(57)【要約】本発明は、ＩＲＴＡ−５に高い親和性で特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体（特に、ヒトモノクローナル抗体）を提供する。本発明の抗体をコードする核酸分子、発現ベクター、宿主細胞、および本発明の抗体を発現するための方法もまた、提供される。本発明の抗体を含む免疫複合体、二重特異性分子および薬学的組成物もまた、提供される。本発明はまた、ＩＲＴＡ−５を検出するための方法、および非ホジキンリンパ腫を含むＢ細胞の悪性腫瘍を処置するための方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位であって、該抗体は：
（ａ）５×１０−８Ｍ以下のＫＤでヒトＩＲＴＡ−５に結合し；
（ｂ）ヒトＩＲＴＡ−１、ヒトＩＲＴＡ−２、ヒトＩＲＴＡ−３、およびヒトＩＲＴＡ−４に実質的に結合せず；そして
（ｃ）ヒトＢリンパ球およびＢ細胞腫瘍株に結合するが、ＣＤ３＋末梢血Ｔ細胞、ＣＤ１Ａ＋末梢血樹状細胞、ＣＤ１４＋末梢血単球、またはＣＤ５６＋末梢血ナチュラルキラー細胞に実質的に結合しない、
単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位。
【請求項２】
前記抗体が、ヒト抗体である、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
前記抗体が、キメラ抗体またはヒト化抗体である、請求項１に記載の抗体。
【請求項４】
前記抗体が、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプの完全長抗体である、請求項２に記載の抗体。
【請求項５】
前記抗体が、抗体フラグメントまたは単鎖抗体である、請求項２に記載の抗体。
【請求項６】
前記抗体が、３×１０−８Ｍ以下のＫＤでヒトＩＲＴＡ−５に結合する、請求項２に記載の抗体。
【請求項７】
前記抗体が、１×１０−９Ｍ以下のＫＤでヒトＩＲＴＡ−５に結合する、請求項２に記載の抗体。
【請求項８】
前記抗体が、０．１×１０−９Ｍ以下のＫＤでヒトＩＲＴＡ−５に結合する、請求項２に記載の抗体。
【請求項９】
前記抗体が、０．０５×１０−９Ｍ以下のＫＤでヒトＩＲＴＡ−５に結合する、請求項２に記載の抗体。
【請求項１０】
前記抗体が、１×１０−９Ｍと１×１０−１１Ｍとの間のＫＤでヒトＩＲＴＡ−５に結合する、請求項２に記載の抗体。
【請求項１１】
前記ヒトＩＲＴＡ−５が、配列番号３７（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＡＬ６０２５０）に示されるようなアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項２に記載の抗体。
【請求項１２】
前記ヒトＩＲＴＡ−１が、配列番号３８（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＰ＿１１２５７２）に示されるようなアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項２に記載の抗体。
【請求項１３】
前記ヒトＩＲＴＡ−２が、配列番号３９（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＰ＿１１２５７１）に示されるようなアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項２に記載の抗体。
【請求項１４】
前記ヒトＩＲＴＡ−３が、配列番号４０（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＡＬ５９３９０）に示されるようなアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項２に記載の抗体。
【請求項１５】
前記ヒトＩＲＴＡ−４が、配列番号４１（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＡＬ６０２４９）に示されるようなアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項２に記載の抗体。
【請求項１６】
前記Ｂ細胞腫瘍株が、Ｄａｕｄｉ細胞株、Ｒａｍｏｓ細胞株、およびＳＵ−ＤＨＬ−４細胞株からなる群より選択される、請求項２に記載の抗体。
【請求項１７】
単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位であって、該抗体が、ＩＲＴＡ−５への結合に関して、以下：
（ａ）配列番号１９、配列番号２０、および配列番号２１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；ならびに
（ｂ）配列番号２２、配列番号２３、および配列番号２４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
を含む参照抗体と相互に競合する、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位。
【請求項１８】
前記参照抗体が、以下：
（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および
（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
を含む、請求項１７に記載の抗体。
【請求項１９】
前記参照抗体が、以下：
（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および
（ｂ）配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
を含む、請求項１７に記載の抗体。
【請求項２０】
前記参照抗体が、以下：
（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
を含む、請求項１７に記載の抗体。
【請求項２１】
ヒトＶＨ  ３−３３遺伝子の産物である重鎖可変領域またはヒトＶＨ  ３−３３遺伝子に由来する重鎖可変領域を含む、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位であって、該抗体が、ＩＲＴＡ−５に特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位。
【請求項２２】
ヒトＶＨ  ＤＰ４４遺伝子、ヒトＶＨ  ３−２３遺伝子もしくはヒトＶＨ  ３−７遺伝子の産物である重鎖可変領域、またはヒトＶＨ  ＤＰ４４遺伝子、ヒトＶＨ  ３−２３遺伝子もしくはヒトＶＨ  ３−７遺伝子に由来する重鎖可変領域を含む、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位であって、該抗体が、ＩＲＴＡ−５に特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位。
【請求項２３】
ヒトＶＫ  Ｌ６遺伝子の産物である軽鎖可変領域またはヒトＶＫ  Ｌ６遺伝子に由来する軽鎖可変領域を含む単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位であって、該抗体が、ＩＲＴＡ−５に特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位。
【請求項２４】
単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位であって、以下：
（ａ）ヒトＶＨ  ３−３３遺伝子、ヒトＶＨ  ＤＰ４４遺伝子、ヒトＶＨ  ３−２３遺伝子またはヒトＶＨ  ３−７遺伝子の重鎖可変領域；および
（ｂ）ヒトＶｋ  Ｌ６の軽鎖可変領域；
を含み、該抗体が、ＩＲＴＡ−５に特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位。
【請求項２５】
前記抗体が、ヒトＶＨ  ３−３３遺伝子の重鎖可変領域およびヒトＶＫ  Ｌ６遺伝子の軽鎖可変領域を含む、請求項２４に記載の抗体。
【請求項２６】
前記抗体が、ヒトＶＨ  ＤＰ４４遺伝子の重鎖可変領域およびヒトＶＫ  Ｌ６遺伝子の軽鎖可変領域を含む、請求項２４に記載の抗体。
【請求項２７】
前記抗体が、ヒトＶＨ  ３−２３遺伝子の重鎖可変領域およびヒトＶＫ  Ｌ６遺伝子の軽鎖可変領域を含む、請求項２４に記載の抗体。
【請求項２８】
前記抗体が、ヒトＶＨ  ３−７遺伝子の重鎖可変領域およびヒトＶＫ  Ｌ６遺伝子の軽鎖可変領域を含む、請求項２４に記載の抗体。
【請求項２９】
前記抗体が、ヒトＩＲＴＡ−１、ヒトＩＲＴＡ−２、ヒトＩＲＴＡ−３、およびヒトＩＲＴＡ−４に特異的に結合しない、請求項２４に記載の抗体。
【請求項３０】
前記ＩＲＴＡ−５が、配列番号３７（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＡＬ６０２５０）に示されるようなアミノ酸配列を有するヒトＩＲＴＡ−５ポリペプチドを含む、請求項２４に記載の抗体。
【請求項３１】
前記ヒトＩＲＴＡ−１が、配列番号３８（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＰ＿１１２５７２）に示されるようなアミノ酸配列を有するヒトＩＲＴＡ−５ポリペプチドを含む、請求項２９に記載の抗体。
【請求項３２】
前記ヒトＩＲＴＡ−２が、配列番号３９（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＰ＿１１２５７１）に示されるようなアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項２９に記載の抗体。
【請求項３３】
前記ヒトＩＲＴＡ−３が、配列番号４０（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＡＬ５９３９０）に示されるようなアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項２９に記載の抗体。
【請求項３４】
前記ヒトＩＲＴＡ−４が、配列番号４１（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＡＬ６０２４９）に示されるようなアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項２９に記載の抗体。
【請求項３５】
単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位であって、以下：
ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域；ならびにＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
を含み、以下：
（ａ）重鎖可変領域のＣＤＲ３配列が、配列番号７、配列番号８、および配列番号９のアミノ酸配列、ならびにそれらの保存的改変のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み；
（ｂ）軽鎖可変領域のＣＤＲ３配列が、配列番号１６、配列番号１７、および配列番号１８のアミノ酸配列、ならびにそれらの保存的改変のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み；
（ｃ）該抗体が、５×１０−８Ｍ以下のＫＤでヒトＩＲＴＡ−５に結合し；
（ｄ）該抗体が、ヒトＩＲＴＡ−１、ヒトＩＲＴＡ−２、ヒトＩＲＴＡ−３、およびヒトＩＲＴＡ−４に実質的に結合せず；そして
（ｅ）該抗体が、ヒトＢリンパ球およびＢ細胞腫瘍株に結合するが、ＣＤ３＋末梢血Ｔ細胞、ＣＤ１Ａ＋末梢血樹状細胞、ＣＤ１４＋末梢血単球、またはＣＤ５６＋末梢血ナチュラルキラー細胞に実質的に結合しない、
単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位。
【請求項３６】
前記重鎖可変領域のＣＤＲ２配列が、配列番号４、配列番号５、および配列番号６のアミノ酸配列、ならびにそれらの保存的改変のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み；そして前記軽鎖可変領域のＣＤＲ２配列が、配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１５のアミノ酸配列、ならびにそれらの保存的改変のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３５に記載の抗体。
【請求項３７】
前記重鎖可変領域のＣＤＲ１配列が、配列番号１、配列番号２、および配列番号３のアミノ酸配列、ならびにそれらの保存的改変のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み；そして前記軽鎖可変領域のＣＤＲ１配列が、配列番号１０、配列番号１１、および配列番号１２のアミノ酸配列、ならびにそれらの保存的改変のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載の抗体。
【請求項３８】
前記抗体が、ヒト抗体である、請求項３５に記載の抗体。
【請求項３９】
前記抗体が、ヒト化抗体またはキメラ抗体である、請求項３５に記載の抗体。
【請求項４０】
前記Ｂ細胞腫瘍株が、Ｄａｕｄｉ細胞株、Ｒａｍｏｓ細胞株、およびＳＵ−ＤＨＬ−４細胞株からなる群より選択される、請求項３５に記載の抗体。
【請求項４１】
重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位であって、以下：
（ａ）該重鎖可変領域が、配列番号１９、配列番号２０、および配列番号２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％相同であるアミノ酸配列を含み；
（ｂ）該軽鎖可変領域が、配列番号２２、配列番号２３、および配列番号２４からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％相同であるアミノ酸配列を含み；
（ｃ）該抗体が、５×１０−８Ｍ以下のＫＤでヒトＩＲＴＡ−５に結合し；
（ｄ）該抗体が、ヒトＩＲＴＡ−１、ヒトＩＲＴＡ−２、ヒトＩＲＴＡ−３、およびヒトＩＲＴＡ−４に実質的に結合せず；そして
（ｅ）該抗体が、ヒトＢリンパ球およびＢ細胞腫瘍株に結合するが、ＣＤ３＋末梢血Ｔ細胞、ＣＤ１Ａ＋末梢血樹状細胞、ＣＤ１４＋末梢血単球、またはＣＤ５６＋末梢血ナチュラルキラー細胞に実質的に結合しない、
単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位。
【請求項４２】
前記抗体が、ヒト抗体である、請求項４１に記載の抗体。
【請求項４３】
前記抗体が、ヒト化抗体またはキメラ抗体である、請求項４１に記載の抗体。
【請求項４４】
前記Ｂ細胞腫瘍株が、Ｄａｕｄｉ細胞株、Ｒａｍｏｓ細胞株、およびＳＵ−ＤＨＬ−４細胞株からなる群より選択される、請求項４１に記載の抗体。
【請求項４５】
単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位であって、以下：
（ａ）配列番号１、配列番号２、および配列番号３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域のＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域のＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１０、配列番号１１、および配列番号１２からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１５からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ２；ならびに
（ｆ）配列番号１６、配列番号１７、および配列番号１８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ３；
を含み、該抗体が、ＩＲＴＡ−５に特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位。
【請求項４６】
前記抗体が、以下：
（ａ）配列番号１を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４を含む重鎖可変領域のＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号７を含む重鎖可変領域のＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１０を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１３を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号１６を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ３、
を含む、請求項４５に記載の抗体。
【請求項４７】
前記抗体が、以下：
（ａ）配列番号２を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５を含む重鎖可変領域のＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号８を含む重鎖可変領域のＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１１を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１４を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号１７を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ３、
を含む、請求項４５に記載の抗体。
【請求項４８】
前記抗体が、以下：
（ａ）配列番号３を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号６を含む重鎖可変領域のＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号９を含む重鎖可変領域のＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１２を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１５を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号１８を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ３、
を含む、請求項４５に記載の抗体。
【請求項４９】
単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位であって、以下：
（ａ）配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、および配列番号３６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；ならびに
（ｂ）配列番号２２、配列番号２３、および配列番号２４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
を含み、該抗体が、ＩＲＴＡ−５に特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位。
【請求項５０】
前記抗体が、以下：
（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および
（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
を含む、請求項４９に記載の抗体。
【請求項５１】
前記抗体が、以下：
（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および
（ｂ）配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
を含む、請求項４９に記載の抗体。
【請求項５２】
前記抗体が、以下：
（ａ）配列番号２１または配列番号３６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
を含む、請求項４９に記載の抗体。
【請求項５３】
請求項１〜５２のいずれか１項に記載の抗体、またはその抗原結合部位、および薬学的に受容可能なキャリアを含有する組成物。
【請求項５４】
請求項１〜５２のいずれか１項に記載の抗体、またはその抗原結合部位を含む、治療因子に結合した免疫複合体。
【請求項５５】
請求項５４に記載の免疫複合体および薬学的に受容可能なキャリアを含有する組成物。
【請求項５６】
前記治療因子が、細胞毒である、請求項５４に記載の免疫複合体。
【請求項５７】
請求項５６に記載の免疫複合体および薬学的に受容可能なキャリアを含有する組成物。
【請求項５８】
前記治療因子が、放射性同位元素である、請求項５４に記載の免疫複合体。
【請求項５９】
請求項５８に記載の免疫複合体および薬学的に受容可能なキャリアを含有する組成物。
【請求項６０】
請求項１〜５２のいずれか１項に記載の抗体、または抗原結合部位を含む、第２の機能的部分に結合した二重特異性分子であって、該第２の機能的部分が、該抗体、またはその抗原結合部位と異なる結合特異性を有する、二重特異性分子。
【請求項６１】
請求項６０に記載の二重特異性分子、および薬学的に受容可能なキャリアを含有する組成物。
【請求項６２】
請求項１〜５２のいずれか１項に記載の抗体、またはその抗原結合部位をコードする単離された核酸分子。
【請求項６３】
請求項６２に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
【請求項６４】
請求項６３に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項６５】
ヒト免疫グロブリン重鎖の導入遺伝子およびヒト免疫グロブリン軽鎖の導入遺伝子を有するトランスジェニックマウスであって、該マウスが、請求項１〜５２のいずれか１項に記載の抗体を発現する、トランスジェニックマウス。
【請求項６６】
請求項６５に記載のマウスから調製されるハイブリドーマであって、該ハイブリドーマが、前記抗体を産生する、ハイブリドーマ。
【請求項６７】
抗ＩＲＴＡ−５抗体を調製するための方法であって、以下：
（ａ）（ｉ）配列番号１、配列番号２、および配列番号３からなる群より選択されるＣＤＲ１配列；配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群より選択されるＣＤＲ２配列；ならびに配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群より選択されるＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域の抗体の配列；または（ｉｉ）配列番号１０、配列番号１１、および配列番号１２からなる群より選択されるＣＤＲ１配列；配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１５からなる群より選択されるＣＤＲ２配列、ならびに配列番号１６、配列番号１７、および配列番号１８からなる群より選択されるＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域の抗体の配列を提供する工程；
（ｂ）少なくとも１つの可変領域の抗体の配列内の少なくとも１つのアミノ酸残基を変更して、少なくとも１つの変更された抗体の配列を形成する工程であって、該配列が、該重鎖可変領域の抗体の配列および該軽鎖可変領域の抗体の配列から選択される、工程；および
（ｃ）該変更された抗体の配列をタンパク質として発現させる工程
を包含する、方法。
【請求項６８】
ＩＲＴＡ５を発現する腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であって、請求項１〜５２のいずれか１項に記載の抗体、またはその抗原結合部位を、該腫瘍細胞の増殖を阻害するのに有効な量で該細胞と接触させる工程を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本出願は、米国仮特許出願番号第６０／５５７，７４１号（２００４年３月２９日出願）に対する優先権を主張し、この出願の内容は、その全体が本明細書によって援用される。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
免疫受容体転座関連（Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ）（ＩＲＴＡ）遺伝子／タンパク質（Ｆｃ受容体ホモログ（ＦｃＲＨ）遺伝子）は、免疫グロブリン様細胞表面受容体のファミリーの５つのメンバーからなる（非特許文献１；非特許文献２）。ＩＲＴＡは、１ｑ２１染色体の再配置を含む多発性骨髄腫細胞株のブレークポイント（ｂｒｅａｋｐｏｉｎｔ）の分析によって最初に見出された（非特許文献３）。ＩＲＴＡ糖タンパク質は、３個から９個の間の細胞外Ｉｇ様ドメインを含む（非特許文献１、前出）。ＩＲＴＡはまた、免疫受容体抑制性チロシンモチーフ（ｉｍｍｕｎｏｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｍｏｔｉｆ）（ＩＴＩＭ）および免疫受容体チロシン活性化様（ｉｍｍｕｎｏｔｙｒｏｓｉｎｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ−ｌｉｋｅ）（ＩＴＡＭ−ｌｉｋｅ）モチーフの存在を示唆する、特定のモチーフ内に含まれる３個から５個の間のチロシン残基を含む細胞質ドメインを有することによって特徴付けられる（非特許文献１、前出；非特許文献３、前出）。
【０００３】
ＩＲＴＡは、末梢リンパ組織において発現され、この組織としては、リンパ節、扁桃、休止期末梢Ｂ細胞および正常な胚中心Ｂ細胞が挙げられる（非特許文献４）。ＩＲＴＡ１が、脾臓において低レベルで検出されたことに対して比較すると、ＩＲＴＡ  ２、ＩＲＴＡ  ３、ＩＲＴＡ  ４、およびＩＲＴＡ  ５は、脾臓において全て高レベルで発現される。ＩＲＴＡ発現は、ヒト扁桃組織のＢ細胞区画内で分析された。ＩＲＴＡ  １は、辺縁帯中および上皮内のリンパ球中のリンパ濾胞の外側に発現される。ＩＲＴＡ２およびＩＲＴＡ３は、中心細胞が豊富な明調域おける最も高い発現を伴って、胚中心の癌内で発現される。ＩＲＴＡ４およびＩＲＴＡ５は、マントルゾーン内で最も高度に発現され、これは、ナイーブなＢ細胞における発現を示す（非特許文献１、前出）。
【０００４】
ＩＲＴＡ５は、膜貫通領域中に荷電したグルタミン酸残基を有する点でＩＲＴＡの間で独特であり、このことは、ＩＲＴＡ５が、多くのＩＴＡＭ関連タンパク質の場合のように、近傍の位置にある正に荷電したアミノ酸を含むタンパク質とヘテロ二量体化することを示唆する（非特許文献１、前出）。
【０００５】
ＩＲＴＡ遺伝子は、Ｂ細胞の非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、濾胞性リンパ腫、Ｂ細胞系のびまん性大細胞型リンパ腫、および多発性骨髄腫において高度に発現されることが示された（非特許文献４、前出）。
【非特許文献１】Ｍｉｌｌｅｒら、「Ｂｌｏｏｄ」、２００２年、第９９巻、ｐ．２６６２
【非特許文献２】Ｄａｖｉｓら、「Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ」、２００２年、第１９０巻、ｐ．１２３
【非特許文献３】Ｈａｔｚｉｖａｓｓｉｌｉｏｕら、「Ｉｍｍｕｎｉｔｙ」、２００１年、第１４巻、ｐ．２７７
【非特許文献４】Ｄａｖｉｓら、「ＰＮＡＳ」、２００１年、第９８巻、ｐ．９７７２
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の要旨）
本発明は、ＩＲＴＡ−５に結合し、そして多くの望ましい性質を示す単離されたモノクローナル抗体（特に、ヒトモノクローナル抗体）を提供する。これらの性質としては、ヒトＩＲＴＡ−５に対して高い親和性で結合するが、ヒトＩＲＴＡ−１、ヒトＩＲＴＡ−２、ヒトＩＲＴＡ−３、またはヒトＩＲＴＡ−４のいずれに対しても実質的な交差反応性を欠くことが挙げられる。さらに、この抗体は、Ｂ細胞に対して特異的に結合する。さらになお、本発明の抗体は、Ｂ細胞の腫瘍細胞株に結合するが、Ｔ細胞、樹状細胞、単球またはナチュラルキラー細胞に結合しないことが示された。
【０００７】
本発明の好ましい実施形態において、ヒトＩＲＴＡ−５は、配列番号３７［Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＡＬ６０２５０］に示されるようなアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み；ヒトＩＲＴＡ−１は、配列番号３８［Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＰ＿１１２５７２］に示されるようなアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み；ヒトＩＲＴＡ−２は、配列番号３９［Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＰ＿１１２５７１］に示されるようなアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み；ヒトＩＲＴＡ−３は、配列番号４０［Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＡＬ５９３９０］に示されるようなアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み；そして／またはヒトＩＲＴＡ−４は、配列番号４１［Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＡＬ６０２４９］に示されるようなアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。
【０００８】
１つの局面において、本発明は、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位に関連し、この抗体は：
（ａ）５×１０−８Ｍ以下のＫＤでヒトＩＲＴＡ−５に結合し；
（ｂ）ヒトＩＲＴＡ−１、ヒトＩＲＴＡ−２、ヒトＩＲＴＡ−３、およびヒトＩＲＴＡ−４に実質的に結合せず；そして
（ｃ）ヒトＢリンパ球およびＢ細胞腫瘍株に結合するが、ＣＤ３＋末梢血Ｔ細胞、ＣＤ１Ａ＋末梢血樹状細胞、ＣＤ１４＋末梢血単球、またはＣＤ５６＋末梢血ナチュラルキラー細胞に実質的に結合しない。好ましくはこの抗体は、ヒト抗体であるが、代替的な実施形態において、この抗体は、マウス抗体、キメラ抗体またはヒト化抗体であり得る。
【０００９】
より好ましい実施形態において、この抗体は、３×１０−８Ｍ以下のＫＤでヒトＩＲＴＡ−５と結合するか、１×１０−９Ｍ以下のＫＤでヒトＩＲＴＡ−５と結合するか、０．１×１０−９Ｍ以下のＫＤでヒトＩＲＴＡ−５と結合するか、０．０５×１０−９Ｍ以下のＫＤでヒトＩＲＴＡ−５と結合するか、または１×１０−９Ｍと１×１０−１１Ｍとの間のＫＤでヒトＩＲＴＡ−５に結合する。
【００１０】
別の好ましい実施形態において、このＢ細胞腫瘍株は、Ｄａｕｄｉ細胞株、Ｒａｍｏｓ細胞株、およびＳＵ−ＤＨＬ−４細胞株からなる群より選択される。
【００１１】
別の実施形態において、本発明は、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位を提供し、この抗体は、ＩＲＴＡ−５への結合に関して、以下：
（ａ）配列番号１９、配列番号２０、および配列番号２１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；ならびに
