(57)【要約】  本発明は、造影基で標識したスルホンアミドヒドロキサメート類の特定タイプのマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤（ＭＭＰｉ）を含む造影剤を開示する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
造影基で標識した以下の式（Ｉ）のメタロプロテイナーゼ阻害剤を含む造影剤であって、哺乳類生体内への標識マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤の投与後に造影基を検出することができる造影剤。
【化１】
2007511494.tif 000036
式中、
Ｙ１はＨ又は−（ＣＨ２）ｗ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｚであって、ｗは１〜６の整数であり、
ＺはＯＨ、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ４〜１０アリールオキシ又はＮＲ１Ｒ２であって、Ｒ１及びＲ２は各々独立にＨ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ１〜６フルオロアルキル又はＣ４〜１０アリールからなる群から選択され、
Ｘ１及びＸ２はそれらが結合した炭素原子と共に脂環式又は二環式のＣ３〜１０飽和環を形成しており、該飽和環はＯ、Ｎ及びＳから選択される１又は２個のヘテロ原子を適宜含んでいてもよく、
Ｘ３はＨ、Ｃ１〜３アルキル又はＣ１〜３フルオロアルキルであり、
Ｙ２は式−［Ａｌ］ｐ［Ｏ］ｑＡ２の基であって、ｐ及びｑは０又は１であり、Ａ１はＣ１〜１０アルキレン、Ｃ３〜８シクロアルキレン、Ｃ１〜１０ペルフルオロアルキレン、Ｃ６〜１０アリーレン又はＣ２〜１０ヘテロアリーレンであり、Ａ２はＨ、Ｃ１〜１０アルキル、Ｃ３〜８シクロアルキル、Ｃ１〜１０ペルフルオロアルキル、Ｃ６〜１０アリール又はＣ２〜１０ヘテロアリールであるが、ただし、ｐ及びｑが共に０である場合、Ａ２はＨではない。
【請求項２】
Ｙ１が−（ＣＨ２）ｗ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｚであって、ｗが１、２又は３である、請求項１記載の造影剤。
【請求項３】
Ｘ３がＨ、ＣＨ３又はＣＨ２Ｆである、請求項１又は請求項２記載の造影剤。
【請求項４】
Ｙ２が−Ｃ６Ｈ４−Ｏ−Ａ２であり、Ａ２がＣ６〜１０アリールである、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載の造影剤。
【請求項５】
前記造影基が、
（ｉ）放射性金属イオン、
（ｉｉ）常磁性金属イオン、
（ｉｉｉ）γ線放出型放射性ハロゲン、
（ｉｖ）陽電子放出型放射性非金属、
（ｖ）過分極ＮＭＲ活性核種、
（ｖｉ）インビボ光学イメージングに適したレポーター、
（ｖｉｉ）血管内検出に適したβ放射体
から選択される、請求項１乃至請求項４のいずれか１項記載の造影剤。
【請求項６】
次の式ＩＩを有する、請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載の造影剤。
【化２】
2007511494.tif 000037
式中、
｛阻害剤｝は式（Ｉ）のメタロプロテイナーゼ阻害剤であり、
−（Ａ）ｎ−はリンカー基であって、各Ａは独立に−ＣＲ２−、−ＣＲ＝ＣＲ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＲ２ＣＯ２−、−ＣＯ２ＣＲ２−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ−、−ＳＯ２ＮＲ−、−ＮＲＳＯ２−、−ＣＲ２ＯＣＲ２−、−ＣＲ２ＳＣＲ２−、−ＣＲ２ＮＲＣＲ２−、Ｃ４〜８シクロへテロアルキレン基、Ｃ４〜８シクロアルキレン基、Ｃ５〜１２アリーレン基もしくはＣ３〜１２へテロアリーレン基、アミノ酸、糖又は単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成単位であり、
Ｒは独立にＨ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４アルコキシアルキル又はＣ１〜４ヒドロキシアルキルから選択され、
ｎは０〜１０の整数であり、
ＸａはＨ、ＯＨ、Ｈａｌ、ＮＨ２、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４アルコキシアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキルであるか、或いはＸａは造影基である。
【請求項７】
前記造影基がメタロプロテイナーゼ阻害剤のＹ１又はＹ２の位置に結合している、請求項６記載の造影剤。
【請求項８】
マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤がリガンドに結合しており、リガンドが放射性金属イオン又は常磁性金属イオンと金属錯体を形成している、請求項１乃至請求項７のいずれか１項記載の造影剤。
【請求項９】
前記リガンドがキレート剤である、請求項８記載の造影剤。
【請求項１０】
前記放射性金属イオンがγ線放射体又は陽電子放射体である、請求項８又は請求項９記載の造影剤。
【請求項１１】
前記放射性金属イオンが９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ又は６８Ｇａである、請求項１０記載の造影剤。
【請求項１２】
前記γ線放出型放射性ハロゲン造影基が１２３Ｉである、請求項１０記載の造影剤。
【請求項１３】
前記陽電子放出型放射性非金属が１８Ｆ、１１Ｃ又は１３Ｎから選択される、請求項１０記載の造影剤。
【請求項１４】
マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤が次の式ＩＶを有する、請求項１乃至請求項１３のいずれか１項記載の造影剤。
【化３】
2007511494.tif 000038
式中、
Ｙ２、ｗ及びＺは請求項１で定義した通りであり、
Ｘ３はＨ、ＣＨ３又はＣＨ２Ｆであり、
Ｘ４は−（ＣＨ２）ｍ−（ｍは、１、２又は３である）、−ＣＨ２ＯＣＨ２−又はＸ５であり、Ｘ５は次式の基であり、ｔは２又は３である。
【化４】
2007511494.tif 000039
【請求項１５】
ＺがＮＲ１Ｒ２である、請求項１４記載の造影剤。
【請求項１６】
マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤が次の式Ｖを有する、請求項１４又は請求項１５記載の造影剤。
【化５】
2007511494.tif 000040
式中、
Ｘ６はＨａｌ、Ｒ１又はＯＲ１であり、Ｒ１はＣ１〜３アルキル又はＣ１〜３フルオロアルキルである。
【請求項１７】
ＺがＮＲ１Ｒ２であり、Ｘ６がＦであり、Ｘ４が−（ＣＨ２）２−、−ＣＨ２ＯＣＨ２−又はＸ５であって、ｔが２に等しい、請求項１６記載の造影剤。
【請求項１８】
請求項１乃至請求項１７のいずれか１項記載の造影剤を生体適合性担体と共に哺乳類への投与に適した形態で含む医薬組成物。
【請求項１９】
請求項１乃至請求項１７のいずれか１項記載の造影剤を生体適合性担体と共に哺乳類への投与に適した形態で含み、造影基が放射性である、放射性医薬組成物。
【請求項２０】
前記造影基が放射性金属イオンを含む、請求項１９記載の放射性医薬組成物。
【請求項２１】
前記造影基が陽電子放出型放射性非金属又はγ線放出型放射性ハロゲンを含む、請求項１９記載の放射性医薬組成物。
【請求項２２】
放射性又は常磁性金属イオンと金属錯体を形成することができるリガンドと請求項１記載の式（Ｉ）のマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤とのコンジュゲート。
【請求項２３】
式ＩＩｂの請求項２０記載のコンジュゲート。
【化６】
2007511494.tif 000041
式中、｛阻害剤｝、Ａ、ｎ及びＸａは、請求項６で定義した通りである。
【請求項２４】
マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤が、請求項１４乃至請求項１７のいずれか１項記載の式ＩＶ又は式Ｖを有する、請求項２２又は請求項２３記載のコンジュゲート。
【請求項２５】
前記リガンドがキレート剤である、請求項２２乃至請求項２４のいずれか１項記載のコンジュゲート。
【請求項２６】
前記キレート剤がジアミンジオキシム、Ｎ２Ｓ２又はＮ３Ｓドナーセットを有する、請求項２５記載のコンジュゲート。
【請求項２７】
請求項２０記載の放射性医薬組成物の調製用キットであって、請求項２２乃至請求項２６記載のコンジュゲートを含むキット。
【請求項２８】
放射性金属イオンが９９ｍＴｃであり、さらに生体適合性還元剤を含む、請求項３０記載のキット。
【請求項２９】
前駆体を含む請求項２１記載の放射性医薬組成物の調製用キットであって、前駆体が、請求項１乃至請求項１７のいずれか１項記載のマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤の非放射性誘導体であり、非放射性誘導体が陽電子放出型放射性非金属源又はγ線放出型放射性ハロゲン源との反応によって所望の放射性医薬を形成できる、キット。
【請求項３０】
前駆体が滅菌非発熱性形態である、請求項２９記載のキット。
【請求項３１】
陽電子放出型放射性非金属源又はγ線放出型放射性ハロゲン源が、
（ｉ）ハロゲン化物イオン又はＦ＋又はＩ＋、或いは
（ｉｉ）アルキルハライド、フルオロアルキルハライド、トシレート、トリフレート又はメシレートから選択されるアルキル化剤
から選択される、請求項２９又は請求項３０記載のキット。
【請求項３２】
前記非放射性誘導体が、
（ｉ）トリアルキルスタンナン又はトリアルキルシランのような有機金属誘導体、
（ｉｉ）求核置換のためのアルキルハライド、アルキルトシレート又はアルキルメシレートを有する誘導体、
（ｉｉｉ）求核又は求電子置換のため活性化された芳香環を有する誘導体、
（ｉｖ）容易にアルキル化を起こす官能基を有する誘導体、
（ｖ）チオール含有化合物とのアルキル化によってチオエーテル含有生成物を形成する誘導体
から選択される、請求項２９乃至請求項３１のいずれか１項記載のキット。
【請求項３３】
前駆体が固相に結合している、請求項２９乃至請求項３２のいずれか１項記載のキット。
【請求項３４】
アテローム性動脈硬化症の画像診断のための請求項１乃至請求項１７のいずれか１項記載の造影剤の使用。
【請求項３５】
不安定プラークの画像診断のための請求項１乃至請求項１７のいずれか１項記載の造影剤の使用。
【請求項３６】
アテローム性動脈硬化症の血管内検出のための請求項１乃至請求項１７のいずれか１項記載の造影剤の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はインビボイメージング用の画像診断造影剤に関する。本造影剤は、インビボ画像診断に適した造影基で標識したメタロプロテイナーゼ阻害剤を含む。
【背景技術】
【０００２】
マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）は、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の分解又はリモデリングを媒介する２０種以上の亜鉛依存性エンドペプチダーゼのファミリーである［Ｍａｓｓｏｖａ  ｅｔ  ａｌ，ＦＡＳＥＢ  Ｊ  １２  １０７５（１９９８）］。ＭＭＰファミリーに属するものはいずれも血管壁のすべての成分を分解することができるため、ＥＣＭ成分の分解を伴う生理現象及び病理現象のいずれにおいても重要な役割を果たす。ＭＭＰは、細胞の挙動を制御する細胞−マトリックス相互作用に干渉することができるため、その活性は細胞の分化、遊走、増殖及びアポトーシスのような様々なプロセスに影響を与える。生理的状況下でのＭＭＰ活性を細かく制御する負の調整制御は必ずしも適切に働くわけではない。ＭＭＰ活性の不適切な発現は、いくつかの病態における病理機序の一部を構成すると考えられている。そのため、ＭＭＰは、多くの炎症性、悪性及び変性疾患の治療用メタロプロテイナーゼ阻害剤（ＭＭＰｉ）のターゲットとされている［Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９９，２７３５（１９９９）］。
【０００３】
従って、ＭＭＰの合成阻害剤は多くの炎症性、悪性及び変性疾患の治療に有用であると考えられる。さらに、ＭＭＰの合成阻害剤がこれらの疾患の診断に有用であることも示唆されている。国際公開第０１／６０４１６号には、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）阻害剤のキレートコンジュゲート並びに診断用金属との金属錯体の調製におけるその使用が開示されている。記載されたＭＭＰ阻害剤の具体的な種類は、ヒドロキサメート類、特にスクシニルヒドロキサメートである。これらの化合物は、アテローム性動脈硬化症、心不全及び再狭窄のような細胞外マトリックス分解に関連した循環器病の診断に有用であると提案されている。好ましいＭＭＰ阻害剤、キレート剤及びリンカーが記載されている。Ｚｈｅｎｇらの報文［Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２９  ７６１〜７７０（２００２）］には、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）トレーサー１１Ｃ及び１８Ｆで標識したＭＭＰ阻害剤の合成が記載されている。同報文に記載された化合物は、乳癌の非侵襲イメージングに有用であると記載されている。
【特許文献１】国際公開第０１／６０４１６号パンフレット
【特許文献２】国際公開第９１／０１１４４号パンフレット
【特許文献３】米国特許第４８８５３６３号明細書
【特許文献４】欧州特許出願公開第０８９５９８８号明細書
【特許文献５】国際公開第０３／００２４８９号パンフレット
【特許文献６】国際公開第０３／００２１５７号パンフレット
【非特許文献１】Ｍａｓｓｏｖａ  ｅｔ  ａｌ，ＦＡＳＥＢ  Ｊ  １２  １０７５（１９９８）
【非特許文献２】Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９９，２７３５（１９９９）
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
今回、造影基で標識した特定の種類のスルホンアミドヒドロキサメートマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤（ＭＭＰｉ）が、インビボイメージング及び哺乳類の診断に有用な診断用造影剤であることが判明した。これらの化合物は、ナノモル未満の範囲のＫｉで、優れたＭＭＰ阻害活性を示す。本発明のＭＭＰｉの尿中排泄特性は、適切なリンカー基、特にポリエチレングリコール（ＰＥＧ）リンカー基の使用によって調節できる。
【０００５】
本発明の造影剤は、特定のマトリックスメタロプロテイナーゼが関与することが知られている一連の病態（炎症性、悪性及び変性疾患）のインビボ画像診断に有用である。これらの病態としては、以下のものが挙げられる。
【０００６】
（ａ）各種ＭＭＰが過剰発現するアテローム性動脈硬化症。ＭＭＰ−１、３、７、９、１１、１２、１３及びＭＴ１−ＭＭＰのレベルの上昇が、ヒトのアテローム硬化型プラークで検出されている［Ｓ．Ｊ．Ｇｅｏｒｇｅ、Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ、９（５）、９９３−１００７（２０００）及び同報文中の参照文献］。ヒトアテロームでのＭＭＰ−２の発現［Ｚ．Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．、１４８、１２１−１２８（１９９６）］及びＭＭＰ−８の発現［Ｍ．Ｐ．Ｈｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、１０４、１８９９−１９０４（２００１）］も報告されている。
【０００７】
（ｂ）慢性心不全（Ｐｅｔｅｒｓｏｎ，Ｊ．Ｔ．ｅｔ  ａｌ，Ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅａｒｔ  ｆａｉｌｕｒｅ、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ．Ｒｅｓ．（２００２）、５５（１）、２９−４４には、心不全においてＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１３及びＭＭＰ−１４が上方制御されると報告されている）。
【０００８】
（ｃ）癌［Ｖｉｈｉｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ９９、ｐ１５７−１６６（２００２）では、ＭＭＰの癌への関与が概説されており、特にＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７及びＭＭＰ−９が強調されている］。
【０００９】
（ｄ）関節炎［Ｊａｃｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｒｅｓ．５０（４）、ｐ１８３−１８６（２００１）「Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ−ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｇｅｌａｔｉｎａｓｅ  Ａ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ」では、ＭＭＰ−２が特に論じられている］。
【００１０】
（ｅ）筋萎縮性側索硬化症［Ｌｉｍ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ、６７、２５１−２５９（１９９６）；ＭＭＰ−２及びＭＭＰ−９が関与］。
【００１１】
（ｆ）ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−９及びＭＭＰ−１３が関係すると報告されている脳転移［Ｓｐｉｎａｌｅ、Ｃｉｒｃｕｌ．Ｒｅｓ．、９０、５２０−５３０（２００２）］。
【００１２】
（ｇ）ＭＭＰ−２及びＭＭＰ−９が関与すると報告されている脳血管疾患［Ｌｕｋｅｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｏｌ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．、１９、２６７−２８４（１９９９）］。
【００１３】
（ｈ）ＭＭＰ−２及びＭＭＰ−９が患部組織中で同定されているアルツハイマー病［Ｂａｃｋｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．、５８、９８３−９９２（１９９２）］。
【００１４】
（ｉ）ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３及びＭＭＰ−９が関与する神経炎症性疾患［Ｍｕｎ−Ｂｒｙｃｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｒａｉｎ．Ｒｅｓ．、９３３、４２−４９（２００２）］。
【００１５】
（ｊ）ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−８及びＭＭＰ−９が上方制御されると報告されているＣＯＰＤ（すなわち、慢性閉塞性肺疾患）［Ｓｅｇｕｒａ−Ｖａｌｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｈｅｓｔ、１１７、６８４−６９４（２０００）］。
【００１６】
（ｋ）眼病［Ｋｕｒｐａｋｕｓ−Ｗｈｅａｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｇ．Ｈｉｓｔｏ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．、３６（３）、１７９−２５９（２００１）］。
【００１７】
（ｌ）皮膚疾患［Ｈｅｒｏｕｙ，Ｙ．、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．、７（１）、３−１２（２００１）］。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
第一の態様では、本発明は、造影基で標識した式（Ｉ）のメタロプロテイナーゼ阻害剤を含む造影剤であって、哺乳類生体内への標識マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤の投与後に造影基を検出することができる造影剤を提供する。
