(57)【要約】  皮膚の選択域に接着テープを当て、そのテープをその選択した皮膚域に固着させ、そしてその皮膚域からテープを剥がして皮膚の外側の角質層を表わす試料を採取して皮膚コレステロールを測定する。テープに固着している試料には皮膚成分が露出している。コレステロールだけに結合する検出試薬を使って試料を分析する。その試薬は露出した皮膚成分に存在するコレステロールの分量を定量するインディケータ成分も有する。
2007534326.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）医療用接着剤で少なくとも一側を塗膜したバッキング部材を含むテープを用意し、
ｂ）皮膚の選択区域にテープを接着して適用し、
ｃ）その選択区域からテープを引き剥がしてその皮膚の角質層を表わしている試料を得、当該試料は露出した皮膚成分を持つようにしてテープに接着しており、
ｄ）式Ａ‐Ｃ‐Ｂ（Ａはコレステロールに対する親和性を有する検出剤であり、Ｂは酵素可視化剤であり、Ｃは検出剤と可視化剤とを結合する結合剤である）の親和性酵素化合物の源を用意し、
ｅ）この親和性酵素化合物の所定量を前記の試料の所定の表面区域へ塗布し、そして前記の露出した皮膚成分に存在するコレステロールに前記の検出剤が結合するに足る期間前記の化合物を前記の試料の所定の表面区域と接触させておき、
ｆ）前記の試料の所定の表面区域に発色剤の所定量を塗布し、この発色剤が前記の親和性酵素化合物と反応してコレステロールレベルを色で示す着色物を形成させる
ことを特徴とする皮膚コレステロールの測定法。
【請求項２】
前記の検出剤は、ステロイドグリコシド、トリテルペングリコシド、疎水性たんぱく質、ポリエン抗生剤そして抗コレステロール抗体から成るグループから選択されている請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記の検出剤はステロイドグリコシドである請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記のステロイドグリコシドがジギトニンである請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記の酵素可視化剤がペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ウレアーゼ、ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼそしてアセチルコリンエステラーゼから成るグループから選択されている酵素である請求項１に記載の方法。
【請求項６】
酵素はペルオキシダーゼである請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記のペルオキシダーゼがホースラディッシュペルオキシダーゼである請求項６に記載の方法。
【請求項８】
段階（ｅ）の後でペルオキシダーゼを過酸化水素で活性化して活性化ペルオキシーダーゼを形成し、そして段階（ｆ）で使用される発色剤が前記の活性化ペルオキシーダーゼと反応して前記の着色物を形成する請求項６もしくは７に記載の方法。
【請求項９】
段階（ｆ）において過酸化水素を含む所定量の水溶液と前記の発色剤を前記の試料の所定の表面区域に塗布する請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記の発色剤が２，２’‐アジノ‐ジ（３‐エチルベンズチアゾリン‐６‐スルホン酸）と３，３’，５，５’‐テトラメチルベンジジンから成るグループから選択されている請求項８もしくは９に記載の方法。
【請求項１１】
前記の発色剤が３，３’，５，５’‐テトラメチルベンジジンである請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記の結合剤がマレイン無水物とＮ‐ピロリドンビニルのコポリマーである請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
前記のバッキング部材がポリエステルで形成されている請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記の医療用接着剤が感圧性接着剤である請求項１〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記の医療用接着剤がアクリルをベースとした接着剤である請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
前記の医療用接着剤が合成ゴムエラストマー接着剤である請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
前記の医療用接着剤がシリコーンをベースとした接着剤である請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
前記の医療用接着剤がスチレン‐イソプレン‐スチレンもしくはスチレン‐ブタジエン‐スチレンのブロック重合体から形成されたエラストマーを含有する請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
請求項１に記載の方法を実施するのに使用するキットにおいて、
前記のテープ、
請求項１でＡ、Ｂ、Ｃを定義したＡ‐Ｃ‐Ｂの式で表わされる親和性酵素化合物の源、そして
前記の発色剤の源
を備えることを特徴とするキット。
【請求項２０】
前記の検出剤はステロイドグリコシド、トリテルペングリコシド、疎水性たんぱく質、ポリエン抗生剤そして抗コレステロール抗体から成るグループから選択されている請求項１９に記載のキット。
【請求項２１】
前記の検出剤はステロイドグリコシドである請求項２０に記載のキット。
【請求項２２】
ステロイドグリコシドがジギトニンである請求項２１に記載のキット。
【請求項２３】
前記の酵素可視化剤がペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ウレアーゼ、ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼそしてアセチルコリンエステラーゼから成るグループから選択されている酵素である請求項１９に記載のキット。
【請求項２４】
前記の酵素がペルオキシダーゼである請求項２３に記載のキット。
【請求項２５】
ペルオキシダーゼがホースラディッシュペルオキシダーゼである請求項２４に記載のキット。
【請求項２６】
過酸化水素を含む所定量の水溶液を更に含み、前記の発色剤が当該水溶液に存在する請求項２４もしくは２５に記載のキット。
【請求項２７】
前記の発色剤が２，２’‐アジノ‐ジ（３‐エチルベンズチアゾリン‐６‐スルホン酸）と３，３’，５，５’‐テトラメチルベンジジンから成るグループから選択されている請求項２６に記載のキット。
【請求項２８】
前記の発色剤が３，３’，５，５’‐テトラメチルベンジジンである請求項２７に記載のキット。
【請求項２９】
前記の結合剤がマレイン無水物とＮ‐ピロリドンビニルのコポリマーである請求項１９〜２８のいずれかに記載のキット。
【請求項３０】
前記のバッキング部材がポリエステルで形成されている請求項１９〜２９のいずれかに記載のキット。
【請求項３１】
前記の医療用接着剤が感圧性接着剤である請求項１９〜３０のいずれかに記載のキット。
【請求項３２】
前記の医療用接着剤がアクリルをベースとした接着剤である請求項１９〜３１のいずれかに記載のキット。
【請求項３３】
前記の医療用接着剤が合成ゴムエラストマー接着剤である請求項１９〜３１のいずれかに記載のキット。
【請求項３４】
前記の医療用接着剤がシリコーンをベースとした接着剤である請求項１９〜３１のいずれかに記載のキット。
【請求項３５】
前記の医療用接着剤がスチレン‐イソプレン‐スチレンもしくはスチレン‐ブタジエン‐スチレンのブロック重合体から形成されたエラストマーを含有する請求項１９〜３１のいずれかに記載のキット。
【請求項３６】
ａ）医療用接着剤で少なくとも一側を塗膜したバッキング部材を含むテープを用意し、
ｂ）皮膚の選択区域にテープを接着して適用し、
ｃ）その選択区域からテープを引き剥がしてその皮膚の角質層を表わしている試料を得、当該試料は露出した皮膚成分を持つようにしてテープに接着しており、
ｄ）式Ａ‐Ｃ‐Ｂ’（Ａはコレステロールに対する親和性を有する検出剤であり、Ｂ’はシグナル生成指示剤であり、Ｃは検出剤とシグナル生成指示剤とを結合する結合剤である）のシグナル生成化合物の源を用意し、
ｅ）このシグナル生成化合物の所定量を前記の試料の所定の表面区域へ塗布し、そして前記の露出した皮膚成分に存在するコレステロールに前記の検出剤が結合するに足る期間前記の化合物を前記の試料の所定の表面区域と接触させておき、
ｆ）前記のシグナル生成指示剤が生ぜしめるシグナルを測定してコレステロールのレベルを表わす値を計測する
ことを特徴とする皮膚コレステロールの測定法。
【請求項３７】
前記の検出剤は、ステロイドグリコシド、トリテルペングリコシド、疎水性たんぱく質、ポリエン抗生剤そして抗コレステロール抗体から成るグループから選択されている請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記の検出剤はステロイドグリコシドである請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記のステロイドグリコシドがジギトニンである請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記のシグナル生成指示剤が染料、蛍光体、放射性同位体、金属・ゾル（ｍｅｔａｌ  ｓｏｌ）化合物そして化学発光化合物から成るグループから選択されている請求項３６に記載の方法。
【請求項４１】
前記のシグナル生成指示剤が染料である請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
段階（ｆ）が分光測色法により実施される請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
段階（ｆ）が比色法により実施される請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
前記のシグナル生成指示剤が蛍光体である請求項４０に記載の方法。
【請求項４５】
段階（ｆ）が蛍光分析法により実施される請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記のシグナル生成指示剤が放射性同位体である請求項４０に記載の方法。
【請求項４７】
段階（ｆ）が放射能センサにより実施される請求項４６に記載の方法。  
【請求項４８】
前記のシグナル生成指示剤が金属・ゾル化合物である請求項４０に記載の方法。
【請求項４９】
段階（ｆ）が比色法により実施される請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記のシグナル生成指示剤が化学発光化合物である請求項４０に記載の方法。
【請求項５１】
段階（ｆ）がルミノメトリにより実施される請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記の結合剤がマレイン無水物とＮ‐ピロリドンビニルのコポリマーである請求項３６〜５１のいずれかに記載の方法。
【請求項５３】
前記のバッキング部材がポリエステルで形成されている請求項３６〜５３のいずれかに記載の方法。
【請求項５４】
前記の医療用接着剤が感圧性接着剤である請求項３６〜５３のいずれかに記載の方法。
【請求項５５】
前記の医療用接着剤がアクリルをベースとした接着剤である請求項３６〜５４のいずれかに記載の方法。
