(57)【要約】  液体担体中の単離または合成親和性分子の混合物が開示される。この混合物は、シングルまたはマルチフローセル圧電結晶マイクロバランス装置に用いるための、少なくとも２種類の異なる親和性分子を含んでなる。各単離または合成親和性分子は、所定の分析対象物とともに、アニオン−カチオン、抗体−抗原、受容体−リガンド、酵素−基質、オリゴヌクレオチド−相補的配列を有するオリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチド−タンパク質、オリゴヌクレオチド−細胞、およびペプチド核酸（ＰＮＡ）オリゴマー−ポリヌクレオチド（なお、このポリヌクレオチドはそのＰＮＡオリゴマーと相補的なＲＮＡ、ＤＮＡおよびＰＮＡポリマーからなる群から選択され得る）からなる群から選択される相互作用対を形成する。また、シングルまたはマルチフローセル圧電結晶マイクロバランス装置の液体流に導入するためのこの混合物の使用、ならびにその混合物を含有するキットも記載される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
シングルまたはマルチフローセル圧電結晶マイクロバランス装置で用いるための、各々所定の分析対象物に親和性を有する少なくとも２種類の異なる親和性分子を含んでなる、液体担体中の単離または合成親和性分子の混合物。
【請求項２】
各単離または合成親和性分子が、所定の分析対象物とともに、アニオン−カチオン、抗体−抗原、受容体−リガンド、酵素−基質、オリゴヌクレオチド−相補的配列を有するオリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチド−タンパク質、オリゴヌクレオチド−細胞、およびペプチド核酸（ＰＮＡ）オリゴマー−ポリヌクレオチド（なお、このポリヌクレオチドは、そのＰＮＡオリゴマーと相補的なＲＮＡ、ＤＮＡおよびＰＮＡポリマーからなる群から選択され得る）からなる群から選択される相互作用対を形成する、請求項１に記載の混合物。
【請求項３】
各単離または合成親和性分子が、各々所定の分析対象物抗原に親和性を有する単一特異性ポリクローナルもしくはモノクローナル抗体、抗体フラグメントまたはその誘導体からなる群から選択される、請求項１または２に記載の混合物。
【請求項４】
異なる親和性分子の各々の濃度が０．０１〜０．８ｍｇ／液体担体ｍｌの間である、請求項３に記載の混合物。
【請求項５】
液体担体が水であり、さらにバッファー、安定剤および／または保存剤を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の混合物。
【請求項６】
分析対象物の各々が、コカイン、ヘロイン、アンフェタミン、メタンフェタミン、カンナビノール類、テトラヒドロカンナビノール類（ＴＨＣ）、およびメチレンジオキシ−Ｎ−メチルアンフェタミン（エクスタシー）からなる群から選択される異なる麻薬からなる群から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の混合物。
【請求項７】
分析対象物の各々が、トリニトロトルエン（ＴＮＴ）、ジニトロトルエン（ＤＮＴ）、ヘキサヒドロ−１，３，５−トリニトロ−１，３，５−トリアジン（ＲＤＸ）、オクタヒドロ−１，３，５，７−テトラニトロ−１，３，５，７−テトラジン（ＨＭＸ）、四硝酸ペンタエリトリトール（ＰＥＴＮ）、およびニトログリセリン（ＮＧ）からなる群から選択される異なる爆薬からなる群から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の混合物。
【請求項８】
分析対象物の各々が、異なる生体分子、微生物およびその一部からなる群から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の混合物。
【請求項９】
前記微生物が、細菌、細菌胞子、マイコバクテリア、真菌およびウイルスから選択される、請求項８に記載の混合物。
【請求項１０】
シングルまたはマルチフローセル圧電結晶マイクロバランス装置の液体流に導入するための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の混合物の使用。
