溶液を真空下蒸発させ、さらにDCM (3x100 mL)と共沸させ、高真空下残渣を乾燥させ、酸クロリドを得た。これは特性付けすることなく使用した。
【０１０９】
上述からの酸クロリド(おおよそ75.9 mmol)をTHF (100 mL)に溶解させ、アルゴン下、THF (100 mL)及びピリジン(100 mL)の混合物中のメチル6-アミノニコチネート(91.1 mmol)攪拌溶液に加えた。反応混合物を一夜攪拌し、次いで、溶媒の殆どを真空下で除去した。残渣を酢酸エチル(250 mL)に吸収させ、懸濁物を逐次的に1Mクエン酸(2部、酸性になるまで洗浄)及びブラインで洗浄し、得られた溶液を乾燥させ(MgSO4)、蒸発させて褐色ガム状物として粗生成物を得た。これをクロマトグラフィー(400 g Biotageシリカカートリッジ、20% v/v酢酸エチルを含有するヘキサンで溶離)に付し、所望の化合物を得た(収率50%)。
【０１１０】
【数３】
2007512301.tif 000023
【０１１１】
3-[(1S)-1-メチル-2-メトキシ-エトキシ-5-ベンジルオキシ-安息香酸
【０１１２】
【化１７】
2007512301.tif 000024
【０１１３】
THF(232 mL)及びメタノール(232 mL)混合物中のメチル3-{[(1S)-1-メチル-2-(メチルオキシ)エチル]オキシ}-5-[(フェニルメチル)オキソ]ベンゾエート(77.4 mmol)溶液を水酸化ナトリウム溶液(2N) (232 mmol)で処理し、得られた反応混合物を４時間周囲温度で攪拌した。得られた溶液を水(250 mL)で稀釈し、殆どの有機溶媒を真空下で除去した。得られた懸濁液をジエチルエーテル(3x200 mL)で洗浄し、洗浄液を捨てた。得られた水性溶液を塩酸溶液(2M)を用いてｐＨ４に酸性化し、酢酸エチル(2x200 mL)で抽出し、抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、乾燥させ(MgSO4)、蒸発させて目的化合物を得た（収率９９％）。
【０１１４】
【数４】
2007512301.tif 000025
【０１１５】
メチル3-[(1S)-1-メチル-2-メトキシ-エトキシ-5-ベンジルオキシ-ベンゾエート
【０１１６】
【化１８】
2007512301.tif 000026
【０１１７】
THF中のメチル3-ヒドロキシ-5-[(フェニルメチル)オキシ]ベンゾエート(77.4 mmol)にポリマー-支持トリフェニルホスフィン(155mmol、3 mmol/g 添加51.7g)及び(R)-(-)-1-メトキシ-2-プロパノール(102 mmol)に加えた。攪拌下の溶液にアルゴンでガスシールし、氷浴で冷却し、ジイソプロピルアゾジカルボキシレート溶液(116 mmol)を１０分間にわたって注射器から滴加した。この溶液の滴加後、２０分間攪拌し、次いで、濾過し、残渣をTHF (500 mL)で洗浄し、ろ液と洗浄液を合わせ、蒸発させて所望の粗化合物を得た。これをさらに精製しないで次の工程に使用した。
【０１１８】
【数５】
2007512301.tif 000027
【０１１９】
スペクトルは少量のビス(1-メチルエチル)ヒドラジン-1,2-ジカルボキシレートに一致するシグナルも含んだ。
メチル3-ヒドロキシ-5-[ベンジルオキシ]ベンゾエート
【０１２０】
【化１９】
2007512301.tif 000028
【０１２１】
DMF (6 L)中の3,5-ジヒドロキシベンゾエート (5.95 mol)溶液に攪拌下炭酸カリウム(9 mol)を加え、得られた懸濁液をアルゴン下周囲温度で攪拌した。これに、ベンジルブロミド(8.42 mol)を１時間にわたってゆっくりと加え（わずかに発熱）、反応混合物を一夜室温で攪拌した。次いで、塩化アンモニウム溶液(5 L)次いで水(35 L)を用いて注意深く冷却した。水性懸濁物をDCM (1x3 L 及び2x5 L)で抽出した。抽出物を合わせ、水洗(10 L)し、一夜乾燥した(MgSO4)。溶液を真空下で蒸発させ、３バッチをクロマトグラフィーに付し(フラッシュカラム、3x2 kg シリカ、10% DCMを含有するヘキサン、純DCM、50%酢酸エチルを含有するDCMからなるグラジエントを用いて溶離)出発物質を除き、次いで、粗溶離液を175 gバッチのクロマトグラフィーに付し(Amicon HPLC, 5 kg順相シリカ、20% v/v 酢酸エチルを含有するイソヘキサンを用いて溶離)、所望の化合物を得た(収率21%)。
