(57)【要約】インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）、特にヒトＩＬ−２２に結合する抗体およびその抗原結合フラグメント、ならびにＩＬ−２２関連免疫応答の調節におけるそれらの使用が、開示される。本明細書中に開示される抗体は、自己免疫障害（例えば、関節炎）などのＩＬ−２２関連免疫疾患の診断、予防、および処置に有用である。本出願は、少なくとも部分的に、高親和性および特異性を持ってインターロイキン２２（「ＩＬ−２２」）、特にヒトＩＬ−２２に結合する抗体およびその抗原結合フラグメント等のＩＬ２２結合剤を提供する。
2007537132.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって、該抗体またはそのフラグメントは、ＩＬ−２２レセプター（ＩＬ−２２Ｒ）とインターロイキン−１０レセプター２（ＩＬ−１０Ｒ２）とを含む複合体に対するＩＬ−２２の結合を軽減する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって、該抗体またはそのフラグメントは、ＩＬ−２２レセプター（ＩＬ−２２Ｒ）に対するＩＬ−２２の結合を軽減する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３】
インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって、該抗体またはそのフラグメントは、インターロイキン−１０レセプター２（ＩＬ−１０Ｒ２）に対するＩＬ−２２の結合を軽減する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４】
インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって、該抗体またはそのフラグメントは、インターロイキン−１０レセプター２（ＩＬ−１０Ｒ２）に対するＩＬ−２２とＩＬ−２２レセプター（ＩＬ−２２Ｒ）との複合体の結合を軽減する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５】
インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）に特異的に結合し、該ＩＬ−２２に対する二次抗体の結合を競合阻害する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって、該二次抗体は、ＰＴＡ−５２５４およびＰＴＡ−５２５５から選択されるハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体である、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６】
１０Ｅ−９またはそれより高い親和性の親和定数（Ｋｄ）が有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項７】
約５ｎＭ〜２００ｐＭまたはそれ以上の範囲内のＥＤ５０でＨＥＰＧ２でのＳＴＡＴリン酸化またはＢａＦ３細胞の増殖を中和する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項８】
約１０Ｅ４〜１０Ｅ６１／Ｍｓの範囲内の反応速度でＩＬ２２と結合し、約１０Ｅ−３〜１０−６Ｅ１／ｓの範囲の解離反応速度を有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
【請求項９】
前記ＩＬ−２２が、配列番号２のアミノ酸３４〜１７９に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有し、Ｓｔａｔ−３タンパク質のリン酸化を誘導することができる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
【請求項１０】
前記ＩＬ−２２が、配列番号２のアミノ酸３４〜１７９を有する、請求項６に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項１１】
前記ＩＬ−２２、ＩＬ−２２Ｒ、およびＩＬ−１０Ｒ２が、ヒト起源である、請求項１、３または４のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項１２】
前記ＩＬ−２２および前記ＩＬ−２２Ｒが、ヒト起源のものである、請求項２に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項１３】
ヒト化、ＣＤＲ移植またはヒト抗体である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
【請求項１４】
ＰＴＡ−５２５４およびＰＴＡ−５２５５から選択されるハイブリドーマによって産生される、モノクローナル抗体。
【請求項１５】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメントを含有する、薬学的組成物。
【請求項１６】
サイトカインインヒビター、成長因子インヒビター、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝インヒビター、酵素インヒビター、細胞毒性剤、および細胞増殖抑制剤からなる群から選択される、別の治療薬をさらに含有する、請求項１５に記載の薬学的組成物。
【請求項１７】
前記治療剤が、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ−１２アンタゴニスト、ＩＬ−１５アンタゴニスト、ＩＬ−１７アンタゴニスト、ＩＬ−１８アンタゴニスト、ＩＬ−２１Ｒアンタゴニスト、Ｔ細胞減少剤、Ｂ細胞減少剤、メトトレキサート、レフルノミド、シロリムス（ラパマイシン）、またはそのアナログ、Ｃｏｘ−２インヒビター、ｃＰＬＡ２インヒビター、ＮＳＡＩＤ、およびｐ３８インヒビターからなる群から選択される、請求項１６に記載の薬学的組成物。
【請求項１８】
ＩＬ−２２と、ＩＬ−２２レセプター複合体またはそのサブユニットとの間の相互作用に妨害する方法であって、該方法は、ＩＬ−２２と、ＩＬ−２２レセプター複合体またはそのサブユニットとの間の相互作用を生じさせる条件下でＩＬ−２２と、該ＩＬ−２２レセプター複合体またはそのサブユニットとを接触させて、それによりＩＬ−２２／ＩＬ−２２レセプター混合物を形成させる工程、ならびにＩＬ−２２／ＩＬ−２２レセプター混合物と、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメントとを接触させて、それによりＩＬ−２２と、ＩＬ−２２レセプター複合体またはそのサブユニットとの間の相互作用に妨害する工程、を包含する方法。
【請求項１９】
被検体においてＩＬ−２２関連障害を処置または予防するための方法であって、該方法は、該被検体に請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメントを、該ＩＬ−２２関連障害を処置または予防するのに十分な量で投与する工程、を包含する方法。
【請求項２０】
前記ＩＬ−２２関連障害が、自己免疫障害、呼吸器障害、および炎症状態からなる群より選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＩＬ−２２関連疾患が、関節リウマチ、変形性関節症、多発性硬化症、重症筋無力症、クローン病、炎症性腸疾患、ループス、糖尿病、乾癬、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、心血管炎症、膵炎、肝炎および腎炎からなる群ヨリ選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記自己免疫障害が、関節リウマチである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記被検体が、哺乳動物である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
前記哺乳動物が、ヒトである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記被検体に、サイトカインインヒビター、成長因子インヒビター、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝インヒビター、酵素インヒビター、細胞毒性剤、および細胞増殖抑制剤からなる群より選択される、別の治療剤を投与する工程をさらに包含する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２６】
前記治療剤が、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ−１２アンタゴニスト、ＩＬ−１５アンタゴニスト、ＩＬ−１７アンタゴニスト、ＩＬ−１８アンタゴニスト、ＩＬ−２１Ｒアンタゴニスト、Ｔ細胞減少剤、Ｂ細胞減少剤、メトトレキサート、レフルノミド、シロリムス（ラパマイシン）またはそのアナログ、Ｃｏｘ−２インヒビター、ｃＰＬＡ２インヒビター、ＮＳＡＩＤ、およびｐ３８インヒビターからなる群より選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
被検体での急性期応答を軽減する方法であって、該方法は、該被検体に、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントを該被検体での急性期応答を軽減するのに十分な量で投与する工程を包含する、方法。
【請求項２８】
前記被検体が、哺乳動物である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記哺乳動物が、ヒトである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
被検体でのＩＬ−２２関連障害を処置または予防するための医薬の製造における、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメントの使用。
【請求項３１】
被検体での急性期応答を処置または予防するための医薬の製造における、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメントの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）、特にヒトＩＬ−２２に結合する抗体およびその抗原結合フラグメントと、ＩＬ−２２関連活性調節でのそれらの用途とに関連する。本明細書で開示した抗体は、自己免疫疾患（例えば、関節炎）等のＩＬ−２２関連疾患の診断、予防、および／または処置に有用である。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）は、ＩＬ−１０と配列相同性を示すクラスＩＩサイトカインである。その発現は、ＩＬ−９またはＣｏｎＡによってＴ細胞で上流制御される（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９７（１８）：１０１４４−９）。さらなる研究によって、ＩＬ−２２ｍＲＮＡの発現がＬＰＳ投与に応答してインビボで誘導されること、また急性期反応を示すパラメーターをＩＬ−２２が修飾することが示された（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）上掲；Ｐｉｔｔｍａｎ  Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２：１７２）。まとめると、これらの観察はＩＬ−２２が炎症になんらかの役割を果たすことを示唆している（Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．（２００２）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＆  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １３（３）：２２３−４０）。
【０００３】
ＩＬ−２２は、ＩＩ型サイトカイン・レセプター・ファミリー（ＣＲＦ２）を構成するレセプターのうちの２つであるＩＬ−２２ＲとＩＬ−１ＯＲ２とからなるレセプター複合体に結合すると考えられている（Ｘｉｅ  Ｍ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７５（４０）：３１３３５−９；  Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６（４）：２７２５−３２）。ＩＬ−２２レセプターの両鎖が数多くの器官で構成的に発現される。これらの器官に由来する上皮細胞株は、インビトロでＩＬ−２２に反応する（Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．（２００２）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＆  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １３（３）：２２３−４０）。ＩＬ−２２は、他のＭＡＰＫの中間体と同様に、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ３およびＥＲＫ経路の活性化を誘導する（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）上掲；  Ｘｉｅ  Ｍ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）上掲；  Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４（４）：１８１４−９；  Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６（４）：２７２５−３２；  Ｌｅｊｅｕｎｅ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７（３７）：３３６７６−８２）。
【０００４】
ＣＲＦ２メンバーは、ＩＦＮα／β、ＩＦＮγ、凝固因子ＶＩＩａ、ＩＬ−１０、およびＩＬ−１０関連タンパク質ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２２、ＩＬ−２４、同様に細菌同定されたＩＦＮ様サイトカイン、ＩＬ−２８、およびＩＬ−２９のレセプターである（Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．（２００２）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １３（３）：２２３−４０；  Ｋｏｔｅｎｋｏ，Ｓ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９（２１）：２５５７−６５；  Ｓｈｅｐｐａｒｄ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４（１）：６３−８；  Ｋｏｔｅｎｋｏ，Ｓ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４（１）：６９−７７）。これらの膜レセプターに加えて、ＣＲＦ２ファミリーもまた、可溶性タンパク質であるＩＬ２２結合タンパク質（ＩＬ−２２ＢＰ）を含み、このタンパク質はＩＬ−２２に特異的であり、その活性を阻害する（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６６（１２）：７０９０−５；  Ｋｏｔｅｎｋｏ，Ｓ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６６（１２）：７０９６−１０３；  Ｘｕ，Ｗ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９８（１７）：９５１１−６；  Ｇｒｕｅｎｂｅｒｇ，Ｂ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｇｅｎｅｓ  ＆  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２（６）：３２９−３４；  Ｗｅｉ  Ｃ−Ｃ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｇｅｎｅｓ  ＆  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ４：２０４−２１１）。しかし、ＩＬ−２２レセプター複合体がＩＬ−２２に対してユニークであるのに対して、各々の鎖（すなわちＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２）は他のＣＲＦ２メンバーと共用され、ＩＬ−２０、ＩＬ−２４（ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−２０Ｒ２）、ＩＬ２８、ＩＬ２９（ＩＦＮ−ＸＲ１／ＩＬ−１０Ｒ２）、およびＩＬ−１０（ＩＬ−１０ＲＩ／ＩＬ−１０Ｒ２）が定義される（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｉｍｕｎｏｌ．１６７（７）：３５４５−９；  Ｗａｎｇ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７（９）：７３４１−７；  Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７（４９）：４７５１７−２３；  Ｋｏｔｅｎｋｏ，Ｓ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（１９９７）ＥＭＢＯ  Ｊ．１６（１９）：５８９４−９０３；  Ｓｐｅｎｃｅｒ，Ｓ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８７（４）：５７１−８）。
【０００５】
ＣＲＦ２複合レセプターの両鎖は、シグナル伝達に必要である。この複合レセプターの一方の鎖は、サイトカインに対する高親和性にもとづいてこれまでリガンド結合鎖として定義されていた（例えば、ＩＦＮγＲ１）。他方の鎖（例えば、ＩＦＮγＲ２）は、ヘルパーまたはアクセサリ鎖として特徴づけられ、単独ではサイトカインに対する親和性が最小である（Ｋｏｔｅｎｋｏ，Ｓ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９（２１）：２５５７−６５）。最近の結果は、両方のレセプター鎖が少なくともＩＬ１０およびＩＬ−２２に対する結合親和性に関与する可能性があることを示唆している（Ｘｉｅ  Ｍ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７５（４０）：３１３３５−９；  Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６（４）：２７２５−３２；  Ｌｏｇｓｄｏｎ，Ｎ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ  ２２（１１）：１０９９−１１２）。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の要旨）
本出願は、少なくとも部分的に、高親和性および特異性を持ってインターロイキン２２（「ＩＬ−２２」）、特にヒトＩＬ−２２に結合する抗体およびその抗原結合フラグメント等のＩＬ２２結合剤を提供する。本発明の抗体およびその抗原結合フラグメントもまた、本明細書では「抗ＩＬ２２抗体」および「そのフラグメント」とそれぞれをいう。一実施形態では、抗ＩＬ２２抗体またはそのフラグメントは、ＩＬ−２２アンタゴニストであることから、少なくとも一種類のＩＬ２２関連活性の軽減、中和、および／またはアンタゴナイズする。例えば、抗ＩＬ２２抗体またはそのフラグメントは、ＩＬ−２２（例えばＩＬ−２２のエピトープ）に結合することができ、ＩＬ−２２とＩＬ２２レセプター複合体（例えば、ＩＬ−２２レセプター（「ＩＬ−２２Ｒ］）とインターロイキン１０レセプター２（ＩＬ−１０Ｒ２」）との複合体）またはそのサブユニット（例えば、ＩＬ−２２ＲもしくはＩＬ１０Ｒ２単独で）との相互作用（例えば結合）に妨害する。したがって、本発明の抗体およびそのフラグメントは、ＩＬ−２２とＩＬ−２２レセプター複合体、またはそのサブユニットとの相互作用（例えば結合）に妨害する（例えば、抑制、阻害、もしくはさもなければ軽減）。
【０００７】
さらに、出願人はＩＬ−２２の投与が急性期反応のパラメーターをインビボ誘導し、中和抗ＩＬ−２２抗体を用いることによるＩＬ２２活性の軽減がマウス・コラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）モデルでの炎症症状を改善することを示した。ＩＬ−２２ｍＲＮＡの発現は、炎症領域で上方制御される。したがって、ＩＬ−２２アンタゴニスト、例えば中和抗ＩＬ−２２抗体およびそのフラグメントを用いてインビボでの免疫抑制を有する。したがって、本発明の抗ＩＬ２２抗体またはそのフラグメントがＩＬ２２関連疾患、例えば自己免疫疾患（例えば多発性硬化症、リウマチ）、呼吸器疾患（例えば喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））、ならびに皮膚（例えば乾癬）、心血管系（例えばアテローム性動脈硬化症）、神経系（例えばアルツハイマー症）、腎臓（例えば腎炎）、肝臓（例えば肝炎）、および膵臓（例えば膵炎）の炎症状態の診断、処置、および／または関節リウマチ）に有用である。
【０００８】
したがって、一局面では、本発明はＩＬ−２２、特に哺乳類ＩＬ−２２（例えば、ヒトもしくはマウスＩＬ−２２）と相互作用（例えば結合）する単離抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴づける。一実施形態によれば、抗体またはそのフラグメントは中和抗体、例えばそれが１種類以上のＩＬ−２２関連活性、中でもケモカイン分泌（例えばＧＲＯ１分泌）、急性期反応、ＳＴＡＴタンパク質（例えばＳＴＡＴ−３タンパク質）等のキナーゼのリン酸化、細胞増殖（例えば、ＨＥＰＧ２増殖および／またはリン酸化）等を軽減または阻害する。抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントは、高親和性、例えば親和定数（Ｋｄ）値が１０Ｅ−７未満、好ましくは１０Ｅ−８、１０Ｅ−９、１０Ｅ−１０、より好ましくは１０Ｅ−１１以上の親和性でＩＬ−２２に結合することができる。他の実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントは、ＥＤ５０値が少なくとも約６０ｎＭ、通常は約５ｎＭ〜２００ｐＭ以上強力である１種類以上のＩＬ−２２関連活性を中和することができる。他の実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントは、１０Ｅ３〜１０Ｅ７１／ＭＳ、一般に１０Ｅ４〜１０Ｅ６１／ＭＳの反応速度（ｋｉｎｅｔｉｃｓ）でＩＬ２２に結合する。別の実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントは、解離反応速度（ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｋｉｎｅｔｉｃｓ）が１０Ｅ−２〜１０Ｅ−６ｌ／ｓ、一般に１０Ｅ−３〜１０Ｅ−６ｌ／ｓである。一実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントは、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５２５５を有するハイブリドーマ細胞株によって産生されたモノクローナル抗体Ａｂ−０４、またはＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５２５４を有するハイブリドーマ細胞株によって産生されたＡｂ−０２に類似した親和性および／または反応速度で、ＩＬ−２２、例えばヒトのＩＬ−２２に結合する。抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントの親和性の試験は、例えばバイオセンサー技術（Ｂｉａｃｏｒｅ）を用いておこなうことができる（以下の実施例５および２２を参照せよ）。抗ＩＬ−２２抗体の阻害活性（ＥＤ５０）の試験は、例えば、本明細書で説明されるように、ＨＥＰＧ２細胞のＳＴＡＴリン酸化アッセイまたはＢａＦ３増殖アッセイを用いておこなうことができる（例えば、実施例２０〜２１を参照せよ）。
【０００９】
一実施形態では、抗ＩＬ２２抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは単鎖Ｆｖフラグメント）は、モノクローナル抗体または単一特異性抗体である。上記抗体またはそのフラグメントを、ヒト、ヒト化、キメラ、ＣＤＲグラフト、またはインビトロ生成抗体とすることもできる。さらに別の実施形態では、抗体は、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、より詳しくは、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４から選択される重鎖定常領域を持つ。別の実施形態では、上記抗体は、例えばカッパまたはラムダから選択される軽鎖を持つ。
【００１０】
別の実施形態では、上記抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントは、ＩＬ−２２、特にヒト等のＩＬ−２２（例えば、配列番号２のアミノ酸配列または配列番号２のほぼアミノ酸３４〜１７９に由来する成熟ヒトＩＬ−２２配列、あるいはそれに対して少なくとも８５％、９０％、９５％、９９％以上同一である配列）に特異的に結合する。別の実施形態では、上記抗体またはフラグメントは、ＩＬ−２２のフラグメントに特異的に結合する。このフラグメントの例として、上記配列番号２のアミノ酸配列に対して隣接する少なくとも１０，２０，５０，７５，１００，１５０，または１７０アミノ酸のフラグメントであり、あるいは少なくとも８５％、９０％、９５％、９９％、またはそれ以上同一である配列のフラグメントである。他の実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントは、ヒトＩＬ−２２に対して特異的に結合し、ヒト以外の種、例えばマウス（例えば、マウスもしくはラット）のＩＬ−２２とは実質的な交叉反応を示さない。別の実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントは２種類以上の形態の哺乳類ＩＬ−２２、例えばヒト、非ヒト霊長類（例えばサル）、およびマウス（例えば、マウスもしくはラット）ＩＬ−２２と結合する。
【００１１】
一実施形態では、上記抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントは、特異的にエピトープと結合する。例えば、このエピトープは、ＩＬ−２２、特に哺乳類（例えばヒトまたはマウス）ＩＬ−２２の直線状エピトープもしくは立体構造エピトープである。別の実施形態では、上記抗ＩＬ−２２抗体またはそのスラグメントは、例えばＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの複合体（「ＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ」）ならびにＩＬ−２２、ＩＬ−２２Ｒ、およびＩＬ−１０Ｒ２の複合体（「ＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２」）から選ばれる複合体と結合する。一実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体またはその複合体はＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの複合体に結合することで、抗ＩＬ−２２抗体またはその複合体、ＩＬ−２２およびＩＬ−２２Ｒの複合体を形成する。抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントの結合は、上記複合体の安定性を高めることで、ＩＬ−１０Ｒ２との複合体の相互作用を妨げる。
【００１２】
他の実施形態では、上記抗体またはそのフラグメントはＩＬ−２２に結合し、相互作用、例えばＩＬ−２２とＩＬ−２２レセプター複合体（例えば、ＩＬ−２２ＲとＩＬ−１０Ｒ２とから構成される複合体）との結合に妨害する（例えば該相互作用を抑制もしくは阻害するか、さもなければ軽減させる）。他の実施形態では、上記抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントはＩＬ−２２に結合し、相互作用、例えばＩＬ−２２とＩＬ−２２レセプター複合体のサブユニット（例えばＩＬ−２２ＲもしくはＩＬ−１０Ｒ２単独）との結合に妨害する（例えば該相互作用を抑制もしくは阻害するか、さもなければ軽減させる）。さらに別の実施形態では、上記抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントはＬ−２２に結合し、相互作用、例えばＩＬ−２２およびＩＬ−２２Ｒの複合体（「ＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ」）とＩＬ−１０Ｒ２との間の結合に妨害する（例えば該相互作用を抑制もしくは阻害するか、さもなければ軽減させる）。別の実施形態では、上記抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントはＩＬ−２２に結合し、相互作用、例えばＩＬ−２２およびＩＬ−１０Ｒ２の複合体（「ＩＬ−２２／ＩＬ−１０Ｒ２」）とＩＬ−２２Ｒとの結合に妨害する（例えば該相互作用を抑制もしくは阻害するか、さもなければ軽減させる）。
【００１３】
別の実施形態では、上記抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントは、ＩＬ−２２、例えば哺乳類ＩＬ−２２（例えばヒトまたはマウスＩＬ−２２）との結合について、ＩＬ−２２結合タンパク質（ＩＬ−２２ＢＰ）、例えば哺乳類ＩＬ−２２ＢＰ（ヒトまたはマウスＩＬ−２２ＢＰ）と競合する。
【００１４】
ＩＬ−２２Ｒに対するＩＬ−２２結合に妨害する抗ＩＬ−２２抗体の非限定的な例は、「Ａｂ−０４」である。Ａｂ−０４（本明細書では、ラット・モノクローナル抗体「Ｐ３／２」ともいう）は、ヒトＩＬ−２２と結合し、少なくとも１つのＩＬ−２２活性を中和する（実施例５、１６、１７、２０、および２１を参照せよ）。２００３年６月５日に、Ａｂ−０４産生ハイブリドーマ細胞株をＡＴＣＣに寄託し、この細胞株にＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５２５５が与えられた。ＩＬ−１０Ｒ２に対するＩＬ−２２結合に妨害する抗ＩＬ−２２抗体の他の非限定的例は、「Ａｂ−０２」である。Ａｂ−０２（本明細書ではラット・モノクローナル抗体「Ｐ３／３」ともいう）は、マウスおよびヒトＩＬ−２２に結合し、少なくとも１つのＩＬ−２２活性を中和する（実施例５、１６、１７、２０、および２１を参照せよ）。２００３年６月５日に、Ａｂ−０２産生ハイブリドーマ細胞株をＡＴＣＣに寄託し、この細胞株にＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５２５４が与えられた。
【００１５】
一実施形態では、上記抗体またはそのフラグメントはＩＬ−２２、例えばマウスもしくはヒトのＩＬ−２２に特異的に結合し、ＩＬ−２２に対する二次抗体、例えばＩＬ−２２（例えばヒトもしくはマウスＩＬ−２２）上の標的エピトープに対する二次抗体の結合を抑制する。二次抗体は、例えばＰＴＡ−５２５４およびＰＴＡ−５２５５から選ばれるハイブリドーマによって産生されたモノクローナル抗体であり得る。別の実施形態では、上記抗体またはそのフラグメントは、ＰＴＡ−５２５４およびＰＴＡ−５２５５等から得らればれるハイブリドーマによって産生された少なくとも１つの抗原結合領域（例えば、可変領域）を含む。さらに別の実施形態では、抗体またはそのフラグメントは、ＰＴＡ−５２５４およびＰＴＡ−５２５５等のハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体に由来する少なくとも１つ、２つ、３つ、もしくは４つの可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはそのフラグメントは、ＰＴＡ−５２５４およびＰＴＡ−５２５５等のハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体に由来する少なくとも１〜２つの重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、上記抗体またはそのフラグメントは、ＰＴＡ−５２５４およびＰＴＡ−５２５５等のハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体に由来する少なくとも１つまたは２つの軽鎖可変領域を含む。さらに別の実施形態では、上記抗体またはそのフラグメントはＰＴＡ−５２５４およびＰＴＡ−５２５５等のハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体に由来する重鎖可変領域に由来する少なくとも１つ、２つ、または３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。さらに別の実施形態では、上記抗体またはそのフラグメントは、ＰＴＡ−５２５４およびＰＴＡ−５２５５等のハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体の軽鎖可変領域に由来する少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む。さらに別の実施形態では、上記抗体またはそのフラグメントは、ＰＴＡ−５２５４およびＰＴＡ−５２５５等のハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体の重鎖および軽鎖可変領域に由来する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲを含む。別の実施形態では、上記モノクローナル抗体は、ＰＴＡ−５２５４およびＰＴＡ−５２５５から選ばれたハイブリドーマによって産生される。
【００１６】
本明細書中に記載された抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントを誘導体化することができ、あるいはそれを別の機能分子、例えば別のペプチドもしくはタンパク質（例えば、Ｆａｂ’フラグメント）に結合させることができる。例えば、融合タンパク質もしくは抗体、または抗原結合部分を、１つ以上の他の分子単位、例えば、とりわけ抗体（例えば二重特異性抗体もしくは多重特異性抗体）、毒素、放射同位元素、細胞毒性もしくは細胞増殖抑制性の薬剤に機能的に結合（例えば、化学結合、遺伝学的融合、非共有結合もしくはその逆のもの）させることができる。
【００１７】
さらに別の実施形態では、ＩＬ−２２結合剤、例えばＩＬ−２２アンタゴニスト（例えば、本明細書中に記載した抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメント）、あるいはその薬学的組成物を、単独投与もしくは併用療法のかたちで投与する。すなわち、他の薬剤、例えばＩＬ−２２関連疾患を処置する上で有用な治療薬と併用する。ＩＬ−２２関連疾患の例として、限定されるものではないが、自己免疫疾患、例えば関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎、（ループス関連関節炎または強直性脊椎炎）、血管炎、多発性硬化症、自己免疫性甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎および湿疹性皮膚炎を含む）、重症筋無力症、炎症性大腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病（糖尿病（Ｉ型）；皮膚炎（例えば乾癬）、心血管系（例えばアテローム性動脈硬化症）、神経系（例えばアルツハイマー病）、肝臓（例えば肝炎）、腎臓（例えば腎炎）、および膵臓（例えば膵炎）；心臓血管疾患、例えばコレステロール代謝異常、酸素フリーラジカル損傷、虚血；創傷治癒に関連した障害；呼吸器疾患、例えば喘息およびＣＯＰＤ（例えば嚢胞性線維症）；敗血症；移植拒絶反応およびアレルギーが挙げられる。一実施形態では、上記ＩＬ−２２関連疾患が関節炎障害、例えば関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎、もしくは強直性脊椎炎から選択される１つ以上から選択される疾患；呼吸器疾患（例えば喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））；または皮膚等の炎症状態（乾癬）、心血管系（例えばアテローム性動脈硬化症）、神経系（アルツハイマー病）、膵臓（例えば膵炎）、および消化器官、例えば大腸炎、クローン病およびＩＢＤである。
【００１８】
併用療法として、１種類以上のＩＬ−２２結合剤、例えばＩＬ−２２アンタゴニスト（例えば、抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメント）とともに、さらに１種類以上の治療薬、例えば１種類以上のサイトカインおよび成長因子インヒビター、免疫抑制剤、抗炎症剤（例えば、全身性抗炎症剤）、代謝インヒビター、酵素インヒビター、および／または細胞障害性もしくは細胞増殖抑制剤を、本明細書により詳しく記載されるように、共配合および／または共投与する。
【００１９】
１種類以上のＩＬ−２２結合剤、例えばＩＬ−２２アンタゴニスト（例えば、抗ＩＬ−２２抗体もしくはそのフラグメント）と共投与および／または共配合し得る好ましいさらなる治療薬の例として、限定されるものではないが、１種類以上のＴＮＦアンタゴニスト（例えば、ＴＮＦに結合するキメラ、ヒト化、ヒトもしくは生体内（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）産生抗体、またはその抗原結合フラグメント；ＴＮＦレセプターの可溶性フラグメント、例えばｐ５５もしくはｐ７５ヒトＴＮＦレセプターまたはその誘導体、例えば７５ＫｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤＴＮＦレセプター−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥｎｂｒｅｌＴＭ）、ｐ５５ｋＤＴＮＦレセプター−ＩｇＧ融合タンパク質；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト、例えばＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）インヒビター）；ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒのアンタゴニスト；Ｔ細胞およびＢ細胞依存型薬剤（例えば、抗ＣＤ４およびＣＤ２２抗体）；低分子インヒビター、例えばメトトレキサートおよびレフルノミド；シロリムス（ラパマイシン）およびそのアナログ、例えばＣＣＩ−７７９；Ｃｏｘ−２およびｃＰＬＡ２インヒビター；ＮＳＡＩＤ；ｐ３８インヒビター、ＴＰＬ−２、Ｍｋ−２およびＮＦｋｂインヒビター；ＲＡＧＥもしくは可溶性ＲＡＧＥ；Ｐ−セレクチンまたはＰＳＧＬ−１インヒビター（例えば低分子インヒビター、その抗体、例えばＰ−セレクチンに対する抗体）；エストロゲン・レセプターβ（ＥＲＢ）アゴニストまたはＥＲＢ−ＮＦｋｂアンタゴニストが挙げられる。１種類以上の抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントと共投与もしくは／または共配合し得る好ましい追加の治療薬の例として、１種類以上の、ＴＮＦレセプターの可溶性フラグメント、例えばｐ５５もしくはｐ７５ヒトＴＮＦレセプターもしくはその誘導体、例えば７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤＴＮＦレセプター−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥｎｂｒｅｌＴＭ）；メトトレキサート、レフルノミド、またはシロリムス（ラパマイシン）もしくはそのアナログ、例えばＣＣＩ−７７９が挙げられる。
【００２０】
理論に束縛されることなく、例えば、全身性炎症とは対照的に組織炎症の増幅剤または調節剤として作用することで、局所的にＩＬ−２２が炎症性効果を及ぼすこと考えられている。したがって、例えば、本明細書に記載した抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントを用いることで、ＩＬ−２２活性の阻害によって、全身性の炎症性モダリティよりもいっそう効果的な組織特異的抗炎症性効果を得ることが可能である。さらにまた、例えば、本明細書に記載された抗ＩＬ−２２抗体もしくはそのフラグメントは、全身性抗炎症性モダリティとの組み合わせにとって有用な候補を提供することが可能である。
【００２１】
別の局面では、本発明は組成物、例えば薬学的組成物を提供するものであり、この組成物として、医薬的に許容される担体と少なくとも１つのＩＬ−２２結合剤、例えばＩＬ２２アンタゴニスト（例えば、本明細書に記載された抗ＩＬ−２２抗体もしくはそのフラグメント）が挙げられる。一実施形態では、上記組成物（例えば薬学的組成物）は、上記ＩＬ−２２結合剤、例えば抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントの１つを二つ以上組み合わせたものを含む。ＩＬ−２２アンタゴニスト、例えば上記抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントと薬物、例えば治療薬（例えば、本明細書でより詳しく説明するように、１種類以上のサイトカインおよび成長因子、抗炎症剤（例えば、全身性抗炎症剤）、全身性抗疾患剤）、代謝インヒビター、酵素インヒビター、および／または細胞障害性もしくは細胞増殖抑制剤）との組み合わせもまた、本発明の範囲内である。
【００２２】
Ａｂ−０２もしくはＡｂ−０４によって認識されるＩＬ−２２（例えばヒトＩＬ−２２）のエピトープもまた、本発明の範囲内である。
【００２３】
別の局面では、被検体での急性期反応を検出、抑制、または軽減させる方法を特徴づける。この方法は、被検体の急性期反応を低下、抑制、または軽減するのに十分な量で、ＩＬ−２結合材、例えばＩＬ−２２アンタゴニスト（例えば、本明細書中に記載したように、抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメント）を、被検体に投与することを含む。一実施形態では、上記被検体は哺乳類、例えばＩＬ−２２関連疾患を患っているヒトであり、この疾患として、例えば呼吸器疾患、炎症性疾患、および自己免疫疾患が挙げられる。一実施形態では、ＩＬ−２２結合剤の投与を、局部的な投与法、例えば局所投与法、皮下投与法、もしくは全身循環ではない他の投与法によっておこなう。
【００２４】
別の局面では、本発明は、例えば、ＩＬ−２２とＩＬ−２２レセプター複合体、またはそのサブユニットである個々のＩＬ−２２ＲもしくはＩＬ−１０Ｒ２等との間の相互作用、例えば結合に対する妨害を調節する方法を特徴づける。この方法は、必要に応じて、ＩＬ−２２とＩＬ−２２レセプターとの複合体またはそのサブユニット（例えば、可溶性ＩＬ−２２レセプター複合体もしくはそのサブユニット、または膜結合ＩＬ−２２レセプター複合体もしくはそのサブユニット、例えばＩＬ−２２レセプター複合体もしくはそのサブユニットを発現する細胞）を提供すること、ＩＬ２２をＩＬ−２２レセプター複合体もしくはそのサブユニットとを、ＩＬ−２２とＩＬ−２２レセプター複合体もしくはそのサブユニットとの相互作用が生じてＩＬ−２２／ＩＬ−２２レセプター混合物を形成させる条件下で、接触させること、ならびに上記ＩＬ−２２／ＩＬ−２２レセプター混合物を、本明細書中に記載したように、少なくとも１種類のＩＬ−２２結合剤、例えば少なくとも１種類の抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントと接触させることで、上記相互作用に対する、例えば妨害（例えば抑制、阻害、もしくはさもなければ軽減）を調節すること、を含む。
【００２５】
本方法は、インビトロ（例えば、無細胞株）で、培養液中（例えば生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏ））で細胞に対して用いることができる。例えば、ＩＬ−２２レセプター発現細胞を培養液中でインビトロ培養することができ、１種類以上の抗ＩＬ−２２抗体もしくはそのフラグメント（例えば、本明細書中に記載したような抗ＩＬ−２２抗体もしくはそのフラグメント）を培養液に添加することで上記接触ステップが達成される。あるいは、上記方法を被検体に存在する細胞に対して、例えばインビボ（例えば治療用もしくは予防用の）プロトコルの一部として、実施することができる。
【００２６】
別の実施形態では、上記発明は、被検体でのＩＬ−２２関連疾患を処置（例えば、治療、抑制、改善、開始の遅延もしくは防止、または再発もしくは回帰の防止）あるいは予防をおこなう方法を特徴づける。上記方法は、ＩＬ−２２結合剤、例えばＩＬ２２アンタゴニスト（例えば、本明細書中に記載したような、抗ＩＬ−２２抗体もしくはそのフラグメント）を、ＩＬ−２２関連疾患の処置もしくは予防に十分な量で、被検体に投与することを含む。一実施形態では、上記ＩＬ−２２結合剤の投与を、局部的な投与法、例えば局所投与法、皮下投与法、もしくは全身循環ではない他の投与法によっておこなう。
【００２７】
ＩＬ−２２結合剤、例えばＩＬ−２２アンタゴニスト（例えば抗ＩＬ−２２抗体もしくはそのフラグメント）を、単独で、もしくは本明細書中に記載したような他の治療モダリティと組み合わせた状態で、被検体に投与することができる。一実施形態では、上記被検体が哺乳類、例えばＩＬ−２２関連疾患、例えば呼吸器疾患、炎症性疾患、および自己免疫疾患を患ったヒトである。
【００２８】
ＩＬ−２２関連疾患の例として、限定されるものではないが、自己免疫疾患、例えば関節炎（例えば関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎、ループス関連関節炎もしくは強直性脊椎炎）、強皮症、全身性紅斑性狼瘡、血管炎、多発性硬化症、自己免疫性甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎および湿疹性皮膚炎を含む）、重症筋無力症、炎症性大腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、糖尿病（Ｉ型）；心臓血管疾患（例えばコレステロール代謝異常、酸素フリーラジカル損傷、虚血、アテローム性動脈硬化症）；創傷治癒と関連した障害；呼吸器疾患（例えば喘息およびＣＯＰＤ（例えば嚢胞性線維症））；皮膚（例えば乾癬）、肝臓（例えば肝炎）、腎臓（例えば腎炎）、および膵臓（例えば膵炎））の炎症性疾患；敗血症；癌（例えば固形腫瘍または軟部組織腫瘍）；移植拒絶反応およびアレルギーが挙げられる。一実施形態では、上記ＩＬ−２２関連疾患は、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎、または強直性脊椎炎（好ましくは関節リウマチ）の１つ以上から選択される疾患；呼吸器疾患（例えば、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））；ならびに皮膚（例えば乾癬）、肝臓（例えば肝炎）、腎臓（例えば腎炎）、および膵臓（例えば膵炎）等の炎症状態である。
【００２９】
他の実施形態では、本発明は、被検体での関節炎（例えば、関節リウマチ）に関連した１つ以上の症状を処置（例えば軽減もしくは改善）または予防する方法を提供する。この方法は、１つ以上の関節炎症状を処置（例えば軽減もしくは改善）または予防するのに十分な量で、ＩＬ−２２結合剤、例えばＩＬ−２２アンタゴニスト（例えばＩＬ−２２抗体もしくはそのフラグメント）を被検体に投与することを含む。ＩＬ−２２抗体を、治療または予防を目的として、あるいはその両方を目的として、投与することができる。ＩＬ−２２結合剤、例えばＩＬ−２２アンタゴニスト、例えば抗ＩＬ−２２抗体もしくはそのフラグメントを、単独で、あるいは本明細書中に記載したような他の治療モダリティと組み合わせて、被検体に投与することができる。好ましくは、被検体は、哺乳類、例えば本明細書中に記載したようなＩＬ−２２関連疾患を患ったヒトである。
【００３０】
別の局面では、本発明はインビトロ試料（例えば、血清、血しょう、組織、または生検等の生物試料）の存在を検出する方法を提供する。本方法を、免疫細胞関連疾患等の疾患の診断に用いることができる。この方法は、（ｉ）試料もしくは対照試料を本明細書中に記載したような抗ＩＬ−２２抗体もしくはフラグメントと接触させること、ならびに（ｉｉ）抗ＩＬ−２２抗体もしくはそのスラグメントと試料もしくは対照試料との間の複合体の形成を検出することを含み、対照試料と比較して、試料での複合体形成に生じた統計学的に有意な変化が、その試料でのＩＬ−２２の存在を示す。
【００３１】
さらに別の局面では、本発明はインビボでのＩＬ−２２の存在を検出するための方法（例えば、被検体でのインビボイメージング）を提供する。本方法を、ＩＬ−２２関連疾患等の疾患の診断に用いることができる。この方法は、（ｉ）本明細書中に記載したような抗ＩＬ−２２抗体もしくはそのフラグメントを、この抗体もしくはフラグメントがＩＬ−２２に結合するのを可能とする条件下で、被検体に投与すること、（ｉｉ）抗体もしくはフラグメントとＩＬ−２２との間の複合体の形成を検出することとを含み、対照被検体と比較して上記複合体の形成での統計学的に有意な変化がＩＬ−２２の存在を示す。
【００３２】
好ましくは、検出可能な基質によって、上記抗体またはそのフラグメントを直接または間接的に標識することで、結合抗体もしくは非結合抗体の検出が促進される。適当な検出可能な基質として、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、あるいは放射性物質が挙げられる。
【００３３】
薬剤、例えば治療薬もしくは細胞毒性薬をインビボでＩＬ−２２発現細胞に送達または標的化させる方法も、開示する。
【００３４】
治療および診断用途のための本発明のＩＬ−２２結合剤、例えばＩＬ−２２抗体もしくはそのフラグメント）を含むキットもまた、本発明の範囲内である。
【００３５】
本明細書中で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されている意味と同じ意味を持つ。本明細書に記載さえた方法および材料と類似または等価な方法および材料を本発明の実施または試験に用いることができるけれども、適当な方法および材料を後述する。本明細書中で言及された全ての刊行物、特許出願、特許、または他の参考文献の全体を本明細書の一部を構成するものとして援用する。矛盾する場合、定義を含む本明細書が規制する。また、材料、方法、および実施例は実例としてのみ挙げられるものであって、限定することを意図するものではない。
【００３６】
本発明の他の特徴および効果は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかである。
【００３７】
（発明の詳細な説明）
インターロイキン２２（「ＩＬ−２２」）は、先天性免疫応答および適応免疫応答の過程で誘導されるサイトカインである。被検体に投与した場合、それによって急性期反応が生じ、炎症機構でＩＬ−２２が果たす役割に関与する。ＩＬ−２２とともに情報伝達複合体を形成するレセプター鎖は、ＩＬ−２２レセプター（「ＩＬ−２２Ｒ」）とＩＬ−１０レセプター２（「ＩＬ−１０Ｒ２」）であり、これらはＩＩ型サイトカイン・レセプター・ファミリーを構成する２つのメンバーである。一実施形態では、出願人はビオチン化サイトカインおよびレセプター細胞外ドメイン（ＥＣＤ）Ｆｃ融合二量体を用いたＥＬＩＳＡベース・フォーマットでこれらのタンパク質間の相互作用を特徴づけた。出願人は、ＩＬ−２２がＩＬ−２２ＲのＥＣＤに対して測定可能な親和性を有し、ＩＬ−１０Ｒ２単独に対しては検出可能な親和性がないことを示した（実施例１２）。ＩＬ−２２は、Ｆｃヘテロ二量体として表されるＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２ＥＣＤに対して実質的に高い親和性を有する（実施例１３）。一時的な添加を伴うさらなる分析は、ＩＬ−１０Ｒ２がＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの結合によって生成された面に結合することを示唆している。出願人は、ＩＬ−１０Ｒ２ＥＣＤがＩＬ−２２の結合をそのサイトカイン・レセプター複合体にさらに安定化させると考える（実施例１４および１５）。別の実施形態では、中和抗ＩＬ−２２抗体を生成して、その結合特異性、親和性、およびＩＬ−２２中和活性について特徴づけた（実施例５、１６、１７、２０、２１、および２２）。一実施形態では、中和ラットＩＬ−２２抗体およびＩＬ−２２ＢＰ（同一の分泌ＩＬ−２２結合タンパク質および天然アンタゴニスト）は、両方とも、ＩＬ−２２ＲＥＣＤ認識にとって直接必要であると思われるＩＬ−２２エピトープを定義する。さらに別の実施形態では、ラット・モノクローナル抗体は、ＩＬ−１０Ｒ２ＥＣＤの役割にとって重要な別のＩＬ−２２領域を定義する。さらに、出願人はインビボでのＩＬ−２２投与が急性期反応のパラメーターを誘導し、しかも中和抗ＩＬ−２２抗体を用いることによるＩＬ−２２活性の軽減が、マウスのコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）モデルで炎症の症状を改善することを示した（実施例９）。炎症を起こした領域で、ＩＬ−２２ｍＲＮＡの発現を上方制御する。したがって、ＩＬ−２２アンタゴニスト（例えば中和抗ＩＬ−２２抗体およびそのフラグメント）を用いてインビボでの免疫抑制を誘導することができる。
【００３８】
したがって、本願は、少なくとも部分的に、ＩＬ−２２、特にヒトＩＬ−２２に高親和性および高特異性で結合する抗体およびその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントは少なくとも１つのＩＬ−２２関連活性を軽減、抑制、もしくは中和する。例えば、上記ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントはＩＬ−２２、例えばＩＬ−２２のエピトープに結合し、例えばＩＬ−２２とＩＬ−２２レセプターとの複合体、例えばＩＬ−２２レセプター（「ＩＬ−２２Ｒ」）とインターロイキン１０レセプター２（「ＩＬ−１０Ｒ２」）とを含む複合体、またはそのサブユニット（例えば、個々に、ＩＬ−２２ＲもしくはＩＬ−１０Ｒ２）とを含む複合体との結合等の相互作用に妨害する。したがって、本発明の抗体およびそのフラグメントを用いて、ＩＬ−２２とＩＬ−２２レセプター複合体、もしくはそのサブユニットとの間の結合等の相互作用に妨害（例えば、抑制、阻害、さもなければ軽減）することができる。したがって、本発明の抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントを用いて、ＩＬ−２２関連疾患、例えば自己免疫疾患、関節疾患（例えば関節リウマチ）；呼吸器疾患（例えば、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；ならびに、皮膚（例えば乾癬）、肝臓（例えば肝炎）、腎臓（例えば腎炎）、および膵臓（例えば膵炎）の炎症状態の診断、処置、または予防に用いることができる。
【００３９】
本発明がより容易に理解されるように、特定の用語を最初に定義する。付加的な定義は、詳細な説明の全体を通じて述べられている。
【００４０】
本明細書中で用いられるように、「インターロイキン２２」もしくは「ＩＬ−２２」という用語は、ＩＬ−１０に対する相同性を示すもので、ＩＬ−９もしくはＣｏｎＡによってＴ細胞中で上方制御される（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９７（１８）：１０１４４−９）。ＩＬ−２２は、ＬＰＳによって発現が刺激され、ＩＦＮ−γでは発現が顕著ではないサイトカインである。ＩＬ−２２は、ヒトおよびマウスＴｈ１によって優先的に産生され、Ｔｈ２、ＣＤ＋４細胞によっては産生されない。ＩＬ−２２は、急性期反応を示すパラメーターを調節する（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）上掲；  Ｐｉｔｔｍａｎ  Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２：１７２；  ＷＯ  ００／６５０２７；  Ｇａｂａｙ，Ｃ．（１９９９）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３４０（６）：４４８−４５４）、ならびに炎症（Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．（２００２）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＆  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １３（３）：２２３−４０；  ＷＯ  ００／６５０２７）。ＩＬ−２２は、ＩＩ型サイトカイン・レセプター・ファミリーを構成する２つのメンバーであるＩＬ−２２レセプター（本明細書では「ＩＬ−２２Ｒ」ともいう）とＩＬ−１０レセプター２（本明細書では「ＩＬ−１０Ｒ２」ともいう）とからなるレセプター複合体に結合すると考えられる。これら２つのレセプターに関するヌクレオチドおよびアミノ酸配列は、Ｘｉｅ  Ｍ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｌｉｅｎｔ  ２７５（４０）：３１３３５−９（ヒトＩＬ−２２Ｒ）；  Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６（４）：２７２５−３２（ヒトＩＬ−１０Ｒ２）。ＩＬ−２２レセプターの両鎖は、多数の器官で恒常的に発現する。これらの器官から誘導される上皮細胞株は、インビトロでＩＬ２２に応答する（Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．（２００２）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＆  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １３（３）：２２３−４０）。ＩＬ−２２は、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ３およびＥＲＫ経路の活性化を誘導するとともに、他のＭＡＰＫ経路の中間体を誘導する（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）上掲；Ｘｉｅ  Ｍ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）上掲；  Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４（４）：１８１４−９）；  Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６（４）：２７２５−３２；  Ｌｅｊｅｕｎｅ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７（３７）：３３６７６−８２）。これらの参考文献の内容を、参照することによって、それらの全体を本明細書の一部を構成するものとして援用する。
【００４１】
したがって、用語「ＩＬ−２２」とは、サイトカイン（好ましくは哺乳類、例えばマウスまたはヒトに由来するもの）のことをいい、このサイトカインはＩＬ−２２レセプター、例えばＩＬ−２２ＲもしくはＩＬ−１０Ｒ２、またはそれらの複合体（好ましくは哺乳類、例えばマウスまたはヒトに由来するもの）と相互作用、例えば結合し、また以下の特徴の１つを有する。すなわち、（ｉ）天然の哺乳類ＩＬ−２２ポリペプチドまたはそのフラグメントのアミノ酸配列、例えば配列番号２（ヒト）もしくは配列番号４（マウス）またはそのフラグメントとして示されるアミノ酸配列、（ｉｉ）配列番号２（ヒト）もしくは配列番号４（マウス）またはそのフラグメントとして示されるアミノ酸配列に対して実質的に相同、例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、９９％相同であるアミノ酸配列、（ｉｉｉ）天然の哺乳類ＩＬ−２２ヌクレオチド配列またはそのフラグメント（例えば、配列番号１（ヒト）もしくは配列番号３（マウス）またはそのフラグメント）によってコードされるアミノ酸配列、（ｉｖ）配列番号１（ヒト）もしくは配列番号３（マウス）またはそのフラグメントとして示されるヌクレオチド配列に対して実質的に相同、例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、９９％相同であるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列、（ｖ）天然のＩＬ−２２ヌクレオチド配列またはそのフラグメント、例えば配列番号１（ヒト）もしくは配列番号３（マウス）またはそのフラグメントに縮重したヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列、あるいは（ｖｉ）ストリンジェントな条件、例えば高ストリンジェントな条件下で、前述のヌクレオチド配列の１つにハイブリダイズするヌクレオチド配列である。好ましくは、ＩＬ−２２ポリペプチドは、１つ以上のＩＬ−２２関連活性、例えば本明細書中に記載したような活性を持つ。
【００４２】
ヒトＩＬ−２２  ｃＤＮＡをブタペスト条約にもとづいて、最初の寄託物として１９９９年４月２８日付でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ，Ｕ．Ｓ．Ａ．２０１１０−２２０９）に寄託し、寄託番号ＡＴＣＣ２０７２３１が与えられた。寄託材料の公開利用に対する全ての制限は、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ§１．８０８（ｂ）に特定された要請を除き、特許の付与によって最終的に取り除かれるものであり、寄託期間は３７Ｃ．Ｆ．Ｒ§１．８０６に従う。
【００４３】
「ＩＬ−２２関連活性」という語句は、ＩＬ−２２ポリペプチド、例えば成熟ＩＬ−２２ポリペプチド（例えば、哺乳類、例えば配列番号２および４でそれぞれ示されるようなアミノ酸配列を持つヒトもしくはマウスＩＬ−２２）のことをいい、限定されるものではないけれども、（１）ＩＬ−２２レセプター（例えば、ＩＬ−２２ＲもしくはＩＬ−１０Ｒ２またはその複合体、好ましくは哺乳類、例えばマウスもしくはヒトに由来するもの）と相互作用、例えば結合すること、（２）１つ以上のシグナル伝達分子との結合、（３）タンパク質キナーゼ、例えばＪＡＫ／ＳＴＡＴ３、ＥＲＫ、およびＭＡＰＫのリン酸化および／または活性化を刺激すること、（４）ＩＬ−２２応答細胞、例えば腎臓、肝臓、大腸、小腸、胸腺、膵臓、皮膚に由来する上皮細胞の増殖、分化、エフェクター細胞機能、細胞溶解活性、サイトカインもしくはケモカイン分泌、および／または生存を、修飾、例えば刺激または減少させること、（５）急性期反応、例えば代謝、肝臓、造血性（例えば貧血、血小板増加）または神経内分泌変化、あるいは変化（例えば、急性期タンパク質の増加もしくは減少、例えばフィブリノーゲンおよび／または血清アミロイドＡの増加、あるいはアルブミンの減少）の少なくとも１つのパラメーターを修飾すること、および／あるいは（６）炎症状態の少なくとも１つのパラメーターを修飾、例えばサイトカイン媒介炎症誘発性作用（例えば、熱、および／またはプロスタグランジン合成、例えばＰＧＥ２合成）の修飾、細胞免疫応答の修飾、サイトカイン、ケモカイン（例えばＧＲＯ１）、またはリンホカイン産生、および／または分泌（例えば、プロインフラメトリ・サイトカイン）のうちの少なくとも１つのパラメーターを調整することである。    
【００４４】
「急性期反応」という用語は、当該技術分野で認識されおり、例えば、Ｇａｂａｙ，Ｃ．（１９９９）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３４０（６）：４４８−４５４を参照せよ。
【００４５】
本明細書で使用される場合、「治療上有効な量」のＩＬ−２２アンタゴニスト（例えば抗体）とは、被検体（例えば、ヒト患者）に対して単回投与もしくは反復投与した際に、疾患の重症度の治療または軽減、疾患の１つ以上の症状の改善、あるいはそのような処置が無い場合に予想される生存期間を超えて被検体を延命させる上で有効な量のことをいう。
【００４６】
本明細書で使用される場合、「予防上有効な量」のＩＬ−２２アンタゴニスト（例えば抗体）とは、疾患、例えば本明細書中に記載したような疾患の発症または再発が生ずるのを予防または遅延させる際に、疾患の重症度の治療または軽減、疾患の１つ以上の症状の改善、あるいはそのような処置が無い場合に予想される生存期間を超えて被検体を延命させる上で有効な量のことをいう。
【００４７】
「誘導（ｉｎｄｕｃｅ）」、「軽減（ｒｅｄｕｃｅ）」、「抑制（ｉｎｈｉｂｉｔ）」、「増強（ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅ）」、「上昇（ｅｌｅｖａｔｅ）」、「増加（ｉｎｃｒｅａｓｅ）」、「減少（ｄｅｃｒｅａｓｅ）」等の用語は、例えば、２つの状態間での定量的な差を意味し、これら２つの状態間で少なくとも統計学的に有意な差のことをいう。
【００４８】
本明細書で使用される場合、「ＩＬ−２２アンタゴニスト」とは、ＩＬ−２２ポリペプチド（例えば、ヒトＨＬ−２２ポリペプチド）またはそのフラグメントの一つまたは複数の生物活性を減少させる薬剤のことをいう。好ましくは、アンタゴニストは、ＩＬ−２２ポリペプチドと相互作用（例えば結合）する。ＩＬ−２２アンタゴニストを用いた拮抗作用（アンタゴニズム）は、ＩＬ−２２関連生物活性の完全な除去を必ずしも示さない。ＩＬ−２２アンタゴニストとして、限定されるものではないが、ヒトＩＬ−２２タンパク質に対する抗体、ヒトＩＬ−２２抗体が標的とするレセプターまたは他の標的の可溶形、ヒトＩＬ−２２が標的とするレセプターもしくは他の標的に対する抗体、ならびにヒトＩＬ−２２がそれのレセプターもしくは他の標的と相互作用するのを抑制もしくは妨害するペプチドおよび低分子のことをいう。一実施形態では、ＩＬ−２２アンタゴニストはＡｂ−０２と類似の結合特性（例えば、同一もしくは類似のエピトープに結合する）を有する。別の実施形態では、ＩＬ−２２アンタゴニストはＡｂ−０４と類似の結合特性（例えば、同一もしくは類似のエピトープに結合する）を有する。
【００４９】
本明細書で使用される場合、「ＩＬ−２２アゴニスト」は、ＩＬ−２２ポリペプチドの１つまたは複数の生物活性を増強、誘導、あるいはさもなければ増進させる。
【００５０】
本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、少なくとも１つ、好ましくは２つの重（Ｈ）鎖可変領域（以下、ＶＨと略す）、ならびに少なくとも１つ、好ましくは２つの軽（Ｌ）鎖可変領域（以下、ＶＬと略す）を含むタンパク質のことをいう。ＶＨおよびＶＬ領域は、さらに、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と呼ばれるより保守的な領域が散在している「相補性決定領域（「ＣＤＲ」）と呼ばれる超可変領域に分けることができる。フレームワーク領域およびＣＤＲの範囲は、正確に定められている（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２、およびＣｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７、これらを本明細書に援用する）。ＶＨおよびＶＬの各々は、３つのＣＤＲと４つのＦＲから構成され、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順番でアミノ末端からカルボキシル末端まで配置された３つのＣＤＲと４つのＦＲとから構成される。
【００５１】
上記抗体は、さらに、重鎖および軽鎖定常領域をさらに含むことで、重鎖および軽鎖免疫グロブリン鎖をそれぞれ形成し得る。一実施形態では、上記抗体は２つの免疫グロブリン重鎖と２つの免疫グロブリン軽鎖との四量体であり、免疫グロブリン重鎖および軽鎖がジスルフィド結合によって相互に連結されている。重鎖定常領域は、３つのドメイン、すなわちＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３から構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、すなわちＣＬから構成される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合領域を含む。抗体の定常利用行きは、一般に、宿主組織もしくは因子に対する抗体の結合を仲介するもので、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）が挙げられる。
【００５２】
本明細書で使用される場合、「免疫グロブリン」という用語は、免疫グロブリン遺伝子によって実施的にコードされた１つ以上のポリペプチドからなるタンパク質のことをいう。存在が認められたヒト免疫グロブリン遺伝子として、カッパ、ラムダ、アルファ（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、ガンマ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、デルタ、エプシロン、およびミュー定常領域遺伝子、さらには無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が挙げられる。完全長の免疫グロブリン「軽鎖」（約２５ｋｄまたは２１４アミノ酸）は、ＮＨ２末端（約１１０アミノ酸）にある可変領域遺伝子とＣＯＯＨ末端にあるカッパもしくはラムダ定常領域遺伝子とによってコードされる。完全長の免疫グロブリン「重鎖」（約５０ｋｄまたは４４６アミノ酸）は、同様に、可変領域遺伝子（約１１６アミノ酸）と前述した他の定常領域遺伝子のうちの１つ、例えばガンマ（約３３０アミノ酸をコード）とによってコードされる。
【００５３】
本明細書で使用される場合、「アイソタイプ」とは、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス（例えば、ＩｇＭまたはＩｇＧ１）のことをいう。
【００５４】
抗体の「抗原結合フラグメント」（または単に「抗体部分」もしくは「フラグメント」）という用語は、本明細書で使用される場合、抗原に特異的に結合する能力を保持する完全長の抗体の１つ以上のフラグメント（例えば、ＣＤ３）のことをいう。抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に包含される結合フラグメントの例として、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインからなる一価のフラグメントであるＦａｂフラグメント、（ｉｉ）ヒンジ領域でジスフィルド架橋によって連結された２つのＦａｂフラグメントから構成される二価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｂフラグメント、（ｉｖ）抗体の一本の腕のＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）、ならびに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメイン（ＶＬおよびＣＨ）は別々の遺伝子によってコードされているにもかかわらず、合成リンカーによって組換え法を用いて連結することができ、この合成リンカーはそれらのドメインが単一のタンパク質鎖となるのを可能とし、このタンパク質鎖ではＶＬ領域とＶＨ領域との対が一価の分子（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知、例えばＢｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；  およびＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３を参照せよ）を形成する。そのような単鎖抗体もまた、抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に包含されることを意図している。これらの抗体フラグメントは、当業者に公知の従来技術を用いて得られ、これらのフラグメントをインタクトな抗体と同様の方法で有用性についてスクリーニングする。
【００５５】
この文脈での「組み合わせて（ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）」という表現は、薬剤が実質的に同時に、一斉または順次のいずれかで、与えられることを意味している。もし順次投与される場合、第２の化合物の投与の開始時に、２つの化合物の最初のものは、処置部位で有効濃度がいまだ検出可能である。
【００５６】
本明細書中に開示した配列に対して類似または相同（例えば、少なくとも約８５％の配列同一性）もまた、この出願の一部である。いくつかの実施形態では、配列同一性は、約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上であり得る。あるいは、核酸セグメントが選択的ハイブリダイゼーション条件（例えば、高度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件）下でその鎖の相補体にハイブリダイズする場合、実施的な同一性が存在する。核酸は、細胞全体、細胞溶解物、あるいは部分的に精製もしくは実質的に精製された形態で存在することが可能である。
【００５７】
２つの配列間での「相同性」または「配列同一性」（これらの用語を本明細書では同義的に用いられる）の計算は、以下のようにおこなう。配列を最適比較目的のために並べる（例えば、例えば、アラインメントを最適化するためにギャップを第１および第２のアミノ酸もしくは核酸配列の間に導入し、非相同配列を比較目的のために無視することができる）。好ましい実施形態では、比較目的のために並べられた参照配列の長さが、少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、さらに好ましくは少なくとも６０％、よりいっそう好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％、１００％の長さの参照配列である。対応するアミノ酸もしくはヌクレオチド位置にあるアミノ酸残基もしくはヌクレオチドを次に比較する。第１の配列にある位置が第２の配列にある対応する位置と同一のアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占められている場合、その分子はその位置で同一である（本明細書で使用される場合、アミノ酸または核酸の「同一性」は、アミノ酸または核酸の「相同性」に等しい）。２つの配列間での同一率（ｐｅｒｃｅｎｔ  ｉｄｅｎｔｉｔｙ）とは、これらの配列によって共有されている同一位置の数（ギャップの数と各ギャップの長さを考慮）と、これら２つの配列のアライメントを最適化するために導入されることが必要である各々のギャップの長さとの関数である。
【００５８】
配列の比較および２つの配列間での配列の同一率の決定は、数学的アルゴリズムを用いて達成することができる。好ましい実施形態では、２つのアミノ酸配列間での同一率は、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ（（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−４５３）のアルゴリズムを用いて決定されるもので、このアルゴリズムはＧＣＧソフトウェア・パッケージにあるＧＡＰプログラム（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）に組み込まれ、ギャップ・ウエイト（ｇａｐ  ｗｅｉｇｈｔ）を１６、１４、１２、１０、８、６、もしくは４にし、レングス・ウエイト（ｌｅｎｇｔｈ  ｗｅｉｇｈｔ）を１、２，３、４、５、もしくは６にしてＢｌｏｓｓｕｍ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれかが用いられる。さらに別の好ましい実施形態では、２つのヌクレオチド配列間の同一率は、ＧＣＧソフトウェア・パッケージのＧＡＰプログラム（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）を用いて決定することができ、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスと、４０、５０、６０、７０、もしくは８０のギャップ・ウエイトおよび１、２、３、４、５、もしくは６のレングス・ウエイトとが用いられる。特に好ましいパラメーターのセット（本発明の配列同一性もしくは相同性の制限内に分子があるかどうかを決定するために、実践者がどのパラメーターを適用すべきかについてわからない場合に用いるべきもの）は、ギャップ・ペナルティ（ｇａｐ  ｐｅｎａｌｔｙ）を１２、ギャップ拡張ペナルティ（ｇａｐ  ｅｘｔｅｎｄ  ｐｅｎａｌｔｙ）を４、さらにフレームシフト・ギャップ・ペナルティ（ｆｒａｍｅｓｈｉｆｔ  ｇａｐ  ｐｅｎａｌｔｙ）を５としたＢｌｏｓｓｕｍ６２スコアリング・マトリックスである。２つのアミノ酸もしくはヌクレオチド配列間のパーセントもまた、Ｅ．Ｍｅｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ（（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ，４：１１−１７）のアルゴリズムを用いて決定することができる。このアルゴリズムは、ＰＡＭ１２０ウエイト残基テーブル、ギャップ長ペナルティ１２、およびギャップ・ペナルティ４を用いて、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。
【００５９】
本明細書で使用される場合、「ストリンジェントな条件下でのハイブリダイズ」とは、ハイブリダイゼーションおよび洗浄の条件を説明するものである。ストリンジェントな条件は、当業者に公知であり、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９），６．３．１−６．３．６に見いだすことができる。水性および非水性の方法がその参考文献に記述されており、どちらも用いることができる。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の好ましい一例は、約４５℃で６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）でのハイブリダイゼーションをおこなった後、５０℃で０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳによる１回以上の洗浄をおこなうことである。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の別の例は、約４５℃で６×ＳＳＣでのハイブリダイゼーションをおこなった後、５５℃で０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳによる１回以上の洗浄をおこなうことである。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件のさらに別の例は、約４５℃で６×ＳＳＣでのハイブリダイゼーションをおこなった後、６０℃で０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳによる１回以上の洗浄をおこなうことである。好ましくは、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、約４５℃で６×ＳＳＣでのハイブリダイゼーションをおこなった後、６５℃で０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳによる１回以上の洗浄をおこなうことである。特に好ましい高ストリンジェントな条件（ならびに本発明のハイブリダイゼーション制限内に分子があるかどうかを決定するために、実践者がどの条件を適用すべきかについてわからない場合に用いるべき条件）は、６５℃で０．５Ｍリン酸ナトリウム、７％ＳＤＳであり、続いて６５℃で０．２×ＳＳＣ、１％ＳＤＳによる１回以上の洗浄をおこなうことである。
