(57)【要約】  本発明は、式ＶＩのメルカプトアセチルトリグリシンダイマー、還元剤および場合によりトランスファー・リガンドを含む溶液に放射性核種を添加し、かくして得られる溶液を加熱する段階を含む、放射性核種で標識されたメルカプトアセチルトリグリシンの製造方法に関する。本発明は、メルカプトアセチルトリグリシンダイマーおよびこの方法におけるその使用、この方法を実施するためのキット、およびこの方法から得られる製剤に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
放射性核種で標識化されたメルカプトアセチルトリグリシンの製造方法であって、式ＶＩ
【化１】
2007537152.tif 000009
のメルカプトアセチルトリグリシンダイマー、還元剤および場合によりトランスファー・リガンドを含む溶液に放射性核種を添加し、かくして得られる溶液を加熱する段階を含む、製造方法。
【請求項２】
メルカプトアセチルトリグリシンダイマー、還元剤および場合によりトランスファー・リガンドを含む溶液が、凍結乾燥物からの再構成により得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
放射性核種がテクネチウム−９９ｍである、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
テクネチウムが９９ｍＴｃ−過テクネチウム酸として添加される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
還元剤が、第一スズ塩、好ましくは塩化第一スズから選択される、請求項１ないし請求項４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
トランスファー・リガンドが、酒石酸ナトリウム、グリシン、クエン酸塩、マロン酸塩、グルコン酸塩、リンゴ酸塩、乳酸塩、ピロリン酸塩、グルコヘプトン酸塩から選択される、請求項１ないし請求項５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
溶液を８０−１２０℃、好ましくは１００℃に加熱する、請求項１ないし請求項６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
溶液を５−６０分間、好ましくは約１０分間加熱する、請求項１ないし請求項７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
請求項１ないし請求項８のいずれかに記載の方法において使用するための、式ＶＩのメルカプトアセチルトリグリシンのダイマー。
【請求項１０】
式ＶＩのメルカプトアセチルトリグリシンのダイマー、還元剤および場合によりトランスファー・リガンドを含む、放射性標識化メルカプトアセチルトリグリシン錯体を製造するためのキット。
【請求項１１】
還元剤が、スズ塩、好ましくは塩化スズである、請求項１０に記載のキット。
【請求項１２】
トランスファー・リガンドが、酒石酸ナトリウム、グリシン、クエン酸塩、マロン酸塩、グルコン酸塩、リンゴ酸塩、乳酸塩、ピロリン酸塩、グルコヘプトン酸塩から選択される、請求項１０または請求項１１に記載のキット。
【請求項１３】
０.０１−０.１０ｍｇ、好ましくは０.０５ｍｇのＭＡＧ３−ダイマー
０.０５−０.２５ｍｇ、好ましくは０.１４ｍｇの塩化スズ（ＩＩ）
１０−２０ｍｇ、好ましくは１７.２ｍｇの酒石酸二ナトリウム
を含む、請求項１１または請求項１２に記載のキット。
【請求項１４】
凍結乾燥形態である、請求項１０ないし請求項１３のいずれかに記載のキット。
【請求項１５】
放射性核種で標識され、請求項１ないし請求項８のいずれかに記載の方法により得ることができる、メルカプトアセチルトリグリシンの製剤。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、放射性核種で標識されたメルカプトアセチルトリグリシンの製造方法に関する。本発明はさらに、Ｓ−保護メルカプトアセチルトリグリシン化合物およびこの方法で使用するためのキット、および放射性標識化メルカプトアセチルトリグリシンを含む製剤に関する。
【０００２】
Ｔｃ−９９ｍで標識されたメルカプトアセチルトリグリシン（ＭＡＧ３）は、診断用放射性医薬である。それは、適する還元剤およびトランスファー・リガンドと共に、ベチアチド（betiatide）（Ｎ−［Ｎ−［Ｎ−［（ベンゾイルチオ）アセチル］グリシル］グリシル］グリシン）を含む凍結乾燥粉末として供給される。滅菌ナトリウム過テクネチウム酸Ｔｃ−９９ｍを用いる再構成の後、形成されるＴｃ−９９ｍメルチアチド（mertiatide）（ジナトリウム［Ｎ−［Ｎ−［Ｎ−（メルカプトアセチル）グリシル］グリシル］グリシナト−（２−）−Ｎ，Ｎ'，Ｎ”，Ｓ'］オキソテクネテート（２−））は、静脈内投与に適する。
【０００３】
