(57)【要約】  ＭＩＦ活性に関連する病的状態の治療を含む、様々な疾患の治療において有用性を有する、ナフチリジン骨格を有するＭＩＦの阻害剤が提供される。ＭＩＦ阻害剤は、立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩を含む、以下の構造（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）を有し、式中、ｎ，Ｒ，Ｒ１，Ｒ２，Ｘ，ＹおよびＺは明細書中で定義される通りである。薬剤として許容される担体と組み合わせてＭＩＦ阻害剤を含む組成物、および、その使用方法も提供される。2007503388.tif 000292
2007503388.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式からなる群より選択される構造を有するマクロファージ遊走阻止因子を阻害する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化１】
2007503388.tif 000213
（式中、
Ｒは、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環，置換複素環，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｒ１は、−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＳＯ２ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５および−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒからなる群より選択され；
Ｒ２は、−ＣＨ２Ｒ３，−ＮＲ４Ｒ５，−ＯＲ３および−Ｒ３からなる群より選択され；
Ｒ３は、それぞれ独立に、アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択され；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択されるか、あるいは、Ｒ４およびＲ５は、一緒になって、複素環または置換複素環を含み；
Ｘは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｙは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｚは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ａｒは、アリールおよび置換アリールからなる群より選択され；
ｍは、それぞれ独立に、０，１，２，３または４であり；
ｎは、０，１または２である。）
【請求項２】
以下の構造を有する請求項１に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化２】
2007503388.tif 000214
（式中、
Ｒは、水素，Ｃ１−Ｃ１２アルキル，Ｃ２−Ｃ１２アルケニル，Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル，Ｃ６−Ｃ１２アリール，Ｃ７−Ｃ１２アリールアルキル，Ｃ７−Ｃ１２アルキルアリール，Ｃ２−Ｃ１２アシルアルキル，Ｃ３−Ｃ１２複素環アルキル，Ｃ３−Ｃ１２アルキル複素環およびＣ２−Ｃ１２複素環からなる群より選択され、Ｒは、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＳＯ２ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ３Ｒ３からなる群より選択される一個以上の置換基で置換され；
Ｒ１は、−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＳＯ２ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ３Ｒ３からなる群より選択され；
Ｒ２は、−ＮＲ４Ｒ５，−ＯＲ３および−Ｒ３からなる群より選択され；
Ｒ３は、それぞれ独立に、Ｃ１−Ｃ１２アルキル，Ｃ２−Ｃ１２アルケニル，Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル，Ｃ６−Ｃ１２アリール，Ｃ７−Ｃ１２アリールアルキル，Ｃ７−Ｃ１２アルキルアリール，Ｃ２−Ｃ１２アシルアルキル，Ｃ３−Ｃ１２複素環アルキル，Ｃ３−Ｃ１２アルキル複素環およびＣ２−Ｃ１２複素環からなる群より選択され、Ｒ３は、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，Ｃ１−Ｃ１２アルコキシおよびＣ１−Ｃ１２アルキルチオからなる群より選択される一個以上の置換基で置換され；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、Ｃ１−Ｃ１２アルキル，Ｃ２−Ｃ１２アルケニル，Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル，Ｃ６−Ｃ１２アリール，Ｃ７−Ｃ１２アリールアルキル，Ｃ７−Ｃ１２アルキルアリール，Ｃ２−Ｃ１２アシルアルキル，Ｃ３−Ｃ１２複素環アルキル，Ｃ３−Ｃ１２アルキル複素環、および、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，Ｃ１−Ｃ１２アルコキシおよびＣ１−Ｃ１２アルキルチオからなる群より選択される一個以上の置換基で置換されたＣ２−Ｃ１２複素環からなる群より選択されるか、あるいは、Ｒ４およびＲ５は、一緒になって、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，Ｃ１−Ｃ１２アルコキシおよびＣ１−Ｃ１２アルキルチオからなる群より選択される一個以上の置換基で置換されたＣ２−Ｃ１２複素環を含み；
Ｘは、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＳＯ２ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−ＯＲ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ３Ｒ３からなる群より選択され；
Ｙは、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＳＯ２ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−ＯＲ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ３Ｒ３からなる群より選択され；
Ｚは、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＳＯ２ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−ＯＲ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ３Ｒ３からなる群より選択され；
Ａｒは、それぞれ独立に、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，Ｃ１−Ｃ１２アルキル，Ｃ１−Ｃ１２アルコキシおよびＣ１−Ｃ１２アルキルチオからなる群より選択される一個以上の置換基で置換されたＣ６−Ｃ１２アリールからなる群より選択され；
ｍは、それぞれ独立に、０，１，２，３または４である。）
【請求項３】
以下の構造を有する請求項１に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化３】
2007503388.tif 000215
（式中、
Ｒは、水素，Ｃ１−Ｃ１２アルキル，Ｃ２−Ｃ１２アルケニル，Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル，Ｃ６−Ｃ１２アリール，Ｃ７−Ｃ１２アリールアルキル，Ｃ７−Ｃ１２アルキルアリール，Ｃ２−Ｃ１２アシルアルキル，Ｃ３−Ｃ１２複素環アルキル，Ｃ３−Ｃ１２アルキル複素環およびＣ２−Ｃ１２複素環からなる群より選択され、Ｒは、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＳＯ２ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ３Ｒ３からなる群より選択される一個以上の置換基で置換され；
Ｒ１は、−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＳＯ２ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ３Ｒ３からなる群より選択され；
Ｒ２は、−ＮＲ４Ｒ５，−ＯＲ３および−Ｒ３からなる群より選択され；
Ｒ３は、それぞれ独立に、Ｃ１−Ｃ１２アルキル，Ｃ２−Ｃ１２アルケニル，Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル，Ｃ６−Ｃ１２アリール，Ｃ７−Ｃ１２アリールアルキル，Ｃ７−Ｃ１２アルキルアリール，Ｃ２−Ｃ１２アシルアルキル，Ｃ３−Ｃ１２複素環アルキル，Ｃ３−Ｃ１２アルキル複素環およびＣ２−Ｃ１２複素環からなる群より選択され、Ｒ３は、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，Ｃ１−Ｃ１２アルコキシおよびＣ１−Ｃ１２アルキルチオからなる群より選択される一個以上の置換基で置換され；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、Ｃ１−Ｃ１２アルキル，Ｃ２−Ｃ１２アルケニル，Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル，Ｃ６−Ｃ１２アリール，Ｃ７−Ｃ１２アリールアルキル，Ｃ７−Ｃ１２アルキルアリール，Ｃ２−Ｃ１２アシルアルキル，Ｃ３−Ｃ１２複素環アルキル，Ｃ３−Ｃ１２アルキル複素環、および、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，Ｃ１−Ｃ１２アルコキシおよびＣ１−Ｃ１２アルキルチオからなる群より選択される一個以上の置換基で置換されたＣ２−Ｃ１２複素環からなる群より選択されるか、あるいは、Ｒ４およびＲ５は、一緒になって、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，Ｃ１−Ｃ１２アルキル，Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ，Ｃ１−Ｃ１２アルキルチオ、および、水素，−Ｆおよび−Ｃｌからなる群より選択される一個以上の置換基で置換されたＣ１−Ｃ１２アルキルからなる群より選択される一個以上の置換基で置換されたＣ２−Ｃ１２複素環を含み；
Ｘは、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，Ｃ１−Ｃ１２アルキル、および、水素，−Ｆおよび−Ｃｌからなる群より選択される一個以上の置換基で置換されたＣ１−Ｃ１２アルキルからなる群より選択され；
Ｙは、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，Ｃ１−Ｃ１２アルキル、および、水素，−Ｆおよび−Ｃｌからなる群より選択される一個以上の置換基で置換されたＣ１−Ｃ１２アルキルからなる群より選択され；
Ｚは、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，Ｃ１−Ｃ１２アルキル、および、水素，−Ｆおよび−Ｃｌからなる群より選択される一個以上の置換基で置換されたＣ１−Ｃ１２アルキルからなる群より選択され；
Ａｒは、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，Ｃ１−Ｃ１２アルキル、および、水素，−Ｆおよび−Ｃｌからなる群より選択される一個以上の置換基で置換されたＣ１−Ｃ１２アルキルからなる群より選択される一個以上の置換基で置換されたＣ６−Ｃ１２アリールからなる群より選択され；
ｍは、それぞれ独立に、０，１，２，３または４である。）
【請求項４】
Ｒ１が−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒを含む請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１が−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ３を含む請求項２に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１が−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３を含む請求項２に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１が−ＣＮを含む請求項２に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ１が−ＮＯ２を含む請求項２に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ１が−ＮＨ２を含む請求項２に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ２が
【化４】
2007503388.tif 000216
を含む請求項２に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ２が
【化５】
2007503388.tif 000217
を含む請求項２に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒが−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒを含む請求項２に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｘが、水素，フッ素および塩素からなる群より選択され；
Ｙが、水素，フッ素および塩素からなる群より選択され；
Ｚが、水素，フッ素および塩素からなる群より選択される請求項２に記載の化合物。
【請求項１４】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化６】
2007503388.tif 000218
【請求項１５】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化７】
2007503388.tif 000219
【請求項１６】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化８】
2007503388.tif 000220
【請求項１７】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化９】
2007503388.tif 000221
【請求項１８】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化１０】
2007503388.tif 000222
【請求項１９】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化１１】
2007503388.tif 000223
【請求項２０】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化１２】
2007503388.tif 000224
【請求項２１】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化１３】
2007503388.tif 000225
【請求項２２】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化１４】
2007503388.tif 000226
【請求項２３】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化１５】
2007503388.tif 000227
【請求項２４】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化１６】
2007503388.tif 000228
【請求項２５】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化１７】
2007503388.tif 000229
【請求項２６】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化１８】
2007503388.tif 000230
【請求項２７】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化１９】
2007503388.tif 000231
【請求項２８】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化２０】
2007503388.tif 000232
【請求項２９】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化２１】
2007503388.tif 000233
【請求項３０】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化２２】
2007503388.tif 000234
【請求項３１】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化２３】
2007503388.tif 000235
【請求項３２】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化２４】
2007503388.tif 000236
【請求項３３】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化２５】
2007503388.tif 000237
【請求項３４】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化２６】
2007503388.tif 000238
【請求項３５】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化２７】
2007503388.tif 000239
【請求項３６】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化２８】
2007503388.tif 000240
【請求項３７】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化２９】
2007503388.tif 000241
【請求項３８】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化３０】
2007503388.tif 000242
【請求項３９】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化３１】
2007503388.tif 000243
【請求項４０】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化３２】
2007503388.tif 000244
【請求項４１】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化３３】
2007503388.tif 000245
【請求項４２】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化３４】
2007503388.tif 000246
【請求項４３】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化３５】
2007503388.tif 000247
【請求項４４】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化３６】
2007503388.tif 000248
【請求項４５】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化３７】
2007503388.tif 000249
【請求項４６】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化３８】
2007503388.tif 000250
【請求項４７】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化３９】
2007503388.tif 000251
【請求項４８】
以下の構造を有する請求項２に記載の化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩。
【化４０】
2007503388.tif 000252
【請求項４９】
薬剤として許容される担体または希釈剤と組み合わせて請求項１に記載の化合物を含む組成物。
【請求項５０】
それを必要としている患者のＭＩＦ活性を下げるための薬剤の調製における、以下の式からなる群より選択される構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩の使用。
【化４１】
2007503388.tif 000253
（式中、
Ｒは、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環，置換複素環，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｒ１は、−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＳＯ２ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５および−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒからなる群より選択され；
Ｒ２は、−ＣＨ２Ｒ３，−ＮＲ４Ｒ５，−ＯＲ３および−Ｒ３からなる群より選択され；
Ｒ３は、それぞれ独立に、アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択され；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択されるか、あるいは、Ｒ４およびＲ５は、一緒になって、複素環または置換複素環を含み；
Ｘは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｙは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｚは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ａｒは、アリールおよび置換アリールからなる群より選択され；
ｍは、それぞれ独立に、０，１，２，３または４であり；
ｎは、０，１または２である。）
【請求項５１】
温血動物における炎症を治療するための薬剤の調製における請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項５２】
温血動物における敗血症性ショックを治療するための薬剤の調製における請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項５３】
温血動物における関節炎を治療するための薬剤の調製における請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項５４】
温血動物における癌を治療するための薬剤の調製における請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項５５】
温血動物における急性呼吸困難症候群を治療するための薬剤の調製における請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項５６】
温血動物における炎症性疾患を治療するための薬剤の調製における請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項５７】
前記炎症性疾患が、慢性関節リウマチ、骨関節症、炎症性腸疾患および喘息からなる群より選択される請求項５６に記載の使用。
【請求項５８】
温血動物における心疾患を治療するための薬剤の調製における請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項５９】
前記心疾患が、心機能不全、心筋梗塞、鬱血性心不全、再狭窄およびアテローム性動脈硬化症からなる群より選択される請求項５８に記載の使用。
【請求項６０】
温血動物における自己免疫疾患を治療するための薬剤の調製における請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項６１】
前記自己免疫疾患が、糖尿病、喘息および多発性硬化症からなる群より選択される請求項６０に記載の使用。
【請求項６２】
温血動物における免疫反応を抑制するための薬剤の調製における請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項６３】
温血動物における血管新生を減少させるための薬剤の調製における請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項６４】
温血動物における過剰なグルココルチコイド濃度に関連する疾患を治療するための薬剤の調製における請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項６５】
前記疾患が、クッシング病である請求項６３に記載の使用。
【請求項６６】
ＰＯＣｌ３と式（３）：
【化４２】
2007503388.tif 000254
（式中、
Ｒは、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環，置換複素環，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｒ１は、−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＳＯ２ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５および−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒからなる群より選択され；
Ｒ３は、それぞれ独立に、アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択され；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択されるか、あるいは、Ｒ４およびＲ５は、一緒になって、複素環または置換複素環を含み；
Ｘは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｙは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｚは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ａｒは、アリールおよび置換アリールからなる群より選択され；
ｍは、それぞれ独立に、０，１，２，３または４である。）
の化合物とを反応させ、式（４）：
【化４３】
2007503388.tif 000255
の化合物を生成する工程と、
式（４）の化合物とピペラジンとを反応させ、式（５）：
【化４４】
2007503388.tif 000256
の化合物を生成する工程と、
式（５）の化合物と、式Ｒ２−Ｃ（＝Ｏ）Ｃｌ（式中、Ｒ２は、−ＣＨ２Ｒ３，−ＮＲ４Ｒ５，−ＯＲ３および−Ｒ３からなる群より選択される。）を有する化合物とを反応させ、式（６）：
【化４５】
2007503388.tif 000257
の化合物を生成する工程と
を含み、
式（６）の化合物は、ＭＩＦ阻害剤としての使用に適している
化合物の調製方法。
【請求項６７】
Ｒ１が−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒを含む請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
Ｒ１が−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ３を含む請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
Ｒ１が−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３を含む請求項６６に記載の方法。
【請求項７０】
Ｒ１が−ＣＮを含む請求項６６に記載の方法。
【請求項７１】
Ｒ１が−ＮＯ２を含む請求項６６に記載の方法。
【請求項７２】
Ｒ１が−ＮＨ２を含む請求項６６に記載の方法。
【請求項７３】
Ｒ２が
【化４６】
2007503388.tif 000258
を含む請求項６６に記載の方法。
【請求項７４】
Ｒ２が
【化４７】
2007503388.tif 000259
を含む請求項６６に記載の方法。
【請求項７５】
Ｒが−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒを含む請求項６６に記載の方法。
【請求項７６】
Ｘが、水素，フッ素および塩素からなる群より選択され；
Ｙが、水素，フッ素および塩素からなる群より選択され；
Ｚが、水素，フッ素および塩素からなる群より選択される請求項６６に記載の方法。
【請求項７７】
式（１３）：
【化４８】
2007503388.tif 000260
（式中、
Ｒは、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環，置換複素環，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択されるか、あるいは、Ｒ４およびＲ５は、一緒になって、複素環または置換複素環を含み；
Ｘは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｙは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｚは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｒ３は、それぞれ独立に、アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択され；
Ａｒは、アリールおよび置換アリールからなる群より選択され；
ｍは、それぞれ独立に、０，１，２，３または４である。）
の化合物とシクロヘキシルアミンとを反応させ、式（１４）：
【化４９】
2007503388.tif 000261
の化合物を生成する工程と、
式（１４）の化合物とＰＯＣｌ３とを反応させ、式（１５）：
【化５０】
2007503388.tif 000262
の化合物を生成する工程と、
式（１５）の化合物とピペラジンとを反応させ、式（１６）：
【化５１】
2007503388.tif 000263
の化合物を生成する工程と、
式（１６）の化合物と、式Ｒ２−Ｃ（＝Ｏ）Ｃｌ（式中、Ｒ２は、−ＣＨ２Ｒ３，−ＮＲ４Ｒ５，−ＯＲ３および−Ｒ３からなる群より選択される。）を有する化合物とを反応させ、式（１７）：
【化５２】
2007503388.tif 000264
の化合物を生成する工程と
を含み、
式（１７）の化合物は、ＭＩＦ阻害剤としての使用に適している
化合物の調製方法。
【請求項７８】
Ｒ２が
【化５３】
2007503388.tif 000265
を含む請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
Ｒ２が
【化５４】
2007503388.tif 000266
を含む請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】
Ｒが−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒを含む請求項７７に記載の方法。
【請求項８１】
Ｘが、水素，フッ素および塩素からなる群より選択され；
Ｙが、水素，フッ素および塩素からなる群より選択され；
Ｚが、水素，フッ素および塩素からなる群より選択される請求項７７に記載の方法。
【請求項８２】
式（２３）：
【化５５】
2007503388.tif 000267
（式中、
Ｒ１は、−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＳＯ２ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５および−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒからなる群より選択され；
Ｒ３は、それぞれ独立に、アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択され；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択されるか、あるいは、Ｒ４およびＲ５は、一緒になって、複素環または置換複素環を含み；
Ｘは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｙは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｚは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ａｒは、それぞれ独立に、アリールおよび置換アリールからなる群より選択され；
ｍは、それぞれ独立に、０，１，２，３または４である。）
の化合物とＰＯＣｌ３およびトリフルオロ酢酸とを反応させ、式（２４）：
【化５６】
2007503388.tif 000268
の化合物を生成する工程と、
式（２４）の化合物と式：
【化５７】
2007503388.tif 000269
（式中、Ｒ２は、−ＣＨ２Ｒ３，−ＮＲ４Ｒ５，−ＯＲ３および−Ｒ３からなる群より選択される。）
の化合物とを反応させ、式（２５）：
【化５８】
2007503388.tif 000270
の化合物を生成する工程と、
式（２５）の化合物と、式ＲＸ’（式中、Ｘ’はハロゲンを含み、Ｒは、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環，置換複素環，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５からなる群より選択される。）を有する化合物とを反応させ、式（２６）：
【化５９】
2007503388.tif 000271
の化合物を生成する工程と
を含み、
式（２６）の化合物は、ＭＩＦ阻害剤としての使用に適している
化合物の調製方法。
【請求項８３】
Ｒ１が−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒを含む請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
Ｒ１が−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ３を含む請求項８２に記載の方法。
【請求項８５】
Ｒ１が−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３を含む請求項８２に記載の方法。
【請求項８６】
Ｒ１が−ＣＮを含む請求項８２に記載の方法。
【請求項８７】
Ｒ１が−ＮＯ２を含む請求項８２に記載の方法。
【請求項８８】
Ｒ１が−ＮＨ２を含む請求項８２に記載の方法。
【請求項８９】
Ｒ２が
【化６０】
2007503388.tif 000272
を含む請求項８２に記載の方法。
【請求項９０】
Ｒ２が
【化６１】
2007503388.tif 000273
を含む請求項８２に記載の方法。
【請求項９１】
Ｒが−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒを含む請求項８２に記載の方法。
【請求項９２】
Ｘが、水素，フッ素および塩素からなる群より選択され；
Ｙが、水素，フッ素および塩素からなる群より選択され；
Ｚが、水素，フッ素および塩素からなる群より選択される請求項８２に記載の方法。
【請求項９３】
Ｒがベンジルを含む請求項８２に記載の方法。
【請求項９４】
式（３ａ）：
【化６２】
2007503388.tif 000274
の化合物とＰＯＣｌ３とを反応させ、式（４ａ）：
【化６３】
2007503388.tif 000275
の化合物を生成する工程と、
式（４ａ）の化合物とピペラジンとを反応させ、式（５ａ）：
【化６４】
2007503388.tif 000276
の化合物を生成する工程と、
式（５ａ）の化合物と、式Ｒ２−Ｃ（＝Ｏ）Ｃｌ（式中、Ｒ２は、−ＣＨ２Ｒ３，−ＮＲ４Ｒ５，−ＯＲ３および−Ｒ３からなる群より選択され、Ｒ３は、アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択され、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択されるか、あるいは、Ｒ４およびＲ５は、一緒になって、複素環または置換複素環を含む。）を有する化合物とを反応させ、式（６ａ）：
【化６５】
2007503388.tif 000277
の化合物を生成する工程と
を含み、
式（６ａ）の化合物は、ＭＩＦ阻害剤としての使用に適している
化合物の調製方法。
【請求項９５】
Ｒ２が
【化６６】
2007503388.tif 000278
を含む請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
式（１３ａ）：
【化６７】
2007503388.tif 000279
の化合物とシクロヘキシルアミンとを反応させ、式（１４ａ）：
【化６８】
2007503388.tif 000280
の化合物を生成する工程と、
式（１４ａ）の化合物とＰＯＣｌ３とを反応させ、式（１５ａ）：
【化６９】
2007503388.tif 000281
の化合物を生成する工程と、
式（１５ａ）の化合物とピペラジンとを反応させ、式（１６ａ）：
【化７０】
2007503388.tif 000282
の化合物を生成する工程と、
式（１６ａ）の化合物と、式Ｒ２−Ｃ（＝Ｏ）Ｃｌ（式中、Ｒ２は、−ＣＨ２Ｒ３，−ＮＲ４Ｒ５，−ＯＲ３および−Ｒ３からなる群より選択され、Ｒ３は、アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択され、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択されるか、あるいは、Ｒ４およびＲ５は、一緒になって、複素環または置換複素環を含む。）を有する化合物とを反応させ、式（１７ａ）：
【化７１】
2007503388.tif 000283
の化合物を生成する工程と
を含み、
式（１７ａ）の化合物は、ＭＩＦ阻害剤としての使用に適している
化合物の調製方法。
【請求項９７】
Ｒ２が
【化７２】
2007503388.tif 000284
を含む請求項９６に記載の方法。
【請求項９８】
式（２３ａ）：
【化７３】
2007503388.tif 000285
の化合物とＰＯＣｌ３およびトリフルオロ酢酸とを反応させ、式（２４ａ）：
【化７４】
2007503388.tif 000286
の化合物を生成する工程と、
式（２４ａ）の化合物と式：
【化７５】
2007503388.tif 000287
（式中、Ｒ２は、−ＣＨ２Ｒ３，−ＮＲ４Ｒ５，−ＯＲ３および−Ｒ３からなる群より選択され、Ｒ３は、アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択され、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択されるか、あるいは、Ｒ４およびＲ５は、一緒になって、複素環または置換複素環を含む。）
の化合物とを反応させ、式（２５ａ）：
【化７６】
2007503388.tif 000288
の化合物を生成する工程と、
式（２５ａ）の化合物と、式ＲＸ（式中、Ｘはハロゲンを含み、Ｒは、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環，置換複素環，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され、Ａｒは、アリールおよび置換アリールからなる群より選択され、ｍは、それぞれ独立に、０，１，２，３または４である。）を有する化合物とを反応させ、式（２６ａ）：
【化７７】
2007503388.tif 000289
の化合物を生成する工程と
を含み、
式（２６ａ）の化合物は、ＭＩＦ阻害剤としての使用に適している
化合物の調製方法。
【請求項９９】
Ｒ２が
【化７８】
2007503388.tif 000290
を含む請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
Ｒ２が
【化７９】
2007503388.tif 000291
を含む請求項９８に記載の方法。
【請求項１０１】
Ｒが−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒを含む請求項９８に記載の方法。
【請求項１０２】
Ｒがベンジルを含む請求項９８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）活性に関連する病的状態の治療を含む、様々な疾患の治療において有用性を有する、ナフチリジン骨格を有するＭＩＦの阻害剤を提供する。
【背景技術】
【０００２】
マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）であるリンフォカインは、宿主防衛におけるマクロファージの機能のメディエーターと確認され、その発現は遅延型過敏症、免疫調整、炎症および細胞性免疫と関係がある。ＭｅｔｚおよびＢｕｃａｌａ、Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、第６６巻、第１９７〜２２３頁、１９９７年を参照のこと。サイズが１２〜１３キロダルトン（ｋＤａ）であるマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）は、いくつかの哺乳類および鳥類の種において確認された。例えば、Ｇａｌａｔら、Ｆｅｄ．Ｅｕｒ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、第３１９巻、第２３３〜２３６頁、１９９３年；Ｗｉｓｔｏｗら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、第９０巻、第１２７２〜１２７５頁、１９９３年；Ｗｅｉｓｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、第８６巻、第７５２２〜７５２６頁、１９８９年；Ｂｅｒｎｈａｇｅｎら、Ｎａｔｕｒｅ、第３６５巻、第７５６〜７５９頁、１９９３年；Ｂｌｏｃｋｉら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、第２巻、第２０９５〜２１０２頁、１９９３年；およびＢｌｏｃｋｉら、Ｎａｔｕｒｅ、第３６０巻、第２６９〜２７０頁、１９９２年を参照のこと。ＭＩＦは最初にマクロファージの遊走を阻止することができるものと特徴付けられたが、ＭＩＦはまた、インターフェロンγによってもたらされるものと異なる機構により、マクロファージ接着をもたらし；マクロファージにインターロイキン１β、インターロイキン６および腫瘍壊死因子αを発現させ；ＨＬＡ−ＤＲをアップレギュレートし；酸化窒素シンターゼおよび酸化窒素の濃度を増加させ；マクロファージを活性化してドノヴァンリーシュマニア腫瘍細胞を殺滅し、マイコプラズマ−アビウムの成長を阻害する。免疫回避分子としての潜在的な役割に加えて、ＭＩＦは、不完全フロイントまたはリポソーム中、ウシ血清アルブミンまたはＨＩＶ  ｇｐ１２０と共に投与したとき、免疫アジュバントとして作用し、完全フロイントに匹敵する抗原誘発性増殖を引き出すことができる。また、ＭＩＦはグルココルチコイド対抗制御因子および血管新生因子として評されてきた。グルココルチコイドによって誘導され、阻害されない数少ないタンパク質の１つとして、ＭＩＦはグルココルチコイドの免疫抑制作用を弱めるのに役立つ。それ自体、ＭＩＦはグルココルチコイドの免疫抑制作用を調節する強力な要素と見られている。したがって、その活性／遺伝子発現が過剰な外因性グルココルチコイドの投与によって過剰に誘発される場合（例えば、炎症、免疫性などを抑制することが臨床的に必要な場合）、ＭＩＦ自体が炎症／免疫反応を激化させるので、著しい毒性がある。Ｂｕｃｃａｌａら、Ａｎｎ．Ｒｅｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、第３３巻、第２４３〜２５２頁、１９９８年を参照のこと。
【０００３】
ＭＩＦはまた、特異的受容体を通して細胞に作用し、これは次にｅｒｋリン酸化およびＭＡＰキナーゼ、ならびにマトリックスメタロプロテアーゼ、ｃ−ｊｕｎ、ｃ−ｆｏｓおよびＩＬ−１  ｍＲＮＡのアップレギュレーションを含む細胞内カスケードを活性化すると考えられている（Ｏｎｏｄｅｒａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、第２７５巻、第４４４〜４５０頁、２０００年を参照）が、一方で、ＭＩＦは、適切な基質（例えば、ドーパクロム）を互変異性化する能力で例示されるような内因性酵素活性も有する。さらに、この酵素活性が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで、ＭＩＦに対する生物学的反応およびこのタンパク質の活性を媒介するかどうかは依然として不明である。ＭＩＦの部位特異的突然変異誘発性が完全な固有活性を有する突然変異体を発生させたが、しかし酵素活性は有さない（Ｈｅｒｍａｎｏｗｓｋｉ−Ｖｏｓａｔｋａら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第３８巻、第１２８４１〜１２８４９頁、１９９９年）。Ｓｗｏｐｅらは、ＭＩＦについてサイトカイン活性と触媒部位との直接的な関連性を記載した（Ｓｗｏｐｅら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、第１７（１３）巻、第３５３４〜３５４１頁、１９９８年）。したがって、ドーパクロムトウトメラーゼのみの阻害によるＭＩＦ活性の阻害剤を特定する戦略によって、臨床的価値のあるＭＩＦ活性の阻害剤が得られるかどうかは不明である。高親和性受容体は現在のところ知られていないので、その細胞表面受容体に対するＭＩＦの阻害を評価する能力も限られている。
【０００４】
ＭＩＦ阻害剤の開発への関心は、ＭＩＦが、感染部位にマクロファージを集めるそのサイトカイン活性、および細胞媒介免疫性について知られているという知見に由来している。さらに、ＭＩＦは、マクロファージ接着、食作用および殺腫瘍活性のメディエーターとして知られている。Ｗｅｉｓｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、第１４７巻、第２００６〜２０１１頁、１９９１年を参照のこと。したがって、ＭＩＦの阻害は、さもなければマクロファージが炎症部位に運ぶことができるサイトカイン、成長因子、ケモカインおよびリンフォカインの間接的な阻害をもたらす。ヒトＭＩＦ  ｃＤＮＡは、Ｔ細胞系から単離され、約１２．４ｋＤａの分子量を有し、活性形としてのホモトリマーを形成する１１５アミノ酸残基を有するタンパク質をコードする（Ｗｅｉｓｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、第８６巻、第７５２２〜７５２６頁、１９８９年）。ＭＩＦは、初めは活性化Ｔ細胞中に認められたが、現在、肝臓、肺、目レンズ、卵巣、脳、心臓、脾臓、腎臓、筋肉などの様々な組織において報告されている。Ｔａｋａｈａｓｈｉら、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、第４３（１）巻、第６１〜６７頁、１９９９年を参照のこと。ＭＩＦの他の特徴は、ＥＲ／ゴルジ経路を経る直接的な古典的な分泌に対する伝統的リーダー配列の欠如（すなわち、リーダーレスタンパク質）である。
【０００５】
ＭＩＦのサイトカイン活性を中和することによって作用するＭＩＦ阻害剤（およびＭＩＦ阻害剤を特定する方法）は、他の種類の阻害剤に対して大きな利点がある。例えば、トウトメラーゼ活性のみと炎症反応との関連性は議論の余地がある。さらに、細胞内で作用する阻害剤は、関連する標的または標的内細胞の活性に対するそれらの作用によって、しばしば有毒である。リガンド受容体複合体の小分子阻害剤は、最適化し、開発することはおろか、同定することすら困難である。ＭＩＦのようなサイトカインの理想的な阻害剤は、ＭＩＦが細胞から放出されるときに効果的に中和されるように、ＭＩＦ自体を変化させるものである。この活性を有する小分子は、タンパク質と薬物としての化学物質との基本的な差異のため、抗体より優れている。ＭｅｔｚおよびＢｕｃａｌａ（前出）；ＳｗｏｐｅおよびＬｏｌｉｓ、Ｒｅｖ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、第１３９巻、第１〜３２頁、１９９９年；Ｗａｅｂｅｒら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｍ．Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．、第１５（１）巻、第４７〜５４頁、１９９９年；Ｎｉｓｈｉｈｉｒａ、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．、第２（１）巻、第１７〜２８頁、１９９８年；Ｂｕｃａｌａ、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、第８４０巻、第７４〜８２頁、１９９８年；Ｂｅｒｎｈａｇｅｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．、第７６（３〜４）巻、第１５１〜１６１頁、１９９８年；ＤｏｎｎｅｌｌｙおよびＢｕｃａｌａ、Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．Ｔｏｄａｙ、第３（１１）巻、第５０２〜５０７頁、１９９７年；Ｂｕｃａｌａら、ＦＡＳＥＢ  Ｊ．、第１０（１４）巻、第１６０７〜１６１３頁、１９９６年を参照のこと。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ＭＩＦは様々な組織において確認され、多くの病的事象に関連づけられたので、当技術分野においてＭＩＦの阻害剤を特定する必要がある。そのような阻害剤を含む薬剤組成物、および、例えば免疫関連疾患、または腫瘍関連血管新生のような他のＭＩＦ誘発性病的事象を治療するためのその使用に関する方法も必要である。好ましい実施形態は、これらの必要を満たし、他の利点も提供することができる。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
好ましい実施形態においては、以下の一般化学構造（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）および（Ｉｄ）を有するＭＩＦの阻害剤が提供される。
【０００８】
【化１】
2007503388.tif 000003
その立体異性体、プロドラッグ、および薬剤として許容される塩を含み、式中、ｎ、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ、ＹおよびＺは下記で定義する通りである。
【０００９】
好ましい実施形態のＭＩＦ阻害剤は、広範囲の治療用途において有用であり、様々な免疫関連反応、腫瘍成長（例えば、前立腺癌、乳癌、肺癌、肝臓癌、皮膚癌、脳腫瘍、骨癌、結腸癌、精巣癌など）、糸球体腎炎、炎症、マラリア性貧血、敗血症性ショック、敗血症、腫瘍関連血管新生、硝子体網膜症、乾癬、対宿主性移植片病（組織拒絶反応）、アトピー性皮膚炎、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、炎症性肺疾患、中耳炎、クローン病、急性呼吸困難症候群、遅延型過敏症、移植片拒絶反応、ＣＮＳ疾患の免疫媒介性および炎症性要素（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症など）、筋ジストロフィー、止血疾患（例えば、凝固障害、静脈閉塞疾患など）、アレルギー性神経炎、肉芽腫、糖尿病、対宿主性移植片病、慢性腎障害、脱毛症（抜け毛）、急性膵炎、関節疾患、心機能不全（例えば、収縮期心不全、拡張期心不全）、心筋梗塞、鬱血性心不全、心血管疾患（例えば、再狭窄、アテローム性動脈硬化症）、関節疾患、骨関節症、腹膜炎、腎症などを含むが、これらに限定されない様々な疾患、病気または病的状態を治療するために用いることができる。そのような方法は、好ましい実施形態により提供されるようなＭＩＦの阻害剤１種以上を、好ましくは薬剤組成物の形で、それを必要とする動物に有効量投与することを含む。好ましい実施形態のＭＩＦ阻害剤１種以上を、薬剤として許容される担体および／または希釈剤と組み合わせて含む薬剤組成物が提供される。
【００１０】
従って、第一の実施形態においては、以下の式からなる群より選択される構造を有するマクロファージ遊走阻止因子を阻害する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００１１】
【化２】
2007503388.tif 000004
式中、
Ｒは、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環，置換複素環，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｒ１は、−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＳＯ２ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５および−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒからなる群より選択され；
Ｒ２は、−ＣＨ２Ｒ３，−ＮＲ４Ｒ５，−ＯＲ３および−Ｒ３からなる群より選択され；
Ｒ３は、それぞれ独立に、アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択され；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択されるか、あるいは、Ｒ４およびＲ５は、一緒になって、複素環または置換複素環を含み；
Ｘは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｙは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｚは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ａｒは、アリールおよび置換アリールからなる群より選択され；
ｍは、それぞれ独立に、０，１，２，３または４であり；
ｎは、０，１または２である。
【００１２】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩である。
【００１３】
【化３】
2007503388.tif 000005
式中、
Ｒは、水素，Ｃ１−Ｃ１２アルキル，Ｃ２−Ｃ１２アルケニル，Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル，Ｃ６−Ｃ１２アリール，Ｃ７−Ｃ１２アリールアルキル，Ｃ７−Ｃ１２アルキルアリール，Ｃ２−Ｃ１２アシルアルキル，Ｃ３−Ｃ１２複素環アルキル，Ｃ３−Ｃ１２アルキル複素環およびＣ２−Ｃ１２複素環からなる群より選択され、Ｒは、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＳＯ２ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ３Ｒ３からなる群より選択される一個以上の置換基で置換され；
Ｒ１は、−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＳＯ２ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ３Ｒ３からなる群より選択され；
Ｒ２は、−ＮＲ４Ｒ５，−ＯＲ３および−Ｒ３からなる群より選択され；
Ｒ３は、それぞれ独立に、Ｃ１−Ｃ１２アルキル，Ｃ２−Ｃ１２アルケニル，Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル，Ｃ６−Ｃ１２アリール，Ｃ７−Ｃ１２アリールアルキル，Ｃ７−Ｃ１２アルキルアリール，Ｃ２−Ｃ１２アシルアルキル，Ｃ３−Ｃ１２複素環アルキル，Ｃ３−Ｃ１２アルキル複素環およびＣ２−Ｃ１２複素環からなる群より選択され、Ｒ３は、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，Ｃ１−Ｃ１２アルコキシおよびＣ１−Ｃ１２アルキルチオからなる群より選択される一個以上の置換基で置換され；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、Ｃ１−Ｃ１２アルキル，Ｃ２−Ｃ１２アルケニル，Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル，Ｃ６−Ｃ１２アリール，Ｃ７−Ｃ１２アリールアルキル，Ｃ７−Ｃ１２アルキルアリール，Ｃ２−Ｃ１２アシルアルキル，Ｃ３−Ｃ１２複素環アルキル，Ｃ３−Ｃ１２アルキル複素環、および、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，Ｃ１−Ｃ１２アルコキシおよびＣ１−Ｃ１２アルキルチオからなる群より選択される一個以上の置換基で置換されたＣ２−Ｃ１２複素環からなる群より選択されるか、あるいは、Ｒ４およびＲ５は、一緒になって、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，Ｃ１−Ｃ１２アルコキシおよびＣ１−Ｃ１２アルキルチオからなる群より選択される一個以上の置換基で置換されたＣ２−Ｃ１２複素環を含み；
Ｘは、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＳＯ２ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−ＯＲ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ３Ｒ３からなる群より選択され；
Ｙは、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＳＯ２ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−ＯＲ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ３Ｒ３からなる群より選択され；
Ｚは、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＳＯ２ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−ＯＲ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ３Ｒ３からなる群より選択され；
Ａｒは、それぞれ独立に、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，Ｃ１−Ｃ１２アルキル，Ｃ１−Ｃ１２アルコキシおよびＣ１−Ｃ１２アルキルチオからなる群より選択される一個以上の置換基で置換されたＣ６−Ｃ１２アリールからなる群より選択され；
ｍは、それぞれ独立に、０，１，２，３または４である。
【００１４】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩である。
【００１５】
【化４】
2007503388.tif 000006
式中、
Ｒは、水素，Ｃ１−Ｃ１２アルキル，Ｃ２−Ｃ１２アルケニル，Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル，Ｃ６−Ｃ１２アリール，Ｃ７−Ｃ１２アリールアルキル，Ｃ７−Ｃ１２アルキルアリール，Ｃ２−Ｃ１２アシルアルキル，Ｃ３−Ｃ１２複素環アルキル，Ｃ３−Ｃ１２アルキル複素環およびＣ２−Ｃ１２複素環からなる群より選択され、Ｒは、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＳＯ２ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ３Ｒ３からなる群より選択される一個以上の置換基で置換され；
Ｒ１は、−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＳＯ２ＮＲ３Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ３Ｒ３からなる群より選択され；
Ｒ２は、−ＮＲ４Ｒ５，−ＯＲ３および−Ｒ３からなる群より選択され；
Ｒ３は、それぞれ独立に、Ｃ１−Ｃ１２アルキル，Ｃ２−Ｃ１２アルケニル，Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル，Ｃ６−Ｃ１２アリール，Ｃ７−Ｃ１２アリールアルキル，Ｃ７−Ｃ１２アルキルアリール，Ｃ２−Ｃ１２アシルアルキル，Ｃ３−Ｃ１２複素環アルキル，Ｃ３−Ｃ１２アルキル複素環およびＣ２−Ｃ１２複素環からなる群より選択され、Ｒ３は、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，Ｃ１−Ｃ１２アルコキシおよびＣ１−Ｃ１２アルキルチオからなる群より選択される一個以上の置換基で置換され；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、Ｃ１−Ｃ１２アルキル，Ｃ２−Ｃ１２アルケニル，Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル，Ｃ６−Ｃ１２アリール，Ｃ７−Ｃ１２アリールアルキル，Ｃ７−Ｃ１２アルキルアリール，Ｃ２−Ｃ１２アシルアルキル，Ｃ３−Ｃ１２複素環アルキル，Ｃ３−Ｃ１２アルキル複素環、および、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，Ｃ１−Ｃ１２アルコキシおよびＣ１−Ｃ１２アルキルチオからなる群より選択される一個以上の置換基で置換されたＣ２−Ｃ１２複素環からなる群より選択されるか、あるいは、Ｒ４およびＲ５は、一緒になって、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，Ｃ１−Ｃ１２アルキル，Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ，Ｃ１−Ｃ１２アルキルチオ、および、水素，−Ｆおよび−Ｃｌからなる群より選択される一個以上の置換基で置換されたＣ１−Ｃ１２アルキルからなる群より選択される一個以上の置換基で置換されたＣ２−Ｃ１２複素環を含み；
Ｘは、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，Ｃ１−Ｃ１２アルキル、および、水素，−Ｆおよび−Ｃｌからなる群より選択される一個以上の置換基で置換されたＣ１−Ｃ１２アルキルからなる群より選択され；
