(57)【要約】  本発明は、小分子調節因子の存在もしくは非存在下における一過性の熱または他のタンパク質毒性（ｐｒｏｔｅｏｔｏｘｉｃ）ストレスによって活性化可能である遺伝子スイッチを含有する条件的複製性ウイルスあるいはウイルスの対に関する。遺伝子スイッチは、効率的なウイルスの複製に必要なタンパク質の遺伝子の発現を制御し、そして、パッセンジャー遺伝子の活性をも制御し得る。
2007513624.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
改変された条件的複製−コンピテントウイルスであって、そのゲノムが、細胞の熱および小分子調節因子への暴露によって、感染細胞において活性化可能な遺伝子スイッチを含み、遺伝子スイッチが、改変ウイルスの効率的な複製に必要なウイルスタンパク質の遺伝子の発現を制御する、ウイルス。
【請求項２】
ウイルスゲノムがパッセンジャー遺伝子をさらに含む、請求項１に記載の改変ウイルス。
【請求項３】
ウイルスが、アデノウイルス科（Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）、ヘルペスウイルス科（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）、およびレトロウイルス科（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）からなる群から選択される科のメンバーである、請求項１に記載の改変ウイルス。
【請求項４】
ウイルスがアデノウイルスである、請求項１に記載の改変ウイルス。
【請求項５】
遺伝子スイッチが、Ｅ１Ａ、Ｅ１ＢおよびＥ４からなる群から選択される少なくとも１つのウイルスタンパク質の発現を制御する、請求項４に記載の改変ウイルス。
【請求項６】
改変された条件的複製−コンピテントウイルスであって、そのゲノムが、細胞の熱への暴露によって感染細胞において活性化され、細胞の小分子調節因子への暴露によって抑制される遺伝子スイッチを含み、遺伝子スイッチが、改変ウイルスの効率的な複製に必要なウイルスタンパク質の遺伝子の発現を制御する、ウイルス。
【請求項７】
ウイルスゲノムがパッセンジャー遺伝子をさらに含む、請求項６に記載の改変ウイルス。
【請求項８】
ウイルスが、アデノウイルス科（Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）、ヘルペスウイルス科（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）、およびレトロウイルス科（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）からなる群から選択される科のメンバーである、請求項６に記載の改変ウイルス。
【請求項９】
ウイルスがアデノウイルスである、請求項６に記載の改変ウイルス。
【請求項１０】
遺伝子スイッチが、Ｅ１Ａ、Ｅ１ＢおよびＥ４からなる群から選択される少なくとも１つのウイルスタンパク質の発現を制御する、請求項９に記載の改変ウイルス。
【請求項１１】
改変ウイルス対であって、その複合ゲノムが、ウイルス対の条件的複製に必要なすべての遺伝情報を含有し；細胞の熱および小分子調節因子への暴露によって、感染細胞において活性化可能な遺伝子スイッチを含み、遺伝子スイッチが、ウイルス対の効率的な複製に必要なウイルスタンパク質の遺伝子の発現を制御する、改変ウイルス対。
【請求項１２】
ウイルスのうち少なくとも一方のゲノムがパッセンジャー遺伝子をさらに含む、請求項１１に記載の改変ウイルス対。
【請求項１３】
ウイルスが、アデノウイルス科（Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）、ヘルペスウイルス科（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）、およびレトロウイルス科（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）からなる群から選択される科のメンバーである、請求項１１に記載の改変ウイルス対。
【請求項１４】
両ウイルスがアデノウイルスである、請求項１１に記載の改変ウイルス対。
【請求項１５】
遺伝子スイッチが、Ｅ１Ａ、Ｅ１ＢおよびＥ４からなる群から選択される少なくとも１つのウイルスタンパク質の発現を制御する、請求項１４に記載の改変ウイルス対。
【請求項１６】
改変ウイルス対であって、その複合ゲノムが、ウイルス対の条件的複製に必要なすべての遺伝情報を含有し；細胞の熱への暴露によって感染細胞において活性化され、細胞の小分子調節因子への暴露によって抑制される遺伝子スイッチを含み、遺伝子スイッチが、ウイルス対の効率的な複製に必要なウイルスタンパク質の遺伝子の発現を制御する、改変ウイルス対。
【請求項１７】
ウイルスのうち少なくとも一方のゲノムがパッセンジャー遺伝子をさらに含む、請求項１６に記載の改変ウイルス対。
【請求項１８】
ウイルスが、アデノウイルス科（Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）、ヘルペスウイルス科（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）、およびレトロウイルス科（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）からなる群から選択される科のメンバーである、請求項１６に記載の改変ウイルス対。
【請求項１９】
両ウイルスがアデノウイルスである、請求項１６に記載の改変ウイルス対。
【請求項２０】
遺伝子スイッチが、Ｅ１Ａ、Ｅ１ＢおよびＥ４からなる群から選択される少なくとも１つのウイルスタンパク質の発現を制御する、請求項１９に記載の改変ウイルス対。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、複製、および場合によりパッセンジャー遺伝子の発現が、熱および小分子調節因子によって二重に制御される遺伝子スイッチによって調節される、ウイルスベクターに関する。
【０００２】
（背景技術）
実験動物、および終局的にはヒトの生物学的研究、エクスビボでの細胞療法および遺伝子療法には多くの状況が存在し、ここで、導入された遺伝子または複製するウイルスの分布および発現の注意深い制御は極めて重要である。ウイルスおよび非ウイルスベクターは、遺伝子を細胞、組織および器官に送達する手段を提供する。しかし、この送達は、典型的に、特定の細胞タイプ、組織または組織局在には特異的ではない。これまで、いわゆる組織特異的プロモーターは、ウイルス複製またはベクターによって特定のタイプの細胞に送達された遺伝子の発現を制限するために使用された。このアプローチの欠点は、「組織特異的」プロモーターが実際に存在するかどうか不明確であることである。プロモーターは、他の細胞タイプ以外の特定の細胞タイプにおいて極めて強力な活性を有し得るが、それは他のいくつかの細胞においても少なくともいくつかの活性を示すようである。さらに、選択された「組織特異的」プロモーターによって支持される転写の速度は、該速度がプロモーターの固有の特性であるが、その有用性を制限し得る。治療遺伝子の発現を制御するための他のアプローチは、小分子調節因子によって活性化されるかまたは不活化される２成分遺伝子スイッチの使用が含まれた。周知のスイッチは、テトラサイクリン、エクジステロン、ミフェプリストンまたはラパマイシンによって制御される。これらのスイッチは、遺伝子活性のストリンジェントなオン−オフ調節を可能にし得る一方、基礎的な遺伝子活性を制御することができず、典型的に、中間レベルの遺伝子活性を達成することが困難である。さらに、遺伝子発現は、組織を介して容易に拡散する小分子調節因子によって局所的に制限することはできない。活性化熱処置は標的組織に対して指向され得るため、熱ショック遺伝子プロモーターは、ウイルスまたは他のベクターによって標的組織に送達される遺伝子の発現を制限するための有効な手段を提供すべきである。これらのプロモーターはまた、ウイルスの複製を制御するのに有用であることが示唆されている（米国特許出願第０９／８５０２７０号明細書）。これらのプロモーターのいくつか、特に本発明者が単離し、特徴付けたヒトｈｓｐ７０Ｂ遺伝子プロモーターは、最小の基礎活性および基礎活性より１０００倍高くあり得る熱誘導性活性を有する。そのようなプロモーターは、局在化された遺伝子発現またはウイルス複製の厳密な調節を達成するのに特に有用であるべきである。しかし、一過性の熱および他のタンパク質毒性（ｐｒｏｔｅｏｔｏｘｉｃ）ストレスによって活性化されるプロモーターを使用するのに不都合が存在する。実験動物またはヒトへの導入後、これらのプロモーターの不慮の活性化が、発熱もしくは虚血／再潅流、酸化剤もしくは他のタンパク質毒性（ｐｒｏｔｅｏｔｏｘｉｃ）剤への暴露、またはおそらくホルモンストレス中に生じ得る。ウイルス複製または遺伝子発現のそのような不都合な、非指向性活性化の交絡している影響は、多くのアプリケーションにおいて許容され得ない。熱（または他のタンパク質毒性（ｐｒｏｔｅｏｔｏｘｉｃ）ストレス）および小分子調節因子の組み合わせのみによって活性化される遺伝子スイッチについては、先に記載されており、治療遺伝子発現の空間的ならびに時間的制御を達成するのに有用であることが示唆された（米国特許第６，３４２，５９６号明細書；米国特許出願第１０／０４６４２０号明細書）。
【０００３】
（発明の概要）
本発明は、改変された条件的複製−コンピテントウイルスであって、そのゲノムが、細胞の熱および小分子調節因子への暴露によって、感染細胞において活性化可能な遺伝子スイッチを含み、遺伝子スイッチは、改変ウイルスの効率的な複製に必要なウイルスタンパク質の遺伝子の発現を制御する、改変された条件的複製−コンピテントウイルスに関する。本発明は、同様に、改変された条件的複製−コンピテントウイルスであって、そのゲノムが、細胞の熱への暴露によって感染細胞において活性化され、細胞の小分子調節因子への暴露によって抑制される遺伝子スイッチを含み、遺伝子スイッチは、改変ウイルスの効率的な複製に必要なウイルスタンパク質の遺伝子の発現を制御する、改変された条件的複製−コンピテントウイルスに関する。本発明の改変された条件的複製−コンピテントウイルスは、パッセンジャー遺伝子をさらに含み得る。パッセンジャー遺伝子の発現はまた、ウイルスの複製を制御する遺伝子スイッチによっても調節することができる。好ましくは、改変された条件的複製−コンピテントウイルスは、アデノウイルス（Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）、ヘルペスウイルス（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）、およびレトロウイルス（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）科のメンバーから誘導される。最も好ましくは、改変された条件的複製−コンピテントウイルスは、アデノウイルス（Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）科のメンバーから誘導される。改変された条件的複製−コンピテントウイルスがアデノウイルスである場合、遺伝子スイッチによって制御することができる遺伝子は、Ｅ１Ａ、Ｅ１ＢおよびＥ４遺伝子を含む。１つもしくはそれ以上のウイルス遺伝子の発現を制御する遺伝子スイッチであって、その産物がウイルスの複製に必要であるかまたはウイルスの複製を容易にする上記遺伝子スイッチは、２つの成分を含んでなる。第１の成分は、小分子調節因子によって活性化されるかまたは阻害されるトランス活性化因子の遺伝子である。好適な実施態様では、トランス活性化因子遺伝子の発現は、一過性の熱または内因性熱ショック因子１（ＨＳＦ１）を仲介する一過性のタンパク質毒性（ｐｒｏｔｅｏｔｏｘｉｃ）ストレスによって活性化され得る熱ショックプロモーターにより、あるいは内因性ＨＳＦ１を仲介する一過性の熱またはタンパク質毒性（ｐｒｏｔｅｏｔｏｘｉｃ）ストレスによって活性化され得るタンデムもしくはハイブリッドプロモーターにより、および活性なトランス活性化因子により制御される。スイッチの第２の成分は、トランス活性化因子の活性型によって活性化されるプロモーターであって、該プロモーターは、調節しようとするウイルスまたはパッセンジャー遺伝子に機能的に連結される。代替的実施態様では、第１の成分は、宿主細胞において継続的（構成的に）発現されるトランス活性化因子遺伝子である。第２の成分は、一過性の熱または他のタンパク質毒性（ｐｒｏｔｅｏｔｏｘｉｃ）ストレスによって活性化され、トランス活性化因子によって抑制される改変された熱ショックプロモーター（適切なＲＮＡリーダー領域を含む）であり得る。小分子調節因子のトランス活性化因子への結合は、それぞれ、その抑制機能を阻害するかまたは可能にすることができる。従って、得られる遺伝子スイッチは、それぞれ小分子調節因子の存在または非存在下で熱またはタンパク質毒性（ｐｒｏｔｅｏｔｏｘｉｃ）ストレスに暴露された細胞において活性である。第２の成分はまた、トランス活性化因子および内因性ＨＳＦ１による同時活性化を必要とする改変された（または部分的）熱ショックプロモーターであり得る。この場合、トランス活性化因子は、結合型小分子調節因子によって活性化される。
【０００４】
本発明はまた、改変ウイルス対であって、その複合ゲノムは、ウイルス対の条件的複製に必要なすべての遺伝情報を含有し；細胞の熱および小分子調節因子への暴露によって、感染細胞において活性化可能な遺伝子スイッチを含み、遺伝子スイッチは、改変ウイルスの効率的な複製に必要なウイルスタンパク質の遺伝子の発現を制御する、改変ウイルス対に関する。さらに本発明は、改変ウイルス対であって、その複合ゲノムは、ウイルス対の条件的複製に必要なすべての遺伝情報を含有し；細胞の熱への暴露によって感染細胞において活性化され、細胞の小分子調節因子への暴露によって抑制される遺伝子スイッチを含み、遺伝子スイッチは、ウイルス対の効率的な複製に必要なウイルスタンパク質の遺伝子の発現を制御する、改変ウイルス対に関する。本発明の改変ウイルス対は、対のうちの一方または他方のウイルスのゲノムに挿入されたパッセンジャー遺伝子をさらに含み得る。パッセンジャー遺伝子はまた、ウイルスの複製を制御する遺伝子スイッチによっても制御することができる。好ましくは、対の改変ウイルスは、アデノウイルス（Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）、ヘルペスウイルス（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）、およびレトロウイルス科（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）科の改変されたメンバーである。最も好ましくは、対の各ウイルスは、アデノウイルス（Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）科のメンバーから誘導される。本発明の対の両方のウイルスが改変されたアデノウイルスである場合、遺伝子スイッチによって制御することができる遺伝子は、Ｅ１Ａ、Ｅ１ＢおよびＥ４遺伝子を含む。１つもしくはそれ以上のウイルス遺伝子の発現を制御する遺伝子スイッチであって、その産物がウイルスの複製に必要であるかまたはウイルスの複製を容易にする上記遺伝子スイッチは、２つの成分を含んでなる。第１の成分は、小分子調節因子によって活性化されるかまたは阻害されるトランス活性化因子の遺伝子である。好適な実施態様では、トランス活性化因子遺伝子の発現は、一過性の熱または内因性熱ショック因子１（ＨＳＦ１）を仲介する一過性のタンパク質毒性（ｐｒｏｔｅｏｔｏｘｉｃ）ストレスによって活性化され得る熱ショックプロモーターにより、あるいは内因性ＨＳＦ１を仲介する一過性の熱またはタンパク質毒性（ｐｒｏｔｅｏｔｏｘｉｃ）ストレスによって活性化され得るタンデムもしくはハイブリッドプロモーターにより、および活性なトランス活性化因子により制御される。スイッチの第２の成分は、トランス活性化因子の活性型によって活性化されるプロモーターであって、該プロモーターは、調節しようとするウイルスまたはパッセンジャー遺伝子に機能的に連結される。代替的実施態様では、第１の成分は、宿主細胞において継続的（構成的に）発現されるトランス活性化因子遺伝子である。第２の成分は、一過性の熱または他のタンパク質毒性（ｐｒｏｔｅｏｔｏｘｉｃ）ストレスによって活性化され、トランス活性化因子によって抑制される改変された熱ショックプロモーター（適切なＲＮＡリーダー領域を含む）であり得る。小分子調節因子のトランス活性化因子への結合は、それぞれ、その抑制機能を阻害するかまたは可能にすることができる。従って、得られる遺伝子スイッチは、それぞれ小分子調節因子の存在または非存在下で熱またはタンパク質毒性（ｐｒｏｔｅｏｔｏｘｉｃ）ストレスに暴露された細胞において活性である。第２の成分はまた、トランス活性化因子および内因性ＨＳＦ１による同時活性化を必要とする改変された（または部分的）熱ショックプロモーターであり得る。この場合、トランス活性化因子は、結合型小分子調節因子によって活性化される。
