(57)【要約】本発明は、治療有効量のＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物を含む、ある状態および／または疾患を予防および／または治療するための組成物、結合体、および方法に関する。ＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物の組み合わせは、糖尿病、高血圧、慢性心不全、体液うっ滞状態、肥満症、代謝症候群ならびに関連疾患および障害を含むがそれらに限定されない、ＧＬＰ−１アゴニストまたはガストリン化合物のどちらかがそれに対して治療作用を有することが証明されている状態および／または疾患を予防および／または治療する際に、有益な効果、特に持続性の有益な効果を提供する。ＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物の組み合わせは、予想外の相加作用または相乗作用を提供するように選択することができる。
2007519642.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
各化合物単独に比較して有益な効果を提供するＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物、ならびに必要に応じて薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、またはビヒクルを含有する、薬学的組成物。
【請求項２】
被験体において投与後の長期間にわたって持続する正常血糖値を提供する形態にある、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
ＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物を必要とする被験体の長期療法または短期療法のための形態で治療有効量のＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物を含有する、請求項１または２のいずれかに記載の薬学的組成物。
【請求項４】
前記治療有効量が、糖尿病を治療するために投与される各化合物単独の量に比較して最適量より少ない、請求項３に記載の薬学的組成物。
【請求項５】
ＧＬＰ−１アゴニストのガストリン化合物に対する比率がＧＬＰ−１アゴニストまたはガストリン化合物の活性を増大するように選択される、請求項１〜４のいずれかに記載の薬学的組成物。
【請求項６】
ＧＬＰ−１アゴニストのガストリン化合物に対する比率が、約１：１〜１：１１０、１：１〜１：１００、１：１〜１：７５、１：１〜１：５０、１：１〜１：２５、１：１〜１：１０、１：１〜１：５、および１：１である、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
ＧＬＰ−１アゴニストに対するガストリン化合物の比率が、約１：１〜１：１１０、１：１〜１：１００、１：１〜１：７５、１：１〜１：５０、１：１〜１：２５、１：１〜１：１０、および１：１〜１：５である、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項８】
前記ＧＬＰ−１アゴニストが、約１：１．５〜１：１５０、好ましくは１：２〜１：５０の間の治療有効量の比率でガストリン化合物と組み合わせて使用される、請求項１〜７のいずれかに記載の薬学的組成物。
【請求項９】
前記ＧＬＰ−１アゴニストおよび前記ガストリン化合物が、状態および／または疾患を治療するために必要とされる各化合物単独の用量に比較して少なくとも約１．１〜１．４分の１、１．５分の１、２分の１、３分の１、４分の１、５分の１、６分の１、７分の１、８分の１、９分の１、もしくは１０分の１である用量で存在する、請求項１〜８のいずれかに記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
薬学的に受容可能な賦形剤、キャリア、またはビヒクル中に追加量の前記ＧＬＰ−１アゴニストおよび前記ガストリン化合物を含有する、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
薬学的に受容可能な賦形剤、キャリア、またはビヒクル中に相乗的有効量の前記ＧＬＰ−１アゴニストおよび前記ガストリン化合物を含有する、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
０．１〜２０μｇ／ｋｇ／日、０．１〜３０μｇ／ｋｇ／日、０．１〜４０μｇ／ｋｇ／日、０．１〜５０μｇ／ｋｇ／日、および０．１〜６０μｇ／ｋｇ／日の間のＧＬＰ−１アゴニストならびに０．１〜２０μｇ／ｋｇ／日、０．１〜３０μｇ／ｋｇ／日、０．１〜４０μｇ／ｋｇ／日、０．１〜５０μｇ／ｋｇ／日、および０．１〜６０μｇ／ｋｇ／日のガストリン化合物を含有する、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
前記有益な効果が、以下：膵島炎症の減少もしくは欠如、疾患進行の低下、生存率の上昇、または疾患もしくは状態の症状の減少のうちの１つ以上である、請求項２に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
前記有益な効果が治療終結後の長期間にわたり持続する有益な効果である、請求項１〜１３のいずれかに記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
前記有益な効果が、治療後に少なくとも約２週間、４週間、５週間、６週間、もしくは１０週間、２〜４週間、２〜８週間、２〜１２週間、２〜２４週間、２週間〜１２カ月間、および２週間〜１８カ月間持続する、請求項１４に記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
前記持続性の有益な効果が、Ｃ−ペプチド産生の上昇、膵インスリン産生の上昇、および治療後の長期間にわたるほぼ正常もしくは低血糖値として現れ得る、請求項１５に記載の薬学的組成物。
【請求項１７】
前記有益な効果が膵インスリンレベルの少なくとも約０．５％、１％、２％、５％、１０％、１５％、２０％、３０％、３３％、３５％、４０％、４５％、または５０％の上昇である、請求項１〜１６のいずれかに記載の薬学的組成物。
【請求項１８】
前記有益な効果が血糖値の少なくとも約２％、５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％の減少である、請求項１〜１７のいずれかに記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
前記有益な効果が、治療後に少なくとも２週間、４週間、６週間、８週間、もしくは１０週間、２〜４週間、２〜６週間、２〜８週間、２〜１２週間、２〜２４週間、２週間〜１２カ月間、および２週間〜１８カ月間の期間にわたる血糖値の減少である、請求項１〜１８のいずれかに記載の薬学的組成物。
【請求項２０】
前記ＧＬＰ−１アゴニストが、ＧＬＰ−１（１−３７）、ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、そのフラグメント、アナログ、および誘導体、ならびにＧＬＰ−１の活性代謝産物およびプロドラッグである、請求項１〜１９のいずれかに記載の薬学的組成物。
【請求項２１】
前記ＧＬＰ−１が、配列番号５のＧＬＰ−１（７−３６）または配列番号１４のガストリン−１７（ｌｅｕ）である、請求項１〜２０のいずれかに記載の薬学的組成物。
【請求項２２】
前記ＧＬＰ−１アゴニストが式ＧＬＰ−１（７−Ｒ）の親ポリペプチドを含み、ここで、Ｒは、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、および４５であり、そして任意で５個、１０個、または１５個までのアミノ酸残基が任意のａ−アミノ酸残基と置換されている、請求項１〜２１のいずれかに記載の薬学的組成物。
【請求項２３】
前記ＧＬＰ−１アゴニストが表１に列挙したＧＬＰ−１のアナログまたは誘導体である、請求項１〜２２のいずれかに記載の薬学的組成物。
【請求項２４】
前記ガストリン化合物が、ガストリン−７１（配列番号１５）、ガストリン−５２（配列番号１６）、ガストリン−３４（ビッグガストリン）（配列番号１１もしくは配列番号１２）、ガストリン−１７（リトルガストリン）（配列番号１３もしくは配列番号１４）、ガストリン−１４（配列番号１７）、ガストリン−８、ガストリン−６（配列番号１８もしくは配列番号１９）、ペンタガストリン、およびテトラガストリンである、請求項１〜２３のいずれかに記載の薬学的組成物。
【請求項２５】
前記ガストリン化合物が、式Ｚ−Ｙｍ−Ｘｎ−ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ４−ＡＡ５−ＡＡ６の化合物であり、ここで、ＡＡ１はＴｙｒまたはＰｈｅであり、ＡＡ２はＧｌｙ、Ａｌａ、またはＳｅｒであり、ＡＡ３はＴｒｐ、Ｖａｌ、またはＩｌｅであり、ＡＡ４はＭｅｔまたはＬｅｕであり、ＡＡ５はＡｓｐまたはＧｌｕであり、そしてＡＡ６は必要に応じてアミド化されたＰｈｅまたはＴｙｒであり；Ｚはキャリア、好ましくはポリマーであり、より好ましくはタンパク質であり；Ｙｍはセリンおよびアラニンを含むがそれらに限定されない小さな中性アミノ酸のｍ個のアミノ酸残基を含む任意のスペーサー領域であり、そしてＸは、配列番号１１もしくは１２の残基１〜２８または配列番号１３もしくは１４の残基１〜１１の任意の連続部分であり、好ましくはＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ４−ＡＡ５−ＡＡ６は、Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−ＰｈｅまたはＴｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｐｈｅである、化合物である、請求項１〜２４のいずれかに記載の薬学的組成物。
【請求項２６】
前記ＧＬＰ−１アゴニストが、Ｇｌｙ８−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ａｓｐ２２ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｌｙｓ２２ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｈｉｓ２２ＧＬＰ−１（７−３７）、Ａｒｇ３４Ｌｙｓ２６（Ｎｅ（ｇ−Ｇｌｕ（Ｎａ−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｇ１ｙ８−ＧＬＰ−１（７−３６）アミド、Ｖａｌ８ＧＬＰ−１（７−３６）アミド、Ｖａｌ８Ａｓｐ２２ＧＬＰ−１（７−３６）アミド、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２ＧＬＰ−１（７−３６）アミド、Ｖａｌ８Ｌｙｓ２２ＧＬＰ−１（７−３６）アミド、およびＶａｌ８Ｈｉｓ２２ＧＬＰ−１（７−３６）アミドからなる群より選択され、そして前記ガストリン化合物が配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１７または配列番号１８を含むガストリンである、請求項１〜２５のいずれかに記載の薬学的組成物。
【請求項２７】
前記ＧＬＰ−１アゴニストがＡｒｇ３４Ｌｙｓ２６（Ｎｅ（ｇ−Ｇｌｕ（Ｎａ−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）であり、前記ガストリン化合物が１５Ｌｅｕガストリン−１７（配列番号１４）である、請求項１〜２６のいずれかに記載の薬学的組成物。
【請求項２８】
前記ガストリン化合物が血清タンパク質、好ましくはヒト血清アルブミンと結合している、請求項２７に記載の薬学的組成物。
【請求項２９】
ＧＬＰ−１アゴニスト、ガストリン化合物、ならびにＧＬＰ−１アゴニストを物理的に安定化させるために有効で、有益な効果、好ましくは持続性の有益な効果を提供するために適合させた薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、またはビヒクルを混合する工程を包含する、ＧＬＰ−１アゴニストの安定性薬学的組成物を調製するための方法。
【請求項３０】
有益な効果、特に持続性の有益な効果を提供するためにガストリン化合物に結合したＧＬＰ−１アゴニストを含む結合体。
【請求項３１】
前記ＧＬＰ−１アゴニストが、Ｇｌｙ８−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ａｓｐ２２ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｌｙｓ２２ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｈｉｓ２２ＧＬＰ−１（７−３７）、Ａｒｇ３４Ｌｙｓ２６（Ｎｅ（ｇ−Ｇｌｕ（Ｎａ−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｇ１ｙ８−ＧＬＰ−１（７−３６）アミド、Ｖａｌ８ＧＬＰ−１（７−３６）アミド、Ｖａｌ８Ａｓｐ２２ＧＬＰ−１（７−３６）アミド、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２ＧＬＰ−１（７−３６）アミド、Ｖａｌ８Ｌｙｓ２２ＧＬＰ−１（７−３６）アミド、およびＶａｌ８Ｈｉｓ２２ＧＬＰ−１（７−３６）アミドからなる群より選択され、そして前記ガストリン化合物が必要に応じて血清タンパク質と結合した配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１７、または配列番号１８を含むガストリンである、請求項３０に記載の結合体。
【請求項３２】
被験体における状態および／または疾患を治療または予防するための方法であって、持続性の有益な効果を生成するために、該被験体へ治療有効量のＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物、または請求項１〜２８、３０および３１のいずれかに記載の組成物もしくは結合体を投与する工程を包含する、方法。
【請求項３３】
前記持続性の有益な効果が、治療後少なくとも２週間、４週間、６週間、８週間、もしくは１０週間、２〜４週間、２〜６週間、２〜８週間、２〜１２週間、２〜２４週間、２週間〜１２カ月間、および２週間〜１８カ月間にわたる血糖値の減少である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
糖尿病の症状を有する被験体への投与の際に持続性の有益な効果を提供する少なくとも１つのガストリン化合物の投与と組み合わせて、該被験体へ治療有効量の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストを投与する工程を包含する、治療方法。
【請求項３５】
少なくとも１つのガストリン化合物の投与と組み合わせた少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストの投与が糖尿病の少なくとも１つの症状への持続性の有益な効果を提供する、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
治療有効量の前記ＧＬＰ−１アゴニストおよび前記ガストリン化合物が前記被験体への投与前に組み合わせられる、請求項３４または３５に記載の方法。
【請求項３７】
治療有効量の前記ＧＬＰ−１アゴニストおよび前記ガストリン化合物が前記被験体へ連続的に投与される、請求項３４または３５に記載の方法。
【請求項３８】
ＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物の治療有効量が相乗的有効量である、請求項２９、３２〜３７のいずれかに記載の方法。
【請求項３９】
ＧＬＰ−１アゴニスト、ガストリン化合物、ならびにＧＬＰ−１アゴニストを物理的に安定化させるために有効で、有益な効果、好ましくは持続性の有益な効果を提供するために適合させた薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、またはビヒクルを混合する工程を包含する、ＧＬＰ−１アゴニストの安定な薬学的組成物を調製する方法。
【請求項４０】
状態および／または疾患を治療する方法であって、有益な効果、好ましくは持続性の有益な効果を生成するために、治療を必要とする被験体へ複数の細胞とともに、ＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物、または請求項１〜２８、３０および３１のいずれかに記載の組成物もしくは結合体を投与する工程を包含する、方法。
【請求項４１】
前記状態および／または疾患が、異脂肪血症、高血糖症、重症低血糖性エピソード、脳卒中、左室肥大症、不整脈、菌血症、敗血症、過敏性腸症候群、呼吸窮迫症候群、機能性消化不良、糖尿病、術後の異化作用の変化、ストレス誘導性高血糖症、胃潰瘍、心筋梗塞、グルコース寛容減損、高血圧、アルツハイマー病およびその他の中枢神経変性状態および末梢神経変性状態、慢性心不全、体液うっ滞状態、代謝性症候群、ならびに関連疾患、障害および肥満症である、請求項２９、３２〜４０のいずれかに記載の方法。
【請求項４２】
前記状態および／または疾患が糖尿病である、請求項４０または４１に記載の方法。
【請求項４３】
被験体における膵島細胞新生を誘導するための方法であって、膵島前駆細胞を、該被験体における膵島前駆細胞の増殖を増加させるために十分な量でＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物、または請求項１〜２８、３０および３１のいずれかに記載の組成物もしくは結合体と接触させ、それにより膵島細胞新生を誘導する工程を包含する、方法。
【請求項４４】
幹細胞をインスリン分泌細胞へ拡大かつ分化させるための方法であって、該幹細胞を有効量のＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物または請求項１〜２８、３０および３１のいずれかに記載の組成物もしくは結合体と接触させる工程を包含する、方法。
【請求項４５】
前記ＧＬＰ−１アゴニストが、Ｇｌｙ８−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ａｓｐ２２ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｌｙｓ２２ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｈｉｓ２２ＧＬＰ−１（７−３７）、Ａｒｇ３４Ｌｙｓ２６（Ｎｅ（ｇ−Ｇｌｕ（Ｎａ−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｇ１ｙ８−ＧＬＰ−１（７−３６）アミド、Ｖａｌ８ＧＬＰ−１（７−３６）アミド、Ｖａｌ８Ａｓｐ２２ＧＬＰ−１（７−３６）アミド、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２ＧＬＰ−１（７−３６）アミド、Ｖａｌ８Ｌｙｓ２２ＧＬＰ−１（７−３６）アミド、およびＶａｌ８Ｈｉｓ２２ＧＬＰ−１（７−３６）アミドからなる群から選択され、そして前記ガストリン化合物が血清タンパク質と結合した配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１７、または配列番号１８を含むガストリンである、請求項２９および３２〜４４のいずれかに記載の方法。
【請求項４６】
前記ＧＬＰ−１アゴニストがＡｒｇ３４Ｌｙｓ２６（Ｎｅ（ｇ−Ｇｌｕ（Ｎａ−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）であり、前記ガストリン化合物が１５Ｌｅｕガストリン−１７（配列番号１４）である、請求項２９および３２〜４５のいずれかに記載の方法。
【請求項４７】
状態および／または疾患を治療するための医薬を調製するための少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストおよび少なくとも１つのガストリン化合物の組み合わせを含有する、組成物の使用。
【請求項４８】
状態および／または疾患を治療するための医薬を製造するためのガストリン化合物と組み合わせて使用されるＧＬＰ−１アゴニストの使用。
【請求項４９】
