(57)【要約】  開示されたのは、アミノアシルｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤、及び別のアミノアシルｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤を組む別の抗生物質を含む薬学組成物である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミノアシルｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤又は薬学上受容可能なその塩、及び追加の抗菌剤を含む組成物。
【請求項２】
２つ又はそれより多いアミノアシルｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤、又は薬学上受容可能なその塩の組み合わせを含む組成物。
【請求項３】
メチオニルｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤又は薬学上受容可能なその塩及び追加の抗菌剤を含む組成物。
【請求項４】
抗菌剤がアミノアシルｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤又は薬学上受容可能なその塩である、請求項３記載の組成物。
【請求項５】
アミノアシルｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤がイソロイシルｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤である、請求項４記載の組成物。
【請求項６】
イソロイシルｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤がムピロシン又は薬学上受容可能なその塩である、請求項５記載の組成物。
【請求項７】
メチオニルｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤が、
【化１】
2007502861.tif 000035
及び前記化合物の何れかの薬学上受容可能な塩からなる群から選択される、請求項３記載の組成物。
【請求項８】
メチオニルｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤が
【化２】
2007502861.tif 000036
又は薬学上受容可能なその塩であり、そして抗菌剤がムピロシン又は薬学上受容可能なその塩又はエステルである、請求項７記載の組成物。
【請求項９】
ムピロシン又は薬学上受容可能なその塩又はエステル、及び少なくとも一つの追加のｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤又は薬学上受容可能なその塩を含む、ヒト又は家畜動物への局所塗布のための薬学組成物。
【請求項１０】
メチオニルｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤の塩を含む組成物であって、当該塩がムピロシネート塩及びフシデート塩からなる群から選択される、組成物。
【請求項１１】
メチオニルｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤が、
【化３】
2007502861.tif 000037
からなる群から選択される、請求項１０記載の組成物。
【請求項１２】
Ｎ−（４，５−ジブロモ−３−メチルチオフェン−２−イルメチル）−Ｎ’−（１Ｈ−キノリン−４−オン）プロパン−１，３−ジアミンムピロシネートを含む、請求項１１記載の組成物。
【請求項１３】
Ｎ−（４−ブロモ−５−（１−フルオロビニル）−３−メチルチオフェン−２−イルメチル）−Ｎ’−（１Ｈ−キノリン−４−オン）プロパン−１，３−ジアミンムピロシネートを含む、請求項１１記載の組成物。
【請求項１４】
Ｎ−（３−クロロ−５−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−イルメチル）−Ｎ’−（１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−プロパン−１，３−ジアミンムピロシネートを含む、請求項１１記載の組成物。
【請求項１５】
Ｎ−（１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−Ｎ’−（３，４，６−トリクロロ−１Ｈ−インドール−２−イルメチル）−−プロパン−１，３−ジアミンムピロシネートを含む、請求項１１記載の組成物。
【請求項１６】
Ｎ−（１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−Ｎ’−（３，４，６−トリクロロ−１Ｈ−インドール−２−イルメチル）−−プロパン−１，３−ジアミンフシデートを含む、請求項１１記載の組成物。
【請求項１７】
請求項２記載の薬学組成物を細菌感染を有する宿主に投与することを含む、細菌感染を治療する方法。
【請求項１８】
細菌感染が腸球菌の感染である、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
腸球菌がエンテロコッカスフェーカリス及びエンテロコッカスフェシウムからなる群から選択される、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
腸球菌がバンコマイシン耐性株である、請求項１７記載の方法。
【請求項２１】
細菌感染が、スタフィロコッカスアウレウス、ストレプトコッカスピオゲネス、スタフィロコッカスエピダミディス及びスタフィロコッカスヘモリチカスからなる群から選択される細菌の感染である、請求項１７記載の方法。
【請求項２２】
スタフィロコッカスアウレウスが、バンコマイシン中間体のスタフィロコッカスアウレウス、低レベルムピロシンに耐性のスタフィロコッカスアウレウス及び高レベルのムピロシン耐性のスタフィロコッカスアウレウスからなる群から選択される、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
細菌感染が、スタフィロコッカスアウレウス、ストレプトコッカスピオゲネス、スタフィロコッカスエピダミディス及びスタフィロコッカスヘモリチカスからなる群から選択される細菌の感染である、請求項１７記載の方法。
【請求項２４】
スタフィロコッカスアウレウスが、バンコマイシン中間体のスタフィロコッカスアウレウス、低レベルムピロシンに耐性のスタフィロコッカスアウレウス及び高レベルのムピロシン耐性のスタフィロコッカスアウレウスからなる群から選択される、請求項２１記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
発明の背景
抗菌剤は、生存に必須の細胞機能の主要なプロセスを干渉することにより細菌の成長を抑制する（ｋｉｌｌ）か又は阻害する。β−ラクタム類（ペニシリン類及びセファロスポリン類）及びグリコペプチド類（バンコマイシン及びテイコプラニン）は、細胞壁の合成を阻害する。マクロリド類（エリスロマイシン、クラリスロマイシン、及びアジスロカイシン）、クリンダマイシン、クロラムフェニコール、アミノグリコシド類（ストレプトマイシン、ゲンタマイシン、及びアミカシン）及びテトラサイクリン類は、蛋白質合成を阻害する。認定された新しいクラスの抗菌剤（リンゾリド）も蛋白質合成を阻害し、合成オキサゾリジノン類である。リファンピンはＲＮＡ合成を阻害し、フルオロキノロン類（例えば、シプロフロキサシン）は、ＤＮＡのトポロジカル状態を維持する酵素を阻害することにより間接にＤＮＡ合成を阻害する。トリメトプリン及びスルフォナミド類はフォレートの生合成を直接阻害し、そして必要なヌクレオチドの一つのプールを枯渇させることにより間接にＤＮＡ合成を阻害する（Ｃｈａｍｂｅｒｓ，Ｈ．Ｆ．ａｎｄ  Ｓａｎｄｅ，Ｍ．Ａ．（１９９６）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ．Ｇｏｏｄｍａｎ  ＆  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。この文献、及び本明細書に引用された全ての他の特許、特許出願、及び刊行物の開示は、それらの全体を本明細書に引用することにより編入する。
【０００２】
抗菌剤に対する耐性は、薬剤の標的が変異することにより、それがいまだ機能し得るが、薬剤によりもはや阻害されないようなときに（例えば、フルオロキノロン類に対する耐性を付与する細菌のジャイラーゼ及びトポイソメラーゼ酵素のキノロン耐性決定領域内の変異）、生じる。耐性は、細胞内部から薬剤を除去する流出（ｅｆｆｌｕｘ）ポンプの過剰発現又は活性化によっても媒介されるかもしれない（例えば、テトラサイクリン流出）。耐性の別の共通の機構は薬剤を修飾するか又は分解する酵素の生産を含み、その結果不活性になる（例えば、β−ラクタマーゼ、アミノグリコシド修飾酵素等）。成長上の利点のために、これは抗菌剤の存在下で耐性細胞及びそれらの子孫を提供し、耐性生物が細菌の集団を素早く引き継ぐ。一つの細胞において生じた耐性が集団中の他の細菌に移り得るのは、細菌が直接に遺伝物質を交換する機構を有するからである。最近の議会報告において、Ｇｅｎｅｒａｌ  Ａｃｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ（ＧＡＯ）は、薬剤耐性細菌によりもたらされる現在と未来の公衆衛生の負担を要約した（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ（１９９９）Ｇｅｎｅｒａｌ  Ａｃｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ（ＧＡＯ／ＲＣＥＤ−９９−１３２））。この報告によれば、薬剤耐性細菌による感染のために設定された病院内で治療された患者の数は、１９９４年から１９９６年で二倍になり、そして１９９６年から１９９７年でさらにほぼ二倍になった。耐性株は、免役抑圧性患者のかなり大きな集団を有する病院又は三次医療施設のような環境において容易に広がり得る。同じＧＡＯの報告は、以前に感受性であった細菌がますます耐性になり、そして世界中に広がるという明確な証拠を提供する。さらに、細菌集団内の耐性細菌の比率は増大している。特に驚くべき進展は、複数耐性であるか又は全ての承認された抗菌剤に対して全耐性（ｐａｎｒｅｓｉｓｔａｎｔ）な細菌株の出現である。薬剤耐性細菌の劇的な増加を認識することにより、食品医薬品局は、最近、医師に対して、抗菌剤の思慮分別ある使用と臨床上必要なときのみの使用を促す忠告を発した（ＦＤＡ  Ａｄｖｉｓｏｒｙ（２０００）．Ｆｅｄｅｒａｌ  Ｒｅｇｉｓｔｅｒ  ６５（１８２），５６５１１−５６５１８）。
