(57)【要約】  本発明はｒａｆ，ＶＥＧＦＲ，ＰＤＧＦＲ，ｐ３８および／またはＦＬＴ−３の少なくとも一つを含む信号形質導入経路に関連した病気および状態を処置するためアリール尿素を使用する方法を提供する。本発明はまた、本発明の化合物によって変調することができる状態および病気を同定するための組成物および方法を提供する。これらの方法は本発明の化合物によって効果的に処置することができる対象の選択を容易化する。加えて、本発明は本発明の化合物を投与された対象をモニターするための方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式Ｉの化合物で処置された対象から得られたサンプル中のＲａｆ，ＶＥＧＦＲ−２，ＶＥＧＦＲ−３，ｐ３８，ＰＤＧＦＲ−βおよび／またはＦｌｔ−３の発現または活性を測定することよりなる、哺乳類対象の病気またはそれから誘導される細胞の処置において式Ｉの化合物の有効性を評価する方法：
Ｂ−ＮＨ−C（Ｏ）−ＮＨ−Ｌ−M−Ｌ’−（Ｑ）１−３      （Ｉ）
式中、Ｂは、次の（ｉ）ないし（ｉｖ）よりなる群から選ばれる。
（ｉ）任意にＲ1 ，ＯＲ1 ，ＮＲ1 Ｒ2 ，Ｓ（Ｏ）q Ｒ1 ，ＳＯ2 ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 ＳＯ2 Ｒ2 ，Ｃ（Ｏ）Ｒ1 ，Ｃ（Ｏ）ＯＲ1 ，Ｃ（Ｏ）ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）ＯＲ2 ，ハロゲン、シアノおよびニトロよりなる群から独立に選ばれた１〜３の置換基で置換されたフェニル；
（ii）任意にＲ1 ，ＯＲ1 ，ＮＲ1 Ｒ2 ，Ｓ（Ｏ）q Ｒ1 ，ＳＯ2 ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 ＳＯ2 Ｒ2 ，Ｃ（Ｏ）Ｒ1 ，Ｃ（Ｏ）ＯＲ1 ，Ｃ（Ｏ）ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）ＯＲ2 ，ハロゲン、シアノおよびニトロよりなる群から独立に選ばれた１〜３の置換基で置換されたナフチル；
（iii)任意にＲ1 ，ＯＲ1 ，ＮＲ1 Ｒ2 ，Ｓ（Ｏ）q Ｒ1 ，ＳＯ2 ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 ＳＯ2 Ｒ2 ，Ｃ（Ｏ）Ｒ1 ，Ｃ（Ｏ）ＯＲ1 ，Ｃ（Ｏ）ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）ＯＲ2 ，ハロゲン、シアノおよびニトロよりなる群から独立に選ばれた１〜３の置換基で置換された、Ｏ，ＮおよびＳよりなる群から独立に選ばれた１〜３のヘテロ原子を持っている５および６員単環ヘテロアリール基；および
（iv) ８ないし１０員の２環ヘテロアリール基であって、第１の環は式ＩのＮＨへ結合し、そしてＯ，ＮおよびＳよりなる群から独立に選ばれた１〜３のヘテロ原子を含み、第２の環は３ないし４個の炭素原子を使用して第１の環へ縮合している２環ヘテロアリールである。この２環ヘテロアリール基は任意にＲ1 ，ＯＲ1 ，ＮＲ1 Ｒ2 ，Ｓ（Ｏ）q Ｒ1 ，ＳＯ2 ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 ＳＯ2 Ｒ2 ，Ｃ（Ｏ）Ｒ1 ，Ｃ（Ｏ）ＯＲ1 ，Ｃ（Ｏ）ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）ＯＲ2 ，ハロゲン、シアノおよびニトロよりなる群から独立に選ばれた１〜３の置換基で置換されている。
Ｌは次の（ｉ）ないし（iｖ) よりなる群から選ばれる。
（ｉ）任意にＣ1 −Ｃ5 直鎖もしくは分岐アルキル、Ｃ1 −Ｃ5 直鎖もしくは分岐ハロアルキル、Ｃ1 −Ｃ3 アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ1 −Ｃ3 アルキルアミノ、Ｃ1 −Ｃ6 ジアルキルアミノ、ハロゲン、シアノおよびニトロよりなる群から独立に選ばれた１〜３の置換基で置換されたフェニル；
（ii) 任意にＣ1 −Ｃ5 直鎖もしくは分岐アルキル、Ｃ1 −Ｃ5 直鎖もしくは分岐ハロアルキル、Ｃ1 −Ｃ3 アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ1 −Ｃ3 アルキルアミノ、Ｃ1 −Ｃ6 ジアルキルアミノ、ハロゲン、シアノおよびニトロよりなる群から独立に選ばれた１〜３の置換基で置換されたナフチル；
（iii)任意にＣ1 −Ｃ5 直鎖もしくは分岐アルキル、Ｃ1 −Ｃ5 直鎖もしくは分岐ハロアルキル、Ｃ1 −Ｃ3 アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ1 −Ｃ3 アルキルアミノ、Ｃ1 −Ｃ6 ジアルキルアミノ、ハロゲン、シアノおよびニトロよりなる群から独立に選ばれた１〜３の置換基で置換された、Ｏ，ＮおよびＳよりなる群から独立に選ばれた１〜３のヘテロ原子を有する５および６員単環ヘテロアリール基；
（iv) 任意にＣ1 −Ｃ5 直鎖もしくは分岐アルキル、Ｃ1 −Ｃ5 直鎖もしくは分岐ハロアルキル、Ｃ1 −Ｃ3 アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ1 −Ｃ3 アルキルアミノ、Ｃ1 −Ｃ6 ジアルキルアミノ、ハロゲン、シアノおよびニトロよりなる群から独立に選ばれた１〜３の置換基で置換された、Ｏ，ＮおよびＳよりなる群から独立に選ばれた１〜３のヘテロ原子を有する８ないし１０員の２環ヘテロアリール基。
Ｍは、
（ａ）−（ＣＨ2 ）m −Ｏ−（ＣＨ2 ）1 −、
（ｂ）−（ＣＨ2 ）m −（ＣＨ2 ）1 −、
（ｃ）−（ＣＨ2 ）m −Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ2 ）1 −、
（ｄ）−（ＣＨ2 ）m −ＮＲ3 −（ＣＨ2 ）1 −、
（ｅ）−（ＣＨ2 ）m −ＮＲ3 Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ2 ）1 −、
（ｆ）−（ＣＨ2 ）m −Ｓ−（ＣＨ2 ）1 −、
（ｇ）−（ＣＨ2 ）m −Ｃ（Ｏ）ＮＲ3 −（ＣＨ2 ）1 −、
（ｈ）−（ＣＨ2 ）m −ＣＦ2 −（ＣＨ2 ）1 −、
（ｉ）−（ＣＨ2 ）m −ＣＣｌ2 −（ＣＨ2 ）1 −、
（ｊ）−（ＣＨ2 ）m −ＣＨＦ−（ＣＨ2 ）1 −、
（ｋ）−（ＣＨ2 ）m −ＣＨ（ＯＨ）−（ＣＨ2 ）1 −、
（ｌ）−（ＣＨ2 ）m −Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ2 ）1 −、
（ｍ）−（ＣＨ2 ）m −Ｃ＝Ｃ−（ＣＨ2 ）1 −、                                  （ｏ）−（ＣＨ2 ）m −ＣＲ4 Ｒ5 −（ＣＨ2 ）1 −、                              （ｎ）ｍおよびｌが０の場合の単結合、
よりなる群から選ばれ、ここで変数ｍおよび１は独立に０〜４から選ばれた整数である。
Ｌ’は次の（ｉ）ないし（viii）よりなる群から選ばれる。
（ｉ）任意にＲ1 ，ＯＲ1 ，ＮＲ1 Ｒ2 ，Ｓ（Ｏ）q Ｒ1 ，ＳＯ2 ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 ＳＯ2 Ｒ2 ，Ｃ（Ｏ）Ｒ1 ，Ｃ（Ｏ）ＯＲ1 ，Ｃ（Ｏ）ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）ＯＲ2 ，ハロゲン、シアノおよびニトロよりなる群から独立に選ばれたＱ以外の追加の１〜２の置換基で置換されたフェニル；
（ii) 任意にＲ1 ，ＯＲ1 ，ＮＲ1 Ｒ2 ，Ｓ（Ｏ）q Ｒ1 ，ＳＯ2 ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 ＳＯ2 Ｒ2 ，Ｃ（Ｏ）Ｒ1 ，Ｃ（Ｏ）ＯＲ1 ，Ｃ（Ｏ）ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）ＯＲ2 ，ハロゲン、シアノおよびニトロよりなる群から独立に選ばれたＱ以外の追加の１〜２の置換基で置換されたナフチル、
（iii)任意にＲ1 ，ＯＲ1 ，ＮＲ1 Ｒ2 ，Ｓ（Ｏ）q Ｒ1 ，ＳＯ2 ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 ＳＯ2 Ｒ2 ，Ｃ（Ｏ）Ｒ1 ，Ｃ（Ｏ）ＯＲ1 ，Ｃ（Ｏ）ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）ＯＲ2 ，ハロゲン、シアノ、ニトロおよびオキサイド（例えば＝Ｏ，−Ｏ- または−ＯＨ）よりなる群から独立に選ばれたＱ以外の追加の１〜２の置換基で置換された、Ｏ，ＮおよびＳよりなる群から独立に選ばれた１〜３のヘテロ原子を持っている５および６員単環ヘテロアリール基；
（iv) 任意にＲ1 ，ＯＲ1 ，ＮＲ1 Ｒ2 ，Ｓ（Ｏ）q Ｒ1 ，ＳＯ2 ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 ＳＯ2 Ｒ2 ，Ｃ（Ｏ）Ｒ1 ，Ｃ（Ｏ）ＯＲ1 ，Ｃ（Ｏ）ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）ＯＲ2 ，ハロゲン、シアノ、ニトロおよびオキサイド（例えば＝Ｏ，−Ｏ- または−ＯＨ）よりなる群から独立に選ばれたＱ以外の追加の１〜２の置換基で置換された、Ｏ，ＮおよびＳよりなる群から独立に選ばれた１〜３のヘテロ原子を持っている８ないし１０員２環ヘテロアリール基；
（ｖ）任意にＲ1 ，ＯＲ1 ，ＮＲ1 Ｒ2 ，Ｓ（Ｏ）q Ｒ1 ，ＳＯ2 ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 ＳＯ2 Ｒ2 ，Ｃ（Ｏ）Ｒ1 ，Ｃ（Ｏ）ＯＲ1 ，Ｃ（Ｏ）ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）ＯＲ2 ，ハロゲン、シアノ、ニトロおよびオキサイド（例えば＝Ｏ，−Ｏ- または−ＯＨ）よりなる群から独立に選ばれたＱ以外の追加の１〜２の置換基で置換された、飽和および部分的飽和Ｃ3 −Ｃ6 単環炭素環基；
（vi) 任意にＲ1 ，ＯＲ1 ，ＮＲ1 Ｒ2 ，Ｓ（Ｏ）q Ｒ1 ，ＳＯ2 ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 ＳＯ2 Ｒ2 ，Ｃ（Ｏ）Ｒ1 ，Ｃ（Ｏ）ＯＲ1 ，Ｃ（Ｏ）ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）ＯＲ2 ，ハロゲン、シアノおよびニトロよりなる群から独立に選ばれたＱ以外の追加の１〜２の置換基で置換された飽和および部分的飽和Ｃ8 −Ｃ10２環炭素環基；
（vii)任意にＲ1 ，ＯＲ1 ，ＮＲ1 Ｒ2 ，Ｓ（Ｏ）q Ｒ1 ，ＳＯ2 ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 ＳＯ2 Ｒ2 ，Ｃ（Ｏ）Ｒ1 ，Ｃ（Ｏ）ＯＲ1 ，Ｃ（Ｏ）ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）ＯＲ2 ，ハロゲン、シアノ、ニトロおよびオキサイド（例えば＝Ｏ，−Ｏ- または−ＯＨ）よりなる群から独立に選ばれた１〜３の置換基で置換された、Ｏ，ＮおよびＳよりなる群から独立に選ばれたＱ以外の追加の１〜２のヘテロ原子を持っている飽和および部分的飽和５および６員単環複素環基；
（viii) 任意にＲ1 ，ＯＲ1 ，ＮＲ1 Ｒ2 ，Ｓ（Ｏ）q Ｒ1 ，ＳＯ2 ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 ＳＯ2 Ｒ2 ，Ｃ（Ｏ）Ｒ1 ，Ｃ（Ｏ）ＯＲ1 ，Ｃ（Ｏ）ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）ＯＲ2 ，ハロゲン、シアノ、ニトロおよびオキサイド（例えば＝Ｏ，−Ｏ- または−ＯＨ）よりなる群から独立に選ばれたＱ以外の追加の１〜２の置換基で置換された、Ｏ，ＮおよびＳよりなる群から独立に選ばれた１〜３のヘテロ原子を持っている飽和および部分的飽和８ないし１０員２環複素環基。
ここで各Ｑは独立に、Ｃ（Ｏ）Ｒ４，Ｃ（Ｏ）ＯＲ４およびＣ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５であり；Ｒ１ないしＲ５は独立に、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１−Ｃ５直鎖、分岐または環状アルキル、
（ｃ）フェニル、
（ｄ）アルキル部分が任意にペルハロまでハロゲンで任意に置換されたＣ１−Ｃ３アルキル−フェニル、
（ｅ）ペルハロまで置換されたＣ１−Ｃ５直鎖、分岐アルキル、
（ｆ）−（ＣＨ２）ｑ−Ｘであって、ここでＸは飽和、部分飽和もしくは芳香性のＯ，ＮおよびＳから選ばれた１〜４原子を含んでいる５または６員単環複素環か、またはＯ，ＮおよびＳからなるヘテロ原子１〜４を有する８ないし１０員２環ヘテロアリールであり、そしてここで前記アルキル部分は任意にペルハロまでハロゲン置換されており；
ここでペルハロ置換Ｃ１−Ｃ５直鎖、分岐アルキル以外のＲ１−Ｒ５の各自は、任意にＣ１−Ｃ５直鎖または分岐アルキル、Ｃ１−Ｃ３アルコキシ、ヒドロキシ、カルボキシ、アミノ、Ｃ１−Ｃ３アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ６ジアルキルアミノ、ハロゲン、シアノおよびニトロよりなる群から選ばれた１−３の置換基で置換されており；
ここで変数ｐは０，１または２から選ばれた整数であり、変数ｑは０，１，２，３または４から選ばれた整数である。
【請求項２】
前記発現の測定は、Ｒａｆ，ＶＥＧＦＲ−２，ＶＥＧＦＲ−３，ｐ３８，ＰＤＧＦＲ−β，および／またはＦｌｔ−３に対応するｍＲＮＡの量を決定することである請求項１の方法。
【請求項３】
前記発現の測定は、Ｒａｆ，ＶＥＧＦＲ−２，ＶＥＧＦＲ−３，ｐ３８，ＰＤＧＦＲ−β，および／またはＦｌｔ−３に対応するポリペプチドの量を決定することである請求項１の方法。
【請求項４】
前記活性の測定は、ホスフォ−ＥＲＫの測定である請求項１の方法。
【請求項５】
前記対象は癌を有し、そして前記活性の測定は末梢血液リンパ球かまたは癌の組織生検サンプル中のホスフォ−ＥＲＫの測定である請求項１の方法。
【請求項６】
前記サンプル中の発現または活性を正常対照と比較することを含む請求項１ないし５のいずれかの方法。
【請求項７】
前記化合物による処置する前の少なくとも一つのサンプル中、および前記化合物による処置後の少なくとも一つのサンプル中の発現または活性を比較することをさらに含む請求項１ないし６のいずれかの方法。
【請求項８】
前記化合物による処置療法中の異なる時点で採取した少なくとも二つのサンプル中の発現を測定することをさらに含む請求項１ないし７のいずれかの方法。
【請求項９】
発現または活性の減少は前記化合物が前記病気の処置において有効であることを指示する請求項１ないし８のいずれかの方法。
【請求項１０】
前記病気は腎細胞カルチノーマまたは黒色腫である請求項１ないし９のいずれかの方法。
【請求項１１】
前記サンプルは腫瘍細胞からなる請求項１ないし１０のいずれかの方法。
【請求項１２】
前記サンプルは末梢血液細胞よりなる請求項１ないし１１のいずれかの方法。
【請求項１３】
式Ｉの化合物を複数の時点で投与することをさらに含む請求項１ないし１１のいずれかの方法。
【請求項１４】
病気を有する対象から得たサンプル中のＲａｆ，ＶＥＧＦＲ−２，ＶＥＧＦＲ−３，ｐ３８，ＰＤＧＦＲ−β，および／またはＦｌｔ−３の発現または活性を測定し、そして高レベルの発現または活性を有するとして同定された対象に対して請求項１の式Ｉの化合物を投与することよりなる、式Ｉの化合物による処置のための病気を有する対象を選択する方法。
【請求項１５】
対象から得たサンプル中の病気に関連したＲａｆ，ＶＥＧＦＲ−２，ＶＥＧＦＲ−３，ｐ３８，ＰＤＧＦＲ−β、および／またはＦｌｔ−３遺伝子突然変異の存在を決定し、そして前記突然変異を有するとして同定された対象に対して請求項１の式Ｉの化合物を投与することよりなる、式Ｉの化合物による処置のための病気を有する対象を選択する方法。
【請求項１６】
前記突然変異はＢＲＡＦ遺伝子中である請求項１５の方法。
【請求項１７】
前記ＢＲＡＦ突然変異は前記遺伝子がコードする配列のアミノ酸位置５９９である請求項１６の方法。
【請求項１８】
前記ＢＲＡＦ突然変異はＶ５９９Ｅである請求項１７の方法。
【請求項１９】
前記病気は黒色腫である請求項１５ないし１８のいずれかの方法。
【請求項２０】
それを必要とする対象へ、請求項１の式Ｉのアリール尿素化合物、式Ｉの化合物の塩、式Ｉの化合物の単離したまたは混合立体異性体、式Ｉの化合物のエステル、式Ｉの化合物の代謝物、または式Ｉの化合物のプロドラッグの有効量を投与することよりなる、哺乳類または哺乳類細胞の病気または状態を処置または防止する方法。
【請求項２１】
前記方法は腫瘍細胞増殖阻害のためである請求項２０の方法。
【請求項２２】
前記有効量は腫瘍退行をもたらす請求項２１の方法。
【請求項２３】
前記方法は癌を有する対象またはそれからの細胞の腫瘍退行をもたらす請求項２０ないし２２のいずもかの方法。
【請求項２４】
前記方法はリンパ管形成を阻害する請求項２０の方法。
【請求項２５】
前記方法は血管形成を阻害する請求項２０の方法。
【請求項２６】
前記方法は、Ｒａｆ，ＶＥＧＦＲ−２，ＶＥＧＦＲ−３，ｐ３８，ＰＤＧＦＲ−β，および／またはＦｌｔ−３によって仲介される哺乳類対象の障害を処置する請求項２０の方法。
【請求項２７】
前記方法はそれを必要とする対象の腫瘍を処置することよりなり、該方法は腫瘍増殖および新脈管化を阻害するための有効量の前記化合物を投与することよりなる請求項２０の方法。
【請求項２８】
式Ｉの化合物において、
Ｌは任意に１−４のハロゲンで置換されたフェニル；
Ｍは−Ｏ−；
ＢはＲ１およびハロゲンよりなる群から独立に選ばれた１−６の置換基で任意に置換されたフェニルまたはピリジル；
Ｌ’は任意に置換されたフェニルまたはピリジル；
である請求項１の方法。
【請求項２９】
ＢおよびＬ’のための置換基は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、イソプロピル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、メトキシ、エトキシ、Ｆ，Ｃｌ，ＢｒおよびＩよりなる群から選ばれる請求項２８の方法。
【請求項３０】
式Ｉの化合物の薬学的に許容し得る塩は、
ａ）塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、トリフルオロスルホン酸、ベンゼンスルホルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、シュウ酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、安息香酸、サリチル酸、フェニル酢酸、およびマンデル酸よりなる群から選ばれた有機酸および無機酸の塩基塩；および
ｂ）アルカリ金属カチオン、アルカリ土類、金属カチオン、アンモニウムカチオン、脂肪族置換アンモニウムカチオン、および芳香族置換アンモニウムカチオンよりなる群から選ばれたカチオンを含んでいる有機および無機塩基の酸塩；
よりなる群から選ばれる請求項１の方法。
【請求項３１】
ある化合物で処置された対象から得たサンプル中のＲａｆ，ＶＥＧＦＲ−２，ＶＥＧＦＲ−３，ｐ３８，ＰＤＧＦＲ−β，および／またはＦｌｔ−３の発現または活性を測定し、前記発現または活性に対する前記化合物の効果を決定することよりなる、哺乳類対象またはそれから誘導された細胞の病気の処置において前記化合物の有効性を評価する方法であって、
前記化合物は、
Ｎ−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−(Ｎ−メチルカルバモイル)−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素；
Ｎ−（４−ブロモ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−(Ｎ−メチルカルバモイル)−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素；
Ｎ−（４−ブロモ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−(Ｎ−メチルカルバモイル)−４−ピリジルオキシ）−２−クロロフェニル）尿素；
Ｎ−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−カルバモイル−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素；
Ｎ−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（１−ヒドロキシ−２−カルバモイル−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素；
Ｎ−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（１−ヒドロキシ−２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素；
Ｎ−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）−２−フルオロフェニル）尿素；
Ｎ−（４−ブロモ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）−２−フルオロフェニル）尿素；
Ｎ−（４−フルオロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ−（４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）−２−フルオロフェニル）尿素；
Ｎ−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ−（４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）−２−クロロフェニル）尿素；
Ｎ−（６−（２，２，４，４−テトラフルオロ−４Ｈ−ベンゾ〔１，３〕ジオキシニル））−Ｎ’−（４−（２−シアノ−４−ピリジルキシ）フェニル）尿素；または
Ｎ−（６−（２，２，４，４−テトラフルオロ−４Ｈ−ベンゾ〔１，３〕ジオキシニル））−Ｎ’−（４−（２−シアノ−４−ピリジルキシ）−２−フルオロフェニル）尿素；
である方法。
【請求項３２】
式Ｉの化合物は以下の式Ｘである請求項１の方法：
【化１】
2007511203.tif 000047
式中、
Ａは、任意にＲ３によって３回まで置換されたフェニルであり、各Ｒ３は独立にＣ１−Ｃ５アルキル、ペルハロまでのＣ１−Ｃ５ハロアルキル、ハロゲン、シアノまたはニトロ、または
Ａは、任意に６回までＲ４によって置換され、各Ｒ４は独立にＣ１−Ｃ５アルコキシかハロゲンである下記式の基であり；
【化２】
2007511203.tif 000048
Ｂは、任意に３回までＲ２によって置換され、各Ｒ２は独立にＣ１−Ｃ５アルキル、ペルハロまでのＣ１−Ｃ５ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ５アルコキシ、ハロゲン、シアノまたはニトロであるフェニレンまたはナフチレンであり；
Ｑは、シアノ、−Ｃ（Ｏ）Ｒａまたは−Ｃ（Ｏ）ＲｂＲｃであり、ここでＲａ，ＲｂおよびＲｃは独立にＨまたはＣ１−Ｃ５アルキルであり；
Ｌは−Ｏ−または−Ｓ−であり；
ｍは０，１，２または３であり；そして
各Ｒ１は独立にハロゲン、Ｃ１−Ｃ５アルキル、ペルハロまでのＣ１−Ｃ５ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ５アルコキシ、Ｎ−オキソまたはＮ−ヒドロキシである。
【請求項３３】
式Ｘの化合物において、各Ｒ２は独立にフッ素、塩素、臭素、メチル、エチル、プロピル、ブチル、イソプロピル、ｔ−ブチル、トリフルオロメチル、メトキシ、ＣＮまたはＮＯ２である請求項３２の方法。
【請求項３４】
式Ｘの化合物において、各Ｒ３は独立にフッ素、塩素、臭素、メチル、エチル、プロピル、ブチル、イソプロピル、ｔ−ブチル、トリフルオロメチル、メトキシ、ＣＮまたはＮＯ２であり、各Ｒ４は独立にフッ素、塩素、臭素またはメチルである請求項３２または３３の方法。
【請求項３５】
式Ｘの化合物において、各Ｒ１は独立にメチル、エチル、プロピル、酸素、シアノ、Ｎ−オキソまたはＮ−ヒドロキシであり、そして各Ｒａ，ＲｂおよびＲｃは独立にＨまたはメチルである請求項３２ないし３４のいずれかの方法。
【請求項３６】
式Ｘの化合物において、Ａは置換フェニルである請求項３２ないし３５のいずれかの方法。
【請求項３７】
式Ｘの化合物において、Ａは任意に４回までＲ４によって置換され、各Ｒ４は独立に塩素またはフッ素である下記式の基である請求項３２ないし３５のいずれかの方法：
【化３】
2007511203.tif 000049
【請求項３８】
式Ｘの化合物において、Ｂはフェニレンである請求項３２ないし３７のいずれかの方法。
【請求項３９】
式Ｘの化合物において、Ｂはナフチレンである請求項３２ないし３７のいずれかの方法。
【請求項４０】
式Ｘの化合物において、Ｂは少なくとも一つのフッ素原子によって置換されたフェニレンである請求項３２ないし３７のいずれかの方法。
【請求項４１】
式Ｘの化合物において、Ｌは酸素である請求項３２ないし４０のいずれかの方法。
【請求項４２】
式Ｘの化合物において、各Ｒ３は塩素、臭素、ｔ−ブチル、トリフルオロメチル、またはメトキシである請求項３２ないし４１のいずれかの方法。
【請求項４３】
式Ｘの化合物において、
Ａは４−クロロ−３−トリフルオロメチルフェニル、４−フルオロ−３−トリフルオロメチルフェニル、４−ブロモ−３−トリフルオロメチルフェニル、または２，２，４，４−テトラフルオロ−４Ｈ−ベンゾ〔１，３〕ジオキシン−６−イルであり；
Ｂはフェニレン、クロロフェニレンまたはフルオロフェニレンであり；
Ｌは−Ｏ−であり；そして
Ｑはシアノ、Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２、またはＣ（Ｏ）−ＮＨＣＨ３である、請求項３２の方法。
【請求項４４】
式（Ｘ）の化合物の薬学的に許容し得る有機酸の塩基塩が使用される請求項３２ないし４３のいずれかの方法。
【請求項４５】
塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、１−ナフタレンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、シュウ酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、安息香酸、サリチル酸、フェニル酢酸またはマンデル酸から選ばれた有機酸の式Ｘの化合物の薬学的に許容し得る塩基塩が投与される請求項３２ないし４３のいずれかの方法。
【請求項４６】
式Ｘの化合物は、
Ｎ−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−２−フルオロ−（４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、または
Ｎ−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素、
の薬学的に許容し得る塩酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、またはメタンスルホン酸である請求項３２の方法。
【請求項４７】
ある化合物処置された対象から得たサンプル中のＲａｆ，ＶＥＧＦＲ−２，ＶＥＧＦＲ−３，ｐ３８，ＰＤＧＦＲ−β、および／またはＦｌｔ−３の発現または活性を測定し、前記発現または活性に対する前記化合物の効果を決定することよりなる、哺乳類対象またはそれから誘導された細胞の病気の処置において前記化合物の有効性を評価する方法であって、
前記化合物は、
式Ｘ，Y，ＺＡ、ＺＢ，ＺＣまたはＺＤのアリール尿素；
式Ｘ，Y，ＺＡ、ＺＢ，ＺＣまたはＺＤの化合物の塩；
式Ｘ，Y，ＺＡ、ＺＢ，ＺＣまたはＺＤの化合物の単離された立体異性退またはその混合物；
式Ｘ，Y，ＺＡ、ＺＢ，ＺＣまたはＺＤの化合物のエステル；
式Ｘ，Y，ＺＡ、ＺＢ，ＺＣまたはＺＤの化合物の代謝物；
式Ｘ，Y，ＺＡ、ＺＢ，ＺＣまたはＺＤの化合物のプロドラッグ；
であり、
【化４】
2007511203.tif 000050
式中、
各Ｒ３は独立にハロゲンまたはトリフルオロメチル；
各Ｒ２は独立にフッ素、塩素、臭素、メチル、トリフルオロメチル、メトキシ、ＣＮまたはＣＮ；
変数ｎは０，１，２，３または４；そして
変数ｐは０，１または２；
である、方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
ｒａｓ信号形質導入経路の活性化は、細胞増殖、分化および形質転換に対し深いインパクトを有する出来事のカスケードを指示する。ｒａｓの下流エフェクターであるＲａｆキナーゼは、細胞表面レセプターから細胞核へのこれら信号のキーメディエーターとして認められている（Ｌｏｗｙ，Ｄ．Ｒ．；Ｗｉｌｌｕｍｓｅｎ，Ｂ．Ｗ．Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９９３，６２，８５１；Ｂｏｓ．Ｊ．Ｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９８９，４９，４６８２）。ｒａｆキナーゼに対する非活性抗体の投与により、または優生ネガティブｒａｆキナーゼもしくはｒａｆキナーゼの基質である優生ネガティブＭＥＫの同時発現によりｒａｆキナーゼ信号経路を阻害することにより、活性ｒａｓの効果を阻害することは、形質転換された細胞の正常表現型への逆転へ導くことが示された（Ｄａｕｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１９９４，１９，４７４−８０；Ｆｒｉｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９４，２６９，３０１０５−８を見よ）。Ｋｏｌｃｈ  ｅｔ  ａｌ（Ｎａｔｕｒｅ  １９９１，３４９，４２６−４２８）は、アンチセンスＲＮＡによるｒａｆキナーゼ発現の阻害は膜関連癌遺伝子において細胞増殖をブロックすることをさらに指示した。同様に、ｒａｆキナーゼの阻害（アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドによる）は、種々のヒト腫瘍タイプとインビボおよびインビトロにおいて相関した。（Ｍｏｎｉａ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１９９６，２，６８５−７５）。Ｒａｆキナーゼ活性の小分子阻害剤は癌の処置のための重要な剤である（Ｎａｕｍａｎ，Ｕ．；Ｅｉｓｎｍａｎｎ−Ｔａｐｐｅ，Ｉ．；Ｒａｐｐ，Ｕ．Ｒ．Ｒｅｃｅｎｔ  Ｒｅｓｕｌｔｓ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９７，１４３，２３７；Ｍａｎｉａ，Ｂ．Ｐ．；Ｊ．Ｆ．；Ｇｅｉｇｅｒ，Ｔ．；Ｍｕｌｌｅｒ，Ｍ．；Ｆａｂｂｒｏ，Ｄ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １９９６，２，６６３）。
【０００２】
