(57)【要約】  チャンバ中の少なくとも１つの担体部材（15）上に収容された少なくとも１つの生物学的試料を処理するための手段を含む、生物学的試料の処理のための装置であって、流体を収容可能な少なくとも１つのレザーバー（18）が、該少なくとも１つの生物学的試料の大部分に隣接および／または対向するチャンバ内の表面上に配置されることを特徴とする、生物学的試料の処理のための装置。好ましくは、該装置は少なくとも１つの生物学的試料を保持する少なくとも１つの担体部材（15）を支持するように配置される底面部材（12）および少なくとも１つの流体レザーバー（18）を含む蓋（14）を含む。水を充填したレザーバーは湿度を提供し、試料が完全に乾燥するのを妨げる。
2007517509.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
チャンバ中の少なくとも１つの担体部材（15）上に収容された少なくとも１つの生物学的試料を処理するための手段を含む、生物学的試料の処理のための装置であって、流体を収容可能な少なくとも１つのレザーバー（18）が、該少なくとも１つの生物学的試料の大部分に隣接および／または対向するチャンバ内の表面上に配置されることを特徴とする、生物学的試料の処理のための装置。
【請求項２】
レザーバー（18）が、担体部材（15）上の試料の上方に配置されることを特徴とする、請求項２記載の方法。
【請求項３】
少なくとも１つの生物学的試料を保持する少なくとも１つの担体部材（15）を支持するように配置される底面部材（12）を含み、少なくとも1つの流体レザーバー（18）を含む蓋（14）をさらに含むことを特徴とする、請求項２記載の装置。
【請求項４】
蓋部材14に、少なくとも1つの流体レザーバー（18）を支持し、蓋14を閉鎖したとき生物学的試料上方に位置するように配置され、それにより、図２に示すように底面部材12を覆う、グリッド、スロットおよび／または指状突起（図示せず）などの保持手段が備わっていることを特徴とする、請求項３記載の装置。
【請求項５】
レザーバー（18）が、担体部材（15）から5 cm未満、好ましくは担体部材（15）から1.0 cm未満、さらにより好ましくは担体部材（15）から0.50 cm未満離れて配置されることを特徴とする、請求項１〜４いずれか記載の装置。
【請求項６】
担体部材（15）上の試料に隣接および／または対向するレザーバー（18）の巨視的表面積が、担体部材総面積の10％より大きく、好ましくは担体部材総面積の30％より大きく、さらにより好ましくは60％より大きいことを特徴とする、請求項１〜５いずれか記載の装置。
【請求項７】
担体部材（15）上の試料を加熱するための加熱手段を含むことを特徴とする、請求項１〜６いずれか記載の装置。
【請求項８】
担体部材（15）の温度を制御し、それにより担体部材（15）上の生物学的試料の温度を制御する温度制御手段を含むことを特徴とする、請求項７記載の装置。
【請求項９】
温度制御手段に接続された少なくとも１つの温度センサーを含むことを特徴とする、請求項８記載の装置。
【請求項１０】
加熱ワイヤを含む加熱手段を特徴とする、請求項７記載の装置。
【請求項１１】
誘導加熱を含む加熱手段を特徴とする、請求項７記載の装置。
【請求項１２】
担体部材（15）上の試料を冷却するための冷却手段を含む温度制御手段を特徴とする、請求項８記載の装置。
【請求項１３】
ペルチェ素子および／または少なくとも１つのファンを含む冷却手段を特徴とする、請求項１２記載の装置。
【請求項１４】
装置がレザーバー（18）を加熱するための加熱手段を含むことを特徴とする、請求項１記載の装置。
【請求項１５】
装置の底面部材（12）および／または蓋（14）の加熱手段または冷却手段を作動させることによってレザーバー（18）および／または試料の温度を変化させることにより、チャンバ内の相対湿度の制御を可能にする温度制御手段を有することを特徴とする、請求項７〜１４いずれか記載の装置。
【請求項１６】
担体部材（15）上の試料を加熱するための加熱手段およびレザーバー（18）を加熱するための加熱手段が、レザーバー（18）が試料よりも高温となるか、またはその逆となり得るように、別々に制御され、異なる温度に加熱され得ることを特徴とする、請求項７〜１５いずれか記載の装置。
【請求項１７】
レザーバー（18）が実質的に平坦なシートの形状であることを特徴とする、請求項１記載の装置。
【請求項１８】
レザーバー（18）の厚さが長さの1/10未満であることを特徴とする、請求項１７記載の装置。
【請求項１９】
レザーバー（18）が、閉じられた位置では温度制御されるプレート（16）上に位置する担体部材（15）上の少なくとも１つの生物学的試料を覆う、蓋（14）に取り付けられていることを特徴とする、請求項１８記載の装置。
【請求項２０】
レザーバー（18）が、閉じられた位置では個々の温度制御されるプレート（16）を有する個々のスライドを覆う、蓋（14）であることを特徴とする、請求項１８記載の装置。
【請求項２１】
レザーバー（18）が、閉じられた位置ではいくつかの温度制御されるプレート（16）上に位置するいくつかのスライドを覆う、蓋（14）であることを特徴とする、請求項１８記載の装置。
【請求項２２】
レザーバー（18）が、波形表面などの湾曲した表面構造および不均一な表面を有することを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項２３】
流体が液体であり、レザーバー（18）が、液体を吸着および／または吸収ならびに脱着および／または放出できる媒体を含むことを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項２４】
流体が実質的に純粋な水であることを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項２５】
流体が抗菌剤などの添加剤を含有する水であることを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項２６】
流体が、ホルムアミド、水性バッファー、アルコール、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、N-メチル-ピロリドン、非水性バッファーまたは無機塩、界面活性剤、pHバッファー、有機溶媒、グリセロール、油および／もしくは水、またはその混合物を含有する複合混合物を包含することを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項２７】
レザーバー（18）が、非常に大きい内表面積を有し、流体を収容できる複数の空隙を含む材料で作製されたデバイスであることを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項２８】
レザーバー（18）が、非常に大きい内表面積を有する材料で作製されたデバイスであり、表面の少なくとも大部分が親水性であることを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項２９】
レザーバー（18）が、ポリマー繊維複合物およびブレンド、ガラス繊維材料、発泡多孔質ポリマー、多孔質セラミックス、rockwoolTM、木材パルプ、段ボール、皮革またはセルロース系材料を含む群からの材料で作製されていることを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項３０】
レザーバー（18）が、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリウレタン、ポリスルホン、ポリビニル、ポリアクリル組成物、エチレン酢酸ビニル、ビスコースレーヨン、ポリスチレン、巨大網状ポリスチレン、脂肪族、またはフェノールホルムアルデヒド縮合ポリマー、エポキシ、綿、多糖、変性多糖類、木材パルプ、炭酸カルシウム、シリカゲル、ガラス繊維、ベントナイト、パーライトおよびゼオライトを含む群からの任意の組成物を含む材料で作製されていることを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項３１】
レザーバー（18）が、人工または合成ポリマー系の接着、非接着、織ったまたは編んだ繊維、微細繊維、織物および房状織物を含む群からの材料で作製されていることを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項３２】
レザーバーが（18）、接着ポリアミド、ポリエステル、ポリオレフィンおよびセルロースアセテート繊維を含む群からの材料で作製されていることを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項３３】
該材料が、親水性変性ポリプロピレンおよびポリエチレン微細繊維の不織および接着のブレンドで作製されていることを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項３４】
該材料が、薄膜壁に保持された繊維または他の隙間のある材料の束で作製されていることを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項３５】
レザーバー（18）に、抗菌剤または他の保護剤を含漬させることを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項３６】
レザーバー（18）材料の型、形状および大きさが、液体表面張力と釣り合うように表面特性が最適となるように選択されることを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項３７】
レザーバー（18）材料が、0.050〜1.5グラム/cm3、好ましくは0.075〜0.75グラム/cm3の密度を有することを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項３８】
レザーバー（18）が、１つの担体部材（15）あたり少なくとも所定の最小容量の液体を保持する能力を有することを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項３９】
レザーバー（18）が、１つの担体部材あたり合計少なくとも10マイクロリットル（μl）、より好ましくは、１つの担体部材あたり合計100マイクロリットル（μl）より多く、例えば、１つの担体部材あたり合計200マイクロリットル（μl）より多く、さらに１つの担体部材あたり合計500マイクロリットル（μl）より多く、例えば、１つの担体部材あたり合計1000マイクロリットル（μl）より多くを保持する能力を有することを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項４０】
さらなるレザーバー（18）が、生物学的試料と反対側の吸収用および脱着用レザーバー（18）との流体による連絡のための蓋（14）の上面上に配置されることを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項４１】
レザーバー（18）が、液体を吸着および／または吸収ならびに脱着および／または放出できる媒体を含むことを特徴とする、請求項１〜４０いずれか記載の装置のためのレザーバー（18）。
【請求項４２】
レザーバー（18）が実質的に平坦なシートまたはプレートの形状であることを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項４３】
レザーバー（18）の厚さが長さの1/10未満であることを特徴とする、請求項４２記載のレザーバー（18）。
【請求項４４】
レザーバー（18）が、波形表面などの湾曲した表面構造および不均一な表面を有することを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項４５】
担体部材（15）上の試料に隣接および／または対向するレザーバー（18）の巨視的表面積が、担体部材総面積の10％より大きく、好ましくは担体部材総面積の30％より大きく、さらにより好ましくは60％より大きいことを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項４６】
レザーバー（18）が、流体を収容できる複数の空隙を含む非常に大きい内表面積を有する材料で作製されたデバイスであることを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項４７】
レザーバー（18）が、非常に大きい内表面積を有する材料で作製されたデバイスであり、ここで表面（１つまたは複数）の少なくとも大部分は親水性であることを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項４８】
レザーバー（18）が、ポリマー系繊維複合物およびブレンド、ガラス繊維材料、発泡多孔質ポリマー、多孔質セラミックス、rockwoolTM、木材パルプ、段ボール、皮革またはセルロース系材料を含む群からの材料で作製されることを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項４９】
レザーバー（18）が、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリウレタン、ポリスルホン、ポリビニル、ポリアクリル組成物、エチレン酢酸ビニル、ビスコースレーヨン、ポリスチレン、巨大網状ポリスチレン、脂肪族、またはフェノール-ホルムアルデヒド縮合ポリマー、エポキシ、綿、多糖、変性多糖類、木材パルプ、炭酸カルシウム、シリカゲル、ガラス繊維、ベントナイト、パーライトおよびゼオライトを含む群からの任意の組成物を含む材料で作製されることを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項５０】
レザーバー（18）が、人工または合成ポリマー系の接着、非接着、織ったまたは編んだ繊維、微細繊維、織物および房状織物を含む群からの材料で作製されることを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項５１】
レザーバー（18）が、接着ポリアミド、ポリエステル、ポリオレフィンおよびセルロースアセテート繊維を含む群からの材料で作製されることを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項５２】
材料が、親水性変性ポリプロピレンおよびポリエチレン微細繊維の不織および接着のブレンドで作製されることを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項５３】
材料が、薄膜壁に保持された繊維または他の隙間のある材料の束で作製されることを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項５４】
