【誤訳訂正書】
【提出日】平成28年6月24日(2016.6.24)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２９を含むゲノムを含むトランスジェニックトウモロコシ植物。
【請求項２】
アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号ＰＴＡ−１０２４４の下で寄託された種子に存在するイベントＤＡＳ−４０２７８−９を含むゲノムを含むトウモロコシ種子。
【請求項３】
配列番号２９を含むゲノムを含むトウモロコシ種子。
【請求項４】
配列番号２９を含む、請求項２に記載の種子を成長させることにより作出されるトウモロコシ植物。
【請求項５】
イベントＤＡＳ−４０２７８−９を含む、請求項４に記載のトウモロコシ植物の子孫植物。
【請求項６】
配列番号２９を含む、請求項１に記載のトウモロコシ植物の除草剤耐性子孫植物。
【請求項７】
花粉、胚珠、花、苗条、根および葉からなる群から選択され、配列番号２９を含む、請求項４に記載の植物の一部分。
【請求項８】
トウモロコシ植物を育種する方法であって、配列番号２９を含む第１トウモロコシ植物を第２トウモロコシ植物と交雑させて、ゲノムを含む第３トウモロコシ植物を作出するステップと、前記第３トウモロコシ植物を前記ゲノムにおける配列番号２９の存在についてアッセイするステップとを含む方法。
【請求項９】
雑草を制御する方法であって、アリールオキシアルカノエート除草剤を野外に散布するステップを含み、前記野外が請求項１に記載の植物を含む、方法。
【請求項１０】
前記除草剤が、２，４−Ｄである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
第二の除草剤を前記野外に散布するステップを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記第二の除草剤が、グリホサートおよびジカンバからなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２４】
ＡＡＤ−１トウモロコシイベントＤＡＳ−４０２７８−９における挿入されたＤＮＡの分子特徴決定も、本明細書に記載される。イベントは、プラスミドｐＤＡＳ１７４０のＦｓｐＩ断片を用いるウィスカー形質転換により生成した。サザンブロット解析を用いて、挿入されたＤＮＡ断片の組み込みパターンを確立し、イベントＤＡＳ−４０２７８−９におけるａａｄ−１遺伝子の挿入断片／コピーの数を決定した。データを作製して、トウモロコシゲノムに挿入されたａａｄ−１導入遺伝子の組み込みおよび完全性を証明した。プロモーターおよびターミネーターのような非コード領域（コード領域を調節するように設計された）、マトリクス付着領域ＲＢ７  Ｍａｒ  ｖ３およびＲＢ７  Ｍａｒ  ｖ４の組み込みの特徴決定、ならびに世代にわたる導入遺伝子挿入断片の安定性を評価した。挿入されたＤＮＡの安定性は、植物の５つの異なる世代にわたって証明された。さらに、アンピシリン抵抗性遺伝子（Ａｐｒ）領域を含む形質転換プラスミド主鎖配列が存在しないことを、プラスミドｐＤＡＳ１７４０の制限部位（ＦｓｐＩ）に接する主鎖領域のほぼ全体をカバーするプローブにより証明した。挿入の詳細な物理的な地図は、イベントＤＡＳ−４０２７８−９のこれらのサザンブロット解析に基づいて描いた。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４３】
全ての主題の開示に鑑みて、主題の発明が、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１０２４４の下で利用可能な種子を含むことが明確である。主題の発明は、受託番号ＰＴＡ−１０２４４の下でＡＴＣＣに寄託された種子から成長した除草剤抵抗性トウモロコシ植物も含む。主題の発明は、葉のような上記の植物の一部分、組織試料、上記の植物により作出される種子、花粉などをさらに含む。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４４】
