【手続補正書】
【提出日】平成27年12月18日(2015.12.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式５ａによる化合物
【化１】
2013139440.tif 000001
の調製方法であって、
（ｉ）１−プロパンホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ）の存在下で９ａと１１を反応させて、化合物１３ａを作製するステップと、
【化２】
2013139440.tif 000002
（ｉｉ）少なくとも５０％がＴＨＦであるＴＨＦ：Ｈ２Ｏ溶液中で、Ｐｄ／Ｃを用いた化合物１３ａの接触水素化を行って、式１４ａの化合物を生成するステップと、
【化３】
2013139440.tif 000003
（ｉｉｉ）塩基を実質上使用しない反応において、１４ａのＴＨＦ溶液を、式１５による化合物と合わせて、化合物６ａを生成するステップと、
【化４】
2013139440.tif 000004
（ｉｖ）ＴＨＦ中にてＤＣＣの存在下で式６ａによる化合物を式１９ａによる化合物と反応させて、化合物２０ａを生成するステップと、
【化５】
2013139440.tif 000005
（ｖ）２０ａを、非プロトン性極性第１５番溶媒に溶解させたε−アミノ含有ペプチド２と合わせて、化合物３ａを生成するステップと、
【化６】
2013139440.tif 000006
（ｖｉ）化合物３ａをＤＭＳＯに溶解させるステップと、
（ｖｉｉ）ステップ（ｖｉ）のＤＭＳＯおよび３ａからなる溶液に、５．５〜７．５の間のｐＨのヒスチジン緩衝液を加えるステップと、
（ｖｉｉｉ）ステップ（ｖｉｉ）の溶液に、配列番号５を含む軽鎖可変部と、配列番号６を含む重鎖可変部とを含む抗体を、ペプチド：抗体モル比が１．８：１〜３：１の間になるように加えるステップと、
（ｉｘ）ステップ（ｖｉｉｉ）において形成した混合物を、ｐＨ５．５〜ｐＨ７．５の間および５℃〜３５℃の間の温度で、反応混合物が泡立つのを回避するように中程度のスピードで少なくとも１時間撹拌するステップと、
（ｘ）（ｉｘ）からの溶液を濾過して、得られたペプチド−リンカー抗体コンジュゲート５ａを抽出するステップと
を含み、
ｑ＝１、２、３、４または５であり、Ｘ＝ＦまたはＣｌであり、ｍ＝３、４または５である方法。
【請求項２】
式３ａによる化合物
【化７】
2013139440.tif 000007
の調製方法であって、
（ｉ）１−プロパンホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ）の存在下で９ａと１１を反応させて、化合物１３ａを作製するステップと、
【化８】
2013139440.tif 000008
（ｉｉ）少なくとも５０％がＴＨＦであるＴＨＦ：Ｈ２Ｏ溶液中で、Ｐｄ／Ｃを用いた化合物１３ａの接触水素化を行って、式１４ａの化合物を生成するステップと、
【化９】
2013139440.tif 000009
（ｉｉｉ）塩基を実質上使用しない反応において、１４ａのＴＨＦ溶液を、式１５による化合物と合わせて、化合物６ａを生成するステップと、
【化１０】
2013139440.tif 000010
（ｉｖ）ＴＨＦ中にてＤＣＣの存在下で式６ａによる化合物を式１９ａによる化合物と反応させて、化合物２０ａを生成するステップと、
【化１１】
2013139440.tif 000011
（ｖ）２０ａを、非プロトン性極性第１５番溶媒に溶解させたε−アミノ含有ペプチド２と合わせて、バイオコンジュゲート３ａを生成するステップと
【化１２】
2013139440.tif 000012
を含み、
ｑ＝１、２、３、４または５であり、Ｘ＝ＦまたはＣｌであり、ｍ＝３、４または５である方法。
【請求項３】
式１３ａの化合物
【化１３】
2013139440.tif 000013
［式中、ｑは、１、２、３、４または５である］の調製方法であって、
【化１４】
2013139440.tif 000014
を、１−プロパンホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ）の存在下で反応させることを特徴とする方法。
【請求項４】
テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、２−メチルテトラヒドロフラン、１−メチル−２−ピロリジノン（ＮＭＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）、１−メチル−２−ピロリジノン、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）、およびアセトニトリル（ＭｅＣＮ）からなる群から選択される第１番溶媒の存在下で９ａと１１の反応を実施する、またはトリメチルアミン、トリエチルアミン、トリブチルアミン、ＤＩＰＥＡ、ピリジン、ＤＢＵ、ＤＡＢＣＯ、２，３−ルチジン、２，４−ルチジン、２，５−ルチジン、２，６−ルチジン、３，４−ルチジン、３，５−ルチジンからなる群から選択される第１番塩基の存在下で反応を実施する、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