【請求項５６】
前記の医療用接着剤が合成ゴムエラストマー接着剤である請求項３６〜５４のいずれかに記載の方法。
【請求項５７】
前記の医療用接着剤がシリコーンをベースとした接着剤である請求項３６〜５４のいずれかに記載の方法。
【請求項５８】
前記の医療用接着剤がスチレン‐イソプレン‐スチレンもしくはスチレン‐ブタジエン‐スチレンのブロック重合体から形成されたエラストマーを含有する請求項３６〜５４のいずれかに記載の方法。
【請求項５９】
請求項３６に記載の方法を実施するのに使用するキットにおいて、
前記のテープ、そして
請求項３０でＡ、Ｂ’、Ｃを定義したＡ‐Ｃ‐Ｂ’の式で表わされる親和性シグナル生成化合物の源
を備えることを特徴とするキット。
【請求項６０】
前記の検出剤はステロイドグリコシド、トリテルペングリコシド、疎水性たんぱく質、ポリエン抗生剤そして抗コレステロール抗体から成るグループから選択されている請求項５９に記載のキット。
【請求項６１】
前記の検出剤はステロイドグリコシドである請求項６０に記載のキット。
【請求項６２】
前記のステロイドグリコシドはジギトニンである請求項６１に記載のキット。
【請求項６３】
前記のシグナル生成指示剤が染料、蛍光体、放射性同位体、金属・ゾル（ｍｅｔａｌ  ｓｏｌ）化合物そして化学発光化合物から成るグループから選択されている請求項５９に記載のキット。
【請求項６４】
前記のシグナル生成指示剤が染料である請求項６３に記載のキット。
【請求項６５】
前記のシグナル生成指示剤が蛍光体である請求項６３に記載のキット。
【請求項６６】
前記のシグナル生成指示剤が放射性同位体である請求項６３に記載のキット。
【請求項６７】
前記のシグナル生成指示剤が金属・ゾル（ｍｅｔａｌ  ｓｏｌ）化合物である請求項６３に記載のキット。
【請求項６８】
前記のシグナル生成指示剤が化学発光化合物である請求項６３に記載のキット。
【請求項６９】
前記の結合剤がマレイン無水物とＮ‐ピロリドンビニルのコポリマーである請求項５９〜６８のいずれかに記載のキット。
【請求項７０】
前記のバッキング部材がポリエステルで形成される請求項５９〜６９のいずれかに記載のキット。
【請求項７１】
前記の医療用接着剤が感圧性接着剤である請求項５９〜７０のいずれかに記載のキット。
【請求項７２】
前記の医療用接着剤がアクリルをベースとした接着剤である請求項５９〜７１のいずれかに記載のキット。
【請求項７３】
前記の医療用接着剤が合成ゴムエラストマー接着剤である請求項５９〜７１のいずれかに記載のキット。
【請求項７４】
前記の医療用接着剤がシリコーンをベースとした接着剤である請求項５９〜７１のいずれかに記載のキット。
【請求項７５】
前記の医療用接着剤がスチレン‐イソプレン‐スチレンもしくはスチレン‐ブタジエン‐スチレンのブロック重合体から形成されたエラストマーを含有する請求項５９〜７１のいずれかに記載のキット。
【請求項７６】
ａ）医療用接着剤で少なくとも一側を塗膜したバッキング部材を含むテープを用意し、
ｂ）皮膚の選択区域にテープを接着して適用し、
ｃ）その選択区域からテープを引き剥がしてその皮膚の角質層を表わしている試料を得、当該試料は露出した皮膚成分を持つようにしてテープに接着しており、
ｄ）コレステロールに対する親和性を有する検出剤としてコレステロール酸化酵素の源を用意し、
ｅ）このコレステロール酸化酵素の所定量を前記の試料の所定の表面区域へ塗布し、そしてコレステロールの酸化と過酸化水素の形成を生ずるに足る期間コレステロール酸化酵素を前記の試料の所定の表面区域と接触させておき、
ｆ）前記の段階（ｅ）で形成されるコレステロールのレベルを示す過酸化水素の量を測定する
ことを特徴とする皮膚コレステロールの測定法。
【請求項７７】
段階（ｆ）を電気化学的センサにより実施する請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
段階（ｆ）を電極を使って電流滴定法により実施する請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
ペルオキシダーゼを加えた後で分光測色法により、そして比色定量インディケータによって段階（ｆ）を実施する請求項７６に記載の方法。
【請求項８０】
前記のペルオキシダーゼがホースラディッシュペルオキシダーゼである請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記の比色定量インディケータが２，２’‐アジノ‐ジ（３‐エチルベンズチアゾリン‐６‐スルホン酸）である請求項７９もしくは８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記の比色定量インディケータが３，３’，５，５’‐テトラメチルベンジジンである請求項７９もしくは８０に記載の方法。
【請求項８３】
前記の比色定量インディケータがトリンダー（Ｔｒｉｎｄｅｒ）もしくはゴレンフォッフ（Ｎｇｏ‐Ｌｅｎｈｏｆｆ）タイプの多成分酸化性試薬である請求項７９もしくは８０に記載の方法。
【請求項８４】
前記のバッキング部材がポリエステルで形成されている請求項７６〜８３のいずれかに記載の方法。
【請求項８５】
前記の医療用接着剤が感圧性接着剤である請求項７６〜８４のいずれかに記載の方法。
【請求項８６】
前記の医療用接着剤がアクリルをベースとした接着剤である請求項７６〜８５のいずれかに記載の方法。
【請求項８７】
前記の医療用接着剤が合成ゴムエラストマー接着剤である請求項７６〜８５のいずれかに記載の方法。
【請求項８８】
前記の医療用接着剤がシリコーンをベースとした接着剤である請求項７６〜８５のいずれかに記載の方法。
【請求項８９】
前記の医療用接着剤がスチレン‐イソプレン‐スチレンもしくはスチレン‐ブタジエン‐スチレンのブロック重合体から形成されたエラストマーを含有する請求項７６〜８５のいずれかに記載の方法。
【請求項９０】
請求項７６に記載の方法を実施するのに使用するキットにおいて、
前記のテープ、そして
前記のコレステロール酸化酵素の源
を備えることを特徴とするキット。
【請求項９１】
請求項７９に記載の方法を実施するのに使用するキットにおいて、
前記のテープ、
前記のコレステロール酸化酵素の源、
ペルオキシダーゼの源、そして
比色定量インディケータの源
を備えることを特徴とするキット。
【請求項９２】
前記のペルオキシダーゼがホースラディッシュペルオキシダーゼである請求項９１に記載のキット。
【請求項９３】
前記の比色定量インディケータが２，２’‐アジノ‐ジ（３‐エチルベンズチアゾリン‐６‐スルホン酸）である請求項９１もしくは９２に記載のキット。
【請求項９４】
前記の比色定量インディケータが３，３’，５，５’‐テトラメチルベンジジンである請求項９１もしくは９２に記載のキット。
【請求項９５】
前記のバッキング部材がポリエステルで形成されている請求項９０〜９４のいずれかに記載のキット。
【請求項９６】
前記の医療用接着剤が感圧性接着剤である請求項９０〜９５のいずれかに記載のキット。  
【請求項９７】
前記の医療用接着剤がアクリルをベースとした接着剤である請求項９０〜９６のいずれかに記載のキット。
【請求項９８】
前記の医療用接着剤が合成ゴムエラストマー接着剤である請求項９０〜９６のいずれかに記載のキット。
【請求項９９】
前記の医療用接着剤がシリコーンをベースとした接着剤である請求項９０〜９６のいずれかに記載のキット。
【請求項１００】
前記の医療用接着剤がスチレン‐イソプレン‐スチレンもしくはスチレン‐ブタジエン‐スチレンのブロック重合体から形成されたエラストマーを含有する請求項９０〜９６のいずれかに記載のキット。
【請求項１０１】
前記のテープが閉止可能デバイスに担持され、この閉止可能デバイスはテープを担持しているサンプリング部材とこのサンプリング部材と係合してデバイス内にテープを保持する閉止部材とを有している請求項１９〜３５、５９〜７５そして９０〜１００のいずれかに記載のキット。
【請求項１０２】
前記の閉止部材がサンプリング部材と係合するときテープはデバイス内に密封される請求項１０１に記載のキット。
【請求項１０３】
少なくとも閉止部材もしくはサンプリング部材には周辺リムを設け、そして他方の閉止部材もしくはサンプリング部材にはリムを受ける周辺溝を設けてテープがデバイス内に密封されるようにした請求項１０２に記載のキット。
【請求項１０４】
前記の閉止部材はヒンジでサンプリング部材へ接続されている請求項１０１〜１０３のいずれかに記載のキット。
【請求項１０５】
前記のサンプリング部材の少なくとも一部はディップスティックを形成するよう閉止可能デバイスから切り取られるようになっており、このディップスティックは、その第一の端にはテープがなく、そして第二の端にはテープがある請求項１０１〜１０４のいずれかに記載のキット。
【請求項１０６】
前記のサンプリング部材の少なくとも一部はディスクを形成するよう閉止可能デバイスから切り取られるようになっており、このディスクの一面にはテープを設けてある請求項１０１〜１０４のいずれかに記載のキット。
【請求項１０７】
前記のデバイスからディスクを切り出すカッティングツールをさらに備えている請求項１０６に記載のキット。
【請求項１０８】
前記の閉止可能デバイスの外面にマーカーを付けてカッティングツールを当てる場所を示すようにした請求項１０７に記載のキット。
【請求項１０９】
ディスク切り出し後カッターの端からディスクを排出するプランジャーを前記のカッティングツールに設けた請求項１０７もしくは１０８に記載のキット。
【請求項１１０】
ａ）表面を有するサンプリング部材、
ｂ）このサンプリング部材の表面の少なくとも一部分に設けたテープであって、このテープが当該表面から離されて存在する医療用接着剤を有しており、そして
ｃ）サンプリング部材に係合し、そしてデバイス内にテープを保持するようになっている閉止部材
を備えることを特徴とする皮膚試料を得るのに使うテープ剥離デバイス。
【請求項１１１】
前記のテープは、閉止部材がサンプリング部材に係合したときデバイス内で密封されている請求項１１０に記載のデバイス。
【請求項１１２】
少なくとも閉止部材もしくはサンプリング部材には周辺リムを設け、そして他方の閉止部材もしくはサンプリング部材にはリムを受けるようにした周辺溝を設けてテープがデバイス内に密封されるようにした請求項１１１に記載のデバイス。
【請求項１１３】
閉止部材はヒンジによりサンプリング部材に連結されている請求項１１０〜１１２のいずれかに記載のデバイス。
【請求項１１４】
前記のサンプリング部材の少なくとも一部はディップスティックを形成するよう閉止可能デバイスから切り取られるようになっており、このディップスティックは、その第一の端にはテープがなく、そして第二の端にはテープがある請求項１１０〜１１３のいずれかに記載のデバイス。
【請求項１１５】
サンプリング部材の少なくとも一部分はディスクを形成するため閉止可能デバイスから切り離されるようになっており、ディスクの一面にはテープを設けてある請求項１１０〜１１３に記載のデバイス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚コレステロールの計測法に係るものである。更に具体的に言えば、本発明は、アテローム動脈硬化に罹っている危険性や、アテローム動脈硬化を悪化させたり、高コレステロールに関連したり、起因している病気を悪化させる危険性を個人に認識させるため、テープ剥離により取除いた皮膚試料のコレステロールを直接分析する方法に係るものである。
【背景技術】
【０００２】
アテローム動脈硬化とそれの合併症、例えば心発作や心拍動が世界中の殆ど全部の国で罹患率と死亡率の主因であることを多くの研究が明らかにしている。
【０００３】