【００６０】
本発明のＩＬ−２２ポリペプチドおよびそのアンタゴニスト（例えば抗体）がさらに保守的もしくは非必須のアミノ酸置換を有してもよく、そのような置換がそれらの機能に対して実質的な影響を及ぼさないことがわかる。「保守的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が類似の側鎖を持つアミノ酸残基によって置き換わる置換である。類似の側鎖を持つアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野で定義されている。これらのファミリーとして、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非帯電性極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、無極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、ならびに芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を持つアミノ酸が挙げられる。
【００６１】
（ＩＬ−２２タンパク質、フラグメント、およびそれらをコードするポリヌクレオチド）
ＩＬ−２２ヌクレオチドおよびアミノ酸配列は当該技術分野で公知であり、以下のように提供される。各々のクローンのヌクレオチド配列もまた、公知の方法にもとづいて寄託されたクローンのシークエンシングによって決定することができる。次に、そのようなヌクレオチド配列から推定アミノ酸配列（完全長および成熟形）を決定することができる。特定のクローンによってコードされたタンパク質のアミノ酸配列もまた、適当な宿主で上記クローンを発現させ、タンパク質を回収してその配列を決定することによって決定することができる。
【００６２】
本明細書で使用される場合、「分泌（ｓｅｃｒｅｔｅｄ）」タンパク質は、適当な宿主細胞で発現された場合、膜を通って輸送され、そのアミノ酸配列の中にあるシグナル配列の結果としての輸送が含まれる。「分泌」タンパク質として、限定されるものではないが、タンパク質が発現される細胞から全体的に（例えば、可溶性タンパク質）または部分的に（例えばレセプター）分泌されたタンパク質が挙げられる。
【００６３】
ヒトＩＬ−２２のヌクレオチド配列（配列番号１）を以下に複写する。また、このヌクレオチド配列はポリ（Ａ）テールを含む。開示されたヌクレオチド配列は、オープン・リーディング・フレームを含み、上述のヌクレオチド配列に対応する完全長ＩＬ−２２タンパク質のアミノ酸配列が配列番号２に報告されている。成熟ＩＬ−２２のアミノ酸配列は、配列番号２のほぼアミノ酸３４〜１７９に一致する。
【００６４】
【化１】
2007537132.tif 000003
コードされたポリペプチドのポリペプチド配列を以下に示す。
【００６５】
【化２】
2007537132.tif 000004
マウスＩＬ−２２をコードするヌクレオチド配列およびコードされたポリペプチドの配列を以下に示す。
【００６６】
【化３】
2007537132.tif 000005
上記参照ポリヌクレオチド配列によってコードされたポリペプチドのアミノ酸配列を以下に示す。
【００６７】
【化４】
2007537132.tif 000006
ＩＬ−２２タンパク質が完全長よりも短い任意の形状であっても、ＩＬ−２２レセプターに対する結合能を保持するという条件で、本発明の方法および組成物で用いることができる。ＩＬ−２フラグメント（例えば、完全長よりも短いもの）を、宿主細胞の完全長ＩＬ−２２タンパク質をコードするポリペプチドの対応フラグメントを発現することによって生産することができる。ＩＬ２２タンパク質これらの対応するポリヌクレオチド・フラグメントは、本発明の一部でもある。上記したように、修飾ポリペプチドを標準的な分子生物学技術、例えば適当な所望の欠失突然変異体の構築、部位特異的突然変異法、または適当なオリゴヌクレオチド・プライマーを用いたポリメラーゼ鎖反応によって、作ることが可能である。
【００６８】
タンパク質のフラグメントを直線状または公知の方法を用いて環状にすることができ、例えば、Ｈ．Ｕ．Ｓａｒａｇｏｖｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０，７７３−７７８（１９９２）およびＲ．Ｓ．ＭｃＤｏｗｅｌｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１４，９２４５−９２５３（１９９２）を参照せよ。これらの文献は両方とも本明細書で援用する。そのようなフラグメントを担体分子、例えば多くの目的では免疫グロブリンと融合させることができ、タンパク質結合部位の結合価が増加する。例えば、タンパク質のフラグメントを「リンカー」配列を介して、免疫グロブリンのＦｃ部分に融合することができる。タンパク質の二価形については、そのような融合はＩｇＧ分子のＦｃ部分に対するものであり得る。他の免疫グロブリン・アイソタイプもまた、そのような融合を生成するために用いることが可能である。例えば、タンパク質−ＩｇＭ融合は本発明のタンパク質の十価形を生成する。
【００６９】
ＩＬ−２２タンパク質およびそのフラグメントは、開示されたタンパク質の長さの少なくとも２５％（より好ましくは少なくとも５０％、最も好ましくは少なくとも７５％）であるアミノ酸配列長を有するタンパク質を含み、開示されたタンパク質と少なくとも６０％の配列同一性（より好ましくは、少なくとも７５％の同一性、最も好ましくは少なくとも９０％もしくは９５％の同一性）を持ち、ここで配列同一性は、配列のギャップを最小限にする一方で重複および同一性を最大限にするように整列された際に、タンパク質のアミノ酸配列を比較することで、決定される。また、本発明に含まれるものは、タンパク質およびタンパク質フラグメントであり、これらは８つ以上（より好ましくは２０個以上、最も好ましくは３０以上）の隣接アミノ酸を含む。これらのアミノ酸は、開示されたタンパク質のいずれかの任意のそのようなフラグメントと少なくとも７５％の配列同一性（より好ましくは、少なくとも８５％同一性、最も好ましくは少なくとも９５％同一性）を共有する。
【００７０】
別の実施形態では、本発明のタンパク質、タンパク質フラグメント、および組換えタンパク質として、少なくとも１つの「ＩＬ−２２レセプター結合モチーフ」の存在にもとづいて同定し得るものが挙げられる。本明細書中で用いられるように、「ＩＬ−２２レセプター結合モチーフ」という用語は、必須のレセプターに対するＩＬ−２２の結合にとって重要であるアミノ酸配列または残基を含む。好ましい実施形態では、ＩＬ−２２タンパク質は、配列番号２のおおよそアミノ酸５０〜６０を含むＩＬ−２２レセプター結合モチーフから構成される。別の実施形態では、ＩＬ−２２タンパク質は、配列番号２のおおよそアミノ酸６３〜８１を含むＩＬ−２２レセプター結合モチーフを有する。さらに別の実施形態では、ＩＬ−２２タンパク質は、配列番号２のおおよそアミノ酸１６８〜１７７を含むＩＬ−２２レセプター結合モチーフを有する。好ましい実施形態では、ＩＬ−２２タンパク質は、配列番号２のアミノ酸５０〜６０、アミノ酸６３〜８１、および／またはおおよそアミノ酸１６８〜１７７の少なくとも１つを含むＩＬ−２２レセプター結合モチーフを有する。
【００７１】
さらに別の実施形態では、ＩＬ−２２レセプター結合モチーフは、配列番号２のアミノ酸５０〜６０、配列番号２のアミノ酸６３〜８１、および配列番号２のアミノ酸１６８〜１７７と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上同一であるアミノ酸を有する。別の実施形態では、本発明のタンパク質、タンパク質フラグメント、および組換えタンパク質として、Ｎ結合グリコシル化に対する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上の部位が存在することにもとづいて同定され得るものが挙げられる。長さは、ポリヌクレオチドの配列を整列させ、配列相補性が最適である領域もしくは複数の領域を同定することによって、決定され得る。
【００７２】
（ベクターおよび宿主細胞）
ＩＬ−２２ポリヌクレオチドは、タンパク質を組換えによって生ずるために、Ｋａｕｆｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９，４４８５−４４９０（１９９１）に開示されたｐＭＴ２またはｐＥＤ発現ベクター等の発現制御配列に作用可能に連結し得る。多くの適当な発現制御配列が当該技術分野で公知である。組換えタンパク質を発現させる一般的な方法もまた、公知であり、Ｒ．Ｋａｕｆｍａｎ（１９９０）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５，５３７−５６６に例証されている。本明細書で定義したように、「作用可能に連結した（ｏｐｅｒａｂｌｙ  ｌｉｎｋｅｄ」は、本発明の単離ポリヌクレオチドと発現制御配列とがベクターまたは細胞内に、結合ポリヌクレオチド／発現制御配列によって形質転換（該配列を形質移入）された宿主細胞によって発現されるようにして、位置している。
【００７３】
本明細書で使用される場合、「ベクター」という用語は、連結されている別の核酸を輸送することが可能な核酸分子に言及することを意図している。ベクターの一種として「プラスミド」があり、プラスミドとは追加のＤＮＡセグメントが結合する環状二重鎖ＤＮＡループのことをいう。ベクターの別の種類としてウイルスベクターがあり、付加的なＤＮＡセグメントをウイルス・ゲノム内に結合させることが可能である。いくつかのベクターは、それらが導入される宿主細胞内で自律複製ができる（例えば、細菌複製開始点とエピソームの哺乳類ベクターとを有する細菌ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳類ベクター）は、宿主細胞に導入される時点で宿主細胞のゲノムに組み込まれ、それによって宿主ゲノムとともに複製される。さらに、いくつかのベクターは該ベクターが作用可能に連結するゲノムの発現を指示することが可能である。そのようなベクターを、本明細書では「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）という。一般に、組換えＤＮＡ技術での有用性の発現ベクターがしばしばプラスミドの形態にある。本明細書では、プラスミドがベクターの最も汎用的に用いられていることから、「プラスミド」および「ベクター」は同義的に用いられる。しかし、本発明は、そのような他の形態の発現ベクター、例えば等価な機能を果たすウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ関連ウイルス）を含む。
【００７４】
「調節配列」という用語は、抗体鎖遺伝子の転写または翻訳を制御するプロモーター、エンハンサー、および他の発現制御要素（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことを意図している。そのような調節配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ；  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９０）に記載されている。当業者によって、調節配列の選択を含む発現ベクターの設計が形質転換すべき宿主の選択、所望のタンパク質の発現レベル等といった因子に依存すると認められる。哺乳類の宿主細胞発現のための好ましい調節配列は、哺乳動物細胞でタンパク質発現を高レベルに導くウイルス要素を含むもので、例えばＦＦ−１ａプロモーターおよびＢＧＨポリＡに由来するプロモーターおよび／またはエンハンサー、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（例えばＣＭＶプロモーター／エンハンサー）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）（例えば、ＳＶ４０プロモーター／エンハンサー）、アデノウイルス（例えば、アデノウイルス主要後期プロモータ（ＡｄＭＬＰ）が挙げられる。ウイルス調節要素およびそれらの配列のさらなる説明については、Ｓｔｉｎｓｋｉによる米国特許第５，１６８，０６２号、Ｂｅｌｌ等による米国特許第４，５１０，２４５号、ならびにＳｃｈａｆｆｎｅｒ等による米国特許第４，９６８，６１５号を参照せよ。
【００７５】
本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞でのベクターの複製を制御する配列（例えば、複製開始点）および選択可能なマーカー遺伝子等、追加の配列を運ぶものであってもよい。選択可能なマーカー遺伝子は、ベクターが導入される宿主細胞の選択を促す（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、第４，６３４，６６５号、および第５，１７９，０１７号、すべてＡｘｅｌ等による）。例えば、一般に、Ｇ４１８、ハイグロマイシン、またはメトトレキサート等の薬物に対する耐性が、選択マーカー遺伝子によって、ベクターが導入される宿主細胞に付与される。好ましい選択マーカー遺伝子として、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキサート選択／増幅によるｄｈｆｒ宿主細胞での使用のため）とネオ遺伝子（Ｇ４１８選択のため）が挙げられる。
【００７６】
多数の細胞型が、ＩＬ−２２タンパク質またはその融合タンパク質の発現に適した宿主細胞として作用可能である。機能的ＩＬ−２２タンパク質を発現することができる任意の細胞型を用いることができる。適当な哺乳類宿主細胞として、例えば、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト腎臓２９３細胞、ヒト表皮Ａ４３１細胞、ヒトＣｏｌｏ２０５細胞、３Ｔ３細胞、ＣＶ−１細胞、他の形質転換霊長類細胞株、正常二倍体細胞、一次組織のインビトロ培養に由来する細胞株、一次外移植片、ＨｅＬａ細胞、マウスＬ細胞、ＢＨＫ、ＨＬ−６０、Ｕ９３７、ＨａＫ、Ｒａｔ２、ＢａＦ３、３２Ｄ、ＦＤＣＰ−１、ＰＣ１２、Ｍｌｘ、またはＣ２Ｃ１２細胞が挙げられる。
【００７７】
ＩＬ−２２タンパク質またはその融合タンパク質もまた、本発明の単離ポリヌクレオチドを１つ以上の昆虫発現ベクターの適当な制御配列内に対して作用可能に連結し、昆虫発現系を用いることで、産生することが可能である。バキュロウイルス／昆虫細胞発現系の材料および方法は、例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（ＭａｘＢａｃ（登録商標）キット）からキットのかたちで商業的に入手可能であり、そのような方法は、Ｓｕｍｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ，Ｔｅｘａｓ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ  Ｓｔａｔｉｏｎ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  Ｎｏ．１５５５（１９８７）（本明細書で援用する）に記載されているように、当該技術分野で公知である。ＩＬ−２２タンパク質の可溶形もまた、上記したように適当な単離ポリヌクレオチドを用いて昆虫細胞でも産生可能である。
【００７８】
あるいは、上記ＩＬ−２２タンパク質またはその融合タンパク質を、酵母等の下級真核生物または細菌等の原核生物で産生することが可能である。適当な酵母株として、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ株、Ｃａｎｄｉｄａ、または異種タンパク質を発現することが可能な任意の酵母が挙げられる。適当な細菌株として、異種タンパク質を発現することが可能である大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、マウスチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、または任意の菌株でも含む。
【００７９】
バクテリアの発現は、組換え型のタンパク質を組み込んでいる封入体の形成に帰着することが可能である。このように、組換え型のタンパク質のリフォールディングは、活性もしくはより活性のある物質を生産するために必要と思われる。細菌封入体から正しく折られた異種タンパク質を得るいくつかの方法は、当該技術分野で公知である。これらの方法は、一般に封入体からタンパク質を可溶化した後、カオトロピック試薬を用いてタンパク質を完全に変性させる。システイン残基がタンパク質の一次アミノ酸配列で存在する場合、そのことはジスフィルド結合（レドックス系）を正しく形成することを可能とする環境でのリフォールディングを達成する上でしばしば必要である。リフォールディングの一般的方法は、Ｋｏｈｎｏ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．，１８５：１８７−１９５（１９９０）に開示されている。欧州特許第０４３３２２５号および同時係属米国特許出願第０８／１６３，８７７号は、他の適当な方法を記載している。
【００８０】
ＩＬ−２２タンパク質またはその融合タンパク質もまた、例えば、ＩＬ−２２タンパク質またはその融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む体細胞または生殖細胞によって特徴づけられるトランスジェニックのウシ、ヤギ、ブタ、またはヒツジの乳の成分として、トランスジェニック動物の産物として発現可能である。
【００８１】
ＩＬ−２２タンパク質またはその融合タンパク質の調製は、所望のタンパク質を発現するのに必要な培養条件下で培養形質転換宿主細胞を増殖させることで、おこなうことが可能である。次に、結果として生ずる発現タンパク質を培地または細胞抽出物から精製することが可能である。結果として生じる発現タンパク質は、それから培地または細胞抽出物から精製される可能性がある。ＩＬ−２２タンパク質またはその融合タンパク質の可溶形を、条件培地から精製することができる。本発明のＩＬ−２２タンパク質の膜結合形も、発現細胞から全膜分画から調製し、非イオン性界面活性剤（例えばＴｒｉｔｏｎＸ−１００）で膜を抽出することによって、精製することができる。
【００８２】
ＩＬ−２２タンパク質は、当業者に公知の方法を用いて精製され得る。例えば、商業的に入手可能なタンパク質濃縮フィルター（例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｐｅｌｌｉｃｏｎの限外濾過ユニット）を使用して本発明のＩＬ−２２タンパク質を濃縮することができる。濃縮ステップの後で、濃縮物をゲル濾過媒体等の精製用マトリックスに加えることができる。あるいは、陰イオン交換樹脂を用いることができる（例えば、ペンダント・ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）またはポリエチレンイミン（ＰＥＩ）基を持つマトリックスまたは基質）。上記マトリックスを、タンパク質精製で一般に使用されるアクリルアミド、アガロース、デキストラン、セルロース、または他のタイプのものとすることができる。あるいは、陽イオン交換ステップを用いることができる。適当な陽イオン交換体として、スルホプロピルまたはカルボキシメチル基を含む種々の不溶性マトリックスが挙げられる。スルホプロピル基が好まれる（例えばＳ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）カラム）。ＩＬ−２２タンパク質または培養液上清からの融合タンパクの精製は、コンカナバリンＡ−アガロース、ヘパリン−ｔｏｙｏｐｅａｒｌ（登録商標）またはシバクロンブルー３ＧＡＳｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）等の親和性樹脂に対して、一つ以上のカラム・ステップを含むものであってもよく、あるいはフェニルエーテル、ブチル・エーテル、またはプロピル・エーテル等の樹脂を使用する疎水的相互作用クロマトグラフィーによって、あるいは免疫アフィニティークロマトグラフィーによるものであってもよい。最後に、疎水性ＲＰ−ＨＰＬＣ媒体（例えば、ペンダント・メチルまたは他の脂肪族基を持つシリカゲル）を用いる１つ以上の逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）ステップを用いて、ＩＬ−２２タンパク質をさらに精製することができる。ＩＬ−２２タンパク質に対する抗体を含む親和性カラムもまた、公知の方法にもとづいて精製に用いることができる。前述の精製ステップの一部または全てを、種々の組合せでまたは他の公知の方法で、実質的に精製単離された組換えタンパク質を提供するために、使用することもできる。好ましくは、他の哺乳類のタンパク質を実質的に含まないように、単離ＩＬ−２２タンパク質を精製する。
【００８３】
本発明のＩＬ−２２タンパク質または融合タンパク質もまた、ＩＬ−２２に結合することができる薬剤（例えば、抗ＩＬ−２２抗体等のＩＬ−２２アンタゴニスト）をスクリーニングするために用いることが可能である。固定化もしくは非固定化の所望の結合タンパク質を用いた結合アッセイは当該技術分野で周知であり、本発明のＩＬ−２２タンパク質を用いるこの目的のために使用することが可能である。精製された細胞ベースもしくはタンパク質ベース（無細胞）のスクリーニングアッセイを用いて、そのような薬剤を同定することが可能である。例えば、ＩＬ−２２タンパク質を精製された形状で担体に固定してもよく、また精製されたＩＬ−２２タンパク質に対する潜在的リガンドの結合を測定することが可能である。
【００８４】
ＩＬ−２２ポリペプチドを公知の従来の化学合成によって生成してもよい。合成手段によって本発明のタンパク質を作る方法は、当業者に知られている。合成して作られたタンパク質の配列は、タンパク質による一次、二次、または三次構造および／または立体配置的な特徴に基づいて、タンパク質活性等、タンパク質と共通の生物学的特性を有するものであってもよい。したがって、それらを、治療用化合物のスクリーニングで、また抗体の発現のための免疫学的プロセスで、天然および精製されたタンパク質に対する生物学的に活性がある置換物もしくは免疫学的置換物として用いることができる。
【００８５】
（抗ＩＬ−２２抗体およびその抗原結合フラグメント）
他の実施形態では、ＩＬ−２２アンタゴニストが抗体、またはその抗原結合フラグメントであり、ＩＬ−２２、好ましくは哺乳類（例えばヒトまたはマウス）のＩＬ−２２に結合する。一実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ‘）２または単鎖Ｆｖフラグメント）がモノクローナルまたは単一特異性抗体である。上記抗体またはそのフラグメントを、ヒト、ヒト化、キメラ、またはヒトＩＬ−２２に対するインビトロ生成抗体とすることができる。
【００８６】
ＩＬ−２２ポリペプチドを用いて動物を免疫して、ＩＬ−２２ポリペプチドと特異的に反応するポリクローナルおよびモノクローナル抗体を得ることも可能である。そのような抗体は、ＩＬ−２２全体を免疫源として用いることで、あるいはＩＬ−２２のフラグメントを用いることで得られる。ＩＬ−２２のより小さなフラグメントを用いて動物を免疫することも可能である。ペプチド免疫源は、さらに、カルボキシ末端にシステイン残基を含むものであってもよく、またキーホール・リンペット・ヘモシアニン（ＫＬＨ）等のハプテンと結合する。硫酸化チロシン残基によるチロシン残基の置換によって、付加的なペプチド免疫源を生成することも可能である。そのようなペプチドを合成するための方法は、例えばＲ．Ｐ．Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−２１５４（１９６３）；  Ｊ．Ｌ．Ｋｒｓｔｅｎａｎｓｋｙ，ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＥＳ  Ｌｅｔｔ．２１１，１０（１９８７）にあるように、当該技術分野で公知である。ＩＬ−２２タンパク質に結合していう中和または非中和抗体（好ましくはモノクローナル抗体）もまた、本明細書中に記載したＩＬ−２２関連疾患の処置に有用であると考えられる。これらの中和モノクローナル抗体は、ＩＬ−２２レセプター、例えばＩＬ−２２ＲもしくはＩＬ−１０Ｒ２またはそれらの組み合わせに対してのＩＬ−２２結合を阻害することが可能である。
【００８７】
下記の実施例５は、抗ＩＬ−２２抗体の産生をより詳細に説明する。ＩＬ−２２Ｒに対するＩＬ−２２の結合に妨害する抗ＩＬ−２２抗体の非限定的例は、「Ａｂ−０４」である。Ａｂ−０４（本明細書ではラット・モノクローナル抗体「Ｐ３／２」ともいう）はヒトＩＬ−２２に結合し、ヒトＩＬ−２２活性を中和する（実施例５、１６、および１７を参照せよ）。Ａｂ−０４を産生するハイブリドーマ細胞株は、２００３年６月５日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５２５５が割り当てられた。ＩＬ−１０Ｒ２に対するＩＬ−２２の結合に妨害する抗ＩＬ−２２抗体の別の非限定的例は、「Ａｂ−０２」である。Ａｂ−０２（本明細書ではラット・モノクローナル抗体「Ｐ３／３」ともいう）はマウスおよびヒトＩＬ−２２に結合し、マウスおよびヒトＩＬ−２２の活性を中和する（実施例５、１６、および１７を参照せよ）。Ａｂ−０２を産生するハイブリドーマ細胞株は、２００３年６月５日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５２５４が割り当てられた。
【００８８】
ＩＬ−２２に対するヒト・モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を、マウス系よりはむしろヒト免疫グロブリン遺伝子を持つトランスジェニック・マウスを用いて、生成することができる。目的とする抗体で免疫化したこれらのトランスジェニック・マウス由来の脾細胞を用いて、ヒト・タンパク質由来のエピトープに対して高い親和性を持つヒトｍＡｂを分泌するハイブリドーマを産生する（例えば、Ｗｏｏｄ等の国際特許出願ＷＯ９１／００９０６；Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ等のＰＣＴ公報ＷＯ  ９１／１０７４１；Ｌｏｎｂｅｒｇ等の国際特許出願ＷＯ  ９２／０３９１８；Ｋｅｙ等の国際特許出願９２／０３９１７；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．１９９４  Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６−８５９；  Ｇｒｅｅｎ，Ｌ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．１９９４  Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．７：１３−２１；  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．１９９４  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１−６８５５；  Ｂｒｕｇｇｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９３  Ｙｅａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ７：３３−４０；  Ｔｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９３  ＰＮＡＳ  ９０：３７２０−３７２４；  Ｂｒｕｇｇｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９１  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２１：１３２３−１３２６を参照せよ）。  
【００８９】
モノクローナル抗体は、組換えＤＮＡ技術の当業者に知られている他の方法によって生成することもできる。代替法（「組み合わせ抗体提示」方法と称す）は、特定の抗原特異性を持つ抗体フラグメントを同定して単離するために開発され、モノクローナル抗体を産生するために利用し得る（組み合わせ抗体提示の説明については、例えばＳａｓｔｒｙ  ｅｔ  ａｌ．１９８９  ＰＮＡＳ  ８６：５７２８；  Ｈｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．１９８９  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５；  およびＯｒｌａｎｄｉ  ｅｔ  ａｌ．１９８９  ＰＮＡＳ  ８６：３８３３を参照せよ）。上述したように、免疫原で動物を免疫化した後に、結果として生じるＢ細胞プールの抗体レパートリーをクローン化した。方法は、通常、オリゴマー・プライマーとＰＣＲの混合物を用いて免疫グロブリン分子の多様な集団の可変領域のＤＮＡの塩基配列を得ることに関して、公知である。例えば、５’リーダー（シグナル・ペプチド）配列および／またはフレームワーク１（ＦＲ１）配列に対応する混合オリゴヌクレオチド・プライマーを、保存３’定常領域プライマーに対するプライマーと同様に、多数のマウス抗体からの重鎖および軽鎖可変領域のＰＣＲ増幅に使用することができる（Ｌａｒｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｂｉｏｔｅｃｌｉｎｉｑｕｅｓ  １１：１５２−１５６）。類似の戦略もまた、ヒト抗体からヒト重鎖および軽鎖可変領域の増幅に使用することができる（Ｌａｒｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２：１０６−１１０）。
【００９０】
キメラ抗体（キメラ免疫グロブリン鎖を含む）を、当該技術分野で公知であられる組換えＤＮＡ技術によって産生することができる。例えば、マウス（または他の種）のモノクローナル抗体分子のＦｃ定常領域をコードしている遺伝子を制限酵素で消化してマウスのＦｃをコードしている領域を除去し、ヒトＦｃ定常領域をコードしている遺伝子の等価部分を置換する（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９；  Ａｋｉｒａ，ｅｔ  ａｌ．，欧州特許出願第１８４，１８７号；  Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ．，欧州特許出願第１７１，４９６号；  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，欧州特許出願第１７３，４９４号；  Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，国際特許出願ＷＯ  ８６／０１５３３；  Ｃａｂｉｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．米国特許出願第４，８１６，５６７号；  Ｃａｂｉｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，欧州特許出願第１２５，０２３号；  Ｂｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０４１−１０４３）；  Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）ＰＮＡＳ  ８４：３４３９−３４４３；  Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３９：３５２１−３５２６；  Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）ＰＮＡＳ  ８４：２１４−２１８；  Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．４７：９９９−１００５；  Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４４６−４４９；  およびＳｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｊ．Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８０：１５５３−１５５９を参照せよ）。  
【００９１】
抗体または免疫グロブリン鎖は、当該技術分野で公知である方法によってヒト化され得る。抗原結合に直接関与していないＦｖ可変領域の配列をヒトＦｖ可変領域由来の等価配列と置換することで、ヒト化の免疫グロブリン鎖を含むヒト化抗体を生成することができる。ヒト化抗体を生成する一般的方法は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２−１２０７，ｂｙ  Ｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４によって、またＱｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．ＵＳ  ５，５８５，０８９，ＵＳ  ５，６９３，７６１  ａｎｄ  ＵＳ  ５，６９３，７６２によって提供され、これらの文献すべての内容を本明細書で援用する。これらの方法は、重鎖または軽鎖の少なくとも１つから免疫グロブリンＦｃ可変領域のすべてまたは一部をコードする核酸配列を単離、操作、および発現することを含む。そのような核酸の供給源は、当業者に周知であり、例えば、所定の標的に対する抗体を産生するハイブリドーマから得ることが可能である。次に、上記ヒト化抗体またはそのフラグメントをコードする組換えＤＮＡを適当な発現ベクターにクローン化することができる。
【００９２】
ヒト化またはＣＤＲ移植抗体分子、あるいは免疫グロブリンをＣＤＲ移植またはＣＤＲ置換によって産生することができ、ここで免疫グロブリン鎖の１つ、２つ、またはすべてのＣＤＲで置き換えることができる。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号；Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．１９８６  Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５５２−５２５；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．１９８８  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４；Ｂｅｉｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．１９８８  Ｊ．Ｉｍｕｍｕｎｏｌ．１４１：４０５３−４０６０；Ｗｉｎｔｅｒ  ＵＳ  ５，２２５，５３９（これらの文献すべての内容を明白に本明細書に援用する）。Ｗｉｎｔｅｒは、本発明のヒト化抗体を調製するために用いることが可能であるＣＤＲ移植方法を記載している（英国特許出願ＧＢ  ２１８８６３８Ａ、１９８７年３月２６日出願；Ｗｉｎｔｅｒ  ＵＳ  ５，２２５，５３９）これらの文献すべての内容を明白に本明細書に援用する。特定のヒト抗体のＣＤＲのすべてを非ヒトＣＤＲの少なくとも一部もしくはＣＤＲのいくつかのみを非ヒトＣＤＲに置き換えることも可能である。所定の抗原に対するヒト化抗体の結合に必要なＣＤＲの数を置き換えることのみが必要である。
【００９３】
欠失、付加、または抗体の他の部分（例えば定常領域）の置換等によって修飾されたモノクローナル、キメラ、およびヒト化抗体もまた、本発明の範囲内である。例えば、抗体を以下のように修飾する。すなわち、（ｉ）定常領域を欠失させることで、（ｉｉ）定常領域を別の定常領域（例えば別の種もしくは抗体クラスの定常領域、あるいは抗体の半減期、安定性、もしくは定常領域）で置き換えることで、あるいは（ｉｉｉ）とりわけ、グリコシル化部位の数、エフェクター細胞機能、Ｆｃレセプター（ＦｃＲ）結合、補体結合等を変えるために定常領域内の１つ以上のアミノ酸を修飾することによる。
【００９４】
抗体定常領域を変える方法は、当該技術分野で公知である。抗体の定常領域を変える方法は、当該技術分野で公知である。変更された機能、例えばエフェクター・リガンド（例えば細胞上のＦｃＲ）もしくは補体のＣｌ成分は、抗体の定常領域にある少なくとも１つのアミノ酸残基を異なる残基で置換することで産生することができる（例えば、ＥＰ  ３８８，１５１  Ａｌ，ＵＳ  ５，６２４，８２１、およびＵＳ  ５，６４８，２６０を参照せよ。なお、これらの文献すべての内容を本明細書で援用する）。マウスまたは他の種の免疫グロブリンに適用した場合にそれらの機能を軽減もしくは除去する同様の種類の変更が記述され得る。
【００９５】
例えば、ＦｃＲ（例えばＦｃガンマＲ１）に対して、または側鎖上に適当な機能性を持つ残基によって特定の残基を置換することで、またはフェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、もしくはアラニン等の荷電官能基を導入することで、Ｃ１ｑ結合に対して、抗体（例えばヒトＩｇＧ等のＩｇＧ）のＦｃ領域の親和性を変えることが可能である（例えば、ＵＳ５，６２４，８２１を参照せよ）。
【００９６】
（薬学的組成物）
ＩＬ−２２結合剤、例えばＩＬ−２２アンタゴニスト（例えば抗ＩＬ−２２抗体およびその抗原結合フラグメント）を、医薬的に許容される担体と組み合わせた場合に薬学的組成物として用いることができる。そのような組成物は、ＩＬ−２２アゴニスとまたはアンタゴニストおよび担体に加えて、種々の希釈剤、充填剤、塩類、緩衝液、安定化剤、可溶化剤、さらに当該技術分野で周知の他の材料を含むものであってもよい。「医薬的に許容される」という表現は、活性成分の生物活性の有効性に妨害しない非毒性材料を意味する。担体の特性は、投与経路に依存する。
【００９７】
本発明の薬学的組成物は、リポソームの形状であってもよく、この中でＩＬ−２２−アンタゴニストは医薬的に許容される他の担体に加えて両親媒性の薬剤に結合することが可能である。この両親媒性薬剤として、ミセルとして凝集した状態で存在する脂質、不溶性の単層、液晶、または水溶液中にあるラメラ層が挙げられる。リポゾーム製剤のための適当な脂質として、限定さえるものではないが、モノグリセリド、ジグリセリド、スルファチド、リゾレシチン、ホスホリピド、サポニン、胆汁酸等が挙げられる。そのようなリポソーム製剤の調製は、例えば、米国特許第，２３５，８７１号、米国特許第４，８３７，０２８号、および米国特許第４，７３７，３２３号（これらの文献すべてを本明細書で援用する）に開示されているように、当該技術分野のレベル内にある。
【００９８】
本発明の処置法または使用法を実施する際に、治療上有効な量のＩＬ−２２アンタゴニストを被検体、例えば哺乳類（例えばヒト）に投与する。ＩＬ−２２アンタゴニストの投与は、単独で、または他の治療法、例えば以下により詳しく説明する抗炎症剤と組み合わせて、本発明の方法にもとづいておこなわれる。１種類以上の薬剤と併用して投与する場合、ＩＬ−２２アンタゴニストを第２の薬剤と同時に、または連続して投与することが可能である。連続投与の場合、主治医は他の薬剤と併用したＩＬ−２２アンタゴニストの投与を適当な順序に決める。
【００９９】
薬学的組成物で使用され、あるいは本発明の方法を実施するために用いられるＩＬ−２２アンタゴニストの投与を種々の従来法、例えば経口摂取、吸入、または皮膚、皮下、あるいは静脈注射でおこなうことができる。患者に対する静脈内注射が好ましい。    
【０１００】
治療上有効な量のＩＬ−２２アンタゴニストを経口投与する場合、結合剤は錠剤、カプセル、粉剤、溶液、またはエリキシルの形状である。錠剤の形状で投与される場合、本発明の薬学的組成物はゼラチン等の固形担体をさらに含むものであってもよい。錠剤、カプセル、および粉剤は、約５〜９５％の結合剤、好ましくは約２５〜９０％の結合剤を含む。液体の形態で投与する場合、液体担体、例えば水、石油、落花生油、鉱油、大豆油、または胡椒油、あるいは合成油を添加してもよい。薬学的組成物の液体形態は、さらに生理的食塩水、ブドウ糖、または他糖類溶液、あるいはグリコール（例えばエチレングリコール、プロピレングリコール、またはポリエチレングリコール）をさらに含むものであってもよい。液体形態で投与した場合、薬学的組成物は約０．５〜９０重量％の結合剤、好ましくは約１〜５０重量％の結合剤を含むものであってもよい。
【０１０１】
治療上有効な量のＩＬ−２２アンタゴニストを静脈内、皮膚または皮下注射によって投与する場合、結合剤は発熱性物質無しの非経口的に許容される水溶液の形態である。ｐＨ、等張性、安定性等に関して与えられるべきものを持つそのような非経口的に許容されるタンパク質溶液は、当該技術分野の範囲内である。静脈、皮膚、または皮下注射にとって好ましい薬学的組成物は、結合剤に加えて、等張性のビヒクルを含まなければならず、このビヒクルとして、塩化ナトリウム注射、リンゲル注射、ブドウ糖注射、ブドウ糖および塩化ナトリウム注射、乳酸化リンゲル溶液、または当該技術分野で公知の他のビヒクルが挙げられる。
【０１０２】
本発明の薬学的組成物に含まれるＩＬ−２２結合剤の量は、処置している症状の性質と重傷度に依存し、また患者が事前に受けた処置の性質に依存する。最終的に、主治医は個々の患者を処置するための結合剤の量を決定する。最初に、主治医は結合剤を低量で投与し、患者の反応を観察する。患者にとって最適な治療効果が得られるまで、より多くの量の結合剤が投与され、その時点で投与量は一般にそれ以上増加されない。本発明の方法を実施するために使用される種々の薬学的組成物は、体重１ｋｇあたり約０．１μｇ〜約１００ｍｇのＩＬ−２２結合剤を含まなければならないことが考えられる。
【０１０３】
本発明の薬学的組成物を使用している静脈内治療の継続は、処置されている疾患の重症度と個々の患者の状態および潜在的特有の反応とに依存する。ＩＬ−２２結合剤の各々の適用期間が連続静脈内投与の１２〜２４時間の範囲内にある。ＩＬ−２２結合剤の各々の適用期間が１２〜２４時間の連続静脈内投与の範囲にあると考えられる。最後に、主治医は本発明の薬学的組成物を使用している静脈内治療の適当な期間を決定する。
【０１０４】
（ＩＬ−２２アゴニストおよびＩＬ−２２アンタゴニストの使用）
ＩＬ−２２は、炎症誘発作用（例えば急性期反応を誘導する）を伴うサイトカインである。以下の実施例で詳細に説明されるように、ＩＬ−２２は炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−１およびＴＮＦα）によって引き起こされるものに関連した変化を誘導し、さらにＩＬ−２２のインヒビターがＩＬ−２２関節リウマチの症状を軽減する。したがって、ＩＬ−２２のレベル上昇またはＩＬ２２の作用を模倣するＩＬ−２２および／または薬剤または本発明の他の分子にとって有用であり、さらにこの分子のアンタゴニストが臨床的状況下で有用であり、特に炎症状態の調節がもとめられている。アゴニストまたはアンタゴニストが、疾患が好ましいかどうかは、疾患病理学（例えば、刺激の性質および細胞の微小環境に関与する細胞種類等の疾患寄生病理学の特定の局面）に依存する。
【０１０５】
ヒトＩＬ−２２アゴニストとして、限定されることなく、ヒトＩＬ−２２タンパク質およびフラグメント、欠失突然変異、およびそれらの追加突然変異と、ヒトＩＬ−２２が検出されるレセプターまたは他の標的と相互作用するペプチドおよび低分子化合物であり；レセプターの可溶形状またはヒトＩＬ−２２が検出されるレセプターもしくは他の標的に対する抗体；ならびにレセプターおよび他の標的によってヒトＩＬ−２２の相互作用を阻害または妨害する低分子化合物が挙げられる。
【０１０６】
一局面では、本発明は、活性を阻害するのに十分な量で、細胞（例えば上皮細胞）をＩＬ−２２アンタゴニスト（例えば、抗ＩＬ−２２抗体またはその抗原結合フラグメント）と接触さえることで、少なくとも１つのＩＬ−２２関連活性を抑制する方法を特徴づける。ＩＬ−２２のアンタゴニスト（例えば、本明細書中に記載されるように、中和抗体）もまた、免疫ＩＬ−２２関連活性の抑制が求められる被検体に投与される。これらの状態として、自己免疫疾患（例えば関節疾患）、呼吸器疾患、または炎症状態が挙げられる。出願人は、ＩＬ−２２活性が中和抗ＩＬ−２２抗体を用いたＩＬ−２２活性の減少がマウスのコラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）動物モデルでの炎症症状を改善することを示した（実施例９）。ＩＬ−２２ｍＲＮＡの発現は、ＣＩＡマウスの前足で上方制御される（実施例１０）。したがって、例えばＩ−２２関連疾患の処置もしくは予防のために、被検体内で、ＩＬ−２２アンタゴニストを用いてインビボ免疫抑制の誘導に用いられる。本明細書で使われるように、「被検体」という用語はヒトおよび非ヒト動物を包含することを意図している。好ましいヒト動物として、異常なＩＬ−２２活性によって特徴づけられる疾患を有するヒト患者が挙げられる。本発明の「非ヒト動物」という用語として、全ての脊椎動物、例えば哺乳類および非哺乳類、例えばヒト以外の霊長類、齧歯動物、ヒツジ、イヌ、ウシ、鶏、両生類、爬虫類、その他が挙げられる。
【０１０７】
処置または予防し得るＩＬ−２２関連疾患の非限定例として、限定されるものではないが、移植拒絶反応、自己免疫疾患（例えば、糖尿病、関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎を含む）、多発性硬化症、脳脊髄炎、重症筋無力症、全身性紅斑性狼瘡、自己免疫性甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎と湿疹性皮膚炎を含む）、シェーグレン症候群、クローン病、アフタ性潰瘍、虹彩炎、結膜炎、角結膜炎、潰瘍性大腸炎、脊椎関節症、強直性脊椎炎、内因性喘息、アレルギー喘息、皮膚エリテマトーデス、強皮症、膣炎、直腸炎、薬疹、ライ病反転反応、ライ性結節性紅斑、自己免疫性ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、急性壊死性の出血性脳症、特発性かつ左右相称の進行性感覚神経聴力損失、再生不良性貧血、真正赤血球性貧血、特発性血小板減少症、多発性軟骨炎、ヴェーゲナー肉芽腫症、慢性活動性肝炎、スティーベンズ−ジョンソン症候群（特発性のばか騒ぎ）扁平苔癬、グレーブス病、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、後部ブドウ膜炎、および間質性肺線維症）呼吸器疾患（例えば喘息またはＣＯＰＤ）；皮膚（例えば乾癬）の炎症性の状態、肝臓（例えば肝炎）、腎臓（例えば腎炎）、および膵臓（例えば膵炎）；移植片対宿主病、およびアレルギー（例えばアトピー性アレルギー）；ならびに癌（例えば固形または軟部組織腫瘍）が挙げられる。本発明の結合剤を使用し得る好ましい疾患として、関節炎（例えば関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎と強直性脊椎炎（望ましくは、関節リウマチ））、多発性硬化症、Ｉ型糖尿病、ループス（ＳＬＥ）、ＩＢＤ、クローン病、ＣＯＰＤ、喘息、血管炎、アレルギー、強皮症、ならびに皮膚（例えば乾癬）、肝臓（例えば肝炎）、腎臓（例えば腎炎）、および膵臓（例えば膵炎）の炎症状態が挙げられる。
【０１０８】
別の実施形態では、ＩＬ−２２アンタゴニストは、単独で、または本明細書に記載したような他の治療薬（例えば、ＴＮＦアンタゴニスト）と組み合わせて、多発性骨髄腫および関連Ｂリンパ球悪性腫瘍を処置するために使用し得る（Ｂｒｅｎｎｅ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｂｌｏｏｄ  Ｖｏｌ．９９（１０）：３７５６−３７６２）。
【０１０９】
一実施形態では、ＩＬ−２２アンタゴニスト（例えば、その薬学的組成物を併用療法で投与する。すなわち、他の薬剤、例えば免疫および炎症性疾患等の病的状態または疾患を処置するのに有用である治療薬と併用する「組み合わせで」という用語は、薬剤が実質的に併用されて、同時にまたは連続的に投与がおこなわれることをいう。連続的に与えられる場合、第２の化合物の投与開始時に、処置工程での有効濃度で、２つの化合物の第１のものが好ましくは依然として検出可能である。
【０１１０】
例えば、併用療法は、１種類以上のさらなる治療薬（例えば、以下により詳細に説明するように、１つ以上のサイトカインおよび成長因子インヒビター、免疫抑制剤、抗炎症薬、代謝インヒビター、酵素インヒビターおよび／または細胞障害剤または細胞増殖抑制剤）と同時配合および／または同時投与された、１種類以上のＩＬ−２２アンタゴニスト、例えば本明細書に記載したようなＩＬ−２２に対する抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、キメラ、ヒト化、ヒト、またはインビトロ生成抗体もしくはその抗原結合フラグメント）を含むことができる。さらにまた、本明細書に記載される１つ以上のＩＬ−２２アンタゴニストを本明細書に記載される治療薬の２つ以上と組み合わせて使用してもよい。
【０１１１】
そのような併用療法は、より低い投与量で投与された治療薬を遊離に利用することが可能であることから、種々の単独両方に関連する潜在的な毒性または合併症が回避される。さらに、本明細書に開示された治療薬は、ＩＬ−２２レセプター経路とは異なる経路で作用することから、ＩＬ−２２アンタゴニストの効果を強化および／または共同すると思われる。理論に束縛されることなく、例えば、全身性炎症とは対照的に組織炎症の増幅剤または制御剤として作用することで、ＩＬ−２２がその炎症効果を奏することが可能であると出願人は考える。出願人の考えは、少なくとも部分的に、ＩＬ−２２Ｒの発現が免疫細胞の循環よりも組織部位に局在化するように見える知見にもとづく。
【０１１２】
したがって、本明細書に記載した抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメント等を用いたＩＬ−２２活性の抑制は、本明細書に記載したような全身性抗炎症モダリティよりも効果的組織特異的抗炎症活性を提供することが可能である。さらに、本明細書に記載した抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメント等を用いた局所的ＩＬ−２２活性の抑制は、本明細書に記載した抗炎症モダリティとの組み合わせにとって有用な候補を提供する。
【０１１３】
一実施形態では、本明細書に記載した１つ以上のＩＬ−２２アンタゴニストを、他のサイトカインまたは成長因子アンタゴニスト（例えば、可溶性レセプター、ペプチド、インヒビター、低分子、リガンド融合）、または他の標的に結合する戸抗体もしくは抗原結合フラグメント（例えば、他のサイトカインもしくは成長因子に結合する抗体、それらのレセプター、もしくは他の細胞表面分子）；ならびに抗炎症性サイトカインもしくはそれらのアゴニストであってもよい。本明細書に記載したＩＬ−２２アンタゴニストと組み合わせて使用し得る薬剤の非限定的例として、限定されるものではないが、１種類以上のアンタゴニスト、例えばＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、およびＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒのアンタゴニスト；サイトカインまたは成長因子もしくはそのレセプター、例えば腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ＬＴ、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、およびＰＤＧＦが挙げられる。ＩＬ−２２アンタゴニストもまた、細胞表面分子、例えばＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８，ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２），ＣＤ９０、またはそれらのリガンド（ＣＤ１５４（ｇｐ３９またはＣＤ４０Ｌ）、またはＬＦＡ−１／ＩＣＡＭ−１、およびＶＬＡ−４／ＶＣＡＭ−１を含む）（Ｙｕｓｕｆ−Ｍａｋａｇｉａｎｓａｒ  Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｍｅｄ  Ｒｅｓ  Ｒｅｖ  ２２（２）：１４６−４７）に対する抗体等のインヒビターと組み合わせて用いることもできる。本明細書に記載したＩＬ−２２アンタゴニストと組み合わせて使用し得る好ましいアンタゴニストとして、ＩＬ−１、ＩＬ−１２、ＴＮＦα、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、およびＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒのアンタゴニストが含まれる。
【０１１４】
それらの薬剤の例として、ＩＬ−１２アンタゴニスト、例えばＩＬ−１２（好ましくはヒトＩＬ−１２）に結合するキメラ、ヒト化、ヒト、またはインビトロ生成抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）、例えばＷＯ００／５６７７２  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ／ＢＡＳＦ）に開示された抗体；ＩＬ−１２レセプターインヒビター、例えばヒトＩＬ−１２レセプターに対する抗体；およびＩＬ−１２レセプター、例えばヒトＩＬ−１２レセプターの可溶性フラグメント挙げられる。ＩＬ−１５アンタゴニストの例として、ＩＬ−１５もしくはそのレセプターに対する抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）、例えばヒトＩＬ−１５もしくはそのレセプター、ＩＬ−１５レセプターの可溶性フラグメント、およびＩＬ−１５結合タンパク質に対するキメラ、ヒト化、ヒト、またはインビトロ生成抗体が挙げられる。ＩＬ−１８アンタゴニストの例として、例えば、ヒトＩＬ−１８、ＩＬ−１８レセプターの可溶性フラグメント、およびＩＬ−１８結合タンパク質に対するキメラ、ヒト化、ヒト、またはインビトロ生成抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）（ＩＬ−１８１３Ｐ，Ｍａｌｌｅｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｃｉｔｅ．Ｒｅｓ．２８）。ＩＬ−１アンタゴニストの例として、インターロイキン−１−変換酵素（ＩＣＥ）インヒビター、例えばＶｘ７４０、ＩＬ−１アンタゴニスト、例えばＩＬ−１ＲＡ（ＡＮＩＫＩＮＲＡ，ＡＭＧＥＮ）、ｓＩＬ１ＲＩＩ（Ｉｍｍｕｎｅｘ）、および抗ＩＬ−１レセプター抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）が挙げられる。
【０１１５】
ＴＮＦアンタゴニストの例として、ＴＮＦ（例えば、ヒトＴＮＦａ）に対する抗体、例えばキメラ、ヒト化、ヒト、またはインビトロ生成抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）、例えばＤ２Ｅ７，（ヒトＴＮＦα抗体、Ｕ．Ｓ．６２５８，５６２；ＢＡＳＦ）、ＣＤＰ−５７１／ＣＤＰ−８７０／ＢＡＹ−１０−３３５６（ヒト化抗ＴＮＦα抗体：Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ｃＡ２（キメラ抗ＴＮＦα抗体；Ｒｅｍｉｃａｄｅ（商標）、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）；抗ＴＮＦ抗体フラグメント（例えば、ＣＰＤ８７０）：ＴＮＦレセプターの可溶性フラグメント、例えばＰ５５もしくはＰ７５ヒトＴＮＦレセプターまたはその誘導体、例えば７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤＴＮＦレセプター−ＩｇＧ融合タンパク質、Ｅｎｂｒｅｌ（商標）；Ｉｍｍｕｎｅｘ；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９４）Ｖｏｌ．３７，Ｓ２９５；  Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｍｅｄ．（１９９６）Ｖｏｌ．４４，２３５Ａ）、ｐ５５  ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（５５  ｋＤ  ＴＮＦレセプター  −ＩｇＧ融合タンパク質（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ））；酵素アンタゴニスト、例えばＴＮＦａ  変換酵素（ＴＡＣＥ）インヒビター（例えば、アルファ−スルホニルヒドロキサム酸誘導体、ＷＯ  ０１／５５１１２、およびＮ−ヒドロキシホルムアミドＴＡＣＥインヒビターＧＷ  ３３３３、−００５、もしくは−０２２）；  ならびにＴＮＦ−ｂｐ／ｓ−ＴＮＦＲ（可溶性ＴＮＦ結合タンパク質；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８４；  Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．−  Ｈｅａｒｔ  ａｎｄ  Ｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ（１９９５）Ｖｏｌ．２６８，ｐｐ．３７−４２を参照せよ）。好ましいＴＮＦアンタゴニストは、ＴＮＦレセプター、例えばｐ５５もしくはｐ７５ヒトＴＮＦレセプターまたはその誘導体、例えば７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ、およびＴＮＦａ変換酵素（ＴＡＣＥ）インヒビターである。
【０１１６】
他の実施形態では、本明細書に記載したＩＬ−２２アンタゴニストを以下のものの１つ以上と組み合わせて投与することができる。すなわち、ＩＬ−１３アンタゴニスト、例えば、可溶性ＩＬ−１３レセプター（ｓＩＬ−１３）および／またはＩＬ−１３に対する抗体；ＩＬ−２アンタゴニスト、例えばＤＡＢ４８６−１Ｌ−２および／またはＤＡＢ３８９−ＩＬ−２（ＩＬ−２融合タンパク質；Ｓｅｒａｇａｎ；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９３）Ｖｏｌ．３６，１２２３を参照せよ）、および／またはＩＬ−２Ｒに対する抗体、例えば、抗Ｔａｃ（ヒト化抗ＩＬ−２Ｒ；Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９０  Ｍａｒ  １；５０（５）：１４９５−５０２）である。さらに別の組み合わせとして、非ディプリーティング（ｎｏｎ−ｄｅｐｌｅｔｉｎｇ）抗ＣＤ４インヒビター（ＩＤＥＣ−ＣＥ９．１／ＳＢ２１０３９６（非ディプリーティング・プリマタイズド抗ＣＤ４抗体；ＩＤＥＣ／ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）と組み合わせたＩＬ−２１アンタゴニストが挙げられる。さらに別の好ましい組み合わせとして、抗体、可溶性レセプター、もしくはアンタゴニスト・リガンドを含む同時刺激経路ＣＤ８０（Ｂ７．１）もしくはＣＤ８６（Ｂ７．２）のアンタゴニスト；さらにはｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ）、抗炎症性サイトカイン、例えばＩＬ−４（ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−１０（ＳＣＨ５２０００；組換えＩＬ−１０ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−１３およびＴＧＦβ、ならびにそれらのアゴニスト（例えば、アゴニスト抗体）が挙げられる。
【０１１７】
他の実施形態では、１つ以上のＩＬ−２２アンタゴニストを、１つ以上の炎症剤、免疫抑制剤、または代謝もしくは酵素インヒビターとともに同時配合および／または同時投与することができる。本明細書に記載したＩＬ−２２アンタゴニストと組み合わせて使用し得る薬物またはインヒビターの非限定的例として、限定されるものではないが、１つ以上の、非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、例えばイブプロフェン、Ｔｅｎｉｄａｐ（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９、Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）、ｓ２８０）を参照せよ）、Ｎａｐｒｏｘｅｎ（例えば、Ｎｅｕｒｏ  Ｒｅｐｏｒｔ（１９９６）Ｖｏｌ．７、ｐｐ．１２０９−１２１３を参照せよ）、Ｍｅｌｏｘｉｃａｍ、Ｐｉｒｏｘｉｃａｍ、Ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ、およびＩｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ；  Ｓｕｌｆａｓａｌａｚｉｎｅ（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），５２８１を参照せよ）；プレドニゾロン等の副腎皮質ステロイド；  サイトカイン抑制性抗炎症剤（ｓ）（ＣＳＡＩＤ）；ヌクレオチド生合成のインヒビター、例えば、プリン生合成（葉酸アンタゴニスト）インヒビター（例えば、メトトレキサート（Ｎ−［４−［（２，４−ジアミノ６−プテリジニル）メチル］メチルアミノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸）；およびピリミジン生合成インヒビター、例えば、ジヒドロオロット酸デヒドロゲナーゼ（ＤＨＯＤＨ）インヒビター（例えば、レフルノミド（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），５１３１；Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９６）Ｖｏｌ．４５，ｐｐ．１０３−１０７を参照せよ）が挙げられる。
【０１１８】
さらなるインヒビターの例として、１つ以上の、副腎皮質ステロイド（経口、吸入、および局所注射）、免疫抑制剤（例えばシクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ−５０６））；およびｍＴＯＲインヒビター、例えばシロリムス（ラパマイシン）またはラパマイシン誘導体、例えば可溶性ラパマイシン誘導体（例えば、エステル・ラパマイシン誘導体、例えばＣＣＩ−７７９（Ｅｌｉｔ．Ｌ．（２００２）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ  ３（８）：１２４９−５３；  Ｈｕａｎｇ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ  ３（２）：２９５−３０４）；  炎症誘発性サイトカイン（例えばＴＮＦαまたはＩＬ−１（例えばＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼインヒビター））による情報伝達に妨害する薬剤；ＣＯＸ２インヒビター、例えばセレコキシブおよびその変異体、ＭＫ−９６６、例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ８１を参照せよ）；ホスホジエステラーゼインヒビター、例えばＲ９７３４０１（ホスホジエステラーゼＩＶ型インヒビター；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），５２８２を参照せよ）；ホスホリパーゼインヒビター、例えばサイトゾル・ホスホリパーゼ２（ｃＰＬＡ２）（例えばトリフルオロメチル・ケトンアナログ（Ｕ．Ｓ．６，３５０，８９２））；脈管内皮細胞成長因子または成長因子受容体（例えばＶＥＧＦインヒビターおよび／またはＶＥＧＦ−Ｒインヒビター）のインヒビター；ならびに血管形成インヒビターが挙げられる。ＩＬ−２２アンタゴニストと組み合わせて使用するのに好ましい治療薬は、免疫抑制剤、例えばシクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ−５０６）；およびｍＴＯＲインヒビター、例えばシロリムス（ラパマイシン）またはラパマイシン誘導体）、例えば可溶性ラパマイシン誘導体（例えば、エステル・ラパマイシン誘導体（例えばＣＣＩ−７７９）；ＣＯＸ２インヒビター（例えばそれのセレコキシブおよびその変異体；さらにホスホリパーゼインヒビター（例えばサイトゾル・ホスホリパーゼ２（ｃＰＬＡ２）（例えばトリフルオロメチル・ケトンアナログ）のインヒビターである。
【０１１９】
ＩＬ−２２アンタゴニストと組み合わせることができる治療薬のさらなる例として、１つ以上の、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）、アザチオプリン・スルファサラジン；メサラジン；オルサラジン・クロロキニン／ヒドロキシクロロキン；  ペンクリアミン；金チオリンゴ酸塩（筋肉内および経口）；アザチオプリン；コチシン；ベータ−２アドレナリン受容体アゴニスト（サルブタモール、テルブタリン、サルメテラール）；キサンチン（テオフィリン、アミノフィリン）；クロモグリク酸；ネドクロミル；ケトチフェン；イプラトロピウムおよびオキシトロピウム；ミコフェノール酸モフェチル；アデノシン作動薬；抗血栓症薬；補体インヒビター；ならびにアドレナリン作動薬が挙げられる。
【０１２０】
特定の免疫疾患を処置または予防するために他の治療薬と組み合わせられる本明細書に開示されたＩＬ−２２アンタゴニストの用途を、以下にさらに詳細に述べる。
【０１２１】
ＩＬ−２２アンタゴニストが組み合わせされ得る関節疾患（例えば関節リウマチ、炎症性関節炎、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、および乾癬性関節炎）を処置または予防するための薬剤の非限定的例として、１つ以上の以下のものが挙げられる。すなわち、本明細書に記載したようなＩＬ−１２アンタゴニスト、ＮＳＡＩＤ；ＣＳＡＩＤ；ＴＮＦ、例えばＴＮＦａ、本明細書に記載したようなアンタゴニスト；本明細書に記載したような非ディプリーティング抗ＣＤ４抗体；本明細書に記載したようなＩＬ−２アンタゴニスト；抗炎症性サイトカイン、例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、およびＴＦＧａ、またはそれらのアゴニスト；本明細書に記載したようなＩＬ−１またはＩＬ−１レセプター・アンタゴニスト）；本明細書に記載したようなホスホジエステラーゼインヒビター；本明細書に記載したようなＣＯＸ−２インヒビター；Ｉｌｏｐｒｏｓｔ（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ８２を参照せよ）；メトトレキサート；サリドマイド（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８２を参照せよ）、およびサリドマイド類似構造薬（例えば、Ｃｅｌｇｅｎ）；レフルノミド；プラスミノーゲン活性化（例えばトラネキサム酸）のインヒビター；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８４を参照せよ；サイトカインインヒビター（例えばＴ−６１４）；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８２を参照せよ；プロスタグランジンＥｌ（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８２を参照せよ）；アザチオプリン（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），５２８１を参照せよ）；インターロイキン−１変換酵素（ＩＣＥ）のインヒビター；  ｚａｐ−７０またはｌｃｋインヒビター（チロシンキナーゼｚａｐ−７０またはＩｃｋのインヒビター）；本明細書に記載されたような脈管内皮細胞成長因子または血管内皮細胞成長因子受容体のインヒビター；本明細書に記載されたような血管形成インヒビター；副腎皮質ステロイド抗炎症剤（例えばＳＢ２０３５８０）；  ＴＮＦ−コンバターゼインヒビター；インターロイキン−１１（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），ｓ２９６を参照せよ）；インターロイキン−１３（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），ｓ３０８を参照せよ）；インターロイキン−１７  インヒビター（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ１２０を参照せよ）；金；ペニシラミン；クロロキン；ヒドロキシクロロキン；クロラニブシル；シクロホスファミド；シクロスポリン；全身リンパ組織照射；抗胸腺細胞グロブリン；  ＣＤ５−毒素；経口投与ペプチド類およびコラーゲン；ロベンザリット二ナトリウム；サイトカイン制御剤（ＣＲＡ）およびＨＰ４６６（Ｈｏｕｇｈｔｅｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）；ＩＣＡＭ−１アンチセンス・ホスホロチオネート・オリゴデオキシヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ２３０２；Ｉｓｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）；可溶性補体レセプター１（  Ｔｐ１０；Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）；プレドニゾン；オルゴテイン；グリコサミノグリカン・ポリ硫酸塩；ミノサイクリン；抗ＩＬ２Ｒ抗体；海産および植物性脂質（魚および植物種子脂肪酸；例えばＤｅＬｕｃａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．２１：７５９−７７７）を参照せよ）；オーラノフィン；フェニルブタゾン；メクロフェナム酸；フルフェナム酸；免疫グロブリン静注；ジレウトン；ミコフェノール酸（ＲＳ−６１４４３）；タクロリムス（ＦＫ−５０６）；シロリムス（ラパマイシン）；アミプリロース（セラフェクチン）；クラドリビン（２−クロロデオキシアデノシン）；およびアザリビンが挙げられる。好ましい組合せとして、１つ以上のＩＬ−２１アンタゴニストをメトトレキサートまたはレフルノミド、中程度または重症の関節リウマチの症例ではシクロスポリンと組み合わせることが挙げられる。
【０１２２】
関節疾患を処置するためにＩＬ−２２アンタゴニストと組み合わせて使用するインヒビターの好ましい例として、ＴＮＦアンタゴニスト（例えば、キメラ、ヒト化、ヒト、またはインビトロ生成抗体、またはその抗原結合フラグメント）であり、ＴＮ−Ｆ；ＴＮＦレセプターの可溶性フラグメント、例えば、ｐ５５もしくはｐ７５ヒトＴＮＦレセプターまたはその誘導体、例えば７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤＴＮＦレセプター−ＩｇＧ融合タンパク質、Ｅｎｂｒｅｌ（商標）、ｐ５５ｋＤＴＮＦレセプター−ＩｇＧ融合タンパク質；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト、例えばＴＮＦａ変換酵素（ＴＡＣＥ）インヒビター）；  ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒのアンタゴニスト；Ｔ細胞およびＢ細胞減少剤（例えば抗ＣＤ４または抗ＣＤ２２抗体）；小分子インヒビター（例えばメトトレキサートおよびレフノミド）；シロリムス（ラパマイシン）およびそのアナログ（例えばＣＣＩ−７７９）；Ｃｏｘ−２およびｃＰＬＡ２インヒビター；  ＮＳＡＩＤ；  ｐ３８インヒビター、ＴＰＬ−２、Ｍｋ−２、およびＮＦｋｂインヒビター；  ＲＡＧＥまたは可溶性ＲＡＧＥ；  Ｐ−セレクチンまたはＰＳＧＬ−１インヒビター（例えばそれに対する小分子インヒビター、例えば抗体、Ｐ−セレクチンに対する抗体）；エストロゲンレセプター・ベータ（ＥＲＢ）アゴニストまたはＥＲＢ−ＮＦｋβアンタゴニストが挙げられる。
【０１２３】
ＩＬ−２２アンタゴニストを組み合わせることができる多発性硬化症を処置または予防するための薬剤の非限定的例として、以下のものが挙げられる。すなわち、例えば、インターフェロン・インターフェロン−アルファ（（例えば、Ａｖｏｎｅｘ（商標）；ビオゲン）、およびインターフェロン−１β（Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ（商標）；Ｃｈｉｒｏｎ／Ｂｅｒｌｅｘ）；共重合体１（Ｃｏｐ−１；Ｃｏｐａｘｏｎｅ（商標）；Ｔｅｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）；高圧酸素；静脈免疫グロブリン；クラブリビン；本明細書に記載されたようなＴＮＦアンタゴニスト；副腎皮質ステロイド；プレドニゾロン；メチルプレドニゾロン；アザチオプリン；シクロホスファミド；シクロスポリン；メトトレキサート；４−アミノピリジン；およびチザニジンである。ＩＬ−２２アンタゴニストと組み合わせて使用し得る追加のアンタゴニストとして、他のヒト・サイトカインまたは成長因子（例えばＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２  ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−１１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、およびＰＤＧＦ）に対する抗体またはそれらのアンタゴニストが挙げられる。本明細書に記載したようなＩＬ−１２アンタゴニストは、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０、またはそれらのリガンド等の細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることができる。ＩＬ−２２アンタゴニストを薬剤と組み合わせることも可能であり、該薬剤の例として、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えばイブプロフェン、プレドニゾロン等の副腎皮質ステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害薬、アデノシン作動薬、抗血栓症薬、補体インヒビター、アドレナリン作動薬、本明細書に記載されるように炎症誘発性サイトカインによる情報伝達に妨害する薬剤、ＩＬ−Ｉβ変換酵素インヒビター（例えば、Ｖｘ７４０）、抗Ｐ７ｓ、ＰＳＧＬ、ＴＡＣＥインヒビター、Ｔ細胞シグナル伝達インヒビター、例えばキナーゼインヒビター、金属ロプロテナーゼ、スルファサラジン、アザスロプリン、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素阻害薬、本明細書に記載されているように、可溶性サイトカイン・レセプター、およびそれらの誘導体、さらに抗炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、およびＴＧＦ）が挙げられる。
【０１２４】
ＩＬ−２２アンタゴニストを組み合わせることができる多発性硬化症治療薬の好ましい例として、インターフェロンβ、例えばＩＦＮｂ−１αおよびＩＦＮｂ−１β；コパキソン、副腎皮質ステロイド、ＩＬ−Ｉインヒビター、ＴＮＦインヒビター、ＣＤ４０およびＣＤ８０に対する抗体、ＩＬ−１２アンタゴニストが挙げられる。
【０１２５】
ＩＬ−２２アンタゴニストを組み合わせることができる炎症性大腸疾患またはクローン病を処置または予防するための薬剤の非限定的例は以下の通りである。すなわち、ブデノシド；上皮細胞成長因子；副腎皮質ステロイド；シクロスポリン；スルファサラジン；アミノ・サリチル酸塩；６‐メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼインヒビター；メサラミン；オルサラジン；バルサラジド；抗酸化剤；トロンボキサンインヒビター；  ＩＬ−１レセプター・アンタゴニスト；抗ＩＬ−１モノクローナル抗体；抗ＩＬ−６モノクローナル抗体；成長因子；エラスターゼインヒビター；ピリジニル−イミダゾール化合物；本明細書に記載されたようなＴＮＦアンタゴニスト；  ＩＬ−４（ＩＬ−１０、ＩＬ−１３および／またはＴＧＦβサイトカインまたはそれらのアゴニスト（例えば、アゴニスト抗体）；インターロイキン−１１；プレドニゾロン、デキサメサゾンまたはブデソニドのグルクロニドもしくはデキストラン複合プロドラッグ；  ＩＣＡＭ−１アンチセンス・ホスホロチオネート・オリゴデオキシヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ２３０２；Ｉｓｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）；可溶性補体レセプター１（ＴＰ１０；Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）；緩効性メサラジン；メトトレキサート；血小板活性因子（ＰＡＦ）のアンタゴニスト；シプロフロキサシン；およびリグノカインである。
【０１２６】
一実施形態では、ＩＬ−２２アンタゴニストを、免疫応答、例えば移植拒絶反応または移植片対宿主病（ｇｒａｆｔ−ｖ−ｈｏｓｔ  ｄｉｓｅａｓｅ）に関わる他の標的に対する１つ以上の抗体と組み合わせて用いることができる。本発明のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストを組み合わせることができる、免疫応答を処置または予防するための薬剤の非限定的例として以下のものが挙げられる。すなわち、細胞表面分子に対する抗体であり、該細胞表面分子として、限定されるものではないが、ＣＤ２５（インターロイキン−２レセプター−α）、ＣＤ１１ａ（ＬＦＡ−１）、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ−１）、ＣＤ４、ＣＤ４５、ＣＤ２８／ＣＴＬＡ４、ＣＤ８０（Ｂ７−１）、および／またはＣＤ８６（Ｂ７−２）が挙げられる。さらに別の実施形態では、ＩＬ−２２アンタゴニストを１つ以上の一般的な免疫抑制剤、例えばシクロスポリンＡまたはＦＫ５０６と組み合わせて用いる。
【０１２７】
本発明の別の局面は、したがって、他の治療用化合物とＩＬ−２２アンタゴニストとの併用投与を実施するためのキットに関する。一実施形態では、このキットは、医薬的担体に処方された１種類以上の結合剤と、適当に１種類以上の別個の医薬製剤として処方された治療薬等の少なくとも１種類の薬剤とを含む。
【０１２８】
（診断アッセイ）
生物試料のＩＬ−２２タンパク質または核酸の有無を検出するための典型的な方法は、被験者から生物試料を得て、ＩＬ−２２タンパク質または核酸の存在が生物試料で検出されるようにして、この生物試料を、ＩＬ−２２タンパク質をコードするＩＬ−２２タンパク質または核酸（例えばｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ）を検出することができる化合物または薬剤と接触させることを含む。ＩＬ−２２ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡを検出するための好ましい薬剤は、ＩＬ−２２ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡでハイブリダイズすることが可能な標識核酸プローブである。核酸プローブは、例えば、完全長ＩＬ−２２核酸、例えば配列番号１の核酸、または長さが少なくとも１５、３０，５０、１００、２５０、または５００ヌクレオチドであり、ＩＬ−２２ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡに対してストリンジェントな条件下で特異的にハイブリダイズするのに十分な、オリゴヌクレオチド等のＩＬ−２２核酸フラグメントまたはその一部分である。