前記ＧＬＰ−１アゴニストが、Ｇｌｙ８−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ａｓｐ２２ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｌｙｓ２２ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ８Ｈｉｓ２２ＧＬＰ−１（７−３７）、Ａｒｇ３４Ｌｙｓ２６（Ｎｅ（ｇ−Ｇｌｕ（Ｎａ−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｇ１ｙ８−ＧＬＰ−１（７−３６）アミド、Ｖａｌ８ＧＬＰ−１（７−３６）アミド、Ｖａｌ８Ａｓｐ２２ＧＬＰ−１（７−３６）アミド、Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２ＧＬＰ−１（７−３６）アミド、Ｖａｌ８Ｌｙｓ２２ＧＬＰ−１（７−３６）アミド、およびＶａｌ８Ｈｉｓ２２ＧＬＰ−１（７−３６）アミドからなる群より選択され、そして前記ガストリン化合物が配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１７、または配列番号１８を含むガストリンである、請求項４７または４８に記載の使用。
【請求項５０】
前記ＧＬＰ−１アゴニストがＡｒｇ３４Ｌｙｓ２６（Ｎｅ（ｇ−Ｇｌｕ（Ｎａ−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）であり、前記ガストリン化合物が１５Ｌｅｕガストリン−１７（配列番号１４）である、請求項４７〜４９のいずれかに記載の使用。
【請求項５１】
前記状態および／または疾患が、異脂肪血症、高血糖症、重症低血糖性エピソード、脳卒中、左室肥大症、不整脈、菌血症、敗血症、過敏性腸症候群、機能性消化不良、呼吸窮迫症候群、糖尿病、術後の異化作用の変化、ストレス誘導性高血糖症、胃潰瘍、心筋梗塞、グルコース寛容減損、高血圧、アルツハイマー病およびその他の中枢神経変性疾患および末梢神経変性状態、慢性心不全、体液うっ滞状態、代謝性症候群、ならびに関連疾患、障害および肥満症である、請求項４７〜５０のいずれかに記載の使用。
【請求項５２】
請求項１〜２８、３０および３１のいずれかに記載の組成物または結合体のキット形。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、一般に、ＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物を含む組成物、結合体、方法、およびその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）は、下部消化管からの生理的インクレチンホルモンである。ＧＬＰ−１は、グルコース依存性インスリン分泌の刺激、グルカゴン分泌および胃内容排出の阻害、食物摂取の阻害、グルコース利用率の増強、β細胞の維持、β細胞アポトーシスの阻害、ならびにβ細胞増殖の誘導を含む重要な生理的活性を有する。（ＧＬＰ−１の概観については、非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４およびｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｌｕｃａｇｏｎ．ｃｏｍを参照されたい）。ＧＬＰ−１は上述した活性を有するために、糖尿病、肥満症、胃潰瘍、高血圧、慢性心不全、体液うっ滞状態、代謝症候群、ならびに関連疾患および障害を含む多数の状態および疾患を治療するために高度に望ましい治療薬である。
【０００３】
本明細書における参考文献についての言及は、そのような参考文献を本発明の先行技術として利用できると是認するものではない。
【非特許文献１】Ｎａｕｃｋ，Ｍ．Ａ．、「Ａｃｔａ  Ｄｉａｂｅｔｏｌ」、１９９８年、第３５巻、ｐ．１１７−１２９
【非特許文献２】Ｈｏｌｓｔ  Ｊ．Ｊ．、「Ｄｅａｂｅｔｅｓ  Ｍｅｔａｂ  Ｒｅｓ  Ｒｅｖ」、２００２年、第１８巻、ｐ．４３０−４４１
【非特許文献３】Ｒｅｉｍｅｒ，Ｒ．Ａ．ら、「Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ」、第１４２巻、第１０号、ｐ．４５２２−４５２８
【非特許文献４】Ｄｒｕｃｋｅｒ，Ｄ．Ｊ．、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ」、２００３年、第１７巻、第２号、ｐ．１６１−１７１
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
（発明の概要）
ＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物の組み合わせは、糖尿病、高血圧、慢性心不全、体液うっ滞状態、肥満症、代謝症候群ならびに関連疾患および障害を含むがそれらに限定されない、ＧＬＰ−１アゴニストまたはガストリン化合物がそれに対して治療作用を有することが証明されている状態および／または疾患を予防および／または治療する際に有益な効果を提供する。ＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物の組み合わせは、予想外の相加作用または相加作用より大きな作用、すなわち相乗作用を提供するように選択することができる。
【０００５】
最高治療有効性を達成するために様々な機序を使用するＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物を含む組成物、結合体、または方法は、高用量または長期単剤療法（すなわち、各化合物単独を用いる療法）の結果として生じる可能性がある副作用のリスクを減少させながら治療に対する忍容を向上させることができる。本発明の組成物、結合体、または方法は、各化合物の有害な毒性作用を減少させながら一方または両方の化合物を低用量で使用することを許容するであろう。最適量より少ない用量は安全域を増加させることができ、予防および治療を達成するために必要な薬物の費用を減少させることもできる。本発明の所定の態様では、単回で併用投与できるという便宜性の上昇がコンプライアンス強化を生じることができる。組成物、結合体、または併用療法の他の長所には、分解および代謝に対するより高い安定性、長期の作用持続、および／または特に低用量での長期の作用持続または有効性を含むことができる。
【０００６】
大まかに言うと、本発明は、有益な効果を提供する治療有効量のＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物を含む、ある状態および／または疾患を予防および／または治療するための組成物、結合体、および方法に関する。
【０００７】
本発明の組成物、結合体、または方法は、治療に続く、または治療終結後の持続性の有益な効果を提供することができる。持続適有効性は、ＧＬＰ−１またはガストリン単独と比較して、Ｃ−ペプチド産生の上昇、膵インスリン産生の上昇、および／またはほぼ正常な血糖値によって証明できる。
【０００８】
１つの態様では、本発明は、各化合物単独に比較して有益な効果を提供するＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物を含む組成物、好ましくは薬学的組成物を企図している。また別の態様では、本発明は、治療後に有益な効果、好ましくは持続性の有益な効果を提供するＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物を含む薬学的組成物を提供する。薬学的組成物は、任意で薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、またはビヒクルを含むことができる。
【０００９】
本発明は、別個の容器中に含まれており、どちらも任意で薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、またはビヒクルを備える、ＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物を含む、有益な効果、特に持続性の有益な効果を提供するために同時または連続投与が予定されている薬学的組成物をさらに企図している。
【００１０】
本発明は、有益な効果、好ましくは本明細書で考察する持続性の有益な効果を提供するためにガストリン化合物と相互作用する、またはガストリン化合物と結合されたＧＬＰ−１アゴニストを含む結合体をさらに企図している。
【００１１】
本発明は、有益な効果、好ましくは持続性の有益な効果を備える組成物および結合体を生じさせる、本発明の組成物および結合体を調製するための方法をさらに企図している。
【００１２】
本発明の１つの態様では、治療後に、有益な効果、好ましくは持続性の有益な効果を提供するために適合させたＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物の安定性薬学的組成物を調製するための方法であって、ＧＬＰ−１アゴニスト、ガストリン化合物、およびＧＬＰ−１アゴニストを物理的に安定化させるために有効な薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、またはビヒクルを含む組成物を調製する工程を含む方法が提供される。
【００１３】
本発明のまた別の態様では、ＧＬＰ−１アゴニストの安定性薬学的組成物を調製するための方法であって、ＧＬＰ−１アゴニスト、ガストリン化合物、およびＧＬＰ−１アゴニストを物理的に安定化させるために有効で、有益な効果、好ましくは持続性の有益な効果を提供するために適合させた薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、またはビヒクルを混合する工程を含む方法が提供される。
【００１４】
本発明は、被験体における本明細書で考察した状態および／または疾患を予防および／または治療するための併用療法であって、有益な効果を提供するために治療有効量の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物を該被験体に投与する工程を含む併用療法に関する。１つの態様では、本発明は、治療後の持続性の有益な効果を提供する併用療法または介入を提供する。
【００１５】
本発明は、本明細書に記載した状態および／または疾患の疾患重症度、疾患症状、および／または再発の周期性を予防する、および／または改善するための、本発明のＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物、組成物、または結合体の使用にさらに関する。本発明は、本発明のＧＬＰ−１アゴニスト、ガストリンおよびガストリン化合物、組成物または結合体を使用する、被験体における疾患および／または状態の予防および／または治療にさらになお関する。
【００１６】
１つの態様では、本発明は、被験体における本明細書で考察した状態および／または疾患を予防および／または介入するための方法であって、本発明の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストおよび少なくとも１つのガストリン化合物、または組成物もしくは結合体の投与を含む方法を提供する。ＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物、組成物または結合体は、被験体に直接的に投与する、または細胞（例、幹細胞または前駆細胞）と接触させて被験体に投与することができる。
【００１７】
他の態様では、本発明は、被験体における本明細書で考察した状態および／または疾患を予防および／または介入するための方法であって、有益な効果を提供するためにそれを必要とする被験体への少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストおよび少なくとも１つのガストリン化合物の投与を含む方法を提供する。
【００１８】
また別の態様では、本発明は、被験体における本明細書で考察した状態および／または疾患を予防および／または介入するための方法であって、それを必要とする被験体へ少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストおよび少なくとも１つのガストリン化合物を共投与する工程を含む方法を提供する。
【００１９】
特定の態様では、本発明は、被験体における膵島細胞新生を誘導する方法であって、膵島前駆細胞を、該被験体における膵島前駆細胞の増殖を増加させるために十分な量で本発明のＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物、組成物または結合体を接触させ、それにより膵島細胞新生を誘導する工程を含む方法に関する。
【００２０】
また別の態様では、本発明は、それを必要とする患者における糖尿病を治療するための方法であって、該患者の膵島前駆細胞から成熟インスリン分泌細胞への分化を達成するため、および／または現存する膵島細胞中のインスリン合成を刺激するために十分な量でガストリン化合物およびＧＬＰ−１アゴニストまたはガストリン化合物およびＧＬＰ−１アゴニストを含む組成物を投与する工程による方法に関する。
【００２１】
本発明は、本発明のＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物、または本発明の組成物もしくは結合体を用いて細胞を治療するための方法を提供する。特別には、本発明は幹細胞または前駆細胞をインスリン分泌細胞内へ拡大かつ分化させるため、インスリン分泌細胞の増殖を強化するため、および／または膵島細胞もしくは前駆細胞を維持するための方法に関する。細胞は、培養内または被験体内でＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物と接触させることができる。
【００２２】
１つの態様では、ある状態および／または疾患を治療するための方法であって、それにより有益な効果、好ましくは持続性の有益な効果を生成するために、それを必要とする被験体へ複数の細胞とともにＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物、本発明の組成物もしくは結合体を投与する工程を含む方法が提供される。１つの実施形態では、化合物／組成物／結合体は全身性投与される。
【００２３】
また別の態様では、本発明は、本明細書で考察した状態および／または疾患を有する被験体を治療するための方法であって、複数の細胞をエックスビボでＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物、または本発明の組成物もしくは結合体と接触させる工程、任意で前記細胞を培養する工程、およびそれを必要とする前記被験体へ前記細胞を投与する工程を含む工程を提供する。
【００２４】
同様に本発明の特定の態様では、膵島内の膵β細胞数を増加させるために十分な量のＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物、または本発明の組成物もしくは結合体へ培養内で曝露させられていた膵島細胞を糖尿病患者へ移植する工程による、それを必要とする被験体における糖尿病を治療するための方法および組成物が提供される。任意で膵β細胞の集団は、移植に先行してβ細胞の集団を拡大させるために十分な時間にわたり培養内で増殖させることができる。
【００２５】
本発明は、ある状態および／または疾患を予防および／または治療するための１つまたは複数の薬剤を調製するための、少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストおよび少なくとも１つのガストリン化合物の組み合わせを含む組成物の使用をさらに企図している。本発明は、ある状態および／または疾患を治療するための薬剤を製造するための、ガストリン化合物と組み合わせたＧＬＰ−１アゴニストの使用をさらに企図している。本発明は、ある状態および／または疾患を治療する目的で薬剤を製造するための、ガストリン化合物と組み合わせて使用すべきＧＬＰ−１アゴニストの使用をさらに企図している。
【００２６】
１つの態様では、本発明は、ある状態および／または疾患を予防および／または治療するための薬剤を調製するための、相乗作用的有効量の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストおよび少なくとも１つのガストリン化合物の使用にさらに関する。また別の態様では、本発明は、ＧＬＰ−１（７−３７）またはエキセンディンに比較して持続性作用プロファイルを有する薬剤を調製するためのＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物の使用に関する。本発明は、ある状態および／または疾患を予防および／または治療するための薬剤の調製における本発明の薬学的組成物および結合体の使用をさらに提供する。本薬剤は、有益な効果、好ましくな治療後に持続性の有益な効果を提供する。
【００２７】
本発明は個別に、または結合体として投与できる活性物質の組み合わせを含む予防および／または治療のための方法に関するので、本発明は、ＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物を含むキットおよびキット形にある本発明の薬学的組成物、または結合体もさらに提供する。本発明のこれらやその他の態様、特徴、および長所は、当業者には以下の詳細な説明から明白になるはずである。
【００２８】
本発明は、以下の図面を参照するとより明確に理解されるであろう。
【００２９】
（用語の解説）
本明細書における終点による数値範囲の列挙には、その範囲内に含まれるすべての数および分数が含まれている（例えば、１〜５には、１、１．５、２、２．７５、３、３．９０、４、および５が含まれる）。さらに、すべての数およびその分数は用語「約」によって修飾されると見なされることも理解されたい。さらに、「１つの」および「その」には、その内容が明白に他のことを指示しない限り複数の対象を含むと理解されたい。そこで、例えば、「１つの化合物」を含有する組成物との言及には、２つ以上の化合物の混合物が含まれる。用語「約」は、言及される数の＋または−０．１〜５０％、５〜５０％、または１０〜４０％、好ましくは１０〜２０％、より好ましくは１０％もしくは１５％を意味する。
【００３０】
本明細書に記載した選択した化合物は１つまたは複数の不斉中心を含有しており、エナンチオマー、ジアステレオマー、および（Ｒ）−または（Ｓ）−のような絶対立体化学によって定義できる他の立体異性体形を生じさせることができる。このため、本発明はすべてのそのような可能性のあるジアステレオマーおよびエナンチオマーならびにそれらのラセミ体および光学純粋形を含んでいる。光学的に活性な（Ｒ）−および（Ｓ）−異性体は、キラルシントンもしくはキラル試薬を用いて調製できる。または従来型技術を用いて分解することができる。本明細書に記載した化合物が幾何学的不斉中心を含有している場合、そして他に特に規定しない限りは、化合物にはＥおよびＡ両方の幾何異性体が含まれることが意図されている。すべての互変異性体形は本発明の範囲内に含まれることが意図されている。
【００３１】
用語「被験体」、「個体」または「患者」は、本明細書に記載した状態および／または疾患に罹患している、または有することが疑われる、または素因がある、哺乳動物などの温血動物を含む動物を意味している。好ましくは、これらの用語はヒトに関する。これらの用語にはさらにまた、ウマ、ウシ、ヒツジ、家禽類、サカナ、ブタ、ネコ、イヌ、および動物園の動物を含む、食用、競技用、またはペットとして飼育された家畜が含まれる。被験体／個体／患者に使用するための本方法は、予防的ならびに治療的使用を企図している。治療のための典型的被験体には、本明細書で考察した状態および／または疾患に罹患しやすい、罹患している、または罹患していたヒトが含まれる。
【００３２】
用語「薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、またはビヒクル」は、有効成分の有効性または活性を妨害しない、そしてそれが投与される宿主にとって毒性ではない媒質を意味する。キャリア、賦形剤、またはビヒクルには、希釈剤、結合剤、接着剤、潤滑剤、崩壊剤、バルク剤、湿潤化剤もしくは乳化剤、ｐＨ緩衝剤、ならびに特定の組成物を調製するために必要になることのある吸収剤などの様々な物質が含まれる。活性物質のためのそのような媒質および物質の使用は、当技術分野においてよく知られている。本発明の所定の態様では、キャリア、賦形剤、またはビヒクルは、ＧＬＰ−１アゴニストを安定化させるために選択される。
【００３３】
「薬学的に受容可能な塩」には、本発明において使用するのに適する化合物中に存在する可能性がある酸性基または塩基性基の塩が含まれる。薬学的に受容可能な塩の例には、カルボン酸基のナトリウム、カルシウムおよびカリウム塩ならびにアミノ基の塩酸塩が含まれる。その他の薬学的に受容可能なアミノ基の塩には、臭化水素酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、リン酸水素塩、リン酸二水素塩、酢酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、乳酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩（メシレート）およびｐ−トルエンスルホン酸塩（トシレート）が含まれる。