【０００５】
（配列表の簡単な説明）
配列番号１はｐＳｈｕｔｔｌｅのヌクレオチド配列を提供する。
【０００６】
配列番号２はｐＧｅｎｅ／Ｖ５−Ｈｉｓのヌクレオチド配列を提供する。
【０００７】
配列番号３はｐＸＣ１のヌクレオチド配列を提供する。
【０００８】
配列番号４はｐＳｗｉｔｃｈのヌクレオチド配列を提供する。
【０００９】
（詳細な説明）
他で規定しない限り、すべての用語は、関連分野におけるそれらの通常の意味を有するべきである。以下の用語は、次のように規定される。
【００１０】
「ウイルスの複製」または「ウイルス／ウイルスの複製」は、ウイルス粒子の増殖を意味すると理解される。
【００１１】
「タンパク質毒性（ｐｒｏｔｅｏｔｏｘｉｃ）ストレス」は、タンパク質のアンフォールディングの増加をもたらすか、新たに合成されるポリペプチドの成熟を減少させるかもしくは適切に折りたたむことができないタンパク質の合成を生じる物理的または化学的傷害である。
【００１２】
「小分子調節因子」は、本発明と組み合わせて使用されるトランス活性化因子の低分子量のリガンドであると理解される。接続されたトランス活性化因子に依存して、小分子調節因子は、トランス活性化因子を阻害または活性化することができる。小分子調節因子は、典型的に１０００ダルトン（１ｋＤａ）未満であるが、必ずしもそうである必要はない。
【００１３】
本明細書に記載の遺伝子スイッチにおいて使用されるすべての調節タンパク質に対する単一の用語を使用することが可能であるためには、「トランス活性化因子」は、以後、特異的ＤＮＡ配列への結合が付近の遺伝子の転写に正または負に影響を及ぼすことができるＤＮＡ結合性タンパク質として理解されるべきである。この定義は、従来のトランス活性化因子ならびに転写を妨害するタンパク質を含む。
【００１４】
トランス活性化された遺伝子と組み合わせて使用される場合の「活性化された」は、遺伝子の発現の速度が活性化前よりも活性化後の方が少なくとも１桁大きいことを意味する。トランス活性化因子と組み合わせて使用される場合、「活性な」または「活性化された」は、正に作用するトランス活性化因子の場合にはトランス活性化因子のＤＮＡ結合およびトランス活性化−コンピテント形態を指し、負に作用するトランス活性化因子の場合にはトランス活性化因子のＤＮＡ結合形態を指す。
【００１５】
「熱ショック遺伝子のプロモーター」、「熱ショック遺伝子プロモーター」および「熱ショックプロモーター」は、同じ意味で使用される。
【００１６】
ここで、ゲノムが非ウイルス性の遺伝子を含むウイルスは、「ウイルス」または「ウイルスベクター」と称される。
【００１７】
「組換え体」は、実験者によって生じる改変の存在を指す。
【００１８】
本発明の好適なウイルスは、それらを含有する細胞が小分子調節因子の存在下で熱または別のタンパク質毒性（ｐｒｏｔｅｏｔｏｘｉｃ）ストレスに暴露される場合にのみ、それらが複製するように操作された特性を有する。他の好適なウイルスの複製は、複製を抑制する小分子調節因子の非存在下で熱または他のタンパク質毒性（ｐｒｏｔｅｏｔｏｘｉｃ）ストレスによって、誘発させることができる。ウイルスは、同じ条件下で活性化され得るまたは活性化され得ないパッセンジャー遺伝子をさらに含有することができる。熱を指向させることができるため、全身に存在する本発明のウイルスを、局所的、即ち、空間的に制限された様式で活性化することができる。本発明のウイルスは、研究目的のために使用してもよい。それらは、動物の生殖細胞系に導入してもよく、または成体の段階を含む発達の任意の段階で全身または局所に導入してもよい。小分子調節因子の投与後または中止後のそれぞれに、実験動物を１回もしくはそれ以上局所的に熱に供し、特定の組織または細胞のグループにおいてウイルスを活性化してもよく、標的化された細胞および周囲組織の細胞の切除ならびに／または活性化されたパッセンジャー遺伝子およびその結果、パッセンジャー遺伝子の産物の活性化および局所的伝播を生じる。そのような実験は、成体における特定の組織または細胞のグループの機能を規定することまたは動物を発達させることまたはパッセンジャー遺伝子の局所発現の生物学的もしくは治療結果を解明することを支援することができる。本発明のウイルスはまた、細胞に基づく治療にも有用である。異種起源の細胞は、免疫抑制療法にもかかわらず移植片対宿主応答を引き起こし得る。これらの細胞に存在する条件的複製性ウイルスは、拒絶が観察される組織において特異的に活性化され、不具合な細胞の局所的死滅を達成し得る一方、拒絶が観察されない組織の治療の有益性は維持される。他のアプリケーションでは、本発明の条件的複製性ウイルスを含有する免疫細胞は、腫瘍療法として投与してもよい。腫瘍に到達する免疫細胞は、小分子調節因子の全身での存在（または非存在）下で熱により局所的に活性化され、腫瘍組織におけるウイルス複製および細胞溶解を誘発し得る。局所の細胞溶解は、特異的免疫の発達を増強すべき局所炎症応答を引き起こす。あるいは、細胞を、治療遺伝子をも含む本発明のウイルスに感染させてもよい。細胞の局所または全身投与後、ウイルス複製を、所望される組織局所において活性化させ、ウイルス複製および治療遺伝子の局所的播種を誘発し、例えば、治療用タンパク質の全身発現に関与する毒性を回避してもよい。本発明のウイルスはまた、モデル動物、および終局的にヒトを使用する実験的遺伝子治療において使用してもよい。例えば、本発明のウイルスを、腫瘍に導入してもよい。小分子調節因子の全身での存在／非存在下における熱処置は、ウイルス複製および腫瘍細胞の死滅を開始する。本発明のウイルスの治療効果は、治療遺伝子、例えば、細胞障害性タンパク質をコードするパッセンジャー遺伝子の存在によって増強され得る。そのようなウイルスは、腫瘍組織において複製するように誘導されるだけではなく、毒性タンパク質を発現して、抗腫瘍活性の増加を生じる。あるいは、本発明のウイルスは、それ自体では細胞を死滅させ得ないが、治療遺伝子、例えば、細胞障害性タンパク質をコードするパッセンジャー遺伝子を含み得る。腫瘍におけるウイルスの局在化された複製は、腫瘍全体にわたるウイルスおよび治療遺伝子の播種を生じる。腫瘍細胞は、治療用タンパク質の作用によって死滅される。
【００１９】
本発明のウイルスの複製は、熱または他のタンパク質毒性（ｐｒｏｔｅｏｔｏｘｉｃ）ストレスおよび小分子調節因子の特定の非存在または存在によって活性化される遺伝子スイッチによって制御される。本発明において用いられる遺伝子スイッチは、２つの成分を含有する。本発明の条件的複製性ウイルスと組み合わせて使用される好適な遺伝子スイッチは、熱ショック遺伝子由来のプロモーター、およびトランス活性化因子に応答性であるプロモーターに機能的に連結された小分子活性型または小分子阻害型トランス活性化因子の遺伝子を含んでなる。スイッチによって調節しようとする遺伝子は、トランス活性化因子に応答性である後者のプロモーターに機能的に連結される。アデノウイルスの場合、後者の標的遺伝子はＥ１遺伝子であってもよい。そのような遺伝子スイッチの操作を図１に概略する。
【００２０】
熱ショック遺伝子は、遺伝子を含有する細胞がその正常な増殖温度を超える温度に暴露される場合、活性が実質的に増強される任意の真核生物体由来の任意の遺伝子として本明細書において規定される。典型的に、遺伝子は、周囲温度が３〜１０℃上昇する場合、活性化される。熱ショック遺伝子は、「古典的な」熱ショックタンパク質、即ち、Ｈｓｐ１１０、Ｈｓｐ９０、Ｈｓｐ７０、Ｈｓｐ６０、Ｈｓｐ４０、およびＨｓｐ２０−３０の遺伝子を含んでなる。それらはまた、ＭＤＲ１、ユビキチン、ＦＫＢＰ５２、ヘモキシダーゼおよび他のタンパク質などの他の熱誘導性遺伝子を含む。これらの遺伝子「熱ショックプロモーター」のプロモーターは、ＮＧＡＡＮもしくはＡＧＡＡＮ型の完全または不完全配列モジュールよりなる熱ショックエレメント（ＨＳＥ）と称される特徴的配列エレメントを含有し、該モジュールは、交互の配向で配列される（シァオ，Ｈ（Ｘｉａｏ，Ｈ）、およびリス，Ｊ．Ｔ．（Ｌｉｓ，Ｊ．Ｔ．）１９８８年．Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９，１１３９−１１４２；アミン，Ｊ．（Ａｍｉｎ，Ｊ．）、アナンタン，Ｊ．（Ａｎａｎｔｈａｎ，Ｊ．）、およびボエルミー，Ｒ．（Ｖｏｅｌｌｍｙ，Ｒ．）１９８８年．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ８，３７６１−３７６９；フェルナンデス，Ｍ．（Ｆｅｒｎａｎｄｅｓ，Ｍ．）、シァオ，Ｈ（Ｘｉａｏ，Ｈ．）、およびリス，Ｊ．Ｔ．（Ｌｉｓ，Ｊ．Ｔ．）１９９４年．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２２，１６７−１７３）。これらのエレメントは、例えば、ショウジョウバエ由来の熱ショックプロモーターがカエル細胞において機能的であり熱調節されるように、すべての真核細胞において高度に保存される（ボエルミー，Ｒ．（Ｖｏｅｌｌｍｙ，Ｒ．）、およびルンガー，Ｄ．（Ｒｕｎｇｇｅｒ，Ｄ．）１９８２年．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７９，１７７６−１７８０）。ＨＳＥ配列は、熱ショック転写因子に対する結合部位である（ＨＳＦ；フー，Ｃ．（Ｗｕ，Ｃ．）１９９５年．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ  Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．１１，４４１−４６９において再検討されている）。熱またはタンパク質毒性（ｐｒｏｔｅｏｔｏｘｉｃ）ストレスに暴露された脊椎動物細胞における熱ショック遺伝子の活性化を担う因子はＨＳＦ１である（ベイラ，Ｒ．（Ｂａｌｅｒ，Ｒ．）、ダール，Ｇ．（Ｄａｈｌ，Ｇ．）、およびボエルミー，Ｒ．（Ｖｏｅｌｌｍｙ，Ｒ．）１９９３年．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１３，２４８６−２４９６；マクミラン，Ｄ．Ｒ．（ＭｃＭｉｌｌａｎ，Ｄ．Ｒ．）、シァオ，Ｘ．（Ｘｉａｏ，Ｘ．）、シャオ，Ｌ．（Ｓｈａｏ，Ｌ．）、グレイブス，Ｋ．（Ｇｒａｖｅｓ，Ｋ．）、およびベンジャミン，Ｉ．Ｊ．（Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｉ．Ｊ．）１９９８年．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３，７５２３−７５２８）。好適なプロモーターは、誘導性ｈｓｐ７０遺伝子由来のプロモーターである。本発明のウイルスにおいて使用される特に好適な熱ショックプロモーターは、ヒトｈｓｐ７０Ｂ遺伝子のプロモーターである（ボエルミー，Ｒ．（Ｖｏｅｌｌｍｙ，Ｒ．）、アーメッド，Ａ（Ａｈｍｅｄ，Ａ．）、シラー，Ｐ．（Ｓｃｈｉｌｌｅｒ，Ｐ．）、ブロムレイ，Ｐ．（Ｂｒｏｍｌｅｙ，Ｐ．）、およびルンガー，Ｄ．（Ｒｕｎｇｇｅｒ，Ｄ．）１９８５年．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２，４９４９−４９５３）。
【００２１】
本発明のウイルスにおいて使用される遺伝子スイッチに組み入れることができる小分子により調節されるトランス活性化因子の例として、テトラサイクリン／ドキソサイクリンにより調節されるｔｅｔ−ｏｎおよびｔｅｔ−ｏｆｆ抑制因子（ゴッセン，Ｍ．（Ｇｏｓｓｅｎ，Ｍ．）およびビュヤード，Ｈ（Ｂｕｊａｒｄ，Ｈ．）１９９２年．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９，５５４７−５５５１；ゴッセン，Ｍ．（Ｇｏｓｓｅｎ，Ｍ．）、フロインドリープ，Ｓ．（Ｆｒｅｕｎｄｌｉｅｂ，Ｓ．）、ベンダー，Ｇ．（Ｂｅｎｄｅｒ，Ｇ．）、ミュラー，Ｇ．（Ｍｕｌｌｅｒ，Ｇ．）、ヒーレン，Ｗ．（Ｈｉｌｌｅｎ，Ｗ．）およびビュヤード，Ｈ（Ｂｕｊａｒｄ，Ｈ．）１９９６年．Ｓｃｉｅｎｃｅ２６８，１７６６−１７６９）、エクジステロン／ポナステロンにより調節される昆虫ステロイド受容体に基づく転写因子ＥｃＲ／ＲＸＲ（ノウ，Ｄ．（Ｎｏ，Ｄ．）、ヤオ，Ｔ．Ｐ．（Ｙａｏ，Ｔ．Ｐ．）、およびエバンス，Ｒ．Ｍ．（Ｅｖａｎｓ，Ｒ．Ｍ．）１９９６年．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９３，３３４６−３３５１）、ＧＬＶＰなどのミフェプリストンにより調節されるＧＡＬ４−ステロイド受容体−活性化ドメインキメラ（ワング，Ｙ．（Ｗａｎｇ，Ｙ．）、デマヨ，Ｆ．Ｊ．（ＤｅＭａｙｏ，Ｆ．Ｊ．）、サイ，Ｓ．Ｙ．（Ｔｓａｉ，Ｓ．Ｙ．）、およびオマレー，Ｂ．Ｗ．（Ｏ’Ｍａｌｌｅｙ，Ｂ．Ｗ．）１９９７年．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５，２３９−２４３；ワング，Ｙ．（Ｗａｎｇ，Ｙ．）、クー，Ｊ．（Ｘｕ，Ｊ．）、ピアソン，Ｔ．（Ｐｉｅｒｓｏｎ，Ｔ．）、オマレー，Ｂ．Ｗ．（Ｏ’Ｍａｌｌｅｙ，Ｂ．Ｗ．）、およびサイ，Ｓ．Ｙ．（Ｔｓａｉ，Ｓ．Ｙ．）１９９７年．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．４，４３２−４４１）、現在「ＧｅｎｅＳｗｉｔｃｈ」（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、カリフォルニア州）の名称で市販されているトランス活性化因子のバージョン、ならびにラパマイシンにより調節されるキメラ因子ＮＦκＢ−ＦＲＢ／ＦＫＢＰ−ＺＦＨＤ１（リベラ，Ｖ．Ｍ．（Ｒｉｖｅｒａ，Ｖ．Ｍ．）、クラックソン，Ｔ．（Ｃｌａｃｋｓｏｎ，Ｔ．）、ネイテサン，Ｓ．（Ｎａｔｅｓａｎ，Ｓ．）、ポロック，Ｒ．（Ｐｏｌｌｏｃｋ，Ｒ．）、アマラ，Ｊ．Ｆ．（Ａｍａｒａ，Ｊ．Ｆ．）、キーナン，Ｔ．（Ｋｅｅｎａｎ，Ｔ．）、マガリ，Ｓ．Ｒ．（Ｍａｇａｒｉ，Ｓ．Ｒ．）、フィリップス，Ｔ．（Ｐｈｉｌｉｐｓ，Ｔ．）、カーリジ，Ｎ．Ｌ．（Ｃｏｕｒａｇｅ，Ｎ．Ｌ．）、セラソリ，Ｆ．Ｊｒ．（Ｃｅｒａｓｏｌｉ，Ｆ．Ｊｒ．）、ホールト，Ｄ．Ａ．（Ｈｏｌｔ，Ｄ．Ａ．）、およびギルマン，Ｍ．（Ｇｉｌｍａｎ，Ｍ．）１９９６年．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２，１０２８−１０３２；マガリ，Ｓ．Ｒ．（Ｍａｇａｒｉ，Ｓ．Ｒ．）、リベラ，Ｖ．Ｍ．（Ｒｉｖｅｒａ，Ｖ．Ｍ．）、イウリウッチＪ．Ｄ．（Ｉｕｌｉｕｃｃｉ，Ｊ．Ｄ．）、ギルマン，Ｍ．（Ｇｉｌｍａｎ，Ｍ．）、およびセラソリ，Ｆ．Ｊｒ．（Ｃｅｒａｓｏｌｉ，Ｆ．，ｊｒ．）１９９７年．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１００，２８６５−２８７２）が挙げられる。他の小分子によって調節可能なトランス活性化因子を使用してもよいが、但し、それらを用いて、宿主細胞の遺伝子の広範な脱調節を生じることなく標的遺伝子の活性を制御することができ、かつさらに会合した小分子調節因子は、それらの有効濃度で宿主細胞に対し十分に低い毒性を有する。
