(57)【要約】  本発明は、ヘパラナーゼ活性の調節に関連する疾患、特に乳癌、肺癌、前立腺癌、結腸癌又は膵癌のような癌を治療するためのエノキサパリンの使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヘパラナーゼ活性の調節に関連する疾患を治療するための、但し前記疾患が扁平苔癬であるときを除く、エノキサパリンの使用。
【請求項２】
哺乳動物においてヘパラナーゼ活性が疾患の病理及び／又は症状に寄与する前記疾患を治療する上での、但し前記疾患が自己免疫疾患であるときを除く、エノキサパリンの使用。
【請求項３】
ヘパラナーゼ活性の調節に関連する疾患の治療のための薬剤を製造するための、但し前記疾患が扁平苔癬であるときを除く、エノキサパリンの使用。
【請求項４】
ヘパラナーゼ活性の調節に関連する疾患の治療のための薬剤を製造するための、但し前記疾患が自己免疫疾患であるときを除く、エノキサパリンの使用。
【請求項５】
前記疾患がヘパラナーゼ活性の阻害に関連する、請求項１から４のいずれかに記載の使用。
【請求項６】
前記エノキサパリンを１又はそれ以上の化学療法剤と組み合わせる、請求項１から５のいずれかに記載の使用。
【請求項７】
前記組合せが、同時、個別又は連続使用のための併用製剤である、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
前記化学療法剤が、ドセタキセル、又はパクリタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン又はシクロホスファミドである、請求項６又は７に記載の使用。
【請求項９】
エノキサパリンをドセタキセル及びドキソルビシンと組み合わせる、請求項６又は７に記載の使用。
【請求項１０】
前記疾患が癌である、請求項１から５のいずれかに記載の使用。
【請求項１１】
前記癌が、乳癌、肺癌、前立腺癌、結腸癌又は膵癌である、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
エノキサパリンが転移の発生を低減する、請求項１から１１のいずれかに記載の使用。
【請求項１３】
治療有効量のエノキサパリン又はエノキサパリンと１又はそれ以上の化学療法剤又は医薬として許容されるこの塩との組合せを、同時に又は別々に又は経時的に連続して動物に投与することを含む、ヘパラナーゼ活性の調節に関連する疾患を治療するための、但し前記疾患が扁平苔癬であるときを除く方法。
【請求項１４】
治療有効量のエノキサパリン又はエノキサパリンと１又はそれ以上の化学療法剤又は医薬として許容されるこの塩との組合せを、同時に又は別々に又は経時的に連続して動物に投与することを含む、ヘパラナーゼ活性の調節に関連する疾患を治療するための、但し前記疾患が自己免疫疾患であるときを除く方法。
【請求項１５】
前記疾患がヘパラナーゼ活性の阻害に関連する、請求項１３又は１４に記載の方法。
【請求項１６】
エノキサパリンの同時、個別又は連続投与を含む、１又はそれ以上の化学療法剤の作用を増強する方法。
【請求項１７】
前記化学療法剤が、ドセタキセル、パクリタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン又はシクロホスファミドである、請求項１３から１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
エノキサパリンをドセタキセル及びドキソルビシンと組み合わせる、請求項１３から１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
前記疾患が癌である、請求項１３、１４又は１６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヘパラナーゼ活性の調節に関連する疾患を治療するためのエノキサパリンの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