【０１２９】
ＩＬ−２２タンパク質を検出するための好ましい薬剤は、ＩＬ−２２タンパク質に結合することができる抗体であり、好ましくは検出可能な標識を持つ抗体である。抗体は、ポリクローナル、またはより好ましくはモノクローナルである。無傷の抗体、またはそのフラグメント（例えばＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２）を用いることができる。「標識」という用語は、プローブまたは抗体に関して、直接標識されている別の試薬による反応性によるプローブまたは抗体の間接的標識に加えて、検出可能な物質をプローブまたは抗体にカップリング（すなわち、物理的連結）することによるプローブまたは抗体の直接的な標識を包含することを意図している。間接的標識の例として、蛍光標識二次抗体を用いた一次抗体の検出と、蛍光標識ストレプトアビジンで検出できるようにビオチンによるＤＮＡプローブの末端標識とが挙げられる。「生物試料」という用語は、被検体から単離された組織、細胞、および体液を含むことを意図している。すなわち、本発明の検出方法は、インビボのみならずインビトロで生物試料に含まれるＩＬ−２２ｍＲＮＡ、タンパク質、またはゲノムＤＮＡを検出するのに用いられる。例えば、ＩＬ−２２ｍＲＮＡを検出するためのインビトロ技術として、ノーザンブロット法とインサイチュハイブリダイゼーションとが挙げられる。ＩＬ−２２タンパク質を検出するためのインビトロ技術として、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロット、免疫沈降、および免疫蛍光が挙げられる。ＩＬ−２２ゲノムＤＮＡを検出するためのインビトロ技術として、サザンブロット法が挙げられる。さらに、ＩＬ−２２タンパク質を検出するためのインビボ技術として、被検体に標識抗ＩＬ−２２抗体を導入することが含まれる。例えば、放射性マーカーで抗体を標識することができ、被検体内でのこの放射性マーカーの存在および位置を標準的なイメージング技術で検出することができる。
【０１３０】
一実施形態では、上記生物試料は被検体由来のタンパク質分子を含む。あるいは、上記生物試料は被検体由来のｍＲＮＡ分子または被検体由来のゲノムＤＮＡを含むことができる。好ましい生物試料は、被検体から従来の手段を用いて単離された血清試料である。
【０１３１】
別の実施形態では、上記方法はさらに、対照被検体から対照背得物試料を得ること、ＩＬ−２２タンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡを検出することができる化合物または薬剤と上記対照試料とを、ＩＬ−２２タンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの存在が生物試料中で検出されるようにして、接触させること、対照試料中のＩＬ−２２タンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの存在を試験試料中のＩＬ−２２タンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの存在と比較することを含む。本発明は、生物試料内のＩＬ−２２の存在を検出するためのキットも包含する。例えば、このキットは、生物試料中のＩＬ−２２タンパク質またはｍＲＮＡを検出することができる標識された化合物または薬剤（例えば、プローブまたは抗体）と、試料中のＩＬ−２２量を測定するための手段と、ＩＬ−２２の量を標準と比較するための手段とから構成される。上記化合物または薬剤を適当な容器に梱包することができる。キットは、ＩＬ−２２タンパク質または核酸を検出するためのキットを用いるための指示をさらに含むことができる。
【０１３２】
（スクリーニングアッセイ）
生物活性を測定するためのアッセイに、高スループットスクリーニングのための複数のタンパク質からなるパネルに含まれ、抗体を立ち上げるために、または別の免疫応答を引き出すために、体液に含まれるタンパク質（またはそのレセプター）のレベルを低量するために設計されたアッセイでの試薬（標識試薬を含む）として、対応するタンパク質が選択的に発現される組織（構成的に、あるいは組織分化もしくは組織成長の特定の段階で、または疾病状態のいずれかで）に対するマーカーとして、さらに、もちろん、相補的なレセプターまたはリガンドを単離するために、本明細書に記載したアンタゴニストを用いることができる。添付した例に記載した方法を用いて、ペプチドまたは小分子インヒビターまたは結合相互作用のアゴニストをスクリーニングすることができる。
【０１３３】
これらの研究用ユーティリティのいずれかまたは全てを商業化のための試薬用またはキット・フォーマットに発展させることができる。
【０１３４】
上記の用途を実施するための方法は、当業者に周知である。そのような方法を開示している参考文献として、限定されるものではないが、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」，２ｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．，Ｅ．Ｆ．Ｆｒｉｔｓｃｈ  ａｎｄ  Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ  ｅｄｓ．，１９８９、および「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ：Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｅｒｇｅｒ，Ｓ．Ｌ．ａｎｄ  Ａ．Ｒ．Ｋｉｍｍｅｌ  ｅｄｓ．，１９８７が挙げられる。
【０１３５】
本発明のＩＬ−２２および抗体の活性は、他の手段との間で、以下の方法で測定することが可能である。
【０１３６】
胸腺細胞または脾細胞の細胞障害性に関した適当なアッセイとし、限定されるものではないが、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｅｄ  ｂｙ  Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗ  Ｓｔｒｏｂｅｒ，Ｐｕｂ．Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（Ｃｈａｐｔｅｒ  ３，Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  ａｓｓａｙｓ  ｆｏｒ  Ｍｏｕｓｅ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ３．１−３．１９；  Ｃｈａｐｔｅｒ  ７，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎｓ）；  Ｈｅｒｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７８：２４８８−２４９２，１９８１；  Ｈｅｒｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２８：１９６８−１９７４，１９８２；  Ｈａｎｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５：１５６４−１５７２，１９８５；  Ｔａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；  Ｔａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８；  Ｈｅｒｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７８：２４８８−２４９２，１９８１；  Ｈｅｒｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２８：１９６８−１９７４，１９８２；  Ｈａｎｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５：１５６４−１５７２，１９８５；  Ｔａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；  Ｂｏｗｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ６１：１９９２−１９９８；  Ｔａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８；  Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３３：３２７−３４１，１９９１；  Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５３：３０７９−３０９２，１９９４  に記載されているものが挙げられる。
【０１３７】
Ｔ細胞依存型免疫グロブリン応答およびアイソタイプ。スイッチング（とりわけ、Ｔ細胞依存型抗体応答を変調し、Ｔｈ１／Ｔｈ２プロフィールに影響を及ぼすタンパク質を同定する）として、限定されるものではないが、Ｍａｌｉｓｚｅｗｓｋｉ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４４：３０２８−３０３３，１９９０；  ａｎｄ  Ａｓｓａｙｓ  ｆｏｒ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ：Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，Ｍｏｎｄ，Ｊ．Ｊ．ａｎｄ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，Ｍ．Ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｄｓ．Ｖｏｌ  １  ｐｐ．３．８．１−３．８．１６，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９４  に記載されているものが挙げられる。
【０１３８】
混合リンパ球培養反応（ＭＬＲ）アッセイ（とりわけ、Ｔｈ１およびＣＴＬ応答を主に起こすタンパク質を同定する）として、限定されるものではないが、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｅｄ  ｂｙ  Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗ  Ｓｔｒｏｂｅｒ，Ｐｕｂ．Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（Ｃｈａｐｔｅｒ  ３，Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  ａｓｓａｙｓ  ｆｏｒ  Ｍｏｕｓｅ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ３．１−３．１９；  Ｃｈａｐｔｅｒ  ７，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎｓ）；  Ｔａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；  Ｔａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８；  Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３７７８−３７８３，１９９２  に記載されているものが挙げられる。
【０１３９】
樹状細胞依存型アッセイ（とりわけ、未処置のＴ細胞を活性化させる樹状細胞によって発現されるタンパク質を同定する）として、限定されるものではないが、Ｇｕｅｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３４：５３６−５４４，１９９５；  Ｉｎａｂａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １７３：５４９−５５９，１９９１；  Ｍａｃａｔｏｎｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １５４：５０７１−５０７９，１９９５；  Ｐｏｒｇａｄｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １８２：２５５−２６０，１９９５；  Ｎａｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ６７：４０６２−４０６９，１９９３；  Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６４：９６１−９６５，１９９４；  Ｍａｃａｔｏｎｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １６９：１２５５−１２６４，１９８９；  Ｂｈａｒｄｗａｊ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ９４：７９７−８０７，１９９４；  およびＩｎａｂａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １７２：６３１−６４０，１９９０に記載されているものが挙げられる。
【０１４０】
リンパ球生存／アポトーシスのためのアッセイ（とりわけ、スーパー抗原誘導後のアポトーシスを防ぐタンパク質とリンパ球ホメオスタシスを調整するタンパク質とを同定する）として、限定されるものではないが、Ｄａｒｚｙｎｋｉｅｗｉｃｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  １３：７９５−８０８，１９９２；  Ｇｏｒｃｚｙｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ７：６５９−６７０，１９９３；  Ｇｏｒｃｚｙｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３：１９４５−１９５１，１９９３；  Ｉｔｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ６６：２３３−２４３，１９９１；  Ｚａｃｈａｒｃｈｕｋ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４５：４０３７−４０４５，１９９０；  Ｚａｍａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  １４：８９１−８９７，１９９３；  Ｇｏｒｃｚｙｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １：６３９−６４８，１９９２に記載されているものが挙げられる。
【０１４１】
Ｔ細胞コミットメントおよび発現の初期段階に影響を及ぼすタンパク質に関するアッセイとして、限定されるものではないが、Ａｎｔｉｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ８４：１１１−１１７，１９９４；  Ｆｉｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １５５：１１１−１２２，１９９４；  Ｇａｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ８５：２７７０−２７７８，１９９５；  Ｔｏｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：７５４８−７５５１，１９９１に記載されているものが挙げられる。
【０１４２】
上記スクリーニングアッセイによって同定される修飾剤を適当な動物モデルで、例えばそのような薬剤による処置の有効性、毒性、または副作用について、試験する。あるいは、修飾剤を、本明細書に記載したインビトロまたはインサイチュアッセイの少なくとも１つで試験する。
【０１４３】
（ＩＬ−２２アゴニストまたはアンタゴニスト効果のアッセイ）
ＩＬ−２２アゴニストまたはアンタゴニストの活性を以下の方法で測定することができる：
Ｔ細胞または胸腺細胞増殖についてのアッセイとして、限定されるものでないが、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｅｄ  ｂｙ  Ｊ．Ｅ，Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗ  Ｓｔｒｏｂｅｒ，Ｐｕｂ．Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（Ｃｈａｐｔｅｒ  ３，Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  ａｓｓａｙｓ  ｆｏｒ  Ｍｏｕｓｅ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ３．１−３．１９；  Ｃｈａｐｔｅｒ  ７，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎｓ）；  Ｔａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；  Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４５：１７０６−１７１２，１９９０；  Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３３：３２７−３４１，１９９１；  Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３７７８−３７８３，１９９２；  Ｂｏｗｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：１７５６−１７６１，１９９４に記載されたものが挙げられる。
【０１４４】
脾臓細胞、リンパ節細胞、または胸腺細胞のサイトカイン産生および／または増殖に関するアッセイとして、限定されるものでないが、Ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ａ．Ｍ．ａｎｄ  Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｅ．Ｍ．Ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｄｓ．Ｖｏｌ  １  ｐｐ．３．１２．１−３．１２．１４，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９４；  およびＭｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｏｕｓｅ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ７，Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｒ．Ｄ．Ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｄｓ．Ｖｏｌ  １  ｐｐ．６．８．１−６．８．８，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９４に記載されたものが挙げられる。
【０１４５】
造血細胞およびリンパ球生成細胞の増殖および分化に関するアッセイとして、限定されるものではないが、Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  ａｎｄ  Ｍｕｒｉｎｅ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ２  ａｎｄ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ４，Ｂｏｔｔｏｍｌｙ，Ｋ．，Ｄａｖｉｓ，Ｌ．Ｓ．ａｎｄ  Ｌｉｐｓｋｙ，Ｐ．Ｅ．Ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｄｓ．Ｖｏｌ  １  ｐｐ．６．３．１−６．３．１２，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９１；  ｄｅＶｒｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１２０５−１２１１，１９９１；  Ｍｏｒｅａｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３６：６９０−６９２，１９８８；  Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８０：２９３１−２９３８，１９８３；  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｏｕｓｅ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  −  Ｎｏｒｄａｎ，Ｒ．Ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｄｓ．Ｖｏｌ  １  ｐｐ．６．６．１−６．６．５，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９１；  Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８３：１８５７−１８６１，１９８６；  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １１  −  Ｂｅｎｎｅｔｔ，Ｆ．，Ｇｉａｎｎｏｔｔｉ，Ｊ．，Ｃｌａｒｋ，Ｓ．Ｃ．ａｎｄ  Ｔｕｒｎｅｒ，Ｋ．Ｊ．Ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｄｓ．Ｖｏｌ  １  ｐｐ．６．１５．１  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９１；  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｏｕｓｅ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ９  −  Ｃｉａｒｌｅｔｔａ，Ａ．，Ｇｉａｎｎｏｔｔｉ，Ｊ．，Ｃｌａｒｋ，Ｓ．Ｃ．ａｎｄ  Ｔｕｒｎｅｒ，Ｋ．Ｊ．Ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｄｓ．Ｖｏｌ  １  ｐｐ．６．１３．１，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９１に記載されたものが挙げられる。
【０１４６】
抗原（とりわけ、増殖およびサイトカイン産生を測定することによって直接的なＴ細胞効果と同様に、ＡＰＣ−Ｔ細胞相互作用に影響を及ぼすタンパク質を同定する）に対するＴ細胞クローン応答に関するアッセイとして、限定されるものではないが、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｅｄ  ｂｙ  Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗ  Ｓｔｒｏｂｅｒ，Ｐｕｂ．Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（Ｃｈａｐｔｅｒ  ３，Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  ａｓｓａｙｓ  ｆｏｒ  Ｍｏｕｓｅ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ；  Ｃｈａｐｔｅｒ  ６，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ；  Ｃｈａｐｔｅｒ  ７，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎｓ）；  Ｗｅｉｎｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：６０９１−６０９５，１９８０；  Ｗｅｉｎｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．１１：４０５−４１１，１９８１；  Ｔａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；  Ｔａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８に記載されたものが挙げられる。
【０１４７】
この発明を非限定的例によってさらに例証する。塩基配列表と同様に、この出願全体を通して引用される全ての参考文献、特許、および公開特許出願の内容を、本明細書の一部を構成するものとして援用する。
【実施例】
【０１４８】
（実施例１：クローン「ＩＬ−２２」の同定および特徴づけ）
本発明のポリヌクレオチドをクローン「ＩＬ−２２」として同定した。クローンＩＬ−２２を以下の方法にもとづいて単離した。マウスＥＳＴをＣｏｎＡおよび骨髄由来樹状細胞で活性化される脾細胞から作られたマウスｃＤＮＡライブラリから同定した。ＥＳＴは、分泌タンパク質をコード化するｃＤＮＡを選択する方法を用いて同定した（米国特許第５，５３６，６３７号を参照せよ）。マウスＥＳＴ配列は、完全長のマウス・クローンを同じｃＤＮＡライブラリから単離するのに用いた。マウス・クローンの配列の分析で、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）との著しい相同性が明らかになった。
【０１４９】
マウス・クローンのヒト相同体を単離するために、ＩＬ−１０に相同性を示したマウス配列の領域に基づいて、ＰＣＲプライマーを作成した。そのようなプライマーをＰＨＡ／ＰＭＡ刺激ヒトＰＢＭＣに由来するｃＤＮＡライブラリでの増幅のためのそのようなプライマーを使用することで、著しい大きさのＰＣＲ産物が生産された。ＰＣＲ生成物の配列の分析により、それがマウスｅＤＮＡの相同体であることを確認した。オリゴヌクレオチドを部分的なヒト・クローン配列から作成し、ＰＢＭＣライブラリから完全長ヒト・クローンを単離するのに用いた。  
【０１５０】
ＩＬ−２２は、分泌タンパク質（また、ここでは「ＩＬ−２２」タンパク質と称する）の全てのコード配列を含む完全長のヒト・クローンである。そのアミノ酸配列の分析は、ｈＩＬ−１０に対して約２３％の相同性を持つことを示した。ＩＬ−１０の推定上の受容体結合モチーフに基づき、類似機能に関係する３つのモチーフがコンピュータ・モデリングを通してＩＬ−２２で提唱された。これらは、残基５０〜６０、残基６３〜８１、および残基１６８〜１７７の配列番号２の領域である。また、データベースの分析は、ＩＬ−２２が、他種のＩＬ−１０と同等レベルの相同性を示すことを明らかにした。
【０１５１】
現在測定されたＩＬ−２２のヌクレオチド配列は、配列番号１であり、ポリＡテールを含む。前述のヌクレオチド配列に対応するＩＬ−２２タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号２で報告した。
【０１５２】
（実施例２：タンパク質「ＩＬ−２２」の特徴づけ）
完全長のＩＬ−２２タンパク質を安定に発現しかつ分泌する細胞株を、適切な発現ベクターでＩＬ−２２ｃＤＮＡにＣＨＯ細胞を形質移入することで作り出した。適切なＩＬ−２２発現ベクターを使用して一過性に形質移入ＣＯＳ細胞は、分析用ＩＬ−２２タンパク質を作るのに使用されてきた。形質移入を市販のＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ試薬（Ｇｉｂｃｏ）を使用して達成した。おもしろいことに、ＩＬ−２２を発現するＣＯＳ細胞が非均一的に剥離して、細胞培養単層に穴が形成された。形質移入ＣＯＳ細胞により条件づけられた培地を、ＩＬ−２２タンパク質のサイトカインのような活性を実証するのに用いた。細胞可溶化物のウエスタンブロット分析は、ＩＬ−２２発現細胞により条件付けられた培地への細胞の曝露に応じて、マクロファージのような特性（ＭＥＳ−１３；Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｊ．ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １６４：１８１４−１８１９を参照せよ）を示す腎臓糸球体間質組織由来細胞株で、Ｓｔａｔ−３がリン酸化される（活性化される）ことを示した。加えて、Ｓｔａｔ−３のリン酸化は、ＩＬ−２２タンパク質で処置された非形質移入のＣＯＳ細胞で誘発される。  
【０１５３】
ＩＬ−２２タンパク質（ここに記述した形質移入ＣＯＳ細胞株に由来する）の電気泳動的分析は、発現タンパク質が一定の範囲内の大きさに存在することを示した。電気泳動法より前のＮ−グリカナーゼによるＣＯＳ由来ＩＬ−２２タンパク質の処置は、未処置のＩＬ−２２で見られる最高の可動性（例えば最低の分子量）種に対応している単一バンドに帰着する。これは、ＩＬ−２２のアミノ酸配列で同定された推定上のＮにリンクされた糖鎖形成部位で起こる可能性があることが提唱された糖鎖形成イベントと一致している（配列番号２のアミノ酸残基５４−５６、６８−７０、９７−９９、および１７６−１７８）。  
【０１５４】
Ｅｄｍａｎ・Ｎ末端シークエンシングを測定した。成熟したＩＬ−２２タンパク質のＮ−終端が、配列番号２の位置３４の残基で始まることを測定した。（アラニン）。成熟したＩＬ−２２タンパク質Ｎ終端に、「６倍速ヒスチジン」親和性タグとＦＬＡＧエピトープ・タグとを融合する発現ベクターを作り出した（加えられたアミノ酸タグは配列番号５に与えられ、以下のアミノ酸配列を有する。ＭＫＦＬＶＮＶＡＬＶＦＭＶＶＹＩＳＹＩＹＡＧＳＧＭＨ＾ＵＨ  ＨＧＳＧＤＹＫＤＤＤＤＫＡＰＩＳＳＨＣＲ）。これらのタグ標識されたコントラクトを、安定に発現するＣＨＯ細胞株と一過性に発現するＣＯＳ細胞株とを創造することに使用した。タグは、ＩＬ−２２（例えば、抗６ｘｈｉｓ抗体；抗ＦＬＡＧ抗体）を検出し、条件培地からタンパク質を精製する（Ｎｉ＋２樹脂を使用）便利な手段を提供した。ＩＬ−２２発現ＣＯＳ細胞株からのこのタグにより精製されたヒトＩＬ−２２タンパク質は、ＭＥＳ−１３細胞でＳｔａｔ−３の活性化を誘発するのに使用可能だった。
【０１５５】
活性化されたＴｈｌ細胞およびＴｈ２細胞（例えば、Ｓｙｒｂｅ  ｅｔ  ａｌ、（１９９９）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ、２１：２６３−８５を参照せよ）でのＩＬ−２２ｍＲＮＡ転写物の比較は、活性化されたＴｈｌ細胞でのＩＬ−２２発現レベルが、活性化されたＴｈ２細胞でのＩＬ−２２発現レベルより高いことを示した。ＩＬ−２２ｍＲＮＡの分析は、ＲＮＡｓｅ保護アッセイで達成された。したがって、ＩＬ−２２は、適応免疫応答の間、特異的にＴｈ１  ＣＤ４＋Ｔ細胞により誘発される。
【０１５６】
（実施例３：ＩＬ−２２組換え型アデノウイルス・ベクターとインビボ投与の確立）
ｐＥＤ６ｄｐｃ−２ｍＩＬ−２２をＥｃｏＲＩおよびＮｏｔＩで消化し、ＥｃｏＲＩおよびＮｏｔＩ消化アデノウイルス／ベクターＡｄｏｒｉ１−２で１．１ｋｂｍＩＬ−２２ｃＤＮＡフラグメントを連結することで、Ａｄｏｒｉ１−２マウスＩＬ−２２（ｍＩＬ−２２）ベクターを誘導した。ＥｃｏＲｌおよびＮｏｔｌで消化し、ＥＧＦＰをＡｄｏｒｉ１−１のＥｃｏＲｌとＮａｉｌ部位に挿入することで、Ａｄｏｒｉ  １−１緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）コンストラクト、ｐＥＧＦＰ−Ｎ１（ＣＬＯＮＴＥＣＨ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を引き出した。両方のコンストラクトは、ラスミド内でのｃＤＮＡ挿入物の広範な制限消化分析とシークエンシングによって検証された。ｍＩＬ−２２ｃＤＮＡおよびＥＧＦＰの発現は、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期プロモーターおよびエンハンサーから促進される。  
【０１５７】
ヒト腎臓胎児性腎培養細胞株２９３での相同的組換えによって、ＡｄｓＥ１ａ欠損（ｄ１３２７）組換えアデノウイルスを生成した。相同的な組換えによって人間の腎臓で細胞株２９３組換え型のアデノウイルス・ウイルスを分離し、その後に、２９３細胞上で増幅した。凍結融解３サイクルにより、ウイルスを感染２９３細胞から遊離した。ウイルスをさらに２つの塩化セシウム遠心分離勾配によって精製し、ｐＨ  ７．２のリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）に対して４℃で透析した。次の透析で、グリセリンを１０％の濃度まで加え、ウイルスを使用するまで８０℃で貯蔵した。ウイルスは、導入遺伝子の発現、２９３細胞上のプラーク形成単位、粒子／ｍｌ、および内毒素測定とウイルスのＰＣＲ分析およびウイルス内のＩＬ−２２コード領域の配列分析により特徴づけたられた。
【０１５８】
ｍＩＬ−２２をコード化する組換え型アデノウイルスの単一用量の５Ｘ１０１０粒子をメスのＣ５７Ｂ１／６マウス（年齢７−８週）の尾静脈の中に注射した。対照マウスは、ＧＦＰまたはＰＢＳ／１０％のグリセリンをコード化するアデノウイルスを受けた。各実験群からのマウスは、注射後様々な時点で殺した。血液学的分析および血清化学分析のために、血液を心臓の穴から採取した。血液は眼窩後副鼻洞を経て採取し、微分計数を血液塗抹標本の上で行った。組織を収集して、ホルマリンに固定し、組織病理学のためにヘマトキシリン‐エオジンで染色した。
【０１５９】
（実施例４：ＩＬ−２２の免疫学的効果）
ＩＬ−２２の免疫学的効果を、マウスへのマウスＩＬ−２２のｃＤＮＡのウイルス導入により、後生動物の前後関係で調査した。アデノウイルスのベクターを８週間目のＣ５７／Ｂ６メスのマウスに５ｘ１０１０ウイルス粒子を静脈内にまたは皮下に注射することによって、マウスＩＬ−２２のｃＤＮＡを発現するのに使用した。そのマウスを注射後７日および１４日で殺し、緩衝液のみまたは緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を発現するアデノウイルスを注射された対照マウスと比較した。７日目および１４日目に、絶対的および相対的な胸腺の重量が、ウイルス・マウスＩＬ−２２を発現したマウスで、著しく減少することが注目された。脾臓の絶対の平均重量は１４日目に減少し、肝臓重量は７日目わずかに増加した。胸腺の著しい全身性萎縮は、リンパ様減少（顕微鏡によって観察される）と同様に７日目および１４日目に明白だった。また、腎臓重量の増加および肝臓の腫張も観察された。
【０１６０】
加えて、赤血球系のパラメーターの減少、赤血球数算定、ヘモグロビン、およびヘマトクリットを含む複数の血液学的効果が７日目に明白となった。まとめると、これらの効果は、動物の貧血症を示した。さらに、好中球の増加による白血球数の増加と同様に、血小板が増加した。これらの観察に照らして、再生応答の証拠がなかったことで、骨髄レベルに効果が及んでいることを示した。このことの考えられる原因は、腎臓または腸を通じての小分子の損失である。さらに、７日目および１４日目に、アルブミン・レベルがわずかに減少した。しかし、急性期反応を示す血清アミロイドＡおよびフィブリノーゲンのレベルは増加した。肝臓ＲＮＡの分析は、ＳＡＡ’ｓ、ＧＲＯ１、ＯＰＮ、ＬＣＮ２、ＰＲＴＮ３、およびＳＯＣＳ３の増加を示した（下記の表３を参照せよ）。その他の臨床観察は、体重の減少、最小脱水症の兆候、尿比重の増加、尿量の減少、および腎近位尿細管好塩基球増加の誘導を含んでいた。観察された好塩基球の増加は、細胞分裂の増加および腎近位尿細管の上皮細胞のｒＲＮＡ存在の増加による。ＩＬ−２２の投与後、検出された変化は、急性期反応を誘発するＩＬ−２２の能力と一致する（例えば、Ｇａｂａｙ，Ｃ．（１９９９）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３４０（６）：４４８−４５４を参照せよ）。
【０１６１】
（実施例５：抗ＩＬ−２２モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体の準備および特徴づけ）
モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体を、本明細書でも記述した通常の方法論を使用して準備した。下記の表１は、ＩＬ−２２に対して作られたチキン・ポリクローナル抗体と同様に、Ｐ３／１、Ｐ３／２、Ｐ３／３およびＰ３／５のモノクローナル抗体の結合親和性、ＣＩＡ有効性、ならびに中和特異性を図示する。また、抗体Ｐ３／１、Ｐ３／２、Ｐ３／３、およびＰ３／５は、ここではそれぞれ抗体−０１、抗体−０４、抗体−０２、および抗体−０３と称する。
【０１６２】
【表１】
2007537132.tif 000007
結合特異性は、マウスまたはヒトのｈ／ｆ  タグ標識されたＩＬ−２２微量定量プレートを用いて、ＥＬＩＳＡによって測定された。各抗体は、表１に示すように、マウスあるいはヒトに強い特異性を示した。中和特異性は、５ｎｇ／ｍＩのマウスまたはヒトｈ／ｆタグ標識されたＩＬ−２２によって媒介されたＳＴＡＴ３のリン酸化を阻害する抗体の能力を判定することにより測定された。結合マウスＩＬ−２２を用いた酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）は、ｍＡｂＰ３／１がＩＬ−２２−Ｆｃに対しては、〜２ｎＭ、Ｈ／ＦＩＬ−２０に対しては〜１０ｎＭにもとづいて〜５ｎＭのＥＤ５０を有する。さらに、組換え型ＩＬ−２２に加えて、Ｐ３／１  ｍＡｂがＩＬ−２２逆ウイルスベクターで形質移入されたＴ細胞から分泌した未変性ＩＬ−２２も結合する。ＩＬ−２３抗体Ｐ３／１は、ＩＤ５０の値が１ｎＭであることが知られており、サイトカインがまさに飽和状態（１ｎＭ）で存在する場合にＩＬ−２２活性を阻害する立体配座滴に作用する。    
【０１６３】
それぞれＢｉａｃｏｒｅ６８．１ｎＭおよび１．５１ｎＭを使用して、ヒトＩＬ−２２に対するラット抗体Ａｂ−０２および抗体−０４結合親和性（ＫＤ）を測定した。同様条件下で、ヒトＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ複合体およびＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃに対するヒトＩＬ−２２の結合親和性を、それぞれ１．４８ｎＭおよび３．３７ＤＭと測定した。これらの結合親和性の測定に用いられる実験条件は、下記の実施例２２でより詳細に述べる。
【０１６４】
（実施例６：ＩＬ−２２ｍＲＮＡおよびレセプターの発現）
様々なヒトおよびマウスの組織のＩＬ−２２およびそのレセプターの発現を半定量的逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応法（ＲＴ−ＰＣＲ）で調べた。  
実験はであることを明らかにする。ＩＬ−２２のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）が、対照アクチンに対して正規化されたとして、ヒトの精巣、肺、前立腺と末梢血リンパ球（末梢血リンパ球）に非常に低レベルで存在する。さらに、半定量的な放射線透過試験−ＰＣＲが、ＩＬ−２２レセプターがヒトの膵臓では最高レベルで検出され、肝臓、腸、皮膚、甲状腺、腎臓、心臓胃、精巣、唾液腺、副腎と前立腺ではより低いレベルで検出されることを示す。その代わりに、マウスＩＬ−２２レセプターは、肝臓、小腸、筋肉、皮膚、および卵巣で最高の発現を示し、腎臓、胚ｅ８．５およびｅ１９でより低い発現を示す。
【０１６５】
（実施例７：ＩＬ−２２タンパク質３０に対するインサイチュハイブリッド形成法およびアポトーシス染色）
アデノウイルス発現ＩＬ−２２（ＡｄＩＬ−２２）またはリポ多糖類（ＬＰＳ）で処置されたマウスのＩＬ−２２タンパク質およびレセプター・メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）に対するインサイチュハイブリッド形成法を行い、以下の結果であった：
【０１６６】
【表２】
2007537132.tif 000008
ＩＬ−２２レセプターｍＲＮＡを、小腸および大腸、胃、リンパ節、脾臓、ならびに肺でさらに検出した。ＩＬ−２２レセプターの発現は、さらに、ＬＰＳ等の先天性免疫応答の媒介物によって上方制御されることが可能である。  
【０１６７】
最終的に、静脈内でｍＩＬ−２２タンパク質を受けとるｃ５７ＢＬ／６マウスから取り出された腎臓細胞のＴＵＮＥＬＴＵＮＥＬアッセイは、複数の近位尿細管に少数のアポトーシス上皮細胞（ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｓｅｌｌｓ）を示した。静脈内に塩類溶液（対照群）の投与を受けたマウスは、陽性染色法を示さなかった。
【０１６８】
これらのデータは、先天性免疫応答の間、サイトカインおよびレセプターが、誘導されることが可能であり、そして、誘導は炎症性の状態（ＬＰＳ）にある組織に制限されることを実証した。適応可能な免疫応答の間、ＩＬ−２２は、Ｔｈ１  ＣＤ４＋  Ｔ細胞から誘導されることも可能である。循環白血球がレセプターを持って現れないので、この結果は、レセプターの組織発現によって補強されているように、適応可能な免疫応答の組織下流内のエフェクターとしてＩＬ−２２の機能が、恒常的におよび一層、炎症の先天性誘導因子によって上方制御したことを示唆する。
【０１６９】
（実施例８：遺伝子発現におけるＩＬ−２２媒介変化）
ＡｄＩＬ−２２またはＡｄ−ＧＦＰコンストラクトが感染したマウスの肝細胞での遺伝発現レベルを変えるＩＬ−２２の能力を調べた。
【０１７０】
感染後１日および３日目から得た凍結マウス肝臓を粉砕し、Ｐｒｏｍｅｇａ  ＲＮＡｇｅｎｔｓ  Ｔｏｔａｌ  ＲＮＡ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いてＲＮＡの精製をおこなった。ＲＮｅａｓｙミニキットを用いてＲＮＡをさらに精製した。ＲＮｅａｓｙミニキットを用いて全ＲＮＡをヒトＰＢＭＣから単離した（Ｑｉａｇｅｎ，Ｈｉｄｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）。
【０１７１】
全ＲＮＡを、１００ｐＭＴ７／Ｔ２４タグ標識オリゴ−ｄＴプライマー（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡで合成）を用いて７０℃で１０分間にわたり１０μｇの全ＲＮＡを変性させ、氷上で冷やすことでハイブリダイゼーションのために、全ＲＮＡを調製した。第１鎖ｃＤＮＡ合成を以下の緩衝液条件下でおこなった。すなわち、１×第１標準緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ．）、１０ｍＭＤＴＴ（ＧＩＢＣＯ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、５００μＭの各々のｄＮＴＰ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））、４００ユニットのＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔＲＴＩＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、および４０ユニットのＲＮアーゼインヒビター（Ａｍｂｉｏｎ，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）である。反応を４７℃で１時間進行させた。第２の鎖ｃＤＮＡは、以下の試薬を指示した最終濃度で追加することで合成した。すなわち、１×第２標準緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、追加２００μＭの各々のｄＮＴＰ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、４０単位のＥ．ｃｏｌｉＤＮＡポリメラーゼＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２単位のＥ．ｃｏｌｉＲＮａｓｅＨ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、および１０単位のＥｃｏｌｉＤＮＡリガーゼである。反応を１５．８℃で２時間にわたり進行させた。反応の最後の５分間で、６単位のＴ４ＤＮＡポリメラーゼ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）を添加した。
【０１７２】
結果として生ずる二重鎖ｃＤＮＡを以下のようにしてＢｉｏＭａｇカルボキシ末端粒子を用いて精製した。すなわち、０．２ｍｇのＢｉｏＭａｇ粒子（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．，ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ，ＰＡ）を０．５ＭＥＤＴＡで洗浄して平衡化し、０．５ＭＥＤＴＡ中に２２．２ｍｇ／ｍｌの濃度で再懸濁した。に重鎖ｃＤＮＡ反応を希釈して最終濃度を１０％ＰＥＧ／１．２５ＭＮａＣｌにし、さらにビーズ懸濁液を添加して最終濃度を０．６１４ｍｇ／ｍｌとした。反応を室温で１０分間インキュベートした。ｃＤＮＡ／ビーズ複合体を３００μｌの７０％エタノールで洗浄し、エタノールを除去し、試験管を空気乾燥させた。２０μｌの１０ｍＭＴｒｉｓアセテート、ｐＨ７．８を添加してｃＤＮＡを溶出させ、さらに２〜５分間インキュベートし、ＤＮＡ含有上清を取り除いた。
【０１７３】
１０μｌの精製二重鎖ＤＮＡをインビトロ転写（ＩＶＴ）溶液に添加した。この溶液は１ｘＩＶＴ緩衝液（Ａｍｂｉｏｎ，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）、５，０００ユニットのＴ７ＲＮＡポリメラーゼ（Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、３ｍＭＧＴＰ、１．５ｍＭＡＴＰ、１．２ＣＴＰ、および１．２ｍＭＵＴＰ（Ａｍｅｒｓｈａｍ／Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、０．４ｍＭの各々のビオ１６ＵＴＰ、ビオ１１ＣＴＰ（Ｅｎｚｏ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｆａｒｍｉｎｇｄａｌｅ，ＮＹ）、および８０ユニットのＲＮアーゼインヒビター（Ａｍｂｉｏｎ，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）を含む。反応を３７℃で１６時間、進行させた。標識ＲＮＡをＲＮｅａｓｙ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて精製した。ＲＮＡ収量を２６０ｎｍでの吸光度を測定することで定量化した。
【０１７４】
１２μｇのインビトロ転写産物を４０ｍＭＴｒｉｓアセテート、ｐＨ８．０、１００ｍＭ酢酸カリウム、および３０ｍＭ酢酸マグネシウム中、３５分間、９５℃で、フラグメント化した。フラグメント化し、かつ標識されたＲＮＡプローブを１×２−Ｎ−モルホリノエタン・スルホン酸（ＭＥＳ）緩衝液（ｐＨ６．５）、５０ｐＭＢｉｏ９４８（プローブ・アレイ上のランドマーク・フィーチャにハイブリダイズする対照ビオチン標識）（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）、１００μｇ／ｍｌニシン精子ＤＮＡ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、および１μｌ／μｇ標準曲線試薬（Ｇｅｎｅ  Ｌｏｇｉｃ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤより提供された専売試薬）の最終組成物で、ハイブリダイゼーション緩衝液により希釈した。このハイブリダイゼーション溶液を２つのガラスビーズ（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）で４５℃、一晩、プレハイブリダイズさせた。ハイブリダイゼーション溶液をきれいな試験管に移し、９５℃で１〜２分、加熱し、高速で２分間微小遠心し、不溶性のデブリをペレットにした。オリゴヌクレオチド・アレイ・カートリッジ（Ｍｕｒｉｎｅ  ４Ｋｖ２，Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ，Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ，ＣＡ）を、非ストリンジェントな洗浄液（０．９Ｍ  ＮａＣｌ，６０ｍＭリン酸ナトリウム、６ｍＭ  ＥＤＴＡ、および０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０）で事前に湿らせ、５〜１０分間、回転させながら−４５℃でインキュベートした。緩衝液をカートリッジから取り除き、アレイを１８０μｌのハイブリダイゼーション溶液、４５℃で、４０〜６０ｒｐｍで一晩回転させながら、ハイブリダイズさせた。一晩インキュベートした後、ハイブリダイゼーション溶液を取り除き、カートリッジに非ストリンジェント洗浄緩衝液で満たした。アレイ・カートリッジを、１０サイクルの２ミックス／サイクル非ストリンジェント洗浄緩衝液にもとづいて、２５℃で、流体ステーションを用いて洗浄し、さらに３サイクルの１５ミックス／サイクル・ストリンジェント洗浄緩衝液（１００ｍＭＭＥＳ，０．１ＭＮａ＋、０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０、および０．００５％消泡剤）で、洗浄した。プローブ・アレイを次に、１０分間、２５℃でＳＡＰＥ溶液（１００ｍＭＭＥＳ、１ＭＮａ＋、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．００５％消泡剤、２ｍｇ／ｍｌアセチル化ＢＳＡア（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、および１０μｇ／ｍｌＲフィコエリスリン・ストレプトアビジン（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ））で最初の染色をおこなった。最初の染色後、プローブ・アレイを、非ストリンジェント洗浄緩衝液、２５℃で、１０サイクルの４ミックス／サイクルで洗浄した。次に、プローブ・アレイを１０分間、２５℃で抗体溶液（１００ｍＭＭＥＳ、１ＭＮａ＋、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．００５％消泡剤、２ｍｇ／ｍｌアセチル化ＢＳＡア（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、１００μｇ／ｍｌヤギＩｇＧ（ＳＩＧＭＡ  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）および３μｇ／ｍｌビオチン化アンチ・ストレプトアビジン抗体（ヤギ）（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａ��ｏｒａｔｏｒｉｅｓ）で染色した。第２の染色後、プローブ・アレイを再び、ＳＡＰＥ溶液でさらに１０分間、２５℃で染色した。最後に、プローブ・アレイを１５サイクルの４ミックス・サイクルで非ストリンジェント洗浄緩衝液を用いて３０℃で洗浄した。
【０１７５】
アレイを、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ遺伝子チップ・スキャナ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ，Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ，ＣＡ）で走査した。スキャナは、走査共焦点顕微鏡を有し、励起源としてアルゴンイオン・レーザを使用した。発光はフォトマルチプライアー・チューブで５００ｎｍのバンド幅フィルター（フルオセイン０  または５６０  ロングパス・フィルタ（フィコエリスリン）によって検出した。
【０１７６】
ｍＲＮＡは、Ｍｕｒｉｎｅ７４Ｋ（ＭＵ７４Ｋ）チップ・セットで分析した。データをＧＥＮＥＣＨＩＰ４．０ソフトウェアを用いて削減した。各実験試料を二ファイル分析で時間一致対照と比較した。データを、１つのグループ内で「プレゼント（Ｐｒｅｓｅｎｔ）」と呼ばれる遺伝子についての基準によってフィルタリングし、「インクリージング（Ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ）」または「デクリージング（Ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇ）」と呼ばれる全ての遺伝子を取り除いた。
【０１７７】
３匹のマウスに対するデータを以下に示す（ＡＤ−ＧＩＬ−１９マウス４９、５１、および５２）。示したものは、Ａｄ−ＧＦＰ対照と比べて発現が変化した遺伝子であり、各動物について平均変化倍率を示している。Ａｄ−ＩＬ−２２処置度物の遺伝子発現で観察された変化は、急性期応答のＩＬ−２２による誘導と一致する。観察された変化はまた、処置した動物での炎症情愛を示すものでもある。
【０１７８】
【表３−１】
2007537132.tif 000009
【０１７９】
【表３−２】
2007537132.tif 000010
【０１８０】
【表３−３】
2007537132.tif 000011
【０１８１】
【表３−４】
2007537132.tif 000012
（実施例９：インビボ関節炎モデルでの抗ＩＬ−２２の効果）
コラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）マウス・モデルでの症状改善に対するＰ３／１モノクローナル抗体の能力を検討した。雄ＤＢＡ／１（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅ）マウスを全ての実験で用いた。抗体を予防的または治療的にＤＢＡマウスに投与した。最適治療計画（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｒｅｇｉｍｅｎ）では、疾患がマウスで連続２日間観察された場合に処置を開始した。
【０１８２】
関節炎の誘導は、牛ＩＩ型コラーゲン（Ｃｈｏｎｄｒｅｘ，Ｒｅｄｍｏｎｄ，ＷＡ）を用いておこなった。牛ＩＩ型コラーゲン（Ｃｈｏｎｄｒｅｘ，Ｒｅｄｍｏｎｄ，ＷＡ）を０．１Ｍ酢酸に溶解し、１ｍｇ／ｍｌ結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）（Ｈ３７ＲＡ株）を含む等量のＣＦＡ（Ｓｉｇｍａ）で乳化した。０日目、１００μｇの牛コラーゲンを尾部に皮下注射した。２１日目に、マウスの尾基部に対して、等量の不完全アジュバント（Ｓｉｇｍａ）を混合した０．１Ｍ酢酸に２００μｇの牛コラーゲンを含む溶液を皮下注射した。未処置の動物に対しては、同様の一連の注射をコラーゲン無しでおこなった。投薬の手順を図１に模式的に示す。
【０１８３】
少なくとも週に３回、疾患の進行についてマウスを観察した。個々の肢に対して、インデックスにもとづいて臨床スコアを割り当てた。すなわち、０＝正常、ｐ＝趾の先端にある局所的な紅斑によって特徴づけられる関節炎、１＝１〜２つの趾の脹れを伴う視認可能な紅斑。２＝顕著な紅斑（肉趾膨張および／または指膨張によって特徴づけられる）、３＝足首関節または手関節に達する広範囲の脹れ。４＝肢の使用の困難性または間接の硬直。したがって、任意のマウスに対する肢スコアの合計によって、最大全身スコアが１６になった。
【０１８４】
疾患の種々の段階で、動物を安楽死させ、組織を回収し、組織学のために足を１０％ホルマリンあるいは４％パラホルムアデヒド、ｐＨ７．４７に固定し、２０％ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）で脱灰し、インサイチュハイブリダイゼーションのためにパラフィンに包埋した。光学顕微鏡を使用して、関節炎の度合および範囲を特徴づけるために、５段階スコアリング法（０〜４）で足のスコアリングをおこなった。炎症に関連した他の変化、例えばパンヌス形成、滑膜の繊維性、関節軟骨エロシンおよび／または肋軟骨下の骨破壊に加えて、炎症浸潤を用いてスコアリングをおこなった。組織学的グレードを個々の足の読み取りを用いて測定した。すなわち、ＮＡＤ＝０または何ら異常を発見せず；  １＝わずかから中程度；２：軽度から中程度；３：過度、および４：重度。
【０１８５】
ＩＬ−２２抗体の治療的投与の効果を図２に示す。身体スコアを、時間の関数として示している。抗ＩＬ−２２抗体を投与されたマウスは、対照ヒトＩｇＧまたはＰＢＳを投与されたマウス（データ不図示）と比較して症状の著しい減少が見られた。
【０１８６】
ＩＬ−２２抗体を中和する予防投与の効果を、図３〜図５に示す。身体スコアは、抗ＩＬ−２２または対照抗体投与後に時間の関数として示されている。抗ＩＬ−２２を投与したマウスでは、対照ラットＩｇＧまたはＰＢＳを投与したマウス（データ不図示）と比較して症状の著しい減少がみられた。
【０１８７】
別個の予防レジメンを受けているマウスについても身体スコアの検討をおこなった。結果を時間の関数として図４に示す。対照抗体で処置されたマウスは、抗ＩＬ−２２で処置されたマウスよりも合計身体スコアの平均値が著しく高かった。抗ＩＬ−２２抗体を投与したマウスでは、対照ラットＩｇＧ１またはＰＢＳ投与マウス（データ不図示）と比較して症状の著しい減少が見られた。
【０１８８】
予防レジメンを受けているマウスの足の病勢悪化を図５に示す。３６日目でマウスを犠牲にし、足の疾患重症度を検討した。疾患なしに対応する０と最も重篤な疾患を表す４とによって０から４までの組織学的グレードを上記足に対して割り当てた。ＩＬ−２２抗体を注射されたラットでは、６０％を上回るものが組織学的グレードが「０」であり、一方約２０％のマウスで組織学的グレードが「１」であった。約１５％のマウスが組織グレード「２」を示し、約１０％のマウスが組織学的グレード「３」を示した。わずかな割合のマウスが組織学的グレード「４」を示した。対照抗体を注射されたマウスでは、約３０％が組織学的グレード「０」を示し、約５％のマウスが組織学的グレード「１」を示した。残りのマウスは、よりいっそう悪い病理学的グレードを示した。すなわち、約１８％が組織学的グレード「２」であり、一方２０％が病理学的グレード「３」であり、さらに残りのマウスが組織学的グレード「４」を示した。抗体ＩＬ−２２抗体を投与したマウスでは、対照ラットＩｇＧ１またはＰＢＳを投与したマウス（データ不図示）に比べて著しい症状の減少が見られた。
【０１８９】
これらの結果は、ＩＬ−２２抗体の予防的または治療的投与が動物系での関節炎の症状を著しく改善することを示している。
【０１９０】
（実施例１０：ＩＩＬ−２２転写産物のインサイチュハイブリダイゼーション）
関節炎マウスの肉趾の種々の細胞型でのＩＬ−２２およびＩＬ−２２レセプターの発現を測定した。抗センスＩＬ−２２およびＩＬ−２２マウス・レセプター・リボプローブを２つの別個のＰＣＲ産物を対応する転写産物から生成することによって作り出した。オリゴヌクレオチド５’−ＧＡＣＴＧＡＴＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＧＧＣＧＡＡＣＡＡＴＴＴＴＧＡＣＴＣＣＧＡＴＡＴＴＧＴＣＣＡＡＧ−３’（配列番号６）および  ５’−ＡＧＧＡＴＧＧＡＧＡＣＡＴＣＴＧＡＣＴＧＣＣＣＴＡＣＧ−３’（配列番号５）を用いて、ＩＬ−２２レセプター・センス・プローブについて生成し、５’−ＡＣＡＡＴＴＴＴＧＡＣＴＣＣＧＡＴＡＴＴＧＴＣＣＡＡＧ（配列番号７）および３’−ＧＡＣＴＧＡＴＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＧＧＣＧＡＡＧＧＡＴＧＧＡＧＡＣＡＴＣＴＧＡＣＴＧＣＣＣＴＡＣＧ−３’（配列番号８）を用いて、ＩＬ−２２レセプター・アンチセンス・プローブについて生成した。ＰＣＲ増幅後、Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼを用い、インビトロ転写でプローブを生成した。
【０１９１】
ＩＬ−２２配列のプローブを、以下の配列をプラスミドに組み込み、この配列をＴ７およびＳＰ６プロモーターの制御下に置くことで、センスおよびアンチセンス転写産物：
ＣＡＧＣＣＡＴＡＣＡＴＣＧＴＣＡＡＣＣＧＣＡＣＣＴＴＴＡＴＧＣＴＧＧＣＣＡＡＧＧＡＧＧＣＣＡＧＣＣＴＴＧＣＡＧＡＴＡＡＣＡＡＣＡＣＡＧＡＴＧＴＣＣＧＧＣＴＣＡＴＣＧＧＧＧＡＧＡＡＡＣＴＧＴＴＣＣＧＡＧＧＡＧＴＣＡＧＴＧＣＴＡＡＧＧＡＴＣＡＧＴＧＣＴＡＣＣＴＧＡＴＧＡＡＧＣＡＧＧＴＧＣＴＣＡＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＡＧＡＣＧＴＴＣＴＧＣＴＣＣＣＣＣＡＧＴＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＣＡ（配列番号９）
を生成した。
【０１９２】
Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼ結合部位をオリゴヌクレオチドに取り込み、センス・リボプローブについてはＰＣＲ産物の５’末端あるいはアンチセンス・リボプローブについてはＰＣＲ産物の３’末端に、Ｔ７結合部位を挿入した。製造元の記述にしたがってＤＩＧ・ＲＮＡ標識混合物（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用い、またＴ７ＲＮＡポリメラーゼ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を用いて、ジゴキシゲニン標識プローブの調製をおこなった。ＣＩＡマウス・モデルの肉趾にあるＩＬ−２２レセプターｍＲＮＡ陽性細胞は、マクロファージ、線維芽細胞、リンパ球の亜集団、活性化された骨芽細胞、滑膜細胞、および表皮であった。対照肉趾またはセンス・プローブでは陽性染色がみられなかった。ｍＩＬ−２２ｍＲＮＡ陽性細胞は、好中球、マクロファージ、線維芽細胞、および骨細胞であった。センス・プローブで処置した肉趾部分およびＩＬ−２２ｍＲＮＡで染色した対照マウスでは染色が見られなかった。インサイチュハイブリダイゼーションは、関節炎マウスの肉趾でのＩＬ−２２レセプターおよびサイトカインの存在を示した。
【０１９３】
（実施例１１：実施例１２〜２２の実験プロトコル）
（組換え体ＩＬ−２２、ＩＬ−２２ＲＥＣＤ、ＩＬ−１０Ｒ２ＥＣＤ、およびＩＬ−２２ＢＰ融合タンパク質）
ヒトＩＬ−２２（ＡＰＩＳＳＨＣＲＬＤ）の成熟末端に融合したＮ末端Ｈｉｓ／Ｆｌａｇタグ（ＧＳＧＨＨＨＨＨＨＧＳＧＤＹＫＤＤＤＤＫ（Ｔｅｒｐｅ，Ｋ．（２００３）Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ＆  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６０（５）：５２３−３３）をコードする哺乳類発現ベクターをチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞に形質移入した。メトトレキサートおよびサイトカインでさらに選別し、その後条件培地で精製し、これらのすべてを標準的方法でおこなった（Ｔｅｒｐｅ，Ｋ．（２００３）上掲；  Ｋａｕｆｍａｎ，Ｒ．Ｊ．（１９９０）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５：５３７−６６；  Ｋａｕｆｍａｎ，Ｒ．Ｊ．（１９９０）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５：４８７−５１１；  Ｈｏｃｈｕｌｉ，Ｅ．（１９８８）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６：１３２１−１３２５）。  ＥＬＩＳＡで使用するために、製造元（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）の推奨に従って、ＥＺ−Ｌｉｎｋ（商標）スルホＮＨＳビオチン・キットを用いて、ヒトＩＬ−２２をビオチニル化した。精製組換えマウスＩＬ−２２は、Ｎ末端ＨＩＳ／ＦＬＡＧタグ（ＧＳＧＨＨＨＨＨＨＧＤＹＫＤＤＤＤＫ）とマウスＩＬ−２２の成熟Ｎ末端（ＬＰＶＮＴＲＣＫＬ）との間の融合をコードする発現ベクターを用いて、同等の方法によって調製した。サイトカインの定量は、アミノ酸組成に由来する理論上の消衰係数を用いて、Ａ２８０吸光度によっておこなった。還元剤の存在または非存在下（データ不図示）で、ヒトおよびマウスＩＬ−２２を〜３０−４０ｋＤでＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で分離する。それは広範囲にグリコシル化される。すなわち、Ｎ−グリカナーゼで処置した場合、ＩＬ−２２が−１９ｋＤ、近傍またはその理論的分子量（データ不図示）に移動する。
【０１９４】
疎水性プロットで定義されるように、ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２の細胞外ドメインを、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインに対するフレキシブル結合リンカーを介してフレーム単位で融合した。ヒトＩＬ−２２ＲＥＣＤ哺乳類発現ベクターを構築し、該ベクターはヒトＩＬ−２２ＲＥＣＤ（ＴＬＰＤＲＴＷＴは  Ｃ  末端配列（Ｘｉｅ  Ｍ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７５（４０）：３１３３５−９；  Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６（４）：２７２５−３２）、ヒトＩＬ−１０Ｒ２ＥＣＤ（ＴＨＤＥＴＶＰＳはＣ末端配列（Ｌｕｔｆａｌｌａ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  １６（２）：３６６−７３））、またはリンカー（ＡＧＳＧＳＧＳＧ）に融合したヒトＩＬ−２２ＢＰ（ＥＥＲＣＶＥＩＰ  はＣ  末端配列（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊｌｍｍｕｎｏｌ  １６６（１２）：７０９０−５；  Ｋｏｔｅｎｋｏ，Ｓ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６６（１２）：７０９６−１０３；  Ｘｕ，Ｗ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９８（１７）：９５１１−６）、続いてヒトＩｇＧ１Ｆｃ（このドメインのＮ末端配列は、ＥＰＫＳＣＤＫＴからスタート）をコードしている。それらのＦｃ融合ホモ二量体の各々を含む調整培地を、標準的な方法論によって、安定なＣＨＯ系から調製した（Ｋａｕｆｍａｎ，Ｒ．Ｊ．（１９９０）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５：５３７−６６；  Ｋａｕｆｍａｎ，Ｒ．Ｊ．（１９９０）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５：４８７−５１１）。ＩＬ−２２Ｒ−ＦｃおよびＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃの両方を発現する調整培地を、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ融合発現ベクターを安定なＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ発現ＣＨＯ系に一時的に形質移入することによって、あるいはこれらの融合レセプターの同時増幅によって、作った。調整培地（ＣＭ）をすべてのＦｃ融合レセプターの供給源として用いた。
【０１９５】
ＣＭでの全Ｆｃ融合を抗ヒトＩｇＧサンドイッチＥＬＩＳＡで定量化した。この際、被覆抗体として、１μｇ／ｍｌのヤギ抗ヒトＩｇＧ（（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）を用い、また検出抗体として、１／１０，０００希釈ヤギ抗体ヒトＩｇＧＨＲＰ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）を用いた。さらに、無関係の精製Ｆｃ融合タンパク質を標準として用い、Ａ２８０での吸光度によって定量した。標準ＥＬＩＳＡでの詳細なプロトコルを以下に示す。
【０１９６】
Ｆｃ融合ホモ二量体とヘテロ二量体との同一性および組成をβメルカプトエタノールの存在または非存在下で評価した（図７Ａ）。この際、標準ＳＤＳアクリルアミドゲル電気泳動法を用い、１：５０００希釈のヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＨＲＰ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｎ，ＡＬ）、１μｇ／ｍｌウサギ抗ＩＬ−２２Ｒ（ＰｒｏＳｃｉ，Ｐｏｗａｙ，ＣＡ）、または０．２μｇ／ｍｌヤギ抗ｈＩＬ−１０Ｒ２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ；ＭＮ）を検出用の試薬として用いた。注意すべき点は、ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２抗体がともに各々のホモ二量体の両鎖とヘテロ二量体の１本の鎖とを検出することである。      
【０１９７】
ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃヘテロ二量体の特異的な検出のために、０．５μｇ／ｍｌウサギ抗ｈＩＬ−２２Ｒ（ＰｒｏＳｃｉ，Ｐｏｗａｙ，ＣＡ）を被覆抗体として、また０．５μｇ／ｍｌビオチン化ヤギ抗ｈＩＬ−１０Ｒ２（Ｒ＆Ｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を検出手段として用いることで、サンドイッチＥＬＩＳＡを確立した。
【０１９８】
（ＩＬ−２２抗体）
ＩＬ−２２に対するモノクローナル抗体を、マウスで、つづいてヒトのサイトカインで、最初にＬＯＵラット（Ｈａｒｌａｎ、Ｈａｒｌａｎ、ＭＡ）を免疫化することで生成した。ラット脾臓をマウス・ミエローマ細胞株Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３（ＡＴＣＣ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）と融合し、ハイブリドーマ細胞株を標準的技術を用いて生成した（Ｇｏｄｉｎｇ  Ｊ．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅｓ．３ｒｄ  ｅｄ．Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；  １９９６．ｐ．１４１−１８０）。１μｇ・ｍｌｈＩＬ−２２で被覆されたプレートを用い、１／５０００希釈ＨＲＰ結合ヤギ抗ラットＩｇＧ（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を検出手段として用いることで、抗ｈＩＬ−２２分泌系を最初にＥＬＩＳＡによって同定した。Ａｂ−０２およびＡｂ−０４は、それぞれ、既にＩＬ−２２抗体Ｐ３／３およびＰ３／２として、既に記載されている（上記実施例５を参照せよ）。標準的方法で、抗体を腹水から生成した。モル濃度に換算するために、１５０ｎｇ／ｍｌを１ｎＭ抗体と定義する。
【０１９９】
（ＩＬ−２２サイトカイン／レセプターＦｃ結合ＥＬＩＳＡ）
２つの標準的フォーマットを用いて、ＩＬ−２２とレセプターＦｃ融合との間の相互関係を調べた。図６Ａ、８Ａ〜８Ｂ、９Ａ〜９Ｂ、１０Ｂ〜１０Ｃ、および１１Ａ〜１１Ｃに示す結果をＥＬＩＳＡアッセイから得た。ＣＨＯ  ＣＭ由来のレセプターＦｃを、抗ｈＩｇＧコートを介して最初に固定化した。平底の９６穴ＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｓｔａｒ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）を、０．１Ｍ炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．６）中１μｇ／ｍｌの１００μｌヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）で一晩、４℃で被覆した。プレートを、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含む２００μｌのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ−Ｔ）で２回洗浄し、１００μｌの１％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）含有ＰＢＳ−Ｔで１時間ブロックし、３回洗浄した。１時間連続してインキュベーション（１００μｌ）した後、各々を３回の洗浄で分離し、固定濃度または段階的に希釈された所定のレセプター融合、固定濃度または段階的に希釈したビオチン化ＩＬ−２２（ビオ−ＩＬ−２２）、続いて１／１０，０００希釈のストレプトアビジン西洋ワサビ・ペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）を用いた。最終セットの洗浄後、１００μｌのＴＭＢマイクロウエル・ペルオキシダーゼ基質（ＢｉｏＦｘ、Ｏｗｉｎｇｓ  Ｍｉｌｌｓ、ＭＤ）を２０分間にわたり添加し、反応を１００μｌの２ＮＨ２ＳＯ４で停止させた。ペルオキシダーゼ産物の比色検出を４５０ｎｍでＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）マイクロプレート・リーダーによりおこなった。
【０２００】
レセプターＦｃとビオＩＬ−２２とがともに一定の濃度である上記フォーマットの特定のＥＬＩＳＡアッセイのために、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃを、ビオＩＬ−２２前またはビオＩＬ−２２とともに（図９Ａ）、あるいはビオＩＬ−２２の後（図９Ｂ）に、添加した。示されたレセプターＦｃおよびビオＩＬ−２２もまた一定の濃度である上記フォーマットの別のＥＬＩＳＡアッセイのために、抗体（図１０Ｂ〜１０Ｃ、１１Ｃ）またはＩＬ−２２ＢＰ（図１１Ａ〜１１Ｂ）を、ビオＩＬ−２２で３０分間にわたってプレインキュベーションした後に、種々の濃度で添加した。ＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ複合体に対するＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃの補充が直接検出されたＥＬＩＳＡアッセイ（データ不図示、図９Ａの実験設計）では、非ビオチン化ＩＬ−２２をＥＬＩＳＡに添加し、ポリクローナル・ヤギ抗ｈＩＬ−１０Ｒ２またはマウス・モノクローナル抗ｈＩＬ−１０Ｒ２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）のいずれかを検出手段として用いた。
【０２０１】
図６Ｂは、逆のフォーマットで実行されたＥＬＩＳＡアッセイの結果を示すもので、１００μｌの１μｇ／ｍｌビオチン化ＩＬ−２２をＲｅａｃｔｉ−Ｂｉｎｄ９６穴ストレプトアビジン被覆プレート（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）に１時間加え、洗浄し、さらにヤギ抗体ヒトＩｇＧ−ＨＲＰで検出した。図６Ａでは、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ（黒四角）またはＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ（白丸）のいずれかを発現するＣＨＯ細胞から調製培地（ＣＭ）中に５０ｎｇ／ｍｌの全Ｆｃが抗ヒトＩｇＧで被覆された穴（ウエル）に捕獲された。種々の濃度のビオチン化ＩＬ−２２（ビオＩＬ−２２）を次に上記ウエルに添加した。ストレプトアビジンＨＲＰを用いて、結合ビオＩＬ−２２を逐次測定した。図６Ｂでは、ビオＩＬ−２２（１μｇ／ｍｌ）がストレプトアビジン・プレートに捕獲された。ＣＨＯで希釈して種々の濃度のＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ（黒四角）またはＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ（白丸）にした。次に、ＣＭをウエルに添加した。続いて、結合レセプターＦｃをヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＨＲＰで測定した。
【０２０２】
（抗ＩＬ−２２抗体を用いたＳＴＡＴ３リン酸化の阻害）
ＨｅｐＧ２細胞（ＡＴＶＣＣ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を、４ｘ１０５細胞／ウエルで播種された６穴組織培養プレート（Ｃｏｍｉｎｇ、Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）を用い、１０％ウシ胎仔血清が添加されたダルベッコ修飾基本培地（ＤＭＥＭ）で培養した。２４時間後、２５分間にわたり５０ｎｇ／ｍｌヒトの有り無しでＩＬ−２２新鮮な培地を添加した。中和作用強度について抗体を試験した場合、サイトカインおよび抗体を室温で３０分間、プレインキュベートした。２００μｌ／ウエルの細胞溶解緩衝液（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）を添加することによって、細胞を溶解させた。細胞可溶化物に含まれる全タンパク質濃度をＢＣＡアッセイによって測定した（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）。１０μｇのタンパク質を４〜２０％ＳＤＳポリアクリルアミドゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）で分離し、続いて室温で終夜、ニトロセルロース膜（Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）上にブロッティングした。リン酸化ＳＴＡＴ３をｐ−ｓｔａｔ３Ｔｙｒ７０５抗体キット（（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）を用いて検出した。化学発光の発現に、製造元（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）の推奨に基づいてＥＣＬ検出システムを用いた。
【０２０３】
（実施例１２：ＩＬ−２２はＩＬ−２２Ｒに結合し、ＩＬ−１０Ｒ２に対する検出可能な親和性は持たない）
ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に対するＩＬ−２２結合を、ＥＬＩＳＡフォーマットを用いて評価した。最初のバージョンでは、レセプター−Ｆｃ融合タンパク質を、Ｆｃドメインを介して、抗ヒトＩｇＧ被覆プレート上に固定した。ビオチン化ＩＬ−２２を次に添加し、ストレプトアビジン−ＨＲＰを検出した。図６Ａは、ビオＩＬ−２２が固定化ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃに結合するけれどもＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃに対しては検出不可能であることを示している直線グラフである。逆のフォーマットでは、ビオＩＬ−２２を最初にストレプトアビジン被覆プレート上に固定した。レセプター−Ｆｃを次に添加し、ＨＲＰ結合抗ｈＩｇＧで検出した。図６Ｂに示すように、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃではなく可溶性ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃが固定化ビオＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃに結合する。ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃをこのアッセイ・フォーマットに対して、高濃度（３〜１０μｇ／ｍｌ、データ不図示）で添加した場合に、バックグラウンド（非特異的Ｆｃ融合）よりもわずかに高いシグナルが観察され、このことはＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃが固定化ビオＩＬ−２２に対してかなり低い結合力を持つことを示唆している。まとめると、ＥＬＩＳＡ実験の最初の段階は、ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間に相対的に強い相互作用があること示している。
