(57)【要約】  本発明は、哺乳類の被検対象由来の試料における感染性プリオンタンパク質を検出するためのアッセイ方法を提供する。前記方法は、前記被検対象からプリオンタンパク質含有試料を得ること、非感染性プリオンタンパク質を消化し、かつ、感染したプリオンタンパク質を部分的に消化する働きをする物質と前記試料を接触させてプリオンタンパク質のポリペプチド残基を得ること、アミノ酸配列Ｖｃ（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｒ1−Ｒ2−Ｈｉｓ−Ｒ3−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｒ4−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｒ5−Ｒ6−Ｌｙｓ（−Ｈｉｓ−Ｒ7−Ａｌａ−Ｇｌｙ）（Ｖｃ；配列番号１）を有するポリペプチドと結合可能な抗体と前記消化された試料を接触させること、及び、前記抗体と前記プリオンタンパク質ポリペプチド残基の複合体を検出することを含み、前記複合体の検出において、検出可能な種の化学的増幅、生物学的増幅又は生化学的増幅、及び前記増幅された種の検出を含むことを特徴とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類の被検対象由来の試料における感染性プリオンタンパク質を検出するためのアッセイ方法であって、前記被検対象からプリオンタンパク質含有試料を得ること、非感染性プリオンタンパク質を消化し、かつ、感染したプリオンタンパク質を部分的に消化する働きをする物質（ａｇｅｎｔ）と前記試料を接触させてプリオンタンパク質のポリペプチド残基を得ること、アミノ酸配列Ｖｃ
（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｒ1−Ｒ2−Ｈｉｓ−Ｒ3−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｒ4−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｒ5−Ｒ6−Ｌｙｓ（−Ｈｉｓ−Ｒ7−Ａｌａ−Ｇｌｙ）（Ｖｃ；配列番号１）
［ここで、Ｒ1は、Ｇｌｙ又はアミノ酸残基が存在していないのいずれかであり；
Ｒ2は、Ｔｈｒ又はＳｅｒのいずれかであり；
Ｒ3は、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ及びＡｓｎから選択されるアミノ酸残基であり；
Ｒ4及びＲ5は、それぞれ独立してＡｓｎ又はＳｅｒのいずれかであり；
Ｒ6は、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ及びＰｈｅから選択されるアミノ酸残基であり；
Ｒ7は、Ｖａｌ又はＭｅｔのいずれかであり；
ここで、括弧内の１以上の残基は、存在していてもよいし、存在していなくてもよい（但し、これらが存在している場合、これらが配列における残りのペプチドに結合（ａｔｔａｃｈ）している）。］
を有するポリペプチドと結合可能な抗体と前記消化された試料を接触させること、及び、前記抗体と前記プリオンタンパク質ポリペプチド残基の複合体（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）を検出することを含み、前記複合体の検出において、検出可能な種の化学的増幅、生物学的増幅又は生化学的増幅、及び前記増幅された種の検出を含むことを特徴とする方法。
【請求項２】
前記被検対象が人間であり、好ましくは生物（ａｎｉｍａｔｅ）である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＣＪＤ、ｎｖＣＪＤ又はクールー（ｋｕｒｕ）に関連する感染性プリオンタンパク質を検出するための請求項１又は２のいずれかに記載の方法。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載のアッセイ方法に使用するためのキットであって、