Ｔｃ−９９ｍメルチアチドは、例えば、成人および小児の腎不全、尿路閉塞および結石などの先天性および後天性の腎臓異常の診断に使用するための、腎臓造影剤である。腎臓全体および腎皮質について、腎機能、部分機能（split function）、腎血管造影図およびレノグラム（renogram）曲線に関する情報を提供することは、診断の助けになる。それはさらに、移植後の腎臓の機能観察に使用され、そこでは反復して造影剤が投与される。
【０００４】
わずかに酸性条件（ｐＨ５−６）での９９ｍＴｃ−メルカプトアセチルトリグリシン（ＭＡＧ３）錯体の製造において、チオールはベンゾイル基により保護され、次いで、それは１０分間の沸騰段階の間に除去され、金属中心への配位を可能にする。その潜在的毒性のために、最終的製剤に安息香酸がないことが、より好都合であり得る。
【０００５】
従って、本発明の目的は、放射性核種で標識されたメルカプトアセチルトリグリシンの溶液の代替的製造方法を提供することである。
【０００６】
本発明に至る研究の中で、メルカプトアセチルトリグリシン自体を「保護基」として使用できることが見出された。再構成すると、Ｔｃ−９９ｍおよびＭＡＧ３−ダイマーの両方が同時に還元され、所望の生成物を与える。
【０００７】
従って、本発明は、式ＶＩ
【化１】
2007537152.tif 000002
のメルカプトアセチルトリグリシンダイマー、還元剤および場合によりトランスファー・リガンドを含む溶液に放射性核種を添加し、かくして得られる溶液を加熱する段階を含む、放射性核種で標識されたメルカプトアセチルトリグリシンの製造方法に関する。
【０００８】
放射性標識化メルカプトアセチルトリグリシンが溶液中で得られる。好ましい実施態様では、メルカプトアセチルトリグリシンダイマー、還元剤および場合によりトランスファー・リガンドを含む溶液は、凍結乾燥物から再構成により得られる。
【０００９】
本発明の方法で使用するための放射性核種は、メルチアチド錯体に結合できるいかなる放射性核種でもあり得、放射線診断または放射線治療の目的に適し、好ましくはテクネチウム−９９ｍである。Ｔｃ−９９ｍは診断適用に最も望ましい放射性標識であるので、テクネチウム−９９ｍは好ましい放射性核種である。それは、低エネルギー（１４０ＫｅＶ）放射を発し、それは、標準的放射線測定器具と組み合わせて使用するのに、良好に適する。加えて、それは高価ではなく、その半減期は約６時間しかなく、このことは、その崩壊におけるベータ粒子の放射の欠如と共に、非常に低いミリキュリー当たりの放射線量をもたらす。これらの特性のために、Ｔｃ−９９ｍは核医薬におけるツールとして理想的である。テクネチウムは９９ｍＴｃ−過テクネチウム酸として適当に添加される。
【００１０】
還元剤は、第一スズ塩、好ましく塩化第一スズ（ＩＩ）である。他の例は、Ｆｅ（ＩＩＩ）−、Ｓｂ（ＩＩＩ）−、Ｍｏ（ＩＩＩ）−およびＷ（ＩＩＩ）−塩である。トランスファー・リガンドは、酒石酸ナトリウム、グリシン、クエン酸塩、マロン酸塩、グルコン酸塩、リンゴ酸塩、乳酸塩、ピロリン酸塩、グルコヘプトン酸塩から適切に選択される。これらのなかで、酒石酸塩が好ましい。
【００１１】
Ｔｃ−９９ｍ錯体は、溶液を８０−１２０℃、好ましくは１００℃に、５−６０分間、好ましくは約１０分間加熱するときにのみ形成されることが判明した。
本発明の方法は、ベンゾイル保護基の使用を回避する。
【００１２】
本発明はさらに、式ＶＩのメルカプトアセチルトリグリシンのダイマーおよび本方法におけるその使用に関する。
【００１３】
本発明はまた、式ＶＩのメルカプトアセチルトリグリシンのダイマー、還元剤および場合によりトランスファー・リガンドを含む、放射性標識化メルカプトアセチルトリグリシン錯体を製造するためのキットを提供する。
【００１４】
好ましい実施態様では、キットは、凍結乾燥形態で、
ＭＡＧ３−ダイマー０.０５ｍｇ
塩化第一スズ（ＩＩ）、２ａｑ、０.１４ｍｇ
酒石酸二ナトリウム、２ａｑ、１７.２ｍｇ
を含む。
【００１５】
本キットは凍結乾燥形態である。なぜなら、より良好な安定性および長い有効期間（shelf-life）が得られるからである。
【００１６】
そのさらなる態様では、本発明は、本方法により得られる、放射性核種で標識されたメルカプトアセチルトリグリシンの製剤に関する。このメルカプトアセチルトリグリシンはベンゾイル保護基で保護されていないので、得られる製剤は、注射用製剤（injectable）として安息香酸を含有せず、同時に生理的に許容し得るｐＨで製剤化される（患者への注射に先立ち中和する必要がない）。
【００１７】
本製剤は、通常の構成成分をさらに含んでもよい。例えば、適する還元剤が必要である。実際の製剤は、塩化スズを含有でき、一方、酒石酸二ナトリウムは、Ｔｃ（Ｖ）酸化状態の安定化剤として機能でき、同時に配位子を移動させる。得られる生成物は、同等かまたは高い放射線化学的純度および安定性を有し、同等かまたは長い有効期間を有する。
【００１８】
本発明を以下の実施例で例示説明する。そこでは、以下の図を参照する：
図１は、ＭＡＧ３ダイマー前駆体の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
図２は、ＭＡＧ３ダイマー前駆体の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
