【手続補正書】
【提出日】平成28年1月26日(2016.1.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次に示す、構造式（１）に表される２−ニトロイミダゾール誘導体の製造方法であって、一般式（２）に表される化合物に、無水酢酸を反応せしめ、一般式（３）に表される化合物となし、しかる後に、一般式（４）に表される化合物と反応せしめ、しかる後に脱保護することを特徴とする、製造方法。
【化１】
2014185135.tif 000001
構造式（１）
【化２】
2014185135.tif 000002
一般式（２）
（但し、式中Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４はそれぞれ独立にアシル基又は水素原子を表し、Ｒ３は水素原子又はアルキル基を表す。）
【化３】
2014185135.tif 000003
一般式（３）
（但し、式中Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４はそれぞれ独立に水素原子又はアシル基を表し、Ｒ５は水素原子又はアルキル基を表す。）
【化４】
2014185135.tif 000004
一般式（４）
（但し、式中Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８はそれぞれ独立にアルキル基を表す。）
【請求項２】
一般式（２）に表される化合物。
【化５】
2014185135.tif 000005
一般式（２）
（但し、式中Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４はそれぞれ独立にアシル基又は水素原子を表し、Ｒ３は水素原子又はアルキル基を表す。）
【請求項３】
一般式（３）に表される化合物。
【化６】
2014185135.tif 000006
一般式（３）
（但し、式中Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４はそれぞれ独立に水素原子又はアシル基を表し、Ｒ５は水素原子又はアルキル基を表す。）
【請求項４】
次に示す、構造式（５）に表される２−ニトロイミダゾール誘導体の製造方法であって、一般式（６）に表される化合物に、無水酢酸を反応せしめ、一般式（７）に表される化合物となし、しかる後に、前記一般式（４）に表される化合物と反応せしめ、しかる後に脱保護することを特徴とする、製造方法。
【化７】
2014185135.tif 000007
構造式（５）
【化８】
2014185135.tif 000008
一般式（６）
（但し、式中Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１２はそれぞれ独立にアシル基又は水素原子を表し、Ｒ１１は水素原子又はアルキル基を表す。）
【化９】
2014185135.tif 000009
一般式（７）
（但し、式中Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１２はそれぞれ独立に水素原子又はアシル基を表し、Ｒ１３は水素原子又はアルキル基を表す。）
【請求項５】
一般式（６）に表される化合物。
【化１０】
2014185135.tif 000010
一般式（６）
（但し、式中Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１２はそれぞれ独立にアシル基又は水素原子を表し、Ｒ１１は水素原子又はアルキル基を表す。）
【請求項６】
一般式（７）に表される化合物。
【化１１】
2014185135.tif 000011
一般式（７）
（但し、式中Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１２はそれぞれ独立に水素原子又はアシル基を表し、Ｒ１３は水素原子又はアルキル基を表す。）
【請求項７】
一般式（８）又は（９）に表される化合物。
【化１２】
2014185135.tif 000012
一般式（８）（但し、式中Ｒ１４はアルキルオキシカルボニル基、ヒドロキシアルキル基、アシルオキシアルキル基を表す。）
【化１３】
2014185135.tif 000013
一般式（９）（但し、式中Ｒ１４はアルキルオキシカルボニル基、ヒドロキシアルキル基、アシルオキシアルキル基を表す。）