アテローム動脈硬化の費用効果的予防に必要なことは個人に危険を認識させることであって、それにより治療したり生活スタイルを変えるようにしたりすることである。目指すことはこれらの人達がハイリスクグループに属していることを認識させることにあるが、危険であることを個人が認識する最適方法を選択することは困難でもある。
【０００４】
アテローム動脈硬化の危険があることを個人に認識させるのに広く使われている方法は、静脈血プラズマ（血漿）中の全コレステロールレベルの測定に基づいている（心臓病予防のための血液コレステロールを低下させるコンセンサス  コンファレンス，ＪＡＭＡ、１９８５、２５３、２０８０頁）。コレステロールレベルが２４０ｍｇ／ｄＬを越えると、その患者はハイリスクにあると考えられ、最近この閾値を低い値に下げようとする運動がある。
【０００５】
しかしながら、全コレステロールレベルだけが患者の危険レベルを精確に予測するものではない。血漿リポタンパク質を分析することによってよりよい予測ができ、特に低密度と高密度のリポタンパク質（ＨＤＬ）コレステロールレベルの測定が有利である（血清内の全体の、そして高い密度のリポタンパク質コレステロールと死亡率の危険，ブリティッシ・メディカル・ジャーナル、１９８５、２９０、１２３９−１２４３頁）。
【０００６】
それらは有利ではあるけれども、上述の方法を使用するには一定期間の絶食後での試料採取を必要としている。加えて、その試料採取は到底快適と言えるようなものではなく、感染の危険もあり、そして血漿リポタンパク質とコレステロールの分析は複雑で、費用もかかる。さらに、血漿分析は動脈壁や他の組織にコレステロールが蓄積する過程を完全に反映することはない。多くの場合において血漿コレステロールのレベルも、完全な脂質分布ですらもアテローム動脈硬化の深刻な状態との関連を示すものではない。
【０００７】
かなりのレベルのコレステロールは組織と血漿に生じるし、そして組織コレステロールがアテローム動脈硬化の進行を促す役割を果たしていることが判ってきた。動脈壁と同じようにしてコレステロールを蓄積する皮膚を含む組織が特定されており、そして動脈壁のコレステロール内容と皮膚のコレステロール内容との間に密接な関係があることが研究によって明らかになっている。例えば、凍結乾燥した皮膚試料からコレステロールを抽出して伝統的な化学技術と生化学技術とにより測定した（ニキチン  ワイ．ピー．、ゴジエンコ  アイ．エイ．、ドルゴフ  エイ．ヴイ．、フイリモノヴァ  ティ．エイ．「皮膚のコレステロール含有、そしてそれと虚血心臓症の患者と正常人との血清内の脂質量との関係」、心臓病学、１９８７、ＩＩ，１０巻、４８−５１頁）。この方法は有用ではあるけれども、あまりにも複雑で、苦痛も多くて多くの人から患者を選別するには不向きである。
【０００８】
米国特許４，４５８，６８６号は皮膚直下の血液内の、もしくは皮膚表面の様々な化合物を定量化する方法を開示している。その方法は、例えばポーラログラフィーを介して電気化学的に酸素濃度変化を測定することに基づいている。皮膚を通って拡散しない非揮発性物質の場合には、皮膚の下に酵素を植えこみ皮膚表面で酸素変化を生じさせる。この特許はまた、コレステロール酸化酵素を使ってコレステロールを定量するのに当該方法を使用することの可能性を述べている。必要となる複雑な計器装備と手法とは高度の熟練者による計測を必要とし、結局多くの人から患者を選別するにはこの方法も不向きである。
【０００９】
皮膚のコレステロール含有量の決定によりアテローム動脈硬化の程度を計測でき、そしてそれは皮膚の生体組織切片の標準的な研究室での分析によって計測できる。しかしながら、皮膚試料の採集にはかなりの痛みを伴うし、採取個所での感染の危険もある。加えて、この方法は他にも欠点がある。厚い皮膚切片は最外角質層（角質層）、表皮そして真皮を含むいくつもの皮膚層を含んでいる。真皮層には多数の血管が通っているので、皮膚生検試料は血管や血液成分を含むことになる。それらは汗や脂肪線も含み、そして分泌物もその中に含まれる。加えて、皮下脂肪は皮膚の直下にあって、試料切片を汚染する。それ故、皮膚生検切片は雑多な成分から成り、それらの分析は皮膚のコレステロール含有について誤ったデータを与えることがある。
【００１０】
米国特許５，４８９，５１０号は、あるコレステロール結合成分を持つ試薬をインディケーター成分を持つ試薬と組合せて皮膚のコレステロールに結合した成分の存在を示す可視的な色彩変化をつくりだす、皮膚上のコレステロールを視認する非侵入法を開示している。この方法はこれまでの手法の問題の多くを解決し、そして個人にアテローム動脈硬化に罹っている危険を認識させる簡単な大量選別に必要な要件を満足させている。その手法は手の平の皮膚に直接実施でき、そして簡単且つ迅速であるけれども、その試験の行われる診療所に個人がいなければならない。このことは明らかに大量選別の実効性を制限する。
【００１１】
角質層における、コレステロールを含む、脂質のモル比は皮膚の直接的な溶媒抽出により得られる試料で測定できる（ノーレン  エル等、ジェイ  インヴェスト、皮膚病学７２−７７、１１２、１９９９）。質量分析法と一緒に高性能液体クロマトグラフ分析法（ＨＰＬＣ）と気体液体クロマトグラフ分析法とを組合せて脂質を分離し、分析した。その分析法は複雑であり、さらに重大な不都合であるのは、腐食性で刺激的な有機溶媒系を使用して人皮を抽出してルーチンの計測をするのであり、それは実用的ではない。
【００１２】
皮膚の角質層の脂質分布は、エイ  ウイーハムとエム  ポネックが述べているテープ剥離法を使って決定できる（アーカイブ．皮膚科学研究１９１−１９９、２９３、２００１）。この研究ではコレステロールを含む脂質は皮膚のテープ剥離後角質から溶媒抽出された。その結果の脂質抽出は高性能薄層クロマトグラフ分析法により分離された。この方法は非常に骨が折れる。３つの溶媒を続けて使い脂質を分離し、染色・炭化法によって成分を可視化し、そして濃度測定段階で脂質の相対量を決定する。この方法では大量の試料切片中のコレステロールのレベルを簡単、迅速に決定できるというわけにはいかない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明の目的は以上の欠点を解消し、そして大量選別を可能とする、簡単で、非侵入的な皮膚コレステロール測定方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明を第１のアスペクトから見ると、
ａ）医療用接着剤で少なくとも一側を塗膜したバッキング部材を含むテープを用意し、
ｂ）皮膚の選択区域にテープを接着して適用し、
ｃ）その選択区域からテープを引き剥がしてその皮膚の角質層を表わしている試料を得、当該試料は露出した皮膚成分を持つようにしてテープに接着しており、
ｄ）式Ａ‐Ｃ‐Ｂ（Ａはコレステロールに対する親和性を有する検出剤であり、Ｂは酵素可視化剤であり、Ｃは検出剤と可視化剤とを結合する結合剤である）の親和性酵素化合物の源を用意し、
ｅ）この親和性酵素化合物の所定量を前記の試料の所定の表面区域へ塗布し、そして前記の露出した皮膚成分に存在するコレステロールに前記の検出剤が結合するに足る期間前記の化合物を前記の試料の所定の表面区域と接触させておき、
ｆ）前記の試料の所定の表面区域に発色剤の所定量を塗布し、この発色剤が前記の親和性酵素化合物と反応してコレステロールレベルを色で示す着色物を形成させる
ことを特徴とする皮膚コレステロールの測定法が提供されている。
【００１５】
この方法における検出剤はステロイドグリコシド、トリテルペングリコシド、疎水性たんぱく質、ポリエン抗生剤そして抗コレステロール抗体から成るグループから選択されている。一つの場合において、検出剤はステロイドグリコシドであり、そしてステロイドグリコシドはジギトニンである。
【００１６】
前記の方法において、酵素可視化剤がペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ウレアーゼ、ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼそしてアセチルコリンエステラーゼから成るグループから選択されている酵素である。一つの場合において、酵素はペルオキシダーゼであり、そしてペルオキシダーゼはホースラディッシュペルオキシダーゼである。
【００１７】
さらに別の場合では、段階（ｅ）の後でペルオキシダーゼを過酸化水素で活性化して活性化ペルオキシーダーゼを形成し、そして段階（ｆ）で使用される発色剤が前記の活性化ペルオキシーダーゼと反応して前記の着色物を形成する。
【００１８】
さらに別の場合では、段階（ｆ）において過酸化水素を含む所定量の水溶液と前記の発色剤を前記の試料の所定の表面区域に塗布する。
【００１９】
前記の発色剤は２，２’‐アジノ‐ジ（３‐エチルベンズチアゾリン‐６‐スルホン酸）と３，３’，５，５’‐テトラメチルベンジジンから成るグループから選択される。特定の場合に前記の発色剤は３，３’，５，５’‐テトラメチルベンジジンである。
【００２０】
前記の結合剤はマレイン無水物とＮ‐ピロリドンビニルのコポリマーである。
【００２１】
さらに、前記のバッキング部材はポリエステルで形成されている。前記の医療用接着剤は感圧性接着剤である。ある場合には医療用接着剤がアクリルをベースとした接着剤である。別の場合には、医療用接着剤は合成ゴムエラストマー接着剤である。さらに別の場合には医療用接着剤はシリコーンをベースとした接着剤である。別の場合では、医療用接着剤はスチレン‐イソプレン‐スチレンもしくはスチレン‐ブタジエン‐スチレンのブロック重合体から形成されているエラストマーを含有する。
【００２２】
本発明を第２のアスペクトから見ると、
ａ）医療用接着剤で少なくとも一側を塗膜したバッキング部材を含むテープを用意し、
ｂ）皮膚の選択区域にテープを接着して適用し、
ｃ）その選択区域からテープを引き剥がしてその皮膚の角質層を表わしている試料を得、当該試料は露出した皮膚成分を持つようにしてテープに接着しており、
ｄ）式Ａ‐Ｃ‐Ｂ’（Ａはコレステロールに対する親和性を有する検出剤であり、Ｂ’はシグナル生成指示剤であり、Ｃは検出剤とシグナル生成指示剤とを結合する結合剤である）のシグナル生成化合物の源を用意し、
ｅ）このシグナル生成化合物の所定量を前記の試料の所定の表面区域へ塗布し、そして前記の露出した皮膚成分に存在するコレステロールに前記の検出剤が結合するに足る期間前記の化合物を前記の試料の所定の表面区域と接触させておき、
ｆ）前記のシグナル生成指示剤が生ぜしめるシグナルを測定してコレステロールのレベルを表わす値を計測する
ことを特徴とする皮膚コレステロールの測定法が提供されている。
【００２３】
前記の検出剤は、ステロイドグリコシド、トリテルペングリコシド、疎水性たんぱく質、ポリエン抗生剤そして抗コレステロール抗体から成るグループから選択されている。一つの場合において、検出剤はステロイドグリコシドであり、そしてステロイドグリコシドがジギトニンである。
【００２４】
前記のシグナル生成指示剤は染料、蛍光体、放射性同位体、金属・ゾル（ｍｅｔａｌ  ｓｏｌ）化合物そして化学発光化合物から成るグループから選択されている。一つの場合においてシグナル生成指示剤は染料である。別の場合において、シグナル生成指示剤が蛍光体である。さらに別の場合において、シグナル生成指示剤は放射性同位体である。別の場合において、シグナル生成指示剤は金属・ゾル化合物である。さらに別の場合において、シグナル生成指示剤は化学発光化合物である。
【００２５】
一つの場合において段階（ｆ）が分光測色法により実施される。別の場合において、段階（ｆ）が比色法により実施される。さらに別の場合において、段階（ｆ）が蛍光分析法により実施される。さらに別の場合において、段階（ｆ）が放射能センサにより実施される。さらに別の場合において、段階（ｆ）がルミノメトリ（照度計を用いた方法）により実施される。