【０１２２】
【数６】
2007512301.tif 000029
【０１２３】
（実施例２）
6-[3-{1メチルエトキシ}-5-{3,5ジフルオロ-フェノキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボン酸
【０１２４】
【化２０】
2007512301.tif 000030
【０１２５】
対応するエステルであるメチル6-[({3-[(3,5-ジフルオロフェニル)オキシ]-5-[(1-メチルエチル)オキシ]フェニル}カルボニル)アミノ]ピリジン-3-カルボキシレートから方法Ａにしたがつて実施例２の化合物を製造した。
【０１２６】
【数７】
2007512301.tif 000031
【０１２７】
実施例２と同様の方法を使用して、実施例２．１〜２．２も適切なエステルを使用して製造した。
【０１２８】
【表３】
2007512301.tif 000032
【０１２９】
実施例２製造用の中間体を下記のようにして製造した。
メチル6-[3-{1メチルエトキシ}-5-{3,5ジフルオロ-フェノキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボキシレート
【０１３０】
【化２１】
2007512301.tif 000033
【０１３１】
実施例２の製造用の適切なエステルを、メチル6-[({3-ヒドロキシ-5-[(1-メチルエチル)オキシ]フェニル}カルボニル)アミノ]ピリジン-3-カルボキシレート及び 3,5-ジフルオロフェニルボロン酸から方法Ｂから製造した。
【０１３２】
【数８】
2007512301.tif 000034
【０１３３】
実施例２．１〜２．２の製造用の適切なエステルも製造した。
【０１３４】
【表４】
2007512301.tif 000035
【０１３５】
使用したボロン酸は商業的に入手するか又は方法Ｃにしたがって商業的に入手できる物質から合成した。メチル6-[({3-ヒドロキシ-5-[(1-メチルエチル)オキシ]フェニル}カルボニル)アミノ]ピリジン-3-カルボキシレートを下記の通りにして製造した。
【０１３６】
メチル6-[3-{1メチルエトキシ}-5-ヒドロキシフェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボキシレート
【０１３７】
【化２２】
2007512301.tif 000036
【０１３８】
1:1 THF/メタノール混合物(1 L)中のメチル6-[({3-[(1-メチルエチル)オキシ]-5-[(フェニルメチル)オキシ]フェニル}カルボニル)アミノ]ピリジン-3-カルボキシレート(64.9 mmol)溶液に攪拌下チャコール上のパラジウム触媒(10% w/wを3.3g)を添加した。得られた懸濁液を水素雰囲気下一夜攪拌した。セライトを通る濾過により触媒を除き、真空下濾液を蒸発させた。ジエチルエーテルを用いる粉末化により所望の化合物を得た(収率73%)
【０１３９】
【数９】
2007512301.tif 000037
【０１４０】
メチル6-[3-{1メチルエトキシ}-5-{ベンジルオキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボキシレート
【０１４１】
【化２３】
2007512301.tif 000038
【０１４２】
DCM (260 mL)及びDMF (1 mL)中の3-[(1-メチルエチル)オキシ]-5-[(フェニルメチル)オキシ]安息香酸(95.5 mmol)溶液にオキサリルクロリド(477.5 mmol)を加えた。得られた溶液を４時間攪拌した。反応混合物を真空下蒸発させ、残渣をジエチルエーテル(3x150 mL)と共沸させ、高真空下１時間乾燥させた。残渣をTHF (100 mL)に溶解させ、ピリジン(40 mL)を含有するTHF (100 mL)中のメチル6-アミノニコチネート(114.6 mmol)溶液にアルゴン下攪拌下に加えた。反応混合物を一夜攪拌し、次いで、酢酸エチル及びクエン酸(1M)間に分配させた。有機物を合わせ、クエン酸(1M)、水酸化ナトリウム溶液(0.5M)、水、ブラインで洗浄し、乾燥し(MgSO4)、真空下濃縮をした。酢酸エチルで残渣を粉砕化し、所望の化合物を得た(収率68%)。
