(57)【要約】本発明の、結晶性（６ＲＳ）−Ｎ（５）−ホルミル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸または非晶質（６Ｓ）−Ｎ（５）−ホルミル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の製造方法は、４０℃〜５０℃の温度の（６ＲＳ）−または（６Ｓ）−フォリン酸カルシウムの水溶液、及び塩酸または酢酸の水溶液を２℃〜１２℃の温度の攪拌された水に添加するが、前記の両溶液の添加の間に得られる混合物において、一方で温度を２℃〜１２℃の値に保持し、他方でｐＨ値を２．５〜３．５の値に保持するように添加し、形成される固体を濾過または遠心分離によって単離し、この固体を先ず冷水で洗浄し、次に水性有機溶媒で洗浄し、かつ、洗浄した固体、即ち、結晶性（６ＲＳ）−Ｎ（５）−ホルミル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸または非晶質（６Ｓ）−Ｎ（５）−ホルミル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸を減圧下で乾燥して得ることを特徴とする。【特許請求の範囲】
【請求項１】
結晶性（６ＲＳ）−Ｎ（５）−ホルミル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸または非晶質（６Ｓ）−Ｎ（５）−ホルミル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の製造方法であって、
−  ４０℃〜５０℃の温度の（６ＲＳ）−または（６Ｓ）−フォリン酸カルシウムの水溶液、及び
−  塩酸または酢酸の水溶液
を２℃〜１２℃の温度の攪拌された水に同時に添加するが、
この添加は、前記の両溶液の添加の間に得られる混合物において、一方で温度を２℃〜１２℃の値に保持し、他方でｐＨ値を２．５〜３．５の値に保持するように行われ、
形成される固体を濾過または遠心分離によって単離し、
この固体を先ず冷水で洗浄し、次に水性有機溶媒で洗浄し、かつ、
洗浄した固体、即ち、結晶性（６ＲＳ）−Ｎ（５）−ホルミル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸または非晶質（６Ｓ）−Ｎ（５）−ホルミル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸を減圧下で乾燥して得ることを特徴とする、方法。
【請求項２】
前記の２つの溶液を同時に加える攪拌された水が、６℃〜１０℃の温度であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
（６ＲＳ）−フォリン酸カルシウムの水溶液が、７．５重量％〜８．５重量％の濃度であることを特徴とする、請求項１〜２のうちの一項に記載の方法。
【請求項４】
（６Ｓ）−フォリン酸カルシウムの水溶液が、３．０重量％〜３．７重量％、好ましくは３．５重量％の濃度であることを特徴とする、請求項１〜２のうちの一項に記載の方法。
【請求項５】
（６ＲＳ）−または（６Ｓ）−フォリン酸カルシウムの水溶液が４６℃の温度であることを特徴とする、請求項１〜４のうちの一項に記載の方法。
【請求項６】
塩酸水溶液が室温であり、かつ１０重量％〜２０重量％、好ましくは１８重量％の濃度であることを特徴とする、請求項１〜５のうちの一項に記載の方法。
【請求項７】
前記の両溶液の同時添加の間に得られる混合物において、温度を６℃〜１０℃の値に保持することを特徴とする、請求項１〜６のうちの一項に記載の方法。
【請求項８】
前記の両溶液の同時添加の間に得られる混合物において、ｐＨ値を２．８〜３．２の値に保持することを特徴とする、請求項１〜７のうちの一項に記載の方法。
【請求項９】
前記の両溶液の同時添加の実現後、得られる混合物を６℃〜１０℃の温度でさらに１時間攪拌することを特徴とする、請求項１〜８のうちの一項に記載の方法。
【請求項１０】
−出発物質として（６ＲＳ）−フォリン酸カルシウムを使用する場合、形成される結晶性固体を、冷水で洗浄した後、アセトンと水との９：１（ｖ／ｖ）の混合物で洗浄すること、および