さらに、主題の発明は、寄託された種子から成長した植物の子孫（descendant）および／または子孫（progeny）植物、好ましくは除草剤抵抗性トウモロコシ植物であって、上記の植物が、本明細書に記載される検出可能な野生型ゲノムＤＮＡ／挿入断片ＤＮＡ接合部配列を含むゲノムを有する植物を含む。本明細書で用いる場合、用語「トウモロコシ」は、メイズ（ゼア・メイズ（Zea mays））を意味し、トウモロコシと育種できるその全ての品種を含む。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４６】
除草剤耐性トウモロコシ植物は、本明細書で言及する系統のいずれか１つの種子から成長したトウモロコシ植物からなる第１の親のトウモロコシ植物と、第２の親のトウモロコシ植物とをまず有性交雑させ、それにより複数の第１子孫植物を作出し、次いで、除草剤に抵抗性の第１子孫植物（または主題の発明のイベントの少なくとも１つを有するもの）を選択し、第１子孫植物を自家生殖し、それにより複数の第２子孫植物を作出し、次いで、第２子孫植物から、除草剤に抵抗性の植物（または主題の発明のイベントの少なくとも１つを有するもの）を選択することにより育種できる。これらのステップは、第１子孫植物または第２子孫植物を、第２の親のトウモロコシ植物または第３の親のトウモロコシ植物と戻し交雑することをさらに含み得る。主題の発明のトウモロコシ種子を含むトウモロコシ作物またはその子孫を、次いで、植えることができる。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４８】
本発明のＤＮＡ分子は、マーカー支援育種（ＭＡＢ）法において分子マーカーとして用いることができる。本発明のＤＮＡ分子は、当該技術において知られるように、遺伝子的に連結した農業経済学的に有用な形質を同定する方法において用いることができる（例えばＡＦＬＰマーカー、ＲＦＬＰマーカー、ＲＡＰＤマーカー、ＳＮＰおよびＳＳＲ）。除草剤抵抗性形質は、主題の発明のトウモロコシ植物との交雑の子孫（またはその子孫および任意のその他のトウモロコシ栽培変種または品種）において、ＭＡＢ法を用いて追跡できる。ＤＮＡ分子は、この形質についてのマーカーであり、当該技術において公知のＭＡＢ法を用いて、主題の発明の少なくとも１つのトウモロコシ系統またはその子孫は、親または祖先であったトウモロコシ植物における除草剤抵抗性形質（複数可）を追跡できる。本発明の方法を用いて、主題のイベントを有する任意のトウモロコシ品種を同定できる。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４９】
主題の発明の方法は、除草剤耐性トウモロコシ植物を作出する方法であって、主題の発明の植物を育種するステップを含む方法を含む。より具体的には、上記の方法は、主題の発明の２つの植物、または主題の発明の１つの植物と任意のその他の植物とを交雑するステップを含み得る。好ましい方法は、上記の交雑種の子孫を、主題の発明に従って検出可能なイベントについて上記の子孫を解析することにより選択するステップをさらに含む。例えば、主題の発明は、種々の実施例において本明細書で試験されるもののような農業経済学的形質のようなその他の所望の形質を含む植物との育種サイクル中に主題のイベントを追跡するために用いることができる。主題のイベントおよび所望の形質を含む植物は、例えば検出でき、同定でき、選択でき、さらなる回の育種において迅速に用いることができる。主題のイベント／形質は、昆虫抵抗性形質（複数可）および／またはさらなる除草剤耐性形質と育種により組み合わせ、主題の発明に従って追跡できる。後者のある好ましい実施形態は、除草剤ジカンバに対する抵抗性をコードする遺伝子と組み合わせた主題のイベントを含む植物である。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５０】