【０００３】
これらの環境は、新生の抗生物質耐性細菌に打ち勝つ新規の抗生物質を開発する努力を促した。アミノアシルｔＲＮＡシンセターゼは、全ての生きている生物に見いだされる必須の酵素である。これらの酵素が新規な抗生物質の開発のための魅力ある標的として現れたのは、これらの酵素を阻害する化合物が、存在する耐性機構を回避する能力を有するからである。
【０００４】
シュードモニック酸Ａはムピロシンとしても知られ、シュードモナスフルオレセンスにより合成される天然生成物であり、そしてスタフィロコッカスアウレウス、スタフィロコッカスエピダミディス及びスタフィロコッカスサプロフィチカスを含むグラム陽性感染性病原体、及びヘモフィルスインフルエンザ、ナイセリアゴノロエ、及びナイセリアメニンギティディスを含むグラム陰性生物由来のイソロイシル−ｔＲＮＡシンセターゼの阻害剤である。細菌のイソロイシルｔＲＮＡシンセターゼ酵素は、細菌の皮膚感染の局所治療のための軟膏又はローションとして製剤化された場合に、ムピロシン又は薬学上受容可能な塩により首尾よく標的化されてきた。
【０００５】
ムピロシン及び誘導体は、グラム陽性好気生物及びいくつかのグラム陰性好気生物に対して主に活性である。ムピロシン遊離酸は、皮膚、目及び耳の疾患を治療することにおいて有用であることが見いだされる。
【０００６】
３つの市販製品が、活性成分として、ムピロシン遊離酸又は結晶ムピロシンカルシウム二水和物を含む。これらの製品は、Ｂａｃｔｒｏｂａｎ（登録商標）軟膏、Ｂａｃｔｒｏｂａｎ（登録商標）鼻用（Ｎａｓａｌ）及びＢａｃｔｒｏｂａｎ（登録商標）クリームであり、グラクソスミスクラインビーチャムにより製造されている。第１の物はムピロシンを含むが、他の２つは結晶ムピロシンカルシウム二水和物を含む。Ｂａｃｔｒｏｂａｎ（登録商標）軟膏は、米国特許第４，５２４，０７５号に記載されている。Ｂａｃｔｒｏｂａｎ（登録商標）鼻用（Ｎａｓａｌ）は、米国特許第４，７９０，９８９号に記載されている。Ｂａｃｔｒｏｂａｎ（登録商標）クリームは、ＷＯ９５／１０９９９及び米国特許第６，０２５，３８９号に記載されている。
【０００７】
結晶ムピロシンカルシウム、その特性及び製造方法は、米国特許第４，９１６，１５５号に記載されている。この特許は、カルシウム塩の結晶二水和物形態の改善された熱安定性を強調している。ムピロシンカルシウム非結晶質は、米国特許第６，４８９，３５８号に記載されている。
【０００８】
ムピロシンは広く受け入れられて成功した製品であるが、２種類の耐性が記載された：１）染色体によりコードされたイソロイシルｔＲＮＡシンセターゼ蛋白質内の変異に大きく帰する、８−２５６μｇ／ｍＬの範囲の最小阻害濃度（ＭＩＣ’ｓ）の低レベル耐性、及び２）プラスミドによりコードされたＩＲＳ酵素により引き起こされ、ＭＩＣｓ＞５１２μｇ／ｍＬをもたらす高レベル耐性（ｍｕｐＡ）。
【０００９】
さらに、２０００年に実施された最近の監査研究は、ラテンアメリカにおいて４．６％、北アメリカ及び欧州においてそれぞれ１４．１％及び１７．８％の範囲でオキサシリン−耐性スタフィロコッカスアウレウス内のムピロシン耐性率を同定した。
【００１０】
アミノアシルｔＲＮＡシンセターゼに向けられた他の公知の天然生成物阻害剤は、ボレリジン、フラノマイシン、グラナチシン、インドルマイシン、オカートキシン（ｏｃｈａｒｔｏｘｉｎ）Ａ、及びシスペンタシンを含むが、これまでにどれもが抗生物質までに開発されていない。メチオニルｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤は、国際特許出願公開ＷＯ００／７１５２４において記載されたとおり、ピリミドンメチオニルｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤である；国際特許出願公開ＷＯ００／７１５２２において記載されたメチオニルｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤であるベンズイミダゾール誘導体；国際特許出願公開ＷＯ９９／５５６７７及びＷＯ００／２１９４９において記載されたメチオニルｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤；米国特許第６，３２０，０５１号に記載されたメチオニルｔＲＮＡシンセターゼの阻害剤である２−（ＮＨ−−又はＯ−−置換された）キノロン類；２００３年１２月５日に出願された米国特許出願連続番号１０／７２９，４１６は「抗菌活性を有する２−ＮＨ−ヘテロアリールイミダゾール」と題する；２００４年２月２日に出願された国際特許出願連続番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３０４０は、「新規化合物」と題する；Ｊａｒｖｅｓｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ（２００３）１３：６６５−６６８；Ｊａｒｖｅｓｔ，ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：１９５９−１９６２；及び２００４年２月２７日に出願された米国特許出願連続番号１０／７８９，８１１は「抗菌活性を有する置換されたチオフェン類」と題する。抗菌剤としてのｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤の製剤化に関する要求が残されている。
【００１１】
発明の概要
本発明は、アミノアシルｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤及び他のアミノアシルｔＲＮＡシンセターゼ組成物を含む他の抗菌剤を含む薬学組成物を提供する。
【００１２】
発明の詳細な説明
本発明の一つの態様は、有効な様式にて宿主に投与された時に、治療用組成物がヒト又は動物を細菌により引き起こされた疾患から防御することができる。本明細書にて使用される防御化合物は、有効な様式にて宿主に投与された時に、細菌により引き起こされた疾患を治療、改善及び／又は予防することができる化合物を意味する。
【００１３】
本開示は、抗菌剤としての使用のための、少なくとも一つのアミノアシルｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤、特にメチオニルｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤を含む治療用組み合わせ組成物を記載する。そのような組み合わせ治療の利益は、局所用途に限定されず、経口及び非経口投与に及ぶ。治療用組成物は、ムピロシン及び他の現在市販されている抗菌剤に耐性の生物により引き起こされた感染の予防及び／又は治療に有用である。
【００１４】
一つの態様において、発明は、細菌感染の治療のための活性成分として、少なくとも一つの治療剤、好ましくは抗菌剤又は抗生物質と化合した、少なくとも一つのアミノアシルｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤を含む製剤を意図する。
【００１５】
一つの態様において、治療用組成物は、メチオニルアミノアシルｔＲＮＡシンセターゼ（ＭＲＳ）阻害剤を含む。ＭＲＳ阻害剤は、国際特許出願公開ＷＯ００／７１５２４、ＷＯ００／７１５２２、ＷＯ９９／５５６７７及びＷＯ００／２１９４９；米国特許第６，３２０，０５１号；２００３年１２月５日に出願された「抗菌活性を有する２−ＮＨ−ヘテロアリールイミダゾール」と題する米国特許出願連続番号１０／７２９，４１６；２００４年２月２日に出願された「新規化合物」と題する国際特許出願連続番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３０４０；Ｊａｒｖｅｓｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ（２００３）１３：６６５−６６８；Ｊａｒｖｅｓｔ，ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：１９５９−１９６２；及び２００４年２月２７日に出願された「抗菌活性を有する置換されたチオフェン類」と題する米国特許出願連続番号１０／７８９，８１１に記載されており、以下の化合物により、本明細書において例示される：
ＭＲＳ阻害剤、
【００１６】
【化１】
2007502861.tif 000002
【００１７】
