(57)【要約】  発作などの、温血動物におけるＣＲＦの分泌過多を明示する障害の治療を含む、種々の障害の治療において有用性を有するＣＲＦ受容体アンタゴニストを開示する。本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは、その立体異性体、プロドラッグおよび医薬上許容される塩を含む、以下の構造式（Ｉ）（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｙ、ＡｒおよびＨｅｔは本明細書の記載と同意義である）を有する。ＣＲＦ受容体アンタゴニストおよび医薬上許容される担体を含有する組成物、ならびにそれを用いる方法もまた開示されている。2007515472.tif 000082
2007515472.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の構造式：
【化１】
2007515472.tif 000080
［式中：
「---」は任意の二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１は水素、アルキル、置換アルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、−ＮＨ２またはハロゲンであり；
Ｒ２はアルキル、置換アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ8、アリール、置換アリール、アリールオキシアルキル、置換アリールオキシアルキル、ヘテロアリールアルコキシアルキル、置換ヘテロアリールアルコキシアルキル、複素環式アルキル、置換複素環式アルキル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり、ここで、該ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールは炭素−炭素結合を介してピリミジン環に連結されており；
Ｒ３は結合、水素またはアルキルであり；
Ｙは＝（ＣＲ４）−または−（Ｃ＝Ｏ）−であり；
Ｒ４は水素、アルキル、置換アルキル、チオアルキル、アルキルスルフィニルまたはアルキルスルホニルであり；
Ａｒはフェニル、１個もしくは２個のＲ５で置換されているフェニル、ピリジルまたは１個もしくは２個のＲ５で置換されているピリジルであり；
Ｒ５は、各々の場合において、ヒドロキシ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、シアノ、ハロゲン、アルキルスルホニルまたはアルキルスルフィニルであり；
Ｈｅｔは、１個もしくは２個のＲ６で置換されていてもよいヘテロアリールであり；
Ｒ６は、各々の場合において、ヒドロキシ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、シアノまたはハロゲンであり；
Ｒ７およびＲ８は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、複素環、置換複素環、アリールアルキル、置換アリールアルキル、複素環式アルキルまたは置換複素環式アルキルであるか、または
Ｒ７とＲ８は、それらが結合する窒素と一緒になって、複素環式環または置換複素環式環を形成する］
で示される化合物あるいはその医薬上許容される塩、エステル、溶媒和物、立体異性体またはプロドラッグ。
【請求項２】
Ｒ１が水素、アルキル、置換アルキル、−ＮＨ２またはハロゲンであるところの、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ２がアルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり、ここで該ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールが炭素−炭素結合を介してピリミジン環に結合されているところの、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ３が結合であるところの、請求項１記載の化合物。
【請求項５】
Ｙが＝（ＣＲ４）−であるところの、請求項４記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ４が水素、アルキルまたは置換アルキルであるところの、請求項５記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ３が水素またはアルキルであるところの、請求項１記載の化合物。
【請求項８】
Ｙが−（Ｃ＝Ｏ）−であるところの、請求項７記載の化合物。
【請求項９】
Ａｒが１個のＲ５で置換されているフェニルであるところの、請求項１記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ５がアルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、シアノ、ハロゲン、アルキルスルホニルまたはアルキルスルフィニルであるところの、請求項９記載の化合物。
【請求項１１】
Ｈｅｔが１個のＲ６で置換されているところの、請求項１記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ６がアルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、シアノまたはハロゲンであるところの、請求項１１記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ１が水素、アルキルまたは置換アルキルであり；
Ｒ３が結合であり；
Ｙが＝（ＣＲ４）−であり；
Ｒ４が水素、アルキルまたは置換アルキルであり；
Ａｒが１個のＲ５で置換されているフェニルであり；
Ｒ５がアルキル、置換アルキル、アルコキシまたは置換アルコキシであり；および
Ｈｅｔがヘテロアリールであるところの、請求項１記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ１が低級アルキルであり；
Ｒ４が低級アルキルであり；
Ｒ５がアルコキシであり；および
Ｈｅｔがピラゾリルであるところの、請求項１３記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ１がメチルであり；
Ｒ４がメチルであり；および
Ｒ５がメトキシであるところの、請求項１４記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ２がアルキル、置換アリールアルキル、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、置換ヘテロアリールオキシアルキル、ヘテロアリールアルキルまたは置換ヘテロアリールアルキルであるところの、請求項１５記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ２が置換アリールアルキル、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであるところの、請求項１６記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ２が置換ベンジル、置換フェニル、置換ピラゾリル、ピリジニルまたは置換ピリジニルであるところの、請求項１７記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ２が置換ピラゾリル、ピリジニルまたは置換ピリジニルであるところの、請求項１８記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ２が置換ピリジニルであるところの、請求項１９記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ２がメチル置換ピリジニルまたはメトキシ置換ピリジニルであるところの、請求項２０記載の化合物。
【請求項２２】
式：
【化２】
2007515472.tif 000081
で示されるところの、請求項２１記載の化合物。
【請求項２３】
請求項１に記載の化合物と、医薬上許容される担体または希釈体とを含む、医薬組成物。
【請求項２４】
哺乳動物においてＣＲＦの分泌過多を明示する障害の治療方法であって、該動物に有効量の請求項２３に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項２５】
障害が発作であるところの、請求項２４記載の方法。
【請求項２６】
障害が鬱病であるところの、請求項２４記載の方法。
【請求項２７】
障害が不安関連の障害であるところの、請求項２４記載の方法。
【請求項２８】
障害が強迫神経症であるところの、請求項２４記載の方法。
【請求項２９】
障害が過敏性腸症候群であるところの、請求項２４記載の方法。
【請求項３０】
障害が拒食症であるところの、請求項２４記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、米国特許仮出願番号６０／５３２，０３１（２００３年１２月１２日出願）の優先権を主張するものであり、その内容を出典明示により本明細書の一部とする。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、一般に、ＣＲＦ受容体アンタゴニストに、そしてそれらを必要とする哺乳動物にかかるアンタゴニストを投与することによる障害の治療方法に関する。
【０００３】
（従来技術）
最初の副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）はヒツジの視床下部から単離され、４１−アミノ酸ペプチドと同定された（非特許文献１）。その後、ヒトとラットのＣＲＦの配列が単離され、同一であるが、４１−アミノ酸残基の７個においてヒツジＣＲＦと異なると決定された（非特許文献２、非特許文献３）。
【０００４】
ＣＲＦは、内分泌、神経および免疫系機能において大きな改変を引き起こすことが判明している。ＣＲＦは、副腎皮質刺激ホルモン（「ＡＣＴＨ」）、β−エンドルフィン、および脳下垂体前葉からの他のプロオピオメラノコルチン（「ＰＯＭＣ」）由来ペプチドの基礎放出およびストレス解放の主たる生理調節物質であると考えられている（非特許文献１）。簡単に言えば、ＣＲＦは、脳（非特許文献４）、脳下垂体（非特許文献５、非特許文献６）、副腎（非特許文献７）および脾臓（非特許文献８）の全体にわたって分散されていることが判明している原形質膜受容体と結合することにより、その生物作用を開始すると考えられている。ＣＲＦ受容体はＣＲＦ刺激のｃＡＭＰの細胞内産生における増加を媒介するＧＴＰ結合蛋白（非特許文献９）と結びつけられる（非特許文献１０）。ＣＲＦに対する受容体は、現在は、ラット（非特許文献１１）、およびヒト脳（非特許文献１２、非特許文献１３）からクローン化される。この受容体は、７回膜貫通ドメインを含んでなる４１５アミノ酸蛋白である。ラットとヒトの配列の同一性の比較は、アミノ酸レベルで高度の相同性（９７％）を示す。
【０００５】
ＡＣＴＨおよびＰＯＭＣの産生を刺激するその役割に加えて、ＣＲＦは、ストレスに対する多種の内分泌反応、自動反応および行動反応を調整すると考えられており、情動障害の病態生理に関連するかもしれない。さらに、ＣＲＦは、免疫系、中枢神経系、内分泌系および循環器系間の連絡における重要な中間物質であると考えられている（非特許文献１４、非特許文献１５、非特許文献１６）。概して、ＣＲＦは、重要な中枢神経系の神経伝達物質のひとつであると思われ、ストレスに対する身体の全応答を統合するにおいて、重要な役割を果たす。
【０００６】
ＣＲＦの脳への直接投与は、ストレスの多い環境に曝露された動物で観察される反応と同一の行動反応、生理反応、および内分泌反応を引き起こす。例えば、ＣＲＦの脳室内注入は、行動活性化（非特許文献１７）、脳波の持続性活性化（非特許文献１８）、交感神経副腎髄質経路の刺激（非特許文献１９）、心拍数および血圧の増加（非特許文献２０）、酸素消費の増加（非特許文献２１）、胃腸活動の変化（非特許文献２２）、食物消費の抑制（非特許文献２３）、性行動の修飾（非特許文献２４）、および免疫機能の低下（非特許文献２５）をもたらす。さらに、臨床データは、ＣＲＦが鬱病、不安症関連障害、および神経性食欲不振において、脳に過剰に分泌されうることを示唆する（非特許文献２６）。従って、臨床データは、ＣＲＦ受容体アンタゴニストがＣＲＦ分泌過多を明白に示す神経精神障害の治療に有用でありうる新規の抗鬱薬および／または抗不安薬であると示唆する。
【０００７】
最初のＣＲＦ受容体アンタゴニスは、ペプチド（例えば、特許文献１（Rivierら）、非特許文献２７を参照のこと）であった。これらのペプチドは、ＣＲＦ受容体アンタゴニストがＣＲＦに対する薬理学的反応を減弱しうることを確立したが、ペプチドＣＲＦ受容体アンタゴニストには、ペプチド治療に通常認められる欠点（安定性の欠如および限定された経口活性を含む）がある。いくつかの公開されている特許公報として、特許文献２、特許文献３、および特許文献４が挙げられ、それらの全てが、ＣＲＦアンタゴニストとしてピラゾロピリミジン化合物を開示する。公開公報の特許文献５は、チロシンキナーゼ阻害剤として特定のピラゾロピリミジン化合物を記載する。
【０００８】
ＣＲＦの生理学的意義のため、ＣＲＦ受容体との有意な結合活性を有し、かつＣＲＦ受容体に対する拮抗能を有する、生理学的に活性な低分子の開発は、今も望ましい目標である。かかるＣＲＦ受容体アンタゴニストは、一般に、内分泌、精神および神経の異常もしくは疾患（ストレス関連障害を含む）の治療に有用でありうる。
【０００９】
ＣＲＦ受容体アンタゴニストの投与を介してのＣＲＦ調整の達成に向って有意な前進がなされたが、当該分野において効果的な低分子ＣＲＦ受容体アンタゴニストに対する要求がある。かかるＣＲＦ受容体アンタゴニストを含有する医薬組成物に対する要求、ならびに、例えば、ストレス関連障害を治療するためのそれらの使用に関する方法に対する要求もある。本発明は、これらの要求を満足させ、他の関連した利点を提供する。
【特許文献１】米国特許第４，６０５，６４２号明細書
【特許文献２】米国特許第６，３１３，１２４号明細書
【特許文献３】国際公開第０１／２３３８８号パンフレット
【特許文献４】国際公開第９７／２９１０９号パンフレット
【特許文献５】国際公開第９８／５４０９３号パンフレット
【非特許文献１】Valeら、Science 213:1394-1397, 1981
【非特許文献２】Rivierら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:4851, 1983
【非特許文献３】Shibaharaら、EMBO J. 2:775, 1983
【非特許文献４】DeSouzaら、Science 224:1449-1451, 1984
【非特許文献５】DeSouzaら、Methods Enzymol. 124:560, 1986
【非特許文献６】Wynnら、Biochem. Biophys. Res. Comm. 110:602-608, 1983
【非特許文献７】Udelsmanら、Nature 319:147-150, 1986
