(57)【要約】  本発明は、組織及び臓器の移植と関係がある移植片拒絶反応を治療するための、組成物及び方法を提供する。より詳細には、本発明の組成物及び方法は、少なくとも１つの他の知られている免疫抑制剤と組み合わせた、コポリマー１、コポリマー１関連ヘテロポリマー又は規則配列型ペプチドから選択される少なくとも１つの物質に関する併用療法に関する。本発明は、単剤療法として規則配列型ペプチド又は規則配列型コポリマー１関連ヘテロポリマーを使用して、移植片拒絶反応を治療するための組成物及び方法も提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
その必要がある対象の移植片拒絶反応を治療又は予防する方法であって、治療有効量の少なくとも１つのコポリマー１又はコポリマー１関連ヘテロポリマーを少なくとも１つの免疫抑制剤と組み合わせて投与することを含み、前記コポリマー１又はコポリマー１関連ヘテロポリマーが以下の群：
（ａ）リシン及びアルギニン、
（ｂ）グルタミン酸及びアスパラギン酸、
（ｃ）アラニン、グリシン及びバリン、
（ｄ）チロシン、トリプトファン及びフェニルアラニン、
の少なくとも３つからそれぞれ選択される少なくとも３つのアミノ酸を含む、方法。
【請求項２】
前記コポリマー１又はコポリマー１関連ヘテロポリマーが、ランダムヘテロポリマー、規則配列型ヘテロポリマー、又は規則配列型ペプチドからなる群から選択される、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記規則配列型ペプチドが配列番号１〜３２から選択される、請求項２記載の方法。
【請求項４】
前記免疫抑制剤が、増殖抑制剤、リンパ球活性化の阻害剤、ステロイド、プリン代謝拮抗物質、抗体及び免疫調節剤からなる群から選択される、請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記免疫抑制剤が、シクロスポリンＡ、ＦＫ５０６、ＩＳＡ２４７、ＦＫ７７８、ラパマイシン、エベロリムス又はＦＴＹ７２０である、請求項４記載の方法。
【請求項６】
前記移植片拒絶反応が、造血細胞、幹細胞、心臓、肺、腎臓、肝臓又は皮膚から選択される細胞、組織又は臓器の移植と関係がある、請求項１記載の方法。
【請求項７】
前記治療有効量のコポリマー１又はコポリマー１関連ヘテロポリマー、及び前記少なくとも１つの免疫抑制剤を同時或いは逐次的に投与する、請求項１記載の方法。
【請求項８】
前記コポリマーが、群（ａ）〜（ｄ）からそれぞれ選択される４種の異なるアミノ酸を含む、請求項２記載の方法。
【請求項９】
前記ヘテロポリマーが、実質的に全体が正電荷でありかつ約２，０００〜約４０，０００ダルトンの分子量のアラニン、グルタミン酸、リシン、及びチロシンを組合せで含む、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
前記ヘテロポリマーが、約２，０００〜約１３，０００ダルトンの分子量を有する、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
本明細書でターポリマーと呼ぶ前記ヘテロポリマーが、群（ａ）〜（ｄ）からそれぞれ選択される３種の異なるアミノ酸を含む、請求項２記載の方法。
【請求項１２】
前記ターポリマーが、アミノ酸チロシン、アラニン及びリシンから本質的になる、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
本明細書でＹＡＫと表す前記ターポリマーが、約０．００５〜約０．２５のチロシン、約０．３〜約０．６のアラニン、及び約０．１〜約０．５のリシンのモル比でチロシン、アラニン及びリシンから本質的になる、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
前記ターポリマーが、アミノ酸グルタミン酸、チロシン及びリシンから本質的になる、請求項１１記載の方法。
【請求項１５】
本明細書でＹＥＫと表す前記ターポリマーが、約０．００５〜約０．３００のグルタミン酸、約０．００５〜約０．２５０のチロシン、及び約０．３〜約０．７のリシンのモル比でアミノ酸グルタミン酸、チロシン及びリシンから本質的になる、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
前記ターポリマーが、アミノ酸チロシン、グルタミン酸、及びアラニンから本質的になる、請求項１１記載の方法。
【請求項１７】
本明細書でＹＥＡと表す前記ターポリマーが、約０．００５〜約０．２５のチロシン、約０．００５〜約０．３のグルタミン酸、及び約０．００５〜約０．８のアラニンのモル比でアミノ酸チロシン、グルタミン酸、及びアラニンから本質的になる、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
ヘテロポリマーを含むアミノ酸が、全てＬ−、全てＤ−又はＬ−とＤ−アミノ酸の混合物である、請求項２記載の方法。
【請求項１９】
移植片拒絶反応を予防及び治療する際に使用するための医薬組成物であって、少なくとも１つの免疫抑制剤及び薬剤として許容可能な担体と組み合わせて、酢酸グラチラマー及び請求項１記載のコポリマー１関連ヘテロポリマーから選択される治療有効量の少なくとも１つの合成ペプチドコポリマーを含む、医薬組成物。
【請求項２０】
経口投与に適した単位剤形の、請求項１９記載の医薬組成物。
【請求項２１】
非経口注射に適した単位剤形の、請求項１９記載の医薬組成物。
【請求項２２】
必要性がある被験体中の移植片拒絶反応を治療又は予防する方法であって、治療有効量の少なくとも１つの規則配列型ペプチド又は規則配列型コポリマー１関連ヘテロポリマーを投与することを含み、前記規則配列型ペプチド又は規則配列型コポリマー１関連ヘテロポリマーが以下の群：
（ａ）リシン及びアルギニン、
（ｂ）グルタミン酸及びアスパラギン酸、
（ｃ）アラニン、グリシン及びバリン、
（ｄ）チロシン、トリプトファン及びフェニルアラニン、
の少なくとも３つからそれぞれ選択される少なくとも３つのアミノ酸を含む、方法。
【請求項２３】
前記コポリマーが、群（ａ）〜（ｄ）からそれぞれ選択される４種の異なるアミノ酸を含む、請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
前記ヘテロポリマーが、実質的に全体が正電荷でありかつ約２，０００〜約４０，０００ダルトンの分子量のアラニン、グルタミン酸、リシン、及びチロシンを組合せで含む、請求項２２記載の方法。
【請求項２５】
前記ヘテロポリマーが、約２，０００〜約２０，０００ダルトンの分子量を有する、請求項２４記載の方法。
【請求項２６】
本明細書でターポリマーと呼ぶ前記ヘテロポリマーが、群（ａ）〜（ｄ）からそれぞれ選択される３種の異なるアミノ酸を含む、請求項２２記載の方法。
【請求項２７】
前記ターポリマーが、アミノ酸チロシン、アラニン及びリシンから本質的になる、請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
本明細書でＹＡＫと表す前記ターポリマーが、約０．００５〜約０．２５のチロシン、約０．３〜約０．６のアラニン、及び約０．１〜約０．５のリシンのモル比でチロシン、アラニン及びリシンから本質的になる、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
前記ターポリマーが、アミノ酸グルタミン酸、チロシン及びリシンから本質的になる、請求項２６記載の方法。
【請求項３０】
本明細書でＹＥＫと表す前記ターポリマーが、約０．００５〜約０．３００のグルタミン酸、約０．００５〜約０．２５０のチロシン、及び約０．３〜約０．７のリシンのモル比でアミノ酸グルタミン酸、チロシン及びリシンから本質的になる、請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
前記ターポリマーが、アミノ酸チロシン、グルタミン酸、及びアラニンから本質的になる、請求項２６記載の方法。
【請求項３２】
本明細書でＹＥＡと表す前記ターポリマーが、約０．００５〜約０．２５のチロシン、約０．００５〜約０．３のグルタミン酸、及び約０．００５〜約０．８のアラニンのモル比でアミノ酸チロシン、グルタミン酸、及びアラニンから本質的になる、請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
ヘテロポリマーを含むアミノ酸が、全てＬ−、全てＤ−又はＬ−とＤ−アミノ酸の混合物である、請求項２２記載の方法。
【請求項３４】
前記規則配列型ペプチドが配列番号１〜３２から選択される、請求項２２記載の方法。
【請求項３５】
前記規則配列型コポリマーが、配列番号１〜３２から選択される少なくとも１つの規則配列型ペプチドのオリゴマーである、請求項２２記載の方法。
【請求項３６】
前記移植片拒絶反応の応答が、造血細胞、幹細胞、心臓、肺、腎臓、肝臓及び皮膚から選択される細胞、組織又は臓器の移植と関係がある、請求項２２記載の方法。
【請求項３７】
前記臓器がＨＬＡ適合型又はＨＬＡ非適合型である、請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
前記細胞がＨＬＡ適合型又はＨＬＡ非適合型である、請求項３６記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、移植片拒絶反応を予防及び治療し、組織及び臓器の移植における宿主応答を弱めるための組成物及び方法を提供する。より詳細には、本発明の組成物及び方法は、少なくとも１つのアミノ酸のヘテロポリマー又は１つの規則配列型ペプチド及び少なくとも１つの他の知られている免疫抑制剤に関する、複合型治療モダリティーに関する。
【背景技術】
【０００２】
臓器移植及び骨髄再建などの移植システムは、多くの生命を脅かす疾患用の重要且つ有効な療法となってきている。しかしながら免疫拒絶反応は、依然として首尾良い移植の大きな障壁である。これは臓器移植の場合、機能低下及び移植片拒絶反応において現れる（宿主対移植片反応、即ちＨＶＧ）。病的な免疫反応性の他の発現は、約３０％の骨髄レシピエントで発生する移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）である。したがって、ＨＶＧ反応及びＧＶＨＤを調節又は予防する際の、依然として満たされていない医学的必要性が存在する。
【０００３】
移植片拒絶反応を予防するための現在利用可能な手法は、シクロスポリンＡ（ＣｙＡ）を含めたシクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ５０６としても知られる）、メトトレキセート及び／又はプレドニソンなどの非特異的な免疫抑制剤の使用を含む。しかしながら、これらの治療剤は腎毒性、高血圧症、高コレステロール血症、糖尿病誘発性効果、神経毒性、男性型多毛症及び歯肉増殖症を含めた重度の副作用を誘導する。さらに、非選択的な免疫系全体の低下によって、患者は感染を受けやすくなる。免疫抑制剤の慢性投与にもかかわらず、移植は長期生存のための療法手法として限られた成功のみを達成している。これらの制約を考慮すると、伝統的な免疫抑制療法は、ＨＬＡ非適合型移植及び異種移植のさらに強力な拒絶反応プロセスを克服することはできない。したがって、これらの伝統的な療法は、急性且つ増大するヒトドナーの不足の問題を解決しない。
【０００４】
病的な免疫拒絶反応のプロセスは、非自己として自己主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子上に提示されるアロ抗原を認識するＴ細胞によって仲介される。次いでそれらは増殖し、サイトカインを分泌し、他の炎症及び細胞毒性細胞を補う（Ｓｙｋｅｓら、１９９６）。免疫拒絶反応を予防するためには、したがって抗原提示及びその結果としてのＴ細胞活性化を阻害することが必要不可欠である。特定のクラスＩＩＭＨＣ分子に高い結合親和性を有する１１〜１４アミノ酸の小さな合成ペプチドは、ネズミの移植片対宿主疾患を予防することができたことは実証されてきている（Ｓｃｈｌｅｇｅｌら、１９９４）。しかしながらこの手法は、阻害剤ペプチドとドナー／レシピエントのＭＨＣハプロタイプの対立特異性に関する必要性によって、及び長時間に及ぶこのような低分子量ペプチドの持続的組織レベルを達成することの難しさによって制限されてきている。