レザーバー（18）に、抗菌剤または他の保護剤を含浸させ得ることを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項５５】
レザーバー材料の型、形状および大きさが、液体表面張力と釣り合うように表面特性が最適となるように選択されることを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項５６】
レザーバー材料が0.050〜1.5グラム/cm3、好ましくは0.075〜0.75グラム/cm3の密度を有することを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項５７】
レザーバーが、１つの担体部材（15）あたり少なくとも所定の最小容量の液体を保持する能力を有することを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項５８】
レザーバーが、１つの担体部材あたり合計少なくとも10マイクロリットル、より好ましくは、１つの担体部材あたり合計100マイクロリットルより多く、さらにより好ましくは、１つの担体部材あたり合計200マイクロリットルより多く、またさらにより好ましくは、１つの担体部材あたり合計500マイクロリットルより多く、最も好ましくは、１つの担体部材あたり合計1000マイクロリットルより多くを保持する能力を有することを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項５９】
水を充填した請求項４１〜５８いずれか記載のレザーバー（18）を近接して存在させることにより、試料上方で実質的に少なくとも80％の相対湿度を維持することを特徴とする、少なくとも１つの生物学的試料が担体部材（15）上に配置される、試料の視覚的解析のために染色することにより試料を調製するための処理のための生物学的試料の処理方法。
【請求項６０】
水を充填したレザーバー（18）を近接して存在させることにより、試料上方において実質的に少なくとも85％の相対湿度、好ましくは少なくとも90％、より好ましくは少なくとも95％相対湿度を維持することを特徴とする、請求項５９記載の方法。
【請求項６１】
担体部材（15）上への試料の配置後にレザーバー（18）に水を供給する、請求項５９記載の方法。
【請求項６２】
請求項５９〜６１いずれか記載の方法を実施するための、請求項１〜４０いずれか記載の装置における請求項４１〜５８いずれか記載のレザーバー（18）の使用。
【請求項６３】
DNAが標的である解析を行なうために試料をハイブリダイズさせる、請求項６２記載の使用。
【請求項６４】
HPV、Her-2、Top2Aに対する、請求項６３記載の使用。
【請求項６５】
RNAが標的である解析を行なうために試料をハイブリダイズさせる、請求項６２記載の使用。
【請求項６６】
HPVに対する、請求項６５記載の使用。
【請求項６７】
IHC解析を行なうための、請求項６２記載の使用。
【請求項６８】
p16、Herファミリー（リン酸化ER/PRを含む）、MIB-1に対する、請求項６７記載の使用。
【請求項６９】
ISH、HPV、HER 2、HER2 FISH、Topo II、テロメア、EGFγ、C-Myc、エプスタインバーウイルス、単純ヘルペスウイルスおよびヒトサイトメガロウイルス、慢性骨髄性白血病（CML）、急性骨髄性白血病（AML）、染色体バンディングおよびペイントを含む群からの解析を行うために試料をハイブリダイズさせる、請求項６２記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、試料処理システムおよび試料処理方法の分野に関する。
本発明は、細胞学および組織学、分子生物学、生化学、免疫学、微生物学および細胞生物学の分野に関する。特に、本発明は、分子細胞遺伝学および免疫組織化学の分野に関し、特に、本発明は、顕微鏡用スライドなどの担体部材上に収容された少なくとも１つの生物学的試料の処理、処置またはさらに染色のための方法および装置に関する。特に、本発明は、処理中の湿度および温度の制御に関する。
【０００２】
本発明が関係し得る適用としては、インサイチューハイブリダイゼーション、蛍光インサイチューハイブリダイゼーション、細胞学、免疫組織化学、特異的染色、およびマイクロアレイ、ならびに潜在的に他の化学的および生物学的適用が特に挙げられる。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
組織学的および細胞学的技術は、医学的診断および研究の補助として、生検材料および他の組織試料を解析するために使用されている。
細胞学は、細胞のすべての正常および異常な成分の構造、ならびにかかる成分の変化、動作および変容の研究である。
【０００４】
細胞は、生きた状態で直接研究されるか、または明視野、蛍光もしくは電子顕微鏡における調査のために死滅（固定）させ、例えば、薄層調製システム、包埋、セクショニングおよび／または染色により調製される。
【０００５】
組織学は、ほとんどの多細胞植物および動物に見られる組織と呼ばれる特化した細胞群の研究である。組織学的調査としては、組織および細胞の死および再生ならびに組織および細胞の傷害に対する反応、癌などの疾患状態またはHPV（ヒトパピローマウイルス）などの侵入性生物の研究が挙げられる。正常組織は特徴的な外観を有するので、疾患組織を同定するために、組織学的検査がしばしば利用される。
【０００６】
インサイチューハイブリダイゼーション（ISH）および免疫組織化学（IHC）解析は、組織学的診断および組織形態学の研究における有用な手段である。
【０００７】
インサイチューハイブリダイゼーション（ISH）、免疫細胞化学および免疫組織化学（IHC）は、検出可能な存在物に結合し得る特異的結合剤を用いることにより、試料中の検出可能な存在物の同定を追求する。
【０００８】
生物学的試料は、本願において、組織学的試料、例えば、組織および細胞検体（細胞株、タンパク質および合成ペプチド、組織、細胞調製物、血液、体液、血液スメア、中期伸展標本（spread）、骨髄、細胞学的検体、薄層調製物、および具体的には顕微鏡スライド上の生物学的試料を含む）などの生物学的試料と理解されたい。
【０００９】
生物学的試料は、さらに、好適には、ホルマリン固定およびパラフィン包埋材料、細胞学的材料、細針吸引物、細胞スメア、剥離性細胞学的検体、接触（touch）調製物、骨髄検体、痰試料、喀出物、口腔スワブ、喉頭スワブ、膣スワブ、気管支吸引物、気管支洗浄液、胃洗浄液、血液、尿、および体液を含む、組織学的材料から選択され得る。これらは、種々の処理に供され得る。
【００１０】
生物学的試料は、またさらに、好適には、ウイルスおよび真菌スワブ、医療機器から採取された試料、獣医学的試料および食品を含む、非ヒト供給源から選択され得る。また、試料は、毛髪、器官、精子および卵細胞ならびにインビトロで成長させた細胞から採取され得る。生物学的試料は、好ましくは、ヒト（Homo sapiens）の生きた、または死後組織に由来するが、真核生物細胞に限定されない。例としては、飲用水中の大腸菌O157などの原核生物の検出が挙げられる。
【００１１】
スライドは、生物学的試料用の任意の適当な固体または半固体の支持体であり得る。特に、支持体は、顕微鏡スライド、マイクロアレイ、膜、フィルター、ポリマースライド、チャンバスライド、皿、またはペトリ皿であり得る。
【００１２】
本発明は、特に-排他的ではないが-インサイチューハイブリダイゼーション（ISH）に関する。以下に、ISHをより詳細に記載する。
【００１３】
ISHは、遺伝子、染色体、細胞、細胞集合体、組織および他の生物学的試料の特徴付けおよび評価のための診断法である。
ISHは、状態、遺伝子異常および感染性微生物によって引き起こされる癌または疾患などの他の疾患状態を評価し、特徴付けるために使用され得る。さらに、これは、細胞を、限定されないが、HPV、HIV（ヒト免疫不全ウイルス）およびHCV（C型肝炎ウイルス）などの感染性因子に関して特徴付けるために使用され得る。
【００１４】
核型解析、PCR、またはLCRで検出することが困難な異数性、遺伝子増幅、遺伝子欠失、RNA発現、RNA輸送、RNA配置および染色体転座、複製、挿入、または逆位などの分子遺伝学的事象は、ISHにより特徴付けられ得る。
【００１５】
ISH技術は、悪性腫瘍のより早期の検出および腫瘍外科処理後のより正確な予後評価を可能にすることにより、癌患者の生存の機会を増加させる潜在性を有し得る。また、該技術は、出生前および出生後遺伝子解析に適用され得る。
【００１６】
さらにまた、該技術は、個々の細胞内の多遺伝子異常の同時検出に使用され得、それにより、アッセイ時間が節約され、検体必要量が限定される。
【００１７】
診断的に重要なISHアッセイの非限定的な例としては、HER-2（HER-2/neuまたはc-erbB2としても知られる）、Topo II（乳癌）、テロマー、EGFγ、C-Myc（乳癌）、N-Myc（神経芽細胞腫）の検出；BCR/ABL（慢性骨髄性白血病）、EWS（ユーイング肉腫）、C-Myc（バーキットリンパ腫、T細胞 ALL）、急性骨髄性白血病（AML）、骨髄増殖性疾患（MPD）、骨髄異形成症候群（MDS）用の転座プローブ対および第17、7、8、9、18、XおよびY染色体用のセントロメアプローブの検出が挙げられる。
【００１８】
他の例としては、エプスタインバーウイルス、単純ヘルペスウイルスおよびヒトサイトメガロウイルス、ヒトパピローマウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス（Varizella zoster virus）ならびにκおよびλ軽鎖mRNAの解析が挙げられる。
【００１９】
また他の例としては、非ヒト起源の試料、例えば、食品媒介性の寄生生物ならびに疾患を引き起こす微生物およびウイルスの検出および解析が挙げられる。
【００２０】
より具体的な例としては、以下が挙げられる：
i）  c-erbB2またはHER-2としても知られ、細胞成長の調節に影響することが示されている遺伝子であるHER-2/neuの解析。該遺伝子は、チロシンキナーゼファミリーの一員である貫膜細胞表面レセプターをコードする。HER-2は、ヒト乳癌、卵巣癌および他の癌で増幅されることが示されている。
【００２１】
ii）  膀胱の移行上皮癌を有する患者の尿検体における9p21遺伝子座の欠損および第3、7、17染色体の異数性の解析。
【００２２】
iii）  8p22に位置するリポタンパク質リパーゼ（LPL）遺伝子および8q24領域に位置するC-MYC遺伝子の検出および定量。前立腺癌試料などの異常細胞において観察される２つの遺伝子変化は、異型接合性の8q24の獲得および8p21-22（LPL）欠損である。
【００２３】
iv）  別の例としては、骨髄から得られた細胞における第8染色体の同定および計数（enumeration） が挙げられる。トリソミー8と、ミエロイド急性転化および好塩基球増加症双方との間には関連がある。トリソミー8は、慢性骨髄性白血病（CML）、急性骨髄性白血病（AML）、および骨髄増殖性疾患（MPD）などのいくつかの特定の疾患における一般的な遺伝子異常である。
【００２４】
v）  別の例としては、14q32に位置し、種々の血液疾患を有する患者に頻繁に観察される免疫グロブリン重鎖遺伝子座（IGH）の転座などの染色体異数性の解析が挙げられる。これらのIGH転座は、IGHエンハンサーとこれらの癌遺伝子との近接並置（juxtaposition）により癌遺伝子の上方調節をもたらす。
【００２５】
VI）別の例としては、16q22に位置するCBFB遺伝子が16p13に位置するMYH11遺伝子に融合し、急性骨髄性白血病（AML）において検出されるキメラタンパク質産物をもたらすinv（16）（p13q22）の同定が挙げられる。
【００２６】
VII）  また別の例としては、低分子DNAウイルスの一群であるヒトパピローマウイルス（HPV） の検出が挙げられる。90を超えるHPV型がある。持続的なHPV感染は、子宮頸癌をもたらし得、また、他の型の癌、例えば結腸癌と関連している。HPV型は、子宮頸癌の発症と関連するリスクにしたがって分類される。15の型が高リスクと分類されており、これらは、すべての子宮頸癌の99％超で検出される。
【００２７】
要するに、インサイチューハイブリダイゼーション（ISH）技術は、正常状態または疾患と関連する、転座、欠失、増幅、挿入または逆位のような染色体異常、染色体断片異常、遺伝子異常および染色体異常の発生に関する細胞の解析のための有用な方法である。さらに、ISHは、感染性因子ならびにRNAの発現のレベルの変化の検出に有用である。
【００２８】
ISHは、例えば、蛍光インサイチューハイブリダイゼーション（FISH）、化学発色インサイチューハイブリダイゼーション（CISH）、Fiber FISH、CGH、染色体ペイントおよびアレイを含むと理解されたい。
【００２９】
以下において、ISH技術および手順をより詳細に記載する。
【００３０】
ISHは、通常、ガラススライドに固定または付着させた検体の標的DNAまたはRNAと結合または「ハイブリダイズ」するように設計された核酸プローブを使用する。
【００３１】
合成または天然の起源のDNA、RNA、PNA、LNAまたは他の核酸プローブがISH技術に使用され得る。
【００３２】
プローブは、プローブ標的ハイブリッドの同定を、蛍光顕微鏡または明視野顕微鏡の使用により可能とするために標識される。プローブは、典型的には、DNAまたはRNAなどの二本鎖または一本鎖核酸である。これは、31P、33Pまたは32Sなどの放射性標識を用いて、またはジゴキシゲニン、もしくは蛍光標識（非常に多くのものが当該技術分野において公知である）などの標識を用いて非放射活性的に標識される。
【００３３】
ハイブリッドは、しばしば、コンピューターイメージング機器により、さらに解析される。ハイブリダイゼーションは、DNA、またはDNAアナログの２つの相補的な鎖間で起こるため、標識されたプローブは、遺伝子異常を検出するために使用され得、出生前疾患、癌、および他の遺伝的疾患または感染性疾患に関する貴重な情報を提供する。
【００３４】
解析のための核酸を遊離するために細胞溶解を必要とする他の分子DNAベースの試験とは異なり、ISHは、インサイチュー、すなわち、その天然の染色体の形態で、細胞内または核内においてさえDNAの解析を可能にする。この特徴は、個々の細胞の染色体、遺伝子および他のDNA/RNA分子の解析を可能にする。
【００３５】
直接標識されたプローブでは、結果は、適切なフィルターを有する蛍光顕微鏡下で試料を見ることにより検出される。CISHのような間接的な検出は、さらなる標識工程を要し、この工程は、典型的には、ストレプトアビジンまたは抗体-酵素コンジュゲートまたはフルオロフォア標識対応物（counterparts）を必要とし、そしていったんプローブが標的に結合したら、さらなる洗浄工程を要する。
【００３６】
