(57)【要約】  表皮のある領域を極微細活性化するためのシステム及び同システムを用いた方法。本システムは装置及び皮膚に有益な薬剤を含む。本装置は表皮組織を効果的に、最小の不快感で極微細活性化する。本システム及び方法は個人使用のための家庭用キットして提供することができる。
2007529247.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
極微細活性化システムであって、
（ａ）近位端（２２）とハンドル装置（２６）に結合された遠位端（２４）とを有し、前記近位端（２２）から前記遠位端（２４）まで延びる中心開口部（３２）をその中に有する中心軸（２０）を含んだアクチュエータ装置（１２）と、前記アクチュエータ装置（１２）の前記中心開口部（３２）内の中心に着脱可能に配設することができ、遠位端（３６）を有するとともにその近位端（４０）断面の表面（３８）内で終端する円筒形ロッド（３４）を含んでおり、前記表面（３８）がそこから突出する少なくとも１つの針（５８）を有しているプローブ（１４）とを備えた、個人の皮膚表面を極微細活性化するための極微細活性化装置（１０）と、
（ｂ）皮膚に有益な薬剤を含んだ組成物、
とを備えた極微細活性化システム。
【請求項２】
前記アクチュエータ装置（１２）は、
前記軸（２０）と同軸上に位置決めされ、中心に配設されたネジ付き開口部（３１）を中に有する刻み付き円盤（３０）と、
前記刻み付き円盤（３０）とネジで協働するネジ付き円筒形ドライバーロッド（３５）とをさらに備え、
前記中心開口部（３２）内に設けられるとともに前記円筒形ドライバーロッド（３５）に着脱可能に固定されたコレット（３３）をさらに備える、請求項１に記載の極微細活性化システム。
【請求項３】
前記表面（３８）は１ｍｍ〜１０ｍｍの断面直径を有する、請求項１又は２に記載の極微細活性化システム。
【請求項４】
前記プローブ（１４）の前記表面（３８）から延びる複数の針（５８）は、粘着性経皮パッチ上にアレイとして配置される、請求項１から３のいずれか一項に記載の極微細活性化システム。
【請求項５】
前記プローブ（１４）の前記表面（３８）から延びる複数の針（５８）は、経皮ローラー装置の上にアレイとして配置される、請求項１から３のいずれか一項に記載の極微細活性化システム。
【請求項６】
前記少なくとも１つの針（５８）は、三角形、台形、又はこれらの組み合わせを含む幾何学形の断面形状を有する、請求項１から５のいずれか一項に記載の極微細活性化システム。
【請求項７】
前記少なくとも１つの針（５８）は、錐台（ｆｒｕｓｔａｃｏｎｅ）の幾何学形状を有する、請求項１から６のいずれか一項に記載の極微細活性化システム。
【請求項８】
前記皮膚に有益な薬剤は、レチノイド、必須脂肪酸、ＰＰＡＲ活性剤、植物エストロゲン、酸性皮膚に有益な薬剤、皮膚美白剤、皮脂抑制剤、収斂剤、創傷治癒剤、及びこれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項１から７のいずれか一項に記載の極微細活性化システム。
【請求項９】
前記少なくとも１つの針（５８）は、前記プローブ（１４）の前記表面（３８）を越えて５０〜２５０μｍ突出する、請求項１から８のいずれか一項に記載の極微細活性化システム。
【請求項１０】
請求項１から９のいずれか一項に記載の極微細活性化システムを提供する工程と、
皮膚表面に前記少なくとも１つの針（５８）を当てることによって前記皮膚表面の表皮細胞を極微細活性化する工程とを含む、個人の皮膚表面の表皮細胞を極微細活性化する方法。
【請求項１１】
前記少なくとも１つの針（５８）を当てる１分〜２４時間前又はその後に、皮膚に前記皮膚に有益な薬剤を適用するさらなる工程を含む、請求項１０に記載の個人の皮膚表面の表皮細胞を極微細活性化する方法。
【請求項１２】
前記皮膚表面の表皮細胞の極微細活性化が終了したときに、アクチュエータ装置（１０）からプローブ（１４）を解放するさらなる工程を含む、請求項１０又は１１に記載の個人の皮膚表面の表皮細胞を極微細活性化する方法。
【請求項１３】
前記皮膚に有益な薬剤はレチノイド、必須脂肪酸、ＰＰＡＲ活性剤、植物エストロゲン、酸性皮膚に有益な薬剤、皮膚美白剤、皮脂抑制剤、創傷治癒剤、収斂剤、及びこれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項１０から１２のいずれか一項に記載の個人の皮膚表面の表皮細胞を極微細活性化する方法。
【請求項１４】
前記少なくとも１つの針（５８）は前記皮膚表面に対して２０°〜１６０°の角度で当てられる、請求項１０から１３のいずれか一項に記載の個人の皮膚表面の表皮細胞を極微細活性化する方法。
【請求項１５】
前記極微細活性化は、皮膚を滑らかにすること、小皺及び皺並びにたるんだ皮膚の外観を変えること、高い弾力性を持った滑らかで張りのある肌の質感の改善、光線で損傷した皮膚の修復、硬度、輝き、ツヤ、全体的に健康な皮膚の外観、並びにこれらの組み合わせから成る群から選択される皮膚への利益を提供する、請求項１０から１４のいずれか一項に記載の個人の皮膚表面の表皮細胞を極微細活性化する方法。
【請求項１６】
前記装置は、表皮下の皮膚層を実質的に穿通しないように皮膚に当てられる、請求項１０から１５のいずれか一項に記載の個人の皮膚表面の表皮細胞を極微細活性化する方法。
【請求項１７】
前記装置は１００μｍの深度まで皮膚の穿通を可能にする、請求項１６に記載の個人の皮膚表面の表皮細胞を極微細活性化する方法。
【請求項１８】
請求項１から９のいずれか一項に記載のシステムを含む、キット。
【請求項１９】
消費者による前記キットの使用は医師の補助を必要としない、請求項１８に記載のキット。
【請求項２０】
請求項２に記載のシステムの極微細活性化装置（１０）を組み立てる方法であって、
（ａ）前記ドライバーロッド（３５）に前記コレット（３３）を固定する工程と、
（ｂ）前記コレット（３３）に前記プローブ（１４）を挿入する工程と、
（ｃ）前記固定されたドライバーロッド（３５）を前記アクチュエータ装置（１２）の前記中心軸（２０）の前記中心開口部（３２）に挿入する工程と、
（ｄ）前記アクチュエータ装置（１２）の上に前記刻み付き円盤（３０）を締め付けることにより、その中に前記ドライバーロッド（３５）を固定し、前記コレット（３３）に前記プローブ（１４）を把持させるように押し込む工程とを含む、方法。
【請求項２１】