１−２ｍｍ３のサイズをこえて進行性腫瘍の成長を支持するためには、線維芽細胞、平滑筋細胞、内皮細胞、細胞外マトリックスタンパク、および可溶性因子よりなる支持構造である機能的ストローマを必要とする（Ｆｏｌｋｍａｎ，Ｊ．，Ｓｅｍｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２００２，２９（６  ｓｕｐｐｌ１６），１５−８）。腫瘍はＰＤＧＦのような可溶性成長因子および形質転換成長因子β（ＴＧＴ−β）のような可溶性成長因子の分泌を通じてストローマ組織の形成を誘発し、このことが次に線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）および脈管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）のようなホスト細胞による相補因子の分泌を刺激する。これらの刺激因子は、腫瘍へ酸素および栄養を運び、そしてそれが成長しそして転移のためのルートを提供することを許容する、新しい血管の形成または脈管形成を誘発する。宿主ストローマ中で血管形成を誘発するため腫瘍によって利用される多数のキー信号経路に対して多能性活性を有する新規な剤の開発の需要が存在する。これらはストローマ形成の強力なスティミュレーターであるＰＤＧＦ（Ｏｓｔｍａｎ，Ａ．ａｎｄ  Ｃ．Ｈ．Ｈｅｌｄｉｎ，Ａｄｖ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００１，８０，１−３８）、線維芽細胞および内皮細胞に対するケモアトラクタントおよびミトゲンであるＴＧＦ、および脈管化の強化なレギュレーターであるＶＥＧＦを含む。
【０００３】
ＰＤＧＦは、パラクリン態様で多数の腫瘍によって分泌され、そして線維芽細胞、平滑筋および内皮細胞の成長を促進し、ストローマ形成および脈管形成を促進するストローマ形成の他のレギュレーターである。ＰＤＧＦは当初サル内腫ウイルスのｖ−ｓｉｓ癌遺伝子生産物として同定された（Ｈｅｌｄｉｎ，Ｃ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ  ｓｕｐｐｌ，１９８５，３，６５−７６）。この成長因子はＡ鎖およびＢ鎖と呼ばれる二つのペプチド鎖からできており、両者はそれらの主アミノ酸配列において６０％相同性を占める。これらの鎖はＡＡ，ＢＢまたはＡＢホモまたはヘテロダイマーのいずれかよりなる３０ｋDａ成熟タンパクを形成するように架橋したジサルファイドである。ＰＤＧＦは血小板中に高いレベルで発見され、そして内皮細胞および脈管平滑筋細胞によって発現される。加えて、ＰＤＧＦの生産は貧弱に脈管化された腫瘍組織に見られるような低酸素条件下で上方へ調節される（Ｋｏｕｒｅｍｂａｎａｓ  Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．１９９７，５１（２），４３８−４３）。ＰＤＧＦは高い親和性をもって１１０６アミノ酸１２４ｋＤａ膜横断チロシンキナーゼレセプターであるＰＤＧＦレセプターへ結合する（Ｈｅｌｄｉｎ，Ｃ．Ｈ．，Ａ．Ｏｓｔｍａｎ，ａｎｄ  Ｌ．Ｒｏｎｎｓｔｒａｎｄ，Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ，１９９８，１３７８（１），７９−１１３）。ＰＤＧＦＲはアミノ酸配列において全体として３０％相同性とそしてそれらのキナーゼドメインの間で６４％相同性を有するホモまたはヘテロダイマー鎖として見出される（Ｈｅｌｄｉｎ，Ｃ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ，Ｅｍｂｏ  Ｊ．１９８８，７（５），１３８７−９３）。ＰＤＧＦＲはＶＥＧＦＲ２（ＫＤＲ），ＶＥＧＦＲ３（Ｆｌｔ４），ｃ−ｋｉｔおよびＦＬＴ３を含むキナーゼドメインに分かれるチロシンキナゼレセプターのファミリーメンバーである。これらすべては腫瘍血管形成、成長および生存を促進する役目を持っている。ＰＤＧＦレセプターは主として線維芽細胞、平滑筋細胞および周皮細胞上に、そして少ない程度でニューロン、腎臓メサンギウムおよび中枢神経系のＬｅｙｄｉｇおよびＳｃｈｗａｎｎ細胞上に発現される。
【０００４】
そのレセプターへ結合する時、ＰＤＧＦはレセプター二量化を誘発し、そしてチロシン残基の自家およびトランスホスフォリル化を受け、これがレセプターのキナーゼ活性を増強し、そしてＳＨ２タンパク結合ドメインの活性化を通じて下流エフェクターの補充を促進する。ＰＩ−３−キナーゼ、ホスフォリパーゼＣ−ガンマ、ｓｒｃおよびＧＡＰ（ｐ２１−ｒａｓのためのＧＴＰファーゼ活性化タンパク）を含む多数の信号分子が活性化されたＰＤＧＦＲと複合体を形成する（Ｓｏｓｋｉｃ，Ｖ．ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９９，３８（６），１７５７−６４）。ＰＩ−３−キナーゼの活性化を通じて、ＰＤＧＦはＲｈｏ信号経路を活性化し、細胞生存性および移動性を誘発し、ＧＡＰの活性化を通じてｐ２１−ｒａｓおよびＭＡＰＫ信号経路の活性化によりミトゲン形成を誘発する。
【０００５】
成人において、ＰＤＧＦの主要な機能は創傷治癒の容易化と速度増大と、そして血管ホメオスタシスの維持であると信じられる（Ｂａｋｅｒ，Ｅ．Ａ．ａｎｄ  Ｄ．Ｊ．Ｌｅａｐｅｒ，Ｗｏｕｎｄ  Ｒｅｐａｉｒ  Ｒｅｇｅｎ，２０００，８６５），３９２−８；Ｙｎ，Ｊ．Ａ．Ｍｏｏｎ  Ａｎｄ  Ｈ．Ｒ．ｋｉｍ，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ，２００１，２８２（３），６９７−７００）。ＰＤＧＦは血小板中に高濃度に見出され、そして線維芽細胞、平滑筋細胞、好中球およびマクロファージのための強力なケモアトラクタントである。創傷治癒における役割に加えて、ＰＤＧＦは脈管ホモオスタシスの維持を助けることが知られている。新しい血管の発達の間、ＰＤＧＦは血管の構造的一体性のために必要な周皮細胞および平滑筋細胞を補給する。ＰＤＧＦは腫瘍新生脈管化の間も同様な役割を果すものと考えられる。脈管形成におけるその役割の一部として、ＰＤＧＦは間隙流体圧力をコントロールし、結合組織細胞と細胞外マトリックス間の相互作用の調節を通じて脈管の透過性を調節する。ＰＤＧＦＲ活性の阻害は間隙圧力を低下させ、腫瘍への細胞毒剤の流入を容易化し、これらの剤の抗腫瘍効果を改善することができる（Ｐｉｅｔｒａｓ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，２００２，６２（１９），５４７６−８４；Ｐｉｅｔｒａｓ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，２００１，６１（７），２９２９−３４）。
【０００６】
ＰＤＧＦはストローマ細胞または腫瘍細胞上のＰＤＧＦＲを直接オートクリンまたはパラクリン刺激することにより、または該レセプターの増幅または組換えによる該レセプターの活性化により、腫瘍成長を促進することができる。ＰＤＧＦの過度の発現は、恐らくストローマ形成および血管形成の誘発に対するＰＤＧＦの直接効果によってＰＤＧＦを発現しない二つの細胞タイプ、ヒトメラノーマ細胞およびケラチノサイトを形質転換し得る（Ｆｏｒｓｂｅｒｇ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，１９９３，９０（２），２９３−７；Ｓｋｏｂｅ，Ｍ．ａｎｄ  Ｎ．Ｅ．Ｆｕｓｅｎｉｇ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，１９９８，９５（３），１０５０−５）。この腫瘍ストローマのパラクリン刺激は、腫瘍がレセプターではなくＰＤＧＦを発現する、大腸、肺、乳房および前立腺のカルチノーマにも観察される（Ｂｈａｒｄｗａｊ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｅｒ  Ｒｅｓ，１９９６，２（４），７７３−８２；Ｎａｋａｎｉｓｈｉ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ，Ｍｏｄ  Ｐａｔｈｏｌ，１９９７，１０（４），３４１−７；Ｓｕｎｄｂｅｒｇ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ，１９９７，１５１（２），４７９−９２；Ｌｉｎｄｍａｒｋ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ，Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ，１９９３，６９（６），６８２−９；Ｖｉｇｆｎａｕｄ，Ｊ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，１９９４，５４（２０），５４５５−６３）。分析した腫瘍の大部分がリガンドＰＤＧＦとそのレセプターを発現する腫瘍細胞成長のオートクリン刺激は、膠芽腫（Ｆｌｅｍｉｎｇ，Ｔ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，１９９２，５２（１６），４５５０−３）、軟組織内腫（Ｗａｎｇ，Ｊ．，Ｍ．Ｄ．Ｃｏｌｔｒｅｒａ  ａｎｄ  Ａ．Ｍ．Ｇｏｗｎ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，１９９４，５４（２），５６０−４）、および卵巣癌（Ｈｅｎｒｉｋｓｅｎ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ，Ｃｅｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，１９９３，５３（１９），４５５０−４）、前立腺（Ｆｕｄｇｅ，Ｋ．，Ｃ．Ｙ．Ｗａｎｇ，ａｎｄ  Ｍ．Ｅ．Ｓｔｅａｒｎｓ，Ｍｏｄ  Ｐａｔｈｏｌ，１９９４，７（５），５４９−５４）、膵臓（Ｆｕｎａ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，１９９２，８９（９），３９４２−６）、および肺（Ａｎｔｏｎｉａｄｅｓ，Ｈ．Ｎ．ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，１９９２，８９（９），３９４２−６）において報告されている。このレセプターのリガンド非依存性活性化は少ない程度で見出され、しかし染色体配座イベントがＥｔｓ様転写因子ＴＥＬとＰＤＧＦレセプターの間の融合タンパクを生成する慢性骨髄単細胞白血病（ＣＭＭＬ）中に報告されている。加えてＰＤＧＦＲにおける突然変異の活性化は、ｃ−ｋｉｔ活性化が含まれない胃腸ストローマ腫瘍中に報告されている（Ｈｅｉｎｒｉｃｈ，Ｍ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００３，９，９）。
【０００７】
ＰＤＧＦＲ阻害剤は腫瘍ストローマ発達を妨害し、そして過度の副作用なしで腫瘍成長および転移を阻害するであろう。腫瘍分泌ＰＤＧＦに応答してストローマ細胞によって分泌されるＶＥＧＦおよびＦＧＦのような追加因子がストローマ形成、血管形成および腫瘍発達において決定的役割を果す。
【０００８】
胚芽発達およびある種の血管形成依存性疾病の両方における血管形成および脈管形成の他の主要なレギュレーターは脈管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ，脈管透過性因子ＶＰＦとも呼ばれる）である。ＶＥＧＦは代替ＲＮＡスプライシングによるホモダイマー形に存在するミトゲンのアイソフォームのファミリーを代表する。ＶＥＧＦアイソフォームは脈管内皮細胞に対して高度に特異性であることが報告されている（レビューについて、Ｆａｒｒａｔａ  ｅｔ  ａｌ，Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｖ．１９９２，１３，１８；Ｎｅｕｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．１９９９，１３，９を見よ）。
【０００９】
ＶＥＧＦ発現は低酸素症（Ｓｈｗｅｉｋｉ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  １９９２，３５９，８４３）により、そしてインターロイキン−１、インターロイキン−６、上皮細胞成長因子および形質転換成長因子のような種々のサイトカインおよび成長因子によって誘発される。今日までＶＥＧＦおよびＶＥＧＦファミリーメンバーは一以上の三つの膜横断レセプターチロシンキナーゼ（Ｍｕｓｔｏｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ，１９９５，１２９，８９５）へ、ＶＥＧＦレセプター１（ｆｉｔ−１（ｆｍｓ様チロシンキナーゼ−１）としても知られる）、ＶＥＧＦＲ−２（キナーゼドメイン含有レセプター（ＫＤＲ）としても知られ、ＫＤＲのネズミ類縁体は胎児肝臓キナーゼ−１（ｆ１ｋ−１）として知られる）、およびＶＥＧＦＲ−３（ｆ１t−４として知られる）と結合することが報告されている。KDRおよびｆ1ｔ−１は異なる信号形質導入性質を持つことが示された（Ｗａｌｔｅｎｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，１９９４，２６９，２６９８８；Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９９５，１０，１３５）。このようにＫＤＲはインタクトな細胞中で強いリガンド依存性チロシンホスフォリール化を受けるが、ｆ１ｔ−１は弱い応答を示す。このためＫＤＲへの結合はＶＥＧＦ仲介生物学的応答の全スペクトルの誘発のための決定的必要性である。
【００１０】
インビボにおいてＶＥＧＦは脈管形性において中心的役割を果し、そして血管形成および血管の透過性化を誘発する。規制されないＶＥＧＦ発現は、異常な血管形成および／または高透過性プロセスを特徴とする多数の病気の発展へ寄与する。ＶＥＧＦ仲介信号形質導入の規制は異常な血管形成および／または高透過性プロセスのコントロールのための有用なモードを提供するであろう。
【００１１】
血管形成は腫瘍が約１−２ｍｍをこえて成長するための重要な必須要件であると考えられる。酸素および栄養はこの限界より小さい腫瘍中の細胞へ拡散によって供給されることができる。しかしながらすべての腫瘍はそれが一定のサイズに達した後は継続して成長するためには血管形成に依存する。腫瘍の低酸素領域内の腫瘍形成性細胞は、新しい血管の形成を刺激するように無活動内皮細胞の活性化を引金するＶＥＧＦ生産の刺激によって応答する（Ｓｈｗｅｉｋｉ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ１  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ，１９９５，９２，７６８）。加えて、血管形成がない腫瘍領域におけるＶＥＧＦ生産はｒａｓ信号形質導入経路を通って進行し得る（Ｇｒｕｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９５，２７０，２５９  １５；Ｒａｋ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９５，５５，４５７５）。その場のハイブリダイゼーション研究は、ＶＥＧＦｍＲＮＡが肺（Ｍａｔｔｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｅｒ  Ｒｅｓ．１９９３，５３，４７２７；Ｓｕｚｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９５，５６，３００４），腎臓および膀こう（Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｌ．１９９３，１４３１，１２５５）；卵巣（Ｏｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９４，５４，１２５５）；および頸部（Ｇｕｉｄｉ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．１９９５，８７，１２１３７）カルチノーマ、それに血管肉腫（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９９５，７３，８５９）およびいくつかの頸蓋内腫瘍（Ｐｌａｔｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  １９９２，３５９，８４５；Ｐｈｉｌｌｉｐｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌ  １９９３，２，９１３；Ｂｅｒｋｍａｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９９３，９１，１５３）を含む、多種類のヒト腫瘍において強い上方調節されることが示された。ＫＤＲに対する中和モノクローナル抗体は腫瘍血管形成をブロックするに有効であることが示された（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  １９９３，３６２，８４１；Ｒｏｃｋｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｄｉｆｆｅｒ．１９９５，３，３１５）。
【００１２】
例えば極端な低酸素症の条件下でのＶＥＧＦの過剰発現は眼内血管形成へ導き、最終的には失明へ導く血管の高増殖をもたらし得る。そのような出来事のカスケートは、糖尿病、網膜症、虚血性網膜静脈塞栓、および未熟網膜症を含む多数の網膜症について（Ａｉｅｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．１９９４，３３１，１４８０；Ｐｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９９５，７２，６３８）および年令関連班退化（ＡＭＤ，Ｌｏｐｅｚ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．１９９５，３７，８５５）について観察された。
【００１３】
リュウマチ性関節炎（ＲＡ）においては、脈管パンヌスの内方成長は血管形成因子の生産によって仲介され得る。ＲＡ患者の滑液中では免疫反応性ＶＥＧＦのレベルが高く、退化的関節症を有する関節炎の他の形の患者の滑液においてはＶＥＧＦレベルは低い（Ｋｏｃｈ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４，１５２，４１４９）。血管形成阻害剤ＡＧＭ−１７０はラットコラーゲン関節炎モデルにおいて関節の新脈管化を阻止することが示された（Ｐｅａｃｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｅｘｐｅｒ．Ｍｅｄ．１９９２，１７５，１１３５）。
【００１４】
増加したＶＥＧＦ発現は乾癬皮膚、それに水疱性天疱瘡、多形紅斑、疱疹状皮膚炎のような上皮下水疱形成に関連した水疱性障害にも示された（Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１９９５，１０４，７４４）。
【００１５】
脈管内皮成長因子（ＶＥＧＦ，ＶＥＧＦ−Ｃ，ＶＥＧＦ−Ｄ）およびそれらのレセプター（ＶＥＧＦＲ２，ＶＥＧＦＲ３）は腫瘍血管形成ばかりでなく、リンパ管形成キーレギュレーターである。ＶＥＧＦ，ＶＥＧＦ−ＣおよびＶＥＧＦ−Ｄは主として腫瘍成長の間、そしてしばしば実質的に増大したレベルにおいて大部分の腫瘍において発現される。ＶＥＧＦ発現は低酸素症、サイトカイン、ｒａｓのような癌遺伝子により、または癌抑制遺伝子の不活性化によって刺激される（ＭｃＭａｈｏｎ，Ｇ．Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ  ２０００，５（Ｓｕｐｐｌ．１），３−１０；ＭｃＤｏｎａｌｄ，Ｎ．Ｑ；Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓｏｎ  Ｗ．Ａ．Ｃｅｌｌ  １９９３，７３，４２１−４２４）。
【００１６】
ＶＥＧＦの生物学活性はそれらのレセプターへの結合を通じて仲介される。ＶＥＧＦＲ３（Ｆ１ｔ−４とも呼ばれる）は正常成人組織中のリンパ管内皮に発現される。ＶＥＧＦＲ３機能は新しいリンパ管形成に必要であるが、しかし既存のリンパ管の維持には必要でない。ＶＥＧＦＲ３は腫瘍中の血管内皮においても上方調節される。ＶＥＧＦＲ３のリガンドであるＶＥＧＦ−ＣおよびＶＥＧＦ−Ｄは哺乳類のリンパ管形成のレギュレーターとして同定された。腫瘍関連リンパ管形成因子によって誘発されるリンパ管形成は腫瘍中へ新しい脈管の成長を促進し、全身循環への腫瘍細胞のアクセスを提供し得る。リンパ管へ侵入した細胞は胸管を経由して血流中へのそれらの進路を見出すことができる。腫瘍発現研究は、一次腫瘍が拡がる能力に直接関係する臨床病理学的要因（例えばリンパ節関与、リンパ管侵襲、二次的転移、および無病生存率）とのＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−ＤおよびＶＥＧＦＲ−３の直接の比較を許容した。多くの場合、これら研究はリンパ球形成因子と一次固形腫瘍が転移する能力との間に統計学的相関性を証明した（Ｓｋｏｂｅ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．２００１，７（２），１９２−１９８；Ｓａｃｋｅｒ，Ｓ．Ａ．ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．２００１，７（２），１８６−１９１；Ｍａｋｉｎｅｎ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．２００１，７（２），１９９−２０５；Ｍａｎｄｒｉｏｔａ，Ｓ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ，ＥＭＢＯ  Ｊ．２００１，２０（４），６７２−８２；Ｋａｒｐａｎｅｎ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００１，６１（５），１７８６−９０；Ｋｕｂｏ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ  ２０００，９６（２），５４６−５３）。
【００１７】
低酸素症は癌細胞におけるＶＥＧＦ生産のための重要な刺激であるらしい。ｐ３８ＭＡＰキナーゼの活性化が低酸素症に応答して腫瘍細胞によるＶＥＧＦ誘発のために必要である（Ｂｌａｓｃｈｋｅ，Ｆ．ｅｔ  ａｌ，Ｏｒａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２００２，３８，２５１−２５７）。ＶＥＧＦ分泌の調節を通ずる血管形成長への関与に加えて、ｐ３８ＭＡＰキナーゼは、癌細胞侵入、およびコラゲナーゼ活性の調節およびウロキナーゼプラスミノゲンアクチベーター発現を通じて異なるタイプの腫瘍の移動を促進する（Ｌａｆｆｅｒｒｉｅｒｅ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００１，２７６，３３７６２−３３７７２；Ｗｅｓｔｅｒｍａｒｃｋ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０００，６０，７１５６−７１６２；Ｈｕａｎｇ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２０００，２７５，１２２６６−１２２７２；Ｓｉｍｏｎ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ，Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ，２００１，２７１，３４４−３５５）。それ故ｐ３８キナーゼの阻害は血管形成および癌細胞侵入に関連する信号カスケードを妨害することにより、腫瘍成長にインパクトを与えることが期待される。
【００１８】
いくつかのジアリール尿素は、セリン−スレオニンキナーゼおよびチロシンキナーゼ阻害剤としての活性を有するとして記載されている。癌、血管形成障害および炎症性障害のための医薬組成物の活性成分としての有用性が示されている。以下の文献を参照。Ｒｅｄｆｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００１，１１，９−１２；Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ，ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００１，１１，２７７５−２７７８；Ｄｕｍａｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｉｏｏｒｇ，Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２０００，１０，２０４７−２０５０；Ｄｕｍａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ，Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２０００，１０，２０５１−２０５４；Ｒａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｏｏｋ  ｏｆ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ，２２０ｔｈ  ＡＣＳ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ，ＵＳＡ，ＭＥＤＩ  １４９；Ｄｕｍａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ，Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００２，１２，１５５９−１５６２；Ｌｏｗｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０００，６（ｓｕｐｐｌ．），３３５；Ｌｙｏｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒ−Ｒｅｌａｔ．Ｃａｎｃｅｒ  ２００１，８，２１９−２２５，Ｒｉｅｄｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｏｏｋ  ｏｆ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ，９２ｎｄ  ＡＡＣＲ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｎｅｗ  Ｏｒｌｅａｎｓ，ＬＡ，ＵＳＡ，ａｂｓｔｒａｃｔ  ４９５６；Ｋｈｉｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｏｏｋ  ｏｆ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ，９３ｒｄ  ＡＡＣＲ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ，ＵＳＡ，ａｂｓｔｒａｃｔ  ４２１１；Ｌｏｗｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓｉｇｎ  ２００２，８，９９−１１０；Ｒｅｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００２，４５，２９９４−３００８；Ｐａｒｇｅｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２００２，９（４），２６８−２７２；Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｏｏｋ  ｏｆ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ，９２ｎｄ  ＡＡＣＲ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｎｅｗ  Ｏｒｌｅａｎｓ，ＬＡ，ＵＳＡ，ａｂｓｔｒａｃｔ  ４９５４；Ｖｉｎｃｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｏｏｋ  ｏｆ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ，３８ｔｈ  ＡＳＣＯ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｏｒｌａｎｄｏ，ＦＬ，ＵＳＡ，ａｂｓｔｒａｃｔ  １９００；Ｈｉｌｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｏｏｋ  ｏｆ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ，３８ｔｈ  ＡＳＣＯ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｏｒｌａｎｄｏ，ＦＬ，ＵＳＡ，ａｂｓｔｒａｃｔ  １９１６；Ｍｏｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｏｏｋ  ｏｆ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ，３８ｔｈ  ＡＳＣＯ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｏｒｊｌａｎｄｏ，ＦＬ，ＵＳＡ，ａｂｓｔｒａｃｔ  １８１６；Ｓｔｒｕｍｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｏｏｋ  ｏｆ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ，３８ｔｈ  ＡＳＣＯ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｏｒｊｌａｎｄｏ，ＦＬ，ＵＳＡ，ａｂｓｔｒａｃｔ  １２１；Ｍａｄｗｅｄ  ＪＢ；Ｂｏｏｋ  ｏｆ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｋｉｎａｓｅｓ；Ｎｏｖｅｌ  Ｔａｒｇｅｔ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ���ＵＳＡ，Ｍａｒｃｈ  ２００２；Ｒｏｂｅｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｏｏｋ  ｏｆ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ，３８ｔｈ  ＡＳＣＯ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｏｒｌａｎｄｏ，Ｆｌ，ＵＳＡ，ａｂｓｔｒａｃｔ  ４７３；Ｔｏｌｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｏｏｋ  ｏｆ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ，  ３８ｔｈ  ＡＳＣＯ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｏｒｊｌａｎｄｏ，ａｂｓｔｒａｃｔ  ３３４；ａｎｄ  Ｋａｒｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｏｏｋ  ｏｆ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ，３８ｔｈ  ＡＡＣＲ  Ｍｅｅｔｉｎｇｔ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ，ＵＳＡ，ａｂｓｔｒａｃｔ  ２７５３．
技術の進歩にも拘らず、追加の処理に対する需要があり続ける。
【発明の開示】
【００１９】
本発明は、ｒａｆ，ＶＥＧＦＲ２，ＶＥＧＦＲ３および／またはＰＤＧＦＲ−ベータを含むがこれに限らない信号形質導入経路に関連した、ヒトおよび他の哺乳類の状態および病気を処置、緩和、予防、変調等のための方法を提供する。本発明の好ましい方法は、ｒａｆ，ＶＥＧＦＲ２，ＶＥＧＦＲ３および／またはＰＤＧＦＲ−ベータに関連した病気および状態の変調を提供する。該方法は、例えば以下に記載するアリール尿素化合物、その薬学的に許容し得る塩、その誘導体等を投与することを含むことができる。