【請求項１１】
親和性分子の混合物が、競合モード分析に関して、所定の分析対象物の分析対象物類似体（この分析対象物類似体は電極に固定化されている）との親和性結合競合のために、装置の液体流に導入される前に、１種または数種の所定の分析対象物を含み得る試験サンプル溶液と混合される、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
前記装置の液体流への導入が、所定の分析対象物の分析対象物類似体（この分析対象物類似体は電極に固定化されている）への結合による、１個または数個のフローセル結晶電極の活性化または再活性化のためのものである、請求項１０に記載の使用。
【請求項１３】
前記混合物が、装置の連続流に間隔をおいて導入される、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４】
前記間隔が、２０分〜２４時間の範囲から選択される、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
前記混合物が、電極の再生後、グリシンのようなｐＨ低下剤とともに装置の連続流に導入される、請求項１３または１４に記載の使用。
【請求項１６】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の安定なまたは安定化された混合物を含有するキット。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、各々所定の分析対象物（analyte）に特異的な少なくとも２種類の異なる親和性分子の混合物およびその混合物の使用に関する。より厳密には、本発明の混合物は、シングルまたはマルチフローセル圧電結晶マイクロバランス装置に用いるための、各々所定の分析対象物に親和性を有する少なくとも２種類の異なる親和性分子を含んでなる、液体担体中の単離または合成親和性分子の混合物である。
【０００２】
背景
圧電技術は、圧電水晶振動子（piezoelectric quartz crystal）の振動数を測定することにより、質量変化を実時間で測定する周知の原理に基づくものである。この圧電結晶装置は、両側に金属電極を有する水晶振動子ウエハーからなる。これらの電極は共振振動数を誘導するために使用され、共振振動数は電極の質量に依存し、振動数の変化は電極上に付着した質量の変化に直接相関する。従って、圧電結晶は高感度質量測定のために使用でき、よって、水晶振動子マイクロバランス法(Quartz Crystal  Microbalances)（ＱＣＭ）と呼ばれている。振動数の変化と結晶の付着質量の間の関係を表すためにいくつかの方程式が提案されている。
【０００３】
圧電結晶マイクロバランスの使用による、溶液中での所定の化学物質または生体分子の検出を対象とした特許は多数あり、例えば、米国特許第４，７３５，９０６号、同第４，  ７８９，８０４号および同第５，７０５，３９９号などがある。同じ試験溶液においていくつかの個々の化学物質または生体分子（分析対象物）の存在を判定する場合、検出しようとする分析対象物の１つにそれぞれ特異的なフローセルで複数のマイクロバランスを同時に取り扱いできる系を備えているのが有利である。このような系は本発明者らの国際特許出願ＷＯ２００４００１３９２に開示されており、これは短時間で多数のサンプルをスクリーニングするのに特に有用である。
【０００４】
本発明の混合物は、上述の特許および特許出願に開示されている圧電結晶マイクロバランス装置で使用できる。
【０００５】
発明の説明
本発明は、シングルまたはマルチフローセル圧電結晶マイクロバランス装置で用いるための、各々所定の分析対象物に親和性を有する少なくとも２種類の異なる親和性分子を含んでなる、液体担体中の単離または合成親和性分子の混合物を提供する。
【０００６】