（ｉ）Ｖｃ−結合抗体；
（ｉｉ）必要に応じて、Ｖａ−結合抗体；
（ｉｉｉ）必要に応じて、プロテイナーゼＫ；
（ｉｖ）化学的増幅、生物学的増幅若しくは生化学的増幅及び検出、又は、検出可能な種の化学的増幅、生物学的増幅若しくは生化学的増幅を生じさせる物質であって、必要に応じて、抗体（ｉ）と複合体を形成する物質；及び
（ｖ）必要に応じて、前記アッセイ方法の実行のための取扱説明書を含むキット。
【請求項５】
ヒトＴＳＥの治療において使用するための薬剤の製造におけるｉＰｒＰ結合抗体の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、哺乳類の被検対象における伝染性海綿状脳症（ＴＳＥ）を検査するためのアッセイ方法の改良及びその方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
海綿状脳症は、変性神経性疾患のグループである。その例は、羊（スクレイピーとして知られている）、牛（ＢＳＥ）及び人間（クロイツフェルトヤコブ病（ＣＪＤ）、新たな変異型ＣＪＤ（ｎｖＣＪＤ）及びクールー（ｋｕｒｕ））を含む多数の哺乳類の種で見出されている。ある種由来のＴＳＥは、研究室の条件下で、その他の種の哺乳動物に感染しうることが報告されている。この感染性病原体（ａｇｅｎｔ）により種の壁を超えること（ｃｒｏｓｓｉｎｇ）は、感染した食用動物由来の物質、特に、ウシ由来の物質の摂取の結果としてヒトへの伝達を起こしうるとして広く懸念されている。
【０００３】
ＴＳＥは、攻撃性及び協調性の欠如を含む精神状態の進行性退化の臨床症状があらわれた後、潜伏期間が短いことを特徴とする。検死は、神経細胞の破壊及び異常なタンパク質繊維の沈着に起因する脳組織の空胞化という特徴的なパターンを示す。
【０００４】
羊において見出された前記疾患の型は長年知られていたとはいえ、海綿状脳症は、ウシにおけるＢＳＥ及びヒトにおけるｎｖＣＪＤの出現の後に一層有名になっている。
【０００５】
ＴＳＥの原因病原体は、いわゆる“プリオン”であり、タンパク質のみを含み核酸を含まない感染性病原体であると考えられている。ＴＳＥにおいて、あるタンパク質（プリオンタンパク質を、「ＰｒＰ」という）は、感染性病原体として同定されている。ＰｒＰは、自然に分泌される細胞性タンパク質であって、３次構造が相違する２つのアイソフォームで存在し、結果として、例えば、プロテイナーゼＫによる酵素分解に対する反応によって区別される。すなわち、非感染性アイソフォームｎｉＰｒＰは、プロテイナーゼＫにより完全に消化されるが、感染性アイソフォームｉＰｒＰは、検出可能なポリペプチド残基ＰｒＰ２７−３０を残して分解される（ｄｅｇｒａｄｅ）。
【０００６】
多くの哺乳類のＰｒＰのアミノ酸配列は知られており、例えば、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔにおいて入手可能である。前記残基ＰｒＰ２７−３０のアミノ酸配列も同様に知られている。異なる哺乳動物のＰｒＰ配列間で高い割合で相同性を有している。
【０００７】
様々な会社が、ＴＳＥのための死後診断検査を開発している。これらは、通常、脳組織試料をタンパク質分解消化処理して得られるＰｒＰ２７−３０に結合する抗体の使用に基づくものである。
【０００８】
Ｅｎｆｅｒ（ダブリン、アイルランド）から利用できる１つのアッセイは、欧州特許第６１６６１３号明細書に記載されている技術を使用する（特許文献１）。より具体的には、前記Ｅｎｆｅｒのアッセイは、（ｉ）ＰｒＰ２７−３０のセクションに対応するポリペプチド配列の免疫原性複合体に対して産生されるポリクローナルと、（ｉｉ）ＰｒＰ２７−３０以外のＰｒＰのセクションに対応するポリペプチド配列の免疫原性複合体に対して産生されるポリクローナル抗体との２つのポリクローナル抗体を使用する。これらのセクションは、それぞれＶｃ及びＶａとして欧州特許第６１６６１３号明細書に言及されている。
