(57)【要約】  プロスタグランジン関連化合物とトレフォイルファクターファミリーペプチドとに関連する組成物、方法および医薬品を開示する。特に興味深いのは、充血の少ない緑内障処置に有用な組成物および方法である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
プロスタグランジンまたはプロスタミドとトレフォイルファクターファミリーペプチドとを含む剤形。
【請求項２】
プロスタグランジンまたはプロスタミドの濃度が0.001％〜0.1％である、請求項1の剤形。
【請求項３】
トレフォイルファクターファミリーペプチドの濃度が0.001％〜1％である、請求項1の剤形。
【請求項４】
トレフォイルファクターファミリーペプチドの濃度が0.01％〜0.5％である、請求項1の剤形。
【請求項５】
トレフォイルファクターファミリーペプチドの濃度が0.1％〜0.2％である、請求項1の剤形。
【請求項６】
トレフォイルファクターファミリーペプチドの濃度が約0.15％である、請求項1の剤形。
【請求項７】
粘膜付着剤をさらに含む、請求項1の剤形。
【請求項８】
多糖体をさらに含む、請求項1の剤形。
【請求項９】
タマリンド種子多糖体をさらに含む、請求項1の剤形。
【請求項１０】
トレフォイルファクターファミリーペプチドがTFF3である、請求項1の剤形。
【請求項１１】
トレフォイルファクターファミリーペプチドがTFF1である、請求項1の剤形。
【請求項１２】
ビマトプロストを含む、請求項1の剤形。
【請求項１３】
ビマトプロストを含む、請求項9の剤形。
【請求項１４】
ヒトの眼充血または結膜充血を処置する方法であって、前記ヒトの眼に処置有効量のトレフォイルファクターファミリーペプチドを局所的に投与することを含み、前記ヒトがプロスタグランジン関連化合物による緑内障または高眼内圧の処置を受けている方法。
【請求項１５】
トレフォイルファクターファミリーペプチドおよびプロスタグランジン関連化合物が単一の組成物として投与される、請求項14の方法。
【請求項１６】
トレフォイルファクターファミリーペプチドおよびプロスタグランジン関連化合物が個別に投与される、請求項14の方法。
【請求項１７】
トレフォイルファクターファミリーペプチドが粘膜付着剤を含む剤形で投与される、請求項14の方法。
【請求項１８】
トレフォイルファクターファミリーペプチドがTFF1またはTFF3を含む、請求項14の方法。
【請求項１９】
ヒトがビマトプロストによる処置を受けている、請求項17の方法。
【請求項２０】
粘膜付着剤が多糖体を含む、請求項17の方法。
【請求項２１】
トレフォイルファミリーペプチドがタマリンド種子多糖体と共に投与される、請求項19の方法。
【請求項２２】
プロスタグランジンまたはプロスタミドがプロスタグランジンF関連化合物である、請求項1の剤形。
【請求項２３】
タマリンド種子多糖体、約0.5％の塩化ナトリウム、約0.005％の塩化ベンザルコニウム、および約0.6％のホウ酸緩衝剤を含み、組成物のpHが約6〜約8に調整される、請求項2の剤形。
【請求項２４】
約0.03％のビマトプロストを含む、請求項23の剤形。
【請求項２５】
約0.005％のラタノプロストを含む、請求項23の剤形。
【請求項２６】
約0.004％のトラボプロストを含む、請求項23の剤形。
【請求項２７】
約0.15％のイソプロピルウノプロストンを含む、請求項23の剤形。
【請求項２８】
処置有効量のプロスタグランジンF関連化合物と処置有効濃度のトレフォイルファクターファミリーペプチドとを含む組成物、および
眼科使用に適した包装材であって、前記組成物がそこから投薬されるもの
を含み、
緑内障を予防または処置するための前記組成物の使用が、その上に表示されている医薬品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、プロスタグランジン関連化合物とトレフォイルファクターファミリーペプチドとを含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
活性な薬物はその治療有効濃度で望ましくない副作用を持つことが多い。これは、例えば比較的穏やかな薬物でさえ刺激を回避することが著しく困難な眼などの敏感な部位における局所使用にとっては、とりわけ大きな問題になる。その結果、眼科局所薬の製剤化は、とりわけ困難な課題になっている。これは残念なことである。なぜなら、薬物の眼科的局所使用は、眼を冒す多くの状態、例えばドライアイ、感染、炎症、アレルギー、および緑内障などの管理に、極めて有用であることがわかっているからである。緑内障は眼内圧の上昇を特徴とするとりわけ重大な眼の疾患であり、多くの場合、薬物の眼科的局所使用によって処置される。緑内障は40歳を超える全ての人の約2％に起こり、無症候状態が何年も続いてから、視力低下が急速に進行する場合もある。外科手術が適応でない場合、β-アドレナリン受容体アンタゴニストおよびα2-アドレナリン受容体アゴニストを含む多くの薬物が、局所適用による緑内障の処置に有用であることが見いだされている。最近、プロスタグランジンは、緑内障の局所処置に、とりわけ有用であることが示されている。
【０００３】
プロスタグランジンは重度の眼内副作用を持たないようであるが、ヒトでは、眼表面（結膜）充血、異物感、およびかゆみ（そう痒）が、前記化合物、特にPGF2αおよびそのプロドラッグ、例えばその1-イソプロピルエステルなどの眼への局所使用に一貫して関係づけられている。眼圧の上昇を伴う状態、例えば緑内障の管理におけるプロスタグランジンの臨床的な可能性は、これらの副作用によって著しく制限される。