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
＜２＞２Ｓ３Ｒ体の製造
２Ｓ３Ｒ体は、２Ｒ３Ｓ体の製造法における出発物質を、イソアスコルビン酸をアスコルビン酸に、アスコルビン酸をイソアスコルビン酸に変えて、前述の２Ｒ３Ｓ体と同様に処理することにより得ることが出来る。即ち、アスコルビン酸をイソプロピリデン等のケトニドで隣接する２つの水酸基を保護し、しかる後に開環してから水酸基の立体を反転させて得られる化合物（（２Ｓ３Ｓ）−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−２，３，４−トリヒドロキシブタン酸エチル）を出発物質とし、これをジメトキシメタンの様なジアルキルオキシメタン中で五酸化リンなどの酸で脱水縮合させ、しかる後に還元し、ジイソプロピリデンなどのケトニドを脱保護し、水酸基をベンゾイルクロライドなどのアシル化剤でアシル化して一般式（２）の化合物に変換したのち、無水酢酸を酸触媒存在下反応させ、一般式（３）の化合物に誘導し、トリメチルシリル−２−二トロイミダゾールのような一般式（４）の化合物と、塩化第二錫などのルイス酸を触媒として縮合し、しかる後にアシル基を脱保護することにより製造することが出来る。
これらの反応はいずれも常温乃至は１００℃の加熱条件下で行うことが出来、常温で行うことが副生成物の量が少ないので特に好ましい。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３３】
水素化リチウムアルミニウム１４．７３ｇにＴＨＦ２００ｍｌを加え、氷冷下撹拌した。化合物（（２Ｒ３Ｒ）−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−２，３，４−トリヒドロキシブタン酸エチル）４８．２７ｇをＴＨＦ１００ｍｌに溶かし、徐々に反応液中に滴下した。滴下には約３時間を要した。滴下後室温にて１時間撹拌し、更に１時間加熱還流した。放冷後、反応液の様子を見ながらＨ２Ｏ  ２５ｍｌを徐々に加えた。その後、ＮａＯＨ  ａｑ２５ｍｌ、Ｈ２Ｏ  ７０ｍｌを加えた。反応液を吸引濾過し、濾液を濃縮した。固体は熱エタノール（３００ｍｌ×５回）で抽出した。オイル状物質が得られた。
オイル状物質にピリジン３００ｍｌを加え溶解し、氷冷下撹拌した。その中に、塩化ベンゾイル１０６．５０ｇを徐々に滴下した。ＴＬＣ上原料がなくなったところでエタノール２００ｍｌを加え濃縮した。酢酸エチルーベンゼン（５：２）７００ｍｌを加え、Ｈ２Ｏ（２００ｍｌ×２回）、ｓａｔＮａＨＣＯ３  ａｑ（２００ｍｌ×１回）、Ｈ２Ｏ（２００ｍｌ×１回）、ｓａｔＮａＣｌａｑ（２００ｍｌ×１回）で洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４にて乾燥後、濾過、溶媒留去し、オイルを得た。しばらく放置したら、結晶化したのでこれを濾取した。濾液はシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎーヘキサンー酢酸エチル）にて精製した。濾取した物とあわせて、６３．０２ｇ（収率７２．０％）の白色結晶を得た。（（２Ｓ３Ｒ）−１，２−ジベンゾイル−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−１，２，３，４−テトラヒドロキシブタン）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）；δ１．３８（ｓ  ３Ｈ）δ１．４４（ｓ  ３Ｈ）δ４．０４（ｄｄ  １Ｈ）
δ４．１６（ｄｄ  １Ｈ）δ４．４６（ｑ  １Ｈ）δ４．５６（ｄｄ  １Ｈ）
δ４．７８（ｄｄ  １Ｈ）δ５．４７〜５．５３（ｍ  １Ｈ）
δ７．３８〜７．４６（ｍ  ４Ｈ）δ７．５１〜７．５９（ｍ  ２Ｈ）
δ７．９８〜８．０６（ｍ  ４Ｈ）
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３５】