【特許文献１】欧州特許第６１６６１３号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
市販のアッセイは多少成功しているが、継続してＴＳＥアッセイを改良する必要性があり、特に、生前に行うことができるか、又は、脳組織試料を必要としないアッセイが必要とされている。
【００１０】
本発明は、まさにこのような改良したアッセイを提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
すなわち、一面から見ると、本発明は哺乳類の被検対象由来の試料における感染性プリオンタンパク質を検出するためのアッセイ方法を提供する。前記方法は、前記被検対象からプリオンタンパク質含有試料を得ること、非感染性プリオンタンパク質を消化し、かつ、感染したプリオンタンパク質を部分的に消化する働きをする物質（ａｇｅｎｔ）と前記試料を接触させてプリオンタンパク質のポリペプチド残基を得ること、アミノ酸配列Ｖｃ
（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｒ1−Ｒ2−Ｈｉｓ−Ｒ3−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｒ4−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｒ5−Ｒ6−Ｌｙｓ（−Ｈｉｓ−Ｒ7−Ａｌａ−Ｇｌｙ）（Ｖｃ；配列番号１）
［ここで、Ｒ1は、Ｇｌｙ又はアミノ酸残基が存在していないのいずれかであり；
Ｒ2は、Ｔｈｒ又はＳｅｒのいずれかであり；
Ｒ3は、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ及びＡｓｎから選択されるアミノ酸残基であり；
Ｒ4及びＲ5は、それぞれ独立してＡｓｎ又はＳｅｒのいずれかであり；
Ｒ6は、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ及びＰｈｅから選択されるアミノ酸残基であり；
Ｒ7は、Ｖａｌ又はＭｅｔのいずれかであり；
ここで、括弧内の１以上の残基は、存在していてもよいし、存在していなくてもよい（但し、これらが存在している場合、これらが配列における残りのペプチドに結合（ａｔｔａｃｈ）している）。］
を有するポリペプチドと結合可能な抗体と前記消化された試料を接触させること、及び、前記抗体と前記プリオンタンパク質ポリペプチド残基の複合体を検出することを含み、前記複合体の検出において、検出可能な種の化学的増幅、生物学的増幅又は生化学的増幅、及び前記増幅された種の検出を含むことを特徴とする。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
Ｖｃと結合可能な前記抗体は、アミノ酸配列Ｖｃ（又は、より好ましくは後述するＶｃ’）の合成ポリペプチドの免疫原性複合体に対して産生される抗体が好ましく、例えば、哺乳動物のワクチン接種及び血清又はＶｃ結合ＩｇＧの採取により産生される抗体が好ましい。
【００１３】
本発明の方法に使用する前記プリオンタンパク質含有試料は、あらゆる体組織、体液又はプリオンタンパク質を含む物質の試料であってもよく、例えば、筋肉、扁桃腺、脳、血液、尿、大便等であってもよい。また、前記試料は、血液、血液バンク由来の血清又は血漿、血液製剤（例えば、凝固因子）、組織産物、哺乳類産物（例えば、ＢＳＡ）を含む培養液、哺乳類由来の医薬品（例えば、ヘパリン）等であってもよい。死後の検査のためには、その高いプリオン含有量のため、脳組織を使用することが望ましい。生前の検査のためには、生検組織試料、血液、尿又は大便が好ましい。前記試料中のいかなる細胞を溶解するために、例えば、均質化又はその他の細胞破壊方法によって前記試料を前処理することが好ましい。
【００１４】
