(57)【要約】  本発明は、アテローム性硬化症の１つまたは２つ以上の症状を緩和する新規なペプチドを提供する。本ペプチドは極めて安定で、経口的に容易に投与することができる。本ペプチドはプレ−ベータ高密度リポタンパク質様粒子の形成およびサイクル進行を刺激し、及び／又は脂質の輸送および解毒を促進するために有効である。本発明はまた哺乳動物でペプチドを追跡する方法を提供する。さらにまた、本ペプチドは骨粗しょう症を抑制する。スタチンとともに投与されるとき、本ペプチドはスタチンの活性を強化してスタチンを極めて低用量で使用することを可能にし、及び／又は任意の与えられた用量でスタチンを一層抗炎症性にさせる。
2007512228.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
炎症性症状の１つまたは２つ以上の症状を緩和するペプチドであって、前記ペプチドが、
長さが３から約５アミノ酸の範囲であり；
約４ｍｇ／ｍＬより高い濃度で酢酸エチルに溶解することができ；
ｐＨ７．０の水性緩衝液に溶解することができ；
水性環境でリン脂質と接触させたとき直径約７．５ｎｍの粒子を形成し、さらに積層二重層であって二重層の寸法が３．４から４．１ｎｍであり前記積層二重層の間には約２ｎｍの間隙を有する積層二重層を形成し、；
約９００ダルトン未満の分子量を有し；
前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、または抗炎症性ＨＤＬをより一層抗炎症性にし；さらに
Ｌｙｓ−Ａｒｇ−ＡｓｐおよびＳｅｒが全てＬアミノ酸であるアミノ酸配列Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ（配列番号：２３８）を有することがない、前記炎症性症状を緩和するペプチド。
【請求項２】
前記ペプチドが酸化剤による酸化からリン脂質を保護する、請求項１のペプチド。
【請求項３】
前記酸化剤が、１３（Ｓ）−ＨＰＯＤＥ、１５（Ｓ）−ＨＰＥＴＥ、ＨＰＯＤＥ、ＨＰＥＴＥ、ＨＯＤＥ、およびＨＥＴＥから成る群から選択される、請求項２のペプチド。
【請求項４】
前記リン脂質が、１−パルミトイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン（ＰＡＰＣ）、１−ステアロイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン（ＳＡＰＣ）および１−ステアロイル−２−アラキドニル−ｓｎ−グリセ−３−ホスホリルエタノールアミン（ＳＡＰＥ）から成る群から選択される、請求項２のペプチド。
【請求項５】
式、Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3n−Ｘ4を有する、炎症性症状の１つまたは２つ以上の症状を緩和するペプチドであって、前記式中、
ｎは０または１であり；
Ｘ1は疎水性アミノ酸であるか、及び／又は疎水性保護基をもち；
Ｘ4は疎水性アミノ酸であるか、及び／又は疎水性保護基をもち；さらに
ｎが０のときは：
Ｘ2は、酸性アミノ酸、塩基性アミノ酸およびヒスチジンから成る群から選択されるアミノ酸であり；
ｎが１のときは：
Ｘ2およびＸ3はそれぞれ独立に酸性アミノ酸、塩基性アミノ酸、脂肪族アミノ酸または芳香族アミノ酸であり；Ｘ2が酸性アミノ酸であるときは、Ｘ3は塩基性アミノ酸、脂肪族アミノ酸、または芳香族アミノ酸であり；さらにＸ2が塩基アミノ酸であるときは、Ｘ3は酸性アミノ酸、脂肪族アミノ酸、または芳香族アミノ酸であり；さらにＸ2が脂肪族または芳香族アミノ酸であるときは、Ｘ3は酸性アミノ酸または塩基性アミノ酸であり；
前記ペプチドは、前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、または抗炎症性ＨＤＬをより一層抗炎症性にし；さらに
前記ペプチドは、Ｌｙｓ−Ａｒｇ−ＡｓｐおよびＳｅｒが全てＬアミノ酸であるアミノ酸配列Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ（配列番号：２３８）を有することがない、ペプチド。
【請求項６】
ｎが０である、請求項５のペプチド。
【請求項７】
前記式中、Ｘ1およびＸ4がそれぞれ独立に、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、プロリン（Ｐｒｏ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、疎水性保護基をもつセリン（Ｓｅｒ）、ベータ−ナフチルアラニン、アルファ−ナフチルアラニン、ノルロイシン、シクロヘキシルアラニン、疎水性保護基を持つスレオニン（Ｔｈｒ）、疎水性保護基を持つチロシン（Ｔｙｒ）、疎水性保護基を持つリジン（Ｌｙｓ）、疎水性保護基を持つアルギニン（Ａｒｇ）、疎水性保護基を持つオルニチン（Ｏｒｎ）、疎水性保護基を持つアスパラギン酸（Ａｓｐ）、疎水性保護基を持つシステイン（Ｃｙｓ）および疎水性保護基を持つグルタミン酸（Ｇｌｕ）から成る群から選択される、請求項６のペプチド。
【請求項８】
Ｘ1が、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ｐｈｅ、ＴｒｐおよびｎｏｒＬｅｕから成る群から選択され；
Ｘ2が、Ａｓｐ、ＡｒｇおよびＧｌｕから成る群から選択され；さらに
Ｘ4が、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、およびｎｏｒＬｅｕから成る群から選択される、請求項７のペプチド。
【請求項９】
Ｘ1が、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ｐｈｅ、ＴｒｐおよびｎｏｒＬｅｕから成る群から選択され；
Ｘ2がＬｙｓ、ＡｒｇおよびＨｉｓから成る群から選択され；さらに
Ｘ4が、Ａｓｐ、ＡｒｇおよびＧｌｕから成る群から選択される、請求項７のペプチド。
【請求項１０】
Ｘ1が疎水性保護基をもつ、請求項６のペプチド。
【請求項１１】
前記疎水性保護基が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、Ｆｍｏｃ、ニコチニル、ＯｔＢｕ、ベンゾイル基、アセチル（Ａｃ）、カルボベンゾキシ、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルエステル、Ｎ−メチルアントラニリル、および３から２０の炭素のアルキル、アミド、３から２０の炭素のアルキル基、９−フルオレンアセチル基、１−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレン−１−カルボン酸基、ベンジルオキシカルボニル（上述のカルボベンゾキシとも称される）、キサンチル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルフォニル（Ｍｔｒ）、メシチレン−２−スルフォニル（Ｍｔｓ）、４，４−ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルフォニル（Ｐｍｃ）、４−メチルベンジル（ＭｅＢｚｌ）、４−メトキシベンジル（ＭｅＯＢｚｌ）、ベンジルオキシ（ＢｚｌＯ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル（Ｄｄｅ）、２，６−ジクロロベンジル（２，６−ＤｉＣｌ−Ｂｚｌ）、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（２−Ｂｒ−Ｚ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、シクロヘキシルオキシ（ｃＨｘＯ）、ｔ−ブトキシメチル（Ｂｕｍ）、ｔ−ブトキシ（ｔＢｕＯ）、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、トリフルオロアセチル（ＴＦＡ）、４［Ｎ−｛１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）−３−メチルジブチル｝−アミノ］ベンジルエステル（ＯＤｍａｂ）、α−アリルエステル（ＯＡｌｌ）、２−フェニルイソプロピルエステル（２−ＰｈｉＰｒ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキシシクロヘキサ−１−イル−イデン）エチル（Ｄｄｅ）から成る群から選択される、請求項１０のペプチド。
【請求項１２】
前記疎水性保護基がＢｏｃ、Ｆｍｏｃ、ニコチニルおよびＯｔＢｕから成る群から選択される、請求項１１のペプチド。
【請求項１３】
Ｘ4が疎水性保護基をもつ、請求項１０のペプチド。
【請求項１４】
前記疎水性保護基が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、Ｆｍｏｃ、ニコチニル、ＯｔＢｕ、ベンゾイル基、アセチル（Ａｃ）、カルボベンゾキシ、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルエステル、Ｎ−メチルアントラニリル、および３から２０の炭素のアルキル、アミド、３から２０の炭素のアルキル基、９−フルオレンアセチル基、１−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレン−１−カルボン酸基、ベンジルオキシカルボニル（上述のカルボベンゾキシとも称される）、キサンチル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルフォニル（Ｍｔｒ）、メシチレン−２−スルフォニル（Ｍｔｓ）、４，４−ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルフォニル（Ｐｍｃ）、４−メチルベンジル（ＭｅＢｚｌ）、４−メトキシベンジル（ＭｅＯＢｚｌ）、ベンジルオキシ（ＢｚｌＯ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル（Ｄｄｅ）、２，６−ジクロロベンジル（２，６−ＤｉＣｌ−Ｂｚｌ）、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（２−Ｂｒ−Ｚ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、シクロヘキシルオキシ（ｃＨｘＯ）、ｔ−ブトキシメチル（Ｂｕｍ）、ｔ−ブトキシ（ｔＢｕＯ）、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、トリフルオロアセチル（ＴＦＡ）、４［Ｎ−｛１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）−３−メチルジブチル｝−アミノ］ベンジルエステル（ＯＤｍａｂ）、α−アリルエステル（ＯＡｌｌ）、２−フェニルイソプロピルエステル（２−ＰｈｉＰｒ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキシシクロヘキサ−１−イル−イデン）エチル（Ｄｄｅ）から成る群から選択される、請求項１３のペプチド。
【請求項１５】
前記ペプチドのＮ−末端がＢｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、およびニコチニル−から成る群から選択される保護基でブロックされる、請求項１４のペプチド。
【請求項１６】
前記ペプチドのＣ−末端が、ｔＢｕおよびＯｔＢｕから成る群から選択される保護基でブロックされる、請求項１４のペプチド。
【請求項１７】
前記ペプチドが表３のペプチドのアミノ酸配列を含む、請求項６のペプチド。
【請求項１８】
前記ペプチドが表３のペプチドである、請求項６のペプチド。
【請求項１９】
前記ペプチドが少なくとも１つのＤアミノ酸を含む、請求項６のペプチド。
【請求項２０】
前記ペプチドが全てＤアミノ酸を含む、請求項６のペプチド。
【請求項２１】
前記ペプチドがＤ−およびＬ−アミノ酸を交互に含む、請求項６のペプチド。
【請求項２２】
前記ペプチドが全てＬアミノ酸を含む、請求項６のペプチド。
【請求項２３】
前記ペプチドが薬理学的に許容できる賦形剤と混合される、請求項６のペプチド。
【請求項２４】
前記ペプチドが、哺乳動物への経口投与に適した薬理学的に許容できる賦形剤と混合される、請求項６のペプチド。
【請求項２５】
前記ペプチドが薬理学的に許容できる賦形剤中のユニット製剤として提供される、請求項６のペプチド。
【請求項２６】
前記ペプチドが経時放出製剤として提供される、請求項６のペプチド。
【請求項２７】
前記ペプチドが、酸化剤による酸化からリン脂質を保護する、請求項６のペプチド。
【請求項２８】
前記酸化剤が、過酸化水素、１３（Ｓ）−ＨＰＯＤＥ、１５（Ｓ）−ＨＰＥＴＥ、ＨＰＯＤＥ、ＨＰＥＴＥ、ＨＯＤＥ、およびＨＥＴＥから成る群から選択される、請求項２７のペプチド。
【請求項２９】
前記リン脂質が、１−パルミトイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン（ＰＡＰＣ）、１−ステアロイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン（ＳＡＰＣ）および１−ステアロイル−２−アラキドニル−ｓｎ−グリセ−３−ホスホリルエタノールアミン（ＳＡＰＥ）から成る群から選択される、請求項２７のペプチド。
【請求項３０】
前記ペプチドがビオチンに結合される、請求項６のペプチド。
【請求項３１】
ｎが１であり：さらに
Ｘ2およびＸ3がそれぞれ独立に酸性アミノ酸または塩基性アミノ酸であり、Ｘ2が酸性アミノ酸であるときは、Ｘ3は塩基性アミノ酸であり；さらにＸ2が塩基アミノ酸であるときは、Ｘ3は酸性アミノ酸である、請求項５のペプチド。
【請求項３２】
Ｘ1およびＸ4がそれぞれ独立に、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、プロリン（Ｐｒｏ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、疎水性保護基をもつセリン（Ｓｅｒ）、ベータ−ナフチルアラニン、アルファ−ナフチルアラニン、ノルロイシン、シクロヘキシルアラニン、疎水性保護基を持つスレオニン（Ｔｈｒ）、疎水性保護基を持つチロシン（Ｔｙｒ）、疎水性保護基を持つリジン（Ｌｙｓ）、疎水性保護基を持つアルギニン（Ａｒｇ）、疎水性保護基を持つオルニチン（Ｏｒｎ）、疎水性保護基を持つアスパラギン酸（Ａｓｐ）、疎水性保護基を持つシステイン（Ｃｙｓ）および疎水性保護基を持つグルタミン酸（Ｇｌｕ）から成る群から選択される、請求項３１のペプチド。
【請求項３３】
Ｘ2およびＸ3がそれぞれ独立に、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、ＡｒｇおよびＨｉｓから成る群から選択される、請求項３２のペプチド。
【請求項３４】
Ｘ2およびＸ3がそれぞれ独立に、Ａｓｐ、ＡｒｇおよびＧｌｕから成る群から選択される、請求項３２のペプチド。
【請求項３５】
Ｘ1が疎水性保護基をもつ、請求項３３のペプチド。
【請求項３６】
前記疎水性保護基が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、Ｆｍｏｃ、ニコチニル、ＯｔＢｕ、ベンゾイル基、アセチル（Ａｃ）、カルボベンゾキシ、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルエステル、Ｎ−メチルアントラニリル、および３から２０の炭素のアルキル、アミド、３から２０の炭素のアルキル基、９−フルオレンアセチル基、１−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレン−１−カルボン酸基、ベンジルオキシカルボニル（上述のカルボベンゾキシとも称される）、キサンチル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルフォニル（Ｍｔｒ）、メシチレン−２−スルフォニル（Ｍｔｓ）、４，４−ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルフォニル（Ｐｍｃ）、４−メチルベンジル（ＭｅＢｚｌ）、４−メトキシベンジル（ＭｅＯＢｚｌ）、ベンジルオキシ（ＢｚｌＯ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル（Ｄｄｅ）、２，６−ジクロロベンジル（２，６−ＤｉＣｌ−Ｂｚｌ）、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（２−Ｂｒ−Ｚ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、シクロヘキシルオキシ（ｃＨｘＯ）、ｔ−ブトキシメチル（Ｂｕｍ）、ｔ−ブトキシ（ｔＢｕＯ）、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、トリフルオロアセチル（ＴＦＡ）、４［Ｎ−｛１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）−３−メチルジブチル｝−アミノ］ベンジルエステル（ＯＤｍａｂ）、α−アリルエステル（ＯＡｌｌ）、２−フェニルイソプロピルエステル（２−ＰｈｉＰｒ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキシシクロヘキサ−１−イル−イデン）エチル（Ｄｄｅ）から成る群から選択される、請求項３５のペプチド。
【請求項３７】
前記疎水性保護基がＢｏｃ、Ｆｍｏｃ、ニコチニルおよびＯｔＢｕから成る群から選択される、請求項３５のペプチド。
【請求項３８】
Ｘ4が疎水性保護基をもつ、請求項３５のペプチド。
【請求項３９】
前記疎水性保護基が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、Ｆｍｏｃ、ニコチニル、ＯｔＢｕ、ベンゾイル基、アセチル（Ａｃ）、カルボベンゾキシ、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルエステル、Ｎ−メチルアントラニリル、および３から２０の炭素のアルキル、アミド、３から２０の炭素のアルキル基、９−フルオレンアセチル基、１−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレン−１−カルボン酸基、ベンジルオキシカルボニル（上述のカルボベンゾキシとも称される）、キサンチル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルフォニル（Ｍｔｒ）、メシチレン−２−スルフォニル（Ｍｔｓ）、４，４−ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルフォニル（Ｐｍｃ）、４−メチルベンジル（ＭｅＢｚｌ）、４−メトキシベンジル（ＭｅＯＢｚｌ）、ベンジルオキシ（ＢｚｌＯ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル（Ｄｄｅ）、２，６−ジクロロベンジル（２，６−ＤｉＣｌ−Ｂｚｌ）、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（２−Ｂｒ−Ｚ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、シクロヘキシルオキシ（ｃＨｘＯ）、ｔ−ブトキシメチル（Ｂｕｍ）、ｔ−ブトキシ（ｔＢｕＯ）、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、トリフルオロアセチル（ＴＦＡ）、４［Ｎ−｛１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）−３−メチルジブチル｝−アミノ］ベンジルエステル（ＯＤｍａｂ）、α−アリルエステル（ＯＡｌｌ）、２−フェニルイソプロピルエステル（２−ＰｈｉＰｒ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキシシクロヘキサ−１−イル−イデン）エチル（Ｄｄｅ）から成る群から選択される、請求項３８のペプチド。
【請求項４０】
前記ペプチドのＮ−末端がＢｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、およびニコチニル−から成る群から選択される保護基でブロックされる、請求項３５のペプチド。
【請求項４１】
前記ペプチドのＣ−末端が、ｔＢｕおよびＯｔＢｕから成る群から選択される保護基でブロックされる、請求項３５のペプチド。
【請求項４２】
前記ペプチドが表４のペプチドのアミノ酸配列を含む、請求項３１のペプチド。
【請求項４３】
前記ペプチドが表４のペプチドである、請求項３１のペプチド。
【請求項４４】
前記ペプチドが少なくとも１つのＤアミノ酸を含む、請求項３１のペプチド。
【請求項４５】
前記ペプチドが全てＤアミノ酸を含む、請求項３１のペプチド。
【請求項４６】
前記ペプチドがＤ−およびＬ−アミノ酸を交互に含む、請求項３１のペプチド。
【請求項４７】
前記ペプチドが全てＬアミノ酸を含む、請求項３１のペプチド。
【請求項４８】
前記ペプチドが薬理学的に許容できる賦形剤と混合される、請求項３１のペプチド。
【請求項４９】
前記ペプチドが、哺乳動物への経口投与に適した薬理学的に許容できる賦形剤と混合される、請求項３１のペプチド。
【請求項５０】
前記ポリペプチドが薬理学的に許容できる賦形剤中のユニット製剤として提供される、請求項３１のペプチド。
【請求項５１】
前記ペプチドが経時放出製剤として提供される、請求項３１のペプチド。
【請求項５２】
前記ペプチドが酸化剤による酸化からリン脂質を保護する、請求項３１のペプチド。
【請求項５３】
前記ペプチドがビオチンに結合される、請求項３１のペプチド。
【請求項５４】
ｎが１であり：さらに
Ｘ2、Ｘ3がそれぞれ独立に酸性、塩基性、または脂肪族アミノ酸で、Ｘ2またはＸ3の１つが酸性または塩基性アミノ酸であり、Ｘ2が酸性または塩基性アミノ酸であるときは、Ｘ3は脂肪族アミノ酸であり；さらにＸ3が酸性または塩基アミノ酸であるときは、Ｘ2は脂肪族アミノ酸である、請求項５のペプチド。
【請求項５５】
Ｘ1およびＸ4がそれぞれ独立に、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、プロリン（Ｐｒｏ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、疎水性保護基をもつセリン（Ｓｅｒ）、ベータ−ナフチルアラニン、アルファ−ナフチルアラニン、ノルロイシン、シクロヘキシルアラニン、疎水性保護基を持つスレオニン（Ｔｈｒ）、疎水性保護基を持つチロシン（Ｔｙｒ）、疎水性保護基を持つリジン（Ｌｙｓ）、疎水性保護基を持つアルギニン（Ａｒｇ）、疎水性保護基を持つオルニチン（Ｏｒｎ）、疎水性保護基を持つアスパラギン酸（Ａｓｐ）、疎水性保護基を持つシステイン（Ｃｙｓ）および疎水性保護基を持つグルタミン酸（Ｇｌｕ）から成る群から選択される、請求項５４のペプチド。
【請求項５６】
Ｘ2およびＸ3がそれぞれ独立に、Ａｓｐ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、ＩｌｅおよびＧｌｕから成る群から選択される、請求項５５のペプチド。
【請求項５７】
Ｘ1が疎水性保護基をもつ、請求項５５のペプチド。
【請求項５８】
前記疎水性保護基が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、Ｆｍｏｃ、ニコチニル、ＯｔＢｕ、ベンゾイル基、アセチル（Ａｃ）、カルボベンゾキシ、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルエステル、Ｎ−メチルアントラニリル、および３から２０の炭素のアルキル、アミド、３から２０の炭素のアルキル基、９−フルオレンアセチル基、１−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレン−１−カルボン酸基、ベンジルオキシカルボニル（上述のカルボベンゾキシとも称される）、キサンチル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルフォニル（Ｍｔｒ）、メシチレン−２−スルフォニル（Ｍｔｓ）、４，４−ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルフォニル（Ｐｍｃ）、４−メチルベンジル（ＭｅＢｚｌ）、４−メトキシベンジル（ＭｅＯＢｚｌ）、ベンジルオキシ（ＢｚｌＯ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル（Ｄｄｅ）、２，６−ジクロロベンジル（２，６−ＤｉＣｌ−Ｂｚｌ）、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（２−Ｂｒ−Ｚ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、シクロヘキシルオキシ（ｃＨｘＯ）、ｔ−ブトキシメチル（Ｂｕｍ）、ｔ−ブトキシ（ｔＢｕＯ）、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、トリフルオロアセチル（ＴＦＡ）、４［Ｎ−｛１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）−３−メチルジブチル｝−アミノ］ベンジルエステル（ＯＤｍａｂ）、α−アリルエステル（ＯＡｌｌ）、２−フェニルイソプロピルエステル（２−ＰｈｉＰｒ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキシシクロヘキサ−１−イル−イデン）エチル（Ｄｄｅ）から成る群から選択される、請求項５７のペプチド。
【請求項５９】
前記疎水性保護基がＢｏｃ、Ｆｍｏｃ、ニコチニルおよびＯｔＢｕから成る群から選択される、請求項５７のペプチド。
【請求項６０】
Ｘ4が疎水性保護基をもつ、請求項５７のペプチド。
【請求項６１】
前記疎水性保護基が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、Ｆｍｏｃ、ニコチニル、ＯｔＢｕ、ベンゾイル基、アセチル（Ａｃ）、カルボベンゾキシ、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルエステル、Ｎ−メチルアントラニリル、および３から２０の炭素のアルキル、アミド、３から２０の炭素のアルキル基、９−フルオレンアセチル基、１−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレン−１−カルボン酸基、ベンジルオキシカルボニル（上述のカルボベンゾキシとも称される）、キサンチル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルフォニル（Ｍｔｒ）、メシチレン−２−スルフォニル（Ｍｔｓ）、４，４−ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルフォニル（Ｐｍｃ）、４−メチルベンジル（ＭｅＢｚｌ）、４−メトキシベンジル（ＭｅＯＢｚｌ）、ベンジルオキシ（ＢｚｌＯ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル（Ｄｄｅ）、２，６−ジクロロベンジル（２，６−ＤｉＣｌ−Ｂｚｌ）、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（２−Ｂｒ−Ｚ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、シクロヘキシルオキシ（ｃＨｘＯ）、ｔ−ブトキシメチル（Ｂｕｍ）、ｔ−ブトキシ（ｔＢｕＯ）、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、トリフルオロアセチル（ＴＦＡ）、４［Ｎ−｛１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）−３−メチルジブチル｝−アミノ］ベンジルエステル（ＯＤｍａｂ）、α−アリルエステル（ＯＡｌｌ）、２−フェニルイソプロピルエステル（２−ＰｈｉＰｒ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキシシクロヘキサ−１−イル−イデン）エチル（Ｄｄｅ）から成る群から選択される、請求項６０のペプチド。
【請求項６２】
前記ペプチドのＮ−末端がＢｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、およびニコチニル−から成る群から選択される保護基でブロックされる、請求項５７のペプチド。
【請求項６３】
前記ペプチドのＣ−末端が、ｔＢｕおよびＯｔＢｕから成る群から選択される保護基でブロックされる、請求項５７のペプチド。
【請求項６４】
前記ペプチドが表５のペプチドのアミノ酸配列を含む、請求項５４のペプチド。
【請求項６５】
前記ペプチドが表５のペプチドである、請求項５４のペプチド。
【請求項６６】
前記ペプチドが少なくとも１つのＤアミノ酸を含む、請求項５４のペプチド。
【請求項６７】
前記ペプチドが全てＤアミノ酸を含む、請求項５４のペプチド。
【請求項６８】
前記ペプチドがＤ−およびＬ−アミノ酸を交互に含む、請求項５４のペプチド。
【請求項６９】
前記ペプチドが全てＬアミノ酸を含む、請求項５４のペプチド。
【請求項７０】
前記ペプチドが薬理学的に許容できる賦形剤と混合される、請求項５４のペプチド。
【請求項７１】
前記ペプチドが、哺乳動物への経口投与に適した薬理学的に許容できる賦形剤と混合される、請求項５４のペプチド。
【請求項７２】
前記ポリペプチドが薬理学的に許容できる賦形剤中のユニット製剤として提供される、請求項５４のペプチド。
【請求項７３】
前記ペプチドが経時放出製剤として提供される、請求項５４のペプチド。
【請求項７４】
前記ペプチドが酸化剤による酸化からリン脂質を保護する、請求項５４のペプチド。
【請求項７５】
前記ペプチドがビオチンに結合される、請求項５４のペプチド。
【請求項７６】
ｎが１であり：さらに
Ｘ2、Ｘ3がそれぞれ独立に酸性、塩基性、または芳香族アミノ酸で、Ｘ2またはＸ3の１つが酸性または塩基性アミノ酸であり、Ｘ2が酸性または塩基性アミノ酸であるときは、Ｘ3は芳香族アミノ酸であり；さらにＸ3が酸性または塩基アミノ酸であるときは、Ｘ2は芳香族アミノ酸である、請求項５のペプチド。
【請求項７７】
Ｘ1およびＸ4がそれぞれ独立に、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、プロリン（Ｐｒｏ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、疎水性保護基をもつセリン（Ｓｅｒ）、ベータ−ナフチルアラニン、アルファ−ナフチルアラニン、ノルロイシン、シクロヘキシルアラニン、疎水性保護基を持つスレオニン（Ｔｈｒ）、疎水性保護基を持つチロシン（Ｔｙｒ）、疎水性保護基を持つリジン（Ｌｙｓ）、疎水性保護基を持つアルギニン（Ａｒｇ）、疎水性保護基を持つオルニチン（Ｏｒｎ）、疎水性保護基を持つアスパラギン酸（Ａｓｐ）、疎水性保護基を持つシステイン（Ｃｙｓ）および疎水性保護基を持つグルタミン酸（Ｇｌｕ）から成る群から選択される、請求項７６のペプチド。
【請求項７８】
Ｘ2およびＸ3がそれぞれ独立に、Ａｓｐ、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、ＰｈｅおよびＬｙｓから成る群から選択される、請求項７７のペプチド。
【請求項７９】
Ｘ1が疎水性保護基をもつ、請求項７６のペプチド。
【請求項８０】
前記疎水性保護基が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ｆｍｏｃ、ニコチニル、ＯｔＢｕ、ベンゾイル基、アセチル（Ａｃ）、カルボベンゾキシ、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルエステル、Ｎ−メチルアントラニリル、および３から２０の炭素のアルキル、アミド、３から２０の炭素のアルキル基、９−フルオレンアセチル基、１−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレン−１−カルボン酸基、ベンジルオキシカルボニル（上述のカルボベンゾキシとも称される）、キサンチル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルフォニル（Ｍｔｒ）、メシチレン−２−スルフォニル（Ｍｔｓ）、４，４−ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルフォニル（Ｐｍｃ）、４−メチルベンジル（ＭｅＢｚｌ）、４−メトキシベンジル（ＭｅＯＢｚｌ）、ベンジルオキシ（ＢｚｌＯ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル（Ｄｄｅ）、２，６−ジクロロベンジル（２，６−ＤｉＣｌ−Ｂｚｌ）、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（２−Ｂｒ−Ｚ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、シクロヘキシルオキシ（ｃＨｘＯ）、ｔ−ブトキシメチル（Ｂｕｍ）、ｔ−ブトキシ（ｔＢｕＯ）、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、トリフルオロアセチル（ＴＦＡ）、４［Ｎ−｛１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）−３−メチルジブチル｝−アミノ］ベンジルエステル（ＯＤｍａｂ）、α−アリルエステル（ＯＡｌｌ）、２−フェニルイソプロピルエステル（２−ＰｈｉＰｒ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキシシクロヘキサ−１−イル−イデン）エチル（Ｄｄｅ）から成る群から選択される、請求項７９のペプチド。
【請求項８１】
前記疎水性保護基がＢｏｃ、Ｆｍｏｃ、ニコチニルおよびＯｔＢｕから成る群から選択される、請求項７９のペプチド。
【請求項８２】
Ｘ4が疎水性保護基をもつ、請求項７９のペプチド。
【請求項８３】
前記疎水性保護基が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、Ｆｍｏｃ、ニコチニル、ＯｔＢｕ、ベンゾイル基、アセチル（Ａｃ）、カルボベンゾキシ、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルエステル、Ｎ−メチルアントラニリル、および３から２０の炭素のアルキル、アミド、３から２０の炭素のアルキル基、９−フルオレンアセチル基、１−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレン−１−カルボン酸基、ベンジルオキシカルボニル（上述のカルボベンゾキシとも称される）、キサンチル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルフォニル（Ｍｔｒ）、メシチレン−２−スルフォニル（Ｍｔｓ）、４，４−ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルフォニル（Ｐｍｃ）、４−メチルベンジル（ＭｅＢｚｌ）、４−メトキシベンジル（ＭｅＯＢｚｌ）、ベンジルオキシ（ＢｚｌＯ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル（Ｄｄｅ）、２，６−ジクロロベンジル（２，６−ＤｉＣｌ−Ｂｚｌ）、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（２−Ｂｒ−Ｚ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、シクロヘキシルオキシ（ｃＨｘＯ）、ｔ−ブトキシメチル（Ｂｕｍ）、ｔ−ブトキシ（ｔＢｕＯ）、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、トリフルオロアセチル（ＴＦＡ）、４［Ｎ−｛１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）−３−メチルジブチル｝−アミノ］ベンジルエステル（ＯＤｍａｂ）、α−アリルエステル（ＯＡｌｌ）、２−フェニルイソプロピルエステル（２−ＰｈｉＰｒ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキシシクロヘキサ−１−イル−イデン）エチル（Ｄｄｅ）から成る群から選択される、請求項８２のペプチド。
【請求項８４】
前記ペプチドのＮ−末端がＢｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、およびニコチニル−から成る群から選択される保護基でブロックされる、請求項７９のペプチド。
【請求項８５】
前記ペプチドのＣ−末端が、ｔＢｕおよびＯｔＢｕから成る群から選択される保護基でブロックされる、請求項７９のペプチド。
【請求項８６】
前記ペプチドが表６のペプチドのアミノ酸配列を含む、請求項７６のペプチド。
【請求項８７】
前記ペプチドが表６のペプチドである、請求項７６のペプチド。
【請求項８８】
前記ペプチドが少なくとも１つのＤアミノ酸を含む、請求項７６のペプチド。
【請求項８９】
前記ペプチドが全てＤアミノ酸を含む、請求項７６のペプチド。
【請求項９０】
前記ペプチドがＤ−およびＬ−アミノ酸を交互に含む、請求項７６のペプチド。
【請求項９１】
前記ペプチドが全てＬアミノ酸を含む、請求項７６のペプチド。
【請求項９２】
前記ペプチドが薬理学的に許容できる賦形剤と混合される、請求項７６のペプチド。
【請求項９３】
前記ペプチドが、哺乳動物への経口投与に適した薬理学的に許容できる賦形剤と混合される、請求項７６のペプチド。
【請求項９４】
前記ペプチドが薬理学的に許容できる賦形剤中のユニット製剤として提供される、請求項７６のペプチド。
【請求項９５】
前記ペプチドが経時放出製剤として提供される、請求項７６のペプチド。
【請求項９６】
前記ペプチドが酸化剤による酸化からリン脂質を保護する、請求項７６のペプチド。
【請求項９７】
前記ペプチドがビオチンに結合される、請求項７６のペプチド。
【請求項９８】
式、Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5を有する、炎症性症状の１つまたは２つ以上の症状を緩和するペプチドであって、前記式中、
Ｘ1は疎水性アミノ酸であるか、及び／又は疎水性保護基をもち；
Ｘ5は疎水性アミノ酸であるか、及び／又は疎水性保護基をもち；さらに
Ｘ2、Ｘ3およびＸ4はそれぞれ独立に選択される芳香族アミノ酸またはヒスチジンであり；さらに前記ペプチドは、前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、または抗炎症性ＨＤＬをより一層抗炎症性にする、ペプチド。
【請求項９９】