（ａ）近位端（２２）とハンドル装置（２６）に結合された遠位端（２４）とを有し、前記近位端（２２）から前記遠位端（２４）まで延びる中心開口部（３２）をその中に有する中心軸（２０）を含んだアクチュエータ装置（１２）と、前記アクチュエータ装置（１２）の前記中心開口部（３２）内の中心に着脱可能に配設することができ、遠位端（３６）を有するとともにその近位端（４０）断面の表面（３８）内で終端する円筒形ロッド（３４）を含んでおり、前記表面（３８）がそこから突出する少なくとも１つの針（５８）を有しているプローブ（１４）とを備えた、個人の皮膚表面を極微細活性化するための極微細活性化装置（１０）と、
（ｂ）米国特許第５８７９３２６号及び第５５９１１３９号のいずれかに実質的に記載されたような装置と、
（ｃ）それらを組み合わせたもの及び実質的同等物、
とから成る群から選択される装置を皮膚に適用することを含む、皮膚極微細化方法。
【請求項２２】
前記表面（３８）は１ｍｍ〜１０ｍｍの断面直径を有する、請求項２１に記載の皮膚極微細化方法。
【請求項２３】
前記装置は皮膚に繰り返し当てられる、請求項２１又は２２に記載の皮膚極微細化方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は皮膚極微細活性化システム及び方法に関する。より具体的には、本発明は１本又は複数の針のシステムを用いて皮膚を無痛で極微細活性化する極微細活性化システム及び方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
薬物又は薬剤を送達させるため或いは生体組織から試料を抽出して診断のためにその試料を分析するために、針を用いることはよく知られている。そのような針の多くは血液細胞に対して直径が比較的大きい、すなわちミリメートル単位の大きな針（マクロニードル）であった。ｖｉｖｉｄａ−ｓａ．ｃｏ．ｚａウェブサイトはＥＮＶＩＲＯＮ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ＲＯＬＬ−ＣＩＴ（登録商標）と呼ばれるマクロニードル装置を記載している。いくつかの用途では、より小径の針、すなわち、直径がマイクロメートル単位のマイクロニードルを使用することが有利である。医薬品の送達並びに生理学的パラメータ及び代謝パラメータを監視するための、針様突出部を含んだパッチに加えマイクロニードル装置が、例えば、米国特許第５８７９３２６号及び第５５９１１３９号に開示されている。米国特許第６５６５５３２号及び第６６５２４７８号は皮膚にマーキングし、半永久的な皮下化粧を施すのに用いられるマイクロニードル装置に関する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
化粧上の利益のために皮膚を極微細活性化するシステムの必要性がある。さらに、医師がいることを必要とせず、侵襲が最小で、不快感を最小にして行うことのできる極微細活性化システム及び方法の必要性がある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
不適な装置並びに先行技術の方法及び技術の欠点を軽減するために本発明の方法とともに先行技術のマイクロニードルを使用することができるが、他方では皮膚極微細活性化システム及び方法が開発されてきた。本発明は究極的な化粧上の利益のために皮膚の修復及び再生機能を活性化するように、皮膚表面下の適当な深さの表皮細胞を、その下側の真皮層を実質的に破壊することなく極微細活性化するシステム及び方法を含む。
【０００５】
第１の態様では、本発明は、
（ａ）近位端とハンドル装置に結合された遠位端とを有し、前記近位端から前記遠位端まで延びる中心開口部をその中に有する、中心軸を含んだアクチュエータ装置と、アクチュエータ装置の中心開口部内の中心に着脱可能に配設することができ、遠位端を有するとともにその近位端断面の表面内で終端する円筒形ロッドを含んでおり、前記表面がそこから突出／延びる少なくとも１つの針を有しているプローブとを備えた、個人の皮膚表面を極微細活性化するための装置と、
（ｂ）皮膚に有益な薬剤を含んだ組成物とを備えた極微細活性化システムを提供する。
【０００６】
前記アクチュエータ装置は前記軸と同軸上に位置決めされた刻み付き円盤をさらに含むことが好ましく、前記刻み付き円盤はその中に中心に配設されたネジ付き開口部と、前記刻み付き円盤とネジで協働するネジ付き円筒形ドライバーロッドとを有し、前記システムは、前記中心開口部内に設けられるとともに前記円筒形ドライバーロッドに着脱可能に固定されたコレットをさらに含む。
【０００７】
前記表面は１ｍｍ〜１０ｍｍの断面直径を有することが好ましい。前記少なくとも１つの針は前記プローブの前記表面を越えて５０〜２５０μｍ突出することが好ましい。
【０００８】
場合によっては、前記プローブの前記表面から延びる複数の針は、粘着性経皮パッチ上にアレイとして配置される。別法として、前記プローブの前記表面から延びる複数の針は経皮ローラー装置の上にアレイとして配置される。
【０００９】
前記少なくとも１つの針は三角形、台形、又はこれらの組み合わせを含む幾何学断面形状を有し得る。例えば、少なくとも１つの針は錐台（ｆｒｕｓｔａｃｏｎｅ）の幾何学形状を有し得る。
【００１０】
前記皮膚に有益な薬剤は、レチノイド、必須脂肪酸、ＰＰＡＲ活性剤、植物エストロゲン、酸性皮膚に有益な薬剤、皮膚美白剤、皮脂抑制剤、収斂剤、創傷治癒剤、及びこれらの組み合わせから成る群から選択されることが好ましい。
【００１１】
第２の態様では、本発明は、本発明の極微細活性化システム又はその誘導体を皮膚表面に当てることにより表皮組織を極微細活性化することによって、個人の皮膚表面の表皮細胞を極微細活性化するための方法を提供する。前記装置は表皮の下の皮膚層を実質的に穿通しないように皮膚に当てられることが好ましい。例えば、複数の針は、接着パッチなどの経皮パッチ又はローラー上にアレイとして配置され得、この針は真皮を貫通することなく無痛で表皮に当てることができる。一般に、皮膚穿通の深度は約１００μｍまでである。この針は皮膚表面に対して２０°〜１６０°の角度で当てられ得る。針又は複数の針を当てる前又は後から、皮膚に有益な薬剤を１分〜２４時間適用することが好ましい。
【００１２】
本方法は前記皮膚表面の表皮細胞の極微細活性化が終了したときにアクチュエータ装置からプローブを解放する工程をさらに含むことが好ましい。
【００１３】
前記皮膚に有益な薬剤は、レチノイド、必須脂肪酸、ＰＰＡＲ活性剤、植物エストロゲン、酸性皮膚に有益な薬剤、皮膚美白剤、皮脂抑制剤、創傷治癒剤、収斂剤、及びこれらの組み合わせから成る群から選択されることが好ましい。
【００１４】
前記極微細活性化は、皮膚を滑らかにすること、細かい線及び皺並びにたるんだ皮膚の外観を変えること、高い弾力性を持った滑らかで張りのある肌の質感の改善、光線で損傷した皮膚の修復、硬度、輝き、ツヤ、全体的に健康な皮膚の外観、並びにこれらの組み合わせから成る群から選択される皮膚への利益を提供することが好ましい。
【００１５】