【００１９】
【化１】
2007511494.tif 000002
式中、
Ｙ１はＨ又は−（ＣＨ２）ｗ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｚであって、ｗは１〜６の整数であり、
ＺはＯＨ、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ４〜１０アリールオキシ又はＮＲ１Ｒ２であって、Ｒ１及びＲ２は各々独立にＨ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ１〜６フルオロアルキル又はＣ４〜１０アリールからなる群から選択され、
Ｘ１及びＸ２はそれらが結合した炭素原子と共に脂環式又は二環式のＣ３〜１０飽和環を形成しており、該飽和環はＯ、Ｎ及びＳから選択される１又は２個のヘテロ原子を適宜含んでいてもよく、
Ｘ３はＨ、Ｃ１〜３アルキル又はＣ１〜３フルオロアルキルであり、
Ｙ２は式−［Ａｌ］ｐ［Ｏ］ｑＡ２の基であって、ｐ及びｑは０又は１であり、Ａ１はＣ１〜１０アルキレン、Ｃ３〜８シクロアルキレン、Ｃ１〜１０ペルフルオロアルキレン、Ｃ６〜１０アリーレン又はＣ２〜１０ヘテロアリーレンであり、Ａ２はＨ、Ｃ１〜１０アルキル、Ｃ３〜８シクロアルキル、Ｃ１〜１０ペルフルオロアルキル、Ｃ６〜１０アリール又はＣ２〜１０ヘテロアリールであるが、ただし、ｐ及びｑが共に０である場合、Ａ２はＨではない。
【００２０】
式（Ｉ）において、Ｙ１は好ましくは−（ＣＨ２）ｗ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｚであって、ｗは１、２又は３、最も好ましくは２又は３、理想的には２である。Ｘ３は好ましくはＨ、ＣＨ３又はＣＨ２Ｆ、最も好ましくはＨ又はＣＨ３、理想的にはＨである。Ｙ２は好ましくはＡ２であって、Ａ２はＣ６〜１０アリール又はＣ２〜１０ヘテロアリール又は−Ａｌ［Ｏ］ｑＡ２であり、Ａ１はＣ６〜１０アリーレンであり、Ａ２はＣ６〜１０アリール又はＣ２〜１０ヘテロアリールである。
【００２１】
Ｚは好ましくはＮＲ１Ｒ２であり、最も好ましくは、Ｒ１及びＲ２の一方がＨで、他方がＨ以外から選択される。
【００２２】
Ｘ１及びＸ２がそれらの結合した炭素原子と共に形成する適当な単環式環としては、シクロアルカン（シクロペンタン又はシクロヘキサンなど）、ピペラジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、テトラヒドロチオフェン及びテトラヒドロチオピランが挙げられる。適当な二環式環としては、ビシクロ［２．２．２］オクタン、ビシクロ［２．２．３］ノナン及び追加のエチレン架橋を有する二環式テトラヒドロピランが挙げられる。Ｘ１及びＸ２の環は、さらに、１以上のヒドロキシル、Ｃ１〜３アルコキシ又はＣ１〜３フルオロアルキル置換基を適宜含んでいてもよい。Ｘ１及びＸ２がそれらの結合した炭素原子と共に形成する好ましい環は、Ｃ４〜６シクロアルキレン、又は単一のエーテル結合が組み込まれた四乃至六員環、最も好ましくは、シクロペンタン、シクロヘキサン又はテトラヒドロピラン環である。
【００２３】
本発明のスルホンアミドヒドロキサメートマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤は、好適には１００〜２０００ダルトン、好ましくは１５０〜６００ダルトン、最も好ましくは２００〜５００ダルトンの分子量を有する。阻害剤は、好ましくは合成品である。
【００２４】
「標識」という用語は、ＭＭＰｉ自体が造影基を含んでいるか、或いは造影基が以下の式ＩＩに示すように追加の核種として適宜リンカー基を介して結合していることを意味する。ＭＭＰｉ自体が造影基を含む場合、「造影基」がＭＭＰｉの化学構造の一部を形成し、その天然存在量よりも格段に高レベルで存在する放射性又は非放射性同位体であることを意味する。こうした同位体の高又は濃縮レベルは、その同位体の天然存在量の好適には５倍以上、好ましくは１０倍以上、最も好ましくは２０倍以上、理想的には５０倍以上、或いはその同位体の濃縮度が９０％〜１００％となるレベルで存在する。「造影基」を含むＭＭＰｉの例を以下に記載するが、造影基がＭＭＰｉの化学構造中の同位体標識１３Ｃ、１１Ｃ又は１８Ｆであるように、１３Ｃ又は１１Ｃレベルを高めたＣＨ３基及び１８Ｆレベルを高めたフルオロアルキル基が挙げられる。放射性同位元素３Ｈ及び１４Ｃは適当な造影基ではない。
【００２５】
「造影基」は哺乳類の体外から検出できるもの又はインビボ用に設計された検出器を用いて検出され、例えば血管内照射又は光学的検出器、例えば内視鏡又は施術内使用のために設計された放射能検出器で検出し得る。好ましい造影基は生体内投与後に非侵襲的方法で外部から検出できるものである。最も好ましい造影基は、放射性、特に放射性金属イオン、γ線放出型放射性ハロゲン及び陽電子放出型放射性非金属、特にＳＰＥＣＴ又はＰＥＴを用いた造影に適したものである。
【００２６】
「造影基」は、好ましくは以下の（ｉ）〜（ｖｉｉ）から選択される。
（ｉ）放射性金属イオン、
（ｉｉ）常磁性金属イオン、
（ｉｉｉ）γ線放出型放射性ハロゲン、
（ｉｖ）陽電子放出型放射性非金属、
（ｖ）過分極ＮＭＲ活性核種、
（ｖｉ）インビボ光学イメージングに適したレポーター、
（ｖｉｉ）血管内検出に適したβ放射体。
【００２７】
造影基が放射性金属イオン、すなわち放射性金属である場合、「放射性金属」という用語には、放射能をもつ遷移元素、ランタニド及びアクチニド、並びに金属主族元素が包含される。半金属のヒ素、セレン及びテルルは除外される。適当な放射性金属は、陽電子放出体、例えば６４Ｃｕ、４８Ｖ、５２Ｆｅ、５５Ｃｏ、９４ｍＴｃ又は６８Ｇａ、γ放射体、例えば９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、１１３ｍＩｎ又は６７Ｇａである。好ましい放射性金属は９９ｍＴｃ、６４Ｃｕ、６８Ｇａ及び１１１Ｉｎである。最も好ましい放射性金属はγ放射体、特に９９ｍＴｃである。
【００２８】
造影基が常磁性金属イオンである場合、適当なかかる金属イオンとしては、Ｇｄ（III）、Ｍｎ（II）、Ｃｕ（II）、Ｃｒ（III）、Ｆｅ（III）、Ｃｏ（II）、Ｅｒ（II）、Ｎｉ（II）、Ｅｕ（III）又はＤｙ（III）が挙げられる。好ましい常磁性金属イオンはＧｄ（III）、Ｍｎ（II）及びＦｅ（III）であり、Ｇｄ（III）が特に好ましい。
【００２９】
造影基がγ線放出型放射性ハロゲンである場合、放射性ハロゲンは１２３Ｉ、１３１Ｉ又は７７Ｂｒから適宜選択される。好ましいγ線放出型放射性ハロゲンは１２３Ｉである。
【００３０】
造影基が陽電子放出型放射性非金属である場合、かかる陽電子放出体の適当なものとしては、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１７Ｆ、１８Ｆ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ又は１２４Ｉが挙げられる。好ましい陽電子放出型放射性非金属は１１Ｃ、１３Ｎ、１２４Ｉ及び１８Ｆであり、特に好ましくは１１Ｃ及び１８Ｆであり、最も好ましくは１８Ｆである。
【００３１】
造影基が過分極ＮＭＲ活性核種である場合、かかるＮＭＲ活性核種は非ゼロ核スピンを有し、１３Ｃ、１５Ｎ、１９Ｆ、２９Ｓｉ及び３１Ｐが挙げられる。これらのうち、１３Ｃが好ましい、「過分極」という用語は、ＮＭＲ活性核種の分極の程度がその平衡分極を超えていることを意味する。１３Ｃの天然存在量（１２Ｃと比較して）は約１％であり、適当な１３Ｃ標識化合物は過分極する前に５％以上、好ましくは５０％以上、最も好ましくは９０％以上の存在量となるように適宜濃縮される。本発明のメタロプロテイナーゼ阻害剤の１以上の炭素原子は１３Ｃで適宜濃縮され、これを次いで過分極させる。
【００３２】
造影基がインビボ光学イメージングに適したレポーターである場合、レポーターは光学イメージング操作法で直接又は間接的に検出できる部分であればよい。レポーターは光散乱体（例えば着色又は未着色粒子）、光吸収体又は光放射体とし得る。さらに好ましくは、レポーターは発色団又は蛍光化合物のような色素である。色素は紫外乃至近赤外域の波長を有する電磁スペクトルの光と相互作用する色素とし得る。最も好ましくはレポーターは蛍光特性を有する。
【００３３】
好ましい有機発色団及び蛍光団レポーターとしては、広範に非局在化した電子系を有する基、シアニン、メロシアニン、インドシアニン、フタロシアニン、ナフタロシアニン、トリフェニルメチン、ポルフィリン、ピリリウム色素、チアピリリアプ色素、スクアリリウム色素、クロコニウム色素、アズレニウム色素、インドアニリン、ベンゾフェノキサジニウム色素、ベンゾチアフェノチアジニウム色素、アントラキノン、ナフトキノン、インダスレン、フタロイルアクリドン、トリスフェノキノン、アゾ色素、分子内及び分子間電荷移動色素及び色素鎖体、トロポン、テトラジン、ビス（ジチオレン）鎖体、ビス（ベンゼン−ジチオレート）鎖体、ヨードアニリン色素、ビス（Ｓ，Ｏ−ジチオレン）鎖体が挙げられる。蛍光タンパク質、例えば緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）及び吸収／発光特性の異なるＧＦＰの修飾物も有用である。ある種の希土類金属（例えばユーロピウム、サマリウム、テルビウム又はジスプロシウム）の鎖体も、蛍光ナノ結晶（量子ドット）のような特定の状況で用いられる。
【００３４】
使用し得る発色団の具体例としては、フルオレセイン、スルホローダミン１０１（テキサスレッド）、ローダミンＢ、ローダミン６Ｇ、ローダミン１９、インドシアニングリーン、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、マリーナブルー、パシフィックブルー、オレゴングリーン８８、オレゴングリーン５１４、テトラメチルローダミン及びＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ３５０、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４３０、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５３２、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５４６、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５５５、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５６８、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５９４、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６３３、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６６０、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６８０、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ７００及びＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ７５０が挙げられる。
【００３５】
特に好ましいのは、４００ｎｍ〜３μｍ、特に６００〜１３００ｎｍの可視又は近赤外域に吸収極大を有する色素である。
【００３６】
光学イメージングモダリティ及び測定法としては、例えば、ルミネセンスイメージング、内視鏡、蛍光内視鏡、光学的密着断層撮影、透過率イメージング、時間分解透過率イメージング、共焦イメージング、非線形顕微鏡分析、光音響イメージング、音響光学イメージング、スペクトル分析、反射スペクトル分析、干渉分析、密着干渉計、拡散光学断層撮影及び蛍光媒介拡散光学断層撮影（連続波長、時間ドメイン及び周波数ドメインシステム）及び光の散乱、吸収、分極、発光、蛍光寿命、量子収率及び消光の測定などが挙げられる。
【００３７】
造影基が血管内検出に適したβ放射体である場合は、かかるβ放射体として適したものとして、放射性金属、６７Ｃｕ、８９Ｓｒ、９０Ｙ、１５３Ｓｍ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ又は１９２Ｉｒ及び非金属３２Ｐ、３３Ｐ、３８Ｓ、３８Ｃｌ、３９Ｃｌ、８２Ｂｒ及び８３Ｂｒが挙げられる。
【００３８】
造影基は式（Ｉ）のＭＭＰｉの好ましくはＹ１、Ｙ２、Ｙ３又はＸ１／Ｘ２の位置、最も好ましくはＹ１又はＹ２の位置に結合し、Ｙ１が−（ＣＨ２）ｗ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｚであるときは、Ｙ１の位置が特に好ましい。造影基は、Ｙ１＝−（ＣＨ２）ｗ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ１Ｒ２部分のＲ１又はＲ２の一方と結合又は含んでいるのが特に好ましい。
【００３９】
本発明の造影剤は、好ましくは次の式（ＩＩ）のものである。
【００４０】
【化２】
2007511494.tif 000003
式中、
｛阻害剤｝は式（Ｉ）のメタロプロテイナーゼ阻害剤であり、
−（Ａ）ｎ−はリンカー基であって、各Ａは独立に−ＣＲ２−、−ＣＲ＝ＣＲ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＲ２ＣＯ２−、−ＣＯ２ＣＲ２−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ−、−ＳＯ２ＮＲ−、−ＮＲＳＯ２−、−ＣＲ２ＯＣＲ２−、−ＣＲ２ＳＣＲ２−、−ＣＲ２ＮＲＣＲ２−、Ｃ４〜８シクロへテロアルキレン基、Ｃ４〜８シクロアルキレン基、Ｃ５〜１２アリーレン基もしくはＣ３〜１２へテロアリーレン基、アミノ酸、糖又は単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成単位であり、
Ｒは独立にＨ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４アルコキシアルキル又はＣ１〜４ヒドロキシアルキルから選択され、
ｎは０〜１０の整数であり、
ＸａはＨ、ＯＨ、Ｈａｌ、ＮＨ２、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４アルコキシアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキルであるか、或いはＸａは造影基である。
【００４１】
「アミノ酸」という用語は、Ｌアミノ酸又はＤアミノ酸、アミノ酸類似体（例えば、ナフチルアラニン）又はアミノ酸擬態を意味し、それらは、天然素材又は純粋に合成由来のものであることができ、光学的に純粋、すなわち、単一の光学異性体、従ってキラルであるか、光学異性体の混合物であり得る。好ましくは、本発明のアミノ酸は、光学的に純粋である。
【００４２】
「糖」という用語は、単糖類、二糖類又は三糖類を意味する。適当な糖としては、グルコース、ガラクトース、マルトース、マンノース及びラクトースが挙げられる。糖は、アミノ酸との結合を容易にするため適宜官能化してもよい。例えば、アミノ酸のグルコサミン誘導体を、ペプチド結合を介して他のアミノ酸に結合させることができる。アスパラギンのグルコサミン誘導体（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ社から市販）はその一例である。
【００４３】
【化３】
2007511494.tif 000004
式ＩＩにおいて、Ｘａは好ましくは造影基である。これは、式（ＩＩ）のリンカー基−（Ａ）ｎ−によってメタロプロテイナーゼ阻害剤の活性部位から造影基が遠ざかるという利点を有する。
これは、造影基が比較的嵩高い（例えば金属鎖体又は放射性ヨウ素原子）場合にＭＭＰ酵素への阻害剤の結合が損なわれないようにするため特に重要である。これは、嵩高い基が活性部位から遠ざかる自由度をもつようにするための柔軟性（例えば単純なアルキル鎖）及び／又は金属錯体を活性部位から遠ざけるシクロアルキル又はアリールのスペーサーのような剛直性の組合せによって達成することができる。
【００４４】
リンカー基の性状は造影剤の生体分布を変化させるのにも使用できる。例えば、リンカーにエーテル基を導入すると、血漿タンパク質の結合を最小限にするのが容易になる。−（Ａ）ｎ−が単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成単位又はアミノ酸残基１〜１０個のペプチド鎖を含むと、リンカー基は生体内での造影剤の薬物動態及び血中クリアランスを変化させる機能をもつことができる。かかる「バイオモディファイアー」のリンカー基はバックグランド組織、例えば筋肉又は肝臓及び／又は血液からの造影剤のクリアランスを加速し、バックグラウンドの干渉の低減による良好な診断画像がもたらされる。バイオモディファイアーリンカー基は、肝臓を経る場合とは異なり、例えば腎臓を経る排出の特定の経路を優先するためにも使用し得る。
【００４５】
−（Ａ）ｎ−がアミノ酸残基１〜１０個のペプチド鎖を含む場合、アミノ酸残基は好ましくはグリシン、リジン、アスパラギン酸又はセリンから選択される。−（Ａ）ｎ−がＰＥＧ部分を含む場合、好ましくは、以下の式ＩＩＩＡ又は式ＩＩＩＢの単分散ＰＥＧ様構造のオリゴマー化で得られる単位、すなわち式ＩＩＩＡの１７−アミノ−５−オキソ−６−アザ−３，９，１２，１５−テトラオキサヘプタデカン酸を含む。
【００４６】
【化４】
2007511494.tif 000005
式中、ｐは１〜１０の整数であり、Ｃ末端単位（＊）は造影基に連結している。別法では、次の式ＩＩＩＢのプロピオン酸誘導体に基づくＰＥＧ様構造も使用できる。
【００４７】
【化５】
2007511494.tif 000006
式中、ｐは式ＩＩＩＡで定義した通りであり、ｑは３〜１５の整数である。式ＩＩＩＢにおいて、ｐは好ましくは１又は２であり、ｑは好ましくは５〜１２である。
【００４８】
リンカー基がＰＥＧ又はペプチド鎖を含まない場合、好ましい−（Ａ）ｎ−基は原子が連結した骨格鎖を有し、２〜１０原子、最も好ましくは２〜５原子、特に好ましくは２又は３原子の−（Ａ）ｎ−部分をなす。２原子の最小のリンカー基骨格鎖は造影基がメタロプロテイナーゼ阻害剤から十分離隔され、如何なる相互作用も最小限となるという利点を与える。
【００４９】
アルキレン基又はアリーレン基のような非ペプチドリンカー基は、それが結合したＭＭＰ阻害剤と顕著な水素結合相互作用をもたず、ＭＭＰ阻害剤にリンカーが巻きつかないという利点を有する。好ましいアルキレンスペーサー基は−（ＣＨ２）ｑ−であり、ｑは２〜５である。好ましいアリーレンスペーサーは次式のものである。
【００５０】
【化６】
2007511494.tif 000007
式中、ａ及びｂは独立に０、１又は２である。
【００５１】
リンカー基−（Ａ）ｎ−は好ましくはジグリコール酸基、マレイミド基、グルタル酸、コハク酸、ポリエチレングリコール系単位又は式ＩＩＩＡのＰＥＧ様単位を含む。
【００５２】
造影基が金属イオンを含む場合、金属イオンは金属鎖体として存在する。かかるメタロプロテイナーゼ阻害剤の金属イオンとのコンジュゲートは好適には次の式ＩＩａのものである。
【００５３】
【化７】
2007511494.tif 000008
式中、Ａ、ｎ及びＸａは、上記の式ＩＩで定義した通りである。
【００５４】
「金属鎖体」という用語は、金属イオンと１以上のリガンドとの配位鎖体を意味する。金属鎖体は「トランスキレート化に対して耐性」、すなわち、金属の配位部位に対する他の潜在的な競合リガンドとリガンド交換を容易に行わないことが極めて好ましい。潜在的な競合リガンドには、ヒドロキサム酸ＭＭＰｉ部分自体及びインビトロ標品中の他の賦形剤（製剤に使用される例えば放射能保護物質又は抗微生物保存料）又は生体の内在性化合物（例えばグルタチオン、トランスフェリン又は血症タンパク質）がある。
【００５５】
式ＩＩａの金属鎖体は次の式ＩＩｂのリガンドのコンジュゲートから誘導される。
【００５６】
【化８】
2007511494.tif 000009
式中、Ａ、ｎ及びＸａは上記の式ＩＩで定義した通りである。
【００５７】
