(57)【要約】  本発明は、式(Ｉ)又は(ＩＩ)の化合物及びそれらの製薬的に許容可能な塩の、抗マラリアのための予防的又は治癒的処置に有用な製薬用組成物の調製における使用に関する。また本発明は、新規の化合物と該化合物を含有する製薬用組成物にも関する。2007533704.tif 000030
2007533704.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の式：
【化１】
2007533704.tif 000020
[上式中、
−  Ｒ１は、Ｈ、又はｉが０〜６であるＯＣｉＨ２ｉ＋１であり；
−  Ｒ２は、Ｈ、又はｊが０〜６であるＯＣｊＨ２j＋１であり；
−  Ｒ３は、Ｈ、又はｋが０〜６であるＯＣｋＨ２ｋ＋１であり；
−  Ｒ４は、Ｈ又はＯＨであり；
−  Ｒ５は、ＯＨ、又はｍが１〜６であるＯＣｍＨ２ｍ＋１、又はアセトキシ基又はオキソ基であり；
−  Ｒ６は、ＯＨ、又はｎが１〜６であるＯＣｎＨ２ｎ＋１、又はアセトキシ基又はオキソ基であり；
−  Ｒ７は、ｐが０〜６であるＯＣｐＨ２ｐ＋１であり；
−  Ｒ８及びＲ９は同一でも異なっていてもよく、Ｈ、又はｑが０〜６であるＯＣｑＨ２ｑ＋１、又はＨａｌ（ここでＨａｌはＣｌ、Ｂｒ、Ｆ又はＩである）を表し、又は共に共有結合を形成し、ここで該結合は二重結合又はエーテル結合(エポキシ基)であり；
−  Ｒ１０は、Ｈ、又はｒが１〜１２であるＣｒＨ２ｒ＋１、又は不飽和のアルキル基又はシクロアルキル基で、(トリ-からヘキサ-)不飽和又はそうではなく、ヘテロ原子を有するか又は有さないもの；又はヘテロ原子を有するか又は有さない芳香族又は多環芳香族基；又はｓが１〜１２であるＣｓＨ２ｓ-Ａであり、ここで、Ａは、ヘテロ原子を有するか又は有さない、飽和又は(トリ-からヘキサ-)不飽和のシクロアルキル基、又はヘテロ原子を有するか又は有さない芳香族又は多環芳香族基であり、又はＡは、ｔが１〜５であるＣ６Ｈ５−ｔ-(Ｈａｌ)ｔ、又はｕが１〜５であり、ｖが０〜６であるＣ６Ｈ５−ｕ-(Ｏ-ＣｖＨ２ｖ＋１)ｕ であり；又はＲ１０は、窒素原子を第４級化にする同一又は異なった２つの置換基、又は酸素原子（ニトロン基）を表し、この場合において、窒素原子とＣ９との間の結合は二重結合であり；又はＲ１０は、ｗが０〜１０であるＣＨ２ＣＨ２[ＯＣＨ２ＣＨ２]ｗＯＣＨ２ＣＨ２-Ｂを表し、ここでＢはＯＨ、Ｏ-Ｄ又はＮＨ-Ｄであり、Ｄはイソチオシアナート等の求電子官能基を担持するＣ１-Ｃ１２アルキル基であり；
−  Ｒ１１は、Ｈ、又はＯＨ、又はｘが１〜６であるＯＣｘＨ２ｘ＋１、又はＨａｌ（ここでＨａｌはＣｌ、Ｂｒ、Ｆ又はＩである）；又はアセトキシ基又はスルホナートエステル基、又はオキソ基であり；又はＲ１０及びＲ１１はイソアルキリデン基を表してもよい]、又は
【化２】
2007533704.tif 000021
[上式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８及びＲ９は上述した通りであり、
−  Ｒ４は、Ｈ、又はＯＨ、又はｌが２〜６であるＯＣｌＨ２ｌ＋１であり；
−  Ｒ１０は、ｙが１〜１２であるＣｙＨ２ｙ、又はｚが０〜１０であるＣＨ２ＣＨ２[ＯＣＨ２ＣＨ２]ｚＯＣＨ２ＣＨ２であり；
−  Ｒ１１は、Ｈ、又はＯＨ、又はｘが１〜６であるＯＣｘＨ２ｘ＋１、又はＨａｌ（ここでＨａｌはＣｌ、Ｂｒ、Ｆ又はＩである）；又はアセトキシ基又はスルホナートエステル基、又はオキソ基である]
を有する化合物と、それらの全ての立体異性体及び光学異性体であり、
但し、式(Ｉ)において、(１)Ｒ３がＯＨ又はアルコキシで、Ｒ４がＨ又はＯＨで、Ｒ５及びＲ６がＯＨ又はアシルオキシで、Ｒ７がＯＣＨ３で、Ｒ８及びＲ９が二重結合を表し、Ｒ１、Ｒ１０及びＲ１１がＨである場合に、Ｒ２はＨ又はアルコキシではなく；(２)Ｒ２がＨで、Ｒ３及びＲ７がＯＣＨ３で、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６がＯＨで、Ｒ８及びＲ９が二重結合を表し、Ｒ１０及びＲ１１がＨである場合に、Ｒ１はＨではない化合物。
【請求項２】
式(Ｉ)を有する請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１１がＯＨである、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ８及びＲ９が共有結合を形成している、請求項１ないし３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１１がＯＨであり、Ｒ１及びＲ２がＨである、請求項１ないし４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１０が、Ｈ又はｒが１〜１２であるＣｒＨ２ｒ-Ａであり、ここで、Ａは、Ｈ、又はｓが３〜６である環状ＣｓＨ２ｓ−１、又は芳香環、又は多環芳香族、又はｔが１〜５であり、ＨａｌがＣｌ、Ｂｒ、Ｆ又はＩであるＣ６Ｈ５−ｔ-(Ｈａｌ)ｔとして、又はｕが１〜５であり、ｖが０〜６であるＣ６Ｈ５−ｕ-(Ｏ-ＣｖＨ２ｖ＋１)ｕとして、又はｗが１〜２であるＣ６Ｈ５−ｗ-(ＮＨ２)ｗとして置換された芳香環であり；又はＲ１０が、窒素原子を第４級化にする同一又は異なった２つの置換基、又は酸素原子を表し；又はＲ１０が、ｘが０〜１０であり、ＢがＨ又はＯＨ又はＮＨ２又はＮ=Ｃ=Ｓである、ＣＨ２ＣＨ２-[Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２]ｘＯ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｂを表す、請求項１ないし５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
４,６,７,１０-テトラヒドロキシ-８,１４-ジデヒドロ-３,８-ジメトキシモルフィナン、及びＮ-メチル-、Ｎ-プロピル-、Ｎ-４-メトキシベンジル-、Ｎ-４-ヒドロキシベンジル-、Ｎ-４-ブロモベンジル-又はＮ-シクロペンチル--４,６,７,１０-テトラヒドロキシ-８,１４-ジデヒドロ-３,８-ジメトキシ-モルフィナンを含む群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
光学的配置(６Ｓ、７Ｓ、９Ｒ、１０Ｒ、１３Ｓ)を有する、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
次の式：
【化３】
2007533704.tif 000022
[上式中、
−  Ｒ１は、Ｈ、又はｉが０〜６であるＯＣｉＨ２ｉ＋１であり；
−  Ｒ２は、Ｈ、又はｊが０〜６であるＯＣｊＨ２j＋１であり；
−  Ｒ３は、Ｈ、又はｋが０〜６であるＯＣｋＨ２ｋ＋１であり；
−  Ｒ４は、Ｈ又はＯＨであり；
−  Ｒ５は、ＯＨ、又はｍが１〜６であるＯＣｍＨ２ｍ＋１、又はアセトキシ基又はオキソ基であり；
−  Ｒ６は、ＯＨ、又はｎが１〜６であるＯＣｎＨ２ｎ＋１、又はアセトキシ基又はオキソ基であり；
−  Ｒ７は、ｐが０〜６であるＯＣｐＨ２ｐ＋１であり；
−  Ｒ８及びＲ９は同一でも異なっていてもよく、Ｈ、又はｑが０〜６であるＯＣｑＨ２ｑ＋１、又はＨａｌはＨａｌ（ここでＨａｌはＣｌ、Ｂｒ、Ｆ又はＩである）を表し、又は共に共有結合を形成し、ここで該結合は二重結合又はエーテル結合(エポキシ基)であり；
−  Ｒ１０は、Ｈ、又はｒが１〜１２であるＣｒＨ２ｒ＋１、又は不飽和のアルキル基又はシクロアルキル基で、(トリ-からヘキサ-)不飽和又はそうではなく、ヘテロ原子を有するか又は有さないもの；又はヘテロ原子を有するか又は有さない芳香族又は多環芳香族基；又はｓが１〜１２であるＣｓＨ２ｓ-Ａであり、ここでＡは、ヘテロ原子を有するか又は有さない、飽和又は(トリ-からヘキサ-)不飽和のシクロアルキル基、又はヘテロ原子を有するか又は有さない芳香族又は多環芳香族基であり、又はＡは、ｔが１〜５であるＣ６Ｈ５−ｔ-(Ｈａｌ)ｔ、又はｕが１〜５であり、ｖが０〜６であるＣ６Ｈ５−ｕ-(Ｏ-ＣｖＨ２ｖ＋１)ｕ であり；又はＲ１０は、窒素原子を第４級化にする同一又は異なった２つの置換基、又は酸素原子（ニトロン基）を表し、この場合において、窒素原子とＣ９との間の結合は二重結合であり；又はＲ１０は、ｗが０〜１０であるＣＨ２ＣＨ２[ＯＣＨ２ＣＨ２]ｗＯＣＨ２ＣＨ２-Ｂを表し、ここでＢはＯＨ、Ｏ-Ｄ又はＮＨ-Ｄであり、Ｄはイソチオシアナート等の求電子官能基を担持するＣ１-Ｃ１２アルキル基であり；
−  Ｒ１１は、Ｈ、又はＯＨ、又はｘが１〜６であるＯＣｘＨ２ｘ＋１、又はＨａｌ（ここでＨａｌはＣｌ、Ｂｒ、Ｆ又はＩである）；又はアセトキシ基又はスルホナートエステル基、又はオキソ基であり；又はＲ１０及びＲ１１はイソアルキリデン基を表してもよい]、又は
【化４】
2007533704.tif 000023
[上式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８及びＲ９は上述した通りであり、
−  Ｒ４は、Ｈ、又はＯＨ、又はｌが２〜６であるＯＣｌＨ２ｌ＋１であり；