【００２６】
前記の結合剤はマレイン無水物とＮ‐ピロリドンビニルのコポリマーである。
【００２７】
テープのバッキング部材はポリエステルで形成されている。一つの場合において医療用接着剤は感圧性接着剤である。別の場合において医療用接着剤がアクリルをベースとした接着剤である。別の場合において、医療用接着剤は合成ゴムエラストマー接着剤である。さらに別の場合において、医療用接着剤はシリコーンをベースとした接着剤である。さらに別の場合において、医療用接着剤がスチレン‐イソプレン‐スチレンもしくはスチレン‐ブタジエン‐スチレンのブロック重合体から形成されたエラストマーを含有する。
【００２８】
本発明を第３のアスペクトから見ると、
ａ）医療用接着剤で少なくとも一側を塗膜したバッキング部材を含むテープを用意し、
ｂ）皮膚の選択区域にテープを接着して適用し、
ｃ）その選択区域からテープを引き剥がしてその皮膚の角質層を表わしている試料を得、当該試料は露出した皮膚成分を持つようにしてテープに接着しており、
ｄ）コレステロールに対する親和性を有する検出剤としてコレステロール酸化酵素の源を用意し、
ｅ）このコレステロール酸化酵素の所定量を前記の試料の所定の表面区域へ塗布し、そしてコレステロールの酸化と過酸化水素の形成を生ずるに足る期間コレステロール酸化酵素を前記の試料の所定の表面区域と接触させておき、
ｆ）前記の段階（ｅ）で形成されるコレステロールのレベルを示す過酸化水素の量を測定する
ことを特徴とする皮膚コレステロールの測定法が提供される。
【００２９】
一つの場合において段階（ｆ）を電気化学的センサにより実施する。別の場合において、段階（ｆ）を電極を使って電流滴定法により実施する。さらに、別の場合において、ペルオキシダーゼを加えた後で分光測色法により、そして比色定量インディケータによって段階（ｆ）を実施する。一つの場合において、ペルオキシダーゼはホースラディッシュペルオキシダーゼである。前記の比色定量インディケータは２，２’‐アジノ‐ジ（３‐エチルベンズチアゾリン‐６‐スルホン酸）である。さらに、別のばあいにおいて、比色定量インディケータは３，３’，５，５’‐テトラメチルベンジジンである。さらに、別の場合において、比色定量インディケータはトリンダー（Ｔｒｉｎｄｅｒ）もしくはゴレンフォッフ（Ｎｇｏ‐Ｌｅｎｈｏｆｆ）タイプの多成分酸化性試薬である。
【００３０】
さらに、前記のバッキング部材はポリエステルで形成されている。前記の医療用接着剤は感圧性接着剤である。一つの場合において、医療用接着剤はアクリルをベースとした接着剤である。別の場合において、医療用接着剤は合成ゴムエラストマー接着剤である。さらに、別の場合において、医療用接着剤はシリコーンをベースとした接着剤である。さらに、別の場合において、医療用接着剤がスチレン‐イソプレン‐スチレンもしくはスチレン‐ブタジエン‐スチレンのブロック重合体から形成されるエラストマーを含有する。
【００３１】
本発明を第４のアスペクトから見ると、第１のアスペクトから見た方法の実施に使用するキットが提供される。このキットは、
前記のテープ、
Ａ‐Ｃ‐Ｂの式（Ａ、Ｂ、Ｃは上に定義されている）で表わされる親和性酵素化合物の源、そして
前記の発色剤の源
を備えることを特徴とする。
【００３２】
検出剤はステロイドグリコシド、トリテルペングリコシド、疎水性たんぱく質、ポリエン抗生剤そして抗コレステロール抗体から成るグループから選択されている。一つの場合において、検出剤はステロイドグリコシドであり、そしてステロイドグリコシドはジギトニンである。
【００３３】
前記のキットにおいて、酵素可視化剤はペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ウレアーゼ、ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼそしてアセチルコリンエステラーゼから成るグループから選択されている酵素である。一つの場合において、酵素はペルオキシダーゼであり、そしてペルオキシダーゼはホースラディッシュペルオキシダーゼである。
【００３４】
さらに、前記のキットは過酸化水素を含む所定量の水溶液を更に含み、発色剤は当該水溶液に存在している。発色剤は２，２’‐アジノ‐ジ（３‐エチルベンズチアゾリン‐６‐スルホン酸）と３，３’，５，５’‐テトラメチルベンジジンから成るグループから選択されている。一つの場合において、発色剤は３，３’，５，５’‐テトラメチルベンジジンである。
【００３５】
さらに、前記のキットにおいて、結合剤はマレイン無水物とＮ‐ピロリドンビニルのコポリマーである。
【００３６】
さらに、テープのバッキング部材はポリエステルで形成されている。前記の医療用接着剤は感圧性接着剤である。医療用接着剤がアクリルをベースとした接着剤である。別の場合において、医療用接着剤は合成ゴムエラストマー接着剤である。さらに、別の場合において、医療用接着剤はシリコーンをベースとした接着剤である。さらに、別の場合において、医療用接着剤はスチレン‐イソプレン‐スチレンもしくはスチレン‐ブタジエン‐スチレンのブロック重合体から形成されるエラストマーを含有する。
【００３７】
本発明を第５のアスペクトから見ると、第２のアスペクトから見た方法の実施に使用するキットが提供される。このキットは、
前記のテープ、そして
Ａ‐Ｃ‐Ｂ’の式（Ａ、Ｂ’、Ｃは上に定義されている）で表わされる親和性シグナル生成化合物の源
を備えることを特徴とする。
【００３８】
このキットにおける検出剤はステロイドグリコシド、トリテルペングリコシド、疎水性たんぱく質、ポリエン抗生剤そして抗コレステロール抗体から成るグループから選択されている。一つの場合において検出剤はステロイドグリコシドであり、そしてステロイドグリコシドはジギトニンである。
【００３９】
前記のキットにおいてシグナル生成指示剤は染料、蛍光体、放射性同位体、金属・ゾル（ｍｅｔａｌ  ｓｏｌ）化合物そして化学発光化合物から成るグループから選択されている。一つの場合において、シグナル生成指示剤は染料である。別の場合において、シグナル生成指示剤は蛍光体である。さらに、別の場合において、シグナル生成指示剤は放射性同位体である。別の場合において、シグナル生成指示剤は金属・ゾル（ｍｅｔａｌ  ｓｏｌ）化合物である。さらに、別の場合において、シグナル生成指示剤は化学発光化合物である。
【００４０】
前記のキットにおいて結合剤はマレイン無水物とＮ‐ピロリドンビニルのコポリマーである。  
【００４１】
さらに、テープのバッキング部材はポリエステルで形成される。医療用接着剤は感圧性接着剤である。一つの場合において、医療用接着剤はアクリルをベースとした接着剤である。別の場合において医療用接着剤が合成ゴムエラストマー接着剤である。さらに、別の場合において医療用接着剤はシリコーンをベースとした接着剤である。さらに別の場合において、医療用接着剤がスチレン‐イソプレン‐スチレンもしくはスチレン‐ブタジエン‐スチレンのブロック重合体から形成されるエラストマーを含有する。
【００４２】
本発明を第６のアスペクトから見ると、第３のアスペクトから見た方法の実施に使用するキットが提供される。このキットは、
前記のテープ、そして
前記のコレステロール酸化酵素の源
を備えることを特徴とする。
【００４３】
上記のキットにおいて、ペルオキシダーゼはホースラディッシュペルオキシダーゼである。一つの場合において、比色定量インディケータは２，２’‐アジノ‐ジ（３‐エチルベンズチアゾリン‐６‐スルホン酸）である。別の場合において、比色定量インディケータは３，３’，５，５’‐テトラメチルベンジジンである。
【００４４】
さらに、バッキング部材はポリエステルで形成されている。医療用接着剤は感圧性接着剤である。一つの場合において、医療用接着剤がアクリルをベースとした接着剤である。別の場合において、医療用接着剤は合成ゴムエラストマー接着剤である。医療用接着剤はシリコーンをベースとした接着剤である。別の場合において、医療用接着剤はスチレン‐イソプレン‐スチレンもしくはスチレン‐ブタジエン‐スチレンのブロック重合体から形成されたエラストマーを含有する。
【００４５】
前記のすべてのキットにおいて、テープは閉止可能デバイスに担持され、この閉止可能デバイスはテープを担持しているサンプリング部材とこのサンプリング部材と係合してデバイス内にテープを保持する閉止部材とを有している。閉止部材がサンプリング部材と係合するときテープはデバイス内に密封されるのが好ましい。少なくとも閉止部材もしくはサンプリング部材には周辺リムを設け、そして他方の閉止部材もしくはサンプリング部材にはリムを受ける周辺溝を設けてテープがデバイス内に密封されるようにしている。閉止部材はヒンジでサンプリング部材へ接続されている。
【００４６】
一つの場合において、前記のサンプリング部材の少なくとも一部はディップスティックを形成するよう閉止可能デバイスから切り取られるようになっており、このディップスティックの第一の端にはテープがなく、そして第二の端にはテープがある。
【００４７】
別の場合において、サンプリング部材の少なくとも一部はディスクを形成するよう閉止可能デバイスから切り取られるようになっており、このディスクの一面にはテープがある。
【００４８】
さらに、前記のキットは前記の閉止可能デバイスからディスクを切り出すカッティングツールをさらに備えている。閉止可能デバイスの外面にマーカーを付けてカッティングツールを当てる場所を示すようにしている。
【００４９】
さらに、ディスク切り出し後カッターの端からディスクを排出するプランジャーを前記のカッティングツールに設けている。
【００５０】
本発明により、皮膚試料を得るのに使うテープ剥離デバイスが提供され、このデバイスは、
ａ）表面を有するサンプリング部材、
ｂ）このサンプリング部材の表面の少なくとも一部分に設けたテープであって、このテープが当該表面から離されて存在する医療用接着剤を有しており、そして
ｃ）サンプリング部材に係合し、そしてデバイス内にテープを保持するようになっている閉止部材
を備えることを特徴とする。
【００５１】
前記のテープは、閉止部材がサンプリング部材に係合したときデバイス内で密封される。一つの場合において、少なくとも閉止部材もしくはサンプリング部材には周辺リムを設け、そして他方の閉止部材もしくはサンプリング部材にはリムを受けるようにした周辺溝を設けてテープがデバイス内に密封されるようにしている。閉止部材はヒンジによりサンプリング部材に接続されている。
【００５２】
一つの場合において、前記のサンプリング部材の少なくとも一部はディップスティックを形成するよう閉止可能デバイスから切り取られるようになっており、このディップスティックの第一の端にはテープがなく、そして第二の端はテープがある。
【００５３】
別の場合において、サンプリング部材の少なくとも一部分はディスクを形成するため閉止可能デバイスから切り離されるようになっており、ディスクの一面にはテープを設けてある。
【００５４】
皮膚コレステロールの計測を前記のテープに固着させた皮膚試料で直接実施できるということに出願人は驚きを禁じえない。提供者個人からテープ剥離した皮膚試料によって遠隔の集中検査室で多数の個人について分析を同時的に行えるのである。こうして、本発明の方法は、多数の個人から心臓血管系の症状を検知してその中から患者を選別摘出するのに適している。
図面の簡単な説明
【００５５】
本発明について一層の理解が得られるよう、本発明がどのように実施されるかを以下に本発明の好ましい実施例につき添付図を参照して説明する。
【００５６】
図１は実例２に使用のサンプリングデバイスの頂面図である。
【００５７】
図２は図１のサンプリングデバイスの一部を切り取って、それのサンプリング部材の詳細を示す図である。
【００５８】