Ｙは、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，Ｃ１−Ｃ１２アルキル、および、水素，−Ｆおよび−Ｃｌからなる群より選択される一個以上の置換基で置換されたＣ１−Ｃ１２アルキルからなる群より選択され；
Ｚは、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，Ｃ１−Ｃ１２アルキル、および、水素，−Ｆおよび−Ｃｌからなる群より選択される一個以上の置換基で置換されたＣ１−Ｃ１２アルキルからなる群より選択され；
Ａｒは、水素，−Ｆ，−Ｃｌ，Ｃ１−Ｃ１２アルキル、および、水素，−Ｆおよび−Ｃｌからなる群より選択される一個以上の置換基で置換されたＣ１−Ｃ１２アルキルからなる群より選択される一個以上の置換基で置換されたＣ６−Ｃ１２アリールからなる群より選択され；
ｍは、それぞれ独立に、０，１，２，３または４である。
【００１６】
第一の実施形態の一態様では、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒを含む。
【００１７】
第一の実施形態の一態様では、Ｒ１が−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ３を含む。
【００１８】
第一の実施形態の一態様では、Ｒ１が−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３を含む。
【００１９】
第一の実施形態の一態様では、Ｒ１が−ＣＮを含む。
【００２０】
第一の実施形態の一態様では、Ｒ１が−ＮＯ２を含む。
【００２１】
第一の実施形態の一態様では、Ｒ１が−ＮＨ２を含む。
【００２２】
第一の実施形態の一態様では、Ｒ２が
【００２３】
【化５】
2007503388.tif 000007
を含む。
【００２４】
第一の実施形態の一態様では、Ｒ２が
【００２５】
【化６】
2007503388.tif 000008
を含む。
【００２６】
第一の実施形態の一態様では、Ｒが−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒを含む。
【００２７】
第一の実施形態の一態様では、Ｘが、水素，フッ素および塩素からなる群より選択され；Ｙが、水素，フッ素および塩素からなる群より選択され；Ｚが、水素，フッ素および塩素からなる群より選択される。
【００２８】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００２９】
【化７】
2007503388.tif 000009
【００３０】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００３１】
【化８】
2007503388.tif 000010
【００３２】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００３３】
【化９】
2007503388.tif 000011
【００３４】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００３５】
【化１０】
2007503388.tif 000012
【００３６】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００３７】
【化１１】
2007503388.tif 000013
【００３８】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００３９】
【化１２】
2007503388.tif 000014
【００４０】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００４１】
【化１３】
2007503388.tif 000015
【００４２】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００４３】
【化１４】
2007503388.tif 000016
【００４４】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００４５】
【化１５】
2007503388.tif 000017
【００４６】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００４７】
【化１６】
2007503388.tif 000018
【００４８】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００４９】
【化１７】
2007503388.tif 000019
【００５０】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００５１】
【化１８】
2007503388.tif 000020
【００５２】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００５３】
【化１９】
2007503388.tif 000021
【００５４】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００５５】
【化２０】
2007503388.tif 000022
【００５６】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００５７】
【化２１】
2007503388.tif 000023
【００５８】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００５９】
【化２２】
2007503388.tif 000024
【００６０】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００６１】
【化２３】
2007503388.tif 000025
【００６２】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００６３】
【化２４】
2007503388.tif 000026
【００６４】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００６５】
【化２５】
2007503388.tif 000027
【００６６】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００６７】
【化２６】
2007503388.tif 000028
【００６８】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００６９】
【化２７】
2007503388.tif 000029
【００７０】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００７１】
【化２８】
2007503388.tif 000030
【００７２】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００７３】
【化２９】
2007503388.tif 000031
【００７４】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００７５】
【化３０】
2007503388.tif 000032
【００７６】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００７７】
【化３１】
2007503388.tif 000033
【００７８】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００７９】
【化３２】
2007503388.tif 000034
【００８０】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００８１】
【化３３】
2007503388.tif 000035
【００８２】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００８３】
【化３４】
2007503388.tif 000036
【００８４】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００８５】
【化３５】
2007503388.tif 000037
【００８６】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００８７】
【化３６】
2007503388.tif 000038
【００８８】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００８９】
【化３７】
2007503388.tif 000039
【００９０】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００９１】
【化３８】
2007503388.tif 000040
【００９２】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００９３】
【化３９】
2007503388.tif 000041
【００９４】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００９５】
【化４０】
2007503388.tif 000042
【００９６】
第一の実施形態の一態様では、以下の構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩が提供される。
【００９７】
【化４１】
2007503388.tif 000043
【００９８】
第一の実施形態の一態様では、薬剤として許容される担体または希釈剤と組み合わせて第一の実施形態の化合物を含む組成物が提供される。
【００９９】
第二の実施形態においては、それを必要としている患者のＭＩＦ活性を下げるための方法であって、以下の式からなる群より選択される構造を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩を有効量、患者に投与することを含む方法が提供される。
【０１００】
【化４２】
2007503388.tif 000044
式中、
Ｒは、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環，置換複素環，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｒ１は、−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＳＯ２ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５および−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒからなる群より選択され；
Ｒ２は、−ＣＨ２Ｒ３，−ＮＲ４Ｒ５，−ＯＲ３および−Ｒ３からなる群より選択され；
Ｒ３は、それぞれ独立に、アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択され；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択されるか、あるいは、Ｒ４およびＲ５は、一緒になって、複素環または置換複素環を含み；
Ｘは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｙは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｚは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ａｒは、アリールおよび置換アリールからなる群より選択され；
ｍは、それぞれ独立に、０，１，２，３または４であり；
ｎは、０，１または２である。
【０１０１】
第一の実施形態の一態様では、温血動物における炎症を治療するための方法であって、第一の実施形態の化合物を有効量、動物に投与することを含む方法が提供される。
【０１０２】
第一の実施形態の一態様では、温血動物における敗血症性ショックを治療するための方法であって、第一の実施形態の化合物を有効量、動物に投与することを含む方法が提供される。
【０１０３】
第一の実施形態の一態様では、温血動物における関節炎を治療するための方法であって、第一の実施形態の化合物を有効量、動物に投与することを含む方法が提供される。
【０１０４】
第一の実施形態の一態様では、温血動物における癌を治療するための方法であって、第一の実施形態の化合物を有効量、動物に投与することを含む方法が提供される。
【０１０５】
第一の実施形態の一態様では、温血動物における急性呼吸困難症候群を治療するための方法であって、第一の実施形態の化合物を有効量、動物に投与することを含む方法が提供される。
【０１０６】
第一の実施形態の一態様では、温血動物における炎症性疾患を治療するための方法であって、第一の実施形態の化合物を有効量、動物に投与することを含む方法が提供される。前記炎症性疾患は、慢性関節リウマチ、骨関節症、炎症性腸疾患および喘息からなる群より選択することができる。
【０１０７】
第一の実施形態の一態様では、温血動物における心疾患を治療するための方法であって、第一の実施形態の化合物を有効量、動物に投与することを含む方法が提供される。前記心疾患は、心機能不全、心筋梗塞、鬱血性心不全、再狭窄およびアテローム性動脈硬化症からなる群より選択することができる。
【０１０８】
第一の実施形態の一態様では、温血動物における自己免疫疾患を治療するための方法であって、第一の実施形態の化合物を有効量、動物に投与することを含む方法が提供される。前記自己免疫疾患は、糖尿病、喘息および多発性硬化症からなる群より選択することができる。
【０１０９】
第一の実施形態の一態様では、温血動物における免疫反応を抑制するための方法であって、第一の実施形態の化合物を有効量、動物に投与することを含む方法が提供される。
【０１１０】
第一の実施形態の一態様では、温血動物における血管新生を減少させるための方法であって、第一の実施形態の化合物を有効量、動物に投与することを含む方法が提供される。
【０１１１】
第一の実施形態の一態様では、温血動物における過剰なグルココルチコイド濃度に関連する疾患を治療するための方法であって、第一の実施形態の化合物を有効量、動物に投与することを含む方法が提供される。前記疾患は、クッシング病であることができる。
【０１１２】
第三の実施形態においては、
ＰＯＣｌ３と式（３）：
【０１１３】
【化４３】
2007503388.tif 000045
（式中、
Ｒは、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環，置換複素環，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｒ１は、−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＳＯ２ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５および−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒからなる群より選択され；
Ｒ３は、それぞれ独立に、アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択され；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択されるか、あるいは、Ｒ４およびＲ５は、一緒になって、複素環または置換複素環を含み；
Ｘは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｙは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｚは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ａｒは、アリールおよび置換アリールからなる群より選択され；
ｍは、それぞれ独立に、０，１，２，３または４である。）
の化合物とを反応させ、式（４）：
【０１１４】
【化４４】
2007503388.tif 000046
の化合物を生成する工程と、
式（４）の化合物とピペラジンとを反応させ、式（５）：
【０１１５】
【化４５】
2007503388.tif 000047
の化合物を生成する工程と、
式（５）の化合物と、式Ｒ２−Ｃ（＝Ｏ）Ｃｌ（式中、Ｒ２は、−ＣＨ２Ｒ３，−ＮＲ４Ｒ５，−ＯＲ３および−Ｒ３からなる群より選択される。）を有する化合物とを反応させ、式（６）：
【０１１６】
【化４６】
2007503388.tif 000048
の化合物を生成する工程と
を含み、
式（６）の化合物は、ＭＩＦ阻害剤としての使用に適している化合物の調製方法が提供される。
【０１１７】
第三の実施形態の一態様では、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒを含む。
【０１１８】
第三の実施形態の一態様では、Ｒ１が−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ３を含む。
【０１１９】
第三の実施形態の一態様では、Ｒ１が−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３を含む。
【０１２０】
第三の実施形態の一態様では、Ｒ１が−ＣＮを含む。
【０１２１】
第三の実施形態の一態様では、Ｒ１が−ＮＯ２を含む。
【０１２２】
第三の実施形態の一態様では、Ｒ１が−ＮＨ２を含む。
【０１２３】
第三の実施形態の一態様では、Ｒ２が
【０１２４】
【化４７】
2007503388.tif 000049
を含む。
【０１２５】
第三の実施形態の一態様では、Ｒ２が
【０１２６】
【化４８】
2007503388.tif 000050
を含む。
【０１２７】
第三の実施形態の一態様では、Ｒが−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒを含む。
【０１２８】
第三の実施形態の一態様では、Ｘが、水素，フッ素および塩素からなる群より選択され；Ｙが、水素，フッ素および塩素からなる群より選択され；Ｚが、水素，フッ素および塩素からなる群より選択される。
【０１２９】
第四の実施形態においては、
式（１３）：
【０１３０】
【化４９】
2007503388.tif 000051
（式中、
Ｒは、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環，置換複素環，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択されるか、あるいは、Ｒ４およびＲ５は、一緒になって、複素環または置換複素環を含み；
Ｘは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｙは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｚは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｒ３は、それぞれ独立に、アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択され；
Ａｒは、アリールおよび置換アリールからなる群より選択され；
ｍは、それぞれ独立に、０，１，２，３または４である。）
の化合物とシクロヘキシルアミンとを反応させ、式（１４）：
【０１３１】
【化５０】
2007503388.tif 000052
の化合物を生成する工程と、
式（１４）の化合物とＰＯＣｌ３とを反応させ、式（１５）：
【０１３２】
【化５１】
2007503388.tif 000053
の化合物を生成する工程と、
式（１５）の化合物とピペラジンとを反応させ、式（１６）：
【０１３３】
【化５２】
2007503388.tif 000054
の化合物を生成する工程と、
式（１６）の化合物と、式Ｒ２−Ｃ（＝Ｏ）Ｃｌ（式中、Ｒ２は、−ＣＨ２Ｒ３，−ＮＲ４Ｒ５，−ＯＲ３および−Ｒ３からなる群より選択される。）を有する化合物とを反応させ、式（１７）：
【０１３４】
【化５３】
2007503388.tif 000055
の化合物を生成する工程と
を含み、
式（１７）の化合物は、ＭＩＦ阻害剤としての使用に適している化合物の調製方法が提供される。
【０１３５】
第四の実施形態の一態様では、Ｒ２が
【０１３６】
【化５４】
2007503388.tif 000056
を含む。
【０１３７】
第四の実施形態の一態様では、Ｒ２が
【０１３８】
【化５５】
2007503388.tif 000057
を含む。
【０１３９】
第四の実施形態の一態様では、Ｒが−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒを含む。
【０１４０】
第四の実施形態の一態様では、Ｘが、水素，フッ素および塩素からなる群より選択され；Ｙが、水素，フッ素および塩素からなる群より選択され；Ｚが、水素，フッ素および塩素からなる群より選択される。
【０１４１】
第五の実施形態においては、
式（２３）：
【０１４２】
【化５６】
2007503388.tif 000058
（式中、
Ｒ１は、−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＳＯ２ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５および−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒからなる群より選択され；
Ｒ３は、それぞれ独立に、アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択され；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択されるか、あるいは、Ｒ４およびＲ５は、一緒になって、複素環または置換複素環を含み；
Ｘは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｙは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｚは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ａｒは、それぞれ独立に、アリールおよび置換アリールからなる群より選択され；
ｍは、それぞれ独立に、０，１，２，３または４である。）
の化合物とＰＯＣｌ３およびトリフルオロ酢酸とを反応させ、式（２４）：
【０１４３】
【化５７】
2007503388.tif 000059
の化合物を生成する工程と、
式（２４）の化合物と式：
【０１４４】
【化５８】
2007503388.tif 000060
（式中、Ｒ２は、−ＣＨ２Ｒ３，−ＮＲ４Ｒ５，−ＯＲ３および−Ｒ３からなる群より選択される。）
の化合物とを反応させ、式（２５）：
【０１４５】
【化５９】
2007503388.tif 000061
の化合物を生成する工程と、
式（２５）の化合物と、式ＲＸ’（式中、Ｘ’はハロゲンを含み、Ｒは、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環，置換複素環，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５からなる群より選択される。）を有する化合物とを反応させ、式（２６）：
【０１４６】
【化６０】
2007503388.tif 000062
の化合物を生成する工程と
を含み、
式（２６）の化合物は、ＭＩＦ阻害剤としての使用に適している化合物の調製方法が提供される。
【０１４７】
第五の実施形態の一態様では、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒを含む。
【０１４８】
第五の実施形態の一態様では、Ｒ１が−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ３を含む。
【０１４９】
第五の実施形態の一態様では、Ｒ１が−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３を含む。
【０１５０】
第五の実施形態の一態様では、Ｒ１が−ＣＮを含む。
【０１５１】
第五の実施形態の一態様では、Ｒ１が−ＮＯ２を含む。
【０１５２】
第五の実施形態の一態様では、Ｒ１が−ＮＨ２を含む。
【０１５３】
第五の実施形態の一態様では、Ｒ２が
【０１５４】
【化６１】
2007503388.tif 000063
を含む。
【０１５５】
第五の実施形態の一態様では、Ｒ２が
【０１５６】
【化６２】
2007503388.tif 000064
を含む。
【０１５７】
第五の実施形態の一態様では、Ｒが−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒを含む。
【０１５８】
第五の実施形態の一態様では、Ｘが、水素，フッ素および塩素からなる群より選択され；Ｙが、水素，フッ素および塩素からなる群より選択され；Ｚが、水素，フッ素および塩素からなる群より選択される。
【０１５９】
第五の実施形態の一態様では、Ｒがベンジルを含む。
【０１６０】
第六の実施形態においては、
式（３ａ）：
【０１６１】
【化６３】
2007503388.tif 000065
の化合物とＰＯＣｌ３とを反応させ、式（４ａ）：
【０１６２】
【化６４】
2007503388.tif 000066
の化合物を生成する工程と、
式（４ａ）の化合物とピペラジンとを反応させ、式（５ａ）：
【０１６３】
【化６５】
2007503388.tif 000067
の化合物を生成する工程と、
式（５ａ）の化合物と、式Ｒ２−Ｃ（＝Ｏ）Ｃｌ（式中、Ｒ２は、−ＣＨ２Ｒ３，−ＮＲ４Ｒ５，−ＯＲ３および−Ｒ３からなる群より選択され、Ｒ３は、アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択され、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択されるか、あるいは、Ｒ４およびＲ５は、一緒になって、複素環または置換複素環を含む。）を有する化合物とを反応させ、式（６ａ）：
【０１６４】
【化６６】
2007503388.tif 000068
の化合物を生成する工程と
を含み、
式（６ａ）の化合物は、ＭＩＦ阻害剤としての使用に適している化合物の調製方法が提供される。
【０１６５】
第六の実施形態の一態様では、Ｒ２が
【０１６６】
【化６７】
2007503388.tif 000069
を含む。
【０１６７】
第七の実施形態においては、
式（１３ａ）：
【０１６８】
【化６８】
2007503388.tif 000070
の化合物とシクロヘキシルアミンとを反応させ、式（１４ａ）：
【０１６９】
【化６９】
2007503388.tif 000071
の化合物を生成する工程と、
式（１４ａ）の化合物とＰＯＣｌ３とを反応させ、式（１５ａ）：
【０１７０】
【化７０】
2007503388.tif 000072
の化合物を生成する工程と、
式（１５ａ）の化合物とピペラジンとを反応させ、式（１６ａ）：
【０１７１】
【化７１】
2007503388.tif 000073
の化合物を生成する工程と、
式（１６ａ）の化合物と、式Ｒ２−Ｃ（＝Ｏ）Ｃｌ（式中、Ｒ２は、−ＣＨ２Ｒ３，−ＮＲ４Ｒ５，−ＯＲ３および−Ｒ３からなる群より選択され、Ｒ３は、アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択され、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択されるか、あるいは、Ｒ４およびＲ５は、一緒になって、複素環または置換複素環を含む。）を有する化合物とを反応させ、式（１７ａ）：
【０１７２】
【化７２】
2007503388.tif 000074
の化合物を生成する工程と
を含み、
式（１７ａ）の化合物は、ＭＩＦ阻害剤としての使用に適している化合物の調製方法が提供される。
【０１７３】
第七の実施形態の一態様では、Ｒ２が
【０１７４】
【化７３】
2007503388.tif 000075
を含む。
【０１７５】
第八の実施形態においては、
式（２３ａ）：
【０１７６】
【化７４】
2007503388.tif 000076
の化合物とＰＯＣｌ３およびトリフルオロ酢酸とを反応させ、式（２４ａ）：
【０１７７】
【化７５】
2007503388.tif 000077
の化合物を生成する工程と、
式（２４ａ）の化合物と式：
【０１７８】
【化７６】
2007503388.tif 000078
（式中、Ｒ２は、−ＣＨ２Ｒ３，−ＮＲ４Ｒ５，−ＯＲ３および−Ｒ３からなる群より選択され、Ｒ３は、アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択され、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択されるか、あるいは、Ｒ４およびＲ５は、一緒になって、複素環または置換複素環を含む。）
の化合物とを反応させ、式（２５ａ）：
【０１７９】
【化７７】
2007503388.tif 000079
の化合物を生成する工程と、
式（２５ａ）の化合物と、式ＲＸ（式中、Ｘはハロゲンを含み、Ｒは、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環，置換複素環，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され、Ａｒは、アリールおよび置換アリールからなる群より選択され、ｍは、それぞれ独立に、０，１，２，３または４である。）を有する化合物とを反応させ、式（２６ａ）：
【０１８０】
【化７８】
2007503388.tif 000080
の化合物を生成する工程と
を含み、
式（２６ａ）の化合物は、ＭＩＦ阻害剤としての使用に適している化合物の調製方法が提供される。
【０１８１】
第八の実施形態の一態様では、Ｒ２が
【０１８２】
【化７９】
2007503388.tif 000081
を含む。
【０１８３】
第八の実施形態の一態様では、Ｒ２が
【０１８４】
【化８０】
2007503388.tif 000082
を含む。
【０１８５】
第八の実施形態の一態様では、Ｒが−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒを含む。
【０１８６】
第八の実施形態の一態様では、Ｒがベンジルを含む。
【０１８７】
これらの、および他の実施形態およびその態様は、以下の詳細な説明を参照すると明白になるであろう。この目的のために、ある手法、化合物および／または組成物をより詳細に記載している様々な参考文献を本明細書に示すが、これによって、参照によりそれらは全てそのまま本明細書に組み込まれる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０１８８】
以下の記載および実施例に、本発明の好ましい実施形態を詳細に説明する。当業者は、本発明の範囲に含まれる本発明の多くの変形形態および変更形態があることを理解するであろう。したがって、好ましい実施形態の記載は、本発明の範囲を限定すると考えるべきではない。
【０１８９】
好ましい実施形態を理解する助けとして、特定の定義を本明細書に示す。
【０１９０】
本明細書で用いている「ＭＩＦ活性」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、マクロファージ遊走阻止因子によって少なくとも一部は媒介される活性または作用を指すことなどのために用いられる。したがって、ＭＩＦ活性は、マクロファージ遊走の阻害、トウトメラーゼ活性（例えば、フェニルピルビン酸塩またはドーパクロムを用いる）、エンドトキシン誘発性ショック、炎症、グルココルチコイド対抗制御、３Ｔ３線維芽細胞へのチミジンの取り込みの誘導、ｅｒｋリン酸化の誘導およびＭＡＰキナーゼ活性を含むが、これらに限定されない。
【０１９１】
本明細書で用いている「搬出」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、規定リーダー配列を介しての標準リーダー配列特異的分泌以外のメカニズムによる、翻訳細胞産物の細胞膜または細胞外間隙への輸送のエネルギー依存的または依存的でない代謝活性プロセスを指すことなどのために用いられる。さらに、「搬出」は、リーダー配列依存的である分泌と異なり、ブレフェルジンＡ（すなわち、搬出されたタンパク質はＥＲ／ゴルジを経て輸送されず、ブレフェルジンＡは搬出タンパク質の輸送に対して直接的作用を有さないと予想される）および他の類似化合物に対して抵抗性である。本明細書で用いているように、「搬出」は「非古典的分泌」を指すこともあり得る。
【０１９２】
本明細書で用いている「リーダーレスタンパク質」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、規定リーダー配列を欠き、細胞内から細胞外環境に搬出されるタンパク質またはポリペプチドを指すことなどのために用いられる。細胞外環境におけるリーダーレスタンパク質は、細胞外間隙にある、または細胞膜の外表面に結合しているタンパク質を指す。好ましい実施形態の状況内では、リーダーレスタンパク質は、マクロファージ遊走阻止因子およびそのフラグメントのような天然に存在するタンパク質、ならびにリーダー配列を欠くように遺伝子工学的に改変され、搬出されるタンパク質、またはリーダーレスタンパク質またはそのフラクションと他のタンパク質との融合を含むように遺伝子工学的に改変されたタンパク質を含む。
【０１９３】
本明細書で用いている「阻害剤」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、ＭＩＦの配座を変化させ、および／または、ＭＩＦに対するモノクローナル抗体と競合することができ、阻害剤の非存在下での活性または搬出と比較して、ＭＩＦの少なくとも１つの活性または細胞からのその搬出を減少させることができる分子（例えば、天然または合成化合物）を指すことなどのために用いられる。言い換えれば、阻害剤を用いずに実施されたアッセイと比較して、阻害剤を用いて実施されたアッセイにおいて測定されたＭＩＦの量、細胞外でおよび／または細胞内で検出されたＭＩＦ活性またはＭＩＦタンパク質の統計的に有意な変化がある場合、「阻害剤」は配座および／または活性および／または搬出を変化させる。
【０１９４】
本明細書で用いている「結合剤」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、阻害剤を含む、ＭＩＦに結合する全ての分子を指すことなどのために用いられる。
【０１９５】
一般的に、ＭＩＦ阻害剤は、ＭＩＦの生理的機能を阻害し、したがって、ＭＩＦが病原である疾患の治療に有用である。
【０１９６】
ある好ましい実施形態においては、以下の構造（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）および（Ｉｄ）を有するＭＩＦの阻害剤、その立体異性体、プロドラッグ、および薬剤として許容される塩が提供される。
【０１９７】
【化８１】
2007503388.tif 000083
式中、
Ｒは、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環，置換複素環，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｒ１は、−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＳＯ２ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５および−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒからなる群より選択され；
Ｒ２は、−ＣＨ２Ｒ３，−ＮＲ４Ｒ５，−ＯＲ３および−Ｒ３からなる群より選択され；
Ｒ３は、それぞれ独立に、アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択され；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択されるか、あるいは、Ｒ４およびＲ５は、一緒になって、複素環または置換複素環を含み；
Ｘは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｙは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｚは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−ＮＯ，−ＮＯ２，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
各Ａｒは、それぞれ独立に、アリールおよび置換アリールからなる群より選択され；
各ｍは、それぞれ独立に、０，１，２，３または４であり；
ｎは、０，１または２である。
【０１９８】
好ましい実施形態においては、以下の構造（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）または（Ｉｄ）を有する化合物、またはその立体異性体、プロドラッグもしくは薬剤として許容される塩を有効量、患者に投与することによって、それを必要としている患者のＭＩＦ活性を下げるための方法が提供される。
【０１９９】
【化８２】
2007503388.tif 000084
式中、
Ｒは、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環，置換複素環，−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒおよび−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｒ１は、−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＳＯ２ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５および−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒからなる群より選択され；
Ｒ２は、−ＣＨ２Ｒ３，−ＮＲ４Ｒ５，−ＯＲ３および−Ｒ３からなる群より選択され；
各Ｒ３は、それぞれ独立に、アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択され；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、水素，アルキル，置換アルキル，アルケニル，置換アルケニル，シクロアルキル，置換シクロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，アシルアルキル，置換アシルアルキル，複素環および置換複素環からなる群より選択されるか、あるいは、Ｒ４およびＲ５は、一緒になって、複素環または置換複素環を含み；
Ｘは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｙは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＮＯ，−ＮＯ２，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
Ｚは、水素，ハロゲン，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＮ，−ＯＣＦ３，−ＣＦ３，−ＮＨＳＯ２Ｒ３，−ＮＯ，−ＮＯ２，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４Ｒ５，−ＮＲ３Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３，−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ３，−Ｒ３，−ＯＲ３，−ＳＲ３，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ，−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ３および−ＮＲ４Ｒ５からなる群より選択され；
各Ａｒは、それぞれ独立に、アリールおよび置換アリールからなる群より選択され；
各ｍは、それぞれ独立に、０，１，２，３または４であり；
ｎは、０，１または２である。
【０２００】
本明細書で用いているように、上記の用語は以下の意味を有する。本明細書で用いている「アルキル」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、１個から２個，３個，４個，５個，６個，７個，８個，９個，１０個，１１個，１２個，１３個，１４個，１５個，１６個，１７個，１８個，１９個，２０個，またはそれ以上の炭素原子を含む直鎖または分枝、非環式または環式、不飽和または飽和脂肪族炭化水素を指すことなどのために用いられる。一方、「低級アルキル」という用語は、アルキルと同じ意味を有するが、１個から２個，３個，４個，５個，６個の炭素原子を含む。代表的な飽和直鎖アルキルは、メチル，エチル，ｎ−プロピル，ｎ−ブチル，ｎ−ペンチル，ｎ−ヘキシルなどを含む。一方、飽和分枝アルキルは、イソプロピル，ｓｅｃ−ブチル，イソブチル，ｔｅｒｔ−ブチル，イソペンチルなどを含む。不飽和アルキルは、隣接する炭素原子間に二重結合または三重結合を少なくとも１つ含む（それぞれ、「アルケニル」または「アルキニル」と呼ぶ）。代表的な直鎖および分枝アルケニルは、エチレニル，プロピレニル，１−ブテニル，２−ブテニル，イソブチレニル，１−ペンテニル，２−ペンテニル，３−メチル−１−ブテニル，２−メチル−２−ブテニル，２，３−ジメチル−２−ブテニルなどを含む。一方、代表的な直鎖および分枝アルキニルは、アセチレニル，プロピニル，１−ブチニル，２−ブチニル，１−ペンチニル，２−ペンチニル，３−メチル−１ブチニルなどを含む。
【０２０１】
本明細書で用いている「シクロアルキル」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、モノ−，ジ−，またはポリ−単素環を含むアルキルを指すことなどのために用いられる。シクロアルキルはまた、「環式アルキル」または「単素環」とも呼ぶ。代表的な飽和環式アルキルは、シクロプロピル，シクロブチル，シクロペンチル，シクロヘキシル，−ＣＨ２シクロプロピル，−ＣＨ２シクロブチル，−ＣＨ２シクロペンチル，−ＣＨ２シクロヘキシルなどを含む。一方、不飽和環式アルキルは、シクロペンテニルおよびシクロヘキセニルなどを含む。環式アルキルは、デカリン，アダマンタンなどを含む。
【０２０２】
本明細書で用いている「アリール」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、フェニルまたはナフチルなどの芳香族炭素環式部分を指すことなどのために用いられる。好ましくは、アリール基は、６個から７個，８個，９個，１０個，１１個，１２個，１３個，１４個，１５個，１６個，１７個，１８個，１９個，２０個，またはそれ以上の炭素原子を含む。
【０２０３】
本明細書で用いている「アリールアルキル」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、ベンジル，−ＣＨ２（１−または２−ナフチル），−（ＣＨ２）２フェニル，−（ＣＨ２）３フェニル，−ＣＨ（フェニル）２などのアリール部分で水素原子を置換したアルキルを少なくとも１つ有するアルキルを指すことなどのために用いられる。
【０２０４】
本明細書で用いている「ヘテロアリール」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、一環系および二環系の両方を含み、窒素，酸素および硫黄から選択されるヘテロ原子少なくとも１個（または２個，３個，または４個以上のヘテロ原子）を有し、少なくとも１個の炭素原子を含む、５員環または６員環から１０員環の芳香族複素環を指すことなどのために用いられる。代表的なヘテロアリールは、（これらに限定されないが）フリル，ベンゾフラニル，チオフェニル，ベンゾチオフェニル，ピロリル，インドリル，イソインドリル，アザインドリル，ピリジル，キノリニル，イソキノリニル，オキサゾリル，イソオキサゾリル，ベンゾオキサゾリル，ピラゾリル，イミダゾリル，ベンズイミダゾリル，チアゾリル，ベンゾチアゾリル，イソチアゾリル，ピリダジニル，ピリミジニル，ピラジニル，トリアジニル，シンノリニル，フタラジニル，およびキナゾリニルを含む。
【０２０５】
本明細書で用いている「ヘテロアリールアルキル」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、−ＣＨ２ピリジニル，−ＣＨ２ピリミジニルなどのヘテロアリール部分で水素原子を置換したアルキルを少なくとも１つ有するアルキルを指すことなどのために用いられる。
【０２０６】
本明細書で用いている「複素環」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、５員環，６員環，または７員環の一環式複素環、または７員環，８員環，９員環，１０員環，１１員環，１２員環，１３員環から１４員環以上の多環式複素環を指すことなどのために用いられる。環は、飽和、不飽和、芳香族、または非芳香族であってもよく、窒素，酸素および硫黄からそれぞれ独立に選択されるヘテロ原子を１個，２個，３個，または４個以上含む。窒素および硫黄ヘテロ原子は任意選択的に酸化されていてもよく、窒素ヘテロ原子は任意選択的に四級化されていてもよく、上記の複素環のいずれかが縮合してベンゼン環になっている二環式の環、および三環式（およびそれ以上）複素環を含む。複素環は、環のヘテロ原子または炭素原子によって結合されていてもよい。複素環は、上記で定義したヘテロアリールを含む。従って、上記の芳香族ヘテロアリールに加えて、複素環はまた、（これらに限定されないが）モルホリニル，ピロリジノニル，ピロリジニル，ピペリジニル，ヒダントイニル，バレロラクトニル，オキシラニル，オキセタニル，テトラヒドロフラニル，テトラヒドロピラニル，テトラヒドロピリジニル，テトラヒドロピリミジニル，テトラヒドロチオフェニル，テトラヒドロチオピラニル，テトラヒドロピリミジニル，テトラヒドロチオフェニル，テトラヒドロチオピラニルなどを含む。また、次の構造の複素環も含まれる。
【０２０７】
【化８３】
2007503388.tif 000085
【０２０８】
本明細書で用いている「複素環アルキル」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、−ＣＨ２モルホリニルなどの複素環で水素原子を置換したアルキルを少なくとも１つ有するアルキルを指すことなどのために用いられる。
【０２０９】
本明細書で用いている「置換」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、少なくとも１個の水素原子が置換基で置換されている上記の基（例えば、アルキル，アリール，アリールアルキル，ヘテロアリール，ヘテロアリールアルキル，複素環または複素環アルキル）すべてを指すことなどのために用いられる。ケトン置換基、例えば−Ｃ（＝Ｏ）−の場合には、２個の水素原子が置換される。置換されたとき、好ましい実施形態の状況内では、「置換基」は、ハロゲン，ヒドロキシ，シアノ，ニトロ，アミノ，アルキルアミノ，ジアルキルアミノ，アルキル，アルコキシ，アルキルチオ，ハロアルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，ヘテロアリール，置換ヘテロアリール，ヘテロアリールアルキル，置換ヘテロアリールアルキル，複素環，置換複素環，複素環アルキル，置換複素環アルキル，−ＮＲａＲｂ，−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｂ，−ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲｂＲｃ，−ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＯＲｂ，−ＮＲａＳＯ２Ｒｂ，−ＯＲａ，−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａ，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲａ，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲｂ，−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａＲｂ，−ＳＨ，−ＳＲａ，−ＳＯＲａ，−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒａ，−ＯＳ（＝Ｏ）２Ｒａ，−Ｓ（＝Ｏ）２ＯＲａ（式中、Ｒａ，ＲｂおよびＲＣは同一であっても、異なっていてもよく、それぞれ独立に、水素，アルキル，ハロアルキル，置換アルキル，アリール，置換アリール，アリールアルキル，置換アリールアルキル，ヘテロアリール，置換ヘテロアリール，ヘテロアリールアルキル，置換ヘテロアリールアルキル，複素環，置換複素環，複素環アルキルまたは置換複素環アルキルから選択される。）を含む。
【０２１０】
本明細書で用いている「ハロゲン」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、フッ素，塩素，臭素，およびヨウ素を指すことなどのために用いられる。
【０２１１】
本明細書で用いている「ハロアルキル」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、トリフルオロメチルなどのハロゲンで少なくとも１個の水素原子を置換したアルキルを指すことなどのために用いられる。
【０２１２】
本明細書で用いている「アルコキシ」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、メトキシ，エトキシなどの酸素架橋（すなわち、−Ｏ−アルキル）によって結合されているアルキル部分を指すことなどのために用いられる。
【０２１３】
本明細書で用いている「チオアルキル」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、メチルチオ，エチルチオなどの硫黄架橋（すなわち、−Ｓ−アルキル）によって結合されているアルキル部分を指すことなどのために用いられる。
【０２１４】
本明細書で用いている「アルキルスルホニル」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、メチルスルホニル，エチルスルホニルなどのスルホニル架橋（すなわち、−ＳＯ２−アルキル）によって結合されているアルキル部分を指すことなどのために用いられる。
【０２１５】
本明細書で用いている「アルキルアミノ」および「ジアルキルアミノ」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、メチルアミノ，エチルアミノ，ジメチルアミノ，ジエチルアミノなどの、それぞれ窒素架橋（すなわち、−Ｎ−アルキル）によって結合されている１つのアルキル部分または２つのアルキル部分を指すことなどのために用いられる。
【０２１６】
本明細書で用いている「ヒドロキシアルキル」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、少なくとも１つのヒドロキシル基で置換されたアルキルを指すことなどのために用いられる。
【０２１７】
本明細書で用いている「モノ−またはジ（シクロアルキル）メチル」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、シクロプロピルメチル，ジシクロプロピルメチルなどの１つまたは２つのシクロアルキル基で置換されたメチル基を指すことなどのために用いられる。
【０２１８】
本明細書で用いている「アルキルカルボニルアルキル」または「アシルアルキル」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、−Ｃ（＝Ｏ）アルキル基で置換されたアルキルを指すことなどのために用いられる。
【０２１９】
本明細書で用いている「アルキルカルボニルオキシアルキル」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル基または−ＯＣ（＝Ｏ）アルキル基で置換されたアルキルを指すことなどのために用いられる。
【０２２０】
本明細書で用いている「アルキルオキシアルキル」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、−Ｏ−アルキル基で置換されたアルキルを指すことなどのために用いられる。
【０２２１】
本明細書で用いている「アリールカルボニルアリール」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、−Ｃ（＝Ｏ）アリール基で置換されたアリールを指すことなどのために用いられる。
【０２２２】
本明細書で用いている「アリールカルボニルオキシアリール」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アリール基または−ＯＣ（＝Ｏ）アリール基で置換されたアリールを指すことなどのために用いられる。
【０２２３】
本明細書で用いている「アリールオキシアリール」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、−Ｏ−アリール基で置換されたアルキルを指すことなどのために用いられる。
【０２２４】
本明細書で用いている「アルキルカルボニルアリール」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、−Ｃ（＝Ｏ）アリール基で置換されたアルキルを指すことなどのために用いられる。
【０２２５】
本明細書で用いている「アルキルカルボニルオキシアリール」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アリール基または−ＯＣ（＝Ｏ）アリール基で置換されたアルキルを指すことなどのために用いられる。
【０２２６】
本明細書で用いている「アルキルオキシアリール」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、−Ｏ−アリール基で置換されたアルキルを指すことなどのために用いられる。
【０２２７】
本明細書で用いている「アリールカルボニルアルキル」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、−Ｃ（＝Ｏ）アルキル基で置換されたアリールを指すことなどのために用いられる。
【０２２８】
本明細書で用いている「アリールカルボニルオキシアルキル」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル基または−ＯＣ（＝Ｏ）アルキル基で置換されたアリールを指すことなどのために用いられる。
【０２２９】
本明細書で用いている「アリールオキシアルキル」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、−Ｏ−アルキル基で置換されたアリールを指すことなどのために用いられる。
【０２３０】
本明細書で用いている「アルキルチオアルキル」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、−Ｓ−アルキル基で置換されたアルキルを指すことなどのために用いられる。
【０２３１】
本明細書で用いている「モノ−またはジ（アルキル）アミノ」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、それぞれ、１つのアルキルまたは２つのアルキルで置換されたアミノを指すことなどのために用いられる。
【０２３２】
本明細書で用いている「モノ−またはジ（アルキル）アミノアルキル」という用語は、上位概念語であり、通常の意味で、限定的でなく、モノ−またはジ（アルキル）アミノで置換されたアルキルを指すことなどのために用いられる。
【０２３３】
本明細書で言う環系は、孤立した単環部分に加えて、縮合環，橋かけ環，およびスピロ環部分を含む。
【０２３４】
次の番号づけしたスキームは、好ましい実施形態の状況で使用される。
【０２３５】
【化８４】
2007503388.tif 000086
【０２３６】
上述の通り、ナフチリジン環の窒素原子は、環の５，６，７，または８位を占めることができる。好ましい実施形態の代表的な化合物についての化学構造を以下に示す。これらの構造において、次の記号は、窒素原子が、環の５，６，７，または８位のいずれかを占めることができるピリジン環を表わすために用いられる。
【０２３７】
【化８５】
2007503388.tif 000087
【０２３８】
以下に示す化学構造のいくつかにおいて、そのように述べたピリジン環は、置換基としてメチル基または塩素原子を含む。そのような置換基が存在する場合、ピリジン環の窒素原子が環の５位を占めるならば、置換基は環の６，７，または８位のいずれかを占める。ピリジン環の窒素原子が環の６位を占めるならば、置換基は環の５，７，または８位のいずれかを占める。ピリジン環の窒素原子が環の７位を占めるならば、置換基は環の５，６，または８位のいずれかを占める。ピリジン環の窒素原子が環の８位を占めるならば、置換基は環の５，６，または７位のいずれかを占める。特に好ましい実施形態では、ピリジン環の窒素原子は環の８位を占め、置換基は、存在するならば、環の６位を占める。
【０２３９】
【化８６】
2007503388.tif 000088
【０２４０】
【化８７】
2007503388.tif 000089
【０２４１】
【化８８】
2007503388.tif 000090
【０２４２】
【化８９】
2007503388.tif 000091
【０２４３】
【化９０】
2007503388.tif 000092
【０２４４】
【化９１】
2007503388.tif 000093
【０２４５】
【化９２】
2007503388.tif 000094
【０２４６】
【化９３】
2007503388.tif 000095
【０２４７】
【化９４】
2007503388.tif 000096
【０２４８】
【化９５】
2007503388.tif 000097
【０２４９】
【化９６】
2007503388.tif 000098
【０２５０】
【化９７】
2007503388.tif 000099
【０２５１】
【化９８】
2007503388.tif 000100
【０２５２】
【化９９】
2007503388.tif 000101
【０２５３】
【化１００】
2007503388.tif 000102
【０２５４】
【化１０１】
2007503388.tif 000103
【０２５５】
【化１０２】
2007503388.tif 000104
【０２５６】
【化１０３】
2007503388.tif 000105
【０２５７】
【化１０４】
2007503388.tif 000106
【０２５８】
【化１０５】
2007503388.tif 000107
【０２５９】
【化１０６】
2007503388.tif 000108
【０２６０】
【化１０７】
2007503388.tif 000109
【０２６１】
【化１０８】
2007503388.tif 000110
【０２６２】
【化１０９】
2007503388.tif 000111
【０２６３】
【化１１０】
2007503388.tif 000112
【０２６４】
【化１１１】
2007503388.tif 000113
【０２６５】
【化１１２】
2007503388.tif 000114
【０２６６】
【化１１３】
2007503388.tif 000115
【０２６７】
【化１１４】
2007503388.tif 000116
【０２６８】
【化１１５】
2007503388.tif 000117
【０２６９】
【化１１６】
2007503388.tif 000118
【０２７０】
【化１１７】
2007503388.tif 000119
【０２７１】
【化１１８】
2007503388.tif 000120
【０２７２】
【化１１９】
2007503388.tif 000121
【０２７３】
【化１２０】
2007503388.tif 000122
【０２７４】
【化１２１】
2007503388.tif 000123
【０２７５】
【化１２２】
2007503388.tif 000124
【０２７６】
【化１２３】
2007503388.tif 000125
【０２７７】
【化１２４】
2007503388.tif 000126
【０２７８】
【化１２５】
2007503388.tif 000127
【０２７９】
【化１２６】
2007503388.tif 000128
【０２８０】
【化１２７】
2007503388.tif 000129
【０２８１】
【化１２８】
2007503388.tif 000130
【０２８２】
【化１２９】
2007503388.tif 000131
【０２８３】
【化１３０】
2007503388.tif 000132
【０２８４】
【化１３１】
2007503388.tif 000133
【０２８５】
【化１３２】
2007503388.tif 000134
【０２８６】
【化１３３】
2007503388.tif 000135
【０２８７】
【化１３４】
2007503388.tif 000136
【０２８８】
【化１３５】
2007503388.tif 000137
【０２８９】
【化１３６】
2007503388.tif 000138
【０２９０】
【化１３７】
2007503388.tif 000139
【０２９１】
【化１３８】
2007503388.tif 000140
【０２９２】
【化１３９】
2007503388.tif 000141
【０２９３】
【化１４０】
2007503388.tif 000142
【０２９４】
【化１４１】
2007503388.tif 000143
【０２９５】
【化１４２】
2007503388.tif 000144
【０２９６】
【化１４３】
2007503388.tif 000145
【０２９７】
【化１４４】
2007503388.tif 000146
【０２９８】
【化１４５】
2007503388.tif 000147
【０２９９】
好ましい実施形態の化合物は、一般に遊離酸または遊離塩基として使用できる。あるいは、好ましい実施形態の化合物は、好ましくは酸付加塩または塩基付加塩の形態であり得る。好ましい実施形態の遊離塩基アミノ化合物の酸付加塩は、当該技術分野で周知の方法により調製することができ、有機酸および無機酸から生成することができる。適当な有機酸として、マレイン酸、フマル酸、安息香酸、アスコルビン酸、琥珀酸、メタンスルホン酸、酢酸、シュウ酸、プロピオン酸、酒石酸、サリチル酸、クエン酸、グルコン酸、乳酸、マンデル酸、桂皮酸、アスパラギン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、グリコール酸、グルタミン酸、ベンゼンスルホン酸などが挙げられる。適当な無機酸として、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸などが挙げられる。遊離酸の塩基付加塩は、当該技術分野で周知の方法により同様に調製することができ、アルカリおよびアルカリ土類金属（例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、バリウムまたはカルシウム）から選択される陽イオンおよびアンモニウム陽イオンなどの適当な塩基から生成することができる。構造（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）または（Ｉｄ）の「薬剤として許容される塩」という用語は、任意の、および全ての許容できる塩の形態を包含することを意図している。