式１４ａの化合物
【化１５】
2013139440.tif 000015
［式中、ｑは、１、２、３、４または５である］の調製方法であって、Ｐｄ／Ｃを用いた化合物１３ａの接触水素化
【化１６】
2013139440.tif 000016
を行うステップを含み、
ＴＨＦが、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、および少なくとも９０％からなる群から選択される量であるＴＨＦ：Ｈ２Ｏ溶液中で反応を実施することを特徴とする方法。
【請求項６】
ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ中での水素化より前に、化合物１３ａを活性炭での処理にかける、請求項１、２または５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
活性炭が、ＳＸ−Ｐｌｕｓ、Ｄａｒｃｏ（登録商標）Ｓ−５１ＨＦ、Ｅ  Ｓｕｐｒａ  ＵＳＰ、ＳＸ−Ｕｌｔｒａ、ＣＡＳＰ、Ｄａｒｃｏ（登録商標）Ｇ−６０、およびＣＧＳＰからなる群から選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
式６ａの化合物
【化１７】
2013139440.tif 000017
［式中、ｑ＝１、２、３、４または５である］の調製方法であって、化合物１４ａ
【化１８】
2013139440.tif 000018
を、ＴＨＦを含む第６番溶媒に溶かした溶液を、化合物１５
【化１９】
2013139440.tif 000019
と反応させるステップを含み、
実質上塩基を使用せずに反応を実施することを特徴とする方法。
【請求項９】
化合物６ａの溶液を真空中で蒸留し、続いて酢酸Ｃ１〜Ｃ４アルキルを含む第７番溶媒を加えて、２５％ＴＨＦ／７５％酢酸Ｃ１〜Ｃ４アルキル〜１００％酢酸Ｃ１〜Ｃ４アルキルの間の溶媒組成を実現する、請求項１、２または８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
第７番溶媒が、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸ｉ−プロピル、酢酸ｎ−プロピル、酢酸ｎ−ブチルからなる群から選択され、好ましくは酢酸ｉ−プロピルである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
第６番溶媒と第７番溶媒の比が２５：７５〜０：１００の間である、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１２】
式６ａによる化合物の結晶化方法であって、
（ｉ）酸６ａを、ＴＨＦを含む第８番溶媒に溶解させるステップと、
（ｉｉ）場合により、活性炭で処理し、次いで前記活性炭を濾別するステップと、
（ｉｉｉ）ＴＨＦ溶液中の酸６ａを２体積〜２０体積の間に濃縮するステップと、
（ｉｖ）２−プロパノールからなる、１体積〜５０体積の間の第９番溶媒を加えるステップと、
（ｖ）酸６ａをＴＨＦおよび２−プロパノールに溶かした溶液を２体積〜５０体積の間に濃縮するステップと、
（ｖｉ）濃縮した酸６の溶液を−２５℃〜１０℃の間に冷却するステップと
を含む方法。
【請求項１３】
式２０ｂによる化合物の調製方法であって、第１０番溶媒中にてＤＣＣの存在下で式６ｂによる化合物を式１９ａによる化合物と反応させるステップを含み、
【化２０】
2013139440.tif 000020
ｑ＝１、２、３、４または５であり、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０であり、Ｘ＝ＦまたはＣｌであり、ｍ＝３、４または５である方法。
【請求項１４】
ε−アミノ含有ペプチド２を式６ｂのリンカーとコンジュゲート形成させる方法であって、
（ｉ）ペプチド２を非プロトン性極性第１５番溶媒に溶解させるステップと、
（ｉｉ）ＴＨＦ中で６ｂを１当量〜１０当量の間の１９ａと反応させて、化合物２０ｂを生成するステップと、
（ｉｉｉ）２０ｂをペプチド２と合わせて、バイオコンジュゲート３ｂを生成するステップと
を含み、
【化２１】
2013139440.tif 000021
【化２２】
2013139440.tif 000022
ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０であり、ｑ＝１、２、３、４または５であり、Ｘ＝ＦまたはＣｌであり、ｍ＝３、４または５である方法。
【請求項１５】
少なくとも１当量の化合物１９ａを化合物６ａまたは６ｂに加える、請求項１、２、１３または１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
ＤＣＣを、−１０℃〜＋１０℃の間の温度で反応に加える、請求項１、２、１３、１４または１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
化合物１９ａと６ａまたは６ｂとの反応を、ＴＨＦ、ジクロロメタン、２−メチルテトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、およびＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドからなる群から選択される第１０番溶媒中で実施する、請求項１、２、１３、１４、１５または１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
化合物１９ａと６ａまたは６ｂとの反応を、ＴＨＦ中で実施する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ＸがＦであり、ｍが５である、請求項１、２、および１３から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
式３ｂのペプチドを抗体とコンジュゲート形成させる方法であって、
（ｉ）化合物３ｂ
【化２３】
2013139440.tif 000023
をＤＭＳＯに溶解させるステップと、
（ｉｉ）ステップ（ｉ）のＤＭＳＯおよび３ｂからなる溶液に、５．５〜７．５の間のｐＨのヒスチジン緩衝液を加えるステップと、
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）の溶液に、配列番号５を含む軽鎖可変部と、配列番号６を含む重鎖可変部とを含み、２％（ｗ／ｗ）のスクロースを含有する１０ｍＭのヒスチジンおよび１０ｍＭのグリシンの緩衝液からなる溶液中にある抗体を、ペプチド：抗体モル比が１．８：１〜３：１の間になるように加えるステップと、
（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）において形成した混合物を、ｐＨ５．５〜ｐＨ７．５の間および５℃〜３５℃の間の温度で、反応混合物が泡立つのを回避するように中程度のスピードで少なくとも１時間撹拌するステップと、
（ｖ）（ｉｖ）からの溶液を濾過して、得られたペプチド−リンカー抗体コンジュゲート５ｂ
【化２４】
2013139440.tif 000024
を抽出するステップと
を含み、
ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０であり、ｑ＝１、２、３、４または５である方法。
【請求項２１】
抗体が、配列番号９、１０、１１および１２からなる群から選択される配列、または１個〜５個の間のアミノ酸置換、欠失、もしくは挿入を含むこれらの変異体を含む軽鎖定常部と、配列番号１３および１４からなる群から選択される配列、または１個〜５個の間のアミノ酸置換、欠失、もしくは挿入を含むこれらの変異体を含む重鎖定常部とを含む、請求項１、または２０に記載の方法。
【請求項２２】
抗体が、配列番号３、または１個〜５個の間のアミノ酸置換、欠失、もしくは挿入を含むその変異体を含む軽鎖と、配列番号４、または１個〜５個の間のアミノ酸置換、欠失、もしくは挿入を含むその変異体を含む重鎖とを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
ｑ＝２であり、存在する場合ｎ＝１であり、存在する場合ｍ＝５であり、存在する場合Ｘ＝Ｆである、請求項１から２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
化合物１３、化合物１３ａ、化合物１４、化合物１４ａ、化合物６、化合物６ａ、化合物６ｂ、化合物２０、化合物２０ａ、化合物２０ｂ、化合物２０ｃ、化合物２０ｄ、化合物２０ｅ、化合物３、化合物３ａ、化合物３ｂ、化合物５、化合物５ａ、および化合物５ｂからなる群から選択される化合物の生成における、請求項１から２３のいずれか一項に記載の方法の使用。
【請求項２５】
次式
【化２５】
2013139440.tif 000025
［式中、ｑは、１、２、３、４または５であり、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０であり、Ｘは、任意のハロゲンであり、ｍ＝３、４または５である］からなる群から選択される構造を含む化合物。