【００３４】
用語「予防および／または治療する工程」、「予防および／または治療」、または「予防および／または介入」は、ある状態および／または疾患が開始する前または後のどちらかにおける被験体への生物活性物質の投与を意味する。治療は、短期的または長期的いずれかの方法で実施できる。特別には、予防には、本明細書で考察した状態および／または疾患を発症するリスク状態にある患者の、該状態および／または疾患の臨床的開始前の管理およびケアが含まれる。治療または介入は、診断時以降の被験体の管理およびケアを意味する。予防、治療、または介入の目的は、該状態および／または疾患と闘うことであり、症状または合併症の開始を予防または遅延させるための活性化合物の投与、または症状もしくは合併症の緩和、または該状態および／または疾患を排除する、もしくは部分的に排除することを含んでいる。
【００３５】
「有益な効果」は、ＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物の組み合わせ、またはその組成物もしくは結合体の、該化合物のいずれか一方単独の作用より大きい作用を意味する。有益な効果には、好都合の薬物学的および／または治療的作用、ならびに改良された薬物動態特性および生物活性が含まれる。有益な効果は、相加作用または相乗作用であってよい。本発明の好ましい実施形態では、有益な効果には、膵島炎症の減少もしくは欠如、疾患進行の低下、生存率の上昇、または状態および／または疾患の排除もしくは部分的排除作用が含まれるがそれらに限定されない。特に好ましい実施形態では、有益な効果は「持続性の有益な効果」であるが、このとき有益な効果は治療終結後の長期間にわたり持続する。１つの実施形態では、上記の作用の１つまたは複数は、治療終結後に長期間にわたり持続する。有益な効果は、治療後に少なくとも約２、４、６、８、１０、２〜４週間、２〜６週間、２〜８週間、２〜１２週間、２〜２４週間、２週間〜１２カ月間、および２週間〜１８カ月間持続する可能性がある。有益な効果が持続する期間は、治療の期間および時機と相関することがある。被験体は、約２〜８週間、２〜１２週間、２〜１６週間、２週間〜６カ月間、２週間〜１２カ月間にわたって持続的に、または定期的に治療することができる。持続性の有益な効果は、Ｃ−ペプチド産生の上昇、膵インスリン産生の上昇、および／または治療後の長期間にわたるほぼ正常もしくは低血糖値のうちの１つまたは複数として発現することがある。
【００３６】
有益な効果は、化合物各々の作用に比較して２つの化合物の作用についての統計解析による統計的有意な作用であってよい。２つの化合物についての各化合物単独と比較した「統計的有意な」または「統計的に相違する」作用もしくはレベルは、標準より高い、または低いレベルを表すことがある。本発明の実施形態では、差は、各化合物単独を用いて入手される作用と比較して１．５、２、３、４、５、もしくは６倍以上（分の１以下）であることがある。
【００３７】
ＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物の「相加作用」は、２つの別個の化合物の作用の和に等しい作用を意味する。
【００３８】
ＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物の「相乗作用」は、２つの別個の化合物の作用の和の結果として生じる相加作用より大きい作用を意味する。
【００３９】
「併用療法」、「併用治療」、および「組み合わせて投与する」は、本明細書では互換的に使用し、有効成分が治療されている患者へ同時に投与されることを意味する。組み合わせて投与する場合は、各成分は同時に、または相違する時点に任意の順序で連続的に投与されてよい。このため、各成分は個別に、しかし所望の作用、特に有益な効果、相加作用、または相乗作用を提供するために十分に近い時間に投与されてよい。第１化合物は、第２化合物を用いた治療を追加して含むレジメンで投与されてよい。所定の実施形態では、この用語は、各々がこれらの化合物の一方を含有する２種の薬剤の個別投与ならびに２種の化合物が１つの調製物中に結合されているかどうか、またはそれらが２つの別個の調製物であるかどうかにかかわらず、同時投与を含む、１年以内のＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物の患者への投与を意味する。
【００４０】
「医薬」は、患者へ医薬上活性な化合物（例えば、ＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物）を投与するのに適している薬学的組成物を意味する。
【００４１】
「治療有効量」は、１つまたは複数の望ましい有益な効果、好ましくは１つまたは複数の持続性の有益な効果を導く、本発明の活性化合物（例、ＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物）、組成物または結合体の量または用量を意味する。「治療有効量」は、治療を実施しない場合に比較して有効である被験体の予防および／または治療のために十分な用量を提供できる。
【００４２】
「相乗的有効量」は、相乗作用、特に相乗的に有益な効果を提供する、本発明の活性化合物（例、ＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物）、組成物または結合体の用量に関する。
【００４３】
「最適量より少ない用量」または「最適量より少ない服用量」は、単剤療法において使用する場合のその化合物にとっての最適用量または服用量より少ない活性化合物の用量または服用量を意味する。
【００４４】
用語「結び付けた」、「結合した」、「相互作用する」、「相互作用」または「相互作用している」は、分子間の何らかの物理的関連を意味する。これらの用語は、例えば、静電性、疎水性、イオン性、水素結合相互作用、または共有的相互作用に起因する２つの分子間の好ましくは安定性関連を意味する。所定の相互作用もしくは関連分子は、それらの１つまたは複数が活性化された後にしか相互作用しない。
【００４５】
本発明の状況では、「ＧＬＰ−１アゴニスト」は、ヒトＧＬＰ−１レセプターを完全に、または部分的に活性化する、ペプチドおよび非ペプチド化合物を含む、任意の化合物を意味すると理解されている。好ましい実施形態では、「ＧＬＰ−１アゴニスト」は、好ましくは当技術分野において知られている方法によって測定した親和性定数（ＫＤ）または例えば１００ｎＭ未満などの１μＭ未満の力価（ＥＣ５０）を備える（例えば、国際公開公報第９８／０８８７１号を参照）ＧＬＰ−１レセプターへ結合し、インスリン分泌促進活性を示す任意のペプチドおよび非ペプチド小分子であるが、このときインスリン分泌促進活性は当業者には知られているインビボまたはインビトロアッセイで測定できる。例えば、ＧＬＰ−１アゴニストを動物へ投与し、インスリン濃度を経時的に測定することができる。
【００４６】
１つの実施形態では、ＧＬＰ−１アゴニストは、ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、ＧＬＰ−１（７−３７）、ＧＬＰ−１（７−３６）−アミドアナログ、ＧＬＰ−１（７−３７）アナログ、またはこれらのいずれかの誘導体からなる群から選択される。
【００４７】
本出願では、「アナログ」という名称は、親ペプチドの１つまたは複数のアミノ酸残基がまた別のアミノ酸残基と置換されている、および／または親ペプチドの１つまたは複数のアミノ酸残基が欠失している、および／または１つまたは複数のアミノ酸残基が親ペプチドへ付加されているペプチドを表すために使用する。そのような付加は、親ペプチドのＮ末端もしくはＣ末端のいずれか、または両方でおこることがある。典型的には、「アナログ」は、６個以下のアミノ酸が置換および／または付加されている、および／または親ペプチドから欠失しているペプチド、より好ましくは３個以下のアミノ酸が置換および／または付加されている、および／または親ペプチドから欠失しているペプチド、および最も好ましくは１個のアミノ酸が置換および／または付加されている、および／または親ペプチドから欠失しているペプチドである。
【００４８】
本特許出願では、「誘導体」は、例えばエステル、アルキルもしくは親油性官能基をペプチドもしくはそのアナログの１つまたは複数のアミノ酸残基上に導入することによって化学修飾されているペプチドもしくはそのアナログを表すために使用する。
【００４９】
ＧＬＰ−１アゴニストを同定するための方法は、国際公開公報第９３／１９１７５号（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ  Ａ／Ｓ社）に記載されており、本発明によって使用できる適切なＧＬＰ−１アナログおよび誘導体の例には、国際公開公報第９９／４３７０５号（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ  Ａ／Ｓ社）、国際公開公報第９９／４３７０６号（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ  Ａ／Ｓ社）、国際公開公報第９９／４３７０７号（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ  Ａ／Ｓ社）、国際公開公報第９８／０８８７１号（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ  Ａ／Ｓ社）、国際公開公報第９９／４３７０８号（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ  Ａ／Ｓ社）、国際公開公報第９９／４３３４１号（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ  Ａ／Ｓ社）、国際公開公報第８７／０６９４１号（Ｔｈｅ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、国際公開公報第９０／１１２９６号（Ｔｈｅ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、国際公開公報第９１／１１４５７号（Ｂｕｃｋｌｅｙら）、国際公開公報第９８／４３６５８号（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ社）、欧州特許出願第０７０８１７９号（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ社）、欧州特許出願第０６９９６８６号（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ社）、国際公開公報第０１／９８３３１号（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ社）の中で挙げられたものが含まれる。
【００５０】
１つの実施形態では、ＧＬＰ−１アゴニストは、親油性置換基を含む、ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、ＧＬＰ−１（７−３７）、ＧＬＰ−１（７−３６）−アミドアナログまたはＧＬＰ−１（７−３７）アナログの誘導体である。
【００５１】
本発明のこの実施形態では、ＧＬＰ−１誘導体は、好ましくは親ペプチドへ付着した３つの親油性置換基、より好ましくは２つの親油性置換基、および最も好ましくは１つの親油性置換基（すなわち、ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、ＧＬＰ−１（７−３７）、ＧＬＰ−１（７−３６）−アミドアナログまたはＧＬＰ−１（７−３７）アナログ）を有するが、このとき各親油性置換基は、好ましくは４〜４０個の炭素原子、より好ましくは８〜３０個の炭素原子、よりいっそう好ましくは８〜２５個の炭素原子、さらにいっそう好ましくは１２〜２５個の炭素原子、および最も好ましくは１４〜１８個の炭素原子を有する。
【００５２】
１つの実施形態では、親油性置換基は、部分的または完全に水素化されたシクロペンタノフェナトレン骨格を含む。
【００５３】
また別の実施形態では、親油性置換基は直鎖状または分枝状アルキル基である。
【００５４】
さらにまた別の実施形態では、親油性置換基は直鎖状または分枝状脂肪酸のアシル基である。好ましくは、親油性置換基は、式ＣＨ３（ＣＨ２）ｎＣＯ−（式中、ｎは４〜３８の整数、好ましくは１２〜３８の整数である）を有するアシル基であり、最も好ましくはＣＨ３（ＣＨ２）１２ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）１４ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）１６ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）１８ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）２０ＣＯ−およびＣＨ３（ＣＨ２）２２ＣＯ−である。より好ましい実施形態では、親油性置換基はテトラデカノイルである。最も好ましい実施形態では、親油性置換基はヘキサデカノイルである。
【００５５】
本発明のさらに別の実施形態では、親油性置換基は、カルボン酸基などの負荷電している基である。例えば、親油性置換基は、直鎖状または分枝状アルカンである式ＨＯＯＣ（ＣＨ２）ｍＣＯ−（式中、ｍは４〜３８の整数、好ましくは１２〜３８の整数である）のａ，ｗ−ジカルボン酸のアシル基であってよく、最も好ましくはＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ−、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ−、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１８ＣＯ−、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）２０ＣＯ−もしくはＨＯＯＣ（ＣＨ２）２２ＣＯ−である。
【００５６】
本発明のＧＬＰ−１誘導体では、親油性置換基は、親ＧＬＰ−１ペプチドの以下のアミノ酸の官能基の１つへ付着させることのできる官能基を含有している：
（ａ）Ｎ末端アミノ酸のα−炭素へ付着させたアミノ基、
（ｂ）Ｃ末端アミノ酸のα−炭素へ付着させたカルボキシル基、
（ｃ）任意のＬｙｓ残基のε−アミノ基、
（ｄ）任意のＡｓｐおよびＧｌｕ残基のＲ基のカルボキシル基、
（ｅ）任意のＴｙｒ、ＳｅｒおよびＴｈｒ残基のＲ基のヒドロキシル基、
（ｆ）任意のＴｒｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、およびＨｉｓ残基のＲ基のアミノ基、または
（ｇ）任意のＣｙｓ残基のＲ基のチオール基。
【００５７】
１つの実施形態では、親油性置換基が任意のＡｓｐおよびＧｌｕ残基のＲ基のカルボキシル基へ付着させられている。
【００５８】
また別の実施形態では、親油性置換基は、Ｃ末端アミノ酸のα−炭素へ付着させたカルボキシル基へ付着させられている。
【００５９】
最も好ましい実施形態では、親油性置換基は任意のＬｙｓ残基のε−アミノ基へ付着させられている。
【００６０】
本発明の好ましい実施形態では、親油性置換基は、スペーサーによって親ＧＬＰ−１ペプチドへ付着させられている。スペーサーは、１つは親油性置換基の官能基へ付着させるため、もう１つは親ＧＬＰ−１ペプチドの官能基へ付着させるための、少なくとも２つの官能基を含有していなければならない。
【００６１】
１つの実施形態では、スペーサーはＣｙｓまたはＭｅｔを除くアミノ酸残基、またはＧｌｙ−Ｌｙｓなどのジペプチドである。本発明のためには、「Ｇｌｙ−Ｌｙｓなどのジペプチド」というフレーズは、ＣｙｓまたはＭｅｔ以外の２つのアミノ酸の任意の組み合わせ、好ましくはＣ末端アミノ酸残基がＬｙｓ、ＨｉｓもしくはＴｒｐ、好ましくはＬｙｓであり、Ｎ末端アミノ酸残基がＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、ＨｉｓおよびＴｒｐであるジペプチドを意味する。好ましくは、親ペプチドのアミノ基は、アミノ酸残基もしくはジペプチドスペーサーのカルボキシル基とアミド結合を形成し、そしてアミノ酸残基もしくはジペプチドスペーサーのアミノ基は親油性置換基のカルボキシル基とアミド結合を形成する。
【００６２】
好ましいスペーサーは、リシル、グルタミル、アスパラギル、グリシル、β−アラニルおよびγ−アミノブタノイルであり、それらの構成成分各々は個別実施形態である。最も好ましいスペーサーは、グルタミルおよびβ−アラニルである。スペーサーがＬｙｓ、ＧｌｕまたはＡｓｐである場合は、それらのカルボキシル基はアミノ酸残基のアミノ基とアミド結合を形成し、それらのアミノ基は親油性置換基のカルボキシル基とアミド結合を形成することができる。Ｌｙｓがスペーサーとして使用された場合、一部の例ではＬｙｓのｅ−アミノ基と親油性置換基との間にまた別のスペーサーを挿入することができる。１つの実施形態では、そのようなまた別のスペーサーは、Ｌｙｓのｅ−アミノ基および親油性置換基内に存在するアミノ基とアミド結合を形成するコハク酸である。また別の実施形態では、そのようなまた別のスペーサーはＬｙｓのｅ−アミノ基とのアミド結合および親油性置換基内に存在するカルボキシル基とまた別のアミド結合を形成するＧｌｕまたはＡｓｐであるので、つまり親油性置換基はＮｅアシル化リシン残基である。
【００６３】
また別の実施形態では、スペーサーは非分枝状アルカンである、１〜７個のメチレン基を有するａ，ｗ−ジカルボン酸基であり、このスペーサーは親ペプチドのアミノ基および親油性置換基のアミノ基との間で架橋を形成する。好ましくは、スペーサーはコハク酸である。
【００６４】
また別の実施形態では、付着させたスペーサーを備える親油性置換基は、式ＣＨ３（ＣＨ２）ｐＮＨ−ＣＯ（ＣＨ２）ｑＣＯ−（式中、ｐは８〜３３、好ましくは１２〜２８の整数であり、およびｑは１〜６の整数、好ましくは２である）の基である。
【００６５】
また別の実施形態では、付着させたスペーサーを備える親油性置換基は、式ＣＨ３（ＣＨ２）ｒＣＯ−ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ２）２ＣＯ−（式中、ｒは４〜２４、好ましくは１０〜２４の整数である）の基である。
【００６６】
また別の実施形態では、付着させたスペーサーを備える親油性置換基は、式ＣＨ３（ＣＨ２）ｓＣＯ−ＮＨＣＨ（（ＣＨ２）２ＣＯＯＨ）ＣＯ−（式中、ｓは４〜２４、好ましくは１０〜２４の整数である）の基である。
【００６７】
また別の実施形態では、親油性置換基は式ＣＯＯＨ（ＣＨ２）ｔＣＯ−（式中、ｔは６〜２４の整数である）の基である。
【００６８】
また別の実施形態では、付着させたスペーサーを備える親油性置換基は、式−ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ２）４ＮＨ−ＣＯ（ＣＨ２）ｕＣＨ３（式中、ｕは８〜１８の整数である）の基である。
【００６９】
また別の実施形態では、付着させたスペーサーを備える親油性置換基は、式ＣＨ３（ＣＨ２）ｖＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）Ｚ−ＣＯ（式中、ｖは４〜２４の整数であり、およびｚは１〜６の整数である）の基である。
【００７０】
また別の実施形態では、付着させたスペーサーを備える親油性置換基は、−ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ２）４ＮＨ−ＣＯＣＨ（（ＣＨ２）２ＣＯＯＨ）ＮＨ−ＣＯ（ＣＨ２）ｗＣＨ３（式中、ｗは１０〜１６の整数である）の基である。
【００７１】
また別の実施形態では、付着させたスペーサーを備える親油性置換基は、−ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ２）４ＮＨ−ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｘＣＨ３（式中、ｘは０または１〜２２、好ましくは１０〜１６の整数である）の基である。
【００７２】
さらにまた別の実施形態では、ＧＬＰ−１アゴニストはＡｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）である。
【００７３】
さらにまた別の実施形態では、ＧＬＰ−１アゴニストは、
【００７４】
【化１】
2007519642.tif 000003
からなる群から選択される。
【００７５】
さらにまた別の実施形態では、ＧＬＰ−１アゴニストは、
【００７６】
【化２】
2007519642.tif 000004
からなる群から選択される。
【００７７】
さらにまた別の実施形態では、ＧＬＰ−１アゴニストは、