【０３００】
構造（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、および（Ｉｄ）を有する化合物は、当業者には公知の有機合成技術に従って、および実施例に記載されている代表的な方法によって製造することができる。一般に、構造（Ｉａ）を有する化合物は、次の反応スキームに従って生成することができる。これらの合成経路では、ナフチリジン環の窒素原子が環の８位を占めることは注目に値する。しかしながら、この合成経路は、後に検討するように、ナフチリジン環の窒素原子が環の５、６、または７位を占める好ましい実施形態の化合物の調製においても有効である。
【０３０１】
中間体  １−ベンジル−４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステルの調製
式（Ｉａ）の化合物の調製における好ましい中間体は、下記式（３）によって示される１−ベンジル−４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステルである。この合成に用いられる出発原料は２−クロロ−３−ピリジンカルボン酸である。式（Ｉｂ）の化合物を調製するために、クロロピリジンカルボン酸を第２級アミノ化合物と反応させる。以下の合成経路では説明する目的で、ベンジルアミンを出発原料として用いる。しかし、他の第２級アミンも、４−メトキシベンジルアミンもしくは４−フルオロベンジルアミンなどの置換ベンジルアミンを含め、出発原料として使用できることに留意されたい。
【０３０２】
中間体  １−ベンジル−４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステルの合成における第１段階は、スキーム１に示されるように、式（１）によって示される２−ベンジルアミノニコチン酸の生成である。
【０３０３】
【化１４６】
2007503388.tif 000148
【０３０４】
次いで、２−ベンジルアミノニコチン酸（１）を用いて、スキーム２に示されるように、式（２）によって示される１−ベンジル−１Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオンが調製できる。
【０３０５】
【化１４７】
2007503388.tif 000149
【０３０６】
次いで、マロン酸ジエチルを、１−ベンジル−１Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（２）と反応させて、スキーム３に示されるように、中間体  １−ベンジル−４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（３）を生成できる。
【０３０７】
【化１４８】
2007503388.tif 000150
【０３０８】
得られる式（Ｉａ）（または式（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、もしくは（Ｉｄ））の化合物の置換基Ｒ１について異なるカルボキシレート置換基が好ましい場合、他のジエステル、例えば、マロン酸ジメチル、マロン酸ジプロピルなどをこの反応において使用することができる。他の場合には、以下で検討するように、カルボキシレート基を例えばシアノなどの他の部分で置換することができる。
【０３０９】
式（Ｉａ）の化合物  −  １−ベンジル−２−オキソ−４−［（４−チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステルの調製
好ましい実施形態の１つの化合物は、出発原料として中間体  １−ベンジル−４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステルを用いて調製することができる。この化合物は、スキーム４に示される連続の反応を適用することによって調製された。
【０３１０】
【化１４９】
2007503388.tif 000151
【０３１１】
上記の反応において、２−チオフェンカルボニルクロリドを１−ベンジル−２−オキソ−４−ピペラジン−１−イル−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステルと反応させることにより、スキーム４において式（６）によって示されるターゲット化合物の１−ベンジル−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステルが得られる。置換基Ｒが２−チオフェン以外であることが好ましい場合、他のカルボニルクロリド化合物をこの反応において代わりに用いることができる。
【０３１２】
置換基Ｒ１としてシアノ基を含む式（Ｉａ）の化合物は、中間体  １−ベンジル−４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステルから出発して調製することができる。この中間体はスキーム５に示される反応によってシアノ基により官能化される。
【０３１３】
【化１５０】
2007503388.tif 000152
【０３１４】
式（Ｉａ）の化合物  −  １−ベンジル−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−３−シアノ［１，８］−ナフチリジンの調製
次いで、スキーム４において式（５）および（６）の化合物の調製において上記に検討したように、ピペラジンとの反応、続く２−チオフェンカルボニルクロリドとの反応によって、最終生成物が調製される。さらに上記に検討したように、置換基Ｒが２−チオフェン以外であることが好ましい場合は、他のカルボニルクロリド化合物をこの反応において代わりに用いることができる。１−ベンジル−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−３−シアノ［１，８］−ナフチリジンの調製に用いられる反応シーケンスをスキーム６に示す。
【０３１５】
【化１５１】
2007503388.tif 000153
【０３１６】
一般構造（Ｉａ）を有する化合物の調製
式（Ｉａ）の好ましい化合物は、１−Ｒ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（式中、ナフチリジニル環の１位における置換基Ｒは、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、複素環、置換複素環、−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒまたは−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５であり、ｍは０、１、２、３または４である。）を含む。この合成のための出発原料は、２−クロロ−３−ピリジンカルボン酸および４−メトキシベンジルアミンである。合成における各段階のシーケンスは、スキーム７に示される通りである。
【０３１７】
【化１５２】
2007503388.tif 000154
【０３１８】
【化１５３】
2007503388.tif 000155
【０３１９】
反応の最終段階において、反応物として適切なハロゲン化物（Ｒ−Ｘ）を選択して、ナフチリジニル環の１位で所望の置換基（Ｒ）を生成することができる。生成物の調製における他の最終段階は、スキーム８に示される通りである。
【０３２０】
【化１５４】
2007503388.tif 000156
【０３２１】
ピペラジン部分における置換基が２−チオフェン以外であることが好ましい場合、ピペラジン−１−イル−チオフェン−２−イル−メタノンの代わりに、対応する酸塩化物によるｔ−ブチル−１−ピペラジンカルボキシレートのアシル化とそれに続く脱保護によって調製される、対応するＮ−アシルピペラジンを用いることができる。
【０３２２】
ナフチリジン部分の３位にカルボニトリルを有する一般構造（Ｉａ）の化合物の調製
式（Ｉａ）の好ましい化合物は、１−Ｒ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］ナフチリジン−３−カルボニトリル（式中、ナフチリジニル環の１位における置換基Ｒは、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、複素環、置換複素環、−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒまたは−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５であり、ｍは０、１、２、３または４である。）を含む。スキーム９において式２０によって示される２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリルは、スキーム７において式１３によって示される４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステルから出発して、主要な中間体として調製した。次いで、この主要な中間体を適切なハロゲン化物（Ｒ−Ｘ）と反応させてターゲット化合物を得た。合成で用いられた各段階のシーケンスは、スキーム９に示される通りである。
【０３２３】
【化１５５】
2007503388.tif 000157
【０３２４】
【化１５６】
2007503388.tif 000158
【０３２５】
ピペラジン部分における置換基が２−チオフェン以外であることが好ましい場合、ピペラジン−１−イル−チオフェン−２−イル−メタノンの代わりに、対応する酸塩化物によるｔ−ブチル−１−ピペラジンカルボキシレートのアシル化とそれに続く脱保護によって調製される、対応するＮ−アシルピペラジンを用いることができる。
【０３２６】
ナフチリジン部分の６位に置換基を有する一般構造（Ｉａ）の化合物の調製
ナフチリジン部分の６位にフルオロ置換基を有する構造（Ｉａ）の化合物を生成するための出発原料として、２，６ジクロロ−５−フルオロ−ニコチン酸を選択した。塩化チオニルで処理した後に乾燥エタノールと還流することによって、２，６ジクロロ−５−フルオロ−ニコチン酸をエステル化し、スキーム１０において式２１によって示される２，６−ジクロロ−５−フルオロ−ニコチン酸エチルエステルが生成された。このエステルは、エタンチオールおよび水素化ナトリウムと反応させると、スキーム１０において式２２によって示される２−クロロ−６−エチルスルファニル−５−フルオロ−ニコチン酸エチルエステルを生成した。スキーム１０において式２３によって示される６−エチルスルファニル−５−フルオロ−２−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−ニコチン酸エチルエステルを２−クロロ−６−エチルスルファニル−５−フルオロ−ニコチン酸エチルエステルのアミノ化によって調製し、これを、エタノールおよびラネーニッケルと還流することによって、スキーム１０において式２４によって示される５−フルオロ−２−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−ニコチン酸エチルエステルに変換した。次いで、５−フルオロ−２−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−ニコチン酸エチルエステルをクロロギ酸トリクロロメチルと反応させて、スキーム１０において式２５によって示される６−フルオロ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−１Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオンが生成された。反応シーケンスをスキーム１０に示す。
【０３２７】
【化１５７】
2007503388.tif 000159
【０３２８】
ナフチリジン部分の６位にクロロ置換基を有する化合物の合成のための出発原料として、２−ヒドロキシニコチン酸を選択した。次亜塩素酸ナトリウムによる２−ヒドロキシニコチン酸の塩素化により、スキーム１１において式２６によって示される５−クロロ−２−ヒドロキシ−ニコチン酸が生成された。この中間体を塩化チオニルで処理した後、メタノールと還流することによって、スキーム１１において式２７によって示される２，５−ジクロロ−ニコチン酸メチルエステルが生成された。ｐ−メトキシベンジルアミンによる２，５−ジクロロ−ニコチン酸メチルエステルのアミノ化により、スキーム１１において式２８によって示される５−クロロ−２−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−ニコチン酸メチルエステルが生成され、これを、スキーム１１に示されるようにクロロギ酸トリクロロメチルと反応させることによって、スキーム１１において式２９によって示される６−クロロ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−１Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオンに変換した。
【０３２９】
【化１５８】
2007503388.tif 000160
【０３３０】
ナフチリジン部分の６位にメチル置換基を有する化合物を調製するための出発原料として、スキーム１２において式３１によって示される２−ブロモ−５−メチルニコチン酸エチルエステルを用いた。スキーム１２に示されるように、この出発原料は、プロピオンアルデヒドとシアノ酢酸エチルの縮合と、続いての得られた中間体の環化によって調製された。ｐ−メトキシベンジルアミンによる２−ブロモ−５−メチルニコチン酸エチルエステルのアミノ化により、スキーム１２において式３２によって示される５−メチル−２−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−ニコチン酸エチルエステルが生成され、次いでこれを、スキーム１２に示されるようにクロロギ酸トリクロロメチルと反応させることによって、スキーム１２において式３３によって示される６−メチル−１−（４−メトキシ−ベンジル）−１Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオンに変換した。
【０３３１】
【化１５９】
2007503388.tif 000161
【０３３２】
スキーム１０、１１および１２において式２５、２９および３３によってそれぞれ示される無水物中間体から、ナフチリジン部分に６−置換を有する化合物を調製した。これらの化合物に適用した合成経路は、上記の非置換の類似体のものと同様であった。これらの化合物を調製するのに用いられた反応のシーケンスをスキーム１３および１４に示す。
【０３３３】
【化１６０】
2007503388.tif 000162
【０３３４】
【化１６１】
2007503388.tif 000163
【０３３５】
ピペラジン部分における置換基が２−チオフェン以外であることが好ましい場合、ピペラジン−１−イル−チオフェン−２−イル−メタノンの代わりに、対応する酸塩化物によるｔ−ブチル−１−ピペラジンカルボキシレートのアシル化とそれに続く脱保護によって調製される、対応するＮ−アシルピペラジンをスキーム１３および１４において用いることができる。
【０３３６】
一般構造（Ｉｃ）を有する化合物の調製
式（Ｉｃ）の好ましい化合物は、１−Ｒ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，６］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（式中、ナフチリジニル環の１位における置換基Ｒは、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、複素環、置換複素環、−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒまたは−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５であり、ｍは０、１、２、３または４である。）を含む。
【０３３７】
この合成のための出発原料は、ｂｏｃ基によって保護された４−アミノピリジンであり、これを、オルトリチオ化、続いてのドライアイスによるクエンチングによって、スキーム１５において式３５として示される４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ニコチン酸に変換した。この中間体をクロロギ酸トリクロロメチルと反応させることにより、スキーム１５において式３６によって示される１Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオンが生成され、次いでこれを、スキーム１５において式３７によって示される４−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，６］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステルに変換した。４−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，６］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステルとピペラジン−１−イル−チオフェン−２−イル−メタノンの反応によって、スキーム１５において式３８によって示される２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［ｌ，６］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステルが生成され、これを、スキーム１５に示されるように、対応するアルキルハロゲン化物（Ｒ−Ｘ）と反応させることによって、１−Ｎ−置換−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，６］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステルが生成された。
【０３３８】
【化１６２】
2007503388.tif 000164
【０３３９】
ピペラジン部分における置換基が２−チオフェン以外であることが好ましい場合、ピペラジン−１−イル−チオフェン−２−イル−メタノンの代わりに、対応する酸塩化物によるｔ−ブチル−１−ピペラジンカルボキシレートのアシル化とそれに続く脱保護によって調製される、対応するＮ−アシルピペラジンを用いることができる。
【０３４０】
あるいは、スキーム１５において式３７によって示される中間体  ４−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，６］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステルは、スキーム１６に示されるように、４−クロロピリジンまたはニコチン酸から調製することができる。ＬＤＡによる４−クロロピリジンのオルトリチオ化、続いてのドライアイスによるクエンチング、またはニコチン酸のリチオ化、続いてのヘキサクロロエタンによるクエンチングによって、スキーム１６において式３９によって示されるクロロニコチン酸中間体を生成することができる。この中間体のアミノ化により、スキーム１６において式４０によって示される３−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−ニコチン酸を生成でき、これを、クロロギ酸トリクロロメチルで処理することによって、スキーム１６において式４１によって示される１−（４−メトキシ−ベンジル）−１Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオンに変換した。この中間体は、スキーム１６に示されるように、スキーム１５において式３７によって示される４−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，６］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステルに変換できる。
【０３４１】
【化１６３】
2007503388.tif 000165
【０３４２】
ナフチリジン部分の３位にカルボニトリル基を有する一般構造（Ｉｃ）の化合物の調製
式（Ｉｃ）の好ましい化合物は、１−Ｒ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，６］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（式中、３位にニトリル基を有するナフチリジニル環の１位における置換基Ｒは、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、複素環、置換複素環、−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒまたは−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５であり、ｍは０、１、２、３または４である。）を含む。これらの化合物は、上記の［１，８］ナフチリジン系のものと類似する反応シーケンスおよび方法を適用することによって、スキーム１６において式４２によって示される中間体  ４−クロロ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，６］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステルから調製することができる。これらの化合物の合成における各段階のシーケンスをスキーム１７に示す。
【０３４３】
【化１６４】
2007503388.tif 000166
【０３４４】
ピペラジン部分における置換基が２−チオフェン以外であることが好ましい場合、ピペラジン−１−イル−チオフェン−２−イル−メタノンの代わりに、対応する酸塩化物によるｔ−ブチル−１−ピペラジンカルボキシレートのアシル化とそれに続く脱保護によって調製される、対応するＮ−アシルピペラジンを用いることができる。
【０３４５】
一般構造（Ｉｂ）を有する化合物の調製
式（Ｉｂ）の好ましい化合物は、１−Ｒ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，７］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（式中、ナフチリジニル環の１位における置換基Ｒは、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、複素環、置換複素環、−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒまたは−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５であり、ｍは０、１、２、３または４である。）を含む。これらの化合物は、出発原料としてピリジン３，４−ジカルボン酸を用いることによって調製することができる。ピリジン３，４−ジカルボン酸は無水酢酸と反応して、スキーム１８において式４３によって示されるフロ［３，４−ｃ］ピリジン−１，３−ジオンを生成することができ、これを、アセトアミドと反応させることによって、スキーム１８において式４４によって示されるピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１，３−ジオンに変換することができる。３−アミノイソニコチン酸は、この中間体のホフマン分解から調製することができる。３−アミノイソニコチン酸の還元的アミノ化により、スキーム１８において式４６によって示される３−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）イソニコチン酸を生成することができる。この中間体はまた、スキーム１８に示されるように、リチウムヘキサメチルジシラジドおよびｐ−メトキシベンジルクロライドを用いることによって、３−アミノイソニコチン酸のアルキル化からも調製することができる。
【０３４６】
【化１６５】
2007503388.tif 000167
【０３４７】
スキーム１８において式４６によって示される中間体  ３−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）イソニコチン酸を用い、一般構造（Ｉａ）を有する化合物の合成に用いられる類似の反応シーケンスおよび方法を適用することによって、一般構造（Ｉｂ）を有する化合物を合成することができる。これらの化合物を調製するのに使用できる反応のシーケンスをスキーム１９に示す。
【０３４８】
【化１６６】
2007503388.tif 000168
【０３４９】
ナフチリジン部分の３位にカルボニトリル基を有する一般構造（Ｉｂ）の化合物の調製
式（Ｉｂ）の好ましい化合物は、１−Ｒ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，７］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（式中、３位にニトリル基を有するナフチリジニル環の１位における置換基Ｒは、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、複素環、置換複素環、−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒまたは−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５であり、ｍは０、１、２、３または４である。）を含む。これらの化合物は、上記の［１，８］ナフチリジン系のものと類似する反応シーケンスおよび方法を適用することによって、スキーム２０において式４７によって示される中間体  ４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，７］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステルから調製することができる。これらの化合物の合成における各段階のシーケンスをスキーム２１に示す。
【０３５０】
【化１６７】
2007503388.tif 000169
【０３５１】
ピペラジン部分における置換基が２−チオフェン以外であることが好ましい場合、ピペラジン−１−イル−チオフェン−２−イル−メタノンの代わりに、対応する酸塩化物によるｔ−ブチル−１−ピペラジンカルボキシレートのアシル化とそれに続く脱保護によって調製される、対応するＮ−アシルピペラジンを用いることができる。
【０３５２】
一般構造（Ｉｄ）を有する化合物の調製
式（Ｉｄ）の好ましい化合物は、１−Ｒ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，５］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（式中、ナフチリジニル環の１位における置換基Ｒは、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、複素環、置換複素環、−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒまたは−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５であり、ｍは０、１、２、３または４である。）を含む。これらの化合物は、出発原料としてピリジン２，３−ジカルボン酸を用いることによって調製することができる。ピリジン２，３−ジカルボン酸は無水酢酸と反応して、スキーム２１において式４８によって示されるフロ［３，４−ｂ］ピリジン−５，７−ジオンを生成することができ、これを、アセトアミドと反応させることによって、スキーム２１において式４９によって示されるピロロ［３，４−ｂ］ピリジン−５，７−ジオンに変換することができる。３−アミノピリジン−２−カルボン酸は、この中間体のホフマン分解から調製することができる。３−アミノピリジン−２−カルボン酸の還元的アミノ化により、スキーム２１において式５１によって示される３−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−ピリジン−２カルボン酸を生成することができる。この中間体はまた、スキーム２１に示されるように、リチウムヘキサメチルジシラジドおよびｐ−メトキシベンジルクロライドを用いることによって、３−アミノイソニコチン酸のアルキル化からも調製することができる。
【０３５３】
【化１６８】
2007503388.tif 000170
【０３５４】
スキーム２１において式５１によって示される中間体  ３−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−ピリジン−２−カルボン酸を用い、一般構造（Ｉａ）を有する化合物の合成に用いられる類似の反応シーケンスおよび方法を適用することによって、一般構造（Ｉｄ）を有する化合物を合成することができる。これらの化合物を調製するのに使用できる反応のシーケンスをスキーム２２に示す。
【０３５５】
【化１６９】
2007503388.tif 000171
【０３５６】
ナフチリジン部分の３位にカルボニトリル基を有する一般構造（Ｉｄ）の化合物の調製
式（Ｉｄ）の好ましい化合物は、１−Ｒ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，５］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（式中、３位にニトリル基を有するナフチリジニル環の１位における置換基Ｒは、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、複素環、置換複素環、−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ａｒまたは−（ＣＨ２）ｍＮＲ４Ｒ５であり、ｍは０、１、２、３または４である。）を含む。これらの化合物は、上記の［１，８］ナフチリジン系のものと類似する反応シーケンスおよび方法を適用することによって、スキーム２３において式５２によって示される中間体  ４−ヒドロキシ−ｌ−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，５］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステルから調製することができる。これらの化合物の合成における各段階のシーケンスをスキーム２３に示す。
【０３５７】
【化１７０】
2007503388.tif 000172
【０３５８】
ピペラジン部分における置換基が２−チオフェン以外であることが好ましい場合、ピペラジン−１−イル−チオフェン−２−イル−メタノンの代わりに、対応する酸塩化物によるｔ−ブチル−１−ピペラジンカルボキシレートのアシル化とそれに続く脱保護によって調製される、対応するＮ−アシルピペラジンを用いることができる。
【０３５９】
薬物標的としてのＭＩＦ
マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）は、その活性が様々な病態生理学的状態に関係していることから、薬物標的としての分析に非常に適している可能性がある。例えば、ＭＩＦは炎症反応と細胞増殖の両方における重要なメディエーターであることが示されている。この点で、ＭＩＦはサイトカイン、下垂体ホルモン、グルココルチコイドに誘発された免疫調整剤として、またごく最近では神経免疫調整剤として、神経機能において役割を果たすことが示されている。Ｔａｋａｈａｓｈｉら、Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．、第４巻、第７０７〜７１４頁、１９９８年；Ｂｕｃａｌａ、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、第８４０巻、第７４〜８２頁、１９９８年；Ｂａｃｈｅｒら、Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．、第４（４）巻、第２１７〜２３０頁、１９９８年。さらに、抗ＭＩＦ抗体は、認められる血管新生の低下と共に、腫瘍成長の著しい低下といった様々な用途を有することが最近、実証された。Ｏｇａｗａら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ、第１２（４）巻、第３０９〜３１４頁、２０００年；ＭｅｔｚおよびＢｕｃａｌａ（上記）。したがって、ＭＩＦを阻害できる小分子は、炎症反応の治療、血管新生の低下、ウイルス感染、細菌性感染、癌（特に腫瘍形成およびアポプトシス）の治療、対宿主性移植片病および付随する組織拒絶反応の治療において重大な価値を有する。ＭＩＦ阻害剤は、特に、様々な免疫関連反応、腫瘍成長、糸球体腎炎、炎症、マラリア性貧血、敗血症性ショック、腫瘍関連血管新生、硝子体網膜症、乾癬、対宿主性移植片病（組織拒絶反応）、アトピー性皮膚炎、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、炎症性肺疾患、中耳炎、クローン病、急性呼吸困難症候群、遅延型過敏症に有用であり得る。ＭＩＦ阻害剤はまた、抵抗力や、例えばグルココルチコイド作用の対抗制御；またはグルココルチコイドが媒介するアラキドン酸遊離の抑制のオーバーライディング（Ｃｙｓ−６０に基づく触媒のＭＩＦオキシドレダクターゼ活性またはＪＡＢＩ／ＣＳＮＳ−ＭＩＦ相互作用に基づくメカニズム）といったグルココルチコイド機能障害の治療において有用であり得る。
【０３６０】
ＭＩＦ阻害剤の有用性の一例は、エンドトキシン曝露後、検出可能なＭＩＦの血清濃度が急性期（１〜８時間）の間は徐々に増加し、８時間後にピークに達し、急性期以降（＞８時間）２０時間までの間、持続するという事実によって証明することができる。ＭＩＦは、いずれの動作理論にも制限されない一方で、例えば感染に対する局在的な応答の一部として、エンドトキシン誘発性ショックの炎症誘発段階において、活性化されたＴ細胞およびマクロファージによって産生されるようである。マクロファージに由来するＭＩＦは、一旦、例えば低濃度のＬＰＳなどの炎症誘発性刺激によって、またはＴＮＦ−αおよびＩＦＮ−γによって遊離されると、エンドトキシン性ショックの急性期において産生されるＭＩＦの供給源である可能性が高い。感染がもはや局在部位に限定されない場合、ＬＰＳに反応してＭＩＦを遊離する下垂体と、マクロファージの両方がエンドトキシン性ショックの急性期の後におけるＭＩＦの供給源である可能性が高い。例えば、参照により全てそのまま本明細書に組み込まれ、抗ＭＩＦ抗体によるこれらの結果を記載している米国特許第６，０８０，４０７号を参照のこと。
【０３６１】
好ましい実施形態の阻害剤は、ＬＰＳ攻撃後のマウスにおける致死性を抑制し、ＩＬ−１βおよびＴＮＦ−α濃度を低減するようである。したがって、様々な炎症状態は、ＭＩＦ阻害剤を用いた治療の影響を受ける可能性が高い。これについては、他の利点の中でも、炎症反応およびショックを治療するために、ＭＩＦの活性および／または遊離に対する阻害を使用することができる。ショック反応の初期段階と後期段階の両方における介入によって、有益な効果を得ることができる。これについては、ＭＩＦ阻害の保護作用を担う理論またはメカニズムいずれにも制限されない一方で、抗ＭＩＦの研究は、抗ＭＩＦ抗体の導入が循環血清中ＴＮＦ−α濃度の明らかな（最大で３５〜４０％）低下と関連していることを実証している。この低下は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるマクロファージに対するＭＩＦのＴＮＦ−α誘発活性と一致し、かつ、エンドトキシン投与後１〜２時間は、循環血液中でＭＩＦが検出できないという事実にもかかわらず、この時点で起こる血清中ＴＮＦ−α濃度の極めて高いピークにＭＩＦが一部関与しているかもしれないことを示唆する。したがって、ＭＩＦ阻害治療は炎症反応の初期段階で有益であり得る。
【０３６２】
ＭＩＦはまた、ショック応答の急性期後の段階においても役割を果たし、その結果、抗ＴＮＦ−α療法などの他の治療が奏効しない後期段階において介入する機会を提供する。ＭＩＦを阻害することにより、高濃度のエンドトキシン（例えば、下垂体ＭＩＦの循環血液への遊離を誘発する濃度）で攻撃した動物、およびＴＮＦ−αで攻撃した動物における致死性ショックを防止することができる。したがって、ＭＩＦ阻害能およびＴＮＦで攻撃された動物に対する防御能は、敗血症性ショックの後期と急性期後におけるＭＩＦの中和が有効であり得ることを示している。
【０３６３】
ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１βの濃度は、少なくとも場合によっては、ＭＩＦ濃度に相関している。したがって、抗ＭＩＦ小分子は、移植片拒絶反応、ＣＮＳ疾患の免疫媒介性および炎症性要素（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症など）、筋ジストロフィー、止血疾患（例えば、凝固障害、静脈閉塞疾患など）、アレルギー性神経炎、肉芽腫、糖尿病、対宿主性移植片病、慢性腎障害、脱毛症（抜け毛）、急性膵炎、関節疾患、鬱血性心不全、心血管疾患（再狭窄、アテローム性動脈硬化症）、関節疾患、骨関節症などを含む、様々なＴＮＦ−αおよび／またはＩＬ−１βに関連する疾患状態において有用であり得る。
【０３６４】
さらに、当該技術における更なる証拠は、ステロイドはサイトカイン産生の強力な阻害剤であるが、実際にＭＩＦの発現を増加させることを示している。Ｙａｎｇら、Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．、第４（６）巻、第４１３〜４２４頁、１９９８年；Ｍｉｔｃｈｅｌｌら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、第２７４（２５）巻、第１８１００〜１８１０６頁、１９９９年；ＣａｌａｎｄｒａおよびＢｕｃａｌａ，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、第１７（１）巻、第７７〜８８頁、１９９７年；Ｂｕｃａｌａ、ＦＡＳＥＢ  Ｊ．、第１０（１４）巻、第１６０７〜１６１３頁、１９９６年。したがって、特に関節リウマチなどの慢性炎症状態における、炎症、ショックおよび他のサイトカインが媒介する病的状態などのサイトカインが媒介する病態生理学的状態の治療のためには、ステロイド療法と組み合わせてＭＩＦ阻害剤を使用することは特に有用であり得る。このような併用療法は、病原応答あるいは他の炎症応答の発生後でさえも有益であり得る。例えば、臨床状況において、敗血症性ショック症状の発生後のステロイド投与はほとんど利益がないことが判明している。Ｂｏｎｅら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、第３１７巻、第６５３〜６５８頁、１９８７年；Ｓｐｒｉｎｇら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、第３１１巻、第１１３７〜１１４１頁、１９８４年を参照のこと。ステロイド／ＭＩＦ阻害の併用療法を使用することで、この障害を克服することができる。さらに、当業者であれば、そのような療法を局所的におよび／または全身的に、ＭＩＦの遊離および／または活性を阻害するように適合できることを理解する。
【０３６５】
アッセイ
ＭＩＦの阻害剤としての化合物の有効性は、様々なアッセイ法によって決定することができる。好ましい実施形態の適当な阻害剤は、ＭＩＦおよび／またはＭＩＦ搬出に関連する１つ以上の活性を低下させることができる。構造（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）または任意の他の構造を有する化合物は、この目的のために、後述するアッセイを含む（しかし、これらに限定されない）、１つ以上の一般的に認められたアッセイによって、ＭＩＦ阻害剤としての活性について評価できる。
【０３６６】
アッセイは一般的に、搬出をモニターするアッセイ、効果器または小分子結合をモニターするアッセイ、ＭＩＦ活性をモニターするアッセイを含む３つのカテゴリに分けることができる。しかしながら、これらのアッセイの組み合わせは、好ましい実施形態の範囲内にある。驚くべきことに、ＭＩＦのエピトープマッピングは、生物学的活性の代用物として作用するように見える。例えば、１つのアッセイでは、候補阻害剤の存在が、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ（ミネアポリス，ミネソタ州）製の市販の抗体などのモノクローナル抗体を用いて測定された細胞（例えばＴＨＰ−１細胞）からのＭＩＦの搬出の検出を遮断するのに対して、ポリクローナル抗体は、ＭＩＦが存在していることを実証する。さらに、細胞に基づく、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるアッセイを使用することで、これらの見込みのある阻害剤がＭＩＦ活性を阻害することを実証することができる。他の形態では、これらの２種類のアッセイ（すなわち、結合アッセイおよび活性アッセイ）は、ＭＩＦ活性にも作用する一方で、試験化合物の結合（例えば、モノクローナル抗体に対する置換能、またはそれらの結合に対する阻害能）を検出する単一のアッセイになるように組み合わせることができる。このようなアッセイは、ＥＬＩＳＡ型アッセイ（またはこれに類似する結合アッセイ）と、ＭＩＦ互変異性アッセイまたはこれに類似する機能アッセイとの組み合わせを含む。当業者が容易に認識するように、対象化合物のＭＩＦ結合能を検出できるとすれば、用いられる正確なアッセイは重要でない。さらに、このアッセイは、生物活性であるＭＩＦおよび不活性でないＭＩＦと相互作用する化合物について選択することから、好ましくは化合物のＭＩＦ活性に対する阻害能を検出する。
【０３６７】
生物活性があって不活性でないＭＩＦ（例えば、阻害される小分子）に結合するモノクローナル抗体に対して阻害能を示す化合物は、ＭＩＦの高次構造を変化させる方法、または抗体結合に必要なエピトープを遮断する方法のいずれかによって、ＭＩＦと相互作用する化合物（例えば小分子）の存在を必然的に示す。他の実施形態では、ＭＩＦ阻害活性は、ＭＩＦを含むポリペプチド複合体の形成を妨げる結果としても認識でき、このような複合体を妨害することによって、検出を阻害する高次構造の変化がもたらされる可能性がある。したがって、ＭＩＦにおける高次構造の変化をモニターするアッセイの使用は、それがｍＡｂを有する小分子などの化合物間の競合を測定するアッセイに加えて、または、そのようなアッセイの代わりとして使用される場合に有利である。種々のそのようなアッセイは当該技術分野で知られており、熱量測定、円偏光二色性、蛍光エネルギー移動、光散乱、核磁気共鳴（ＮＭＲ）、表面プラスモン共鳴、シンチレーション近接アッセイ（米国特許第５，２４６，８６９号を参照のこと）などを含む。さらに、ＷＯ０２／０７７２０−Ａ１およびＷＯ９７／２９６３５−Ａ１を参照のこと。したがって、当業者であれば、結合、および好ましくはＭＩＦの活性部位近くの高次構造の変化または配置を示す任意のアッセイが使用できることを認識する。数種類のより複雑な近接アッセイおよび高次構造のアッセイについては以下に記載する。この議論は単に例示にすぎず、好ましい実施形態において利用できる技術のタイプに限定するように決して解釈されるべきではない。
【０３６８】
一例では、円偏光二色性を利用することで、候補阻害剤の結合を測定することができる。円偏光二色性（ＣＤ）は、大半の生物タンパク質高分子が非対称の単量体単位であるＬ−アミノ酸から成り、それらは全て光学活性の特性を有するという事実に一部基づいている。加えて、ＤＮＡまたはαヘリックスポリペプチドのような剛構造は、適切な分光系を用いて測定される光学特性を有する。実際、容易に測定できる分光パラメータの大幅な変化により、様々な環境下での構造状態および構造状態の変化を同定するため、時には高分子内もしくはそれに付着した単一基の摂動を観察するための選択手段が提供できる。さらに、ＣＤ分析を頻繁に使用することで、様々な高分子の小分子およびリガンドとの相互作用が調べられる。Ｄｕｒａｎｄら、Ｅｕｒ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．、第２７（２）巻、第１４７〜１５１頁、１９９８年；Ｋｌｅｉｆｅｌｄら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．、第３９（２６）巻、第７７０２〜７７１１頁、２０００年；Ｂｉａｎｃｈｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．、第３８（４２）巻、第１３８４４〜１３８５２頁、１９９９年；Ｓａｒｖｅｒら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、第１４３４（２）巻、第３０４〜３１６頁、１９９９年を参照のこと。
【０３６９】
パスツールの法則は、光学的に活性な分子が非対称でなければならないこと、すなわち同分子とその鏡像が重ね合わせ不能であることを主張する。平面偏光は、同位相で伝わる左円偏光と右円偏光の組み合わせである。この光と非対称分子との相互作用は、吸収領域において、差分吸収（すなわち二色性）として認められる、１つの円偏光成分における優先的な相互作用をもたらす。Ｕｒｒｙ，Ｄ．Ｗ．，Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｈｉｃａｇｏ，Ｉｌｌ．，第３３〜１２０頁（１９６９年）；ＢｅｒｏｖａおよびＷｏｏｄｙ，Ｃｉｒｃｕｌａｒ  Ｄｉｃｈｒｏｉｓｍ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．，（２０００年）を参照のこと。
【０３７０】
そして、円偏光二色性は、発色団が特定波長で平面偏光と相互作用する場合にもたらされる吸収現象である。吸収帯は、同発色団における右および左円偏光成分の差分吸収に依存して負か、あるいは正である。バックグラウンドの寄与や実際の光相互作用の領域から何ミリミクロンも離れた対象の発色団を測定する旋光分散（ＯＲＤ）とは異なり、ＣＤは事象が起こる時点の波長における光学的事象を測定するという利点をもたらす。よって、円偏光二色性は、発色団の電子遷移に特異的である。ＢｅｒｏｖａおよびＷｏｏｄｙ，Ｃｉｒｃｕｌａｒ  Ｄｉｃｈｒｏｉｓｍ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．，（２０００年）を参照のこと。
【０３７１】
高分子溶液に対して円偏光二色性を適用することで、高次構造状態の同定することができる（ＢｅｒｏｖａおよびＷｏｏｄｙ，Ｃｉｒｃｕｌａｒ  Ｄｉｃｈｒｏｉｓｍ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．，（２０００年））。この技術は、高分子におけるランダムコイル、αヘリックス、およびβ鎖の高次構造状態を識別できる。タンパク質では、αヘリカル線維状タンパク質はαヘリカルポリペプチドのそれらと酷似する吸収曲線を示すが、リゾチームやＲＮＡ分解酵素のような既知の構造を有する球状タンパク質では、ヘリカル構造がＸ線結晶学の研究成果に合致する点はむしろ少ない。球状タンパク質における更なる困難の源は、約２８０ｎｍの分子上の芳香族性発色団の広がりである。ヘリックス上の変化における興味深い例は、ミオグロビンやアポミオグロビンを用いて実証されている。補欠分子族ヘムの除去後、残存するアポタンパク質は、残余円偏光二色性において２５％低下した楕円率を有する。ヘリックスのこの低下は、分子の１０〜１５残基が伸びた状態にあることに起因している。他の非ペプチドの光学活性された発色団は、高分子の第１級アミノ酸配列内に位置する場合、チロシン、トリプトファン、フェニルアラニン、システインなどを含む。非ペプチドの楕円率の例として、リボヌクレアーゼにおけるジスルフィド遷移やインスリンのシステイン遷移が挙げられる。
【０３７２】
したがって、円偏光二色性を使用することで、ＭＩＦの高次構造に対する作用能について候補阻害剤がスクリーニングできる。
【０３７３】
ある実施形態では、ＭＩＦを含む複合体や検出可能に標識された結合剤の存在を検出することによって、ＭＩＦ結合剤または阻害剤複合体の形成について決定することができる。以下により詳細に説明されるように、例えば蛍光偏光による蛍光エネルギーシグナルの検出により、ＭＩＦ結合剤分子複合体の形成を示すシグナルレベルが決定できる。それ故に、本明細書で提供されるように、候補阻害剤の非存在下および存在下での蛍光エネルギーシグナルに基づくＭＩＦ結合剤複合体形成の比較により、作用物質がＭＩＦと結合剤の間の相互作用を変えるかどうかを確認するための方法が提供される。例えば、結合剤がＭＩＦ基質、抗ＭＩＦ抗体、または既知の阻害剤でありうる一方で、候補阻害剤は試験されるべき化合物でも、その逆でもありうる。
【０３７４】
上述のように、ＭＩＦ結合剤複合体の形成に関する蛍光エネルギーシグナルに基づく測定は使用可能である。蛍光エネルギーシグナルの検出は、例えば、蛍光偏光、蛍光共鳴エネルギー移動、当該技術分野で既知の他の蛍光法によって可能である。一例として、ＭＩＦポリペプチドが候補阻害剤と同様に標識でき、かつエネルギー移動分子のドナー−アクセプターのペアを含むことが可能であり、エネルギードナーからエネルギーアクセプターへの蛍光共鳴エネルギー移動のレベルが決定される。
【０３７５】
候補阻害剤および／または結合剤は検出可能に標識でき、そして特に好ましい実施形態では、候補阻害剤および／または結合剤は蛍光エネルギーシグナルを生成することができる。候補阻害剤および／または結合剤は、当該技術分野で既知であり、かつ本明細書に記載の方法に基づく、例えば用いられるべき特定の蛍光エネルギー技術によって選択される様々な蛍光材料のいずれか（例えば蛍光団）といった適切なレポーター分子または部分に、共有結合または非共有結合によって、検出可能に標識できる。例えば、Ｈａｕｇｌａｎｄ（１９９６  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ−Ｓｉｘｔｈ  Ｅｄ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ；１９９９  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ−Ｓｅｖｅｎｔｈ  Ｅｄ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ，ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｒｏｂｅｓ．ｃｏｍ／ｌｉｔ／）および本明細書で参照された参考文献において蛍光レポーター部分および本明細書で提供される方法を認めることができる。好ましい実施形態における蛍光団のような使用にとって特に好ましいものとして、フルオレセイン、ローダミン、テキサスレッド、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ−５９４、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ−４８８、オレゴングリーン、ＢＯＤＩＰＹ−ＦＬ、Ｃｙ−５などが挙げられる。しかし、任意の適切な蛍光団が使用でき、特定の実施形態では列挙されるもの以外の蛍光団が好ましいことがある。
【０３７６】
本明細書において提供されるように、蛍光エネルギーシグナルは、任意の蛍光放射、励起、エネルギー移動、クエンチング、デクエンチング現象などを含む。典型的には、蛍光エネルギーシグナルは、適切な波長の光に反応する蛍光検出可能に標識された候補阻害剤および／または結合剤によって媒介できる。手短に述べると、また理論に拘束されることを望まない場合、蛍光エネルギーシグナルの生成は、一般に、一時的に基底状態から励起状態へ蛍光団のエネルギー状態を上昇させる適切なエネルギー源（例えば、選択された蛍光レポーター部分に適合する波長の光または蛍光団）による蛍光団の励起を伴う。励起された蛍光団は、通常は励起に好ましい波長とは異なる（例えば通常より長い）波長を有する検出可能な光の形態でエネルギーを次々に放射し、そうすることで同エネルギーは基底状態に戻る。好ましい実施形態の方法では、当業者であれば精通している基準に従って容易にかつ必要以上の実験を行うことなく選択できる特定の蛍光団、基質の標識方法および検出器具類に依存して、任意の蛍光エネルギーシグナルの使用について検討している。
【０３７７】
特定の実施形態では、蛍光エネルギーシグナルは、蛍光偏光（ＦＰ）シグナルである。特定の他の実施形態では、蛍光エネルギーシグナルは、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）シグナルでありうる。特定の他の好ましい実施形態では、蛍光エネルギーシグナルは、蛍光クエンチング（ＦＱ）シグナルまたは蛍光共鳴分光学（ＦＲＳ）シグナルでありうる（ＦＰ、ＦＲＥＴ、ＦＱおよびＦＲＳに関して詳しくは、例えば、ＷＯ９７／３９３２６；ＷＯ９９／２９８９４；Ｈａｕｇｌａｎｄ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ−６ｔｈ  Ｅｄ．，１９９６年，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ，４５６頁；および同文献で参照される参考文献を参照されたい）。
【０３７８】
ＦＰ、すなわちエネルギー源からの蛍光団による光子の吸収と、それに続く蛍光団による光子の放出との間に発生する蛍光団の（分子回転拡散に起因する）平均角変位の測定は、蛍光団の励起状態時における回転拡散の範囲や速度、分子の大きさや形状、溶液粘度、ならびに溶液温度に依存する（Ｐｅｒｒｉｎ、１９２６年  Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｒａｄ．、第１巻、第３９０頁）。粘度と温度が一定に保持される場合、ＦＰは見掛けの分子体積または蛍光団の大きさに直接に関係する。偏光値は、互いに異なる平面（例えば垂直および水平）において測定される蛍光強度の比率であることから、蛍光団の強度によって影響を受けない無次元量である。本明細書で提供される検出可能に標識された候補阻害剤および／または結合剤などの低分子量の蛍光団は、溶液中で高速な分子回転（すなわち低異方性）が可能であることから、低い蛍光偏光が読み取られることになる。しかし、本明細書で提供されるＭＩＦなどのより高分子量をもつ分子と複合体を形成する場合、基質の蛍光団部分は、溶液中で比較的低速な分子回転（すなわち高異方性）を示し、より高い蛍光偏光が読み取られることになる複合体と結合する。
【０３７９】
ＭＩＦの偏光値と比較される、検出可能に標識された遊離した候補阻害剤および／または結合剤の偏光値における差異、すなわち候補阻害剤および／または結合剤の複合体を使用することで、複合（例えば結合）に対する遊離の比率も決定できる。この差異を使用することで、例えば作用物質の非存在下で検出されるＦＰと作用物質の存在下で検出されるＦＰとを比較することによって、上記複合体の形成および／または予め形成された複合体の安定性に対する候補作用物質（すなわち候補阻害剤）の作用についても検出することができる。反応成分を分離することなく、ＦＰ測定は実施可能である。
【０３８０】
上述のように、好ましい実施形態の一態様は、モノクローナル抗体、既知の阻害剤をはじめとする結合剤の結合もしくは置換および／またはＭＩＦを含む候補阻害剤の複合体形成を使用することで、ＭＩＦ活性を変える阻害剤を同定する方法が提供される。これに関連して、ある種の化合物は、不活性な（組換え型の）ＭＩＦ（市販の供給元から入手可能）への抗体の認識能に作用しない一方で、細胞から自然に産生される生物活性のあるＭＩＦへのモノクローナル抗体の結合に対する阻害能／低下能を有することを実証し、かつｉｎ  ｖｉｖｏにおいてＭＩＦ活性を顕著に調節することについても実証した。したがって、抗体結合は酵素活性の代替として選ばれる可能性があることから、各候補化合物に関して高価でかつ複雑な酵素アッセイを実施する必要性がなくなる。当業者が容易に認識するように、酵素アッセイを回避できる場合には、ハイスループットの使用に極めて適合するアッセイが実現できることになる。
【０３８１】
さらに当業者が容易に認識できるように、そのようなアッセイは、ＭＩＦ関連以外でも利用でき、また酵素活性あるいは生物活性が結合アッセイによって交換可能な場合には常に使用することができる。例えば、不活性型（例えば、低分子の阻害型）を認識しないモノクローナル抗体によって認識される生物活性型である任意の酵素または他のポリペプチドが好ましい。酵素に関連する範囲内で、モノクローナル抗体は活性部位に結合できるが、低分子によって置換されうる。したがって、抗体を置換する任意の低分子は、候補酵素阻害剤として極めて優位でありうる。当業者が認識するように、抗体は酵素の活性状態に依存する高次構造を変化させるエピトープを認識でき、さらにエピトープが活性部位に存在しない場合でさえ、エピトープに対する抗体の結合を阻害するような低分子の結合は、酵素活性の代用としても作用することができる。したがって、抗体の置換が活性低下を予測する実質的に全てのポリペプチドへの使用に、本明細書で使用されるアッセイの種類を広げることが可能である。したがって、その最も単純な形態では、例えば酵素やそれに関連する中和抗体といった任意のポリペプチドを使用して、抗体を置換する低分子についてスクリーニングでき、それによって候補阻害剤を同定することができる。
【０３８２】
ＭＩＦ結合剤／候補阻害剤の複合体は、例えば、同時精製、共沈、免疫共沈降、放射アッセイまたは蛍光アッセイ、ウエスタンイムノブロット分析、固相リガンド−カウンターリガンド吸着剤技術、親和性クロマトグラフィー、表面親和性プラスモン共鳴などのアフィニティー技術を含むアフィニティー捕捉、ＮＭＲなど、上記に説明したように、ＭＩＦと別分子の間の分子間相互作用を測定する当該技術分野では既知の種々の技術のいずれかによって、同定することができる（例えば、米国特許第５，３５２，６６０号を参照のこと。）。ＭＩＦまたは結合剤に特異的に結合する、モノクローナル、ポリクローナル、キメラ、一本鎖抗体などを含む抗体を使用することで、そのような複合体の存在が決定できる。
【０３８３】
標識されたＭＩＦおよび／または標識された結合剤／候補阻害剤を使用することで、複合体の存在を検出することができる。対象分子は、適切なレポーター分子または部分、例えば様々な酵素のいずれか、蛍光物質、発光物質、および放射性物質に共有結合または非共有結合することによって標識することができる。適切な酵素の例として、西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ｐ−ガラクトシダーゼ、アセチルコリンエステラーゼなどが挙げられるが、これらに限定されない。適切な蛍光物質の例として、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシル、フィコエリトリン、テキサスレッド、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ−５９４、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ−４８８、オレゴングリーン、ＢＯＤＩＰＹ−ＦＬ、Ｃｙ−５などが挙げられるが、これらに限定されない。適切な発光物質としてルミノールが挙げられるが、これに限定されず、また、適切な放射性物質としては、放射性リン［３２Ｐ］、ヨウ素［１２５Ｉもしくは１３１Ｉ］、またはトリチウム［３Ｈ］が挙げられる。
【０３８４】
ＭＩＦおよび結合剤および／または候補阻害剤は、各成分間の分子間複合体の形成を可能にするのに十分な条件下で、かつ十分な時間をかけて結合される。複合体の存在を検するため、および／または、溶液中の遊離基質を検出するための溶液条件や方法を含む、このような複合体の形成に適する条件は、当該技術分野で既知であり、かつ本明細書で提供される教示に基づいて容易に決定することができる。
【０３８５】
ＭＩＦを含む複合体における検出可能に標識された結合剤（１種もしくは複数）および／または候補阻害剤（１種もしくは複数）、および／または同複合体の一部ではない結合剤あるいは候補阻害剤の結合は、基質によって生成される蛍光エネルギーシグナルの検出を介し、好ましい実施形態に従って同定することができる。典型的には、蛍光エネルギーシグナルを検出するためのエネルギー源は、基質を標識する蛍光レポーター部分に依存する、当業者が精通した分類に従って選択される。（ａ）ＭＩＦおよび（ｂ）検出可能に標識された結合剤および／または候補阻害剤を含有する試験溶液は、エネルギー源に曝露され、蛍光エネルギーシグナルが生成され、この蛍光エネルギーシグナルは種々の周知の器具のいずれかによって検出され、特定の蛍光エネルギーシグナルに従って同定される。好ましい実施形態では、蛍光エネルギーシグナルは、偏光フィルターを具備する分光蛍光計を用いて検出できる蛍光偏光シグナルである。特に好ましい実施形態では、ＬＪＬ  ＣＲＩＴＥＲＩＯＮ（商標）Ａｎａｌｙｓｔ（ＬＪＬ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）プレートリーダーを用いて読取り可能な複数の反応チャンバーのそれぞれにおいて蛍光偏光アッセイを同時に実施し、例えば、様々な反応チャンバー間で多様な反応成分または条件を有する高処理スクリーニング（ＨＴＳ）を提供する。蛍光偏光の読取りが得られる他の適切な器具の例として、ＰＯＬＡＲＳＴＡＲ（商標）（ＢＭＧ  Ｌａｂ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｏｆｆｅｎｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＢＥＡＣＯＮ（商標）（Ｐａｎｖｅｒａ，Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、ＰＯＬＡＲＩＯＮ（商標）（Ｔｅｃａｎ，Ｉｎｃ．，Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ，ＮＣ）装置などが挙げられる。
【０３８６】
ＭＩＦと結合剤の間で形成している複合体および／または候補阻害剤の存在に関する測定は、本明細書において提供され、かつ当該技術分野で既知である蛍光エネルギーシグナルの方法を含む、上述した種々の方法によって実施することができる。このような方法は、例としてＦＰ、ＦＲＥＴ、ＦＱ、他の蛍光アッセイ、同時精製、共沈、免疫共沈降、放射分析、ウエスタンイムノブロット分析、固相リガンド−カウンターリガンド吸着剤技術、親和性クロマトグラフィー、表面親和性プラスモン共鳴などのアフィニティー技術を含むアフィニティー捕捉、円偏光二色性などを含みうるが、これらに限定されない。これらや他の有用なアフィニティー技術として、例えば、Ｓｃｏｐｅｓ，Ｒ．Ｋ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，１９８７年，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，ＮＹ；Ｗｅｉｒ，Ｄ．Ｍ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９８６年，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｂｏｓｔｏｎ；およびＨｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．ら、Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ａｆｆｎｉｔｙ  Ｌｉｇａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９９２年，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａを参照されたい。これらは参照により全てそのまま本明細書に組み込まれ、アフィニティー技術を含む、複合体を単離して特性化するための技術に関して詳しい。様々な実施形態では、Ｋａが約１０４Ｍ−１を超えるかまたはそれに等しい、好ましくは約１０５Ｍ−１を超えるかまたはそれに等しい、より好ましくは約１０６Ｍ−１を超えるかまたはそれに等しい、さらにより好ましくは約１０７Ｍ−１を超えるかまたはそれに等しい１０１１Ｍ−１までの条件でＭＩＦが結合剤および／または候補阻害剤と結合する場合、ＭＩＦは特異的な結合を介して結合剤および／または候補阻害剤と相互作用することができる。結合パートナー間の親和性は、上記の蛍光エネルギーシグナルの方法に従い、例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄら、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、第５１巻、第６６０頁（１９４９年）に記載された従来のデータ処理技術を用いて生成されたデータから容易に算出することができる。
