(57)【要約】本発明は、白血球の表面上の補体経路の成分のレベルを決定することによって、炎症性疾患または炎症性状態を診断するための方法に関する。この方法は、（ａ）個体に由来する白血球を含む血液サンプルにおいて、そのサンプル中の白血球の表面上での補体経路の成分のレベルを決定する工程；および（ｂ）その決定を、それぞれ、コントロール白血球の表面上での補体経路の成分のレベルと比較する工程であって、異なる補体成分レベルは、その個体がその炎症疾患または炎症性状態を有することを示す、工程；を包含する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体における炎症性疾患または炎症性状態を診断またはモニターするための方法であって、該方法は、
（ａ）該個体に由来する白血球を含む血液サンプルにおいて、該サンプル中の白血球の表面上での補体経路の成分のレベルを決定する工程；および
（ｂ）該決定を、それぞれ、コントロール白血球の表面上での補体経路の成分のレベルと比較する工程であって、異なる補体成分レベルは、該個体が該炎症疾患または炎症性状態を有することを示す、工程；
を包含する、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、前記白血球は、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、および単球からなる群より選択される、方法。
【請求項３】
請求項２に記載の方法であって、前記白血球は、抗ＣＤ３抗体を使用して単離される、方法。
【請求項４】
請求項１に記載の方法であって、前記補体経路の成分は、Ｃ４ｄである、方法。
【請求項５】
請求項１に記載の方法であって、前記補体経路の成分は、Ｃ３ｄである、方法。
【請求項６】
請求項１に記載の方法であって、前記炎症性疾患または炎症性状態は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、強皮症、慢性関節リウマチ、脈管炎、筋炎、多発性硬化症、通風、子癇前症、血清病、移植拒絶、心血管疾患、およびＣ型肝炎ウイルス感染からなる群より選択される、方法。
【請求項７】
請求項６に記載の方法であって、前記炎症性疾患または炎症性状態は、ＳＬＥである、方法。
【請求項８】
請求項７に記載の方法であって、補体成分Ｃ４ｄのレベルが決定される、方法。
【請求項９】
請求項８に記載の方法であって、前記白血球および前記コントロール白血球は、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、および単球からなる群より選択される、方法。
【請求項１０】
請求項８に記載の方法であって、補体成分Ｃ４ｄのレベルが、補体成分Ｃ４ｄに対して特異的な抗体を使用して決定される、方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法であって、前記Ｃ４ｄ抗体は、標識されている、方法。
【請求項１２】
請求項１０に記載の方法であって、前記Ｃ４ｄ抗体は、モノクローナル抗体である、方法。
【請求項１３】
請求項８に記載の方法であって、少なくとも１つの他の補体成分のレベルが、決定される、方法。
【請求項１４】
請求項１３に記載の方法であって、補体成分Ｃ３ｄのレベルが決定される、方法。
【請求項１５】
請求項１４に記載の方法であって、補体成分Ｃ３ｄのレベルが、補体成分Ｃ３ｄに対して特異的な抗体を使用して決定される、方法。
【請求項１６】
請求項１５に記載の方法であって、前記Ｃ３ｄ抗体は、標識されている、方法。
【請求項１７】
請求項１５に記載の方法であって、前記Ｃ３ｄ抗体は、モノクローナル抗体である、方法。
【請求項１８】
個体における炎症性疾患または炎症性状態を診断またはモニターするためのキットであって、該キットは、
補体成分に対して特異的な抗体；および
白血球を単離するための手段；
を備える、キット。
【請求項１９】
請求項１８に記載のキットであって、前記抗体は、補体成分Ｃ４ｄに対して特異的である、キット。
【請求項２０】
請求項１９に記載のキットであって、
補体成分Ｃ３ｄに対して特異的な抗体
をさらに備える、キット。
【請求項２１】
請求項１８に記載のキットであって、前記白血球は、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、および単球からなる群より選択され、該白血球は、該白血球に対して特異的な抗体を使用して単離される、キット。
【請求項２２】
請求項１８に記載のキットであって、前記白血球は、リンパ球であり、該リンパ球は、該リンパ球に対して特異的な抗体を使用して単離される、キット。
【請求項２３】
コンピューター読み取り可能な媒体であって、
（ａ）白血球の表面上に沈着された補体成分の決定に対応するデータを受容するためのコード；
（ｂ）個体の白血球の表面上に沈着された該補体成分についての基準値を検索するためのコード；
（ｃ）（ａ）におけるデータを（ｂ）における参照値と比較するためのコード；
を含む、コンピューター読み取り可能な媒体。
【請求項２４】
請求項２３に記載のコンピューター読み取り可能な媒体であって、前記補体成分は、Ｃ４ｄである、コンピューター読み取り可能な媒体。
【請求項２５】
請求項２３に記載のコンピューター読み取り可能な媒体であって、前記補体成分は、Ｃ３ｄである、コンピューター読み取り可能な媒体。
【請求項２６】
請求項２３に記載のコンピューター読み取り可能な媒体であって、前記白血球は、リンパ球である、コンピューター読み取り可能な媒体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の援用）
本願は、２００４年５月１１日に出願された米国仮特許出願第６０／５７０，４０６号の恩恵を主張する。この米国仮特許出願は、すべての目的のために本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
（米国連邦政府によって支援された研究または開発に関する陳述）
本発明は、米国国立衛生研究所によって授与された助成金番号１  ＲＯ１  ＨＬ０７４３３５および１  Ｐ３０  ＡＲ４７３７２の下で政府の支援を受けてなされた。米国政府は、本発明におてい特定の権利を有し得る。
【０００３】
（発明の分野）
本発明は、白血球の表面上の補体経路の成分のレベルを決定することによって、炎症性疾患または炎症性状態を診断するための方法に関する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
（発明の背景）
本発明は、免疫学的炎症性状態および免疫学的炎症性疾患（例えば、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ））を有する患者の診断および／またはモニタリングに関する。炎症は、事実上あらゆる免疫系疾患または事実上あらゆる免疫系状態、およびあらゆる感染性疾患またはあらゆる感染性状態に特有である。多くの慢性炎症性状態および慢性炎症性疾患（すなわち、免疫系疾患または免疫系状態、および感染性疾患または感染性状態）は、複数の器官系に対する損傷を引き起こす。これらは、診断するのが困難である。多くの免疫学的炎症性状態および免疫学的炎症性疾患の症状は、重複するので、特定の免疫系疾患および免疫系状態を迅速かつ確実に診断およびモニターするための診断方法が、大いに必要である。本発明は、この必要性および他の必要性を解決する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（発明の簡単な要旨）
本発明は、個体における炎症性疾患または炎症性状態を診断またはモニターするための方法、白血球の表面上での少なくとも１つの補体経路成分のレベルを決定するための方法、およびその決定を、コントロール由来の白血球の表面上での同じ補体経路成分のレベルまたはコントロール白血球由来の参照値と比較するための方法を提供する。
【０００６】
本発明の一局面において、上記白血球は、リンパ球である。リンパ球は、そのリンパ球上の特定のタンパク質を認識する抗体を使用して（例えば、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ８抗体、または抗ＣＤ１９抗体を使用して）、単離され得る。
【０００７】
本発明の別の局面において、上記炎症性疾患または炎症性状態は、例えば、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、強皮症、慢性関節リウマチ、脈管炎、筋炎、血清病、移植拒絶、鎌状赤血球貧血、多発性硬化症、通風、子癇前症、心血管疾患、およびＣ型肝炎ウイルス感染である。本発明は、慢性形態の上記の疾患の診断を包含する。
【０００８】
本発明の別の局面において、補体成分Ｃ４ｄのレベルが、決定され、そして炎症性疾患または炎症性状態を診断またはモニターするために使用される。いくつかの実施形態において、１つ以上の他の補体成分のレベルが、上記Ｃ４ｄのレベルと組み合わせて決定される。
【０００９】
本発明の別の局面において、補体成分Ｃ３ｄのレベルが、決定され、そして炎症性疾患または炎症性状態を診断またはモニターするために使用される。いくつかの実施形態において、１つ以上の他の補体成分のレベルが、上記Ｃ３ｄのレベルと組み合わせて決定される。