【０００４】
本願と同じくAllergan，Inc.に譲渡され、参照により本明細書に組み入れられる米国特許第5,688,819号には、プロスタミドと呼ばれる化合物が開示されている。プロスタミドは、カルボニル基に結合している酸素が窒素含有置換基で置き換えられている点で、プロスタグランジンとは区別される。当該生物学的分子に含まれる重要な構造特徴のいくつかの電子的性質および立体的性質を、この置換が有意に変化させることは、当業者には容易に理解されるだろう。意義深いことに、窒素孤立電子対とカルボニルπ結合の間の共鳴は、カルボン酸エステルまたはカルボン酸におけるカルボニル基と酸素孤立電子対の間の共鳴よりもかなり大きいと、当技術分野では一般に考えられている。この考えは、アミンがピラミッド形の幾何学的位置関係を持つのに対して、アミド中の窒素原子は平面であるという、十分に確立された実験的観察結果によって裏付けられる。すなわち、当技術分野で一般に受け入れられている考えは、アミンの窒素原子はsp3混成であるのに対して、アミドの窒素原子はsp2混成であり、結合電子がsp2混成軌道を占め、非結合電子対がp軌道を占めることにより、カルボニルπ系との共役が可能になるというものである。対照的に、水およびアルコール中の酸素原子が持つ電子の混成状態、結合および幾何学的位置関係はカルボン酸またはカルボン酸エステルのものとによく似ている。
【０００５】
アミドにおける窒素とカルボニル基の間の共鳴の増加は、いくつかのユニークな特性をこの分子に付与する。第1に、アミドの加水分解はエステルの加水分解よりも少なくとも2桁は遅いことが、当技術分野ではよく知られている（例えばFrancis A. Carey「Organic Chemistry」ニューヨーク：McGraw-Hill Book Company，1987，779頁参照）。したがって、インビボでのアミドの加水分解は、プロスタミドがプロスタグランジンのプロドラッグとは見なせなくなる程度にまで遅くなる。第2に、共鳴の増加は、窒素-カルボニルσ結合の周りの回転障壁を、エステルおよびカルボン酸に付随する類似の回転障壁と比較して、有意に増加させる。したがってプロスタミドでは、プロスタグランジンの酸素原子が、立体的に有意な、安定な、固定的な基によって、置き換えられている。幾何学的位置関係は多くの受容体部位にとって重要であるから、この有意な立体的相違は、いくつかの受容体部位への結合において、有意な影響を持つだろう。プロスタグランジンのカルボン酸基はイオン化可能な極性基であり、4つの潜在的な水素結合受容電子対を持つと共に、プロトン化した酸の場合は1つの潜在的水素結合供与体を持つので、この官能基がいくつかの受容体への当該分子の結合にとって重要になると考えることは、当業者としては理にかなっている。したがって、酸素との比較で窒素の場合、共鳴性、結合電子および非結合電子の混成状態、窒素原子の幾何学的位置関係、利用可能な水素結合部位の数、ならびに電気陰性度が変化されることで、プロスタグランジンと比較して有意に異なる生物学的性質がプロスタミドに付与されるということになる。
【０００６】
アミドがカルボン酸に対して異なる性質を持つことは、最近、当技術分野では、一般に受け入れられるようになってきている。例えば、アラキドン酸の一般的アミドであるアナンダミドは、アラキドン酸が持たない有意な生物学的活性を持つことが示されている。アミドがカルボン酸と比べて異なる活性を持つことを示す研究は他にも行なわれており、その結果、一部の当業者は脂肪酸アミドを「新しい生物学的活性脂質ファミリー」と分類するようになっている（Bezuglovら「Synethesis and Biological Evaluation of Novel Amides of Polyunsaturated Fatty Acids with Dopamine（ポリ不飽和脂肪酸のドーパミンとの新規アミドの合成および生物学的評価）」Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 11（2001），447-449）。
【０００７】
プロスタミドは平滑筋に対して顕著な作用を持ち、強力な眼圧降下剤であることが示されている。また、プロスタミドが引き起こす眼表面充血はプロスタグランジンよりも有意に少ない。これらの作用の好例となるプロスタミドの1つは、Allergan，Inc.がLumigan（登録商標）という商標で販売しているビマトプロストであり、これは以下の式Iに示す構造を持つ。
【化１】
2007507498.tif 000002
しかし、ビマトプロストには、一定のプロスタグランジンと比較すると有意に少ない充血および他の刺激性副作用が付随するが、依然として、さらなる改善が大いに望ましい。
【０００８】