【００７８】
【化３】
2007519642.tif 000005
からなる群から選択される。
【００７９】
さらにまた別の実施形態では、ＧＬＰ−１アゴニストは安定性ＧＬＰ−１アナログ／誘導体である。本出願を通して、「安定性ＧＬＰ−１アナログ／誘導体」は、以下で記載する方法によって決定されるような、ヒトにおける少なくとも１０時間のインビボ血漿排泄半減期を示すＧＬＰ−１アナログまたはＧＬＰ−１アナログの誘導体を意味する。安定性ＧＬＰ−１アナログ／誘導体の例は、国際公開公報第９８／０８８７１号および国際公開公報第９９／４３７０６号に見いだすことができる。ヒトにおける化合物の血漿排泄半減期の決定方法は以下のとおりである：化合物を等張性バッファー（ｐＨ７．４）であるＰＢＳまたは任意の他の適切なバッファー中に溶解させる。用量を末梢に、好ましくは腹部または大腿上部へ注射する。活性化合物を決定するための血液サンプルを頻回な間隔で、そして最終排泄部分をカバーするために十分な期間にわたり採取する（例えば、投与前、投与１、２、３、４、５、６、７、８、１０、１２、２４時間後（第２日）、３６時間後（第２日）、４８時間後（第３日）、６０時間後（第３日）、７２時間後（第４日）および８４時間後（第４日））。活性化合物の濃度の決定は、Ｗｉｌｋｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ  ４３（５１）：Ａ１４３，  ２０００に記載されたとおりに実施する。誘導薬物動態パラメーターは、市販されているソフトウェアＷｉｎＮｏｎｌｉｎバージョン２．１（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ社、米国ノースカロライナ州カリー）を用いて、ノンコンパートメント法を使用して各個別被験体について濃度−時間データから計算する。末端排泄速度定数は、濃度−時間曲線の最終対数−線形部分での対数線形回帰によって推定し、排泄半減期を計算するために使用する。
【００８０】
安定性ＧＬＰ−１アナログおよび誘導体は、国際公開公報第９８／０８８７１号（親油性置換基を備えるアナログ）および国際公開公報第０２／４６２２７号（血清アルブミンまたはＩｇのＦｃ部分へ融合したアナログ）に開示されている。
【００８１】
また別の実施形態では、ＧＬＰ−１アゴニストは、上述したようにヒトにおいて少なくとも１０時間の半減期を有するように調製される。これは、おそらく当技術分野において知られている徐放性調製物によって入手できよう。
【００８２】
さらにまた別の実施形態では、ＧＬＰ−１アゴニストは、エキセンディン−４もしくはエキセンディン−３、エキセンディン−４もしくはエキセンディン−３のアナログまたはこれらのいずれかの誘導体である。
【００８３】
本発明の範囲内に含まれるエキセンディンならびにそのアナログ、誘導体、およびフラグメントの例は、国際公開公報第９７／４６５８４号、米国特許第５，４２４，２８６号および国際公開公報第０１／０４１５６号に開示されている。米国特許第５，４２４，２８６号は、エキセンディンポリペプチドを用いてインスリン放出を刺激するための方法を記載している。開示されたエキセンディンポリペプチドには、
【００８４】
【化４】
2007519642.tif 000006
；（式中、Ｘ＝ＰまたはＹ）、および
【００８５】
【化５】
2007519642.tif 000007
；（式中、Ｘ１Ｘ２＝ＳＤ（エキセンディン−３）もしくはＧＥ（エキセンディン−４））が含まれる）。国際公開公報第９７／４６５８４号は、エキセンディンペプチドの短縮型を記載している。開示されたペプチドは、インスリンの分泌および生合成を増加させるが、グルカゴンの分泌および生合成は減少させる。国際公開公報第０１／０４１５６号はエキセンディン−４アナログおよび誘導体ならびにこれらの分子の調製について記載している。血清アルブミンまたはＩｇのＦｃ部分への融合によって安定化させられたエキセンディン−４アナログについては国際公開公報第０２／４６２２７号に開示されている。
【００８６】
１つの実施形態では、エキセンディン−４アナログは
【００８７】
【化６】
2007519642.tif 000008
である。
【００８８】
さらにまた別の実施形態では、ＧＬＰ−１アゴニストは安定性エキセンディン−４アナログ／誘導体である。本明細書で使用する用語「安定性エキセンディン−４アナログ／誘導体」は、「安定性ＧＬＰ−１アナログ／誘導体」について上述した方法によって決定されるような、ヒトにおける少なくとも１０時間のインビボ血漿排泄半減期を示すエキセンディン−４（１−３９）アナログまたはエキセンディン−４（１−３９）アナログの誘導体を意味する。
【００８９】
さらにまた別の実施形態では、ＧＬＰ−１アゴニストは、Ａｉｂ８，３５ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド（Ａｉｂ＝ａ−アミノイソブチル酸）である。
【００９０】
さらにまた別の実施形態では、ＧＬＰ−１アゴニストはＳｅｒ３８、Ｌｙｓ３９，４０，４１，４２，４３，４４−エキセンディン−４（１−３９）−アミドである。
【００９１】
さらにまた別の実施形態では、ＧＬＰ−１アゴニストは国際公開公報第００／４２０２６号に開示された非ペプチド小分子ＧＬＰ−１アゴニストから選択される。
【００９２】
ＧＬＰ−１アゴニストのアミノ酸部分は、固相合成法、自然源からのＧＬＰ−１アゴニストの精製、組み換えテクノロジー、またはこれらの方法の組み合わせなどの当技術分野において知られている様々な方法によって調製できる。例えば、米国特許第５，１８８，６６６号、第５，１２０，７１２号、第５，５２３，５４９号、第５，５１２，５４９号、第５，９７７，０７１号、第６，１９１，１０２号、Ｄｕｇａｓ  ａｎｄ  Ｐｅｎｎｅｙ  １９８１，  Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，  １９６２，  Ｓｔｅｗａｒｔ  ａｎｄ  Ｙｏｕｎｇ  １９６９およびその中で言及された参考文献を参照されたい。ＧＬＰ−１アゴニスト誘導体は、適切なバックボーンの適切な誘導体化によって、例えばペプチド合成およびペプチド化学の分野において知られている方法を用いる組み換えＤＮＡテクノロジーまたはペプチド合成法（例、メリフィールド型固相合成法）によって生成できる。
【００９３】
「ガストリン化合物」は、ガストリン／ＣＣＫＢレセプターと完全または部分的に結び付く、および／または活性化する、ペプチドおよび非ペプチド化合物を含む任意の化合物を意味する。本発明の態様では、当技術分野において知られている方法によって測定した場合にガストリン／ＣＣＫＢレセプターで例えば約〜０．７ｎＭのＩＣ５０のような適切なＩＣ５０を有するガストリン化合物が選択される（例えば、インビトロ細胞増殖アッセイについて記載しているＳｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ（１９９５）Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７０：８４２９−８４３８，およびＫｏｐｉｎ  ｅｔ  ａｌ（１９９５）Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７０：５０１９−５０２３、およびレセプター結合アッセイについて記載しているＳｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ（１９９５）Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７０：８４２９−８４３８，およびＫｏｐｉｎ  ｅｔ  ａｌ（１９９５）Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７０：５０１９−５０２３を参照されたい）。ガストリン化合物は、さらにまた本明細書で考察するような活性、半減期などの他の基準に基づいて選択することもできる。
【００９４】
「ガストリン化合物」には、非限定的に、ガストリン−７１、ガストリン−５２、ガストリン−３４（ビッグガストリン）、ガストリン−１７（リトルガストリン）、ガストリン−１４、およびガストリン−８（ミニガストリン）、ペンタガストリン、テトラガストリン、ならびにそれらのフラグメント、アナログ、および誘導体などの様々な形態のガストリンが含まれる。ビッグガストリン−３４（Ｂｏｎａｔｏ  ｅｔ  ａｌ，  １９８６，  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３９：９５９）およびリトルガストリン−１７（Ｂｅｎｔｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ（１９６６）Ｎａｔｕｒｅ  ２０９：５８３）を含むガストリンの配列は当技術分野において知られており、一部は配列番号１１〜１８に示した。特別には、ガストリンの配列には、配列番号１５のガストリン−７１、配列番号１６のガストリン−５２、配列番号１１もしくは１２のガストリン−３４（ビッグガストリン）、配列番号１３もしくは１４のガストリン−１７（リトルガストリン）、配列番号１７のガストリン−１４、および配列番号１８もしくは１９のガストリン−６が含まれる。ガストリン−３４は、本質的にはガストリン−１７のＮ末端でのアミノ酸配列の伸長である。ビッグガストリンは、インビボで開裂されるとガストリン−１７を放出する。ガストリンのＮ末端のＧｌｐは、グルタミン酸塩の天然環化形であるピログルタミン酸塩である。ピログルタミン酸塩を有するガストリンの末端へシステインまたはリシンが付加されている種々の実施形態では、ピログルタミン酸塩はグルタミン酸塩と置換されている、またはピログルタミン酸塩が欠失している。本発明では、本明細書に記載した配列番号６〜９に示したように、第１５位でメチオニンまたはロイシンが存在するガストリン−３４またはガストリン−１７を使用できる。
【００９５】
本発明において使用できるガストリン化合物の例には、米国特許第６，２８８，３０１号に開示された化合物が含まれる。本発明の一部の適用では、Ａ７１３７８（Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ２５８（４  Ｐｔ  １）：Ｇ６４８，  １９９０）などのガストリンレセプターのペプチドまたは非ペプチドアゴニストまたは部分アゴニストであるガストリン化合物を選択できる。本発明の一部の適用では、ＣＣＫ  ５８、ＣＣＫ  ３３、ＣＣＫ  ２２、ＣＣＫ  １２およびＣＣＫ  ８などのコレシストキニン（ＣＣＫ）を含むがそれらに限定されないガストリン／ＣＣＫＢレセプターであるガストリン化合物が選択されてよい。
【００９６】
所定の態様では、ガストリン化合物は、例えば６０％の配列同一性、または７０％の配列同一性、または８０％の配列同一性を共有するような、内因性哺乳動物ガストリンとアミノ酸配列を共有する活性アナログ、フラグメントまたはその他の修飾形であってよい。そのような化合物には、内因性ガストリン、コレシストキニンまたは組織貯蔵部位からの同様の活性ペプチドの分泌を増加させる物質もまた含まれる。これらの例は、ガストリン放出ペプチド、胃酸分泌を阻害するオメプラゾール、およびＣＣＫ刺激を増加させるダイズトリプシン阻害因子である。
【００９７】
「ガストリン化合物」には、ガストリン−７１［配列番号１５］、ガストリン−５２［配列番号１６］、ガストリン−３４（ビッグガストリン）［配列番号１１もしくは１２］、ガストリン−１７（リトルガストリン）［配列番号１３もしくは１４］、ガストリン−１４［配列番号１７］、ガストリン−８、ガストリン−６［配列番号１８］、ペンタガストリン、およびテトラガストリンの修飾形を含むがそれらに限定されないガストリンの修飾形が含まれる。修飾されたガストリンは、好ましくはＴｒｐＭｅｔＡｓｐＰｈｅ−ＮＨ２［配列番号２６］またはＴｒｐＬｅｕＡｓｐＰｈｅ−ＮＨ２［配列番号２７］を含む。
【００９８】
本発明の態様では、修飾されたガストリンは少なくとも配列番号１１もしくは１２のアミノ酸１〜３４、１８〜３４、もしくは２９〜３４または配列番号１３もしくは１４のアミノ酸１〜１７、２〜１７、１２〜１７、もしくは１４〜１７を含む。
【００９９】
本発明において使用するための修飾されたガストリン化合物は、参照して本明細書に全体として組み込まれるＰＣＴ／ＣＡ０３／０１７７８、米国特許出願第１０／７１９，４５０号、および米国特許出願第６０／５１９，９３３号に記載された修飾されたガストリン化合物を含む。
【０１００】
特別には、修飾されたガストリンは、ガストリンの（Ｃ末端から）最小６アミノ酸の配列、特に配列番号１１もしくは１２のアミノ酸残基１〜３４、１８〜３４、もしくは２９〜３４、または配列番号１３もしくは１４のアミノ酸残基１〜１７、２〜１７、１２〜１７、もしくは１４〜１７を含み、さらに付加反応を受けることのできる反応性基を含むガストリン誘導体またはアナログであってよい。反応性基の例には、非限定的に、チオール基、α−アミノ基、ε−アミノ基、カルボキシル基または芳香環基が含まれる。反応性基は、一般に架橋剤および／またはスペーサー領域を介して直接的または間接的に、ガストリン配列をキャリアへ結合させることができる。
【０１０１】
反応性基は、例えばシステインまたはリシンを付加することによって、反応性基を含むアミノ酸を付加する、または置換することによって導入できる。このため、修飾されたガストリンは、少なくとも１つの反応性アミノ酸（例、システインまたはリシン）が付加または置換されているガストリン配列（例、ガストリン−３４またはガストリン−１７）を含んでいてよい。反応性アミノ酸の付加は、末端領域、特にＮ末端領域であってよい。
【０１０２】
修飾されたガストリンは、さらにまた任意でスペーサーを含んでいてよい。スペーサーは、反応性基、例えば反応性基を含むアミノ酸と相互作用することができる。スペーサーは、１つまたは複数のアミノ酸、ペプチド、ペプチドミメティック、または小有機分子であってよい。スペーサーは、少なくとも１つのアミノ酸、好ましくは少なくとも２つ、３つ、４つ、または５つのアミノ酸を含んでいてよく、所定の実施形態では、非限定的にアラニンまたはグリシンを含む数個のアミノ酸の配列である。スペーサーは、代替アミノ酸（例、グリシンおよび／またはアラニン）、非代替アミノ酸、ランダム配列または特定配列を含んでいてよい。例えば、スペーサーは、ガストリン配列のアミノ酸の一部として合成できる、またはガストリン配列のアミノ酸へ化学的に付着させられてもよい。
【０１０３】
修飾されたガストリンは、さらにまた任意で架橋剤を含んでいてよい。架橋剤は、ガストリン、スペーサーおよび／または反応性基と直接的または間接的に相互作用するためにホモ二官能またはヘテロ二官能部分を含んでいてよい。架橋剤は、ガストリン配列もしくはスペーサーと相互作用することができる、または修飾されたガストリンの末端（特に、Ｎ末端）で反応性基へ付加されてもよい。
【０１０４】
架橋剤は、直接的またはスペーサーを介してガストリン配列をキャリアと結合させることのできる任意の物質であってよい。ホモ二官能性架橋剤の例には、非限定的に、ビスイミデート（例、アセトイミデートメチル塩酸塩）、二官能性ハロゲン化アリール（例、１，５−ジクロロ−２，４−ジニトロベンゼン）、二官能性アシル化剤（例、ジイソシアネート）、二官能性ハロゲン化スルホニル（例、フェノール−２，４−ジスルホニル−クロリド）、二官能性アシルアジド（例、タートリルジアジド）、ジアルデヒド（例、グルタルアルデヒド）、およびジケトン（例、２，５−ヘキサンジオン）などのアミノ基特異的ホモ二官能性架橋剤が含まれる。ヘテロ二官能性架橋剤の例には、アミノ基およびスルフヒドリル基特異的二官能性試薬（例、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオプロピオネート）、カルボキシル基およびスルフヒドリル基もしくはアミノ基に特異的な二官能性試薬（例、ｐ−ニトロフェニルジアゾアセテート）、ならびにカルボニル基およびスルフヒドリル基特異的二官能性試薬（例、１−（アミノオキシ）−４−［３−ニトロ−２−ピリジル）ジチオ）］ブタン）が含まれる。
【０１０５】
修飾されたガストリンは、ポリマーであってよいキャリアを任意で含むことができる。キャリアは、アミノ酸のポリマー（タンパク質）、糖（多糖）、ヌクレオシド、合成ポリマーおよびそれらの混合物であってよい。タンパク質キャリアは、循環系中で見いだされるタンパク質であってよい。循環系、特にヒト循環系中で見いだされるタンパク質キャリアの例には、非限定的に、血清などの血漿成分、アルブミン（特に、ヒト血清アルブミン）などの精製された血清タンパク質、トランスフェリン、または免疫グロブリン、グリコホリンＡおよびＡＥ−１などの赤血球タンパク質、レクチンなどの糖結合タンパク質、不活化酵素リン酸塩および硫酸塩結合タンパク質、ならびに脂質結合タンパク質が含まれる。その他の適切なポリマーキャリアの例には、非限定的に、セルロースおよびその誘導体、デンプンおよびその誘導体、ヘパリンおよびその誘導体、ならびにポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびデキストランなどの合成ポリマーおよびその誘導体が含まれる。キャリアは、ガストリンまたはスペーサーへ反応性基によって付着させられてよく、またはキャリア、ガストリン、および／またはスペーサーへ導入されてもよい。例えば、キャリアは、存在する可能性がある、またはガストリンまたはスペーサーの化学修飾によって付加されてよいガストリンまたはスペーサー上の反応性基（例えば、チオール基、α−アミノ基およびε−アミノ基、カルボキシル基または芳香族基など）へ共有結合させることができる。
【０１０６】
本発明の所定の態様では、修飾されたガストリンは、配列番号１１、１２、１３、１４、１７、または１８のガストリンおよびキャリアを含んでいてよい。
【０１０７】
１群の修飾されたガストリン化合物には、アミノ末端からＺ−Ｙｍ−Ｘｎ−ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ４−ＡＡ５−ＡＡ６（式中、ＡＡ１はＴｙｒまたはＰｈｅであり、ＡＡ２はＧｌｙ、Ａｌａ、またはＳｅｒであり、ＡＡ３はＴｒｐ、Ｖａｌ、またはＩｌｅであり、ＡＡ４はＭｅｔまたはＬｅｕであり、ＡＡ５はＡｓｐまたはＧｌｕであり、そしてＡＡ６はＰｈｅまたはＴｙｒであり、さらにＡＡ６は任意でアミド化されている；Ｚはキャリア、特にポリマーであり、該ポリマーがタンパク質である場合はＺはアミノ酸配列である；Ｙｍはセリンおよびアラニンを含むがそれらに限定されない小さな中性アミノ酸のｍ個のアミノ酸残基を含む任意のスペーサー領域であり、そしてＸは、ガストリン化合物がガストリンＣＣＫＢレセプターへ結合することを前提とした、配列番号１１もしくは１２の残基１〜２８（＝ｎ）または配列番号１３もしくは１４の残基１〜１１の任意の連続部分である）の配列を含むアミノ酸配列を有する化合物が含まれる。一般に、ｍは０〜約２０残基である。１つの態様では、Ｚはタンパク質、特に循環系のタンパク質、より特別には血清タンパク質、さらにより特別にはアルブミン、最も特別にはヒト血清アルブミンである。
【０１０８】
実施形態では、Ｘは配列番号１１の１８位から２８位までの１つまたは複数のアミノ酸残基である。このため、ガストリン化合物はＸが存在することによって１８〜２８位、１９〜２８位、２０〜２８位、２１〜２８位などの任意のガストリン配列を有していてよい。ガストリン化合物は、任意で長さがｍのアミノ酸スペーサー（Ｙ）を含有しており、ｍは０〜約２０残基である。
【０１０９】
実施形態では、Ｘは配列番号１３もしくは１４の１〜１１位または２〜１１位までの１つまたは複数のアミノ酸残基である。このため、ガストリン化合物はＸが存在することによって２〜１１位、３〜１１位、４〜１１位、５〜１１位などの任意のガストリン配列を有していてよい。ガストリン化合物は、任意で長さがｍのアミノ酸スペーサー（Ｙ）を含有しており、ｍは０〜約２０残基である。
【０１１０】
ガストリン化合物は、式Ｘｎ−ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ４−ＡＡ５−ＡＡ６（式中、スペーサー（Ｙ）は存在せず、ｍは０であり、さらにキャリアＺとの相互作用または結合のために二官能性架橋剤をさらに含むが、このときＺはデキストランまたはＰＥＧなどの非タンパク質性ポリマーをさらに含む）の修飾されたガストリン化合物を含んでいる。
【０１１１】
特に本明細書で記載する修飾されたガストリン化合物は、アミノ末端システインまたはリシン残基をさらに含んでいてよい。
【０１１２】
本明細書で記載する修飾されたガストリン化合物の一部の実施形態では、ガストリン成分は少なくとも配列番号１１もしくは１２のアミノ酸残基２９〜３４を含有しており、ポリマー、脂質または炭水化物と結び付いている。ポリマーは、合成または天然型ポリマーであってよい。用語「ポリマー」にはアミノ酸のタンパク質ポリマーが含まれ、合成ポリマーには限定されない。ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはデキストランであってよい。修飾されたガストリン化合物は、配列番号１１もしくは１２もしくは「ビッグ」ガストリン−３４に基づいていてよく、各々３２位でメチオニンまたはロイシンである残基を有していてよい。