図３は本発明のサンプリングデバイスから切り取ったディップスティックの斜視図である。
【００５９】
図４は別の実施例のサンプリングデバイスから切り取ったディスクの斜視図である。
【００６０】
図５はマイクロウエルプレートの凹所に入れた図４のディスクの横断面図である。
【００６１】
図６は図４のディスクをつくるカッティングツールを持つサンプリングデバイスの斜視図である。
【００６２】
図７は図４のディスクをつくるカッティングツールを持つサンプリングデバイスの断面図である。
【００６３】
図８はマイクロウエルプレートの凹所に入れたカッティングツールの横断面図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００６４】
ポリエステルで形成されているバッキング部材を持つテープを使うのが好ましい。このテープの一方の面は医療用接着剤が塗膜されている。本文で言う「医療用接着剤」とは皮膚に塗布して低アレルギー性で、安全な接着剤のことである。そのような接着剤は感圧性接着剤、例えばスチレン‐イソプレン‐スチレンもしくはスチレン‐ブタジエン‐スチレンのブロック重合体から形成されたエラストマーを含有することが好ましい。
【００６５】
接着剤には多くの種類があることは理解されよう。一般に、本発明で使用するに適した接着剤は上に述べた医療用接着剤であって、試料採取のため皮膚にその接着剤を塗布してもアレルギー反応を生じるという問題のないものである。皮膚試料採取のため本発明者はいくつかの種類の接着剤を試してみた。それらの多くは感圧性のアクリルをベースとした接着剤であるが、合成ゴムのタイプのエラストマー接着剤とシリコーンをベースとした接着剤も試した。
【００６６】
本発明者は、スチレンとブタジエンもしくはスチレンとイソプレンのブロック重合体をベースとした合成ゴム接着剤も適当であることを確認した。合成ゴム接着剤の例としてはスチレンとブタジエンのブロック重合体をベースとした合成Ｋｒａｔｏｎ（登録商標）タイプの（ラテックス・フリー）接着剤である。このような接着剤は皮膚試料を安定させ事後の分析のため試料を転送させるのを容易とする。
【００６７】
本発明の方法に使用するのに適した別の好ましい接着テープは両面塗膜の感圧性医療グレードのテープである。そのような医療グレードのテープの例はプロダクト＃９８７７と言う名称で３Ｍが市販しており、もしくはプロダクト＃８５７０と言う名称でアドヘッシブ  リサーチインコーポレテッドが市販している。
【００６８】
本発明者が試験してみたその他のテープの幾つかを以下の表に示す。常に要求されることは低アレルギー性である医療グレードテープを使用することである。
2007534326.tif 000003
【００６９】
表１の接着テープで網羅したということではない。今のところ本発明で使用するに適しているとした様々な接着テープを示したに過ぎない。当業者であれば他にも適当な接着テープを見出すであろうが、それらはいずれも本発明で想定されているものである。
【００７０】
簡単に除去できるライナーを貼った両面塗膜感圧性テープが一般に入手できる。ライナーはそれを除くまではテープが固着するのを防いで、接着剤が汚染されないようにしている。両面塗膜テープのどちら側にでもライナーを貼ることができるし、また、テープは１枚のライナーしか持たなくても、それ自体を巻くことによって両面を保護することもできる。
【００７１】
剥離特性に違いのあるライナーを使って第２接着面は保護したまま、接着剤の第１面を露出するようにすることもできる。違いのあるライナーを有する両面塗膜テープは皮膚採取に特に有利である。第１ライナーの除去によりテープはサンプリングデバイスのバッキングサポートに貼れ、そして皮膚採取側は第２ライナーで覆ったままである。この第２ライナーによって皮膚採取接着域は、それが使われるまでくっついたり、汚染したりしないようになっている。皮膚採取が必要となると第２のライナーを除く。
【００７２】
テープは皮膚のどの部分にでも貼れるが、最適な部分は手のひらである。手のひらは、脂肪線の分泌は、結果に影響するようなコレステロールを分泌する脂腺を有していないからである。さらに、手のひらの皮膚は採取しやすい。
【００７３】
均一量の皮膚試料を得るようにするのが分析には望ましい。採取のため接着テープを貼るにはテープを皮膚に押しつけるだけで行うのが典型であり、普通でもある。追加的な量の角質層を追加のテープを皮膚に貼り付けて採取することもできる。皮膚にテープを続けて貼るごとに皮膚をテープに次々と固着させる。皮膚材料でテープが一杯になって、接着できなくなるまでこれを続ける。テープを一杯にするまでに要する貼り付の回数は使うテープによって異なるが、最も普通に使用している接着テープでは例えば１０回であるが、これに限定されるものではなく、例えば、３〜７回である。剥離する毎に皮膚の新しい場所にテープを貼ってテープを一杯にする。それ故、継続して良好な採取をするには貼る毎に新しい場所を使ってテープを皮膚へ１０回貼るのがよい。
【００７４】
接着テープの皮膚試料に存在するコレステロールの総量は得られた皮膚試料の大きさに関連している。さらに、異なる個人間で皮膚コレステロールの相対レベルを比較するには一定の皮膚試料を必要とする。
【００７５】
様々な人達から（または、繰り返して同じ人から）一定の大きさの皮膚試料を得ることは以下のようにして達成される。第一に、先に述べたように、接着テープが皮膚で一杯になって、接着できなくなるまで皮膚へ反復してテープを貼ることにより皮膚試料を採取する。３回から７回貼った後でテープは一杯になり、そして確実に一杯にするには１０回貼るのが普通である。次に、分析する一定の面積の皮膚試料を得るのに皮膚サンプリングデバイスから（実例２と３から明らかとなるように）一定の大きさを除去し、そして後述するように、基準量の検出剤と指示剤に浸す。
【００７６】
皮膚採取後サンプリングデバイスを閉じ、そしてコレステロール分析のため中央試験所に搬送する。
【００７７】
皮膚試料のコレステロールを分析するのに式Ａ‐Ｃ‐ＢもしくはＡ‐Ｃ‐Ｂ’の化合物を使うとき、検出剤Ａは例えばステロイドグリコシド、トリテルペングリコシド、疎水性たんぱく質、ポリエン抗生剤もしくは抗コレステロール抗体である。ステロイドグリコシド、例えばジギトニンを使うのが好ましい。一方、結合剤Ｃはマレイン無水物とＮ‐ピロリドンビニルのコポリマーであるのが好ましい。
【００７８】
式Ａ‐Ｃ‐Ｂの化合物を使った場合には、酵素可視化剤Ｂはペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ウレアーゼ、ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼそしてアセチルコリンエステラーゼから成るグループから選択されている酵素であるのが好ましい。ペルオキシダーゼ、例えばホースラディッシュペルオキシダーゼが好ましい。この場合段階（ｅ）の後でペルオキシダーゼを過酸化水素で活性化して活性化ペルオキシダーゼを形成し、そして段階（ｆ）で使用する発色剤を活性化ペルオキシダーゼと反応させて前記の着色物を形成する。このため所定量の過酸化水素含有水溶液と発色剤とを段階（ｆ）で試料の所定表面域に加える。段階（ｆ）で使用できる適当な発色剤の例は２，２’‐アジノ‐ジ（３‐エチルベンズチアゾリン‐６‐スルホン酸）と３，３’，５，５’‐テトラメチルベンジジンを含む。３，３’，５，５’‐テトラメチルベンジジンが好ましい。
【００７９】
式Ａ‐Ｃ‐Ｂ’の化合物を使った場合には、指示剤は例えば染料、蛍光体、放射性同位体、金属・ゾル（ｍｅｔａｌ  ｓｏｌ）化合物もしくは化学発光化合物である。指示剤が染料であると、段階（ｆ）は比色法のような分光測色法により実施される。指示剤が蛍光体であると、段階（ｆ）が蛍光分析法により実施される。指示剤が放射性同位体であると、段階（ｆ）は放射能センサにより実施される。指示剤が金属・ゾル化合物であると、段階（ｆ）が比色法により実施される。指示剤が化学発光化合物であると、段階（ｆ）はルミノメトリにより実施される。
【００８０】
コレステロールに対して親和性を有する検出剤としてコレステロールオキシダーゼを用いた場合には段階（ｆ）を電気化学的センサにより、例えば電極を使って電流滴定法により実施するのが好ましい。段階（ｆ）はペルオキシダーゼを加えた後で分光測色法により、そして比色定量インディケータによって実施することもできる。使用するペルオキシダーゼはホースラディッシュペルオキシダーゼであるのが好ましい。使用できる適当な比色定量インディケータは２，２’‐アジノ‐ジ（３‐エチルベンズチアゾリン‐６‐スルホン酸）と３，３’，５，５’‐テトラメチルベンジジンを含む。トリンダー（Ｔｒｉｎｄｅｒ）もしくはゴレンフォッフ（Ｎｇｏ‐Ｌｅｎｈｏｆｆ）タイプの多成分酸化性結合試薬から成る比色定量インディケータも使用できる。ペルオキシダーゼと比色定量インディケータを使うときは、第三のアスペクトで見た本発明の方法を実施する前記のキットはさらに、ペルオキシダーゼの源と比色定量インディケータの源とをさらに備えている。
【００８１】
本発明の方法は簡便且つ高度の処理能力で皮膚コレステロール分析を果たす。
実例１
【００８２】
アドヘッシブ  リサーチ  インコーポレーテッドが販売している、上部の採取側上に保護レリーズ・ライナーを有する両面塗膜の感圧性医療用グレードのテープを使用した。１インチ×１インチのテープ片を切り出した。このテープ片を、その露出した、下側の粘着面を使って、１インチ×３インチの薄いプラスチック（白いポリスチレン）部材の一端に貼りつけ、覆われていないプラスチックの１インチ×２インチ片をハンドルとして残し、このハンドルを使ってテープを皮膚に付け、そして試料のラベルを貼るようにする。
【００８３】
皮膚試料を得るため、保護ライナーを取除き、そしてその露出粘着面を皮膚の清潔な乾燥部分に貼った。接着区域にわたりプラスチック部材の後に圧力をかけ、皮膚と接着剤とを十分に接触させた。貼ったテープと角質試料とを持ったプラスチック部材を皮膚から剥離した。
【００８４】
試料からそれぞれがμインチ×μインチの同じ大きさの４つの切片に切り出した。一つの切片を１２の凹所を有する組織培養プレートの一つの凹所に、もしくは類似の容器に皮膚採取側を上にして入れた。既知少量のＡ‐Ｃ‐Ｂタイプの試薬を皮膚試料の所定の表面域に加えた。使用したＡ‐Ｃ‐Ｂタイプの試薬は、無水マレイン酸‐Ｎ‐ピロリドンビニルのコポリマー（Ｃ）を介してホースラディッシュペルオキシダーゼ（Ｂ）に結合したジギトニン結合体（Ａ）であった。この試薬を室温で１５分間皮膚試料に接触させておいた。その後吸引して除去した。その後、既知少量の洗浄溶液で試料を三度洗浄して非特異的結合剤を除去した。それから１２凹所の組織培養皿の新しい、清浄な凹所、もしくは類似の容器に、皮膚採取側を上にしてその試料を入れた。この試料に既知少量の基質溶液を加えて、室温で約１５分間皮膚試料と接触させておいた。使用した基質溶液はネオゲン  コーポレーション（米国、ケンタッキー州、レキシントン）から入手できるエンハンスド  ケイ・ブルーであって、発色剤として過酸化水素とテトラメチル  ベンジジンとを含んでいる。既知少量の発現した基質溶液を凹所から取除き、そしてそれを９６凹所マイクロウエルプレートの一つの凹所内の既知少量の１規定の硫酸へ加えた。その結果できた溶液の光学的濃度（皮膚試料中のコレステロールの量の測度）をプレートリーディング分光光度計で約４５０ｎｍのところで読んだ。
実例２
【００８５】