トレフォイルペプチド、すなわちトレフォイルファクターファミリー（TFF）ペプチドは、トレフォイルドメインと呼ばれる共通の構造モチーフをその構造の一部として含む一群のペプチドである。トレフォイルモチーフは、6個のシステイン残基を含有する約20〜約60個のアミノ酸残基（通常約40個）を含む。これら6個のシステイン残基は3つのジスルフィド架橋を形成し、そのジスルフィド架橋は、上記約40個の残基がトレフォイルドメインと呼ばれるクローバー状の形状を持つように、ペプチド鎖中に3つのループを完成させる。TFFペプチドは1分子あたり1個また2個のトレフォイルドメインを持つことができ、トレフォイルドメインの一部ではない追加のアミノ酸残基を含んでもよい。現在までに、3タイプのTFFペプチド、すなわちTFF1（pS2とも呼ばれる）、TFF2（SPとも呼ばれる）、およびTFF3（ITFとも呼ばれる）が、ヒトから単離されている。TFF1ペプチドおよびTFF3ペプチドはそれぞれ1つのトレフォイルドメインを含有し、TFF2ペプチドは2つのトレフォイルドメインを含有する。TFF1ペプチドおよびTFF2ペプチドはどちらも胃の粘液産生細胞によって産生され、TFF3ペプチドは小腸および大腸の杯状細胞によって産生される。
【０００９】
3つの形態のTFFペプチドはいずれも粘膜損傷領域周辺の上皮細胞中で産生されることがわかっており、このことから、トレフォイルは傷害（特に上皮細胞への傷害）を治癒する役割を持つことが示唆される。TFFペプチドは、傷害部位の粘膜を安定化すると共に、修復を刺激することによって、治癒を支援すると考えられる。TFFペプチドはムチンに非共有結合することによって、粘液ゲルのレオロジーに影響を及ぼす（例えば粘度を増加させる）ことが示されている［Hauser F，Poulsom R，Chinery Rら，Proc Natl Acad Sci USA，1993，vol.90，6961-6965頁、およびBabyatsky MW，deBeaumont M，Thim L，Podolky D K，Gastroenterology，1996，vol.110，489-497頁］。TFFペプチドは傷害部位への上皮細胞の移動を促進することによる修復の刺激も担っているようである［Goeke Mら，Experimental Cell Research，2001，vol.264，337-344頁、およびPlayford RJ，Journal of the Royal College of Physicians of London，vol.31，37-40頁］。
【００１０】
眼表面、涙腺、遠心路および周辺組織におけるTFFペプチドの役割についてはわからないことがまだ多いものの、TFFペプチドは眼での治癒および他の関連プロセス中に存在しうると考えられる。TFF1ペプチドおよびTFF3ペプチドの生合成および貯蔵はヒト結膜上皮で起こる（TFF2の場合はこれが起こらない）ことがわかっており［Langer Gら，Invest Ophthalmol Vis Sci，1999，vol.40，2220-2224頁］、インビトロ研究では、TFF2ペプチドおよびTFF3ペプチドがウサギ由来の傷ついた角膜上皮細胞の移動を促進することが示されている［Goeke Mら，Experimental Cell Research，2001，vol.264，337-344頁］。しかし、TFFペプチドと眼を冒す何らかの病理学的状態との直接的な関係は、我々が知る限り、明白には確立されていない。
【発明の開示】
【００１１】
発明の概要
本明細書では、プロスタグランジンまたはプロスタミドとトレフォイルファクターファミリーペプチドとを含む剤形および方法を開示する。
【００１２】
発明の詳細な説明
本明細書では、プロスタグランジンまたはプロスタミドとトレフォイルファクターファミリーペプチドとを含む剤形を開示する。また、ヒトの眼充血または結膜充血を処置する方法であって、前記ヒトの眼に、処置有効量のトレフォイルファクターファミリーペプチドを局所的に投与することを含み、前記ヒトがプロスタグランジン関連化合物による緑内障の処置を受けている方法も開示する。
【００１３】
本明細書に開示する方法に関して、プロスタグランジン関連化合物およびトレフォイルファクターファミリーペプチドの個々の性質は、この2つをどのように投与するかを決定するにあたって考慮すべき事項になりうる。ある実施形態では、プロスタグランジン関連化合物およびトレフォイルファクターファミリーが単一の組成物として投与される。別の実施形態では、プロスタグランジン関連化合物およびトレフォイルファクターペプチドが、個別に投与される。別の実施形態では、プロスタグランジン関連化合物およびトレフォイルファクターファミリーペプチドが、同時に投与される。別の実施形態では、プロスタグランジン関連化合物およびトレフォイルファクターファミリーペプチドが、実質的に異なる時間に投与される。別の実施形態では、プロスタグランジン関連化合物およびトレフォイルファクターファミリーペプチドが、等しい頻度で投与される。別の実施形態では、プロスタグランジン関連化合物がトレフォイルファクターファミリーペプチドよりも高い頻度で投与される。別の実施形態では、プロスタグランジン関連化合物がトレフォイルファクターファミリーペプチドよりも低い頻度で投与される。
【００１４】
「プロスタグランジン関連化合物」とは、天然プロスタグランジンであること、プロスタグランジン類似体であること、プロスタグランジン受容体アゴニストであること、プロスタミドであること、または前記クラスのいずれかの医薬的に許容できる塩もしくはプロドラッグであることにより、プロスタグランジンに関連づけられる任意の化合物と、広く定義される。天然プロスタグランジンは、以下の構造式を持つプロスタン酸の誘導体であると記述することができる。
【化２】
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【００１５】