【０００５】
１５，０００〜２５，０００の分子量を有し約６部のＡｌａと２部のＧｌｕと４．５部のＬｙｓと１部のＴｙｒのモル比でＬ−Ａｌａ、Ｌ−Ｇｌｕ、Ｌ−Ｌｙｓ及びＬ−Ｔｙｒ残基からなる、高分子量の合成基本ランダムコポリマーは、感染しやすい動物において誘導することができる実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）、疾患類似多発性硬化症（ＭＳ）を治療又は予防するための物質として、米国特許第３，８４９，５５０号中に最初に記載された。
【０００６】
その中で４種のアミノ酸がＤ−配置を有するＤ−コポリマー１又はＤ−Ｃｏｐ１、即ちＤ−Ａｌａ、Ｄ−Ｇｌｕ、Ｄ−Ｌｙｓ及びＤ−Ｔｙｒ残基を含むランダムコポリマーも記載されてきている（Ｗｅｂｂら、１９７６）。
【０００７】
コポリマー１（化学的慣用名酢酸グラチラマーによっても知られる）、４種のアミノ酸：Ｌ−Ｇｌｕ、Ｌ−Ｌｙｓ、Ｌ−Ａｌａ、及びＬ−Ｔｙｒから構成される非病原性の合成ランダムコポリマー（本明細書では以後「Ｃｏｐ１」）は、ＣＯＰＡＸＯＮＥ（登録商標）の名称の下にある多発性硬化症を治療するための現在承認されている薬剤である（Ｔｅｉｔｅｌｂａｕｍら、１９９８）。それはごくわずかな有害反応に非常に充分に耐性がある。摂取又は吸入によるＣｏｐ１を用いた治療は、米国特許第６，２１４，７９１号中に開示されている。
【０００８】
近年動物モデルにおいて、Ｃｏｐ１が幾つかの他の障害に関して有益な効果をもたらすことが分かった。したがってＣｏｐ１は、骨髄移植の場合は移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）（Ｓｃｈｌｅｇｅｌら、１９９６；米国特許第５，８５８，９６４号）、及び実質性臓器の移植の場合は移植片拒絶反応において現れる免疫拒絶反応を抑制する（Ａｈａｒｏｎｉら、２００１；ＷＯ００／２７４１７）。
【０００９】
ＷＯ０１／５２８７８及びＷＯ０１／９３８９３は、Ｃｏｐ１、Ｃｏｐ１関連ペプチド及びポリペプチド、並びにそれによって活性化されるＴ細胞は、ＣＮＳ細胞をグルタミン酸毒性から保護し、神経変性を予防又は阻害し、或いは中枢神経系（ＣＮＳ）及び末梢神経系（ＰＮＳ）における神経再生を助長することを開示している。したがって例えばＣｏｐ１は、視神経障害及び緑内障などの神経変性疾患用の治療用ワクチンとして評価中である（Ｋｉｐｎｉｓ及びＳｃｈｗａｒｔｚ、２００２）。
【００１０】
自己免疫疾患を治療するための、Ｃｏｐ１及び関連コポリマー及びペプチドは、本明細書に完全に開示するが如くその全容が参照としてここに組み込まれるＷＯ００／０５２５０（Ａｈａｒｏｎｉら、２０００）中に開示されている。
【００１１】
ＷＯ００／２７４１７は、コポリマー１及びコポリマー１関連ランダムヘテロポリマーを活性成分として含む、宿主対移植片免疫応答及び移植片対宿主疾患を治療し予防するための組成物及び方法を開示している。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
移植片拒絶反応を予防又は治療する安全且つさらに有効な手段に関する、長年感じられている必要性が存在する。本発明はこの必要性を満たし、関連する利点も提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、移植片拒絶反応（本明細書では宿主対移植片反応とも呼ぶ、ＨＶＧと略す）を予防及び治療する際に使用するための医薬組成物を提供する。本発明の組成物は、少なくとも１つの他の知られている免疫抑制剤と組み合わせた、コポリマー１及びコポリマー１関連ヘテロポリマー又は規則配列型ペプチドを含めたランダム又は規則配列型コポリマーを含む。
【００１４】
本発明は、少なくとも１つの他の免疫抑制剤と組み合わせたコポリマー１又はコポリマー１関連ヘテロポリマーは、ＨＶＧを治療又は予防するための予期せぬ相乗効果を示すという驚くべき発見に部分的に基づく。本発明によれば、コポリマー１及びコポリマー１関連ヘテロポリマー又はペプチドは、他の免疫抑制剤と組み合わせて予期せぬ相乗効果を誘導し、したがって現在の免疫抑制養生法の有効性を改善する。したがって、他の免疫抑制剤と組み合わせたコポリマー１、コポリマー１関連ヘテロポリマーの使用は、低用量で免疫抑制剤の有効性を高め、これによって毒性の副作用を低下させる。薬剤の組合せは同時に投与することができ、或いは逐次的に投与することができる。本発明は明らかに、一定比のこれらの活性物質を有する経口又は非経口投与に適した１つの単位剤形、又はそのそれぞれが独立に経口投与又は非経口注射に適した形であってよい、それぞれの物質の多数の別個の単位剤形などの、ほぼ同じ形式でのこれらの物質の同時投与を含むことは明白に理解されよう。
【００１５】
本明細書で開示するように、本発明の一態様は、移植片拒絶反応を治療又は予防するための、他の免疫抑制剤と組み合わせたコポリマー１又はコポリマー１関連ヘテロポリマーを使用する方法を提供する。本発明によれば、他の免疫抑制剤と組み合わせたコポリマー１又はコポリマー１関連ヘテロポリマーは相乗効果を誘導し、したがって現在の免疫抑制養生法の用量及び毒性を低下させることができる。ヒト移植用に現在使用されている免疫抑制剤は、その適用例を制限する重度及び毒性の副作用を誘導する。さらに、Ｃｏｐ１活性はＭＨＣ遮断及びＴｈ１からＴｈ２へのサイトカイン変化と関係があるが、シクロスポリンＡ、タクロリムス（ＦＫ５０６）及びラパマイシンなどの一般的な免疫抑制剤はシグナル変換経路に干渉する。いかなる特定の理論又は作用機構によっても縛られることを望まずに、併用療法におけるＣｏｐ１及び他の免疫抑制剤は、現在の免疫抑制養生法の有効性を改善することがしたがってできる。
【００１６】
驚くべきことに、他の免疫抑制剤と組み合わせたＣｏｐ１の治療の有益な効果は、臓器又は細胞移植の前に古典的な免疫抑制剤を使用する予備治療によって得られる効果とほぼ同じであり、したがってこのような予備治療の必要性が除去され、これによって予備治療中に生じる可能性がある副作用が減少することが現在初めて開示されている。
【００１７】
さまざまな実施形態によれば、数群の免疫抑制剤は、本発明のコポリマー１又はコポリマー１関連ヘテロポリマーと組み合わせて使用することができる。一実施形態では、リンパ球活性化の阻害剤である薬剤を併用療法において使用する。好ましい薬剤は例えばシクロスポリン、好ましくはシクロスポリンＡ、タクロリムス（ＦＫ５０６）、ＩＳＡ２４７又はＦＫ７７８である。他の実施形態では、増殖抑制剤を併用療法において使用する。好ましい薬剤は例えばラパマイシン及びエベロリムス（Ｃｅｒｔｉｃａｎ（登録商標））である。さらに他の実施形態では、リンパ球再循環を調節するＦＴＹ７２０などの免疫調節剤を併用療法において使用する。ステロイド、プリン代謝拮抗物質及び抗体などの他の薬剤も、併用療法において使用することができる。
【００１８】
本発明の一実施形態によれば、他の免疫抑制剤と組み合わせて使用する、酢酸グラチラマー及びコポリマー１関連ヘテロポリマーは、ランダムアミノ酸配列を有するコポリマー（ランダムコポリマー）を含む。
【００１９】
本発明の他の実施形態によれば、他の免疫抑制剤と組み合わせて使用する物質は、規則配列型のアミノ酸配列を有するペプチド（規則配列型ペプチド又は規則配列型コポリマー）を含む。
【００２０】
他の実施形態では、規則配列型ペプチドはＨＶＧを治療するための単剤療法剤として使用することができる。本発明のこの実施形態は、コポリマー１関連ペプチドであるとみなすことができる特定の規則配列型ペプチドは、ＨＶＧの単剤療法用の活性成分として使用することができるという原理に基づく。詳細には本出願の本発明者は、ＨＶＧを治療するための規則配列型ペプチド及び規則配列型コポリマー１関連ヘテロポリマーの使用を、本明細書で初めて開示する。
【００２１】
本発明のさまざまな実施形態によれば、併用療法において使用するランダム又は規則配列型コポリマー及びペプチドは、適切な量の正電荷のアミノ酸、リシン又はアルギニンなどを、負電荷を有するアミノ酸（さらに少ない量であることが好ましい）、グルタミン酸又はアスパラギン酸などと組み合わせて、充填剤として働く電気的に中性であるアミノ酸、アラニン、グリシン又はバリンなどと任意選択で、フェニルアラニン、チロシン又はトリプトファン、コポリマーに免疫原性を与えるように適合させた任意選択のアミノ酸と任意選択で組み合わせて含む。
【００２２】
併用療法において使用するコポリマーは、Ｌ−又はＤ−アミノ酸、又はこれらの混合物から構成され得る。当業者によって知られているように、Ｌ−アミノ酸は大部分の天然タンパク質に存在する。しかしながら、Ｄ−アミノ酸は市販されており、使用するアミノ酸の一部分又は全体を置換して、本発明において使用するコポリマーを作製することができる。本発明はＤ−アミノ酸とＬ−アミノ酸の両方を含むコポリマー、及びＬ−アミノ酸又はＤ−アミノ酸のいずれかから本質的になるコポリマーの使用を企図する。
【００２３】
本発明のさまざまな実施形態では、コポリマーは約１５〜約１００アミノ酸、好ましくは約４０〜約８０アミノ酸長のランダムポリペプチドであってよい。他の実施形態では、この物質は６〜２５アミノ酸、好ましくは１０〜２０アミノ酸の規則配列型の合成ペプチドである。さらに他の実施形態では、約１５〜約１００アミノ酸、好ましくは約４０〜約８０アミノ酸長を有する、オリゴマー形のこれらのペプチドを生成することができる。
【００２４】
より詳細には、本発明の一実施形態では、ＨＶＧを予防及び治療するための併用療法において使用する医薬組成物は、少なくとも１つのランダム又は規則配列型コポリマーを含み、前記コポリマーは以下の群：
（ａ）リシン及びアルギニン、
（ｂ）グルタミン酸及びアスパラギン酸、
（ｃ）アラニン、グリシン及びバリン、
（ｄ）フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファン
の異なる１つからそれぞれ選択される少なくとも３つの異なるアミノ酸を含む。
【００２５】
併用療法において使用するのに好ましいコポリマーは、実質的に全体が正電荷のアラニン、グルタミン酸、リシン、及びチロシンを組合せで含む。好ましい実施形態では、医薬組成物はアミノ酸グルタミン酸約０．１４、アラニン約０．４３、チロシン約０．１０、及びリシン約０．３４のモル比のコポリマー１を含む。他の好ましい実施形態では、アミノ酸残基の好ましいモル比は、相対的モル比０．１７グルタミン酸対０．３８リシン対０．４９アラニン対０．１チロシン、或いは０．１９グルタミン酸対０．４リシン対０．６アラニン対０．１チロシンを含む。
【００２６】
一実施形態では、本発明のコポリマーの平均分子量は約２，０００〜４０，０００ダルトン、好ましくは約２，０００〜１８，０００ダルトン、より好ましくは約４，５００〜１６，０００ダルトンである。幾つかの実施形態によれば、本発明の組成物又は方法において使用する酢酸グラチラマーは、より好ましくは約５，０００〜９，０００ダルトン、及び最も好ましくは約６，０００〜８，０００ダルトンの平均分子量を有する。
【００２７】
これは例によってのみ与えられ、前述の一般的基準に固執する場合、成分及び成分の相対的比率に関して組成物は変わる可能性があることは明らかである。
【００２８】
他の実施形態では、併用療法において使用するためのコポリマーは、群（ａ）〜（ｄ）の３つの群からそれぞれ選択される３つの異なるアミノ酸を含む。これらのコポリマーは、本明細書ではターポリマーと呼ぶ。
【００２９】
したがって本発明は、治療有効量の少なくとも１つのランダム又は規則配列型ターポリマーを含む、併用療法において使用するための医薬組成物も対象とする。ターポリマーは３つの異なるアミノ酸からなり、それぞれ以下の群：