【０２０４】
（実施例１３；ＩＬ−２２Ｒ−ＦｃおよびＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ二量体およびヘテロ二量体の調製および特徴づけ）
以下の実験は、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃが隣接している場合、ＩＬ−１０Ｒ２の細胞外ドメインがＩＬ−２２に結合するかどうかを評価するためにおこなわれた。増幅ＣＨＯ系からのＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃの分泌が貧弱である（〜５０〜１００ｎｇ／ｍｌ）であり、その一方でＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃがかなりよく分泌される（〜１０μｇ／ｍｌ）ことから、ＩＬ−１０Ｒ２−ＦｃがＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃの選択を促進させることができるかもしれないと考えられる。ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃを発現するＣＨＯ系は、一時的にＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ発現ベクターによって形質移入された。このプラスミドの導入は、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃの発現を２〜４倍増加させた。続いて、Ｆｃ融合レセプターの両方の鎖を同時発現させる安定な系が実質的に確立された。
【０２０５】
単量体のＩＬ−２２ＲＥＣＤ−ＦｃおよびＩＬ−１０Ｒ２ＥＣＤ−Ｆｃ融合がそれぞれ分子量〜６０ｋＤおよび〜８５ｋＤを持つことを測定した。両方のレセプターＦｃ融合またはいずれかを発現するＣＨＯ細胞由来の還元および非還元調整培地（ＣＭ）をＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で分離し、膜にブロッティングし、続いてヒトＩｇＧＦｃ、ＩＬ−２２Ｒ、またはＩＬ−１０Ｒ２のいずれかに対するポリクローナル抗体でプロービングした。より具体的には、図７Ａで、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ、または両方のレセプターＦｃを発現するＣＨＯ細胞由来の調整培地を８％ポリアクリルアミドゲル上で、還元（＋βＭＥ）および非還元（−βＭＥ）条件下で分離し、膜ブロッティングに移した。ウエスタンブロットを、抗ヒトＩｇＧ１、抗ｈＩＬ−２２Ｒ、または抗ｈＩＬ−１０Ｒ２抗体のいずれかを用いて実施した。抗ｈＩｇＧ検出のブロットについては、全体で４ｎｇのＦｃ融合を含むＣＭを各レーンに充填した。抗ＩＬ−２２Ｒおよび抗ＩＬ−１０Ｒ２抗体検出については、同時発現ＣＨＯ由来の全体で１６ｎｇのＦｃ融合を含むＣＭを用いた。図７Ｂでは、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ（黒四角）、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ（白丸）、またはそれら両方（黒三角）のいずれかを発現するＣＨＯ細胞由来の調整培地を、ウサギ抗ヒトＩＬ−２２Ｒ抗体で被覆されたＥＬＩＳＡプレートに添加した。２種類のホモ二量体からなる１：１混合物もまた対照（白三角）として添加した。結合レセプターの検出は、ビオチン化ヤギ抗ヒトＩＬ−１０Ｒ２抗体、続いてストレプトアビジン−ＨＲＰを用いておこなった。
【０２０６】
還元条件下（＋βＭＥ、図７Ａ）、ＩＬ−２２Ｒ、およびＩＬ１０Ｒ２−ＦｃＣＨＯ系は異なる分子量でヒトＦｃ融合タンパク質を分泌する。レセプター鎖特異的抗体による検出は、〜６０ｋＤ種がＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃであり、〜８５ｋＤ種がＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃであることを確証する。これら成熟レセプター融合タンパク質の両方とも理論的分子量は〜５１ｋＤである。ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃは、４つの潜在的Ｎ結合グリコシル化部位を持つもので、５つの潜在的Ｎ結合部位を持つＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃよりも、ＣＨＯ細胞を介したその継代の過程でグリコシル化の程度がより低いと予測される。ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃは、より大きな翻訳後修飾を持つと思われる。この分析は、還元条件下で、同時発現ＣＨＯ細胞が両方のＦｃ融合を分泌することも示す。抗ｈＩｇＧ検出パネルから派生するデータは、ＩＬ−１０Ｒ２−ＦｃがＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃよりも高レベルで発現されることを示唆している。
【０２０７】
両方のレセプターＦｃ融合を発現するＣＨＯ細胞は、優先的にＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃヘテロ二量体およびＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃホモ二量体を分泌する。これらのレセプターＦｃ融合は異なる分子量を持つことから、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（−βＭＥ、図７Ａ）によるＣＭの分析は、２つのホモ二量体間でゲル上に分離するレセプターＦｃヘテロ二量体の検出を可能にする。これらの条件下で、ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃヘテロ二量体とＩＬ−１ｏＲ２−Ｆｃホモ二量体とが同時発現ＣＨＯ細胞由来のＣＭ中で抗ｈＩｇＧによって検出された。ＩＬ−２２Ｒ抗体検出パネルは、非還元条件下で、同時発現ＣＨＯがＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃホモ二量体を分泌するけれども、実質的にヘテロ二量体よりも少ないことを示す。まとめると、図７Ａに示す結果は、ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ形質移入ＣＨＯが共有結合ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃヘテロ二量体とＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃホモ二量体と、かなり少ないＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃホモ二量体を分泌することを示す。
【０２０８】
ＣＨＯ細胞由来のＣＭでのヘテロ二量体の存在を、サンドイッチＥＬＩＳＡで確認した。この際、ヘテロ二量体の各鎖に特異的な抗体を用いた。ＩＬ−２２Ｒポリクローナル抗体で被覆されたウエルに調整培地を添加した後、結合タンパク質をビオチン化ＩＬ−１０Ｒ２ポリクローナル抗体で検出した。このＥＬＩＳＡフォーマットは、ＩＬ−２２ＲエピトープとＩＬ−１０Ｒ２エピトープとが安定的に結合している分子のみを検出する。ＩＬ−２２Ｒ−ＦｃまたはＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃのいずれかを発現しているＣＨＯ由来のＣＭ単独、またはこれらＣＭを一緒に混合したものは、このＥＬＩＳＡフォーマットではなんら検出可能なシグナルを与えなかった。シグナルは、ＩＬ−２２Ｒ−ＦｃおよびＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃを動じ発現したＣＨＯ細胞からのみ得られた。図７Ａのデータに沿って、この観察が示したことは、両方のＦｃ融合レセプターを発現しているＣＨＯ細胞がＩＬ−２２ＲＥＣＤおよびＩＬ−１０Ｒ２ＥＣＤＦｃ単量体鎖間での共有結合を含むヘテロ二量体を分泌することである。
【０２０９】
まとめると、図７Ａ〜７Ｂに示した結果は、レセプターＦｃ融合がホモ二量体およびヘテロ二量体としてＣＨＯ細胞から分泌されることである。ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ同時発現ＣＨＯ細胞は、ほとんどの場合、ヘテロ二量体とＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃホモ二量体とを分泌する。
【０２１０】
（実施例１４：ＩＬ−２２は隣接ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２レセプターＦｃ鎖に対する増強された結合を示す）
Ｆｃヘテロ二量体として分泌されたＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２のＥＣＤに対するＩＬ−２２結合を次に評価した。ＣＭ由来の一定濃度の全Ｆｃ融合タンパク質を最初に、Ｆｃドメインを介して、抗ヒトＩｇＧ被覆プレートに固定した。ビオＩＬ−２２の種々の濃度を検出手段として用いて、結合に対するサイトカインの能力を次に評価した（図８Ａ）。図６Ａにあるように、ＩＬ−２２Ｒ−ＦｃおよびＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃホモ二量体は、シグナルおよび検出不可能なシグナルをそれぞれ与える。しかし、最も効率のよいビオＩＬ−２２結合は、同時発現ＣＨＯ細胞のＣＭに由来する固定化レセプターＦｃによって得られた。すなわち、固定化ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃホモ二量体による比較可能なシグナルに対するよりも、８倍少ないビオＩＬ−２２が必要とされた。ＩＬ−１０Ｒ２Ｆｃ二量体成分のＩＬ−２２に対する結合がそれらの条件下では検出不可能であることから（図６Ａ、８Ａ）、同時発現ＣＨＯのＣＭ由来のＦｃタンパク質によるＩＬ−２２の増強された結合は、ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃヘテロ二量体成分によるものに違いない。この場合もやはり、非常に少ないＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃホモ二量体がそれらの同時発現ＣＨＯ細胞によって分泌される（図７Ａ〜７Ｂ）。ＩＬ−２２を結合するためのヘテロ二量体のより強い能力が、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃホモ二量体と比べて少ない固定化ヘテロ二量体が図８Ａの実験設計に用いられたという事実によって、強調される。一定濃度の全Ｆｃをウエルに添加したことから、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃホモ二量体ＣＭとは対照的に、ヘテロ二量体を含有するＣＭを他のＦｃ成分で希釈する。ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃヘテロ二量体は、最良の結合シグナルを与えることから、ＩＬ−１０Ｒ２のＥＣＤに対するＩＬ−２２結合の役割が示されると結論された。ＩＬ−１０Ｒ２ホモ二量体単独ではＩＬ−２２に結合できないことから、それらの結果はＩＬ−１０Ｒ２の結合ＩＬ−２２に対する影響がＩＬ−２２Ｒの存在を必要とすることも示している。
【０２１１】
ランダムに並べて置かれたＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２ＥＣＤもまた、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃホモ二量体よりも効率的にＩＬ−２２に結合することができる。図３Ｂの実験に関して、ＣＭの１：１混合物を調製し、これには等量のＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃホモ二量体とＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃホモ二量体もしくは無関係なＦｃホモ二量体のいずれかとが含まれる。Ｆｃ融合の混合物を、ヘテロ二量体を含有するＣＭと同様に、段階的に希釈した後、所定の全Ｆｃ濃度で、抗ヒトＩｇＧ被覆プレート上に固定化した。一定濃度のビオＩＬ−２２を検出手段として用いて、サイトカインの結合能力を次に評価した。図８Ｂの結果は、ＩＬ−２２Ｒ−ＦｃとＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃとのホモ二量体混合物がＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃと無関係のＦｃホモ二量体との混合物よりも、２〜３倍大きい効率でビオＩＬ−２２と結合する。この観察は、ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２レセプター鎖がＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃに対する共有結合を、このＥＬＩＳＡをベースとしたフォーマットでのその機能を促進させるためには必要としないことを示している。適当な物理的並置が２つのホモ二量体のランダム被覆の過程で一緒に生ずる場合、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃと無関係なＦｃホモ二量体との混合物と比較して、ビオチン化ＩＬ−２２の増強された結合が検出される。この増強されたシグナルは、全Ｆｃ融合が高濃度である際に、よりいっそう顕著であり、ＩＬ−２２ＲとＩＬ−ＩＯＲ２  ＥＣＤとが互いに隣接して並置される傾向がある。対照的に、ヘテロ二量体のレセプターＦｃ間の共有結合がそれらのレセプターのＥＣＤの濃度非依存型並置を与え、任意の濃度の全Ｆｃで最も強いシグナルとなる。まとめると、図８Ａ〜８Ｂに示す結果は、ＩＬ−２２ＲのＥＣＤがＩＬ−２２結合でのＩＬ−１０Ｒ２の役割を検出する上で必要とされる。ＩＬ−２２の増強された結合が、両ＥＣＤが存在する場合に検出される。
【０２１２】
（実施例１５：ＩＬ−１０Ｒ２の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）がＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒの細胞外ドメインとの間の初期相互作用の安定化をもたらす）
ＩＬ−１０Ｒ２のＩＬ−２２結合機能は、ＩＬ−２２Ｒの存在を必要とする（図８Ａ〜８Ｂ）。ＩＬ−２２サイトカイン・レセプター複合体の発現におけるＩＬ−１Ｒ２の一時的な役割をさらに評価するために、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃホモ二量体後にＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃホモ二量体を添加することで、ＥＬＩＳＡフォーマットを修飾した。そのことから、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃホモ二量体を添加する効果を、ビオＩＬ−２２の添加に先だって、同時に、あるいはその後に評価することができた。より具体的に、図９Ａでは、ＣＭ由来のＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ５０ｎｇ／ｍｌを抗ヒトＩｇＧ被覆ウエル上に捕獲した。次に、ウエルを１０μｇ／ｍｌヒトＩｇＧでブロックした。次に、ビオＩＬ−２０（３０ｎｇ／ｍｌ）をウエルに添加した。その後、ストレプトアビジン−ＨＲＰ（破線）を用いて結合ビオＩＬ−２２を検出した。種々の濃度のＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃとビオチン化ＩＬ−２２（３０ｎｇ／ｍｌ）とも一緒に添加し、結合ビオＩＬ−２２を測定した（黒ひし型）。ＣＭ由来の種々の濃度のＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃもまた、最初にインキュベートし、プレートを洗った後、３０ｎｇ／ｍｌビオチン化ＩＬ−２２を続いてウエルに添加して、結合ビオＩＬ−２２を検出した（白ひし型）。ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃを１０μｇ／ｍｌｈＩｇＧに段階希釈した。図９Ｂでは、ＣＭ由来の５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃを抗ヒトＩｇＧ被覆ウエル上に捕獲した。次に、ビオＩＬ−２２（３０ｎｇ／ｍｌ）をウエルに添加した。次に、結合ビオＩＬ−２２もまた、ＰＢＳ−１％ＢＳＡ（破線）または種々の濃度のＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ（黒丸）のいずれかでさらに１時間インキュベートした後に検出した。
【０２１３】
図９Ａの実験に関して、一定量のＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ融合ホモ二量体をそのＦｃを介して抗ヒトＩｇＧ被覆プレート上に固定化した。次に、ヒトＩｇＧ（１００μｇ／ｍｌ）を添加して、プレート上のいまだ利用可能な抗ヒトＩｇＧ抗体を支配またはブロックした。一定濃度のビオＩＬ−２２がシグナル（＝１．２５）を与え、ＩＬ−２２ＲのＥＣＤとの相互作用を介してプレートに結合した。ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃホモ二量体（ｈＩｇＧに段階希釈した）をビオＩＬ−２２の添加に先立って添加する場合、プレートに実質的に結合したビオＩＬ−２２の量になんら影響を及ぼさない。これらの観察は、ＩＬ−１０Ｒ２−ＦｃおよびＩＬ−２２Ｒ−ＦｃのＥＣＤが、ＩＬ−２２の増強によって実質的に検出される互いの安定的な結合に対して、単独では作用することができないことを示唆している。むしろ、そのサイトカイン結合増強に変化をもたらすために、ＩＬ−１０Ｒ２−ＦｃはＩＬ−２２Ｒと同様に、ＩＬ−２２の存在を必要とする。図９Ａの実験では、ＩＬ−１０Ｒ２−ＦｃにビオＩＬ−２２が添加される場合、ここで、ＩＬ−２２Ｒに結合するビオＩＬ−２２の量がＩＬ−１０Ｒ２容量依存的に増加する。また、ビオＩＬ−２２の添加前に固定化ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃとともにインキュベートした場合、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃの添加が増強をもたらすことができない。
【０２１４】
サイトカイン結合に対するＩＬ−１０Ｒ２の効果の必要条件であるＩＬ−２２（図９Ａ）およびＩＬ−２２Ｒ（図８）の両方を検討することで、ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間の相互作用をこれらの必要条件が構成するかどうかが直接決定された。図９Ｂの実験に関して、一定量のＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ融合ホモ二量体をそのＦｃを介して、抗ヒトＩｇＧ被覆プレート上に固定化した。一定量のビオＩＬ−２２の添加は、シグナル（〜２．５）を与え、ＩＬ−２２ＲのＥＣＤとのその相互作用を介してプレートに結合した。ビオＩＬ−２２シグナルを直ちに検出する代わりに、引き続く洗浄およびさらなるインキュベーションの後にも検出した。最初にビオＩＬ−２２をウエルでインキュベートし、続いて１％ＢＳＡをウエルでインキュベートした場合、０．６（すなわち１．５／２．５）のオリジナル／シグナルを検出し、１％ＢＳＡによるさらなるインキュベーションの過程で、いくつかのビオＩＬ−２２が固定化ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃホモ二量体から放出された。対照的に、最初にビオＩＬ−２２、続いて濃度を増加させたＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃホモ二量体をウエルに添加する場合、より強いビオＩＬ−２２シグナルが検出され、ビオＩＬ−２２インキュベーション後直ちに得られるシグナルに近づく。これらの結果は、ＩＬ−２２結合でのＩＬ−１０Ｒ２の機能がＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの相互作用を必要とする。ウエルへのＩＬ−１０Ｒ２の添加は、ＩＬ−２２インキュベーション後、ＩＬ−２２Ｒ単独よりもＩＬ−２２についてより遅いオフ・レート（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）を有する複合体の形成を誘導する。
【０２１５】
まとめると、図６、８、および９に示す結果は、ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２レセプター鎖のＥＣＤによるＩＬ−２２の結合に関する一時的なモデルを示唆している。ＩＬ−２２は最初にＩＬ−２２Ｒに結合する。次に、ＩＬ−１０Ｒ２はＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒに結合し、さらにＩＬ−２２をサイトカイン・レセプター複合体に安定化させる（図１２にまとめをしめす）。
【０２１６】
（実施例１６：ＩＬ−２２の２つの異なる面がＩＬ−２２ＲとＩＬ−１０Ｒ２ＥＣＤとによる各々の相互作用にとって必要とされる）
２つのラットモノクローナル抗体（Ａｂ−０２およびＡｂ−０４）を生成し、これらの抗体がヒトＩＬ−２２に結合するのを示した（実施例５）。これらの抗体を、ＩＬ−２２依存型シグナル伝達をブロックする能力について試験した。ＩＬ−２２は、ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２レセプター鎖（例えば、ＨＥＰＧ２）の両方を発現する細胞株でのＳＴＡＴ３転写因子のリン酸化をもたらす（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９７（１８）：１０１４４−９）。これらの抗体がＩＬ−２２を中和する場合、より少ないＰ−ＳＴＡＴ３が細胞溶解物に検出されなければならない。図１０Ａの実験に関して、段階希釈した抗体を細胞培地中の一定濃度のＩＬ−２２をプレインキュベートした。この培地は抗体と複合体を形成したＩＬ−２２を含むもので、この培地をＨＥＰＧ２細胞に適用した。続いて、細胞溶解物を調製し、ゲル電気泳動でタンパク質を分離し、膜に移し、この膜をＰ−ＳＴＡＴ３に特異的な抗体とインキュベートした。より具体的には、ヒトＩＬ−２２（５０ｎｇ／ｍｌ）を３７℃で３０分間、種々の濃度のＡｂ−０２またはＡｂ−０４と細胞培地中でプレインキュベートした後、この培地をＨｅｐＧ２細胞に加え、細胞を２５分間インキュベートした。次に、細胞溶解物を、抗ホスホＳＴＡＴ３抗体を用いてウエスタンブロットで分析した。ＩＬ−２２単独（＋）またはＩＬ−２２無し（−）でインキュベートした細胞を正および負の対照としてそれぞれ取り込んだ。これらの抗体はともに、細胞上でのＩＬ−２２の活性を抗体の濃度を高めることでブロックすることができ、Ｐ−ＳＴＡＴ３の検出が低下する。しかし、これらの抗体は効力が異なり、Ａｂ−０２およびＡｂ−０４のＮＤ５０は、それぞれ〜３０ｎＭおよび〜０．４ｎＭである。まとめると、図１０Ａに示す結果は、細胞にシグナル伝達するこのサイトカインの能力にとって重要なＩＬ−２２上の面に両方の抗体が結合することを示す。
【０２１７】
もし各々の抗体が、レセプター鎖との相互作用を阻害することでＩＬ−２２を中和するならば、Ａｂ−０２およびＡｂ−０４はサイトカイン・レセプター相互作用に必要なＩＬ−２２エピトープを定義する。抗体を、サイトカイン・レセプター結合ＩＬＩＳＡで評価することで、これらの抗体がＩＬ−２２結合にどのように影響するかを判断した。図１０Ｂの実験に関しては、一定量のＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃホモ二量体をそのＦｃを介して抗ヒトＩｇＧ被覆プレート上に固定化した。一定量のビオＩＬ−２２によってシグナル（〜２．２５）が与えられ、ＩＬ−２２ＲのＥＣＤとの相互作用を介してプレートに結合した。これら２つの抗体とＩＬ−２２とのプレインキュベーションは、引き続いてＩＬ−２２Ｒに結合するＩＬ−２２の能力に対して定量的に異なる影響を持つ。Ａｂ−０４は、ＩＬ−２２ＲへのＩＬ−２２結合をブロックし（ＮＤ５０＝０．７ｎＭ）、一方Ａｂ−０２はＩＬ−２２Ｒに対するＩＬ−２２の結合を増強する（ＥＣ５０＝０．１ｎＭ）。このＥＬＩＳＡでのこれらの抗体に関する明確な表現型は、かおれらが異なるＩＬ−２２エピトープを定義することを示している。Ａｂ−０４によって定義されるエピトープは、ＩＬ−２２ＲのＥＣＤによるＩＬ−２２の認識に必要とされ、あるいはＩＬ−２２Ｒによる隣接ＩＬ−２２エピトープの認識に立体的に緩衝する抗体にとって必要とされる。
【０２１８】
これらの抗体はまた、ＩＬ−２２Ｒホモ二量体よりはむしろ、ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃヘテロ二量体が抗ヒトＩｇＧ被覆ウエルに固定化された場合に、ＩＬ−２２結合に対するそれらの抗体の効果について評価された（図１０Ｃ）。図１０Ｃの実験では、一定量のビオＩＬ−２２を続けて添加することで、シグナル（〜２．５）が与えられ、ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２の両方による相互作用を介してプレートに結合した。この場合、両方の抗体がヘテロ二量体Ｆｃ融合レセプターに対するＩＬ−２２の結合を阻害する。また、これらの抗体は、定量的に異なる。Ａｂ−０４は、ＮＤ５０＝０．２ｎＭで、ほぼ完全に結合を阻害する。一方、Ａｂ−０２は、ＮＤ５０≧１０ｎＭで、結合を部分的に阻害する。われわれは、Ａｂ−０４がほぼ完全に、ＩＬ−２２Ｒ（図５Ｂ）およびヘテロ二量体（図１０Ｃ）ＥＬＩＳＡの両方で、ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間の相互作用をブロックする。ヘテロ二量体ＥＬＩＳＡで相対的に低いＡｂ−０２の効力は、推定上、ＩＬ−２２に対するその相対的に弱い親和性の反映である。Ａｂ−０２がＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間の相互作用をブロックしないことから（図１０Ｂ）、図１０Ｃに示す結果が、ＩＬ−２２結合のＩＬ−１０Ｒ２による安定化にとって必要、またはＩＬ−１０Ｒ２による隣接ＩＬ２２エピトープの認識に立体的に緩衝するこのエピトープに対するＡｂ−０２の結合にとって必要とされる別々のエピトープを定義することを、示唆している。
【０２１９】
ポリクローナル抗体ＩＬ−１０Ｒ２もまた、ＩＬ−２２ＲおよびレセプターＦｃヘテロ二量体の両方に対するＩＬ−２２の結合を抑制する能力について、評価した。先のＥＬＩＳＡでは、ＩＬ−１０Ｒが存在しない場合、増大した抗体に一定量のビオＩＬ−２２が添加され、ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒヘテロ二量体との間の相互作用に対して、なんら顕著な影響を与えなかった（図１０Ｂ）。対照的に、固定化ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃを含むＥＬＩＳＡに対して、ＩＬ−２２により増大したＩＬ−１０Ｒ２抗体が添加されると、この抗体がヘテロ二量体に対するＩＬ−２２の結合をブロックした（ＮＤ５０＝３ｎＭ、図１０Ｃ）。この影響の完全性は、種々のＩＬ−１０Ｒ２エピトープに対するこの抗体の結合もまた、おそらく立体的な妨害、ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間の相互作用によって、妨げられる。
【０２２０】
要約すると、図１０Ａ−１０Ｃで示される結果は、Ａｂ−０２とＡｂ−０４とがそのレセプター鎖でＩＬ−２２相互作用にとって重要であるＩＬ−２２の上で各々異なったエピトープを定義することを示唆する。Ａｂ−０４は、ＩＬ−２２Ｒによって最初になされるＩＬ−２２の認識に必要なエピトープを定義する（図１２）。抗体−０２は、サイトカイン・レセプター複合体の安定化におけるＩＬ−１０Ｒ２の役割にとって必要なエピトープを定義する（図１２）。ラット抗マウスＩＬ−２２モノクローナルによる比較可能なデータは、ｍＩＬ−２２上での類似のエピトープを定義する（データ不図示）。さらなるＩＬ−１０Ｒ２ポリクローナル抗体によるＩＬ−２２結合の抑制は、サイトカイン結合に対するＩＬ−１０Ｒ２の重要性を実証する。
【０２２１】
（実施例１７：ＩＬ−２２ＢＰはＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間の相互作用をブロックする）
ＩＬ−２２結合タンパク質（ＩＬ−２２ＢＰ）は、ＩＬ−２２Ｒの細胞外ドメインに対する相同性が低いＩＬ−２２に対する可溶性「レセプター」である。それは、ＩＬ−２２によって媒介される形質導入を中和する（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  ｂｎｍｕｎｏｌ  １６６（１２）：７０９０−５；  Ｋｏｔｅｎｋｏ，Ｓ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６６（１２）：７０９６−１０３；  Ｘｕ，Ｗ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９８（１７）：９５１１−６；  Ｗｅｉ  Ｃ−Ｃ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｇｅｎｅｓ  ＆  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ４：２０４−２１１１７）。ＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃ融合を分泌するＣＨＯ細胞由来の調整培地を、サイトカイン・レセプター結合ＥＬＩＳＡに添加して、この天然アンタゴニストがそのレセプター鎖とのＩＬ−２２の相互作用をどのようにブロックするかを決定する。図１１Ａおよび１１Ｂの実験に関して、１０Ｒ２−Ｆｃヘテロ二量体を、それぞれ、そのＦｃを介して抗ヒトＩｇＧ被覆プレート上に固定化した。一定濃度のビオＩＬ−２２によってシグナルが与えられ、固定化レセプター鎖との相互作用を介してプレートに結合する。増大したＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃに一定濃度のＩＬ−２２が添加されると、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃがほぼ完全に、ＩＬ−２２Ｒ（ＮＤ５０＝４ｎＭ、図１１Ａ）およびヘテロ二量体（ＮＤ５０＝２ｎＭ、図６Ｂ）の両方に対するＩＬ−２２の結合をブロックした。このことは、ＩＬ−２２ｒによるそれの認識にとって必要とされるＩＬ−２２のエピトープをブロックすることで、結合を抑制すること、示唆している。これらの観察は、Ａｂ−０４で得られたものに類似している。
【０２２２】
ＩＬ−２２ＢＰ、Ａｂ−０４、およびＡｂ−０２がＩＬ−２２上の異なる、あるいは重なるエピトープに結合するかどうかを判断するために、結合ＥＬＩＳＡを用いた。ここで、ＩＬ−２２Ｒ−ＦｃをそのＦｃを介して、抗ヒトＩｇＧ被覆プレート上に固定化した（図１１Ｃ）。一定濃度のビオＩＬ−２２によってシグナルが与えられ、ＩＬ−２２ＢＰとの相互作用を介してプレートに結合する。増大したＡｂ−０４またはＡｂ−０２に対しても、一定濃度のＩＬ−２２を添加した。Ａｂ−０４は、ＩＬ−３３とＩＬ−２２ＢＰとの間の相互作用を完全にブロックし（ＮＤ５０＝０．０５ｎＭ）、これら２つのインヒビターが同一または重複したＩＬ−２２エピトープを共有することが示された。対照的に、Ａｂ−０２はＩＬ−２２ＢＰのＩＬ−２２による認識を部分的かつ弱くブロックし（ＮＤ５０＝  １００  ｎＭ）、Ａｂ０２とＩＬ２２ＢＰとがＩＬ−２２上に異なってはいるが重なっているエピトープを持つことが示された。
【０２２３】
まとめると、図１１に示した結果は、ＩＬ−２２ＢＰおよびＡｂ−０４が、ＩＬ−２２Ｒに対する結合にとって重要であるＩＬ−２２上の類似のエピトープを共有することを示している。Ａｂ−０２によって定義されるＩＬ−２２エピトープが識別される。
【０２２４】
（実施例１８：ＩＬ−２２は逐次的にＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１ＯＲ２のＥＣＤと相互作用する）
ビオチン化、Ｎ末端ＨＩＳ／ＦＬＡＧタグ標識ヒトＩＬ−２２サイトカインおよびＩＬ−２２ＲＥＣＤおよびＩＬ−１０ＲＥＣＤ−Ｆｃ融合を、ＥＬＩＳＡをベースとしたフォーマットで用いて、ＩＬ−２２がどのようにそのレセプター鎖に妨害するかを検討した。図１２の模式的モデルにまとめたように、ＩＬ−２２は、ＩＬ−２２ＲのＥＣＤと最初に結合することが可能である。次に、ＩＬ−２２／ＩＬ−２２ＲＥＣＤは、ＩＬ−１０Ｒ２のＥＣＤに妨害して、ＩＬ−２２に対する高い親和性を持つサイトカイン・レセプター複合体を形成する。この複合体に対するＩＬ−１ＯＲ２ＥＣＤの安定した補充が直接示されていない一方で、以下の知見はこのモデルを支持する。
【０２２５】
ＩＬ−２２と個々のレセプター・サブユニットとの相互作用を調べ、ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの結合が容易に検出し得るという知見を得た（図６Ａおよび図６Ｂで、それぞれＥＤ５０＝  ２０  ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−２２およびＥＤ５０  ＝  ６ｎｇ／ｍｌ  ＥＬ−２２Ｒ−Ｆｃ）。対照的に、固定化ＩＬ−２２と可溶性ＩＬ−１０Ｒ２との間には弱い結合力のみが検出され、このことは高濃度のＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃを必要とした（３〜１０μｇ／ｍｌ；データ不図示）。これらの結果は、ＬＯｇｓｄｏｎ，Ｎ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（後述）による最近の研究と矛盾せず、単量体ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間の相互作用がナノモル範囲（Ｋｅｑ〜１５ｎＭ）で検出され、一方ＩＬ−２２とＩＯＬ−１０Ｒ２との間の相互作用がミリモル範囲（Ｋｅｑ〜１ｍＭ）であった（Ｌｏｇｓｄｏｎ，Ｎ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ  ２２（１１）：１０９９−１１２）。
【０２２６】
理論に束縛されることなく、出願人はＩＬ−１０Ｒ２のＥＣＤがその後、ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒの細胞外ドメインとの相互作用によって定まるエピトープに対する親和性に基づいて、最初のＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−２２ＲＥＣＤ複合体と結合する。ＩＬ−１０Ｒ２ＥＣＤの一時的な関与（ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ）は、サイトカインをレセプター複合体野中に安定化させ、効果的なシグナル伝達をもたらす（図１２）。固定化ＩＬ−２２ＲＥＬＩＳＡでビオチン化ＩＬ−２２に対して可溶性ＩＬ−１０Ｒ２Ｆｃの先行、併用（図９Ａ）、または逐次添加（図９Ｂ）が、ＩＬ−２２結合に対するＩＬ−１０Ｒ２の効果が先行するＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ相互作用に依存することを示した（図９）。使用した系では、増強されたＩＬ−２２結合をもたらすために、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃは最初にＩＬ−２２（図６）またはＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ（図９Ａ）のいずれにも結合することができない。これらの知見は、Ｌｏｎｇｓｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）（上掲）の親和性測定と一致するもので、溶液相ＩＬ−１０Ｒ２に対する固定化ＩＬ−２２親和性単独が〜１ｍＭ（Ｋｑ）であり、一方で全体的に溶液相ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２に対する親和性が２０倍以上（〜４５μＭ）である。
【０２２７】
このＥＬＩＳＡ系でのＩＬ−１０Ｒ２サブユニットとＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ複合体との安定な関与（ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ）は、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体を用いて、直接検出することができなかった。これらの抗ｈＩＬ−１０Ｒ２試薬の両方が、１００μｇ／ｍｌヒトＩｇＧが存在しても、またＩＬ−２２ＲまたはＩＬ−２２の添加とは無関係に、ＥＬＩＳＡプレートに対するＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃの明確な非特異的結合を検出した。この高いバックグラウンドは、ＥＬＩＳＡプレートに対するＩＬ−１０Ｒ２のＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒに依存した結合に由来する小さなシグナルをマスクする可能性がある。しかし、注意すべきことは、このＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃの非特異的結合が、サイトカインが逐次添加され、おそらく不十分なＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃが、ｈＩｇＧがアッセイに加えられることから、ＩＬ−２２ＲＥＣＤに対してサイトカインが逐次添加された場合に、ビオＩＬ−２２に由来するシグナルを増強することはない（図９Ａ）．
ヘテロ二量体のコンテクストでのＩＬ−１０Ｒ２に対するＩＬ−２２Ｒの共有結合性の並置は、本明細書中で使用される系で、ＩＬ−２２結合の最適な検出を与える（図８Ａ）。
実質的に、一旦サイトカインがアッセイに加えられるならば、この共有結合性の結合はＩＬ−１０Ｒ２ＥＣＤがＩＬ−２２／ＩＬ−２２ＲＥＣＤ複合体の近傍にあるという可能性を増加させる。これらのヘテロ二量体は、細胞膜の範囲内でＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１ＯＲ２レセプター・サブユニットの間の潜在的な前結合（ｐｒｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）を人工的に模倣するものであってもよい。単細胞ＦＲＥＴ系（Ｋｒａｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ＆  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  １（１０）：８０５−１５によって開発）の研究は、された完全機能的ＩＦＮ−γＲ１およびＩＦＮ−γＲ２レセプター鎖の間の前結合がＣ末端ＧＦＰおよびＢＦＰ融合を介して検出し得ることを示している。この系で、ＩＦＮ−γの結合によって、またサイトカイン・レセプター複合体の推定オリゴマー化によって、ＦＲＥＴシグナルが減少することから、キナーゼがレセプター鎖をリン酸化し、下流のシグナル・カスケードを増幅するにつれ、細胞内ドメインが分離することが示唆される。１つのモデルで、一時的なＩＬ−２２サイトカイン・レセプター相互作用が本明細書に記載されたＥＬＩＳＡ系モデルで研究され、この相互作用は、細胞膜内で、他のＩＩ型サイトカイン・レセプターと同様に、前結合ＩＬ−２２レセプター鎖のオリゴマー化にとって必要な相互作用である。
【０２２８】
（実施例１９：ＩＬ−２２は別々のＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２結合面を有する）
ラットＩＬ−２２抗体、Ａｂ−０２、およびＡｂ−０４は、サイトカイン・レセプター複合体の提案された一時的アセンブリにとって、またそれに続くシグナル伝達にとって必要とされるＩＬ−２２エピトープ上の潜在的結合部位を評価するために有用なツールであることが証明された（図１２）。これらの抗体の作用効果に関する研究によって、ＩＬ−２２アンタゴニストの２つのタイプを特徴づけることが可能になる。最初のタイプは、Ａｂ−０４およびｈＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃによって例示され、ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間の初期相互作用をブロックする（図１０Ｂおよび１２）。インヒビターの第２のタイプは、Ａｂ−０２によって例示され、ＩＬ−１０Ｒ２ＥＣＤによってＩＬ−２２／ＩＬ−２２ＲＥＣＤの逐次認識を阻害する（図１０Ｃおよび１２）。これらの抗体はまた、ＩＬ−２２によるシグナル伝達もブロックする（図１０Ａ）。
【０２２９】
ＩＬ−２２抗体によって定義されるエピトープが受容体結合部位に重なるかどうか、あるいは抗体の結合部位が立体的にレセプター鎖でのサイトカイン認識に妨害するかどうかにかかわりなく、抗体のこれら３つのタイプは、ＩＬ−２２がＩＬ−２２とＩＬ−１ＯＲ２のために異なった受容体結合部位を持つことを確証する。ここに報告した抗体の特徴に焦点を当てると、Ａｂ−０４は、ＩＬ−２２ＲによってＩＬ−２２の認識を妨げるＩＬ−２２エピトープに結合し、このことはＡｂ−０２の場合には当てはならない。ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの結合は、Ａｂ−０２によってはブロックされない。実際、Ａｂ−０２は、固定化ＩＬ−２２Ｒに対するＩＬ−２２の結合を増大させる（図５Ｂ）。このことが、このサイトカインがＩＬ−２２ＲのＥＣＤと相互作用し、該相互作用によってＩＬ−２２に生じた立体配座的変化をＡｂ−０２が認識することによって生ずるものであると、信じられている。Ａｂ−０２がサイトカイン・アセンブリの最初のステップをブロックしない一方で、第２のステップをブロックすることが可能である（例えば、ＩＬ−１０Ｒ２のＥＣＤによるＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒの認識）。したがって、Ａｂ−０４およびＡｂ−０２が、ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２によるそれぞれ異なる結合部位の認識をブロックすると結論される。ＩＬ−２２、ＩＬ−２２ＢＰに対する天然のアンタゴニストおよび結合タンパク質は、Ａｂ−０４としての類似の特徴を持ち、ＩＬ−２２ＲによるＩＬ−２２の認識に妨害する（図１１Ａ）。固定化ＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃに対するＩＬ−２２の結合に強く妨害するＡｂ−０４の能力は、さらに、Ａｂ−０４とＩＬ−２２ＢＰがＡｂ−０４によって定義されたものとは異なるＩＬ−２２上の類似のエピトープを共有するという結論を支持する。
【０２３０】
まとめると、本明細書に示した結果は、ＩＬ−２２が一時的なメカニズムで、ＩＬ−２２がそのレセプター鎖に妨害することを示唆している。最初に、ＩＬ−２２はＩＬ−２２ＲのＥＣＤと結合し、Ａｂ−０４およびＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃによって例示されるアンタゴニストがこの相互作用を妨げる。第２に、ＩＬ−１０Ｒ２のＥＣＤは、ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間の先の相互作用によって定まる異なる結合部位に、結合する（図１２）。
【０２３１】
（実施例２０：ラット抗ヒトＩＬ−２２抗体を用いたｐＳＴＡＴルシフェラーゼ・アッセイでのＩＬ２２活性の阻害）
（実験プロトコル：）
ｐＳＴＡＴ−ＴＡ−ルシフェラーゼ・ベクターを以下のように構築した。ＳＴＡＴ応答成分の５つのコピー（ＲＮ  Ｐｅａｒｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）ＰＮＡＳ  ９０：４３１４−４３１８）を、商業的供給源（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｃａｔ．Ｎｏ．：ＰＴ３６０６−５）から得たｐＴＡ−Ｌｕｃベクターの中にクローニングした。
【０２３２】
ルシフェラーゼ活性は、以下のｐＳＴＡＴルシフェラーゼ・アッセイを用いて検出した。第１日目、ＨｅｐＧ２細胞を完全にトリプシン化し、５ｘ１０６細胞／Ｐ１００の密度で、Ｐ１００ディッシュ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に分けた。２日目では、細胞に対して、Ｐ１００プレート１枚あたり以下の条件で、形質移入をおこなった。すなわち、溶液１：２０μｇＳＴＡＴ−ＴＡ−ＬｕｃＤＮＡ＋０．５ｍｌ無血清培地（ＧｉｂｃｏのＯｐｔｉ−ＭＥＭ）；および溶液２：６０μｌのＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎ２０００（Ｇｉｂｃｏ）＋０／５ｍｌ無血清培地（ＧｉｂｃｏのＯｐｔｉ−ＭＥＭ）。混合物を室温で２０分間静置させた。ＨｅｐＧ２細胞由来の培地を除去し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で１回洗った。９ｍｌ／ｐ１００の無血清培地（ＤＭＥ＋ＰＳＧ＋ＨＥＰＥＳ）をＰ１００に添加した。ＤＮＡ／Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎ２０００混合物（溶液１＋溶液２）を滴下して細胞に添加した。混合物をやさしく攪拌してインキュベータにもどした。３日目、細胞をトリプシン処理して９６穴細胞培養用平底プレート、１つの９６穴プレート／ｐ１００（１００μｌ／ウエル）に播種した。４日目、一連の希釈抗体を３０ｎｇ／ｍｌのｈｕＩＬ−２２を含むＤＭＥ＋ＰＳＧ＋１０％ＦＢＳで、３７℃、３０分間、プレインキュベートした。１００μｌの抗体：サイトカイン混合物を次に、培地を取り除いた後、細胞培養プレートに添加した。細胞を３７℃で６時間インキュベートした。培地を除去し、９６穴プレートに対して１×ＲＬＢ緩衝液（ＰｒｏｍｅｇａＥ３９７１）を５０μｌ／ウエル添加し、均一になるまで混合した。ルシフェラーゼ・アッセイのために、４０μｌのライセートを化学発光用９６穴アッセイ・プレート（ＰａｃｋａｒｄまたはＷａｌｌａｃの透明９６穴プレート）に移した。１００μｌのルシフェラーゼ・アッセイ試薬（ＰｒｏｍｅｇａＥ１４８３）を添加した。発光の定量をＬｕｍｉｎｏｍｅｔｅｒ（Ｗａｌｌａｘ  Ｍｉｃｒｏ  Ｂｅｔａ  ＴｒｉＬｕｘ  シンチレーション・カウンタ）によっておこなった。
【０２３３】
この実施例では、ラット抗ヒトＩＬ−２２抗体、Ａｂ−０２、およびＡｂ−０４を用いて、Ｆｃに融合したヒトＩＬ２２結合タンパク質の融合コンストラクト（ｈｕｌＬ２２ＢＰ−ｈｕＦｃ）と比較して、ｐＳＴＡＴルシフェラーゼ・アッセイでのＩＬ−２２活性の阻害を説明する。図１３は、ラット抗ヒトＩＬ−２２モノクローナル抗体、Ａｂ−０２およびＡｂ−０４を用いたＩＬ−２２活性の阻害を示すグラフである。培地中で一定濃度のＩＬ−２２を種々の濃度のＡｂ−２（黒丸）またはＡｂ−０４（黒三角）あるいは対照抗体（−）とプレインキュベートし、次にｐＳＴＡＴ−ＴＡ−Ｌｕベクターによって一時的に形質移入させたＨｅｐＧ２に添加した。６時間後、細胞を溶解させ、等量の細胞溶解物（ライセート）にルシフェラーゼ基質を添加した。照度計を用いてシグナルを測定した。ＩＬ−２２とともにインキュベートした（破線）あるいはインキュベートしない（点線）細胞を正および負の対照として、それぞれインキュベートした。Ａｂ−０２に対するＥＤ５０は、約１０ｎＭであった。Ａｂ−０４に対するＥＤ５０は約０．３ｎＭであった。
【０２３４】
図１４は、ラット抗ヒトＩＬ−２２モノクローナル抗体、Ａｂ−０４またはＩＬ−２２ＢＰ−ＦｃによるＩＬ−２２活性の阻害を示すグラフである。一定濃度のＩＬ−２２を、細胞培地中で種々の濃度のＡｂ−０４（黒三角）またはＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃ（白四角）とプレインキュベートし、ｐＳＴＡＴ−ＴＡ−Ｌｕｃベクターによって一時的に形質移入したＨｅｐＧ２細胞に添加した。照度計を用いてシグナルの検出をおこなった。ＩＬ−２２とともにインキュベートした（破線）あるいはインキュベートしない（点線）細胞を正および負の対照として、それぞれインキュベートした。ＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃに対するＥＤ５０は、約０．４ｎＭであった。
【０２３５】
（実施例２１：ラット抗ヒトＩＬ−２２抗体を用いたＢａＦ３増幅アッセイでのＩＬ２２活性の阻害）
（実験的プロトコル：）
完全長ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２をコードするＤＮＡフラグメントをＧＦＰ−ＲＶ（緑色蛍光タンパク質リポーターを有するレトロウイルスベクター）およびＹＦＰ−ＲＶ（黄色蛍光タンパク質を有するレトロウイルスベクター）に、それぞれクローン化した。ＢａＦ３細胞を、ＩＬ−１０Ｒ２−ＹＦＰ−ｒＶによって形質導入し、ＦＡＣＳにより選別した。ＩＬ−１０Ｒ２陽性ＢａＦ３細胞を、ＩＬ−２２Ｒ−ＧＦＰ  ＲＶでさらに形質導入し、ＦＡＣＳによって選別した。ＩＬ−ＩＯＲ２／ＩＬ−２２Ｒ二重陽性ＢａＦ３細胞を、以下に示すように、ＢａＦ３増殖アッセイで用いた。
【０２３６】
ＢＡＦ３細胞を洗浄した。１０５／ｍｌの細胞懸濁液を、細胞培養プレート中で、ＲＰＭＩ１６４０＋ＰＳＧ＋１０％ＦＢＳかつ５０μｌ／ウエルの等分割量となるように調製した（ＶＷＲ＃６２４０２−９２９）。段階希釈抗体を１．５ｎｇ／ｍｌヒトＩＬ−２２含有ＲＰＭ１６４０＋ＰＳＧ＋１０％ＦＢＳで３７℃、３０分間、プレインキュベートした。次に、混合物を５０μｌ／ウエルで細胞培養プレートに加えた。細胞を３７℃、５％ＣＯ２で、加湿恒温器（インキュベータ）中で４８〜７２時間、インキュベートした。増殖を評価するために、培養プレートをインキュベータから出して室温まで冷やした。約１００μｌ／ウエルの再構築Ｃｅｌｌ−ＴｉｒｅｒＧｌｏ試薬を添加した。プレートをオービタル・シェーカーで２分間、振とうさせることで、細胞の完全なライセートを確実にした。蛍光は、Ｔｒｉｌｕｘ（Ｗａｌｌａｘ  Ｍｉｃｒｏ  Ｂｅｔａ  ＴｒｉＬｕｘ  シンチレーション・カウンタ）を用いて１秒／ウエルで読み取った。
【０２３７】
この実施例は、ラット抗ヒトＩＬ−２２抗体、Ａｂ−０２およびＡｂ−０４を用いて、ＢａＦ３増幅でのＩＬ−２２活性の阻害を説明する（図１５）。培地中で一定濃度のＩＬ−２２を種々の濃度のＡｂ−２（黒丸）またはＡｂ−０４（黒三角）あるいは対照抗体（−）とプレインキュベートし、次にＩＬ−２２ＲおよびＩＬ１０Ｒ２レセプターを発現するＢａＤ３細胞に添加した。４８〜７２時間後、細胞増殖を、Ｃｅｌｌ−ＴｉｒｅｒＧｌｏ試薬で検出した。シグナルは照度器を用いて検出した。Ａｂ−０２およびＡｂ−０４に対するＥＤ５０は、それぞれ約４０ｎＭおよび０．２Ｍであった。
【０２３８】
（実施例２２：ＢＩＡコアによりＩＬ−２２に結合するラットＡｂ−０２、０４、ＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃ、ＩＬ−２２Ｒ、およびＩＬ−２２ＲＩＬ−１０Ｒ２の反応速度分析）
（実験的プロトコル）
バイオセンサー表面を調製するために、ヤギ抗ヒトＩｇＧ親和性精製（ＫＰＬ０１−１０−２０）；Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ａ（Ｐｉｅｒｃｅ２１１８４）、ヤギ抗ラットＩｇＧまたは直接、試験タンパク質を、研究グレードのカルボキシメチル・デキストラン・チップ（ＣＭ５）上に、アミン・カップリングを用いて、固定化した。表面をＥＤＣ／ＮＨＳで活性化させた。捕獲抗体を酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５）で５０μｇ／ｍｌの濃度で注射し、Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ａを酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．０）で５０μｇ／ｍｌの濃度で注射し、あるいは試験タンパク質を直接、酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）で０．０１〜１μｇ／ｍｌの濃度で注射した。固定化は、ウィザード・ツールを用いておこなった。この際、抗体ヒトまたは抗ラットＩｇｆＧに対しては１０，０００共鳴単位（ＲＵ）、Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ａに対しては３０００（ＲＵ）、さらに直接固定化試験タンパク質に対しては５０〜１００（ＲＵ）を目標値とした。残留活性化基を１．０Ｍエタノール（ｐＨ８．０）でブロックした。対照として、第１のフローセルを参照面として、バルク屈折率、マトリックス効果、および非特異的結合の修正に用い、第２，第３、および第４のフローセルを捕捉分子によって被覆した。
【０２３９】
反応速度分析のために、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃレセプター複合体、またはＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃタンパク質を抗ヒトＩｇＧ抗体またはＰｒｏｔｅｉｎ−Ａ表面に捕獲した。ラット抗体を、４００ｎｇ／ｍｌ溶液の６０μｌを注射することで、抗ラットＩｇＧ抗体表面上に捕獲した。基線とＦｃ融合タンパク質注射の完了後約９０秒の点との間で、正味の差を取り、結合したリガンドの量を提示した。３００、１５０、７５、５０、２５、１２．５、６．５、および０ｎＭの濃度でＩＬ−２２の溶液を１分間あたり３０μｌの流量で、３分間にわたり注射を三重反復でおこない、時間の関数としての結合物質の量をセンサーグラムとして記録した。解離相をＨＢＳ／ＥＰ緩衝液で１０分間、同一流速でモニターし、続いて０．１％ＴＦＡを５μｌ注射し、グリシンｐＨ１．５を５μｌ注射することで、完全に活性化された捕獲面を再生した。反応速度実験全てをＨＢＳ／ＥＰ緩衝液中、２２．５℃でおこなった。ブランクおよび緩衝液効果を、二重に参照（ｄｏｕｂｌｅ  ｒｅｆｅｒｅｎｃｉｎｇ）を用いて各センサーグラムから差し引いた。
【０２４０】
反応速度・データの分析は、１：１モデルに適用したＢＩＡ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ３．０．２を用いておこなった。見かけの解離（Ｋｄ）および結合（Ｋａ）速度定数を大域解析を用いてセンサーグラムの適当な領域から計算した。レセプター、抗体、およびＩＬ−２２の間の適当な領域の親和定数を以下の式：ＫＤ＝Ｋｄ／Ｋａによって、カイネティク速度定数から計算した。
【０２４１】
ＩＬ−２２に結合するラット抗体の親和性を、ラット抗体の異なるプレゼンテーションを用いて、ＢＩＡｃｏｒｅで試験し、直接、ラット抗体をＢＩＡコア上に、あるいは抗ラットＩｇＧ抗体によってＢＩＡコア・チップ上にラット抗体を捕獲する。次に、異なる濃度のＩＬ−２２をチップに注射し、続いて緩衝液を注射した。相互作用の親和性定数は、ＢＩＡ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  を用いて分析した。異なる実験から類似のデータが得られた。
【０２４２】
ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ、ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃレセプター複合体とＩＬ−２２に結合したＩＬ−２２Ｂ−Ｆｃとを、上記レセプターＦｃ融合タンパク質を含む調整培地を用いてＢｉＡｃｏｒｅで試験した。レセプターＦｃ融合タンパク質を抗ヒトＩｇＧ抗体でＢＩＡｃｏｒｅのチップ上に捕獲した。次に、異なる濃度のＩＬ−２２をチップに注射し、続いて緩衝液を注射した。ＢＩＡ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅを用いて、相互作用の親和性定数を分析した。類似のデータが異なる実験から得られた。
【０２４３】
【表４】
2007537132.tif 000013
（ハイブリドーマ細胞株の寄託）
Ａｂ−０２およびＡｂ−０４を産生するハイブリドーマ細胞株を、ブダペスト条約にもとづき、２００３年６月５日付で、原寄託としてＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ，Ｕ．Ｓ．Ａ．２０１１０−２２０９）に寄託し、それぞれＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５２５４およびＰＴＡ−５２５５が割り当てられた。寄託材料の公共での利用および入手に対する全ての制限は、３７  Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．８０８（ｂ）で規定された特定の要求を除いて、特許の付与によって最終的に取り除かれる。なお、寄託の期間については３７  Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．８０６に応ずる。
【０２４４】
（等価物）
当業者は、ほんの単調な実験しか使用しないこと、また本明細書中で記載される発明の特定の実施形態に対する多くの等価物があることを理解するか、もしくは確認することが可能である。そのような等価物は以下の特許請求の範囲に包含される。
【図面の簡単な説明】
【０２４５】
【図１】図１は、インビボマウス関節炎モデルに対するＩＬ−２２抗体の効果を分析するために用いられる実験的プロトコルを示す模式図である。
【図２】図２は、治療処置計画を用いて関節炎マウスをＩＬ−２２抗体または対照で処理した後の身体スコアを示すグラフである。
【図３】図３は、予防処置計画を用いて関節炎マウスをＩＬ−２２抗体または対照で処理した後の身体スコアを示すグラフである。
【図４】図４は、重症関節炎マウスをＩＬ−２２抗体または対照によって処置した後の身体スコアを示すグラフである。
【図５】図５は、ＩＬ−２２抗体または対照でフォローする所定の組織化学的等級を示す前足の相対的割合を示すグラフである。
【図６】図６Ａおよび６Ｂは、ＩＬ−２２とＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２との間の相互作用を直線で表したグラフである。図６Ａは、固定化ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃに対してビオＩＬ−２２が結合するけれどもＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃに対する結合は検出可能ではないことを示す直線グラフである。逆結合実験の結果は、図６Ｂにグラフ表示してある。可溶性ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃは、固定化ビオＩＬ−２２に結合するけれども、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃは結合しない。これらの結果は、ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間に相対的に強い相互作用がある一方で、ＩＬ−１０Ｒ２−ＦｃはＩＬ−２２に対してわずかな結合活性があるにすぎない。
【図７】図７Ａおよび７Ｂは、ＣＨＯ調整培地でのレセプターＦｃ融合の特徴を示す。図７Ａは、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ、もしくは両方のレセプターＦｃのいずれかを発現するＣＨＯ細胞の調整培地が還元（＋βＭＥ）条件下および非還元（−βＭＥ）条件下の両方でＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で分離したことを示すウエスタンブロットのパネルである。ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルをメンブランにブロッティングし、これを次にヒトＩｇＧＦｃ、ＩＬ−２２Ｒ、またはＩＬ−１０Ｒ２のいずれかに対するポリクローナル抗体でプロービングした。還元条件（＋βＭＥ、図７Ａ）では、ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ１０Ｒ２−ＦｃＣＨＯ系がヒトＦｃ融合タンパク質を分泌し、分子量〜６０ｋＤ種の場合はＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃであり、一方分子量〜８５ｋＤ種の場合はＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃであった。図７Ｂは、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ（黒四角）、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ（白丸）、または両方（黒三角）のいずれかを発現するＣＨＯ細胞の調整培地を用いてＥＬＩＳＡから得られた結果を示す直線グラフである。ＥＬＩＳＡプレートをウサギ抗ヒトＩＬ−２２Ｒ抗体で被覆した。２種類のホモ二量体の１：１混合物も対照（白三角）として加えた。結合レセプターの検出は、ビオチン化ヤギ抗ヒトＩＬ−１０Ｒ２抗体を用い、続いてストレプトアビジンＨＲＰによっておこなった。図７Ａおよび７Ｂに示された結果は、レセプターＦｃ融合がホモ二量体およびヘテロ二量体としてＣＨＯ細胞から分泌されることを示している。ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ共発現ＣＨＯ細胞は、多くの場合、ヘテロ二量体とＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃホモ二量体とを分泌する。
【図８】図８Ａおよび８Ｂは、Ｆｃ融合ヘテロ二量体として、またはランダム並列ホモ二量体として、ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２の両方とのＩＬ−２２の相互作用を直線で表したグラフである。図８Ａでは、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ（黒四角）、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ（白丸）、またはＩＬ−２２Ｒ−ＦｃおよびＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃの両方（黒三角）由来の全Ｆｃの５０ｎｇ／ｍｌを抗ヒトＩｇＧ被覆ウエル上に捕獲した。次に、このウエルに種々の濃度のビオＩＬ−２２を添加した。その後、ストレプトアビジン−ＨＲＰを用いて、結合ビオＩＬ−２２を検出した。図８Ｂでは、種々の濃度の以下の全Ｆｃを抗ヒトＩｇＧ被覆ウエル上に、ＩＬ−２２Ｒ−ＦｃＣＭと無関係なＦｃタンパク質との１：１混合物（黒四角）、ＩＬ−２２Ｒ−ＦｃＣＭとＩＬ−１０Ｒ２−ＦｃＣＭとの１：１混合物（白三角）、もしくは共発現細胞由来のＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ／ＩＬ−１０Ｒ２−ＦｃＣＭと対照Ｆｃタンパク質との１：１混合物（黒三角）から、捕獲した。次に、ビオＩＬ−２２（３０ｎｇ／ｍｌ）をウエルに添加した。その後、ストレプトアビジン−ＨＲＰを用いて、結合ビオＩＬ−２２を検出した。図８Ａおよび８Ｂに示す結果は、ＩＬ−２２結合でのＩＬ−１０Ｒ２の役割を検出するためにＩＬ−２２ＲのＥＣＤが必要であることを示している。両ＥＣＤが存在する場合にＩＬ−２２の結合増大が検出される。
【図９】図９Ａおよび９Ｂは、ＩＬ−１０Ｒ２とＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒとの間の相互作用を直線で表したグラフである。ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃホモ二量体添加の効果を、ビオＩＬ−２２の添加前または添加後のいずれかに評価した。図９Ａは、抗ヒトＩｇＧ被覆ウエル上に捕獲されたＣＭ由来のＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃを用いたＥＬＩＳＡから得た結果を示す直線グラフである。次に、またその後も、ストレプトアビジンＨＲＰ（破線）を用いてビオＩＬ−２２の検出をおこなった。種々の濃度のＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃおよびビオチン化ＩＬ−２２もまた一緒に添加し、結合ビオＩＬ−２２を検出した（黒ひし型）。ＣＭ由来の種々の濃度のＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃも最初に添加し、次にビオＩＬ−２２をウエルに添加して結合ビオＩＬ−２２を検出した（白ひし型）。図９Ｂでは、ＣＭ由来の５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃを抗ヒトＩｇＧ被覆ウエル上に捕獲した。次に、ビオＩＬ−２２をウエルに添加した。その後直ちに、ストレプトアビジンＨＲＰを用いて結合ビオＩＬ−２２を検出した（実線）。結合ビオＩＬ−２２の検出を、ＰＢＳ−１％ＢＳＡ（破線）または種々の濃度のＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ（黒丸）のいずれかでさらに１時間インキュベートした後もおこなった。本明細書中に示す結果は、ＩＬ−１０Ｒ２に対する結合がそのＩＬ−２２結合増強での役割に先立ってＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間の相互作用を必要とすることを示している。
【図１０】図１０Ａ〜１０Ｃは、ラット・モノクローナル抗ヒトＩＬ−２２抗体（Ａｂ−０２もしくはＡｂ−０４）によるＩＬ−２２活性の阻害を示す。図１０Ａでは、段階希釈した抗体を細胞培地中で一定濃度のＩＬ−２２とともにプレインキュベートした。次に、この培地（抗体と複合体を形成したＩＬ−２２を含む）をＨＥＰＧ２細胞に適用した。続いて、細胞溶解物（ライセート）を調製し、タンパク質をゲル電気泳動で分離してブロッティングし、さらにＰ−ＳＴＡＴ３特異的抗体でプロービングした。ＩＬ−２２単独（＋）もしくはＩＬ−２２無し（−）でインキュベートした細胞を、それぞれ陽性および陰性対照として含んだ。これらの抗体の両方とも、細胞上でのＩＬ−２２の活性を阻害することができ、すなわち抗体の濃度が高くなると、Ｐ−ｓＴＡＴ２の検出が低下する。図１０Ｂでは、ＣＭ由来の５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃを抗ヒトＩｇＧ被覆ウエル上に捕獲した。次に、ビオチン化ＩＬ−２２（３０ｎｇ／ｍｌ）を単独（破線）で、または種々の濃度のＡｂ−０２（黒丸）、Ａｂ−０４（黒三角）、抗ＩＬ−１０Ｒ２（＋）、あるいは対照抗体（−）と３０分間にわたってプレインキュベートした後、固定化ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃを有するウエルに添加した。続いて、ストレプトアビジンＨＲＰを用いて、結合ビオチン化ＩＬ−２２を検出した。（Ｃ）ＩＬ−２２Ｒ−ＦｃおよびＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃの両方を発現するＣＨＯ細胞由来のＣＭでの全Ｆｃの５０ｎｇ／ｍｌを抗ヒトＩｇＧ被覆ウエルでインキュベートした。ビオチン化ＩＬ−２２（５ｎｇ／ｍｌ）を単独（破線）で、または種々の濃度のＡｂ−０２（黒丸）、Ａｂ−０４（黒三角）、抗ＩＬ−１０Ｒ２（＋）、あるいは対照抗体（−）と３０分間にわたってプレインキュベートした後、固定化ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃを有するウエルに添加した。続いて、ストレプトアビジンＨＲＰを用いて、結合ビオチン化ＩＬ−２２を検出した。これらの結果は、Ａｂ−０２およびＡｂ−０４の両方がＩＬ−２２活性を中和することを示している。Ａｂ−０４は、ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間の相互作用を阻害し、Ａｂ−０２はＩＬ−２２とＩＬ−１０Ｒ２との間の相互作用を阻害する。
【図１１】図１１Ａ〜１１Ｃは、ＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃを用いたＩＬ−２２活性の阻害を示す。図１１Ａでは、ＣＭ由来の５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃを抗ヒトＩｇＧ被覆ウエル上に捕獲した。次に、ビオチン化ＩＬ−２２（３０ｎｇ／ｍｌ）を単独（破線）で、または種々の濃度のＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃ（  ）と３０分間にわたってプレインキュベートした後、固定化ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃを有するウエルに添加した。続いて、ストレプトアビジンＨＲＰを用いて、結合ビオチン化ＩＬ−２２を検出した。バックグラウンドを点線で示す。図１１Ｂでは、ＩＬ−２２Ｒ−ＦｃおよびＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃの両方を発現するＣＨＯ細胞由来のＣＭでの全Ｆｃの５０ｎｇ／ｍｌを抗ヒトＩｇＧ被覆ウエルでインキュベートした。ビオチン化ＩＬ−２２（５ｎｇ／ｍｌ）を単独（破線）で、または種々の濃度のＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃ（  ）と３０分間にわたってプレインキュベートした後、固定化ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃを有するウエルに添加した。続いて、ストレプトアビジンＨＲＰを用いて、結合ビオチン化ＩＬ−２２を検出した。図１１Ｃは、ＣＭでのＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃの１５ｎｇ／ｍｌを抗ヒトＩｇＧ被覆ウエルでインキュベートしたものである。ビオチン化ＩＬ−２２（１ｎｇ／ｍｌ）を単独でプレインキュベート（波線）または種々の濃度のＡｂ−０２（黒丸）、またはＡｂ−０４（黒三角）、または対照ラット抗体（−）で３０分間、続いて固定化ＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃのウエルに添加した。ストレプトアビジンＨＲＰで、結合ビオチン化ＩＬ−２２を続いて検出した。図１１Ａおよび図１１Ｃは、ＩＬ−２２ＢＰがＡｂ−０４と類似した様式でＩＬ−２２活性を阻害すること、またＡｂ−０２が区別可能であることを示している。
【図１２】図１２は、ＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２レセプター複合体からなるアセンブリを示す模式図である。ＩＬ−２２のエピトープに結合するＡｂ−０４によって示される抗体では、その結合がＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間の相互作用の阻害をもたらす。Ａｂ−０４は、ＩＬ−２２結合タンパク質（ＩＬ−２２ＢＰ）と同様のレベルまでＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間の相互作用をブロックすると考えられる。ＩＬ−２２のエピトープに結合するＡｂ−０２によって表される抗体では、その結合がＩＬ−２２とＩＬ−１０Ｒ２との間の相互作用の阻害をもたらす。Ａｂ−０２はＩＬ−２２／ＩＬ−２２ＲとＩＬ−１０Ｒ２との複合体の形成を軽減もしくは阻害する。
【図１３】図１３は、ラット抗ヒトＩＬ−２２モノクローナル抗体によるＩＬ−２２活性の阻害を示すグラフである。一定濃度のＩＬ−２２を、細胞培地中で種々の濃度のＡｂ−０２（黒丸）もしくはＡｂ−０４（黒三角）または対照抗体（−）のいずれかとプレインキュベートした後、ｐＳＴＡＴ−ＴＡ−Ｌｕｃベクターを過渡的に形質移入したＨｅｐＧ２細胞に添加した。
【図１４】図１４は、ラット抗ヒトＩＬ−２２モノクローナル抗体とＩＬ−２２ＢＰ−ＦｃとによるＩＬ−２２活性の抑制を示すグラフである。一定濃度のＩＬ−２２を、細胞培地中で種々の濃度のＡｂ−０４（黒三角）またはＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃ（白四角）のいずれかとプレインキュベートした後、ｐＳＴＡＴ−ＴＡ−Ｌｕｃベクターを過渡的に形質移入したＨｅｐＧ２細胞に添加した。
【図１５】図１５は、ラット抗ヒトＩＬ−２２モノクローナル抗体によるＩＬ−２２活性の阻害を示すグラフである。一定濃度のＩＬ−２２を、細胞培地中で種々の濃度のＡｂ−０２（黒丸）もしくはＡｂ−０４（黒三角）または対照抗体（−）のいずれかとプレインキュベートした後、ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２レセプターの両方を発現するＢａＦ３細胞に添加した。
【図１】
2007537132.tif 000014
【図２】
2007537132.tif 000015
【図３】
2007537132.tif 000016
【図４】
2007537132.tif 000017
【図５】
2007537132.tif 000018
【図６】
2007537132.tif 000019
【図７】
2007537132.tif 000020
【図８】
2007537132.tif 000021
【図９】
2007537132.tif 000022
【図１０】
2007537132.tif 000023
【図１１】
2007537132.tif 000024
【図１２】
2007537132.tif 000025
【図１３】
2007537132.tif 000026
【図１４】
2007537132.tif 000027
【図１５】
2007537132.tif 000028
【配列表】
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【誤訳訂正書】
【提出日】平成19年10月19日(2007.10.19)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって、該抗体またはそのフラグメントは、ＩＬ−２２レセプターサブユニット（ＩＬ−２２Ｒ）に対するＩＬ−２２の結合を軽減する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって、該抗体またはそのフラグメントは、インターロイキン−１０レセプター２サブユニット（ＩＬ−１０Ｒ２）に対するＩＬ−２２とＩＬ−２２レセプターサブユニット（ＩＬ−２２Ｒ）との複合体の結合を軽減する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３】
インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）に特異的に結合し、該ＩＬ−２２に対する二次抗体の結合を競合阻害する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって、該二次抗体は、ＰＴＡ−５２５４およびＰＴＡ−５２５５から選択されるハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体である、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４】
１０Ｅ−９またはそれより高い親和性の親和定数（Ｋｄ）を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項５】
約５ｎＭ〜２００ｐＭまたはそれ以上の範囲内のＥＤ５０でＨＥＰＧ２でのＳＴＡＴリン酸化またはＢａＦ３細胞の増殖を中和する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項６】
約１０Ｅ４〜１０Ｅ６１／Ｍｓの範囲内の反応速度でＩＬ２２と結合し、約１０Ｅ−３〜１０−６Ｅ１／ｓの範囲の解離反応速度を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
【請求項７】
前記ＩＬ−２２が、配列番号２のアミノ酸３４〜１７９に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有し、Ｓｔａｔ−３タンパク質のリン酸化を誘導することができる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
【請求項８】
前記ＩＬ−２２が、配列番号２のアミノ酸３４〜１７９を有する、請求項４に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項９】
前記ＩＬ−２２、ＩＬ−２２Ｒ、およびＩＬ−１０Ｒ２が、ヒト起源である、請求項２に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項１０】
前記ＩＬ−２２および前記ＩＬ−２２Ｒが、ヒト起源のものである、請求項１に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項１１】
ヒト化、ＣＤＲ移植またはヒト抗体である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
【請求項１２】
ＰＴＡ−５２５４およびＰＴＡ−５２５５から選択されるハイブリドーマによって産生される、モノクローナル抗体。
【請求項１３】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメントを含有する、薬学的組成物。
【請求項１４】
サイトカインインヒビター、成長因子インヒビター、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝インヒビター、酵素インヒビター、細胞毒性剤、および細胞増殖抑制剤からなる群から選択される、別の治療薬をさらに含有する、請求項１３に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
前記治療剤が、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ−１２アンタゴニスト、ＩＬ−１５アンタゴニスト、ＩＬ−１７アンタゴニスト、ＩＬ−１８アンタゴニスト、ＩＬ−２１Ｒアンタゴニスト、Ｔ細胞減少剤、Ｂ細胞減少剤、メトトレキサート、レフルノミド、シロリムス（ラパマイシン）、またはそのアナログ、Ｃｏｘ−２インヒビター、ｃＰＬＡ２インヒビター、ＮＳＡＩＤ、およびｐ３８インヒビターからなる群から選択される、請求項１４に記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
ＩＬ−２２と、ＩＬ−２２レセプター複合体またはそのサブユニットとの間の相互作用を妨害する方法であって、該方法は、ＩＬ−２２と、ＩＬ−２２レセプター複合体またはそのサブユニットとの間の相互作用を生じさせる条件下でＩＬ−２２と、該ＩＬ−２２レセプター複合体またはそのサブユニットとを接触させて、それによりＩＬ−２２／ＩＬ−２２レセプター混合物を形成させる工程、ならびにＩＬ−２２／ＩＬ−２２レセプター混合物と、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメントとを接触させて、それによりＩＬ−２２と、ＩＬ−２２レセプター複合体またはそのサブユニットとの間の相互作用を妨害する工程、を包含する方法。