図３は、ＭＡＧ３ダイマーの１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
図４は、ＭＡＧ３ダイマーの１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
図５は、ＭＡＧ３ダイマーのＨＰＬＣプロフィールを示す。
図６は、ＭＡＧ３ダイマーおよびそのモノマーを共注入することにより得られるＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
図７は、（１）標識後の公定品（official product）である Technescan MAG3 について、そして（２）本ダイマーを有効成分として含有する標識化された「湿性」製剤について得られる、２つのＨＰＬＣクロマトグラムの例を示す。
【００１９】
実施例
実施例１
メルカプトアセチルトリグリシン−ダイマー（ＭＡＧ３）２（ＶＩ）の合成および特徴分析
【化２】
2007537152.tif 000003
【００２０】
合成経路
１．活性化エステルＶの合成および特徴分析
乾燥ジクロロ−メタン３０ｍｌ中のジチオグリコール酸（Ｉ）２.０ｇ（１０.９６ｍｍｏｌ）の溶液を氷浴中で０℃に冷却する。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＩＩ）（２.７８ｇ、２４.２ｍｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチル−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣｌ.ＨＣｌ、ＩＶ）４.６４ｇ（２４.２ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を０℃、窒素下で３０分間、後に室温で１時間撹拌する。溶媒を蒸発させ、固体残渣を水で３回洗浄する。活性化エステルを真空乾燥し、最初にカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離剤としてジクロロメタン中の１０％メタノールを用いる）により、最後に酢酸エチルからの再結晶により、精製する。精製生成物（２ｇ、５.４ｍｍｏｌ）を、収率４９％で得る。
【００２１】
Ｃ１２Ｈ１２Ｎ２Ｏ８Ｓ２の元素分析：
【表１】
2007537152.tif 000004
【００２２】
図１は、１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。対応する化学シフトは、以下の通りである：
1. 3.90 ppm (s, 4H, S-CH2)
2. 2.84 ppm (s, 8H, CH2)
3. 1.58 ppm, (s, CDCl3に含まれるH2O)
CDCl3, 7.24 ppm
【００２３】
図２は、１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。対応する化学シフトは、以下の通りである：
1. 168.76; 165.10 ppm (CO)
2.  38.70; 25.58 ppm (CH2)
CDCl3, 77.0 ppm
【００２４】
２．ＭＡＧ３ダイマー（（ＭＡＧ３）２）の合成および特徴分析
【化３】
2007537152.tif 000005
【００２５】
ＴＨＦ１０ｍｌ中の活性化エステル（Ｖ）２００ｍｇ（０.５３ｍｍｏｌ）の溶液を、氷浴上で０℃に冷却する。水１ｍｌ中のトリグリシン（ＶＩ）（２０１ｍｇ、１.０６ｍｍｏｌ）の懸濁液および１Ｎ水酸化ナトリウム１ｍｌを、上記の溶液にゆっくりと添加する。反応混合物を室温で２時間撹拌し、黄色の溶液を得、それを真空乾燥してＴＨＦを除去する。残っている水性溶液を、沈殿が始まるまで、２Ｎ ＨＣｌで酸性化する（∀３ｍｌ）。形成される沈殿を濾過により収集し、濾液のｐＨが５になるまで水で数回洗浄する。得られる白色固体を、真空乾燥し、最終生成物１９５ｍｇ（０.３７ｍｍｏｌ）を得る。収率は６９％である。この段階は、水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）の代わりに、トリエチルアミン（ＮＥｔ３）でも実施できる。そのときは、収率はやや低く、５９％である。
【００２６】
３.（ＭＡＧ３）２の精製
粗生成物を、炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）の３.５％溶液６ｍｌに溶解する。白色沈殿が出現するまで２Ｎ塩酸を添加する。固体を濾過し、濾液のｐＨが５になるまで水で数回洗浄する。生成物を終夜真空乾燥する。
【００２７】
４.（ＭＡＧ３）２の特徴分析
４.１Ｃ１６Ｈ２４Ｎ６Ｏ１０Ｓ２の元素分析：
【表２】
2007537152.tif 000006
【００２８】
４.２エルマン試験
リン酸バッファー（０.１Ｍ、ｐＨ８）中のシステインの標準溶液から、較正曲線を作成した。サンプルをリン酸バッファー（０.１Ｍ、ｐＨ８）に溶解し、濃度２ｍＭとした。４１２ｎｍで吸光度を測定し、遊離チオール（ＳＨ）の濃度を較正曲線から算出した。