−  Ｒ１０は、ｙが１〜１２であるＣｙＨ２ｙ、又はｚが０〜１０であるＣＨ２ＣＨ２[ＯＣＨ２ＣＨ２]ｚＯＣＨ２ＣＨ２であり；
−  Ｒ１１は、Ｈ、又はＯＨ、又はｘが１〜６であるＯＣｘＨ２ｘ＋１、又はＨａｌ（ここでＨａｌはＣｌ、Ｂｒ、Ｆ又はＩである）；又はアセトキシ基又はスルホナートエステル基、又はオキソ基である]
を有する医薬と、それらの全ての立体異性体及び光学異性体であり、
但し、式(Ｉ)において、(１)Ｒ３がＯＨ又はアルコキシで、Ｒ４がＨ又はＯＨで、Ｒ５及びＲ６がＯＨ又はアシルオキシで、Ｒ７がＯＣＨ３で、Ｒ８及びＲ９が二重結合を表し、Ｒ１、Ｒ１０及びＲ１１がＨである場合に、Ｒ２はＨ又はアルコキシではなく；(２)Ｒ２がＨで、Ｒ３及びＲ７がＯＣＨ３で、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６がＯＨで、Ｒ８及びＲ９が二重結合を表し、Ｒ１０及びＲ１１がＨである場合に、Ｒ１はＨではない医薬。
【請求項１０】
次の式：
【化５】
2007533704.tif 000024
[上式中、
−  Ｒ１は、Ｈ、又はｉが０〜６であるＯＣｉＨ２ｉ＋１であり；
−  Ｒ２は、Ｈ、又はｊが０〜６であるＯＣｊＨ２j＋１であり；
−  Ｒ３は、Ｈ、又はｋが０〜６であるＯＣｋＨ２ｋ＋１であり；
−  Ｒ４は、Ｈ又はＯＨであり；
−  Ｒ５は、ＯＨ、又はｍが１〜６であるＯＣｍＨ２ｍ＋１、又はアセトキシ基又はオキソ基であり；
−  Ｒ６は、ＯＨ、又はｎが１〜６であるＯＣｎＨ２ｎ＋１、又はアセトキシ基又はオキソ基であり；
−  Ｒ７は、ｐが０〜６であるＯＣｐＨ２ｐ＋１であり；
−  Ｒ８及びＲ９は同一でも異なっていてもよく、Ｈ、又はｑが０〜６であるＯＣｑＨ２ｑ＋１、又はＨａｌ（ここでＨａｌはＣｌ、Ｂｒ、Ｆ又はＩである）を表し、又は共に共有結合を形成し、ここで該結合は二重結合又はエーテル結合であり；
−  Ｒ１０は、Ｈ、又はｒが１〜１２であるＣｒＨ２ｒ＋１、又は不飽和のアルキル基又はシクロアルキル基で、(トリ-からヘキサ-)不飽和又はそうではなく、ヘテロ原子を有するか又は有さないもの；又はヘテロ原子を有するか又は有さない芳香族又は多環芳香族基；又はｓが１〜１２であるＣｓＨ２ｓ-Ａであり、ここでＡは、ヘテロ原子を有するか又は有さない、飽和又は(トリ-からヘキサ-)不飽和のシクロアルキル基、又はヘテロ原子を有するか又は有さない芳香族又は多環芳香族基であり、又はＡは、ｔが１〜５であるＣ６Ｈ５−ｔ-(Ｈａｌ)ｔ、又はｕが１〜５であり、ｖが０〜６であるＣ６Ｈ５−ｕ-(Ｏ-ＣｖＨ２ｖ＋１)ｕ であり；又はＲ１０は、窒素原子を第４級化にする同一又は異なった２つの置換基、又は酸素原子（ニトロン基）を表し、この場合において、窒素原子とＣ９との間の結合は二重結合であり；又はＲ１０は、ｗが０〜１０であるＣＨ２ＣＨ２[ＯＣＨ２ＣＨ２]ｗＯＣＨ２ＣＨ２-Ｂを表し、ここでＢはＯＨ、Ｏ-Ｄ又はＮＨ-Ｄであり、Ｄはイソチオシアナート等の求電子官能基を担持するＣ１-Ｃ１２アルキル基であり；
−  Ｒ１１は、Ｈ、又はＯＨ、又はｘが１〜６であるＯＣｘＨ２ｘ＋１、又はＨａｌ（ここでＨａｌはＣｌ、Ｂｒ、Ｆ又はＩである）；又はアセトキシ基又はスルホナートエステル基、又はオキソ基であり；又はＲ１０及びＲ１１はイソアルキリデン基を表してもよい]、又は
【化６】
2007533704.tif 000025
[上式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８及びＲ９は上述した通りであり、
−  Ｒ４は、Ｈ、又はＯＨ、又はｌが２〜６であるＯＣｌＨ２ｌ＋１であり；
−  Ｒ１０は、ｙが１〜１２であるＣｙＨ２ｙ、又はｚが０〜１０であるＣＨ２ＣＨ２[ＯＣＨ２ＣＨ２]ｚＯＣＨ２ＣＨ２であり；
−  Ｒ１１は、Ｈ、又はＯＨ、又はｘが１〜６であるＯＣｘＨ２ｘ＋１、又はＨａｌ（ここでＨａｌはＣｌ、Ｂｒ、Ｆ又はＩである）；又はアセトキシ基又はスルホナートエステル基、又はオキソ基である]
の抗マラリア化合物と、それらの全ての立体異性体及び光学異性体。
【請求項１１】
次の式：
【化７】
2007533704.tif 000026
[上式中、
−  Ｒ１は、Ｈ、又はｉが０〜６であるＯＣｉＨ２ｉ＋１であり；
−  Ｒ２は、Ｈ、又はｊが０〜６であるＯＣｊＨ２j＋１であり；
−  Ｒ３は、Ｈ、又はｋが０〜６であるＯＣｋＨ２ｋ＋１であり；
−  Ｒ４は、Ｈ又はＯＨであり；
−  Ｒ５は、ＯＨ、又はｍが１〜６であるＯＣｍＨ２ｍ＋１、又はアセトキシ基又はオキソ基であり；
−  Ｒ６は、ＯＨ、又はｎが１〜６であるＯＣｎＨ２ｎ＋１、又はアセトキシ基又はオキソ基であり；
−  Ｒ７は、ｐが０〜６であるＯＣｐＨ２ｐ＋１であり；
−  Ｒ８及びＲ９は同一でも異なっていてもよく、Ｈ、又はｑが０〜６であるＯＣｑＨ２ｑ＋１、又はＨａｌ（ここでＨａｌはＣｌ、Ｂｒ、Ｆ又はＩである）を表し、又は共に共有結合を形成し、ここで該結合は二重結合又はエーテル結合であり；
−  Ｒ１０は、Ｈ、又はｒが１〜１２であるＣｒＨ２ｒ＋１、又は不飽和のアルキル基又はシクロアルキル基で、(トリ-からヘキサ-)不飽和又はそうではなく、ヘテロ原子を有するか又は有さないもの；又はヘテロ原子を有するか又は有さない芳香族又は多環芳香族基；又はｓが１〜１２であるＣｓＨ２ｓ-Ａであり、ここでＡは、ヘテロ原子を有するか又は有さない、飽和又は(トリ-からヘキサ-)不飽和のシクロアルキル基、又はヘテロ原子を有するか又は有さない芳香族又は多環芳香族基であり、又はＡは、ｔが１〜５であるＣ６Ｈ５−ｔ-(Ｈａｌ)ｔ、又はｕが１〜５であり、ｖが０〜６であるＣ６Ｈ５−ｕ-(Ｏ-ＣｖＨ２ｖ＋１)ｕ であり；又はＲ１０は、窒素原子を第４級化にする同一又は異なった２つの置換基、又は酸素原子（ニトロン基）を表し、この場合において、窒素原子とＣ９との間の結合は二重結合であり；又はＲ１０は、ｗが０〜１０であるＣＨ２ＣＨ２[ＯＣＨ２ＣＨ２]ｗＯＣＨ２ＣＨ２-Ｂを表し、ここでＢはＯＨ、Ｏ-Ｄ又はＮＨ-Ｄであり、Ｄはイソチオシアナート等の求電子官能基を担持するＣ１-Ｃ１２アルキル基であり；
−  Ｒ１１は、Ｈ、又はＯＨ、又はｘが１〜６であるＯＣｘＨ２ｘ＋１、又はＨａｌ（ここでＨａｌはＣｌ、Ｂｒ、Ｆ又はＩである）；又はアセトキシ基又はスルホナートエステル基、又はオキソ基を表し；又はＲ１０及びＲ１１はイソアルキリデン基を表してもよい]、又は
【化８】
2007533704.tif 000027
[上式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８及びＲ９は上述の通りであり、
−  Ｒ４は、Ｈ、又はＯＨ、又はｌが２〜６であるＯＣｌＨ２ｌ＋１であり；
−  Ｒ１０は、ｙが１〜１２であるＣｙＨ２ｙ、又はｚが０〜１０であるＣＨ２ＣＨ２[ＯＣＨ２ＣＨ２]ｚＯＣＨ２ＣＨ２であり；
−  Ｒ１１は、Ｈ、又はＯＨ、又はｘが１〜６であるＯＣｘＨ２ｘ＋１、又はＨａｌ（ここでＨａｌはＣｌ、Ｂｒ、Ｆ又はＩである）；又はアセトキシ基又はスルホナートエステル基、又はオキソ基である]
の化合物と、それらの全ての立体異性体及び光学異性体、及びそれらの製薬的に許容可能な塩の、抗マラリアの予防的又は治癒的処置に有用な製薬用組成物の調製における使用。
【請求項１２】
次の式：
【化９】
2007533704.tif 000028
[上式中、
−  Ｒ１は、Ｈ、又はｉが０〜６であるＯＣｉＨ２ｉ＋１であり；
−  Ｒ２は、Ｈ、又はｊが０〜６であるＯＣｊＨ２j＋１であり；
−  Ｒ３は、Ｈ、又はｋが０〜６であるＯＣｋＨ２ｋ＋１であり；
−  Ｒ４は、Ｈ又はＯＨであり；
−  Ｒ５は、ＯＨ、又はｍが１〜６であるＯＣｍＨ２ｍ＋１、又はアセトキシ基又はオキソ基であり；
−  Ｒ６は、ＯＨ、又はｎが１〜６であるＯＣｎＨ２ｎ＋１、又はアセトキシ基又はオキソ基であり；
−  Ｒ７は、ｐが０〜６であるＯＣｐＨ２ｐ＋１であり；
−  Ｒ８及びＲ９は同一でも異なっていてもよく、Ｈ、又はｑが０〜６であるＯＣｑＨ２ｑ＋１、又はＨａｌ（ここでＨａｌはＣｌ、Ｂｒ、Ｆ又はＩである）を表し、又は共に共有結合を形成し、ここで該結合は二重結合又はエーテル結合であり；
−  Ｒ１０は、Ｈ、又はｒが１〜１２であるＣｒＨ２ｒ＋１、又は不飽和のアルキル基又はシクロアルキル基で、(トリ-からヘキサ-)不飽和又はそうではなく、ヘテロ原子を有するか又は有さないもの；又はヘテロ原子を有するか又は有さない芳香族又は多環芳香族基；又はｓが１〜１２であるＣｓＨ２ｓ-Ａであり、ここでＡは、ヘテロ原子を有するか又は有さない、飽和又は(トリ-からヘキサ-)不飽和のシクロアルキル基、又はヘテロ原子を有するか又は有さない芳香族又は多環芳香族基であり、又はＡは、ｔが１〜５であるＣ６Ｈ５−ｔ-(Ｈａｌ)ｔ、又はｕが１〜５であり、ｖが０〜６であるＣ６Ｈ５−ｕ-(Ｏ-ＣｖＨ２ｖ＋１)ｕ であり；又はＲ１０は、窒素原子を第４級化にする同一又は異なった２つの置換基、又は酸素原子（ニトロン基）を表し、この場合において、窒素原子とＣ９との間の結合は二重結合であり；又はＲ１０は、ｗが０〜１０であるＣＨ２ＣＨ２[ＯＣＨ２ＣＨ２]ｗＯＣＨ２ＣＨ２-Ｂを表し、ここでＢはＯＨ、Ｏ-Ｄ又はＮＨ-Ｄであり、Ｄはイソチオシアナート等の求電子官能基を担持するＣ１-Ｃ１２アルキル基であり；