【請求項１７】
被検体においてＩＬ−２２関連障害を処置または予防するための組成物であって、該組成物は、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメントを、該ＩＬ−２２関連障害を処置または予防するのに十分な量で含有する、組成物。
【請求項１８】
前記ＩＬ−２２関連障害が、自己免疫障害、呼吸器障害、および炎症状態からなる群より選択される、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記ＩＬ−２２関連障害が、関節リウマチ、変形性関節症、多発性硬化症、重症筋無力症、クローン病、炎症性腸疾患、ループス、糖尿病、乾癬、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、心血管炎症、膵炎、肝炎および腎炎からなる群より選択される、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２０】
前記自己免疫障害が、関節リウマチである、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２１】
前記被検体が、哺乳動物である、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２２】
前記哺乳動物が、ヒトである、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
サイトカインインヒビター、成長因子インヒビター、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝インヒビター、酵素インヒビター、細胞毒性剤、および細胞増殖抑制剤からなる群より選択される治療剤をさらに含有する、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２４】
前記治療剤が、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ−１２アンタゴニスト、ＩＬ−１５アンタゴニスト、ＩＬ−１７アンタゴニスト、ＩＬ−１８アンタゴニスト、ＩＬ−２１Ｒアンタゴニスト、Ｔ細胞減少剤、Ｂ細胞減少剤、メトトレキサート、レフルノミド、シロリムス（ラパマイシン）またはそのアナログ、Ｃｏｘ−２インヒビター、ｃＰＬＡ２インヒビター、ＮＳＡＩＤ、およびｐ３８インヒビターからなる群より選択される、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
被検体での急性期応答を軽減するための組成物であって、該組成物は、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントを該被検体での急性期応答を軽減するのに十分な量で含有する、組成物。
【請求項２６】
前記被検体が、哺乳動物である、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記哺乳動物が、ヒトである、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
被検体でのＩＬ−２２関連障害を処置または予防するための医薬の製造における、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメントの使用。
【請求項２９】
被検体での急性期応答を処置または予防するための医薬の製造における、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメントの使用。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）、特にヒトＩＬ−２２に結合する抗体およびその抗原結合フラグメントと、ＩＬ−２２関連活性調節でのそれらの用途とに関連する。本明細書で開示した抗体は、自己免疫疾患（例えば、関節炎）等のＩＬ−２２関連疾患の診断、予防、および／または処置に有用である。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）は、ＩＬ−１０と配列相同性を示すクラスＩＩサイトカインである。その発現は、ＩＬ−９またはＣｏｎＡによってＴ細胞で上流制御される（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９７（１８）：１０１４４−９）。さらなる研究によって、ＩＬ−２２ｍＲＮＡの発現がＬＰＳ投与に応答してインビボで誘導されること、また急性期反応を示すパラメーターをＩＬ−２２が修飾することが示された（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）上掲；Ｐｉｔｔｍａｎ  Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２：１７２）。まとめると、これらの観察はＩＬ−２２が炎症になんらかの役割を果たすことを示唆している（Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．（２００２）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＆  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １３（３）：２２３−４０）。
【０００３】
ＩＬ−２２は、ＩＩ型サイトカイン・レセプター・ファミリー（ＣＲＦ２）を構成するレセプターのうちの２つであるＩＬ−２２ＲとＩＬ−１０Ｒ２とからなるレセプター複合体に結合すると考えられている（Ｘｉｅ  Ｍ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７５（４０）：３１３３５−９；  Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６（４）：２７２５−３２）。ＩＬ−２２レセプターの両鎖が数多くの器官で構成的に発現される。これらの器官に由来する上皮細胞株は、インビトロでＩＬ−２２に反応する（Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．（２００２）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＆  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １３（３）：２２３−４０）。ＩＬ−２２は、他のＭＡＰＫの中間体と同様に、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ３およびＥＲＫ経路の活性化を誘導する（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）上掲；  Ｘｉｅ  Ｍ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）上掲；  Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４（４）：１８１４−９；  Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６（４）：２７２５−３２；  Ｌｅｊｅｕｎｅ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７（３７）：３３６７６−８２）。
【０００４】
ＣＲＦ２メンバーは、ＩＦＮα／β、ＩＦＮγ、凝固因子ＶＩＩａ、ＩＬ−１０、およびＩＬ−１０関連タンパク質ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２２、ＩＬ−２４、同様に細菌同定されたＩＦＮ様サイトカイン、ＩＬ−２８、およびＩＬ−２９のレセプターである（Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．（２００２）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １３（３）：２２３−４０；  Ｋｏｔｅｎｋｏ，Ｓ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９（２１）：２５５７−６５；  Ｓｈｅｐｐａｒｄ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４（１）：６３−８；  Ｋｏｔｅｎｋｏ，Ｓ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４（１）：６９−７７）。これらの膜レセプターに加えて、ＣＲＦ２ファミリーもまた、可溶性タンパク質であるＩＬ２２結合タンパク質（ＩＬ−２２ＢＰ）を含み、このタンパク質はＩＬ−２２に特異的であり、その活性を阻害する（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６６（１２）：７０９０−５；  Ｋｏｔｅｎｋｏ，Ｓ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６６（１２）：７０９６−１０３；  Ｘｕ，Ｗ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９８（１７）：９５１１−６；  Ｇｒｕｅｎｂｅｒｇ，Ｂ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｇｅｎｅｓ  ＆  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２（６）：３２９−３４；  Ｗｅｉ  Ｃ−Ｃ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｇｅｎｅｓ  ＆  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ４：２０４−２１１）。しかし、ＩＬ−２２レセプター複合体がＩＬ−２２に対してユニークであるのに対して、各々の鎖（すなわちＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２）は他のＣＲＦ２メンバーと共用され、ＩＬ−２０、ＩＬ−２４（ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−２０Ｒ２）、ＩＬ２８、ＩＬ２９（ＩＦＮ−ＸＲ１／ＩＬ−１０Ｒ２）、およびＩＬ−１０（ＩＬ−１０Ｒ１／ＩＬ−１０Ｒ２）が定義される（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｉｍｕｎｏｌ．１６７（７）：３５４５−９；  Ｗａｎｇ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７（９）：７３４１−７；  Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７（４９）：４７５１７−２３；  Ｋｏｔｅｎｋｏ，Ｓ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（１９９７）ＥＭＢＯ  Ｊ．１６（１９）：５８９４−９０３；  Ｓｐｅｎｃｅｒ，Ｓ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８７（４）：５７１−８）。
【０００５】
ＣＲＦ２複合レセプターの両鎖は、シグナル伝達に必要である。この複合レセプターの一方の鎖は、サイトカインに対する高親和性にもとづいてこれまでリガンド結合鎖として定義されていた（例えば、ＩＦＮγＲ１）。他方の鎖（例えば、ＩＦＮγＲ２）は、ヘルパーまたはアクセサリ鎖として特徴づけられ、単独ではサイトカインに対する親和性が最小である（Ｋｏｔｅｎｋｏ，Ｓ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９（２１）：２５５７−６５）。最近の結果は、両方のレセプター鎖が少なくともＩＬ１０およびＩＬ−２２に対する結合親和性に関与する可能性があることを示唆している（Ｘｉｅ  Ｍ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７５（４０）：３１３３５−９；  Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６（４）：２７２５−３２；  Ｌｏｇｓｄｏｎ，Ｎ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ  ２２（１１）：１０９９−１１２）。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の要旨）
本出願は、少なくとも部分的に、高親和性および特異性を持ってインターロイキン２２（「ＩＬ−２２」）、特にヒトＩＬ−２２に結合する抗体およびその抗原結合フラグメント等のＩＬ−２２結合剤を提供する。本発明の抗体およびその抗原結合フラグメントもまた、本明細書では「抗ＩＬ２２抗体」および「そのフラグメント」とそれぞれをいう。一実施形態では、抗ＩＬ２２抗体またはそのフラグメントは、ＩＬ−２２アンタゴニストであることから、少なくとも一種類のＩＬ２２関連活性を軽減、中和、および／またはアンタゴナイズする。例えば、抗ＩＬ２２抗体またはそのフラグメントは、ＩＬ−２２（例えばＩＬ−２２のエピトープ）に結合することができ、ＩＬ−２２とＩＬ２２レセプター複合体（例えば、ＩＬ−２２レセプター（「ＩＬ−２２Ｒ］）とインターロイキン１０レセプター２（ＩＬ−１０Ｒ２」）との複合体）またはそのサブユニット（例えば、ＩＬ−２２ＲもしくはＩＬ１０Ｒ２単独で）との相互作用（例えば結合）を妨害する。したがって、本発明の抗体およびそのフラグメントは、ＩＬ−２２とＩＬ−２２レセプター複合体、またはそのサブユニットとの相互作用（例えば結合）を妨害する（例えば、抑制、阻害、もしくはさもなければ軽減）。
【０００７】
さらに、出願人はＩＬ−２２の投与が急性期反応のパラメーターをインビボ誘導し、中和抗ＩＬ−２２抗体を用いることによるＩＬ２２活性の軽減がマウス・コラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）モデルでの炎症症状を改善することを示した。ＩＬ−２２ｍＲＮＡの発現は、炎症領域で上方制御される。したがって、ＩＬ−２２アンタゴニスト、例えば中和抗ＩＬ−２２抗体およびそのフラグメントは、インビボでの免疫抑制を誘導するために使用され得る。したがって、本発明の抗ＩＬ２２抗体またはそのフラグメントは、ＩＬ２２関連疾患、例えば自己免疫疾患（例えば多発性硬化症、リウマチ）、呼吸器疾患（例えば喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））、ならびに皮膚（例えば乾癬）、心血管系（例えばアテローム性動脈硬化症）、神経系（例えばアルツハイマー症）、腎臓（例えば腎炎）、肝臓（例えば肝炎）、および膵臓（例えば膵炎）の炎症状態の診断、処置、および／または関節リウマチ）に有用である。
【０００８】
したがって、一局面では、本発明はＩＬ−２２、特に哺乳類ＩＬ−２２（例えば、ヒトもしくはマウスＩＬ−２２）と相互作用（例えば結合）する単離抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一実施形態によれば、抗体またはそのフラグメントは中和抗体、例えばそれが１種類以上のＩＬ−２２関連活性、中でもケモカイン分泌（例えばＧＲＯ１分泌）、急性期反応、ＳＴＡＴタンパク質（例えばＳＴＡＴ−３タンパク質）等のキナーゼのリン酸化、細胞増殖（例えば、ＨＥＰＧ２増殖および／またはリン酸化）等を軽減または阻害する。抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントは、高親和性、例えば親和定数（Ｋｄ）値が１０Ｅ−７未満、好ましくは１０Ｅ−８、１０Ｅ−９、１０Ｅ−１０、より好ましくは１０Ｅ−１１以上の親和性でＩＬ−２２に結合することができる。他の実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントは、少なくとも約６０ｎＭ、通常は約５ｎＭ〜２００ｐＭ、またはそれよりも強力なＥＤ５０で、１種類以上のＩＬ−２２関連活性を中和することができる。他の実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントは、１０Ｅ３〜１０Ｅ７１／ＭＳ、一般に１０Ｅ４〜１０Ｅ６１／ＭＳの反応速度（ｋｉｎｅｔｉｃｓ）でＩＬ２２に結合する。別の実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントは、解離反応速度（ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｋｉｎｅｔｉｃｓ）が１０Ｅ−２〜１０Ｅ−６ｌ／ｓ、一般に１０Ｅ−３〜１０Ｅ−６ｌ／ｓである。一実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントは、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５２５５を有するハイブリドーマ細胞株によって産生されたモノクローナル抗体Ａｂ−０４、またはＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５２５４を有するハイブリドーマ細胞株によって産生されたＡｂ−０２に類似した親和性および／または反応速度で、ＩＬ−２２、例えばヒトのＩＬ−２２に結合する。抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントの親和性の試験は、例えばバイオセンサー技術（Ｂｉａｃｏｒｅ）を用いておこなうことができる（以下の実施例５および２２を参照せよ）。抗ＩＬ−２２抗体の阻害活性（ＥＤ５０）の試験は、例えば、本明細書で説明されるように、ＨＥＰＧ２細胞のＳＴＡＴリン酸化アッセイまたはＢａＦ３増殖アッセイを用いておこなうことができる（例えば、実施例２０〜２１を参照せよ）。
【０００９】
一実施形態では、抗ＩＬ２２抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは単鎖Ｆｖフラグメント）は、モノクローナル抗体または単一特異性抗体である。上記抗体またはそのフラグメントを、ヒト、ヒト化、キメラ、ＣＤＲグラフト、またはインビトロ生成抗体とすることもできる。さらに別の実施形態では、抗体は、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、より詳しくは、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４から選択される重鎖定常領域を持つ。別の実施形態では、上記抗体は、例えばカッパまたはラムダから選択される軽鎖を持つ。
【００１０】
別の実施形態では、上記抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントは、ＩＬ−２２、特にヒト等のＩＬ−２２（例えば、配列番号２のアミノ酸配列または配列番号２のほぼアミノ酸３４〜１７９に由来する成熟ヒトＩＬ−２２配列、あるいはそれに対して少なくとも８５％、９０％、９５％、９９％以上同一である配列）に特異的に結合する。別の実施形態では、上記抗体またはフラグメントは、ＩＬ−２２のフラグメントに特異的に結合する。このフラグメントの例として、上記配列番号２のアミノ酸配列に対して隣接する少なくとも１０，２０，５０，７５，１００，１５０，または１７０アミノ酸のフラグメントであり、あるいは少なくとも８５％、９０％、９５％、９９％、またはそれ以上同一である配列のフラグメントである。他の実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントは、ヒトＩＬ−２２に対して特異的に結合し、ヒト以外の種、例えばマウス（例えば、マウスもしくはラット）のＩＬ−２２とは実質的な交叉反応を示さない。別の実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントは２種類以上の形態の哺乳類ＩＬ−２２、例えばヒト、非ヒト霊長類（例えばサル）、およびマウス（例えば、マウスもしくはラット）ＩＬ−２２と結合する。
【００１１】
一実施形態では、上記抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントは、特異的にエピトープと結合する。例えば、このエピトープは、ＩＬ−２２、特に哺乳類（例えばヒトまたはマウス）ＩＬ−２２の直線状エピトープもしくは立体構造エピトープである。別の実施形態では、上記抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントは、例えばＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの複合体（「ＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ」）ならびにＩＬ−２２、ＩＬ−２２Ｒ、およびＩＬ−１０Ｒ２の複合体（「ＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２」）から選ばれる複合体と結合する。一実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体またはその複合体はＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの複合体に結合することで、抗ＩＬ−２２抗体またはその複合体、ＩＬ−２２およびＩＬ−２２Ｒの複合体を形成する。抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントの結合は、上記複合体の安定性を高めることで、ＩＬ−１０Ｒ２との複合体の相互作用を妨げる。
【００１２】
他の実施形態では、上記抗体またはそのフラグメントはＩＬ−２２に結合し、相互作用、例えばＩＬ−２２とＩＬ−２２レセプター複合体（例えば、ＩＬ−２２ＲとＩＬ−１０Ｒ２とから構成される複合体）との結合に妨害する（例えば該相互作用を抑制もしくは阻害するか、さもなければ軽減させる）。他の実施形態では、上記抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントはＩＬ−２２に結合し、相互作用、例えばＩＬ−２２とＩＬ−２２レセプター複合体のサブユニット（例えばＩＬ−２２ＲもしくはＩＬ−１０Ｒ２単独）との結合に妨害する（例えば該相互作用を抑制もしくは阻害するか、さもなければ軽減させる）。さらに別の実施形態では、上記抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントはＩＬ−２２に結合し、相互作用、例えばＩＬ−２２およびＩＬ−２２Ｒの複合体（「ＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ」）とＩＬ−１０Ｒ２との間の結合に妨害する（例えば該相互作用を抑制もしくは阻害するか、さもなければ軽減させる）。別の実施形態では、上記抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントはＩＬ−２２に結合し、相互作用、例えばＩＬ−２２およびＩＬ−１０Ｒ２の複合体（「ＩＬ−２２／ＩＬ−１０Ｒ２」）とＩＬ−２２Ｒとの結合を妨害する（例えば該相互作用を抑制もしくは阻害するか、さもなければ軽減させる）。
【００１３】
別の実施形態では、上記抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントは、ＩＬ−２２、例えば哺乳類ＩＬ−２２（例えばヒトまたはマウスＩＬ−２２）との結合について、ＩＬ−２２結合タンパク質（ＩＬ−２２ＢＰ）、例えば哺乳類ＩＬ−２２ＢＰ（ヒトまたはマウスＩＬ−２２ＢＰ）と競合する。
【００１４】
ＩＬ−２２Ｒに対するＩＬ−２２結合を妨害する抗ＩＬ−２２抗体の非限定的な例は、「Ａｂ−０４」である。Ａｂ−０４（本明細書では、ラット・モノクローナル抗体「Ｐ３／２」ともいう）は、ヒトＩＬ−２２と結合し、少なくとも１つのＩＬ−２２活性を中和する（実施例５、１６、１７、２０、および２１を参照せよ）。２００３年６月５日に、Ａｂ−０４産生ハイブリドーマ細胞株をＡＴＣＣに寄託し、この細胞株にＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５２５５が与えられた。ＩＬ−１０Ｒ２に対するＩＬ−２２結合を妨害する抗ＩＬ−２２抗体の他の非限定的例は、「Ａｂ−０２」である。Ａｂ−０２（本明細書ではラット・モノクローナル抗体「Ｐ３／３」ともいう）は、マウスおよびヒトＩＬ−２２に結合し、少なくとも１つのＩＬ−２２活性を中和する（実施例５、１６、１７、２０、および２１を参照せよ）。２００３年６月５日に、Ａｂ−０２産生ハイブリドーマ細胞株をＡＴＣＣに寄託し、この細胞株にＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５２５４が与えられた。
【００１５】
一実施形態では、上記抗体またはそのフラグメントはＩＬ−２２、例えばマウスもしくはヒトのＩＬ−２２に特異的に結合し、ＩＬ−２２に対する二次抗体、例えばＩＬ−２２（例えばヒトもしくはマウスＩＬ−２２）上の標的エピトープに対する二次抗体の結合を抑制する。二次抗体は、例えばＰＴＡ−５２５４およびＰＴＡ−５２５５から選ばれるハイブリドーマによって産生されたモノクローナル抗体であり得る。別の実施形態では、上記抗体またはそのフラグメントは、ＰＴＡ−５２５４およびＰＴＡ−５２５５等から選ばれるハイブリドーマによって産生された少なくとも１つの抗原結合領域（例えば、可変領域）を含む。さらに別の実施形態では、抗体またはそのフラグメントは、ＰＴＡ−５２５４およびＰＴＡ−５２５５等のハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体に由来する少なくとも１つ、２つ、３つ、もしくは４つの可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはそのフラグメントは、ＰＴＡ−５２５４およびＰＴＡ−５２５５等のハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体に由来する少なくとも１〜２つの重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、上記抗体またはそのフラグメントは、ＰＴＡ−５２５４およびＰＴＡ−５２５５等のハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体に由来する少なくとも１つまたは２つの軽鎖可変領域を含む。さらに別の実施形態では、上記抗体またはそのフラグメントはＰＴＡ−５２５４およびＰＴＡ−５２５５等のハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体に由来する重鎖可変領域に由来する少なくとも１つ、２つ、または３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。さらに別の実施形態では、上記抗体またはそのフラグメントは、ＰＴＡ−５２５４およびＰＴＡ−５２５５等のハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体の軽鎖可変領域に由来する少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む。さらに別の実施形態では、上記抗体またはそのフラグメントは、ＰＴＡ−５２５４およびＰＴＡ−５２５５等のハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体の重鎖および軽鎖可変領域に由来する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲを含む。別の実施形態では、上記モノクローナル抗体は、ＰＴＡ−５２５４およびＰＴＡ−５２５５から選ばれたハイブリドーマによって産生される。
【００１６】
本明細書中に記載された抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントを誘導体化することができ、あるいはそれを別の機能分子、例えば別のペプチドもしくはタンパク質（例えば、Ｆａｂ’フラグメント）に結合させることができる。例えば、融合タンパク質もしくは抗体、または抗原結合部分を、１つ以上の他の分子単位、例えば、とりわけ抗体（例えば二重特異性抗体もしくは多重特異性抗体）、毒素、放射同位元素、細胞毒性もしくは細胞増殖抑制性の薬剤に機能的に結合（例えば、化学結合、遺伝学的融合、非共有結合もしくはその逆のもの）させることができる。
【００１７】
さらに別の実施形態では、ＩＬ−２２結合剤、例えばＩＬ−２２アンタゴニスト（例えば、本明細書中に記載した抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメント）、あるいはその薬学的組成物を、単独投与もしくは併用療法で投与する。すなわち、他の薬剤、例えばＩＬ−２２関連疾患を処置する上で有用な治療薬と併用する。ＩＬ−２２関連疾患の例として、限定されるものではないが、自己免疫疾患、例えば関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎、（ループス関連関節炎または強直性脊椎炎）、血管炎、多発性硬化症、自己免疫性甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎および湿疹性皮膚炎を含む）、重症筋無力症、炎症性大腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病（糖尿病（Ｉ型）；皮膚炎（例えば乾癬）、心血管系（例えばアテローム性動脈硬化症）、神経系（例えばアルツハイマー病）、肝臓（例えば肝炎）、腎臓（例えば腎炎）、および膵臓（例えば膵炎）；心臓血管疾患、例えばコレステロール代謝異常、酸素フリーラジカル損傷、虚血；創傷治癒に関連した障害；呼吸器疾患、例えば喘息およびＣＯＰＤ（例えば嚢胞性線維症）；敗血症；移植拒絶反応およびアレルギーが挙げられる。一実施形態では、上記ＩＬ−２２関連疾患が関節炎障害、例えば関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎、もしくは強直性脊椎炎から選択される１つ以上から選択される疾患；呼吸器疾患（例えば喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））；または皮膚等の炎症状態（乾癬）、心血管系（例えばアテローム性動脈硬化症）、神経系（アルツハイマー病）、膵臓（例えば膵炎）、および消化器官、例えば大腸炎、クローン病およびＩＢＤである。
【００１８】
併用療法として、１種類以上のＩＬ−２２結合剤、例えばＩＬ−２２アンタゴニスト（例えば、抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメント）とともに、さらに１種類以上の治療薬、例えば１種類以上のサイトカインおよび成長因子インヒビター、免疫抑制剤、抗炎症剤（例えば、全身性抗炎症剤）、代謝インヒビター、酵素インヒビター、および／または細胞障害性もしくは細胞増殖抑制剤を、本明細書により詳しく記載されるように、共配合および／または共投与する。
【００１９】
１種類以上のＩＬ−２２結合剤、例えばＩＬ−２２アンタゴニスト（例えば、抗ＩＬ−２２抗体もしくはそのフラグメント）と共投与および／または共配合し得る好ましいさらなる治療薬の例として、限定されるものではないが、１種類以上のＴＮＦアンタゴニスト（例えば、ＴＮＦに結合するキメラ、ヒト化、ヒトもしくはｉｎ  ｖｉｔｒｏ産生抗体、またはその抗原結合フラグメント；ＴＮＦレセプターの可溶性フラグメント、例えばｐ５５もしくはｐ７５ヒトＴＮＦレセプターまたはその誘導体、例えば７５ＫｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤＴＮＦレセプター−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥｎｂｒｅｌＴＭ）、ｐ５５ｋＤＴＮＦレセプター−ＩｇＧ融合タンパク質；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト、例えばＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）インヒビター）；ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒのアンタゴニスト；Ｔ細胞およびＢ細胞依存型薬剤（例えば、抗ＣＤ４およびＣＤ２２抗体）；低分子インヒビター、例えばメトトレキサートおよびレフルノミド；シロリムス（ラパマイシン）およびそのアナログ、例えばＣＣＩ−７７９；Ｃｏｘ−２およびｃＰＬＡ２インヒビター；ＮＳＡＩＤ；ｐ３８インヒビター、ＴＰＬ−２、Ｍｋ−２およびＮＦｋｂインヒビター；ＲＡＧＥもしくは可溶性ＲＡＧＥ；Ｐ−セレクチンまたはＰＳＧＬ−１インヒビター（例えば低分子インヒビター、その抗体、例えばＰ−セレクチンに対する抗体）；エストロゲン・レセプターβ（ＥＲＢ）アゴニストまたはＥＲＢ−ＮＦｋｂアンタゴニストが挙げられる。１種類以上の抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントと共投与もしくは／または共配合し得る好ましい追加の治療薬の例として、１種類以上の、ＴＮＦレセプターの可溶性フラグメント、例えばｐ５５もしくはｐ７５ヒトＴＮＦレセプターもしくはその誘導体、例えば７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤＴＮＦレセプター−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥｎｂｒｅｌＴＭ）；メトトレキサート、レフルノミド、またはシロリムス（ラパマイシン）もしくはそのアナログ、例えばＣＣＩ−７７９が挙げられる。
【００２０】
理論に束縛されることなく、例えば、全身性炎症とは対照的に組織炎症の増幅剤または調節剤として作用することで、局所的にＩＬ−２２が炎症性効果を及ぼすと考えられている。したがって、例えば、本明細書に記載した抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントを用いることで、ＩＬ−２２活性の阻害によって、全身性の炎症性モダリティよりもいっそう効果的な組織特異的抗炎症性効果を得ることが可能である。さらにまた、例えば、本明細書に記載された抗ＩＬ−２２抗体もしくはそのフラグメントは、全身性抗炎症性モダリティとの組み合わせにとって有用な候補を提供することが可能である。
【００２１】
別の局面では、本発明は組成物、例えば薬学的組成物を提供するものであり、この組成物として、医薬的に許容される担体と少なくとも１つのＩＬ−２２結合剤、例えばＩＬ２２アンタゴニスト（例えば、本明細書に記載された抗ＩＬ−２２抗体もしくはそのフラグメント）が挙げられる。一実施形態では、上記組成物（例えば薬学的組成物）は、上記ＩＬ−２２結合剤、例えば抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントの１つを二つ以上組み合わせたものを含む。ＩＬ−２２アンタゴニスト、例えば上記抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントと薬物、例えば治療薬（例えば、本明細書でより詳しく説明するように、１種類以上のサイトカインおよび成長因子、抗炎症剤（例えば、全身性抗炎症剤）、全身性抗疾患剤）、代謝インヒビター、酵素インヒビター、および／または細胞障害性もしくは細胞増殖抑制剤）との組み合わせもまた、本発明の範囲内である。
【００２２】
Ａｂ−０２もしくはＡｂ−０４によって認識されるＩＬ−２２（例えばヒトＩＬ−２２）のエピトープもまた、本発明の範囲内である。
【００２３】
別の局面では、被検体での急性期反応を検出、抑制、または軽減させる方法を特徴づける。この方法は、被検体の急性期反応を低下、抑制、または軽減するのに十分な量で、ＩＬ−２結合材、例えばＩＬ−２２アンタゴニスト（例えば、本明細書中に記載したように、抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメント）を、被検体に投与することを含む。一実施形態では、上記被検体は哺乳類、例えばＩＬ−２２関連疾患を患っているヒトであり、この疾患として、例えば呼吸器疾患、炎症性疾患、および自己免疫疾患が挙げられる。一実施形態では、ＩＬ−２２結合剤の投与を、局部的な投与法、例えば局所投与法、皮下投与法、もしくは全身循環ではない他の投与法によっておこなう。
【００２４】
別の局面では、本発明は、例えば、ＩＬ−２２とＩＬ−２２レセプター複合体、またはそのサブユニットである個々のＩＬ−２２ＲもしくはＩＬ−１０Ｒ２等との間の相互作用、例えば結合に対する妨害を調節する方法を特徴とする。この方法は、必要に応じて、ＩＬ−２２とＩＬ−２２レセプターとの複合体またはそのサブユニット（例えば、可溶性ＩＬ−２２レセプター複合体もしくはそのサブユニット、または膜結合ＩＬ−２２レセプター複合体もしくはそのサブユニット、例えばＩＬ−２２レセプター複合体もしくはそのサブユニットを発現する細胞）を提供すること、ＩＬ２２をＩＬ−２２レセプター複合体もしくはそのサブユニットとを、ＩＬ−２２とＩＬ−２２レセプター複合体もしくはそのサブユニットとの相互作用が生じてＩＬ−２２／ＩＬ−２２レセプター混合物を形成させる条件下で、接触させること、ならびに上記ＩＬ−２２／ＩＬ−２２レセプター混合物を、本明細書中に記載したように、少なくとも１種類のＩＬ−２２結合剤、例えば少なくとも１種類の抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントと接触させることで、上記相互作用に対する、例えば妨害（例えば抑制、阻害、もしくはさもなければ軽減）を調節すること、を含む。
【００２５】
本方法は、インビトロ（例えば、無細胞系）で、培養液中（例えば生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏ））で細胞に対して用いることができる。例えば、ＩＬ−２２レセプター発現細胞を培養液中でインビトロ培養することができ、１種類以上の抗ＩＬ−２２抗体もしくはそのフラグメント（例えば、本明細書中に記載したような抗ＩＬ−２２抗体もしくはそのフラグメント）を培養液に添加することで上記接触ステップが達成される。あるいは、上記方法を被検体に存在する細胞に対して、例えばインビボ（例えば治療用もしくは予防用の）プロトコルの一部として、実施することができる。
【００２６】
別の実施形態では、上記発明は、被検体でのＩＬ−２２関連疾患を処置（例えば、治療、抑制、改善、開始の遅延もしくは防止、または再発もしくは回帰の防止）あるいは予防をおこなう方法を特徴とする。上記方法は、ＩＬ−２２結合剤、例えばＩＬ２２アンタゴニスト（例えば、本明細書中に記載したような、抗ＩＬ−２２抗体もしくはそのフラグメント）を、ＩＬ−２２関連疾患の処置もしくは予防に十分な量で、被検体に投与することを含む。一実施形態では、上記ＩＬ−２２結合剤の投与を、局部的な投与法、例えば局所投与法、皮下投与法、もしくは全身循環ではない他の投与法によっておこなう。
【００２７】
ＩＬ−２２結合剤、例えばＩＬ−２２アンタゴニスト（例えば抗ＩＬ−２２抗体もしくはそのフラグメント）を、単独で、もしくは本明細書中に記載したような他の治療モダリティと組み合わせた状態で、被検体に投与することができる。一実施形態では、上記被検体が哺乳類、例えばＩＬ−２２関連疾患、例えば呼吸器疾患、炎症性疾患、および自己免疫疾患を患ったヒトである。
【００２８】
ＩＬ−２２関連疾患の例として、限定されるものではないが、自己免疫疾患、例えば関節炎（例えば関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎、ループス関連関節炎もしくは強直性脊椎炎）、強皮症、全身性紅斑性狼瘡、血管炎、多発性硬化症、自己免疫性甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎および湿疹性皮膚炎を含む）、重症筋無力症、炎症性大腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、糖尿病（Ｉ型）；心臓血管疾患（例えばコレステロール代謝異常、酸素フリーラジカル損傷、虚血、アテローム性動脈硬化症）；創傷治癒と関連した障害；呼吸器疾患（例えば喘息およびＣＯＰＤ（例えば嚢胞性線維症））；皮膚（例えば乾癬）、肝臓（例えば肝炎）、腎臓（例えば腎炎）、および膵臓（例えば膵炎））の炎症性疾患；敗血症；癌（例えば固形腫瘍または軟部組織腫瘍）；移植拒絶反応およびアレルギーが挙げられる。一実施形態では、上記ＩＬ−２２関連疾患は、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎、または強直性脊椎炎（好ましくは関節リウマチ）の１つ以上から選択される疾患；呼吸器疾患（例えば、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））；ならびに皮膚（例えば乾癬）、肝臓（例えば肝炎）、腎臓（例えば腎炎）、および膵臓（例えば膵炎）等の炎症状態である。
【００２９】
他の実施形態では、本発明は、被検体での関節炎（例えば、関節リウマチ）に関連した１つ以上の症状を処置（例えば軽減もしくは改善）または予防する方法を提供する。この方法は、１つ以上の関節炎症状を処置（例えば軽減もしくは改善）または予防するのに十分な量で、ＩＬ−２２結合剤、例えばＩＬ−２２アンタゴニスト（例えばＩＬ−２２抗体もしくはそのフラグメント）を被検体に投与することを含む。ＩＬ−２２抗体を、治療または予防を目的として、あるいはその両方を目的として、投与することができる。ＩＬ−２２結合剤、例えばＩＬ−２２アンタゴニスト、例えば抗ＩＬ−２２抗体もしくはそのフラグメントを、単独で、あるいは本明細書中に記載したような他の治療モダリティと組み合わせて、被検体に投与することができる。好ましくは、被検体は、哺乳類、例えば本明細書中に記載したようなＩＬ−２２関連疾患を患ったヒトである。
【００３０】
別の局面では、本発明はインビトロ試料（例えば、血清、血しょう、組織、または生検等の生物試料）の存在を検出する方法を提供する。本方法を、免疫細胞関連疾患等の疾患の診断に用いることができる。この方法は、（ｉ）試料もしくは対照試料を本明細書中に記載したような抗ＩＬ−２２抗体もしくはフラグメントと接触させること、ならびに（ｉｉ）抗ＩＬ−２２抗体もしくはそのフラグメントと試料もしくは対照試料との間の複合体の形成を検出することを含み、対照試料と比較して、試料での複合体形成に生じた統計学的に有意な変化が、その試料でのＩＬ−２２の存在を示す。
【００３１】
さらに別の局面では、本発明はインビボでのＩＬ−２２の存在を検出するための方法（例えば、被検体でのインビボイメージング）を提供する。本方法を、ＩＬ−２２関連疾患等の疾患の診断に用いることができる。この方法は、（ｉ）本明細書中に記載したような抗ＩＬ−２２抗体もしくはそのフラグメントを、この抗体もしくはフラグメントがＩＬ−２２に結合するのを可能とする条件下で、被検体に投与すること、（ｉｉ）抗体もしくはフラグメントとＩＬ−２２との間の複合体の形成を検出することとを含み、対照被検体と比較して上記複合体の形成での統計学的に有意な変化がＩＬ−２２の存在を示す。
【００３２】
好ましくは、検出可能な基質によって、上記抗体またはそのフラグメントを直接または間接的に標識することで、結合抗体もしくは非結合抗体の検出が促進される。適当な検出可能な基質として、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、あるいは放射性物質が挙げられる。
【００３３】
薬剤、例えば治療薬もしくは細胞毒性薬をインビボでＩＬ−２２発現細胞に送達または標的化させる方法も、開示する。
【００３４】
治療および診断用途のための本発明のＩＬ−２２結合剤、例えばＩＬ−２２抗体もしくはそのフラグメント）を含むキットもまた、本発明の範囲内である。
【００３５】
本明細書中で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されている意味と同じ意味を持つ。本明細書に記載さえた方法および材料と類似または等価な方法および材料を本発明の実施または試験に用いることができるけれども、適当な方法および材料を後述する。本明細書中で言及された全ての刊行物、特許出願、特許、または他の参考文献の全体を本明細書の一部を構成するものとして援用する。矛盾する場合、定義を含む本明細書が規制する。また、材料、方法、および実施例は実例としてのみ挙げられるものであって、限定することを意図するものではない。
【００３６】
本発明の他の特徴および効果は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかである。
【００３７】
（発明の詳細な説明）
インターロイキン２２（「ＩＬ−２２」）は、先天性免疫応答および適応免疫応答の過程で誘導されるサイトカインである。被検体に投与した場合、それによって急性期反応が生じ、炎症機構でＩＬ−２２が果たす役割に関与する。ＩＬ−２２とともに情報伝達複合体を形成するレセプター鎖は、ＩＬ−２２レセプター（「ＩＬ−２２Ｒ」）とＩＬ−１０レセプター２（「ＩＬ−１０Ｒ２」）であり、これらはＩＩ型サイトカイン・レセプター・ファミリーを構成する２つのメンバーである。一実施形態では、出願人はビオチン化サイトカインおよびレセプター細胞外ドメイン（ＥＣＤ）Ｆｃ融合二量体を用いたＥＬＩＳＡベース・フォーマットでこれらのタンパク質間の相互作用を特徴づけた。出願人は、ＩＬ−２２がＩＬ−２２ＲのＥＣＤに対して測定可能な親和性を有し、ＩＬ−１０Ｒ２単独に対しては検出可能な親和性がないことを示した（実施例１２）。ＩＬ−２２は、Ｆｃヘテロ二量体として表されるＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２  ＥＣＤに対して実質的に高い親和性を有する（実施例１３）。一時的な添加を伴うさらなる分析は、ＩＬ−１０Ｒ２がＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの結合によって生成された面に結合することを示唆している。出願人は、ＩＬ−１０Ｒ２ＥＣＤがＩＬ−２２の結合をそのサイトカイン・レセプター複合体にさらに安定化させると考える（実施例１４および１５）。別の実施形態では、中和抗ＩＬ−２２抗体を生成して、その結合特異性、親和性、およびＩＬ−２２中和活性について特徴づけた（実施例５、１６、１７、２０、２１、および２２）。一実施形態では、中和ラットＩＬ−２２抗体およびＩＬ−２２ＢＰ（同一の分泌ＩＬ−２２結合タンパク質および天然アンタゴニスト）は、両方とも、ＩＬ−２２ＲＥＣＤ認識にとって直接必要であると思われるＩＬ−２２エピトープを定義する。さらに別の実施形態では、ラット・モノクローナル抗体は、ＩＬ−１０Ｒ２ＥＣＤの役割にとって重要な別のＩＬ−２２領域を定義する。さらに、出願人はインビボでのＩＬ−２２投与が急性期反応のパラメーターを誘導し、しかも中和抗ＩＬ−２２抗体を用いることによるＩＬ−２２活性の軽減が、マウスのコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）モデルで炎症の症状を改善することを示した（実施例９）。炎症を起こした領域で、ＩＬ−２２ｍＲＮＡの発現を上方制御する。したがって、ＩＬ−２２アンタゴニスト（例えば中和抗ＩＬ−２２抗体およびそのフラグメント）を用いてインビボでの免疫抑制を誘導することができる。
【００３８】
したがって、本願は、少なくとも部分的に、ＩＬ−２２、特にヒトＩＬ−２２に高親和性および高特異性で結合する抗体およびその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントは少なくとも１つのＩＬ−２２関連活性を軽減、抑制、もしくは中和する。例えば、上記ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントはＩＬ−２２、例えばＩＬ−２２のエピトープに結合し、例えばＩＬ−２２とＩＬ−２２レセプターとの複合体、例えばＩＬ−２２レセプター（「ＩＬ−２２Ｒ」）とインターロイキン１０レセプター２（「ＩＬ−１０Ｒ２」）とを含む複合体、またはそのサブユニット（例えば、個々に、ＩＬ−２２ＲもしくはＩＬ−１０Ｒ２）とを含む複合体との結合等の相互作用を妨害する。したがって、本発明の抗体およびそのフラグメントを用いて、ＩＬ−２２とＩＬ−２２レセプター複合体、もしくはそのサブユニットとの間の結合等の相互作用を妨害（例えば、抑制、阻害、さもなければ軽減）することができる。したがって、本発明の抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントを用いて、ＩＬ−２２関連疾患、例えば自己免疫疾患、関節疾患（例えば関節リウマチ）；呼吸器疾患（例えば、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；ならびに、皮膚（例えば乾癬）、肝臓（例えば肝炎）、腎臓（例えば腎炎）、および膵臓（例えば膵炎）の炎症状態の診断、処置、または予防に用いることができる。
【００３９】
本発明がより容易に理解されるように、特定の用語を最初に定義する。付加的な定義は、詳細な説明の全体を通じて述べられている。
【００４０】
本明細書中で用いられるように、「インターロイキン２２」もしくは「ＩＬ−２２」という用語は、ＩＬ−１０に対する相同性を示すもので、ＩＬ−９もしくはＣｏｎＡによってＴ細胞中で上方制御される（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９７（１８）：１０１４４−９）。ＩＬ−２２は、ＬＰＳによって発現が刺激され、ＩＦＮ−γでは発現が顕著には刺激されないサイトカインである。ＩＬ−２２は、ヒトおよびマウスＴｈ１によって優先的に産生され、Ｔｈ２、ＣＤ＋４細胞によっては産生されない。ＩＬ−２２は、急性期反応を示すパラメーターを調節する（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）上掲；  Ｐｉｔｔｍａｎ  Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２：１７２；  ＷＯ  ００／６５０２７；  Ｇａｂａｙ，Ｃ．（１９９９）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３４０（６）：４４８−４５４）、ならびに炎症（Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．（２００２）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＆  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １３（３）：２２３−４０；  ＷＯ  ００／６５０２７）。ＩＬ−２２は、ＩＩ型サイトカイン・レセプター・ファミリーを構成する２つのメンバーであるＩＬ−２２レセプター（本明細書では「ＩＬ−２２Ｒ」ともいう）とＩＬ−１０レセプター２（本明細書では「ＩＬ−１０Ｒ２」ともいう）とからなるレセプター複合体に結合すると考えられる。これら２つのレセプターに関するヌクレオチドおよびアミノ酸配列は、Ｘｉｅ  Ｍ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｌｉｅｎｔ  ２７５（４０）：３１３３５−９（ヒトＩＬ−２２Ｒ）；  Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６（４）：２７２５−３２（ヒトＩＬ−１０Ｒ２）。ＩＬ−２２レセプターの両鎖は、多数の器官で恒常的に発現する。これらの器官から誘導される上皮細胞株は、インビトロでＩＬ２２に応答する（Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．（２００２）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＆  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １３（３）：２２３−４０）。ＩＬ−２２は、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ３およびＥＲＫ経路の活性化を誘導するとともに、他のＭＡＰＫ経路の中間体を誘導する（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）上掲；Ｘｉｅ  Ｍ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）上掲；  Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４（４）：１８１４−９）；  Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６（４）：２７２５−３２；  Ｌｅｊｅｕｎｅ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７（３７）：３３６７６−８２）。これらの参考文献の内容を、参照することによって、それらの全体を本明細書の一部を構成するものとして援用する。
【００４１】
したがって、用語「ＩＬ−２２」とは、サイトカイン（好ましくは哺乳類、例えばマウスまたはヒトに由来するもの）のことをいい、このサイトカインはＩＬ−２２レセプター、例えばＩＬ−２２ＲもしくはＩＬ−１０Ｒ２、またはそれらの複合体（好ましくは哺乳類、例えばマウスまたはヒトに由来するもの）と相互作用、例えば結合し、また以下の特徴の１つを有する。すなわち、（ｉ）天然の哺乳類ＩＬ−２２ポリペプチドまたはそのフラグメントのアミノ酸配列、例えば配列番号２（ヒト）もしくは配列番号４（マウス）またはそのフラグメントとして示されるアミノ酸配列、（ｉｉ）配列番号２（ヒト）もしくは配列番号４（マウス）またはそのフラグメントとして示されるアミノ酸配列に対して実質的に相同、例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、９９％相同であるアミノ酸配列、（ｉｉｉ）天然の哺乳類ＩＬ−２２ヌクレオチド配列またはそのフラグメント（例えば、配列番号１（ヒト）もしくは配列番号３（マウス）またはそのフラグメント）によってコードされるアミノ酸配列、（ｉｖ）配列番号１（ヒト）もしくは配列番号３（マウス）またはそのフラグメントとして示されるヌクレオチド配列に対して実質的に相同、例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、９９％相同であるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列、（ｖ）天然のＩＬ−２２ヌクレオチド配列またはそのフラグメント、例えば配列番号１（ヒト）もしくは配列番号３（マウス）またはそのフラグメントに縮重したヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列、あるいは（ｖｉ）ストリンジェントな条件、例えば高ストリンジェントな条件下で、前述のヌクレオチド配列の１つにハイブリダイズするヌクレオチド配列である。好ましくは、ＩＬ−２２ポリペプチドは、１つ以上のＩＬ−２２関連活性、例えば本明細書中に記載したような活性を持つ。
【００４２】
ヒトＩＬ−２２  ｃＤＮＡをブタペスト条約にもとづいて、最初の寄託物として１９９９年４月２８日付でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ，Ｕ．Ｓ．Ａ．２０１１０−２２０９）に寄託し、寄託番号ＡＴＣＣ２０７２３１が与えられた。寄託材料の公開利用に対する全ての制限は、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ§１．８０８（ｂ）に特定された要請を除き、特許の付与によって最終的に取り除かれるものであり、寄託期間は３７Ｃ．Ｆ．Ｒ§１．８０６に従う。
【００４３】
「ＩＬ−２２関連活性」という語句は、ＩＬ−２２ポリペプチド、例えば成熟ＩＬ−２２ポリペプチド（例えば、哺乳類、例えば配列番号２および４でそれぞれ示されるようなアミノ酸配列を持つヒトもしくはマウスＩＬ−２２）のことをいい、限定されるものではないけれども、（１）ＩＬ−２２レセプター（例えば、ＩＬ−２２ＲもしくはＩＬ−１０Ｒ２またはその複合体、好ましくは哺乳類、例えばマウスもしくはヒトに由来するもの）と相互作用、例えば結合すること、（２）１つ以上のシグナル伝達分子との結合、（３）タンパク質キナーゼ、例えばＪＡＫ／ＳＴＡＴ３、ＥＲＫ、およびＭＡＰＫのリン酸化および／または活性化を刺激すること、（４）ＩＬ−２２応答細胞、例えば腎臓、肝臓、大腸、小腸、胸腺、膵臓、皮膚に由来する上皮細胞の増殖、分化、エフェクター細胞機能、細胞溶解活性、サイトカインもしくはケモカイン分泌、および／または生存を、修飾、例えば刺激または減少させること、（５）急性期反応、例えば代謝、肝臓、造血性（例えば貧血、血小板増加）または神経内分泌変化、あるいは変化（例えば、急性期タンパク質の増加もしくは減少、例えばフィブリノーゲンおよび／または血清アミロイドＡの増加、あるいはアルブミンの減少）の少なくとも１つのパラメーターを修飾すること、および／あるいは（６）炎症状態の少なくとも１つのパラメーターを修飾、例えばサイトカイン媒介炎症誘発性作用（例えば、熱、および／またはプロスタグランジン合成、例えばＰＧＥ２合成）の修飾、細胞免疫応答の修飾、サイトカイン、ケモカイン（例えばＧＲＯ１）、またはリンホカイン産生、および／または分泌（例えば、前炎症性サイトカインの産生および／または分泌）のうちの少なくとも１つのパラメーターを調整することである。
【００４４】
「急性期反応」という用語は、当該技術分野で認識されおり、例えば、Ｇａｂａｙ，Ｃ．（１９９９）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３４０（６）：４４８−４５４を参照せよ。
【００４５】
本明細書で使用される場合、「治療上有効な量」のＩＬ−２２アンタゴニスト（例えば抗体）とは、被検体（例えば、ヒト患者）に対して単回投与もしくは反復投与した際に、疾患の重症度の治療または軽減、疾患の１つ以上の症状の改善、あるいはそのような処置が無い場合に予想される生存期間を超えて被検体を延命させる上で有効な量のことをいう。
【００４６】
本明細書で使用される場合、「予防上有効な量」のＩＬ−２２アンタゴニスト（例えば抗体）とは、疾患、例えば本明細書中に記載したような疾患の発症または再発が生ずるのを予防または遅延させる際に、疾患の重症度の治療または軽減、疾患の１つ以上の症状の改善、あるいはそのような処置が無い場合に予想される生存期間を超えて被検体を延命させる上で有効な量のことをいう。
【００４７】
「誘導（ｉｎｄｕｃｅ）」、「軽減（ｒｅｄｕｃｅ）」、「抑制（ｉｎｈｉｂｉｔ）」、「増強（ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅ）」、「上昇（ｅｌｅｖａｔｅ）」、「増加（ｉｎｃｒｅａｓｅ）」、「減少（ｄｅｃｒｅａｓｅ）」等の用語は、例えば、２つの状態間での定量的な差を意味し、これら２つの状態間で少なくとも統計学的に有意な差のことをいう。
【００４８】
本明細書で使用される場合、「ＩＬ−２２アンタゴニスト」とは、ＩＬ−２２ポリペプチド（例えば、ヒトＩＬ−２２ポリペプチド）またはそのフラグメントの一つまたは複数の生物活性を減少させる薬剤のことをいう。好ましくは、アンタゴニストは、ＩＬ−２２ポリペプチドと相互作用（例えば結合）する。ＩＬ−２２アンタゴニストを用いた拮抗作用（アンタゴニズム）は、ＩＬ−２２関連生物活性の完全な除去を必ずしも示さない。ＩＬ−２２アンタゴニストとして、限定されるものではないが、ヒトＩＬ−２２タンパク質に対する抗体、ヒトＩＬ−２２抗体が標的とするレセプターまたは他の標的の可溶形、ヒトＩＬ−２２が標的とするレセプターもしくは他の標的に対する抗体、ならびにヒトＩＬ−２２がそれのレセプターもしくは他の標的と相互作用するのを抑制もしくは妨害するペプチドおよび低分子のことをいう。一実施形態では、ＩＬ−２２アンタゴニストはＡｂ−０２と類似の結合特性（例えば、同一もしくは類似のエピトープに結合する）を有する。別の実施形態では、ＩＬ−２２アンタゴニストはＡｂ−０４と類似の結合特性（例えば、同一もしくは類似のエピトープに結合する）を有する。
【００４９】
本明細書で使用される場合、「ＩＬ−２２アゴニスト」は、ＩＬ−２２ポリペプチドの１つまたは複数の生物活性を増強、誘導、あるいはさもなければ増進させる。
【００５０】
本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、少なくとも１つ、好ましくは２つの重（Ｈ）鎖可変領域（以下、ＶＨと略す）、ならびに少なくとも１つ、好ましくは２つの軽（Ｌ）鎖可変領域（以下、ＶＬと略す）を含むタンパク質のことをいう。ＶＨおよびＶＬ領域は、さらに、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と呼ばれるより保守的な領域が散在している「相補性決定領域（「ＣＤＲ」）と呼ばれる超可変領域に分けることができる。フレームワーク領域およびＣＤＲの範囲は、正確に定められている（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２、およびＣｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７、これらを本明細書に援用する）。ＶＨおよびＶＬの各々は、３つのＣＤＲと４つのＦＲから構成され、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順番でアミノ末端からカルボキシル末端まで配置された３つのＣＤＲと４つのＦＲとから構成される。
【００５１】
上記抗体は、さらに、重鎖および軽鎖定常領域をさらに含むことで、重鎖および軽鎖免疫グロブリン鎖をそれぞれ形成し得る。一実施形態では、上記抗体は２つの免疫グロブリン重鎖と２つの免疫グロブリン軽鎖との四量体であり、免疫グロブリン重鎖および軽鎖がジスルフィド結合によって相互に連結されている。重鎖定常領域は、３つのドメイン、すなわちＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３から構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、すなわちＣＬから構成される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合領域を含む。抗体の定常領域は、一般に、宿主組織もしくは因子に対する抗体の結合を仲介するもので、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）が挙げられる。
【００５２】
本明細書で使用される場合、「免疫グロブリン」という用語は、免疫グロブリン遺伝子によって実質的にコードされた１つ以上のポリペプチドからなるタンパク質のことをいう。存在が認められたヒト免疫グロブリン遺伝子として、カッパ、ラムダ、アルファ（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、ガンマ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、デルタ、エプシロン、およびミュー定常領域遺伝子、さらには無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が挙げられる。完全長の免疫グロブリン「軽鎖」（約２５ｋｄまたは２１４アミノ酸）は、ＮＨ２末端（約１１０アミノ酸）にある可変領域遺伝子とＣＯＯＨ末端にあるカッパもしくはラムダ定常領域遺伝子とによってコードされる。完全長の免疫グロブリン「重鎖」（約５０ｋｄまたは４４６アミノ酸）は、同様に、可変領域遺伝子（約１１６アミノ酸）と前述した他の定常領域遺伝子のうちの１つ、例えばガンマ（約３３０アミノ酸をコード）とによってコードされる。
【００５３】
本明細書で使用される場合、「アイソタイプ」とは、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス（例えば、ＩｇＭまたはＩｇＧ１）のことをいう。
【００５４】
抗体の「抗原結合フラグメント」（または単に「抗体部分」もしくは「フラグメント」）という用語は、本明細書で使用される場合、抗原に特異的に結合する能力を保持する完全長の抗体の１つ以上のフラグメント（例えば、ＣＤ３）のことをいう。抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に包含される結合フラグメントの例として、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインからなる一価のフラグメントであるＦａｂフラグメント、（ｉｉ）ヒンジ領域でジスフィルド架橋によって連結された２つのＦａｂフラグメントから構成される二価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｂフラグメント、（ｉｖ）抗体の一本の腕のＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）、ならびに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメイン（ＶＬおよびＣＨ）は別々の遺伝子によってコードされているにもかかわらず、合成リンカーによって組換え法を用いて連結することができ、この合成リンカーはそれらのドメインが単一のタンパク質鎖となるのを可能とし、このタンパク質鎖ではＶＬ領域とＶＨ領域との対が一価の分子（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知、例えばＢｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；  およびＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３を参照せよ）を形成する。そのような単鎖抗体もまた、抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に包含されることを意図している。これらの抗体フラグメントは、当業者に公知の従来技術を用いて得られ、これらのフラグメントをインタクトな抗体と同様の方法で有用性についてスクリーニングする。
【００５５】
この文脈での「組み合わせて（ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）」という表現は、薬剤が実質的に同時に、一斉または順次のいずれかで、与えられることを意味している。もし順次投与される場合、第２の化合物の投与の開始時に、２つの化合物の最初のものは、処置部位で有効濃度がいまだ検出可能である。
【００５６】
本明細書中に開示した配列に対して類似または相同（例えば、少なくとも約８５％の配列同一性）もまた、この出願の一部である。いくつかの実施形態では、配列同一性は、約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上であり得る。あるいは、核酸セグメントが選択的ハイブリダイゼーション条件（例えば、高度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件）下でその鎖の相補体にハイブリダイズする場合、実質的な同一性が存在する。核酸は、細胞全体、細胞溶解物、あるいは部分的に精製もしくは実質的に精製された形態で存在することが可能である。
【００５７】
２つの配列間での「相同性」または「配列同一性」（これらの用語を本明細書では同義的に用いられる）の計算は、以下のようにおこなう。配列を最適比較目的のために並べる（例えば、アラインメントを最適化するためにギャップを第１および第２のアミノ酸もしくは核酸配列の間に導入し、非相同配列を比較目的のために無視することができる）。好ましい実施形態では、比較目的のために並べられた参照配列の長さが、少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、さらに好ましくは少なくとも６０％、よりいっそう好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％、１００％の長さの参照配列である。対応するアミノ酸もしくはヌクレオチド位置にあるアミノ酸残基もしくはヌクレオチドを次に比較する。第１の配列にある位置が第２の配列にある対応する位置と同一のアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占められている場合、その分子はその位置で同一である（本明細書で使用される場合、アミノ酸または核酸の「同一性」は、アミノ酸または核酸の「相同性」に等しい）。２つの配列間での同一率（ｐｅｒｃｅｎｔ  ｉｄｅｎｔｉｔｙ）とは、これらの配列によって共有されている同一位置の数（ギャップの数と各ギャップの長さを考慮）と、これら２つの配列のアライメントを最適化するために導入されることが必要である各々のギャップの長さとの関数である。
【００５８】
配列の比較および２つの配列間での配列の同一率の決定は、数学的アルゴリズムを用いて達成することができる。好ましい実施形態では、２つのアミノ酸配列間での同一率は、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ（（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−４５３）のアルゴリズムを用いて決定されるもので、このアルゴリズムはＧＣＧソフトウェア・パッケージにあるＧＡＰプログラム（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）に組み込まれ、ギャップ・ウエイト（ｇａｐ  ｗｅｉｇｈｔ）を１６、１４、１２、１０、８、６、もしくは４にし、レングス・ウエイト（ｌｅｎｇｔｈ  ｗｅｉｇｈｔ）を１、２，３、４、５、もしくは６にしてＢｌｏｓｓｕｍ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれかが用いられる。さらに別の好ましい実施形態では、２つのヌクレオチド配列間の同一率は、ＧＣＧソフトウェア・パッケージのＧＡＰプログラム（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）を用いて決定することができ、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスと、４０、５０、６０、７０、もしくは８０のギャップ・ウエイトおよび１、２、３、４、５、もしくは６のレングス・ウエイトとが用いられる。特に好ましいパラメーターのセット（本発明の配列同一性もしくは相同性の制限内に分子があるかどうかを決定するために、実践者がどのパラメーターを適用すべきかについてわからない場合に用いるべきもの）は、ギャップ・ペナルティ（ｇａｐ  ｐｅｎａｌｔｙ）を１２、ギャップ拡張ペナルティ（ｇａｐ  ｅｘｔｅｎｄ  ｐｅｎａｌｔｙ）を４、さらにフレームシフト・ギャップ・ペナルティ（ｆｒａｍｅｓｈｉｆｔ  ｇａｐ  ｐｅｎａｌｔｙ）を５としたＢｌｏｓｓｕｍ６２スコアリング・マトリックスである。２つのアミノ酸もしくはヌクレオチド配列間のパーセントもまた、Ｅ．Ｍｅｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ（（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ，４：１１−１７）のアルゴリズムを用いて決定することができる。このアルゴリズムは、ＰＡＭ１２０ウエイト残基テーブル、ギャップ長ペナルティ１２、およびギャップ・ペナルティ４を用いて、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。
【００５９】
本明細書で使用される場合、「ストリンジェントな条件下でのハイブリダイズ」とは、ハイブリダイゼーションおよび洗浄の条件を説明するものである。ストリンジェントな条件は、当業者に公知であり、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９），６．３．１−６．３．６に見いだすことができる。水性および非水性の方法がその参考文献に記述されており、どちらも用いることができる。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の好ましい一例は、約４５℃で６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）でのハイブリダイゼーションをおこなった後、５０℃で０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳによる１回以上の洗浄をおこなうことである。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の別の例は、約４５℃で６×ＳＳＣでのハイブリダイゼーションをおこなった後、５５℃で０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳによる１回以上の洗浄をおこなうことである。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件のさらに別の例は、約４５℃で６×ＳＳＣでのハイブリダイゼーションをおこなった後、６０℃で０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳによる１回以上の洗浄をおこなうことである。好ましくは、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、約４５℃で６×ＳＳＣでのハイブリダイゼーションをおこなった後、６５℃で０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳによる１回以上の洗浄をおこなうことである。特に好ましい高ストリンジェントな条件（ならびに本発明のハイブリダイゼーション制限内に分子があるかどうかを決定するために、実践者がどの条件を適用すべきかについてわからない場合に用いるべき条件）は、６５℃で０．５Ｍリン酸ナトリウム、７％ＳＤＳであり、続いて６５℃で０．２×ＳＳＣ、１％ＳＤＳによる１回以上の洗浄をおこなうことである。
【００６０】
本発明のＩＬ−２２ポリペプチドおよびそのアンタゴニスト（例えば抗体）がさらに保存的もしくは非必須のアミノ酸置換を有してもよく、そのような置換がそれらの機能に対して実質的な影響を及ぼさないことがわかる。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が類似の側鎖を持つアミノ酸残基によって置き換わる置換である。類似の側鎖を持つアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野で定義されている。これらのファミリーとして、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非帯電性極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、無極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、ならびに芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を持つアミノ酸が挙げられる。
【００６１】
（ＩＬ−２２タンパク質、フラグメント、およびそれらをコードするポリヌクレオチド）
ＩＬ−２２ヌクレオチドおよびアミノ酸配列は当該技術分野で公知であり、以下のように提供される。各々のクローンのヌクレオチド配列もまた、公知の方法にもとづいて寄託されたクローンのシークエンシングによって決定することができる。次に、そのようなヌクレオチド配列から推定アミノ酸配列（完全長および成熟形）を決定することができる。特定のクローンによってコードされたタンパク質のアミノ酸配列もまた、適当な宿主で上記クローンを発現させ、タンパク質を回収してその配列を決定することによって決定することができる。
【００６２】
本明細書で使用される場合、「分泌（ｓｅｃｒｅｔｅｄ）」タンパク質は、適当な宿主細胞で発現された場合、膜を通って輸送（そのアミノ酸配列の中にあるシグナル配列の結果としての輸送が含まれる）されるタンパク質である。「分泌」タンパク質として、限定されるものではないが、タンパク質が発現される細胞から全体的に（例えば、可溶性タンパク質）または部分的に（例えばレセプター）分泌されたタンパク質が挙げられる。「分泌タンパク質」はとしてはまた、限定されるものではないが、小胞体の膜を通って輸送されるタンパク質が挙げられる。
【００６３】
ヒトＩＬ−２２のヌクレオチド配列（配列番号１）を以下に複写する。また、このヌクレオチド配列はポリ（Ａ）テールを含む。開示されたヌクレオチド配列は、オープン・リーディング・フレームを含み、上述のヌクレオチド配列に対応する完全長ＩＬ−２２タンパク質のアミノ酸配列が配列番号２に報告されている。成熟ＩＬ−２２のアミノ酸配列は、配列番号２のほぼアミノ酸３４〜１７９に一致する。
【００６４】
【化１】
2007537132.tif 000034
コードされたポリペプチドのポリペプチド配列を以下に示す。
【００６５】
【化２】
2007537132.tif 000035
マウスＩＬ−２２をコードするヌクレオチド配列およびコードされたポリペプチドの配列を以下に示す。
【００６６】
【化３】
2007537132.tif 000036
上記参照ポリヌクレオチド配列によってコードされたポリペプチドのアミノ酸配列を以下に示す。
【００６７】
【化４】
2007537132.tif 000037
ＩＬ−２２タンパク質が完全長よりも短い任意の形状であっても、ＩＬ−２２レセプターに対する結合能を保持するという条件で、本発明の方法および組成物で用いることができる。ＩＬ−２フラグメント（例えば、完全長よりも短いもの）を、宿主細胞の完全長ＩＬ−２２タンパク質をコードするポリペプチドの対応フラグメントを発現することによって生産することができる。これらの対応するポリヌクレオチド・フラグメントは、本発明の一部でもある。上記したような修飾ポリペプチドを標準的な分子生物学技術、例えば適当な所望の欠失突然変異体の構築、部位特異的突然変異法、または適当なオリゴヌクレオチド・プライマーを用いたポリメラーゼ連鎖反応によって、作ることが可能である。
【００６８】
タンパク質のフラグメントを直線状または公知の方法を用いて環状にすることができ、例えば、Ｈ．Ｕ．Ｓａｒａｇｏｖｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０，７７３−７７８（１９９２）およびＲ．Ｓ．ＭｃＤｏｗｅｌｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１４，９２４５−９２５３（１９９２）を参照せよ。これらの文献は両方とも本明細書で援用する。そのようなフラグメントを担体分子、例えば多くの目的では免疫グロブリンと融合させることができ、タンパク質結合部位の結合価が増加する。例えば、タンパク質のフラグメントを「リンカー」配列を介して、免疫グロブリンのＦｃ部分に融合することができる。タンパク質の二価形については、そのような融合はＩｇＧ分子のＦｃ部分に対するものであり得る。他の免疫グロブリン・アイソタイプもまた、そのような融合を生成するために用いることが可能である。例えば、タンパク質−ＩｇＭ融合は本発明のタンパク質の十価形を生成する。
【００６９】
ＩＬ−２２タンパク質およびそのフラグメントは、開示されたタンパク質の長さの少なくとも２５％（より好ましくは少なくとも５０％、最も好ましくは少なくとも７５％）であるアミノ酸配列長を有するタンパク質を含み、開示されたタンパク質と少なくとも６０％の配列同一性（より好ましくは、少なくとも７５％の同一性、最も好ましくは少なくとも９０％もしくは９５％の同一性）を持ち、ここで配列同一性は、配列のギャップを最小限にする一方で重複および同一性を最大限にするように整列された際に、タンパク質のアミノ酸配列を比較することで、決定される。また、本発明に含まれるものは、タンパク質およびタンパク質フラグメントであり、これらは８つ以上（より好ましくは２０個以上、最も好ましくは３０以上）の隣接アミノ酸を含む。これらのアミノ酸は、開示されたタンパク質のいずれかの任意のそのようなフラグメントと少なくとも７５％の配列同一性（より好ましくは、少なくとも８５％同一性、最も好ましくは少なくとも９５％同一性）を共有する。