トランスキレート化に耐性である金属鎖体を形成する本発明の使用に適したリガンドとしては、（金属ドナー原子同士が炭素原子又は非配位複素環原子の非配位骨格で連結されていることによって）五又は六員キレート環が形成されるように２〜６個、好ましくは２〜４個の金属ドナー原子が配列したキレート剤、又はイソニトリル、ホスフィン又はジアゼニドなどの金属イオンに強力に結合するドナー原子を含む単座リガンドが挙げられる。キレート剤の部分として金属に良好に結合するドナー原子の例は、アミン、チオール、アミド、オキシム及びホスフィンである。ホスフィン類は強力な金属鎖体を形成し、単座又は二座ホスフィンであっても適当な金属鎖体を形成する。イソニトリル及びジアゼニドの線状構造は、それらがキレート剤に容易に取り込まれないようにするためであり、従って、典型的には単座リガンドとして使用される。適当なイソニトリルの例としては、ｔ−ブチルイソニトリルのような単純なアルキルイソニトリル及びｍｉｂｉ（すなわち、１−イソシアノ−２−メトキシ−２−メチルプロパン）のようなエーテル置換イソニトリルが挙げられる。適当なホスフィンの例としては、テトロホスミン及び単座ホスフィン類、例えばとリス（３−メトキシプロピル）ホスフィンが挙げられる。適当なジアゼニドの例としては、リガンドのＨＹＮＩＣ系列、すなわちヒドラジン置換ピリジン又はニコチンアミドが挙げられる。
【００５８】
好ましいリガンドは、キレート剤、及び動力学的に安定な金属錯体、例えばホスフィン、イソニトリル及びジアゼニドなどである。最も好ましいリガンドは、上記で定義したキレート剤である。
【００５９】
トランスキレート化に耐性の金属鎖体を形成するテクネチウムの適当なキレート剤の例としては、特に限定されないが、以下の（ｉ）〜（ｖ）が挙げられる。
（ｉ）次式のジアミンジオキシム。
【００６０】
【化９】
2007511494.tif 000010
式中、Ｅ１〜Ｅ６は各々独立にＲ′基であり、
各Ｒ′はＨ又はＣ１〜１０アルキル、Ｃ３〜１０アルキルアリール、Ｃ２〜１０アルコキシアルキル、Ｃ１〜１０ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜１０フルオロアルキル、Ｃ２〜１０カルボキシアルキル又はＣ１〜１０アミノアルキルであるか、或いは２個以上のＲ′がそれらと結合している原子と共に炭素環、複素環、飽和環又は不飽和環を形成するもので、Ｒ′基の１以上がＭＭＰ阻害剤に結合しており、
Ｑは式−（Ｊ）ｆ−の架橋基であり、
ｆは３、４又は５であり、各Ｊは独立に−Ｏ−、−ＮＲ′−又は−Ｃ（Ｒ′）２−であるが、ただし、−（Ｊ）ｆ−が、−Ｏ−又は−ＮＲ′−であるＪ基を最大１個しか含まないことを条件とする。
【００６１】
好ましいＱ基は以下のものである。
Ｑ＝−（ＣＨ２）（ＣＨＲ′）（ＣＨ２）−、すなわちプロピレンアミンオキシムつまりＰｎＡＯ誘導体、
Ｑ＝−（ＣＨ２）２（ＣＨＲ′）（ＣＨ２）２−、すなわちペンチレンアミンオキシムつまりＰｅｎｔＡＯ誘導体、
Ｑ＝−（ＣＨ２）２ＮＲ′（ＣＨ２）２−。
【００６２】
Ｅ１〜Ｅ６は、好ましくはＣ１〜３アルキル、アルキルアリールアルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、フルオロアルキル、カルボキシアルキル又はアミノアルキルから選択される。最も好ましくは、各Ｅ１〜Ｅ６基はＣＨ３である。
【００６３】
ＭＭＰ阻害剤は好ましくはＥ１又はＥ６のＲ′基、又はＱ部分のＲ′基のいずれかで結合する。最も好ましくは、ＭＭＰ阻害剤はＱ部分のＲ′基に結合する。ＭＭＰ阻害剤がＱ部分のＲ′基に結合する場合は、Ｒ′基は好ましくはブリッジヘッド位置にある。かかる場合、Ｑは好ましくは−（ＣＨ２）（ＣＨＲ′）（ＣＨ２）−、−（ＣＨ２）２（ＣＨＲ′）（ＣＨ２）２−又は−（ＣＨ２）２ＮＲ′（ＣＨ２）２−、最も好ましくは−（ＣＨ２）２（ＣＨＲ′）（ＣＨ２）２−である。
【００６４】
特に好ましい二官能性ジアミンジオキシムキレーターは、次式のものであり、ＭＭＰ阻害剤はブリッジヘッド−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２基を介して結合している。
【００６５】
【化１０】
2007511494.tif 000011
（ｉｉ）チオールトリアミドドナーセットを有するＮ３Ｓリガンド、例えばＭＡＧ３（メルカプトアセチルトリグリシン）及び関連リガンド、又はジアミドピリジンチオールドナーセットを有するもの、例えばＰｉｃａ。
（ｉｉｉ）ジアミンジチオールドナーセットを有するＮ２Ｓ２リガンド、例えばＢＡＴ又はＥＣＤ（すなわちエチルシステイネート二量体）又はアミドアミンジチオールドナーセットを有するもの、例えばＭＡＭＡ。
（ｉｖ）テトラミン、アミドトリアミン又はジアミンジアミンドナーセットを有する開環又はマクロ環状リガンドであるＮ４リガンド、例えばサイクラム、モノオキシサイクラム又はジオキシサイクラム。
（ｖ）ジアミンジフェノールドナーセットを有するＮ２Ｏ２リガンド。
【００６６】
上記リガンドは特にテクネチウム、例えば９４ｍＴｃ又は９９ｍＴｃとの錯形成に適しており、Ｊｕｒｉｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ［Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，９９，２２０５−２２１８（１９９９）］にさらに詳細に記載されている。これらのリガンドは、他の金属、例えば銅（６４Ｃｕ又は６７Ｃｕ）、バナジウム（例えば４８Ｖ）、鉄（例えば５２Ｆｅ）又はコバルト（例えば５５Ｃｏ）にも有用である。他の適当なリガンドとしては、Ｓａｎｄｏｚの国際公開第９１／０１１４４号に記載されたものがあり、インジウム、イットリウム及びガドリニウムに特に適したリガンド、特にマクロ環アミノカルボキシレート及びアミノホスホン酸リガンドが挙げられる。ガドリニウムの非イオン系（すなわち中性）金属鎖体を形成するリガンドは公知であり、米国特許第４８８５３６３号に記載されている。放射性金属イオンがテクネチウムである場合は、リガンドは好ましくは四座キレート剤である。テクネチウムに対する好ましいキレート剤はジアミンジオキシム又は上記Ｎ２Ｓ２又はＮ３Ｓのドナーセットを有するものである。
【００６７】
多座ヒドロキサム酸はキレート剤であり、９９ｍＴｃを始めとする放射性金属と金属錯体を形成することが知られている［Ｓａｆａｖｙ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，４，１９４〜１９８（１９９３）］。しかし、本発明者らは、式（Ｉ）においてＸ３がＨである場合のような単座ヒドロキサム酸である場合、ヒドロキサム酸ＭＭＰｉが放射性金属の結合リガンドと効果的に競争し得ることを見出した。従って、Ｘ３がＨである場合、リガンドの選択には特別な注意が必要である。すなわち、望ましくない［ヒドロキサム酸］−［放射性金属］の金属錯体の形成を避けるため、放射性金属のヒドロキサム酸ＭＭＰｉと効果的に競争するリガンドを選択することが必要である。かかるリガンドの適当なものとしては、ホスフィン；イソニトリル；テトラミン、アミドトリアミン又はジアミドジアミンドナーセットを有するＮ４キレート剤；チオールトリアミンドナー又はジアミドピリジンチオールドナーセットを有するＮ３Ｓキレート剤；或いはＢＡＴなどのジアミンジチオールドナーセット又はＭＡＭＡなどのアミドアミンジチオールドナーセットを有するＮ２Ｓ２キレート剤が挙げられる。かかるリガンドの好ましいものとしては、上記のＮ４、Ｎ３Ｓ及びＮ２Ｓ２キレート剤、最も好ましくはＮ４テトラミン及びＮ２Ｓ２ジアミンジチオール又はジアミドジチオールキレート剤、特にＢＡＴとして知られるＮ２Ｓ２ジアミンジチオールキレーターが挙げられる。
【００６８】
【化１１】
2007511494.tif 000012
マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤は、結合が血中で容易に代謝されない態様で金属鎖体に結合するのが極めて好ましい。かかる代謝が起これば標識メタロプロテイナーゼ阻害剤が所望の生体内標的部位に到達する前に金属鎖体が切断されるからである。従ってマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤は好ましくは容易に代謝されない結合を介して本発明の金属鎖体に共有結合する。
【００６９】
造影基が放射性ハロゲン、例えばヨウ素である場合は、ＭＭＰ阻害剤は以下の要素、すなわち：非放射性ハロゲン原子、例えばアリールのヨウ化物又は臭化物（放射性ヨウ素交換を可能とするため）、活性化アリール環（例えばフェノール基）、有機金属前駆体化合物（例えばトリアルキルスズ又はトリアルキルシリル）、有機前駆体、例えばトリアゼン又は求核置換反応のための良好な脱離基、例えばヨードニウム塩を含むように適宜選択される。放射性ハロゲン（例えば１２３Ｉ及び１８Ｆ）を取り込む方法は、Ｂｏｌｔｏｎ、［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４５，４８５−５２８（２００２）］に記載されている。放射性ハロゲン、特にヨウ素が結合することができる適当なアリール基の例を以下に示す。
【００７０】
【化１２】
2007511494.tif 000013
両者共に芳香族環上への容易な放射性ヨウ素置換を可能とする置換基を含んでいる。放射性ヨウ素を含む別の置換基は、例えば以下に示すような放射性ハロゲン交換による直接ヨウ素化によって合成できる。
【００７１】
【化１３】
2007511494.tif 000014
造影基がヨウ素の放射性同位体である場合は、放射性ヨウ素原子は好ましくは芳香族環、例えばベンゼン環又はビニル基に共有結合で直接結合する。飽和脂肪族系に結合したヨウ素原子は生体内代謝を受けやすく、放射性ヨウ素が消失しやすいことが知られているからである。
【００７２】
造影基がフッ素の放射性同位体（例えば１８Ｆ）を含む場合は、放射性ハロゲン化は、アルキルブロミド、アルキルメシレート又はアルキルトシレートのような良好な脱離基を有する適当な前駆体との１８Ｆ−フロリドの反応を用いた直接標識によって実施し得る。１８Ｆは、Ｎ−（ＣＨ２）３１８Ｆを得るための１８Ｆ（ＣＨ２）３ＯＭｓ（Ｍｓはメシレート）のようなアルキル化剤を用いたアミン前駆体のＮ−アルキル化、或いは１８Ｆ（ＣＨ２）３ＯＭｓ又は１８Ｆ（ＣＨ２）３Ｂｒを用いたヒドロキシル基のＯ−アルキル化によって導入することもできる。１８Ｆは、１８Ｆ（ＣＨ２）３ＯＨ反応物を用いたＮ−ハロアセチル基のアルキル化によって導入することもでき、−ＮＨ（ＣＯ）ＣＨ２Ｏ（ＣＨ２）３１８Ｆ誘導体を生じる。アリール系に関しては、アリールジアゾニウム塩からの窒素の１８Ｆ−フロリド求核置換、アリールニトロ化合物又はアリール第四級アンモニウム塩がアリール−１８Ｆ誘導体への適切な経路である。
【００７３】
式（Ｉ）の第一級アミン含有ＭＭＰｉも、Ｋａｈｎ他［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．４５，１０４５〜１０５３（２００２）］及びＢｏｒｃｈ他［Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．９３，２８９７（１９７１）］に教示されているように、１８ＦＣ６Ｈ４−ＣＨＯを用いる還元的アミノ化によって１８Ｆ標識することができる。この方法は、アリール第一級アミン例えばフェニル−ＮＨ２又はフェニル−ＣＨ２ＮＨ２基を含む化合物などにも有効に応用することができる。
【００７４】
式（Ｉ）のアミン含有ＭＭＰ阻害剤は、次式のような１８Ｆ標識活性エステルとの反応で１８Ｆで標識することもでき、アミド結合で結合した生成物を生じる。
【００７５】
【化１４】
2007511494.tif 000015
上記Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル及びそのペプチド標識のための使用は、Ｖａｉｄｙａｎａｔｈａｎ他［Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．，１９（３），２７５〜２８１（１９９２）］及びＪｏｈｎｓｔｒｏｍ他［Ｃｌｉｎ．Ｓｃｉ．，１０３（Ｓｕｐｐｌ．４８），４５〜８５（２００２）］に教示されている。
【００７６】
１８Ｆ標識誘導体の合成経路の詳細は、Ｂｏｌｔｏｎ，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４５，４８５〜５２８（２００２）に記載されている。
【００７７】
Ｘ３位置のＰＥＴ放射性同位体標識の導入は、Ｆｅｉ他［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４６，３４３〜３５１（２００３）］又はＺｈｅｎｇ他［Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．，３０，７５３〜７６０（２００３）］に教示されているように、例えば１１ＣＨ３ＯＳＯ２ＣＦ３のようなトリフレート誘導体を用いた対応ヒドロキサム酸誘導体（Ｘ１＝Ｈ）のＯ−アルキル化によって達成し得る。１１ＣＰＥＴ放射性標識は、Ｚｈｅｎｇ他［Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．，３１，７７〜８５（２００４）］に教示されているように、上記トリフレート誘導体を用いたフェノール性水酸基のアルキル化によっても導入できる。１１Ｃでのその他の標識法は、Ａｎｔｏｎｉ他［「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ」、Ｍ．Ｊ．Ｗｅｌｃｈ及びＣ．Ｓ．Ｒｅｄｖａｎｌｙ（編者）、Ｗｉｌｅｙ（２００３）、第５章、１４１〜１９４］に教示されている。
【００７８】
本発明の好ましいマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤は次の式ＩＶのものである。
【００７９】
【化１５】
2007511494.tif 000016
式中、
Ｙ２、ｗ及びＺは上記で定義した通りであり、
Ｘ３はＨ、ＣＨ３又はＣＨ２Ｆであり、
Ｘ４は−（ＣＨ２）ｍ−（ｍは、１、２又は３である）、−ＣＨ２ＯＣＨ２−又はＸ５であり、Ｘ５は次式の基であり、ｔは２又は３である。
【００８０】
【化１６】
2007511494.tif 000017
式（ＩＶ）において、Ｘ３は、好ましくはＨ又はＣＨ３、最も好ましくはＨであり、Ｘ４は、好ましくは−（ＣＨ２）２−、−ＣＨ２ＯＣＨ２−又はｔが２に等しいＸ５基である。Ｘ４は、最も好ましくは−（ＣＨ２）２−又は−ＣＨ２ＯＣＨ２−である。式（ＩＶ）の好ましいＹ２、ｗ及びＺ基は上記の式（Ｉ）で記載した通りである。
【００８１】
造影剤が式ＩＶのＭＭＰ阻害剤を含み、造影基がγ線放出型放射性ハロゲンである場合、造影基は、好ましくはＹ２、Ｚ又はＸ４置換基のいずれか、最も好ましくはＹ２又はＺ置換基に結合している。造影基が陽電子放出型放射性非金属である場合、好ましくはＸ３、Ｘ４、Ｙ２又はＺ、最も好ましくはＸ４又はＺの位置に結合している。Ｘ３がＨである場合、陽電子放出型放射性非金属は、最も好ましくはＺ又はＸ４の位置、最も好ましくはＺの位置に結合している。
【００８２】
造影基が放射性又は常磁性金属イオンである場合は、Ｘ４又はＺ置換基の一方は、好ましくは造影基に結合又は造影基を含む。最も好ましくは式ＩＶのＺ置換基は、放射性又は常磁性金属イオン造影基に好ましくは結合又は造影基を含む。
【００８３】
本発明の好ましいマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤は次の式Ｖのものである。
【００８４】
【化１７】
2007511494.tif 000018
式中、
Ｘ６はＨａｌ、Ｒ１又はＯＲ１であり、Ｒ１は、Ｃ１〜３アルキル又はＣ１〜３フルオロアルキルである。
【００８５】
式（Ｖ）の好ましいＸ４、ｗ及びＺは上記の式（ＩＶ）で記載した通りである。ｗは、最も好ましくは２である。Ｘ６は、好ましくはＦ、最も好ましくは４−フルオロである。
【００８６】
本発明のＭＭＰ阻害剤化合物は、以下のスキーム１にまとめた通り調製することができる。
【００８７】
【化１８】
2007511494.tif 000019
類似のＭＭＰｉ化合物２７の合成は、欧州特許出願公開第０８９５９８８号及び実施例５に記載されている。合成法の文献は、Ｓｋｉｌｅｓ他の総説［Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，８，４２５〜４７４（２００１）］に挙げられている。
【００８８】
本発明の造影剤が放射性又は常磁性金属イオンを含む場合、金属イオンは適宜、金属鎖体として存在する。かかる金属鎖体は適宜、式ＩＩｂのコンジュゲートと適当な金属イオンとの反応で調製される。式ＩＩｂのＭＭＰ阻害剤のリガンドコンジュゲート又はキレーターコンジュゲートは二官能性キレート法で調製できる。すなわち、官能基を結合したリガンド又はキレート剤の調製は周知である（それぞれ「二官能性リンカー」又は「二官能性キレート」）。結合させる官能基としては、アミン、チオシアネート、マレイミド及び活性エステル、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミド又はペンタフルオロフェノールが挙げられる。本発明のキレーター１はアミン官能性付与二官能性キレートの一例である。ＢＡＴキレーターコンジュゲートの調製に使用できるチオラクトン系二官能性キレートについては、Ｂａｉｄｏｏ他［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，５，１１４〜１１８（１９９４）］に記載されている。テクネチウム又はレニウムトリカルボニルコアの錯化に適した二官能性キレートは、Ｓｔｉｃｈｅｌｂｅｒｇｅｒ他［Ｖｅｒｓａｔｉｌｅ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  ｎｅｗ  ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｃｈｅｌａｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ  ｔａｉｌｏｒ  ｍａｄｅ  ｆｏｒ  ｌａｂｅｌｉｎｇ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｆａｃ−［Ｍ（ＣＯ）３］＋  ｃｏｒｅ（Ｍ＝Ｔｃ，９９ｍＴｃ，Ｒｅ）：ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｉｎ  ｖｉｔｒｏ，ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｂｅｈａｖｉｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｏｄｅｌ  ｃｏｍｐｌｅｘ［Ｍ（ＡＰＰＡ）（ＣＯ）３］（ａｐｐａ＝［（５−アミノペンチル）−２−イル−メチル−アミノ］−酢酸）；Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｏｌ．，３０，４６５〜４７０（２００３）］に記載されている。二官能性ＨＹＮＩＣリガンドは、Ｅｄｗａｒｄｓ他［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，８，１４６（１９９７）］に記載されている。かかる二官能性キレートは、所望のコンジュゲートを形成するためのマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤上の適当な官能基と反応させることができる。阻害剤上のかかる適当な官能基としては、以下のものが挙げられる。
カルボキシル類（アミン官能性付与二官能性キレーターとのアミド結合形成用）、
アミン類（カルボキシル又は活性エステル官能性付与２官能性キレーターとのアミド結合形成用）、
ハロゲン類、メシレート類及びトシレート類（アミン官能性付与二官能性キレーターのＮ−アルキル化用）、及び
チオール類（マレイミド官能性付与二官能性キレーターとの反応用）。
【００８９】
本発明のＭＭＰ阻害剤の放射標識は「前駆体」を用いて好適に実施できる。造影基が金属イオンを含む場合は、かかる前駆体は後記の第四の実施形態で説明する通り、好適にはＭＭＰ阻害剤とリガンドとの「コンジュゲート」を含む。造影基が非金属放射性同位体、すなわちγ線放出型放射性ハロゲン又は陽電子放出型放射性非金属を含む場合、かかる「前駆体」は好適には非放射性物質を含み、所望の非金属放射性同位体の好適な化学的形態との化学反応を最小限の段階数（理想的には単一段階）実施でき、多大な精製を必要性とせず（理想的にはそれ以上精製せず）に所望の放射能をもつ生成物を得ることができるように設計される。かかる前駆体は好適には良好な化学純度で得ることができ、適宜滅菌形態で供給される。
【００９０】
本発明のＭＭＰ阻害剤の放射標識のための「前駆体」（リガンドコンジュゲートを含む）は以下の通り製造できると考えられる。
【００９１】