−  Ｒ１１は、Ｈ、又はＯＨ、又はｘが１〜６であるＯＣｘＨ２ｘ＋１、又はＨａｌ（ここでＨａｌはＣｌ、Ｂｒ、Ｆ又はＩである）；又はアセトキシ基又はスルホナートエステル基、又はオキソ基であり；又はＲ１０及びＲ１１はイソアルキリデン基を表してもよい]、又は
【化１０】
2007533704.tif 000029
[上式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８及びＲ９は上述の通りであり、
−  Ｒ４は、Ｈ、又はＯＨ、又はｌが２〜６であるＯＣｌＨ２ｌ＋１であり；
−  Ｒ１０は、ｙが１〜１２であるＣｙＨ２ｙ、又はｚが０〜１０であるＣＨ２ＣＨ２[ＯＣＨ２ＣＨ２]ｚＯＣＨ２ＣＨ２であり；
−  Ｒ１１は、Ｈ、又はＯＨ、又はｘが１〜６であるＯＣｘＨ２ｘ＋１、又はＨａｌ（ここでＨａｌはＣｌ、Ｂｒ、Ｆ又はＩである）；又はアセトキシ基又はスルホナートエステル基、又はオキソ基である]
の化合物と、それらの全ての立体異性体及び光学異性体、又はそれらの製薬的に許容可能な塩の、肝期におけるマラリアの予防的又は治癒的処置に有用な製薬用組成物の調製における使用。
【請求項１３】
少なくとも一の第２の抗マラリア化合物、製薬的に許容可能なビヒクルと共に、請求項１１に記載の少なくとも一の化合物又はそれらの製薬的に許容可能な塩を含有する製薬用組成物。
【請求項１４】
請求項１ないし８のいずれか一項に記載の少なくとも一の化合物、又はそれらの製薬的に許容可能な塩と、製薬的に許容可能なビヒクルを含有する製薬用組成物。
【請求項１５】
式Ｉ又はＩＩの化合物が、組成物の重量に対して０．００１〜５０重量％の量で存在している、請求項１３又は１４に記載の製薬用組成物。
【請求項１６】
ビヒクルが水性である、請求項１３ないし１５のいずれか一項に記載の製薬用組成物。
【請求項１７】
抗マラリア活性を有するStrychnopsis thouarsiiの単離抽出物を含む製薬用組成物。
【請求項１８】
請求項１ないし８のいずれか一項に記載の式Ｉ又はＩＩの少なくとも一の化合物と製薬的に許容可能なビヒクルを含有するStrychnopsis thouarsiiの単離抽出物を含む製薬用組成物。
【請求項１９】
少なくとも前記Strychnopsis thouarsii抽出物と製薬的に許容可能なビヒクルを含有する製薬用組成物の調製における、Strychnopsis thouarsiiの単離抽出物の使用であって、組成物がマラリアの予防的又は治癒的処置に有用である使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
本発明は、アルカロイド化合物及び医薬としてのそれらの用途に関する。これらの化合物及び誘導体は、予防的及び／又は治癒的処置においてマラリアに対して特に有用である。よって、本発明は、その新規化合物を含有する製薬用組成物と、抗マラリア組成物の製造プロセスにおけるその化合物の使用にもまた関する。さらに本発明の他の態様では、これらの化合物の製造方法に関する。
【０００２】
マラリアは、主として熱帯地方及び亜熱帯地方において年間約３億人を襲ったことに証明されるように、感染患者数及び患者死亡率のために社会に多大な脅威を与える重大な医療課題であり、これらの地域では約２００万人の死亡原因である。
マラリアは、通常は、クロロキン、ピリメタミン、キニーネ、プログアニル、プリマキン、アルテミシニン化合物等、またその併用物を投与することにより治療されるが、ほとんどのマラリア寄生虫が最終的にはこれらの抗マラリア剤に対して耐性を持つようになったため、これらの一般的な抗マラリア剤を用いた効果的な治療は困難になった。通常の抗マラリア化合物のほとんどは、寄生虫の血液期には活性であるが、肝期(hepatic stage)では活性ではないことが知られている。
マラリアを治療するための既知の化合物のいくつかは、副作用がないわけではなく、ある状況でその長時間の使用を有害なものとし、これらの化合物の使用を制約する。
よって、それらの通常の欠点がなく、血液期ばかりでなく肝期においてもマラリアに対して有効であり、これにより化合物に予防効果をもたらす化合物が今でも必要とされている。さらに、製薬用組成物に処方するのが容易な抗マラリア剤が必要とされている。
【０００３】
本出願人は、Strychnopsis thouarsiiから単離されたある種の化合物と、その合成誘導体が、赤血球サイクルに対してのみ活性な従来の抗マラリア剤のほとんどとは異なり、特にプラスモジウム(Plasmodium、マラリア原虫)の肝期(赤血球外期とも呼ばれる)に対して、良好な抗マラリア活性を有していることを見出した。
日本国特開昭６２−２６３１５８号には、抗腫瘍剤としてシノコクリン(sinoccoculine)が記載されており、日本国特開昭６２−２８９５６５号には四環系アルカロイド類とそれらの抗腫瘍活性が記載されており、化合物はCocculus sarmentosus又はCocculus trilobusから抽出されている。
【０００４】
よって、本発明は、以下の式Ｉ又はＩＩの化合物とそれらの誘導体の、医薬、特に抗マラリア化合物としての使用に関する。
【０００５】
それらの中でも、ほとんどが新規である。他の態様では、本発明は次の式：
【化１】
2007533704.tif 000003
[上式中、
−  Ｒ１は、Ｈ、又はｉが０〜６であるＯＣｉＨ２ｉ＋１であり；
−  Ｒ２は、Ｈ、又はｊが０〜６であるＯＣｊＨ２j＋１であり；
−  Ｒ３は、Ｈ、又はｋが０〜６であるＯＣｋＨ２ｋ＋１であり；
−  Ｒ４は、Ｈ又はＯＨであり；
−  Ｒ５は、ＯＨ、又はｍが１〜６であるＯＣｍＨ２ｍ＋１、又はアセトキシ基又はオキソ基であり；
−  Ｒ６は、ＯＨ、又はｎが１〜６であるＯＣｎＨ２ｎ＋１、又はアセトキシ基又はオキソ基であり；
−  Ｒ７は、ｐが０〜６であるＯＣｐＨ２ｐ＋１であり；
−  Ｒ８及びＲ９は同一でも異なっていてもよく、Ｈ、又はｑが０〜６のＯＣｑＨ２ｑ＋１、又はＨａｌ（ここでＨａｌはＣｌ、Ｂｒ、Ｆ又はＩである）を表し、又は共に共有結合を形成し、ここで該結合は二重結合であるか、又は酸素原子と共にエーテル結合(エポキシ基)を形成し；
−  Ｒ１０は、Ｈ、又はｒが１〜１２であるＣｒＨ２ｒ＋１、又は不飽和のアルキル基又はシクロアルキル基で、(トリ-からヘキサ-)不飽和又はそうではなく、ヘテロ原子を有するか又は有さないもの；又はヘテロ原子を有するか又は有さない芳香族又は多環芳香族基；又はｓが１〜１２であるＣｓＨ２ｓ-Ａであり、ここでＡは、ヘテロ原子を有するか又は有さない、飽和又は(トリ-からヘキサ-)不飽和のシクロアルキル基、又はヘテロ原子を有するか又は有さない芳香族又は多環芳香族基であり、又はＡは、ｔが１〜５であるＣ６Ｈ５−ｔ-(Ｈａｌ)ｔ、又はｕが１〜５であり、ｖが０〜６であるＣ６Ｈ５−ｕ-(Ｏ-ＣｖＨ２ｖ＋１)ｕ であり；又はＲ１０は、窒素原子を第４級化にする同一又は異なった２つの置換基、又は酸素原子（ニトロン基）を表し、この場合において、窒素原子とＣ９との間の結合は二重結合であり；又はＲ１０は、ｗが０〜１０であるＣＨ２ＣＨ２[ＯＣＨ２ＣＨ２]ｗＯＣＨ２ＣＨ２-Ｂを表し、ここでＢはＯＨ、Ｏ-Ｄ又はＮＨ-Ｄであり、Ｄはイソチオシアナート等の求電子官能基を担持するＣ１-Ｃ１２アルキル基であり；
−  Ｒ１１は、Ｈ、又はＯＨ、又はｘが１〜６であるＯＣｘＨ２ｘ＋１、又はＨａｌ（ここでＨａｌはＣｌ、Ｂｒ、Ｆ又はＩである）；又はアセトキシ基又はスルホナートエステル基、又はオキソ基であり；
又はＲ１０及びＲ１１はイソアルキリデン基を表してもよい]、又は
【化２】
2007533704.tif 000004
[上式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８及びＲ９は上述の通りであり、
−  Ｒ４は、Ｈ、又はＯＨ、又はｌが２〜６であるＯＣｌＨ２ｌ＋１であり；
−  Ｒ１０は、ｙが１〜１２であるＣｙＨ２ｙ、又はｚが０〜１０であるＣＨ２ＣＨ２[ＯＣＨ２ＣＨ２]ｚＯＣＨ２ＣＨ２であり；
−  Ｒ１１は、Ｈ、又はＯＨ、又はｘが１〜６であるＯＣｘＨ２ｘ＋１、又はＨａｌ（ここでＨａｌはＣｌ、Ｂｒ、Ｆ又はＩである）；又はアセトキシ基又はスルホナートエステル基、又はオキソ基である]
を有する化合物と、それらの全ての立体異性体及び光学異性体であり、
但し、式(Ｉ)において、(１)Ｒ３がＯＨ又はアルコキシで、Ｒ４がＨ又はＯＨで、Ｒ５及びＲ６がＯＨ又はアシルオキシで、Ｒ７がＯＣＨ３で、Ｒ８及びＲ９が二重結合を表し、Ｒ１がＨである場合に、Ｒ２はＨ又はアルコキシではなく；また(２)Ｒ２がＨで、Ｒ３及びＲ７がＯＣＨ３で、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６がＯＨで、Ｒ８及びＲ９が二重結合を表し、Ｒ１０がＨである場合に、Ｒ１はＨではなく；特に式(Ｉ)において、(１)Ｒ３がＯＨ又はアルコキシで、Ｒ４がＨ又はＯＨで、Ｒ５及びＲ６がＯＨ又はアシルオキシで、Ｒ７がＯＣＨ３で、Ｒ８及びＲ９が二重結合を表し、Ｒ１、Ｒ１０及びＲ１１がＨである場合に、Ｒ２はＨ又はアルコキシではなく；また(２)Ｒ２がＨで、Ｒ３及びＲ７がＯＣＨ３で、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６がＯＨで、Ｒ８及びＲ９が二重結合を表し、Ｒ１０及びＲ１１がＨである場合に、Ｒ１はＨではなく、これらは日本国特開昭６２−２６３１５８号及び日本国特開昭６２−２８９５６５号から知られている。