【０１４３】
【数１０】
2007512301.tif 000039
【０１４４】
3-[1-メチルエトキシ]-5-[ベンジルオキシ]安息香酸
【０１４５】
【化２４】
2007512301.tif 000040
【０１４６】
THF/メタノールの1:1混合物(300 mL)中のメチル3-[(1-メチルエチル)オキシ]-5-[(フェニルメチル)オキシ]ベンゾエート(37g)溶液に水酸化ナトリウム溶液(4M) (150ml)を加えた。得られた混合物を４５分間還流し、その後、有機物を真空下で除去した。水性物を塩酸(2M)でｐＨ４に酸性化し、酢酸エチルで抽出した。有機物を合わせ、水、ブラインで洗浄し、乾燥し(MgSO4)、真空下で濃縮し、所望化合物を得た(33.45g)。精製しないで使用した。
【０１４７】
【数１１】
2007512301.tif 000041
【０１４８】
メチル3-[1-メチルエトキシ]-5-[ベンジルオキシ]ベンゾエート
【０１４９】
【化２５】
2007512301.tif 000042
【０１５０】
DMF (250 mL)中のメチル3-ヒドロキシ-5-[(1-メチルエチル)オキシ]ベンゾエート(25g)溶液に無水炭酸カリウム(297 mmol)及びベンジルブロミド(143 mmol)を加えた。得られた混合物を６０℃で５時間攪拌し、次いで、室温に冷却した。真空下で溶媒を除去し、残渣を酢酸エチル及び水間で分配した。有機物を合わせ、さらに水及びブラインで洗浄し、乾燥し(MgSO4)、真空下で濃縮し、所望の化合物を得た(37g)。精製しないで使用した。
【０１５１】
【数１２】
2007512301.tif 000043
【０１５２】
メチル3-ヒドロキシ-5-[1-メチルエトキシ]ベンゾエート
【０１５３】
【化２６】
2007512301.tif 000044
【０１５４】
DMF (180 mL)中のメチル3,5-ジヒドロキシベンゾエート(0.1 mol)溶液に攪拌下粉末炭酸カリウム(0.2 mol)及び2-ヨードプロパン(0.1 mol)を加え、得られた混合物を周囲温度で１６時間攪拌した。水(1000 mL)中に反応混合物を注ぎ、混合物をエーテルで抽出した。抽出物を合わせ、逐次的に水（２回）及びブラインで洗浄し、溶液を乾燥し(MgSO4)、濾過し、真空下蒸発させて淡黄色油状物として粗生成物を得た(12.6g)。これをトルエン(40 mL)で処理し、一夜放置した。不溶物質(出発フェノール)を濾過により除き、真空下濾液を蒸発させた。得られた油状物をクロマトグラフィー(2x90 g Biotageシリカカートリッジ、エチル酢酸を10%から15% v/vまで増加させながら含むヘキサンを用いて溶離)に付した。標題化合物を油状物として得た(収率25%)。これは同様の方法により調製した試料に対するＴＬＣにより同定した。
【０１５５】
【数１３】
2007512301.tif 000045
【０１５６】
（実施例３）
6-[3-{4-フルオロフェノキシ}-5-{(1S)-1-メチルプロパ-2-エン-1-イルオキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボン酸 
【０１５７】
【化２７】
2007512301.tif 000046
【０１５８】
実施例３の化合物を対応するエステルであるメチル6-{[3-[(4-フルオロフェニル)オキシ]-5-{[(1S)-1-メチルプロパ-2-エン-1-イル]オキシ}フェニル)カルボニル]アミノ}ピリジン-3-カルボキシレートから方法Ａにしたがって製造したが、酸沈殿物を酢酸エチルで数回抽出し、濃縮して所望の化合物を得た(収率55%)。
【０１５９】
【数１４】
2007512301.tif 000047
【０１６０】
実施例３の化合物の製造用中間体を下記のようにして製造した。
メチル6-[3-{4-フルオロフェノキシ}-5-{(1S)-1-メチルプロパ-2-エン-1-イルオキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボキシレート
【０１６１】
【化２８】