（ａ）リシン及びアルギニン、
（ｂ）アラニン、グリシン及びバリン、
（ｃ）フェニルアラニン、チロシン又はトリプトファン
の異なる１つから選択される。
【００３０】
本発明のこの実施形態の好ましいコポリマーは、約０．００５〜約０．２５のチロシン、約０．３〜約０．６のアラニン、及び約０．１〜約０．５のリシンのモル比でチロシン、アラニン及びリシン、及び薬剤として許容可能な担体を含む。本明細書で以後ＹＡＫと表すこのターポリマーは、グルタミン酸を実質的に含まないことが好ましい。
【００３１】
好ましい実施形態では、チロシン、アラニン、及びリシンのモル比はそれぞれ約０．１０対約０．５４対約０．３５である。ＹＡＫの平均分子量は約２，０００〜４０，０００ダルトン、好ましくは約３，０００〜３５，０００ダルトン、より好ましくは約５，０００〜２５，０００ダルトンである。アルギニンとリシン、グリシン又はバリンとアラニン又はフェニルアラニン、或いはトリプトファンとチロシンを置換することができる。
【００３２】
本発明は、３つの異なるアミノ酸からなる併用療法において使用するための治療有効量のランダム又は規則配列型ターポリマーを含む、医薬組成物をさらに提供し、それぞれのアミノ酸は以下の群：
（ａ）リシン及びアルギニン、
（ｂ）グルタミン酸及びアスパラギン酸、
（ｃ）フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファン
の異なる１つから選択される。
【００３３】
本発明のこの実施形態の好ましいコポリマーは、約０．００５〜約０．３００のグルタミン酸、約０．００５〜約０．２５０のチロシン、及び約０．３〜約０．７のリシンのモル比でグルタミン酸、チロシン及びリシン、及び薬剤として許容可能な担体を含む。本明細書で以後ＹＥＫと表すこのターポリマーは、アラニンを実質的に含まないことが好ましい。
【００３４】
好ましい実施形態では、グルタミン酸、チロシン及びリシンのモル比はそれぞれ約０．２６対約０．１６対約０．５８である。ＹＥＫの平均分子量は約２，０００〜４０，０００ダルトン、好ましくは約３，０００〜３５，０００ダルトン、より好ましくは約５，０００〜２５，０００ダルトンである。アルギニンとリシン、アスパラギン酸とグルタミン酸、或いはフェニルアラニン又はトリプトファンとチロシンを置換することができる。
【００３５】
本発明は、３つの異なるアミノ酸からなる併用療法において使用するための治療有効量のランダム又は規則配列型ターポリマーを含む、医薬組成物も対象とし、それぞれのアミノ酸は以下の群：
（ａ）グルタミン酸及びアスパラギン酸、
（ｂ）アラニン、グリシン及びバリン、
（ｃ）フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファン
の異なるメンバーから選択される。
【００３６】
本発明のこの実施形態の好ましいコポリマーは、約０．００５〜約０．２５のチロシン、約０．００５〜約０．３のグルタミン酸、及び約０．００５〜約０．８のアラニンのモル比でチロシン、グルタミン酸、及びアラニン、及び薬剤として許容可能な担体を含む。本明細書で以後ＹＥＡと表すこのターポリマーは、リシンを実質的に含まないことが好ましい。
【００３７】
好ましい実施形態では、グルタミン酸、アラニン、及びチロシンのモル比はそれぞれ約０．２１対約０．６５対約０．１４である。ＹＥＡの平均分子量は約２，０００〜４０，０００ダルトン、好ましくは約３，０００〜３５，０００ダルトン、及びより好ましくは約５，０００〜２５，０００ダルトンである。アスパラギン酸とグルタミン酸、グリシンとアラニン及びフェニルアラニン、或いはトリプトファンとチロシンを置換することができる。
【００３８】
本発明は、少なくとも１つの他の免疫抑制剤と組み合わせて前に記載した少なくとも１つのコポリマーを含む治療有効量の組成物を投与することによって、哺乳動物中のＨＶＧを治療及び予防する方法であって、前記コポリマーがランダムコポリマー及び規則配列型コポリマーからなる群から選択され、前記コポリマーが以下の群：
（ａ）リシン及びアルギニン、
（ｂ）グルタミン酸及びアスパラギン酸、
（ｃ）アラニン、グリシン及びバリン、
（ｄ）フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファン
の少なくとも３つからそれぞれ選択される少なくとも３つの異なるアミノ酸を含む方法をさらに提供する。
【００３９】
さらに本発明は、特定の規則配列型コポリマー１関連ヘテロポリマーは、ＨＶＧを治療するための一種の活性成分として使用することができるという驚くべき発見に基づく。詳細には本出願の本発明者は、ＨＶＧを治療するための規則配列型コポリマー１関連ヘテロポリマーの使用を、本明細書で初めて開示する。
【００４０】
本明細書で前に示したように、規則配列型のアミノ酸配列を有するヘテロポリマー（規則配列型コポリマー）は、本発明の範囲内にある。このようなヘテロポリマー又はペプチドの例は、その全容が参照としてこの本明細書に完全に組み込まれているＷＯ００／０５２４９中に開示された例である。前記出願中で詳細に開示された３２のペプチドを、本明細書の以下の表１に再現する。このようなペプチド及び他の同様のペプチドは、Ｃｏｐ１と同様の活性を有すると予想される。このようなペプチド、及び他の同様のペプチドも、Ｃｏｐ１関連ペプチド又はポリペプチドの定義内にあるとみなされ、それらの使用は本発明の一部であるとみなされる。
【００４１】
【表１】
2007500693.tif 000002
【００４２】
本発明のさまざまな実施形態では、宿主対移植片拒絶反応の予防及び／又は治療は、ＨＬＡ適合型又は非適合型同種異系ヒトドナー、又は他種のドナー由来の異種移植片由来の臓器又は組織の移植を含む。
【００４３】
一実施形態では、宿主対移植片拒絶反応は、造血細胞、幹細胞、心臓、肺、腎臓、肝臓、皮膚から選択される移植細胞、組織又は臓器、及びドナーからレシピエントに移植された他の臓器又は組織の拒絶反応を含む。
【００４４】
本発明のさまざまな実施形態によれば、コポリマー１関連ヘテロポリマーの治療有効量は、約１．０ｍｇ〜約５００．０ｍｇ／１日である。好ましくは、このようなコポリマー１関連ヘテロポリマーの治療有効量は、約２０．０ｍｇ〜約１００．０ｍｇ／１日である。
【００４５】
本明細書は本発明の幾つかの好ましい実施形態を記載するが、本発明は、本発明の定義の範疇にある文献中に記載されたＣｏｐ１の形を含めた、本明細書で定義するアミノ酸残基の相対モル比及び平均分子量を有する、免疫抑制剤と組み合わせたＧｌｕ又はＡｓｐ、Ｌｙｓ又はＡｒｇ、ＡｌａＧｌｙ又はバリン、及びＰｈｅ又はＴｙｒ又はＴｒｐの少なくとも３つの任意の合成ランダム又は規則配列型コポリマーの使用を含むことは理解されよう。
【００４６】
他の態様で本発明は、移植片拒絶反応を予防及び治療するための医薬品を製造するための、免疫抑制剤と組み合わせた前に記載したランダム又は規則配列型コポリマーの使用に関する。
【００４７】
他の実施形態では本発明は、臓器移植の過程中のＨＶＧの治療法に関するものであり、前記方法は少なくとも１つの免疫抑制剤と組み合わせた有効量の前述のランダム又は規則配列型コポリマーを、必要性のある患者に投与することを含む。
【００４８】
さまざまな実施形態によれば、数群の免疫抑制剤は、本発明のコポリマー１又はコポリマー１関連ヘテロポリマーと組み合わせて使用することができる。一実施形態では、リンパ球活性化の阻害剤である薬剤を併用療法において使用する。好ましい薬剤は例えばシクロスポリン、好ましくはシクロスポリンＡ、タクロリムス、ＩＳＡ２４７又はＦＫ７７８である。他の実施形態では、増殖抑制剤を併用療法において使用する。好ましい薬剤は例えばラパマイシン及びエベロリムスである。さらに他の実施形態では、リンパ球再循環を調節するＦＴＹ７２０などの免疫調節剤を併用療法において使用する。
【００４９】
これらの実施形態及び他の実施形態は、以下の詳細な説明及び実施例から明らかであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５０】
名称ＧＬＡＴコポリマー又はＹＥＡＫコポリマーは、化学的慣用名酢酸グラチラマー（ＧＡ）によって知られるＣｏｐ１に関しても使用されてきている。したがって、本明細書及び特許請求の範囲中では以後、用語コポリマー１、Ｃｏｐ１、Ｌ−ＧＬＡＴ及びＬ−ＹＥＡＫはＬ形のＣｏｐ１に関して相互に使用し、用語Ｄ−コポリマー１、Ｄ−Ｃｏｐ１、Ｄ−ＧＬＡＴ及びＤ−ＹＥＡＫはＤ形のＣｏｐ１に関して相互に使用する。
【００５１】
コポリマー１又はコポリマー１関連ヘテロポリマーと組み合わせた免疫抑制剤の使用を定義する際の語句「併用療法」は、薬剤併用の有益な効果をもたらすであろう、養生法における連続形式のそれぞれの物質の投与を含むものとする。この語句は、一定比のこれらの活性物質を有する１つのカプセル中、又はそれぞれの物質用の多数の別個のカプセル中などの、ほぼ同じ形式でのこれらの物質の同時投与も含むものとする。
【００５２】
語句「治療有効量」は、他の療法と典型的には関係がある悪い副作用を避けながら、それぞれの物質単独の治療中の重度及び発生頻度の改善目的を達成する併用療法において使用するための、それぞれの物質の量を定量化することを目的とする。
【００５３】
本発明の併用療法において使用する、ランダム及び規則配列型コポリマー１並びにコポリマー１関連コポリマーは、移植片拒絶反応を治療するための新規な治療手法となる。詳細には、ランダム及び規則配列型コポリマーは、ＨＶＧを治療するための、特に造血細胞、幹細胞、心臓、肺、腎臓、肝臓、皮膚から選択される細胞、組織及び臓器、及びドナーからレシピエントに移植した他の臓器又は組織の移植に関する併用療法において使用する。
【００５４】
本発明において使用するためのコポリマーは、Ｌ−又はＤ−アミノ酸、又はこれらの混合物から構成され得る。当業者によって知られているように、Ｌ−アミノ酸は大部分の天然タンパク質に存在する。しかしながら、Ｄ−アミノ酸は市販されており、使用するアミノ酸の一部分又は全体を置換して、本発明のターポリマー及び他のコポリマーを作製することができる。本発明はＤ−アミノ酸とＬ−アミノ酸の両方を含むコポリマー、及びＬ−アミノ酸又はＤ−アミノ酸のいずれかから本質的になるコポリマーを企図する。
【００５５】
コポリマー中のアミノ酸の平均分子量及び平均モル分率は変わる可能性がある。しかしながら、約２，０００〜４０，０００ダルトンの分子量範囲が企図される。好ましい分子量範囲は約２，０００〜約１８，０００ダルトンである。コポリマーは、約１５〜約１００アミノ酸、好ましくは約４０〜約８０アミノ酸長であってよい。好ましい分子量範囲及び好ましい形のコポリマー１を作製するための方法は、その全容が完全にここに組み込まれている米国特許第５，８００，８０８号及び米国特許第５，８５８，９６４号中に記載されている。
【００５６】
一実施形態では、本明細書で以後ＹＡＫと表す、本発明の併用療法において使用するためのターポリマーはチロシン、アラニン、及びリシンを含む。これらのターポリマー中のアミノ酸の平均モル分率は変わる可能性がある。例えば、チロシンは約０．００５〜約０．２５０のモル分率で存在することができ；アラニンは約０．３〜約０．６のモル分率で存在することができ；且つリシンは約０．１〜約０．５のモル分率で存在することができる。平均分子量は２，０００ダルトンと約４０，０００ダルトンの間、好ましくは約３，０００ダルトンと約３５，０００ダルトンの間である。より好ましい実施形態では、平均分子量は約５，０００〜約２５，０００ダルトンである。アルギニンとリシン、グリシンとアラニン又はフェニルアラニン、或いはトリプトファンとリシンを置換することができる。
【００５７】