【００１０】
一実施形態において、上記炎症性疾患または炎症性状態は、ＳＬＥである。ＳＬＥの診断のために、補体成分Ｃ４ｄのレベルが、リンパ球の表面上で決定される。別の実施形態において、Ｃ４ｄレベルが、例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、または単球の表面上で決定される。Ｃ４ｄレベルが、例えば、Ｃ４ｄに対して特異的な抗体を使用して決定され得る。上記抗体は、検出のために標識され得、例えば、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体が、使用され得る。
【００１１】
ＳＬＥの診断はまた、リンパ球上のＣ４ｄのレベルと少なくとも１つの他の補体経路成分と組み合わせて決定することによって、達成され得る。一実施形態において、補体成分Ｃ４ｄのレベルおよび補体成分Ｃ３ｄのレベルが、ＳＬＥを診断またはモニターするために決定される。Ｃ４ｄレベルは、上記のようにして決定され得る。Ｃ３ｄレベルは、例えば、Ｃ３ｄに対して特異的な抗体を使用して、決定され得る。上記抗体は、検出のために標識され得、例えば、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体が、使用され得る。
【００１２】
ＳＬＥの診断はまた、リンパ球の表面上の補体成分Ｃ３ｄのレベルを決定することによって、達成され得る。別の実施形態において、Ｃ３ｄレベルは、例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、または単球の表面上で決定される。上記のように、Ｃ３ｄレベルは、例えば、Ｃ３ｄに対して特異的な抗体を使用して、決定され得る。上記抗体は、検出のために標識され得、例えば、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体が、使用され得る。
【００１３】
別の局面において、本発明は、個体における炎症性疾患または炎症性状態を診断またはモニターするためのキットを提供する。上記キットは、補体成分に対して特異的な抗体；および白血球を単離するための手段；を備え得る。一般的に、白血球を単離するための手段は、その白血球に対して特異的な抗体である。一実施形態において、上記キットは、補体成分Ｃ４ｄに対して特異的な抗体を備える。さらなる実施形態において、上記キットは、補体成分Ｃ３ｄに対して特異的な第二抗体を備える。
【００１４】
別の実施形態において、上記白血球は、リンパ球である。このリンパ球は、そのリンパ球に対して特異的な抗体（例えば、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ８抗体、または抗ＣＤ１９抗体）を使用して単離される。別の実施形態において、上記白血球は、例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、または単球である。
【００１５】
さらなる局面において、本発明は、コンピューター読み取り可能な媒体を提供し、このコンピューター読み取り可能な媒体は、（ａ）白血球の表面上に沈着された補体成分の決定に対応するデータを受容するためのコード；（ｂ）個体の白血球の表面上に沈着されたその補体成分についての基準値を検索するためのコード；（ｃ）（ａ）におけるデータを（ｂ）における参照値と比較するためのコード；を含む。
【００１６】
上記コンピューター読み取り可能な媒体の一実施形態において、上記補体成分は、Ｃ４ｄである。上記コンピューター読み取り可能な媒体の別の実施形態において、上記補体成分は、Ｃ３ｄである。上記コンピューター読み取り可能な媒体のさらなる実施形態において、上記白血球は、リンパ球である。別の実施形態において、上記白血球は、例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、または単球である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
（発明の詳細な説明）
（導入部）
本開示は、白血球の表面上の少なくとも１つの補体成分のレベルを決定することによって、炎症疾患または炎症状態を診断およびモニターするための方法を提供する。以前には、赤血球上の補体成分Ｃ４ｄおよびＣＲ１のレベルが、決定され、そして個体における全身性エリテマトーデス（ＳＬＲ）を診断するために使用された。例えば、２００３年３月２０日に公開されたＷＯ０３／０２２２２３（これは、すべての目的のために本明細書によって援用される）を参照のこと。本開示は、白血球の表面上の少なくとも１つの補体経路成分のレベルを決定することによって、炎症性疾患または炎症性状態を診断およびモニターすることを、初めて記載するものである。
【００１８】
炎症性疾患または炎症性状態の発症もしくは以前の発症を診断する場合、サンプル中の白血球の表面上に沈着された少なくとも１つの補体経路成分のレベルが、決定される。その後、この決定は、その炎症性疾患も炎症性状態も有さない個体の白血球の表面上で見出される同じ補体経路成分の量と比較される。
【００１９】
炎症性疾患または炎症性状態を有する患者の疾患活性をモニターする場合、少なくとも１つの補体経路成分のレベルの決定が、その患者の血液サンプルにおいてなされ、その後、この決定は、過去に同じ患者から得られたサンプルにおける白血球の表面上での同じ補体経路成分の量と比較される。比較はまた、その炎症性疾患も炎症性状態も有さない個体の白血球の表面上で見出される同じ補体経路成分の量に対してもなされ得る。
【００２０】
本開示の方法は、リンパ球上の補体経路成分Ｃ４ｄおよび／または補体経路成分Ｃ３ｄのレベルを決定することによって、ＳＬＥを診断および／またはモニターするために使用され得る。ＳＬＥは、健康上の深刻な問題であるので、この状態の比較的正確かつ早期の診断が、必要である。同様に、この疾患の活性をモニターする能力が、非常に重要である。本開示の方法はまた、リンパ球上のＣ４ｄのレベルおよび補体経路成分Ｃ３ｄのレベルを決定することによって、ＳＬＥを診断および／またはモニターするために使用され得る。
【００２１】
ＳＬＥの発生または以前の発生を診断する場合、サンプル中のリンパ球の表面上に沈着された補体成分Ｃ４ｄが、単独でかまたはＣ３ｄと組み合わせて、決定される。その後、この決定は、ＳＬＥを有さない個体のリンパ球の表面上において見出されるＣ４ｄの量およびＣ３ｄの量と比較される。
【００２２】
ＳＬＥを有する患者の疾患活性をモニターする場合、同じ決定が、その患者の血液サンプルにおいてなされ、その後、過去に同じ患者から得られたサンプルにおけるリンパ球の表面上でのＣ４ｄの量およびＣ３ｄの量の決定と比較される。比較はまた、ＳＬＥを有さない個体のリンパ球の表面上で見出されるＣ４ｄの量およびＣ３ｄの量に対してもなされ得る。
【００２３】
本明細書中で引用されるすべての刊行物および特許出願は、個々の刊行物または特許出願の各々が具体的かつ個別に参考として援用されることが示されたかの如く、本明細書中に参考として援用される。
【００２４】
（定義）
本明細書中で使用される場合、「炎症性疾患または炎症性状態」とは、個体において炎症増加を引き起こす、任意の免疫疾患または免疫状態を指す。炎症性疾患または炎症性状態とはまた、個体における炎症増加を引き起こす、任意の感染性疾患または感染性状態も指す。いくつかの実施形態において、上記炎症性疾患または炎症性状態は、「慢性炎症性疾患または慢性炎症性状態」である。慢性炎症性疾患または慢性炎症性状態とは、数週間、数ヶ月間、またはそれ以上の期間の後にも回復しない炎症性状態である。慢性炎症性状態は、急性炎症性状態の後に続き得るか、あるいは、ある種の疾患または状態については、急性炎症性疾患も急性炎症性状態も存在せずに生じ得る。炎症性疾患または炎症性状態としては、ＳＬＥ、慢性関節リウマチ、脈管炎（およびその特異的形態（例えば、ヴェーゲナー肉芽腫症））、強皮症、筋炎、血清病、移植拒絶、鎌状細胞貧血、通風、妊娠の合併症（例えば、子癇前症）、多発性硬化症、心血管疾患、感染性疾患（例えば、Ｃ型肝炎ウイルス感染）などが挙げられる。これらの疾患または状態の各々はまた、慢性炎症性疾患または慢性炎症性状態とも記載され得る。
【００２５】
本明細書中で使用される場合、「白血球」とは、赤血球でも網状赤血球でもない循環血球（例えば、リンパ球（例えば、Ｔ細胞およびＢ細胞、ＮＫ細胞）、好酸球、好塩基球、顆粒球、好中球、単球、マクロファージ、巨核球、プラスマ細胞、循環内皮細胞、および幹細胞）を指す。
【００２６】
本明細書中で使用される場合、「コントロール白血球」とは、炎症性疾患も炎症性状態も有さない個体から単離される、上記に定義された白血球を指す。炎症性疾患または炎症性状態が患者においてモニターされる場合、コントロール白血球はまた、より早い時期（例えば、数週間前、数ヶ月間前、または数年前）に同じ患者から単離された白血球を指し得る。
【００２７】