【非特許文献８】Webster, E.L.およびE.B. DeSouza, Endocrinology 122:609-617, 1988
【非特許文献９】Perrinら、Endocrinology 118:1171-1179, 1986
【非特許文献１０】Bilezikjian, L.M.およびW.W. Vale, Endocrinology 113:657-662, 1983
【非特許文献１１】Perrinら、Endo 133（6）:3058-3061, 1993
【非特許文献１２】Chenら、PNAS 90（19）:8967-8971, 1993
【非特許文献１３】Vitaら、FEBS 335（1）:1-5, 1993
【非特許文献１４】Croffordら、J. Clin. Invest. 90:2555-2564, 1992
【非特許文献１５】Sapolskyら、Science 238:522-524, 1987
【非特許文献１６】Tildersら、Regul. Peptides 5:77-84, 1982
【非特許文献１７】Suttonら、Nature 297:331, 1982
【非特許文献１８】Ehlersら、Brain Res. 278:332, 1983
【非特許文献１９】Brownら、Endocrinology 110:928, 1982
【非特許文献２０】Fisherら、Endocrinology 110:2222, 1982
【非特許文献２１】Brownら、Life Sciences 30:207, 1982
【非特許文献２２】Williamsら、Am. J. Physiol. 253:G582, 1987
【非特許文献２３】Levineら、Neuropharmacology 22:337, 1983
【非特許文献２４】Sirinathsinghjiら、Nature 305:232, 1983
【非特許文献２５】Irwinら、Am. J. Physiol. 255:R744, 1988
【非特許文献２６】DeSouza, Ann. Reports in Med. Chem. 25:215-223, 1990
【非特許文献２７】Rivierら、Science 224:889, 1984
【００１０】
（発明の開示）
概して、本発明は、ＣＲＦ受容体アンタゴニスト、さらに具体的には以下の一般構造（Ｉ）：
【化１】
2007515472.tif 000003
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｙ、Ａｒ、およびＨｅｔは、以下と同意義である）
を有するＣＲＦ受容体アンタゴニストおよびそれらの医薬上許容される塩、エステル、溶媒和化合物、立体異性体、およびプロドラックに関する。
【００１１】
本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは、広範囲の治療的適用にわたって有用であり、多様の障害もしくは疾患（ストレス関連障害を含む）を治療するのに使用されうる。かかる方法は、医薬的に有効な量の本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストを、好ましくは医薬組成物の形態で、それらを必要とする動物に投与することを包含する。従って、別の実施形態において、１種またはそれ以上の本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニスト、および医薬上許容される担体および／または希釈剤を含有する医薬組成物が開示されている。
【００１２】
これらのおよび他の本発明の態様は、以下の詳細な記載を参照して明らかになるだろう。この目的のため、特定の手順、化合物および／または組成物をさらに詳細に記載する、種々の文献が本明細書にて列挙されており、それらを出典明示により本明細書の一部とする。
【００１３】
（発明の詳細な記載）
本発明は、一般に、副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）受容体アンタゴニストに関する。
【００１４】
第一の実施形態において、本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは、以下の構造式（Ｉ）：
【化２】
2007515472.tif 000004
【００１５】
［式中：
「---」は任意の二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１は水素、アルキル、置換アルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、−ＮＨ２またはハロゲンであり；
Ｒ２はアルキル、置換アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ8、アリール、置換アリール、アリールオキシアルキル、置換アリールオキシアルキル、ヘテロアリールアルコキシアルキル、置換ヘテロアリールアルコキシアルキル、複素環式アルキル、置換複素環式アルキル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり、ここで、該ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールは炭素−炭素結合を介してピリミジン環に連結されており；
Ｒ３は結合、水素またはアルキルであり；
Ｙは＝（ＣＲ４）−または−（Ｃ＝Ｏ）−であり；
【００１６】
Ｒ４は水素、アルキル、置換アルキル、チオアルキル、アルキルスルフィニルまたはアルキルスルホニルであり；
Ａｒはフェニル、１個もしくは２個のＲ５で置換されているフェニル、ピリジルまたは１個もしくは２個のＲ５で置換されているピリジルであり；
Ｒ５は、各々の場合において、ヒドロキシ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、シアノ、ハロゲン、アルキルスルホニルまたはアルキルスルフィニルであり；
Ｈｅｔは、１個もしくは２個のＲ６で置換されていてもよいヘテロアリールであり；
Ｒ６は、各々の場合において、ヒドロキシ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、シアノまたはハロゲンであり；
【００１７】
Ｒ７およびＲ８は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、複素環、置換複素環、アリールアルキル、置換アリールアルキル、複素環式アルキルまたは置換複素環式アルキルであるか、または
Ｒ７とＲ８は、それらが結合する窒素と一緒になって、複素環式環または置換複素環式環を形成する］
を有する。
【００１８】
本明細書において使用する、上記の語は、以下の意味を有する：
「アルキル」は、１〜１０個の炭素原子を含有する直鎖もしくは分岐、非環状もしくは環状、不飽和もしくは飽和の炭化水素を意味し、「低級アルキル」なる語は、アルキルと同じ意味を有するが、１〜６個の炭素原子を含有する。代表的な飽和直鎖アルキルとして、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル等が挙げられ、飽和分岐アルキルとして、イソプロピル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチル等が挙げられる。代表的な飽和環状アルキルとして、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、−ＣＨ２−シクロプロピル、−ＣＨ２−シクロブチル、−ＣＨ２−シクロペンチル、−ＣＨ２−シクロヘキシル等が挙げられ、不飽和環状アルキルとして、シクロペンテニルおよびシクロヘキセニル等が挙げられる。環状アルキルは、「単素環式環」と呼ばれ、単素二環式環および単素多環式環（例、デカリンおよびアダマンチル等）を包含する。不飽和アルキルは、隣接した炭素原子間に少なくとも１個の二重結合もしくは三重結合を含有する（それぞれ「アルケニル」または「アルキニル」と称される）。代表的な直鎖および分岐のアルケニルとして、エチレニル、プロピレニル、１−ブテニル、２−ブテニル、イソブチレニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、3−メチル−１−ブテニル、２−メチル−２−ブテニル、２，３−ジメチル−２−ブテニル等が挙げられ、代表的な直鎖および分岐のアルキニルとして、アセチレニル、プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−メチル−１ブチニル等が挙げられる。
【００１９】
「アルキリデニル」は、同じ炭素原子から２個の水素原子が離脱した二価のアルキル（例、＝ＣＨ２、＝ＣＨＣＨ３、＝ＣＨＣＨ２ＣＨ３、＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３等）を表す。
「アリール」は、芳香族炭素環式基（例、フェニルもしくはナフチル）を意味する。
「アリールアルキル」は、アリールで置換された少なくとも１個のアルキル水素原子を有するアルキル（例、ベンジル（つまり、−ＣＨ２フェニル）、−ＣＨ２−（１−または２−ナフチル）、−（ＣＨ２）２フェニル、−（ＣＨ２）３フェニル、−ＣＨ（フェニル）２等）を意味する。
「アリールオキシアルキル」は、酸素架橋を介してアルキルに結合したアリール（つまり、アリール−Ｏ−アルキル−）（例、−メチル−Ｏ−フェニル等）を意味する。
【００２０】
「ヘテロアリール」は、窒素、酸素および硫黄から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を有し、少なくとも１個の炭素原子を含有する、５〜１０員の芳香族複素環式環（単環式および二環式系の両方を含む）を意味する。代表的なヘテロアリールとして、（これに限定されないが）フリル、ベンゾフラニル、チオフェニル、ベンゾチオフェニル、ピロリル、インドリル、イソインドリル、アザインドリル、ピリジル、キノリニル、イソキノリニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ベンゾオキサゾリル、ピラゾリル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、チアゾリル、ベンゾチアゾリル、イソチアゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、シンノリニル、フタラジニル、およびキナゾリニルが挙げられる。
【００２１】
「ヘテロアリールアルキル」は、ヘテロアリールで置換された少なくとも１個のアルキル水素原子を有するアルキル（例、−ＣＨ２−ピリジニル、−ＣＨ２−ピリミジニル等）を意味する。
【００２２】
「複素環」（本明細書において「複素環式環」ともいう）は、飽和、不飽和または芳香族のいずれかであり、窒素、酸素および硫黄（窒素および硫黄ヘテロ原子は、場合により酸化されることもあり、窒素ヘテロ原子は、場合により四級化されることもある）から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を含有する、５〜７員の単環式、または７〜１４員の多環式の複素環式環を意味し、上記の複素環のいずれかが、ベンゼン環だけでなく三環系（および三環より大きい環系）複素環式環に縮合される二環式環を含む。複素環は、任意のヘテロ原子もしくは炭素原子を介して結合されうる。複素環として、上記に定義されるヘテロアリールが挙げられる。従って、上記に列挙した芳香族ヘテロアリールの他に、複素環として、（これに限定されないが）モルホリニル、ピロリジノニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペリジニル（ｐｉｐｅｒｉｚｉｎｙｌ）、ヒダントイニル、バレロラクタミル、オキシラニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロプリジニル、テトラヒドロピリミジニル（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐｒｉｍｉｄｉｎｙｌ）、テトラヒドロチオフェニル、テトラヒドロチオピラニル、テトラヒドロピリミジニル、テトラヒドロチオフェニル、テトラヒドロチオピラニル等が挙げられる。
【００２３】
「複素環式アルキル」は、複素環で置換された少なくとも１個のアルキル水素原子を有するアルキル（例、−ＣＨ２モルホリニル等）を意味する。
本明細書において使用される「置換」なる語は、少なくとも１個の水素原子が置換基で置換されているところのいずれかの基（例えば、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、複素環または複素環式アルキル）をいう。ケト置換基（「−Ｃ（＝Ｏ）−」）の場合、２個の水素原子が置換される。本発明の範囲内の「置換基」として、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキル、アルコキシ、チオアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリールアルキル、複素環、置換複素環、複素環式アルキル、置換複素環式アルキル、−ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＯＲｂ−ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、−ＯＲａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲａ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＳＨ、−ＳＲａ、−ＳＯＲａ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒａ、−ＯＳ（＝Ｏ）２Ｒａ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＯＲａ（ここで、ＲａとＲｂは、同一または異なって、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリールアルキル、複素環、置換複素環、複素環式アルキルまたは置換複素環式アルキルである）が挙げられる。
【００２４】
「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味する。
「ハロアルキル」は、ハロゲンで置換された少なくとも１個の水素原子を有するアルキル（例、トリフルオロメチル等）を意味する。ハロアルキルは、アルキルが１個もしくは複数個のハロゲン原子で置換された置換アルキルの特定の形態である。
「アルコキシ」は、酸素架橋を介して結合したアルキル（つまり、−Ｏ−アルキル）（例、−Ｏ−メチル、−Ｏ−エチル等）を意味する。
【００２５】
「チオアルキル」は、硫黄架橋を介して結合したアルキル（つまり、−Ｓ−アルキル）（例、−Ｓ−メチル、−Ｓ−エチル等）を意味する。
「アルキルアミノ」および「ジアルキルアミノ」は、窒素架橋を介して結合した１個または２個のアルキル部分（つまり、−ＮＨアルキルまたは−Ｎ（アルキル）（アルキル））（例、メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ等）を意味する。