2007512301.tif 000048
【０１６２】
ジイソプロピルアゾジカルボキシレート(1.1 mmol)を、THF (10 mL)中のメチル6-[({3-[(4-フルオロフェニル)オキシ]-5-ヒドロキシフェニル}カルボニル)アミノ]ピリジン-3-カルボキシレート(1 mmol)、トリフェニルホスフィン(1.1 mmol)及び(R) 3-ブチナ-2-オール(1.1 mmol)の溶液に滴加した。反応物を周囲温度で１６時間攪拌した。得られた反応混合物を真空下で濃縮し、残渣を1:1酢酸エチル/イソヘキサンで粉末化し、濾過し、濾液を真空下で濃縮した。残渣を、溶離液としてイソヘキサン中の20-25%酢酸エチルを用いるシリカ上のクロマトグラフィーに付し、所望の化合物を得た(収率74%)。
m/z 436(M+H)+。
【０１６３】
メチル6-[3-{4-フルオロフェノキシ}-5-ヒドロキシフェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボキシレート
【０１６４】
【化２９】
2007512301.tif 000049
【０１６５】
チャコール上のパラジウム(10重量%)(250 mg)を、THF (70 mL)及びメタノール(70 mL)中のメチル6-[({3-[(4-フルオロフェノキシ)オキシ]-5-[(フェニルメチル)オキシ]フェニル}カルボニル)アミノ]ピリジン-3-カルボキシレート(5.28 mmol)溶液にアルゴン雰囲気下加えた。不活性雰囲気に代えて水素雰囲気にし、反応混合物を周囲温度で６時間攪拌した。水素雰囲気に代えて空気雰囲気にし、反応混合物をセライトによる濾過をし、真空下濃縮した。残渣を、溶離液としてDCM中の1-5%メタノールを用いてシリカ上のクロマトグラフィーに付し、所望化合物を得た(収率78%)。
【０１６６】
【数１５】
2007512301.tif 000050
【０１６７】
メチル6-[3-{4-フルオロフェノキシ}-5-{ベンジルオキシ}フェニルカルボニルアミノ]ピリジン-3-カルボキシレート
【０１６８】
【化３０】
2007512301.tif 000051
【０１６９】
オキサリルクロリド(22.2 mmol)をDCM (50 mL)及びDMF (0.5 mL)中の3-[(4-フルオロフェニル)オキシ]-5-[(フェニルメチル)オキシ]安息香酸(7.39 mmol)のスラリーに加えた。反応物を周囲温度で６時間３０分にわたって攪拌し、次いで、真空下で濃縮した。残渣をDCM (x3)と共沸し、真空下で乾燥させた。メチル6-アミノニコチネート(8.87 mmol)及びピリジン(40-50 mL)を得られた残渣に加え、反応物をアルゴン雰囲気下で１６時間攪拌した。反応物を真空下で濃縮し、残渣を酢酸エチル及び塩酸(2M)間で分配した。有機層を分離し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、ブラインで洗浄し、乾燥させ(MgSO4)、次いで、真空下で濃縮した。残渣を溶離液としてイソヘキサン中30%酢酸エチルを用いてシリカ上でクロマトグラフィーに付し、所望の化合物を得た(収率72%)。
【０１７０】
【数１６】
2007512301.tif 000052
【０１７１】
3-(4-フルオロフェノキシ)-5-(ベンジルオキシ)安息香酸
【０１７２】
【化３１】
2007512301.tif 000053
【０１７３】
水酸化ナトリウム溶液(1N) (42 mmol)を、メタノール(30 mL)及びTHF (10 mL)中のメチル3-[(4-フルオロフェニル)オキシ]-5-[(フェニルメチル)オキシ]ベンゾエート(8.32 mmol)溶液に加えた。反応物を周囲温度で１６時間攪拌し、有機溶媒を真空下で除去し、水と交換した。反応混合物を塩酸(2M)で酸性化し、生じた沈殿を濾過し、水洗し、真空下で乾燥して所望化合物を得た(収率89%)。
【０１７４】
【数１７】
2007512301.tif 000054
【０１７５】
メチル3-(4-フルオロフェノキシ)-5-(ベンジルオキシ)ベンゾエート
【０１７６】
【化３２】
2007512301.tif 000055
【０１７７】
方法Ｂにしたがって、メチル3-ヒドロキシ-5-[(フェニルメチル)オキシ]ベンゾエートから上記化合物を製造した。
【０１７８】