別の態様では、本発明は極微細活性化装置及び／又は第１の態様による皮膚に有益な薬剤を含んだキットである。該キットは民生用に適しており、医師の補助を必要としない。
【００１６】
さらなる態様では、以下の工程を含む本発明のシステムの極微細活性化装置を組み立てる方法が提供される。
（ａ）ドライバーロッドにコレットを固定する工程、
（ｂ）コレットにプローブを挿入する工程、
（ｃ）固定されたドライバーロッドをアクチュエータ装置の中心軸の中心開口部に挿入する工程、及び
（ｄ）アクチュエータ装置の上に刻み付き円盤を締め付けることにより、その中にドライバーロッドを固定し、コレットにプローブを把持させるように押し込む工程。
【００１７】
さらなる態様では、皮膚極微細活性化の方法が提供され、該方法は、
（ａ）近位端とハンドル装置に結合された遠位端とを有し、前記近位端から前記遠位端まで延びる中心開口部をその中に有する、中心軸を含んだアクチュエータ装置と、前記アクチュエータ装置の前記中心開口部内の中心に着脱可能に配設することができ、遠位端を有するとともにその近位端断面の表面内で終端する円筒形ロッドを含んでおり、前記表面がそこから突出する少なくとも１つの針を有しているプローブとを備えた、個人の皮膚表面を極微細活性化するための極微細活性化装置と、
（ｂ）米国特許第５８７９３２６号及び第５５９１１３９号のいずれかに実質的に記載されたような装置と、
（ｃ）それらを組み合わせたもの及び実質的同等物とから成る群から選択される装置を皮膚に適用することを含む。
【００１８】
前記表面は１ｍｍ〜１０ｍｍの断面直径を有することが好ましい。本装置は繰り返して皮膚に当てることができる。
【００１９】
本発明の上記及び他の特徴及び利点をより完全に理解するために、以下の好適な実施形態の説明を参照されたい。
【００２０】
添付図面を参照するとともに以下の好適な実施形態の詳細な説明によって、本発明はよりよく理解されよう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
本発明は、皮膚のバリア破壊及び皮膚基底細胞の極微細創傷によって、皮膚細胞の活性化がもたらされ、その結果、理論に拘束されることなく、皮膚細胞の創傷治癒及び／又は細胞交代／再生過程といった有益な化粧上の効果が皮膚にもたらされるという新しい考え方に基づくものである。本発明の皮膚極微細活性化システム及び方法は、針様突出部を有するプローブを当てて基底層表皮細胞を活性化することによって皮膚上部層を破壊することを伴う。本発明の装置及び方法を用いれば、表皮の基底層を含む表皮が破壊され、これによって皮膚の創傷治癒及び／又は細胞の再生過程が効果的に活性化される。
【００２２】
本明細書で用いられる場合、「含む」という用語は、「備える」、「〜から構成される」、「〜から成る」、「〜成立する」及び／又は「本質的に〜から成立する」ということを包含する。操作実施例及び比較実施例の場合を除き、又は別途明示する場合を除き、材料の量又は比率或いは反応条件、材料の物理的性質及び／又は使用を表す本記載における全数値は、「約」という言葉によって変更されるものと理解されたい。
【００２３】
「表皮」という用語は、真皮上にある皮膚の血管のない外部層を指す。
【００２４】
本明細書で用いられる場合「極微細活性化」という用語は、顕微鏡スケールの装置を用いて、皮膚バリア／角質層の顕微鏡スケールの機械的な皮膚の破壊又は破損及び基底層ケラチノサイトの極微細創傷をもたらす、創傷治癒及び／又は有益なバリア修復及び／又は表皮細胞の再生及び／又は交代機序若しくは過程の活性化を指す。
【００２５】
本明細書で用いられる場合、「皮膚」という用語は、顔、口（上皮細胞）、頚部、胸部、背中、腕、手、脚、及び頭皮の上又は中にある皮膚を含む。
【００２６】
図１Ａ及び１Ｂを参照すると、好適な一実施形態では、個人の皮膚表面用の極微細活性化装置１０は、その中の中心部に着脱可能に配設されたプローブ１４を有するアクチュエータ装置１２を備えている。場合によっては、プローブ１４の所望の長さ１８がそこから延びるように、アクチュエータ装置１２に固定することができるとともにアクチュエータ装置１２の上に着脱可能且つ調節可能に位置決めすることのできる円筒形位置決めスリーブ１６が設けられる。
【００２７】
図１Ｃを参照すると、アクチュエータ装置１２は、近位端２２及びハンドル装置２６内で終端する遠位端２４を有する円筒形中心軸２０を備えている。アクチュエータ装置は、以下図２に関して説明するように、軸２０と同軸上に位置決めされるとともに実質的に中心にハンドル装置２６の上に固定された刻み付き円盤３０をさらに備えている。刻み付き円盤３０は、その中の中心に配設されたネジ付き開口部３１を有している。
【００２８】
図２を参照すると、中心軸２０はその中に位置する中心開口部３２を有しており、該開口部は、近位端２２では直径の大きい錐台状部分２８で始まって、錐台状部分が円筒形部分内へとテーパ状になって遠位端２４に向かって延びるにしたがってシート３７を形成しながら、軸の近位端２２から遠位端２４まで延在している。コレット３３がシート３７に着脱可能に設けられているとともに、中心開口部３２内に配設されたネジ付き円筒形ドライバーロッド３５にも着脱可能に固定されており、次いでこれが、開口部３１のネジ穴の協働によって刻み付き円盤３０に連結され、これによって刻み付き円盤３０がハンドル装置２６の上に固定される。コレット３３がシート３７に入るときに圧縮されてプローブ１４を保持するように、コレット３３は分割されて圧縮可能になっている。
【００２９】
図１Ａ及び１Ｂを参照すると、任意の位置決めスリーブ１６は中心軸２０よりも径の大きい中心開口部４３をその中に有する円筒形ロッド４２を含んでいる。位置決めスリーブ１６は、円筒形ロッド４２上の選択された部分５０から延びて遠位端４６において終端する外側ネジ付き表面部分４８を有する、近位端４４及び遠位端４６を備えている。位置決めスリーブ１６は、ネジ付き表面部分４８と協働するようにその中にネジ付き円筒形空洞を有するとともに該表面部分４８に沿って調整可能に位置決めされた第１のロッキングリング５２と、ネジ付き表面部分４８と協働するようにその中にネジ付き円筒形空洞を有するとともに遠位端４６からそれに隣接した第１のロッキングリング５２までネジ付き表面４８に沿って調整可能に位置決めされた第２のロッキングリング５４とをさらに備えている。
【００３０】
図１Ｃ及び３を参照すると、プローブ１４は、遠位端３６及び円盤状であり得る断面表面３８で終端する近位端４０を有するとともに該表面から直角に突出する少なくとも１つの針５８を有する、円筒形ロッド３４を含む。ロッド３４は１本又は複数の針５８を保持するのに適した任意の小さな大きさで、コレット３３と協働するのに適した大きさであり得る。ロッド３４は、約１ｍｍ〜約１０ｍｍの断面径を有することが好ましい。円筒形ロッド３４及びまた表面３８は、約１．５ｍｍの断面径を有することが好ましい。