本明細書中で使用される場合、「補体経路または補体系」とは、体液性免疫および炎症のエフェクター機能のうちの多くを提供するように非常に調節された様式で相互作用し、それによって細菌感染および真菌感染に対する主要な防御機構として作用する、３０種よりも多くの機能的に関連したタンパク質の複合ネットワークを指す。このタンパク質系は、３つの別個の経路（古典的経路（抗体の存在下））、または代替的経路（抗体の非存在下））および、レクチン経路）を介して、外来生物による侵入に対抗するように作用する。一旦活性化されると、各経路内のタンパク質は、連続的に自己アセンブリして多分子複合体となることを含むカスケードを形成し、この多分子複合体は、その応答を開始する異種抗原を根絶することが意図される種々の機能を実施する。補体経路の概説について、例えば、ＳｉｍおよびＴｓｉｆｔｓｏｇｌｏｕ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３２：２１〜２７（２００４）を参照のこと。
【００２８】
古典的経路は、通常は、外来粒子に結合した抗体によって誘発される。古典的経路は、古典的経路に特異的でありかつＣ１、Ｃ４、Ｃ３と呼ばれる、いくつかの成分からなる。連続的に、抗原−抗体複合体に対するＣ１ｑの結合は、Ｃ１ｒおよびＣ１ｓ（両方とも、セリンプロテアーゼである）の活性化をもたらし、活性化されたＣ１ｓが、Ｃ４およびＣ２を切断して、それぞれ、Ｃ４ａおよびＣ４ｂ、ならびにＣ２ａおよびＣ２ｂにする。フラグメントＣ４ｂおよびフラグメントＣ２ａは、アセンブルしてＣ４ｂ２ａを形成し、このＣ４ｂ２ａは、タンパク質Ｃ３をＣ３ａおよびＣ３ｂへと切断する。これによって、古典的経路の活性化は完了する。フラグメントＣ４ｂおよびフラグメントＣ３ｂは、第Ｉ因子によるさらなる分解に供される。この因子は、Ｃ４ｂを切断してＣ４ｄを生成し、そしてまたＣ３ｂを切断してｉＣ３ｂとその後のＣ３ｄを生成する。従って、補体の古典的経路の活性化は、多数のフラグメント（例えば、Ｃ４ｄ、ｉＣ３ｂ、およびＣ３ｄ）が、免疫複合体または他の標的表面上に沈着されることをもたらし得る。そのような標的としては、血液中を循環する細胞（例えば、リンパ球および他の白血球、赤血球、および血小板）が挙げられる。
【００２９】
本明細書中で使用される場合、「補体経路の成分」としては、タンパク質であるＣ１、Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３、およびそれらのフラグメント（例えば、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、Ｃ４ａ、Ｃ４ｂ、Ｃ２ａ、Ｃ２ｂ、Ｃ４ｂ２ａ、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ４ｃ、Ｃ４ｄ、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄ、Ｃ３ｉ、Ｃ３ｄｇ）が挙げられる。また、Ｃ５、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１ｉｎｈ、ＭＡＳＰ２、ＣＲ１、ＤＡＦ、ＭＣＰ、ＣＤ５９、Ｃ３ａＲ、Ｃ５ａＲ、Ｃ１ｑＲ、ＣＲ２、ＣＲ３、およびＣＲ４、ならびに本明細書中に具体的には列挙されていない他の補体経路成分、レセプター、およびリガンドも、挙げられる。
【００３０】
本明細書中で使用される場合、「全身性エリテマトーデス」、「ＳＬＥ」、または「狼瘡」とは、多器官の病変（ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ）をもたらす原型的自己免疫疾患である。この抗自己応答は、種々の核成分および細胞質細胞成分に対する自己抗体によって、特徴付けられる。これらの自己抗体は、そのそれぞれの抗原に結合し、免疫複合体を形成する。この免疫複合体は、循環し、最終的には組織中に沈着する。この免疫複合体の沈着および結果的な補体系活性化は、慢性炎症および組織損傷を引き起こす。
【００３１】
疾患活性を診断およびモニターすることは、ＳＬＥを有する患者において問題である。診断は、微妙な症状〜曖昧な症状から、生命の危険がある多器官不全に及ぶ範囲の広範な疾患が原因で、問題である。さらに、多系病変（ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ）を伴う他の炎症疾患が、狼瘡と間違われ得、その逆もあり得る。疾患分類のための基準が、１９７１年（Ｃｏｈｅｎ，ＡＳら、１９７１，Ｂｕｌｌ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．２１：６４３〜６４８）に開発され、１９８２年（Ｔａｎ，ＥＭら、１９８２、Ａｒｔｈ．Ｒｈｅｕｍ．２５：１２７１〜１２７７）および１９９７年（Ｈｏｃｈｂｅｒｇ，ＭＣ．１９９７．Ａｒｔｈ．Ｒｈｅｕｍ．４０：１７２５）に改訂された。これらの基準は、種々の地理的位置の出身である患者が比較可能であることを確実にするようになっている。その１１種の基準のうち、連続的にかまたは同時に４種以上が存在することが、ＳＬＥを有するとして患者を分類するために十分である。これらの基準は、ＳＬＥを他の関連自己免疫疾患と区別する特徴についての有用な注意点（ｒｅｍｉｎｄｅｒ）として役立つが、これらの基準は、誤りを免れ得ない。その基準が存在することまたは存在しないことを決定するのは、しばしば、医師の解釈および判断に依存する。ＳＬＥにおける臨床的症状発現の範囲は、上記の１１種の基準によって記載される範囲よりもかなり広い。各々の症状発現は、活性および重篤度のレベルで、患者ごとに変化し得る。さらに、ＳＬＥの症状は、しばしば、疾患の経過の間に進行する。現在までＳＬＥについての決定的検査は存在しない。従って、ＳＬＥは、しばしば誤診される。しかし、本開示は、ＳＬＥならびに他の炎症性疾患および炎症性状態の診断のための、効率的かつ正確な方法を提供する。
【００３２】
ＳＬＥは、一連の発赤または急性疾病期間において進行し、その後寛解する。発赤の症状（これは、患者間で、そして同じ患者においてさえ、かなり変化する）としては、倦怠感、発熱、全身性関節痛、および日光過敏（短時間の太陽への曝露後の発疹の発生）が挙げられる。ＳＬＥの他の症状としては、毛髪損失、粘膜の潰瘍、ならびに胸部痛をもたらす心臓および肺の内部の炎症が挙げられる。赤血球、血小板、および白血球が、狼瘡において標的とされ得、貧血および出血の問題を生じる。より深刻なことには、血管における免疫複合体の沈着および慢性炎症が、腎臓の病変（ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ）をもたらし得、時には、透析もしくは腎移植を必要とする腎不全をもたらし得る。血管が、ＳＬＥにおける自己免疫応答の主要標的であるので、早発性脳卒中および心臓疾患が、珍しくはない。しかし、経時的には、これらの発赤は、不可逆的器官損傷をもたらし得る。
【００３３】
「抗体」とは、抗原に特異的に結合してその抗原を認識する、免疫グロブリン遺伝子由来のフレームワーク領域を含むかまたはそのフラグメントを含むポリペプチドを指す。認識される免疫グロブリン遺伝子としては、κ定常領域遺伝子、λ定常領域遺伝子、α定常領域遺伝子、γ定常領域遺伝子、δ定常領域遺伝子、ε定常領域遺伝子、およびμ定常領域遺伝子、ならびに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が挙げられる。軽鎖は、κまたはλのいずれかとして分類される。重鎖は、γ、μ、α、δ、またはεとして分類され、これは次に、それぞれ、免疫グロブリンクラスＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥを規定する。代表的には、抗体の抗原結合領域は、結合の特異性および親和性において最も重要である。
【００３４】
例示的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は、テトラマーを含む。各テトラマーは、２つの同じポリペプチド鎖対から構成される。その各々の対は、１つの「軽鎖」（約２５ｋＤ）および１つの「重鎖」（約５０ｋＤ〜約７０ｋＤ）を有する。各鎖のＮ末端は、抗原認識を主に担う、約１００個〜約１１０個またはそれ以上のアミノ酸からなる可変領域を規定する。用語「可変軽鎖（ＶＬ）」および「可変重鎖（ＶＨ）」とは、それぞれ、これらの軽鎖および重鎖を指す。
【００３５】
抗体は、例えば、インタクトな免疫グロブリンとして存在するか、または種々のペプチダーゼでの消化により生成された、十分に特徴付けられた多数のフラグメントとして存在する。従って、例えば、ペプシンは、ヒンジ領域中のジスルフィド結合の下で抗体を消化して、Ｆ（ａｂ）’２を生じる。このＦ（ａｂ）’２は、それ自体が、ジスルフィド結合によりＶＨ−ＣＨに結合された軽鎖である。このＦ（ａｂ）’２は、ヒンジ領域中のジスルフィド結合を破壊するように穏やかな条件下で還元され得、それによって、このＦ（ａｂ）’２ダイマーがＦａｂ’モノマーへと変換され得る。このＦａｂ’モノマーは、本質的にはＦａｂであり、そのヒンジ領域の一部を備える（Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｐａｕｌら，第３版，１９９３）を参照のこと）。種々の抗体フラグメントが、インタクトな抗体の消化に関して規定されているが、当業者は、そのようなフラグメントが、化学的に新規に合成され得るか、または組換えＤＮＡ方法を使用することによって新規に合成され得ることを、認識する。従って、用語「抗体」とはまた、本明細書中で使用される場合、抗体全体の改変によって生成される抗体フラグメント、または組換えＤＮＡ方法を使用して新規に合成される抗体フラグメント（例えば、単鎖Ｆｃ）、またはファージディスプレイライブラリーを使用して同定される抗体フラグメント（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２〜５５４（１９９０）を参照のこと）を包含する。