本発明の混合物としては、各単離または合成親和性分子が、所定の分析対象物とともに、アニオン−カチオン、抗体−抗原、受容体−リガンド、酵素−基質、オリゴヌクレオチド−相補的配列を有するオリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチド−タンパク質、オリゴヌクレオチド−細胞、およびペプチド核酸（ＰＮＡ）オリゴマー−ポリヌクレオチド（なお、このポリヌクレオチドはそのＰＮＡオリゴマーと相補的なＲＮＡ、ＤＮＡおよびＰＮＡポリマーからなる群から選択され得る）からなる群から選択される相互作用対を形成するようなものが好ましい。
【０００７】
親和性分子は、天然源または合成源からの単離による、化学合成または生物合成またはその双方の使用による、大分子からの切断によるなどの、何らかの好適な方法で個々に作製されると理解すべきである。
【０００８】
本発明の好ましい実施形態では、各単離または合成親和性分子は、各々所定の分析対象物、すなわち所定の抗原に親和性を有する単一特異性ポリクローナルもしくはモノクローナル抗体、抗体フラグメントまたはその誘導体からなる群から選択される。
【０００９】
これらの抗体は特定の製造者によって受注生産することもできるし、種々の供給者から購入することもできるし、Hybridoma Technology in the Biosciences & Medicine. T. A. Springer, editor, Plenum Press, 1985などの文献から知られている手順によって合成することもできる。
【００１０】
本発明の混合物、現在のところ好ましい実施形態では、異なる親和性分子の各々の濃度は０．０１〜０．８ｍｇ／液体担体ｍｌの間である。
【００１１】
液体担体の例としては水が挙げられ、これはさらにバッファー、安定剤および／または保存剤を含んでもよく、当業者ならば構成される混合物の選択肢に基づいて選択することができる。安定剤は、例えば、界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０またはＴｗｅｅｎ（登録商標）８０または同等のもの）および／または種々のタンパク質（例えば、アルブミン、カゼインまたは他の保護剤もしくは遮断剤）の混合物であってもよい。
【００１２】
シングルまたはマルチフローセル圧電結晶マイクロバランス装置において本発明の混合物の使用により試験溶液中で検出可能な個々の分析対象物の例としては、コカイン、ヘロイン、アンフェタミン、メタンフェタミン、カンナビノール類、テトラヒドロカンナビノール類（ＴＨＣ）、およびメチレンジオキシ−Ｎ−メチルアンフェタミン（エクスタシー）などの種々の麻薬、トリニトロトルエン（ＴＮＴ）、ジニトロトルエン（ＤＮＴ）、ヘキサヒドロ−１，３，５−トリニトロ−１，３，５−トリアジン（ＲＤＸ）、オクタヒドロ−１，３，５，７−テトラニトロ−１，３，５，７−テトラジン（ＨＭＸ）、四硝酸ペンタエリトリトール（ＰＥＴＮ）、およびニトログリセリン（ＮＧ）などの種々の爆薬、種々の生体分子、微生物およびその一部が挙げられる。微生物の例としては、細菌、細菌胞子、マイコバクテリア、真菌およびウイルスが挙げられる。
【００１３】
本発明のもう１つの態様は、シングルまたはマルチフローセル圧電結晶マイクロバランス装置の液体流に導入するための、本発明による混合物の使用を対象とする。
本発明で好ましいとして注目される圧電結晶マイクロバランス装置の使用については、競合モード（competition mode）と脱離モード（displacement mode）という、若干異なる２つのコンセプトがある。
【００１４】
本発明による混合物の使用に関する一実施形態では、親和性分子の混合物は、装置の液体流に導入される前に、１種または数種の所定の分析対象物を含み得る試験サンプル溶液と混合される。試験サンプル中の遊離の分析対象物分子は、親和性分子をめぐって、圧電結晶マイクロバランス装置の電極表面に固定化されている分析対象物類似体と競合し、電極質量の変化が記録される。この使用が競合モードコンセプトの例となる。
【００１５】
本発明による混合物の使用に関するもう１つの実施形態では、装置の液体流への導入は、所定の分析対象物の分析対象物類似体（この分析対象物類似体は電極に固定化されている）への結合により、１個または数個のフローセル結晶電極の活性化または再活性化することを目的とするものである。この使用は脱離モードコンセプトで採用されるものである。
【００１６】