【００３１】
図３を参照すると、プローブ１４の表面３８は平坦な表面領域５６を含み、該領域５６はそこから上方に延びて平坦な表面領域５６に沿って無作為の構成又はパターン化された構成などの任意の構成で位置決めされた少なくとも１本の針５８を有する。図４に示すように、針５８の構成は製造が容易でになるために、パターン化されること、すなわち対称的であることが好ましい。
【００３２】
場合によっては、本発明の好適な一実施形態によれば、各針５８又は複数の針５８は、表面領域５６から上方に延びて１本又は複数の針５８を囲繞する位置決めカラー６０を備える。
【００３３】
針５８（１本又は複数）は任意の３次元形状であってよく、これによって各針５８が鋭い先又は先端で終端する限りは垂直軸又は水平軸のいずれかに沿って任意の断面形状及び対称性を有する。よりよい活性化のためには、針５８の鉛直断面形状は三角形、台形、花弁形又は丸みを帯びた三角形（すなわち、３点で交わる１本の直線と２本の丸みのある線によって区切られた三角形で、２本の丸みのある線の結合が鋭い先端を形成する）、或いは頂点が鋭い先端又は鋭角を含んだ別の形状であることが好ましい。この針は円錐又は錐台形の形状であることが好ましい。
【００３４】
本発明の一態様では、表面３８は１本の針５８のみから成り得る。別の態様では、表面３８は複数の針５８又は針５８のアレイから成り得る。針５８の大きさ及び数は、針の穿通程度は表皮よりも深いべきではない、すなわち皮膚を活性化するのに丁度十分であるが、痛みを生じさせないという基準によって決定される。針５８の長さは約５０〜約２５０μｍであることが好ましく、穿通深度は約１００μｍであることが好ましい。基部における針の直径は約１０〜約２００μｍ、好適には約１５〜約１５０μｍ、より好適には、最も効果的な活性化のためには約１５〜約１２０μｍであり得る。針５８の鋭い先すなわち先端部は約１〜約２μｍの直径を有する。針５８は皮膚の極微細穿通するための任意の適した材料、好適には金属（例えば、ステンレス鋼）又はＳｉＯ２から作製されてよく、装置１０の残りの部分はプラスチックから作製されることが好ましいが、針５８を保持するとともに針に角質層に極小穴を開けさせるのに適した任意の材料であってもよい。複数の針５８は、例えば、接着パッチなどの表面（３８）に貼り付けられた経皮パッチ又はローラー上にアレイとして配置されてもよく、この針は真皮を貫通することなく無痛で表皮に当てることができるので、皮膚が極微細活性化される。
【００３５】
図１Ｂ及び１Ｃを参照すると、極微細活性化装置１０を組み立てるために、コレット３３をドライバーロッド３５に固定し、プローブ１４をコレット３３に挿入する。次に、ドライバーロッド３５をアクチュエータ装置１２の中心軸２０の中心開口部３２に挿入する。刻み付き円盤３０をアクチュエータ装置２０の上で締めてドライバーロッド３５をその中に固定し、シート３７内にコレット３３を押し込むことによって、コレット３３内でプローブ１４を把持する。場合によっては位置決めスリーブ１６を中心軸２０を覆って滑らせて、第２のロッキングリング５４がアクチュエータ装置１２の中心軸２０の遠位端２４にある状態でプローブ１４の所望の長さ１８が位置決めスリーブ１６の近位端４４を越えて突出且つ延ばすことが可能となる。所望の長さ１８は表皮下の皮膚層を実質的に穿通しないように所望の皮膚穿通度によって決定される。皮膚穿通の深度は約１００μｍであることが好ましい。
【００３６】
使用の際、装置１０は滅菌状態で送り届けられる。プローブ１４を滅菌し極微細活性化装置１０を組み立てた後、皮膚表面への複数回又は繰り返しの突き刺しは、マイクロニードル５８を皮膚に当てるか又は皮膚表面をプローブ１４の針５８に接触させることにより手動又は電動手段によってなされる。マイクロニードル５８が皮膚表面を突き刺す角度は、皮膚が適した深さまで穿通されるかぎり、約２０°〜約１６０°、好適には約７０°〜約１１０°、さらに好適には約９０°すなわち皮膚表面に対して直角であってよい。突き刺す回数は最高で約３００回、好適には約２０〜約５０回であり得る。一般には、約１００μｍの深さまで皮膚を穿通して、皮膚修復機能の活性化を生じさせる。理論に拘束されることなく、皮膚修復機能の活性化は基底層の皮膚細胞を破壊することによってもたらされると考えられる。
【００３７】
さらに装置１０の使用に関して、第２のロッキングリング５４をネジ付き表面部分４８に沿って調整し、第１のロッキングリング５２に近付けさせるか或いは遠ざけて、これによって位置決めスリーブ１６の長さを調整することができる。位置決めスリーブ１６の全体の長さを調整することによって、次にプローブ１４の突出の所望の長さ１８が調整され、これによって皮膚に加えられる圧力を制御することが可能になるとともに、皮膚を過度に穿通することが防止される。プローブ１４の表面３８の平坦な表面領域５６も、プローブ１４が平坦な表面領域５６があることで皮膚の接触部を越えて穿通しなくなるので、針５８の穿通深度を制御する。場合によっては、また好適には、位置決めカラー６０も、例えば表皮の厚さの違いのためのほか、皮膚がプローブ１４の中心において「一ヶ所に集まる（ｂｕｎｃｈｉｎｇ  ｕｐ）」のを防止するために、針５８の延伸を調整することによって穿通深度の制御の機能を果たす。接触している皮膚細胞の最高約２％が傷付けられることが好ましい。皮膚極微細活性化過程が終了すると、プローブ１４はコレット３３から解放される。場合によってはプローブ１４を使用後に廃棄することもできる。
【００３８】
極微細活性化装置１０によって、迅速で無痛の皮膚活性化が可能となるとともに、傷跡は一切残らない。本発明の極微細活性化方法を用いて達成される皮膚の化粧上の利益には以下のようなものが挙げられる。
小皺、皺およびたるんだ皮膚を少なくすること、
皮膚を滑らかにすること、
肌合いの改善の結果として得られる、高い弾力性を持った滑らかで張りのある皮膚、
光線の損傷を受けた皮膚を修復すること、
硬度、
並びに輝き及びツヤを伴った全体的に健康な皮膚の外観。
【００３９】
発明の装置及び方法によって有利には、効果が得られ、不快感が最小になり、瘢痕が残らなくなり、皮膚を極微細活性化する能力が得られる。したがって、本装置は一個人において多様な使い方をするのに向いている。
【００４０】
この技術は、単独で又は皮膚に有益な薬剤と併用して使用するための説明とともに極微細活性化装置１０を含み得る家庭用の皮膚極微細活性化キットに適合させることができる。
【００４１】
皮膚に有益な薬剤