【００３６】
抗体（例えば、組換え抗体、モノクローナル抗体、またはポリクローナル抗体）の調製のために、当該分野で公知の多くの技術が、使用され得る（例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５〜４９７（１９７５）；Ｋｏｚｂｏｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ４：７２：（１９８３）；Ｃｏｌｅら、ｐｐ．７７〜９６，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．（１９８５）；Ｃｏｌｉｇａｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９９１）；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｏｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９８８）；ならびにＧｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ（第２版、１９８６）を参照のこと）。対象とする抗体の重鎖をコードする遺伝子および軽鎖をコードする遺伝子が、細胞からクローニングされ得る。例えば、モノクローナル抗体をコードする遺伝子が、ハイブリドーマからクローニングされ得、組換えモノクローナル抗体を生成するために使用され得る。モノクローナル抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子ライブラリーもまた、ハイブリドーマまたはプラスマ細胞から作製され得る。その重鎖遺伝子産物と軽鎖遺伝子産物とのランダムな組み合わせが、種々の抗原特異性を有する抗体の大きなプールを生成する（例えば、Ｋｕｂｙ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第３版、１９９７）を参照のこと）。単鎖抗体または組換え抗体の生成技術（米国特許第４，９４６，７７８号、米国特許第４，８１６，５６７号）が、本発明のポリペプチドに対する抗体を生成するために適合され得る。また、トランスジェニックマウスまたは他の生物（例えば、他の哺乳動物）が、ヒト化抗体またはヒト抗体を発現させるために使用され得る（例えば、米国特許第５，５４５，８０７号、米国特許第５，５４５，８０６号；米国特許第５，５６９，８２５号；米国特許第５，６２５，１２６号；米国特許第５，６３３，４２５号；米国特許第５，６６１，０１６号；Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９〜７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇら、Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６〜８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８１２〜１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８４５〜５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８２６（１９９６）；ならびにＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５〜９３（１９９５）を参照のこと）。あるいは、ファージディスプレイ技術が、選択された抗原に特異的に結合する、抗体およびヘテロマーＦａｂフラグメントを同定するために使用され得る（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２〜５５４（１９９０）；Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９〜７８３（１９９２）を参照のこと）。抗体はまた、二重特異性（すなわち、２つの異なる抗原を認識可能）にされ���る（例えば、ＷＯ９３／０８８２９、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５〜３６５９（１９９１）；およびＳｕｒｅｓｈら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １２１：２１０（１９８６）を参照のこと）。抗体はまた、へテロ結合体（例えば、共有結合された２つの抗体）または免疫毒素）であり得る（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、ＷＯ９１／００３６０；ＷＯ９２／２００３７３；およびＥＰ  ０３０８９を参照のこと）。
【００３７】
一実施形態において、上記抗体は、「エフェクター」部分に結合される。そのエフェクター部分は、診断アッセイにおいて使用するための標識部分（例えば、放射性標識または蛍光標識）を含む、多数の分子であり得る。
【００３８】
抗体に「特異的（または選択的）に結合する」あるいは「特異的（または選択的）に免疫反応性である」という句は、タンパク質またはペプチドを言及する場合には、そのタンパク質の（しばしば、タンパク質および他の生物学的物質の不均質集団中における）存在を決定する結合反応をさす。従って、指定される免疫アッセイ条件下で、その特定の抗体は、バックグラウンドの少なくとも２倍、より代表的にはバックグラウンドの１０倍〜１００倍よりも強く、特定のタンパク質に結合する。そのような条件下での抗体への特異的結合には、特定のタンパク質に対する特異性について選択された抗体が必要である。例えば、補体経路成分に対してか、または白血球マーカー、多型改変体、対立遺伝子、オルソログ、および保存的に改変された改変体、もしくはスプライス改変体、またはそれらの一部に対して惹起された、ポリクローナル抗体が、その補体経路成分または白血球マーカーとは特異的に免疫反応性であるが他のタンパク質とは特異的に免疫反応性ではないポリクローナル抗体のみを得るために、選択され得る。この選択は、他の分子と交差反応する抗体を差し引くことによって、達成され得る。種々の免疫アッセイ形態が、特定のタンパク質と特異的に免疫反応性である抗体を選択するために使用され得る。例えば、固相ＥＬＩＳＡ免疫アッセイが、タンパク質と特異的に免疫反応性である抗体を選択するために慣用的に使用される（特異的免疫反応性を決定するために使用され得る免疫アッセイの形式および条件の説明については、例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９８８）を参照のこと）。
【００３９】
「抗原」とは、抗体によって認識されて結合される分子（例えば、ペプチド、糖質、有機分子、またはより複雑な分子（例えば、糖脂質および糖タンパク質））である。その抗原のうちの抗体結合標的である部分は、抗原決定基であり、１つの抗原決定基に対応する小さな官能基は、ハプテンと呼ばれる。
【００４０】
「標識」とは、分光学的手段、光化学的手段、生化学的手段、免疫化学的手段、または化学的手段によって検出可能な、組成物である。例えば、有用な標識としては、３２Ｐ、１２５Ｉ、蛍光色素、電子密度試薬、酵素（例えば、ＥＬＩＳＡにおいて一般的に使用される酵素）、ビオチン、ジゴキシゲニン、またはハプテン、および抗血清もしくはモノクローナル抗体が利用可能な（例えば、補体経路成分に対して特異的な抗体または白血球マーカーに対して特異的な抗体が、例えば、その抗体に放射性標識もしくは蛍光標識を組み込むことによって検出可能にされ得、その標識抗体と特異的に反応性である補体経路成分または白血球マーカーを検出するために使用され得る）タンパク質が挙げられる。標識された二次抗体もまた、補体経路成分に対して特異的な抗体または白血球マーカーに対して特異的な抗体を検出するために使用され得る。
【００４１】
用語「接触」または「接触する」とは、本明細書において、「と合わされる」、「に添加される」、「と混合される」、「を通す」、「とともにインキュベートされる」、「に流す」などと互換可能に使用される。
【００４２】
用語「免疫アッセイ」とは、抗原に特異的に結合するために抗体を使用するアッセイである。その免疫アッセイは、その抗原を単離、標的化、および／または定量するために特定の抗体の特異的結合特性を使用することによって、特徴付けられる。
【００４３】
両方の場合において、「決定」または「決定する」および「量」と言う場合、本発明者らは、物質の量または数量の両方を包含することを意図する。１つよりも多くの補体経路成分が測定される場合、例えば、Ｃ４ｄおよびＣ３ｄの「決定」またはこれらを「決定する」こと、およびこれらの「量」は、さらに、またはあるいは、第一の補体経路成分と第二の補体経路成分との比（例えば、Ｃ４ｄ対Ｃ３ｄの比）を意味する。