【０３８７】
例えば蛍光エネルギーシグナルが蛍光偏光シグナルである場合の様々な実施形態において、遊離した検出可能に標識された候補阻害剤および／または結合剤の（偏光における）蛍光異方性はＭＩＦの非存在下で測定でき、かつ十分に結合した基質の（偏光における）蛍光異方性は滴定した量のＭＩＦの存在下で測定できる。偏光における蛍光異方性は、標識された候補阻害剤および／または結合剤が蛍光団における励起状態の寿命が尽きるまでの間に起こす回転運動量の関数として変動する。候補阻害剤および／または結合剤の遊離したものと十分に結合したものとの異方性は、例えば候補作用物質が存在するといった所定の一連の実験条件下でＭＩＦに結合した候補阻害剤および／または結合剤の画分を測定するために、有用に使用することができる（例えば、Ｌｕｎｄｂｌａｄら、１９９６年、Ｍｏｌｅｃ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．、第１０巻、第６０７頁；Ｄａｎｄｌｉｋｅｒら、１９７１年、Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ．、第７巻、第７９９頁；Ｃｏｌｌｅｔｔ，Ｅ．，Ｐｏｌａｒｉｚｅｄ  Ｌｉｇｈｔ：Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，１９９３年、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照のこと。）。
【０３８８】
特定の好ましい実施形態は、一部は分子間エネルギー移動の使用に関連することで、ＭＩＦ結合剤における複合体の形成と安定性および／またはＭＩＦ候補阻害剤における複合体の形成がモニターされる。
【０３８９】
エネルギー移動（ＥＴ）は、２分子間の共鳴相互作用、すなわちエネルギーを供与する「ドナー」分子とエネルギーを受ける「アクセプター」分子から引き起こされる。エネルギー移動は、（１）ドナーの放射スペクトルがアクセプターの吸収スペクトルと重なり、かつ（２）ドナーとアクセプターが互いに特定の距離内（例えば、約１０ｎｍ未満）に存在する場合に発生しうる。エネルギー移動の効率は、主にドナーとアクセプターの接近に基づいて決定され、距離と共に６乗のオーダーで低下する。故に、ＥＴの測定値はアクセプター化合物とドナー化合物の接近に対して著しく影響を与え、ＥＴ上の変化は例えばドナーとアクセプターの結合または解離などの化合物の近接の変化に感度よく影響する。
【０３９０】
したがって、ＭＩＦまたは１種もしくは複数のＥＴドナーおよびＥＴアクセプター分子を含むＭＩＦ結合剤の複合体と接触することによって、適切な部分において、候補ＭＩＦ阻害剤をアッセイし、ＥＴドナーを励起して励起ＥＴドナー分子を生成し、ＥＴドナーからＥＴアクセプターへのエネルギー移動によって生成されるシグナルを検出するための方法を提供することは、好ましい実施形態の一態様である。さらに本明細書で提供されるように、本方法は、ドナー−アクセプター対として機能できる任意の適切なＥＴドナー分子とＥＴアクセプター分子を使用できる。
【０３９１】
特定の好ましい実施形態では、ＥＴドナー分子とアクセプター分子間のエネルギー移動によって生成される検出可能なシグナルは、先に検討したように、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）に起因する。励起されたドナー蛍光団からのエネルギーがアクセプター蛍光団に直接移動する際、ＦＲＥＴは１分子内で、または２種類の様々な分子間で生じる（レビューとして、Ｗｕら、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、第２１８巻、第１〜１３頁、１９９４年を参照のこと）。
【０３９２】
好ましい実施形態の他の態様では、候補阻害剤のＭＩＦ輸送に対する作用能が試験される。
【０３９３】
上記アッセイの第１段階を実施することで、細胞外でＭＩＦが検出される。このアッセイでは、ＭＩＦを発現する試験細胞が使用される（例えばＴＨＰ−１細胞）。試験細胞は、タンパク質を自然に産生できるか、またはトランスフェクトされた発現ベクターから産生できる。試験細胞は、好ましくは正常に、トランスフェクションが単に発現レベルを上げるようにタンパク質を発現する。故に、ＭＩＦおよびＩＬ−１の発現にとってＴＨＰ１細胞が好適である。ＨＩＶｔａｔなどのウイルス由来のタンパク質のアッセイ中において、試験細胞がタンパク質を「自然に」産生しない場合には、適切なベクターを用いて容易にトランスフェクトでき、当業者が容易に認識するように、試験細胞は所望のタンパク質を発現する。
【０３９４】
ＭＩＦは、発現後に、種々の周知の方法および手順のいずれか１つによって検出される。このような方法は、フローサイトメトリー、共焦点顕微鏡、画像解析、細胞の細胞質ゾルまたは細胞用培地に関する免疫沈降、細胞用培地におけるウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、一次元もしくは二次元ゲル解析、ＨＰＬＣ、バイオアッセイなどと組み合わせた、抗体を用いた染色を含む。初期スクリーニングに便利なアッセイはＥＬＩＳＡである。ＭＩＦの搬送は、その他のアッセイのうちの１つ、好ましくは代謝標識後の細胞用培地における免疫沈降によって確認できる。簡単に言えば、ＭＩＦタンパク質を発現する細胞は、メチオニンおよび／またはシステインを含まない培地内で３５Ｓ−メチオニンおよび／または３５Ｓ−システインで１５分間パルス標識され、過剰なメチオニンおよび／またはシステインを追加した培地内で追跡される。培地画分が収集され、例えば遠心分離機で遠心分離によって清澄化される。１％ＮＰ−４０、０．５％デオキシコール酸塩（ＤＯＣ）、２０ｍＭ  ＴＲＩＳ、ｐＨ７．５、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、２ｍＭ  ＥＧＴＡ、１０ｎＭ  ＰＭＳＦ、１０ｎｇ／ｍｌ  アプロチニン、１０ｎｇ／ｍｌ  ロイペプチン、および１０ｎｇ／ｍｌ  ペプスタチンを含有する緩衝液が清澄化培地に添加される。ＭＩＦに対する抗体が添加され、冷間でインキュベーション後、タンパク質Ａ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）またはＧａｍｍａＢｉｎｄ（商標）−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）などの沈降二次抗体または免疫グロブリン結合タンパク質が更なるインキュベーションのために添加される。同時に対照として、細胞質内タンパク質がモニターされ、細胞質内タンパク質に対する抗体が免疫沈降において選ばれる。免疫複合体がペレット状にされ、氷冷した緩衝液で洗浄される。さらに、複合体を氷冷したＩＰ緩衝液（０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  Ｎａ−リン酸塩、ｐＨ７．２、１％ＤＯＣ、１％ＮＰ−４０、０．１％ＳＤＳ）で洗浄する。免疫複合体がＳＤＳゲル試料用緩衝液中に直接溶出され、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで電気泳動される。ゲルはフルオログラフィーで処理され、乾燥され、Ｘ線フィルムに曝露される。あるいは、細胞をうまく処理することで、レポーターで標識されたＭＩＦが産生できる。これにより、活性ＭＩＦの存在がレポーターの代替活性を通してありうる。
【０３９５】
理論に束縛されることは望まないものの、現在の阻害剤は、自然に産生されたＭＩＦ複合体との直接的な相互作用によって、その生物活性を遮断するのに十分なタンパク質の高次構造の改変に関する方法で機能すると考えられている。この相互作用をＭＩＦ化合物の共結晶のＸ線結晶学によりマッピングすることで、相互作用の正確な部位を決定することができる。一部位はＭＩＦの互変異性活性に関与するポケットに局在する。
【０３９６】
ＭＩＦの輸送の阻害についてのスクリーニングアッセイは、阻害剤の種類および作用を受けている活性の性質によって変動する。アッセイは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにおいて実施することができる。一般に、モデル細胞または動物系において、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのアッセイはＭＩＦ活性、または多量体化を評価することを目的とし、ｉｎ  ｖｉｖｏでのアッセイはＭＩＦ活性、細胞外局在化、および細胞内局在化を評価することを目的とする。これらのアッセイいずれにおいても、適切な対照との比較して、統計的に有意な上昇または低下は促進または阻害を示す。
【０３９７】
マクロファージ遊走に対するＭＩＦの阻害能に基づく候補化合物の効果を試験することにより、１つのｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるアッセイを実施することができる。つまり、ヒト末梢血単球は、本質的に、Ｗｅｉｓｅｒら、Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、第９０巻、第１６７〜１７８頁、１９８５年およびＨａｒｒｉｎｇｔｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、第１１０巻、第７５２〜７５９頁、１９７３年に記載のように、アガロース−液滴アッセイ系における指標細胞として好適である。マクロファージ遊走を分析する他のアッセイ系もまた使用することができる。このようなアッセイは、Ｈｅｒｍａｎｏｗｓｋｉ−Ｖｏｓａｔｋａら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．、第３８巻、第１２８４１〜１２８４９頁、１９９９年に記載されている。
【０３９８】
他のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイは、ドーパクロムのＤ−異性体の互変異性に対するＭＩＦの触媒能を測定することを目的とする（Ｒｏｓｅｎｇｒｅｎら、Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．、第２巻、第１４３〜１４９頁、１９９６年；Ｗｉｎｄｅｒら、Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．、第１０６巻、第１５３〜１６６頁、１９９３年；Ａｒｏｃａら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．、第２７７巻、第３９３〜３９７頁を参照のこと。）。つまり、この方法では、Ｄ−ドーパクロムが候補阻害剤の存在下および非存在下でＭＩＦに提供され、５，６−ジヒドロキシインドール−２−カルボン酸（ＤＨＩＣＡ）への互変異性に対する触媒能がモニターされる。しかし、Ｄ−ドーパクロムのメチルエステルの使用は、より高速な反応速度が観察される点で、好ましい可能性がある。互変異性の検出は、種々の標準的方法のいずれによっても実施することができる。
【０３９９】
同様のアッセイにおいて、フェニルピルビン酸の互変異性に対するＭＩＦの触媒能を試験することができる（Ｊｏｈｎｓｏｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．、第３８（４８）巻、第１６０２４〜１６０３３頁、１９９９年を参照のこと。）。つまり、この方法では、通常、フェニルピルビン酸または（ｐ−ヒドロキシフェニル）ピルビン酸がケトン化された後に分光学を用いる。さらに、産物の形成は、これらの化合物のＭＩＦによる処理と、それに続く１Ｈ  ＮＭＲ分析を意図したリンゴ酸塩への変換によって確認できる。
【０４００】
ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるアッセイは、本明細書に記載のものなど、ＭＩＦ核酸分子を含有する発現ベクターで一時的もしくは安定的にトランスフェクトされた細胞において実施できる。これらの細胞は、候補化合物の存在下または非存在下でＭＩＦ活性（例えば、アポトーシス、増殖などの調節）または細胞外および細胞内の局在化を測定するのに好ましい可能性がある。アポトーシスについてアッセイする場合、例えば、核酸のフラグメンテーションおよび細胞の空隙率を試験するために、色素染色および顕微鏡使用を含む種々の細胞分析を使用することができる。
【０４０１】
試験化合物の存在下または非存在下でＭＩＦの組換え型あるいは天然型を系に与え、または内因性ＭＩＦの発現を誘発することによって、モデル細胞または動物系の病理における統計的に有意な上昇または低下を測定することにより、同系において他のアッセイを実施することができる。例えば、ＬＰＳを使用することで、中毒性ショック応答を誘発することができる。
【０４０２】
本明細書に簡潔に記載されたアッセイを使用することで、ＭＩＦに特異的な阻害剤を同定することができる。
【０４０３】
本明細書に記載のアッセイのいずれかにおいて、試験細胞は自然に（例えばＴＨＰ−１細胞）またはタンパク質をコードする組換えＤＮＡ分子の導入後にＭＩＦを発現できる。トランスフェクションおよび形質転換プロトコルは、当該技術分野で周知であり、Ｃａ２ＰＯ４が介在するトランスフェクション、エレクトロポレーション、ウイルスベクターによる感染、ＤＥＡＥ−デキストランが介在するトランスフェクションなどを含む。上記のタンパク質に代わるものとして、キメラＭＩＦタンパク質（すなわち、ＭＩＦタンパク質と他のタンパク質もしくはタンパク質断片との融合によって調製されるタンパク質）、またはリーダー配列が欠損するように設計されたタンパク質配列が使用できる。同様の方法により、融合を構築して分泌、輸送または細胞質内保持を誘導することができる。これらのあらゆる配列をＭＩＦとの融合構築に使用することで、阻害剤のアッセイを補助することができる。宿主細胞は、ウイルスなどによる罹患や感染の結果として、ＭＩＦを発現することもできる。リーダー配列によって輸送される分泌タンパク質は周知であり、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧα）、成長ホルモン、肝細胞成長因子、トランスフェリン、神経成長因子、血管内皮成長因子、オバルブミン、インスリン様成長因子などを含む。同様に、細胞質内タンパク質は周知であり、ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、アクチン、他の細胞骨格タンパク質、タンパク質キナーゼＡまたはＣなどの酵素などを含む。最も有用なタンパク質細胞質内または分泌タンパク質は、ＥＬＩＳＡなどの便利なアッセイにおいて容易に測定されるものである。これら３種類のタンパク質（リーダーを含まない、分泌および細胞質内）は、試験細胞における同時トランスフェクションによって自然に同時発現でき、または独立した宿主細胞内に別々にトランスフェクトできる。さらに、本明細書に記載されるアッセイにおいて、細胞は安定的に形質転換でき、またはタンパク質を一時的に発現できる。
【０４０４】
免疫沈降は、阻害の測定に使用できるアッセイの１つである。つまり、自然にまたは導入されたベクターコンストラクトからＭＩＦを発現する細胞は、メチオニンおよび／またはシステインを含まない細胞用培地内で短時間、通常は１５分以上で、３５Ｓ−メチオニンおよび／または３５Ｓ−システインで標識される。パルス標識後、リーダーを含まないタンパク質がヘパリンと結合する場合、細胞はヘパリンを加えた過剰な未標識のメチオニンおよびシステインを補給された培地で洗浄される。次いで、細胞は、様々な時間にわたり、同じ追跡培地内で培養される。候補阻害剤またはエンハンサーが様々な濃度で培養物に添加される。培養上清が収集され、清澄化される。抗ＭＩＦ免疫血清もしくはモノクローナル抗体、またはペプチドタグが存在する場合に抗タグ抗体と共に上清がインキュベートされた後、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  Ｃｏｗａｎ  Ｓｔｒａｉｎ  Ｉ、タンパク質Ａ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）、もしくはＧａｍｍａ−ｂｉｎｄ（商標）Ｇ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）などの発色試薬で追跡する。免疫複合体は遠心分離によってペレット状にされ、１％ＮＰ−４０および０．５％デオキシコール酸塩、ＥＧＴＡ、ＰＭＳＦ、アプロチニン、ロイペプチン、およびペプスタチンを含有する緩衝液で洗浄される。次いで、沈殿物をリン酸ナトリウムｐＨ７．２、デオキシコール酸塩、ＮＰ−４０、およびＳＤＳを含有する緩衝液で洗浄する。免疫複合体がＳＤＳゲル試料用緩衝液中に溶出され、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離される。ゲルはフルオログラフィーで処理され、乾燥され、Ｘ線フィルムに曝露される。
【０４０５】
あるいは、細胞上清中のＭＩＦ量を検出して定量するのにＥＬＩＳＡを選択することができる。ＥＬＩＳＡはハイスループットスクリーニングにおける検出にとって好ましい。つまり、９６ウェルプレートは、抗ＭＩＦ抗体または抗タグ抗体でコーティングされ、洗浄され、２％ＢＳＡでブロッキングされる。次いで、細胞上清がウェルに添加される。インキュベーションおよび洗浄の後、二次抗体（例えばＭＩＦに対する抗体）が添加される。二次抗体は、酵素などの標識用もしくは検出用試薬またはビオチンに結合することができる。更なるインキュベーション後に、生成試薬が添加され、ＥＬＩＳＡプレートリーダーを用いてＭＩＦの量が測定される。生成試薬は、二次抗体（典型的には抗アイソタイプ抗体）に結合する酵素またはストレプトアビジンに結合する酵素についての基質である。適切な酵素は当該技術分野で周知であり、比色反応を起こす基質（例えばＡＢＴＳ）上で作用する西洋わさびペルオキシダーゼを含む。酵素に結合された二次抗体を用いるのではなく、抗ＭＩＦ抗体が西洋わさびペルオキシダーゼまたは他の匹敵する検出試薬と直接結合できることが認められる。必要に応じて、細胞上清を濃縮することで、検出限界の向上が可能である。さらに、ＥＬＩＳＡなどの検出法を使用して、細胞内および細胞外のＭＩＦの濃度をモニターすることができる。細胞内濃度が望ましい場合、細胞溶解液が好適である。細胞外濃度が望ましい場合、培地をスクリーニングできる。
【０４０６】
ＥＬＩＳＡは、複数の候補阻害剤またはエンハンサーのハイスループットスクリーニングにも容易に適合できる。つまり、このようなアッセイは好都合にも細胞ベースであり、９６ウェルプレート内で実施される。自然にまたは安定的にＭＩＦを発現する試験細胞は、約２０，０００個の細胞／ウェルなど、発現された産物の検出に適する濃度で播種する。しかし、細胞がタンパク質を自然に発現しない場合、エレクトロポレーションまたはＣａ２ＰＯ４が介在するトランスフェクションなどによって一時的な発現が得られる。エレクトロポレーションにおいて、細胞の混合物１００μｌ（例えば１５０，０００個の細胞／ｍｌ）およびベクターＤＮＡ（５μｇ／ｍｌ）を９６ウェルプレートの個々のウェル内に分散させる。９６ウェル電極を具備する装置（例えばＥＣＭ６００エレクトロポレーションシステム、ＢＴＸ、Ｇｅｎｅｔｒｏｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．）を用いて細胞ｗｐエレクトロポレートする。エレクトロポレーションにとって最適な条件は、特定の宿主細胞種を対象に実験的に決定される。電位、抵抗、およびパルス長は、代表的な変動パラメータである。エレクトロポレーションを最適化するためのガイドラインは、製造業者から入手でき、またはＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌら（編），Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，１９８７年）などのプロトコルマニュアルに見ることができる。細胞は培地と等しい容量で希釈され、４８時間インキュベートされる。哺乳類細胞、酵母細胞、細菌などを含む様々な細胞種に対してエレクトロポレーションを実施することができる。インキュベーション後に、培地が阻害剤の有無にかかわらず添加され、さらに細胞が１〜２日間インキュベートされる。この時点で培地が採取され、本明細書におけるアッセイのいずれかによってタンパク質がアッセイされる。好ましくは、タンパク質の検出にＥＬＩＳＡが使用される。初期濃度５０μＭが試験される。この量が搬出またはモノクローナルＡｂの検出の統計的に有意な低下をもたらす場合、さらに候補阻害剤が用量反応において試験される。
【０４０７】
あるいは、濃縮した上清をＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で電気泳動し、ナイロンまたはニトロセルロースなどの固体支持体に移動することができる。次いで、同位体または非同位体のレポーター基を含有するＭＩＦに対する抗体を用いて、イムノブロットによってＭＩＦが検出される（Ｈａｒｌｏｗ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８年）。これらのレポーター基として、酵素、共同因子、色素、放射性同位体、発光分子、蛍光分子、ビオチンなどが挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、レポーター基は、２，２’−アジノ−ジ−３−エチルベンズチアゾリンスルホン酸を用いたインキュベーションによって検出できるｌ２５Ｉまたは西洋わさびペルオキシダーゼである。前述したこれらの検出アッセイは、ＭＩＦがペプチドタグを含有する場合の使用に容易に適合する。その場合、抗体はペプチドタグに結合する。他のアッセイとしては、ＨＰＬＣや親和性クロマトグラフィーを含むサイズまたは電荷に基づくクロマトグラフィーが挙げられる。
【０４０８】
あるいは、バイオアッセイを使用することで、細胞用培地内に存在する活性ＭＩＦの量を定量することができる。例えば、ＭＩＦの生物活性は、マクロファージ遊走アッセイによって測定することができる。つまり、ＭＩＦを含有する発現ベクターでトランスフェクトされた細胞は約３０時間培養され、その時間内に候補阻害剤またはエンハンサーが添加される。インキュベーション後、細胞は血清含量が低い血清培地に移され、さらに１６時間インキュベーションを行う。培地は取り除かれ、遠心分離によって清澄化される。プロテアーゼ阻害剤を含有する緩衝液が培地に添加され、あるいは、細胞が溶解され、内部濃度が次のようにして測定される。次いで、ＭＩＦの生物活性がマクロファージ遊走アッセイ、イソメラーゼ活性、または増殖アッセイによって測定される。培養された休止３Ｔ３細胞に様々な量の溶出液を添加することによって、増殖アッセイが実施される。トリチウムチミジンが培地に添加され、約２４時間後にＴＣＡ沈殿カウント数が測定される。バイタル色素ＭＴＴの低下は、増殖を測定する他の方法である。標準として、精製された組換え型ヒトＦＧＦ−２が使用できる。ＣＰＳに誘発される中毒性ショック、ＴＳＳＴ−１に誘発される中毒性ショック、コラーゲンに誘発される関節炎など、当該技術分野で使用可能な適切なバイオアッセイにおいて他の機能をアッセイすることができる。
【０４０９】
他のｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける血管新生アッセイは、コラーゲンゲル内部の内皮細胞の増殖（Ｇｏｔｏら、Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ．、第６９巻、第５０８頁、１９９３年）、ＭＩＦタンパク質を搬出する細胞からチャンバーによって分離されたコラーゲンゲル上の脳毛細血管内皮細胞の共培養（Ｏｋａｍｕｒｅら、Ｂ．Ｂ．Ｒ．Ｃ．、第１８６巻、第１４７１頁、１９９２年、Ａｂｅら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９２巻、第５４頁、１９９３年）、または、細胞遊走アッセイ（Ｗａｒｒｅｎら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、第９５巻、第１７８９頁、１９９５年を参照）を測定するバイオアッセイを含む。
【０４１０】
抗体の産生
本明細書で用いている「抗体」という用語は包括的用語であり、通常の意味で、限定的でなく用いられ、ポリクローナル抗体、単一特異的抗体、モノクローナル抗体などに加え、このような抗体の抗原結合断片を呼ぶことを含む。好ましい実施形態の抗ＭＩＦ／標的抗体に関しては、本明細書で用いている「抗原」という用語は包括的用語であり、通常の意味で、限定的でなく用いられ、マクロファージ遊走阻止因子ポリペプチドまたは標的ポリペプチド、変異体、あるいはそれらの機能断片を呼ぶことを含む。抗ＭＩＦ／標的抗体、または、そのような抗体の抗原結合断片は、少なくとも約１×１０５個Ｍ−１、一般に少なくとも約１×１０６個Ｍ−１、および好ましくは少なくとも約１×１０８個Ｍ−ｌの標的ポリペプチドまたはそのエピトープについて特異的な結合活性を有するものとして特徴付けられる。ＭＩＦ／標的ポリペプチドに特異的なエピトープに特異的な結合活性を保持する抗ＭＩＦ／標的抗体のＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ＦｄおよびＦｖ断片は、好ましい実施形態の範囲内に包含される。特に興味深い点は、活性のポリペプチドに結合し、阻害性低分子の結合時に置換される抗体である。当業者であれば、このような置換が高次構造変化の結果である可能性があり、従って、エピトープの性質、エピトープとの競合的結合、または抗体のそのエピトープからの立体排除を変化させる可能性があることを容易に認識する。一実施例において、酵素の活性部位は、特定の抗体についてのエピトープであり得、活性部位で、またはその近くの低分子の結合時に抗体の免疫応答性が失われ、それによって、酵素活性の代理マーカーとして抗体との免疫応答性の消失を使用することが可能になる。
【０４１１】
さらに、本明細書で用いている「抗体」という用語は包括的用語であり、通常の意味で、限定的でなく用いられ、例えば、一本鎖抗体、キメラ、二機能およびヒト化抗体に加え、それらの抗原結合断片を含む、天然抗体および非天然抗体を呼ぶことを含む。このような非天然抗体は、固相ペプチド合成を用いて構成でき、組換え技術によって産生でき、または例えば可変重鎖および可変軽鎖を含むコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって得ることができる（Ｈｕｓｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、第２４６巻、第１２７５〜１２８１頁（１９８９年））。例えば、キメラ、ヒト化、ＣＤＲ移植、一本鎖、および二機能抗体を作製するこれら及び他の方法は、当該技術分野では周知である（ＷｉｎｔｅｒおよびＨａｒｒｉｓ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ、第１４巻、第２４３〜２４６頁（１９９３年）；Ｗａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ、第３４１巻、第５４４〜５４６頁（１９８９年）；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９２年）；Ｂｏｒｒａｂｅｃｋ、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２ｄ  ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ（１９９５年）；Ｈｉｌｙａｒｄら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９９２年））。
【０４１２】
特定の好ましい実施形態では、抗ＭＩＦ／標的抗体は、上記のように、天然源から調製できる、あるいは遺伝子技術によって産生できるＭＩＦまたは標的ポリペプチドの活性部位領域を含む単離ペプチドを例とする免疫原、または上記のように、合成ペプチドを含むＭＩＦ／標的ポリペプチドの免疫原性断片（例えば、８〜３０個以上の隣接したアミノ酸配列を含む免疫原性配列）として用いて産生可能である。ＭＩＦ／標的ポリペプチドの非免疫原性ペプチド部分には、ハプテンをウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）もしくはスカシ貝ヘモシアニン（ＫＬＨ）などのキャリアー分子と結合させる、またはペプチド部分を融合タンパク質として発現させることによって免疫原性を付与できる。様々な他のキャリアー分子およびハプテンをキャリアー分子と結合させる方法は、当該技術分野で周知である（ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、前出、１９９２年）。
【０４１３】
例えば、ウサギ、ヤギ、マウス、他の哺乳動物において、ポリクローナル抗体を産生する方法は当該技術分野で周知である。さらに、モノクローナル抗体は、当該技術分野で周知であり、かつごく普通の方法を用いて得ることができる（ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、前出、１９９２年）。例えば、標的ポリペプチドで免疫された哺乳動物由来の脾臓細胞をＳＰ／０２骨髄腫細胞などの適切な骨髄腫細胞系と融合することで、ハイブリドーマ細胞を産生することができる。クローニングされたハイブリドーマ細胞系を、ラベリングされた標的ポリペプチドまたはその機能断片を用いて、スクリーニングすることで、所望の特異性を有する標的ポリペプチドモノクローナル抗体を分泌するクローンが同定できる。所望の特異性および親和性を有する標的ポリペプチドモノクローナル抗体を発現するハイブリドーマは単離でき、例えば標準化されたキットを調製するのに有用である抗体の連続的供給源として利用できる。同様に、例えば、一本鎖抗標的ポリペプチドを発現する組換えファージも、標準化されたキットを調製するのに使用できるモノクローナル抗体を提供する。
【０４１４】
ＭＩＦ阻害剤を使用する用途および方法
ＭＩＦ阻害剤は、上記のように、様々な適用可能な用途を有する。ＭＩＦの候補阻害剤は単離できるか、または細菌、真菌、植物、寄生虫、化学物質のライブラリ（低分子）、ペプチドまたはペプチド誘導体などの種々の供給源から入手できる。さらに、当業者は、コントロールレベルからの統計的に有意な変動が観察される場合に阻害が生じていることを認識する。
【０４１５】
病理学およびホメオスタシスにおけるＭＩＦの様々な役割について考えると、ＭＩＦの活性またはＭＩＦの細胞外局在化に対する阻害は、治療効果を発揮することができる。例えば、最近の研究では、抗ＭＩＦ抗体がマウスをＬＰＳに誘発される致死性から十分に防御したことから、ＭＩＦは内毒素血症のメディエーターであることが実証されている。Ｂｅｒｎｈａｇｅｎら、Ｎａｔｕｒｅ、第３６５巻、第７５６〜７５９頁、１９９３年；Ｃａｌａｎｄｒａら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、第１７９巻、第１８９５〜１９０２頁、１９９４年；Ｂｅｒｎｈａｇｅｎら、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．、第２巻、第１９８〜２０１頁、１９９４年を参照のこと。さらに、抗ＭＩＦ抗体は、敗血症性ショックを誘発するグラム陽性細菌で攻撃したマウスにおける生存率を顕著に上昇させている。Ｂｅｒｎｈａｇｅｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．、第７６巻、第１５１〜１６１頁、１９９８年。他の研究では、腫瘍細胞の成長におけるＭＩＦの役割やＭＩＦのアンチセンス阻害がアポトーシス刺激に耐性をもたらすことが実証されている。Ｔａｋａｈａｓｈｉら、Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．、第４巻、第７０７〜７１４頁、１９９８年；Ｔａｋａｈａｓｈｉら、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、第４３（１）巻、第６１〜６７頁、１９９９年。さらに、ＭＩＦがグルココルチコイド作用の対抗制御因子であるという研究結果は、ＭＩＦの細胞外局在化を阻害する方法が自己免疫、炎症、内毒素血症や、成人呼吸困難症候群、炎症性腸疾患、中耳炎、炎症性関節疾患、クローン病などを含む種々の病的状態の治療を可能にすることを示している。Ｂｅｒｎｈａｇｅｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．、第７６巻、第１５１〜１６１頁、１９９８年；Ｃａｌａｎｄｒａら、Ｎａｔｕｒｅ、第３７７巻、第６８〜７１頁、１９９５年；Ｄｏｎｎｅｌｌｙら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．、第３巻、第３２０〜３２３頁、１９９７年。ＭＩＦが血管新生作用を有することも認識されているため、このサイトカインの阻害は、抗血管新生活性であり、癌、糖尿病網膜症、乾癬、血管障害、不妊、肥満、クッシング病やアディソン病のようなグルココルチコイド機能障害に関する遺伝性疾患などを含むが、これらに限定されない血管新生性疾患に特に有用である可能性がある。
【０４１６】
ＭＩＦ活性または搬出の阻害剤は治療に使用でき、また、特定の細胞に特異的な細胞表面受容体に結合する標的部分と共に使用できる。一般に、阻害剤またはエンハンサーの投与は、確立されたプロトコルに準じる。好ましい実施形態の組成物は、例えば、経口、経鼻、経粘膜、経皮、静脈、頭蓋内、腹腔内、皮下または筋肉内の投与を含む、指示された投与法に対して調製することができる。他の実施形態の範囲内では、本明細書に記載される組成物は、徐放性インプラントの一部として投与することができる。さらに他の実施形態の範囲内では、好ましい実施形態の組成物は、凍結乾燥物として、および再水和後に安定性を与える適切な賦形剤を利用して、凍結乾燥物として調製することもできる。
【０４１７】
他の実施形態では、１種または複数のＭＩＦ阻害剤を含有する薬剤組成物が提供される。投与目的のために、好ましい実施形態の化合物は、薬剤組成物として調製することができる。好ましい実施形態の薬剤組成物は、１種もしくは複数の好ましい実施形態のＭＩＦ阻害剤（すなわち、構造（Ｉａ）または（Ｉｂ）を有する化合物）および薬剤として許容される担体および／または希釈剤を含む。ＭＩＦ阻害剤は、特定の疾患を治療するのに有効な量、すなわちＭＩＦの濃度もしくは活性、症状の低下を得るのに十分な量、および／または、好ましくは患者に対する毒性が許容レベルである量で、組成物内に含まれる。好ましくは、好ましい実施形態の薬剤組成物は、投与経路に依存して、用量当たり約０．０１ｍｇ未満から約１０００ｍｇを超えるまで、好ましくは約０．０２５、０．０５、０．０７５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８または０．９ｍｇから約６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、３００、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、５００、６００、７００、８００または９００ｍｇまで、より好ましくは約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０または２５ｍｇから約３０、３５、４０、４５、５０、５５または６０ｍｇまでの量でＭＩＦ阻害剤を含むことができる。しかし、特定の実施形態では、上記のものよりも低い用量または高い用量が好適でありうる。適切な濃度および用量は、当業者によって容易に決定することができる。
【０４１８】
薬剤として許容される担体および希釈剤は、当業者にとっては周知である。溶液として調製された組成物については、許容できる担体および／または希釈剤は塩化ナトリウム水溶液および滅菌水を含み、場合によって酸化防止剤、緩衝液、静菌剤、他の普通の添加剤などを含むことができる。組成物は、１種もしくは複数のＭＩＦ阻害剤に加え、希釈剤、分散剤および界面活性剤、結合剤、潤滑剤などを含む、ピル、カプセル、顆粒、または錠剤としても調製できる。さらに当業者であれば、適切な方法で、およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ  １９９０年に記載されたものなど、慣例に従ってＭＩＦ阻害剤を製剤することができる。
【０４１９】
さらに、プロドラッグも好ましい実施形態の範囲内に含まれる。プロドラッグは、患者に投与される場合には、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて構造（Ｉａ）または（Ｉｂ）を有する化合物を放出する共有結合された担体すべてである。一般に、プロドラッグは、ごく普通の操作によって、またはｉｎ  ｖｉｖｏで修飾が切断されるような方法で官能基を修飾することによって調製され、親化合物を生成する。
【０４２０】
立体異性体に関して、構造（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、および（Ｉｄ）を有する化合物は不斉中心を有し、ラセミ化合物、ラセミ混合物として、および個々の光学異性体またはジアステレオマーとして生じることができる。そのような異性体形態は全て、それらの混合物を含み、好ましい実施形態の範囲内に含まれる。さらに、構造（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、および（Ｉｄ）を有する化合物の結晶形態のいくつかは多形体として存在することができ、これは好ましい実施形態に含まれる。さらに、構造（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、および（Ｉｄ）を有する化合物のいくつかは、水または他の有機溶媒を含む溶媒和物も形成できる。そのような溶媒和物は、同様に、好ましい実施形態の範囲内に含まれる。
【０４２１】
他の実施形態では、炎症性疾患、関節炎、免疫関連疾患などを含む種々の障害または疾患を治療するための方法が提供される。このような方法は、障害または疾患を治療するのに十分な量で好ましい実施形態の化合物を温血動物に投与することを含む。このような方法は、好ましくは薬剤組成物の形態で、好ましい実施形態のＭＩＦ阻害剤を全身投与することを含む。本明細書で用いられる全身投与は経口および非経口による投与方法を含む。経口投与について、ＭＩＦ阻害剤の適切な薬剤組成物は、粉剤、顆粒、ピル、錠剤、カプセル剤や、液剤、シロップ剤、懸濁液、乳剤などを含む。これらの組成物はまた、フラボラント、保存剤、懸濁化剤、増粘剤、乳化剤や他の薬剤として許容される添加剤を含むことができる。非経口的投与については、好ましい実施形態の化合物は、ＭＩＦの活性および／または搬出の阻害剤に加えて、緩衝液、酸化防止剤、静菌剤、このような溶液中で一般に使用される他の添加剤を含有できる水性注射液に調製できる。
【０４２２】
上述のように、好ましい実施形態の化合物の投与は、非常に様々な障害または疾患を治療するために使用することができる。特に、好ましい実施形態の化合物は、炎症、癌、免疫疾患などの治療のために温血動物に投与することができる。
【０４２３】
ＭＩＦを阻害する化合物は、他の医薬化合物と組み合わせて使用することができる。好ましい実施形態では、ＭＩＦ阻害化合物は、ＭＩＦが病原である、またはＭＩＦが疾患過程において中枢の役割あるいは他の役割を果たす疾患または状態を治療するのに用いられる従来の薬物と組み合わせてある。特に好ましい実施形態では、様々な癌、喘息や他の呼吸器疾患、敗血症、関節炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）や他の炎症性疾患、免疫疾患、他のＭＩＦが病原である疾患または障害の治療用の薬物を含むが、これらに限定されない、１種もしくは複数の追加の医薬化合物と組み合わせて、構造（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、および（Ｉｄ）を有する化合物を含むが、これらに限定されない、１種もしくは複数のＭＩＦ阻害化合物を含む薬剤組成物が提供される。
【０４２４】
特に好ましい実施形態では、１種もしくは複数のＭＩＦ阻害化合物は、１種もしくは複数の非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、または関節炎または他の炎症性疾患を治療するための他の医薬化合物と組み合わせてある。好適な化合物として、セロコキシブ；ロフェコキシブ；ＮＳＡＩＤ、例えば、アスピリン、セレコキシブ、コリンマグネシウム三サリチル酸、ジクロフェナクカリウム、ジクロフェナクナトリウム、ジフルニサル、エトファミド、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラク、メフェナム酸、ナブメトン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、オキサプロジン、ピロキシカム、ロフェコキシブ、サルサラート、スリンダク、トルメチンなど；ならびにコルチコステロイド、例えば、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニゾロン、ベタメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ブデゾニド、デキサメタゾンリン酸ナトリウム、フルニソリド、プロピオン酸フルチカゾン、トリアムシノロンアセトニド、ベタメタゾン、フルオシノロン、フルオシノニド、ベタメタゾンジプロピオン酸、吉草酸ベタメタゾン、デソニド、デソキシメタゾン、フルオシノロン、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、プロピオン酸クロベタゾール、デキサメタゾンなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【０４２５】
特に好ましい実施形態では、１種もしくは複数のＭＩＦ阻害化合物は、１種もしくは複数のβ刺激剤、吸入コルチコステロイド、抗ヒスタミン剤、ホルモン、または喘息、急性呼吸困難または他の呼吸器疾患を治療するための他の医薬化合物と組み合わせてある。好適な化合物として、β刺激剤、例えば一般に処方される気管支拡張剤；吸入コルチコステロイド、例えば、ベクロメタゾン、フルチカゾン、トリアムシノロン、モメタゾン、およびプレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロンなどのプレドニゾンの形態；抗ヒスタミン剤、例えば、アザタジン、カルビノキサミン／偽エフェドリン、セチリジン、シプロヘプタジン、デクスクロフェニラミン、フェキソフェナジン、ロラタジン、プロメタジン、トリペレナミン、ブロムフェニルアミン、コロフェニラミン、クレマスチン、ジフェンヒドラミン；ならびにホルモン、例えば、エピネフリンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０４２６】
特に好ましい実施形態では、１種もしくは複数のＭＩＦ阻害化合物は、薬剤組成物において、アザチオプリンまたはコルチコステロイドなどのＩＢＤを治療するための医薬化合物と組み合わせてある。
【０４２７】
特に好ましい実施形態では、１種もしくは複数のＭＩＦ阻害化合物は、薬剤組成物において、パクリタキセルなどの癌を治療するための医薬化合物と組み合わせてある。
【０４２８】
特に好ましい実施形態では、１種もしくは複数のＭＩＦ阻害化合物は、薬剤組成物において、免疫抑制化合物と組み合わせてある。特に好ましい実施形態では、１種もしくは複数のＭＩＦ阻害化合物は、例えば、ライム病、ループス（例えば、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ））または後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）といった自己免疫疾患を治療するための１種もしくは複数の薬物と組み合わせてある。このような薬物は、プロテアーゼ阻害剤、例えば、インディナビル、アンプレナビル、サクイナビル、ロピナビル、リトナビル、ネルフィナビルなど；ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、例えば、ジドブジン、アバカビル、ラミブジン、イダノシン、ザルシタビン、スタブジンなど；ヌクレオチド逆転写酵素阻害剤、例えばフマル酸テノホビルジソプロキシル；非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、例えば、デラビルジン、エファビレンツ、ネビラピンなど；生物反応修飾物質、例えば、エタネルセプト、インフリキシマブ、腫瘍壊死因子を阻害するか妨害する他の化合物など；ならびに抗ウイルス薬、例えばアミブジンやジドブジンを含むことができる。
【０４２９】
特に好ましい実施形態では、１種もしくは複数のＭＩＦ阻害化合物は、ステロイドもしくは抗感染薬などの敗血症を治療するための医薬化合物と組み合わせてある。ステロイドの例として、コルチコステロイド、例えば、コルチソン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニゾロン、ベタメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ブデゾニド、デキサメタゾンリン酸ナトリウム、フルニソリド、プロピオン酸フルチカゾン、トリアムシノロンアセトニド、ベタメタゾン、フルオシノロン、フルオシノニド、ジプロピオン酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、デソニド、デソキシメタゾン、フルオシノロン、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、プロピオン酸クロベタゾール、デキサメタゾンなどが挙げられる。抗感染症薬の例として、駆虫剤（メベンダゾル）、アミノクリコシド系（ゲンタマイシン、ネオマイシン、トブラマイシン）、抗真菌性抗生物質（アンフォテリシンｂ、フルコナゾール、グリセオフルビン、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ナイスタチン、ミカチン、トルナフテート）、セファロスポリン系（セファクロール、セファゾリン、セフォタキシム、セフタジジム、セフトリアキソン、セフロキシム、セファレキシン）、βラクタム系抗生物質（セフォテタン、メロペネム）、クロラムフェニコール、マクロライド系（アジスロマイシン、クラリスロマイシン、エリトロマイシン）、ペニシリン系（ペニシリンＧナトリウム塩、アモキシシリン、アンピシリン、ジクロキサシリン、ナフシリン、ピペラシリン、チカルシリン）、テトラサイクリン系（ドキシサイクリン、ミノサイクリン、テトラサイクリン）、バシトラシンなどを含む抗生物質；クリンダマイシン；硫酸コリスチンナトリウム；硫酸ポリミキシンｂ；バンコマイシン；アシクロビル、アマンタジン、ディダノシン、エファビレンツ、ホスカルネット、ガンシクロビル、インディナビル、ラミブジン、ネルフィナビル、リトナビル、サクイナビル、スタブジン、バラシクロビル、バルガンシクロビル、ジドブジンなどを含む抗ウイルス薬；キノロン系（シプロフロキサシン、レボフロキサシン）；スルホンアミド系（スルファジアジン、スルフイソキサゾール）；スルホン系（ダプソーン）；フラゾリドン；メトロニダゾール；ペンタミジン；スルファニルアミドュムクリスタリナム；ガチフロキサシン；ならびにスルファメトキサゾール／トリメトプリムなどが挙げられる。
【０４３０】
特定の疾患の治療において、例えば、エタノール、ブピバカイン、クロロプロカイン、レボブピバカイン、リドカイン、メピバカイン、プロカイン、ロピバカイン、テトラカイン、デスフルレン、イソフルレン、ケタミン、プロポフォール、セボフルラン、コデイン、フェンタニール、ヒドロモルフォン、マーカイン、メペリジン、メタドン、モルヒネ、オキシコドン、レミフェンタニル、サフェンタニル、ブトルファノール、ナルブフィン、トラマドール、ベンゾカイン、ジブカイン、塩化エチル、キシロカイン、フェナゾピリジンなどの麻酔薬と組み合わせて、ＭＩＦ阻害剤を用いて患者を治療することは有益でありうる。
【実施例】
【０４３１】
好ましい実施形態のＭＩＦの阻害剤を実施例１に記載した方法により調製した。
【０４３２】
＜実施例１＞
【０４３３】
２−ベンジルアミノニコチン酸（１）の合成
ベンジルアミン（１４ｍＬ、１２６．８ｍｍｏｌ）を、クロロニコチン酸（１０ｇ、６３．４ｍｍｏｌ）のピリジン溶液に加え、一晩還流させた。ピリジンを蒸留し、残渣を１Ｎ  ＮａＯＨに溶解した。この溶液を水で希釈してｐＨを１０から１１に調整し、ジクロロメタンで洗浄した。水相を冷１０％ＨＣｌ水溶液で中和して、ｐＨを６から７に調整した。形成された固体をろ過し、冷水で洗浄し、真空オーブンで乾燥して、１２．２ｇ（８４％）の２−ベンジルアミノニコチン酸（１）を白色固体として生じた。ＭＰ：１４８℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ４．６９（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，２Ｈ）、６．６１（ｄｄ，Ｊ＝４．９，７．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．２３（ｍ，１Ｈ）、７．２９（ｍ，４Ｈ）、８．０８（ｄｄ，Ｊ＝１．８，７．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．２８（ｄｄ，Ｊ＝１．８，７．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．４７（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、１３．１０（ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：２２９（Ｍ＋１）、２５１（Ｍ＋２３）。
【０４３４】
１−ベンジル−１Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（２）の合成
クロロギ酸トリクロロメチル（２．５ｍＬ、２１ｍｍｏｌ）を、（１）（４ｇ、１７．５ｍｍｏｌ）のジオキサン懸濁液にゆっくり加え、窒素雰囲気下で８時間還流させた。この溶液を冷却し、溶媒を真空下で除去した。残渣をジクロロメタンに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させて残渣を得た。この残渣をエーテルで再結晶化させて、３．０２ｇ（６８％）の１−ベンジル−１Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（２）を白色固体として得た。ＭＰ：１６８℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ５．３５（ｓ，２Ｈ）、７．２６（ｍ，１Ｈ）、７．３０（ｍ，２Ｈ）、７．３９（ｍ，３Ｈ）、８．４１（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ）、８．７２（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：２７７（Ｍ＋２３）。
【０４３５】
上記の２−ベンジルアミノニコチン酸（１）および１−ベンジル−１Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（２）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０４３６】
【化１７１】
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【０４３７】
１−ベンジル−４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（３）の合成
マロン酸ジエチル（０．６ｍＬ、４ｍｍｏｌ）を、ＮａＨ（鉱油中６０％、１６４ｍｇ、４．１ｍｍｏｌ）のジメチルアセトアミド（２０ｍＬ）懸濁液にゆっくり加え、不活性雰囲気下、室温で０．５時間攪拌した。１−ベンジル−１Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（２）（１ｇ、４ｍｍｏｌ）をこの溶液に加えて、１１０℃で４時間加熱した（ＴＬＣコントロール）。溶液を冷却し、氷水に注いだ。溶液のｐＨを冷１０％ＨＣｌで３に調整した。形成された固体をろ過し、過剰の水で洗浄し、真空オーブンで乾燥して、９４０ｍｇ（７２％）の１−ベンジル−４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（３）を白色固体として得た。ＭＰ：１４３℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２９（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）、４．３１（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ）、５．５５（ｓ，２Ｈ）、７．２３（ｍ，５Ｈ）、７．３６（ｍ，１Ｈ）、８．４５（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ）、８．７０（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：３２５（Ｍ＋１）、３４７（Ｍ＋２３）。
【０４３８】
１−ベンジル−４−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（４）の合成
１−ベンジル−４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（３）（０．９４ｇ、２．９ｍｍｏｌ）の溶液を、純ＰＯＣｌ３中で９０℃で３時間加熱した。溶液を冷却し、過剰のＰＯＣｌ３を真空下で蒸発させた。残渣を水に懸濁させ、固体ＮａＨＣＯ３で中和し、ジクロロメタンで抽出した。続いて、有機層を飽和ＮａＨＣＯ３溶液、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて、０．９ｇ（９８％）の１−ベンジル−４−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（４）を白色固体として得た。ＭＰ：１０９℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．３１（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）、４．３７（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ）、５．６２（ｓ，２Ｈ）、７．２７（ｍ，５Ｈ）、７．５１（ｄｄ，Ｊ＝４．７，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．４６（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ）、８．８０（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：３４３（Ｍ＋１）、３６５（Ｍ＋２３）。
【０４３９】
上記の１−ベンジル−４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（３）および１−ベンジル−４−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（４）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０４４０】
【化１７２】
2007503388.tif 000174
【０４４１】
１−ベンジル−２−オキソ−４−ピペラジン−１−イル−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（５）の合成
１−ベンジル−４−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（４）（１．２ｇ、３．５ｍｍｏｌ）を含むジクロロメタン溶液を、攪拌しているピペラジン（０．９ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液に室温でゆっくり加えた。この溶液を室温で一晩攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を水に懸濁させ、短時間超音波にかけ、ジクロロメタンで抽出した。続いて、合わせた有機相を、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させて、１．１２ｇ（８２％）の１−ベンジル−２−オキソ−４−ピペラジン−１−イル−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（５）を黄色固体として得た。ＭＰ：１２０℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．３０（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）、２．２８（ｍ，４Ｈ）、３．０３（ｍ，４Ｈ）、４．２８（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ）、５．５５（ｓ，２Ｈ）、７．１６〜７．２８（ｍ，５Ｈ）、７．３６（ｍ，１Ｈ）、８．２５（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ）、８．６３（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：３９３（Ｍ＋１）、４１５（Ｍ＋２３）。
【０４４２】
１−ベンジル−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（６）の合成
２−チオフェンカルボニルクロライド（０．１６ｍＬ、１．５ｍｍｏｌ）を、攪拌している１−ベンジル−２−オキソ−４−ピペラジン−１−イル−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（５）（３９２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を含むピリジン（５ｍＬ）溶液に、０℃、不活性雰囲気下で加えた。この溶液を室温に戻し、さらに１８時間攪拌した。溶液を氷水に注ぎ、形成された固体をろ過し、水で洗浄し、乾燥し、エーテルおよび酢酸エチルで再結晶化させて、２５６ｍｇ（５１％）の１−ベンジル−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（６）を白色固体として得た。ＭＰ：１６８℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２９（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）、３．１６（ｍ，４Ｈ）、３．８８（ｍ，４Ｈ）、４．３１（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ）、５．５６（ｓ，２Ｈ）、７．１５（ｄｄ，Ｊ＝３．５，４．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．２０〜７．２９（ｍ，５Ｈ）、７．３８（ｄｄ，Ｊ＝４．６，８．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．９７（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ）、８．３５（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ）、８．６６（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：５０３（Ｍ＋１）、５２５（Ｍ＋２３）。元素分析Ｃ２７Ｈ２６Ｎ４Ｏ４Ｓ（Ｃ，Ｈ，Ｎ）。
【０４４３】
上記の１−ベンジル−２−オキソ−４−ピペラジン−１−イル−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（５）および１−ベンジル−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（６）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０４４４】
【化１７３】
2007503388.tif 000175
【０４４５】
１−ベンジル−４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（７）の合成
シクロヘキシルアミン（１．１８ｍＬ、１０．３５ｍｍｏｌ）を、攪拌している１−ベンジル−４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（３）（１．６８ｇ、５．１７ｍｍｏｌ）のキシレン溶液に加え、１４０℃で３時間加熱した。溶液を冷却し、溶媒を真空下で蒸発させた。残渣を水に懸濁させ、ジクロロメタンで抽出した。合わせた有機相を水およびブラインで洗浄し、次いで、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させて、１．６ｇ（８２％）の１−ベンジル−４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（７）を白色固体として得た。ＭＰ：１４３℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２２〜１．８７（ｍ，１０Ｈ）、３．８７（ｍ，１Ｈ）、５．６２（ｓ，２Ｈ）、７．２０〜７．３２（ｍ，５Ｈ）、７．４３（ｄｄ，Ｊ＝４．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．４８（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ）、８．７７（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ）、１０．２０（ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：３７８（Ｍ＋１）。
【０４４６】
１−ベンジル−４−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（８）の合成
１−ベンジル−４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（７）（１．３ｇ、３．４４ｍｍｏｌ）の純ＰＯＣｌ３溶液を９０℃で一晩加熱した。溶液を冷却し、過剰のＰＯＣｌ３を真空下で蒸留した。残渣を水に懸濁させ、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で塩基性化し、ジクロロメタンで抽出した。続いて、合わせた有機相を飽和ＮａＨＣＯ３溶液、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させた。残渣をアセトンで結晶化させ、５３０ｍｇ（５２％）の１−ベンジル−４−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（８）を白色固体として得た。ＭＰ：１８８℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ５．６１（ｓ，２Ｈ）、７．２１〜７．３１（ｍ，５Ｈ）、７．５６（ｄｄ，Ｊ＝４．８，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．５３（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．８６（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：２９６（Ｍ＋１）。