【００２０】
本発明はまた、本発明の化合物によって変調することができる状態および病気を同定するための方法を提供する。これらの方法は、本発明の化合物で効果的に処置することができる対象の選定を容易化する。加えて本発明は、本発明の化合物を投与した対象をモニターする方法を提供する。これは、例えば、種々の病気および状態の処置において本発明の化合物の有効性を決定し、そして処置養生法を決定することを含む。
【００２１】
本発明の方法に使用されるアリール尿素化合物は、ここでは「本発明の化合物」と集合的に呼ぶ、式Ｉの化合物、その薬学的に許容し得る塩、そのエステル、その立体異性体（単離したものおよび混合物）、そのプロドラッグ、およびその任意の活性誘導体を含む。
【００２２】
式Ｉは以下のとおりである。
Ｂ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｌ−Ｍ−Ｌ’−（Ｑ）１−３      （Ｉ）
【００２３】
式中、Ｂは、次の（ｉ）ないし（ｉｖ）よりなる群から選ばれる。
（ｉ）任意にＲ1 ，ＯＲ1 ，ＮＲ1 Ｒ2 ，Ｓ（Ｏ）q Ｒ1 ，ＳＯ2 ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 ＳＯ2 Ｒ2 ，Ｃ（Ｏ）Ｒ1 ，Ｃ（Ｏ）ＯＲ1 ，Ｃ（Ｏ）ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）ＯＲ2 ，ハロゲン、シアノおよびニトロよりなる群から独立に選ばれた１〜３の置換基で置換されたフェニル；
（ii）任意にＲ1 ，ＯＲ1 ，ＮＲ1 Ｒ2 ，Ｓ（Ｏ）q Ｒ1 ，ＳＯ2 ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 ＳＯ2 Ｒ2 ，Ｃ（Ｏ）Ｒ1 ，Ｃ（Ｏ）ＯＲ1 ，Ｃ（Ｏ）ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）ＯＲ2 ，ハロゲン、シアノおよびニトロよりなる群から独立に選ばれた１〜３の置換基で置換されたナフチル；
（iii)任意にＲ1 ，ＯＲ1 ，ＮＲ1 Ｒ2 ，Ｓ（Ｏ）q Ｒ1 ，ＳＯ2 ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 ＳＯ2 Ｒ2 ，Ｃ（Ｏ）Ｒ1 ，Ｃ（Ｏ）ＯＲ1 ，Ｃ（Ｏ）ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）ＯＲ2 ，ハロゲン、シアノおよびニトロよりなる群から独立に選ばれた１〜３の置換基で置換された、Ｏ，ＮおよびＳよりなる群から独立に選ばれた１〜３のヘテロ原子を持っている５および６員単環ヘテロアリール基；および
（iv) ８ないし１０員の２環ヘテロアリール基であって、第１の環は式ＩのＮＨへ結合し、そしてＯ，ＮおよびＳよりなる群から独立に選ばれた１〜３のヘテロ原子を含み、第２の環は３ないし４個の炭素原子を使用して第１の環へ縮合している２環ヘテロアリールである。この２環ヘテロアリール基は任意にＲ1 ，ＯＲ1 ，ＮＲ1 Ｒ2 ，Ｓ（Ｏ）q Ｒ1 ，ＳＯ2 ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 ＳＯ2 Ｒ2 ，Ｃ（Ｏ）Ｒ1 ，Ｃ（Ｏ）ＯＲ1 ，Ｃ（Ｏ）ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）ＯＲ2 ，ハロゲン、シアノおよびニトロよりなる群から独立に選ばれた１〜３の置換基で置換されている。
【００２４】
Ｌは次の（ｉ）ないし（iv) よりなる群から選ばれる。
（ｉ）任意にＣ1 −Ｃ5 直鎖もしくは分岐アルキル、Ｃ1 −Ｃ5 直鎖もしくは分岐ハロアルキル、Ｃ1 −Ｃ3 アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ1 −Ｃ3 アルキルアミノ、Ｃ1 −Ｃ6 ジアルキルアミノ、ハロゲン、シアノおよびニトロよりなる群から独立に選ばれた１〜３の置換基で置換されたフェニル；
（ii) 任意にＣ1 −Ｃ5 直鎖もしくは分岐アルキル、Ｃ1 −Ｃ5 直鎖もしくは分岐ハロアルキル、Ｃ1 −Ｃ3 アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ1 −Ｃ3 アルキルアミノ、Ｃ1 −Ｃ6 ジアルキルアミノ、ハロゲン、シアノおよびニトロよりなる群から独立に選ばれた１〜３の置換基で置換されたナフチル；
（iii)任意にＣ1 −Ｃ5 直鎖もしくは分岐アルキル、Ｃ1 −Ｃ5 直鎖もしくは分岐ハロアルキル、Ｃ1 −Ｃ3 アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ1 −Ｃ3 アルキルアミノ、Ｃ1 −Ｃ6 ジアルキルアミノ、ハロゲン、シアノおよびニトロよりなる群から独立に選ばれた１〜３の置換基で置換された、Ｏ，ＮおよびＳよりなる群から独立に選ばれた１〜３のヘテロ原子を有する５および６員単環ヘテロアリール基；
（iv) 任意にＣ1 −Ｃ5 直鎖もしくは分岐アルキル、Ｃ1 −Ｃ5 直鎖もしくは分岐ハロアルキル、Ｃ1 −Ｃ3 アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ1 −Ｃ3 アルキルアミノ、Ｃ1 −Ｃ6 ジアルキルアミノ、ハロゲン、シアノおよびニトロよりなる群から独立に選ばれた１〜３の置換基で置換された、Ｏ，ＮおよびＳよりなる群から独立に選ばれた１〜３のヘテロ原子を有する８ないし１０員の２環ヘテロアリール基。
【００２５】
Ｍは、
（ａ）−（ＣＨ2 ）m −Ｏ−（ＣＨ2 ）1 −、
（ｂ）−（ＣＨ2 ）m −（ＣＨ2 ）1 −、
（ｃ）−（ＣＨ2 ）m −Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ2 ）1 −、
（ｄ）−（ＣＨ2 ）m −ＮＲ3 −（ＣＨ2 ）1 −、
（ｅ）−（ＣＨ2 ）m −ＮＲ3 Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ2 ）1 −、
（ｆ）−（ＣＨ2 ）m −Ｓ−（ＣＨ2 ）1 −、
（ｇ）−（ＣＨ2 ）m −Ｃ（Ｏ）ＮＲ3 −（ＣＨ2 ）1 −、
（ｈ）−（ＣＨ2 ）m −ＣＦ2 −（ＣＨ2 ）1 −、
（ｉ）−（ＣＨ2 ）m −ＣＣｌ2 −（ＣＨ2 ）1 −、
（ｊ）−（ＣＨ2 ）m −ＣＨＦ−（ＣＨ2 ）1 −、
（ｋ）−（ＣＨ2 ）m −ＣＨ（ＯＨ）−（ＣＨ2 ）1 −、
（ｌ）−（ＣＨ2 ）m −Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ2 ）1 −、
（ｍ）−（ＣＨ2 ）m −Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ2 ）1 −、
（ｎ）−（ＣＨ2 ）m −ＣＲ４Ｒ５−（ＣＨ2 ）1 −、
（ｏ）ｍおよびｌが０の場合の単結合、
よりなる群から選ばれ、ここで変数ｍおよび１は独立に０〜４から選ばれた整数である。
【００２６】
Ｌ'は次の（ｉ）ないし（viii）よりなる群から選ばれる。
（ｉ）任意にＲ1 ，ＯＲ1 ，ＮＲ1 Ｒ2 ，Ｓ（Ｏ）q Ｒ1 ，ＳＯ2 ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 ＳＯ2 Ｒ2 ，Ｃ（Ｏ）Ｒ1 ，Ｃ（Ｏ）ＯＲ1 ，Ｃ（Ｏ）ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）ＯＲ2 ，ハロゲン、シアノおよびニトロよりなる群から独立に選ばれたＱ以外の追加の１〜２の置換基で置換されたフェニル；
（ii) 任意にＲ1 ，ＯＲ1 ，ＮＲ1 Ｒ2 ，Ｓ（Ｏ）q Ｒ1 ，ＳＯ2 ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 ＳＯ2 Ｒ2 ，Ｃ（Ｏ）Ｒ1 ，Ｃ（Ｏ）ＯＲ1 ，Ｃ（Ｏ）ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）ＯＲ2 ，ハロゲン、シアノおよびニトロよりなる群から独立に選ばれたＱ以外の追加の１〜２の置換基で置換されたナフチル、
（iii)任意にＲ1 ，ＯＲ1 ，ＮＲ1 Ｒ2 ，Ｓ（Ｏ）q Ｒ1 ，ＳＯ2 ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 ＳＯ2 Ｒ2 ，Ｃ（Ｏ）Ｒ1 ，Ｃ（Ｏ）ＯＲ1 ，Ｃ（Ｏ）ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）ＯＲ2 ，ハロゲン、シアノ、ニトロおよびオキサイド（例えば＝Ｏ，−Ｏ- または−ＯＨ）よりなる群から独立に選ばれたＱ以外の追加の１〜２の置換基で置換された、Ｏ，ＮおよびＳよりなる群から独立に選ばれた１〜３のヘテロ原子を持っている５および６員単環ヘテロアリール基；
（iv) 任意にＲ1 ，ＯＲ1 ，ＮＲ1 Ｒ2 ，Ｓ（Ｏ）q Ｒ1 ，ＳＯ2 ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 ＳＯ2 Ｒ2 ，Ｃ（Ｏ）Ｒ1 ，Ｃ（Ｏ）ＯＲ1 ，Ｃ（Ｏ）ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）ＯＲ2 ，ハロゲン、シアノ、ニトロおよびオキサイド（例えば＝Ｏ，−Ｏ- または−ＯＨ）よりなる群から独立に選ばれた１〜３の置換基で置換された、Ｏ，ＮおよびＳよりなる群から独立に選ばれたＱ以外の追加の１〜２のヘテロ原子を持っている８ないし１０員２環ヘテロアリール基；
（ｖ）任意にＲ1 ，ＯＲ1 ，ＮＲ1 Ｒ2 ，Ｓ（Ｏ）q Ｒ1 ，ＳＯ2 ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 ＳＯ2 Ｒ2 ，Ｃ（Ｏ）Ｒ1 ，Ｃ（Ｏ）ＯＲ1 ，Ｃ（Ｏ）ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）ＯＲ2 ，ハロゲン、シアノ、ニトロおよびオキサイド（例えば＝Ｏ，−Ｏ- または−ＯＨ）よりなる群から独立に選ばれたＱ以外の追加の１〜２の置換基で置換された、飽和および部分的飽和Ｃ3 −Ｃ6 単環炭素環基；
（vi) 任意にＲ1 ，ＯＲ1 ，ＮＲ1 Ｒ2 ，Ｓ（Ｏ）q Ｒ1 ，ＳＯ2 ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 ＳＯ2 Ｒ2 ，Ｃ（Ｏ）Ｒ1 ，Ｃ（Ｏ）ＯＲ1 ，Ｃ（Ｏ）ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）ＯＲ2 ，ハロゲン、シアノおよびニトロよりなる群から独立に選ばれたＱ以外の追加の１〜２の置換基で置換された飽和および部分的飽和Ｃ8 −Ｃ10２環炭素環基；
（vii)任意にＲ1 ，ＯＲ1 ，ＮＲ1 Ｒ2 ，Ｓ（Ｏ）q Ｒ1 ，ＳＯ2 ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 ＳＯ2 Ｒ2 ，Ｃ（Ｏ）Ｒ1 ，Ｃ（Ｏ）ＯＲ1 ，Ｃ（Ｏ）ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）Ｒ2，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）ＯＲ2 ，ハロゲン、シアノ、ニトロおよびオキサイド（例えば＝Ｏ，−Ｏ- または−ＯＨ）よりなる群から独立に選ばれたＱ以外の追加の１〜２の置換基で置換された、Ｏ，ＮおよびＳよりなる群から独立に選ばれた１〜３のヘテロ原子を持っている飽和および部分的飽和５および６員単環複素環基；
（viii) 任意にＲ1 ，ＯＲ1 ，ＮＲ1 Ｒ2 ，Ｓ（Ｏ）q Ｒ1 ，ＳＯ2 ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 ＳＯ2 Ｒ2 ，Ｃ（Ｏ）Ｒ1 ，Ｃ（Ｏ）ＯＲ1 ，Ｃ（Ｏ）ＮＲ1 Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）Ｒ2 ，ＮＲ1 Ｃ（Ｏ）ＯＲ2 ，ハロゲン、シアノ、ニトロおよびオキサイド（例えば＝Ｏ，−Ｏ- または−ＯＨ）よりなる群から独立に選ばれたＱ以外の追加の１〜２の置換基で置換された、Ｏ，ＮおよびＳよりなる群から独立に選ばれた１〜３のヘテロ原子を持っている飽和および部分的飽和８ないし１０員２環複素環基。
【００２７】
ここで各Ｑは独立に、Ｃ（Ｏ）Ｒ４，Ｃ（Ｏ）ＯＲ４およびＣ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５であり；Ｒ１ないしＲ５は独立に、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１−Ｃ５直鎖、分岐または環状アルキル、
（ｃ）フェニル、
（ｄ）アルキル部分が任意にペルハロまでハロゲンで任意に置換されたＣ１−Ｃ３アルキル−フェニル、
（ｅ）ペルハロまで置換されたＣ１−Ｃ５直鎖、分岐アルキル、
（ｆ）−（ＣＨ２）ｑ−Ｘであって、ここでＸは飽和、部分飽和もしくは芳香性のＯ，ＮおよびＳから選ばれた１〜４原子を含んでいる５または６員単環複素環か、またはＯ，ＮおよびＳからなるヘテロ原子１〜４を有する８ないし１０員２環ヘテロアリールであり、そしてここで前記アルキル部分は任意にペルハロまでハロゲン
置換されて
おり；
ここでペルハロ置換Ｃ１−Ｃ５直鎖、分岐アルキル以外のＲ１−Ｒ５の各自は、任意にＣ１−Ｃ５直鎖または分岐アルキル、Ｃ１−Ｃ３アルコキシ、ヒドロキシ、カルボキシ、アミノ、Ｃ１−Ｃ３アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ６ジアルキルアミノ、ハロゲン、シアノおよびニトロよりなる群から選ばれた１−３の置換基で置換されており；
ここで変数ｐは０，１または２から選ばれた整数であり、変数ｑは０，１，２，３または４から選ばれた整数である。
【００２８】
式Ｉにおいて、好適なヘテロアリール基は限定でなく、一以上の環の１−４の炭素原子が酸素、窒素またはイオウによって置換されることができる単環および少なくとも環の一つが芳香環である２環を含んでいる５−１０員環系を含む。２環系においては各環は３−７原子を持つことができる。
【００２９】
「単環ヘテロアリール」とは、５ないし６の環原子を有し、少なくともその一つはＮ，ＯおよびＳよりなる群から選ばれたヘテロ原子であり、残りは炭素である芳香単環を意味する。この基に２以上のヘテロ原子が存在する時、それらは他のものと独立に選ばれ、そのためそれは同じかまたは異なることができる。単環ヘテロアリール基は、限定でなくピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、イソチアゾール、トリアゾール、テトラゾール、チアジアゾール、オキサジアゾール、ピリジン、ピリミジン、ピラジンおよびトリアジンを含む。
【００３０】
「２環ヘテロアリール」は、環の一つが上に記載した単環ヘテロアリール環であり、第２の環がベンゼンか、または上に記載した単環ヘテロアリール環である縮合双環基を意味する。２環基中の両方の環がヘテロアリール環である時、それらは、この分野で既知の手段により化学的にアクセス可能である限り、同じでも異なっても良い。２環ヘテロアリール環は、例えば限定でなくベンゾオキサゾール（縮合フェニルおよびオキサゾール）、キノリン（縮合フェニルおよびピリジン）、イミダゾピリミジン（縮合イミダゾールおよびピリミジン）等を含む、合成可能な５−５，と６−６縮合２環芳香環構造を含む。
【００３１】
語句「酸素、窒素およびイオウより選ばれた少なくとも１個を含み、飽和、部分飽和または芳香環である５員または６員複素環」とは、限定でなく、テトラヒドロピラン、テトラヒドロフラン、１，３−ジオキサン、モルホリン、チオモルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ピペリジノン、テトラヒドロピリミドン、ペンタメチレンサンファイド、テトラメチレンサルファイド、ジヒドロピラン、ジヒドロフラン、ジヒドロチオフェン、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、イソチアゾール、トリアゾール、ピリジン、ピリミジン、ピリダジン、トリアジン等を含む。
【００３２】
用語「Ｃ１−Ｃ３アルキルフェニル」は、限定でなく、３−フェニルプロピル、２−フェニル−１−メチルエチルを含む。置換した例は、２−〔２−クロロフェニル〕エチル、３，４−ジメチルフェニルメチル等を含む。
【００３３】
式ＩのＢ，ＬおよびＬ’のような本発明の化合物のための好適な置換および未置換ヘテロアリール基は、限定でなく以下の単環ヘテロアリール基を含む。
【００３４】
２−および３−フリル、２−および３−チエニル、２−および４−トリアジニル、１−，２−および３−ピロリル、１−，２−，４−および５−イミダゾリル、１−，３−，４−および５−ピラゾリル、２−，４−および５−オキサゾリル、３−，４−および５−イソオキサゾリル、２−，４−および５−チアゾリル、３−，４−および５−イソチアゾリル、２−，３−および４−ピリジル、２−，４−，５−および６−ピリミジル、１，２，３−トリアゾール−１−，４−および５−イル、１，２，４−トリアゾール−１−，３−および５−イル、１−および５−テトラゾリル、１，２，３−オキサジアゾル−４−および５−イル、１，２，４−オキサジアゾール−３−および５−イル、１，３，４−チアジアゾル−２−および５−イル、１，３，４−チアジアゾル−２−および５−イル、１，２，４−オキサジアゾール−３−および５−イル、１，２，３−チアジアゾール−４−および５−イル、２−，３−，４−，５−および６−２Ｈ−チオピラニル、２−, ３−および４−４Ｈ−チオピラニル、３−および４−ピリダジニル、２−および３−ピラジニル。
【００３５】
該基は以下のような２環複素環基を含む。
ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾピラゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンズ−１，３−オキサジアゾリル、キノリニル、イソキノリニル、キナゾリニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、ジヒドロベンゾフラニル、ピラゾロ〔３，４−ｂ〕ピリミジニル、プリニル、ベンゾジアジン、プラリジニル、ピロロ〔２，３−ｂ〕ピリジニル、ピラゾロ〔３，４−ｂ〕ピリジニル、オキサゾ〔４，５−ｂ〕ピリジニル、イミダゾ〔４，５−ｂ〕ピリジニル、ヘクロペンテノピリジン、シクロヘキサノピリジン、シクロペンタノピリミジン、シクロヘキサノピリミジン、シクロペンタノピラジン、シクロヘキサノピラジン、シクロペンタノピリダジン、シクロヘキサノピリダジン、シクロペンタノイミダゾール、シクロヘキサノイミダゾール、シクロペンタノチオフエンおよびシクロキサノチオフエン。
【００３６】
ヘテロ原子を含まない好適なアリール基は、例えばフェニル、１−および２−ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、インデニル、ベンゾシクロブタニル、ベンゾシクロヘプタニルおよびベンゾシクロヘプテニルを含む。
【００３７】
好適な直鎖アルキル基および例えばアルコキシ、アルキルフェニルおよびアルキルヘテロアリール等の基のアルキル部分は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル等を含む。好適な分岐アルキル基はイソプロチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル等のようなすべての分岐異性体を含む。
【００３８】
用語「アルコキシ」は、直鎖または１回もしくは多数回分岐の分岐飽和炭素原子を有する直鎖または分岐鎖アルコキシ基を意味し、そしてメトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ等を含む。それは２，２−ジクロロエトキシ、トリフルオロメトキシ等のハロゲン化基をも含む。
【００３９】
「Ｃ１−Ｃ３アルキルミノ」は、メチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノまたはイソプロピルアミノを意味する。Ｃ１−Ｃ６ジアルキルミアノ基の例は、限定でなく、ジエチルアミノ、エチルイソプロピルアミノ、メチルイソブチルアミノ、ジヘキシルアミノを含む。
【００４０】
好適なハロゲン基はＦ，Ｃ１および／またはＩを含み、アルキル基がハロゲンで置換される場合は１からペル置換（すなわち基上のすべてのＨがハロゲンで置換される）が可能であり、与えられた基に対してハロゲンの混合置換も可能である。好ましいハロゲンはＣｌ，ＢｒおよびＦである。
【００４１】
用語「ペルハロまで置換された直鎖および分岐アルキル」は、１つのアルキル水素がハロゲンで置換されたアルキル基、すべての水素がハロゲンで置換されたアルキル基、２以上であるがしかし全部より少ないアルキル水素がハロゲンで置換されたアルキル基、およびハロゲンと他の置換基で置換された水素を有するアルキル基を含む。その例はクロロメチル、ジクロロメチル、トリクロロメチル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル等を含む。
【００４２】
用語「シクロアルキル」とは、ここではシクロプロピル、シクロブチルおよびシクロペンチルのような環中に３〜８員を有する環状構造と、そして例えば「Ｃ3 シクロアルキルはメチル置換シクロプロピルを含むように、アルキル置換基を有する３〜８員を有する環状構造をいう。
【００４３】
用語「飽和炭素環基」は、環状構造のみ、すなわちシクロペンチル、シクロヘキシル等を定義する。これらの環状構造上のどのようなアルキル置換も特定的に同定される。
【００４４】
飽和単環および２環炭素環基はシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびデカヒドロナフタレンを含む。
【００４５】
部分的飽和単環および２環炭素環基は、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、およびテトラヒドロナフタレンを含む。
【００４６】
飽和単環および２環複素環基は、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、１，３−ジオキソラン、１，４−ジオキサニル、モルホリニル、チオモルホニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピペリジノニル、テトラヒドロピリミドニル、ペンタメチレンサルファイド、およびテトラメチレンサルファイドを含む。
【００４７】
部分的飽和単環および２環複素環基は、ジヒドロピラニル、ジヒドロフラニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロピペリジニル、およびジヒドロピリミドニルを含む。
【００４８】
どれかの基が置換されている時は、指示した置換基の最大数まで可能であり、そして各置換基は該基上のどの利用し得る位置に位置することができ、そして置換基上のどの利用できる原子を介して結合することができる。「どの利用し得る位置」とは、この分野で既知の手段またはここに教示した手段によって化学的に可能であり、そして不当に不安定な分子を生成しない該基上の任意の位置を意味する。どれかの基上に二以上の置換基が存在する時は、各置換基は他の置換基と独立して定義され、従って同一又は異なることができる。
【００４９】
用語「任意に置換された」とは、該基は未置換か、または同定した置換基で置換されても良いことを意味する。
【００５０】
Ｌ’がピリジンである場合、ピリジン置換基としての用語「ヒドロキシ」は、２−，３−および４−ヒドロキシピリジンを含むのみならず、この分野で１−オキソピリジンおよび１−ヒドロキシピリジンと呼ばれる構造を含むことを理解すべきである。
【００５１】
化合物、塩等の用語の複数形がここで使用される場合、単一の化合物、塩等をも意味する。
【００５２】
ＢおよびＬ’の置換構造は、好ましくは各自独立にメチル、トリフルオロメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、Ｃｌ，ＢｒおよびＦ、シアノ、ニトロ、シドロキシ、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、エチルアミノ、ジエチルアミノよりなる群から選ばれる。
【００５３】
ＢおよびＬ’のための他の置換基は、フェニル、ピリジニル、ピリミジニル、クロロフェニル、ジクロロフェニル、ブロモフェニル、ジブロモフェニル、クロロピリジニル, ブロモピリジニル、ジクロロピリジニル、ジブロモピリジニル、メチルフェニル、メチルピリジニル、キノリニル、イソキノリニル、イソインドリニル、ピラジニル、ピリダジニル、ピロリニル、イミダゾリニル、チエニル、フリル、イソオキサゾリニル、イソチアゾリニル、ベンゾピリジニル、ベンゾチアゾリル、
Ｃ1 −Ｃ5 アシル；
アミノフェニルのようなＮＨ（Ｃ1 −Ｃ5 アルキル、フェニルまたはピリジニル）；
ジエチルアミノおよびジメチルアミノのようなＮ（Ｃ1 −Ｃ5 アルキル）（Ｃ1 −Ｃ5 アルキル、フェニルまたはピリジニル）；
メタンスルホニルのようなＳ（Ｏ）q （Ｃ1 −Ｃ5 アルキル；Ｓ（Ｏ）q Ｈ；
ＳＯ2 ＮＨ2 ；
ＳＯ2 ＮＨ（Ｃ1 −Ｃ5 アルキル）；
ＳＯ2 Ｎ（Ｃ1 −Ｃ5 アルキル）（Ｃ1 −Ｃ5 アルキル）；
ＮＨＳＯ2 （Ｃ1 −Ｃ5 アルキル）；
Ｎ（Ｃ1 −Ｃ5 アルキル）ＳＯ2 （Ｃ1 −Ｃ5 アルキル）；
Ｃ（Ｏ）（Ｃ1 −Ｃ6 アルキルまたはフェニル）；
Ｃ（Ｏ）Ｈ；
Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ3 ，Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ2 ＣＨ3 のようなＣ（Ｏ）Ｏ（Ｃ1 −Ｃ6 アルキルまたはフェニル）；
Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ2 ＣＨ2 ＣＨ3 ；
Ｃ（Ｏ）ＯＨ；
Ｃ（Ｏ）ＮＨ2 （カルバモイル）；
Ｎ−メチルエチルカルバモイル、Ｎ−メチルカルバモイル、Ｎ−エチルカルバモイル、またはＮ−ジメチルアミノエチルカルバモイルのようなＣ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ1 −Ｃ6 アルキルまたはフェニル）；
Ｎ−ジメチルカルバモイルのようなＣ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ1 −Ｃ6 アルキルまたはフェニル）（Ｃ1 −Ｃ6 アルキルまたはフェニルまたはピリジニル）；
ジメチルカルバモイル；
Ｃ（Ｎ（Ｃ1 −Ｃ5 アルキル）（Ｃ1 −Ｃ5 アルキル）；
ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ1 −Ｃ6 アルキルまたはフェニル）；および
Ｎ（Ｃ1 −Ｃ5 アルキル）Ｃ（Ｏ）（Ｃ1 −Ｃ5 アルキル）；
を含む。上の置換基の各自は、ジフルオロメチルスルホニルのように任意に部分的または完全にハロゲン化される。
【００５４】
本発明の一具体例は、式Ｉ，Ｌ，ＢおよびＬ’が以下の組合わせに従う本発明の化合物の投与を含む。
【００５５】
Ｂ＝フェニル、Ｌ＝フェニル、Ｌ’＝フェニル、ピリジニル、キノリニル、イソキノリニル、または存在しない；
Ｂ＝フェニル、Ｌ＝ピリジニル、Ｌ’＝フェニル、ピリジニル、キノリニル、イソキノリニル、または存在しない；
Ｂ＝フェニル、Ｌ＝ナフチル、Ｌ’＝フェニル、ピリジニル、キノリニル、イソキノリニル、または存在しない；
Ｂ＝ピリジニル、Ｌ＝フェニル、Ｌ’＝フェニル、ピリジニル、キノリニル、イソキノリニル、または存在しない；
Ｂ＝ピリジニル、Ｌ＝ピリジニル、Ｌ’＝フェニル、ピリジニル、キノリニル、イソキノリニル、または存在しない；
Ｂ＝ピリジニル、Ｌ＝ナフチル、Ｌ’＝フェニル、ピリジニル、キノリニル、イソキノリニル、または存在しない；
Ｂ＝イソキノリニル、Ｌ＝フェニル、Ｌ’＝フェニル、ピリジニル、キノリニル、イソキノリニル、または存在しない；
Ｂ＝イソキノリニル、Ｌ＝ピリジニル、Ｌ’＝フェニル、ピリジニル、キノリニル、イソキノリニル、または存在しない；
Ｂ＝イソキノリニル、Ｌ＝ナフチル、Ｌ’＝フェニル、ピリジニル、キノリニル、イソキノリニル、または存在しない；
Ｂ＝キノリニル、Ｌ＝フェニル、Ｌ’＝フェニル、ピリジニル、キノリニル、イソキノリニル、または存在しない；
Ｂ＝キノリニル、Ｌ＝ピリジニル、Ｌ’＝フェニル、ピリジニル、キノリニル、イソキノリニル、または存在しない；
Ｂ＝キノリニル、Ｌ＝ナフチル、Ｌ’＝フェニル、ピリジニル、キノリニル、イソキノリニル、または存在しない。
【００５６】
式Ｉの構造Ｍは、好ましくは−Ｏ−，単結合、−Ｓ−，−ＮＨ−，−Ｎ（ＣＨ3 ）−，−ＮＨＣＨ2 −，−ＮＣ2 Ｈ4 −，−ＣＨ2 −，−Ｃ（Ｏ）−，−ＣＨ（ＯＨ）−，−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ3 ）ＣＨ2 −，−Ｎ（ＣＨ3 ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ3 ）ＣＨ2 −，−ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ3 ）−，−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ3 ）ＣＨ2 −，−ＮＨＣ（Ｏ）−，−Ｎ（ＣＨ3 ）Ｃ（Ｏ）−，−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ3 ）−，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−，−ＣＨ2 Ｏ−，−ＣＨ2 Ｓ−，−ＣＨ2 Ｎ（ＣＨ3 ）−，−ＯＣＨ2 −，−ＣＨＦ−，−ＣＦ2 −，−ＣＣｌ2 −，−Ｓ−ＣＨ2 −，およびＮ（ＣＨ3 ）ＣＨ2 −である。
【００５７】
特に関心ある本発明の化合物はＬ’，Ｌ，ＭおよびＱが上で定義したとおりであり、そしてＢが任意に１−４のハロゲンで置換されたフェニルである式Ｉの化合物を含む。
【００５８】
特に関心ある本発明の化合物はＬ，Ｌ’およびＱが上で定義したとおりであり、Ｍが−Ｏ−であり、そしてＢが任意に１−４のハロゲンで置換されたフェニルである式Ｉの化合物を含む。
【００５９】
特に関心ある本発明は、Ｂが任意にＲ１およびハロゲンから独立して選ばれた１−６の置換基で置換されたフェニルまたはピリジンルであり、Ｌ’およびＱが上で規定したとおりであり、Ｍが−Ｏ−であり、そしてＬが任意に１−４のハロゲンで置換されたフェニルである式Ｉの化合物を含む。
【００６０】
特に関心ある本発明の化合物は、Ｂが任意にＲ１およびハロゲンよりなる群から独立して選ばれた１−６の置換基で置換されたフェニルであり、Ｌ’およびＱが上で規定したとおりであり、Ｍが−Ｏ−であり、そしてＬが任意に１−４のハロゲンで置換されたフェニルである式Ｉの化合物を含む。
【００６１】
特に関心ある本発明の化合物は、Ｂが任意にＲ１およびハロゲンよりなる群から選ばれた基によって置換された４−クロロ（２−トリフルオロメチル）フェニルであり、Ｌ’およびＱが上で定義したとおりであり、Ｍが−Ｏ−であり、そしてＬが任意に１−４のハロゲンで置換されたフェニルである式Ｉの化合物を含む。
【００６２】