上記の構造およびプロスタグランジン関連化合物に関して、「α鎖」という用語は、上記の構造で1〜7と呼ばれる炭素原子によって形成される上側の鎖を指す。「ω鎖」という用語は、上記の構造で13〜20と呼ばれる炭素原子によって形成される下側の鎖を指す。8〜12と呼ばれる炭素原子によって形成される環を、ここでは便宜上、「シクロペンチル環」と呼ぶことがある。天然プロスタグランジンは、シクロペンチル環上の官能基または二重結合の存在、炭素5と炭素6の間のシス二重結合の有無、および炭素13と炭素14の間のトランス二重結合の有無によって特徴づけられる。そのような命名法は当技術分野ではよく知られている。だたし、決して本発明の範囲の限定を望むわけではないが、重要な天然プロスタグランジン化合物群として、プロスタグランジンE、プロスタグランジンF、およびプロスタグランジンDが挙げられる。プロスタグランジンEは、炭素9のカルボニル基およびα立体配置をとる炭素11上のヒドロキシル基を特徴とする。本発明において興味深いプロスタグランジンEの1つは、炭素5と炭素6の間に共有単結合を持ち、炭素13と炭素14の間に共有二重結合を持つ、プロスタグランジンE1である。本発明において興味深いもう1つのプロスタグランジンEは、炭素5と炭素6の間に共有二重結合を持ち、炭素13と炭素14の間に共有二重結合を持つ、プロスタグランジンE2である。すなわち、下付き文字は、基本プロスタグランジン構造中に見いだされる炭素-炭素二重結合の数を示している。
【００１６】
プロスタグランジンFと総称される化合物は、炭素9と炭素11の両方にヒドロキシル基が結合しているという共通の特徴によって特徴づけられる。プロスタグランジンEと同様に、炭素11についてはOHがα立体配置をとっているが、炭素9におけるOHの立体配置は下付き文字によって指定される。例えば、本発明において特に興味深いプロスタグランジンF2αは、炭素9にα立体配置のOHを持つプロスタグランジンFであり、プロスタグランジンE2と同様に、プロスタグランジンF2αは炭素5と炭素6の間および炭素13と炭素14の間に2つの炭素-炭素共有二重結合を持つ。
【００１７】
プロスタグランジンDと総称される化合物は、炭素9がCHOHで、そのOHがα立体配置をとっており、かつ炭素11がC=Oであるという共通の特徴によって特徴づけられる。先の例と同様に、本発明において興味深いプロスタグランジンDの1つはプロスタグランジンD2と呼ばれ、これは、この化合物が炭素5と炭素6の間および炭素13と炭素14の間に2つの炭素-炭素共有二重結合を持つことを示している。
【００１８】
本明細書にいう「プロスタグランジン類似体」は、天然のプロスタグランジンに対して特定の構造的類似性を持つ化合物を指す。類似体は、シクロペンチル環に関する天然プロスタグランジンの特徴、例えば立体化学、C15上のα-ヒドロキシル基、および炭素5、炭素6、炭素13および炭素14における二重結合の有無、またはこれらの特徴の合理的等価物をすべて持っている。ある特徴の合理的等価物とは、同様の目的を持つがその化合物の性質を強化する可能性があると当業者が合理的に判断するであろう特徴である。決して本発明の範囲を限定するつもりはないが、一般論として、ある原子または官能基が、それによって置き換えられる原子または官能基と等原子価または等電子であるなら、その原子または官能基は合理的等価物であるだろう。したがって、例えばα-CHSH基はα-CHOH基の合理的等価物であり、C=S基はC=O基の合理的等価物である。もう1つのタイプの合理的等価物は、それによって置き換えられる基とは異なる電子的性質を持つが、立体的性質が似ているものである。例えばFはHの合理的等価物であり、OCH3はOHの合理的等価物である。
【００１９】
上記のシクロペンチル環および二重結合に関する類似性の他に、プロスタグランジン類似体はシクロペンチル環上の隣接原子に結合したα鎖およびω鎖を持ちうる。プロスタグランジン類似体に関してシクロペンチル環ならびにα鎖およびω鎖が持つ意味は、天然プロスタグランジンのそれらが持つ意味よりも広い。プロスタグランジン類似体の場合、「シクロペンチル環」は3個以上の炭素原子からなる5員環であり、「α鎖」は4〜12個の炭素原子を持ち、「ω鎖」は4〜20個の炭素原子を持つ。どちらの鎖も、二重結合または三重結合、芳香環または脂環、ならびにS、O、N、およびハロゲンなどのヘテロ原子を含みうる。プロスタグランジン類似体の唯一の立体化学的要件は、それらが関係する天然プロスタグランジンのものと同じである。
【００２０】
従って、プロスタグランジンE類似体の場合、炭素9および炭素11は、OHがα立体配置であるCHOHであるべきであり、かつα鎖およびω鎖は、シクロペンチル環との結合に関して、それぞれα立体配置およびβ立体配置を持つべきである。以下の表に、数タイプの天然プロスタグランジンの類似体中に存在するであろう特徴を列挙する。もう1つの選択肢として、与えられたプロスタグランジン類似体には、各特徴の合理的等価物が存在してもよい。
【００２１】
2007507498.tif 000004
NAは要件がないことを意味する
【００２２】
「プロスタグランジン受容体アゴニスト」とは、後述する放射性リガンド結合およびFLIPR（商標）アッセイで、104nM未満の濃度でプロスタグランジン受容体の1つに結合し、それを活性化する化合物を指す。本発明において特に興味深いものは、FP受容体、EP2受容体、EP4受容体、および/またはDP受容体でアゴニスト活性を持つ化合物である。
【００２３】