例示的な一般的ISH手順には、以下の順次手順工程:
・スライドへの生物学的試料の配置
・高温でのベーキング
・必要であれば、脱ろうまたは脱パラフィン化
・洗浄
・高温での標的回復（retrieval）
・高温での変性
・ブロッキング試薬とのインキュベーション
・スライド上の試料へのプローブ混合物の添加
・試料およびプローブミックス上へのカバースリップの配置およびラバーセメントでのシーリング
・高温でのハイブリダーゼーション
・高温での洗浄およびカバースリップの除去
・空気乾燥および対比染色
・FISHまたはCISHの指示に従う可視化
・顕微鏡での検査および評価
の１つまたはいくつかが含まれる。
【００３７】
より詳細には、パラフィン包埋組織切片のための例示的なFISHプロトコルとしては、以下の順次手順工程:
・ブロックからの2〜4マイクロメートル腫瘍切片の切断
・スライドへの配置
・60℃で30分間のベーキング
・キシレンを用いた脱パラフィン化
・エタノール/水混合物中に浸漬することによる再水和
・95℃で10分間水性バッファーで洗浄することによる予備処理
・10分間周囲温度でペプシン消化
・繰り返し洗浄
・冷エタノール/水混合物系列での脱水
・空気乾燥
・スライド1枚あたり10マイクロリットルの蛍光標識されたDNAまたはPNAプローブ混合物の添加
・22×22 mmのガラスカバースリップおよびラバーセメントでの端部のシーリング
・82℃で5分間の変性、直後に
・45℃で一晩（18時間）ハイブリダーゼーション
・カバースリップの除去
・65℃で10分間のストリンジェント洗浄
・洗浄バッファーで繰り返し洗浄
・冷エタノール/水混合物系列中での浸漬による脱水
・空気乾燥
・対比染料としてDAPIを含む10マイクロリットルの退色防止溶液の添加（mounting）
・カバースライドでのシーリング
・蛍光顕微鏡での検査および評価
の１つまたはいくつかが含まれ得る。
【００３８】
ハイブリダイゼーション混合物は、典型的には、多くの成分の複合の混合物である。成分の非限定的な例としては、ホルムアミド、水、トリトンx-100、tween 20、Trisまたはリン酸塩バッファー、EDTA、EGTA、ポリビニルピロリドン、硫酸デキストラン、Ficoll、またはサケ精子DNAが挙げられる。
【００３９】
化学発色インサイチューハイブリダイゼーション（CISH）は、IHC染色手順と類似する免疫学的染色方法の使用により可視化され得る標識されたプローブを使用する。
CISHは、FISH技術と比べていくつかの違いを有する:遺伝子異常は、組織形態の状況（context）-組織病理学およびISH結果の同時検査内で見られ得る。また、結果は、標準的な明視野顕微鏡で可視化され得、スライド上に生成した化学発色染料（例えば、DAB）は、蛍光シグナルの退色が全くまたはほとんどなく、永続的である。
【００４０】
ISHに加え、本発明はまた、免疫組織化学および免疫細胞化学に関する。
【００４１】
一般的な例示的ホルマリン固定パラフィン包埋（FFPE）免疫組織化学的（IHC）化学発色染色手順は、
組織の切断およびトリミング（trimming）、固定、脱水、パラフィン浸透、薄片への切断、ガラススライドへの配置、ベーキング、脱パラフィン、再水和、抗原回復、ブロッキング工程、一次抗体の適用、洗浄、二次抗体-酵素コンジュゲートの適用、洗浄、酵素色原体基質の適用、洗浄、対比染色、カバースリップ配置（slipping）および顕微鏡検査
の工程を含み得る。
【００４２】
前記のように、スライドの試料処理は、複雑であり、面倒であり、多くの異なる試薬を種々の温度で長期間使用する。
【００４３】
通常の条件下では、ほんの少量の試薬、200μlまたはそれより少量を試料に適用すると理解されたい。したがって、試薬および試料は、特に、高温および低相対湿度下では、非常に容易に乾燥する。
変性工程およびハイブリダイゼーション工程を含むISHにおける多くの手順工程は、典型的には、湿度チャンバにおいて行なわれる。湿度チャンバは、スライドが処理および加熱され得る密閉または半密閉容器である。
【００４４】
処理温度ならびに温度傾斜時間-すなわち、単位時間あたりの温度の変化は、全体プロトコルの長さおよびそれに続く可視化された結果の両方に重要であると理解されたい。
【００４５】
さらにまた、染色結果は、試料処理中の湿度に強く依存することが観察された。
【００４６】
また、形態は、処理中の乾燥の害を受け得る。例えば、染色体糸は、乾燥条件により容易に崩壊し得る。
【００４７】
温度の変化中、スライド上方の空気は、膨張または収縮する。温度低下中の圧力の減少は、外部から空気を引き込み、これは、スライド上方の空気と比較すると、水であまり飽和され得ない。加熱中、空気は、スライドおよび蓋の間の空間の外に押圧される。この空気は湿気を含み、これはシステムから放出される。
【００４８】
結果として、複数の高速な温度の変化の繰り返し、長時間の高温およびスライドおよび蓋の間の小空間により、湿気は、急速に、または時間をかけてのいずれかでシステムから放出され得、生物学的試料に適用された試薬の濃度の変化、したがって、プロトコルの変化または生物学的試料の乾燥さえもたらす。
【００４９】
絶対湿度は、ある与えられた容積の気体における水の量と定義される。相対湿度は、水の量と与えられた温度および圧力で可能な水の最大量の比である。容積あたりの水の最大量、結果として相対湿度は、クラウジウス・クラペイロンの式で記載される温度に強く依存する。
【００５０】
密閉システムにおける水の添加なしでは、25℃で100％相対湿度は、60℃で16.3％および95℃で3.7％に相当し、強い温度依存性を示す。
温度の小さな変化でさえ、相対湿度は劇的に変化する。例えば、80℃で100％の相対湿度は、湿気の添加なしの密閉システムにおける90℃でわずか66.7％に相当する。
【００５１】
前記の考察から、湿度、加熱および冷却の正確な制御は、例えば、一貫したISH結果を得るために必須であることが明らかである。
【００５２】
要するに、効率的な加湿システムのない、スライドの加熱は、試薬または試料の高速乾燥をもたらし得る。
【００５３】
（従来技術の説明）
スライド上の「試薬」の乾燥を防ぐため、いくつかの異なる密閉加湿システムが、細胞遺伝学実験室、病理学実験室および研究所において、例えば、変性およびハイブリダイゼーションの重要な工程中に使用されることが知られている。
【００５４】
US 6,555,361は、シーリングしたときのチャンバ内の空気を飽和させ、それにより、液体試料の乾燥を防ぐためのビルトイン（built-in）機構を含むハイブリダイゼーションチャンバを開示する。ハイブリダイゼーションチャンバは、一緒にしたとき、o-リングおよびクランピングデバイスによりシーリングされる、ぴったり合う（matching）上部および下部貝殻様の半面（half）により規定される。チャンバは、液体レザーバーを備え、ここからの液体は、ハイブリダイゼーションチャンバ内に密閉された空気の容積を飽和させるのに役立つ。チャンバ内の飽和された雰囲気は、試料の蒸発を防ぐ。図は、ガラス顕微鏡スライドを受ける大きさである内部チャンバを示す。US 6,555,361は、液体試料を保持するための領域から独立して液体を保持するためのチャンバ内ウェルの位置決めを示唆する。さらに、チャンバ内の、特にウェル内の多孔質膜材料の移動が示唆される。急速な加熱（warm-up）または冷却期中のチャンバ内部の温度および湿度の制御は、この文献では考察していない。
【００５５】
加湿ボックスまたは加湿チャンバは、典型的には、蓋を有するプラスチック容器である。水浸漬ペーパータオルを、ボックスの底面内に配置し、過剰の水をデカントにより廃棄する。ラック中のスライドは、例えば、一晩ハイブリダイゼーション中にボックス内に水平または垂直に配置され得る。
【００５６】
典型的な手作りの加湿ボックス実験室装置としては、密封蓋を有する標準的なTupperwareTMもしくはRubbermaidTMボックスまたは標準的なケーキ焼き皿が挙げられる。
ウェットペーパーティッシュを、底に配置する。フレームまたはグリッドを、ティッシュ上に配置し、蓋を閉める前に、フレームまたはグリッド上にスライドを配置する。
加湿ボックスは、例えば、変性工程またはハイブリダイゼーション工程中に、従来のオーブンもしくは電子レンジ内または加熱プレートの上面に配置する。
【００５７】
湿度および温度プロフィールをさらに制御するために、加湿ボックスは、熱損失を制限するために隔離され得、それにより、より長期間、温度を保持する。
例えば、本体および蓋を有する発泡ポリスチレン製のHybBoxTM（InSitus BioTechnologies, Albuqueque, NM, USA）のような断熱ボックスは、例えば、ハイブリダイゼーション中の湿度および温度をさらに制御するための試みである。
オーブン内のスライド上の生物学的試料の変性後、スライドを、密閉したHybBoxTMに移す。ハイブリダイゼーション後、ボックスを開け、スライドをさらに処理する。
【００５８】
一般的なスライド処理中に温度プロフィールをさらに制御するため、いくつかの温度制御されるチャンバが市販されている。１つの例は、温度制御加熱ブロックからなるBoekel Slide MoatTM（Boekel Scientific, Feasterville, PA, USA）である。30個までの標準的な顕微鏡スライドが、加熱ブロックに水平に配置され得る。シーリングを有するガラス蓋が加熱ブロックおよびスライド上で閉鎖される。加熱ブロックにウェットタオルをスライドとともに配置すると、高湿度が得られ得る。
【００５９】
HYBriteTM変性/ハイブリダイゼーションシステム（Vysis, Abbott Laboratories, Downers Grove, Illinois, USA）は、特にISH研究室において広く使用されている別の温度制御多湿チャンバである。これは、その上面に12個までの顕微鏡スライドが配置され得るプログラム可能な加熱プレートからなる。蓋が加熱プレートおよびスライドの上部に下降し、システムを閉鎖する。スライド加熱プレートの各側面では、ウェルまたはチャネルが水またはウェットティッシュもしくはタオルを保持し得る。従って、湿度は、ウェットティッシュまたはタオルの使用により制御が図られる。いったんスライドが装置内に配置されると、蓋を閉鎖し、順次変性およびハイブリダイゼーション工程が、ユーザーの介在なしで自動的に行なわれ得る。
【００６０】
さらに温度を制御し、少量の温度変動を回避する試みにおいて、TruTemp加熱システム（Matrix, Hudson, NH, USA）は、加熱されるスライドブロックに加えて加熱される蓋を使用する。装置は、その上面にスライドが配置されるプログラム可能な加熱ブロックからなる。蓋は、さらに加熱される。加湿は、その上面にスライドが置かれる加熱ブロック内に一体化されたウェルに添加される水によって提供される。
【００６１】
典型的には、ユーザーは、種々の市販の温度制御加湿システムを、0〜24時間を越えて周囲温度〜100℃までの多くの時間温度プロトコルによりプログラムすることができる。
【００６２】
処理中の温度および湿度を自動化するまた別の試みにおいて、いわゆる液体カバースリップシステムを用いる自動化装置（Ventana Medical Systems, Tucson, Az）が導入されている。スライド配置検体の乾燥は、試薬および試料を非混和性オイルで覆うことにより制限が図られる。該システムは、蒸発を制限するにすぎず、大部分の容量の試薬が失われる結果となり、例えば、12時間を越える高温でのハイブリダイゼーションには実用的ではない。
【００６３】
該装置は、いくつかの工程を削減し、細胞遺伝学実験室、病理学実験室および研究所により行なわれる従来のISH手順の間に必要とされる人手による（hands-on）時間を短縮する。
【００６４】
オーブンおよび種々のプラスチック容器を用いる手動システムでもなお、一般的に、形態の保存および染色効率の両方に関して最も良好な結果が得られる。
【００６５】
部分的にまたは完全に自動化された加湿ボックスまたはチャンバは、例えば、人手による作業が少なく使用し易いという利点を有する。部分的にまたは完全に自動化された加湿ボックスまたはチャンバでは、いずれも、形態の保存および染色効率に関して手動方法と同等またはこれを超える性能が成功裏に提供されていない。
【００６６】
湿度制御は、上述のように、温度と密接に関連しているが、制御は容易でない。
【００６７】
スライドに対して長時間、制御可能な均一な温度と均一で高い湿度との両方を有するという課題に真に取り組んだ公知のシステムはない。
【００６８】
要するに、試料処理デバイスは、理想的には、
・プログラム可能な温度制御
・加熱および冷却の正確な制御
・温度の高速変化
・被処理スライドの数の非依存性
・任意の関連温度での高湿度
・長期間の一定湿度
・スライド上での均一な温度および湿度
を含む。
【００６９】
（発明の概要）
本発明は、少なくとも１つの担体部材上に収容された少なくとも１つの生物学的試料を処理するための手段を含む、生物学的試料の処理のための装置であって、流体を収容可能な少なくとも１つのレザーバーが、該少なくとも１つの生物学的試料の大部分に隣接および／または対向する表面上に配置されることを特徴とする、生物学的試料の処理のための装置を提供する。液体レザーバーおよび試料の近接性は、昇温を伴う加熱期間中、試料を囲む装置内側表面により形成されるチャンバ内で、一定の高い相対湿度を維持し得る速度で、レザーバーからの蒸気が生成し得ることを確実にするために重要である。
好ましい態様において、レザーバーは、少なくとも１つの担体部材上の少なくとも１つの試料の上方に配置される。
【００７０】
好ましい態様において、装置は、少なくとも１つの生物学的試料を保持する少なくとも１つの担体部材を支持するように配置される底面部材を含み、少なくとも1つの流体レザーバーを含む蓋をさらに含むことを特徴とする。流体レザーバーの好ましい位置は、蓋の下面である。これは、試料との最適な近接性を確実にする。
【００７１】
好ましい態様において、蓋部材14には、少なくとも1つの流体レザーバー18を支持し、蓋14を閉鎖したとき生物学的試料上方に位置するように配置され、それにより、図2に示すように底面部材12を覆う、グリッド、スロットおよび／または指状突起（finger）（図示せず）などの保持手段が備わっている。
【００７２】
好ましい態様において、本発明による装置は、レザーバーが、担体部材から5 cm未満、好ましくは担体部材から1.0 cm未満、さらにより好ましくは担体部材から0.50 cm未満離れて配置されることを特徴とする。
【００７３】
好ましくは、本発明による装置は、担体部材上の試料に隣接および／または対向するレザーバーの巨視的表面積が、担体部材総面積の10％より大きく、好ましくは担体部材総面積の30％より大きく、さらにより好ましくは60％より大きいことを特徴とする。レザーバーの拡張は、昇温を伴う急速な加熱中に相対湿度が変化し得る速度および所定の高い相対湿度を維持する能力を改善することにより、近接性と同様に重要な役割を果たす。