皮膚に有益な薬剤はレチノイド、必須脂肪酸、ＰＰＡＲ活性剤、植物エストロゲン、酸性皮膚に有益な薬剤、皮膚美白剤、皮脂抑制剤、収斂剤、創傷治癒剤、及びこれらの組み合わせから成る群から選択されることが好ましい。
【００４２】
レチノイド
皮膚に有益な薬剤はレチニルエステル、レチノール、レチナル酸及びレチノイン酸、好適にはレチノール又はレチニルエステルから選択される、レチノイドを含むことが好ましい。「レチノール」という用語は次のレチノールの異性体を含む：オールトランス型レチノール、シス−１３−レチノール、シス−１１−レチノール、シス−９−レチノール、３，４−ジデヒドロ−レチノール、３，４−ジデヒドロ−シス−１３−レチノール；３，４−ジデヒドロ−シス１１−レチノール；３，４−ジデヒドロ−シス−９−レチノール。好適な異性体はオールトランス型レチノール、シス−１３−レチノール、３，４−ジデヒドロ−レチノール、シス−９−レチノールである。最も好適なのは広く市販されているのでオールトランス型レチノールである。
【００４３】
レチニルエステルはレチノールのエステルである。本発明に使用するのに適したレチニルエステルはレチノールのＣ１〜Ｃ３０エステル、好適にはＣ２〜Ｃ２０エステル、最も好適には、より一般的に入手可能であるのでＣ２、Ｃ３、及びＣ１６エステルである。レチニルエステルの例には、以下に限定するものではないが、パルミチン酸レチニル、ギ酸レチニル、酢酸レチニル、プロピオン酸レチニル、酪酸レチニル、吉草酸レチニル、イソ吉草酸レチニル、ヘキサン酸レチニル、ヘプタン酸レチニル、オクタン酸レチニル、ノナン酸レチニル、デカン酸レチニル、ウンデカン酸レチニル、ラウリン酸レチニル、トリデカン酸レチニル、ミリスチン酸レチニル、ペンタデカン酸レチニル、ヘプタデカン酸レチニル、ステアリン酸レチニル、イソステアリン酸レチニル、ノナデカン酸レチニル、アラキドン酸レチニル、ベヘン酸レチニル、リノール酸レチニル、オレイン酸レチニルが挙げられる。
【００４４】
本発明に使用するのに適した好適なエステルは、最も商業上入手し易いが故に最も安価であるので、パルミチン酸レチニル、酢酸レチニル、及びプロピオン酸レチニルから選択される。リノール酸レチニル及びオレイン酸レチニルもその有効性から好ましい。
【００４５】
レチノール又はレチニルステルは、本発明の組成物においては本組成物の約０．００１〜約１０重量％の量で、好適には約０．０１〜約１重量％の量で、最も好適には約０．０１〜約０．５重量％の量で用いられる。
【００４６】
必須脂肪酸
別の好適な任意の皮膚に有益な薬剤は、必須脂肪酸（ＥＦＡ）、すなわち、あらゆる細胞の形質膜形成に不可欠である脂肪酸から選択される。ＥＦＡもまた、表皮の脂質生合成を増強し表皮のバリア形成のために脂質を提供する。この必須脂肪酸はリノール酸、γ−リノレン酸、ホモ−γ−リノレン酸、コルンビン酸、エイコサ−（ｎ−６，９，１３）−トリエン酸、アラキドン酸、γ−リノレン酸、チムノドン酸、ヘキサエノン酸、及びこれらの混合物から選択されることが好ましい。
【００４７】
植物エストロゲン
植物エストロゲンには、８−プレニルナリンゲニン、ホップ抽出物、大豆抽出物、ヒヨコ豆抽出物、エストロゲン様フラボノイド、ゲニステイン、ダイゼイン、グリシチン、ビオカニンＡ、ホルモノネチン及びエクオル並びにこれらの混合物、ゲニステイン及びダイゼインのアセチル及びマロニルエステル、並びにゲニステイン及びダイゼインのグルコシドといったフラボノイドが挙げられる。上記リストは限定的なものではなく、当業者には知られている他の植物エストロゲンを含んでよいことに留意されたい。本発明の組成物は約０．００１重量％〜約１０重量％の少なくとも１つの植物エストロゲンを含むことが好ましい。
【００４８】
ＰＰＡＲ活性剤
適したＰＰＡＲ活性剤は本明細書に援用した米国特許第６４２３３２５号に記載されている。本発明の好ましいＰＰＡＲ活性剤は１２−ヒドロキシステアリン酸、シス−パリナリン酸、トランス−７−オクタデセン酸、シス−５，８，１１，１４，１７エイコサペンタエン酸、シス−４，７，１０，１３，１６，１９ドコサヘキサエン酸、共役リノール酸（シス−９、トランス−１１）、コルンビン酸、リノレンエライジン酸、リシノール酸、ステアリドン酸、２−ヒドロキシステアリン酸、α−リノレン酸、アラキドン酸、シス−１１，１４−エイコサジエン酸、共役リノール酸（トランス１０、シスー１２）、共役リノール酸（トランス−９、トランス−１１）、共役リノール酸（シス−９、トランス−１１及びトランス−１０、シス−１２の５０：５０の混合物）、コリアンダー酸、リノレンエライジン酸、モノペトロセリン酸、ペトロセリン酸、リシノール酸、ステアロル酸、ニオイヒバ抽出物及びトランス−バクセン酸である。さらに適した好適なＰＰＡＲ活性剤には、シス−１１，１４，１７エイコサトリエン酸、シス−５エイコセン酸、シス−８，１１，１４エイコサトリエン酸、ヘキサデカトリエン酸、パルミトレイン酸、ペトロセリン酸、トランス−トランス−ファルネソール酸、シス−１３，１６ドコサジエン酸、シス−バクセン酸、シス−１１エイコセン酸、シス−１３，１６，１９ドコサトリエン酸、シス−１３−オクタデセン酸、シス−１５オクタデカン酸、シス−７，１０，１３，１６ドコサテトラエン酸、エライジン酸、γ−リノレン酸、ゲラン酸、ゲラニルゲラノイン酸、リノール酸、オレイン酸、ペトロセリニルアルコール、フイタン酸、ピノレン酸、トランス−１３−オクタデセン酸、及びトリデシルサリチル酸（ＴＤＳ）が挙げられる。
【００４９】
酸性皮膚に有益な薬剤
酸性皮膚に有益な薬剤の例には、α−ヒドロキシ酸及びヒドロキシエステル、β−ヒドロキシ酸及びヒドロキシエステル、ジカルボン酸ないし二酸及びジカルボンエステル、ポリヒドロキシ酸及びポリヒドロキシエステル、並びにこれらの混合物が挙げられる。好適なα−ヒドロキシ酸の例には、グリコール酸、乳酸、２−ヒドロキシオクタン酸、及びこれらの混合物が挙げられる。好適なβ−ヒドロキシ酸には、サリチル酸がある。好適なジカルボン酸又は二酸の例には、セバシン酸、マロン酸、及びこれらの混合物が挙げられる。ベツリン酸は酸性皮膚に有益な薬剤の別の例であり、単独又はミノキシジルと併用して用いることができる。この酸性皮膚に有益な薬剤の量は組成物の少なくとも０．００１重量％である。
【００５０】
皮膚美白剤
皮膚美白剤の例には、レゾルシノール誘導体、フェルラ酸、コジック酸及びコジックエステル、ヒドロキノン、ｔ−ブチルヒドロキノン、ナイアシンアミド、ビタミンＣ誘導体、並びにこれらの混合物が挙げられる。具体的には特定のレゾルシノール誘導体、特に４置換レゾルシノール誘導体が毛髪及び皮膚の利益のための化粧用組成物においてはとりわけ有用である。レゾルシノール誘導体は米国特許第６１３２７４０号及び欧州特許１１３４２０７号を含む多数の刊行物に記載されている。４−エチルレゾルシノールなどの４−アルキルレゾルシノールが好ましい。他の有効な皮膚美白用レゾルシノール誘導体には、４，６−ジ−アルキルレゾルシノールなどの４，６−ジ−置換レゾルシノール誘導体がある。