当業者は、式Ｉの化合物のあるものは異なる幾何異性体形で存在できることを認識するであろう。すべてのそのような構造（エナンチオマーおよびジアステレオマーを含む）が本発明の範囲内に含まれることが意図される。式Ｉの化合物の多数が種々の置換基の位置および性格に応じて不斉中心を有し、それ故ラセミおよび光学活性形で、それにそれらのラセミまたは非ラセミ混合物の形で、そしてジアステレオマーおよびジアステレオマー混合物の形で存在し得る。不斉炭素原子は（Ｒ）または（Ｓ）構造、または（Ｒ，Ｓ）構造において存在し得る。ある場合には、不斉は与えられた結合、例えば特定の化合物の二つの置換芳香環と隣接する中心結合手のまわりの制限された回転によっても存在することができる。シス異性体、トランス異性体、ジアステレオマー混合物、ラセミ体、エナンチオマーの非ラセミ混合物、実質上純粋および純粋エナンチオマーを含む。これらすべての混合物が本発明の化合物の範囲内であると考えられ、そして本発明の化合物を参照する時集合物にそのように呼ばれる。それ故本発明の方法は、ｃ−ｒａｆ，ｂ−ｒａｆ，ｐ３８，ＶＥＧＦＲ，ＰＤＧＦＲおよび／またはＦＬＴ−３活性を有する、式Ｉに記載された化合物の任意の単離されたラセミまたは光学活性形の使用を包含する。
【００６３】
エナンチオマーおよびジアステレオマー混合物の分離方法は当業者に良く知られている。光学異性体は、慣用のプロセスに従って、例えば光学活性酸または塩基を使用してジアスステレオマー塩の形成によって、ラセミ体混合物の分割により得ることができる。適切な酸の例は酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、ジトルオイル酒石酸、およびカンファースルホン酸である。ジアステレオマーの混合物は、それらの物理学的相違を基にして当業者に既知の方法により、例えばクロマトグラフィーまたは分別結晶によってそれらの個々のジアステレオマーに分離することができる。光学活性塩基または酸は分離されたジアステレオマー塩から遊離される。
【００６４】
光学異性体の分離のための他のプロセスは、エナンチオマーの分離を最大にするように最適に選んだキラールクロマトグラフィーカラム（例えばキラールＨＰＬＣカラム）の使用を含む。好適なキラールＨＰＬＣカラムはダイセルによって製造されたＣｈｉｒａｃｅｌ  ＯＢおよびＯＪである。式Ｉの光学活性化合物は光学活性出発物質を利用して同様に得ることができる。
【００６５】
本発明は、Ｒａｆ，ＶＥＧＦＲ，ＰＤＧＦＲ，ｐ３８および／またはＦＬＴ−３活性、および／またはここで述べる病気および／または状態のどれかの変調に有効性を有する、式Ｉの化合物のどのような分離された、単離された、純粋または部分的精製した異性体またはラセミ混合物を包含する。用語「立体異性体」は、ジアステレオマー、エナンチオマー、幾何異性体等を包含するものと理解される。
【００６６】
好ましい化合物は、一層望ましい活性を誘発する式Ｉの化合物の絶対配位を持つ化合物であり、やはり本発明の範囲内に含まれる。前記異性体の精製および前記異性体混合物の分離は当分野で知られた標準的技術によって達成することができる。ここでは実質的に純粋なエナンチオマーは対応する反対のエナンチオマーの５％ｗ／ｗが存在しないことを意味する。
【００６７】
これらの化合物の薬学的に許容し得る塩およびこれらの化合物の普通に使用されるプロドラッグも本発明の範囲内である。用語「薬学的に許容し得る塩」は、本発明の化合物の比較的無毒性の無機または有機酸付加塩をいう。例えば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．“Ｐｈａｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ，”Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１９７７，６６，１−１９を参照。
【００６８】
好適な塩は、特に式Ｉの化合物の薬学的に許容し得る塩、または例えば式Ｉの化合物の有機または無機酸付加塩のような塩である。好適な酸付加塩は、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、カンファー酸塩、カンファースルホン酸塩、ケイ皮酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、イタコン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、パモエート、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、スルホン酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩およびウンデカン酸塩を含む。好適な無機酸は、限定でなく、ハロゲン酸（塩酸および臭化水素酸のような）、硫酸またはリン酸を含む。好適な有機酸は、限定でなく、カルボン酸、スルフォン酸またはスルファミン酸を含み、その例は酢酸、プロピオン酸、オクタン酸、デカン酸、トリフルオロ酢酸、ドデカン酸、グリコール酸、乳酸、２−または３−ヒドロキシ酪酸、γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）、グルコン酸、グルコースモノカルボン酸、安息香酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、グルタル酸、ガラクタリン酸、アミノ酸（グルタミン酸、アスパラギン酸、Ｎ−メチルグリシン、アセチルアミノ酢酸、Ｎ−アセチルアスパラギン、またはＮ−アセチルシスティンのような）、ピルビン酸、アセト酢酸、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、１−ナフタレンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、ホスフォセリン、および２−または３−グリセロリン酸を含む。
【００６９】
加えて、薬学的に許容し得る塩は、アルカリカチオン（例えばＬｉ+ ，Ｎａ+ またはＫ+ ）、アルカリ土類カチオン（例えばＭｇ+2，Ｃａ+2またはＢａ+2）、アンモニウムカチオンのような無機塩基の酸塩、それにトリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルアミン、リジン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、１，４ージアザビシクロ〔２．２．２〕オクタン（ＤＡＢＣＯ）、１，５−ジアザビシクロ〔４．３．０〕ノネンー５（ＤＢＮ）、および１，８−ジアザビシクロ〔５．４．０〕ウンデセン−７（ＤＢＵ）のプロトン化またはペルアルキル化から生ずるような脂肪族および芳香族置換アンモニウムおよび４級アンモニウムカチオンを含む有機塩基の酸塩を含む。
【００７０】
塩基塩は、カリウムおよびナトリウムのようなアルカリ金属塩、カルシウムおよびマグネシウムのようなアルカリ土類金属塩、およびジシクロヘキシルアミンおよびＮ−メチル−Ｄ−グルカミンのような有機塩基のアンモニウム塩を含む。加えて、塩基性窒素含有基は、メチル、エチル、プロピルおよびブチルクロライド、ブロマイドおよびヨーダイドのような低級アルキルハライド、ジメチル、ジエチルおよびジブチルサルフェートのようなジアルキルサルフェート、およびジアミルサルフェート、デシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリルクロライド、ブロマイドおよびヨーダイドのような長鎖ハライド、ベンジルおよびフェネチルブロマイド等のようなアラルキルハライドで４級化することができる。
【００７１】
本発明の適切な化合物のエステルは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチルまたはペンチルエステルのようなよく耐えられる薬学的に許容し得るエステルである。フェニルＣ１−Ｃ５アルキルのような追加のエステルも使用し得るが、メチルエステルが好ましい。
【００７２】
プロドラッグの形成は親化合物の性質を増強するためのこの分野では良く知られている。そのような性質は、溶解度、吸収、バイオアベイラビリティおよび放出時間を含む（Ｐｈａｍａｃｅｃｃｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｓｉｘｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ），ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ａｎｃｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｐｕｂｉｓｈｅｄ  ｂｙ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，ｐａｇｅｓ  ２７−２９（１９５５）参照。これは参照としてここに取り入れる）。開示されたオキサゾリル−フェニル−２，４−ジアミノピリミジン化合物の普通に使用されるプロドラッグは、主要な薬物バイオトランスフォーメーション反応の利益を得るために設計され、そして本発明の範囲内であると考えるべきである。主要な薬物バイオトランスフォーメーション反応は、Ｎ−デアルキル化、Ｏーデアルキル化、脂肪族ヒドロキシル化、芳香族ヒドロキシル化、Ｎ−酸化、Ｓ−酸化、デアミノ化、加水分解反応、グルクロナイド化、サルフェート化およびアセチル化を含む（Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｎｉｎｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ），ｅｄｉｔｅｄ  Ｍｏｌｉｎｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ｂｙ  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，ｐａｇｅｓ  １１−１３（１９９６）を見よ。これを参照としてここに取れ入れる）。
【００７３】
本発明は、限定でなく、ｒａｆ，ＶＥＧＦＲ−２，ＶＥＧＦＲ−３，ｐ３８，ＰＤＧＦＲ−β，および／またはＦｌｔ−３を含む一以上の信号形質導入経路を変調することができる化合物を提供する。Ｒａｆは、細胞生育、細胞生存および侵入を含む、多数のキー細胞プロセスの調節に関与する重要な信号分子である。それはＲａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路の一員である。この経路は大多数の腫瘍細胞内に存在する。ＶＥＧＦＲ−２，ＶＥＧＦＲ−３，ＰＤＧＦＲ−βおよびＦｌｔ−３は膜横断レセプター分子であり、それは適切なリガンドによって刺激される時、Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ細胞信号経路を引金し、細胞出来事のカスケードへ導びく。これらレセプター分子の各自はチロシンキナーゼ活性を持っている。
【００７４】
ＶＥＧＦＲレセプターは脈管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）によって刺激され、そして内皮細胞発達および機能の調節において重要なコントロールポイントである。ＶＥＧＦ−βレセプターは、間葉細胞を含む多数の細胞タイプにおける細胞増殖および生存を規制する。Ｆｌｔ−３はＦＬリガンドのためのレセプターである。これはｃ−ｋｉｔに構造的に似ており、そして多能性造血細胞の成長を変調し、Ｔ−細胞、Ｂ−細胞および樹状細胞の発達に影響する。
【００７５】
野生タイプおよび変異性を含む、ｒａｆ，ＶＥＧＦＲ−２，ＶＥＧＦＲ−３，ｐ３８，ＰＤＧＦ−β、および／またはＦｉｔ−３の任意の遺伝子またはイソフォームが本発明に従って変調されることができる。Ｒａｆまたはｒａｆ−１キナーゼは少なくとも３種のファミリーメンバー、すなわちＡ−Ｒａｆ，Ｂ−ＲａｆおよびＣ−ＲａｆまたはＲａｆ−１よりなるセリン／スレオニンキナーゼのファミリーである。例えば、Ｄｈｉｌｌｃｎ  ａｎｄ  Ｋｏｌｃｈ，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ，４０４：３−９，２００２を見よ。Ｃ−ＲａｆおよびＢ−Ｒａｆが本発明の化合物のための好ましい標的である。活性化するＢ−Ｒａｆ突然変異（例えばＶ−５９９Ｅ変異株）は、メラノーマを含む各種の癌において同定されており、ここに記載する化合物はそれらの活性を阻害するために使用することができる。
【００７６】
用語「変調」とは、経路（またはその成分）の機能的活性が該化合物の不存在下での正常な活性に比較して変化することを意味する。この効果は、増大、アゴナイジング、増大、増強、容易化、刺激、減少、ブロッキング、阻害、消失、拮抗化等を含む。変調のどのような品質または程度をも含む。
【００７７】
表１６および１７は、それぞれインビトロ（生化学的）およびインビボ（細胞）アッセイにおける本発明の化合物Ｎ−〔４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル〕−Ｎ’−{４−〔２−Ｎ−メチルカルバモイル−４−ピリジルオキシ〕フェニル}尿素の活性を示す。その生化学的活性プロフィル（表１６）によって示されるように、この化合物は多数の異なる細胞キナーゼの強力な阻害剤である。さらにそれはキナーゼ活性、細胞成長、および全細胞における他の細胞プロセスに影響を及ぼす能力を持っている。表１７は全細胞において、標的ホスフォリル化を５０％（ＩＣ５０）した化合物の濃度を示す。この活性プロフィルは本発明の活性化合物の代表であるが、すべての化合物が本発明において有用であるために同じランクのオーダーの強さを持つ必要はない。生化学的および細胞活性のためのアッセイは慣用であり、そして後の実施例に記載する方法を含む任意の適切なフォーマットを使用して実施することができる。ＶＥＧＦＲ−３キナーゼアッセイ(例えばＭａｎｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５（２６）：５６８７−９３，２００２；Ｓｔａｈｌ  ｅｔ  ａｌ，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，４１（７）：１１７４−８，２００２)；ＦＬＴ３キナーゼアッセイ（Ｙｅｅ，ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，１００（８）：２９４１−９，２００２；Ｋｅｌｌｙ，ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ，１（５）：４２１−３２，２００２）をも見よ。
【００７８】
本発明の化合物はまた、限定でなく以下のプロセスの一以上を変調することができる。細胞成長（例えば分化、細胞生存、および／または増殖）、腫瘍細胞成長（例えば分化、細胞生存、および／または増殖）、腫瘍退行、内皮細胞成長（例えば分化、細胞生存、および／または増殖）、血管形成（血管成長）、リンパ管形成（リンパ管成長）、および／または造血（例えばＴ−およびＢ−細胞発達、樹状細胞発達等）。
【００７９】
特定の作用の理論またはメカニズムに拘束されることを欲するものではないが、本発明の化合物はキナーゼ活性を変調する能力を有していることが発見された。しかしながら本発明の方法は特定のメカニズムまたは如何に本発明の化合物がそれぞれの効果を達成するかに制限されない。用語「キナーゼ活性」とは、アデノシントリリン酸（ＡＴＰ）からのガンマリン酸エステルがアミノ酸残基（例えばセリン、スレオニンまたはチロシン）に変換される触媒活性を意味する。ある化合物は、例えばキナーゼのＡＴＰ結合ポケットに対してＡＴＰと直接競合することにより、活性に影響する酵素のコンフォメーション変化を生じさせることにより（例えば生物学的に活性な三次元構造の破壊により）等によってキナーゼ活性を阻害することができる。
【００８０】
キナーゼ活性は慣用のアッセイ方法を使用して日常的に決定することができる。キナーゼアッセイは、典型的にはキナーゼ酵素、基質および検出系の成分を含む。典型的なキナーゼアッセイは、ホスフォリル化最終生成物（例えばペプチド基質を使用する時ホスフォタンパク）を生成するように、タンパクキナーゼのペプチド基質およびＡＴＰとの反応を含む。生成した最終生成物は適当な方法を使用して検出することができる。放射活性ＡＴＰが使用される時、放射活性標識ホスフォタンパクはアフィニティメンブレンまたはゲル電気泳動を使用して未反応ガンマ−３２Ｐ−ＡＴＰから分離することができ、次にオートラジオグラフィーを用いてゲル上で可視化されるか、またはシンチレーションカウンターで検出することができる。非放射活性方法も使用できる。これら方法はホスフォリル化された基質を認識する抗体、例えば抗ホスフォチロシン抗体を利用する。例えば、キナーゼ酵素は、酵素が基質をホスフォリル化するのに有効な条件下、ＡＴＰとバッファーの存在下で基質とインキュベートされる。反応混合物は例えば電気泳動によって分離することができ、次に基質のホスフォリル化を例えば抗ホスフォチロシン抗体を用いてウエスタンブロックにより測定することができる。抗体は検出可能な標識、例えばＨＲＰのような酵素、アビジンまたはビオチン、ケミルミネセント試薬で標識することができる。他の方法はＥＬＩＳＡフォーマット、アフィニティメンブレン分離、蛍光分極アッセイ、ルミネッセントアッセイ等を使用することができる。
【００８１】
放射活性フォーマットの代替法は、時間解像蛍光共鳴エネルギー移動（ＴＲ−ＴＲＥＴ）である。この方法は標準的キナーゼ反応に従い、ここでは基質、例えばビオチニル化ポリ（ＧｌｕＴｙｒ）がＡＴＰの存在下タンパクキナーゼによってホスフォリル化される。次に最終生成物はユウロピウムキレートホスフォ特異性抗体（抗ホスフォチロシンまたはホスフォセリン／スレオニン）と、そしてビオチニル化基質と結合するストレプトアビジンＡＰＣで検出することができる。これら２成分は結合において空間的に一緒にされ、そしてホスフォ特異性抗体からアクセプター（ＳＡ−ＡＰＣ）へのエネルギー移動が均質フォーマットによって蛍光読みを発生させる。
【００８２】
本発明の化合物は、ｒａｆ，ＶＥＧＦＲ−２，ＶＥＧＦＲ−３，ｐ３８，ＰＤＧＦＲ−β，および／またはＦｌｔ−３を含む、細胞信号形質導入経路の１以上が関与するどれかの病気または状態を処置および／または予防するために使用することができる。用語「処置」は慣用的に、例えば病気または障害状態の闘争、緩和、減少、寛解、改善を目的として対象の管理またはケアを意味する。処置することができる病気および状態は上で述べたもののほか、以下のものを含む。
【００８３】
Ｒａｆ関連病は、例えば細胞増殖障害、癌、腫瘍等を含む。
【００８４】
ＶＥＧＦＲ−２関連病は、例えば癌、腫瘍成長、炎症病、リュウマチ性関節炎、網膜症、乾癬、糸球体腎炎、喘息、慢性気管支炎、アテローム性動脈硬化症、移植拒絶、血管形成が関与する状態等を含む。
【００８５】
ＶＥＧＦＲ−３関連病は、例えば癌、角膜病、炎症角膜（例えば、Ｈａｍｒａｈ，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ，１６３：５７−６８，２００３）、角膜移植（Ｃｕｒｓｉｅｆｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｏｒｎｅａ，２２：２７１−８，２００３）、リンパ管過形成、リンパ管形成が関与する状態等を含む。
【００８６】
ＰＤＧＦＲ−β関連病は、例えば細胞増殖、細胞マトリッス生産、細胞運動、および／または細胞外マトリッス生産によって特徴付けられる病気または状態である。特定の例は、例えば腫瘍、悪性腫瘍、癌、転移、慢性骨髄白血病、炎症、腎臓病、糖尿性ネフロパシー、糸状体増殖性糸状体腎炎、線維症状態、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、高血圧関連動脈硬化、静脈パイパス移植動脈硬化、硬皮症、間隙性呼吸器病、滑液障害、関節炎、白血病、リンパ腫等を含む。
【００８７】
Ｆｌｔ−３関連病は、例えば免疫関連障害、血球障害、造血細胞発達が関与する状態（例えばＴ−細胞、Ｂ−細胞、樹状細胞）、癌、貧血、ＨＩＶ，ＡＩＤＳ症候群等を含む。
【００８８】
加えて本発明の化合物は、米国特許Ｎｏ．６，３１６，４７９に開示されている状態または障害、例えば糸状体硬化症、間隙性腎炎、間隙性呼吸器病、アテローム性動脈硬化症、創傷瘢痕および硬皮症を処置するために使用することができる。
【００８９】
本発明の化合物は、炎症状態、冠再狭窄、腫瘍関連血管形成、アテローム性硬化症、自家免疫病、炎症、糸状体または糸状体細胞の増殖に関連した腎臓病、網膜脈管増殖に関連した眼病、乾癬、肝硬変、糖尿病、アテローム性硬化症、再狭窄、血管移植再狭窄、ステント内再狭窄、血管形成、眼病、呼吸器線維症、閉塞性気管支炎、糸状体腎炎、リュウマチ性関節炎のような広い範囲の病気の進行を処置または防止する広い治療活性を有する。
【００９０】
本発明は、ヒトおよび／または他の哺乳類における以下の状態の一つ以上を処置、防止、変調等を提供する。糖尿性網膜症、虚血性網膜静膜塞栓、未熟児および年令関連斑退化網膜症を含む網膜症；リュウマチ性関節炎；水疱性類天疱瘡、多形性紅斑、疱瘡状皮膚炎を含む皮下水疱形成に関連する水疱性障害または乾癬；
リウマチ熱、骨吸収、閉経後骨粗しょう症、敗血症、グラム陰性敗血症、敗血症ショック、エンドトキシンショック、毒性ショック症候群、炎症応答症候群、炎症性腸病（クローン病および潰瘍性大腸炎）、ジャリッシューヘルクスハイマー反応、肺サルコイド−シス、アレルギー性呼吸器病、ケイ肺病、炭鉱労働者じん肺症、肺胞傷害、肝不全、急性炎症中の肝臓病、重症アルコール性肝炎、マラリア（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ  マラリアおよび脳性マラリア）、非インスリン依存性真性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）、うつ血性心不全、心臓病後障害、動脈硬化、アルツハイマー病、急性脳炎、脳傷害、多発性硬化症（多発性硬化症における脱髄および稀突起細胞損失）、進行がん、悪性リンパ腫、膵臓炎、感染炎症およびがんにおける創傷治癒傷害、骨髄形成異常症候群、全身円板状エリテマトーデス、胆管硬変、腸壊死、放射線傷害／モノクローナル抗体投与後の毒性、ホスト対グラフト反応（虚血性灌流傷害および腎臓、肝臓、心臓および皮膚のアログラフト反応）、肺アログラフト拒絶反応（閉塞性気管支炎）、または股関節全置換による合併症；結核、消化器潰瘍病中のヘリコバクター・ピロリ感染、Ｔｒｉｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ感染から発生するチャガ病、大腸菌感染から生ずるシガ様トキシンの影響、スタフィロコッカス感染、メミンゴコッカス感染およびＢｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ，Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ，サイトメガロウイルス、インフルエンザウイルス、Ｔｈｅｉｌｅｒ’ｓ脳脊髄炎ウイルス、およびヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）からの感染よりなる群から選ばれた感染病；
乳頭腫、杯神経膠腫、カポジ肉腫、黒色腫、肺癌、頸部癌、膀こう癌、乳癌、大腸癌、甲状腺癌、胃癌、肝細胞カルチノーマ、白血病、リンパ腫、ホジキンス病、バーキッツ病、関節炎、リュウマチ性関節炎、糖尿性網膜炎、血管形成、狭窄、ステント内狭窄、血管移植狭窄、肺線維症、肝硬変、動脈硬化、糸状体腎炎、糖尿性腎炎、血栓性ミュアンギオパシー症候群、移植拒絶反応、乾癬、糖尿病、創傷治癒、炎症、神経退化病、高免疫障害、血管腫、筋心臓血管形成、冠および能併発脈管化、虚血症、角膜病、ルベオーシス、新脈管緑内障、未熟児斑退化網膜症、創傷治癒、潰瘍ヘリコバクター関連病、骨折、子宮内膜炎、糖尿状態、ネコ掻傷熱、甲状腺肥大、熱傷後の喘息または浮腫、外傷、慢性肺病、発作、ポリープ、嚢、滑膜炎、慢性およびアレルギー性炎症、卵巣高刺激症候群、肺および脳浮腫、ケロイド、線維症、硬変、手根トンネル症候群、成人呼吸窮迫症候群、腹水炎、眼状態、心脈管状態、クロウーフカセ（ＰＯＥＭＳ）病、クローン病、糸状体腎炎、変形性関節症、多発性硬化症、移植拒絶、ライム病、敗血症、フオンリツペルリンダウ病、天疱瘡、ページェト病、ポリ嚢腎臓病、ザルコイドーシス、咽頭炎、高粘度症候群、オスラー、ウエーバーレンジュ病、慢性閉塞性肺病、放射、低酸素症、前子かん、子宮内膜炎、ヘルペスシンプレックスによる感染、虚血性網膜炎、角膜血管形成、ヘルペスゾスター、ヒト免疫不全ウイルス、パラポツクスウイルス、プロトゾア、トキソプラスモシス、および腫瘍関連惨出および浮腫。
【００９１】
化合物は述べた活性の２以上を持つことができ、それ故複数の信号形質導入経路を標的とすることができる。このためこれら化合物は異なる化合物の組合わせを使用する時のみ通常得られる治療および予防効果を達成することができる。例えば、単一の化合物を使用する新しい脈管形成（例えばＶＥＧＦＲ−２および３の機能に関連した）（例えば血管および／またはリンパ管）および細胞増殖（例えばｒａｆおよびＰＤＧＦＲ−β機能に関連した）の両方を阻害する能力は、癌および新しい脈管化を容易化する他の細胞増殖障害の処置において特に有益である。このため本発明は、特に少なくとも抗細胞増殖および抗血管形成（すなわち血管形成を阻害する）活性を有する化合物に関する。脈管成長および細胞増殖から利益を受けるとの障害または状態も本発明に従って処置することができる。単一化合物の使用は、その活性範囲が一層精密に規定されることができるために有益である。
【００９２】
上に示したとおり、本発明はｒａｆ，ＶＥＧＦＲ−２，ＶＥＧＦＲ−３，ＰＤＧＦＲ−βおよび／またはＦｌｔ−３に関連した病気および状態を処置および／または防止するための、および／または一以上の経路、ポリペプチド、遺伝子、病気、状態等を変調するための方法に関する。これらの方法は一般に本発明の化合物の有効量を投与することを含み、ここで有効量とは所望の結果を達成するのに有用な該化合物の量である。化合物は、後で詳しく論ずるように、どのような有効なルートによってもどのような形においても投与することができる。
【００９３】
該方法は、細胞増殖の阻害を含む、腫瘍細胞増殖の変調を含む。細胞増殖の変調は腫瘍細胞の成長および／または分化が減少、消失、遅延化されること等を意味する。用語「増殖」は、細胞成長および分裂に関するいかなるプロセスを含み、そして分化およびアポプトシスを含む。上で論じたように、ｒａｆキナーゼは細胞増殖、分化およびアポトシスに含まれる細胞形質信号カスケードの活性化においてキーとなる役目を果す。例えば、研究はアンチセンスオリゴヌクレオチドによるｃ−ｒａｆ−１の阻害は細胞増殖をブロックできることを発見した（上を参照）。阻害のどのような量も治療的であると考えられる。
【００９４】
限定でなく、ｒａｆ，ＶＥＧＦＲ−２，ＶＥＧＦＲ−３，ＰＤＧＦＲ−βおよび／またはＦｌｔ−３、および／またはｒａｓ、それにそれらが一部である信号経路のどれかの上流または下流メンバーの一以上の突然変異を有する癌を含む、いかなる腫瘍または癌も処置することができる。以前に論じたように、癌はそれが責任あるメカニズムに関係なく本発明の化合物で処置することができる。限定でなく、例えば結腸、膵臓、乳房、前立腺、骨、肝臓、腎臓、肺、睾丸、皮膚、胃、結腸直腸、腎細胞カルチノーマ、肝細胞カルチノーマ、黒色腫等を含むどの器官の癌も処置することができる。
【００９５】
乳がんの例は、限定でなく、侵襲性管悪性腫瘍、侵襲性小葉悪性腫瘍、その場の管悪性腫瘍およびその場の小葉悪性腫瘍を含む。
【００９６】
脳がんの例は、限定でなく、脳幹および視床下部グリオーマ、小脳および大脳マストロサイトーマ、髄質プラストーマ、脳室上衣腫、それに神経外胚葉および松果体腫瘍を含む。
【００９７】
男性生殖器の腫瘍は、限定でなく、前立腺および睾丸がんを含む。
【００９８】
女性生殖器の腫瘍は、限定でなく、子宮内膜、頸管、卵巣、膣、外陰部がん、それに子宮筋腫を含む。
【００９９】
消化器官の腫瘍は、限定でなく、肛門、結腸、結直腸、食道、胆のう、胃、膵臓、直腸、小腸、および唾液腺がんを含む。
【０１００】
泌尿器の腫瘍は、限定でなく、膀胱、陰茎、腎臓、腎孟、尿管および尿道がんを含む。
【０１０１】
眼のがんは、限定でなく、眼内メラノーマおよび網膜芽腫を含む。
【０１０２】
肝臓がんの例は、限定でなく、肝細胞悪性腫瘍（線維層状変種ありなし）、胆管がん（肝内胆管がん）、および混合肝細胞および胆管がんを含む。
【０１０３】
皮膚がん、限定でなく、鱗細胞がん、カポジ肉腫、悪性メラノーマ、メルケル皮膚がん、および非メラノーマ皮膚がんを含む。
【０１０４】
頭頸部がんは、限定でなく、上顎／下顎／咽頭下部／鼻咽頭／口腔咽頭がん、および唇と口腔がんを含む。リンパ腫は、限定でなく、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ホジキン病、および中枢神経系のリンパ腫を含む。
【０１０５】
肉腫は、限定でなく、軟組織の肉腫、骨肉腫、悪性線維性組織腫瘍、リンパ肉腫、および横紋筋肉腫を含む。白血病は、限定でなく、急性骨髄白血病、急性リンパ芽白血病、慢性リンパ細胞白血病、慢性骨髄白血病、および毛状細胞白血病を含む。
【０１０６】
腫瘍細胞増殖の阻害に加えて、本発明の化合物は腫瘍退行、例えば腫瘍のサイズまたは体内の癌の範囲の減少を生じさせることができる。
【０１０７】
本発明は、細胞を含むシステムにおいて血管形成および／またはリンパ管形成を変調する方法に関し、該方法はここに記載した化合物の有効量をシステムへ投与することを含む。細胞を含む系は、患者の腫瘍、単離した器官、細胞または細胞のようなインビボシステム、インビトロアッセイシステム（ＣＡＭ，ＢＣＥ等）、動物モデル（例えばインビボ、皮下、癌モデル）、処置を必要とする宿主（例えば癌のような血管形成および／またはリンパ管形成成分を有する病気にかかっている宿主）等であることができる。本発明の好ましい化合物は血管形成および／またはリンパ形成、例えば新しい血管の形成を阻害する。
【０１０８】
血管形の不適切なそして異所性の発現は生物にとって有害であり得る。多数の病現学的状態は余分の血管形成に関連する。これらは限定でなく、糖尿性網膜症、新生脈管緑内障、乾癬、退行性線維増殖、血管線維腫、炎症等を含む。加えて癌および新生組織に関連した増加した血液供給は成長を促進し、急速な腫瘍拡大および転移へ導く。さらに腫瘍内の新しい血管およびリンパ管の成長は変節した細胞の逃げ道を提供し、転移およびその結果の癌のひろがりを促進する。
【０１０９】
血管形成変調のための有用なシステムは、例えば腫瘍外科植片の新生脈管化（例えば米国特許Ｎｏｓ．５，１９２，７４４；６，０２４，６８８）、ニワトリ奨尿膜（ＣＡＭ）アッセイ（例えばＴａｙｌｅｒ  ａｎｄ  Ｆｏｌｋｍａｎ，Ｎａｔｕｒｅ，２９７：３０７−３１２，１９８２；Ｅｌｉｃｅｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，１４０：１２５５−１２６３，１９９８），ウシ毛細管内皮（ＢＣＥ）細胞アッセイ（例えば米国特許Ｎｏ．６，０２４，６８８；Ｐｏｌｖｅｒｉｎｉ；Ｐ．J．ｅｔ  ａｌ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ., １９８：４４０−４５０，１９９１），ミグレーションアッセイ，およびＨＵＶＥＣ（ヒト臍帯脈管内皮）成長阻害アッセイ（例えば米国特許Ｎｏ．６，０６０，４４９）を含む。加えて、リンパ管形成変調のための有用なシステムは、例えばウサギ耳モデル（例えばＳｚｕｂａ  ｅｔ  ａｌ，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．，１６（１４）：１９８５−７，２００２）を含む。
【０１１０】