−Ｎ（ＣＨ２）２ＯＨ又は−Ｎ（ＣＨ２）３ＯＨ誘導体の末端−ＯＨ基はトシル又はメシル基又はブロモ誘導体に転化し、次にこれを用いてアミノ官能性付与キレーターを結合すればよい。１８Ｆ標識ＰＥＴ造影剤を得るため、上記前駆体のトシレート、メシレート又はブロモ基を［１８Ｆ］フッ化物で置き換えてもよい。
【００９２】
放射性ヨウ素誘導体は対応するフェノール前駆体から調製することができる。アルキルブロミド誘導体は、アミン官能性を付与したキレーターのＮ−アルキル化に使用することができる。ヨウ化フェニル誘導体もまた、放射性ヨウ素化合物の有機金属前駆体、例えばトリアルキルスズ又はトリメチルシリル（ＴＭＳ）前駆体に転化することができる。ヨウ化フェニル誘導体は、また、１８Ｆフッ化物による放射性フッ素化のためのアリールヨードニウム前駆体に転化することもできる。
【００９３】
第一級アミン官能性を付与したＭＭＰ阻害剤は、酸無水物と反応してタイプ−Ｎ（ＣＯ）（ＣＨ２）３ＣＯ２ＨのＮ−官能性とした前駆体を生じさせることができ、それを次に二官能性アミンを含有するリガンドに結合させることができる。かかる第一級アミン置換ＭＭＰｉは、ブロモ誘導体をベンジルアミンでアルキル化した後、ベンジル保護基を木炭上のパラジウム触媒を使用する水素化のような標準的な条件下で除去することによって調製することができる。
【００９４】
アミン官能性を付与したＭＭＰｉは、カルボキシル又は活性エステル官能性付与２官能性キレーターと直接又はリンカーを介して結合することができる。かかる化合物は、また、１８Ｆ標識に適したアルキル化剤例えば１８Ｆ（ＣＨ２）２ＯＴｓ（Ｔｓはトシレート基）又は１８Ｆ（ＣＨ２）２ＯＭｓ（Ｍｓはメシレート基）と反応させてＮ（ＣＨ２）２１８Ｆ置換基を有する対応するＮ−官能性付与アミン誘導体を生じさせることができる。別法では、アミンを最初に塩化クロロアセチルと反応させて−Ｎ（ＣＯ）ＣＨ２ＣｌのＮ−誘導体化したアミドを生じさせ、続いてＨＳ（ＣＨ２）３１８Ｆ又はＨＯ（ＣＨ２）３１８Ｆと反応させてそれぞれ−Ｎ（ＣＯ）ＣＨ２Ｓ（ＣＨ２）３１８Ｆ及び−Ｎ（ＣＯ）ＣＨ２Ｏ（ＣＨ２）３１８Ｆを生じさせる。
【００９５】
本発明の放射性金属鎖体は、適当なｐＨで式ＩＩａのリガンドコンジュゲートに適当な酸化状態の放射性金属の溶液を反応させることにより調製することができる。溶液は好ましくは金属と弱く錯形成するリガンド（例えばグルコネート又はシトレート）を含み、すなわち放射性金属鎖体はリガンドの交換又はトランスキレート化により調製する。かかる条件は金属イオンの加水分解のような不都合な副反応を抑制するのに有用である。放射性金属イオンが９９ｍＴｃの場合は、通常の出発材料は９９Ｍｏ発生物質に由来のナトリウムペルテクネテートである。テクネチウムは比較的非反応性であるＴｃ（ＶＩＩ）酸化状態の９９ｍＴｃペルテクネテート中に存在する。そのため酸化状態の低いＴｃ（Ｉ）〜Ｔｃ（Ｖ）のテクネチウム鎖体の調製は通常は錯形成を促進するために、ナトリウムジチオナイト、ナトリウムビサルファイト、アスコルビン酸、ホルムアミジンスルフィン酸、スズイオン、Ｆｅ（ＩＩ）又はＣｕ（Ｉ）のような適当な薬学的に許容される還元剤の添加を必要とする。薬学的に許容される還元剤は好ましくはスズ塩、最も好ましくは塩化スズ、フッ化スズ又は酒石酸スズである。
【００９６】
造影基が過分極ＮＭＲ活性核種、例えば過分極１３Ｃ原子である場合、所望の過分極化合物は適当な１３Ｃ富化ヒドロキサム酸誘導体への過分極ガス（例えば１２９Ｘｅ又は３Ｈｅ）からの分極交換により調製することができる。
【００９７】
第二の態様では、本発明は哺乳類への投与に適した形態の生体適合性担体と共に上記造影剤を含む医薬組成物を提供する。「生体適合性担体」とは流体、特に液体であり、組成物が生理学的耐容性をもち、すなわち、毒性又は予定外の不快感を伴うことなく哺乳類生体内に投与できるように造影剤を懸濁又は溶解できるものである。生体適合性担体は適宜、注射用担体液体、例えば滅菌された発熱物質非含有の注射用水、水溶液、例えば生理食塩水（注射用の最終生成物が等張性又は非低張性であるように好都合に平衡されていてよい）、浸透圧調節物質（例えば生体適合性対イオンを有する血漿中カチオンの塩）、糖類（例えばグルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えばソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えばグリセロール）又は他の非イオン性ポリオール物質（例えばポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の１種以上の水溶液である。
【００９８】
第三の態様では、本発明は、哺乳類への投与に適した形態の生体適合性担体（上記で定義）と共に造影基が放射性である上記造影剤を含む医薬組成物を提供する。かかる放射性医薬組成物は無菌状態を維持しながら皮下注射用の針で１回又は複数回穿刺するのに適したシール（例えばクリンプドオンセプタムシール蓋）と共に提供される何れかの容器中で供給されるのが適している。かかる容器は単回又は多数回の患者用量を含有することができる。好ましい多用量の容器には、多数回の患者用量を含む単一の大型バイアル（例えば１０〜３０ｃｍ３容量）を含み、これにより単回分の患者用量を臨床用等級のシリンジ内に様々な時間間隔で臨床状況に適した製剤の有効期限内に取り出すことができる。充填済みシリンジはヒト用単回用量を含むように設計され、従って好ましくは使い捨て又は他の臨床用途に適したシリンジである。充填済みシリンジは適宜放射線量からオペレーターを保護するためにシリンジシールドと共に提供してよい。適当なかかる放射性医薬品用シリンジシールドは当該分野で知られており、好ましくは鉛又はタングステンを含む。
【００９９】
造影基が９９ｍＴｃを含む場合、画像診断用放射性医薬品に適した放射線の含量は生体内で造影される部位、取り込み及び標的のバックグラウンドに対する比に応じて、９９ｍＴｃの１８０〜１５００ＭＢｑの範囲である。
【０１００】
本発明の放射性医薬品は、以下の第五及び第六の実施形態に記載のキットにより調製することができる。別法では、放射性医薬品は、所望の滅菌製品を生じさせるために無菌製造条件下で調製することができる。放射性医薬品は、また、非無菌条件下で調製した後に、例えばγ線照射、高圧蒸気殺菌、乾式加熱又は化学的処理（例えばエチレンオキシドによる）を用いる最終的な殺菌を続けてもよい。好ましくは、本発明の放射性医薬品はキットから調製する。
【０１０１】
第四の態様では、本発明は式（Ｉ）のマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤とリガンドのコンジュゲートを提供する。リガンドコンジュゲートは放射性金属イオン又は常磁性金属イオンのいずれかで標識されたマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤の製造に適している。好ましくはリガンドコンジュゲートは上記で定義した式ＩＩｂを有する。最も好ましくはリガンドコンジュゲートのＭＭＰ阻害剤は上記で定義した式ＩＶを有する。本発明の第四の態様のコンジュゲートのリガンドは、好ましくはキレート剤である。好ましくはキレート剤は、ジアミンジオキシム、Ｎ２Ｓ２又はＮ３Ｓドナーセットを有する。
【０１０２】
第五の態様では、本発明は、造影基が、リガンドの式（Ｉ）のマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤とのコンジュゲートを含む放射性金属を含む上記の放射性医薬組成物を調製するための非放射性キットを提供する。放射性金属が９９ｍＴｃである場合はキットは生体適合性の還元剤を適切にはさらに含む。リガンドコンジュゲート、及び好ましい態様は、上の第四の態様に記載されている。
【０１０３】
かかるキットは例えば血流中への直接の注射によるヒトへの投与に適した滅菌された放射性医薬品を生じるように設計される。９９ｍＴｃについてはキットは、好ましくは凍結乾燥され、９９ｍＴｃ放射性同位体発生物質由来の滅菌９９ｍＴｃ−ペルテクネテート（ＴｃＯ４−）と共に希釈再調製することによりそれ以上操作せずにヒトへの投与に適した溶液を与えるように設計されている。適当なキットは、無菌状態及び／又は放射能安全性と、さらに適宜不活性ヘッドスペースガス（例えば窒素又はアルゴン）を維持することを可能とし、一方シリンジによる溶液の追加及び引き出しを可能にする密封容器を含む。好ましいかかる容器は、気密クロージャがオーバーシール（一般的にはアルミニウム製）と共に圧着されているセプタム密封バイアルである。かかる容器はクロージャが、必要に応じて、例えばヘッドスペースのガスを交換するか又は溶液からガスを抜くときに真空に耐えることができるという追加の利点を有する。キットは、ナトリウムジチオナイト、ナトリウムビサルファイト、アスコルビン酸、ホルムアミジンスルフィン酸、スズイオン、Ｆｅ（ＩＩ）又はＣｕ（Ｉ）のような生体適合性の還元剤と共に遊離の塩基塩又は酸塩のいずれかの形態のリガンド又はキレーターコンジュゲートを含む。生体適合性還元剤は好ましくはスズ塩、例えば塩化スズ又は酒石酸スズなどである。別法ではキットは、放射性金属を添加すると金属交換反応（すなわち、金属の転換）で所望の生成物を生じる金属錯体を適宜含有していてもよい。
【０１０４】
非放射性キットは適宜さらにトランスキレート剤、放射能保護剤、抗微生物保存料、ｐＨ調節剤又は充填剤のような別の成分を含んでいてもよい。「トランスキレート剤」とは急速に反応してテクネチウムと弱い鎖体を形成し、次いでリガンドにより置き換えられる化合物である。これによりテクネチウム錯体形成と競合するペルテクネテートの急速な還元による還元加水分解テクネチウム（ＲＨＴ）の形成の危険性が最小限となる。適当なかかるトランスキレート剤は、弱い有機酸、すなわち３〜７のｐＫａを有する有機酸と、生体適合性のカチオンの塩である。適当なかかる弱い有機酸は、酢酸、クエン酸、酒石酸、グルコン酸、グルコヘプトン酸、安息香酸、フェノール又はホスホン酸である。従って適当な塩は、酢酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、グルコン酸塩、グルコヘプトン酸塩、安息香酸塩、フェノレート又はホスホン酸塩である。好ましいかかる塩は酒石酸塩、グルコン酸塩、グルコヘプトン酸塩、安息香酸塩又はホスホン酸塩であり、最も好ましくはホスホン酸塩であり、特にジホスホン酸塩である。好ましいかかるトランスキレート剤はＭＤＰ、すなわちメチレンジホスホン酸の生体適合性カチオンとの塩である。「生体適合性カチオン」という用語は、イオン化した負帯電アニオンと塩を形成する正帯電した対イオンを意味し、正帯電した対イオンは、また、無毒性であり、従って哺乳類生体、特に人体に投与するのに適している。適当な生体適合性カチオンの例としては、アルカリ金属のナトリウム又はカリウム、アルカリ土類金属のカルシウム及びマグネシウム、並びにアンモニウムイオンが挙げられる。
【０１０５】
「放射能保護剤」という用語は水の放射線分解で生じる酸素含有フリーラジカルのような高度な反応性を有するフリーラジカルを捕獲することにより酸化還元過程のような分解反応を抑制する化合物を意味する。本発明の放射能保護剤はアスコルビン酸、ｐ−アミノ安息香酸（すなわち４−アミノ安息香酸）、ゲンチシン酸（すなわち２，５−ジヒドロキシ安息香酸）及び上記生体適合性カチオンとのこれらの塩から適宜選択される。
【０１０６】
「抗微生物保存料」という用語は、細菌、酵母又はカビのような潜在的に有害な微生物の生育を抑制する薬剤を意味する。抗微生物保存料はまた用量に応じてある程度の殺菌作用も有する。本発明の抗微生物保存料の主な役割は、希釈再調製後の放射性医薬組成物中、すなわち放射性診断用品自身中の何れかのかかる微生物の生育を抑制することである。しかし、抗微生物保存料は、また、適宜希釈再調製前の本発明の非放射性キットの成分１種以上中の潜在的に有害な微生物の生育の抑制に使用し得る。適当な抗微生物保存料としては、パラベン類、すなわちメチル、エチル、プロピル又はブチルパラベン又はこれらの混合物、ベンジルアルコール、フェノール、クレゾール、セトリミド及びチオメルサールが挙げられる。好ましい抗微生物保存料はパラベン類である。
【０１０７】
「ｐＨ調節剤」という用語は、希釈再調製キットのｐＨがヒト又は哺乳類への投与のための許容限度（約ｐＨ４．０〜１０．５）内とするために有用な化合物又は化合物の混合物を意味する。かかるｐＨ調節剤として適当なものとしては、薬学的に許容される緩衝物質、例えばトリシン、ホスフェート又はＴＲＩＳ［すなわちトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン］及び薬学的に許容される塩基、例えば炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム又はこれらの混合物が挙げられる。コンジュゲートが酸の塩の形態で用いられる場合は、ｐＨ調節剤は適宜、キットのユーザーが多段階手順の一部としてｐＨを調節できるように個別のバイアル又は容器内に入れて提供することができる。
【０１０８】
「充填剤」という用語は、製造及び凍結乾燥の間の材料の取り扱いを容易にする薬学的に許容される増量剤を意味する。適当な充填剤としては、塩化ナトリウムのような無機塩及び水溶性糖類又は糖アルコール、例えばスクロース、マルトース、マンニトール又はトレハロースが挙げられる。
【０１０９】
第六の態様では、本発明は造影基が非金属放射性同位体、すなわちγ線放出型放射性ハロゲン又は陽電子放出型放射性非金属を含む放射性医薬組成物の製造用キットを提供する。かかるキットは、滅菌放射性同位体源との反応により最小数の操作で所望の放射性薬品が得られるように、好ましくは無菌非発熱物質の形態で、以下で記述する「前駆体」を含む。かかる考え方は、放射性同位体が比較的短い半減期を有する放射性医薬品に関して、取り扱いの容易さとこれによる放射線薬剤師に対する低減された放射線量の観点から、特に重要である。従って、かかるキットの希釈再調製のための反応媒体は好ましくは水性であり、哺乳類への投与に適した形態である。前駆体は、上の第四の実施形態について記した密封容器に入れて好ましくは供給する。
【０１１０】
「前駆体」は、所望の非金属放射性同位体の好適な化学的形態をした化学反応が所望の放射能をもつ生成物を生じさせるために最少の段階数（理想的には単一の段階）と大した精製を必要とせず（理想的にはそれ以上精製せず）に実施することができるように設計された滅菌非発熱性形態をしたマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤の非放射性誘導体を適切には含む。かかる前駆体は、良好な化学的純度で都合よく得ることができる。適当な前駆体は、ＢｏｌｔｏｎのＪ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４５，４８５−５２８（２００２）に記載されている例からくるものである。
【０１１１】
この実施形態の好ましい前駆体は、求電子又は求核ハロゲン化のいずれかを受け、アルキルハライド、フルオロアルキルハライド、トシレート、トリフレート（すなわち、トリフルオロメタンスルホネート）又はメシレートから選択されるアルキル化剤で容易にアルキル化され、或いはチオール部分をアルキル化してチオエーテル連鎖を形成する誘導体を含む。第一のカテゴリーの例は、以下の（ａ）〜（ｃ）である。
（ａ）トリアルキルスタンナン（例えば、トリメチルスタンニル又はトリブチルスタンニル）又はトリアルキルシラン（トリメチルシリル）などの有機金属誘導体、
（ｂ）ハロゲン交換のための非放射性ヨウ化アルキル又は臭化アルキル及び求核ハロゲン化のためのアルキルトシレート、メシレート又はトリフレート、
（ｃ）求電子ハロゲン化に向けて活性化された芳香環（例えばフェノール）及び求核ハロゲン化に向けて活性化された芳香環（例えばアリールヨードニウム、アリールジアゾニウム、ニトロアリール）。
【０１１２】
容易にアルキル化を受ける好ましい誘導体は、アルコール、フェノール又はアミン基、特にフェノール類及び立体的に込み入っていない第一級又は第二級アミンである。
【０１１３】
チオール含有放射性同位体反応物をアルキル化する好ましい誘導体は、Ｎ−ハロアセチル基、特にＮ−クロロアセチル及びＮ−ブロモアセチル誘導体である。
【０１１４】
前駆体は、無菌製造条件下で使用して所望の滅菌非発熱性物質を生じさせることができる。前駆体は、また、非無菌条件下で調製した後に、例えばγ線照射、高圧蒸気殺菌、乾式加熱又は化学的処理（例えばエチレンオキシドによる）を用いる最終的な殺菌を続けてもよい。好ましくは、前駆体は、滅菌非発熱性の形態で使用する。
【０１１５】
式ＩにおけるＸ３がＨである場合、式ＩのＭＭＰｉに対する適当な前駆体はそれ故Ｘ３がヒドロキサム酸部分に対する保護基（ＰＧ）である誘導体を含む。「保護基」という用語は、望ましくない化学反応を抑制又は抑圧するが、十分に反応性であるように設計されており、その結果、分子の他の部分を変えない十分にマイルドな条件下で問題になっている官能基からそれが開裂することができる基を意味する。脱保護した後、所望の生成物が得られる。保護基は当業者にはよく知られており、アミン基に対しては、Ｂｏｃ（Ｂｏｃは、ｔ−ブチルオキシカルボニルである）、Ｆｍｏｃ（Ｆｍｏｃは、フルオレニルメトキシカルボニルである）、トリフルオロアセチル、アリルオキシカルボニル、Ｄｄｅ［すなわち、１−４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル］又はＮｐｙｓ（すなわち、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル）、及びカルボキシル基に対しては、メチルエステル、ｔ−ブチルエステル又はベンジルエステルから適切に選択される。ヒドロキシル基に対しては、適当な保護基は、ベンジル、アセチル、ベンゾイル、トリチル（Ｔｒｔ）又はトリアルキルシリル例えばテトラブチルジメチルシリルである。チオール基に対しては、適当な保護基は、トリチル及び４−メトキシベンジルである。ヒドロキサム酸部分のヒドロキシル基に対する好ましい保護基は、ベンジル又はトリアルキルシリルである。その他の保護基の使用については、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｔｈｅｏｒｏｄｏｒａ  Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ及びＰｅｔｅｒ  Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９１）に記載されている。
【０１１６】
望ましい非金属放射性同位体の好ましい好適な化学形態としては、以下のものが挙げられる。
（ａ）ハロゲン化物イオン（例えば、１２３Ｉヨウ化物又は１８Ｆフッ化物）で特に置換反応のために水性媒体中のもの、
（ｂ）良好な脱離基例えばブロミド、メシレート又はトシレートを有する１１Ｃヨウ化メチル又は１８Ｆフルオロアルキレン化合物、
（ｃ）アルキル化前駆体例えばＮ−クロロアセチル又はＮ−ブロモアセチル誘導体などとのＳ−アルキル化反応のためのＨＳ（ＣＨ２）３１８Ｆ。
【０１１７】
適当な上記「前駆体」の例、及びそれらの調製方法は、第一の実施形態（上記）で記載されている。
【０１１８】
キットの「前駆体」は、固体支持体マトリックスに共有結合した状態で好ましくは供給される。こうすることにより、所望の放射性医薬品が溶液中に形成され、一方、出発材料及び不純物は固相に結合したままとなる。１８Ｆ−フッ化物を用いた固相求電子フッ素化のための前駆体は、国際公開第０３／００２４８９に記載されている。１８Ｆ−フッ化物による固相求核フッ素化のための前駆体は国際公開第０３／００２１５７号に記載されている。キットは適切に適合された自動化合成装置に装填することができるカートリッジを備えていてもよい。カートリッジは、固体支持体結合前駆体とは別に、望ましくないフッ化物イオンを除去するためのカラム、及び、反応混合物を蒸発させ生成物が所望通りに製剤化されるようにするために連結された適当な容器を備えていてもよい。合成に必要な試薬及び溶媒及び他の消耗品もまた、放射性物質の濃度、容量、デリバリー時間などに関する顧客の要望に合致するような方法で合成装置が操作できるようにするソフトウエアの入ったコンパクトディスクと共に組み込むことができる。好適には、キットのすべての要素を使い捨てとすることにより、試験相互間の混入の可能性を最小限にし、無菌であり、品質保証される。
【０１１９】
第八の態様では、本発明はアテローム性動脈硬化症、特に不安定な脆弱性のプラークの画像診断のための上記のマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤造影剤の使用を開示する。
【０１２０】