ＭＲＳ阻害剤１−８は、それぞれ、２−［３−（６，８−ジブロモ−２，３，４，５−テトラヒドロキノリン−４−イルアミノ）プロプ−１−イルアミノ］−１Ｈ−キノリン−４−オン；Ｎ−（６，８−ジブロモ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−４−イル）−Ｎ’−（１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−プロパン−１，３−ジアミンジヒドロクロリド；２−｛［（１Ｒ，２Ｓ）−２−（３，４−ジクロロベンジルアミノ）シクロペンチルメチル］アミノ｝−１Ｈ−キノリン−４−オン；Ｎ−（４，５−ジブロモ−３−メチルチオフェン−２−イルメチル）−Ｎ’−（１Ｈ−キノリン−４−オン）プロパン−１，３−ジアミン；Ｎ−（４−ブロモ−５−（１−フルオロビニル）−３−メチルチオフェン−２−イルメチル）−Ｎ’−（１Ｈ−キノリン−４−オン）プロパン−１，３−ジアミン；Ｎ−（４−ブロモ−５−（１−フルオロビニル）−３−メチルチオフェン−２−イルメチル）−Ｎ’−（１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−プロパン−１，３−ジアミン；Ｎ−（３−クロロ−５−メトキシ−１Ｈ−インドール−７−イルメチル）−Ｎ’−（１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−プロパン−１，３−ジアミン；及びＮ−（１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−Ｎ’−（３，４，６−トリクロロ−１Ｈ−インドール−２−イルメチル）−−プロパン−１，３−ジアミンとも呼ばれる。
【００１８】
一つの態様において、治療用組成物は、ＭＲＳ阻害剤とムピロシン又はフシジン酸を含む。ムピロシン又はフシジン酸はそれらの薬学上受容可能な塩又はエステルにて使用してよい。さらに、治療用組成物は、ＭＲＳ阻害剤ムピロシネート（即ち、ＭＲＳ阻害剤とムピロシンの間に形成される塩）又はＭＲＳ阻害剤フシデート（即ち、ＭＲＳ阻害剤とフシジン酸の間に形成される塩）の形態であってよい。ＭＲＳ阻害剤は、交換可能に、短縮してＭＲＳｉと呼んでよい。ムピロシン又はフシジン酸の適切な薬学上受容可能な塩は、当業界にてよく知られており、アルカリ金属塩、例えば、ナトリウム及びリチウム及びアルカリ土類金属、例えば、カルシウムを含み、そのうちではカルシウム塩が望ましく、特に結晶無水物形態であり、並びに他の金属塩、例えば、銀及びアルミニウム塩及びアンモニウム置換されたアンモニウム塩を含む。上記の塩は無水物であってよく、あるいは薬学上受容可能な溶媒和物、例えばアルコラート、特に水和物の形態であってよい。塩は、カルシウム、銀及びリチウム塩、特にカルシウム塩を含み得る。ムピロシンのカルシウム塩の場合、結晶塩、結晶水和カルシウム塩、又は結晶二水和物を用いる。ＭＲＳｉムピロシネート塩又はＭＲＳｉフシデートは、薬学上受容可能な溶媒和物、例えば、アルコラート、特に水和物の形態であってよい。
【００１９】
【化２】
2007502861.tif 000003
【００２０】
一つの態様において、細菌の感染は局所細菌感染であり、限定ではないが、インペチゴ、感染した皮膚の外傷、感染性皮膚炎（湿疹、乾癬等）、創傷、やけどの感染、手術後の感染、透析部位の感染、及び病原性生物による鼻咽腔のコロニー化に付随した感染、副鼻腔炎、を含み、再発を含む。
【００２１】
治療用組成物の活性成分がアミノアシルｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤の場合、発明の治療用組成物中で組み合わせられた２つ又はそれより多い阻害剤は相乗性又は相加性を示すべきであるが、なぜなら、各阻害剤は同じ生化学プロセスの成分を標的とするからである（同起源のアミノ酸によるｔＲＮＡの変化、又はより一般的には蛋白質合成）。さらに、ｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤の組み合わせからなる抗菌薬剤は耐性の発現に関して低い傾向を有するが、なぜなら２つの酵素中の耐性は薬剤に対する細菌の防御を提供することを同時に発現することを必要とするからである。この発明において具体化される組み合わせ生成物は、臨床単離物において発生する低レベル及び高レベルのムピロシン（ｍｕｐＡ）耐性機構の両方を回避する能力を有することになる。そのような組み合わせ生成物は、単独の薬剤物質との製剤において耐性細菌の発現の危険性を増加させるかもしれない低レベル用量の薬剤物質に細菌を暴露する不利を被らないはずである。これまでに記載されたアミノアシルｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤の多くは静菌性（ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ）であるが、高い用量が局所的に適用できるために、組み合わされた生成物は感染の部位において局所濃度にて殺菌活性を示すことが予測される。
【００２２】
当業界において公知のあらゆるｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤も、この開示に従い組み合わせて使用することができる。上記のものに加えて、本発明において有用なｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤は、限定ではないが、ボレジジン、フラノマイシン、グラナチシン、インドルマイシン、オクラトキシン、シスペンタシン、５’−Ｏ−グリシルスルファモイルアデノシン；米国特許出願公開２００３−００１３７２４Ａ１、及び米国特許番号第６，４１７，２１７号及び第６，３３３，３４４号に記載されたプロリンに基づくｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤；米国特許番号第５，８２４，６５７号に記載されたアミノアシルスルファミドに基づくｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤；米国特許番号第６，３４８，４８２号及び米国特許出願公開２００２−００４０１４７Ａ１に記載されたカテコールに基づくｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤；米国特許番号第６，１５３，６４５号に記載されたヘテロシクルに基づくｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤；米国特許番号第５，７２６，１９５号に記載されたアミノアシルアデニレート模倣体イソロイシル−ｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤；米国特許番号第６，４１４，００３号及び第６，１６９，１０２号に記載されたオキサゾロン誘導体；及び米国特許第６，４４８，０５９号に記載されたｔＲＮＡのクリーブリーフ構造の領域を標的とするオリゴヌクレオチド類を含む。
【００２３】
本開示の治療用組成物は、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）、連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）及び腸球菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ）、特に、現在市販されている薬剤に耐性の単離物を含む、臨床上重要なグラム陽性病原体に対して抗菌活性を有する。
【００２４】
本開示の治療用組成物は、ムピロシン及び他の現在市販されている抗微生物剤に耐性の生物により引き起こされる感染の予防及び／又は治療のためにも使用することができる。
鼻咽腔を含む鼻及び喉の皮膚又は粘膜への局所塗布のためには、活性成分を、クリーム、ローション軟膏、スプレー又は吸入薬、トローチ剤、喉のペイント剤、歯磨き剤、粉末に調合し、ミセル又はリポソームへ封入し、そして徐放のためにデザインされた生物適合性被覆内に取り込まれた活性化合物を含む薬剤放出カプセル、及びマウスウオッシュ及び他のウオッシュに調合してよい。活性成分のために使用してよい製剤は、当業界においてよく知られた慣用の製剤であり、例えば、米国薬局方（ＵＳＰ）、英国薬局方、欧州薬局方、日本薬局方、及び国際薬局方のような薬学のテキストブックに記載されたとおりである。
【００２５】
本開示の組成物は、抗生物質の局所投与に適したあらゆる慣用の担体、例えば、パラフィン及びアルコール内に調合してよい。それらは、例えば、軟膏，クリーム又はローション、目の軟膏及び耳の軟膏、ゲル、皮膚パッチ、浸潤包帯及びエアロゾルとして提示してよい。組成物は、適切な慣用の付加物、例えば、保存剤、薬剤の浸透を助ける溶剤（例えば、ＤＭＳＯ）、皮膚軟化薬、局所麻酔剤、保存剤及びバッファー剤を含んでもよい。
【００２６】
本発明による適切な組成物は、約０．０１重量％から９９重量％、好ましくは０．１−４０重量％の活性成分を含む。組成物が用量ユニットを含むなら、各用量ユニットは、好ましくは０．１−５００ｍｇの活性成分を含む。成人のヒトの治療のためには、ｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤の投与の経路及び頻度に依存して、用いられる用量は、好ましくは、１日あたり１ｍｇから５ｇの範囲になる。
【００２７】
適切な軟膏の基剤は、６５から１００％（好ましくは７５から９６％）の白色ソフトパラフィン、０から１５％の液体パラフィン、及び０から７％（好ましくは３から７％）のラノリン又はその合成均等物の誘導体を好都合に含んでよい。別の適切な軟膏基剤は、好都合には、ポリエチレン−液体パラフィンマトリックスを含んでよい。