【００７０】
別の実施形態では、本発明のタンパク質、タンパク質フラグメント、および組換えタンパク質として、少なくとも１つの「ＩＬ−２２レセプター結合モチーフ」の存在にもとづいて同定し得るものが挙げられる。本明細書中で用いられるように、「ＩＬ−２２レセプター結合モチーフ」という用語は、必須のレセプターに対するＩＬ−２２の結合にとって重要であるアミノ酸配列または残基を含む。好ましい実施形態では、ＩＬ−２２タンパク質は、配列番号２のおおよそアミノ酸５０〜６０を含むＩＬ−２２レセプター結合モチーフから構成される。別の実施形態では、ＩＬ−２２タンパク質は、配列番号２のおおよそアミノ酸６３〜８１を含むＩＬ−２２レセプター結合モチーフを有する。さらに別の実施形態では、ＩＬ−２２タンパク質は、配列番号２のおおよそアミノ酸１６８〜１７７を含むＩＬ−２２レセプター結合モチーフを有する。好ましい実施形態では、ＩＬ−２２タンパク質は、配列番号２のアミノ酸５０〜６０、アミノ酸６３〜８１、および／またはおおよそアミノ酸１６８〜１７７の少なくとも１つを含むＩＬ−２２レセプター結合モチーフを有する。
【００７１】
さらに別の実施形態では、ＩＬ−２２レセプター結合モチーフは、配列番号２のアミノ酸５０〜６０、配列番号２のアミノ酸６３〜８１、および配列番号２のアミノ酸１６８〜１７７と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上同一であるアミノ酸を有する。別の実施形態では、本発明のタンパク質、タンパク質フラグメント、および組換えタンパク質として、Ｎ結合グリコシル化に対する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上の部位が存在することにもとづいて同定され得るものが挙げられる。長さは、ポリヌクレオチドの配列を整列させ、配列相補性が最適である領域もしくは複数の領域を同定することによって、決定され得る。
【００７２】
（ベクターおよび宿主細胞）
ＩＬ−２２ポリヌクレオチドは、タンパク質を組換えによって生ずるために、Ｋａｕｆｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９，４４８５−４４９０（１９９１）に開示されたｐＭＴ２またはｐＥＤ発現ベクター等の発現制御配列に作用可能に連結し得る。多くの適当な発現制御配列が当該技術分野で公知である。組換えタンパク質を発現させる一般的な方法もまた、公知であり、Ｒ．Ｋａｕｆｍａｎ（１９９０）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５，５３７−５６６に例証されている。本明細書で定義したように、「作用可能に連結した（ｏｐｅｒａｂｌｙ  ｌｉｎｋｅｄ」は、本発明の単離ポリヌクレオチドと発現制御配列とがベクターまたは細胞内に、ライゲーションされたポリヌクレオチド／発現制御配列によって形質転換（該配列を形質移入）された宿主細胞によって発現されるようにして、位置していることを意味する。
【００７３】
本明細書で使用される場合、「ベクター」という用語は、連結されている別の核酸を輸送することが可能な核酸分子に言及することを意図している。ベクターの一種として「プラスミド」があり、プラスミドとは追加のＤＮＡセグメントが結合し得る環状二本鎖ＤＮＡループのことをいう。ベクターの別の種類としてウイルスベクターがあり、付加的なＤＮＡセグメントをウイルス・ゲノム内に結合させることが可能である。いくつかのベクターは、それらが導入される宿主細胞内で自律複製ができる（例えば、細菌複製開始点とエピソームの哺乳類ベクターとを有する細菌ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳類ベクター）は、宿主細胞に導入される時点で宿主細胞のゲノムに組み込まれ、それによって宿主ゲノムとともに複製される。さらに、いくつかのベクターは該ベクターが作用可能に連結するゲノムの発現を指示することが可能である。そのようなベクターを、本明細書では「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）という。一般に、組換えＤＮＡ技術での有用性の発現ベクターがしばしばプラスミドの形態にある。本明細書では、プラスミドがベクターの最も汎用的に用いられていることから、「プラスミド」および「ベクター」は同義的に用いられる。しかし、本発明は、そのような他の形態の発現ベクター、例えば等価な機能を果たすウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ関連ウイルス）を含む。
【００７４】
「調節配列」という用語は、抗体鎖遺伝子の転写または翻訳を制御するプロモーター、エンハンサー、および他の発現制御要素（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことを意図している。そのような調節配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ；  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９０）に記載されている。当業者によって、調節配列の選択を含む発現ベクターの設計が形質転換すべき宿主の選択、所望のタンパク質の発現レベル等といった因子に依存すると認められる。哺乳類の宿主細胞発現のための好ましい調節配列は、哺乳動物細胞でタンパク質発現を高レベルに導くウイルス要素を含むもので、例えばＦＦ−１ａプロモーターおよびＢＧＨポリＡに由来するプロモーターおよび／またはエンハンサー、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（例えばＣＭＶプロモーター／エンハンサー）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）（例えば、ＳＶ４０プロモーター／エンハンサー）、アデノウイルス（例えば、アデノウイルス主要後期プロモータ（ＡｄＭＬＰ）が挙げられる。ウイルス調節要素およびそれらの配列のさらなる説明については、Ｓｔｉｎｓｋｉによる米国特許第５，１６８，０６２号、Ｂｅｌｌ等による米国特許第４，５１０，２４５号、ならびにＳｃｈａｆｆｎｅｒ等による米国特許第４，９６８，６１５号を参照せよ。
【００７５】
本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞でのベクターの複製を制御する配列（例えば、複製開始点）および選択可能なマーカー遺伝子等、追加の配列を運ぶものであってもよい。選択可能なマーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞の選択を促す（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、第４，６３４，６６５号、および第５，１７９，０１７号、すべてＡｘｅｌ等による）。例えば、一般に、Ｇ４１８、ハイグロマイシン、またはメトトレキサート等の薬物に対する耐性が、選択マーカー遺伝子によって、ベクターが導入された宿主細胞に付与される。好ましい選択マーカー遺伝子として、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキサート選択／増幅によるｄｈｆｒ宿主細胞での使用のため）とネオ遺伝子（Ｇ４１８選択のため）が挙げられる。
【００７６】
多数の細胞型が、ＩＬ−２２タンパク質またはその融合タンパク質の発現に適した宿主細胞として作用可能である。機能的ＩＬ−２２タンパク質を発現することができる任意の細胞型を用いることができる。適当な哺乳類宿主細胞として、例えば、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト腎臓２９３細胞、ヒト表皮Ａ４３１細胞、ヒトＣｏｌｏ２０５細胞、３Ｔ３細胞、ＣＶ−１細胞、他の形質転換霊長類細胞株、正常二倍体細胞、一次組織のインビトロ培養に由来する細胞株、一次外移植片、ＨｅＬａ細胞、マウスＬ細胞、ＢＨＫ、ＨＬ−６０、Ｕ９３７、ＨａＫ、Ｒａｔ２、ＢａＦ３、３２Ｄ、ＦＤＣＰ−１、ＰＣ１２、Ｍ１ｘ、またはＣ２Ｃ１２細胞が挙げられる。
【００７７】
ＩＬ−２２タンパク質またはその融合タンパク質もまた、本発明の単離ポリヌクレオチドを１つ以上の昆虫発現ベクターの適当な制御配列内に対して作用可能に連結し、昆虫発現系を用いることで、産生することが可能である。バキュロウイルス／昆虫細胞発現系の材料および方法は、例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（ＭａｘＢａｃ（登録商標）キット）からキットのかたちで商業的に入手可能であり、そのような方法は、Ｓｕｍｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ，Ｔｅｘａｓ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ  Ｓｔａｔｉｏｎ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  Ｎｏ．１５５５（１９８７）（本明細書で援用する）に記載されているように、当該技術分野で公知である。ＩＬ−２２タンパク質の可溶形もまた、上記したように適当な単離ポリヌクレオチドを用いて昆虫細胞でも産生可能である。
【００７８】
あるいは、上記ＩＬ−２２タンパク質またはその融合タンパク質を、酵母等の下等真核生物または細菌等の原核生物で産生することが可能である。適当な酵母株として、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ株、Ｃａｎｄｉｄａ、または異種タンパク質を発現することが可能な任意の酵母が挙げられる。適当な細菌株として、異種タンパク質を発現することが可能である大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、マウスチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、または任意の菌株でも含む。
【００７９】
細菌における発現は、組換え型のタンパク質を組み込んでいる封入体の形成に帰着することが可能である。このように、組換え型のタンパク質のリフォールディングは、活性もしくはより活性のある物質を生産するために必要と思われる。細菌封入体から正しく折られた異種タンパク質を得るいくつかの方法は、当該技術分野で公知である。これらの方法は、一般に封入体からタンパク質を可溶化した後、カオトロピック試薬を用いてタンパク質を完全に変性させる。システイン残基がタンパク質の一次アミノ酸配列で存在する場合、ジスフィルド結合（レドックス系）を正しく形成することを可能とする環境でリフォールディングを達成することがしばしば必要である。リフォールディングの一般的方法は、Ｋｏｈｎｏ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．，１８５：１８７−１９５（１９９０）に開示されている。欧州特許第０４３３２２５号および同時係属米国特許出願第０８／１６３，８７７号は、他の適当な方法を記載している。
【００８０】
ＩＬ−２２タンパク質またはその融合タンパク質もまた、例えば、ＩＬ−２２タンパク質またはその融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む体細胞または生殖細胞によって特徴づけられるトランスジェニックのウシ、ヤギ、ブタ、またはヒツジの乳の成分として、トランスジェニック動物の産物として発現可能である。
【００８１】
ＩＬ−２２タンパク質またはその融合タンパク質の調製は、所望のタンパク質を発現するのに必要な培養条件下で培養形質転換宿主細胞を増殖させることで、おこなうことが可能である。次に、結果として生ずる発現タンパク質を培地または細胞抽出物から精製することが可能である。結果として生じる発現タンパク質は、それから培地または細胞抽出物から精製される可能性がある。ＩＬ−２２タンパク質またはその融合タンパク質の可溶形を、条件培地から精製することができる。本発明のＩＬ−２２タンパク質の膜結合形も、発現細胞から全膜分画から調製し、非イオン性界面活性剤（例えばＴｒｉｔｏｎＸ−１００）で膜を抽出することによって、精製することができる。
【００８２】
ＩＬ−２２タンパク質は、当業者に公知の方法を用いて精製され得る。例えば、商業的に入手可能なタンパク質濃縮フィルター（例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｐｅｌｌｉｃｏｎの限外濾過ユニット）を使用して本発明のＩＬ−２２タンパク質を濃縮することができる。濃縮ステップの後で、濃縮物をゲル濾過媒体等の精製用マトリックスに加えることができる。あるいは、陰イオン交換樹脂を用いることができる（例えば、ペンダント・ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）またはポリエチレンイミン（ＰＥＩ）基を持つマトリックスまたは基質）。上記マトリックスを、タンパク質精製で一般に使用されるアクリルアミド、アガロース、デキストラン、セルロース、または他のタイプのものとすることができる。あるいは、陽イオン交換ステップを用いることができる。適当な陽イオン交換体として、スルホプロピルまたはカルボキシメチル基を含む種々の不溶性マトリックスが挙げられる。スルホプロピル基が好まれる（例えばＳ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）カラム）。ＩＬ−２２タンパク質または培養液上清からの融合タンパクの精製は、コンカナバリンＡ−アガロース、ヘパリン−ｔｏｙｏｐｅａｒｌ（登録商標）またはシバクロンブルー３ＧＡＳｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）等の親和性樹脂に対して、一つ以上のカラム・ステップを含むものであってもよく、あるいはフェニルエーテル、ブチル・エーテル、またはプロピル・エーテル等の樹脂を使用する疎水的相互作用クロマトグラフィーによって、あるいは免疫アフィニティークロマトグラフィーによるものであってもよい。最後に、疎水性ＲＰ−ＨＰＬＣ媒体（例えば、ペンダント・メチルまたは他の脂肪族基を持つシリカゲル）を用いる１つ以上の逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）ステップを用いて、ＩＬ−２２タンパク質をさらに精製することができる。ＩＬ−２２タンパク質に対する抗体を含む親和性カラムもまた、公知の方法にもとづいて精製に用いることができる。前述の精製ステップの一部または全てを、種々の組合せでまたは他の公知の方法で、実質的に精製単離された組換えタンパク質を提供するために、使用することもできる。好ましくは、他の哺乳類のタンパク質を実質的に含まないように、単離ＩＬ−２２タンパク質を精製する。
【００８３】
本発明のＩＬ−２２タンパク質または融合タンパク質もまた、ＩＬ−２２に結合することができる薬剤（例えば、抗ＩＬ−２２抗体等のＩＬ−２２アンタゴニスト）をスクリーニングするために用いることが可能である。固定化もしくは非固定化の所望の結合タンパク質を用いた結合アッセイは当該技術分野で周知であり、本発明のＩＬ−２２タンパク質を用いるこの目的のために使用することが可能である。精製された細胞ベースもしくはタンパク質ベース（無細胞）のスクリーニングアッセイを用いて、そのような薬剤を同定することが可能である。例えば、ＩＬ−２２タンパク質を精製された形状で担体に固定してもよく、精製されたＩＬ−２２タンパク質に対する結合または潜在的リガンドを測定することが可能である。
【００８４】
ＩＬ−２２ポリペプチドを公知の従来の化学合成によって生成してもよい。合成手段によって本発明のタンパク質を作る方法は、当業者に知られている。合成して作られたタンパク質の配列は、タンパク質による一次、二次、または三次構造および／または立体配置的な特徴に基づいて、タンパク質活性等、タンパク質と共通の生物学的特性を有するものであってもよい。したがって、それらを、治療用化合物のスクリーニングで、また抗体の発現のための免疫学的プロセスで、天然および精製されたタンパク質に対する生物学的に活性がある置換物もしくは免疫学的置換物として用いることができる。
【００８５】
（抗ＩＬ−２２抗体およびその抗原結合フラグメント）
他の実施形態では、ＩＬ−２２アンタゴニストが抗体、またはその抗原結合フラグメントであり、ＩＬ−２２、好ましくは哺乳類（例えばヒトまたはマウス）のＩＬ−２２に結合する。一実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ‘）２または単鎖Ｆｖフラグメント）がモノクローナルまたは単一特異性抗体である。上記抗体またはそのフラグメントを、ヒト、ヒト化、キメラ、またはヒトＩＬ−２２に対するインビトロ生成抗体とすることができる。
【００８６】
ＩＬ−２２ポリペプチドを用いて動物を免疫して、ＩＬ−２２ポリペプチドと特異的に反応するポリクローナルおよびモノクローナル抗体を得ることも可能である。そのような抗体は、ＩＬ−２２全体を免疫原として用いることで、あるいはＩＬ−２２のフラグメントを用いることで得られる。ＩＬ−２２のより小さなフラグメントを用いて動物を免疫することも可能である。ペプチド免疫原は、さらに、カルボキシ末端にシステイン残基を含むものであってもよく、またキーホール・リンペット・ヘモシアニン（ＫＬＨ）等のハプテンと結合する。硫酸化チロシン残基によるチロシン残基の置換によって、付加的なペプチド免疫原を生成することも可能である。そのようなペプチドを合成するための方法は、例えばＲ．Ｐ．Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−２１５４（１９６３）；  Ｊ．Ｌ．Ｋｒｓｔｅｎａｎｓｋｙ，ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＥＳ  Ｌｅｔｔ．２１１，１０（１９８７）にあるように、当該技術分野で公知である。ＩＬ−２２タンパク質に結合していう中和または非中和抗体（好ましくはモノクローナル抗体）もまた、本明細書中に記載したＩＬ−２２関連疾患の処置に有用であると考えられる。これらの中和モノクローナル抗体は、ＩＬ−２２レセプター、例えばＩＬ−２２ＲもしくはＩＬ−１０Ｒ２またはそれらの組み合わせに対してのＩＬ−２２結合を阻害することが可能である。
【００８７】
下記の実施例５は、抗ＩＬ−２２抗体の産生をより詳細に説明する。ＩＬ−２２Ｒに対するＩＬ−２２の結合に妨害する抗ＩＬ−２２抗体の非限定的例は、「Ａｂ−０４」である。Ａｂ−０４（本明細書ではラット・モノクローナル抗体「Ｐ３／２」ともいう）はヒトＩＬ−２２に結合し、ヒトＩＬ−２２活性を中和する（実施例５、１６、および１７を参照せよ）。Ａｂ−０４を産生するハイブリドーマ細胞株は、２００３年６月５日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５２５５が割り当てられた。ＩＬ−１０Ｒ２に対するＩＬ−２２の結合に妨害する抗ＩＬ−２２抗体の別の非限定的例は、「Ａｂ−０２」である。Ａｂ−０２（本明細書ではラット・モノクローナル抗体「Ｐ３／３」ともいう）はマウスおよびヒトＩＬ−２２に結合し、マウスおよびヒトＩＬ−２２の活性を中和する（実施例５、１６、および１７を参照せよ）。Ａｂ−０２を産生するハイブリドーマ細胞株は、２００３年６月５日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５２５４が割り当てられた。
【００８８】
ＩＬ−２２に対するヒト・モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を、マウス系よりはむしろヒト免疫グロブリン遺伝子を持つトランスジェニック・マウスを用いて、生成することができる。目的とする抗体で免疫化したこれらのトランスジェニック・マウス由来の脾細胞を用いて、ヒト・タンパク質由来のエピトープに対して高い親和性を持つヒトｍＡｂを分泌するハイブリドーマを産生する（例えば、Ｗｏｏｄ等の国際特許出願ＷＯ９１／００９０６；Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ等のＰＣＴ公報ＷＯ  ９１／１０７４１；Ｌｏｎｂｅｒｇ等の国際特許出願ＷＯ  ９２／０３９１８；Ｋｅｙ等の国際特許出願９２／０３９１７；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．１９９４  Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６−８５９；  Ｇｒｅｅｎ，Ｌ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．１９９４  Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．７：１３−２１；  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．１９９４  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１−６８５５；  Ｂｒｕｇｇｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９３  Ｙｅａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ７：３３−４０；  Ｔｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９３  ＰＮＡＳ  ９０：３７２０−３７２４；  Ｂｒｕｇｇｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９１  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２１：１３２３−１３２６を参照せよ）。  
【００８９】
モノクローナル抗体は、組換えＤＮＡ技術の当業者に知られている他の方法によって生成することもできる。代替法（「組み合わせ抗体提示」方法と称す）は、特定の抗原特異性を持つ抗体フラグメントを同定して単離するために開発され、モノクローナル抗体を産生するために利用し得る（組み合わせ抗体提示の説明については、例えばＳａｓｔｒｙ  ｅｔ  ａｌ．１９８９  ＰＮＡＳ  ８６：５７２８；  Ｈｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．１９８９  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５；  およびＯｒｌａｎｄｉ  ｅｔ  ａｌ．１９８９  ＰＮＡＳ  ８６：３８３３を参照せよ）。上述したように、免疫原で動物を免疫化した後に、結果として生じるＢ細胞プールの抗体レパートリーをクローン化した。方法は、通常、オリゴマー・プライマーとＰＣＲの混合物を用いて免疫グロブリン分子の多様な集団の可変領域のＤＮＡの塩基配列を得ることに関して、公知である。例えば、５’リーダー（シグナル・ペプチド）配列および／またはフレームワーク１（ＦＲ１）配列に対応する混合オリゴヌクレオチド・プライマーを、保存３’定常領域プライマーに対するプライマーと同様に、多数のマウス抗体からの重鎖および軽鎖可変領域のＰＣＲ増幅に使用することができる（Ｌａｒｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｂｉｏｔｅｃｈｉｎｉｑｕｅｓ  １１：１５２−１５６）。類似の戦略もまた、ヒト抗体からヒト重鎖および軽鎖可変領域の増幅に使用することができる（Ｌａｒｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２：１０６−１１０）。
【００９０】
キメラ抗体（キメラ免疫グロブリン鎖を含む）を、当該技術分野で公知であられる組換えＤＮＡ技術によって産生することができる。例えば、マウス（または他の種）のモノクローナル抗体分子のＦｃ定常領域をコードしている遺伝子を制限酵素で消化してマウスのＦｃをコードしている領域を除去し、ヒトＦｃ定常領域をコードしている遺伝子の等価部分を置換する（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９；  Ａｋｉｒａ，ｅｔ  ａｌ．，欧州特許出願第１８４，１８７号；  Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ．，欧州特許出願第１７１，４９６号；  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，欧州特許出願第１７３，４９４号；  Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，国際特許出願ＷＯ  ８６／０１５３３；  Ｃａｂｉｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．米国特許出願第４，８１６，５６７号；  Ｃａｂｉｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，欧州特許出願第１２５，０２３号；  Ｂｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０４１−１０４３）；  Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）ＰＮＡＳ  ８４：３４３９−３４４３；  Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３９：３５２１−３５２６；  Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）ＰＮＡＳ  ８４：２１４−２１８；  Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．４７：９９９−１００５；  Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４４６−４４９；  およびＳｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｊ．Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８０：１５５３−１５５９を参照せよ）。
【００９１】
抗体または免疫グロブリン鎖は、当該技術分野で公知である方法によってヒト化され得る。抗原結合に直接関与していないＦｖ可変領域の配列をヒトＦｖ可変領域由来の等価配列と置換することで、ヒト化の免疫グロブリン鎖を含むヒト化抗体を生成することができる。ヒト化抗体を生成する一般的方法は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２−１２０７，ｂｙ  Ｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４によって、またＱｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．ＵＳ  ５，５８５，０８９，ＵＳ  ５，６９３，７６１  ａｎｄ  ＵＳ  ５，６９３，７６２によって提供され、これらの文献すべての内容を本明細書で援用する。これらの方法は、重鎖または軽鎖の少なくとも１つから免疫グロブリンＦｃ可変領域のすべてまたは一部をコードする核酸配列を単離、操作、および発現することを含む。そのような核酸の供給源は、当業者に周知であり、例えば、所定の標的に対する抗体を産生するハイブリドーマから得ることが可能である。次に、上記ヒト化抗体またはそのフラグメントをコードする組換えＤＮＡを適当な発現ベクターにクローン化することができる。
【００９２】
ヒト化またはＣＤＲ移植抗体分子、あるいは免疫グロブリンをＣＤＲ移植またはＣＤＲ置換によって産生することができ、ここで免疫グロブリン鎖の１つ、２つ、またはすべてのＣＤＲで置き換えることができる。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号；Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．１９８６  Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５５２−５２５；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．１９８８  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４；Ｂｅｉｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．１９８８  Ｊ．Ｉｍｕｍｕｎｏｌ．１４１：４０５３−４０６０；Ｗｉｎｔｅｒ  ＵＳ  ５，２２５，５３９（これらの文献すべての内容を明白に本明細書に援用する）。Ｗｉｎｔｅｒは、本発明のヒト化抗体を調製するために用いることが可能であるＣＤＲ移植方法を記載している（英国特許出願ＧＢ  ２１８８６３８Ａ、１９８７年３月２６日出願；Ｗｉｎｔｅｒ  ＵＳ  ５，２２５，５３９）これらの文献すべての内容を明白に本明細書に援用する。特定のヒト抗体のＣＤＲのすべてを非ヒトＣＤＲの少なくとも一部もしくはＣＤＲのいくつかのみを非ヒトＣＤＲに置き換えることも可能である。所定の抗原に対するヒト化抗体の結合に必要なＣＤＲの数を置き換えることのみが必要である。
【００９３】
欠失、付加、または抗体の他の部分（例えば定常領域）の置換等によって修飾されたモノクローナル、キメラ、およびヒト化抗体もまた、本発明の範囲内である。例えば、抗体を以下のように修飾する。すなわち、（ｉ）定常領域を欠失させることで、（ｉｉ）定常領域を別の定常領域（例えば、抗体の半減期、安定性またはその抗体に対する親和性を増加させることを意味する定常領域、または別の種もしくは抗体クラス由来の定常領域）で置き換えることで、あるいは（ｉｉｉ）とりわけ、グリコシル化部位の数、エフェクター細胞機能、Ｆｃレセプター（ＦｃＲ）結合、補体結合等を変えるために定常領域内の１つ以上のアミノ酸を修飾することによる。
【００９４】
抗体の定常領域を変える方法は、当該技術分野で公知である。変更された機能、例えばエフェクター・リガンド（例えば細胞上のＦｃＲ）を有する抗体、もしくは補体のＣｌ成分は、抗体の定常領域にある少なくとも１つのアミノ酸残基を異なる残基で置換することで産生することができる（例えば、ＥＰ  ３８８，１５１  Ａｌ，ＵＳ  ５，６２４，８２１、およびＵＳ  ５，６４８，２６０を参照せよ。なお、これらの文献すべての内容を本明細書で援用する）。マウスまたは他の種の免疫グロブリンに適用した場合にそれらの機能を軽減もしくは除去する同様の種類の変更が記述され得る。
【００９５】
例えば、ＦｃＲ（例えばＦｃガンマＲ１）に対して、または側鎖上に適当な機能性を持つ残基によって特定の残基を置換することで、またはフェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、もしくはアラニン等の荷電官能基を導入することで、Ｃ１ｑ結合に対して、抗体（例えばヒトＩｇＧ等のＩｇＧ）のＦｃ領域の親和性を変えることが可能である（例えば、ＵＳ５，６２４，８２１を参照せよ）。
【００９６】
（薬学的組成物）
ＩＬ−２２結合剤、例えばＩＬ−２２アンタゴニスト（例えば抗ＩＬ−２２抗体およびその抗原結合フラグメント）を、医薬的に許容される担体と組み合わせた場合に薬学的組成物として用いることができる。そのような組成物は、ＩＬ−２２アゴニストまたはアンタゴニストおよび担体に加えて、種々の希釈剤、充填剤、塩類、緩衝液、安定化剤、可溶化剤、さらに当該技術分野で周知の他の材料を含むものであってもよい。「医薬的に許容される」という表現は、活性成分の生物活性の有効性を妨害しない非毒性材料を意味する。担体の特性は、投与経路に依存する。
【００９７】
本発明の薬学的組成物は、リポソームの形状であってもよく、この中でＩＬ−２２−アンタゴニストは医薬的に許容される他の担体に加えて両親媒性の薬剤に結合することが可能である。この両親媒性薬剤として、ミセルとして凝集した状態で存在する脂質、不溶性の単層、液晶、または水溶液中にあるラメラ層が挙げられる。リポゾーム製剤のための適当な脂質として、限定さえるものではないが、モノグリセリド、ジグリセリド、スルファチド、リゾレシチン、ホスホリピド、サポニン、胆汁酸等が挙げられる。そのようなリポソーム製剤の調製は、例えば、米国特許第４，２３５，８７１号、米国特許第４，５０１，７２８号、米国特許第４，８３７，０２８号、および米国特許第４，７３７，３２３号（これらの文献すべてを本明細書で援用する）に開示されているように、当該技術分野のレベル内にある。
【００９８】
本発明の処置法または使用法を実施する際に、治療上有効な量のＩＬ−２２アンタゴニストを被検体、例えば哺乳類（例えばヒト）に投与する。ＩＬ−２２アンタゴニストの投与は、単独で、または他の治療法、例えば以下により詳しく説明する抗炎症剤と組み合わせて、本発明の方法にもとづいておこなわれる。１種類以上の薬剤と併用して投与する場合、ＩＬ−２２アンタゴニストを第２の薬剤と同時に、または連続して投与することが可能である。連続投与の場合、主治医は他の薬剤と併用したＩＬ−２２アンタゴニストの投与を適当な順序に決める。
【００９９】
薬学的組成物で使用され、あるいは本発明の方法を実施するために用いられるＩＬ−２２アンタゴニストの投与を種々の従来法、例えば経口摂取、吸入、または皮膚、皮下、あるいは静脈注射でおこなうことができる。患者に対する静脈内注射が好ましい。
【０１００】
治療上有効な量のＩＬ−２２アンタゴニストを経口投与する場合、結合剤は錠剤、カプセル、粉剤、溶液、またはエリキシルの形状である。錠剤の形状で投与される場合、本発明の薬学的組成物はゼラチン等の固形担体をさらに含むものであってもよい。錠剤、カプセル、および粉剤は、約５〜９５％の結合剤、好ましくは約２５〜９０％の結合剤を含む。液体の形態で投与する場合、液体担体、例えば水、石油、落花生油、鉱油、大豆油、または胡椒油、あるいは合成油を添加してもよい。薬学的組成物の液体形態は、さらに生理的食塩水、ブドウ糖、または他糖類溶液、あるいはグリコール（例えばエチレングリコール、プロピレングリコール、またはポリエチレングリコール）をさらに含むものであってもよい。液体形態で投与した場合、薬学的組成物は約０．５〜９０重量％の結合剤、好ましくは約１〜５０重量％の結合剤を含むものであってもよい。
【０１０１】
治療上有効な量のＩＬ−２２アンタゴニストを静脈内、皮膚または皮下注射によって投与する場合、結合剤は発熱性物質無しの非経口的に許容される水溶液の形態である。ｐＨ、等張性、安定性等に関して与えられるべきものを持つそのような非経口的に許容されるタンパク質溶液は、当該技術分野の範囲内である。静脈、皮膚、または皮下注射にとって好ましい薬学的組成物は、結合剤に加えて、等張性のビヒクルを含まなければならず、このビヒクルとして、塩化ナトリウム注射、リンゲル注射、ブドウ糖注射、ブドウ糖および塩化ナトリウム注射、乳酸化リンゲル溶液、または当該技術分野で公知の他のビヒクルが挙げられる。
【０１０２】
本発明の薬学的組成物に含まれるＩＬ−２２結合剤の量は、処置している症状の性質と重篤度に依存し、また患者が事前に受けた処置の性質に依存する。最終的に、主治医は個々の患者を処置するための結合剤の量を決定する。最初に、主治医は結合剤を低量で投与し、患者の反応を観察する。患者にとって最適な治療効果が得られるまで、より多くの量の結合剤が投与され、その時点で投与量は一般にそれ以上増加されない。本発明の方法を実施するために使用される種々の薬学的組成物は、体重１ｋｇあたり約０．１μｇ〜約１００ｍｇのＩＬ−２２結合剤を含まなければならないことが考えられる。
【０１０３】
本発明の薬学的組成物を使用している静脈内治療の継続は、処置されている疾患の重症度と個々の患者の状態および潜在的特有の反応とに依存する。ＩＬ−２２結合剤の各々の適用期間が１２〜２４時間の連続静脈内投与の範囲にあると考えられる。最後に、主治医は本発明の薬学的組成物を使用している静脈内治療の適当な期間を決定する。
【０１０４】
（ＩＬ−２２アゴニストおよびＩＬ−２２アンタゴニストの使用）
ＩＬ−２２は、炎症誘発作用（例えば急性期反応を誘導する）を伴うサイトカインである。以下の実施例で詳細に説明されるように、ＩＬ−２２は炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−１およびＴＮＦα）によって引き起こされるものに関連した変化を誘導し、さらにＩＬ−２２のインヒビターがＩＬ−２２関節リウマチの症状を軽減する。したがって、ＩＬ−２２、および／またはＩＬ−２２のレベルを上昇させるかもしくはＩＬ２２（および本発明の他の分子）の作用を模倣する薬剤は、特定の臨床的状況下でアゴニストとして有用であり、この分子のアンタゴニストが他の臨床的状況下で有用であり、特に炎症状態の調節をするものがもとめられている。アゴニストまたはアンタゴニストが、疾患が好ましいかどうかは、疾患病理学（例えば、刺激の性質および細胞の微小環境に関与する細胞種類等の疾患寄生病理学の特定の局面）に依存する。
【０１０５】
ヒトＩＬ−２２アゴニストとして、限定されることなく、ヒトＩＬ−２２タンパク質およびフラグメント；それらの欠失突然変異および付加突然変異；ならびにヒトＩＬ−２２が指向するレセプターまたは他の標的と相互作用するペプチドおよび低分子化合物が挙げられる。ヒトＩＬ−２２アンタゴニストとしては、限定されることなく、ヒトＩＬ−２２を指向する抗体；レセプターの可溶形状またはヒトＩＬ−２２が指向する他の標的；ヒトＩＬ−２２が指向するレセプターまたは他の標的に対して指向する抗体；ならびにヒトＩＬ−２２とそのレセプターもしくは他の標的との相互作用を阻害または干渉するペプチドおよび低分子化合物が挙げられる。
【０１０６】
一局面では、本発明は、活性を阻害するのに十分な量で、細胞（例えば上皮細胞）をＩＬ−２２アンタゴニスト（例えば、抗ＩＬ−２２抗体またはその抗原結合フラグメント）と接触させることで、少なくとも１つのＩＬ−２２関連活性を抑制する方法を特徴づける。ＩＬ−２２のアンタゴニスト（例えば、本明細書中に記載されるように、中和抗体）もまた、免疫ＩＬ−２２関連活性の抑制が求められる被検体に投与される。これらの状態として、自己免疫疾患（例えば関節疾患）、呼吸器疾患、または炎症状態が挙げられる。出願人は、ＩＬ−２２活性が中和抗ＩＬ−２２抗体を用いたＩＬ−２２活性の減少がマウスのコラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）動物モデルでの炎症症状を改善することを示した（実施例９）。ＩＬ−２２ｍＲＮＡの発現は、ＣＩＡマウスの前足で上方制御される（実施例１０）。したがって、例えばＩＬ−２２関連疾患の処置もしくは予防のために、被検体内で、ＩＬ−２２アンタゴニストを用いてインビボ免疫抑制の誘導に用いられる。本明細書で使われるように、「被検体」という用語はヒトおよび非ヒト動物を包含することを意図している。好ましいヒト動物として、異常なＩＬ−２２活性によって特徴づけられる疾患を有するヒト患者が挙げられる。本発明の「非ヒト動物」という用語として、全ての脊椎動物、例えば哺乳類および非哺乳類、例えばヒト以外の霊長類、齧歯動物、ヒツジ、イヌ、ウシ、鶏、両生類、爬虫類、その他が挙げられる。
【０１０７】
処置または予防し得るＩＬ−２２関連疾患の非限定例として、限定されるものではないが、移植拒絶反応、自己免疫疾患（例えば、糖尿病、関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎を含む）、多発性硬化症、脳脊髄炎、重症筋無力症、全身性紅斑性狼瘡、自己免疫性甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎と湿疹性皮膚炎を含む）、シェーグレン症候群、クローン病、アフタ性潰瘍、虹彩炎、結膜炎、角結膜炎、潰瘍性大腸炎、脊椎関節症、強直性脊椎炎、内因性喘息、アレルギー喘息、皮膚エリテマトーデス、強皮症、膣炎、直腸炎、薬疹、ライ病反転反応、ライ性結節性紅斑、自己免疫性ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、急性壊死性の出血性脳症、特発性かつ左右相称の進行性感覚神経聴力損失、再生不良性貧血、真正赤血球性貧血、特発性血小板減少症、多発性軟骨炎、ヴェーゲナー肉芽腫症、慢性活動性肝炎、スティーベンズ−ジョンソン症候群（特発性のばか騒ぎ）扁平苔癬、グレーブス病、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、後部ブドウ膜炎、および間質性肺線維症）呼吸器疾患（例えば喘息またはＣＯＰＤ）；皮膚（例えば乾癬）の炎症性の状態、肝臓（例えば肝炎）、腎臓（例えば腎炎）、および膵臓（例えば膵炎）；移植片対宿主病、およびアレルギー（例えばアトピー性アレルギー）；ならびに癌（例えば固形または軟部組織腫瘍）が挙げられる。本発明の結合剤を使用し得る好ましい疾患として、関節炎（例えば関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎と強直性脊椎炎（望ましくは、関節リウマチ））、多発性硬化症、Ｉ型糖尿病、ループス（ＳＬＥ）、ＩＢＤ、クローン病、ＣＯＰＤ、喘息、血管炎、アレルギー、強皮症、ならびに皮膚（例えば乾癬）、肝臓（例えば肝炎）、腎臓（例えば腎炎）、および膵臓（例えば膵炎）の炎症状態が挙げられる。
【０１０８】
別の実施形態では、ＩＬ−２２アンタゴニストは、単独で、または本明細書に記載したような他の治療薬（例えば、ＴＮＦアンタゴニスト）と組み合わせて、多発性骨髄腫および関連Ｂリンパ球悪性腫瘍を処置するために使用し得る（Ｂｒｅｎｎｅ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｂｌｏｏｄ  Ｖｏｌ．９９（１０）：３７５６−３７６２）。
【０１０９】
一実施形態では、ＩＬ−２２アンタゴニスト（例えば、その薬学的組成物）を併用療法で投与する。すなわち、他の薬剤、例えば免疫および炎症性疾患等の病的状態または疾患を処置するのに有用である治療薬と併用する「組み合わせで」という用語は、薬剤が実質的に併用されて、同時にまたは連続的に投与がおこなわれることをいう。連続的に与えられる場合、第２の化合物の投与開始時に、処置工程での有効濃度で、２つの化合物の第１のものが好ましくは依然として検出可能である。
【０１１０】
例えば、併用療法は、１種類以上のさらなる治療薬（例えば、以下により詳細に説明するように、１つ以上のサイトカインおよび成長因子インヒビター、免疫抑制剤、抗炎症薬、代謝インヒビター、酵素インヒビターおよび／または細胞障害剤または細胞増殖抑制剤）と同時配合および／または同時投与された、１種類以上のＩＬ−２２アンタゴニスト、例えば本明細書に記載したようなＩＬ−２２に対する抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、キメラ、ヒト化、ヒト、またはインビトロ生成抗体もしくはその抗原結合フラグメント）を含むことができる。さらにまた、本明細書に記載される１つ以上のＩＬ−２２アンタゴニストを本明細書に記載される治療薬の２つ以上と組み合わせて使用してもよい。
【０１１１】
そのような併用療法は、より低い投与量で投与された治療薬を有利に利用することが可能であることから、種々の単独療法に関連する潜在的な毒性または合併症が回避される。さらに、本明細書に開示された治療薬は、ＩＬ−２２レセプター経路とは異なる経路で作用することから、ＩＬ−２２アンタゴニストの効果を強化および／または共働すると思われる。理論に束縛されることなく、例えば、全身性炎症とは対照的に組織炎症の増幅剤または制御剤として作用することで、ＩＬ−２２がその炎症効果を奏することが可能であると出願人は考える。出願人の考えは、少なくとも部分的に、ＩＬ−２２Ｒの発現が免疫細胞の循環よりも組織部位に局在化するように見える知見にもとづく。
【０１１２】
したがって、本明細書に記載した抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメント等を用いたＩＬ−２２活性の抑制は、本明細書に記載したような全身性抗炎症モダリティよりも効果的な組織特異的抗炎症活性を提供することが可能である。さらに、本明細書に記載した抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメント等を用いた局所的ＩＬ−２２活性の抑制は、本明細書に記載した全身性抗炎症モダリティとの組み合わせにとって有用な候補を提供し得る。
【０１１３】
一実施形態では、本明細書に記載した１つ以上のＩＬ−２２アンタゴニストを、他のサイトカインまたは成長因子アンタゴニスト（例えば、可溶性レセプター、ペプチド、インヒビター、低分子、リガンド融合）、または他の標的に結合する抗体もしくは抗原結合フラグメント（例えば、他のサイトカインもしくは成長因子、それらのレセプター、もしくは他の細胞表面分子に結合する抗体）；ならびに抗炎症性サイトカインもしくはそれらのアゴニストのような、１種以上のさらなる薬剤と、同時配合および／または同時投与され得る。本明細書に記載したＩＬ−２２アンタゴニストと組み合わせて使用し得る薬剤の非限定的例として、限定されるものではないが、１種類以上のアンタゴニスト、例えばＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、およびＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒのアンタゴニスト；サイトカインまたは成長因子もしくはそのレセプター、例えば腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ＬＴ、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、およびＰＤＧＦが挙げられる。ＩＬ−２２アンタゴニストもまた、細胞表面分子、例えばＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８，ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２），ＣＤ９０、またはそれらのリガンド（ＣＤ１５４（ｇｐ３９またはＣＤ４０Ｌ）、またはＬＦＡ−１／ＩＣＡＭ−１、およびＶＬＡ−４／ＶＣＡＭ−１を含む）（Ｙｕｓｕｆ−Ｍａｋａｇｉａｎｓａｒ  Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｍｅｄ  Ｒｅｓ  Ｒｅｖ  ２２（２）：１４６−４７）に対する抗体等のインヒビターと組み合わせて用いることもできる。本明細書に記載したＩＬ−２２アンタゴニストと組み合わせて使用し得る好ましいアンタゴニストとして、ＩＬ−１、ＩＬ−１２、ＴＮＦα、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、およびＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒのアンタゴニストが含まれる。
【０１１４】
それらの薬剤の例として、ＩＬ−１２アンタゴニスト、例えばＩＬ−１２（好ましくはヒトＩＬ−１２）に結合するキメラ、ヒト化、ヒト、またはインビトロ生成抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）、例えばＷＯ００／５６７７２  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ／ＢＡＳＦ）に開示された抗体；ＩＬ−１２レセプターインヒビター、例えばヒトＩＬ−１２レセプターに対する抗体；およびＩＬ−１２レセプター、例えばヒトＩＬ−１２レセプターの可溶性フラグメント挙げられる。ＩＬ−１５アンタゴニストの例として、ＩＬ−１５もしくはそのレセプターに対する抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）、例えばヒトＩＬ−１５もしくはそのレセプター、ＩＬ−１５レセプターの可溶性フラグメント、およびＩＬ−１５結合タンパク質に対するキメラ、ヒト化、ヒト、またはインビトロ生成抗体が挙げられる。ＩＬ−１８アンタゴニストの例として、例えば、ヒトＩＬ−１８、ＩＬ−１８レセプターの可溶性フラグメント、およびＩＬ−１８結合タンパク質に対するキメラ、ヒト化、ヒト、またはインビトロ生成抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）（ＩＬ−１８１３Ｐ，Ｍａｌｌｅｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｃｉｔｅ．Ｒｅｓ．２８）。ＩＬ−１アンタゴニストの例として、インターロイキン−１−変換酵素（ＩＣＥ）インヒビター、例えばＶｘ７４０、ＩＬ−１アンタゴニスト、例えばＩＬ−１ＲＡ（ＡＮＩＫＩＮＲＡ，ＡＭＧＥＮ）、ｓＩＬ１ＲＩＩ（Ｉｍｍｕｎｅｘ）、および抗ＩＬ−１レセプター抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）が挙げられる。
【０１１５】
ＴＮＦアンタゴニストの例として、ＴＮＦ（例えば、ヒトＴＮＦａ）に対する抗体、例えばキメラ、ヒト化、ヒト、またはインビトロ生成抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）、例えばＤ２Ｅ７，（ヒトＴＮＦα抗体、Ｕ．Ｓ．６２５８，５６２；ＢＡＳＦ）、ＣＤＰ−５７１／ＣＤＰ−８７０／ＢＡＹ−１０−３３５６（ヒト化抗ＴＮＦα抗体：Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ｃＡ２（キメラ抗ＴＮＦα抗体；Ｒｅｍｉｃａｄｅ（商標）、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）；抗ＴＮＦ抗体フラグメント（例えば、ＣＰＤ８７０）：ＴＮＦレセプターの可溶性フラグメント、例えばＰ５５もしくはＰ７５ヒトＴＮＦレセプターまたはその誘導体、例えば７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤＴＮＦレセプター−ＩｇＧ融合タンパク質、Ｅｎｂｒｅｌ（商標）；Ｉｍｍｕｎｅｘ；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９４）Ｖｏｌ．３７，Ｓ２９５；  Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｍｅｄ．（１９９６）Ｖｏｌ．４４，２３５Ａ）、ｐ５５  ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（５５  ｋＤ  ＴＮＦレセプター−ＩｇＧ融合タンパク質（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ））；酵素アンタゴニスト、例えばＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）インヒビター（例えば、アルファ−スルホニルヒドロキサム酸誘導体、ＷＯ  ０１／５５１１２、およびＮ−ヒドロキシホルムアミドＴＡＣＥインヒビターＧＷ  ３３３３、−００５、もしくは−０２２）；  ならびにＴＮＦ−ｂｐ／ｓ−ＴＮＦＲ（可溶性ＴＮＦ結合タンパク質；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８４；  Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．−  Ｈｅａｒｔ  ａｎｄ  Ｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ（１９９５）Ｖｏｌ．２６８，ｐｐ．３７−４２を参照せよ）。好ましいＴＮＦアンタゴニストは、ＴＮＦレセプター、例えばｐ５５もしくはｐ７５ヒトＴＮＦレセプターまたはその誘導体、例えば７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ、およびＴＮＦａ変換酵素（ＴＡＣＥ）インヒビターである。
【０１１６】
他の実施形態では、本明細書に記載したＩＬ−２２アンタゴニストを以下のものの１つ以上と組み合わせて投与することができる。すなわち、ＩＬ−１３アンタゴニスト、例えば、可溶性ＩＬ−１３レセプター（ｓＩＬ−１３）および／またはＩＬ−１３に対する抗体；ＩＬ−２アンタゴニスト、例えばＤＡＢ４８６−１Ｌ−２および／またはＤＡＢ３８９−ＩＬ−２（ＩＬ−２融合タンパク質；Ｓｅｒａｇｅｎ；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９３）Ｖｏｌ．３６，１２２３を参照せよ）、および／またはＩＬ−２Ｒに対する抗体、例えば、抗Ｔａｃ（ヒト化抗ＩＬ−２Ｒ；Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９０  Ｍａｒ  １；５０（５）：１４９５−５０２）である。さらに別の組み合わせとして、非欠乏性抗ＣＤ４インヒビター（ＩＤＥＣ−ＣＥ９．１／ＳＢ２１０３９６（非欠乏性霊長類化抗ＣＤ４抗体；ＩＤＥＣ／ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）と組み合わせたＩＬ−２１アンタゴニストが挙げられる。さらに別の好ましい組み合わせとして、抗体、可溶性レセプター、もしくはアンタゴニスト・リガンドを含む同時刺激経路ＣＤ８０（Ｂ７．１）もしくはＣＤ８６（Ｂ７．２）のアンタゴニスト；さらにはｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ）、抗炎症性サイトカイン、例えばＩＬ−４（ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−１０（ＳＣＨ５２０００；組換えＩＬ−１０ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−１３およびＴＧＦβ、ならびにそれらのアゴニスト（例えば、アゴニスト抗体）が挙げられる。
【０１１７】
他の実施形態では、１つ以上のＩＬ−２２アンタゴニストを、１つ以上の炎症剤、免疫抑制剤、または代謝もしくは酵素インヒビターとともに同時配合および／または同時投与することができる。本明細書に記載したＩＬ−２２アンタゴニストと組み合わせて使用し得る薬物またはインヒビターの非限定的例として、限定されるものではないが、１つ以上の、非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、例えばイブプロフェン、Ｔｅｎｉｄａｐ（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９、Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）、ｓ２８０）を参照せよ）、Ｎａｐｒｏｘｅｎ（例えば、Ｎｅｕｒｏ  Ｒｅｐｏｒｔ（１９９６）Ｖｏｌ．７、ｐｐ．１２０９−１２１３を参照せよ）、Ｍｅｌｏｘｉｃａｍ、Ｐｉｒｏｘｉｃａｍ、Ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ、およびＩｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ；  Ｓｕｌｆａｓａｌａｚｉｎｅ（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８１を参照せよ）；プレドニゾロン等の副腎皮質ステロイド；  サイトカイン抑制性抗炎症剤（ＣＳＡＩＤ）；ヌクレオチド生合成のインヒビター、例えば、プリン生合成（葉酸アンタゴニスト）インヒビター（例えば、メトトレキサート（Ｎ−［４−［（２，４−ジアミノ６−プテリジニル）メチル］メチルアミノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸）；およびピリミジン生合成インヒビター、例えば、ジヒドロオロット酸デヒドロゲナーゼ（ＤＨＯＤＨ）インヒビター（例えば、レフルノミド（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ１３１；Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９６）Ｖｏｌ．４５，ｐｐ．１０３−１０７を参照せよ）が挙げられる。
【０１１８】
さらなるインヒビターの例として、１つ以上の、副腎皮質ステロイド（経口、吸入、および局所注射）、免疫抑制剤（例えばシクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ−５０６））；およびｍＴＯＲインヒビター、例えばシロリムス（ラパマイシン）またはラパマイシン誘導体、例えば可溶性ラパマイシン誘導体（例えば、エステル・ラパマイシン誘導体、例えばＣＣＩ−７７９（Ｅｌｉｔ．Ｌ．（２００２）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ  ３（８）：１２４９−５３；  Ｈｕａｎｇ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ  ３（２）：２９５−３０４）；  炎症誘発性サイトカイン（例えばＴＮＦαまたはＩＬ−１（例えばＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼインヒビター））による情報伝達に妨害する薬剤；ＣＯＸ２インヒビター、例えばセレコキシブおよびその変異体、ＭＫ−９６６、例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ８１を参照せよ）；ホスホジエステラーゼインヒビター、例えばＲ９７３４０１（ホスホジエステラーゼＩＶ型インヒビター；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８２を参照せよ）；ホスホリパーゼインヒビター、例えばサイトゾル・ホスホリパーゼ２（ｃＰＬＡ２）（例えばトリフルオロメチル・ケトンアナログ（Ｕ．Ｓ．６，３５０，８９２））；脈管内皮細胞成長因子または成長因子受容体（例えばＶＥＧＦインヒビターおよび／またはＶＥＧＦ−Ｒインヒビター）のインヒビター；ならびに血管形成インヒビターが挙げられる。ＩＬ−２２アンタゴニストと組み合わせて使用するのに好ましい治療薬は、免疫抑制剤、例えばシクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ−５０６）；およびｍＴＯＲインヒビター、例えばシロリムス（ラパマイシン）またはラパマイシン誘導体）、例えば可溶性ラパマイシン誘導体（例えば、エステル・ラパマイシン誘導体（例えばＣＣＩ−７７９）；ＣＯＸ２インヒビター（例えばそれのセレコキシブおよびその変異体；さらにホスホリパーゼインヒビター（例えばサイトゾル・ホスホリパーゼ２（ｃＰＬＡ２）（例えばトリフルオロメチル・ケトンアナログ）のインヒビターである。
【０１１９】
ＩＬ−２２アンタゴニストと組み合わせることができる治療薬のさらなる例として、１つ以上の、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）、アザチオプリン・スルファサラジン；メサラジン；オルサラジン・クロロキニン／ヒドロキシクロロキン；  ペンクリアミン；金チオリンゴ酸塩（筋肉内および経口）；アザチオプリン；コチシン；ベータ−２アドレナリン受容体アゴニスト（サルブタモール、テルブタリン、サルメテラール）；キサンチン（テオフィリン、アミノフィリン）；クロモグリク酸；ネドクロミル；ケトチフェン；イプラトロピウムおよびオキシトロピウム；ミコフェノール酸モフェチル；アデノシン作動薬；抗血栓症薬；補体インヒビター；ならびにアドレナリン作動薬が挙げられる。
【０１２０】
特定の免疫疾患を処置または予防するために他の治療薬と組み合わせられる本明細書に開示されたＩＬ−２２アンタゴニストの用途を、以下にさらに詳細に述べる。
【０１２１】
ＩＬ−２２アンタゴニストが組み合わせされ得る関節疾患（例えば関節リウマチ、炎症性関節炎、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、および乾癬性関節炎）を処置または予防するための薬剤の非限定的例として、１つ以上の以下のものが挙げられる。すなわち、本明細書に記載したようなＩＬ−１２アンタゴニスト、ＮＳＡＩＤ；ＣＳＡＩＤ；ＴＮＦ、例えばＴＮＦα、本明細書に記載したようなアンタゴニスト；本明細書に記載したような非欠乏性抗ＣＤ４抗体；本明細書に記載したようなＩＬ−２アンタゴニスト；抗炎症性サイトカイン、例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、およびＴＦＧａ、またはそれらのアゴニスト；本明細書に記載したようなＩＬ−１またはＩＬ−１レセプター・アンタゴニスト）；本明細書に記載したようなホスホジエステラーゼインヒビター；本明細書に記載したようなＣＯＸ−２インヒビター；Ｉｌｏｐｒｏｓｔ（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ８２を参照せよ）；メトトレキサート；サリドマイド（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８２を参照せよ）、およびサリドマイド類似構造薬（例えば、Ｃｅｌｇｅｎ）；レフルノミド；プラスミノーゲン活性化（例えばトラネキサム酸）のインヒビター；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８４を参照せよ；サイトカインインヒビター（例えばＴ−６１４）；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８２を参照せよ；プロスタグランジンＥｌ（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８２を参照せよ）；アザチオプリン（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８１を参照せよ）；インターロイキン−１変換酵素（ＩＣＥ）のインヒビター；  ｚａｐ−７０またはｌｃｋインヒビター（チロシンキナーゼｚａｐ−７０またはＩｃｋのインヒビター）；本明細書に記載されたような脈管内皮細胞成長因子または血管内皮細胞成長因子受容体のインヒビター；本明細書に記載されたような血管形成インヒビター；副腎皮質ステロイド抗炎症剤（例えばＳＢ２０３５８０）；  ＴＮＦ−コンバターゼインヒビター；インターロイキン−１１（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），ｓ２９６を参照せよ）；インターロイキン−１３（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），ｓ３０８を参照せよ）；インターロイキン−１７  インヒビター（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ１２０を参照せよ）；金；ペニシラミン；クロロキン；ヒドロキシクロロキン；クロラニブシ���；シクロホスファミド；シクロスポリン；全身リンパ組織照射；抗胸腺細胞グロブリン；  ＣＤ５−毒素；経口投与ペプチド類およびコラーゲン；ロベンザリット二ナトリウム；サイトカイン制御剤（ＣＲＡ）ＨＰ２２８およびＨＰ４６６（Ｈｏｕｇｈｔｅｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）；ＩＣＡＭ−１アンチセンス・ホスホロチオネート・オリゴデオキシヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ２３０２；Ｉｓｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）；可溶性補体レセプター１（  Ｔｐ１０；Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）；プレドニゾン；オルゴテイン；グリコサミノグリカン・ポリ硫酸塩；ミノサイクリン；抗ＩＬ２Ｒ抗体；海産および植物性脂質（魚および植物種子脂肪酸；例えばＤｅＬｕｃａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．２１：７５９−７７７）を参照せよ）；オーラノフィン；フェニルブタゾン；メクロフェナム酸；フルフェナム酸；免疫グロブリン静注；ジレウトン；ミコフェノール酸（ＲＳ−６１４４３）；タクロリムス（ＦＫ−５０６）；シロリムス（ラパマイシン）；アミプリロース（セラフェクチン）；クラドリビン（２−クロロデオキシアデノシン）；およびアザリビンが挙げられる。好ましい組合せとして、１つ以上のＩＬ−２１アンタゴニストをメトトレキサートまたはレフルノミド、中程度または重症の関節リウマチの症例ではシクロスポリンと組み合わせることが挙げられる。
【０１２２】
関節疾患を処置するためにＩＬ−２２アンタゴニストと組み合わせて使用するインヒビターの好ましい例として、ＴＮＦアンタゴニスト（例えば、キメラ、ヒト化、ヒト、またはインビトロ生成抗体、またはその抗原結合フラグメント）であり、ＴＮ−Ｆ；ＴＮＦレセプターの可溶性フラグメント、例えば、ｐ５５もしくはｐ７５ヒトＴＮＦレセプターまたはその誘導体、例えば７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤＴＮＦレセプター−ＩｇＧ融合タンパク質、Ｅｎｂｒｅｌ（商標）、ｐ５５ｋＤＴＮＦレセプター−ＩｇＧ融合タンパク質；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト、例えばＴＮＦａ変換酵素（ＴＡＣＥ）インヒビター）；  ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒのアンタゴニスト；Ｔ細胞およびＢ細胞減少剤（例えば抗ＣＤ４または抗ＣＤ２２抗体）；小分子インヒビター（例えばメトトレキサートおよびレフノミド）；シロリムス（ラパマイシン）およびそのアナログ（例えばＣＣＩ−７７９）；Ｃｏｘ−２およびｃＰＬＡ２インヒビター；  ＮＳＡＩＤ；  ｐ３８インヒビター、ＴＰＬ−２、Ｍｋ−２、およびＮＦｋｂインヒビター；  ＲＡＧＥまたは可溶性ＲＡＧＥ；  Ｐ−セレクチンまたはＰＳＧＬ−１インヒビター（例えばそれに対する小分子インヒビター、例えば抗体、Ｐ−セレクチンに対する抗体）；エストロゲンレセプター・ベータ（ＥＲＢ）アゴニストまたはＥＲＢ−ＮＦｋβアンタゴニストが挙げられる。１種以上のＩＬ−２２アンタゴニストと同時投与および／または同時配合され得る最も好ましいさらなる治療剤としては、以下の１つ以上：ＴＮＦレセプターの可溶性フラグメント（例えば、ｐ５５）またはｐ７５ヒトＴＮＦレセプターもしくはその誘導体（例えば、７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ）（７５ＫＤ  ＴＮＦレセプター−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥｎｂｒｅｌＴＭ）；メトトレキサート、レフルノミド、またはシロリムス（ラパマイシン）もしくはそのアナログ（例えば、ＣＣＩ−７７９）が挙げられる。
【０１２３】
ＩＬ−２２アンタゴニストを組み合わせることができる多発性硬化症を処置または予防するための薬剤の非限定的例として、以下のものが挙げられる。すなわち、例えば、インターフェロン・インターフェロン−アルファ（（例えば、Ａｖｏｎｅｘ（商標）；Ｂｉｏｇｅｎ）、およびインターフェロン−１β（Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ（商標）；Ｃｈｉｒｏｎ／Ｂｅｒｌｅｘ）；共重合体１（Ｃｏｐ−１；Ｃｏｐａｘｏｎｅ（商標）；Ｔｅｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）；高圧酸素；静脈免疫グロブリン；クラブリビン；本明細書に記載されたようなＴＮＦアンタゴニスト；副腎皮質ステロイド；プレドニゾロン；メチルプレドニゾロン；アザチオプリン；シクロホスファミド；シクロスポリン；メトトレキサート；４−アミノピリジン；およびチザニジンである。ＩＬ−２２アンタゴニストと組み合わせて使用し得る追加のアンタゴニストとして、他のヒト・サイトカインまたは成長因子（例えばＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２  ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−１１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、およびＰＤＧＦ）に対する抗体またはそれらのアンタゴニストが挙げられる。本明細書に記載したようなＩＬ−２１アンタゴニストは、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０、またはそれらのリガンド等の細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることができる。ＩＬ−２２アンタゴニストを薬剤と組み合わせることも可能であり、該薬剤の例として、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えばイブプロフェン、プレドニゾロン等の副腎皮質ステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害薬、アデノシン作動薬、抗血栓症薬、補体インヒビター、アドレナリン作動薬、本明細書に記載されるように炎症誘発性サイトカインによる情報伝達に妨害する薬剤、ＩＬ−Ｉβ変換酵素インヒビター（例えば、Ｖｘ７４０）、抗Ｐ７ｓ、ＰＳＧＬ、ＴＡＣＥインヒビター、Ｔ細胞シグナル伝達インヒビター、例えばキナーゼインヒビター、金属ロプロテナーゼ、スルファサラジン、アザスロプリン、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素阻害薬、本明細書に記載されているように、可溶性サイトカイン・レセプター、およびそれらの誘導体、さらに抗炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、およびＴＧＦ）が挙げられる。
【０１２４】
ＩＬ−２２アンタゴニストを組み合わせることができる多発性硬化症治療薬の好ましい例として、インターフェロンβ、例えばＩＦＮｂ−１αおよびＩＦＮｂ−１β；コパキソン、副腎皮質ステロイド、ＩＬ−Ｉインヒビター、ＴＮＦインヒビター、ＣＤ４０リガンドおよびＣＤ８０に対する抗体、ＩＬ−１２アンタゴニストが挙げられる。
【０１２５】
ＩＬ−２２アンタゴニストを組み合わせることができる炎症性大腸疾患またはクローン病を処置または予防するための薬剤の非限定的例は以下の通りである。すなわち、ブデノシド；上皮細胞成長因子；副腎皮質ステロイド；シクロスポリン；スルファサラジン；アミノ・サリチル酸塩；６‐メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼインヒビター；メサラミン；オルサラジン；バルサラジド；抗酸化剤；トロンボキサンインヒビター；  ＩＬ−１レセプター・アンタゴニスト；抗ＩＬ−１モノクローナル抗体；抗ＩＬ−６モノクローナル抗体；成長因子；エラスターゼインヒビター；ピリジニル−イミダゾール化合物；本明細書に記載されたようなＴＮＦアンタゴニスト；  ＩＬ−４（ＩＬ−１０、ＩＬ−１３および／またはＴＧＦβサイトカインまたはそれらのアゴニスト（例えば、アゴニスト抗体）；インターロイキン−１１；プレドニゾロン、デキサメサゾンまたはブデソニドのグルクロニドもしくはデキストラン複合プロドラッグ；ＩＣＡＭ−１アンチセンス・ホスホロチオネート・オリゴデオキシヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ２３０２；Ｉｓｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）；可溶性補体レセプター１（ＴＰ１０；Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）；緩効性メサラジン；メトトレキサート；血小板活性因子（ＰＡＦ）のアンタゴニスト；シプロフロキサシン；およびリグノカインである。
【０１２６】
一実施形態では、ＩＬ−２２アンタゴニストを、免疫応答、例えば移植拒絶反応または移植片対宿主病（ｇｒａｆｔ−ｖ−ｈｏｓｔ  ｄｉｓｅａｓｅ）に関わる他の標的に対する１つ以上の抗体と組み合わせて用いることができる。本発明のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストを組み合わせることができる、免疫応答を処置または予防するための薬剤の非限定的例として以下のものが挙げられる。すなわち、細胞表面分子に対する抗体であり、該細胞表面分子として、限定されるものではないが、ＣＤ２５（インターロイキン−２レセプター−α）、ＣＤ１１ａ（ＬＦＡ−１）、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ−１）、ＣＤ４、ＣＤ４５、ＣＤ２８／ＣＴＬＡ４、ＣＤ８０（Ｂ７−１）、および／またはＣＤ８６（Ｂ７−２）が挙げられる。さらに別の実施形態では、ＩＬ−２２アンタゴニストを１つ以上の一般的な免疫抑制剤、例えばシクロスポリンＡまたはＦＫ５０６と組み合わせて用いる。
【０１２７】
本発明の別の局面は、したがって、他の治療用化合物とＩＬ−２２アンタゴニストとの併用投与を実施するためのキットに関する。一実施形態では、このキットは、医薬的担体に処方された１種類以上の結合剤と、適当に１種類以上の別個の医薬製剤として処方された治療薬等の少なくとも１種類の薬剤とを含む。
【０１２８】
（診断アッセイ）
生物試料のＩＬ−２２タンパク質または核酸の有無を検出するための典型的な方法は、被験者から生物試料を得て、ＩＬ−２２タンパク質または核酸の存在が生物試料で検出されるようにして、この生物試料を、ＩＬ−２２タンパク質をコードするＩＬ−２２タンパク質または核酸（例えばｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ）を検出することができる化合物または薬剤と接触させることを含む。ＩＬ−２２ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡを検出するための好ましい薬剤は、ＩＬ−２２ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡにハイブリダイズすることが可能な標識核酸プローブである。核酸プローブは、例えば、完全長ＩＬ−２２核酸、例えば配列番号１の核酸、または長さが少なくとも１５、３０，５０、１００、２５０、または５００ヌクレオチドであり、ＩＬ−２２ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡに対してストリンジェントな条件下で特異的にハイブリダイズするのに十分な、オリゴヌクレオチド等のＩＬ−２２核酸フラグメントまたはその一部分である。本発明の診断アッセイにおける使用のための他の適切なプローブは、本明細書中に記載される。
【０１２９】
ＩＬ−２２タンパク質を検出するための好ましい薬剤は、ＩＬ−２２タンパク質に結合することができる抗体であり、好ましくは検出可能な標識を持つ抗体である。抗体は、ポリクローナル、またはより好ましくはモノクローナルである。無傷の抗体、またはそのフラグメント（例えばＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２）を用いることができる。「標識」という用語は、プローブまたは抗体に関して、検出可能な物質をプローブまたは抗体にカップリング（すなわち、物理的連結）することによるプローブまたは抗体の直接的な標識に加えて、直接標識されている別の試薬による反応性によるプローブまたは抗体の間接的標識を包含することを意図している。間接的標識の例として、蛍光標識二次抗体を用いた一次抗体の検出と、蛍光標識ストレプトアビジンで検出できるようにビオチンによるＤＮＡプローブの末端標識とが挙げられる。「生物試料」という用語は、被検体から単離された組織、細胞、および体液を含むことを意図している。すなわち、本発明の検出方法は、インビボのみならずインビトロで生物試料に含まれるＩＬ−２２ｍＲＮＡ、タンパク質、またはゲノムＤＮＡを検出するのに用いられる。例えば、ＩＬ−２２ｍＲＮＡを検出するためのインビトロ技術として、ノーザンブロット法とインサイチュハイブリダイゼーションとが挙げられる。ＩＬ−２２タンパク質を検出するためのインビトロ技術として、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロット、免疫沈降、および免疫蛍光が挙げられる。ＩＬ−２２ゲノムＤＮＡを検出するためのインビトロ技術として、サザンブロット法が挙げられる。さらに、ＩＬ−２２タンパク質を検出するためのインビボ技術として、被検体に標識抗ＩＬ−２２抗体を導入することが含まれる。例えば、放射性マーカーで抗体を標識することができ、被検体内でのこの放射性マーカーの存在および位置を標準的なイメージング技術で検出することができる。
【０１３０】
一実施形態では、上記生物試料は被検体由来のタンパク質分子を含む。あるいは、上記生物試料は被検体由来のｍＲＮＡ分子または被検体由来のゲノムＤＮＡを含むことができる。好ましい生物試料は、被検体から従来の手段を用いて単離された血清試料である。
【０１３１】
別の実施形態では、上記方法はさらに、対照被検体から対照生物試料を得ること、ＩＬ−２２タンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡを検出することができる化合物または薬剤と上記対照試料とを、ＩＬ−２２タンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの存在が生物試料中で検出されるようにして、接触させること、対照試料中のＩＬ−２２タンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの存在を試験試料中のＩＬ−２２タンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの存在と比較することを含む。本発明は、生物試料内のＩＬ−２２の存在を検出するためのキットも包含する。例えば、このキットは、生物試料中のＩＬ−２２タンパク質またはｍＲＮＡを検出することができる標識された化合物または薬剤（例えば、プローブまたは抗体）と、試料中のＩＬ−２２量を測定するための手段と、ＩＬ−２２の量を標準と比較するための手段とから構成される。上記化合物または薬剤を適当な容器に梱包することができる。キットは、ＩＬ−２２タンパク質または核酸を検出するためのキットを用いるための指示をさらに含むことができる。
【０１３２】
（スクリーニングアッセイ）
生物活性を測定するためのアッセイに、高スループットスクリーニングのための複数のタンパク質からなるパネルに含まれ、抗体を惹起するために、または別の免疫応答を引き出すために、体液に含まれるタンパク質（またはそのレセプター）のレベルを定量するために設計されたアッセイでの試薬（標識試薬を含む）として、対応するタンパク質が選択的に発現される組織（構成的に、あるいは組織分化もしくは組織成長の特定の段階で、または疾病状態のいずれかで）に対するマーカーとして、さらに、もちろん、相関するレセプターまたはリガンドを単離するために、本明細書に記載したアンタゴニストを用いることができる。添付した例に記載した方法を用いて、ペプチドまたは小分子インヒビターまたは結合相互作用のアゴニストをスクリーニングすることができる。
【０１３３】
これらの研究用ユーティリティのいずれかまたは全てを商業化のための試薬用またはキット・フォーマットに発展させることができる。
【０１３４】
上記の用途を実施するための方法は、当業者に周知である。そのような方法を開示している参考文献として、限定されるものではないが、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」，２ｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．，Ｅ．Ｆ．Ｆｒｉｔｓｃｈ  ａｎｄ  Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ  ｅｄｓ．，１９８９、および「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ：Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｅｒｇｅｒ，Ｓ．Ｌ．ａｎｄ  Ａ．Ｒ．Ｋｉｍｍｅｌ  ｅｄｓ．，１９８７が挙げられる。