【数１８】
2007512301.tif 000056
【０１７９】
メチル3-ヒドロキシ-5-(ベンジルオキシ)ベンゾエート
【０１８０】
【化３３】
2007512301.tif 000057
【０１８１】
メチル3-ヒドロキシ-5-[(フェニルメチル)オキシ]ベンゾエートの製造は実施例１で記載した。
【０１８２】
生物学
試験
式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)又は(Ie)の化合物の生物学的作用を下記のようにして試験できる。
【０１８３】
（１）  GLKの酵素活性をGLK、ATP及びグルコースをインキュベートすることにより測定できる。生成物形成速度を、分析物をG-6-Pデヒドロゲナーゼ、NADP/NADPH系にカップリングさせ、340nmにおける光学密度の線状増加を測定することにより決定できる(Matschinsky等1993)。化合物によるGLKの活性を、Brocklehurst等(Diabetes 2004, 53, 535-541)に記載されている通り、GLKRP (GLK調節タンパク質)の存在下又は不存在下でこの分析を使用して評価できる。
【０１８４】
（２）  GLK 及びGLKRP間の結合相互作用を測定するためのGLK/GLKRP結合分析。この方法は、GLK及びGLKRP間の相互作用を調節することによりGLKを調節する化合物を同定するのに使用できる。GLKRP及びGLKを、場合により試験化合物の存在下で、抑制濃度のF-6-Pと共にインキュベートし、GLK及びGLKRP間の相互作用の程度を測定する。F-6-Pを置換するか又は他の方法でGLK/GLKRP相互作用を減少させる化合物は、形成したGLK/GLKRP複合体の量の減少により検出し得る。F-6-P結合性を促進するか又は他の方法でGLK/GLKRP相互作用を増強する化合物は、形成したGLK/GLKRP複合体の量の増加により検出し得る。このような結合性分析の特定の例を下記に示す。
【０１８５】
GLK/GLKRPシンチレーション近接アッセイ
組換ヒトGLK及びGLKRPを使用して、WO01/20327（本願の内容を参照として本明細書に含める）に記載されている通りにして「混合及び測定 “mix and measure”」９６ウエルSPA (scintillation proximity assay)を展開した。GLK (ビオチン化)及びGLKRPを、シグナルを与える、放射標識化[3H]F-6-P (Amersham Custom Synthesis TRQ8689)の阻害濃度の共存下でストレプトアビジン結合SPA ビーズ(streptavidin linked SPA beads) (Amersham)とインキュベートした。F-6-Pを置換するか又はその他の方法でGLK/GLKRP結合性相互作用を妨害する化合物はこの信号を消失させ得る。
【０１８６】
結合性アッセイを室温で２時間行った。反応混合物は50mM Tris-HCl (pH 7.5)、2mM ATP、5mM MgCl2、0.5mM DTT、組換ビオチン化GLK ( 0.1 mg)、組換GLKRP (0.1 mg)、0.05mCi [3H] F-6-P (Amersham)を含有し、最終容量を100mlにした。インキュベート後、GLK/GLKRP複合体形成の程度を、0.1mg/ウエルアビジン結合SPAビーズ(Amersham)の添加及びPackard TopCount NXTでのシンチレーション計数により決定した。
【０１８７】
（３）  GLKRP及びF-6-P間の結合性相互作用を測定するためのF-6-P/GLKRP結合性アッセイ。この方法を使用して化合物の作用のメカニズムのさらなる情報を与えることができる。GLK/GLKRP結合性アッセイで同定した化合物を、F-6-Pを置換すること、又はその他の方法でGLK/GLKRP相互作用を変えることのいずれかによりGLK及びGLKRPの相互作用を調節できる。例えば、タンパク質−タンパク質相互作用は、多結合性部位による相互作用によりもたらすことを一般に知られている。したがって、GLK及びGLKRP間の相互作用を修正する化合物は１以上の異なる結合性部位に結合することにより作用できる。
【０１８８】