【００２８】
適切なクリーム基剤は、好都合には、 乳化システム、例えば、２から１０％のポリオキシエチレンアルコール（例えば、トレードマークＣｅｔｏｍａｃｒｏｇｏｌ  １０００にて利用可能な混合物）、１０から２５％のステアリルアルコール、２０から６０％の液体パラフィン、及び１０から６５％の水；一つ又はそれより多い保存剤、例えば、０．１から１％のＮ，Ｎ’’−メチレンビス［Ｎ’−［３−（ヒドロキシメチル）−２，５−ジオキソ−４−イミダゾリジニル］ウレア］（Ｉｍｉｄｕｒｅａ  ＵＳＮＦの名前で利用可能）、０．１から１％のアルキル４−ヒドロキシベンゾエート（例えば、トレードマークＮＩＰＡＳＴＡＴにてＮｉｐａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから利用可能な混合物）、０．０１から０．１％のソディウムブチル４−ヒロキシベンゾエート（例えば、トレードマークＮＩＰＡＢＵＴＹＬ  ＳＯＤＩＵＭにてＮｉｐａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから利用可能な混合物）、及び０．１から２％のフェノキシエタノールを共に含んでよい。
【００２９】
クリームのための他の適切な基剤は、ソルビタンモノステアリレート、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ  ６０，セチルパルミテート、パラフィン、セチルステアリルアルコール、ベンジルアルコール、シリカ、トリアセチン、イソプロピルモノステアリレート、ポリエチレングリコール、グリセロールモノステアリレート、ポリアクリル酸、水酸化ナトリウム、ドクサートナトリウム（ｄｏｃｕｓａｔｅ  ｓｏｄｉｕｍ）、ジメチコーン、トリグリセリド、オクチルデカノール及びオクチルドデカノールを含む。いくつかの態様において、ペトロラタムとハードファットからなる群から選択される油性基剤；セトステアリルアルコール、セチルアルコール及びステアリルアルコールからなる群から選択される硬化剤；カストルオイル及びオレイルアルコールからなる群から選択される湿潤剤；５に等しいか又はそれ未満のＨＬＢの界面活性剤からなる群から選択される界面活性剤、及び薬学上受容可能な付加物を含むクリーム調製物が提供される。
【００３０】
適切なゲル基剤は、好都合には、高度な架橋により液体相が３次元ポリマーマトリックス内に束縛された（ｃｏｎｓｔｒａｉｎｅｄ）半固形システムを含んでよい。液体相は、好都合には、水を、０から２０％の水混和性付加物、例えば、グリセロール、ポリエチレングリコール、又はプロピレングリコール、及び０．１から１０％、好ましくは０．５から２％の、天然産物、例えば、トラガカントゴム、ペクチン、カラゲーニン、寒天及びアルギン酸、又は合成或いは半合成化合物、例えば、メチルセルロース及びカルボキシポリメチレン（カルボポル）であってよい濃縮剤；並びに一つ又はそれより多い保存剤、例えば、０．１から２％のメチル４−ヒドロキシベンゾエート（メチルパラベン）又はフェノキシエタノールを含んでよい。他の適切な基剤は、７０から９０％のポリエチレングリコール（例えば、米国国有処方集（ＵＳＮＦ）に従い調製された、４０％のポリエチレングリコール３３５０及び６０％のポリエチレングリコール４００を含むポリエチレングリコール軟膏、５から２０％の水、０．０２から０．２５％の抗酸化剤（例えば、ブチル化されたヒドロキシトルエン）、及び０．００５から０．１％のキレート剤（例えば、エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ））を含んでよい。
【００３１】
上で使用されたような用語ソフトパラフィンは、クリーム又は軟膏基剤の白色ソフトパラフィン及び黄色ソフトパラフィンを包含する。用語ラノリンは、天然ウールの脂肪及び精製されたウールの脂肪を包含する。ラノリンの誘導体は、特に、それらの物理特性又は化学特性を変えるために化学修飾されたラノリンを含み、そしてラノリンの合成均等物は、特に、公知であって薬剤及び化粧品においてラノリンの代替物として使用されて、例えば、ラノリン置換体と呼んでよい合成又は半合成化合物又は混合物を含む。
【００３２】
使用してよいラノリンノ一つの適切な合成均等物は、ＳＯＦＴＩＳＡＮトレードマークにて利用可能な物質である。
上記開示の組成物は、慣用の薬学の技術により製造してよい。即ち、上記の組成物は、都合よくは、例えば、上昇させた温度、好ましくは６０−７０℃において、ソフトパラフィン、存在させるなら液体パラフィン、及びラノリン又はその誘導体又は合成均等物を共に混合することにより製造してよい。上記混合物を、次に、室温にまで冷却し、そして活性成分及びあらゆる他の成分の添加後に、十分な拡散を保証するまで撹拌する。必要なら、上記組成物は、上記プロセスの如何なる適切な段階においてすりつぶしてよい。適切な滅菌手法を必要ならば含ませてもよい。或いは、原材料を滅菌条件下で得て、組成物を無菌にて製造する。
【００３３】
一般に、上記開示において使用される治療剤は、有効な量をヒト又は動物に投与される。一般に、有効な量は、（１）治療されることが望まれる疾患の兆候を軽減するか又は（２）治療されることが望まれる疾患を治療することに関して薬学上の変化を誘導するのに有効な量である。細菌感染に関して、有効な量は、細菌の集団を減少させるか又は排除するか；感染の拡散を遅延させるか；又は病気のヒト又は動物の平均寿命を伸ばすのに有効な量である。
【００３４】
上記治療剤の治療上有効な量は、所望の効果をもたらすのに十分な如何なる量又は用量でもあり得て、一部には、感染の条件、種類及び位置、患者の大きさ及び症状、並びに当業者には容易に知られる他の因子に依存する。用量は、一回の用量、又は複数回の用量にて提供することができ、例えば、数週間の期間にわたり分けることができる。
【００３５】
本開示は、本開示の治療用組成物を利用する処置の方法にも向けられる。当該方法は、そのような投与を必要とする被験者に上記治療剤を投与することを含む。
組成物は、ヒト又は動物の外部皮膚及び他の部分の両方、例えば、目及び鼻内に局所塗布してよい。組成物は、例えば、やけどや創傷において見られるような皮膚が無くなったか又は損傷を受けたエリアに局所塗布してもよい。
【００３６】
即ち、本開示は、ヒト又は家畜動物において皮膚の障害を治療する方法を提供し、当該方法は、その必要があるヒト又は家畜動物に組成物を局所塗布することを含む。
さらに、本発明は、いくつかの態様において、限定ではないが、再発性感染を含む、外科手術部位の感染、カテーテル関連の感染、やけど及び副鼻腔炎を含む感染の予後治療のための医薬の製造における、他のｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤、例えば、ムピロシン又はその薬学上受容可能なエステル又は塩を含む他の抗生物質を伴う、ｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤の用途を提供する。
【００３７】
そのような治療は、予後治療であってよく；即ち、細菌感染の完全な排除のみならず、その部分排除、即ち、急性のエピソードの数の減少も含む治療である。
細菌感染、例えば、再発性の中耳炎及び再発性の副鼻腔炎の治療の成功は、スタフィロコッカスアウレウス、ヘモフィルスインフルエンザ、ストレプトコッカスニューモニエ及びモレキセラカタルハリスのような病原細菌の鼻の通過（ｃａｒｒｉａｇｅ）、特に、そのような生物による鼻咽腔のコロニー化の排除又は減少に関連する。
【００３８】
従って、さらなる側面において、本発明は、再発性中耳炎に付随した病原性生物の鼻の通過を減少させるか又は排除するための医薬の製造における、ｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤と、別のｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤を含む抗生物質、例えば、ムピロシン又は薬学上受容可能なそのエステル又は塩の用途を提供し、当該医薬は鼻の投与、特に鼻咽腔への集中した送達に適合される。
【００３９】
実施例
実施例１．ムピロシネート塩の製剤化のための一般法
１．０ｍｅｑのメタノリックシュードモニック酸Ａ溶液に、１．０ｍｅｑのＭＲＳｉを加えた。当該混合物を５０℃に温め、そして穏やかに１０分間撹拌した。混合物が周囲温度に戻った後で、それを１μｍのガラス繊維シリンジフィルターに通した。フラスコとフィルターをメタノールで洗浄し、そして混合された濾過物を水で希釈した。当該溶液を、次に、遠心分離濃縮機を用いて濃縮し、次に、周囲温度において真空オーブン内で乾燥することにより、オフホワイトの非晶質の固形物を得た。
【００４０】
実施例２．フシデート製剤化のための一般法
１．０ｍｅｑのメタノリックフシジン酸に、１．０ｍｅｑのＭＲＳｉを加えた。当該混合物を５０℃に温め、そして穏やかに１０分間撹拌した。混合物が周囲温度に戻った後で、それを１μｍのガラス繊維シリンジフィルターに通した。フラスコとフィルターをメタノールで洗浄し、そして混合された濾過物を水で希釈した。当該溶液を、次に、遠心分離濃縮機を用いて濃縮し、次に、周囲温度において真空オーブン内で乾燥することにより、オフホワイトの非晶質の固形物を得た。
【００４１】
実施例３．２−［３−（６，８−ジブロモ−２，３，４，５−テトラヒドロキノリン−４−イルアミノ）プロプ−１−イルアミノ］−１Ｈ−キノリン−４−オン．