【００７４】
好ましくは、本発明による装置は、担体部材上の試料を加熱するための加熱手段を含むことを特徴とする。好ましくは、加熱手段は、装置内に組み込まれる。
【００７５】
好ましくは、装置は、担体部材の温度を制御し、それにより担体部材上の生物学的試料の温度を制御する温度制御手段を含むことを特徴とする。好ましくは、装置は、試料の所望の処理を規定するプロトコルに指示された使用説明書にしたがって試料を自動加熱するのを可能にする温度制御手段を含む。
【００７６】
好ましくは、装置は、温度制御手段に接続された少なくとも１つの温度センサーを含むことを特徴とする。
【００７７】
好ましい態様において、加熱手段は加熱ワイヤである。あるいは、加熱手段は、誘導加熱であり得る。
【００７８】
好ましくは、温度制御手段は、担体部材上の試料を冷却するための冷却手段を含む。生物学的試料の指示される処理は、典型的には、加熱期間後に冷却を含む。好ましい態様において、冷却手段は、ペルチェ素子および／または少なくとも１つのファンである。
【００７９】
好ましい態様において、装置はレザーバーを加熱するための加熱手段を含み得、温度制御手段は、装置の底面部材および／または蓋の加熱手段または冷却手段を作動させることによってレザーバーおよび／または試料の温度を変化させることにより、チャンバ内の湿度の制御を可能にし得る。
【００８０】
装置の好ましい態様において、担体部材上の試料を加熱するための加熱手段およびレザーバーを加熱するための加熱手段は、レザーバーが試料よりも高温（warmer）となるか、またはその逆となり得るように、別々に制御され、異なる温度に加熱され得る。このように、レザーバーの温度を上げ、それにより、チャンバ内の雰囲気内、それにより試料の周囲に蒸気分子を放出させることにより高湿度が高速で生成し得るため、チャンバ内の試料の周囲の相対湿度の制御が高度に改善され得る。試料および試料上の試薬の温度に応じて（かかる温度は、試料の支持体の加熱または冷却により制御され得る）、蒸気は試薬および試料と均衡のとれた状態であり得るか、または試料上および試薬含有溶液中に凝縮し得る。
あるいは、低い湿度が所望される場合、これは、蒸気がレザーバー上に凝縮する傾向になるようにレザーバーの温度を下げることにより得られ得、また、試料の乾燥を所望すべき場合は、蒸気が試料の周囲の雰囲気から抽出され得るようにレザーバーに吸収されるようにレザーバーの温度を下げることにより得られ得る。
生物学的試料の周囲の雰囲気の温度および湿度の完全な制御が可能になったことは、本発明による新規な装置の本質的な利点である。
【００８１】
装置の好ましい態様において、レザーバーは、実質的に平坦なシートの形状である。好ましくは、レザーバーの厚さは、長さの1/10未満であり、その結果、外側表面（巨視的表面とも呼ばれる）は、容積に比べて大きくなる。レザーバーが充分な容量の水を含み得ることは不可欠であり、レザーバーの内外での蒸気の交換を可能にする表面が蒸気の急速な放出または吸収を可能にするのに充分大きいことは、さらにより不可欠である。
【００８２】
装置の好ましい態様において、レザーバーは、閉じられた位置では温度制御されるプレート上に位置する担体部材上の少なくとも１つの生物学的試料を覆う、蓋に取り付けられている。装置の別の好ましい態様では、レザーバーは、閉じられた位置では個々の温度制御されるプレートを有する個々のスライドを覆う、蓋である。装置のまた別の好ましい態様では、レザーバーは、閉じられた位置ではいくつかの温度制御されるプレート上に位置するいくつかのスライドを覆う、蓋である。
【００８３】
好ましくは、本発明による装置において、レザーバーは、波形表面などの湾曲した表面構造および不均一な表面を有し得る。
【００８４】
好ましくは、レザーバー内の流体は液体であり、レザーバーは、液体を吸着および／または吸収ならびに脱着および／または放出できる媒体を含む。好ましくは、流体は、実質的に純粋な水である。あるいは、流体は、抗菌剤などの添加剤を含有する水であり得る。
【００８５】
流体は、ホルムアミド、水性バッファー、アルコール、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、N-メチル-ピロリドン、非水性バッファーまたは無機塩、界面活性剤、pHバッファー、有機溶媒、グリセロール、油および／もしくは水、またはその混合物を含有する複合混合物を包含し得る。
【００８６】
好ましくは、レザーバーは、人工および天然のスポンジなどの非常に大きい内表面積を有し、流体を収容できる複数の空隙を含む材料で作製されたデバイスである。好ましくは、表面の少なくとも大部分が親水性である。
【００８７】
好ましくは、レザーバーは、ポリマー繊維複合物およびブレンド、ガラス繊維材料、発泡多孔質ポリマー、多孔質セラミックス、rockwoolTM、木材パルプ、段ボール、皮革またはセルロース系材料を含む群からの材料で作製されている。
【００８８】
好ましくは、レザーバーは、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリウレタン、ポリスルホン、ポリビニル、ポリアミド、ポリイソブチレン、シロキサンポリマー、ポリアクリル組成物、エチレン酢酸ビニル、ビスコースレーヨン、ポリスチレン、巨大網状（macroreticular）ポリスチレン、脂肪族、またはフェノールホルムアルデヒド縮合ポリマー、エポキシ、綿、多糖、変性多糖類、木材パルプ、炭酸カルシウム、シリカゲル、ガラス繊維、ベントナイト（bentonit）、パーライトおよびゼオライトを含む群からの任意の組成物を含む材料で作製されている。
【００８９】
好ましくは、レザーバーは、人工または合成ポリマー系の接着（bonded）、非接着、織ったまたは編んだ繊維、微細繊維、織物および房状織物を含む群からの材料で作製されている。好ましくは、レザーバーは、接着ポリアミド、ポリエステル、ポリオレフィンおよびセルロースアセテート繊維を含む群からの材料で作製されている。好ましくは、該材料は、親水性変性ポリプロピレンおよびポリエチレン微細繊維の不織および接着のブレンドで作製されている。好ましくは、該材料は、薄膜壁に保持された繊維または他の隙間のある（loose）材料の束で作製されている。
【００９０】
好ましくは、レザーバー材料は、0.050〜1.5グラム/cm3、好ましくは0.075〜0.75グラム/cm3の密度を有する。好ましくは、レザーバー材料は、１つの担体部材あたり少なくとも所定の最小容量の液体を保持する能力を有する。好ましくは、レザーバー材料は、１つの担体部材あたり合計少なくとも10マイクロリットル（μl）、より好ましくは、１つの担体部材あたり合計100マイクロリットル（μl）より多く、例えば、１つの担体部材あたり合計200マイクロリットル（μl）より多く、さらに１つの担体部材あたり合計500マイクロリットル（μl）より多く、例えば、１つの担体部材あたり合計1000マイクロリットル（μl）より多くを保持する能力を有する。
【００９１】
好ましくは、さらなるレザーバーは、生物学的試料と反対側の吸収用および脱着用レザーバーとの流体による連絡のための蓋の上面上に配置される。さらなるレザーバーには、ハイブリダイズ用チャンバを開けることなく、容易に水を補充し得、さらなるレザーバーは、レザーバー物質と、蓋内の細いチャネルを介して流体により連絡し得、水がゆっくりとレザーバー物質の方に漏出または流動するのを可能にする。
【００９２】
本発明は、液体レザーバーをスライド上の試料に非常に近づけ、隣接させ、好ましくは対向させることにより、ISHまたはIHC反応に由来する湿度の制御の問題を解決した。さらにまた、レザーバーは、レザーバー内の液相とスライドおよび蓋間の空間内の蒸気相との間の湿度の高速交換用に設計される。
【００９３】
本発明はまた、レザーバーに関する。本発明によるレザーバーは、レザーバーが、液体を吸着および／または吸収ならびに脱着および／または放出できる媒体を含むことを特徴とする。
【００９４】
好ましくは、レザーバーは、試料に対向するレザーバーの表面が大きい、好ましくは試料の表面より大きいような、実質的に平坦なシートまたはプレートの形状であり得る。好ましくは、レザーバーの厚さは、少なくとも１つの試料を囲むチャンバにはめ込ませるために、長さの1/10未満である。典型的には、試料支持体および試料を囲むチャンバを構成するカバーまたは蓋は、試料とカバーまたは蓋の間に少し空きスペースが空くように設計され得る。チャンバの容積を最小限にすることにより、試料からの蒸発を制限すること、および小さいチャンバ内の雰囲気の内容量を制御することがより容易になる。
【００９５】
ある態様において、レザーバーは、表面積を増加させるために、波形表面などの湾曲した表面構造および不均一な表面を有し得る。
【００９６】
好ましくは、担体部材上の試料に隣接および／または対向するレザーバーの巨視的表面積（外側表面積）は、担体部材総面積の10％より大きく、好ましくは担体部材総面積の30％より大きく、さらにより好ましくは60％より大きい。
【００９７】
好ましくは、レザーバーは、例えば流体を収容できる複数の空隙を含む、非常に大きい内表面積を有する材料で作製されたデバイスであるか、またはここで、該材料は、薄膜壁に保持された繊維または他の隙間のある材料の束で作製されている。好ましくは、表面（１つまたは複数）の少なくとも大部分は親水性である。
【００９８】
好ましくは、レザーバーには、抗菌剤または他の保護剤を含浸させ得る。好ましくは、レザーバー材料の型、形状および大きさは、液体表面張力と釣り合うように表面特性が最適となるように選択される。
【００９９】
レザーバーは、スライド、およびスライドの下方の加熱プレートの上部に、またはこれに隣接して位置する液体、例えば、水を含み得るデバイスである。液体は、重力にもかかわらず、スライド上方のレザーバー内に含まれ得る。
【０１００】
レザーバーは、液体を高速吸着および／または吸収ならびに脱着および／または放出する能力を有する。レザーバーは、好ましくは、非常に大きい表面積を有する物質で作製されている。
レザーバーは、いくつかの異なる物質で作製され得、非限定的な例としては、ポリマー系繊維複合物およびブレンド、ガラス繊維材料、発泡多孔質ポリマー、多孔質セラミックス、RockwoolTM、木材パルプ、段ボール、皮革またはセルロース系材料が挙げられる。
【０１０１】
さらに非限定的な例としては、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリウレタン、ポリスルホン、ポリビニル、ポリアクリル、エチレン酢酸ビニル、ビスコースレーヨン、ポリスチレン、巨大網状ポリスチレン、脂肪族、またはフェノール-ホルムアルデヒド縮合ポリマー、エポキシ、綿、多糖、変性多糖類、木材パルプ、炭酸カルシウム、シリカゲル、ガラス繊維、ベントナイト、パーライトまたはゼオライトを含む材料が挙げられる。細い鋼ワイヤのグリッドでさえ、液体のレザーバーを提供し得る。
【０１０２】
好ましい材料としては、人工または合成ポリマー系の接着、非接着、織ったまたは編んだ繊維、微細繊維、織物および房状織物が挙げられる。より好ましくは、該材料は、接着ポリアミド、ポリエステル、ポリオレフィンまたはセルロースアセテート繊維で作製されている。さらにより好ましくは、該材料は、親水性変性ポリプロピレンおよびポリエチレン微細繊維の不織および接着のブレンドで作製されている。さらに、レザーバー材料は、薄膜壁に保持された繊維または他の隙間のある材料の束で作製され得ることを理解されたい。
【０１０３】
該物質は、液体表面張力と釣り合うように表面エネルギーが最適となるように選択され得る。物質の表面特性は、かさ高い材料に起因し得るか、または特定の化学的、プラズマまたは放射線照射表面処理に由来し得る。かかる処理は、ポリマー化学の当業者に周知である。
【０１０４】
大きな内表面積は、広範囲の種々の異なる液体を、これらが使用される環境に応じて吸着し、後に脱着し得る。
スライド上の試料の上方の相対湿度は、レザーバー物質の吸収特性および温度の結果である。
【０１０５】
レザーバー物質の型、表面特性、形状および大きさ、多孔度および孔径などの変形例の選択により、加湿作用の広域の要件が、みたされ得る。
【０１０６】
レザーバーは、0.050〜1.5グラム/cm3、好ましくは0.075〜0.75グラム/cm3の密度を有する材料から選択されるべきである。経験的に、かかる重量の好ましい多孔質または繊維質材料は、所望の吸収および脱着の特徴を提供することが証明されている。
【０１０７】
レザーバーは、１つの担体部材または顕微鏡スライドあたり少なくとも所定の最小容量の液体を保持する能力を有する物質および幾何学的形状から選択されるべきである。好ましくは、レザーバーは、１つの担体部材あたり合計少なくとも10マイクロリットル、より好ましくは、１つの担体部材あたり合計100マイクロリットルより多く、さらにより好ましくは、１つの担体部材あたり合計200マイクロリットルより多く、またさらにより好ましくは、１つの担体部材あたり合計500マイクロリットルより多く、最も好ましくは、１つの担体部材あたり合計1000マイクロリットルより多くを保持する能力を有する。
【０１０８】
水を保持する能力は、試料上の少しの水滴でも試料の染色を劣化させるため、不可欠である。また、レザーバー内の大量の水は、試料上方および試料内で所望の湿度を維持するために湿った空気の高速交換を得るのに重要である。
【０１０９】
好ましくは、レザーバーは、平坦なシートまたはプレートの形態である。好ましくは、これらは、表面積を最適化するために、波形表面などの湾曲した表面構造および不均一な表面を有し得る。
【０１１０】
好ましくは、レザーバーは、充分に硬質であり、安定であり、自己支持性であり、クリープを起こしたり、下方に曲がったりしない。また、好ましくは、レザーバーは、液体の脱着もしくは吸着中、または温度の変化により、著しく膨潤したり形状が変化したりしない。
【０１１１】
好ましくは、レザーバーは、スライド上方5 cm未満に配置される。好ましくは、レザーバーは、スライドの上方1.0 cm未満、さらにより好ましくは、スライドの上方0.50 cm未満に配置される。
【０１１２】
スライドおよびレザーバーは、傾斜または鉛直または水平位置にあり得ることを理解されたい。これは、スライド上の試料に隣接した位置であり、不可欠である。
【０１１３】
スライドに対向するレザーバーの巨視的表面積（外側表面）は、好ましくは、スライド総面積の10％より大きいべきである。より好ましくは、該面積は、スライド総面積の30％より大きいべきである。さらにより好ましくは、該面積は、スライド総面積の100％より大きいべきである。レザーバーの巨視的表面積は、レザーバーの外側面積であり、繊維または空洞の内表面積ではないと理解されたい。
【０１１４】