（ｂ）配列番号２２、配列番号２３、および配列番号２４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
を含む参照抗体と交差競合（ｃｒｏｓｓ−ｃｏｍｐｅｔｅ）する。
種々の実施形態において、この参照抗体は、以下：
（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および
（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
を含むか、またはこの参照抗体は、以下：
（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および
（ｂ）配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
を含むか、またはこの参照抗体は、以下：
（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
を含む。
【００１２】
別の局面において、本発明は、ヒトＶＨ  ３−３３遺伝子の産物である重鎖可変領域またはヒトＶＨ  ３−３３遺伝子に由来する重鎖可変領域を含む、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位に関連し、この抗体は、ＩＲＴＡ−５に特異的に結合する。本発明はまた、ヒトＶＨ  ＤＰ４４遺伝子、ヒトＶＨ  ３−２３遺伝子もしくはヒトＶＨ  ３−７遺伝子の産物である重鎖可変領域、またはヒトＶＨ  ＤＰ４４遺伝子、ヒトＶＨ  ３−２３遺伝子もしくはヒトＶＨ  ３−７遺伝子に由来する重鎖可変領域を含む、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位を提供し、この抗体は、ＩＲＴＡ−５に特異的に結合する。本発明は、ヒトＶＫ  Ｌ６遺伝子の産物である軽鎖可変領域またはヒトＶＫ  Ｌ６遺伝子に由来する軽鎖可変領域を含む単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位を、さらになお提供し、この抗体は、ＩＲＴＡ−５に特異的に結合する。
【００１３】
好ましい実施形態において、本発明は、以下：
（ａ）ヒトＶＨ  ３−３３遺伝子、ヒトＶＨ  ＤＰ４４遺伝子、ヒトＶＨ  ３−２３遺伝子またはヒトＶＨ  ３−７遺伝子の重鎖可変領域；および
（ｂ）ヒトＶｋ  Ｌ６の軽鎖可変領域；
を含む単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位であって、この抗体が、ＩＲＴＡ−５に特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位を提供する。
好ましい実施形態において、この抗体は、ヒトＶＨ  ３−３３遺伝子の重鎖可変領域およびヒトＶＫ  Ｌ６遺伝子の軽鎖可変領域を含む。別の好ましい実施形態において、この抗体は、ヒトＶＨ  ＤＰ４４遺伝子の重鎖可変領域およびヒトＶＫ  Ｌ６遺伝子の軽鎖可変領域を含む。
【００１４】
別の局面において、本発明は、以下：
ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域；ならびにＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
を含む単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位であって、以下：
（ａ）この重鎖可変領域のＣＤＲ３配列が、配列番号７、配列番号８、および配列番号９のアミノ酸配列、ならびにそれらの保存的改変のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み；
（ｂ）この軽鎖可変領域のＣＤＲ３配列が、配列番号１６、配列番号１７、および配列番号１８のアミノ酸配列、ならびにそれらの保存的改変のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み；
（ｃ）該抗体が、５×１０−８Ｍ以下のＫＤでヒトＩＲＴＡ−５に結合し；
（ｄ）該抗体が、ヒトＩＲＴＡ−１、ヒトＩＲＴＡ−２、ヒトＩＲＴＡ−３、およびヒトＩＲＴＡ−４に実質的に結合せず；そして
（ｅ）該抗体が、ヒトＢリンパ球およびＢ細胞腫瘍株に結合するが、ＣＤ３＋末梢血Ｔ細胞、ＣＤ１Ａ＋末梢血樹状細胞、ＣＤ１４＋末梢血単球、またはＣＤ５６＋末梢血ナチュラルキラー細胞に実質的に結合しない、
単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位を提供する。
好ましくは、この重鎖可変領域のＣＤＲ２配列は、配列番号４、配列番号５、および配列番号６のアミノ酸配列、ならびにそれらの保存的改変のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み；そしてこの軽鎖可変領域のＣＤＲ２配列は、配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１５のアミノ酸配列、ならびにそれらの保存的改変のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。好ましくは、この重鎖可変領域のＣＤＲ１配列は、配列番号１、配列番号２、および配列番号３のアミノ酸配列、ならびにそれらの保存的改変のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み；そしてこの軽鎖可変領域のＣＤＲ１配列は、配列番号１０、配列番号１１、および配列番号１２のアミノ酸配列、ならびにそれらの保存的改変のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【００１５】
好ましい実施形態において、このＢ細胞腫瘍株は、Ｄａｕｄｉ細胞株、Ｒａｍｏｓ細胞株、およびＳＵ−ＤＨＬ−４細胞株からなる群より選択される。
【００１６】
なお別の局面において、本発明は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位であって、以下：
（ａ）この重鎖可変領域が、配列番号１９、配列番号２０、および配列番号２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％相同であるアミノ酸配列を含み；
（ｂ）この軽鎖可変領域が、配列番号２２、配列番号２３、および配列番号２４からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％相同であるアミノ酸配列を含み；
（ｃ）この抗体が、５×１０−８Ｍ以下のＫＤでヒトＩＲＴＡ−５に結合し；
（ｄ）この抗体が、ヒトＩＲＴＡ−１、ヒトＩＲＴＡ−２、ヒトＩＲＴＡ−３、およびヒトＩＲＴＡ−４に実質的に結合せず；そして
（ｅ）この抗体が、ヒトＢリンパ球およびＢ細胞腫瘍株に結合するが、ＣＤ３＋末梢血Ｔ細胞、ＣＤ１Ａ＋末梢血樹状細胞、ＣＤ１４＋末梢血単球、またはＣＤ５６＋末梢血ナチュラルキラー細胞に実質的に結合しない、
単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位を提供する。
【００１７】
好ましい実施形態において、本発明は、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位であって、以下：
（ａ）配列番号１、配列番号２、および配列番号３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域のＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域のＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１０、配列番号１１、および配列番号１２からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１５からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ２；ならびに
（ｆ）配列番号１６、配列番号１７、および配列番号１８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ３；
を含み、この抗体が、ＩＲＴＡ−５に特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位を提供する。
好ましい組み合わせは、以下：
（ａ）配列番号１を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４を含む重鎖可変領域のＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号７を含む重鎖可変領域のＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１０を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１３を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号１６を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ３、
を含む。
別の好ましい組み合わせは、以下：
（ａ）配列番号２を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５を含む重鎖可変領域のＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号８を含む重鎖可変領域のＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１１を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１４を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号１７を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ３、
を含む。
なお別の好ましい組み合わせは、以下：
（ａ）配列番号３を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号６を含む重鎖可変領域のＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号９を含む重鎖可変領域のＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１２を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１５を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号１８を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ３、
を含む。
【００１８】
別の好ましい実施形態において、このＢ細胞腫瘍株は、Ｄａｕｄｉ細胞株、Ｒａｍｏｓ細胞株、およびＳＵ−ＤＨＬ−４細胞株からなる群より選択される。
【００１９】
本発明の他の好ましい抗体、またはその抗原結合部位は、以下：
（ａ）配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、および配列番号３６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；ならびに
（ｂ）配列番号２２、配列番号２３、および配列番号２４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
を含み、この抗体が、ＩＲＴＡ−５に特異的に結合する。
好ましい組み合わせは、以下：
（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および
（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
を含む。
別の好ましい組み合わせは、以下：
（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および
（ｂ）配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
を含む。
なお別の好ましい組み合わせは、以下：
（ａ）配列番号２１または配列番号３６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
を含む。
【００２０】
本発明の別の局面において、抗体、またはその抗原結合部位は、ＩＲＴＡ−５への結合に関して上記の抗体のいずれかと競合する。
【００２１】
本発明の抗体は、例えば、完全長抗体（例えば、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプの完全長抗体）であり得る。あるいは、この抗体は、抗体フラグメント（例えば、ＦａｂフラグメントまたはＦａｂ’２フラグメント）、または単鎖抗体であり得る。
【００２２】
本発明はまた、本発明の抗体、またはその抗原結合部位を含む、治療因子（例えば、細胞毒または放射性同位体）に結合した免疫複合体を提供する。本発明はまた、本発明の抗体、またはその抗原結合部位を含む、第２の機能的部分に結合した二重特異性分子であって、この第２の機能的部分が、この抗体、またはその抗原結合部位と異なる結合特異性を有する、二重特異性分子を提供する。
【００２３】
本発明の抗体、もしくはその抗原結合部位、または免疫複合体または二重特異性分子および薬学的に受容可能なキャリアを含有する組成物もまた、提供される。
【００２４】
本発明の抗体、またはその抗原結合部位をコードする核酸分子、ならびにこのような核酸を含む発現ベクターおよびこのような発現ベクターを含む宿主細胞もまた、本発明に包含される。さらに、本発明は、ヒト免疫グロブリン重鎖の導入遺伝子およびヒト免疫グロブリン軽鎖の導入遺伝子を有するトランスジェニックマウスを提供し、このマウスは、本発明の抗体、およびこのようなマウスから調製されるハイブリドーマを発現し、このハイブリドーマは、本発明の抗体を産生する。
【００２５】
なお別の局面において、本発明は、処置の必要がある被験体中のＢ細胞の悪性腫瘍を処置する方法を提供し、この処置は、この被験体中のＢ細胞の悪性腫瘍が処置されるように、本発明の抗体、またはその抗原結合部位をこの被験体に投与する工程を包含する。この疾患は、例えば、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、濾胞性リンパ腫、Ｂ細胞系のびまん性大細胞型リンパ腫、および多発性骨髄腫であり得る。
【００２６】
本発明はまた、本明細書中で提供される抗ＩＲＴＡ−５抗体の配列に基づく「第２世代」抗ＩＲＴＡ−５抗体を作製するための方法を提供する。例えば、本発明は、以下：
（ａ）（ｉ）配列番号１、配列番号２、および配列番号３からなる群より選択されるＣＤＲ１配列；配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群より選択されるＣＤＲ２配列；ならびに配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群より選択されるＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域の抗体の配列；または（ｉｉ）配列番号１０、配列番号１１、および配列番号１２からなる群より選択されるＣＤＲ１配列；配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１５からなる群より選択されるＣＤＲ２配列、ならびに配列番号１６、配列番号１７、および配列番号１８からなる群より選択されるＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域の抗体の配列を提供する工程；
（ｂ）重鎖可変領域の抗体の配列および／または軽鎖可変領域の抗体の配列内の少なくとも１つのアミノ酸残基を変更して、少なくとも１つの変更された抗体の配列を形成する工程；および
（ｃ）この変更された抗体の配列をタンパク質として発現させる工程、
を包含する、抗ＩＲＴＡ−５抗体を調製するための方法を提供する。
【００２７】
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および実施例から明らかであり、この詳細な説明および実施例は、限定として解釈されるべきではない。本願全体に引用される全ての参考文献、Ｇｅｎｂａｎｋ登録事項、特許および公開特許出願の内容は、本明細書中に参照として明白に援用される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２８】
（発明の詳細な説明）
本発明は、ＩＲＴＡ−５に特異的に結合し、そしてＩＲＴＡ−５の機能的性質を阻害する単離されたモノクローナル抗体（特に、ヒトモノクローナル抗体）に関する。特定の実施形態において、本発明の抗体は、特定の重鎖および軽鎖の生殖系列配列に由来し、そして／または特定の構造的特徴（例えば、特定のアミノ酸配列を含むＣＤＲ領域）を含む。本発明は、単離された抗体、このような抗体、このような抗体を含む免疫複合体および二重特異性分子を作製する方法ならびに本発明の抗体、免疫複合体または二重特異性分子を含む薬学的組成物を提供する。本発明はまた、ＩＲＴＡ−５を検出することおよびＩＲＴＡ−５の発現に関連する疾患（例えば、ＩＲＴＡ−５を発現するＢ細胞の悪性腫瘍）を処置することのような、この抗体を使用する方法に関する。したがって、本発明はまた、Ｂ細胞の悪性腫瘍を処置するために（例えば、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、濾胞性リンパ腫、Ｂ細胞系のびまん性大細胞型リンパ腫、および多発性骨髄腫の処置において）本発明の抗ＩＲＴＡ−５抗体を使用する方法を提供する。
【００２９】
本発明がさらに容易に理解され得るように、特定の用語が、最初に定義される。さらなる定義は、詳細な説明全体に示される。
【００３０】
用語「免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連遺伝子（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ遺伝子）５」と「ＩＲＴＡ−５」とは、交換可能に使用され、そしてヒトＩＲＴＡ−５の改変体、アイソフォームおよび種のホモログを含む。したがって、特定の場合において、本発明のヒト抗体は、ヒト以外の種由来のＩＲＴＡ−５と交差反応し得る。他の場合において、この抗体は、ヒトＩＲＴＡ−５に対して完全に特異的であり得、そして種に関する交差反応性または他の型の交差反応性を示し得ない。ヒトＩＲＴＡ−５の完全なアミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＡＬ６０２５０（配列番号３７）を有する。
【００３１】
用語「ＩＲＴＡ−１」、「ＩＲＴＡ−２」、「ＩＲＴＡ−３」、および「ＩＲＴＡ−４」は、ヒト「ＩＲＴＡ−１」、ヒト「ＩＲＴＡ−２」、ヒト「ＩＲＴＡ−３」、およびヒト「ＩＲＴＡ−４」の改変体、アイソフォームならびに種のホモログを、それぞれ含む。ヒトＩＲＴＡ−１の完全なアミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＰ＿１１２５７２（配列番号３８）を有する。ヒトＩＲＴＡ−２の完全なアミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＰ＿１１２５７１（配列番号３９）を有する。ヒトＩＲＴＡ−３の完全なアミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＡＬ５９３９０（配列番号４０）を有する。ヒトＩＲＴＡ−４の完全なアミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＡＬ６０２４９（配列番号４１）を有する。
【００３２】
用語「免疫応答」とは、例えば、リンパ球、抗原提示細胞、食細胞、顆粒球、および上記の細胞または肝臓によって産生される可溶性高分子（抗体、サイトカイン、および補体が挙げられる）の作用をいい、この作用は、侵入する病原体、病原体に感染された細胞もしくは組織、癌性の細胞、または自己免疫または病理学的な炎症の場合において、正常なヒト細胞もしくはヒト組織を、選択的に障害するか、選択的に破壊するか、またはヒトの身体から選択的に排除する。
【００３３】
「シグナル伝達経路」とは、細胞の１つの部分から細胞の別の部分へシグナルを伝達する役割を果たす多くのシグナル伝達分子の間の生物学的関係をいう。本明細書中で使用される場合、語句「細胞表面受容体」は、例えば、シグナルおよびこのようなシグナルの細胞の原形質膜を横切る伝達を受容し得る、分子ならびに分子の複合体を包含する。本発明の「細胞表面受容体」の例は、ＩＲＴＡ−５受容体である。
【００３４】
本明細書中で引用される場合、用語「抗体」は、完全な抗体および任意の抗原結合フラグメント（すなわち、「抗原結合部位」）、またはそれらの単鎖を包含する。「抗体」とは、ジスルフィド結合によって相互に連結した、少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖、またはその抗原結合部位を含む糖タンパク質をいう。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（本明細書中でＶＨと略される）および重鎖定常領域から構成される。この重鎖定常領域は、３つのドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）から構成される。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書中でＶＬと略される）および軽鎖定常領域から構成される。この軽鎖定常領域は、１つのドメイン（ＣＬ）から構成される。このＶＨ領域およびＶＬ領域はさらに、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存性の領域によって分散され、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される高可変性の領域に細分される。各ＶＨおよび各ＶＬは、以下の順序でアミノ末端からカルボシキシ末端に配列される３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖の可変領域および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の上記定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、効果細胞）および古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主の組織または因子に対する免疫グロブリンの結合を媒介し得る。
【００３５】
本明細書中で使用される場合、抗体の用語「抗原結合部位」（または単に「抗体部分」）は、抗原（例えば、ＩＲＴＡ−５）に対して特異的に結合する能力を保持する、抗体の１つ以上のフラグメントをいう。抗体の抗原結合機能が、完全長抗体のフラグメントによって果たされ得ることが示されている。抗体に関する用語「抗原結合部位」に包含される結合フラグメントの例としては、（ｉ）Ｆａｂフラグメント（ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、ＣＬドメインおよびＣＨ１ドメインからなる一価のフラグメント）；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント（ヒンジ領域におけるジスルフィド架橋によって連結した２つのＦａｂフラグメントからなる二価のフラグメント）；（ｉｉｉ）ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の単一の腕のＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント；（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄら、（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）；ならびに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、このＦｖフラグメントの２つのドメイン（ＶＬおよびＶＨ）は、別個の遺伝子によってコードされるが、これらの遺伝子は、合成リンカーによる組換え方法を使用して接続され得、このリンカーは、ＶＬ領域およびＶＨ領域が対形成して、一価の分子を形成する単一のタンパク質鎖としてこれらのドメインが作製されることを可能にする（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知である；例えば、Ｂｉｒｄら、（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；およびＨｕｓｔｏｎら、（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３を参照のこと）。このような単鎖抗体もまた、抗体に関する用語「抗原結合部位」に包含されることが意図される。これらの抗体フラグメントは、当業者にとって公知である慣習的な技術を使用して得られ、そしてこれらのフラグメントは、インタクトな抗体と同じ様式での利用のためにスクリーニングされる。
【００３６】
本明細書中で使用される場合、「単離された抗体」は、異なる抗原の性質を有する他の抗体を実質的に含まない抗体をいうことが意図される（例えば、ＩＲＴＡ−５に特異的に結合する単離された抗体は、ＩＲＴＡ−５以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかし、ＩＲＴＡ−５に特異的に結合する単離された抗体は、他の抗原（例えば、他の種由来のＩＲＴＡ−５分子）に対する交差反応性を有し得る。さらに、単離された抗体は、他の細胞内物質および／または化学物質を実質的に含まない可能性がある。
【００３７】
本明細書中で使用される場合、用語「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」は、単一分子の組成物である抗体分子の調製物をいう。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対して、単一の結合特異性および結合親和性を示す。
【００３８】
本明細書中で使用される場合、用語「ヒト抗体」は、フレームワーク領域およびＣＤＲ領域の両方がヒト生殖系列の免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体を包含することが意図される。さらに、この抗体が定常領域を含む場合、この定常領域はまた、ヒト生殖系列の免疫グロブリン配列に由来する。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖系列の免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロのランダムな変異誘発もしくは部位特異的変異またはインビボの体細胞変異によって導入された変異）を含み得る。しかし、本明細書中で使用される場合、用語「ヒト抗体」は、別の哺乳動物種（例えば、マウス）の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトのフレームワーク配列に挿入された抗体を包含することを意図されない。
【００３９】
用語「ヒトモノクローナル抗体」とは、フレームワーク領域およびＣＤＲ領域の両方がヒト生殖系列の免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する、単一の結合特異性を示す抗体をいう。１つの実施形態において、このヒトモノクローナル抗体は、不死化細胞と融合されたヒト重鎖の導入遺伝子およびヒト軽鎖の導入遺伝子を有する、非ヒトトランスジェニック動物（例えば、トランスジェニックマウス）から得られたＢ細胞を含むハイブリドーマによって産生される。
【００４０】
本明細書中で使用される場合、用語「組換えヒト抗体」は、組換え手段によって調製されるか、発現されるか、生成されるか、または単離される全てのヒト抗体（例えば、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子もしくはそこから調製されるハイブリドーマ（以下にさらに記載される）についての遺伝子組換えまたは染色体組換えである動物（例えば、マウス）から単離された抗体、（ｂ）ヒト抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から（例えば、トランスフェクトーマ（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｏｍａ）から）単離された抗体、（ｃ）組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、および（ｄ）他のＤＮＡ配列に対するヒト免疫グロブリン遺伝子配列のスプライシングを包含する任意の他の手段によって調製されるか、発現されるか、生成されるか、または単離される抗体）を含む。このような組換えヒト抗体は、フレームワーク領域およびＣＤＲ領域がヒト生殖系列の免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する。しかし、特定の実施形態において、このような組換えヒト抗体は、インビトロの変異誘発（または、ヒトＩｇ配列について遺伝子組換えされた動物が使用される場合は、インビボの体細胞変異誘発）に供され得、したがってこの組換え抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列のＶＨ配列およびＶＬ配列に由来ならびに関連するが、インビボにおけるヒト抗体生殖系列のレパートリー内に天然に存在し得ない配列である。
【００４１】
本明細書中で使用される場合、「アイソタイプ」とは、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体のクラス（例えば、ＩｇＭまたはＩｇＧ１）をいう。
【００４２】
語句「抗原を認識する抗体」および「抗原に特異的な抗体」は、本明細書中で、用語「抗原に特異的に結合する抗体」と交換可能に使用される。
【００４３】
本明細書中で使用される場合、「ヒトＩＲＴＡ−５に特異的に結合する」抗体は、５×１０−８Ｍ以下のＫＤ、より好ましくは３×１０−８Ｍ以下のＫＤ、およびさらになお好ましくは１×１０−９Ｍ以下のＫＤでヒトＩＲＴＡ−５に結合する抗体をいうことが意図される。
【００４４】
本明細書中で使用される場合、用語「Ｋａｓｓｏｃ」または「Ｋａ」は、特定の抗体−抗原相互作用の会合速度をいうことが意図される一方で、本明細書中で使用される場合、用語「Ｋｄｉｓ」または「Ｋｄ」は、特定の抗体−抗原相互作用の解離速度をいうことが意図される。本明細書中で使用される場合、用語「ＫＤ」は、Ｋａに対するＫｄの比（すなわち、Ｋｄ／Ｋａ）から得られ、そしてモル濃度（Ｍ）として表される解離定数をいうことが意図される。抗体についてのＫＤ値は、当該分野において良好に確立された方法を使用して決定され得る。抗体のＫＤを決定するための好ましい方法は、表面プラズモン共鳴を使用し、好ましくはバイオセンサーシステム（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）システム）を使用することによるものである。
【００４５】
本明細書中で使用される場合、ＩｇＧ抗体に対する用語「高親和性」は、標的抗原に対して、１０−８Ｍ以下のＫＤを有し、より好ましくは１０−９Ｍ以下のＫＤを有し、そしてさらになお好ましくは１０−１０Ｍ以下のＫＤを有する抗体をいう。しかし、「高親和性」結合は、他の抗体アイソタイプによって変化し得る。例えば、ＩｇＭアイソタイプについての「高親和性」結合とは、１０−７Ｍ以下のＫＤを有し、より好ましくは１０−８Ｍ以下のＫＤを有する抗体をいう。
【００４６】