メタノール（２ｍｌ）及び酢酸（０．１ｍｌ）中の２−（３−アミノプロピルアミノ）−１Ｈ−キノリン−４−オンジヒドロクロリド（０．０３８ｇ，０．１３ｍｍｏｌ）を、ソディウムメトキシド（メタノール中０．５Ｍ、０．５２ｍｌ，０．２６ｍｍｏｌ）で処理した。この溶液に、次に、メタノール（２ｍｌ）中の６，８−ジブロモ−２，３，４，５−テトラヒドロキノリン−４−オン（０．０４０ｇ，０．１３ｍｍｏｌ）を加えた。当該混合物を、次に、アルゴン下で温め、そしてソディウムシアノボロヒドリド（０．０２５ｇ，０．４ｍｍｏｌ）を加えた。当該反応物を、次に、４０時間還流し、１６時間及び２４時間後にもっとホウ化水素を加え、そして蒸発させて乾燥させた。残渣をＳＣＸカートリッジ上、次にフラッシュクロマトグラフィー上で精製し、ジクロロメタン中の０−８％の「メタノール中の１０％アンモニア」により溶出したところ、表題の化合物をオフホワイトのガムとして得た（０．００９％，１４％）；δＨ
【００４２】
【化３】
2007502861.tif 000004
【００４３】
実施例４．Ｎ−（６，８−ジブロモ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−４−イル）−Ｎ’−（１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−プロパン−１，３−ジアミンジヒドロクロリド．
Ｎ−（６，８−ジブロモ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−４−イル）−Ｎ’−（１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）プロパン−１，３−ジアミン（実施例８、工程ｃ）において記載される）（０．０５５ｇ，０．２９ｍｍｏｌ）と６，８−ジブロモ−２，３，４，５−テトラヒドロキノリン−４−オン（０．０８８ｇ，０．２９ｍｍｏｌ）のメタノール（２ｍｌ）中及び酢酸（０．０６ｇ）に、ソディウムシアノボロヒドリド（０．０１９ｇ，０．３ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を、次に、２０時間還流した。反応混合物を、ＭｅＯＨ（１５ｍｌ）でフラッシュした２ｇのＳＣＸカートリッジに適用した。当該カートリッジを、次に、１５ｍｌのＭｅＯＨ中の０．２Ｍ  ＮＨ３により溶出し、そしてこの溶出物を蒸発させて乾燥させた。ジクロロメタン中の０−１０％（９：１メタノール／．８８０アンモニア水）により溶出するシリカゲル上でのさらなる精製により、表題の化合物、化合物２を得て、メタノール（０．４ｍｌ）中の１．０Ｍ  ＨＣｌへの溶解によりそのジヒドロクロリドに変換し、そして溶液を蒸発させて白色の固形物を得た（０．０６０ｇ，３７％）；δＨ
【００４４】
【化４】
2007502861.tif 000005
【００４５】
実施例５．２−｛［（１Ｒ，２Ｓ）−２−（３，４−ジクロロベンジルアミノ）シクロペンチルメチル］アミノ｝−１Ｈ−キノリン−４−オン．
ＭＲＳｉ化合物３を、引用により本明細書に編入する米国特許第６，３２０，０５１号の実施例７１に記載されたとおりに製造した。
【００４６】
実施例６．Ｎ−（４，５−ジブロモ−３−メチルチオフェン−２−イルメチル）−Ｎ’−（１Ｈ−キノリン−４−オン）プロパン−１，３−ジアミンムピロシネート．
還元アミン化のための一般法を用いて、２−（３−アミノプロプ−１−イルアミノ）−１Ｈ−キノリン−４−オンジアミン（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００２，４５，１９５９）と４，５−ジブロモ−３−メチルチオフェン−２−カルバルデヒドの混合物が、Ｎ−（４，５−ジブロモ−３−メチルチオフェン−２−イルメチル）−Ｎ’−（１Ｈ−キノリン−４−オン）プロパン−１，３−ジアミン４を白色固形物として与えた（０．０３４ｇ，４９％）。ｍ／ｚ（ＥＳ＋）４８４（１００％Ｍ＋）。
【００４７】
ムピロシネート形成のための一般法（実施例１）を用いて、Ｎ−（４，５−ジブロモ−３−メチルチオフェン−２−イルメチル）−Ｎ’−（１Ｈ−キノリン−４−オン）プロパン−１，３−ジアミン４とシュードモニック酸Ａは、表題の化合物をオフホワイトの固形物として与えた（０．００８ｇ）。ｍｐ．６０−７０Ｃ．；
【００４８】
【化５】
2007502861.tif 000006
【００４９】
実施例７．Ｎ−（４−ブロモ−５−（１−フルオロビニル）−３−メチルチオフェン−２−イルメチル）−Ｎ’−（１Ｈ−キノリン−４−オン）プロパン−１，３−ジアミンムピロシネート．
ａ）ジフェニル（１−フルオロビニル）メチルシラン．無水雰囲気下で火炎により乾燥させた１Ｌの３首丸底フラスコ中で、６５ｍＬ（３０９ｍｍｏｌ）のジフェニルメチルクロロシランを、６５０ｍＬの無水ＴＨＦ中の４．３ｇ（６１８ｍｍｏｌ）のリチウムワイヤーに加えた。当該混合物を、周囲温度において２０時間撹拌した。当該混合物を、次に、−７８℃に冷却し、そして反応混合物の温度が−５５℃未満のままであるように、雰囲気を１，１−ジフルオロエチレン（過剰）により置換した。反応温度がー７０℃になるか又はそれ未満のままになったときに、ジフルオロエチレンの添加を止めた。透明な明るい黄色に変わるまで（約２時間）反応物を＜−７０℃にて撹拌し、そして周囲温度まで温めた。残ったリチウムワイヤーを除去し、そして添加と同時にガスが発生しなくなるまで、混合物をＮａ２ＳＯ４−１０Ｈ２Ｏの一部（ｐｏｒｔｉｏｎｓ）で処理した。混合物を、次に、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、シリカパッドを通して濾過し、そしてパッドをエーテルで洗浄した。混合された濾過物を真空下で乾燥させ、結果の残渣をヘキサン中に懸濁／溶解し、そして別のシリカパッドを通して濾過した。パッドをヘキサンで洗浄し、濾過物を混合し、そして減圧下で溶剤を除去したところ、明るい黄色みがかった（ｙｅｌｌｏｗｉｓｈ）液体を得たが、いくらかの白色結晶物質が存在した。当該産物を真空蒸発により精製（約２ｔｏｒｒにて１１３−１１７℃）したところ、４４ｇ（５９％）の表題の化合物を透明無色な液体として得た。
【００５０】
【化６】
2007502861.tif 000007
【００５１】
ｂ）４−ブロモ−５−（１−フルオロビニル）−３−メチルチオフェン−２−カルバルデヒド．２５ｍＬ丸底フラスコ中の不活性雰囲気下で、１６６ｍｇのａ）からのジフェニル（１−フルオロビニル）メチルシラン（０．６８５ｍｍｏｌ）、１３０ｍｇの４，５−ジブロモ−３−メチルチオフェン−２−カルバルデヒド（０．４５９ｍｍｏｌ）、２０９ｍｇのＣｓＦ（１．３８ｍｍｏｌ）、８８ｍｇのＣｕＩ（０．４５９ｍｍｏｌ）、１０．５ｍｇのＰｄ２（ｄｂａ）３（０．０１１５ｍｍｏｌ）及び１４．１ｍｇのＡｓＰｈ３（０．０４５９ｍｍｏｌ）を混合した。上記固形物を含むフラスコを氷のバスの中で約０℃に冷却し、そして２ｍＬを脱気し、無水ジメチルフォルムアミド（ＤＭＦ）を加えた。反応混合物を０から５℃において２時間撹拌し、２ｍＬの水を加えた。混合物を、次に、５ｍＬの１ＮのＮａＯＨにより希釈し、そして２５％ジエチルエーテル／ヘキサン（４ｘ２０ｍＬ）により抽出した。混合された抽出物をブライン（１ｘ５ｍＬ）により洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、そして真空下で溶剤を除去した。残りの残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ヘキサン）により精製したところ、５０％の収量の表題の化合物を白色固形物として得た。
【００５２】
【化７】
2007502861.tif 000008
【００５３】
ｃ）Ｎ−（４−ブロモ−５−（１−フルオロビニル）−３−メチルチオフェン−２−イルメチル）−Ｎ‘−（１Ｈ−キノリン−４−オン）プロパン−１，３−ジアミン．乾燥雰囲気下及び周囲温度において、１．００ｇ（３．４５ｍｍｏｌ）の２−（３−アミノプロプ−１−イルアミノ）−１Ｈ−キノリン−４−オンジヒドロクロリド及び０．７７０ｇ（９．３９ｍｍｏｌ）のＮａＯＡｃを、４０ｍＬの無水ＭｅＯＨ中の溶解し、そして１０分間室温において撹拌した。０．７８０ｇのｂ）からの４−ブロモ−５−（１−フルオロビニル）−３−メチルチオフェン−２−カルバルデヒド（３．１３ｍｍｏｌ）を次に加え、そして８ｍＬのトリメチルオルトフォルメート及び追加の１０ｍＬの無水ＭｅＯＨを加えた。当該混合物を周囲温度において２時間撹拌した。溶剤を次に減圧下で除去し、残った残渣を５０ｍＬの無水ＭｅＯＨに溶解し、そして０．４７４ｇ（１２．５ｍｍｏｌ）のＮａＢＨ４を周囲温度において撹拌しながら加えた。３０分間周囲温度において撹拌後に、溶剤を減圧下で除去し、そして結果の粘着性の固形物を、０．１ＮのＮａＯＨ（１ｘ，生成物が凝固する（ｓｏｌｉｄｉｆｙ）のに要求される一晩の撹拌）、脱イオン水（２ｘ）及び１：１のＥｔ２Ｏ／ヘキサン（２ｘ）と共に摩砕した。残った固形物を真空下で乾燥させ、そして生成物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＮＨ３飽和されたＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）により精製したところ、９００ｍｇ（６４％）の所望の生成物、化合物５を白色の泡として得た。
【００５４】
【化８】
2007502861.tif 000009
【００５５】
ｄ）Ｎ−（４−ブロモ−５−（１−フルオロビニル）−３−メチルチオフェン−２−イルメチル）−Ｎ’−（１Ｈ−キノリン−４−オン）プロパン−１，３−ジアミンムピロシネート．ムピロシネート形成のための一般法（実施例１）を用いて、ｃ）からのＮ−（４−ジブロモ−５−（１−フルオロビニル）−３−メチルチオフェン−２−イルメチル）−Ｎ’−（１Ｈ−キノリン−４−オン）プロパン−１，３−ジアミン５と、シュードモニック酸Ａは、表題の化合物をオフホワイトの固形物として与えた（２．１ｇ）。ｍｐ．６５−２００Ｃ（２００Ｃより高い分解）