−出発物質として（６Ｓ）−フォリン酸カルシウムを使用する場合、形成される結晶性固体を、冷水で洗浄した後、エタノールと水との９４：６（ｖ／ｖ）の混合物で洗浄すること
を特徴とする、請求項１〜９のうちの一項に記載の方法。
【請求項１１】
結晶性（６ＲＳ）−Ｎ（５）−ホルミル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸および非晶質（６Ｓ）−Ｎ（５）−ホルミル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸。
【請求項１２】
請求項１〜１０のうちの一項に記載の方法に従って製造されたことを特徴とする、請求項１１に記載の結晶性（６ＲＳ）−Ｎ（５）−ホルミル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸および非晶質（６Ｓ）−Ｎ（５）−ホルミル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸。
【請求項１３】
（６ＲＳ）−または（６Ｓ）−フォリン酸のナトリウムまたはカリウム塩の水溶液の製造のための、結晶性（６ＲＳ）−Ｎ（５）−ホルミル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸または非晶質（６Ｓ）−Ｎ（５）−ホルミル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の使用。
【請求項１４】
（６ＲＳ）−または（６Ｓ）−フォリン酸のナトリウムまたはカリウム塩の、濃縮された安定な溶液、特に注射液または輸液の製造方法であって、
結晶性（６ＲＳ）−フォリン酸または非晶質（６Ｓ）−フォリン酸を、室温で不活性ガス雰囲気下、脱ガスし注射液または輸液の製造に許容される水中に懸濁し、次に、
ナトリウムまたはカリウムの水酸化物、炭酸水素塩または炭酸塩の水溶液を、それぞれの所望のｐＨ値を有する透明な溶液が形成されるまでの長時間に、分割して添加し、
得られる溶液を無菌濾過に付し、
得られる無菌溶液を、不活性ガス雰囲気下、バイアルまたはアンプルに充填する
ことを特徴とする、方法。
【請求項１５】
結晶性（６ＲＳ）−フォリン酸または非晶質（６Ｓ）−フォリン酸が、請求項１〜１０のうちの一項に記載の方法に従って製造されることを特徴とする、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記の透明な溶液が、（６ＲＳ）−または（６Ｓ）−フォリン酸ナトリウムまたは（６ＲＳ）−または（６Ｓ）−フォリン酸カリウムを、２重量％〜１５重量％、特に２重量％〜６重量％、好ましくは５重量％含有することを特徴とする、請求項１４〜１５のうちの一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記の透明な溶液のｐＨ値が、７．５〜８．５の範囲内、特に７．９〜８．１、好ましくは８．０であることを特徴とする、請求項１４〜１６のうちの一項に記載の方法。
【請求項１８】
水と、（６Ｓ）−フォリン酸ナトリウムまたは（６Ｓ）−フォリン酸カリウムを含有することを特徴とする、濃縮された安定な溶液、特に注射液または輸液。
【請求項１９】
請求項１４〜１７のうちの一項に記載の方法に従って製造されることを特徴とする、請求項１８に記載の溶液。
【請求項２０】
（６Ｓ）−フォリン酸ナトリウムまたは（６Ｓ）−フォリン酸カリウムを、２重量％〜１５重量％、特に２重量％〜６重量％、好ましくは５重量％含有することを特徴とする、請求項１８〜１９のうちの一項に記載の溶液。
【請求項２１】
ｐＨ値が７．５〜８．５の範囲内、特に７．９〜８．１、好ましくは８．０であることを特徴とする、請求項１８〜２０のうちの一項に記載の溶液。
【請求項２２】
安定剤も錯化剤も含まないことを特徴とする、請求項１８〜２１のうちの一項に記載の溶液。
【請求項２３】
内部に不活性ガス雰囲気、特に窒素雰囲気を有する、バイアルまたはアンプルに充填されることを特徴とする、請求項１８〜２２のうちの一項に記載の溶液。