血管形成の変調は任意の適当な方法によって決定することができる。例えば、組織脈管化の程度は典型的には与えられたサンプル中に存在する脈管の数および密度を評価することによって決定される。例えば微小脈管密度（ＭＶＤ）は他出力顕微鏡フィールドにおいて皮内細胞クラスターの数を計数することにより、または微小脈管皮内細胞に対して特異的なマーカーもしくはＣＤ３１（血小板皮内細胞接着分子もしくはＰＥＣＡＭとしても知られる）のような確立された脈管の成長の他のマーカーを検出することによって決定することができる。ＣＤ３１抗体は、例えばＰｅｎｆｏｌｄ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｒ．Ｊ．Ｏｒａｌ  ａｎｄ  Ｍａｘｉｌｌ．Ｓｕｒｇ．３４：３７−４１；米国特許Ｎｏ．６，０１７，９４９；Ｄｅｌｌａｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｇｙｎ．Ｏｎｃｏｌ．６７：２７−３３，１９７７等に記載されているような、免疫ステイン組織片に対する慣用の免疫細胞学的方法に使用することができる。血管形成に対する他のマーカーは、例えばＶｅｚｆｌ（例えばＸｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｄｅｖ．Ｂｉｏ．２０６：１２３−１４１，１９９９），アンギオポイエチンＴｉｅ−１およびＴｉｅ−２（例えばＳａｔｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，３７６：７０−７４，１９９５）を含む。加えてＶＥＧＦ−１６５，ＶＥＧＦ−Ｃ，ＶＥＧＦ−Ｄのような循環ＶＥＧＦのレベルは、それが体内の血管形成活性を示す閾値以上かどうかを決定するためにＥＬＩＳＡで測定することができる。
【０１１１】
加えて、本発明は本発明の化合物に対する感受性を決定するため患者をスクリーニングする方法に関する。例えば、本発明は式Ｉの化合物で処置するための病気を有する対象を選択する方法に関し、該方法は以下のステップの一以上、例えば病気を有する対象から得たサンプル中のＲａｆ，ＶＥＧＦＲ−２，ＶＥＧＦＲ−３，ｐ３８，ＰＤＧＦＲ−βおよび／またはＦｌｔ−３の発現または活性を測定し、そして発現または活性の高レベルを有すると同定された対象に式Ｉの化合物を投与することよりなる一以上のステップを含む。
【０１１２】
用語「感受性」は、例えば応答する能力、毒性または他の副作用を示すように広い意味で使用される。例えば、本発明はここに開示した化合物によって状態が変調できるかどうかを決定する方法に関し、該方法はそのような状態を有する細胞中のＲｅｆ，ＶＥＧＦＲ−２，ＶＥＧＦＲ−３，ｐ３８，ＰＤＧＦＲ−βおよびＦｌｔ−３の発現または活性を測定することよりなる。結果は対象が本発明の化合物に応答するかどうかを決定または予測するために使用できる。例えば状態が腫瘍の場合、この方法はその腫瘍が本発明の化合物に対して感受性であるかどうかを予測するために使用することができる。用語「感受性」は、例えば腫瘍退化または細胞死滅、細胞増殖阻害、腫瘍成長阻害、腫瘍転移阻害等を発生させることによってそれを処置できることを意味する。
【０１１３】
腫瘍のような状態が本発明の化合物に対して感受性であるかどうかは日常的に決定することができる。例えばこの状態を示す細胞または組織（例えば腫瘍細胞、生検サンプル等）は、Ｒａｆ，ＶＥＧＦＲ−２，ＶＥＧＦＲ−３，ｐ−３８，ＰＤＧＦＲ−βおよび／またはＦｌｔ−３の存在および／または活性についてアッセイすることができる。高レベルの発現および／または活性が同定される時、これは対象は本発明の化合物に対して応答し、それから利益を受けることを示し得る。遺伝子発現レベル（例えばｍＲＮＡレベル）、遺伝子増幅、および遺伝子生産物活性（例えばチロシンキナーゼ活性）は、対応する遺伝子および信号経路に関して細胞の状態を特徴化するために使用することができる。例えば、本発明の標的遺伝子はチロシンキナーゼ活性を持っており、それ故キナーゼ活性を細胞または組織状態の評価のために使用することができる。後記実施例においては、ホスフォリル化された基質のレベルを見ることによって活性が測定された。これは定量的に（例えばアイソトープ、分光分析等の使用）、または実施例のように半定量的に実施することができ、そこではレベルは肉眼で評価され、＋１から＋４までの強度のレベルを割当てられた。高レベルのホスフォリル化基質を持つ細胞または組織は高レベルのキナーゼ活性を持つと考えられ、それ故本発明の化合物での治療の候補と考えられる。二以上の活性を評価することができ、そしていくつかの標的からの結果は、対象の状態（例えば腫瘍が本発明の化合物に対して応答するかどうかを決定するため）に使用できる。
【０１１４】
高レベルの標的活性は対照または標準との比較とすることができる。例えば後記実施例においては、高レベル活性は通常は標的遺伝子の実質的レベルを発現しない組織部分中の細胞タイプ（ストローマ）に対してである。それ故高レベルは細胞が比較のために用いた標準または対照よりも満足的に高い量の測定した活性またはホスフォリル化基質を発現した場合である。高レベルは２５％以上の細胞が標的活性（例えばホスフォＥＲＫ）を発現する場合とすることもできる。
【０１１５】
この方法はサンプル中の発現を正常な対照の発現と比較するか、または正常または無影響の組織から得たサンプル中の発現と比較するステップをさらに含むことができる。比較は電子形の標準（例えばデータベースに対して）に対してマニアルで実施することができる。正常対照はアッセイに提供された標準サンプルとすることができ、それは同じ患者からの隣接するがしかし無影響の組織から得ることができ、またはそれはあらかじめ定めた値等とすることができる。遺伝子発現、タンパク発現（例えば細胞中の豊富度）、タンパク活性（例えばキナーゼ活性）等を決定することができる。
【０１１６】
例えば、癌患者からの生検は、Ｒａｆ，ＶＥＧＦＲ−２，ＶＥＧＦＲ−３，ｐ３８，ＰＤＧＦＲ−βおよびＦｌｔ−３の存在、量、および／または活性についてアッセイすることができる。これらの一つ以上の発現または活性の増大は癌が本発明の化合物による処理の標的となり得ることを指示し得る。例えば、実施例に記載するように、ｒａｆ活性はホスフォＥＲＫを生ずるＥＲＫホスフォリル化へ導くカスケード（すなわちｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ）を開始させる能力によってモニターすることができる。癌中の増加したホスフォＥＲＫレベルはそのｒａｆ活性が上昇したことを示し、それを処置するため本発明の化合物の使用を示唆する。生検サンプルに加え、ホスフォＥＲＫ（他のマーカー）が血清、血液、脳髄液、尿、末梢血リンパ球（ＰＢＬｓ）中で測定できる。後者の場合、ＥＲＫホスフォリルの阻害が、後記実施例に記載した抗体を使用してホルボールミリステートアセテートによる活性化に続いて測定できる。
【０１１７】
加えて、癌を有する患者は組織が脈管新生を経験しているかどうかおよびどの程度かに基づいて選択し、モニターすることができる。これは上で論じたように、例えば循環しているＶＧＦＲリガンド等のレベルである脈管マーカー（例えばＣＤ３１）について免疫組織化学を使用して評価できる。
【０１１８】
患者の選択およびモニタリングは、ＶＥＧＦＲ−２，ＶＥＧＦＲ−３，ｐ３８，ＰＤＧＦＲ−βおよびＦｌｔ−３の細胞外部分を含む、種々のレセプターから得た脱皮させた表面ドメインの体液（血液のような）中の正常値以上のレベルの出現に基づいて行うこともできる。検出方法は、例えば細胞外ドメインへ特異的に結合する抗体を使用して日常的に実施することができる。
【０１１９】
発現の特定は、細胞またはその表面中に存在するポリペプチドの量を決定もしくは検出すること、および根原的なｍＲＮＡを測定することを含み、後者の場合は存在するｍＲＮＡの量は細胞によって生産されるポリペプチドの量と考えられる。さらに、Ｒａｆ，ＶＥＧＦＲ−２，ＶＥＧＦＲ−３，ｐ３８，ＰＤＧＦＲ−βおよび／またはＦｌｔ−３のための遺伝子は、異常発現またはポリペプチド活性に責任ある遺伝子欠陷があるかどうかを決定するために分析することができる。遺伝子配列は、例えばＮＭ−００４３３３ホモサピエンスｖ−ｒａｆネズミ肉腫オンコジーンホモログＢ１（ＢＲＡＦ）；ＮＭ−００２２５ホモサピエンスＶＥＧＦＲ−２；ＮＭＬ−１８２９２５ホモサピエンスｆｍｓ−関連チロシンキナーゼ４（ＦＬＴ４）；Ｌ３５２５３ホモサピエンスｐ３８ミトゲン活性化タンパク（ＭＡＰ）キナーゼが公に利用可能である。
【０１２０】
ポリペプチド検出は、例えばウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ，ドットブロット、免疫沈澱、ＲＩＡ，免疫組織化学等の任意の利用可能な方法によって実施できる。例えば、組織片を調製し、特異性抗体で標識することができる（間接また直接および顕微鏡で可視化）。ポリペプチドの量は、例えば関心あるサンプルを溶解し、次にＥＬＩＳＡまたはウエスタンによって組織量あたりのポリペプチド量を決定することにより可視化せずに定量できる。抗体または他の特異性結合試薬を使用できる。検出をどのように実施するかは限定しない。
【０１２１】
サンプル中の標的核酸（例えばｒａｆ，ＶＥＧＦＲ，ＰＤＧＦＲ，Ｆｌｔ−３等のための遺伝子、ｍＲＮＡ等）の定量、存在／不存在検出を許容するアッセイが使用できる。アッセイは単一細胞レベルでも、またはサンプル中の細胞および組織の全体のコレクションの「平均した発現」のアッセイである多数の細胞を含むサンプルで実施することができる。限定でなく、例えばサザンブロット分析、ノーザンブロット分析、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）（例えばＳａｉｋｉ  ｅｔ  ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４１：５３，１９８８；米国特許Ｎｏｓ．４，６８３，１９５；４，６８３，２０２；６，０４０，１６６；ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ，ａｄｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９０），逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ），アンカードＰＣＲ，ｃＤＮＡ末端の急速増幅（ＲＡＣＥ）（例えばＣｈａｅｆｅｒ  ｉｎ  Ｇｅｎｅ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ，Ｐａｇｅｓ  ９９−１１５，１９９７），リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）（ＥＰ３２０３０８），片側ＰＣＲ（Ｏｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ１．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，８６：５６７３−５６７７，１９８９），インデキシング法（例えばＬｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．２１：３２６９−３２７５，１９９３；米国特許Ｎｏｓ．５，２６２，３１１；５，５９９，０７２；５，９６５，４０９，ＷＯ９７／１８４５４，Ｐｒａｓｈａｒ  ａｎｄ  Ｗｅｉｓｓｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ１．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９３：６５９−６６３，米国特許Ｎｏｓ．６，０１０，８５０；５，７１２，１２６；Ｗｅｌｓｈ  ｅｔ  ａｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．２０：４９６５−４９７０，１９９２，および米国特許Ｎｏ．５，４８７，９８５）、および他のＲＮＡ指紋技術、核酸配列増幅（ＮＡＳＢＡ）および他の転写酵素増幅システム（例えば米国特許Ｎｏｓ．５，４０９，８１８；５，５５４，５２７；ＷＯ８８／１０３１５）、ポリヌクレオチドアッセイ（例えば米国特許Ｎｏｓ．５，１４３，８５４；５，４２４，１８６；５，７００，６３７；５，８７４，２１９；６，０５４，２７０；ＷＯ９２／１００９２，ＷＯ９０／１５０７０），ケベックレプリカーゼ（ＰＣＴ／ＵＳ８７／００８８０），ストランド移動増幅（ＳＤＡ），修復連鎖反応（ＲＣＲ），ヌクレアーゼ保護アッセイ、サブストラクション方法、急速スキャン等を含む、任意の好適なアッセイフォーマットを使用できる。追加の有用な方法は、限定でなく、例えば鋳型増幅法、競合ＰＣＲ（例えば米国特許Ｎｏ．５，７４７，２５１）、レドックス法（例えば米国特許Ｎｏ．５，８７１，９１８）、Ｔａｑｍａｎアッセイ（例えばＨｏｌｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｌ．Ａｃｄ．Ｓｃｉ．８８：７２７６−７２８０，１９９１；米国特許Ｎｏｓ．５，２１０，０１５および５，９９４，０６３）、リアルタイム蛍光モニタリング（例えば米国特許Ｎｏ．５，９２８，９０７），分子エネルギー移動標識（例えば米国特許Ｎｏｓ．５，３４８，８５３；５，５３２，１��９；５，５６３，３２２；６，０３０，７８７；６，１１７，６３５；Ｔｙａｇｉ  ａｎｄ  Ｋｒａｍｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１４：３０３−３０９，１９９６）を含む。遺伝子またはタンパク発現の単一細胞分析に適したどの方法も使用することができ、そしてその場のハイブリダイゼーション、免疫組織化学、ＭＡＣＳ，ＦＡＣＳ，フローサイトメトリー等を含む。単一細胞アッセイについては、発現生産物は、抗体、ＰＣＲまたは他のタイプの核酸増幅（例えばＢｒａｄｙ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．＆  Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ，２，１７−２５，１９９０；Ｅｂｅｒｗｉｎｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ，Ｎａｔ１．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８９：３０１０−３０１４，１９９２；米国特許Ｎｏ．５，７２３，２９０）を用いて測定できる。これらおよび他の方法は、例えば引用した刊行物に記載されているように慣用的に実施できる。
【０１２２】
ｒａｆ，ＶＥＧＦＲ−２，ＶＥＧＦＲ−３，ｐ３８，ＰＤＧＦＲ−βおよびＦｌｔ−３の活性は、例えば後記実施例に記載されているように、またはキナーゼのための標準的アッセイ（上を見よ）を使用して日常的に評価できる。
【０１２３】
発現の測定は、遺伝子の転写および翻訳機械のすべての局面を評価することを含む。例えば、もしプロモーター欠陥が障害の原因であるかまたはその疑いがあれば、サンプルは遺伝子のプロモーター配列を観察により（例えば配列もしくは制限マッピング）、転写産物（例えばＲＮＡ）の検出により、翻訳産物（例えばポリペプチド）の検出によって評価（すなわちアッセイ）できる。ポリペプチド、ポリヌクレオチドおよび遺伝子活性のための機能的アッセイを含む、遺伝子が機能性であるかどうかの測定を使用できる。
【０１２４】
この評価の実施において、結果を障害に関連しない遺伝子と、または影響されていない組織の同じ組織の影響されていない区域の同じ遺伝子と比較することが有用であり得る。この比較の性格は評価をどのように達成するかによって日常的に決定できる。例えばもしサンプルのｍＲＮＡレベルを決定するのであれば、正常のｍＲＮＡレベル、または障害によって、影響されなかったことが知られている遺伝子が比較として役立ち得る。ｍＲＮＡの検出方法は良く知られており、そして上で論じられ、例えば限定でなくノーザンブロット分析、ＰＣＲ，逆転写酵素ＰＣＲ，ＲＡＣＥ  ＰＣＲ等である。同様に、もしポリペプチド生産を遺伝子評価に使用するならば、正常組織中のポリペプチドを比較として使用するか、またはその発現障害に影響されていないことが知られた異なる遺伝子からのポリペプチドを使用できる。これらはどのようにそのような方法を実施できるかの例示に過ぎない。
【０１２５】
患者は、癌に関連することが既知のゲノタイプ、特にＢＲＡＦ，ＫＲＡＳまたはＭＥＫ遺伝子の突然変異のようなＲａｆ／Ｍｅｋ／Ｅｒｋ経路に影響するゲノタイプを持っているかによって処置のため選択できる。この線に沿って、本発明は対象から得たサンプル中の病気に関連したＲａｆ，ＶＥＧＦＲ−２，ＶＥＧＦＲ−３，ｐ３８，ＰＤＧＦＲ−βおよび／またはＦｌｔ−３遺伝子突然変異の存在を決定し、そしてそのような突然変異を持っていると同定された対象へ式Ｉの化合物を投与することを含む、処置のため患者を選択する方法に関する。
【０１２６】
突然変異の存在は、例えば対照から細胞または組織のサンプルを採取し、それから核酸を抽出し、標的遺伝子の遺伝子配列または構造を決定し（例えばｍＲＮＡ，ｃＤＮＡ，ゲノムＤＮＡ等）、標的遺伝子の配列または構造は正常な遺伝子の配列または構造と比較し、それにより配列または構造の差異は対象の遺伝子の突然変異を指示することによって日常的に決定できる。突然変異は任意の効果的方法、例えば標準遺伝子と対象の遺伝子の間の制限マップ、ヌクレオチド配列、アミノ酸配列、ＲＦＬＰ，ＤＮＡアーゼ部位、ＤＮＡメチル化指紋（例えば米国特許Ｎｏ．６，２１４，５５６）、タンパク開裂部位、分子量、電気泳動度、電荷、イオン移動度等を比較することによって決定することができる。そのような方法を実施するため、遺伝子またはポリペプチドの全体または部分を比較することができる。例えばもしヌクレオチド配列を用いるならば、プロモーター、イントロンおよびエクソンを含む遺伝子で全体、または例えばエクソン１、エクソン２等の一部だけを配列決定し、比較することができる。
【０１２７】
本発明は、病気の処置における本発明の化合物の有効性を評価する方法にも関し、該方法は、例えば本発明の化合物で処置された対象から得たサンプル中のＲａｆ，ＶＥＧＦＲ−２，ＶＥＧＦＲ−３，ｐ３８，ＰＯＧＦＲ−βおよび／またはＦｌｔ−３の発現または活性を測定し、そして前記発現または活性に対する本発明の化合物の効果を決定することを含む。
【０１２８】
例えば、本発明の化合物で処置された患者から生検サンプルを採取し、前記信号分子の存在および／または活性をアッセイすることができる。上で論じたように、癌組織中のホスフォＥＲＫの減少したレベル（例えば正常組織または処置前と比較して）は、化合物がインビボで有効性を発揮しそして治療有効性であることを指示する。
【０１２９】
発現または活性に対する化合物の効果の決定は、組織サンプルと対照または他のタイプの標準との間の比較を実施することを含む。使用できる標準は、限定でなく処置前の組織、影響されない組織からのまたは影響された組織の影響されない区域（例えば癌に形質転換されない組織の区域）からの組織サンプルを含む。標準はそのマーカーのために確立された発現の正常レベルを代表する値または範囲であることもできる。比較は本発明の化合物による処置療法の間少なくとも二つの異なる時点で採取したサンプル間で行うこともできる。例えば、薬物処置の開始後種々の時点でサンプルを集めることができ、そして発現および／または活性レベルの分析を対象の発展／予後、例えば対象がどのように薬物療法に応答しているかをモニターするために使用できる。例えば毎日、週２回、毎週、２週間毎、毎月、毎年、複数時点（少なくとも２，３，４，８，１２等）のような任意の時点を使用できる。
【０１３０】
用語「効果の決定」は、化合物によって生じた結果を分析しおよび／または同定することを指示する。例えば実施例３において、データは化合物がホスフォＥＲＫのレベルを減少（すなわちｒａｆ活性に対する化合物の効果がホスフォＥＲＫを測定することによって決定された）したことを示している。どのようなタイプの効果、例えば発現および／または活性が減少する場合、下方調節、阻害、ブロック、増加、上方調節、無変化等が同定できる。
【０１３１】
この方法は適切な投与量および投与計画、例えばどの位の量の化合物をそしてどのような頻度で投与するかを決定するために使用できる。組織中の信号分子に対する効果をモニターすることにより、臨床医は適切な処置プロトコールを決定し、そして望む効果、例えば形質導入経路の変調および阻害に対する効果が達成つつあるかを決定することができる。例えばもし化合物がホスフォＥＲＫのようなマーカーのノックダウンに効果的でなければ、患者において投与量を増すかまたはもっと頻繁に与えることができる。同様に化合物がホスフォＥＲＫまたは病的状態のための他のマーカーのレベルのノックダウンに有効であることが示された時、投与量および／または投与回数を減らすことができる。化合物は他の処置、例えば放射線、化学療法、および他の剤と併用して投与できるので、対象のモニターは病気の進行に対する処置の併用効果を評価するために使用できる。
【０１３２】
突然変異の例は、黒色腫のような癌に関連するＫ−ＲＡＳの突然変位、位置５９９の突然変異のような、Ｖ５９９Ｅおよび位置４６１，４６２，４６３，４６５，４６８，５９３，５９６，６０等における突然変異のようなＢＲＡＦの突然変異を含む。
【０１３３】
本発明の化合物はサンプル中のｒａｆ，ＶＥＧＦＲ−２，ＶＥＧＦＲ−３，ＰＤＧＦＲ−βおよび／またはＦｌｔ−３の存在および量を決定するためのマーカーとして使用することができる。該方法は、生物学的材料よりなるサンプルを本発明の化合物と接触させ、そして該化合物が該材料と結合するかどうかを決定することを含む。化合物は標識するか、または標識ＡＴＰのような標識化合物に対する競合試薬として使用することができる。
【０１３４】
本発明はまた、限定でなく、ｒａｆ，ＶＥＧＦＲ，ＰＤＧＦＲおよび／またはＦｌｔ−３よりなる信号形質導入経路の他の変調剤と共に本発明の化合物を投与することを含む、哺乳類の病気および状態を処置、防止、変調等のための方法を提供する。これらは同じ組成物内に、または別の製剤もしくは投与単位中に存在し得る。投与は同じまたは異なるルートであることができ、そして同時、逐次的等であることができる。
【０１３５】
本発明はまた、他の活性剤と共に本発明の化合物を、例えば同じトータル時間にわたって他の活性剤の同時または間歇投与により２８連続日まで１日１回以上投与することを含む、病気および状態の処置、防止、変調等の方法に関する。
【０１３６】
組成物へ加えることができる任意的抗増殖剤は、限定ではないが、アスパラギナーゼ、ブレオマイシン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、コラスパーゼ、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、エピルビシン、エポトシド、５−フロロウラシル、ヘキサメチルメラミン、ヒドロキシ尿素、イフオスファミド、イリノテカン、リユーコボリン、ロムスチン、メクロレサミン、６−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキセート、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、プロカルバジン、ラロキシフェン、ストレプトゾシン、タモキシフェン、チオグアニン、トポテカン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、およびビンデシンのような、メルクインデックス第１２版（１９９６）（ここに参照として取入れる）にがん化学療法薬物療法に掲げられている化合物を含んでいる。
【０１３７】
本発明の組成物と共に使用するのに適した他の抗増殖剤は、限定でなく、アミノグルテチミド、Ｌ−アスパラギナーゼ、アザチオプリン、５−アザシチジン、クラドリビン、ブスルファン、ジエチルスチルベストロール、２’−２’−ジフロロデオキシシチジン、ドセタクセル、エリスロヒドロキシノニルアデニン、エチニルエストラジオール、５−フロロデオキシウリジン、５−クロロデオキシウリジンモノリン酸、フルダラビンホスフェート、フルオキシメステロン、フルタミド、ヒドロキシプロゲステロンカプロエート、イダルビシン、インターフェロン、メドロキシプロゲステロンアセテート、メゲステロールアセテート、メルファラン、ミトタン、パクリタクセル、ペントスタチン、Ｎ−ホスフォノアセチル−Ｌ−アスパルテート（ＰＡＬＡ）、プリカマイシン、セムスチン、テニポシド、テストステロンプロピオネート、チオテパ、トリメチルメラミン、ウリジン、およびビノレルビンのような、Ｇｏｏｄｎａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｎｔｉｓ（Ｎｉｎｔｈ  Ｅｄ．），ｅｄｉｔｅｄ  Ｍｏｌｉｎｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，ｐｕｂｉｓｈｅｄ  ｂｙ  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，ｐａｇｅｓ  １２２５−１２８７（１９９６）（ここに参照として取入れる）において腫瘍性病に使用するために認知された化合物を含む。
【０１３８】
本発明の化合物は、任意の形で、例えば経口、非経口、経腸、静脈内、腹腔内、局所、経皮（例えば標準パッチを使用して）、眼内、鼻内、局所、アエロゾル、吸入、皮下、筋肉内、バッカル、舌下、肛門内、経膣、動脈内および硬膜下腔内等のような非経口を含む任意の効果的ルートによって投与できる。それらは単独で、または活性または非活性の任意の成分と組合わせて投与できる。それらは任意の有効投与量、例えば全体重ｋｇあたり約０．１ないし約２００ｍｇで投与することができる。
【０１３９】
本発明は、塩およびエステルおよび組成物を含む上に記載した化合物（式Ｉの化合物）を哺乳類の高増殖障害を処置するために使用する方法に関する。この方法は、障害の処置に有効な量の本発明の化合物、または薬学的に許容し得るその塩もしくはエステルをヒトを含むそれを必要する哺乳類に投与することを含む。高増殖障害は、限定でなく、乳房、呼吸管、脳、生殖器、消化管、尿管、眼、肝臓、皮膚、頭頸部、甲状腺、副甲状腺、およびそれらの転移を含む。これらの障害はリンパ腫、内腫および白血病を含む。
【０１４０】
式Ｉの化合物の合成および式Ｉの化合物の合成に含まれる中間体の合成に使用できる合成変換は当業者に既知であるかまたはアクセスし得る。
【０１４１】
合成変換のコレクションは以下の編集物に見られる。
【０１４２】
Ｊ．Ｍａｒｃｈ．Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４ｔｈ  ｅｄ．；Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９２）；
Ｒ．Ｃ．Ｌａｒｏｃｋ．Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｍａｔｉｏｎｓ，２ｎｄ  ｅｄ．；Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９９）；
Ｆ．Ａ．Ｃａｒｅｙ；Ｒ．Ｊ．Ｓｕｎｄｂｅｒｇ．Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２ｎｄ  ｅｄ．；Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４）；
Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ；Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ  ｅｄ．；Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９９）；
Ｌ．Ｓ．Ｈｅｇｅｄｕｓ．Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  Ｍｅｔａｌｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｃｏｍｐｌｅｘ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２ｎｄ  ｅｄ．；Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｂｏｏｋｓ：Ｍｉｌｌ  Ｖａｌｌｅｙ，ＣＡ（１９９４）；
Ｌ．Ａ．Ｐａｑｕｅｔｔｅ，Ｅｄ．Ｔｈｅ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；Ｊｏｈｎ    Ｗｉｌｅｙ；Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９４）；
Ａ．Ｒ．Ｋａｔｒｉｚｋｙ；Ｏ．Ｍｅｔｈ−Ｃｏｈｎ；Ｃ．Ｗ．Ｒｅｅｓ，Ｅｄｓ．Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｆｕｎｃｔｉｊｏｎａｌ  Ｇｒｏｕｐ  Ｔｒａｎｓｆｏｍａｔｉｏｎｓ；Ｐｅｒｇｅｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ：Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ（１９９５）；
Ｇ．Ｗｉｋｉｎｓｏｎ；Ｆ．Ｇ  Ａ．Ｓｔｏｎｅ；Ｅ．Ｗ．Ａｂｅｌ，Ｅｄｓ．Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ；Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ；Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ（１９８２）；
Ｂ．Ｍ．Ｔｒｏｓｔ；Ｉ．Ｆｌｅｍｉｎｇ．Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ：Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ（１９９１）；
Ａ．Ｒ．Ｋａｔｒｉｚｋｙ；Ｃ．Ｗ．Ｒｅｅｓ  Ｅｄｓ．Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ；Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ；Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ  １９８４）；
Ａ．Ｒ．Ｋａｔｒｉｚｋｙ；Ｃ．Ｗ．Ｒｅｅｓ；Ｅ．Ｆ．Ｖ．Ｓｃｒｉｖｅｎ，Ｅｄｓ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ／／；Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ；Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ（１９９６）；
Ｃ．Ｈａｎｓｃｈ；Ｐ．Ｇ．Ｓａｍｍｅｓ；Ｊ．Ｂ．Ｔａｙｌｏｒ，Ｅｄｓ．Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ；Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ；Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ（１９９０）；
【０１４３】
加えて、合成方法論および関係するトピックの評論は、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｔｈｅ  Ｔｏｔａｌ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｔｈｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  Ｃａ；Ｍｅｔｈｏｄｅｎｄｅｒ  Ｏｒａｎｎｉｓｃｈｏｎ  Ｃｈｅｍｉｅ，（Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ），Ｔｈｉｅｍｅ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙに見られる。さらに合成変換のデータベースは、ＣＡＳ  ＯｎＬｉｎｅまたはＳｃｉＦｉｎｄｅｒを用いて検索し得るＣｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ，ＳｐｏｔＦｉｒｅを用いて検索し得るＨａｎｄｂｕｃｈ  ｄｅｒ  Ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ  Ｃｈｅｍｉｅ（Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎ）、およびＲＥＡＣＣＳを含む。
【０１４４】
一般的製造方法