【００５６】
【化９】
2007502861.tif 000010
【００５７】
実施例８．Ｎ−（４−ブロモ−５−（１−フルオロビニル）−３−メチルチオフェン−２−イルメチル）−Ｎ’−（１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−プロパン−１，３−ジアミン．
ａ）１，３−ジヒドロイミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−チオン．ピリジン（４０ｍｌ）中の２，３−ジアミノピリジン（４．３６ｇ，４０ｍｍｏｌ）に、二硫化炭素（３．６ｍｌ，６０ｍｍｏｌ）を加えた。当該混合物を５０℃に６時間加熱し、次に、減圧下の蒸発により低容量に濃縮し、そして残渣をテトラヒドロフランにより摩砕した。パールブラウンの固形物を濾過により回収し、そして乾燥させることにより、３．６ｇの第１クロップを得た。第２クロップ（２．４４ｇ）は、再度の蒸発及びテトラヒドロフランによる摩砕により濾過物から得た。ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）１５２（ＭＨ＋，１００％）。
【００５８】
ｂ）２−メタンスルファニル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン  乾燥テトラヒドロフラン（１００ｍｌ）中の工程ａ）からの化合物（５．５５ｇ，３６．７５ｍｍｏｌ）に、アルゴン下で、トリエチルアミン（５．６６ｍｌ，４０ｍｍｏｌ）及びヨードメタン（２．５ｍｌ，４０ｍｍｏｌ）を加えた。２０時間２０℃において撹拌後に、固形物を濾過により取り出して、ＴＨＦにより洗浄した。混合された濾過物を蒸発させることにより乾燥させ、そしてジクロロメタンにより摩砕した。固形物を濾過により回収した、（４．５５ｇ，７５％）。ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）１６６（ＭＨ＋，１００％）。
【００５９】
ｃ）Ｎ−（１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）プロパン−１，３−ジアミン．工程ｂ）からの生成物（４．５５ｇ）を１，３−ジアミノプロパン（４０ｍｌ）により還流しながらアルゴン下で５０時間処理した。溶剤を蒸発により減圧下で除去し、そして残渣をジエチルエーテルにより摩砕して、褐色の固形物を得た。これをシリカゲル上のクロマトグラフィー、ジクロロメタン中の５−２５％（９：１メタノール／．８８０アンモニア水）による溶出により精製し、要求された生成物、（２．６ｇ，５０％）を得た。
【００６０】
ｄ）還元アミン化のための一般法．メタノール（２ｍｌ）中のアミン（０．２ｍｍｏｌ）（アミンがジヒドロクロリドとして存在するなら０．５ｍｍｏｌの酢酸ナトリウムを含む）に、メタノール（２ｍｌ）及び酢酸（０．０３３ｍｌ）中のアルデヒド（０．２ｍｍｏｌ）を加えた。アルゴン下で１０分間撹拌後に、ＭｅＯＨ（１ｍｌ）中のＮａＣＮＢＨ３（２４ｍｇ，０．４ｍｍｏｌ）を加え、そして反応物を１６時間撹拌した。反応混合物を、ＭｅＯＨ（８ｍｌ）によりフラッシュされた２ｇのＶａｒｉａｎ  Ｂｏｎｄ  Ｅｌｕｔｅ  ＳＣＸカートリッジに適用した。当該カートリッジを、次に、ＭｅＯＨ中の８ｍｌの０．２Ｍ  ＮＨ３により溶出して、溶出物を蒸発により乾燥させた。残渣をＣＨ２Ｃｌ２中の２−１０％（９：１  ＭｅＯＨ／２０Ｍ  ＮＨ３）により溶出するシリカゲル上のクロマトグラフィーにより精製した。生成物を含むフラクションを混合し、そして減圧下で蒸発させて、生成物を白色の固形物として得た。これを対応するジヒドロクロリドに変換するため、当該固形物をメタノール（０．４ｍｌ）中の１．０Ｍ  ＨＣｌに溶解して、溶液を蒸発させて乾燥させた。
【００６１】
ｅ）Ｎ−（４−ブロモ−５−（１−フルオロビニル）−３−メチルチオフェン−２−イルメチル）−Ｎ’−（１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−プロパン−１，３−ジアミン．還元アミン化のための一般法を用いて、工程ｃ）からのＮ−（１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）プロパン−１，３−ジアミンと、実施例７ｂ）において製造されたとおりの４−ブロモ−５−（１−フルオロビニル）−３−メチルチオフェン−２−カルバルデヒドの混合物が、表題の化合物を白色の固形物として与えた。ｍ／ｚ（ＥＳ＋）４２４（１００％，Ｍ＋）。
【００６２】
実施例９．Ｎ−（３−クロロ−５−メトキシ−１Ｈ−インドール−７−イルメチル）−Ｎ’−（１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−プロパン−１，３−ジアミンムピロシネート．
ａ）５−メトキシインドリン−７−カルバルデヒド．１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メトキシインドリン（Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ，１９９２，３４，１０３１；１．７５ｇ，７．０ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦに溶解し、ＴＭＥＤＡ（１．４ｍｌ）により処理し、そしてアルゴン雰囲気下で−７８℃に冷却した。ｓ−ブチルリチウム（シクロヘキサン中１．３Ｍ，５．１８ｍｌ）の溶液を滴下した。−７８℃において１時間撹拌後に、当該溶液を乾燥ＤＭＦ（１．０８ｍｌ，１４ｍｍｏｌ）により処理し、そしてさらに０．５時間撹拌した。冷却バスを次に取り除き、そして溶液を１時間かけて室温に達するようにした。反応混合物を１０％水性ＮＨ４Ｃｌによりクエンチし、そして生成物を酢酸エチルにより抽出した。抽出物を混合し、水とブラインにより洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして蒸発させた。残渣をＫｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０上でクロマトグラフして、ヘキサン中の０−２０％酢酸エチルにより溶出した。生成物を含むフラクションを混合し、そして蒸発させることにより、表題の化合物を与えた；３５％（重量）の対応するＮ−Ｂｏｃ類似体が混在した；
【００６３】
【化１０】
2007502861.tif 000011
【００６４】
ｂ）５−メトキシインドール−７−カルバルデヒド．９ａからの生成物（８０ｍｇ；０．３ｍｍｏｌの５−メトキシインドール−７−カルバルデヒドを含む）をジクロロメタン（３１０ｍｌ）に溶解し、そしてＭｎＯ２（３４４ｍｇ，４．０ｍｍｏｌ）により処理した。反応混合物を室温において１６時間撹拌し、セライトを通して濾過し、そして溶剤を真空中で除去した。残渣をＫｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０上でクロマトグラフして、ヘキサン中の０−２０％酢酸エチルにより溶出した。生成物を含むフラクションを混合し、そして蒸発させることにより、表題の化合物をパールイエローの固形物として与えた（２３ｍｇ，４４％），
【００６５】
【化１１】
2007502861.tif 000012
【００６６】
ｃ）３−クロロ−５−メトキシ−１Ｈ−インドール−７−カルバルデヒド．ｂ）からの５−メトキシインドール−７−カルバルデヒド（４０ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍｌ）に溶解し、Ｎ−クロロサクシニミド（４０ｍｇ）により処理し、そして混合物を室温において１６時間撹拌した。当該溶液を、次に、ジクロロメタンにより希釈し、水とブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして蒸発させることにより、パールブラウンの固形物になった。
【００６７】
ｄ）Ｎ−（３−クロロ−５−メトキシ−１Ｈ−インドール−７−イルメチル）−Ｎ’−（１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−プロパン−１，３−ジアミン．ｃ）からの生成物を、実施例８、工程ｃ）からのＮ−（１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）プロパン−１，３−ジアミンに、０．２ｍｍｏｌスケールにて、還元アミン化のための一般法（実施例８、工程ｄ）を用いてカップリングさせたところ、表題の化合物、化合物７を白色の固形物として得た（７ｍｇ，９％）；ｍ／ｚ（ＣＩ＋）３８６（ＭＨ＋，７０％）。
【００６８】
ｅ）Ｎ−（３−クロロ−５−メトキシ−１Ｈ−インドール−７−イルメチル）−Ｎ’−（１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−プロパン−１，３−ジアミンムピロシネート．ムピロシネート形成のための一般法（実施例１）を用いて、ｄ）からのＮ−（３−クロロ−５−メトキシ−１Ｈ−インドール−７−イルメチル）−Ｎ’−（１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−プロパン−１，３−ジアミン、化合物７とシュードモニック酸Ａの混合物が、表題の化合物をオフホワイトの固形物として与えた（０．０１０ｇ）；ｍｐ．８６−８８Ｃ。
【００６９】