得られた化合物（（２Ｓ３Ｒ）−１，２−ジベンゾイル−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−１，２，３，４−テトラヒドロキシブタン）６２．１５ｇにＴＨＦを加えて溶かし、そこへ８０％酢酸水溶液を加えた。ＴＬＣで反応の進行状態を見ながら、酢酸水溶液を追加した。このとき、反応を速く進行させるために６０℃位に加熱した。ＴＬＣ上原料がほとんど消失したところで反応溶液を濃縮し、酢酸エチルーベンゼン（５：２）７００ｍｌで希釈し、Ｈ２Ｏ（１００ｍｌ×１回）、ｓａｔＮａＨＣＯ３  ａｑ（１００ｍｌ×１回）、Ｈ２Ｏ（１００ｍｌ×１回）、ｓａｔＮａＣｌａｑ（１００ｍｌ×１回）で洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４にて乾燥後、濾過、溶媒留去し、オイルを６２．１８ｇ得た。得られたオイルをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎーヘキサンー酢酸エチル）にて精製し、微黄色オイル５３．３６ｇ（収率９６．３％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）；δ２．５３（ｄｄ  １Ｈ）δ３．１１（ｄ  １Ｈ）
δ３．６９（ｄｄｄ  １Ｈ）δ３．８０（ｄｄｄ  １Ｈ）
δ３．９１〜３．９９（ｍ  １Ｈ）δ４．７８（ｄｄ  １Ｈ）
δ４．８５（ｄｄ  １Ｈ）δ５．３４〜５．４０（ｍ  １Ｈ）
δ７．４０〜７．４８（ｍ  ４Ｈ）δ７．５３〜７．６３（ｍ  ２Ｈ）
δ８．０１〜８．０９（ｍ  ４Ｈ）
得られたジオール５．０７ｇにピリジン５０ｍｌを加えて溶かし、氷冷下撹拌した。塩化ベンゾイル２．３９ｇをジエチルエーテル５ｍｌに溶かしたものを反応容器中に徐々に滴下した。約３．５時間後、エタノール５ｍｌを加えて反応を終了させてから濃縮した。酢酸エチルーベンゼン（４：１）５００ｍｌで希釈し、Ｈ２Ｏ（１００ｍｌ×１回）、ｄ−ＨＣｌ（１００ｍｌ×１回）、ｓａｔＮａＨＣＯ３  ａｑ（１００ｍｌ×１回）、Ｈ２Ｏ（１００ｍｌ×１回）、ｓａｔＮａＣｌａｑ（１００ｍｌ×１回）で洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４にて乾燥後、濾過、溶媒留去し、白色固体を６．４９ｇ（収率９７．３％）得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）；δ３．１５（ｄ  １Ｈ）δ４．３２〜４．４２（ｍ  １Ｈ）
δ４．４８（ｄｄ  １Ｈ）δ４．６７（ｄｄ  １Ｈ）
δ４．７６〜４．８７（ｍ  ２Ｈ）δ５．５３〜５．５９（ｍ  １Ｈ）
δ７．４０〜７．４５（ｍ  ６Ｈ）δ７．５３〜７．５９（ｍ  ３Ｈ）
δ７．９９〜８．０５（ｍ  ６Ｈ）
上記で得られたベンゾエート６．４９ｇにベンゼン１０ｍｌを加えて溶かし、そこへジメトキシメタン３０ｍｌを加え、室温にて撹拌した。五酸化二リンを適当量加えた。ＴＬＣ上の原料が消失したところで撹拌を止め、酢酸エチルーベンゼン（４：１）５００ｍｌで希釈し、ｓａｔＮａＨＣＯ３  ａｑ（１００ｍｌ×１回）、Ｈ２Ｏ（１００ｍｌ×１回）、ｓａｔＮａＣｌａｑ（１００ｍｌ×１回）で洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４にて乾燥後、濾過、溶媒留去し、黄色オイルを得た。しばらく放置したら結晶化し、６．５３ｇの固体を得た。（収率９１．４％；（２Ｓ３Ｒ）−１，２，４−トリベンゾイルオキシ−３−メトキシメトキシブタン）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）；δ３．３９（ｓ  ３Ｈ）δ４．３７〜４．５１（ｍ  ２Ｈ）
δ４．６１〜４．８７（ｍ  ５Ｈ）δ５．７２〜５．７８（ｍ  １Ｈ）
δ７．３８〜７．４６（ｍ  ６Ｈ）δ７．５１〜７．５８（ｍ  ３Ｈ）
δ７．９９〜８．０７（ｍ  ６Ｈ）
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３７】
（２Ｓ３Ｒ）−１，２，４−トリベンゾイルオキシ−３−メトキシメトキシブタン６．５３ｇにベンゼン２０ｍｌを加えて溶かし、そこへ無水酢酸  １．５ｍｌを加えて氷冷下で撹拌した。三ふっ化ほう素ジエチルエーテル錯体１ｍｌを加えた。添加と同時に、（２Ｓ３Ｒ）−３−アセトキシメトキシ−１，２，４−ベンゾイルオキシブタンが生成し、反応液は黒色へと変化した。この（２Ｓ３Ｒ）−３−アセトキシメトキシ−１，２，４−ベンゾイルオキシブタンを取り出すことなく、６０分後、ｓａｔＮａＨＣＯ３  ａｑ１００ｍｌと氷を反応液へ加えた。酢酸エチルーベンゼン（４：１）５００ｍｌで抽出し、Ｈ２Ｏ（１００ｍｌ×１回）、ｓａｔＮａＣｌａｑ（１００ｍｌ×１回）で洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４にて乾燥後、濾過、溶媒留去し、茶色オイル７．４２ｇを得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）；δ１．９１（ｓ  ３Ｈ）δ４．４３〜４．５２（ｍ  ２Ｈ）