【請求項２４】
請求項１８〜２３のうちの一項に記載の濃縮された安定な溶液を充填されることを特徴とする、バイアルまたはアンプル。
【請求項２５】
高用量のメトトレキサートで処置した後の救命用医薬−救命薬−の製造のための、請求項１８〜２３のうちの一項に記載の溶液の使用。
【請求項２６】
５−フルオロウラシルと組み合わせられる医薬の製造のための、請求項１８〜２３のうちの一項に記載の溶液の使用。
【請求項２７】
巨赤芽球性貧血およびジヒドロプテリジン還元酵素欠損症の治療用薬剤の製造のための、請求項１８〜２３のうちの一項に記載の溶液の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、結晶性（６ＲＳ）−Ｎ（５）−ホルミル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸および非晶質（６Ｓ）−Ｎ（５）−ホルミル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の製造方法に関する。
【０００２】
また、本発明は、結晶性（６ＲＳ）−Ｎ（５）−ホルミル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸および非晶質（６Ｓ）−Ｎ（５）−ホルミル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸自体に関する。
【０００３】
また、本発明は、（６ＲＳ）−または（６Ｓ）−フォリン酸のナトリウムまたはカリウム塩の濃縮された安定な溶液、特に注射液または輸液の製造方法、およびこの溶液自体に関する。
【背景技術】
【０００４】
Ｎ（５）−ホルミル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸は、フォリン酸とも呼ばれている。
【０００５】
還元葉酸塩の易溶性アルカリ金属塩の薬理学的意義が、欧州特許ＥＰ０６６７１５９号の明細書の初めに記載されている。
【０００６】
フォリン酸の製造の、既知の先行技術は、ノルウェー特許ＮＯ１７２４９２号に記載されている。
【０００７】
この言及により、これら２件の引例でなされたような記述もここで開示されると見なされる。
【０００８】
これらの方法に従って製造されるフォリン酸は、非晶質のものであると推測できる。
【０００９】
結晶性のフォリン酸は、本発明の出願日までは、開示されていない。
【００１０】
国際特許ＷＯ９３／１７０２２号の実施例１には、純粋な（６ＲＳ）−フォリン酸の製造が記載されている。この実施例では、（６ＳＲ）−フォリン酸の「沈殿(precipitate)」と記述されている。
【００１１】
この実施例に従って得られた生成物のＸ線解析から、かつ、図２に示される通り、この生成物は少なくとも３０％の非晶質（６ＲＳ）−フォリン酸を含有することが明らかである。
【００１２】
フォリン酸は、水溶性のフォリン酸塩の水溶液の直接酸性化によって入手可能であることは予測されるであろう。
【００１３】
例えば、フォリン酸カルシウムの水溶液を希塩酸で酸性化する場合、温度、濃度、反応時間等の様々なパラメータを変える場合でも、その後、処理不可能なゴム状の生成物が得られる。
【００１４】
欧州特許ＥＰ０２９３０２９号の実施例６によれば、希塩酸は（６Ｓ）−フォリン酸カルシウムの水溶液に慎重に添加され、それによって（６Ｓ）−フォリン酸は沈殿するはずであり、濾過によって得ることができるはずである。
【００１５】
本発明の出願人は、この実施例を繰り返すことはできなかった：温度、濃度、反応時間等の様々なパラメータを変えたという事実にもかかわらず、いつも処理不可能なゴム状の生成物が得られた。
【００１６】
Ｅ．カリファ(Khalifa)、Ａ．Ｎ．ガングリー(Ganguly)、Ｊ．Ｈ．ビエリ(Bieri)およびＭ．ビスコンティニ(Viscontini)のHelv. Chim. Acta、６３巻、２５５４頁（１９８０年）によれば、ここに記述されるフォリン酸は、明らかに、（６ＲＳ）−ジアステレオ異性体の混合物であり、非晶形のものである。
【００１７】