ある好ましい態様において、レザーバーは蓋に取り付けられており、これは、温度制御されるプレート上に位置するスライドの上に下降する。それにより、スライドは、密閉制御可能な空間内に封入され、好ましくは、周囲環境（climate）制御する温度センサーが備わっている。別の態様では、レザーバーは、スライドおよび蓋（温度制御されるプレート上に位置するスライドの上方に下降する）の間に配置される。また別の態様では、レザーバーは、個々に温度制御されるプレート群を有する個々のスライドまたは温度制御される１つもしくは複数のプレートに位置するいくつかのスライドの上に下降する蓋である。
【０１１５】
カバーまたは蓋は、温度制御されるプレートまたは個々に温度制御される複数のプレート上の１つ、２つのまたはいくつかのスライドを覆い得ることを理解されたい。
【０１１６】
またさらなる態様では、前記レザーバーは、レザーバー上の加熱デバイスによってさらに温度制御され得る。好ましくは、１つ以上のセンサーが、スライド（１つまたは複数）上方の温度を感知するために配置される。
【０１１７】
レザーバーが蓋に取り付けられ、交換（change）される場合、手動操作しやすいように、該物質に小さいハンドルまたは穿孔タップを有することが好ましい。
【０１１８】
好ましくは、スライドの下方からの加熱により、スライドおよび生物学的試料の温度を制御する。しかしながら、レザーバーもまた加熱され得ることを理解されたい。好ましくは、これは、レザーバー材料内に包埋された電気的加熱ワイヤにより、または蓋内の加熱プレートから行なわれ得る。これは、予備加温したレザーバーは、スライド上方の空間をより容易に加湿するため、スライド上方の空気を加湿するレザーバーの能力の効率をさらに増加させる。
【０１１９】
さらに、レザーバーは、容量の増加を可能にするために、管類または他の手段により外部レザーバーに接続させ得ることを理解されたい。結果として、レザーバーは容易に補充され得る。また、反応および試料処理を規定するプロトコルに応じて、異なる液体が添加され得る。
【０１２０】
いくつかの適用では、温度は、長期間周囲温度であり得ることを理解されたい。すなわち、スライドは、周囲温度より高くまで加熱されなくてもよい。これは、染色の前もしくは後の一晩のスライドの保存のため、または試薬との延長された（expanded）インキュベーションに適切である。
【０１２１】
レザーバーは、水、水性バッファー、ホルムアミド、アルコール、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、N-メチル-ピロリドン、非水性バッファーまたは無機塩、界面活性剤、pHバッファー、有機溶媒、グリセロール、油および／もしくは水ならびに前記液体の混合物を含有する複合混合物を保持し得る。
【０１２２】
さらに、液体の組成物としては、抗菌剤、UV保護剤または他の保護剤が挙げられ得ることを理解されたい。
【０１２３】
さらに、レザーバー内の液体の組成は、蒸気相、すなわち、レザーバー物質および担体上の生物学的試料と試薬の間の環境内の雰囲気中の蒸気と同じでなくてもよいことを理解されたい。レザーバー内の液体の組成を調整することにより、スライド上方の蒸気の組成が制御され得る。特に、レザーバー内の液体成分の温度の調整により、周囲の蒸気相の含量が影響され得る。経験的に、関連する処理中に100％に近い高湿度を維持することにより、試料中の水の含量は、かかる処理の終了時（典型的には、加熱、冷却および一晩保存後）までには、試料の完璧な染色を得るのにほぼ最適となることが証明されている。
【０１２４】
さらに、本発明は、特に、部分的にまたは完全に自動化された装置に関することを理解されたい。特に、スライドを取り扱い、処理するための、コンピューター制御されたプログラム可能な自動化された装置は、本発明の恩恵を被る。個々に位置する、または装置内に棚もしくは回転トレイ状に配置されるスライド上方の湿度が本発明により制御され得る。実際、本発明は、スライド土台上のスライドのいかなる特定の配置にも限定されない。レザーバーは、スライドに隣接する固定された位置に位置し得る。
あるいは、レザーバーまたはスライドは、湿度を制御すべき場合、互いに隣接するように移動させ得る。レザーバーは、部分的にまたは完全に自動化された装置において、単回使用、使い捨て、またはより永続的に使用され得る。
【０１２５】
特に適切なのは、完全または部分的に本発明のレザーバーで作製された蓋の使用である。蓋は、スライドに隣接して、好ましくは対向して配置され得、蓋は湿度を制御する、すなわち、充分に湿った蓋は、ほとんど100％の相対湿度を提供する。好ましくは、蓋は、スライドの上方に配置されるが、スライドは、加熱デバイスの上方に位置する。試薬または他の液体は、蓋内の１つまたはいくつかの穴を介してスライドに添加され得る。
【０１２６】
自動化分配デバイスは、試薬を送達し得る。同様に、液体は、装置内の自動化分配デバイスによってレザーバーに添加され得る。
【０１２７】
さらに、本発明はまた、一定時間ならびに均一な温度および湿度を指定することにより、顕微鏡スライドまたは他の支持体の一般的な加温器としての機能を果たし得ることを理解されたい。
【０１２８】
本発明の恩恵を被る別の適用は、アレイ上のISHである。アレイは、何千もの試料のスポットまたはドットを含み得る。例えば、固定化した組織、遺伝物質、DNA、cDNAまたはRNAである。処理および可視化プロトコルは、より伝統的なISHのプロトコルに類似する。同様に、湿度の制御は、一貫した結果のために不可欠である。
【０１２９】
ウエスタンおよびノーザンブロットおよび電気泳動ゲルの処理において使用されるもののような平坦な膜またはゲルを使用する適用は、本発明の高度に制御された湿度および温度の恩恵を被る。
【０１３０】
PCRおよびLCR技術を、スライド上に載せた試料においてインサイチューで行なうのは困難を伴うだけである。問題点の１つは、温度傾斜時間および均一な湿度制御に関する標準化の欠如である。長時間温度変化の繰り返しを伴ったPCRまたはLCR手順は、本発明の恩恵を被り得た。
【０１３１】
本発明の恩恵を被る別の適用は、アレイ上のISHである。アレイは、単一の小さいもしくは大きいスライドまたは平面支持体上に、何千ものスポット、ドット、試料ドットまたは組織試料を含み得る。温度および湿度に関する多くのドット全体の均一な処理は、再現可能な結果を確実にするために特に重要である。
【０１３２】
また、本発明は、湿度を低下させ得ることを理解されたい。レザーバーが湿気を効率的に吸着する能力は、除湿システムを創出する。一例として、かかる能力は、スライドの温度が低下し、スライド上方の空気中の一部の蒸気が水として放出され、この水は、スライド上方の空気から除去されるべきであることが示唆される場合に望ましいことがある。親水性レザーバーにすることにより、かかる蒸気は、親水性繊維上に吸着され得る。
【０１３３】
例えば、液体が全くまたはほとんど存在しない乾燥レザーバーを使用することにより、大きな面積の表面から、スライドとレザーバーの空間の間の液体が除去される。これにより、スライドの高速脱水がもたらされる。さらにまた、スライドに熱を負荷することにより、脱水プロセスの速度および効率が増加する。例えば、前述のように、典型的なISHプロトコルは、ストリンジェンシー洗浄工程の後に脱水工程を含む。ストリンジェンシー洗浄の後には、２つの洗浄工程が続き、ここでは、エタノール濃度が増加する一連の浴にスライドを浸漬させ、マウント媒体の添加前に空気乾燥させる。
【０１３４】
液体を吸着する能力を有するレザーバーを使用することにより、プロセスの工程数が低減され得る。スライドに負荷される熱は、プロセスをさらに加速する。要するに、効率的な除湿システムは、スライドの脱水に必要な工程および試薬を低減し得る。
【０１３５】
本発明は、さらに、水を充填した請求項41〜58いずれか記載のレザーバーを近接して存在させることにより、試料上方で実質的に少なくとも80％の相対湿度を維持することを特徴とする、少なくとも１つの生物学的試料が担体部材上に配置される、試料の視覚的解析のために染色することにより試料を調製するための処理のための生物学的試料の処理方法に関する。好ましくは、該方法は、水を充填したレザーバーを近接して存在させることにより、試料上方の雰囲気において実質的に少なくとも85％の相対湿度、好ましくは少なくとも90％、より好ましくは少なくとも95％相対湿度および最も好ましくは99〜100％の相対湿度を維持することを特徴とする。
【０１３６】
該処理方法を行なう場合、担体部材上への試料の配置後にレザーバーに水を供給することが好ましい。所定含量の水を含むレザーバー物質を有する蓋をかなりの時間開放したままにすると、水は、レザーバーから流出して下方に漏出し得る。好ましくは、蓋は、水を含む場合、および試料の処理中、通常の水平な定位置で閉鎖されて位置する。
【０１３７】
最後に、本発明は、請求項59〜61いずれか記載の方法を実施するための、請求項1〜40いずれか記載の装置における請求項41〜58いずれか記載のレザーバーの使用に関する。経験的に、本発明は、DNAがHPV、Her-2、Top2Aの標的である解析を行なうために試料をハイブリダイズさせるのに、RNAがHPVの標的である解析を行なうために試料をハイブリダイズさせるのに、p16、Herファミリー（リン酸化ER/PRを含む）、MIB-1のIHC解析を行なうのに、およびISH、HPV、HER 2、HER2 FISH、Topo II、テロメア、EGFγ、C-Myc、エプスタインバーウイルス、単純ヘルペスウイルスおよびヒトサイトメガロウイルス、慢性骨髄性白血病（CML）、急性骨髄性白血病（AML）、染色体バンディングおよびペイントを含む群からの解析を行うために試料をハイブリダイズさせるのに特に有用であることが示された。
【０１３８】
（図面の詳細な説明）
以下において、本発明を、本発明による装置の好ましい態様の非限定的な例として示す添付の図面に関して、さらに詳細に説明する。
【０１３９】
図1は、一例として、本発明による装置10の態様を示す。該装置は、底面部材12および蓋部材14を含む。好ましくは、底面部材12および蓋部材14は、図示しないヒンジにより連結されている。図2に示す密閉した位置において、該２つの部材は、密閉されたか、または少なくとも半分密閉されたチャンバを提供する。
【０１４０】
担体部材15上の複数の生物学的試料は、例えば図3および11に示すような底面部材12上に配置され得る。典型的には、試料は、顕微鏡スライド15上の組織試料であり得る。この種の装置は、StatSpin, MA, USおよびDakoCytomation, Denmark A/Sにより製造および販売されている。
【０１４１】
底面部材12は、図4に示すような温度制御される加熱プレート16を含む。加熱プレート16は、例えば銅などの、金属などの熱伝導性材料で作製され得る。あるいは、これは、熱伝導性ポリマーであり得る。加熱プレートは、電気的加熱用の加熱ワイヤなどの加熱手段（図示せず）、および温度を感知するためのセンサー手段を含む。かかる温度調節は周知であり、ここではさらに詳細に記載しない。好ましくは、傾斜した温度プロフィールを可能にするために冷却手段（例えば、ペルチェ素子および／または空気を吹き出すファン（１つまたは複数））もまた提供される。試料処理の最終的な結果は、正確な最適化温度プロフィールに高度に依存性であり得、温度が、装置内に現時点で配置されている生物学的試料の処理のためのプロトコルに規定された要件にしたがって、急速に変化し得ることを要する。
【０１４２】
好ましくは、蓋部材14には、グリッド、スロットおよび／または指状突起（図示せず）などの保持手段が提供されており、２つの湿度制御ストリップ18を支持し、蓋14を密閉したとき生物学的試料の上部に位置するように配置され、それにより、図2に示すように底面部材12を覆う。ストリップ18は、生物学的試料の処理中、密閉装置内部に水の存在を確保する水レザーバーとして作用する。ストリップは、任意の公知の種類の取り付け具もしくは接着手段により取り付けされ得るか、または図4〜6に示すように、蓋もしくはカバー14に一体化され得る。
【０１４３】
好ましい態様において、蓋部材14には、さらなる加熱および／または冷却手段16a（図5A）、ならびに温度感知手段が提供され得る。好ましくは、装置内の温度制御ユニットは、チャンバからの蒸気の放出または吸収を加速するために、蓋の温度を、底面部材12内の加熱部材16に選択された温度とは異なる値に設定するのが可能なように配置される。これは、水レザーバーのこの余分な加熱または冷却なしでは相対湿度を制御するのが困難であり得る、試料処理の急速な加熱または冷却段階中に、特に適切であり得る。
【０１４４】
さらなる態様において、蓋部材14には、試料処理中に液体の補充を可能にするさらなるレザーバー28（図6）が提供され得る。
【０１４５】
ストリップ18が、その外側表面およびその全容積と比べて大きな内側表面を有することは不可欠である。該材料は、孔を含む種類のものであり得、水を収容する空洞を形成する。しかしながら、現時点では、空洞は、無作為に位置した結合繊維間の空間によって形成されることが好ましくあり、好ましくは親水性を有する。ストリップまたはレザーバー18は、いくつかの異なる材料で作製され得、非限定的な例としては、ポリマー系繊維複合物およびブレンド、ガラス繊維材料、発泡多孔質ポリマー、多孔質セラミックス、RockwoolTM、木材パルプ、カードボード、皮革またはセルロース系材料が挙げられる。
【０１４６】
非限定的な例としては、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリウレタン、ポリスルホン、ポリビニル、ポリアクリル性組成物、エチレン酢酸ビニル、ビスコースレーヨン、ポリスチレン、巨大網状ポリスチレン、脂肪族、またはフェノール-ホルムアルデヒド縮合ポリマー、エポキシ、綿、多糖、改質多糖類、木材パルプ、炭酸カルシウム、シリカゲル、ガラス繊維、ベントナイト(bentonit)、パーライトもしくはゼオライトを含有する材料が挙げられる。
【０１４７】
好ましい材料としては、人工または合成ポリマー系の接着、非接着、織ったもしくは編んだ繊維、微細繊維、織物もしくは房状織物が挙げられる。より好ましくは、該材料は、結合ポリアミド、ポリエステル、ポリオレフィンまたはセルロースアセテート繊維で作製されている。
【０１４８】
現時点で好ましい態様において、ストリップ18は、不織および接着のブレンドの親水性改質ポリプロピレンおよびポリエチレン微細繊維で作製された長方形プレートである。好ましくは、該材料は、0.050〜1.5グラム/cm3、好ましくは0.075〜0.75グラム/cm3の密度を有する。この組成は、ストリップに極めて大きな内側表面を提供する。親水性は、内側表面が小さいわずかな水滴に接着するのを可能にし、空気に対して非常に大きな表面の水を提供し、それにより、水の液相と蒸気相間の高速交換および均衡を可能にし、改善する。
【０１４９】
好ましくは、試料を有する担体部材に対向するストリップ（レザーバー）の巨視的表面積は、担体部材総面積の10％より大きく、好ましくは担体部材総面積の30％より大きく、なおさらにより好ましくは担体部材総面積の50％より大きく、最も好ましい態様では、担体部材総面積の80％より大きい。