【０４４７】
上記の１−ベンジル−４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（７）および１−ベンジル−４−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（８）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０４４８】
【化１７４】
2007503388.tif 000176
【０４４９】
１−ベンジル−２−オキソ−４−ピペラジン−１−イル−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９）の合成
１−ベンジル−４−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（８）（５３０ｍｇ、１．７９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液を、攪拌しているピペラジン（４６３ｍｇ、５．３７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液に室温でゆっくり加えた。この溶液をさらに一晩室温で攪拌し、ジクロロメタンで希釈した。続いて、この溶液を飽和ＮａＨＣＯ３溶液、水およびブラインで洗浄し、次いで、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させて、６１０ｍｇ（９８％）の１−ベンジル−２−オキソ−４−ピペラジン−１−イル−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９）を白色固体として得た。ＭＰ：２１１℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ２．９３（ｍ，４Ｈ）、３．５７（ｍ，４Ｈ）、５．５３（ｓ，２Ｈ）、７．２０〜７．２７（ｍ，５Ｈ）、７．３４（ｄｄ，Ｊ＝４．８，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．２６（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．６５（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：２９６（Ｍ＋１）。ＥＩＭＳ：３４６（Ｍ＋１）。
【０４５０】
１−ベンジル−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１０）の合成
２−チオフェンカルボニルクロライド（０．１６ｍＬ、１．５ｍｍｏｌ）を、攪拌している１−ベンジル−２−オキソ−４−ピペラジン−１−イル−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９）（３４５ｍｇ、１ｍｍｏｌ）のピリジン溶液に、０℃で加えた。この溶液を室温に戻し、さらに室温で一晩攪拌した。この溶液を氷水に注ぎ、形成された固体をろ過し、水で洗浄し、乾燥した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィーにより、ＭｅＯＨを０〜３％含むＣＨ２Ｃｌ２溶液の線形勾配を用いて溶離、精製して、２７３ｍｇ（４５％）の１−ベンジル−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１０）を白色固体として得た。ＭＰ：２６３℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７５（ｍ，４Ｈ）、３．９４（ｍ，４Ｈ）、５．５８（ｓ，２Ｈ）、７．１５（ｄｄ，Ｊ＝３．５，４．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．１９〜７．２９（ｍ，５Ｈ）、７．４０（ｄｄ，Ｊ＝４．８，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．５２（ｄｄ，Ｊ＝４．０，５．２Ｈｚ，１Ｈ）、８．３５（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．７２（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４５６（Ｍ＋１）。元素分析Ｃ２５Ｈ２１Ｎ５Ｏ２Ｓ（Ｃ，Ｈ，Ｎ）。
【０４５１】
上記の１−ベンジル−２−オキソ−４−ピペラジン−１−イル−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９）および１−ベンジル−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１０）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０４５２】
【化１７５】
2007503388.tif 000177
【０４５３】
２−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−ニコチン酸（１１）の合成
ｐ−メトキシベンジルアミン（８．２４ｍＬ、６３．５ｍｍｏｌ）を２−クロロニコチン酸（５ｇ、３１．７ｍｍｏｌ）のピリジン溶液に加え、一晩還流させた。ピリジンを蒸留し、残渣を１Ｎ  ＮａＯＨに溶解した。溶液を水で希釈して、ｐＨを１０から１１に調整して、ジクロロメタンで洗浄した。水相を冷１０％ＨＣｌ水溶液で中和して、ｐＨを４から５に調整した。形成された固体をろ過し、冷水で洗浄し、真空オーブンで乾燥させて、６．３２ｇ（７７％）の２−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−ニコチン酸（１１）を白色固体として得た。ＭＰ：２２９℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７２（ｓ，３Ｈ）、４．６０（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，２Ｈ）、６．４０（ｄｄ，Ｊ＝４．９，７．７Ｈｚ，１Ｈ）、６．６２（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ）、７．２５（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ）、８．０９（ｄｄ，Ｊ＝１．８，７．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．２６（ｄｄ，Ｊ＝１．８，７．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．４８（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、１３．１１（ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：２５９（Ｍ＋１）、２８１（Ｍ＋２３）。
【０４５４】
１−（４−メトキシ−ベンジル）−１Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（１２）の合成
クロロギ酸トリクロロメチル（３．３６ｍＬ、２７．８ｍｍｏｌ）を、２−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−ニコチン酸（１１）（６ｇ、２３．２３ｍｍｏｌ）のジオキサン懸濁液にゆっくり加え、窒素雰囲気下で１８時間還流した。この溶液を冷却し、溶媒を真空下で除去した。残渣をジクロロメタンに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させて、残渣を得た。残渣をエーテルで再結晶化させ、４．４７ｇ（６７％）の１−（４−メトキシ−ベンジル）−１Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（１２）を白色固体として得た。ＭＰ：１６０℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７１（ｓ，１Ｈ）、５．２７（ｓ，２Ｈ）、６．８５（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ）、７．３３（ｍ，３Ｈ）、８．４０（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ）、８．７５（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：２８６（Ｍ＋２３）。
【０４５５】
上記の２−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−ニコチン酸（１１）および１−（４−メトキシ−ベンジル）−１Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（１２）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０４５６】
【化１７６】
2007503388.tif 000178
【０４５７】
４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１３）の合成
マロン酸ジエチル（２．３７ｍＬ、１５．６１ｍｍｏｌ）を、ＮａＨ（鉱油中６０％、０．６２ｇ、１５．６１ｍｍｏｌ）のジメチルアセトアミド（４０ｍＬ）懸濁液にゆっくり加え、不活性雰囲気下、室温で０．５時間攪拌した。１−（４−メトキシベンジル）−１Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（１２）（４．４７ｇ、１５．６１ｍｍｏｌ）をこの溶液に加え、１１０℃で３時間攪拌した（ＴＬＣコントロール）。この溶液を冷却し、氷水に注いだ。溶液のｐＨを冷１０％ＨＣｌで３に調整した。形成された固体をろ過し、過剰の水で洗浄し、真空オーブンで乾燥した。粗生成物を酢酸エチルで再結晶化して、１．２ｇ（２１％）の４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１３）を白色固体として得た。ＭＰ：１５３℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．３１（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）、３．６８（ｓ，３Ｈ）、４．３２（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ）、５．４７（ｓ，２Ｈ）、６．８１（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ）、７．２１（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ）、７．３６（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、８．４２（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ）、８．７３（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ）、１３．００（Ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：３５５（Ｍ＋１）。
【０４５８】
上記の４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１３）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０４５９】
【化１７７】
2007503388.tif 000179
【０４６０】
４−クロロ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１４）の合成
４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１３）（０．４０ｇ、１．１３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（３９３μＬ、２．８２ｍｍｏｌ）の溶液を、純ＰＯＣｌ３中で９０℃で３時間加熱した。この溶液を冷却し、過剰のＰＯＣｌ３を真空下で蒸留した。残渣を飽和ＮａＨＣＯ３溶液に懸濁させ、短時間超音波にかけ、ろ過した。固体をジクロロメタンに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液、水およびブラインで続けて洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥し、蒸発させて、４００ｍｇ（９５％）の４−クロロ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１４）を白色固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．３０（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）、３．６２（ｓ，３Ｈ）、４．３０（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ）、５．４７（ｓ，２Ｈ）、６．８１（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ）、７．２１（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ）、７．３１（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、８．４０（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ）、８．７１（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：３７３（Ｍ＋１）。
【０４６１】
４−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１５）
４−クロロ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１３）（０．４０ｇ、１．０７ｍｍｏｌ）を含む純トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）溶液を３時間還流させた。この溶液を冷却し、過剰のＴＦＡを真空下で蒸留させた。残渣を飽和ＮａＨＣＯ３溶液に懸濁させ、短時間超音波にかけ、ろ過した。固体を水で洗浄し、室温で乾燥して、２５２ｍｇ（９３％）の４−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１５）を白色固体として得た。ＭＰ：１７２℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．３１（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）、４．３５（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ）、７．４１（ｄｄ，Ｊ＝４．７，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．３４（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ）、８．６９（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ）、１２．９０（ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：２５３（Ｍ＋１）。
【０４６２】
上記の４−クロロ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１４）および４−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１５）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０４６３】
【化１７８】
2007503388.tif 000180
【０４６４】
２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１６）の合成
ＤＡＢＣＯ（０．５７ｇ、５．１４ｍｍｏｌ）を、４−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１５）（０．６５ｇ、２．５７ｍｍｏｌ）およびピペラジン−１−イル−チオフェン−２−イル−メタノン（０．６０ｇ、３．０８ｍｍｏｌ）を含むジメチルアセトアミド溶液に室温で加えた。この溶液を１１０℃で一晩加熱した。溶液を冷却し、氷水に注いだ。形成された固体をろ過し、水で洗浄し、乾燥して、４２０ｍｇ（３９％）の２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１６）を白色固体として得た。ＭＰ：２３９℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．３０（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）、３．１３（ｍ，４Ｈ）、３．８７（ｍ，４Ｈ）、４．３０（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ）、７．１５（ｄｄ，Ｊ＝３．５，４．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．４０（ｄｄ，Ｊ＝４．８，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．４５（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．８０（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．２４（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ）、８．５６（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ）１２．２５（ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４１３（Ｍ＋１）。
【０４６５】
上記の２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１６）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０４６６】
【化１７９】
2007503388.tif 000181
【０４６７】
ナフチリジン部分のＮ−１位のアルキル化による化合物の調製
化合物１７から２８と称される化合物は、一般的手順Ａまたは一般的手順Ｂのいずれかを適用することにより調製した。
【０４６８】
一般的手順Ａ
固体２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１６）（４５５ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を、攪拌しているＮａＨ（鉱油中６０％、５３ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ懸濁液に室温で分割して加えた。この溶液を室温でさらに１時間攪拌して、黄色の透明な溶液を得た。対応するハロゲン化アルキル（１．３２ｍｍｏｌ）をこの溶液に加えて、さらに３時間攪拌した。この溶液を氷水に注ぎ、形成された固体をろ過し、冷水で洗浄し、乾燥した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィーにより、メタノールを０〜２％含むジクロロメタン溶液の勾配を用いて溶離、精製して、標題化合物を得た。
【０４６９】
一般的手順Ｂ
２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１６）（４５５ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）、対応するハロゲン化アルキル（１．６５ｍｍｏｌ）および無水炭酸カリウム（５．５ｍｍｏｌ）を含むＤＭＦ溶液を、９０℃で一晩加熱した。この溶液を冷却して、真空下でＤＭＦを除去した。残渣を水に懸濁し、短時間超音波にかけ、ろ過し、室温で乾燥した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィーにより、メタノールを０〜２％含むジクロロメタン溶液の勾配を用いて溶離、精製して、標題化合物を得た。
【０４７０】
１−（４−アセトキシ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１７）の合成
この化合物は、一般的手順Ａに従って、４−アセトキシベンジルブロミド（３０５ｍｇ，１．３２ｍｍｏｌ）を用いて調製し、２７５ｍｇ（４５％）の白色固体を得た。ＭＰ：１２３℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．３７（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ），２．１９（ｓ，３Ｈ），３．２２（ｍ，４Ｈ），３．９５（ｍ，４Ｈ），４．４０（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），５．８１（ｓ，２Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．１６（ｍ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．４５（ｍ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．４１（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．７０（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：５６１（Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２９Ｈ２８Ｎ４Ｏ６Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
【０４７１】
１−（２−ジメチルアミノエチル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−ｌ−イル］−１，２−ジヒドロ−［１．８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１８）の合成
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、２−ジメチルアミノエチルクロライドヒドロクロライド（１８８ｍｇ，１．３２ｍｍｏｌ）を用いて調製し、２２３ｍｇ（３５％）の白色固体を得た。ＭＰ：１３４℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．３５（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ），２．２０（ｓ，６Ｈ），３．０２（ｍ，４Ｈ），３．９０（ｍ，４Ｈ），４．３０（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），４．５０（ｍ，２Ｈ），７．１５（ｄｄ，Ｊ＝３．５，４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｄｄ，Ｊ＝４．８，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３８（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．７６（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４８４（Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２４Ｈ２９Ｎ５Ｏ４Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
ｌ−メチル−２−オキソ−４−［４−（クロライド−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１９）の合成
【０４７２】
この化合物は、一般的手順Ａに従って、ヨウ化メチル（８２μＬ，１．３２ｍｍｏｌ）を用いて調製し、１０２ｍｇ（２２％）の白色固体を得た。ＭＰ：１６４℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．３１（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），３．１３（ｍ，４Ｈ），３．６４（ｓ，３Ｈ），３．８８（ｍ，４Ｈ），４．３１（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），７．１５（ｄｄ，Ｊ＝３．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｄｄ，Ｊ＝４．８，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３４（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７０（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４２７（Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２１Ｈ２２Ｎ４Ｏ４Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
【０４７３】
１−（４−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（２０）の合成
この化合物は、一般的手順Ａに従って、４−フルオロベンジルブロミド（１６２μＬ，１．３２ｍｍｏｌ）を用いて調製し、３５５ｍｇ（６２％）の白色固体を得た。ＭＰ：１９６℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２４（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），３．２０（ｍ，４Ｈ），３．９０（ｍ，４Ｈ），４．３１（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），５．５７（ｓ，２Ｈ），７．１０−７．２０（ｍ，３Ｈ），７．３０−７．４０（ｍ，３Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７０（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：５２１（Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２７Ｈ２５ＦＮ４Ｏ４Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
２−オキソ−１−プロピル−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（２１）の合成
【０４７４】
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、１−ヨウ化プロパン（１２９μＬ，１．３２ｍｍｏｌ）を用いて調製し、１４０ｍｇ（２８％）の黄色固体を得た。ＭＰ：９２−９６℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ０．９１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．３０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．６（ｍ，２Ｈ），３．１３（ｓ，４Ｈ），３．８８（ｓ，４Ｈ），４．３（ｍ，４Ｈ），７．１（ｍ，１Ｈ），７．４（ｍ，１Ｈ），７．４５（ｄｄ，Ｊ＝１．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄｄ，Ｊ＝０．８，４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３４（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７０（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ４５５  （Ｍ＋Ｈ）。
【０４７５】
１−ブチル−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（２２）の合成
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、ヨウ化ブタン（１５１μＬ，１．３２ｍｍｏｌ）を用いて調製し、２００ｍｇ（３９％）の黄色固体を得た。ＭＰ：９０−９６℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：  ０．９２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．３（ｍ，５Ｈ），１．６（ｍ，２Ｈ），３．１３（ｓ，４Ｈ），３．８８（ｓ，４Ｈ），４．３２（ｍ，４Ｈ），７．１５（ｍ，１Ｈ），７．３８（ｍ，１Ｈ），７．４５（ｄｄ，Ｊ＝１．２，３．６，１Ｈ），７．７９（ｄｄ，Ｊ＝１．２，５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．３４（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７０（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ４６９  （Ｍ＋Ｈ）。
【０４７６】
１−アリル−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（２３）の合成
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、ヨウ化アリル（１３４μＬ，１．３２ｍｍｏｌ）を用いて調製し、１７０ｍｇ（３４％）の黄色固体を得た。ＭＰ：８９−９６℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．３０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），３．１５（ｓ，４Ｈ），３．８９（ｓ，４Ｈ），４．３１（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），５．０（ｍ，４Ｈ），５．９（ｍ，１Ｈ），７．１５（ｍ，１Ｈ），７．３９（ｄｄ，Ｊ＝４．８，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｄｄ，Ｊ＝０．８，３．６Ｈｚ），７．７９（ｄｄ，Ｊ＝０．８，４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３４（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．６８（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ４５３  （Ｍ＋Ｈ）。
【０４７７】
１−（２−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（２４）の合成
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、２−フルオロベンジルブロミド（１６２μＬ，１．３２ｍｍｏｌ）を用いて調製し、１７０ｍｇ（３０％）の黄色固体を得た。ＭＰ：１０５−１１０℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），３．１９（ｓ，４Ｈ），３．９１（ｓ，４Ｈ），４．３０（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），５．６０（ｓ，２Ｈ），６．８１（ｍ，１Ｈ），７．０４（ｍ，１Ｈ），７．２（ｍ，３Ｈ），７．３９（ｍ，１Ｈ），７．４６（ｄｄ，Ｊ＝０．８，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄｄ，Ｊ＝０．８，４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３８（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．６３（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  Ｍ／ｚ  ５２１  （Ｍ＋Ｈ）。
【０４７８】
１−（３−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（２５）の合成
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、３−フルオロベンジルブロミド（１６２μＬ，１．３２ｍｍｏｌ）を用いて調製し、１９０ｍｇ（３３％）の黄色固体を得た。ＭＰ：１０５−１１０℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２９（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），３．１８（ｓ，４Ｈ），３．８９（ｓ，４Ｈ），４．３１（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），５．５６（ｓ，２Ｈ），７．１（ｍ，４Ｈ），７．４（ｍ，３Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），８．３６（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ５２１  （Ｍ＋Ｈ）。
【０４７９】
１−（３−ジメチルアミノ−プロピル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（２６）の合成
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、（β−ジメチルアミノプロピルヒドロクロライド（２０９ｍｇ，１．３２ｍｍｏｌ）を用いて調製し、１１０ｍｇ（２０％）の黄色固体を得た。ＭＰ：８４−９４℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．３０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．７（ｍ，２Ｈ），２．１４（ｓ，６Ｈ），２．３０（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．１３（ｂ，４Ｈ），３．８８（ｂ，４Ｈ），４．３（ｍ，４Ｈ），７．２（ｍ，１Ｈ），７．３（ｍ，１Ｈ），７．４５（ｄｄ，Ｊ＝１．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄｄ，Ｊ＝０．８，４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３４（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７０（ｄｄ，Ｊ＝２．０，４．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ４９８  （Ｍ＋Ｈ）。
【０４８０】
２−オキソ−１−（２−オキソ−２−フェニル−エチル）−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−ｌ−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（２７）の合成
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、２−ブロモアセトフェノン（２６２μＬ，１．３２ｍｍｏｌ）を用いて調製し、５８ｍｇ（１０％）の赤色固体を得た。ＭＰ：１１５℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），３．２１（ｓ，４Ｈ），３．９２（ｓ，４Ｈ），４．３１（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），５．８９（ｓ，２Ｈ），７．１６（ｔ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４（ｍ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．７４（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１２（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），８．３８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．５６（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ５３１  （Ｍ＋１）。
【０４８１】
４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（２９）の合成
シクロヘキシルアミン（１．１８ｍＬ、１０．３５ｍｍｏｌ）を、攪拌している４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１３）（１．８０ｇ、５．１７ｍｍｏｌ）を含むキシレン溶液に加えて、１４０℃で３時間加熱した。この溶液を冷却し、溶媒を真空下で蒸発させた。残渣を水に懸濁させ、ジクロロメタンで抽出した。合わせた有機相を水およびブラインで洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させて、１．６８ｇ（８２％）の４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（２９）を白色固体として得た。ＭＰ：１４９℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２〜１．４（ｍ，５Ｈ）、１．５５（ｍ，１Ｈ）、１．７０（ｍ，２Ｈ）、１．９０（ｍ，２Ｈ）、３．６９（ｓ，３Ｈ）、３．８６（ｍ，１Ｈ）、５．５４（ｓ，２Ｈ）、６．８１（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．２０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．４３（ｍ，１Ｈ）、８．４７（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．７９（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ）、１０．２２（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ４０８（Ｍ＋１）。
【０４８２】
２，４−ジクロロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（３０）の合成
４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（２９）（１．４ｇ、３．４４ｍｍｏｌ）を含む純ＰＯＣｌ３溶液を、９０℃で一晩加熱した。この溶液を冷却し、過剰のＰＯＣｌ３を真空下で蒸留した。残渣を水に懸濁させ、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で塩基性化し、ジクロロメタンで抽出した。合わせた有機相を飽和ＮａＨＣＯ３溶液、水およびブラインで続けて洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させた。残渣をアセトンで結晶化して、６２４ｍｇ（８１％）の２，４−ジクロロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（３０）を茶色固体として得た。ＭＰ：２３１。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ７．９５（ｍ，１Ｈ）、８．７８（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．４Ｈｚ，１Ｈ）、９．３３（ｄｄ，Ｊ＝２．０，４．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ２２４（Ｍ＋１）。
【０４８３】
上記の４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（２９）および２，４−ジクロロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（３０）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０４８４】
【化１８０】
2007503388.tif 000182
【０４８５】
４−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［ｌ，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（３１）の合成
酢酸アンモニウム（６．８１ｇ、８８．３７ｍｍｏｌ）を２，４−ジクロロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（３０）を含む酢酸懸濁液に室温で加え、１４０℃で４５分間加熱した。この溶液を冷却し、氷水に注いだ。形成された固体をろ過し、冷水で洗浄し、飽和炭酸ナトリウム溶液に懸濁させた。室温で一晩攪拌後、固体をろ過し、冷水で洗浄し、真空下、室温で乾燥して、８．０ｇ（４８％）の４−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（３１）を白色固体として得た。ＭＰ：３１０℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ７．５８（ｄｄ，Ｊ＝４．４，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．５０（ｄ，Ｊ＝２．０，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．８３（ｄｄ，Ｊ＝４．４，１．６Ｈｚ，１Ｈ）、１３．０３（Ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：２０６（Ｍ＋１）。
【０４８６】
代替方法
１−（４−メトキシベンジル）−４−クロロ−１，２−ジヒドロ−２−オキソ−１，８−ナフチリジン−３−カルボニトリル（３２）（３２６ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を含むＴＦＡ溶液を、２４時間還流した。この溶液を冷却し、過剰のＴＦＡを減圧下で留去した。残渣を水に入れ、固体ＮａＨＣＯ３で塩基性化し、ろ過した。固体を過剰の水で洗浄し、乾燥して、１９７ｍｇ（９５％）の４−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（３１）を白色固体として得た。ＭＰ：３１０℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ７．５８（ｄｄ，Ｊ＝４．４，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．５０（ｄ，Ｊ＝２．０，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．８３（ｄｄ，Ｊ＝４．４，１．６Ｈｚ，１Ｈ）、１３．０３（ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：２０６（Ｍ＋１）。
【０４８７】
１−（４−メトキシベンジル）−４−クロロ−１，２−ジヒドロ−２−オキソ−１，８−ナフチリジン−３−カルボニトリル（３２）の合成
４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（２９）（１．２２ｇ、３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．０４ｍＬ、７．５ｍｍｏｌ）の溶液を、９０℃で、純ＰＯＣｌ３中で一晩加熱した。この溶液を冷却し、過剰のＰＯＣｌ３を真空下で蒸留した。残渣を飽和ＮａＨＣＯ３溶液に懸濁させ、短時間超音波にかけ、ろ過した。固体をジクロロメタンに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液、水およびブラインで続けて洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥し、蒸発して、０．８３ｇ（８５％）の１−（４−メトキシベンジル）−４−クロロ−１，２−ジヒドロ−２−オキソ−１，８−ナフチリジン−３−カルボニトリル（３２）を茶色固体として得た。ＭＰ：１９５℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．６９（ｓ，３Ｈ）、５．４２（ｓ，２Ｈ）、６．８３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．２９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．５５（ｍ，１Ｈ）、８．５０（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．８８（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ３２６（Ｍ＋１）。
【０４８８】
上記の４−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［ｌ，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（３１）および１−（４−メトキシベンジル）−４−クロロ−１，２−ジヒドロ−２−オキソ−１，８−ナフチリジン−３−カルボニトリル（３２）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０４８９】
【化１８１】
2007503388.tif 000183
【０４９０】
２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（３３）の合成
１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］−オクタン（８．６０ｇ、７７ｍｍｏｌ）を、４−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（３１）（７．９ｇ、３８ｍｍｏｌ）およびピペラジン−１−イル−チオフェン−２−イル−メタノン（１１．３０ｇ、５７ｍｍｏｌ）を含むジメチルアセトアミド溶液に室温で加えた。この溶液を１１０℃で一晩加熱した。この溶液を冷却し、氷冷１０％ＮＨ４Ｃｌ溶液に注いだ。形成された固体をろ過し、冷水で洗浄し、室温で真空下で乾燥して、７．１ｇ（５１％）の２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（３３）を白色固体として得た。ＭＰ：３２０℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．６９（ｍ，４Ｈ）、３．９０（ｍ，４Ｈ）、７．１６（ｄｄ，Ｊ＝３．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．３０（ｄｄ，Ｊ＝４．４，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．４９（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．８０（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．２０（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．６０（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ）、１２．２０（Ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：３６６（Ｍ＋１）。
【０４９１】
上記の２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（３３）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０４９２】
【化１８２】
2007503388.tif 000184
【０４９３】
ナフチリジン部分のＮ−１位のアルキル化による化合物の調製
化合物３４から４８と称される化合物は、２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（３３）（４００ｍｇ，１．１ｍｍｏｌ）と対応するハロゲン化アルキルとから、上記の一般的手順Ａまたは一般的手順Ｂのいずれかを適用することにより調製した。
【０４９４】
１−メチル−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（３４）の合成
この化合物は、一般的手順Ａに従って、ヨウ化メチル（８２μＬ，１．３２ｍｍｏｌ）を用いて調製し、２２１ｍｇ（５３％）の白色固体を得た。ＭＰ：２６６℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．６２（ｓ，３Ｈ），３．６９（ｍ，４Ｈ），３．９１（ｍ，４Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ＝３．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｄｄ，Ｊ＝４．８，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２９（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７４（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：３８０（Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ１９Ｈ１７Ｎ５Ｏ２Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１−ビニル−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（３５）の合成
【０４９５】
この化合物は、一般的手順Ａに従って、ヨウ化アリル（１２１μＬ，１．３２ｍｍｏｌ）を用いて調製し、２８３ｍｇ（６３％）の白色固体を得た。ＭＰ：２２８℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７１（ｍ，４Ｈ），３．９２（ｍ，４Ｈ），４．９４（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），５．０２（ｄｄ，Ｊ＝１．２，１０．４Ｈｚ，１Ｈ），５．０８（ｄｄ，Ｊ＝１．２，１０．４Ｈｚ，１Ｈ），５．９２（ｍ，１Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ＝３．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｄｄ，Ｊ＝４．８，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３２（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７１（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭ  ：４０５（Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２１Ｈ１９Ｎ５Ｏ２Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
【０４９６】
１−ブチル−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（３６）の合成
この化合物は、一般的手順Ａに従って、ヨウ化ブタン（１５１μＬ，１．３２ｍｍｏｌ）を用いて調製し、２９６ｍｇ（６４％）の白色固体を得た。ＭＰ：１４３℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ０．９１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．３２（ｍ，２Ｈ），１．５９（ｍ，２Ｈ），３．６７（ｍ，４Ｈ），３．９０（ｍ，４Ｈ），４．３４（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ＝４．４，５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３６（ｄｄ，Ｊ＝４．８，８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄｄ，Ｊ＝１．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄｄ，Ｊ＝１．２，４．２Ｈｚ，１Ｈ），８．３２（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．２Ｈｚ，１Ｈ），８．７１（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４２２（Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２２Ｈ２３Ｎ５Ｏ２Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
１−（３−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（３７）の合成
【０４９７】
この化合物は、一般的手順Ａに従って、３−フルオロベンジルブロミド（１６２μＬ，１．３２ｍｍｏｌ）を用いて調製し、２６２ｍｇ（５０％）の白色固体を得た。ＭＰ：２３１℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７３（ｍ，４Ｈ），３．９３（ｍ，４Ｈ），５．５５（ｓ，２Ｈ），７．０６（ｍ，３Ｈ），７．１７（ｍ，１Ｈ），７．３０（ｍ，２Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．３３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．６８（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４７４（Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２５Ｈ２０ＦＮ５Ｏ２Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
【０４９８】
２−オキソ−１−（２−オキソ−２−フェニル−エチル）−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（３８）の合成
この化合物は、一般的手順Ａに従って、２−ブロモアセトフェノン（２６２ｍｇ，１．３２ｍｍｏｌ）を用いて調製し、１１３ｍｇ（２１％）の白色固体を得た。ＭＰ：２６９℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７８（ｍ，４Ｈ），３．９４（ｍ，４Ｈ），５．８８（ｓ，２Ｈ），７．１７（ｄｄ，Ｊ＝３．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｄｄ，Ｊ＝４．４，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｍ，２Ｈ），７．７４（ｍ，１Ｈ），７．８０（ｄｄ，Ｊ＝１．２，４．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１２（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３９（ｄｄ，Ｊ＝１．２，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．５９（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４８４（Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２６Ｈ２１Ｎ５Ｏ３Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
１−（４−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（３９）の合成
【０４９９】
この化合物は、一般的手順Ａに従って、４−フルオロベンジルブロミド（１６２μＬ，１．３２ｍｍｏｌ）を用いて調製し、３６１ｍｇ（６９％）の白色固体を得た。ＭＰ：２７１℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７２（ｍ，４Ｈ），３．９２（ｍ，４Ｈ），５．５２（ｓ，２Ｈ），７．１０（ｍ，２Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ＝３．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３３−７．３９（ｍ，３Ｈ），７．４９（ｄｄ，Ｊ＝１．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄｄ，Ｊ＝１．２，４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３３（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７０（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４７４（Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２５Ｈ２０ＦＮ５Ｏ２Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
１−（２−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−  （チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（４０）の合成
【０５００】
この化合物は、一般的手順Ａに従って、２−フルオロベンジルブロミド（１６２μＬ，１．３２ｍｍｏｌ）を用いて調製し、３７０ｍｇ（７１％）の白色固体を得た。ＭＰ：２８６℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７４（ｍ，４Ｈ），３．９２（ｍ，４Ｈ），５．５８（ｓ，２Ｈ），６．８９（ｍ，１Ｈ），７．０３（ｍ，１Ｈ），７．１６−７．２６（ｍ，３Ｈ），７．３７（ｄｄ，Ｊ＝４．４，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄｄ，Ｊ＝１．２，４．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３４（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．６５（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４７４（Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２５Ｈ２０ＦＮ５Ｏ２Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
【０５０１】
酢酸−２−｛３−シアノ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−ｌ−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−１−イル｝−エチルエステル（４１）の合成
この化合物は、一般的手順Ａに従って、α−ブロモエチルアセテート（１４５μＬ，１．３２ｍｍｏｌ）を用いて調製し、３２６ｍｇ（６５％）の白色固体を得た。ＭＰ：１８９℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．８８（ｓ，３Ｈ），３．７０（ｍ，４Ｈ），３．９２（ｍ，４Ｈ），４．３０（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），４．６０（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ＝３．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｄｄ，Ｊ＝４．４，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄｄ，Ｊ＝１．２，３．２Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｄｄ，Ｊ＝１．２，５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．３３（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７２（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４５２（Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２２Ｈ２１Ｎ５Ｏ４Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
【０５０２】
２−オキソ−１−プロピル−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（４２）の合成