「ヒドロキシアルキル」は、少なくとも１個のヒドロキシル基で置換されたアルキルを意味する。
【００２６】
「モノ−もしくはジ（シクロアルキル）メチル」は、１個もしくは２個のシクロアルキル基で置換されたメチル基（例、シクロプロピルメチル、ジシクロプロピルメチル等）を表す。
「アルキルカルボニルアルキル」は、−Ｃ（＝Ｏ）アルキル基で置換されたアルキルを表す。
「アルキルカルボニルオキシアルキル」は、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏアルキル基もしくは−ＯＣ（＝Ｏ）アルキル基で置換されたアルキルを表す。
「アルコキシアルキル」は、−Ｏ−アルキル基で置換されたアルキルを表す。
「アルキルチオアルキル」は、−Ｓ−アルキル基で置換されたアルキルを表す。
【００２７】
「モノ−またはジ（アルキル）アミノ」は、それぞれ１個のアルキルまたは２個のアルキルで置換されたアミノを表す。
「モノ−またはジ（アルキル）アミノアルキル」は、モノ−またはジ（アルキル）アミノで置換されたアルキルを表す。
「アルキルスルホニルまたはアルキルスルフィニル」は、それぞれ（−Ｓ（＝Ｏ）２−）または（−Ｓ（＝Ｏ）−）官能基で置換されたアルキルを表す。
【００２８】
本明細書において示される本発明の実施形態は、例としての目的であって、限定する目的ではない。本発明の第一実施形態において、Ｒ３は、結合であり、Ｙは、以下の構造（ＩＩ）において、＝（ＣＲ４）−であり、さらなる一実施形態において、Ｙは、以下の構造（ＩＩＩ）において−（Ｃ＝Ｏ）−である。
【化３】
2007515472.tif 000005
（ＩＩ）                      （ＩＩＩ）
【００２９】
本発明のさらなる実施形態は、Ｒ２がフェニルであり、Ｒが該フェニルの任意の置換基であり、Ｙが＝（ＣＲ４）−である、構造式（ＩＶ）を有する。
【化４】
2007515472.tif 000006
（ＩＶ）
【００３０】
本発明のさらなる実施形態（Ｙは、＝（ＣＲ４）−である）においては、式（Ｖ）のＡｒが２個のＲ５で置換されているフェニルであるもの、および式（ＶＩ）のＨｅｔが１個のＲ６で置換されているピリジルであるものである。
【化５】
2007515472.tif 000007
（Ｖ）                          （ＶＩ）
【００３１】
本発明の化合物は、通常、遊離塩基として利用されうる。別法として、本発明の化合物は、酸付加塩の形態で使用されてもよい。本発明の遊離塩基性アミノ化合物の酸付加塩は、当技術分野で周知の方法で調製されてもよく、有機酸および無機酸から合成してもよい。適当な有機酸として、マレイン酸、フマル酸、安息香酸、アスコルビン酸、コハク酸、メタンスルホン酸、酢酸、シュウ酸、プロピオン酸、酒石酸、サリチル酸、クエン酸、グルコン酸、乳酸、マンデル酸、ケイ皮酸、アスパラギン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、グリコール酸、グルタミン酸、およびベンゼンスルホン酸が挙げられる。適当な無機酸として、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、および硝酸が挙げられる。従って、構造式（I）の「医薬上許容される塩」なる語は、あらゆる全ての許容しうる塩の形態を包含することを意図する。
【００３２】
一般に、構造式（I）の化合物は、当業者に公知の有機合成方法、ならびに実施例に記載される典型的な方法に従って、合成されてもよい。本発明の化合物を調製するのに用いることのできる合成方法の一例が反応スキーム１−３に例示されている。
【００３３】
反応スキーム１
【化６】
2007515472.tif 000008
【００３４】
４−アミノ安息香酸エステルａのアミノ官能基は、所望により、置換マロンアルデヒドで縮合させて、対応する４−ピラゾール−１−イル安息香酸エステルｂを得てもよい。ＬＡＨ、ＳＯＣｌ２、およびＮａＣＮと反応させて、ピラゾロフェニルアセトニトリル化合物ｃに変換した後、Ｎａ／カルボン酸エチルエステルおよびヒドラジンと反応させて、ビス−ピラゾールｄを得る。適宜置換されたβ−ケトエステルと反応させて、ピラゾロピリミジンｅを得、それをＰＯＣｌ３と反応させて、クロリドｆを得る。クロリドｆを、適当な触媒またはプロモータの存在下、適当な有機金属試薬Ｒ２Ｍと反応させて、化合物ｇを得る。適当な有機金属試薬および適当な触媒／プロモータは：
１．（置換）アルキルグリニャール試薬  Ｒ２ＭｇＸ（Ｆｅ（ａｃａｃ）３プロモータ）；
２．アリール、ヘテロアリールまたはアルケニルボロン酸またはエステル（Ｐｄ（ＰｈＰ）４触媒）；および
３．アリールまたはヘテロアリール亜鉛試薬（Ｐｄ（ＰｈＰ）４触媒）。
【００３５】
組み込まれたＲ２基は、当業者に周知の標準の方法（例えば酸化／還元、加水分解等）を用いて、さらに処理されまたは反応して、本発明のさらなる例を提供しうる。
【００３６】
反応スキーム２
【化７】
2007515472.tif 000009
【００３７】
本発明のピラゾロピリミジン核に至る複数の合成経路が利用可能である。反応スキーム２において、所望により置換されていてもよいハロベンズアルデヒドｈをトシルメチルイソシアニド（ＴｏｓＭＩＣ）と反応させて、フェニルアセトニトリルｉを形成させる。ｉとＮａＨおよびＥｔＯＡｃとを反応させて、３−ヒドロキシブタ−２−エンニトリルｊを得、それはヒドラジンＨＢｒとの反応で閉環されて、３−アミノ２−フェニルピラゾールｋを得る。β−ケトエステルを加えて、ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−オールｌを得る。反応経路にあるように酸素を置換し、末端臭素をＨｅｔで置換して本発明の化合物を得る。
【００３８】
反応スキーム３
【化８】
2007515472.tif 000010
【００３９】
置換アセトニトリルｍをケトンｎと反応させ（ここで、Ｒ’は、良好な脱離基（例、アルコキシ、シアノ、またはハロであり、Ｒ”は、ヒドロキシまたはアルコキシなどの基である）、シアノケトンｏを得、それをヒドラジンと反応させて、置換ピラゾールｐを得る。ｐをβ−ケトエステルｑと反応させて、ピラゾロピリミジンｒを得る。ＰＯＣｌ３と反応させて、クロリドｓを得、クロリドをＲ２で置換して、化合物ｔを得る。
【００４０】
ＣＲＦ受容体アンタゴニストとしての化合物の効果は、様々なアッセイ法により、決定されうる。本発明の適当なＣＲＦアンタゴニストは、ＣＲＦのその受容体への特異的結合を阻害し、ＣＲＦと関連する活性を拮抗することができる。構造式（I）の化合物は、この目的のため一般に認められた１種もしくは数種のアッセイにより、ＣＲＦアンタゴニストとしての活性について評価されうる。上記アッセイとして、（これらに限定されないが）DeSouzaら（J. Neuroscience 7:88, 1987）およびBattagliaら（Synapse 1:572, 1987）により開示されたアッセイが挙げられる。上記の通り、適当なＣＲＦアンタゴニストには、ＣＲＦ受容体親和性を示す化合物が含まれる。ＣＲＦ受容体親和性は、放射性標識したＣＲＦ（例えば、［１２５Ｉ］チロシン−ＣＦＲ）のその受容体（例えば、ラット大脳皮質膜から調製される受容体）への結合を阻害する化合物の能力を測定する結合の研究により、決定されうる。DeSouzaら（上記、１９８７年）により記載される放射リガンド結合アッセイは、ＣＲＦ受容体に対する化合物の親和性を決定するためのアッセイを提供する。かかる活性は、典型的には、受容体からの放射性標識したリガンドの５０％を置換するのに必要な化合物の濃度としてのＩＣ５０から算出され、以下の式により、算出される「Ｋｉ」値として報告される。
【数１】
2007515472.tif 000011
式中、Ｌは、放射リガンドであり、ＫＤは、受容体に対する放射リガンドの親和力である（Cheng and Prusoff、Biochem. Pharmacol. 22:3099、1973）。
【００４１】
ＣＲＦ受容体結合を阻害することに加えて、化合物のＣＲＦ受容体アンタゴニスト活性は、ＣＲＦに関連する活性を拮抗する化合物の能力によって、確立されうる。例えば、ＣＲＦは、種々の生化学プロセス（アデニル酸シクラーゼ活性を含む）を誘導することが知られている。従って、化合物は、ＣＲＦにより誘導されるアデニル酸シクラーゼ活性を拮抗するそれらの能力により、例えばｃＡＭＰ濃度の測定することにより、ＣＲＦアンタゴニストとして評価されうる。Battagliaら（前掲、１９８７）により記載されたＣＲＦにより誘導されるアデニル酸シクラーゼ活性のアッセイは、ＣＲＦ活性を拮抗する化合物の能力を決定するためのアッセイを提供する。従って、ＣＲＦ受容体アンタゴニスト活性は、一般に、初期の結合アッセイ法（例、DeSouza（前掲、１９８７）により開示された）、次のｃＡＭＰスクリーニングプロトコル（例、Battaglia（上記、１９８７）により開示された）を含むアッセイ技法により、決定される。
【００４２】
ＣＲＦ受容体結合親和性に関して、本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは、１０μＭ未満のＫｉを有する。本発明の好ましい実施形態において、ＣＲＦ受容体アンタゴニストは、１μＭ未満のＫｉを、より好ましくは０．２５μＭ（つまり、２５０ｎＭ）未満のＫｉを有する。以下にさらに詳細に記載するＫｉ値は、実施例２７に記載の方法により、検定されうる。
【００４３】
本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは、ＣＲＦ受容体部位で活性を示し、広範囲の障害もしくは疾患（内分泌、精神および神経の障害もしくは疾患を含む）の治療のための治療薬として使用されうる。さらに具体的には、本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは、ＣＲＦの分泌過多から生じる生理学的異常もしくは障害を治療するのに有用でありうる。ＣＲＦは、ストレスに対する内分泌反応、行動反応および自動反応を活性化し、調整する重要な神経伝達物質であると考えられているので、本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは、神経精神障害の治療に使用されうる。本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストによって治療可能でありうる神経精神障害として、情動障害（例、鬱病）；不安症関連障害（例、全般性不安障害、パニック障害、強迫性障害、異常攻撃）、心臓血管系異常（例、不安定狭心症および反応性高血圧症））；摂食障害（例、神経性食欲不振、過食症、および過敏性腸症候群）が挙げられる。ＣＲＦアンタゴニストは、脳卒中だけでなく様々な疾患状態に関連するストレス誘導性免疫の抑制に有用でありうる。本発明のＣＲＦアンタゴニストの他の使用は、炎症性疾患（例、慢性関節リウマチ、ブドウ膜炎、喘息、炎症性腸疾患および胃腸の運動性疾患）、疼痛、クッシング病、点頭痙攣、癲癇ならびに他の幼児と成人の両方における発作、および種々の物質乱用と禁断症状（アルコール症を含む）の治療に有用でありうる。
【００４４】
本発明の別の実施形態において、１種もしくは複数種のＣＲＦ受容体アンタゴニストを含有する医薬組成物が、開示される。投与の目的上、本発明の化合物は、医薬組成物として処方されうる。本発明の医薬組成物は、本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニスト（つまり、構造（I）の化合物）と医薬上許容される担体および／または希釈剤を含んでなる。ＣＲＦ受容体アンタゴニストは、特定の障害を治療するのに有効な量、つまり、患者にとって好ましくは許容できる毒性を有するＣＲＦ受容体アンタゴニスト活性を実現するのに十分な量で、医薬組成物中に存在する。本発明の医薬組成物は、投与の経路に応じて適用量当り０．１ｍｇ〜２５０ｍｇ、さらに好ましくは１ｍｇ〜６０ｍｇの量で、ＣＲＦ受容体アンタゴニストを含有するのが好ましい。当業者は、適切な濃度および適用量を容易に決定することができる。
【００４５】
医薬上許容される担体および／または希釈剤に関して、当業者は、精通している。液体溶液として処方される組成物に関して、許容される担体および／または希釈剤として、食塩水および無菌水が挙げられ、場合により、酸化防止剤、緩衝剤、静菌薬および他の一般的な添加剤を含有してもよい。上記組成物は、さらに、ＣＲＦ受容体アンタゴニストの他に、希釈剤、拡散剤および界面活性剤、結合剤、および潤滑剤を含有する丸剤、カプセル、顆粒、または錠剤として処方されることが可能である。当業者は、適切な方法で、容認された実践（例、Remington's Pharmaceutical Sciences, Gennaro, Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA 1990に開示された方法）に従って、ＣＲＦ受容体アンタゴニストを処方しうる。
【００４６】
加えて、プロドラックも、本発明の範囲内である。プロドラックは、上記のプロドラッグが患者に投与されると、インビボで構造式（I）の化合物を放出する任意の共有結合された担体である。プロドラックは、一般的に、所定の操作またはインビボのいずれかで、修飾が切断され、親化合物を生じるような方法で官能基を修飾することにより、調製される。
【００４７】
立体異性体に関して、構造式（I）の化合物は、キラル中心を有してもよく、ラセミ化合物、ラセミ混合物としておよび個々の鏡像異性体もしくはジアステレオマーとして、存在してもよい。全ての上記の異性体の形態は、それらの混合物を含めて、本発明に含まれる。さらに、構造式（I）の化合物の結晶形のいくつかは、別の結晶形、無定形または多形体としての多形形態にて存在するものもあり、そのすべてが本発明に含まれる。さらに、構造式（I）の化合物は、さらに、水または他の有機溶媒と溶媒和化合物を形成することもある。このような溶媒和化合物は、同様に本発明の範囲内に含まれる。
【００４８】
別の実施形態において、本発明は、多様の障害もしくは疾患（内分泌障害もしくは疾患、精神障害もしくは疾患および神経障害もしくは疾患を含む）を治療する方法を提供する。上記の方法には、本発明の化合物を障害もしくは疾患を治療するのに十分な量、温血動物に投与することが含まれる。上記の方法には、本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストの好ましくは医薬組成物の形態での系統的投与が、含まれる。本明細書において使用される系統的投与には、経口および非経口の投与方法が含まれる。経口投与のための、適切なＣＲＦ受容体アンタゴニスの医薬組成物として、粉末、顆粒、丸剤、錠剤、およびカプセル、さらに液体、シロップ、懸濁液、および乳濁液が挙げられる。これらの組成物には、香料、防腐剤、沈殿防止剤、増稠剤および乳化剤、ならびに他の医薬上許容される添加剤が、さらに含まれうる。非経口投与のための、本発明の化合物は、ＣＲＦ受容体アンタゴニストの他に、緩衝剤、酸化防止剤、静菌薬、および上記溶液中で一般的に使用される他の添加剤を含有しうる水性注射液中で、調製されることができる。
【００４９】