エノキサパリン（Ｌｏｖｅｎｏｘ（商標）、Ｃｌｅｘａｎｅ（商標））は、中又は高危険度手術における静脈血栓塞栓性疾患の予防的治療、血液透析の間の体外循環系における凝固の予防、全身性深静脈血栓症の治療、及びアスピリンとの併用で、不安定狭心症及び急性非Ｑ波心筋梗塞のために市販されている、低分子量ヘパリンである。エノキサパリンはまた、中枢神経系の外傷（国際公開公報第ＷＯ９８／５３８３３号）及び脳水腫（国際公開公報第ＷＯ９８／５３８３４号）の予防及び／又は治療においても有用である。エノキサパリンはまた、運動ニューロン疾患（国際公開公報第ＷＯ００／３５４６２号）の予防及び／又は治療において、及び脳虚血の治療（国際公開公報第ＷＯ０１／４９２９８号）のためにも有用である。
【０００３】
癌を有する患者は、重大な整形外科手術後の危険度と同様の、静脈血栓塞栓症（ＶＴＥ）の高い危険度を有する。血栓症は、癌を有する患者における２番目に主要な死亡原因である（Ｇｒｅｅｎ  Ｋ．Ｂ．ら、Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．  １０：４９９−５３０，１９９６）。癌を有する患者はしばしば、深静脈血栓症（ＤＶＴ）又は肺塞栓症（ＰＥ）の治療又は予防のためのヘパリン（未分画ヘパリン（ＵＦＨ）及び低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ））に関する臨床試験に包含される。いくつかの臨床試験は、ＵＦＨを有する癌患者（Ｌｅｂｅａｕ  Ｂ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  ７４：３８−４５，１９９４；Ｚａｃｈａｒｓｋｉ  Ｌ．ら、Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．８０：１０−２３，１９９８）及びＬＭＷＨを有する癌患者（Ｂｅｒｇｑｖｉｓｔ  Ｄ．ら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．  Ｍｅｄ．３４６：９７５−９８０，２００２；ｖｏｎ  Ｔｅｍｐｅｌｈｏｆｆ  Ｇ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．１０：８１５−８２４，２０００）における生存率の改善を報告した。転移性非小細胞肺癌を有する化学療法ナイーブ患者でのドセタキセルプラスエノキサパリンの１５名の患者における小さな第ＩＩ相試験で、エノキサパリンは、ドセタキセルで治療したときの癌患者における血栓事象を予防するために使用され、患者において血管新生タンパク質ＴＧＦ−β１レベルを有意に低下させることが報告されている（Ｒｏｂｅｒｔ  Ｆ．ら、Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  ４２：２３７−２４５，２００３）。従ってこれら試験は、静脈血栓症及び肺塞栓症の予防及び／又は治療に関連した癌治療におけるヘパリンの役割を示唆した。
【０００４】
悪性疾患の病態生理学は複雑で多因子性である。関与する過程の中で、炎症、トロンビン及びフィブリン形成、癌細胞増殖、血管新生、癌細胞の移動（転移）は、疾患の主要成分として認識されている。
【０００５】
癌細胞移動（転移）は、特に細胞外基質の分解に依存する。エンドグリコシダーゼのファミリーであるヘパラナーゼは、細胞浸潤を促進する基質分解を惹起する。ヘパラナーゼ活性は、転移の間の炎症細胞及びまた腫瘍細胞の血管外遊出のような種々の生物学的過程に関与する。ヘパラナーゼ活性は、様々な正常及び悪性細胞及び組織、中でも特に内皮細胞、血小板、マスト細胞、好中球、マクロファージ、Ｔ及びＢリンパ球、リンパ腫、黒色腫及び癌腫において認められる。１個の単一遺伝子の産物である、ヒト血小板、マウスマクロファージ及び黒色腫細胞からの異なるヘパラナーゼが記述されている（Ｖｌｏｄａｖｓｋｙ  Ｉ．ら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．７：７９３−８０２，１９９９）。
【０００６】