親和性分子は電極表面の分析対象物類似体と結合するが、対象とする分析対象物との結合よりも弱いので、試験溶液中に分析対象物が存在すれば、その分析対象物は、分析対象物類似体から解離した（detached）親和性分子と相互作用対を形成し、電極の質量損失が記録され、試験溶液中に分析対象物が存在することを示す。
【００１７】
本発明の混合物は装置の連続流に間隔をおいて導入され、例えば、その間隔は２０分〜２４時間の範囲から選択され、例えば３０分おきである。
本発明の混合物はまた、電極の再生後、すなわち、電極表面から抗体を除去した後に、グリシンのようなｐＨ低下剤とともに装置の連続流に導入してもよい。
【００１８】
本発明の混合物は、本来安定であるか、またはタンパク質、例えばアルブミン、のような安定剤の添加により安定化される。
本発明のさらなる態様は、本発明による安定なまたは安定化された混合物を含有するキットを対象とする。
【００１９】
以下、本発明を、親和性分子が抗体であり、分析対象物が抗原である実施形態によりさらに説明する。
【００２０】
競合モードにおいて、本発明者らの国際特許出願ＷＯ２００４００１３９２に開示されているマルチフローセル圧電バランス装置の結晶は、未知量の分析対象物、すなわち抗原と所定量の特定抗体の混合物とを含有する試験サンプル溶液の暴露前に、まず、上記のような抗原類似体で表面修飾する。このとき、固定化された分析対象物分子と遊離の分析対象物分子が抗体との結合をめぐって競合する。この試験サンプルと抗体の混合物が表面修飾された結晶表面に曝されると、結晶質量の増加、すなわち、振動数の低下は、試験サンプル中の分析対象物濃度と逆の相関を示す。
【００２１】
本発明の混合物は、１つのセル内の１つの電極、または分離したセル中の分離した電極に付着した、または被覆された、すなわち、固定化された少なくとも２種類の異なる抗原類似体を含む圧電結晶マイクロバランスフローセルの活性化または再活性化に特に有用である。
【００２２】
「電極に付着した、または被覆された、または固定化された抗原類似体」という表現は、抗体結合抗原部位とフローセル電極の金属表面との間にあらゆる種類のスペーサー分子を含むと理解すべきである。このようなスペーサー分子の例としては、本発明者らの国際特許出願ＷＯ２００４００１４１７およびＷＯ２００４１４１６に含まれている。
所定の抗原の異なる抗原類似体は各々、その抗原に特異的な抗体と結合して免疫複合体を形成する。免疫複合体を被覆した圧電結晶マイクロバランスフローセルは、液体サンプル、すなわち試験溶液中の少なくとも２種類の異なる分析対象物、すなわち、検出しようとする所定の抗原を検出するための脱離モードを用いたセンサー系において抗体活性化フローセルとして用いられる。
【００２３】
本発明の安定なまたは安定化された混合物により、例えば税関や空港旅客管理などでのスクリーニング状況において検出される所定の抗原の少なくとも２種類の異なる抗原類似体を含んでなる１つ、２つまたはそれ以上のフローセルを備えた圧電結晶マイクロバランス装置で、麻薬および／または爆薬の存在の可能性を迅速に分析することができる。
【００２４】
この混合物の抗体は標識する必要がないので、本発明の混合物により、麻薬、爆薬および本明細書に記載の他の物質を検出するための無標識免疫センサー系が可能となる。この技術の重要な特徴は、その物質の存在による、免疫複合体で被覆した圧電結晶からの抗体の脱離である。この抗体の脱離は、結晶の振動特性の変化として、通常は圧電結晶の振動数の増加としてモニタリングされ、その物質の濃度に直接相関する。
【００２５】
脱離原理を図１に示す。図で分かるように、まず、ＱＣＭ電極を抗原類似体と抗体の免疫複合体で被覆する。この免疫複合体被覆電極を、抗原を含む液体サンプルに曝すと、それらの可溶性抗原は、その表面上の免疫複合体の抗体をめぐって競合し、それらの脱離が起こり、その結果、結晶の振動数が増加する。この脱離の程度が液体サンプル中の抗原の濃度と直接相関する。しかしながら、感度を調整するためにこの免疫複合体を設計するのは極めて微妙な作業である。表面に固定化された抗原類似体と抗体の間の親和性が強すぎるとわずかしか脱離が起こらなかったり、全く脱離が起こらなかったりする。他の免疫アッセイ技術ではほとんどの場合、抗体抗原相互作用は非常に強くて不可逆的であることが望ましい。しかしながら、脱離分析においては、この抗原類似体と抗体の間の親和性が極めて低ければ、抗体は極めて容易に分離（dissociates）し、限られた時間内で感度を高くすることができる。