δ４．６６（ｄｄ  １Ｈ）δ４．７２〜５．２７（ｍ  ２Ｈ）
δ５．３９（ｄ  １Ｈ）δ５．４８（ｄ  １Ｈ）
δ５．６７〜５．７２（ｍ  １Ｈ）δ７．３７〜７．４６（ｍ  ６Ｈ）
δ７．５１〜７．６０（ｍ  ３Ｈ）δ７．９７〜８．０７（ｍ  ６Ｈ）
２ーニトロイミダゾール１．８６ｇにＮ，Ｏービス（トリメチルシリル）アセタミド７ｍｌを加え室温にて撹拌した。反応液が黄色澄明液になったのを確認してから濃縮した。
ベンゾエート７．４２ｇをベンゼン１０ｍｌで溶かして、２ーニトロイミダゾールに加えた。更に、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート１ｍｌを加え室温にて撹拌した。ＴＬＣ上原料の消失が認められたところで撹拌を止めた。酢酸エチルーベンゼン（４：１）５００ｍｌで希釈し、ｓａｔＮａＨＣＯ３  ａｑ（１００ｍｌ×１０回）で洗浄し、未反応の２ーニトロイミダゾールを除いた。更に、Ｈ２Ｏ（１００ｍｌ×１回）、ｓａｔＮａＣｌａｑ（１００ｍｌ×１回）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４にて乾燥後、濾過、溶媒留去し、茶色オイルを得た。少量のエタノールを加えて結晶化させ、５．０６ｇの白色結晶を得た。（収率６６．３％；（２Ｓ３Ｒ）−３−（２−ニトロイミダゾール−１−イルメトキシ）−１，２，４−トリベンゾイルオキシブタン）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）；δ４．４４〜４．５１（ｍ  ２Ｈ）δ４．６０（ｄｄ  １Ｈ）
δ４．７５（ｄｄ  １Ｈ）δ４．８１〜４．８５（ｍ  １Ｈ）
δ５．６９〜５．７２（ｍ  １Ｈ）δ５．９７（ｄ  １Ｈ）
δ６．０７（ｄ  １Ｈ）δ７．００（ｓ  １Ｈ）δ７．２８（ｓ  １Ｈ）
δ７．４０〜７．４９（ｍ  ６Ｈ）δ７．５４〜７．６３（ｍ  ３Ｈ）
δ７．９３〜８．０５（ｍ  ６Ｈ）
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４１】
（２Ｒ３Ｒ）−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−２，３，４−トリヒドロキシブタン酸エチル４．９７ｇを氷冷下撹拌した中に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１０ｍｌ、クロルメチルメチルエーテル７ｍｌを加えた。１時間氷冷下撹拌した後、室温で撹拌したが、溶液が固化してしまったので、塩化メチレン２０ｍｌを加えた。ＴＬＣ上の原料がほぼ消失したところで撹拌を止め、溶液を濃縮した。酢酸エチルーベンゼン（５：２）７００ｍｌで希釈し、Ｈ２Ｏ（１００ｍｌ×１回）、ｓａｔＮａＨＣＯ３  ａｑ（１００ｍｌ×１回）、Ｈ２Ｏ（１００ｍｌ×１回）、ｓａｔＮａＣｌａｑ（１００ｍｌ×１回）で洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４にて乾燥後、濾過、溶媒留去して、茶色オイル６．００ｇを得た。（収率９９．３％；（２Ｒ３Ｒ）−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−３，４−ジヒドロキシ−２−メトキシメトキシブタン酸エチル）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）；δ１．３６（ｓ  ３Ｈ）δ１．４１（ｓ  ３Ｈ）δ２．０９（ｓ  ３Ｈ）
δ３．３９（ｓ  ３Ｈ）δ３．７８〜３．８３（ｍ  １Ｈ）
δ３．９５（ｄｄ  １Ｈ）δ４．０６〜４．２０（ｍ  ３Ｈ）
δ４．４４（ｄｄ  １Ｈ）δ４．６８（ｄ  １Ｈ）δ４．７６（ｄ  １Ｈ）
水素化リチウムアルミニウム１．００ｇにＴＨＦ３０ｍｌを加え、氷冷下にて撹拌した。（２Ｒ３Ｒ）−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−３，４−ジヒドロキシ−２−メトキシメトキシブタン酸エチル６．００ｇをＴＨＦ１０ｍｌに溶かしそれを反応容器の中に徐々に滴下した。氷冷下にて１時間撹拌した後、加熱還流した。滴下終了から７時間後に加熱を止め、放冷してからＨ２Ｏ  ２ｍｌを加え、続いて５０％ＮａＯＨａｑ  ２ｍｌ、Ｈ２Ｏ  ５ｍｌを加えた。