図１に示すサンプリングデバイスを使用した。全体を参照数字１０で示したサンプリングデバイスはプラスチック（ポリプロピレン）から形成され、閉止部材１４が一体のヒンジ１６で連結されたサンプリング部材１２を備えている。閉止部材１４は周辺リム１８と４つのピン２０とを有し、これらの周辺リム１８と４つのピン２０はそれぞれサンプリング部材１２の周辺溝２２と４つの孔２４に嵌り合う。ヒンジ１６を曲げて、リム１８を溝２２と係合させ、そしてピン２０を孔２４に嵌ることにより、デバイス１０の２つのハーフは閉じられ、そして密封されて内面が塵や汚染から保護される。閉止部材１４の外表面（図１、図２では示されていない）は、試料を識別するラベルとバーコード片を付すための平坦領域を有している。サンプリング部材１２と閉止部材１４にはデバイス１０を開けるための指タブ２６，２８をそれぞれに設けてある。
【００８６】
プロダクト＃９８７７として３Ｍから販売されている、保護用クラフト紙レリーズライナー３２を有する両面塗膜の感圧性医療グレードのテープ３０をサンプリング部材１２の中央域へ貼る。レリーズライナー３２は接着テープ３０よりも幅広であって、テープの付いていないはみ出し片３２’がテープの一つの縁に沿って出ている。このライナーのはみ出し片３２’はデバイスの縁から出ていてライナーを剥がし易くするタブとなっている。使用直前にライナー３２をこのタブ３２’を使って取除くと皮膚採取のためのテープ３０の接着面が露出する。
【００８７】
採取するための手のひらの皮膚区域を清浄にし、そして乾燥した。接着面を露出したテープ３０を手のひらに当てた。接着域の上でサンプリング部材１２の後を圧して皮膚にテープ３０を押しつけ、それにより角質層を固着させた。デバイス１０を剥がして、手のひらの新しい場所にまた貼って皮膚に押しつけた。こうして全部で１０回デバイスを手のひらの皮膚に貼ったり、剥がしたりした。
【００８８】
皮膚への接着後に幅が約４ｍｍの少なくとも２つの小さいディップスティック４０（図３参照）をデバイス１０から以下のようにして切り取った。図２を参照する。タブ２６に隣接した溝２２の部分に沿って切ることによりサンプリング部材１２の端部分を取除いた。それからサンプリング部材１２に成形されている案内線３６（図２に示す）に沿って３つの切り込みを付けて、中心線をちょうど過ぎた端から切断して４ｍｍのスティックとする。サンプリング部材１２に成形されている案内線３８を使ってサンプリング部材１２の中心を横切って第３の切り込みをつけることにより２枚の４ｍｍ幅のスティックをサンプリング部材１２から切り離した。スティック４０の第１の端部分４２にはテープがなく、そして第２の端部分４４には皮膚試料の固着したテープが付いている。
【００８９】
９６個の凹所つきマイクロウエルプレート（図示せず）の凹所内のＡ‐Ｃ‐Ｂ試薬の溶液約１００μＬにスティックを入れる。この試薬は無水マレイン酸‐Ｎ‐ピロリドンビニルのコポリマー（Ｃ）を介してホースラディッシュペルオキシダーゼ（Ｂ）に結合したジギトニン結合体（Ａ）で、約１μｇ／ｍＬの濃度で使用した。スティックをこの試薬に室温で１５分間入れておき、その後取出し、約２００μＬの洗浄溶液を含むマイクロウエルプレートの新しい凹所に入れた。マイクロウエルプレートを撹伴して洗浄を行い、約一分後スティックを取り出し、約２００μＬの新しい洗浄溶液を含む新しい凹所に移し、再び約１分撹伴した。撹伴洗浄を３度行い、その後スティックを取り出し、そして約１００μＬの基質溶液（エンハンスド  ケイ・ブルー試薬）に漬けた。そして、スティックを基質溶液で室温で約１５分、暗所中でインキュベートした。この工程中マイクロウエルプレートを振っていることができる。
【００９０】
スティックのインキュベート後、スティックを取り出すことができる。そして、約１００μＬの１規定の硫酸を基質溶液が入っている凹所に加えてそれ以上反応させないようにし、そしてその結果の溶液の光学的濃度をプレートリーディング分光光度計により約４５０ｎｍで読んで、皮膚試料のコレステロール量の測度を得た。
実例３
【００９１】
実例２からの多くの試料を一緒に処理するには、ディップスティック４０を標準の９６凹所（８×１２）のマイクロプレートの凹所配列に一致した配列とすることが必要となる。これらのプレートに試薬を分与し、そして凹所を洗浄する器具は入手可能であり、分析の工程間での試薬のキャリーオーバーを防ぐのに必要な要件がある。分析の最終工程で凹所内の着色溶液を直読できる分光光度計も容易に入手できる。しかしながら、そのようなことであっても、ディップスティックの凹所からの突出部分とそれらを保持するつかみ具とが分与工程と洗浄工程とで凹所へ容易に接近させないようにする。その結果、ディップスティックの分析ではマイクロウエルにおける従来の分析よりも手作業の工程が多くなったり、設備を特別注文しなければならなくなる。
【００９２】
小さいディスク５０（図４参照）をサンプリングデバイスから取り出すことにより、多数の試料の一括処理ができる。ここで、このディスク５０は、その一面５２上の接着テープ３０へ接着した皮膚試料７０を有している（皮膚試料７０と接着テープ３０とは図が複雑にならないように接着テープ３０として図面には示しているが、サンプリングデバイスを例えば手のひらに当てた後には接着テープ３０の上に皮膚試料７０があると理解すべきである）。次いで、図５に示すように、マイクロプレート５６の凹所５４内でこれらのディスクを処理する。このようにすると凹所の上方に突出部は出なくなり、容易に入手できる自動化液分与・洗浄設備を使ってコレステロール分析のために必要な試薬を分与することができる。ディスクの大きさはマイクロプレートの凹所にピッタリしているが、中で自由に動けないということのない大きさである。例えば、これに限定するのではないが、ディスクの直径は６．０ｍｍよりも小さく、普通につくられているマイクロプレートの凹所にピッタリ入る。小さすぎるディスクは分析感度と再現性との折り合いをつけている皮膚の量に足りないということになる。直径が５〜６ｍｍのディスクが９６凹所マイクロプレートの分析に最適であることが判っている。しかし、本発明をこれらの大きさに限定解釈すべきものではなく、異なる凹所やマイクロプレートでは他のディスクの大きさとなることは当業者には明らかなことであろう。
【００９３】
加えて、ディスクが凹所内に置かれたとき、皮膚側を上にしてディスクが浮くようなことがあってはならない。洗浄工程で挿入される分与チューブや吸引チューブに皮膚側が接触するからである。それ故、サンプリングデバイスが水よりも密度が低い材料から構成されていると、皮膚側を下にして凹所へディスクを加えるべきである。サンプリングデバイスが水よりも密度が高い材料から構成されていると、そのときは分与チューブや吸引チューブの高さを調整して皮膚表面にそれらが接触しないようにして、皮膚側を上にして凹所へディスクを加えるのが最良である。
【００９４】
特別注文のカッティングツールもしくは３／１６インチ（４．７６ｍｍ）の大きさの単孔紙パンチを使ってサンプリングデバイスからディスクを切り出してくることができる。パンチもしくはカッティングツールからディスクを放出するのに使うアンビル形式の部分が皮膚に触れるというようなことがないようにして、デバイスからディスクを切り出さなければならない。こうして、紙パンチを使うときに、ディスクを切り出し、放出する際アンビルはデバイスの後側（皮膚のない側）に接触すべきである。
【００９５】
図６と図７に示されているように、図１のデバイス１０が折畳まれた（閉じられた）状態で、カッティングツール６０がデバイス１０からディスクを切り出す。サンプリング部材１２の外表面６２を上に向けた状態で、閉じたデバイスをしっかりした面（図示せず）上に置く。デバイス１０のサンプリング部材１２の外表面６２につけた円形窪み６４にカッティングツール６０を挿入し、それからカッティングツール６０を押し下げてプラスチックとテープ３０／皮膚試料７０を切り出す。カッティングツール６０をあまり深く押しこまないようにして、デバイス１０の閉止部材１４のプラスチックを切り出さないようにする。
【００９６】
デバイス１０から必要なディスク５０が切り出されると、ディスク５０の付いたカッティングツール６０の端６６をマイクロプレート５６（図８参照）の指定凹所５４に置いて、カッティングツール６０のプランジャー６８を押し下げて接着テープに付けた皮膚試料と一緒にディスクを凹所５４に放出する。
【００９７】
マイクロウエルプレートのすべての指定された凹所にディスクが入れられると、そのマイクロウエルプレートを自動読取・洗浄装置に配置し、そして約１００μＬの検出試薬をすべての凹所に加え、そして２０℃―２４℃の室温で約１５分間ディスクをインキュベートする。その試薬は実例２で詳述したＡ‐Ｃ‐Ｂ試薬の溶液でよい。
【００９８】
それからこの検出試薬を吸引し、そして約２５０μＬの洗浄緩衝液を凹所に加える。洗浄緩衝液を加えたら約３０秒ほどプレートを振って、過剰な検出剤を取除き、それからさらに約９０秒放置する。洗浄工程は必要なら二度もしくはそれ以上繰り返す。３回洗浄すれば満足できることが判っている。
【００９９】
凹所を洗浄したら、約１００μＬのエンハンスド  ケイ・ブルー基質を凹所に加え、そして（先に説明したように）室温である周囲温度で約１５分間その洗浄したディスクをインキュベートする。この工程中マイクロウエルプレートを振って、そして実例２におけるように、暗所でインキュベートする。
【０１００】
凹所へ約１００μＬの１規定の硫酸を加えることにより反応を停止させ、そしてプレートを振って溶液を混合する。約１００μＬのその反応停止の基質を新しいプレートの凹所へ移し、そしてプレートリーディング分光計により約４５０ｎｍで読み、そして先に説明したようにして、各提供者の皮膚コレステロールの相対レベルを決定する。
【０１０１】
上記の実例について、本発明の技術思想の範囲解釈に当たって本発明をそれらの実例に示した数値に限定すべきものではなく、容量、回数、温度そして波長は様々に変更できることは当業者であれば当然理解できることであり、また「約」と言う表現を用いたのもそのためである。
【０１０２】
以下の説明は例示だけのためであって、限定事項ではない。本発明の他の実施例は本文の説明から当業者には明らかであろう。
【０１０３】
ここで説明した実施例は現時点で好ましいと考えられているものであるが、本発明の技術思想の範囲内で様々に変更できるものでもある。本文での開示事項はあくまで例示であって、それだけというものではない。この開示事項は当業者に多くの変形態様を示唆していよう。それらすべての変形態様は本発明の技術的思想の範囲に含まれる。当業者は開示した特定実施例と均等なものが特許請求の範囲に含まれることについて認識することとなろう。
【図面の簡単な説明】
【０１０４】
【図１】実例２に使用のサンプリングデバイスの頂面図である。
【図２】図１のサンプリングデバイスの一部を切り取って、それのサンプリング部材の詳細を示す図である。
【図３】本発明のサンプリングデバイスから切り取ったディップスティックの斜視図である。
【図４】別の実施例のサンプリングデバイスから切り取ったディスクの斜視図である。
【図５】マイクロウエルプレートの凹所に入れた図４のディスクの横断面図である。
【図６】図４のディスクをつくるカッティングツールを持つサンプリングデバイスの斜視図である。
【図７】図４のディスクをつくるカッティングツールを持つサンプリングデバイスの断面図である。
【図８】マイクロウエルプレートの凹所に入れたカッティングツールの横断面図である。
【符号の説明】
【０１０５】
１０      サンプリングデバイス
１２      サンプリング部材
１４      閉止部材
１６      ヒンジ
１８      周辺リム
２０      ピン
２２      周辺溝
２４      孔
２６      タブ
２８      タブ
３０      テープ
３２      ライナー
３２’    はみ出し片
３６      案内線
３８      案内線
４０      ディップスティック
４２      第1の端
４４      第２の端
５０      ディスク
５２      ディスクの一面
５４      凹所