ついで、非感染性プリオンタンパク質の消化するための条件下、十分な期間、プリオンタンパク質を消化する物質、例えば、プロテイナーゼＫと前記試料を接触させる。この処理、処理条件及び処理の期間は、当業者によく知られている。
【００１５】
必要に応じて、消化前及び／又は消化後に、例えば、遠心、クロマトグラフィー等により前記試料を処理し、未消化プリオンタンパク質又は部分的に消化されたプリオンタンパク質以外の試料成分及び／又は消化産物を分離してもよい。
【００１６】
消化後、前記試料をＶｃ結合抗体と接触させる。これは、欧州特許第６１６６１３号明細書に記載されているように調製できる。前記抗体は、配列
ＧＱＧＧＳＨＳＱＷＮＫＰＳＫＰＫＴＮＭＫＨＶＧＣ（Ｖｃ’；配列番号２）
のポリペプチドの複合体であって、免疫原性キャリア、例えば、破傷風トキサイド、オボアルブミン等との複合体を用いて調製することが特に好ましい。複合体は、標準の架橋剤、例えば、ｍ−マレイミドーベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシニミドエステル（ＳＭＢＳ）等を使用して行ってもよい。前記抗体は、ポリクローナルが好ましい。標準的な抗体産生技術を使用してもよい。
【００１７】
前記Ｖｃ結合抗体は、基材（例えば、平面、必要に応じて超常磁性ビーズ、ロッド、メッシュ、チューブ等）上に、従来のタンパク質固定化技術を使用して固定してもよい。あるいは、固定していないＶｃ結合抗体を使用してもよい。
【００１８】
前記アッセイ方法の検出段階における正確な（ｐｒｅｃｉｓｅ）一連の工程は、固定されたＶｃ結合抗体を使用するか又は固定されていないＶｃ結合抗体を使用するかどうか、化学的増幅、生物学的増幅又は生化学的増幅から選択される技術に依存する。
【００１９】
化学的増幅については、生化学的ではない化学反応（例えば、生物学的環境において通常見出されない化学物質により触媒される反応）を使用して検出できる種を産生し、それらの有無が、抗体：プリオンタンパク質ポリペプチド残基複合体の存在を表す。
【００２０】
生物学的増幅については、微生物を使用して検出できる種（例えば、化学物質、微生物等）を産生し、それらの有無が、抗体：プリオンタンパク質ポリペプチド残基複合体の存在を表す。
【００２１】
生化学的増幅については、生化学反応（例えば、酵素反応又はＰＣＲ等の核酸増幅）を使用して検出可能な種（例えば、化学物質）を産生し、それらの有無が、抗体：プリオンタンパク質ポリペプチド残基複合体の存在を表す。
【００２２】
増幅される物質又は増幅を生じさせる物質は、前記Ｖｃ結合抗体又は抗体：残基複合体と結合可能なその他の物質、例えば、第２の抗体と複合体を形成してもよい。前記Ｖｃ結合抗体と複合体を形成する場合、機能する能力は、前記ＰｒＰ２７−３０との複合体形成によって影響されなくてもよいし、この複合体形成によって活性化されても不活化されてもよい。この結果、不活化された抗体が、抗体：残基複合体から分離されなければならないかもしれないし、分離されなければならなくてもよいかもしれない。これは、免疫測定法の手法としてありふれており、当業者は、とるべき手順を容易に理解できる。増幅される物質又は増幅を生じさせる物質がＶｃ結合抗体から分離している場合、通常、複合体を形成していない抗体を抗体：残基複合体から分離する必要がある。これも同様に、免疫測定法の手法としてありふれており、当業者は、とるべき手順を容易に理解できる。
【００２３】
増幅される物質又は増幅を生じさせる物質は、成分を１を超えて含んでもよい。この場合、前記成分の１つは、前記Ｖｃ結合抗体と複合体を形成していてもよいし、その他の成分は、前記抗体：残基に結合可能な分離した物質と複合体を形成していてもよい。前記した通り、抗体：残基複合体から複合体を形成していないＶｃ結合抗体の分離が必要か否かは、当業者にとって明らかである。この２以上の成分系を使用する場合、異なる成分が一緒になってそれ自身が単一成分で達成可能な効果から異なる増幅効果を生み出すことが好ましい。例えば、それらが、多段階の反応の異なる段階を触媒する触媒（例えば、酵素）であってもよいし、それらが、同一又は異なる目的微生物に異なる効果を有するウイルス性の物質であってもよい。