【０１３５】
本発明のＩＬ−２２および抗体の活性は、他の手段との間で、以下の方法で測定することが可能である。
【０１３６】
胸腺細胞または脾細胞の細胞障害性に関した適当なアッセイとし、限定されるものではないが、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｅｄ  ｂｙ  Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗ  Ｓｔｒｏｂｅｒ，Ｐｕｂ．Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（Ｃｈａｐｔｅｒ  ３，Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  ａｓｓａｙｓ  ｆｏｒ  Ｍｏｕｓｅ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ３．１−３．１９；  Ｃｈａｐｔｅｒ  ７，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎｓ）；  Ｈｅｒｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７８：２４８８−２４９２，１９８１；  Ｈｅｒｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２８：１９６８−１９７４，１９８２；  Ｈａｎｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５：１５６４−１５７２，１９８５；  Ｔａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；  Ｔａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８；  Ｈｅｒｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７８：２４８８−２４９２，１９８１；  Ｈｅｒｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２８：１９６８−１９７４，１９８２；  Ｈａｎｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５：１５６４−１５７２，１９８５；  Ｔａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；  Ｂｏｗｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ６１：１９９２−１９９８；  Ｔａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８；  Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３３：３２７−３４１，１９９１；  Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５３：３０７９−３０９２，１９９４  に記載されているものが挙げられる。
【０１３７】
Ｔ細胞依存型免疫グロブリン応答およびアイソタイプ。スイッチング（とりわけ、Ｔ細胞依存型抗体応答を変調し、Ｔｈ１／Ｔｈ２プロフィールに影響を及ぼすタンパク質を同定する）として、限定されるものではないが、Ｍａｌｉｓｚｅｗｓｋｉ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４４：３０２８−３０３３，１９９０；  ａｎｄ  Ａｓｓａｙｓ  ｆｏｒ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ：Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，Ｍｏｎｄ，Ｊ．Ｊ．ａｎｄ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，Ｍ．Ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｄｓ．Ｖｏｌ  １  ｐｐ．３．８．１−３．８．１６，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９４  に記載されているものが挙げられる。
【０１３８】
混合リンパ球培養反応（ＭＬＲ）アッセイ（とりわけ、Ｔｈ１およびＣＴＬ応答を主に起こすタンパク質を同定する）として、限定されるものではないが、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｅｄ  ｂｙ  Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗ  Ｓｔｒｏｂｅｒ，Ｐｕｂ．Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（Ｃｈａｐｔｅｒ  ３，Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  ａｓｓａｙｓ  ｆｏｒ  Ｍｏｕｓｅ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ３．１−３．１９；  Ｃｈａｐｔｅｒ  ７，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎｓ）；  Ｔａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；  Ｔａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８；  Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３７７８−３７８３，１９９２  に記載されているものが挙げられる。
【０１３９】
樹状細胞依存型アッセイ（とりわけ、未処置のＴ細胞を活性化させる樹状細胞によって発現されるタンパク質を同定する）として、限定されるものではないが、Ｇｕｅｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３４：５３６−５４４，１９９５；  Ｉｎａｂａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １７３：５４９−５５９，１９９１；  Ｍａｃａｔｏｎｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １５４：５０７１−５０７９，１９９５；  Ｐｏｒｇａｄｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １８２：２５５−２６０，１９９５；  Ｎａｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ６７：４０６２−４０６９，１９９３；  Ｈｕａｎｇ
ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６４：９６１−９６５，１９９４；  Ｍａｃａｔｏｎｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １６９：１２５５−１２６４，１９８９；  Ｂｈａｒｄｗａｊ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ９４：７９７−８０７，１９９４；  およびＩｎａｂａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １７２：６３１−６４０，１９９０に記載されているものが挙げられる。
【０１４０】
リンパ球生存／アポトーシスのためのアッセイ（とりわけ、スーパー抗原誘導後のアポトーシスを防ぐタンパク質とリンパ球ホメオスタシスを調整するタンパク質とを同定する）として、限定されるものではないが、Ｄａｒｚｙｎｋｉｅｗｉｃｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  １３：７９５−８０８，１９９２；  Ｇｏｒｃｚｙｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ７：６５９−６７０，１９９３；  Ｇｏｒｃｚｙｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３：１９４５−１９５１，１９９３；  Ｉｔｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ６６：２３３−２４３，１９９１；  Ｚａｃｈａｒｃｈｕｋ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４５：４０３７−４０４５，１９９０；  Ｚａｍａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  １４：８９１−８９７，１９９３；  Ｇｏｒｃｚｙｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １：６３９−６４８，１９９２に記載されているものが挙げられる。
【０１４１】
Ｔ細胞コミットメントおよび発現の初期段階に影響を及ぼすタンパク質に関するアッセイとして、限定されるものではないが、Ａｎｔｉｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ８４：１１１−１１７，１９９４；  Ｆｉｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １５５：１１１−１２２，１９９４；  Ｇａｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ８５：２７７０−２７７８，１９９５；  Ｔｏｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：７５４８−７５５１，１９９１に記載されているものが挙げられる。
【０１４２】
上記スクリーニングアッセイによって同定される修飾剤を適当な動物モデルで、例えばそのような薬剤による処置の有効性、毒性、または副作用について、試験する。あるいは、修飾剤を、本明細書に記載したインビトロまたはインサイチュアッセイの少なくとも１つで試験する。
【０１４３】
（ＩＬ−２２アゴニストまたはアンタゴニスト効果のアッセイ）
ＩＬ−２２アゴニストまたはアンタゴニストの活性を以下の方法で測定することができる：
Ｔ細胞または胸腺細胞増殖についてのアッセイとして、限定されるものでないが、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｅｄ  ｂｙ  Ｊ．Ｅ，Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗ  Ｓｔｒｏｂｅｒ，Ｐｕｂ．Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（Ｃｈａｐｔｅｒ  ３，Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  ａｓｓａｙｓ  ｆｏｒ  Ｍｏｕｓｅ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ３．１−３．１９；  Ｃｈａｐｔｅｒ  ７，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎｓ）；  Ｔａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；  Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４５：１７０６−１７１２，１９９０；  Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３３：３２７−３４１，１９９１；  Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３７７８−３７８３，１９９２；  Ｂｏｗｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：１７５６−１７６１，１９９４に記載されたものが挙げられる。
【０１４４】
脾臓細胞、リンパ節細胞、または胸腺細胞のサイトカイン産生および／または増殖に関するアッセイとして、限定されるものでないが、Ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ａ．Ｍ．ａｎｄ  Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｅ．Ｍ．Ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｄｓ．Ｖｏｌ  １  ｐｐ．３．１２．１−３．１２．１４，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９４；  およびＭｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｏｕｓｅ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  γ，Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｒ．Ｄ．Ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｄｓ．Ｖｏｌ  １  ｐｐ．６．８．１−６．８．８，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９４に記載されたものが挙げられる。
【０１４５】
造血細胞およびリンパ球生成細胞の増殖および分化に関するアッセイとして、限定されるものではないが、Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  ａｎｄ  Ｍｕｒｉｎｅ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ２  ａｎｄ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ４，Ｂｏｔｔｏｍｌｙ，Ｋ．，Ｄａｖｉｓ，Ｌ．Ｓ．ａｎｄ  Ｌｉｐｓｋｙ，Ｐ．Ｅ．Ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ
Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｄｓ．Ｖｏｌ  １  ｐｐ．６．３．１−６．３．１２，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９１；  ｄｅＶｒｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１２０５−１２１１，１９９１；  Ｍｏｒｅａｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３６：６９０−６９２，１９８８；  Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８０：２９３１−２９３８，１９８３；  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｏｕｓｅ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  −  Ｎｏｒｄａｎ，Ｒ．Ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｄｓ．Ｖｏｌ  １  ｐｐ．６．６．１−６．６．５，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９１；  Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８３：１８５７−１８６１，１９８６；  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １１  −  Ｂｅｎｎｅｔｔ，Ｆ．，Ｇｉａｎｎｏｔｔｉ，Ｊ．，Ｃｌａｒｋ，Ｓ．Ｃ．ａｎｄ  Ｔｕｒｎｅｒ，Ｋ．Ｊ．Ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｄｓ．Ｖｏｌ  １  ｐｐ．６．１５．１  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９１；  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｏｕｓｅ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ９  −  Ｃｉａｒｌｅｔｔａ，Ａ．，Ｇｉａｎｎｏｔｔｉ，Ｊ．，Ｃｌａｒｋ，Ｓ．Ｃ．ａｎｄ  Ｔｕｒｎｅｒ，Ｋ．Ｊ．Ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｄｓ．Ｖｏｌ  １  ｐｐ．６．１３．１，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９１に記載されたものが挙げられる。
【０１４６】
抗原（とりわけ、増殖およびサイトカイン産生を測定することによって直接的なＴ細胞効果と同様に、ＡＰＣ−Ｔ細胞相互作用に影響を及ぼすタンパク質を同定する）に対するＴ細胞クローン応答に関するアッセイとして、限定されるものではないが、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｅｄ  ｂｙ  Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗ  Ｓｔｒｏｂｅｒ，Ｐｕｂ．Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（Ｃｈａｐｔｅｒ  ３，Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  ａｓｓａｙｓ  ｆｏｒ  Ｍｏｕｓｅ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ；  Ｃｈａｐｔｅｒ  ６，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ；  Ｃｈａｐｔｅｒ  ７，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎｓ）；  Ｗｅｉｎｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：６０９１−６０９５，１９８０；  Ｗｅｉｎｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．１１：４０５−４１１，１９８１；  Ｔａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；  Ｔａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８に記載されたものが挙げられる。
【０１４７】
この発明を非限定的例によってさらに例証する。塩基配列表と同様に、この出願全体を通して引用される全ての参考文献、特許、および公開特許出願の内容を、本明細書の一部を構成するものとして援用する。
【実施例】
【０１４８】
（実施例１：クローン「ＩＬ−２２」の同定および特徴づけ）
本発明のポリヌクレオチドをクローン「ＩＬ−２２」として同定した。クローンＩＬ−２２を以下の方法にもとづいて単離した。マウスＥＳＴをＣｏｎＡおよび骨髄由来樹状細胞で活性化される脾細胞から作られたマウスｃＤＮＡライブラリから同定した。ＥＳＴは、分泌タンパク質をコード化するｃＤＮＡを選択する方法を用いて同定した（米国特許第５，５３６，６３７号を参照せよ）。マウスＥＳＴ配列は、完全長のマウス・クローンを同じｃＤＮＡライブラリから単離するのに用いた。マウス・クローンの配列の分析で、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）との著しい相同性が明らかになった。
【０１４９】
マウス・クローンのヒト相同体を単離するために、ＩＬ−１０に相同性を示したマウス配列の領域に基づいて、ＰＣＲプライマーを作成した。そのようなプライマーをＰＨＡ／ＰＭＡ刺激ヒトＰＢＭＣに由来するｃＤＮＡライブラリでの増幅のためのそのようなプライマーを使用することで、著しい大きさのＰＣＲ産物が生産された。ＰＣＲ生成物の配列の分析により、それがマウスｃＤＮＡの相同体であることを確認した。オリゴヌクレオチドを部分的なヒト・クローン配列から作成し、ＰＢＭＣライブラリから完全長ヒト・クローンを単離するのに用いた。
【０１５０】
ＩＬ−２２は、分泌タンパク質（また、ここでは「ＩＬ−２２」タンパク質と称する）の全てのコード配列を含む完全長のヒト・クローンである。そのアミノ酸配列の分析は、ｈＩＬ−１０に対して約２３％の相同性を持つことを示した。ＩＬ−１０の推定上の受容体結合モチーフに基づき、類似機能に関係する３つのモチーフがコンピュータ・モデリングを通してＩＬ−２２で提唱された。これらは、残基５０〜６０、残基６３〜８１、および残基１６８〜１７７の配列番号２の領域である。また、データベースの分析は、ＩＬ−２２が、他種のＩＬ−１０と同等レベルの相同性を示すことを明らかにした。
【０１５１】
現在測定されたＩＬ−２２のヌクレオチド配列は、配列番号１であり、ポリＡテールを含む。前述のヌクレオチド配列に対応するＩＬ−２２タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号２で報告した。
【０１５２】
（実施例２：タンパク質「ＩＬ−２２」の特徴づけ）
完全長のＩＬ−２２タンパク質を安定に発現しかつ分泌する細胞株を、適切な発現ベクターでＩＬ−２２ｃＤＮＡをＣＨＯ細胞に形質移入することで作り出した。適切なＩＬ−２２発現ベクターを使用した一過性形質移入ＣＯＳ細胞は、分析用ＩＬ−２２タンパク質を作るのに使用されてきた。形質移入を市販のＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ試薬（Ｇｉｂｃｏ）を使用して達成した。おもしろいことに、ＩＬ−２２を発現するＣＯＳ細胞が非均一的に剥離して、細胞培養単層に穴が形成された。形質移入ＣＯＳ細胞により条件づけられた培地を、ＩＬ−２２タンパク質のサイトカインのような活性を実証するのに用いた。細胞溶解物のウエスタンブロット分析は、ＩＬ−２２発現細胞により条件付けられた培地への細胞の曝露に応じて、マクロファージのような特性（ＭＥＳ−１３；Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｊ．ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １６４：１８１４−１８１９を参照せよ）を示す腎臓糸球体間質組織由来細胞株で、Ｓｔａｔ−３がリン酸化される（活性化される）ことを示した。加えて、Ｓｔａｔ−３のリン酸化は、ＩＬ−２２タンパク質で処置された非形質移入のＣＯＳ細胞で誘発される。  
【０１５３】
ＩＬ−２２タンパク質（ここに記述した形質移入ＣＯＳ細胞株に由来する）の電気泳動的分析は、発現タンパク質が一定の範囲内の大きさに存在することを示した。電気泳動前のＮ−グリカナーゼによるＣＯＳ由来ＩＬ−２２タンパク質の処置は、未処置のＩＬ−２２で見られる最高の可動性（例えば最低の分子量）種に対応している単一バンドに帰着する。これは、ＩＬ−２２のアミノ酸配列で同定された推定上のＮ結合型グリコシル化部位で起こる可能性があることが提唱されたグリコシル化イベントと一致している（配列番号２のアミノ酸残基５４−５６、６８−７０、９７−９９、および１７６−１７８）。  
【０１５４】
Ｅｄｍａｎ・Ｎ末端シークエンシングを測定した。成熟したＩＬ−２２タンパク質のＮ−終端が、配列番号２の位置３４の残基で始まることを測定した。（アラニン）。成熟したＩＬ−２２タンパク質Ｎ終端に、「６倍速ヒスチジン」親和性タグとＦＬＡＧエピトープ・タグとを融合する発現ベクターを作り出した（加えられたアミノ酸タグは配列番号５に与えられ、以下のアミノ酸配列を有する。ＭＫＦＬＶＮＶＡＬＶＦＭＶＶＹＩＳＹＩＹＡＧＳＧＨＨＨＨＨＨＧＳＧＤＹＫＤＤＤＤＫＡＰＩＳＳＨＣＲ）。これらのタグ標識されたコントラクトを、安定に発現するＣＨＯ細胞株と一過性に発現するＣＯＳ細胞株とを創造することに使用した。タグは、ＩＬ−２２（例えば、抗６ｘｈｉｓ抗体；抗ＦＬＡＧ抗体）を検出し、条件培地からタンパク質を精製する（Ｎｉ＋２樹脂を使用）便利な手段を提供した。ＩＬ−２２発現ＣＯＳ細胞株からのこのタグにより精製されたヒトＩＬ−２２タンパク質は、ＭＥＳ−１３細胞でＳｔａｔ−３の活性化を誘発するのに使用可能だった。
【０１５５】
活性化されたＴｈｌ細胞およびＴｈ２細胞（例えば、Ｓｙｒｂｅ  ｅｔ  ａｌ、（１９９９）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ、２１：２６３−８５を参照せよ）でのＩＬ−２２ｍＲＮＡ転写物の比較は、活性化されたＴｈ１細胞でのＩＬ−２２発現レベルが、活性化されたＴｈ２細胞でのＩＬ−２２発現レベルより高いことを示した。ＩＬ−２２ｍＲＮＡの分析は、ＲＮＡｓｅ保護アッセイで達成された。したがって、ＩＬ−２２は、適応免疫応答の間、特異的にＴｈ１  ＣＤ４＋Ｔ細胞により誘発される。
【０１５６】
（実施例３：ＩＬ−２２組換え型アデノウイルス・ベクターとインビボ投与の確立）
ｐＥＤ６ｄｐｃ−２ｍＩＬ−２２をＥｃｏＲＩおよびＮｏｔＩで消化し、ＥｃｏＲＩおよびＮｏｔＩ消化アデノウイルス／ベクターＡｄｏｒｉ１−２と１．１ｋｂ  ｍＩＬ−２２ｃＤＮＡフラグメントを連結することで、Ａｄｏｒｉ１−２マウスＩＬ−２２（ｍＩＬ−２２）ベクターを誘導した。ＥｃｏＲｌおよびＮｏｔｌで消化し、ＥＧＦＰをＡｄｏｒｉ１−１のＥｃｏＲｌとＮａｉｌ部位に挿入することで、Ａｄｏｒｉ  １−１緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）コンストラクト、ｐＥＧＦＰ−Ｎ１（ＣＬＯＮＴＥＣＨ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を導いた。両方のコンストラクトは、プラスミド内でのｃＤＮＡ挿入物の広範な制限消化分析とシークエンシングによって検証された。ｍＩＬ−２２ｃＤＮＡおよびＥＧＦＰの発現は、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期プロモーターおよびエンハンサーから促進される。  
【０１５７】
ヒト腎臓胎児性腎培養細胞株２９３での相同的組換えによって、Ａｄ５  Ｅ１ａ欠損（ｄ１３２７）組換えアデノウイルスを生成した。相同組換えによって人間の腎臓で細胞株２９３組換え型のアデノウイルス・ウイルスを分離し、その後に、２９３細胞上で増幅した。凍結融解３サイクルにより、ウイルスを感染２９３細胞から遊離した。ウイルスをさらに２つの塩化セシウム遠心分離勾配によって精製し、ｐＨ  ７．２のリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）に対して４℃で透析した。次の透析で、グリセリンを１０％の濃度まで加え、ウイルスを使用するまで−８０℃で貯蔵した。ウイルスは、導入遺伝子の発現、２９３細胞上のプラーク形成単位、粒子／ｍｌ、および内毒素測定とウイルスのＰＣＲ分析およびウイルス内のＩＬ−２２コード領域の配列分析により特徴づけたられた。
【０１５８】
ｍＩＬ−２２をコードする組換え型アデノウイルスの単一用量の５Ｘ１０１０粒子をメスのＣ５７Ｂ１／６マウス（年齢７−８週）の尾静脈の中に注射した。対照マウスは、ＧＦＰをコードするアデノウイルスまたはＰＢＳ／１０％のグリセリンを与えた。各実験群からのマウスは、注射後様々な時点で屠殺した。血液学的分析および血清化学分析のために、血液を心臓の穴から採取した。血液は眼窩後副鼻洞を経て採取し、差示的な計数を血液塗抹標本の上で行った。組織を収集して、ホルマリンに固定し、組織病理学のためにヘマトキシリン‐エオジンで染色した。
【０１５９】
（実施例４：ＩＬ−２２の免疫学的効果）
ＩＬ−２２の免疫学的効果を、マウスへのマウスＩＬ−２２のｃＤＮＡのウイルス導入により、後生動物の前後関係で調査した。アデノウイルスのベクターを８週間目のＣ５７／Ｂ６メスのマウスに５ｘ１０１０ウイルス粒子を静脈内にまたは皮下に注射することによって、マウスＩＬ−２２のｃＤＮＡを発現するのに使用した。そのマウスを注射後７日および１４日で屠殺し、緩衝液のみまたは緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を発現するアデノウイルスを注射された対照マウスと比較した。７日目および１４日目に、絶対的および相対的な胸腺の重量が、ウイルス・マウスＩＬ−２２を発現したマウスで、著しく減少することが注目された。脾臓の絶対の平均重量は１４日目に減少し、肝臓重量は７日目わずかに増加した。胸腺の著しい全身性萎縮は、リンパ様減少（顕微鏡によって観察される）と同様に７日目および１４日目に明白だった。また、腎臓重量の増加および肝臓の腫張も観察された。
【０１６０】
加えて、赤血球系のパラメーターの減少、赤血球数算定、ヘモグロビン、およびヘマトクリットを含む複数の血液学的効果が７日目に明白となった。まとめると、これらの効果は、動物の貧血症を示した。さらに、好中球の増加による白血球数の増加と同様に、血小板が増加した。これらの観察に照らして、再生応答の証拠がなかったことで、骨髄レベルに効果が及んでいることを示した。このことの考えられる原因は、腎臓または腸を通じての小分子の損失である。さらに、７日目および１４日目に、アルブミン・レベルがわずかに減少した。しかし、急性期反応を示す血清アミロイドＡおよびフィブリノーゲンのレベルは増加した。肝臓ＲＮＡの分析は、ＳＡＡ’ｓ、ＧＲＯ１、ＯＰＮ、ＬＣＮ２、ＰＲＴＮ３、およびＳＯＣＳ３の増加を示した（下記の表３を参照せよ）。その他の臨床観察は、体重の減少、最小脱水症の兆候、尿比重の増加、尿量の減少、および腎近位尿細管好塩基球増加の誘導を含んでいた。観察された好塩基球の増加は、細胞分裂の増加および腎近位尿細管の上皮細胞のｒＲＮＡ存在の増加による。ＩＬ−２２の投与後、検出された変化は、急性期反応を誘発するＩＬ−２２の能力と一致する（例えば、Ｇａｂａｙ，Ｃ．（１９９９）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３４０（６）：４４８−４５４を参照せよ）。
【０１６１】
（実施例５：抗ＩＬ−２２モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体の調製および特徴づけ）
モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体を、本明細書でも記述した通常の方法論を使用して準備した。下記の表１は、ＩＬ−２２に対して作られたチキン・ポリクローナル抗体と同様に、Ｐ３／１、Ｐ３／２、Ｐ３／３およびＰ３／５のモノクローナル抗体の結合親和性、ＣＩＡ有効性、ならびに中和特異性を図示する。また、抗体Ｐ３／１、Ｐ３／２、Ｐ３／３、およびＰ３／５は、ここではそれぞれＡｂ−０１、Ａｂ−０４、Ａｂ−０２、およびＡｂ−０３と称する。
【０１６２】
【表１】
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結合特異性は、マウスまたはヒトのｈ／ｆ  タグ標識されたＩＬ−２２微量定量プレートを用いて、ＥＬＩＳＡによって測定された。各抗体は、表１に示すように、マウスあるいはヒトＩＬ−２２のいずれかに強い特異性を示した。中和特異性は、５ｎｇ／ｍＩのマウスまたはヒトｈ／ｆタグ標識されたＩＬ−２２によって媒介されたＳＴＡＴ３のリン酸化を阻害する抗体の能力を判定することにより測定された。結合マウスＩＬ−２２を用いた酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）は、ｍＡｂＰ３／１がＩＬ−２２−Ｆｃに対しては〜２ｎＭ、Ｈ／ＦＩＬ−２０に対しては〜１０ｎＭにもとづいて、〜５ｎＭのＥＤ５０を有することを実証した。さらに、組換え型ＩＬ−２２を認識することに加えて、Ｐ３／１  ｍＡｂは、ＩＬ−２２レトロウイルスベクターで形質移入されたＴ細胞から分泌された未変性ＩＬ−２２も結合する。ＩＬ−２２抗体Ｐ３／１は、ＩＤ５０の値が〜１ｎＭであることが知られており、サイトカインがまさに飽和状態（１ｎＭ）で存在する場合にＩＬ−２２活性を阻害する立体配座的に作用することが知られている。
【０１６３】
それぞれＢｉａｃｏｒｅ６８．１ｎＭおよび１．５１ｎＭを使用して、ヒトＩＬ−２２に対するラット抗体Ａｂ−０２およびＡｂ−０４結合親和性（ＫＤ）を測定した。同様条件下で、ヒトＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ複合体およびＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃに対するヒトＩＬ−２２の結合親和性を、それぞれ１．４８ｎＭおよび３．３７ＤＭと測定した。これらの結合親和性の測定に用いられる実験条件は、下記の実施例２２でより詳細に述べる。
【０１６４】
（実施例６：ＩＬ−２２ｍＲＮＡおよびレセプターの発現）
様々なヒトおよびマウスの組織のＩＬ−２２およびそのレセプターの発現を半定量的逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応法（ＲＴ−ＰＣＲ）で調べた。この実験は、ＩＬ−２２のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）が、対照アクチンに対して正規化された場合に、ヒトの精巣、肺、前立腺と末梢血リンパ球（末梢血リンパ球）に非常に低レベルで存在することを明らかにする。さらに、半定量的なＲＴ−ＰＣＲが、ＩＬ−２２レセプターがヒトの膵臓では最高レベルで検出され、肝臓、腸、皮膚、甲状腺、腎臓、心臓胃、精巣、唾液腺、副腎と前立腺ではより低いレベルで検出されることを示す。その代わりに、マウスＩＬ−２２レセプターは、肝臓、小腸、筋肉、皮膚、および卵巣で最高の発現を示し、腎臓、胚ｅ８．５およびｅ１９でより低い発現を示す。
【０１６５】
（実施例７：ＩＬ−２２タンパク質に対するインサイチュハイブリダイゼーションおよびアポトーシス染色）
アデノウイルス発現ＩＬ−２２（ＡｄＩＬ−２２）またはリポ多糖類（ＬＰＳ）で処置されたマウスのＩＬ−２２タンパク質およびレセプター・メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）に対するインサイチュハイブリダイゼーションを行い、以下の結果であった：
【０１６６】
【表２】
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ＩＬ−２２レセプターｍＲＮＡを、小腸および大腸、胃、リンパ節、脾臓、ならびに肺でさらに検出した。ＩＬ−２２レセプターの発現は、さらに、ＬＰＳ等の先天性免疫応答の媒介物によって上方制御されることが可能である。  
【０１６７】
最終的に、静脈内でｍＩＬ−２２タンパク質を受けとるｃ５７ＢＬ／６マウスから取り出された腎臓細胞のＴＵＮＥＬアッセイは、複数の近位尿細管に少数のアポトーシス上皮細胞（ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｓｅｌｌｓ）を示した。静脈内に塩類溶液（対照群）の投与を受けたマウスは、陽性染色を示さなかった。
【０１６８】
これらのデータは、先天性免疫応答の間、サイトカインおよびレセプターが誘導されることが可能であり、そして、誘導は炎症性の状態（ＬＰＳ）にある組織に制限されることを実証した。適応可能な免疫応答の間、ＩＬ−２２は、Ｔｈ１  ＣＤ４＋  Ｔ細胞から誘導されることも可能である。循環白血球がレセプターを持っていないようなので、この結果は、レセプターの組織発現によって補強されているように、適応可能な免疫応答の組織下流内のエフェクターとしてＩＬ−２２の機能が、恒常的にかつ一層、炎症の先天性誘導因子によって上方制御されたことを示唆する。
【０１６９】
（実施例８：遺伝子発現におけるＩＬ−２２媒介変化）
ＡｄＩＬ−２２またはＡｄ−ＧＦＰコンストラクトが感染したマウスの肝細胞での遺伝発現レベルを変えるＩＬ−２２の能力を調べた。
【０１７０】
感染後１日および３日目から得た凍結マウス肝臓を粉砕し、Ｐｒｏｍｅｇａ  ＲＮＡｇｅｎｔｓ  Ｔｏｔａｌ  ＲＮＡ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いてＲＮＡの精製をおこなった。ＲＮｅａｓｙミニキットを用いてＲＮＡをさらに精製した。ＲＮｅａｓｙミニキットを用いて全ＲＮＡをヒトＰＢＭＣから単離した（Ｑｉａｇｅｎ，Ｈｉｄｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）。
【０１７１】
全ＲＮＡを、１００ｐＭＴ７／Ｔ２４タグ標識オリゴ−ｄＴプライマー（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡで合成）を用いて７０℃で１０分間にわたり１０μｇの全ＲＮＡを変性させ、氷上で冷やすことでハイブリダイゼーションのために、全ＲＮＡを調製した。第１鎖ｃＤＮＡ合成を以下の緩衝液条件下でおこなった。すなわち、１×第１標準緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ．）、１０ｍＭＤＴＴ（ＧＩＢＣＯ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、５００μＭの各々のｄＮＴＰ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））、４００ユニットのＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔＲＴＩＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、および４０ユニットのＲＮａｓｅインヒビター（Ａｍｂｉｏｎ，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）である。反応を４７℃で１時間進行させた。第２の鎖ｃＤＮＡは、以下の試薬を指示した最終濃度で追加することで合成した。すなわち、１×第２標準緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、追加２００μＭの各々のｄＮＴＰ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、４０単位のＥ．ｃｏｌｉＤＮＡポリメラーゼＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２単位のＥ．ｃｏｌｉＲＮａｓｅＨ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、および１０単位のＥｃｏｌｉＤＮＡリガーゼである。反応を１５．８℃で２時間にわたり進行させた。反応の最後の５分間で、６単位のＴ４ＤＮＡポリメラーゼ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）を添加した。
【０１７２】
結果として生ずる二本鎖ｃＤＮＡを以下のようにしてＢｉｏＭａｇカルボキシ末端粒子を用いて精製した。すなわち、０．２ｍｇのＢｉｏＭａｇ粒子（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．，ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ，ＰＡ）を０．５Ｍ  ＥＤＴＡで洗浄して平衡化し、０．５ＭＥＤＴＡ中に２２．２ｍｇ／ｍｌの濃度で再懸濁した。二本鎖ｃＤＮＡ反応を希釈して最終濃度を１０％ＰＥＧ／１．２５Ｍ  ＮａＣｌにし、さらにビーズ懸濁液を添加して最終濃度を０．６１４ｍｇ／ｍｌとした。反応を室温で１０分間インキュベートした。ｃＤＮＡ／ビーズ複合体を３００μｌの７０％エタノールで洗浄し、エタノールを除去し、試験管を空気乾燥させた。２０μｌの１０ｍＭＴｒｉｓアセテート、ｐＨ７．８を添加してｃＤＮＡを溶出させ、さらに２〜５分間インキュベートし、ＤＮＡ含有上清を取り除いた。
【０１７３】
１０μｌの精製二本鎖ＤＮＡをインビトロ転写（ＩＶＴ）溶液に添加した。この溶液は１ｘＩＶＴ緩衝液（Ａｍｂｉｏｎ，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）、５，０００ユニットのＴ７  ＲＮＡポリメラーゼ（Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、３ｍＭ  ＧＴＰ、１．５ｍＭ  ＡＴＰ、１．２ｍＭ  ＣＴＰ、および１．２ｍＭ  ＵＴＰ（Ａｍｅｒｓｈａｍ／Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、０．４ｍＭの各々のビオ１６ＵＴＰ、ビオ−１１ＣＴＰ（Ｅｎｚｏ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｆａｒｍｉｎｇｄａｌｅ，ＮＹ）、および８０ユニットのＲＮａｓｅインヒビター（Ａｍｂｉｏｎ，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）を含む。反応を３７℃で１６時間、進行させた。標識ＲＮＡをＲＮｅａｓｙ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて精製した。ＲＮＡ収量を２６０ｎｍでの吸光度を測定することで定量化した。
【０１７４】
１２μｇのインビトロ転写産物を４０ｍＭＴｒｉｓアセテート、ｐＨ８．０、１００ｍＭ酢酸カリウム、および３０ｍＭ酢酸マグネシウム中、３５分間、９４℃で、フラグメント化した。フラグメント化し、かつ標識されたＲＮＡプローブを１×２−Ｎ−モルホリノエタン・スルホン酸（ＭＥＳ）緩衝液（ｐＨ６．５）、５０ｐＭＢｉｏ９４８（プローブ・アレイ上のランドマーク・フィーチャにハイブリダイズする対照ビオチン標識）（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）、１００μｇ／ｍｌニシン精子ＤＮＡ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、および１μｌ／μｇ標準曲線試薬（Ｇｅｎｅ  Ｌｏｇｉｃ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤより提供された専売試薬）の最終組成物で、ハイブリダイゼーション緩衝液により希釈した。このハイブリダイゼーション溶液を２つのガラスビーズ（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）で４５℃、一晩、プレハイブリダイズさせた。ハイブリダイゼーション溶液をきれいな試験管に移し、９５℃で１〜２分、加熱し、高速で２分間微小遠心し、不溶性のデブリをペレットにした。オリゴヌクレオチド・アレイ・カートリッジ（Ｍｕｒｉｎｅ  ７４Ｋｖ２，Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ，Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ，ＣＡ）を、非ストリンジェントな洗浄液（０．９Ｍ  ＮａＣｌ，６０ｍＭリン酸ナトリウム、６ｍＭ  ＥＤＴＡ、および０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０）で事前に湿らせ、５〜１０分間、回転させながら４５℃でインキュベートした。緩衝液をカートリッジから取り除き、アレイを１８０μｌのハイブリダイゼーション溶液、４５℃で、４０〜６０ｒｐｍで一晩回転させながら、ハイブリダイズさせた。一晩インキュベートした後、ハイブリダイゼーション溶液を取り除き、カートリッジに非ストリンジェント洗浄緩衝液で満たした。アレイ・カートリッジを、１０サイクルの２ミックス／サイクル非ストリンジェント洗浄緩衝液にもとづいて、２５℃で、流体ステーションを用いて洗浄し、さらに４サイクルの１５ミックス／サイクル・ストリンジェント洗浄緩衝液（１００ｍＭＭＥＳ，０．１ＭＮａ＋、０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０、および０．００５％消泡剤）で、洗浄した。プローブ・アレイを次に、１０分間、２５℃でＳＡＰＥ溶液（１００ｍＭ  ＭＥＳ、１Ｍ  Ｎａ＋、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．００５％消泡剤、２ｍｇ／ｍｌアセチル化ＢＳＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、および１０μｇ／ｍｌＲフィコエリスリン・ストレプトアビジン（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ））で最初の染色をおこなった。最初の染色後、プローブ・アレイを、非ストリンジェント洗浄緩衝液、２５℃で、１０サイクルの４ミックス／サイクルで洗浄した。次に、プローブ・アレイを１０分間、２５℃で抗体溶液（１００ｍＭＭＥＳ、１Ｍ  Ｎａ＋、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．００５％消泡剤、２ｍｇ／ｍｌアセチル化ＢＳＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、１００μｇ／ｍｌヤギＩｇＧ（ＳＩＧＭＡ  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）および３μｇ／ｍｌビオチン化アンチ・ストレプトアビジン抗体（ヤギ）（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａ��ｏｒａｔｏｒｉｅｓ）で染色した。第２の染色後、プローブ・アレイを再び、ＳＡＰＥ溶液でさらに１０分間、２５℃で染色した。最後に、プローブ・アレイを１５サイクルの４ミックス・サイクルで非ストリンジェント洗浄緩衝液を用いて３０℃で洗浄した。
【０１７５】
アレイを、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ遺伝子チップ・スキャナ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ，Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ，ＣＡ）で走査した。スキャナは、走査共焦点顕微鏡を有し、励起源としてアルゴンイオン・レーザを使用した。発光はフォトマルチプライアー・チューブで５３０ｎｍのバンド幅フィルター（フルオセイン０  または５６０  ロングパス・フィルタ（フィコエリスリン）によって検出した。
【０１７６】
ｍＲＮＡは、Ｍｕｒｉｎｅ７４Ｋ（ＭＵ７４Ｋ）チップ・セットで分析した。データをＧＥＮＥＣＨＩＰ４．０ソフトウェアを用いて削減した。各実験試料を二ファイル分析で時間一致対照と比較した。データを、１つのグループ内で「プレゼント（Ｐｒｅｓｅｎｔ）」と呼ばれる遺伝子についての基準によってフィルタリングし、「インクリージング（Ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ）」または「デクリージング（Ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇ）」と呼ばれる全ての遺伝子を取り除いた。
【０１７７】
３匹のマウスに対するデータを以下に示す（ＡＤ−ＧＩＬ−１９マウス４９、５１、および５２）。示したものは、Ａｄ−ＧＦＰ対照と比べて発現が変化した遺伝子であり、各動物について平均変化倍率を示している。Ａｄ−ＩＬ−２２処置動物の遺伝子発現で観察された変化は、急性期応答のＩＬ−２２による誘導と一致する。観察された変化はまた、処置した動物での炎症状態を示すものでもある。
【０１７８】
【表３−１】
2007537132.tif 000040
【０１７９】
【表３−２】
2007537132.tif 000041
【０１８０】
【表３−３】
2007537132.tif 000042
【０１８１】
【表３−４】
2007537132.tif 000043
（実施例９：インビボ関節炎モデルでの抗ＩＬ−２２の効果）
コラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）マウス・モデルでの症状改善に対するＰ３／１モノクローナル抗体の能力を検討した。雄ＤＢＡ／１（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅ）マウスを全ての実験で用いた。抗体を予防的または治療的にＤＢＡマウスに投与した。治療計画（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｒｅｇｉｍｅｎ）では、疾患がマウスで連続２日間観察された場合に処置を開始した。
【０１８２】
関節炎の誘導は、牛ＩＩ型コラーゲン（Ｃｈｏｎｄｒｅｘ，Ｒｅｄｍｏｎｄ，ＷＡ）を用いておこなった。牛ＩＩ型コラーゲン（Ｃｈｏｎｄｒｅｘ，Ｒｅｄｍｏｎｄ，ＷＡ）を０．１Ｍ酢酸に溶解し、１ｍｇ／ｍｌ結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）（Ｈ３７ＲＡ株）を含む等量のＣＦＡ（Ｓｉｇｍａ）で乳化した。０日目、１００μｇの牛コラーゲンを尾部に皮下注射した。２１日目に、マウスの尾基部に対して、等量の不完全アジュバント（Ｓｉｇｍａ）を混合した０．１Ｍ酢酸に２００μｇの牛コラーゲンを含む溶液を皮下注射した。未処置の動物に対しては、同様の一連の注射をコラーゲン無しでおこなった。投薬の手順を図１に模式的に示す。
【０１８３】
少なくとも週に３回、疾患の進行についてマウスを観察した。個々の肢に対して、インデックスにもとづいて臨床スコアを割り当てた。すなわち、０＝正常、ｐ＝趾の先端にある局所的な紅斑によって特徴づけられる関節炎、１＝１〜２つの趾の脹れを伴う視認可能な紅斑。２＝顕著な紅斑（肉趾膨張および／または指膨張によって特徴づけられる）、３＝足首関節または手関節に達する広範囲の脹れ。４＝肢の使用の困難性または間接の硬直。したがって、任意のマウスに対する肢スコアの合計によって、最大全身スコアが１６になった。
【０１８４】
疾患の種々の段階で、動物を安楽死させ、組織を回収し、組織学のために足を１０％ホルマリンあるいは４％パラホルムアデヒド、ｐＨ７．４７に固定し、２０％ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）で脱灰し、インサイチュハイブリダイゼーションのためにパラフィンに包埋した。光学顕微鏡を使用して、関節炎の度合および範囲を特徴づけるために、５段階スコアリング法（０〜４）で足のスコアリングをおこなった。炎症に関連した他の変化、例えばパンヌス形成、滑膜の繊維性、関節軟骨エロシンおよび／または肋軟骨下の骨破壊に加えて、炎症浸潤を用いてスコアリングをおこなった。組織学的グレードを個々の足の読み取りを用いて測定した。すなわち、ＮＡＤ＝０または何ら異常を発見せず；  １＝わずかから中程度；２：軽度から中程度；３：過度、および４：重度。
【０１８５】
ＩＬ−２２抗体の治療的投与の効果を図２に示す。身体スコアを、時間の関数として示している。抗ＩＬ−２２抗体を投与されたマウスは、対照ヒトＩｇＧまたはＰＢＳを投与されたマウス（データ不図示）と比較して症状の著しい減少が見られた。
【０１８６】
ＩＬ−２２抗体を中和する予防投与の効果を、図３〜図５に示す。身体スコアは、抗ＩＬ−２２または対照抗体投与後に時間の関数として示されている。抗ＩＬ−２２を投与したマウスでは、対照ラットＩｇＧまたはＰＢＳを投与したマウス（データ不図示）と比較して症状の著しい減少がみられた。
【０１８７】
別個の予防レジメンを受けているマウスについても身体スコアの検討をおこなった。結果を時間の関数として図４に示す。対照抗体で処置されたマウスは、抗ＩＬ−２２で処置されたマウスよりも合計身体スコアの平均値が著しく高かった。抗ＩＬ−２２抗体を投与したマウスでは、対照ラットＩｇＧ１またはＰＢＳ投与マウス（データ不図示）と比較して症状の著しい減少が見られた。
【０１８８】
予防レジメンを受けているマウスの足の病勢悪化を図５に示す。３６日目でマウスを屠殺し、足の疾患重症度を検討した。疾患なしに対応する０と最も重篤な疾患を表す４とによって０から４までの組織学的グレードを上記足に対して割り当てた。ＩＬ−２２抗体を注射されたラットでは、６０％を上回るものが組織学的グレードが「０」であり、一方約２０％のマウスで組織学的グレードが「１」であった。約１５％のマウスが組織グレード「２」を示し、約１０％のマウスが組織学的グレード「３」を示した。わずかな割合のマウスが組織学的グレード「４」を示した。対照抗体を注射されたマウスでは、約３０％が組織学的グレード「０」を示し、約５％のマウスが組織学的グレード「１」を示した。残りのマウスは、よりいっそう悪い病理学的グレードを示した。すなわち、約１８％が組織学的グレード「２」であり、一方２０％が病理学的グレード「３」であり、さらに残りのマウスが組織学的グレード「４」を示した。抗体ＩＬ−２２抗体を投与したマウスでは、対照ラットＩｇＧ１またはＰＢＳを投与したマウス（データ不図示）に比べて著しい症状の減少が見られた。
【０１８９】
これらの結果は、ＩＬ−２２抗体の予防的または治療的投与が動物系での関節炎の症状を、治療的または予防的のいずれかで、著しく改善することを示している。
【０１９０】
（実施例１０：ＩＩＬ−２２転写産物のインサイチュハイブリダイゼーション）
関節炎マウスの肉趾の種々の細胞型でのＩＬ−２２およびＩＬ−２２レセプターの発現を測定した。抗センスＩＬ−２２およびＩＬ−２２マウス・レセプター・リボプローブを２つの別個のＰＣＲ産物を対応する転写産物から生成することによって作り出した。オリゴヌクレオチド５’−
【数１】
2007537132.tif 000044
を用いて、ＩＬ−２２レセプター・センス・プローブについて生成し、５’−
【数２】
2007537132.tif 000045
を用いて、ＩＬ−２２レセプター・アンチセンス・プローブについて生成した。ＰＣＲ増幅後、Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼを用い、インビトロ転写でプローブを生成した。
【０１９１】
ＩＬ−２２配列のプローブを、以下の配列をプラスミドに組み込み、この配列をＴ７およびＳＰ６プロモーターの制御下に置くことで、センスおよびアンチセンス転写産物：
【数３】
2007537132.tif 000046
を生成した。
【０１９２】
Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼ結合部位をオリゴヌクレオチドに取り込み、センス・リボプローブについてはＰＣＲ産物の５’末端あるいはアンチセンス・リボプローブについてはＰＣＲ産物の３’末端に、Ｔ７結合部位を挿入した。製造元の記述にしたがってＤＩＧ・ＲＮＡ標識混合物（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用い、またＴ７ＲＮＡポリメラーゼ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を用いて、ジゴキシゲニン標識プローブの調製をおこなった。ＣＩＡマウス・モデルの肉趾にあるＩＬ−２２レセプターｍＲＮＡ陽性細胞は、マクロファージ、線維芽細胞、リンパ球の亜集団、活性化された骨芽細胞、滑膜細胞、および表皮であった。対照肉趾またはセンス・プローブでは陽性染色がみられなかった。ｍＩＬ−２２ｍＲＮＡ陽性細胞は、好中球、マクロファージ、線維芽細胞、および骨細胞であった。センス・プローブで処置した肉趾部分およびｍＩＬ−２２ｍＲＮＡで染色した対照マウスでは染色が見られなかった。インサイチュハイブリダイゼーションは、関節炎マウスの肉趾でのＩＬ−２２レセプターおよびサイトカインの存在を示した。
【０１９３】
（実施例１１：実施例１２〜２２の実験プロトコル）
（組換え体ＩＬ−２２、ＩＬ−２２ＲＥＣＤ、ＩＬ−１０Ｒ２ＥＣＤ、およびＩＬ−２２ＢＰ融合タンパク質）
ヒトＩＬ−２２（ＡＰＩＳＳＨＣＲＬＤ）の成熟末端に融合したＮ末端Ｈｉｓ／Ｆｌａｇタグ（ＧＳＧＨＨＨＨＨＨＧＳＧＤＹＫＤＤＤＤＫ（Ｔｅｒｐｅ，Ｋ．（２００３）Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ＆  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６０（５）：５２３−３３）をコードする哺乳類発現ベクターをチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞に形質移入した。メトトレキサートおよびサイトカインでさらに選別し、その後条件培地で精製し、これらのすべてを標準的方法でおこなった（Ｔｅｒｐｅ，Ｋ．（２００３）上掲；  Ｋａｕｆｍａｎ，Ｒ．Ｊ．（１９９０）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５：５３７−６６；  Ｋａｕｆｍａｎ，Ｒ．Ｊ．（１９９０）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５：４８７−５１１；  Ｈｏｃｈｕｌｉ，Ｅ．（１９８８）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６：１３２１−１３２５）。  ＥＬＩＳＡで使用するために、製造元（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）の推奨に従って、ＥＺ−Ｌｉｎｋ（商標）スルホＮＨＳビオチン・キットを用いて、ヒトＩＬ−２２をビオチニル化した。精製組換えマウスＩＬ−２２は、Ｎ末端ＨＩＳ／ＦＬＡＧタグ（ＧＳＧＨＨＨＨＨＨＧＤＹＫＤＤＤＤＫ）とマウスＩＬ−２２の成熟Ｎ末端（ＬＰＶＮＴＲＣＫＬ）との間の融合をコードする発現ベクターを用いて、同等の方法によって調製した。サイトカインの定量は、アミノ酸組成に由来する理論上の消衰係数を用いて、Ａ２８０吸光度によっておこなった。還元剤の存在または非存在下（データ不図示）のいずれかで、ヒトおよびマウスＩＬ−２２を〜３０−４０ｋＤでＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で分離する。それは広範囲にグリコシル化される。すなわち、Ｎ−グリカナーゼで処置した場合、ＩＬ−２２が〜１９ｋＤ、近傍またはその理論的分子量（データ不図示）に移動する。
【０１９４】
疎水性プロットで定義される、ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２の細胞外ドメインを、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインに対するフレキシブル結合リンカーを介してフレーム単位で融合した。ヒトＩＬ−２２ＲＥＣＤ哺乳類発現ベクターを構築し、該ベクターはヒトＩＬ−２２ＲＥＣＤ（ＴＬＰＤＲＴＷＴがＣ末端配列（Ｘｉｅ  Ｍ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７５（４０）：３１３３５−９；  Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６（４）：２７２５−３２）、ヒトＩＬ−１０Ｒ２ＥＣＤ（ＴＨＤＥＴＶＰＳがＣ末端配列（Ｌｕｔｆａｌｌａ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  １６（２）：３６６−７３））、またはリンカー（ＡＧＳＧＳＧＳＧ）に融合したヒトＩＬ−２２ＢＰ（ＥＥＲＣＶＥＩＰがＣ末端配列（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６６（１２）：７０９０−５；  Ｋｏｔｅｎｋｏ，Ｓ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６６（１２）：７０９６−１０３；  Ｘｕ，Ｗ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９８（１７）：９５１１−６）、続いてヒトＩｇＧ１Ｆｃ（このドメインのＮ末端配列は、ＥＰＫＳＣＤＫＴからスタート）をコードしている。それらのＦｃ融合ホモ二量体の各々を含む調整培地を、標準的な方法論によって、安定なＣＨＯ系から調製した（Ｋａｕｆｍａｎ，Ｒ．Ｊ．（１９９０）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５：５３７−６６；  Ｋａｕｆｍａｎ，Ｒ．Ｊ．（１９９０）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５：４８７−５１１）。ＩＬ−２２Ｒ−ＦｃおよびＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃの両方を発現する調整培地を、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ融合発現ベクターを安定なＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ発現ＣＨＯ系に一時的に形質移入することによって、あるいはこれらの融合レセプターの同時増幅によって、作った。調整培地（ＣＭ）をすべてのＦｃ融合レセプターの供給源として用いた。
【０１９５】
ＣＭでの全Ｆｃ融合を抗ヒトＩｇＧサンドイッチＥＬＩＳＡで定量化した。この際、被覆抗体として、１μｇ／ｍｌのヤギ抗ヒトＩｇＧ（（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）を用い、また検出抗体として、１／１０，０００希釈ヤギ抗体ヒトＩｇＧＨＲＰ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）を用いた。さらに、無関係の精製Ｆｃ融合タンパク質を標準として用い、Ａ２８０での吸光度によって定量した。標準ＥＬＩＳＡでの詳細なプロトコルを以下に示す。
【０１９６】
Ｆｃ融合ホモ二量体とヘテロ二量体との同一性および組成をβメルカプトエタノールの存在または非存在下で評価した（図７Ａ）。この際、標準ＳＤＳアクリルアミドゲル電気泳動法を用い、１：５０００希釈のヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＨＲＰ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｎ，ＡＬ）、１μｇ／ｍｌウサギ抗ＩＬ−２２Ｒ（ＰｒｏＳｃｉ，Ｐｏｗａｙ，ＣＡ）、または０．２μｇ／ｍｌヤギ抗ｈＩＬ−１０Ｒ２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ；ＭＮ）を検出用の試薬として用いた。注意すべき点は、ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２抗体がともに各々のホモ二量体の両鎖とヘテロ二量体の１本の鎖とを検出することである。
【０１９７】
ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃヘテロ二量体の特異的な検出のために、０．５μｇ／ｍｌウサギ抗ｈＩＬ−２２Ｒ（ＰｒｏＳｃｉ，Ｐｏｗａｙ，ＣＡ）を被覆抗体として、また０．５μｇ／ｍｌビオチン化ヤギ抗ｈＩＬ−１０Ｒ２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を検出手段として用いることで、サンドイッチＥＬＩＳＡを確立した。
【０１９８】
（ＩＬ−２２抗体）
ＩＬ−２２に対するモノクローナル抗体を、マウスで、つづいてヒトのサイトカインで、最初にＬＯＵラット（Ｈａｒｌａｎ、Ｈａｒｌａｎ、ＭＡ）を免疫化することで生成した。ラット脾臓をマウス・ミエローマ細胞株Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３（ＡＴＣＣ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）と融合し、ハイブリドーマ細胞株を標準的技術を用いて生成した（Ｇｏｄｉｎｇ  Ｊ．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅｓ．３ｒｄ  ｅｄ．Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；  １９９６．ｐ．１４１−１８０）。１μｇ・ｍｌ  ｈＩＬ−２２で被覆されたプレートを用い、１／５０００希釈ＨＲＰ結合ヤギ抗ラットＩｇＧ（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を検出手段として用いることで、抗ｈＩＬ−２２分泌系を最初にＥＬＩＳＡによって同定した。Ａｂ−０２およびＡｂ−０４は、それぞれ、ＩＬ−２２抗体Ｐ３／３およびＰ３／２として、既に記載されている（上記実施例５を参照せよ）。標準的方法で、抗体を腹水から生成した。モル濃度に換算するために、１５０ｎｇ／ｍｌを１ｎＭ抗体と定義する。
【０１９９】
（ＩＬ−２２サイトカイン／レセプターＦｃ結合ＥＬＩＳＡ）
２つの標準的フォーマットを用いて、ＩＬ−２２とレセプターＦｃ融合との間の相互関係を調べた。図６Ａ、８Ａ〜８Ｂ、９Ａ〜９Ｂ、１０Ｂ〜１０Ｃ、および１１Ａ〜１１Ｃに示す結果をＥＬＩＳＡアッセイから得た。ＣＨＯ  ＣＭ由来のレセプターＦｃを、抗ｈＩｇＧコートを介して最初に固定化した。平底の９６穴ＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｓｔａｒ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）を、０．１Ｍ炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．６）中１μｇ／ｍｌの１００μｌヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）で一晩、４℃で被覆した。プレートを、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含む２００μｌのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ−Ｔ）で２回洗浄し、１００μｌの１％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）含有ＰＢＳ−Ｔで１時間ブロックし、３回洗浄した。１時間連続してインキュベーション（１００μｌ）した後、各々を３回の洗浄で分離し、固定濃度または段階的に希釈された所定のレセプター融合、固定濃度または段階的に希釈したビオチン化ＩＬ−２２（ビオ−ＩＬ−２２）、続いて１／１０，０００希釈のストレプトアビジン西洋ワサビ・ペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）を用いた。最終セットの洗浄後、１００μｌのＴＭＢマイクロウエル・ペルオキシダーゼ基質（ＢｉｏＦｘ、Ｏｗｉｎｇｓ  Ｍｉｌｌｓ、ＭＤ）を２０分間にわたり添加し、反応を１００μｌの２ＮＨ２ＳＯ４で停止させた。ペルオキシダーゼ産物の比色検出を４５０ｎｍでＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）マイクロプレート・リーダーによりおこなった。
【０２００】
レセプターＦｃとビオＩＬ−２２とがともに一定の濃度である上記フォーマットの特定のＥＬＩＳＡアッセイのために、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃを、ビオＩＬ−２２前またはビオＩＬ−２２とともに（図９Ａ）、あるいはビオＩＬ−２２の後（図９Ｂ）に、添加した。示されたレセプターＦｃおよびビオＩＬ−２２もまた一定の濃度である上記フォーマットの別のＥＬＩＳＡアッセイのために、抗体（図１０Ｂ〜１０Ｃ、１１Ｃ）またはＩＬ−２２ＢＰ（図１１Ａ〜１１Ｂ）を、ビオＩＬ−２２で３０分間にわたってプレインキュベーションした後に、種々の濃度で添加した。ＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ複合体に対するＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃの補充が直接検出されたＥＬＩＳＡアッセイ（データ不図示、図９Ａの実験設計）では、非ビオチン化ＩＬ−２２をＥＬＩＳＡに添加し、ポリクローナル・ヤギ抗ｈＩＬ−１０Ｒ２またはマウス・モノクローナル抗ｈＩＬ−１０Ｒ２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）のいずれかを検出手段として用いた。
【０２０１】
図６Ｂは、逆のフォーマットで実行されたＥＬＩＳＡアッセイの結果を示すもので、１００μｌの１μｇ／ｍｌビオチン化ＩＬ−２２をＲｅａｃｔｉ−Ｂｉｎｄ９６穴ストレプトアビジン被覆プレート（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）に１時間加え、洗浄し、さらにヤギ抗体ヒトＩｇＧ−ＨＲＰで検出した。図６Ａでは、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ（黒四角）またはＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ（白丸）のいずれかを発現するＣＨＯ細胞から調製培地（ＣＭ）中に５０ｎｇ／ｍｌの全Ｆｃが抗ヒトＩｇＧで被覆された穴（ウエル）に捕獲された。種々の濃度のビオチン化ＩＬ−２２（ビオＩＬ−２２）を次に上記ウエルに添加した。ストレプトアビジンＨＲＰを用いて、結合ビオＩＬ−２２を逐次測定した。図６Ｂでは、ビオＩＬ−２２（１μｇ／ｍｌ）がストレプトアビジン・プレートに捕獲された。ＣＨＯで希釈して種々の濃度のＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ（黒四角）またはＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ（白丸）にした。次に、ＣＭをウエルに添加した。続いて、結合レセプターＦｃをヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＨＲＰで測定した。
【０２０２】
（抗ＩＬ−２２抗体を用いたＳＴＡＴ３リン酸化の阻害）
ＨｅｐＧ２細胞（ＡＴＶＣＣ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を、４ｘ１０５細胞／ウエルで播種された６穴組織培養プレート（Ｃｏｍｉｎｇ、Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）を用い、１０％ウシ胎仔血清が添加されたダルベッコ修飾基本培地（ＤＭＥＭ）で培養した。２４時間後、２５分間にわたり５０ｎｇ／ｍｌヒトＩＬ−２２の有り無しで新鮮な培地を添加した。中和作用強度について抗体を試験した場合、サイトカインおよび抗体を室温で３０分間、プレインキュベートした。２００μｌ／ウエルの細胞溶解緩衝液（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）を添加することによって、細胞を溶解させた。細胞可溶化物に含まれる全タンパク質濃度をＢＣＡアッセイによって測定した（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）。１０μｇのタンパク質を４〜２０％ＳＤＳポリアクリルアミドゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）で分離し、続いて室温で終夜、ニトロセルロース膜（Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）上にブロッティングした。リン酸化ＳＴＡＴ３をｐ−ｓｔａｔ３Ｔｙｒ７０５抗体キット（（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）を用いて検出した。化学発光の発現に、製造元（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）の推奨に基づいてＥＣＬ検出システムを用いた。
【０２０３】
（実施例１２：ＩＬ−２２はＩＬ−２２Ｒに結合し、ＩＬ−１０Ｒ２に対する検出可能な親和性は持たない）
ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に対するＩＬ−２２結合を、ＥＬＩＳＡフォーマットを用いて評価した。最初のバージョンでは、レセプター−Ｆｃ融合タンパク質を、Ｆｃドメインを介して、抗ヒトＩｇＧ被覆プレート上に固定した。ビオチン化ＩＬ−２２を次に添加し、ストレプトアビジン−ＨＲＰを検出した。図６Ａは、ビオＩＬ−２２が固定化ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃに結合するけれどもＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃに対しては検出不可能であることを示している直線グラフである。逆のフォーマットでは、ビオＩＬ−２２を最初にストレプトアビジン被覆プレート上に固定した。レセプター−Ｆｃを次に添加し、ＨＲＰ結合抗ｈＩｇＧで検出した。図６Ｂに示すように、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃではなく可溶性ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃが固定化ビオＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃに結合する。ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃをこのアッセイ・フォーマットに対して、高濃度（３〜１０μｇ／ｍｌ、データ不図示）で添加した場合に、バックグラウンド（非特異的Ｆｃ融合）よりもわずかに高いシグナルが観察され、このことはＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃが固定化ビオＩＬ−２２に対してかなり低い結合力を持つことを示唆している。まとめると、ＥＬＩＳＡ実験の最初の段階は、ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間に相対的に強い相互作用があること示している。
【０２０４】
（実施例１３；ＩＬ−２２Ｒ−ＦｃおよびＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ二量体およびヘテロ二量体の調製および特徴づけ）
以下の実験は、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃが隣接している場合、ＩＬ−１０Ｒ２の細胞外ドメインがＩＬ−２２に結合するかどうかを評価するためにおこなわれた。増幅ＣＨＯ系からのＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃの分泌が貧弱である（〜５０〜１００ｎｇ／ｍｌ）であり、その一方でＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃがかなりよく分泌される（〜１０μｇ／ｍｌ）ことから、ＩＬ−１０Ｒ２−ＦｃがＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃの選択を促進させることができるかもしれないと考えられる。ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃを発現するＣＨＯ系は、一時的にＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ発現ベクターによって形質移入された。このプラスミドの導入は、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃの発現を２〜４倍増加させた。続いて、Ｆｃ融合レセプターの両方の鎖を同時発現させる安定な系が実質的に確立された。
【０２０５】
単量体のＩＬ−２２ＲＥＣＤ−ＦｃおよびＩＬ−１０Ｒ２ＥＣＤ−Ｆｃ融合がそれぞれ分子量〜６０ｋＤおよび〜８５ｋＤを持つことを測定した。両方のレセプターＦｃ融合またはいずれかを発現するＣＨＯ細胞由来の還元および非還元調整培地（ＣＭ）をＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で分離し、膜にブロッティングし、続いてヒトＩｇＧＦｃ、ＩＬ−２２Ｒ、またはＩＬ−１０Ｒ２のいずれかに対するポリクローナル抗体でプロービングした。より具体的には、図７Ａで、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ、または両方のレセプターＦｃを発現するＣＨＯ細胞由来の調整培地を８％ポリアクリルアミドゲル上で、還元（＋βＭＥ）および非還元（−βＭＥ）条件下で分離し、膜ブロッティングに移した。ウエスタンブロットを、抗ヒトＩｇＧ１、抗ｈＩＬ−２２Ｒ、または抗ｈＩＬ−１０Ｒ２抗体のいずれかを用いて実施した。抗ｈＩｇＧ検出のブロットについては、全体で４ｎｇのＦｃ融合を含むＣＭを各レーンに充填した。抗ＩＬ−２２Ｒおよび抗ＩＬ−１０Ｒ２抗体検出については、同時発現ＣＨＯ由来の全体で１６ｎｇのＦｃ融合を含むＣＭを用いた。図７Ｂでは、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ（黒四角）、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ（白丸）、またはそれら両方（黒三角）のいずれかを発現するＣＨＯ細胞由来の調整培地を、ウサギ抗ヒトＩＬ−２２Ｒ抗体で被覆されたＥＬＩＳＡプレートに添加した。２種類のホモ二量体からなる１：１混合物もまた対照（白三角）として添加した。結合レセプターの検出は、ビオチン化ヤギ抗ヒトＩＬ−１０Ｒ２抗体、続いてストレプトアビジン−ＨＲＰを用いておこなった。
【０２０６】
還元条件下（＋βＭＥ、図７Ａ）、ＩＬ−２２Ｒ、およびＩＬ１０Ｒ２−Ｆｃ  ＣＨＯ系は異なる分子量でヒトＦｃ融合タンパク質を分泌する。レセプター鎖特異的抗体による検出は、〜６０ｋＤ種がＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃであり、〜８５ｋＤ種がＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃであることを確証する。これら成熟レセプター融合タンパク質の両方とも理論的分子量は〜５１ｋＤである。ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃは、４つの潜在的Ｎ結合グリコシル化部位を持つもので、５つの潜在的Ｎ結合部位を持つＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃよりも、ＣＨＯ細胞を介したその継代の過程でグリコシル化の程度がより低いと予測される。ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃは、より広範な翻訳後修飾を持つと思われる。この分析は、還元条件下で、同時発現ＣＨＯ細胞が両方のＦｃ融合を分泌することも示す。抗ｈＩｇＧ検出パネルから派生するデータは、ＩＬ−１０Ｒ２−ＦｃがＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃよりも高レベルで発現されることを示唆している。
【０２０７】