【０１５０】
現時点で好ましい態様において、ストリップは約2 mm厚、約28 mm幅および約250 mm長である。この構造は、試料から小間隔以内で試料の表面と対向する大きな表面のストリップを提供する。好ましくは、湿度制御ストリップは、湿度空気の高速交換および供給を改善するために試料と近接して位置する。好ましくは、ストリップは、１つのスライドあたり合計10マイクロリットルより多く、より好ましくは１つのスライドあたり合計200マイクロリットルより多く、さらにより好ましくは１つのスライドあたり合計500マイクロリットルより多く、一層より好ましくは、１つのスライドあたり合計1000マイクロリットルより多く保持し得る。
【０１５１】
蓋の内側表面上に（好ましくは、試料担体の上部に直接）制御ストリップをマウントすることにより、ストリップから試料までの間隔が最小化される。典型的には、該間隔は、1もしくは2 mmまたはそれ未満でさえあり得るが、空気と蒸気の層が、ストリップを試料から分離させるために常にゼロより大きい。制御ストリップは、試料と接触しないのがよい。
【０１５２】
さらなる有利な態様において、ストリップは、波形表面などの湾曲した表面構造および不均一な表面を有し得る。それにより、内側表面内に開口を含む外側表面が大きくなり、蒸気の急速な交換が改善され、より具体的には空気と水の蒸気がほとんど1００００％の相対湿度を提供する。
【０１５３】
またさらなる有利な態様において、ストリップには、抗菌剤、UV保護剤または他の保護剤が含浸されていてもよい。
【０１５４】
現時点で好ましい態様において、レザーバーは、水供給が重力によって補助されるように、担体部材上の試料の上部に位置する。
【０１５５】
先に説明したように、高湿度は、生物学的試料の染色の最終結果に不可欠である。水の存在は、高湿度を維持するために不可欠である。数回の、おそらく急速な温度変化を含む試料の処理は、試料上部の雰囲気において高相対湿度の維持を確保するために、水の液相と蒸気相間の急速な交換を必要とする。かかる高相対湿度は、ストリップ18が組み込まれる本発明による装置の使用により維持され得る。
【０１５６】
現時点で好ましい態様において、ストリップは、その親水性のために選択される材料で作製される。しかしながら、他の流体が想定され得、かかる場合では、ストリップ材料は、例えば、ホルムアミドのかかる流体と協同するように選択されなければならない。より具体的には、レザーバー材料の型、形状および大きさは、液体表面張力と適合するために表面特性が最適となるように選択されるべきである。
【０１５７】
好ましい態様において、装置は、データ処理手段ならびにデータ入力および出力手段（例えば、図1および7に示すキーボードまたはキーパッドおよび表示手段20）を含むか、または、PCなどのコンピューターとの通信のために適合させている。好ましくは、データ処理手段は温度感知手段からの入力を受信し得、加熱および／または冷却手段に制御シグナルを提供し得るべきである。
【０１５８】
コンピューターには、試料の処理のための条件（例えば、温度および時間）を規定するプロトコルにしたがって、装置内部の温度および湿度の自動制御を可能にするソフトウェアおよび使用説明書が提供され得る。
【０１５９】
図9および10は、図1および2の装置と類似する、手動型の装置を示すが、コンピューター補助制御を伴わない。
【０１６０】
以下の実施例は、好ましい態様の自動装置をどのように使用するかを示す。
【０１６１】
実施例A：ユニットの起動
ユーザーは、ユニットが適切なコンセントに接続されたことを確認した後、ユーザーは、電源スイッチ（図示せず）を、その「ON」位置に移動させる。次いで、装置は、音声認識可能なビーという音を発し、電源が入ったことを示し、冷却ファンおよび加熱（図示せず）が開始され、装置内の加熱プレートが37℃の初期設定温度に達したとき、表Iに示すように、メインメニューがディスプレイ手段22に表示される。
【０１６２】
【表１】
2007517509.tif 000003
【０１６３】
実施例B：変性およびハイブリダーゼーションプログラム
メインメニュースクリーンが表示された後、メニュー上のカーソルがメニューの「PGMの実行」ラインをハイライトする。次いで、ユーザーは、入力および出力手段20の「エンター」キーを押し、このメニュー項目が受理される。続いて、矢印キーを用い、ユーザーは、種々のプログラム番号またはプログラム名の間をスクロールする。プログラムの選択を受理させるため、ユーザーは、入力および出力手段20の「エンター」ボタンまたはキーを押す。次いで、ディスプレイ22は、PGM番号/名ならびに変性およびハイブリダーゼーション時間および温度をを確認し、その例を表IIに示す。カーソルは、「PGM実行」ラインをハイライトする。次いで、ユーザーは、「エンター」ボタンまたはキーを押し、この選択が受理される。
【０１６４】
【表２】
2007517509.tif 000004
【０１６５】
ディスプレイ22は、次いで、ユーザーに、表IIIに示すように、「スライドの設置および蓋の密閉」を促す。スライドを設置する前に、ユーザーは、２つの湿度制御ストリップ18をスライド蓋内部に挿入する。ストリップ挿入後、およびスライド設置後、ユーザーは、ストリップ18を蒸留水または等価物（乾燥ストリップに対しておよそ13 mL）で飽和させる。カーソルは、次いで、「スタート」ラインをハイライトする。ユーザーは、「エンター」ボタンまたはキーを押し、プログラムを実行させる。
【０１６６】
【表３】
2007517509.tif 000005
【０１６７】
メインメニューに戻るため、ユーザーはカーソルを移動させてディスプレイ22の「メインメニュー」ラインをハイライトさせ、「エンター」ボタンまたはキーを押す。ディスプレイは、「加熱」およびスライドの現在の温度を示す。一度温度が変性設定点に達したら、表IVに示すように、変性時間が設定時間からカウントダウンされる。
【０１６８】
【表４】
2007517509.tif 000006
【０１６９】
一度変性が完了したら、次いで、装置は、ハイブリダイゼーション設定温度まで自動的に冷却される（表V）。
【０１７０】
【表５】
2007517509.tif 000007
【０１７１】
一度温度がハイブリダイゼーション設定点に達したら、ハイブリダイゼーション時間は、次いで、設定時間からカウントダウンされる。
【０１７２】
プログラムの完了時、ユニットは、音声認識可能なビーという音を発してユーザーに警告し、ディスプレイは、表VIに示すように、「プロセス完了」を示す。ハイブリダイゼーション温度は、「PGM終了/メインメニュー」メニュー選択が、入力および出力手段20の「エンター」ボタンを押すことによって受理されるまで維持される。「エンター」ボタンを押す前に、ユーザーは、さらなる処理のために、スライドを取り出し得る。「PGM終了/メインメニュー」選択がプログラム完了の最初の１分間以内に受理されない場合、ハイブリダイゼーション時間は、ハイブリダイゼーション温度での合計時間をカウントし始める。
【０１７３】
【表６】
2007517509.tif 000008
【０１７４】
実施例C：ハイブリダイゼーション単独プログラムの実行
メインメニュースクリーンが表示された後、メニュー上のカーソルは、メニューの「PGM実行」ラインをハイライトする。次いで、ユーザーは、入力および出力手段20の「エンター」キーを押し、このメニュー項目が受理される。続いて、矢印キーを用い、ユーザーは、種々のプログラム番号またはプログラム名の間をスクロールする。プログラムの選択を受理させるため、ユーザーは、入力および出力手段20の「エンター」ボタンまたはキーを押す。ユーザーは、ハイブリダイゼーション単独プログラムを選択し、ディスプレイ20は、次いで、PGM番号/名ならびにハイブリダイゼーション単独プロトコルの時間および温度を確認し、その例を表VIIに示す。カーソルは、「PGM実行」ラインをハイライトする。
【０１７５】
【表７】
2007517509.tif 000009
【０１７６】
次いで、ユーザーは、２つの湿度制御ストリップ18をスライド蓋内部に取り付ける。ストリップ取り付け後、およびスライドの設置後、ユーザーは、ストリップ18を蒸留水または等価物（乾燥ストリップに対しておよそ13 mL）で飽和させる。カーソルは「スタート」ラインをハイライトし、ユーザーは、次いで、「エンター」キーまたはボタンを押し、表VIIIに示すようにプログラムを実行させる。
【０１７７】
【表８】
2007517509.tif 000010
【０１７８】
装置は、表VIIIaに示すように、ハイブリダイゼーション温度までスライドを加熱する。
【０１７９】
【表９】
2007517509.tif 000011
【０１８０】
一度ハイブリダイゼーション温度に達したら、ディスプレイは、表VIIIbに示すように変わり、時間が設定時間からカウントダウンされる。
【０１８１】
【表１０】
2007517509.tif 000012
【０１８２】
プログラムの完了時、ユニットは、音声認識可能なビーという音を発してユーザーに警告し、ディスプレイ22は、「プロセス完了」のメッセージを示す（表IX）。ハイブリダイゼーション温度は、「PGM終了/メインメニュー」選択が、「エンター」ボタンを押すことによって受理されるまで維持される。「エンター」ボタンを押す前に、ユーザーは、さらなる処理のために、スライドを取り出し得る。「PGM終了/メインメニュー」選択がプログラム完了の最初の１分間以内に受理されない場合、ハイブリダイゼーション時間は、ハイブリダイゼーション温度での合計時間をカウントし始める。
【０１８３】
【表１１】
2007517509.tif 000013
【０１８４】
実施例D：固定温度プログラム
メインメニュースクリーンが表示された後、メニュー上のカーソルは、メニューの「PGM実行」ラインをハイライトする。次いで、ユーザーは、入力および出力手段20の「エンター」キーを押し、このメニュー項目が受理される。続いて、矢印キーを用い、ユーザーは、種々のプログラム番号またはプログラム名の間をスクロールする。プログラムの選択を受理させるため、ユーザーは、入力および出力手段20の「エンター」ボタンまたはキーを押す。ユーザーは、固定温度プログラムを選択する。ディスプレイ20は、次いで、PGM番号/名および固定温度を確認し（表X）、カーソルは、ディスプレイ22の「PGM実行」ラインをハイライトする。
【０１８５】
【表１２】
2007517509.tif 000014
【０１８６】
入力および出力手段20の「エンター」ボタンまたはキーを押すことにより、プログラムが実行され、装置を、表XIに示すように固定温度まで加熱する。
【０１８７】
【表１３】
2007517509.tif 000015
【０１８８】
固定温度に達すると、ディスプレイ22は、次いで、ユーザーに、「スライドの設置および蓋の密閉」を促す。スライドを設置する前に、ユーザーは、２つの湿度制御ストリップをスライド蓋内部に取り付ける。ストリップ取り付け後、およびスライド設置後、ユーザーは、ストリップ18を蒸留水または等価物（乾燥ストリップに対しておよそ13 mL）で飽和させ、蓋を密閉する。カーソルは、ディスプレイ22の「スタート」ラインをハイライトする（表XII）。ユーザーは、次いで、入力および出力手段20の「エンター」ボタンまたはキーを押し、プログラムを継続させる。
【０１８９】
【表１４】
2007517509.tif 000016
【０１９０】
メインメニューに戻るため、ユーザーはカーソルを移動させてディスプレイ22の「メインメニュー」ラインをハイライトし、入力および出力手段20の「エンター」ボタンを押す。ディスプレイ22は、次いで、表XIIIに示すように、スライドの現在の温度を示し、タイマーが経過した時間をカウントする。（ユーザーにより「エンター」ボタンが押されると、タイマーがゼロにリセットされる）。
【０１９１】
【表１５】
2007517509.tif 000017
【０１９２】
ユーザーは、入力および出力手段20の矢印キーを使用し、ハイライトされたディスプレイを「PGM終了/メインメニュー」ラインに移動させ、次いで、「エンター」ボタンを押してプログラムを終了させる。上記の実施例（実施例A〜実施例D）が示すように、湿度制御ストリップであるレザーバー18は、ハイブリダイザーに有用であり得る。
【０１９３】
しかしながら、これらは、多くの他の装置に使用され得る。図8および図12〜16は、本発明によるレザーバー18でカバーされる加熱プレート16上に、単一の組織スライド15を備える本発明のさらなる態様を示す。
【０１９４】
図8に示す態様において、蓋14それ自体は、ストリップ18について本明細書において先に規定したように、親水性材料のシートである。加熱ワイヤを親水性材料中に包埋し得る。また、該材料は２層であり得る。かかる蓋は、顕微鏡スライドなどの１つ以上の試料担体を保持する加熱プレートの上面に単純に配置され得る。
【０１９５】
かかる配置は、自動染色装置（回転型ならびに試薬および／またはスライドを移動させるロボットを備える染色装置の両方）等の、試料を処理するためのいくつかの型の装置に組み込まれ得る。
【０１９６】
また、図8および図12〜16に示す配置は、傾斜型に使用され得る。図13〜14に示すように、図8に示すレザーバー18は、図1に示す態様と類似する蓋14に組み込まれ得るが、１つのレザーバーおよび１つのスライド15だけを備える。加熱プレート16aは、例えば、図5Aに示すように、蓋14内に接着し得るか、または包埋され得る。
【０１９７】
図16では、ロボットアーム30が、蓋14上部に配置されているのが示される。蓋14は、孔24を備えており、これはレザーバー18への液体の供給口を提供し、ロボットが水もしくは試薬などの流体をレザーバーおよび／または試料に提供するのを可能にする。これは、本発明による装置が、複数の生物学的試料を処理するための自動試料処理装置の一部であり得ることを強調するためである。
【０１９８】
図11は、図3と類似する図を示し、ここでは、図1および2の装置の底面部材上への12個のスライドの配置を補助するスライド位置装置を有する。
【０１９９】
図に示す配置は、特にレザーバーの設置は、図示していない温度センサーと連携して、およびコンピューターなどの適切な制御ユニットと連携して、スライド15上の組織周辺の環境の正確な制御を可能にする。特に、レザーバーの親水性吸着性媒体は、自動試料処理装置を用いた場合、本明細書で公知のものより良好な染色結果を可能にする。
【０２００】
以下において、図1に示す装置の好ましい態様の検証試験から選ばれた7つの実施例を示す。
【０２０１】
実施例1では、レザーバー物質は、通常、ろ紙であったが、推奨される超極細繊維材料ではなかった。すべての他の実施例において、試験は、「ハイブリダイザー湿度制御ストリップ（Hybridizer Humidity Control Strip）」と呼ばれる推奨された超極細繊維ストリップを用いて行なった。これらのストリップは、親水性改質ポリプロピレンおよびポリエチレン超極細繊維の不織および接着のブレンド製の長方形プレートであった。