F-6-P/GLKRP結合性アッセイは、GLKRPの結合性部位からF-6-Pを置換することによりGLK及びGLKRPの相互作用を調節できるような化合物のみ同定できる。
GLKRPを試験化合物及びF-6-Pの阻止濃度（GLKの不存在下）とインキュベートし、F-6-P及びGLKRP間の相互作用の程度を測定する。F-6-Pの結合性をGLKRPに置換する化合物を、形成したGLKRP/F-6-P複合体の量の変化により検出できる。結合性アッセイのような特定の例を以下に記載する。
【０１８９】
F-6-P / GLKRP シンチレーション近接アッセイ
組換ヒトGLKRPを使用して、WO01/20327（本願の内容を参照として本明細書に含める）に記載されている通りにして「混合及び測定 “mix and measure”」９６ウエルSPA (scintillation proximity assay)を展開した。FLAG-標識化GLKRPを、放射標識化[3H]F-6-Pの阻害濃度の共存下でプロテインＡコート結合SPA ビーズ(Amersham)及び抗−FLAG抗体とインキュベートした。シグナルが発生する。F-6-Pを置換する化合物はこのシグナルを消失させ得る。このアッセイとGLK/GLKRP結合アッセイとの組合せは、F-6-Pを置換することにより観察者がGLK/GLKRP結合相互作用を妨害する化合物を同定できる。
【０１９０】
結合性アッセイを室温で２時間行う。反応混合物は50mM Tris-HCl (pH 7.5)、2mM ATP、5mM MgCl2、0.5mM DTT、組換FLAG標識化GLKRP (0.1 mg)、抗-FLAG M2抗体(0.2mg)(IBI Kodak)、0.05mCi [3H] F-6-P (Amersham)を含有し、最終容量を100mlにした。インキュベート後、F-6-P/GLKRP複合体形成の程度を、0.1mg/ウエルプロテインＡ結合SPAビーズ(Amersham)の添加及びPackard TopCount NXTでのシンチレーション計数により決定した。
【０１９１】
組換GLK及びGLKRPの産生
mRNAの調製
Sambrook J, Fritsch EF & Maniatis T, 1989に記載されている通りにして、ヒト肝臓総mRNAを4Mグアニジンイソチオシアネート、2.5mMクエン酸塩、 0.5% Sarkosyl、100mM b-メルカプトエタノール中でポリトロンホモゲナイズ後、135,000g (最大)で5.7M CsCl、25mM酢酸ナトリウムにより遠心分離することにより調製した。
ポリA+ mRNAをFastTrackTM mRNA 分離キット(Invitrogen)を使用して直接調製した。
【０１９２】
GLK及びGLKRP cDNAシーケンスのPCR増幅
Sambrook, Fritsch & Maniatis, 1989に記載されている確立した技術を使用してヒト肝臓mRNAからPCRによりヒトGLK及びGLKRP cDNAを得た。Tanizawa 等1991及びBonthron, D.T.等1994 (Warner, J.P. 1995で後に訂正)に示されているGLK及びGLKRP cDNAに従ってPCRプライマーをデザインした。
【０１９３】
Bluescript IIベクター中のクローニング
pBluescript II, (Short等1998)を使用してE. coli中でGLK及びGLKRP cDNA
をクローン化した。pBluescript IIはYanisch-Perron C 等(1985)により使用されたものと類似する組換クローニングベクター系であり、多数ユニーク制限部位を含有するポリリンカーDNA断片を持つcolEI-系レプリコンを含み、バクテリオファージT3及びT7プロモーターシーケンスにより隣接され、複製の線状ファージ起源及びアンピシリン薬抵抗性マーカー遺伝子である。
【０１９４】
形質転換
E. Coli形質転換は、一般に、エレクトロボレーションにより行った。菌株DH5a 又はBL21(DE3)の400 ml培養物をL-broth中で0.5のOD 600まで増殖させ、2,000gで遠心分離することにより集菌した。氷冷脱イオン水中で２回細胞を洗浄し、10% グリセリン1ml 中に再懸濁させ、−７０℃でアリコート中に保存した。ライゲーションミックスをMillipore V seriesTM メンブラン(0.0025mmボアサイズ)を使用して脱塩した。40mlの細胞を、0.2cmエレクトロポレーションキュベット中で１０分間氷上の1mlライゲーションミックス又はプラスミドDNAと共にインキュベートし、次いで、0.5kVcm-1, 250mF でGene PulserTM装置(BioRad)を使用してパルス処理をした。100mg/mlのテトラサイクリン又はアンピシリンで補足したL-寒天上で形質転換を選択した。