別の実施形態において、本発明は、放射性もしくは非放射性医薬品により、体内の特定の部位の可視化診断を可能にする。本発明の化合物の使用は、患者の生理学的評価、機能的評価、または生物的評価、或いは、疾患の検出および評価または病理学的検出および評価を提供しうる。放射性医薬品は、シンチグラフィー、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）、コンピューター断層撮影（ＣＴ）、および単一光子放射型コンピューター断層撮影（ＳＰＥＣＴ）において利用される。上記の適用のため、放射性同位体として、ヨウ素（Ｉ）（１２３Ｉ（ＰＥＴ）、１２５Ｉ（ＳＰＥＣＴ）、および１３１Ｉを含む）、テクネチウム（Ｔｃ）（９９Ｔｃ（ＰＥＴ）を含む）、リン（Ｐ）（３１Ｐおよび３２Ｐを含む）、クロム（Ｃｒ）（５１Ｃｒを含む）、炭素（Ｃ）（１１Ｃを含む）、フッ素（Ｆ）（１８Ｆを含む）、タリウム（Ｔｌ）（２０１Ｔｌを含む）およびそれらに類する陽電子ならびに電離放射線の放出源のような元素が包含される。非放射性医薬品は、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、蛍光透視法、および超音波に利用される。上記の適用のため、同位体として、ガドリニウム（Ｇｄ）（１５３Ｇｄを含む）、鉄（Ｆｅ）、バリウム（Ｂａ）、マンガン（Ｍｎ）、およびタリウム（Ｔｌ）、のような元素が包含される。上記の物質は、さらに、混合物中の特定の標的部位の存在を同定するのに有用であり、また混合物中の分子を標識するのに有用である。
【００５０】
上記の如く、本発明の化合物の投与は、非常に多様な障害もしくは疾患を治療するのに利用されうる。特に、本発明の化合物は、鬱病、不安障害、パニック障害、強迫性障害、異常攻撃、不安定狭心症、反応性高血圧症、神経性食欲不振、過食症、過敏性腸症候群、ストレス誘導性免疫の抑制、脳卒中、炎症、疼痛、クッシング病、点頭痙攣、癲癇、および物質乱用もしくは禁断症状の治療のために温血動物に投与されうる。
【００５１】
以下の実施例は、限定するのではなく、例示の目的で提供される。
実施例
本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは、実施例１ないし２３に開示される方法により調製されうる。実施例２４は受容体結合親和力の測定方法を提供し、実施例２５は本発明の化合物をＣＲＦ刺激性アデニレートシクラーゼ活性についてスクリーニングするアッセイを開示する。
【００５２】
分析用ＨＰＬＣ−ＭＳ方法１
プラットフォーム：アギレント（Agilent）１１００シリーズ：自動−試料供給装置、ＵＶ検出装置（２２０ｎＭおよび２５４ｎM）、ＭＳ検出装置（ＡＰＣＩ）を装着；
ＨＰＬＣカラム：ＹＭＣ  ＣＤＳ  ＡＱ、Ｓ−５、５μ、２．０ｘ５０ｍｍカートリッジ；
ＨＰＬＣ勾配：１．０ｍＬ／分、２．５分にて水中１０％アセトニトリルから水中９０％アセトニトリルまで、９０％を１分間維持する。アセトニトリルおよび水は共に０．０２５％ＴＦＡを有する。
【００５３】
分析用ＨＰＬＣ−ＭＳ方法２
プラットフォーム：アギレント１１００シリーズ：自動−試料供給装置、ＵＶ検出装置（２２０ｎＭおよび２５４ｎM）、ＭＳ検出装置（ＡＰＣＩ）を装着；
ＨＰＬＣカラム：Phenomenex  Synergi-Max  RP、２．０ｘ５０ｍｍカラム；
ＨＰＬＣ勾配：１．０ｍＬ／分、１３．５分にて水中５％アセトニトリルから水中９５％アセトニトリルまで、９５％を２分間維持する。アセトニトリルおよび水は共に０．０２５％ＴＦＡを有する。
【００５４】
分析用ＨＰＬＣ−ＭＳ方法３
プラットフォーム：アギレント１１００シリーズ：自動−試料供給装置、ＵＶ検出装置（２２０ｎＭおよび２５４ｎM）、ＭＳ検出装置（電子噴射）を装着；
ＨＰＬＣカラム：XTerra  MS、Ｃ１８、５μ、３．０ｘ２５０ｍｍカラム；
ＨＰＬＣ勾配：１．０ｍＬ／分、４６分にて水中１０％アセトニトリルから水中９０％アセトニトリルまで、９９％アセトニトリルにまで飛び越え、９９％アセトニトリルを８．０４分間維持する。アセトニトリルおよび水は共に０．０２５％ＴＦＡを有する。
【００５５】
分析用ＨＰＬＣ−ＭＳ方法４
プラットフォーム：アギレント１１００シリーズ：自動−試料供給装置、ＵＶ検出装置（２２０ｎＭおよび２５４ｎM）、ＭＳ検出装置（ＡＰＣＩ）およびBerger  FCM  １２００  ＣＯ２ポンプモジュールを装着；
ＨＰＬＣカラム：Berger  Pyridine、ＰＹＲ  ６０Ａ、６μ、４．６ｘ１５０ｍｍカラム；
ＨＰＬＣ勾配：４．０ｍＬ／分、１２０バール；１．６７分にて超臨界ＣＯ２中１０％メタノールから超臨界ＣＯ２中６０％メタノールまで、６０％を１分間維持する。メタノールは１．５％水を有する。背圧を１４０バールに制御した。
【００５６】
分取用ＨＰＬＣ−ＭＳ
プラットフォーム：島津  ＨＰＬＣ：ギルソン（Gilson）２１５自動−試料供給装置／画分収集装置、ＵＶ検出装置およびPＥ  Sciez  ＡＰＩ１５０ＥＸ質量検出装置を装着；
ＨＰＬＣカラム：ＢＨＫ  ＯＤＳ−Ｏ／Ｂ、５μ、３０ｘ７５ｍｍ；
ＨＰＬＣ勾配：３５ｍＬ／分、７分にて水中１０％アセトニトリルから１００％アセトニトリルまで、１００％アセトニトリルを３分間維持する。０．０２５％ＴＦＡを有する。
【００５７】
略語：
ＡＡ：酢酸アセチル
ＬＡＨ：水素化アルミニウムリチウム
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＥＡＡ：アセト酢酸エチル
ＬＣ−ＭＳ：液体クロマトグラフィー−質量分光法
ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３：トリアセトキシホウ水素化ナトリウム
Ｐｄ−Ｃ：炭素上パラジウム（１０％）
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
トスミック：トシルメチルイソシアニド
ａｃａｃ：アセチルアセトネート
ＥＤＣＩ：Ｎ−エチル−Ｎ’−（ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＥＡ：トリエチルアミン
ｔＲ：保持時間
【００５８】
実施例１
７−（２−メトキシ−フェニル）−３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−２,５−ジメチル−ピラゾロ［１,５−ａ］ピリミジン
【化９】
2007515472.tif 000012
【００５９】
工程１Ａ：
４−アミノ−２−メトキシ安息香酸メチル（６.８２ｇ、３７.７ミリモル）の６ＮＨＣｌ（水性）中冷却懸濁液に、亜硝酸ナトリウム（２.６０ｇ、３７.７ミリモル）の溶液を滴下した。０℃にて２０分間攪拌した後、塩化第一スズ・二水和物（２４.７ｇ、１０９.３ミリモル）を少しずつ添加した。得られた懸濁液を０℃で１.５時間攪拌し、濾過した。集めた固体をＥｔＯＨに懸濁させ、それにマロンアルデヒドビス（ジメチルアセタール）（７.５ｍＬ、４５.７ミリモル）を添加し、この反応混合物を一夜還流に供した。ＥｔＯＨを蒸発させた後、該残渣をＥｔＯＡｃと水の間に抽出し、有機相を乾燥させ、蒸発乾固させた。残渣をシリカゲルプラグ（２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に通し、化合物１ｂ（７.４３ｇ）を安息香酸メチルおよびエチルの混合物として得た。
【００６０】
工程１ｂ：
１ｂ（１０.６ｇ）の乾燥ジエチルエーテル（２００ｍＬ）中溶液に、ＬＡＨ粉末（１.７４ｇ）を０℃でゆっくりと添加した。０℃で４５分間攪拌した後、該反応混合物を氷水上にデカントし、水相をｐＨ４.０にまで酸性化した。単離した後、該アルコール（８.８ｇ）を、ＤＣＭ中、塩化チオニル（１０ｍＬ）と一緒に２.５時間攪拌し、氷水上にデカントし、ＤＣＭで抽出した。塩化ベンジル粗製物（８.２６ｇ）を、ＤＭＳＯ（１００ｍＬ）中、ＮａＣＮ（３.６５ｇ、７４.４ミリモル）と一緒に８０℃で４５分間加熱した。ＤＭＳＯを除去した後、３０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサンでのカラムクロマトグラフィーに付して、化合物１ｃ（５.９８ｇ）を得た。
【００６１】
工程１Ｃ：
１ｃ（５.９８ｇ、２８.１ミリモル）のＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）中溶液に、金属ナトリウム（１.０ｇ、４３.５ミリモル）を少しずつ加え、該混合物を一夜還流した。得られた懸濁液を氷水上にデカントし、ｐＨ４.０に酸性化した。有機相を乾燥させ、蒸発乾固させた。得られた化合物（９.５ｇ）をヒドラジン・一臭化水素酸塩（１５.３ｇ、１３５.４ミリモル）と混合し、ＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏ（６：１）中に５時間還流させた。ＥｔＯＨを蒸発させ、ＥｔＯＡｃで抽出して、有機相を乾燥させ、蒸発乾固させて化合物１ｄ（７.５ｇ）を得た。
【００６２】
工程１Ｄ：
１ｄ（７.５ｇ、２７.９ミリモル）の混合物をアセト酢酸エチル（５.０ｍＬ）と一緒にＡｃＯＨ（１００ｍＬ）中で３時間還流した。ＡｃＯＨを蒸発させ、ジエチルエーテル中に沈殿させた後、濾過して化合物１ｅ（１０.４ｇ）を得た。
【００６３】
工程１Ｅ：
１ｅ（２.１ｇ、６.３ミリモル）のアセトニトリル中溶液に、ＰＯＣｌ３（２.２ｍＬ、２４.１ミリモル）を添加し、この混合物を５時間還流し、氷水中にデカントし、ＥｔＯＡｃで抽出し、クロマトグラフィー精製に付して化合物１ｆ（１.８８ｇ）を得た。
【００６４】
工程１Ｆ：
化合物１ｆ（１.０ミリモル）、２−メトキシフェニルボロン酸（１.２ミリモル）、Ｋ２ＣＯ３（２.０ミリモル）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（０.０５ミリモル）の混合物を１,４−ジオキサン／Ｈ２Ｏ（２：１）中１１０℃で一夜加熱した。溶媒を蒸発させた後、混合物をＣＨＣｌ３/Ｈ２Ｏの間に抽出し、有機相を乾燥させ、蒸発乾固させた。カラムクロマトグラフィーに付した後、化合物１−１（４０２ｍｇ）を得た。アリールボロン酸試薬でのアリール官能基導入に応じて、以下の表に列挙される化合物を合成し、分取性ＬＣ−ＭＳにより精製した：
【００６５】
【化１０】
2007515472.tif 000013
【表１−１】
2007515472.tif 000014
【表１−２】
2007515472.tif 000015
【表１−３】
2007515472.tif 000016
【表１−４】
2007515472.tif 000017
【表１−５】
2007515472.tif 000018
【表１−６】
2007515472.tif 000019
【表１−７】
2007515472.tif 000020
【表１−８】
2007515472.tif 000021
【表１−９】
2007515472.tif 000022
【表１−１０】
2007515472.tif 000023
【００６６】
実施例１Ａ
中間体１ｆの別の合成方法
【化１１】
2007515472.tif 000024
【００６７】
工程１Ａ−Ａ：
メカニカルスターラーを装着した三口フラスコに、２５０ｇ（１.１２モル）の２−メトキシ−４−アセチルアミノ安息香酸メチルエステルを、つづいて１Ｌのメタノールを充填した。攪拌を開始し、９４ｍＬ（３.３６ミリモル、３当量）の濃硫酸をゆっくりと加え、ゆるやかに還流させる。該混合物を２４時間攪拌した。該混合物を真空下で濃縮し、粘性のあるスラリーを得た。該スラリーをブフナー漏斗を用いて濾過し、３００ｍＬの冷メタノールで洗浄した。濾過ケーキを集め、真空下、４５℃で２４時間乾燥させ、３０２ｇの１ａをヘミ硫酸塩として収率９６％にて得た。
【００６８】
工程１Ａ−Ｂ：
メカニカルスターラーおよびサーモカップルを装着した２Ｌの二口フラスコにて２００ｇ（７１６ミリモル）の４−アミノ−２−メトキシ安息香酸メチル１ａを充填した。該固体を７００ｍＬの６Ｎ塩酸でスラリー状にし、氷浴にて冷却した。該混合物に、添加の間１５℃未満の温度を維持しながら、５４.３ｇ（７８８ミリモル、１.１当量）の亜硝酸ナトリウム／水（１００ｍＬ）を少しずつ加えた。該混合物をさらに１．５時間攪拌し、明黄色の均質な溶液を得た。該混合物に２７２ｇ（１４３２ミリモル、２当量）の無水塩化第一スズを注意して添加した。その添加の間温度を１０℃未満に保持した。該混合物を０℃で１時間攪拌し、ついで５℃で１６時間貯蔵した。沈殿物をブフナー漏斗を介する濾過により集め、濾過ケーキを２時間風乾させた。その濾過ケーキを磁気攪拌棒を装着した２Ｌの丸底フラスコに移し、６００ｍＬのエタノールで希釈した。そのスラリーに１４２ｍＬ（８５９ミリモル、１．２当量）のマロンアルデヒドビス（ジメチルアセタール）を加え、該混合物を６時間還流した。エタノールを蒸発させた後、残渣を酢酸エチルで希釈し、水酸化ナトリウムで中和した。有機相を分離し、乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物をヘキサン中２５％酢酸エチルで溶出するシリカゲルプラグに通し、９６ｇの化合物１ｂをメチルおよびエチルエステルの混合物として収率５８％にて得た。
【００６９】
工程１Ａ−Ｃ：
５００ｍＬの乾燥ＴＨＦを含有する１Ｌの丸底フラスコに、ＬＡＨ（１４.５ｇ、３８０ミリモル、０.９５当量）を添加し、その混合物を０℃に冷却した。この混合物に、１ｂ（９６ｇ、４００ミリモル、１．０当量）のＴＨｆ（３００ｍＬ）中溶液を滴下した。添加の間、温度を１５℃未満に維持した。添加終了後、混合物を１時間攪拌し、ついで反応混合物を注意して水（１４.５ｍＬ）、１０％水性水酸化ナトリウム（１４.５ｍＬ）および水（４３.５ｍＬ）でクエンチした。得られた混合物をセライトパッドを介して濾過し、濃縮して、１ｂ．１をわずかに黄色の油状物（６３.９ｇ、７５.７％）として得、それをさらに精製することなく使用した。
【００７０】
工程１Ａ−Ｄ：
塩化チオニル（９５ｍＬ、１.３０モル、３.１当量）を、緩やかな還流が維持されるように添加速度を保持しながら、１ｂ．１（８５.０ｇ、０.４２モル）のＤＣＭ（４００ｍＬ）中溶液に１時間にわたって滴下した。沈殿物が形成されたが、添加終了時には再び溶解した。得られた暗色溶液を４時間還流した。冷却された反応混合物を５００ｇの氷上に注ぎ、得られた混合物をＤＣＭ（２ｘ７００ｍＬ）で抽出した。合した有機層を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して１ｂ．２（７６．５ｇ）を褐色固体として得、それをさらに精製することなく使用した。
【００７１】
工程１Ａ−Ｅ：
１ｂ．２（７６ｇ、３４０ミリモル、１.０当量）のＤＭｆ（１００ｍＬ）中溶液を、シアン化ナトリウム（２４.５ｇ、５００ミリモル、１.５当量）およびＤＭｆ（３００ｍＬ）の１００℃に加熱した混合物に２０分間にわたって滴下した。該混合物を１００℃で４時間加熱し、ついで冷却された混合物をセライトを介して濾過した。濾液を濃縮し、ついで残渣をＤＣＭ（３００ｍＬ）に溶かし、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（２００ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、 濾過し、濃縮して暗褐色固体残渣を得た。この残渣をエタノール（１００ｍＬ）中でスラリー状にし、ついで該固体を濾過により集め、冷エタノールおよびエーテルで洗浄し、１ｃ（４８．０ｇ）をオフホワイト固体として得た。母液を濃縮し、ヘキサン／酢酸エチル（１：１）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーに付して精製し、さらに１５.４ｇの１ｃを白色固体として得た。合計の収量６３.４ｇ。