【０１１３】
また別の好ましいガストリン化合物は、構造式Ｃ−Ｙｍ−Ｘ（式中、ＣはＣｙｓまたはＬｙｓであり、Ｙｍは小さな中性アミノ酸のｍ個のアミノ酸残基を含む任意のスペーサー領域であり、そしてＸは、少なくともガストリン−１７（配列番号１３もしくは１４）の１２〜１７位または少なくともガストリン−３４（配列番号１１もしくは１２）の２９〜３４位を含む少なくとも６個のアミノ酸残基である）を含んでいる。この修飾されたガストリン化合物は、架橋剤の一方の反応性部分がＣへ共有結合し、他方の反応性部分がポリマーまたはタンパク質へ共有結合する二官能性架橋剤をさらに含んでいてよい。
【０１１４】
本発明の特定の態様では、修飾されたガストリン化合物中のＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ４−ＡＡ５−ＡＡ６は、Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ［配列番号２３］またはＴｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ［配列番号２４］である。
【０１１５】
ガストリン化合物は、タンパク質の化学においてよく知られている、固相合成法（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，  １９６４，  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ａｓｓｏｃ．  ８５：２１４９−２１５４）または均質溶液中での合成法（Ｈｏｕｂｅｎｗｅｙｌ，  １９８７，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ｅｄ．  Ｅ．  Ｗａｎｓｃｈ，  Ｖｏｌ．  １５  Ｉ  ａｎｄ  ＩＩ，  Ｔｈｉｅｍｅ，  Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ）などの技術を用いた化学合成法によって合成できる。合成は、手動方法を用いて、または自動化によって実施できる。自動合成法は、例えばＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ４３１Ａペプチド合成装置（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ社）を用いて実施できる。ガストリン化合物は、市販入手源から入手することもできる。例えば、１５位にメチオニンまたはロイシンを備える合成ヒトガストリン−１７は、Ｂａｃｈｅｍ  ＡＧ社（スイス国ブーベンドルフ）およびＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｌｕｓ社（米国ニュージャージー州）から入手できる。
【０１１６】
「ガストリン／ＣＣＫレセプター」は、非限定的にＣＣＫ−８、脱硫ＣＣＫ−８、ＣＣＫ−３３、ＣＣＫ−４を含むコレシストキニン（ＣＣＫ）、または非限定的に脱硫もしくは硫化ガストリン−１７を含むガストリン、もしくはペンタガストリン、または他のＣＣＫもしくはガストリンアナログもしくはファミリーメンバーに特徴的な結合親和性を示すＧタンパク質結合レセプターファミリーのメンバーである。ＣＣＫ／ガストリンレセプタータンパク質の例は、ＣＣＫＡおよびＣＣＫＢ／ガストリンレセプター、特にＣＣＫＢ／ガストリンレセプターである。
【０１１７】
「状態および／または疾患」は、それに対してＧＬＰ−１アゴニストまたはガストリン化合物の一方または両方が有益な効果または治療作用を提供する１つまたは複数の病理的症状または症候群を意味する。状態および／または疾患は、血糖値の減少、胃酸分泌の阻害、β細胞のアポトーシスの阻害、β細胞の増殖または分化の刺激、および体重の減少を必要とすることがある。状態および／または疾患の例には、異脂肪血症、高血糖症、重症低血糖症性エピソード、脳卒中、左室肥大症、不整脈、菌血症、敗血症、過敏成長症候群、機能性消化不良、糖尿病、術後の異化作用の変化、ストレス性高血糖症、呼吸窮迫症候群、胃潰瘍、心筋梗塞、グルコース寛容減損、高血圧、慢性心不全、体液うっ滞状態、代謝症候群および関連疾患および障害、肥満症、糖尿病合併症ならびにアルツハイマー病、パーキンソン病、およびその他の老化関連性の組織変性病を含む血糖値上昇ならびに例えばグルコース寛容減損および非糖尿病性肥満患者における上昇したレプチンのアテローム発生作用に起因して組織が損傷している他の疾患の症状が含まれるがそれらに限定されない。
【０１１８】
本明細書で使用する用語「糖尿病」は、実験動物モデルを含む、およびＩ型やＩＩ型糖尿病、初期糖尿病、およびインスリンが軽度に減少もしくは軽度に上昇した血糖値を特徴とする前糖尿病状態などのヒトの形態を含む、任意の哺乳動物において発現した糖尿病の症状を意味する。「前糖尿病状態」は、インスリンもしくは血糖値によって症状を示している、および／または家族歴、遺伝的素因、またはＩＩ型糖尿病のケースでは肥満に起因する糖尿病または関連状態に対する感受性を示している被験体を表しており、以前に糖尿病または関連状態を有していた被験体、および再発のリスクに曝されている被験体が含まれる。
【０１１９】
「インスリン分泌促進活性」は、細胞によるグルコース取り込みを生成または増加させるために上昇した血中グルコースレベルまたは減少した血清グルコースもしくは血中グルコースレベルに反応してインスリン分泌を刺激する物質の能力を意味する。インスリン分泌促進活性についてアッセイするためには、当技術分野において知られている方法を使用できる。例えば、ＧＬＰ−１レセプター結合活性もしくはガストリンレセプター結合活性、レセプター活性化（Ｇｅｌｆａｎｄらの欧州特許第６１９，３２２号および米国特許第５，１２０，７１２号に記載された方法を参照されたい）、および／またはインスリンもしくはＣ−ペプチドレベルを測定するインビトロおよびインビボ法を使用できる。本明細書に記載した化合物、組成物または結合体は、該化合物、組成物もしくは結合体の存在下で膵島細胞がインスリンを分泌する場合は、バックグラウンドレベルまたは該化合物、組成物もしくは結合体の不在下のレベルを超えるインスリン分泌促進活性を有する。化合物は動物に投与することができ、インスリン濃度を経時的に監視できる。
【０１２０】
「膵島細胞新生」は、非限定的方法で再生する能力を有する幹細胞の特徴を有する、または有していない可能性がある、分化による新規β細胞の形成を意味する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０１２１】
（発明の実施形態の詳細な説明）
本発明は、有益な効果を提供するためにＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物を利用する組成物、結合体、および方法に関する。特別には、本発明は、ＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物を含む、本明細書で考察した状態および／または疾患を予防、介入および／または治療するための組成物、結合体、および方法に関する。本発明の態様では、本発明の組成物、結合体および方法は、ＧＬＰ−１アゴニストおよび／またはガストリン化合物単独に比較して増強された有益な効果、特に持続性の有益な効果を提供する。有益な効果は、相加作用または相乗作用であってよい。
【０１２２】
本発明の態様では、状態および／または疾患が糖尿病である場合は、本発明の組成物、併用療法、または結合体の有益な効果、特に持続性の有益な効果は以下のうちの１つまたは複数として発現する可能性がある：
ａ）糖尿病の症状を有する被験体への投与後に活性化合物の不在下または各化合物単独について測定されたレベルに比較した膵インスリンレベルの上昇。好ましくは、化合物は組み合わせると、被験体において膵インスリンレベルの少なくとも約０．０５％、０．１％、０．５％、１％、２％、５％、１０％、１５％、２０％、３０％、３３％、３５％、４０％、４５％、または５０％の上昇を誘導する。
【０１２３】
ｂ）糖尿病の症状を有する被験体への投与後に膵島炎症の症状の減少または欠如。
【０１２４】
ｃ）糖尿病の症状を有する被験体において活性化合物の不在下または各化合物単独について測定されたレベルに比較した血糖値の減少。好ましくは、化合物は、血糖値の少なくとも約１％、２％、５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％の減少を誘導する。最も好ましくは、化合物は、正常被験体において一般的なレベルとほぼ同じまたは近い血糖値を生じさせる。
【０１２５】
ｄ）糖尿病の症状を有する被験体において活性化合物の不在下または各化合物単独について測定されたレベルに比較したＣ−ペプチドレベルの上昇。好ましくは、化合物は組み合わせると、Ｃ−ペプチドレベルの少なくとも約０．０５％、０．１％、０．５％、１％、２％、５％、１０％、１５％、２０％、３０％、３３％、３５％、４０％、４５％、または５０％の上昇を誘導する。
【０１２６】
ｅ）長期間にわたるほぼ正常値での血糖値の維持。
【０１２７】
ｆ）長期間にわたるほぼ正常値でのヘモグロビンＡ１ｃもしくはグリケート化ヘモグロビンの維持、特にヘモグロビンＡ１ｃ率を６〜８％、より特別には約７％で維持する。
【０１２８】
ｇ）β細胞の破壊の減少。好ましくは、化合物は、少なくとも約１％、２％、５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％の減少を誘導する。
【０１２９】
ｈ）β細胞機能の上昇。好ましくは、化合物は、β細胞機能における少なくとも約１％、２％、５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％の上昇を誘導する。
【０１３０】
ｉ）糖尿病の被験体における疾患の減少、予防または進行速度の緩徐化。
【０１３１】
ｊ）糖尿病の症状を伴う重症高血糖症およびケトアシドーシスの発生の減少または予防。
【０１３２】
ｋ）糖尿病の症状を有する被験体における生存率の上昇。
【０１３３】
本発明の実施形態では、有益な効果または持続性の有益な効果は、本質的にａ）からｋ）のうちの２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、または１１を含む、またはそれらからなる。特定の実施形態では、有益な効果または持続性の有益な効果は、本質的にａ）、ｂ）、およびｃ）；ａ）、ｂ）、ｃ）、およびｄ）；ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、およびｅ）；ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）、およびｆ）；ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）、ｆ）、およびｇ）；ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）、ｆ）、ｇ）およびｈ）；ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）、ｆ）、ｇ）、ｈ）およびｉ）；ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）、ｆ）、ｇ）、ｈ），ｉ）およびｊ）；ａ）、ｄ）、およびｅ）；ａ）、ｄ）、ｅ）、およびｈ）；ａ）、ｄ）、ｅ）、ｈ）、およびｉ）；ａ）、ｄ）、ｅ）、ｈ）、ｉ）およびｊ）；ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）、ｈ）、ｉ）およびｊ）；ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）、ｈ）、ｉ）、ｊ）およびｋ）；ｂ）、ｃ）、ｄ）、およびｅ）；ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）、ｈ）、ｉ）、およびｊ）；ならびに、ｂ）、ｈ）、ｉ）およびｊ）を含む、またはそれらからなる。
【０１３４】
これらの有益な効果または持続性の有益な効果のうちの１つまたは複数は、糖尿病患者もしくは疾患モデル、例えば糖尿病の症状を有する非肥満性（ＮＯＤ）マウスにおいて、当業者に知られている標準方法を用いて証明することができる。例えば、膵インスリンレベル、グルコースレベル、Ｃ−ペプチドレベルおよびヘモグロビンＡ１ｃをアッセイするために市販されている方法およびキットを使用できる。
【０１３５】
本発明における特定実施形態のためには、ガストリン化合物は、特に有益な効果を提供するために、インスリン分泌促進活性、ＧＬＰ−１アゴニストの活性を増強する能力（特にＧＬＰ−１アゴニストのインスリン分泌促進作用を増強するため）、および／またはＧＬＰ−１アゴニストの物理的または化学的安定性を増加させる能力を含む特徴に基づいて選択することができる。ガストリン化合物は、さらにまたβ細胞の増殖／分化を刺激する能力、ならびにβ細胞のインビボ半減期に基づいて選択することもできる。
【０１３６】
本発明の１つの態様では、本発明の方法、組成物、および結合体において使用するガストリン化合物は、ポリマーに結び付いているガストリン−１７ならびにそのアナログおよび誘導体である。特定の態様では、ガストリン化合物は、アミノ酸１５位でＬｅｕ残基を備える１７アミノ酸残基を有する合成ヒトガストリンＩ［配列番号１４］である。
【０１３７】
本発明のまた別の態様では、本発明の方法、組成物、および結合体において使用するガストリン化合物は、ガストリン−３４ならびにそのアナログおよび誘導体である。特定の態様では、ガストリン化合物は３２位でメチオニンまたはロイシンを備える合成ヒトガストリン−３４［配列番号１１もしくは１２］である。
【０１３８】
本発明のまた別の態様では、本発明の方法、組成物および結合体において使用されるガストリン化合物は、血清タンパク質、特にアルブミンもしくは免疫グロブリン、より特別にはヒト血清アルブミンと直接的または間接的に相互作用する、または結び付いているガストリン−３４もしくはガストリン−１７またはそれらの部分である。
【０１３９】
本発明の特定の態様では、ガストリン化合物は、配列番号１１もしくは１２の２〜３４アミノ酸残基、および任意でＮ末端システインおよび／またはキャリアを有する合成ヒトガストリン−３４；アミノ酸１５位でＬｅｕ残基を備える１〜１７アミノ酸残基［配列番号１４］、および任意でＮ末端システイン残基を有する合成ヒトガストリン；ならびに任意でスペーサー［例、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ、すなわち（ＧＡ）５］［配列番号２５］を介して結合されたＮ末端システイン残基（例、ＰＥＧまたはヒト血清アルブミン）および／またはキャリアとともに配列番号１３もしくは１４のアミノ酸残基２〜１７または５〜１７を有する合成ヒトガストリン、特に［Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ、すなわち（ＧＡ）５］スペーサーを介して結合されたヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）ポリマー、および任意でＮ末端システイン残基とともに配列番号１３もしくは１４のアミノ酸残基２〜１７または５〜１７を有する合成ヒトガストリンを含んでいる。
【０１４０】
ＧＬＰ−１アゴニストは、本発明における特定の適用のために以下の特徴のうちの１つまたは複数に基づいて選択できる：好ましくは約１μＭ未満、より好ましくは約１００ｎＭ未満の親和性定数ＫｄでＧＬＰ−１レセプターへ結合する能力；結果としてインスリン分泌促進活性を生じさせるシグナル伝達経路を開始させる能力；インスリン分泌促進活性；β細胞の増殖／分化の刺激；ＤＰ  ＩＶ開裂に対する抵抗性；および、従来方法を用いてヒトにおける少なくとも約１５分間〜２４時間、好ましくは２〜１０時間または２〜８時間のインビボ半減期（例えば、米国特許出願第２００３／０１４４２０６号に記載された方法を参照されたい）。
【０１４１】
本発明の態様では、ＧＬＰ−１アゴニストは天然短縮型ＧＬＰ−１ポリペプチド（ＧＬＰ−１（７−３６）もしくは（（ＧＬＰ−１（７−３７））、またはそれらのアナログもしくは誘導体である。これらの天然短縮型ＧＬＰ−１アゴニストの配列は、配列番号４、５、および６に示した。
【０１４２】
本発明の所定の態様では、ＧＬＰ−１アゴニストは、１〜２０位、好ましくは１〜１５位、より好ましくは１〜１０位、最も好ましくは１〜５位のアミノ酸残基が配列番号１、２または３の配列とは相違するように修飾された配列番号１、２または３のアミノ酸配列を有していてよい。
【０１４３】
本発明のある実施形態では、ＧＬＰ−１アゴニストは、ＧＬＰ−１（７−３７）もしくはＧＬＰ−１（７−３６）におけるアミノ酸残基とは相違する１０個未満のアミノ酸残基を有する、ＧＬＰ−１（７−３７）もしくはＧＬＰ−１（７−３６）におけるアミノ酸残基とは相違する５個未満のアミノ酸残基を有する、ＧＬＰ−１（７−３７）もしくはＧＬＰ−１（７−３６）におけるアミノ酸残基とは相違する３個未満のアミノ酸残基を有する、好ましくはＧＬＰ−１（７−３７）もしくはＧＬＰ−１（７−３６）におけるアミノ酸残基とは相違するアミノ酸残基を１個だけ有するＧＬＰ−１（７−３７）もしくはＧＬＰ−１（７−３６）のアナログである。
【０１４４】
本発明において特別な有用性を有する可能性があるＧＬＰ−１アゴニストには、１つまたは複数のアミノ酸がＧＬＰ−１（７−３７）もしくはＧＬＰ−１（７−３６）のＮ末端および／またはＣ末端へ付加されているポリペプチドが含まれる。好ましくは、約１〜６個のアミノ酸をＮ末端へ付加することができる、および／または１〜８個のアミノ酸をＣ末端へ付加することができる。所定の適用では、３９個までのアミノ酸を有するＧＬＰ−１アゴニストが選択される。伸長したＧＬＰ−１アゴニストの１〜６位のアミノ酸は、それらが親ＧＬＰ−１（７−３７）もしくはＧＬＰ−１（７−３６）の対応する位置で同一である、またはアミノ酸の保存的置換であるように選択することができる。伸長したＧＬＰ−１アゴニストの３８〜４５位のアミノ酸は、それらがエキセンディン−３またはエキセンディン−４（各々配列番号７および８）の対応する位置で同一である、またはアミノ酸の保存的置換であるように選択することができる。
【０１４５】
本発明の態様では、８位アナログを含むＧＬＰ−１アゴニストが利用されるが、このときそのようなアナログまたはそのフラグメントについてのバックボーンはアラニン以外のアミノ酸を含有している。８位のアミノ酸は、グリシン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、またはメチオニンから選択されてよい。
【０１４６】
ある実施形態では、ＧＬＰ−１アゴニストは、ＧＬＰ−１（１−３７）のインスリン分泌促進アナログ、例えば、Ｍｅｔ８−ＧＬＰ−１（７−３７）（式中、８位のアラニンはメチオニンと置換されており、１〜６位のアミノ酸残基は欠失している）、およびＡｒｇ３４−ＧＬＰ−１（７−３７）（式中、３４位のバリンはアルギニンと置換されており、１〜６位のアミノ酸残基は欠失している）である。
【０１４７】
また別の実施形態では、配列ＧＬＰ−１（７−３７）ＯＨおよびＧＬＰ−１（７−３６）−アミドを有する、そして対応する８位アナログを有するＧＬＰ−１アゴニストが選択されるが、このときそのようなアナログのためのバックボーンはアラニン以外のアミノ酸を含有する。８位のアミノ酸は、グリシン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、またはメチオニン、好ましくはバリンまたはグリシンから選択されてよい。アナログは、追加して（ａ）グルタミン酸、リシン、アスパラギン酸、アルギニン、および好ましくはグルタミン酸またはリシンから選択される２２位のアミノ酸；（ｂ）グルタミン酸、アスパラギン酸、セリン、またはヒスチジンから選択される３０位のアミノ酸；（ｃ）リシン、アルギニン、トレオニン、グルタミン酸、アスパラギン酸、セリン、トリプトファン、チロシン、フェニルアラニン、またはヒスチジンから選択された３７位のアミノ酸；および／または（ｄ）アラニン、リシン、アルギニン、トリプトファン、チロシン、フェニルアラニン、またはヒスチジンから選択された２７位のアミノ酸を含むことができる。
【０１４８】