実施例１０．Ｎ−（１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−Ｎ’−（３，４，６−トリクロロ−１Ｈ−インドール−２−イルメチル）−−プロパン−１，３−ジアミンムピロシネート．
ａ）Ｎ−（３，４，６−トリクロロ−１Ｈ−インドール−２−イルメチル）−Ｎ’−（１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−プロパン−１，３−ジアミン．３，４，６−トリクロロインドール−２−カルボキシアルデヒドを、実施例８、工程ｃ）からの化合物と、０．１ｍｍｏｌスケールにて、還元アミン化のための一般法を用いてカップリングさせたところ、表題の化合物を白色の固形物として得た（１５ｍｇ，３５％）；
【００７０】
【化１２】
2007502861.tif 000013
【００７１】
ｂ）ムピロシネート形成のための一般法（実施例１）を用いて、Ｎ−（１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−Ｎ’−（３，４，６−トリクロロ−１Ｈ−インドール−２−イルメチル）−−プロパン−１，３−ジアミン８（実施例１０ａから）とシュードモニック酸Ａの混合物が、表題の化合物をオフホワイトの固形物として得た（０．０１１ｇ）；ｍｐ．９６−９８Ｃ。
【００７２】
実施例１１．Ｎ−（１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−Ｎ’−（３，４，６−トリクロロ−１Ｈ−インドール−２−イルメチル）−−プロパン−１，３−ジアミンフシデート．
フシデート形成のための一般法（実施例２）を用いて、Ｎ−（１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−Ｎ’−（３，４，６−トリクロロ−１Ｈ−インドール−２−イルメチル）−−プロパン−１，３−ジアミン８（実施例１０ａから）とフシジン酸Ａの混合物が、表題の化合物をオフホワイトの固形物として得た（０．０１１ｇ）。
【００７３】
【化１３】
2007502861.tif 000014
【００７４】
実施例１２．ＭＲＳ阻害剤単独及びムピロシンとの組み合わせは多剤耐性スタフィロコッカスアウレウスに対して活性である。
ＭＲＳ阻害剤、
【００７５】
【化１４】
2007502861.tif 000015
【００７６】
を、ムピロシンと他の薬剤、例えばゲンタマイシン及びオキサシリンに対して多剤耐性の株を含む、スタフィロコッカスアウレウスの臨床単離物のコレクションに対して試験した。表１の結果は、３つのＭＲＳ阻害剤全ての抗菌活性が、他の薬剤クラスに対する交差耐性（ｃｒｏｓｓ−ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）により影響されなかったことを示す。例えば、ＭＲＳｉ化合物２は、ムピロシンに対して低いレベルの耐性の株及び高いレベルの耐性の株を含む試験された全ての株に対して均等な活性を示した（０．０６−０．２５μｇ／ｍＬの範囲のＭＩＣｓ）。これらのデータは、細菌のメチオニルｔＲＮＡシンセターゼを阻害する化合物がムピロシン耐性のブドウ球菌により引き起こされる感染の治療に有力であるかもしれないことを示す。
【００７７】
【表１】
2007502861.tif 000016
【００７８】
ＭＲＳ阻害剤４の単独及びムピロシンとの組み合わせ（ムピロシン塩及び１：１の組み合わせ）を、グラム陽性病原体に対して試験した。表２の結果は、ＭＲＳｉ化合物４のムピロシン塩とＭＲＳｉ化合物４／ムピロシン１：１組み合わせの両方が、試験された全ての生物に対して均等な活性を示したことを示す。組み合わせ生成物は、ムピロシン耐性スタフィロコッカスアウレウス及びスタフィロコッカスエピダミディスに対して有力な活性を示した。
【００７９】
【表２】
2007502861.tif 000017
【００８０】
ＭＲＳ阻害剤８もフシデート及びムピロシネート塩として調製して、グラム陽性細菌に対する抗菌活性を試験した（表３）。ムピロシネート塩及びフシデート塩は、試験された生物全てに対して均等な抗菌活性を示した。ＭＲＳｉ化合物８単独及びフシデート塩及びムピロシネート塩は、ムピロシン耐性のスタフィロコッカスアウレウス及びスタフィロコッカスエピダミディス及びムピロシンに感受性ではないエンテロコッカスフェーカリスのような生物に対して活性であった。
【００８１】
【表３】
2007502861.tif 000018
【００８２】
ＭＲＳ阻害剤５アセテート及びムピロシン塩を、グラム陽性細菌のコレクションに対して試験した。他のＭＲＳ阻害剤と共通して、ＭＲＳｉ化合物５単独及びムピロシンとの組み合わせは、表４に示すとおり、ムピロシン及びオキサシリン（メチシリン）耐性のスタフィロコッカスアウレウスを含む全ての病原体に対して有力な活性を示した。
【００８３】
【表４】
2007502861.tif 000019
【００８４】
ＭＲＳｉ化合物５（アセテート及びムピロシン塩）を、さらに、スタフィロコッカスアウレウスの６２の臨床単離物に対して攻撃させ、そして表５がオキサシリン感受性及び耐性の両方の生物に対しての有力な活性を示す。
【００８５】
【表５】
2007502861.tif 000020
【００８６】
実施例１３．ムピロシン耐性スタフィロコッカスアウレウスに対するＭＲＳＩ化合物５及びＭＲＳＩ化合物５／ムピロシンの活性
ＭＲＳ阻害剤５のアセテート及びムピロシン塩を、スタフィロコッカスアウレウスの低レベル及び高レベルの両方のムピロシン耐性臨床単離物のコレクションに対して試験した（表６）。結果は、ＭＲＳｉ化合物５単独及びムピロシンとの組み合わせ（ムピロシン塩）が低レベル及び高レベルの両方のムピロシン耐性スタフィロコッカスアウレウスに対して有力な活性を有することを示す。
【００８７】
【表６−１】
2007502861.tif 000021
【００８８】
【表６−２】
2007502861.tif 000022
【００８９】
実施例１４．バンコマイシン−中間体スタフィロコッカスアウレウス（ＶＩＳＡ）に対するＭＲＳ阻害剤５単独及びＭＲＳｉ活性を５／ムピロシンの活性
ＭＲＳｉ化合物５のアセテート及びムピロシン塩を、バンコマイシン−中間体（バンコマイシンＭＩＣｓ，８−１６μｇ／ｍＬ）であるスタフィロコッカスアウレウスの８単離物に対して試験した。ＭＲＳｉ化合物５単独（アセテート）及びムピロシン（ムピロシネート）との組み合わせは、全てのＶＩＳＡ単離物に対して活性を保持し、ＭＩＣｓは≦０．００８−０．２５μｇ／ｍＬの範囲であった。対照的に、ムピロシネートは３つの単離物に対して乏しい活性しか示さず、ＭＩＣｓは＞８μｇ／ｍＬであった。
【００９０】
【表７】
2007502861.tif 000023
【００９１】
実施例１５．バンコマイシン耐性株を含む腸球菌に対するＭＲＳ阻害剤単独及びムピロシネートとの組み合わせの活性
さらに、ＭＲＳ阻害剤は、バンコマイシン耐性株（ＶＲＥ）を含む腸球菌に対して有力な活性を示した。
【００９２】
ＭＲＳｉ化合物５単独及びムピロシネートとの組み合わせを、エンテロコッカスフェーカリス（ｎ＝２８）及びエンテロコッカスフェシウム（ｎ＝２３）の最近の臨床単離物に試験した。ＭＲＳｉのアセテート塩とムピロシネート塩の両方が、バンコマイシン感受性と耐性の両方の腸球菌に対して有力な活性を保持した（表８、９及び１０）。
【００９３】
【表８】
2007502861.tif 000024
【００９４】
【表９】
2007502861.tif 000025
【００９５】
【表１０】
2007502861.tif 000026
【００９６】
実施例１６．ストレプトコッカスピオゲネスに対するＭＲＳ阻害剤ＭＲＳＩ化合物５単独及びムピロシネートとの組み合わせの活性
ストレプトコッカスピオゲネスも重要な皮膚の病原体であり、４８の最近の臨床単離物を、ＭＲＳｉ化合物５単独（アセテート）及びムピロシン（ムピロシネート）との組み合わせ（１：１）に対するそれらの感受性に関して試験した。ＭＲＳｉ関して５単独と１：１の組み合わせの両方が、ストレプトコッカスピオゲネスに対して有力な活性を示した（表１１）。
【００９７】
【表１１】
2007502861.tif 000027
【００９８】
実施例１７．相乗試験：ムピロシンとの組み合わせにおけるメチオニルｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤
本研究の目的は、ムピロシン（細菌のイソロイシルｔＲＮＡシンセターゼの阻害剤）が、ＭＲＳｉ化合物２（細菌のメチオニルｔＲＮＡシンセターゼの阻害剤）と組み合わせたときに、スタフィロコッカスアウレウスのムピロシン感受性株及び耐性株に対して相乗性を示すか否かを決定した。
ムピロシン（シュードモニック酸）の構造
【００９９】
【化１５】
2007502861.tif 000028
【０１００】
ＭＲＳｉ化合物２の構造
【０１０１】
【化１６】
2007502861.tif 000029
【０１０２】
相乗試験
以下の株を相乗試験研究において使用した：
スタフィロコッカスアウレウスＡＴＣＣ２９２１３（ムピロシン感受性）
スタフィロコッカスアウレウスオックスフォード（ムピロシン感受性）
スタフィロコッカスアウレウス３１−１３３４（低レベルムピロシン耐性の臨床単離物）
スタフィロコッカスアウレウス１４−３５４（低レベルムピロシン耐性の臨床単離物）
スタフィロコッカスアウレウス２５−６７０（高レベルムピロシン耐性の臨床単離物）
細菌の株を、ムピロシン及びＭＲＳｉ化合物２に対する感受性に関して、ＮＣＣＬＳガイドラインによるブロスマイクロ希釈法を用いて試験することにより、それらのＭＩＣｓを測定した。
【０１０３】