【００４４】
（白血球上での補体経路の成分のレベルの決定）
本発明は、患者から得られた白血球に関して、補体経路成分レベルを決定するためのアッセイを実行することを包含する。その後、その補体成分のレベルは、個体における炎症性疾患または炎症性状態を診断またはモニターするために使用される。
【００４５】
血液サンプルが、その患者から取得され、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）で処理されて、補体活性化が阻害される。そのサンプルは、室温でかまたは冷条件下で維持される。アッセイは、好ましくは２４時間以内で行われる。
【００４６】
いくつかの実施形態において、その白血球は、血液サンプルの他の成分から単離される。例えば、白血球（軟膜）が、遠心分離によって血漿および赤血球から単離され得る。各々の型の白血球は、その細胞型（例えば、リンパ球）に対して特異的な既知の細胞表面マーカーに対する抗体を使用して、単離され得る。白血球の細胞表面マーカーに対する抗体は、当業者にとって公知であり、例えば、ＢＤ  Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓから市販されている。例えば、細胞表面マーカーであるＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、およびＣＤ１９は、リンパ球に対して特異的であり、ＣＤ３に対して特異的なモノクローナル抗体、ＣＤ４に対して特異的なモノクローナル抗体、ＣＤ８に対して特異的なモノクローナル抗体、およびＣＤ１９に対して特異的なモノクローナル抗体が、ＢＤ  Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡから入手可能である。
【００４７】
白血球の単離は、細胞表面マーカーに対して特異的な抗体を、固体支持体に付着させ、その後、その白血球を含むサンプルと、結合された抗体とを接触させることによって行われ得る。夾雑する細胞は、洗い流されて、その単離された白血球を収集することを可能にする。
【００４８】
いくつかの実施形態において、ＦＡＣＳが、白血球（例えば、例えば、リンパ球）を単離するために使用される。用語「ＦＡＣＳ」とは、蛍光活性化セルソーティング、すなわち、目的の特定の分子の含有量に従って細胞を分離するために使用される技術をいう。その目的の分子は、細胞型に特異的であってもよいし、特定の細胞状態に特異的であってもよい。その目的の分子は、蛍光色素を結合することによって直接的に、または蛍光標識された二次分子（例えば、蛍光標識されておりかつその目的の分子に特異的に結合する、抗体、レクチン、またはアプタマー）に結合することによって、蛍光標識され得る。従って、白血球特異的マーカーは、血液サンプル中で、特定の白血球を他の細胞から単離するために使用され得る。
【００４９】
白血球の単離はまた、フローサイトメトリー分析の間に特定の細胞集団をアッセイするために使用されるゲーティング技術をいう。目的の白血球集団に特異的な標識マーカーは、それらの細胞を、ある集団から分析するために使用される。次いで、第２の標識マーカーは、その白血球の表面にある、補体経路の成分のレベルを決定するために使用される。
【００５０】
補体経路の成分のレベルの決定は、多くの方法（フローサイトメトリー、白血球溶解物を使用するＥＬＩＳＡ、およびラジオイムノアッセイが挙げられる）によって行われ得る。本発明の一実施形態において、補体経路の成分のレベルの決定は、フローサイトメトリー法を用いて行われ、補体経路の成分に対して特異的なポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を用いて直接的免疫蛍光または間接的免疫蛍光によって測定が行われる。白血球の補体経路の成分に対する平均蛍光チャネル（ＭＦＣ）が決定される。補体成分（例えば、Ｃ４ｄ、ＣＲ１、および赤血球または血小板の表面上の補体成分）の決定は、ＷＯ０３／０２２２２３（２００３年３月２０日公開）およびＵＳＳＮ  ６０／４６３，４４７（２００３年４月１６日出願）において記載され、これらはともに、全ての目的で本明細書に参考として援用される。
【００５１】
一実施形態において、補体経路成分Ｃ４ｄまたは補体成分Ｃ３ｄのレベルは、個体におけるＳＬＥの進行を診断またはモニターするために、リンパ球の表面で決定される。これらリンパ球は、リンパ球特異的抗体（例えば、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ８抗体、または抗ＣＤ１９抗体）を用いて単離または検出される。いくつかの実施形態において、補体経路成分Ｃ４ｄおよび補体経路成分Ｃ３ｄのレベルが、決定される。Ｃ４ｄレベルおよびＣ３ｄレベルの決定は、多くの方法（フローサイトメトリー、リンパ球溶解物を使用するＥＬＩＳＡ、およびラジオイムノアッセイが挙げられる）によって行われ得る。本発明の一実施形態において、Ｃ４ｄおよびＣ３ｄのレベルの決定は、フローサイトメトリー法を用いて行われ、測定は、Ｃ４ｄまたはＣ３ｄに特異的なポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を使用する直接的または間接的な免疫蛍光によって測定される。リンパ球のＣ４ｄまたはＣ３ｄに対する平均蛍光チャネル（ＭＦＣ）が決定される。アッセイの同じ型が、ＳＬＥを有することが既知の患者において疾患活性を診断またはモニターするために使用され得る。
【００５２】
（キット）
炎症疾患を診断する、および炎症疾患活性をモニターする両方のためのアッセイを行うためのキットは、本発明の一部である。上記キットは、本明細書に記載される方法を実施するために必要な種々の試薬のいずれかを使用する。例えば、免疫蛍光アッセイを使用して、このキットは、一般に、補体経路成分に対して特異的なモノクローナル抗体（例えば、抗Ｃ４ｄ抗体または抗Ｃ３ｄ抗体）と蛍光部分との結合体、および好ましくは、目的の白血球（例えば、リンパ球）に対して特異的なモノクローナル抗体（例えば、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ８抗体および抗ＣＤ１９抗体を使用する）と、種々の蛍光部分との結合体もまた含む。さらに、上記キットは、この型のアッセイを行うときに必要とされ得る場合に、ユーザーのための指示材料（ｉｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａ  ｍａｔｅｒｉａｌ）およびこのような他の材料を含み得る（例えば、緩衝液、放射性標識抗体、比色試薬など）。
【００５３】
これら方法およびキットにおいて使用するための抗体もまた、公知である。例えば、ＣＤ３に対して特異的なモノクローナル抗体、ＣＤ４に対して特異的なモノクローナル抗体、ＣＤ８に対して特異的なモノクローナル抗体、およびＣＤ１９に対して特異的なモノクローナル抗体が、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）から市販されている。抗Ｃ４ｄ抗体および抗Ｃ３ｄ抗体は、Ｑｕｉｄｅｌ  Ｃｏｒｐ．（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）から市販されており、Ｒｏｇｅｒｓ，Ｊ．，Ｎ．Ｃｏｏｐｅｒら，ＰＮＡＳ  ８９：１００１６−１００２０，（１９９２）；Ｓｃｈｗａｂ，Ｃ．ら，Ｂｒａｉｎ．Ｒｅｓ．７０７（２）：１９６（１９９６）；Ｇｅｍｍｅｌｌ，Ｃ．Ｊ．  Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．３７：４７４−４８０，（１９９７）；ならびにＳｔｏｌｔｚｎｅｒ，Ｓ．Ｅ．ら，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１５６：４８９−４９９，（２０００）に概ね記載されている。
【００５４】
（診断法）
炎症疾患または状態を有する患者の診断は、補体経路成分の測定と、正常個体におけるリンパ球の表面に代表的に存在する同じ補体経路成分の量に関する基準値（ｂａｓｅ  ｖａｌｕｅ）または値の範囲とを比較することによって、行われる。
【００５５】
例えば、ＳＬＥを有する患者の診断は、Ｃ４ｄおよび／またはＣ３ｄの測定と、正常個体におけるリンパ球の表面に代表的に存在するＣ４ｄおよびＣ３ｄの量に関する基準値または値の範囲とを比較することによって、行われる。正常個体において、低レベルのＣ４ｄが、通常検出され得るが、Ｃ３ｄは存在しない。間接免疫蛍光法によるフローサイトメトリー測定値を使用する場合、健常個体のリンパ球上のＣ４ｄおよびＣ３ｄのＭＦＣは、それぞれ、１．２５〜５８．６３の範囲（平均１７．０２）および−３．４２〜２．６７の範囲（平均０．５２）であった（表１および表３）、ＳＬＥを有する患者におけるリンパ球のＣ４ｄおよびＣ３ｄのＭＦＣは、健常個体のものより高く、それぞれ、−２．６２〜１０５７．１９の範囲（平均２０１．０６）および−３．９５〜３１８．１８の範囲（平均６２．４２）であった（表２および表３）。
【００５６】
（患者のモニタリング）