従って、欧州特許ＥＰ０６６７１５９号では、実施例において、非晶質（６ＲＳ）−フォリン酸が使用されたことが記載されている。
【００１８】
還元型フォリン酸塩の生物学的活性体は、（６Ｓ）−立体配置であることは、よく知られている；例えば、Ｅ．Ｅ．ヴァン・タメレン(van Tamelen)、Ｒ．Ｅ．ホプラ(Hopla)、米国化学会誌(Journal of the America Chemical Society)、１０１巻、６１１４−６１１５頁（１９７９年）参照のこと。
【００１９】
それから、欧州特許ＥＰ０６６７１５９号に記載されたような注射液は、（６Ｒ）−立体配置の不活性物質を５０％含有する。換言すれば、このことは、そのような注射液が投与される人体に不必要な負担がかかることを意味する（倍の投与期間および不活性物質の投与）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２０】
本発明の目的は、上述の難点を克服することである。
【００２１】
本発明のさらなる目的は、結晶性（６ＲＳ）−フォリン酸および非晶質（６Ｓ）−フォリン酸を提供することである。
【００２２】
また、これら２つの化合物の製造方法も提供される。
【００２３】
また、（６Ｓ）−フォリン酸のナトリウムまたはカリウム塩の濃縮した安定な溶液も提供される。
【００２４】
また、非晶質（６Ｓ）−フォリン酸から出発する、この溶液の製造方法も提供される。
【課題を解決するための手段】
【００２５】
本発明によって、これらの目的は達成される。
【００２６】
誠に驚くべきことに、請求項１の特徴的部分の教示に従って実施する場合、結晶性（６ＲＳ）−フォリン酸が得られることが判った。
【００２７】
また、請求項１の特徴的部分の教示に従って製造された非晶質（６Ｓ）−フォリン酸は、結晶性（６ＲＳ）−フォリン酸と同等の安定性を有することも判った。
【００２８】
結晶性（６ＲＳ）−Ｎ（５）−ホルミル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸または非晶質（６Ｓ）−Ｎ（５）−ホルミル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の発明的製造方法は、
−  ４０℃〜５０℃の温度の（６ＲＳ）−または（６Ｓ）−フォリン酸カルシウムの水溶液
−  塩酸または酢酸の水溶液
を２℃〜１２℃の温度の攪拌された水に同時に添加するが、
この添加は、前記の両溶液の添加の間に得られる混合物において、一方で温度を２℃〜１２℃の値に保持し、他方でｐＨ値を２．５〜３．５の値に保持するように行われ、
形成される固体を濾過または遠心分離によって単離し、
この固体を先ず冷水で洗浄し、次に水性有機溶媒で洗浄し、かつ、
洗浄した固体、即ち、結晶性（６ＲＳ）−Ｎ（５）−ホルミル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸または非晶質（６Ｓ）−Ｎ（５）−ホルミル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸を減圧下で乾燥して得ることを特徴とする。
【００２９】
（６ＲＳ）−または（６Ｓ）−フォリン酸のナトリウムまたはカリウム塩の濃縮された安定な溶液、特に注射液または輸液の発明的製造方法は、
結晶性（６ＲＳ）−フォリン酸または非晶質（６Ｓ）−フォリン酸を、室温で不活性ガス雰囲気下、脱ガスし注射液または輸液の製造に許容される水中に懸濁し、次に、
ナトリウムまたはカリウムの水酸化物、炭酸水素塩または炭酸塩の水溶液を、それぞれの所望のｐＨ値を有する透明な溶液が形成されるまでの長期間に、分割して添加し、
得られる溶液を無菌濾過に付し、
得られる無菌溶液を、不活性ガス雰囲気下、バイアルまたはアンプルに充填する
ことを特徴とする。
【００３０】
発明の濃縮された安定な溶液、特に注射液または輸液は、水と、（６Ｓ）−フォリン酸ナトリウムまたは（６Ｓ）−フォリン酸カリウムを含有することを特徴とする。
【００３１】
この発明の溶液は、
−  高用量のメトトレキサートで処置した後の救命用医薬−救命薬−の製造のため
−  ５−フルオロウラシルと組み合わせられる医薬の製造のため