他の実施形態では、本明細書で以後ＹＥＫと表す、本発明の併用療法において使用するためのターポリマーはチロシン、グルタミン酸、及びリシンを含む。これらのターポリマー中のアミノ酸の平均モル分率は変わる可能性がある：グルタミン酸は約０．００５〜約０．３００のモル分率で存在することができ、チロシンは約０．００５〜約０．２５０のモル分率で存在することができ、リシンは約０．３〜約０．７のモル分率で存在することができる。平均分子量は２，０００ダルトンと約４０，０００ダルトンの間、好ましくは約３，０００ダルトンと約３５，０００ダルトンの間である。より好ましい実施形態では、平均分子量は約５，０００〜約２５，０００ダルトンである。アスパラギン酸とグルタミン酸、アルギニンとリシン又はフェニルアラニン、或いはトリプトファンとチロシンを置換することができる。
【００５８】
他の実施形態では、本明細書で以後ＹＥＡと表す、本発明の併用療法において使用するためのターポリマーはチロシン、グルタミン酸、及びアラニンを含む。これらのポリペプチド中のアミノ酸の平均モル分率は変わる可能性がある。例えば、チロシンは約０．００５〜約０．２５０のモル分率で存在することができ、グルタミン酸は約０．００５〜約０．３００のモル分率で存在することができ、アラニンは約０．００５〜約０．８００のモル分率で存在することができる。平均分子量は２，０００ダルトンと約４０，０００ダルトンの間、好ましくは約３，０００ダルトンと約３５，０００ダルトンの間である。より好ましい実施形態では、平均分子量は約５，０００〜約２５，０００ダルトンである。アスパラギン酸とグルタミン酸、及びグリシンとアラニンを置換することができる。
【００５９】
より好ましい実施形態では、併用療法において使用するためのヘテロポリマーのアミノ酸のモル分率は、コポリマー１に関して好ましいものとほぼ同じである。コポリマー１中のアミノ酸のモル分率は、グルタミン酸約０．１４、アラニン約０．４３、チロシン約０．１０、及びリシン約０．３４である。コポリマー１に関する最も好ましい平均分子量は、約５，０００ダルトンと約９，０００ダルトンの間である。以下の置換：アスパラギン酸とグルタミン酸、グリシンとアラニン、及びアルギニンとリシンの１つ又は複数を行う場合、ＨＶＧの治療においてコポリマー１の活性は存在し続けると予想される。
【００６０】
グルタミン酸、アラニン、及びチロシンのより好ましいターポリマー、即ちＹＥＡのモノマーのモル分率は、約０．２１対約０．６５対約０．１４である。
【００６１】
グルタミン酸、チロシン、及びリシンのより好ましいターポリマー、即ちＹＥＫのモノマーのモル分率は、約０．２６対約０．１６対約０．５８である。
【００６２】
チロシン、アラニン及びリシンのより好ましいターポリマー、即ちＹＡＫのモノマーのモル分率は、約０．１０対約０．５４対約０．３５である。
【００６３】
本発明によれば、臓器移植を受けようとする患者において使用される、現在利用可能な免疫抑制療法の制限は、本明細書に記載するコポリマー１或いは他のランダム又は規則配列型コポリマーを使用することによって克服される。コポリマー１は、商標名、Ｃｏｐａｘｏｎｅ（登録商標）、酢酸グラチラマーで多発性硬化症（ＭＳ）の治療用に幾つかの国で承認されてきている。幾つかの臨床試験は、コポリマー１は、大部分が注射部位での穏やかな反応であった非常にわずかな副反応に充分耐性があることを実証した（Ｊｏｈｎｓｏｎら、１９９５）。
【００６４】
本発明によれば、Ｌ−コポリマー１、Ｄ−コポリマー１、及び他のランダム及び規則配列型コポリマーは、免疫抑制剤と組み合わせて投与すると、移植片拒絶反応を予防するか或いは著しく遅延させると想定される。本明細書の以後の実施例中に示すように、同じＭＨＣハプロタイプである他のマウス系統から得た移植片のマウスにおける拒絶反応を抑制する際に、コポリマー１は有効である。したがって移植片拒絶反応は、Ｂ１０．Ｄ２ドナーマウス由来の移植片を与えたＢＡＬＢ／ｃマウス中、Ｃ５７ＢＬドナーマウス由来の移植片を与えたＣ３ＨＳＨマウス中、Ｂ１０ＰＬドナーマウス由来の移植片を与えたＰＪＬマウス中で抑制されると思われる（表４及び５）。これらの移植マウスモデルは、ヒトにおけるＭＨＣ適合型臓器移植と類似している。さらにコポリマー１は、異なるＭＨＣハプロタイプの系統由来の移植片のマウスにおける拒絶反応を抑制する際に、例えばＣ５７ＢＬドナーマウス（本明細書の表４及び５を参照）から得た移植片のＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける拒絶反応、ヒトにおけるＭＨＣ非適合型臓器移植と類似するモデルを抑制する際にも有効である。したがって移植後の限られた時間、コポリマー１を移植前後に投与することによって、免疫拒絶反応の発生、発症及び重度を有意に低下させ、改善された長期の生存をもたらすことができる。
【００６５】
ＧＶＨＤの作用機構に関して前に記載したように（Ａｈａｒｏｎｉら、１）、コポリマー１は移植片細胞に応答するＴ細胞増殖を阻害する。コポリマー１治療は、移植片細胞に対する細胞毒性活性を完全に消失させ、サイトカイン様インターロイキン２（ＩＬ−２）及びインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）の分泌を妨げ、有益な抗炎症応答を誘導した。
【００６６】
本発明は、免疫抑制剤と組み合わせて投与してＨＶＧを予防及び治療するための、本明細書で定義するターポリマーの使用も対象とする。当業者に利用可能な任意の手順によって、ターポリマーを作製することができる。例えばターポリマーは、溶液中で望ましいモル比のアミノ酸を使用して、或いは固相合成手順によって縮合条件下で作製することができる。縮合条件には適切な温度、ｐＨ、及び１アミノ酸のカルボキシル基と他のアミノ酸のアミノ基を縮合させてペプチド結合を形成するための溶媒条件がある。縮合剤、例えばジシクロヘキシル−カルボジイミドを使用して、ペプチド結合の形成を容易にすることができる。保護基を使用して、望ましくない副反応に対して、官能基、例えば側鎖部分、及び幾つかのアミノ又はカルボキシル基などを保護することができる。
【００６７】
本明細書で前に開示したように、本発明の一態様は、移植片拒絶反応を治療するための、他の免疫抑制剤と組み合わせたコポリマー１又はコポリマー１関連ヘテロポリマーの使用である。本発明によれば、他の免疫抑制剤と組み合わせたコポリマー１又はコポリマー１関連ヘテロポリマーは相乗効果を誘導し、したがって現在の免疫抑制養生法の用量及び毒性を低下させることができる。ヒト移植用に現在使用されている免疫抑制剤は、その適用例を制限する重度及び毒性の副作用を誘導する。さらに、Ｃｏｐ１活性はＭＨＣ遮断及びＴｈ１からＴｈ２へのサイトカイン変化と関係があるが、シクロスポリンＡ、タクロリムス（ＦＫ５０６としても知られる）及びラパマイシンなどの免疫抑制剤はシグナル変換経路に干渉する。他の免疫抑制剤を用いる併用療法においてＣｏｐ１は、したがって付加又は相乗効果を誘導し、現在の免疫抑制養生法の有効性をしたがって改善することができる。
【００６８】
本発明によれば、それぞれその独自の特徴を有する３つの実験動物モデル：即ち皮膚移植、甲状腺移植及び異所心臓移植を使用した。１．皮膚移植片は、移植における最も堅い組織の１つである。成功に関する唯一のパラメータは移植片の平均生存時間（ＭＳＴ）であり、適度な延長さえも意味のあるものとみなす。２．甲状腺移植によって、ヨウ素を吸収するその能力によって甲状腺の機能を評価することができる。その機能は、移植腎臓中の放射性ヨウ素の吸収の実質的な程度によって定義する（非移植腎臓中の放射能を差し引いた後、したがって埋め込み対照をそれぞれ個々のマウスに与える）。この系におけるさまざまな薬剤及び組合せによる治療の効果は、治療マウスと未治療マウスの間の実質的なヨウ素吸収の比である平均機能指数（ＭＦＩ）として数字によって表すが、したがって移植片の生物学的機能に完全に基づく。３．ラットにおける異所心臓移植によって、マウスより大きい動物において血管新生及び灌流臓器を研究することができる。おそらく異なる移植片による抗原提示の異なる経路のために、異なる拒絶反応の挙動が血管新生及び非血管新生同種移植片に対して得られることは以前に実証された（Ｍｏｒｒｉｓ  ＰＪ、Ｗｏｏｄ  ＫＪ、Ｄａｌｌｍａｎ  ＭＪ．「臓器の同種移植片に対する抗原誘導型寛容性（Antigen-induced tolerance to organ allografts）Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９１；６３６：２９５」。心臓の触感を評価することによって移植した移植片の生存及び活性の測定を可能にする、心臓移植に関するこの動物モデルは、したがって患者における臓器移植とさらに関係がある。
【００６９】
本発明によれば、３つ全ての移植系（マウスにおける皮膚移植片及び甲状腺移植、並びにラットにおける心臓移植）において、Ｃｏｐ１、及びＣｙＡ又はタクロリムスを用いた併用療法は有意に有効であった。移植片拒絶反応で得られた遅延は、いずれの場合もＣｏｐ１単独又は免疫抑制剤単独を用いて得られたそれより大きかった。さらにいずれの場合も、Ｃｏｐ１との組合せは、少なくとも二倍量の免疫抑制療法剤単独より有効であった。最も重要なことに、移植の日の異所心臓拒絶反応におけるタクロリムスを用いた併用療法におけるＣｏｐ１は、臓器又は細胞移植の前に古典的な免疫抑制剤を使用する予備治療によって得られた結果と比較して同様に有効であった。
【００７０】
さまざまな実施形態によれば、数群の免疫抑制剤は、本発明のコポリマー１又はコポリマー１関連ヘテロポリマーと組み合わせて使用することができる。一実施形態では、リンパ球活性化の阻害剤である薬剤を併用療法において使用する。好ましい薬剤は例えばシクロスポリン、好ましくはシクロスポリンＡ、タクロリムス（ＦＫ５０６）、ＩＳＡ２４７又はＦＫ７７８である。併用療法において投与するシクロスポリンＡの用量は、０．１ｍｇ／体重１ｋｇ／１日〜１ｇ／体重１ｋｇ／１日、好ましくは１ｍｇ／体重１ｋｇ／１日〜１００ｍｇ／体重１ｋｇ／１日、より好ましくは６〜１０ｍｇ／体重１ｋｇ／１日であってよい。併用療法において投与するＦＫ５０６の用量は、０．００１ｍｇ／体重１ｋｇ／１日〜１０ｍｇ／体重１ｋｇ／１日、好ましくは０．０１ｍｇ／体重１ｋｇ／１日〜１ｍｇ／体重１ｋｇ／１日、より好ましくは０．１〜０．１５ｍｇ／体重１ｋｇ／１日であってよい。
【００７１】
他の実施形態では、増殖抑制剤を併用療法において使用する。好ましい薬剤は例えばラパマイシン及びエベロリムス（Ｃｅｒｔｉｃａｎ（登録商標））である。併用療法において投与するラパマイシンの用量は、０．０２ｍｇ／１日〜２００ｍｇ／１日、好ましくは０．２ｍｇ／１日〜２０ｍｇ／１日、より好ましくは２〜６ｍｇ／１日であってよい。
【００７２】
さらに他の実施形態では、リンパ球再循環を調節するＦＴＹ７２０などの免疫調節剤を併用療法において使用する。ステロイド、プリン代謝拮抗物質及び抗体などの他の薬剤も、併用療法において使用することができる。
【００７３】
米国特許第３，８４９，５５０号中に開示された方法は、本発明のコポリマーを調製するために使用することができる。例えば、チロシン、アラニン、γ−グルタミン酸ベンジル及びＮ，ε−トリフルオロアセチル−リシンのＮ−カルボキシ無水物は、重合開始剤としてジエチルアミンを含む無水ジオキサン中で周囲温度において重合させる。グルタミン酸のγ−カルボキシル基は、氷酢酸中で臭化水素によって脱保護することができる。トリフルオロアセチル基は、１モルのピペリジンによってリシンから除去する。グルタミン酸、アラニン、チロシン、又はリシンのいずれか１つと関係がある反応を選択的に除去することによって、このプロセスを調節して所望のアミノ酸、即ちコポリマー１中の４つのアミノ酸のうち３つを含むペプチド及びポリペプチドを作製することができることを、当業者は容易に理解する。米国特許第６，６２０，８４７号、６，３６２，１６１号、６，３４２，４７６号、６，０５４，４３０号、６，０４８，８９８号及び５，９８１，５８９号は、酢酸グラチラマー（Ｃｏｐ−１）を調製するための改善された方法を開示する。本出願の目的用に、用語「周囲温度」及び「室温」は、約２０℃〜約２６℃の範囲の温度を典型的には意味する。
【００７４】