本明細書中で使用される場合、用語「被験体」は、任意のヒトまたは非ヒト動物を含む。用語「非ヒト動物」は、全ての脊椎動物（例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などのような哺乳類および非哺乳類）を含む。
【００４７】
本発明の種々の局面は、以下の小節において、さらに詳細に記載される。
【００４８】
（抗ＩＲＴＡ−５抗体）
特定の生殖系列配列を有する抗体、同種抗体、保存的改変を有する抗体、操作され、かつ改変された抗体を含む本発明の抗体は、この抗体の特定の機能的特徴または機能的性質によって特徴付けられる。例えば、この抗体は、ヒトＩＲＴＡ−５に特異的に結合する。好ましくは、本発明の抗体は、高親和性（例えば、１０−８Ｍ以下のＫＤか、または１０−９Ｍ以下のＫＤか、または１０−１０Ｍ以下のＫＤでさえ）でＩＲＴＡ−５に結合する。本発明の抗ＩＲＴＡ−５抗体は、好ましくは以下：
（ａ）５×１０−８Ｍ以下のＫＤでヒトＩＲＴＡ−５に結合し；
（ｂ）ヒトＩＲＴＡ−１、ヒトＩＲＴＡ−２、ヒトＩＲＴＡ−３、およびヒトＩＲＴＡ−４に実質的に結合せず；そして／または
（ｃ）ヒトＢリンパ球およびＢ細胞腫瘍株に結合するが、ＣＤ３＋末梢血Ｔ細胞、ＣＤ１Ａ＋末梢血樹状細胞、ＣＤ１４＋末梢血単球、またはＣＤ５６＋末梢血ナチュラルキラー細胞に実質的に結合しない、
という特性のうちの１つ以上を示す。
より好ましくは、この抗体は、３×１０−８Ｍ以下のＫＤ、または１×１０−９Ｍ以下のＫＤ、または０．１×１０−９Ｍ以下のＫＤ、または０．０５×１０−９Ｍ以下のＫＤ、または１×１０−９Ｍと１×１０−１１Ｍとの間のＫＤでヒトＩＲＴＡ−５に結合する。
【００４９】
特定の実施形態において、抗ＩＲＴＡ−５抗体は、実施例に記載されるような、例示される抗体２Ｇ５、５Ａ２、７Ｇ８、１Ｅ５、７Ｆ５、４Ｂ７、または２Ｇ１の特性を有する。別の実施形態において、抗ＩＲＴＡ−５抗体は、ＩＲＴＡ−５への結合に関して、２Ｇ５、５Ａ２、７Ｇ８、１Ｅ５、７Ｆ５、４Ｂ７、または２Ｇ１のうちの１つ以上と競合する。
【００５０】
ＩＲＴＡ−５に対する上記抗体の結合能力を評価する標準的なアッセイは、当該分野において公知であり、このアッセイとしては、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロットおよびＲＩＡが挙げられる。適切なアッセイは、実施例において詳細に記載される。この抗体の結合動態（例えば、結合親和性）はまた、当該分野において公知である標準的なアッセイ（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ分析）によって評価され得る。
【００５１】
本発明の抗体は、この抗体が、ＩＲＴＡ−５に対して約１０：１より大きく、そして好ましくは約１００：１より大きい、他のＩＲＴＡの１種に対する選択性を上回る選択性を有する場合に、ＩＲＴＡ−１、ＩＲＴＡ−２、ＩＲＴＡ−３、またはＩＲＴＡ−４に対して「実質的に結合」しない。選択性は、イムノアッセイによって測定され得る。
【００５２】
（モノクローナル抗体２Ｇ５、５Ａ２、および７Ｇ８）
本発明の好ましい抗体は、実施例１および実施例２に記載されるような、単離され、そして構造的に特徴付けられたヒトモノクローナル抗体２Ｇ５、５Ａ２、および７Ｇ８である。２Ｇ５、５Ａ２、および７Ｇ８のＶＨのアミノ酸配列は、配列番号１９、配列番号２０、および配列番号２１に、それぞれ示される。２Ｇ５、５Ａ２、および７Ｇ８のＶＬのアミノ酸配列は、配列番号２２、配列番号２３、および配列番号２４に、それぞれ示される。
【００５３】
これらの抗体の各々がＩＲＴＡ−５に結合し得ることを考えると、これらのＶＨ配列およびＶＬ配列は、「混合されかつマッチングされ（ｍｉｘｅｄ  ａｎｄ  ｍａｔｃｈｅｄ）」て、本発明の他の抗ＩＲＴＡ−５結合分子を生成し得る。このような「混合されかつマッチングされ」た抗体のＩＲＴＡ−５への結合は、上に記載され、そして実施例に記載される結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）を使用して試験され得る。好ましくは、ＶＨ鎖およびＶＬ鎖が、混合されかつマッチングされる場合、特定のＶＨ／ＶＬ対形成から得たＶＨ配列は、構造的に類似するＶＨ配列によって置換される。同様に、好ましくは、特定のＶＨ／ＶＬ対形成から得たＶＬ配列は、構造的に類似するＶＬ配列によって置換される。例えば、２Ｇ５および５Ａ２のＶＨ配列ならびにＶＬ配列は、混合および対応に対して、特に従いやすい。なぜならこれらの抗体は、同じ生殖系列配列（ＶＨ  ３−３３およびＶｋ  Ｌ６）に由来するＶＨ配列およびＶＬ配列を使用し、したがってそれらは、構造的な類似性を示すからである。
【００５４】
したがって、１つの局面において、本発明は、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位であって、以下：
（ａ）配列番号１９、配列番号２０、および配列番号２１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；ならびに
（ｂ）配列番号２２、配列番号２３、および配列番号２４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
を含み、
この抗体が、ＩＲＴＡ−５（好ましくは、ヒトＩＲＴＡ−５）に特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位を提供する。
重鎖および軽鎖の好ましい組み合わせは、以下を含む：
（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および（ｂ）配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域。
【００５５】
別の局面において、本発明は、２Ｇ５、５Ａ２、および７Ｇ８の重鎖ＣＤＲ１および軽鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ２ならびに重鎖ＣＤＲ３および軽鎖ＣＤＲ３、またはそれらの組み合わせを含む抗体を提供する。２Ｇ５、５Ａ２、および７Ｇ８のＶＨのＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１、配列番号２、および配列番号３に示される。２Ｇ５、５Ａ２、および７Ｇ８のＶＨのＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号４、配列番号５、および配列番号６に示される。２Ｇ５、５Ａ２、および７Ｇ８のＶＨのＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号７、配列番号８、および配列番号９に示される。２Ｇ５、５Ａ２、および７Ｇ８のＶｋのＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１０、配列番号１１、および配列番号１２に示される。２Ｇ５、５Ａ２、および７Ｇ８のＶｋのＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１５に示される。２Ｇ５、５Ａ２、および７Ｇ８のＶｋのＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１６、配列番号１７、および配列番号１８に示される。これらのＣＤＲ領域は、Ｋａｂａｔシステム（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら、（１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ公開番号９１−３２４２）を使用して表される。
【００５６】
これらの抗体の各々がＩＲＴＡ−５に結合し得、そして抗原結合特異性が、主にＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、およびＣＤＲ３領域によって提供されることを考えると、上記ＶＨのＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、およびＣＤＲ３配列ならびにＶｋのＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、およびＣＤＲ３配列は、「混合されかつマッチングされ」（すなわち、異なる抗体由来のＣＤＲは、混合されかつマッチングされるが、各抗体は、ＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ならびにＶｋのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含まなければならない）て、本発明の他の抗ＩＲＴＡ−５結合分子を生成し得る。このような「混合されかつマッチングされ」た抗体のＩＲＴＡ−５への結合は、上記され、そして実施例に記載される結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ、Ｂｉａｃｏｒｅ分析）を使用して試験され得る。好ましくは、ＶＨのＣＤＲ配列が、混合されかつマッチングされる場合、特定のＶＨ配列由来のＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列および／またはＣＤＲ３配列は、構造的に類似する１つ以上のＣＤＲ配列によって置換される。同様に、ＶｋのＣＤＲ配列が、混合されかつマッチングされる場合、特定のＶｋ配列由来のＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列および／またはＣＤＲ３配列は、好ましくは構造的に類似する１つ以上のＣＤＲ配列によって置換される。例えば、２Ｇ５、５Ａ２、および７Ｇ８のＶＨのＣＤＲ１は、ある程度の構造類似性を共有し、そしてそれによって混合および対応に従いやすい。新規のＶＨ配列およびＶＬ配列が、モノクローナル抗体（抗体２Ｇ５、５Ａ２、および７Ｇ８）に関して本明細書中に開示されるＣＤＲ配列由来の構造的に類似する配列で、１つ以上のＶＨのＣＤＲ領域および／またはＶＬのＣＤＲ領域の配列を置換することによって生成され得る。
【００５７】
したがって、別の局面において、本発明は、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位であって、以下：
（ａ）配列番号１、配列番号２、および配列番号３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域のＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域のＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１０、配列番号１１、および配列番号１２からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１５からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ２；ならびに
（ｆ）配列番号１６、配列番号１７、および配列番号１８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ３；
を含み、この抗体が、ＩＲＴＡ−５（好ましくはヒトＩＲＴＡ−５）に特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位を提供する。
好ましい実施形態において、この抗体は、以下：
（ａ）配列番号１を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４を含む重鎖可変領域のＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号７を含む重鎖可変領域のＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１０を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１３を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号１６を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ３、
を含む。
別の好ましい実施形態において、この抗体は、以下：
（ａ）配列番号２を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５を含む重鎖可変領域のＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号８を含む重鎖可変領域のＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１１を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１４を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号１７を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ３、
を含む。
別の好ましい実施形態において、この抗体は、以下：
（ａ）配列番号３を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号６を含む重鎖可変領域のＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号９を含む重鎖可変領域のＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１２を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１５を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号１８を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ３、
を含む。
【００５８】
（特定の生殖系列配列を有する抗体）
特定の実施形態において、本発明の抗体は、特定の生殖系列の重鎖免疫グロブリン遺伝子由来の重鎖可変領域および／または特定の生殖系列の軽鎖免疫グロブリン遺伝子由来の軽鎖可変領域を含む。
【００５９】
例えば、好ましい実施形態において、本発明は、ヒトＶＨ  ３−３３遺伝子の産物である重鎖可変領域またはヒトＶＨ  ３−３３遺伝子に由来する重鎖可変領域を含む、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位を提供し、この抗体は、ＩＲＴＡ−５に特異的に結合する。別の好ましい実施形態において、本発明は、ヒトＶＨ  ＤＰ４４遺伝子、ヒトＶＨ  ３−２３遺伝子もしくはヒトＶＨ  ３−７遺伝子の産物である重鎖可変領域、またはヒトＶＨ  ＤＰ４４遺伝子、ヒトＶＨ  ３−２３遺伝子もしくはヒトＶＨ  ３−７遺伝子に由来する重鎖可変領域を含む、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位を提供し、この抗体は、ＩＲＴＡ−５に特異的に結合する。なお別の好ましい実施形態において、本発明は、ヒトＶＫ  Ｌ６遺伝子の産物である軽鎖可変領域またはヒトＶＫ  Ｌ６遺伝子に由来する軽鎖可変領域を含む単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位を、さらになお提供し、この抗体は、ＩＲＴＡ−５に特異的に結合する。なお別の好ましい実施形態において、本発明は、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位を提供し、この抗体は：
（ａ）ヒトＶＨ  ３−３３遺伝子、ヒトＶＨ  ＤＰ４４遺伝子、ヒトＶＨ  ３−２３遺伝子、もしくはヒトＶＨ  ３−７遺伝子（配列番号３１、配列番号３２、配列番号３４および配列番号３６に示されるアミノ酸配列を、それぞれコードする）の産物である重鎖可変領、またはヒトＶＨ  ３−３３遺伝子、ヒトＶＨ  ＤＰ４４遺伝子、ヒトＶＨ  ３−２３遺伝子、もしくはヒトＶＨ  ３−７遺伝子に由来する重鎖可変領域を含み；
（ｂ）  ヒトＶｋ  Ｌ６遺伝子の産物である軽鎖可変領域またはヒトＶｋ  Ｌ６遺伝子（配列番号３３に示されるアミノ酸配列をコードする）に由来する軽鎖可変領域を含み；そして
（ｃ）ＩＲＴＡ−５（好ましくはヒトＩＲＴＡ−５）に特異的に結合する。
【００６０】
ＶＨ  ３−３３およびＶｋ  Ｌ６のＶＨならびにＶＫを有する抗体の例としては、２Ｇ５および５Ａ２が、それぞれ挙げられる。ＶＨ  ＤＰ４４  およびＶｋ  Ｌ６のＶＨならびにＶＫを有する抗体の例としては、それぞれ、７Ｇ８が挙げられる。実施例３で議論されるように、ＶＨ  ＤＰ４４とＶＨ  ３−２３およびＶＨ  ３−７との構造上の関連性が与えられる場合、これらのさらなる生殖系列配列のいずれかに由来するＶＨ領域を利用する本発明の他のＩＲＴＡ−５抗体が、選択され得ることが予期される。
【００６１】
本明細書中で使用される場合、ヒト抗体は、上記抗体の可変領域がヒト生殖系列の免疫グロブリン遺伝子を使用するシステムから得られる場合、特定の生殖系列配列「の産物」であるか、もしくは特定の生殖系列配列「に由来する」重鎖可変領域または軽鎖可変領域を含む。このようなシステムは、ヒト免疫グロブリン遺伝子を保有するトランスジェニックマウスを目的の抗原によって免疫する工程またはファージ上に示されるヒト免疫グロブリン遺伝子のライブラリーを目的の抗原によってスクリーニングする工程を包含する。ヒト生殖系列の免疫グロブリン配列「の産物」であるか、またはヒト生殖系列の免疫グロブリン配列「に由来する」ヒト抗体は、例えば、ヒト抗体のアミノ酸配列をヒト生殖系列の免疫グロブリンのアミノ酸配列と比較し、そして配列がヒト抗体の配列に最も近い（すなわち、最も大きい同一性の％）ヒト生殖系列の免疫グロブリン配列を選択することによって同定され得る。ヒト生殖系列の免疫グロブリン配列「の産物」であるか、またはヒト生殖系列の免疫グロブリン配列「に由来する」ヒト抗体は、例えば、天然に存在する体細胞変異または部位特異的変異の意図的な導入に起因して、この生殖系列配列と比べて異なるアミノ酸を含み得る。しかし、選択されたヒト抗体は、代表的に、アミノ酸配列がヒト生殖系列の免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であり、そしてヒトを他の種の生殖系列（例えば、マウス生殖系列配列）の免疫グロブリンのアミノ酸配列と比較した場合に、ヒト抗体を同定するアミノ酸残基を含む。特定の場合において、ヒト抗体は、そのアミノ酸配列が、生殖系列の免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であり得るか、または少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一でさえあり得る。代表的に、特定のヒト生殖系列配列に由来するヒト抗体は、ヒト生殖系列の免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と異なる、１０個以下のアミノ酸を示す。特定の場合において、このヒト抗体は、この生殖系列の免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と異なる、５個以下か、またはさらに４個以下か、３個以下か、２個以下か、もしくは１個以下のアミノ酸を示し得る。
【００６２】
（同種抗体）
なお別の実施形態において、本発明の抗体は、本明細書中に記載される好ましい抗体のアミノ酸配列と同種であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、そしてこの抗体は、本発明の抗ＩＲＴＡ−５抗体の所望の機能的性質を保持する。
【００６３】
例えば、本発明は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位を提供し、ここで：
（ａ）この重鎖可変領域が、配列番号１９、配列番号２０、および配列番号２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％相同であるアミノ酸配列を含み；
（ｂ）この軽鎖可変領域が、配列番号２２、配列番号２３、および配列番号２４からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％相同であるアミノ酸配列を含み；
（ｃ）この抗体が、５×１０−８Ｍ以下のＫＤでヒトＩＲＴＡ−５に結合し；
（ｄ）この抗体が、ヒトＩＲＴＡ−１、ヒトＩＲＴＡ−２、ヒトＩＲＴＡ−３、およびヒトＩＲＴＡ−４に実質的に結合せず；そして
（ｅ）この抗体が、ヒトＢリンパ球およびＢ細胞腫瘍株に結合するが、ＣＤ３＋末梢血Ｔ細胞、ＣＤ１Ａ＋末梢血樹状細胞、ＣＤ１４＋末梢血単球、またはＣＤ５６＋末梢血ナチュラルキラー細胞に実質的に結合しない。
【００６４】
種々の実施形態において、上記抗体は、例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体であり得る。
【００６５】
他の実施形態において、上記ＶＨおよび／またはＶＬのアミノ酸配列は、上記に示される配列と８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％相同であり得る。上記に示される配列のＶＨ領域およびＶＬ領域に対して高い相同性（すなわち、８０％以上）を有するＶＨ領域およびＶＬ領域を有する抗体は、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、または配列番号３０をコードする核酸分子の変異誘発（例えば、部位特異的変異誘発またはＰＣＲを介する変異誘発）を行い、次いで本明細書中に記載される機能アッセイを使用して、保持される機能（すなわち、上記の（ｃ）および（ｄ）に示される機能）についてコードされる変更された抗体を試験することによって得られ得る。
【００６６】
本明細書中で使用される場合、２つのアミノ酸配列の間の相同性の％は、２つの配列の間の同一性の％に相当する。これら２つの配列の間の同一性の％は、これら２つの配列の最適なアラインメントのために導入される必要があるギャップの数および各ギャップの長さに配慮した、これらの配列によって共有される同じ位置の数の関数（すなわち、相同性の％＝同じ位置の数／位置の総数×１００）である。配列の比較および２つの配列の間の同一性の％の決定は、以下の非限定的な例に記載されるように、数学的アルゴリズムを使用して達成され得る。
【００６７】
２つのアミノ酸配列の間の同一性の％は、ＰＡＭ１２０重み残基表、１２のギャップ長ペナルティーおよび４のギャップペナルティーを使用する、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれたＥ．ＭｅｙｅｒｓおよびＷ．Ｍｉｌｌｅｒ（Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．、４：１１−１７（１９８８））のアルゴリズムを使用して決定され得る。さらに、２つのアミノ酸配列の間の同一性の％は、Ｂｌｏｓｓｕｍ  ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、および１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップの重み付けおよび１、２、３、４、５、または６の長さの重み付けを使用する、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍにて利用可能）のＧＡＰプログラム中に組み込まれたＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−４５３（１９７０））のアルゴリズムを使用して決定され得る。
【００６８】
さらに、または代替的に、本発明のタンパク質配列は、例えば、関連する配列を同定するために、公的データベースに対して検索を行うための「クエリー配列」としてさらに使用され得る。このような検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０のＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して行われ得る。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、本発明の抗体分子と相同なアミノ酸配列を得るために、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３によって行われ得る。比較目的のためのギャップ付き（ｇａｐｐｅｄ）アラインメントを得るために、Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴが、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９−３４０２に記載される通りに利用され得る。ＢＬＡＳＴプログラムおよびＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴプログラムが利用される場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）の初期設定パラメーターが、使用され得る。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照のこと。
【００６９】
（保存的改変を有する抗体）
特定の実施形態において、本発明の抗体は、ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域ならびにＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含み、これらのＣＤＲ配列のうちの１つ以上は、本明細書中に記載される好ましい抗体（例えば、２Ｇ５、５Ａ２、または７Ｇ８）、またはその保存的改変に基づく特定のアミノ酸配列を含み、そしてこの抗体は、本発明の抗ＩＲＴＡ−５抗体の所望の機能的性質を保持する。したがって、本発明は、ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域ならびにＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含む単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位を提供し、ここで：
（ａ）この重鎖可変領域のＣＤＲ３配列が、配列番号７、配列番号８、および配列番号９のアミノ酸配列、ならびにそれらの保存的改変のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み；
（ｂ）この軽鎖可変領域のＣＤＲ３配列が、配列番号１６、配列番号１７、および配列番号１８のアミノ酸配列、ならびにそれらの保存的改変のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み；
（ｃ）この抗体が、５×１０−８Ｍ以下のＫＤでヒトＩＲＴＡ−５に結合し；
（ｄ）この抗体が、ヒトＩＲＴＡ−１、ヒトＩＲＴＡ−２、ヒトＩＲＴＡ−３、およびヒトＩＲＴＡ−４に実質的に結合せず；そして
（ｅ）この抗体が、ヒトＢリンパ球およびＢ細胞腫瘍株に結合するが、ＣＤ３＋末梢血Ｔ細胞、ＣＤ１Ａ＋末梢血樹状細胞、ＣＤ１４＋末梢血単球、またはＣＤ５６＋末梢血ナチュラルキラー細胞に実質的に結合しない。
【００７０】
好ましい実施形態において、上記重鎖可変領域のＣＤＲ２配列は、配列番号４、配列番号５、および配列番号６のアミノ酸配列、ならびにそれらの保存的改変のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み；そして上記軽鎖可変領域のＣＤＲ２配列は、配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１５のアミノ酸配列、ならびにそれらの保存的改変のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。別の好ましい実施形態において、上記重鎖可変領域のＣＤＲ１配列は、配列番号１、配列番号２、および配列番号３のアミノ酸配列、ならびにそれらの保存的改変のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み；そして上記軽鎖可変領域のＣＤＲ１配列は、配列番号１０、配列番号１１、および配列番号１２のアミノ酸配列、ならびにそれらの保存的改変のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【００７１】
種々の実施形態において、上記抗体は、例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体であり得る。
【００７２】
本明細書中で使用される場合、用語「保存的な配列改変」は、そのアミノ酸配列を含む抗体の結合特性に顕著に影響しないか、またはそれを顕著に変えないアミノ酸改変をいうことが意図される。このような保存的改変としては、アミノ酸の置換、付加および削除が挙げられる。改変は、当該分野において公知である標準的な方法（例えば、部位特異的変異誘発およびＰＣＲを介する変異誘発）によって、本発明の抗体に導入され得る。保存的なアミノ酸の置換は、アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基によって置換されることである。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該分野において定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性の側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性の側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、無電荷の極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β−分枝状側鎖を有するアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が挙げられる。したがって、本発明の抗体のＣＤＲ領域内の１個以上のアミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基によって置換され得、そしてこの変更された抗体は、本明細書中に記載される機能アッセイを使用して、保持される機能（すなわち、上記の（ｃ）〜（ｊ）に示される機能）について試験され得る。
【００７３】
（本発明の抗ＩＲＴＡ−５抗体と同じエピトープに結合する抗体）
別の実施形態において、本発明は、本発明の抗ＩＲＴＡ−５モノクローナル抗体のいずれかと、同じヒトＩＲＴＡ−５上のエピトープに結合する抗体（すなわち、ＩＲＴＡ−５に対する結合に関して、本発明のモノクローナル抗体のいずれかと相互の競合する能力を有する抗体）を提供する。７つの抗ＩＲＴＡ−５抗体（２Ｇ５、５Ａ２、７Ｇ８、４Ｂ７、７Ｆ５、４Ｂ７および２Ｇ１）のエピトープマッピングは、Ｂｉａｃｏｒｅ分析（実施例４を参照のこと）によって決定され、そしてこれらの抗体は、図８に模式的に示される３つのエピトープ群に分類されることが示された。本発明は、これらのエピトープ群のいずれかの範囲に含まれる抗ＩＲＴＡ５抗体を包含し、このことは、上記で同定された抗体を用いる相互競合（ｃｒｏｓｓ−ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ）研究によって決定され得る。好ましい実施形態において、相互競合研究のための参照抗体は、モノクローナル抗体２Ｇ５（配列番号１９および配列番号２２に示されるようなＶＨ配列ならびにＶＬ配列を有する）、モノクローナル抗体５Ａ２（配列番号２０および配列番号２３に示されるようなＶＨ配列ならびにＶＬ配列を有する）、またはモノクローナル抗体７Ｇ８（配列番号２１および配列番号２４に示されるようなＶＨ配列ならびにＶＬ配列を有する）であり得る。このような相互に競合する抗体は、標準的なＩＲＴＡ−５結合アッセイにおいて、２Ｇ５、５Ａ２、または７Ｇ８と相互に競合するそれらの能力に基づいて同定され得る。例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ分析、ＥＬＩＳＡアッセイまたはフローサイトメトリーは、現行の発明の抗体との相互競合を実証するために使用され得る。例えば、ヒトＩＲＴＡ−５に対する２Ｇ５、５Ａ２、または７Ｇ８の結合を阻害する試験抗体の能力は、この試験抗体がヒトＩＲＴＡ−５に結合するために２Ｇ５、５Ａ２、または７Ｇ８と競合し得ることを実証し、したがってこの試験抗体は、２Ｇ５、５Ａ２、または７Ｇ８と同じヒトＩＲＴＡ−５上のエピトープに結合する。好ましい実施形態において、２Ｇ５、５Ａ２、または７Ｇ８と、同じヒトＩＲＴＡ−５上のエピトープに結合する抗体は、ヒトモノクローナル抗体である。このようなヒトモノクローナル抗体は、実施例に記載される通りに、調製され得、そして単離され得る。