−  巨赤芽球性貧血およびジヒドロプテリジン還元酵素欠損症の治療用薬剤の製造のために使用してもよい。
【００３２】
本発明の好ましい態様は、従属項において規定される。
【００３３】
以下の実施例は、本発明を例示する。
【実施例】
【００３４】
実施例１
ノルウェー特許ＮＯ１７２４９２号に従って製造された、２５０ｇの（６ＲＳ）−フォリン酸カルシウムを、５５℃の温度で、３．３リットルの脱イオン水に溶解した。
【００３５】
この透明溶液（以下の部分において溶液Ａと言及する）を５０℃の温度に冷却した。
【００３６】
冷却装置および攪拌装置を備えた１０リットルの反応器に、２．５２リットルの脱イオン水を添加し、攪拌下、６℃の温度に冷却した。
【００３７】
この６℃の冷水に、攪拌下、前記の溶液Ａと１８％塩酸水溶液を、２つの蠕動ポンプを用いて同時に添加した。
【００３８】
溶液Ａの添加速度は、得られる混合物の温度が６℃〜１０℃の間であるように選択された。
【００３９】
１８％塩酸水溶液の添加の相対速度は、得られる混合物のｐＨ値が２．８〜３．２の間であるように選択された。
【００４０】
溶液Ａおよび塩酸の添加は、３時間後に終了した。
【００４１】
得られた懸濁液は、６℃〜１０℃の温度で、さらに１時間攪拌した。
【００４２】
形成された結晶性固体は、遠心分離によって単離した。
【００４３】
固体は、脱イオン水で一度、アセトンと脱イオン水との９：１（ｖ／ｖ）の混合物で一度、洗浄した。両洗浄液は、５℃〜１０℃の温度であった。
【００４４】
洗浄した結晶性固体は、減圧下（２０〜３０ｍｂａｒ）、室温で２時間、および、５０℃の温度で１時間、乾燥した。
【００４５】
２１５ｇの結晶性（６ＲＳ）−フォリン酸が得られた。
ＨＰＬＣ純度：９９．６％
ＨＰＬＣ分析／含量：１００．３％
【００４６】
図１より、得られた個体が結晶性であったことが判る。
【００４７】
この固体を、冷蔵庫で２℃〜８℃の温度で保存した。それにより、この固体について下記の安定性データが得られた。
【００４８】
時間（月）          分析（ＨＰＬＣ）        純度（ＨＰＬＣ）
０                  ９９．４％              ９９．７８％
３                  ９９．０％              ９９．７９％
６                  ９９．１％              ９９．７５％
９                １００．２％              ９９．８２％
１２                  ９９．９％              ９９．７９％
【００４９】
実施例２
欧州特許ＥＰ６００４６０号およびノルウェー特許ＮＯ１７２４９２号に従って製造された、２９０ｇの（６Ｓ）−フォリン酸カルシウムを、５８℃の温度で、４．９リットルの脱イオン水に溶解した。
【００５０】
この透明溶液（以下の部分において溶液Ｂと言及する）を４５℃の温度に冷却した。
【００５１】
冷却装置および攪拌装置を備えた２０リットルの反応器に、４リットルの脱イオン水を添加し、攪拌下、６℃の温度に冷却した。
【００５２】
この６℃の冷水に、攪拌下、前記の溶液Ｂと１８％塩酸水溶液を、２つの蠕動ポンプを用いて同時に添加した。
【００５３】
溶液Ｂの添加速度は、得られる混合物中の温度が６℃〜１０℃の間になるように選択された。
【００５４】
１８％塩酸水溶液の添加の相対速度は、得られる混合物のｐＨ値が２．８〜３．２の間になるように選択された。
【００５５】
溶液Ｂおよび塩酸の添加は、３時間後に終了した。
【００５６】
得られた懸濁液は、６℃〜１０℃の温度で、さらに１時間攪拌した。
【００５７】
形成された非晶質の固体は、遠心分離によって単離した。
【００５８】
固体は、脱イオン水で一度、エタノールと脱イオン水との９４：６（ｖ／ｖ）の混合物で一度、洗浄した。両洗浄液は、５℃〜１０℃の温度であった。
【００５９】
洗浄した非晶質の固体は、減圧下（２０〜３０ｍｂａｒ）、室温で２時間乾燥した。
【００６０】
１４６ｇの非晶質（６Ｓ）−フォリン酸が得られた。
ＨＰＬＣ純度：９９．２％
ＨＰＬＣ分析／含量：９９．０％
【００６１】