ターポリマーの分子量はポリペプチド合成中、或いはターポリマーを作製した後で調節することができる。ポリペプチド合成中に分子量を調節するために、合成条件又はアミノ酸の量は、ポリペプチドが望まれるおよその長さに達するときに合成が停止するように調節する。合成後、所望の分子量を有するポリペプチドを、分子量サイジングカラム又はゲルでのポリペプチドのクロマトグラフィー、及び望ましい分子量範囲の回収などの、任意の利用可能サイズ選択手順によって得ることができる。本発明のポリペプチドを、例えば酸又は酵素加水分解によって部分的に加水分解して高分子量種を除去して、次いで精製してその酸又は酵素を除去することもできる。
【００７５】
一実施形態では、所望の分子量を有するターポリマーは、保護ポリペプチドと臭化水素酸を反応させて所望の分子量概略を有するトリフルオロアセチル−ポリペプチドを形成することを含む方法によって調製することができる。この反応は、１つ又は複数の試験反応によって予め決めた時間及び温度で行う。試験反応中に、時間及び温度を変え、試験ポリペプチドの所与のバッチの分子量範囲を決定する。ポリペプチドのバッチの最適な分子量範囲をもたらす試験条件を、そのバッチ用に使用する。したがって、所望の分子量概略を有するトリフルオロアセチル−ポリペプチドは、保護ポリペプチドと臭化水素酸を試験反応によって予め決めた時間及び温度で反応させることを含む方法によって生成することができる。所望の分子量概略を有するトリフルオロアセチル−ポリペプチドは、水性ピペリジン溶液を用いて次いでさらに処理して、所望の分子量を有する低毒性ポリペプチドを形成する。
【００７６】
好ましい実施形態では、所与のバッチ由来の保護ポリペプチドの試験サンプルを、約２０〜２８℃の温度で約１０〜５０時間臭化水素酸と反応させる。そのバッチに関する最高条件は、数回の試験反応を行うことによって決定する。例えば一実施形態では、保護ポリペプチドは約２６℃の温度で約１７時間臭化水素酸と反応させる。
【００７７】
本発明で使用するランダム及び規則配列型コポリマーは、薬剤として許容可能な担体を含む医薬組成物に配合することができる。本明細書で使用する「薬剤として許容可能な担体」は、任意及び全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤、甘味料などを含む。薬剤として許容可能な担体は、特定の治療組成物を調製するために必要とされる可能性がある、希釈剤、結合剤及び接着剤、潤滑剤、錠剤分解剤、着色剤、充填剤、着香剤、甘味剤、並びにバッファー及び吸収剤などの種種雑多の物質だけには限られないがこれらを含めた広範囲の物質から調製することができる。このような媒体及び物質、並びに薬剤として活性がある物質の使用は、当分野ではよく知られている。ある従来の媒体又は物質が活性成分と不適合である場合以外は、治療組成物中のその使用は企図される。
【００７８】
したがって、本発明に従い使用するための医薬組成物は、医薬品として使用することができる調製物への活性化合物の加工を容易にする、賦形剤及び助剤を含めた１つ又は複数の生理的に許容可能な担体を使用して、従来の方法で配合することができる。適切な配合は、選択する投与の経路に依存する。
【００７９】
注射用に、本発明の化合物は水溶液、好ましくは生理的に適合性があるバッファー、例えばハンクスの溶液、リンガーの溶液、又は生理食塩水バッファーなどに配合することができる。経粘膜投与用に、障壁を通過するのに適した浸透剤を配合物中に使用する。このような浸透剤、例えばＤＭＳＯ、又はポリエチレングリコールは当分野で一般的に知られている。
【００８０】
経口投与用に、活性化合物と当分野でよく知られている薬剤として許容可能な担体を組み合わせることによって、化合物を容易に配合することができる。このような担体によって、患者による経口摂取用の錠剤、ピル、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして本発明の化合物を配合することができる。経口使用するための薬理学的調製物は、固形賦形剤を使用して、任意選択で生成した混合物を粉砕し、望むならば適切な助剤を加えた後に顆粒の混合物を処理することによって作製し、錠剤又は糖衣錠のコアを得ることができる。適切な賦形剤は特に、ラクトース、スクロース、マンニトール、又はソルビトールを含めた糖類などの充填剤；例えばトウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどのセルロース調製物；及び／又はポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などの生理的に許容可能なポリマーである。望むならば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、或いはアルギン酸又はアルギン酸ナトリウムなどのその塩などの錠剤分解剤を加えることができる。
【００８１】
経口使用することができる医薬組成物には、ゼラチンでできた押し込みカプセル、並びにゼラチン及びグリセロール又はソルビトールなどの可塑剤でできた軟質の密封カプセルがある。押し込みカプセルは、ラクトースなどの充填剤、デンプンなどの結合剤、タルク又はステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、及び任意選択で安定剤と混合された活性成分を含むことができる。
【００８２】
軟質カプセル中に活性化合物を溶かすことができ、或いは脂肪油、液状パラフィン、又は液状ポリエチレングリコールなどの適切な液体中に懸濁させることができる。さらに、安定剤を加えることができる。経口投与用の全ての配合物は、選択した投与経路に適した用量でなければならない。
【００８３】
口内投与用に組成物は、従来の方法で配合した錠剤又は薬用ドロップの形をとることができる。
【００８４】
非経口投与用の医薬組成物は、水溶形の活性成分の水溶液を含む。さらに、活性化合物の懸濁液を、適切な油状注射用懸濁液として調製することができる。適切な親油性溶媒又は賦形剤には、ゴマ油などの脂肪油、又はオレイン酸エチルなどの合成脂肪酸エステル、トリグリセリド又はリポソームがある。水性注射用懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール又はデキストランなどの懸濁液の粘度を増大させる物質を含むことができる。任意選択で、高濃度の溶液の調製を可能にするために化合物の溶解度を増大させる適切な安定剤又は物質も、懸濁液は含むことができる。
【００８５】
米国特許第６，２１４，７９１号は、摂取又は吸入によるコポリマー１の経口投与によって、多発性硬化症を治療するための方法を開示する。コポリマー１を経口的に導入するとき、それを他の食品形と混合し、固体、半固体、懸濁液、又は乳濁液の形で消費することができ；水、懸濁剤、乳化剤、調味料などを含めた薬剤として許容可能な担体と、それを混合することができる。一実施形態では、経口組成物を腸溶性コーティングする。吸入剤又は点鼻剤によって幾つかの前述の形で、コポリマー１を鼻部に投与することもできる。さらに経口吸入を使用して、気管及び気管支経路の粘膜内層にコポリマー１を送達することができる。
【００８６】
以下の実施例は、本発明の幾つかの実施形態をより完全に例示するために示す。しかしながら、これらは決して広範囲の本発明を制限するものとして解釈すべきではない。当業者は本発明の範囲から逸脱せずに、本明細書で開示する原理の多くの変更形態及び変形形態を容易に考案することができる。
【実施例】
【００８７】
物質及び方法
Ａ．コポリマー１及び対照の調製
（ｉ）Ｌ−Ａｌａ、γ−ベンジル−Ｌ−Ｇｌｕ、Ｎ，ε−トリフルオロアセチル−Ｌ−Ｌｙｓ、及びＬ−ＴｙｒのＮ−カルボキシ無水物の重合によって、コポリマー１を調製した。重合反応は、重合開始剤としてジエチルアミンを含む無水ジオキサン中で室温において行った。グルタミン酸のγ−カルボキシル基の脱保護は、室温において２４時間氷酢酸中で臭化水素を用いて、次に１Ｍのピペリジンによってリシン残基からトリフルオロアセチル基を除去して行った。最終生成物は、Ａｌａ（４．１〜５．８残基）、Ｇｌｕ（１．４〜１．８残基）、Ｌｙｓ（３．２〜４．２残基）、Ｔｙｒ（１残基）のアミノ酸組成を有するランダムポリペプチドの酢酸塩の混合物である。
（ｉｉ）以下のペプチドを標準的なＦｍｏｃ化学法によって合成した。全てのペプチドは高性能液体クロマトグラフィーによって測定して９５％〜９９％純粋であり、アミノ酸分析及び質量分析法によって調べた。配列は１文字コードで与える：
ＭＢＰ  Ａｃ１−１１［４Ａ］、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）のアセチル化Ｎ末端１〜１１ペプチド、Ａｌａによって位置４において元のＬｙｓ残基が置換された：ＡｃＡＳＱＡＲＰＳＱＲＨＧ；
ＭＢＰ３５〜４７、Ｉ−Ｅｕに関して認識されるＭＢＰのエピトープ：ＴＧＩＬＤＳＩＧＲＦＦＳＧ；
ＫＭの主要な伸長ペプチド、オボアルブミンの抗原の主要配列３２３〜３３９に基づく：ＫＭＫＭＶＨＡＡＨＡＫＭＫＭ；
ＭＢＰ８９〜１０１：ＶＨＦＦＫＮＩＶＴＰＲＴＰはｔ−ブトキシカルボニル化学法によって合成した。
【００８８】
Ｂ．動物
ＢＡＬＢ／ｃ（Ｈ−２ｄ）、Ｂ１０．Ｄ２／ｎＳｎＪ（Ｈ−２ｄ）、ＣＢＡ（Ｈ−２ｋ）、Ｃ５７ＢＬ／６及びＣ３Ｈ（Ｈ−２ｂ）、Ｂ１０．ＰＬ及びＰＬ／Ｊ（Ｈ−２ｕ）マウスは、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ）から、；或いはＳｉｍｏｎｓｅｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｇｉｌｒｏｙ、ＣＡ）から購入した。
【００８９】
Ｃ．ＨＶＧに関する皮膚移植片の移植モデル系
皮膚移植は、免疫拒絶反応を測定するための確立したモデルである。このモデルでは、レシピエント及びドナーマウスに麻酔をかけ、毛を剃り清潔な状態にした。円形片の皮膚（直径１．０〜１．３ｃｍ）をドナーマウスの背側から切断し、ヒストアクリル（Ｂｒａｕｎ、Ｍｅｌｓｕｎｇｅｎ、ドイツ）を使用することによってレシピエント動物に対して背側に移植した。移植片はノベクタン消毒スプレー済み包帯（Ａｓｔｒａ、Ｗｅｄｅｌ、ドイツ）で覆った。マウスは別々のカゴで飼育し毎日調べた。生命力のあるドナーの表皮が残っていないとき、移植片は拒絶されたとみなした。
【００９０】
Ｄ．甲状腺移植アッセイ
ＨＶＧに関するこの移植モデルでは、ドナーマウス由来の甲状腺をレシピエントマウスの腎臓の皮膜に移植した。一週間後、移植マウスに１２５Ｉを注射し、各腎臓（レシピエント又は非移植腎臓）の放射能を２０時間後に測定した。Δｃｐｍは、同じ治療におけるレシピエント腎臓の１２５Ｉ吸収度から非移植腎臓の１２５Ｉ吸収度を引くことによって計算した。治療に関する平均機能指数（ＭＦＩ）は、試験した治療に関する平均ΔｃｐｍをＰＢＳ治療に関する平均Δｃｐｍで割ることによって計算した。ＡＮＯＶＡ検定によってＰ値を得た。このアッセイは移植片生存率を客観的且つ定量的に示すだけでなく、移植甲状腺組織の機能（ヨウ素吸収）を客観的且つ定量的に示す（Ｉｓａｋｏｖら、１９７９）。
【００９１】
Ｅ．ＨＶＧに関するコポリマー１治療
移植マウス又はラットは、移植の７日又は１４日前から始めて、マウスに関してＰＢＳ溶液中０．６〜２．５ｍｇ／１日、ラットに関してＰＢＳ溶液中２５ｍｇ／１日の用量でコポリマー１を用いて毎日治療した。幾つかの場合、最初のＣｏｐ１治療剤はデポー剤としてＩＣＦＡで皮下に注射した。
【００９２】
Ｆ．異所心臓移植
この系では、マンシェット吻合技法を使用して、ラット（ルイス）に他系統（Ｆｉｓｈｅｒ−３４４）由来の他の心臓を移植した。心臓の同種異系移植片の生存率は、移植片を毎日触感することによって調べた。触感の中止は同種異系移植片の拒絶反応を示した。
【００９３】