この酵素の通常の基質は、高い基質特異性を有する、ヘパラン硫酸である。ヘパラン硫酸はヘパラナーゼによって切断され、この分解は多数の病理学的影響を及ぼす。実際に、ヘパラン硫酸は正常及び病的過程において、中でも組織修復、炎症、自己免疫、腫瘍増殖及び転移において、中心的役割を果たす。ヘパラン硫酸の酵素分解は、炎症及び癌転移の発現に関与する可能性が高い（Ｈｕｌｅｔｔｅ  Ｍ．Ｄ．ら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．７：８０３−８０９，１９９９）。
【０００７】
いくつかの文書が、種々のヘパリン種の存在下でのヘパラナーゼ活性の阻害を論じている（Ｖｌｏｄａｖｓｋｉ  Ｉ．ら、Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．３１３：３１７−２７，１９９２；Ｐａｒｉｓｈ  Ｃ．  Ｒ．ら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ４０：５１１−５１８，１９８７；Ｂｉｔａｎ．Ｍ．ら、Ｉｓｒ．Ｊ．Ｍｅｄ  Ｓｃｉ．３１：１０６−１１８，１９９５）。ヘパリンはヘパラナーゼ阻害因子とみなされ、この阻害活性は免疫調節作用に結びつく（Ｇｏｒｓｋｉ  Ａら、ＦＡＳＥＢ  Ｊ．５：２２８７−２２９１，１９９１）。これはヘパラナーゼの阻害剤としてのエノキサパリンの使用を促すものでは全くない。未分画ヘパリンと比較して、エノキサパリンが異なる活性を有することは周知である。エノキサパリンは６００から１４，０００ダルトンの範囲のフラグメントの混合物であり、一方未分画ヘパリンは５，０００から３０，０００ダルトンの範囲のフラグメントの混合物である。６００から５，０００ダルトンのフラグメントは未分画ヘパリンにおいては無視し得る。これらの６００から５，０００ダルトンのフラグメントはエノキサパリンの６０％以上を占める。
【０００８】
Ｐａｃｈｅｃｏの論文の中で（Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｔｒｅａｔ．１２：１２３−１２６，２００１）、扁平苔癬の治療のために「低分子量ヘパリン（エノキサパリン）はヘパラナーゼの発現を阻害することが示された」と引用されている。しかしこの情報は、ＣＤ４＋リンパ球が、これらが内皮基底膜に浸透することを可能にするエンドグリコシダーゼ（ヘパラナーゼ）を産生するために前記阻害が起こるとみなされるという事実に関連して解釈しなければならない。これに加えて、著者は、エノキサパリンをこの必要のある患者に投与したとき扁平苔癬が有効に治療されることだけを明らかにしている。著者は、この作用の原因、例えばＣＤ４＋リンパ球は表皮を攻撃することができないのかどうか、ＣＤ４＋リンパ球はもはや「活性化」されないのかどうか、ＣＤ４＋リンパ球は、エノキサパリンによって阻害されるヘパラナーゼを産生するのかどうかは明らかにしていない。
【０００９】
もう１つの側面として、Ａｍｉｒｋｈｏｓｒａｖｉらの論文（Ｊ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ  １：１９７２−１９７６，２００３）では、チンザパリン（低分子量ヘパリン）が、内皮組織因子系凝固阻害因子（ＴＦＰＩ）の有効な放出の故に、Ｂ１６黒色腫モデルのマウスにおいて肺腫瘍の転移を阻害することが報告された。加えて、エノキサパリンは他のＬＭＷＨに比べて活性の大きな変動性を有する。大部分のＬＭＷＨのように、エノキサパリンは未分画ヘパリンソース物質から生じる。ＬＭＷＨは、化学的又は酵素的解重合の多様な工程を通して、大きな未分画ヘパリン鎖からより小さなものへの分解によって製造される。各々のＬＭＷＨ製造者は解重合の異なる工程を利用する。これは、異なる化学構造を備え、従って異なる薬理活性を有するＬＭＷＨを生じさせる。Ｆａｒｅｅｄ  Ｊ．らの論文は（Ａｎｎａｌｓ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ａｃａｄｅｍｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ５５６，１９８９）、薬理学的見地に加えて生化学的観点からも、全てのＬＭＷＨが等しいわけではないことを示している。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