【００２２】
図２における例では、ミフェプリストン活性化可能なキメラトランス活性化因子ＧＬＶＰの遺伝子が、厳密に熱により調節されるヒトｈｓｐ７０Ｂ熱ショックプロモーターに機能的に連結される。標的遺伝子は、この例におけるアデノウイルスのＥ１Ａ遺伝子などのウイルスの複製に必要な遺伝子である。標的遺伝子は、トランス活性化因子に応答性であるプロモーターに機能的に連結される。本例において、適切なプロモーターは、ＧＡＬ４に対する結合部位を補充された最小のプロモーターである。図１において概要された種類の遺伝子スイッチは、図３Ａに示されるウイルスベクターに組み入れられ得る。この例では、トランス活性化因子応答性プロモーターは、アデノウイルスのＥ１Ａプロモーターを置き換え、トランス活性化因子遺伝子カセットは、ウイルスの非必須遺伝子セグメント、例えば、アデノウイルスにおけるＥ３領域を置き換える。あるいは、欠失されたウイルスゲノムにおいて選択されたトランス活性化因子遺伝子の封入に十分な余地な存在しない場合、遺伝子スイッチは、２つのウイルスベクター間に配分してもよい。図３Ｂの例では、トランス活性化因子応答性プロモーターは、それ以外の野生型アデノウイルスゲノムのＥ１Ａプロモーターを置き換え、ｈｓｐ７０Ｂ指向性トランス活性化因子遺伝子は、Ｅ１およびおそらくＥ３配列を欠く典型的な複製欠損アデノウイルスのゲノムに挿入される。本発明の条件的複製性ウイルスの対の特定の例を図３Ｃに示す。第１のアデノウイルスは、トランス活性化因子応答性プロモーターによって置き換えられるＥ１ＡおよびＥ４プロモーター領域を除いて野生型である。第２のウイルスは、Ｅ１ＡおよびＥ４機能を最小限に欠く複製欠損ウイルスである。ｈｓｐ７０Ｂプロモーター−ｇｌｖｐ遺伝子カセットは、後者のウイルスのゲノムに挿入される。
【００２３】
ウイルスの複製が生じるためには、細胞は、組換え体ウイルス対に同時感染させる必要がある。遺伝子スイッチ指向性ウイルス複製は、以下のようにして生じる：細胞を図３Ｃの組換え体ウイルス組み合わせに感染させた後、細胞を適切な濃度の小分子調節因子、ミフェプリストンに暴露し、一過性の熱処置に供して、ｈｓｐ７０Ｂプロモーターを活性化する。ＧＬＶＰが発現され、ミフェプリストンによって活性化される。次いで、活性なＧＬＶＰは、第１のウイルスゲノムからＥ１ＡおよびＥ４遺伝子発現をトランス活性化し、ウイルス対の複製を生じる。アデノウイルスの複製が生じた細胞は溶解し、ウイルス粒子が解放され、隣接細胞に感染する。さらなる一過性の熱処置の投与時に、２次感染細胞において複製が誘発されるなどである。
【００２４】
本発明のウイルスまたはウイルス対はまた、パッセンジャー遺伝子を含んでもよい。パッセンジャー遺伝子またはなおトランス活性化因子遺伝子を、すべての遺伝子および複製に必要な他の配列を含有するウイルスゲノム組み入れることができるかどうかは、ウイルスのタイプ、パッキングのための最大ゲノムサイズ、欠失することができる非必須ウイルス遺伝子に関する知識、ならびに挿入しようとするトランス活性化因子およびパッセンジャー遺伝子のサイズに依存する。アデノウイルスの場合、パッセンジャー遺伝子およびおそらくはなおトランス活性化因子遺伝子を、部分欠失または完全抜去したウイルスゲノムに挿入する必要があり得る。図５Ｃのケースの例によって例示されるように、「本発明のウイルス」は、ウイルスの対であり、そのうちの第１のものは、ＧＬＶＰトランス活性化因子に応答性であるＧＡＬ４結合部位含有ｇｌｖｐ−ｒプロモーターによるＥ１ＡおよびＥ４プロモーターの置換を除いて完全なゲノムを含有する。第２のウイルスは、複製欠損である。ウイルス遺伝子の相当の大きさの欠失によって提供される空間、典型的に、Ｅ１およびＥ３遺伝子領域（およびこの特定の場合においてはＥ４配列もまた）は、パッセンジャー遺伝子およびトランス活性化因子遺伝子によって占められる。トランス活性化因子遺伝子は、機能的に連結された熱ショックプロモーター、または図に実際に示された（そして下記において考察する）ハイブリッドもしくはタンデムｈｓｐ７０Ｂ−ｇｌｖｐ−ｒプロモーターの制御下にある。パッセンジャー遺伝子は、ｇｌｖｐ−ｒプロモーターまたはアプリケーションが必要とし得るような別のプロモーターに連結してもよい。
【００２５】
ウイルスの対を使用する場合、ウイルスは典型的に同じ種であることが留意される。根本的な理由は、典型的に、ウイルス対の少なくとも１つウイルスが、複製について、他のウイルスに担持される遺伝子から発現される種特異的ウイルスタンパク質に依存していることである。２つのウイルスのうちの一方が複製に必要なすべての遺伝子を含有する必要はないことがさらに留意される。これらの遺伝子は、両ウイルスにわたって分配され得る。２つのウイルスゲノムが共に合わせて、必要とされるすべてのウイルス機能をコードすることが重要である。
【００２６】
最も好ましくは、本発明のウイルスおよび所望であれば、パッセンジャー遺伝子の複製は、米国特許第６，３４２，５９６号明細書および米国特許出願第１０／０４６４２０号明細書に記載の、より複雑なスイッチによって制御される。上記のスイッチとは異なり、これらのスイッチは、それらが活性化熱処置または他のタンパク質毒性（ｐｒｏｔｅｏｔｏｘｉｃ）ストレスへの暴露後に長期間活性を保持することを可能にする自己活性化エレメントを含有する。そのようなスイッチの成分および操作に関する包括的概要を図４Ａに示す。この種のスイッチもまた、２つの成分を含んでなる。第１の成分は、小分子により調節されるトランス活性化因子の遺伝子であり、該遺伝子は、熱ショックプロモーターならびにトランス活性化因子応答性プロモーターとして作用するＤＮＡ配列に機能的に連結される。このＤＮＡ配列は、ＨＳＦ１およびトランス活性化因子の両方に対する結合部位を含んでなるハイブリッドプロモーターを含有し得る。あるいは、それは、２つの個別のプロモーターを含有してもよく、それらのうちの一方は、熱ショックプロモーターであり、他方はトランス活性化因子応答性プロモーターであるが、但し、プロモーターのそれぞれは、連結されたトランス活性化因子遺伝子から発現を指令することができる。第２の成分は、トランス活性化因子応答性プロモーターに機能的に連結された標的遺伝子である。そのようなスイッチの成分を含有する細胞が一過性の熱または他のタンパク質毒性（ｐｒｏｔｅｏｔｏｘｉｃ）ストレスに暴露される場合、ＨＳＦ１は活性化され、トランス活性化因子遺伝子から転写を誘導する。使用する特定のトランス活性化因子が小分子調節因子によって活性化されるかまたは阻害されるかに依存して、その小分子調節因子の存在または非存在下で、新たに作製されたトランス活性化因子は、標的遺伝子の発現を活性化し、さらなるトランス活性化因子タンパク質の発現を促進する。その結果、トランス活性化因子レベルは、一過性ストレス後にＨＳＦ１が不活化された後にも維持され、標的遺伝子発現が継続する。小分子調節因子の中止または追加は、それぞれ、スイッチの不活化を生じる。図４Ｂは、この種のスイッチの例を示し、図中、トランス活性化因子は、ミフェプリストン活性化トランス活性化因子ＧＬＶＰであり、標的遺伝子は、アデノウイルスのＥ１Ａ遺伝子である。図５では、本発明のアデノウイルスにおけるスイッチの後者の例の組み入れを例示する。図５Ａは、この領域からの配列の欠失後に、ｇｌｖｐ遺伝子および連結されたハイブリッドまたはタンデムプロモーターがＥ３領域に導入される様子を例示する。Ｅ１Ａプロモーターは、ＧＬＶＰに応答性であるＧＡＬ４結合部位含有プロモーターｇｌｖｐ−ｒによって置き換えられる。そのような組換え体を実際に作製することができるかどうかは、それぞれ、ウイルスのパッケージングの限界および欠失および挿入された配列の長さに依存する。図５Ｂにおける例では、スイッチは、ウイルスの対にわたって分配される。これらのウイルスのうちの一方は、ｇｌｖｐ−ｒプロモーターによるＥ１ＡおよびＥ４プロモーターの置き換えを除いて、完全なウイルスゲノムを含有し得る。他方のウイルスは、Ｅ１、Ｅ３およびＥ４配列を欠き得るが、ｇｌｖｐ遺伝子、および熱と活性なＧＬＶＰによって活性化される連結されたハイブリッド、またはタンデムプロモーターを含有する複製欠損ウイルスである。図５Ｃの図式に示されるように、パッセンジャー遺伝子はまた、後者のウイルスの欠損型ゲノムに含まれ得る。パッセンジャー遺伝子は、トランス活性化因子応答性プロモーターまたは別のプロモーターによって制御され得る。
【００２７】
あるいは、本発明のウイルスまたはウイルス対の複製および所望であれば、パッセンジャー遺伝子の発現は、トランス活性化因子（トランス活性化−コンピテントではない）の構成的に発現された遺伝子を含んでなるタイプの遺伝子スイッチ（図６Ａ）によって制御され得、該トランス活性化因子のＤＮＡ結合活性は、小分子調節因子の結合、およびトランス活性化因子に対する１つもしくはそれ以上の結合部位を含有する５’非翻訳配列を含む改変された熱ショックプロモーターによって調節される。後者のプロモーターは、調節しようとするウイルスまたはパッセンジャー遺伝子に機能的に連結される。トランス活性化因子結合部位は、トランス活性化因子の結合が連結された遺伝子の熱活性化転写を防止するように、熱ショックプロモーター（および／またはＲＮＡリーダー領域）に配置される。トランス活性化因子のＨＳＦ１結合部位付近に挿入された部位への結合は、ＨＳＦ１がプロモーターに結合することを防止し得；トランス活性化因子の５’非翻訳配列に挿入された部位への結合は、転写伸長を阻害し得る。得られる遺伝子スイッチは、小分子調節因子の存在または非存在下における一過性の熱によって活性化される。本発明のウイルスの複製および所望であれば、パッセンジャー遺伝子の発現を制御するために使用することができるさらなるタイプの遺伝子スイッチ（図６Ｂ）は、構成的に発現されるトランス活性化因子の遺伝子を含んでなり、該トランス活性化因子のＤＮＡ結合活性は、小分子調節因子の結合、およびトランス活性化因子に対する結合部位を含む改変された熱ショックプロモーターによって活性化または阻害される。トランス活性化因子に対して低い親和性の結合部位であり得るこれらの結合部位、またはおそらく、半分の部位は、トランス活性化因子単独によるプロモーターの活性を可能にするのに不十分である。プロモーターは、一過性の熱または他のタンパク質毒性（ｐｒｏｔｅｏｔｏｘｉｃ）ストレスにより誘導されるＨＳＦ１および活性なトランス活性化因子によって効率的に同時活性化される。同時活性化に必要な改変された熱ショックプロモーターは、熱ショックプロモーターにおける１つを除いてすべての熱ショックエレメントの欠失によって得ることができ、その活性化は、複数の熱ショックエレメントの存在および１つもしくはそれ以上のトランス活性化因子結合部位の付加に依存する。
【００２８】
本発明における使用に特に適切なウイルスは、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、およびフォーミーウイルスを含むレトロウイルスなどの複製性または腫瘍溶解性ウイルスベクターとして先に使用されたウイルスである。
【００２９】
アデノウイルスの生物学および遺伝子学については良好に理解されている（ラッセル，Ｗ．Ｃ．（Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｗ．Ｃ．）２０００年．Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．８１，２５７３−２６０４；ヒットＭ．Ｍ．（Ｈｉｔｔ，Ｍ．Ｍ．）、アディソン，Ｃ．Ｌ．（Ａｄｄｉｓｏｎ，Ｃ．Ｌ．）、およびグラハム，Ｆ．Ｌ．（Ｇｒａｈａｍ，Ｆ．Ｌ．）１９９７年．Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ４０，１３７−２０６）。当業者であれば、複製−コンピテントまたは複製欠損アデノウイルスベクターを調製および投与する方法を知っている。アデノウイルスの複製を制御するために使用されるストラテジーについては、最近、再検討された（ポスト，Ｄ．Ｅ．（Ｐｏｓｔ，Ｄ．Ｅ．）、クリ，Ｆ．Ｒ．（Ｋｈｕｒｉ，Ｆ．Ｒ．）、シモンズ，Ｊ．Ｗ．（Ｓｉｍｏｎｓ，Ｊ．Ｗ．）およびバン・メリ，Ｅ．Ｇ．（Ｖａｎ  Ｍｅｉｒ，Ｅ．Ｇ．）２００３年．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１４，９３３−９４６）。典型的に、アデノウイルスの条件的複製は、Ｅ１Ａ、Ｅ１ＢまたはＥ４ウイルスプロモーターを選択された調節されたまたは組織選択的プロモーターで置き換えることによって達成された。いくつかの場合では、後者のウイルスプロモーターのうちの２つが置き換えられた。例えば、エルナンデス−アルコセバ（Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ−Ａｌｃｏｃｅｂａ）ら（Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１１，２００９−２０２４（２０００年））は、Ｅ１ＡおよびＥ４プロモーターのエストロゲン受容体に対する結合部位を含有する短縮型ｐＳ２プロモーターによる置き換えによって、条件的複製性５型アデノウイルスを調製した。組換え体ウイルスは複製し、エストロゲン受容体ポジティブであるがエストロゲン受容体ネガティブではない細胞を効率的に溶解した。ユー（Ｙｕ）ら（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５９，１４９８−１５０４（１９９９年））は、Ｅ１ＡおよびＥ１Ｂプロモーターを、それぞれＰＳＥ（前立腺特異的エンハンサー）プロモーターおよびカリクレイン２遺伝子由来のプロモーターフラグメントで置換することによって、条件的複製性アデノウイルス７６４を構築した。ウイルス７６４は、前立腺腫瘍細胞系統由来の細胞において効率的に複製し、該細胞を死滅させたが、いくらかの他の細胞系統由来の細胞ではそうではなかった。
【００３０】
ヘルペスウイルスは、大きなゲノムを伴う、エンベロープに入った、二本鎖ＤＮＡウイルス（ＨＳＶ−１について１５２ｋｂｐ）である。この大きなゲノムサイズのため、過去において遺伝子解析および実験が妨げられた。この問題は、全ヘルペスウイルスゲノムの組み込みを可能にする細菌人工染色体（ＢＡＣ）の使用によって解決されており、ウイルスゲノムを操作するための効率的な変異および組換えプロトコルの使用が可能にされている（ワグナー，Ｍ．（Ｗａｇｎｅｒ，Ｍ．）、ルジックス，Ｚ．（Ｒｕｚｓｉｃｓ，Ｚ．）、およびコスジノスキー，Ｕ．Ｈ．（Ｋｏｓｚｉｎｏｗｓｋｉ，Ｕ．Ｈ．）２００２年．Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１０，３１８−３２４）。少なくとも２つのヘルペスウイルスの前初期遺伝子、ＩＣＰ４およびＩＣＰ２７の産物は、ウイルスの複製に必須である（バートン，Ｅ．Ａ．（Ｂｕｒｔｏｎ，Ｅ．Ａ．）、バイ，Ｑ．（Ｂａｉ，Ｑ．）、ゴインス，Ｗ．Ｆ．（Ｇｏｉｎｓ，Ｗ．Ｆ．）、およびグロリオス，Ｊ．（Ｇｌｏｒｉｏｓｏ，Ｊ．）２００２年．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３，４２４−４２８、ならびに本明細書において引用した参考文献）。これらの遺伝子のうちの１つを調節されたまたは組織選択的プロモーターの制御下に配置する操作は、条件的複製性ヘルペスウイルスを生成する。例えば、ミヤタケ（Ｍｉｙａｔａｋｅ）ら（Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７１，５１２４−５１３２（１９９７年））は、ａ４遺伝子（ＩＣＰ４をコードする遺伝子）の両方のコピーを欠くＨＳＶ−１変異ｄ１２０を利用して、この変異に、アルブミンエンハンサーおよびプロモーターエレメントを含有するプロモーターに機能的に連結されたａ４遺伝子コピーを挿入した。得られる組換え体ヘルペスウイルスは、他の細胞よりもアルブミン発現細胞では３の対数尺度だけ良好に複製した。さらに、ウイルスは、アルブミン発現腫瘍異種移植片の増殖を効率的に阻害した。ヘルペスウイルスは、チミジンキナーゼの遺伝子ＩＣＰ６またはＩＣＰ３４．５の欠失により、有糸分裂的に活性な細胞において好適に複製するように作製することができる（ハリントン，Ｋ．Ｊ．（Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ，Ｋ．Ｊ．）、ベータマン，Ａ．Ｒ．（Ｂａｔｅｍａｎ，Ａ．Ｒ．）、メルヒャー，Ａ．Ａ．（Ｍｅｌｃｈｅｒ，Ａ．Ａ．）、アーメッド，Ａ（Ａｈｍｅｄ，Ａ．）、およびビレ，Ｒ．Ｇ．（Ｖｉｌｅ，Ｒ．Ｇ．）２００２年．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ１４，３−１６、および本明細書において引用した参考文献）。