両方のレセプターＦｃ融合を発現するＣＨＯ細胞は、優先的にＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃヘテロ二量体およびＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃホモ二量体を分泌する。これらのレセプターＦｃ融合は異なる分子量を持つことから、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（−βＭＥ、図７Ａ）によるＣＭの分析は、２つのホモ二量体間でゲル上に分離するレセプターＦｃヘテロ二量体の検出を可能にする。これらの条件下で、ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃヘテロ二量体とＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃホモ二量体とが同時発現ＣＨＯ細胞由来のＣＭ中で抗ｈＩｇＧによって検出された。対照的に、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃホモ二量体は、ほとんど検出されなかった。ＩＬ−２２Ｒ抗体検出パネルは、非還元条件下で、同時発現ＣＨＯがＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃホモ二量体を分泌するけれども、実質的にヘテロ二量体よりも少ないことを示す。まとめると、図７Ａに示す結果は、ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ形質移入ＣＨＯが共有結合ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃヘテロ二量体とＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃホモ二量体と、かなり少ないＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃホモ二量体を分泌することを示す。
【０２０８】
ＣＨＯ細胞由来のＣＭでのヘテロ二量体の存在を、サンドイッチＥＬＩＳＡで確認した。この際、ヘテロ二量体の各鎖に特異的な抗体を用いた。ＩＬ−２２Ｒポリクローナル抗体で被覆されたウエルに調整培地を添加した後、結合タンパク質をビオチン化ＩＬ−１０Ｒ２ポリクローナル抗体で検出した。このＥＬＩＳＡフォーマットは、ＩＬ−２２ＲエピトープとＩＬ−１０Ｒ２エピトープとが安定的に結合している分子のみを検出する。ＩＬ−２２Ｒ−ＦｃまたはＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃのいずれかを発現しているＣＨＯ由来のＣＭ単独、またはこれらＣＭを一緒に混合したものは、このＥＬＩＳＡフォーマットではなんら検出可能なシグナルを与えなかった。シグナルは、ＩＬ−２２Ｒ−ＦｃおよびＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃを同時発現したＣＨＯ細胞からのみ得られた。図７Ａのデータに沿って、この観察が示したことは、両方のＦｃ融合レセプターを発現しているＣＨＯ細胞がＩＬ−２２ＲＥＣＤおよびＩＬ−１０Ｒ２ＥＣＤＦｃ単量体鎖間での共有結合を含むヘテロ二量体を分泌することである。
【０２０９】
まとめると、図７Ａ〜７Ｂに示した結果は、レセプターＦｃ融合がホモ二量体およびヘテロ二量体としてＣＨＯ細胞から分泌されることを示す。ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ同時発現ＣＨＯ細胞は、ほとんどの場合、ヘテロ二量体とＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃホモ二量体とを分泌する。
【０２１０】
（実施例１４：ＩＬ−２２は隣接ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２レセプターＦｃ鎖に対する増強された結合を示す）
Ｆｃヘテロ二量体として分泌されたＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２のＥＣＤに対するＩＬ−２２結合を次に評価した。ＣＭ由来の一定濃度の全Ｆｃ融合タンパク質を最初に、Ｆｃドメインを介して、抗ヒトＩｇＧ被覆プレートに固定した。ビオＩＬ−２２の種々の濃度を検出手段として用いて、結合に対するサイトカインの能力を次に評価した（図８Ａ）。図６Ａにあるように、ＩＬ−２２Ｒ−ＦｃおよびＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃホモ二量体は、シグナルおよび検出不可能なシグナルをそれぞれ与える。しかし、最も効率のよいビオＩＬ−２２結合は、同時発現ＣＨＯ細胞のＣＭに由来する固定化レセプターＦｃによって得られた。すなわち、固定化ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃホモ二量体による比較可能なシグナルに対するよりも、８倍少ないビオＩＬ−２２が必要とされた。ＩＬ−１０Ｒ２Ｆｃ二量体成分のＩＬ−２２に対する結合がそれらの条件下では検出不可能であることから（図６Ａ、８Ａ）、同時発現ＣＨＯのＣＭ由来のＦｃタンパク質によるＩＬ−２２の増強された結合は、ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃヘテロ二量体成分によるものに違いない。この場合もやはり、非常に少ないＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃホモ二量体がそれらの同時発現ＣＨＯ細胞によって分泌される（図７Ａ〜７Ｂ）。ＩＬ−２２を結合するためのヘテロ二量体のより強い能力が、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃホモ二量体と比べて少ない固定化ヘテロ二量体が図８Ａの実験設計に用いられたという事実によって、強調される。一定濃度の全Ｆｃをウエルに添加したことから、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃホモ二量体ＣＭとは対照的に、ヘテロ二量体を含有するＣＭを他のＦｃ成分で希釈する。ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃヘテロ二量体は、最良の結合シグナルを与えることから、ＩＬ−１０Ｒ２のＥＣＤに対するＩＬ−２２結合の役割が示されると結論された。ＩＬ−１０Ｒ２ホモ二量体単独ではＩＬ−２２に結合できないことから、それらの結果はＩＬ−１０Ｒ２の結合ＩＬ−２２に対する影響がＩＬ−２２Ｒの存在を必要とすることも示している。
【０２１１】
ランダムに並べて置かれたＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２  ＥＣＤもまた、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃホモ二量体よりも効率的にＩＬ−２２に結合することができる。図３Ｂの実験に関して、ＣＭの１：１混合物を調製し、これには等量のＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃホモ二量体とＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃホモ二量体もしくは無関係なＦｃホモ二量体のいずれかとが含まれる。Ｆｃ融合の混合物を、ヘテロ二量体を含有するＣＭと同様に、段階的に希釈した後、所定の全Ｆｃ濃度で、抗ヒトＩｇＧ被覆プレート上に固定化した。一定濃度のビオＩＬ−２２を検出手段として用いて、サイトカインの結合能力を次に評価した。図８Ｂの結果は、ＩＬ−２２Ｒ−ＦｃとＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃとのホモ二量体混合物がＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃと無関係のＦｃホモ二量体との混合物よりも、２〜３倍大きい効率でビオＩＬ−２２と結合することを示す。この観察は、ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２レセプター鎖がＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃに対する共有結合を、このＥＬＩＳＡをベースとしたフォーマットでのその機能を促進させるためには必要としないことを示している。適当な物理的並置が２つのホモ二量体のランダム被覆の過程で一緒に生ずる場合、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃと無関係なＦｃホモ二量体との混合物と比較して、ビオチン化ＩＬ−２２の増強された結合が検出される。この増強されたシグナルは、全Ｆｃ融合が高濃度である際に、よりいっそう顕著であり、ＩＬ−２２ＲとＩＬ−１０Ｒ２  ＥＣＤとが互いに隣接して並置される傾向がある。対照的に、ヘテロ二量体のレセプターＦｃ間の共有結合がそれらのレセプターのＥＣＤの濃度非依存型並置を与え、任意の濃度の全Ｆｃで最も強いシグナルとなる。まとめると、図８Ａ〜８Ｂに示す結果は、ＩＬ−２２ＲのＥＣＤがＩＬ−２２結合でのＩＬ−１０Ｒ２の役割を検出する上で必要とされることを示す。ＩＬ−２２の増強された結合が、両ＥＣＤが存在する場合に検出される。
【０２１２】
（実施例１５：ＩＬ−１０Ｒ２の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）がＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒの細胞外ドメインとの間の初期相互作用の安定化をもたらす）
ＩＬ−１０Ｒ２のＩＬ−２２結合機能は、ＩＬ−２２Ｒの存在を必要とする（図８Ａ〜８Ｂ）。ＩＬ−２２サイトカイン・レセプター複合体の発現におけるＩＬ−１０Ｒ２の一時的な役割をさらに評価するために、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃホモ二量体後にＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃホモ二量体を添加することで、ＥＬＩＳＡフォーマットを修飾した。そのことから、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃホモ二量体を添加する効果を、ビオＩＬ−２２の添加に先だって、同時に、あるいはその後に評価することができた。より具体的に、図９Ａでは、ＣＭ由来のＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ  ５０ｎｇ／ｍｌを抗ヒトＩｇＧ被覆ウエル上に捕獲した。次に、ウエルを１００μｇ／ｍｌヒトＩｇＧでブロックした。次に、ビオＩＬ−２２（３０ｎｇ／ｍｌ）をウエルに添加した。その後、ストレプトアビジン−ＨＲＰ（破線）を用いて結合ビオＩＬ−２２を検出した。種々の濃度のＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃとビオチン化ＩＬ−２２（３０ｎｇ／ｍｌ）とも一緒に添加し、結合ビオＩＬ−２２を測定した（黒ひし型）。ＣＭ由来の種々の濃度のＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃもまた、最初にインキュベートし、プレートを洗った後、３０ｎｇ／ｍｌビオチン化ＩＬ−２２を続いてウエルに添加して、結合ビオＩＬ−２２を検出した（白ひし型）。ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃを１０μｇ／ｍｌｈＩｇＧに段階希釈した。図９Ｂでは、ＣＭ由来の５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃを抗ヒトＩｇＧ被覆ウエル上に捕獲した。次に、ビオＩＬ−２２（３０ｎｇ／ｍｌ）をウエルに添加した。次に、結合ビオＩＬ−２２もまた、ＰＢＳ−１％ＢＳＡ（破線）または種々の濃度のＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ（黒丸）のいずれかでさらに１時間インキュベートした後に検出した。
【０２１３】
図９Ａの実験に関して、一定量のＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ融合ホモ二量体をそのＦｃを介して抗ヒトＩｇＧ被覆プレート上に固定化した。次に、ヒトＩｇＧ（１００μｇ／ｍｌ）を添加して、プレート上のいまだ利用可能な抗ヒトＩｇＧ抗体を支配またはブロックした。一定濃度のビオＩＬ−２２がシグナル（＝１．２５）を与え、ＩＬ−２２ＲのＥＣＤとの相互作用を介してプレートに結合した。ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃホモ二量体（ｈＩｇＧに段階希釈した）をビオＩＬ−２２の添加に先立って添加する場合、プレートに実質的に結合したビオＩＬ−２２の量になんら影響を及ぼさない。これらの観察は、ＩＬ−１０Ｒ２−ＦｃおよびＩＬ−２２Ｒ−ＦｃのＥＣＤが、ＩＬ−２２の増強によって実質的に検出される互いの安定的な結合に対して、単独では作用することができないことを示唆している。むしろ、そのサイトカイン結合増強に変化をもたらすために、ＩＬ−１０Ｒ２−ＦｃはＩＬ−２２Ｒと同様に、ＩＬ−２２の存在を必要とする。図９Ａの実験では、ＩＬ−１０Ｒ２−ＦｃにビオＩＬ−２２が添加される場合、ここで、ＩＬ−２２Ｒに結合するビオＩＬ−２２の量がＩＬ−１０Ｒ２容量依存的に増加する。また、ビオＩＬ−２２の添加前に固定化ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃとともにインキュベートした場合、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃの添加が増強をもたらすことができない。
【０２１４】
サイトカイン結合に対するＩＬ−１０Ｒ２の効果の必要条件であるＩＬ−２２（図９Ａ）およびＩＬ−２２Ｒ（図８）の両方を検討することで、ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間の相互作用をこれらの必要条件が構成するかどうかが直接決定された。図９Ｂの実験に関して、一定量のＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ融合ホモ二量体をそのＦｃを介して、抗ヒトＩｇＧ被覆プレート上に固定化した。一定量のビオＩＬ−２２の添加は、シグナル（〜２．５）を与え、ＩＬ−２２ＲのＥＣＤとのその相互作用を介してプレートに結合した。ビオＩＬ−２２シグナルを直ちに検出する代わりに、引き続く洗浄およびさらなるインキュベーションの後にも検出した。最初にビオＩＬ−２２をウエルでインキュベートし、続いて１％ＢＳＡをウエルでインキュベートした場合、０．６（すなわち１．５／２．５）のオリジナル／シグナルを検出し、１％ＢＳＡによるさらなるインキュベーションの過程で、いくつかのビオＩＬ−２２が固定化ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃホモ二量体から放出された。対照的に、最初にビオＩＬ−２２、続いて濃度を増加させたＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃホモ二量体をウエルに添加する場合、より強いビオＩＬ−２２シグナルが検出され、ビオＩＬ−２２インキュベーション後直ちに得られるシグナルに近づく。これらの結果は、ＩＬ−２２結合でのＩＬ−１０Ｒ２の機能がＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの相互作用を必要とする。ウエルへのＩＬ−１０Ｒ２の添加は、ＩＬ−２２インキュベーション後、ＩＬ−２２Ｒ単独よりもＩＬ−２２についてより遅いオフ・レート（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）を有する複合体の形成を誘導する。
【０２１５】
まとめると、図６、８、および９に示す結果は、ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２レセプター鎖のＥＣＤによるＩＬ−２２の結合に関する一時的なモデルを示唆している。ＩＬ−２２は最初にＩＬ−２２Ｒに結合する。次に、ＩＬ−１０Ｒ２はＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒに結合し、さらにＩＬ−２２をサイトカイン・レセプター複合体に安定化させる（図１２にまとめをしめす）。
【０２１６】
（実施例１６：ＩＬ−２２の２つの異なる面がＩＬ−２２ＲとＩＬ−１０Ｒ２ＥＣＤとによる各々の相互作用にとって必要とされる）
２つのラットモノクローナル抗体（Ａｂ−０２およびＡｂ−０４）を生成し、これらの抗体がヒトＩＬ−２２に結合するのを示した（実施例５）。これらの抗体を、ＩＬ−２２依存型シグナル伝達をブロックする能力について試験した。ＩＬ−２２は、ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２レセプター鎖（例えば、ＨＥＰＧ２）の両方を発現する細胞株でのＳＴＡＴ３転写因子のリン酸化をもたらす（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９７（１８）：１０１４４−
９）。これらの抗体がＩＬ−２２を中和する場合、より少ないＰ−ＳＴＡＴ３が細胞溶解物に検出されなければならない。図１０Ａの実験に関して、段階希釈した抗体を細胞培地中の一定濃度のＩＬ−２２をプレインキュベートした。この培地は抗体と複合体を形成したＩＬ−２２を含むもので、この培地をＨＥＰＧ２細胞に適用した。続いて、細胞溶解物を調製し、ゲル電気泳動でタンパク質を分離し、膜に移し、この膜をＰ−ＳＴＡＴ３に特異的な抗体とインキュベートした。より具体的には、ヒトＩＬ−２２（５０ｎｇ／ｍｌ）を３７℃で３０分間、種々の濃度のＡｂ−０２またはＡｂ−０４と細胞培地中でプレインキュベートした後、この培地をＨｅｐＧ２細胞に加え、細胞を２５分間インキュベートした。次に、細胞溶解物を、抗ホスホＳＴＡＴ３抗体を用いてウエスタンブロットで分析した。ＩＬ−２２単独（＋）またはＩＬ−２２無し（−）でインキュベートした細胞を正および負の対照としてそれぞれ取り込んだ。これらの抗体はともに、細胞上でのＩＬ−２２の活性を抗体の濃度を高めることでブロックすることができ、Ｐ−ＳＴＡＴ３の検出が低下する。しかし、これらの抗体は効力が異なり、Ａｂ−０２およびＡｂ−０４のＮＤ５０は、それぞれ〜３０ｎＭおよび〜０．４ｎＭである。まとめると、図１０Ａに示す結果は、細胞にシグナル伝達するこのサイトカインの能力にとって重要なＩＬ−２２上の面に両方の抗体が結合することを示す。
【０２１７】
もし各々の抗体が、レセプター鎖との相互作用を阻害することでＩＬ−２２を中和するならば、Ａｂ−０２およびＡｂ−０４はサイトカイン・レセプター相互作用に必要なＩＬ−２２エピトープを定義する。抗体を、サイトカイン・レセプター結合ＩＬＩＳＡで評価することで、これらの抗体がＩＬ−２２結合にどのように影響するかを判断した。図１０Ｂの実験に関しては、一定量のＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃホモ二量体をそのＦｃを介して抗ヒトＩｇＧ被覆プレート上に固定化した。一定量のビオＩＬ−２２によってシグナル（〜２．２５）が与えられ、ＩＬ−２２ＲのＥＣＤとの相互作用を介してプレートに結合した。これら２つの抗体とＩＬ−２２とのプレインキュベーションは、引き続いてＩＬ−２２Ｒに結合するＩＬ−２２の能力に対して定量的に異なる影響を持つ。Ａｂ−０４は、ＩＬ−２２ＲへのＩＬ−２２結合をブロックし（ＮＤ５０＝０．７ｎＭ）、一方Ａｂ−０２はＩＬ−２２Ｒに対するＩＬ−２２の結合を増強する（ＥＣ５０＝０．１ｎＭ）。このＥＬＩＳＡでのこれらの抗体に関する明確な表現型は、これらが異なるＩＬ−２２エピトープを定義することを示している。Ａｂ−０４によって定義されるエピトープは、ＩＬ−２２ＲのＥＣＤによるＩＬ−２２の認識に必要とされ、あるいはＩＬ−２２Ｒによる隣接ＩＬ−２２エピトープの認識に立体的に干渉する抗体にとって必要とされる。
【０２１８】
これらの抗体はまた、ＩＬ−２２Ｒホモ二量体よりはむしろ、ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃヘテロ二量体が抗ヒトＩｇＧ被覆ウエルに固定化された場合に、ＩＬ−２２結合に対するそれらの抗体の効果について評価された（図１０Ｃ）。図１０Ｃの実験では、一定量のビオＩＬ−２２を続けて添加することで、シグナル（〜２．５）が与えられ、ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２の両方による相互作用を介してプレートに結合した。この場合、両方の抗体がヘテロ二量体Ｆｃ融合レセプターに対するＩＬ−２２の結合を阻害する。また、これらの抗体は、定量的に異なる。Ａｂ−０４は、ＮＤ５０＝０．２ｎＭで、ほぼ完全に結合を阻害する。一方、Ａｂ−０２は、ＮＤ５０≧１０ｎＭで、結合を部分的に阻害する。われわれは、Ａｂ−０４がほぼ完全に、ＩＬ−２２Ｒ（図５Ｂ）およびヘテロ二量体（図１０Ｃ）ＥＬＩＳＡの両方で、ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間の相互作用をブロックすると結論付けた。ヘテロ二量体ＥＬＩＳＡで相対的に低いＡｂ−０２の効力は、推定上、ＩＬ−２２に対するその相対的に弱い親和性の反映である。Ａｂ−０２がＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間の相互作用をブロックしないことから（図１０Ｂ）、図１０Ｃに示す結果が、ＩＬ−２２結合のＩＬ−１０Ｒ２による安定化にとって必要、またはＩＬ−１０Ｒ２による隣接ＩＬ２２エピトープの認識に立体的に干渉するこのエピトープに対するＡｂ−０２の結合にとって必要とされる別々のエピトープを定義することを、示唆している。
【０２１９】
ポリクローナル抗体ＩＬ−１０Ｒ２もまた、ＩＬ−２２ＲおよびレセプターＦｃヘテロ二量体の両方に対するＩＬ−２２の結合を抑制する能力について、評価した。先のＥＬＩＳＡでは、ＩＬ−１０Ｒが存在しない場合、増大した抗体に一定量のビオＩＬ−２２が添加され、ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒヘテロ二量体との間の相互作用に対して、なんら顕著な影響を与えなかった（図１０Ｂ）。対照的に、固定化ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃを含むＥＬＩＳＡに対して、ＩＬ−２２に、増大したＩＬ−１０Ｒ２抗体が添加されると、この抗体がヘテロ二量体に対するＩＬ−２２の結合をブロックした（ＮＤ５０＝３ｎＭ、図１０Ｃ）。この影響の完全性は、種々のＩＬ−１０Ｒ２エピトープに対するこの抗体の結合もまた、おそらく立体的な妨害、ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間の相互作用によって、妨げられることを示す。
【０２２０】
要約すると、図１０Ａ−１０Ｃで示される結果は、Ａｂ−０２とＡｂ−０４とが各々、ＩＬ−２２のそのレセプター鎖との相互作用のために重要な、ＩＬ−２２における異なったエピトープを定義することを示唆する。Ａｂ−０４は、ＩＬ−２２ＲのＩＬ−２２の初期認識に必要なエピトープを定義する（図１２）。Ａｂ−０２は、サイトカイン・レセプター複合体の安定化におけるＩＬ−１０Ｒ２の役割にとって必要なエピトープを定義する（図１２）。ラット抗マウスＩＬ−２２モノクローナルによる比較可能なデータは、ｍＩＬ−２２上での類似のエピトープを定義する（データ不図示）。ＩＬ−１０Ｒ２ポリクローナル抗体によるＩＬ−２２結合の抑制はさらに、サイトカイン結合に対するＩＬ−１０Ｒ２の重要性を実証する。
【０２２１】
（実施例１７：ＩＬ−２２ＢＰはＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間の相互作用をブロックする）
ＩＬ−２２結合タンパク質（ＩＬ−２２ＢＰ）は、ＩＬ−２２Ｒの細胞外ドメインに対する相同性が低いＩＬ−２２に対する可溶性「レセプター」である。それは、ＩＬ−２２によって媒介される形質導入を中和する（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  ｂｎｍｕｎｏｌ  １６６（１２）：７０９０−５；  Ｋｏｔｅｎｋｏ，Ｓ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６６（１２）：７０９６−１０３；Ｘｕ，Ｗ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９８（１７）：９５１１−６；  Ｗｅｉ  Ｃ−Ｃ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｇｅｎｅｓ  ＆  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ４：２０４−２１１１７）。ＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃ融合を分泌するＣＨＯ細胞由来の調整培地を、サイトカイン・レセプター結合ＥＬＩＳＡに添加して、この天然アンタゴニストがそのレセプター鎖とのＩＬ−２２の相互作用をどのようにブロックするかを決定した。図１１Ａおよび１１Ｂの実験に関して、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃヘテロ二量体またはＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃヘテロ二量体を発現する細胞由来の一定量の総Ｆｃを、それぞれ、そのＦｃを介して抗ヒトＩｇＧ被覆プレート上に固定化した。一定濃度のビオＩＬ−２２によってシグナルが与えられ、固定化レセプター鎖との相互作用を介してプレートに結合する。増大したＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃに一定濃度のＩＬ−２２が添加されると、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃがほぼ完全に、ＩＬ−２２Ｒ（ＮＤ５０＝４ｎＭ、図１１Ａ）およびヘテロ二量体（ＮＤ５０＝２ｎＭ、図６Ｂ）の両方に対するＩＬ−２２の結合をブロックした。このことは、ＩＬ−２２ＢＰが、ＩＬ−２２ＲによるＩＬ−２２ＢＰの認識のために必要とされるＩＬ−２２のエピトープをブロックすることによって結合を抑制することを示唆している。これらの観察は、Ａｂ−０４で得られたものに類似している。
【０２２２】
ＩＬ−２２ＢＰ、Ａｂ−０４、およびＡｂ−０２がＩＬ−２２上の異なる、あるいは重なるエピトープに結合するかどうかを判断するために、結合ＥＬＩＳＡを用いた。ここで、ＩＬ−２２Ｒ−ＦｃをそのＦｃを介して、抗ヒトＩｇＧ被覆プレート上に固定化した（図１１Ｃ）。一定濃度のビオＩＬ−２２によってシグナルが与えられ、ＩＬ−２２ＢＰとの相互作用を介してプレートに結合する。増大したＡｂ−０４またはＡｂ−０２に対しても、一定濃度のＩＬ−２２を添加した。Ａｂ−０４は、ＩＬ−３３とＩＬ−２２ＢＰとの間の相互作用を完全にブロックし（ＮＤ５０＝０．０５ｎＭ）、これら２つのインヒビターが同一または重複したＩＬ−２２エピトープを共有することが示された。対照的に、Ａｂ−０２はＩＬ−２２ＢＰのＩＬ−２２による認識を部分的かつ弱くブロックし（ＮＤ５０＝  １００  ｎＭ）、Ａｂ−０２とＩＬ−２２ＢＰとがＩＬ−２２上に異なってはいるが重なっているエピトープを持つことが示された。
【０２２３】
まとめると、図１１に示した結果は、ＩＬ−２２ＢＰおよびＡｂ−０４が、ＩＬ−２２Ｒに対する結合にとって重要であるＩＬ−２２上の類似のエピトープを共有することを示している。Ａｂ−０２によって定義されるＩＬ−２２エピトープは、別個のものである。
【０２２４】
（実施例１８：ＩＬ−２２は逐次的にＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２のＥＣＤと相互作用する）
ビオチン化、Ｎ末端ＨＩＳ／ＦＬＡＧタグ標識ヒトＩＬ−２２サイトカインおよびＩＬ−２２ＲＥＣＤおよびＩＬ−１０ＲＥＣＤ−Ｆｃ融合を、ＥＬＩＳＡをベースとしたフォーマットで用いて、ＩＬ−２２がどのようにそのレセプター鎖と相互作用するかを検討した。図１２の模式的モデルにまとめたように、ＩＬ−２２は、ＩＬ−２２ＲのＥＣＤと最初に結合することが可能である。次に、ＩＬ−２２／ＩＬ−２２ＲＥＣＤは、ＩＬ−１０Ｒ２のＥＣＤと相互作用して、ＩＬ−２２に対する高い親和性を持つサイトカイン・レセプター複合体を形成する。この複合体に対するＩＬ−１０Ｒ２ＥＣＤの安定した補充は直接示されてはいないが、以下の知見がこのモデルを支持する。
【０２２５】
ＩＬ−２２と個々のレセプター・サブユニットとの相互作用を調べ、ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの結合が容易に検出し得るという知見を得た（図６Ａおよび図６Ｂで、それぞれＥＤ５０＝  ２０  ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−２２およびＥＤ５０  ＝  ６ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ）。対照的に、固定化ＩＬ−２２と可溶性ＩＬ−１０Ｒ２との間には弱い結合力のみが検出され、このことは高濃度のＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃを必要とした（３〜１０μｇ／ｍｌ；データ不図示）。これらの結果は、Ｌｏｇｓｄｏｎ，Ｎ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（後述）による最近の研究と矛盾せず、単量体ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間の相互作用がナノモル範囲（Ｋｅｑ〜１５ｎＭ）で検出され、一方ＩＬ−２２とＩＯＬ−１０Ｒ２との間の相互作用がミリモル範囲（Ｋｅｑ〜１ｍＭ）であった（Ｌｏｇｓｄｏｎ，Ｎ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ  ２２（１１）：１０９９−１１２）。
【０２２６】
理論に束縛されることなく、出願人はＩＬ−１０Ｒ２のＥＣＤがその後、ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒの細胞外ドメインとの相互作用によって定まるエピトープに対する親和性に基づいて、最初のＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−２２ＲＥＣＤ複合体と結合することを提唱する。ＩＬ−１０Ｒ２ＥＣＤの一時的な関与（ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ）は、サイトカインをレセプター複合体の中に安定化させ、効果的なシグナル伝達をもたらす（図１２）。固定化ＩＬ−２２Ｒ  ＥＬＩＳＡにおけるビオチン化ＩＬ−２２に対する、可溶性ＩＬ−１０Ｒ２Ｆｃの先行添加、併用添加（図９Ａ）、または逐次添加（図９Ｂ）のいずれかを包含する実験が、ＩＬ−２２結合に対するＩＬ−１０Ｒ２の効果は先行するＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ相互作用に依存することを示した（図９）。使用した系では、増強されたＩＬ−２２結合をもたらすために、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃは最初にＩＬ−２２（図６）またはＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ（図９Ａ）のいずれにも結合してはならない。これらの知見は、Ｌｏｎｇｓｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）（上掲）の親和性測定と一致するもので、溶液相ＩＬ−１０Ｒ２に対する固定化ＩＬ−２２親和性単独が〜１ｍＭ（Ｋｑ）であり、一方で全体的に溶液相ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２に対する親和性が２０倍以上（〜４５μＭ）である。
【０２２７】
このＥＬＩＳＡ系でのＩＬ−１０Ｒ２サブユニットとＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ複合体との安定な関与（ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ）は、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体を用いて、直接は検出されなかった。これらの抗ｈＩＬ−１０Ｒ２試薬の両方が、１００μｇ／ｍｌヒトＩｇＧが存在しても、またＩＬ−２２ＲまたはＩＬ−２２の添加とは無関係に、ＥＬＩＳＡプレートに対するＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃの明確な非特異的結合を検出した。この高いバックグラウンドは、ＥＬＩＳＡプレートに対するＩＬ−１０Ｒ２のＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒに依存した結合に由来する小さなシグナルをマスクする可能性がある。しかし、注意すべきことは、おそらくｈＩｇＧがこのアッセイに添加されるときに不十分なＩＬ−２２Ｒ−ＦｃがＩＬ−２２ＲＥＣＤに隣合うため、サイトカインが逐次添加された場合にＩＬ−２２Ｒ２−Ｆｃのこの非特異的結合は、ビオＩＬ−２２由来のシグナルを増強しないことである。
ヘテロ二量体のコンテクストでのＩＬ−１０Ｒ２に対するＩＬ−２２Ｒの共有結合性の並置は、本明細書中で使用される系で、ＩＬ−２２結合の最適な検出を与える（図８Ａ）。実質的に、一旦サイトカインがアッセイに加えられるならば、この共有結合性の結合はＩＬ−１０Ｒ２ＥＣＤがＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ  ＥＣＤ複合体の近傍にあるという可能性を増加させる。これらのヘテロ二量体は、細胞膜の範囲内でＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２レセプター・サブユニットの間の潜在的な前結合（ｐｒｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）を人工的に模倣するものであってもよい。単細胞ＦＲＥＴ系（Ｋｒａｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ＆  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  １（１０）：８０５−１５によって開発）の研究は、された完全機能的ＩＦＮ−γＲ１およびＩＦＮ−γＲ２レセプター鎖の間の前結合がＣ末端ＧＦＰおよびＢＦＰ融合を介して検出し得ることを示している。この系で、ＩＦＮ−γの結合によって、またサイトカイン・レセプター複合体の推定オリゴマー化によって、ＦＲＥＴシグナルが減少することから、キナーゼがレセプター鎖をリン酸化し、下流のシグナル・カスケードを増幅するにつれ、細胞内ドメインが分離することが示唆される。１つのモデルで、一時的なＩＬ−２２サイトカイン・レセプター相互作用が本明細書に記載されたＥＬＩＳＡ系モデルで研究され、この相互作用は、細胞膜内で、他のＩＩ型サイトカイン・レセプターと同様に、前結合ＩＬ−２２レセプター鎖のオリゴマー化にとって必要な相互作用である。
【０２２８】
（実施例１９：ＩＬ−２２は別々のＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２結合面を有する）
ラットＩＬ−２２抗体、Ａｂ−０２、およびＡｂ−０４は、サイトカイン・レセプター複合体の提案された一時的アセンブリにとって、またそれに続くシグナル伝達にとって必要とされるＩＬ−２２エピトープ上の潜在的結合部位を評価するために有用なツールであることが証明された（図１２）。これらの抗体の作用効果に関する研究によって、ＩＬ−２２アンタゴニストの２つのタイプを特徴づけることが可能になる。最初のタイプは、Ａｂ−０４およびｈＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃによって例示され、ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間の初期相互作用をブロックする（図１０Ｂおよび１２）。インヒビターの第２のタイプは、Ａｂ−０２によって例示され、ＩＬ−１０Ｒ２ＥＣＤによるＩＬ−２２／ＩＬ−２２ＲＥＣＤの逐次認識を阻害する（図１０Ｃおよび１２）。これらの抗体はまた、ＩＬ−２２によるシグナル伝達もブロックする（図１０Ａ）。
【０２２９】
ＩＬ−２２抗体によって定義されるエピトープが受容体結合部位に重なるかどうか、あるいは抗体の結合部位が立体的にレセプター鎖でのサイトカイン認識に妨害するかどうかにかかわりなく、抗体のこれら３つのタイプは、ＩＬ−２２がＩＬ−２２とＩＬ−１０Ｒ２のために異なった受容体結合部位を持つことを確証する。ここに報告した抗体の特徴に焦点を当てると、Ａｂ−０４は、ＩＬ−２２ＲによってＩＬ−２２の認識を妨げるＩＬ−２２エピトープに結合し、このことはＡｂ−０２の場合には当てはならない。ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの結合は、Ａｂ−０２によってはブロックされない。実際、Ａｂ−０２は、固定化ＩＬ−２２Ｒに対するＩＬ−２２の結合を増大させる（図５Ｂ）。このことが、このサイトカインがＩＬ−２２ＲのＥＣＤと相互作用し、該相互作用によってＩＬ−２２に生じた立体配座的変化をＡｂ−０２が認識することによって生ずるものであると、信じられている。Ａｂ−０２はサイトカイン・アセンブリの最初のステップをブロックしない一方で、第２のステップをブロックすることが可能である（例えば、ＩＬ−１０Ｒ２のＥＣＤによるＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒの認識）。したがって、Ａｂ−０４およびＡｂ−０２が、ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２によるそれぞれ異なる結合部位の認識をブロックすると結論される。ＩＬ−２２、ＩＬ−２２ＢＰに対する天然のアンタゴニストおよび結合タンパク質は、Ａｂ−０４としての類似の特徴を持ち、ＩＬ−２２ＲによるＩＬ−２２の認識に妨害する（図１１Ａ）。固定化ＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃに対するＩＬ−２２の結合に強く妨害するＡｂ−０４の能力は、さらに、Ａｂ−０４とＩＬ−２２ＢＰがＡｂ−０４によって定義されたものとは異なるＩＬ−２２上の類似のエピトープを共有するという結論を支持する。
【０２３０】
まとめると、本明細書に示した結果は、ＩＬ−２２が一時的なメカニズムで、ＩＬ−２２がそのレセプター鎖と相互作用することを示唆している。最初に、ＩＬ−２２はＩＬ−２２ＲのＥＣＤと結合し、Ａｂ−０４およびＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃによって例示されるアンタゴニストがこの相互作用を妨げる。第２に、ＩＬ−１０Ｒ２のＥＣＤは、ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間の先の相互作用によって定まる異なる結合部位に、結合する（図１２）。この後者の相互作用は、Ａｂ−０２によって例示されるアンタゴニストによってブロックされる（図１２）。
【０２３１】
（実施例２０：ラット抗ヒトＩＬ−２２抗体を用いたｐＳＴＡＴルシフェラーゼ・アッセイでのＩＬ２２活性の阻害）
（実験プロトコル：）
ｐＳＴＡＴ−ＴＡ−ルシフェラーゼ・ベクターを以下のように構築した。ＳＴＡＴ応答成分の５つのコピー（ＲＮ  Ｐｅａｒｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）ＰＮＡＳ  ９０：４３１４−４３１８）を、商業的供給源（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｃａｔ．Ｎｏ．：ＰＴ３６０６−５）から得たｐＴＡ−Ｌｕｃベクターの中にクローニングした。
【０２３２】
ルシフェラーゼ活性は、以下のｐＳＴＡＴルシフェラーゼ・アッセイを用いて検出した。第１日目、ＨｅｐＧ２細胞を完全にトリプシン処理し、５ｘ１０６細胞／Ｐ１００の密度で、Ｐ１００ディッシュ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に分けた。２日目では、細胞に対して、Ｐ１００プレート１枚あたり以下の条件で、形質移入をおこなった。すなわち、溶液１：２０μｇＳＴＡＴ−ＴＡ−ＬｕｃＤＮＡ＋０．５ｍｌ無血清培地（ＧｉｂｃｏのＯｐｔｉ−ＭＥＭ）；および溶液２：６０μｌのＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎ２０００（Ｇｉｂｃｏ）＋０．５ｍｌ無血清培地（ＧｉｂｃｏのＯｐｔｉ−ＭＥＭ）。混合物を室温で２０分間静置させた。ＨｅｐＧ２細胞由来の培地を除去し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で１回洗った。９ｍｌ／ｐ１００の無血清培地（ＤＭＥ＋ＰＳＧ＋ＨＥＰＥＳ）をＰ１００に添加した。ＤＮＡ／Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎ２０００混合物（溶液１＋溶液２）を滴下して細胞に添加した。混合物をやさしく攪拌してインキュベータにもどした。３日目、細胞をトリプシン処理して９６穴細胞培養用平底プレート、１つの９６穴プレート／ｐ１００（１００μｌ／ウエル）に播種した。４日目、一連の希釈抗体を３０ｎｇ／ｍｌのｈｕＩＬ−２２を含むＤＭＥ＋ＰＳＧ＋１０％ＦＢＳで、３７℃、３０分間、プレインキュベートした。１００μｌの抗体：サイトカイン混合物を次に、培地を取り除いた後、細胞培養プレートに添加した。細胞を３７℃で６時間インキュベートした。培地を除去し、９６穴プレートに対して１×ＲＬＢ緩衝液（ＰｒｏｍｅｇａＥ３９７１）を５０μｌ／ウエル添加し、均一になるまで混合した。ルシフェラーゼ・アッセイのために、４０μｌのライセートを化学発光用９６穴アッセイ・プレート（ＰａｃｋａｒｄまたはＷａｌｌａｃの透明９６穴プレート）に移した。１００μｌのルシフェラーゼ・アッセイ試薬（ＰｒｏｍｅｇａＥ１４８３）を添加した。発光の定量をＬｕｍｉｎｏｍｅｔｅｒ（Ｗａｌｌａｘ  Ｍｉｃｒｏ  Ｂｅｔａ  ＴｒｉＬｕｘ  シンチレーション・カウンタ）によっておこなった。
【０２３３】
この実施例では、ラット抗ヒトＩＬ−２２抗体、Ａｂ−０２、およびＡｂ−０４を用いて、Ｆｃに融合したヒトＩＬ２２結合タンパク質の融合コンストラクト（ｈｕｌＬ２２ＢＰ−ｈｕＦｃ）と比較して、ｐＳＴＡＴルシフェラーゼ・アッセイでのＩＬ−２２活性の阻害を説明する。図１３は、ラット抗ヒトＩＬ−２２モノクローナル抗体、Ａｂ−０２およびＡｂ−０４を用いたＩＬ−２２活性の阻害を示すグラフである。培地中で一定濃度のＩＬ−２２を種々の濃度のＡｂ−２（黒丸）またはＡｂ−０４（黒三角）あるいは対照抗体（−）とプレインキュベートし、次にｐＳＴＡＴ−ＴＡ−Ｌｕｃベクターによって一時的に形質移入させたＨｅｐＧ２に添加した。６時間後、細胞を溶解し、同量の細胞溶解物を、ルシフェラーゼ基質を含む各サンプルに添加した。照度計を用いてシグナルを測定した。ＩＬ−２２とともにインキュベートした（破線）あるいはインキュベートしない（点線）細胞を正および負の対照として、それぞれインキュベートした。Ａｂ−０２に対するＥＤ５０は、約１０ｎＭであった。Ａｂ−０４に対するＥＤ５０は約０．３ｎＭであった。
【０２３４】
図１４は、ラット抗ヒトＩＬ−２２モノクローナル抗体、Ａｂ−０４またはＩＬ−２２ＢＰ−ＦｃによるＩＬ−２２活性の阻害を示すグラフである。一定濃度のＩＬ−２２を、細胞培地中で種々の濃度のＡｂ−０４（黒三角）またはＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃ（白四角）とプレインキュベートし、ｐＳＴＡＴ−ＴＡ−Ｌｕｃベクターによって一時的に形質移入したＨｅｐＧ２細胞に添加した。６時間後、細胞を溶解し、同量の細胞溶解物を、ルシフェラーゼ基質を含む各サンプルに添加した。照度計を用いてシグナルの検出をおこなった。ＩＬ−２２とともにインキュベートした（破線）あるいはインキュベートしない（点線）細胞を正および負の対照として、それぞれインキュベートした。ＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃに対するＥＤ５０は、約０．４ｎＭであった。
【０２３５】
（実施例２１：ラット抗ヒトＩＬ−２２抗体を用いたＢａＦ３増殖アッセイでのＩＬ−２２活性の阻害）
（実験的プロトコル：）
完全長ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２をコードするＤＮＡフラグメントをＧＦＰ−ＲＶ（緑色蛍光タンパク質リポーターを有するレトロウイルスベクター）およびＹＦＰ−ＲＶ（黄色蛍光タンパク質を有するレトロウイルスベクター）に、それぞれクローン化した。ＢａＦ３細胞を、ＩＬ−１０Ｒ２−ＹＦＰ−ＲＶによって形質導入し、ＦＡＣＳにより選別した。ＩＬ−１０Ｒ２陽性ＢａＦ３細胞を、ＩＬ−２２Ｒ−ＧＦＰ  ＲＶでさらに形質導入し、ＦＡＣＳによって選別した。ＩＬ−１０Ｒ２／ＩＬ−２２Ｒ二重陽性ＢａＦ３細胞を、以下に示すように、ＢａＦ３増殖アッセイで用いた。
【０２３６】
ＢＡＦ３細胞を洗浄した。１０５／ｍｌの細胞懸濁液を、細胞培養プレート中で、ＲＰＭＩ１６４０＋ＰＳＧ＋１０％ＦＢＳかつ５０μｌ／ウエルの等分割量となるように調製した（ＶＷＲ＃６２４０２−９２９）。段階希釈抗体を１．５ｎｇ／ｍｌヒトＩＬ−２２含有ＲＰＭ１６４０＋ＰＳＧ＋１０％ＦＢＳで３７℃、３０分間、プレインキュベートした。次に、混合物を５０μｌ／ウエルで細胞培養プレートに加えた。細胞を３７℃、５％ＣＯ２で、加湿恒温器（インキュベータ）中で４８〜７２時間、インキュベートした。増殖を評価するために、培養プレートをインキュベータから出して室温まで冷やした。約１００μｌ／ウエルの再構築Ｃｅｌｌ−ＴｉｒｅｒＧｌｏ試薬を添加した。プレートをオービタル・シェーカーで２分間、振とうさせることで、細胞の完全な溶解を確実にした。蛍光は、Ｔｒｉｌｕｘ（Ｗａｌｌａｘ  Ｍｉｃｒｏ  Ｂｅｔａ  ＴｒｉＬｕｘ  シンチレーション・カウンタ）を用いて１秒／ウエルで読み取った。
【０２３７】
この実施例は、ラット抗ヒトＩＬ−２２抗体、Ａｂ−０２およびＡｂ−０４を用いた、ＢａＦ３増殖でのＩＬ−２２活性の阻害を説明する（図１５）。培地中で一定濃度のＩＬ−２２を種々の濃度のＡｂ−２（黒丸）またはＡｂ−０４（黒三角）あるいは対照抗体（−）とプレインキュベートし、次にＩＬ−２２ＲおよびＩＬ１０Ｒ２レセプターを発現するＢａＦ３細胞に添加した。４８〜７２時間後、細胞増殖を、Ｃｅｌｌ−ＴｉｒｅｒＧｌｏ試薬で検出した。シグナルは照度器を用いて検出した。Ａｂ−０２およびＡｂ−０４に対するＥＤ５０は、それぞれ約４０ｎＭおよび０．２Ｍであった。
【０２３８】
（実施例２２：ＢＩＡコアによりＩＬ−２２に結合するラットＡｂ−０２、０４、ＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃ、ＩＬ−２２Ｒ、およびＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２の反応速度分析）
（実験的プロトコル）
バイオセンサー表面を調製するために、ヤギ抗ヒトＩｇＧ親和性精製（ＫＰＬ０１−１０−２０）；Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ａ（Ｐｉｅｒｃｅ２１１８４）、ヤギ抗ラットＩｇＧまたは直接、試験タンパク質を、研究グレードのカルボキシメチル・デキストラン・チップ（ＣＭ５）上に、アミン・カップリングを用いて、固定化した。表面をＥＤＣ／ＮＨＳで活性化させた。捕獲抗体を酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５）で５０μｇ／ｍｌの濃度で注射し、Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ａを酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．０）で５０μｇ／ｍｌの濃度で注射し、あるいは試験タンパク質を直接、酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）で０．０１〜１μｇ／ｍｌの濃度で注射した。固定化は、ウィザード・ツールを用いておこなった。この際、抗体ヒトまたは抗ラットＩｇＧに対しては１０，０００共鳴単位（ＲＵ）、Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ａに対しては３０００（ＲＵ）、さらに直接固定化試験タンパク質に対しては５０〜１００（ＲＵ）を目標値とした。残留活性化基を１．０Ｍエタノール（ｐＨ８．０）でブロックした。対照として、第１のフローセルを参照面として、バルク屈折率、マトリックス効果、および非特異的結合の修正に用い、第２，第３、および第４のフローセルを捕捉分子によって被覆した。
【０２３９】
反応速度分析のために、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃレセプター複合体、またはＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃタンパク質を抗ヒトＩｇＧ抗体またはＰｒｏｔｅｉｎ−Ａ表面に捕獲した。ラット抗体を、４００ｎｇ／ｍｌ溶液の６０μｌを注射することで、抗ラットＩｇＧ抗体表面上に捕獲した。基線とＦｃ融合タンパク質注射の完了後約９０秒の点との間で、正味の差を取り、結合したリガンドの量を提示した。３００、１５０、１００、７５、５０、２５、１２．５、６．５、および０ｎＭの濃度でＩＬ−２２の溶液を１分間あたり３０μｌの流量で、３分間にわたり注射を三重反復でおこない、時間の関数としての結合物質の量をセンサーグラムとして記録した。解離相をＨＢＳ／ＥＰ緩衝液で１０分間、同一流速でモニターし、続いて０．１％ＴＦＡを５μｌ注射し、グリシンｐＨ１．５を５μｌ注射することで、完全に活性化された捕獲面を再生した。反応速度実験全てをＨＢＳ／ＥＰ緩衝液中、２２．５℃でおこなった。ブランクおよび緩衝液効果を、二重に参照（ｄｏｕｂｌｅ  ｒｅｆｅｒｅｎｃｉｎｇ）を用いて各センサーグラムから差し引いた。
【０２４０】
反応速度・データの分析は、１：１モデルに適用したＢＩＡ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ３．０．２を用いておこなった。見かけの解離（Ｋｄ）および結合（Ｋａ）速度定数を大域解析を用いてセンサーグラムの適当な領域から計算した。レセプター、抗体、およびＩＬ−２２の間の適当な領域の親和定数を以下の式：ＫＤ＝Ｋｄ／Ｋａによって、カイネティク速度定数から計算した。
【０２４１】
ＩＬ−２２に結合するラット抗体の親和性を、ラット抗体の異なるプレゼンテーションを用いて、ＢＩＡｃｏｒｅで試験し、直接、ラット抗体をＢＩＡコア上に、あるいは抗ラットＩｇＧ抗体によってＢＩＡコア・チップ上にラット抗体を捕獲する。次に、異なる濃度のＩＬ−２２をチップに注射し、続いて緩衝液を注射した。相互作用の親和性定数は、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  を用いて分析した。異なる実験から類似のデータが得られた。
【０２４２】
ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ、ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃレセプター複合体とＩＬ−２２に結合したＩＬ−２２Ｂ−Ｆｃとを、上記レセプターＦｃ融合タンパク質を含む調整培地を用いてＢｉＡｃｏｒｅで試験した。レセプターＦｃ融合タンパク質を抗ヒトＩｇＧ抗体でＢＩＡｃｏｒｅのチップ上に捕獲した。次に、異なる濃度のＩＬ−２２をチップに注射し、続いて緩衝液を注射した。ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅを用いて、相互作用の親和性定数を分析した。類似のデータが異なる実験から得られた。
【０２４３】
【表４】
2007537132.tif 000047
（ハイブリドーマ細胞株の寄託）
Ａｂ−０２およびＡｂ−０４を産生するハイブリドーマ細胞株を、ブダペスト条約にもとづき、２００３年６月５日付で、原寄託としてＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ，Ｕ．Ｓ．Ａ．２０１１０−２２０９）に寄託し、それぞれＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５２５４およびＰＴＡ−５２５５が割り当てられた。寄託材料の公共での利用および入手に対する全ての制限は、３７  Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．８０８（ｂ）で規定された特定の要求を除いて、特許の付与によって最終的に取り除かれる。なお、寄託の期間については３７  Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．８０６に応ずる。
【０２４４】
（等価物）
当業者は、ほんの単調な実験しか使用しないこと、また本明細書中で記載される発明の特定の実施形態に対する多くの等価物があることを理解するか、もしくは確認することが可能である。そのような等価物は以下の特許請求の範囲に包含される。
【図面の簡単な説明】
【０２４５】
【図１】図１は、インビボマウス関節炎モデルに対するＩＬ−２２抗体の効果を分析するために用いられる実験的プロトコルを示す模式図である。
【図２】図２は、治療処置計画を用いて関節炎マウスをＩＬ−２２抗体または対照で処理した後の身体スコアを示すグラフである。
【図３】図３は、予防処置計画を用いて関節炎マウスをＩＬ−２２抗体または対照で処理した後の身体スコアを示すグラフである。
【図４】図４は、重症関節炎マウスをＩＬ−２２抗体または対照によって処置した後の身体スコアを示すグラフである。
【図５】図５は、ＩＬ−２２抗体または対照の後の、所定の組織化学的等級を示す前足の相対的割合を示すグラフである。
【図６】図６Ａおよび６Ｂは、ＩＬ−２２とＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２との間の相互作用を直線で表したグラフである。図６Ａは、固定化ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃに対してビオＩＬ−２２が結合するけれどもＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃに対する結合は検出可能ではないことを示す直線グラフである。逆結合実験の結果は、図６Ｂにグラフ表示してある。可溶性ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃは、固定化ビオＩＬ−２２に結合するけれども、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃは結合しない。これらの結果は、ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間に相対的に強い相互作用がある一方で、ＩＬ−１０Ｒ２−ＦｃはＩＬ−２２に対してわずかな結合活性があるにすぎないことを示す。
【図７】図７Ａおよび７Ｂは、ＣＨＯ調整培地でのレセプターＦｃ融合の特徴を示す。図７Ａは、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ、もしくは両方のレセプターＦｃのいずれかを発現するＣＨＯ細胞の調整培地が還元（＋βＭＥ）条件下および非還元（−βＭＥ）条件下の両方でＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で分離したことを示すウエスタンブロットのパネルである。ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを膜にブロッティングし、これを次にヒトＩｇＧＦｃ、ＩＬ−２２Ｒ、またはＩＬ−１０Ｒ２のいずれかに対するポリクローナル抗体でプロービングした。還元条件（＋βＭＥ、図７Ａ）では、ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ１０Ｒ２−ＦｃＣＨＯ系がヒトＦｃ融合タンパク質を分泌し、分子量〜６０ｋＤ種の場合はＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃであり、一方分子量〜８５ｋＤ種の場合はＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃであった。図７Ｂは、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ（黒四角）、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ（白丸）、または両方（黒三角）のいずれかを発現するＣＨＯ細胞の調整培地を用いてＥＬＩＳＡから得られた結果を示す直線グラフである。ＥＬＩＳＡプレートをウサギ抗ヒトＩＬ−２２Ｒ抗体で被覆した。２種類のホモ二量体の１：１混合物も対照（白三角）として加えた。結合レセプターの検出は、ビオチン化ヤギ抗ヒトＩＬ−１０Ｒ２抗体を用い、続いてストレプトアビジンＨＲＰによっておこなった。図７Ａおよび７Ｂに示された結果は、レセプターＦｃ融合がホモ二量体およびヘテロ二量体としてＣＨＯ細胞から分泌されることを示している。ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ共発現ＣＨＯ細胞は、多くの場合、ヘテロ二量体とＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃホモ二量体とを分泌する。
【図８】図８Ａおよび８Ｂは、Ｆｃ融合ヘテロ二量体として、またはランダム並列ホモ二量体として、ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２の両方とのＩＬ−２２の相互作用を直線で表したグラフである。図８Ａでは、ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ（黒四角）、ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ（白丸）、またはＩＬ−２２Ｒ−ＦｃおよびＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃの両方（黒三角）由来の全Ｆｃの５０ｎｇ／ｍｌを抗ヒトＩｇＧ被覆ウエル上に捕獲した。次に、このウエルに種々の濃度のビオＩＬ−２２を添加した。その後、ストレプトアビジン−ＨＲＰを用いて、結合ビオＩＬ−２２を検出した。図８Ｂでは、種々の濃度の以下の全Ｆｃを抗ヒトＩｇＧ被覆ウエル上に、ＩＬ−２２Ｒ−ＦｃＣＭと無関係なＦｃタンパク質との１：１混合物（黒四角）、ＩＬ−２２Ｒ−ＦｃＣＭとＩＬ−１０Ｒ２−ＦｃＣＭとの１：１混合物（白三角）、もしくは共発現細胞由来のＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ／ＩＬ−１０Ｒ２−ＦｃＣＭと対照Ｆｃタンパク質との１：１混合物（黒三角）から、捕獲した。次に、ビオＩＬ−２２（３０ｎｇ／ｍｌ）をウエルに添加した。その後、ストレプトアビジン−ＨＲＰを用いて、結合ビオＩＬ−２２を検出した。図８Ａおよび８Ｂに示す結果は、ＩＬ−２２結合でのＩＬ−１０Ｒ２の役割を検出するためにＩＬ−２２ＲのＥＣＤが必要であることを示している。両ＥＣＤが存在する場合にＩＬ−２２の結合増大が検出される。
【図９】図９Ａおよび９Ｂは、ＩＬ−１０Ｒ２とＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒとの間の相互作用を直線で表したグラフである。ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃホモ二量体添加の効果を、ビオＩＬ−２２の添加前または添加後のいずれかに評価した。図９Ａは、抗ヒトＩｇＧ被覆ウエル上に捕獲されたＣＭ由来のＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃを用いたＥＬＩＳＡから得た結果を示す直線グラフである。次に、またその後も、ストレプトアビジンＨＲＰ（破線）を用いてビオＩＬ−２２の検出をおこなった。種々の濃度のＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃおよびビオチン化ＩＬ−２２もまた一緒に添加し、結合ビオＩＬ−２２を検出した（黒ひし型）。ＣＭ由来の種々の濃度のＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃも最初に添加し、次にビオＩＬ−２２をウエルに添加して結合ビオＩＬ−２２を検出した（白ひし型）。図９Ｂでは、ＣＭ由来の５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃを抗ヒトＩｇＧ被覆ウエル上に捕獲した。次に、ビオＩＬ−２２をウエルに添加した。その後直ちに、ストレプトアビジンＨＲＰを用いて結合ビオＩＬ−２２を検出した（実線）。結合ビオＩＬ−２２の検出を、ＰＢＳ−１％ＢＳＡ（破線）または種々の濃度のＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃ（黒丸）のいずれかでさらに１時間インキュベートした後もおこなった。本明細書中に示す結果は、ＩＬ−１０Ｒ２に対する結合がそのＩＬ−２２結合増強での役割に先立ってＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間の相互作用を必要とすることを示している。
【図１０】図１０Ａ〜１０Ｃは、ラット・モノクローナル抗ヒトＩＬ−２２抗体（Ａｂ−０２もしくはＡｂ−０４）によるＩＬ−２２活性の阻害を示す。図１０Ａでは、段階希釈した抗体を細胞培地中で一定濃度のＩＬ−２２とともにプレインキュベートした。次に、この培地（抗体と複合体を形成したＩＬ−２２を含む）をＨＥＰＧ２細胞に適用した。続いて、細胞溶解物（ライセート）を調製し、タンパク質をゲル電気泳動で分離してブロッティングし、さらにＰ−ＳＴＡＴ３特異的抗体でプロービングした。ＩＬ−２２単独（＋）もしくはＩＬ−２２無し（−）でインキュベートした細胞を、それぞれ陽性および陰性対照として含んだ。これらの抗体の両方とも、細胞上でのＩＬ−２２の活性を阻害することができ、すなわち抗体の濃度が高くなると、Ｐ−ｓＴＡＴ２の検出が低下する。図１０Ｂでは、ＣＭ由来の５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃを抗ヒトＩｇＧ被覆ウエル上に捕獲した。次に、ビオチン化ＩＬ−２２（３０ｎｇ／ｍｌ）を単独（破線）で、または種々の濃度のＡｂ−０２（黒丸）、Ａｂ−０４（黒三角）、抗ＩＬ−１０Ｒ２（＋）、あるいは対照抗体（−）と３０分間にわたってプレインキュベートした後、固定化ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃを有するウエルに添加した。続いて、ストレプトアビジンＨＲＰを用いて、結合ビオチン化ＩＬ−２２を検出した。（Ｃ）ＩＬ−２２Ｒ−ＦｃおよびＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃの両方を発現するＣＨＯ細胞由来のＣＭでの全Ｆｃの５０ｎｇ／ｍｌを抗ヒトＩｇＧ被覆ウエルでインキュベートした。ビオチン化ＩＬ−２２（５ｎｇ／ｍｌ）を単独（破線）で、または種々の濃度のＡｂ−０２（黒丸）、Ａｂ−０４（黒三角）、抗ＩＬ−１０Ｒ２（＋）、あるいは対照抗体（−）と３０分間にわたってプレインキュベートした後、固定化ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃを有するウエルに添加した。続いて、ストレプトアビジンＨＲＰを用いて、結合ビオチン化ＩＬ−２２を検出した。これらの結果は、Ａｂ−０２およびＡｂ−０４の両方がＩＬ−２２活性を中和することを示している。Ａｂ−０４は、ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間の相互作用を阻害し、Ａｂ−０２はＩＬ−２２とＩＬ−１０Ｒ２との間の相互作用を阻害する。
【図１１】図１１Ａ〜１１Ｃは、ＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃを用いたＩＬ−２２活性の阻害を示す。図１１Ａでは、ＣＭ由来の５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃを抗ヒトＩｇＧ被覆ウエル上に捕獲した。次に、ビオチン化ＩＬ−２２（３０ｎｇ／ｍｌ）を単独（破線）で、または種々の濃度のＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃ（  ）と３０分間にわたってプレインキュベートした後、固定化ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃを有するウエルに添加した。続いて、ストレプトアビジンＨＲＰを用いて、結合ビオチン化ＩＬ−２２を検出した。バックグラウンドを点線で示す。図１１Ｂでは、ＩＬ−２２Ｒ−ＦｃおよびＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃの両方を発現するＣＨＯ細胞由来のＣＭでの全Ｆｃの５０ｎｇ／ｍｌを抗ヒトＩｇＧ被覆ウエルでインキュベートした。ビオチン化ＩＬ−２２（５ｎｇ／ｍｌ）を単独（破線）で、または種々の濃度のＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃ（  ）と３０分間にわたってプレインキュベートした後、固定化ＩＬ−２２Ｒ−Ｆｃ／ＩＬ−１０Ｒ２−Ｆｃを有するウエルに添加した。続いて、ストレプトアビジンＨＲＰを用いて、結合ビオチン化ＩＬ−２２を検出した。図１１Ｃは、ＣＭでのＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃの１５ｎｇ／ｍｌを抗ヒトＩｇＧ被覆ウエルでインキュベートしたものである。ビオチン化ＩＬ−２２（１ｎｇ／ｍｌ）を単独でプレインキュベート（波線）または種々の濃度のＡｂ−０２（黒丸）、またはＡｂ−０４（黒三角）、または対照ラット抗体（−）で３０分間、続いて固定化ＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃのウエルに添加した。ストレプトアビジンＨＲＰで、結合ビオチン化ＩＬ−２２を続いて検出した。図１１Ａおよび図１１Ｃは、ＩＬ−２２ＢＰがＡｂ−０４と類似した様式でＩＬ−２２活性を阻害すること、またＡｂ−０２が区別可能であることを示している。
【図１２】図１２は、ＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２レセプター複合体からなるアセンブリを示す模式図である。ＩＬ−２２のエピトープに結合するＡｂ−０４によって示される抗体では、その結合がＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間の相互作用の阻害をもたらす。Ａｂ−０４は、ＩＬ−２２結合タンパク質（ＩＬ−２２ＢＰ）と同様のレベルまでＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒとの間の相互作用をブロックすると考えられる。ＩＬ−２２のエピトープに結合するＡｂ−０２によって表される抗体では、その結合がＩＬ−２２とＩＬ−１０Ｒ２との間の相互作用の阻害をもたらす。Ａｂ−０２はＩＬ−２２／ＩＬ−２２ＲとＩＬ−１０Ｒ２との複合体の形成を軽減もしくは阻害すると考えられる。
【図１３】図１３は、ラット抗ヒトＩＬ−２２モノクローナル抗体によるＩＬ−２２活性の阻害を示すグラフである。一定濃度のＩＬ−２２を、細胞培地中で種々の濃度のＡｂ−０２（黒丸）もしくはＡｂ−０４（黒三角）または対照抗体（−）のいずれかとプレインキュベートした後、ｐＳＴＡＴ−ＴＡ−Ｌｕｃベクターを過渡的に形質移入したＨｅｐＧ２細胞に添加した。
【図１４】図１４は、ラット抗ヒトＩＬ−２２モノクローナル抗体とＩＬ−２２ＢＰ−ＦｃとによるＩＬ−２２活性の抑制を示すグラフである。一定濃度のＩＬ−２２を、細胞培地中で種々の濃度のＡｂ−０４（黒三角）またはＩＬ−２２ＢＰ−Ｆｃ（白四角）のいずれかとプレインキュベートした後、ｐＳＴＡＴ−ＴＡ−Ｌｕｃベクターを過渡的に形質移入したＨｅｐＧ２細胞に添加した。
【図１５】図１５は、ラット抗ヒトＩＬ−２２モノクローナル抗体によるＩＬ−２２活性の阻害を示すグラフである。一定濃度のＩＬ−２２を、細胞培地中で種々の濃度のＡｂ−０２（黒丸）もしくはＡｂ−０４（黒三角）または対照抗体（−）のいずれかとプレインキュベートした後、ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２レセプターの両方を発現するＢａＦ３細胞に添加した。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】全図
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１】
2007537132.tif 000048
【図２】
2007537132.tif 000049
【図３】
2007537132.tif 000050
【図４】
2007537132.tif 000051
【図５】
2007537132.tif 000052
【図６】
2007537132.tif 000053
【図７】
2007537132.tif 000054
【図８】
2007537132.tif 000055
【図９】
2007537132.tif 000056
【図１０】
2007537132.tif 000057
【図１１】
2007537132.tif 000058
【図１２】
2007537132.tif 000059
【図１３】
2007537132.tif 000060
【図１４】
2007537132.tif 000061
【図１５】
2007537132.tif 000062
【手続補正書】
【提出日】平成18年3月1日(2006.3.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2007537132000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成19年5月7日(2007.5.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって、該抗体またはそのフラグメントは、ＩＬ−２２レセプター（ＩＬ−２２Ｒ）とインターロイキン−１０レセプター２（ＩＬ−１０Ｒ２）とを含む複合体に対するＩＬ−２２の結合を軽減する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって、該抗体またはそのフラグメントは、ＩＬ−２２レセプター（ＩＬ−２２Ｒ）に対するＩＬ−２２の結合を軽減する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３】
インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって、該抗体またはそのフラグメントは、インターロイキン−１０レセプター２（ＩＬ−１０Ｒ２）に対するＩＬ−２２の結合を軽減する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４】
インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって、該抗体またはそのフラグメントは、インターロイキン−１０レセプター２（ＩＬ−１０Ｒ２）に対するＩＬ−２２とＩＬ−２２レセプター（ＩＬ−２２Ｒ）との複合体の結合を軽減する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５】
インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）に特異的に結合し、該ＩＬ−２２に対する二次抗体の結合を競合阻害する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって、該二次抗体は、ＰＴＡ−５２５４およびＰＴＡ−５２５５から選択されるハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体である、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６】
１０Ｅ−９またはそれより高い親和性の親和定数（Ｋｄ）を有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項７】
約５ｎＭ〜２００ｐＭまたはそれ以上の範囲内のＥＤ５０でＨＥＰＧ２でのＳＴＡＴリン酸化またはＢａＦ３細胞の増殖を中和する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項８】
約１０Ｅ４〜１０Ｅ６１／Ｍｓの範囲内の反応速度でＩＬ２２と結合し、約１０Ｅ−３〜１０−６Ｅ１／ｓの範囲の解離反応速度を有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
【請求項９】
前記ＩＬ−２２が、配列番号２のアミノ酸３４〜１７９に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有し、Ｓｔａｔ−３タンパク質のリン酸化を誘導することができる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
【請求項１０】
前記ＩＬ−２２が、配列番号２のアミノ酸３４〜１７９を有する、請求項６に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項１１】
前記ＩＬ−２２、ＩＬ−２２Ｒ、およびＩＬ−１０Ｒ２が、ヒト起源である、請求項１、３または４のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項１２】
前記ＩＬ−２２および前記ＩＬ−２２Ｒが、ヒト起源のものである、請求項２に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項１３】
ヒト化、ＣＤＲ移植またはヒト抗体である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
【請求項１４】
ＰＴＡ−５２５４およびＰＴＡ−５２５５から選択されるハイブリドーマによって産生される、モノクローナル抗体。
【請求項１５】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメントを含有する、薬学的組成物。
【請求項１６】
サイトカインインヒビター、成長因子インヒビター、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝インヒビター、酵素インヒビター、細胞毒性剤、および細胞増殖抑制剤からなる群から選択される、別の治療薬をさらに含有する、請求項１５に記載の薬学的組成物。
【請求項１７】
前記治療剤が、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ−１２アンタゴニスト、ＩＬ−１５アンタゴニスト、ＩＬ−１７アンタゴニスト、ＩＬ−１８アンタゴニスト、ＩＬ−２１Ｒアンタゴニスト、Ｔ細胞減少剤、Ｂ細胞減少剤、メトトレキサート、レフルノミド、シロリムス（ラパマイシン）、またはそのアナログ、Ｃｏｘ−２インヒビター、ｃＰＬＡ２インヒビター、ＮＳＡＩＤ、およびｐ３８インヒビターからなる群から選択される、請求項１６に記載の薬学的組成物。
【請求項１８】
ＩＬ−２２と、ＩＬ−２２レセプター複合体またはそのサブユニットとの間の相互作用を妨害する方法であって、該方法は、ＩＬ−２２と、ＩＬ−２２レセプター複合体またはそのサブユニットとの間の相互作用を生じさせる条件下でＩＬ−２２と、該ＩＬ−２２レセプター複合体またはそのサブユニットとを接触させて、それによりＩＬ−２２／ＩＬ−２２レセプター混合物を形成させる工程、ならびにＩＬ−２２／ＩＬ−２２レセプター混合物と、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメントとを接触させて、それによりＩＬ−２２と、ＩＬ−２２レセプター複合体またはそのサブユニットとの間の相互作用を妨害する工程、を包含する方法。
【請求項１９】
被検体においてＩＬ−２２関連障害を処置または予防するための組成物であって、該組成物は、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメントを、該ＩＬ−２２関連障害を処置または予防するのに十分な量で含有する、組成物。
【請求項２０】
前記ＩＬ−２２関連障害が、自己免疫障害、呼吸器障害、および炎症状態からなる群より選択される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記ＩＬ−２２関連障害が、関節リウマチ、変形性関節症、多発性硬化症、重症筋無力症、クローン病、炎症性腸疾患、ループス、糖尿病、乾癬、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、心血管炎症、膵炎、肝炎および腎炎からなる群より選択される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２２】
前記自己免疫障害が、関節リウマチである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２３】
前記被検体が、哺乳動物である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２４】
前記哺乳動物が、ヒトである、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
サイトカインインヒビター、成長因子インヒビター、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝インヒビター、酵素インヒビター、細胞毒性剤、および細胞増殖抑制剤からなる群より選択される治療剤をさらに含有する、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２６】
前記治療剤が、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ−１２アンタゴニスト、ＩＬ−１５アンタゴニスト、ＩＬ−１７アンタゴニスト、ＩＬ−１８アンタゴニスト、ＩＬ−２１Ｒアンタゴニスト、Ｔ細胞減少剤、Ｂ細胞減少剤、メトトレキサート、レフルノミド、シロリムス（ラパマイシン）またはそのアナログ、Ｃｏｘ−２インヒビター、ｃＰＬＡ２インヒビター、ＮＳＡＩＤ、およびｐ３８インヒビターからなる群より選択される、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
被検体での急性期応答を軽減するための組成物であって、該組成物は、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントを該被検体での急性期応答を軽減するのに十分な量で含有する、組成物。
【請求項２８】
前記被検体が、哺乳動物である、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
前記哺乳動物が、ヒトである、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
被検体でのＩＬ−２２関連障害を処置または予防するための医薬の製造における、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメントの使用。
【請求項３１】
被検体での急性期応答を処置または予防するための医薬の製造における、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメントの使用。
【国際調査報告】
2007537132.tif 000063
2007537132.tif 000064
2007537132.tif 000065
2007537132.tif 000066
2007537132.tif 000067
2007537132.tif 000068