上記化合物を、Ｅｌｉｏｐｏｕｌｏｓ，Ｇ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｒ．Ｃ．Ｍｏｅｌｌｅｒｉｎｇ，Ｊｒ．１９９６．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ，ｐ．３３０−３９６．Ｉｎ  Ｖ．Ｌｏｒｉａｎ（ｅｄ．），Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ｉｎ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｔｈｅ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｌｋｉｎｓ  Ｃｏ．，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄに記載されたチェッカーボード方法を用いて相乗に関して試験した。
【０１０４】
簡単に言えば、ＭＩＣとチェッカーボードタイトレーションアッセイを、カチオン付加されたＭｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎブロス（Ｄｉｆｃｏ）によりマイクロタイタートレイ中で株を用いて実施した。接種物は、０．５  ＭｃＦａｒｌａｎｄスタンダードのそれに均等な密度に滅菌塩溶液中の血液寒天プレートからの成長物（ｇｒｏｗｔｈ）を懸濁することにより調製し、そして１：１０に希釈することにより、５ｘ１０５ＣＦＵ／ｍｌの最終接種物を生産した。上記トレイを好気下で一晩培養した。標準の質の対照株を各実行において含ませた。フラクションの阻害濃度（ＦＩＣｓ）は、組み合わせの薬剤Ａ又はＢのＭＩＣ／単独の薬剤Ａ又はＢのＭＩＣとして計算し、そしてＦＩＣ指数は２つのＦＩＣｓを加算することにより得た。ＦＩＣ指数は、値が≦０．５ならば相乗性、値が＞０．５から４ならば付加的か又は並、そして値が＞４．０ならば拮抗関係として解釈した。
【０１０５】
【表１２】
2007502861.tif 000030
【０１０６】
ムピロシンとメチオニルｔＲＮＡシンセターゼ阻害剤（ＭＲＳｉ化合物２）の組み合わせは、スタフィロコッカスアウレウスのムピロシン感受性株及び低レベル耐性株に対して付加性（ａｄｄｉｔｉｖｉｔｙ）を示した。当該組み合わせは、試験された高レベルの耐性株に対しては並（ｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔ）であった。拮抗作用はこの研究において試験された５株に対して検出されなかった。
【０１０７】
実施例１８．ムピロシンと組み合わせたＭＲＳ阻害剤（ＭＲＳＩ化合物２）がスタフィロコッカスアウレウスの自発的耐性変異体に関して選択する能力を測定する研究
多くの抗微生物薬剤は、自発的耐性変異体に関して選択できることが示された。最近の研究においては、臨床設定において単離された低レベルと高レベルの両方のムピロシン耐性腸球菌の報告が増加している。この研究の目的は、スタフィロコッカスアウレウスの自発的耐性変異体に関して選択することに関するムピロシンとＭＲＳ阻害剤単独及び組み合わせの能力を試験することであった。
【０１０８】
約１０９の細菌を、１０％のウマ血液を付加され且つ様々な濃度の試験化合物単独及び組み合わせを付加されたＭｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ寒天上にプレートした。３５℃において２４及び４８時間インキュベート後に、細菌のコロニーを計数し、そして変異の頻度を、プレートされた生物の全生存カウントに比較して測定した。耐性コロニーは、１回、選択のために使用された同じ濃度の薬剤を含むプレートに再度プレートした。結果を表１３及び図１及び２に要約する。
【０１０９】
【表１３】
2007502861.tif 000031
【０１１０】
自発的耐性変異体を、各化合物の２、４及び８倍のＭＩＣにおいてムピロシン又はＭＲＳｉ化合物２を含む培地上にスタフィロコッカスアウレウス株ＡＴＣＣ２９２１３及び３１−１３３４をプレートすることにより、選択した。２、４及び８のそれらの各々のＭＩＣｓにおいて両化合物を含むプレート上では、耐性コロニーが検出されなかった。これらの結果は、ＭＲＳ阻害剤（ＭＲＳｉ化合物２）とムピロシン（ＩＲＳ阻害剤）の組み合わせが、スタフィロコッカスアウレウスの耐性変異体の選択の傾向を実質上低下させることを示唆するデータを提供する。
【０１１１】
ＭＲＳｉ化合物５（アセテート塩、１μｇ／ｍＬ）、ムピロシン（１μｇ／ｍＬ及び１：１のＭＲＳｉ化合物５／ムピロシンの組み合わせ（１μｇ／ｍＬの各成分）を、７つの異なる腸球菌単離物からの自発的耐性変異体に関して選択するそれらの能力に関して試験した。１０９のコロニー形成ユニット（ＣＦＵ）の各生物を単独の薬剤又は組み合わせの一つを含む培地上でインキュベートした。図３の結果は、ＭＲＳｉ化合物５とムピロシンの両方が、インキュベーション４８時間後に腸球菌からの自発的耐性変異体の選択に関する低い傾向を有したことを示す（耐性頻度が３．３ｘ１０−９から１．３５ｘ１０−７の範囲）。対照的に、ＭＲＳｉ化合物５／ムピロシン（１：１の組み合わせ）を含む培地上では、４８時間のインキュベーション後に、試験された７つの腸球菌単離物の何れに関しても、耐性コロニーは検出できなかった。
【０１１２】
実施例１９．継代後の耐性の発現
ＭＲＳｉ化合物５（アセテート塩）、ムピロシン及びＭＲＳｉ化合物５／ムピロシン１：１組み合わせを、スタフィロコッカスアウレウス、コアグラーゼ陰性腸球菌及びストレプトコッカスピオゲネス株を含む１９の単離物を用いた継代後の耐性の発現に関して試験した。ＭＲＳｉ化合物５単独の存在下の継代は、２０代後には上昇したＭＩＣｓを有する単離物をもたらした（表１４）。選択できたもっとも耐性の単離物は、１６μｇ／ｍＬのＭＩＣｓを有し、そして試験された生物の５つにおいて観察された。１：１のＭＲＳｉ化合物５／ムピロシンの組み合わせの存在下において継代された生物の場合、上昇したＭＩＣｓを有する単離物の選択に関して低い傾向があった。もっとも耐性の変異体は、単一の単離物、スタフィロコッカスアウレウス１０７９１０１（高いレベルのムピロシン耐性）から得られ、２０代後に組み合わせ生成物に対して８／８μｇ／ｍＬのＭＩＣを有した。
【０１１３】
【表１４】
2007502861.tif 000032
【０１１４】
実施例２０．スタフィロコッカスアウレウスのＭＲＳ耐性変異体のムピロシン及び１：１ＭＲＳＩ化合物５／ムピロシン組み合わせに対する感受性
継代又は自発的耐性発現研究の何れかにおいてインビトロにおいて生じたＭＲＳ−耐性変異体を、ムピロシン単独及びＭＲＳｉ化合物５との１：１組み合わせに対する感受性に関して評価した。全ての変異体がｍｅｔＳに鍵となる変異を同定すると特徴付けられた（表１５）。全てのＭＲＳ−耐性変異体が、ムピロシン及び１：１  ＭＲＳｉ化合物５／ムピロシンに関して感受性を保持しており、それぞれ０．１２から１μｇ／ｍＬ及び０．０６／０．０６から１／１μｇ／ｍＬの範囲のＭＩＣｓであったことから、２つの標的の間には交差耐性（ｃｒｏｓｓ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）が全く又はほとんどないことが示される。
【０１１５】
【表１５】
2007502861.tif 000033
【０１１６】
実施例２１．ＭＲＳ−耐性変異体の成長曲線分析
ＭＲＳ−耐性変異体、スタフィロコッカスアウレウスＳＰ−１Ａ２及びスタフィロコッカスアウレウスＳＰ−１Ｂ５を、親の野生型株（スタフィロコッカスアウレウスＡＴＣＣ２９２１３）と共に成長曲線研究において評価した。３株全ての成長を、８時間にわたり光学密度（６００ｎｍ）を監視することにより測定した。図４の結果は、両耐性株が野生型親株に比較してゆっくりとした成長速度を有することを示す。Ａ２４７ＥとＩ５７Ｎ変異は、ＭＲＳｉ化合物５に対して低レベルの耐性に必須であるらしく、そして細胞に対する適合性負担コストにも関係するらしいと言える。
【０１１７】
実施例２２．その作用様式を確認するために、ＭＲＳｉ化合物５をスタフィロコッカスアウレウスの株に対して試験したが、ｍｅｔＲＳ遺伝子をスタフィロコッカスアウレウス適合可能なプラスミド上でｘｙｌ／ｔｅｔプロモーターの制御下に置いた。当該株は、０．０１μｇ／ｍＬのアンヒドロテトラサイクリンの添加に際して高いレベルのＭＲＳを発現する。表１６の結果は、ＭＲＳの過剰発現が、ＭＲＳｉ化合物５に関してはＭＩＣにおいて８倍の増加を導くが、ムピロシン又は他の試験された対照の化合物に関しては導かないことを示す。
【０１１８】
【表１６】
2007502861.tif 000034
【図面の簡単な説明】
【０１１９】
【図１】図１は、ＭＲＳｉ化合物２及びムピロシン単独及び組み合わせへの暴露後の、スタフィロコッカスアウレウスＡＴＣＣ２９２１３からの自発的耐性変異体の選択を示す。
【図２】図２は、ＭＲＳｉ化合物２及びムピロシン単独及び組み合わせへの暴露後のスタフィロコッカスアウレウス３１−１３３４（低レベルムピロシン耐性）からの自発的耐性変異体の選択を示す。
【図３】図３は、ＭＲＳｉ化合物５単独、ムピロシン単独ＭＲＳｉ化合物５／ムピロシン組み合わせへの暴露後の７つの腸球菌からの自発的耐性変異体の選択を示す。
【図４】図４は、スタフィロコッカスアウレウスの低レベルＭＲＳ−耐性株（ＳＰ−１Ａ２及びＳＰ−１Ｂ５）及びそれらの野生型ＭＲＳ−感受性親株に関する成長曲線を示す。
【図１】
2007502861.tif 000038
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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