【００７４】
（操作および改変された抗体）
本発明の抗体は、改変された抗体を操作するための出発物質として本明細書中に開示されるＶＨ配列および／またはＶＬ配列の１つ以上を有する抗体を使用して、さらに調製され得、この改変された抗体は、この出発抗体から変化した性質を有し得る。抗体は、一方または両方の可変領域（すなわち、ＶＨおよび／またはＶＬ）内（例えば、１つ以上のＣＤＲ領域内および／または１つ以上のフレームワーク領域内）の１個以上の残基を改変することによって操作され得る。さらに、または代替的に、抗体は、例えば、抗体の１つ以上のエフェクター機能を変更するために、１つ以上の定常領域内の残基を改変することによって操作され得る。
【００７５】
実施され得る可変領域の操作の１つの型は、ＣＤＲ移植である。抗体は、６個の重鎖および軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）中に配置されるアミノ酸残基によって、標的抗原と優勢に相互作用する。この理由に関して、ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、個々の抗体の間において、ＣＤＲの外側の配列より多様である。なぜならＣＤＲ配列は、ほとんどの抗体−抗原相互作用を引き起こし、異なる性質を有する異なる抗体由来のフレームワーク配列上に移植された天然に存在する特定の抗体由来のＣＤＲ配列を含む発現ベクターを構築することによって、天然に存在する特定の抗体の性質を模倣する組換え抗体を発現することが可能だからである（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．ら、（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７；Ｊｏｎｅｓ，Ｐ．ら、（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；Ｑｕｅｅｎ，Ｃ．ら、（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｅｅ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：１００２９−１００３３；Ｗｉｎｔｅｒの米国特許第５，２２５，５３９号、ならびにＱｕｅｅｎらの米国特許第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６２号および同第６，１８０，３７０号を参照のこと）。
【００７６】
したがって、本発明の別の実施形態は、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位に関連し、この単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部位は、それぞれ、配列番号１、配列番号２、および配列番号３；配列番号４、配列番号５、および配列番号６；ならびに配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、ならびにそれぞれ、配列番号１０、配列番号１１、および配列番号１２；配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１５；ならびに配列番号１６、配列番号１７、および配列番号１８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【００７７】
このようなフレームワーク配列は、生殖系列の抗体遺伝子配列を含む、公的なＤＮＡデータベースまたは刊行された参考文献から得られ得る。例えば、ヒトの重鎖可変領域遺伝子および軽鎖可変領域遺伝子に関する生殖系列のＤＮＡ配列は、「ＶＢａｓｅ」ヒト生殖系列配列のデータベース（インターネット上のｗｗｗ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｖｂａｓｅにて利用可能）、ならびにＫａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら、（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ公開番号９１−３２４２；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，Ｉ．Ｍ．ら、（１９９２）「Ｔｈｅ  Ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｒｍｌｉｎｅ  ＶＨ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  Ｒｅｖｅａｌｓ  ａｂｏｕｔ  Ｆｉｆｔｙ  Ｇｒｏｕｐｓｏｆ  ＶＨ  Ｓｅｇｍｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  Ｌｏｏｐｓ」、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６−７９８；およびＣｏｘ，Ｊ．Ｐ．Ｌ．ら、（１９９４）「Ａ  Ｄｉｒｅｃｔｏｒｙ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｒｍ−ｌｉｎｅ  ＶＨ  Ｓｅｇｍｅｎｔｓ  Ｒｅｖｅａｌｓ  ａ  Ｓｔｒｏｎｇ  Ｂｉａｓ  ｉｎ  ｔｈｅｉｒ  Ｕｓａｇｅ」、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：８２７−８３６（これらの各々の内容は、本明細書中に参考として明白に援用される）に見出され得る。
【００７８】
本発明の抗体における使用のために好ましいフレームワーク配列は、本発明の選択された抗体に使用されるフレームワーク配列と構造的に類似する配列である（例えば、好ましい本発明のモノクローナル抗体によって使用される、ＶＨ  ３−３３配列（配列番号３１）および／またはＶＨ  ＤＰ４４配列（配列番号３２）および／またはＶＨ  ３−２３配列（配列番号３４）および／またはＶＨ  ３−７配列（配列番号３５）および／またはＶｋ  Ｌ６フレームワーク配列（配列番号３３）と類似する）。ＶＨのＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、およびＣＤＲ３配列、ならびにＶＫのＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、およびＣＤＲ３配列は、フレームワーク配列が由来する生殖系列の免疫グロブリン遺伝子中に見出される配列と同じ配列を有するフレームワーク領域上に移植され得るか、またはこれらのＣＤＲ配列は、この生殖系列配列と比較した場合に、１つ以上の変異を含むフレームワーク領域上に移植され得る。例えば、特定の場合において、これらの抗体の抗原結合能力を維持するか、または増強するためにフレームワーク領域の残基を変異させることは、有利であることが見出された（例えば、Ｑｕｅｅｎらの米国特許第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６２号および同第６，１８０，３７０号）。
【００７９】
可変領域の改変の別の型は、ＶＨおよび／もしくはＶＫのＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域ならびに／またはＣＤＲ３領域内のアミノ酸残基を変異させ、それによって目的の抗体の１つ以上の結合する性質（例えば、親和性）を改良することである。部位特異的変異誘発またはＰＣＲを介する変異誘発は、１つ以上の変異を導入するために行われ得、そして抗体の結合における効果、または目的とする他の機能的性質は、本明細書に記載され、そして実施例に提供されるようなインビトロアッセイまたはインビボアッセイにおいて評価され得る。好ましい保存的改変（上記で議論されるような）が、導入される。この変異は、アミノ酸の置換、付加または削除であり得るが、好ましくは置換である。さらに、代表的に、ＣＤＲ領域内の１残基以下、２残基以下、３残基以下、４残基以下、または５残基以下が、変更される。
【００８０】
したがって、別の実施形態において、本発明は、以下を含む重鎖可変領域を含む単離された抗ＩＲＴＡ−５モノクローナル抗体、またはその抗原部位を提供する：（ａ）配列番号１、配列番号２、および配列番号３からなる群より選択されるアミノ酸配列、あるいは配列番号１、配列番号２、および配列番号３と比較した場合に、１個、２個、３個、４個、もしくは５個のアミノ酸の置換、削除または付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨのＣＤＲ１領域；（ｂ）配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群より選択されるアミノ酸配列、あるいは配列番号４、配列番号５、および配列番号６と比較した場合に、１個、２個、３個、４個、もしくは５個のアミノ酸の置換、削除または付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨのＣＤＲ２領域；（ｃ）配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群より選択されるアミノ酸配列、あるいは配列番号７、配列番号８、および配列番号９と比較した場合に、１個、２個、３個、４個、もしくは５個のアミノ酸の置換、削除または付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨのＣＤＲ３領域；（ｄ）配列番号１０、配列番号１１、および配列番号１２からなる群より選択されるアミノ酸配列、あるいは配列番号１０、配列番号１１、および配列番号１２と比較した場合に、１個、２個、３個、４個、もしくは５個のアミノ酸の置換、削除または付加を有するアミノ酸配列を含むＶＫのＣＤＲ１領域；（ｅ）配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１５からなる群より選択されるアミノ酸配列、あるいは配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１５と比較した場合に、１個、２個、３個、４個、もしくは５個のアミノ酸の置換、削除または付加を有するアミノ酸配列を含むＶＫのＣＤＲ２領域；ならびに（ｆ）配列番号１６、配列番号１７、および配列番号１８からなる群より選択されるアミノ酸配列、あるいは配列番号１６、配列番号１７、および配列番号１８と比較した場合に、１個、２個、３個、４個、もしくは５個のアミノ酸の置換、削除または付加を有するアミノ酸配列を含むＶＫのＣＤＲ３領域。
【００８１】
本発明の操作された抗体としては、改変が、例えば、抗体の性質を改良するためにＶＨおよび／またはＶＫ内のフレームワーク残基に作製される抗体が挙げられる。代表的に、このようなフレームワークの改変は、これらの抗体の免疫原性を減少させるために行われる。例えば、１つのアプローチは、１つ以上のフレームワーク残基を対応する生殖系列配列まで「変異の修正をする（ｂａｃｋｍｕｔａｔｅ）」ことである。より具体的には、体細胞変異を受けた抗体は、抗体が由来する生殖系列配列と異なるフレームワーク残基を含み得る。このような残基は、この抗体のフレームワーク配列を、この抗体が由来する生殖系列配列と比較することによって同定され得る。例えば、２Ｇ５に関して、ＶＨのアミノ酸残基番号４（ＦＲ１内の）は、バリンであるが、ＶＨ  ３−３３の生殖系列配列に対応するこの残基は、ロイシンである。このフレームワーク領域配列をこれらの生殖系列の構成に戻すために、この体細胞変異は、例えば、部位特異的変異誘発またはＰＣＲを介する変異誘発によって、この生殖系列配列まで「バックミューテーションされ（ｂａｃｋｍｕｔａｔｅｄ）」得る（例えば、５Ａ２のＶＨのＦＲ１の残基番号４は、バリンからロイシンに「バックミューテーションされ」得る）。
【００８２】
別の例として、７Ｇ８に関して、ＶＨのアミノ酸残基番号１（ＦＲ１内の）は、アスパラギン酸であるが、対応するＶＨ  ＤＰ４４の生殖系列配列におけるこの残基は、グルタミン酸である。このフレームワーク領域配列をこれらの生殖系列の構成に戻すために、例えば、ＶＨの７Ｇ８の残基番号１は、アスパラギン酸からグルタミン酸に「バックミューテーションされ」得る。このような「バックミューテーションされ」た抗体もまた、本発明に包含されることが意図される。
【００８３】
なお別の例として、７Ｇ８に関して、ＶＨのアミノ酸残基番号３（ＦＲ１内の）は、ヒスチジンであるが、対応するＶＨ  ＤＰ４４の生殖系列配列におけるこの残基は、グルタミンである。このフレームワーク領域配列をこれらの生殖系列の構成に戻すために、例えば、７Ｇ８のＶＨの残基番号３は、ヒスチジンからグルタミンに「バックミューテーションされ」得る。このような「バックミューテーションされ」た抗体もまた、本発明に包含されることが意図される。
【００８４】
なお別の例として、７Ｇ８に関して、ＶＨのアミノ酸残基番号３７（ＦＲ２内の）は、イソロイシンであるが、対応するＶＨ  ＤＰ４４の生殖系列配列におけるこの残基は、バリンである。このフレームワーク領域配列をこれらの生殖系列の構成に戻すために、例えば、７Ｇ８のＶＨの残基番号３７（ＦＲ２の残基番号２）は、イソロイシンからバリンに「バックミューテーションされ」得る。このような「バックミューテーションされ」た抗体もまた、本発明に包含されることが意図される。
【００８５】
なお別の例として、７Ｇ８に関して、ＶＨのアミノ酸残基番号４４（ＦＲ２内の）は、アスパラギン酸であるが、対応するＶＨ  ＤＰ４４の生殖系列配列におけるこの残基は、グリシンである。このフレームワーク領域配列をこれらの生殖系列の構成に戻すために、例えば、７Ｇ８のＶＨの残基番号４４（ＦＲ２の残基番号９）は、アスパラギン酸からグリシンに「バックミューテーションされ」得る。このような「バックミューテーションされ」た抗体もまた、本発明に包含されることが意図される。
【００８６】
なお別の例として、２Ｇ５に関して、ＶＫのアミノ酸残基番号８５（ＦＲ３内の）は、ロイシンであるが、対応するＶＫ  Ｌ６の生殖系列配列におけるこの残基は、バリンである。このフレームワーク領域配列をこれらの生殖系列の構成に戻すために、例えば、２Ｇ５のＶＫの残基番号８５（ＦＲ３の残基番号２９）は、ロイシンからバリンに「バックミューテーションされ」得る。このような「バックミューテーションされ」た抗体もまた、本発明に包含されることが意図される。
【００８７】
好ましい実施形態において、７Ｇ８のＶＨ内の特定の残基は、他のヒトの生殖系列配列中の残基と同一であるかまたは類似する残基に変異される（実施例３においてさらに議論される）。例えば、本発明はまた、位置１３のヒスチジンがリジンまたはグルタミンに変異し、そして位置８７のメチオニンがトレオニンに変異した７Ｇ８（ｍｕｔ）の重鎖可変領域を提供する。７Ｇ８（ｍｕｔ）のＶＨのアミノ酸配列は、配列番号３６に示される。したがって、別の実施形態において、本発明は、配列番号３６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２２、配列番号２３または配列番号２４（好ましくは、配列番号２４）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体を提供する。
【００８８】
フレームワークの改変の別の型は、このフレームワーク領域内（または、１つ以上のＣＤＲ領域内でさえ）の１個以上の残基を変異させて、Ｔ細胞エピトープを除去し、それによってこの抗体の潜在的な免疫原性を減少させる工程を包含する。このアプローチはまた、「脱免疫化（ｄｅｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）」と称され、そしてＣａｒｒらの米国特許公開番号第２００３０１５３０４３号に、さらに詳細に記載される。
【００８９】
上記フレームワーク領域またはＣＤＲ領域内に作製される改変に加えてか、またはそれに代えて、本発明の抗体は、Ｆｃ領域内に改変を含むように操作され得、代表的にはこの抗体の１つ以上の機能的性質（例えば、血清半減期、補体結合、Ｆｃ受容体の結合、および／または抗体依存性細胞媒介性細胞傷害）を変更するように操作され得る。さらに、本発明の抗体は、上記の場合と同じくこの抗体の１つ以上の機能的性質を変更するために、化学的に改変されても（例えば、１つ以上の化学的部分が、この抗体に接続され得る）、抗体のグリコシル化を変更ように改変されてもよい。これらの実施形態の各々は、以下でさらに詳細に記載される。上記Ｆｃ領域中の残基の番号付けは、ＥＵ  ｉｎｄｅｘ  ｏｆ  Ｋａｂａｔの番号付けである。
【００９０】
１つの実施形態において、ＣＨ１のヒンジ領域は、このヒンジ領域中のシステイン残基が変更される（例えば、増加されるかまたは減少される）ように改変される。このアプローチは、Ｂｏｄｍｅｒらによる米国特許第５，６７７，４２５号に、さらに記載される。ＣＨ１のヒンジ領域中のシステイン残基の数は、例えば、これらの軽鎖および重鎖の組み立てを促進するためか、またはこの抗体の安定性を増加させるか、もしくは減少させるために、変更される。
【００９１】
別の実施形態において、抗体のＦｃヒンジ領域は、この抗体の生物学的半減期を減少させるために変異される。より具体的には、１つ以上のアミノ酸変異は、この抗体がネイティブなＦｃ−ヒンジドメインのＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｙｌタンパク質Ａ（ＳｐＡ）結合に対して障害されたＳｐＡ結合を有するように、このＦｃ−ヒンジフラグメントのＣＨ２−ＣＨ３ドメインの界面領域中に導入される。このアプローチは、Ｗａｒｄらの米国特許第６，１６５，７４５号に、さらに詳細に記載される。
【００９２】
別の実施形態において、上記抗体は、その生物学的半減期が増加するように改変される。種々のアプローチが、可能である。例えば、以下の変異の１つ以上が、Ｗａｒｄの米国特許第６，２７７，３７５号に記載されるように導入される：Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５６Ｆ。あるいは、生物学的半減期を増加させるために、この抗体は、Ｐｒｅｓｔａらの米国特許第５，８６９，０４６号および同第６，１２１，０２２号に記載されるように、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループから受け継がれるサルベージ受容体結合エピトープ（ｓａｌｖａｇｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｅｐｉｔｏｐｅ）を含むためにＣＨ１またはＣＬ領域内で変更され得る。
【００９３】
なお他の実施形態において、上記Ｆｃ領域は、上記抗体の１つ以上のエフェクター機能を変更するために、少なくとも１個のアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基で置換することによって変更される。例えば、アミノ酸残基２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０および３２２から選択される１個以上のアミノ酸は、この抗体がエフェクターリガンド対する変更された親和性を有しながらも、本発明の抗体の抗原結合能力を保持するように、異なるアミノ酸残基で置換され得る。抗体の親和性が変更されるエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体または補体のＣ成分であり得る。このアプローチは、両方ともＷｉｎｔｅｒらのものである米国特許第５，６２４，８２１号および同第５，６４８，２６０号に、さらに詳細に記載される。
【００９４】
別の例において、アミノ酸残基３２９、３３１および３２２から選択される１個以上のアミノ酸は、変更されたＣ１ｑ結合および／または減少したか、もしくは消失した補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）を有するように、異なるアミノ酸残基で置換され得る。このアプローチは、Ｉｄｕｓｏｇｉｅらの米国特許第６，１９４，５５１号に、さらに詳細に記載される。
【００９５】
別の例において、アミノ酸の位置２３１と２３９との範囲内の１個以上のアミノ酸残基は、変更され、それによって補体を固定するこの抗体の能力を変更する。このアプローチは、ＢｏｄｍｅｒらのＰＣＴ国際公開第９４／２９３５１号に、さらに詳細に記載される。
【００９６】
なお別の例において、上記Ｆｃ領域は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介し、そして／またはＦｃγ受容体に対するこの抗体の親和性を増加するこの抗体の能力を増加するために、以下の位置における１個以上のアミノ酸を改変することによって改変される：２３８、２３９、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１５、３２０、３２２、３２４、３２６、３２７、３２９、３３０、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８または４３９。このアプローチは、ＰｒｅｓｔａのＰＣＴ国際公開第００／４２０７２号に、さらに記載される。さらに、ヒトＩｇＧ１上のＦｃγＲ１、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃＲｎに対する結合部位は、マッピングされそして改善された結合を有する改変体が、記載された（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ら、（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１−６６０４を参照のこと）。位置２５６、２９０、２９８、３３３、３３４および３３９における特定の変異は、ＦｃγＲＩＩＩに対する結合を改良することを示した。さらに、以下の変異の組み合わせは、ＦｃγＲＩＩＩ結合を改善することを示した：Ｔ２５６Ａ／Ｓ２９８Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｋ２２４ＡおよびＳ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ。
【００９７】
さらに別の実施形態において、グリコシル化抗体のグリコシル化が改変された。例えば、非グリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｌａｔｅｄ）抗体が作製され得る（すなわち、抗体が、グリコシル化を欠く）。グリコシル化は、例えば、抗原に対する抗体の親和性を増加するために変更され得る。このような糖質の改変は、抗体配列内の１つ以上の部位のグリコシル化を変更することによって達成され得る。例えば、１個以上のアミノ酸の置換は、１つ以上の可変領域フレームワークのグリコシル化部位の排除を生じるように行われ得、それによってこれらの部位におけるグリコシル化を排除する。このようなグリコシル化の妨害（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）は、抗原に対する抗体の親和性を増加し得る。このようなアプローチは、Ｃｏらの米国特許第５，７１４，３５０号および同第６，３５０，８６１号に、さらに詳細に記載される。
【００９８】
さらに、または代替的に、抗体は、グリコシル化の変更された型（例えば、減少した量のフコシル残基を有する低フコシル化抗体または増加した２等分のＧｌｃＮａｃ構造を有する抗体）を有するように作製され得る。このような変更されたグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能力を増加することが実証された。このような糖質の改変は、例えば、変更されたグリコシル化機構を有する宿主細胞中でこの抗体を発現することによって達成され得る。変更されたグリコシル化機構を有する細胞は、当該分野において記載され、そして本発明の組換え抗体を発現する宿主細胞として使用され得、変更されたグリコシル化を伴う抗体を産生する。例えば、細胞株Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、およびＭｓ７０９は、フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦＵＴ８（α（１，６）フコシルトランスフェラーゼ）を欠き、その結果、Ｍｓ７０４細胞株、Ｍｓ７０５細胞株、およびＭｓ７０９細胞株中で発現される抗体は、この抗体の糖質においてフコースを欠く。Ｍｓ７０４  ＦＵＴ８−／−細胞株、Ｍｓ７０５  ＦＵＴ８−／−細胞株、およびＭｓ７０９  ＦＵＴ８−／−細胞株は、２つの置換ベクターを使用する、ＣＨＯ／ＤＧ４４細胞中のＦＵＴ８遺伝子の標的化された破壊によって作製された（Ｙａｍａｎｅらの米国特許公開番号第２００４０１１０７０４号およびＹａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら、（２００４）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ  ８７：６１４−２２を参照のこと）。別の例として、Ｈａｎａｉらの欧州特許第１，１７６，１９５号は、機能的に破壊された、フコシルトランスフェラーゼをコードするＦＵＴ８遺伝子を有する細胞株を記載する。このような細胞株中で発現される抗体は、α１，６結合に関連する酵素が減少するか、または排除されることによって低フコシル化を示す。Ｈａｎａｉらはまた、この抗体のＦｃ領域に結合するＮ−アセチルグルコサミンに対するフコースの付加に関して低い酵素活性を有するか、またはこの酵素活性を有さない細胞株（例えば、ラット骨髄腫細胞株ＹＢ２／０（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６６２））を記載する。ＰｒｅｓｔａのＰＣＴ国際公開第０３／０３５８３５号は、Ａｓｎ（２９７）に連結した糖質に対してフコースを結合させる能力が減少した、改変体ＣＨＯ細胞株（Ｌｅｃ１３細胞）を記載し、この細胞株もまた、宿主細胞中で発現される抗体の低フコシル化を生じる（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ら、（２００２）Ｊ  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３−２６７４０も参照のこと）。ＵｍａｎａらのＰＣＴ国際公開第９９／５４３４２号は、操作された細胞株中で発現される抗体が、抗体の増加したＡＤＣＣ活性を生じる増加した２等分のＧｌｃＮａｃ構造を示すような、糖タンパク質を改変するグリコシルトランスフェラーゼ（例えば、β（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現するように操作された細胞株を記載する（Ｕｍａｎａら、（１９９９）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６−１８０も参照のこと）。あるいは、抗体のフコシル残基は、フコシダーゼ酵素を使用して切断され得る。例えば、フコシダーゼ（α−Ｌ−フコシダーゼ）は、抗体からフコシル残基を除去する（Ｔａｒｅｎｔｉｎｏ，Ａ．Ｌ．ら、（１９７５）Ｂｉｏｃｈｅｍ．１４：５５１６−２３）。
【００９９】
本発明によって企図される本明細書中の抗体の別の改変は、ポリエチレングリコール化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）である。抗体は、例えば、抗体の生物学的（例えば、血清）半減期を増加させるためにポリエチレングリコール化され得る。抗体をポリエチレングリコール化するために、抗体、またはそのフラグメントは、代表的に、１つ以上のＰＥＧが抗体または抗体フラグメントに結合される条件下において、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（例えば、反応性エステルまたはＰＥＧのアルデヒド誘導体）と反応される。好ましくは、このポリエチレングリコール化は、反応性のＰＥＧ分子（または類似する反応性の水溶性ポリマー）を用いるアシル化反応またはアルキル化反応を介して行われる。本明細書中で使用される場合、用語「ポリエチレングリコール」は、他のタンパク質を誘導体化するために使用されるＰＥＧの形態のいずれか（例えば、モノ（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ−ポリエチレングリコールもしくはモノ（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ−ポリエチレングリコールまたはモノ（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ−ポリエチレングリコール−マレイミドもしくはモノ（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ−ポリエチレングリコール−マレイミド）を包含することが意図される。特定の実施形態において、ポリエチレングリコール化される抗体は、グリコシル化を妨害された抗体である。タンパク質をポリエチレングリコール化するための方法は、当該分野において公知であり、そして本発明の抗体に適用され得る。例えば、Ｎｉｓｈｉｍｕｒａらの欧州特許第０  １５４  ３１６号およびＩｓｈｉｋａｗａらの欧州特許第０  ４０１  ３８４号を参照のこと。
【０１００】
（抗体を操作する方法）
上で議論されるように、本明細書中で開示されるＶＨ配列およびＶＫ配列を有する抗ＩＲＴＡ−５抗体は、ＶＨ配列および／またはＶＫ配列、またはそれらに結合している定常領域を改変することにより、新規な抗ＩＲＴＡ−５抗体を作製するために使用され得る。したがって、本発明の別の局面において、本発明の抗ＩＲＴＡ−５抗体（例えば、２Ｇ５、５Ａ２または７Ｇ８）の構造的特徴は、構造的に関連する抗ＩＲＴＡ−５抗体を作製するために使用され、この抗体は、本発明の抗体の少なくとも１つの機能特性（例えば、ヒトＩＲＴＡ−５への結合）を保持する。例えば、２Ｇ５、５Ａ２または７Ｇ８の１以上のＣＤＲ領域、またはこれらの変異体は、上で議論されるように、組換え的に操作されたさらなる本発明の抗ＩＲＴＡ−５抗体を作製するために、公知のフレームワーク領域および／または他のＣＤＲと組換え的に結合され得る。他の型の改変としては、前の節で記載された改変が挙げられる。この操作方法についての出発物質は、本明細書中で提供される１以上のＶＨ配列および／またはＶＫ配列またはその１以上のＣＤＲ領域である。操作された抗体を作製するために、本明細書中で提供される１以上のＶＨ配列および／またはＶＫ配列、またはその１以上のＣＤＲ領域を有する抗体を、実際に調製する（すなわち、タンパク質として発現する）必要はない。むしろ、この配列に含まれる情報は、元の配列に由来する「第２世代」配列を作製するために出発物質として使用され、次いで、その「第２世代」配列が、調製され、タンパク質として発現される。
【０１０１】
したがって、別の実施形態において、本発明は、抗ＩＲＴＡ−５抗体を調製するための方法を提供し、この方法は、以下の工程：