この化合物は、一般的手順Ａに従って、１−ヨウ化プロパン（１２９μＬ，１．３２ｍｍｏｌ）を用いて調製し、２３４ｍｇ（５２％）の白色固体を得た。ＭＰ：１９６℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ０．９０（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ），１．６４（ｍ，２Ｈ），３．６７（ｍ，４Ｈ），３．９１（ｍ，４Ｈ），４．２８（ｍ，２Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ＝３．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３６（ｄｄ，Ｊ＝４．４，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄｄ，Ｊ＝１．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄｄ，Ｊ＝１．２，４．２Ｈｚ，１Ｈ），８．２９（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７３（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４０８（Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２１Ｈ２１Ｎ５Ｏ２Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
１−（２，２−ジメチル−プロピル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（４３）の合成
【０５０３】
この化合物は、一般的手順Ａに従って、ヨウ化ネオペンチル（１７５μＬ，１．３２ｍｍｏｌ）を用いて調製し、２２３ｍｇ（４６％）の白色固体を得た。ＭＰ：２３２℃；１ｌＨ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ０．８９（ｓ，９Ｈ），３．７０（ｍ，４Ｈ），３．９２（ｍ，４Ｈ），４．３５（ｓ，２Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ＝３．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｄｄ，Ｊ＝４．８，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄｄ，Ｊ＝１．２，４．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄｄ，Ｊ＝１．２，４．２Ｈｚ，１Ｈ），８．２９（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．６９（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４３６（Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２３Ｈ２５Ｎ５Ｏ２Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
１−（４−シアノ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（４４）の合成
【０５０４】
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、α−ブロモ−ｐ−トルニトリル（２５９ｍｇ，１．３２ｍｍｏｌ）を用いて調製し、３５３ｍｇ（６６％）の白色固体を得た。ＭＰ：２４１℃；１ＩＨ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７３（ｍ，４Ｈ），３．９１（ｍ，４Ｈ），５．６１（ｓ，２Ｈ），７．１０（ｍ，２Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ＝３．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｄｄ，Ｊ＝４．８，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｍ，２Ｈ），７．５０（ｄｄ，Ｊ＝１．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｍ，２Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３４（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４８１（Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２６Ｈ２０Ｎ６Ｏ２Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
【０５０５】
１−シクロヘキシル−２−オキソ−４−［（チオフェン−２−カルボニル−ピペラジン−１−イル）−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（４５）の合成
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、ブロモメチルシクロヘキサン（１８３μＬ，１．３２ｍｍｏｌ）を用いて調製し、２４３ｍｇ（４８％）の白色固体を得た。ＭＰ：１９２℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．０５−１．１３（ｍ，５Ｈ），１．５３−１．６５（ｍ，５Ｈ），２．８０（ｍ，１Ｈ），３．６９（ｍ，４Ｈ），３．９１（ｍ，４Ｈ），４．２１（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ＝３．６，５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｄｄ，Ｊ＝４．８，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄｄ，Ｊ＝１．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄｄ，Ｊ＝１．２，４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２８（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７２（ｄｄ，Ｊ＝２．０，４．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４６２（Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２５Ｈ２７Ｎ５Ｏ２Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
【０５０６】
｛３−シアノ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−１−イル｝−酢酸エチルエステル（４６）の合成
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、エチルブロモアセテート（１４６μＬ，１．３２ｍｍｏｌ）を用いて調製し、２６７ｍｇ（５４％）の白色固体を得た。ＭＰ：２３６℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．１９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），３．７６（ｍ，４Ｈ），３．９２（ｍ，４Ｈ），４．１２（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），５．０７（ｓ，２Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ＝４．０，５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４０（ｄｄ，Ｊ＝４．４，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄｄ，Ｊ＝１．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３４（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．６８（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４５２（Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２２Ｈ２１Ｎ５Ｏ４Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
【０５０７】
１−（３−ジメチルアミノ−プロピル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（４７）の合成
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、β−ジメチルアミノプロピルヒドロクロライド（２０９ｍｇ，１．３２ｍｍｏｌ）を用いて調製し、１９４ｍｇ（３９％）の白色固体を得た。ＭＰ：１７６℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．７３（ｍ，２Ｈ），２．１１（ｓ，６Ｈ），２．２９（ｍ，２Ｈ），３．６８（ｍ，４Ｈ），３．９１（ｍ，４Ｈ），４．３４（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ＝３．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｄｄ，Ｊ＝４．４，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄｄ，Ｊ＝１．２，５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．３１（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７４（ｄｄ，Ｊ＝１．２，４．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４５１（Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２３Ｈ２６Ｎ６Ｏ２Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
【０５０８】
１−シクロプロピルメチル−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（４８）の合成
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、ブロモメチルシクロプロパン（１２８μＬ，１．３２ｍｍｏｌ）を用いて調製し、２７８ｍｇ（６０％）の白色固体を得た。ＭＰ：１８９℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ０．４２（ｍ，４Ｈ），１．２８（ｍ，１Ｈ），３．７０（ｍ，４Ｈ），３．９０（ｍ，４Ｈ），４．２３（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ＝３．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｄｄ，Ｊ＝４．４，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄｄ，Ｊ＝１．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄｄ，Ｊ＝１．２，５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．３２（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７３（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４２０（Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２２Ｈ２１Ｎ５Ｏ２Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
【０５０９】
ナフチリジン部分を置換したピペラジンのアシル化による化合物の調製
化合物４９から５５と称される化合物は、１−ベンジル−２−オキソ−４−ピペラジン−１−イル−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（５）から、一般的手順Ｃまたは一般的手順Ｄのいずれかを適用することにより調製した。
【０５１０】
一般的手順Ｃ
対応する酸塩化物（１．５ｍｍｏｌ）を、攪拌している１−ベンジル−２−オキソ−４−ピペラジン−１−イル−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（５）（３９２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を含むピリジン（５ｍＬ）溶液に、０℃、アルゴン下で加えた。この溶液を室温に戻し、さらに一晩攪拌した。この溶液を氷水に注ぎ、形成された固体をろ過した。この固体を過剰の水で洗浄し、乾燥し、フラッシュクロマトグラフィーにより、ＭｅＯＨを０〜２％含むＣＨ２Ｃｌ２溶液の勾配を用いて溶離、精製した。
【０５１１】
一般的手順Ｄ
塩化オキサリル（２ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（２滴）を順次、攪拌している、対応する酸（１．５ｍｍｏｌ）を含むＣＨ２Ｃｌ２溶液に室温で加え、次いで、アルゴン雰囲気下でさらに２時間攪拌した。この溶媒を真空下、室温で除去し、対応する酸塩化物を得た。１−ベンジル−２−オキソ−４−ピペラジン−１−イル−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（５）（３９２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を含む乾燥ピリジン（５ｍＬ）溶液を、アルゴン雰囲気下で残渣に加え、短時間超音波にかけた。この溶液を、アルゴン雰囲気下、室温で一晩攪拌した。この溶液を氷水に注ぎ、形成された固体をろ過した。この固体を過剰の水で洗浄し、乾燥し、フラッシュクロマトグラフィーにより、ＭｅＯＨを０〜２％含むＣＨ２Ｃｌ２溶液の勾配を用いて溶離、精製した。
【０５１２】
１−ベンジル−４−（４−シクロペンタンカルボニル−ピペラジン−１−イル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（４９）の合成
この化合物は、一般的手順Ｃに従って調製した。白色固体，収率６４％，ｍｐ１７０℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２８（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），１．６（ｍ，８Ｈ），３．０５（ｍ，５Ｈ），３．７４（ｍ，４Ｈ），４．２９（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），５．５６（ｓ，２Ｈ），７．２５（ｍ，５Ｈ），７．３８（ｍ，１Ｈ），８．３４（ｄｄ，Ｊ＝１．６，７．６Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ４８９  （Ｍ＋１）。
【０５１３】
４−（４−ベンゾイル−ピペラジン−１−イル）−１−ベンジル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（５０）の合成
この化合物は、一般的手順Ｃに従って調製した。白色固体，収率９０％，ｍｐ２２０℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２９（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），３．１（ｍ，４Ｈ），３．５−４．０（ｍ，４Ｈ），４．３０（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），５．５６（ｓ，２Ｈ），７．２３（ｍ，５Ｈ），７．４０（ｍ，６Ｈ），８．３３（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．６６（ｄｄ，Ｊ＝２．０，４．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ４９７  （Ｍ＋１）。
【０５１４】
１−ベンジル−４−［４−（４−クロロ−ベンゾイル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（５１）の合成
この化合物は、一般的手順Ｃに従って調製した。白色固体，収率，８６％，ｍｐ１１０−１１５℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），３．１（ｍ，４Ｈ），３．５−４．０（ｍ，４Ｈ），４．３１（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），５．５６（ｓ，２Ｈ），７．２５（ｍ，５Ｈ），７．３８（ｍ，１Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），８．３３（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．６６（Ｊ＝１．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ５３１  （Ｍ＋１）。
【０５１５】
１−ベンジル−４−イル−４−［４−（６−クロロ−ピリジン−３−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（５２）の合成
この化合物は、一般的手順Ｃに従って調製した。黄色固体，収率８９％，ｍｐ１２５−１３０℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２９（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），３．１５（ｍ，４Ｈ），３．５−４．０（ｍ，４Ｈ），４．３１（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），５．５６（ｓ，２Ｈ），７．２７（ｍ，５Ｈ），７．３８（ｍ，１Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），７．９６（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．３３（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．５２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ５３２  （Ｍ＋１）。
【０５１６】
１−ベンジル−２−オキソ−４−［４−（ピリジン−４−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（５３）の合成
この化合物は、一般的手順Ｃに従って調製した。黄色固体，収率３２％，ｍｐ１３０−１３５℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），３．０８（ｂ，２Ｈ），３．２０（ｂ，２Ｈ），３．５０（ｂ，２Ｈ），３．９０（ｂ，２Ｈ），４．３１（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），５．５６（ｓ，２Ｈ），７．２５（ｍ，５Ｈ），７．３６（ｍ，１Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），８．３２（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），８．６６（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），８．７０（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ４９８  （Ｍ＋１）。
【０５１７】
１−ベンジル−２−オキソ−４−［４−（ピリジン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（５４）の合成
この化合物は、一般的手順Ｃに従って調製した。黄色固体，収率２３％，ｍｐ１１２−１１７℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．３０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），３．１２（ｂ，２Ｈ），３．２０（ｂ，２Ｈ），３．６６（ｂ，２Ｈ），３．９１（ｂ，２Ｈ），４．３２（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），５．５６（ｓ，２Ｈ），７．２６（ｍ，５Ｈ），７．３７（ｍ，１Ｈ），７．５１（ｍ，１Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．９６（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），８．６１（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），８．６６（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ４９８  （Ｍ＋１）。
【０５１８】
１−ベンジル−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−３−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（５５）の合成
この化合物は、一般的手順Ｄに従って調製した。白色固体，収率６８％，ｍｐ１１５℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），３．１４（ｂ，４Ｈ），３．７５（ｂ，４Ｈ），４．３０（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），５．５６（ｓ，２Ｈ），７．２５（ｍ，６Ｈ），７．３７（ｍ，１Ｈ），７．６５（ｍ，１Ｈ），７．８５（ｄｄ，Ｊ＝１．２，２．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３４（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｄｄ，Ｊ＝２．０，４．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ５０３  （Ｍ＋１）。
【０５１９】
ナフチリジンカルボニトリル部分を置換したピペラジンのアシル化による化合物の調製
化合物５６から６４と称される化合物は、１−ベンジル−２−オキソ−４−ピペラジン−１−イル−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９）から、上記の一般的手順Ｃまたは一般的手順Ｄのいずれかを適用することにより調製した。
【０５２０】
１−ベンジル−４−（４−シクロペンタンカルボニル−ピペラジン−１−イル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（５６）の合成
この化合物は、一般的手順Ｃに従って調製した。茶色固体，収率６４％，ｍｐ１９７℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．７（ｍ，８Ｈ），３．０７（ｍ，１Ｈ），３．７０（ｍ，８Ｈ），５．５５（ｓ，２Ｈ），７．２３（ｍ，５Ｈ），７．３７（ｍ，１Ｈ），８．３１（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．６９（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ４４２  （Ｍ＋１）。
【０５２１】
４−（４−ベンゾイル−ピペラジン−１−イル）−１−ベンジル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（５７）の合成
この化合物は、一般的手順Ｃに従って調製した。白色固体，収率７１％，ｍｐ２８７℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７（ｍ，８Ｈ），５．５５（ｓ，２Ｈ），７．２３（ｍ，５Ｈ），７．３５（ｍ，１Ｈ），７．４９（ｍ，５Ｈ），８．３１（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．６９（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ４５０  （Ｍ＋１）。
【０５２２】
１−ベンジル−４−［４−（４−クロロ−ベンゾイル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（５８）の合成
この化合物は、一般的手順Ｃに従って調製した。黄色固体，収率７５％，ｍｐ２９８℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７（ｍ，８Ｈ），５．５５（ｓ，２Ｈ），７．２５（ｍ，５Ｈ），７．３６（ｍ，１Ｈ），７．５５（ｍ，４Ｈ），８．３０（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．６９（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ４８４  （Ｍ＋１）。
１−ベンジル−４−［４−（６−クロロ−ピリジン−３−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１．８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（５９）の合成
【０５２３】
この化合物は、一般的手順Ｃに従って調製した。白色固体，収率８９％，ｍｐ２５０℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７５（ｍ，８Ｈ），５．５５（ｓ，２Ｈ），７．２５（ｍ，５Ｈ），７．３７（ｍ，１Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．００（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．５６（ｄｄ，Ｊ＝０．４，２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．６９（ｄｄ，Ｊ＝１．２，４．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ４８５  （Ｍ＋１）。
【０５２４】
１−ベンジル−２−オキソ−４−［４−（ピリジン−４−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（６０）の合成
この化合物は、一般的手順Ｃに従って調製した。茶色固体，収率９３％，ｍｐ２７５℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．５５（ｂ，２Ｈ），３．６５（ｂ，２Ｈ），３．７６（ｂ，２Ｈ），３．９２（ｂ，２Ｈ），５．５５（ｓ，２Ｈ），７．２５（ｍ，５Ｈ），７．３６（ｍ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），８．２９（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７０（ｍ，３Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ４５１  （Ｍ＋１）。
１−ベンジル−２−オキソ−４−［４−（ピリジン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（６１）の合成
【０５２５】
この化合物は、一般的手順Ｃに従って調製した。茶色固体，収率４７％，ｍｐ２５６℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７０（ｍ，６Ｈ），３．９４（ｍ，２Ｈ），５．５５（ｓ，２Ｈ），７．２５（ｍ，５Ｈ），７．３６（ｍ，１Ｈ），７．５２（ｍ，１Ｈ），７．６８（ｍ，１Ｈ），７．９７（ｍ，１Ｈ），８．３４（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．６４（ｍ，１Ｈ），８．６９（ｍ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ４５１  （Ｍ＋１）。
【０５２６】
１−ベンジル−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−３−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（６２）の合成
この化合物は、一般的手順Ｄに従って調製した。茶色固体，収率９６％，ｍｐ２５７℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７５（ｍ，８Ｈ），５．５５（ｓ，２Ｈ），７．２５（ｍ，６Ｈ），７．３５（ｍ，１Ｈ），７．６５（ｍ，１Ｈ），７．８８（ｄｄ，Ｊ＝１．２，２．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３１（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．６９（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ４５６  （Ｍ＋１）。
１−ベンジル−４−［４−（５−フルオロ−チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（６３）の合成
【０５２７】
この化合物は、一般的手順Ｄに従って調製した。白色固体，収率８０％，ｍｐ２２６℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７３（ｍ，４Ｈ），３．９３（ｍ，４Ｈ），５．５５（ｓ，２Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２５−７．３１（ｍ，６Ｈ），７．３７（ｄｄ，Ｊ＝４．０，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．３３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．６９（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ４７４  （Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２５Ｈ２０ＦＮ５Ｏ２Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
【０５２８】
１−ベンジル−４−［４−（５−クロロ−チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（６４）の合成
この化合物は、一般的手順Ｄに従って調製した。白色固体，収率７７％，ｍｐ２４９℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７３（ｍ，４Ｈ），３．９２（ｍ，４Ｈ），５．５５（ｓ，２Ｈ），７．２１−７．２９（ｍ，６Ｈ），７．３６（ｄｄ，Ｊ＝４．８，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），８．３３（ｄｄ，Ｊ＝１．２，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．６９（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ４９０  （Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２５Ｈ２０ＣｌＮ５Ｏ２Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
【０５２９】
２，６−ジクロロ−５−フルオロ−ニコチン酸エチルエステル（６５）の合成
２，６−ジクロロ−５−フルオロニコチン酸（４３ｇ、２０５ｍｍｏｌ）を含む塩化チオニル（２００ｍＬ）およびトルエン（２００ｍＬ）の懸濁液を３時間還流して透明な溶液を得た。この溶液を冷却し、真空下で蒸発させた。残渣を氷浴で冷却し、冷無水エタノールをゆっくり加えた。０℃で１５分攪拌後、この溶液をアルゴン下で３０分間還流した。この溶液を冷却し、溶媒を真空下で除去した。残渣を酢酸エチルに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液、水およびブラインで続けて洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥し、蒸発して、４８．５ｇ（９９％）の２，６−ジクロロ−５−フルオロ−ニコチン酸エチルエステル（６５）を無色粘性油状物質として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．３２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）、４．３７（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、８．４６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ２３８（Ｍ）。
【０５３０】
２−クロロ−６−エチルスルファニル−５−フルオロ−ニコチン酸エチルエステル（６６）の合成
エタンチオール（１５．０８ｍＬ、２０４ｍｍｏｌ）を、攪拌しているＮａＨ（鉱油中６０％、８．１５ｇ、２０４ｍｍｏｌ）を含むＴＨＦ懸濁液にゆっくり加え、室温で３０分間攪拌して白色濃懸濁液を得た。この懸濁液を冷ＴＨＦで希釈し、０℃に冷却して、アルゴン下、−２０℃に予め冷却した２，６−ジクロロ−５−フルオロ−ニコチン酸エチルエステル（６５）（４８．５ｇ、２０４ｍｍｏｌ）を含むＴＨＦ溶液に、−１０℃未満の温度を維持して移した。この溶液を−２０℃で１５分間攪拌し、室温にゆっくり戻した。溶液を水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して、５３ｇ（９８％）の２−クロロ−６−エチルスルファニル−５−フルオロ−ニコチン酸エチルエステル（６６）を茶色液体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．３３（ｍ，６Ｈ）、３．１９（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、４．３３（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、８．１０（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ２６４（Ｍ＋１）。
【０５３１】
６−エチルスルファニル−５−フルオロ−２−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−ニコチン酸エチルエステル（６７）の合成
２−クロロ−６−エチルスルファニル−５−フルオロ−ニコチン酸エチルエステル（６６）（５３ｇ、２０１ｍｍｏｌ）を含む無水エタノール溶液に、アルゴンをパージし、ｐ−メトキシベンジルアミン（５２．５ｍＬ、４０２ｍｍｏｌ）を室温で加えた。この溶液をアルゴン下で一晩還流した。この溶液を冷却し、溶媒を減圧下で蒸発させた。残渣をジクロロメタンに入れ、短時間超音波にかけ、不溶性の固体をろ別した。ろ液を水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィーにより、ヘキサン：ＣＨ２Ｃｌ２（１：１）を用いて溶離、精製して、４７ｇ（６４％）の６−エチルスルファニル−５−フルオロ−２−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−ニコチン酸エチルエステル（６７）を粘性油状物質として得て、これは真空下、室温で数日間保存した後に固化され、白色固体を得た。Ｍｐ５９℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．１８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）、１．２９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）、３．０８（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．７１（ｓ，３Ｈ）、４．２６（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、４．６２（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、６．８７（ｍ，２Ｈ）、７．２４（ｍ，２Ｈ）、７．７１（ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ，１Ｈ）、８．３２（ｍ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ３６５（Ｍ＋１）。
【０５３２】
上記の２，６−ジクロロ−５−フルオロ−ニコチン酸エチルエステル（６５）、２−クロロ−６−エチルスルファニル−５−フルオロ−ニコチン酸エチルエステル（６６）および６−エチルスルファニル−５−フルオロ−２−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−ニコチン酸エチルエステル（６７）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０５３３】
【化１８３】
2007503388.tif 000185
【０５３４】
５−フルオロ−２−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−ニコチン酸エチルエステル（６８）の合成
活性化させたばかりのラネーニッケル（５０ｇ）を６−エチルスルファニル−５−フルオロ−２−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−ニコチン酸エチルエステル（６７）（３１ｇ、８５ｍｍｏｌ）の無水エタノール溶液に加え、４８時間還流させた。この溶液を冷却し、セライトを通してろ過した。ろ液を減圧下で蒸発させて、２４ｇ（９３％）の５−フルオロ−２−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−ニコチン酸エチルエステル（６８）を粘性油状物質として得て、これは真空下、室温で数日間保存した後に固化され、白色固体を得た。Ｍｐ９０℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．３０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）、３．７１（ｓ，３Ｈ）、４．２９（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、４．５５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、６．８７（ｍ，２Ｈ）、７．２６（ｍ，２Ｈ）、７．９６（ｄｄ，Ｊ＝３．２，８．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．１２（ｍ，１Ｈ）、８．３５（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ３０５（Ｍ＋１）。
【０５３５】
６−フルオロ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−１Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（６９）の合成
クロロギ酸トリクロロメチル（１１．４１ｍＬ、９４．６３ｍｍｏｌ）を、５−フルオロ−２−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−ニコチン酸エチルエステル（６８）（２４ｇ、７８．８６ｍｍｏｌ）を含むジオキサン溶液にゆっくり加え、窒素雰囲気下で４時間還流させた。この溶液を冷却し、溶媒を真空下で除去した。残渣をエーテルで再結晶化させ、２１．５ｇ（９０％）の６−フルオロ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−１Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（６９）を白色固体として得た。ＭＰ：１４３℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７１（ｓ，３Ｈ）、５．２７（ｓ，２Ｈ）、６．８５（ｍ，２Ｈ）、７．３５（ｍ，２Ｈ）、８．４０（ｄｄ，Ｊ＝２．８，６．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．８２（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：３０３（Ｍ＋１）。
【０５３６】
上記の５−フルオロ−２−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−ニコチン酸エチルエステル（６８）および６−フルオロ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−１Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（６９）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０５３７】
【化１８４】
2007503388.tif 000186
【０５３８】
５−クロロ−２−ヒドロキシ−ニコチン酸（７０）の合成
次亜塩素酸ナトリウム（１４％有効塩素、３５ｍＬ、８２．２１ｍｍｏｌ）溶液を、攪拌している２−ヒドロキシニコチン酸（７ｇ、５０．３ｍｍｏｌ）を含む１０％ＮａＯＨ水溶液に加えた。この溶液を室温で４８時間攪拌した。亜硫酸ナトリウム（３．１５０ｇ、２５ｍｍｏｌ）の水溶液を加え、さらに室温で３０分間攪拌した。この溶液を冷水で希釈し、ｐＨを冷希釈ＨＣｌで２に調整した。形成された固体をろ過し、冷水で洗浄し、乾燥して、６．８ｇ（７８％）の５−クロロ−２−ヒドロキシ−ニコチン酸（７０）を白色固体として得た。ＭＰ：２７６℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ８．２３（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．２９（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：１７４（Ｍ＋１）。
【０５３９】
２，５−ジクロロ−ニコチン酸メチルエステル（７１）の合成
５−クロロ−２−ヒドロキシ−ニコチン酸（７０）（６ｇ、３．４６ｍｍｏｌ）を含む塩化チオニル（２００ｍＬ）およびＤＭＦ（１ｍＬ）の懸濁液を３時間還流して透明な溶液を得た。この溶液を冷却し、過剰の塩化チオニルを真空下で蒸発させた。残渣を氷浴で冷却し、冷無水メタノールをゆっくり加えた。０℃で１５分攪拌後、この溶液をアルゴン下で１時間還流させた。この溶液を冷却し、溶媒を真空下で除去した。残渣を酢酸エチルに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液、水およびブラインで続けて洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥し、蒸発させて４．３ｇ（６０％）の２，５−ジクロロ−ニコチン酸メチルエステル（７１）を無色粘性油状物質として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．８８（ｓ，３Ｈ）、８．３９（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．７０（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ２０６（Ｍ）。
【０５４０】
上記の５−クロロ−２−ヒドロキシ−ニコチン酸（７０）および２，５−ジクロロ−ニコチン酸メチルエステル（７１）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０５４１】
【化１８５】
2007503388.tif 000187
【０５４２】
５−クロロ−２−（４−メトキシ−ベンズアミノ）−ニコチン酸メチルエステル（７２）の合成
２，５−ジクロロ−ニコチン酸メチルエステル（７１）（２５ｇ、１２１ｍｍｏｌ）を含む無水メタノール溶液に、アルゴンをパージし、ｐ−メトキシベンジルアミン（３４．５ｍＬ、２６６ｍｍｏｌ）を室温で加えた。この溶液を、アルゴン下で一晩還流させた。この溶液を冷却し、溶媒を減圧下で蒸発させた。残渣をジクロロメタンに入れ、短時間超音波にかけ、不溶性固体をろ別した。ろ液を水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィーにより、ヘキサン：ＣＨ２Ｃｌ２（１：１）を用いて溶離、精製して、１６．２ｇ（４４％）の５−クロロ−２−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−ニコチン酸メチルエステル（７２）を白色固体として得た。Ｍｐ９４℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７１（ｓ，３Ｈ）、３．８２（ｓ，３Ｈ）、４．５９（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、６．８７（ｍ，２Ｈ）、７．２４（ｍ，２Ｈ）、８．０６（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．２７（ｍ，１Ｈ）、８．３２（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ３０７（Ｍ＋１）。
【０５４３】
６−クロロ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−１Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（７３）の合成
クロロギ酸トリクロロメチル（５．４０ｍＬ、４４．８２ｍｍｏｌ）を、５−クロロ−２−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−ニコチン酸メチルエステル（７２）（１２．５ｇ、４０．７５ｍｍｏｌ）を含むジオキサン溶液にゆっくり加え、窒素雰囲気下で４時間還流した。この溶液を冷却し、溶媒を真空下で除去した。残渣をエーテルで再結晶化して、１１．８０ｇ（９１％）の６−クロロ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−ｌＨ−ピリド［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（７３）を白色固体として得た。ＭＰ：１７３℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：３．７１（ｓ，３Ｈ）、５．２５（ｓ，２Ｈ）、６．８５（ｍ，２Ｈ）、７．３３（ｍ，２Ｈ）、８．４９（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．８２（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：３１９（Ｍ＋１）。
【０５４４】
上記の５−クロロ−２−（４−メトキシ−ベンズアミノ）−ニコチン酸メチルエステル（７２）および６−クロロ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−１Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（７３）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０５４５】
【化１８６】
2007503388.tif 000188
【０５４６】
６−フルオロ−４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７４）の合成
マロン酸ジエチル（１０．７９ｍＬ、７１．３８ｍｍｏｌ）を、ＮａＨ（鉱油中６０％、３．１３ｇ、７８．２４ｍｍｏｌ）を含むジメチルアセトアミド（２００ｍＬ）の懸濁液にゆっくり加え、不活性雰囲気下、室温で０．５時間攪拌した。６−フルオロ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−１Ｈ−ピリド−［２，３−ｄ］−［１，３］−オキサジン−２，４−ジオン（６９）（２１．５ｇ、７１．３１ｍｍｏｌ）をこの溶液に加え、１１０℃で４時間加熱した（ＴＬＣコントロール）。溶液を冷却し、氷水に注いだ。溶液のｐＨを、冷１０％ＨＣｌで３に調整した。形成された固体をろ過し、過剰の水で洗浄し、真空オーブンで乾燥して、２６．０１ｇ（９８％）の６−フルオロ−４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７４）を淡黄色固体として得た。ＭＰ：１６３℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）、３．６８（ｓ，３Ｈ）、４．２７（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ）、５．４３（ｓ，２Ｈ）、６．８１（ｍ，Ｈｚ，２Ｈ）、７．１９（ｍ，２Ｈ）、８．２６（ｄｄ，Ｊ＝２．８，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．７４（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）、１３．００（ｂｒ．Ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：３７３（Ｍ＋１）。
【０５４７】
６−クロロ−４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７５）の合成
マロン酸ジエチル（６．０２ｍＬ、７１．３８ｍｍｏｌ）を、ＮａＨ（鉱油中６０％、３．１３ｇ、７８．２４ｍｍｏｌ）を含むジメチルアセトアミド（２００ｍＬ）の懸濁液にゆっくり加え、アルゴン雰囲気下、室温で０．５時間攪拌した。６−クロロ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−１Ｈ−ピリド−［２，３−ｄ］−［１，３］−オキサジン−２，４−ジオン（７３）（２１．５ｇ、７１．３１ｍｍｏｌ）をこの溶液に加え、１１０℃で４時間加熱した（ＴＬＣコントロール）。この溶液を冷却し、氷水に注いだ。溶液のｐＨを、冷１０％ＨＣｌで３に調整した。形成された固体をろ過し、過剰の水で洗浄し、真空オーブンで乾燥して、１４．０ｇ（９９％）の６−クロロ−４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７５）を白色固体として得た。ＭＰ：１９８℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）、３．６８（ｓ，３Ｈ）、４．３０（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、５．４３（ｓ，２Ｈ）、６．８１（ｍ，Ｈｚ，２Ｈ）、７．２０（ｍ，２Ｈ）、８．４３（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．７４（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：３８９（Ｍ＋１）。
【０５４８】
上記の６−フルオロ−４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７４）および６−クロロ−４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７５）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０５４９】
【化１８７】
2007503388.tif 000189
【０５５０】
４−クロロ−６−フルオロ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７６）の合成
６−フルオロ−４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７４）（７．０ｇ、１８．７９ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（５．２ｍＬ、３７．５８ｍｍｏｌ）の溶液を、純ＰＯＣｌ３中、９０℃で３時間加熱した。この溶液を冷却し、過剰のＰＯＣｌ３を真空下で蒸留した。残渣を飽和ＮａＨＣＯ３溶液に懸濁させ、短時間超音波にかけ、ろ過した。固体をジクロロメタンに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液、水およびブラインで続けて洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥し、蒸発させて、６．２ｇ（８５％）の４−クロロ−６−フルオロ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７６）を黄色ろう状固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．３１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）、３．７０（ｓ，３Ｈ）、４．３７（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、５．５１（ｓ，２Ｈ）、６．８４（ｍ，２Ｈ）、７．２４（ｍ，２Ｈ）、８．３７（ｄｄ，Ｊ＝２．８，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．８２（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：３９１（Ｍ＋１）。
【０５５１】
４，６−ジクロロ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７７）の合成
６−クロロ−４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７５）（６．０ｇ、１５．４３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（５．３６ｍＬ、３８．５７ｍｍｏｌ）の溶液を、純ＰＯＣｌ３中、９０℃で３時間加熱した。この溶液を冷却し、過剰のＰＯＣｌ３を真空下で蒸留した。残渣を飽和ＮａＨＣＯ３溶液に懸濁させ、短時間超音波にかけ、ろ過した。固体をジクロロメタンに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液、水およびブラインで続けて洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥し、蒸発させて、６．２ｇ（８５％）の４，６−ジクロロ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７７）を黄色ろう状固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．３０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）、３．６９（ｓ，３Ｈ）、４．３８（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、５．５０（ｓ，２Ｈ）、６．８２（ｍ，２Ｈ）、７．２４（ｍ，２Ｈ）、８．４８（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）、８．８７（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４０７（Ｍ）。
【０５５２】
４−クロロ−６−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７８）の合成
４−クロロ−６−フルオロ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７６）（６．０ｇ、１５．３５ｍｍｏｌ）を含む純ＴＦＡ溶液を、３時間還流させた。この溶液を冷却し、過剰のＴＦＡを真空下で蒸留した。残渣を飽和ＮａＨＣＯ３溶液に懸濁させ、短時間超音波にかけ、ろ過した。固体を水で洗浄し、室温で乾燥して、４．１ｇ（９８％）の４−クロロ−６−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７８）を白色固体として得た。ＭＰ：２１７℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：１．２８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）、４．３５（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、８．２４（ｄｄ，Ｊ＝２．８，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．７５（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）、１３．００（ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：２７１（Ｍ＋１）。
【０５５３】
４，６−ジクロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７９）の合成
４，６−ジクロロ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７７）（６．０ｇ、１４．７３ｍｍｏｌ）を含む純ＴＦＡ溶液を、３時間還流した。この溶液を冷却し、過剰のＴＦＡを真空下で蒸留した。残渣を飽和ＮａＨＣＯ３溶液に懸濁させ、短時間超音波にかけ、ろ過した。固体を水で洗浄し、室温で乾燥させて、４．２ｇ（９９％）の４，６−ジクロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７９）を白色固体として得た。ＭＰ：２２８℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）、４．３７（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、８．３８（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）、８．７５（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）、１３．１０（ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：２８７（Ｍ）。
【０５５４】
上記の４−クロロ−６−フルオロ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７６）、４，６−ジクロロ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７７）、４−クロロ−６−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７８）および４，６−ジクロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７９）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０５５５】
【化１８８】
2007503388.tif 000190
置換ピペラジン誘導体による４−クロロ−ナフチリジン部分のアミノ化
化合物８０から８２と称される化合物は、４−クロロ−６−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７８）または４，６−ジクロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７９）のいずれかから、一般的手順Ｅに従って、対応するピペラジン誘導体と反応させることにより調製した。
【０５５６】
一般的手順Ｅ
ＤＡＢＣＯ（２ｍｏｌ当量）を、４−クロロ−６−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７８）または４，６−ジクロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７９）（１ｍｏｌ当量）および対応するピペラジニル誘導体（１．２ｍｏｌ当量）を含むジメチルアセトアミド溶液に室温で加えた。この溶液を１１０℃で３時間加熱した。溶液を冷却し、氷水に注いだ。形成された固体をろ過し、水で洗浄し、乾燥して対応する生成物を得た。
【０５５７】
６−フルオロ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（８０）の合成
この化合物は、一般的手順Ｅに従って、４−クロロ−６−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７８）およびピペラジン−１−イル−チオフェン−２−イル−メタノンから調製した。収量３．１６ｇ（６６％），ＭＰ１２４−１３３℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），３．１１（ｍ，４Ｈ），３．８８（ｍ，４Ｈ），４．２８（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），７．１５（ｄｄ，Ｊ＝３．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｄｄ，Ｊ＝１．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄｄ，Ｊ＝１．２，４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．０５（ｄｄ，Ｊ＝２．８，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．６３（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），１２．４０（ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４３１  （Ｍ＋１）。
【０５５８】
６−フルオロ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（８１）の合成
この化合物は、一般的手順Ｅに従って、４−クロロ−６−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７８）および２−フロイルピペラジンから調製した。収量３．１１ｇ（７４％），ＭＰ２０７℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），３．１１（ｍ，４Ｈ），３．９０（ｍ，４Ｈ），４．２９（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），６．６５（ｄｄ，Ｊ＝２．０，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８７（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．０６（ｄｄ，Ｊ＝２．８，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．６３（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），１２．４０（ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４１５  （Ｍ＋１）。