前記式中、Ｘ1およびＸ5がそれぞれ独立に、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、プロリン（Ｐｒｏ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、疎水性保護基をもつセリン（Ｓｅｒ）、ベータ−ナフチルアラニン、アルファ−ナフチルアラニン、ノルロイシン、シクロヘキシルアラニン、疎水性保護基を持つスレオニン（Ｔｈｒ）、疎水性保護基を持つチロシン（Ｔｙｒ）、疎水性保護基を持つリジン（Ｌｙｓ）、疎水性保護基を持つアルギニン（Ａｒｇ）、疎水性保護基を持つオルニチン（Ｏｒｎ）、疎水性保護基を持つアスパラギン酸（Ａｓｐ）、疎水性保護基を持つシステイン（Ｃｙｓ）および疎水性保護基を持つグルタミン酸（Ｇｌｕ）から成る群から選択される、請求項９８のペプチド。
【請求項１００】
Ｘ2、Ｘ3およびＸ4が、それぞれ独立にＰｈｅ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、ＴｙｒおよびＨｉｓから成る群から選択される、請求項９９のペプチド。
【請求項１０１】
Ｘ1が、疎水性保護基をもつ、請求項９８のペプチド。
【請求項１０２】
前記疎水性保護基が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、Ｆｍｏｃ、ニコチニル、ＯｔＢｕ、ベンゾイル基、アセチル（Ａｃ）、カルボベンゾキシ、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルエステル、Ｎ−メチルアントラニリル、および３から２０の炭素のアルキル、アミド、３から２０の炭素のアルキル基、９−フルオレンアセチル基、１−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレン−１−カルボン酸基、ベンジルオキシカルボニル（上述のカルボベンゾキシとも称される）、キサンチル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルフォニル（Ｍｔｒ）、メシチレン−２−スルフォニル（Ｍｔｓ）、４，４−ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルフォニル（Ｐｍｃ）、４−メチルベンジル（ＭｅＢｚｌ）、４−メトキシベンジル（ＭｅＯＢｚｌ）、ベンジルオキシ（ＢｚｌＯ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル（Ｄｄｅ）、２，６−ジクロロベンジル（２，６−ＤｉＣｌ−Ｂｚｌ）、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（２−Ｂｒ−Ｚ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、シクロヘキシルオキシ（ｃＨｘＯ）、ｔ−ブトキシメチル（Ｂｕｍ）、ｔ−ブトキシ（ｔＢｕＯ）、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、トリフルオロアセチル（ＴＦＡ）、４［Ｎ−｛１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）−３−メチルジブチル｝−アミノ］ベンジルエステル（ＯＤｍａｂ）、α−アリルエステル（ＯＡｌｌ）、２−フェニルイソプロピルエステル（２−ＰｈｉＰｒ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキシシクロヘキサ−１−イル−イデン）エチル（Ｄｄｅ）から成る群から選択される、請求項１０１のペプチド。
【請求項１０３】
前記疎水性保護基がＢｏｃ、Ｆｍｏｃ、ニコチニルおよびＯｔＢｕから成る群から選択される、請求項１０１のペプチド。
【請求項１０４】
Ｘ5が疎水性保護基をもつ、請求項１０１のペプチド。
【請求項１０５】
前記疎水性保護基が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、Ｆｍｏｃ、ニコチニル、ＯｔＢｕ、ベンゾイル基、アセチル（Ａｃ）、カルボベンゾキシ、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルエステル、Ｎ−メチルアントラニリル、および３から２０の炭素のアルキル、アミド、３から２０の炭素のアルキル基、９−フルオレンアセチル基、１−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレン−１−カルボン酸基、ベンジルオキシカルボニル（上述のカルボベンゾキシとも称される）、キサンチル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルフォニル（Ｍｔｒ）、メシチレン−２−スルフォニル（Ｍｔｓ）、４，４−ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルフォニル（Ｐｍｃ）、４−メチルベンジル（ＭｅＢｚｌ）、４−メトキシベンジル（ＭｅＯＢｚｌ）、ベンジルオキシ（ＢｚｌＯ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル（Ｄｄｅ）、２，６−ジクロロベンジル（２，６−ＤｉＣｌ−Ｂｚｌ）、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（２−Ｂｒ−Ｚ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、シクロヘキシルオキシ（ｃＨｘＯ）、ｔ−ブトキシメチル（Ｂｕｍ）、ｔ−ブトキシ（ｔＢｕＯ）、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、トリフルオロアセチル（ＴＦＡ）、４［Ｎ−｛１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）−３−メチルジブチル｝−アミノ］ベンジルエステル（ＯＤｍａｂ）、α−アリルエステル（ＯＡｌｌ）、２−フェニルイソプロピルエステル（２−ＰｈｉＰｒ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキシシクロヘキサ−１−イル−イデン）エチル（Ｄｄｅ）から成る群から選択される、請求項１０４のペプチド。
【請求項１０６】
前記ペプチドのＮ−末端がＢｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、およびニコチニル−から成る群から選択される保護基でブロックされる、請求項９８のペプチド。
【請求項１０７】
前記ペプチドのＣ−末端が、ｔＢｕおよびＯｔＢｕから成る群から選択される保護基でブロックされる、請求項９８のペプチド。
【請求項１０８】
前記ペプチドが表７のペプチドのアミノ酸配列を含む、請求項９８のペプチド。
【請求項１０９】
前記ペプチドが表７のペプチドである、請求項９８のペプチド。
【請求項１１０】
前記ペプチドが少なくとも１つのＤアミノ酸を含む、請求項９８のペプチド。
【請求項１１１】
前記ペプチドが全てＤアミノ酸を含む、請求項９８のペプチド。
【請求項１１２】
前記ペプチドがＤ−およびＬ−アミノ酸を交互に含む、請求項９８のペプチド。
【請求項１１３】
前記ペプチドが全てＬアミノ酸を含む、請求項９８のペプチド。
【請求項１１４】
前記ペプチドが薬理学的に許容できる賦形剤と混合される、請求項９８のペプチド。
【請求項１１５】
前記ペプチドがビオチンに結合される、請求項９８のペプチド。
【請求項１１６】
炎症性症状の１つまたは２つ以上の症状を緩和するペプチドであって、前記ペプチドは、長さが５から１１アミノ酸の範囲であり；末端アミノ酸は疎水性アミノ酸であるか、及び／又は疎水性保護基をもち；非末端アミノ酸は少なくとも１つの酸性ドメインおよび少なくとも１つの塩基性ドメインを形成し；さらに前記ペプチドは、前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、または抗炎症性ＨＤＬをより一層抗炎症性にする、ペプチド。
【請求項１１７】
炎症性症状の１つまたは２つ以上の症状を緩和するペプチドであって、前記ペプチドは、長さが５から１１アミノ酸の範囲であり；末端アミノ酸は疎水性アミノ酸であるか、及び／又は疎水性保護基をもち；非末端アミノ酸は少なくとも１つの酸性ドメインまたは１つの塩基性ドメインおよび少なくとも１つの脂肪族ドメインを形成し；さらに前記ペプチドは、前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、または抗炎症性ＨＤＬをより一層抗炎症性にする、ペプチド。
【請求項１１８】
炎症性症状の１つまたは２つ以上の症状を緩和するペプチドであって、前記ペプチドは、
長さが５から１１アミノ酸の範囲であり；末端アミノ酸は疎水性アミノ酸であるか、及び／又は疎水性保護基をもち；非末端アミノ酸は少なくとも１つの酸性ドメインまたは１つの塩基性ドメインおよび少なくとも１つの芳香族ドメインを形成し；さらに前記ペプチドは、前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、または抗炎症性ＨＤＬをより一層抗炎症性にする、ペプチド。
【請求項１１９】
炎症性症状の１つまたは２つ以上の症状を緩和するペプチドであって、前記ペプチドは、長さが６から１１アミノ酸の範囲であり；末端アミノ酸は疎水性アミノ酸であるか、及び／又は疎水性保護基をもち；非末端アミノ酸は少なくとも１つの芳香族ドメインまたは１つ若しくは２つ以上のヒスチジンによって分離された２つまたは３つ以上の芳香族ドメインを形成し；さらに前記ペプチドは、前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、または抗炎症性ＨＤＬをより一層抗炎症性にする、ペプチド。
【請求項１２０】
炎症性症状の１つまたは２つ以上の症状を緩和するアミノ酸対であって、前記アミノ酸対は、少なくとも１つの保護基をもつ第一のアミノ酸；および少なくとも１つの保護基をもつ第二のアミノ酸を含み、ここで前記第一のアミノ酸および前記第二のアミノ酸は異なるアミノ酸種であり、さらに前記アミノ酸対は、前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、または抗炎症性ＨＤＬをより一層抗炎症性にする、アミノ酸対。
【請求項１２１】
前記アミノ酸対が、水性環境下でリン脂質と接触させたとき直径約７．５ｎｍの粒子を形成し、さらに３．４から４．１ｎｍの寸法の積層二重層であって積層二重層の間に約２ｎｍの間隙を有する積層二重層を形成する、請求項１２０のアミノ酸対。
【請求項１２２】
前記第一および第二のアミノ酸がそれぞれ独立に、酸性アミノ酸、塩基性アミノ酸および非極性アミノ酸から成る群から選択される、請求項１２０のアミノ酸対。
【請求項１２３】
前記第一のアミノ酸は酸性または塩基性であり、さらに前記第二のアミノ酸は非極性であるか、または前記第一のアミノ酸は非極性であり、さらに前記第二のアミノ酸は酸性または塩基性である、請求項１２２のアミノ酸対。
【請求項１２４】
両アミノ酸が酸性である、請求項１２２のアミノ酸対。
【請求項１２５】
両アミノ酸が塩基性である、請求項１２２のアミノ酸対。
【請求項１２６】
前記アミノ酸対が直接またはリンカーを介して共有結合により一緒に結合されている、請求項１２０のアミノ酸対。
【請求項１２７】
前記アミノ酸がペプチド結合を介して結合され、それによってジペプチドを形成する、請求項１２６のアミノ酸対。
【請求項１２８】
前記アミノ酸対が一緒に混合されるが共有結合によって結合されていない、請求項１２０のアミノ酸対。
【請求項１２９】
前記疎水性保護基が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、Ｆｍｏｃ、ニコチニル、ＯｔＢｕ、ベンゾイル基、アセチル（Ａｃ）、カルボベンゾキシ、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルエステル、Ｎ−メチルアントラニリル、および３から２０の炭素のアルキル、アミド、３から２０の炭素のアルキル基、９−フルオレンアセチル基、１−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレン−１−カルボン酸基、ベンジルオキシカルボニル（上述のカルボベンゾキシとも称される）、キサンチル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルフォニル（Ｍｔｒ）、メシチレン−２−スルフォニル（Ｍｔｓ）、４，４−ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルフォニル（Ｐｍｃ）、４−メチルベンジル（ＭｅＢｚｌ）、４−メトキシベンジル（ＭｅＯＢｚｌ）、ベンジルオキシ（ＢｚｌＯ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル（Ｄｄｅ）、２，６−ジクロロベンジル（２，６−ＤｉＣｌ−Ｂｚｌ）、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（２−Ｂｒ−Ｚ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、シクロヘキシルオキシ（ｃＨｘＯ）、ｔ−ブトキシメチル（Ｂｕｍ）、ｔ−ブトキシ（ｔＢｕＯ）、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、トリフルオロアセチル（ＴＦＡ）、４［Ｎ−｛１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）−３−メチルジブチル｝−アミノ］ベンジルエステル（ＯＤｍａｂ）、α−アリルエステル（ＯＡｌｌ）、２−フェニルイソプロピルエステル（２−ＰｈｉＰｒ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキシシクロヘキサ−１−イル−イデン）エチル（Ｄｄｅ）から成る群から選択される、請求項１２０のアミノ酸対。
【請求項１３０】
前記第一のアミノ酸がＢｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、およびニコチニル−から成る群から選択される保護基でブロックされ、前記第二のアミノ酸が、ｔＢｕおよびＯｔＢｕから成る群から選択される保護基でブロックされる、請求項１２０のアミノ酸対。
【請求項１３１】
各アミノ酸が少なくとも２つの保護基をもつ、請求項１２８のアミノ酸対。
【請求項１３２】
各アミノ酸が、Ｂｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、およびニコチニル−から成る群から選択される第一の保護基、およびｔＢｕおよびＯｔＢｕから成る群から選択される第二の保護基でブロックされるアミノ酸対。
【請求項１３３】
各アミノ酸がＢｏｃおよびＯｔＢｕでブロックされるアミノ酸対。
【請求項１３４】
前記アミノ酸対がＰｈｅ−Ａｒｇ、Ｇｌｕ−ＬｅｕおよびＡｒｇ−Ｇｌｕから成る群から選択されるジペプチドを形成する、請求項１２０のアミノ酸対。
【請求項１３５】
前記アミノ酸対が、Ｂｏｃ−Ａｒｇ−ＯｔＢｕ、Ｂｏｃ−Ｇｌｕ−ＯｔＢＵ、Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＯｔＢｕ、Ｂｏｃ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−ＯｔＢｕ、およびＢｏｃ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕから成る群から選択されるジペプチドを形成する、請求項１２０のアミノ酸対。
【請求項１３６】
請求項１、５、６、３１、５４、７６、９８、１１６、１１７および１１９に記載の１つ若しくは２つ以上のペプチド、または請求項１２０に記載のアミノ酸対、並びに医薬的に許容できる賦形剤を含む医薬製剤
【請求項１３７】
前記ペプチドが有効な用量で存在する、請求項１３６の医薬製剤。
【請求項１３８】
前記ペプチドが経時徐放製剤として存在する、請求項１３６の医薬製剤。
【請求項１３９】
前記製剤がユニット剤形製剤として製剤化される、請求項１３６の医薬製剤。
【請求項１４０】
前記製剤が経口投与のために製剤化される、請求項１３６の医薬製剤。
【請求項１４１】
前記製剤が、経口投与、吸入、直腸投与、腹腔内注射、血管内注射、皮下注射、経皮投与、吸入投与、筋肉内注射から成る群から選択される経路による投与のために製剤化される、請求項１３６の医薬製剤。
【請求項１４２】
請求項１、５、６、３１、５４、７６、９８、１１６、１１７および１１９に記載の１つ若しくは２つ以上のペプチド、または請求項１２０に記載のアミノ酸対、並びに炎症を特徴とする病変の治療に前記ペプチドまたはアミノ酸対の使用を教示する指示物を収納する容器を含むキット。
【請求項１４３】
前記病変が、アテローム性硬化症、慢性関節リウマチ、紅斑性狼瘡、結節性多発性動脈炎、骨粗しょう症、アルツハイマー病、慢性閉塞性肺疾患、喘息、多発性硬化症、糖尿病およびウイルス性疾患から成る群から選択される病変である、請求項１４２のキット。
【請求項１４４】
請求項１、５、６、３１、５４、７６、９８、１１６、１１７および１１９のペプチド、または請求項１２０のアミノ酸対の有効量を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物でアテローム性硬化症の１つまたは２つ以上の症状を緩和する方法。
【請求項１４５】
前記ペプチドが医薬的に許容できる賦形剤中に存在する、請求項１４４の方法。
【請求項１４６】
前記ペプチドが脂質と併用して投与される、請求項１４４の方法。
【請求項１４７】
前記ペプチドが経口投与のために適切な医薬的に許容できる賦形剤中に存在する、請求項１４４の方法。
【請求項１４８】
前記ペプチドがユニット剤形製剤として投与される、請求項１４４の方法。
【請求項１４９】
前記投与が、経口投与、吸入、直腸投与、腹腔内注射、血管内注射、皮下注射、経皮投与、および筋肉内注射から成る群から選択される経路によって前記ペプチドを投与することを含む、請求項１４４の方法。
【請求項１５０】
前記哺乳動物が、アテローム性硬化症の１つまたは２つ以上の症状を有すると診断された哺乳動物である、請求項１４４の方法。
【請求項１５１】
前記哺乳動物が、卒中またはアテローム性硬化症のリスクがあると診断された哺乳動物である、請求項１４４の方法。
【請求項１５２】
前記哺乳動物が人間である、請求項１４４の方法。
【請求項１５３】
前記哺乳動物が人間ではない哺乳動物である、請求項１４４の方法。
【請求項１５４】
請求項１、５、６、３１、５４、７６、９８、１１６、１１７および１１９のペプチド、または請求項１２０のアミノ酸対の有効量を哺乳動物に投与することを含む、炎症性病変の１つまたは２つ以上の症状を緩和する方法。
【請求項１５５】
前記炎症性病変が、アテローム性硬化症、慢性関節リウマチ、紅斑性狼瘡、結節性多発性動脈炎、骨粗しょう症、アルツハイマー病、多発性硬化症、慢性閉塞性肺疾患、喘息、糖尿病およびウイルス性疾患から成る群から選択される病変である、請求項１５４の方法。
【請求項１５６】
前記ペプチドが医薬的に許容できる賦形剤中に存在する、請求項１５４の方法。
【請求項１５７】
前記ペプチドが脂質と併用して投与される、請求項１５４の方法。
【請求項１５８】
前記ペプチドが経口投与のために適切な医薬的に許容できる賦形剤中に存在する、請求項１５４の方法。
【請求項１５９】
前記ペプチドがユニット剤形製剤として投与される、請求項１５４の方法。
【請求項１６０】
前記投与が、経口投与、吸入、直腸投与、腹腔内注射、血管内注射、皮下注射、経皮投与、および筋肉内注射から成る群から選択される経路によって前記ペプチドを投与することを含む、請求項１５４の方法。
【請求項１６１】
前記哺乳動物が、卒中のリスクがあると診断された哺乳動物である、請求項１５４の方法。
【請求項１６２】
前記哺乳動物が人間である、請求項１５４の方法。
【請求項１６３】
前記哺乳動物が人間ではない哺乳動物である、請求項１５４の方法。
【請求項１６４】
請求項１、５、６、３１、５４、７６、９８、１１６、１１７および１１９のペプチド、または請求項１２０のアミノ酸対の有効量をスタチンと併用投与することを含む、哺乳動物でスタチンの活性を強化する方法。
【請求項１６５】
前記スタチンが、セリバスタチン、アトルバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ロスバスタチンおよびピタバスタチンから成る群から選択される、請求項１６４の方法。
【請求項１６６】
前記ペプチドが、前記スタチンと同時に投与される、請求項１６４の方法。
【請求項１６７】
前記ペプチドが、前記スタチンの前に投与される、請求項１６４の方法。
【請求項１６８】
前記ペプチドが、前記スタチンの後に投与される、請求項１６４の方法。
【請求項１６９】
前記ペプチド及び／又は前記スタチンがユニット剤形製剤として投与される、請求項１６４の方法。
【請求項１７０】
前記投与が、経口投与、吸入、直腸投与、腹腔内注射、血管内注射、皮下注射、経皮投与、および筋肉内注射から成る群から選択される経路によって前記ペプチド及び／又は前記スタチンを投与することを含む、請求項１６４の方法。
【請求項１７１】
前記哺乳動物がアテローム性硬化症の１つまたは２つ以上の症状を有すると診断された哺乳動物である、請求項１６４の方法。
【請求項１７２】
前記哺乳動物が、卒中またはアテローム性硬化症のリスクがあると診断された哺乳動物である、請求項１６４の方法。
【請求項１７３】
前記哺乳動物が人間である、請求項１６４の方法。
【請求項１７４】
前記哺乳動物が人間でない哺乳動物である、請求項１６４の方法。
【請求項１７５】
哺乳動物でアテローム性硬化症に付随する１つまたは２つ以上の症状を緩和する方法であって、前記方法が、スタチンの有効量、並びに請求項１、５、６、３１、５４、７６、９８、１１６、１１７および１１９のペプチド、または請求項１２０のアミノ酸対の有効量を前記哺乳動物に投与することを含み、ここで前記スタチンの有効量は、前記ペプチド無しに投与されるスタチンの有効量より低い、前記１つまたは２つ以上の症状を緩和する方法。
【請求項１７６】
前記ペプチドの有効量が、前記スタチン無しに投与されるペプチドの有効量よりも低い、請求項１７５の方法。
【請求項１７７】
前記スタチンが、セリバスタチン、アトルバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ロスバスタチンおよびピタバスタチンから成る群から選択される、請求項１７５の方法。
【請求項１７８】
前記ペプチドが、前記スタチンと同時に投与される、請求項１７５の方法。
【請求項１７９】
前記ペプチドが、前記スタチンの前に投与される、請求項１７５の方法。
【請求項１８０】
前記ペプチドが、前記スタチンの後に投与される、請求項１７５の方法。
【請求項１８１】
前記ペプチド及び／又は前記スタチンがユニット剤形製剤として投与される、請求項１７５の方法。
【請求項１８２】
前記投与が前記組成物を経口的に投与することを含む、請求項１７５の方法。
【請求項１８３】
前記投与が、経口投与、吸入、直腸投与、腹腔内注射、血管内注射、皮下注射、経皮投与、および筋肉内注射から成る群から選択される経路による、請求項１７５の方法。
【請求項１８４】
前記哺乳動物がアテローム性硬化症の１つまたは２つ以上の症状を有すると診断された哺乳動物である、請求項１７５の方法。
【請求項１８５】
前記哺乳動物が、卒中またはアテローム性硬化症のリスクがあると診断された哺乳動物である、請求項１７５の方法。
【請求項１８６】
前記哺乳動物が人間である、請求項１７５の方法。
【請求項１８７】
前記哺乳動物が人間でない哺乳動物である、請求項１７５の方法。
【請求項１８８】
スタチン及び／又はエゼチミブ、並びに請求項１、５、６、３１、５４、７６、９８、１１６、１１７および１１９のいずれかに記載のペプチド若しくは前記ペプチドのコンカテマー、または請求項１２０に記載のアミノ酸対を含む医薬製剤。
【請求項１８９】
前記ペプチド及び／又は前記スタチンが有効な用量で存在する、請求項１８８の医薬製剤。
【請求項１９０】
前記スタチンの有効量が、前記ペプチド無しに投与されるスタチンの有効量よりも低い、請求項１８９の医薬製剤。
【請求項１９１】
前記ペプチドの有効量が、前記スタチン無しに投与されるペプチドの有効量よりも低い、請求項１８９の医薬製剤。
【請求項１９２】
前記エゼチミブの有効量が、前記ペプチド無しに投与されるエゼチミブの有効量よりも低い、請求項１８９の医薬製剤。
【請求項１９３】
前記ペプチドの有効量が、前記エゼチミブ無しに投与されるペプチドの有効量よりも低い、請求項１８９の医薬製剤。
【請求項１９４】
前記スタチンが、セリバスタチン、アトルバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ロスバスタチンおよびピタバスタチンから成る群から選択される、請求項１８８の医薬製剤。
【請求項１９５】
前記エゼチミブ、スタチン及び／又は前記ペプチドが経時放出製剤として存在する、請求項１８８の医薬製剤。
【請求項１９６】
前記製剤がユニット剤形製剤として製剤化される、請求項１８８の医薬製剤。
【請求項１９７】
前記製剤が経口投与のために製剤化される、請求項１８８の医薬製剤。
【請求項１９８】
前記製剤が、経口投与、吸入、直腸投与、腹腔内注射、血管内注射、皮下注射、経皮投与、および筋肉内注射から成る群から選択される経路による投与のために製剤化される、請求項１８８の医薬製剤。
【請求項１９９】
前記製剤がさらに１つまたは２つ以上のリン脂質を含む、請求項１８８の医薬製剤。
【請求項２００】
哺乳動物で骨粗しょう症の１つまたは２つ以上の症状を軽減または抑制する方法であって、前記方法は、請求項１、５、６、３１、５４、７６、９８、１１６、１１７および１１９に記載の１つ若しくは２つ以上のペプチドまたは請求項１２０に記載のアミノ酸対を前記動物に投与することを含み、ここで前記ペプチドまたはアミノ酸対は、骨粗しょう症の１つまたは２つ以上の症状を軽減または排除するために十分な濃度で投与される、前記骨粗しょう症の１つまたは２つ以上の症状を軽減または抑制する方法。
【請求項２０１】
前記ペプチドが、骨の脱灰を減少または排除するために十分な濃度で投与される、請求項２００の方法。
【請求項２０２】
前記ペプチドが、骨のカルシウム再沈着の誘発に十分な濃度で投与される、請求項２００の方法。
【請求項２０３】
前記ペプチドが薬理学的に許容できる賦形剤と混合される、請求項２００の方法。
【請求項２０４】
前記ペプチドが、哺乳動物への経口投与のために適切な薬理学的に許容できる賦形剤と混合される、請求項２００の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互引用
本出願はＵＳＳＮ１０／６４９，３７８（２００３年８月２６日出願）の部分継続出願であり、前記はＵＳＳＮ６０／４９４，４４９（２００３年８月１１日出願）に対し優先権を主張する。前記出願はいずれも参照によりその全体が本明細書に含まれる。
【０００２】
連邦政府の研究開発援助の下で達成された発明の権利に関する記述
本研究はＵｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｇ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  ａｎｄ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｒｔ，  Ｌｕｎｇ  ａｎｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  の補助金、グラントＨＬ３０５６８およびＨＬ３４３４３によって補助された。アメリカ合衆国政府は本発明に関して一定の権利を有する。
【０００３】
本発明は、アテローム性硬化症の分野に関する。特に本発明は、経口投与が可能であり、アテローム性硬化症の１つまたは２つ以上の症状を緩和するペプチド類の特定に関する。
【背景技術】
【０００４】
心脈管系疾患は、特に米国および西ヨーロッパの国々では罹患率および死亡率の主要な原因である。原因となるいくつかの因子が心脈管系疾患の発症で想定される。前記因子には前記疾患に対する遺伝性素因、性別、生活習慣因子（例えば喫煙および食事）、年齢、高血圧および高脂血症（高コレステロール血症を含む）が含まれる。これらの因子のいくつか、特に高脂血症および高コレステロール血症（高い血中コレステロール濃度）は、アテローム性硬化症に付随する重大なリスク因子を提供する。
【０００５】
コレステロールは、リポタンパク質粒子（一般的にはカイロミクロンとして知られている）、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）および高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）内で遊離およびエステル化コレステロールとして血中に存在する。血中の総コレステロール濃度は以下によって影響を受ける：（１）消化管からのコレステロールの吸収、（２）食事の構成成分（例えば炭水化物、タンパク質、脂肪およびエタノール）からのコレステロールの合成、および（３）組織（特に肝臓）による血液からのコレステロールの除去およびそれに続くコレステロールの胆汁酸、ステロイドホルモンおよび胆管コレステロールへの変換。
【０００６】
血中コレステロール濃度の維持は遺伝的因子および環境的因子の両方によって影響を受ける。遺伝的因子には、コレステロール生合成における律速酵素の濃度、肝臓の低密度リポタンパク質に対するレセプターの濃度、コレステロール胆汁酸の変換のための律速酵素の濃度、リポタンパク質の合成および分泌の速度並びに性別が含まれる。人間の血中コレステロール濃度のホメオスタシスに影響を与える環境的因子には、食事の成分、喫煙率、身体活動性、種々の医薬の使用が含まれる。食事に関する変数には脂肪の量およびタイプ（飽和およびポリ不飽和脂肪酸）、コレステロールの量、線維の量およびタイプ並びにおそらくはビタミン（例えばビタミンＣおよびＤ）およびミネラル（例えばカルシウム）の量が含まれる。
【０００７】
疫学的研究によって、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）およびアポリポタンパク質（アポ）Ａ−Ｉレベルとアテローム性硬化症の出現との反比例の関係が示されている（Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ８：７３７−７４１）。アテローム誘発性食事を与えられたウサギにＨＤＬを注射することによって、アテローム硬化症病巣形成が抑制されることが示された（Ｂａｄｉｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９０）  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ８５：１２３４−１２４１）。
【０００８】
ヒトのアポＡ−Ｉは、その抗アテローム誘発特性のために重点的研究の主題であった。交換可能なアポリポタンパク質（アポＡ−Ｉを含む）は脂質結合ドメインを有する（Ｂｒｏｕｉｌｌｅｔｔｅ  ａｎｄ  Ａｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈ  （１９９５）  Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ａｃｔａ  １２５６：１０３−１２９；Ｓｅｇｒｅｓｔ  ｅｔ  ａｌ．  （１９７４）  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  ３８：２４７−２５３）。アポＡ−Ｉは、２２量体配列の８つの縦並びの繰り返しを有し、それらの大半はクラスＡ両親媒性ヘリックス構造を形成する潜在能力を有すると説明されてきた（Ｓｅｇｒｅｓｔ  ｅｔ  ａｌ．  （１９７４）  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  ３８：２４７−２５３）。クラスＡ両親媒性ヘリックスの特徴は、極性−非極性境界面に陽性荷電残基および極性面の中央に陰性荷電残基の存在を含む（Ｓｅｇｒｅｓｔ  ｅｔ  ａｌ．  （１９７４）  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  ３８：２４７−２５３；Ｓｅｇｒｅｓｔ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９０）  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ８：１０３−１１７）。アポＡ−Ｉはリン脂質と強力に結合して複合体を形成し、さらにコレステロール富裕細胞からコレステロールの流出を促進することが示された。アテローム硬化症の１つまたは２つ以上を効果的に緩和するためのアポＡ−Ｉの送達および血清レベルの維持はこれまで困難であった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
発明の要旨
本発明は新規なペプチドおよびアミノ酸対を提供し、前記の投与は、アテローム性硬化症および他の炎症性症状、例えば慢性関節リウマチ、紅斑性狼瘡、結節性多発性動脈炎、骨粗しょう症、アルツハイマー病、うっ血性心不全、内皮機能障害、ウイルス性疾患（例えばインフルエンザＡ）および多発性硬化症のような疾患の１つまたは２つ以上の症状を緩和する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
ある種の実施態様では、本発明の発見は、クラスＡ両親媒性ヘリックスを含むペプチドは、“Ｄ”アミノ酸残基で製剤化されたとき、及び／又は保護アミノおよびカルボキシル末端を有するとき、生物に経口投与することができ、容易に吸収されて血清にデリバーされ、さらにアテローム性硬化症の１つまたは２つ以上の症状の緩和に有効であるということであった。ある種の実施態様では、前記ペプチドは全て“Ｌ”アミノ酸残基で製剤化することができ、それでもなお、有効である（特に経口投与以外の他のルートで投与されるとき）。
【００１１】
さらにまた見出されたことは、“小さな”ペプチド（例えば長さが約３アミノ酸から約１１アミノ酸の範囲）もまた、アテローム性硬化症または炎症性反応を特徴とする他の病的状態の１つまたは２つ以上の症状を緩和することができ、前記小さなペプチドは、本明細書に記載したように、疎水性末端アミノ酸または１つ若しくは２つ以上の疎水性封鎖基によって疎水性にさせられた末端アミノ酸を有し、さらに内部の酸性及び／又は塩基性及び／又は脂肪族、及び／又は芳香族アミノ酸を有する。
【００１２】
本発明のペプチド及び／又はアミノ酸対は、典型的には、プレ−ベータ高密度リポタンパク質様粒子の形成およびサイクル進行を刺激し、及び／又は脂質輸送および解毒を促進するために有効である。
【００１３】
本明細書に記載したペプチド及び／又はアミノ酸対はまた骨粗しょう症の１つまたは２つ以上の症状の開始の予防または抑制または排除に有効である。
【００１４】
さらにまた、驚くべき発見は、前記ペプチド及び／又はアミノ酸対を用いて、スタチン及び／又はエゼチミブ（Ｅｚｅｔｉｍｉｂｅ）または他のコレステロール取り込み阻害剤の活性を強化し（例えば相乗的に強化し）、それによってスタチンまたはコレステロール取り込み阻害剤のより低用量での使用を有効にし、及び／又はスタチンまたはコレステロール取り込み阻害剤の抗炎症性をいずれの投与用量においても顕著に強化することができるということであった。
【００１５】
ある種の実施態様では、本発明はペプチド、またはペプチド及び／又はアミノ酸対の組合せを提供し、前記は炎症症状（例えばアテローム性硬化症、慢性関節リウマチ、紅斑性狼瘡、結節性多発性動脈炎、骨粗しょう症、アルツハイマー病、ウイルス性疾患、喘息、糖尿病など）の１つまたは２つ以上の症状を緩和する。ある種の好ましいペプチドは長さが３から約５アミノ酸であり；酢酸エチルに約４ｍｇ／ｍＬを超える濃度で可溶性であり；ｐＨ７．０の水性緩衝液に可溶性であり；水性環境でリン脂質と接触させたとき直径約７．５ｎｍの粒子を形成し、及び／又は３．４から４．１ｎｍの規模の二重層の寸法をもつ積層二重層を形成し、前記積層二重層の間に約２ｎｍの間隙を有し；約９００ダルトン未満の分子量を有し；前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、または抗炎症性ＨＤＬをより一層抗炎症性にし；さらにアミノ酸配列Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ（配列番号：２３８）を有することはない（ここでＬｙｓ−Ａｒｇ−ＡｓｐおよびＳｅｒは全てＬアミノ酸である）。ある種の実施態様では、これらのペプチドは、リン脂質（例えば１−パルミトイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン（ＰＡＰＣ）、１−ステアロイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン（ＳＡＰＣ））および１−ステアロイル−２−アラキドニル−ｓｎ−グリセ−３−ホスホリルエタノールアミン（ＳＡＰＥ）を保護する。ある種の実施態様では、これらのペプチドは本明細書に記載した小さなペプチドのいずれも含むことができるが、ただしこれらに限定されるとは限らない。
【００１６】
ある種の実施態様では、本発明は、ペプチド、またはペプチド及び／又はアミノ酸対の組合せを提供し、前記は炎症症状（例えばアテローム性硬化症、慢性関節リウマチ、紅斑性狼瘡、結節性多発性動脈炎、骨粗しょう症、アルツハイマー病、ウイルス性疾患、喘息、糖尿病など）の１つまたは２つ以上の症状を緩和する。ある種の好ましいペプチドは、式Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3n−Ｘ4を特徴とし、式中、ｎは０または１であり、Ｘ1は疎水性アミノ酸であるか、及び／又は疎水性保護基をもち；Ｘ4は疎水性アミノ酸であるか、及び／又は疎水性保護基をもち；さらに、ｎが０のときはＸ2は、酸性アミノ酸、塩基性アミノ酸およびヒスチジンから成る群から選択されるアミノ酸であり；ｎが１のときはＸ2およびＸ3はそれぞれ独立に酸性アミノ酸、塩基性アミノ酸、脂肪族アミノ酸または芳香族アミノ酸であり、Ｘ2が酸性アミノ酸であるときは、Ｘ3は塩基性アミノ酸、脂肪族アミノ酸、または芳香族アミノ酸であり；Ｘ2が塩基アミノ酸であるときは、Ｘ3は酸性アミノ酸、脂肪族アミノ酸、または芳香族アミノ酸であり；さらにＸ2が脂肪族または芳香族アミノ酸であるときは、Ｘ3は酸性アミノ酸または塩基性アミノ酸である。ある種の好ましいペプチドは、前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、または抗炎症性ＨＤＬをより一層抗炎症性にする。ある種の実施態様では、前記ペプチドは、アミノ酸配列Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ（配列番号：２３８）を有することはない（ここでＬｙｓ、Ａｒｇ、ＡｓｐおよびＳｅｒは全てＬアミノ酸である）。本発明のペプチドは、上記の式のペプチド、及び／又は上記の式のペプチドを含むペプチド、及び／又はそのようなペプチドのコンカテマーを含む。
【００１７】