したがって、主題の発明は、例えば、グリホサート抵抗性（例えば抵抗性植物または細菌のＥＰＳＰＳ、ＧＯＸ、ＧＡＴ）、グルフォシネート抵抗性（例えばＰａｔ、ｂａｒ）、アセト乳酸合成酵素（ＡＬＳ）阻害除草剤抵抗性（例えばイミダゾリノン［例えばイマゼタピル］、スルホニル尿素、トリアゾロピリミジンスルホンアニリド、ピルミジニルチオベンゾエート（pyrmidinylthiobenzoates）およびその他の化学物質［Ｃｓｒ１、ＳｕｒＡら］）、ブロモキシニル抵抗性（例えばＢｘｎ）、ＨＰＰＤ（４−ヒドロキシフェニル−ピルベート−ジオキシゲナーゼ）酵素の阻害剤に対する抵抗性、フィトエン不飽和化酵素（ＰＤＳ）の阻害剤に対する抵抗性、光化学系ＩＩ阻害除草剤に対する抵抗性（例えばｐｓｂＡ）、光化学系Ｉ阻害除草剤に対する抵抗性、プロトポルフィリノゲン酸化酵素ＩＸ（ＰＰＯ）阻害除草剤に対する抵抗性（例えばＰＰＯ−１）、フェニル尿素除草剤に対する抵抗性（例えばＣＹＰ７６Ｂ１）、ジカンバ分解酵素（例えばＵＳ２００３０１３５８７９を参照されたい）をコードする形質と組み合わせることができ、その他のものを単独または複数の組み合わせで掛け合わせて、雑草のシフトおよび／もしくは上記のクラスの任意の除草剤に対する抵抗性を効果的に制御または妨げる能力を提供できる。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５２】
さらに、ＡＡＤ−１単独または１もしくは複数の追加のＨＴＣ形質を掛け合わせたものは、１または複数の追加の入力（例えば昆虫抵抗性、真菌抵抗性またはストレス耐性など）または出力（例えば収率の増加、油プロファイルの改善、繊維の質の改善など）形質と掛け合わせることができる。したがって、主題の発明を用いて、任意の数の農業経済学的害虫を柔軟にかつ経済的に効率よく制御する能力を有する、作物の質が改善された完全な農業経済学的パッケージを提供できる。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５８】
本明細書で用いる場合、遺伝子、イベントまたは形質を「掛け合わせる」ことは、所望の形質を１つのトランスジェニック系統に組み合わせることである。植物育種家は、トランスジェニック形質を、それぞれが所望の形質を有する親同士の交雑種を作製し、次いでこれらの所望の形質の両方を有する子を同定することにより掛け合わせる。遺伝子を掛け合わせる別の方法は、２以上の遺伝子を、植物の細胞核に、形質転換中に同時に伝達することによる。遺伝子を掛け合わせる別の方法は、トランスジェニック植物を、対象の別の遺伝子で再形質転換することによる。例えば、遺伝子掛け合わせは、例えば２以上の異なる昆虫形質、昆虫抵抗性形質（複数可）および疾患抵抗性形質（複数可）、２以上の除草抵抗性性形質、ならびに／または昆虫抵抗性形質（複数可）および除草剤抵抗性形質（複数可）を含む２以上の異なる形質を組み合わせるために用いることができる。対象の遺伝子に加えて選択マーカーを用いることは、遺伝子掛け合わせと考えることもできる。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６０】
主題のＡＡＤ−１酵素は、ほぼ全ての広葉雑草および禾本雑草（grass weeds）を制御する除草剤の組み合わせに対する耐性をもたらすトランスジェニック発現を可能にする。ＡＡＤ−１は、例えばその他の除草剤耐性作物（ＨＴＣ）形質（例えばグリホサート抵抗性、グルフォシネート抵抗性、イミダゾリノン抵抗性、ブロモキシニル抵抗性など）および昆虫抵抗性形質（Ｃｒｙ１Ｆ、Ｃｒｙ１Ａｂ、Ｃｒｙ３４／４５など）と掛け合わせるための優れたＨＴＣ形質として働くことができる。さらに、ＡＡＤ−１は、第２の遺伝子または遺伝子の群で遺伝子的に工学的に操作された植物の１次形質転換体の選択を助けるための選択マーカーとして働くことができる。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６１】