（ａ）（ｉ）配列番号１、配列番号２、および配列番号３からなる群より選択されるＣＤＲ１配列、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群より選択されるＣＤＲ２配列、ならびに／もしくは配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群より選択されるＣＤＲ３配列を含む、重鎖可変領域の抗体配列；ならびに／または（ｉｉ）配列番号１０、配列番号１１、および配列番号１２からなる群より選択されるＣＤＲ１配列、配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１５からなる群より選択されるＣＤＲ２配列、ならびに／もしくは配列番号１６、配列番号１７、および配列番号１８からなる群より選択されるＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域の抗体の配列を、提供する工程；
（ｂ）上記重鎖可変領域の抗体配列および／または上記軽鎖可変領域の抗体配列内の少なくとも１つのアミノ酸残基を変更して、少なくとも１つの変更された抗体の配列を作製する工程；ならびに
（ｃ）この変更された抗体の配列をタンパク質として発現させる工程
を包含する。
【０１０２】
標準的分子生物学技術が、この変更された抗体配列を調製しそして発現するために使用され得る。
【０１０３】
好ましくは、この変更された抗体配列によってコードされる抗体は、本明細書中で記載される抗ＩＲＴＡ−５抗体の機能特性のうちの１つ、いくつかまたは全てを保持する抗体であり、この機能特性としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
（ｉ）５×１０−８Ｍ以下のＫＤで、ヒトＩＲＴＡ−５に結合する；
（ｉｉ）ヒトＩＲＴＡ−１、ヒトＩＲＴＡ−２、ヒトＩＲＴＡ−３およびヒトＩＲＴＡ−４に実質的には結合しない；および／または
（ｉｉｉ）ヒトＢリンパ球およびＢ細胞腫瘍腫瘍系に結合するが、ＣＤ３＋末梢血Ｔ細胞、ＣＤ１Ａ＋末梢血樹状細胞、ＣＤ１４＋末梢血単球またはＣＤ５６＋末梢血ナチュラルキラー細胞に実質的には結合しない。
【０１０４】
上記の変更された抗体の機能特性は、当該分野で利用可能であり、かつ／または本明細書中で記載される、標準的アッセイを使用して評価され得、これらのアッセイは、例えば、実施例において示されるアッセイ（例えば、フローサイトメトリー、結合アッセイ）である。
【０１０５】
本発明の抗体を操作する方法の特定の実施形態において、変異が、抗ＩＲＴＡ−５抗体コード配列の全てまたは部分に沿って無作為にまたは選択的に導入され得、そして得られた改変抗ＩＲＴＡ−５抗体は、結合活性および／または本明細書中で記載されるような他の機能特性についてスクリーニングされ得る。変異の方法は、当該分野で記載されている。例えば、Ｓｈｏｒｔによる国際公開第０２／０９２７８０号は、飽和変異誘発、合成的ライゲーションアセンブリ、またはそれらの組み合わせを使用して抗体変異を作製しそしてスクリーニングする方法について記載する。あるいは、Ｌａｚａｒらによる国際公開第０３／０７４６７９号は、コンピュータースクリーニング方法を使用して抗体の生理化学特性を最適化する方法を記載する。
【０１０６】
（本発明の抗体をコードする核酸分子）
本発明の別の局面は、本発明の抗体をコードする核酸分子に関する。この核酸は、全細胞（ｗｈｏｌｅ  ｃｅｌｌ）中に存在し得るか、細胞溶解産物中に存在し得るか、または部分的精製形態もしくは実質的に純粋な形態で存在し得る。核酸は、他の細胞構成成分または他の夾雑物（例えば、他の細胞性の核酸またはタンパク質）から標準的技術により精製される場合、「単離される」か、または「実質的に純粋にされる」。この技術としては、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンド形成、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動および他の当該分野で周知の技術が挙げられる。Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌら編（１９８７）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照。本発明の核酸は、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡであり得、イントロン配列を含んでも含まなくてもよい。好ましい実施形態において、上記核酸は、ｃＤＮＡ分子である。
【０１０７】
本発明の核酸は、標準的分子生物学技術を用いて得られ得る。ハイブリドーマ（例えば、上記にさらに記載されるようなヒト免疫グロブリン遺伝子を有するトランスジェニックマウスから調製されるハイブリドーマ）によって発現される抗体については、このハイブリドーマによって産生される抗体の軽鎖および重鎖をコードするｃＤＮＡは、標準的ＰＣＲ増幅技術またはｃＤＮＡクローニング技術によって得られ得る。免疫グロブリン遺伝子ライブラリーから（例えば、ファージディスプレイ技術を用いて）得られる抗体については、この抗体をコードする核酸が、このライブラリーから回収される。
【０１０８】
本発明の好ましい核酸分子は、２Ｇ５モノクローナル抗体、５Ａ２モノクローナル抗体または７Ｇ８モノクローナル抗体の、ＶＨ配列およびＶＬ配列をコードする核酸分子である。２Ｇ５、５Ａ２および７Ｇ８のＶＨ配列をコードするＤＮＡ配列は、それぞれ配列番号２５、配列番号２６および配列番号２７に示される。２Ｇ５、５Ａ２および７Ｇ８のＶＬ配列をコードするＤＮＡ配列は、それぞれ配列番号２８、配列番号２９および配列番号３０に示される。
【０１０９】
ＶＨセグメントおよびＶＬセグメントをコードするＤＮＡフラグメントが一旦得られると、これらのＤＮＡ配列は、標準的組換えＤＮＡ技術により、例えば、可変領域遺伝子を、完全長抗体鎖遺伝子、Ｆａｂフラグメント遺伝子またはｓｃＦｖ遺伝子に変換するように、さらに操作され得る。これらの操作において、ＶＬコードＤＮＡフラグメントまたはＶＨコードＤＮＡフラグメントは、別のタンパク質（例えば、抗体定常領域または変動可能（ｆｌｅｘｉｂｌｅ）リンカー）をコードする別のＤＮＡフラグメントに作動可能に連結される。用語「作動可能に連結される」は、この文脈で使用される場合、その２つのＤＮＡフラグメントによってコードされるアミノ酸配列がインフレームを維持するように、その２つのＤＮＡフラグメントが連結されることを意味することが意図される。
【０１１０】
ＶＨ領域をコードする単離されたＤＮＡは、ＶＨをコードするこのＤＮＡを、重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）をコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することにより、完全長の重鎖遺伝子に変換され得る。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は、当該分野で公知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２を参照）、そしてこれらの領域を含むＤＮＡフラグメントは、標準的ＰＣＲ増幅によって得られ得る。上記重鎖定常領域は、ＩｇＧ１定常領域、ＩｇＧ２定常領域、ＩｇＧ３定常領域、ＩｇＧ４定常領域、ＩｇＡ定常領域、ＩｇＥ定常領域、ＩｇＭ定常領域、またはＩｇＤ定常領域であり得るが、最も好ましくは、ＩｇＧ１定常領域またはＩｇＧ４定常領域である。Ｆａｂフラグメント重鎖遺伝子のために、ＶＨをコードするＤＮＡが、重鎖ＣＨ１定常領域のみをコードする別のＤＮＡ分子と作動可能に連結され得る。
【０１１１】
ＶＬ領域をコードする単離されたＤＮＡは、ＶＬをコードするこのＤＮＡを、軽鎖定常領域ＣＬをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することにより、完全長の軽鎖遺伝子に変換され得る。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は、当該分野で公知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２）、そしてこれらの領域を含むＤＮＡフラグメントは、標準的ＰＣＲ増幅によって得られ得る。上記軽鎖定常領域は、κ定常領域またはλ定常領域であり得るが、最も好ましくは、κ定常領域である。
【０１１２】
ｓｃＦｖ遺伝子を作製するために、ＶＨコードＤＮＡフラグメントおよびＶＬコードＤＮＡフラグメントが、ＶＨ配列およびＶＬ配列が変動可能リンカーをコードする別のフラグメント（例えば、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）３をコードする）に作動可能に連結され、ＶＬおよびＶＨ領域がその変動可能リンカーにより連結された連続した一本鎖タンパク質として発現され得るようになる（例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；Ｈｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４を参照）。
【０１１３】
（本発明のモノクローナル抗体の産生）
本発明のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、従来のモノクローナル抗体方法論（例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５の標準的体細胞ハイブリダイゼーション技術）を含む種々の技術によって産生され得る。体細胞ハイブリダイゼーション手順が好ましいが、原則として、モノクローナル抗体を産生するための他の技術（例えば、Ｂリンパ球のウイルス性形質転換または他の腫瘍形成性形質転換）が、使用され得る。
【０１１４】
ハイブリドーマを調製するための好ましい動物系は、マウス系である。マウスにおけるハイブリドーマ産生は、非常によく確立されている手順である。免疫プロトコールおよび融合のための免疫脾細胞の単離の技術は、当該分野で公知である。融合パートナー（例えば、マウス骨髄腫細胞）および融合手順もまた、公知である。
【０１１５】
本発明のキメラ抗体またはヒト化抗体は、上述のように調製されたマウスモノクローナル抗体の配列に基づいて調製され得る。重鎖免疫グロブリンおよび軽鎖免疫グロブリンをコードするＤＮＡが、標準的分子生物学技術を用いて、目的のマウスハイブリドーマから得られ得、そして非マウス（例えば、ヒト）免疫グロブリン配列を含むように操作され得る。例えば、キメラ抗体を作製するため、当該分野で公知の技術を用い、マウス可変領域をヒト定常領域に連結し得る（例えば、Ｃａｂｉｌｌｙらに対する米国特許第４，８１６，５６７号を参照）。ヒト化抗体を作製するために、マウスＣＤＲ領域が、当該分野で公知の方法を用いて、ヒトフレームワーク内に挿入され得る（例えば、Ｗｉｎｔｅｒに対する米国特許第５，２２５，５３９号、およびＱｕｅｅｎらに対する米国特許公開５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９；同第５，６９３，７６２および同第６，１８０，３７０号を参照）。
【０１１６】
好ましい実施形態において、本発明の抗体は、ヒトモノクローナル抗体である。ＩＲＴＡ−５に対するそのようなヒトモノクローナル抗体は、マウス免疫系ではなくヒト免疫系の一部を保有するトランスジェニックマウスまたは染色体導入（ｔｒａｎｓｃｈｒｏｍｏｓｏｍｉｃ）マウスを用いて産生され得る。これらのトランスジェニックマウスまたは染色体導入マウスとしては、それぞれＨｕＭＡｂ  Ｍｏｕｓｅ（登録商標）およびＫＭ  Ｍｏｕｓｅ（登録商標）と本明細書中で言及されるマウスが挙げられ、そして本明細書中で集合的に「ヒトＩｇマウス」と呼ばれる。
【０１１７】
ＨｕＭＡｂ  Ｍｏｕｓｅ（登録商標）（Ｍｅｄａｒｅｘ（登録商標）Ｉｎｃ．）は、再配列されていないヒト重鎖免疫グロブリン配列（μおよびγ）およびヒトκ軽鎖免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子小座（ｍｉｎｉｌｏｃｏｓ）を、内因性のμ鎖遺伝子座およびκ鎖遺伝子座を不活性化する標的化変異と共に含む（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇら（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８（６４７４）：８５６−８５９を参照）。したがって、このマウスは、マウスＩｇＭまたはκの発現低下を示し、そして免疫に応答して、導入されたヒト重鎖導入遺伝子およびヒト軽鎖導入遺伝子がクラススイッチおよび体細胞変異を受け、高親和性ヒトＩｇＧκモノクローナル抗体を産生する（Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ら（１９９４）前出；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．（１９９４）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｎｉｅｎｔａｌ  Ｐｈａｍａｃｏｌｏｇｙ中の総説１１３：４９−１０１；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．およびＨｕｓｚａｒ，Ｄ．（１９９５）Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３，ならびにＨａｒｄｉｎｇ，Ｆ．およびＬｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．（１９９５）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７６４：５３６−５４６）。ＨｕＭａｂ  Ｍｏｕｓｅ（登録商標）の調製および使用、ならびにこのようなマウスによって保持されるゲノム改変は、以下においてさらに記載される：Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．ら（１９９２）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０：６２８７−６２９５；Ｃｈｅｎ，Ｊ．ら（１９９３）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ５：６４７−６５６；Ｔｕａｉｌｌｏｎら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：３７２０−３７２４；Ｃｈｏｉら（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４：１１７−１２３；Ｃｈｅｎ，Ｊ．ら（１９９３）ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：８２１−８３０；Ｔｕａｉｌｌｏｎら（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：２９１２−２９２０；Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．ら（１９９４）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ６：５７９−５９１；およびＦｉｓｈｗｉｌｄ，Ｄ．ら（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８４５−８５１（これら全ての内容は、本明細書中でその全体が、具体的に参考として援用される）。さらに、米国特許第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，７８９，６５０号；同第５，８７７，３９７号；同第５，６６１，０１６号；同第５，８１４，３１８号；同第５，８７４，２９９号；および同第５，７７０，４２９号（全てＬｏｎｂｅｒｇおよびＫａｙに対する）；米国特許第５，５４５，８０７号（Ｓｕｒａｎｉらに対する）；国際公開第９２／０３９１８号、同第９３／１２２２７号、同第９４／２５５８５号、同第９７／１３８５２号、同第９８／２４８８４号および同第９９／４５９６２号（全てＬｏｎｂｅｒｇおよびＫａｙに対する）；ならびに国際公開第０１／１４４２４号（Ｋｏｒｍａｎらに対する）もまた、参照。
【０１１８】
別の実施形態において、本発明のヒト抗体は、導入遺伝子および導入染色体上にヒト免疫グロブリン配列を保有するマウス（たとえば、ヒト重鎖導入遺伝子およびヒト軽鎖導入染色体を保有するマウス）を使用して惹起され得る。このようなマウス（本明細書中で「ＫＭマウスＴＭ」と呼ばれるマウス）は、Ｉｓｈｉｄａらに対する国際公開第０２／４３４７８号に詳細に記載される。
【０１１９】
なおさらに、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替のトランスジェニック動物系が、当該分野で利用可能であり、そして本発明の抗ＩＲＴＡ−５抗体を惹起するために使用され得る。例えば、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．）と呼ばれる代替のトランスジェニック系が、使用され得る；このようなマウスは、例えば、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらに対する米国特許第５，９３９，５９８号；同第６，０７５，１８１号；同第６，１１４，５９８号；同第６，１５０，５８４号および同第６，１６２，９６３号に記載される。
【０１２０】
その上、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替の染色体導入動物系が、当該分野で利用可能であり、本発明の抗ＩＲＴＡ−５抗体を惹起するために使用され得る。例えば、「ＴＣマウス」と呼ばれる、ヒト重鎖導入染色体およびヒト軽鎖導入染色体の両方を保有するマウスが、使用され得る；このマウスは、Ｔｏｍｉｚｕｋａら（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９７：７２２−７２７に記載される。さらに、ヒト重鎖およびヒト軽鎖の導入染色体を保有する雌ウシが、当該分野で記載されており（Ｋｕｒｏｉｗａら（２００２）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２０：８８９−８９４）、そして、本発明の抗ＩＲＴＡ−５抗体を惹起するために使用され得る。
【０１２１】
本発明のヒトモノクローナル抗体はまた、ヒト免疫グロブリン遺伝子のライブラリーをスクリーニングするためのファージディスプレイ方法を使用して調製され得る。ヒト抗体を単離するためのこのようなファージディスプレイ方法は、当該分野で確立されている。例えば、米国特許第５，２２３，４０９号；同第５，４０３，４８４号；および同第５，５７１，６９８号（Ｌａｄｎｅｒらに対する）；米国特許第５，４２７，９０８号および同第５，５８０，７１７号（Ｄｏｗｅｒらに対する）；米国特許第５，９６９，１０８号および同第６，１７２，１９７号（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙらに対する）；ならびに同第５，８８５，７９３号；同第６，５２１，４０４号；同第６，５４４，７３１号；同第６，５５５，３１３号；同第６，５８２，９１５号および同第６，５９３，０８１号（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓらに対する）を参照。
【０１２２】
本発明のヒトモノクローナル抗体はまた、ＳＣＩＤマウスを使用して調製され得、このＳＣＩＤマウス中にヒト免疫細胞が再構築されており、ヒト抗体応答が免疫の際に生成され得るようになっている。このようなマウスは、例えば、Ｗｉｌｓｏｎらに対する米国特許第５，４７６，９９６号および同第５，６９８，７６７号に記載される。
【０１２３】
（ヒトＩｇマウスの免疫）
ヒトＩｇマウスが、本発明のヒト抗体を惹起するために使用される場合、このようなマウスは、ＩＲＴＡ−５抗原および／または組換えＩＲＴＡ−５、またはＩＲＴＡ−５融合タンパク質の精製調製物または濃縮（ｅｎｒｉｃｈｅｄ）調製物で免疫され得る（Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ら（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８（６４７４）８５６−８５９：Ｆｉｓｈｗｉｌｄ，Ｄ．ら（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８４５−８５１；ならびに国際公開第９８／２４８８４号および同第０１／１４４２４号に記載される）。好ましくは、マウスは、最初の注入において６〜１６週齢である。例えば、ＩＲＴＡ−５抗原の精製調製物または組換え調製物（５〜５０μｇ）が、ヒトＩｇマウスを腹腔内免疫するために使用され得る。
【０１２４】
ＩＲＴＡ−５に対する完全なヒトモノクローナル抗体を発生させるための詳細な手順は、以下の実施例１に記載される。種々の抗原を用いた累積的な経験は、完全フロイントアジュバント中の抗原でまず腹腔内（ＩＰ）免疫され、その後、不完全フロイントアジュバント中の抗原で隔週でＩＰ免疫される（計６回まで）場合、トランスジェニックマウスが応答することを示している。しかし、フロイント以外のアジュバントもまた、有効であることが知られている。さらに、アジュバント非存在下での全細胞（ｗｈｏｌｅ  ｃｅｌｌ）は、高度に免疫抗原性であることが見出される。免疫応答は、免疫プロトコールの経過の間モニタリングされ得、血漿サンプルが眼窩後方（ｒｅｔｒｏｏｒｂｉｔａｌ）採血によって得られる。血漿は、ＥＬＩＳＡによって（以下で記載するように）スクリーニングされ、そして抗ＩＲＴＡ−５ヒト免疫グロブリンの十分な力価を有するマウスは、融合のために使用され得る。マウスは、抗原で静脈内に屠殺および脾臓摘出の３日間前にブーストされ得る。各免疫につき２〜３回の融合を、実施する必要があり得ることが予期される。各抗原につき、６匹と２４匹との間のマウスが、代表的に免疫される。通常、ＨＣｏ７系統およびＨＣｏ１２系統が使用される。さらに、ＨＣｏ７導入遺伝子およびＨＣｏ１２導入遺伝子の両方が、共に掛け合わされて、２つの異なるヒト重鎖導入遺伝子（ＨＣｏ７／ＨＣｏ１２）を有する１匹のマウスが産生され得る。あるいは、またはさらに、ＫＭ  Ｍｏｕｓｅ（登録商標）系統もまた使用され得る。
【０１２５】
（本発明のヒトモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマの産生）
本発明のヒトモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを産生するため、免疫されたマウスに由来する脾細胞および／またはリンパ節細胞が単離され得、そして適切な不死化細胞株（例えば、マウス骨髄腫細胞株）に融合され得る。得られたハイブリドーマは、抗原特異的抗体の産生のためにスクリーニングされ得る。例えば、得られたマウスに由来する１種の脾臓リンパ球の細胞懸濁液は、６分の１の数のＰ３Ｘ６３−Ａｇ８．６５３非分泌性マウス骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ，ＣＲＬ  １５８０）に、５０％  ＰＥＧを用いて融合され得る。細胞は、約２×１０５で平底マイクロタイタープレート中に播種され、その後、２０％ウシ胎仔血清、１８％「６８３」馴化培地、５％  ｏｒｉｇｅｎ（ＩＧＥＮ）、４ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．０５５ｍＭ  ２−メルカプトエタノール、５０単位／ｍｌペニシリン、５０ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン、５０ｍｇ／ｍｌゲンタマイシンおよび１×ＨＡＴ（Ｓｉｇｍａ；ＨＡＴは融合の２４時間後に添加される）を含有する選択培地中で、２週間インキュベーションされる。約２週間後、細胞は、ＨＡＴがＨＴで置き換えられている培地中で培養され得る。次いで、個々のウェルは、ヒトモノクローナルＩｇＭ抗体およびヒトモノクローナルＩｇＧ抗体についてのＥＬＩＳＡによってスクリーニングされ得る。一旦、広範なハイブリドーマの増殖が起こると、培地は、通常、１０〜１４日後に観察され得る。抗体分泌性ハイブリドーマは、再びプレートに播種され得、再びスクリーニングされ得て、なおヒトＩｇＧに対して陽性であった場合、このモノクローナル抗体は、限界希釈により少なくとも２回サブクローニングされ得る。次いで、安定的なサブクローンは、性質決定のために組織培養培地中に少量の抗体を産生するため、インビトロで培養され得る。
【０１２６】
ヒトモノクローナル抗体を精製するために、選択されたハイブリドーマは、モノクローナル抗体精製のために２リットルのスピナーフラスコ中で増殖され得る。上清は濾過され得、そして濃縮された後、プロテインＡ−セファロースを用いたアフィニティクロマトグラフィー（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）にかけられ得る。溶出されたＩｇＧは、ゲル電気泳動によって確認され得、そして高速液体クロマトグラフィーによって、純度を確認され得る。バッファー溶液は、ＰＢＳに交換され得、そして吸光係数１．４３を用いてＯＤ２８０によって濃度が決定され得る。このモノクローナル抗体は、等分されて、−８０℃で保存され得る。
【０１２７】
（本発明のモノクローナル抗体を産生するトランスフェクトーマ（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｏｍａ）の産生）
本発明の抗体はまた、宿主細胞トランスフェクトーマ（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｏｍａ）において、例えば、当該分野で周知であるように（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２）、組換えＤＮＡ技術および遺伝子トランスフェクション方法の組み合わせを用いて、産生され得る。
【０１２８】
例えば、抗体またはその抗体フラグメントを発現するため、一部または完全長の軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡが、標準的分子生物学技術（例えば、目的の抗体を発現するハイブリドーマを用いるＰＣＲ増幅またはｃＤＮＡクローニング）によって得られ得、そしてこのＤＮＡは、その遺伝子が転写制御配列および翻訳制御配列に作動可能に連結されるように、発現ベクター内に挿入され得る。この文脈において、用語「作動可能に連結される」は、抗体遺伝子が、ベクター内に、そのベクター内の転写制御配列および翻訳制御配列の抗体遺伝子の転写および翻訳を制御するというその意図される機能をもたらすように、ライゲーションされることを意味することを意図される。発現ベクターおよび発現制御配列は、使用される発現宿主細胞に適合性であるように選択される。抗体軽鎖遺伝子および抗体重鎖遺伝子は、別々のベクター内に挿入され得るか、またはより代表的には、両遺伝子は、同じ発現ベクター内に挿入される。抗体遺伝子は、標準的方法（例えば、抗体遺伝子フラグメントおよびベクターの相補的制限部位のライゲーション、または制限部位が存在しない場合は平滑末端ライゲーション）により、発現ベクター内に挿入される。本明細書中に記載される抗体の軽鎖可変領域および重鎖可変領域は、発現ベクター（所望のアイソタイプの重鎖定常領域および軽鎖定常領域を既にコードしている）内にこれらを挿入してＶＨセグメントがそのベクター内のＣＨセグメントに作動可能に連結され、ＶＫセグメントがベクター内のＣＬセグメントに作動可能に連結されるようにすることにより、任意の抗体アイソタイプの完全長抗体遺伝子を作製するために使用され得る。さらに、または代替的に、組換え発現ベクターは、宿主細胞からの抗体鎖の分泌を促進するシグナルペプチドをコードし得る。抗体鎖遺伝子は、シグナルペプチドがインフレームで抗体鎖遺伝子のアミノ末端に連結されるようにベクター内にクローニングされ得る。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチドまたは異種のシグナルペプチド（すなわち、非免疫グロブリンタンパク質からのシグナルペプチド）であり得る。
【０１２９】
抗体鎖遺伝子に加えて、本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞において抗体鎖遺伝子の発現を制御する調節配列を保有する。用語「調節配列」は、プロモーター、エンハンサーおよび抗体鎖遺伝子の転写または翻訳を制御する他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことを意図する。このような調節配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ（Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９０））に記載される。発現ベクターの設計（調節配列の選択を含む）は、形質転換させる宿主細胞の選択、所望のタンパク質の発現レベルなどの要因に依存し得ることが、当業者に理解される。哺乳動物宿主細胞発現のための好ましい調節配列としては、哺乳動物細胞における高レベルのタンパク質発現を指向するウイルスエレメントが挙げられ、このウイルスエレメントは、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）由来のプロモーターならびに／またはエンハンサー、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）由来のプロモーターならびに／またはエンハンサー、アデノウイルス由来のプロモーターならびに／またはエンハンサー（例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））およびポリオーマ由来のプロモーターならびに／またはエンハンサーである。あるいは、非ウイルス性調節配列（例えば、ユビキチンプロモーターまたはβグロブリンプロモーター）が使用され得る。なおさらに、調節エレメントは、異なる供給源（例えば、ＳＶ４０初期プロモーターからの配列およびヒトＴ細胞白血病ウイルス１型の長末端反復からの配列を含むＳＲαプロモーター系（Ｔａｋｅｂｅ，Ｙ．ら（１９８８）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８：４６６−４７２））からの配列から構成される。
【０１３０】
抗体鎖遺伝子および調節配列に加えて、本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞におけるベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）および選択マーカー遺伝子のような、さらなる配列を保有し得る。選択マーカー遺伝子は、ベクターが中に導入されている宿主細胞の選択を容易にする（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，６３４，６６５号および同第５，１７９，０１７号（全てＡｘｅｌらによる）を参照のこと）。例えば、代表的に、選択マーカー遺伝子は、ベクターが導入されている宿主細胞に薬剤（例えば、Ｇ４１８、ハイグロマイシンまたはメトトレキサート）に対する耐性を付与する。好ましい選択マーカー遺伝子としては、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子（ｄｈｆｒ宿主細胞におけるメトトレキサートでの選択／増幅において使用される）およびｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択）が挙げられる。
【０１３１】
軽鎖および重鎖の発現について、重鎖および軽鎖をコードする発現ベクターは、標準的技術によって、宿主細胞内にトランスフェクトされる。用語「トランスフェクション」の種々の形態は、原核宿主生物または真核宿主生物への外来性ＤＮＡの導入のために一般に使用される広範な種々の技術（例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなど）を包含することを意図する。原核生物宿主細胞および真核生物宿主細胞のどちらにおいても本発明の抗体を発現することは理論的に可能であるが、真核細胞（最も好ましくは哺乳動物細胞）における抗体の発現が最も好ましい。なぜなら、このような真核細胞（特に哺乳動物宿主細胞）は、原核細胞よりも、正しく折りたたまれた免疫学的に活性な抗体を構築しやすく、そして分泌しやすいからである。原核生物による抗体遺伝子の発現は、活性な抗体の高収量の産生に役に立たないことが報告されている（Ｂｏｓｓ，Ｍ．Ａ．およびＷｏｏｄ，Ｃ．Ｒ．（１９８５）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ６：１２−１３）。