ある種の実施態様では、Ｘ1およびＸ4はそれぞれ独立に以下から成る群から選択される：アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、プロリン（Ｐｒｏ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、疎水性保護基をもつセリン（Ｓｅｒ）、ベータ−ナフチルアラニン、アルファ−ナフチルアラニン、ノルロイシン、シクロヘキシルアラニン、疎水性保護基を持つスレオニン（Ｔｈｒ）、疎水性保護基を持つチロシン（Ｔｙｒ）、疎水性保護基を持つリジン（Ｌｙｓ）、疎水性保護基を持つアルギニン（Ａｒｇ）、疎水性保護基を持つオルニチン（Ｏｒｎ）、疎水性保護基を持つアスパラギン酸（Ａｓｐ）、疎水性保護基を持つシステイン（Ｃｙｓ）および疎水性保護基を持つグルタミン酸（Ｇｌｕ）。
【００１８】
ある種の実施態様では、前記ペプチドはトリマーである（すなわちｎは０）。ある種のトリマーでは、Ｘ1はＧｌｕ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ｐｈｅ、ＴｒｐまたはｎｏｒＬｅｕであり；Ｘ2は酸性（例えばアスパラギン酸、グルタミン酸など）または塩基性（例えばリジン、アルギニン、ヒスチジンなど）であり；Ｘ4はＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、ｎｏｒＬｅｕである。ある種の実施態様では、前記ペプチドは表３に挙げたペプチドのアミノ酸配列を含む。ある種の実施態様では、前記ペプチドは表３に示す保護されたトリマーである。
【００１９】
ある種の実施態様では、ｎは１であり前記ペプチドはテトラマーであるか、またはテトラマーを含み、その中ではＸ2およびＸ3はそれぞれ独立に酸性アミノ酸または塩基性アミノ酸であって、Ｘ2が酸性アミノ酸のときＸ3は塩基性アミノ酸であり、Ｘ2が塩基性アミノ酸のときＸ3は酸性アミノ酸であり、Ｘ1およびＸ4は、それぞれ独立に選択された例えば上記に示したようなアミノ酸を含むことができる。ある種の実施態様では、Ｘ2およびＸ3は、それぞれ独立にＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、ＡｒｇおよびＨｉｓから選択される。ある種の実施態様では、前記ペプチドは表４に挙げたペプチドのアミノ酸配列を含む。ある種の実施態様では、前記ペプチドは表４に示す保護されたテトラマーである。
【００２０】
なお別の実施態様では、ｎは１であり前記ペプチドはテトラマーであるか、またはテトラマーを含み、その中ではＸ2およびＸ3はそれぞれ独立に酸性、塩基性または脂肪族アミノ酸であって、Ｘ2またはＸ3の１つは酸性または塩基性アミノ酸であり、Ｘ2が酸性または塩基性アミノ酸であるときＸ3は脂肪族アミノ酸であり、さらにＸ3が酸性または塩基性アミノ酸であるときＸ2は脂肪族アミノ酸である。Ｘ1およびＸ4は、それぞれ独立に選択された例えば上記に示したようなアミノ酸を含むことができる。ある種の実施態様では、Ｘ2およびＸ3は、それぞれ独立にＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、ＨｉｓおよびＩｌｅから成る群からから選択され、より好ましくはＡｓｐ、Ａｒｇ、ＬｅｕおよびＧｌｕから成る群から選択される。ある種の実施態様では、前記ペプチドは表５に挙げたペプチドのアミノ酸配列を含む。ある種の実施態様では、前記ペプチドは表５に示す保護されたテトラマーである。
【００２１】
別の実施態様では、ｎは１であり前記ペプチドはテトラマーであるか、またはテトラマーを含み、その中ではＸ2、Ｘ3はそれぞれ独立に酸性、塩基性または芳香族アミノ酸であって、Ｘ2またはＸ3の１つは酸性または塩基性アミノ酸であり、Ｘ2が酸性または塩基性アミノ酸であるときＸ3は芳香族アミノ酸であり、さらにＸ3が酸性または塩基性アミノ酸であるときＸ2は芳香族アミノ酸である。Ｘ1およびＸ4は、それぞれ独立に選択された例えば上記に示したようなアミノ酸を含むことができる。ある種の実施態様では、Ｘ2およびＸ3は、それぞれ独立にＡｓｐ、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、およびＬｙｓから成る群からから選択される。ある種の実施態様では、前記ペプチドは表６に挙げたペプチドのアミノ酸配列を含む。ある種の実施態様では、前記ペプチドは表６に示す保護されたテトラマーである。
【００２２】
本発明はまた、式Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5を特徴とするペンタマー（５量体）であるか、またはペンタマーを含むペプチドを提供する。式中、Ｘ1は疎水性アミノ酸であるか、及び／又は疎水性保護基を有し；Ｘ5は疎水性アミノ酸であるか、及び／又は疎水性保護基を有し；さらにＸ2、Ｘ3およびＸ4は、それぞれ独立に選択される芳香族アミノ酸またはヒスチジンであり；さらに前記ペプチドは前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、または抗炎症性ＨＤＬをより一層抗炎症性にする。ある種の実施態様では、Ｘ1およびＸ5はそれぞれ独立に以下から成る群から選択される：アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、プロリン（Ｐｒｏ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、疎水性保護基をもつセリン（Ｓｅｒ）、ベータ−ナフチルアラニン、アルファ−ナフチルアラニン、ノルロイシン、シクロヘキシルアラニン、疎水性保護基を持つスレオニン（Ｔｈｒ）、疎水性保護基を持つチロシン（Ｔｙｒ）、疎水性保護基を持つリジン（Ｌｙｓ）、疎水性保護基を持つアルギニン（Ａｒｇ）、疎水性保護基を持つオルニチン（Ｏｒｎ）、疎水性保護基を持つアスパラギン酸（Ａｓｐ）、疎水性保護基を持つシステイン（Ｃｙｓ）および疎水性保護基を持つグルタミン酸（Ｇｌｕ）。ある種の実施態様では、Ｘ2、Ｘ3およびＸ4は、それぞれ独立にＰｈｅ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、ＴｙｒおよびＨｉｓから成る群から選択される。ある種の実施態様では、前記ペプチドは表７に挙げたペプチドのアミノ酸配列を含む。ある種の実施態様では、前記ペプチドは表７に示す保護されたテトラマーである。
【００２３】
本発明はまた、炎症性症状の１つまたは２つ以上の症状を緩和するより大きなペプチドを提供する。ある種の実施態様では、前記ペプチドは長さが５から１１アミノ酸の範囲であり；末端アミノ酸は疎水性アミノ酸であるか、及び／又は疎水性保護基を有し；非末端アミノ酸は少なくとも１つの酸性ドメインおよび少なくとも１つの塩基性ドメインを形成し；さらに前記ペプチドは、前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、または抗炎症性ＨＤＬをより一層抗炎症性にする。
【００２４】
ある種の実施態様では、前記ペプチドは長さが５から１１アミノ酸の範囲であり；末端アミノ酸は疎水性アミノ酸であるか、及び／又は疎水性保護基を有し；非末端アミノ酸は少なくとも１つの酸性ドメインまたは１つの塩基性ドメインおよび少なくとも１つの脂肪族ドメインを形成し；さらに前記ペプチドは、前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、または抗炎症性ＨＤＬをより一層抗炎症性にする。
【００２５】
他の実施態様では、前記ペプチドは長さが５から１１アミノ酸の範囲であり；末端アミノ酸は疎水性アミノ酸であるか、及び／又は疎水性保護基を有し；非末端アミノ酸は少なくとも１つの酸性ドメインまたは１つの塩基性ドメインおよび少なくとも１つの芳香族ドメインを形成し；さらに前記ペプチドは、前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、または抗炎症性ＨＤＬをより一層抗炎症性にする。
【００２６】
さらに他の実施態様では、前記ペプチドは長さが６から１１アミノ酸の範囲であり；末端アミノ酸は疎水性アミノ酸であるか、及び／又は疎水性保護基を有し；非末端アミノ酸は少なくとも１つの芳香族ドメインまたは１つ若しくは２つ以上のヒスチジンによって分離された２つ若しくは３つ以上の芳香族ドメインを形成し；さらに前記ペプチドは、前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、または抗炎症性ＨＤＬをより一層抗炎症性にする。
【００２７】
本発明はまた、炎症性症状の１つまたは２つ以上の症状を緩和するペプチドを提供し、前記ペプチドは１つまたは２つ以上の両親媒性ヘリックスを含む。したがって、本発明は、長さが約１０から約３０アミノ酸、好ましくは約１８から約３０アミノ酸の範囲であり；少なくとも１つのクラスＡの両親媒性ヘリックスを含み；１つまたは２つ以上の脂肪族または芳香族アミノ酸を前記両親媒性ヘリックスの非極性面の中心に含み；酸化剤による酸化からリン脂質を保護し；さらにＤ−１８Ａペプチドではないペプチドまたはペプチドのコンカテマーを含む。ある種の実施態様では、前記ペプチドは、表２または表１２に挙げたペプチドのアミノ酸配列を含む。ある種の実施態様では、前記ペプチドは、表２または表１２に示す保護されたテトラマーである。
【００２８】
ある種の実施態様では、本発明のペプチドは、リン脂質（例えば１−パルミトイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン（ＰＡＰＣ）、１−ステアロイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン（ＳＡＰＣ））、１−ステアロイル−２−アラキドニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルエタノールアミン（ＳＡＰＥ）を、酸化剤（例えば１３（Ｓ）−ＨＰＯＤＥ、１５（Ｓ）−ＨＰＥＴＥ、ＨＰＯＤＥ、ＨＰＥＴＥ、ＨＯＤＥ、ＨＥＴＥなど）による酸化から保護する。
【００２９】
本明細書に記載したペプチドのいずれも１つまたは２つ以上の疎水性保護基をアミノ末端アミノ酸（例えばＸ1）上に、及び／又はカルボキシ末端アミノ酸（例えばＸ4、Ｘ5など）上にもつことができる、前記保護基は、アミノ酸のアミノまたはカルボキシ末端に、及び／又は側鎖（Ｒ基）に結合させることができる。前記保護基は直接結合させてもよいし（例えば共有結合を介する）、または間接的に結合させてもよい（例えばリンカーを介する）。好ましい疎水性保護基には以下が含まれる（ただしこれらに限定されない）：ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、Ｆｍｏｃ、ニコチニル、ＯｔＢｕ、ベンゾイル基、アセチル（Ａｃ）、カルボベンゾキシ、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルエステル、Ｎ−メチルアントラニリル、および３から２０の炭素のアルキル、アミド、３から２０の炭素のアルキル基、９−フルオレンアセチル基、１−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレン−１−カルボン酸基、ベンジルオキシカルボニル（上記で述べたようにカルボベンゾキシとも称される）、キサンチル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルフォニル（Ｍｔｒ）、メシチレン−２−スルフォニル（Ｍｔｓ）、４，４−ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルフォニル（Ｐｍｃ）、４−メチルベンジル（ＭｅＢｚｌ）、４−メトキシベンジル（ＭｅＯＢｚｌ）、ベンジルオキシ（ＢｚｌＯ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル（Ｄｄｅ）、２，６−ジクロロベンジル（２，６−ＤｉＣｌ−Ｂｚｌ）、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（２−Ｂｒ−Ｚ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、シクロヘキシルオキシ（ｃＨｘＯ）、ｔ−ブトキシメチル（Ｂｕｍ）、ｔ−ブトキシ（ｔＢｕＯ）、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、トリフルオロアセチル（ＴＦＡ）、４［Ｎ−｛１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）−３−メチルジブチル｝−アミノ］ベンジルエステル（ＯＤｍａｂ）、α−アリルエステル（ＯＡｌｌ）、２−フェニルイソプロピルエステル（２−ＰｈｉＰｒ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキシシクロヘキサ−１−イル−イデン）エチル（Ｄｄｅ）など。ある種の実施態様では、前記疎水性保護基は、Ｂｏｃ、Ｆｍｏｃ、ニコチニルおよびＯｔＢｕから成る群から選択される。ある種の実施態様では、前記ペプチドのＮ−末端は、Ｂｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、およびニコチニル−から成る群から選択される保護基でブロックされ、及び／又は前記ペプチドのＣ−末端はｔＢｕおよびＯｔＢｕから成る群から選択される保護基でブロックされる。
【００３０】
前記ペプチドはまた場合によって少なくとも１つのＤアミノ酸を含みうる。ある種の実施態様では、前記ペプチドは複数のＤアミノ酸を含むか、または全てＤアミノ酸を含むことすらできる。ある種の実施態様では、前記ペプチドはＤ−およびＬ−アミノ酸を交互に含む。前記ペプチドはまた全てがＬ型アミノ酸でもよい。前記ペプチドはまた単離されてあっても（例えば実質的に純粋）、乾燥物でも、または溶液中に存在していても、及び／又は薬理学的に許容できる賦形剤と混合されていてもよい。ある種の実施態様では、前記ペプチドは、哺乳動物（例えばヒトまたはヒトではない哺乳動物）の経口投与に適した薬理学的に許容できる賦形剤と混合される。前記ペプチドは、薬理学的に許容できる賦形剤中のユニット製剤として、及び／又は経時放出製剤として提供することができる。
【００３１】
前記ペプチドはまた、１つまたは２つ以上のビオチンと結合させることができる（例えば直接、リンカーを介して、及び／又はアミノ酸側鎖を介して）。ある種の実施態様では、前記ビオチンはリジン（Ｌｙｓ）と結合される。
【００３２】
ある種の実施態様では、本発明はまた、炎症性症状の１つまたは２つ以上の症状を緩和するアミノ酸対を提供する。前記アミノ酸対は、典型的には、少なくとも１つの保護基をもつ第一のアミノ酸；および少なくとも１つの保護基をもつ第二のアミノ酸を含み、ここで前記第一のアミノ酸および第二のアミノ酸は異なる種のアミノ酸であり、さらに前記アミノ酸対は、前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、または抗炎症性ＨＤＬをより一層抗炎症性にする。種々の実施態様では、前記アミノ酸対は、水性環境下でリン脂質と接触させたとき、直径約７．５ｎｍの粒子を形成し、さらに二重層の寸法が３．４から４．１ｎｍの規模の積層二重層を形成し、前記積層二重層の間に約２ｎｍの間隙を有する。ある種の実施態様では、前記第一および第二のアミノ酸はそれぞれ独立に、酸性アミノ酸、塩基性アミノ酸および非極性アミノ酸から成る群から選択される。ある種の実施態様では、第一のアミノ酸は酸性または塩基性で、第二のアミノ酸は非極性であるか、または第一のアミノ酸は非極性で、第二のアミノ酸は酸性または塩基性である。ある種の実施態様では、両アミノ酸が酸性または塩基性である。第一および第二のアミノ酸は、場合によって共有結合により一緒に、例えば直接またはリンカーを介して結合されることができる。ある種の実施態様では、アミノ酸はペプチド結合によって結合され、それによってジペプチドを形成する。ある種の実施態様では、第一のアミノ酸および第二のアミノ酸は一緒に混合されるが、共有結合によって結合されない。保護基は本明細書に記載した保護基のいずれかを含むが、ただしこれらに限定されない。ある種の実施態様では、第一のアミノ酸は、Ｂｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、およびニコチニル−から成る群から選択される保護基でブロックされ、さらに第二のアミノ酸はｔＢｕおよびＯｔＢｕから成る群から選択される保護基でブロックされる。ある種の実施態様では、各アミノ酸は少なくとも２つの保護基をもつ。ある種の実施態様では、各アミノ酸は、Ｂｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、およびニコチニル−から成る群から選択される第一の保護基、およびｔＢｕおよびＯｔＢｕから成る群から選択される第二の保護基でブロックされる。ある種の実施態様では、各アミノ酸はＢｏｃおよびＯｔＢｕでブロックされる。種々の実施態様では、アミノ酸対は、Ｐｈｅ−Ａｒｇ、Ｇｌｕ−Ｌｅｕ、およびＡｒｇ−Ｇｌｕから成る群から選択されるジペプチドを形成する。ある種の実施態様では、アミノ酸対は、Ｂｏｃ−Ａｒｇ−ＯｔＢｕ、Ｂｏｃ−Ｇｌｕ−ＯｔＢＵ、Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＯｔＢｕ、Ｂｏｃ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−ＯｔＢｕ、およびＢｏｃ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕから成る群から選択されるジペプチドを形成する。
【００３３】
本発明はまた、本明細書に記載した１つまたは２つ以上のペプチド、及び／又はアミノ酸対、並びに医薬的に許容できる賦形剤を含む医薬製剤を提供する。典型的には、前記ペプチド及び／又はアミノ酸対は有効な用量で存在する。前記ペプチド及び／又はアミノ酸対はまた経時徐放製剤として及び／又はユニット剤形製剤として提供することができる。ある種の実施態様では、前記製剤は経口投与のために製剤化される。ある種の実施態様では、前記製剤は、経口投与、吸入（例えば鼻内投与または口腔内吸入など）、直腸投与、腹腔内注射、血管内注射、皮下注射、経皮投与、吸入投与、筋肉内注射などから成る群から選択される経路による投与のために製剤化される。
【００３４】
さらにまた提供されるものは、本明細書に記載した１つまたは２つ以上のペプチド及び／又はアミノ酸対、並びに炎症（例えばアテローム性硬化症、慢性関節リウマチ、紅斑性狼瘡、結節性多発性動脈炎、喘息、骨粗しょう症、アルツハイマー病、ウイルス性疾患など）を特徴とする病変の治療に前記ペプチド及び／又はアミノ酸対の使用を教示する指示物を収納する容器を含むキットである。
【００３５】
本発明はまた、哺乳動物（ヒトまたはヒトではない哺乳動物）でアテローム性硬化症の１つまたは２つ以上の症状を緩和する（例えば軽減させるかまたは排除する）方法を提供する。前記方法は、典型的には前記哺乳動物に有効な量の１つまたは２つ以上の本明細書に記載のペプチド及び／又はアミノ酸対を投与することを伴う。前記ペプチド及び／又はアミノ酸対は医薬的に許容できる（例えば経口投与のための）賦形剤中で投与することができ、さらに場合によっては脂質と併用して（例えば前、後または同時に）投与することができる。前記投与は、経口投与、吸入（例えば鼻内投与または口腔内吸入など）、直腸投与、腹腔内注射、血管内注射、皮下注射、経皮投与、および筋肉内注射から成る群から選択される経路によって前記ペプチド及び／又はアミノ酸対を投与することを含むことができる。ある種の実施態様では、前記哺乳動物は、アテローム性硬化症の１つまたは２つ以上の症状を有すると診断された哺乳動物である。ある種の実施態様では、前記哺乳動物は、卒中またはアテローム性硬化症のリスクがあると診断された哺乳動物である。
【００３６】
別の実施態様では、本発明は、炎症性病変（例えばアテローム性硬化症、慢性関節リウマチ、紅斑性狼瘡、結節性多発性動脈炎、骨粗しょう症、多発性硬化症、糖尿病、喘息、アルツハイマー病、ウイルス性疾患など）の１つまたは２つ以上の症状を緩和する方法を提供する。前記方法は、典型的には前記哺乳動物に有効な量の１つまたは２つ以上の本明細書に記載のペプチド及び／又はアミノ酸対を投与することを伴う。前記ペプチド及び／又はアミノ酸対は医薬的に許容できる（例えば経口投与のための）賦形剤中で投与することができ、さらに場合によっては脂質と併用して（例えば前、後または同時に）投与することができる。前記投与は、経口投与、吸入、直腸投与、腹腔内注射、血管内注射、皮下注射、経皮投与、および筋肉内注射から成る群から選択される経路によって前記ペプチド及び／又はアミノ酸対を投与することを含むことができる。ある種の実施態様では、前記哺乳動物は、炎症性病変の１つまたは２つ以上の症状を有すると診断された哺乳動物である。ある種の実施態様では、前記哺乳動物は、炎症性病変のリスクがあると診断された哺乳動物である。
【００３７】
本発明のペプチド及び／又はアミノ酸対はまた、スタチン及び／又は選択的コレステロール取り込み阻害物質（例えばエゼチミブ）と相乗的に作用する。前記方法は典型的には、有効量の１つまたは２つ以上の本明細書に記載のペプチドとスタチン及び／又はコレステロール取り込み阻害物質との併用投与を伴う。ある種の実施態様では、前記スタチンは、セリバスタチン、アトルバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ロスバスタチンおよびピタバスタチンから成る群から選択される。前記ペプチドは、スタチン及び／又はコレステロール取り込み阻害物質と同時に、またはその前、その後に投与することができる。前記ペプチド及び／又は前記スタチン及び／又はコレステロール取り込み阻害物質はユニット剤形製剤として投与することができる。ある種の実施態様では、前記投与は、経口投与、鼻内投与、直腸投与、腹腔内注射、血管内注射、皮下注射、経皮投与、および筋肉内注射から成る群から選択される経路によって前記ペプチド及び／又は前記スタチンを投与することを含む。前記哺乳動物は、アテローム性硬化症の１つまたは２つ以上の症状を有すると診断されたか、または卒中若しくはアテローム性硬化症のリスクがあると診断された哺乳動物を含むが、ただし前記に限定されない。
【００３８】
本発明はまた、アテローム性硬化症に付随する１つまたは２つ以上の症状を哺乳動物で緩和する方法を提供する。前記方法は、典型的にはスタチン及び／又は選択的コレステロール取り込み阻害物質；および有効量の１つまたは２つ以上の本明細書に記載のペプチド及び／又はアミノ酸対を投与することを必要とし、ここで前記スタチン及び／又はコレステロール取り込み阻害物質の有効量は、前記ペプチド及び／又はアミノ酸対無しに投与されるスタチンまたはコレステロール取り込み阻害物質の有効量より低い。ある種の実施態様では、前記ペプチド及び／又はアミノ酸対の有効量は、前記スタチン及び／又はコレステロール取り込み阻害物質無しに投与される前記ペプチド及び／又はアミノ酸対の有効量よりも低い。ある種の実施態様では、前記スタチンは、セリバスタチン、アトルバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ロスバスタチンおよびピタバスタチンから成る群から選択される。前記ペプチドは、スタチン及び／又はコレステロール取り込み阻害物質と同時にまたはその前、その後に投与することができる。前記ペプチド、及び／又はアミノ酸対、及び／又は前記スタチン及び／又はコレステロール取り込み阻害物質はユニット剤形製剤として投与することができる。ある種の実施態様では、前記投与は、経口投与、吸入、直腸投与、腹腔内注射、血管内注射、皮下注射、経皮投与、および筋肉内注射から成る群から選択される経路によって前記ペプチド、及び／又はアミノ酸対、及び／又は前記スタチンを投与することを含む。前記哺乳動物は、アテローム性硬化症の１つまたは２つ以上の症状を有すると診断されたか、または卒中若しくはアテローム性硬化症のリスクがあると診断された哺乳動物を含むが、ただし前記に限定されない。前記哺乳動物は、アテローム性硬化症の１つまたは２つ以上の症状を有すると診断されたか、または卒中若しくはアテローム性硬化症のリスクがあると診断された哺乳動物を含むが、ただし前記に限定されない。
【００３９】
さらに別の実施態様では、本発明は、骨粗しょう症の１つまたは２つ以上の症状を哺乳動物で軽減または抑制する方法を提供する。前記方法は、典型的には本明細書に記載の１つまたは２つ以上のペプチド及び／又はアミノ酸対を投与することを必要とし、ここで前記ペプチド及び／又はアミノ酸対は、骨粗しょう症の１つまたは２つ以上の症状を軽減または排除するために十分な濃度で投与される。ある種の実施態様では、前記ペプチド及び／又はアミノ酸対は、骨の脱灰を低下または排除するために十分な濃度で投与される。ある種の実施態様では、前記ペプチド及び／又はアミノ酸対は骨のカルシウム再沈着の誘発に十分な濃度で投与される。前記ペプチド及び／又はアミノ酸対は、薬理学的に許容できる賦形剤（例えば哺乳動物への経口投与に適した賦形剤）と混合することができる。
【００４０】
ある種の実施態様では、本発明の方法及び／又はペプチドは、ＷＯ９７／３６９２７及び／又は米国特許６，０３７，３２３号及び／又は６，３７６，４６４号及び／又は６，７５３，３１３号及び／又はＧａｒｂｅｒらの論文（Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ，  １２：８８６−８９４）に開示されたペプチドの一切を除外する。ある種の実施態様では、本発明は、米国特許４，６４３，９８８号及び／又はＧａｒｂｅｒら（１９９２）の論文に開示されたペプチドの一切を除外する（前記ペプチドは、全てＬアミノ酸である鏡像体アミノ酸により合成されたか、またはＤアミノ酸を用いて合成されたものでこの場合前記ペプチドは封鎖基である）。ある種の実施態様では、本発明は、式Ａ1−Ｂ1−Ｂ2−Ｃ1−Ｄ−Ｂ3−Ｂ4−Ａ2−Ｃ2−Ｂ5−Ｂ6−Ａ3−Ｃ3−Ｂ7−Ｃ4−Ａ4−Ｂ8−Ｂ9（配列番号：１）を有するペプチドを除外する。前記式中で、Ａ1、Ａ2、Ａ3およびＡ4はそれぞれ独立にアスパラギン酸またはグルタミン酸、またはそれらの同族体または類似体であり；Ｂ1、Ｂ2、Ｂ3、Ｂ4、Ｂ5、Ｂ6、Ｂ7、Ｂ8およびＢ9はそれぞれ独立にトリプトファン、フェニルアラニン、アラニン、ロイシン、チロシン、イソロイシン、バリンまたはα−ナフチルアラニン、またはそれらの同族体または類似体であり；Ｃ1、Ｃ2、Ｃ3およびＣ4はそれぞれ独立にリジンまたはアルギニンであり、Ｄはセリン、スレオニン、アラニン、グリシン、ヒスチジン、またはそれらの同族体または類似体であるが；ただし、Ａ1およびＡ2がアスパラギン酸であり、Ａ3およびＡ4がグルタミン酸であり、B2およびＢ9がロイシンであり、Ｂ3およびＢ7がフェニルアラニンであり、Ｂ4がチロシンであり、Ｂ5がバリンであり、Ｂ6、Ｂ8およびＤがアラニンであり、さらにＣ1、Ｃ2、Ｃ3およびＣ4がリジンであり、Ｂ1がトリプトファンでないことを条件とする。ある種の実施態様では、本発明は上述のペプチドの１つまたは２つ以上を排除することがあり得るが、配列番号：８（の４ＦまたはＤ４Ｆ）のペプチドは明示的に除外されるであろう。
【００４１】
ある種の実施態様では、本発明はＷＯ９７／３６９２７の一切のペプチド及び／又はそれらのＤ型変種を除外する。個々の実施態様は下記の１つまたは２つ以上を除外する：アポプロテインＡ、アポプロテインＡ−１、アポプロテインＡ−２、アポプロテインＡ４、アポプロテインＢ、アポプロテインＢ−４８、アポプロテインＢ−１００、アポプロテインＣ、アポプロテインＣ−１、アポプロテインＣ−２、アポプロテインＣ−３、アポプロテインＤ、アポプロテインＥ（ＷＯ９７／３６９２７に記載）。
【００４２】
ある種の実施態様では、さらにまた米国特許６，０３７，３２３号に開示された一切のペプチド及び／又はそれらのＤ型変種を除外する。個々の実施態様は、以下を含むアポＡ−Ｉアゴニスト化合物を除外する：（ｉ）１８から２２残基のペプチドまたはペプチド類似体で、脂質の存在下でα−ヘリックスを形成し、さらに式Ｚ1−Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−Ｘ7−Ｘ8−Ｘ9−Ｘ10−Ｘ11−Ｘ12−Ｘ13−Ｘ14−Ｘ15−Ｘ16−Ｘ17−Ｘ18−Ｚ2（配列番号：２）を含むもの（式中Ｘ1はＰｒｏ（Ｐ）、Ａｌａ（Ａ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）またはＤ−Ｐｒｏ（Ｐ）であり；Ｘ2は脂肪族アミノ酸であり；Ｘ3はＬｅｕ（Ｌ）であり；Ｘ4は酸性アミノ酸であり；Ｘ5はＬｅｕ（Ｌ）またはＰｈｅ（Ｆ）であり；Ｘ6はＬｅｕ（Ｌ）またはＰｈｅ（Ｆ）であり；Ｘ7は塩基性アミノ酸であり；Ｘ8は酸性アミノ酸であり；Ｘ9はＬｅｕ（Ｌ）またはＴｒｐ（Ｗ）であり；Ｘ10はＬｅｕ（Ｌ）またはＴｒｐ（Ｗ）であり；Ｘ11は酸性アミノ酸またはＡｓｎ（Ｎ）であり；Ｘ12は酸性アミノ酸であり；Ｘ13はＬｅｕ（Ｌ）、Ｔｒｐ（Ｗ）またはＰｈｅ（Ｆ）であり；Ｘ14は塩基性アミノ酸またはＬｅｕ（Ｌ）であり；Ｘ15はＧｌｎ（Ｑ）またはＡｓｎ（Ｎ）であり；Ｘ16は塩基性アミノ酸であり；Ｘ17はＬｅｕ（Ｌ）であり；Ｘ18は塩基性アミノ酸であり；Ｚ1はＨ2Ｎ−−またはＲＣ（Ｏ）ＮＨ−−であり；Ｚ2は−−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、−−Ｃ（Ｏ）ＯＲまたは−−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたはそれらの塩であり；各Ｒはそれぞれ独立に−−Ｈ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルケニル、（Ｃ1−Ｃ6）アルキニル、（Ｃ5−Ｃ20）アリール、（Ｃ6−Ｃ26）アルカリール、５−２０員環のヘテロアリールまたは６−２６員環のアルクヘテロアリールまたは１から４残基のペプチドまたはペプチド類似体であって残基１−７の間の１つまたは２つ以上の結合がそれぞれ独立に置換アミド、アミドのイソスターまたはアミド模倣体であるもの；さらに残基Ｘ1からＸ18までの各“−”がそれぞれ独立にアミド結合、置換アミド結合、アミドのイソスターまたはアミド模倣体を表すもの；または（ｉｉ）式（Ｉ）の改変形であって、式中、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、Ｘ4、Ｘ5、Ｘ6、Ｘ7、Ｘ8、Ｘ9、Ｘ10、Ｘ11、Ｘ12、Ｘ13、Ｘ14、Ｘ15、Ｘ16、Ｘ17またはＸ18の少なくとも１つが別の残基と保存的に置換されているか、またはそのＤ型変種であるもの。
【００４３】
ある種の実施態様では、本発明は、配列Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ（配列番号：２３８）を有するペプチドを除外し、さらにある実施態様では、本発明は、配列Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ（配列番号：２３８）を有するペプチドであってＬｙｓ−Ａｒｇ−ＡｓｐおよびＳｅｒが全てＬ型アミノ酸であるものを除外する。
【００４４】
ある種の実施態様では、本発明のペプチドは、米国特許６，３７６，４６４号で提供したアッセイによって測定したとき、３８％未満、好ましくは３５％未満、より好ましくは約３０％未満または２５％未満のＬＣＡＴ活性化活性を示す。
【００４５】
定義
“ポリペプチド”、“ペプチド”および“タンパク質”という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために本明細書では互換的に用いられる。前記用語は、天然に存在するアミノ酸ポリマーと同様に、１つまたは２つ以上のアミノ酸残基が対応する天然のアミノ酸の人工的な化学的類似体であるアミノ酸ポリマーにも提供される。
【００４６】
“クラスＡ両親媒性ヘリックス”という用語は、極性−非極性界面に存在する陽性荷電残基および極性面の中心部に存在する陰性荷電残基により、極性および非極性面の分断をもたらすα−ヘリックスを形成するタンパク質構造を指す（例えば以下を参照されたい：Ｓｅｇｒｅｔ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９０）  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，  ａｎｄ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ８：１０３−１１７）。
【００４７】
“アテローム性硬化症の１つまたは２つ以上の症状を緩和する”ということに関して用いられるときは、“緩和する”という用語は、アテローム性硬化症及び／又は付随する病変に特徴的な１つまたは２つ以上の症状の軽減、予防、または排除を指す。そのような軽減には、酸化リン脂質の減少または排除、アテローム硬化症斑の形成および断裂の減少、臨床症状（例えば心臓発作、狭心症または卒中）の減少、高血圧の軽減、炎症性タンパク質の生合成の低下、血中コレステロールの低下など以下が含まれる（ただしこれらに限定されない）。“アテローム性硬化症の１つまたは２つ以上の症状を緩和する”はまた、アテローム性硬化症によって影響を受ける血管床への血流の改善を意味することができる。
【００４８】
“鏡像体アミノ酸”という用語は、互いに上重ねすることができない鏡像である、少なくとも２つの形態として存在することができるアミノ酸を指す。ほとんどのアミノ酸（グリシンを除く）は鏡像体を有し、いわゆるＬ−型（Ｌアミノ酸）またはＤ−型（Ｄアミノ酸）として存在する。ほとんどの天然に存在するアミノ酸は“Ｌ”アミノ酸である。“Ｄアミノ酸”および“Ｌアミノ酸”という用語は、平面偏光の回転の個々の方向ではなくてアミノ酸の絶対的立体配置を指すために用いられる。本明細書での使用は当業者による標準的な使用と一致する。
【００４９】
“保護基”という用語は、アミノ酸の官能基（例えば側鎖、アルファアミノ基、アルファカルボキシル基）と結合したとき、前記官能基の特性をブロックまたは隠蔽する化学基を指す。好ましいアミノ末端保護基にはアセチルまたはアミノ基が含まれるが、ただしこれらに限定されない。他のアミノ末端保護基には、アルキル鎖（脂肪酸の場合のように）、プロピオニル、フォルミルおよび他のものが含まれるが、ただしこれらに限定されない。好ましいカルボキシル末端保護基には、アミドまたはエステルを形成する基が含まれるが、ただしこれらに限定されない。“側鎖保護基”という用語は、アミノ酸の側鎖（すなわちＲ基）を保護／ブロックする保護基を指す。側鎖保護基には、アミノ保護基、カルボキシル保護基およびヒドロキシル保護基（例えばアリールエステル）、およびグアニジン保護基（例えばニトロ、トシルなど）が含まれる。
【００５０】
“酸化剤による酸化からリン脂質を保護する”という語句は、リン脂質を酸化剤（例えば過酸化水素、１３（Ｓ）−ＨＰＯＤＥ、１５（Ｓ）−ＨＰＥＴＥ、ＨＰＯＤＥ、ＨＰＥＴＥ、ＨＯＤＥ、およびＨＥＴＥなど）と接触させたときの、前記リン脂質の酸化速度（または生成される酸化リン脂質の量）を低下させる化合物の能力を指す。
【００５１】
“低密度リポタンパク質”または“ＬＤＬ”という用語は、当業者の一般的な使用と一致する定義を有する。一般的には、ＬＤＬは、超遠心によって単離したときにｄ＝１．０１９からｄ＝１．０６３の範囲の密度で見出される脂質−タンパク質複合体を指す。
【００５２】
“高密度リポタンパク質”または“ＨＤＬ”という用語は、当業者の一般的な使用と一致する定義を有する。一般的には、ＨＤＬは、超遠心によって単離したときにｄ＝１．０６３からｄ＝１．２１の範囲の密度で見出される脂質−タンパク質複合体を指す。
【００５３】
“群Ｉ  ＨＤＬ”という用語は、酸化脂質（例えば低密度リポタンパク質において）を減少させるか、または酸化脂質を酸化剤による酸化から保護する、高密度リポタンパク質またはその成分（例えばアポＡ−Ｉ、パラオキソナーゼ、血小板活性化因子アセチルヒドロラーゼなど）を指す。
【００５４】
“群ＩＩ  ＨＤＬ”は、酸化から脂質を保護するか、または酸化脂質を修復する（例えば還元する）活性が低下した、若しくは前記能力をもたないＨＤＬを指す。
【００５５】
“ＨＤＬ成分”という用語は、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）を含む成分（例えば分子）を指す。酸化から脂質を保護するか、または修復する（例えば酸化脂質を還元する）ＨＤＬについてのアッセイはまた、そのような活性を示すＨＤＬの成分（例えばアポＡ−Ｉ、パラオキソナーゼ、血小板活性化因子アセチルヒドロラーゼなど）についてのアッセイを含む。
【００５６】
“ヒトアポＡ−Ｉペプチド”という用語は、完全長のヒトアポＡ−ＩペプチドまたはクラスＡ両親媒性ヘリックスを含むヒトアポＡ−Ｉペプチドのフラグメントもしくはドメインを指す。
【００５７】
本明細書で用いられる“単球反応”は、アテローム硬化症斑の形成に付随する“炎症性反応”に特徴的な単球活性を指す。単球反応は、血管壁の細胞（例えば血管内皮の細胞）への単球の粘着、及び／又は内皮下間隙への化学走性、及び／又は単球のマクロファージへの分化、及び／又はｉｎ  ｖｉｔｒｏで測定される単球の化学走性（例えばニューロプローブチャンバーの利用）を特徴とする。
【００５８】
酸化リン脂質の量に関して“変化が存在しない”という用語は、検出可能な変化を欠くこと、より好ましくは実質的に顕著な変化を欠くことを指す（例えば少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、もっとも好ましくは少なくとも９８％または９９％信頼度で）。酸化リン脂質レベルは変化しても、本明細書に記載のタンパク質が存在しない場合、または他の陽性もしくは陰性コントロールを参照した場合、ほどは変化がないアッセイの場合もまた、検出可能な変化が存在しないということができる。
【００５９】
以下の略語が本明細書では用いられる：ＰＡＰＣ：Ｌ−α−１−パルミトイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン；ＰＯＶＰＣ：１−パルミトイル−２−（５−オキソバレリル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン；ＰGＰＣ：１−パルミトイル−２−グルタリル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン；ＰＥIＰＣ：１−パルミトイル−２−（５，６−エポキシイソプロスタンＥ2）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン；ＣｈＣ１８：２：コレステリルリノレート；ＣｈＣ１８：２−ＯＯＨ：コレステリルリノレートヒドロペルオキシド；ＤＭＰＣ：１，２−ジテトラデカノイル−ｒａｃ−グリセロール−３−ホスホコリン；ＰＯＮ：パラオキソナーゼ；ＨＰＥ：標準化高倍率視野（ｈｉｇｈ  ｐｏｗｅｒ  ｆｉｅｌｄ）；ＰＯＮ：パラオキソナーゼ；ＢＬ／６：Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ；Ｃ３Ｈ：Ｃ３Ｈ／ＨｅＪ。
【００６０】