【００２６】
本発明者らの同時係属中の国際特許出願ＷＯ２００４００１３９２（その内容は引用することにより本明細書の一部とする）に開示されているＱＣＭ装置の作動は、分析しようとするサンプルをフィルター上に載せるか、または他の技術によりサンプルをＱＣＭ装置に注入した後は完全に自動である。装置の自動作動は、例えばフィルターからコールドスポットへの分析対象物の脱着、適当なバッファーでの抽出、その後の、振動数のシフトのモニタリングによる分析のための、分析対象物含有バッファーの抗体活性化ＱＣＭセルへの導入を含む。図２はその系の略図を示す。
【００２７】
電極の作製
分析システム装置におけるバイオセル内のＱＣＭ電極は、本発明者らの同時係属中国際特許出願ＷＯ２００４１４１６およびＷＯ２００４１４１７の脱離反応用に作製されたものである。圧電結晶（ＱＣＭ結晶）上の各金電極を、検出しようとする所定の分析対象物−抗原の誘導体である、それら個々の抗原類似体で表面被覆する。各被覆抗原類似体は、溶液中の分析対象物−抗原よりも抗体に対して弱い親和性を示すように改変したものである。この表面修飾ＱＣＭ結晶をセルハウジング（バイオセル）に挿入し、その後、装置の流動系に設置する。溶離液（バッファー）を連続セルへ送り、数分以内で安定化させる。
【００２８】
一般的な分析実施は次のように記載できる：
分析しようとするサンプルの水溶液少量（サンプルプラグ）をルーピング（looping）することにより、自動装置のセル内にサンプルを導入する（例えば、同時係属中の国際特許出願ＷＯ２００４００１３９２参照）。供試サンプルは通常、疑わしい表面をふき取ること、および／または何らかのバキュームクリーナーまたはプレコンセントレーターを用いて周囲の蒸気を集めることにより、フィルター上に採集されたものである。フィルター上に採集されたサンプルの分析対象物は、国際特許出願ＷＯ０３／０７３０７０（その内容は引用することにより本明細書の一部とする）に記載の脱着法によるか、または本発明者らの同時係属中の国際特許出願ＰＣＴ／ＳＥ／０００７６７に記載のものなどのイオナイザープローブを用いて抽出することによって移行および精製する。種々の分析対象物、すなわち、異なる抗原に対する異なるモノクローナル抗体の混合物（ＭＡＢ混合物）を種々のセルに注入した後、そのサンプルプラグを流動系に導入する。
【００２９】
興味深いことに、薬物乱用者の皮膚を濾紙、布などでふき取り、本発明に従って分析を行ったところ、試験麻薬に関して良好な分析結果が得られた。
本発明による抗原−特異的抗体の混合物は少なくとも２種類の異なる抗体を含み、その異なる抗体の数、すなわち、１度の実施で検出したい数に応じて、混合物は例えば３、４、５、６、７、８またはそれ以上の異なる抗体を含む。
【００３０】
検出する分析対象物の例としては、コカイン、ヘロイン、アンフェタミン、メタンフェタミン、カンナビノール類、テトラヒドロカンナビノール類（ＴＨＣ）、およびメチレンジオキシ−Ｎ−メチルアンフェタミン（エクスタシー）からなる群から選択される異なる麻薬（抗原）、ならびにトリニトロトルエン（ＴＮＴ）、ジニトロトルエン（ＤＮＴ）、ヘキサヒドロ−１，３，５−トリニトロ−１，３，５−トリアジン（ＲＤＸ）、オクタヒドロ−１，３，５，７−テトラニトロ−１，３，５，７−テトラジン（ＨＭＸ）、四硝酸ペンタエリトリトール（ＰＥＴＮ）、およびニトログリセリン（ＮＧ）からなる群から選択される異なる爆薬が挙げられる。
【００３１】
例えば、本発明による抗原−特異的抗体の混合物は、図２〜６の各々で用いられる抗体を含み得る。爆薬に特異的な異なる抗体を麻薬に特異的な異なる抗体と混合することもでき、そうすれば、１度の実施で爆薬と麻薬の双方を検出することができる。
【００３２】
注入するＭＡＢ混合物の量は一般に２〜５０マイクロリットルであり、何らかのＭＡＢ容器から自動マイクロインジェクションによりＱＣＭ電極の入ったセルへとサンプルを導入する約数秒前にＭＡＢを注入し、その後、装置内に組み込まれているバイアルにより標本化される（図２参照）。また、ＭＡＢ混合物は間隔をおいて、手動または自動で、連続流動装置に注入することもできる。