【０１３２】
本発明の組換え抗体を発現するために好ましい哺乳動物宿主細胞としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（ＵｒｌａｕｂおよびＣｈａｓｉｎ（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６−４２２０に記載されるｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含み、これは例えば、Ｒ．Ｊ．ＫａｕｆｍａｎおよびＰ．Ａ．Ｓｈａｒｐ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１−６２１に記載されるようにＤＨＦＲ選択マーカーと共に使用される）、ＮＳＯ骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞およびＳＰ２細胞が挙げられる。特に、ＮＳＯ骨髄腫細胞と共に使用するために、別の好ましい発現系は、ＷＯ８７／０４４６２、ＷＯ８９／０１０３６およびＥＰ３３８，８４１において開示されるＧＳ遺伝子発現系である。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターが哺乳動物宿主細胞内に導入される場合、宿主細胞において抗体の発現を可能にするため、またはより好ましくは、宿主細胞が増殖している培養培地中への抗体の分泌を可能にするために十分な時間、宿主細胞を培養することによって、抗体は産生される。抗体は、培養培地から、標準的タンパク質精製方法を用いて回収され得る。
【０１３３】
（抗原に結合する抗体の性質決定）
本発明の抗体は、例えば、標準的ＥＬＩＳＡによって、ＩＲＴＡ−５への結合について試験され得る。簡潔には、マイクロタイタープレートは、ＰＢＳ中０．２５μｇ／ｍｌの精製ＩＲＴＡ−５によりでコートされ、次いで、ＰＢＳ中５％ウシ血清アルブミンでブロックされる。抗体の希釈物（例えば、ＩＲＴＡ−５免疫マウス由来の血漿の希釈物）が、各ウェルに添加され、そして３７℃で１〜２時間インキュベーションされる。プレートは、ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗浄され、次いで、アルカリホスファターゼと結合体化した二次試薬（例えば、ヒト抗体については、ヤギ−抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ特異的ポリクローナル試薬）と共に、３７℃で１時間インキュベーションされる。洗浄後、このプレートは、ｐＮＰＰ基質（１ｍｇ／ｍｌ）で発色され、そして４０５〜６５０のＯＤで分析される。好ましくは、最高の力価を示したマウスが、融合のために使用される。
【０１３４】
上述のＥＬＩＳＡアッセイはまた、ＩＲＴＡ−５イムノゲンに対し、陽性の反応性を示すハイブリドーマについてスクリーニングするために使用され得る。高い結合性でＩＲＴＡ−５に結合するハイブリドーマは、サブクローニングされ、そしてさらに性質決定される。親細胞の反応性（ＥＬＩＳＡによる）を保持する各ハイブリドーマからの１つのクローンは、−１４０℃で保存される５〜１０個の細胞バンクのバイアルの作製、および、抗体精製のために選択される。
【０１３５】
抗ＩＲＴＡ−５抗体を精製するために、選択されたハイブリドーマは、モノクローナル抗体精製のために２リットルのスピナーフラスコ中で増殖され得る。上清は、濾過され得、そしてプロテインＡ−セファロースを用いたアフィニティクロマトグラフィー（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）の前に濃縮される。溶出されたＩｇＧは、ゲル電気泳動および高速液体クロマトグラフィーによってチェックされ得、純度を確認され得る。バッファー溶液は、ＰＢＳに交換され得、そして吸光係数１．４３を用いたＯＤ２８０によって濃度が決定され得る。このモノクローナル抗体は、等分されて、−８０℃で保存され得る。
【０１３６】
選択された抗−ＩＲＴＡ−５モノクローナル抗体が独特のエピトープに結合するか否かを決定するため、各抗体は、市販の試薬（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を用いてビオチン化され得る。未標識モノクローナル抗体およびビオチン化モノクローナル抗体を用いる競合研究は、ＩＲＴＡ−５でコートしたＥＬＩＳＡプレートを用いて、上述のように実施され得る。ビオチン化ｍＡｂ結合は、ストレプトアビジン−アルカリホスファターゼ（ｓｔｒｅｐ−ａｖｉｄｉｎ−ａｌｋａｌｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ）プローブを用いて検出され得る。
【０１３７】
精製した抗体のアイソタイプを決定するために、特定のアイソタイプの抗体に対して特異的な試薬を用いるアイソタイプＥＬＩＳＡが実施され得る。例えば、ヒトモノクローナル抗体のアイソタイプを決定するために、マイクロタイタープレートのウェルは、１μｇ／ｍｌの抗ヒト免疫グロブリンで、４℃で一晩コートされ得る。１％  ＢＳＡでのブロック後、このプレートは、１μｇ／ｍｌ以下の試験モノクローナル抗体または１μｇ／ｍｌ以下の精製アイソタイプコントロールと、周囲の温度で１〜２時間反応される。次いで、ウェルは、ヒトＩｇＧ１特異的アルカリホスファターゼ結合体化プローブまたはヒトＩｇＭ特異的アルカリホスファターゼ結合体化プローブのどちらかで反応され得る。プレートは、上述のように発色されそして分析される。
【０１３８】
抗ＩＲＴＡ−５ヒトＩｇＧは、ＩＲＴＡ−５抗原に対する反応性について、ウェスタンブロッティングによりさらに試験され得る。簡潔には、ＩＲＴＡ−５が、調製され、そしてドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動にかけられ得る。電気泳動後、分離した抗原は、ニトロセルロースメンブレンに移され、１０％ウシ胎仔血清でブロックされ、そして試験されるモノクローナル抗体でプローブされる。ヒトＩｇＧ結合は、抗ヒトＩｇＧアルカリホスファターゼを用いて検出されてＢＣＩＰ／ＮＢＴ基質タブレット（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）で発色され得る。
【０１３９】
（免疫結合体）
別の局面において、本発明は、細胞毒、薬物（例えば免疫抑制剤）、または放射性毒物のような治療部分と結合体化した、抗ＩＲＴＡ−５抗体または抗ＩＲＴＡ−５抗体のフラグメントの特徴を有する。このような結合体は、本明細書中で、「免疫結合体」と呼ばれる。１以上の細胞毒を含む免疫結合体は、「免疫毒素」と呼ばれる。細胞毒または細胞毒性薬剤としては、細胞に有害な（例えば、細胞を殺す）任意の薬剤が挙げられる。例としては、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムブロマイド、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシンならびにこれらのアナログまたはホモログが挙げられる。また、治療剤としては、例えば、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエパクロラムブシル（ｔｈｉｏｅｐａ  ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣおよびシス−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前はダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ））、および抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）が挙げられる。
【０１４０】
本発明の抗体と結合体化し得る、治療用細胞毒の他の好ましい例としては、ズオカルマイシン、カリケアミシン、メイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）およびアウリスタチン、およびこれらの誘導体が挙げられる。カリケアミシン抗体結合体の例は、市販されている（ＭｙｌｏｔａｒｇＴＭ；Ｗｙｅｔｈ）。
【０１４１】
細胞毒素は、当該分野で利用可能なリンカー技術を用いて本発明の抗体と結合体化され得る。細胞毒素を抗体に結合体化させるために使用されているリンカー型の例としては、ヒドラゾン、チオエーテル、エステル、ジスルフィドおよびペプチド含有リンカーが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、リソソーム画分の中で低ｐＨにより切断されやすいリンカー、またはプロテアーゼ（例えばカテプシン（例えば、カテプシンＢ、カテプシンＣ、カテプシンＤ）のように腫瘍組織において優先的に発現されるプロテアーゼ）によって切断されやすいリンカーであるように選択され得る。
【０１４２】
治療剤を抗体に結合体化させる細胞毒素、リンカーおよび方法の型のさらなる考察については、以下もまた参照のこと：Ｓａｉｔｏ，Ｇ．ら（２００３）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５５：１９９−２１５；Ｔｒａｉｌ，Ｐ．Ａ．ら（２００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：  ３２８−３３７；Ｐａｙｎｅ，Ｇ．（２００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ３：２０７−２１２；Ａｌｌｅｎ，Ｔ．Ｍ．（２００２）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ  ２：７５０−７６３；Ｐａｓｔａｎ，ｌ．およびＫｒｅｉｔｍａｎ，Ｒ．Ｊ．（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ  ３：１０８９−１０９１；Ｓｅｎｔｅｒ，Ｐ．Ｄ．およびＳｐｒｉｎｇｅｒ，Ｃ．Ｊ．（２００１）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５３：２４７−２６４。
【０１４３】
本発明の抗体はまた、放射性同位体に結合体化されて、細胞毒性放射性医薬品（放射性免疫結合体（ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）とも呼ばれる）を産生し得る。診断的な使用または治療的な使用のために抗体に結合体化され得る放射性同位体の例としては、ヨウ素１３１、インジウム１１１、イッテリウム９０およびルテチウム１７７が挙げられるが、これらに限定されない。放射性免疫結合体を調製するための方法は、当該分野において確立されている。放射性免疫結合体の例は市販されており、ＺｅｖａｌｉｎＴＭ（ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）およびＢｅｘｘａｒＴＭ（Ｃｏｒｉｘａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）が挙げられ、そして、類似の方法が、本発明の抗体を使用して放射性免疫結合体を調製するために使用され得る。
【０１４４】
本発明の抗体結合体は、所定の生物学的応答を修飾するために使用され得、そしてこの薬物部分は、古典的な化学治療剤に限定されるように解釈されるべきではない。例えば、この薬物部分は、所望の生物学的活性を有する、タンパク質またはポリペプチドであり得る。このようなタンパク質としては、例えば、酵素学的に活性な毒素またはその活性フラグメントが挙げられ、例えば、アブリン、リシンＡ、シュードモナス体外毒素、もしくはジフテリア毒素；腫瘍壊死因子もしくはインターフェロン−γのようなタンパク質；または生物学的反応修飾物質（例えば、リンホカイン、インターロイキン−１（「ＩＬ−１」）、インターロイキン−２（「ＩＬ−２」）、インターロイキン−６（「ＩＬ−６」）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（「ＧＭ−ＣＳＦ」）、顆粒球コロニー刺激因子（「Ｇ−ＣＳＦ」）、または他の成長因子）である。
【０１４５】
治療部分を抗体に結合体化させる技術は、周知であり、例えば、以下を参照のこと：Ａｒｎｏｎら、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｒｅｉｓｆｅｌｄら（編）、ｐｐ．２４３−５６（Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（第２版）、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら（編）、ｐｐ．６２３−５３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ」、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｐｉｎｃｈｅｒａら（編）、ｐｐ．４７５−５０６（１９８５）；「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  Ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂａｌｄｗｉｎら（編）、ｐｐ．３０３−１６（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  １９８５）、およびＴｈｏｒｐｅら、「Ｔｈｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  Ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ」、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，６２：１１９−５８（１９８２）。
【０１４６】
（二重特異性分子）
別の局面において、本発明は、本発明の抗ＩＲＴＡ−５抗体またはそのフラグメントを含む、二重特異性分子を特徴とする。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、別の機能的分子（例えば、別のペプチドまたはタンパク質）（例えば、別の抗体または受容体に対するリガンド）に誘導体化されるかまたは結合されて、少なくとも２つの異なる結合部位または標的分子に結合する二重特異性分子を産生する。本発明の抗体は、実際に、１つよりも多くの他の機能的分子に誘導体化されるか結合されて、２つよりも多くの異なる結合部位および／または標的分子に結合する多重特異性（ｍｕｌｔｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）分子を産生し得る；このような多重特異性分子もまた、本明細書中で使用される用語「二重特異性分子」に含まれる。本発明の二重特異性分子を作製するために、本発明の抗体は、１以上の他の結合分子（例えば、別の抗体、抗体フラグメント、ペプチドまたは結合模倣物）に機能的に結合（例えば、化学結合、遺伝的融合、非共有結合またはその他の結合）されて、二重特異性分子を生じ得る。
【０１４７】
したがって、本発明は、ＩＲＴＡ−５に対する少なくとも１つの第１結合特異性、および第２の標的エピトープに対する第２の結合特異性を有する、二重特異性分子を含む。本発明の特定の実施形態において、第２の標的エピトープは、Ｆｃ受容体（例えば、ヒトＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）またはヒトＦｃα受容体（ＣＤ８９））である。したがって、本発明は、ＦｃγＲ、ＦｃαＲまたはＦｃεＲを発現するエフェクター細胞（例えば、単球、マクロファージまたは多形核細胞（ＰＭＮ））と、ＩＲＴＡ−５を発現する標的細胞の両方に結合可能な二重特異性分子を含む。これらの二重特異性分子は、ＩＲＴＡ−５発現細胞をエフェクター細胞に対して標的化し、そしてＦｃ受容体媒介性エフェクター細胞活性（例えば、ＩＲＴＡ−５発現細胞の食作用、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、サイトカイン放出、またはスーパーオキシドアニオンの産生）を引き起こす。
【０１４８】
二重特異性分子が多重特異性である本発明の実施形態において、この分子は、抗Ｆｃ結合特異性および抗ＩＲＴＡ−５結合特異性に加えて、第３の結合特異性をさらに含み得る。１つの実施形態において、第３の結合特異性は、抗増強因子（ａｎｔｉ−ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｆａｃｔｏｒ）（ＥＦ）部分であり、例えば、細胞毒性活性に関与する表面タンパク質に結合し、それにより、標的細胞に対する免疫応答を増大させる分子である。「抗増強因子部分」は、抗体、機能的抗体フラグメント、または所定の分子（例えば、抗原または受容体）に結合するリガンドであり得、そして、それにより、Ｆｃ受容体または標的細胞抗原についての結合決定基の効果の増強をもたらす。「抗増強因子部分」は、Ｆｃ受容体または標的細胞抗原に結合し得る。あるいは、抗増強因子部分は、第１の結合特異性および第２の結合特異性が結合する実体とは異なる実体に結合し得る。例えば、抗増強因子部分は、細胞毒性Ｔ細胞に（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＩＣＡＭ−１、または標的細胞に対し増大した免疫応答をもたらす他の免疫細胞を介して）結合し得る。
【０１４９】
１つの実施形態において、本発明の二重特異性分子は、結合特異性として、少なくとも１つの抗体またはその抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは一本鎖Ｆｖが挙げられる）を含む。この抗体はまた、Ｌａｄｎｅｒらの米国特許第４，９４６，７７８号（この内容は、明白に参考として援用される）に記載されるように、軽鎖二量体もしくは重鎖二量体、またはその任意の最小のフラグメント（例えば、Ｆｖまたは一本鎖構築物）であり得る。
【０１５０】
１つの実施形態において、Ｆｃγ受容体の結合特異性は、モノクローナル抗体によって提供され、このモノクローナル抗体の結合は、ヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）によってブロックされない。本明細書中で使用される場合、用語「ＩｇＧ受容体」とは、第１染色体上に配置されている８つのγ鎖遺伝子のいずれかをいう。これらの遺伝子は、計１２の膜貫通受容体イソ型または可溶性の受容体イソ型をコードし、これらのイソ型は、３つのＦｃγ受容体クラスに分類される：ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）。１つの好ましい実施形態において、このＦｃγ受容体は、ヒト高親和性ＦｃγＲＩである。ヒトＦｃγＲＩは、７２ｋＤａの分子であり、単量体のＩｇＧに対して高い親和性（１０８〜１０９Ｍ−１）を示す。
【０１５１】
特定の好ましい抗Ｆｃγモノクローナル抗体の産生および性質決定は、Ｆａｎｇｅｒらにより、国際公開第８８／０００５２号および米国特許第４，９５４，６１７号において記載され、これらの教示は、本明細書中で参考として完全に援用される。これらの抗体は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩまたはＦｃγＲＩＩＩのエピトープに、受容体のＦｃγ結合部位とは異なる部位において結合し、したがって、これらの結合は、生理学的レベルのＩｇＧによって実質的にブロックされない。本発明において有用である特異的抗ＦｃγＲＩ抗体は、ｍＡｂ２２、ｍＡｂ３２、ｍＡｂ４４、ｍＡｂ６２およびｍＡｂ１９７である。ｍＡｂ３２を産生するハイブリドーマは、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手可能な、ＡＴＣＣ受託番号ＨＢ９４６９である。他の実施形態において、抗Ｆｃγ受容体抗体は、モノクローナル抗体２２のヒト化形態（Ｈ２２）である。Ｈ２２抗体の産生および性質決定は、Ｇｒａｚｉａｎｏ，Ｒ．Ｆ．ら（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５５（１０）：４９９６−５００２および国際公開第９４／１０３３２号において記載される。Ｈ２２産生細胞株は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに、ＨＡ０２２ＣＬ１の名称で寄託され、受託番号ＣＲＬ  １１１７７を有する。
【０１５２】
なお他の好ましい実施形態において、Ｆｃ受容体に対する結合特異性は、ヒトＩｇＡ受容体（例えば、Ｆｃ−α受容体（ＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）））に対して結合する抗体によって提供される結合は、好ましくはヒト免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）によってブロックされない。用語「ＩｇＡ受容体」は、第１９染色体上に配置される１つのα遺伝子（ＦｃαＲＩ）の遺伝子産物を含むことを意図する。この遺伝子は、５５〜１１０ｋＤａの選択的スプライシングによる膜貫通イソ形態を数個コードすることが知られている。ＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）は、単球／マクロファージ、好酸顆粒球および好中顆粒球の上に構成的に発現されるが、非エフェクター細胞集団上には発現されない。ＦｃαＲＩは、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２の両方に対して中程度の親和性（約５×１０７Ｍ−１）を有し、この親和性は、Ｇ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦのようなサイトカインに対して曝される際に上昇する（Ｍｏｒｔｏｎ，Ｈ．Ｃ．ら（１９９６）Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １６：４２３−４４０）。Ａ３、Ａ５９、Ａ６２およびＡ７７として同定され、ＩｇＡリガンド結合ドメインの外でＦｃαＲＩに結合する４種のＦｃαＲＩ特異的モノクローナル抗体は、記載されている（Ｍｏｎｔｅｉｒｏ，Ｒ．Ｃ．ら（１９９２）Ｊ．Ｉｍｎｉｕｎｏｌ．１４８：１７６４）。
【０１５３】
ＦｃαＲＩおよびＦｃγＲＩは、本発明の二重特異性分子における使用のための好ましいトリガー受容体である。何故なら、ＦｃαＲＩおよびＦｃγＲＩは、（１）主に免疫エフェクター細胞（例えば、単球、ＰＭＮ、マクロファージおよび樹状細胞）上で発現され、（２）高レベル（例えば、１細胞あたり５，０００〜１００，０００）で発現され、（３）細胞毒性活性（例えば、ＡＤＣＣ、食作用）のメディエータであり、（４）抗原（自身を標的とする自己抗原を含む）の抗原提示の増強を媒介するからである。
【０１５４】
ヒトモノクローナル抗体が好ましいが、本発明の二重特異性分子において使用され得る他の抗体は、マウスモノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体およびヒト化モノクローナル抗体である。
【０１５５】
本発明の二重特異性分子は、構成部分（ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔ）結合特異性（例えば、抗ＦｃＲ結合特異性および抗ＩＲＴＡ−５結合特異性）を当該分野で公知の方法を用いて結合体化することによって調製され得る。例えば、二重特異性分子の各結合特異性は、別々に産生され、次いで、互いに結合体化され得る。この結合特異性がタンパク質またはペプチドである場合、種々のカップリング剤または架橋剤が、共有結合性結合体化のために使用され得る。架橋剤の例としては、プロテインＡ、カルボジイミド、Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチル−チオ酢酸（ＳＡＴＡ），５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）、ｏ−フェニレンジマレイミド（ｏＰＤＭ）、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、およびスルホスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸塩（ｓｕｌｆｏ−ＳＭＣＣ）が挙げられる（例えば、Ｋａｒｐｏｖｓｋｙら（１９８４）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６０：１６８６；Ｌｉｕ，ＭＡら（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：８６４８を参照）。他の方法としては、以下に記載される方法が挙げられる：Ｐａｕｌｕｓ（１９８５）Ｂｅｈｒｉｎｇ  Ｉｎｓ．Ｍｉｔｔ．第７８巻、１１８−１３２；Ｂｒｅｎｎａｎら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１−８３、およびＧｌｅｎｎｉｅら（１９８７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：２３６７−２３７５。好ましい結合体化剤は、ＳＡＴＡおよびｓｕｌｆｏ−ＳＭＣＣであり、両方とも、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）から入手可能である。
【０１５６】
結合特異性が抗体である場合、これらは、２つの重鎖のＣ末端ヒンジ領域のスルフヒドリル結合を介して結合体化され得る。特に好ましい実施形態において、このヒンジ領域は、結合体化の前に奇数（好ましくは、１つ）のスルフヒドリル残基を含むように改変される。
【０１５７】
あるいは、両結合特異性は、同じベクターにコードされ得、そして同じ宿主細胞において発現され、そして集合される。この方法は、二重特異性分子がｍＡｂ×ｍＡｂ融合タンパク質、ｍＡｂ×Ｆａｂ融合タンパク質、Ｆａｂ×Ｆ（ａｂ’）２融合タンパク質またはリガンド×Ｆａｂ融合タンパク質である場合に、特に有用である。本発明の二重特異性分子は、１つの一本鎖抗体および１つの結合決定基を含む一本鎖分子であり得るか、または、２つの結合決定基を含む一本鎖二重特異性分子であり得る。二重特異性分子は、少なくとも２つの１本鎖分子を含み得る。二重特異性分子を調製するための方法は、例えば、米国特許第５，２６０，２０３号；同第５，４５５，０３０号；同第４，８８１，１７５号；同第５，１３２，４０５号；同第５，０９１，５１３号；同第５，４７６，７８６号；同第５，０１３，６５３号；同第５，２５８，４９８号；および同第５，４８２，８５８号において記載される。
【０１５８】
二重特異性分子のその特異的標的への結合は、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ＦＡＣＳ分析、バイオアッセイ（例えば、増殖阻害）、またはウェスタンブロットアッセイによって、確認され得る。これらのアッセイの各々は、一般に、特に目的とするタンパク質−抗体複合体の存在を、その目的の複合体に特異的な標識試薬（例えば、抗体）を使用することによって、検出する。例えば、ＦｃＲ−抗体複合体は、例えば、抗体−ＦｃＲ複合体を認識しかつこれに特異的に結合する酵素連結抗体または酵素連結抗体フラグメントを使用して、検出され得る。あるいは、ＦｃＲ−抗体複合体は、種々の他のイムノアッセイのいずれかを使用して検出され得る。例えば、この抗体は、放射標識され得、そして、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）において使用され得る（例えば、Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ，Ｂ．，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ、Ｓｅｖｅｎｔｈ  Ｔｒａｉｎｉｎｇ  Ｃｏｕｒｓｅ  ｏｎ  Ｒａｄｉｏｌｉｇａｎｄ  Ａｓｓａｙ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、Ｔｈｅ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、１９８６年３月を参照。これは、本明細書中で参考として援用される）。放射性同位体は、γカウンターもしくはシンチレーションカウンターの使用のような手段またはオートラジオグラフィーによって検出され得る。
【０１５９】
（薬学的組成物）
別の局面において、本発明は、例えば、本発明の１種のモノクローナル抗体もしくはモノクローナル抗体の組み合わせまたはこれらの抗原結合部分を含有し、薬学的に受容可能なキャリアと共に処方されているような、組成物（例えば、薬学的組成物）を提供する。このような組成物は、本発明の１種の抗体もしくは（例えば、２種以上の異なる）抗体の組み合わせ、または免疫結合体あるいは二重特異性分子を含有し得る。例えば、本発明の薬学的組成物は、標的抗原上の異なったエピトープに結合するかまたは相補的活性を有する抗体（または免疫結合体もしくは二重特異性分子）の組み合わせを含有し得る。
【０１６０】
本発明の薬学的組成物はまた、併用治療において、すなわち、他の薬剤と組み合わせて、投与され得る。例えば、併用治療は、少なくとも１種の他の抗炎症剤または免疫抑制剤と組み合わせて、本発明の抗ＩＲＴＡ−５抗体を含有し得る。併用治療において使用され得る治療剤の例は、以下の本発明の抗体の使用の節においてより詳細に記載される。
【０１６１】
本明細書中で使用される場合、「薬学的に受容可能なキャリア」としては、任意かつ全ての溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが挙げられ、これらは、生理学的に適合性である。好ましくは、このキャリアは、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、非経口投与、脊髄投与または表皮投与（例えば、注射または輸液による）に適している。投与経路に依存して、活性化合物（すなわち、抗体、免疫結合体または二重特異性分子）は、この化合物を不活性化し得る酸および他の天然条件の作用からこの化合物を保護するために、物質内に覆われ得る。
【０１６２】
本発明の薬学的化合物は、１種以上の薬学的に受容可能な塩を含有し得る。「薬学的に受容可能な塩」とは、親化合物の所望の生物学的活性を保持し、かつ、いかなる望ましくない毒性の効果をも与えない塩をいう（例えば、Ｂｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．ら（１９７７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９を参照）。このような塩の例としては、酸付加塩および塩基付加塩が挙げられる。酸付加塩としては、非毒性無機酸（例えば、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸など）、ならびに非毒性有機酸（例えば、脂肪族一カルボン酸、脂肪族二カルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族スルホン酸および芳香族スルホン酸など）、に由来する酸付加塩が挙げられる。塩基付加塩としては、アルカリ土類金属（例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなど）、ならびに非毒性有機アミン（例えば、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカインなど）に由来する塩基付加塩が挙げられる。
【０１６３】
また、本発明の薬学的組成物としては、薬学的に受容可能な抗酸化物質が挙げられる。薬学的に受容可能な抗酸化物質の例としては、以下が挙げられる：（１）水溶性抗酸化物質（例えば、アスコルビン酸、システイン塩酸塩、硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど）；（２）油溶性抗酸化物質（例えば、アスコルビン酸パルミテート、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α−トコフェロールなど）；ならびに（３）金属キレート剤（例えば、クエン酸、エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸など）。