本発明において使用するための１群のＧＬＰ−１アナログおよび誘導体は、米国特許第５，５４５，６１８号および米国特許出願第２００４００１８９７５号に記載されたＧＬＰ−１アゴニストを含む。アナログには、７〜１０位でアミノ酸置換を有する、および／またはＣ末端で短縮している、および／または塩基性ペプチド内で様々な他のアミノ酸置換を含有する活性ＧＬＰ−１ペプチド、７−３４、７−３５、７−３６および７−３７が含まれる。好ましいアナログには、７および８位にＤ−アミノ酸置換および／または７位でＮ−アルキル化もしくはＮ−アシル化アミノ酸を備えるアナログが含まれるが、それはそれらが特にインビボでの分解に抵抗性であるためである。
【０１４９】
本発明の態様では、ＧＬＰ−１アゴニストは、ＧＬＰ−１（１−３８）、ＧＬＰ−１（１−３９）、ＧＬＰ−１（１−４０）、ＧＬＰ−１（１−４１）、ＧＬＰ−１（７−３８）、ＧＬＰ−１（７−３９）、ＧＬＰ−１（７−４０）、およびＧＬＰ−１（７−４１）からなる群を含む、またはそれらから選択されたペプチドを含む。
【０１５０】
本発明のまた別の態様では、ＧＬＰ−１アゴニストの少なくとも１つのアミノ酸は、直接的または間接的（例えば、γ−Ｇｌｕまたはβ−Ａｌａなどのスペーサーを介して）に付着させられた少なくとも１つの置換基を有する。置換基は、一般に、親ＧＬＰ−１アゴニストの作用プロファイルをより長く持続させるため、ＧＬＰ−１アゴニストを代謝的および物理的により安定性にさせるため、および／またはＧＬＰ−１アゴニストの溶解度を上昇させるように選択される。特定の置換基の例は、アミド、炭水化物、および親油性置換基である。親油性置換基には、１つのω−カルボン酸基を有する基であるアルキル基、直鎖状もしくは分枝状脂肪酸のアシル基またはテトラデカノイル、ヘキサデカノイルなどのアルカンが含まれるが、それらに限定されない。本発明の特定の組成物、結合体および治療は、国際公開公報第９９／４３３４１号（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ社）および米国特許出願第２００３／０１１９７３４号（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ社）に記載されたような親油性置換基を備えるＧＬＰ−１アゴニストを使用する。
【０１５１】
本発明の特別の態様では、ＧＬＰ−１アゴニストは、ＧＬＰ−１（７−３６）−アミドまたはＴｙｒ３１−エキセンディン−４（１−３１）−アミドである。
【０１５２】
本発明の所定の態様は、親油性置換基を含むＧＬＰ−１（７−３６）またはＧＬＰ−１（７−３７）の誘導体であるＧＬＰ−１アゴニストを提供する。ある実施形態では、ＧＬＰ−１アゴニストはＡｒｇ３４Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）である。
【０１５３】
本発明の実施形態では、ＧＬＰ−１アゴニストは、
【０１５４】
【化７】
2007519642.tif 000009
【０１５５】
【化８】
2007519642.tif 000010
からなる群を含む、またはそれらから選択される。
【０１５６】
特定の実施形態では、ＧＬＰ−１アゴニストは、
【０１５７】
【化９】
2007519642.tif 000011
からなる群を含む、またはそれらから選択される。
【０１５８】
また別の特定の実施形態では、ＧＬＰ−１アゴニストは、
【０１５９】
【化１０】
2007519642.tif 000012
からなる群を含む、またはそれらから選択される。
【０１６０】
また別の特定の実施形態では、ＧＬＰ−１アゴニストは、
【０１６１】
【化１１】
2007519642.tif 000013
からなる群を含む、またはそれらから選択される。
【０１６２】
本発明のさらに別の実施形態では、ＧＬＰ−１アゴニストは、エキセンディン（例、エキセンディン−３およびエキセンディン−４）またはそれらのアナログ、誘導体、もしくはフラグメントである。本発明に利用できるエキセンディンの例には、非限定的に、国際公開公報第９７４６５８４号、米国特許第５，４２４，２８６号および国際公開公報第０１／０４１５６号に開示されたエキセンディンが含まれる。米国特許第５，４２４，２８６号は、インスリン放出を刺激するためのエキセンディンポリペプチドの使用について記載している。この米国特許に記載されたエキセンディンポリペプチドには、
【０１６３】
【化１２】
2007519642.tif 000014
（式中、Ｘ＝ＰまたはＹ）、および
【０１６４】
【化１３】
2007519642.tif 000015
；（式中、Ｘ１Ｘ２＝ＳＤ（エキセンディン−３）またはＧＥ（エキセンディン−４）が含まれる。国際公開公報第９７４６５８４号は、インスリンの分泌および生合成を増加させるが、グルカゴンを減少させる短縮型エキセンディンペプチドについて記載している。国際公開公報第０１／０４１５６号は、エキセンディン−４のアナログおよび誘導体ならびにそれらの調製法について記載している。
【０１６５】
また別の実施形態では、ＧＬＰ−１アゴニストは、エキセンディン−４（１−３９）のインスリン分泌促進アナログ、特にＳｅｒ２Ａｓｐ３−エキセンディン−４（１−３９）であり、このとき２および３位にあるアミノ酸残基はセリンおよびアスパラギン酸と各々置換されている（この特定のアナログは、当技術分野においてエキセンディン−３（配列番号７）としても知られている）。
【０１６６】
本発明の所定の態様では、ＧＬＰ−１アゴニストは、安定性ＧＬＰ−１アゴニスト、特に安定性ＧＬＰ−１アナログもしくは誘導体、または安定性エキセンディン−４もしくはエキセンディン−３アナログもしくは誘導体である。
【０１６７】
ＧＬＰ−１アゴニストまたはガストリン化合物単独と比較して、有益な効果、特に統計的有意に有益な効果または持続性の有益な効果を提供する、本発明の薬学的組成物を選択できる。糖尿病の状態に関する有益な効果は、本明細書に記載した１つまたは複数の、特にａ）からｊ）で上述した有益な効果のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、または１０個の有益な効果によって証明できる。
【０１６８】
以下：
【０１６９】
【化１４】
2007519642.tif 000016
からなる群から選択されたＧＬＰ−１アゴニスト、ならびに任意で血清タンパク質と結び付けたガストリン化合物（例、配列番号１１、１２、１３もしくは１４）を含む、有益な効果、特に統計的有意に有益な効果または持続性の有益な効果を備える薬学的組成物が提供される。
【０１７０】
ある態様では、ＧＬＰ−１（７−３６）［配列番号５］およびガストリン−１７（ｌｅｕ）［配列番号１４］を含む、統計的有意に有益な効果または持続性の有益な効果を備える薬学的組成物が提供される。
【０１７１】
ある態様では、Ａｒｇ３４Ｌｙｓ２６（Ｎε（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）−ＧＬＰ−１（７−３７）およびガストリン−１７（ｌｅｕ）［配列番号１４］を含む、統計的有意に有益な効果または持続性の有益な効果を備える薬学的組成物が提供される。
【０１７２】
また別の態様では、Ａｉｂ８，３５ＧＬＰ−１（７−３６）−アミドまたはＳｅｒ３８，Ｌｙｓ３９，４０，４１，４２，４３，４４−エキセンディン−４（１−３９）−アミドおよびガストリン−１７（ｌｅｕ）［配列番号１４］を含む、統計的有意に有益な効果または持続性の有益な効果を備える薬学的組成物が提供される。
【０１７３】
以下：
【０１７４】
【化１５】
2007519642.tif 000017
からなる群から選択されたＧＬＰ−１アゴニスト、ならびにアミノ末端からＺ−Ｙｍ−Ｘｎ−ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ４−ＡＡ５−ＡＡ６（式中、ＡＡ１はＴｙｒまたはＰｈｅであり、ＡＡ２はＧｌｙ、Ａｌａ、またはＳｅｒであり、ＡＡ３はＴｒｐ、Ｖａｌ、またはＩｌｅであり、ＡＡ４はＭｅｔまたはＬｅｕであり、ＡＡ５はＡｓｐまたはＧｌｕであり、およびＡＡ６はＰｈｅまたはＴｙｒである；Ｚはポリマーであり、該ポリマーがタンパク質の場合はＺはアミノ酸配列である；Ｙｍはセリンおよびアラニンを含むがそれらに限定されない小さな中性アミノ酸のｍ個のアミノ酸残基を含む任意のスペーサー領域であり、そしてＸは配列番号１１もしくは１２の残基１〜２８、または配列番号１３もしくは１４の残基１〜１１の任意の連続部分であり、好ましくはＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ４−ＡＡ５−ＡＡ６はＴｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−ＰｈｅまたはＴｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−ＰｈｅＡである）を含むアミノ酸配列を有するガストリン化合物、を含む、有益な効果、特に統計的有意に有益な効果または持続性の有益な効果を備える薬学的組成物が提供される。特定の実施形態では、Ｚは血清タンパク質、とくにヒト血清アルブミンである。
【０１７５】
本発明の所定の態様では、ＧＬＰ−１アゴニストの薬学的に受容可能な塩および／またはガストリン化合物の薬学的に受容可能な塩が利用される。
【０１７６】
特定の態様における本発明は、ある状態および／または疾患、好ましくは糖尿病を治療する目的で持続性の有益な効果を提供するために被験体へ投与するために適合させられている薬学的組成物を提供する。糖尿病を予防および／または治療するための実施形態では、組成物は、被験体への投与がほぼ正常な血糖値を生じさせ、これが治療停止後の長期間にわたって被験体において持続するような形態にある。
【０１７７】
本発明は、ガストリン化合物と結合された、または相互作用するＧＬＰ−１アゴニストを含む結合体を提供するが、この相互作用は、例えばアミノ基またはカルボキシル基を介して発生する。本発明は、本発明の単離された共有結合結合体、および本発明の共有結合結合体を含む組成物にさらに関する。ＧＬＰ−１アゴニストは、ガストリン化合物のＯＨとＣＯＯＨとの間のエステル結合によって種へ結合体させることができる。ＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物の結合体は、中間スペーサーまたはリンカーと結合体させることができる。適切なスペーサーまたはリンカーは、１つまたは複数のそのような成分を含む単糖もしくは二糖、アミノ酸、硫酸塩、コハク酸塩、酢酸塩、またはオリゴマーもしくはポリマースペーサーまたはリンカーであってよい。
【０１７８】
本発明は、向上した薬物動態特性、生物活性、および有益な効果を備える結合体を生じさせる、結合体を調製する方法をさらに提供する。本方法は、ＧＬＰ−１アゴニストをガストリン化合物と一緒に、これら２つの化合物の共有結合の形成を許容する条件下でインキュベートする工程を含む。本方法はこのため、ガストリン化合物に共有結合または結合させられたＧＬＰ−１アゴニストを含む共有結合結合体を調製するための製法であって：ＧＬＰ−１アゴニストをガストリン化合物と一緒に、ＧＬＰ−１アゴニストとガストリン化合物との間の共有結合または結合を形成させるために十分な条件ならびにｐＨおよび時間下でインキュベートする工程と；および共有結合結合体を単離する工程と、を含む製法を企図している。ＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物を含む結合体を調製するための上記の製法は、ＧＬＰ−１アゴニストへ共有結合した実質的な量のＧＬＰ−１アゴニストを備える結合体を提供する。
【０１７９】
任意でスペーサーまたはリンカーを用いてガストリン化合物と結合体したＧＬＰ−１アゴニストを含む、Ｎ末端またはＣ末端融合タンパク質もしくはキメラタンパク質は、組み換え技術を通してＧＬＰ−１アゴニストのＮ末端またはＣ末端配列をガストリン化合物の配列と融合させる工程によって調製することもできる。
【０１８０】
本発明は、本明細書に記載した製法によって調製した結合体に関する。本発明は、本発明の結合体および薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、もしくはビヒクルを含む医薬調製物または組成物にさらに関する。
【０１８１】
本発明は、ＧＬＰ−１アゴニスト単独に比較して有益な効果、好ましくは持続性の有益な効果を提供する、ガストリン化合物へ共有結合したＧＬＰ−１アゴニストを含む実質的に純粋な共有結合結合体の医薬調製物または組成物にさらに関する。ある実施形態では、中間スペーサーまたはリンカーを使用せずにガストリン化合物へ共有結合したＧＬＰ−１アゴニストを含む本質的に共有結合結合体からなる医薬調製物が提供される。また別の実施形態では、中間スペーサーまたはリンカーを使用してガストリン化合物へ共有結合したＧＬＰ−１アゴニストを含む本質的に共有結合結合体からなる医薬調製物が提供される。
【０１８２】
本発明の態様では、ＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物を含む組成物または結合体は、ＧＬＰ−１アゴニストもしくはガストリン化合物単独の活性またはＧＬＰ−１（７−３７）ＯＨの活性と比較して、治療後により大きな持続性のインスリン分泌促進活性を有する。
【０１８３】
本発明は、被験体における状態および／または疾患を予防、治療および／または介入するための方法であって、有益な効果、特に持続性の有益な効果を提供するために、本発明のガストリン化合物およびＧＬＰ−１アゴニストまたは薬学的組成物を投与する工程を含む方法を提供する。
【０１８４】
有益な効果、特に統計的有意に有益な効果または持続性の有益な効果を提供する本発明の方法では、ＧＬＰ−１アゴニストは、
【０１８５】
【化１６】
2007519642.tif 000018
からなる群から選択することができ、そしてガストリン化合物は任意で血清タンパク質と結び付けた、配列番号１１、１２、１３もしくは１４を含むことができる。
【０１８６】
本発明の所定の方法では、ＧＬＰ−１（７−３６）［配列番号５］およびガストリン−１７（Ｉｅｕ）［配列番号１４］が投与される。
【０１８７】
本発明の他の方法では、Ａｒｇ３４Ｌｙｓ２６（Ｎε（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）−ＧＬＰ−１（７−３７）およびガストリン−１７（Ｉｅｕ）［配列番号１４］が投与される。
【０１８８】
本発明の所定の別の態様では、Ａｉｂ８，３５ＧＬＰ−１（７−３６）−アミドまたはＳｅｒ３８，Ｌｙｓ３９，４０，４１，４２，４３，４４−エキセンディン−４（１−３９）−アミドおよびガストリン−１７（ｌｅｕ）［配列番号１４］が投与される。
【０１８９】
有益な効果、特に統計的有意に有益な効果または持続性の有益な効果を提供する本発明の所定の別の方法では、ＧＬＰ−１アゴニストは、
【０１９０】
【化１７】
2007519642.tif 000019
からなる群から選択することができ、そしてガストリン化合物はアミノ末端からＺ−Ｙｍ−Ｘｎ−ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ４−ＡＡ５−ＡＡ６（式中、ＡＡ１はＴｙｒまたはＰｈｅであり、ＡＡ２はＧｌｙ、Ａｌａ、またはＳｅｒであり、ＡＡ３はＴｒｐ、Ｖａｌ、またはＩｌｅであり、ＡＡ４はＭｅｔまたはＬｅｕであり、ＡＡ５はＡｓｐまたはＧｌｕであり、およびＡＡ６はＰｈｅまたはＴｙｒである；Ｚはポリマーであり、該ポリマーがタンパク質の場合はＺはアミノ酸配列である；Ｙｍはセリンおよびアラニンを含むがそれらに限定されない小さな中性アミノ酸のｍ個のアミノ酸残基を含む任意のスペーサー領域であり、そしてＸは配列番号１１もしくは１２の残基１〜２８、または配列番号１３もしくは１４の残基１〜１７の任意の連続部分であり、好ましくはＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ４−ＡＡ５−ＡＡ６はＴｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−ＰｈｅまたはＴｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｐｈｅである）を含むアミノ酸配列を含んでいる。特定の実施形態では、Ｚは血清タンパク質、とくにヒト血清アルブミンである。
【０１９１】
１つの態様では、本発明は、被験体における本明細書で考察した状態および／または疾患を予防および／または介入するための方法であって、少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストおよび少なくとも１つのガストリン化合物の投与を含む方法を提供する。ＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物は、被験体に直接的に投与する、または細胞（例、幹細胞または前駆細胞）と接触させて被験体に投与することができる。
【０１９２】
本発明は、被験体における本明細書で考察した状態および／または疾患を予防および／または治療するための、有益な効果を提供するために治療有効量の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物を該被験体に投与する工程を含む併用療法をさらに提供する。本発明の１つの態様では、治療後の持続性の有益な効果を提供する併用療法または介入を提供する。
【０１９３】
特別には、本発明は、被験体における状態および／または疾患を予防または治療するための、有益な効果、好ましくは持続性の有益な効果を提供するために治療有効量の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストおよび少なくとも１つのガストリン化合物を該被験体に投与する工程を含む併用療法を提供する。
【０１９４】
本発明は、糖尿病の症状を有する被験体へ投与すると、血糖値の減少および／または膵インスリンの増加として発現する、有益な効果、好ましくは持続性の有益な効果を生成する、少なくとも１つのガストリン化合物と組み合わせて治療有効量の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストを投与する工程を含む治療方法にさらに関する。
【０１９５】
本発明の１つの態様では、治療有効量のＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物は、被験体へ投与する前に組み合わせられる。ある実施形態では、治療有効量のＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物は、生理的に許容されるｐＨで混合される。
【０１９６】
１つの実施形態では、本発明は、被験体におけるβ細胞増殖を刺激するための方法であって、治療有効量の本発明の組成物もしくは結合体を投与する工程、またはＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物を組み合わせて投与する工程を含む方法を提供する。
【０１９７】
また別の実施形態では、本発明は、被験体におけるβ細胞の数および／またはサイズを増加させるための方法であって、治療有効量の本発明の組成物もしくは結合体を投与する工程、またはＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物を組み合わせて投与する工程を含む方法を提供する。
【０１９８】
別の実施形態では、本発明は、Ｉ型またはＩＩ型糖尿病を予防または治療するための方法であって、治療有効量の本発明の組成物もしくは結合体を投与する工程、またはＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物を組み合わせて投与する工程を含む方法を提供する。
【０１９９】
さらに別の実施形態では、本発明は、ＩＩ型糖尿病に罹患している患者における疾患の進行を緩和するため、または重症度の低い病期にするための方法であって、治療有効量の本発明の組成物もしくは結合体を投与する工程、またはＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物を組み合わせて投与する工程を含む方法を提供する。
【０２００】
本発明は、グルコース寛容減損の進行または非インスリン依存性ＩＩ型糖尿病からインスリン依存性ＩＩ型糖尿病への進行を遅延させる方法であって、治療有効量の本発明の組成物もしくは結合体を投与する工程、またはＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物を組み合わせて投与する工程を含む方法に関する。
【０２０１】
本発明は、被験体のインスリン合成能力を上昇させる方法であって、治療有効量の本発明の組成物もしくは結合体を投与する工程、またはＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物を組み合わせて投与する工程を含む方法にさらに関する。
【０２０２】