主題の発明のＨＴＣ形質は、その他のＨＴＣ形質（それに限定されないが、グリホサート耐性を含む）との新規な組み合わせにおいて用いることができる。形質のこれらの組み合わせにより、新しく獲得した抵抗性または除草剤（例えばグリホサート）に対する固有の耐性により、雑草（など）の種を制御する新規な方法が得られる。つまり、ＨＴＣ形質に加えて、除草剤を用いて雑草を制御するための新規な方法（除草剤耐性は、トランスジェニック作物における上記の酵素により確立された）は、本発明の範囲内である。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６２】
さらに、グリホサート耐性作物を世界的に成長させることが普及している。その他のグリホサート耐性作物との輪作が多数になると、グリホサート抵抗性の自生植物（volunteers）の制御は、輪作作物において困難になることがある。したがって、掛け合わされたかまたは作物に個別に形質転換された主題のトランスジェニック形質の使用は、その他のＨＴＣ自生作物の制御のためのツールを提供する。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７１】
「農業経済学的にエリート」は、系統が、収率、成熟度、疾患抵抗性などのような所望の農業経済学的特徴を、主題のイベント（複数可）による昆虫抵抗性に加えて有することを意味する。以下の実施例に示すように、主題の発明のイベントを含む植物において個別または任意の組み合わせで考慮される農業経済学的形質は、主題の発明の範囲内である。これらの農業経済学的特徴およびデータ点のいずれかおよび全てを用いて、このような植物を規定するために用いる特徴の範囲における点として、または一端もしくは両端のいずれかとしてこのような植物を同定できる。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８５】
さらなる実施形態において、主題の発明は、主題の発明のａａｄ−１イベントを含むトウモロコシ植物を作出する方法であって、（ａ）第１の親のトウモロコシ系統（上記の系統の植物に上記の除草剤抵抗性を与える、本発明の発現カセットを含む）と、第２の親のトウモロコシ系統（この除草剤耐性形質を欠く）とを有性交雑させ、それにより複数の子孫植物を作出するステップと、（ｂ）分子マーカーを用いて子孫植物を選択するステップとを含む方法を含む。このような方法は、子孫植物を第２の親のトウモロコシ系統と戻し交雑して、上記の昆虫耐性形質を含む優良種（true-breeding）トウモロコシ植物を作出するさらなるステップを所望により含み得る。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１２】
多数のイベントを生成した。生存し、健常で、ハロキシホップ抵抗性カルス組織を生成したイベントに、推定上の形質転換イベントを表すユニーク識別コードを割り当て、新鮮な選択培地に継続して移した。植物は、各ユニークイベントに由来する組織から再生し、温室に移した。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１５】
サザンブロットデータは、トウモロコシイベントＤＡＳ−４０２７８−９におけるｐＤＡＳ１７４０／ＦｓｐＩ断片挿入が、プラスミドｐＤＡＳ１７４０からのａａｄ−１  ＰＴＵの単一のインタクトなコピーの単純な組み込みとして生じたことを示唆した。詳細なサザンブロット解析を、プラスミド領域に含有される遺伝子、プロモーター、ターミネーターおよびその他の調節要素に特異的なプローブと、プラスミド内にある切断部位を有し、プラスミドの内部のハイブリダイズする断片またはトウモロコシゲノムＤＮＡとのプラスミドの接合部に及ぶ断片（境界断片）を生成する説明的な制限酵素とを用いて行った。制限酵素とプローブとの組み合わせについてサザンハイブリダイゼーションから示された分子量は、イベントについてユニークであり、その同定パターンを確立した。これらの解析は、プラスミド断片が、ａａｄ−１  ＰＴＵの再構成なしにトウモロコシゲノムＤＮＡに挿入されたことも示した。