【０１６４】
本発明の薬学的組成物中で使用され得る適切な水性キャリアおよび非水性キャリアの例としては、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびその適切な混合物、植物油（例えば、オリーブ油）、および注射可能な有機エステル（例えば、エチルオレエート）が挙げられる。例えば、コーティング物質（例えば、レシチン）の使用、分散の場合における所望の粒子サイズの維持、そして界面活性剤の使用により、適正な流動性が維持され得る。
【０１６５】
これらの組成物はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤および分散化剤のようなアジュバントをも含有し得る。微生物の存在の防止は、滅菌手順（前出）および種々の抗細菌剤および抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸など）の含有のどちらによっても、達成され得る。等張剤（例えば、糖、塩化ナトリウムなど）が、組成物中に含有されることもまた、望ましくあり得る。さらに、注射可能薬学的形態の吸収の延長は、吸収を遅延させる薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）の含有によってもたらされ得る。
【０１６６】
薬学的に受容可能なキャリアとしては、無菌水溶液または無菌分散剤、および無菌の注射可能溶液または注射可能分散剤の即時調製のための無菌粉末、が挙げられる。薬学的に活性な物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は、当該分野で公知である。任意の従来の媒体または薬剤が活性化合物と不適合性である範囲を除き、その媒体または薬剤の本発明の薬学的組成物における使用が企図される。補充活性化合物もまた、この組成物中に組み込まれ得る。
【０１６７】
治療組成物は、代表的に無菌でなければならず、かつ製造および保管の条件下で安定でなければならない。この組成物は、液剤、マイクロエマルジョン、リポソームまたは高い薬物濃度に適した他の規則正しい構造として処方され得る。このキャリアは、溶媒または分散媒体であり、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）、およびこれらの適切な混合物が挙げられる。例えば、コーティング物質（例えば、レシチン）の使用、分散剤の場合における所望の粒子サイズの維持、そして界面活性剤の使用により、適正な流動性が維持され得る。多くの場合、例えば、糖、ポリアルコール（例えば、マンニトール、ソルビトール）または塩化ナトリウムのような、等張剤を組成物中に含有することが好ましい。注射可能組成物の吸収の延長は、吸収を遅延させる薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）をその組成物中に含有させることによってもたらされ得る。
【０１６８】
無菌注射可能溶液は、所望される場合には上で列挙した成分の１種または組み合わせと共に、活性化合物を所望の量で適切な溶媒中に組み込み、その後、精密濾過滅菌が行われることによって調製され得る。一般に、分散剤は、基礎の分散媒体および所望の（上で列挙した）他の成分を含有する無菌のビヒクル中に、活性化合物を組み込むことによって調製される。無菌注射可能溶液の調製のための無菌粉末の場合、好ましい調製の方法は、真空乾燥および凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｙｉｎｇ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ））であり、これらは、活性成分および任意のさらなる所望の成分の事前に濾過滅菌した溶液から、活性成分および任意のさらなる所望の成分の粉末を生じる。
【０１６９】
キャリア物質と混合されて単回投与形態を作製し得る活性成分の量は、処置される被験体および特定の投与様式に依存して変化し得る。キャリア物質と混合されて単回投与形態を作製し得る活性成分の量は、一般に、治療効果をもたらす組成物の量である。一般に、この量は、１００％のうち約０．０１％から約９９％の活性成分の範囲にわたり、好ましくは、約０．１％から約７０％、最も好ましくは約１％から約３０％の範囲にわたる活性成分であり、薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせられる。
【０１７０】
投薬レジメンは、最適な所望される応答（例えば、治療応答）を提供するように調整される。例えば、単回のボーラスが投与されてもよく、数回に分けた用量が経時的に投与されてもよく、または治療状況の緊急事態により示されるように用量は比例的に減少され得るか、もしくは増加され得る。非経口組成物を投与単位形態で処方することは、投与の容易さおよび用量の均等性のために、特に有益である。本明細書中で使用される投与単位形態は、処置される被験体についての１回の用量に適した、物理的に別個の単位をいう。各単位は、所望の治療効果をもたらすように計算された所定の量の活性化合物を、所望の薬学的キャリアと共に含有する。本発明の投与単位形態についての詳細は、（ａ）活性化合物の独特の特性および達成される特定の治療効果、ならびに（ｂ）個体における感受性の処置のためのそのような活性化合物を合成する分野における固有の限定によって指定され、そして直接これに依存する。
【０１７１】
抗体の投与について、用量は、宿主の体重の約０．０００１ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇまで、より普通には、０．０１ｍｇ／ｋｇから５ｍｇ／ｋｇまでの範囲に及ぶ。例えば、用量は、０．３ｍｇ／ｋｇ体重、１ｍｇ／ｋｇ体重、３ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重または１０ｍｇ／ｋｇ体重、または１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。例示的な処置レジームは、１週間に１回の投与、２週間に１回の投与、３週間に１回の投与、４週間に１回の投与、１ヶ月に１回の投与、３ヶ月に１回の投与、または３〜６ヶ月に１回の投与を伴う。本発明の抗ＩＲＴＡ−５抗体の好ましい投薬レジメンは、静脈内投与を介した１ｍｇ／ｋｇ体重または３ｍｇ／ｋｇ体重でありを含み、この抗体は、以下の投薬計画のうちの１つを用いて与えられる：（ｉ）６回の投与について４週間毎、次いで、３ヶ月毎；（ｉｉ）３週間毎；（ｉｉｉ）１回に３ｍｇ／ｋｇ体重、その後、３週間毎に１ｍｇ／ｋｇ。
【０１７２】
ある方法において、異なる結合特異性を有する２種以上のモノクローナル抗体が同時に投与され、この場合の投与される各抗体の用量は示された範囲内である。抗体は、通常、複数の機会で投与される。単回投与の間の間隔は、例えば、毎週、毎月、３ヶ月毎または毎年であり得る。間隔はまた、患者における標的抗原に対する抗体の血液レベルの測定により示されるように、不規則であり得る。ある方法において、用量は、血漿抗体濃度が約１〜１０００μｇ／ｍｌに達するように調整され、ある方法においては約２５〜３００μｇ／ｍｌに達するように調整される。
【０１７３】
あるいは、抗体は、徐放性処方物として投与され得、この場合、より少ない頻度の投与しか必要とされない。用量および頻度は、患者における抗体の半減期に依存して変化する。一般に、ヒト抗体は、最も長い半減期を示し、ヒト化抗体、キメラ抗体および非ヒト抗体と続く。投与の用量および頻度は、その処置が予防であるか治療であるかに依存して変り得る。予防的適用においては、比較的低い用量が、長期間にわたり、比較的頻繁でない間隔で投与される。ある患者群は、その人生の最後まで処置を受け続ける。治療的適用の場合、その疾患の進行が軽減するかまたは止まるまで、そして好ましくは、患者が部分的または完全な疾患の症状の改善を示すまで、比較的高用量が比較的短い間隔で、時々必要とされる。その後、患者は、予防レジメンを投与され得る。
【０１７４】
本発明の薬学的組成物中の活性成分の実際の投薬レベルは、患者に毒性であることなく特定の患者、組成および投与様式について所望の治療応答を達成するために有効な量の活性成分の量を得られるように、変り得る。選択された投薬レベルは、種々の薬物速度論の因子に依存し、この因子としては、使用される本発明の特定の組成物の活性、またはそのエステルの活性、その塩の活性もしくはそのアミドの活性、投与経路、投与時間、使用される特定の化合物の排出速度、処置の期間、他の薬物、使用される特定の組成物と併用して使用される化合物および／もしくは物質、処置される患者の年齢、処置される患者の性別、処置される患者の体重、処置される患者の状態、処置される患者の全身的な健康および処置される患者の以前の病歴、ならびに医療分野で周知の同様の因子が挙げられる。
【０１７５】
本発明の抗ＩＲＴＡ−５抗体の「治療的に有効な用量」は、好ましくは、疾患症状の重篤度における軽減、疾患症状のない期間の頻度および持続期間の増大、または疾患の苦痛に起因する欠陥（ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ）または障害（ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ）の予防をもたらす。例えば、ＩＲＴＡ−５＋腫瘍の処置について、「治療的に有効な用量」は、好ましくは、細胞増殖または腫瘍増殖を、未処置の患者と比較して、好ましくは少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約４０％、さらにより好ましくは少なくとも約６０％、なおより好ましくは少なくとも約８０％阻害する。腫瘍増殖を阻害する化合物の能力は、ヒト腫瘍における効力を予測し得る動物モデル系において評価され得る。あるいは、組成物のこの特性は、化合物の阻害の能力を試験すること（例えば、医師に公知であるアッセイによる阻害のインビトロの試験）により、評価され得る。治療的に有効な用量の治療化合物は、腫瘍の大きさを縮小させ得るか、または他に、被験体における症状を改善させ得る。当業者は、被験体の大きさ、被験体の症状の重篤度、および選択した特定の組成または投与経路のような因子に基づき、この量を決定し得る。
【０１７６】
本発明の組成物は、当該分野で公知の種々のうちの１つ以上の方法を用い、１つ以上の投与経路を介して投与され得る。当業者に理解されるように、投与の経路および／または様式は、所望する結果に基づいて変化する。本発明の抗体の好ましい投与経路は、静脈内投与経路、筋肉内投与経路、皮内投与経路、腹腔内投与経路、皮下投与経路、脊髄投与経路または他の非経口投与経路（例えば、注射または輸液による）である。語句「非経口投与」は、本明細書中で使用される場合、腸内投与および局所投与以外の投与様式（通常、注射による投与様式)を意味し、限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、関節包内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管（ｔｒａｎｓｔｒａｃｈｅａｌ）、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内（ｉｎｔｒａｓｔｅｒｎａｌ）の注射および輸液が挙げられる。
【０１７７】
あるいは、本発明の抗体は、局所投与経路、表皮投与経路または粘膜投与経路のような非経口ではない経路（ｎｏｎ−ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｒｏｕｔｅ）（例えば、鼻腔内投与経路、経口投与経路、経膣投与経路、直腸投与経路、舌下投与経路または局所投与経路）介して投与され得る。
【０１７８】
活性化合物は、その化合物を急速な放出から保護するキャリアと共に、例えば制御放出処方物（移植物、経皮パッチおよび微小カプセル送達系を含む）として調製され得る。生分解性かつ生物適合性のポリマー（例えば、酢酸エチレンビニル、ポリ無水物類、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル類、およびポリ乳酸）が、使用され得る。このような処方物の調製のための多くの方法は、特許されているか、または一般に当該分野で公知である。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ編、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８を参照。
【０１７９】
治療組成物は、当該分野で公知の医療デバイスにより投与され得る。例えば、好ましい実施形態において、本発明の治療組成物は、米国特許第５，３９９，１６３号；同第５，３８３，８５１号；同第５，３１２，３３５号；同第５，０６４，４１３号；同第４，９４１，８８０号；同第４，７９０，８２４号；または同第４，５９６，５５６号において開示されるデバイスのような、針なし皮下注射デバイスによって投与され得る。本発明に有用な周知の移植物およびモジュールの例としては、以下が挙げられる：米国特許第４，４８７，６０３号（制御された速度で医薬を分散させるための、移植可能な微小注入ポンプを開示する）；米国特許第４，４８６，１９４号（皮膚を通した医薬の投与のための治療デバイスを開示する）；米国特許第４，４４７，２３３号（正確な注入速度で医薬を送達するための注入ポンプを開示する）；米国特許第４，４４７，２２４号（連続的な薬物送達のための可変流量移植可能注入装置を開示する）米国特許第４，４３９，１９６号（多チャンバー区画を有する浸透薬物送達系を開示する）；ならびに米国特許第４，４７５，１９６号（浸透薬物送達系を開示する）。これらの特許は、本明細書中で参考として援用される。多くの他のこのような移植物、送達システムおよびモジュールが、当業者に公知である。
【０１８０】
特定の実施形態において、本発明のヒトモノクローナル抗体は、インビボでの適正な分布を確実にするように処方され得る。例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）は、親水性の高い化合物の多くを排除する。本発明の治療化合物が（所望される場合に）ＢＢＢを横切ることを確実にするために、本発明の治療化合物は、例えば、リポソーム内に処方され得る。リポソームの製造方法については、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号；同第５，３７４，５４８号；および同第５，３９９，３３１号を参照。リポソームは、特定の細胞または組織に選択的に輸送され、標的薬物送達を増強する、１以上の部分を含み得る（例えば、Ｖ．Ｖ．Ｒａｎａｄｅ（１９８９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２９：６８５）。例示的な標的化部分（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｍｏｉｅｔｙ）は、葉酸塩またはビオチン（例えば、Ｌｏｗらに対する米国特許第５，４１６，０１６号を参照）；マンノシド（Ｕｍｅｚａｗａら（１９８８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５３：１０３８）；抗体（Ｐ．Ｇ．Ｂｌｏｅｍａｎら（１９９５）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３５７：１４０；Ｍ．Ｏｗａｉｓら（１９９５）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．３９：１８０）；界面活性剤プロテインＡ受容体（Ｂｒｉｓｃｏｅら（１９９５）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１２３３：１３４）；ｐ１２０（Ｓｃｈｒｅｉｅｒら（１９９４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：９０９０）が挙げられる。また、Ｋ．Ｋｅｉｎａｎｅｎ；Ｍ．Ｌ．Ｌａｕｋｋａｎｅｎ（１９９４）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３４６：１２３；Ｊ．Ｊ．Ｋｉｌｌｉｏｎ；Ｉ．Ｊ．Ｆｉｄｌｅｒ（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２７３も参照。
【０１８１】
（本発明の使用および方法）
本発明の抗体（特にヒト抗体）、抗体組成物および方法は、多くのインビトロおよびインビボの診断有用性および治療有用性を有し、ＩＲＴＡ−５媒介性障害の診断および治療に関連する。例えば、これらの分子は、培養中の細胞、インビトロまたはエキソビボで、またはヒト被験体に（例えば、インビボで）投与され、種々の障害を処置、予防および診断し得る。本明細書中で使用される場合、用語「被験体」は、ヒトおよび非ヒト動物を含むことを意味する。非ヒト動物は、全ての脊椎動物（例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ニワトリ、両生類および爬虫類のような、哺乳動物および非哺乳動物）を含む。好ましい被験体としては、ＩＲＴＡ−５活性よって媒介される障害を有するヒト患者が挙げられる。異常なＩＲＴＡ−５発現に関連する障害を有するヒト患者を処置するために、本方法は特に適している。ＩＲＴＡ−５に対する抗体が、別の薬剤と共に投与される場合、この２つは、どちらが先に投与されてもよく、または同時に投与されてもよい。
【０１８２】
本発明の抗体が、ＩＲＴＡ−１、ＩＲＴＡ−２、ＩＲＴＡ−３およびＩＲＴＡ−４と比較してＩＲＴＡ−５に対して特異的に結合することを考慮すれば、本発明の抗体は、細胞の表面上でのＩＲＴＡ−５発現を特異的に検出するために使用され得、そしてさらに、ＩＲＴＡ−５を免疫親和性精製を介して精製するために使用され得る。
【０１８３】
さらに、種々の腫瘍細胞上でのＩＲＴＡ−５の発現を考慮すれば、本発明のヒト抗体、抗体組成物および方法は、腫瘍形成性の障害（例えば、ＩＲＴＡ−５を発現する腫瘍細胞の存在により特徴付けられる障害であって、例えば、バーキットリンパ腫、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、結節性核切れ込み小細胞型リンパ腫、リンパ性リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫、レナートリンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬＬ）、成人Ｔ細胞リンパ腫（Ｔ−ＡＬＬ）、胚中心細胞性／中心細胞性（ｅｎｔｒｏｂｌａｓｔｉｃ／ｃｅｎｔｒｏｃｙｔｉｃ）（ｃｂ／ｃｃ）濾胞性リンパ腫癌、Ｂ系統のびまん性大細胞型リンパ腫、血管免疫芽球性リンパ節症（ＡＩＬＤ）様のＴ細胞リンパ種、ＨＩＶ関連の体腔ベースのリンパ腫（ＨＩＶ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｂｏｄｙ  ｃａｖｉｔｙ  ｂａｓｅｄ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）、胎生期癌、鼻咽頭の未分化癌腫（例えば、シュミンケ腫瘍（Ｓｃｈｍｉｎｃｋｅ’ｓ  ｔｕｍｏｒ））、キャッスルマン病、カポージ肉腫および他のＢ細胞リンパ腫）を有する被験体を処置するために使用され得る。
【０１８４】
１つの実施形態において、本発明の抗体（例えば、ヒトモノクローナル抗体、多重特異性分子および二重特異性分子ならびに組成物）は、ＩＲＴＡ−５のレベルまたはＩＲＴＡ−５をその膜表面上に含む細胞のレベルを検出するために使用され得、このレベルは特定の疾患症状と関連し得る。あるいは、この抗体は、ＩＲＴＡ−５機能を阻害するかまたはブロックするために使用され得、この使用は、特定の疾患症状の予防および改善に関連し得る（従って、ＩＲＴＡ−５は疾患のメディエータとして関連付けられる）。これは、サンプルおよびコントロールサンプルを、抗ＩＲＴＡ−５抗体にその抗体とＩＲＴＡ−５との間の複合体を形成させる条件下で接触させることによって達成され得る。抗体とＩＲＴＡ−５との間に形成されるあらゆる複合体が検出され、そしてサンプルとコントロールとが比較される。
【０１８５】
別の実施形態において、本発明の抗体（例えば、ヒト抗体、多重特異性分子および二重特異性分子ならびに組成物）は、治療的使用または診断的使用に関連した結合活性について、まずインビトロで試験され得る。例えば、本発明の組成物は、以下の実施例において記載されるフローサイトメトリーアッセイを用いて試験され得る。
【０１８６】
本発明の抗体（例えば、ヒト抗体、多重特異性分子および二重特異性分子、免疫結合体ならびに組成物）は、ＩＲＴＡ−５関連疾患の治療および診断におけるさらなる有用性を有する。例えば、ヒトモノクローナル抗体、多重特異性分子または二重特異性分子ならびに免疫結合体は、インビボまたはインビトロで、ＩＲＴＡ−５を発現する細胞の増殖を阻害する活性、および／もしくはＩＲＴＡ−５を発現する細胞を殺す活性、ヒトエフェクター細胞の存在下で、ＩＲＴＡ−５を発現する細胞の食作用またはＡＤＣＣを媒介する活性、または、ＩＲＴＡ−５リガンドのＩＲＴＡ−５への結合をブロックする活性という生物活性のうちの１つ以上を誘発するために使用され得る。
【０１８７】
特定の実施形態において、上記抗体（例えば、ヒト抗体、多重特異性分子および二重特異性分子ならびに組成物）は、インビボで、種々のＩＲＴＡ−５関連疾患を処置するか、予防するかまたは診断するために使用される。ＩＲＴＡ−５関連疾患の例としては、とりわけ、癌、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、未分化大細胞型リンパ腫（ＡＬＣＬ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、結節性核切れ込み小細胞型リンパ腫、リンパ性リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫、レナートリンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬＬ）、成人Ｔ細胞リンパ腫（Ｔ−ＡＬＬ）、胚中心細胞性／中心細胞性（ｅｎｔｒｏｂｌａｓｔｉｃ／ｃｅｎｔｒｏｃｙｔｉｃ）（ｃｂ／ｃｃ）濾胞性リンパ腫癌、Ｂ系統のびまん性大細胞リンパ腫、血管免疫芽球性リンパ節症（ＡＩＬＤ）様のＴ細胞リンパ種、ＨＩＶ関連の体腔ベースのリンパ腫（ＨＩＶ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｂｏｄｙ  ｃａｖｉｔｙ  ｂａｓｅｄ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）、胎生期癌、鼻咽頭の未分化癌腫（例えば、シュミンケ腫瘍（Ｓｃｈｍｉｎｃｋｅ’ｓ  ｔｕｍｏｒ））、キャッスルマン病、カポージ肉腫および他のＢ細胞リンパ腫が挙げられる。
【０１８８】
本発明の抗体組成物（例えば、ヒトモノクローナル抗体、多重特異性分子および二重特異性分子ならびに免疫結合体）のインビボおよびインビトロの適切な投与経路は、当該分野で周知であり、当業者によって選択可能である。例えば、抗体組成物は、注射（例えば、静脈内注射または皮下注射）によって投与され得る。使用される分子の適切な用量は、被験体の年齢および体重、ならびに抗体組成物の濃度および／または処方に依存する。
【０１８９】
前に記載した通り、本発明のヒト抗ＩＲＴＡ−５抗体は、１種または他のより多くの治療剤（例えば、細胞毒性薬剤、放射性毒性薬剤または免疫抑制剤）と同時投与され得る。この抗体は、この薬剤と（免疫複合体として）連結され得るか、または、上記薬剤と別々に投与され得る。後者の場合（別々の投与の場合）、抗体は、薬剤より前、後または同時に投与され得るか、他の公知の治療（例えば、抗ガン治療（例えば、放射線照射））と同時投与され得る。このような治療剤としては、とりわけ、抗腫瘍薬剤（例えば、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、硫酸シスプラチンブレオマイシン、カルムスチン、クロラムブシルおよびシクロホスファミドヒドロキシ尿素）が挙げられ、これらは、これらのみでは、患者に対して毒性であるかまたは準毒性であるレベルでのみ、有効である。シスプラチンは、１００ｍｇ用量として４週間毎に１回静脈投与され、アドリアマイシンは、６０〜７５ｍｇ／ｍｌとして２１日間毎に１回静脈投与される。本発明のヒト抗ＩＲＴＡ−５抗体またはその抗原結合フラグメントの化学治療剤との同時投与は、異なったメカニズムを介して作用する２種の抗癌剤（ヒト腫瘍細胞に対する細胞毒性効果を生じる）を提供する。このような同時投与は、薬物に対する耐性の発生に起因する問題または腫瘍細胞を抗体に対し非反応性にする腫瘍細胞の抗原性の変化に起因する問題を解決し得る。
【０１９０】
標的特異的エフェクター細胞（例えば、本発明の組成物（例えば、ヒト抗体、多重特異性分子および二重特異性分子）に関連するエフェクター細胞）はまた、治療剤として使用され得る。標的化のためのエフェクター細胞は、ヒト白血球（例えば、マクロファージ、好中球または単球）であり得る。他の細胞としては、好酸球、ナチュラルキラー細胞およびＩｇＧ受容体またはＩｇＡ受容体を有する他の細胞が挙げられる。所望される場合、エフェクター細胞は、処置される被験体から得られ得る。標的特異的エフェクター細胞は、生理学的に受容可能な溶液中の細胞の懸濁液として投与され得る。投与される細胞の数は、１０８〜１０９程度であり得るが、治療目的によって変化し得る。一般に、この量は、標的細胞（例えば、ＩＲＴＡ−５を発現する腫瘍細胞）での局在化を得るため、食作用による細胞殺傷を達成させるのに十分である。投与経路もまた、変化し得る。
【０１９１】
標的特異的エフェクター細胞を用いた治療は、標的細胞の除去のための他の技術と組み合わせて実施され得る。例えば、本発明の組成物（例えば、ヒト抗体、多重特異性分子および二重特異性分子）および／またはこれらの組成物を備えたエフェクター細胞を用いる抗腫瘍治療が、化学療法と組み合わせて使用され得る。さらに、組み合わせ免疫治療は、２つの異なる細胞毒性エフェクター集団を腫瘍細胞排除に指向させるために使用され得る。例えば、抗ＦｃγＲＩまたは抗ＣＤ３に連結された抗ＩＲＴＡ−５抗体が、ＩｇＧ受容体またはＩｇＡ受容体に特異的な結合剤と共に使用され得る。
【０１９２】
本発明の二重特異性分子および多重特異性分子は、例えば細胞表面上の受容体のキャッピングおよび除去により、ＦｃγＲまたはエフェクター細胞上のＦｃγＲレベルを調節するためにもまた、使用され得る。抗Ｆｃ受容体の混合物もまた、この目的のために使用され得る。
【０１９３】
補体結合部位（例えば、補体に結合する、ＩｇＧ１由来の部分、ＩｇＧ２由来の部分もしくはＩｇＧ３由来の部分またはＩｇＭ由来の部分）を有する本発明の組成物（例えば、ヒト抗体、多重特異性分子および二重特異性分子ならびに免疫結合体）もまた、補体の存在下で使用され得る。１つの実施形態において、本発明の結合剤および適切なエフェクター細胞による標的細胞を含む細胞集団のエキソビボ処置は、補体または補体を含有する血清の添加により、補強され得る。本発明の結合剤で被膜された標的細胞の食作用は、補体タンパク質の結合により改善され得る。別の実施形態において、本発明の組成物（例えば、ヒト抗体、多重特異性分子および二重特異性分子）で被膜された標的細胞はまた、補体によって溶解され得る。なお別の実施形態において、本発明の組成物は、補体を活性化しない。
【０１９４】
本発明の組成物（例えば、ヒト抗体、多重特異性分子および二重特異性分子）はまた、補体と共に投与され得る。したがって、ヒト抗体、多重特異性分子もしくは二重特異性分子と、血清または補体とを含有する組成物は、本発明の範囲内にある。これらの組成物は、補体が上記ヒト抗体、多重特異性分子または二重特異性分子の近傍に位置するという点で、有利である。あるいは、本発明のヒト抗体、多重特異性分子または二重特異性分子と、上記血清または補体とは、別々に投与され得る。
【０１９５】
本発明の抗体組成物（例えば、ヒト抗体、多重特異性分子もしくは二重特異性分子または免疫結合体）および使用説明書を含むキットもまた、本発明の範囲内にある。このキットは、１種以上のさらなる試薬（例えば、免疫抑制試薬、細胞毒性薬剤または放射性毒性薬剤）、または１種以上のさらなる本発明のヒト抗体（例えば、第１のヒト抗体とは異なるＩＲＴＡ−５抗原のエピトープに結合する相補的活性を有するヒト抗体）をさらに含み得る。
【０１９６】
したがって、本発明の抗体組成物で処置される患者は、（本発明のヒト抗体の投与の前、これと同時、または後に）ヒト抗体の治療効果を増強または亢進する別の治療剤（例えば、細胞毒性薬剤または放射性薬剤）をさらに投与され得る。
【０１９７】
他の実施形態において、被験体は、ＦｃγまたはＦｃγ受容体の発現または活性を調節（例えば、増強または阻害）する薬剤で（例えばサイトカインで被験体を処置することにより）さらに処置され得る。多重特異性分子での処置の間の投与のために好ましいサイトカインとしては、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）が挙げられる。
【０１９８】
本発明の組成物（例えば、ヒト抗体、多重特異性分子および二重特異性分子）はまた、ＦｃγＲまたはＩＲＴＡ−５を発現する細胞を標識するため、例えば、これらの細胞を標識するために使用され得る。このような使用のために、結合剤は、検出され得る分子に結合され得る。したがって、本発明は、Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃγＲまたはＩＲＴＡ−５）を発現する細胞をエキソビボまたはインビトロで位置決定するための方法を提供する。検出可能な標識は、例えば、放射性同位体、蛍光化合物、酵素または酵素補因子であり得る。
【０１９９】
特定の実施形態において、本発明は、サンプル中のＩＲＴＡ−５抗原の存在、またはＩＲＴＡ−５抗原の量を測定する方法を提供し、これらの方法は、サンプルおよびコントロールサンプルを、ＩＲＴＡ−５と特異的に結合するヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分と、その抗体またはその部分とＩＲＴＡ−５との間の複合体の形成が可能な条件下で接触させる工程を包含する。次いで、複合体の形成が検出され、ここで、コントロールサンプルと比較してサンプルとの間で異なる複合体形成は、サンプル中のＩＲＴＡ−５抗原の存在を示す。
【０２００】
他の実施形態において、本発明は、被験体に上述のヒト抗体を投与することによって、被験体におけるＩＲＴＡ−５媒介性障害（例えば、ガン、非ホジキン性リンパ腫、バーキットリンパ腫、未分化大細胞型リンパ腫（ＡＬＣＬ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、結節性核切れ込み小細胞型リンパ腫、リンパ性リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫、レナートリンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬＬ）、成人Ｔ細胞リンパ腫（Ｔ−ＡＬＬ）、胚中心細胞性／中心細胞性（ｅｎｔｒｏｂｌａｓｔｉｃ／ｃｅｎｔｒｏｃｙｔｉｃ）（ｃｂ／ｃｃ）濾胞性リンパ腫癌、Ｂ系統のびまん性大細胞リンパ腫、血管免疫芽球性リンパ節症（ＡＩＬＤ）様のＴ細胞リンパ種、ＨＩＶ関連の体腔ベースのリンパ腫（ＨＩＶ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｂｏｄｙ  ｃａｖｉｔｙ  ｂａｓｅｄ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）、胎生期癌、鼻咽頭の未分化癌腫（例えば、シュミンケ腫瘍（Ｓｃｈｍｉｎｃｋｅ’ｓ  ｔｕｍｏｒ））、キャッスルマン病、カポージ肉腫および他のＢ細胞リンパ腫）を処置するための方法を提供する。このような抗体およびその誘導体は、特定の障害に関連する、ＩＲＴＡ−５誘導性活性（例えば、増殖および分化）を阻害するために使用され得る。上記抗体をＩＲＴＡ−５と接触させることにより（例えば、抗体を被験体に投与することにより）、ＩＲＴＡ−５がこのような活性を誘導する能力が阻害され、したがって、関連の障害が処置される。上記抗体組成物は、単独で投与され得るか、またはこの抗体組成物と組み合わせて作用するか、もしくは抗体組成物と相乗的に作用して作用する別の治療剤（例えば、細胞毒性薬剤または放射性毒性薬剤）と共に投与され得、ＩＲＴＡ−５媒介性疾患を処置または予防し得る。