本発明の方法の特別な特徴は、以前の数週間またはさらに数ヶ月の間に、患者に発生した炎症活性を示すまたはこの活性を反映することである。この手順を用いると、白血球の表面に沈着した補体経路（例えば、リンパ球の表面に沈着したＣ４ｄおよびＣ３ｄ）の成分の残存に起因して、以前の数週間またはあるいはさらに以前の数ヶ月の間の炎症疾患または状態（例えば、ＳＬＥ）の再発（ｆｌａｒｅ−ｕｐ）の発生を同定することが可能である。
【００５７】
（自動化およびコンピューターソフトウェア）
補体経路成分（例えば、Ｃ４ｄおよび／またはＣ３ｄ）の測定、ならびに上記の診断方法および疾患活性モニタリング方法は、手動で行われ得るが、しばしば、便利には、自動化システムおよび／または自動化装置を使用して行われる。このシステムおよび／または装置において、血液サンプルは、必要な測定を行うために自動的に分析され、基準値または参照値（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｖａｌｕｅ）との比較が、その目的に適したコンピューターソフトウェアを用いて自動的に行われる。
【００５８】
従って、一局面において、本発明は、個体における炎症疾患または状態を診断またはモニタリングするための方法を包含し、この方法は、（ａ）その個体に由来する、目的の白血球を含む血液サンプル中で、このサンプル中の白血球の表面に沈着した補体経路成分を自動的に測定する工程、および（ｂ）この測定と、白血球の表面にある同じ補体経路成分に関する参照値とを、自動的に比較する工程、を包含する。
【００５９】
別の局面において、本発明は、個体におけるＳＬＥを診断またはモニタリングするための方法を包含し、この方法は、（ａ）その個体に由来する、リンパ球を含む血液サンプル中で、このサンプル中のリンパ球の表面に沈着した補体成分であるＣ４ｄおよびＣ３ｄを自動的に測定する工程、ならびに（ｂ）上記測定と、リンパ球の表面にある成分Ｃ４ｄおよびＣ３ｄに関する参照値とを、自動的に比較する工程、を包含する。
【００６０】
本発明の方法において使用するためのコンピューターソフトウェア、またはコンピューター読み取り可能な媒体は、以下を包含する：
（１）：以下を含むコンピューター読み取り可能な媒体：
白血球の表面に沈着した補体経路成分の測定に対応するデータを受容するためのコード；
個体の白血球の表面に沈着した同じ補体経路成分に関する参照値を引き出す（ｒｅｔｒｉｅｖｉｎｇ）ためのコード；ならびに
（ａ）におけるデータと、（ｂ）の参照値とを比較するためのコード。
【００６１】
いくつかの実施形態において、本発明の方法において使用する、ＳＬＥを診断またはモニタリングするためのコンピューターソフトウェア、またはコンピューター読み取り可能な媒体は、以下を包含する：
（１）：以下を含むコンピューター読み取り可能な媒体：
リンパ球の表面に沈着した補体成分であるＣ４ｄおよびＣ３ｄの測定に対応するデータを受容するためのコード；
個体のリンパ球の表面に沈着した補体成分であるＣ４ｄおよびＣ３ｄに関する参照値を引き出すためのコード；ならびに
（ａ）におけるデータと、（ｂ）の参照値とを比較するためのコード。
【００６２】
本発明の実施形態において、１つ以上の参照値が、デジタルコンピューターと関連づけられたメモリ中に保存され得る。補体経路成分の測定に対応するデータが（例えば、適切な分析機器から）得られた後、このデジタルコンピューターは、補体経路成分データを、１つ以上の適切な参照値と比較し得る。この比較が行われた後、このデジタルコンピューターは、補体経路成分の測定に対応するデータが、目的と炎症疾患または状態と関連しているか否かを自動的に決定し得る。
【００６３】
本発明のいくつかの実施形態において、１つ以上の参照値が、デジタルコンピューターと関連づけられたメモリに保存され得る。補体Ｃ４ｄおよびＣ３ｄの測定に対応するデータが（例えば、適切な分析機器から）得られた後、このデジタルコンピューターは、Ｃ４ｄおよびＣ３ｄのデータと、１つ以上の適切な参照値とを比較し得る。この比較を行った後、このデジタルコンピューターは、補体Ｃ４ｄおよびＣ３ｄの測定に対応するデータがＳＬＥと関連しているか否かを自動的に決定し得る。
【００６４】
従って、本発明のいくつかの実施形態は、デジタルコンピューターによって実行されるコンピューターコードによって具現化され得る。このデジタルコンピューターは、任意の標準的なまたは専門のオペレーティングシステム（例えば、Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）ベースのオペレーティングシステム）を用いる、マイクロフレームコンピューター、ミニフレームコンピューターまたはラージフレームコンピューターであり得る。このコードは、任意の適切なコンピューター読み取り可能な媒体上に保存され得る。コンピューター読み取り可能な媒体の例としては、磁気的な、電気的な、または光学的な、ディスク、テープ、スティック、チップなどが挙げられる。このコードはまた、当業者によって、かつ任意の適切なコンピュータープログラミング言語（Ｃ、Ｃ＋＋などが挙げられる）で書かれ得る。
【実施例】
【００６５】
（実施例および実験データ）
以下の実施例は、例示によってのみ提供されるのであって、限定によって提供されるのではない。当業者は、本質的に類似の結果を得るために変更または改変され得る種々の重要でないパラメーターを容易に認識する。
【００６６】
（実施例１：健常個体（ネガティブ）におけるリンパ球のＣ４ｄおよびＣ３ｄのアッセイ）
１９名の健常個体を調査した。表１に示されるように、Ｃ３ｄは、この１９名の健常個体の各人のリンパ球で検出可能でなかったかまたはかろうじて検出可能であった。３ｍｌのＥＤＴＡで凝固阻止した末梢血のサンプルを、各個体から採取し、リンパ球および他の白血球の供給源として使用した。これらリンパ球を洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁した。Ｃ４ｄ、Ｃ３ｄ、およびＣＤ３のレベルを、それぞれ、Ｃ４ｄ、Ｃ３ｄ、およびＣＤ３に対して特異的なモノクローナル抗体を用いて、２色の間接免疫蛍光法により測定した。Ｃ４ｄおよびＣ３ｄのレベルを、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて、フローサイトメトリーによって定量する。これらリンパ球を、前方散乱および側方散乱、ならびにＣＤ３蛍光によって同定し、その平均蛍光チャネル（ＭＦＣ）を、Ｃ４ｄおよびＣ３ｄに関して測定した。
【００６７】
より具体的には、ＥＤＴＡを含むＶａｃｕｔａｉｎｅｒＴＭ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）に血液を取って、２００×ｇで遠心分離した。白血球（ＷＢＣ）を含むバフィーコートを、注意深く収集し、新たなチューブに移し、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄した。夾雑する赤血球を低張性溶解により除去した後、残りの白血球を、ＰＢＳで洗浄し、２色のフローサイトメトリー分析のために特異的な抗体の種々の組み合わせを用いて、免疫蛍光により標識した。最初の研究において使用した抗体は、以下を含んでいた：
１）細胞系統マーカーに対して特異的な抗体（例えば、Ｔリンパ球に関しては、抗ＣＤ３、抗ＣＤ４、および抗ＣＤ８、Ｂリンパ球に関しては抗ＣＤ１９、および単球に関しては抗ＣＤ１４（ＢＤ  ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ））、ならびに２）補体Ｃ４ｄまたはＣ３ｄに反応性の抗体（Ｑｕｉｄｅｌ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、またはアイソタイプコントロールマウスＩｇＧ  ＭＯＰＣ２１。次いで、染色した細胞を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒＴＭフローサイトメーターおよびＣｅｌｌＱｕｅｓｔＴＭソフトウェア（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を用いて分析した。リンパ球を、前方散乱特性およびリンパ球サブセットに対して特異的なマーカーであるＣＤ３（またはＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９）の発現によって電気的にゲートした。リンパ球への免疫グロブリンの非特異的結合を、アイソタイプコントロール抗体ＭＯＰＣ２１（ＡＴＣＣから得た）を用いて、平行して同一のアッセイを行うことによって測定した。抗Ｃ４ｄおよび抗Ｃ３ｄの特異的結合を、ＭＯＰＣ２１で得たＭＦＣを、それぞれ、抗Ｃ４ｄおよび抗Ｃ３ｄで得たＭＦＣから差し引くことによって決定した。
【００６８】
（実施例２：ＳＬＥを有する患者を健常コントロールから区別するためのリンパ球のＣ４ｄ／Ｃ３ｄのアッセイ）
この実施例は、ＳＬＥを診断し、補体成分Ｃ４ｄおよびＣ３ｄに関する参照値または値の範囲を確立するために、患者に対してアッセイを行うことを記載する。
【００６９】