式Ｉの化合物は既知の化学反応および操作の使用により製造することができ、あるものは商業的に入手し得る出発原料から出発する。それにもかかわらず一般的製造方法が当業者がこれら化合物の合成を助けるために以下に提供され、さらに詳細な実施例が後の実験の部に提供される。
【０１４５】
置換アニリンは一般に標準的方法（Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３ｒｄ  Ｅｄ．Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８５），Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ；ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８９））によって生成させることができる。スキームIIに示すように、アリールアミンは普通Ｎｉ，ＰｄまたはＰｔのような触媒とＨ2 を使用して、またはホルメート，シクロヘキサジエンまたはボロハイドライドのような水素化物変換剤を使用してニトロアリールの還元によって合成される（Ｒｙｌａｎｄｅｒ，Ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｉｏｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ：Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ（１９８５））。ニトロアリールはＬｉＡｌＨ4 のような強いハイドライドソースを使用して（Ｓｅｙｄｅｎ−Ｐｅｎｎｅ，Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  Ｄｙ  ｔｈｅ  Ａｌｕｍｉｎｏ−ａｎｄ  Ｂｒｏｈｙｄｒｉｄｅｓ  ｉｎ
Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９１））またはしばしば酸性媒体中でＦｅ，ＳｎまたはＣａのようなゼロ価金属を使用して直接還元することもできる。ニトロアリールの合成のために多数の方法が存在する（Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３ｒｄ
Ｅｄ．Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８５），Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ；ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８９））。
【０１４６】
【化１】
2007511203.tif 000002
【０１４７】
スキームＩ．ニトロアリールのアリールアミンへの還元
ニトロアリールは共通してＨＮＯ3 または代りのＮＯ2 + 源を使用して求電子性芳香族ニトロ化によって生成される。ニトロアリールは還元前にさらに手を加えてもよい。このためニトロアリールは、
【０１４８】
【化２】
2007511203.tif 000003
【０１４９】
により置換され、可能性ある脱離基（例えばＦ，Ｃｌ，Ｂｒ等）はチオレート（スキームIIに例示）またはフエノキサイドのような求核試薬との処理において置換反応を受けることができる。ニトロアリールはウルマンタイプのカップリング反応（スキームII）を受けることもできる。
【０１５０】
【化３】
2007511203.tif 000004
【０１５１】
スキームII．ニトロアリール使用する選択した求核芳香族置換
ニトロアリールは遷移金属仲介クロスカップリング反応を受けることもできる。例えば、ニトロアリールブロマイド、ヨウダイドまたはトリフレートのようなニトロアリール求核試薬は、アリールボロン酸（鈴木反応、以下に例示）、アリールスズ（ｓｔｉｌｌ反応）またはアリール亜鉛（根岸反応）のようなアリール求核試験とパラジウム仲介クロス反応を受け、ビアリール（５）を与える。
【０１５２】
【化４】
2007511203.tif 000005
【０１５３】
スキームIII ．非対称尿素生成の選択された方法
スキームIVに示すように、非対称尿素生成はアリールイソシアネート（１４）とアリールアミン（１３）との反応を含むことができる。ヘテロアリールイソシアネートは、ホスゲン、またはトリクロロメチルクロロホルメート（ジホスゲン）、ビス（トリクロロメチル）カーボネート（トリホスゲン）、もしくはＮ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）のようなホスゲン均等物での処理によってヘテロアリールアミンから合成することができる。イソシアネートは、エステル、酸ハライドまたは無水物のような複素環カルボキシル酸誘導体からクルチウスタイプ転位によって得ることもできる。このように酸誘導体（１６）のアジト源との反応および続いての転位はイソシアネートを与える。対応するカルボキシル酸（１７）はジフェニルフォスフォリルアジト（ＯＰＰＡ）または類似の試薬を使用してクルチウムタイプ転位へかけることもできる。
【０１５４】
【化５】
2007511203.tif 000006
【０１５５】
最後に尿素は当業者に親密な方法を使用してさらに処理することができる。          
【０１５６】
化合物は、経口的、局所的、非経口的、吸入もしくはスプレーにより、経直腸的に投与単位製剤において投与することができる。注射による投与は、静脈内、筋肉内、皮下および非経口注射、および注入技術の使用を含む。一以上の化合物は一以上の薬学的に許容し得る担体およびもし望むならば他の活性成分と組合せて存在することができる。
【０１５７】
経口使用を意図する組成物は、薬剤組成物の製造のための当業者に知られた適当な方法に従って調製することができる。そのような組成物は希釈剤、甘味剤、香味剤、着色剤および保存剤よりなる群から選ばれた一以上の剤を服用可能な製剤を調製するために含むことができる。錠剤は錠剤の製造に適した非毒性の薬学的に許容し得る補助剤との混合物中の活性成分を含有する。これら補助剤は、例えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、乳糖、リン酸カルシウムもしくはリン酸ナトリウムのような不活性希釈剤；例えばコーンスターチまたはアルギン酸のような顆粒化および崩壊剤；および例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクのような結合剤であることができる。錠剤は未被覆か、またはそれらは胃腸管において崩壊および吸収を遅らせ、それにより長期間にわたって持続作用を提供するため公知技術によって被覆されることができる。例えばグリセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレートのような時間遅延材料を使用することができる。これらの化合物は固形の速放形に調製することもできる。
【０１５８】
経口使用のための製剤は、活性成分が例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウムもしくはカオリンのような不活性個体希釈剤と混合された硬ゼラチンカプセルとして、または活性成分が水または油性媒体、例えばピーナッツオイル、流状パラフィンもしくはオリーブ油と混合された軟ゼラチンカプセルとして提供することもできる。
【０１５９】
水性懸濁液の製造に適した補助剤との混合物中の活性成分を含有する水性懸濁液も使用し得る。そのような補助剤は懸濁剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガントガム、アカシアガムであり、分散または湿潤剤は天然に存在するフォスファチド、例えばレシチン、または長鎖脂肪族アルコールとのエチレンオキシドの縮合物、例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール、またはポリオキシエチレンソルビトールモノオレエートのような脂肪酸とヘキシトールから得られた部分エステルとのエチレンオキシドの縮合生成物、または脂肪酸と無水ヘキシトールから得られた部分エステルとのエチレンオキシドの縮合生成物例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートであることができる。水性懸濁液は一以上の保存剤、例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルもしくはｎ−プロピル；一以上の着色剤；一以上の香味剤、およびショ糖もしくはサッカリンのような一以上の甘味剤を含むことができる。
【０１６０】
水の添加により水性懸濁液の調製に適した分散し得る粉末および顆粒は、分散または湿潤剤、懸濁剤および一以上の保存剤との混合物の活性成分を提供する。適切な分散もしくは湿潤剤および分散剤は既に上述したものによって例示されている。追加の補助剤、例えば甘味剤、香味剤および着色剤も存在することができる。
【０１６１】
化合物は非水性液体製剤の形、例えば活性成分を植物油、例えばアラキス油、オリーブ油もしくはピーナッツ油中に、または液状パラフィンのような鉱油中に分散することによって製剤化することができる油性懸濁液の形であってもよい。油性懸濁液は増粘剤、例えば蜜ロウ、硬パラフィンまたはセチルアルコールを含有することができる。服用し得る経口製剤を提供するため、上で述べたような甘味剤および香味剤を加えることができる。これら組成物はアスコルビン酸のような抗酸化剤の添加によって保存することができる。
【０１６２】
本発明の薬剤組成物は水中油型のエマルジョンの形にあることができる。油相は植物油例えばオリーブ油もしくはアラキス油、または鉱油例えば液状パラフィン、またはこれらの混合物でよい。好適な乳化剤は天然ガム例えばアカシアガムもしくはトラガントガム、天然フォスファチド例えば大豆レシチン、および脂肪酸と無水ヘキシトールから誘導されたエステルもしくは部分エステル例えばソルビタンモノオレエート、および前記エステルのエチレンオキシドとの縮合生成物例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートを含む。エマルジョンは甘味剤および香味剤を含むことができる。
【０１６３】
シロップおよびエリキサーは甘味剤例えばグリセロース、プロピレングリコール、ソクビトールもしくはショ糖で処方することができる。そのような処方は緩和剤、保存剤、香味剤および着色剤を含有することができる。
【０１６４】
化合物は薬物の直腸投与のための坐剤の形で投与することもできる。これらの組成物は、薬物を常温で固体であるがしかし直腸または膣温度では液体であり、そして直腸または膣内で溶融して薬物を放出する適当な非刺激性補助剤と混合することによって調製することができる。そのような材料はココアバターおよびポリエチレングリコールを含む。
【０１６５】
本発明の化合物は、水、食塩水、デキストロース水溶液および関連する糖溶液、エタノール、イソプロパノールまたはヘキサデシルアルコールのようなアルコール類、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールのようなグリコール類、２，２−ジメチル−１，４−ジオキソラン−４−メタノールのようなグリセロールケタール、ポリエチレングリコール４００のようなエーテル類、油、脂肪酸、脂肪酸エステルまたは脂肪酸グリセライドまたはアセチル化脂肪酸グリセライドのような無菌液体または液体混合物であることができる、薬剤担体を有する生理学的に許容し得る希釈剤中の、石鹸または洗剤のような界面活性剤、ペクチン、カルボマー、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、またはカルボキシメチルセルロースのような懸濁剤、または乳化剤および他の薬学的アジュバントの添加ありなしで化合物の注射可能な投与形として、非経口的に、すなわち皮下、静脈内、眼内、滑液内、筋内または腹腔内投与することができる。
【０１６６】
本発明の非経口製剤に使用できる油の例は、石油、動物、植物または合成起源のもの、例えば落花生油、大豆油、ゴマ油、綿実油、コーン油、オリーブ油、ペトロラタムおよび鉱油である。好適な脂肪酸はオレイン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸およびミリスチン酸を含む。好適な脂肪酸エステルは、例えばオレイン酸エチルおよびミリスチン酸イソプロピルである。好適な石鹸は脂肪酸アルカリ金属塩、アンモニウム塩およびトリエタノールアミン塩であり、そして好適な洗剤はカチオン性洗剤、例えばジメチルジアルキルアンモニウムハライド、アルキルピリジニウムハライド、アルキルアミンアセテート；アニオン性洗剤、例えばアルキル、アリールおよびオレフィンスルホネート、アルキル、オレフィン、エーテルおよびモノグリセライドサルフェートおよびスルホサクシネート；非イオン洗剤、例えば脂肪アミンオキサイド、脂肪酸アルカノールアミド、およびポリ（オキシエチレン−オキシプロピレン）、またはエチレンオキシド−プロピレンオキシド共重合体；および両性洗浄剤、例えばアルキル−β−アミノプロピオネートおよび２−アルキルイミダゾリン４級アンモニウム塩、および混合物を含む。
【０１６７】
本発明の非経口組成物は、典型的には溶液中約０．５％ないし約２５％の活性成分を含むであろう。保存剤およびバッファーも有利に使用し得る。注射部位での刺激を最小化またはなくすために、そのような組成物は、好ましくは約１２ないし約１７のＨＬＢを有する非イオン界面活性剤を含むことができる。そのような製剤中の界面活性剤の量は好ましくは約５ないし約１５重量％の範囲である。界面活性剤は上のＨＬＢを有する単一成分か、または所望のＨＬＢを有する２以上の成分の混合物であることができる。
【０１６８】
非経口製剤に使用される界面活性剤の例は、ポリエチレンソルビタン脂肪酸エステルクラス、例えばソルビタンモノオレエートおよびポリエチレンオキシドとプロピレングリコールとの縮合によって生成したエチレンオキシドと疎水性ベースの高分子量付加物である。
【０１６９】
医薬組成物は無菌の注射可能水性懸濁液の形でもよい。そのような懸濁液は、既知の方法に従って、適当な分散または湿潤剤および、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トランガントガムおよびアカシアガムのような懸濁剤；レシチンのような天然ホスファチド、エチレンオキシドと脂肪酸との縮合物、例えばポリオキシエチレンステアレート、エチレンオキシドと長鎖脂肪酸との縮合生成物例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエートのような脂肪酸およびヘキシトールから誘導された部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物、または脂肪酸および無水ヘキシトールから誘導された部分エステルとエチレンオキシドの縮合生成物例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートであることができる分散または湿潤剤を使用して処方することができる。
【０１７０】
無菌の注射可能な製剤は、非毒性の非経口的に許容し得る希釈剤または溶媒中の無菌の注射溶液または懸濁液であることもできる。
【０１７１】
採用し得る希釈剤または溶媒は、例えば水、リンゲル液、等張塩化ナトリウム溶液または等張グルコース溶液である。加えて、無菌の固定油を溶媒または懸濁媒として慣用的に採用し得る。この目的のため合成モノまたはジグリセライドを含む任意のブランドの固定油を採用することができる。加えてオレイン酸のような脂肪酸を注射製剤に使用することができる。
【０１７２】
本発明の化合物は当業者に既知の方法（パッチ）を使用して経皮的に投与することもできる(例えば、Ｃｈｉｅｎ；“Ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ  Ｃｏｎｔｒａｌｌ  Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ”；Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｃｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．；１９８７，Ｃｉｐｐ  ｅｔ  ａｌ，ＷＯ９４／０４１５７，３Ｍａｒ９４を見よ)。そのような経皮パッチは、本発明の化合物を制御された量で連続または非連続注入することを提供するために使用し得る。薬物の送達のための経皮パッチの構造および使用はこの分野では良く知られている（例えば米国特許Ｎｏ．５，０２３，２５２、１９９１年６月１日発行を見よ。参照としてここに取入れる）。そのようなパッチは薬剤の連続的脈動的またはオンデマンド送達のために構成することができる。例えば、任意に浸透促進剤を含んでいる適当な揮発性溶媒中の式Ｉの化合物の溶液または懸濁液は、マトリックス材料および殺バクテリア剤のような当業者に既知の追加の添加剤と組合せることができる。滅菌後、得られる混合物は既知の操作に従って投与形態に製剤化することができる。加えて、乳化剤および水との処理により、式Ｉの化合物の溶剤もしくは懸濁液はローションまたはザルベに製剤化することができる。
【０１７３】
経皮放出システムを処理するための適切な溶剤は当業者に既知であり、そしてエタノールまたはイソプロピルアルコールのような低級アルコール、アセトンのような低級ケトン、酢酸エチルのような低級カルボキシル酸エステル、テトラヒドロフランのような極性エーテル、ヘキサン、シクロヘキサンまたはベンゼンのような低級炭化水素、またはジクロロメタン、クロロホルム、トリクロロトリフロロエタンもしくはトリクロロフロロエタンのようなハロゲン化炭化水素を含む。好適な溶媒はまた、低級アルコール、低級ケトン、低級カルボキシル酸エステル、極性エーテル、低級炭化水素、ハロゲン化炭化水素から選ばれた一以上の物質の混合物を含むことができる。
【０１７４】
経皮放出システムのための好適な浸透促進剤は当業者に既知であり、そして例えばエタノール、プロピレングリコールもしくはベンジルアルコールのようなモノヒドロキシまたはポリヒドロキシアルコール；ラウリルアルコールまたはセチルアルコールのような飽和もしくは不飽和Ｃ8-18脂肪アルコール；ステアリン酸のような飽和もしくは不飽和Ｃ8-18脂肪酸；メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチルのような２４炭素までの飽和もしくは不飽和脂肪エステル；酢酸、カプロン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、ステアリン酸またはパルミチン酸のモノグリセリンエステル；またはジイソプロピルアジペート、ジイソブチルアジペート、ジイソプロピルセバケート、ジイソプロピルマレエートもしくはジイソプロピルフマレートのようなトータルで２４炭素までの飽和もしくは不飽和ジカルボン酸のジエステルを含む。追加の浸透促進剤は、レシチンもしくはセファリンのようなフォスファチジル誘導体、テルペン、アミド、ケトン、尿素およびその誘導体、およびジメチルイソソルビットおよびジエチレングリコールモノエチルエーテルのようなエーテルを含む。好適な浸透促進製剤はまた、モノヒドロキシもしくはポリヒドロキアルコール、飽和もしくは不飽和Ｃ8-18脂肪アルコール、飽和もしくは不飽和Ｃ8-18脂肪酸、２４炭素までの飽和もしくは不飽和脂肪エステル、トータルで２４炭素までの飽和もしくは不飽和ジカルボン酸のジエステル、フォスファチジル誘導体、テルペン、アミド、ケトン、尿素およびその誘導体およびエーテルから選ばれた一以上の物質の混合物を含むことができる。
【０１７５】
経皮放出システムに適した結合剤は当業者に既知であり、そしてポリアクリレート、シリコーン、ポリウレタン、ブロック共重合体、スチレンブタジエン共重合体および天然および合成ゴムを含む。セルロースエーテル、誘導体化ポリエチレンおよびシリケートもマトリックス成分として使用し得る。粘性樹脂もしくはオイルのような追加の添加剤はマトリックスの粘度を増すために添加することができる。
【０１７６】
本発明の方法において採用し得る他の製剤は経皮送達デバイス（パッチ）を採用する。そのような経皮パッチは、本発明の化合物を制御された量で連続または非連続注入することを提供するために使用し得る。薬剤の送達のための経皮パッチの構造および使用はこの分野では良く知られている（例えば米国特許第５，０２３，２５２号、１９９１年６月１１日発行を見よ。参考としてここに取り入れる）。
【０１７７】
非経口投与のための制御された放出製剤は、この分野で既知のリポソーム、ポリマーマイクロスフェアおよびポリマーゲル製剤を含む。
【０１７８】
医薬組成物は機械的送達器具を用いて患者へ導入することが望ましいか必要である。薬剤の送達のための機械的送達器の構造および使用は当分野で良く知られている。例えば薬物を脳へ直接投与するための直接の技術は、通常血液−脳バリヤーをパイパスするため患者の心室系に配置された薬物送達カテーテルを含む。薬剤を体の特定の解剖学的区域へ輸送するため内植し得る送達システムの一例は、１９９１年４月３０日発行の米国特許第５，０１１，４７２号記載されている。
【０１７９】
本発明の組成物は、必要または所望に応じ、一般に担体または希釈剤と呼ばれる他の慣用の薬学的に許容し得る配合成分を含むことができる。適切な投与形のそのような組成物を調製するための慣用操作を利用することができる。そのような成分および操作はここに参照として取り入れる以下の参考文献に記載されているものを含む。Ｐｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ，Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ，ＰＤＡ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １９９３，５２（５），２３８−３１１；Ｓｔｒｉｃｋｅｙ，Ｒ．Ｇ．，Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｓｍａｌｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｍａｒｋｅｔｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｖｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ（１９９９）Ｐａｒｔ−１，ＰＤＡ  Ｊｏｕｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｎｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １９９９，５３（６），３２４−３４８；Ｎｅｍａ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ，Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ  ｉｎ  ｉｎｊｊｅｃｔａｂｌｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，ＰＤＡ  Ｊｏｕｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｎｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １９９７，５１（４），１６６−１７１。
【０１８０】
本発明は、１以上の本発明の化合物を含む医薬組成物の投与にも関する。これらの組成物はそれを必要とする患者へ投与することによって所望の薬理効果を達成するために利用される。本発明の目的のための患者は特定の状態および疾病のための処置を含むヒトを含む哺乳類である。それ故本発明は、薬学的に許容し得る担体と、有効量の本発明の化合物、それらの塩よりなる医薬組成物を含む。薬学的に許容し得る担体は、好ましくは担体に帰すべき副作用が活性成分の有益な効果を損なわないように、活性成分の有効活性と矛盾しない濃度において無毒性でありかつ患者に対して無害の担体である。化合物の薬学的に有効量は、処置されている特定の状態に結果を産むまたは影響する量である。本発明の化合物は、薬学的に許容し得る担体と共に、即時、遅延および時間放出製剤を含む有効な慣用の投与単位形において経口、非経口、局所、経鼻、経眼、経耳的、舌下、経直腸、経膣等により投与することができる。
【０１８１】
経口投与のため、化合物はカプセル、ピル、錠剤、トローチ、ひし形錠、溶融物、粉末、溶液、サスペンジョン、またはエマルジョンのような固形または液状製剤に製剤することができ、そして医薬製剤の分野において知られた方法によって製造することができる。固形単位投与形は、例えば界面活性剤、滑沢剤、および乳糖、ショ糖、リン酸カルシウムおよびコーンスターチのような不活性フィラーを含んでいる通常の硬また軟ゼラチンシェルのカプセルであることができる。
【０１８２】
他の具体例において、本発明の化合物は、アカシア、コーンスターチまたはゼラチンのようなバインダー、バレイショデンプン、アルギン酸、コーンスターチ、グアーガム、トラガントガム、アカシアのような投与後錠剤の崩壊を助けることを意図した崩壊剤、錠剤顆粒の流動を改善し、そして錠剤臼および杵の表面への錠剤原料の付着を防止することを意図した滑沢剤例えばタルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、カルシウムまたは亜鉛、染料、着色剤および錠剤の美的品質を増強しそしてそれらの患者に対して受入れ易くすることを意図した、染料着色料、およびペパーミント、ウインターグリーンまたはチェリー香料のような香料と組合せて乳糖、ショ糖およびコーンスターチのような錠剤ベースと共に打錠することができる。経口液体形に使用するための好適な補助剤は、リン酸ジカルシウム、および薬学的に許容し得る界面活性剤、懸濁剤または乳化剤の添加ありなしの水およびアルコール、例えばエタノール、ベンジルアルコールおよびポリエチレンアルコールのような希釈剤を含む。コーティングとして、または他のように投与単位の物理的形状を修飾するための種々の他の材料が存在し得る。例えば錠、ピルまたはカプセルはシェラック、糖または両者でコーティングし得る。
【０１８３】
本発明の組成物は、必要または所望に応じ、一般に担体または希釈剤と呼ばれる他の慣用の薬学的に許容し得る配合成分を含むことができる。適切な投与形のそのような組成物を調製するための慣用操作を利用することができる。そのような成分および操作はここに参照として取り入れる以下の参考文献に記載されているものを含む。Ｐｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ，Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ，ＰＤＡ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １９９３，５２（５），２３８−３１１；Ｓｔｒｉｃｋｅｙ，Ｒ．Ｇ．，Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｓｍａｌｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｍａｒｋｅｔｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｖｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ（１９９９）Ｐａｒｔ−１，ＰＤＡ  Ｊｏｕｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｎｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １９９９，５３（６），３２４−３４８；Ｎｅｍａ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ，Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ  ｉｎ  ｉｎｊｊｅｃｔａｂｌｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，ＰＤＡ  Ｊｏｕｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｎｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １９９７，５１（４），１６６−１７１。
【０１８４】
意図した投与ルートのための組成物を処方するために適切として使用することができる普通に使用される薬剤成分は以下のものを含む。
【０１８５】
酸性化剤（非限定的な例は、酢酸、クエン酸、フマル酸、塩酸、硝酸を含む）；
アルカリ化剤（非限定的な例は、アンモニア溶液、炭酸アンモニウム、ジエタノールアミン、モノエタノールアミン、水酸化カリウム、ホウ酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、トリエタノールアミン、トロールアミンを含む）；
吸着剤（非限定的な例は、粉末セルロースおよび活性炭を含む）；
エアゾル噴射剤（非限定的な例は、二酸化炭素、ＣＣｌ２Ｆ２，Ｆ２ＣｌＣ−ＣＣｌＦ２およびＣＣｌＦ３）；
空気置換剤（非限定的な例は、窒素およびアルゴンを含む）；
抗カビ保存剤（非限定な例は、安息香酸、ブチルパラベン、エチルパラベン、メチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸ナトリウムを含む）；
抗微生物保存剤（非限定的な例は、塩化ベンズアルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、塩化セチルピリジニム、クロロブタノール、フェノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、およびメチロサールを含む）；
抗酸化剤（非限定的な例は、アスコルビン酸、アスコルビルパルミテート、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、次亜リン酸、モノチオグリセロール、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、ナトリウムホルムアルデヒドスルホキシレート、メタ重亜硫酸ナトリウムを含む）；
結合物質（非限定的な例は、ブロック共重合体、天然および合成ゴム、ポリアクリレート、ポリウレタン、シリコーン、ポリシロキサン、スチレンブタジエン共重合体を含む）；
緩衝剤（非限定な例は、メタリン酸カリウム、リン酸二カリウム、酢酸ナトリウム、無水クエン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム二水和物を含む）；
担持剤（非限定的な例は、アカシアシロップ、芳香シロップ、芳香エリキサー、チェリーシロップ、ココアシロップ、オレンジシロップ、シロップ、コーンオイル、鉱油、落花生油、ゴマ油、静菌塩化ナトリウム注射液、注射用静菌水を含む）；
キレート剤（非限定的な例は、エデト酸ジナトリウムおよびエデト酸を含む）；
着色剤（非限定的な例は、ＦＤ  ＆  ＣレッドＮｏ．３，ＦＤ  ＆  ＣレッドＮｏ．２０，ＦＤ  ＆  ＣイエローＮｏ．６，ＦＤ  ＆  ＣブルーＮｏ．２，Ｄ  ＆  ＣグリーンＮｏ．５，Ｄ  ＆  ＣオレンジＮｏ．５，Ｄ  ＆  ＣレッドＮｏ．８，カラメル、赤色酸化鉄を含む）；
清澄化剤（非限定な例はベントナイト）；
乳化剤（非限定的な例は、アカシア、セトマクロゴール、セチルアルコール、グリセリルモノステアレート、レシチン、ソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレン５０モノステアレートを含む）；
カプセル化剤（非限定的な例は、ゼラチンおよびセルロースアセテートフタレートを含む）；