酢酸エチルで抽出し、抽出液を合わせて濃縮した。微黄色オイル４．９９ｇを得た。（（２Ｓ３Ｒ）−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−１，３，４−トリヒドロキシ−２−メトキシメトキシブタン）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）；δ１．３５（ｓ  ３Ｈ）δ１．４２（ｓ  ３Ｈ）
δ２．７９（ｂｒ  ｓ  １Ｈ）δ３．４５（ｓ  ３Ｈ）
δ３．５５〜３．６１（ｍ  １Ｈ）δ３．６４〜３．６９（ｍ  １Ｈ）
δ３．８０〜３．８６（ｍ  １Ｈ）δ３．８６〜３．９５（ｍ  １Ｈ）
δ４．０６〜４．１４（ｍ  ２Ｈ）δ４．７１（ｄ  １Ｈ）
δ４．７６（ｄ  １Ｈ）
（２Ｓ３Ｒ）−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−１，３，４−トリヒドロキシ−２−メトキシメトキシブタン４．９９ｇにピリジン３０ｍｌを加えて溶かし、氷冷下撹拌した。そこへ塩化ベンゾイル５．２６ｇを徐々に滴下した。４時間後、エタノールを加え濃縮した。酢酸エチルーベンゼン（４：１）５００ｍｌにて希釈後、Ｈ２Ｏ（１００ｍｌ×１回）、ｓａｔＮａＨＣＯ３  ａｑ（１００ｍｌ×１回）、Ｈ２Ｏ（１００ｍｌ×１回）、ｓａｔＮａＣｌａｑ（１００ｍｌ×１回）で洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４にて乾燥後、濾過、溶媒留去して黄色オイルを得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチルーｎーヘキサン）で精製し、無色透明オイル５．２１ｇ（収率６９．５％；（２Ｓ３Ｒ）−１−ベンゾイルオキシ−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−３，４−ジヒドロキシ−２−メトキシメトキシブタン）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）；δ１．３７（ｓ  ３Ｈ）δ１．４４（ｓ  ３Ｈ）δ３．３８（ｓ  ３Ｈ）
δ３．９２〜３．９８（ｍ  １Ｈ）δ４．０１（ｄｄ  １Ｈ）
δ４．１３（ｄｄ  １Ｈ）δ４．２５（ｑ  １Ｈ）
δ４．３６（ｄｄ  １Ｈ）δ４．６７（ｄｄ  １Ｈ）
δ４．７２（ｄ  １Ｈ）δ４．８２（ｄ  １Ｈ）
δ７．４１〜７．４７（ｍ  ２Ｈ）δ７．５３〜７．５９（ｍ  １Ｈ）
δ８．０５（ｄ  ２Ｈ）
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４３】
（２Ｓ３Ｒ）−１−ベンゾイルオキシ−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−３，４−ジヒドロキシ−２−メトキシメトキシブタン５．２１ｇに８０％酢酸５０ｍｌを加え、約５０℃に加熱して撹拌した。３時間後撹拌を止め、酢酸エチルーベンゼン（４：１）５００ｍｌで希釈した。ｄ−ＮａＯＨａｑ（１００ｍｌ×３回）、ｓａｔＮａＨＣＯ３  ａｑ（１００ｍｌ×１回）、Ｈ２Ｏ（１００ｍｌ×１回）、ｓａｔＮａＣｌａｑ（１００ｍｌ×１回）で洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４にて乾燥後、濾過、溶媒留去して淡黄色オイル３．９６ｇ（収率８７．３％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）；δ２．３２（ｂｒ  ｓ  １Ｈ）δ３．０２（ｄ  １Ｈ）
δ３．４２（ｓ  ３Ｈ）δ３．８１（ｂｒ  ｓ  ３Ｈ）
δ３．９２〜３．９８（ｍ  １Ｈ）δ４．５８（ｄ  ２Ｈ）
δ４．７４（ｄ  １Ｈ）δ４．８０（ｄ  １Ｈ）δ７．４６（ｔ  ２Ｈ）
δ７．５４〜７．６１（ｍ  １Ｈ）δ８．０５（ｄ  ２Ｈ）