（ＭＡＧ３）２の２つのバッチを、分光光度法により分析した。
【表３】
2007537152.tif 000007
【００２９】
４.３ＮＭＲ分光法
４.３.１１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル
図３は、１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。化学シフトは、以下の通りである：
C1, 171.16 ppm; C2, 169.14 ppm; C3, 169.01 ppm; C7, 168.38 ppm; C4, 42.36 ppm; C5, 41.88 ppm; C6, 41.76 ppm; C8, 40.60 ppm; DMSO, 39.5 ppm
【００３０】
４.３.２１Ｈ−ＮＭＲ
図４は、１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。化学シフトは、以下の通りである：
1. 12.53 ppm (1H, s, br, OH)
2. 8.31 ppm (1H, tr., JN-H, 6Hz, N-H); 8.19 ppm (1H, tr., JN-H, 6Hz, N-H); 8.12 ppm (1H, tr., JN-H, 6Hz, N-H)
3. 3.78 ppm (2H, d., JH-H, 6Hz, CH2); 3.74 ppm (4H, d., JH-H, 6Hz, 2CH2)
4. 3.56 ppm (2H, s, S-CH2)
DMSO, 2.49 ppm
【００３１】
４.４ＨＰＬＣ分析
以下のパラメーターを使用した：
【表４】
2007537152.tif 000008
結果を図５に示す。
【００３２】
（ＭＡＧ３）２のジスルフィド結合の還元により得られる単量体であるメルカプトアセチルトリグリシンを、親化合物と共注入し、図６に示すクロマトグラムを得た。
【００３３】
実施例２
製剤の実験
存在するＭＡＧ３キットに関してキット製剤の組成を変更しないために、塩化スズを還元剤として、酒石酸ナトリウムをトランスファー・リガンドとして使用した。９９ｍＴｃＯ４−の存在下、１０分間の沸騰段階の後、ＭＡＧ３ダイマー０.５ｍｇ、酒石酸ナトリウム二水和物１７.１ｍｇおよびＳｎ（ＩＩ）Ｃｌ２０.０４７ｍｇを含有する製剤を、６０ないし７０％の９９ｍＴｃ−ＭＡＧ３で得た。
【００３４】
標準的な Technescan MAG3 製剤（参照）は、以下を含有する：
ベンゾイルメルカプトアセチルトリグリシン（ベンゾイルＭＡＧ３）１ｍｇ
塩化スズ（ＩＩ）０.０４ｍｇ
酒石酸二ナトリウム１６.９ｍｇ
【００３５】
本発明のＭＡＧ３−ダイマー製剤は、例えば、以下を含有する：
ＭＡＧ３−ダイマー０.０５ｍｇ
塩化スズ（ＩＩ）０.１４ｍｇ
酒石酸二ナトリウム１７.２ｍｇ
【００３６】
図７は、（１）標識後の局方品である Technescan MAG3 について、そして（２）本ダイマーを有効成分として含有する標識化された「湿性」製剤について得られる、２つのＨＰＬＣクロマトグラムの例を示す。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】図１は、ＭＡＧ３ダイマー前駆体の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図２】図２は、ＭＡＧ３ダイマー前駆体の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図３】図３は、ＭＡＧ３ダイマーの１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４】図４は、ＭＡＧ３ダイマーの１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図５】図５は、ＭＡＧ３ダイマーのＨＰＬＣプロフィールを示す。
【図６】図６は、ＭＡＧ３ダイマーおよびそのモノマーを共注入することにより得られるＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図７】図７は、（１）標識後の局方品である Technescan MAG3 について、そして（２）本ダイマーを有効成分として含有する標識化された「湿性」製剤について得られる、２つのＨＰＬＣクロマトグラムの例を示す。
【図１】
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【図２】
2007537152.tif 000011
【図３】
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【図４】
2007537152.tif 000013
【図５】
2007537152.tif 000014
【図６】
2007537152.tif 000015
【図７】
2007537152.tif 000016
【国際調査報告】
2007537152.tif 000017
2007537152.tif 000018
2007537152.tif 000019