【００２４】
本発明のアッセイ方法において第２の結合物質を使用する場合、前記第２の結合物質も抗体であることが好ましい。しかしながら、必要に応じてその他の結合物質を使用してもよい。
【００２５】
本願明細書で使用する「抗体」という用語は、その内容を別に示さない限り、抗体そのもの又はその機能性フラグメント（例えば、Ｆａｂフラグメント）、単一鎖抗体又はオリゴマーの抗体構築物であってもよい。これらの物質は、ありふれた方法で産生できる。
【００２６】
不要な偽陰性を避けるために、本発明のアッセイ方法は、ＰｒＰ含有原試料の一部を検査することを含むことが好ましい。これは従来法で行うことができ、例えば、市販のＢＳＥ試験においてＰｒＰ結合抗体を用いて行うことができる。この場合、前記ＰｒＰ結合抗体は、ｉＰｒＰ及び／又はＰｒＰ又は変性若しくは部分的な消化により露出したそのフラグメントと結合可能であるべきである。この抗体は、前記文献に記載されている。
【００２７】
また一方、好ましい形態において、Ｖａ結合抗体は非ＰＫ消化試料に使用される。すなわち、Ｖａ結合抗体は、前記ｎｉＰｒＰ消化段階を省略したＶｃ結合抗体と類似する。前記使用する抗体は、後述するＶａ結合抗体であることが特に好ましい。このような抗体が、アミノ酸配列Ｖａ（又はより好ましくは後述するＶａ’）の合成ポリペプチドの免疫原性複合体に対して産生される１つであることが極めて好ましく、例えば、哺乳類のワクチン接種及び血清又はＶａ結合ＩｇＧの採取により産生された抗体が好ましい。
【００２８】
Ｖａ結合抗体は、配列
（Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｒ8）−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−（Ｇｌｙ−Ｒ9−Ｒ10−Ｔｒｐ）（Ｖａ；配列番号３）
のポリペプチドと結合可能な１つを意味する。
ここで、Ｒ8及びＲ9は、それぞれ独立して、Ｇｌｙ又はアミノ酸残基が存在していないのいずれかであり；
Ｒ10は、Ｇｌｙ又はＴｈｒのいずれかであり；
ここで、括弧内の１以上の残基は、存在していてもよいし、存在していなくてもよい（但し、これらが存在している場合、これらが配列における残りのペプチドに結合している）。
【００２９】
これは、欧州特許６１６６１３号明細書に記載されているように調製できる。前記抗体は、配列のペプチドの複合体を使用して調製されることが特に好ましい。これは欧州特許第６１６６１３号明細書に記載されているとおりに調製できる。前記抗体は、配列
ＧＧＷＮＴＧＧＳＲＹＰＧＱＧＳＰＧＧＮＲＹＰＰＱＧＧＧＣ（Ｖａ’；配列番号４）
のポリペプチドの複合体であって、免疫原性キャリア、例えば、破傷風トキサイド、オボアルブミン等との複合体を用いて調製することが特に好ましい。複合体は、標準の架橋剤、例えば、ＳＭＢＳ等を使用して行ってもよい。前記抗体は、ポリクローナルが好ましい。標準的な抗体産生技術を使用してもよい。
【００３０】
生前のＴＳＥアッセイの結果が陽性であれば、前記被検対象をＶｃ結合抗体を含む治療薬で治療することが好ましい。これは、前記抗体単独であってもよいし、ｎｉＰｒＰがｉＰｒＰへ形質転換を阻害する役割を果たす物質又はｉＰｒＰを分解する物質と前記抗体との複合体であってもよい。ヒトＴＳＥの場合において、前記治療抗体は、選択された抗体（すなわち、前記した抗Ｖｃ抗体又は抗Ｖａ抗体）が好ましい。投与は、注射又は点滴により、例えば、前記ＣＳＦへ行うことが好ましい。投与量は、ＴＳＥ感染した動物モデルを使用した従来法により決定できる。このような治療的使用は、本発明のさらなる形態を形成する。
【００３１】
さらなる面からみると、本発明は、前記本発明のアッセイ方法に使用するためのキットを提供する。前記キットは、
（ｉ）Ｖｃ−結合抗体；
（ｉｉ）必要に応じて、好ましくは、Ｖａ−結合抗体；