ベンゾエート３．９６ｇをピリジン５０ｍｌに溶かし、氷冷下で撹拌した。その中へ塩化ベンゾイル５．１３ｇを徐々に滴下した。途中室温撹拌に戻した。ＴＬＣ上の原料がほぼ消失したところでエタノールを加え溶媒を留去した。酢酸エチルーベンゼン（４：１）５００ｍｌで希釈した後、Ｈ２Ｏ（１００ｍｌ×１回）、ｓａｔＮａＨＣＯ３  ａｑ（１００ｍｌ×１回）、Ｈ２Ｏ（１００ｍｌ×１回）、ｓａｔＮａＣｌａｑ（１００ｍｌ×１回）で洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥後、濾過、溶媒留去した所、結晶が析出したのでこれを濾取した。白色結晶４．９８ｇ（収率７１．０％；（２Ｒ３Ｓ）−１，２，４−トリベンゾイルオキシ−３−メトキシメトキシブタン）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）；δ３．３９（ｓ  ３Ｈ）δ４．３７〜４．５１（ｍ  ２Ｈ）
δ４．６３〜４．８８（ｍ  ５Ｈ）δ５．７３〜５．７９（ｍ  １Ｈ）
δ７．３９〜７．４６（ｍ  ６Ｈ）δ７．５２〜７．５９（ｍ  ３Ｈ）
δ７．９９〜８．０７（ｍ  ６Ｈ）
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４５】
実施例１と同様に、２−ニトロイミダゾール１．８６ｇにＮ，Ｏービス（トリメチルシリル）アセタミド７ｍｌを加え室温にて撹拌した。反応液が黄色澄明液になったのを確認してから濃縮した。
（２Ｒ３Ｓ）−１，２，４−トリベンゾイルオキシ−３−メトキシメトキシブタン７．４２ｇをベンゼン１０ｍｌで溶かして、２ーニトロイミダゾールに加えた。更に、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート１ｍｌを加え室温にて撹拌した。ＴＬＣ上原料の消失が認められたところで撹拌を止めた。酢酸エチルーベンゼン（４：１）５００ｍｌで希釈し、ｓａｔＮａＨＣＯ３  ａｑ（１００ｍｌ×１０回）で洗浄し、未反応の２ーニトロイミダゾールを除いた。更に、Ｈ２Ｏ（１００ｍｌ×１回）、ｓａｔＮａＣｌａｑ（１００ｍｌ×１回）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４にて乾燥後、濾過、溶媒留去し、茶色オイルを得た。少量のエタノールを加えて結晶化させ、５．０６ｇの白色結晶を得た。（収率６６．３％；（２Ｒ３Ｓ）−３−（２−ニトロイミダゾール−１−イルメトキシ）−１，２，４−トリベンゾイルオキシブタン）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）；δ４．４３〜４．５２（ｍ  ２Ｈ）δ４．６０（ｄｄ  １Ｈ）
δ４．７５（ｄｄ  １Ｈ）δ４．７９〜４．８８（ｍ  １Ｈ）
δ５．６８〜５．７３（ｍ  １Ｈ）δ５．９７（ｄ  １Ｈ）
δ６．０６（ｄ  １Ｈ）δ７．００（ｓ  １Ｈ）δ７．２８（ｓ  １Ｈ）
δ７．４０〜７．４８（ｍ  ６Ｈ）δ７．５４〜７．６３（ｍ  ３Ｈ）
δ７．９３〜８．０７（ｍ  ６Ｈ）
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４９】
（２Ｒ３Ｓ）−１，２，４−トリベンゾイルオキシ−３−メトキシメトキシブタンについて、別法での製造を試みた。即ち、Ｌ−アスコルビン酸より誘導した、（２Ｒ３Ｓ）−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−２，３，４−トリヒドロキシブタン酸エチル６．８６ｇにトリフェニルホスフィン１７．７３ｇ、安息香酸８．３０ｇ、ＴＨＦ１００ｍｌを加え、室温で撹拌し溶解させた。ＴＨＦ２０ｍｌにジエチルアゾジカルボキシレート１２．６４ｇを溶かし、それを反応溶液の中に滴下した。若干発熱したが、そのまま撹拌した。７２時間後、溶液を濃縮し、酢酸エチルーベンゼン（５：２）７００ｍｌで希釈した。Ｈ２Ｏ（１００ｍｌ×１回）、ｓａｔＮａＨＣＯ３  ａｑ（１００ｍｌ×１回）、Ｈ２Ｏ（１００ｍｌ×１回）、ｓａｔＮａＣｌａｑ（１００ｍｌ×１回）で洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４にて乾燥後、濾過、溶媒留去し、赤茶色オイルを得た。得られたオイルをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル−ｎ−ヘキサン）で精製した。得られた分画には不純物として安息香酸の混入が認められたため、酢酸エチルーベンゼン（５：２）７００ｍｌで希釈した後、ｓａｔＮａＨＣＯ３  ａｑ（１００ｍｌ×３回）、Ｈ２Ｏ（１００ｍｌ×１回）、ｓａｔＮａＣｌａｑ（１００ｍｌ×１回）で洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４にて乾燥後、濾過、溶媒留去し、目的のベンゾエート５．４３ｇを微黄色オイルとして得た。（収率５２．４％；（２Ｓ３Ｓ）−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−２−ベンゾイルオキシ−３，４−ジヒドロキシブタン酸エチル）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）；δ１．２９（ｔ  ３Ｈ）δ１．３８（ｓ  ３Ｈ）δ１．４３（ｓ  ３Ｈ）