【０２０１】
なお別の実施形態において、本発明の免疫結合体は、化合物（例えば、治療剤、標識、サイトカイン、放射性毒素、免疫抑制剤など）を上記抗体と連結することにより、このような化合物をＩＲＴＡ−５細胞表面受容体を有する細胞に対して標的化するために使用され得る。したがって、本発明は、ＩＲＴＡ−５を発現する細胞を（例えば、放射性同位体、蛍光化合物、酵素または酵素補因子のような検出可能標識を用いて）エキソビボまたはインビボで位置決定するための方法もまた、提供する。あるいは、この免疫結合体は、ＩＲＴＡ−５に対して細胞毒素または放射性毒素を標的化することにより、ＩＲＴＡ−５細胞表面受容体を有する細胞を殺すために使用され得る。
【０２０２】
本発明は、以下の実施例においてさらに説明される。これらの実施例は、さらなる限定として解釈されるべきではない。全ての図面の内容および本出願を通して引用された全ての参考文献、特許および公開された特許出願は、本明細書中に、明白に参考として援用される。
【実施例】
【０２０３】
（実施例１：ＩＲＴＡ５に対するヒトモノクローナル抗体の産生）
（抗原）
異種ポリペプチドに結合したＩＲＴＡ５の細胞外ドメインから構成される融合タンパク質を、標準的組換え方法によって産生し、免疫のための抗原として使用した。
【０２０４】
（トランスジェニックＨｕＭａｂ  Ｍｏｕｓｅ（登録商標））
ＩＲＴＡ５に対する完全ヒトモノクローナル抗体を、トランスジェニックＨｕＭａｂ  Ｍｏｕｓｅ（登録商標）のＨｃｏ７系統由来のマウス（ヒト抗体遺伝子を発現する）を用いて調製した。このマウス系統において、内在性マウスκ軽鎖遺伝子はＣｈｅｎら（１９９３）ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：８１１−８２０に記載されるようにホモ接合的に分裂されており、そして内在性マウス重鎖遺伝子は国際公開第０１／０９１８７号の実施例１に記載されるようにホモ接合的に分裂されている。その上さらに、このマウス系統は、Ｆｉｓｈｗｉｌｄら（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８４５−８５１に記載されるようなヒトκ軽鎖導入遺伝子ＫＣｏ５を保有し、そして米国特許第５，５４５，８０６号、同第５，６２５，８２５号および同第５，５４５，８０７号に記載されるようなヒト重鎖導入遺伝子ＨＣｏ７を保有する。
【０２０５】
（ＨｕＭａｂ免疫）
ＩＲＴＡ５に対する完全ヒトモノクローナル抗体を産生するために、ＨＣｏ７  ＨｕＭａｂ  Ｍｏｕｓｅ（登録商標）系統のマウスを、組換えＩＲＴＡ５融合タンパク質をコードする遺伝子を含む発現ベクターでトランスフェクトした哺乳動物細胞に由来する、精製した融合タンパク質で免疫した。ＨｕＭａｂ  Ｍｏｕｓｅ（登録商標）についての一般的な免疫スキームは、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ら（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８（６４７４）：８５６−８５９；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ，Ｄ．ら（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８４５−８５１および国際公開第９８／２４８８４号に記載される。このマウスは、最初の抗原注入において、６〜１６週齢であった。精製した組換え体ＩＲＴＡ５抗原調製物（５〜５０μｇ、ＩＲＴＡ５融合タンパク質を発現するトランスフェクトした哺乳動物細胞から精製）を、ＨｕＭａｂマウスｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｌｙｍｉｃｅＴＭを腹腔内（ＩＰ）免疫するために使用した。
【０２０６】
トランスジェニックマウスを、完全フロイントアジュバント中またはＲｉｂｉアジュバント中の抗原で２回ＩＰ免疫し、その後、不完全フロイントアジュバント中またはＲｉｂｉアジュバント中のその抗原で３〜２１日間ＩＰ免疫した（計１１回までの免疫）。免疫応答を、眼窩後方の採血によってモニタリングした。血漿を、ＥＬＩＳＡによって（以下に記載のように）スクリーニングし、そして抗ＩＲＴＡ５ヒト免疫グロブリンの十分な力価を有するマウスを、融合のために使用した。マウスを、屠殺および脾臓の摘出の３日間前に、抗原で静脈内にブーストした。
【０２０７】
（抗ＩＲＴＡ５抗体を産生するＨｕＭａｂマウスＴＭの分泌）
ＩＲＴＡ５に結合する抗体を産生するＨｕＭａｂマウスＴＭを選択するために、免疫したマウスからの血清を、改変ＥＬＩＳＡによって試験した。この改変ＥＬＩＳＡは、元来Ｆｉｓｈｗｉｌｄ，Ｄ．ら（１９９６）に記載される。簡潔には、マイクロタイタープレートを、精製組換えＩＲＴＡ５融合タンパク質（ＰＢＳ中１〜２μｇ／ｍｌ、５０μｌ／ウェル）で、４℃で１晩インキュベートしてコートし、次いで、ＰＢＳ中２００μｌ／ウェルの５％ＢＳＡでブロックした。ＩＲＴＡ５免疫マウスからの血漿の希釈物を各ウェルに添加し、そして１〜２時間、周囲の温度でインキュベートした。このプレートを、次いで、ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗浄し、次いで、アルカリホスファターゼと結合体化したヤギ抗ヒトκ軽鎖ポリクローナル抗体と共に１時間、室温でインキュベートした。洗浄後、プレートをｐＮＰＰ基質で発色させ、そして分光光度計によってＯＤ４１５〜６５０で分析した。抗ＩＲＴＡ５抗体の最も高い力価で発色したマウスを、融合のために使用した。融合を、以下に記載するように実施し、そしてハイブリドーマ上清を、ＥＬＩＳＡによって抗ＩＲＴＡ５活性について試験した。
【０２０８】
（ＩＲＴＡ５に対するヒトモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマの産生）
ＨｕＭａｂマウスＴＭから単離されたマウス脾臓細胞を、標準的プロトコールに基づき、ＰＥＧによりマウス骨髄腫細胞株と融合させた。次いで、得られたハイブリドーマを、抗原特異的抗体の産生についてスクリーニングした。免疫したマウスからの脾臓リンパ球の単個細胞浮遊液を、４分の１の数のＰ３Ｘ６３  Ａｇ８．６．５３（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １５８０）非分泌マウス骨髄腫細胞に５０％ＰＥＧ（Ｓｉｇｍａ）を用いて融合させた。細胞を、平底マイクロタイタープレート中に約１×１０５／ウェルでプレートし、その後、ＲＰＭＩ中のｏｒｉｇｅｎ（ＩＧＥＮ）、Ｌ−グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳ、ペニシリン、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン、１×ＨＡＴ、およびβ−メルカプトエタノールを補充した１０％ウシ胎仔血清含有選択培地中で、約２週間インキュベーションした。１〜２週間後、ＨＡＴをＨＴで置き換えた培地中で細胞を培養した。次いで、個々のウェルを、ＥＬＩＳＡ（上述）によってヒト抗ＩＲＴＡ５モノクローナルＩｇＧ抗体についてスクリーニングした。一旦、広範なハイブリドーマの増殖が起こってから通常１０〜１４日後に培地をモニタリングした。上記抗体を分泌するハイブリドーマを、再びプレートし、再びスクリーニングし、なおヒトＩｇＧについて陽性であった場合、抗ＩＲＴＡ５モノクローナル抗体を、限界希釈により少なくとも２回サブクローニングした。次いで、安定したサブクローンをインビトロで培養し、さらなる性質決定のために、組織培養培地中に少量の抗体を産生させた。
【０２０９】
ハイブリドーマクローン２Ｇ２、２Ｇ５、５Ａ２、７Ｇ８、１Ｅ５、４Ｂ７、および７Ｆ５を、さらなる分析のために選択した。
【０２１０】
（実施例２：ヒトモノクローナル抗体５Ａ２、ヒトモノクローナル抗体２Ｇ５およびヒトモノクローナル抗体７Ｇ８の構造的性質決定）
２Ｇ５モノクローナル抗体、５Ａ２モノクローナル抗体および７Ｇ８モノクローナル抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域をコードするｃＤＮＡ配列を、標準的ＰＣＲ技術を用いてそれぞれ２Ｇ５ハイブリドーマ、５Ａ２ハイブリドーマおよび７Ｇ８ハイブリドーマから得、標準的ＤＮＡ配列決定技術を用いて配列決定した。
【０２１１】
２Ｇ５の重鎖可変領域のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を、図１Ａならびに配列番号２５および配列番号１９にそれぞれ示す。
【０２１２】
２Ｇ５の軽鎖可変領域のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を、図１Ｂならびに配列番号２８および配列番号２２にそれぞれ示す。
【０２１３】
２Ｇ５重鎖免疫グロブリン配列の、公知のヒト生殖細胞系列免疫グロブリン重鎖配列との比較は、２Ｇ５重鎖が、ヒト生殖細胞系列ＶＨ  ３−３３由来のＶＨセグメント、ヒト生殖細胞系列７−２７由来のＤセグメント、およびヒト生殖細胞系列ＪＨ  ３ｂ由来のＪＨセグメントを使用していることを実証した。２Ｇ５  ＶＨ配列と生殖細胞系列ＶＨ  ３−３３配列とのアラインメントを、図４に示す。ＣＤＲ領域決定のＫａｂａｔシステムを用いた２Ｇ５  ＶＨ配列のさらなる分析は、重鎖のＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域およびＣＤ３領域の描写をもたらした。それぞれ、図１Ａおよび図４ならびに配列番号１、配列番号４および配列番号７において示す。
【０２１４】
２Ｇ５軽鎖免疫グロブリン配列の、公知のヒト生殖細胞系列免疫グロブリン重鎖配列との比較は、２Ｇ５軽鎖は、ヒト生殖細胞系列ＶＫ  Ｌ６由来のＶＬセグメントおよびヒト生殖細胞系列ＪＫ  ２由来のＪＫセグメントを使用していることを実証した。２Ｇ５  ＶＬ配列と生殖細胞系列ＶＫ  Ｌ６配列とのアラインメントを、図６に示す。ＣＤＲ領域決定のＫａｂａｔシステムを用いた２Ｇ５  ＶＬ配列のさらなる分析は、軽鎖のＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域およびＣＤ３領域の描写をもたらした。それぞれ、図１Ｂおよび図６、ならびに配列番号１０、配列番号１３および配列番号１６において示す。
【０２１５】
５Ａ２の重鎖可変領域のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を、図２Ａならびに配列番号２６および配列番号２０にそれぞれ示す。
【０２１６】
５Ａ２の軽鎖可変領域のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を、図２Ｂならびに配列番号２９および配列番号２３にそれぞれ示す。
【０２１７】
５Ａ２重鎖免疫グロブリン配列の、公知のヒト生殖細胞系列免疫グロブリン重鎖配列との比較は、５Ａ２重鎖は、ヒト生殖細胞系列ＶＨ  ３−３３由来のＶＨセグメント、未決定のＤセグメント、およびヒト生殖細胞系列ＪＨ  ４ｂ由来のＪＨセグメントを使用していることを実証した。５Ａ２  ＶＨ配列と生殖細胞系列ＶＨ  ３−３３配列とのアラインメントを、図４に示す。ＣＤＲ領域決定のＫａｂａｔシステムを用いた５Ａ２  ＶＨ配列のさらなる分析は、重鎖のＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域およびＣＤＲ３領域の描写をもたらした。それぞれ、図２Ａおよび図４、ならびに配列番号２、配列番号５および配列番号８において示す。
【０２１８】
５Ａ２軽鎖免疫グロブリン配列の、公知のヒト生殖細胞系列免疫グロブリン軽鎖配列との比較は、５Ａ２軽鎖は、ヒト生殖細胞系列ＶＫ  Ｌ６由来のＶＬセグメントおよびヒト生殖細胞系列ＪＫ  １由来のＪＫセグメントを使用していることを実証した。５Ａ２  ＶＬ配列と生殖細胞系列ＶＫ  Ｌ６配列とのアラインメントを、図６に示す。ＣＤＲ領域決定のＫａｂａｔシステムを用いた５Ａ２  ＶＬ配列のさらなる分析は、軽鎖のＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域およびＣＤ３領域の描写をもたらした。それぞれ、図２Ｂおよび図６、ならびに配列番号１１、配列番号１４および配列番号１７において示す。
【０２１９】
７Ｇ８の重鎖可変領域のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を、図３Ａならびに配列番号２７および配列番号２１にそれぞれ示す。
【０２２０】
７Ｇ８の軽鎖可変領域のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を、図３Ｂならびに配列番号３０および配列番号２４にそれぞれ示す。
【０２２１】
７Ｇ８重鎖免疫グロブリン配列の公知の、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン重鎖配列との比較は、７Ｇ８重鎖は、ヒト生殖細胞系列ＶＨ  ＤＰ４４由来のＶＨセグメント、未決定のＤセグメント、およびヒト生殖細胞系列ＪＨ  ２由来のＪＨセグメントを使用していることを実証した。７Ｇ８  ＶＨ配列と生殖細胞系列ＶＨ  ＤＰ４４配列とのアラインメントを、図５に示す。ＣＤＲ領域決定のＫａｂａｔシステムを用いた７Ｇ８  ＶＨ配列のさらなる分析は、重鎖のＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域およびＣＤ３領域の描写をもたらした。それぞれ、図３Ａおよび図５、ならびに配列番号３、配列番号６および配列番号９で示す。
【０２２２】
７Ｇ８軽鎖免疫グロブリン配列の、公知のヒト生殖細胞系列免疫グロブリン軽鎖配列との比較は、７Ｇ８軽鎖は、ヒト生殖細胞系列ＶＫ  Ｌ６由来のＶＬセグメントおよびヒト生殖細胞系列ＪＫ  １由来のＪＫセグメントを使用していることを実証した。７Ｇ８  ＶＬ配列と生殖細胞系列ＶＫ  Ａ２７配列とのアラインメントを、図６に示す。ＣＤＲ領域決定のＫａｂａｔシステムを用いた７Ｇ８  ＶＬ配列のさらなる分析は、軽鎖のＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域およびＣＤ３領域の描写をもたらした。それぞれ、図３Ｂおよび図６、ならびに配列番号１２、配列番号１５および配列番号１８において示す。
【０２２３】
（実施例３：ｍＡｂ  ７Ｇ８の変異および代替の生殖細胞系列の使用）
上の実施例２で議論したように、ｍＡｂ  ７Ｇ８は、ＨｕＭａｂ  Ｍｏｕｓｅ（登録商標）系統のＨＣｏ７導入遺伝子に存在する、ヒトＤＰ−４４生殖細胞系列配列に由来する重鎖可変領域を利用する。ＤＰ−４４は、天然のヒト免疫グロブリンレパートリーにおいて利用される生殖細胞配列ではないので、７Ｇ８のＶＨ配列を変異させ、潜在的な免疫抗原性を低下させることは、有利であり得る。好ましくは、７Ｇ８  ＶＨ配列の１つ以上のフレームワーク残基が、構造的に関連するＶＨ生殖細胞系列配列のうちの、天然のヒト免疫グロブリンレパートリーにおいて使用されるフレームワーク中に存在する残基において変異される。例えば、図７は、７Ｇ８  ＶＨ配列とＤＰ４４生殖細胞系列配列とのアラインメントを示し、２つの構造的に関連したヒト生殖細胞系列配列であるＶＨ  ３−２３とＶＨ  ３−７とのアラインメントもまた示す。これらの配列の関連性を考慮すると、ヒトＩＲＴＡ５に特異的に結合し、かつＶＨ  ３−２３またはＶＨ  ３−７に由来するＶＨ領域を使用するヒト抗体を選択し得ることを予測し得る。その上、ＶＨ  ３−２３配列中もしくはＶＨ  ３−７配列中の比較可能な位置の残基とは異なる７Ｇ８  ＶＨ配列内の１以上の残基を、ＶＨ  ３−２３中もしくはＶＨ  ３−７中に存在する残基へと変異させ得るか、またはその保存的アミノ酸置換へと変異させ得る。例えば、本明細書中で提供される７Ｇ８の好ましい変異形態は、７Ｇ８（ｍｕｔ）といい、図７および配列番号３６に示すアミノ酸配列を有する。７Ｇ８（ｍｕｔ）において、アミノ酸１３位のヒスチジンは、リジンまたはグルタミンのどちらかへと変異されており、そして８７位のメチオニンは、トレオニンに変異されている。
【０２２４】
（実施例４：抗ＩＲＴＡ５ヒトモノクローナル抗体の結合特異性および結合速度論の性質決定）
この実施例において、抗ＩＲＴＡ５抗体の結合親和性、結合速度論、結合特異性および交差競合を、Ｂｉａｃｏｒｅ分析によって試験する。また、結合特異性を、フローサイトメトリーによって試験する。
【０２２５】
（結合親和性および結合速度論）
抗ＩＲＴＡ５抗体を、Ｂｉａｃｏｒｅ分析（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）により、親和性および結合速度論について性質決定した。標準的アミンカップリング化学およびＢｉａｃｏｒｅによって提供されるキットを使用して、精製組換えヒトＩＲＴＡ５融合タンパク質を、ＣＭ５チップ（カルボキシメチルデキストランでコートしたチップ）に第一級アミンを介して共有結合させた。ＨＢＳ  ＥＰバッファー（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢによって提供される）中に抗体を密度２６７ｎＭ、流速５０μｌ／分で流動（ｆｌｏｗｉｎｇ）させることにより、結合を測定した。抗原−抗体会合速度論を３分間追跡し、解離速度論を７分間追跡した。会合曲線および解離曲線を、ＢＩＡｅｖａｌａｔｉｏｎ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ）を使用して、１：１ラングミュア結合モデルに当てはめた。結合定数の推定におけるアビディティの影響を最小化するために、会合段階および解離段階に対応するデータの最初のセグメントのみを当てはめに使用した。ＫＤ値、ｋｏｎ値およびｋｏｆｆ値を、表１に示すように決定した。
【０２２６】
【表１】
2007530076.tif 000002
。
【０２２７】
（抗ＩＲＴＡ５抗体のエピトープマッピング）
Ｂｉａｃｏｒｅを使用し、抗ＩＲＴＡ５  ＨｕＭＡｂのエピトープ分類を決定した。抗ＩＲＴＡ５抗体（２Ｇ５、５Ａ２、７Ｇ８、４Ｂ７、７Ｆ５、４Ｂ７、２Ｇ１）を使用し、そのＩＲＴＡ５上のエピトープをマッピングした。抗体２Ｇ５、抗体５Ａ２および抗体７Ｇ８を、同じチップの３種の異なる表面上に各８０００ＲＵになるようにコートした。上記の７つのｍＡｂのそれぞれの希釈物を１０μｇ／ｍＬで開始して作製し、ＩＲＴＡ５−Ｆｃ（５０ｎＭ）と共に１時間インキュベートした。インキュベートした複合体を、３つ全ての表面（およびブランクの表面）の上に１．５分間、流速２０μＬ／分で同時に注入した。１．５分間の最後の各表面からのシグナルを、適切なブランクの減算後、複合体におけるｍＡｂの濃度に対してプロットしている。データの分析の際、この７種の抗ＩＲＴＡ５抗体を、３つのエピトープ群に分類した。Ａ群は２Ｇ５、５Ａ２および７Ｇ８を含み、Ｂ１群は７Ｇ８および１Ｅ５を含み、そしてＢ２群は、７Ｆ５、４Ｂ７および２Ｇ１を含む。この３つのエピトープ群の相互関係を、図８に概略的に図示する。
【０２２８】
（フローサイトメトリーによる結合特異性）
上記の５種のＩＲＴＡタンパク質の各々のうち１種を細胞表面上に発現するチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株を発生させ、ＩＲＴＡ５  ＨｕＭＡｂの特異性をフローサイトメトリーにより決定するために使用した。ＣＨＯ細胞を、ＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４またはＩＲＴＡ５の膜貫通形態をコードする完全長のｃＤＮＡを含む発現プラスミドでトランスフェクトした。さらに、トランスフェクトしたタンパク質は、エピトープに対して特異的な抗体による検出のために、Ｎ末端にエピトープタグを含んだ。上記７種の抗ＩＲＴＡ５  ＨｕＭＡｂの結合を、トランスフェクトした細胞を上記ＩＲＴＡ５  Ａｂの各々（濃度１０μｇ／ｍｌ）と共にインキュベートすることにより、評価した。細胞を洗浄し、そして結合を、ＦＩＴＣ標識した抗ヒトＩｇＧ  Ａｂで検出した。マウス抗エピトープタグＡｂをポジティブコントロールとして用い、その後、標識した抗マウスＩｇＧをポジティブコントロールとして用いた。非特異的ヒトＡｂおよび非特異的マウスのＡｂを、ネガティブコントロールとして使用した。結果を、図９に図示する。ＩＲＴＡ５でトランスフェクトしたＣＨＯ株に結合したが、ＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２またはＩＲＴＡ４を発現するＣＨＯ株に結合しなかったＩＲＴＡ５  ＨｕＭＡｂを、染色の平均蛍光強度（ＭＦＩ）によって測定した。結果として、ＨｕＭＡｂは、ＩＲＴＡ３を発現するＣＨＯ株への特異的な結合を有するとは示さなかった（データは示さず）。これらのデータは、ＨｕＭＡｂのＩＲＴＡ５に対する特異性を実証した。
【０２２９】
（実施例５：ＩＲＴＡ５抗体の正常Ｂ細胞およびＢ細胞由来腫瘍株への結合）
２色の免疫蛍光およびフローサイトメトリーを使用して、ＩＲＴＡ５  ＨｕＭＡｂの末梢血Ｂ細胞への結合を実証した。ＣＤ１９は、末梢血Ｂリンパ球を識別するために使用され得る細胞表面マーカーである。ヒト末梢血単核細胞を、ビオチン化２Ｇ５、ビオチン化７Ｇ８またはイソ型コントロールビオチン化ヒトＡｂと共にインキュベートした。細胞を洗浄し、そしてＦＩＴＣ標識ストレプトアビジンおよびフィコエリトリン標識抗ＣＤ１９抗体と共にインキュベートした。細胞を洗浄し、そしてフローサイトメトリーにより分析した。結果を、図１０Ａに図示する。リンパ球は黒「点」として通過し、そして単球は灰色「点」として通過した。波長を、ＦＩＴＣ（ＦＬ１）シグナル伝達およびフィコエリトリン（ＦＬ２）シグナル伝達についてスクリーニングするために選択した。ＣＤ１９＋Ｂ細胞は、フィコエリトリン標識抗ＣＤ１９抗体に対し高いレベルの結合を示した（横軸）。２Ｇ５＋細胞または７Ｇ８＋細胞（縦軸）もまた主にＣＤ１９＋であり、二重陽性（上段右の四分区画）に局在した。これらのデータは、ＩＲＴＡ５タンパク質は、ＨｕＭＡｂ  ２Ｇ５およびＨｕＭＡｂ  ７Ｇ８の結合によって評価されたように、正常末梢血Ｂリンパ球の（全てではないが）大部分によって発現されることを実証した。
【０２３０】
２色免疫蛍光およびフローサイトメトリーをまた、末梢血Ｔ細胞、樹状細胞、単球またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞に対するＩＲＴＡ５  ＨｕＭＡｂの結合について試験するためにも使用した。ＣＤ３、ＣＤ１Ａ、ＣＤ１４およびＣＤ５６は、それぞれ末梢血Ｔリンパ球、末梢血樹状細胞、末梢血単球および末梢血ＮＫ細胞を識別するために使用され得る細胞表面マーカーである。ビオチン化した２Ｇ５、７Ｇ８またはアイソタイプコントロール抗体およびフィコエリトリン標識マーカー抗体（ＣＤ３、ＣＤ１Ａ、ＣＤ１４およびＣＤ５６）を、上述のように、フローサイトメトリー分析に使用した。結果を図１０Ｂに図示する。リンパ球は黒「点」として通過し、そして単球は灰色「点」として通過した。波長を、ＦＩＴＣ（ＦＬ１）シグナル伝達およびフィコエリトリン（ＦＬ２）シグナル伝達についてスクリーニングするために選択した。ＩＲＴＡ５  ＨｕＭＡｂ  ２Ｇ５およびＩＲＴＡ５  ＨｕＭＡｂ  ７Ｇ８は、ＣＤ３＋末梢血Ｔ細胞にも、ＣＤ１Ａ＋末梢血樹状細胞にも、ＣＤ１４＋末梢血単球にも、ＣＤ５６＋末梢血ＮＫ細胞にも結合しなかった。このことは、ＩＲＴＡ５のＢ細胞特異的発現を確認した。
【０２３１】
ＩＲＴＡ５  ＨｕＭＡｂのＢ細胞腫瘍株であるＤａｕｄｉ（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−２１３）、Ｒａｍｏｓ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５９６）、Ｋａｒｐａｓ  １１０６Ｐ（ＤＳＭＺ  ＡＣＣ  ５４５）、ＳＵ−ＤＨＬ−４（ＤＳＭＺ  ＡＣＣ  ４９５）、Ｇｒａｎｔａ  ５１９（ＤＳＭＺ  ＡＣＣ  ３４２）およびＬ−５４０（ＤＳＭＺ  ＡＣＣ  ７２）への結合を、フローサイトメトリーにより評価した。上記細胞株を、上記ＩＲＴＡ５  ＨｕＭＡｂのそれぞれまたはコントロールヒト抗体と共にインキュベートし、洗浄しそしてフィコエリトリン標識抗ヒト二次抗体により検出した。図１１は、ＩＲＴＡ５  ＨｕＭＡｂ  ２Ｇ２のＤａｕｄｉ細胞およびＲａｍｏｓ細胞に対する結合を、コントロールヒト抗体と比較して示す。残りの６種のＩＲＴＡ５  ＨｕＭＡｂは、類似した結合パターンを示す（データは示さず）。これらのデータは、ＩＲＴＡ５タンパク質がＢ細胞起源のＤａｕｄｉ腫瘍細胞株およびＲａｍｏｓ腫瘍細胞株の表面上に発現されることを示す。図１２は、ＩＲＴＡ５  ＨｕＭＡｂ  ２Ｇ５のＫａｒｐａｓ  １１０６Ｐ細胞、ＳＵ−ＤＨＬ−４細胞、Ｇｒａｎｔａ  ５１９細胞およびＬ−５４０細胞への結合を、アイソタイプコントロール抗体と比較して示す。このデータは、ＩＲＴＡ５抗体がＳＵ−ＤＨＬ−４  Ｂ細胞腫瘍株に対する増加した結合を有することを示す（染色の平均蛍光強度（ＭＦＩ）によって測定）。まとめると、これらのデータは、特定のＢ細胞腫瘍株がＩＲＴＡ５タンパク質を細胞表面上に発現することを実証する。
【０２３２】
（ＩＲＴＡ−５（配列番号３７））
【０２３３】
【数１】
2007530076.tif 000003
（ＩＲＴＡ−１（配列番号３８））
【０２３４】
【数２】
2007530076.tif 000004
（ＩＲＴＡ−２（配列番号３９））
【０２３５】
【数３】
2007530076.tif 000005
（ＩＲＴＡ−３（配列番号４０））
【０２３６】
【数４】
2007530076.tif 000006
（ＩＲＴＡ−４（配列番号４１））
【０２３７】
【数５】
2007530076.tif 000007
【０２３８】
【表２】
2007530076.tif 000008
【図面の簡単な説明】
【０２３９】
【図１Ａ】図１Ａは、２Ｇ５ヒトモノクローナル抗体の重鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号２５）およびアミノ酸配列（配列番号１９）を示す。このＣＤＲ１（配列番号１）領域、ＣＤＲ２（配列番号４）領域およびＣＤＲ３（配列番号７）領域が示され、そしてこのＶ生殖系列の派生物、Ｄ生殖系列の派生物およびＪ生殖系列の派生物が示される。
【図１Ｂ】図１Ｂは、２Ｇ５ヒトモノクローナル抗体の軽鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号２８）およびアミノ酸配列（配列番号２２）を示す。このＣＤＲ１（配列番号１０）領域、ＣＤＲ２（配列番号１３）領域およびＣＤＲ３（配列番号１６）領域が示され、そしてこのＶ生殖系列の派生物およびＪ生殖系列の派生物が示される。
【図２Ａ】図２Ａは、５Ａ２ヒトモノクローナル抗体の重鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号２６）およびアミノ酸配列（配列番号２０）を示す。このＣＤＲ１（配列番号２）領域、ＣＤＲ２（配列番号５）領域およびＣＤＲ３（配列番号８）領域が示され、そしてこのＶ生殖系列の派生物およびＪ生殖系列の派生物が示される。
【図２Ｂ】図２Ｂは、５Ａ２ヒトモノクローナル抗体の軽鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号２９）およびアミノ酸配列（配列番号２３）を示す。このＣＤＲ１（配列番号１１）領域、ＣＤＲ２（配列番号１４）領域およびＣＤＲ３  （配列番号１７）領域が示され、そしてこのＶ生殖系列の派生物およびＪ生殖系列の派生物が示される。
【図３Ａ】図３Ａは、７Ｇ８ヒトモノクローナル抗体の重鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号２７）およびアミノ酸配列（配列番号２１）を示す。このＣＤＲ１（配列番号３）領域、ＣＤＲ２（配列番号６）領域およびＣＤＲ３（配列番号９）領域が示され、そしてこのＶ生殖系列の派生物およびＪ生殖系列の派生物が示される。
【図３Ｂ】図３Ｂは、７Ｇ８ヒトモノクローナル抗体の軽鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号３０）およびアミノ酸配列（配列番号２４）を示す。このＣＤＲ１（配列番号１２）領域、ＣＤＲ２（配列番号１５）領域およびＣＤＲ３（配列番号１８）領域が示され、そしてこのＶ生殖系列の派生物およびＪ生殖系列の派生物が示される。
【図４】図４は、２Ｇ５および５Ａ２の重鎖可変領域のアミノ酸配列と、ヒト生殖系列のＶＨ  ３−３３アミノ酸配列（配列番号３１）とのアラインメントを示す。
【図５】図５は、７Ｇ８の重鎖可変領域のアミノ酸配列とヒト生殖系列のＶＨ  ＤＰ４４アミノ酸配列（配列番号３２）とのアラインメントを示す。
【図６】図６は、２Ｇ５、５Ａ２、および７Ｇ８の軽鎖可変領域のアミノ酸配列と、ヒト生殖系列のＶｋ  Ｌ６アミノ酸配列（配列番号３３）とのアラインメントを示す。
【図７】図７は、７Ｇ８の重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号２１）および７Ｇ８（ｍｕｔ）（配列番号３６）と称される７Ｇ８の重鎖可変領域の変異形態と、ヒト生殖系列のＶＨ  ＤＰ４４アミノ酸配列、ＶＨ  ３−２３アミノ酸配列およびＶＨ  ３−７アミノ酸配列（それぞれ、配列番号３２、配列番号３４および配列番号３５）とのアラインメントを示す。
【図８】図８は、ＢＩＡｃｏｒｅ分析に基づく抗ＩＲＴＡ−５抗体のエピトープの分類を示す。
【図９】図９は、ヒトＩＲＴＡ−５に対して指向されるヒトモノクローナル抗体４Ｂ７、２Ｇ１、７Ｆ５、７Ｇ８、５Ａ２、１Ｅ５、および２Ｇ５が、ヒトＩＲＴＡ−５に特異的に結合することを実証する実験の結果を示すグラフである。
【図１０Ａ】図１０Ａは、ヒトＩＲＴＡ−５に対して指向されるヒトモノクローナル抗体２Ｇ５および７Ｇ８が、ＣＤ１９＋  Ｂ細胞に結合することを実証するフローサイトメトリー実験の結果を示す。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、ヒトＩＲＴＡ−５に対して指向されるヒトモノクローナル抗体２Ｇ５および７Ｇ８が、ＣＤ３＋末梢血Ｔ細胞、ＣＤ１Ａ＋末梢血樹状細胞、ＣＤ１４＋末梢血単球、またはＣＤ５６＋末梢血ＮＫ細胞に結合しないことを実証するフローサイトメトリー実験の結果を示す。
【図１１】図１１は、ヒトＩＲＴＡ−５に対して指向されるヒトモノクローナル抗体２Ｇ２が、Ｂ細胞由来の腫瘍細胞株の細胞表面に特異的に結合することを実証するヒストグラムのプロットを示す。
【図１２】図１２は、ヒトＩＲＴＡ−５に対して指向されるヒトモノクローナル抗体２Ｇ５の、Ｂ−細胞腫瘍株Ｋａｒｐａｓ  １１０６Ｐ、ＳＵ−ＤＨＬ−４、Ｇｒａｎｔａ  ５１９、およびＬ−５４０に対する結合を実証するフローサイトメトリー実験の結果を示す。
【図１Ａ】
2007530076.tif 000009
【図１Ｂ】
2007530076.tif 000010
【図２Ａ】
2007530076.tif 000011
【図２Ｂ】
2007530076.tif 000012
【図３Ａ】
2007530076.tif 000013
【図３Ｂ】
2007530076.tif 000014
【図４】
2007530076.tif 000015
【図５】
2007530076.tif 000016
【図６】
2007530076.tif 000017
【図７】
2007530076.tif 000018
【図８】
2007530076.tif 000019
【図９】
2007530076.tif 000020
【図１０Ａ】
2007530076.tif 000021
【図１０Ｂ】
2007530076.tif 000022
【図１１】
2007530076.tif 000023
【図１２】
2007530076.tif 000024
【配列表】
2007530076000001.xml
【国際調査報告】
2007530076.tif 000049