【０５５９】
６−クロロ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（８２）の合成
この化合物は、一般的手順Ｅに従って、４，６−ジクロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７９）およびピペラジン−１−イル−チオフェン−２−イル−メタノンから調製した。収量６．４ｇ（７３％），ＭＰ２４２℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），３．１２（ｍ，４Ｈ），３．８７（ｍ，４Ｈ），４．２８（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），７．１５（ｄｄ，Ｊ＝３．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｄｄ，Ｊ＝１．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１７（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．６１（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），１２．４０（ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４４７  （Ｍ）。
【０５６０】
上記の６−フルオロ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（８０）、６−フルオロ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（８１）および６−クロロ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（８２）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０５６１】
【化１８９】
2007503388.tif 000191
【０５６２】
６−置換ナフチリジン部分のＮ−１位のアルキル化による化合物の調製
化合物８３から９１と称される化合物は、６−フルオロ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（８０）または６−フルオロ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（８１）または６−クロロ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（８２）のいずれかと、対応するハロゲン化アルキルとから、一般的手順Ｂを適用することにより調製した。
【０５６３】
１−ベンジル−６−フルオロ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（８３）の合成
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、６−フルオロ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−ｌ−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（８０）およびベンジルブロミドから調製した。収量１５２ｍｇ（２１％），ＭＰ１３０℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），３．１５（ｍ，４Ｈ），３．９０（ｍ，４Ｈ），４．３２（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），５．５５（ｓ，２Ｈ），７．１４−７．３０（ｍ，６Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｄｄ，Ｊ＝２．８，８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７４（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：５２１  （Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２７Ｈ２５ＦＮ４Ｏ４Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
６−フルオロ−１−（３−フルオロベンジル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（８４）の合成
【０５６４】
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、６−フルオロ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（８０）および３−フルオロベンジルブロミドから調製した。収量１１３ｍｇ（８％），ＭＰ１１３℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），３．１５（ｍ，４Ｈ），３．９０（ｍ，４Ｈ），４．３３（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），５．５５（ｓ，２Ｈ），７．０８（ｍ，３Ｈ），７．１５（ｄｄ，Ｊ＝３．６，５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｍ，１Ｈ），７．４６（ｄｄ，Ｊ＝１．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄｄ，Ｊ＝１．２，５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１７（ｄｄ，Ｊ＝２．８，８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７４（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：５３９  （Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２７Ｈ２４Ｆ２Ｎ４Ｏ４Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
６−フルオロ−２−オキソ−１−（２−オキソ−２−フェニル−エチル）−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（８５）の合成
【０５６５】
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、６−フルオロ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（８０）および２−ブロモアセトフェノンから調製した。収量２９３ｍｇ（３８％），ＭＰ２６２℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），３．１９（ｍ，４Ｈ），３．９２（ｍ，４Ｈ），４．３２（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），５．８８（ｓ，２Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ＝３．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄｄ，Ｊ＝１．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｍ，２Ｈ），７．７２（ｍ，１Ｈ），７．８１（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１１（ｍ，２Ｈ），８．１８（ｄｄ，Ｊ＝２．８，８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：５４９  （Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２８Ｈ２５ＦＮ４Ｏ５Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
１−ベンジル−６−フルオロ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（８６）の合成
【０５６６】
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、６−フルオロ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（８１）およびベンジルブロミドから調製した。収量３９１ｍｇ（４７％），ＭＰ１１９℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），３．１５（ｍ，４Ｈ），３．９２（ｍ，４Ｈ），４．２９（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），５．５４（ｓ，２Ｈ），６．６５（ｄｄ，Ｊ＝１．６，３．２Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｍ，５Ｈ），７．８７（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１８（ｄｄ，Ｊ＝２．８，８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７４（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：５０５  （Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２７Ｈ２５ＦＮ４Ｏ５）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
６−フルオロ−１−（３−フルオロベンジル）−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（８７）の合成
【０５６７】
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、６−フルオロ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（８１）および３−フルオロベンジルブロミドから調製した。収量４２１ｍｇ（４９％），ＭＰ１２１℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），３．１５（ｍ，４Ｈ），３．９２（ｍ，４Ｈ），４．２９（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），５．５３（ｓ，２Ｈ），６．６５（ｄｄ，Ｊ＝１．６，３．２Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｍ，４Ｈ），７．３３（ｍ，１Ｈ），７．８７（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．１８（ｄｄ，Ｊ＝２．８，８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７３（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：５２３  （Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２７Ｈ２４Ｆ２Ｎ４Ｏ５）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
【０５６８】
６−フルオロ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−ｌ−イル］−２−オキソ−１−（２−オキソ−２−フェニル−エチル）−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（８８）の合成
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、６−フルオロ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（８１）および２−ブロモアセトフェノンから調製した。収量２９８ｍｇ（３４％），ＭＰ１３４℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），３．１９（ｍ，４Ｈ），３．９４（ｍ，４Ｈ），４．３１（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），５．８８（ｓ，２Ｈ），６．６６（ｄｄ，Ｊ＝１．６，３．２Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｍ，２Ｈ），７．７４（ｍ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１１（ｍ，２Ｈ），８．２０（ｄｄ，Ｊ＝２．８，８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：５３３  （Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２８Ｈ２５ＦＮ４Ｏ６）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
１−ベンジル−６−クロロ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（８９）の合成
【０５６９】
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、６−クロロ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（８２）およびベンジルブロミドから調製した。収量３１９ｍｇ（５９％），ＭＰ１９７℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），３．１５（ｍ，４Ｈ），３．９５（ｍ，４Ｈ），４．３２（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），５．５２（ｓ，２Ｈ），７．１５−７．２８（ｍ，６Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７３（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：５３７  （Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２７Ｈ２５ＣｌＮ４Ｏ４Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
【０５７０】
６−クロロ−１−（３−フルオロベンジル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（９０）の合成
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、６−フルオロ−６−クロロ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（８２）および３−フルオロベンジルブロミドから調製した。収量２０７ｍｇ（３７％），ＭＰ１８６℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），３．１６（ｍ，４Ｈ），３．９２（ｍ，４Ｈ），４．３２（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），５．２４（ｓ，２Ｈ），７．０７（ｍ，３Ｈ），７．１５（ｄｄ，Ｊ＝３．６，５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３０（ｍ，１Ｈ），７．４７（ｄｄ，Ｊ＝１．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７３（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：５５５  （Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２７Ｈ２４ＣｌＦＮ４Ｏ４Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
６−クロロ−２−オキソ−１−（２−オキソ−２−フェニル−エチル）−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（９１）の合成
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、６−クロロ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（８２）および２−ブロモアセトフェノンから調製した。収量３３３ｍｇ（５９％），ＭＰ２２７℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），３．２０（ｍ，４Ｈ），３．９２（ｍ，４Ｈ），４．３２（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），５．８７（ｓ，２Ｈ），７．１７（ｄｄ，Ｊ＝３．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄｄ，Ｊ＝１．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｍ，２Ｈ），７．７３（ｍ，１Ｈ），７．８１（ｄｄ，Ｊ＝１．２，４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１１（ｍ，２Ｈ），８．３２（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：５６５  （Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２８Ｈ２５ＣｌＮ４Ｏ５Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
【０５７１】
６−フルオロ−４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（９２）の合成
シクロヘキシルアミン（６．１４ｍＬ、５３．６５ｍｍｏｌ）を、攪拌している６−フルオロ−４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７４）（１０ｇ、２６．８２ｍｍｏｌ）を含むキシレン溶液に加え、１４０℃で３時間攪拌した。この溶液を冷却し、溶媒を真空下で蒸発させた。残渣を水に懸濁させ、ジクロロメタンで抽出した。合わせた有機相を、水およびブラインで洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させて、７．４６ｇ（６５％）の６−フルオロ−４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（９２）を白色固体として得た。ＭＰ：１７６℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２５〜１．４１（ｍ，５Ｈ）、１．５４（ｍ，１Ｈ）、１．６６（ｍ，２Ｈ）、１．８７（ｍ，２Ｈ）、３．６８（ｓ，３Ｈ）、３．８６（ｍ，１Ｈ）、５．５１（ｓ，２Ｈ）、６．８１（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．２０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、８．３１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．８３（ｓ，１Ｈ）、１０．２４（ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ４２６（Ｍ＋１）。
【０５７２】
６−クロロ−４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（９３）の合成
シクロヘキシルアミン（６．１５ｍＬ、５３．７０ｍｍｏｌ）を、攪拌している６−クロロ−４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［ｌ，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（７５）（１０．４４ｇ、２６．８５ｍｍｏｌ）を含むキシレン溶液に加え、１４０℃で３時間加熱した。この溶液を冷却し、溶媒を真空下で蒸発させた。残渣を水に懸濁させ、ジクロロメタンで抽出した。合わせた有機相を水およびブラインで洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させて、１０．６ｇ（８９％）の６−クロロ−４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（９３）を白色固体として得た。ＭＰ：１９３℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：ｄ  １．２４〜１．９９（ｍ，１０Ｈ）、３．４７（ｓ，３Ｈ）、３．．９３（ｍ，１Ｈ）、５．５９（ｓ，２Ｈ）、６．７８（ｍ，２Ｈ）、７．３７（ｍ，２Ｈ）、８．３９（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）、８．６０（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）、１０．１５（ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ４４２（Ｍ＋１）。
【０５７３】
上記の６−フルオロ−４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（９２）および６−クロロ−４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（９３）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０５７４】
【化１９０】
2007503388.tif 000192
【０５７５】
４−クロロ−６−フルオロ−１−（４−メトキシベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９４）の合成
６−フルオロ−４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（９２）（７．４６ｇ、１７．５３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（６．１ｍＬ、４３．８３ｍｍｏｌ）の溶液を、純ＰＯＣｌ３中、９０℃で一晩加熱した。溶液を冷却し、過剰のＰＯＣｌ３を真空下で蒸留した。残渣を飽和ＮａＨＣＯ３溶液に懸濁させ、短時間超音波にかけ、ろ過した。固体をジクロロメタンに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液、水およびブラインで続けて洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥し、蒸発させて、４．２ｇ（６９％）の４−クロロ−６−フルオロ−１−（４−メトキシベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，８−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９４）を白色固体として得た。ＭＰ１９５℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．６９（ｓ，３Ｈ）、５．５１（ｓ，２Ｈ）、６．８２（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．２９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、８．４８（ｄｄ，Ｊ＝２．８，８．４Ｈｚ，１Ｈ）、８．９６（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ３４４（Ｍ＋１）。
【０５７６】
４，６−ジクロロ−１−（４−メトキシベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９５）の合成
６−クロロ−４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（９３）（１０．６ｇ、２４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（８．３３ｍＬ、６０ｍｍｏｌ）の溶液を、純ＰＯＣｌ３中、９０℃で一晩加熱した。溶液を冷却し、過剰のＰＯＣｌ３を真空下で蒸留した。残渣を飽和ＮａＨＣＯ３溶液に懸濁させ、短時間超音波にかけ、ろ過した。固体をジクロロメタンに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液、水およびブラインで続けて洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥し、蒸発させて、８．２ｇ（９５％）の４，６−ジクロロ−１−（４−メトキシベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，８−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９５）を白色固体として得た。ＭＰ２０８℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．６９（ｓ，３Ｈ）、５．５０（ｓ，２Ｈ）、６．８２（ｍ，２Ｈ）、７．８７（ｍ，２Ｈ）、８．５９（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．９４（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ３６２（Ｍ＋２）。
【０５７７】
４−クロロ−６−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９６）の合成
４−クロロ−６−フルオロ−１−（４−メトキシベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，８−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９４）（４．３ｇ、１２．５０ｍｍｏｌ）を含む純ＴＦＡ溶液を、２４時間還流させた。この溶液を冷却し、過剰のＴＦＡを減圧下で留去した。残渣を水に入れ、固体ＮａＨＣＯ３で塩基性化し、ろ過した。固体を過剰の水で洗浄し、乾燥させて、２．６ｇ（９６％）の４−クロロ−６−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９６）を白色固体として得た。ＭＰ：２７２℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ８．２６（ｄｄ，Ｊ＝２．８，８．２Ｈｚ，１Ｈ）、８．８１（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）、１３．０３（Ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：２２４（Ｍ＋１）。
【０５７８】
４，６−ジクロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９７）の合成
４，６−ジクロロ−１−（４−メトキシベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，８−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９５）（８．２ｇ、２２．７０ｍｍｏｌ）を含む純ＴＦＡを２４時間還流させた。この溶液を冷却して、過剰のＴＦＡを減圧下で留去した。残渣を水に入れ、固体ＮａＨＣＯ３で塩基性化し、ろ過した。固体を過剰の水で洗浄し、乾燥して、５．２ｇ（９６％）の４，６−ジクロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９７）を黄色固体として得た。ＭＰ：２４７℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ８．４５（ｄｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）、８．８２（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）、１３．１７（Ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：２４０（Ｍ）。
【０５７９】
上記の４−クロロ−６−フルオロ−１−（４−メトキシベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９４）、４，６−ジクロロ−１−（４−メトキシベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９５）、４−クロロ−６−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９６）および４，６−ジクロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９７）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０５８０】
【化１９１】
2007503388.tif 000193
【０５８１】
置換ピペラジン誘導体による４−クロロ−ナフチリジンカルボニトリル部分のアミノ化
化合物９８から１０１と称される化合物は、４−クロロ−６−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９６）または４，６−ジクロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９７）のいずれかから、上記の一般的手順Ｅに従って、対応するピペラジン誘導体と反応させることにより調製した。
【０５８２】
６−フルオロ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９８）の合成
この化合物は、一般的手順Ｅに従って、４−クロロ−６−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９６）およびピペラジン−１−イル−チオフェン−２−イル−メタノンから、４．８５ｇ（７９％）の６−フルオロ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９８）を黄色固体として得た。ＭＰ２４４℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７２（ｍ，４Ｈ），３．９１（ｍ，４Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ＝３．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．０５（ｄｄ，Ｊ＝２．８，７．２Ｈｚ，１Ｈ），８．７０（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：３８４  （Ｍ＋１）。
【０５８３】
６−フルオロ−２−オキソ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９９）の合成
この化合物は、一般的手順Ｅに従って、４−クロロ−６−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９６）および２−フロイルピペラジンから、２．８７ｇ（７１％）の６−フルオロ−２−オキソ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９９）を白色固体として得た。ＭＰ３１２℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．６９（ｍ，４Ｈ），３．９３（ｍ，４Ｈ），６．６６（ｄｄ，Ｊ＝１．６，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．０７（ｄｄ，Ｊ＝２．８，９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．６９（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），１２．３０（ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：３６８  （Ｍ＋１）。
【０５８４】
６−クロロ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１００）の合成
この化合物は、一般的手順Ｅに従って、４，６−ジクロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９７）およびピペラジン−１−イル−チオフェン−２−イル−メタノンから、６．８ｇ（７４％）の６−クロロ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１００）を黄色固体として得た。ＭＰ１５８℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．６４（ｍ，４Ｈ），３．９０（ｍ，４Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ＝３．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄｄ，Ｊ＝１．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｄｄ，Ｊ＝１．２，５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．２１（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．６６（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４００  （Ｍ＋１）。
【０５８５】
６−クロロ−２−オキソ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１０１）の合成
この化合物は、一般的手順Ｅに従って、４，６−ジクロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９７）および２−フロイルピペラジンから、２．２７ｇ（７１％）の６−クロロ−２−オキソ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１０１）を黄色固体として得た。ＭＰ３０３℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７６（ｍ，４Ｈ），３．９３（ｍ，４Ｈ），６．６５（ｄｄ，Ｊ＝１．６，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．２１（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．６６（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），１２．３６（ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：３８４  （Ｍ＋１）。
【０５８６】
上記の６−フルオロ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９８）、６−フルオロ−２−オキソ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９９）、６−クロロ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１００）および６−クロロ−２−オキソ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１０１）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０５８７】
【化１９２】
2007503388.tif 000194
【０５８８】
６−置換ナフチリジンカルボニトリル部分のＮ−１位のアルキル化による化合物の調製
化合物１０２から１１３と称される化合物は、６−フルオロ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９８）、６−フルオロ−２−オキソ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９９）、６−クロロ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１００）または６−クロロ−２−オキソ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１０１）のいずれかと、対応するハロゲン化アルキルとから、上記の一般的手順Ｂを適用することにより調製した。
【０５８９】
１−ベンジル−６−フルオロ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１０２）の合成
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、６−フルオロ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９８）およびベンジルブロミドから調製した。収量３１７ｍｇ（４３％），ＭＰ１７３℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７３（ｍ，４Ｈ），３．９２（ｍ，４Ｈ），５．５３（ｓ，２Ｈ），７．２２−７．３０（ｍ，６Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄｄ，Ｊ＝１．２，５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｄｄ，Ｊ＝２．８，９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．７７（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４７４  （Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２５Ｈ２０ＦＮ５Ｏ２Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
６−フルオロ−１−（３−フルオロベンジル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１０３）の合成
【０５９０】
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、６−フルオロ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９８）および３−フルオロベンジルブロミドから調製した。収量４２８ｍｇ（５６％），ＭＰ１３７℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７３（ｍ，４Ｈ），３．９３（ｍ，４Ｈ），５．５２（ｓ，２Ｈ），７．０６−７．１０（ｍ，３Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ＝３．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｍ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄｄ，Ｊ＝１．２，５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１７（ｄｄ，Ｊ＝２．８，９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．７７（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４９２  （Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２５Ｈ１９Ｆ２Ｎ５Ｏ２Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
【０５９１】
６−フルオロ−２−オキソ−１−（２−オキソ−２−フェニル−エチル）−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１０４）の合成
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、６−フルオロ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９８）および２−ブロモアセトフェノンから調製した。収量２９３ｍｇ（３８％），ＭＰ２６２℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７９（ｍ，４Ｈ），３．９５（ｍ，４Ｈ），５．８７（ｓ，２Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ＝３．６，５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｍ，２Ｈ），７．５０（ｍ，１Ｈ），７．８１（ｄｄ，Ｊ＝１．２，４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１２（ｍ，２Ｈ），８．２３（ｄｄ，Ｊ＝２．８，９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．７０（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：５０２  （Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２６Ｈ２０ＦＮ５Ｏ３Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
１−ベンジル−６−フルオロ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１０５）の合成
【０５９２】
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、６−フルオロ−２−オキソ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９９）およびベンジルブロミドから調製した。収量１３６ｍｇ（１８％），ＭＰ２１６℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７２（ｍ，４Ｈ），３．９５（ｍ，４Ｈ），５．５３（ｓ，２Ｈ），６．６６（ｄｄ，Ｊ＝２．０，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２１−７．２８（ｍ，５Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．１８（ｄｄ，Ｊ＝２．８，９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．７７（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４５８  （Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２５Ｈ２０ＦＮ５Ｏ３）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
６−フルオロ−１−（３−フルオロベンジル）−２−オキソ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１０６）の合成
【０５９３】
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、６−フルオロ−２−オキソ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９９）および３−フルオロベンジルブロミドから調製した。収量２９７ｍｇ（３８％），ＭＰ２１１℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７２（ｍ，４Ｈ），３．９５（ｍ，４Ｈ），５．５２（ｓ，２Ｈ），６．６７（ｄｄ，Ｊ＝１．６，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．０６−７．１０（ｍ，４Ｈ），７．３３（ｍ，１Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．１８（ｄｄ，Ｊ＝２．８，９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．７８（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４７６  （Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２５Ｈ１９Ｆ２Ｎ５Ｏ３）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
【０５９４】
６−フルオロ−４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１−（２−オキソ−２−フェニル−エチル）−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１０７）の合成
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、６−フルオロ−２−オキソ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９９）および２−ブロモアセトフェノンから調製した。収量２４２ｍｇ（３１％），ＭＰ２９３℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７９（ｍ，４Ｈ），３．９８（ｍ，４Ｈ），５．８７（ｓ，２Ｈ），６．６７（ｄｄ，Ｊ＝１．６，３．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｍ，２Ｈ），７．７３（ｍ，１Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．１２（ｍ，２Ｈ），８．２１（ｄｄ，Ｊ＝２．８，９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．７０（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４８６  （Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２６Ｈ２０ＦＮ５Ｏ４）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
１−ベンジル−６−クロロ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１０８）の合成
【０５９５】
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、６−クロロ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１００）およびベンジルブロミドから調製した。収量１８４ｍｇ（３７％），ＭＰ２２１℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：  ３．７５（ｍ，４Ｈ），３．９２（ｍ，４Ｈ），５．５１（ｓ，２Ｈ），７．１５−７．３０（ｍ，６Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．３２（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．７５（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４９０  （Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２５Ｈ２０ＣｌＮ５Ｏ２Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
６−クロロ−１−（３−フルオロベンジル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１０９）の合成
【０５９６】
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、６−クロロ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１００）および３−フルオロベンジルブロミドから調製した。収量２１４ｍｇ（４２％），ＭＰ２０４℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７６（ｍ，４Ｈ），３．９２（ｍ，４Ｈ），５．５１（ｓ，２Ｈ），７．０６（ｍ，３Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ＝３．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｍ，１Ｈ），７．５０（ｄｄ，Ｊ＝１．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄｄ，Ｊ＝１．２，５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．３３（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．７５（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：５０８  （Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２５Ｈ１９ＣｌＦＮ５Ｏ２Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
６−クロロ−２−オキソ−１−（２−オキソ−２−フェニル−エチル）−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１１０）の合成
【０５９７】
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、６−クロロ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１００）および２−ブロモアセトフェノンから調製した。収量１１７ｍｇ（２３％），ＭＰ３１６℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．８１（ｍ，４Ｈ），３．９４（ｍ，４Ｈ），５．８６（ｓ，２Ｈ），７．１７（ｄｄ，Ｊ＝３．６，５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｄｄ，Ｊ＝１．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｍ，２Ｈ），７．７３（ｍ，１Ｈ），７．８１（ｄｄ，Ｊ＝１．２，５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１２（ｍ，２Ｈ），８．３６（ｄｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：５１８  （Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２６Ｈ２０ＣｌＮ５Ｏ３Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
１−ベンジル−６−クロロ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１１１）の合成
【０５９８】
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、６−クロロ−２−オキソ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１０１）およびベンジルブロミドから調製した。収量２２３ｍｇ（３１％），ＭＰ１９６℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７５（ｍ，４Ｈ），３．９４（ｍ，４Ｈ），５．５１（ｓ，２Ｈ），６．６６（ｄｄ，Ｊ＝１．６，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２２−７．２８（ｍ，５Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３２（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．７６（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４７４  （Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２５Ｈ２０ＣｌＮ５Ｏ３）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
６−クロロ−１−（３−フルオロベンジル）−２−オキソ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１１２）の合成
【０５９９】
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、６−クロロ−２−オキソ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１０１）および３−フルオロベンジルブロミドから調製した。収量１１３ｍｇ（１５％），ＭＰ１３４℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．７５（ｍ，４Ｈ），３．９５（ｍ，４Ｈ），５．５１（ｓ，２Ｈ），６．６６（ｄｄ，Ｊ＝１．６，３．２Ｈｚ，１Ｈ），７．０６−７．１０（ｍ，４Ｈ），７．３３（ｍ，１Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．３３（ｄｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．７５（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４９２  （Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２５Ｈ１９ＣｌＦＮ５Ｏ３）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
６−クロロ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１−（２−オキソ−２−フェニル−エチル）−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１１３）の合成
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、６−クロロ−２−オキソ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１０１）および２−ブロモアセトフェノンから調製した。収量２３３ｍｇ（３１％），ＭＰ３２８℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．８１（ｍ，４Ｈ），３．９７（ｍ，４Ｈ），５．８６（ｓ，２Ｈ），６．６６（ｄｄ，Ｊ＝１．６，３．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｍ，２Ｈ），７．７３（ｍ，１Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．１４（ｍ，２Ｈ），８．３７（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：５０２  （Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２６Ｈ２０ＣｌＮ５Ｏ４）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
【０６００】
１−ベンジル−４−ヒドロキシ−３−（メチルスルホニル）−［１，８］−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（１１４）の合成
メタンスルホニル酢酸エチル（１．３ｍＬ、９．８３ｍｍｏｌ）を、ＮａＨ（鉱油中６０％、４３３ｍｇ、１０．８１ｍｍｏｌ）を含むジメチルアセトアミド（２０ｍＬ）の懸濁液にゆっくり加え、アルゴン下、室温で０．５時間攪拌した。１−ベンジル−１Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（２）（２．５ｇ、９．８３ｍｍｏｌ）をこの溶液に加え、１１０℃で４時間攪拌した（ＴＬＣコントロール）。この溶液を冷却し、氷水に注いだ。溶液のｐＨを冷１０％ＨＣｌで４に調整した。形成された固体をろ過し、過剰の水で洗浄し、真空オーブンで乾燥して、９５０ｍｇ（３０％）の１−ベンジル−４−ヒドロキシ−３−（メチルスルホニル）−［１，８］−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（１１４）を白色固体として得た。ＭＰ：１５５℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．５１（ｓ，３Ｈ）、５．５７（ｓ，２Ｈ）、７．２３（ｍ，１Ｈ）、７．２７（ｍ，４Ｈ）、７．４３（ｍ，１Ｈ）、８．４８（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．７９（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．０Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ３３１（Ｍ＋１）。
【０６０１】
１−ベンジル−４−クロロ−３−（メチルスルホニル）−１，８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（１１５）の合成
トリエチルアミン（１．２ｍＬ、８．６ｍｍｏｌ）を、１−ベンジル−４−ヒドロキシ−３−（メチルスルホニル）−［１，８］−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（１１４）（０．９４ｇ、２．９ｍｍｏｌ）を含む純ＰＯＣｌ３懸濁液に加え、９０℃で３時間加熱した。この溶液を冷却し、過剰のＰＯＣｌ３を真空下で蒸留した。残渣を水に懸濁させて、固体ＮａＨＣＯ３で中和し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液、水およびブラインで続けて洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させて、１−ベンジル−４−クロロ−３−（メチルスルホニル）−［１，８］−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（１１５）を黄色固体として得た。収量０．９２ｇ（９２％）、ｍｐ１９１℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．５０（ｓ，３Ｈ）、５．６５（ｓ，２Ｈ）、７．２８（ｍ，５Ｈ）、７．５５（ｍ，１Ｈ）、８．７０（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．４Ｈｚ，１Ｈ）、８．８４（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ３４９（Ｍ＋１）。
【０６０２】
上記の１−ベンジル−４−ヒドロキシ−３−（メチルスルホニル）−［１，８］−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（１１４）および１−ベンジル−４−クロロ−３−（メチルスルホニル）−１，８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（１１５）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０６０３】
【化１９３】
2007503388.tif 000195
【０６０４】
１−ベンジル−３−メタンスルホニル−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１Ｈ−［１，８］−ナフチリジン−２−オン（１１６）の合成
ＤＡＢＣＯ（０．５７ｇ、５．０ｍｍｏｌ）を、１−ベンジル−４−クロロ−３−（メチルスルホニル）−［１，８］−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（１１５）（０．８８ｇ、２．５ｍｍｏｌ）およびピペラジン−１−イル−チオフェン−２−イル−メタノン（０．６０ｇ、３．０８ｍｍｏｌ）を含むＮ−メチルピロリドン溶液に室温で加えた。この溶液を１１０℃で１５分間加熱した。この溶液を冷却し、氷冷１０％塩化アンモニウム水溶液に注いだ。形成された固体をろ過し、水で洗浄し、乾燥して、０．９５ｇ（７４％）の１−ベンジル−３−メタンスルホニル−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１Ｈ［１，８］−ナフチリジン−２−オン（１１６）を黄色固体として得た。ＭＰ：２２３℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．３７（ｓ，３Ｈ）、３．５９（ｍ，４Ｈ）、３．９３（ｂ，４Ｈ）、５．５９（ｓ，２Ｈ）、７．２（ｍ，６Ｈ）、７．３８（ｍ，１Ｈ）、７．４７（ｄｄ，Ｊ＝１．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．８１（ｄｄ，Ｊ＝１．２，５．２Ｈｚ，１Ｈ）、８．４６（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．７０（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ５０９（Ｍ＋１）。
【０６０５】
上記の１−ベンジル−３−メタンスルホニル−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１Ｈ−［１，８］−ナフチリジン−２−オン（１１６）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０６０６】