【０００６】
上記において、但し書きは、式Ｉの化合物において、(１)Ｒ３がＯＨ又はアルコキシで、Ｒ４がＨ又はＯＨで、Ｒ５及びＲ６がＯＨ又はアシルオキシで、Ｒ７がＯＣＨ３で、Ｒ８及びＲ９が二重結合を表し、Ｒ１がＨである場合に、Ｒ２はＨ又はアルコキシではなく；また(２)Ｒ２がＨで、Ｒ３及びＲ７がＯＣＨ３で、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６がＯＨで、Ｒ８及びＲ９が二重結合を表し、Ｒ１０がＨである場合に、Ｒ１はＨではないが、また式(Ｉ)において、(１)Ｒ３がＯＨ又はアルコキシで、Ｒ４がＨ又はＯＨで、Ｒ５及びＲ６がＯＨ又はアシルオキシで、Ｒ７がＯＣＨ３で、Ｒ８及びＲ９が二重結合を表し、Ｒ１、Ｒ１０及びＲ１１がＨである場合に、Ｒ２はＨ又はアルコキシではなく；また(２)Ｒ２がＨで、Ｒ３及びＲ７がＯＣＨ３で、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６がＯＨで、Ｒ８及びＲ９が二重結合を表し、Ｒ１０及びＲ１１がＨである場合に、Ｒ１はＨではないと定義される。
【０００７】
特に、本発明は、上記但し書きを持つ式Ｉの化合物と、但し書きを持たない式Ｉの化合物のその抗マラリア活性による用途に関する。それらの中でも、好ましい化合物は、Ｒ８及びＲ９が二重結合を形成し、Ｒ１及びＲ２がＨであるもの、特にＲ１１がＯＨである化合物である。
本発明の一態様によれば、Ｒ１０は、Ｈ又はｒが１〜１２であるＣｒＨ２ｒ-Ａを表すことができ、ここで、Ａは、Ｈ、又はｓが３〜６である環ＣｓＨ２ｓ−１、又は芳香環、又は多環芳香族、又はｔが１〜５であり、ＨａｌがＣｌ、Ｂｒ、Ｆ又はＩであるＣ６Ｈ５−ｔ-(Ｈａｌ)ｔとして、又はｕが１〜５であり、ｖが０〜６であるＣ６Ｈ５−ｕ-(Ｏ-ＣｖＨ２ｖ＋１)ｕとして、又はｗが１〜２であるＣ６Ｈ５−ｗ-(ＮＨ２)ｗとして置換された芳香環であり；又はＲ１０は、窒素原子を第４級化にする同一又は異なった２つの置換基、又は酸素原子を表し；又はＲ１０は、ｘが０〜１０であり、ＢがＨ又はＯＨ又はＮＨ２又はＮ=Ｃ=Ｓである、ＣＨ２ＣＨ２-[Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２]ｘＯ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｂを表す。
好ましい化合物は以下、すなわち実施例及び詳細な説明に記載する。
【０００８】
より詳細には、本発明は、よって、４,６,７,１０-テトラヒドロキシ-８,１４-ジデヒドロ-３,８-ジメトキシモルフィナン及びその誘導体Ｎ-メチル-、Ｎ-プロピル-、Ｎ-４-メトキシベンジル-、Ｎ-４-ヒドロキシベンジル-、Ｎ-４-ブロモベンジル-又はＮ-シクロペンチル--４,６,７,１０-テトラヒドロキシ-８,１４-ジデヒドロ-３,８-ジメトキシ-モルフィナン、並びにそれらの製薬的に許容可能な塩、及びラセミ化合物を含むそれらの光学異性体、より詳細には光学的配置(６Ｓ、７Ｓ、９Ｒ、１０Ｒ、１３Ｓ)を有する異性体に関する。
【０００９】
より詳細には、本発明は、次の式：
【化３】
2007533704.tif 000005
及び、次の(２)
【化４】
2007533704.tif 000006
の抗マラリア化合物としての使用に関する。
【００１０】
さらに、本発明は、上述した式Ｉ又はＩＩの化合物、及びその立体異性体及び光学異性体、及び製薬的に許容可能な塩を活性剤として、製薬的に許容可能なビヒクル、特に水性ビヒクルと共に含む製薬用組成物に関する。
また、本発明は、少なくとも一の第２の抗マラリア化合物及び製薬的に許容可能なビヒクルと共に、但し書きなしの上述した式Ｉ又は式ＩＩの化合物を含有する製薬用組成物に関する。
また、本発明は、マラリアの治療に有用な製薬用組成物の製造のためのこれらの化合物の使用であって、該組成物が、但し書きなしでの式Ｉ又はＩＩの少なくとも一の化合物と他の抗マラリア化合物を含む使用に関する。
本発明は、さらに、マラリアの予防的又は治癒的処置に有用な製薬用組成物の製造のための、但し書きのない式Ｉ又はＩＩの化合物と、それらの全ての立体異性体及び光学異性体の使用に関する。
【００１１】
さらなる側面では、本発明は、抗マラリア活性を有するStrychnopsis thouarsiiの単離抽出物を含む製薬用組成物に関する。
本発明は、また、Strychnopsis thouarsiiの単離抽出物と、式Ｉ又はＩＩの少なくとも一の化合物と、製薬的に許容可能なビヒクルを含有する製薬用組成物に関する。
本発明は、また、少なくとも前記Strychnopsis thouarsii抽出物及び製薬的に許容可能なビヒクルを含有する製薬用組成物の調製のための、Strychnopsis thouarsiiの単離抽出物の使用であって、該組成物がマラリアの予防的又は治癒的処置に有用である使用に関する。
【００１２】
本発明の化合物は、寄生虫が成長して肝臓シゾントを形成し、それが成熟すると(例えば、P. falciparumの場合ではスポロゾイトの侵入から６日後)、バーストにより肝臓メロゾイトを放出する、肝臓への寄生虫の移行及び肝細胞の感染に対応する肝期に特に対して抗マラリア活性を有する。第３段階は、寄生虫の無性型(メロゾイト)による赤血球の感染により特徴付けられ；成長中のこの赤血球期は病気の発病段階に対応する。第４段階は、蚊において細胞外有性型又は配偶子になるであろう有性となる可能性のある形態(又は生殖母細胞)の形成に対応する。第２段階はまたプラスモジウムの赤血球外期とも呼ばれる。
【００１３】
肝期に対して活性がある既知で特に使用されている分子は、プリマキン及びアトバコンである。
しかしながら、プリマキンには非常に毒性があり、アトバコンは素早く耐性が生じるため、使用が制約されており、他の抗マラリア剤と組み合わせて使用されるのみである。
【００１４】
本発明の化合物は、マラリアの肝期の予防的及び治癒的処置に特に有用である。さらに、本発明の化合物は、感染した蚊による伝染直後、及び赤血球内での増殖による発病前に、寄生虫を殺すことが証明されている。よって、本発明の化合物は通常の治療と比較して、特に抗マラリア予防に対して有用である。
以下に記載する試験に従い、マウス及びヒト肝細胞におけるプラスモジウムの成長阻害によるインビトロでの抗マラリア活性について、植物の煎剤（滲出液）及びメタノール抽出物を評価した。
クロマトグラフィーによる分離技術にこのインビトロ試験を関連付ける植物抽出物のバイオアッセイ誘導分画を、以下に記載するようにして実施し、活性化合物の単離に至った。
【００１５】
よって、本発明は、製薬用組成物に使用されるここに記載された植物の樹皮又は葉の単離抽出物をも包含する
本発明の製薬用組成物は、本発明の化合物(類)に加えて、製薬的に許容可能な担体を含む。製薬的に許容可能な担体は投薬形態に依存する。
本発明の化合物の利点の一つは、それらの生物学的利用能にある。水及び水性ビヒクル中でのそれらの溶解性は大きな利点である。
製薬的に許容可能なビヒクルの中でも、水性ビヒクルが好ましい。
【００１６】
製薬用組成物が経口投与に使用される場合、それらは、バインダー、例えばリン酸二カルシウム；崩壊剤、例えばスクロース；染料；及び香料、例えばオレンジフレーバー；及び溶媒、例えば水、エタノール及びグリセロールを含む製薬的に許容可能な担体を適宜含みうる。
本発明の製薬用組成物が注射可能な組成物である場合、適切な製薬的に許容可能な担体には、滅菌水、等張生理食塩水、及びｐＨ緩衝液が含まれる。また、本発明の注射可能な組成物は、滅菌水に単に溶解させることで使用可能な、滅菌パウダー組成物又は凍結乾燥パウダー組成物であってもよい。本発明の注射可能な製薬用組成物は、糖類(グルコース、マンニトール及びデキストリン等)、多価アルコール(グリセロール等)、及び無機塩(ナトリウム塩及びマグネシウム塩等)を含んでいてもよい。
本発明の製薬用組成物が静脈内注射又は注入により投与される場合、それらは栄養素、例えばグルコース、ビタミン類、アミノ酸及び脂質を含んでいてもよい。
他の投与モデル、例えば経鼻投与、吸入及び経皮投与用の投与形態のものに添加される製薬用の担体もまた当業者にはよく知られている。
【００１７】
本発明の製薬用組成物が経口投与される場合、それらは制御放出又は持続放出製剤の形態であってもよい。よく知られている持続放出製剤には、通常の持続放出又は制御放出製剤、例えばゲルコート製剤及び多層コート製剤並びに部位特異性デリバリー製剤(例えば、幽門部での爆発型放出、又は十二指腸への発泡性デリバリー)を含む。経口組成物には、例えば錠剤、丸薬、カプセル剤、アンプル剤、小袋、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤等が含まれる。