香味剤（非限定的な例は、アニス油、シナモン油、ココア、メンソール、オレンジ油、ペパーミント油、バニリンを含む）；
調湿剤（非限定的な例は、グリセロール、プロピレン、グリコール、ソルビトールを含む）；
滑剤（非限定な例は鉱油およびグリセリン）；
オイル（非限定的な例は、アラキス油、鉱油、オリーブ油、グリセリンを含む）；
軟膏基剤（非限定的な例は、ラノリン、親水性軟膏、ポリエチレングリコール軟膏、ペテロラタム、親水性ペトロラタム、白色軟膏、黄色軟膏、ローズウォーター軟膏を含む）；
浸透促進剤（経皮送達）（非限定的な例は、モノまたはポリヒドロキシアルコール、モノまたは多価アルコール、飽和または不飽和脂肪アルコール、飽和または不飽和脂肪エステル、飽和または不飽和ジカルボン酸、精油、ホスフェチジル誘導体、セファリン、テルペン、アミド、エーテル、ケトンおよび尿素を含む）；
可塑剤（非限定的な例は、フタル酸ジエチルおよびグリセロールを含む）；
溶媒（非限定的な例は、エタノール、コーンオイル、綿実油、グリセロール、イソプロパノール、鉱油、オレイン酸、落花生油、精製水、注射用水、注射用無菌水、洗浄のための無菌水を含む）；
硬化剤（非限定的な例は、セチルアルコール、セチルエステルワックス、微結晶ワックス、パラフィン、ステアリルアルコール、白ロウ、黄色ロウを含む）；
坐薬基剤(非限定な例はカカオバターおよびポリエチレングリコール)；
界面活性剤（非限定的な例は、塩化ベンゼトニウム、ノノキシノール１０、オキシトキシリノール９、ポリソルベート８０、ラウリル硫酸ナトリウム、ソルビタンモノパルミテートを含む）；
懸濁剤（非限定的な例は、寒天、ベントナイト、カルボマー、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カオリン、メチルセルロース、トラガントガム、ビーガムを含む）；
甘味剤（非限定的な例は、アスパルテーム、デキストロース、グリセロール、マンニトール、プロピレングリコール、サッカリンナトリウム、ソルビトール、ショ糖を含む）；
錠剤抗粘着剤（非限定的な例は、ステアリン酸マグネシウム、タルクを含む）；
錠剤バインダー（非限定的な例は、アカシア、アルギン酸、カルボキシメチルセルロースナトリウム、圧縮性糖、エチルセルロース、ゼラチン、液体グルコース、メチルセルロース、非架橋ポリビニルピロリドン、プレゼラチン化デンプンを含む）；
錠剤およびカプセル希釈剤（非限定的な例は、二塩基性リン酸カルシウム、カオリン、乳糖、マンニトール、微結晶セルロース、粉末セルロース、沈降性炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、ソルビトール、デンプンを含む）；
錠剤コーティング剤（非限定的な例は、液体グルコース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、セルロースアセテートフタレート、シエラックを含む）；
錠剤直打賦形剤（非限定的な例は、二塩基性リン酸カルシムウムを含む）；
錠剤崩壊剤（非限定的な例は、アルギン酸、カルボキメチルセルロースカルシウム、微結晶セルロース、ポラクリンカリウム、架橋ポリビニルピロリドン、アルギン酸ナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、デンプンを含む）；
錠剤滑剤（非限定的な例は、コロイド状シリカ、コーンスターチおよびタルクを含む）；
錠剤滑沢剤（非限定的な例は、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、鉱油、ステアリン酸、ステアリン酸亜鉛を含む）；
錠剤／カプセル不透明化剤（非限定な例は、二酸化チタンを含む）；
錠剤研磨剤（非限定的な例は、カルナウバロウ、シロロウを含む）；
濃化剤（非限定的な例は、蜜ロウ、セチルアルコール、パラフィンを含む）；
浸透圧調節剤（非限定的な例は、デキストロース、塩化ナトリウムを含む）；
増粘剤（非限定的な例は、アルギン酸、ベントナイト、カルボマー、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、アルギン酸ナトリウム、トラガントガムを含む）；そして
湿潤剤（非限定的な例は、ペプタデカエチレンオキシセタノール、レシチン、ソルビトールモノオレエート、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート、ポリオキシエチレンステアレートを含む）
【０１８６】
投与すべき活性成分の総量は１日体重ｋｇあたり、一般に約０．００１ｍｇ／ｋｇないし約２００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．０１ｍｇ／ｋｇないし約２０ｍｇ／ｋｇの範囲であろう。単位投与量は活性成分約０．５ｍｇないし約１５００ｍｇを含有することができ、例えば１日１回以上投与することができる。式Ｉの化合物のためここに記載したすべての療法のため、１日当りの経口投与療法は好ましくは０．０１ないし２００ｍｇ／ｋｇ全体重であろう。静脈内、筋肉内、皮下および非経口的、および注入技術の使用を含む注射投与のための１日当りの投与量は０．０１ないし２００ｍｇ／ｋｇ全体重であろう。１日当りの経膣投与療法は好ましくは０．０１ないし２００ｍｇ／ｋｇ全体重であろう。１日当りの経直腸投与療法は好ましくは０．０１ないし２００ｍｇ／ｋｇ全体重であろう。１日当りの局所投与療法は好ましくは１日１ないし４回投与される０．１ないし２００ｍｇであろう。経皮濃度は、好ましくは１日当り０．０１ないし２００ｍｇ／ｋｇの投与量を維持するのに要する濃度であろう。１日当りの吸入投与量は好ましくは０．０１ないし１０ｍｇ／ｋｇ全体重であろう。これらの投与療法は１日で、または週または月ベースのような延長投与において多数回投与によって達成することができる。
【０１８７】
高増殖障害の処置に有用な化合物を評価する既知の標準的研究室技術に基づいて、標準的毒性試験により、そして哺乳類における上で同定した状態の処置の決定のための標準的薬理学的アッセイにより、そしてこれらの結果をこれらの状態を処置するために使用される既知の薬剤の結果と比較することにより、本発明の化合物の有効投与量は各所望の適応症の処置のために容易に決定できる。これら状態の一つの処置において投与すべき活性成分の量は、使用される特定の化合物および投与単位、投与モード、処置期間、処置される患者の年令および性別、および処置される状態の性格および程度のような配慮に応じて広く変化し得る。
【０１８８】
当業者には、特定の投与方法は種々のファクターに依存し、そのすべての治療剤を投与する時日常的に考慮されるものであることが認められるであろう。しかしながら、与えられた患者に対する特定の投与量レベルは、投与される化合物の特定の活性、患者の年令、患者の体重、患者の一般的健康、患者の性別、患者の食事、投与時間、投与ルート、排泄速度、薬物併用、および治療を受ける症状の重篤度等を含む、種々のファクターに依存することが理解されるであろう。さらに当業者には、最適の治療コース、すなわち処置モードおよび限られた日数について式Ｉの化合物または薬学的に許容し得るその塩の日毎の投与回数は慣用の処置テストコースを使用して当業者により確かめることができることが認められるであろう。
【０１８９】
しかしながら、特定の患者に対する特定の投与量レベルは、投与される特定の化合物の活性、年令、体重、一般的健康状態、性別、食事、投与時間、投与ルート、排泄速度、薬物併用、および治療を受ける症状の重篤度を含む、種々のファクターに依存することが理解されるであろう。
【０１９０】
当業者には、最適の処置コース、すなわち処置モードおよび限られた日数のために与えられる本発明の化合物の１日の投与回数は、慣用の処置テストを使用して当業者によって確かめることができることが認められるであろう。
【０１９１】
本発明の化合物の特定の製造法は既に特許文献に記載されており、そして本発明の化合物に適応させることができる。例えばリードルら、“ｒａｆキナーゼ阻害剤としてのＯ−カルボキシアリール置換ジフェニル尿素”，ＷＯ００／４２０１２；リードら、“ｐ３８キナーゼ阻害剤としてのＯ−カルボキシアリール置換ジフェニル尿素”、ＷＯ００／４１６９８。
【０１９２】
本発明に従って医薬組成物は以下に例示することができる。
【０１９３】
無菌ＩＶ溶液：本発明の所望の化合物の５ｍｇ／ｍｌ溶液は、無菌の注射用水を使用して製造することができ、そしてもし必要ならｐＨが調節される。この溶液は無菌５％デキストロースで投与のため１−２ｍｇ／ｍｌに希釈され、そして６０分にわたるＩＶ注入液として投与される。
【０１９４】
ＩＶ投与のための凍結乾燥粉末：無菌製剤は、（ｉ）凍結乾燥粉末として本発明の所望の化合物１００−１０００ｍｇと、（ｉｉ）３２−３２７ｍｇ／ｍｌクエン酸ナトリウムと、そして（ｉｉｉ）３００−３０００ｍｇのデキストラン４０とで調製することができる。この処方は無菌注射用食塩水またはデキストロースで１０−２０ｍｇ／ｍｌの濃度で復元され、これはさらに食塩または５％デキストロースで０．２−０．４ｍｇ／ｍｌへ希釈され、ボーラスＩＶとしてまたは１５−６０分にわたるＩＶ注入によって投与される。
【０１９５】
筋肉内懸濁液：筋肉内注射のため以下の溶液または懸濁液を調製することができる。
本発明の所望の水不溶性化合物  ５０ｍｇ／ｍｌ
カルボキシメチルセルロースナトリウム  ５ｍｇ／ｍｌ
ＴＷＥＥＮ８０  ４ｍｇ／ｍｌ
塩化ナトリウム  ９ｍｇ／ｍｌ
ベンジルアルコール  ９ｍｇ／ｍｌ
【０１９６】
硬カプセル：多数の単位カプセルは、標準２片硬ゼラチンカプセルへ、各自活性成分粉末１００ｍｇと、乳糖１５０ｍｇと、セルロース５０ｍｇと、そしてステアリン酸マグネシウム６ｍｇを充填することによって調製することができる。
【０１９７】
軟ゼラチンカプセル：大豆油、綿実油またはオリーブ油のような消化し得る油中の活性成分の混合物が調製され、そして積極移動ポンプにより溶融ゼラチン中へ注入され、活性成分１００ｍｇを含有する軟ゼラチンカプセルに形成される。活性成分は、水混和性薬物ミックスを調製するためポリエチレングリコールと、グリセリンと、ソルビトールの混合物中に溶かすことができる。
【０１９８】
錠剤：投与単位が活性成分１００ｍｇ、コロイド状二酸化ケイ素０．２ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム５ｍｇ、微結晶セルロース２７５ｍｇ、デンプン１１ｍｇ、および乳糖９８．８ｍｇであるように、慣用の操作に従って多類の錠剤が調製される。服用性を増大し、エレガンスおよび安定性を改良し、また遅延吸収のため、適切な水性および非水性コーティングを適用することができる。
【０１９９】
即時放出錠剤／カプセル：これらは慣用および新しいプロセスによって製造された固形経口投与形である。これらの単位は即時溶解および投薬の送達のため水なしで服用される。活性成分は糖、ゼラチン、ペクチンおよび甘味剤のような液体含有成分中に混合される。これらの液体は凍結乾燥および固相抽出技術によって固体錠剤またはカプセルに固化される。薬物化合物は、水なしで即時放出を意図した多孔質マトリックスを製造する粘弾性および熱弾性糖およびポリマーまたは発泡成分と共に圧縮することができる。
【０２００】
本発明の化合物の製造法は以下の米国出願にも記載されている。
０９／４２５，２２８，１９９９年１０月２２日出願
０９／７２２，４１８，２０００年１１月２８日出願
０９／７５８，５４７，２００１年１月１２日出願
０９／８３８，２８５，２００１年４月２０日出願
０９／８３８，２８６，２００１年４月２０日出願
【０２０１】
上記および下記において引用したすべての出願、特許および発表の全体の開示をここに参照として取入れる。
【０２０２】
本発明の化合物は、既知の化合物から（または既知の化合物から製造し得る出発原料から）、例えば以下に示した一般的調製方法によって製造し得る。与えられた化合物の脈管形成を阻害する活性は、例えば後記の操作に従って日常的にアッセイすることができる。
【０２０３】
以下の実施例は単に例証と考えるべきであり、開示の残部の限定と考えるべきではない。以下の実施例は例証目的であって、本発明をいかなる態様において限定を意図せず、またはそのように解すべきではない。
【実施例】
【０２０４】
すべての反応は乾燥アルゴンまたは乾燥窒素の陽圧のもとで炎乾燥またはオーブン乾燥されたガラス器具内で実施され、そして特記しない限り磁気的に攪拌された。敏感な液体および溶液はシリンジまたはカニューレにより移され、そしてゴム栓を通って反応容器へ導入された。特記しない限り、「減圧下の濃縮」の用語は約１５ｍｍＨｇにおけるＢｕｃｈｉロータリエバポレーターの使用を指す。特記しない限り、用語「高真空下」とは、特記しない限り０．４〜１．０ｍｍＨｇの真空を指す。
【０２０５】
すべての温度は未補正の摂氏（℃）で報告される。特記しない限り、すべての部およびパーセントは重量による。
【０２０６】
市販のグレードの試薬および溶媒をさらに精製することなく使用された。Ｎ−シクロヘキシル−Ｎ’−シクロヘキシル−Ｎ’−（メチルポリスチレン）カルボジイミドはＣａｌｂｉｏｃｈｅｍ−Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ  Ｃｏｒｐから購入した。３−ｔ−ブチルアニリン、５−ｔ−ブチル−２−メトキシアニリン、４−ブロモ−３−（トリフルオロメチル）アニリン、４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）アニリン、２−メトキシ−５−（トリフルオロメチル）アニリン、４−ブチル−２−ニトロアニリン、３−アミノ−２−ナフトール、４−イソシアナート安息香酸エチル、Ｎ−アセチル−４−クロロ−２−メトキシ−５−（トリフルオロメチル）アニリン、および４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニルイソシアネートは購入し、さらに精製することなく使用した。３−アミノ−２−メトキシキノリン（Ｅ．Ｃｈａｏ  ｅｔ  ａｌ，ＷＯ９９／００４０２；Ａ．Ｃｏｒｄｉ  ｅｔ  ａｌ，ＥＰ５４２，６０９；ＩＢＩＤ  Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ，３，１９９５，１２９），４−（３−カルバモイルフェノキシ）−１−ニトロベンゼン（Ｋ．Ｉｋａｗａ，薬学雑誌７９，１９５９，７６０；Ｃｈｅｍ．Ａｂｓｔｒ．５３，１９５９，１２７６１ｂ），３−ｔ−ブチルフェニルイソシアネート（Ｏ．Ｒｏｈｒ  ｅｔ  ａｌ，ＤＥ２，４３６，１０８），および２−メトキシフェニルイソシアネート（Ｋ．Ｉｎｕｋａｉ  ｅｔ  ａｌ，ＪＰ４２，０２５，０６７；ＩＢＩＤ工業化学雑誌７０，１９６７，４９１）は以前に記載されている。
【０２０７】
薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）はＷｈａｔｍａｎプレコートガラスバックシリカゲル６０Ａ  Ｆ−２５４の２５０μｍプレートを使用して実施した。プレートの可視化は次の技術の一以上によって実施された。（ａ）紫外線照射、（ｂ）ヨウ素蒸気へ曝露、（ｃ）エタノール中リンモリブデン酸１０％溶液中プレートの浸漬および続いて加熱、（ｄ）硫酸セリウム溶液中プレートの浸漬および続いて加熱、（ｅ）２，４−ジニトロフェニルヒドラジンの酸性エタノール溶液中プレートの浸漬および続いて加熱。カラムクロマトグラフィー（フラッシュクロマトグラフィー）は２３０−４００メッシュＥＭサイエンスシリカゲルを使用して実施された。
【０２０８】
融点（ｍｐ）は、Ｔｈｏｍａｓ−Ｈｏｏｖｅｒ融点装置またはＭｅｔｔｌｅｒＦＰ６６自動融点装置を使用して決定され、補正しなかった。プロトン（ 1Ｈ）核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルは、Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｅｌｅｃｔｒｉｃ  ＧＮ−オメガ３００（３００ＭＨｚ）スペクトロメータにより、標準としてＭｅ4 Ｓｉ（δ０．００）またはプロトン化溶媒（ＣＨＣｌ3 δ７．２６；ＭｅＯＨ  δ３．３０；ＤＭＳＯ  δ２．４９）で測定された。炭素（13Ｃ）ＮＭＲスペクトルはＧｅｎｅｒａｌ  Ｅｌｅｃｔｒｉｃ  ＧＮ−オメガ３００（７５ＭＨｚ）スペクトロメータと、標準として溶媒（ＣＤＣｌ3 δ７７．０；ＭｅＯＤ−ｄ3 ；δ４９．０；ＤＭＳＯ−ｄ6 δ３９．５）で測定された。低解像質量スペクトル（ＭＳ）および高解像質量スペクトル（ＨＲＭＳ）は、電子インパクト（ＥＩ）質量スペクトルとして、または高速原子衝撃（ＦＡＢ）質量スペクトルとして得られた。電子インパクト質量スペクトル（ＥＩ−ＭＳ）はサンプル導入のためＶａｃｕｍｅｔｒｉｃ脱着化学的イオン化プローブを備えたヒューレット−パッカード５９８９Ａ質量スペクトル計で得られた。イオン源は２５０℃に維持された。電子インパクトイオン化は電子エネルギー７０ｅＶおよびトラップ電流３００μＡで実施された。液体セシウム二次イオン質量スペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）すなわち高速原子衝撃の最新型はＫｒａｔｏｓ  Ｃｏｎｃｅｐｔ  １−Ｈスペクトル計を用いて得られた。化学的イオン化質量スペクトル（ＣＩ−ＭＳ）は試薬ガスとして（１×１０-4トルないし２．５×１０-4トル）メタンまたはアンモニアを使用し、ヒューレット−パッカードＭＳ−エンジン（５９８９Ａ）を使用して得られた。直接挿入脱着化学的イオン化（ＤＣＩ）プローブ（Ｖａｃｕｍｅｔｒｉｃｓ，Ｉｎｃ）は１０秒で０〜１５Ａから立ち上げられ、サンプルの痕跡すべてが消失するまで（〜１〜２分）１０Ａに保たれた。スペクトルは２秒／走査において５０〜８００ａｍｕから走査された。ＨＰＬＣエレクトロスプレー質量スペクトル（ＨＰＬＣ  ＥＳ−ＭＳ）は、四級ポンプ、可変波長検出器、Ｃ−１８カラム、およびエレクトロスプレーイオン化を有するＦｉｎｎｉｇａｎ  ＬＣＱイオントラップ質量スペクトル計を備えたヒューレット−パッカード１１００ＨＰＬＣを使用して得られた。スペクトルはソースのイオンの数に従って可変イオン時間を使用して１２０〜８００ａｍｕから走査された。ガスクロマトグラフィー／イオン選択性質量スペクトル（ＧＣ−ＭＳ）は、ＨＰ−１メチルシリコーンカラム（０．３３ｍＭコーティング；２５ｍ×０．２ｍｍ）を備えたヒューレット−パッカード５８９０ガスクロマトグラフ、およびヒューレット−パッカード５９７１質量選択性検出器（イオン化エネルギー７０ｅＶ）で得られた。元素分析はＲｏｂｅｒｔｓｏｎ  Ｍｉｃｒｏｌｉｔ  Ｌａｂｓ．Ｍａｄｉｓｏｎ  ＭＪによって実施された。
【０２０９】
略号のリスト
ＡｃＯＨ              酢酸
ａｎｈ                無水
ａｔｍ                気圧
ＢＯＣ                ｔ−ブトキシカルボニル
ＣＤＩ                １，１’−カルボニルジイミダゾール
ｃｏｎｃ              濃縮
ｄ                    日
ｄｅｃ                分解
ＤＭＡＣ              Ｎ，Ｎ−ジメチルアセタミド
ＤＭＰＵ              １，３−ジメチルー３，４，５，６−テトラヒドロ−              ２（１Ｈ）ピリミジン
ＤＭＦ                ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ              ジメチルスルホキシド
ＤＰＰＡ              ジフェニルフォスフォリルアシド
ＥＤＣＩ              １−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド
ＥｔＯＡｃ            酢酸エチル
ＥｔＯＨ              エタノール（１００％）
Ｅｔ2 Ｏ              ジエチルエーテル
Ｅｔ3 Ｎ              トリエチルアミン
ｈ                    時間
ＨＯＢＴ              １−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ｍ−ＣＰＢＡ          ３−クロロペルオキシ安息香酸
ＭｅＯＨ              メタノール
ｐｅｔ．ｅｔｈｅｒ    石油エーテル
ＴＨＦ                テトラヒドロフラン
ＴＦＡ                トリフロロ酢酸
Ｔｆ                  トリフロロメタンスルホニル
【０２１０】
以下の一般的方法は米国特許出願Ｎｏ．０９／９４８，９１５，２００１年９月１０日出願に記載されており、参照としてここに取入れる。
Ａ．置換アニリンの合成のための一般的方法，１８−４３ページ
Ｂ．尿素前駆体の合成，４３ページ
Ｃ．尿素生成方法，４４−５１ページ
Ｄ．尿素の相互変換，５２−５６ページ
【０２１１】
実施例Ａ
Ｎ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕−Ｎ’−｛４−〔２−カルバモイルー（４−ピリジル）〕フェニル｝尿素：
ステップ１：４−クロロ−２−ピリジンカルボキサマイドの製造
【０２１２】
【化６】
2007511203.tif 000007
【０２１３】
濃アンモニア水（３２ｍｌ）に溶かした４−クロロ−２−ピリジンカルボン酸メチル（１．０ｇ，４．８１ｍｍｏｌ）のかきまぜた混合物へ、塩化アンモニウム（９６．３ｍｇ，０．３７当量）を加え、この不均質反応混合物を環境温度で１６時間攪拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）と水（３００ｍｌ）へ注いだ。有機層を水（２×３００ｍｌ）および飽和食塩水（１×３００ｍｌ）で洗い、乾燥（ＭｇＳＯ4 ）し、減圧濃縮し、ベージュ色の固体として４−クロロ−２−ピリジンカルボキサマイド（６０４．３ｍｇ，８０．３％）を得た。ＴＬＣ（５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）Ｒｆ０．２０； 1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ8 ）δ８．６１（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），８．２０（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），８．０２（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），７．７６−７．７３（ｍ，１Ｈ）
【０２１４】
ステップ２：４−（４−アミノフェノキシ）−２−ピリジンカルボキサマイドの製造
【化７】
2007511203.tif 000008
【０２１５】
無水ＤＭＦ（７．７ｍｌ）中の４−アミノフェノール（４１８ｍｇ，３．８３ｍｍｏｌ）へ、カリウムｔ−ブトキサイド（４４７ｍｇ，３．９８ｍｍｏｌ，１．０４当量）を１度に加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌し、次に無水ＤＭＦ（４ｍｌ）中の４−クロロ−２−ピリジンカルボキサマイド（６００ｍｇ，３．８３ｍｍｏｌ，１．０当量の溶液を加えた。反応混合物を８０℃で３日間攪拌し、ＥｔＯＡｃと飽和食塩水の混合物中へ注いだ。有機層を飽和ＮＨ4 Ｃｌ溶液および飽和食塩水で順次洗い、乾燥（ＭｇＳＯ4 ）し、そして減圧濃縮した。粗生成物をＭＰＬＣクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ，１００％ＥｔＯＡｃから１０％ＭｅＯＨ／５０％ＥｔＯＡｃ／４０％ヘキサンまでの勾配）を使用して精製し、褐色固体として４−クロロ−５−トリフロロメチルアニリン（５１０ｍｇ，５８％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6 ）δ８．４３（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．０７（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），７．６６（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（ｄｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２．７Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），６．６２（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），５．１７（ｂｒ，ｓ，２Ｈ）；ＨＰＬＣ  ＥＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ２３０（（Ｍ＋Ｈ）+ ）
【０２１６】
ステップ３：Ｎ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕−Ｎ’−｛４−〔２−カルバモイル−（４−ピリジルオキシ）〕フェニル｝尿素の製造
【化８】
2007511203.tif 000009
【０２１７】
無水ジクロロエタン（５．５ｍｌ）中の４−クロロ−５−トリフロロメチルアニリン（４５１ｍｇ，２．３１ｍｍｏｌ，１．１当量）と１，１’−カルボニルジイミダゾール（４１９ｍｇ，２．５４ｍｍｏｌ，１．２当量）の混合物物をアルゴン下６５℃で１６時間攪拌した。一旦室温へ冷却し、無水ＴＨＦ（４．０ｍｌ）中の４−（４−アミノフェノキシ）−２−ピリジンカルボキサマイド（４８０ｍｇ，２．０９ｍｍｏｌ）の溶液を加え、反応混合物を６０℃で４時間攪拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ中へ加え、有機層を水（２×）および飽和食塩水（１×）で洗い、乾燥（ＭｇＳＯ4 ）し、濾過し、そして減圧濃縮した。ＭＰＬＣクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ，１００％ＥｔＯＡｃから２％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃまでの勾配）を使用した精製は、白色固体としてＮ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕−Ｎ’−｛４−〔２−カルバモイルー（４−ピリジルオキシ）〕フェニル｝尿素（７７０ｍｇ，８２％）を与えた。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）Ｒｆ０．１１，１００％ＥｔＯＡｃ；1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6 ）δ８．２１（ｓ，１Ｈ），８．９９（ｓ，１Ｈ），８．５０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．１１（ｓ，１Ｈ），７．６９（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），７．６４（ｄｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．１４（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ  ＬＣ−ＭＳ（（ＭＨ+ ＝４５１）；元素分析Ｃ20Ｈ14ＣｌＦ3 Ｎ4 Ｏ3 に対する計算値：Ｃ５３，２９％，Ｈ３．１３％，Ｎ１２．４３％；実験値：Ｃ５３．３３％，Ｈ３．２１％，Ｎ１２．６０％
【０２１８】
実施例Ｂ
Ｎ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕−Ｎ’−｛４−〔２−Ｎ−メチルカルバモイル−４−ピリジルオキシ〕フェニル｝尿素
【化９】
2007511203.tif 000010
【０２１９】
ステップ１：４−クロロ−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイドは、４−クロロピリジン−２−カルボニルクロライドＨＣｌ塩（７．０ｇ，３２．９５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１００ｍｌ）とＭｅＯＨ（２０ｍｌ）中の２．０Ｍメチルアミン溶液の混合物へ０℃で少しずつ加えることにより、４−クロロピリジン−２−カルボニルクロライドから最初に合成される。生成する反応混合物を３℃において４時間貯蔵し、次に減圧濃縮する。生成した殆んど乾燥した固体をＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）に懸濁し、濾過する。濾液を飽和食塩水（２×１００ｍｌ）で洗い、乾燥（ＭｇＳＯ4 ）し、減圧濃縮すると黄色結晶性固体として４−クロロ−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイドを与える。
【０２２０】
ステップ２：無水ＤＭＦ（１５０ｍｌ）中の４−アミノフェノール（９．６０ｇ，８８．０ｍｍｏｌ）をカリウムｔ−ブトキサイド( １０．２９ｇ，９１．７ｍｍｏｌ）で処置し、赤褐色混合物を室温で２時間攪拌する。内容物をステップ１からの４−クロロ−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド（１５．０ｇ，８７．９ｍｍｏｌ）とＫ2 ＣＯ3 （６．５０ｇ，４７．０ｍｍｏｌ）で処理し、次に８０℃で８時間加熱する。混合物を室温へ冷やし、ＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）と飽和食塩水（５００ｍｌの間に分配する。水相をＥｔＯＡｃ（３００ｍｌ）で逆抽出し、合併した有機層を飽和食塩水（４×１００ｍｌ）で洗い、乾燥（Ｎａ2 ＳＯ4 ）し、減圧濃縮する。生成した固体を３５℃で３時間減圧乾燥すると明るい褐色の固体として４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）アニリンを与える。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6 ）δ２．７７（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，３Ｈ），５．１７（ｂｒ，ｓ，２Ｈ），６．６４，６．８６（ＡＡ’ＢＢ’ｑ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，４Ｈ），７．０６（ｄｄ，Ｊ＝５．５，２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），８．４４（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．７３（ｂｒ．ｄ，１Ｈ）；ＨＰＬＣ  ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ２４４（（Ｍ+ Ｈ）+ ）
【０２２１】
ステッス３：ＣＨ2 Ｃｌ2 （３５ｍｌ）中の４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニルイソシアネート（１４．６０ｇ，６５．９０ｍｍｏｌ）溶液をＣＨ2 Ｃｌ2 （３５ｍｌ）中のステップ２からの４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）アニリン（１６．０ｇ，６５．７７ｍｍｏｌ）の懸濁液へ０℃において滴下する。生成する混合物を室温で２２時間攪拌する。生成する黄色固体を濾過により除去し、次にＣＨ2 Ｃｌ2 （２×３０ｍｌ）で洗い、減圧下（約１ｍｍＨｇ）で乾燥し、Ｎ−（４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素を灰白色固体として得る。ｍｐ２０７−２０９℃；1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6 ）δ２．７７（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，３Ｈ），７．１６（ｍ，３Ｈ），７．３７（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６２（ｍ，４Ｈ），８．１１（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），８．４９（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．７７（ｂｒ．ｄ，１Ｈ），８．９９（ｓ，１Ｈ），９．２１（ｓ，１Ｈ）；ＨＰＬＣ  ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ４６５（（Ｍ+ Ｈ）+ ）