【００７２】
工程１Ａ−Ｆ：
１ｃ（６３.４ｇ、０.３０モル、１当量）の酢酸エチル（８００ｍＬ）中溶液を金属ナトリウム（１０.３ｇ、０.４５ミリモル、１.５当量）に少しずつ添加し、該混合物を１６時間還流した。冷却された懸濁液を５００ｇの氷上に注ぎ、ｐＨ５にまで酸性化し、ついで酢酸エチル（２ｘ３００ｍＬ）で抽出した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して黄色油の粗製物（８６.５ｇ）にまで濃縮した。
【００７３】
該黄色油の粗製物（８６.５ｇ）をエタノール（４８０ｍＬ）および水（８０ｍＬ）に溶かし、ついでヒドラジン・一臭化水素酸塩（１００ｇ、０.８８モル、３当量）を添加し、該混合物を８５℃で１６時間加熱した。溶媒を蒸発させ、ブライン（２００ｍＬ）を加え、該混合物を酢酸エチル（２ｘ３００ｍＬ）で抽出した。合した有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して１ｄ（６８ｇ）を褐色泡沫粗製物として得、それをさらに精製することなく使用した。
【００７４】
工程１Ａ−Ｇ：
１ｄ（６８ｇ、２５０ミリモル、１.０当量）、アセト酢酸エチル（１００ｍＬ）、酢酸（１５０ｍＬ）およびエタノール（１５０ｍＬ）を２４時間還流した。冷却された混合物を濃縮して固体残渣を得、それをフリットガラスフィルター上に堆積させ、エーテルで洗浄し、１ｅ（５２.０ｇ、５１.２％）をオフホワイト固体として得た。母液を濃縮し、ついで溶出液としてＤＣＭ中１０％メタノールを用いるシリカゲル上のクロマトグラフィーに付した。こうして得られた固体生成物をエーテルで洗浄し、さらに１７.０ｇの１ｅをオフホワイト固体（合計の収量６９ｇ）として得た。
【００７５】
工程１Ａ−Ｈ：
１ｅ（４１.２ｇ、１２３ミリモル）のアセトニトリル（２００ｍＬ）中懸濁液に、ＰＯＣｌ３（４５.０ｍＬ、４９３ミリモル）を添加し、この混合物を１６時間還流した。冷却された反応混合物を氷水上に注ぎ、得られた混合物をクロロホルムで抽出した。合した有機抽出液を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をヘキサン／酢酸エチル（３：１）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーに付して精製し、１ｆ（２９.０ｇ）を黄褐色固体として得た。
【００７６】
実施例２
７−イソプロピル−３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−２,５−ジメチル−ピラゾロ［１,５−ａ］ピリミジン
【化１２】
2007515472.tif 000025
【００７７】
工程２Ａ：
化合物１ｆ（１.４１ｇ、４.０ミリモル）およびＦｅ（ａｃａｃ）３（４２４ｍｇ、１.２ミリモル）のＴＨＦ／ＮＭＰ（ｖ／ｖ＝８：１）中溶液に、ｉＰｒＭｇＣｌ（２.０Ｍ／ＴＨＦ、４.０ｍＬ）をゆっくりと室温にて添加した。反応混合物を１.５時間攪拌し、１Ｎ  ＨＣｌ（水性）でクエンチした。ＥｔＯＡｃで抽出した後、生成粗製物をカラムクロマトグラフィー（２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製し、化合物２−１（６２８ｍｇ）を得た。
【００７８】
ハロゲン化アルキルマグネシウムにおけるアルキルの官能性に応じて、以下の表に列挙される化合物が合成された：
【化１３】
2007515472.tif 000026
【表２−１】
2007515472.tif 000027
【表２−２】
2007515472.tif 000028
【００７９】
実施例３
３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−２,５−ジメチル−ピラゾロ［１,５−ａ］ピリミジン−７−カルボン酸エチルエステル
【化１４】
2007515472.tif 000029
【００８０】
工程３Ａ：
ＥｔＯＨ（２０ｍＬ）に、化合物１ｄ（１.０ｇ、実施例１、工程１ｃ）およびエチル−２,４−ジオキソバレラート（０.８２ｇ）を添加し、つづいて０.５ｍＬの酢酸を添加した。該反応混合物を８０℃で１２時間加熱した。濃縮およびシリカゲルカラムクロマトグラフィーでの精製を行い、化合物３−１（０.６６ｇ、４６.１％収率）および反転付加化合物３−２（０.４７ｇ、３２.２％収率）を得た。
【００８１】
工程３Ｂ：
ＴＨＦ（１.５ｍＬ）に溶かした化合物３−１（３０ｍｇ）をＤＩＢＡＬ（１５０μＬ、ヘキサン中２ＭＤＩＢＡＬ）に溶かした。該反応混合物を室温で２時間攪拌し、水（０.４ｍＬ）でクエンチした。
ＬＣ−ＭＳを介する精製に付した後、化合物３−３（３.３ｍｇ）を得た。同様の操作に従って、化合物３−２を還元し、精製後に化合物３−４（２.６ｍｇ）を得た。
【００８２】
工程３Ｃ：
ＴＨＦ（１.５ｍＬ）に、化合物３−１（３０ｍｇ）を、つづいてＣＨ３ＭｇＢｒ（１５０μＬ、ＴＨＦ中２ＭＣＨ３ＭｇＢｒ）を添加した。反応混合物を室温で２時間攪拌し、水でクエンチした。得られた物質をＬＣ−ＭＳで精製し、化合物３−５（３.８ｍｇ）を得た。この操作を化合物３−１とＣＨ３ＣＨ２ＭｇＢｒで行い、精製後に化合物３−６（４.１ｍｇ）を得た。同様の反応操作を出発試薬として化合物３−２および求核試薬としてＣＨ３ＭｇＢｒを用いて行い、精製後に化合物３−７（４.０ｍｇ）を得た。
【００８３】
工程３Ｄ：
ＴＨＦ（１.５ｍＬ）にアセトアミドオキシム（２０ｍｇ）およびＮａＨ（１０ｍｇ）を室温にて３０分間攪拌しながら添加した。化合物３−２（４０ｍｇ）を加え、該混合物を密封管中９０℃にて２時間加熱した。ＬＣ−ＭＳを介する精製に付した後、化合物３−８を得た（５.５ｍｇ）。
【００８４】
工程３Ｅ：
ジオキサン：水（９：１）中の化合物３−１（２００ｍｇ）に、ＬｉＯＨ（３０ｍｇ）を加えた。反応を攪拌しながら室温にて６時間続け、つづいてｐＨ４（ＨＣｌ、４Ｎ）にクエンチし、Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）の間に抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。得られた濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（５０：５０  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製し、化合物３−９（１８０ｍｇ）を得た。実施例３に示される化合物を以下の表にする：
【００８５】
【化１５】
2007515472.tif 000030
【表３】
2007515472.tif 000031
【００８６】
実施例４
３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−２,５−ジメチル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１,５−ａ］ピリミジン
【化１６】
2007515472.tif 000032
【００８７】
工程４Ａ：
化合物１ｄ（４０ｍｇ、実施例１、工程１ｃ）および１,１,１−トリフルオロペンタン−２,４−ジオン（過剰量）の混合物をＡｃＯＨ中１５０℃にて１５分間マイクロ波を用いて加熱し、ＬＣ−ＭＳを介する精製に付した後 化合物４−１（２９ｍｇ）を得た。トリフルオロジオンに応じて、以下の表の化合物を合成した：
【００８８】
【化１７】
2007515472.tif 000033
【表４】
2007515472.tif 000034
＊ＨＰＬＣ測定はすべて分析用方法２を用いた。
【００８９】
実施例５
３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−２,５−ジメチル−ピラゾロ［１,５−ａ］ピリミジン−７−カルボン酸ジメチルアミド
【化１８】
2007515472.tif 000035
【００９０】
工程５Ａ：
化合物３−９（５０ｍｇ、０.１４ミリモル、１当量）のＤＣＭ（１ｍＬ）中溶液に、ＨＯＢＴ（５７ｍｇ、０.４２ミリモル、３当量）、ＴＥａ（０.１２ｍＬ、０.８４ミリモル、６当量）、ジメチルアミン塩酸塩（３４ｍｇ、０.４２ミリモル、３当量）およびＥＤＣＩ（７９ｍｇ、０.４２ミリモル、３当量）を添加した。該混合物を室温で１６時間攪拌し、ついで溶媒を蒸発させ、粗反応混合物を分取性ＨＰＬＣ／ＭＳで精製し、化合物５−１（１０ｍｇ）をＴＦＡ塩として得た。上記したアミド化工程に応じて、以下の表の化合物を合成した：
【００９１】
【化１９】
2007515472.tif 000036
【表５】
2007515472.tif 000037
＊ＨＰＬＣ測定はすべて分析用方法２を用いた。
【００９２】
実施例６
シクロペンチル−{２−［３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−２,５−ジメチル−ピラゾロ［１,５−ａ］ピリミジン−７−イル］−ベンジル}−アミン
【化２０】
2007515472.tif 000038
【００９３】
工程６Ａ：
１ｆ（５００ｍｇ、１.４ミリモル、１当量）のジオキサン／水（１：１、６ｍＬ）中溶液に、２−ホルミルフェニルボロン酸（２５５ｍｇ、１.７ミリモル、１.２当量）を、つづいて炭酸カリウム（３９０ｍｇ、２.８ミリモル、２.０当量）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（８２ｍｇ、０.０７ミリモル、０.０５当量）を添加した。該混合物を密封管中１００℃にて３時間加熱し、ついで該溶媒を真空下にて除去した。残渣を酢酸エチルに溶かし、水およびブラインで洗浄した。その有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して濃縮し、該残渣を溶出液としてヘキサン／酢酸エチル（１：１）を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付して精製し、６ａ（５００ｍｇ、８５％）を黄色固体として得た。
【００９４】
工程６Ｂ：
トリアセトキシホウ水素化ナトリウム（８０ｍｇ、０.３８ミリモル、２当量）を室温にて６ａ（８０ｍｇ、０.１９ミリモル、１当量）および酢酸（０.０１１ｍＬ、０.１９ミリモル、１当量）のジクロロエタン（１ｍＬ）中溶液に滴下した。該混合物を室温にて１６時間攪拌し、ついで該混合物を濃縮してメタノールに溶かし、分取性ＨＰＬＣ／ＭＳで精製して６−１（３６ｍｇ、３８％収率）をＴＦＡ塩として得た。
上記の還元アミノ化工程に用いるアミンに応じて、以下の表に示される化合物が合成された：
【００９５】
【化２１】
2007515472.tif 000039
【表６−１】
2007515472.tif 000040
【表６−２】
2007515472.tif 000041
＊ＨＰＬＣ測定はすべて分析用方法２を用いた。
【００９６】
実施例７
３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−２,５−ジメチル−７−［２−（２−モルホリン−４−イル−エチル）−フェニル］−ピラゾロ［１,５−ａ］ピリミジン
【化２２】
2007515472.tif 000042
【００９７】
工程７Ａ：
６ａ（３４５ｍｇ、０.８２ミリモル）のＴＨＦ／メタノール（１：１、４ｍＬ）中室温での懸濁液に、ホウ水素化ナトリウム（６２ｍｇ、１.６ミリモル、２当量）を注意して添加した。混合物を３０分間攪拌し、ついで水を添加し、該混合物をＤＣＭで抽出した。合した有機層を水およびブラインで洗浄し、ついで硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して７−１（４５０ｍｇ、９０％）を固体として得、それをさらに精製することなく使用した。
【００９８】
工程７Ｂ：
塩化チオニル（０.１７ｍＬ、２.３ミリモル、２.２当量）を７−１（４５０ｍｇ、１.０５ミリモル、１当量）の室温でのＤＣＭ（５ｍＬ）中溶液に添加した。該混合物を室温にて３０分間攪拌し、ついで水を添加し、該混合物をＤＣＭで抽出した。合した有機抽出液を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して７−２（４２０ｍｇ、９０％）を黄色固体として得た。
【００９９】
工程７Ｃ：
水素化ナトリウム（１１ｍｇ、鉱油中６０％分散液、０.２８ミリモル、４当量）を室温での２−メチルイミダゾール（１７ｍｇ、０.２１ミリモル、３当量）のＤＭｆ（２ｍＬ）中溶液に加えた。該混合物を１０分間攪拌し、ついで７−２（３０ｍｇ、０.０７ミリモル、１当量）のＤＭｆ（０.２ｍＬ）中溶液を加え、該混合物を室温で１７時間攪拌した。該混合物をメタノールで希釈し、ついで分取性ＨＰＬＣ／ＭＳで直接精製し、７−Ｘ（６ｍｇ）をＴＦＡ塩として得た。
【０１００】
工程７Ｄ：
水素化ナトリウム（３.３ｍｇ、０.０６７ミリモル、３当量）を室温での７−２（１０ｍｇ、０.０２３ミリモル、１当量）のＤＭＳＯ（３ｍＬ）中溶液に添加した。該混合物を室温で２時間攪拌し、ついで水を加え、該混合物をＤＣＭで抽出した。合した有機層を水およびブラインで洗浄し、ついで硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して７−３の粗製物（８ｍｇ、８０％収率）を固体として得た。
【０１０１】
工程７Ｅ：
ＤＩＢＡＬ−Ｈ（０.２３ｍＬ、トルエン中１.５Ｍ溶液、０.３５ミリモル、３当量）を−７８℃での７−３（５０ｍｇ、０.１１ミリモル）のＤＣＭ（１ｍＬ）中溶液に添加した。該混合物を−７８℃で２０分間攪拌し、ついで室温にまで加温した。水を添加し、該混合物を１０分間攪拌し、ついで水層をＤＣＭの２つの付加的な部分で抽出した。合した有機抽出液を水およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、セライトを介して濾過し、濃縮した。残渣を分取性ＨＰＬＣ／ＭＳで精製し、７ａ（１５ｍｇ）をＴＦＡ塩として得た。
【０１０２】
工程７Ｆ：
トリアセトキシホウ水素化ナトリウム（１５ｍｇ、０.０６９ミリモル、２当量）を、室温にて、７ａ（１５ｍｇ、０.０３４ミリモル、１当量）および酢酸（０.００２ｍＬ、０.０３４ミリモル、１当量）のＤＣＭ（１ｍＬ）中溶液に添加した。該混合物を室温で１６時間攪拌し、ついで該混合物を濃縮し、メタノールに溶かし、分取性ＨＰＬＣ／ＭＳで直接精製し、７−４（１１ｍｇ、５０％收率）をＴＦＡ塩として得た。
以下の表にて実施例７の化合物を列挙する。上記の還元アミノ化工程に利用するアミンを変えることで、該表に含まれる化合物７−５および７−６は工程７Ｅの方法で合成された：
【０１０３】
【化２３】
2007515472.tif 000043
【表７】
2007515472.tif 000044
【０１０４】
実施例８