上述した投与形態及び製薬用の担体は、出典明示によりここに援用される、Remington's Pharmaceutical Sciences,  第16版, (1980), Mack Publishing Companyに記載されている。
【００１８】
本発明の製薬用組成物又は単位投薬系は、種々の他の経路、例えば経粘膜(舌下、経鼻、頬)、腸内、皮膚投与、坐薬又は点滴静注を介して投与することができる。これらの投与形式は、投与される活性化合物の量、患者の症状及び他の要因に依存する。
これらの投与形式の中でも、経口投与が特に好ましく、また水性ビヒクルの使用が興味深い任意の形式も同様である。
【００１９】
本発明によれば、本発明の化合物は製薬用組成物に０．００１〜５０重量％の量で存在している。
本発明の化合物が、第２の抗マラリア化合物と組み合わせて、又は他の抗マラリア化合物の抗マラリア活性のエンハンサーとして存在する場合、本発明の化合物は製薬用組成物に０．０００１〜２０重量％の量で存在している。
本発明において、マラリアの処置に使用される本発明の化合物の有効量は、年齢、体重、患者の症状、及び投与形式に応じて、通常は毎日１−１０００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは毎日５−５００ｍｇ／ｋｇ体重である。
【００２０】
抽出プロセスによるそれらの入手法とは別に、本発明の化合物は合成によっても得ることができる。以下の実施例から明らかなように、(１)及び(２)の誘導体は、通常の化学的手順に従い調製することができる。特に、生成物(１)及び(２)に対して、適切なアルキル化条件下で、対応する適切なアルキル化剤を用いてアルキル化手順が実施される。例えば、適切なアルキル化剤は対応するアルデヒド類又はジアルデヒド類である。適切な条件は還元性アルキル化条件でありうる。
さらに、酸化及び引き続いてのアルキル化は、通常の手順により実施することができ、必要ならば、予め置換基を保護することもできる。
【００２１】
以下の実施例では、茎の樹皮を処理して、植物から化合物を抽出する。しかしながら、植物の他の部位、並びに同様の抽出物を産生可能な他の種を処理してもよい。また、Strychopsis thouarsiiの葉、並びに他の植物及び種を使用することもできる。当業者であれば、処理される植物の種又は部位に応じて、分離プロセスを適合させることができるであろう。
図１は、感染後の日数に対する寄生虫血症のパーセンテージを示すグラフである。コントロールグループは●で示し、化合物(１)で処置したグループは◆で示す。
【実施例】
【００２２】
調製実施例
実施例１：抽出プロセス
以下の手順に従い、６日間、室温で、ＭｅＯＨ中に攪拌しつつ、５００ｇのパウダー状のStrychnopsis thouarsiiの茎の樹皮を浸漬した。
２４時間毎に溶質を濾過し、固形残留物を２リットルのＭｅＯＨで処理した。得られた６つの溶質をプールし、減圧下で蒸発乾固させたところ、２２ｇのメタノール抽出物が得られた。
この抽出物を２リットルのＨ２Ｏに溶解させ、１００００ｒｐｍで１時間、遠心分離した。１０ｇの残留物を除去し、上清をＨ２ＯとＣＨ２Ｃｌ２(５００ｍＬ)の間で３回分配した。
【００２３】
得られた１１．７ｇの水性抽出物を逆相シリカゲルカラム(ＲＰ-２)においてクロマトグラフィーにかけ、(１００−０、９０−１０、８０−２０、０−１００)の割合のＨ２Ｏ-ＭｅＯＨ非連続勾配を用いて溶出させた。
画分をそれらのＴＬＣプロファイルに従い、３つの画分Ｆ１〜Ｆ３にプールした。
画分Ｆ１(９．４ｇ)をシリカゲルカラムでさらに分離させ、ＣＨ２Ｃｌ２-ＭｅＯＨ-ＮＨ４ＯＨ(８５−１５−０．５)で溶出させたところ、１０の画分Ｆ１−１〜Ｆ１−１０を得た。
以下に記載する方法に従い実施された生物活性の評価により、画分Ｆ１−６が、得られた画分の中で最も高い活性があることを決定した。
【００２４】
実施例２：化合物(１)及び(２)の単離
化合物(１)＝４,６,７,１０-テトラヒドロキシ-８,１４-ジデヒドロ-３,８-ジメトキシ-モルフィナンＣ１８Ｈ２３ＮＯ６
化合物(２)＝４,６,７-トリヒドロキシ-８,１４-ジデヒドロ-３,８-ジメトキシ-モルフィナン(シノコクリン又はＦＫ１０００)[ＣＡＳ登録番号１０９３５１-３６-２]Ｃ１８Ｈ２３ＮＯ５
画分Ｆ１−６(０．８５０ｇ)のアリコートを、セファデックス(sephadex)ゲルカラム(ＬＨ-２０)においてクロマトグラフィーにかけ、ＭｅＯＨを用いて溶出させたところ、４つの画分Ｆ１−６−１〜Ｆ１−６−４を得た。
画分Ｆ１−６−３(０．３６８ｇ)をシリカゲルカラムで精製し、ＣＨ２Ｃｌ２-ＭｅＯＨ-ＮＨ４ＯＨ(８７-１３-１)で溶出させたところ、６の画分Ｆ１−６−３−１〜Ｆ１−６−３−６を得た。
画分Ｆ１−６−３−４(０．１２２ｇ)は２つの化合物(１)及び(２)の混合物であることが分かった。
さらに、Ｆ１−６−３−４(０．０４５ｇ)のアリコートを調製シリカゲルＴＬＣにかけ、ＣＨＣｌ３−ＮＨ(Ｃ２Ｈ５)２(７０−３０)にて移動させたところ、２つの画分Ｆ１−６−３−４−１(０．０１ｇ)とＦ１−６−３−４−２(０．０２８ｇ)を得た。
第１の画分を、ＣＨ２Ｃｌ２−ＭｅＯＨ−ＮＨ４ＯＨ(７０−３０−３)を用いたシリカゲルカラム濾過にかけたところ、純粋な化合物(２)(０．００４ｇ)が得られ、第２の画分からは、同じ条件下で純粋な化合物(１)(０．０１９ｇ)が得られた。
【００２５】
実施例３：化合物(１)及び(２)の単離
画分Ｆ１−６(０．２２ｇ)のアリコートをそのまま調製シリカゲルＴＬＣにかけ、ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ−ＮＨ４ＯＨ(７５−２５−３．５)にて移動させたところ、化合物(１)(０．０４ｇ)が得られるが、極性の低い生成物に相当するバンドをプールし、第２の調製ＴＬＣにかけ、ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ−ＣＨ３ＣＯＯＨ−Ｈ２Ｏ(７５−１８−４−３)にて移動させたところ、３つの画分Ｆ１−６−１'〜Ｆ１−６−３'を得た。
画分Ｆ１−６−１'(０．０１２ｇ)を、ＣＨ２Ｃｌ２−ＭｅＯＨ−ＮＨ４ＯＨ(９０−１０−１)を用いたシリカゲルカラム濾過にかけたところ、純粋な化合物(２)(０．００４ｇ)が得られた。
【００２６】
実施例４：化合物(１)及び(２)の分析データ
１）化合物(１)
【化５】
2007533704.tif 000007
ａ）ＣＤ３ＯＤにおける(１)のＮＭＲデータ及び２Ｄ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ)によるその特質
【表１】
2007533704.tif 000008
ｂ）(１)の物理化学的データ
質量分析(ＥＳＩ-ＴＯＦ＋)：ｍ／ｚ ３５０．１[Ｍ＋Ｈ]＋
Ｃ１８Ｈ２４ＮＯ６に対する算出質量：３５０．１６０４
高分解能ＭＳ(ＤＣＩ＋)：ｍ／ｚ ３５０．１６０４[Ｍ＋Ｈ]＋
ＵＶ(λｍａｘｎｍ(ε)、ＭｅＯＨ)：２８２(３３１８)、２４２ｓｈ(９９２６)、２０７(５７４８３)
[α]２０Ｄ-４６°(ｃ０．５、ＭｅＯＨ)
円偏光二色性(λｅｘｔｎｍ、θ)：(２１６、＋６６３２４)、(２２７、−１５９４９)、(２４２、＋１６８６４)
(ｃ＝１．１５ｘ１０−３Ｍ、ＭｅＯＨ)
【００２７】
２）化合物(２)
【化６】
2007533704.tif 000009
ａ）(２)のＮＭＲデータ
１Ｈ-ＮＭＲ(３００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ)：δ６．８５(ｄ，１Ｈ，Ｊ=８．３Ｈｚ)、６．６２(ｄｄ，１Ｈ，Ｊ=１．２，８．３Ｈｚ)、４．９６(ｄｄ，１Ｈ，Ｊ=１．７，６．２Ｈｚ)、４．３９(ｄｄ，１Ｈ，Ｊ=１．１，３．１Ｈｚ)、３．８７(ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ=３．１，３．９，１３．５Ｈｚ)、３．８４(ｓ，３Ｈ)、３．７８(ｓ，３Ｈ)、３．３１(ｄｄｄ，３Ｈ，Ｊ=１．２，６．２，１９．１Ｈｚ)、３．１４(ｄｄ，１Ｈ，Ｊ=４．６，１３．１Ｈｚ)、３．１０(ｄｄ，１Ｈ，Ｊ=１．７，１９．１Ｈｚ)、３．０３(ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ=１．１，３．９，１３．５Ｈｚ)、２．８４(ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ=４．１，１３．１，１３．２Ｈｚ)、２．２４(ｄｄ，１Ｈ，Ｊ=１３．５，１３．５Ｈｚ)、２．１９(ｄｄ，１Ｈ，Ｊ=４．１，１３．２Ｈｚ)、２．０６(ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ=４．６，１３．２，１３．２Ｈｚ)
１３Ｃ-ＮＭＲ(３００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ)：δ３３．５３、３４．０８、３６．０、３８．４６、４０．６７、４７．９６、５６．２２、５６．６７、６５．３８、６８．１１、１１１．３０、１１３．９２、１１９．４８、１２７．９０、１２８．５６、１４５．７９、１４８．０９、１５０．６６