“保存的置換”という用語は、実質的に当該分子の活性（特異性（例えばリポタンパク質に対する））または結合活性（例えば脂質またはリポタンパク質に対する）を変化させないアミノ酸置換をいうためにタンパク質またはペプチドに関して用いられる。典型的な保存的アミノ酸置換は、あるアミノ酸による同様な化学的特性（例えば電荷または疎水性）を有する別のアミノ酸の置換を含む。下記の６つの群は各々、互いに典型的な保存的置換であるアミノ酸を含む：１）アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；および６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）。
【００６１】
２つまたは３つ以上の核酸またはポリペプチド配列の関係で“同一”またはパーセント“同一”という用語は、最大の一致を求めて以下の配列比較アルゴリズムの１つを用いるかまたは目視精査によって比較またはアラインメントを実施したとき、同じである２つまたは３つ以上の配列若しくは部分配列、または同じであるアミノ酸残基またはヌクレオチドを特定の百分率で有する２つ若しくは３つ以上の配列または部分配列を指す。本発明のペプチドに関しては、配列同一性は前記ペプチドの完全長にわたって決定される。
【００６２】
配列比較の場合、典型的には１つの配列は参照配列として機能し、前記参照配列に対して試験配列が比較される。配列比較アルゴリズムを用いるときは、試験配列および参照配列はコンピュータに入力され、必要な場合には部分配列座標が指定され、さらに配列比較アルゴリズムが指定される。続いて前記配列比較アルゴリズムは、指定されたプログラムパラメーターを基準にして、参照配列に対する試験配列のパーセント同一性を計算する。
【００６３】
比較のための最適な配列アラインメントは例えば以下によって実施される：局所相同性アルゴリズム（Ｓｍｉｔｈ  ＆  Ｗａｔｅｒｍａｎ，  Ａｄｖ．  Ａｐｐｌ．  Ｍａｔｈ．  ２：４８２  （１９８１））；相同性アラインメントアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ＆  Ｗｕｎｓｃｈ，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ４８：４４３  （１９７０））；類似性検索方法（Ｐｅａｒｓｏｎ  ＆  Ｌｉｐｍａｎ，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５：２４４４  （１９８８））；前記アルゴリズムのコンピュータによる実施（ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴ（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ，  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，  ５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，  Ｍａｄｉｓｏｎ，  ＷＩ）または目視精査（一般的には上掲書（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．）を参照されたい）。
【００６４】
有用なアルゴリズムの一例はＰＩＬＥＵＰである。ＰＩＬＥＵＰは、一組の漸進的なアラインメントを用いて関連する一群の配列から多数の配列アラインメントを作製し、関連およびパーセント配列同一性を示す。前記はまた前記アラインメントを作製するために用いられたクラスター形成関係を示す樹形図または系統樹を描く。ＰＩＬＥＵＰは、Ｆｅｎｇ  ＆  Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ（Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｅｖｏｌ．  ３５：３５１−３６０（１９８７））の漸進的アラインメント法の単純化したものを用いる。使用される方法は、Ｈｉｇｇｉｎｓ  ＆  Ｓｈａｒｐ（ＣＡＢＩＯＳ，  ５：１５１−１５３  （１９８９））が記載した方法に類似する。このプログラムは３００もの配列（各々最大の長さが５，０００ヌクレオチドまたはアミノ酸である）をアラインメントすることができる。多数のアラインメントを実施する工程は、２つのもっとも類似する配列を一組としてアラインメントすることによって開始され、２つのアラインメントされた配列クラスターが作製される。続いて、このクラスターはその次にもっとも関係が深い配列またはアラインメントされた配列クラスターとアラインメントされる。２つの配列クラスターは、２つの個々の配列の対アラインメントの単純な伸長によってアラインメントされる。最終的なアラインメントは、一連の漸進的対アラインメントによって達成される。前記プログラムは、特定の配列および配列比較領域のためにそれらのアミノ酸またはヌクレオチド座標を指定し、さらにプログラムパラメーターを指定することによって実行される。例えば、以下のパラメーターを用いて、参照配列を他の試験配列と比較し、パーセント配列同一性関係を決定することができる：デフォールトギャップウェイト（３．００）、デフォールトギャップ長ウェイト（０．１０）および重み付けエンドギャップ。
【００６５】
パーセント配列同一性および配列類似性を決定するために適切なまた別のアルゴリズムの例はＢＬＡＳＴアルゴリズムであり、前記はＡｌｔｓｃｈｕｌらの論文に記載されている（Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２１５：４０３−４１０  （１９９０））。ＢＬＡＳＴ解析を実施するためのソフトは以下の機関から公開されている：Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  （ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）。このアルゴリズムは先ず初めに、データベース配列中の同じ長さのワードとアラインメントを実施したときある正の値の閾値スコアＴとマッチするか、またはこれを満足させる、クエリー配列中の長さがＷの短いワードを特定することによって高スコア配列対（ＨＳＰ）を特定することを伴う。前記ワードは、。Ｔは近傍ワードスコア閾値と称される（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．上掲書）。これらの初期近傍ワードヒットは、検索を開始しより長いＨＳＰを見つけ出すためのシードとして機能する。続いてこのワードヒットを累積アラインメントが増加できる限り各配列の両方向に沿って伸長させる。累積スコアは、ヌクレオチド配列の場合はパラメーターＭ（マッチする残基対のための褒章スコア、常に＞０）およびＮ（ミスマッチ残基のためのペナルティースコア、常に＜０）を用いて計算される。アミノ酸配列の場合、スコア付与マトリックスが累積スコアの計算に用いられる。各方向におけるワードヒットの伸張は以下の時点で停止される：累積アラインメントスコアがその最大達成値から量Ｘだけ低下したとき；累積スコアが、１つまたは２つ以上の負のスコアを与える残基アラインメントの蓄積のためにゼロ以下になったとき；またはどちらかの配列の最後に達したとき。ＢＬＡＳＴアルゴリズムのパラメーターＷ、ＴおよびＸはアラインメントの感度および速度を決定する。ＢＬＡＳＴプログラム（ヌクレオチド配列用）は、規定値として１１のワード長（Ｗ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝４および両鎖の比較を用いる。アミノ酸配列の場合、ＢＬＡＳＴプログラムは、規定値として３のワード長（Ｗ）、１０の期待値（Ｅ）、およびＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックスを使用する（以下を参照されたい：Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ＆  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  （１９８９）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８９：１０９１５）。
【００６６】
パーセント配列同一性の計算の他に、ＢＬＡＳＴアルゴリズムはまた、２つの配列間の類似性の統計的解析を実施する（例えば以下を参照されたい：Ｋａｒｌｉｎ  ＆  Ａｌｔｓｃｈｕｌ  （１９９３）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ９０：５８７３−５７８７）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって提供される類似性の測定値は最小合計確率（Ｐ（Ｎ））であり、前記は、２つのヌクレオチドまたはアミノ酸配列間のマッチが偶然によって生じる確率の目安を提供する。例えば、参照核酸と試験核酸の比較で最小合計確率が約０．１未満、より好ましくは約０．０１未満、およびもっとも好ましくは約０．００１未満ならば、前記核酸は参照配列と類似と考えられる。
【００６７】
“Ｄ−１８Ａペプチド”という用語は以下の配列を有するペプチドを指す：Ｄ−Ｗ−Ｌ−Ｋ−Ａ−Ｆ−Ｙ−Ｄ−Ｋ−Ｖ−Ａ−Ｅ−Ｋ−Ｌ−Ｋ−Ｅ−Ａ−Ｆ（配列番号：３）、前記の配列において鏡像アミノ酸の全てがＤ型アミノ酸である。
【００６８】
“併用投与”または“同時投与”という用語は、例えば本発明のペプチドおよび別の活性物質（例えばスタチン）に関して用いられるときは、前記ペプチドおよび活性物質の両方が生理学的作用を同時に達成できるように前記両者を投与することを意味する。しかしながら前記２つの物質は一緒に投与される必要はない。ある種の実施態様では、１つの物質の投与は他方の投与に先行することができるが、そのような併用投与によって典型的には、両物質は、与えられた任意の用量について、それらの最大血清濃度の顕著な割合において（例えば２０％以上、好ましくは３０％または４０％またはそれより多い、より好ましくは５０％または６０％またはそれより多い、もっとも好ましくは７０％または８０％または９０％またはそれより多い部分において）同時に体内（例えば血中）で存在する結果がもたらされる。
【００６９】
“解毒する”という用語は、脂質、ＬＤＬまたはＨＤＬに関して用いられるときは、いくらかのまたは全ての酸化性脂質及び／又は酸化された脂質の除去を指す。したがって、例えば全てのまたはいくらかのＨＰＯＤＥ及び／又はＨＰＥＴＥ（両者とも脂肪酸上のヒドロペルオキシドである）の取り込みは、これら過酸化物のＬＤＬへの進入を防止または低下させ、したがってＬＤＬ酸化を防止または低下させるであろう。
【００７０】
“プレ−ベータ高密度リポタンパク質様粒子”という用語は、典型的にはアポＡ−Ｉもまた含有するコレステロール含有粒子であって、前記はより小さく、大半のＨＤＬ粒子の脂質：タンパク質比と比べて相対的に脂質が乏しいものを指す。血漿をＦＰＬＣによって分離したとき、これらの“プレ−ベータ高密度リポタンパク質様粒子”は、主要ＨＤＬピークに存在する粒子よりも小さな粒子を含むＦＰＬＣ分画に見出され、さらに関連出願ＵＳＳＮ１０／４２３，８３０に示されているようにＦＰＬＣクロマトグラフィー図ではＨＤＬの右側に位置する。
【００７１】
“逆脂質輸送および解毒”という語句は、脂質（コレステロール、他のステロール（酸化されたステロールを含む）、リン脂質、酸化剤および酸化されたリン脂質を含む）の組織（例えば動脈）からの除去、およびこれらの末梢組織から器官への輸送を指す（前記器官で前記脂質は解毒され排泄される（例えば肝臓による胆汁への排出および腎臓による尿への排泄））。解毒はまた、本明細書で説明するように酸化リン脂質の形成の阻止及び／又は破壊を指す。
【００７２】
本明細書で用いられる“生物学的サンプル”は、生きている生物または死んだ生物から得られる任意のサンプルを指す。生物学的サンプルの例には、体液、組織標本、生物から得られる細胞および細胞株（例えばヒトまたは非ヒト哺乳動物）が含まれる。
【００７３】
“アミド”という用語は、疎水性保護基または疎水性封鎖基を指していうときは、単純なアミドからメチルアミドまたはエチルアミドを含む。前記用語はまたアルキルアミド、例えばＣＯ−ＮＨ−Ｒを含み、ここでＲはメチル、エチルなど（例えば７まで、好ましくは９、より好ましくは１１または１３個の炭素）である。
【００７４】
“Ｄ−ペプチド”は、前記ペプチドを構成する鏡像アミノ酸の１つまたは２つ以上がＤ型アミノ酸であるペプチドを指す。ある種の実施態様では、複数の鏡像アミノ酸がＤ型アミノ酸である。ある種の実施態様では、鏡像アミノ酸の少なくとも半分がＤ型アミノ酸である。ある種の実施態様ではペプチドは交互にＤ型およびＬ型アミノ酸を含む。ある種の実施態様では、鏡像アミノ酸の全てがＤ型アミノ酸である。
【００７５】
“Ｌペプチド”という用語は、アミノ酸（鏡像アミノ酸）の全てがＬ型アミノ酸であるペプチドを指す。
【００７６】
“前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、または抗炎症性ＨＤＬを一層抗炎症性にする”ペプチドは、哺乳動物（ヒト、ラット、マウスなど）に投与したとき、または適切なｅｘ  ｖｉｖｏアッセイ（例えば本明細書に記載されたアッセイ）で使用したとき、ＨＤＬを酸化剤（例えばＵＳＳＮ６，５９６，５４４に記載されたもの）による脂質の酸化を低下または阻止するＨＤＬに変換するペプチド、及び／又はパラオキソナーゼ活性を増加させるか、及び／又はコントロールアッセイのＨＤＬ（例えばより低用量のペプチドを投与されたコントロール動物若しくはアッセイのＨＤＬ、または当該ペプチドを欠く陰性コントロール動物若しくはアッセイのＨＤＬ）と比較したとき動脈壁細胞によって生成されるＬＤＬ−誘発単球化学走性活性を低下させるＨＤＬに変換するペプチドを指す。ＨＤＬの前記変化（保護活性のないものから保護活性を有するものへの変換、または保護活性の増加への変換）は、好ましくは検出可能な変化である。好ましい実施態様では、前記変化は統計的に有意な変化、例えば提供されたデータセットに適合させた任意の統計的試験（例えばｔ−検定、分散分析法（ＡＮＯＶＡ）、セミパラメーター法（ｓｅｍｉｐａｒａｍｅｔｒｉｃ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）、非パラメーター法（ｎｏｎ−ｐａｒａｍｅｔｒｉｃ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）（例えばウィルコクソン・マン−ウィットニーテスト、ウィルコクソンサインドランクステスト（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ  Ｓｉｇｎｅｄ  Ｒａｎｋｓ  Ｔｅｓｔ）、サインテスト、クルスクル−ウォリステスト（Ｋｒｕｓｋａｉ−Ｗａｌｌｉｓ  Ｔｅｓｔなど））を用いて決定されるような変化である。好ましくは、統計的に有意な変化は、少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、さらに好ましくは少なくとも９５％、もっとも好ましくは少なくとも９８％または９９％の信頼度で有意である。ある種の実施態様では、前記変化は、少なくとも１０％の変化、好ましくは少なくとも２０％の変化、より好ましくは少なくとも５０％の変化、もっとも好ましくは少なくとも９０％の変化である。
【００７７】
“と併用して”という語句は、例えばアミノ酸対を含む２つのアミノ酸の投与に関して、本発明のペプチドの組合せの使用に関して、本発明のペプチド／アミノ酸対と他の薬理学的に活性化薬剤（例えば１つまたは２つ以上スタチン）との使用に関して本明細書で用いられるときは、２つ（または３つ以上）の薬剤が、当該生物に対するそれらの生理学的な活性において少なくともある程度時間的にオーバーラップするように投与されることを意味する。したがって、２つまたは３つ以上の薬剤は同時に及び／又は順番に投与することができる。順番に投与するときは、第二の薬剤が投与されるときまたは当該生物で活性になるときに、第一の投与薬剤が何らかの生理学的変化を当該生物に対して示しているかぎり、第二の薬剤の投与前にある実質的な遅れ（例えば数分または場合によっては数時間または数日）があってもよい。
【００７８】
発明の詳細な説明
本発明は、クラスＡ両親媒性ヘリックスモチーフ（Ｓｅｇｒｅｓｔ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９０）  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ８：１０３−１１７）を模して設計された合成ペプチドは、リン脂質と結合し、ヒトアポＡ−Ｉと類似する多くの生物学的特性を示すことができるという発見に関する。特に、Ｄアミノ酸を用いてそのようなペプチドを製剤化するとき、前記ペプチドは劇的に長い血中半減期を示し、特にアミノ及び／又はカルボキシ末端がブロックされているときは経口投与すら可能であるということが本発明の発見である。
【００７９】
さらに、これらのペプチドは、プレ−ベータ高密度リポタンパク質様粒子の形成およびサイクリングを刺激することができるということもまた驚くべき発見であった。さらにまた、前記ペプチドは、スタチンの作用を強化／補助させて、スタチンを極めて低い用量で投与することを可能にし、または任意の与えられた用量で抗炎症性をいっそう顕著にすることができる。さらに、本明細書に記載したペプチドは、骨粗しょう症の１つまたは２つ以上の症状を抑制及び／又は防止及び／又は治療することができるということも発見された。本ペプチドはまたプレ−ベータＨＤＬを増加させることができ、及び／又はＨＤＬパラオキシナーゼ活性を高めることができる。
【００８０】
さらにまた、そのようなＤ−型ペプチドは対応するＬ−型ペプチドの生物学的活性を保持するということは本発明の驚くべき発見であった。そのようなＤ−型ペプチドを用いたｉｎ  ｖｉｖｏの動物実験によって、効果的な経口的送達、血中半減期の延長およびアテローム性硬化症の１つまたは２つ以上の症状を緩和または防止／抑制する能力が示された。
【００８１】
最低限２つのアミノ酸または単一アミノ酸対（もっぱらそのアミノ酸の１つまたは２つ以上はＤ立体異性アミノ酸である（必ずしも必然ではないが））から成り、さらに脂質タンパク質相互作用を可能にする疎水性ドメインおよび一定度の水溶性を可能にする親水性ドメインを有するある種の小さなペプチドはまた、顕著な抗炎症性特性を有するということもまた驚くべき発見であった。特定の理論に拘束されないが、本明細書に記載のペプチドまたはアミノ酸対は、前炎症性酸化リン脂質（例えばＯｘ−ＰＡＰＣ、ＰＯＶＰＣ、ＰＧＰＣおよびＰＥＩＰＣ）の形成に必要な“シーディング分子”と結合すると考えられる。多くの炎症性症状は、少なくとも部分的には酸化された脂質によって仲介されるので、本発明のペプチドまたはアミノ酸対は、生物学的に活性な酸化脂質の形成に起因することが判明しているか、または疑われている症状の緩和に有効であると我々は考えている。これら症状にはアテローム性硬化症、慢性関節リウマチ、紅斑性狼瘡、結節性多発性動脈炎、多発性硬化症、喘息、糖尿病、アルツハイマー病および骨粗しょう症が含まれるが、ただしこれらに限定されない。“小ペプチド”は典型的には、長さが２または３アミノ酸から約１５アミノ酸、より好ましくは約４アミノ酸から約１０または１１アミノ酸、もっとも好ましくは約４から約８または１０アミノ酸の範囲である。前記ペプチドは典型的には、疎水性末端アミノ酸を有すること、または１つ若しくは２つ以上の疎水性“保護”基の結合によって疎水性にされた末端アミノ酸を有することを特徴とする。前記ペプチドの内部構造は本明細書でさらに詳細に述べる。
【００８２】
さらにまた、多数の物理的特性が、本発明の前記小ペプチド（例えば１０未満のアミノ酸、好ましくは８未満のアミノ酸、より好ましくは約２または３から約５または６アミノ酸）またはアミノ酸対の、ＨＤＬをいっそう抗炎症性にする能力およびアテローム性硬化症及び／又は炎症性反応を特徴とする他の病変を哺乳動物で緩和する能力を予想するということは本発明の驚くべき発見であった。前記物理的特性には、酢酸エチル中での高い溶解性（例えば約４ｍｇ／ｍＬよりも高い）、およびｐＨ７．０の水性緩衝液における溶解性が含まれる。リン脂質（例えば１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ））と水性環境下で接触させると、特に有効な小ペプチドは約７．５ｎｍ（±０．１ｎｍ）の直径を有する粒子を形成するか、及び／又は積層二重層であって、前記二重層が３．４から４．１ｎｍの大きさで、積層二重層の間に約２ｎｍの間隙を有するものを形成するか、及び／又は約３８ｎｍの小胞構造を形成する。ある種の好ましい実施態様では、小ペプチドまたはアミノ酸対は約９００Ｄａ未満の分子量を有する。
【００８３】
Ｉ．プレ−ベータ高密度リポタンパク質様粒子の形成およびサイクル進行を刺激する
逆コレステロール輸送は、アテローム性硬化症に罹患し易くする脂質の構築防止で重要であると考えられている（Ｓｈａｈ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，  １０３：３０４７−３０５０）。重要な脂質はコレステロールであると多くの人々が考えていた。我々の研究室は、アテローム性硬化症で炎症性反応を開始させる重要な脂質は酸化された脂質であることを示した（Ｎａｖａｂ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．  Ｔｈｒｏｍｂ．  Ｖａｓｃ．  Ｂｉｏｌ．，  ２１（４）：４８１−４８８；Ｖａｎ  Ｌｅｎｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｍｅｄ，  １１：１５５−１６１；Ｍ．  Ｎａｖａｂ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，  １０４：２３８６−２３８７）。
【００８４】
この炎症性反応はまた、心臓発作および卒中をもたらすプラークのびらんまたは破裂を招くおそれが高い。ＨＤＬ−コレステロールレベルは心臓発作および卒中のリスクと逆比例する（Ｄｏｗｎｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  ＪＡＭＡ  ２７９：１６１５−１６２２；Ｇｏｒｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ，  （１９７７）  Ａｍ  Ｊ．  Ｍｅｄ．，  ６２：７０７−７１４；Ｃａｓｔｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８６）  ＪＡＭＡ，  ２５６：２８３５−２８３８）。
【００８５】
プレ−ベータＨＤＬは一般的には逆コレステロール輸送の促進でもっとも活性なＨＤＬであると考えられる（例えば末梢組織（例えば動脈）からコレステロールをピックアップし、胆管への分泌のために前記コレステロールを肝臓へ運ぶ。例えば以下を参照されたい：Ｆｉｅｌｄｉｎｇ  ａｎｄ  Ｆｉｅｌｄｉｎｇ  （２００１）  Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ，  １５３３（３）：１７５−１８９）。しかしながら、プレ−ベータＨＤＬのレベルは、プレ−ベータＨＤＬを成熟したα−移動性ＨＤＬにサイクルさせることができないために（例えばＬＣＡＴ不全または阻害）増加し得る（Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  Ｊ  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ，  ３９：６７０−６７８）。高レベルのプレ−ベータＨＤＬは冠動脈疾患患者で報告されている（Ｍｉｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  ＣｌｉｎＣｈｅｍ，  ４２：１９９２−１９９５）。
【００８６】
さらにまた、男性は女性よりも高レベルのプレ−ベータＨＤＬを有することが判明しているが、冠動脈心疾患に対するリスクは男性が女性よりも高い（Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ  ｅｔ
ａｌ．  （１９９８）  Ｊ  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ，  ３９：６７０−６７８）。したがって、プレ−ベータＨＤＬレベルの統計的測定は必ずしも冠動脈心疾患のリスクを予測しない。しかしながら、コレステロールからプレ−ベータＨＤＬを通って成熟ＨＤＬへのサイクルはアテローム性硬化症に対する防御であると普遍的に考えられている（Ｆｉｅｌｄｉｎｇ  ａｎｄ  Ｆｉｅｌｄｉｎｇ  （２００１）  Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ，  １５３３（３）：１７５−１８９）。さらにまた、我々は、この経路により酸化脂質を動脈壁細胞から除去することによってＬＤＬ酸化が妨げられることを示した。
【００８７】
経口投与した場合の比較的低い吸収速度にもかかわらず、本発明のペプチド（例えばＤ−４Ｆ）は高い活性を有していた。
【００８８】
Ｄ−４Ｆを経口投与したアポＥヌルマウスの実験で、腸管から吸収された２０分後に、Ｄ−４Ｆは、比較的多量のアポＡ−Ｉおよびパラオキソナーゼを含む小さなプレ−ベータＨＤＬ様粒子を形成する。実際に、ウェスタンブロットからこれらのプレ−ベータＨＤＬ様粒子のアポＡ−Ｉの量を概算し、これら粒子におけるアポＡ−Ｉの量をＤ−４Ｆの量と比較することによって（放射能活性またはＬＣ−ＭＲＭによって決定）、Ｄ−４Ｆが腸管から吸収され、Ｄ−４Ｆはこれらプレ−ベータＨＤＬ様粒子の形成を引き起こす触媒として機能することが示唆された。この少量の腸管に由来するＤ−４Ｆは、ある量のアポＡ−Ｉ、パラオキソナーゼおよびコレステロールをこれら粒子に補給し、前記粒子はＤ−４Ｆの量よりも桁違いに大きいように思われる。（例えば、Ｎａｖａｂ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、１０９：ｒ１２０−ｒ１２５参照）
したがって、吸収の後、本発明のＤ−４Ｆおよび他のペプチドまたはアミノ酸対は、比較的大量のアポＡ−Ｉおよびパラオキソナーゼを迅速に補給し、逆コレステロール輸送の促進および生物学的に活性な酸化脂質の破壊の両方についておそらくもっとも強力な粒子であるプレ−ベータＨＤＬ様粒子を形成する。これら粒子の形成およびそれに続く前記粒子の成熟ＨＤＬへの迅速な取り込みは、血漿コレステロールまたはＨＤＬ−コレステロールにおける変化に関係なく、欧風飼料飼育ＬＤＬレセプターヌルマウスおよび固形飼料飼育アポＥヌルマウスで我々が観察したアテローム性硬化症における劇的な減少の説明となるだろうと我々は考えている（上掲書）。
【００８９】
したがってある実施態様では、本発明は、本明細書記載の１つまたは２つ以上のペプチドまたはアミノ酸対の投与によって、プレ−ベータ高密度リポタンパク質様粒子の形成およびサイクリングを刺激する方法を提供する。それによってペプチドまたはアミノ酸対は脂質輸送と解毒を促進する。
【００９０】
ＩＩ．アテローム性硬化症の症状の緩和
我々は、正常なＨＤＬは軽度に酸化されたＬＤＬの形成で３つの工程を阻害することを発見した。これらの実験（例えば同時係属出願ＵＳＳＮ０９／５４１，４６８号（２０００年３月３１日出願）を参照されたい）で、我々は、アポＡ−ＩまたはアポＡ−Ｉ模倣ペプチド（３７ｐＡ）によるヒトＬＤＬのｉｎ  ｖｉｔｒｏ処理は、ＨＰＯＤＥおよびＨＰＥＴＥを含むＬＤＬからシーディング分子を除去することを示した。これらのシーディング分子は、ヒト動脈壁細胞のコカルチャーがＬＤＬを酸化することができるように、およびＬＤＬが動脈壁細胞の単球化学走性活性の生成を誘発するために必要であった。我々はまた、アポＡ−Ｉのマウスへの注射またはヒトへの輸液の後、アポＡ−Ｉの注射／輸液後に前記マウスまたはヒト志願者から単離したＬＤＬはヒト動脈壁細胞による酸化に耐性を有し、さらに動脈壁細胞コカルチャーで単球化学走性活性を誘発しないことを示した。
【００９１】
本発明のある種のペプチドの保護的機能は親出願（０９／６４５，４５４号、２０００年８月２４日出願；０９／８９６，８４１号、２００１年６月２９日出願；およびＷＯ０２／１５９２３号（ＰＣＴ／ＵＳ０１／２６４９７）、２００１年６月２９日出願、例えばＷＯ０２／１５９２３の図１−５を参照されたい）。ＷＯ０２／１５９２３の図１のパネルＡ、Ｂ、ＣおよびＤは、アポＥヌルマウスにおける血液成分と14Ｃ−Ｄ−５Ｆとの結合を示している。前記はまた、アテローム形成性飼料を与え、ＰＢＳを注射したマウスのＨＤＬはヒトＬＤＬの酸化を阻害することができないこと、およびヒトの動脈壁コカルチャーにおいてＬＤＬ−誘発単球走化性活性を阻害することができないことを示している。対照的に、アテローム形成性飼料を与え、本明細書記載のペプチドを毎日注射したマウスのＨＤＬは、ヒトＬＤＬの酸化の阻害およびヒトの動脈壁コカルチャーにおけるＬＤＬ誘発単球化学走性活性の防止において、正常なヒトＨＤＬと同様に有効であった（ＷＯ０２／１５９２３の図２Ａおよび２Ｂ）。さらにまた、アテローム形成性飼料を与え、毎日ＰＢＳを注射したマウスから採取したＬＤＬは、同じ飼料を与えたがペプチド５Ｆを毎日２０μｇ注射したマウスから採取したＬＤＬよりもいっそう容易に酸化され、いっそう容易に単球走化性活性を誘発した。Ｄペプチドは免疫原性を有するようには見えなかった（ＷＯ０２／１５９２３の図４）。
【００９２】
アテローム形成性飼料を与え、本発明のペプチドを注射したマウスのＨＤＬおよびＬＤＬに対するヒト動脈壁細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ反応は、前記ペプチドがｉｎ  ｖｉｖｏで示した防御的反応と一致する。総コレステロールレベル、総コレステロールの％としてのＬＤＬ−コレステロール、ＩＤＬ＋ＶＬＤＬ−コレステロールおよび低級ＨＤＬ−コレステロールのレベルが類似するにもかかわらず、アテローム形成性飼料を与え、前記ペプチドを注射した動物は顕著に低い病巣スコアを有していた（ＷＯ０２／１５９２３の図５）。したがって、前記ペプチドは、アテローム形成性飼料を与えたマウスでアテローム性硬化症病巣の進行を防止した。
【００９３】
したがって、ある実施態様では、本発明は、アテローム性硬化症及び／又は炎症性反応を特徴とする他の症状の１つまたは２つ以上の症状を緩和及び／又は防止する方法を提供する。
【００９４】
ＩＩＩ．急性炎症性反応を伴うアテローム性硬化症の症状の緩和
本発明のペプチドまたはアミノ酸対はまた多数の状況で有用である。例えば、我々は、心脈管合併症（例えばアテローム性硬化症、卒中など）は、しばしば急性期炎症反応に付随するか、これに後続することを観察してきた。そのような急性期炎症反応にはしばしば、再発性炎症性疾患（例えばハンセン氏病、結核、全身性紅斑性狼瘡、および慢性関節リウマチ）、ウイルス性疾患（例えばインフルエンザ）、細菌感染、真菌感染、器官移植、創傷または他の外傷、人工装具移植、バイオフィルムなどが付随する。
【００９５】
本明細書に記載の１つまたは２つ以上のペプチドの投与は、急性期反応時または反応後の酸化リン脂質の形成を低下または防止し、それによってそのような症状に付随する心脈管合併症を緩和または排除することができるということは、本発明の驚くべき発見であった。
【００９６】
したがって、例えば我々は、インフルエンザ感染の結果、ＨＤＬでパラオキソナーゼ活性および血小板活性化アセチルヒドロラーゼ活性が減少することを示した。特定の理論に拘束されないが、我々は、これらＨＤＬの酵素的活性の低下の結果として、および急性期反応時のプロオキシダントタンパク質とＨＤＬとの結合の結果として、ＨＤＬはもはやＬＤＬ酸化を防ぐことができず、さらに内皮細胞によるＬＤＬ−誘発単球化学走性活性の発生ももはや防ぐことができなかったと考える。
【００９７】
我々は、インフルエンザウイルスＡ感染後に非常に低用量の本発明のポリペプチド（例えばマウスに対して２０μｇ）を毎日注射した対象動物では、パラオキソナーゼレベルは下降せず、生物学的に活性な酸化リン脂質の生成はバックグラウンドを超えないことを観察した。このことは、インフルエンザ感染時、または急性期炎症反応（例えばウイルス感染、細菌感染、外傷、移植、種々の自己免疫症状などのために）を生じ得る他の事象中に既知の冠動脈疾患をもつ患者にＤ−４Ｆ（及び／又は本発明の他のペプチド）を投与（例えば経口投与または注射によって投与）することができることを示し、したがって我々は、この短期間処置によって、そのような炎症状態をもたらす病変に付随する心臓発作および卒中発生が増加するのを防ぐことができる。
【００９８】
したがってある種の実施態様では、本発明は、急性炎症反応のリスクがあるか、または前記が発生している対象者、及び／又はアテローム性硬化症の症状のリスクがあるか、または前記が発生している対象者に、本発明の１つまたは２つ以上のペプチドまたはアミノ酸対を投与することを意図する。
【００９９】
したがって例えば、冠動脈疾患を有する者またはそのリスクをもつ者には、予防的にインフルエンザのシーズン中に本発明のペプチドまたはアミノ酸対を投与することができる。再発性炎症症状（例えば慢性関節リウマチ、種々の自己免疫疾患など）をもつ者（または動物）を本発明のポリペプチドで処置して、アテローム性硬化症または卒中の発生を緩和または防止することができる。外傷（例えば急性損傷、組織移植など）を受けた者（または動物）を本発明のポリペプチドで処置して、アテローム性硬化症または卒中の発生を緩和または防止することができる。
【０１００】
ある種の事例では、そのような方法は、急性炎症反応の出現またはリスクの診断を伴う。急性炎症反応は典型的には代謝の変化および肝臓での遺伝子調節を伴う。急性炎症反応は、免疫系、心脈管系および中枢神経系に加え身体の主要な形の全てを巻き込むホメオスタシスの動的過程である。通常は、急性期反応は数日続くだけであるが、慢性または再発性炎症の場合には、急性期反応のいくつかの局面の異常な持続が、疾患に付随する隠れた組織損傷に寄与する可能性があり、さらにまた更なる合併症、例えば心脈管疾患またはタンパク質沈積疾患（例えばアミロイド症）もたらす可能性がある。
【０１０１】
急性期反応の重要な局面は肝臓の急激に変化した生合成プロファイルである。正常な環境下では、肝臓は固有の範囲の血漿タンパク質を定常的な濃度で合成する。これらタンパク質の多くは重要な機能を有し、炎症刺激に続く急性期反応時には、より高い血中レベルのこれら急性期反応物（ＡＰＲ）または急性期タンパク質（ＡＰＰ）が必要とされる。ほとんどのＡＰＲは肝細胞によって合成されるが、いくつかは他の細胞タイプ（単球、内皮細胞、線維芽細胞および脂肪細胞を含む）によって生成される。ほとんどのＡＰＲは正常レベルよりも５０％から数倍の間で誘発される。対照的に、主要なＡＰＲは通常レベルの１０００倍に増加し得る。この群にはアミロイドＡ（ＳＡＡ）およびヒトのＣ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）またはマウスにおけるそのホモログ、血清アミロイドＰ成分（ＳＡＰ）が含まれる。いわゆる負のＡＰＲは急性期反応時に血中濃度が低下し、肝臓が誘発ＡＰＲを合成する能力を増強することを可能にする。
【０１０２】
ある種の実施態様では、したがって急性期反応またはそのリスクは１つまたは２つ以上のＡＰＰを測定することによって評価される。そのようなマーカーの測定は当業者には周知で、そのような測定を提供する企業が存在する（例えばＣａｒｄｉｏｔｅｃｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ，  ＫＹ）によって測定されるＡＧＰ）。
【０１０３】
ＩＶ．スタチンの活性の補助
さらにまた、アポＥヌルマウスの飲み水への低用量のＤ−４Ｆ（１μｇ／ｍＬ）の２４時間添加は、ＨＤＬ機能の顕著な改善をもたらさないことが発見された（例えば関連出願ＵＳＳＮ１０／４２３，８３０を参照されたい）。さらに、アポＥヌルマウスの飲み水への０．０５ｍｇ／ｍＬのアトルバスタチンまたはプラバスタチンのみの２４時間添加はＨＤＬ機能を改善しなかった。しかしながら、０．０５ｍｇ／ｍＬのアトルバスタチンまたはプラバスタチンと一緒にＤ−４Ｆ（１μｇ／ｍＬ）を飲み水に添加したとき、ＨＤＬ機能の顕著な改善があった。実際、前炎症性アポＥヌルＨＤＬは、３５０μｇ／ｍＬの正常ヒトＨＤＬ（ｈ，  ＨＤＬ例えば関連出願ＵＳＳＮ１０／４２３，８３０を参照されたい）と同じ抗炎症性になった。
【０１０４】
したがって、それらは単独ではＨＤＬ機能に影響を与えないＤ−４Ｆ単独投与またはスタチン単独投与は、一緒に投与されたとき相乗的に作用した。Ｄ−４ＦおよびスタチンはアポＥヌルマウスに一緒に与えられたとき、それらマウスの前炎症性ＨＤＬ（５０μｇ／ｍＬのＨＤＬ−コレステロール）は、ヒト動脈壁細胞のコカルチャーでＨＰＯＤＥ酸化ＰＡＰＣによって誘発される炎症性反応の防止で正常なヒトＨＤＬ（３５０μｇ／ｍＬのＨＤＬ−コレステロール）と同じように有効になった。
【０１０５】
したがって、ある種の実施態様では、本発明はスタチンの活性を強化する方法を提供する。前記方法は、一般的には本明細書に記載の１つまたは２つ以上のペプチドまたはアミノ酸対を１つまたは２つ以上のスタチンと同時に投与することを伴う。Ｄ−４Ｆまたは本明細書に記載の他の同様なペプチドはスタチンと経口投与ペプチドとの間の相乗作用を達成し、アテローム性硬化症を緩和する。この状況では、スタチンは極めて低い用量で投与することができ、それによって高投与量スタチンの使用に付随する種々の有害な副作用（例えば筋肉消耗）を回避することができ、及び／又は任意の与えられた用量でスタチンの抗炎症性特性を顕著に強化することができる。
【０１０６】
Ｖ．骨粗しょう症の抑制／処置．７
血管のカルシウム沈着および骨粗しょう症はしばしば同じ対象者に共存する（Ｏｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ，  ６７６：２９７−３０７；Ｂｏｕｋｈｒｉｓ  ａｎｄ  Ｂｅｃｋｅｒ  （１９７２）  ＪＡＭＡ，  ２１９：１３０７−１３１１；Ｂａｎｋｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｅｕｒ  Ｊ．  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ，  ２４：８１３−８１７；Ｌａｒｏｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｃｌｉｎ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ，  １３：６１１−６１４；Ｂｒｏｕｌｉｋｂａｎｄ  Ｋａｐｉｔｏｌａ  （１９９３）  Ｅｎｄｏｃｒ  Ｒｅｇｕｌ，  ２７：５７−６０；Ｆｒｙｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅ，  １９：１８５−１９４；Ｂａｒｅｎｇｏｌｔｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  Ｃａｌｃｉｆ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｉｎｔ，  ６２：２０９−２１３；Ｂｕｒｎｅｔｔ  ａｎｄ  Ｖａｓｉｋａｒａｎ  （２００２）  Ａｎｎ  Ｃｌｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍ，  ３９：２０３−２１０）。Ｐａｒｈａｍｉら（Ａｔｅｒｉｏｓｃｌ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ，  １７：６８０−６８７  （１９９７））は、軽度に酸化されたＬＤＬ（ＭＭ−ＬＤＬ）およびＭＭ−ＬＤＬ中の生物学的に活性を有する脂質（すなわち酸化された１−パルミトイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン（Ｏｘ−ＰＡＰＣ））は、イソプロスタン、８−イソプロスタグランジンＥ2と同様にアルカリホスファターゼ活性およびカルシウム沈着血管細胞（ＣＶＣ）の骨芽細胞分化をｉｎ  ｖｉｔｒｏで誘発するが（しかし非酸化リン脂質（ＰＡＰＣ）またはイソプロスタン、８−イソプロスタグランジンＦ2αは誘発しない）、ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１骨細胞の分化を抑制することを示した。