その他の態様では、本発明は他の炎症性疾患、癌又は変性疾患の画像診断のための上記のマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤造影剤の使用を開示する。
【０１２１】
その他の態様では、本発明はプロキシミティ検出を用いたアテローム性動脈硬化症、特に不安定な脆弱性のプラークの血管内検出のための上記のマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤造影剤の使用を開示する。かかるプロキシミティ検出は、カテーテルのような血管内装置を用いるか、又は、手持ち式の検出器（例えばγ線検出器）を用いて術中に成し遂げることができる。かかる血管内検出は、造影基がインビボ光学イメージング又はβ放射体に適したレポーター基である場合には、かかる部分は哺乳類生体外では容易に検出されないが、プロキシミティ検出には適していることから特に有用である。
【実施例】
【０１２２】
本発明を以下に詳述する非限定的な実施例により説明する。実施例１は化合物１，１，１−トリス（２−アミノエチル）メタンの合成について説明する。実施例２は潜在的に有害なアジド中間体の使用を回避する１，１，１−トリス（２−アミノエチル）メタンの別の合成法を提供する。実施例３はクロロニトロソアルカン前駆体の合成について説明する。実施例４は本発明の好ましいアミン置換二官能性ジアミンジオキシムの合成について説明する（キレーター１）。
【０１２３】
実施例５は、本発明のＭＭＰｉ、化合物２７の合成法を提供する。実施例６は、放射性ハロゲン化に適するフェノール置換ＭＭＰｉ（化合物２３）の合成法を提供する。実施例７は、放射性ハロゲン化に適するヨードアニリン前駆体（化合物２６）の合成法について説明する。実施例９は、本発明のＭＭＰｉのキレーターコンジュゲートの合成方法を提供する。実施例１０は、ＰＥＧリンカー基で官能性を付与したＭＭＰｉの合成法を提供する。実施例１１は、ＰＥＧリンカー基を有するキレーターコンジュゲートの合成法について説明する。実施例１２は、ＰＥＴ放射標識に適するクロロアセチル前駆体の合成法を提供する。実施例１３は、チオエーテル連鎖のフルオロアルキルＭＭＰｉ誘導体の合成法を提供する。実施例１４は、生物学的特性の修正を可能にするアミノ酸及び／又はＰＥＧ連鎖ＭＭＰｉの範囲を提供する。
【０１２４】
実施例１５及び１６は、１８ＦＭＭＰｉ放射標識のために適当な１８Ｆ標識化合物の合成法を提供する。実施例１７は、化合物４５乃至４８の合成法を提供する。実施例１８は、本発明のＭＭＰｉの誘導体がＭＭＰ阻害剤としての生物学的活性を保持することを示すインビトロアッセイについて説明する。実施例１９は、キレーターコンジュゲートについての一般的な９９ｍＴｃ放射標識方法を提供する。実施例２０は、本発明の適当な前駆体に対する放射ヨウ素標識の手順を提供する。実施例２１は、本発明の特定の１８Ｆ誘導体の製剤を提供する。実施例２２は、本発明の放射ヨウ素標識誘導体がインビボイメージング剤として機能する適切な血漿安定性を示す証拠を提供する。実施例２３は、生体内腫瘍モデルにおける本発明の放射ヨウ素標識造影剤の取り込みについて説明する。これは本発明のリンカー基を使用して体内分布を修正することができることを示す。化合物２０Ａ（すなわち、ＰＥＧ３スペーサーを有する化合物２４Ａ）は、類似の血中の滞留を示したが、化合物２４と比較して尿中排泄で１０％の増加及びＨＢＳでは対応する１０％の減少を示した。そのため、生体調節物質の添加の結果薬物動態における変化がもたらされた。腫瘍中への取り込みは、化合物２４Ａの場合に見られたものよりわずかに低いが保持率はわずかに増大した。化合物３２Ａは、時間と共に消える高い初期血中保持率を示した。良好な腫瘍中への取り込み及び保持率が、注射後最大で１時間まで見られた。高い尿中排泄及び低い消化管（ＧＩ）排泄が見られた。阻害有効性を失わないこれら化合物による生体調節の薬効を実証するこれらの薬物動態は、より好ましく、生体調節物質（すなわち化合物２４Ａ）のない化合物のものとは著しく異なる。
【０１２５】
実施例２４は、生体内腫瘍モデルにおける本発明の１８Ｆ標識造影剤の取り込みについて説明する。実施例２５は、アテローム性動脈硬化症の生体内モデルにおける本発明の造影剤の取り込みについて説明する。実施例２６は、本発明の薬剤が生体内のアテローム性動脈硬化部位で取り込まれるオートラジオグラフィーの証拠を提供する。実施例２７は、腫瘍モデルにおける腫瘍造影について説明する。
【０１２６】
実施例１
１，１，１−トリス（２−アミノエチル）メタンの合成
（段階ａ）：３−（メトキシカルボニルメチレン）グルタル酸ジメチルエステル
トルエン（６００ｍｌ）中のカルボメトキシメチレントリフェニルホスホラン（１６７ｇ、０．５モル）をジメチル３−オキソグルタレート（８７ｇ、０．５モル）で処理し、反応混合物を３６時間窒素雰囲気下で１２０℃で油浴上に加熱した。次に反応混合物を真空下で濃縮し、油状の残留物を４０／６０石油エーテル／ジエチルエーテル１：１、６００ｍｌで粉状にした。トリフェニルホスフィン酸化物を沈殿させ、上清をデカントし、濾去した。真空下で蒸発させた残留物を高真空Ｂｐｔ（０．２トルでオーブン温度１８０〜２００℃）下にクーゲルロール蒸留し、３−（メトキシカルボニルメチレン）グルタル酸ジメチルエステル（８９．０８ｇ、５３％）を得た。
【０１２７】
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３）：δ３．３１（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２）、３．７（９Ｈ，ｓ，３×ＯＣＨ３）、３．８７（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２）、５．７９（１Ｈ，ｓ，＝ＣＨ，）ｐｐｍ。
【０１２８】
ＮＭＲ  １３Ｃ（ＣＤＣｌ３）、δ３６．５６、ＣＨ３、４８．７、２×ＣＨ３、５２．０９及び５２．５（２×ＣＨ２）；１２２．３及び１４６．１６  Ｃ＝ＣＨ；１６５．９、１７０．０及び１７０．５  ３×ＣＯＯ  ｐｐｍ。
【０１２９】
（段階ｂ）：３−（メトキシカルボニルメチレン）グルタル酸ジメチルエステルの水素化
メタノール（２００ｍｌ）中の３−（メトキシカルボニルメチレン）グルタル酸ジメチルエステル（８９ｇ、２６７ミリモル）を（３０時間）にわたって水素ガス（３．５バール）雰囲気下で（１０％Ｐｄ／Ｃ：５０％水）（９ｇ）と共に振盪した。溶液をケイソウ土を通して濾過し、真空下に濃縮して、油状物として３−（メトキシカルボニルメチル）グルタル酸ジメチルエステルを得た、収量（８４．９ｇ、９４％）。
【０１３０】
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３）、δ２．４８（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，３×ＣＨ２）、２．７８（１Ｈ，六重線，Ｊ＝８Ｈｚ  ＣＨ，）３．７（９Ｈ，ｓ，３×ＣＨ３）。
【０１３１】
ＮＭＲ  １３Ｃ（ＣＤＣｌ３）、δ２８．６、ＣＨ；３７．５０、３×ＣＨ３；５１．６、３×ＣＨ２；１７２．２８、３×ＣＯＯ。
【０１３２】
（段階ｃ）トリメチルエステルからトリアセテートへの還元及びエステル化
３つ口２Ｌ丸底フラスコ中に窒素雰囲気下で、テトラヒドロフラン（４００ｍｌ）中の水素化リチウムアルミニウム（２０ｇ、５８８ミリモル）をテトラヒドロフラン（２００ｍｌ）中のトリス（メトキシカルボニルメチル）メタン（４０ｇ、２１２ミリモル）で１時間慎重に処理した。激しい発熱反応が発生し、溶媒が激しく還流した。反応混合物を３日間還流下に９０℃で油浴上で加熱した。反応混合物を水素の放出が終了するまで酢酸（１００ｍｌ）を慎重に滴加して失活させた。攪拌した反応混合物を穏やかな還流が生じる程度の速度で、無水酢酸溶液（５００ｍｌ）で慎重に処理した。フラスコに蒸留装置を付け、次に９０℃（油浴温度）で加熱し、テトラヒドロフランを留去した。無水酢酸（３００ｍｌ）をさらに添加し、反応混合物を還流配置に戻し、１４０℃の油浴中で５時間攪拌し、加熱した。反応混合物を放冷し、濾過した。酸化アルミニウム沈殿物を酢酸エチルで洗浄し、合わせた濾液を真空（５ｍｍＨｇ）下に５０℃のウォーターバス温度でロータリーエバポレーター上で濃縮し、油状物を得た。油状物を酢酸エチル（５００ｍｌ）に溶解し、飽和炭酸カリウム溶液で洗浄した。酢酸エチル溶液を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下で濃縮して油状物を得た。油状物を高真空下でクーゲルロール蒸留し、油状物としてトリス（２−アセトキシエチル）メタン（４５．３ｇ、９６％）を得た。沸点０．１ｍｍＨｇで２２０℃。
【０１３３】
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３）、δ１．６６（７Ｈ，ｍ，３×ＣＨ２，ＣＨ）、２．０８（１Ｈ，ｓ，３×ＣＨ３）；４．１（６Ｈ，ｔ，３×ＣＨ２Ｏ）。ＮＭＲ  １３Ｃ（ＣＤＣｌ３）、δ２０．９、ＣＨ３；２９．３４、ＣＨ；３２．１７、ＣＨ２；６２．１５、ＣＨ２Ｏ；１７１、ＣＯ。
【０１３４】
（段階ｄ）：トリアセテートからのアセテート基の除去
メタノール（２００ｍｌ）中のトリス（２−アセトキシエチル）メタン（４５．３ｇ、１６５ｍＭ）及び８８０アンモニア（１００ｍｌ）を２日間油浴中８０℃で加熱した。反応混合物を８８０アンモニア（５０ｍｌ）でさらに処理し、２４時間油浴中８０℃で加熱した。８８０アンモニア（５０ｍｌ）をさらに添加し、反応混合物を２４時間８０℃で加熱した。次に反応混合物を真空下で濃縮し、全溶媒を除去し、油状物を得た。これを８８０アンモニア（１５０ｍｌ）に溶解し、２４時間８０℃で加熱した。次に反応混合物を真空下で濃縮し、全溶媒を除去し、油状物を得た。クーゲルロール蒸留してアセトアミド沸点１７０〜１８０  ０．２ｍｍを得た。アセトアミドを含有するバルブをきれいに洗浄し、蒸留を続行した。トリス（２−ヒドロキシエチル）メタン（２２．５３ｇ、９２％）を沸点２２０℃  ０．２ｍｍで蒸留した。
【０１３５】
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３）、δ１．４５（６Ｈ，ｑ，３×ＣＨ２）、２．２（１Ｈ，五重線，ＣＨ）；３．７（６Ｈ，ｔ  ３×ＣＨ２ＯＨ）；５．５（３Ｈ，ｂｒｓ，３×ＯＨ）。
【０１３６】
ＮＭＲ  １３Ｃ（ＣＤＣｌ３）、δ２２．１３、ＣＨ；３３．９５、３×ＣＨ２；５７．８、３×ＣＨ２ＯＨ。
【０１３７】
（段階ｅ）：トリオールのトリス（メタンスルホネート）への転化
ジクロロメタン（５０ｍｌ）中のトリス（２−ヒドロキシエチル）メタン（１０ｇ、０．０６７６モル）の攪拌氷冷溶液にジクロロメタン（５０ｍｌ）中の塩化メタンスルホニル（４０ｇ、０．３４９モル）の溶液を温度が１５℃を超えないような速度で窒素下でゆっくり滴下した。次にジクロロメタン（５０ｍｌ）に溶解したピリジン（２１．４ｇ、０．２７ミリモル、４当量）を発熱反応で温度が１５℃を超えないような速度で滴下して加えた。反応混合物を２４時間室温で攪拌し続け、次に５Ｎ塩酸溶液（８０ｍｌ）で処理し、層分離した。水層をジクロロメタン（５０ｍｌ）でさらに抽出し有機抽出物を合わせ、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮して過剰の塩化メタンスルホニルを含有するトリス［２−（メチルスルホニルオキシ）エチル］メタンを得た。理論上の収量は２５．８ｇであった。
【０１３８】
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３）、δ４．３（６Ｈ，ｔ，２×ＣＨ２）、３．０（９Ｈ，ｓ，３×ＣＨ３）、２（１Ｈ，六重線，ＣＨ）、１．８５（６Ｈ，ｑ，３×ＣＨ２）。
【０１３９】
（段階ｆ）：１，１，１−トリス（２−アジドエチル）メタンの調製
乾燥ＤＭＦ（２５０ｍｌ）中のトリス［２−（メチルスルホニルオキシ）エチル］メタン［段階１（ｅ）から、過剰の塩化メチルスルホニルに汚染されている］（２５．８ｇ、６７ミリモル、理論上）の窒素下での攪拌溶液を、アジ化ナトリウム（３０．７ｇ、０．４７モル）で１５分かけて少しずつ処理した。発熱が観察され、反応混合物を氷浴上で冷却した。３０分後、反応混合物を２４時間５０℃で油浴上で加熱した。反応混合物は茶色になった。反応混合物を放冷し、希炭酸カリウム溶液（２００ｍｌ）で処理し、４０／６０石油エーテル／ジエチルエーテル１０：１（３×１５０ｍｌ）で３回抽出した。有機抽出物を水（２×１５０ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過した。石油／エーテル溶液にエタノール（２００ｍｌ）を添加してトリアゾールを溶液中に保持し、真空下で容量を、２００ｍｌを下回らないように減量した。エタノール（２００ｍｌ）を添加し、真空下に再濃縮し、エタノール溶液が２００ｍｌを下回らないように石油の痕跡を除去した。トリアゾールのエタノール溶液を段階１（ｇ）に直接使用した。
【０１４０】
注意：アジドは潜在的に爆発性があるので、全溶媒を除去してはいけないし、常に希溶液を保持すべきである。
【０１４１】
溶液０．２ｍｌ未満を真空下に蒸発させてエタノールを除去し、この少量の試料でＮＭＲを実施した。
【０１４２】
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３）、δ３．３５（６Ｈ，ｔ，３×ＣＨ２）、１．８（１Ｈ，七重線，ＣＨ，）、１．６（６Ｈ，ｑ，３×ＣＨ２）。
【０１４３】
（段階ｇ）：１，１，１−トリス（２−アミノエチル）メタンの調製
エタノール（２００ｍｌ）中のトリス（２−アジドエチル）メタン（１５．０６ｇ、０．０６７６モル）（前反応から１００％の収率と仮定）を１０％Ｐｄ／Ｃ（２ｇ、５０％水）で処理し、１２時間水素化した。反応容器を２時間毎に排気し、反応混合物から出てくる窒素を除去し、水素で補充した。ＮＭＲ分析のために試料を取り、トリアジドのトリアミンへの完全な転化を確認した。
【０１４４】
警告：還元しないアジドは蒸留で爆発することがある。反応混合物を、セライトパッドを通して濾過し、触媒を除去し、真空下で濃縮して油状物としてトリス（２−アミノエチル）メタンを得た。これを０．４ｍｍ／Ｈｇで沸点１８０〜２００℃のクーゲルロール蒸留によりさらに精製し無色の油状物（８．１ｇ、トリオールからの全収率８２．７％）を得た。
【０１４５】
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３）、２．７２（６Ｈ，ｔ，３×ＣＨ２Ｎ）、１．４１（Ｈ，七重線，ＣＨ）、１．３９（６Ｈ，ｑ，３×ＣＨ２）。
【０１４６】
ＮＭＲ  １３Ｃ（ＣＤＣｌ３）、δ３９．８（ＣＨ２ＮＨ２）、３８．２（ＣＨ２．）、３１．０（ＣＨ）。
【０１４７】
実施例２
１，１，１−トリス（２−アミノエチル）メタンの別の調製法
（段階ａ）：トリメチルエステルのｐ−メトキシ−ベンジルアミンによるアミド化
トリス（メチルオキシカルボニルメチル）メタン［２ｇ、８．４ミリモル、上記段階１（ｂ）の通り調製］をｐ−メトキシ−ベンジルアミン（２５ｇ、１７８．６ミリモル）に溶解した。蒸留のために装置を設置し、窒素気流下で、２４時間１２０℃で加熱した。反応の進行を収集されるメタノールの量でモニターした。反応混合物を室温まで冷却し、酢酸エチル３０ｍｌを添加し、次に沈殿したトリアミド生成物を３０分間攪拌した。トリアミドを濾過により単離し、フィルターケーキを十分な量の酢酸エチルで数回洗浄し、過剰のｐ−メトキシ−ベンジルアミンを除去した。乾燥後、白色粉末４．６ｇ、１００％を得た。高度に不溶性の生成物をさらに精製又は特性化することなく直接次の段階で使用した。
【０１４８】
（段階ｂ）：１，１，１−トリス［２−（ｐ−メトキシベンジルアミノ）エチル］メタンの調製
氷水浴中で冷却した１０００ｍｌ３つ口丸底フラスコで、段階２（ａ）からのトリアミド（１０ｇ、１７．８９ミリモル）を注意深く加え、２５０ｍｌの１Ｍボラン溶液、ボラン（３．５ｇ、２４４．３ミリモル）とする。添加完了後、氷水浴を除去し、反応混合物をゆっくり６０℃に加熱する。反応混合物を２０時間６０℃で攪拌する。反応混合物の試料（１ｍｌ）を引き出し、０．５ｍｌの５ＮのＨＣｌと混合し、３０分間放置した。試料に０．５ｍｌの５０ＮａＯＨ、次いで水２ｍｌを加え、白色沈殿がすべて溶解するまで溶液を攪拌した。溶液をエーテル（５ｍｌ）で抽出し、蒸発させた。残留物を１ｍｇ／ｍｌの濃度でアセトニトリルに溶解し、ＭＳにより分析した。ＭＳスペクトルでモノ−及びジアミド（Ｍ＋Ｈ／ｚ＝５２０及び５３４）が観察された場合は、反応は完了していない。反応を完結させるため、さらに１００ｍｌの１ＭボランＴＨＦ溶液を加え、反応混合物を６０℃でさらに６時間攪拌し、前の試料採取手順に従って新しい試料を引き出す。トリアミンへの完全な転化が完了するまで、必要に応じて１ＭのボランＴＨＦ溶液をさらに添加し続ける。
【０１４９】
反応混合物を室温まで冷却し、５ＮのＨＣｌをゆっくり添加する［注意：激しい泡沫形成が発生する！］。ガス放出が観察されなくなるまでＨＣｌを添加した。混合物を３０分間攪拌し、次に蒸発させた。ケーキをＮａＯＨ水溶液（２０〜４０％、１：２ｗ／ｖ）中に懸濁させ、３０分間攪拌した。次に混合物を水で（３倍に）希釈した。次に混合物をジエチルエーテル（２×１５０ｍｌ）で抽出した［注意：ハロゲン化溶媒を使用してはいけない］。次に合わせた有機層を水（１×２００ｍｌ）、塩水（１５０ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥した。蒸発後の収量：油状物として７．６ｇ、８４％。
【０１５０】
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３）、δ：１．４５、（６Ｈ，ｍ，３×ＣＨ２；１．５４、（１Ｈ，七重線，ＣＨ）；２．６０（６Ｈ，ｔ，３×ＣＨ２Ｎ）；３．６８（６Ｈ，ｓ，ＡｒＣＨ２）；３．７８（９Ｈ，ｓ，３×ＣＨ３Ｏ）；６．９４（６Ｈ，ｄ，６×Ａｒ）。７．２０（６Ｈ，ｄ，６×Ａｒ）。
【０１５１】
ＮＭＲ  １３Ｃ（ＣＤＣｌ３）、δ：３２．１７、ＣＨ；３４．４４、ＣＨ２；４７．００、ＣＨ２；５３．５６、ＡｒＣＨ２；５５．２５、ＣＨ３Ｏ；１１３．７８、Ａｒ；１２９．２９、Ａｒ；１３２．６１；Ａｒ；１５８．６０、Ａｒ；
（段階ｃ）：１，１，１−トリス（２−アミノエチル）メタンの調製
１，１，１−トリス［２−（ｐ−メトキシベンジルアミノ）エチル］メタン（２０．０グラム、０．０３６モル）をメタノール（１００ｍｌ）に溶解し、Ｐｄ（ＯＨ）２（５．０グラム）を添加した。混合物を水素化し（３バール、１００℃、オートクレーブ中）、５時間攪拌した。Ｐｄ（ＯＨ）２をさらに２回に分けて（２×５グラム）それぞれ１０及び１５時間後に加えた。反応混合物を濾過し、濾液をメタノールで洗浄した。合わせた有機層を蒸発させ、残留物を真空（１×１０−２、１１０℃）下で蒸留し、前述の実施例１と同様に１，１，１−トリス（２−アミノエチル）メタン２．６０グラム（５０％）を得た。
【０１５２】
実施例３
３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタンの調製
２−メチルブタ−２−エン（１４７ｍｌ、１．４モル）及び亜硝酸イソアミル（１５６ｍｌ、１．１６モル）の混合物を、ドライアイス及びメタノールのバス中で−３０℃に冷却し、オーバヘッドエア攪拌器で激しく攪拌し、温度を−２０℃より下に維持するような速度で、濃塩酸（１４０ｍｌ、１．６８モル）を滴下して処理した。かなりの発熱があり、過熱を防ぐために注意を払う必要があるのでこれに１時間を要した。エタノール（１００ｍｌ）を添加し、添加の終わりに形成されたスラリーの粘度を低下させ、反応混合物をさらに２時間−２０〜−１０℃で攪拌し、反応を完了させた。沈殿物を真空下で濾過して回収し、４×３０ｍｌの冷（−２０℃）エタノール及び１００ｍｌの氷冷水で洗浄し、真空乾燥し、白色固体としての３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタンを得た。エタノール濾液及び洗浄液をあわせ、水（２００ｍｌ）で希釈し、冷却し、−１０℃で１時間放置したところ、３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタンがさらに晶出した。沈殿物を濾過して回収し、少量の水で洗浄し、真空下で乾燥し、ＮＭＲによる純度＞９８％の３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタンの総収量（１１５ｇ  ０．８５モル、７３％）を得た。
【０１５３】
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３）、異性体の混合物として（異性体１，９０％）１．５  ｄ、（２Ｈ，ＣＨ３）、１．６５  ｄ、（４Ｈ，２×ＣＨ３）、５．８５、ｑ、及び５．９５、ｑ、合計１Ｈ。（異性体２，１０％）、１．７６ｓ、（６Ｈ，２×ＣＨ３）、２．０７（３Ｈ，ＣＨ３）。