同一のハイブリダイゼーション断片が、トランスジェニックトウモロコシイベントＤＡＳ−４０２７８−９の異なる５つの世代において観察され、このことは、世代にわたるａａｄ−１  ＰＴＵ挿入の遺伝形質の安定性を示す。プラスミドｐＤＡＳ１７４０上のＦｓｐＩの制限部位の外側に位置する３つの主鎖プローブの混合物とのハイブリダイゼーションは、いずれの特定のＤＮＡ／遺伝子断片も検出せず、このことは、トランスジェニックトウモロコシイベントＤＡＳ−４０２７８−９におけるアンピシリン抵抗性遺伝子の不在と、プラスミドｐＤＡＳ１７４０のＦｓｐＩ制限部位に直接隣接するその他のベクター主鎖領域の不在とを示した。ａａｄ−１トウモロコシイベントＤＡＳ−４０２７８−９における挿入断片の説明のための地図を、図２〜３に示す。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１９９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１９９】
【表１３】
2016136941.tif 000001
2016136941.tif 000002
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３５】
簡単に述べると、遺伝子発現カセットの側面に位置する特定のＤＮＡ配列を認識し、結合して切断するジンクフィンガーヌクレアーゼのような配列特異的エンドヌクレアーゼを設計する。ジンクフィンガーヌクレアーゼは、トランスジェニックジンクフィンガーヌクレアーゼ発現カセットを含有する親の植物を、トウモロコシイベントＤＡＳ−４０２７８−９を含有する第２の親の植物と交雑させることにより植物細胞に送達される。得られる子孫を成熟まで成長させ、ｐａｔ発現カセットの喪失を、グルフォシネートを含有する除草剤を用いる葉の塗装により解析する。除草剤に抵抗性でない子孫植物を、分子的に確認し、自家繁殖に進む。ｐａｔ発現カセットの切り出しおよび除去は、自家繁殖から得られる子孫において分子的に確認される。本明細書で提供される教示を用いて、任意の異種核酸を、トウモロコシの第２染色体から、実施例４で論じた５’分子マーカーと３’分子マーカーとの間にある標的部位、好ましくは配列番号２９内にあるもの、またはその示された領域にて切り出すことができる。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３６】
ブリトルスナップ（brittlesnap）への抵抗性
ブリトルスナップとは、通常、迅速成長期中の成長調節除草剤の散布後に強風によりトウモロコシの茎がくずれることをいう。強風による被害をシミュレートするためにトウモロコシを物理的に押す棒を用いる機械的「プッシュ」試験を、イベントＤＡＳ−４０２７８−９を含有するハイブリッドトウモロコシおよびイベントＤＡＳ−４０２７８−９を含有しない対照植物について行った。処理は、４つの地理的に異なる場所で完了し、４回反復した（例外として３回だけ反復した１つの試行があった）。プロットは、８列からなった：２列はイベントＤＡＳ−４０２７８−９を含有し、２列はイベントを含有しない、２つのハイブリッドのそれぞれの４列。各列は２０フィートの長さであった。トウモロコシ植物は、Ｖ４発達段階まで成長させ、２，４−Ｄを含有する市販の除草剤（Ｗｅｅｄａｒ  ６４、Ｎｕｆａｒｍ  Ｉｎｃ．、Ｂｕｒｒ  Ｒｉｄｇｅ、ＩＬ）を、１１２０ｇ  ａｅ／ｈａ、２２４０ｇ  ａｅ／ｈａおよび４４８０ｇ  ａｅ／ｈａの割合で用いた。除草剤を用いた７日後に、機械的プッシュ試験を行った。ブリトルスナップについての機械的プッシュ試験は、風被害をシミュレートするために、４フィートの棒で２列のトウモロコシを引き倒すことからなった。棒の高さおよび移動の速さは、未処理の植物を用いて低レベルの茎の破壊（１０％以下）をもたらすように設定して、処理間で相違が証明されるのに十分に試験が厳しいことを確実にした。ブリトルスナップ処理の指向性は、もたれかかったトウモロコシに対して用いた。