（ｉｉｉ）必要に応じて、好ましくは、プロテイナーゼＫ；
（ｉｖ）化学的増幅、生物学的増幅若しくは生化学的増幅、好ましくは生物学的増幅若しくは生化学的増幅、及び検出、又は、検出可能な種の化学的増幅、生物学的増幅若しくは生化学的増幅、好ましくは生物学的増幅若しくは生化学的増幅を生じさせる物質であって、必要に応じて抗体（ｉ）と複合体を形成する物質；及び
（ｖ）必要に応じて、好ましくは、前記アッセイ方法を実行するための取扱説明書を含む。
【００３２】
前記物質（ｉｖ）は、抗体又はその他の触媒であってもよいが、増幅操作においてそれ自身を複製する物質が好ましい。
【００３３】
以下の結合されない実施例を参照してさらに本発明を説明する。
【実施例１】
【００３４】
試料調製
初期組織の破壊は、乳棒及び遠心チューブを用いた界面活性剤を含む緩衝液中での均質化といった適当な方法を使用し、粗均質化物（ホモジネート）を調製する。前記粗均質化物は、遠心により清澄されていてもよい。前記均質化組織試料を適当な緩衝液にて実用的な濃度に希釈し、プロテイナーゼＫ消化の準備を整える。
【実施例２】
【００３５】
プリオンタンパク質の消化
ｉＰｒＰをｎｉＰｒＰと区別するための検出システムは、酵素プロテイナーゼＫ（ＰＫ）による消化に対するｉＰｒＰの相対耐性に基づく（Ｋｒｅｔｚｓｃｈｍａｒ、Ｃｌｉｎ  Ｌａｂ  Ｍｅｄ．Ｐ１０９−１２８（２００３）参照）。ＰＫ処理の一般的な条件は、希釈均質化試料を同量となるように二つに分け、一方にＰＫを加え、適宜培養する（例えば、３７℃で３０分間）。
【実施例３】
【００３６】
Ｖｃ結合抗体の添加
Ｖｃペプチド複合体ワクチンで免疫化した動物の血液から血清又は精製ＩｇＧを調製する。ついで、これらの血清を実用的な濃度に希釈し、前記ＰＫで消化された均質化試料と接触させ、適宜培養する（例えば、２０〜２５℃で１時間）。
【実施例４】
【００３７】
シグナルの増幅及び検出
シグナルの増幅は、一般的に、生化学的技術、分子的又は複合化第２の抗体技術の適用が必要とされる。１つの例は、ホースラディッシュペルオキシダーゼと複合体を形成したアビジン（ビオチン結合剤）（例えば、２０〜２５℃で１時間）の添加により増幅されたビオチン分子と複合体を形成した抗体の培養（例えば、２０〜２５℃で１時間）、及び、分光光度計での特異的な吸収で読み取る色素生産性基質を使用した検出である。
【実施例５】
【００３８】
抗体の有効性
Ｖｃ’及びＶａ’のそれぞれの抗原性複合体での動物免疫化によって調製されたＶｃ結合ポリクローナル抗体及びＶａ結合ポリクローナル抗体を、ＣＪＤ感染したヒト脳及びＣＪＤに感染していないヒト脳から前述のようにして調製された脳均質化物であってプロテイナーゼＫ消化を行った脳均質化物及びプロテイナーゼＫ消化を行っていない脳均質化物と接触させた。ついで、前記試料を用いてウエスタンブロット分析を行い、その結果を図１及び図２に示す。図１及び２は、それぞれ、Ｖａ結合抗体の結果及びＶｃ結合抗体の結果である。各図において、レーン１は、感染していない均質化物であり、レーン２は、ＰＫ処理された感染していない均質化物であり、レーン３は、感染した均質化物であり、レーン４は、ＰＫ処理された感染した均質化物である。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】図１は、実施例におけるウエスタンブロットの結果（Ｖａ結合抗体）である。
【図２】図２は、実施例におけるウエスタンブロットの結果（Ｖｃ結合抗体）である。
【配列表フリーテキスト】
【００４０】
配列番号１：Ｖｃ
配列番号２：Ｖｃ’
配列番号３：Ｖａ
配列番号４：Ｖａ’
【図１】
2007519918.tif 000002
【図２】
2007519918.tif 000003
【配列表】
2007519918000001.app
【国際調査報告】
2007519918.tif 000004
2007519918.tif 000005
2007519918.tif 000006
2007519918.tif 000007