【０２０２】
実施例1：FISH検証
これは、TOP2Aおよびろ紙ストリップを用いる実施例である。TOP2Aの平均許容基準：スコアリング1.5〜3（シグナル強度および特異性）。平均少なくとも2のスコアまたは参照から平均±0.5以内の偏差スコアを必要とする。個々のアウトライヤーを、これらが報告される場合は、明白な理由により排除し得る。ハイブリダイザー上でTOP2Aを用いる第１回目の実行は、ろ紙ストリップ（Filterストリップ）を用いて行なった、表1A。装置を、同じ組織ブロック由来の12個のスライドを用いて試験し、手動参照スライドのシグナル強度に類似するTOP2Aシグナル強度の平均スコアを得た。
【０２０３】
緑シグナルのシグナル強度、ハイブリダイザー上のセントロメア17、スコア2.0は、手動参照の強度、スコア3と類似しなかった。1.5未満のスコアを有するセントロメアシグナル強度を、12個のスライドのうち2個で観察した。しかしながら、セントロメア17のシグナル強度は、平均2、赤シグナルであり、HER2は、手動参照と実際類似しており、したがって、許容基準は、かろうじて満たされた。表は、同じホルマリン固定、パラフィン包埋乳癌組織ブロックから切り出された切片上のTOP2Aプローブの生のデータを示し；湿度ストリップとしてろ紙ストリップを用いたハイブリダイザー装置で行なった。
【０２０４】
【表１６】
2007517509.tif 000018
【０２０５】
２：TOP2AおよびDakoCytomationハイブリダイザー湿度制御ストリップを用いた実施例
ハイブリダイザー装置で行なった実行により、ハイブリダイザー湿度制御ストリップ（0.198 g/cm3）をろ紙ストリップの代わりに使用した場合、許容基準が容易にみたされることを確認した。装置試験実行は、手動手順と同程度であった。結論として、ハイブリダイザーはTOP2Aの許容基準にパスした。スライドのスコアは、ハイブリダイザー湿度制御ストリップを使用した場合、手動手順と同程度であった。
【０２０６】
表（表2）は、同じホルマリン固定、パラフィン包埋乳癌組織ブロックから切り出された切片上のTOP2Aプローブの生のデータを示し、ハイブリダイザー湿度制御ストリップ（3 mm厚、0.198 g/cm3）を用いてハイブリダイザー装置で行なった。緑シグナル、セントロメア17；赤シグナル、HER2。
【０２０７】
【表１７】
2007517509.tif 000019
【０２０８】
実施例３  HER2
HER2の平均許容基準：スコアリング1.5〜3（シグナル強度および特異性）。平均少なくとも2のスコアまたは参照から平均±0.5以内の偏差スコアを必要とする。個々のアウトライヤーを、これらが報告される場合は、明白な理由により排除し得る。ハイブリダイザー上でHER2を用いる実行は、ハイブリダイザー湿度制御ストリップ（0.270 g/cm3）を用いて行なった。装置を、同じホルマリン固定パラフィン包埋組織ブロック由来の異なる厚さ（2μm〜6μm）の組織切片を用いて試験した。実行により、手動参照と類似したシグナル強度のスコアおよび組織構造を得た。平均±0.5グレード以上のスコア偏差を観察しなかった。結論として、ハイブリダイザーは、HER2の許容基準にパスした。スライドのスコアは手動手順と同程度であった。表3は、同じホルマリン固定、パラフィン包埋乳癌組織ブロックから切り出されたHER2プローブ切片の生のデータを示し；ハイブリダイザー湿度制御ストリップ（2 mm厚、0.270 g/cm3）を用いてハイブリダイザー装置で行なった。緑シグナル、セントロメア17；赤シグナル、HER2。
【０２０９】
【表１８】
2007517509.tif 000020
【０２１０】
実施例4-MLLおよびETV6
MLLおよびETV6の平均許容基準：スコアリング1.5〜3（シグナル強度および特異性）。参照から平均±0.5のスコア偏差を許容する。個々のアウトライヤーを、これらが報告される場合は、明白な理由により排除し得る。
【０２１１】
ハイブリダイザーでの実行は、ハイブリダイザー湿度制御ストリップ（0.270 g/cm3）を用いて行なった。装置は、同じロットの中期伸展標本由来の試料検体を用いて試験した。実行により、手動参照で観察されるものよりも良好なMLLおよびETV6シグナル強度のスコアを得た。細胞の構造は、手動参照と類似した。結論として、ハイブリダイザーは、MLLおよびETV6の許容基準にパスした。スライドのスコアは、手動手順より良好であった。ハイブリダイザーで得られたスコアは、しかしながら、両方のプローブで、手動参照よりもシグナルが0.5グレードより大きかった。これらのスコアは、許容基準に記載される偏差より大きいが、なお許容可能である。
【０２１２】
表4は、中期伸展標本における転座プローブ、MLLおよびETV6の生のデータを示し、ハイブリダイザー湿度制御ストリップ（2 mm厚、0.270 g/cm3）を用いてハイブリダイザー装置で行なった。
【０２１３】
【表１９】
2007517509.tif 000021
【０２１４】
実施例5
この実施例は、ホルマリン固定パラフィン包埋組織ブロックにおけるHPVのCISH検証に関する。細胞におけるHPVの平均許容基準：2.5〜4シグナル；0 陰性対照；0〜1バックグラウンド；手動染色から±0.25グレード発散（個々のスライドについて）。
【０２１５】
ハイブリダイザーでHPVプローブを用いた実行を、ハイブリダイザー湿度制御ストリップを用いて行なった。シグナル強度は、手動参照のものと完全に類似した。スコア偏差を観察しなかった。バックグラウンドレベルは、手動方法よりもハイブリダイザーで低いようであった。
【０２１６】
結論として、スライドのシグナル強度のスコアは、ハイブリダイゼーションを湿度制御ストリップと共に行った場合、手動手順と同程度であった。
【０２１７】
【表２０】
2007517509.tif 000022
【０２１８】
実施例6
テロメア
テロメアの平均許容基準：スコアリング1.5〜3（シグナル強度および特異性）。参照から平均±0.5のスコア偏差を許容する。個々のアウトライヤーを、これらが報告される場合は、明白な理由により排除し得る。ハイブリダイザーでの実行は、ハイブリダイザー湿度制御ストリップ（0.22〜25 g/cm3）を用いて行なった。検証装置は、２つの異なるロットの中期伸展標本由来の試料検体を用いて試験した。実行により、テロメアプローブで標識されたFISH（K 5325）およびCy3（K 5326）の両方で、手動参照と類似したシグナル強度のスコアおよび組織構造を得た。平均±0.5グレードを超えるスコア偏差を観察しなかった。細胞の構造は手動参照と類似した。結論として、ハイブリダイザーは、テロメアの許容基準にパスした。スライドのスコアは手動手順と同程度であった。
【０２１９】
【表２１】
2007517509.tif 000023
【０２２０】
実施例7-EBER（EBV）
EBERの平均許容基準：スコアリング1.5〜3（シグナル強度および特異性）。参照から平均±0.5のスコア偏差を許容する。個々のアウトライヤーを、これらが報告される場合は、明白な理由により排除し得る。
【０２２１】
ハイブリダイザーでの実行は、ハイブリダイザー湿度制御ストリップ（0.22〜25 g/cm3）を用いて行なった。実行により、手動参照と類似したシグナル強度のスコアを得た。平均±0.5グレード以上のスコア偏差を観察しなかった。バックグラウンドは、手動方法よりもハイブリダイザーで低いようであった。結論として、ハイブリダイザーは、EBERの許容基準にパスした。スライドのスコアは手動手順と同程度であった。
【０２２２】
【表２２】
2007517509.tif 000024
【０２２３】
最終的に、試験をまた、図15に示すように、チャンバ内に単一の組織スライドを有する単一のスライドチャンバにおいて行なった。試験により、本発明によるレザーバーは、スライド上の試料の適切な湿度の維持を提供することが証明された。
【０２２４】
したがって、生物学的試料を処理するための改善された装置および方法ならびにレザーバーが開示されている。本発明を、図示し、考察した態様にしたがって記載したが、当業者は、態様に対する変形体があり得、それらの変形体は本発明の精神および範囲内であり得ることを容易に認識しよう。例えば、本発明の好ましい態様を、12個のスライドのハイブリダイザーの関係において記載したが、本発明の教示は、温度および湿度を制御するための任意のシステムを備えた任意の数のチャンバにおいて、例えば各々が組織を含む単一の顕微鏡スライドを保持して配置される、複数のヒータープレートを含む自動化試料処理装置において処理される任意の数のスライドに適用可能であることは認識されよう。したがって、多くの変更が当業者によって、添付の特許請求の範囲に規定される本発明の精神および範囲から逸脱することなく行なわれ得る。
【図面の簡単な説明】
【０２２５】
【図１】図1は、蓋を開放した本発明による装置の好ましい態様を示す。
【図２】図2は、図1の蓋を密閉した状態を示す。
【図３】図3は、装置の底面部材上の担体部材の配置の概略図を示す。
【図４】図4は、図3のa-aラインに沿った装置の断面図を示す。
【図５】図5は、図3のb-bラインに沿った装置の断面図を示す。
【図５Ａ】図5Aは図5と類似するが、蓋内に加熱プレートを有する。
【図６】図6は、外部レザーバーを有する態様の図5と類似する断面図を示す。
【図７】図7は、図1および2の装置のディスプレイおよびキーパッドを示す。
【図８】図8は、本発明によるレザーバーで覆われた加熱プレート上の単一の組織スライドを示す。
【図９】図9は、図1および2の装置の手動型を示す。
【図１０】図10は、図1および2の装置の手動型を示す。
【図１１】図11は、図1、2、または9、10に示す装置の底面部材上の担体部材の位置決めを補助するスライド位置決め装置を示す。
【図１２】図12は、レザーバーおよび蓋に覆われた加熱プレート上に配置されたスライド上の試料を示す。
【図１３】図13は、図9および10の装置と類似するが、１つだけのスライド用に設計された装置を示す。
【図１４】図14は、図9および10の装置と類似するが、１つだけのスライド用に設計された装置を示す。
【図１５】図15は、図13〜14の装置の断面図を示す。
【図１６】図16は、ロボットアームを含む、図12〜14と類似する配置を示す。
【符号の説明】
【０２２６】
10；装置、ハイブリダイザー
12；底面部材
14；蓋部材
15；担体部材、顕微鏡スライド
16；温度制御された加熱プレート
16a；蓋14内の加熱プレート
18；湿度制御ストリップ-レザーバー
20；制御パネル-キーパッド
22；ディスプレイ
24；孔24
28；レザーバー18に補充するためのさらなるレザーバー
30；ロボットアーム
【図１】
2007517509.tif 000025
【図２】
2007517509.tif 000026
【図３】
2007517509.tif 000027
【図４】
2007517509.tif 000028
【図５】
2007517509.tif 000029
【図５Ａ】
2007517509.tif 000030
【図６】
2007517509.tif 000031
【図７】
2007517509.tif 000032
【図８】
2007517509.tif 000033
【図９】
2007517509.tif 000034
【図１０】
2007517509.tif 000035
【図１１】
2007517509.tif 000036
【図１２】
2007517509.tif 000037
【図１３】
2007517509.tif 000038
【図１４】
2007517509.tif 000039
【図１５】
2007517509.tif 000040
【図１６】
2007517509.tif 000041
【手続補正書】
【提出日】平成17年11月3日(2005.11.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
チャンバ中の少なくとも１つの担体部材（15）上に収容された少なくとも１つの生物学的試料を処理するための手段を含み、チャンバ内に流体を収容可能な少なくとも１つのレザーバー（18）を含む生物学的試料の処理のための装置であって、流体を収容可能な少なくとも１つのレザーバー（18）が、該少なくとも１つの生物学的試料の大部分に対向するチャンバ内の表面上に配置されることを特徴とする、生物学的試料の処理のための装置。
【請求項２】
レザーバー（18）が、担体部材（15）上の試料の上方に配置されることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項３】
少なくとも１つの生物学的試料を保持する少なくとも１つの担体部材（15）を支持するように配置される底面部材（12）を含み、該少なくとも1つの流体レザーバー（18）を含む蓋（14）をさらに含むことを特徴とする、請求項２記載の装置。
【請求項４】
蓋部材14に、少なくとも1つの流体レザーバー（18）を支持し、蓋14を閉鎖したとき生物学的試料上方に位置するように配置され、それにより、図２に示すように底面部材12を覆う、グリッド、スロットおよび／または指状突起（図示せず）などの保持手段が備わっていることを特徴とする、請求項３記載の装置。
【請求項５】
レザーバー（18）が、担体部材（15）から5 cm未満、好ましくは担体部材（15）から1.0 cm未満、さらにより好ましくは担体部材（15）から0.50 cm未満、例えば約1または2 mmまたはそれよりさらに小さいが常に0より大きい距離離れて配置されることを特徴とする、請求項１〜４いずれか記載の装置。
【請求項６】
担体部材（15）上の試料に隣接および／または対向するレザーバー（18）の巨視的表面積が、担体部材総面積の10％より大きく、好ましくは担体部材総面積の30％より大きく、さらにより好ましくは60％より大きいことを特徴とする、請求項１〜５いずれか記載の装置。
【請求項７】
担体部材（15）上の試料を加熱するための加熱手段を含むことを特徴とする、請求項１〜６いずれか記載の装置。
【請求項８】
担体部材（15）の温度を制御し、それにより担体部材（15）上の生物学的試料の温度を制御する温度制御手段を含むことを特徴とする、請求項７記載の装置。
【請求項９】
温度制御手段に接続された少なくとも１つの温度センサーを含むことを特徴とする、請求項８記載の装置。
【請求項１０】
加熱ワイヤを含む加熱手段を特徴とする、請求項７記載の装置。
【請求項１１】
誘導加熱を含む加熱手段を特徴とする、請求項７記載の装置。
【請求項１２】
担体部材（15）上の試料を冷却するための冷却手段を含む温度制御手段を特徴とする、請求項８記載の装置。
【請求項１３】
ペルチェ素子および／または少なくとも１つのファンを含む冷却手段を特徴とする、請求項１２記載の装置。
【請求項１４】