本発明は、被験体における膵島細胞新生を誘導する方法であって、膵島前駆細胞を、該被験体における膵島前駆細胞の増殖を増加させるために十分な量でＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物、または本発明の組成物もしくは結合体を接触させ、それにより膵島細胞新生を誘導する工程を含む方法にさらに関する。
【０２０３】
本発明は、糖尿病患者における膵島移植片の機能的なβ細胞質量を拡大させる方法であって、患者に治療有効量のＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物、または本発明の組成物もしくは結合体を投与する工程を含む方法を企図している。
【０２０４】
１つの態様では、本発明は、それを必要とする患者における糖尿病を治療するための、該患者の膵島前駆細胞から成熟インスリン分泌細胞への分化を達成するため、および／または現存する膵島細胞中のインスリン合成を刺激するために十分な量でガストリン化合物およびＧＬＰ−１アゴニストを含む組成物を投与する工程による方法を提供する。本組成物は、全身性で投与できる、または発現ベクター中に１つまたは複数の核酸構築物を含有する宿主細胞によってインサイチューで発現させることができるが、このとき該核酸構築物はガストリン化合物のためのコーディング配列もしくはＧＬＰ−１アゴニストのためのコーディング配列または両方の化合物のためのコーディング配列を、膵島前駆細胞中で機能的である転写および翻訳調節領域と一緒に含んでいる。
【０２０５】
本発明は、本発明のＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物、または本発明の組成物もしくは結合体を用いて細胞を、好ましくは培養内の細胞を治療するための方法を提供する。本発明は、本発明のＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物、または本発明の組成物もしくは結合体を用いる細胞療法をさらに提供する。一般的培養方法および細胞療法の説明についてはＰＣＴ／ＣＡ０３／３３５９５を参照されたい。
【０２０６】
１つの態様では、本発明は、幹細胞もしくは前駆細胞をインスリン分泌細胞へ拡大および分化させるための方法であって、幹細胞もしくは前駆細胞をＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物、または本発明の組成物もしくは結合体と、幹細胞もしくは前駆細胞を拡大および分化させるために十分な量で接触させるステップを含む方法に関する。拡大および分化の量は、化合物、組成物もしくは結合体の非存在下で達成された量と比較して有意に相違する可能性があり、詳細には、この量はＧＬＰ−１アゴニストまたはガストリン化合物単独を用いて達成された量と比較して有意に大きい可能性がある。１つの実施形態では、幹細胞もしくは前駆細胞は培養内で化合物、組成物もしくは結合体と接触させられる。また別の実施形態では、幹細胞もしくは前駆細胞は被験体内で化合物、組成物もしくは結合体と接触させられる。化合物、組成物もしくは結合体は、被験体の幹細胞を拡大および分化させるために、被験体への幹細胞の移植前、移植中、または移植後に被験体へ投与することができる。幹細胞は、膵島、臍帯、胚、または幹細胞系から入手できる。本方法は、追加して免疫抑制剤を投与する工程を含むことができる。
【０２０７】
本発明は、培養内でのインスリン分泌細胞の増殖を強化するための方法であって、細胞の増殖を強化するために十分な量で、該細胞を本発明のＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物、組成物もしくは結合体と接触させる工程を含む方法にさらに関する。増殖の量は、化合物、組成物もしくは結合体の非存在下で達成された量と比較して有意に相違する可能性がある。１つの実施形態では、増殖の量はＧＬＰ−１アゴニストまたはガストリン化合物単独と比較して有意に大きい。
【０２０８】
本発明は、培養内で膵島細胞もしくは前駆細胞を維持するための方法であって、培養内で細胞を維持するために十分な量にあるＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物、または本発明の組成物もしくは結合体の存在下で該細胞を培養する工程を含む方法にさらに関する。細胞は、化合物、組成物もしくは結合体の非存在下、またはＧＬＰ−１アゴニストまたはガストリン化合物単独の存在下で培養された細胞と比較して有意に長期間にわたり培養内で維持することができる。本発明のＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物または組成物もしくは結合体の存在下で細胞を培養する工程は、移植が意図された細胞を調製および維持する際に特に有用であろう。
【０２０９】
１つの態様では、本発明は、ある状態および／または疾患を治療する方法であって、それにより有益な効果、好ましくは持続性の有益な効果を生成するために、それを必要とする被験体へ複数の細胞とともにＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物、本発明の組成物もしくは結合体を投与する工程を含む方法を提供する。
【０２１０】
本明細書で考察した状態および／または疾患を有する被験体を治療するための方法は、複数の細胞をエックスビボでＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物、または本発明の組成物もしくは結合体と接触させる工程、任意で前記細胞を培養する工程、およびそれを必要とする前記被験体へ前記細胞を投与する工程を含んでいる。
【０２１１】
上述した細胞療法の実施形態では、細胞は膵管細胞であり、本発明において使用される化合物／組成物／結合体の量は、一般に被験体におけるインスリン分泌細胞の量を増加させるために有効である。細胞は、自家細胞（すなわち、同一被験体由来）、もしくは同一種のまた別の個体、または相違する種由来であってよい。
【０２１２】
本発明は、被験体における糖尿病を治療するための方法であって、被験体に膵島細胞調製物を移植する工程と、そして治療有効量のＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物、または本発明の組成物もしくは結合体を投与する工程を含む方法を企図している。
【０２１３】
本発明の細胞療法では、ある状態および／または疾患に罹患した個体へ投与される細胞数は、該状態および／または疾患の重症度、投与様式、および／または投与部位によって変動するであろう。一般に、治療有効量の細胞は安全かつ有効な量、特に１つまたは複数の有益な効果、特に持続性の有益な効果、または相乗作用を提供するために必要な量である。
【０２１４】
細胞は、当業者には明白な様々な手段を用いて被験体へ投与できる。適切な方法には、被験体における標的部位への細胞の注射が含まれる。細胞は、被験体への注射または移植を容易にするために送達器具内へ挿入することができる。送達器具の例には、チューブ、例えば被験体の体内へ細胞および液体を注入するためのカテーテルが含まれる。細胞は、様々な相違する形態で送達するために調製できる。例えば、細胞は溶液もしくはゲル中に懸濁させることができる、またはその中では細胞が生育性のままである薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、もしくは希釈剤と混合することができる。薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、および希釈剤には、食塩液、緩衝水溶液、溶媒および／または分散媒が含まれる。そのようなキャリアおよび希釈剤の使用は、当技術分野においてよく知られている。溶液は一般に無菌であり、しばしば等張性であろう。好ましくは、製造および保管の条件下で安定性であり、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどの使用を通して微生物の汚染作用から保護されている細胞溶液が選択される。
【０２１５】
細胞の投与様式には、非限定的に、全身性の心臓内、冠動脈内、静脈内、皮内もしくは動脈内注射および予定活性部位、または活性部位の近位の組織もしくは器官内への直接的注射が含まれる。細胞調製物は、例えば注入もしくはボーラス注射のための任意の便宜的経路によって投与でき、そして他の生物活性物質と一緒に投与できる。一部の態様における投与は、好ましくは全身性である。細胞調製物は、例えば注入もしくはボーラス注射のための任意の便宜的経路によって投与でき、そして他の生物活性物質と一緒に投与できる。
【０２１６】
本発明の方法は、血中グルコース、血清グルコース、血中グリコシル化ヘモグロビン、膵β細胞質量、血清中インスリン、膵インスリンレベル、形態測定学により決定したβ細胞質量、インスリン分泌細胞の量、およびインスリン分泌細胞の糖反応性、などのマーカーのうちの１つまたは複数を測定または監視する工程をさらに含むことができる。
【０２１７】
本発明は、ある状態および／または疾患を治療する際の有益な効果、好ましくは持続性の有益な効果を提供するための薬剤を調製するための少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストおよび少なくとも１つのガストリン化合物の組み合わせを含む組成物の使用をさらに企図している。１つの態様では、本発明は、ある状態および／または疾患を治療する際の、有益な効果、好ましくは持続性の有益な効果を提供するための薬剤を調製するための治療有効量の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニスト、および少なくとも１つのガストリン化合物の使用にさらに関する。１つの実施形態では、本発明は、治療後の被験体におけるβ細胞の数および／またはサイズを増加させる（好ましくは持続的に増加させる）ための薬剤を調製するためのＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物の使用を提供する。また別の実施形態では、本発明は、治療後のβ細胞増殖を刺激（好ましくは持続性に刺激）するための薬剤を調製するためのＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物の使用を提供する。本発明のさらにまた別の実施形態では、本発明は、Ｉ型またはＩＩ型糖尿病を治療するための薬剤を調製するためのＧＬＰ−１およびガストリンの使用を提供する。
【０２１８】
本発明は、状態および／または疾患の治療において、有益な効果、好ましくは持続性の有益な効果のための薬剤の調製における本発明の薬学的組成物および結合体の使用をさらに提供する。
【０２１９】
本発明の化合物、組成物および結合体の治療有効性および毒性は、細胞培養内での標準的な医薬方法によって、またはＥＤ５０（集団の５０％において治療上有効な用量）もしくはＬＤ５０（集団の５０％にとって致死的な用量）統計量などの統計パラメーターを計算する工程などの実験動物を用いて決定できる。治療指数は、治療作用対毒性作用の用量比であり、これはＥＤ５０／ＬＤ５０比として表すことができる。大きな治療指数を示す薬学的組成物が好ましい。
【０２２０】
本発明の化合物、組成物、薬剤、および結合体は、活性物質と被験体または患者の身体内での薬剤の作用部位との接触を生じさせる任意の手段によって投与できる。有効成分は、所望の有益な効果を提供するために、同時にもしくは連続的に、および任意の順序で相違する時点に投与することができる。化合物、結合体および組成物は、局所的または全身性で送達するために持続性放出に合わせて調製できる。これは、本発明の組成物、結合体、および治療法の作用を最適化する投与の形態および経路を選択するために熟練の医師または獣医の能力の範囲内に含まれる。
【０２２１】
組成物は、錠剤、カプセル剤（その各々が徐放性または持続放出性調製物を含む）、ピル剤、散剤、顆粒剤、エリキシル剤、着色剤、懸濁剤、シロップ剤、および乳剤などの経口剤形で投与できる。それらは、静脈内（ボーラスもしくは点滴）、腹腔内、皮下、または筋肉内の形式で投与することもできるが、それらはすべて医薬分野の当業者にはよく知られている剤形を利用する。本発明の組成物は、適切な鼻腔内ビヒクルの局所使用による鼻腔内経路、または例えば従来型の皮膚パッチを用いる経皮経路によって投与することができる。経皮的送達系を用いた投与のための投与プロトコールは、投与レジメンを通して間欠的ではなくむしろ連続的であってよい。
【０２２２】
特定の投与経路は、非経口投与、好ましくは末梢非経口投与である。非経口投与は、一般に、無菌シリンジまたは注入ポンプなどの他の機械的器具による身体内への用量の注射を意味すると理解されている。本発明のために、非経口投与経路には、静脈内、筋肉内、皮下、および腹腔内投与経路が含まれる。非経口投与のためには、本明細書に記載した化合物もしくは結合体は、適切なｐＨで蒸留水と合わせることができる。
【０２２３】
本発明は、相加的もしくは相乗的に有効な量、または治療有効量のＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物、または本発明の結合体もしくは組成物を提供するための量を送達する相加的もしくは相乗的活性を提供する併用療法が含まれる。このため、本発明において使用するのに適する薬学的組成物には、有効成分が相乗的有効量もしくは治療有効量で含有される組成物が含まれる。
【０２２４】
本発明の投与レジメンは、薬剤の薬物動態特性ならびにそれらの投与様式および経路；患者の種、年齢、性別、健康状態、医学的状態、および体重、症状の性質や程度、併用療法の種類、治療の頻度、投与経路、患者の腎および肝機能、ならびに所望の作用などの知られている因子に依存して変動するであろう。ある状態の進行を予防する、対抗する、または阻止するために必要とされる薬物の有効量は、熟練の医師または獣医であれば容易に決定することができる。
【０２２５】
本発明の組成物、薬剤、または治療は、単位用量の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストおよび単位用量の少なくとも１つのガストリン化合物を含んでいてよい。「単位用量」は、単一の、すなわち患者へ投与することのできる、そして活性物質それ自体または１つまたは複数の固体もしくは液体の医薬賦形剤、キャリア、もしくはビヒクルとの混合物のいずれかを含む物理的および化学的に安定性の単位用量であり続けながら、容易に取り扱いかつ包装できる１回量を意味する。
【０２２６】
１つの態様では、治療後の長期間にわたり糖レベルを減少もしくは低下させることにガストリン化合物もしくはＧＬＰ−１アゴニストいずれか単独の用量と比較して有効である治療上有効である最適量より少ない用量のＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物を含む薬学的組成物が提供される。
【０２２７】
また別の態様では、ある状態および／または疾患、特に糖尿病の長期または短期療法のための形態で治療上有効な最適量より少ない用量のＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物を含む、改良された薬学的組成物が提供される。
【０２２８】
１つの実施形態では、本組成物は、ある状態および／または疾患を治療する目的で、有益な効果、好ましくは持続性の有益な効果を提供するために必要とされる各化合物の用量と同量、または少なくとも１．１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０分の１である用量でＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物を含む。
【０２２９】
１つの態様では、本発明は、１単位当たり０．５〜６０００、１００〜１５００、１００〜６０００、１０００〜６０００、２０００〜６０００、および３０００〜６０００μｇのＧＬＰ−１アゴニストおよび１単位当たり０．５〜６０００、１００〜３０００、１００〜６０００、１０００〜６０００、２０００〜６０００、および３０００〜６０００μｇのガストリン化合物を含む薬学的組成物を提供する。
【０２３０】
また別の態様では、本発明は、０．１〜２０、０．１〜３０、０．１〜４０、０．１〜５０、および０．１〜６０μｇ／ｋｇ／日のＧＬＰ−１ならびに０．１〜２０、０．１〜３０、０．１〜４０、０．１〜５０、および０．１〜６０μｇ／ｋｇ／日のガストリン化合物を含む薬学的組成物を提供する。
【０２３１】
本発明の組成物もしくは調製物は、被験体へ２週間〜１２カ月間、２週間〜６カ月間、２〜１６週間、２〜１２週間、および／または２〜８週間にわたり持続的に、または定期的に投与することができる。
【０２３２】
１つの実施形態では、本発明の組成物中でのＧＬＰ−１アゴニスト対ガストリン化合物の比率は、ＧＬＰ−１アゴニストおよび／またはガストリン化合物の活性を増強させるため、および有益な効果、好ましくは持続性の有益な効果を提供するために選択される。
【０２３３】
ＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物は、有益な効果、特に持続性の有益な効果を提供するため、および／または相加作用もしくは相乗作用を生成するために、一方または両方の化合物の活性を強化するために選択された比率であってよい。実施形態では、ＧＬＰ−１アゴニスト対ガストリン化合物の比率は、１：１〜１：１１０、１：１〜１：１００、１：１〜１：７５、１：１〜１：５０、１：１〜１：２５、１：１〜１：１０、１：１〜１：５、および１：１であってよい。他の特定の実施形態では、ＧＬＰ−１アゴニスト対ガストリン化合物の比率は、１：１〜１：１１０、１：１〜１：１００、１：１〜１：７５、１：１〜１：５０、１：１〜１：２５、１：１〜１：１０、および１：１〜１：５であってよい。
【０２３４】
ＧＬＰ−１アゴニストは、約１：１〜１：１５０、特に１：１〜１：５０の治療有効量の比率でガストリン化合物と組み合わせて使用されてよい。また別の実施形態では、ガストリン化合物は、約１：１〜１：１５０、特に１：１〜１：５０の治療有効量の比率でＧＬＰ−１アゴニストと組み合わせて使用されてよい。
【０２３５】
本発明の組成物またはその分画は、典型的には予定投与形態に基づいて選択された、および従来型の医薬の慣習と一致する適切な医薬上の希釈剤、賦形剤、ビヒクルまたはキャリアを含んでいる。キャリア、ビヒクルなどは、相加的、相乗的有効量または治療有効量の活性化合物を提供するように適合させることができる。
【０２３６】
適切な医薬希釈剤、賦形剤、ビヒクル、およびキャリアは、標準的な教科書であるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙの中に記載されている。例えば、カプセル剤もしくは錠剤の形状で経口投与するためには、活性化合物は、ラクトース、デンプン、スクロース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、グルコース、カルシウム、硫酸塩、リン酸二カルシウム、マンニトール、ソルビトールなどの薬学的に受容可能な経口用の非毒性不活性キャリアと合わせることができる。液剤形で経口投与するためには、薬物成分は、エタノール、グリセロール、水などの薬学的に受容可能な、任意の経口用の非毒性不活性キャリアと合わせることができる。適切な結合剤（例、ゼラチン、デンプン、トウモロコシ甘味料、グルコースを含む天然糖；天然および合成ガム、およびろう）、潤滑剤（例、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、および塩化ナトリウム）、崩壊剤（例、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、およびキサンタンガム）、矯味剤、および着色剤もまたそれらの組成物もしくは成分内で合わせることができる。
【０２３７】
本発明の１つの態様では、薬学的組成物は、約７から１０のｐＨを有する。
【０２３８】
本発明の組成物を非経口投与するための調製物は、水溶液、シロップ、水性もしくは油性懸濁液および綿実油、ヤシ油もしくは落花生油などの食用油との乳濁液を含んでいてよい。水性懸濁液のために使用できる分散剤もしくは懸濁化剤には、トラガカントなどの合成もしくは天然ガム、アルギン酸塩、アカシア、デキストラン、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、ゼラチン、メチルセルロース、およびポリビニルピロリドンが含まれる。
【０２３９】
非経口投与するための組成物は、水、等張食塩液、等張グルコース液、緩衝液などの無菌の水性もしくは非水性溶剤、または治療上有効な薬剤を非経口投与するために便宜的に使用される他の溶剤を含むことができる。非経口投与することが企図される組成物は、安定剤、緩衝液、もしくは保存料、例えばメチルヒドロキシ安息香酸などの抗酸化物質などの従来型添加物、または類似の添加物をさらに含んでいてよい。
【０２４０】
１つの実施形態では、結晶質もしくは非晶質ＧＬＰ−１アゴニストおよび結晶質もしくは非晶質ガストリン化合物を含む固形の薬学的組成物（例、錠剤、カプセル剤、粉末化もしくは微粉化形）が提供される。