【００３１】
レトロウイルスは、集中的に研究され、治療遺伝子を転移するための複製欠損型ベクターとして使用されている一本鎖、二倍体ＲＮＡウイルスである（ビレ，Ｒ．Ｇ．（Ｖｉｌｅ，Ｒ．Ｇ．）およびラッセル，Ｓ．Ｊ．（Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｓ．Ｊ．）１９９５年．Ｂｒ．Ｍｅｄ．Ｂｕｌｌ．５１，１２−３０）。当業者であれば、レトロウイルスのゲノムを操作する方法およびレトロウイルスベクターを製造する方法について知っている。レトロウイルスベクターの調製およびそれらの使用については、欧州特許出願第０１７８２２０号明細書；米国特許第４，４０５，７１２号明細書；ギルボア（Ｇｉｌｂｏａ）１９８６年．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ４，５０４−５１２；マン（Ｍａｎｎ）ら１９８３年．Ｃｅｌｌ３３，１５３−１５９；コーン（Ｃｏｎｅ）およびムリガン（Ｍｕｌｌｉｇａｎ）１９８４年．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８１，６３４９−６３５３；エグリティス，Ｍ．Ａ．（Ｅｇｌｉｔｉｓ，Ｍ．Ａ．）ら１９８８年．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ６，６０８−６１４；ミラー，Ａ．Ｄ．（Ｍｉｌｌｅｒ，Ａ．Ｄ．）ら１９８９年．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ７，９８１−９９０；ミラー，Ａ．Ｄ．（Ｍｉｌｌｅｒ，Ａ．Ｄ．）１９９２年．Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８，１−２４；国際公開第９２／０７９４３号パンフレット、表題「Ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  Ｕｓｅｆｕｌ  ｉｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ」；フー，Ｗ．Ｓ．（Ｈｕ，Ｗ．Ｓ．）、およびパサク，Ｖ．Ｋ．（Ｐａｔｈａｋ，Ｖ．Ｋ．）２０００年．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．５２，４９３−５１１を含む多くの刊行物において記載されている。ウイルス遺伝子の発現を駆動するプロモーターは、プロウイルスのＵ５およびＵ３領域に存在する。実際のウイルスゲノムはＵ５領域を欠く。従って、それは、Ｕ３領域のプロモーターのみを含有する。最近、ログ（Ｌｏｇｇ）ら（Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７６，１２７８３−１２７９１（２００２年））前立腺において活性であるアンドロゲンにより調節されるプロバシン遺伝子のプロモーター由来、またはプロバシンプロモーターから誘導される変異体プロモーター由来の配列による、マウス白血病ウイルスにおけるＵ３領域内の多塩基置換型（ｐｒｏｍｉｓｃｕｏｕｓ）転写制御エレメントの置き換えは、前立腺由来細胞において好適に複製する組換え体ウイルスを生じることを実証した。ネスラー（Ｎｅｓｔｌｅｒ）ら（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．４，１２７０−１２７７（１９９７年）は、Ｕ３領域の大きなセグメントおよびｂｅｔ遺伝子のほとんどを欠く複製−コンピテントフォーミーウイルスの構築について報告した。プロドラック活性化酵素、即ち、ヘルペスチミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼおよびポリヌクレオシドホスホリラーゼをコードする遺伝子を短縮型ｂｅｔ遺伝子に融合した。後者の「自殺」タンパク質を融合タンパク質として発現させ、融合点における自己切断配列の存在により処理し、非融合タンパク質を産出させた。
【００３２】
より一般的には、本発明の使用に適切なウイルスは、レトロウイルス、ならびに宿主の転写機構を利用し、その複製は感染後に発現されるタンパク質に依存する一本鎖および二本鎖ＤＮＡウイルスを含む。後者のＤＮＡウイルスは、ヘパドナウイルス（Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ）、パルボウイルス（Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ）、パポーバウイルス（Ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ）、サーコウイルス（Ｃｉｒｃｏｖｉｒｉｄａｅ）、アデノウイルス（Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）およびヘルペスウイルス（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）科を含む。
【００３３】
パポーバウイルス科（Ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ）は、少なくとも９種のヒトパピローマウイルスならびにポリオーマウイルスＢＫおよびＪＣを含む。
【００３４】
レトロウイルス科（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）は、ＨＴＬＶ−Ｉ、ＨＴＬＶ−ＩＩ、ＨＩＶ−Ｉ、ＨＩＶ−ＩＩ、ウシ白血病ウイルス、ネコ肉腫および白血病ウイルス、トリ細網内皮症ウイルス、マウス乳腺腫瘍ウイルス、ビスナウイルス、馬伝染性貧血ウイルス、ＦＩＶ、ウシレンチウイルス、ＳＵＶ、およびフォーミーウイルスなどのレンチウイルス（Ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ）、スポルナウイルス（Ｓｐｏｒｎａｖｉｒｕｓ）ならびにその他の属のウイルスを含む。
【００３５】
ヘパドナウイルス科（Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ）は、Ｂ型肝炎様ウイルス、例えば、Ｂ型肝炎および関連ウイルスを含む。
【００３６】
パルボウイルス（Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ）は、ヒトおよび動物パルボウイルスなどのパルボウイルス、デペンドウイルスおよびデンソウイルス属のウイルスを含む。
【００３７】
アデノウイルス科（Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）は、ヒトおよび動物マスタデノウイルス株などのマスタデノウイルス（Ｍａｓｔａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）およびアビアデノウイルス（Ａｖｉａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）属のウイルスを含む。
【００３８】
ヘルペスウイルス科（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）は、シンプレックスウイルス（Ｓｉｍｐｌｅｘｖｉｒｕｓ）、バリセラウイルス（Ｖａｒｉｃｅｌｌａｖｉｒｕｓ）、ベータヘルペスウイルス（Ｂｅｔａｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｎａｅ）、サイトメガロウイルス（Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ）、リンホクリプトウイルス（ｌｙｍｐｈｏｃｒｙｐｔｏｖｉｒｕｓ）、マレック病様ウイルス（Ｍａｒｅｋ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ−ｌｉｋｅ  ｖｉｒｕｓｅｓ）およびラジノウイルス（Ｒｈａｄｉｎｏｖｉｒｕｓ）属のウイルスを含む。例には、単純ヘルペス、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、マレック病ウイルス、ＥＢウイルスおよびその他がある。
【００３９】
サーコウイルス科（Ｃｉｒｃｏｖｉｒｉｄａｅ）は、サーコウイルス（Ｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓ）属を含む。サーコウイルスの例には、ニワトリ貧血ウイルス、オウム嘴羽病ウイルス、およびブタサーコウイルスがある。
【００４０】
上記のウイルスの科およびそれらのメンバーの生物学、生化学および遺伝学に関する広範な説明については、「Ｖｉｒｏｌｏｇｙ」（Ｂ．Ｎ．フィールズ（Ｂ．Ｎ．Ｆｉｅｌｄｓ）、Ｄ．Ｍ．ナイペ（Ｄ．Ｍ．Ｋｎｉｐｅ）、およびＰ．Ｍ．ホウリー（Ｐ．Ｍ．Ｈｏｗｌｅｙ）編）、第１および第２巻、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ペンシルバニア州（１９９６年）に見出される。
【００４１】
パッセンジャー遺伝子は、アポトーシス誘導因子をコードする遺伝子、細胞死、加齢、分裂およびＤＮＡ合成に影響を及ぼす遺伝子、ミトコンドリア遺伝子、ペルオキシソーム遺伝子、免疫応答関連遺伝子、ＡＴＰ結合タンパク質、細胞骨格遺伝子、すべてのレスキュー遺伝子、細胞損傷および修復に関与する遺伝子などの細胞に影響を及ぼす遺伝子を含み得る。本発明のウイルスベクターに含まれ得る潜在的な酵母および哺乳動物遺伝子の列挙を以下に提供する。
【００４２】
酵母遺伝子：
細胞レスキュー、防御、細胞死および加齢  ＰＲＥ３、ＰＲＥ１、ＰＵＰ２、ＲＰＮ１２、ＲＰＴ１、ＭＡＧ１、ＯＧＧ１、ＳＥＤ１、ＡＴＨ１、ＳＰＥ２、ＧＲＥ３、ＴＰＳ２、ＴＰＳ１、ＡＴＲ１、ＡＴＸ１、ＳＫ１３、ＳＫ１２、ＳＫ１８、ＡＰＮ１、ＨＰＲ５、ＥＲＧ５、ＣＣＺ１、ＳＲＡ１、ＳＮＦ１、ＹＣＫ１、ＹＣＫ２、ＨＲＲ２５、ＣＴＡ１、ＣＴＴ１、ＷＳＣ４、ＰＡＭ１、ＴＩＲ２、ＴＩＲ１、ＨＤＦ２、ＴＦＢ４、ＲＡＤ１、ＨＡＭ１、ＬＹＳ７、ＳＯＤ１、ＫＩＮ２８、ＤＩＴ２、ＥＲＧ１１、ＣＹＣ７、ＣＣＰ１、ＰＨＲ１、ＤＡＫ２、ＤＡＫ１、ＡＬＲ１、ＡＬＲ２、ＨＯＲ２、ＲＡＤ１７、ＤＤＣ１、ＤＤＲ２、ＡＬＫ１、ＨＥＬ１、ＳＳＬ２、ＲＡＤ５、ＳＧＳ１、ＰＩＦ１、ＲＡＤ３、ＣＤＣ９、ＲＥＶ７、ＮＴＧ１、ＲＡＤ１８、ＲＡＤ５７、ＲＡＤ５５、ＸＲＳ２、ＲＡＤ３０、ＭＭＳ２１、ＲＡＤ５１、ＲＡＤ１０、ＰＳ０２、ＲＥＶ１、ＤＩＮ７、ＲＡＤ５４、ＣＤＣ２、ＰＥＳ４、ＰＯＬ２、ＲＥＶ３、ＲＰＢ７、ＲＰＢ４、ＳＧＥ１、ＵＢＡ１、ＵＢＣ４、ＵＢＣ５、ＲＡＤ６、ＱＲ１８、ＲＮＣ１、ＮＴＧ２、ＥＲＣ１、ＲＡＤ４、ＥＴＨ１、ＦＫＢ２、ＹＨＢ１、ＦＬＲ１、ＭＥＣ３、ＺＷＦ１、ＧＳＨ１、ＧＲＸ１、ＴＴＲ１、ＨＹＲ１、ＧＬＲ１、ＹＣＦ１、ＦＰＳ１、ＧＰＤ１、ＲＡＳ２、ＲＡＳ１、ＣＵＰＳ、ＨＳＰ２６、ＨＳＰ３０、ＨＳＰ１２、ＨＳＰ１０４、ＤＤＲ４８、ＨＳＣ８２、ＨＳＰ８２、ＭＤＪ１、ＭＤＪ２、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ７８、ＥＣＭ１０、ＳＳＥ１、ＳＳＡ１、ＳＳＡ３、ＳＳＡ４、ＳＳＡ２、ＳＳＥ２、ＨＳＦ１、ＨＩＧ１、ＨＤＦ１、ＨＭＳ２、ＧＲＥ１、ＤＤ１１、ＲＴＡ１、ＳＩＭＩ、ＬＡＧ２、ＺＤＳ１、ＭＥＴ１８、ＳＮＧ１、ＮＣＡ３、ＫＴＩ１２、ＵＴＨ１、ＳＵＮ４、ＳＳＵ８１、ＳＳＤ１、ＴＨ１４、ＫＡＲ３、ＬＩＦ１、ＳＦＡ１、ＬＡＧ１、ＬＴＶ１、ＭＤＲ１、ＳＳＫ２２、ＳＳＫ２、ＨＯＬ１、ＣＩＳ３、ＨＳＰ１５０、ＰＩＲ３、ＭＡＣ１、ＣＵＰ１Ａ、ＣＵＰ１Ｂ、ＹＤＪ１、ＳＳＱ１、ＳＳＣ１、ＩＭＰ２、ＭＰＴ５、ＡＴＸ２、ＳＮ０２、ＭＬＰ１、ＮＨＸ１、ＮＣＰ１、ＮＳＲ１、ＳＮＦ４、ＲＡＤ１６、ＲＡＤ７、ＲＡＤ１４、ＲＡＤ２３、ＲＯＤ１、ＭＧＴ１、ＯＳＭ１、ＳＩＰ１８、ＳＡＴ２、ＭＮＲ２、ＭＭＳ２、ＰＮＴ１、ＣＹＰ２、ＰＡＤ１、ＰＤＲ５、ＰＤＲ３、ＰＤＲ６、ＲＴＳ１、ＰＡ１３、ＨＯＲ７、ＤＵＮ１、ＩＲＥ１、ＭＫＫ２、ＭＥＴ２２、ＰＰＺ２、ＰＴＣ１、ＰＴＰ２、ＭＭＳ４、ＲＡＤ５２、ＰＤＲ１３  ＳＬＧ１、ＧＲＲ１  ＨＩＴ１、ＲＤＨ５４  ＢＲ０１、ＰＩＲ１  ＭＳＲＡ、ＲＮＲ４  ＲＮＲ３、ＨＡＬ１、ＹＧＰ１、ＣＤＣ５５、ＰＰＺ１、ＰＫＣ１、ＨＡＬ５、ＭＫＫ１、ＨＯＧ１、ＳＬＴ２、ＢＣＫｉ、ＲＡＤ５３、ＳＩＲ４、ＳＩＲ３、ＳＩＲ２、ＭＧＡ１、ＦＵＮ３０、ＹＲ０２、ＤＮＬ４、ＲＲＤ１、ＳＡＴ４、ＲＡＤ２７、ＭＳＮ２、ＳＴ１１、ＰＡＵ３、ＰＡＵ２、ＰＡＵ５、ＰＡＵ１、ＰＡＵ４、ＰＡＵ６、（ＭＬＰ１）、ＲＡＤ２、ＦＺ＿Ｆ１、ＳＳＵ１、ＳＯＤ２、ＣＲＳ５、ＢＣＫ２、ＡＳＭ４、ＴＩＰ１、ＴＦＢ１、ＣＣＬ１、ＳＳＬ１、ＴＦＢ３、ＴＦＢ２、ＴＳＡＩ、ＴＲＸ１、ＴＲＸ２、ＲＯＸ３、ＰＤＲ１、ＧＴＳ１、ＭＣＭ１、ＳＫＮ７、ＣＡＤ１、ＭＳＮ４、ＹＡＰ１、ＳＬＮ１、ＳＳＫ１、ＰＢＳ２、ＵＢ１４、ＲＳＰ５、ＳＶＳ１、ＺＲＣ１
【００４３】
細胞増殖、細胞分裂およびＤＮＡ合成  ＧＳＣ２、ＰＬＣ１、ＰＲＥ３、ＰＲＥ２、ＰＲＥ１、ＰＵＰ２、ＲＰＮ１２、ＲＰＴ６、ＲＰＴ１、ＤＩＳ３、ＲＰ  ＳＯＡ、ＡＧＡ１、ＡＧＡ２、ＡＳＧ７、ＡＣＨ１、ＡＣＴ１、ＳＡＣ６、ＡＲＰ１００、ＡＢＰ１、ＰＡＮ１、ＡＲＰ  ２、ＡＲＥＩＡＲＥ２、ＳＰＥ２、ＣＹＲ１、ＳＲＶ２、ＡＤＫ２、ＧＣＳ１、ＳＯＨ１、ＴＵＢ１、ＴＵＢ３  ＳＡＧ１、ＡＫＲ１、ＹＡＲ１、ＳＫ１８、
【００４４】