癌を有する患者は治療の選択肢が限られており、これらの限られた治療に対する応答は、特に転移発生の抑制に関して、最良とは言えない。癌治療に対する応答、転移の抑制及び細胞傷害性物質の腫瘍細胞内部への浸透改善を増強することができる新しい薬剤を提供することが現在も求められている。これは、これらの患者のために生存率の改善とより良いクオリティ・オブ・ライフをもたらすと期待される。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
今や、意外にも、エノキサパリンは疾患に関与するヘパラナーゼ活性を調節することが見出された。特にエノキサパリンはヘパラナーゼ活性を阻害することが認められた。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
１つの実施態様では、本発明は、ヘパラナーゼ活性の調節に関連する疾患を治療するための、但し前記疾患が扁平苔癬であるときを除く、エノキサパリンの使用に関する。
【００１３】
もう１つの実施態様では、本発明は、ヘパラナーゼ活性が疾患の病理及び／又は症状に寄与する、但し前記疾患が扁平苔癬であるときを除く、哺乳動物において疾患を治療する上でのエノキサパリンの使用に関する。
【００１４】
もう１つの実施態様では、本発明は、ヘパラナーゼ活性が疾患の病理及び／又は症状に寄与する、但し前記疾患が自己免疫疾患であるときを除く、哺乳動物において疾患を治療する上でのエノキサパリンの使用に関する。
【００１５】
本発明はまた、ヘパラナーゼ活性の調節に関連する疾患を治療するための、但し前記疾患が自己免疫疾患であるときを除く、エノキサパリンの使用に関する。
【００１６】
例えば前記自己免疫疾患は、多発性硬化症、自己免疫性脳脊髄炎及び扁平苔癬を含むがこれらに限定されない群から選択される。特に、前記自己免疫疾患は扁平苔癬である。
【００１７】
本発明はまた、ヘパラナーゼ活性が疾患の病理及び／又は症状に寄与する、但し前記疾患が主として中枢神経系の炎症に関連するときを除く、哺乳動物において疾患を治療する上でのエノキサパリンの使用に関する。
【００１８】
もう１つの実施態様では、本発明は、ヘパラナーゼ活性の調節に関連する疾患の治療のための薬剤を製造するための、但し前記疾患が扁平苔癬であるときを除く、エノキサパリンの使用に関する。
【００１９】
もう１つの実施態様では、本発明は、ヘパラナーゼ活性の調節に関連する疾患の治療のための薬剤を製造するための、但し前記疾患が自己免疫疾患であるときを除く、エノキサパリンの使用に関する。
【００２０】
もう１つの実施態様では、本発明は、より特定すると、疾患がヘパラナーゼの阻害に関連する、上述したエノキサパリンの使用に関する。
【００２１】
上記疾患は、好ましくは癌である。
【００２２】
前記癌は、乳癌、肺癌、前立腺癌、結腸癌又は膵癌を含むがこれらに限定されない群から選択される。
【００２３】
特に好ましい癌は乳癌である。
【００２４】
もう１つの実施態様では、本発明は、より好ましくは、エノキサパリンを１又はそれ以上の化学療法剤と組み合わせる、上述した使用に関する。
【００２５】
前記化学療法剤は、ドセタキセル（ＩＮＮ）、パクリタキセル（ＩＮＮ）、シクロホスファミド（ＩＮＮ）又はアントラサイクリンを含むがこれらに限定されない群から選択される。
【００２６】
好ましいアントラサイクリンは、特にドキソルビシン（ＩＮＮ）である。
【００２７】
好ましいアントラサイクリンは、特にエピルビシン（ＩＮＮ）である。
【００２８】
特に好ましい化学療法剤はドセタキセルである。
【００２９】
もう１つの実施態様では、本発明は、より好ましくは、エノキサパリンをドセタキセル及びドキソルビシンと組み合わせる、上述した使用に関する。
【００３０】
例えば本発明はまた、ドセタキセル、ドキソルビシン及びシクロホスファミドと組み合わせたエノキサパリンの使用に関する。
【００３１】
上述した好ましい実施態様への言及は、個々の好ましい群の全ての組合せを包含することが意図されている。