δ４．１１〜４．２１（ｍ  ２Ｈ）δ４．２６（ｑ  ２Ｈ）
δ４．５８〜４．６４（ｍ  １Ｈ）δ５．３５（ｄ  １Ｈ）
δ７．４３〜７．５１（ｍ  ２Ｈ）δ７．５６〜７．６５（ｍ  １Ｈ）
δ８．１０（ｄ  ２Ｈ）
水素化リチウムアルミニウム１．０１ｇにＴＨＦ１５ｍｌを加え、氷冷下撹拌した。ベンゾエート５．４３ｇをＴＨＦ１０ｍｌに溶かし、徐々に反応液中に滴下した。滴下終了後室温にて１時間撹拌し、更に加熱還流を４．５時間した。放冷後、反応液の様子を見ながらＨ２Ｏ  １ｍｌを加え、更に、５０％ＮａＯＨａｑ１ｍｌ、Ｈ２Ｏ  ５ｍｌを加えた。反応液を濃縮してから、酢酸エチル、メタノールで抽出し、無色透明オイル５．０７ｇを得た。
得られた無色透明オイルにピリジン５０ｍｌを加え溶解し、氷冷下撹拌した。その中に、塩化ベンゾイル１０ｍｌを徐々に滴下した。約１７時間後、エタノール１０ｍｌを加え濃縮した。酢酸エチルーベンゼン（５：２）７００ｍｌを加え、Ｈ２Ｏ（１００ｍｌ×１回）、ｓａｔＮａＨＣＯ３  ａｑ（１００ｍｌ×１回）、Ｈ２Ｏ（１００ｍｌ×１回）、ｓａｔＮａＣｌａｑ（１００ｍｌ×１回）で洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４にて乾燥後、濾過、溶媒留去し、茶色オイルを得た。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎーヘキサン：酢酸エチル＝９：１）にて精製し、白色結晶３．６０ｇを得た。（収率５５．２％，総収率２８．９％；（２Ｒ３Ｓ）−１，２−ジベンゾイルオキシ−３，４−イソプロピリデン−３，４−ジヒドロキシブタン）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）；δ１．３８（ｓ  ３Ｈ）δ１．４４（ｓ  ３Ｈ）
δ４．０６（ｄｄ  １Ｈ）δ４．１７（ｄｄ  １Ｈ）
δ４．４８（ｑ  １Ｈ）δ４．５６（ｄｄ  １Ｈ）
δ４．７９（ｄｄ  １Ｈ）δ５．４９〜５．５４（ｍ  １Ｈ）
δ７．３８〜７．４７（ｍ  ４Ｈ）δ７．５０〜７．６２（ｍ  ２Ｈ）
δ７．９９〜８．０７（ｍ  ４Ｈ）
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５１】
（２Ｒ３Ｓ）−１，２−ジベンゾイルオキシ−３，４−イソプロピリデン−３，４−ジヒドロキシブタン４．２２ｇにＴＨＦ５０ｍｌを加え溶解した。そこへ８０％酢酸５０ｍｌを加え、室温にて撹拌した。反応液中に結晶が析出していたのでＴＨＦ５０ｍｌを追加した。ＴＬＣで反応の進行状況を見て、ＴＬＣ上原料がほとんど消失した時点で撹拌を止めた。酢酸エチルーベンゼン（４：１）５００ｍｌで希釈し、Ｈ２Ｏ（１００ｍｌ×１回）、ｓａｔＮａＨＣＯ３  ａｑ（１００ｍｌ×５回）、Ｈ２Ｏ（１００ｍｌ×１回）、ｓａｔＮａＣｌａｑ（１００ｍｌ×１回）で洗浄した。尚、ｓａｔＮａＨＣＯ３  ａｑで洗浄した時には、水層がアルカリ性になったことを確認した。続いて、無水Ｎａ２ＳＯ４にて乾燥し、濾過、溶媒留去し、オレンジ色オイルを３．３０ｇ得た。（収率８７．７％）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）；δ２．５９（ｂｒ  ｓ  １Ｈ）δ３．１７（ｄ  １Ｈ）
δ３．６８〜３．７６（ｍ  ２Ｈ）δ３．９５（ｍ  １Ｈ）
δ４．７５〜４．８８（ｍ  ２Ｈ）δ５．３５〜５．４１（ｍ  １Ｈ）
δ７．４０〜７．４７（ｍ  ４Ｈ）δ７．５３〜７．６２（ｍ  ２Ｈ）
δ８．０１〜８．０５（ｍ  ４Ｈ）