【０１５４】
実施例４
ビス［Ｎ−（１，１−ジメチル−２−Ｎ−ヒドロキシイミンプロピル）２−アミノエチル］−（２−アミノエチル）メタン（キレーター１）
乾燥エタノール（３０ｍｌ）中のトリス（２−アミノエチル）メタン（４．０４７ｇ、２７．９ミリモル）の溶液に、無水炭酸カリウム（７．７ｇ、５５．８ミリモル、２当量）を窒素雰囲気下で激しく攪拌しながら室温で添加した。３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタン（７．５６ｇ、５５．８ミリモル、２当量）の溶液を乾燥エタノール（１００ｍｌ）に溶解し、この溶液７５ｍｌを反応混合物にゆっくり滴下した。次いで反応混合物をシリカに基づくＴＬＣ［プレートをジクロロメタン、メタノール、濃（０．８８ｓｇ）アンモニア、１００／３０／５で処理し、ニンヒドリンを噴霧し加熱することによりＴＬＣプレートを展開］に付した。モノ−、ジ−及びトリ−アルキル化生成物がその順序でのＲＦの増加を伴って観察された。３％アンモニア水中の７．５〜７５％アセトニトリル勾配におけるＲＰＲ逆相カラムを使用し分析ＨＰＬＣを実施した。反応混合物を真空下で濃縮し、エタノールを除去し、水（１１０ｍｌ）に再懸濁させた。水性スラリーをエーテル（１００ｍｌ）で抽出し、いくつかのトリアルキル化化合物及び親油性不純物を除去し、水層にモノ及び所望のジアルキル化生成物を残存させた。良好なクロマトグラフィーを確保するため水溶液を酢酸アンモニウム（２当量、４．３ｇ、５５．８ミリモル）で緩衝した。水溶液を自動分離用ＨＰＬＣで精製する前に４℃で一晩保管した。
【０１５５】
収量（２．２ｇ、６．４ミリモル、２３％）。
【０１５６】
マススペクトル；陽イオン１０Ｖｃｏｎｅ電圧。測定値：３４４；計算Ｍ＋Ｈ＝３４４。
【０１５７】
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３）、δ１．２４（６Ｈ，ｓ，２×ＣＨ３）、１．３（６Ｈ，ｓ，２×ＣＨ３）、１．２５〜１．７５（７Ｈ，ｍ，３×ＣＨ２，ＣＨ）、（３Ｈ，ｓ，２×ＣＨ２）、２．５８（４Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ｎ）、２．８８（２Ｈ，ｔ  ＣＨ２Ｎ２）、５．０（６Ｈ，ｓ，ＮＨ２，２×ＮＨ，２×ＯＨ）。
【０１５８】
ＮＭＲ  １Ｈ（（ＣＤ３）２ＳＯ）δ１．１  ４×ＣＨ；１．２９、３×ＣＨ２；２．１（４Ｈ，ｔ，２×ＣＨ２）；
ＮＭＲ  １３Ｃ（（ＣＤ３）２ＳＯ）、δ９．０（４×ＣＨ３）、２５．８（２×ＣＨ３）、３１．０  ２×ＣＨ２，３４．６  ＣＨ２、５６．８  ２×ＣＨ２Ｎ；１６０．３、Ｃ＝Ｎ。
【０１５９】
ＨＰＬＣ条件：流速８ｍｌ／分２５ｍｍＰＲＰカラム使用
Ａ＝３％アンモニア溶液（比重＝０．８８）／水；Ｂ＝アセトニトリル
時間      ％Ｂ
０        ７．５
１５      ７５．０
２０      ７５．０
２２      ７．５
３０      ７．５
１回のラン当り水溶液３ｍｌをロードし、１２．５〜１３．５分の時間窓で収集する。
【０１６０】
実施例５
３−［（４′−フルオロビフェニル−４−スルホニル）−（１−ヒドロキシカルバモイルシクロペンチル）アミノ］プロピオン酸（化合物２７、従来技術）の合成
（段階Ａ）１−アミノシクロペンタンカルボン酸ベンジルエステルｐ−トルエンスルホン酸塩（１２．１グラム、３０．９ミリモル）及びトリエチルアミン（１０．０ｍＬ、７２ミリモル）の水（１５０ｍＬ）及び１，４−ジオキサン（１５０ｍＬ）の溶液に、４′−フルオロビフェニル−４−スルホニルクロリド（８．８グラム、３２．５ミリモル）を加えた。混合物を室温で１６時間攪拌し、次いで溶媒の殆どを真空下で蒸発させて除去した。混合物を酢酸エチルで希釈し、希塩酸溶液、水、及びブラインで連続して洗浄した。溶液を硫酸マグネシウム上で乾燥し、濃縮すると固体の１−（４′−フルオロビフェニル−４−スルホニルアミノ）シクロペンタンカルボン酸ベンジルエステル１２．３３グラム（７６％）が残った。
【０１６１】
（段階Ｂ）１−（４′−フルオロビフェニル−４−スルホニルアミノ）シクロペンタンカルボン酸ベンジルエステル（２３．０グラム、５０．７ミリモル）の乾燥ＤＭＦ（５００ｍｌ）中の室温の溶液に、カリウムヘキサメチルジシラジド（１２．２グラム、６１．１ミリモル）を加え、４５分後にｔ−ブチル−（３−ヨードプロピル）ジメチルシラン（１８．３グラム、６０．９ミリモル）を加えた。得られた混合物を室温で１６時間攪拌した。追加のカリウムヘキサメチルジシラジド（３．０グラム、１５ミリモル）及びｔ−ブチル−（３−ヨードプロピル）ジメチルシラン（４．５グラム、１５ミリモル）を次に加えた。室温での攪拌をさらに５時間継続した。混合物を、飽和アンモニウム溶液を加えて失活させた。ＤＭＦを真空下で蒸発させて除去した。残留物をジエチルエーテル中に取り出し、水、塩酸希薄水溶液及びブラインで順次洗浄した。硫酸マグネシウム上で乾燥した後、ジエチルエーテルを蒸発させて黄色油状物を得た。これにヘキサン及び塩化メチレンを加えて出発物質の結晶化を引き起こし、濾過してそれを回収した。濾液からの溶媒の蒸発により、琥珀色の油状物としての粗１−［［３−（ｔ−ブチル−ジメチルシラニルオキシ）プロピル］−（４′−フルオロビフェニル−４−スルホニル）アミノ］−シクロペンタンカルボン酸ベンジルエステル（２７．３５グラム）を得た。
【０１６２】
（段階Ｃ）粗１−［［３−（ｔ−ブチル−ジメチルシラニルオキシ）プロピル］−（４′−フルオロビフェニル−４−スルホニル）アミノ］−シクロペンタンカルボン酸ベンジルエステル（２７．３５グラム）の塩化メチレン（４５０ｍＬ）中の室温の溶液に、三フッ化ホウ素エーテラート（１１ｍＬ，８９．４ミリモル）を加えた。４５分後、反応物を、飽和アンモニウム溶液及び水を順次加えることにより失活させた。有機相を分離し、水とブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥した。真空下での溶媒の蒸発により、琥珀色の油状物としての粗１−［（４′−フルオロビフェニル−４−スルホニル）−（３−ヒドロキシプロピル）アミノ］−シクロペンタンカルボン酸ベンジルエステル（２２．１グラム）が提供された。
【０１６３】
（段階Ｄ）粗１−［（４′−フルオロビフェニル−４−スルホニル）−（３−ヒドロキシプロピル）アミノ］−シクロペンタンカルボン酸ベンジルエステル（２２．１グラム）のアセトン（４００ｍＬ）中の溶液を、氷浴中で冷却し、オレンジ色が持続するまでジョーンズ試薬（約２０ｍＬ）で処理した。混合物を０℃から室温まで２時間にわたって攪拌した。過剰の酸化剤をイソプロパノール（１ｍＬ）で失活させた後、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）を加え、混合物を濾過した。濾液を真空下で濃縮した。残留物を酢酸エチル中に取り出し、水とブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濃縮して油状物としての粗１−［（２−カルボキシエチル）−（４′フルオロビフェニル−４−スルホニル）アミノ］シクロペンタンカルボン酸ベンジルエステル（２１．４グラム）を得た。
【０１６４】
（段階Ｅ）粗１−［（２−カルボキシエチル）−（４′フルオロビフェニル−４−スルホニル）アミノ］シクロペンタンカルボン酸ベンジルエステル（２１．４グラム）のＤＭＦ（５００ｍＬ）中の室温の溶液に、炭酸カリウム（２２．５グラム、１６３ミリモル）及びヨウ化メチル（３．７ｍＬ、５９．４ミリモル）を加えた。混合物を、室温で１６時間攪拌し、次に真空下で濃縮した。残留物を水中に取り出し、６Ｎの塩酸水溶液を用いて酸性にした。得られた混合物をジエチルエーテルと酢酸エチルの混合物で抽出した。有機抽出物を水とブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥した。琥珀色の油状物まで濃縮した後、１−［（４′−フルオロビフェニル−４−スルホニル）−（２−メトキシカルボニルエチル）アミノ］−シクロペンタン−１−カルボン酸ベンジルエステル（１２．６グラム）の白色固体を、ヘキサン中１５％の酢酸エチルで溶離するシリカに基づくフラッシュクロマトグラフィーにより単離した。
【０１６５】
（段階Ｆ）１−［（４′−フルオロビフェニル−４−スルホニル）−（２−メトキシカルボニルエチル）アミノ］−シクロペンタン−１−カルボン酸ベンジルエステル（１２．１グラム、２２．４ミリモル）のメタノール（２７０ｍＬ）中の溶液を、１０％のパラジウム／活性炭で処理し、３気圧のＰａｒｒ（登録商標）シェーカー中で３．５時間水素化した。触媒を除去するためにナイロン（孔径０．４５μｍ）を通して濾過し、溶媒を蒸発させて白色発泡体としての１−｛（４′−フルオロビフェニル−４−スルホニル）−（２−メトキシカルボニルエチル）アミノ］シクロペンタン−１−カルボン酸（１０．１グラム、１００％）を得た。
【０１６６】
（段階Ｇ）ジイソプロピルエチルアミン（４．３ｍＬ，２４．６ミリモル）及び（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリス−（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（１１．０グラム、２４．９ミリモル）を、１−［（４′−フルオロビフェニル−４−スルホニル）−（２−メトキシカルボニルエチル）−アミノ］シクロペンタン−１−カルボン酸（１０．１グラム、２２．４ミリモル）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１７０ｍＬ）中の溶液に加えた。混合物を、４時間攪拌した。追加のジイソプロピルエチルアミン（７．８ｍＬ，４４．６ミリモル）及びＯ−ベンジルヒドロキシルアミン塩酸塩（４．６４グラム、２９．１ミリモル）を次に加え、得られた混合物を６０℃で１６時間攪拌した。真空下で濃縮した後、残留物を水中に取り出し、１Ｎの塩酸水溶液で酸性にした。混合物を酢酸エチルで抽出し、抽出物を、水、炭酸ナトリウム飽和水溶液及びブラインで順次洗浄した。溶液を硫酸マグネシウム上で乾燥し、濃縮して、７：３：１のヘキサン／酢酸エチル／塩化メチレンで粉末にすると、白色結晶性固体として提供される３−［（１−ベンジルオキシカルバモイルシクロペンチル）−（４′−フルオロビフェニル−４−スルホニル）アミノ］プロピオン酸メチルエステルの固体（１０．６５グラム、８６％）が得られた。
【０１６７】
（段階Ｈ）３−［（１−ベンジルオキシカルバモイルシクロペンチル）−（４′−フルオロビフェニル−４−スルホニル）アミノ］プロピオン酸メチルエステルの固体（１０．６５グラム、１９．２ミリモル）のメタノール（２５０ｍＬ）中の溶液を、５％パラジウム／硫酸バリウムで処理し、３気圧のＰａｒｒ（登録商標）シェーカー中で３時間水素化した。触媒を除去するためにナイロン（孔径０．４５μｍ）を通して濾過した後、溶媒を蒸発させて白色発泡体としての３−［（４′−フルオロビフェニル−４−スルホニル）−（１−ヒドロキシカルバモイルシクロペンチル）アミノ］プロピオン酸メチルエステル（８．９グラム、１００％）を得た。
【０１６８】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．８０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．８５〜７．７５（ｍ、６Ｈ）、７．３２〜７．２５（ｍ，２Ｈ）、３．５４（ｓ，３Ｈ）、３．５２〜３．４８（ｍ，２Ｈ）、２．７３〜２．６９（ｍ，２Ｈ）、２．２４〜２．２１（ｍ，２Ｈ）、１．８６〜１．８３（ｍ，２Ｈ）、１．６０〜１．４０（ｍ，４Ｈ）。
【０１６９】
（段階Ｉ）３−［（４′−フルオロビフェニル−４−スルホニル）−（１−ヒドロキシカルバモイルシクロペンチル）アミノ］プロピオン酸メチルエステル（８．９グラム、１９．２ミリモル）のメタノール（５００ｍＬ）中の溶液を、１Ｎの水酸化ナトリウム水溶液（９５ｍＬ、９５ミリモル）で処理し、室温で５．５時間攪拌した。混合物を濃縮してメタノールを除去し、水で希釈し、６Ｎの塩酸水溶液で酸性にし、酢酸エチルで抽出した。水とブラインで洗浄した後、有機抽出物を硫酸マグネシウム上で乾燥し、濃縮して白色発泡体としての３−［（４′−フルオロビフェニル−４−スルホニル）−（１−ヒドロキシカルバモイルシクロペンチル）アミノ］プロピオン酸を得て、それを酢酸エチルから結晶化させた（６．７４グラム、７８％）。Ｍｐ：１６３〜１６４℃。
【０１７０】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．３０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、１０．４０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、８．７７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．８９〜７．７４（ｍ，６Ｈ）、７．３１〜７．２７（ｍ，２Ｈ）、３．５１〜３．４４（ｍ，２Ｈ）、２．６４〜２．６０（ｍ，２Ｈ）、２．２４〜２．２２（ｍ，２Ｈ）、１．８６〜１．８３（ｍ，２Ｈ）、１．６０〜１．４０（ｍ，４Ｈ）。ＭＳ  ４４９（Ｍ−１）。
【０１７１】
実施例６
化合物２３の合成
化合物１、Ｏ−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩又はＴＢＴＵ及びＮ−メチルモルホリンのＤＭＦ中の攪拌された溶液に、チラミンを加えた。反応混合物を室温で２４時間、不活性雰囲気下で反応するままにした。反応はＨＰＬＣでモニターした。完了後黄色い透明溶液を濃縮し、高真空下で４時間乾燥した。粗生成物を分離用ＨＰＬＣで精製し８８％の非純白の固体を得た。
【０１７２】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１０．５（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）；９．３（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）；８．８（１Ｈ，ｓ，ＯＨ）；８（１Ｈ，ｓ，ＯＨ）；７．８（２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，ｄ，Ｈａｒ）；７．３（２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ，ｔ，Ｈａｒ）；７．２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，Ｈａｒ）；７．１（２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，ｄ，Ｈａｒ）；７（２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，ｄ，Ｈａｒ）；６．７（２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，ｄ，２Ｈ）；３．４（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２）；３．１（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２）；２．７（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２）、２．６（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２）；２．２〜１．９（４Ｈ，ｍ，ＣＨ２）；１．５（４Ｈ，ｍ，ＣＨ２）
ＭＳ：（ＥＳＩ）５８６．２（ＭＨ＋）及び６０８．２（ＭＮａ＋）
ＨＰＬＣ：純度９８％。
【０１７３】
実施例７
化合物２６の合成
化合物１、（７−アザベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＡＯＰ）及びＮ−メチルモルホリンのＤＭＦ中の攪拌された溶液に、ヨードアニリンを加えた。反応混合物を室温で３日間、不活性雰囲気下で反応するままにした。反応はＨＰＬＣでモニターした。完了後溶液を濃縮し、高真空下で４時間乾燥した。粗生成物を分離用ＨＰＬＣで精製し２１％の固体を得た。
【０１７４】
ＭＳ：（ＥＳＩ）６６８（ＭＨ＋）及び６９０（ＭＮａ＋）
ＨＰＬＣ：純度１００％。
【０１７５】
実施例８
化合物２４の合成
段階Ａ：３−ヨードチラミンの調製
ヨウ素溶液（１Ｍ、２ｍｌ）を、２０ｍｌのチラミン溶液（３０％アンモニア中５０ｍＭ）に室温でゆっくり加えた。５時間後、溶液を５ｍｌまで濃縮し、０℃で一晩放置した。形成された非純白の沈殿物を濾過し、冷水で洗浄した。固体を高真空下で一晩乾燥した。
【０１７６】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ２．７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ）；２．９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ）；６．７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ）；
７．１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，８Ｈｚ）；７．５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ）。
【０１７７】
段階Ｂ
化合物１、Ｏ−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩又はＴＢＴＵ及びＮ−メチルモルホリンのＤＭＦ中の攪拌された溶液に、３−ヨードチラミン（段階Ａ由来）を加えた。反応混合物を室温で２４時間、不活性雰囲気下で反応するままにした。反応はＨＰＬＣでモニターした。完了後黄色い透明溶液を濃縮し、高真空下で４時間乾燥した。粗生成物を分離用ＨＰＬＣで精製し、１０％の非純白の固体（化合物２４）を得た。
【０１７８】
ＭＳ（ＥＳＩ）：７１２（ＭＨ＋）７３４（ＭＮａ＋）
実施例９
キレーターＭＭＰｉコンジュゲート（化合物２）の合成
【０１７９】
【化１９】
2007511494.tif 000020
化合物１（５．１ｍｇ）、ＰｙＡＯＰ（６．０ｍｇ）及びＮ−メチルモルホリン（２μＬ）を、ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）に溶解し、混合物を２分間攪拌した。キレーター１（３．４ｍｇ）を加え、反応混合物を一晩攪拌した。２０％アセトニトリル／水（８ｍＬ）を加え、生成物を分離用ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ１０ｐ  Ｃ１８（２）２５０×１０ｍｍ、検出：２３０ｎｍ、溶媒Ａ：Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、溶媒Ｂ：ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：５ｍＬ／分、勾配：３０分で２０〜６０％Ｂ、ｔＲ：１７分）を用いて精製した。凍結乾燥後、１ｍｇの純粋物質を得て、ＬＣ−ＭＳ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ５μ  Ｃ１８（２）２５０×４．６ｍｍ、検出：２１４ｎｍ、溶媒Ａ：Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、溶媒Ｂ：ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：１ｍＬ／分、勾配：２０分で２０〜６０％Ｂ、ｔＲ：１４．３２分、測定ｍ／ｚ：７９２．５、予測ＭＨ＋：７９２．４）により特性を決定した。
【０１８０】
実施例１０
アミノ−ＰＥＧリンカーから誘導されたＭＭＰｉ（化合物４）の合成
段階（ａ）１，１１−ジアジド−３，６，９−トリオキサウンデカン
乾燥テトラエチレングリコール（１９．４ｇ、０．１００モル）及び塩化メタンスルホニル（２５．２ｇ，０．２２０モル）のドライのＴＨＦ（１００ｍｌ）中の溶液をアルゴン下に保ち、氷／水浴中で０℃に冷却した。フラスコにトリエチルアミン（２２．６ｇ、０．２２０モル）の乾燥ＴＨＦ（２５ｍｌ）中の溶液を４５分かけて滴下して加えた。１時間後冷却浴を取り外し、攪拌を４時間続けた。水（６０ｍｌ）を加えた。混合物に炭酸水素ナトリウム（６ｇ、ｐＨ８まで）及びアジ化ナトリウム（１４．３ｇ、０．２２０ミリモル）をその順番で加えた。ＴＨＦを蒸留により除去し、水溶液を２４時間還流させた（２層が形成された）。混合物を冷却し、エーテル（１００ｍｌ）を加えた。水相を塩化ナトリウムで飽和させた。相を分離し、水相をエーテルで抽出した（４×５０ｍｌ）。合わせた有機相をブラインで洗浄し（２×５０ｍｌ）、乾燥させた（ＭｇＳＯ４）。濾過及び濃縮することにより２２．１ｇ（９１％）の黄色い油状物を得た。生成物をそれ以上精製せずに次の段階で使用した。