【００３３】
ＭＡＢ混合物少量の注入後、総てのセルで短時間のうち、一般には２０秒以内に、圧電結晶の振動数に５〜２００Ｈｚの減少シフトが見られる（図３および４参照）。
【００３４】
いくつかの図面の詳細な説明
［図３］  ４マイクロリットルの抗体混合物をマイクロインジェクションし、その後、約４０秒でブランクサンプルを導入した際の、直列に接続した４つの異なるバイオセル（図２参照）からの典型的な応答。
［図４］  まず、４マイクロリットルの抗体混合物をマイクロインジェクションし（図３と比較）、その４０秒後に２ｎｇのＤ／Ｌアンフェタミンを導入した際の、直列に接続した４つの異なるバイオセル（図２参照）からの典型的な応答（順序は図３と同様であり、すなわち、セル１がコカイン、セル２がヘロイン、セル３がアンフェタミン、セル４がエクスタシー（ＭＤＭＡ）である）。
［図５］  まず、４マイクロリットルの抗体混合物をマイクロインジェクションし（図３および４と比較）、その４０秒後に２ｎｇのコカインと２ｎｇのＴＮＴを導入した際の、直列に接続した４つの異なるバイオセル（図２参照）からの典型的な応答（順序は、セル２以外は図３と同様であり、すなわち、セル１がコカイン、セル２がトリニトロトルエン、セル３がアンフェタミン、セル４がエクスタシー（ＭＤＭＡ）である）。
［図６］  まず、４マイクロリットルの抗体混合物をマイクロインジェクションし（図３および４および５と比較）、その４０秒後に２ｎｇのＴＮＴを導入した際の、直列に接続した４つの異なるバイオセル（図２参照）からの典型的な応答（順序は図５と同様であり、すなわち、セル１がコカイン、セル２がトリニトロトルエン、セル３がアンフェタミン、セル４がエクスタシー（ＭＤＭＡ）である）。
【００３５】
装置における溶離液、すなわち、バッファー溶液の流速は、セルの所望の滞留時間に応じて１０〜２００マイクロリットル／分の間で一定に維持するが、分析手順において、抗体活性化工程とサンプル分析工程で異なってもよい。
【００３６】
本発明者らは、脱離反応の感度を高めるには、電極上の抗原類似体に対する抗体の親和性を調整することが最も有利であるとの結論に至った。この調整は、溶離液に尿素、塩酸グアニジン、ＫＳＣＮ、ＭｇＣｌ２、種々の界面活性剤、例えばＴｗｅｅｎ（登録商標）２０またはＴｗｅｅｎ（登録商標）８０などのカオトロピック剤を加え、カオトロピック作用を達成するためにｐＨを７未満または７より高い値に調節することなどによって達成される。
【００３７】
全分析時間は、抗体の活性化および分析手順（脱離）を含め、７０秒以内である（図４参照）。本発明者らの国際特許出願ＷＯ０２００４００１３９２のマルチフローセル圧電結晶マイクロバランスの自動モードでは、分析時間は現在、およそ４０秒である。
【００３８】
バイアル中での抗体混合物の安定性は、安定化した場合には室温で通常は数週間、または数ヶ月である。
【００３９】
連続サンプルの現定数は、繰り返し可能な方法においては、各ＭＡＢ活性化後に注入することができる。しかしながら、図４に示すように、感度を最大にするためには、各サンプルの導入前にＭＡＢの活性化が必要である。図３および４の双方で分かるように、抗原類似体で被覆したＱＣＭ電極は総て、選択的抗体、すなわち、分析対象物抗原に特異的な抗体によって活性化される。図４はまた、予め選択された抗原の１つ（２ｎｇのアンフェタミン）を含有するサンプルを導入した後に応答を示す。セルの１つで振動数に正の応答が見られるのは、電極の１つのみ、すなわち、アンフェタミン類似体被覆と、抗体の１つとしてアンフェタミンに特異的な抗体を含有する抗体混合物による活性化によって準備された電極のみ、からアンフェタミン抗体の選択的脱離が起こったことによるものである。この系では、コカイン、ヘロインおよびエクスタシー（ＭＤＭＡ）類似体で同じように準備された残りのセルのいずれにも交差反応は見られなかった。
【００４０】