【０１０７】
骨単位は、マトリックスおよび線維芽細胞様細胞を収納する内皮下間隙によって取り巻かれている内皮細胞が並ぶ管腔の中心に位置するという点で、骨単位は動脈壁と類似する。前記内皮下間隙は、動脈壁の平滑筋細胞と類似する位置を占める前骨芽細胞および骨芽細胞によって取り巻かれている（上掲書）。海綿質の骨芽細胞もまた骨髄の内皮下間隙と結びく（上掲書）。Ｐａｒｈａｍｉらは、リポタンパク質は骨の動脈の内皮を通過して内皮下間隙に沈着することができ、前記間隙で前記リポタンパク質は冠状動脈の場合と同じように酸化され得ると説明した（上掲書）。前記著者らのｉｎ  ｖｉｔｒｏデータを基にして、彼らは、骨動脈の内皮下間隙および骨髄でのＬＤＬの酸化は骨芽細胞の分化および石化の低下（前記は骨粗しょう症の一因となるであろう）をもたらすであろうと予想した（上掲書）。彼らの仮説はさらに、ＬＤＬレベルは冠動脈のカルシウム沈着と正比例するように骨粗しょう症と正比例する（Ｐｏｈｌ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，  １０４：１９２７−１９３２）が、ＨＤＬレベルは骨粗しょう症と反比例する（Ｐａｒｈａｍｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）  Ａｔｅｒｉｏｓｃｌ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ，  １７：６８０−６８７）であろうと予想する。
【０１０８】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでは、骨髄の支質細胞株Ｍ２−１０Ｂ４の骨芽細胞分化はＭＭ−ＬＤＬによって抑制されるが、本来のＬＤＬでは抑制されなかった（Ｐａｒｈａｍｉ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ｊ  Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ  Ｒｅｓ，  １４：２０６７−２０７８）。アテローム性硬化症に感受性を有し、低脂肪飼料で飼育されたＣ５７ＢＬ／６（ＢＬ６）マウス由来の骨髄支質細胞を培養したとき、激しい骨形成分化が生じた（上掲書）。対照的に、高脂肪のアテローム形成性飼料を与えた後でマウスから採取した骨髄支質細胞を培養したときは、前記細胞は骨形成分化を生じなかった（上掲書）。この観察は、骨粗しょう症の発生における骨髄支質細胞の骨形成潜在能力の低下に対して可能な説明を提供するので特に重要である（Ｎｕｔｔａｌ  ａｎｄ  Ｇｉｍｂｌｅ  （２０００）  Ｂｏｎｅ，  ２７：１７７−１８４）。骨形成潜在能力の低下はｉｎ  ｖｉｖｏでは骨粗しょう症の骨における脂肪形成の増加を伴う（上掲書）。
【０１０９】
アポＥヌルマウスの飲み水に６週間Ｄ−４Ｆを与えることによって小柱の骨ミネラル濃度が劇的に増加することが見出され、本発明の他のペプチドも同様に作用すると考えられる。
【０１１０】
我々のデータは、骨粗しょう症は“骨のアテローム性硬化症”とみなすことができることを示している。骨粗しょう症は酸化された脂質の働きの結果のように見える。ＨＤＬはこれらの酸化脂質を破壊し、骨芽細胞の分化を促進する。我々のデータは、本発明のペプチドを哺乳動物に投与することによって（例えばアポＥヌルマウスの飲み水で）ほんの数週間で小柱の骨が劇的に増加することを示している。
【０１１１】
このことは、本明細書に記載したペプチドまたはアミノ酸対は骨粗しょう症の１つまたは２つ以上の症状の緩和に（例えば脱灰の抑制に）、または骨粗しょう骨のカルシウム再沈着の誘発に有用であることを示している。前記ペプチドはまた、哺乳動物（例えば骨粗しょう症のリスクを有する患者）で骨粗しょう症の症状の開始を妨げる予防薬として有用である。
【０１１２】
我々は、同様なメカニズムが冠状動脈のカルシウム沈着（例えば灰化大動脈狭窄）を引き起こすと考える。したがって、ある種の実施態様では、本発明は、例えば冠状動脈カルシウム沈着、灰化大動脈狭窄、骨粗しょう症などの疾患の症状を抑制または防止するために本明細書に記載のペプチドまたはアミノ酸対を使用することを意図する。
【０１１３】
他の適用症
特定の理論に拘束されないが、我々はまた、本明細書に記載のペプチドまたはアミノ酸対は、以下を含む（ただしこれらに限定されない）多様な他の症状の開始及び／又は１つまたは２つ以上の症状を予防的にまたは治療的に緩和するために有用であると考える：リウマチ性多発性筋痛、結節性多発性動脈炎、強皮症、紅斑性狼瘡、多発性硬化症、特発性肺線維症、慢性閉塞性肺疾患（例えば喘息）、アルツハイマー病、エイズおよび糖尿病。典型的には前記ペプチドはこれら症状における炎症性反応によって惹起されるか、または前記炎症反応に付随する症状の緩和に有用である。
【０１１４】
ＶＩＩ．ペプチド／アミノ酸対の投与
本発明の方法は、典型的には生物（好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒト）に本発明の１つまたは２つ以上のペプチドまたはアミノ酸対（又はそのようなペプチドやアミノ酸対の模倣体）を投与することを伴う。前記ペプチドまたはアミノ酸対は、本明細書に記載するように多数の任意の標準的方法にしたがって投与することができる。前記方法には、注射、座薬、吸入（例えば鼻腔スプレー、口腔吸入など）、経時放出移植、経皮パッチなどが含まれるが、ただしこれらに限定されない。特に好ましいある実施態様では、前記ペプチドは経口的に（例えばシロップ、カプセル、散剤、ゲルカプセルまたは錠剤として）投与される。
【０１１５】
本方法は本発明のただ１つのペプチドまたはアミノ酸対の投与、または２つまたは３つ以上の別個のペプチドまたはアミノ酸対の投与を伴うことができる。前記ペプチドまたはアミノ酸対はモノマーとして、またはダイマー、オリゴマーまたはポリマー形で提供することができる。ある種の実施態様では、マルチマー形は結合モノマー（例えばイオンによりまたは疎水的に結合される）を含むが、他のマルチマー形は共有結合された（直接結合またはリンカーを介して結合された）モノマーを含むことができる。
【０１１６】
本発明は人間での使用に関して記載されているが、動物のため、例えば獣医による使用についてもまた適切である。したがって、好ましい生物にはヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ウマ、ネコ、ブタ、有蹄類、ラルゴモルフ（ｌａｒｇｏｍｏｒｐｈ）が含まれるが、ただしこれらに限定されない。
【０１１７】
本発明の方法は、アテローム性硬化症の１つまたは２つ以上の症状（例えば高血圧、プラーク形成および破裂、臨床症状（例えば心臓発作、アンギナ、または卒中）の減少、高レベルの血中コレステロール、高レベルの低密度リポタンパク質、高レベルの超低密度リポタンパク質または炎症性タンパク質（例えばＣＲＰ）など）を示す人間または人間ではない動物に限定されず、予防的関係においても有用である。したがって、本発明のペプチドまたはアミノ酸対（またはその模倣体）は、アテローム性硬化症及び／又は本明細書に記載の他の適用症のあるものの１つまたは２つ以上の症状の開始／進行を防止するために生物に投与することができる。この関係で特に好ましい対象者は、アテローム性硬化症の１つまたは２つ以上のリスク因子（例えば家族歴、高血圧、肥満、高アルコール摂取、喫煙、高血中コレステロール、高血中トリグリセリド、高い血中ＬＤＬ、ＶＬＤＬ、ＩＤＬまたは低いＨＤＬ、糖尿病、または糖尿病の家族歴、高血中脂質、心臓発作、アンギナまたは卒中など）及び／又は本明細書に記載の他の症状の１つを示す対象者である。
【０１１８】
ある種の実施態様では、本発明のペプチドまたはアミノ酸対はまた、プレ−ベータ高密度リポタンパク質様粒子の形成およびサイクリングの刺激及び／又は脂質逆輸送および解毒の促進のために投与することができる。
【０１１９】
前記ペプチドまたはアミノ酸対はまたスタチンとの併用投与のために有用であり、この場合、それらは、典型的な投与用量のスタチンの活性を強化（例えば相乗作用を示し）、及び／又はスタチンを低用量で投与することを可能にする。
【０１２０】
さらにまた、前記ペプチドまたはアミノ酸対は、骨粗しょう症、及び／又は糖尿病、及び／又は本明細書に記載の他の症状の１つまたは２つ以上の症状の軽減または排除のために、及び／又は骨粗しょう症及び／又は本明細書に記載の他の適用症の１つまたは２つ以上の症状の開始の防止／抑制のために投与することができる。
【０１２１】
ＶＩＩＩ．ある種の好ましいペプチドおよびそれらの調製
Ａ）クラスＡ両親媒性ヘリックスペプチド
クラスＡ両親媒性ヘリックスを含むペプチド（“クラスＡペプチド”）はアテローム性硬化症の１つまたは２つ以上の症状を緩和することができるということは本発明の発見であった。クラスＡペプチドは、極性および非極性残基を分離させ、それによって極性−非極性界面に存在する陽性荷電残基、および極性面の中心に存在する陰性荷電残基をもつ極性および非極性面を形成するαヘリックスの形成を特徴とする（例えば以下を参照されたい：Ａｎａｎｔｈａｒａｍａｍａｉａｈ  （１９８６）  Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ，  １２８：６２６−６６８）。アポＡ−Ｉの４番目のエクソンは、３．６６７残基／ターンに折り畳まれたときクラスＡ両親媒性ヘリックス構造を生じることが記載されている。
【０１２２】
特に好ましいあるクラスＡペプチド（１８Ａと称する、例えば以下を参照されたい：Ａｎａｎｔｈａｒａｍａｍａｉａｈ  （１９８６）  Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ，  １２８：６２６−６６８）を本明細書に記載したように改変し、経口投与が可能でアテローム性硬化症の１つまたは２つ以上の症状の抑制または防止に高度に有効なペプチドを生成した。特定の理論に拘束されないが、本発明のペプチドはｉｎ  ｖｉｖｏで作用して、シーディング分子を摘み取ることによってＬＤＬの酸化を緩和することができると考えられる。
【０１２３】
我々は、Ｐａｌｇｕｎａｃｈａｒｉら（Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ＆  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １６：３２８−３３８  （１９９６））がコンピュータ計算により求めたとおり、１８Ａの疎水性面のＰｈｅ残基の数の増加は脂質親和性を理論的に高めるであろうと決定した。１８Ａの非極性面の残基のＰｈｅによる系統的置換によって理論的には６つのペプチドを得ることができるであろう。さらに２つ、３つおよび４つのＰｈｅをもつぺピチドは、それぞれ１３、１４および１５ユニットの理論的脂質親和性（λ）値を有するであろう。しかしながら、追加のＰｈｅが４個から５個に増加した場合λ値は４ユニット跳ね上がった（１９λユニット）。Ｐｈｅが６または７個に増加することによって劇的な増加は少ないであろう（それぞれ２０および２１λユニット）。したがって、我々は５つの追加Ｐｈｅ（したがってこのペプチドは５Ｆと称される）を選択した。特に好ましいある実施態様では、前記５Ｆペプチドは、アミノ末端残基をアセチル化しカルボキシル末端残基をアミド化してブロックした。
【０１２４】
前記新規なクラスＡペプチド類似体、５Ｆはアテローム性硬化症感受性マウスで病巣の拡大を抑制した。Ｌｅｖｉｎｅら（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９０：１２０４０−１２０４４  （１９９３））の実験を基にペプチド投与を用い、前記新規なペプチド類似体５ＦをマウスアポＡ−Ｉ（ＭｏＡ−Ｉ）と、これらマウスにおける食餌誘発アテローム性硬化症の抑制について比較した。
【０１２５】
他の多数のクラスＡペプチドがまた製造され、アテローム性硬化症の１つまたは２つ以上の症状の緩和に多様であるが顕著な程度の有効性が示された。多数のそのようなペプチドは表１に示されている。
【０１２６】
表１：本発明で使用されるアポＡ−Ｉの両親媒性ヘリックスの例示的模倣体
【０１２７】
【表１−１】
2007512228.tif 000003
【０１２８】
【表１−２】
2007512228.tif 000004
【０１２９】
【表１−３】
2007512228.tif 000005
【０１３０】
【表１−４】
2007512228.tif 000006
【０１３１】
1リンカーには下線が付されている。
ＮＭＡはＮ−メチルアントラニリルである。
【０１３２】
ある種の好ましい実施態様では、前記ペプチドは、１つまたは両方アスパラギン酸（Ｄ）がグルタミン酸（Ｅ）によって置き換えられた、４Ｆ（表１の配列番号：８）またはＤ−４Ｆの変種を含んでいる。さらにまた、１つ、２つ、３つまたは４つのアミノ酸がカルボキシ末端から欠失している、及び／又は１つ、２つ、３つまたは４つのアミノ酸がカルボキシ末端から欠失している、及び／又は１つまたは両方のアスパラギン酸（Ｄ）がグルタミン酸（Ｅ）によって置き換えられているペプチド（例えば４ＦまたはＤ−４Ｆ）が意図される。本明細書に記載のペプチドのいずれにおいても、Ｎ−末端をブロックし、マンチル成分を用いて標識することができる（例えばＮ−メチルアントラニリル）。
【０１３３】
表１の種々のペプチドは、アミノ末端を保護するアセチル基またはＮ−メチルアントラニリル基およびカルボキシル末端を保護するアミド基を用いて示されているが、これら保護基のいずれも除去してもよいし、及び／又は本明細書に記載の別の保護基で置換してもよい。特に好ましい実施態様では、前記ペプチドは本明細書に記載したように１つまたは２つ以上のＤ−型アミノ酸を含む。ある種の実施態様では、表１のペプチドの各アミノ酸（例えば各鏡像体アミノ酸）がＤ−型アミノ酸である。
【０１３４】
表１は完全に包括的ではないということもまた記載しておく。本明細書に提供される開示を用いれば、他の適切なクラスＡ両親媒性ヘリックスペプチドをルーチンで生成することができる（例えば保存的または半保存的置換（例えばＤをＥによって置き換える）、伸長、欠失などによって）。したがって、例えばある実施態様は本明細書に示したペプチド（例えば表１の配列番号：５−２３および４２−によって特定されるペプチド）の任意の１つまたは２つ以上の切端形を利用する。したがって、例えば配列番号：２４は、１つまたは２つ以上のＤアミノ酸を含む、１８ＡのＣ−末端から１４アミノ酸を含むペプチドを示しているし、配列番号：２５−４１は他の切端形を示している。
【０１３５】
さらに長いペプチドもまた適切である。そのような長いペプチドは全体がクラスＡ両親媒性ヘリックスを形成することが可能であり、また前記クラスＡ両親媒性ヘリックスは１つまたは２つ以上のペプチドドメインを形成することができる。さらにまた、本発明はペプチドのマルチマー型も意図する。したがって、例えば本明細書に示されているペプチドは、（直接的にまたはリンカー（例えば炭素リンカーまたは１つ若しくは２つ以上のアミノ酸）を介して１つまたは２つ以上の介在アミノ酸と）一緒に結合させることができる。例示的ポリマーペプチドには１８Ａ−Ｐｒｏ−１８Ａおよび配列番号：８１−８８のペプチドが含まれ、前記は、ある種の実施態様では１つまたは２つ以上のＤアミノ酸を含み、より好ましくは本明細書に記載したように各アミノ酸はＤアミノ酸であり、及び／又は一方または両方の末端が保護されている。
【０１３６】
Ｂ）非極性面に芳香族または脂肪族残基を有する他のクラスＡ両親媒性ヘリックスペプチド
ある種の実施態様では、本発明はまた改変クラスＡ両親媒性ヘリックスペプチドを提供する。ある種の好ましいペプチドは１つまたは２つ以上の芳香族残基を非極性面の中心に取り込んでいるか（例えば３ＦCπ（４Ｆに提示されている））、または非極性面の中心に１つまたは２つ以上の脂肪族残基を有する（例えば３ＦIπ）。特定の理論に拘束されないが、ペプチド３ＦCπの非極性面の中心にある芳香族残基は、非極性面の中心のπ電子の存在のために水分子がペプチド−脂質複合体の疎水性脂質アルキル鎖近くに進入することを許容し、細胞表面から隠されている反応酸素種（例えば脂質ペルオキシド）の進入を可能にすると我々は考えている。同様にまた、非極性面の中心に脂肪族残基を有するペプチド（例えば３ＦIπ）も同じように機能するが３ＦCπのようには効果的ではないと我々は考えている。
【０１３７】
好ましいペプチドは、前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、または抗炎症性ＨＤＬをいっそう抗炎症性にし、及び／又は動脈壁細胞によって生成されるＬＤＬ誘発単球化学走性活性をＤ４Ｆ若しくは表１に示した他のペプチドと同程度にまたはそれらよりも強く減少させるであろう。この活性を示すペプチドは、アテローム性硬化症および他の炎症性症状（例えば慢性関節リウマチ、紅斑性狼瘡、結節性多発性動脈炎、骨粗しょう症、アルツハイマー病、うっ血性心不全、内皮機能障害およびウイルス性疾患（例えばインフルエンザＡ）および多発性硬化症のような疾患）の緩和に有用である。
表２：ある種の好ましいペプチドの例
【０１３８】
【表２】
2007512228.tif 000007
【０１３９】
Ｃ）より小さなペプチド
最低限３つのアミノ酸から成るある種の小さなペプチド（（必須ではないが）好ましくは１つまたは２つ以上のアミノ酸がＤ立体異性体のアミノ酸であり、さらに脂質タンパク質の相互作用を可能にする疎水性ドメインおよびある程度の水溶性を可能にする親水性ドメインを有する）もまた、顕著な抗炎症性特性を有するということもまた驚くべき発見であった。特定の理論に拘束されないが、ペプチドは酸化された前炎症性リン脂質（例えばＯｘ−ＰＡＰＣ、ＰＯＶＰＣ、ＰＧＰＣおよびＰＥＩＰＣ）の形成に必要な“シーディング分子”と結合すると考えられる。多くの炎症性症状は少なくとも部分的には酸化された脂質によって仲介されるので、我々は、本発明のペプチドは生物学的に活性を有する酸化脂質の形成によることが判明しているまたは疑われている症状の緩和に有効であると考える。これら症状には、アテローム性硬化症、慢性関節リウマチ、紅斑性狼瘡、結節性多発性動脈炎、肺疾患、喘息、多発性硬化症、アルツハイマー病、糖尿病および骨粗しょう症が含まれるが、ただしこれらに限定されない。前記“小ペプチド”は典型的には長さが３アミノ酸から１５アミノ酸、より好ましくは約４アミノ酸から約１０または１１アミノ酸、もっとも好ましくは約４から約８または１０アミノ酸の範囲である。前記ペプチドは典型的には、疎水性末端アミノ酸または１つ若しくは２つ以上の疎水性“保護”基の結合により疎水性にされた末端アミノ酸を有することを特徴とする。
【０１４０】
ある種の実施態様では、前記ペプチドは下記式Ｉの特徴を有する：
Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3n−Ｘ4        Ｉ
式中、ｎは０または１であり、Ｘ1は疎水性アミノ酸であるか、及び／又は疎水性保護基をもち；Ｘ4は疎水性アミノ酸であるか、及び／又は疎水性保護基をもち；さらにｎが０のときは、Ｘ2は酸性アミノ酸または塩基性アミノ酸であり；ｎが１のときはＸ2およびＸ3はそれぞれ独立に酸性アミノ酸、塩基性アミノ酸、脂肪族アミノ酸または芳香族アミノ酸であり、Ｘ2が酸性アミノ酸であるときは、Ｘ3は塩基性アミノ酸、脂肪族アミノ酸、または芳香族アミノ酸であり；Ｘ2が塩基アミノ酸であるときは、Ｘ3は酸性アミノ酸、脂肪族アミノ酸、または芳香族アミノ酸であり；さらにＸ2が脂肪族または芳香族アミノ酸であるときは、Ｘ3は酸性アミノ酸または塩基性アミノ酸である。
【０１４１】
より長いペプチド（例えば１０、１１または１５アミノ酸まで）もまた本発明の範囲内に包含される。典型的には短いペプチド（例えば式Ｉのペプチド）が酸性、塩基性、脂肪族または芳香族アミノ酸を特徴とする場合、より長いペプチドは１つまたは２つ以上の前記タイプのアミノ酸を含む、酸性、塩基性、脂肪族または芳香族ドメインを特徴とする。
【０１４２】
１）活性を有する小ペプチドの機能的特性
多くの物理的特性によって、本発明の小ペプチド（例えば１０アミノ酸未満、好ましくは８アミノ酸未満、より好ましくは約３から約５または６アミノ酸）のＨＤＬをいっそう抗炎症性にする能力、さらにアテローム性硬化症及び／又は炎症性反応を特徴とする他の病変を哺乳動物で緩和する能力が予測されるということは本発明の驚くべき発見であった。前記物理的特性には、酢酸エチル中での高い溶解性（例えば約４ｍｇ／ｍＬを超える）および水性緩衝液（ｐＨ７．０）での溶解性が含まれる。リン脂質（例えば１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ））と水性環境下で接触させたとき、特に有効な小ペプチドは、直径約７．５ｎｍ（±０．１ｎｍ）の粒子の形成を誘発または形成に参画し、及び／又は積層二重層の形成を誘発または形成に参画し、前記二重層の大きさは３．４から４．１ｎｍで、二重層間に約２ｎｍの間隙を有し、及び／又は約３８ｎｍの小胞構造の形成を誘発または形成に参画する。ある種の好ましい実施態様では、小ペプチドは約９００Ｄａ未満の分子量を有する。
【０１４３】
したがって、ある種の実施態様では、本発明は、炎症性症状の１つまたは２つ以上の症状を緩和する小ペプチドを意図する。ここで前記小ペプチドは、長さが約３から約８アミノ酸、好ましくは約３から６または７アミノ酸、より好ましくは約３から約５アミノ酸であり；酢酸エチルに約４ｍｇ／ｍＬより高い濃度で溶解し；さらに水性緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解し；リン脂質と水性環境下で接触させたとき、直径約７．５ｎｍ（±０．１ｎｍ）の粒子を、及び／又は前記二重層の大きさが３．４から４．１ｎｍで、二重層間に約２ｎｍの間隙を有する積層二重層を形成し；約９００Ｄａ未満の分子量を有し；前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、または抗炎症性ＨＤＬをいっそう抗炎症性にし；さらにＬｙｓ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ（配列番号：２３８）をもたない（ここでＬｙｓ−Ａｒｇ−ＡｓｐおよびＳｅｒは全てＬアミノ酸である）。ある種の実施態様では、これら小ペプチドはリン脂質を酸化剤による酸化から保護する。
【０１４４】
ある種の実施態様では、これら小ペプチドは下記に記載の小ペプチドを含むことができるが、ただしこれら小ペプチドはそのように限定される必要はない。
【０１４５】
２）トリペプチド
本明細書に記載の所望の特性（例えば前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換する能力、動脈壁細胞によって生じるＬＤＬ誘発単球化学走性活性を低下させる能力、プレ−ベータＨＤＬを増加させる能力など）を示すある種のトリペプチド（３アミノ酸ペプチド）を合成することができることが発見された。ある種の実施態様では、前記ペプチドは式Ｉの特徴を有し、式中Ｎは０であり下記式ＩＩとして示される：
Ｘ1−Ｘ2−Ｘ4              ＩＩ
式中、末端アミノ酸（Ｘ1およびＸ4）は疎水性側鎖のために又は側鎖若しくはＣ及び／又Ｎ末端が１つ若しくは２つ以上の疎水性保護基でブロックされているために疎水性である（例えばＮ末端がＢｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、ニコチニル−などでブロックされ、さらにＣ末端が（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕなどでブロックされる）。ある種の実施態様では、Ｘ2アミノ酸は、酸性であるか（例えばアスパラギン酸、グルタミン酸など）、または塩基性である（例えばヒスチジン、アルギニン、リジンなど）。前記ペプチドは全てＬアミノ酸でもよく、または１つ若しくは２つ以上のＤアミノ酸を含んでいてもよく全てがＤアミノ酸でもよい。
【０１４６】
本発明のある種の好ましいトリペプチドには表３に示すペプチドが含まれるが、ただしこれらに限定されない。
【０１４７】
【表３−１】
2007512228.tif 000008
【０１４８】
【表３−２】
2007512228.tif 000009
【０１４９】
【表３−３】
2007512228.tif 000010
【０１５０】
【表３−４】
2007512228.tif 000011
【０１５１】
【表３−５】
2007512228.tif 000012
【０１５２】
表３のペプチドは特定の保護基とともに例示されているが、これら保護基は本明細書に記載の他の保護基で置換することが可能であること、及び／又は表示の保護基の１つまたは２つ以上を除去することができることを記載しておく。
【０１５３】
３）酸性および塩基性の中心アミノ酸をもつ小ペプチド
ある種の実施態様では、本発明のペプチドは４アミノ酸から約１０アミノ酸の範囲である。末端アミノ酸は、疎水性側鎖のために、または末端アミノ酸が１つ若しくは２つ以上の疎水性保護基をもつために典型的には疎水性である。末端アミノ酸（Ｘ1およびＸ4）は疎水性側鎖のために、または側鎖若しくはＣ及び／又Ｎ末端が１つ若しくは２つ以上の疎水性保護基でブロックされているために疎水性である（例えばＮ末端はＢｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、ニコチニル−などでブロックされ、さらにＣ末端は（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕなどでブロックされる）。典型的にはペプチドの中心部分は塩基性アミノ酸および酸性アミノ酸を含むか（例えば４量体の場合）、またはより長い分子では塩基性ドメイン及び／又は酸性ドメインを含む。
【０１５４】
これら４量体は式Ｉによって表すことができ、式中、Ｘ1およびＸ4は疎水性であるか、及び／又は本明細書に記載のように疎水性保護基をもち、Ｘ2は酸性であってこのときＸ3は塩基性であるか、またはＸ2は塩基性であってこのときＸ3は酸性である。前記ペプチドは全てがＬアミノ酸でもよいが、また１つ若しくは２つ以上のＤアミノ酸を含むか、または全てＤアミノ酸を含むことができる。
【０１５５】
ある種の好ましい本発明のペプチドには表４に示したペプチドが含まれるが、ただしこれらに限定されない。
【０１５６】
表４中心に酸性および塩基性アミノ酸を含む例示的小ペプチド
【０１５７】
【表４−１】
2007512228.tif 000013
【０１５８】
【表４−２】
2007512228.tif 000014
【０１５９】
【表４−３】
2007512228.tif 000015
【０１６０】
【表４−４】
2007512228.tif 000016
【０１６１】
【表４−５】
2007512228.tif 000017
【０１６２】
表４のペプチドは特定の保護基とともに例示されているが、これら保護基は本明細書に記載の他の保護基で置換することが可能であること、及び／又は表示の保護基の１つまたは２つ以上を除去することができることを記載しておく。
【０１６３】
４）中心の脂肪族アミノ酸とともに中心に酸性または塩基性アミノ酸のどちらかを有する小ペプチド
ある種の実施態様では、本発明のペプチドは４アミノ酸から約１０アミノ酸の範囲である。末端アミノ酸は、疎水性側鎖のために、または末端アミノ酸が１つ若しくは２つ以上の疎水性保護基をもつために典型的には疎水性である。末端アミノ酸（Ｘ1およびＸ4）は疎水性側鎖のために、または側鎖若しくはＣ及び／又Ｎ末端が１つ若しくは２つ以上の疎水性保護基でブロックされているために疎水性である（例えばＮ末端はＢｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、ニコチニル−などでブロックされ、さらにＣ末端は（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕなどでブロックされる）。典型的にはペプチドの中心部分は塩基性または酸性アミノ酸および脂肪族アミノ酸を含むか（例えば４量体の場合）、またはより長い分子では塩基性ドメインまたは酸性ドメインおよび脂肪族ドメインを含む。
【０１６４】
これら４量体は式Ｉによって表すことができ、式中、Ｘ1およびＸ4は疎水性であるか、及び／又は本明細書に記載のように疎水性保護基をもち、Ｘ2は酸性または塩基性であってそのときＸ3は脂肪族であるか、Ｘ2は脂肪族であってそのときＸ3は酸性または塩基性である。前記ペプチドは全てがＬアミノ酸でもよいが、また１つ若しくは２つ以上のＤアミノ酸を含むか、または全てＤアミノ酸を含むことができる。
【０１６５】
ある種の好ましい本発明のペプチドには表５に示したペプチドが含まれるが、ただしこれらに限定されない。
【０１６６】
表５：脂肪族の中心アミノ酸とともに中心に酸性または塩基性アミノ酸のどちらかを有するある種の好ましいペプチドの例
【０１６７】
【表５−１】
2007512228.tif 000018
【０１６８】
【表５−２】
2007512228.tif 000019
【０１６９】
表５のペプチドは特定の保護基とともに例示されているが、これら保護基は本明細書に記載の他の保護基で置換することが可能であること、及び／又は表示の保護基の１つまたは２つ以上を除去することができることを記載しておく。
【０１７０】
５）芳香族の中心アミノ酸とともに中心に酸性または塩基性アミノ酸のどちらかを有する小ペプチド
ある種の実施態様では、本発明のペプチドは４アミノ酸から約１０アミノ酸の範囲である。末端アミノ酸は、疎水性側鎖のために、または末端アミノ酸が１つ若しくは２つ以上の疎水性保護基をもつために典型的には疎水性である。末端アミノ酸（Ｘ1およびＸ4）は疎水性側鎖のために、または側鎖若しくはＣ及び／又Ｎ末端が１つ若しくは２つ以上の疎水性保護基でブロックされているために疎水性である（例えばＮ末端はＢｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、ニコチニル−などでブロックされ、さらにＣ末端は（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕなどでブロックされる）。典型的にはペプチドの中心部分は塩基性または酸性アミノ酸および芳香族アミノ酸を含むか（例えば４量体の場合）、またはより長い分子では塩基性ドメインまたは酸性ドメインおよび芳香族ドメインを含む。
【０１７１】
これら４量体は式Ｉによって表すことができ、式中、Ｘ1およびＸ4は疎水性であるか、及び／又は本明細書に記載のように疎水性保護基をもち、Ｘ2は酸性または塩基性であってそのときＸ3は芳香族であるか、Ｘ2は芳香族であってそのときＸ3は酸性または塩基性である。前記ペプチドは全てがＬアミノ酸でもよいが、また１つ若しくは２つ以上のＤアミノ酸を含むか、または全てＤアミノ酸を含むことができる。５量体は式Ｉをわずかに改変することによって表すことができ、ここでＸ5は表６に示すように挿入され、式中Ｘ5は典型的には芳香族アミノ酸である。
【０１７２】
ある種の好ましい本発明のペプチドには表６に示したペプチドが含まれるが、ただしこれらに限定されない。
【０１７３】
表６：芳香族の中心アミノ酸とともに中心に酸性または塩基性アミノ酸のどちらかを有するある種の好ましいペプチドの例
【０１７４】
【表６】
2007512228.tif 000020
【０１７５】
表６のペプチドは特定の保護基とともに例示されているが、これら保護基は本明細書に記載の他の保護基で置換することが可能であること、及び／又は表示の保護基の１つまたは２つ以上を除去することができることを記載しておく。
【０１７６】
６）芳香族アミノ酸または中心のヒスチジンによって分けられた複数の芳香族アミノ酸を有する小ペプチド
ある種の実施態様では、本発明のペプチドは分子の中心に露出したπ電子を特徴とし、前記π電子は粒子の水和を可能にし、ペプチド粒子が前炎症性酸化脂質（例えば脂肪酸ヒドロペルオキシドおよびｓｎ−２位にアラキドン酸の酸化生成物を含むリン脂質）を捕捉するのを可能にする。
【０１７７】
ある種の実施態様では、これらのペプチドは最低限４アミノ酸および最大限約１０アミノ酸から成り、好ましくは（必然的ではないが）１つまたは２つ以上のＤ立体異性アミノ酸を有し、末端アミノ酸は、疎水性側鎖のために、または末端アミノ酸が１つ若しくは２つ以上の疎水性保護基をもつために疎水性である（例えばＮ末端はＢｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、ニコチニル−などでブロックされ、さらにＣ末端は（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕ基などでブロックされる）。中心に酸性または塩基性アミノ酸を有する代わりに、これらペプチドは一般的に中心に芳香族アミノ酸を有するか、またはペプチドの中心にあるヒスチジンによって分けられる複数の芳香族アミノ酸を有する。
【０１７８】
ある種の好ましい本発明のペプチドには表７に示すペプチドが含まれるが、ただしこれらに限定されない。
【０１７９】
表７：中心に芳香族アミノ酸を有するかまたは１つ若しくは２つ以上のヒスチジンによって隔てられる複数の芳香族アミノ酸または芳香族ドメインを有するペプチドの例
【０１８０】
【表７】
2007512228.tif 000021
【０１８１】
表７のペプチドは特定の保護基とともに例示されているが、これら保護基は本明細書に記載の他の保護基で置換することが可能であること、及び／又は表示の保護基の１つまたは２つ以上を除去することができることを記載しておく。
【０１８２】
７）トリペプチドおよびテトラペプチドの概要
明確にするために、本発明の多数のトリペプチドおよびテトラペプチドは下記の表８で一般的に要約される。
【０１８３】
表８：本発明のある種のペプチドの一般的構造
【０１８４】
【表８】
2007512228.tif 000022
【０１８５】
より長いペプチドを所望の場合は、Ｘ2およびＸ3は個々のアミノ酸ではなくドメイン（所定のタイプの２つまたは３つ以上のアミノ酸の領域）を表すことができる。表８は例示的を意図し、限定的ではない。本明細書で提供される教示を用いて、他の適切なペプチドも容易に特定できよう。
【０１８６】
８）アミノ酸対およびジペプチド
ある種の実施態様では本発明は、ある種のアミノ酸対は、互いに連携して投与するかまたは結合させてジペプチドを形成させたとき本明細書に記載した１つ又は２つ以上の特性を有するという発見に関する。したがって、特定の理論に拘束されないが、前記アミノ酸対が本明細書に記載するのように互いに共同して投与されるとき、それらはｉｎ  ｖｉｖｏでミセルの形成に参画するか、またはミセルの形成を誘発することができる。
【０１８７】
本明細書に記載の他の小ペプチドと同様に、ペプチド対はｉｎ  ｖｉｖｏで結合し、酢酸エチル中での高い溶解性（例えば４ｍｇ／ｍＬを超える）、水性緩衝液（ｐＨ７．０）での溶解性を含む物理的特性を示すと考えられる。リン脂質、例えば１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）との水性環境下での接触に際して、前記アミノ酸対は、直径約７．５ｎｍ（±０．１ｎｍ）の粒子の形成を誘発または形成に参画し、及び／又は二重層の寸法が３．４から４．１ｎｍの規模の積層二重層であって前記積層二重層の間に約２ｎｍの間隙を有する積層二重層の形成を誘発または形成に参画し、及び／又は約３８ｎｍの小胞構造の形成を誘発または形成に参画する。
【０１８８】
さらにまた、前記アミノ酸対は以下の生理学的に関連する特性の１つ又は２つ以上を提示することができると考えられる：
１．それらは、前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、または抗炎症性ＨＤＬをいっそう抗炎症性にする；
２．それらは、動脈壁細胞によって生じるＬＤＬ誘発単球化学走性活性を減少させる；
３．それらは、プレ−βＨＤＬの形成およびサイクリングを刺激する；
４．それらはＨＤＬコレステロールを上昇させる；及び／又は
５．それらはＨＤＬパラオキソナーゼ活性を増加させる。
【０１８９】
アミノ酸対は別個のアミノ酸として投与してもよく（連続的にまたは同時に（例えば混合製剤として）投与される）、または直接的に若しくはリンカー（例えばＰＥＧリンカー、炭素リンカー、分枝リンカー、直鎖リンカー、複素環式リンカー、誘導脂質で形成されたリンカーなど）を介して共有結合させてもよい。ある種の実施態様では、前記アミノ酸対はペプチド結合を介して共有結合により連結してジペプチドが形成される。種々の実施態様では、ジペプチドは典型的には２つのアミノ酸を含みその各々には保護基が付加されているが、本発明はまたただ１つのアミノ酸だけが１つまたは２つ以上の保護基をもつジペプチドも意図する。
【０１９０】
前記アミノ酸対は典型的には、各アミノ酸が少なくとも１つの保護基（例えば本明細書に記載した疎水性保護基）と結合しているアミノ酸を含む。前記アミノ酸はＤ型またはＬ型であろう。ある種の実施態様では、対を構成するアミノ酸が互いに結合していない場合は、各アミノ酸は２つの保護基（例えば表９の分子１および２）をもつ。
表９：本発明の例示的アミノ酸対
【０１９１】
【表９】
2007512228.tif 000023
【０１９２】
＊これは典型的には第二のアミノ酸と連携して投与されるであろう。
＊＊ある種の実施態様では、これらジペプチドは互いに連携して投与されるであろう。
＊＊＊ある種の実施態様では、このペプチドは単独で、または本明細書に記載の他のペプチドの１つと組み合わせて投与されるであろう。
【０１９３】
適切なアミノ酸対は、保護アミノ酸対及び／又はジペプチドを提供し、続いて上述の物理的及び／又は生理的特性の１つまたは２つ以上について前記アミノ酸対／ジペプチドをスクリーニングすることによって容易に特定することができる。ある種の実施態様では、本発明はアスパラギン酸およびフェニルアラニンを含むアミノ酸対及び／又はジペプチドを除外する。ある種の実施態様では、本発明は、１つのアミノ酸が（−）−Ｎ−［（トランス−４−イソプロピルシクロヘキサン）カルボニル］−Ｄ−フェニルアラニン（ナテグリニド）であるアミノ酸対及び／又はジペプチドを除外する。
【０１９４】