全ての移植系においてレシピエントは、示した用量で、移植の１又は２週間前から始めてＣｏｐ１（ＣＯＰＡＸＯＮＥ（登録商標）Ｔｅｖａ、イスラエル）を、或いは移植の０〜５日前から始めて、免疫抑制剤、即ちシクロスポリンＡ（ＣｙＡ、Ｓａｎｄｏｚ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｅａｓｔ  Ｈａｎｏｖｅｒ、ＮＪ）及びタクロリムス（ＦＫ５０６フジサワ）（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ大阪、日本）を毎日投与することによって治療した。
【００９４】
（実施例１）
Ｂ１０．Ｄ２→ＢＡＬＢ／ｃモデルにおける移植片拒絶反応（ＨＶＧ）に対するコポリマー１の影響
移植片拒絶反応を予防するためにコポリマー１を使用する実現可能性は、副組織適合性障害が及ぶ移植系で最初に試験した。したがって、レシピエントマウス（ＢＡＬＢ／Ｃ）に、ドナーとレシピエントが副組織適合性抗原のみが異なるように（副組織適合性障害が及ぶ移植）、他系統（Ｂ１０．Ｄ２）由来であるが同じＨ−２ハプロタイプ（Ｈ−２ｄ）である移植片を移植した。このモデルは、ドナー及びレシピエントが通常ＨＬＡ適合型である、大部分のヒト移植における臨床設定と非常に似ている。
【００９５】
２つの移植系において、コポリマー１の影響を対照ＰＢＳ治療の影響と比較した：
（ｉ）他の臓器の拒絶反応より抑制するのが困難である激しい拒絶反応プロセスを通常もたらす皮膚移植片の移植（Ｉｓａｋｏｖら、１９７９）、及び
（ｉｉ）移植片生存の客観的且つ定量的誘導だけでなく、移植甲状腺組織の機能（ヨウ素摂取）も可能にする腎臓の皮膜への甲状腺の移植。
【００９６】
Ｂ１０．Ｄ２→ＢＡＬＢ／ｃモデルにおける皮膚移植片拒絶反応に対するコポリマー１の治療の影響を試験するために、ＢＡＬＢ／ｃレシピエントマウスに、Ｂ１０．Ｄ２ドナー由来の皮膚移植片を移植し、７日前からＰＢＳ腹腔内、７日前からコポリマー１（腹腔内及び皮下）を用いて毎日治療した。移植片は毎日調べた。生命力のあるドナーの表皮が残っていないとき、拒絶反応は陽性であるとみなした。これらの結果は、図１中及び表２中に要約する。コポリマー１治療マウスの平均移植片生存時間（ＭＳＴ）は、それぞれ０．３ｍｇ及び０．６ｍｇに関して２０．４日及び２０．６日であった、一方ＰＢＳ対照治療は１６．１日のＭＳＴをもたらした。したがってＣｏｐ１は、Ｂ１０．Ｄ２→ＢＡＬＢ／ｃ系における皮膚移植片生存に対する非常に有益な影響を誘導した。コポリマー１はＦＫ５０６より幾分有効性が低かったが、ＣｙＡよりは有効性が高かったことを述べなければならない。しかしながら、非常に低量のＣｙＡをこの特定の実験で使用した（図１参照）。
【００９７】
Ｂ１０．Ｄ２→ＢＡＬＢ／ｃモデルにおける移植甲状腺の機能に対するコポリマー１の治療の影響を試験するために、ドナーＢ１０．Ｄ２由来の甲状腺をＢＡＬＢ／ｃマウスの腎臓の皮膜に移植した。一週間後、移植マウスに１２５Ｉを注射し、各腎臓の放射能を２０時間後に測定した。Δｃｐｍは、同じ治療におけるレシピエント腎臓の１２５Ｉ吸収度から非移植腎臓の１２５Ｉ吸収度を引くことによって計算した。それぞれの治療に関する平均機能指数（ＭＦＩ）は、以下のように、試験した治療における（移植腎臓−非移植腎臓）の平均１２５Ｉ吸収度を、ＰＢＳ治療における（移植腎臓−非移植腎臓）の平均１２５Ｉ吸収度で割ることによって計算した：
＊ＭＦＩ＝Ｃｏｐ１試験治療に関する平均Δｃｐｍ／ＰＢＳ試験治療に関する平均Δｃｐｍ
【００９８】
甲状腺移植の結果は図２中及び表３中に要約する。コポリマー１治療マウス（６００μｇ／１日）のＭＦＩは、ＰＢＳ治療マウスに対して一実験では３．２倍、他の実験では５．２倍であった。したがってコポリマー１治療は、Ｂ１０Ｄ２→ＢＡＬＢ／Ｃ系における移植甲状腺の機能低下を予防する際に有意に有効であった。この治療はこの実験で使用したＦＫ５０６と同等に有効であり、低量のＣｙＡよりさらに一層有効であった。
【００９９】
これらの結果は、皮膚移植片と甲状腺移植系の両方において、コポリマー１が移植片の生存及び機能に対して有意で顕著な影響を誘導したことを示す。
【０１００】
以下の態様：（ｉ）異なるネズミ系統の組合せにおけるＨＶＧに対するコポリマー１の影響、及び（ｉｉ）ヒト移植用に現在使用されている他の免疫抑制剤、即ちＦＫ５０６及びシクロスポリンＡの影響と比較した、ＨＶＧに対するコポリマー１の影響を処理しながら、他の試験を次いでマウスに行って、前に記載した２つの移植モデル系を使用して、宿主による移植片の免疫拒絶反応を阻害するＣｏｐ１の能力を確定した。
【０１０１】
【表２】
2007500693.tif 000003
【０１０２】
【表３】
2007500693.tif 000004
【０１０３】
（実施例２）
異なるネズミ系統におけるＨＶＧに対するコポリマー１の影響
異なる系統であるが同じＨ−２ハプロタイプのレシピエント／ドナーマウスのモデルを試験した後、他のＨ−２ハプロタイプのドナー由来の移植片を移植した（主要組織適合性障害が及ぶ移植）マウスにおける拒絶反応、ヒトにおけるＨＬＡ非適合型移植のモデルを我々は試験した。
【０１０４】
したがって、コポリマー１によって誘導されるＨＶＧに対する有益な影響が、一般的な現象であるかどうかを見出すために、他の系統の組合せにおいて移植片拒絶反応を阻害するコポリマー１の能力を我々は試験した。３つのネズミ系統の組合せ：Ｂ１０．Ｄ２→ＢＡＬＢ／ｃ、Ｈ−２ｄハプロタイプ、Ｃ５７ＢＬ→Ｃ３ＨＳＷ、Ｈ−２ｂハプロタイプ、及びＢ１０ＰＬ→ＰＬ／Ｊ、Ｈ−２ｕハプロタイプを副組織適合性障害、及び主要組織適合性障害に関して試験し、移植はＣ５７ＢＬ→ＢＡＬＢ／ｃ、Ｈ−２ｂ→Ｈ−２ｄハプロタイプで試験した。これらの系統の組合せは、皮膚移植と甲状腺移植の両方を使用してコポリマー１を用いて試験した。
【０１０５】
表４及び５に示すように、皮膚移植生存期間の延長、及びＰＢＳ治療マウスと比較したコポリマー１治療マウスにおける甲状腺のヨウ素吸収の増大によって実証されたように、コポリマー１は全ての系統の組合せにおいて移植片拒絶反応を阻害した。Ｈ−２適合型移植の拒絶反応より強い拒絶反応過程を通常誘導する、異なるＨ−２ハプロタイプのドナー由来の移植片の拒絶反応さえも、コポリマー１は有意に阻害した（表４及び５）。これらの結果は、コポリマー１は異なる系統の組合せにおいてさまざまな源由来の移植片の免疫拒絶反応を抑制する際に有効であり、したがって他種においても有効性がある可能性があることを示す。
【０１０６】
【表４】
2007500693.tif 000005
【０１０７】
【表５】
2007500693.tif 000006
【０１０８】
（実施例３）
他の免疫抑制剤と比較したＨＶＧに対するＣｏｐ１治療の影響
ヒト移植における移植片拒絶反応を予防するために現在使用されている２つの他の免疫抑制剤、タクロリムス（ＦＫ５０６）及びシクロスポリンＡ（ＣｙＡ）の影響と比較したＣｏｐ１の影響を、２つのモデル系において試験した。
【０１０９】
ＢＡＬＢ／ｃレシピエントマウスに、Ｂ１０．Ｄ２ドナー由来の皮膚移植片を移植し、７日前からＰＢＳ腹腔内、７日前からコポリマー１（腹腔内及び皮下）、７日前からＣｙＡ腹腔内、及び移植の２日前からのＦＫ５０６の７回腹腔内注射を用いて毎日治療した。移植片は毎日調べた。生命力のあるドナーの表皮が残っていないとき、拒絶反応は陽性であるとみなした。Ｂ１０．Ｄ２ドナー由来の甲状腺を、ＢＡＬＢ／ｃマウスの腎臓の皮膜に移植した。ＣｙＡがこれらの系において有意且つ有益な影響を誘導することはなかったが、ＦＫ５０６は皮膚移植系と甲状腺移植系の両方で移植片生存／機能を有意に改善した。Ｃｏｐ１も、ＦＫ５０６の影響と同様の移植片生存／機能に対する有意且つ有益な影響を誘導した。皮膚移植片生存に対するＣｏｐ１の影響は、ＦＫ５０６の影響より幾分小さかったが（ＦＫ５０６に関する２１．２と比較してＣｏｐ１に関してＭＳＴ２０．６（表２）、移植した甲状腺移植片の機能低下を予防する際に、Ｃｏｐ１はＦＫ５０６と同等に有効であった（それぞれＣｏｐ１及びＦＫ５０６に関するＰＢＳ対照の３．２倍及び３．１倍、表３及び図２）。
【０１１０】
（実施例４）
Ｃ５７ＢＬ→ＢＡＬＢ／ｃモデルにおける皮膚移植片拒絶反応に対するＦＫ５０６又はＣｙＡ治療と組み合わせたＣｏｐ１の影響
酢酸グラチラマー（ＧＡ）とさまざまな用量のＣｙＡ及びＦＫ５０６の併用療法が、それぞれの薬剤単独の影響と比較して皮膚移植片の生存を延長させることができるかどうかを試験するために、ＢＡＬＢ／ｃレシピエントマウスに、第０日にＣ５７ＢＬドナー由来の皮膚移植片を移植した。ＧＡ（１００ｍｇ／ｋｇ、皮下）を移植の２週間前から始めて毎日注射した。示した濃度のタクロリムス（ＦＫ５０６）及びＣｙＡを、移植の６日前から始めて毎日筋肉内注射した。生命力のあるドナーの表皮が残っていないとき、拒絶反応は陽性であるとみなした。
【０１１１】
表６は、ＧＡとＣｙＡ又はタクロリムスのいずれかの併用療法が、それぞれの薬剤単独の影響と比較して移植片の生存を有意に延長させたことを示す。これは低量の免疫抑制剤を使用したとき（ＣｙＡ５ｍｇ／ｋｇ及びＦＫ１．２５ｍｇ／ｋｇ）、他の効果−それぞれの薬剤単独による延長の合計と類似した延長、及び相乗効果−多量の免疫抑制剤（ＣｙＡ７．５ｍｇ／ｋｇ、ＦＫ２．５及び５ｍｇ／ｋｇ）を用いた個々の影響の合計より長い延長において示された。したがって、３．０〜５．４及び２．１〜３．０倍の併用効果（ＧＡを用いて得た延長とＧＡなしで得た延長の間の比）を、それぞれＧＡとＣｙＡ並びにＧＡとＦＫ５０６に関して得た。併用療法によって得た延長値は、２倍多量の同じ薬剤単独によって得た延長値より常に高かった。例えば、７．５ｍｇ／ｋｇのＣｙＡとＧＡの組合せは３８％の移植片生存の延長を誘導し、一方２倍量の１５ｍｇ／ｋｇのＣｙＡ単独はわずか２７％の延長を誘導した。同様に、５．０ｍｇ／ｋｇのＦＫ５０６とＧＡの組合せは６６％の延長を誘導し、一方１０ｍｇ／ｋｇのＦＫ５０６単独による治療は、皮膚移植片生存のわずか５４％の延長をもたらした。興味深いことに、ＧＡとＣｙＡ７．５ｍｇ／ｋｇ又はＦＫ５０６  ５ｍｇ／ｋｇの組合せによって治療したこれらの群のそれぞれでは、免疫抑制剤を用いた治療を移植後２０日で中断しても、１匹のマウスが長時間生存した（それぞれ、ＧＡとＣｙＡを用いて２５日間、及びＧＡとＦＫ５０６を用いて４５日間）。これらの場合、皮膚移植片において毛の成長を確認した（図３Ｃ）。
【０１１２】
【表６】
2007500693.tif 000007
【０１１３】
図３は、皮膚移植片拒絶反応に対するＧＡ、ＣｙＡ及びＦＫ５０６の影響を実証する図である。Ｃｏｐ１治療は皮膚移植片生存の有意な延長を誘導し、未治療対照群において得た８．５日と比較して、平均生存時間（ＭＳＴ）は１０．８日であった（２７％の増大）。この延長は、ＣｙＡ又はＦＫ５０６  ５ｍｇ／ｋｇによって得られた延長−ＭＳＴ９．７及び９．５日より長く（それぞれ１４％及び１２％の延長）、１０ｍｇ／ｋｇのＣｙＡのそれと同等であった。最高量のこれらの薬剤−ＣｙＡ１５ｍｇ／ｋｇ、又はＦＫ５０６  １０ｍｇ／ｋｇ、ＭＳＴ１６及び１３．８日ほど、ＧＡは有効ではなかった（それぞれ６２％及び８８％の延長）。しかしながら、これらの高用量のＣｙＡ及びＦＫ５０６はマウスに対して毒性の影響があり、相当な体重減少及び弱化を誘導した（図３Ａに示すように、さらに死も（平均２０％のマウス）。対照的に、さらに高用量（１００ｍｇ／ｋｇ）のＧＡを毎日注射したマウスは、完全に健康であるように見えた（図３Ｂ）。
【０１１４】
移植の１ヵ月後にＧＡとＦＫ５０６の組合せで治療した特定のマウスの写真を、図３Ｃに示す。ＢＡＬＢ／ｃマウスにＣ５７ＢＬ／６ドナー由来の皮膚移植片を移植し、ＧＡ１００ｍｇ／ｋｇとＦＫ５０６  ５ｍｇ／ｋｇの併用療法によって治療した。皮膚移植片は移植後２０日で治療を中断しても４５日間生存し、毛の成長さえも示し、完全な移植を示した。ＧＡ１００ｍｇ／ｋｇとＣｙＡ７．５ｍｇ／ｋｇの併用療法で治療したマウスにおいて同様の効果を得て、このマウスは２５日間生存した。
【０１１５】
（実施例５）
Ｃ５７ＢＬ→ＢＡＬＢ／ｃモデルにおける移植甲状腺の機能に対するＦＫ５０６又はＣｙＡ治療と組み合わせたＣｏｐ１の影響