各々所定の抗原に特異的な少なくとも２種類の異なる抗体の、安定化した混合物は、溶離液、抗体混合物および試験溶液アリコートの、圧電結晶を含むセルコンパートメントへの連続流動のための流動手段、および抗体と試験溶液アリコート中の個々の分析対象物の存在の間で相互作用が起こった後に結晶の振動特性の変化を個々に特異的なマイクロバランスによって測定することを含む、個々に作動する圧電結晶マイクロバランスのアレイによる、試験溶液アリコート中の数種の個々の分析対象物を検出するための系において特に有用である。
【００４１】
さらに、この抗体混合物は、分析前に複数の各電極を同時に活性化するのに有用である。
一般に、脱離分析の前に、少量、１〜５０マイクロリットル、例えば、４マイクロリットルの抗体混合物を個々のセルに導入する。この少量が、互いに流体的に接続された順序でセルを流れる。
【００４２】
一般に、バイアル、シリンジ、カセットなどのような市販の、好ましくは使い捨ての容器に、いくつかの電極の初期活性化のため、およびスクリーニング状況下でのいくつかの液体サンプルの測定中に２回目の中間的活性化のための、安定なまたは安定化した抗体混合物を収容する。
【００４３】
本発明の安定化した抗体混合物を含むバイアルの一例としては、
総量１ｍｌ中に、
各抗原に特異的な抗体０．１ｍｇ／ｍｌ、
アルブミン２ｍｇ／ｍｌ、
脱イオン水中、リン酸バッファー（ｐＨ７．４）
を含む。
【００４４】
この安定化した抗体混合物は、特異的な抗原で被覆した少なくとも１つの振動圧電結晶を含むセンサーシステムを用いることで液体中の分析対象物を検出し、少量の特定の抗体、次いで分析対象物（抗原）を含有する液体サンプルを導入し、圧電結晶電極の被覆上での質量変化を、抗原と抗体の間の相互作用から生じる振動特性の変化として検出する方法において有用である。
【００４５】
本方法の感度およびその系のセルの寿命を高めるためには、０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０などの界面活性剤を溶離液に加えるのが有利である。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】ＱＣＭ表面で起こる脱離のメカニズムを示す。注：この図では縮尺を無視している。実際には、抗体は、金属、例えば金表面に結合している薬物分子類似体よりもはるかに大きい。左の図では、薬物分子は、抗体がセンサー上の抗原類似体に付着されているバイオセル(BioCell)（登録商標）に入っている。右の図では、結晶表面上で、溶液中、薬物（すなわち、所定の抗原）分子の存在下、抗体が遊離される。薬物分子と抗体の間の質量比が、質量変化に関して増幅作用を生じさせる。
【図２】実施例で用いられる分析系の略図である。
【図３】それぞれコカイン、ヘロイン、アンフェタミンおよびエクスタシー（ＭＤＭＡ）に特異的な抗体０．１ｍｇ／ｍｌを含有する抗体混合物約４マイクロリットルを注入した後の振動数の低下を示す。
【図４】２ｎｇアンフェタミンを含有するサンプルを、サンプルプラグを液流中にルーピングすることにより注入すると、各セルに入っていくことを示す。図４では、アンフェタミンセルの陽性応答を除けば、他のセルに応答（交差反応）は見られなかった。
【図５】ＴＮＴ  ２ｎｇとコカイン２ｎｇを含有する混合物を４つの連続接続セルに注入した場合を示す。
【図６】ＴＮＴ約２ｎｇを同じセル構成に注入した場合を示す。
【図１】
2007512528.tif 000002
【図２】
2007512528.tif 000003
【図３】
2007512528.tif 000004
【図４】
2007512528.tif 000005
【図５】
2007512528.tif 000006
【図６】
2007512528.tif 000007
【手続補正書】
【提出日】平成17年9月20日(2005.9.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１】
2007512528.tif 000008
【図２】
2007512528.tif 000009
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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