【００３２】
もう１つの実施態様では、本発明は、より特定すると、エノキサパリンを１又はそれ以上の化学療法剤と組み合わせ、前記組合せが同時、別個又は連続使用のための併用製剤である、上述した使用に関する。
【００３３】
もう１つの実施態様では、本発明は、エノキサパリンが転移の発生を低減する、上述したエノキサパリンの使用に関する。
【００３４】
もう１つの特別な実施態様では、本発明は、治療有効量のエノキサパリン又はエノキサパリンと１又はそれ以上の化学療法剤又は医薬として許容されるこの塩との組合せを、同時に又は別々に又は経時的に連続して動物に投与することを含む、ヘパラナーゼ活性の調節に関連する疾患を治療するための、但し前記疾患が扁平苔癬であるときを除く方法に関する。
【００３５】
もう１つの実施態様では、本発明は、治療有効量のエノキサパリン又はエノキサパリンと１又はそれ以上の化学療法剤又は医薬として許容されるこの塩との組合せを、同時に又は別々に又は経時的に連続して動物に投与することを含む、ヘパラナーゼ活性の調節に関連する疾患を治療するための、但し前記疾患が自己免疫疾患であるときを除く方法に関する。
【００３６】
もう１つの実施態様では、本発明は、より特定すると、疾患がヘパラナーゼの阻害に関連する、上述した方法に関する。
【００３７】
もう１つの実施態様では、本発明は、エノキサパリンの同時、別個又は連続投与を含む、１又はそれ以上の化学療法剤の作用を増強する方法に関する。
【００３８】
上記化学療法剤は、ドセタキセル、パクリタキセル、シクロホスファミド又はアントラサイクリンを含むがこれらに限定されない群から選択される。
【００３９】
好ましいアントラサイクリンは、特にドキソルビシンである。
【００４０】
好ましいアントラサイクリンは、特にエピルビシンである。
【００４１】
特に好ましい化学療法剤はドセタキセルである。
【００４２】
本発明は、より好ましくは、エノキサパリンをドセタキセル及びドキソルビシンと組み合わせる、上述した方法に関する。
【００４３】
例えば本発明はまた、エノキサパリンをドセタキセル、ドキソルビシン及びシクロホスファミドと組み合わせる、上述した方法に関する。
【００４４】
上述した好ましい実施態様への言及は、個々の好ましい群の全ての組合せを包含することが意図されている。
【００４５】
上記疾患は、好ましくは癌である。
【００４６】
前記癌は、乳癌、肺癌、前立腺癌、結腸癌又は膵癌を含むがこれらに限定されない群から選択される。
【００４７】
特に好ましい癌は乳癌である。
【００４８】
ヘパラナーゼを阻害するこの能力に関するエノキサパリンの評価を以下のように実施した。
【００４９】
放射標識ヘパリン／ヘパラン硫酸（ＨＳ）をヘパラナーゼによって分解し、ゲル透過クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）及び分画の液体シンチレーション計数によって測定することができるＨＳの低分子量フラグメントを生じる。
【００５０】
ブタ腸粘膜からの未分画ヘパリン（ナトリウム塩）（Ｉａグレード、１８３ＵＳＰ／ｍｇ）をＳｉｇｍａ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｄｅｉｓｅｎｈｏｆｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手した。ヘパリチナーゼ（ＨＰリアーゼ（ＥＣ４．２．２．８））をＳｅｉｋａｇａｋｕ（Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）から購入した。ＴＳＫ  ４０００をＴｏｓｏ  Ｈａａｓから、及びガードカラムを備えるセファロースＱカラムをＰｈａｒｍａｃｉａ／ＬＫＢ（Ｆｒｅｉｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手した。
【００５１】
ヒト頚線維芽細胞系を使用して、代謝標識によって３５Ｓ標識ヘパラン硫酸（プロテオグリカン）を調製した。この細胞系は、シンデカン及びグリピカンなどの種々のヘパラン硫酸プロテオグリカン（ＨＳ−ＰＧ）を比較的大量に生産することが示されている（Ｄｒｚｅｎｉｅｋら、Ｂｌｏｏｄ  ９３：２８８４−２８９７，１９９９）。