【００５１】
皮脂抑制剤
他の皮膚への利点は皮脂の抑制である。皮脂抑制剤の例には、例えば、ＰＣＴ国際出願ＷＯ９９／１８９２８号に開示されているような、分岐アルコールのカルボキシアルキレート及び分岐アルコールのエトキシレートが挙げられる。米国特許第２００２／００１５７１７号、米国特許第２００４／００１３６３０号、及び米国特許第２００４／００１８９４８号は、分岐アルコールのカルボキシアルキレート及び／又は分岐アルコールのエトキシレートを含んだ化粧用組成物の皮膚への局所適用によってヒト皮膚を調整するための化粧上の方法及び組成物を開示している。
【００５２】
創傷治癒剤
酸化亜鉛及びグルコン酸亜鉛などの亜鉛化合物；生酵母細胞誘導体、アロエ抽出物及びアロエ植物由来の化合物；リポタイコ酸；ツボクサ抽出物；アジアチコシド；ｅｕｐｏｌｉｎ、銅ペプチド；ＴＧＦ、ＰＤＧＦなどの成長因子；並びにマンサク、カモミール、キンセンカ及び創傷治癒特性を有する他のものなどの天然抽出物などの創傷治癒剤と併用して極微細活性化装置１０を用いることが特に有益である。
【００５３】
付加的な化粧用皮膚に有益な薬剤には、本明細書に援用した米国特許第５８５１５４４号に記載されたような、二酸化炭素を注入した液体で不活性の疎水性過フッ化炭化水素が挙げられる。この組成物は皮膚への血流を増大させるので、内因性酸素及び栄養素の皮膚への送達が増大する。このような化粧用スキンケア組成物は、ｉ）二酸化炭素を注入した、組成物の約０．１重量％〜約７０重量％の、フルオロカーボンを含んでよい。このフルオロカーボンは不活性で２５℃で液体で疎水性であり、ペルフルオロオクタン、ペルフルオロデカン、ペルフルオロデカリン、臭化ペルフルオロオクチル、臭化ペルフルオロデシル、ヨウ化ペルフルオロオクチル、ペルフルオロトリプロピルアミン、ペルフルオロ−トリブチルアミン、ビス−（Ｆ−ブチル）−エテン及びペルフルオロ−ポリメチルイソプロピルエーテルから成る群から選択される。酸素がエネルギーを供給して極微細活性化装置によって引き起こされた極微細な創傷の治癒中に細胞増殖を強化する。
【００５４】
収斂剤
収斂剤の例には、これに限定するものではないが、エタノール、マンサク、亜鉛塩及びアルミニウム塩、並びにポリフェノールが挙げられる。本明細書では略してＡＣＨと呼ばれるアルミニウムクロロハイドレートは広く市販されており比較的安価であるので、本発明にとって最も好適な収斂性塩である。
【００５５】
ビタミンＡ、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ６、Ｄ、Ｅ、デクスパンテノール及びβカロテン、補酵素Ｑ１０、カルニチン、及び３〜約１００個のアミノ酸から成るペプチドなどの他の皮膚に有益な薬剤が含まれてもよい。電気的、磁気的、又は電磁気的の皮膚刺激を用いてもよい。本発明は対数Ｋｐ（Ｋｐはオクタノール／水分配係数）が５以上で４００ダルトン以上の分子量の活性化剤又はそれらの組み合わせと併用して用いられるときにも有用である。
【００５６】
任意成分
日焼け防止剤、着色剤、乳白剤、色素、香料、抗菌剤、化粧品上許容可能なビヒクル及び粉末などの任意の成分を皮膚に有益な薬剤とともに含むことができる。
【００５７】
日焼け防止剤
日焼け防止剤には紫外線を阻止するのに一般的に用いられる材料を含む。例示的な化合物はＰＡＢＡ、桂皮酸塩及びサリチル酸塩の誘導体である。例えば、メトキシ桂皮酸オクチル及び２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン（オキシベンゾンとしても知られている）を用いることができる。メトキシ桂皮酸オクチル及び２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノンは、それぞれ登録商標Ｐａｒｓｏｌ  ＭＣＸ及びＢｅｎｚｏｐｈｅｎｏｎｅ−３として市販されている。
【００５８】
使用される日焼け防止剤の正確な量は、太陽のＵＶ照射線からの所望の防護度に応じて変化し得る。
【００５９】
他の任意の成分には、着色剤、乳白剤及び色素（例えば、二酸化チタン、シリカ）並びに香料を含んでよい。含まれる場合、これらの量は組成物の０．００１重量％から最大で２０重量％の範囲にあり得る。
【００６０】
特に水を含有した多数の化粧用組成物は潜在的に有害な微生物の成長から保護しなければならない。したがって、トリクロサンなどの抗菌剤及び保存剤が含まれるのが好ましい。適した保存剤には、ｐ−ヒドロキシ安息香酸のアルキルエステル、ヒダントイン誘導体、プロピオン酸塩、及び種々の第四級アンモニウム化合物が挙げられる。本発明の特に好適な保存剤はメチルパラベン、プロピルパラベン、フェノキシエタノール及びベンジルアルコールである。保存剤は通常は組成物の０．１重量％〜２重量％の量で使用される。
【００６１】
化粧品上許容可能なビヒクル
本発明の組成物は組成物が皮膚に塗布されるときにそれらが分布し易くするように、組成物中で皮膚に有益な成分のための希釈剤、分散剤又は担体として機能する化粧品上許容可能なビヒクルも含む。
【００６２】
このビヒクルは水性、無水性、又は乳剤であってよい。組成物は水性又は乳剤、特に油中水又は水中油乳剤であるのが好ましい。存在する場合、水は組成物の５〜９９重量％、好適には４０〜９０重量％、最適には６０〜９０重量％の範囲にある。
【００６３】
適した油及び／又は皮膚軟化剤には、以下に限定するものではないが、シリコーン油、植物油、エステル、脂肪酸及び脂肪アルコール、並びに炭化水素が挙げられる。そのような油及び／又は皮膚軟化剤のレベルは組成物全体の０．５重量％〜５０重量％、好適には５重量％〜３０重量％の範囲にあってよい。皮膚軟化剤はそのような一般的な化学分類に基づいてエステル、脂肪酸及び脂肪アルコール、ポリオール並びに炭化水素として分類することができる。
【００６４】
エステルはモノエステル又はジエステルであってよい。脂肪酸ジエステルの許容可能な例にはアジピン酸ジブチル、セバシン酸ジエチル、ジメリト酸ジイソプロピル、及びコハク酸ジオクチルが挙げられる。許容可能な分鎖脂肪酸エステルにはミリスチン酸２−エチル−ヘキシル、ステアリン酸イソプロピル及びパルミチン酸イソステアリルが挙げられる。許容可能な三塩基酸エステルにはトリリノール酸トリイソプロピル及びクエン酸トリラウリルが挙げられる。許容可能な直鎖脂肪酸エステルにはパルミチン酸ラウリル、乳酸ミリスチル、エルカ酸オレイル及びオレイン酸ステアリルが挙げられる。好適なエステルには、ココ−カプリル酸塩／カプリン酸塩（ココ−カプリル酸塩及びココ−カプリン酸塩のブレンド）、酢酸プロピレングリコールミリスチルエーテル、アジピン酸ジイソプロピル及びオクタン酸セチルが挙げられる。