(２)のＮＭＲデータは、文献[１,２]に過去に記載されたものと同様であった。
【００２８】
ｂ）(２)の物理化学的データ
質量分析(ＥＳＩ-ＴＯＦ＋)：ｍ／ｚ ３３４．１[Ｍ＋Ｈ]＋
Ｃ１８Ｈ２４ＮＯ５に対する算出質量：３３４．１６５４
Ｃ１８Ｈ２３ＮＯ５に対して算出された高分解能ＭＳ：３３４．１６５５
ＵＶ(ＭｅＯＨ)λｍａｘｎｍ(ε)：２８２(２８５６)、２４２ｓｈ(６９８４)、２０７(５９６０２)
[α]２０Ｄ-１４３°(ｃ０．２５、ＭｅＯＨ)  参照：[３] [α]２０Ｄ-１３７．４°(ｃ０．１２、ＭｅＯＨ)
円偏光二色性(λｅｘｔｎｍ、θ)：(２１６、＋６３３４０)、(２２７、−１５２３１)、(２４２、＋１６１０５)
(ｃ＝１．２０ｘ１０−３Ｍ、ＭｅＯＨ)
参照：[１] ＣＤ(λｅｘｔｎｍ、θ)：(２３８、＋６２１００)(ｃ＝９．６７ｘ１０−５Ｍ、ＭｅＯＨ)
【００２９】
３）化合物(１)及び(２)の立体化学
化合物(２)及びシノコクリンの比旋光度値は酷似していた。
化合物(１)及び(２)は、シノコクリンと同じ核オーバーハウザー効果スペクトロスコピーＹ(Nuclear Overhauser Effect SpectroscopY)(ＮＯＥＳＹ)相関関係(表１を参照)を示した。その結果、化合物(１)及び(２)にはシノコクリンと同じ相対配置(６Ｓ★、７Ｓ★、９Ｒ★、１３Ｓ★)が付与されている。
さらに、化合物(１)及び(２)は、文献に記載されたシノコクリンと一致して、類似したＣＤスペクトル(２１６ｎｍ及び２４２ｎｍで陽性極大、２２７ｎｍで陰性極大)示し、化合物(１)及び化合物(２)の絶対(立体)配置が、それぞれ(６Ｓ、７Ｓ、９Ｒ、１０Ｒ、１３Ｓ)及び(６Ｓ、７Ｓ、９Ｒ、１３Ｓ)であると結論付けることができた。
【００３０】
【表２】
2007533704.tif 000010
【００３１】
実施例５：Ｎ-メチル-４,６,７,１０-テトラヒドロキシ-８,１４,ジデヒドロ-３,８-ジメトキシ-モルフィナン(３)Ｃ１９Ｈ２５ＮＯ６
１）化合物(３)の調製
１ｍＬのＭｅＯＨに(１)(１０．９ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ)が入った溶液に、１００μｌのホルムアルデヒド溶液(水に３７％)を添加した。室温で１時間攪拌した後、３ｍｇのＮａＢＨ４を添加し、混合物をさらに３時間攪拌した。
減圧下で溶媒を除去した後、残留物を１ＮのＨＣｌで酸性化し、ついで２０％のＮＨ４ＯＨ水で塩基性化し、さらにシリカゲルカラムにかけ、ＣＨ２Ｃｌ２−ＭｅＯＨ−ＮＨ４ＯＨ(８５−１５−１)で溶出させたところ、収率７１％で、白色固体として化合物(３)(８ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ)が得られた。
【００３２】
２）(３)の分析データ
【化７】
2007533704.tif 000011
１Ｈ-ＮＭＲ(３００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ)：δ６．９０(ｄ，１Ｈ，Ｊ=８．４Ｈｚ)、６．８３(ｄ，１Ｈ，Ｊ=８．４Ｈｚ)、４．７０(ｄ，１Ｈ，Ｊ=２．２Ｈｚ)、４．３０(ｄｄ，１Ｈ，Ｊ=１．３，３．４Ｈｚ)、４．２１(ｄ，１Ｈ，Ｊ=２．２Ｈｚ)、３．８８(ｍ，１Ｈ，Ｊ=３．４,４．１，１３．８Ｈｚ)、３．８７(ｓ，３Ｈ)、３．７０(ｓ，３Ｈ)、２．９８(ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ=１．３，４．１，１３．８Ｈｚ)、２．５１(ｄｄ，１Ｈ，Ｊ=３．３，１２．４Ｈｚ)、２．４７(ｓ，３Ｈ)、２．２６(ｍ，１Ｈ，Ｊ=２．９，１２．４，１２．９Ｈｚ)、２．１８(ｄｄ，１Ｈ，Ｊ=１３．８，１３．８Ｈｚ)、１．９５(ｍ，２Ｈ，Ｊ=２．９，３．３，１２．９Ｈｚ)
質量分析(ＥＳＩ-ＴＯＦ＋)：ｍ／ｚ ３６４．１[Ｍ＋Ｈ]＋
Ｃ１９Ｈ２６ＮＯ６に対する算出質量：３６４．１７６０
高分解能ＭＳ(ＤＣｌ＋)：ｍ／ｚ ３６４．１７６４[Ｍ＋Ｈ]＋
[α]２０Ｄ-４１°(ｃ０．５、ＭｅＯＨ)
【００３３】
実施例６：Ｎ-プロピル-４,６,７,１０-テトラヒドロキシ-８,１４,ジデヒドロ-３,８-ジメトキシ-モルフィナン(４)Ｃ２１Ｈ２９ＮＯ６
１）化合物(４)の調製
３００μｌのＭｅＯＨに(１)(３．０５ｍｇ、０．００８７ｍｍｏｌ)が入った溶液に、１μｌ、０．０１４ｍｍｏｌのプロピオンアルデヒド溶液と、０．６ｍｇ、０．００９５ｍｍｏｌのシアノホウ化水素ナトリウムＮａＢＨ３ＣＮを添加した。混合物を室温で４時間攪拌した。
減圧下で溶媒を除去した後、残留物を１ＮのＨＣｌで酸性化し、ついで２０％のＮＨ４ＯＨ水で塩基性化し、調製ＴＬＣにかけ、ＣＨ２Ｃｌ２−ＭｅＯＨ−ＮＨ４ＯＨ(９０−１０−１)で２回溶出させたところ、収率６８％で、白色固体として(４)(２．３ｍｇ、０．０５９ｍｍｏｌ)が得られた。
【００３４】
２）(４)の分析データ
【化８】
2007533704.tif 000012
１Ｈ-ＮＭＲ(３００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ)：δ６．９９(ｄ，１Ｈ，Ｊ=８．４Ｈｚ)、６．９６(ｄ，１Ｈ，Ｊ=８．４Ｈｚ)、４．８２(ｄ，１Ｈ，Ｊ=１．９Ｈｚ)、４．７２(ｓ，１Ｈ)、４．３７(ｄ，１Ｈ，Ｊ=３．３Ｈｚ)、３．９２(ｍ，１Ｈ)、３．８９(ｓ，３Ｈ)、３．７８(ｓ，３Ｈ)、３．０５(ｍ，４Ｈ)、２．６６(ｍ，２Ｈ)、２．２７(ｄｄ，１Ｈ，Ｊ=１３．５，１３．５Ｈｚ)、２．１１(ｄｄ，１Ｈ，Ｊ=３．９，１２．３Ｈｚ)、１．７７(ｍ，２Ｈ，Ｊ=２．２，７．３，７．３Ｈｚ)、１．０２(ｔ，３Ｈ，Ｊ=７．３Ｈｚ)
質量分析(ＥＳＩ-ＴＯＦ＋)：ｍ／ｚ ３９２．２[Ｍ＋Ｈ]＋
Ｃ２１Ｈ３０ＮＯ６に対する算出質量：３９２．２０７３
高分解能ＭＳ(ＤＣｌ＋)：ｍ／ｚ ３９２．２０６４[Ｍ＋Ｈ]＋
[α]２０Ｄ-１８°(ｃ０．１、ＭｅＯＨ)
【００３５】
実施例７：Ｎ-４-メトキシベンジル-４,６,７,１０-テトラヒドロキシ-８,１４,ジデヒドロ-３,８-ジメトキシ-モルフィナン(５)Ｃ２６Ｈ３１ＮＯ７
１）化合物(５)の調製
５００μｌのＭｅＯＨに(１)(５．７ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ)が入った溶液に、２００μｌ、１．６ｍｍｏｌのアニスアルデヒドを添加した。室温で１時間攪拌した後、３ｍｇのＮａＢＨ４を添加し、混合物を室温でさらに３時間攪拌した。
減圧下で溶媒を除去した後、残留物を１ＮのＨＣｌで酸性化し、ついで２０％のＮＨ４ＯＨ水で塩基性化し、調製ＴＬＣにかけ、ＣＨ２Ｃｌ２−ＭｅＯＨ−ＮＨ４ＯＨ(９０−１０−１．５)で２回溶出させたところ、収率４０％で、白色固体として(５)(３．０ｍｇ、０．００６４ｍｍｏｌ)が得られた。
【００３６】
２）(５)の分析データ
【化９】
2007533704.tif 000013
１Ｈ-ＮＭＲ(３００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ)：δ７．４７(ｄ，２Ｈ，Ｊ=８．６Ｈｚ)、７．０(ｄ，２Ｈ，Ｊ=８．６Ｈｚ)、６．９８(ｄ，１Ｈ，Ｊ=８．４Ｈｚ)、６．９３(ｄ，１Ｈ，Ｊ=８．４Ｈｚ)、４．８８(ｓ，１Ｈ)、４．７１(ｓ，１Ｈ)、４．４０(ｄ，１Ｈ，Ｊ=２．８Ｈｚ)、４．２５(ｓ，２Ｈ)、３．９９(ｍ，１Ｈ)、３．８８(ｓ，３Ｈ)、３．８３(ｓ，３Ｈ)、３．７７(ｓ，３Ｈ)、３．０６(ｍ，２Ｈ，Ｊ=３．６，３．９，１２．５，１３．６Ｈｚ)、２．７５(ｄｄ，１Ｈ，Ｊ=２．１，１２．５Ｈｚ)、２．２８(ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ=３．２，１３．６，１３．６Ｈｚ)、２．２０(ｄｄ，１Ｈ，Ｊ=３．９，１３．２Ｈｚ)、２．０７(ｄｄ，１Ｈ，Ｊ=２．１，１３．２Ｈｚ)
質量分析(ＥＳＩ-ＴＯＦ＋)：ｍ／ｚ ４７０．２[Ｍ＋Ｈ]＋
Ｃ２６Ｈ３２ＮＯ７に対する算出質量：４７０．２１７９
高分解能ＭＳ(ＤＣｌ＋)：ｍ／ｚ ４７０．２１７０[Ｍ＋Ｈ]＋
[α]２０Ｄ-１２°(ｃ０．１、ＭｅＯＨ)
【００３７】
実施例８：Ｎ-４-ヒドロキシベンジル-４,６,７,１０-テトラヒドロキシ-８,１４,ジデヒドロ-３,８-ジメトキシ-モルフィナン(６)Ｃ２５Ｈ２９ＮＯ７
１）化合物(６)の調製
５００μｌのＭｅＯＨに(１)(４．８５ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ)が入った溶液に、４-ヒドロキシ-ベンズアルデヒド(１．７ｍｇ、１当量)を添加した。室温で４時間攪拌した後、０．９ｍｇ、１当量のＮａＢＨ３ＣＮを添加し、混合物を室温でさらに３時間攪拌した。
減圧下で溶媒を除去した後、残留物を１ＮのＨＣｌで酸性化し、ついで２０％のＮＨ４ＯＨ水で塩基性化し、調製ＴＬＣにかけ、ＣＨ２Ｃｌ２−ＭｅＯＨ−ＮＨ４ＯＨ(９０−１０−１)で２回溶出させたところ、収率５５％で、白色固体として(６)(３．５ｍｇ、０．００７７ｍｍｏｌ)が得られた。