装置がレザーバー（18）を加熱するための加熱手段を含むことを特徴とする、請求項１記載の装置。
【請求項１５】
装置の底面部材（12）および／または蓋（14）の加熱手段または冷却手段を作動させることによってレザーバー（18）および／または試料の温度を変化させることにより、チャンバ内の相対湿度の制御を可能にする温度制御手段を有することを特徴とする、請求項７〜１４いずれか記載の装置。
【請求項１６】
担体部材（15）上の試料を加熱するための加熱手段およびレザーバー（18）を加熱するための加熱手段が、レザーバー（18）が試料よりも高温となるか、またはその逆となり得るように、別々に制御され、異なる温度に加熱され得ることを特徴とする、請求項７〜１５いずれか記載の装置。
【請求項１７】
レザーバー（18）が実質的に平坦なシートの形状であることを特徴とする、請求項１記載の装置。
【請求項１８】
レザーバー（18）の厚さが長さの1/10未満であることを特徴とする、請求項１７記載の装置。
【請求項１９】
レザーバー（18）が、閉じられた位置では温度制御されるプレート（16）上に位置する担体部材（15）上の少なくとも１つの生物学的試料を覆う、蓋（14）に取り付けられていることを特徴とする、請求項１８記載の装置。
【請求項２０】
レザーバー（18）が、閉じられた位置では個々の温度制御されるプレート（16）を有する個々のスライドを覆う、蓋（14）であることを特徴とする、請求項１８記載の装置。
【請求項２１】
レザーバー（18）が、閉じられた位置ではいくつかの温度制御されるプレート（16）上に位置するいくつかのスライドを覆う、蓋（14）であることを特徴とする、請求項１８記載の装置。
【請求項２２】
レザーバー（18）が、波形表面などの湾曲した表面構造および不均一な表面を有することを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項２３】
流体が液体であり、レザーバー（18）が、液体を吸着および／または吸収ならびに脱着および／または放出できる媒体を含むことを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項２４】
流体が実質的に純粋な水であることを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項２５】
流体が抗菌剤などの添加剤を含有する水であることを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項２６】
流体が、ホルムアミド、水性バッファー、アルコール、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、N-メチル-ピロリドン、非水性バッファーまたは無機塩、界面活性剤、pHバッファー、有機溶媒、グリセロール、油および／もしくは水、またはその混合物を含有する複合混合物を包含することを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項２７】
レザーバー（18）が、非常に大きい内表面積を有し、流体を収容できる複数の空隙を含む材料で作製されたデバイスであることを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項２８】
レザーバー（18）が、非常に大きい内表面積を有する材料で作製されたデバイスであり、表面の少なくとも大部分が親水性であることを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項２９】
レザーバー（18）が、ポリマー繊維複合物およびブレンド、ガラス繊維材料、発泡多孔質ポリマー、多孔質セラミックス、rockwoolTM、木材パルプ、段ボール、皮革またはセルロース系材料を含む群からの材料で作製されていることを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項３０】
レザーバー（18）が、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリウレタン、ポリスルホン、ポリビニル、ポリアクリル組成物、エチレン酢酸ビニル、ビスコースレーヨン、ポリスチレン、巨大網状ポリスチレン、脂肪族、またはフェノールホルムアルデヒド縮合ポリマー、エポキシ、綿、多糖、変性多糖類、木材パルプ、炭酸カルシウム、シリカゲル、ガラス繊維、ベントナイト、パーライトおよびゼオライトを含む群からの任意の組成物を含む材料で作製されていることを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項３１】
レザーバー（18）が、人工または合成ポリマー系の接着、非接着、織ったまたは編んだ繊維、微細繊維、織物および房状織物を含む群からの材料で作製されていることを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項３２】
レザーバーが（18）、接着ポリアミド、ポリエステル、ポリオレフィンおよびセルロースアセテート繊維を含む群からの材料で作製されていることを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項３３】
該材料が、親水性変性ポリプロピレンおよびポリエチレン微細繊維の不織および接着のブレンドで作製されていることを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項３４】
該材料が、薄膜壁に保持された繊維または他の隙間のある材料の束で作製されていることを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項３５】
レザーバー（18）に、抗菌剤または他の保護剤を含漬させることを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項３６】
レザーバー（18）材料の型、形状および大きさが、液体表面張力と釣り合うように表面特性が最適となるように選択されることを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項３７】
レザーバー（18）材料が、0.050〜1.5グラム/cm3、好ましくは0.075〜0.75グラム/cm3の密度を有することを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項３８】
レザーバー（18）が、１つの担体部材（15）あたり少なくとも所定の最小容量の液体を保持する能力を有することを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項３９】
レザーバー（18）が、１つの担体部材（15）あたり合計少なくとも10マイクロリットル（μl）、より好ましくは、１つの担体部材（15）あたり合計100マイクロリットル（μl）より多く、例えば、１つの担体部材（15）あたり合計200マイクロリットル（μl）より多く、さらに１つの担体部材（15）あたり合計500マイクロリットル（μl）より多く、例えば、１つの担体部材（15）あたり合計1000マイクロリットル（μl）より多くを保持する能力を有することを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項４０】
さらなるレザーバー（18）が、生物学的試料と反対側の吸収用および脱着用レザーバー（18）との流体による連絡のための蓋（14）の上面上に配置されることを特徴とする、上記の請求項いずれか記載の装置。
【請求項４１】
レザーバー（18）が、液体を吸着および／または吸収ならびに脱着および／または放出できる媒体を含むことを特徴とする、請求項１〜４０いずれか記載の装置のためのレザーバー（18）。
【請求項４２】
レザーバー（18）が実質的に平坦なシートまたはプレートの形状であることを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項４３】
レザーバー（18）の厚さが長さの1/10未満であることを特徴とする、請求項４２記載のレザーバー（18）。
【請求項４４】
レザーバー（18）が、波形表面などの湾曲した表面構造および不均一な表面を有することを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項４５】
担体部材（15）上の試料に隣接および／または対向するレザーバー（18）の巨視的表面積が、担体部材総面積の10％より大きく、好ましくは担体部材総面積の30％より大きく、さらにより好ましくは60％より大きいことを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項４６】
レザーバー（18）が、流体を収容できる複数の空隙を含む非常に大きい内表面積を有する材料で作製されたデバイスであることを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項４７】
レザーバー（18）が、非常に大きい内表面積を有する材料で作製されたデバイスであり、ここで表面（１つまたは複数）の少なくとも大部分は親水性であることを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項４８】
レザーバー（18）が、ポリマー系繊維複合物およびブレンド、ガラス繊維材料、発泡多孔質ポリマー、多孔質セラミックス、rockwoolTM、木材パルプ、段ボール、皮革またはセルロース系材料を含む群からの材料で作製されることを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項４９】
レザーバー（18）が、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリウレタン、ポリスルホン、ポリビニル、ポリアクリル組成物、エチレン酢酸ビニル、ビスコースレーヨン、ポリスチレン、巨大網状ポリスチレン、脂肪族、またはフェノール-ホルムアルデヒド縮合ポリマー、エポキシ、綿、多糖、変性多糖類、木材パルプ、炭酸カルシウム、シリカゲル、ガラス繊維、ベントナイト、パーライトおよびゼオライトを含む群からの任意の組成物を含む材料で作製されることを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項５０】
レザーバー（18）が、人工または合成ポリマー系の接着、非接着、織ったまたは編んだ繊維、微細繊維、織物および房状織物を含む群からの材料で作製されることを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項５１】
レザーバー（18）が、接着ポリアミド、ポリエステル、ポリオレフィンおよびセルロースアセテート繊維を含む群からの材料で作製されることを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項５２】
材料が、親水性変性ポリプロピレンおよびポリエチレン微細繊維の不織および接着のブレンドで作製されることを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項５３】
材料が、薄膜壁に保持された繊維または他の隙間のある材料の束で作製されることを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項５４】
レザーバー（18）に、抗菌剤または他の保護剤を含浸させ得ることを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項５５】
レザーバー材料の型、形状および大きさが、液体表面張力と釣り合うように表面特性が最適となるように選択されることを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項５６】
レザーバー材料が0.050〜1.5グラム/cm3、好ましくは0.075〜0.75グラム/cm3の密度を有することを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項５７】
レザーバーが、１つの担体部材（15）あたり少なくとも所定の最小容量の液体を保持する能力を有することを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項５８】
レザーバーが、１つの担体部材あたり合計少なくとも10マイクロリットル、より好ましくは、１つの担体部材あたり合計100マイクロリットルより多く、さらにより好ましくは、１つの担体部材あたり合計200マイクロリットルより多く、またさらにより好ましくは、１つの担体部材あたり合計500マイクロリットルより多く、最も好ましくは、１つの担体部材あたり合計1000マイクロリットルより多くを保持する能力を有することを特徴とする、請求項４１記載のレザーバー（18）。
【請求項５９】
水を充填した請求項４１〜５８いずれか記載のレザーバー（18）を近接して存在させることにより、試料上方で実質的に少なくとも80％の相対湿度を維持することを特徴とする、少なくとも１つの生物学的試料が担体部材（15）上に配置される、試料の視覚的解析のために染色することにより試料を調製するための処理のための生物学的試料の処理方法。
【請求項６０】
水を充填したレザーバー（18）を近接して存在させることにより、試料上方において実質的に少なくとも85％の相対湿度、好ましくは少なくとも90％、より好ましくは少なくとも95％相対湿度を維持することを特徴とする、請求項５９記載の方法。
【請求項６１】
担体部材（15）上への試料の配置後にレザーバー（18）に水を供給する、請求項５９記載の方法。
【請求項６２】
請求項５９〜６１いずれか記載の方法を実施するための、請求項１〜４０いずれか記載の装置における請求項４１〜５８いずれか記載のレザーバー（18）の使用。
【請求項６３】
DNAが標的である解析を行なうために試料をハイブリダイズさせる、請求項６２記載の使用。
【請求項６４】
HPV、Her-2、Top2Aに対する、請求項６３記載の使用。
【請求項６５】
RNAが標的である解析を行なうために試料をハイブリダイズさせる、請求項６２記載の使用。
【請求項６６】
HPVに対する、請求項６５記載の使用。
【請求項６７】
IHC解析を行なうための、請求項６２記載の使用。
【請求項６８】
p16、Herファミリー（リン酸化ER/PRを含む）、MIB-1に対する、請求項６７記載の使用。
【請求項６９】
ISH、HPV、HER 2、HER2 FISH、Topo II、テロメア、EGFγ、C-Myc、エプスタインバーウイルス、単純ヘルペスウイルスおよびヒトサイトメガロウイルス、慢性骨髄性白血病（CML）、急性骨髄性白血病（AML）、染色体バンディングおよびペイントを含む群からの解析を行うために試料をハイブリダイズさせる、請求項６２記載の使用。
【国際調査報告】
2007517509.tif 000042
2007517509.tif 000043