【０１８１】
段階（ｂ）１１−アジド−３，６，９−トリオキサウンデカンアミン
５％塩酸（２００ｍｌ）中の１，１１−ジアジド−３，６，９−トリオキサウンデカン（２０．８ｇ、０．０８５モル）の機械的に激しく攪拌された懸濁液に、エーテル（１５０ｍｌ）中のトリフェニルホスフィン（１９．９ｇ、０．０７３モル）の溶液を室温で３時間かけて加えた。反応混合物をさらに２４時間攪拌した。相分離し、水相をジクロロメタンで抽出した（３×４０ｍｌ）。水相を氷／水浴中で冷却し、ｐＨを、ＫＯＨを加えて約１２に調節した。生成物をジクロロメタン中に抽出した（５×５０ｍｌ）。合わせた有機相を乾燥（ＭｇＳＯ４）した。濾過及び蒸発により１４．０ｇ（８８％）の黄色い油状物を得た。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析（マトリックス：□−シアノ−４−ヒドロキシ桂皮酸）による分析により、予想の２１９でＭ＋Ｈピークが得られた。１Ｈ（５００ＭＨｚ）及び１３Ｃ（１２５ＭＨｚ）ＮＭＲ分光法を用いる追加のキャラクタリゼーションにより構造を明らかにした。
【０１８２】
段階（ｃ）（化合物１）−ＰＥＧ（３）−Ｎ３の合成
【０１８３】
【化２０】
2007511494.tif 000021
ＤＭＦ（５ｍｌ）中の化合物１（４１ｍｇ、８７μモル）の溶液に、１１−アジド−３，６，９−トリオキサウンデカンアミン（１９ｍｇ、８７μモル）、ＨＡＴＵ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、３３ｍｇ、８７μモル）及びＤＩＥＡ（Ｆｌｕｋａ、３０μｌ、１７４μモル）を加えた。１時間の反応時間の後、混合物を濃縮し、残留物を分離用ＨＰＬＣ（カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）５μｍ  ２１．２×２５０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ、６０分で３０〜６０％Ｂの勾配、流速１０．０ｍｌ／分、２１４ｎｍでＵＶ検出）により精製し、凍結乾燥後３３．９ｍｇ（５９％）の生成物を得た。ＬＣ−ＭＳ分析（カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）３μｍ  ５０×４．６０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ、１０分で２０〜１００％Ｂの勾配、流速１ｍｌ／分、２１４ｎｍでＵＶ検出、ＥＳＩ−ＭＳ）は、予想通り４．８８分でｍ／ｚ６６７．４（ＭＨ＋）のピークを与えた。
【０１８４】
段階（ｄ）化合物４の合成
【０１８５】
【化２１】
2007511494.tif 000022
メタノール（４ｍｌ）中の（化合物１）−ＰＥＧ（３）−Ｎ３（４．７ｍｇ、７μモル）の溶液に、Ｐｄ／Ｃ（Ｋｏｃｈ−Ｌｉｇｈｔ、約１０ｍｇ）を加えた。混合物を水素雰囲気下（１気圧）の室温で１０分間攪拌した。混合物を濾過して濃縮した。ＬＣ−ＭＳ分析（カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）３μｍ  ５０×４．６０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ、１０分で２０〜１００％Ｂの勾配、流速１ｍｌ／分、２１４ｎｍでＵＶ検出、ＥＳＩ−ＭＳ）は、予想通り４．１７分でｍ／ｚ６４１．４（ＭＨ＋）のピークを与えた。生成物はそれ以上精製せずにその後の段階で直接使用した。
【０１８６】
実施例１１
ＰＥＧ（３）−ジグリコーリルスペーサーとのキレーターコンジュゲート（化合物３）の合成
段階（ａ）（化合物１）−ＰＥＧ（３）−ジグリコール酸の合成
【０１８７】
【化２２】
2007511494.tif 000023
ＤＭＦ（４ｍｌ）中の（化合物１）−ＰＥＧ（３）−ＮＨ２（実施例６、２５ｍｇ、３９μモル）の溶液に、ジグリコール酸無水物（Ａｃｒｏｓ、９ｍｇ、７８μモル）を加えた。１．５時間攪拌後、反応混合物を濃縮し、残留物を分離用ＨＰＬＣ（カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）５μｍ  ２１．２×２５０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ、６０分で２０〜８０％Ｂの勾配、流速１０．０ｍｌ／分、２１４ｎｍでＵＶ検出）により精製し、１４．９ｍｇ（５１％）の凍結乾燥した物質を得た。生成物をＬＣ−ＭＳ分析（カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）３μｍ  ５０×４．６０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ、１０分で２０〜１００％Ｂの勾配、流速１ｍｌ／分、２１４ｎｍでＵＶ検出、ＥＳＩ−ＭＳ）により分析し、生成物に相当する４．１５分におけるｍ／ｚ７５７．３（ＭＨ＋）のピークを与えた。追加のキャラクタリゼーションを、ＮＭＲ分光法を用いて行った。
【０１８８】
段階（ｂ）：化合物３の合成
【０１８９】
【化２３】
2007511494.tif 000024
ＤＭＦ（３ｍｌ）中の（化合物１）−ＰＥＧ（３）−ジグリコール酸（６．６ｍｇ、９μモル）の溶液に、キレーター１（３．１ｍｇ、９μモル）、ＨＡＴＵ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、３．４ｍｇ、９μモル）及びＤＩＥＡ（Ｆｌｕｋａ、３．１μｌ、１８μモル）を加えた。２０分の反応時間の後、混合物を濃縮し、残留物を分離用ＨＰＬＣ（カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）５μｍ  ２１．２×２５０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ、６０分で１０〜８０％Ｂの勾配、流速１０．０ｍｌ／分、２１４ｎｍでＵＶ検出）により精製し、４．２ｍｇ（４３％）の凍結乾燥した生成物を得た。ＬＣ−ＭＳ分析（カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）３μｍ  ５０×４．６０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ、１０分で２０〜１００％Ｂの勾配、流速１ｍｌ／分、２１４ｎｍでＵＶ検出、ＥＳＩ−ＭＳ、ｔＲ＝４．１７分、ｍ／ｚ１０８２．５（ＭＨ＋））及びＮＭＲ分光法により構造を確認した。
【０１９０】
実施例１２
ＰＥＴ造影用のクロロアセチル誘導体（化合物５）の合成
【０１９１】
【化２４】
2007511494.tif 000025
新たに調製した無水クロロ酢酸（５２ｍｇ、０．３０ミリモル）及びＤＩＥＡ（５１μｌ、０．３０ミリモル）を、ＤＭＦ（１０ｍｌ）中の化合物４（実施例１０段階ｄ、約０．１５ミリモル）の溶液に加えた。１時間後反応混合物を濃縮し、残留物を分離用ＨＰＬＣ（カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）１０μｍ  ５０×２５０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ、６０分で３０〜４０％Ｂの勾配、流速５０．０ｍｌ／分、２１４ｎｍでＵＶ検出）により精製し、２５．８ｍｇ（２４％）の凍結乾燥後の生成物を得た。ＬＣ−ＭＳ分析（カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）３μｍ  ５０×４．６０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ、１０分で２０〜１００％Ｂの勾配、流速１ｍｌ／分、２１４ｎｍでＵＶ検出、ＥＳＩ−ＭＳ）は、予想通り６．０１分でｍ／ｚ７１７．５（ＭＨ＋）のピークを与えた。
【０１９２】
実施例１３
３−フルオロプロピルチオールのクロロアセチル化化合物への結合（化合物６）
段階（ａ）３−トリチルスルファニル−プロパン−１−オール［Ｐｈ３Ｃ−Ｓ（ＣＨ２）３ＯＨ］の合成
ＴＦＡ（１０ｍｌ）中のトリフェニルメタノール（３９０．６ｍｇ、１．５ミリモル）を、ＴＦＡ（１０ｍｌ）中の３−メルカプトプロピルアルコール（１２９．６μｌ、１．５ミリモル）の攪拌された溶液に滴下して加えた。添加後、ＴＦＡを減圧下で蒸発させ、粗生成物を逆相分離クロマトグラフィー（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８カラム、００Ｇ−４２５３−Ｖ０、溶媒Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、６０分で７０〜８０％Ｂの勾配、流速５０ｍｌ／分、２５４ｎｍでＵＶ検出）により直ちに精製し３７２ｍｇ（７４％）の純粋な化合物を得た。（分析ＨＰＬＣ：Ｖｙｄａｃ  Ｃ１８カラム、２１８ＴＰ５４：溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、２０分で７０〜８０％Ｂの勾配、流速１．０ｍｌ／分、保持時間５．４分、２１４及び２５４ｎｍで検出）。構造をＮＭＲ分光法により確認した。
【０１９３】
段階（ｂ）メタンスルホン酸３−トリチルスルファニル−プロピルエステル［Ｐｈ３Ｃ−Ｓ（ＣＨ２）３ＯＭｓ］の合成
３−トリチルスルファニル−プロパン−１−オール（３７２．０ｍｇ、１．１１ミリモル）のＴＨＦ（１０ｍｌ）中の溶液に、トリエチルアミン（１５１．７ｍｇ、２０９μｌ、１．５ミリモル）及び塩化メシル（１７１．９ｍｇ、１１６．６μｌ、１．５ミリモル）を加えた。１時間の反応時間の後、沈殿を濾過して除去した。溶液を濃縮し、残留物を逆相ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８カラム、００Ｇ−４２５３−Ｖ０、溶媒Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、６０分で８０〜１００％Ｂの勾配、流速５０ｍｌ／分、２５４ｎｍで検出）により、３１８ｍｇ（６９％）の純粋な化合物を得た。（分析ＨＰＬＣ：Ｖｙｄａｃ  Ｃ１８カラム、２１８ＴＰ５４：溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、２０分で６０〜７０％Ｂの勾配、流速１．０ｍｌ／分、保持時間１８．７分、２１４及び２５４ｎｍで検出）。構造をＮＭＲ分光法により確認した。
【０１９４】
段階（ｃ）（３−フルオロ−プロピルスルファニル）トリフェニルメタン［Ｐｈ３Ｃ−Ｓ（ＣＨ２）３Ｆ］の合成
フッ化カリウム（１．４ｍｇ、０．０２４ミリモル）及びＫｒｙｐｔｏｆｉｘ  ２２２（９．０ｍｇ、０．０２４ミリモル）をアセトニトリル（０．２ｍｌ）に溶解（加熱）した。メタンスルホン酸３−トリチルスルファニル−プロピルエステル（５ｍｇ、０．０１２ミリモル）のアセトニトリル（０．２ｍｌ）の溶液を加えた。反応混合物を、８０℃で９０分間加熱した。逆相分離クロマトグラフィー（Ｖｙｄａｃ  Ｃ１８カラム、２１８ＴＰ１０２２、溶媒Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、４０分で４０〜９０％Ｂの勾配、流速１０ｍｌ／分、２５４ｎｍで検出）により精製した。純粋な物質の２ｍｇ（５０％）の収量が得られた（分析ＨＰＬＣ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８カラム、００Ｂ−４２５１−Ｅ０：溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、１０分で４０〜８０％Ｂの勾配、流速２．０ｍｌ／分、保持時間８．２分、２１４及び２５４ｎｍで検出）。構造をＮＭＲ分析により確認した。
【０１９５】
段階（ｄ）化合物６の合成
【０１９６】
【化２５】
2007511494.tif 000026
３−フルオロ−トリチルスルファニル−プロパン（１．４ｍｇ、４μモル）を、ＴＦＡ（５０μｌ）、トリイソプロピルしラン（５μｌ）及び水（５μｌ）の混合物中で攪拌した。混合物を、化合物５（１．５ｍｇ、２μモル）の水とアセトニトリルの１：１の混合物（８００μｌ）中の溶液に加えた。ｐＨを、Ｋ２ＣＯ３水溶液（２００μｌ、０．５ｇ／ｍｌ）を添加して１０に調整し、混合物を６０℃で２５分間加熱した。生成物を分離ＨＰＬＣ（カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）５μｍ  １０．０×２５０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ、６０分で３０〜５０％Ｂの勾配、流速５．０ｍｌ／分、２１４ｎｍでＵＶ検出）により精製し、０．９ｍｇ（５８％）の生成物を得た。ＬＣ−ＭＳ分析（カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）３μｍ  ５０×４．６０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ、１０分で１０〜８０％Ｂの勾配、流速１ｍｌ／分、２１４ｎｍでＵＶ検出、ＥＳＩ−ＭＳ、ｔＲ＝６．２５、ｍ／ｓ７７５．４（ＭＨ＋））により構造を確認した。
【０１９７】
実施例１４
ＰＥＴ造影用のクロロアセチル化アミノ酸及びＰＥＧの誘導体
［化合物１］−Ｌｙｓ−ＰＥＧ（４）−ジグリコーリル−Ｌｙｓ（クロロアセチル）−ＮＨ２（化合物７）
【０１９８】
【化２６】
2007511494.tif 000027
化合物７を、Ｆｍｏｃ保護したＲｉｎｋアミドＭＢＨＡ樹脂（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）−ＯＨ（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）、Ｆｍｏｃ−アミノ−ＰＥＧ−ジグリコール酸（Ｐｏｌｙｐｕｒｅ  ＡＳ）及びＣＰ−４７１３５８（Ｐｆｉｚｅｒ）を使用して、０．０５ミリモルの規模で手動式窒素気泡装置を用いて合成した。すべてのアミノ酸及びＣＰ−４７１３５８を、カップリング試薬としてＨＡＴＵ／ＤＩＥＡを用いてカップリングした。反応段階は、Ｋａｉｓｅｒテストにより分析した。ＣＰ化合物側鎖をカップリングした後、Ｃ末端リシンのＤｄｅ基を標準的なヒドラジン処理によって開裂した。クロロ酢酸（Ｆｌｕｋａ）を新たに用意した左右対称の無水物によりカップリングした。それと同時の樹脂からの生成物の除去及び側鎖のＢｏｃ保護基の開裂は、２．５％のＨ２Ｏ及び２．５％のトリイソプロピルシランを含有するＴＦＡ中で２時間行った。粗製物質をエーテルから沈殿させ、分離ＨＰＬＣ（カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）１０μｍ  ２５０×１０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ、６０分で２０〜４０％Ｂの勾配、流速５．０ｍｌ／分、２１４ｎｍでＵＶ検出）により精製して５．０ｍｇの白色固体を得た。
【０１９９】
ＬＣ−ＭＳによる分析（カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）３μｍ  ２．０×５０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ、１０分で１０〜８０％Ｂの勾配、流速０．３ｍｌ／分、２１４ｎｍ及び２５４ｎｍでＵＶ検出、ＥＳＩ−ＭＳポジティブモード）は、ＭＨ＋に対して予想通りの５．９分でｍ／ｚ１０８８．４のピークを与えた。
【０２００】
固相ペプチド合成法を用いて、化合物８〜２２を同じ方法で調製し、ＭＳにより特性を明らかにした。
【０２０１】
実施例１５
Ｎ−アルキル化のための１８Ｆ−標識誘導体の合成
３−［１８Ｆ］フルオロプロピルトシレートの合成
【０２０２】
【化２７】
2007511494.tif 000028
２方向コックを通して、ガラスバイアルに用意したアセトニトリル（３００μｌ）中のＫｒｙｐｔｏｆｉｘ２２２（１０ｍｇ）及び水（３００μｌ）中の炭酸カリウム（４ｍｇ）を、プラスチックのシリンジ（１ｍｌ）を用いて真鍮製ヒーター内に設置した炭素ガラスの反応容器中に移した。ターゲット用水中（０．５〜２ｍｌ）の１８Ｆフッ化物（１８５〜３７０ＭＢｑ）を、次に２方向コックを通して加えた。ヒーターを１２５℃にセットし、タイマーを始動させた。１５分後、３個のアセトニトリルのアリコート（０．５ｍｌ）を１分間隔で加えた。１８Ｆフッ化物を、最大で合計４０分まで枯渇させた。４０分後、ヒーターを圧搾空気で冷却し、ポットの蓋を取り除き、１，３−プロパンジオール−ジ−ｐ−トシレート（５〜１２ｍｇ）及びアセトニトリル（１ｍｌ）を加えた。ポットの蓋を元に戻し、ラインをストッパーで締めた。ヒーターを１００℃にセットし、１００℃／１０分で標識した。標識後、３−［１８Ｆ］フルオロプロピルトシレートを、Ｇｉｌｓｏｎ  ＲＰ  ＨＰＬＣで以下の条件を用いて単離した。
【０２０３】
カラム          ｕ−ｂｏｎｄａｐａｋ  Ｃ１８  ７．８×３００ｍｍ
溶離液          水（ポンプＡ）：アセトニトリル（ポンプＢ）
ループサイズ    １ｍｌ
ポンプ速度      ４ｍｌ／分
波長            ２５４ｎｍ
勾配            ２０分で５〜９０％の溶離液Ｂ
生成物Ｒｔ      １２分
一旦単離したら、カットサンプル（約１０ｍｌ）を水（１０ｍｌ）で希釈し、調整済みのＣ１８セップパック（ｓｅｐ  ｐａｋ）に装填した。セップパックを窒素で１５分間乾燥させ、有機溶媒、ピリジン（２ｍｌ）、アセトニトリル（２ｍｌ）又はＤＭＦ（２ｍｌ）を流して洗った。活性のほぼ９９％が洗い流された。
【０２０４】
３−［１８Ｆ］フルオロプロピルトシレートを、ピリジン中で還流させることによりアミンをＮ−アルキル化するために使用する。
【０２０５】
実施例１６
Ｓ−アルキル化のための［１８Ｆ］−チオール誘導体
段階（ａ）：３−［１８Ｆ］フルオロ−トリチルスルファニル−プロパンの調製
【０２０６】
【化２８】
2007511494.tif 000029
２方向コックを通して、ガラスバイアルに用意したアセトニトリル（８００μｌ）中のＫｒｙｐｔｏｆｉｘ２２２（１０ｍｇ）及び水（５０μｌ）中の炭酸カリウム（１ｍｇ）を、プラスチックのシリンジ（１ｍｌ）を用いて真鍮製ヒーター内に設置した炭素ガラスの反応容器中に移した。ターゲット用水中（０．５〜２ｍｌ）の１８Ｆフッ化物（１８５〜３７０ＭＢｑ）を、次に２方向コックを通して加えた。ヒーターを１２５℃にセットし、タイマーを始動させた。１５分後３個のアセトニトリルのアリコート（０．５ｍｌ）を１分間隔で加えた。１８Ｆフッ化物を、最大で合計４０分まで枯渇させた。４０分後、ヒーターを圧搾空気で冷却し、ポットの蓋を取り除き、トリメチル−（３−トリチルスルファニル−プロポキシ）シラン（１〜２ｍｇ）及びＤＭＳＯ（０．２ｍｌ）を加えた。ポットの蓋を元に戻し、ラインをストッパーで締めた。ヒーターを８０℃にセットし、８０℃／５分で標識した。標識後、反応混合物をＲＰ  ＨＰＬＣで以下の条件を用いて単離した。
【０２０７】
カラム          ｕ−ｂｏｎｄａｐａｋ  Ｃ１８  ７．８×３００ｍｍ
溶離液          ０１．％ＴＦＡ／水（ポンプＡ）：０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル（ポンプＢ）
ループサイズ    １００μｌ
ポンプ速度      ４ｍｌ／分
波長            ２５４ｎｍ
勾配            １分      ４０％Ｂ
１５分    ４０〜８０％Ｂ
５分      ８０％Ｂ
反応混合物をＤＭＳＯ／水（１：１ｖ／ｖ、０．１５ｍｌ）で希釈し、調整済みのｔ−Ｃ１８セップパックに装填した。セップパックを水（１０ｍｌ）で洗浄し、窒素で乾燥させ、３−［１８Ｆ］フルオロ−１−トリチルスルファニル−プロパンを、４個のアセトニトリルのアリコート（１アリコート当たり０．５ｍｌ）で溶離した。
【０２０８】
段階（ｂ）：３−［１８Ｆ］フルオロ−プロパン−１−チオールの調製
【０２０９】
【化２９】
2007511494.tif 000030