この目的で、本発明者らは、ＳＬＥを有する８７名の患者を、本発明者らの外来診療所から採用した。リンパ球のＣ４ｄ／Ｃ３ｄの単一の測定を、ＳＬＥの診断に関するＡＣＲ基準を満たす８７個体において（表２）、および１９名の健常コントロール（表１）において行った。ＳＬＥを有する患者および健常コントロールに関するＣ４ｄおよびＣ３ｄの平均値を、表３に示す。健常個体におけるＣ４ｄおよびＣ３ｄに関する平均値は、それぞれ、１７．０２および０．５２であったのに対して、ＳＬＥを有する患者のＣ４ｄおよびＣ３ｄに関する平均値は、それぞれ、２０１．０６および６２．４２であった（ともにｐ＝０．０００１）。
【００７０】
（表１．健常コントロールに由来するリンパ球の表面にあるＣ４ｄおよびＣ３ｄのレベル）
【００７１】
【表１】
2007537449.tif 000002
ａ：特異的平均蛍光チャネル
ｂ：行っていない。
【００７２】
（表２．ＳＬＥ患者に由来するリンパ球の表面にあるＣ４ｄおよびＣ３ｄのレベル）
【００７３】
【表２−１】
2007537449.tif 000003
【００７４】
【表２−２】
2007537449.tif 000004
（実施例３：ＳＬＥを有する患者を他の疾患を有する患者から区別するためのリンパ球のＣ４ｄ／Ｃ３ｄのアッセイ）
ＳＬＥを有する患者  対  健常コントロールのこれらの研究の次に、ＳＬＥを有する患者と、ＳＬＥ以外の疾患を有すると診断された患者（ｎ＝３１；慢性関節リウマチ、強皮症、または炎症性筋炎を有する患者）とを比較する研究を行った。同じアッセイを用いて、リンパ球のＣ４ｄ／Ｃ３ｄの単一の測定を行った（表４）。ＳＬＥを有する患者に関するＣ４ｄおよびＣ３ｄの平均値を、他の疾患を有する患者と比較して、表３に示す。他の疾患を有する患者におけるＣ４ｄおよびＣ３ｄに関する平均値が、それぞれ２９．６０および１２．７３であったのに対して、ＳＬＥを有する患者のＣ４ｄおよびＣ３ｄに関する平均値は、それぞれ、２０１．０６および６２．４２であった（ともにｐ＜０．０００１）。
【００７５】
（表３．リンパ球のＣ４ｄおよびＣ３ｄのレベル分析）
【００７６】
【表３】
2007537449.tif 000005
＊ＦＩＴＣ抗ＣＤ３およびＰＥ抗Ｃ４ｄまたはＰＥ抗Ｃ３ｄで染色した白血球を、２色のフローサイトメトリー分析に供した。ＣＤ３＋  Ｔリンパ球を、電気的にゲートし、その表面に沈着したＣ４ｄおよびＣ３ｄのレベルに関して分析した。
ａ：ＣＤ３＋  Ｔリンパ球で検出されたＣ４ｄレベルの特異的平均蛍光強度（ＳＭＦＣ）
ｂ：ＣＤ３＋  Ｔリンパ球で検出されたＣ３ｄレベルのＳＭＦＣ。
【００７７】
（表４．他の疾患を有する患者に由来するリンパ球の表面にあるＣ４ｄおよびＣ３ｄのレベル）
【００７８】
【表４】
2007537449.tif 000006
（実施例４：ＳＬＥを有する患者を区別するための、リンパ球のＣ４ｄのアッセイ）
補体経路成分であるＣ４ｄを、ＳＬＥを有する患者の末梢血Ｔリンパ球上に特異的に沈着させる。末梢血Ｔリンパ球上のＣ４ｄの沈着を、２色フローサイトメトリーアッセイによって決定した。Ｔリンパ球を、ＣＤ３（Ｔリンパ球に関する表面マーカー）に対して特異的なＦＩＴＣ結合モノクローナル抗体を用いて同定し、これらの細胞に沈着したＣ４ｄを、モノクローナル抗Ｃ４ｄ抗体、次に、ＰＥ結合二次抗体を用いて測定した。結果を図１に示す。示されるデータは、ＳＬＥを有する患者（ｎ＝８７）、他の自己免疫疾患を有する患者（ｎ＝３１）、または健常コントロール（ｎ＝１９）に由来する末梢血Ｔリンパ球のＣ４ｄ特異的平均蛍光（ＳＭＦ）である。特異的平均蛍光のカットポイントを、Ｃ４ｄ陽性Ｔリンパ球を有する個体（ＳＭＦ＞５８）を、Ｃ４ｄ陰性Ｔリンパ球を有する個体（ＳＭＦ＜５８）から区別するために経験的に決定した。健常コントロールはいずれも、カットポイントより高いＣ４ｄレベルを有さなかった（０／１９）が、ＳＬＥ患者のほぼ半数は、カットポイントより高いＣ４ｄレベルを有し（４２／８７）、そして他の自己免疫疾患を有する患者のうちの数名は、カットポイントより高いＣ４ｄレベルを有した（４／３１）。この群の中でＣ４ｄ陽性Ｔリンパ球を有する患者の頻度をχ２検定を用いて比較し、比較した各対に対するｐ値を、水平線の上に示す。この群の中でのＴリンパ球上のＣ４ｄ特異的蛍光の平均値を、スチューデントＴ検定を用いて比較し、それぞれのｐ値を、水平線の下に示す。図６は、このデータを、Ｘ軸上の対数目盛りとともに示す。
【００７９】
（実施例５：ＳＬＥを有する患者と、他の炎症疾患を有する患者を区別するためのリンパ球のＣ３ｄのアッセイ）
補体経路成分であるＣ３ｄを、ＳＬＥを有する患者の末梢血Ｔリンパ球および他の炎症疾患を有する患者の末梢血Ｔリンパ球に特異的に沈着させる。末梢血Ｔリンパ球上のＣ３ｄの沈着を、２色フローサイトメトリーアッセイによって測定した。Ｔリンパ球を、ＣＤ３（Ｔリンパ球に関する表面マーカー）に対して特異的なＦＩＴＣ結合モノクローナル抗体を用いて同定し、これらの細胞に沈着したＣ３ｄを、モノクローナル抗Ｃ４ｄ抗体、続いてＰＥ結合二次抗体を用いて測定した。結果を図２に示す。示されるデータは、ＳＬＥを有する患者（ｎ＝８７）、他の自己免疫疾患を有する患者（ｎ＝３１）、または健常コントロール（ｎ＝１９）に由来する末梢血Ｔリンパ球のＣ３ｄ特異的平均蛍光である。特異的平均蛍光のカットポイントを、Ｃ３ｄ陽性Ｔリンパ球を有する患者（ＳＭＦＣ＞３）を、Ｃ３ｄ陰性Ｔリンパ球を有する患者（ＳＭＦＣ＜３）から区別するために経験的に決定した。健常コントロールはいずれも、カットポイントより高いＣ３ｄレベルを有した（０／１９）が、ＳＬＥ患者のほぼ７５％が、カットポイントより高いＣ３ｄレベルを有し（６５／８７）、他の自己免疫疾患を有する患者の約半数が、カットポイントより高いＣ３ｄレベルを有した（１５／３１）。この群の中でＣ４ｄ陽性Ｔリンパ球を有する個体の頻度を、χ２検定を用いて比較し、比較した各対に対するｐ値を、水平線の上に示す。この群の中でのＴリンパ球上のＣ３ｄ特異的蛍光の平均値を、スチューデントＴ検定を用いて比較し、それぞれのｐ値を、水平線の下に示す。図７は、このデータを、Ｘ軸上の対数目盛りとともに示す。
【００８０】
（実施例６：Ｔリンパ球を用いるアッセイの概要およびＢリンパ球または単球を用いるアッセイに対する比較）
補体リガンドであるＣ４ｄおよびＣ３ｄを、ＳＬＥを有する患者の末梢血Ｔリンパ球に特異的に沈着させる。図３は、２色フローサイトメトリーアッセイによって決定した末梢血Ｔリンパ球上のＣ３ｄおよびＣ４ｄの沈着を示す。Ｔリンパ球を、ＣＤ３（Ｔリンパ球に関する表面マーカー）に対して特異的なＦＩＴＣ結合モノクローナル抗体を用いて同定し、これらの細胞に沈着したＣ３ｄ／Ｃ４ｄを、モノクローナル抗Ｃ３ｄ（または抗Ｃ４ｄ）抗体、続いて、ＰＥ結合二次抗体を用いて測定した。示されるデータは、ＳＬＥを有する患者（ｎ＝８７）、他の自己免疫疾患を有する患者（ｎ＝３１）、または健常コントロール（ｎ＝１９）に由来する末梢血Ｔリンパ球のＣ３ｄ特異的メジアン蛍光およびＣ４ｄ特異的メジアン蛍光である。特異的平均蛍光のカットポイントを、Ｃ３ｄ陽性Ｔリンパ球を有する個体（ＳＭＦＣ＞３）またはＣ４ｄ陽性Ｔリンパ球を有する個体（ＳＭＦＩ＞５８）を、Ｃ３ｄ陰性Ｔリンパ球またはＣ４ｄ陰性Ｔリンパ球を有する個体から区別するために、経験的に決定した。この群の中でＴリンパ球上のＣ３ｄ特異的蛍光の平均値を、スチューデントＴ検定を用いて比較し、それぞれのｐ値は、＜０．０００１である（示さず）。Ｃ４ｄレベルは、他の疾患を有する患者と比較して、または健常コントロールと比較して、ＳＬＥを有する患者に由来するＴリンパ球より有意に高かった。Ｃ３ｄレベルはまた、他の疾患を有する患者と比較して、または健常コントロールと比較して、ＳＬＥを有する患者に由来するＴリンパ球よりも有意に高かった。
【００８１】
Ｃ４ｄレベルを、ＳＬＥを有する患者、他の疾患を有する患者、および健常コントロールのＴリンパ球、Ｂリンパ球、および単球の表面に対して測定した。異なる型の細胞にあるＣ４ｄを、細胞特異的表面マーカーおよびＣ４ｄまたはアイソタイプコントロール免疫グロブリンに対して特異的なモノクローナル抗体を用いて、３色フローサイトメトリーアッセイによって測定した。Ｃ４ｄのレベルを、特異的メジアン蛍光強度（ＳＭＦＩ）＝抗Ｃ４ｄメジアン蛍光強度−アイソタイプＩｇメジアン蛍光強度、として計算した。Ｔ細胞を、モノクローナル抗ＣＤ３抗体によって陽性に染色される細胞を電気的にゲートすることによって同定した。Ｂ細胞を、モノクローナル抗ＣＤ１９抗体によって陽性に染色される細胞の電気的ゲーティングによって同定した。単球を、前方散乱および側方散乱ならびに抗Ｃｄ３による陰性染色によって同定した。他の炎症疾患（例えば、炎症性ミオパシー、シェーグレン症候群、脈管炎、レーノー現象、および心血管疾患）を有する患者。スチューデントｔ検定；ＳＬＥを有する患者  対  他の疾患を有する患者。Ｃ４ｄレベルは、他の疾患を有する患者と比較して、または健常コントロールと比較して、ＳＬＥを有する患者に由来するＴリンパ球、Ｂリンパ球、および単球に関して有意に高かった。
【００８２】