３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−２,５−ジメチル−７−（３−メチル−ピリジン−２−イル）−ピラゾロ［１,５−ａ］ピリミジン
【化２４】
2007515472.tif 000045
【０１０５】
工程８Ａ：
２−ブロモ−３−メチルピリジン（４.８５ｇ、２８.２ミリモル）の−７０℃に冷却した乾燥ＴＨｆ（８.０ｍＬ）中溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中１.６Ｍ溶液、１７.６ｍＬ、２８.２ミリモル）を滴下した。反応混合物を−７０℃で３０分間攪拌し、ついでＺｎＣｌ２（ＴＨＦ中０．５Ｍ溶液、６６.０ｍＬ、３４ミリモル）を５分間にわたって添加した。該混合物を１時間にわたって０℃にまで加温し、ついで該化合物１ｆ（１.６６ｇ、４.７０ミリモル）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（３２６ｍｇ、０.２８ミリモル）を添加した。該混合物を還流温度にて４時間加熱した。冷却された反応混合物を水でクエンチし、ＴＨＦを蒸発させ、得られた水性混合物を酢酸エチルで抽出させた。合した有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して濃縮し、残渣をヘキサン／酢酸エチル（１：３）を用いるシリカゲル上のクロマトグラフィーに付し、８−１の遊離塩基（１.６ｇ、８３％）を黄色固体として得た。８−１（１.６ｇ、３.９ミリモル）の酢酸エチル／クロロホルム（７：１、１００ｍＬ）中溶液に、塩化水素（４.０ｍＬ、エーテル中２.０Ｍ溶液、８.０ミリモル）を０℃にて添加した。その懸濁液をエーテルで希釈し、ついで該固体をフリットガラスフィルター上に集め、エーテルですすぎ、高真空下で乾燥させて、８−１のＨＣｌ塩（１.７ｇ、９８％）を得た。
【０１０６】
上記の工程８Ａにて利用したハライドに応じて、以下の表に示される化合物が合成された：
【化２５】
2007515472.tif 000046
【表８−１】
2007515472.tif 000047
【表８−２】
2007515472.tif 000048
＊ＨＰＬＣ測定はすべて分析用方法２を利用した。
【０１０７】
実施例９
２−メチル−４−（ピラゾール−１−イル）フェニルボロン酸ピナコールエステル試薬の合成
【化２６】
2007515472.tif 000049
【０１０８】
工程９Ａ：
４−ブロモ−３−メチルアニリン（１０.２ｇ）を６Ｎ  ＨＣｌ（８５ｍＬ）に懸濁させ、０℃に冷却した。亜硝酸ナトリウム（４０ｍＬのＨ２Ｏ中に４ｇ）の溶液を１０分間にわたって添加した。該反応物を０℃で１５分間攪拌し、つづいて塩化第一スズ・二水和物（２５ｍＬの１２Ｎ  ＨＣｌ中に３６ｇ）を添加した。該反応物を０℃で２時間攪拌した。反応物を濾過し、濾過ケーキを冷Ｈ２Ｏで洗浄し、４−ブロモ−３−メチルフェニルヒドラジン塩酸塩（化合物９ａ、２０ｇ）を黄褐色固体として得た。
【０１０９】
工程９Ｂ：
工程９Ａより得られた化合物（２０ｇ）を５０ｍＬのエタノールに懸濁させた。マロンジアルデヒドビス−ジメチルアセタール（１１.０ｍＬ、６７ミリモル）を加え、該反応物を８５℃に２時間加熱した。反応混合物を炭酸水素ナトリウムで中和し、ＤＣＭで洗浄することで抽出させた。合した有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥させて濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶かし、該混合物をセライトパッドを介して濾過した。濾液を蒸発させ、その油状残渣をカラムクロマトグラフィー（１：１  酢酸エチル：ヘキサン）に付して精製し、１−（４−ブロモ−３−メチルフェニル）ピラゾール（化合物９ｂ、９.６ｇ、７３％）をアンバー色油として得た。
【０１１０】
工程９Ｃ：
化合物９ｂ（１５ｍＬのジオキサン中に２．０ｇ）の溶液に、ビス（ピナコラト）ジボラン（２.４ｇ）、酢酸カリウム（２.４ｇ）および１,１'−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンジクロロパラジウム（ＩＩ）（５００ｍｇ）を添加した。反応物を８５℃に１２時間加熱した。該反応混合物をセライトパッドを介して濾過し、濾過ケーキを酢酸エチルで洗浄した。濾液を褐色液体にまで濃縮し、それをカラムクロマトグラフィー（２０％酢酸エチル：ヘキサン）で精製し、２−メチル−４−（ピラゾール−１−イル）フェニルボロン酸ピナコールエステル（化合物９ｃ、１.８ｇ、７５％）を黄色油として得た；ＬＣ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝２８５.０。
【０１１１】
２−クロロ−４−（ピラゾール−１−イル）フェニルボロン酸ピナコールエステル（９ｄ）および２−メチル−３−（ピラゾール−１−イル）フェニルボロン酸ピナコールエステル（９ｅ）も上記した方法により調製した。
【０１１２】
実施例１０
７−（２−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−２,５−ジメチル−３−（４−メチル−６−ピラゾール−１−イル−ピリジン−３−イル）−ピラゾロ［１,５−ａ］ピリミジン
【化２７】
2007515472.tif 000050
【０１１３】
工程１０Ａ：
３−アミノ−５−メチルピラゾール（２０.０ｇ、２０６ミリモル）、アセト酢酸エチル（３２.０ｇ、２４７ミリモル）、酢酸（６ｍＬ）およびジオキサン（１５０ｍＬ）の溶液を１６時間還流した。白色固体が沈殿し、それを濾過により集めた。濾過ケーキをエーテルで洗浄し、１０ａ（２９.０ｇ、８６％）を白色固体として得た。
【０１１４】
工程１０Ｂ：
化合物１０ａ（５.０ｇ、３１ミリモル）の１,４−ジオキサン（３０ｍＬ）中懸濁液に、トリエチルアミン（８.５０ｍＬ、６２ミリモル）およびオキシ塩化リン（７.４ｍＬ、７７ミリモル）を添加した。該反応物を、窒素下、１００℃で２時間加熱した。反応混合物を氷浴中で冷却し、ついで水および炭酸水素ナトリウム水溶液（最終ｐＨ８）で連続して処理した。ジクロロメタンを加え、該混合物を水で３回洗浄した。合した有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、暗褐色油にまで濃縮した。生成粗製物を溶出液としてヘキサン中３０％酢酸エチルを用いるシリカゲルクロマトグラフィーに付して精製し、１０ｂ（３.８ｇ、７０％）を白色固体として得た。
【０１１５】
工程１０Ｃ：
８０ｍＬのジオキサンおよび８ｍＬの水の混合液に、化合物１０ｂ（３.３ｇ、１８ミリモル、１当量）、２−フルオロ−３−メトキシフェニルボロン酸（４.３ｇ、２６ミリモル、１.４当量）、炭酸カリウム（５.０ｇ、３６ミリモル、２当量）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１.５ｇ、１.３ミリモル、０.０７当量）を添加した。該混合物を攪拌し、１００℃で１６時間加熱し、ついで冷却して水（７５ｍＬ）を添加した。該混合物を酢酸エチルで抽出し、ついで合した有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して濃縮した。該残渣を４：１  ヘキサン／酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーに付して精製し、化合物１０ｃ（３.７８ｇ、７６％）を白色固体として得た。
【０１１６】
工程１０Ｄ：
臭素（１.７７ｇ、１１ミリモル）を１０ｃ（３.０ｇ、１１ミリモル）のメタノール（３０ｍＬ）中溶液に−１０℃で添加した。１０分後、該混合物を濾過し、形成された沈殿物を集めた。濾過ケーキを冷メタノールで洗浄し、ついで真空下で乾燥させ、１０ｄ（３.１５ｇ、８３％）を黄色固体として得た。
【０１１７】
工程１０Ｅ：
２−フルオロ−３−メトキシフェニルボロン酸の代わりに化合物１２−１を用い、上記した工程１０Ｃの操作に従って化合物１０ｄ（４６０ｍｇ、１.３ミリモル）をスズキ（Suzuki）反応に付し、分取性ＨＰＬＣ／ＭＳおよびシリカゲルクロマトグラフィー（４：１  ヘキサン／酢酸エチルの溶出液）により精製した後に化合物１０−１（１５ｍｇ、固体）を得た。
【０１１８】
最終のスズキ反応にて使用されるボロン酸エステルまたは酸に依存して、以下の表に列挙される化合物が合成され、分取性ＬＣ−ＭＳにより精製された：
【化２８】
2007515472.tif 000051
【表９】
2007515472.tif 000052
＊ＨＰＬＣ測定はすべて分析用方法２を利用した。
【０１１９】
実施例１１
７−（２−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−２,５−ジメチル−３−（３−メチル−５−ピラゾール−１−イル−ピリジン−２−イル）−ピラゾロ［１,５−ａ］ピリミジン
【化２９】
2007515472.tif 000053
【０１２０】
工程１１Ａ：
水素化ナトリウム（１.５４ｇ、油中６０％分散液、３８.５ミリモル、２当量）をシアノアセトンナトリウム塩（２.５ｇ、２３ミリモル、１.２当量）のＤＭｆ（４０ｍＬ）中溶液に室温にて添加した。該混合物を１５分間攪拌し、ついで２−フルオロ−３−メチル−５−ニトロピリジン（３.０ｇ、１９.２ミリモル、１.０当量）のＤＭｆ（１０ｍＬ）中溶液を滴下した。反応混合物を室温で６時間攪拌した。該反応物を５ｇの氷、つづいて１５０ｍＬの水および１０ｍＬの酢酸でクエンチした。混合物を酢酸エチルで抽出し、ついで合した有機抽出液を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して濃縮した。残渣を溶出液としてヘキサン中３０％ヘキサンを用いるシリカゲルクロマトグラフィーに付して精製し、１１ａ（１.８５ｇ、４４％收率）を橙色油として得た。
【０１２１】
工程１１ｂ：
１１ａ（１.８ｇ、８.２ミリモル、１.０当量）、ヒドラジン一臭化水素酸塩（１.０ｇ、８.８ミリモル、１.１当量）、エタノール（３０ｍＬ）および水（３ｍＬ）の混合物を還流温度で１７時間加熱した。溶媒を蒸発させ、残渣を溶出液としてヘキサン／酢酸エチル（１／１）を用いるシリカゲルクロマトグラフィーに付して直接精製し、１１ｂ（１.８ｇ、９４％收率）を黄色泡沫体として得た。
【０１２２】
工程１１ｃ：
１１ｂ（１.８ｇ、７.７ミリモル、１.０当量）、エタノール（１５ｍＬ）、酢酸（１５ｍＬ）およびアセト酢酸エチル（１.６ｇ、１２.４ミリモル、１.６当量）の混合物を密封管中１０５℃にて１９時間加熱した。溶媒を蒸発させ、残渣をフリットガラスフィルター上に堆積させ、エーテルですすぎ、１１ｃ（１.０ｇ、４３％收率）を黄色固体として得た。
【０１２３】
工程１１Ｄ：
１１ｃ（８００ｍｇ、２.７ミリモル、１.０当量）、オキシ塩化リン（９００ｍｇ、５.９ミリモル、２.２当量）およびアセトニトリル（１５ｍＬ）の混合物を３時間還流した。該反応物を氷上に注ぎ、ついで該混合物を酢酸エチルで抽出した。合した酢酸エチル抽出液を水性炭酸水素ナトリウムで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して１１ｄ（６４０ｍｇ、７６％）を黄色固体として得た。
【０１２４】
工程１１Ｅ：
１１ｄ（６４０ｍｇ、２.０ミリモル、１当量）、２−フルオロ−３−メトキシフェニルボロン酸（４８０ｍｇ、３.８ミリモル、１.４当量）、炭酸カリウム（５５５ｍｇ、４.０ミリモル、２.０当量）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２３０ｍｇ、０.２ミリモル、０.１当量）のジオキサン（２０ｍＬ）および水（２ｍＬ）中懸濁液を攪拌し、１００℃で１６時間加熱した。水（５０ｍＬ）を添加し、該混合物を酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して濃縮した。残渣をメタノールでトリチュレートし、１１ｅ（３００ｍｇ、３７％）を黄色固体として得た。
【０１２５】
工程１１Ｆ：
１０％Ｐｄ／Ｃ（１００ｍｇ）を１１ｅ（３００ｍｇ、０.７４ミリモル、１.０当量）のエタノール（２０ｍＬ）およびＴＨＦ（１０ｍＬ）中窒素通気の溶液に添加した。該混合物を、パールシェーカー中、４０ｐｓｉの水素気体の下、室温で６時間振盪させた。該混合物を窒素でパージして濾過した。濾液を濃縮して１１ｆ（２６０ｍｇ、９４％收率）を黄色油として得た。
【０１２６】
工程１１Ｇ：
亜硝酸ナトリウム（６０ｍｇ、０.８７ミリモル、１.３当量）の水（１０ｍＬ）中溶液を１１ｆ（２６０ｍｇ、０.６９ミリモル、１.０当量）の４Ｎ塩酸（５ｍＬ）中氷冷溶液に滴下した。該混合物を０℃で１時間攪拌し、つづいて１０ｍＬのヨウ化カリウム半飽和水溶液を添加した。該混合物を室温で１６時間攪拌し、ついで５０ｍＬの炭酸水素ナトリウム飽和水溶液を加え、該混合物を２ｘ５０ｍＬの酢酸エチルで抽出した。合した有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して濃縮し、残渣を溶出液として４：１  ヘキサン／酢酸エチルを用いるシリカゲルクロマトグラフィーに付して精製し、１１ｇ（１７０ｍｇ、５１％收率）を黄色固体として得た。
【０１２７】
工程１１Ｈ：
１１ｇ（１７０ｍｇ、０.３５ミリモル、１.０当量）のジオキサン（６ｍＬ）中溶液に、炭酸カリウム（２００ｍｇ、１.４５ミリモル、４.１当量）、ピラゾール（６０ｍｇ、０.８９ミリモル、２.５当量）、ヨウ化銅（Ｉ）（６０ｍｇ、０.３２ミリモル、０.９当量）、トランス−１,２−ジアミノシクロヘキサン（３６ｍｇ、０.３２ミリモル、０.９当量）およびＮ,Ｎ'−ジメチルエチレンジアミン（２８ｍｇ、０.３２ミリモル、０.９当量）を添加した。該混合物を攪拌し、密封管中、１００℃で１９時間加熱した。反応混合物をセライトパッドを介して濾過し、濃縮し、分取性ＨＰＬＣ／ＭＳに付して精製し、化合物１１−１（７０ｍｇ、３７％收率）をＴＦＡ塩として得た；分子量：４２８.４７；ＬＣ／ＭＳ：４２９［ＭＨ］＋；ｔＲ：５.３９０（分析用方法２）。
【０１２８】
実施例１２
４−メチル−２−ピラゾール−１−イル−５−ピリジルボロン酸
【化３０】
2007515472.tif 000054
【０１２９】
工程１２Ａ：
２−クロロ−４−メチル−５−ニトロピリジン（５.０ｇ、２９ミリモル、１.０当量）を５０ｍＬのヒドラジン溶液（ＴＨＦ中１Ｍ溶液）に溶かし、該混合物を攪拌し、密封管中、８０℃にて２２時間加熱した。冷却された反応混合物を濾過し、得られた固体をエーテルで洗浄し、５.７ｇの緑がかった褐色固体を得た。
【０１３０】
この固体（５.７ｇ、２４ミリモル、１.０当量）、マロンアルデヒドビス（ジメチルアセタール）（５.９ｇ、３１ミリモル、１.３当量）および酢酸（５０ｍＬ）の混合物を攪拌し、密封管中、８０℃にて５時間加熱した。溶媒を蒸発させ、ついで炭酸水素ナトリウム水溶液（２００ｍＬ）を加え、該混合物を酢酸エチル（２ｘ２００ｍＬ）で抽出した。合した有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して濃縮した。残渣をエタノールから再結晶し、１２ａ（２.６ｇ、５３％收率）を黄色固体として得た。
【０１３１】
工程１２Ｂ：