【化１９４】
2007503388.tif 000196
【０６０７】
ピリジン−４−イル−カルバミン酸−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１１７）の合成
４−アミノピリジン（２５ｇ、２６５ｍｍｏｌ）を、攪拌しているジ−ｔ−ブチル−ジ−カルボネート（６３．７５ｇ、２９２ｍｍｏｌ）を含むＴＨＦ溶液に、室温で、固体添加漏斗により、ゆっくり加えた。この溶液をさらに１時間室温で攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をエーテルで再結晶化させて４３．５ｇ（８４％）のピリジン−４−イル−カルバミン酸−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１１７）を白色固体として得た。ＭＰ：２６０℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．４８（ｓ，９Ｈ）、７．４０（ｄｄ，Ｊ＝１．２，４．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．３３（ｄｄ，Ｊ＝１．２，４．８Ｈｚ，１Ｈ）、９．９３（ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  １９５（Ｍ＋１）。
【０６０８】
４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ニコチン酸（１１８）の合成
ｎ−Ｂｕｌｉ（１．６Ｍ溶液、１５５ｍＬ、２４９ｍｍｏｌ）を、攪拌しているＴＭＥＤＡ（３７．３６ｍＬ、２４９ｍｍｏｌ）を含むＴＨＦ溶液に、−４０℃で加えた。この溶液を、１０分かけて室温に戻し、さらに１０分間攪拌した。この溶液を−７８℃に冷却した。ピリジン−４−イル−カルバミン酸−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１１７）（２２ｇ、１１３．２６ｍｍｏｌ）を含むＴＨＦ溶液を、ゆっくり加えた。この溶液を３時間以内に室温に戻した。室温で１５分間攪拌後、この溶液を再び−７８℃に冷却し、砕いたばかりのドライアイスを加えた。この溶液を室温に戻し、３０分間攪拌して、氷冷１０％ＮＨ４Ｃｌ溶液に注いだ。この溶液を１Ｎ  ＮａＯＨ溶液で塩基性化して、ジクロロメタンで洗浄した。水相のｐＨを冷１０％ＨＣｌ溶液で４に調整した。形成された固体をろ過し、水で洗浄し、真空下、室温で乾燥して、１６．３ｇ（３０％）の４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ニコチン酸（１１８）を白色固体として得た。ＭＰ：２６０℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．４９（ｓ，９Ｈ）、８．２３（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．５５（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．９６（ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ２３８（Ｍ＋１）。
【０６０９】
上記のピリジン−４−イル−カルバミン酸−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１１７）および４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ニコチン酸（１１８）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０６１０】
【化１９５】
2007503388.tif 000197
【０６１１】
１Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（１１９）の合成
クロロギ酸トリクロロメチル（９ｍＬ、７５ｍｍｏｌ）を、４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ニコチン酸（１１８）（１６．２ｇ、６８ｍｍｏｌ）を含むジオキサン溶液にゆっくり加え、窒素雰囲気下で４時間還流した。この溶液を冷却し、溶媒を真空下で除去した。残渣をエーテルで再結晶化させて、１０．９２ｇ（９８％）の１Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（１１９）を白色固体として得た。ＭＰ：２４３℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ７．３２（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．７１（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、９．１１（ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  １６５（Ｍ＋１）。
【０６１２】
４−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，６］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１２０）の合成
マロン酸ジエチル（１３．７７ｍＬ、９１ｍｍｏｌ）を、ＮａＨ（鉱油中６０％、３．６３ｍｇ、９１ｍｍｏｌ）を含むジメチルアセトアミド懸濁液にゆっくり加え、不活性雰囲気下、室温で０．５時間攪拌した。１Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（１１９）（１５ｇ、９１ｍｍｏｌ）をこの溶液に加えて、１１０℃で一晩加熱した。この溶液を冷却し、氷水に注いだ。飽和ＮａＨＣＯ３溶液で塩基性化し、ジクロロメタンで抽出した。水相のｐＨを、冷１０％ＨＣｌで３に調整し、ｎ−ＢｕＯＨで抽出した。ブタノールを蒸発させた後に得られた残渣をＰＯＣｌ３に溶解し、９０℃で３時間加熱した。この溶液を冷却し、過剰のＰＯＣｌ３を真空下で蒸留した。残渣を水に懸濁させ、固体ＮａＨＣＯ３で中和し、酢酸エチルで抽出した。有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液、水およびブラインで続けて洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて残渣を得た。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、０．８ｇ（３％）の４−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，６］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１２０）を白色固体として得た。ＭＰ：２１９℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．３１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）、４．３７（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、７．３０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、８．６３（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、９．０５（ｓ，１Ｈ）、１２．８０（ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：２５３（Ｍ＋１）。
【０６１３】
上記の１Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（１１９）および４−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，６］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１２０）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０６１４】
【化１９６】
2007503388.tif 000198
【０６１５】
２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，６］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１２１）の合成
ＤＡＢＣＯ（０．７ｇ、６．３ｍｍｏｌ）を、４−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，６］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１２０）（０．８ｇ、３．１６ｍｍｏｌ）およびピペラジン−１−イル−チオフェン−２−イル−メタノン（０．９３ｇ、４．７４ｍｍｏｌ）を含むＤＭＡ溶液に室温で加えた。この溶液を１１０℃で２時間加熱した。溶液を冷却し、氷冷１０％塩化アンモニウム水溶液に注いだ。形成された固体をろ過し、水で洗浄し、乾燥して、１．２ｇ（９２％）の２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，６］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１２１）を白色固体として得た。ＭＰ：２３１℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）、３．１８（ｍ，４Ｈ）、３．８９（ｍ，４Ｈ）、４．２７（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、７．１４（ｄｄ，Ｊ＝３．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．１８（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．４７（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．８０（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．５１（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、８．９１（ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ４１３（Ｍ＋１）。
【０６１６】
上記の２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，６］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１２１）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０６１７】
【化１９７】
2007503388.tif 000199
【０６１８】
６−置換［１，６］ナフチリジン部分のＮ−１位のアルキル化による化合物の調製
化合物１２２から１２４と称される化合物は、２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，６］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１２１）と、対応するハロゲン化アルキルとから、上記の一般的手順Ｂを適用することにより調製した。
【０６１９】
１−（４−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，６］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１２２）の合成
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，６］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１２１）および４−フルオロベンジルブロミドから調製した。収量２１０ｍｇ（５５％），ＭＰ１３２℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．３０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），３．２１（ｍ，４Ｈ），３．９１（ｍ，４Ｈ），４．３１（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），５．４１（ｓ，２Ｈ），７．１３−７．２９（ｍ，５Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄｄ，Ｊ＝１．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄｄ，Ｊ＝４．８，１．２Ｈｚ，１Ｈ），８．５７（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），９．０９（ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：５２１  （Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２７Ｈ２５ＦＮ４Ｏ４Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
１−（３−フルオロベンジル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，６］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１２３）の合成
【０６２０】
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，６］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１２１）および３−フルオロベンジルブロミドから調製した。収量１１３ｍｇ（２２％），ＭＰ１３５℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），３．２２（ｍ，４Ｈ），３．９２（ｍ，４Ｈ），４．３２（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），５．４４（ｓ，２Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｍ，２Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ＝３．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｍ，２Ｈ），７．４７（ｄｄ，Ｊ＝１．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄｄ，Ｊ＝１．２，４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．５６（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），９．０９（ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：５２１  （Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２７Ｈ２５ＦＮ４Ｏ４Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
【０６２１】
２−オキソ−１−（２−オキソ−２−フェニル−エチル）−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，６］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１２４）の合成
この化合物は、一般的手順Ｂに従って、２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１，６］−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（１２１）および２−ブロモアセトフェノンから調製した。収量１２７ｍｇ（２４％），ＭＰ１５７℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  １．２７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），３．２４（ｍ，４Ｈ），３．９３（ｍ，４Ｈ），４．２６（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），５．８５（ｓ，２Ｈ），７．１５（ｄｄ，Ｊ＝３．６，５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｍ，２Ｈ），７．６２（ｍ，２Ｈ），７．７４（ｍ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１３（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．３２（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），８．５６（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），９．１２（ｓ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：５３１  （Ｍ＋１）。元素分析（Ｃ２８Ｈ２６Ｎ４Ｏ５Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
【０６２２】
１−ベンジル−４−ヒドロキシ−３−ニトロ−１，８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（１２５）の合成
ニトロ酢酸エチル（８．７ｍＬ、７８ｍｍｏｌ）を、ＮａＨ（鉱油中６０％、３．４６ｍｇ、８７ｍｍｏｌ）を含むジメチルアセトアミド懸濁液にゆっくり加え、アルゴン下、室温で０．５時間攪拌した。１−ベンジル−１Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（２）（２．５ｇ、９．８３ｍｍｏｌ）をこの溶液に加え、１１０℃で１２時間加熱した（ＴＬＣコントロール）。この溶液を冷却し、セライトパッドを通してろ過した。ろ液を冷水で希釈し、ｐＨを冷１０％ＨＣｌで２に調整した。形成された固体をろ過し、過剰の水で洗浄し、真空オーブンで乾燥して白色固体を得た。収量９．７ｇ、４２％、ｍｐ約１８２℃（鋭くない）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ５．５３（ｓ，２Ｈ）、７．２５（ｍ，６Ｈ）、８．４６（ｄｄ，Ｊ＝２．０，７．６Ｈｚ，１Ｈ）、８．６３（ｄｄ，Ｊ＝２．０，４．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ２９８（Ｍ＋１）。
【０６２３】
１−ベンジル−４−クロロ−３−ニトロ−１，８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（１２６）の合成
トリエチルアミン（１２．２ｍＬ、８８ｍｍｏｌ）を、１−ベンジル−４−ヒドロキシ−３−ニトロ−１，８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（１２５）（８．７ｇ、２９ｍｍｏｌ）を含む純ＰＯＣｌ３懸濁液に加え、９０℃で３時間加熱した。この溶液を冷却し、過剰のＰＯＣｌ３を真空下で留去した。残渣を水に懸濁させ、固体ＮａＨＣＯ３で中和し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液、水およびブラインで続けて洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させて黄色固体を得た。収量９．２ｇ、９８％、Ｍｐ約２１５℃（鋭くない）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ５．６６（ｓ，２Ｈ）、７．２８（ｍ，５Ｈ）、７．６１（ｍ，１Ｈ）、８．５７（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．４Ｈｚ，１Ｈ）、８．８９（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ３１６（Ｍ＋１）。
【０６２４】
上記の１−ベンジル−４−ヒドロキシ−３−ニトロ−１，８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（１２５）および１−ベンジル−４−クロロ−３−ニトロ−１，８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（１２６）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０６２５】
【化１９８】
2007503388.tif 000200
【０６２６】
１−ベンジル−３−ニトロ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１Ｈ−［１，８］−ナフチリジン−２−オン（１２７）の合成
ＤＡＢＣＯ（６．２６ｇ、５５ｍｍｏｌ）を、１−ベンジル−４−クロロ−３−ニトロ−１，８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（１２６）（８．８１ｇ、２８ｍｍｏｌ）およびピペラジン−１−イル−チオフェン−２−イル−メタノン（６．５７ｇ、３３ｍｍｏｌ）を含むＮ−メチルピロリドン溶液に室温で加えた。この溶液を１１０℃で２時間加熱した。この溶液を冷却し、氷冷１０％塩化アンモニウム水溶液に注いだ。形成された固体をろ過し、水で洗浄し、乾燥して黄色固体を得た。収量１１ｇ（８３％）、ｍｐ２５５℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．２６（ｍ，４Ｈ）、３．９０（ｍ，４Ｈ）、５．６１（ｓ，２Ｈ）、７．１５（ｍ，１Ｈ）、７．２５（ｍ，５Ｈ）、７．４７（ｍ，２Ｈ）、７．８０（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）、８．４３（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、８．７６（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ４７６（Ｍ＋１）。
【０６２７】
３−アミノ−１−ベンジル−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１Ｈ−［１，８］−ナフチリジン−２−オン（１２８）の合成
１−ベンジル−３−ニトロ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１Ｈ−［１，８］−ナフチリジン−２−オン（１２７）（４７５ｍｇ、１ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（１０％、５０ｍｇ）を含むエタノール溶液を、水素雰囲気下、室温で一晩攪拌した。この溶液をセライトパッドを通してろ過し、ろ液を濃縮して黄色固体を得た。収率７５％、ｍｐ２１０℃、１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ  ３．０５（ｂ，２Ｈ）、３．３５（ｂ，２Ｈ）、３．７０（ｂ，２Ｈ）、４．００（ｂ，２Ｈ）、５．５４（ｓ，２Ｈ）、５．６８（ｓ，２Ｈ）、７．２（ｍ，７Ｈ）、７．４７（ｄｄ，Ｊ＝１．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．７７（ｄｄ，Ｊ＝１．２，５．２Ｈｚ，１Ｈ）、８．２４（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．３１（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ４４６（Ｍ＋１）。
【０６２８】
上記の１−ベンジル−３−ニトロ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１Ｈ−［１，８］−ナフチリジン−２−オン（１２７）および３−アミノ−１−ベンジル−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１Ｈ−［１，８］−ナフチリジン−２−オン（１２８）の調製における反応シーケンスは次の通りである。
【０６２９】
【化１９９】
2007503388.tif 000201
１−ベンジル−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１２９）の合成
この化合物は、一般的手順Ｃに従って、２−フリルクロライドおよび１−ベンジル−２−オキソ−４−ピペラジン−１−イル−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（９）から調製した。この反応で、１−ベンジル−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，８］−ナフチリジン−３−カルボニトリル（１２９）が白色固体として得られた。ＭＰ：２０６℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：  ３．６０（ｍ，４Ｈ），３．７６（ｍ，４Ｈ），５．５１（ｓ，２Ｈ），６．６５（ｄｄ，Ｊ＝３．５，４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｄｄ，Ｊ＝３．５，４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２０−７．３５（ｍ，５Ｈ），７．４２（ｄｄ，Ｊ＝４．８，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．３９（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７３（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＩＭＳ：４４０  （Ｍ＋１）。元素分析Ｃ２５Ｈ２１Ｎ５Ｏ３（Ｃ，Ｈ，Ｎ）。
【０６３０】
＜実施例２＞
見込みのあるＭＩＦ阻害剤の活性を評価するためのアッセイを次節に記載する。
【０６３１】
マクロファージ遊走アッセイ
マクロファージ遊走を、ＨａｒｒｉｎｇｔｏｎおよびＳｔａｓｔｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１０（３）：７５２〜７５９頁、１９７３年に記載のように、アガロース小滴アッセイ（ａｇａｒｏｓｅ  ｄｒｏｐｌｅｔ  ａｓｓａｙ）およびキャピラリー法を用いて測定する。簡単に言えば、マクロファージを含む試料を、長さ７５ｍｍ、内径１．２ｍｍのヘマトクリット管に加える。この管をヒートシールし、１００×Ｇで３分間遠心分離にかけ、細胞−液体界面でカットし、Ｓｙｋｅｓ−Ｍｏｏｒｅ培養チャンバー内のシリコーングリースの滴に埋め込む。培養チャンバーは、対照タンパク質（ＢＳＡ）または試料のいずれかを含む。遊走面積は、３７℃で２４時間および４８時間インキュベーションした後に、マクロファージファンの映し出された画像を追跡し、面積測定により遊走の面積を測定することによって決定する。
【０６３２】
あるいは、９６ウェルプレートの各ウェルを、１μＬの液体０．８％（ｗ／ｖ）Ｓｅａ  Ｐｌａｑｕｅ  Ａｇａｒｏｓｅの水溶液を各ウェルの真中に分配して、予め被覆する。次いで、プレートをライトボックスでアガロース滴がちょうど乾燥するまで穏やかに温める。３７℃に加熱された、０．２％アガロース（ｗ／ｖ）を含む（ＭＩＦまたは他の対照群を含む、または含まない）培地に最大で２５％（ｖ／ｖ）のマクロファージ含有細胞懸濁液２μＬを、予め被覆したプレートウェルに加え、５分間４℃に冷却する。次いで、各ウェルを培地で満たし、３７℃で、５％ＣＯ２−９５％空気下、４８時間インキュベートする。アガロース滴からの遊走を２４時間後および４８時間後に、小滴の端から遊走の末端までの距離を決定することによって測定する。
【０６３３】
遊走アッセイ
組換えマウスおよびヒト野生型およびマウス変異ＭＩＦの単球遊走阻害活性を、改良型Ｂｏｙｄｅｎ  ｃｈａｍｂｅｒ法で、ヒト末梢血単核細胞またはＴ細胞を除去した単核細胞を用いることによって分析する。Ｃａｌｃｅｉｎ  ＡＭ標識単球を、Ｌ−グルタミン（フェノールレッドを含まない）および０．１ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミンまたはウシ血清アルブミンを含むＲＰＭＩ  １６４０培地中に、２．５から５×１０６／ｍＬで懸濁させる。細胞懸濁液のアリコート（２００μＬ）を、予め３７℃に温めたＵ底９６ウェル培養プレート（Ｃｏｓｔａｒ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）のウェルに加える。ＭＩＦを含むＲＰＭＩ  １６４０を、細胞懸濁液に加え、最終濃度１、１０、１００、および１０００ｎｇ／ｍＬを得る。培養プレートを、温度制御されたプレートリーダーのチャンバーに入れ、３０秒間混合し、３７℃で１０〜２０分間インキュベートする。インキュベーションの間、２８μＬの予め温めたヒト単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ−１；Ｐｅｐｒｏ  Ｔｅｃｈ．，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｙ  Ｈｉｌｌ，ＮＪ）を１０または２５ｎｇ／ｍＬで、または０．１ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡを含むＲＰＭＩ  １６４０を、ＣｈｅｍｏＴＸプレート（Ｎｅｕｒｏ  Ｐｒｏｂｅ  Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ；ウェル直径３ｍｍ、フィルター孔径５μＭ）の底のウェルに加える。フィルタープレートを、ベースプレートに注意深く重ねる。処理した細胞懸濁液をインキュベーターから取り除き、３０μＬをフィルタープレートの各ウェルに加える。組み立てたプレートを、３７℃で９０分間、５％ＣＯ２の加湿チャンバー内でインキュベートする。インキュベーション後、細胞懸濁液をフィルターの表面から吸引し、続いて、フィルターをベースプレートから取り除き、５０μＬの１ＸＨＢＳＳ−を各フィルターセグメントに加えることにより３回洗浄する。洗浄の間に、スキージ（ＮｅｕｒｏＰｒｏｂｅ）を用いて、残ったＨＢＳＳ−を除去する。フィルターは自然乾燥し、その後、蛍光プレートリーダー内で、４８５ｎｍの励起および５３５ｎｍの励起で直接読み込む。走化性または無秩序な遊走の指数は、ＭＣＰ−１またはＭＩＦのいずれも含まないウェルのフィルターの平均蛍光で割った所定ウェルの平均フィルター結合蛍光として定義する。蛍光標識細胞の滴定により、このアッセイで検出された蛍光レベルが細胞数と比例関係を有することが示された（図示せず）。
【０６３４】
トウトメラーゼアッセイ
互変異性化反応を、基本的にＲｏｓｅｎｇｒｅｎら、Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．２（１）：１４３〜１４９頁、１９９６年に記載のように行う。５，６−ジヒドロキシインドール−２−カルボン酸へのＤ−ドーパクロムの変換を評価する。ＭＩＦの０．１ｍＭ  ＥＤＴＡおよび１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．０）を含有する、０．４２ｍＭ基質および１．４μｇの試料溶液を含む１ｍｌの試料キュベットを準備し、イミノクロム吸収の減少率を４７５ｎｍで追跡する。Ｌ−ドーパクロムを対照として用いる。さらに、反応生成物は、ＨＰＬＣを用いて、流速１．２ｍｌ／分の２０ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４緩衝液（ｐＨ４．０）および１５％メタノールを含む移動相を使用して追跡することができる。蛍光定量的検出は、２９５／３４５ｎｍで追跡する。
【０６３５】
あるいは、フェニルピルビン酸塩または（ｐ−ヒドロキシフェニル）ピルビン酸塩を用いる互変異性化反応を、基本的にＪｏｈｎｓｏｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．３８：１６０２４〜１６０３３頁、１９９９年に記載のように行う。この方法では、フェニルピルビン酸塩のケトン化を２８８ｎｍ（ｅ＝１７３００Ｍ−１ｃｍ−１）で観測し、（ｐ−ヒドロキシフェニル）ピルビン酸塩のケトン化を３００ｎｍ（ｅ＝２１６００Ｍ−１ｃｍ−１）で観測する。アッセイ混合物は５０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４緩衝液（１ｍＬ、ｐＨ６．５）を含み、定量のＭＩＦの溶液を十分に希釈して（０．５〜１．０μＬの２．３ｍｇ／ｍＬ溶液、最終濃度９３〜１８６ｎＭ）、最初のライナー速度を得る。このアッセイは、エタノール中で調製されたストック溶液からの少量（１〜３．３μＬ）のフェニルピルビン酸塩または（ｐ−ヒドロキシフェニル）ピルビン酸塩のいずれかを加えることにより開始する。フェニルピルビン酸塩および（ｐ−ヒドロキシフェニル）ピルビン酸塩の結晶形は、エノール異性体としてのみ存在する（Ｌａｒｓｅｎら、Ａｃｔａ  Ｃｈｅｍ．Ｓｃａｎｄ．Ｂ２８：９２〜９６頁、１９７４年）。０．５％ｖ／ｖ未満でエタノールによるＭＩＦ活性の有意な阻害が観察されることなく、基質濃度は１０から１５０Ｍの範囲内で変えられる。
【０６３６】
免疫沈降およびウェスタンブロット分析
細胞培養実験を、候補化合物の活性、ＭＩＦ発現、輸送、および搬出を特徴付けるために計画する。細胞および馴化培地分画を、４００μｌの溶解緩衝液（１％  ＮＰ−４０、０．５％デオキシコール酸塩、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．５、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、２ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．０１ｍＭフッ化フェニルメチルスルホニル、１０ｎｇ／ｍｌアプロチニン、１０ｎｇ／ｍｌロイペプチン、１０ｎｇ／ｍｌペプスタチン）を、マイクロフュージで１５分間遠心分離することにより清澄化した後の培地分画に加える以外は、基本的に以前に記載したように（Ｆｌｏｒｋｉｅｗｉｃｚら、Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ  ４：２６５〜２７５頁、１９９１年；Ｆｌｏｒｋｉｅｗｉｃｚら、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６３８：１０９〜１２６）、免疫沈降用に準備する。細胞または培地分画を、ＭＩＦに対するモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体と共にインキュベートし、ＧａｍｍａＢｉｎｄ（商標）Ｇ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＬＫＢ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を加えて、さらに３０分間インキュベーションする。免疫複合体を、マイクロフュージ遠心分離により沈降させ、溶解緩衝液で３回、氷冷免疫沈降洗浄用緩衝液（０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、０．０１Ｍ  リン酸Ｎａ  ｐＨ７．２、１％デオキシコール酸塩、１％  ＮＰ−４０、０．１％ドデシル硫酸ナトリウム）で４回洗浄する。免疫複合体を、ＳＤＳゲル試料緩衝液、１２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８）、４％  ＳＤＳ、１０％グリセロール、０．００４％ブロモフェノールブルー、２ｍＭ  ＥＧＴＡ中で直接解離させ、１２％  ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離する。ゲルを、蛍光光度分析用に処理し、乾燥し、−７０℃でＸ線フィルムに曝す。ネオマイシンホスホトランスフェラーゼを免疫沈降させる際には、ウサギ抗ＮＰＴ抗体（５Ｐｒｉｍｅ−３Ｐｒｉｍｅ，Ｂｏｕｌｄｅｒ，ＣＯ）を用いる。
【０６３７】
ウェスタンブロット分析では、２５ｍＭ  ３−［ジメチル（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］−２−ヒドロキシプロパン−スルホン酸、ｐＨ９．５、２０％メタノールを含む冷緩衝液中で９０分間、０．４アンペアで、タンパク質を１２％  ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルからニトロセルロース膜（孔径０．４５μｍ）に移す。ウェスタンブロット分析では、細胞馴化培地の中の培地を、遠心分離（８００ｇで１０分）し、上清は膜ろ過（１０ｋＤａカットオフ、Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ−１０  Ａｍｉｃｏｎ）で１０倍に濃縮する。次いで、試料を還元条件下、１６％  ＳＤＳ  Ｔｒｉｓ−ｇｌｙｃｉｎ  ゲル（Ｎｏｖｅｘ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）上で還元し、２０Ｖで３時間かけてニトロセルロース膜（Ｎｏｖｅｘ）に移す。膜を、ウサギポリクローナル抗ラット抗体（１：１０００）（Ｔｏｒｒｅｙ  Ｐｉｎｅｓ  Ｂｉｏｌａｂ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）と共に、次いで西洋わさびペルオキシダーゼ−複合体（１：１０００）（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）と共にインキュベートする。ＭＩＦを、クロロナフトール／Ｈ２Ｏ２で現像することにより可視化する。組換えＭＩＦ（２ｎｇ、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓより購入）を、電気泳動させ、標準として移す。膜を、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＮａＮ３、０．３５％ポリオキシエチレン−ソルビタンモノラウレート、および５％脱脂粉乳（Ｃａｒｎａｔｉｏｎ  Ｃｏ．，Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓ，ＣＡ）中、室温で１時間ブロックする。膜を、モノクローナル抗体（カタログ番号ＭＡＢ２８９、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮより購入）またはポリクローナル抗体（ヤギポリクローナル血清、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社製、カタログ番号ＡＦ−２８９−ＰＢ）と共にインキュベートする。インキュベーション後、膜を室温で、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５００ｍＭ  リン酸ナトリウム（ｐＨ７．４）、５ｍＭ  ＮａＮ３、および０．０５％ポリオキシエチレン−ソルビタンモノラウレートを含む緩衝液を１０回取り替えて洗浄する。モノクローナル抗体を用いる際には、その後、膜を室温で、１μｇ／ｍｌウサギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ，ａｆｆｉｎｉｐｕｒｅ，Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）を含むブロッキング緩衝液中で３０分間インキュベートする。ポリクローナル探索では、インキュベーションに、ウサギ抗ヤギ（Ｓｉｇｍａ社製、カタログ番号Ｇ５５１８）を用いる。続いて、膜を上述した１Ｌの緩衝液中で洗浄し、１５μＣｉ１２５Ｉ−タンパク質Ａ（ＩＣＮ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｃｏｓｔａ  Ｍｅｓａ，ＣＡ）を含む１００ｍｌのブロッキング緩衝液中で１時間インキュベートし、１Ｌの緩衝液で洗浄する。放射性信号をオートラジオグラフィーで可視化する。
【０６３８】
細胞外局在化アッセイ
ＭＩＦ搬出を調節する化合物のｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性を評価するために、マウスマクロファージＲＡＷ  ２６４．７細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）が選択される。Ｒａｗ  ２６４．７マクロファージ（３×１０６細胞／ウェル）を、１２ウェル組織培養プレート（Ｃｏｓｔａｒ）で培養し、ＲＰＭＩ／１％熱失活ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（Ｈｙｃｌｏｎｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｌｏｇａｎ，ＵＴ）中で培養する。５％ＣＯ２の加湿雰囲気下、３７℃で３時間インキュベーションした後、非接着性細胞を除去し、ウェルを２回ＲＰＭＩ／１％ＦＢＳで洗浄する。次いで、約９５％の純度の細胞を、ＬＰＳ（０１１１：Ｂ４）またはＴＳＳＴ−１（Ｔｏｘｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓａｒａｓｏｔａ，ＦＬ）と共に２４時間インキュベートし、１ｐｇ／ｍｌから１０００ｎｇ／ｍｌの濃度範囲で、パイロジェンを含まない水に再懸濁させる（用量反応実験用）。経時的実験では、平行した培養の馴化培地を、１ｎｇ／ｍｌ  ＴＳＳＴ−１またはＬＰＳによる刺激後０．５、１、２、４、８および２４時間の間隔で取り除く。阻害試験では、ＲＡＷ  ２６４．７細胞（３×１０６細胞／ウェル）を２４時間、１ｎｇ／ｍｌのＬＰＳ（０１１１：Ｂ４）または１ｎｇ／ｍｌのＴＳＳＴ−１と共に、０．０１μＭから１０μＭの候補化合物または緩衝液（対照として）の存在下でインキュベートする。細胞−馴化培地中のＭＩＦをフィルター上に濃縮し、試料中に残っているＭＩＦを、ウェスタンブロッティングにより分析し、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ  Ｅａｇｌｅ  Ｅｙｅ（商標）でＭＩＦバンド密度も測定する。
【０６３９】
１ｎｇ／ｍｌ  ＴＳＳＴ−１またはＬＰＳのいずれかの添加により、ＲＡＷ細胞を誘導してＭＩＦを発現させ、２４時間培養する。馴化培地中のＭＩＦを上述のように測定する。ＭＩＦ阻害化合物は、緩衝液のみと共にインキュベートした細胞と比較して、馴化培地中の免疫検出可能なＭＩＦレベルを濃度依存的に減少させる。
【０６４０】
細胞培養、形質移入、および代謝標識
Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＣＲＬ  １６５０）から入手した標的細胞を４８ウェルプレート中、１０％ウシ胎児血清、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１００ｎＭ非必須アミノ酸、および５０μｇ／ｍｌゲンタマイシンを補ったＤＭＥＭ中で一晩培養する。次いで、トランスフェクションバッファー（１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＫＣｌ、１ｍＭ  ＣａＣｌ２、０．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．９ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４））中で標的細胞に２μｇ／ｍｌのＣｓＣｌ−精製プラスミドＤＮＡを形質移入する。各ウェルに、３００μｌのＤＮＡを含むトランスフェクションバッファーを加える。細胞を３７℃で３０分間インキュベートし、緩衝液を吸引する。１００μＭクロロキンを追加した温めた培地を１．５時間加える。この培地を取り除き、細胞を完全培地で２回洗浄する。次いで、細胞を４０〜４８時間インキュベートする。関心あるプラスミドを、選択可能なマーカーネオマイシンホスホトランスフェラーゼを含むｐＭＡＭｎｅｏ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）と共に、同時形質移入する。関心ある２μｇのプラスミドを１０μｇのｐＭＡＭｎｅｏと共に同時形質移入すると、免疫蛍光顕微鏡検査法によって決定されるように、７０％を超える形質移入された細胞がＭＩＦおよびｎｅｏの両方を発現する。
【０６４１】
免疫沈降アッセイでは、標的細胞を１５分間、１００μＣｉの３５Ｓ−メチオニンおよび３５Ｓ−システイン（トランス３５Ｓ標識、ＩＣＮ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ）を含む、メチオニンおよびシステインを含まないＤＭＥＭ  １ｍｌで代謝的にパルスラベルする。標識化後、細胞単層を、過剰の（１０ｍＭ）非標識化メチオニンおよびシステインを追加したＤＭＥＭで１〜２分間、１回洗浄する。次いで、細胞を、指示した時間、２ｍｌのこの培地中で培養し、細胞上清を、リーダーレスタンパク質の有無を調べるために免疫沈降する。指示された培養では、追跡培地に指示濃度のモジュレーターを追加する。
【０６４２】
あるいは、ＥＬＩＳＡによる分析では、標的細胞を、１から２分間、２５０μｌの０．１Ｍ炭酸ナトリウム（ｐＨ１１．４）で１回洗浄し、直ちに吸引する。代わりには、高濃度食塩水が好ましいであろう。細胞を、０．５％  ＦＢＳと２５μｇ／ｍｌヘパリンとを含む培地で洗浄し、次いで、指示された時間、この同一培地中でインキュベートする。指示培地では、追跡培地にモジュレーターを追加する。ｈＣＧ−αまたはその他の非ヘパリン結合タンパク質などのリーダー配列を含むタンパク質をコードするベクターを形質移入された細胞では、炭酸塩洗浄およびヘパリン含有培地を省略することができる。
【０６４３】
ＭＩＦ阻害についての高処理スクリーニングアッセイ
ＭＩＦ阻害についての高処理スクリーニングアッセイは、ＴＨＰ−１細胞により産生されるＭＩＦを用い、９６ウェル形式で行われ、次のように行われる。ＭＩＦアッセイは、上述のようにＥＬＩＳＡにより行う。ＴＨＰ−１細胞を、約５×１０６細胞／ｍｌで、２０μｇ／ｍｌの細菌性ＬＰＳを含むＲＰＭＩ培地に再懸濁させ、細胞を１８〜２０時間インキュベートする。続いて、細胞上清を回収し、推定阻害剤と共にインキュベートする。簡単に言えば、９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ社製、番号３５９０）ＥＬＩＳＡプレートを、３７℃で２時間、４μｇ／ｍｌの濃度で、ＭＩＦモノクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社製、カタログ番号ＭＡＢ２８９）により被覆する。不希釈の培養上清をＥＬＩＳＡプレートに加え、室温で２時間インキュベーションする。次いで、ウェルを洗浄し、ビオチニル化したＭＩＦポリクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社製、＃ＡＦ−２８９−ＰＢ）を加え、次いでストレプトアビジン−ＨＲＰおよび発色基質を加える。ＭＩＦの量を、ＭＩＦ標準曲線からの内挿により計算する。
【０６４４】
血清中での候補阻害剤のＨＰＬＣ分析
ｉｎ  ｖｉｖｏでの任意の小分子の影響を評価するに先立ち、血液などの体液中でこの化合物が定量的方法で検出できることが望ましい。ＭＩＦ阻害剤などの試験化合物を最初に再現性よく検出し、次いで生体液中での濃度を測定するための分析方法を確立する。
【０６４５】
ＲＰ−ＨＰＬＣを、Ｓｙｍｍｅｔｒｙ  Ｓｈｉｅｌｄ  ＲＰ−８（４．６×７５ｍｍ、同上、Ｗａｔｅｒｓ，Ｍｉｌｏｒｄ，ＭＡ）を用い、Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ  Ｍｏｄｅｌ  ＨＰ−１１００ユニットにより行う。移動相は、０．１％トリフルオロ酢酸を含む３５％アセトニトリル／水の等張液である。吸収は、２３５ｎｍで観察する。血清中の試験化合物の量を測定するために、最初に試料血清蛋白質を５０％アセトニトリル（４℃一晩）を用いて分離し、次いで、１４０００ｒｐｍで３０分間遠心分離する。次いで、上清をＲＰ−ＨＰＬＣで分析し、化合物濃度を既知標準の検量線に基づいて計算する。この手順によれば、逆相ＨＰＬＣを使用し、スパイクされた試験試料を用いて、候補化合物を１．５〜８００ｎｇの線形範囲で検出する。上記分析技術を候補化合物を受けた（０．４ｍｇ／２０ｇマウス）動物由来の血清に適用すると、候補化合物の循環濃度が定量的に測定される。
【０６４６】
候補化合物を定量する上記方法の開発によって、化合物の様々な投与経路の有効性を評価し、生理活性を特徴付けることが可能である。時間依存的な血清の生理活性を試験するために、動物を腹腔内注射（ｉ．ｐ．）および強制経口投与により候補化合物で治療する。
【０６４７】
ＭＩＦのＩｎ  Ｖｉｖｏでの阻害
ｉｎ  ｖｉｖｏ実験の目的は、ＭＩＦを阻害する候補化合物を用いた最初のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイの結果を確認することである。これらの炎症媒介物質を中和し、阻害することによって、エンドトキシンショックから動物を保護することが可能であるので、ＬＰＳ誘導毒性は、ＭＩＦ、ならびにＴＮＦ−αおよびＩＬ−１βの過剰産生に関係しているように思われる。このモデルは再現性のある、急速な致死モデルの種および感染性ショックのモデルを与えるので、これを選択している。
【０６４８】
各実験の前に、任意の量のリポ多糖類（ＬＰＳ）を調製する。ＬＰＳ（大腸菌０１１１：Ｂ４、Ｓｉｇｍａ社製）を、０．５％  ＴＥＡ（１ｍｌ  ＵＳＰ水＋５ｍｌトリエチルアミン（Ｐｉｅｒｃｅ社製））を５ｍｇのエンドトキシンを含むバイアルに加えて再構成する。再構成後直ぐに、この溶液を３７℃で３０分間インキュベートする。続いて、この溶液を、５６〜６０℃の槽型超音波装置で、３０秒間３回、超音波処理する。超音波処理後、この混合物を３分間続けてボルテックスにかける。次いでＬＰＳのストック溶液を使用する準備をする。
【０６４９】
血中のＩＬ−１βおよびＴＮＦ−αおよびＭＩＦの検出
１０匹の１０週齢（２０±２ｇ）雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｋｉｎｇｓｔｏｎ，ＮＹ）を、餌および水を自由に摂取しうるケージで、１ケージ当たり５匹の群で飼育して、実験前に少なくとも一週間順化させる。実験当日、マウスの体重を測定し、無作為に同じ平均体重の１０匹の群に分ける。マウスに、ＬＰＳ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ０１１１：Ｂ４、１０ｍｇ／ｋｇまたは５ｍｇ／ｋｇ体重）およびβ−Ｄ−ガラクトサミン（５０ｍｇ／ｋｇ体重）をｉ．ｐ．注射する直前に、２００μＬの調剤した候補化合物または緩衝液単独をｉ．ｐ．注射する。各用量のＬＰＳ（２０ｇのマウスに対し０．２ｍｌ）を腹腔内に投与し、最終濃度５０ｍｇ／ｍｌのβ−Ｄ−ガラクトサミンと混合する。心臓穿刺により採取した血液標本の採取後、動物を屠殺する。通常の採取をＬＰＳ処置の４時間後に行う。製造元の手順に従って、血清を血清分離機（Ｍｉｃｒｏｔａｉｎｅｒ（登録商標）Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＮＪ）で分離する。マウス血清Ｉｌ−１βおよびＴＮＦ−αを、製造元の指示に従い、「マウスＩＬ１β免疫アッセイ」または「マウスＴＮＦ−α免疫アッセイ」キット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を用いて、ＥＬＩＳＡで測定する。マウス血清中での血清ＭＩＦ濃度を、サンドイッチＥＬＩＳＡ（ＣｈｅｍｉＫｉｎｅ  ＭＩＦ  Ｋｉｔ，Ｃｈｅｍｉｃｏｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で定量する。試料を２回分析し、結果を平均する。
【０６５０】
マウスＬＰＳモデル
１０匹の８から１０週齢（２０±２ｇ）の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスを上述のように飼育して、順化させる。実験当日、マウスの体重を測定し、無作為に同じ平均体重の５匹の群に分ける。マウスに、ＬＰＳ（Ｅ．Ｃｏｌｉ  ０５５Ｂ５、Ｓｉｇｍａ）（４０、１０、５、２または０．５ｍｇ／ｋｇ体重）および５０ｍｇ／ｋｇのβ−Ｄ−ガラクトサミンをｉ．ｐ．注射した後、２００μｌの調剤した候補化合物またはその緩衝液（平均２０ｍｇ／ｋｇの化合物）を注射する。マウスを、最初の１８時間は２時間ごとに、７日間は１日に２回観察する。これらの研究では、Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ推定法を用いて動物の生存を評価する。
【０６５１】
全てのｉｎ  ｖｉｖｏ試験では、処置群の間で標準的な統計比較を、カテゴリーデータのためのＦｉｓｈｅｒ検定および連続変数のためのＭａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ検定を用いて行う。血清ＩＬ−１レベルが血清ＭＩＦに関連するか否かを決定するために、Ｆｉｓｈｅｒ検定を適用する。解析は、Ｓｔａｔ  Ｖｉｅｗ  ５．０  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ａｂａｃｕｓ  Ｃｏｎｃｅｐｔｓ，Ｂｅｒｋｅｌｅｙ，ＣＡ）を用いて行う。両側性で、０．０５未満の値の報告された全てのｐ値を考慮して、統計的有意性を示す。
【０６５２】
最初の対照実験を行って、マウスモデル系（雌Ｂａｌｂ／ｃマウス）で内在性ＭＩＦのベースラインレベルを決定し、さらに、ＬＰＳ（１０ｍｇ／ｋｇ）による処置後の内在性ＭＩＦの上昇速度および範囲を決定する。雌Ｂａｌｂ／ｃマウスを、５０ｍｇ／ｋｇのβ−Ｄ−ガラクトサミンを混合したＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ社製、０１１１：Ｂ１）で処置する。血清中のＭＩＦレベルを、ＬＰＳ／ガラクトサミン処置の０、２、５および６時間後に、上述したようにＨＰＬＣで測定する。この代表的な実験の開始時点では、内因性ＭＩＦレベルのベースラインレベルは、約４５ｎｇ／ｍｌである。しかし、この６時間の実験の間に、採取した血清試料中で検出されるＭＩＦレベルに、時間依存性の上昇がみられる。マウスを候補化合物（５０％の水溶液中で調剤）および１０ｍｇ／ｋｇのＬＰＳで処置する場合、検出可能な循環ＭＩＦレベルに有意な減少がみられる。ＬＰＳ投与時に、ＢＡＬＢ／ｃマウスに２０ｍｇ／ｋｇ体重の候補化合物をｉ．ｐ．注射する。５．５時間後に血液試料を採取する。この結果は、候補化合物で処置した動物ではＬＰＳに対して応答する能力が減少することを示し、ＭＩＦレベルの低下が検出される。マウスに半分のＬＰＳ投与量（５ｍｇ／ｋｇ）を投与する更なる試験では、血清ＭＩＦを処置の４時間後に決定する。このデータは、ＭＩＦの減少を示す。更なる実験では、ＭＩＦおよびＩＬ−１βの両方を、ＥＬＩＳＡによりマウス血清中で測定する。この実験は、ＭＩＦおよびＩＬ−１β間の直接的かつ高い有意な相関性を示す。この相関性は、ＭＩＦおよびＴＮＦ−α間でも観察される。類似の実験では、２０ｍｇ／ｋｇの候補化合物の投与後に、血清ＩＬ−１βレベルおよび血清ＴＮＦ−αレベルの減少が観察される。
【０６５３】
実験的なＬＰＳにより誘導される毒素性ショックの研究により、ＭＩＦおよびＴＮＦ−αの中心的な役割が明らかにされる。ＬＰＳがマクロファージ様細胞を刺激してＭＩＦを産生させ、次に、マクロファージ様細胞によるＴＮＦ−αの分泌を誘導するという事実は、ＬＰＳの病原性におけるＭＩＦの潜在的な役割を示唆している。候補化合物がＬＰＳショックを阻害するか否かを試験するために、β−Ｄ−ガラクトサミンで感作させたＢＡＬＢ／ｃマウスの致死的ＬＰＳ媒介ショックモデルを使用する。致死量のＬＰＳ（２、５および１０ｍｇ／ｋｇ）の注射時に候補化合物で処置すると、実質的に生存の確率を上昇させる。この効果は用いるＬＰＳの濃度により調節され、より高い濃度のＬＰＳを用いる場合には、候補化合物の効果は飽和性であり、それゆえ特異的であることを示している。候補化合物は、濃度依存的に、ＬＰＳ誘導毒素性ショックからマウスを保護することができる。
【０６５４】
ＭＩＦは、候補化合物の効果を圧倒する
候補化合物と共に投与すると、外来性組換え型ヒトＭＩＦは、化合物の有益な効果を逆転させる可能性があり、候補化合物が、マウス血清中のＭＩＦレベルを調節することによって、ＬＰＳに対する動物の抵抗を上昇させるように作用するという仮説を支持する。１ｍｇ／ｋｇのＬＰＳおよび２０ｍｇ／ｋｇの候補化合物に加え、３００μｇ／ｋｇのヒト組換え型ＭＩＦを投与する動物がいる以外は、マウスを標準的なＬＰＳプロトコルで処理する。１２時間後、候補化合物と共にＬＰＳを受けて、かなり多くのマウスが生存するが、この生存は、ＭＩＦの投与により無効にされる。
【０６５５】
コラーゲン誘導関節炎モデルにおけるＭＩＦ阻害剤
１０〜１２週齢の２０匹のＤＢＡ／１ＬａｃＪマウスを、０日目にフロイント完全アジュバント（ＦＣＡ、ＧｉｂｃｏＢＲＬ社製）中で乳化したウシコラーゲンタイプＩＩ（ＣＩＩ  １００μｇ）により尾の根元で免疫化する。７日目に、２回目の用量のコラーゲンを同じ経路を介して投与する（フロイント不完全アジュバントで乳化したもの）。１４日目に、マウスに１００ｍｇのＬＰＳ（０５５：Ｂ５）を皮下注射する。７０日目に、マウスに４０μｇのＬＰＳ（０１１１：Ｂ４）を腹腔内注射する。無作為化後、カリパスで測定した肢の厚みによって群に分け、平均化した出発群を作る。候補化合物を含む緩衝液を、７１、７２、７３、および７４日目にマウスに与える（０．４ｍｇ／投与量で全８回の投与、約２０ｍｇ／ｋｇ体重）。次いで７４日目に、マウスの肢の厚みを２人の観察者により調べる。この実験では、鎮静したマウス（末期の関節炎の減少）を７０日目にＬＰＳの最終的なｉ．ｐ．注射で処置し、サイトカイン産生および急性炎症を刺激する。候補化合物で処置したマウスでは、溶媒のみで処置した対照群と比較して、肢の浮腫のわずかな減少が生じる。遅い時点では、対照群と比較して、処置群の動物はコラーゲン誘導関節炎の完全な発現に至らない。
【０６５６】
他の実験では、１０〜１２週齢の１５匹のＤＢＡ／１Ｊマウスを、０日目にフロイント完全アジュバント（ＦＣＡ、ＧｉｂｃｏＢＲＬ社製）で乳化したウシコラーゲンタイプＩＩ（ＣＩＩ  １００μｇ）により、尾の根元で免疫化する。２１日目に、フロイント不完全アジュバントで乳化した、２回目の用量のコラーゲンを同じ経路を介して投与する。２８日目に、マウスに１００μｇのＬＰＳ（０５５：Ｂ５）を皮下注射する。７１日目に、マウスに４０μｇのＬＰＳ（０１１１：Ｂ４）をｉ．ｐ．注射する。群および処置プロトコルは上述したものと同一である。７４日目に、血液試料を採取し、サイトカインを測定する。候補化合物は、未処置のＣＩＡ試料と比較して、血清ＭＩＦレベルを減少させる。血清ＴＮＦ−αレベルのより著しい阻害さえも検出される。
【０６５７】
選択された化合物によるＭＩＦ阻害−トウトメラーゼアッセイ
以下のＭＩＦの阻害剤を好ましい実施形態の方法により調製した。次の構造では、式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ３の基を指すのに「ＣＯＯＥｔ」を用い、式−ＣＨ２ＣＨ３の基を指すのに「Ｅｔ」を用いている。トウトメラーゼアッセイの結果は、各ＭＩＦ阻害剤化合物が１００μＭ以下の濃度でＭＩＦ活性の有意な阻害を示すことを示した。
【０６５８】
【化２００】
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【０６５９】
【化２０１】
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【０６６０】
【化２０２】
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【０６６１】
【化２０３】
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【０６６２】
【化２０４】
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【０６６３】
ＭＩＦ阻害剤
以下の化合物を好ましい実施形態の方法により調製した。これらの化合物は、ＭＩＦ活性の有意な阻害を示すことが期待される。次の構造では、式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ３の基を指すのに「ＣＯＯＥｔ」を用い、式−ＣＨ２ＣＨ３の基を指すのに「Ｅｔ」を用いている。
【０６６４】
【化２０５】
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【０６６５】
【化２０６】
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【０６６６】
【化２０７】
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【０６６７】
【化２０８】
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【０６６８】
【化２０９】
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【０６６９】
【化２１０】
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【０６７０】
本明細書で引用された全ての参考文献は、参照することにより全体として本明細書に援用される。参照することにより援用される出版物および特許または特許出願が本明細書に含まれる開示と矛盾する範囲では、そのような矛盾する資料いずれよりも本明細書が優先され、および／または優位となることを意図するものである。
【０６７１】
本明細書で用いられる「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」または「によって特徴付けられる（ｃｈａｒａｔｅｒｉｚｅｄ  ｂｙ）」と同義であり、包含的またはオープンエンドであり、付加的な、引用されていない要素または方法の段階を排除しない。
【０６７２】
明細書および特許請求の範囲で用いられる成分の量、反応条件などを表す全ての数は、全ての場合に「約」という用語により修飾されていると考えるべきである。すなわち、それと反対に示されていない限り、明細書および添付された特許請求の範囲に記載された数値パラメータは、本発明により得ようとしている所望の特性によって変化させることができる近似値である。少なくとも、特許請求の範囲に対する均等論の適用を制限する試みとしてではなく、各数値パラメータは、有効桁の数および通常の四捨五入のアプローチの観点から解釈すべきである。
【０６７３】
上記記載は、本発明のいくつかの方法および材料を開示している。本発明は、方法および材料の改変、ならびに製造方法および装置の変更を受け入れることができる。このような改変は、この開示または本明細書に開示した発明の実行を考慮することにより、当業者には明らかとなるであろう。その結果として、本発明は、本明細書に開示された特定の実施形態に制限されることを意図するものではなく、特許請求の範囲に具現化された本発明の真の範囲および精神に含まれる全ての改変および代替物すべてに及ぶことを意図するものである。
【国際調査報告】
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