３−［１８Ｆ］フルオロ−トリチルスルファニル−プロパンのアセトニトリル（１〜２ｍｌ）中の溶液を、１００℃／１０分の窒素気流を用いて乾燥するまで蒸発させた。ＴＦＡ（０．０５ｍｌ）、トリイソプロピルシラン（０．０１ｍｌ）及び水（０．０１ｍｌ）の混合物を加え、続いて８０℃／１０分加熱して３−［１８Ｆ］フルオロ−プロパン−１−チオールを生成させた。
【０２１０】
段階（ｃ）：−Ｎ（ＣＯ）ＣＨ２Ｃｌ前駆体との反応
クロロアセチル前駆体を標識する一般的方法は、段階（ｂ）からの３−［１８Ｆ］フルオロ−１−メルカプト−プロパンを含有する反応容器を圧搾空気で冷却し、次にアンモニア（２７％水溶液、０．１ｍｌ）及び前駆体（１ｍｇ）の水溶液（０．０５ｍｌ）を加え、混合物を８０℃で１０分間加熱する。
【０２１１】
実施例１７
化合物４５〜４８の合成
段階（ａ）：アミノオキシ前駆体の合成
化合物４５及び４７を、Ｆｍｏｃ保護したＲｉｎｋアミドＭＢＨＡ樹脂（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）から出発して、０．２ミリモルの規模で手動式窒素気泡装置を用いて合成した。Ｆｍｏｃアミノ酸は、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍから購入し、単分散Ｆｍｏｃ−ＰＥＧアミノ酸は、Ｐｏｌｙｐｕｒｅ  ＡＳから購入した。Ｂｏｃ−（アミノオキシ）酢酸は、Ｆｌｕｋａから購入した。Ｄｄｅ−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨを樹脂に結合した後、側鎖のＦｍｏｃ基を開裂し、続いてＢｏｃ（アミノオキシ）酢酸をカップリングした。Ｄｄｅ基は、標準的なヒドラジン処理により開裂した。リシンはＨＡＴＵ／ＤＩＥＡを用いてカップリングし、一方すべての他のカップリングにはＰｙＡＯＰ／ＤＩＥＡを用いた。グルコースＯ−アセチル基をナトリウムメトキシドのメタノール溶液との反応により除去し、その後物質を固体支持体から開裂した。それと同時の樹脂からの生成物の除去及び側鎖保護基の開裂は、２．５％のＨ２Ｏ及び２．５％のトリイソプロピルしランを含有するＴＦＡ中で１〜２時間行った。粗製物質を、分離ＨＰＬＣ（カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）５μｍ  ２１．２×２５０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ、６０分での適当な勾配、流速１０．０ｍｌ／分、２１４ｎｍでＵＶ検出）により精製して凍結乾燥後白色固体又は粘稠な無色の油状物を得た。生成物の本体は、ＬＣ−ＭＳ分析（カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）３μｍ  ２．０×５０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ、１０分での適当な勾配、流速０．３ｍｌ／分、２１４ｎｍ及び２５４ｎｍでＵＶ検出、ＥＳＩ−ＭＳポジティブモード）により確認した。
【０２１２】
段階（ｂ）：非放射性フッ素化合物４６及び４８を与える結合
４−フルオロベンズアルデヒド及び４−（３−フルオロプロピル）ベンズアルデヒドはそれぞれＦｌｕｋａ及びＦｌｕｏｒｏｃｈｅｍから購入した。アミノオキシ前駆体（約５μモル、ａ由来）の２０％アセトニトリル（３ｍｌ）中の溶液に、アルデヒド（５倍過剰）を加えた。混合物を室温で１５分間攪拌し濃縮した。生成物を上の段階（ａ）におけるのと同様にして精製及び分析をした。
【０２１３】
実施例１８
インビトロメタロプロテイナーゼ阻害アッセイ
化合物を次の市販の生体分子アッセイキットを使用してスクリーニングを行った。
【０２１４】
ＭＭＰ−１比色定量アッセイキット−カタログ番号ＡＫ−４０４、
ＭＭＰ−２比色定量アッセイキット−カタログ番号ＡＫ−４０８、
ＭＭＰ−８比色定量アッセイキット−カタログ番号ＡＫ−４１４、
ＭＭＰ−９比色定量アッセイキット−カタログ番号ＡＫ−４１０、
ＭＭＰ−１２比色定量アッセイキット−カタログ番号ＡＫ−４０２、
これらは、Ａｆｆｉｎｉｔｉ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｌｔｄ．（Ｐａｌａｔｉｎｅ  Ｈｏｕｓｅ、Ｍａｔｆｏｒｄ  Ｃｏｕｒｔ、Ｅｘｅｔｅｒ、ＥＸ２  ８ＮＬ、ＵＫ）から入手できる。
【０２１５】
（ａ）試験化合物調製
阻害剤は、粉末の形態で提供し、４℃で保存した。各阻害剤についてＤＭＳＯ中の１ｍＭの原液を調製し、２０μｌのアリコートに小分けし、これらのアリコートを−２０℃で保存した。原液を希釈して８つの濃度（推奨：５０μＭ、５μＭ、５００ｎＭ、５０ｎＭ、５ｎＭ、５００ｐＭ、５０ｐＭ及び５ｐＭ）を与えた。希釈は、キットのアッセイ緩衝液で行った。阻害剤原液の５倍希釈を、アッセイウェルに加えて行い、最終濃度範囲は１０μＭ〜１ｐＭである。
【０２１６】
（ｂ）実験手順
詳細は、市販のキットにより提供されるが、次のように要約することができる。
【０２１７】
−  上と同様にして試験化合物の希釈物を用意する、
−  アッセイ緩衝液をプレートに加える、
−  試験化合物をプレートに加える、
−  標準キット阻害剤ＮＮＧＨを用意する（希釈係数はキットを参照）、
−  ＮＮＧＨを対照阻害剤ウェルに加える、
−  ＭＭＰ酵素を用意する（希釈係数はキットを参照）、
−  ＭＭＰをプレートに加える、
−  プレートを３７℃で〜１５分培養する、
−  チオペプトリド（ｔｈｉｏｐｅｐｔｏｌｉｄｅ）基質を用意する（希釈係数はキットを参照）、
−  基質をプレートに加える、
−  ＬａｂｓｙｓｔｅｍｓｉＥＭＳプレートリーダーによる３７℃、４１４ｎｍを、１時間にわたり２分毎にカウントする（ＭＭＰ−１については３０秒毎に２０分間カウントする）、
（ｃ）結果
結果を表１に示す。
【０２１８】
【表１】
2007511494.tif 000031
実施例１９
９９ｍＴｃ放射標識（一般的方法）
９９ｍＴｃ錯体は、下記のものを窒素パージしたＰ４６バイアルに加えることによって調製することができる：
１ｍｌのＮ２をパージしたＭｅＯＨ、
１００μｌのＭｅＯＨ中の１００μｇのリガンド−ＭＭＰｉコンジュゲート、
０．５ｍｌのＮａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３緩衝液（ｐＨ９．２）、
Ｔｃジェネレータからの０．５ｍｌのＴｃＯ４−、
０．１ｍｌのＳｎＣｌ２／ＭＤＰ溶液（１０．２ｍｇのＳｎＣｌ２及び１０１ｍｇのメチレンジホスホン酸を含有する１００ｍｌのＮ２パージした生理食塩水中の溶液）。
【０２１９】
ＩＴＬＣ（Ｉｎｓｔａｎｔ  ｔｈｉｎ  ｌａｙｅｒ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ−インスタント薄層クロマトグラフィー）を使用してＲＣＰを測定する。ＳＧプレート及びＭｅＯＨ／（ＮＨ４ＯＡｃ０．１Ｍ）１：１の移動相は、開始点におけるＲＨＴ（還元加水分解Ｔｃ）、溶媒先端部におけるペルテクネテート及び中間Ｒｆにおけるテクネチウム錯体を示す。
【０２２０】
実施例２０
前駆体の求電子放射ヨウ素標識の一般的手順
前駆体はすべて以下の手順に従って標識した：
１０μＬ、０．１ｍＭのＮａ１２７Ｉ（０．０１ＭのＮａＯＨ中、１×１０−９モル）を、２００μＬ、０．２ＭのＮＨ４ＯＡｃ緩衝液（ｐＨ４）を含有するバイアルに加えた。この混合物をＮａ１２３Ｉ（０．０５ＭのＮａＯＨ中２５．０μＬ、約５００ＭＢｑ）を含有するバイアルに加えた。合わせた溶液を、次にシラン処理したプラスチックバイアルに移した。５μＬ（２．５×１０−８モル）の新たに調製した過酢酸水溶液（約５ｍＭ）を、反応バイアルに加えた。最後に、前駆体（ＭｅＯＨ中３ｍＭ溶液の３４μＬ）を、反応バイアルに加え、溶液を３分間そのまま放置した。
【０２２１】
化合物をＨＰＬＣで精製した。
【０２２２】
ＨＰＬＣ法：
溶媒Ａ：水中０．１％ＴＦＡ
溶媒Ｂ：ＭｅＣＮ中０．１％ＴＦＡ
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μｍ  Ｃ１８（２）１５０×４．６ｍｍ
勾配：
時間          ％Ｂ
０．０        ３０
２０．０      ７０
２０．２０    １００
２３．２０    １００
２３．７０    ３０
３０．０      ３０
【０２２３】
【表２】
2007511494.tif 000032
実施例２１
１８Ｆ−標識誘導体の合成：化合物４６Ｂ及び４８Ｂ
段階（ａ）：４−１８Ｆ−ベンズアルデヒド
平底炭素ガラス反応容器（４ｍｌ）に、アセトニトリル（８００μｌ）中のＫｒｙｐｔｏｆｉｘ２２２（５ｍｇ）と、炭酸カリウム［１３．５ｍｇ／ｍｌ（Ｈ２Ｏ）、約０．１モル］（５０μｌ）とを加えた。容器を真鍮製ヒーター内に置き、３ＰＴＦＥラインを取り付けた反応容器の蓋をきつく締めた。ライン１には２方向のコックを取り付け、ライン２は、廃液バイアルにつなぎ、ライン３は、閉塞した。実験のセットアップは、鉛の壁の背後に置いた。サイクロトロンターゲット用水中に含まれている１８Ｆ−フッ化物（３７０〜７４０ＭＢｑ、０．５〜２ｍｌ）を、２方向コックを介して加えた。Ｎ２ラインを２方向コックにつなぎ、ヒーターを１１０℃にセットした。加熱を開始した後１０分後にＮ２ラインを取り外し、アセトニトリル（０．５ｍｌ）のアリコートを加えた。このプロセスを加熱開始後約１０．５分及び１１分に繰り返した。アセトニトリルの各添加に続いてＮ２ラインを２方向コックにつないだ。２番目の窒素ラインを仕上がったライン３につなぎ、このライン中に存在した液体をすべて追い出した。１８Ｆ−フッ化物は、最大で合計３０分まで乾燥した。３０分後、ヒーターを圧搾空気で冷却し反応容器の蓋を取り外し、ＤＭＳＯ（１０００μｌ）中の４−（トリメチルアンモニウム）ベンズアルデヒドトリフルオロメタンスルホネート［Ｐｏｅｔｈｋｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，４５（５）ｐ８９２〜９０２（２００４）の方法により調製、０．５〜０．８ｍｇ、０．００１６〜０．００２６ミリモル］を加えた。３ＰＴＦＥラインに栓をして閉じた。反応容器を９０℃／１５分の加熱をし、４−１８Ｆ−ベンズアルデヒドを得た（典型的な結合収率約５０％）。粗生成物を、それ以上精製せずに使用した。
【０２２４】
段階（ｂ）：結合手順
クエン酸／Ｎａ２ＨＰＯ４緩衝液［５００μｌ、８０９μＬの０．１Ｍクエン酸水溶液を１１０μＬの０．２Ｍの無水Ｎａ２ＨＰＯ４の水溶液と混合して調製］に溶解した化合物４５（２ｍｇ、０．００３ミリモル）及び化合物４７（４ｍｇ、０．００２ミリモル）を段階（ａ）からの４−１８Ｆ−ベンズアルデヒド（粗生成物）に直接加えた。反応容器を７０℃／１５分で加熱し、粗製化合物４６Ｂ又は４８Ｂを得た。
【０２２５】
段階（ｃ）：後処理手順及び製剤化
段階（ｂ）からの全体の反応混合物を、水で希釈して約２０ｍｌとし、調整済みのｔ−Ｃ１８セップパック［ＤＭＳＯ（５ｍｌ）に続く水（１０ｍｌ）により調整］に搭載した。搭載したｔ−Ｃ１８セップパックを、その後水（２×５ｍｌ）で、続いてＤＭＳＯ（３×５ｍｌ）で洗い流した。合わせた所望の生成物を含有するＤＭＳＯの排液を、ＲＰ  ＨＰＬＣ分離システムを用いて精製した：
カラム          ＬｕｎａＣ１８（２）１０×１０ｍｍ（５ｕ）
溶離液          水（ポンプＡ）、アセトニトリル（ポンプＢ）
ループサイズ    ２ｍｌ
流速            ３ｍｌ／分
波長            ２５４ｎｍ
調製用カラム上の化合物４６Ｂ及び４８Ｂに対する典型的な保持時間はそれぞれ２３分及び２１分であった。分離したＨＰＬＣピーク物質を、水で希釈して約２０ｍｌの容積とし、調整済みのｔ−Ｃ１８セップパック［エタノール（５ｍｌ）で、続いて水（１０ｍｌ）で調整］に搭載した。搭載したｔ−Ｃ１８セップパックを、その後水（１×５ｍｌ）で、続いてエタノール（３×０．２ｍｌ、１×０．４ｍｌ）で洗い流した。合わせた所望の生成物を含有するエタノールの排液を、約０．１ｍｌの容積まで蒸発させ、リン酸塩で緩衝した生理食塩水（ＰＢＳ，１ｍｌ）で約１０％のエタノールに製剤化した。製剤化した化合物のｐＨは、約７であった。
【０２２６】
実施例２２
化合物２４の１２３Ｉ放射ヨウ素標識誘導体（化合物２４Ａ）の血漿及び生体内安定性
化合物２４Ａについて、化合物の安定性及び代謝を判断するために血漿及び生体内安定性の検討を行った。ラット生体内の血漿安定性は、親化合物のＲＣＰで、３７℃における２時間の培養を通して９３％から８０％まで変化する良好な安定性を実証した。
【０２２７】
ラットにおける生体内の検討により、化合物２４Ａの生体内時間を通したわずかな不安定性及び代謝の両方が示された。尿中の放射能が不十分なために、血漿及び胆汁の試料のみが分析可能であった。血漿試料中には時間を通して遊離のヨウ化物量の増加が見られるが、注射した全体の活性度の少量のみが存在した。１個の代謝産物が血漿試料中に検出され、４個が胆汁試料中に検出され、代謝も起こっていることを示した。
【０２２８】
実施例２３
生体内ＬＬＣ腫瘍モデルにおける放射ヨウ素標識誘導体（化合物２４Ａ）の体内分布
１×１０６個のルイス肺癌腫（ＬＬＣ）細胞を、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの右の太ももの内側に皮下注射する。腫瘍は、体内分布を行う前の１５日間成長するままにした。このモデルは、活性なゼラチナーゼ（ＭＭＰ−２）、コラゲナーゼ（ＭＭＰ−１及び８）の両方の発現レベルが示されている［Ｂａｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｄｒｕｇｓ  Ｅｘｐ  Ｃｌｉｎ  Ｒｅｓ．，２９（１）：１５〜２３（２００３）］。
【０２２９】
結果
体内分布の検討は、ＬＬＣ腫瘍モデルで実施した。化合物２４Ａを、最初に血液から非常に素早く取り出し、肝胆道系（ＨＢＳ）を通して最初に排出した。ある程度の滞留が、背景組織の低い取り込みで腫瘍組織内に見られた。結果の概要を下の表３に示す。
【０２３０】
【表３】
2007511494.tif 000033
実施例２４
生体内腫瘍モデル中の１８Ｆ−標識誘導体（化合物４６Ｂ及び４８Ｂ）の体内分布
化合物４６Ｂ及び４８Ｂによる体内分布を、実施例２３のＬＬＣ腫瘍モデルで行った。結果の概要を下に示す。
【０２３１】
【表４】
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実施例２５
生体内アテローム性動脈硬化症のモデルにおける１２３Ｉ−及び１８Ｆ−標識化合物の体内分布
ＡｐｏＥ結紮モデル
ＡｐｏＥ−／−マウスは、ＡｐｏＥ遺伝子を欠損した遺伝子組換えノックアウトマウスであり、それ故それらの血漿コレステロール濃度を調節できない。その結果、ＡｐｏＥマウスは、アテローム性動脈硬化性病変、高脂肪食の給餌により加速されるプロセスを発現する。病変発現のさらなる加速が、頚動脈を結紮することによって達成することができ、手術及び高脂肪食給餌の４週間以内に進行性病変部位の形成をもたらす。このモデルは、高いマクロファージ及びＭＭＰの発現を伴うある程度の組織リモデリングを有することが示されており、Ｉｖａｎらにより説明されている［Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１０５，２６８６〜２６９１（２００２）］。
【０２３２】
これらの実験に対しては２つの対照：（１）ＡｐｏＥニセ動物であって、マウスが同じ外科的介入を受けるが、縫合は頚動脈の真下を通るだけで次いで取り除かれるもの、（２）ＡｐｏＥ結紮マウスと同じ外科的結紮及び高脂肪給餌を受けるＣ５７ＢＬ／６結紮動物、を使用した。文献の報告は、これらの動物は、ある程度の組織リモデリングを有するが、活性なＭＭＰの濃度は低いことを述べている［Ｉｖａｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１０５，２６８６〜２６９１（２００２）］。
【０２３３】
結果を表４に示す。
【０２３４】
【表５】
2007511494.tif 000035
実施例２６
生体内アテローム性動脈硬化症のモデルにおける化合物２４Ａ及び３２Ａのオートラジオグラフィー
ウサギコレステロールモデル
ニュージーランド白ウサギに１％コレステロール食を８週間給餌し、大動脈にアテローム性動脈硬化の病変発生を誘発させる。このモデルのバリデーションにより、大動脈弓から下行大動脈へのマクロファージに富む進行性アテローム性動脈硬化の病変が発生することが示されている。簡潔には、化合物２４Ａ及び３２Ａを、コレステロール給餌ウサギに静脈内注射し、注射２時間後安楽死させた。大動脈をそっくり除去し、１０％の中性に緩衝したホルマリン中に固定した。大動脈を腹側正中線に沿って縦方向に開き、正面をスダンＩＶで染色し、それによって脂肪染色によりアテローム性動脈硬化病変の存在を検出する。大動脈を次に、蛍光スクリーンに向かって一晩セットする。スクリーンを次に翌日に走査し、大動脈組織内の放射活性領域を測定する。
【０２３５】
その結果は、両化合物共、大動脈内のアテローム性動脈硬化病変中への取り込みを示し、正常な大動脈の領域中への取り込みは最小限であった。
【０２３６】
実施例２７
生体内腫瘍モデルにおける造影
造影は、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍モデル（ヒト乳癌異種移植片モデル）で化合物２４Ａにより行った。文献の証拠により、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞は、ＭＭＰ−１（プロ及びアクティブ）（Ｂｅｎｂｏｗ  ｅｔ  ａｌ，Ｂａｃｈｅｉｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ）、ＭＭＰ−２（Ｂａｃｈｅｉｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ）、ＭＭＰ−３（Ｂａｃｈｅｉｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ）、ＭＭＰ−７プロ（Ｂａｃｈｅｉｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ）、ＭＭＰ−９プロ（アクティブではない）（Ｂｅｎｂｏｗ  ｅｔ  ａｌ，ＢａｃｈｅｉｍｅｒらＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｗｅｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ）、ＭＭＰ−１０、１１及び１４（すべてプロ）（Ｂｅｎｂｏｗ  ｅｔ  ａｌ，Ｂａｃｈｅｉｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ）を含む広範囲のＭＭＰを発現することが実証されている。
【０２３７】
Ｂａｃｈｍｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００１  １１月〜１２月、２１（６Ａ）：３８２１〜８、
Ｂａｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｄｒｕｇｓ  Ｅｘｐ  Ｃｌｉｎ  Ｒｅｓ．２００３；２９（１）：１５〜２３、
Ｂｅｎｂｏｗ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．ｌ９９９  ５月、１７（３）：２３１〜８、
Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｅｕｒ．Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，２００１；３７：１０６〜１１３、
Ｗｅｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｏｎｃｏｌ．，２００２  ２月、２０（２）：２９９〜３０３。
【０２３８】
腫瘍「ホットスポット」は、注射後５分から１２０分まで見られ、重要な領域の筋肉に対する比は、すべての時点で２：１を超えた。結果を図３に示す。
【図面の簡単な説明】
【０２３９】
【図１Ａ】本発明のいくつかの化合物の化学構造を、それらが由来するＭＭＰｉ（化合物１）を含めて示す図である。
【図１Ｂ】本発明のいくつかの化合物の化学構造を、それらが由来するＭＭＰｉ（化合物１）を含めて示す図である。
【図１Ｃ】本発明のいくつかの化合物の化学構造を、それらが由来するＭＭＰｉ（化合物１）を含めて示す図である。
【図２】本発明の３個のＭＭＰｉの化学構造を示す図である。
【図３】実施例２７から得られた画像を示す図である。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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