Ｃ３ｄレベルを、ＳＬＥを有する患者、他の疾患を有する患者、および健常コントロールのＴリンパ球、Ｂリンパ球、および単球の表面に対して測定した。異なる型の細胞にあるＣ３ｄを、細胞特異的表面マーカーおよびＣ３ｄまたはアイソタイプコントロール免疫グロブリンに対して特異的なモノクローナル抗体を用いて、３色フローサイトメトリーアッセイによって測定した。Ｃ３ｄのレベルを、特異的メジアン蛍光強度（ＳＭＦＩ）＝抗Ｃ３ｄメジアン蛍光強度−アイソタイプＩｇメジアン蛍光強度、として計算した。Ｔ細胞を、モノクローナル抗ＣＤ３抗体によって陽性に染色される細胞を電気的にゲートすることによって同定した。Ｂ細胞を、モノクローナル抗ＣＤ１９抗体によって陽性に染色される細胞の電気的ゲーティングによって同定した。単球を、前方散乱および側方散乱ならびに抗Ｃｄ３による陰性染色によって同定した。他の炎症疾患（例えば、炎症性ミオパシー、シェーグレン症候群、脈管炎、レーノー現象、および心血管疾患）を有する患者。Ｃ３ｄレベルは、他の疾患を有する患者と比較して、または健常コントロールと比較して、ＳＬＥを有する患者に由来するＴリンパ球、Ｂリンパ球、および単球に関して有意に高かった。
【００８３】
図およびデータから、補体活性化は、広い範囲の正常な炎症プロセスおよび免疫プロセス、ならびに異常な炎症プロセスおよび免疫プロセスに関与していることが理解され得る。従って、白血球上の補体活性化生成物および補体レセプターの異常なパターンは、炎症疾患および全身性エリテマトーデス以外の免疫疾患を診断および／モニタリングすることにおいて有用である。図１〜４におけるデータは、このことを支持する。末梢血Ｔ細胞上のＣ３ｄおよびＣ４ｄの最も高いレベルが、ＳＬＥを有する患者において発生するが、Ｃ３ｄの異常なレベルが、他の疾患を有する患者の１５／３１（４８．４％）から得たＴ細胞で検出される。さらに、他の疾患を有する患者から得たＴ細胞上のＣ３ｄの平均レベルは、健常コントロールから得たＴ細胞上のＣ３ｄの平均レベルより有意に高い（ｐ＝０．０２７）。
【００８４】
本明細書に引用される全ての刊行物および特許出願は、各個々の刊行物または特許出願が具体的にかつ個々に援用されていることを示すかのように、本明細書に参考として援用される。
【００８５】
前述の発明は、理解を明瞭にする目的で、例示によって幾分詳細に記載されてきたが、添付の特許請求の範囲の趣旨および範囲から逸脱することなく特定の変更および改変が本発明に対して行われ得ることは、本発明の教示に鑑みて、当業者にとって容易に明らかである。
【図面の簡単な説明】
【００８６】
【図１】図１は、補体経路成分Ｃ４ｄが、ＳＬＥを有する患者の末梢血Ｔリンパ球上に特異的に沈着されることを示す。末梢血Ｔリンパ球上でのＣ４ｄの沈着が、２色フローサイトメトリーアッセイによって決定された。Ｔリンパ球は、ＣＤ３（Ｔリンパ球に関する表面マーカー）に対して特異的なＦＩＴＣ結合体化モノクローナル抗体を使用して同定された。これらの細胞上に沈着されたＣ４ｄが、モノクローナル抗Ｃ４ｄ抗体を使用し、その後、ＰＥ結合体化二次抗体を使用して、決定された。示されるデータは、ＳＬＥを有する患者（ｎ＝８７、菱形）、他の自己免疫疾患を有する患者（ｎ＝３１、四角）、または健常コントロール（ｎ＝１９、三角）に由来する末梢血Ｔリンパ球のＣ４ｄ特異的平均蛍光（ＳＭＦ）である。特異的平均蛍光のカットポイントは、Ｃ４ｄ陽性Ｔリンパ球を有する個体（ＳＭＦ＞５８）をＣ４ｄ陰性Ｔリンパ球を有する個体（ＳＭＦ＜５８）から区別するために経験的に決定された。これらの群の間のＣ４ｄ陽性Ｔリンパ球を有する個体の頻度が、χ２検定を使用して比較された。比較された各対についてのｐ値が、水平線の上に示される。これらの群の間のＴリンパ球上でのＣｄ４特異的蛍光の平均値が、スチューデントＴ検定を使用して比較された。個々のｐ値が、水平線の下に示される。
【図２】図２は、補体経路成分Ｃ３ｄが、ＳＬＥを有する患者の末梢血Ｔリンパ球上に特異的に沈着されることを示す。末梢血Ｔリンパ球上でのＣ３ｄの沈着が、２色フローサイトメトリーアッセイによって決定された。Ｔリンパ球は、ＣＤ３（Ｔリンパ球に関する表面マーカー）に対して特異的なＦＩＴＣ結合体化モノクローナル抗体を使用して同定された。これらの細胞上に沈着されたＣ３ｄが、モノクローナル抗Ｃ３ｄ抗体を使用し、その後、ＰＥ結合体化二次抗体を使用して、決定された。示されるデータは、ＳＬＥを有する患者（ｎ＝８７、菱形）、他の自己免疫疾患を有する患者（ｎ＝３１、四角）、または健常コントロール（ｎ＝１９、三角）に由来する末梢血Ｔリンパ球のＣ３ｄ特異的平均蛍光である。特異的平均蛍光のカットポイントは、Ｃ３ｄ陽性Ｔリンパ球を有する個体（ＳＭＦＣ＞３）をＣ３ｄ陰性Ｔリンパ球を有する個体（ＳＭＦＣ＜３）から区別するために経験的に決定された。これらの群の間のＣ３ｄ陽性Ｔリンパ球を有する個体の頻度が、χ２検定を使用して比較された。比較された各対についてのｐ値が、水平線の上に示される。これらの群の間のＴリンパ球上でのＣｄ３特異的蛍光の平均値が、スチューデントＴ検定を使用して比較された。個々のｐ値が、水平線の下に示される。
【図３】図３は、補体リガンドＣ４ｄおよびＣ３ｄが、ＳＬＥを有する末梢血Ｔリンパ球上に特異的に沈着されることを示す。末梢血Ｔリンパ球上でのＣ３ｄおよびＣ４ｄの沈着が、２色フローサイトメトリーアッセイによって決定された。Ｔリンパ球は、ＣＤ３（Ｔリンパ球に関する表面マーカー）に対して特異的なＦＩＴＣ結合体化モノクローナル抗体を使用して同定された。これらの細胞上に沈着されたＣ３ｄ／Ｃ４ｄが、モノクローナル抗Ｃ３ｄ抗体（またはモノクローナル抗Ｃ４ｄ抗体）を使用し、その後、ＰＥ結合体化二次抗体を使用して、決定された。示されるデータは、ＳＬＥを有する患者（ｎ＝８７）、他の自己免疫疾患を有する患者（ｎ＝３１）、または健常コントロール（ｎ＝１９）に由来する末梢血Ｔリンパ球の、Ｃ３ｄ特異的メジアン蛍光およびＣ４ｄ特異的メジアン蛍光である。特異的平均蛍光のカットポイントは、Ｃ３ｄ陽性Ｔリンパ球を有する個体（ＳＭＦ＞３）またはＣ４ｄ陽性Ｔリンパ球を有する個体（ＳＭＦＩ＞５８）を、Ｃ３ｄ陰性Ｔリンパ球を有する個体またはＣ４ｄ陰性Ｔリンパ球を有する個体から区別するために経験的に決定された。これらの群の間のＴリンパ球上でのＣｄ３特異的蛍光の平均値が、スチューデントＴ検定を使用して比較された。個々のｐ値は、＜０．０００１である（示されない）。
【図４】図４は、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、および単球の表面上でのＣ４ｄのレベルを提供する。種々の型の細胞上のＣ４ｄが、細胞表面マーカーに対して特異的なモノクローナル抗体、およびＣ４ｄに対して特異的なモノクローナル抗体、またはアイソタイプコントロール免疫グロブリンに対して特異的なモノクローナル抗体を使用して、３色フローサイトメトリーアッセイによって決定された。Ｃ４ｄのレベルが、特異的メジアン蛍光強度（ＳＭＦＩ）＝（抗Ｃ４ｄメジアン蛍光強度）−（アイソタイプＩｇメジアン蛍光強度）として算出された。ａＴ細胞が、モノクローナル抗ＣＤ３抗体によって陽性染色された細胞の電気ゲーティングによって同定された。ｂＢ細胞が、モノクローナル抗ＣＤ１９抗体によって陽性染色された細胞の電気ゲーティングによって同定された。ｃ単球が、前方散乱および側方散乱、ならびに抗ＣＤ３による陰性染色によって、同定された。ｄ他の炎症性疾患（例えば、炎症性ミオパシー、シェーグレン症候群、脈管炎、レーノー現象、および心血管疾患）を有する患者。ｅスチューデントｔ検定；ＳＬＴを有する患者  対  他の疾患を有する患者。ｆスチューデントｔ検定；ＳＬＴを有する患者  対  健常コントロール。
【図５】図５は、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、および単球の表面上でのＣ３ｄのレベルを提供する。種々の型の細胞上のＣ３ｄが、細胞表面マーカーに対して特異的なモノクローナル抗体、およびＣ３ｄに対して特異的なモノクローナル抗体、またはアイソタイプコントロール免疫グロブリンに対して特異的なモノクローナル抗体を使用して、３色フローサイトメトリーアッセイによって決定された。Ｃ３ｄのレベルが、特異的メジアン蛍光強度（ＳＭＦＩ）＝（抗Ｃ３ｄメジアン蛍光強度）−（アイソタイプＩｇメジアン蛍光強度）として算出された。ａＴ細胞が、モノクローナル抗ＣＤ３抗体によって陽性染色された細胞の電気ゲーティングによって同定された。ｂＢ細胞が、モノクローナル抗ＣＤ１９抗体によって陽性染色された細胞の電気ゲーティングによって同定された。ｃ単球が、前方散乱および側方散乱、ならびに抗ＣＤ３による陰性染色によって、同定された。ｄ他の炎症性疾患（例えば、炎症性ミオパシー、シェーグレン症候群、脈管炎、レーノー現象、および心血管疾患）を有する患者。ｅスチューデントｔ検定；ＳＬＴを有する患者  対  他の疾患を有する患者。ｆスチューデントｔ検定；ＳＬＴを有する患者  対  健常コントロール。
【図６】図６は、末梢血Ｔリンパ球上でのＣ４ｄの沈着であり、これは、Ｙ軸上の対数スケールを使用して図１のデータを示し、健常コントロールと疾患状態との間の差異の明確な図を提供する。
【図７】図７は、末梢血Ｔリンパ球上でのＣ３ｄの沈着であり、これは、Ｙ軸上の対数スケールを使用して図２のデータを示し、健常コントロールと疾患状態との間の差異の明確な図を提供する。
【図１】
2007537449.tif 000007
【図２】
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【図３】
2007537449.tif 000009
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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