【０１９５】
発現
N-末端メチオニンに隣接する6-Hisタグを含有する組換タンパク質を生成する、E.coli BL21細胞中のベクターpTB375NBSEからGLKを発現させた。あるいは、別の適切なベクターはpET21(+)DNA（Novagen, Cat number 697703）である。Qiagen (cat no 30250)から購入したニッケル−ニトリロトリ酢酸アガロースで充填したカラム上で、6-Hisタグを使用して組換タンパク質の精製をした。
【０１９６】
C-末端FLAGタグを含有する組換タンパク質を生成する、E.coli BL21細胞中のベクターpFLAG CTC (IBI Kodak)からGLKRPを発現させた。該タンパク質は、最初、DEAE Sepharoseイオン交換により精製し、次いで、Sigma-Aldrich (cat no. A1205)から購入したM2 抗-FLAG免疫親和性カラム上の最終精製用FLAGタグの利用により精製した。
【０１９７】
GLKのビオチン化：
Sigma-Aldrich (cat no. B2643)から購入したビオチンアミドカプロエートN-ヒドロキシサクシンイミドエステル(biotin-NHS)と反応させることによりGLKを
ビオチン化した。簡単に言えば、目標タンパク質(GLK)の遊離アミノ基を、共有結合ビオチンを含有する生成物をもたらす安定なアミド結合を形成する一定のモル比でビオチン-NHSと反応させる。過剰の、非−複合化ビオチン-NHSを透析により生成物から除いた。具体的には、7.5mg のGLKを、4mL の25mM HEPES pH7.3、0.15M KCl、1mMジチオトレイトール、1mM EDTA、1mM MgCl2(バッファーA)中の0.31mg のビオチン-NHSに加えた。この反応混合物を、さらに22mg のビオチン-NHSを含有する100mLのバッファーAに対して透析した。４時間後、過剰のビオチン-NHSをバッファーAに対する延長透析により除去した。
【０１９８】
ラットに対する経口投与後の血漿レベル及び血漿タンパク質結合の測定
ラットに対する化合物の投与及び血漿のサンプリング
惑星粉砕化合物[15分、500rpm、5個の Zirconium Balls、Puluerisette 7 Mill (Glen Creston Ltd, Stanmore, Middlesex, UK)中]を0.5% HPMC Tween中に懸濁させ、High Fat Fed(Research Diets, D12451、14日間無制限飼育) Female Alderley Park Zucker 又はAlderley Park Wistar系ラットに5ml/kgの割合で、強制経口投与により0.3〜10mg/kgの用量で投与した。血漿試料を下記のような意識血液サンプリング(conscious blood sampling)又は末端血液サンプリングのいずれかにより血漿試料を得た。
【０１９９】
意識血液サンプリング（化合物レベル又は血液化学のため）−600μl Starstedt Multivette (EDTA)及び22G針を使用し、必要な経過時間時に尾静脈から静脈血液試料を採取した。試料を氷上に保持し、3000rpmで引き抜き１５〜３０分以内に１０分間遠心分離をした。血漿を吸引し、−２０℃で保存した。
【０２００】
化合物レベル又は血液化学のための末端血液サンプリング−実験の終了時に、CO2/O2に露出して動物を安楽死させた。心臓穿刺により血液試料を採取した。試料を氷上に保持し、3000rpmで引き抜き１５〜３０分以内に１０分間遠心分離をした。血漿を吸引し、−２０℃で保存した。
【０２０１】
ラット血漿中の化合物レベルの測定