ある種の実施態様では、前記対を構成するアミノ酸は、それぞれ独立に酸性アミノ酸（例えばアスパラギン酸、グルタミン酸など）、塩基性アミノ酸（例えばリジン、アルギニン、ヒスチジンなど）および非極性アミノ酸（アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、メチオニンなど）から成る群から選択される。ある種の実施態様では、第一のアミノ酸が酸性または塩基性である場合は第二のアミノ酸は非極性であり、さらに第二のアミノ酸が酸性または塩基性である場合は第一のアミノ酸は非極性である。ある種の実施態様では、第一のアミノ酸が酸性である場合は第二のアミノ酸は塩基性であり、逆もまた同様である。（例えば表１０を参照されたい）。
【０１９５】
同様な組合せはジペプチドを投与することによって得ることができる。したがって、例えばある種の実施態様では、表９の分子３および４が互いに併用して投与されるであろう。
【０１９６】
表１０：一般化されたある種のペプチド対
【０１９７】
【表１０】
2007512228.tif 000024
【０１９８】
これらのアミノ酸／ジペプチドは例示を意図しており、限定するものではない。本明細書に提供した教示を用いて、他の適切なアミノ酸対／ジペプチドを容易に決定できる。
【０１９９】
Ｄ）他のペプチド改変
本明細書に記載したペプチドは、特にそれらが１つまたは２つ以上のＤ−アミノ酸を取り込むとき、それらは活性を保持し経口的にも投与することができるということは驚くべき発見であった。さらにまた、この経口投与によって比較的効率のよい取り込みおよび顕著な血中半減期がもたらされ、それによってアテローム性硬化症または炎症性過程を特徴とする他の病変の１つまたは２つ以上の症状を緩和する効果的な方法が提供される。
【０２００】
本明細書に提供した開示を用いて、当業者は例示されたペプチドを日常的に改変し、本発明のペプチドに類似する他のペプチドを製造することができる。例えば、現存するアミノ酸の日常的な保存的または半保存的置換（例えばＤをＥに置換）を実施することができる。得られたペプチドの脂質親和性に対する種々の置換の影響は、Ｐａｌｇｕｎａｃｈａｒｉら（Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ，  ＆  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １６：３２８−３３８  （１９９６））が記載したコンピュータによる方法を用いて予測することができる。ペプチドは、クラスＡα−ヘリックス構造が保存されるかぎり長くも短くもできる。さらにまた、得られるペプチドを対照種によって内因的に生成されるペプチドといっそう類似させるために置換を実施することができる。
【０２０１】
ある種の実施態様では、本発明のペプチドは、米国特許４，６４３，９８８号に記載のペプチドの“Ｄ”型、より好ましくは一端または両端に保護基が結合されている“Ｄ”型を含む。ある種の実施態様では、鏡像体アミノ酸の少なくとも５０％が“Ｄ”型、より好ましくは鏡像体アミノ酸の少なくとも８０％が“Ｄ”型、もっとも好ましくは鏡像体アミノ酸の少なくとも９０％または全てが“Ｄ”型アミノ酸である。
【０２０２】
ある種の実施態様では、本発明のペプチドは天然に存在するアミノ酸または天然に存在するアミノ酸のＤ型を利用するが、天然に存在しないアミノ酸（例えば、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウム、ノルロイシン、エプシロン−アミノカプロン酸、４−アミノブタン酸、テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸、８−アミノカプリル酸、４−アミノ酪酸、Ｌｙｓ（Ｎ（エプシロン）−トリフルオロアセチル）、α−アミノイソ酪酸など）による置換もまた意図される。
【０２０３】
本明細書に記載したペプチドの他に、ペプチド模倣体もまた本明細書で意図される。ペプチド類似体は製薬工業では、鋳型ペプチドの特性と類似する特性を有する非ペプチドドラッグとして一般的に用いられる。これらのタイプの非ペプチド化合物は“ペプチド模倣体”または“ペプチドミメティクス”と称され（Ｆａｕｃｈｅｒｅ  （１９８６）  Ａｄｖ．  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓ．  １５：２９；Ｖｅｂｅｒ  ａｎｄ  Ｆｒｅｉｄｉｎｇｅｒ  （１９８５）  ＴＩＮＳ  ｐ．３９２；Ｅｖａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８７）  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ３０：１２２９）、通常はコンピュータ支援分子モデリングにより開発される。治療的に有用なペプチドと構造的に類似するペプチド模倣体は、同等の治療効果または予防効果を得るために用いることができる。
【０２０４】
一般的には、ペプチド模倣体は模範ポリペプチド（例えば本明細書に記載の４Ｆ、配列番号：２５８）と構造的に類似するが、１つまたは２つ以上のペプチド結合は、当業者に既知でさらに下記参考文献に記載の方法によって、−ＣＨ2ＮＨ−、−ＣＨ2Ｓ−、−ＣＨ2−ＣＨ2−、−ＣＨ＝ＣＨ−（シスおよびトランス）、−ＣＯＣＨ2−、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ2−、−ＣＨ2ＳＯ−などから成る群から選択される結合で場合により置き換えられる：Ｓｐａｔｏｌａ  （１９８３）  ｐ．２６７，  “Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ，  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｏｉｎｓ”，  Ｂ．  Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ，  ｅｄｓ．，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，；Ｓｐａｔｏｌａ  （１９８３）  Ｖｅｇａ  Ｄａｔａ  １（３）  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｂａｃｋｂｏｎｅ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ．（概説）；Ｍｏｒｌｅｙ  （１９８０）  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ｐｐ．４６３−４６８（概説）；Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９７９）  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｅｐｔ  Ｐｒｏｔ  Ｒｅｓ  １４：１７７−１８５（−ＣＨ2ＮＨ−、−ＣＨ2ＣＨ2−）；Ｓｐａｔｏｌａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８６）  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ  ３８：１２４３−１２４９（−ＣＨ2Ｓ−）；Ｈａｎｎ  （１９８２）  Ｊ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ．  Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ  Ｉ  ３０７−３１４（−ＣＨ＝ＣＨ−（シスおよびトランス））；Ａｌｍｑｕｉｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８０）  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ２３：１３９２−１３９８（−ＣＯＣＨ2−）；Ｊｅｎｎｉｎｇｓ−Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８２）  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．  ２３：２５３３（−ＣＯＣＨ2−）；Ｍ．  Ｓｚｅｌｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，  欧州特許出願ＥＰ  ４５６６５  （１９８２）ＣＡ：９７：３９４０５  （１９８２）（−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ2−）；Ｈｏｌｌａｄａｙ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８３）  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ  ２４：４４０１−４４０４（−Ｃ（ＯＨ）ＣＨ2−）；およびＨｒｕｂｙ  （１９８２）  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．，  ３１：１８９−１９９（−ＣＨ2Ｓ−）。
【０２０５】
特に好ましい非ペプチド結合は−ＣＨ2ＮＨ−である。そのようなペプチド模倣体はポリペプチド体よりも顕著な利点を有することができる。前記利点には例えばより経済的な生産、より高い化学的安定性、強化された薬理学的特性（半減期、吸収、能力、有効性など）、抗原性の低下、その他が含まれる。
【０２０６】
さらにまた、本明細書に記載のペプチドの環式順列またはコンセンサス配列若しくは実質的に同一のコンセンサス配列変種を含む拘束ペプチド（環状化ペプチドを含む）も当業者に既知の方法（Ｒｉｚｏ  ａｎｄ  Ｇｉｅｒａｓｃｈ  （１９９２）  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ６１：３８７）により、例えばペプチドを環状化する分子内ジスルフィド架橋を形成することができる内部システイン残基を加えることによって作製することができる。
【０２０７】
ＩＸ．ペプチドの機能的アッセイ
本発明のある種のペプチドは種々の式（例えば上記の式Ｉ）及び／又は個々の配列によって本明細書に記載されている。しかしながら、ある種の実施態様では、本発明の好ましいペプチドは以下の機能的特性の１つまたは２つ以上によって特徴づけられる：
１．それらは、前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、または抗炎症性ＨＤＬをいっそう抗炎症性にする；
２．それらは、動脈壁細胞によって生じるＬＤＬ誘発単球化学走性活性を減少させる；
３．それらは、プレ−βＨＤＬの形成およびサイクリングを刺激する；
４．それらはＨＤＬコレステロールを上昇させる；及び／又は
５．それらはＨＤＬパラオキソナーゼ活性を増加させる。
【０２０８】
本明細書に開示した具体的なペプチド、及び／又は本明細書に記載した種々の式に対応するペプチドは、所望のこれら活性の１つまたは２つ以上について容易にテストすることができる。
【０２０９】
これらの機能的特性の各々についてスクリーニングする方法は当業者には周知である。さらにまた、そのようなスクリーニングは本明細書の実施例で例示される。特に、単球化学走性活性、ＨＤＬコレステロールおよびＨＤＬ  ＨＤＬパラオキソナーゼ活性のためのアッセイはＰＣＴ／ＵＳ０１／２６４９７（ＷＯ０２／１５９２３）で示されている。ＨＤＬ炎症性及び／又は抗炎症性特性を測定するアッセイは下記の記載のように実施された。
【０２１０】
Ａ）ＨＤＬ炎症性／抗炎症性特性の決定
１）単球化学走性活性（ＭＣＡ）のアッセイ
以前に記載されたように（Ｖａｎ  Ｌｅｎｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，  １０６：１１２７−１１３２）リポタンパク質、ヒト動脈壁コカルチャーおよび単球を調製し、単球化学走性活性（ＭＣＡ）を決定した。標準的なコントロールＬＤＬによるＭＣＡの誘発は対象者のＨＤＬの非存在下または存在下で決定した。ＨＤＬの非存在下での値を１．０に基準化した。ＨＤＬの添加後の１．０を越える値は前炎症性ＨＤＬを示し、１．０未満の値は抗炎症性ＨＤＬを示した。
【０２１１】
２）無細胞アッセイ
無細胞アッセイは、蛍光誘発剤としてＰＥＩＰＣを用いる以前に発表された方法9の改変であった。簡単に記せば、ＨＤＬは硫酸デキストラン法によって単離した。硫酸デキストランおよびマグネシウムイオンを含むシグマ（Ｓｉｇｍａ）“ＨＤＬコレステロール試薬”（カタログ番号３５２−３）を蒸留水に溶解した（１０．０ｍｇ／ｍＬ）。５０μＬの硫酸デキストラン溶液を５００μＬのテスト血漿と混合し、室温で５分インキュベートし、続いて８，０００ｇで１０分遠心した。ＨＤＬを含む上清をコレステロールアッセイキット（カタログ番号２３４０−２００、Ｔｈｅｒｍｏ  ＤＭＡ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ，  ＴＸ）を用いたコレステロール測定の後で実験に使用した。我々は、以前にこの方法で単離したＨＤＬは生物活性を有するリン脂質を、通常の超遠心法で単離したＨＤＬと比較して同様な程度に不活化することを報告した（Ｎａｖａｂ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｊ  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ，  １３０８−１３１７）。患者およびコントロールから得たＨＤＬサンプルの炎症性／抗炎症性特性を決定するために、テストＨＤＬの非存在下または存在下におけるＰＥＩＰＣによるＤＣＦＨの酸化の結果としての蛍光濃度の変化を用いた。ＤＣＦＨ−ＤＡは新しいメタノールに２．０ｍｇ／ｍＬで溶解し、室温でインキュベートし、光から３０分保護し、ＤＣＦＨが遊離した。アッセイは、プレート読取装置を用いる多数のサンプルの分析のために適応させた。平底の黒色ポリスチレンマイクロタイタープレート（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｏｒ２、カタログ番号１４−２４５−１７６、Ｆｉｓｈｅｒ）をこの目的に利用した。１０μＬのＰＥＩＰＣ溶液（最終濃度５０μｇ／ｍＬ）および９０μＬのＨＤＬ含有硫酸デキストラン上清（最終濃度１０μｇ／ｍＬコレステロール）のアリコットをマイクロタイタープレートに取り、混合した。続いて前記プレートを３７℃で回転装置上で１．０時間インキュベートした。続いて１０μＬのＤＣＦＨ溶液（０．２ｍｇ／ｍＬ）を各ウェルに添加して混合し、回転させながら３７℃でさらに２時間インキュベートした。続いて励起波長４８５ｎｍおよび放射波長５３０ｎｍ並びに５１５ｎｍのカットオフを用い、フォトマルチプライアー感度を“中”に設定してプレート読取装置（Ｓｐｅｃｔｒａ  Ｍａｘ，  Ｇｅｍｉｎｉ  ＸＳ；  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）で蛍光を測定した。アッセイ内変動性およびアッセイ間変動性の値はそれぞれ５．３±１．７％および７．１±３．２％であった。ＨＤＬの非存在下での値を１．０に基準化した。テストＨＤＬの添加後に１．０よりも大きい値は前炎症性ＨＤＬを示し、１．０未満の値は抗炎症性ＨＤＬを示す。
【０２１２】
３）他の手順
インターロイキン−６（ＩＬ−６）および腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）の血中レベルは以前に報告された方法（Ｓｃｈｅｄｔ−Ｎａｖｅ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ，  ８６：２０３２−２０４２；Ｐｉｇｕｅｔ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８７）  Ｊ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ  Ｍｅｄ  １６６：１２８０−１２８９）によって決定した。血中総コレステロール、トリグリセリド、ＬＤＬ−コレステロール、ＨＤＬ−コレステロールおよびグルコースは以前に記載されたように（Ｎａｖａｂ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ，  ９９：２００５−２０１９）キット（Ｓｉｇｍａ）を用いて決定し、さらにｈｓ−ＣＲＰレベル（Ｒｉｆａｉ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ，  ４５：２１３６−２１４１）は、イムノダイアグノスティック（Ｉｍｍｕｎｏｄｉａｇｎｏｓｔｉｋ）のサンドイッチ酵素イムノアッセイ（ＡＬＰＣＯ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，  Ｗｉｎｄｈａｍ，  ＮＨ）を用いて決定した。統計的有意性はモデルＩ  ＡＮＯＶＡで決定し、有意性はｐ＜０．０５と定義された。
【０２１３】
４）小ペプチドの物理的特性のスクリーニング
多数の物理的特性によって、本発明の小ペプチド（例えば１０アミノ酸未満、好ましくは８アミノ酸未満、より好ましくは約３から約５または６アミノ酸）のＨＤＬをいっそう抗炎症性にする能力およびアテローム性硬化症及び／又は炎症性反応を特徴とする他の病変を哺乳動物で緩和する能力が予測されるということは、本発明の驚くべき発見であった。本明細書で説明されるように、物理的特性には、酢酸エチル中での高い溶解性（例えば約４ｍｇ／ｍＬより高い）および水性緩衝液（ｐＨ７．０）での溶解性が含まれる。リン脂質、例えば１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）と水性環境下で接触させたとき、特に有効な小ペプチドは、直径約７．５ｎｍ（±０．１ｎｍ）をもつ粒子を形成し、及び／又は二重層間に約２ｎｍの間隙を有し、前記二重層の大きさが３．４から４．１ｎｍである積層二重層を形成し、及び／又は約３８ｎｍの小胞構造を形成する。ある種の好ましい実施態様では、前記小ペプチドは約９００Ｄａ未満の分子量を有する。
【０２１４】
実質的にはいずれの小ペプチドも、これら特性の１つまたは２つ以上について、例えば本明細書の実施例３に記載されたように容易にスクリーニングすることができる。実際のところ、約１０4または１０5より多い、より好ましくは約１０6または１０7より多い、最も好ましくは約１０8または１０9より多いペプチドを含む組合せ小ペプチドライブラリーが、当業者に周知の方法を用いて容易に作製することができる。前記ペプチドライブラリーはランダムライブラリーでもよく、あるいは、ある種の実施態様では前記ライブラリーは、本明細書で提供された式の１つまたは２つ以上にしたがって作製された小ペプチドを含むであろう。
【０２１５】
続いて前記ペプチドライブラリーは、例えば高処理スクリーニング方法を用いて上述の物理的特性の１つまたは２つ以上について容易にスクリーニングすることができる。これらアッセイで陽性であるペプチドは、おそらくＨＤＬをいっそう抗炎症性にする能力およびアテローム性硬化症及び／又は炎症性反応を特徴とする他の病変を哺乳動物で緩和する能力をおそらく有するであろう。
【０２１６】
上述のスクリーニング方法は単なる例示であり、限定を意図しないことを特に言及しておく。本明細書に提供された開示を用いれば、前記ペプチドの所望の機能的特性のための他のアッセイが用意に提供されよう。
【０２１７】
Ｘ．ペプチドの調製
Ａ）一般的合成方法
本発明で用いられるペプチドは、ペプチドの標準的化学合成技術を用いて化学的に合成することができる。または、特に前記ペプチドが“Ｄ”アミノ酸を含まない場合は、ペプチドは組換えにより容易に発現させることができる。“Ｄ”ポリペプチドを組換えにより発現させる場合は、宿主生物（例えば細菌、植物、菌類細胞など）を、１つまたは２つ以上のアミノ酸がもっぱらＤ型で前記生物に提供される環境下で培養することができる。前記のような系で組換えにより発現されたペプチドはしたがってそれらＤアミノ酸を取り込む。
【０２１８】
ある種の実施態様では、Ｄアミノ酸は、Ｄアミノ酸を認識する改変アミノアセチル−ｔＲＮＡシンセターゼを用いて組換えにより発現されるペプチドに取り込ませることができる。
【０２１９】
ある種の好ましい実施態様では、前記ペプチドは、当業者に周知の多数の液相または固相ペプチド合成技術のいずれかによって化学的に合成することができる。配列のＣ−末端アミノ酸が不溶性支持体に結合され、続いて配列内の残余のアミノ酸が連続的に付加される固相合成が、本発明のポリペプチドの化学的合成にとって好ましい方法である。固相合成の技術は当業者には周知であり、さらに例えば以下の文献に記載されている：Ｂａｒａｎｙ  ａｎｄ  Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ  （１９６３）  Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；  ｐｐ．３−２８４，  “Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：
Ａｎａｌｙｓｉｓ，  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｂｉｏｌｏｇｙ．  Ｖｏｌ．２：  Ｓｐｅｃｉａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｐａｒｔ  Ａ；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９６３）  Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ，  ８５：２１４９−２１５６；Ｓｔｅｗａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）  Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ２nd  ｅｄ．  Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．  Ｃｏ．，  Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，  Ｉｌｌ。
【０２２０】
ある実施態様では、前記ペプチドは、固体支持体としてベンズヒドリルアミン樹脂（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ，  樹脂１ｇにつき０．５９ｍｍｏｌのＮＨ2）を用いる固相ペプチド合成工程によって合成される。ＣＯＯＨ末端アミノ酸（例えばｔ−ブチルカルボニル−Ｐｈｅ）は４−（オキシメチル）フェナセチル基を介して固体支持体に結合される。これは、通常のベンジルエステル結合よりも安定的な結合であり、しかも最終的ペプチドは水素添加によって切断することができる。水素ドナーとしてギ酸を用いる転移水素添加がこの目的に用いられる。ペプチド合成および合成されたペプチドの分析のために使用される詳細なプロトコルは、Ａｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈら（Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，  ２６０（１６）：１０２４８−１０２５５  （１９８５））の文献に付随するミニプリント補稿に記載されている。
【０２２１】
ペプチド（特にＤアミノ酸を含むペプチド）の化学合成では、合成によって通常多数の切端形ペプチドが所望の完全長の生成物の他に生成されるということを記載しておく。精製方法（典型的にはＨＰＬＣ）は完全長生成物の顕著な量の低下をもたらす。
【０２２２】
最長の形態の精製における損失を防ぐために、特にＤペプチド（例えばＤ−４）の合成では、混合物を透析して使用し、それによって最後のＨＰＬＣ精製を除外することができるということは本発明の発見であった。そのような混合物は高度に精製された生成物の効力の約５０％（例えばタンパク質生成物の単位重量当たり）を失うが、前記混合物は約６倍多いペプチドを含み、したがって総活性はより高い。
【０２２３】
Ｂ）Ｄ型アミノ酸の取り入れ
Ｄ−アミノ酸はペプチドの１つまたは２つ以上の箇所に、単に化学合成でＤ型誘導アミノ酸残基を用いることによって取り入れることができる。固相ペプチド合成のためのＤ型残基は多数の供給元から市販されている（例えば以下を参照されたい：Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｔｅｃｈ，  Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ；Ｎｏｖａ  Ｂｉｏｃｈｅｍ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ；Ｓｉｇｍａ，  Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ；Ｂａｃｈｅｍ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  Ｉｎｃ．，  Ｔｏｒｒａｎｃｅ，  ｅｔｃ）。Ｄ型アミノ酸は、所望にしたがってペプチドの任意の箇所から完全に省略することも任意の箇所に取り入れることも可能である。したがって、例えばある種の実施態様では、ペプチドはただ１つのＤアミノ酸を含むことができ、一方他の実施態様では、ペプチドは少なくとも２つ、一般的には少なくとも３つ、より一般的には少なくとも４つ、もっとも一般的には少なくとも５つ、好ましくは少なくとも６つ、より好ましくは少なくとも７つ、もっとも好ましくは少なくとも８つのＤアミノ酸を含む。特に好ましい実施態様では、本質的に一つおきの（鏡像体）アミノ酸がＤ型アミノ酸である。ある種の実施態様では、鏡像体アミノ酸の少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％がＤ型アミノ酸である。特に好ましいある実施態様では、本質的に全ての鏡像体アミノ酸がＤ型アミノ酸である。
【０２２４】
Ｃ）液相合成方法
ある種の実施態様では、本発明のペプチドは液相法を用いて容易に合成することができる。そのような合成法のあるスキームは図１および２に示されている。
【０２２５】
このスキームでは、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤは所望のペプチド中のアミノ酸を表す。Ｘ−は永久的なα−アミノ保護基を表す。Ｙ−は永久的なα−カルボキシル保護基を表す。ｍおよびｎの文字は、Ｎ−およびＣ−末端アミノ酸が側鎖官能基をもつ場合は側鎖保護基を表す。側鎖保護基ｏおよびｐは、側鎖保護基ｍおよびｐ並びにα−アミノおよびα−カルボキシル保護基が安定である中性条件下で、水素ドナーとしてギ酸アンモニウムを用いる例えば触媒的転移水素添加のような処理によって除去することができる保護基である（Ａｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈ  ａｎｄ  Ｓｉｖａｎａｎｄａｉａｈ  （１９７７）  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ．  Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．  ４９０：１−５；Ｂａｂｉｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９７８）  Ｊ  Ｏｒｇ  Ｃｈｅｍ  ４４：３４４２−３４４４）。ＨＯＢＴ−ＨＢＴＵは縮合剤を表し、前記試薬下では最小限のラセミ化が観察される。活性化されたアミノ酸Ｘ−Ａ（ｍ）に、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール−２（Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアンモニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＯＢＴ−ＨＢＴＵ）および少量の第三アミン、例えばＤＭＦ中のジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）がＨ2Ｎ−Ｂ（ｎ）−ＣＯＯ-のＤＩＥＡ塩の２当量で添加され、一晩室温で攪拌される。前記反応は、過剰のアミノ酸（この場合α−アミノは遊離状態であり、カルボキシルはＤＩＥＡ塩として一時的に保護される）を用い、活性化カルボン酸に関して反応が完了するまで実施される。クエン酸水溶液（１０％）を用いて反応混合物を酸性化させ、酢酸エチルで抽出した。この過程で、遊離アミノ酸はクエン酸中に残留する。酢酸エチルを水で洗浄した後、Ｎ−末端が保護されたジペプチド遊離酸を５％重炭酸ナトリウム溶液で抽出し、さらに酸性化する。ジペプチド遊離酸を酢酸エチルで抽出し、有機相を乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、溶媒を蒸発させてジペプチド遊離酸を得た。トリペプチドはまた、ジペプチド遊離酸を適切に保護されたアミノ酸（この場合α−アミノは遊離状態で、カルボキシルはＤＩＥＡ塩として一時的に保護される）と反応させることによって同様のやり方で得られる。テトラペプチドを得るために、適切にカルボキシルが保護されたアミノ酸をＨＯＢＴ−ＨＢＴＵを用いて縮合させた。最終的なテトラペプチドは保護ペプチドであるので、縮合後の反応混合物は酢酸エチル中に取り入れられ、重炭酸塩（５％）水溶液およびクエン酸（５％）水溶液の両方、続いて水で十分に洗浄される。これらの洗浄によって過剰な遊離酸および遊離塩基および縮合剤が除去されるであろう。続いて保護ペプチドを酢酸エチル（またはエーテル）および石油エーテルを用いて再沈殿させる。続いて遊離保護ペプチドを新しく調製したパラジウム黒（Ｐｄ黒）の存在下で水素ドナーとしてギ酸アンモニウムを用いて触媒転移水素添加に付す。この反応はほぼ中性の条件下で実施することができ、したがって酸感受性側鎖保護基に影響を与えない。この過程によってアミノ酸ＢおよびＣ上の保護基が除去されるであろう。この方法の例は配列番号：２５６の合成により下記で示される。
【０２２６】
この反応スキームは例示であって限定を意図したものではないことを記載しておく。本明細書に提供した教示を用いて、当業者は他の適切な反応スキームを理解するであろう。
【０２２７】
Ｄ）保護基
ある種の実施態様では、構成アミノ酸及び／又は末端アミノ酸の１つまたは２つ以上のＲ基は保護基（もっとも好ましくは疎水性保護基）でブロックされる。特定の理論に拘束されないが、本発明の対象ペプチドの封鎖、特にアミノ及び／又はカルボキシル末端の封鎖は、経口による送達を大きく改善し、血中半減期を顕著に増加させることは本発明の発見である。
【０２２８】
多数の保護基がこの目的に適している。そのような基には、アセチル、アミドおよびアセチルをもつアルキル基が含まれ（ただしこれらに限定されない）、Ｎ−末端保護にはアルキル基が特に好ましく、カルボキシル末端保護にはアミド基が好ましい。ある種の実施態様では、封鎖基はさらに検出可能な標識としても機能することができる（例えばＮ−メチルアントラニリル）。
【０２２９】
特に好ましいある種の実施態様では、保護基には脂肪酸のようなアルキル鎖、プロピオニル、ホルミルおよび他のものが含まれるが、ただしこれらに限定されない。特に好ましいカルボキシル保護基にはアミド、エステルおよびエーテル形成保護基が含まれる。ある好ましい実施態様では、アセチル基がアミノ末端の保護に用いられ、アミド基がカルボキシル末端の保護に用いられる。これらの封鎖基はペプチドのヘリックス形成傾向を強化する。特に好ましいある種の封鎖基には、種々の長さのアルキル基、例えば式ＣＨ3−（ＣＨ2）n−ＣＯ−を有する基が含まれる。式中、ｎは約３から約２０、好ましくは約３から約１６、より好ましくは約３から約１３、もっとも好ましくは約３から約１０の範囲である。
【０２３０】
他の保護基には以下が含まれる（ただしこれらに限定されない）：Ｎ−メチルアントラニリル、Ｆｍｏｃ、ｔ−ブトキシカルボニル（ｔ−ＢＯＣ）、９−フルオレンアセチル基、１−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレン−１−カルボン酸基、ベンジルオキシカルボニル、キサンチル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メトキシ２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルホニル（Ｍｔｒ）、メシチレン−２−スルホニル（Ｍｔｓ）、４，４−ジメトキシベンゾヒドリル（Ｍｂｈ）、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル（Ｐｍｃ）、４−メチルベンジル（ＭｅＢｚｌ）、４−メトキシベンジル（ＭｅＯＢｚｌ）、ベンジルオキシ（ＢｚｌＯ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル（Ｄｄｅ）、２，６−ジクロロベンジル（２，６−ＤｉＣｌ−Ｂｚｌ）、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（２−Ｂｒ−Ｚ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、シクロヘキシルオキシ（ｃＨｘＯ）、ｔ−ブトキシメチル（Ｂｕｍ）、ｔ−ブトキシ（ｔＢｕＯ）、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、アセチル（Ａｃ）、およびトリフルオロアセチル（ＴＦＡ）。
【０２３１】
保護基／封鎖基は、そのような基を本発明のペプチドを含む適切な残基に結合させる方法と同様に当業者に周知である（例えば以下を参照されたい：Ｇｒｅｅｎｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ２ｎｄ  ｅｄ．，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．  Ｓｏｍｅｒｓｅｔ，  Ｎ．Ｊ．）。ある好ましい実施態様では、例えばアセチル化は、ペプチドが樹脂上にあるときに無水酢酸を用いて合成中に実施される。アミド保護は、適切な合成のための樹脂を選択することによって達成することができる。本明細書の実施例に記載したペプチドの合成時にはリンクアミド樹脂が用いられた。合成が完了した後、酸性二官能性アミノ酸（例えばＡｓｐおよびＧｌｕ）および塩基性アミノ酸Ｌｙｓ、Ｔｙｒのヒドロキシル上の半永久的保護基は全て同時に除去される。酸性処理を用いてそのような樹脂から遊離されたペプチドは、Ｎ−末端がアセチルとして保護され、カルボキシルはＮＨ2として保護され、さらに他の保護基の全てが同時に除去された状態で出現する。
【０２３２】
ＸＩ．ペプチドの取り込み／経口による利用性の強化
Ａ）Ｄ−アミノ酸の使用
全てがＬアミノ酸のペプチド（例えばその他の点では本発明のペプチド配列を有する）はＤ型（すなわち本発明のペプチド）と併用して投与されるとき、Ｄ型ペプチドの取り込みは高められるということはまた、本発明の驚くべき発見であった。したがって、ある種の実施態様では、本発明は、本発明の方法でＤ型およびＬ型ペプチドの組合せを使用することを意図する。Ｄ型ペプチドおよびＬ型ペプチドは別個のアミノ酸配列を有することができるが、好ましい実施態様では、それらはともに本明細書に記載したペプチドのアミノ酸配列を有し、さらに好ましい実施態様では、それらは同じアミノ酸配列を有する。
【０２３３】
本発明のクラスＡ両親媒性ヘリックスペプチドのコンカテマーもまたアテローム性硬化症の１つまたは２つ以上の症状の緩和に有効であるということもまた本発明の発見であった。前記コンカテマーを構成するモノマーは直接結合させるか、またはリンカーによって結合させることができる。ある種の実施態様では、前記リンカーはアミノ酸リンカー（例えばプロリン）またはペプチドリンカー（例えばＧｌｙ4Ｓｅｒ3）（配列番号：４４８）である。ある種の実施態様では、前記コンカテマーは２量体、より好ましくは３量体、さらに好ましくは４量体、もっとも好ましくは５量体、８量体、１０量体または１５量体である。
【０２３４】
Ｂ）ＤおよびＬアミノ酸を交互にする
ペプチドの中心に鏡像異性体型のアミノ酸を交互に入れることによって粒子の水和を可能にし、ペプチド粒子が前炎症性酸化脂質（例えば脂肪酸ヒドロオキシド）およびアラキドン酸の酸化生成物をｓｎ−２位に含むリン脂質をより捕捉しやすくするということが発見された。
【０２３５】
したがってある種の実施態様では、本明細書に記載したペプチドは、４アミノ酸から１０−１５アミノ酸を含むように合成され、好ましくは（必然ではないが）、中心（非末端）アミノ酸が交互にＤおよびＬ立体異性型アミノ酸である。末端アミノ酸は、疎水性側鎖のためまたは前記アミノ酸が本明細書に記載したように疎水性封鎖基をもつために疎水性である（例えばＮ−末端は、Ｂｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、およびニコチニル−などでブロックされ、さらにＣ−末端は（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕなどでブロックされる）。
【０２３６】
そのようなペプチドの例は表１１に例示されている。
【０２３７】
表１１：ＤおよびＬ残基を交互に中心領域に含むペプチドのある種の例
【０２３８】
【表１１】
2007512228.tif 000025
【０２３９】
表１１には特定のアミノ酸配列が例示されているが、本明細書に記載したいずれのペプチドでも交互になっているＤおよびＬアミノ酸を用いることができる。
【０２４０】
Ｃ）ビオチン誘導ペプチド
ある種の実施態様では、本明細書に記載のいずれのペプチドも１つまたは２つ以上のビオチンと結合させることができる（直接的にまたはリンカーを介して間接的に共有結合させる）。ビオチンは腸のナトリウム依存マルチビタミン輸送物質と相互作用し、それによって経口投与されたペプチドの取り込みおよび生体利用性を高める。
【０２４１】
ビオチンは、当業者に既知の多数の簡便な手段のいずれかによって、直接的に結合またはリンカーもしくはアミノ酸の側鎖を介して結合させることができる。ある種の実施態様では、ビオチンはリジンのアミノ基に結合される。
【０２４２】
多数のビオチン結合ペプチドが表１２に例示される。
【０２４３】
表１２：ある種の好ましいペプチドの例
【０２４４】
【表１２】
2007512228.tif 000026
【０２４５】
ＸＩＩ．医薬製剤
本発明の方法を実施するために、本発明の１つ若しくは２つ以上のペプチド、またはアミノ酸対、またはペプチド模倣体が、例えばアテローム性硬化症の１つまたは２つ以上の症状を有すると、またはアテローム性硬化症のおそれが在ると診断された個体に投与される。前記ペプチド、またはアミノ酸対、またはペプチド模倣体は“天然の”形態で、または所望される場合は塩、エステル、アミド、プロドラッグ、誘導体などの形態で投与することができるが、ただし、前記塩、エステル、アミド、プロドラッグまたは誘導体は薬理学的に適切である、すなわち本方法で有効であることを条件とする。前記活性物質の塩、エステル、アミド、プロドラッグおよび他の誘導体は、合成有機化学分野の当業者に既知の標準的方法を用いて調製することができ、さらに例えば以下の文献に記載されている：Ｍａｒｃｈ  （１９９２）  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ；  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  ４ｔｈ  Ｅｄ．  ＮＹ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ）。