放射性リガンド結合
EP1、EP2、EP4およびFP受容体を安定に発現させる細胞
ヒトまたはネコFP受容体、またはEP1、EP2、もしくはEP4受容体を安定に発現させるHEK-293細胞をTME緩衝液で洗浄し、フラスコの底からこすり落とし、Brinkman PT 10/35ポリトロンを使って30秒間ホモジナイズした。TME緩衝液を加えて遠心管中で最終体積を40mlにした（TMEの組成は100mM TRIS塩基、20mM MgCl2、2M EDTAであり、10N HClを加えてpHを7.4にする）。
【００２４】
Beckman Ti-60ロータを使って、4℃、19000r.p.m.で、20分間細胞ホモジネートを遠心分離した。得られたペレットをTME緩衝液に再懸濁して、Bioradアッセイで決定される最終タンパク質濃度を1mg/mlにした。［3H］17-フェニルPGF2α（5nM）に対する放射性リガンド結合競合アッセイを、100μlの体積で60分間行なった。血漿膜画分を加えることによって結合反応を開始させた。4mlの氷冷TRIS-HCl緩衝液を添加し、Brandelセル・ハーベスタを使ってガラス繊維GF/Bフィルターを通して迅速濾過することにより、反応を停止した。フィルターを氷冷緩衝液で3回洗浄し、1時間オーブン乾燥した。
【００２５】
EP受容体には［3H］PGE2（比活性180Ci/mmol）を放射性リガンドとして使用した。FP受容体結合試験には、［3H］17-フェニルPGF2αを使用した。EP1、EP2、EP4およびFP受容体を使った結合試験は、少なくとも3回の独立した実験で、それぞれ二重に行なった。200μlのアッセイ体積を使用した。インキュベーションは25℃で60分間とし、4mlの氷冷50mM TRIS-HClを添加した後、セル・ハーベスタ（Brandel）中でWhatman GF/Bフィルターを通して迅速濾過し、新たな4mlで3回洗浄することによって停止した。競合試験は、試験対象である受容体サブタイプに応じて、最終濃度5nMの［3H］-PGE2または5nMの［3H］17-フェニルPGF2αを使って行い、非特異的結合は、10-5Mの非標識PGE2または17-フェニルPGF2αを使って決定した。
【００２６】
FLIPR（商標）試験の方法
（a）細胞培養
組換えヒトプロスタグランジン受容体の1タイプまたは1サブタイプを安定に発現させるHEK-293（EBNA）細胞（発現されるプロスタグランジン受容体：hDP/Gqs5；hEP1；hEP2/Gqs5；hEP3A/Gqi5；hEP4/Gqs5；hFP；hIP；hTP）を、100mm培養皿中、10％ウシ胎仔血清、2mM l-グルタミン、選択マーカーとして250μg/mlのジェネティシン（G418）および200μg/mlのハイグロマイシンB、そして100単位/mlのペニシリンG、100μg/mlのストレプトマイシンおよび0.25μg/mlのアンホテリシンBを含有する高グルコースDMEM培地で培養した。
【００２７】
（b）FLIPR（商標）でのカルシウムシグナル試験
細胞を、Biocoat（登録商標）ポリ-D-リジン被覆黒壁透明底96穴プレート（Becton-Dickinson）の各ウェルに5×104細胞の密度で播種し、培養器中、37℃で一晩付着させた。次にDenley Cellwashプレート洗浄機（Labsystems）を使って、細胞を、HBSS-HEPES緩衝液（重炭酸塩およびフェノールレッドを含まないハンクス平衡塩類溶液、20mM HEPES、pH7.4）で2回洗浄した。最終濃度2μMのカルシウム感受性色素Fluo-4 AMを使って、暗所で45分間の色素負荷を行なった後、過剰な色素を除去するためにプレートをHBSS-HEPES緩衝液で4回洗浄し、各ウェルに100μlを残した。プレートを数分間、37℃に再平衡化した。
【００２８】
アルゴンレーザーを使って488nmで細胞を励起し、510〜570nmバンド幅発光フィルターを通して発光を測定した（FLIPR（商標），Molecular Devices，カリフォルニア州サニーベール）。薬物溶液を各ウェルに50μlの体積で加えて所望の最終濃度を得た。蛍光強度のピーク増加を各ウェルについて記録した。各プレート上でそれぞれ4つのウェルを陰性対照（HBSS-HEPES緩衝液）および陽性対照（標準アゴニスト：受容体に応じて、BW245C（hDP）；PGE2（hEP2；hEP2/Gqs5；hEP3A/Gqi5；hEP4/Gqs5）；PGF2α（hFP）；カルバサイクリン（hIP）；U-46619（hTP））とした。次に、各薬物含有ウェルにおけるピーク蛍光変化を、対照との比較で表した。
【００２９】
化合物はハイスループット（HTS）形式または濃度-応答（CoRe）形式で試験した。HTS 形式の場合、1プレートにつき44化合物を10-5Mの濃度で二重に調べた。濃度-応答曲線を作成するために、1プレートにつき4化合物を10-5〜10-11Mの濃度範囲で二重に試験した。それら二重の値を平均した。HTS形式でもCoRe形式でも、n≧3となるように、継代の異なる細胞を使って少なくとも3つの独立したプレートで、各化合物を試験した。
【００３０】
プロスタミドも「プロスタグランジン関連」化合物とみなされる。本明細書において、アミドという用語は、有機化学者が一般に理解している最も広い意味を持つ。プロスタミドは当技術分野で一般に知られている方法によって製造され、また参照により本明細書に組み込まれる米国特許第5,688,819号に記載の方法によっても製造される。重要な実施形態の1つは、本明細書に開示する組成物および方法におけるビマトプロストの使用に関する。ビマトプロストはAllergen，Inc.により、Lumigan（登録商標）という商標で販売されている。