【０２４１】
また別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物の薬学的に受容可能な塩を含む液剤調製物、ならびに安定しており、かつ非経口投与に適する懸濁液を提供するために復元できる凍結乾燥薬剤調製物に関する。
【０２４２】
特定の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物の薬学的に受容可能な塩ならびに可溶化を実行する溶媒系を含む水性組成物に関する。本発明は、少なくとも１つの可溶化剤とともにＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物の薬学的に受容可能な塩の水性調製物を含む薬物をさらに提供する。
【０２４３】
本発明の組成物は、例えば細菌保持フィルターを通しての濾過、組成物への滅菌剤の添加、組成物の照射、または組成物の加熱によって滅菌することができる。または、本発明の化合物、結合体、および組成物は、使用直前に無菌溶媒中で容易に溶解させられる、例えば凍結乾燥粉末のような無菌固形調製物として提供されてよい。
【０２４４】
本明細書に記載した調製物に加えて、組成物はデポー製剤として調製することもできる。そのような長時間作用型調製物は、移植（例えば、皮下もしくは筋肉内）または筋肉内注射によって投与されてよい。そこで、例えば適切なポリマーもしくは疎水性材料（例えば、許容される油中の乳濁剤として）、もしくはイオン交換樹脂と一緒に、または例えばやや溶けにくい塩のようなやや溶けにくい誘導体としてのフラクションを調製できる。
【０２４５】
本発明の組成物およびそれらの成分は、標的を定められる薬物キャリアとして可溶性ポリマーを含んでいてよい。
【０２４６】
薬学的組成物が調製された後、それらは適切な容器内に入れて、適応状態の治療についてラベル表示することができる。本発明の組成物の投与については、そのようなラベル表示は、投与の量、頻度、および方法を含むであろう。
【０２４７】
本発明は、非限定的に免疫抑制剤、肥満抑制薬、抗糖尿病薬、食欲調節薬、降圧薬、ある状態および／または疾患、特に糖尿病および肥満の結果として生じる、またはそれらに関連する合併症を治療および／または予防するための薬剤、抗嘔吐薬、鎮痛薬、および副作用を治療または予防する一般的医薬品を含む１つまたは複数の追加の治療薬と組み合わせて本発明の組成物を使用する方法をさらに含んでいる。
【０２４８】
本発明は個別に、または結合体として投与できる活性物質の組み合わせを含む治療方法に関するので、本発明は、ＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物を含むキットおよびキット形にある薬学的組成物または結合体にもさらに関する。本発明は、１つの箱の中にＧＬＰ−１アゴニストを含む１つのボトルおよびガストリンを含むもう１つのボトルを含む医薬キットにさらに関する。キットは、本発明の結合体または組成物を含有する容器を収容し、さらに被験体へ結合体または組成物を投与するための取扱説明書を収容する包装を含んでいてよい。
【０２４９】
以下では、特定の実施例によって本発明をより詳細に説明しよう。以下の実施例は、例示する目的で提供するものであり、決して本発明を限定することは意図していない。当業者であれば、本質的に同一の結果を生み出すように変更または修飾できる様々な非臨界的パラメーターを容易に認識できるであろう。
【実施例】
【０２５０】
（実施例１  急性糖尿病性ＮＯＤマウスにおけるＧＬＰ−１（Ｂａｃｈｅｍ社、ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、ヒト）と組み合わせたガストリンの作用）
本実施例では、糖尿病性ＮＯＤマウスにおける糖尿病を逆転させるための、ＧＬＰ−１およびガストリンを用いる全身性療法後のインビボでのβ細胞新生を刺激することによる方法および組成物を示す。雌性ＮＯＤマウス（１２〜１６週齢）は、糖尿病発現後２日間以内に始めて、ビヒクル（ＰＢＳ）単独、ＧＬＰ−１（３００μｇ／ｋｇ／日）、またはＧＬＰ−１（３００μｇ／ｋｇ／日）＋ガストリン（３μｇ／ｋｇ／日）を用いて１８日間にわたり１日２回の腹腔内注射によって処置した。糖尿病の発現は、空腹時血糖（ＦＢＧ）値（６．０ｍＭ未満の正常ＦＢＧに比較して９〜１５ｍＭ）によって決定した。マウスは、尿糖については１日１回、そしてＦＢＧ値については週１回監視した。
【０２５１】
処置開始時に、空腹時血糖値の範囲は１１〜１４ｍＭであった。１８日間にわたる処置後、ＦＢＧは、ビヒクル処置マウス群では２４±１ｍＭ、ＧＬＰ−１単独処置マウス群では１３±２ｍＭ、ならびにＧＬＰ−１およびガストリンの併用処置マウス群では６±１ｍＭであった（平均値±ＳＥ、処置群ではｎ＝４（マウス）；対照群ではｎ＝６（マウス））。
【０２５２】
１８日間の処置を停止した後、ＦＢＧをさらに６週間にわたり週１回監視した。処置完了から１週間後、併用療法で注射されたマウスのＦＢＧ値は正常値に戻り、それらは処置６週間後の試験終了までの全期間を通してそのようなレベルで維持された。これと比較して、未処置群の動物は、５週間後に疾患重症度のために致死させなければならなかった。ＧＬＰ−１単独処置マウス群は処置中止後２週間までＦＢＧ値の一過性の改善を示したが、その後の空腹時血糖値は漸進的に上昇し、試験終了時には未処置ビヒクル群で観察されたレベルと同様となった。
【０２５３】
試験結果は図１に示した。
【０２５４】
これらの結果は、糖尿病性ＮＯＤマウスへの短期間のＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン併用療法は糖尿病を効果的に治療するために高血糖症を正常化し、そしてβ細胞新生およびインスリン産生の刺激を示す空腹時血糖値への持続性作用を有したことを証明している。
【０２５５】
（実施例２  急性糖尿病性ＮＯＤマウスにおけるＧＬＰ−１と組み合わせたガストリン（ＧＩ）の作用）
（目的：）
ＮＯＤマウスは、膵島β細胞の自己免疫性破壊の結果としてインスリン依存型糖尿病を自然に発生する。本試験の目的は、ＧＬＰ−１およびガストリン（Ｇ１）を用いて膵島β細胞を再生させることによってＮＯＤマウスにおける糖尿病を治療することであった。
【０２５６】
（方法：）
雌性ＮＯＤマウス（１２〜１６週齢）を、ビヒクル（ＰＢＳ）、または３００μｇ／ｋｇ／日のＧＬＰ−１と３μｇ／ｋｇ／日のガストリン（ＧＩ）を組み合わせて用いて腹腔内注射（ｉ．ｐ．）によって１８日間にわたり処置した。動物に糖尿病発現後２〜５日間以内に始めて１８日間にわたり１日２回注射した。空腹時血糖（ＦＢＧ）値は、糖尿病の発現時に９〜１５ｍＭであった（正常ＦＢＧは６．０ｍＭ未満）。尿中グルコースレベルについては１日１回、そしてＦＢＧ値については処置中、そして処置中止後にもさらに６週間にわたり週１回、マウスを監視した。膵インスリンレベルを各群について決定し、さらに膵組織の組織学的分析を実施した。膵組織を固定し、インスリン産生細胞について染色した。β細胞質量は、形態測定学的分析によって決定した。
【０２５７】
（結果：）
１８日間にわたる１日１回の処置後に、３０μｇ／ｋｇ／日のＧＬＰ−１および３μｇ／ｋｇ／日のＧ１の組み合わせで処置した動物では、空腹時血糖値は６．１±０．７ｍＭであったが、ビヒクル処置群における空腹時血糖値は２４．４±１．５ｍＭであった。これに比較して、ＧＬＰ−１単独処置群の動物は１２．５±２．２ｍＭの空腹時血糖値を有していた。これらのデータは、ＧＬＰ−１およびガストリン併用療法がＮＯＤマウスにおける血糖値を制御することに関してＧＬＰ−１単独より有効であったことを示している。
【０２５８】
全処置は１８日後に中止したが、ＦＢＧはさらに６週間にわたり週１回監視した。処置完了から１週間後、併用療法で注射されたマウスにおけるＦＢＧ値は正常値（６ｍＭ未満）となり、試験終了までの全期間を通してそのようなレベルを維持し、処置６週間後のＦＢＧ値は４．３±０．２ｍＭであった。これに比較して、ＧＬＰ−１処置群動物は最高血糖値（３０ｍＭ超）に達し、糖尿病性合併症に罹患していた。未処置群の動物は、処置５週間後に疾患重症度のために致死させなければならなかった（図１および図２）。
【０２５９】
これらのデータは、ＧＬＰ−１およびガストリンの組み合わせは処置６週間後でさえ正常血糖値を回復させることに有効であったが、他方ＧＬＰ−１処置群動物は重症高血糖症を発症したことを示している。
【０２６０】
図３は、非糖尿病性動物は膵臓当たり約１０μｇのインスリンを有するが、他方上昇した血糖値を備える急性糖尿病性の動物は０．５〜１．０μｇの膵インスリンを有することを例示している。これらのデータは、ＮＯＤマウスが血糖値を調節するためにそれらの膵インスリンの１０％未満しか必要としないことを示している。糖尿病の発症５週間後、未処置群動物は最低レベルの膵インスリンを有しており、この段階で動物は３０〜３２ｍＭの血糖値を有し、糖尿病性合併症に罹患していた。ＧＬＰ−１処置群は未処置動物群より高い１．０〜１．５μｇの膵インスリンレベルを有しており、これはＧＬＰ−１がＮＯＤマウスモデルにおいていくらか膵島細胞再生を刺激することを示唆している。
【０２６１】
注目すべきことに、ＧＬＰ−１およびガストリン処置動物群は膵臓当たり８μｇを超えるインスリンを有していたていたが、これはＧＬＰ−１群より有意に高いだけではなく、正常な非糖尿病性膵インスリンレベルの８０％を超えている。これらの試験は、ＧＬＰ−１およびガストリン併用療法が、処置後の長期間にわたり疾患を逆転させることのできる膵島再生を刺激することに極めて強力であることを示している。
【０２６２】
ＧＬＰ−１およびガストリン併用群は、膵インスリン含量を糖尿病の発症後および処置前に測定した低レベルから血糖正常マウスにおいて測定したレベルに類似するレベルへ回復させることができた。ＮＯＤマウスにおける高血糖症の矯正は、図４に示したように、膵インスリン含量の上昇と有意に相関していた（ｒ＝０．９０）。
【０２６３】
図５は、インスリン染色細胞（茶褐色に）は処置前の急性糖尿病性ＮＯＤマウスにおいてはほとんど見られないことを示している。これらの膵島細胞の数は、未処置群では経時的にさらに減少する。組織学的検査は、ＧＬＰ−１およびガストリン併用処置マウス群において膵管に隣接して、単核白血球によって取り囲まれているが浸潤はされていない、大きな、強度にインスリンが染色された膵島を明らかにした。
【０２６４】
β細胞質量は実験の進行中（８週間）に０．４１ｍｇから０．０１ｍｇへ減少したが、他方ＧＬＰ−１およびガストリン併用処置動物群ではβ細胞質量は１．０５ｍｇへ増加した。非糖尿病性動物におけるβ細胞質量は、１．０〜１．５ｍｇの範囲内にあると報告されている。ＧＬＰ−１およびガストリン併用処置は、ＮＯＤマウスにおけるβ細胞質量を、処置終了６週間後に試験した場合でさえほぼ正常レベルへ有意に増加させる。
【０２６５】
図６は、ビヒクルならびにＧＬＰ−１およびガストリンを用いて処置されたＮＯＤマウスにおける膵管からの膵島細胞の染色を示している。これらのデータは、膵管中の膵島細胞クラスターのβ細胞質量が実験の進行（８週間）中に０．０６から０．０１へ減少するが、他方これらのβ細胞質量のクラスターはＧＬＰ−１およびガストリン併用処置ＮＯＤマウス群においては０．１７ｍｇへ上昇したことを証明している。これらのデータは、ＧＬＰ−１およびガストリン併用処置がＮＯＤマウスにおいて膵管中で膵島前駆細胞を含む膵島細胞新生を誘導することを示している。
【０２６６】
これを要約すると、これらの試験はＧＬＰ−１およびガストリン併用処置がＮＯＤマウスモデルにおいてこれらの疾患モデルにおいて進行する可能性のある破壊を圧倒するために十分に膵島細胞再生を誘導し、膵臓内の島細胞の最終的な蓄積をもたらすことを示している。
【０２６７】
（結論：）
糖尿病性ＮＯＤマウスに対する短期間のＧＬＰ−１およびガストリン処置は高血糖症を正常化させ、処置後少なくとも６週間にわたり空腹時血糖値に持続性の作用を及ぼす。さらに、これらのデータは、ＧＬＰ−１およびガストリンが、正常レベルの８０〜９０％に近い膵インスリンレベルを刺激することができるが、他方ＧＬＰ−１単独は穏当な作用しか有していないことを示している。
【０２６８】
さらにその上、膵の組織学的分析は、炎症性細胞に取り囲まれているにもかかわらず、膵島細胞が正常に見え、極めて多数のインスリン産生細胞を有することを示している。膵臓の形態測定学的分析は、ＧＬＰ−１およびガストリン処置が膵臓中のβ細胞質量を増加させることを証明し、そして膵管中のβ細胞質量を増加させることによって細胞新生を誘導する徴候を示している。ＧＬＰ−１およびガストリン処置は、ＮＯＤマウスモデルにおいて正常血糖値および膵インスリンレベルを回復させることのできる膵島再生の強力な誘導因子である。
【０２６９】
（実施例３  発症早期糖尿病を有するＮＯＤマウスにおける糖尿病進行を防止する際のＧＬＰ−１と組み合わせたＰＣＴ／ＣＡ０３／０１７７８記載の修飾されたガストリン化合物／結合体）
ＧＬＰ−１および未修飾ガストリンならびにＧＬＰ−１および修飾されたガストリン化合物／結合体の併用療法の作用を発症早期糖尿病を有するＮＯＤマウスにおいて試験し、ＧＬＰ−１およびガストリン処置療法の投与が重症高血糖症を予防するかどうか、ならびに発症早期糖尿病を有するＮＯＤマウスにおける膵インスリン含量を増加させるかどうかを決定する。使用するＧＬＰ−１は、ヒト／マウスＧＬＰ−１のＧＬＰ−１生物活性フラグメント（それからフラグメントがプロセシングされる前駆物質に比較して７〜３６位で残基を有する；Ｂａｃｈｅｍ  Ｈ６７９５から入手した）である。使用するガストリン化合物／結合体は以下のとおりである：化合物Ｂ  −  アミノ酸１５位でＬｅｕ残基を備える１７アミノ酸残基を有する合成ヒトガストリンＩとしてのガストリン、化合物Ｅ  −  ２〜１７アミノ酸残基を有する合成ヒトガストリンＩとしてのガストリン、化合物Ｑ  −  （ＧＡ）５（すなわち、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ）を介して結合されたＨＳＡポリマーを備える２〜１７アミノ酸残基を有する合成ヒトガストリンＩとしてのガストリン。
【０２７０】
非肥満性糖尿病性（ＮＯＤ）雌性マウス（１２〜１４週齢）を糖尿病発症の進行について監視し（空腹時血糖値は８．０〜１５ｍｍｏＬ／Ｌ）、そして症状出現後４８時間以内に、４群のマウスを各々以下のとおりに処置する：１群はビヒクル単独で処置する；もう１つの群には１００μｇ／ｋｇ／日のＧＬＰ−１を投与し、残りの群はＧＬＰ−１（１００μｇ／ｋｇ／日）およびガストリン化合物（３μｇ／ｋｇ／日のガストリン同等量）の組み合わせを投与するが、各処置は１日１回腹腔内経路を介して投与する。
【０２７１】
療法は１４日間〜１８日間にわたり投与する。動物は空腹時血糖（ＦＢＧ）値について週１回監視する。ＦＢＧ値は食物が除去されてから約１２時間後に、および最終ペプチドもしくはビヒクル注射の２４時間後に測定する。処置の中止後、処置の終了後に高血糖症の防止が持続するかどうかを決定できるように、全マウスをＦＢＧ値について次の４週間（第２〜６週間）にわたり監視する。１４〜１８日間後に、処置を停止する。
【０２７２】
プロトコールには、６週間後に再びデータ取得のためにこれらのマウスをサンプリングする工程、ＦＢＧおおび血漿Ｃ−ペプチドをアッセイするために採血する工程、および膵島インスリン値を決定するためにマウスを致死させて膵島炎症（インスリン炎）について評価付けする工程が含まれる。処置の開始から、マウスはインスリン置換療法も免疫抑制療法も受けない。以下のパラメーターについて評価する：生存率、膵インスリンレベル、膵島炎症の存在および空腹時血糖値。
【０２７３】
長い半減期を有する修飾されたガストリン化合物／結合体（化合物ＥまたはＱ）と組み合わせたＧＬＰ−１は、糖尿病性動物におけるより一層の血糖値低下を提供することができる。
【０２７４】
（実施例４）
標準Ｆｍｏｃ合成を用いて、２つの相違する「反応性」ガストリン化合物を生成する：化合物Ａは、Ｎ末端で追加のシステインを有する修飾されたガストリン−１７である；化合物Ｂは、Ｎ末端で追加のシステインを備えるスペーサー領域として交互のグリシンおよびアラニン（各々５アミノ酸）の追加の１０アミノ酸を有する修飾されたガストリン−１７ペプチドである。
【０２７５】
非肥満性糖尿病性（ＮＯＤ）雌性マウスを糖尿病の発症（６．６ｍｍｏＬ／Ｌより高い空腹時血糖（ＦＢＧ）値であると決定された）について監視し、糖尿病が発症したら、４つの群に分割する。マウスは、１４日間にわたり１日１回、腹腔内注射（ｉ．ｐ．）を介して投与する、対照としてのビヒクル；またはガストリン−１７、化合物Ａ、もしくは化合物Ｂのいずれかで処置する（３つのガストリン処置群全てにおいて、同じモル濃度の有効成分、すなわちガストリンが使われるものとする）。
【０２７６】
空腹時血糖（ＦＢＧ）値および膵インスリンレベルを測定かつ決定する。さらに、ガストリンの血清中半減期ならびにガストリンの循環血清中レベルを測定する。
【０２７７】
３つのガストリン処置群のうち、化合物Ａまたは化合物Ｂのどちらかで処置されるＮＯＤマウスの両群は血清中ガストリンのより高い循環中レベルを維持するであろう。さらに、測定されたガストリンの半減期は、非修飾ガストリンに比較して化合物ＡまたはＢのどちらかで処置されたマウスでは長くなるであろう。
【０２７８】
さらに、次第に増加する高ＦＢＧ値を記録するビヒクル処置対照群に比較して、全３つの処置動物群は減少したＦＢＧ値を有することもまた予想されている。化合物Ａまたは化合物Ｂのどちらかで処置された動物は、未修飾ガストリンを用いて処置した動物に比較していっそう低いＦＢＧ値ならびに上昇した膵インスリンレベルを有する可能性がある。
【０２７９】
本発明は、本明細書に記載した特定の実施形態による範囲内に限定するべきではないが、それは、そのような実施形態は本発明の１つの態様の単独の例示としてのみ意図されており、任意の機能的に同等の実施形態は本発明の範囲内に含まれるためである。実際に、本明細書に示して記載した修飾ならびに本発明の様々な修飾は、上述した説明および添付の図面から当業者には明白になるであろう。そのような修飾は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図されている。
【０２８０】
本明細書で言及するすべての刊行物、特許および特許出願は、各個別刊行物、特許または特許出願が詳細かつ個別にその全体が参照して組み込まれると指示されているのと同程度に参照してその全体が本明細書に組み込まれる。本明細書における参考文献についての言及は、そのような参考文献を本発明の先行技術として利用できるという是認ではない。
【０２８１】
【表１−１】
2007519642.tif 000020
【０２８２】
【表１−２】
2007519642.tif 000021
【０２８３】
【化１８】
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【０２８４】
【化１９】
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【０２８５】
【化２０】
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【０２８６】
【化２１】
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【図面の簡単な説明】
【０２８７】
【図１】急性糖尿病性ＮＯＤマウスにおける空腹時血糖値へＧＬＰ−１アゴニストおよびガストリン化合物（ＩＮＴ−２）を用いる膵島細胞新生療法が及ぼす作用を示したグラフである。この図は、ＧＬＰ−１（３００μｇ／ｋｇ）およびガストリン（３μｇ／ｋｇ）の併用療法がＮＯＤマウスにおいて高血糖症を逆転させて死亡を防止することを例示している。
【図２】ＧＬＰ−１（３００μｇ／ｋｇ）およびガストリン（３μｇ／ｋｇ）の組み合わせを用いて治療した急性糖尿病性ＮＯＤマウスにおける個々の空腹時血糖値を示したグラフである。
【図３】ＧＬＰ−１およびガストリンの併用療法はＮＯＤマウスモデルにおいて膵インスリンレベルを回復させる。
【図４】膵インスリン含量と空腹時血糖値との相関を示しているグラフである。
【図５】ビヒクルおよびＧＬＰ−１およびガストリンを用いて治療された急性糖尿病性ＮＯＤマウスにおけるインスリン染色細胞を示した図である。
【図６】ビヒクルおよびＧＬＰ−１およびガストリンを用いて治療されたＮＯＤマウスにおける膵管からの膵島細胞の染色を示した図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
2007519642.tif 000031
【配列表】
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【国際調査報告】
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