ジアステレオ異性体純度は９９．７％（ＨＰＬＣ）であった。
【００６２】
この固体を、冷蔵庫で２℃〜８℃の温度で保存した。それにより、この固体について下記の安定性データが得られた。
【００６３】
時間（月）          分析（ＨＰＬＣ）        純度（ＨＰＬＣ）
０                  ９９．０％              ９９．２％
１                  ９８．５％              ９９．０％
２                  ９８．１％              ９８．９％
３                  ９８．９％              ９８．９％
６                  ９８．１％              ９８．４％
１２                  ９７．８％              ９７．２％
【００６４】
実施例３
実施例２に従って製造された、１００ｇの非晶質（６Ｓ）−フォリン酸を、窒素雰囲気下室温で、脱気した滅菌水１．２リットルに懸濁した。
【００６５】
次に、攪拌下、１０％水酸化ナトリウム水溶液を、ｐＨ値８．０の透明な溶液が形成されるまで、長時間滴下した。
【００６６】
得られた透明な溶液は、１．８リットルの脱気した滅菌水を添加して希釈した。
【００６７】
この希釈した溶液を、無菌濾過（孔径０．２マイクロメートル）に付した。
【００６８】
得られた無菌濾液は、窒素雰囲気下、１０ｍｌのサイズのガラス製バイアルに充填した。
【００６９】
これらのガラス製バイアルを、冷蔵庫で２℃〜８℃の温度で保存した。それにより、ガラス製バイアルに充填された溶液について下記の安定性データが得られた。
【００７０】
時間（月）          分析（ＨＰＬＣ）        純度（ＨＰＬＣ）
０                  １００．０％            ９８．４％
１                  １０１．０％            ９８．４％
３                  １０６．０％            ９８．３％
６                  １１０．９％            ９８．９％
９                  １０８．０％            ９８．１％
１２                  １１１．７％            ９７．６％
【００７１】
１２ヶ月後、溶液はなお透明であり、沈殿は検出できなかった。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】図１は、発明の結晶性（６ＲＳ）−フォリン酸のＸ線解析を示す。図１から、（６ＲＳ）−フォリン酸の化合物は結晶性が高いことが明らかである。非常に驚くべきことに、請求項１の特徴的部分の教示に従って製造される（６Ｓ）−Ｎ（５）−ホルミル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸は、結晶形態で入手できないことが言及されていた。対応するＸ線解析は、有意なピークがないことを示す。
【図２】図２は、国際特許ＷＯ９３／１７０２２号の実施例１に従って得られた生成物のＸ線解析である。この生成物は少なくとも３０％の非晶質（６ＲＳ）−フォリン酸を含有することが明らかである。
【図１】
2007523095.tif 000002
【図２】
2007523095.tif 000003
【国際調査報告】
2007523095.tif 000004
2007523095.tif 000005
2007523095.tif 000006
2007523095.tif 000007
2007523095.tif 000008
2007523095.tif 000009
2007523095.tif 000010
2007523095.tif 000011
2007523095.tif 000012
2007523095.tif 000013
2007523095.tif 000014
2007523095.tif 000015
2007523095.tif 000016
2007523095.tif 000017