【００６５】
適した脂肪アルコール及び脂肪酸には、１０〜２０個の炭素原子を有する化合物がある。特に好適な化合物はセチル、ミリスチル、パルミチン及びステアリルのアルコール及び酸などの化合物である。
【００６６】
皮膚軟化剤として機能し得るポリオールには、直鎖及び分鎖のアルキルポリヒドロキシル化合物がある。例えば、プロピレングリコール、ソルビトール及びグリセリンが好ましい。ポリプロピレングリコール及びポリエチレングリコールなどの重合ポリオールも有用であり得る。ブチレン及びプロピレングリコールも浸透促進剤として特に好ましい。
【００６７】
皮膚軟化剤として機能し得る例示的な炭化水素は１２〜３０個の炭素原子の炭化水素鎖を有するものである。具体的な例には鉱油、ワセリン、スクアレン及びイソパラフィンが挙げられる。
【００６８】
本発明の化粧品用組成物中の機能性成分の別の分類は増粘剤である。増粘剤は通常、組成物の０．１〜２０重量％、好適には０．５重量％〜１０重量％の量で存在する。例示的な増粘剤はＢ．Ｆ．Ｇｏｏｄｒｉｃｈ  Ｃｏｍｐａｎｙ社の登録商標Ｃａｒｂｏｐｏｌで市販されている架橋ポリアクリレート材料である。キサンタン、カラゲナン、ゼラチン、カラヤ、ペクチン及びイナゴマメゴムなどのゴムを用いることができる。特定の条件下では、増粘機能はシリコーン又は皮膚軟化剤としても働く材料によって達成され得る。例えば、０．１ｃｍ２／ｓ（１０センチストーク）を超えるシリコーンゴム及びステアリン酸グリセロールなどのエステルは二重機能性を有する。
【００６９】
本発明の化粧用組成物に粉末を組み込んでもよい。これらの粉末には、チョーク、滑石、フラー土、カオリン、でんぷん、スメクタイト粘土、化学修飾されたケイ酸マグネシウムアルミニウム、有機修飾されたモンモリロナイト粘土、ケイ酸アルミニウム水和物、フュームドシリカ、アルミニウムデンプンオクテニルスクシネート及びそれらの混合物が挙げられる。
【００７０】
本発明の化粧用システムの装置及び組成物は、特に、皮膚を調整及び滑らかにし、皮膚の皺又は老化を予防又は抑えるための薬剤としてヒト皮膚への局所適用製品を主として意図したものである。
【００７１】
以下では、本発明のシステム及び方法の用途のいくつかの実施例を記載する。以下は本発明を実施するための最良の実施態様を説明するための本発明の原理の一例であって、限定されるものではない。
【実施例１】
【００７２】
実施例１
この実施例は効果的な表皮組織の極微細活性化を提供するための本発明の極微細活性化方法の使用を例証する。
【００７３】
細胞培養
トリプシン処理によって新生児包皮から分離した正常ヒトケラチノサイトを、放射線照射したマウス線維芽細胞の存在下で１０％ウシ胎仔血清とともにダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、ニューヨーク州グランドアイランド）で成長させて、分化ケラチノサイトコロニーを確立した。細胞をその第２継代まで培養し、後から使用するために−７０℃で保存した。培養はすべて５％ＣＯ２、３７℃で行った。凍結した第２継代のケラチノサイトを解凍し、Ｔ７５フラスコ（Ｃｏｒｎｉｎｇ社、ニューヨーク州コーニング）内のＫＧＭ培地（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｒｐ．社、カリフォルニア州サンディエゴ）に平板培養して集密培養し、後から使用するためにトリプシン処理により採取した。
【００７４】
ケラチノサイトを１プレート当たり１００万個で６枚のウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ社）で平板培養し、集密培養した。集密したら、倍地を新鮮なＫＧＭと交換し、０．２ＭのＣａＣｌ２溶液の無菌アリコートを添加してカルシウム濃度を１．２ｍＭにした。細胞をさらに２４時間培養した。培地を新鮮なＫＧＭと交換した。表面５６上に設置された鍼治療用の針である針５８（Ｐｅａｃｅ商標、ＣＴ５Ｐ−０１、中国、０．１６ｍｍ×１３ｍｍ）を用いて以下の様に細胞に傷を付けた。先端が整列するように５本の消毒針５８を保持した。針５８の突き刺しがプレート床面にわたって均一に当たるように、この針の集まりを無作為の分布パターンで０、２０、５０、１００、及び２００回細胞集密床に押し付けた。１つのウェルでは、プレート床面の上で針を引きずって、床面領域全体の上に針の集まりを１回通過させた。このウェルを「引っ掻き」ウェルと呼んだ。細胞をさらに２４時間培養した。次いで、この培地を取り出して、細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、０．８５％、ＮａＣｌ、１０ｍＭのＮａＰＯ４、ｐＨ７．４）で洗浄し、１ｍｌの抽出緩衝液（ＰＢＳ、０．５％ラウリル硫酸ナトリウム、４Ｍの尿素、１０ｍＭのＥＤＴＡ）で溶解した。この溶解物を用いてＢＣＬ−２（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社、カリフォルニア州サンタクルーズ）用の電気泳動／ウェスタンブロッティングの標本及び抗体を作製し、ケラチン１６（Ｌａｂｖｉｓｉｏｎ社、カリフォルニア州フレモント）を用い、Ｔｙｐｈｏｏｎ画像化システム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ社）を使用することによって上記抗原を定量した。この結果を対照群の割合として表し、図５及び６に示している。
【００７５】
結果からＢＣＬ−２及びケラチン１６はともに、ケラチノサイトを損傷させたウェルにおいては用量依存性で上昇したことがわかった。ＢＣＬ−２及びケラチン１６はともに、ケラチノサイト「活性化」、すなわちそれらが創傷治癒の過程に関与する状態のマーカーであるとみなされる。
【実施例２】
【００７６】
実施例２
トリプシン処理によって新生児包皮から分離した正常ヒト線維芽細胞を、１０％ウシ胎仔血清とともにダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、ニューヨーク州グランドアイランド）で成長させた。細胞をその第２継代まで培養し、後から使用するために−７０℃で保存した。培養はすべて５％ＣＯ２、３７℃で行った。凍結した第２継代の線維芽細胞を解凍し、Ｔ７５フラスコ（Ｃｏｒｎｉｎｇ社、ニューヨーク州コーニング）内のＤＭＥＭ培地に平板培養して集密培養し、後から使用するためにトリプシン処理により採取した。
【００７７】