ＡＲＧ８２、ＡＢＦ１、ＳＴＥ６、ＢＡＲ１、８０１１、ＴＵＢ２、ＲＢＩ−２、ＢＩＧ１、ＢＩ  Ｍ１、ＢＡＴ１、ＢＥＭ１、ＢＥＭ４、ＳＢＥ２、ＢＮ１４、ＢＵＤ６、８０１２、ＢＵＤ９、ＢＵＤ４、ＢＵＤ８、ＲＣ  Ｋ２、ＣＭＫ１、ＣＮＡ１、ＣＭＰ２、ＣＮＢ１、ＣＣＨ１、ＣＭＤ１、ＳＲＡ１、ＹＣＫ１、ＹＣＫ２、ＨＲＲ２  ５、ＣＫＡ２、ＣＫＡ１、ＹＣＫ３、ＥＳＴ２、ＴＦＳ１、ＳＣＭ４、ＧＩＣ２、ＧＩＣ１、ＣＡＫ１、ＢＵＢ２、Ｂ  ＵＢ３、ＥＳＲ１、ＲＡＤ２４、ＤＢＦ２０、ＰＤＳ１、ＨＰＣ２、ＮＵＤ１、ＣＤＣ４７、ＣＤＣ１０、ＣＤＣ１３、Ｃ  ＤＣ３７、ＣＤＣ１、ＣＤＣ４０、ＣＤＣ４、ＣＤＣ２０、ＣＤＣ６、ＣＤＣ４６、ＣＤＣ３、ＫＡＲ１、ＢＢ  Ｐ１、ＣＤＣ５０、ＦＵＳ１、ＫＲＥ９、ＥＧＴ２、ＡＲＰ１、ＣＨＳ１、ＣＨＳ２、ＣＨＳ３、ＣＨＳ５、ＭＳ１１、ＣＡＣ２、Ｒ  ＬＦ２、ＣＨＬ４、ＳＭＣ１、ＳＭＣ２、ＣＩＮ１、ＳＮＦ７、ＣＬＣ１、ＣＯＦ１、ＰＡＭ１、ＬＡＳ１７、ＨＤＦ２、ＳＥＣ３、ＳＮＦ２、ＳＷＩ１、ＳＮＦ５、ＳＮＦ１  １、ＤＯＣ１、ＡＰＣ２、ＡＰＣ５、ＴＡＰ４２、ＣＤＣ５３、ＫＡＲ  ９、ＣＣＥ１、ＣＬＢ６、ＣＬＢ５、ＣＬＮ３、ＰＣＬ２、ＣＬＮ１、ＰＣＬ１、ＣＬＮ２、ＣＩ−１３３、ＣＩ−１３１、ＣＬＢ４、ＣＩ−１３２、ＦＡＲ１、ＣＫＳ１、ＣＤＣ２８、ＰＨ０８５、ＫＩＮ２８、ＳＳＮ３、ＣＬＧ１、ＤＩＴ２、ＳＬＡ１、ＳＬＡ２、ＳＰ０２０、ＤＰＰ１、ＲＡＤ１７、ＤＤＣ１、ＨＥＬ１、ＤＮＡ２、ＲＡＤ５、ＳＧＳ１、ＨＣＳ１、ＰＩＦ１、ＣＤＣ９、ＭＳＨ３、ＭＳＨ６、ＭＬＨ１、ＰＭＳ１、ＭＳＨ２、ＭＳＨ１、ＰＯＬ４、ＲＥＶ７、ＭＲＥ１１、ＲＡＤ２６、ＲＡＤ９、ＲＡＤ１８、ＲＡＤ５７、ＲＡＤ５５、ＸＲＳ２、ＭＭＳ２１、ＲＡＤ５１、ＲＡＤＩＯ、ＲＡＤ５０、ＲＦＡ３、ＲＦＡ２、ＲＦＡ１、ＲＦＣ４、ＲＦＣ５、ＲＦＣ３、ＲＦＣ２、ＲＦＣ１、ＦＯＢ１、ＴＯＰ１、ＴＯ  Ｐ２、ＴＯＰ３、ＲＡＰ１、ＲＡＤ５４、ＰＲ１２、ＰＲ１１、ＰＯＬ１、ＰＯＩ−１２、ＣＴＦ４、ＨＵＳ２、ＣＤＣ２、Ｐ  ＥＳ４、ＰＯＬ２、ＤＰＢ２、ＤＰＢ３、ＭＩＰ１、ＲＥＶ３、ＳＳＮ８、ＧＡＬ１１、ＲＧＲ１、ＳＲＢ６、ＲＰ０４１、ＳＥＣ５９、ＤＩＰ２、ＣＤＣ１４、ＭＳＧ５、ＤＹＮ１、ＵＢＣ４、ＵＢＣ９、ＣＤＣ３４、ＵＢＣ５、ＵＢＣ１、ＵＢＣ６、ＲＡＤ６、ＱＲ１８、ＥＬＣ１、ＲＮＣ１、ＣＴＳ１、ＫＥＸ２、ＡＰＧ１、ＳＳＰ１、ＳＵＰ３５、ＥＸＭ２、Ｓ  ＰＲ１、ＥＸＧ１、ＥＸＧ２、ＤＨＳ１、ＣＡＰ１、ＣＡＰ２、ＢＲＮ１、ＧＰＲ１、ＧＩＦ１、ＭＥＣ３、ＴＵ  Ｂ４、ＣＩＳ２、ＬＴＥ１、ＳＤＣ２５、ＳＲＭ１、ＣＤＣ２５、ＲＯＭ２、ＢＵＤＳ、ＲＯＭ１、ＳＰＴ１６、ＣＤＣ４３、Ｇ  ＩＰ１、ＳＩＮ４、ＳＮＦ６、ＫＲＥ６、ＧＦＡ１、ＮＧＲ１、ＷＨ１２、ＲＳＲ１、ＣＩＮ４、ＲＡＳ２、ＲＡＳ１、ＧＰ  Ａ１、ＳＴＥ４、ＳＴＥ１８、ＣＤＣ４２、ＭＤＧ１、ＳＥＣ４、ＴＥＭ１、ＲＨ０３、ＲＨ０４、ＲＩ−１０２、ＲＨＯ１、ＣＤＣ２４、ＢＥＭ２、ＢＵＤ２、ＢＥＭ３、ＬＲＧ１、ＧＰＡ２、ＳＩＳ１、ＨＳＰ８２、ＨＳＦ１、ＡＢＦ２、ＨＤＦ１、ＨＤＲ１、ＲＰＤ３、ＨＳＬ７、ＨＯ、ＳＢＡ１、ＨＰＲ１、ＩＤＳ２、ＮＦＩ１、ＣＳＥ２、ＭＤＭ１、ＭＩ−１  １３１、ＭＩＤＩ、ＳＩＭＩ、ＨＩＲ３、ＳＩＳ２、ＭＡＫＩ  １、ＬＡＳ１、ＳＰＡ２、ＷＨ１４、ＥＣＭ３３、ＳＥＴ１、ＣＴＦ１９、ＣＩＮ２、ＭＣＭ１６、ＳＬＫ１９、ＣＹＫ２、ＣＮＭ６７、ＳＳＴ２、ＤＰＢ１１、ＤＯＳ２、Ｄ  ＦＧ１６、ＡＦＲ１、ＺＤＳ１、ＳＲ０７、ＰＥＡ２、ＦＡＲ３、ＳＭＰ２、ＷＨ１３、ＣＤＣ５、ＭＥＴ３０、ＳＡＳ２、ＳＣＣ２、ＣＩＳ１、ＳＴＮ１、ＵＴＨ１、ＰＡＣ２、ＳＳＤ１、ＳＲＰ１、ＫＲＥ５、ＫＩＰ１、ＣＩＮ８、ＳＭＹ１、ＫＩＰ２、ＫＡＲ３、ＫＩＰ３、ＣＢＦ１、ＣＢＦ２、ＳＫＰ１、ＣＥＰ３、ＣＴＦ１３、ＤＢＲ１、ＬＡＧ１、ＭＩＨ１、ＢＦＲ１、ＤＩＧ２、ＤＩＧ１、ＭＦＡ１、ＭＦＡ２、ＭＦΑＩｐｈａ１、ＭＦＡＩｐｈａ２、ＭＩＤ２、ＳＳＦ１、ＭＡＴΑＬＰＨＡ２、ＭＡＴΑＬＰＨＡ１、ΑＬＰＨＡＩ、ΑＬＰＨＡ２、Ａ２、Ａ１、ＳＡＮ１、ＰＧＤ１、ＳＰＯ１１、ＭＳＨ５、ＤＭＣ１、ＩＳＣ１０、ＭＳＨ４、ＳＰ０１３、ＮＤＴ８０、ＲＥＣ１０４、ＨＯＰＩ、ＲＥＤ１、ＳＰ０７、ＭＵＭ２，ＭＥ１５、Ｓ  ＡＥ２、ＮＡＭ８、ＲＥＣ１０７、ＲＥＣ１０２、ＲＥＣ１１４、ＭＥＲ１、ＲＩＭ０１、ＮＤＪ１、ＣＤＣ５４、ＣＰ  Ｒ７、ＳＹＧ１，ＭＣＭ２、ＣＩＳ３、ＨＳＰ１５０、ＡＣＥ２、ＣＤＣ４８、ＡＳＥ１、ＹＴＭ１、ＨＳＭ３、ＹＤ  Ｊ１、ＥＲＶ１、ＦＵＳ３、ＪＮＭ１、ＭＣＤ１、ＭＭＣ１、ＭＳＢ１、ＭＳＢ２、ＭＰＴ５、ＺＤＳ２、ＭＳＮ５、ＫＥＭ１、ＭＬＣ１、ＭＹ０２、ＭＹ０４、ＭＹ０５、ＭＹ０３、ＭＹ０１、ＤＥＣ１、ＰＭＤ１、Ｍ  ＤＳ３、ＡＳＨ１、ＵＭＥ１、ＵＭＥ６、ＮＨＰ６Ａ、ＲＦＴ１、ＴＲＦ５、ＮＮＦ１、ＮＤＣ１、ＢＩＫ１、ＫＡＲ２、ＫＡＲ５、ＮＵＭ１、ＣＤＣ３９、ＭＡＫ１６、ＮＡＰ１、ＲＡＤ１６、ＲＡＤ２３、ＮＢＰ３５、ＯＲＣ１、ＯＲＣ６、ＯＲＣ５、ＯＲＣ４、ＯＲＣ３、ＲＲＲ１、ＳＩＣ１、ＢＵＤ３、ＰＷＰ２、ＳＴＥ３、ＳＴＥ２、ＯＰＹ２、ＳＴＥ５０、ＳＴＥ５、ＰＥＬ１、ＴＯＲ１、ＴＯＲ２、ＰＩＫ１、ＳＴＴ４、ＭＳＳ４、ＳＰ０１４、ＰＯＬ３２、ＩＭＥ４、ＳＨＰ１、ＰＤＳ５、ＦＥＮ１、ＣＳＥ１、ＦＬ０８、ＰＦＹ１、ＰＨＢ２、ＰＨＢ１、ＰＯＩ−３０、ＡＸＬ１、ＳＴＥ２３、ＲＡＤ２８、ＣＤＣ７、ＳＭＰ３、ＭＫＫ２、ＣＤＣ１５、ＡＲＤ１、ＣＨＵ、ＰＰＨ３、ＰＰＨ２１、ＰＰＨ２２、ＰＴＣ１、ＳＥ  Ｃ９、ＰＰＳ１、ＰＴＰ３、ＹＶＨ１、ＰＴＰ２、ＰＵＳ４、ＰＣＨ２、ＰＣＨ１、ＣＢＦ５、ＳＥＦ１、ＭＭＳ４、ＳＨＲ５、ＲＡＤ５９、ＲＡＤ５２、ＲＨＣ１８、ＲＧＰ１、ＲＶＳ１６７、ＲＩＭ９、ＢＮＲ１１、ＢＮ１１、ＳＰＴ３、ＳＯＫ２、ＫＡＲ４、ＤＢＦ４、ＳＤＳ２２、ＭＣＭ３、ＣＴＦ１８、ＳＲ０４、ＳＰＨ１、ＦＵＳ２、ＭＯＢ１、ＦＬ０８、ＦＩＧ１、ＦＩＧ２、ＥＮＤ３、ＤＦＧ５、ＣＴＲ９、ＴＯＭ１、ＰＯＰ２、ＧＲＲ１、ＳＣＰ１６０、ＳＵＲ１、ＭＵＭ３、ＺＩＰ２  ＣＤＣ４５、ＲＤＨ５４、ＳＨＥ３、ＳＨＥ２、ＳＨＥ４、ＧＰＩ１、ＭＩＦ２、ＥＳＰ１、ＨＯＰ２、ＤＮＡ４３、ＳＭＣ３、ＰＡＣ１１、ＰＡＣ１０、ＲＤ１１、ＲＧＡ１、ＲＮＲ１、ＲＮＲ２、ＲＮＲ４、ＲＮＲ３、ＰＲＰＳ１、ＲＰＬ１０、ＲＰＳ１Ａ、ＭＴＦ１、ＳＮ１２、Ｃ��Ｃ１２、ＣＤＣ１１、ＳＰＲ２８、ＣＤＣ５５、ＧＬＣ７、ＰＫＣ１、ＧＩ  Ｎ４、ＳＰＳ１、ＲＣＫ１、ＢＵＢ１、ＩＭＥ２、ＹＡＫ１、ＹＰＫ２、ＲＩＭ１１、ＣＬＡ４、ＭＫＫ１、ＭＥＫ１、Ｉ  ＰＬ１、ＳＧＶ１、ＳＬＴ２、ＫＳＳ１、ＢＣＫ１、ＳＴＥ１１、ＳＴＥ２０、ＤＢＦ２、ＨＳＬ１、ＮＲＫ１、ＳＩＴ４、Ｔ  ＰＤ３、ＥＬＭ１、ＭＣＫ１、ＲＡＤ５３、ＳＴＥ７、ＳＷＥ１、ＭＰＳ１、ＳＡＳ３、ＨＳＴ１、ＳＩＲ４、ＳＩＲ３、ＳＩＲ１、ＳＩＲ２、ＣＴＨ１、ＤＯＭ３４、ＨＳＴ４、ＲＶＳ１６１、ＤＮＬ４、ＩＱＧ１、ＦＵＮ１６、ＨＹＭ１、ＲＴ  Ｓ２、ＭＮＮ１０、ＰＲＫ１、ＭＣＭ６、ＳＡＰ１５５、ＳＡＰ４、ＳＡＰ１９０、ＳＡＰ１８５、ＭＵＤ１３、Ｍ  ＡＤ１、ＣＩＫ１、ＮＵＦ１、ＳＰＣ９７、ＳＰＣ４２、ＳＰＣ９８、ＣＤＣ３１、ＮＵＦ２、ＭＡＤ３、ＭＡＤ２、ＤＩ  Ｔ１、ＹＳＷ１、ＳＰ０１２、ＳＰ０１６、ＭＣＤ４、ＢＤＦ１、ＳＧＡ１、ＧＳＧ１、ＳＨＣ１、ＣＤＡ１、ＣＤ  Ａ２、ＳＭＫ１、ＳＰＳ２、ＳＰＲ６、ＳＬＺ１、ＳＰＳ４、ＳＰＲ３、ＳＰＳ１００、ＳＰＳ１８、ＲＡＤ２７、ＳＮＺ  １、ＳＵＲ４、ＳＴ１１、ＳＢＥ２２、ＣＳＥ４、ＢＭＨ１、ＳＶＬ３、ＳＣＨ９、（ＭＬＰ１）、ＳＳＦ２、ＲＡＤ２、ＣＤＨ１、ＣＤＣ２７、ＣＤＣ２６、ＣＤＣ２３、ＣＤＣ１６、ＡＰＣ１、ＡＰＣ１１、ＡＰＣ４、ＡＰＣ９、ＳＡＰ３０、ＲＳＣ６、ＲＳＣ８、ＳＴＨ１、ＳＦＨ１、ＳＡＳ５、ＪＳＮ１、ＢＭＨ２、ＳＭＴ４、ＢＣＫ２、ＨＯＣ１、ＺＩＰ１、ＵＦＥ１、ＥＳＴ１、ＴＥＬ１、ＡＮＣ１、ＣＣＬ１、ＤＳＴ１、ＴＲＸ１、ＴＲＸ２、ＴＲＦ４、ＰＡＴ１、ＳＰＴ４、ＳＰ  Ｔ６、ＣＤＣ３６、ＳＷＩ５、ＳＷＩ４、ＰＨＤ１、ＳＷＩ６、ＧＴＳ１、ＭＣＭ１、ＩＭＥ１、ＳＫＮ７、ＭＢＰ１、ＳＷ１３、ＳＩＮ３、ＳＴＥ１２、ＣＩＮ５、ＳＤＳ３、ＳＰ０１、ＭＯＴ２、ＲＰＧ１、ＰＲＴ１、ＣＤＣ３３、ＴＰＭ１、ＴＰＭ２、ＴＷＦ１、ＴＥＣ１、ＴＴＰ１、ＳＴＥ１３、ＰＲＰ８、ＵＢ１４、ＤＳＫ２、ＲＳＰ５、Ｄ  ＯＡ４、ＵＮＧ１、ＶＰＳ４５、ＶＡＮ１、ＶＲＰ１、ＤＦＧ１０、ＹＨＭ２、ＧＬ’Ｑ３、ＳＦＰ１、ＳＴＥ２４、ＲＭＥ１、ＳＡＥ３、ＭＥ１４、ＮＨＰ６Ｂ、ＭＯＢ２、ＥＳＴ３、ＲＩＭ１
【００４５】
熱ショックタンパク質  ＣＡＴ５、ＣＰＨ１、ＣＴＴ１、ＣＹＰ２、ＤＤＲ２、ＦＰＲ２、ＨＳＣ８２、ＨＳＰ１０４、ＨＳＰ１２、ＨＳＰ１５０、ＨＳＰ２６、ＨＳＰ３０、ＨＳＰ４２、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ７８、ＨＳＰ８２、ＫＡＲ２、ＭＤＪ１、ＳＩＳ１、Ｓ  ＯＤ２、ＳＳＡ１、ＳＳＡ２、ＳＳＡ３、ＳＳＡ４、ＳＳＢ１、ＳＳＢ２、ＳＳＣ１、ＳＳＥ１、ＳＳＥ２、ＳＴ１１、ＴＩＰ１、ＴＰＳ２、ＵＢ１４、ＹＤＪ１
【００４６】
ミトコンドリア  ＡＡＣ１、ＡＡＣ３、ＡＡＴ１、ＡＢＣ１、ＡＢＦ２、ＡＣ０１、ＡＣＲ１、ＡＤＨ３、ＡＤＫ２、ＡＥＰ２、ＡＦＧ３、ＡＬＤ１、ＡＬＤ２、ＡＲＧ１１、ＡＲＧ２、ＡＲＧ５，６、ＡＲＧ７、ＡＲＧ８、ＡＲＨ１、ＡＴ  Ｍ  １、ＡＴＰ１、ＡＴＰ１０、ＡＴＰ１１、ＡＴＰ１２、ＡＴＰ１４、ＡＴＰ１５、ＡＴＰ１６、ＡＴＰ２、ＡＴＰ３、ＡＴＰ４、Ａ  ＴＰ５、ＡＴＰ６、ＡＴＰ７、ＡＴＰ８、ＡＴＰ９、ＢＡＴ１、ＢＣＳ１、ＣＢＰ１、ＣＢＰ２、ＣＢＰ３、ＣＢＰ４、ＣＢ  Ｐ６、ＣＢＲ１、ＣＢＳ１、ＣＢＳ２、ＣＣＡ１、ＣＣＥ１、ＣＣＰ１、ＣＥＭ１、ＣＩＴ１、ＣＩＴ３、ＣＯＢ、ＣＯ  Ｑ１、ＣＯＱ２、ＣＯＱ３、ＣＯＱ６、ＣＯＲ１、ＣＯＴ１、ＣＯＸ１、ＣＯＸ１０、ＣＯＸ１１、ＣＯＸ１２、Ｃ  ０Ｘ３、ＣＯＸ１４、ＣＯＸ１５、ＣＯＸ１７、ＣＯＸ２、ＣＯＸ３、ＣＯＸ４、ＣＯＸ５Ａ、ＣＯＸ５Ｂ、ＣＯＸ６、ＣＯＸ７、ＣＯＸ８、ＣＯＸ９、ＣＰＲ３、ＣＴＰ１、ＣＹＢ２、ＣＹＣ１、ＣＹＣ２、ＣＹＣ３、ＣＹＣ７、ＣＹＴ１、ＣＹＴ２、ＤＢ１５６、ＤＬＤ１、ＤＴＰ、ＥＮＳ２、ＥＲＶ１、ＦＬＸ１、ＦＵＭ１、ＧＣＶ１、ＧＣＶ３、ＧＩ−０４、ＧＰＤ２、ＧＳＤ２、ＧＵＴ２、ＨＥＭ１、ＨＥＭ１５、ＨＳＰ１０、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ７８、ＨＴＳ１、ＩＤＨ１、ＩＤ  Ｈ２、ＩＤＰ１、ＩＦＭ１、ＩＬＶ１、ＩＬＶ２、ＩＬＶ３、ＩＬＶ５、ＩＬＶ６、ＩＭＰ１、ＩＭＰ２、ＩＮＨ１、ＩＳＭ１、ＫＧ  Ｄ１、ＫＧＤ２、ＬＡＴ１、ＬＥＵ４、ＬＩＰ５、ＬＰＤ１、ＬＹＳ１２、ＬＹＳ４、ＭＡＥ１、ＭＡＭ３３、ＭＡＳ１、ＭＡＳ２、ＭＢＡ１、ＭＣＲ１、ＭＤＨ１、ＭＤＪ１、ＭＤＪ２、ＭＤＭ１０、ＭＤＭ１２、ＭＥＦ１、ＭＥＦ２、ＭＥＴ１３、ＭＧＥ１、ＭＧＭ１０１、ＭＩＰ１、ＭＩＲ１、ＭＩＳ１、ＭＭＭ１、ＭＭＴｉ、Ｍ  ＭＴ２、ＭＯＤ５、ＭＯＬ１、ＭＲＦ１、ＭＲＰ１、ＭＲＰ１３、ＭＲＰ１７、ＭＲＰ２、ＭＲＰ２０、ＭＲＰ２１、ＭＲＰ４、ＭＲＰ４９、ＭＲＰ５１、ＭＲＰ８、ＭＲＰＬ１０、ＭＲＰＬ１１、ＭＲＰＬ１３、ＭＲＰＬ１５、ＭＲＰＬ１６、ＭＲＰＬ１７、ＭＲＰＬ１９、ＭＲＰＬ２、ＭＲＰＬ２０、ＭＲＰＬ２３、ＭＲＰＬ２４、ＭＲＰＬ２５、ＭＲＰＬ２７、ＭＲＰＬ２８、ＭＲＰ  Ｌ３、ＭＲＰＬ３１、ＭＲＰＬ３２、ＭＲＰＬ３３、ＭＲＰＬ３５、ＭＲＰＬ３６、ＭＲＰＬ３７、ＭＲＰＬ３８、ＭＲ  ＰＩ−３９、ＭＲＰＬ４、ＭＲＰＬ４０、ＭＲＰＬ４４、ＭＲＰＬ４９、ＭＲＰＬ６、ＭＲＰＬ７、ＭＲＰＬ８、Ｍ  ＲＰＬ９、ＭＲＰＳ２８、ＭＲＰＳ５、ＭＲＰＳ９、ＭＲＳ１、ＭＲＳ１１、ＭＲＳ２、ＭＲＳ３、ＭＲＳ４、ＭＲＳ５、ＭＳＤ１、ＭＳＥ１、ＭＳＦ１、ＭＳＨ１、ＭＳＫ１、ＭＳＭ１、ＭＳＰ１、ＭＳＲ１、ＭＳ  Ｓ１、ＭＳＳ１１６、ＭＳＳ１８、ＭＳＳ５１、ＭＳＴ１、ＭＳＵ１、ＭＳＷ１、ＭＳＹ１、ＭＴＦ１、Ｍ  Ｔ０１、ＮＡＭ１、ＮＡＭ２、ＮＡＭ９、ＮＤ１１、ＮＨＸ１、ＮＵＣ１、ＯＭ４５、ＯＲＦＡ０４５１４、ＯＳＭ１、ＯＸＡ１、ＰＤＡ１、ＰＤＢ１、ＰＤＸ１、ＰＥＬ１、ＰＥＴ１１１、ＰＥＴ１１２、ＰＥＴ１１７、ＰＥＴ１２２、ＰＥＴ１２３、ＰＥＴ１２７、ＰＥＴ１３０、ＰＥＴ１９１、ＰＥＴ３０９、ＰＥＴ４９４、ＰＥＴ５４、ＰＥＴ５６、ＰＥＴ９、ＰＥＴＣＲ４６、ＰＩ−１１３１、ＰＨＢ２、ＰＩＦ１、ＰＩＭ１、ＰＯＲ１、ＰＯＲ２、ＰＰＡ２、ＰＳＤ１、ＰＵＴ１、ＰＵＴ２、ＱＣＲ１０、ＱＣＲ２、ＱＣＲ６、ＱＣＲ７、ＱＣＲ８、ＱＣＲ９、ＲＣＡｉ、ＲＦ２、ＲＩＭ１、ＲＩＭ２、ＲＩＰ１、ＲＭＬ２、ＲＮＡ１２、ＲＰＭ２、ＲＰ  ０４１、ＳＣ０１、ＳＣＯ２、ＳＤＩ−１１、ＳＤＨ２、ＳＤＩ−１３、ＳＤＩ−１４、ＳＥＣＹ、ＳＨＭ１、ＳＨＹ１、ＳＬＳ１、ＳＭＦ２、ＳＯＤ２、ＳＯＭ１、ＳＳＣ１、ＳＳ．ＣＯＰＹＲＧＴ．１、ＳＴＦ１、ＳＴＦ２、ＳＵＮ４、ＳＵＶ３、ＴＩＭ１７、ＴＩＭ２２、ＴＩＭ２３  ＴＩＭ４４、ＴＩＭ５４、ＴＯＭ２０、ＴＯＭ２２、ＴＯＭ３７、ＴＯＭ４０、ＴＯＭ６、ＴＯＭ７、ＴＯＭ７０、ＴＯＭ７２、ＴＲＭ１、ＴＵＦ１、ＵＮＧ１、ＶＡＲ１、ＹＡＨ１、ＹＡＬ０１１Ｗ、ＹＡＴ１、ＹＢＬ０１３  Ｗ、ＹＣＲ０２４Ｃ、ＹＤＲ０４１Ｗ、ＹＤＲ１１５Ｗ、ＹＤＲ１１６Ｃ、ＹＥＲ０７３Ｗ、ＹＦＨ１、ＹＧＬＯ６８Ｗ、ＹＧＲ２５７Ｃ、ＹＨＭ１、ＹＨＲ０７５Ｃ、ＹＨＲ１４８Ｗ、ＹＪＬ２００Ｃ、ＹＪＲ１１３Ｃ、ＹＫＬＯ５５Ｃ、ＹＫＬ１２０Ｗ、ＹＫＬ１３４Ｃ、ＹＫＬ１９２Ｃ、ＹＬＲ１６８Ｃ、ＹＭＣ１、ＹＭＣ２、ＹＭＬ０２５Ｃ、ＹＭＲ１８８Ｃ、ＹＭＲ３１、ＹＮＬ０８１  Ｃ、ＹＮＬ３０６Ｗ、ＹＮＲ０３６Ｃ、ＹＮＲ０３７Ｃ、ＹＯＲ２２１  Ｃ、ＹＰＬ０１３Ｃ、ＥＴＦ−ΒＥＴＡ
【００４７】
ペルオキシソーム  ＣＡＴ２、ＣＩＴ２、ＣＴＡ１、ＤＡＬ７、ＥＨＤ１、ＥＨＤ２、ＦＡＡ２、ＦＡＴ２、ＦＯＸ２、ＩＣＵ、ＩＤＰ３、ＭＤＨ３、ＭＬＳ１、ＰＥＸ１１、ＰＥＸ１２、ＰＥＸ１３、ＰＥＸ１４、ＰＥＸ１７、ＰＥＸ２、ＰＥＸ３、ＰＥ  Ｘ４、ＰＥＸ６、ＰＥＸ７、ＰＥＸＢ、ＰＯＴ１、ＰＯＸ１、ＰＸＡ１、ＰＸＡ２、ＳＰＳ１９、ＹＢＲ２０４Ｃ、ＹＤＲ  ４４９Ｃ、ＹＨＲ１８０Ｗ  ＤＮＡ−ＡＳＳＯＣＩＡＴＥＤ  ＡＬＰＨＡ１、ＡＬＰＨＡ２、ＡＢＦ１、ＡＢＦ２、ＡＤＡ２、ＡＤＥ１２、ＡＤＲ１、Α１、Α２、ＡＮＣ１、ＡＰＮ１、ＡＲＧＲ１、ＡＲＧＲ２、ＡＲＧＲ３、ＡＲＲ１、ＡＳＨ１、ＡＺＦ１、ＢＡＳ１、ＢＤＦ１、ＢＲ  Ｆ１、ＢＵＲ６、ＣＡＣ２、ＣＡＤ１、ＣＡＦ１７、ＣＡＴＢ、ＣＢＦ１、ＣＢＦ２、ＣＣＥ１、ＣＣＲ４、ＣＤＣ１３、ＣＤＣ３６、ＣＤＣ３９、ＣＤＣ４６、ＣＤＣ４７、ＣＤＣ５４、ＣＤＣ６、ＣＤＣ７、ＣＤＣ７３、ＣＤＣ９、ＣＥＦ１、ＣＥＰ３、ＣＨＡ４、ＣＨＤ１、ＣＨＵ、ＣＨＬ４、ＣＲＺ１、ＣＳＥ１、ＣＳＥ２、ＣＳＥ４、ＣＴＦ１３、ＣＵＰ２、ＣＵＰ９、ＤＡＬ８０、ＤＡＬ８１、ＤＡＬ８２、ＤＡＴ１、ＤＢＦ４、ＤＭＣ１、ＤＮＡ２、ＤＮＡ４３、ＤＮＬ４、Ｄ  ＯＳ２、ＤＯＴ６、ＤＰ１３１  １、ＤＰＢ２、ＤＰＢ３、ＤＳＴ１、ＥＣＭ２２、ＥＮＳ２、ＥＳＴ１、ＥＺＬ１、ＦＣＰ１、ＦＨＬ１、ＦＫＨ１、ＦＫＨ２、ＦＬ０８、ＦＺＦ１、ＧＡＬ１１、ＧＡＬ４、ＧＡＴ１、ＧＢＰ２、ＧＣＮ４、ＧＣＮＳ、ＧＣＲ１、ＧＣＲ２、ＧＬＮ３、ＧＬ０３、ＧＴＳ１、ＧＺＦ３、ＨＡＣ１、ＨＡＰ１、ＨＡＰ２、ＨＡＰ３、ＨＡＰ４、ＨＣＭ１、ＨＤＡ１、ＨＤＦ１、ＨＦＭ１、ＨＨＦ１、ＨＨＦ２、ＨＨ０１、ＨＨＴ１、ＨＨＴ２、ＨＭ０１、ＨＭＳ１、ＨＭＳ２、Ｈ０、ＨＯＰ１、ＨＰＲ１、ＨＰＲＳ、ＨＳＦ１、ＨＴＡ１、ＨＴＡ２、ＨＴＡ３、ＨＴＢ１、ＨＴ６２、ＩＦＨ１、ＩＭＥ１、ＩＭＥ４、ＩＮ０２、ＩＮ０４、ＩＸＲ１、ＫＡＲ４、ＬＥＵ３、ＬＹＳ１４、ＬＹＳ２０、ＬＹＳ２１、Ｍ  ＡＣ１、ＭＡＧＩ、ＭＡＬ１３、ＭＡＬ２３、ＭＡＬ３３、ＭＡＴΑＬＰＨＡ１、ＭＡＴΑＬＰＨＡ２、ＭＢＰ１、ＭＣＤ１、ＭＣＭ１、ＭＣＭ２、ＭＣＭ３、ＭＣＭ６、ＭＥＤ６、ＭＥＲ２、ＭＥＴ１８、ＭＥＴ２８、ＭＥＴ３０、ＭＥＴ３１、ＭＥＴ３２、ＭＥＴ４、ＭＧＡ２、ＭＧＴ１、ＭＩＦ２、ＭＩＧ１、ＭＩＧ２、ＭＩＰ１、ＭＬＨ１、ＭＯＬ１、ＭＯＴ１、ＭＰＴ４、ＭＲＥ１１、ＭＳＨ１、ＭＳＨ２、ＭＳＨ３、ＭＳＨ４、ＭＳＨＳ、ＭＳ１１、ＭＳＮ１、ＭＳＮ２、ＭＳＮ４、ＭＴＦ１、ＮＢＮ１、ＮＣ１３２、ＮＤＪ１、ＮＧＧ１、ＮＨＰ２、ＮＨＰ６  Ａ、ＮＨＰ６Ｂ、ＮＯＴ３、ＮＵＣ２、ＯＡＦ１、ＯＰ１１、ＯＲＣ１、ＯＲＣ２、ＯＲＣ３、ＯＲＣ４、ＯＲＣＳ、ＯＲＣ６、ＰＡＦ１、ＰＣＨ１、ＰＣＨ２、ＰＤＲ１、ＰＤＲ３、ＰＧＤ１、ＰＨＤ１、ＰＨ０２、ＰＨ０４、ＰＨＲ１、ＰＩＦ１、ＰＩＰ２、ＰＭＳ１、ＰＯＢ１、ＰＯＬ１、ＰＯＬ１２、ＰＯＬ２、ＰＯＬ３、ＰＯＬ３０、ＰＯ  Ｌ４、ＰＯＰ２、ＰＰＲ１、ＰＲＩ１、ＰＲ１２、ＰＳ０２、ＰＵＴ３、ＲＡＤ１、ＲＡＤ１０、ＲＡＤ１４、ＲＡＤ１６、ＲＡＤ１８、ＲＡＤ２、ＲＡＤ２３、ＲＡＤ２６、ＲＡＤ２７、ＲＡＤ３、ＲＡＤ４、ＲＡＤＳ、ＲＡＤ５０、ＲＡＤ５１、ＲＡＤ５２、ＲＡＤ５４  ＲＡＤ５５、ＲＡＤ５７、ＲＡＤ６、ＲＡＤ７、ＲＡＰ１、ＲＡＴ−１、ＲＣＳ１、ＲＥＢ１、ＲＥＣ１０２、ＲＥ  Ｃ１０４、ＲＥＣ１１４、ＲＥＤ１、ＲＥＧ１、ＲＥＴ１、ＲＥＶ３、ＲＦＡ１、ＲＦＡ２、ＲＦＡ３、ＲＦＣ１、ＲＦＣ２、ＲＦＣ３、ＲＦＣ４、ＲＦＣＳ、ＲＧＭ１、ＲＧＴ１、ＲＩＦ１、ＲＩＦ２、ＲＩＭ１、ＲＩＭ１０１、ＲＬＦ２、ＲＬＭ１、Ｒ  ＭＥ１、ＲＭＳ１、ＲＯＸ１、ＲＯＸ３、ＲＰＡ１２、ＲＰＡ１３５、ＲＰＡ１４、ＲＰＡ１９０、ＲＰＡ３４、ＲＰＡ４３、ＲＰＡ４９、ＲＰ１３１  ０、ＲＰＢ１１、ＲＰＢ２、ＲＰ１３３、ＲＰ１３４、ＲＰＢＳ、ＲＰＢ６、ＲＰＢ７、ＲＰＢＢ、ＲＰＢ９、ＲＰＣ１０、ＲＰＣ１９、ＲＰＣ２５、ＲＰＣ３１、ＲＰＣ３４、ＲＰＣ４０、ＲＰＣ５３、ＲＰＣ８２、ＲＰＤ３、ＲＰ０２１、ＲＰ０３１、ＲＰ０４１、ＲＲＮ１０、ＲＲＮ１１、ＲＲＮ３、ＲＲＮＳ、ＲＲＮ６、ＲＲＮ７、ＲＲＮ９、ＲＳＣ４、ＲＳＣ６、ＲＳＣ８、ＲＴＧ１、ＲＴＧ３、ＳＡＳＳ、ＳＥＦ１、ＳＥＴ１、ＳＦＨ１、ＳＦＬ１、ＳＧＳ１、ＳＩＧ１、ＳＩＮ３、ＳＩＮ４、ＳＩＰ２、ＳＩＰ４、ＳＩＲ１、ＳＩＲ２、ＳＩＲ３、ＳＩＲ４、ＳＫＮ７、ＳＫ０１、ＳＭＣ１、ＳＭＣ２、ＳＭＰ１、ＳＮＦ２、ＳＮＦＳ、ＳＮＦ６、ＳＯＫ２、ＳＰＫｉ、ＳＰＯＬ、ＳＰＳ１８、ＳＰＴ１０、ＳＰＴ１５、ＳＰＴ１６、ＳＰＴ２、ＳＰＴ２１、ＳＰＴ２３、ＳＰＴ３、ＳＰＴ４、ＳＰＴ５、ＳＰＴ６、ＳＰＴＢ、ＳＲＩ３２、ＳＲＢ４、ＳＲＢＳ、Ｓ  ＲＢ６、ＳＲＢ７、ＳＲ１３８、ＳＲ１３９、ＳＳＬ２、ＳＳＮ３、ＳＳＮ６、ＳＳＮＢ、ＳＳＵ７２、ＳＴＢ４、ＳＴＢＳ、Ｓ  ＴＥ１２、ＳＴＨ１、ＳＵＡ７、ＳＷＩ１、ＳＷ１３、ＳＷ１４、ＳＷ１６、ＳＷＰ７３、ＴＡＦ１９、ＴＡＦ２５、ＴＢＦ１、ＴＥＡ１、ＴＥＣ１、ＴＦＡＩ、ＴＦＡ２、ＴＦ１３１、ＴＦ１３２、ＴＦ１３３、ＴＦＢ４、ＴＦＣ１、ＴＦＣ２、ＴＦ  Ｃ３、ＴＦＣ４、ＴＦＣＳ、ＴＦＧ１、ＴＦＧ２、ＴＨ１２、ＴＯＡ１、ＴＯＡ２、ＴＯＰ１、ＴＯＰ２、ＴＯＰ３、ＴＲＦ４、ＴＳ  Ｐ１、ＴＵＰ１、ＴＹＥ７、ＵＧＡ３、ＵＭＥ６、ＵＮＧＩ、ＵＳＶ１、ＸＲＳ２、ＹＡＬ０１９Ｗ、ＹＡＰ１、ＹＡ  Ｐ３、ＹＡＰＳ、ＹＢＬ０５４Ｗ、ＹＢＲ０２６Ｃ、ＹＢＲ１５０Ｃ、ＹＢＲ２３９Ｃ、ＹＣＲ１０６Ｗ、ＹＤＲ０２６  Ｃ、ＹＤＲ０６０Ｗ、ＹＤＲ２１３Ｗ、ＹＥＲ０４５Ｃ、ＹＥＲ１８４Ｃ、ＹＦＬ０５２Ｗ、ＹＩＬ０３６Ｗ、ＹＩＬ  １３０Ｗ、ＹＪＬ１０３Ｃ、ＹＪＬ２０６Ｃ、ＹＫＬ００５Ｃ、ＹＫＬ２２２Ｃ、ＹＫＲ０６４Ｗ、ＹＬＬ０５４Ｃ、ＹＬＲＯ８７Ｃ、ＹＬＲ２６６Ｃ、ＹＮＬ２０６Ｃ、ＹＯＬ０８９Ｃ、ＹＯＲ１７２Ｗ、ＹＯＲ３８０Ｗ、ＹＯＸ１、ＹＰＬ１３３Ｃ、ＹＰＲ００８Ｗ、ＹＰＲ１９６Ｗ、ＹＲＲ１、ＺＡＰ１、ＺＩＰ１、ＺＵ０１