１２ａ（２.６ｇ、１３ミリモル）および１０％Ｐｄ／Ｃ（２００ｍｇ）の１：１  ＴＨＦ／メタノール（３０ｍＬ）中混合物を、パール装置中、４０ｐｓｉの水素下、室温にて２時間振盪させた。該反応混合物をセライトパッドを介して濾過し、濾液を明緑色油にまで濃縮した。該油状物を３Ｎ臭化水素酸（１０ｍＬ）に再懸濁させ、０℃に冷却し、ついで亜硝酸ナトリウム（８３５ｍｇ、１２ミリモル、１.１当量）の水（２ｍＬ）中溶液を滴下して処理した。該混合物を０℃で１時間攪拌し、ついで２ｍＬのヨウ化カリウム半飽和溶液を加え、該混合物を室温で２２時間攪拌した。炭酸水素ナトリウム飽和水溶液を加え、ついで該混合物を酢酸エチル（２ｘ１００ｍＬ）で抽出し、合した有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して濃縮した。該残渣を溶出液として４：１  ヘキサン／酢酸エチルを用いるシリカゲルクロマトグラフィーに付して精製し、１２ｂ（１.２３ｇ、 ３３％）を黄色固体として得た。
【０１３２】
工程１２Ｃ：
ｎ−ブチルリチウム（１.８ｍＬ、ペンタン中２.０Ｍ溶液、３.６ミリモル）を化合物１２ｂ（６００ｍｇ、２.１ミリモル）およびトリイソプロピルボレート（９００ｍｇ、４.８ミリモル）の−７８℃でのＴＨＦ（５ｍＬ）中溶液に滴下した。該混合物を１時間にわたって室温にまで加温し、ついで該混合物を−７８℃に冷却し、付加的なトリイソプロピルボレート（４００ｍｇ、２.１ミリモル）で、つづいて付加的なｎ−ブチルリチウム（０.５ｍＬ、ペンタン中２.０Ｍ溶液、１.０ミリモル）で処理した。該混合物を再び１時間にわたって室温にまで加温し、ついで０.８ｍＬの１Ｎ塩酸を添加し、該混合物を１時間攪拌した。その混合物を濾過し、該固体をメタノールおよび酢酸エチルですすぎ、ついで濾液を濃縮した。残渣を１：１  ヘキサン／酢酸エチルで溶出するシリカゲル上のクロマトグラフィーに付し、化合物１２−１（２２０ｍｇ、５２％收率）を赤色固体として得た。
【０１３３】
実施例１３
７−（４−クロロ−フェノキシメチル）−３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−２,５−ジメチル−ピラゾロ［１,５−ａ］ピリミジン
【化３１】
2007515472.tif 000055
【０１３４】
工程１３Ａ：
化合物３−３（２５ｍｇ、０.０７２ミリモル、１当量）のＴＨＦ（１.５ｍＬ）中溶液に、ジ−tert−ブチルアゾジカルボキシレート（３０ｍｇ、０.１１ミリモル、１.５当量）、トリフェニルホスフィン（３０ｍｇ、０.１１ミリモル、１.５当量）および４−クロロフェノール（３０ｍｇ、０.０２３ミリモル、３.３当量）を添加した。該混合物を室温で１７時間攪拌し、ついで溶媒を蒸発させ、残渣をヘキサン／酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーに付して精製し、化合物１３−１（８ｍｇ）を固体として得た。
【０１３５】
使用するフェノールに応じて、以下の表に示される化合物が合成され、それを分取性ＬＣ−ＭＳで精製した：
【化３２】
2007515472.tif 000056
【表１０】
2007515472.tif 000057
＊ＨＰＬＣ測定はすべて分析用方法２を利用した。
【０１３６】
実施例１４
６−{３−［３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−２,５−ジメチル−ピラゾロ［１,５−ａ］ピリミジン−７−イル］−プロポキシ}−ニコチノニトリル
【化３３】
2007515472.tif 000058
【０１３７】
工程１４Ａ：
化合物１ｆ（１.０６ｇ、３.０ミリモル）およびアセチルアセトン鉄（ＩＩＩ）錯体（３５３ｍｇ、１.０ミリモル）の無水ＴＨＦ／ＮＭＰ（１０ｍＬ、７：１）中溶液に、塩化３−ブテニルマグネシウム（９.０ｍＬ、ＴＨＦ中０.５Ｍ溶液、４.５ミリモル）をゆっくりと添加した。該反応混合物を室温で１時間にわたって攪拌し、ついでさらなるアセチルアセトン鉄（ＩＩＩ）錯体（１.０ｇ、２.８ミリモル）およびグリニャール試薬（６.０ｍＬ、３.０ミリモル）を添加した。反応混合物を２時間攪拌し、ついで水を加えた。該混合物を酢酸エチルで抽出し、ついで合した有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して濃縮した。残渣を溶出液としてヘキサン／酢酸エチルを用いるシリカゲル上のクロマトグラフィーに付し、１４ａ（５３８ｍｇ、４８％收率）を得た。
【０１３８】
工程１４Ｂ：
１４ａ（３８０ｍｇ、１.０２ミリモル）のＴＨＦ／水（１０ｍＬ、４：１）中溶液に、四酸化オスミウム（２６ｍｇ、０.１０ミリモル）を、つづいて過ヨウ素酸ナトリウム（６４２ｍｇ、３.０ミリモル）を室温で添加した。該混合物を室温で一時間攪拌し、ついで酢酸エチルおよび水を添加した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、蒸発させてアルデヒド粗製物を得、それをメタノール（２０ｍＬ）に溶かした。ホウ水素化ナトリウム（１５２ｍｇ、４.０ミリモル）を少しずつ添加した。室温で２０分間攪拌した後、反応混合物を濃縮した。残渣をヘキサン／酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーに付して精製し、化合物１４−１（２３０ｍｇ、６０％收率）を得た。
【０１３９】
工程１４Ｃ：
１４−１（３０ｍｇ、０.０８ミリモル、１当量）、ヨウ化銅（Ｉ）（１５ｍｇ、０.０８ミリモル、１当量）、炭酸セシウム（５２ｍｇ、０.１６ミリモル、２当量）および１,１０−フェナントロリン（１４ｍｇ、０.０８ミリモル、１当量）の混合物を、密封バイアル中、１ｍＬのトルエンにて１１０℃で１７時間加熱した。冷却された混合物をセライトを介して濾過し、ついで濃縮した。残渣を溶出液としてヘキサン／酢酸エチルを用いるシリカゲルクロマトグラフィーに付して精製し、１４−２（５ｍｇ）を固体として得た。
【０１４０】
工程１４Ｃの方法にて使用されるアリールハライドに応じて、以下の表に示される化合物を、化合物１４−１に加えて、合成し、分取性ＬＣ−ＭＳにより精製した。
【化３４】
2007515472.tif 000059
【表１１−１】
2007515472.tif 000060
【表１１−２】
2007515472.tif 000061
＊ＨＰＬＣ測定はすべて分析用方法２を利用した。
【０１４１】
実施例１５
７−イミダゾール−１−イルメチル−３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−２,５−ジメチル−ピラゾロ［１,５−ａ］ピリミジン
【化３５】
2007515472.tif 000062
【０１４２】
工程１５Ａ：
塩化メタンスルホニル（１００ｍｇ、０.８６ミリモル、１.５当量）のＤＣＭ（０.５ｍＬ）中溶液を、化合物３−３（２００ｍｇ、０.５７ミリモル、１当量）の０℃でのＤＣＭ（５ｍＬ）中溶液に滴下した。該混合物を１時間にわたって室温にまで加温し、ついで炭酸水素ナトリウム飽和水溶液を加え、該混合物を２ｘ２００ｍＬのＤＣＭで抽出した。合した有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して１５ａ（１８０ｍｇ、４９％收率）を黄色泡沫体として得た。
【０１４３】
工程１５Ｂ：
炭酸カリウム（２０ｍｇ、０.１４ミリモル、２.６当量）およびイミダゾール（２０ｍｇ、０.３０ミリモル、５.５当量）を、１５ａ（２３ｍｇ、０.０５４ミリモル、１当量）のＤＭＦ（１ｍＬ）中溶液に添加した。該反応混合物を室温で１６時間攪拌し、ついでメタノール（１ｍＬ）を加え、該反応混合物を分取性ＨＰＬＣ／ＭＳで直接精製し、１５−１（１０ｍｇ）をＴＦＡ塩として得た。
【０１４４】
使用する求核ヘテロサイクルまたはアミンに応じて、以下の表に列挙される化合物が合成され、分取性ＬＣ−ＭＳで精製した：
【化３６】
2007515472.tif 000063
【表１２】
2007515472.tif 000064
＊ＨＰＬＣ測定はすべて分析用方法２を利用した。
【０１４５】
実施例１６
４−メチル−２−ピロール−１−イル−５−ピリジルボロン酸
【化３７】
2007515472.tif 000065
【０１４６】
工程１６Ａ：
２−アミノ−５−ブロモ−４−メチルピリジン（１ｇ、５.４ミリモル）および２,５−ジヒドロキシテトラヒドロフラン（２.８ｇ、２７ミリモル）の酢酸（１０ｍＬ）中溶液を、密封管中、９０℃にて２時間加熱した。反応混合物を濃縮し、残渣をヘキサン／酢酸エチルを用いるシリカゲルクロマトグラフィーに付して精製し、１６ａ（９００ｍｇ、７１％收率）を明黄色油として得た。
【０１４７】
工程１６Ｂ：
ｎ−ブチルリチウム（３.６ｍＬ、ペンタン中２.０Ｍ溶液、７.２ミリモル）を、化合物１６ａ（８６０ｍｇ、３.６ミリモル）およびトリイソプロピルボレート（１.４ｇ、７.３ミリモル）のＴＨＦ（６ｍＬ ）中−７８℃での溶液に滴下した。該混合物を１時間にわたって室温にまで加温し、ついで０.５ｍＬの４Ｎ  塩酸を添加し、該混合物を１０分間攪拌した。混合物を２ｘ２５ｍＬのＤＣＭで抽出し、ついで有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して１６−１（２５０ｍｇ）を黄色油として得た。水層を濃縮し、ついで該固体残渣をエタノールで洗浄した。合したエタノールの濾液を濃縮し、付加的な１６−１（５００ｍｇ）を黄色油として得た。
【０１４８】
実施例１７
７−エチル−２,５−ジメチル−３−{２−［２−（１−メチル−ピロリジン−２−イル）−エトキシ］−４−ピラゾール−１−イル−フェニル}−ピラゾロ［１,５−ａ］ピリミジン
【化３８】
2007515472.tif 000066
【０１４９】
工程１７Ａ：
化合物２−６（３５０ｍｇ）のクロロホルム（５ｍＬ）中溶液に、ＢＢｒ３（ＤＣＭ中１.０Ｍ、５ｍＬ）を添加した。該混合物を室温で一夜攪拌し、水でクエンチした。該混合物をクロロホルム（２ｘ１０ｍＬ）で抽出し、ついで合した有機抽出液を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して化合物１７−１（２８０ｍｇ）を油状物として得た。アリコート（１０ｍｇ）を分取性ＨＰＬＣ／ＭＳに付して精製し、精製された化合物１７−１（２.９ｍｇ）を得た。
【０１５０】
工程１７Ｂ：
化合物１７−１（４５ｍｇ、０.１４ミリモル、１当量）、炭酸カリウム（５６ｍｇ、０.４１ミリモル、３当量）、ヨウ化ナトリウム（２０ｍｇ、０.１３ミリモル、１当量）、２−（２−クロロエチル）−１−メチルピロリジン塩酸塩（３９ｍｇ、０.２１ミリモル、１.５当量）、アセトン（１ｍＬ）および水（１ｍＬ）の混合物を、密封管中、マイクロ波反応器にて１５０℃で２５分間加熱した。アセトンを蒸発させ、ついで残渣をメタノールで希釈し、濾過し、分取性ＨＰＬＣ／ＭＳ精製に直接付し、化合物１７−２（１４ｍｇ、２０％）をＴＦＡ塩として得た；分子量：４４４.５８；ＬＣ／ＭＳ：４４４［ＭＨ］＋；ｔＲ：６.０１０（分析用方法２）。
【０１５１】
実施例１８
７−（３−メトキシ−propyl）−３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−２,５−ジメチル−ピラゾロ［１,５−ａ］ピリミジン
【化３９】
2007515472.tif 000067
【０１５２】
工程１８Ａ：
１４−１（３０ｍｇ）の乾燥ＤＭＦ中溶液に、ＮａＨ（１０ｍｇ、６０％分散液）を添加した。室温で１０分間攪拌した後、ヨウ化メチル（０.０１５ｍＬ）を加えた。該混合物を１時間攪拌し、ついでメタノール（１ｍＬ）を添加し、該混合物を分取性ＨＰＬＣ／ＭＳ精製に直接的に付し、化合物１８−１（１２ｍｇ）をＴＦＡ塩として得た；分子量：３９１.４７  ＬＣ／ＭＳ：３９１［ＭＨ］＋；ｔＲ：７.０５０（分析用方法２）。
【０１５３】
実施例１９
２−［７−（２−メトキシメチル−フェニル）−２,５−ジメチル−ピラゾロ［１,５−ａ］ピリミジン−３−イル］−５−ピラゾール−１−イル−フェノール
【化４０】
2007515472.tif 000068
【０１５４】
工程１９Ａ：
実施例１８の操作を出発物質として化合物７−１を用いて行った。
使用するアルキルハライドに応じて、以下の表に列挙する化合物を合成し、分取性ＬＣ−ＭＳにより精製した。
【化４１】
2007515472.tif 000069
【表１３】
2007515472.tif 000070
＊ＨＰＬＣ測定はすべて分析用方法２を用いた。
【０１５５】
実施例２０
【化４２】
2007515472.tif 000071
【０１５６】
工程２０Ａ：
化合物１ｆ（７１０ｍｇ、２.０ミリモル）、（２−エトキシカルボニル）フェニルボロン酸（４７０ｍｇ、２.４ミリモル）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１１６ｍｇ、０.１ミリモル）および炭酸カリウム（５５０ｍｇ、４.０ミリモル）の混合物を９：１  ジオキサン／水（１０ｍＬ）中１００℃で２.５時間加熱した。水酸化ナトリウム溶液（３Ｎ、１０ｍＬ）を加え、該混合物を１００℃で付加的に３０分間攪拌した。冷却された混合物を濃縮し、ついで水を加え、そのｐＨを塩酸で２に調節した。該混合物をクロロホルムで抽出し、ついで合したクロロホルム抽出液を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して固体粗製物を得、それをクロロホルムから再結晶し、化合物２０ａ（４２０ｍｇ、４８％收率）を黄色固体として得た。
【０１５７】
工程２０Ｂ：
化合物２０ａ（４２０ｍｇ、０.９６ミリモル）を１０ｍＬのクロロホルム中にて塩化チオニル（１.０ｍＬ、１４ミリモル）と一緒に７０℃にて２時間加熱した。揮発性物質を蒸発させて化合物２０ｂ（４５０ｍｇ）を暗色固体として得た。
【０１５８】
工程２０Ｃ：
２０ｂ（３２ｍｇ、０.０７ミリモル）のクロロホルム（１ｍＬ）中溶液を室温でモルホリン（０.１ｍＬ、１ミリモル）と反応させた。該混合物を放置して３０分間室温とし、ついで溶媒を蒸発させた。残渣をメタノールに溶かし、濾過し、分取性ＨＰＬＣ／ＭＳに付して直接精製し、２０−１（１３ｍｇ、３０％）をＴＦＡ塩として得た。使用するアミンに依存して、以下の表に列挙される化合物を合成し、分取性ＨＰＬＣ−ＭＳで精製した：
【０１５９】
【化４３】
2007515472.tif 000072
【表１４】
2007515472.tif 000073
＊ＨＰＬＣはすべて分析用方法２を使用した。
【０１６０】
実施例２１
７−（１−エチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−２,５−ジメチル−ピラゾロ［１,５−ａ］ピリミジン
【化４４】
2007515472.tif 000074
【０１６１】
工程２１Ａ：