【００３１】
本明細書で使用する「プロドラッグ」という用語は、当技術分野で通常理解されている意味を持つ。すなわち、プロドラッグは、インビボで容易に分解して天然プロスタグランジン、プロスタグランジン類似体、プロスタミドまたはプロスタグランジン受容体アゴニストを形成する化合物である。決して本発明の範囲を限定するつもりはないが、よくあるタイプのプロドラッグの1つは、加水分解によってヒドロキシド官能基を持つ活性化合物を与えるエステルである。
【００３２】
「塩」という用語は、当業者に通常理解されている意味を持つ。「医薬的に許容できる塩」は、親化合物の活性を保っていて、その投与を受ける対象に対し、およびそれが投与される状況で、有害な作用または不都合な作用を与えない、任意の塩である。
【００３３】
酸性官能基の医薬的に許容できる塩は、有機塩基または無機塩基から誘導することができる。塩は一価イオンまたは多価イオンであることができる。特に興味深いのは、無機イオン、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、およびマグネシウムである。有機塩、アミン、特にアンモニウム塩、例えばモノ-、ジ-およびトリ-アルキルアミンまたはエタノールアミン類などを使って製造することができる。塩は、カフェイン、トロメタミンおよび類似の分子を使って形成させることもできる。塩酸または他の医薬的に許容できる酸は、アミンまたはピリジン環などの塩基性基を含む化合物と塩を形成することができる。
【００３４】
特定のプロスタグランジン関連化合物クラスに言及するためにある用語法を使用する。「プロスタグランジンF関連」と呼ぶ化合物は、天然プロスタグランジンF、プロスタグランジンF類似体、プロスタグランジンFP受容体アゴニスト、または上述したプロスタグランジンF類似体に特有の特徴を持つプロスタミド、または前記化合物クラスのいずれかの塩もしくはプロドラッグである。異なるプロスタグランジンクラス、例えばプロスタグランジンE（「プロスタグランジンE関連」）またはプロスタグランジンD（「プロスタグランジンD関連」）などに関係する他のプロスタグランジン化合物を特定する場合にも、同様の用語法を使用しうる。
【００３５】
当業者は、本明細書に記載の組成物および方法で使用されるプロスタグランジン関連化合物の量または濃度を、過重な実験を行なわずに決定することができる。ある実施形態では、投与される剤形におけるプロスタグランジン関連化合物の濃度が、0.001％〜0.1％である。もう1つの実施形態では、投与される剤形におけるプロスタグランジン関連化合物の濃度が約0.03％である。
【００３６】
本明細書で使用するトレフォイルファクターファミリー（TFF）ペプチドという用語は、天然物であるか合成物であるかにかかわらず、上述のトレフォイルモチーフを含む任意のペプチドを指す。すなわちTFFペプチドは、6個のシステイン残基を含む20〜約60個のアミノ酸を含む残基を含む。システイン残基はジスルフィド結合を形成し、そのジスルフィド結合が、3つのループを含むクローバー状の形状をペプチド残基に持たせる。ペプチドの組換え発現や、合成ペプチドの合成など、TFFペプチドを製造する方法は、当技術分野ではよく知られている。例えばTFFペプチドの製造方法は以下の参考文献に記載されている：米国特許第6,525,018号、Allenら，J Clin Gastroenterol 1998；10（Suppl 1）：S93-S98、Ligumskyら，Isr J Med Sci 1986；22：801-806、Dignassら，J. Clin. Invest.，94，376-383、Babyatskyら，Gastroenterology，110，489-497、Hauserら，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，vol.90，6961-6965頁，August 1993、WO 02102403、およびWO 02085402（以上は参照により本明細書に組み入れられる）。ある実施形態では、トレフォイルファクターファミリーペプチドがTFF1、TFF2、またはTFF3である。もう1つの実施形態では、トレフォイルファクターファミリーペプチドがTFF1またはTFF3である。
【００３７】
当業者は、本明細書に開示する方法および組成物に使用されるトレフォイルファクターファミリーペプチドの濃度または量を、過重な実験を行なわずに容易に決定することができる。ある実施形態では、トレフォイルファクターファミリーペプチドの濃度が0.001％〜1％である。もう1つの実施形態では、トレフォイルファクターファミリーペプチドの濃度が0.01％〜0.5％である。もう1つの実施形態では、トレフォイルファクターファミリーペプチドの濃度が0.1％〜0.2％である。もう1つの実施形態では、トレフォイルファクターファミリーペプチドの濃度が約0.15％である。
【００３８】