【００４８】
免疫抑制  ＦＥＮ１、ＳＳＨ４、ＳＨＲ３  ＣＹＣＬＩＮＳ  ＣＣＵ、ＣＬＢ１、ＣＬＢ２、ＣＬＢ３、ＣＬ１３４、ＣＬＢＳ、ＣＬＢ６、ＣＬＧ１、ＣＬＮ１、ＣＬＮ２、ＣＬＮ３、ＣＴＫ２、ＰＣＬ１、ＰＣＬ１０、ＰＣＬ２、ＰＣＬＳ、ＰＣＬ６、ＰＣＬ７、ＰＣＬＢ、ＰＣＬ９、ＰＨ０８０、Ｓ  ＳＮＢ、ＹＢＲ０９５Ｃ
【００４９】
ＡＴＰ結合カセットタンパク質  ＡＤＰ１、ＡＴＭ１、ＣＡＦ１６、ＧＣＮ２０、ＭＤＬ１、ＭＤＬ２、ＰＤＲ１０、ＰＤＲ１１、ＰＤＲ１２、ＰＤＲ１５、ＰＤＲＳ、ＰＸＡ１、ＰＸＡ２、ＳＮＱ２、ＳＴＥ６、ＹＢＴ１、ＹＣＦ１、ＹＤＬ２２３Ｃ、ＹＤ  Ｒ０９１Ｃ、ＹＥＦ３Ｂ、ＹＥＲ０３６Ｃ、ＹＨＬ０３５Ｃ、ＹＫＲ１０３Ｗ、ＹＫＲ１０４Ｗ、ＹＬＬ０１５Ｗ、ＹＮＲ０７０Ｗ、ＹＯＲ０１１Ｗ、ＹＯＲ１、ＹＰＬ２２６Ｗ
【００５０】
細胞骨格  ＡＢＰ１、ＡＣＦ２、ＡＣＴ１、ＡＦＲ１、ＡＩＰ１、ＡＩＰ２、ＡＲＰ３、ＡＵＴ２、ＡＵＴ７、ＢＥＭ１、ＢＩ  Ｍ１、ＢＮ１１、ＢＮ１４、ＢＵＤ３、ＢＵＤ６、ＣＡＰ１、ＣＡＰ２、ＣＤＣ１０、ＣＤＣ１１、ＣＤＣ１２、ＣＤＣ３、ＣＩＮ１、ＣＩＮ２、ＣＩＮ４、ＣＭＤ１、ＣＯＦ１、ＣＲＮ１、ＥＮＤ３、ＧＩＣ１、ＧＩＣ２、ＧＩＮ４、Ｊ  ＮＭ１、ＫＡＲ９、ＫＩＰ２、ＫＩＰ３、ＬＡＳ１７、ＭＤＭ１、ＭＨＰ１、ＭＹ０１、ＭＹ０２、ＭＹ０３、ＭＹ０４、ＭＹ０５、ＰＦＹ１、ＲＶＳ１６１、ＲＶＳ１６７、ＳＡＣ６、ＳＡＣ７、ＳＥＣ１、ＳＨＥ３、ＳＨＭ２、ＳＬＡ１、ＳＬ  Ａ２、ＳＭＹ１、ＳＭＹ２、ＳＰＡ２、ＳＰＨ１、ＳＰＲ２８、ＳＰＲ３、ＳＲＶ２、ＴＣＰ１、ＴＰＭ１、ＴＰＭ２、ＴＵＢ１、ＴＵＢ２、ＴＵＢ３、ＶＰＳ１６、ＶＲＰ１  ＡＰＯＰＴＯＳＩＳ  ＡＴＰ１、ＡＴＰ１４、ＡＴＰ１５、ＡＴＰ１６、ＡＴＰ２、ＡＴＰ３、ＡＴＰ４、ＡＴＰＳ、ＡＴＰ６、ＡＴＰ７、ＡＴＰ８、ＡＴＰ９、ＣＹＣ１、ＳＨ０１、ＳＳＫ２、ＳＳＫ２２、ＳＷ１３、ＳＸＭ１
【００５１】
細胞レスキュー  ＡＣＣ１、ＡＬＤ６、ＢＣＫ１、ＢＥＭ１、ＢＥＭ２、ＢＩＭ１、ＢＭＨ１、ＢＭＨ２、ＣＡＮ１、ＣＢＦ１、ＣＤＣ１、ＣＤＣ１４、ＣＤＣ１５、ＣＤＣ２０、ＣＤＣ２５、ＣＤＣ２８、ＣＤＣ３３、ＣＤＣ３７、ＣＤＣ４２、ＣＤＣ４３、ＣＤＣ５３、ＣＤＣ６、ＣＨＣ１、ＣＩＮ８、ＣＫＡ１、ＣＫＡ２、ＣＬＡ４、ＣＬＢ１、ＣＬＢ２、ＣＬＢ３、ＣＬＢ４、ＣＬＢ５、ＣＬＮ１、ＣＬＮ２、ＣＬＮ３、ＣＭＰ２、ＣＮＡ１、ＣＯＦ１、ＣＴＴ１、ＤＢＦ２、ＤＢＦ２０、ＤＰＭ１、ＥＲＧ２５、ＧＩＣ１、ＧＩＣ２、ＧＰＡ１、ＧＲＲ１、ＨＣＡ４、ＨＩＳ４、ＨＯＣ１、ＨＳＦ１、ＫＡＲ１、ＫＥＳ１、ＫＲＥ６、ＫＳＳ１、ＭＢＰ１、ＮＭＴ１、ＯＲＣ２、ＯＲＣ５、ＰＤＥ２、ＰＥＰ１２、ＰＥＰ７、ＰＫＣ１、Ｐ  ＬＣ１、ＰＭＲ１、ＰＯＬ３０、ＰＲＰ１８、ＲＡＭ１、ＲＡＳ１、ＲＡＳ２、ＲＢＬ２、ＲＥＤ１、ＲＦＣ１、ＲＨ０１、ＲＨ０３、ＲＨ０４、ＳＡＣ１、ＳＥＣ１３、ＳＥＣ１４、ＳＥＣ２２、ＳＥＣ４、ＳＥＴ１、ＳＩＳ２、ＳＫＰ１、ＳＰＣ９８、ＳＲＡ１、ＳＲ０４、ＳＲＰ１、ＳＳＡ１、ＳＳＡ２、ＳＳＡ４、ＳＳＮ８、ＳＴＥ２０、ＳＴＮ１、ＳＴＴ４、ＳＵＪ３、ＳＷＥ１、ＳＷ１４、ＳＷ１６、ＴＥＬ１、ＴＯＲ１、ＴＵＢ１、ＴＵＢ４、ＶＭＡ１、ＹＣＫ１、ＹＣＫ２、ＹＰＴ１
【００５２】
細胞損傷  ＡＰＮ１、ＢＵＢ１、ＣＤＣ２８、ＣＤＣ４５、ＣＤＣ４６、ＣＤＣ４７、ＣＤＣ５４、ＣＤＣ７、ＣＬＢ１、ＣＬＢ２、ＣＬＢ３、ＣＬＢ５、ＤＤＣ１、ＤＤＲ２、ＤＤＲ４８、ＤＩＮ７、ＤＵＮ１、ＥＣＭ３２、ＨＳＭ３、ＩＭＰ２、ＭＥＣ１、ＭＥＣ３、ＭＧＴ１、ＭＯＬ１、ＭＲＥ１１、ＭＵＳ８１、ＮＴＧ１、ＰＤＳ１、ＰＧＤ１、Ｐ  ＨＲ１、ＰＯＬ２、ＰＯＬ３、ＰＯＬ３０、ＰＯＬ４、ＰＲ１１、ＰＳ０２、ＲＡＤ１４、ＲＡＤ１６、ＲＡＤ１７、ＲＡＤ１８、ＲＡ  Ｄ２４、ＲＡＤ３０、ＲＡＤ５１、ＲＡＤ５２、ＲＡＤ５４、ＲＡＤ５５、ＲＡＤ５７、ＲＡＤ７、ＲＡＤ９、ＲＤＨ５４、ＲＥＶ３、ＲＦＡ１、ＲＦＣ５、ＲＮＲ１、ＲＮＲ２、ＲＮＲ３、ＲＮＲ４、ＲＰＨ１、ＳＩＣ１、ＳＭＬ１、ＳＰ  Ｋ１、ＳＴＮ１、ＳＴＳ１、ＴＥＬ１、ＴＦＡ１、ＴＦＡ２、ＴＵＰ１、ＵＢＣ７、ＵＢ１４、ＸＢＰ１、ＹＢＲ０９８Ｗ、ＹＦＨ１
【００５３】
他の関連変異および遺伝子  Ｙ−１、９５２０ｂ、Ｃ６５８−Ｋ７、ＪＰＤ  ４、ＪＰＭ９、Ｃｙ３２、Ｅ３５４、ＪＣ４８８、ＰＳＹ１４２、０１−２、Ｙ２１７、ＪＣ７８７−９Ａ、ＭＬ１−２１、Ｙ５００，８６−９Ｃ、ＧＬ１、ＧＴ５−１Ａ、ＨＤ５６５Ａ、ＰＺ１、１２７−４Ｄ、Ｙ２２９、ＪＣ３０２−２６Ｂ、ＪＣ４８２、ＬＢ２２１１−２Ｂ、ＭＨ４１−７Ｂ／Ｐ２１、ｅｒｇ８１、ＳＥＹ６２１１、ＧＬ４、Ｋ３３５、ＭＫ２０、ＭＫ３４、ＤＥ４−３Ａ、ＤＥ４−３Ｂ、ＤＥ４−３Ｃ、ＭＭＹ０１１、ＵＨ  １−ＧＲＧＺ、２１５０−２−３ａ、Ｙ２１１、ＤＰ１／５１７，９４３，１１１７、Ｃ６５８、１２５２、Ｈ７９．２０．３、ＬＢ１−３Ｂ、Ｃ６５８−Ｋ４２、Ｒ２９Ｂ、ＬＢ５４−３Ａ、ＸＷ５２０−９Ａ、ａｄｅ７、Ｄ２２５−５Ａ、３０９、ＳＤＨ１、ＳＤＨ２、ＳＤＨ３、ＳＤＨ４、ＴＣＭ６２、ＰＤＥ１、ＰＤＥ２
【００５４】
哺乳動物遺伝子：
１１−βヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼＩＩ型、１２−リポオキシゲナーゼ、１７−βヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ、６０Ｓリボソームタンパク質Ｌ６，６−Ｏメチルグアニン−ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ、活性化転写因子２、活性化転写因子３、活性化転写因子４、アクチビンβＥ、アクチビン受容体１１型、アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、アシルＣｏＡキャリアタンパク質、アデニンヌクレオチド翻訳因子１、アラニンアミノトランスフェラーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼ１、アルコールデヒドロゲナーゼ２、アルコールデヒドロゲナーゼ３、アルコールデヒドロゲナーゼ４、アルコールデヒドロゲナーゼ５、アルデヒドデヒドロゲナーゼ１、アルデヒドデヒドロゲナーゼ２、アルデヒドデヒドロゲナーゼ３、α１−アンチトリプシン、α−１酸糖タンパク質、α−１アンチキモトリプシン、α−カテニン、αチューブリン、アポリポタンパク質Ａ１、アポリポタンパク質Ａ１１、アポリポタンパク質Ｃｌｉｌ、アポリポタンパク質Ｅ、アリール炭化水素受容体、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、ミトコンドリア、小脳性運動失調（Ａｔａｘｉａ  ｔｅｌａｎｇｅｉｃｔａｓｉａ）、ＡＴＰ依存性ヘリカーゼ１１（７０ｋＤａ）、ＡＴＰ依存性ヘリカーゼ１１（Ｋｕ８０）、ＢＡＧ−１、ＢＡＫ、Ｂａｘ（α）、Ｂｃｌ−２、Ｂｃｌ−ｘＬ、β−アクチン、ビリルビンＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼアイソザイム１、ビリルビンＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼアイソザイム２、ビリベルジンリダクターゼ、分岐鎖アシルＣｏＡオキシダーゼ、ＢＲＣＡ１、ＢＲ−カドヘリン、Ｃ４ｂ結合タンパク質、ｃ−ａｂｌ、カルシニューリンＢ、カルネキシン、カルプロテクチン、カルレティキュリン、小管多特異性有機アニオントランスポーター、カルボニックアンヒドラーゼ１１１、カルニチンパルミトイル−ＣｏＡトランスフェラーゼ、カスパーゼ１、カスパーゼ２（Ｎｅｄｄ２）、カスパーゼ３（ＣＰＰ３２β）、カスパーゼ５（ＩＣＥ  ｒｅｌＩＩＩ）、カスパーゼ６（Ｍｃｈ２−α）、カスパーゼ７（Ｍｃｈ３α）、カスパーゼ８（ＦＬＩＣＥ）、カタラーゼ、カテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ、ＣＣＡＡＴ／エンハンサー結合タンパク質α、ＣＣＡＡＴ／エンハンサー結合タンパク質ε、細胞分裂周期タンパク質２、細胞分裂周期タンパク質２０、細胞分裂周期タンパク質２５、細胞内レチノイン酸結合タンパク質１、細胞内レチノイン酸結合タンパク質２、ｃｅｒｂ；ｃ−ｆｏｓ、チェックポイントキナーゼ−１、コレステロールエステラーゼ、ｃ−Ｈ−ｒａｓ、ｃｊｕｎ、クラステリン、ｃ−ｍｙｃ、補体成分Ｃ３、コネキシン３０、コネキシン３２、コネキシン−４０、副腎皮質ステロイド結合グロブリン、コルチコトロピン放出因子、Ｃ−反応性タンパク質、クレアチンキナーゼｂ、サイクリンＤ１、サイクリン依存性キナーゼ１、サイクリン依存性キナーゼ４、サイクリン依存性キナーゼインヒビター１Ａ、サイクリンＥ、サイクリンＧ、サイクリン依存性キナーゼ４インヒビター（Ｐ１１６）、サイクリン依存性キナーゼ４インヒビターＢ（Ｐ１６）、サイクリン依存性キナーゼインヒビターＰ２７Ｋｉｐ１、シクロオキシゲナーゼ２、嚢��性線維症膜コンダクタンス制御因子、シトクロムＰ４５０  １１Ａ１、シトクロムＰ４５０  １７Ａ、シトクロムＰ４５０  １Ａ１、シトクロムＰ４５０  １Ａ２、シトクロムＰ４５０  １Ｂ１、シトクロムＰ４５０  ２Ａ１、シトクロムＰ４５０  ２Ａ３、シトクロムＰ４５０  ２Ａ６、シトクロムＰ４５０  ２１３１、シトクロムＰ４５０  ２１３１０、シトクロムＰ４５０  ２１３２、シトクロムＰ４５０  ２Ｃ１１、シトクロムＰ４５０  ２Ｃ１２、シトクロムＰ４５０  ２Ｃ１９、シトクロムＰ４５０  ２Ｃ９、シトクロムＰ４５０  ２Ｄ６、シトクロムＰ４５０  ２Ｅ１、シトクロムＰ４５０  ２Ｆ２、シトクロムＰ４５０  ３Ａ１、シトクロムＰ４５０  ３Ａ４、シトクロムＰ４５０  ４Ａ、シトクロムＰ４５０  ４Ａ１、損傷特異的ＤＮＡ結合タンパク質ｐ４８サブユニット、細胞死に対する防御因子（Ｄｅｆｅｎｄｅｒ  ａｇａｉｎｓｔ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ）−１、大腸癌において欠失されている大腸癌の腫瘍抑制遺伝子の候補物質（Ｄｅｌｅｔｅｄ  ｉｎ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、δ様タンパク質、ジヒドロ葉酸リダクターゼ、ジスルフィドイソメラーゼ関連タンパク質（ＥＲｐ７２）、ＤＮＡ結合タンパク質インヒビターＩＤ２、ＤＮＡ依存性ヘリカーゼ、ＤＮＡ依存性タンパク質キナーゼ、ＤＮＡリガーゼ１、ＤＮＡリガーゼＩＶ、ＤＮＡミスマッチ修復タンパク質（ＭＬＨ１）、ＤＮＡミスマッチ修復タンパク質（ＰＭＳ２）、ＤＮＡミスマッチ修復／結合タンパク質（ＭＳＨ３）、ＤＮＡポリメラーゼα、ＤＮＡポリメラーゼβ、ＤＮＡポリメラーゼβ、ＤＮＡ修復および組換えホモログ（ＲＡＤ５２）、ＤＮＡ修復ヘリカーゼＩＩ  ＥＲＣＣ−３、ＤＮＡ修復タンパク質（ＲＡＤ５０）、ＤＮＡ修復タンパク質（ＸＲＣＣ１）、ＤＮＡ修復タンパク質ＸＰ−Ｄ、ＤＮＡ複製因子Ｃ（３６ｋＤａ）、ＤＮＡトポイソメラーゼ１、ＤＮＡトポイソメラーゼ１１、ドーパミンβ−ヒドロキシラーゼ、ＤＲＡ、ダイニンの軽鎖１、Ｅ２Ｆ、早期増殖関連タンパク質１、Ｅ−カドヘリン、ＥＣＥ−１（エンドセリン変換酵素）、エンドセリン−１、エノラーゼα、エノイル−ＣｏＡヒドラターゼ、エオタキシン、上皮増殖因子、エポキシドヒドロラーゼ、ＥＲＡ−Ｂ、ＥＲＣＣ１（除去修復タンパク質）、ＥＲＣＣ３（ＤＮＡ修復ヘリカーゼ１１）、ＥＲＣＣ５（除去修復タンパク質）、ＥＲＣＣ６（除去修復タンパク質）、ＥＲＫ１、エリスロポエチン、エリスロポエチン受容体、Ｅセレクチン、エストロゲン受容体、ファルネソール受容体、Ｆａｓ抗原、Ｆａｓ結合デスドメイン（ＦＡＤＤ）、Ｆａｓリガンド、Ｆａｓ／Ａｐｏ１受容体、脂肪酸シンターゼ、脂肪酸アシル−ＣｏＡオキシダーゼ、脂肪酸アシル−ＣｏＡシンターゼ、ＦＥＮ−１（エンドヌクレアーゼ）、フィブリノーゲンγ鎖、フィブロネクチン受容体、ＦＩＣ１、フィラグリン、フラビン含有モノオキシゲナーゼ１、フラビン含有モノオキシゲナーゼ３、ＦｏｓＢ、Ｆｒａ−１、フコシルトランスフェラーゼ（α−１，２フコシルトランスフェラーゼ）、Ｇａｄｄ１５３、Ｇａｄｄ４５、γ−グルタミルヒドラーゼ前駆体、γ−グルタミルトランスペプチダーゼ、ＧＣＬＲ、ＧＣＬＳ、グルココルチコイド受容体、グルコース−６−リン酸デヒ��ロゲナーゼ、グルコース調節タンパク質１７０、グルコース調節タンパク質５８、グルコース調節タンパク質７８、グルコース調節タンパク質９４、グルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミナーゼ、グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（Ｇｌｕｔａｍｉｎｃ−ｐｙｒｕｖｉｃ  ｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅ）、グルタチオンペルオキシダーゼ、グルタチオンリダクターゼ、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼαサブユニット、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ４ａ、グルタチオンシンテターゼ、グリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲナーゼ、ＧＯＳ２４（ジンクフィンガー転写調節因子）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、増殖停止特異的タンパク質１、増殖停止特異的タンパク質３、ＧＴミスマッチ結合タンパク質、Ｈ−カドヘリン、熱ショックタンパク質１２、熱ショックタンパク質４７、熱ショックタンパク質７０、熱ショックタンパク質７０．