ＢＡＬＢ／ｃレシピエントマウスに、第０日にドナーマウス由来の甲状腺を腎臓の皮膜中に移植した。移植片は毎日調べた。移植した甲状腺組織の機能（ヨウ素吸収）は、腎臓中のヨウ素吸収を測定することによって移植の１０日後に調べた。以下の表７中及び図４中に要約した結果によって、Ｃｏｐ１とＦＫ５０６又はＣｙＡのいずれかの併用療法は移植片の機能を有意に改善し、Ｃｏｐ１又は免疫抑制剤単独による治療より有効であったことが明らかになった。重要なことに、Ｃｏｐ１及び知られている免疫抑制剤の併用療法を施した動物において、平均機能指数（ＭＦＩ）が有意に改善されることは明らかである。
【０１１６】
図４中では、バー内に表す数字は、移植腎臓及び非移植腎臓中のヨウ素摂取を示す。バーの対の間の太字の数字は、併用療法及び単剤療法によって得られたＭＦＩの増大倍数を示す。特に、最低量のＣｏｐ１とシクロスポリンＡの組合せによって、２０倍を越えるＭＦＩの改善を得た。
【０１１７】
【表７】
2007500693.tif 000008
【０１１８】
【表８】
2007500693.tif 000009
【０１１９】
（実施例６）
ラットにおける心臓拒絶反応に対するＣｙＡ治療と組み合わせたＣｏｐ１の影響
ルイスラットに、同種異系の異なるＢＮドナーラット由来の副心臓を移植した。レシピエントラットは、ＧＡ１００ｍｇ／ｋｇ、移植の２週間前に開始；ＣｙＡ  １．２５、２．５、５又は１０ｍｇ／ｋｇ、移植の日に開始、或いはＦＫ５０６  １．２５、２．５又は５ｍｇ／ｋｇ、移植の６日前に開始（図５、影付きバー）で毎日治療した。ＧＡ及びそれぞれの用量の免疫抑制剤を用いた予備治療の組合せ（無地のバー）；予備治療なしで移植の日から投与するＧＡを用いた治療（すじ付きバー）。心臓の同種異系移植片の生存率は、移植片の触感を調べることによって毎日調べた。心臓の触感を観察することができなかったとき、移植片は拒絶されたとみなした。
【０１２０】
ＧＡ、ＣｙＡ、ＦＫ５０６、及びこれらの組合せによって治療したレシピエントラットにおける移植した心臓の平均生存時間は、表８及び図５に示す。示すようにこの系では、ＧＡ治療自体が移植片の生存を延長することはなく、一方異なる濃度のＣｙＡ及びＦＫ５０６は、用量依存式に有意な延長を誘導した。さらに、相当な抑制効果が得られた用量（５又は１０ｍｇ／ｋｇのＣｙＡ、及び２．５又は５ｍｇ／ｋｇのＦＫ５０６）は毒性の結果も有しており、５ｍｇ／ｋｇのＦＫ５０６を与えたラットさえも６〜８日間毎日注射した後に死んだ。ＧＡをＣｙＡ又はＦＫ５０６治療に加えることによって、それぞれの薬剤単独の効果を越えて心臓の生存時間が有意に延長した。したがって、平均２８．７日の生存時間をＧＡと２．５ｍｇ／ｋｇのＣｙＡの組合せによって得て（未治療対照と比較して２１．５日の延長）、一方同じ用量のＣｙＡ単独はわずか１７．８日の生存時間をもたらし（１０．６日の延長）、併用療法による２倍の延長効果を示した（図５Ａ及び表８）。さらに、ＧＡと２．５ｍｇ／ｋｇのＣｙＡの組合せによる２８．７日の生存時間は、相当毒性であった４倍高用量のＣｙＡ単独を用いて得られた２，６．２日より長かった。同様に、ＧＡとＦＫ５０６、１．２５及び２．５ｍｇ／ｋｇの併用療法は、同じ用量のＦＫ５０６単独によって得られた２２．５及び２５．５日と比較して、それぞれ２６．７及び３１．５日の生存時間をもたらした（図５Ｂ及び表８）。図５中に示すように、さらに高用量（即ち１０ｍｇ／ｋｇ）のＣｙＡ単独の投与と比較して、Ｃｏｐ１とＣｙＡ（２．５ｍｇ／ｋｇ）の組合せを投与したとき同様の結果を得た。Ｃｏｐ１とＦＫ５０６の組合せを用いて同じパターンを得た。
【０１２１】
最も重要なことに、ＧＡとＦＫ５０６の組合せは、予備治療なしで移植の日にＦＫ５０６と共にＧＡ投与を開始したときと同様に有効であった。ＦＫ５０６に関してはＣｙＡの場合と同様に、ＧＡとの組合せは、毒性の多量の薬剤単独によって得られた生存時間より長い生存時間をもたらした。
【０１２２】
【表９】
2007500693.tif 000010
【０１２３】
本明細書で前に詳細に示し記載したことに本発明が制限されないことは、当業者によって理解されよう。そうではなくて、本発明の範囲は以下の特許請求の範囲によって定義される。
【０１２４】
引用文献
Ａｈａｒｏｎｉら、「コポリマー１又は脊髄ホモジェネートによって誘導された抑制Ｔ細胞ハイブリドーマ及びインターロイキン−２−依存系は、実験的アレルギー性脳脊髄炎を下方制御する（T suppressor hybridomas and interleukin-2-dependent lines induced by copolymer 1 or by spinal cord homogenate down-regulate experimental allergic encephalomyelitis）」、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：１７〜２５（１９９３）。
Ａｈａｒｏｎｉら、「合成ランダムコポリマーＧＬＡＴの移植片対宿主疾患に対する影響の機構及び特異性に関する機構（Studies on the mechanism and specificity of the effect of the synthetic random copolymer GLAT on graft-versus-host disease）」、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、５８（２）：７９〜８７（１９９７）。
Ａｈａｒｏｎｉ  Ｒ、Ｔｅｉｔｅｌｂａｕｍ  Ｄ、Ｓｅｌａ  Ｍ、Ａｒｎｏｎ  Ｒ、「コポリマー１は、ミエリン塩基性タンパク質と交差反応し実験的自己免疫性脳脊髄炎を抑制する、Ｔヘルパー２型のＴ細胞を誘導する（Copolymer1 induces T cells of the T helper type 2 that crossreact with myelin basic protein and suppress experimental autoimmune encephalomyelitis）」、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９４：１０８２１（１９９７）。
Ａｈａｒｏｎｉ  Ｒ、Ｔｅｉｔｅｌｂａｕｍ  Ｄ、Ｓｅｌａ  Ｍ、Ａｒｎｏｎ  Ｒ、「コポリマー１は、移植片拒絶反応の症状発現を示す（Copolymer1 inhibits manifestation of graft rejection）」、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ７２：５９８（２００１）。
Ｂｏｒｎｓｔｅｉｎら、「多発性硬化症におけるＣｏｐ１の臨床試験（Clinical trials of Cop 1 in multiple sclerosis）」、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ、ｅｄ．Ｃｏｏｋ  Ｓ．Ｄ．Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｉｎｃ．、ｐ．４６９（１９９０）。
Ｆｒｉｄｋｉｓ−Ｈａｒｅｌｉら、「生きている抗原提示細胞上での、ミエリン塩基性タンパク質及び合成コポリマー１とクラスＩＩ主要組織適合性複合分子の直接的結合−特異性及び混乱状態（Direct binding of myelin basic protein and synthetic copolymer 1 to class II major histocompatibility complex molecules on living antigen-presenting cells - specificity and promiscuity）」、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９１：４８７２〜７６（１９９４）。
Ｉｓａｋｏｖら、「異なる組織でのＨ−２関連組織適合性抗原の差次的免疫発現。心臓、甲状腺、及び皮膚の同種異系移植片の間の生存の違い（Differential immunogenic expression of an H-2-linked histocompatibility antigen on different tissues. Differences in survival between heart, thyroid, and skin allografts）」、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、２８（１）：３１〜５（１９７９）。
Ｉｓｈｉｏｋａら、「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏでの長期生存ＭＨＣの飽和の実証の失敗。ＭＨＣ阻害ペプチドの治療可能性の暗示。（Failure to demonstrate long-lived MHC saturation both in vitro and in vivo. Implications for therapeutic potential of MHC-blocking peptides）」、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５２（９）：４３１０〜４３１９（１９９４）。
Ｊａｃｏｂら、「単純配列タンデムリピートの長さの変化に基づくサイトカイン遺伝子のＤＮＡ多形（DNA polymorphism in cytokine genes based on length variations in simple-sequence tandem repeats）」、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ、３８：２５１（１９９３）。
Ｊｏｈｎｓｏｎら、「Ｃｏｐ１陽性結果−再発性弛張の第ＩＩＩ相試験（Cop1 positive results-a phase III trial in relapsing remitting）」、ＭＳ．１１  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ａ．Ｎ．Ａ．（１９９４）。
Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＫＰ、Ｂｒｏｏｋｓ  ＢＲ、Ｃｏｈｅｎ  ＪＡら、「酢酸グラチラマー（Ｃｏｐａｘｏｎｅ）の長期の使用は充分容認されており、多発性硬化症再発率及び障害の程度に対してその臨床的影響を保つ（Extended use of Glatiramer Acetate (Copaxone) is well tolerated and maintains its clinical effect on Multiple Sclerosis relapse rate and degree of disability）」、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５０：７０１（１９９８）。
Ｊｏｈｎｓｏｎら、「コポリマー１は再発率を低下させ、再発性弛張、多発性硬化症における障害を改善する：複数機関の二重盲検プラセボ−対照試験の第ＩＩＩ相の結果。コポリマー１多発性硬化症研究グループ（Copolymer 1 reduces relapse rate and improves disability in relapsing-remitting multiple sclerosis: results of a phase III multicenter, double-blind placebo-controlled trial. The Copolymer 1 Multiple Sclerosis Study Group）」、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、１：６５（１９９５）。
Ｍｏｒｒｉｓ  ＰＪ、Ｗｏｏｄ  ＫＪ、Ｄａｌｌｍａｎ  ＭＪ．「臓器の同種異系移植片に対する抗原誘導型の寛容性（Antigen-induced tolerance to organ allografts）」、Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ６３６：２９５（１９９１）。
