【手続補正書】
【提出日】平成28年3月9日(2016.3.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細菌培養用培地を用い、細菌の増殖を抑制し、かつ酵母の増殖を向上させる条件下で、細菌および酵母を含有する可能性のある検体を培養することを特徴とする酵母・細菌共通培養方法。
【請求項２】
細菌の増殖を抑制し、かつ酵母の増殖を向上させる条件での培養が、細菌培養用培地のｐＨを、５〜６.５、培養温度を２０〜３０℃とする培養である請求項１記載の酵母・細菌共通培養方法。
【請求項３】
細菌の増殖を抑制し、かつ酵母の増殖を向上させる条件での培養が、細菌培養用培地に１〜８ｇ／Ｌとなる量の、グルコース、マルトース、ガラクトース、フルクトース、スクロースおよびデキストリンから選ばれる糖成分を追加で添加した培地を使用し、ｐＨを、５〜６.８、培養温度を２０〜３０℃とする培養である請求項１記載の酵母・細菌共通培養方法。
【請求項４】
細菌培養用培地が、レシチンおよび非イオン性界面活性剤が加えられたトリプトソイ培地である請求項１ないし３の何れかの項記載の酵母・細菌共通培養方法。
【請求項５】
細菌培養用培地を用い、細菌の増殖を抑制し、かつ酵母の増殖を向上させる条件下で細菌および酵母を含有する可能性のある検体を培養した後、当該培養物中の細菌および酵母をそれぞれ検出することを特徴とする検体中の細菌および酵母の検出方法。
【請求項６】
細菌の増殖を抑制し、かつ酵母の増殖を向上させる条件での培養が、細菌培養用培地のｐＨを、５〜６.５、培養温度を２０〜３０℃とする培養である請求項５記載の検体中の細菌および酵母の検出方法。
【請求項７】
細菌の増殖を抑制し、かつ酵母の増殖を向上させる条件での培養が、細菌培養用培地に１〜８ｇ／Ｌの、グルコース、マルトース、ガラクトース、フルクトース、スクロースおよびデキストリンから選ばれる糖成分を追加で添加した培地を使用し、ｐＨを、５〜６.８、培養温度を２０〜３０℃とする培養である請求項５記載の検体中の細菌および酵母の検出方法。
【請求項８】
細菌培養用培地が、レシチンおよび非イオン性界面活性剤が加えられたトリプトソイ培地である請求項５ないし７の何れかの項記載の検体中の細菌および酵母の検出方法。
【請求項９】
検体が、防腐剤あるいは抗菌剤を含むものである請求項５ないし８の何れかの項記載の検体中の細菌および酵母の検出方法。
【請求項１０】
レシチンおよび非イオン性界面活性剤が加えられたトリプトソイ培地に、更に酸性剤または緩衝剤を加え、そのｐＨを５〜６.５としてなることを特徴とする酵母・細菌共通培養培地。
【請求項１１】
請求項１０記載の酵母・細菌共通培養培地に、追加糖成分として、１〜８ｇ／Ｌとなる量の、グルコース、マルトース、ガラクトース、フルクトース、スクロースおよびデキストリンよりなる群から選ばれる糖成分を添加してなる、酵母・細菌共通培養培地。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
例えば、日本薬局方に収載されている微生物限度試験法は、医薬品・化粧品等の微生物汚染の有無を確認する検査法であり、製品の出荷判定として用いられることが多いが、近年の改訂（非特許文献１）により、検査対象菌株として、従来の細菌の他、酵母であるカンジダ・アルビカンス（Candida albicans）が追加された。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
更に本発明は、レシチンおよび非イオン性界面活性剤が加えられたトリプトソイ培地に、更に酸性成分または緩衝剤を加え、そのｐＨを、５〜６.５としてなることを特徴とする酵母・細菌共通培養培地である。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
本発明は、主に日本薬局方に収載されている微生物限度試験法の改良に関するものであり、医薬品や化粧品（以下、「製品」ということがある）中に存在する可能性のある細菌および酵母（以下、「検査微生物」と総称することがある）を増殖するための培養工程において、同一の培養培地を用い、同一時間で検査微生物の培養をおこなうものである。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
本発明方法では、基本的には細菌培養用培地を用いるが、これを細菌の増殖を抑制し、かつ酵母の増殖が向上する条件で使用するか、当該培地を細菌の増殖を抑制し、かつ酵母の増殖が向上するように変性するか、あるいはこの双方の技術を採用する。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
具体的に、本発明の培養方法を実施するには、次の手段の何れかを採用できる。
（１）細菌培養用培地のｐＨを、５〜６.５程度、好ましくは、５〜６に調整し、温度を２０〜３０℃程度、好ましくは２０〜２５℃として培養する。
（２）細菌培養用培地に、追加糖成分として１〜８ｇ／Ｌの、グルコース、マルトース、ガラクトース、フルクトース、スクロースおよびデキストリンから選ばれる糖成分を添加した培地を使用し、ｐＨを、５〜６.８程度、好ましくは、５〜６.５、温度を２０〜３０℃程度、好ましくは２０〜２５℃として培養する。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
本発明において使用される培地は、日本薬局方に収載されている微生物限度試験法で用いられる細菌培養用培地であれば特段制約はないが、好ましいものとしては、レシチンおよび非イオン性界面活性剤が加えられたトリプトソイ培地（ＳＣＤＬＰ培地）が挙げられる。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
本発明方法の第一の態様は、上記のように細菌培養用培地のｐＨを、５〜６.５程度、好ましくは、５〜６に調整し、温度を２０〜３０℃程度、好ましくは２０〜２５℃として培養するというものであるが、このｐＨは、酵母（真菌）についての至適ｐＨに近いものである。同様に、上記温度も酵母の至適温度に近い温度である。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
なお、本発明の第一の態様の実施に有利に利用できる培地としては、ＳＣＤＬＰ培地のような細菌培養用培地組成中に、そのｐＨを、５〜６.５程度とすることのできる塩酸、酢酸、乳酸、乳酸ナトリウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸水素一カリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素一ナトリウム、コハク酸、コハク酸ナトリウムなどの公知の無機酸あるいは有機酸等の酸性剤または緩衝剤を配合したものを使用すればよい。この中で、特に塩酸、クエン酸、クエン酸ナトリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸水素一カリウムが好適に使用できる。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
本発明方法の第二の態様は、第一の態様で使用する細菌培養用培地に、更に追加成分として糖を加えるというものである。この培養培地に追加される糖成分としては、グルコース、マルトース、ガラクトース、フルクトース、スクロース、デキストリンが挙げられ、その量は、培養時の培地中で１〜８ｇ／Ｌとなる量である。このように糖が追加された培養培地では、酵母がこの糖を資化することでその増殖が盛んになる。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３６】
［  細菌・酵母複合菌試料  ］
緑膿菌として、シュードモナス・エルギノーザ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＩＦＯ  １３２７５株、黄色ブドウ球菌として、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）ＩＦＯ  １３２７６株、大腸菌として、エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＩＦＯ  ３９７２株、酵母として、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）ＩＦＯ１５９４株を使用した。これらを、試験培地中に、それぞれ、１〜９ＣＦＵ／ｍＬ、１〜９ＣＦＵ／ｍＬ、１〜９ＣＦＵ／ｍＬ、１〜９ＣＦＵ／ｍＬとなるように添加し、混合して細菌・酵母複合菌試料とした。