５６      マイクロプレート
６０      カッティングツール
６２      外表面
６４      円形窪み
６８      プランジャー
７０      皮膚試料
【図１】
2007534326.tif 000004
【図２】
2007534326.tif 000005
【図３】
2007534326.tif 000006
【図４】
2007534326.tif 000007
【図５】
2007534326.tif 000008
【図６】
2007534326.tif 000009
【図７】
2007534326.tif 000010
【図８】
2007534326.tif 000011
【手続補正書】
【提出日】平成17年11月10日(2005.11.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）医療用接着剤で少なくとも一側を塗膜したバッキング部材を含むテープを用意し、
ｂ）皮膚の選択区域にテープを接着して適用し、
ｃ）その選択区域からテープを引き剥がしてその皮膚の角質層を表わしている試料を得、当該試料は露出した皮膚成分を持つようにしてテープに接着しており、
ｄ）式Ａ‐Ｃ‐Ｂ（Ａはコレステロールに対する親和性を有する検出剤であり、Ｂは酵素可視化剤であり、Ｃは検出剤と可視化剤とを結合する結合剤である）の親和性酵素化合物の源を用意し、
ｅ）この親和性酵素化合物の所定量を前記の試料の所定の表面区域へ塗布し、そして前記の露出した皮膚成分に存在するコレステロールに前記の検出剤が結合するに足る期間前記の化合物を前記の試料の所定の表面区域と接触させておき、
ｆ）前記の試料の所定の表面区域に発色剤の所定量を塗布し、この発色剤が前記の親和性酵素化合物と反応してコレステロールレベルを色で示す着色物を形成させる
ことを特徴とする皮膚コレステロールの測定法。
【請求項２】
前記の検出剤は、ステロイドグリコシド、トリテルペングリコシド、疎水性たんぱく質、ポリエン抗生剤そして抗コレステロール抗体から成るグループから選択されている請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記の検出剤はステロイドグリコシドである請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記のステロイドグリコシドがジギトニンである請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記の酵素可視化剤がペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ウレアーゼ、ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼそしてアセチルコリンエステラーゼから成るグループから選択されている酵素である請求項１に記載の方法。
【請求項６】
酵素はペルオキシダーゼである請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記のペルオキシダーゼがホースラディッシュペルオキシダーゼである請求項６に記載の方法。
【請求項８】
段階（ｅ）の後でペルオキシダーゼを過酸化水素で活性化して活性化ペルオキシーダーゼを形成し、そして段階（ｆ）で使用される発色剤が前記の活性化ペルオキシーダーゼと反応して前記の着色物を形成する請求項６もしくは７に記載の方法。
【請求項９】
段階（ｆ）において過酸化水素を含む所定量の水溶液と前記の発色剤を前記の試料の所定の表面区域に塗布する請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記の発色剤が２，２’‐アジノ‐ジ（３‐エチルベンズチアゾリン‐６‐スルホン酸）と３，３’，５，５’‐テトラメチルベンジジンから成るグループから選択されている請求項８もしくは９に記載の方法。
【請求項１１】
前記の発色剤が３，３’，５，５’‐テトラメチルベンジジンである請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記の結合剤がマレイン無水物とＮ‐ピロリドンビニルのコポリマーである請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
前記のバッキング部材がポリエステルで形成されている請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記の医療用接着剤が感圧性接着剤である請求項１〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記の医療用接着剤がアクリルをベースとした接着剤である請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
前記の医療用接着剤が合成ゴムエラストマー接着剤である請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
前記の医療用接着剤がシリコーンをベースとした接着剤である請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
前記の医療用接着剤がスチレン‐イソプレン‐スチレンもしくはスチレン‐ブタジエン‐スチレンのブロック重合体から形成されたエラストマーを含有する請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
請求項１に記載の方法を実施するのに使用するキットにおいて、
前記のテープ、
請求項１でＡ、Ｂ、Ｃを定義したＡ‐Ｃ‐Ｂの式で表わされる親和性酵素化合物の源、そして
前記の発色剤の源
を備えることを特徴とするキット。
【請求項２０】
前記の検出剤はステロイドグリコシド、トリテルペングリコシド、疎水性たんぱく質、ポリエン抗生剤そして抗コレステロール抗体から成るグループから選択されている請求項１９に記載のキット。
【請求項２１】
前記の検出剤はステロイドグリコシドである請求項２０に記載のキット。
【請求項２２】
ステロイドグリコシドがジギトニンである請求項２１に記載のキット。
【請求項２３】
前記の酵素可視化剤がペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ウレアーゼ、ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼそしてアセチルコリンエステラーゼから成るグループから選択されている酵素である請求項１９に記載のキット。
【請求項２４】
前記の酵素がペルオキシダーゼである請求項２３に記載のキット。
【請求項２５】
ペルオキシダーゼがホースラディッシュペルオキシダーゼである請求項２４に記載のキット。
【請求項２６】
過酸化水素を含む所定量の水溶液を更に含み、前記の発色剤が当該水溶液に存在する請求項２４もしくは２５に記載のキット。
【請求項２７】
前記の発色剤が２，２’‐アジノ‐ジ（３‐エチルベンズチアゾリン‐６‐スルホン酸）と３，３’，５，５’‐テトラメチルベンジジンから成るグループから選択されている請求項２６に記載のキット。
【請求項２８】
前記の発色剤が３，３’，５，５’‐テトラメチルベンジジンである請求項２７に記載のキット。
【請求項２９】
前記の結合剤がマレイン無水物とＮ‐ピロリドンビニルのコポリマーである請求項１９〜２８のいずれかに記載のキット。
【請求項３０】
前記のバッキング部材がポリエステルで形成されている請求項１９〜２９のいずれかに記載のキット。
【請求項３１】
前記の医療用接着剤が感圧性接着剤である請求項１９〜３０のいずれかに記載のキット。
【請求項３２】
前記の医療用接着剤がアクリルをベースとした接着剤である請求項１９〜３１のいずれかに記載のキット。
【請求項３３】
前記の医療用接着剤が合成ゴムエラストマー接着剤である請求項１９〜３１のいずれかに記載のキット。
【請求項３４】
前記の医療用接着剤がシリコーンをベースとした接着剤である請求項１９〜３１のいずれかに記載のキット。
【請求項３５】
前記の医療用接着剤がスチレン‐イソプレン‐スチレンもしくはスチレン‐ブタジエン‐スチレンのブロック重合体から形成されたエラストマーを含有する請求項１９〜３１のいずれかに記載のキット。
【請求項３６】
ａ）医療用接着剤で少なくとも一側を塗膜したバッキング部材を含むテープを用意し、
ｂ）皮膚の選択区域にテープを接着して適用し、
ｃ）その選択区域からテープを引き剥がしてその皮膚の角質層を表わしている試料を得、当該試料は露出した皮膚成分を持つようにしてテープに接着しており、
ｄ）式Ａ‐Ｃ‐Ｂ’（Ａはコレステロールに対する親和性を有する検出剤であり、Ｂ’はシグナル生成指示剤であり、Ｃは検出剤とシグナル生成指示剤とを結合する結合剤である）のシグナル生成化合物の源を用意し、
ｅ）このシグナル生成化合物の所定量を前記の試料の所定の表面区域へ塗布し、そして前記の露出した皮膚成分に存在するコレステロールに前記の検出剤が結合するに足る期間前記の化合物を前記の試料の所定の表面区域と接触させておき、
ｆ）前記のシグナル生成指示剤が生ぜしめるシグナルを測定してコレステロールのレベルを表わす値を計測する
ことを特徴とする皮膚コレステロールの測定法。
【請求項３７】
前記の検出剤は、ステロイドグリコシド、トリテルペングリコシド、疎水性たんぱく質、ポリエン抗生剤そして抗コレステロール抗体から成るグループから選択されている請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記の検出剤はステロイドグリコシドである請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記のステロイドグリコシドがジギトニンである請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記のシグナル生成指示剤が染料、蛍光体、放射性同位体、金属・ゾル（ｍｅｔａｌ  ｓｏｌ）化合物そして化学発光化合物から成るグループから選択されている請求項３６に記載の方法。
【請求項４１】
前記のシグナル生成指示剤が染料である請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
段階（ｆ）が分光測色法により実施される請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
段階（ｆ）が比色法により実施される請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
前記のシグナル生成指示剤が蛍光体である請求項４０に記載の方法。
【請求項４５】
段階（ｆ）が蛍光分析法により実施される請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記のシグナル生成指示剤が放射性同位体である請求項４０に記載の方法。
【請求項４７】
段階（ｆ）が放射能センサにより実施される請求項４６に記載の方法。  
【請求項４８】
前記のシグナル生成指示剤が金属・ゾル化合物である請求項４０に記載の方法。
【請求項４９】
段階（ｆ）が比色法により実施される請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記のシグナル生成指示剤が化学発光化合物である請求項４０に記載の方法。
【請求項５１】
段階（ｆ）がルミノメトリにより実施される請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記の結合剤がマレイン無水物とＮ‐ピロリドンビニルのコポリマーである請求項３６〜５１のいずれかに記載の方法。
【請求項５３】