【００３８】
２）(６)の分析データ
【化１０】
2007533704.tif 000014
１Ｈ-ＮＭＲ(３００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ)：δ７．２９(ｄ，２Ｈ，Ｊ=８．６Ｈｚ)、６．９６(ｄ，１Ｈ，Ｊ=８．４Ｈｚ)、６．９１(ｄ，１Ｈ，Ｊ=８．４Ｈｚ)、６．８２(ｄ，２Ｈ，Ｊ=８．６Ｈｚ)、４．７９(ｓ，１Ｈ)、４．５７(ｄ，１Ｈ，Ｊ=１．６Ｈｚ)、４．３７(ｄ，１Ｈ，Ｊ=３．３Ｈｚ)、４．０１(ｄ，２Ｈ，Ｊ=８．１Ｈｚ)、３．９４(ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ=３．７，３．７，１２．９Ｈｚ)、３．８７(ｓ，３Ｈ)、３．７２(ｓ，３Ｈ)、３．０２(ｄｄ，１Ｈ，Ｊ=４．１，１３．５Ｈｚ)、２．８８(ｄ，１Ｈ，Ｊ=１２．６Ｈｚ)、２．５９(ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ=３．７，１２．６，１２．６Ｈｚ)、２．２５(ｄｄ，１Ｈ，Ｊ=１３．５，１３．５Ｈｚ)、２．１２(ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ=４．５，１２．６，１２．６Ｈｚ)、２．０１(ｄ，１Ｈ，Ｊ=１２．６Ｈｚ)
質量分析(ＥＳＩ-ＴＯＦ＋)：ｍ／ｚ ４５６．２[Ｍ＋Ｈ]＋
Ｃ２５Ｈ３０ＮＯ７に対する算出質量：４５６．２０２２
高分解能ＭＳ(ＤＣｌ＋)：ｍ／ｚ ４５６．２０１８[Ｍ＋Ｈ]＋
[α]２０Ｄ-１０°(ｃ０．０３、ＭｅＯＨ)
【００３９】
実施例９：Ｎ-４-ブロモベンジル-４,６,７,１０-テトラヒドロキシ-８,１４,ジデヒドロ-３,８-ジメトキシ-モルフィナン(７)Ｃ２５Ｈ２８ＮＯ６Ｂｒ
１）化合物(７)の調製
３００μｌのＭｅＯＨに(１)(３．３ｍｇ、０．００９５ｍｍｏｌ)が入った溶液に、２ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌの４-ブロモ-ベンズアルデヒド、及び３ｍｇのＮａＢＨ３ＣＮを添加した。混合物を室温で２０時間攪拌した。
減圧下で溶媒を除去した後、残留物を１ＮのＨＣｌで酸性化し、ついで２０％のＮＨ４ＯＨ水で塩基性化し、調製ＴＬＣにかけ、ＣＨ２Ｃｌ２−ＭｅＯＨ−ＮＨ４ＯＨ(９５−５−０．５)で２回溶出させたところ、収率６１％で、白色固体として(７)(３．０ｍｇ、０．００５８ｍｍｏｌ)が得られた。
【００４０】
２）(７)の分析データ
【化１１】
2007533704.tif 000015
１Ｈ-ＮＭＲ(３００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ)：δ７．５１(ｄ，２Ｈ，Ｊ=８．４Ｈｚ)、７．３５(ｄ，２Ｈ，Ｊ=８．４Ｈｚ)、６．９２(ｄ，１Ｈ，Ｊ=８．４Ｈｚ)、６．８８(ｄ，１Ｈ，Ｊ=８．４Ｈｚ)、４．７８(ｄ，１Ｈ，Ｊ=３．４Ｈｚ)、４．７４(ｓ，２Ｈ)、４．７３(ｄ，１Ｈ，Ｊ=２．２Ｈｚ)、４．３２(ｄ，１Ｈ，Ｊ=１，３．４Ｈｚ)、３．９３(ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ=２．９，３．４，１３．５Ｈｚ)、３．８８(ｓ，３Ｈ)、３．６８(ｓ，３Ｈ)、３．０(ｄｄ，１Ｈ，Ｊ=２．９，１３．５Ｈｚ)、２．６６(ｍ，１Ｈ，Ｊ=４．６，１２．１Ｈｚ)、２．４６(ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ=３．９，１２．１，１２．１Ｈｚ)、２．２１(ｄｄ，１Ｈ，Ｊ=１３．５，１３．５Ｈｚ)、２．０５(ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ=４．６，１２．６，１２．６Ｈｚ)、１．９４(ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ=１．９，３．９，１２．６Ｈｚ)
質量分析(ＥＳＩ-ＴＯＦ＋)：ｍ／ｚ ５１９．１及び５２１．１[Ｍ＋Ｈ]＋
Ｃ２５Ｈ２９ＮＯ６Ｂｒに対する算出質量：５１９．１０３５及び５２１．１０５５
高分解能ＭＳ(ＤＣｌ＋)：ｍ／ｚ ５１９．１０３７及び５２１．１０５８[Ｍ＋Ｈ]＋
[α]２０Ｄ-０．５°(ｃ０．５、ＭｅＯＨ)
【００４１】
実施例１０：Ｎ-シクロペンチル-４,６,７,１０-テトラヒドロキシ-８,１４,ジデヒドロ-３,８-ジメトキシ-モルフィナン(８)Ｃ２３Ｈ３１ＮＯ６
１）化合物(８)の調製
３００μｌのＭｅＯＨに(１)(４．９５ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ)が入った溶液に、２μｌ、０．０２３ｍｍｏｌのシクロペンタノン、及び３ｍｇのＮａＢＨ３ＣＮを添加した。混合物を室温で６時間攪拌した。
減圧下で溶媒を除去した後、残留物を１ＮのＨＣｌで酸性化し、ついで２０％のＮＨ４ＯＨ水で塩基性化し、調製ＴＬＣにかけ、ＣＨ２Ｃｌ２−ＭｅＯＨ−ＮＨ４ＯＨ(９０−１０−１)で２回溶出させたところ、収率８１％で、白色固体として(８)(４．７５ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ)が得られた。
【００４２】
２）(８)の分析データ
【化１２】
2007533704.tif 000016
１Ｈ-ＮＭＲ(３００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ)：δ６．９８(ｄ，１Ｈ，Ｊ=８．４Ｈｚ)、６．９４(ｄ，１Ｈ，Ｊ=８．４Ｈｚ)、４．８３(ｓ，１Ｈ)、４．７１(ｓ，１Ｈ)、４．３７(ｄ，１Ｈ，Ｊ=２．７Ｈｚ)、３．９１(ｍ，１Ｈ)、３．８８(ｓ，３Ｈ)、３．７８(ｓ，３Ｈ)、３．２１(ｄ，１Ｈ，Ｊ=１２．６Ｈｚ)、３．０５(ｄｄ，１Ｈ，Ｊ=３．５，１４．３Ｈｚ)、２．２７(ｍ，２Ｈ，Ｊ=１２．６，１４．３Ｈｚ)、２．１６(ｍ，１Ｈ)、１．８６(ｍ，４Ｈ)、１．６５(ｍ，６Ｈ)
質量分析(ＥＳＩ-ＴＯＦ＋)：ｍ／ｚ ４１８．２[Ｍ＋Ｈ]＋
Ｃ２３Ｈ３２ＮＯ６に対する算出質量：４１８．２２３０
高分解能ＭＳ(ＤＣｌ＋)：ｍ／ｚ ４１８．２２３９[Ｍ＋Ｈ]＋
[α]２０Ｄ-３０°(ｃ０．０３、ＭｅＯＨ)
【００４３】
化合物の生物活性の評価
・材料及び方法
・・植物抽出物及び純粋な化合物(１)−(８)の抗マラリア活性のインビトロでの評価
Ａ−マウスモデル：Plasmodium yoelii yoelii 265BYの肝期
マウス肝細胞の初代培養物を、コラゲナーゼ(１ｇ／Ｌ)を用いた灌流により、６〜８週齢のスイスマウスの肝臓から単離し、６０％のパーコール勾配を通して精製した。
以下に記載するように、ウェル当たり０．３ｍＬの次に記載する完全培養培地に９００００細胞の割合で、肝細胞を滅菌チャンバー(Lab-Tek)にて培養し、４％のＣＯ２雰囲気下、３７℃で一晩インキュベートした。肝細胞の完全培養培地は、１０％のdecomplementedウシ胎児血清、１％のグルタミン、１％のピルビン酸ナトリウム、１％のインシュリン、トランスフェリン及びセレンの混合物、１％の非必須アミノ酸、及びペニシリンとストレプトマイシンの１％溶液、１％のオウグメンチン、及び２．５ｐｇ／ｍｌのフルシトシンを含有する抗生物質混合物が補足されたウィリアムズＥ培養培地であった。
肝細胞に感染している寄生虫；すなわちスポロゾイトは、感染したハマダラカ属の蚊の唾液腺を切開することにより回収した。
培養培地と共に、ポッター(Potter)グラインダーでそれらを挽いた後、懸濁液を４０μｍメッシュのフィルターで濾過し、４℃で２分間、遠心分離した(１５０００ｒｐｍ)。ペレットを完全培養培地に再び導入した。ついで、「セルＶｕ」カウンター(ＣＭＬ)でスポロゾイトを計測し、感染に必要な濃度である７０μＬ当たり１０００００スポロゾイトに調節した。
【００４４】
１日後、試験される生成物の存在下又は非存在下で、感染したハマダラカ属の蚊の唾液腺からの上述のスポロゾイトによって、ウェル当たり１０００００スポロゾイトの割合で、肝細胞を感染させた。感染が明らかになったときに、培地に１０−７Ｍのデキサメタゾンを補填した。生成物をまずＤＭＳＯに溶解させた。
感染した肝細胞を洗浄し、感染３時間及び２４時間後に試験用生成物を含有する培養培地を与えた。
感染４８時間後に、冷メタノール固定液で処理することにより、培養を停止した。
まず、シゾント期に得られた寄生虫を、プラスモジウム[４]のＨＳＰ７０に対して反応した組換えタンパク質１７２のＮ末端からの組換え断片にて免疫されたＢＡＬＢ／ｃマウスから単離された血清を用い、第２に、ＦＩＴＣに結合させた抗体−マウス抗免疫グロブリン−を用いて、免疫標識付けをした。エバンス・ブルー及びＤＡＰＩ、核酸マーカーを、同時に肝細胞に添加した。ついで、シゾントを蛍光顕微鏡で計測した。
マウス肝細胞でのP. yoelii yoelii 265BY成長に対して有意な阻害効果を示す抽出物及び精製された生成物を、P. falciparum NF54に感染したヒト肝細胞培養について試験した。