本明細書に開示する組成物および方法の一部では粘膜付着剤が使用される。本発明に関して「粘膜付着剤（mucoadhesive）」という用語は、対象の粘膜に付着することができる、高分子、ポリマー、およびオリゴマー、またはそれらの混合物を含む天然成分または合成成分を意味する。粘膜への粘膜付着剤の付着は、主として、水素結合やファンデルワールス力などの非共有結合性相互作用によって起こる（Taborら，1977 J. Colloid Interface Sci. 58：2、およびGood 1977 J. Colloid Interface Sci. 59：398）。
【００３９】
本明細書に開示する実施形態で使用される粘膜付着剤の例には、Carbopol（登録商標）、ペクチン、アルギン酸、アルギネート、キトサン、ヒアルロン酸、ポリソルベート、例えばポリソルベート-20、-21、-40、-60、-61、-65、-80、-81、-85；ポリ（エチレングリコール）、例えばPEG-7、-14、-16、-18、-55、-90、-100、-135、-180、-4、-240、-6、-8、-9、-10、-12、-20、または-32；オリゴ糖および多糖体、例えばタマリンド種子多糖体、ジェラン、カラギーナン、キサンタンゴム、アカシアゴム、およびデキストラン；セルロースエステルおよびセルロースエーテル；修飾セルロースポリマー、例えばカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルエチルセルロース；ポリエーテルポリマーおよびオリゴマー、例えばポリオキシエチレン；ポリ（エチレンオキシド）と長い疎水性鎖（例えば炭素原子数約12〜20の脂肪族鎖）を持つ様々な反応性水素含有化合物との縮合生成物、例えばポリ（エチレンオキシド）と脂肪酸、脂肪アルコール、脂肪アミド、多価アルコールとの縮合生成物；ポリエーテル化合物、例えばポリ（メチルビニルエーテル）、ポリオキシプロピレン（繰り返し単位数が10未満）；ポリエーテル化合物、例えばエチレンオキシドとプロピレンオキシドとのブロックコポリマー；エチレンオキシドとプロピレンオキシドとのブロックコポリマーと、他の賦形剤、例えばポリ（ビニルアルコール）との混合物；ポリアクリルアミド；加水分解ポリアクリルアミド；ポリ（ビニルピロリドン）；ポリ（メタクリル酸）；ポリ（アクリル酸）または架橋ポリアクリル酸、例えばCarbomer（登録商標）、すなわち、ペンタエリスリトールのアリルエーテル、スクロースのアリルエーテル、またはプロピレンのアリルエーテルで架橋されたアクリル酸のホモポリマーなどがあるが、これらに限定されるわけではない。
【００４０】
ある実施形態では、粘膜付着剤が多糖体である。本明細書に開示する実施形態において粘膜付着剤として特に有用な多糖体の1つはタマリンド種子多糖体であり、これはタマリンドノキ（Tamarindus Indica）の種子仁から抽出されるガラクトキシログルカンであり、オレゴン州ポートランドのTCI Americaから購入することができる。
【００４１】
ある実施形態では、pHを約6〜約8に維持するために、緩衝剤を含む。特定の場合にはpHを約7に維持することが望ましい。使用する緩衝剤は当業者に知られているものであり、限定するつもりはないが、例を挙げると、酢酸緩衝剤、ホウ酸緩衝剤、炭酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、およびリン酸緩衝剤がある。好ましくは緩衝剤にホウ酸塩を含む。当業者は、本発明の目的に必要な緩衝剤の有効量を、過重な実験を行なわずに容易に決定することができる。緩衝剤がホウ酸塩を含むある実施形態では、ホウ酸緩衝剤の濃度が約0.6％である。
【００４２】
本明細書に記載するどの組成物にも浸透圧調節剤を使用することができる。浸透圧調節剤は、溶解した物質の濃度を所望の等張性範囲に調節するために、眼科用組成物に使用される。浸透圧調節剤は眼科分野の当業者には知られており、限定するつもりはないが、例として、グリセリン、マンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウム、および他の電解質が挙げられる。特に有用な浸透圧調節剤は塩化ナトリウムである。
【００４３】
本明細書に記載するどの組成物にも保存剤を使用することができ、その組成物を複数回使用するつもりである場合は特にそうである。個々の状況に応じて、単回使用組成物中に保存剤を使用する理由も存在しうる。保存剤という用語は、眼科分野で一般に理解されている意味を持つ。保存剤は複数回用眼科調製物中に細菌汚染を防ぐために用いられ、限定するつもりはないが、例えば塩化ベンザルコニウム、安定化オキシクロロ錯体（Purite（登録商標）とも呼ばれる）、酢酸フェニル水銀、クロロブタノール、ベンジルアルコール、パラベン、およびチメロサールなどがある。特に有用な保存剤の1つは塩化ベンザルコニウム（BAK）である。
【００４４】
ある状況で、ここに記載する発明に関連するどの組成物にも、界面活性剤を使用することができる。本明細書で使用する界面活性剤という用語は、当技術分野で一般に理解されている意味を持つ。界面活性剤は、当該組成物の処置活性剤または他の不溶性成分の可溶化を助けるために使用されると共に、他の目的にも役立つ。アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤、双性イオン界面活性剤、および非イオン性界面活性剤はいずれも本発明で使用することができる。ポリソルベート、ポロキサマー、アルコールエトキシレート、エチレングリコール-プロピレングリコールブロックコポリマー、脂肪酸アミド、アルキルフェノールエトキシレート、またはリン脂質などの非イオン性界面活性剤は、本明細書に開示する組成物および方法には特に有用である。