【００５２】
標識は、細胞を約１×１０−６細胞／ｍｌの細胞密度で３３μＣｉ／ｍｌ  ３５Ｓ硫酸と共に組織培養培地中で２４時間インキュベートすることによって実施する。この後上清を収集し、プロテアーゼ阻害剤ＰＭＳＦ（フッ化フェニルメチルスルホニル）（１ｍｍｏｌ／Ｌ）を添加した。ヘパラン硫酸プロテオグリカン（ＨＳ−ＰＧ）をセファロースＱカラムでの陰イオン交換クロマトグラフィーによって精製した。試料は比較的高い量のヘパラン硫酸プロテオグリカンを含んでおり、酵素ヘパラナーゼの特異性の故に、コンドロイチン硫酸／デルマタン硫酸−プロテオグリカンの除去は必要なかった。
【００５３】
ヘパラナーゼをヒト末梢血白血球（ＰＢＬ、軟膜）から調製し、フィコール勾配手順によって多形核細胞（ＰＭＮ）を濃縮した。単離したＰＭＮを２．５×１０−７細胞／ｍｌに調整し、４℃で１時間インキュベートした。この後、ヘパラナーゼを含む上清を収集し、ｐＨ６．２に調整して（２０ｍＭクエン酸−リン酸緩衝液）、直ちに使用するか又はアリコートに分けて−２０℃で凍結保存した。
【００５４】
約２２００ｄｐｍ／ｍｌに調整した３５Ｓ標識ヘパラン硫酸（プロテオグリカン）２００μｌを、ＰＭＮ上清を含むヘパラナーゼ１μｌと共に３７℃で１８時間インキュベートする。この後、試料２００μｌをＴＳＫ  ４０００ゲル透過クロマトグラフィーカラム（ＦＰＬＣ）に適用し、分画を収集して、液体シンチレーション計数によって分析した。以下の式に従って分解を算定した：
【００５５】
％分解＝［［Σ計数（ｄｐｍ）分画２０−３３（ＨＥＰ）−Σ計数（ｄｐｍ）分画２０−３３（ＣＯＮＴ）］／［総計数（ｄｐｍ）分画１２−３３（ＣＯＮＴ）］］×１００
【００５６】
例えば、ヘパラナーゼ処理後の試料の分画２０−３３中の計数の合計（ｄｐｍ）から対照試料のバックグラウンド計数（ｄｐｍ）（分画２０−３３）を差し引いた。この合計をカラムに適用した総計数（分画１２−３３）で除して％分解を算定した。種々のクロマトグラフィーの総計数を２２００計数／ｄｐｍに基準化するために補正係数を使用した。結果をパーセント分解として示す。阻害実験では、対照試料（ヘパラナーゼを含む）の分解を１００％（分解）に設定し、これに従って％阻害値を算定した。スルファターゼ活性は検出できなかったので、スルファターゼ活性についての補正は必要なかった。
【００５７】
ヘパラナーゼの以下の阻害因子、未分画ヘパリン（ＵＦ−Ｈ）及びエノキサパリン（ＷＳＤ  ３０１４）を、３つの異なる濃度で上述したアッセイにおいて試験した。重量ベースでの比較を行った。データをヘパラナーゼ活性のパーセント阻害として表わす。
【００５８】
得られた結果は以下の通りである。
【００５９】
最初に、この試験のためにヘパラナーゼアッセイを最適化した。実際的な理由から、分解アッセイでのインキュベーション時間は１８時間に設定した。標識効果及びヘパラン硫酸（プロテオグリカン）含量に従って、１バッチの標識ヘパラン硫酸（プロテオグリカン）で全てのアッセイを実施できるように、ヘパラン硫酸（プロテオグリカン）の総計数を約２２００ｄｐｍ／試料に設定した。図１ａは、未変性試料のＴＳＫ  ４０００ゲル透過クロマトグラフィーを示す。図１ｂは、ヘパラナーゼによって誘導される試料の分子量分布のシフトを示す。この後、ヘパラン硫酸プロテオグリカンの約８０％の分解を可能にするヘパラナーゼの量を測定した（試料は約３５％のヘパラン硫酸プロテオグリカン及び約６５％のコンドロイチン／デルマタン硫酸−プロテオグリカンを含んだ）。従って、約１０−８０％分解の範囲は比較的線形であり、阻害因子の作用を測定するのに適する。図１ｃは、１μｇ／ｍｌ未分画ヘパリン（ＵＦＨ）のヘパラナーゼ活性への作用を示し、９７．３％の阻害を生じている。
【００６０】
アッセイの確立後、ブタ腸粘膜からの未分画ヘパリン（ＵＦＨ）の作用を試験した。図２は用量依存的阻害を示す。１μｇ／ｍｌの未分画ヘパリン（ＵＦＨ）濃度（最終濃度）で、ヘパラナーゼ活性のほぼ完全な阻害が認められた。
【００６１】