化合物１ｆ（２１０ｍｇ、０.６ミリモル）、Ｎ−Ｂｏｃ−ピロール−２−ボロン酸（１５８ｍｇ、０.７５ミリモル）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（４０ｍｇ、０.０３５ミリモル）および炭酸カリウム（１６６ｍｇ、１.２ミリモル）の混合物を、密封管の９：１  ジオキサン／水（５ｍＬ）中、１１０℃にて３時間加熱した。冷却された混合物を濃縮し、ついで水を加え、該混合物をクロロホルムで抽出した。合したクロロホルム抽出液を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して固体粗製物を得、それを１：１  ＴＦＡ／ＤＣＭ（３ｍＬ）中で１６時間攪拌させた。該混合物を酢酸エチルで希釈し、ついで水性アンモニアで処理した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、その残渣を溶出液としてヘキサン／酢酸エチルを用いるシリカゲル上のクロマトグラフィーに付し、２１ａ（１１０ｍｇ、４８％收率）を黄色固体として得た。
【０１６２】
工程２１ｂ：
２１ａ（１１０ｍｇ、０.２８ミリモル）の乾燥ＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液に、水素化ナトリウム（２０ｍｇ、鉱油中６０％分散液、０.５ミリモル）を室温にて添加した。該混合物を５分間攪拌し、ついでヨウ化エチル（０.０５０ｍＬ、０.６０ミリモル）を添加し、該混合物を室温で２時間攪拌した。水および酢酸エチルを添加し、ついで酢酸エチル層を水およびブラインで洗浄し、ついで硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して濃縮した。残渣を溶出液としてヘキサン／酢酸エチルを用いるシリカゲルクロマトグラフィーに付して精製し、化合物２１−１（８４ｍｇ、７３％收率）を黄色固体として得た；分子量：４１２.５０  ＬＣ／ＭＳ：４１２［ＭＨ］＋；ｔＲ：７.６３０（分析用方法２）。
【０１６３】
実施例２２
７−（３−エチル−３Ｈ−イミダゾール−４−イル）−３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−２,５−ジメチル−ピラゾロ［１,５−ａ］ピリミジン
【化４５】
2007515472.tif 000075
【０１６４】
工程２２Ａ：
化合物１ｆ（１.５０ｇ、４.２５ミリモル）、２−フェニルエテニルボロン酸（６９２ｍｇ、４.６８ミリモル）、炭酸カリウム（１.１７ｇ、８.５０ミリモル）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２５０ｍｇ、０.２２ミリモル）のジオキサン（９ｍＬ）および水（１ｍＬ）中混合物を１０５℃で１６時間加熱した。該混合物を酢酸エチルで希釈し、ブラインで洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して濃縮し、該残渣を溶出液としてヘキサン／酢酸エチルを用いるシリカゲル上のクロマトグラフィーに付し、２２ａ（１.６０ｇ、８９％收率）を黄色固体として得た。
【０１６５】
工程２２Ｂ：
オゾン／酸素の混合物を−７０℃にて８分間２２ａ（１.６０ｇ、３.８ミリモル）の乾燥ＤＣＭ／メタノール（２：１、２０ｍＬ）中溶液に通気した。硫化ジメチル（１.５ｍＬ）を加え、該混合物を攪拌し、室温にて１６時間にわたって加温した。溶媒を蒸発させ、残渣を溶出液としてヘキサン／酢酸エチルを用いるシリカゲル上のクロマトグラフィーに付し、化合物２２ｂ（１.０ｇ、７６％收率）を黄色固体として得た。
【０１６６】
工程２２Ｃ：
２２ｂ（３５ｍｇ、０.１０ミリモル）、エチルアミン（１.０ｍＬ、ＴＨＦ中２.０Ｍ溶液、２.０ミリモル）および硫酸マグネシウムの１,２−ジクロロエタン中混合物を室温で１５時間攪拌した。該混合物を濾過し、ついで濾液を蒸発乾固させた。その残渣を１：１  エタノール／ＤＭＥ（２ｍＬ）に溶かし、ついでＴＯＳＭＩＣ（３８ｍｇ、０.１９ミリモル）および炭酸カリウム（５５ｍｇ、０.４ミリモル）を加え、該混合物を１７時間還流させた。水を加え、該混合物を酢酸エチルで抽出した。合した有機抽出液を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して濃縮した。残渣を溶出液としてヘキサン／酢酸エチルを用いるシリカゲルクロマトグラフィーに付して精製し、化合物２２−１（５ｍｇ）を油状物として得た；分子量：４１３.４８  ＬＣ／ＭＳ：４１３［ＭＨ］＋；ｔＲ：５.０００（分析用方法２）。
【０１６７】
実施例２３
３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−２,５−ジメチル−７−（４−メチル−オキサゾール−５−イル）−ピラゾロ［１,５−ａ］ピリミジン
【化４６】
2007515472.tif 000076
【０１６８】
２２ｂ（２０８ｍｇ、０.６０ミリモル）、アルファ−メチル−ＴＯＳＭＩＣ（２５１ｍｇ、１.２ミリモル）および炭酸カリウム（２４８ｍｇ、１.８ミリモル）の混合物を５ｍＬの１：１  ＤＭＥ／エタノール中８０℃にて１４時間加熱した。水を添加し、該混合物を酢酸エチルで抽出した。合した有機抽出液を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して濃縮した。残渣を溶出液としてヘキサン／酢酸エチルを用いるシリカゲルクロマトグラフィーに付して精製し、２３−１（６０ｍｇ、２３％）を油状物として得た；分子量：４００.４４  ＬＣ／ＭＳ：４００［ＭＨ］＋；ｔＲ：５.２５０（分析用方法２）。
【０１６９】
実施例２４
７−（４−フルオロ−ベンジル）−２,５−ジメチル−３−（４−メチル−６−ピロール−１−イル−ピリジン−３−イル）−ピラゾロ［１,５−ａ］ピリミジン
【化４７】
2007515472.tif 000077
【０１７０】
工程２４Ａ：
塩化４−フルオロフェニル亜鉛（２０ｍＬ、ＴＨＦ中０.５Ｍ溶液、１０ミリモル）の溶液に、化合物１０ｂ（１.０ｇ、５.５ミリモル）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（３００ｍｇ、０.２６ミリモル）を添加した。反応混合物を密封管中９０℃で３時間加熱した。冷却された反応混合物を４Ｎ塩酸（４ｍＬ）で処理し、ついで水を加え、該混合物を酢酸エチルで抽出した。合した有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して濃縮した。該残渣をヘキサン中３０％酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーに付して精製し、２４ａ（１.０ｇ、７１％收率）をオフホワイト固体として得た。
【０１７１】
工程２４Ｂ：
化合物２４ａ（１.０ｇ、３.９ミリモル）を１５ｍＬのメタノールに溶かした。臭素（０.６２ｇ、３.９ミリモル）を該溶液に滴下し、白色沈殿物の形成をもたらした。該固体をフリットガラスフィルター上に集め、メタノールですすいだ。この化合物を４：１  ヘキサン／酢酸エチルで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付して精製し、第一に二臭素化生成物（１１０ｍｇ、７％收率）を得、つづいて２４ｂ（１.０ｇ、７７％收率）を白色固体として得た。
【０１７２】
工程２４Ｃ：
化合物２４ｂ（８００ｍｇ、２.４ミリモル）、化合物１６−１（５００ｍｇ、２.５ミリモル）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２８０ｍｇ、０.２４ミリモル）および炭酸カリウム（６００ｍｇ、４.３ミリモル）の混合物を密封管にて９：１  ジオキサン／水（３.５ｍＬ）中９５℃で３時間加熱した。炭酸水素ナトリウム水溶液（５ｍＬ）を該冷却混合物に加え、ついでそれをＤＣＭで２回抽出した。合したＤＣＭ抽出液を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して油状粗製物を得、それを分取性ＨＰＬＣ／ＭＳで部分的に精製した。ついで、その部分的に精製した生成物を溶出液として４：１  ヘキサン／酢酸エチルを用いるシリカゲル上のクロマトグラフィーに付し、化合物２４−１（３ｍｇ）を黄色固体として得た；分子量：４１１.４８  ＬＣ／ＭＳ：４１２［ＭＨ］＋；ｔＲ：９.１６０（分析用方法２）。
【０１７３】
実施例２５
３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−２,５−ジメチル−７−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピラゾロ［１,５−ａ］ピリミジン
【化４８】
2007515472.tif 000078
【０１７４】
工程２５Ａ：
１−メチルイミダゾール（２４６ｍｇ、３.０ミリモル）の−７０℃に冷却した乾燥ＴＨＦ（３ｍＬ）中溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中２.５Ｍ溶液、１.７ｍＬ、４.２ミリモル）を滴下した。反応混合物を−７０℃で１０分間攪拌し、ついでＺｎＣｌ２（ＴＨＦ中０.５Ｍ溶液、２０ｍＬ、１０ミリモル）を５分間にわたって加えた。該混合物を−７０℃で１時間攪拌し、ついで０℃に加温した。化合物１ｆ（１０６ｍｇ、０.３０ミリモル）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（７０ｍｇ、０.０６ミリモル）を添加した。ついで、該混合物を加熱し、３時間還流させた。冷却された反応混合物を水でクエンチし、ＴＨＦを蒸発させ、得られた水性混合物を酢酸エチルで抽出した。合した有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して濃縮し、該残渣を溶出液として酢酸エチルを用いるシリカゲル上のクロマトグラフィーに付し、２５−１（１５ｍｇ）を黄色固体として得た；ＨＰＬＣ保持時間  ４.１３分（方法２）；分子量３９９.５；測定されたＭＳ  ３９９。
【０１７５】
実施例２６
３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−２,５−ジメチル−７−（２−メチル−２H−ピラゾール−３−イル）−ピラゾロ［１,５−ａ］ピリミジン
【化４９】
2007515472.tif 000079
【０１７６】
工程２６Ａ：
１−メチルピラゾール（８２０ｍｇ、１０ミリモル）の−７０℃に冷却した乾燥ＴＨＦ（２０ｍＬ）中溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中１.６Ｍ溶液、６.３ｍＬ、１０ミリモル）を滴下した。反応混合物を−７０℃で５分間攪拌し、ついでホウ酸トリイソプロピル（２.５ｍＬ、１１ミリモル）を５分間にわたって添加した。該混合物を室温で１時間にわたって加温し、ついで６Ｎ塩酸（５ｍＬ）を添加した。該混合物を３０分間攪拌し、ついで蒸発乾固させ、２６ａを固体として得、それをさらに精製することなく使用した。
【０１７７】
工程２６Ｂ：
化合物１ｆ（５３０ｍｇ、１.５ミリモル）および２６ａ粗製物（全体量；約１０ミリモル）を、実施例１の操作に従って、スズキ反応に供した。反応混合物を濃縮し、ついで水を加え、該混合物をクロロホルムで抽出した。合した有機抽出液を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、ついで残渣を溶出液としてヘキサン／酢酸エチルを用いるシリカゲルクロマトグラフィーに付して精製した。該生成物をさらにアセトニトリルからの結晶化により精製し、化合物２６−１（２８０ｍｇ）を黄色固体として得た；ＨＰＬＣ保持時間  ６.４２分（方法２）；分子量  ３９９.５；測定されたＭＳ  ３９９。
【０１７８】
実施例２７
本発明の化合物は、一般に、Grigoriadisら（Mol. Pharmacol. 第５０巻、６７９−６８６頁、１９９６）およびHoareら（Mol. Pharmacol 第６３巻、７５１−７６５頁、２００３）に記載されるような、標準的放射性リガンド結合アッセイによりＣＲＦ受容体との結合活性について評価されうる。放射性標識されたＣＲＦリガンドを利用することにより該アッセイは使用され、本発明の化合物の結合活性をＣＲＦ受容体サブタイプで評価しうる。
【０１７９】
簡単に言えば、該結合アッセイは放射性標識されたＣＲＦリガンドをＣＲＦ受容体から移動させることを含む。より詳しくは、該結合アッセイは、ヒトＣＲＦ受容体で安定的にトランスフェクトされた細胞から由来の１−１０μｇの細胞膜を用いて、９６−ウェルのアッセイプレートで行われる。各ウェルは、目的とする化合物または対照となるリガンド（例えば、サウバジン（sauvagine）、ウロコチン（urocotin）ＩまたはＣＲＦ）を含有する約０．０５ｍＬのアッセイバッファー（例えば、ダルベッコ・リン酸緩衝セイライン、１０ｍＭ  塩化マグネシウム、２ｍＭ  ＥＤＴＡ）、０．０５ｍＬの［１２５Ｉ］チロシン−サウバジン（最終濃度約１５０ｐＭまたはScatchard分析により測定した場合のおよそのＫＤ）、および０．１ｍＬのＣＲＦ受容体を含有する細胞膜懸濁液を受ける。該混合物を２２℃で２時間インキュベートし、つづいてガラスファイバーフィルターでの急速濾過により結合およびフリー放射性リガンドを分離させる。３回洗浄した後、フィルターを乾燥させ、放射性活性（１２５Ｉからのオージェ電子）をシンチレーションカウンターを用いて計数する。すべての放射性リガンド結合データは非線形最小二乗曲線適合プログラムプリズム（GraphPad Software Inc）またはＸＬfit（ID Business Solutions Ltd）を用いて分析されうる。
【０１８０】
実施例２８
ＣＲＦ刺激のアデニレートシクラーゼ活性
本発明の化合物はまた、種々の機能試験により評価されてもよい。例えば、本発明の化合物はＣＲＦ刺激のアデニレートシクラーゼ活性についてスクリーニングされうる。ＣＲＦ刺激のアデニレートシクラーゼ活性を測定するためのアッセイは、全細胞調製に対するアッセイに適合するように修飾を加えて、一般に、Battagliaら（Synapse １：５７２，１９８７）に記載されているように実施されてもよい。
【０１８１】
さらに詳しくは、標準的なアッセイ混合物は、０．１ｍＬの最終容量にて、以下の：２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、２０ｍＭ  ＨＲＰＥＳ、および１ｍＭ  ＩＭＢＸ／ＤＭＥＭバッファーを含有してもよい。刺激実験において、特定の受容体サブタイプの薬理学的順位のプロフィールを確立するために、ＣＲＦ受容体をトランスフェクトさせた全細胞を９６−ウェルプレートに置き、種々の濃度のＣＲＦ関連の、および非関連のペプチドと一緒に３７℃で３０分間インキュベートする。インキュベーション後に、標準的な市販のキット、例えばApplied Biosystems製のｃＡＭＰ−Ｓｃｒｅｅｎ（登録商標）を用いてサンプル中のｃＡＭＰを測定する。化合物の機能を評価するために、細胞と、ｃＡＭＰ産生の５０％刺激を惹起する単一濃度のＣＲＦまたは関連ペプチドを種々の濃度の競合化合物および上記したように測定されたｃＡＭＰと一緒に３７℃で３０分間インキュベートする。
【０１８２】
本発明の具体的な実施形態は説明のために本明細書中に記載されているが、本発明の精神および範囲を逸脱することなく、種々の修飾がなされてもよい。したがって、本発明は添付した特許請求の範囲により限定される場合を除き、限定されるものではない。
【国際調査報告】
2007515472.tif 000083
2007515472.tif 000084
2007515472.tif 000085
2007515472.tif 000086