１、熱ショックタンパク質９０、ヘリカーゼ様転写因子、ヘム結合タンパク質２３、ヘムオキシゲナーゼ−１、肝性リパーゼ、肝細胞増殖因子、肝細胞増殖因子活性化因子、肝細胞増殖因子受容体、肝細胞核因子４、ヒストン２Ａ、ヒストン２８、ＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼ、ヒドロキシアシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ、ヒドロキシステロイドスルホトランスフェラーゼａ、ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ、ＩＣＥ−ｒｅｌ１１（カスパーゼ４）、ＩＣＨ−２システインプロテアーゼ＝カスパーゼ４、ＩｋＢ−ａ、インスリン様増殖因子結合タンパク質１、インスリン様増殖因子結合タンパク質２、インスリン様増殖因子結合タンパク質３、インスリン様増殖因子Ｉ、インスリン様増殖因子１１、インテグリンα、インテグリンαＬ、インテグリンβｓ、インテグリンβ２、細胞接着分子−１、細胞接着分子−２、細胞接着分子−３、インターフェロンγ、インターフェロン誘導性タンパク質１０、インターフェロン誘導性タンパク質１５、インターロイキン−１α、インターロイキン−１２、インターロイキン−２、インターロイキン−４、インターロイキン−５、インターロイキン−６、インボルクリン、ＪＮＫ１ストレス活性化タンパク質キナーゼ、Ｋ−カドヘリン、Ｋｉ６７、乳酸デヒドロゲナーゼ８、ラクトフェリン、リポ多糖結合タンパク質、リポタンパク質リパーゼ前駆体、肝臓脂肪酸結合タンパク質、Ｌ−ｍｙｃ、低密度リポタンパク質受容体、黄体形成ホルモン、リシルオキシダーゼ、マクロファージ炎症性タンパク質−１α、マクロファージ炎症性タンパク質−１β、マクロファージ炎症性タンパク質−２α、マクロファージ炎症性タンパク質−２β、マクロファージ炎症性タンパク質−３α、マクロファージ炎症性タンパク質−３β、リンゴ酸酵素、ＭＡＰキナーゼキナーゼ、マトリックスメタロプロテイナーゼ１、マトリックスメタロプロテイナーゼ−２、ＭＤＭ−２、ＭＥＴ癌原遺伝子、メタロチオネイン１、メタロチオネイン２、メタロチオネイン３、メタロチオネインＩＡ、メタロチオネインＩＧ、金属調節転写因子−１、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（Ｐ３８）、マイトジェン誘導性遺伝子（ｍｉｇ−２）、ＭＯＡＴ−Ｂ（ＭＲＰ／有機アニオントランスポーター）、モノアミンオキシ���ーゼＡ、モノアミンオキシダーゼＢ、多剤耐性関連タンパク質、多剤耐性タンパク質−１、多剤耐性タンパク質−２、多剤耐性タンパク質−３＝ｃＭＯＡＴ２、ＭＵＴＬホモログ（ＭＬＨ１）、ＭｕｔＳホモログ（ＭＳＨ２）、骨髄細胞分化タンパク質−１、Ｎａ／タウロコール酸同時輸送ポリペプチド、ＮＡＤＰＨシトクロムＰ４５０−オキシドレダクターゼ、ＮＡＤＰＨシトクロムＰ４５０レダクターゼ、ＮＡＤＰＨキノンオキシドレダクターゼ−１（ＤＴジアフォラーゼ）、ナチュラルキラー細胞増強因子Ｂ、Ｎ−カドヘリン、ＮＦ−κＢ（ｐ６５）、酸化窒素シンターゼ−１、誘導性、ヌクレオシド二リン酸キナーゼβアイソフォーム、０−６−アルキルグアニン−ＤＮＡアルキルトランスフェラーゼ、ＯＢカドヘリン１、ＯＢ−カドヘリン２、オクタマー結合タンパク質１、オクタマー結合タンパク質２、オクタマー結合タンパク質３、オンコスタチンＭ、有機アニオントランスポーター１、有機アニオントランスポーター３、有機アニオントランスポーターＫ１、有機アニオン輸送ポリペプチド１、有機カチオントランスポーター１、有機カチオントランスポーター２、有機カチオントランスポーター３、有機カチオントランスポーターＮ１、有機カチオントランスポーターＮ２、オルニチンデカルボキシラーゼ、オステオポンティン、酸素調節タンパク質１５０、ｐ５３、ＰＡＰＳシンテターゼ、Ｐ−カドヘリン、ＰＥＧＳ（増悪遺伝子（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｇｅｎｅ  ３）、ペルオキシソーム３−ケトアシル−ＣｏＡチオラーゼ１、ペルオキシソーム３−ケトアシルＣｏＡチオラーゼ２、ペルオキシソームアシル−ＣｏＡオキシダーゼ、ペルオキシソーム脂肪酸アシル−ＣｏＡオキシダーゼ、ペルオキシソーム形成因子１、ペルオキシソーム形成因子２、ペルオキシソーム形成異常タンパク質−１、ペルオキシソーム形成異常タンパク質−１１、ペルオキシソーム形成異常タンパク質−４、ペルオキシソームヒドラターゼ、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体α、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ、フェノールスルホトランスフェラーゼ、ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ、ホスホグリセリドキナーゼ、ホスホリパーゼＡ２、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター２、血小板由来増殖因子Ｂ、血小板／内皮細胞接着分子−１、ポリ（ＡＤＰリボー
ス）ポリメラーゼ、増殖細胞核抗原遺伝子、プロスタグランジンＨシンターゼ、タンパク質キナーゼＣβｌ、タンパク質−チロシンホスファターゼ、推定タンパク質チロシンホスファターゼ、ＲＡＩＤ、ＲＡＩＤ５１ホモログ、ＲＡＮＴＥＳ、Ｒｅｆ１、複製因子Ｃ、４０−ｋＤａサブユニット（Ａｌ）、複製タンパク質Ａ（７０ｋＤａサブユニット）、網膜芽細胞腫、網膜芽細胞腫関連タンパク質（Ｐ１０７）、レチノイドＸ受容体α、レチノイドＸ受容体β、レチノイドＸ受容体γ、リボヌクレオチドリダクターゼＭ１サブユニット、リボソームタンパク質Ｌ１３Ａ、リボソームタンパク質Ｓ９、ＲＮＡ依存性ヘリカーゼ、ＲＯＡＴ１（腎有機アニオントランスポーター）、血清アミロイドＡ１、血清アミロイドＡ２α、胆汁排出ポンプの胆汁酸トランスポーター（Ｓｉｓｔｅｒ  ｏｆ  ｐ−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）、ナトリウム／胆汁酸共輸送体、ソニックヘッジホッグ遺伝子、ＳＱＭ１、スーパーオキシドジスムターゼＣｕ／Ｚｎ、スーパーオキシドジスムターゼＭｎ、Ｔ細胞シクロフィリン、テネイシン、チオプリンメチルトランスフェラーゼ、チオレドキシン、トロンボスポンジン２、チミジンキナーゼ、チミジル酸シンターゼ、チモシンβ−１０、メタロプロテイナーゼの組織インヒビター−１、組織トランスグルタミナーゼ、転写因子ＩＩＤ、トランスフェリン、トランスフォーミング増殖因子−β３、腫瘍壊死因子結合因子２（ＴＲＡＦ２）、腫瘍壊死因子受容体１、腫瘍壊死因子受容体２、腫瘍壊死因子受容体−１結合タンパク質（ＴＲＡＤＤ）、腫瘍壊死因子−α、腫瘍壊死因子β、１型間質コラゲナーゼ、チロシンアミノトランスフェラーゼ、チロシンタンパク質キナーゼ受容体（ＵＦＯ）、ユビキチン、ユビキチン結合酵素（Ｒａｄ６ホモログ）、ユビキチンホモログドメインタンパク質ＰＩＣ１、ＵＤＰグルクロノシルトランスフェラーゼ１、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ１Ａ６、ＵＤＰグルクロノシルトランスフェラーゼ２、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ２８、脱共役タンパク質１、脱共役タンパク質２、脱共役タンパク質３、尿酸オキシダーゼ、ＵＶ除去修復タンパク質ＲＡＤ２３（ＸＰ−Ｃ）、血管細胞接着分子１（ＶＣＡＭ−１）、血管内皮増殖因子、血管内皮増殖因子Ｄ、極長鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、ビメンチン、ビテロジェニン、Ｗａｆ１、ＸＲＣＣ１（ＤＮＡ修復タンパク質）。
【００５５】
パッセンジャー遺伝子はまた、ウイルスチミジンキナーゼ、ウイルスチミジンホスホリラーゼ、シトシンデアミナーゼ、細菌カルボキシペプチダーゼＧ２、シトクロムＰ４５０タンパク質、カルボキシルエステラーゼ、デオキシシチジンキナーゼ、ニトロレダクターゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、およびキサンチン（ｘａｎｔｉｎｅ）グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼなどのプロドラック活性化酵素をコードする遺伝子を含む。また、ジフテリア毒素および細胞致死性膨張性毒素などの「タンパク質毒素（ｐｒｏｔｅｏｔｏｘｉｎ）」も含まれる。
【００５６】
本発明について上記のように包括的に説明してきたが、例示的方法により提供され、本発明を制限することを意図しない以下の実施例を参考にすることによって、本発明はさらに容易に理解されるであろう。
【実施例】
【００５７】
小分子調節因子ミフェプリストンおよび一過性の熱に暴露された感染細胞において条件的に複製するアデノウイルス対の構築
アデノウイルス５型を、以降、Ａｄと省略する。一般に公知の分子生物学および生化学方法を使用する。分子生物学的方法については、例えば、「Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ」、アウスベル，Ｆ．Ｍ．（Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．）ら編、第１〜４巻、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．ＩＳＢＮ０−４７１−５０３３８−Ｘに記載されている。
【００５８】
組換え体アデノウイルス１（ｒＡｄ１）
組換え体アデノウイルス１はＥ３を包含するヌクレオチド２８、１３０−３０、８２０を欠く。アデノウイルス５型のゲノムに関するヌクレオチド番号については、ＧＩ：３３６９４６３７．デビッドソン，Ａ．Ｊ．（Ｄａｖｉｓｏｎ，Ａ．Ｊ．）、ベンコ，Ｍ．（Ｂｅｎｋｏ，Ｍ．）、およびハラチ，Ｂ．（Ｈａｒｒａｃｈ，Ｂ．）２００３．Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．８４，２８９５−２９０８において規定されている。さらに、Ｅ１ＡプロモーターおよびＥ４プロモーター配列は、ＧＡＬ４部位を含有する最小プロモーターで置き換えられる。
【００５９】
ヒー（Ｈｅ）ら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５，２５０９−２５１４（１９９８））により開発された組換え体アデノウイルスを作製するための単純化されたシステムを用いる。このシステムのバージョンは、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、カリフォルニア州のＳｔｒａｔａｇｅｎｅ  Ｃｏｒｐ．より市販されている。表題「ＡｄＥａｓｙＴＭＡｄｅｎｏｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｓｙｓｔｅｍ」のマニュアル（改訂番号０６０００２）は、業者から顧客に配布されており、業者のウェブサイトｗｗｗ．ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ．ｃｏｍからも利用可能である。
【００６０】
変異は、Ｓｔａｔａｇｅｎｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎより配布されているトランスファーベクターｐＳｈｕｔｔｌｅ（ヒー（Ｈｅ）ら１９９８．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５，２５０９−２５１４）において行われる。このプラスミドの完全なヌクレオチド配列は配列番号４において同定される。表題「ＡｄＥａｓｙＴＭＡｄｅｎｏｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｓｙｓｔｅｍ」のＳｔｒａｔａｇｅｎｅのマニュアル（改訂番号０６０００２）に従えば、ｐＳｈｕｔｔｌｅは、次のアデノウイルス配列エレメントを含有する：左側の末端逆向き反復、キャプシド形成シグナル（Ａｄ１−３３１）、「右アームの相同領域」（３，５３４−５７９０）、「左アームの相同領域」（３４，９３１−３５，９３５）および右側の末端逆向き反復。部位特異的変異、いわゆるポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を利用するＳｔｒａｔａｇｅｎｅ  Ｃｏｒｐ．のＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ（登録商標）手順を用いて、ｐＳｈｕｔｔｌｅ（Ａｄ３５，５８６−３５，８０８）の左アームの相同領域に存在するＥ４プロモーター配列を欠失し、それらをＮｈｅＩ制限部位で置き換える。ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅプロトコルについては、例えば、それらのウェブサイトｗｗｗ．ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ．ｃｏｍでＳｔｒａｔａｇｅｎｅ  Ｃｏｒｐ．により公開され、メールで顧客に配布されている指示マニュアル「ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ  ＸＬ  ｓｉｔｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  ｋｉｔ」（改訂番号０６３００３）に記載されている。関連する手順は、ゲトウチェ，Ｔ．（２００２年）博士論文、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍｉａｍｉ、Ｍｉａｍｉ、フロリダ州により簡単に説明されている。得られる構築物は「ｐＳｈｕｔｔｌｅ−Ｎｈｅ」と標記される。
【００６１】
ＧＡＬ４結合部位含有最小プロモーターはｐＳｈｕｔｔｌｅ−ＮｈｅのＮｈｅＩ部位に挿入される。これを達成するために、プラスミドｐＧｅｎｅ／Ｖ５−Ｈｉｓ（カリフォルニア州、ＣａｒｌｓｂａｄのＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）のヌクレオチド７６７７〜３２３を包含するＤＮＡフラグメントは、ＮｈｅＩ制限部位も含有する適切なプライマーを使用してＰＣＲ増幅される。ＮｈｅＩによるＰＣＲフラグメントの消化後、それは、ＮｈｅＩ消化ｐＳｈｕｔｔｌｅ−ＮｈｅＤＮＡに連結される。組換え体は、制限消化およびヌクレオチド配列決定によって同定される。ヌクレオチド配列決定は、ｐＳｈｕｔｔｌｅ−Ｎｈｅの左アーム相同領域のＥ４配列に対して挿入されたプロモーター配列が正確に配向されるクローンの選択を可能にする。このプラスミドを、ｐＳｈｕｔｔｌｅ−Ｎｈｅ−ＧＡＬと命名する。ｐＧｅｎｅ／Ｖ５−Ｈｉｓのヌクレオチド配列は配列番号２において提供される。プラスミドについてはまた、業者から顧客に配布され、ｗｗｗ．ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ．ｃｏｍからも利用可能であるＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．の指示マニュアル「ＧｅｎｅＳｗｉｔｃｈ  ＴＭ  Ｓｙｓｔｅｍ、バージョンＢ、０００８２９／２５−０３１３」にも記載されている。
【００６２】