図３は、エノキサパリン（ＷＳＤ３０１４）の用量依存的阻害を示す。このデータから、エノキサパリンはヘパラナーゼの強力な阻害活性を示すと結論を出すことができる。
【００６２】
一般に、当業者は、個人的知識と本出願の開示に基づき、前記化学療法剤、特にドセタキセル、パクリタキセル、ドキソルビシン、シクロホスファミド及びエピルビシンのための適切な製剤を確認することができる。好ましくは、適切な製剤は前記化学療法剤の市販製剤である。
【００６３】
一般に、当業者は、個人的知識と本出願の開示に基づき、エノキサパリンのための適切な製剤を確認することができる。
【００６４】
例えば本発明の薬剤は、エノキサパリンの塩を、不活性又は生理的に活性であり得る、他の何らかの製薬上適合性の製品と組み合わせた組成物の形態の塩（好ましくはナトリウム又はカルシウム）又はエノキサパリンから成る。
【００６５】
本発明に従った薬剤は、静脈内経路で、皮下経路で及び経口的に使用できる。静脈内又は皮下投与のための滅菌組成物は、一般に水溶液である。これらの組成物はまた、佐剤、特に湿潤剤、等張化剤、乳化剤、分散剤及び安定剤も含有し得る。滅菌はいくつかの方法で、例えば無菌ろ過によって、滅菌剤を組成物に組み込むことによって、又は照射殺菌によって実施できる。これらはまた、使用時に滅菌水又は他の何らかの注射用滅菌媒質に溶解することができる、滅菌固体組成物の形態でも調製し得る。
【００６６】
経口投与のための液体組成物として、水、エタノール、グリセロール、植物油又はパラフィン油などの不活性希釈剤を含有する、医薬として許容される溶液、懸濁液、乳剤、シロップ及びエリキシルを使用することが可能である。これらの組成物は、希釈剤以外の物質、例えば湿潤剤、甘味料、増粘剤、香味料又は安定剤を含有し得る。
【００６７】
一般にエノキサパリンは、単独で又は１又はそれ以上の化学療法剤と組み合わせて、当技術分野において公知である通常の許容される方式のいずれかによって治療有効量で投与される。一般に化学療法剤は、単独で又は１又はそれ以上の化学療法剤と組み合わせて、当技術分野において公知である通常の許容される方式のいずれかによって治療有効量で投与される。治療有効量は、疾患の重症度、被験者の年齢及び相対的健康度、使用する化合物の効力及び他の因子に依存して広く異なり得る。一般に、当業者は、個人的知識と本出願の開示に基づき、所与の疾患を治療するための化合物の治療有効量を確認することができる。
【００６８】
例えばドセタキセルの用量は、７５ｍｇ／ｍ２／日で、１時間の静脈内（ｉｖ）注入を３週間の間隔で４回反復する。エピルビシンの用量は、５０ｍｇ／ｍ２／日のｉｖ注入を３週間の間隔で４回反復する。
【００６９】
例えばエノキサパリンの可能用量は、１０から４０ｍｇ注射／日の範囲であり得、１回目のｉｖ注射に続いて、全ての治療期間中１日１回の皮下（ｓｃ）注射を反復する。
【００７０】
一般に、医師は、治療する被験者の年齢、体重及び被験者に特異的な他の全ての因子の関数として適切な用量を決定する。
【００７１】
好ましくは、適切な用量は、エノキサパリンの市販用量及び前記化学療法剤の市販用量である。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１ａ】未変性試料のＴＳＫ  ４０００ゲル透過クロマトグラフィーを示す。
【図１ｂ】ヘパラナーゼによって誘導される試料の分子量分布のシフトを示す。
【図１ｃ】１μｇ／ｍｌ未分画ヘパリン（ＵＦＨ）のヘパラナーゼ活性への作用を示す。
【図２】ＵＦＨの用量依存的阻害を示す。
【図３】エノキサパリン（ＷＳＤ３０１４）の用量依存的阻害を示す。
【図１ａ】
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【図１ｂ】
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【図１ｃ】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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