【００４５】
本明細書に記載するどの組成物にも使用することができるもう1つのタイプの化合物はキレート剤である。キレート剤という用語は、化学分野の当業者に理解されているとおり、金属を錯化することができる化合物を指す。眼科用組成物には保存有効性を強化するためにキレート剤が用いられる。限定するつもりはないが、有用なキレート剤の例として、エデト酸二ナトリウム、エデト酸カルシウム二ナトリウム、エデト酸ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、およびエデト酸二カリウムなどのエデト酸塩が挙げられる。
【００４６】
特に有用な実施形態の1つは、濃度0.001％〜0.1％のプロスタグランジン関連化合物、トレフォイルファクターファミリーペプチド、タマリンド種子多糖体、約0.5％塩化ナトリウム、約0.005％塩化ベンザルコニウム、および約0.6％のホウ酸緩衝剤を含み、組成物のpHは約6〜約8に調整される。ある組成物では、プロスタグランジン関連化合物が、0.03％の濃度で存在するビマトプロストである。もう1つの組成物では、プロスタグランジン関連化合物が、0.005％の濃度で存在するラタノプロストである。もう1つの組成物では、プロスタグランジン関連化合物が、0.004％の濃度で存在するトラボプロストである。もう1つの組成物では、プロスタグランジン関連化合物が、0.15％の濃度で存在するイソプロピルウノプロストンである。
【００４７】
もう1つの実施形態は、処置有効量のプロスタグランジンF関連化合物と処置有効濃度のトレフォイルファクターファミリーペプチドとを含む組成物、および眼科使用に適した包装材であって前記組成物がそこから投薬されるものを含み、緑内障を予防または処置するための上記組成物の使用がその上に表示されている医薬品に関する。
【００４８】
本発明を実施する最良の形態を以下の実施例に記載する。これらの実施例は、本発明を実施する方法に関する指針を与えるために記載するに過ぎず、決して本発明の範囲を限定しようとするものではない。
【実施例１】
【００４９】
本発明に関係する組成物を以下の手法で製造する。別段の表示がない限り、全ての手順ステップを室温で行なう。
【００５０】
パートI
タマリンド種子多糖体（TSP）を表1に示す濃度で精製水に加え、その溶液を沸騰させ、約30分間、穏やかな沸騰状態に保つ。次に、その溶液を室温まで冷まし、沸騰中の蒸発損失分を補うために水を加える。次に、その溶液を20ミクロン清澄フィルターを通して濾過した後、0.45ミクロン滅菌フィルターを通して濾過する。
【００５１】
パートII
表1に列挙した各成分を、パートIで得た固定体積の溶液に、表示した濃度を得るのに必要な量だけ、以下の順序で加える：TFF1、ホウ酸、ホウ酸ナトリウム十水和物、塩化ナトリウム、およびBAK。各成分を加えるごとに、溶質が完全に溶解するまで混合物を撹拌してから、次の成分を加える。製剤の成分を全て添加し、溶解し終えたら、NaOHまたはHClでpHを7.0に調整する。次にその溶液を滅菌濾過する。
【００５２】
【表１】
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【実施例２】
【００５３】
表2の組成を持つ製剤を実施例1の手法と類似する手法で製造する。ラタノプロストは当技術分野では周知であり、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第6,429,226号に記載の手法によって製造することができる。
【００５４】
【表２】
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【実施例３】
【００５５】
表3の組成を持つ製剤を実施例1の手法と類似する手法で製造する。
【表３】
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【実施例４】
【００５６】
表4の組成を持つ製剤を実施例1の手法と類似する手法で製造する。
【表４】
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【実施例５】
【００５７】
表5の組成を持つ製剤を実施例1の手法と類似する手法で製造する。
【表５】
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【実施例６】
【００５８】
表6の組成を持つ製剤を実施例1の手法と類似する手法で製造する。
【表６】
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【実施例７】
【００５９】
表7の組成を持つ製剤を実施例1の手法と類似する手法で製造する。
【表７】
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【実施例８】
【００６０】
実施例1および実施例3〜5の1つに従って製造した組成物1滴を、緑内障を患っている複数の患者に、少なくとも1日1回、滴下する。眼内圧の低下は全ての患者に観察されるが、トレフォイルファクターファミリーペプチドを含有する実施例1、実施例3および実施例4の組成物を投与した患者では、実施例5の組成物を投与した患者と比較して、観察される充血が少ない。
【国際調査報告】
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