【０２２２】
実施例Ｃ
Ｎ−〔２−メトキシ−５−（トリフロロメチル）フェニル〕−Ｎ’−｛４−〔２−Ｎ−メチルカルボモイル−４−ピリジルオキシ〕フェニル｝尿素
【化１０】
2007511203.tif 000011
【０２２３】
ステップ１：４−クロロ−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイドは、４−クロロピリジン−２−カルボニルクロライドＨＣｌ塩（７．０ｇ，３２．９５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１００ｍｌ）とＭｅＯＨ（２０ｍｌ）中の２．０Ｍメチルアミン溶液の混合物へ０℃で少しずつ加えることにより、４−クロロピリジン−２−カルボニルクロライドから最初に合成される。生成する反応混合物を３℃において４時間貯蔵し、次に減圧濃縮する。生成した殆んど乾燥した固体をＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）に懸濁し、濾過する。濾液を飽和食塩水（２×１００ｍｌ）で洗い、乾燥（ＭｇＳＯ4 ）し、減圧濃縮すると黄色結晶性固体として４−クロロ−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイドを与える。
【０２２４】
ステップ２：無水ＤＭＦ（１５０ｍｌ）中の４−アミノフェノール（９．６０ｇ，８８．０ｍｍｏｌ）をカリウムｔ−ブトキサイド( １０．２９ｇ，９１．７ｍｍｏｌ）で処置し、赤褐色混合物を室温で２時間攪拌する。内容物をステップ１からの４−クロロ−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド（１５．０ｇ，８７．９ｍｍｏｌ）とＫ2 ＣＯ3 （６．５０ｇ，４７．０ｍｍｏｌ）で処理し、次に８０℃で８時間加熱する。混合物を室温へ冷やし、ＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）と飽和食塩水（５００ｍｌの間に分配する。水相をＥｔＯＡｃ（３００ｍｌ）で逆抽出し、合併した有機層を飽和食塩水（４×１００ｍｌ）で洗い、乾燥（Ｎａ2 ＳＯ4 ）し、減圧濃縮する。生成した固体を３５℃で３時間減圧乾燥すると明るい褐色の固体として４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）アニリンを与える。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6 ）δ２．７７（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，３Ｈ），５．１７（ｂｒ，ｓ，２Ｈ），６．６４，６．８６（ＡＡ’ＢＢ’ｑ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，４Ｈ），７／０６（ｄｄ，Ｊ＝５．５，２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），８．４４（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．７３（ｂｒ．ｄ，１Ｈ）；ＨＰＬＣ  ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ２４４（（Ｍ+ Ｈ）+ ）
【０２２５】
ステップ３：無水ＣＨ2 Ｃｌ2 （１５ｍｌ）中の２−メトキシ−５−（トリフロロメチル）アニリン（０．１５ｇ）の溶液へ０℃においてＣＤＩ（０．１３ｇ）を加える。生成する溶液を１時間で室温へ暖めることを許容し、室温で１６時間攪拌し、次にステップ２からの４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）アニリン（０．１８ｇ）で処理する。生成する黄色溶液を室温で７２時間攪拌し、水（１２５ｍｌ）で処理する。生成する水性混合物をＥｔＯＡｃ（２×１５０ｍｌ）で抽出する。合併した有機層を飽和食塩水（１００ｍｌ）で洗い、乾燥（ＭｇＳＯ4 ）し、減圧濃縮する。残渣をこねる（９０％ＥｔＯＡｃ／１０％ヘキサン）。生成する白色固体を濾過し集め、ＥｔＯＡｃで洗う。濾液を減圧下で濃縮し、残渣のオイルをカラムクロマトグラフィー（３３％ＥｔＯＡｃ／６７％ヘキサンから５０％ＥｔＯＡｃ／５０％ヘキサンまでの勾配）で精製し、明るい褐色固体としてＮ−（２−メトキシ−５−（トリフロロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（Ｎ−メチルカルバモイル）−４−ピリジルオキシ）フェニル）尿素を得る。ＴＬＣ（１００％ＥｔＯＡｃ）Ｒｆ０．６２；1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6 ）δ２．７６（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，３Ｈ），３．９６（ｓ，３Ｈ），７．１−７．６および８．４−８．６（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），９．５５（ｓ，１Ｈ）；ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ４６１（（Ｍ+ Ｈ）+ ）
【０２２６】
以下の表に上の詳細な実験操作に従って合成された化合物を掲げる。
【０２２７】
実施例化合物の合成
実施例化合物の合成は２００２年４月１１日に発行された米国特許出願Ｎｏ．２００２００４２５１７により詳しく記載されている。
表
以下の表１−７に掲げた化合物は、上に示した一般的方法、および２００２年４月１１日に発行された米国特許Ｎｏ．２００２００４２５１７に記載されているさらに詳細な実験操作に従って合成された。
【０２２８】
【表１】
2007511203.tif 000012
【０２２９】
【表２】
2007511203.tif 000013
【０２３０】
【表３】
2007511203.tif 000014
2007511203.tif 000015
2007511203.tif 000016
2007511203.tif 000017
2007511203.tif 000018
2007511203.tif 000019
【０２３１】
【表４】
2007511203.tif 000020
2007511203.tif 000021
2007511203.tif 000022
2007511203.tif 000023
2007511203.tif 000024
2007511203.tif 000025
2007511203.tif 000026
【０２３２】
【表５】
2007511203.tif 000027
2007511203.tif 000028
【０２３３】
【表６】
2007511203.tif 000029
2007511203.tif 000030
【０２３４】
【表７】
2007511203.tif 000031
【０２３５】
選ばれた化合物は以下のように命名される。
【０２３６】
【表８】
2007511203.tif 000032
2007511203.tif 000033
2007511203.tif 000034
【０２３７】
【表９】
2007511203.tif 000035
【０２３８】
【表１０】
2007511203.tif 000036
【０２３９】
以下の刊行物はＶＥＧＦＲ−３の阻害に関し、そしてＶＥＧＦＲ−３により仲介される病的状態およびそのような活性を決定するためのアッセイの説明のためここに参照として取入れる。
【表１１】
2007511203.tif 000037
【０２４０】
以下の刊行物はＶＥＧＦＲ−２の阻害に関し、そしてＶＥＧＦＲ−２により仲介される病的状態およびそのような活性を決定するためのアッセイの説明のためここに参照として取入れる。
【表１２】
2007511203.tif 000038
【０２４１】
以下の刊行物はＦＬＴ−３の阻害に関し、そしてＦＬＴ−３により仲介される病的状態およびそのような活性を決定するためのアッセイの説明のためここに参照として取入れる。
【表１３】
2007511203.tif 000039
2007511203.tif 000040
【０２４２】
以下の刊行物はＰＤＧＦ／ＰＤＧＦＲの阻害に関し、そしてＰＤＧＦＲ−βにより仲介される病的状態およびそのような活性を決定するためのアッセイの説明のためここに参照として取入れる。
【表１４】
2007511203.tif 000041
2007511203.tif 000042
2007511203.tif 000043
【０２４３】
以下の刊行物はＰＤＧＦ／ＰＤＧＦＲの阻害に関し、そしてＦＧＦＲにより仲介される病的状態およびそのような活性を決定するためのアッセイの説明のためここに参照として取入れる。
【表１５】
2007511203.tif 000044
【０２４４】
生化学および細胞実施例
１．ｃ−ＲＡＦ（Ｒａｆ−１）生化学アッセイ
ｃ−ＲＡＦ生化学アッセイは、Ｌｃｋキナーゼによって活性化（ホスホリル化）したｃ−Ｒａｆ酵素で実施された。Ｌｃｋ−活性化ｃ−Ｒａｆ（Ｌｃｋ−Ｒａｆ）は、Ｓｆ９昆虫細胞中にポリヘドリンプロモーターのコントロール下にＧＳＴ−ｃ−Ｒａｆ（アミノ酸３０２からアミノ酸６８４まで）とＬｃｋ（全長）を発現するバキュロウイルスで同時感染させることによって生産した。両方のバキュロウイルスは２．５の感染倍数で使用し、そして細胞は感染後４８時間で収穫した。
【０２４５】
ＭＥＫ−１タンパクは、Ｓｆ９昆虫細胞中に感染倍数５においてＧＳＴ−ＭＥＫ−１（全長）融合タンパクを発現するバキュロウイルスで細胞を感染させ、そして細胞を感染４８時間後に収穫することによって生産した。ＧＳＴ−Ｃ−Ｒａｆ３０２−６４８およびＧＳＴ−ＭＥＫ−１のために同様な精製操作が使用された。
【０２４６】
形質転換した細胞は、１０ｍＭリン酸ナトリウム、１４０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ７．３，０．５％トリトンＸ−１００、およびプロテアーゼ阻害剤カクテルを含んでいるバッファー中ｍＬあたり湿った細胞バイオマス１００ｍｇ懸濁した。細胞をポリトロンホモナイザーで破壊し、３０，０００ｇで３０分遠心した。３０，０００ｇ上清をＧＳＨ−セファローズへ適用した。樹脂を５０ｍｇトリス，ｐＨ８．０，１５０ｍＭ  ＮａＣｌおよび０．０１％トリトンＸ−１００を含んでいるバッファーで洗った。ＧＳＴ−標識タンパクをグルタチオン１００ｍＭ、５０ｍＭトリス、ｐＨ８．０、１５０ｍＭ  ＮａＣｌおよび０．０１％トリトンＸ−１００を含む溶液で溶出した。精製したタンパクは、２０ｍＭトリス、ｐＨ７．５、１５０ｍＭ  ＮａＣｌおよび２０％グリセロールを含むバッファー中へ透析した。
【０２４７】
テスト化合物は３倍希釈液を用いて典型的には５０μＭないし２０ｎＭの範囲ストック濃度へ（１μＭないし０．４ｎＭのアッセイ範囲の最終濃度）ＤＭＳＯ中に段階希釈した。ｃ−Ｒａｆ生化学アッセイは９６ウエルコスターポリプロピレンプレート（コスタ３３６）中で放射活性フィルターマットアッセイとして行われた。プレートへ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．５、７０ｍＭ  ＮａＣｌ、８０ｎｇのＬｃｋ／ｃ−Ｒａｆおよび１μｇ  ＭＥＫ−１を含む溶液７５μＬを負荷した。次に段階希釈した個々の化合物の２μＬをＡＴＰ添加の前に反応へ加えた。反応は５μＭ  ＡＴＰおよび０．３ｕＣｉ〔３３Ｐ〕−ＡＴＰを含む２５μＬ  ＡＴＰ溶液によって開始された。プレートはシールされ、３２℃で１時間インキュベートされた。反応は４％リン酸５０μＬの添加により停止され、そしてＷａｌｌａｃ  Ｔｏｍｔｅｃハーベスターを用いてＰ３０フィルターマット（パーキンエルマー）上に収穫された。フィルターマットは最初１％リン酸で、２番目に脱イオン水で洗った。フィルターをマイクロウェーブで乾燥し、シンチレーション液に浸し、そしてＷａｌｌａｃ１２０５ベータープレートカウンター（Ｗａｌｌａｃ  Ｉｎｃ．，Ａｔｌａｎｔａ，ＧＡ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）中で読取られた。結果はパーセント阻害として表される。
【０２４８】
％阻害＝〔１００−（Ｔｉｂ／Ｔｉ）〕×１００
ここでＴｉｂ＝（阻害剤ありのカウント／分）−（バックグラント）
Ｔｉ＝（阻害剤なしのカウント／分）−（バックグラント）
【０２４９】
２．Ｂｉｏ−ＰＬｅｘ  Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＥＲＫ１／２イムノアッセイ
レーザーフローサイトメトリープラットフォームを使用する９６−ウエルホスホ−ＥＲＫ（ｐＥＲＫ）イムノアッセイは、細胞ライン中のベーサルｐＥＲＫの阻害を測定するために確立された。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を完全成育培地中、９６−ウエルマイクロタイタープレート中で５０，０００細胞／ウエルにおいてプレートした。ベーサルｐＥＲＫ１／２阻害に対するテスト化合物の効果のため、プレート翌日にＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を０．１％ＢＳＡを有するＤＭＥＭへ移し、０．１％ＤＭＳＯ中３μＭないし１２ｎＭの最終濃度へ１：３希釈した。細胞をテスト化合物と２時間インキュベートし、洗浄し、Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ全細胞溶解バッファーＡに溶解した。サンプルはバッファーＢ１：１（ｖ／ｖ）で希釈し、アッセイプレートへ直接移すか、または処理するまで−８０℃で凍結した。希釈したＭＤＡ−ＭＢ−２３１溶解物の５０μＬを抗ＥＲＫ１／２抗体を接合した５ミクロンＢｉｏ−Ｐｌｅｘビーズ約２０００と一夜シエカー上で室温でインキュベートした。翌日、ビオチニル化ホスホＥＲＫ１／２サンドイッチイノムアッセイを実施し、ビーズを各インキュベーションの間３回洗い、次に現像剤としてＰＥ−ストレプトアビジン５０μＬを使用した。ｐＥＲＫ１／２の相対的蛍光単位が高感度において２５ビーズをＢｉｏ−Ｐｌｅｘフローセル（プローブ）でカウントすることによって検出された。ＩＣ５０が最大として未処理細胞をそしてバックグランドとして細胞なし（ビーズのみ）を用いて計算された。
【０２５０】
３．抗−ｐＥＲＫ抗体による腫瘍セクションの免疫細胞化学的染色
活性化Ｒａｆキナーゼは、ＭＥＫ（ミトゲン活性化タンパクキナーゼ）をホスホリル化し、そして活性化する。これは代ってＥＲＫ（細胞外信号調節されたキナーゼ）をホスホリル化および活性化し、このことは次に核へ転送されそして遺伝子発現を修飾する。この経路は活性ｒａｓ，突然変異ＢＲＡＦの存在、または成長因子レセプターのために、しばしば腫瘍細胞において異常に活性化される。ある患者が本発明の化合物に応答するかどうかを決定し、そしてその効力を評価するため、患者選択バイオマーカーとしてヒト腫瘍生検サンプル中のホスホリル化ＥＲＫ（ｐＥＲＫ）を検出するための半定量的免疫組織化学的方法が開発された、使用される抗体は、ｐ４４およびｐ４２（ホスホＰ４４／４２ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ２００／Ｔｙｒ２０４））ＭＡＰキナーゼ（ＦＲＫ１およびＥＲＫ２）のホスホリル化状態を検出するポリクローナル抗体（ウサギ）であった。この操作は以下のように実施される。
【０２５１】
１．患者から腫瘍サンプルが採取される。サンプルはパラフィン中に埋め込まれ、断片化される。
２．腫瘍断片スライドから脱パラフィン化され、スライドが９５０Ｃクエン酸バッファー中３５分間インキュベートされる。
３．スライド（バッファー中）を予熱したスチーマー中に３０分間入れる。
４．終了した時、加熱したバッファー中のスライドを３０分で室温へ冷やす。５．スライドを洗浄バッファーで洗い、染色装置内の染色ラック上へ負荷する。この時すべてのスライドが常時バッファーで濡れていることを確実にする。
６．スライドを１．５％過酸化水素溶液で１０分ブロックし、次に正常ブロッキング血清（ヤギ）で２０分間ブロックする。
７．スライドをバッファー中で洗う。
８．スライドを一次抗ｐＥＲＫ抗体〔ホスホ−ｐ４４／４２ＭＡＫＲ（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）〕と１：５０希釈度において３０分間インキュベートする。
９．スライドをバッファーでリンスする。
１０．スライドをビオチニル化二次抗体溶液中３０分間インキュベートする。
１１．スライドをバッファーでリンスする。
１２．スライドをアビジンへ接合した西洋のサビペルオキシターゼよりなる予製した複合体へ３０分間露出する。
１３．スライドをバッファーでリンスする。
１４．ＤＡＢ基質クロモゲンをスライドへ１分間適用する。
１５．スライドを蒸留水でリンスする。
１６．スライドをヘマトキシリンで１分間逆染色する。
１７．スライドをバッファーでリンスする。
１８．スライドを蒸留水でリンスする。
１９．スライドを再び水和し、マウントカバーする。
２０．Ｂｉｏｑｕａｎｔ  ＴＣＷ９８イメージ分析システムを用いて各組織断片を評価する。５個の非オーバーラップフィールド／組織を選び、そしてオリンパスＢＸ−６０顕微鏡およびＢｉｏｑｕａｎｔソフトウエアで稼動するＰＣコンピューターへ接続したＯｐｔｒｏｎｉｃ  ＤＥＩ−７５０カラーデジタルカメラを用いて電子的に捕捉する。
【０２５２】
黒色腫を有する患者が本発明の化合物で処理され、そして上に記載したアッセイを使用して評価された。図１は組織断片を分析するために使用した半定量的操作を示す。
【０２５３】
図２は、化合物の投与前、黒色腫を有する患者はストローマ細胞に比較して腫瘍組織中に高レベルのホスホＥＲＫを有し、この対象は本発明の化合物での処置のための候補であることを指示した。対象は次に化合物の６００ｍｇＢＩＤ投与量を投与された。
【０２５４】
化合物に対する応答はベースライン対第２サイクルで取ったＰＥＴスキャンを比較することによって観察された。ベースラインにおいて有意な代謝活性を示したＰＥＴスキャンは、処置後完全に沈静化したと報告された。この対応は処置後生検において核発現ｐＥＲＫの％の減少に対応する。この対象は処置の６サイクルを通じＲＥＣＩＳＴによってＣＴスキャン測定を基にして安定し続けた。このようにホスホＥＲＫ（ｒａｆ活性）が対象は化合物に測定可能な改善を示すことによって応答することを予見させたばかりでなく、細胞内ｒａｆ活性のレベル（ホスホＥＲＫによって測定する時）を化合物が減少させた。使用した化合物は、Ｎ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕−Ｎ’−{４−〔２−Ｎ−メチルカルバモイル−４−ピリジルオキシ〕フェニル}尿素であった。
【０２５５】
４．Ｆｌｋ−１（ネズミＶＥＧＦＲ−２）生化学アッセイ
このアッセイは、ＴＲ−ＦＲＥＴフォーマット中の９６ウエルオパックプレート（Ｃｏｓｔａｒ３９１５）中で実施された。反応条件は以下のとおり。１０μＭ  ＡＴＰ，２５ｎＭポリＧＴ−ビオチン、２ｎＭ  Ｅｎ標識ホスホ−Ｔｒｙ  Ａｂ，１０ｎＭ  ＡＰＣ，７ｎＭ  Ｆｌｋ−１（キナーゼドメイン）、１％ＤＭＳＯ，３０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．５，１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２，０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ，０．０１５％ＢＲＵ，０．１ｍｇ／ｍｌ  ＢＳＡ，０．１％メルカプトエタノール。反応は酵素の添加により開始される。各ウエル中の最終容積は１００μＬである。プレートは、反応開始後約１．５ないし２．０時間においてパーキンエルマービクターＶマルチラベルカウンター上で６１５および６６５ｎｍの両方において読まれる。信号は各ウエルあたり比：（６６５ｎｍ／６１５ｎｍ）＊１００００として計算される。
【０２５６】
５．ネズミＰＤＧＦＲ  ＦＲＥＴ生化学アッセイ
このアッセイは９６ウエルブラックプレート（Ｃｏｓｔａｒ３９１５）中にフォーマット化された。以下の試薬（およびそれらのソース）が使用された。ユーロピウム標識抗ホスフォチロシン抗体ｐＹ２０およびストレプトアビジン−ＡＰＣ；ポリＧＴ−ビオチン、およびＤＲＴ中のマウスＰＤＧＦＲ。反応条件は以下のとおり。１ｎＭマウスＰＤＧＦＲがアッセイバッファー（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．５，１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２，０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ，０．０１５％  ＢＲＩＪ  ３５，０．１ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ，０．１％メルカプトエタノール）中、２０μＭ  ＡＴＰ，７ｎＭポリＧＴ−ビオチン、１ｎＭ  ｐＹ２０抗体、５ｎＭストレプトアビジン−ＡＰＣおよび１％  ＤＭＳＯと混合される。各ウエル中の最終反応容積は１００μＬである。９０分後１０μＬ／ウエルの５μＭスタウロスポリンを添加して反応を停止する。反応停止約１時間後、プレートはＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＶｉｃｔｏｒＶマルチラベルカウンター上６１５および６６５ｎｍにおいて読取られる。信号は各ウエルについて比：（６６５ｎｍ／６１５ｎｍ）×１０００として計算される。
【０２５７】
ＰＤＧＦＲ−βのためのＩＣ５０の発生のため、酵素開始前に化合物が加えられた。５０倍ストックプレートは５０％ＤＭＳＯ／５０％ｄＨ２Ｏ溶液中段階的に１：３希釈した化合物でつくられた。ストックの２μＬ添加は１％ＤＭＳＯ中１０μＭないし４．５６ｎＭの範囲の化合物最終濃度を与えた。データは％阻害として表わされた。％阻害＝１００−（阻害剤あり信号−バックグランド）／（阻害なしの信号−パックグランド）×１００
【０２５８】
６．ＡｏＳＭＣ細胞中のｐＰＤＧＦＲサンドイッチＥＬＩＳＡ
１００Ｋ  Ｐ３−Ｐ６大動脈ＳＭＣが標準的細胞技術を用いて１２ウエルクラスターの各ウエルへＳＧＭ−２の１００μＬ／ウエルにおいてプレートされた。翌日細胞を１００μＬ  Ｄ−ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）で１回リンスし、０．１％ＢＳＡ（シグマ、ＣａｔＡ９５７６）で５００μＬ  ＳＢＭ（平滑筋細胞ベーサル培地）中で一夜餓えさせた。化合物はＤＭＳＯ中に１０μＭないし１ｎＭまで１０倍希釈ステップにおいて希釈された。流し中で急速に反転することによって古い培地を除去し、次に各希釈液の１００μＬを細胞の対応するウエルへ３７℃において１時間加えた。次に細胞を１０ｎｇ／ｍＬのＰＤＧＦ  ＢＢリガンドで３７℃において７分間刺激した。培地を傾斜し、プロテアーゼ阻害剤錠（完全、ＥＤＴＡなし）と０．２ｍＭ  Ｎａバナデートを含む等張溶解バッファーを加えた。細胞は冷室内で−４℃において１５分間溶解される。溶解物をエッペンドルフ管へ入れ、それへアガロース接合抗ＰＤＧＦＲ−β抗体１５μＬを加え（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，ｓｃ−３３９）、４℃で一夜インキュベートする。翌日ビーズをＰＢＳの５０ボリュームで３回リンスし、１×ＬＤＳサンプルバッファー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中５分間沸騰する。サンプルを３−８％勾配トリス−アセテートゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を通し、ニトロセルロース上へ移した。膜は、ブロッキングバッファー（１：１０００希釈）中抗ホスホＰＤＧＦＲ−β中１時間インキュベートする前に、１％ＢＳＡ／ＴＢＳ−Ｔ中で１時間ブロックした。ＴＢＳ−Ｔ中で３回洗った後、膜をヤギ抗ウサギＨＲＰ  ＩｇＧ（Ａｍｅｒｓｈａｍ，１：２５０００希釈）中で１時間インキュベートした。ＥＣＬ基質の添加前にもう３回の洗浄が続いた。膜をハイパーフィルムＥＣＬへ露出した。その後膜を剥がし、トータルＰＤＧＦＲ−βについて抗ＰＤＧＦＲ−β（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）で再プローブした。
【０２５９】
７．ＭＤＡ−ＭＥ２３１増殖アッセイ
ヒト乳癌細胞（ＭＤＡ  ＭＢ−２３１，ＮＣＩ）が１０％熱不活性化ＦＢＳを補給した標準成長培地（ＤＭＥＭ）中で加湿インキュベーター中５％ＣＯ２（ｖｏｌ／ｖｏｌ）中３７℃で培養された。細胞は９６ウエル培養皿中９０μＬ成長培地中３０００細胞／ウエルの密度にプレートされた。Ｔｏｈ  ＣＴＧ値を決定するため、プレート２４時間後ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏルミネセント試薬の１００μＬが各ウエルへ加えられ、室温で３０分インキュベートされた。Ｗａｌｌａｃ  Ｖｉｃｔｏｒ  ＩＩ機器上で発光が記録された。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬は細胞溶解をもたらし、存在する細胞の数に正比例する、存在するＡＴＰの量に比例するルミネセント信号を発生した。
【０２６０】
テスト化合物は１０ｍＭストックを調製するため１００ＤＭＳＯに溶解した。ストックは成長培地中１：４００へさらに希釈され、０．２５％ＤＭＳＯ中２５μＭの作業ストックとした。テスト化合物はすべてウエルについてコンスタントなＤＭＳＯ濃度を維持するように成長培地中に段階的に希釈された。希釈したテスト化合物の６０μＬが各培養ウエルへ加えられ、１８０μＬの最終ボリュームとした。個々のテスト化合物ありなしの細胞は７２時間インキュベートされ、その時点でＡＴＰ依存性ＡＴＰが前に記載したように測定され、Ｔ７２ｈ値を得る。場合により、化合物濃度対％阻害を使用して最小自乗分析プログラムでＩＣ５０値が決定される。
【０２６１】
％阻害＝〔１−（Ｔ７２ｈ  ｔｅｓｔ−Ｔｏｈ）／（Ｔ７２ｈ  ｃｔｒ１−Ｔｏｈ）〕×１００
ここで、Ｔ７２ｈ  ｔｅｓｔ＝テスト化合物の存在下７２時間におけるＡＴＰ依存ルミネセンス
Ｔ７２ｈ  ｃｔｒ１＝テスト化合物なしの７２時間におけるＡＴＰ依存ルミネセンス
Ｔｏｈ＝時間ゼロにおけるＡＴＰ依存ルミネセンス
【０２６２】
８．腫瘍処理
癌に対する本発明化合物の有効性をテストするため、Ｎ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕−Ｎ’−{４−〔２−Ｎ−メチルカルバモイル−４−ピリジオキシ〕フェニル}尿素塩がＨＣＴ１１６結腸(突然変異ｋ−Ｒａｓ)、ＭＩＡ  Ｐａ−Ｃａ膵臓（突然変異ｋ−Ｒａｓ)、ＮＣＩ−Ｈ４６０肺（突然変異ｋ−Ｒａｓ)、およびＳＫ−ＯＶ−３卵巣（ｗｔ  ｋ−Ｒａｓ)異種グラフトモデルへ投与された。すべての処理はｑｄ×１４スケジュールで経口投与された。１０．３０および１００ｍｇ／ｋｇ／投与の投与量は４５％ないし６８％範囲のＨＣＴ−１１６種用の投与量依存性阻害を生じた。同様に、ＭＩＡ  Ｐａ−Ｃａ−２腫瘍はそれぞれ１０，３０および１００ｍｇ／ｋｇ／投与の投与量において４４％、６６％および７３％阻害された。ＮＣＩ−Ｈ４６０腫瘍はこのＲａｆキナーゼ阻害剤の１０および３０ｍｇ／ｋｇ／投与量において２７％および５６％阻害された。ＳＫ−ＯＶ−３モデルは僅かに一層感受性であり、３ないし１００ｍｇ／ｋｇ／投与の投与量において４５％および８１％腫瘍成長阻害を発生した。
【０２６３】
長期間の抗腫瘍有効性がＨＣＴ１１６モデルにおいて評価された。本化合物は、処置を３０日間に延長した時３０および１００ｍｇ／ｋｇ／投与の投与において正味の腫瘍停止を生じた。
【０２６４】
ＨＣＴ１１６，ＳＫ−ＯＶ−３およびＭＩＡ  ＰａＣａ−２ストック腫瘍は、ＣＤ−１  Ｎｕ／Ｎｕ雌マウス（ＨＣＴ１１６およびＳＫ−ＯＶ−３）またはＣＢ１７  ＳＣＩＤ雄マウス（ＭＩＡ−ＰａＣａ−２）中の断片の段階的ｓ．ｃ．通過として維持された。処理は経口投与され、そして確立された腫瘍に対して開始された。腫瘍寸法が週２〜３回カリパーにより測定され、式〔Ｌ×ＣＷ２〕２によって腫瘍塊へ変換された。ここでＬおよびＷはそれぞれ最大および最小寸法を指す。
【０２６５】
９．ｐ３８キナーゼアッセイ
化合物のインビトロ阻害性はｐ３８キナーゼ阻害アッセイを使用して決定された。ｐ３８活性は９６ウエルマイクロタイタープレート中のインビトロアッセイを使用して検出された。組換えヒトｐ３８（０．５ｎｇ／ｍＬ）がキナーゼバッファー（２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ，２０ｍＭ  ＭｇＣｌ２および１５０ｍＭ  ＮａＣｌ）中の基準（ミエリン塩基性タンパク、５ｎｇ／ｍＬ）とそして化合物と混合された。３３Ｐ標識ＡＴＰの１ｕＣｉ／ウエル（１０ｕＭ）が最終ボリューム１００ｍＬに加えられた。反応は３２℃で３０分間行われ、そして１Ｍ  ＨＣｌ溶液で停止された。基質に取り込まれた放射活性の量は、１％リン酸溶液を用いて負に帯電したガラス繊維濾紙上にトラッピングし、そしてシンチレーションカウンターで読取ることによって決定された。陰性対照は基質プラスＡＴＰ単独を含んでいた。
【０２６６】
さらに考究することなく、当業者は以上の説明を使用して本発明を最大限に利用できるものと信じられる。それ故特定の好ましい具体例は単に例証であって、開示の残部の限定ではないと考えるべきである。２００４年３月２５日出願の米国特許仮出願Ｎｏｓ．６０／５５６，０６２；２００３年１１月１７日出願の６０／５２０，３９９および２００３年５月２０日出願の６０／４７１，７３５を含む、上で引用した出願、特許および刊行物全体をここに参照として取入れる。
【０２６７】
生化学アッセイ
【表１６】
2007511203.tif 000045
【０２６８】
細胞アッセイ
【表１７】
2007511203.tif 000046
【図面の簡単な説明】
【０２６９】
【図１】染色強度を評価し、陽性に染色された細胞および染色に含まれた細胞内コンパートメントを同定し、そして全体のスライド品質を評価することよりなる定性的評価である。別々の評価が腫瘍細胞および腫瘍細胞ストローマに実施された。染色の強さは以下のスケールに基づいてグレード化された。陰性；±（不確実）；１＋（弱い）；２＋（中程度）；３＋(強い)；４＋（もっと強い）。染色の強さは、標本全体の評価によって決定した。標的抗原発現の半定量的評価は各標的抗原を発現する標本全体を通じて細胞のパーセントを基にする以下の階級化システムを使用して行なわれた。陽性標的抗原発現０−５％＝＜５％；６−２５％＝１番目の四分位（１Ｑ）；２６−５０％＝２番目の四分位（２Ｑ）；５１−７５％＝３番目の四分位（３Ｑ）；７６−１００％＝４番目の四分位（４Ｑ）。
【図２】処理前および処理後のヒト黒色腫のホスホＥＲＫのための免疫組織化学染色である。
【図１】
2007511203.tif 000051
【図２】
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【国際調査報告】
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