【００４５】
Ｂ−ヒトモデル：Plasmodium falciparum NF54の肝期
部分的肝切除を施したヒト成人の肝臓断片を酵素的に灌流することにより、ヒト肝細胞を得た。
P. falciparumに感染したハマダラカ属の蚊stephensiの唾液腺から得られたスポロゾイト(オランダのナイメーヘンのPr. W. Eling, Univの研究室)により、培養２４時間後に、肝細胞を感染させた。
試験用生成物を含む培養培地を感染３時間後に交換し、ついで、実験中少なくとも２４時間毎に新しいものにした。
感染５日後に、マウス肝細胞に対して記載されたもの[５]と同様の方法で、培養物を固定した。
ＣＩ５０値(処置されないコントロールウェルと比較して、寄生虫の数が５０％阻害される濃度)は、StatView SIグラフィックスによる３つの独立した評価の平均値である。
【００４６】
・・植物抽出物及び純粋な化合物(１)−(８)の細胞傷害性のインビトロでの評価
細胞傷害アッセイを、１０％のウシ胎児血清、Ｌ-グルタミン(２ｍＭ)、ペニシリンＧ(１００Ｕ／ｍＬ)、ストレプトマイシン(１００μｇ／ｍＭ)及びゲンタマイシン(１０μｇ／ｍＬ)が共に補填されたヒト癌腫ＫＢ株化細胞(ATCC CCL-17)(ＤＭＥＭ培地中１０４細胞／ｍＬ)及びヒト大腸腫瘍ＨＴ２９株化細胞(ATCC HTB-38)(ＲＰＭＩ１６４０培地中１０５細胞／ｍＬ)に対し、９６ウェルマイクロタイタープレートにおいて３回実施した。
試験用化合物の原液をＨ２Ｏ／ＤＭＳＯ(９／１)に調製した。
５％のＣＯ２の雰囲気下、７２時間、３７℃でのインキュベートの後、ＰＢＳに０．０２％のニュートラルレッドを添加した。
２４時間後、培養培地を除去し、水に１％のＳＤＳを添加することにより、細胞膜を溶解させた。
ニュートラルレッドが導入されて染色された生存細胞を比色測定することにより、細胞増殖を評価した。光学密度をTitertek Multiskan光度計にて５４０ｎｍで測定した。
コントロールの５０％の細胞増殖を阻害するのに必要な化合物の濃度として、ＣＩ５０値を定義した。
【００４７】
・結果
表２は、マウス肝細胞でのP. yoelii yoelii 265BYの成長阻害及びヒト腫瘍株化細胞に対するそれらの細胞傷害性についての、天然化合物(１)及び(２)、及び(１)のＮ置換誘導体の化合物(３)−(８)のインビトロ活性を表す。
表２では、Ｒは、式Ｉに記載の(１)の化学修飾により、窒素原子に導入される基を表す。
算出された選択指数(＝細胞傷害性のＣＩ５０と抗マラリア活性のＣＩ５０との比)は、哺乳動物細胞に関し、プラスモジウム寄生虫に対する化合物の実際の効果であるべきである。
プリマキン及びアトバコンは、プラスモジウムの肝期に対するそれらの阻害活性の参照として試験する一方、５-フルオロウラシル及びビンブラスチンは、ＫＢ及びＨＴ２９細胞に対するそれらの細胞傷害活性の参照として試験した。
【００４８】
【表３】
2007533704.tif 000017
【００４９】
表３は、ヒト肝細胞でのP. falciparum NF54に対する天然化合物(１)及び(２)のインビトロ活性を表す。
【表４】
2007533704.tif 000018
【００５０】
・・・化合物(１)の抗マラリア活性のインビボ評価
４０匹のスイスマウス(６週齢)に対してインビボアッセイを実施した。それらを２つのグループに分けた：
−  ２０匹のマウスのグループには、１００ｍｇ／ｋｇの用量で滅菌水に希釈した化合物(１)を４回：感染２４時間前及び１時間前、肝期中、感染２４時間後及び４０時間後に与えた；
−  ２０匹のマウスのコントロールグループには、同じ回数、滅菌水を与えた。
マウス当たり、１００μｌのリン酸緩衝生理食塩水に、４０００のPlasmodium yoelii yoelii 265BYのスポロゾイトが入ったものを眼窩後注射により、感染を実施した。
寄生虫が肝臓から解放され、血液循環に入る感染後３日目Ｄ３から感染後２３日目Ｄ２３の間で毎日、寄生虫血症をモニターした。マウスの尾静脈から取り出された血液塗抹標本によって、モニタリングを実施した。塗抹標本をギームザで染色し、寄生された赤血球を顕微鏡で計測する。
寄生虫血症を以下の式に従い算出した：
寄生された赤血球数×１００／全赤血球数
【００５１】
・結果
以下の表は得られた結果を表す。
【表５】
2007533704.tif 000019
処理されたマウスのいずれにも感染後５日目に寄生はなかったが、コントロールマウスの１００％に３日目になるとすぐに寄生した。
処理グループでは、第１のマウスは感染後６日目に寄生があり、これはコントロールグループのマウスと比較して３日遅い。
アッセイの終わりである２３日目には、処理されたマウスでは２０匹のうち６匹のみが寄生されているが、コントロールマウスでは１００％が寄生されていた。その結果を図１に示す。
【００５２】
第１の結論として、１００ｍｇ／ｋｇの化合物(１)を用いた処理により、マウスのマラリア感染を全体で７０％保護することができ、また処理されたマウスの３０％も最小で３日遅らせることができ、保護されないというものではなかった。
第２の結論として、１００ｍｇ／ｋｇの化合物(１)を用いた処理により、コントロールグループ(７５％)と比較して、処理グループ(９０％)においてＤ２３でのマウスの生存率を良好にすることができる。
さらに、寄生虫血症の平均パーセンテージは、コントロールグループにおいて寄生されたマウスと比較して、処理グループにおいて寄生されたマウスの方が低かった(図１)。
第３の結論として、１００ｍｇ／ｋｇの化合物(１)を用いた処理により、寄生された赤血球の数を有意に低減させることができる。
インビボでの結果は、Plasmodium yoelii 265BY及びPlasmodium falciparum NF54に対する保護についての、化合物(１)の効果に関し、インビトロでの結果を追認する。経口投与された化合物(１)は、P. yoelii 265BYによる感染からマウスを保護し(７０％)、寄生虫血症を低減させ、寄生虫の出現を遅延化させ、マウスの生存率を改善する。
この予防的処置は、主として寄生虫の血液形態を標的とする通常の処置とは異なる。
【００５３】
(参考文献)
[１]Itokawa H., Tsuruoka S., Takeya K., Mori N., Sonobe T., Kosemura S., Hamanaka T. An Antitumor Morphinane Alkaloid, Sinococuline, from Cocculus trilobus. Chem. Pharm. Bull., 1987, 35, 1660-1662．
[２]Deng J.-Z., Zhao S.-X., Miao Z.-C. A Morphinan Alkaloid from roots of Stephania cepharantha. Phytochemistry, 1992, 31(4), 1448-1450．
[３]Hitotsuyanagi Y., Nishimura K., Ikuta H., Takeya K., Itokawa H. Synthesis of Antitumor morphinane Alkaloids, Sinococuline and 6-epi-, 7-epi-, and 6-epi-7-epi-Sinococuline, from Sinomenine. J. Org. Chem., 1995, 60, 4549-4558．
[４]Motard A., Marussig M., Renia L., Baccam D., Landau I., Mattei D., Targett G., Mazier D. Immunization with the malaria heat shock like protein hsp70-1 enhances transmission to the mosquito. Int. Immunol., 1995, 7(1), 147-50．
[５]Mazier D., Beaudoin R.L., Mellouk S., Druilhe P., Texier B., Trosper J., Miltgen F., Landau I., Paul C., Brandicourt O.ら．Complete development of hepatic stages of Plasmodium falciparum in vitro．Science, 1985, 227(4685), 440-2．
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】感染後の日数に対する寄生虫血症のパーセンテージを示すグラフである。コントロールグループは●で示し、化合物(１)で処置したグループは◆で示す。
【図１】
2007533704.tif 000031
【国際調査報告】
2007533704.tif 000032
2007533704.tif 000033
2007533704.tif 000034