Ｓｃｈｌｅｇｅｌら、「クラスＩＩ主要組織適合性複合分子とのペプチド結合による移植片対宿主疾患の予防（Prevention of Graft-Versus-Host Disease by Peptides Binding to Class II Major Histocompatibility Complex Molecules）」、Ｂｌｏｏｄ  ８４：２８０２〜１０（１９９４）。
Ｓｃｈｌｅｇｅｌら、「クラスＩＩ主要組織適合性複合分子と乱雑に結合した合成ランダム基本コポリマーは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの主要及び副組織適合性抗原とのＴ細胞増殖応答を阻害し、ｉｎ  ｖｉｖｏでネズミ移植片対宿主疾患を予防する能力を与える（A synthetic random basic copolymer with promiscuous binding to class II major histocompatibility complex molecules inhibits T-cell proliferative responses to major and minor histocompatibility antigens in vitro and confers the capacity to prevent murine graft-versus-host disease in vivo）」、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）、９３：５０６１〜６（１９９６）。
Ｓｅｌａら、Ｂｕｌｌ．Ｉｎｓｔ．Ｐａｓｔｅｕｒ（Ｐａｒｉｓ）８８：３０３〜３１４（１９９０）。
Ｓｙｋｅｓら、「移植の免疫学（Immunobiology of transplantation）」、ＦＡＳＥＢ  Ｊ、１０（７）：７２１〜３０（１９９６）。
Ｔｅｉｔｅｌｂａｕｍら、「合成ポリペプチドによる実験的アレルギー性脳脊髄炎の抑制（Suppression of experimental allergic encephalomyelitis by a synthetic polypeptide）」、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：２４２〜４８（１９７１）。
Ｔｅｉｔｅｌｂａｕｍら、「ウシ及びヒト塩基性脳炎誘発物質を用いてモルモット及びウサギにおいて誘導された、実験的アレルギー性脳脊髄炎の幾つかの合成ポリペプチドによる抑制（Suppression by several synthetic polypeptides of experimental allergic encephalomyelitis induced in guinea pigs and rabbits with bovine and human basic encephalitogen）」、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３：２７２（１９７３）。
Ｔｅｉｔｅｌｂａｕｍら、「合成基本コポリマーによるアカゲザルにおける実験的アレルギー性脳脊髄炎の抑制（Suppression of experimental allergic encephalomyelitis in rhesus monkeys by a synthetic basic copolymer）」、Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．３：２５６（１９７４ａ）。
Ｔｅｉｔｅｌｂａｕｍら、「Ｃｏｐ１によるヒヒにおける実験的アレルギー性脳脊髄炎の抑制（Suppression of experimental allergic encephalomyelitis in baboons by Cop 1）」、イスラエル、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．１３：１０３８（１９７４ｂ）。
Ｔｅｉｔｅｌｂａｕｍ  Ｄ、Ａｈａｒｏｎｉ  Ｒ、Ｆｒｉｄｋｉｓ−Ｈａｒｅｌｉ  Ｍ、Ａｒｎｏｎ  Ｒ、Ｓｅｌａ  Ｍ．「多発性硬化症に対する特異的薬剤としてのＣｏｐ１（Ｃｏｐａｘｏｎｅ）の開発（Development of copolymer 1 (Copaxone) as a specific drug against multiple sclerosis）」、Ｉｎ：Ｓｈｏｅｎｆｅｌｄ  Ｙ、ｅｄ．Ｔｈｅ  Ｄｅｃａｄｅ  ｉｎ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、１８３（１９９８）。
Ｔｅｉｔｅｌｂａｕｍら、「合成コポリマー１によるミエリン塩基性タンパク質に対するＴ細胞応答の特異的阻害（Specific inhibition of the T-cell response to myelin basic protein by the synthetic copolymer Cop 1）」、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８５：９７２４〜２８（１９８８）。
Ｗｅｂｂら、「アミノ酸の合成基本コポリマーによるＥＡＥの抑制に関する分子要件（Molecular requirements involved in suppression of EAE by synthetic basic copolymers of amino acids）」、Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １３：３３３〜３３７（１９７６）。
Ｗｅｂｂら、「成熟Ｔ細胞の胸腺外の寛容性：免疫の結果としてのクローン排除（Extrathymic tolerance of mature T cells: clonal elimination as a consequence of immunity）」、Ｃｅｌｌ、６３：１２４９〜１２５６（１９９０）。
【図面の簡単な説明】
【０１２５】
【図１】Ｂ１０Ｄ２ドナーマウス由来の皮膚移植片を与えたＢＡＬＢ／ｃマウスにおける、皮膚移植片拒絶反応に対するＣｏｐ１治療の影響を示す図である。Ｂ１０Ｄ２皮膚の生存率は、皮膚移植片拒絶反応又は許容の指標として使用した。Ｃｏｐ１治療はＰＢＳを用いた治療、並びに２つの知られている免疫抑制剤、シクロスポリンＡ（ＣｙＡ）及びタクロリムス（ＦＫ５０６）を用いた治療と比較した。ＢＡＬＢ／ｃレシピエントマウスは、（１）皮膚移植の７日前からＰＢＳの腹腔内注射（四角形）、（２）３００マイクログラム／１日（小円）及び６００マイクログラム／１日（大円）の用量で、皮膚移植の７日前からＣｏｐ１を毎日腹腔内及び皮下（ｓｃ）注射、（３）皮膚移植の７日前から１マイクログラム／１日の用量でＣｙＡの腹腔内注射（白い三角形）、及び（４）移植の２日前から３００マイクログラム／１日の用量でのタクロリムスの７回腹腔内注射（黒い三角形）によって毎日治療した。皮膚移植片は毎日調べた。生命力のあるドナーの表皮が残っていないとき、拒絶反応は陽性であるとみなした。
【図２】Ｂ１０Ｄ２ドナーマウス由来の甲状腺を腎臓皮膜に移植したＢＡＬＢ／ｃマウスにおける、移植した甲状腺機能に対するＣｏｐ１治療の影響を示す図である。Ｃｏｐ１治療（移植前の第７日から６００マイクログラム／１日でＣｏｐ１を毎日腹腔内注射）を、ＰＢＳ（移植前の第７日から毎日腹腔内注射）、シクロスポリンＡ（１マイクログラム／１日のＣｙＡを移植前の第７日から毎日腹腔内注射）及びタクロリムス（移植前の第２日から３００マイクログラム／１日で７回腹腔内注射）を用いた治療と比較した。移植から一週間で、移植マウスに１２５Ｉを注射し、それぞれの放射能を２０時間後に測定した。レシピエント腎臓（無地のバー）の平均１２５Ｉ吸収度、及び非移植腎臓（すじ付きバー）の平均１２５Ｉ吸収度を示す。
【図３Ａ】非常に不適切な皮膚移植片の生存に対するＧＡ、ＣｙＡ及びタクロリムスの影響を実証する図である。Ｃ５７ＢＬ／６ドナー由来の皮膚移植片をＢＡＬＢ／ｃマウスに移植した。さまざまな用量の免疫抑制剤と比較したＧＡの影響：ＧＡ１００ｍｇ／ｋｇ、移植の２週間前に開始；ＣｙＡ５、１０又は１５ｍｇ／ｋｇ、移植の６日前に開始；及びタクロリムス５又は１０ｍｇ／ｋｇ、移植の６日前に開始。
【図３Ｂ】非常に不適切な皮膚移植片の生存に対するＧＡ、ＣｙＡ及びタクロリムスの影響を実証する図である。Ｃ５７ＢＬ／６ドナー由来の皮膚移植片をＢＡＬＢ／ｃマウスに移植した。免疫抑制剤と組み合わせたＧＡの影響：ＧＡ１００ｍｇ／ｋｇを、ＣｙＡ７．５ｍｇ／ｋｇ又はタクロリムス５ｍｇ／ｋｇのいずれかと共に投与した。免疫抑制剤単独と比較した併用療法の効果を実証する。生命力のあるドナーの表皮が残っていないとき、移植片は拒絶されたとみなした。少なくとも７匹のマウスをそれぞれの群で試験した。未治療対照を超える移植片生存率に関する統計的有意（カプラン−マイヤー検定によりｐ＜０．０５）をＧＡ、ＣｙＡ１５ｍｇ／ｋｇ及びタクロリムス１０ｍｇ／ｋｇ（Ａ）に関して、及び２つの併用療法（Ｂ）に関して得た。
【図３Ｃ】非常に不適切な皮膚移植片の生存に対するＧＡ、ＣｙＡ及びタクロリムスの影響を実証する図である。Ｃ５７ＢＬ／６ドナー由来の皮膚移植片をＢＡＬＢ／ｃマウスに移植した。ＧＡとＦＫ５０６の組合せによって治療した１匹のマウスの図である。移植後２０日で治療を中断しても、生体組織移植は４５日間続けた。
【図４】ＢＡＬＢ／ｃマウスの腎臓皮膜に移植したＢ１０Ｄ２ドナーマウス由来の移植した甲状腺の機能に対する、Ｃｏｐ１、及びＣｙＡ（ａ）とＦＫ５０６（ｂ）とを用いた併用療法の影響を示す図である。レシピエント腎臓（無地のバー）の平均１２５Ｉ吸収度、及び非移植腎臓（すじ付きバー）の平均１２５Ｉ吸収度を示す。数字は平均機能指数（物質及び方法中に記載するＭＦＩ）を表す。
【図５Ａ】同種異系の異なるＢＮドナーラット由来の副心臓を移植したルイスラットに対する、ＧＡ、ＣｙＡ及びタクロリムス（ＦＫ５０６）の影響を実証する図である。レシピエントラットは、以下の治療養生法：ＧＡ１００ｍｇ／ｋｇ、移植の２週間前に開始；ＣｙＡ  １．２５、２．５、５又は１０ｍｇ／ｋｇ、移植の日に開始；（影付きバー、図５Ａ）；又はタクロリムス１．２５、２．５又は５ｍｇ／ｋｇ、移植の６日前に開始（影付きバー、図５Ｂ）；ＧＡ及びそれぞれの用量の免疫抑制剤（無地のバー、図５Ａ及び５Ｂ参照）；ＧＡを用いた治療、予備治療なしで移植の日から投与（すじ付きバー、図５Ｂ）を用いた予備治療の組合せの１つで毎日治療した。心臓の同種異系移植片の生存率は、移植片の触感を調べることによって毎日調べた。心臓の触感に気付くことができなかったとき、移植片は拒絶されたとみなした。５〜１５匹のラットの群をそれぞれの地点用に使用した。
【図５Ｂ】同種異系の異なるＢＮドナーラット由来の副心臓を移植したルイスラットに対する、ＧＡ、ＣｙＡ及びタクロリムス（ＦＫ５０６）の影響を実証する図である。レシピエントラットは、以下の治療養生法：ＧＡ１００ｍｇ／ｋｇ、移植の２週間前に開始；ＣｙＡ  １．２５、２．５、５又は１０ｍｇ／ｋｇ、移植の日に開始；（影付きバー、図５Ａ）；又はタクロリムス１．２５、２．５又は５ｍｇ／ｋｇ、移植の６日前に開始（影付きバー、図５Ｂ）；ＧＡ及びそれぞれの用量の免疫抑制剤（無地のバー、図５Ａ及び５Ｂ参照）；ＧＡを用いた治療、予備治療なしで移植の日から投与（すじ付きバー、図５Ｂ）を用いた予備治療の組合せの１つで毎日治療した。心臓の同種異系移植片の生存率は、移植片の触感を調べることによって毎日調べた。心臓の触感に気付くことができなかったとき、移植片は拒絶されたとみなした。５〜１５匹のラットの群をそれぞれの地点用に使用した。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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