【０２４６】
例えば、酸付加塩は、典型的には適切な酸との反応を伴う通常の方法を用いて遊離塩基から製造される。一般的には、薬剤の塩基形は極性有機溶媒（例えばメタノールまたはエタノール）に溶解され、さらに酸がこれに添加される。生じた塩が沈殿するか、またはより極性の小さい溶媒を転化することによって溶液から取り出す。酸付加塩を調製するために適切な酸には有機酸（例えば酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、蓚酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸など）も無機酸（例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸など）が含まれる。酸付加塩は、適切な塩基との処理によって遊離塩基に再度変換することができる。本発明の活性な物質の特に好ましい酸付加塩はハロゲン化塩であり、例えば塩酸または臭化水素酸を用いて調製することができるものである。逆に、ペプチドまたは模倣体の塩基性塩調製物は、医薬的に許容できる塩基（例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、トリメチルアミンなど）を用いて同様のやり方で製造することができる。特に好ましい塩基性塩にはアルカリ金属塩、例えばナトリウム塩および銅塩が含まれる。
【０２４７】
エステルの調製は典型的には、薬剤の分子構造内に存在しうるヒドロキシル及び／又はカルボキシル基の官能化を伴う。前記エステルは典型的には遊離アルコール基（すなわち式ＲＣＯＯＨ（式中Ｒはアルキル、好ましくは低級アルキル）のカルボン酸に由来する成分）のアシル置換誘導体である。エステルは、所望の場合は、通常の水素添加分解または加水分解工程を用いて遊離酸に再度変換することができる。
【０２４８】
アミドおよびプロドラッグはまた当業者に公知の技術または関連文献に記載の技術を用いて調製することができる。例えば、アミドは、適切なアミン反応物質を用いてエステルから製造するか、またはアンモニアまたは低級アルキルアミンとの反応によって無水物もしくは酸塩化物から製造することができる。プロドラッグは、典型的には、個体の代謝系によって改変されるまでは治療的に活性をもたない化合物を生じる成分の共有結合によって製造される。
【０２４９】
本明細書で特定されたペプチドまたはアミノ酸対または模倣体は、アテローム性硬化症及び／又はその症状および／または本明細書に特定した他の適応症１つまたは２つ以上の予防的及び／又は治療的処置のために、非経口、局所、経口、鼻腔（または別には吸入）、直腸または限局投与で（例えばエーロゾルによってまたは経皮的に）有用である。本医薬組成物は、投与方法に応じて多様なユニット剤形で投与することができる。適切なユニット剤形には散剤、錠剤、ピル、カプセル、ロゼンジ、座薬、膏薬、鼻腔スプレー、注射剤、移植可能な徐放製剤、脂質複合体などが含まれるが、ただしこれらに限定されない。
【０２５０】
本発明のペプチド及び／又はアミノ酸対及び／又はペプチド模倣体は典型的には医薬的に許容できる担体（賦形剤）と混合され、薬理学的組成物が形成される。医薬的に許容できる担体は、１つまたは２つ以上の生理学的に許容できる化合物を含むことができ、前記は例えば組成物を安定化させるため、または活性物質の吸収を増加または低下させるために機能する。生理学的に許容できる化合物は、例えば炭水化物（例えばグルコース、シュクロースまたはデキストラン）、抗酸化剤（例えばアスコルビン酸またはグルタチオン）、キレート剤、低分子量タンパク質、保護および取り込み強化物質（例えば脂質、活性物質のクリアランスまたは加水分解を低下させる組成物、または賦形剤）、または他の安定化剤及び／又は緩衝剤を含むことができる。
【０２５１】
他の生理学的に許容できる化合物には湿潤剤、乳化剤、分散剤または微生物の増殖若しくは働きを防止するために特に有用な保存料が含まれる。種々の保存料がよく知られており、例えばフェノールおよびアスコルビン酸が含まれる。医薬的に許容できる担体（生理学的に許容できる化合物を含む）の選択は、例えば活性物質の投与ルートおよび活性物質の個々の生理化学的特性に左右されることは当業者には理解されよう。
【０２５２】
賦形剤は好ましくは無菌的で、一般的に望ましくない物質を含まない。これらの組成物は通常のよく知られている滅菌技術によって滅菌することができる。
【０２５３】
治療的応用では、本発明の組成物は、アテローム性硬化症の１つまたは２つ以上の症状をもつ患者またはアテローム性硬化症のおそれがある患者に、前記疾患及び／又はその合併症の治癒または少なくとも部分的な防止若しくは進行の停止に十分な量で投与される。これを達成するために適切な量は“治療的に有効な用量”と定義される。この使用のために有効な量は疾患の重篤度および患者の一般的な健康状態に左右されるであろう。患者に必要でありさらに患者が耐性を示す投与量および頻度に応じて、前記組成物の単回投与または複数回投与を実施することができる。いずれの場合にも、前記組成物は、患者を効果的に治療（１つまたは２つ以上の症状を緩和）するために本発明の製剤の活性物質の十分な量を提供しなければならない。
【０２５４】
ペプチドまたはアミノ酸対または模倣体の濃度は幅広く変動することが可能であり、選択される個々の投与態様および患者の要求にしたがって原則的には液体の容積、粘度、体重などを基準に選択されるであろう。しかしながら濃度は典型的には約０．１または１ｍｇ／ｋｇ／日から約５０ｍｇ／ｋｇ／日および時にはそれより高い範囲の投与量を提供するために選択されるであろう。典型的な投与量は、約３ｍｇ／ｋｇ／日から約３．５ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは約３．５ｍｇ／ｋｇ／日から約７．２ｍｇ／ｋｇ／日、より好ましくは約７．２ｍｇ／ｋｇ／日から約１１．０ｍｇ／ｋｇ／日、もっとも好ましくは約１１．０ｍｇ／ｋｇ／日から約１５．０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。ある種の好ましい実施態様では、投与量は約１０ｍｇ／ｋｇ／日から約５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。そのような投与量は、個々の対象者および対象群の治療計画を最適にするために変動させることができることは理解されよう。
【０２５５】
ある種の好ましい実施態様では、本発明のペプチド及び／又はアミノ酸対及び／又はペプチド模倣体は、当業者に周知の標準的な方法にしたがって、経口的に投与されるか（例えば錠剤により）、または注射剤として投与される。他の好ましい実施態様では、前記ペプチドまたはアミノ酸対はまた、通常の経皮的ドラッグ送達システムを用いて皮膚から送達することができる。前記経皮的送達システムは、すなわち経皮“膏薬”であって、典型的には皮膚に固定されるドラッグ送達装置として機能するラミネート内に活性物質が収納されている。そのような構造物には、典型的には上部の裏地層の下に存在する層または“レザバー”内に薬剤組成物が収められている。この文脈での“レザバー”という用語は、最終的に皮膚表面への送達に利用することができる大量の“活性物質”を指すことは理解されよう。したがって、例えば“レザバー”は、膏薬の裏地層上の粘着剤に、または当業者に既知の多様な種々のマトリックス製剤のいずれかに活性物質を含むことができる。膏薬はただ１つのレザバーを含むことができ、また多数のレザバーを含むこともできる。
【０２５６】
ある実施態様では、レザバーは、ドラッグ送達時に皮膚にシステムを固定するために機能する医薬的に許容できる接触接着剤のポリマーマトリックスを含むことができる。適切な皮膚接触接着剤の例には、ポリエチレン、ポリシロキサン、ポリイソブチレン、ポリアクリレート、ポリウレタンなどが含まれるが、ただしこれらに限定されない。あるいは、薬剤収納レザバーおよび皮膚接触粘着剤は分離した別々の層として存在し、接着剤はレザバーの下に位置し、この場合接着剤は上述のポリマーマトリックスであってもよいが、また液体若しくはヒドロゲルレザバーであっても、または他の何らかの形態を有するものでもよい。これらラミネート内の裏地層（装置の上部表面として機能する）は、好ましくは“膏薬”の基本構造成分として機能し、装置に大きな可撓性を提供する。裏地層として選択される材料は好ましくは、活性物質および存在する他のいずれの物質に対しても実質的に非透過性である。
【０２５７】
局所ドラッグ送達のために好ましい他の製剤には軟膏およびクリームが含まれるが、ただしこれらに限定されない。軟膏は半固形調製物であり、典型的にはワセリンまたは他のワセリン誘導体を基剤とする。選択した活性物質を含むクリームは典型的には粘稠な液体または半固形乳液で、しばしば水中油または油中水である。クリームの基剤は典型的には水で洗浄可能で、油相、乳化剤および水相を含む。油相（時折”内部”相と呼ばれる）は一般的にはワセリンおよび脂肪アルコール（例えばセチルまたはステアリルアルコール）を含み、水相は、通常（ただし必然ではないが）容積で油相を超え一般的には湿潤剤を含む。クリーム製剤の乳化剤は、一般的には非イオン性、陰イオン性、陽イオン性または両性界面活性剤である。使用される具体的な軟膏またはクリームは、当業者には理解されるところであるが、最適なドラッグ送達を提供するものである。他の担体またはベヒクルのように、軟膏基剤は不活性であり、安定、非炎症性であり、さらに感作を誘発しないものであるべきである。
【０２５８】
典型的なペプチド製剤と異なり、Ｄ型アミノ酸を含む本発明のペプチド、アミノ酸対は、胃酸などによるタンパク質分解に対する防御を実施しないで経口的にさえ投与することが可能である。にもかかわらず、ある種の実施態様では、ペプチド送達は保護賦形剤の使用によって強化することができる。これは典型的には、ポリペプチドを酸性および酵素性加水分解に対して耐性にする組成物とポリペプチドとの複合体を形成するか、またはポリペプチドを適切な耐性を有する担体（例えばリポソーム）中にパッケージすることによって達成される。経口送達に対してポリペプチドを保護する手段は当業界で周知である（例えば治療薬剤の経口送達ための脂質組成物を開示する米国特許５，３９１，３７７号を参照されたい）。
【０２５９】
Ａ）徐放性製剤
高い血中半減期は徐放性タンパク質“パッケージ”系の使用によって維持することができる。そのような徐放系は当業者に周知である。一つの好ましい実施態様では、タンパク質およびペプチドのためのプロリース（ＰｒｏＬｅａｓｅ）生物分解性微小球送達系（Ｔｒａｃｙ  （１９９８）  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｐｒｏｇ  １４：１０８；Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６），  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ  ２：７９５；Ｈｅｒｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８），  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ  Ｒｅｓ  １５：３５７）は、ポリマーマトリックス中にタンパク質を収納する生物分解性ポリマー微小球を含む乾燥粉末で、前記は（他の物質とともにまたは他の物質を含まずに）乾燥製剤として調合することができる。
【０２６０】
プロリース微小球の製造プロセスは、タンパク質の完全性を維持しながら高いタンパク質被包化効率を達成するために特に設計された。前記プロセスは以下の工程から成る：（ｉ）安定化賦形剤とともに薬剤溶液をスプレーフリーズドライすることによって原料タンパク質から凍結乾燥させたタンパク質粒子を調製し、（ｉｉ）薬剤−ポリマー懸濁液を調製し続いて超音波処理または均質化して薬剤粒子サイズを低下させ、（ｉｉｉ）液体窒素中に微粒化することにより凍結薬剤−ポリマー微小球を製造し、（ｉｖ）前記ポリマー溶媒をエタノールで抽出し、さらに（ｖ）ろ過および真空乾燥させて最終生成物の乾燥粉末を製造する。得られた粉末は固形のタンパク質を含み、前記タンパク質は多孔性ポリマー粒子内に均一にしっかりと分散している。本プロセスでもっとも一般的に用いられるポリマー、ポリ（ラクチドーコーグリコリド）（ＰＬＧ）は生物適合性および生物分解性の両方を有する。
【０２６１】
被包化は低温（例えば−４０℃）で実施することができる。被包化中に、タンパク質は水の非存在下で固体状態で維持され、したがって水によって誘発されるタンパク質の配座移動度を最小限にし、反応物質として水を含むタンパク質の分解反応が防止され、タンパク質が変性をこうむる可能性がある有機相−水相界面反応を回避することができる。好ましいプロセスでは、ほとんどのタンパク質が不溶性で、したがって高い被包化効率（例えば９５％を超える）が得られる溶媒が用いられる。
【０２６２】
別の実施態様では、溶液の１つまたは２つ以上の成分は、直ぐに希釈できるように例えば貯蔵容器中に（例えば予め測定された容積で）、または一定容積の水に直ぐに添加できるように可溶性カプセル中に“濃縮物”として提供することができる。
【０２６３】
Ｂ）混合製剤
ある種の事例では、本発明の１つまたは２つ以上のペプチド及び／又はアミノ酸対は１つまたは２つ以上の活性物質（例えばスタチン、ベータブロッカー、ＡＣＥ阻害剤、脂質など）と併用して投与される。前記２つの物質（例えばペプチドおよびスタチン）は同時にまたは連続して投与することができる。連続投与の場合は、前記２つの物質は、両方が同じような時間にわたって生理学的に適切な濃度を達成できるように（例えば両物質がある共通の時間に活性を有することができるように）投与される。
【０２６４】
ある種の実施態様では、両物質は同時に投与される。そのような事例では、両物質をただ１つの混合製剤として提供することが便利であろう。これは、当業者に周知の多様な方法によって実施することができる。例えば錠剤製剤の場合には、錠剤は２つの層を含み、一方の層は例えばスタチンを含み、他方の層は例えばペプチドを含む。経時放出カプセルでは、カプセルは２つの経時放出ビーズセットを含み、１つはペプチドのためで１つはスタチンを含む。
【０２６５】
前述の製剤および投与方法は例示を意図し限定ではない。本明細書に提供された教示を用いて、他の適切な製剤および投与態様が容易に考案できることは理解されよう。
【０２６６】
ＸＩＩＩ．追加の薬理学的に活性な物質
追加の薬理学的に活性な物質を主要な活性物質（例えば本発明のペプチドまたはアミノ酸対）とともに送達することができる。一つの実施態様では、そのような物質にはアテローム性硬化症及び／又はその合併症のおそれを軽減する物質が含まれるが、ただしこれに限定されない。そのような物質にはベータブロッカー、ベータブロッカーとチアジド利尿薬との組合せ、スタチン、アスピリン、ＡＣＥ阻害剤、ＡＣＥレセプター阻害剤（ＡＲＢ）などが含まれるが、ただしこれらに限定されない。
【０２６７】
Ａ）スタチン
本発明の１つまたは２つ以上のペプチドを１つまたは２つ以上のスタチンと“共同的に”投与することによってスタチンの効果が相乗的に強化されるということは驚くべき発見であった。すなわち、スタチンは同様な効能をより低い用量で達成し、それによってこれら薬剤に付随する潜在的な悪い副作用（例えば筋肉るい痩）を予防し、及び／又はスタチンを任意の与えられた用量でいっそう顕著に抗炎症性にすることができる。
【０２６８】
スタチンの主要な作用はＬＤＬ−コレステロールレベルを低下させることであり、それらは多くの他のタイプの薬剤よりも強くＬＤＬ−コレステロールを減少させる。スタチンは一般的には酵素ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼを阻害する（前記酵素は体内でのコレステロール産生速度を制御する）。これらの薬剤は典型的には、コレステロールの産生をスローダウンさせることによって、さらに既に血中にあるＬＤＬ−コレステロールを除去する肝臓の能力を高めることによってコレステロールを減少させる。
【０２６９】
これら薬剤によってもたらされる総コレステロールおよびＬＤＬ−コレステロールの顕著な低下は、心臓発作および心疾患による死亡の顕著な低下をもたらすように思われる。これらの研究におけるスタチンの処置の記録およびそれらのＬＤＬ−コレステロールを低下させる能力のおかげで、コレステロールを低下させる薬剤が必要なときには、スタチンはもっとも頻繁に処方される薬剤になった。スタチンを用いた研究によって、これら薬剤で患者のＬＤＬ−コレステロールレベルが２０から６０％低下したことが報告された。スタチンはまた、上昇したトリグリセリドレベルを低下させ、さらにＨＤＬ−コレステロールの軽度の増加をもたらす。最近になって、スタチンは、達成された脂質の低下の度合いに直接には関係しないであろうと思われる抗炎症性特性を有することが認識された。例えば、スタチンは、血漿の脂質レベルの変化と相対的に無関係である炎症性マーカーＣＲＰの血漿レベルを減少させることが見出された。スタチンによりもたらされる臨床事象の減少の予測で、スタチンのこの抗炎症性活性は、ＬＤＬの低下と同じかまたはそれより重要であることが見出された。
【０２７０】
スタチンは通常は夕食時または就寝時に単回投与で与えられる。これらの医薬は、昼よりも夜に身体がコレステロールを生成するという事実を利用してしばしば夕方与えられる。本明細書に記載したペプチドと併用されたとき、前記併用されるペプチド／スタチンによる処方はまた典型的には夕方に与えられるであろう。
【０２７１】
適切なスタチンは当業者には周知である。そのようなスタチンには、アトルバスタチン（Ｌｉｐｉｔｏｒ（商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）、シムバスタチン（Ｚｏｃｏｒ（商標）、Ｍｅｒｃｋ）、プラバスタチン（Ｐｒａｖａｃｈｏｌ（商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ（商標））、フルバスタチン（Ｌｅｓｃｏｌ（商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ロバスタチン（Ｍｅｖａｃｏｒ（商標）、Ｍｅｒｃｋ）、ロスバスタチン（Ｃｒｅｓｔｏｒ（商標）、Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ）およびピタバスタチン（Ｓａｎｋｙｏ）などが含まれるが、ただしこれらに限定されない。
【０２７２】
併用スタチン／ペプチドの投与量は、各患者についてルーチン的に最適化される。典型的には、スタチンは数週間後に結果を示し、最大効果は４から６週間で得られる。スタチンおよび本明細書記載のペプチドの１つとの併用治療の前に、医師はスタチンの開始のためにＬＤＬ−コレステロールおよびＨＤＬ−コレステロールレベルを含む日常的検査を実施するであろう。さらにまた、医師は患者のＨＤＬの抗炎症性特性を測定し、高い感度をもつアッセイによりＣＲＰレベルを決定するであろう。併用治療の約４から６週間後に、典型的には医師はこれらに検査を繰り返し、前記医薬の投与量を調節して最大の脂質低下および最大の抗炎症性活性を達成するであろう。
【０２７３】
Ｂ）コレステロール吸収阻害剤
ある種の実施態様では、本発明の１つまたは２つ以上のペプチド及び／又はアミノ酸対は、１つまたは２つ以上のコレステロール吸収阻害剤と一緒に対象者に投与される。前記ペプチドは、前記コレステロール吸収阻害剤の前、後または同時に投与される。後者の事例では、コレステロール吸収阻害剤は別個の製剤として、または前記１つまたは２つ以上のペプチドとの混合製剤として提供することができる。
【０２７４】
コレステロール吸収阻害剤は当業者には周知である。ある重要なコレステロール吸収阻害剤はエゼチミブ（Ｅｚｅｔｉｍｉｂｅ）である。前記はまた１−（４−フルオロフェニル）−３（Ｒ）−［３−（４−フルオロフェニル）−３（Ｓ）−ヒドロキシプロピル］−４（Ｓ）−（４−ヒドロキシフェニル）−２−アゼチジノン（Ｍｅｒｃｋから入手できる）としても知られている。エゼチミブは、小腸によるコレステロール吸収を阻害することによって血液コレステロールを減少させる。
【０２７５】
Ｃ）ベータブロッカー
適切なベータブロッカーには、心選択的（選択的ベータ１ブロッカー）、例えばアセブトロール（Ｓｅｃｔｒａｌ（商標））、アテノロール（Ｔｅｎｏｒｍｉｎ（商標））、ベータキソロール（Ｋｅｒｌｏｎｅ（商標））、ビソプロロール（Ｚｅｂｅｔａ（商標））、メトプロロール（Ｌｏｐｒｅｓｓｏｒ（商標））などが含まれるが、ただしこれらに限定されない。適切な非選択的ブロッカー（ベータ１およびベータ２を等しくブロックする）にはカルテオロール（Ｃａｒｔｒｏｌ（商標））、ナドロール（Ｃｏｒｇａｒｄ（商標））、ペンブトロール（Ｌｅｖａｔｏｌ（商標））、ピンドロール（Ｖｉｓｋｅｎ（商標））、カルベジロール（Ｃｏｒｅｇ（商標））、プロプラノロール（Ｉｎｄｅｒａｌ（商標））、チモロール（Ｂｌｏｃｋａｄｒｅｎ（商標））、ラベタロール（Ｎｏｒｍｏｄｙｎｅ（商標）、Ｔｒａｎｄａｔｅ（商標））などが含まれるが、ただしこれらに限定されない。
【０２７６】
適切なベータブロッカーチアジド利尿薬組合せにはロプレッサ（Ｌｏｐｒｅｓｓｏｒ）ＨＣＴ、ＺＩＡＣ、テノレチック（Ｔｅｎｏｒｅｔｉｃ）、コルジド（Ｃｏｒｚｉｄｅ）、チモリド（Ｔｉｍｏｌｉｄｅ）、インデラル（Ｉｎｄｅｒａｌ）ＬＡ４０／２５、インデリド（Ｉｎｄｅｒｉｄｅ）、ノルモジド（Ｎｏｒｍｏｚｉｄｅ）などが含まれるが、ただしこれらに限定されない。
【０２７７】
Ｄ）ＡＣＥ阻害剤
適切なＡＣＥ阻害剤にはカプトリル（例えばＣａｐｏｔｅｎ（商標）、Ｓｑｕｉｂｂ）、ベナゼプリル（例えばＬｏｔｅｎｓｉｎ（商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、エナラプリル（例えばＶａｓｏｔｅｃ（商標）、Ｍｅｒｃｋ）、フォシノプリル（例えばＭｏｎｏｐｒｉｌ（商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ）、リシノプリル（例えばＰｒｉｎｉｖｉｌ（商標）、Ｍｅｒｃｋ；またはＺｅｓｔｒｉｌ（商標）、Ａｓｔｒａ−Ｚｅｎｅｃａ）、キナプリル（例えばＡｃｃｕｐｒｉｌ（商標）、Ｐａｒｋｅ−Ｄａｖｉｓ）、ラミプリル（例えばＡｌｔａｃｅ（商標）、Ｈｏｅｃｈｓｔ  Ｍａｒｉｏｎ  Ｒｏｕｓｓｅｌ，  Ｋｉｎｇ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、イミダプリル、ペリンドプリル  エルブミン（例えばＡｃｅｏｎ（商標）、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ）、トランドラプリル（例えばＭａｖｉｋ（商標）、Ｋｎｏｌｌ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）などが含まれるが、ただしこれらに限定されない。適切なＡＲＢＳ（Ａｃｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｂｌｏｃｋｅｒｓ）にはロサルタン（例えばＣｏｚａａｒ（商標）、Ｍｅｒｃｋ）、イルベサルタン（例えばＡｖａｐｒｏ（商標）、Ｓａｎｏｆｉ）、カンデサルタン（例えばＡｔａｃａｎｄ（商標）、Ａｓｔｒａ  Ｍｅｒｃｋ）、バルサルタン（例えばＤｉｏｖａｎ（商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）などが含まれるが、ただしこれらに限定されない。
【０２７８】
Ｅ）脂質系製剤
ある種の実施態様では、本発明のペプチド及び／又はアミノ酸対は１つまたは２つ以上の脂質と一緒に投与される。前記脂質は、活性な物質として及び／又は保護のための賦形剤として及び／又はペプチドの輸送／取り込みの強化のために製剤化することができ、またはそれらは別個に投与してもよい。
【０２７９】
特定の理論に拘束されないが、ある種のリン脂質の投与（例えば経口投与）はＨＤＬ／ＬＤＬ比を顕著に高めることができるということは本発明の発見であった。さらにまた、長さが中程度のある種のリン脂質は、一般的な脂質輸送に必要とされるプロセスとは別のプロセスによって輸送されると考えられる。したがって、長さが中程度のある種のリン脂質を本発明のペプチドと同時投与することによって多数の利点が付与される。すなわち、それらはリン脂質を消化または加水分解から保護する；それらはペプチドの取り込みを改善する；さらにそれらはＨＤＬ／ＬＤＬ比を改善する。
【０２８０】
前記脂質は、本発明のポリペプチドを被包化するリポソームに形成することができ、及び／又はそれらは本発明のポリペプチドとの単なる複合体形成／混合であってもよい。リポソームの製造および試薬の被包化の方法は当業者には周知である（例えば以下を参照されたい：Ｍａｒｔｉｎ  ａｎｄ  Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ  （１９８２）  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，  ２５７：２８６−２８８；Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，  ８８：１１４６０−１１４６４；Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，  ５２：６７７４−６７８１；Ｌａｓｉｃ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ，  ３１２：２５５−２５８など）。
【０２８１】
これらの方法で使用される好ましいリン脂質は、ｓｎ−１位およびｓｎ−２位に約４炭素から約２４炭素の範囲の脂肪酸を有する。ある種の好ましい実施態様では、前記脂肪酸は飽和している。他の好ましい実施態様では、前記脂肪酸は不飽和でもよい。種々の好ましい脂肪酸が表１３に例示されている。
【０２８２】
表１３：Ｄポリペプチドの投与に好ましいリン脂質のｓｎ−１位及び／又はｓｎ−２位の好ましい脂肪酸
【０２８３】
【表１３】
2007512228.tif 000027
【０２８４】
これらの位置の脂肪酸は同じでも異なっていてもよい。特に好ましいリン脂質はｓｎ−３位にホスホリルコリンを有する。
【０２８５】
ＸＩＶ．キット
別の実施態様では、本発明は、アテローム性硬化症の１つまたは２つ以上の症状の緩和のため、及び／又はアテローム性硬化症のおそれのある対象者（人間または動物）の予防的処置のため、及び／又はプレ−ベータ高密度リポタンパク質様粒子の形成およびサイクリングの促進のため、及び／又は骨粗しょう症の１つまたは２つ以上の症状の抑制のためのキットを提供する。前記キットは好ましくは、本発明の１つまたは２つ以上のペプチド、及び／又はアミノ酸対、及び／又はペプチド模倣体を収納する容器を含む。前記ペプチド及び／又はアミノ酸対及び／又はペプチド模倣体は、ユニット剤形（例えば座薬、錠剤、カプレット、膏薬など）で提供することができ、及び／又は場合によって１つまたは２つ以上の医薬的に許容できる賦形剤と組み合わされていてもよい。
【０２８６】
前記キットは、場合によってさらに心疾患及び／又はアテローム性硬化症の治療に用いられる１つまたは２つ以上の他の物質を含むことができる。そのような物質には、上述のようにベータブロッカー、血管拡張剤、アスピリン、スタチン、ＡＣＥ阻害剤またはＡＣＥレセプター阻害剤（ＡＲＢ）などが含まれるが、ただしこれらに限定されない。
【０２８７】
ある種の好ましい実施態様では、前記キットはさらにスタチン（例えばセリバスタチン、アトルバスタチン、シムバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ロスバスタチン、ピタバスタチンなど）を含む（前記スタチンは別個に製剤化されているか、または前記ペプチドと一緒に製剤化されている）。典型的には、そのような製剤中のスタチンの用量は、協同的に作用するペプチド無しに典型的に処方されるスタチンの用量よりも低くてよい。
【０２８８】
さらにまた、前記キットは場合によって、本発明の“治療薬”または“予防薬”の使用方法の実施に必要な指示（すなわちプロトコル）を提供する、標識及び／又は指示用物を含む。好ましい指示用物には、本発明の１つまたは２つ以上のポリペプチド及び／又はアミノ酸対を使用して、アテローム性硬化症の１つまたは２つ以上の症状を緩和すること、及び／又はアテローム性硬化症のおそれのある個体におけるそのような症状の１つまたは２つ以上の開始もしくは増加を防止すること、及び／又はプレ−ベータ高密度リポタンパク質様粒子の形成およびサイクリングを促進すること、及び／又は骨粗しょう症の１つまたは２つ以上の症状を抑制すること、及び／又は炎症性反応を特徴とする病変の１つまたは２つ以上の症状を緩和することが記載されている。前記指示用物は場合によって好ましい用量／治療計画／禁忌症などを教示していてもよい。
【０２８９】
前記指示用物は典型的には手書きまたは印刷物であるが、ただしそれらはそのようには限定されない。そのような指示を保存し、それらを末端の使用者に伝達することができる任意の媒体が本発明に包含される。そのような媒体には電子的保存媒体（例えば磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ）、光学的媒体（例えばＣＤＲＯＭ）などが含まれるが、ただしこれらに限定されない。そのような媒体は、そのような指示物を提供するインターネットサイトのアドレスを含むことができる。
【０２９０】
以下の実施例は、例示のために提供され、本発明の請求の範囲を限定するものではない。
【実施例１】
【０２９１】
実施例１：アテローム性硬化症の症状および他の炎症性病変を緩和する小ペプチドの評価
本明細書に記載したアポＡ−Ｉ模倣ペプチド（例えば表１参照）は、動脈壁細胞がＬＤＬを酸化するために必要な  “シーディング分子”（例えば酸化リン脂質（例えばＯｘ−ＰＡＰＣ、ＰＯＶＰＣ、ＰＧＰＣおよびＰＥＩＰＣ）など）をそれらが除去するという点でアポＡ−Ｉと同様な抗アテローム形成特性を示し、それらがマウスモデルでアテローム性硬化症を緩和したという点でアポＡ−Ｉに類似する。
【０２９２】
アポＡ−Ｉ模倣ペプチド（例えばＤ−４Ｆ、配列番号：８）は、それらはまたアポＪと同様にコインキュベーションで活性を示すという点でアポＡ−Ｉと異なっている（例えばＵＳＳＮ１０／１２０，５０８およびＰＣＴ／ＵＳ０３／０９９８８を参照されたい）。これらのペプチドは一般的にアポＡ−Ｉと実質的な配列相同性をもたないが、それらのらせん構造およびそれらの脂質結合能力では相同性を有する。
【０２９３】
本明細書に記載したより小さなペプチド（例えば表４−７を参照されたい）は、それらが、動脈壁細胞とのプレインキュベーションにおいてＬＤＬ酸化およびＬＤＬ誘発単球化学走性を防止するが、コインキュベーションでは防止しないという点で天然のアポＡ−Ｉと類似する（例えば図３を参照されたい）。
【０２９４】
図３に記載したペプチドはまたはｉｎ  ｖｉｖｏでも活性を示した（図４）。テトラペプチドまたはＤ−４Ｆ（配列番号：８）を５μｇ／ｍＬでアポＥヌルマウスの飲み水に添加または添加しなかった（アポＥヌルマウスはヒトのアテローム性硬化症のマウスモデルである）。１８時間後、マウスから採血し、それらのリポタンパク質をＦＰＬＣで単離した。成熟ＨＤＬ含有分画またはこれらの分画の後ろのＦＰＬＣ分画（この分画にはプレ−ベータＨＤＬ（主要ＨＤＬピークの直ぐ後でＦＬＬＣカラムから出る粒子；ポストＨＤＬ）がペプチドを含まない飲み水を与えられたマウスでは期待される）の添加によって、ヒト動脈壁細胞コカルチャーに添加されたコントロールＬＤＬにより誘発される単球化学走性活性が増加した（図４）。対照的に、テトラペプチドまたはＤ−４Ｆをその飲み水に与えられたマウス由来のＨＤＬまたはポストＨＤＬ  ＦＰＬＣ分画の添加はＬＤＬ誘発単球化学走性活性を低下させ、テトラペプチドおよびＤ−４Ｆは、これらのリポタンパク質を前炎症性から抗炎症性状態に変換したことを示した（図４）。
【０２９５】
図５に示したように、テトラペプチドまたはＤ−４Ｆを与えられたマウスから採取されたＬＤＬは、ペプチドを与えられなかったマウスのＬＤＬよりも顕著に低い単球化学走性活性しか誘発せず、経口投与されたＤ−テトラペプチドの生物学的活性が確認された。
【０２９６】
図６は、Ｄ−アミノ酸から合成した表４の配列番号：２５８を胃管によってアポＥヌルマウスの胃に点滴してから２０分または６時間後に採取したＨＤＬは、前炎症性から抗炎症性に変換され、さらにＤ−４Ｆを投与されたマウスのＨＤＬと類似し、同じＤ−アミノ酸を有するがクラスＡ両親媒性ヘリックスの形成が妨げられしたがってペプチドが脂質と結合できないように編成されたペプチド（スクランブルＤ−４Ｆ）を投与されたマウスから得られたＨＤＬとは極めて異なっていたことを示している。
【０２９７】
図７は、Ｄ−４ＦまたはＤ−アミノ酸から合成された配列番号：２５８の経口投与後２０分および６時間の両方で、前記マウスのＬＤＬは、スクランブルＤ−４Ｆペプチドを投与されたマウスから採取したＬＤＬと比較して単球化学走性活性の誘発能力は極めて低かったことを示している。
【０２９８】
図８は、表４の配列番号：２３８（全てＤ−アミノ酸から合成されている）をアポＥヌルマウスの飼料に１８時間添加することによって、アポＥヌルマウスの前炎症性ＨＤＬは抗炎症性ＨＤＬに変換されたことを示している。
【０２９９】
図９は、表４の配列番号：２５８は配列番号：２３８よりもｉｎ  ｖｉｔｒｏで１０倍高い能力を有したことを示している。
【０３００】
図３に示すように、１２５μｇ／ｍＬの配列番号：２３８は軽度な有効性しか示さなかったが、一方図９に示すように、配列番号：２５８はｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるプレインキュベーションで１２．５μｇ／ｍＬで高い活性を示した。
【０３０１】
図１０に示した実験は、表４の配列番号：２４３、配列番号：２４２および配列番号：２５６もまたアポＥヌルマウスの前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換することができたことを示している。
【０３０２】
本発明の個々のペプチドの活性は、図１１、１２および１３に示すように個々のアミノ酸置換に左右される。配列番号：２５４は配列番号：２５８と同一であるが、ただしアルギニンとグルタミン酸のアミノ酸の位置は配列が倒置されている（すなわち配列番号：２５４はＢｏｃ−Ｌｙｓ（εＢｏｃ）−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕであるが、配列番号：２５８はＢｏｃ−Ｌｙｓ（εＢｏｃ）−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕである）。この見た目は小さな変化の結果として、配列番号：２５４は、配列番号：２５８よりもこれらのアッセイで実質的に有効性が低い。
【０３０３】
図１１および１２に示した実験は、表４の配列番号：２５８は、配列番号：２５４または配列番号：２８２よりも前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換する効率が高く、さらに単球化学走性活性を誘発するＬＤＬの能力を低下させることを示している。
【０３０４】
血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）はマウスで急性期陽性反応物質であり、ヒトのＣ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）と類似する。図１３のデータは、この急性期反応物質が配列番号：２５８の注射後に血中で顕著に低下し、配列番号：２５４および配列番号：２８２注射後には低下の程度はより少なく顕著でなかったことを示している。
【０３０５】
図１４は、配列番号：２５８として表４に記載されているペプチドは、全てＬ−アミノ酸から合成されアポＥヌルマウスに経口的に投与されたときは、前炎症性ＨＤＬを抗炎症性に変換し、さらに血漿パラオキソナーゼ活性を増加させた（図１５）ことを示している。
【０３０６】
図１６、１７、１８および１９は、配列番号：２５８として表４に記載されているペプチドは、全てＤ−アミノ酸から合成されアポＥヌルマウスに経口的に投与されたときは、ＨＤＬを抗炎症性にさせ（図１６および１７）、ＬＤＬ−誘発単球化学走性活性を低下させ（図１７）、血中ＨＤＬ−コレステロールを増加させ（図１８）、さらにＨＤＬパラオキソナーゼ活性を増加させた（図１９）ことを示している。これらのデータはまた、配列番号：２３８は、全てＬ−アミノ酸から合成されアポＥヌルマウスに経口的に投与されたときは、ＨＤＬの炎症性特性を顕著には変化させず（図１６および１７）、ＬＤＬ−誘発単球化学走性活性にも顕著な変化を与えず（図１７）、血中ＨＤＬ−コレステロール濃度にも顕著な変化を与えず（図１８）、ＨＤＬパラオキソナーゼ活性にも顕著な変化を与えなかった（図１９）ことを示している。さらにまた、これらのデータは、表４の配列番号：２３８が、全てＤ−アミノ酸から合成されアポＥヌルマウスに経口的に投与されたときは、ＨＤＬを抗炎症性にし（図１６および１７）、さらにＬＤＬ−誘発単球化学走性活性を低下させたが（図１７）、いずれの変化も配列番号：２５８ほど劇的でなかったことを示している。さらにまた、配列番号：２５８とは異なり、表４の配列番号：２３８は、全てＤ−アミノ酸から合成されたときは、血中ＨＤＬ−コレステロール濃度を上昇させず（図１８）、ＨＤＬパラオキソナーゼ活性も増加させなかった（図１９）ことを示している。我々は、Ｌ−アミノ酸から合成された表４の配列番号：２３８は、経口的に投与されたときは有効ではないが、Ｄ−アミノ酸から合成されたときは有効であるが、しかし配列番号：２５８よりも実質的に有効性は低いと結論した。
【０３０７】
ここに提示したデータは、配列番号：２３８は、全てＬ−アミノ酸から合成され経口的に投与されたときは一般的に効果がないが、全てＤ−アミノ酸から合成されたときは有効で、しかしながら経口的に投与されたとき、全てＤ−アミノ酸で合成された同じ用量の配列番号：２５８よりも効果は実質的に小さいことを示している。
【実施例２】
【０３０８】
実施例２：ペプチドはスタチン活性を補助する
図２０および２１は、アポＥヌルマウスにおけるアテローム性硬化症緩和のスタチン（プラバスタチン）とＤ−４Ｆとの間の非常に劇的な相乗作用を示している。マウスはスタチンに対して耐性を有することが知られている。それらの飲み水に２０μｇ／ｍＬでプラバスタチンを与えられたマウスは、７０ｋｇの人間の場合１日当たり１７５ｍｇに等しい用量のプラバスタチンを消費し、さらにそれらの飲み水に５０μｇ／ｍＬでプラバスタチンを与えられたマウスは、７０ｋｇの人間の場合１日当たり４３７．５ｍｇに等しい用量のプラバスタチンを消費した。図２０および２１に示されているように、これら非常に高用量のプラバスタチンはアポＥヌルマウスのアテローム性硬化症病巣の緩和に有効ではなかった。図２０および２１に示されているように、Ｄ−４ＦのみをアポＥヌルマウスの飲み水に２μｇ／ｍＬまたは５μｇ／ｍＬの濃度で添加してもアテローム性硬化症病巣は減少しなかった。これらのＤ−４Ｆの用量は、７０ｋｇの人間ではそれぞれ１日当たり１７．５ｍｇおよび１日当たり４３．７５ｍｇの用量に等しい。驚くべきことに、図２０および２１に示されているように、同じ濃度のプラバスタチンおよびＤ−４Ｆを一緒にアポＥヌルマウスの飲み水に添加することによって、これらのマウスでアテローム性硬化症が本質的に停止した。このことは、スタチン（プラバスタチン）とＤ−４Ｆの間の非常に高度な相乗作用を示している。