25μlのラット血漿を96ウエルタンパク質沈殿プレート(Varian inc. Palo Alto, California, USA)中のウエルに加えた。各ウエルに、内部標準として作用する1μg/mlの(3-イソプロポキシ-5-ベンゾオキシ-ベンゾイル)アミノピリジン3-カルボン酸を含有する、500μlのアセトニトリルを加えた。次いで、血漿／溶媒混合物を真空下沈殿プレートにより引っ張り、溶離液を集めた。この溶離液を遠心分離エバポレーターを使用して蒸発させて乾燥し、200μlのメタノール：水：ギ酸(60:40:0.1)中で再構成した。
【０２０２】
次いで、再構成した試料をタンデム質量分析検出を備えた高速液体クロマトグラフィー(HPLC-MS-MS)を使用して分析した。HPLC は、Phenomenex Prodigy C8、50x4.6、5μm  カラム(Phenomenex, Macclesfield, UK)を使用し、下記のグラジエント溶離プロフィールを使用し、注入量10μlを使用し、流速1ml/分で行った。
移動相A                  水中0.1%ギ酸
移動相B                  メタノール中0.1%ギ酸
移動相グラジエント        ０分50% A
０．５分5% A
２．６分50% A
３．０分50% A。
【０２０３】
Applied Biosystems API3000 Mass spectrometer (Applied Biosystems, Foster City, California, USA )を使用して質量分析を行った。試料を走らせる前に質量分析器を試験化合物の構造に対して最適化した。
【０２０４】
試験試料の濃度を、内部標準のピーク高さに対する試験試料のピーク高さの比から決定した。試験試料の濃度を、上述した通りの処置である、内部標準として(3-イソプロピル-5-ベンジルオキシ-ベンゾイル)アミノピリジン3-カルボン酸を使用してラット血漿の試料に加えられた試験試料の既知の濃度を使用することにより調製した濃度に対する比に関連する標準曲線に関して算出した。
【０２０５】
化合物の血漿タンパク質結合の測定
化合物の血漿タンパク質結合を、平衡透析法(W. Lindner et al, J.Chromatography, 1996, 677, 1-28 )を使用して測定した。化合物を、20μMの濃度で18時間37℃で血漿及び等張リン酸塩バッファーpH7.4を用いて透析した(透析細胞で各1ml)。SpectrumTM20-セルを、テフロン、セミミクロ透析細胞及び分子量分断12〜14000 Daltonで 47mm Spectra/PorTM2膜ディスク(PerBio Science UK Ltd, Tattenhall, Cheshireにより供給)と共に使用した。血漿及びバッファー試料を透析後に除き、HPLCUV/MS (UV及び質量スペクトル検出の高速液体クロマトグラフィー)を使用して分析し、血漿中の遊離濃度％を与えた。
【０２０６】
血漿半減期の評価
血漿半減期は、血漿中の化合物の濃度が最初の値の半分に減少するのに要した時間である。これは、典型的には、試験化合物の静脈投与後に、次いで、上述した通りにして血漿試料の化合物濃度の測定をして決定される。血漿半減期を、試料採取時間(t,直線状)に対する血漿濃度の対数(lnCp)をプロットする片対数プロットから評価する。見かけ一次消失率定数（ｋ）は線の傾斜に等しく、消失半減期(t1/2)は前記消失率定数の逆数である(Gibaldi, M及びPerrier, D, 1975 Pharmacokinetics, Marcel Dekker, New York)。
【０２０７】
【数１９】
2007512301.tif 000058
【０２０８】
本発明の化合物は下記の特徴を有する。
（ｉ）  グルコキナーゼについての活性化活性のEC50 が約200nM未満;
（ｉｉ）  約0.04%〜約1%の血漿中の遊離％;
（ｉｉｉ）  化合物1mg／ラット体重kgの標準化用量について約0.3μM〜約10μMのピーク血液濃度(結合及び遊離双方を含む);及び
（ｉｖ）  少なくとも約１時間の血漿中の半減期(t1/2)である。
【０２０９】
例えば、実施例１は下記の値を示す。
【０２１０】
【表５】
2007512301.tif 000059
【０２１１】
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