次に、ｐＳｈｕｔｔｌｅ−Ｎｈｅ−ＧＡＬの右アーム相同領域を、相同領域に加えてＥ１領域の発端部をも含有するＡｄ配列と置き換える。ｐＳｈｕｔｔｌｅ−Ｎｈｅ−ＧＡＬをＢｇｌＩＩおよびＰｍｅＩで消化し、ＤＮＡポリメラーゼクレノウ（Ｋｌｅｎｏｗ）フラグメントで埋め、再連結してｐＳｈｕｔｔｌｅ−Ｎｈｅ−ＧＡＬ−ｄｅｌＥ１を生成する。後者のプラスミドは右アーム相同領域を欠く。Ａｄ４９６−５７８０を含有するフラグメントは、プラスミドｐＸＣ１（Ｍｉｃｒｏｂｉｘ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｔｏｒｏｎｔｏ、オンタリオ州）からのＰＣＲ増幅によって得られる。このプラスミドのヌクレオチド配列を配列番号３において提示する。ＡｓｃＩＩおよびＮｏｔＩ制限部位を含有する順方向プライマー（Ｅ１遺伝子に読み込まれる）ならびにＮｏｔＩ制限部位を含有する逆方向プライマーを使用して、後者のＰＣＲ増幅を行う。ＮｏｔＩによる消化後、ＰＣＲフラグメントをＮｏｔＩ消化ｐＳｈｕｔｔｌｅ−Ｎｈｅ−ＧＡＬ−ｄｅｌＥ１ＤＮＡに連結し、プラスミドｐＳｈｕｔｔｌｅ−Ｎｈｅ−ＧＡＬ−Ｅ１を生成する。挿入されたＥ１配列の配向が、欠失された右アームの相同性において、短縮型Ｅ１配列の配向と同じであるクローンを選択する。以後のサブクローニング工程では、ＡｓｃＩＩ制限部位をも含有する適切なプライマーを使用して、プラスミドｐＧｅｎｅ／Ｖ５−Ｈｉｓのヌクレオチド７６７７〜３２３を包含するＤＮＡフラグメントをＰＣＲ増幅する。ＡｓｃＩＩによるＰＣＲフラグメントの消化後、それは、ＡｓｃＩＩ消化ｐＳｈｕｔｔｌｅ−Ｎｈｅ−ＧＡＬ−Ｅ１ＤＮＡに連結される。組換え体は、制限消化およびヌクレオチド配列決定によって同定される。ヌクレオチド配列決定は、挿入されたｐＧｅｎｅ／Ｖ５−Ｈｉｓプロモーター配列がＥ１配列に対して正確に配向されたクローンの選択を可能にする。このクローンをｐＳｈｕｔｔｌｅ−Ｎｈｅ−ＧＡＬ−Ｅ１−ＧＡＬと命名する。最後に、挿入されたＧＡＬ４部位を含有するプロモーター（挿入されたｐＧｅｎｅ／Ｖ５−Ｈｉｓプロモーター配列）に隣接するＮｏｔＩ部位を、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ変異によって欠失する。その結果、得られる構築物ｐＳｈｕｔｔｌｅ−Ｎｈｅ−ＧＡＬ−Ｅ１−ＧＡＬ−ｄｅｌＮｏｔは、Ｅ１配列のすぐ下流に設置された独特なＮｏｔＩ部位を含有する。組換え体Ａｄを調製するために、ＮｏｔＩ消化によってｐＳｈｕｔｔｌｅ−Ｎｈｅ−ＧＡＬ−Ｅ１−ＧＡＬ−ｄｅｌＮｏｔＤＮＡを線状化し、ｐＡｄＥａｓｙ−１ＤＮＡ（ヒー（Ｈｅ）ら１９９８年．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５，２５０９−２５１４）と共に大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＢＪ５１８３細胞に同時エレクトロポレートする。ＢＪ５１８３細胞（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅカタログ番号２００１５４）は、導入されたウイルス配列間の相同組換えを行うのに必要な細胞成分を有する。組換え体Ａｄプラスミドの作製および組換え体Ａｄウイルスの以後の産生のための詳細な方法については、ヒー（Ｈｅ）ら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５，２５０９−２５１４（１９９８））ならびにＳｔｒａｔａｇｅｎｅマニュアル「ＡｄＥａｓｙＴＭＡｄｅｎｏｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｓｙｓｔｅｍ」（改訂０６０００２）において考察されている。簡単に説明すると、組換え体Ａｄプラスミドは、制限消化によって特徴付けられる。正確な組換え体の十分量のＤＮＡの調製後、ＤＮＡをＰａｃＩで消化して、プラスミド配列と、Ａｄ配列を含んでなる挿入配列とを分離する。組換え体Ａｄを生成するために、消化したＤＮＡを２９３Ｅ４ｐＩＸ細胞にトランスフェクトする。２９３Ｅ４ｐＩＸ細胞は、ＭＭＴＶプロモーターを駆動するＥ４転写単位を含有する２９３細胞である。デキサメタゾンの存在下、これらの細胞は、条件的に活性なＥ１ＡおよびＥ４遺伝子を有する所望される組換え体ウイルスを増幅するのに必要とされるＥ１およびＥ４の両方の機能を提供する。標準的な技術（ヒー（Ｈｅ）らにおいて簡単に説明されている；また、グラハム，Ｆ．Ｌ．（Ｇｒａｈａｍ，Ｆ．Ｌ．）、およびプレベック，Ｌ．（Ｐｒｅｖｅｃ，Ｌ．）１９９１．Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ  ｖｅｃｔｏｒｓ．：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、第７巻、Ｅ．Ｊ．マリー（Ｅ．Ｊ．Ｍｕｒｒａｙ）編、Ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．、Ｃｌｉｆｔｏｎ、ニュージャージー州、１０９−１２７頁を参照のこと）を使用して、ウイルスプラークを単離し、ウイルスストックを調製する。ウイルスストックは、ＣｓＣｌ勾配遠心分離によって調製することができる。ｐＡｄＥａｓｙ−１はヌクレオチド１〜３，５３３および２８，１３０〜３０，８２０を除くすべてのＡｄ配列を含有することに留意すること。従って、ここに記載の組換え体ウイルスは、非必須Ｅ３領域の欠失を含有する。すべてのＥ３配列を含有するＡｄプラスミドを使用することによって、完全なＥ３領域を有する組換え体ウイルスを入手し得る。
【００６３】
組換え体アデノウイルス２（ｒＡｄ２）
組換え体アデノウイルス２は、先に記載のトランス活性化因子ＧＬＶＰに関連するトランス活性化因子を含有するＥ１／Ｅ３／Ｅ４欠失Ａｄ（Ａｄ１〜３，５３３、２８，１３０〜３０，８２０および３５，５８６〜３５，８０８を欠く）である。本実施例において用いられるトランス活性化因子は、プラスミドｐＳｗｉｔｃｈ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．）から回収することができるＧＡＬ４ＤＮＡ結合ドメイン改変ヒトプロゲステロン受容体リガンド結合ドメインヒトｐ６５活性化ドメインキメラ（ＧＬＰ６５）である。ｐＳｗｉｔｃｈの完全な配列を配列番号４に示す。トランス活性化因子は、エストロゲンのアンタゴニストであるミフェプリストンによって活性化される。ｒＡｄ２では、トランス活性化因子遺伝子がｈｓｐ７０Ｂ−ＧＡＬ４タンデムプロモーターに機能的に連結される。場合により、ｒＡｄ２はまた、ｈｓｐ７０Ｂ−ＧＡＬ４タンデムプロモーターまたは別のプロモーターによって調節されるパッセンジャー遺伝子を含有してもよい。
【００６４】
ｈｓｐ７０Ｂ−ＧＡＬ４タンデムプロモーターは、必須プロモーター配列（約３５０ｂｐ）を含んでなるヒトｈｓｐ７０Ｂ遺伝子の約４６０ｂｐ長のＢａｍＨＩ−ＨｉｎｄＩＩＩフラグメントを含んでなり、３つの機能的に重要な熱ショックエレメント配列、および約１１０ｂｐ長の転写された配列（ＲＮＡリーダー領域）を含む。フェルミーＲ．（Ｖｏｅｌｌｍｙ，Ｒ．）ら、１９８５年．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２，４９４９−４９５３。シラー，Ｐ．（Ｓｃｈｉｌｌｅｒ，Ｐ．）ら、１９８８年．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０３，９７−１０５。ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ手順を使用して、独特な制限部位を、転写された配列の終端部の付近に導入した。同じ制限部位を含有するプライマーを使用して、プラスミドｐｈＲＬ−ＣＭＶ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ウィスコンシン州）に存在する短い介在配列（約２２０ｂｐ長）をＰＣＲ増幅した。消化後、ＰＣＲフラグメントを、ｈｓｐ７０Ｂ  ＲＮＡリーダー領域の追加された独特な制限部位に挿入した。次いで、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ手順によって、ＡｓｃＩＩ部位をイントロン配列に導入した。ＡｓｃＩＩ制限部位をも含有する適切なプライマーを使用して、プラスミドｐＧｅｎｅ／Ｖ５−Ｈｉｓのヌクレオチド７６７７〜３２３を包含するＤＮＡフラグメントをＰＣＲ増幅した。ＡｓｃＩＩによるＰＣＲフラグメントの消化後、それをイントロンＡｓｃＩＩ部位に挿入した。得られる構築物は、２つのプロモーター、ｈｓｐ７０Ｂプロモーター、およびｈｓｐ７０ＲＮＡリーダー領域に挿入されたイントロンに存在するＧＡＬ４部位含有プロモーターを含有した。このｈｓｐ７０Ｂ−ＧＡＬ４タンデムプロモーターの下流に配置される遺伝子は、一過性の熱によって活性化されるｈｓｐ７０Ｂプロモーターならびにミフェプリストンの存在下でトランス活性化因子ＧＬＰ６５によって活性化されるＧＡＬ４プロモーターから転写され得る。熱およびＧＡＬ４結合ドメイン含有トランス活性化因子に応答するプロモーターは、タンデムプロモーターである必要はないことに留意すること。ハイブリッドプロモーターはまた、例えば、ＧＡＬ４結合部位のｈｓｐ７０Ｂプロモーターへの挿入によって構築することができる。タンデムまたはハイブリッドプロモーターは、一過性の熱活性化後に連結された遺伝子の転写活性が維持されるような所望される調節の特徴を提供するが、所定のアプリケーションでは、そのようなプロモーターの使用を必ずしも必要としないことにさらに留意すること。そのようなアプリケーションでは、トランス活性化因子発現は、例えば、上記の４６０−ｂｐのｈｓｐ７０Ｂプロモーターフラグメントによって制御され得る。
【００６５】
プラスミドＳｈｕｔｔｌｅ−Ｎｈｅ−ｈｓｐ７０Ｂ−ＧＡＬ４−ＧＬＰ６５を構築するために、ｐＳｗｉｔｃｈのヌクレオチド５００〜２９３９を包含するｇｌｐ６５含有フラグメントをＰＣＲ増幅し、Ｈｓｐ７０Ｂ−ＧＡＬ４タンデムプロモーターを含有するフラグメントと共にｐＳｈｕｔｔｌｅ−Ｎｈｅのマルチクローニング部位に挿入する。制限解析およびヌクレオチド配列決定を使用して、タンデムプロモーターおよびｇｌｐ６５配列が適切な相対的配向で接続され、ｇｌｐ６５の転写が時計回り、即ち、右アームの相同領域の方へ進行するクローンを同定する。ｐＳｈｕｔｔｌｅ−Ｎｈｅ−ｈｓｐ７０Ｂ−ＧＡＬ４−ＧＬＰ６５に含有されるｐＳｗｉｔｃｈフラグメントは、ＧＬＰ６５コーディング配列、およびウシ成長ホルモン遺伝子由来の３’非翻訳領域を含む。
【００６６】
ｒＡＤ２構築物はまた、パッセンジャー遺伝子を含むことができる。本実施例では、ＩＬ１２コーディング配列および３’翻訳配列が適切な構築物からＰＣＲ増幅される。このＰＣＲフラグメントおよびＨｓｐ７０Ｂ−ＧＡＬ４タンデムプロモーターを含有するフラグメントが、トランス活性化因子カセットに隣接するマルチクローニング部位に挿入される。ヌクレオチド配列解析を使用し、Ｈｓｐ７０−ＧＡＬ４プロモーターが適切に設置され、ｉｌ１２遺伝子からの転写を制御することを確認する。単一のタンデムプロモーターを使用して、ｇｌｐ６５およびｉｌ１２遺伝子活性を制御し得ることが留意される。この場合、ｐＳｈｕｔｔｌｅ−Ｎｈｅに挿入されるエレメントの配列は以下の通りである：Ｈｓｐ７０Ｂ／ＧＡＬ４タンデムプロモーター−ｉｌ１２遺伝子−内部リボゾーム結合部位−ｇｌｐ６５遺伝子−３’非翻訳配列。構成的に活性なプロモーターによって調節されるパッセンジャー遺伝子の位置決定に注意を払うべきである。そのような場合、パッセンジャー遺伝子カセットは、ｇｌｐ６５遺伝子の下流かまたはｇｌｐ６５遺伝子の転写方向に対向する転写方向を生じる配向で挿入されるべきである。任意のパッセンジャー遺伝子およびｒＡｄ２に組み入れようとする関連する３’非翻訳配列は、ＰｍｅＩおよびＰａｃＩ部位の存在について配列決定する必要があることがさらに留意される。そのような部位が存在する場合、それらを欠失する必要がある。欠失は、典型的に、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ変異手順を使用することによって、従来通りに達成することができる。
【００６７】
ｒＡＤ２（ウイルス）を調製するために、上記のサブクローニング工程から得られるｒＡＤ２プラスミド（ｐＳｈｕｔｔｌｅ−Ｎｈｅ−ｈｓｐ７０Ｂ−ＧＡＬ４−ＧＬＰ６５または誘導体プラスミド）をＰｍｅＩで線状化し、ＡｄＥａｓｙ−１配列と共に適切な大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）株に同時導入し、先に記載のように、ウイルス配列の相同組換え、正確な組換え体プラスミドの単離、十分量のプラスミドの調製、ＰａｃＩによる消化、Ｅ４を発現する２９３細胞へのトランスフェクション、およびｒＡｄ２ウイルスの単離を達成する。
【００６８】
適切な濃度のミフェプリストンの存在下で一過性の、指向された熱に暴露されたｒＡｄ１およびｒＡｄ２の混合物に感染させた細胞培養物の細胞または組織の細胞は、ウイルス対の１ラウンドの複製（ならびに存在するならば、細胞が溶解するまでパッセンジャー遺伝子の発現）を可能にする。最初に感染した細胞から放出されるウイルスは周囲の細胞に感染する。第２ラウンドのウイルスの複製は、第２の一過性の指向された熱投与などによって誘発させることができる。
【００６９】
必然的に、ｒＡｄ１および２に同時感染した細胞では、ＧＬＰ６５トランス活性化因子の低レベルの発現が存在する。この活性は、例えば、ミフェプリストンの存在下（熱処置を伴わない）でパッセンジャー遺伝子の発現の感受性アッセイによって、検出することができる。以下の任意の測定はＧＬＰ６５の基底レベルの発現を減少する。これらの測定のいくらかは、最大の効果のために組み合わせることができる。第１に、トリプシンの上流のプロモーターからのリードスルー転写活性は、タンデムプロモーター−ｇｌｐ６５遺伝子カセットを、対向配向、即ち、タンデムプロモーターがｐＳｈｕｔｔｌｅ−Ｎｈｅの右アーム相同領域に面する配向で挿入することによって、排除することができる。第２に、ｇｌｐ６５遺伝子に隣接の３’非翻訳配列の排除もまた、基底の発現を減少する。これは、ｐＳｈｕｔｔｌｅ−Ｎｈｅのマルチクローニング部位に、Ｈｓｐ７０−ＧＡＬ４タンデムプロモーターおよびｐＳｗｉｔｃｈのヌクレオチド５００〜２４９４を含有する短縮されたＰＣＲフラグメントを同時に導入することによって、達成することができる。第３に、ＧＬＰ６５の翻訳が開始するＡＵＧ周辺の配列（ｐＳｗｉｔｃｈの５１９〜５２１位）は、翻訳効率を減少するために修飾することができる。−３位のＡ（ＡＵＧ開始コドンのＡに関連する）をＴに、＋４位のＧをＴに変更することによって、減少が達成される。
【００７０】
刊行物、特許および特許出願を含む本出願において引用されるすべての参考文献は、それらの全体が引用されているものとみなされるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００７１】
【図１】小分子調節因子の非存在もしくは存在下において一過性の熱またはタンパク質毒性（ｐｒｏｔｅｏｔｏｘｉｃ）ストレスによって活性化することができる一般的な遺伝子スイッチを示す。
【図２】スイッチの一般的なトランス活性化因子がミフェプリストン活性型活性化因子ＧＬＶＰで置き換えられている、図１のスイッチの例を提供する。
【図３】図１および２のスイッチが、それぞれ単一のアデノウイルスのゲノムまたは一対のアデノウイルスのゲノムに組み入れられ得る様子を概略する。
【図４】Ａ部は、小分子調節因子の非存在もしくは存在下において一過性の熱またはタンパク質毒性（ｐｒｏｔｅｏｔｏｘｉｃ）ストレスによって活性化することができる一般的な遺伝子スイッチを示す。スイッチは、一過性活性化の後にトランス活性化因子発現を維持させる自己活性化ループを含有する。Ｂ部は例示的スイッチを示し、図中、一般的なトランス活性化因子がミフェプリストン活性化活性因子ＧＬＶＰに置き換えられている。
【図５】図４の例示的スイッチが、それぞれ単一のアデノウイルスのゲノムまたは一対のアデノウイルスのゲノムに組み入れられ得る様子を概略する。Ｃ部はまた、パッセンジャー遺伝子が導入され得る様子を例示する。
【図６】本発明のウイルスの複製を調節するために使用することができるかまたは可能性がある２つのタイプの代替的遺伝子スイッチならびにパッセンジャー遺伝子の発現を包括的に概略する。
【図１】
2007513624.tif 000003
【図２】
2007513624.tif 000004
【図３】
2007513624.tif 000005
【図４】
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【図５】
2007513624.tif 000007
【図６】
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【配列表】
2007513624000001.xml
【手続補正書】
【提出日】平成18年7月20日(2006.7.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2007513624000001.app
【国際調査報告】
2007513624.tif 000026
2007513624.tif 000027
2007513624.tif 000028