【０３０９】
図２２は、アポＥヌルマウスのＬＤＬおよびＨＤＬの両方の脂質ヒドロペルオキシド含有量の低下に、表４の配列番号：１９８および配列番号：２０３は等しく有効であること、またはＤ−４Ｆよりも有効ですらあることを示している。これらのデータは、部分的には、ＬＤＬが炎症性アテローム性硬化症反応を誘発するために必要な“シーディング分子”を隔離することによって機能するＤ−４Ｆおよび本出願に開示したペプチドと一致する。図３から１９に示されたデータを総合すれば、本出願に開示したペプチド（例えば表４の配列番号：２５０  １９８および配列番号：２５８）は、アテローム性硬化症の緩和においてＤ−４Ｆと同じように有効またはより有効であろうということは極めてあり得ることである。
【実施例３】
【０３１０】
実施例３：  ＨＤＬをいっそう抗炎症性にし、哺乳動物でアテローム性硬化症を緩和する能力を予測する新規な小有機分子（分子量＜９００ダルトン）の物理的特性
多数の物理的特性によってＨＤＬをいっそう抗炎症性にし、さらにアテローム性硬化症及び／又は炎症性反応を特徴とする他の病変を哺乳動物で緩和する本発明の小ペプチドの能力が予測されることは本発明の驚くべき発見であった。前記物理的特性には、酢酸エチル中での高い溶解性（例えば約４ｍｇ／ｍＬを超える）、および水性緩衝液（ｐＨ７．０）における溶解性が含まれる。リン脂質（例えば１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ））と水性環境下で接触させるとき、特に有効な小ペプチドは約７．５ｎｍ（±０．１ｎｍ）の直径を有する粒子を形成するか、及び／又は積層二重層であって、前記二重層が３．４から４．１ｎｍの大きさで、積層二重層の間に約２ｎｍの間隙を有するものを形成するか、及び／又は約３８ｎｍの小胞構造を形成する。ある種の好ましい実施態様では、前記小ペプチドは約９００Ｄａ未満の分子量を有する。
【０３１１】
これら物理的特性の予測される効果は下記の２つの配列の比較によって例示される：
配列番号：２５４：Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（εＢｏｃ）−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕ、および
配列番号：２５８：Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（εＢｏｃ）−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕ
酢酸エチル中での可溶性を判定するために、各ペプチドを秤量し、遠心管に加え、さらに酢酸エチル（ＨＰＬＣグレード；蒸発後の残留物＜０．０００１％）を添加して１０ｍｇ／ｍＬの濃度にした。前記遠心管に封をし、ヴォルテックス攪拌し、さらに１０分毎にヴォルテックス攪拌しながら３０分室温で維持した。前記管を続いて１０，０００ｒｐｍで５分遠心し、上清を以前に秤量してあった管に移した。酢酸エチルをアルゴン下で蒸発させ、さらに管を秤量して上清に含まれていたペプチドの量を決定した。上清に溶解していた最初に添加されたペプチドのパーセントはＹ軸に示されている。データは平均±Ｓ．Ｄ．である。コントロールは擬似処理管を表す。配列番号：２５４および配列番号：２５８はともに全てＤ−アミノ酸から合成された。配列番号：２５０は全てＬ−アミノ酸から合成された。
【０３１２】
図２３に示されたように、配列番号：２５８は酢酸エチルに非常に可溶性であるが、配列番号：２５４はそうではない（両方とも全てＤ−アミノ酸から合成されている）。さらにまた、図２３のデータは、配列番号：２５０［Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−ＯｔＢｕ］（全てＬ−アミノ酸から合成）はまた酢酸エチルに非常に可溶性である。
【０３１３】
リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中のＤＭＰＣ懸濁液１ｍｇ／ｍＬに、１０％デオキシコレートをＤＭＰＣが溶解するまで添加した。ペプチド、配列番号：２５８または配列番号：２５４を添加し（ＤＭＰＣ：ペプチド；１：１０；ｗｔ：ｗｔ）、反応混合物を透析した。透析後、溶液は配列番号：２５８では透明なままであったが、配列番号：２５４の場合には溶液はデオキシコレートを透析により除去した後混濁した。
【０３１４】
図２４−２６は、配列番号：２５８を水性環境下でＤＭＰＣに添加したとき、約７．５ｎｍの直径を有する粒子が形成され、積層脂質二重層であって、３．４から４．１ｎｍの大きさを有し、積層二重層の間に約２ｎｍの間隙を有するものが形成され、さらに約３８ｎｍの小胞構造がまた形成されることを示している。
【０３１５】
特に、図２４はネガティブ染色により調製した倍率１４７，４２０ｘの電子顕微鏡写真を示している。矢印は、７．５ｎｍの配列番号：２５８の粒子を示している（前記粒子は白色の粒子として認められる）。
【０３１６】
図２５に例示されるように、水性環境下でＤＭＰＣに添加された配列番号：２５８を含むペプチドは、約７．５ｎｍの直径を有する粒子（白矢印）を形成し、さらに積層脂質−ペプチド二重層であって（円筒状重層ディスク内の白線を指し示している斜線入り矢印）、前記二重層が３．４から４．１ｎｍの大きさで、積層二重層の間に約２ｎｍの間隙（積層ディスク内の白線の間の黒い線）を有するものを形成する。
【０３１７】
図２６は、水性環境下でＤＭＰＣに添加された配列番号：２５８のペプチドは、積層脂質−ペプチド二重層（斜線入り矢印）および約３８ｎｍの小胞構造（白色矢印）を形成することを示している。
【０３１８】
図２７は、配列番号：２５８を含まない水性環境下のＤＭＰＣは、約７．５ｎｍの直径の粒子も積層脂質ペプチド二重層も約３８ｎｍの小胞構造も形成しないことを示している。
【０３１９】
配列番号：２５４のペプチド（ペプチドのアミノ末端およびカルボキシ末端に対するアルギニンとグルタミン酸の順序のみが配列番号：２５８のペプチドと異なっている）は、図２４に記載した条件下では約７．５ｎｍの直径の粒子も、積層脂質−ペプチド二重層も、約３８ｎｍの小胞構造も形成しなかったことを示している（データは示されていない）。したがって、ペプチド内でのアルギニンとグルタミン酸の順序は、ＤＭＰＣと相互作用するその能力を劇的に変化させ、これは酢酸エチル中での溶解性によって予測された（すなわち、配列番号：２５８のペプチドは酢酸エチルに高度に可溶性で、約７．５ｎｍの直径をもつ粒子、および積層脂質−ペプチド二重層を、約３８ｎｍの小胞構造と同様に形成したが、配列番号：２５４のペプチドは酢酸エチルに難溶性で、図２４に記載した条件下ではこれらの構造を形成しなかった）。図２４に記載したプロトコルの他に、ＰＢＳ中のＤＭＰＣ懸濁液を、配列番号：２５８のペプチド（ＤＭＰＣ：ペプチド；１：１０；ｗｔ：ｗｔ）または配列番号：２５４のペプチド（ＤＭＰＣ：ペプチド；１：１０；ｗｔ：ｗｔ）に添加し、さらに前記混合物をＤＭＰＣの遷移温度の直ぐ上（５０℃の直ぐ上）と室温の間で数回１時間ずつサイクルし、続いて室温に４８時間置いた場合にも同様な結果がまた得られた（データは示されていない）。
【０３２０】
配列番号：２５８の物理的特性は、このペプチドが両親媒性特性をもつ（すなわち酢酸エチルに高度に可溶性で、水性緩衝液（ｐＨ７．０）にも溶解性であり（データは示されていない）、さらに上述のようにＤＭＰＣと相互作用する）ことを示している（しかし配列番号：２５４はこの特性をもたない）。酢酸エチルに高度に可溶性でありさらにまた水性緩衝液（ｐＨ７．０）に可溶性であるペプチドはＤＭＰＣと相互作用して脂質−ペプチド複合体（アポＡ−Ｉと細胞との相互作用により形成される発生期ＨＤＬ粒子（Ｆｏｒｔｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｊ．  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ，  ３４：３１７−３２４）と顕著に類似する）を形成するということは本発明の驚くべき発見であった。
【０３２１】
表１３は、脂質を含まないヒトアポＡ−ＩとＣＨＯ−Ｃ１９細胞とのｉｎ  ｖｉｔｒｏでの相互作用を、上記の図４−７で指摘した配列番号：２５８とＤＭＰＣとの相互作用と比較したものである。
【０３２２】
表１３：上記の図２４−２７で指摘した配列番号：２５８のペプチドとＤＭＰＣとの相互作用とＦｏｒｔｅら（Ｊ．  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ，  ３４：３１７−３２４，  １９９３）が記載したＣＨＯ−Ｃ−１９細胞と相互作用する脂質を含まないヒトアポＡ−Ｉとの比較
【０３２３】
【表１４】
2007512228.tif 000028
【０３２４】
したがって、酢酸エチルに高度に可溶性で水性緩衝液（ｐＨ７．０）にも可溶性である本明細書に記載した小ペプチドは、アポＡ−Ｉと類似する脂質（ＤＭＰＣ）（前記は２８０００ダルトンの分子量を有する）と相互作用する。
【０３２５】
図２８−３２に示した分子モデルは、配列番号：２５８と比較した配列番号：２５４の空間的特性を示している。
【０３２６】
図２８−３２に示した分子モデルは、配列番号：２５４のペプチドおよび配列番号：２５８のペプチドは、各々の分子に極性および非極性部分を含むが、前記２つの分子の極性および非極性成分の配置には空間的相違が存在する。分子の空間的配置における相違の結果として、酢酸エチル中での２つの分子の可溶性の相違（図２３）およびＤＭＰＣとの相互作用における相違（図２４−２７）が存在する。
【０３２７】
図３３−３５のデータは、配列番号：２５４のペプチド対配列番号：２５８のペプチドの物理的特性は、哺乳動物に経口投与したときＨＤＬを抗炎症性にし、アテローム性硬化症を緩和するこれら分子の能力を予測する。
【０３２８】
８週齢の雌のアポＥヌルマウスは食餌にペプチドが添加されない（餌）か、または配列番号：２５４の２００μｇ／ｍＬ（＋２５４）または配列番号：２５８の２００μｇ／ｍＬ（＋２５８）が投与された（前記ペプチドは両方とも全てＤ−アミノ酸から合成されている）。１５週間後、マウスから採血し、それらの血漿をＦＰＬＣで分画し、それらのＨＤＬ（ｍＨＤＬ）をヒト動脈壁コカルチャーでテストした。ヒト動脈壁コカルチャーに標準的なヒトＬＤＬ（１００μｇ／ｍＬのＬＤＬ−コレステロール）を単独で添加（ＬＤＬ）、または添加せず（無添加）、または５０μｇ／ｍＬの正常ヒトＨＤＬ（ｈＨＤＬ）若しくは５０μｇ／ｍＬのマウスＨＤＬ（ｍＨＤＬ）を添加し、生じた単球化学走性活性を決定し、Ｙ軸にプロットした。図３３は、アポＥヌルマウスのＨＤＬは、マウスを配列番号：２５８で食餌した後に抗炎症性になったが、配列番号：２５４で食餌した後には抗炎症性にならなかった。
【０３２９】
図３４に示したように、配列番号：２５８のペプチドは、上述のアポＥヌルマウスの大動脈根（大動脈洞）のアテローム性硬化症を顕著に軽減させたが、配列番号：２５４は軽減させなかった。図３５は、配列番号：２５８は大動脈の表面調製物のアテローム性硬化症を顕著に減少させたが、配列番号：２５４は減少させなかったことを示している。図２３は、全てＬ−アミノ酸から合成された配列番号：２５０（上記図２３を参照されたい）の酢酸エチル中での溶解性は、この分子のアポＥヌルマウスでアテローム性硬化症を緩和する能力を正確に予測することを示している。
【０３３０】
したがって、これら小ペプチドの物理的特性は、これらペプチドのアポＥヌルマウスでアテローム性硬化症を緩和する能力を正確に予測した。
【０３３１】
我々は、したがって典型的には約９００ダルトン未満の分子量を有し、酢酸エチルで高度な溶解性（約４ｍｇ／ｍＬを超える）をもち、さらに水性緩衝液（ｐＨ７．０）にも溶解性であり、リン脂質（例えば１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ））と水性環境下で接触させたとき、約７．５ｎｍの直径を有する粒子を形成するか、及び／又は積層二重層であって、前記二重層が３．４から４．１ｎｍの大きさで、積層二重層の間に約２ｎｍの間隙を有するものを形成するか、及び／又は約３８ｎｍの小胞構造を形成し、哺乳動物に投与したとき、ＨＤＬをいっそう抗炎症性にし、さらにアテローム性硬化症の１つまたは２つ以上および炎症性反応を特徴とする他の病変を緩和する小ペプチドを開示する。
【０３３２】
本明細書に記載した実施例および実施態様は単に例示的目的のためであること、さらに本明細書の記載に基づき種々の修飾および変更が当業者には示唆され、それらは本出願の精神および範囲および添付の請求の範囲の範囲に包含されるということは理解されよう。本明細書に引用された全ての刊行物、特許および特許出願は、参照によりその全体が全ての目的のために本明細書に取り込まれる。
【図面の簡単な説明】
【０３３３】
【図１】本発明のペプチドの液相合成のための合成スキームを示す。
【図２】図１に概略した方法を用いたテトラペプチド合成方法を示す。
【図３】Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕ（全てＤアミノ酸から合成される）（表４の配列番号：２３８）のプレインキュベーション（ｐｒｅ−ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）はヒト動脈壁細胞（ＨＡＥＣ）によって得られるＬＤＬ−誘発単球化学走性を阻害するが、コインキュベーション（Ｃｏ−ｉｎｃ）は前記を阻害しないことを示す。１２５μｇ／ｍＬ、２５０μｇ／ｍＬまたは５００μｇ／ｍＬのペプチドと細胞をプレインキュベーションし続いてペプチドを除いてから新しい培養液を用いて１００μｇ／ｍＬのコレステロールのＬＤＬを添加するか、または同じ濃度のペプチドをＬＤＬと一緒に添加し、さらに単球の化学走性活性を測定した。
【図４】図３に記載のテトラペプチドのアポＥヌルマウスの飲水への添加によって、Ｄ−４Ｆと同様に、ＨＤＬおよびポスト−ＨＤＬ  ＦＰＬＣ分画が前炎症性から抗炎症性に変換されたことを示す。テトラペプチドまたはＤ−４Ｆをマウス（各条件についてｎ＝４）の飲水に５μｇ／ｍＬの濃度で１８時間添加した。マウスを採血し、それらのリポタンパク質をＦＰＬＣで分離した。コントロールのヒトＬＤＬ（１００μｇ／ｍＬコレステロール）をヒト動脈壁コカルチャーに添加し（ＬＤＬ）または添加せず（Ｎｏ  ａｄｄｉｔｉｏｎ）、あるいは、前記コントロールヒトＬＤＬ（１００μｇ／ｍＬコレステロール）を正常ヒトコントロールから得たＨＤＬ（５０μｇ／ｍＬ）（＋Ｃｏｎｔｒｏｌ  ＨＤＬ）、またはペプチド非含有飲料水を投与（＋Ｗａｔｅｒ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ＨＤＬ）若しくはテトラペプチドを投与（＋Ｄ−ＴｅｔｒａＨＤＬ）若しくはＤ−４Ｆを投与（＋Ｄ４Ｆ  ＨＤＬ）したアポＥヌルマウスから得たＨＤＬ（５０μｇ／ｍＬ）とともに添加するか、または、ペプチド非投与アポＥヌルマウス由来のポスト−ＨＤＬ  ＦＰＬＣ分画（＋Ｗａｔｅｒ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｐｏｓｔＨＤＬ）またはテトラペプチド投与マウス（＋Ｄ−Ｔｅｔｒａ  ｐｏｓｔＨＤＬ）若しくはＤ−４Ｆ投与マウス由来（＋Ｄ−４ＦＨＤＬ）のポスト−ＨＤＬ  ＦＰＬＣ分画をコントロールヒトＬＤＬ（１００μｇ／ｍＬコレステロール）と一緒に２０μｇ／ｍＬで添加した。８時間後に上清を単球の化学走性活性についてアッセイした。
【図５】飲水でＤ−テトラペプチドまたはＤ−４Ｆを投与されたアポＥマウスは、単球の化学走性活性の誘発が低下したＬＤＬを有することを示す。図４に記載のマウスのＦＰＬＣ分画から得たＬＤＬを前記コカルチャーに１００μｇ／ｍＬで添加した。８時間後に上清を単球の化学走性活性についてアッセイした。
【図６】全てＤアミノ酸で合成された表４由来の配列番号：２５８（図にはＤ−１１と表示）またはＤ−４Ｆは経口投与されたとき、アポＥヌルマウスでＨＤＬを抗炎症性にするが、Ｄ−４Ｆと同じＤアミノ酸を含むが脂質結合を妨げるように配列をスクランブルして編成されたペプチドは抗炎症性にすることができないことを示す。Ｄアミノ酸から合成した５００μｇの配列番号：２５８（Ｄ−１１）または５００μｇのＤ−４Ｆ（Ｄ−４Ｆ）またはスクランブルした５００μｇのＤ−４Ｆ（Ｓｃｒａｍ．  Ｐｅｐｔ）を、３ヶ月齢の雌のアポＥヌルマウス（ｎ＝４）に胃管から点滴し、２０分後（経管投与後２０分）または６時間後（経管投与後６時間）に前記マウスから採血した。血漿を分離し、ＦＰＬＣによってＨＤＬを単離した。培養液のみ（Ｎｏ  Ａｄｄｉｔｉｏｎ／アッセイコントロール）、標準正常ヒトＬＤＬ（１００μｇｍ／ｍＬコレステロール）で標準コントロールヒトＨＤＬ（５０μｇｍ／ｍＬコレステロール）を含まないもの（ＬＤＬ／アッセイコントロール）もしくは含むもの（ＬＤＬ＋Ｃｏｎｔｒｏｌ  ＨＤＬ／アッセイコントロール）、またはコントロールヒトＬＤＬ（１００μｇｍ／ｍＬコレステロール）を加えたヒト大動脈内皮細胞培養を、スクランブルＤ−４Ｆペプチド（ＬＤＬ＋Ｓｃｒａｍｂ．Ｐｅｐｔ．ＨＤＬ）またはＤ−４Ｆ（ＬＤＬ＋Ｄ−４Ｆ  ＨＤＬ）または全てＤアミノ酸から作製した配列番号：２５８（ＬＤＬ＋Ｄ−１１  ＨＤＬ）を投与したマウスから得たマウスＨＤＬ（５０μｇｍ／ｍＬコレステロール）とともに加えた。前記培養を８時間インキュベートした。続いて上清を単球の化学走性活性についてアッセイした。値は、９個の高倍率視野における遊泳単球数の平均±ＳＤである。＊はｐ＜０．００１を示す。
【図７】Ｄ−４ＦまたはＤアミノ酸から合成した表４の配列番号：２５８（Ｄ−１１）を投与されたアポＥヌルマウスは単球化学走性活性の誘発が低いＬＤＬを有するが、スクランブルされたＤ−４Ｆを投与されたマウスではそうではないことを示す。図６に記載のマウスのＦＰＬＣ分画から得たＬＤＬを１００μｇ／ｍＬで培養に添加した。８時間後に上清を単球の化学走性活性についてアッセイした。＊はｐ＜０．００１を示し、＊＊はｐ＜０．０１を示す。
【図８】アポＥヌルマウスの餌にＤアミノ酸から合成した表４の配列番号：２５８（Ｄ−１と表示されている）を添加した後（２００μｇ／ｇ餌、１８時間）、ＨＤＬは、前炎症性から抗炎症性に変換されたことを示す。アッセイコントロール：Ｎｏ  Ａｄｄｉｔｉｏｎ、コカルチャーへの添加無し；ＬＤＬ、標準コントロールヒトＬＤＬをコカルチャーに添加した；＋Ｃｏｎｔｒｏｌ  ＨＤＬ、コントロール正常ヒトＨＤＬをコカルチャーに添加した；餌  ＬＤＬ、餌のみを与えられたマウスのＬＤＬ；＋餌  自家ＨＤＬ、餌のみを与えられたマウスのＨＤＬをこれらのマウス由来のＬＤＬと一緒に添加した；＋Ｄ−１  自家ＨＤＬ、ペプチドを与えられたマウスのＨＤＬをこれらのマウス由来のＬＤＬと一緒にコカルチャーに添加し、単球の化学走性活性を決定した。
【図９】テトラペプチド（表４の配列番号：２５８）は配列番号：２３８よりもｉｎ  ｖｉｔｒｏで１０倍強力であることを示す。テトラペプチドを１００、５０、２５または１２．５μｇｍ／ｍＬでヒトの動脈壁細胞コカルチャーにプレインキュベーションとして添加し、または添加しないで２時間インキュベートした。続いて前記培養を洗浄した。続いていくつかのウェルには培養液のみ（Ｎｏ  Ａｄｄｉｔｉｏｎ）を加えた。他のウェルには、標準正常ヒトＬＤＬ（１００μｇｍ／ｍＬコレステロール）（ＬＤＬ）を加えるか、またはこのＬＤＬを標準コントロールヒトＨＤＬ（５０μｇｍ／ｍＬコレステロール）と一緒に加え（ＬＤＬ＋Ｃｏｎｔｒｏｌ  ＨＤＬ）、８時間インキュベートした。続いて培養上清を単球の化学走性活性についてアッセイした。値は、９個の高倍率視野における遊泳単球数の平均±ＳＤである。上に表示した濃度のペプチドを２時間のプレインキュベーションで添加し、続いてＬＤＬ（１００μｇｍ／ｍＬコレステロール）を添加したウェルは図に表示されている（ＬＤＬ＋ｔｅｔｒａｐｅｐｔｉｄｅ、μｇｍ／ｍＬ）。
【図１０】表４の配列番号：２４３、２４２および２５６（図ではそれぞれ配列番号：５、配列番号：６および配列番号：９と表示）は、アポＥヌルマウス由来の前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換する。１８時間絶食させた２ヶ月齢の雌のアポＥヌルマウス（ｎ＝４／処理）の腹腔内に２０μｇｍ／マウスのＬ−テトラペプチドを注射するか、または食塩水担体（Ｓａｌｉｎｅ  Ｖｅｈｉｃｌｅ）を注射した。２時間後に、イソフルオリンによる軽度の麻酔下で後眼窩洞から血液を採取した。血漿を分離し、ＦＰＬＣによりＨＤＬを単離した。続いてＨＤＬ炎症性／抗炎症性特性を決定した。ヒト大動脈内皮細胞培養に、培養液のみを添加するか（Ｎｏ  Ａｄｄｉｔｉｏｎ）、標準正常ヒトＬＤＬ（１００μｇｍ／ｍＬコレステロール）を標準コントロールヒトＨＤＬ（５０μｇｍ／ｍＬコレステロール）無しに添加（ＬＤＬ）若しくは前記と一緒に添加するか（ＬＤＬ＋Ｃｏｎｔｒｏｌ  ＨＤＬ）、または標準コントロールヒトＬＤＬ（１００μｇｍ／ｍＬコレステロール）をテトラペプチド若しくは食塩水担体を投与されたマウスから得たマウスＨＤＬ（５０μｇｍ／ｍＬコレステロール）とともに添加した（腹腔内注射マウス由来ＬＤＬ＋ＨＤＬ）。前記培養を８時間インキュベートした。続いて上清を単球の化学走性活性についてアッセイした。値は、９個の高倍率視野における遊泳単球数の平均±ＳＤである。
【図１１】表４の配列番号：２５８（図ではＳ−１１と表示）は、配列番号：２５４および配列番号：２８２（図ではそれぞれＳ−７およびＳ−３５と表示）よりも良好にアポＥヌルマウスの前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換する。１８時間絶食させた２ヶ月齢の雌のアポＥヌルマウス（ｎ＝４／処理）の腹腔内に２０μｇｍ／マウスのＳ−７またはＳ−１１またはＳ−３５を注射するか、または食塩水担体（食塩水）を注射した。２時間後に、イソフルオリンによる軽度の麻酔下で後眼窩洞から血液を採取した。血漿を分離し、ＦＰＬＣによりＬＤＬおよびＨＤＬを単離した。続いてＨＤＬ炎症性／抗炎症性特性を決定した。ヒト大動脈内皮細胞培養に、培養液のみを添加するか（Ｎｏ  Ａｄｄｉｔｉｏｎ／アッセイコントロール）、標準正常ヒトＬＤＬ（１００μｇｍ／ｍＬコレステロール）を標準コントロールヒトＨＤＬ（５０μｇｍ／ｍＬコレステロール）無しに添加（ＬＤＬ／アッセイコントロール）若しくは前記と一緒に添加するか（＋Ｃｏｎｔｒｏｌ  ＨＤＬ／アッセイコントロール）、またはマウスＬＤＬ（１００μｇｍ／ｍＬコレステロール）をＳ−７若しくはＳ−１１若しくはＳ−３５（それぞれＬＤＬ＋Ｓ−７ＨＤＬ、ＬＤＬ＋Ｓ−１１ＨＤＬ、ＬＤＬ＋Ｓ−３５ＨＤＬ）、または食塩水担体（ＬＤＬ＋Ｓａｌｉｎｅ  ＨＤＬ）を投与したマウスから得たマウスＨＤＬ（５０μｇｍ／ｍＬコレステロール）とともに添加した。前記培養を８時間インキュベートした。続いて上清を単球の化学走性活性についてアッセイした。値は、９個の高倍率視野における遊泳単球数の平均±ＳＤである。＊ｐ＜０．００１。
【図１２】図１１に記載したマウスのＦＰＬＣ分画から得たＬＤＬを細胞に１００μｇ／ｍＬで添加した。８時間後に上清を単球の化学走性活性についてアッセイした。アッセイコントロールは図１１で述べたとおりである。Ｓａｌｉｎｅ  ＬＤＬ、食塩水担体を注射したマウスから得たＬＤＬ；Ｓ−７  ＬＤＬ、図１１に記載したように表４の配列番号：２５４を注射したマウスから得たＬＤＬ；Ｓ−１１  ＬＤＬ、図１１に記載したように表４の配列番号：２５８を注射したマウスから得たＬＤＬ；Ｓ−３５  ＬＤＬ、図９に記載したように配列番号：２８２を注射したマウスから得たＬＤＬ。＃ｐ＜０．００１。
【図１３】ペプチド注射後の血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）の血漿レベルを示す。血漿のＳＡＡレベルは図１１および１２に記載したペプチドの注射の２４時間後に測定した。＊ｐ＜０．００１。
【図１４】全てＬアミノ酸から合成され、経口的に投与されたとき、表４の配列番号：２５８は、アポＥヌルマウスの前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換することを示す。３ヶ月齢の雌のアポＥヌルマウス（ｎ＝４）に表４の配列番号：２５８として記載されたペプチド（水に２００μｇ）を投与した。前記ペプチドはすべてＬアミノ酸から合成された（図ではＳ−１１と表示）。ペプチドまたは前記ペプチドを含まない水を胃管によって投与し、４時間後にマウスから採血した。４匹のマウスで構成される第二の群は標準的マウス飼料を与えられた。前記飼料は粉末形で、粉末マウス飼料１．０グラムにつき添加された２００μｇのＳ−１１（全てＬアミノ酸で合成された）を含む。合計８００μｇのペプチドを含む合計４グラムの粉末マウス飼料が４匹のマウスを入れたケージに与えられるか、またはペプチドを含まない同じ粉末マウス飼料が与えられた。マウスは前記飼料を一晩利用でき、朝までに飼料は消費されており、前記マウスから採血した。血漿を分離し、ＦＰＬＣによってＨＤＬを単離した。続いてＨＤＬ炎症性／抗炎症性特性を決定した。ヒト大動脈内皮細胞培養に、培養液のみを添加するか（Ｎｏ  Ａｄｄｉｔｉｏｎ／アッセイコントロール）、標準正常ヒトＬＤＬ（１００μｇ／ｍＬコレステロール）を標準コントロールヒトＨＤＬ（５０μｇ／ｍＬコレステロール）無しに添加（ＬＤＬ／アッセイコントロール）若しくは前記と一緒に添加するか（ＬＤＬ＋Ｃｏｎｔ．ＨＤＬ／アッセイコントロール）、またはコントロールヒトＬＤＬ（１００μｇ／ｍＬコレステロール）を、ペプチド無し（ＬＤＬ＋Ｎｏ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ＨＤＬ）若しくはＬ−Ｓ−１１（ＬＤＬ＋Ｌ−Ｓ−１１  ＨＤＬ）を胃管により（胃管経由）またはマウス飼料により（粉末飼料）投与されたマウスから得られたマウスＨＤＬ（５０μｇ／ｍＬコレステロール）と一緒に添加した。前記培養を８時間インキュベートした。続いて上清を単球の化学走性活性についてアッセイした。値は、９個の高倍率視野における遊泳単球数の平均±ＳＤである。ｐ＜０．００１。
【図１５】Ｌ−Ｓ−１１は、全てＬアミノ酸から合成され、経口的に投与されたときは血漿のパラオキソナーゼ活性を高めることを示す。図１４に記載のマウスから得た血漿をパラオキソナーゼ活性（ＰＯＮ活性、前記は血漿５００μＬ当たりのユニットとして図に示されている）についてアッセイした。Ｎｏ  Ｐｅｐｔｉｄｅ、ペプチドを含まない水または飼料のみを与えられたマウス；Ｌ−Ｓ−１１、図１４に記載したように、表４の配列番号：２５６に記載のペプチド２００μｇを水または飼料で与えられたマウス。ｐ＜０．００１。
【図１６】表４の配列番号：２３８（Ｄ−１と表示）および配列番号：２５８（Ｄ−１１と表示）は、全てＤアミノ酸で合成され経口的に投与されたときは、アポＥヌルマウスでＨＤＬを抗炎症性にするが、全てＬアミノ酸で合成され経口的に投与されたときは抗炎症性にしないことを示している。３ヶ月齢の雌のアポＥヌルマウス（ｎ＝４）に標準的マウス飼料を与えた。前記飼料は粉末形で、粉末マウス飼料１．０グラムにつき添加された各ペプチド０．５ミリグラムを含む。合計２．０ミリグラムのペプチドを含む合計４グラムの粉末マウス飼料が４匹のマウスを入れたケージに与えられるか、またはペプチドを含まない同じ粉末マウス飼料が与えられた。マウスは前記飼料を２４時間利用でき、その間に飼料は消費され、前記マウスから採血された。血漿を分離し、ＦＰＬＣによってＨＤＬを単離した。ヒト大動脈内皮細胞培養に、培養液のみを添加するか（Ｎｏ  Ａｄｄｉｙｉｏｎ／アッセイコントロール）、標準正常ヒトＬＤＬ（１００μｇ／ｍＬコレステロール）を標準コントロールヒトＨＤＬ（５０μｇ／ｍＬコレステロール）無しに添加（ＬＤＬ／アッセイコントロール）若しくは前記と一緒に添加するか（ＬＤＬ＋Ｃｏｎｔｒｏｌ  ＨＤＬ／アッセイコントロール）、またはコントロールヒトＬＤＬ（１００μｇ／ｍＬコレステロール）を、ペプチド無し（ＬＤＬ＋Ｎｏ  Ｐｅｐ．  ＨＤＬ）若しくは全てＬアミノ酸から合成した配列番号：２３８（ＬＤＬ＋Ｌ−１  ＨＤＬ）若しくは全てＤアミノ酸から合成した配列番号：２３８（ＬＤＬ＋Ｄ−１  ＨＤＬ）もしくは全てＤアミノ酸から合成した配列番号：２５８（ＬＤＬ＋Ｄ−１１  ＨＤＬ）を投与したマウスから得たマウスＨＤＬ（５０μｇ／ｍＬコレステロール）と一緒に添加した。前記培養を８時間インキュベートした。続いて上清を単球の化学走性活性についてアッセイした。値は、９個の高倍率視野における遊泳単球数の平均±ＳＤである。＊はｐ＜０．０１を示し、＊＊はｐ＜０．００１を示す。
【図１７】表４の配列番号：２３８（Ｄ−１）および配列番号：２５８（Ｄ−１１）は、全てＤアミノ酸で合成され経口的に投与されたときは、アポＥヌルマウスでＨＤＬを抗炎症性にし、さらにＬＤＬ−誘発単球化学走性活性を低下させるが、配列番号：２３８は全てＬアミノ酸で合成され経口的に投与されたときはそうではないことを示している。図１６に記載のマウスから得た血漿を分離し、ＦＰＬＣによってＨＤＬおよびＬＤＬを単離した。ヒト大動脈内皮細胞培養に、培養液のみを添加するか（Ｎｏ  Ａｄｄｉｔｉｏｎ／アッセイコントロール）、標準正常ヒトＬＤＬ（１００μｇ／ｍＬコレステロール）を標準コントロールヒトＨＤＬ（５０μｇ／ｍＬコレステロール）無しに添加（ＬＤＬ／アッセイコントロール）若しくは前記と一緒に添加するか（ＬＤＬ＋Ｃｏｎｔｒｏｌ  ＨＤＬ／アッセイコントロール）、または自己マウスＬＤＬ（１００μｇｍ／ｍＬコレステロール）を単独で（ｍＬＤＬ）、または、ペプチド無し（ｍＬＤＬ＋Ｎｏ  Ｐｅｐ．  ＨＤＬ）若しくは全てＬアミノ酸から合成した配列番号：２３８（ｍＬＤＬ＋Ｌ−１  ＨＤＬ）若しくは全てＤアミノ酸から合成した配列番号：２３８（ｍＬＤＬ＋Ｄ−１  ＨＤＬ）若しくは全てＤアミノ酸から合成した配列番号：２５８（ｍＬＤＬ＋Ｄ−１１  ＨＤＬ）を投与したマウスから得たマウスＨＤＬ（５０μｇｍ／ｍＬコレステロール）と一緒に添加した。前記培養を８時間インキュベートした。続いて上清を単球の化学走性活性についてアッセイした。値は、９個の高倍率視野における遊泳単球数の平均±ＳＤである。＊はｐ＜０．０５を示し、＊＊はｐ＜０．０１を示し、＊＊＊はｐ＜０．００１を示す。
【図１８】全てＤアミノ酸で合成された表４の配列番号：２５８（Ｄ−１１）は、経口的に投与されたときＨＤＬコレステロール濃度を高めるが、Ｌアミノ酸またはＤアミノ酸で合成された配列番号：２３８（それぞれＬ−１またはＤ−１）を経口的に投与した場合はそうではないことを示している。図１６および１７に記載されているマウスの血漿ＨＤＬ−コレステロール濃度を決定した。Ｎｏ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＨＤＬ、ペプチドを投与されなかったマウスの血漿ＨＤＬ−コレステロール；Ｌ−１  ＨＤＬ、Ｌアミノ酸で合成された配列番号：２３８を投与されたマウスの血漿ＨＤＬ−コレステロール；Ｄ−１  ＨＤＬ、Ｄアミノ酸で合成された配列番号：２３８を投与されたマウスの血漿ＨＤＬ−コレステロール；Ｄ−１１  ＨＤＬ、Ｄアミノ酸で合成された配列番号：２５８を投与されたマウスの血漿ＨＤＬ−コレステロール。＊はｐ＜０．００１を示す。
【図１９】全てＤアミノ酸で合成された表４の配列番号：２５８（Ｄ−１１）は、経口的に投与されたときＨＤＬパラオキソナーゼ（ＰＯＮ）活性を高めるが、Ｌアミノ酸またはＤアミノ酸で合成された配列番号：２３８（それぞれＬ−１またはＤ−１）を経口的に投与した場合はそうではないことを示している。図１８に記載のＨＤＬのパラオキソナーゼ活性を決定した。値は血漿５００μＬ当たりの活性である。＊はｐ＜０．００１を示す。
【図２０】アポＥヌルマウスの表面調製物（ｅｎ  ｆａｃｅ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）で調べたとき、プラバスタチンおよびＤ−４Ｆは相乗的に作用して大動脈病巣を減少させることを示す。５週齢の雌のアポＥヌルマウスに、添加無し（ｗａｔｅｒ  ｃｏｎｔｒｏｌ）、プラバスタチン５０μｇ／ｍＬ、プラバスタチン２０μｇ／ｍＬ、またはＤ−４Ｆ  ２μｇ／ｍＬ、Ｄ−４Ｆ  ５μｇ／ｍＬ、またはＤ−４Ｆ  ２μｇ／ｍＬとともにプラバスタチン（ＰＲＡＶＡ．）２０μｇ／ｍＬ  、若しくはＤ−４Ｆ  ５μｇ／ｍＬとともプラバスタチン（ＰＲＡＶＡ．）５０μｇ／ｍＬ  を飲み水で与えた。１１週間後、マウスを殺し、表面調製物で病巣を調べた。
【図２１】プラバスタチンおよびＤ−４Ｆは相乗的に作用してアポＥヌルマウスで大動脈洞病巣を減少させることを示す。５週齢の雌のアポＥヌルマウスに、添加無し（ＷＡＴＥＲ  ＣＯＮＴＲＯＬ）、プラバスタチン５０μｇ／ｍＬ、プラバスタチン２０μｇ／ｍＬ、またはＤ−４Ｆ  ２μｇ／ｍＬ若しくはＤ−４Ｆ  ５μｇ／ｍＬ、またはＤ−４Ｆ  ５μｇ／ｍＬとともにプラバスタチン（Ｐ）５０μｇ／ｍＬ  、若しくはＤ−４Ｆ  ２μｇ／ｍＬとともプラバスタチン（Ｐ）２０μｇ／ｍＬ  を飲み水で与えた。１１週間後、マウスを殺し、大動脈洞病巣を調べた。
【図２２】Ｄ−４Ｆ並びに表４の配列番号：２４２および配列番号：２５８はアポＥヌルマウスでリポタンパク質脂質ヒドロペルオキシドを劇的に減少させることを示す。配列番号：２４２（図ではＤ−１９８）または配列番号：２５８（図ではＤ−２０３）またはＤ−４Ｆ（このペプチドは全てＤアミノ酸で合成された）の５０μｇ／ｇｍをアポＥヌルマウスの飼料に添加するか、またはマウスを添加物非含有飼料で維持した（Ｎｏｎｅ）。１８時間後マウスから採血し、血漿をＦＰＬＣで分画し、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）および高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）の脂質ペルオキシド（ＬＯＯＨ）含有量を決定した。＊はｐ＜０．０１を示す。
【図２３】酢酸エチル中でのペプチドの可溶性を示す。配列番号：２５４：Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（εＢｏｃ）−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕ；および配列番号：２５８：Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（εＢｏｃ）−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕ。さらにまた配列番号：２５０の酢酸エチル中での可溶性が示される。
【図２４】配列番号：２５８は水性環境下でＤＭＰＣと混合したとき７．５ｎｍの粒子を形成することを示す。リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中の１ｍｇ／ｍＬのＤＭＰＣ懸濁液に、ＤＭＰＣが溶解するまで１０％のデオキシコレートを添加した。配列番号：２５８または配列番号：２５４を添加し（ＤＭＰＣ：ペプチド；１：１０（ｗｔ／ｗｔ））、反応混合物を透析した。透析後、配列番号：２５８に関しては溶液は透明のままであったが、配列番号：２５４の場合にはデオキシコレートが透析で除かれた後溶液は混濁した。図は、ネガティブ染色を施した電子顕微鏡写真で、倍率は１４７，４２０ｘである。矢印は、７．５ｎｍの配列番号：２５８の粒子を示している（それらは小さな白い粒子のように見える）。
【図２５】水性環境下でＤＭＰＣに添加された配列番号：２５８は約７．５ｎｍの直径を有する粒子（大きな白い矢印）、および積層脂質ペプチド二重層（大きな斜線入り矢印）を形成する（小さな矢印はディスクの円筒形の積層の中の白い線を指している）。前記二重層は、二重層（積層ディスク内の白線の間の黒い線）の間に約２ｎｍの間隙を有する３．４から４．１ｎｍの大きさを有する。条件および倍率は図２４に記載したものと同じである。
【図２６】水性環境下でＤＭＰＣに添加された配列番号：２５８のペプチドは積層脂質−ペプチド二重層（斜線入り矢印）および約３８ｎｍの小胞構造（白色矢印）を形成することを示す。
【図２７】配列番号：２５８を含まない水性環境下のＤＭＰＣは、約７．５ｎｍの直径を有する粒子または積層脂質ペプチド二重層も、約３８ｎｍの小胞構造も形成しないことを示す。表示されているＤＭＰＣ小胞は１２．５−１４ｎｍである。条件および倍率は図２４に記載したものと同じである。
【図２８】配列番号：２５８のペプチドと比較した配列番号：２５４のペプチドの分子モデルを示す。赤は酸素を示し、青は窒素を示し、灰色は炭素を示し、白は水素分子を示す。
【図２９】配列番号：２５８のペプチドと比較した配列番号：２５４の間隙充填分子モデルを示す。この間隙充填分子モデル中の矢印は分子の極性部分及び非極性部分を同定する。カラーコードは図２８と同じである。
【図３０】上部パネルに示した向きのペプチド骨格を（下部パネルに）示す。
【図３１】配列番号：２５８のペプチドと比較した配列番号：２５４の分子モデルを示し、Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕ基が特定される。カラーコードは図２８と同じである。
【図３２】配列番号：２５８のペプチドと比較した配列番号：２５４の分子モデルを示し、種々の封鎖基が特定される。カラーコードは図２８と同じである。
【図３３】配列番号：２５８はアポＥヌルＨＤＬを抗炎症性にするが、配列番号：２５４はそうではないことを示す。
【図３４】配列番号：２５８はアポＥヌルマウスで大動脈根のアテローム性硬化症を顕著に軽減するが、配列番号：２５４はそうではないことを示す。大動脈根（大動脈洞）の病巣スコアを図３３に記載のアポＥヌルマウスで求めた。各群のマウスの数（ｎ＝）は図の下に示され、各群の代表的な切片は図の上に示されている。
【図３５】配列番号：２５８はアポＥヌルマウスの表面調製物で大動脈のアテローム性硬化症を顕著に軽減するが、配列番号：２５４はそうではないことを示す。アテローム硬化症病巣を含むパーセント大動脈表面積を図３３に記載のアポＥヌルマウスの表面調製物で求めた。各群のマウスの数（ｎ＝）は左パネルの下に示され、飼料のみまたは配列番号：２５８補充飼料を与えられたマウスの代表的な大動脈は右のパネルに示されている。
【図３６】全てＬアミノ酸から合成された配列番号：２５０はアテローム性硬化症を顕著に軽減することを示す。アポＥヌルマウス（各群に２０匹）を飼料で維持するか（餌）、または全てＬアミノ酸で合成した配列番号：２５０を２００μｇ／ｇｍ飼料で補充した飼料で維持した（２５０）。１２週間後にマウスを殺し、病巣をもつ％大動脈表面積を表面調製物で求めた。＊ｐ＝０．０１２。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【国際調査報告】
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