前記のバッキング部材がポリエステルで形成されている請求項３６〜５２のいずれかに記載の方法。
【請求項５４】
前記の医療用接着剤が感圧性接着剤である請求項３６〜５３のいずれかに記載の方法。
【請求項５５】
前記の医療用接着剤がアクリルをベースとした接着剤である請求項３６〜５４のいずれかに記載の方法。
【請求項５６】
前記の医療用接着剤が合成ゴムエラストマー接着剤である請求項３６〜５４のいずれかに記載の方法。
【請求項５７】
前記の医療用接着剤がシリコーンをベースとした接着剤である請求項３６〜５４のいずれかに記載の方法。
【請求項５８】
前記の医療用接着剤がスチレン‐イソプレン‐スチレンもしくはスチレン‐ブタジエン‐スチレンのブロック重合体から形成されたエラストマーを含有する請求項３６〜５４のいずれかに記載の方法。
【請求項５９】
請求項３６に記載の方法を実施するのに使用するキットにおいて、
前記のテープ、そして
請求項３０でＡ、Ｂ’、Ｃを定義したＡ‐Ｃ‐Ｂ’の式で表わされる親和性シグナル生成化合物の源
を備えることを特徴とするキット。
【請求項６０】
前記の検出剤はステロイドグリコシド、トリテルペングリコシド、疎水性たんぱく質、ポリエン抗生剤そして抗コレステロール抗体から成るグループから選択されている請求項５９に記載のキット。
【請求項６１】
前記の検出剤はステロイドグリコシドである請求項６０に記載のキット。
【請求項６２】
前記のステロイドグリコシドはジギトニンである請求項６１に記載のキット。
【請求項６３】
前記のシグナル生成指示剤が染料、蛍光体、放射性同位体、金属・ゾル（ｍｅｔａｌ  ｓｏｌ）化合物そして化学発光化合物から成るグループから選択されている請求項５９に記載のキット。
【請求項６４】
前記のシグナル生成指示剤が染料である請求項６３に記載のキット。
【請求項６５】
前記のシグナル生成指示剤が蛍光体である請求項６３に記載のキット。
【請求項６６】
前記のシグナル生成指示剤が放射性同位体である請求項６３に記載のキット。
【請求項６７】
前記のシグナル生成指示剤が金属・ゾル（ｍｅｔａｌ  ｓｏｌ）化合物である請求項６３に記載のキット。
【請求項６８】
前記のシグナル生成指示剤が化学発光化合物である請求項６３に記載のキット。
【請求項６９】
前記の結合剤がマレイン無水物とＮ‐ピロリドンビニルのコポリマーである請求項５９〜６８のいずれかに記載のキット。
【請求項７０】
前記のバッキング部材がポリエステルで形成される請求項５９〜６９のいずれかに記載のキット。
【請求項７１】
前記の医療用接着剤が感圧性接着剤である請求項５９〜７０のいずれかに記載のキット。
【請求項７２】
前記の医療用接着剤がアクリルをベースとした接着剤である請求項５９〜７１のいずれかに記載のキット。
【請求項７３】
前記の医療用接着剤が合成ゴムエラストマー接着剤である請求項５９〜７１のいずれかに記載のキット。
【請求項７４】
前記の医療用接着剤がシリコーンをベースとした接着剤である請求項５９〜７１のいずれかに記載のキット。
【請求項７５】
前記の医療用接着剤がスチレン‐イソプレン‐スチレンもしくはスチレン‐ブタジエン‐スチレンのブロック重合体から形成されたエラストマーを含有する請求項５９〜７１のいずれかに記載のキット。
【請求項７６】
ａ）医療用接着剤で少なくとも一側を塗膜したバッキング部材を含むテープを用意し、
ｂ）皮膚の選択区域にテープを接着して適用し、
ｃ）その選択区域からテープを引き剥がしてその皮膚の角質層を表わしている試料を得、当該試料は露出した皮膚成分を持つようにしてテープに接着しており、
ｄ）コレステロールに対する親和性を有する検出剤としてコレステロール酸化酵素の源を用意し、
ｅ）このコレステロール酸化酵素の所定量を前記の試料の所定の表面区域へ塗布し、そしてコレステロールの酸化と過酸化水素の形成を生ずるに足る期間コレステロール酸化酵素を前記の試料の所定の表面区域と接触させておき、
ｆ）前記の段階（ｅ）で形成されるコレステロールのレベルを示す過酸化水素の量を測定する
ことを特徴とする皮膚コレステロールの測定法。
【請求項７７】
段階（ｆ）を電気化学的センサにより実施する請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
段階（ｆ）を電極を使って電流滴定法により実施する請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
ペルオキシダーゼを加えた後で分光測色法により、そして比色定量インディケータによって段階（ｆ）を実施する請求項７６に記載の方法。
【請求項８０】
前記のペルオキシダーゼがホースラディッシュペルオキシダーゼである請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記の比色定量インディケータが２，２’‐アジノ‐ジ（３‐エチルベンズチアゾリン‐６‐スルホン酸）である請求項７９もしくは８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記の比色定量インディケータが３，３’，５，５’‐テトラメチルベンジジンである請求項７９もしくは８０に記載の方法。
【請求項８３】
前記の比色定量インディケータがトリンダー（Ｔｒｉｎｄｅｒ）もしくはゴレンフォッフ（Ｎｇｏ‐Ｌｅｎｈｏｆｆ）タイプの多成分酸化性試薬である請求項７９もしくは８０に記載の方法。
【請求項８４】
前記のバッキング部材がポリエステルで形成されている請求項７６〜８３のいずれかに記載の方法。
【請求項８５】
前記の医療用接着剤が感圧性接着剤である請求項７６〜８４のいずれかに記載の方法。
【請求項８６】
前記の医療用接着剤がアクリルをベースとした接着剤である請求項７６〜８５のいずれかに記載の方法。
【請求項８７】
前記の医療用接着剤が合成ゴムエラストマー接着剤である請求項７６〜８５のいずれかに記載の方法。
【請求項８８】
前記の医療用接着剤がシリコーンをベースとした接着剤である請求項７６〜８５のいずれかに記載の方法。
【請求項８９】
前記の医療用接着剤がスチレン‐イソプレン‐スチレンもしくはスチレン‐ブタジエン‐スチレンのブロック重合体から形成されたエラストマーを含有する請求項７６〜８５のいずれかに記載の方法。
【請求項９０】
請求項７６に記載の方法を実施するのに使用するキットにおいて、
前記のテープ、そして
前記のコレステロール酸化酵素の源
を備えることを特徴とするキット。
【請求項９１】
請求項７９に記載の方法を実施するのに使用するキットにおいて、
前記のテープ、
前記のコレステロール酸化酵素の源、
ペルオキシダーゼの源、そして
比色定量インディケータの源
を備えることを特徴とするキット。
【請求項９２】
前記のペルオキシダーゼがホースラディッシュペルオキシダーゼである請求項９１に記載のキット。  
【請求項９３】
前記の比色定量インディケータが２，２’‐アジノ‐ジ（３‐エチルベンズチアゾリン‐６‐スルホン酸）である請求項９１もしくは９２に記載のキット。
【請求項９４】
前記の比色定量インディケータが３，３’，５，５’‐テトラメチルベンジジンである請求項９１もしくは９２に記載のキット。
【請求項９５】
前記のバッキング部材がポリエステルで形成されている請求項９０〜９４のいずれかに記載のキット。
【請求項９６】
前記の医療用接着剤が感圧性接着剤である請求項９０〜９５のいずれかに記載のキット。  
【請求項９７】
前記の医療用接着剤がアクリルをベースとした接着剤である請求項９０〜９６のいずれかに記載のキット。
【請求項９８】
前記の医療用接着剤が合成ゴムエラストマー接着剤である請求項９０〜９６のいずれかに記載のキット。
【請求項９９】
前記の医療用接着剤がシリコーンをベースとした接着剤である請求項９０〜９６のいずれかに記載のキット。
【請求項１００】
前記の医療用接着剤がスチレン‐イソプレン‐スチレンもしくはスチレン‐ブタジエン‐スチレンのブロック重合体から形成されたエラストマーを含有する請求項９０〜９６のいずれかに記載のキット。
【請求項１０１】
前記のテープが閉止可能デバイスに担持され、この閉止可能デバイスはテープを担持しているサンプリング部材とこのサンプリング部材と係合してデバイス内にテープを保持する閉止部材とを有している請求項１９〜３５、５９〜７５そして９０〜１００のいずれかに記載のキット。
【請求項１０２】
前記の閉止部材がサンプリング部材と係合するときテープはデバイス内に密封される請求項１０１に記載のキット。
【請求項１０３】
閉止部材もしくはサンプリング部材の少なくとも一方には周辺リムを設け、そして他方の閉止部材もしくはサンプリング部材にはリムを受ける周辺溝を設けてテープがデバイス内に密封されるようにした請求項１０２に記載のキット。
【請求項１０４】
前記の閉止部材はヒンジでサンプリング部材へ接続されている請求項１０１〜１０３のいずれかに記載のキット。
【請求項１０５】
前記のサンプリング部材の少なくとも一部はディップスティックを形成するよう閉止可能デバイスから切り取られるようになっており、このディップスティックは、その第一の端にはテープがなく、そして第二の端にはテープがある請求項１０１〜１０４のいずれかに記載のキット。
【請求項１０６】
前記のサンプリング部材の少なくとも一部はディスクを形成するよう閉止可能デバイスから切り取られるようになっており、このディスクの一面にはテープを設けてある請求項１０１〜１０４のいずれかに記載のキット。
【請求項１０７】
前記のデバイスからディスクを切り出すカッティングツールをさらに備えている請求項１０６に記載のキット。
【請求項１０８】
前記の閉止可能デバイスの外面にマーカーを付けてカッティングツールを当てる場所を示すようにした請求項１０７に記載のキット。
【請求項１０９】
ディスク切り出し後カッターの端からディスクを排出するプランジャーを前記のカッティングツールに設けた請求項１０７もしくは１０８に記載のキット。
【請求項１１０】
ａ）表面を有するサンプリング部材、
ｂ）このサンプリング部材の表面の少なくとも一部分に設けたテープであって、このテープが当該表面から離されて存在する医療用接着剤を有しており、そして
ｃ）サンプリング部材に係合するようになっており、サンプリング部材に係合したとき、デバイス内にテープの少なくとも一部を密閉するようになっている閉止部材
を備えることを特徴とする皮膚試料を得るのに使うテープ剥離デバイス。
【請求項１１１】
少なくとも閉止部材もしくはサンプリング部材には周辺リムを設け、そして他方の閉止部材もしくはサンプリング部材にはリムを受けるようにした周辺溝を設けてテープがデバイス内に密封されるようにした請求項１１０に記載のデバイス。
【請求項１１２】
閉止部材はヒンジによりサンプリング部材に連結されている請求項１１０〜１１１のいずれかに記載のデバイス。
【請求項１１３】
前記のサンプリング部材の少なくとも一部はディップスティックを形成するよう閉止可能デバイスから切り取られるようになっており、このディップスティックは、その第一の端にはテープがなく、そして第二の端にはテープがある請求項１１０〜１１２のいずれかに記載のデバイス。
【請求項１１４】
サンプリング部材の少なくとも一部分はディスクを形成するため閉止可能デバイスから切り離されるようになっており、ディスクの一面にはテープを設けてある請求項１１０〜１１２に記載のデバイス。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
本発明の目的は以上の欠点を解消し、そして大量選別を可能とする、簡単で、非侵入的な皮膚コレステロール測定方法を提供することである。本発明の目的は、さらに、皮膚試料を採取する際に使用されるテープ剥離デバイスを提供することにある。
【国際調査報告】
2007534326.tif 000012
2007534326.tif 000013
2007534326.tif 000014