ジオール３．３０ｇをピリジン５０ｍｌに溶かし、氷冷下撹拌した。塩化ベンゾイル２．９３ｇを反応容器中に徐々に滴下した。約２．５時間後、メタノール１０ｍｌを加えて反応を終了させてから濃縮した。酢酸エチルーベンゼン（４：１）５００ｍｌで希釈し、Ｈ２Ｏ（１００ｍｌ×１回）、ｓａｔＮａＨＣＯ３  ａｑ（１００ｍｌ×１回）、Ｈ２Ｏ（１００ｍｌ×１回）、ｓａｔＮａＣｌａｑ（１００ｍｌ×１回）で洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４にて乾燥後、濾過、溶媒留去した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチルーｎーヘキサン）にて精製し白色結晶３．８３ｇを得た。（収率８８．２％）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）；δ３．２１（ｂｒ  ｓ  １Ｈ）δ４．３６（ｂｒ  ｓ  １Ｈ）
δ４．４７（ｄｄ  １Ｈ）δ４．６７（ｄｄ  １Ｈ）
δ４．７５〜４．８８（ｍ  ２Ｈ）δ５．５３〜５．５９（ｍ  １Ｈ）
δ７．４１〜７．４６（ｍ  ６Ｈ）δ７．５４〜７．６０（ｍ  ３Ｈ）
δ８．０１〜８．０６（ｍ  ６Ｈ）
ベンゾエート１．８１ｇにジメトキシメタン３０ｍｌを加えて溶かし、室温にて撹拌した。そこへ五酸化二リンを適当量加えた。ＴＬＣ上の原料が消失したところで撹拌を止め、酢酸エチルーベンゼン（５：１）３００ｍｌで希釈し、Ｈ２Ｏ（５０ｍｌ×１回）、ｓａｔＮａＨＣＯ３  ａｑ（５０ｍｌ×１回）、Ｈ２Ｏ（５０ｍｌ×１回）、ｓａｔＮａＣｌａｑ（５０ｍｌ×１回）で洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４にて乾燥後、濾過、溶媒留去し、茶色オイルを得た。しばらく放置し結晶化させ、１．９３ｇの固体を得た。（収率９５．８％；（２Ｒ３Ｓ）−１，２，４−トリベンゾイルオキシ−３−メトキシメトキシブタン）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）；δ３．３９（ｓ  ３Ｈ）δ４．３７〜４．５１（ｍ  ２Ｈ）
δ４．６３〜４．８８（ｍ  ５Ｈ）δ５．７３〜５．７９（ｍ  １Ｈ）
δ７．３９〜７．４６（ｍ  ６Ｈ）δ７．５２〜７．５９（ｍ  ３Ｈ）
δ７．９９〜８．０７（ｍ  ６Ｈ）
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５３】
（２Ｓ３Ｒ）−３−（２−ニトロイミダゾール−１−イルメトキシ）ブタン−１，２，４−トリオール、（２Ｒ３Ｓ）−３−（２−ニトロイミダゾール−１−イルメトキシ）ブタン−１，２，４−トリオール）及びドラニダゾールについて、ＥＭＴ−６に対する低酸素性細胞放射線増感効果をイン・ビボ−イン・ビトロアッセイで比較した。即ち、特開平０３−２２３２５８号公報に記載の方法に従い、１０５個のＥＭＴ−６細胞をＢａｌｂ／ｃ雌性マウス（５週齢）の後ろ肢大腿部に移植し、１週間飼育し、固形腫瘍を形成させ、しかる後にγ線２０Ｇｙを照射し、腫瘍を取り出し、トリプシン処理して浮遊細胞となし、これを、５％ＦＢＳ加ＭＥＭ培地で培養し、コロニー形成法により、生存率を求め、これより増感係数を求めた。（増感剤を投与しない場合を１とし、どの程度増感したかをしめす指標）結果を表１に示す。この値は、特開平０３−２２３２５８号公報の結果と良く一致するものであることか判る。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５５】
細胞腫を、種々変えて、コロニー法（ｃｏｌｏｎｙ  ａｓｓａｙ）を用いて、低酸素性細胞放射線増感作用を調べた。即ち、細胞をトリプシン処理し、浮遊細胞とし、２０分間９５％Ｎ２＋５％ＣＯ２で通気し低酸素状態にした後、ＰＢＳ及び検体のＰＢＳ溶液の存在下で、Ｘ線（０、１、２、３Ｇｙ）を照射した。その後５％ＦＢＳ加ＭＥＭ培地で７２時間培養し、形成したコロニー数を計数し、線量・生存率曲線を引き、この線量−生存率曲線より被験化合物無添加時の低酸素性細胞の生存率を１％下げる放射線量を、被験化合物添加時の低酸素性細胞の生存率を１％下げさせる放射線量で除した値を求めて増感係数を求めた。ここで、ＳＣＣＶＩＩはＢａｌｂ／ｃに自然発生した扁平上皮癌から樹立された細胞であり、Ｖ７９はチャイニーズハムスターの肺由来のフィブロブラスト様細胞であり、Ｌ５１７８Ｙはリンパ種由来のガン細胞である。結果を表２に示す。これより、（２Ｒ３Ｓ）−２−（２−ニトロイミダゾール−１−イルメトキシ）−１，３，４−トリヒドロキシブタン）は特異的に、肺癌、リンパ腫に優れた増感効果を示すことが判る。