線維芽細胞を１２ウェルプレート当たり１００万個で平板培養し、上記培養条件で集密培養した。上記のように培養したケラチノサイトを以下のように傷付けた。（実施例１に記載のような）鍼治療用の５本の針５８のグループを分布が均一になるようにウェルの床面にわたって０、５、１０又は２０回引きずった。創傷後、細胞を２４時間培養した。次いで、各ウェルから２ｍｌの培地を採取し、１ｍＬの培地を、線維芽細胞の入った１２ウェルプレートのウェルの１つに新鮮なＤＥＭＥ１ｍｌとともに平板培養した。標本は３つ作製した。次いで、プレートをさらに８、２４、又は４８時間培養した。次いで、上澄み培地を採取し、電気泳動及びウェスタンブロッティング法のためにアリコートを用いて、適した抗体（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ社、カリフォルニア州テメキュラ）を使用してプロコラーゲン１の存在及び量を決定した。
【００７８】
プロコラーゲン１はコラーゲンの前駆物質であり、創傷治癒及び真皮再生において重要な役割を担うと考えられる。図７を参照すると、結果から、創傷後８、２４、及び４８時間に採取した創傷したケラチノサイトからの上澄み培地は、培養線維芽細胞においてプロコラーゲン１の発現を増大することができることがわかった。
【実施例３】
【００７９】
実施例３
臨床試験
年齢２５〜５０才の１０人の被験者を臨床試験に募集して、内部審査委員会により承認されたプロトコルへのインフォームドコンセントを行った後マイクロニードル５８の効果を試験した。鍼治療用針（Ｓｅｉｒｉｎ社、０．１２ｍｍ×３０ｍｍ）である針５８を、狭径のプラスチック管、すなわち位置決めカラー６０内に針先端が位置決めカラー６０の端部を越えて約２５０μｍ突出するように接着剤で固定した。この構成によって使用中の過度の穿通が防止された。このプロトコルはビヒクル単独又は０．０５％又は０．１％レチノールを含んだビヒクルの背下部の皮膚上への適用を提供した。ビヒクル単独部位及び０．０５％レチノール部位では、マイクロニードル５８を１ｃｍ２当たり１００個の穿通密度で当てた。内部面積が１．５ｃｍ２の接着性リングを用いて治療領域を定めた。マイクロニードル装置１０をオペレータの手に持たせ、被験者の皮膚に軽く当てさせた。マイクロニードルで穿通直後に治療溶液の２０μｌのアリコートを関連する部位に適用した。４日間にわたって１日１回部位を治療した。５日目に研磨プローブを用いて表皮サンプルを採取し、抽出緩衝液（上記参照）に入れた。ポリアクリルアミドゲル電気泳動及びウェスタンブロッティング法を用いて、皮膚中のレチノイド活性のマーカーと考えられるタンパク質である細胞内レチノイン酸結合タンパク質ＩＩ（ＣＲＡＢＰＩＩ）が存在するかどうかサンプルを分析した。
【００８０】
図８を参照すると、結果からは適用されるレチノールの濃度が上昇するにつれてＣＲＡＢＰ  ＩＩが用量依存性に上昇することがわかった。この結果からは、マイクロニードル５８＋０．０５％レチノール処理によって、０．０５％レチノール単独処理の場合に見られたＣＲＡＢＰ  ＩＩ発現を超えてＣＲＡＢＰ  ＩＩ発現が統計学的に有意（ｐ＜０．０５）に上昇したこと及び実際に、マイクロニードル５８＋０．０５％レチノール処理に伴うＣＲＡＢＰ  ＩＩ発現は０．１％レチノール単独処理に伴うその発現よりも大きかったこともわかった。この差も統計学的に有意であった。
【実施例４】
【００８１】
実施例４
マイクロニードルによるＢＣＬ−２発現の導入
この試験は、皮膚細胞の活性化（創傷治癒状態への遷移）のマーカーであると考えられる、皮膚における生化学を上昇させる際のマイクロニードル５８処理単独の効果を試験することを目的としたものであった。細胞創傷後にＢＣＬ−２バイオマテリアルの発現が増大することは活性化のマーカーであると考えられる。
【００８２】
年齢２５〜５０才の１０人の被験者を臨床試験に募集して、承認されたプロトコルへのインフォームドコンセントを行った後マイクロニードル５８の効果を試験した。（上記実施例３のような）マイクロニードル５８を被験者の背中の皮膚に１ｃｍ２当たり１００個の穿通密度で当てた。内部面積が１．５ｃｍ２の接着性リングを用いて治療領域を定めた。一部位は未治療の対照例とし、他の９部位には１、３及び９日間にわたって１日１回マイクロニードル５８で治療を行った。１日、３日、及び１０日目に削り取った表皮研磨サンプルを採取し、上記のように処理した。１日目、未治療の対照部位及び治療後１５分、５時間及び２４時間の治療した別個の３部位からサンプルを採取した。３日目、それまで治療したがその日は治療しなかった一部位から、治療後１５分、５時間、２４時間の別々の部位から３サンプルを採取した。１０日目、２部位からサンプルを採取した。そのうち１例はそれまでに治療を受けたが１０日目に治療しなかったものであり、他方は治療１５分後のものであった。ＢＣＬ−２と呼ばれるタンパク質が存在するかどうか、ポリアクリルアミドゲル電気泳動及びウェスタンブロッティング法を用いてサンプルを分析した。
【００８３】
図９を参照すると、結果からは、３日治療の２４時間後に被験者から採取したサンプル及び１０日治療サンプルの両方に関して、ＢＣＬ−２のレベルが統計学的に有意に上昇したことがわかった。これはマイクロニードル５８の治療が表皮細胞における活性化を惹起したことを示唆している。臨床医はどの治療部位においても著しい炎症を認めなかった。極微細活性化部位からは表皮極微細活性化処置による瘢痕は一切見られなかった。
【図面の簡単な説明】
【００８４】
【図１Ａ】好適な一実施形態による組み立てられた極微細活性化装置を示す斜視図である。
【図１Ｂ】位置決めスリーブか外された状態の、図１Ａの極微細活性化装置を示す分解図である。
【図１Ｃ】図１Ａの極微細活性化装置のアクチュエータ装置及びプローブを示す分解図である。
【図２】図１Ａの線２−２で切った断面図である。
【図３】図１Ｃの線３−３で切った断面図である。
【図４】図１Ａの極微細活性化装置のプローブの表面を示す拡大図である。
【図５】培養ケラチノサイトにおけるＢＣＬ−２の発現への極微細活性化の影響を示すグラフである。
【図６】培養ケラチノサイトにおけるケラチン１６の発現への極微細活性化の影響を示すグラフである。
【図７】創傷したケラチノサイト馴化培地で処理した線維芽細胞におけるプロコラーゲン１の発現を示すグラフである。
【図８】図１Ａの極微細活性化装置及びレチノールを用いて併用処理したヒト表皮におけるＣＲＡＢＰＩＩへの影響を示すグラフである。
【図９】ヒト表皮におけるＢＣＬ−２の発現への本発明の方法及び図１Ａの装置を用いた極微細活性化の影響を示すグラフである。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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