(57)【要約】  式（Ｉ）の化合物（式中、Ｒ１は水素およびＣ１〜４アルキルから選択され；Ｒ２はＲ４−Ｃ（Ｒ５ａＲ５ｂ）−、Ｒ４＝Ｃ（Ｒ６）−およびＲ７ａＣ（Ｒ７ｂ）＝Ｃ（Ｒ６）−から選択され；Ｒ３−Ｘ−はメチル、メトキシメチルから選択され；Ｒ４は（場合により置換された）Ｃ１〜４アルキル、フェニル、Ｃ３〜６シクロアルキルおよびヘテロアリールから選択され；Ｒ５ａおよびＲ５ｂは水素、フルオロおよびＣ１〜４アルキルから独立して選択され；Ｒ６は水素およびＣ１〜４アルキルから選択され；Ｒ７ａおよびＲ７ｂは場合により置換されたＣ１〜４アルキルである）、またはその塩、プロドラッグもしくは溶媒和物が記載される。ＧＬＫ活性化剤としてのそれらの使用、それらを含有する医薬組成物、およびそれらの製造のための工程も記載される。
2007519618.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2007519618.tif 000047
（式中、Ｒ１は水素およびＣ１〜４アルキルから選択され；
Ｒ２はＲ４−Ｃ（Ｒ５ａＲ５ｂ）−、Ｒ４＝Ｃ（Ｒ６）−およびＲ７ａＣ（Ｒ７ｂ）＝Ｃ（Ｒ６）−から選択され；
Ｒ３−Ｘ−はメチル、メトキシメチルおよび：
【化２】
2007519618.tif 000048
から選択され；
Ｒ４はＣ１〜４アルキル、フェニル、Ｃ３〜６シクロアルキルおよびヘテロアリールから選択され、ここでＲ４は場合によりＲ８から独立して選択される１または２種の置換基によって置換され；
Ｒ５ａおよびＲ５ｂは水素、フルオロおよびＣ１〜４アルキルから独立して選択され；
Ｒ６は水素およびＣ１〜４アルキルから選択され；
Ｒ７ａおよびＲ７ｂはＣ１〜４アルキルから独立して選択され、ここでＲ７ａおよびＲ７ｂは場合によりＲ８から独立して選択される１または２種の置換基によって置換され；
Ｒ８はＣ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、フルオロおよびクロロから独立して選択され；
ただし：
（ｉ）少なくともＲ５ａおよびＲ５ｂの１種はフルオロであり；そして
（ｉｉ）Ｒ２がＲ４＝Ｃ（Ｒ６）−の場合、Ｒ４はＣ３〜６シクロアルキルである）、またはその塩、プロドラッグもしくは溶媒和物。
【請求項２】
式（Ｉａ）の化合物：
【化３】
2007519618.tif 000049
（式中、Ｒ１およびＲ２は請求項１で定義したとおりである）である、請求項１で記載した式（Ｉ）の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ。
【請求項３】
式（Ｉｃ）の化合物：
【化４】
2007519618.tif 000050
（式中、Ｒ１およびＲ２は請求項１で定義したとおりである）である、請求項１で記載した式（Ｉ）の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ。
【請求項４】
Ｒ２がＲ４−Ｃ（Ｒ５ａＲ５ｂ）−である、請求項１〜３のいずれかにおいて記載した化合物、またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ。
【請求項５】
Ｒ２がＲ４＝Ｃ（Ｒ６）−である、請求項１〜３のいずれかにおいて記載した化合物、またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ。
【請求項６】
請求項１で記載した式（Ｉ）の化合物（式中：
Ｒ１は水素であり；
Ｒ２はＲ４−Ｃ（Ｒ５ａＲ５ｂ）−およびＲ４＝Ｃ（Ｒ６）−から選択され；
Ｒ３−Ｘ−はメチルおよびメトキシメチルから選択され；
Ｒ４はフェニルおよびＣ３〜６シクロアルキルから選択され、ここでＲ４は場合によりＲ７から独立して選択される１または２種の置換基によって置換され；
Ｒ５ａおよびＲ５ｂは水素およびフルオロから独立して選択され；
Ｒ６は水素であり；
Ｒ７はＣ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、フルオロおよびクロロから独立して選択され；
ただし：
（ｉｉｉ）少なくともＲ５ａおよびＲ５ｂの１種はフルオロであり；そして
（ｉｖ）Ｒ２がＲ４＝Ｃ（Ｒ６）−の場合、Ｒ４はＣ１〜３シクロアルキルである）、またはその塩、プロドラッグもしくは溶媒和物。
【請求項７】
Ｒ７が置換されていない、請求項６で記載した式（Ｉ）の化合物；またはその塩、プロドラッグもしくは溶媒和物。
【請求項８】
Ｒ５ａおよびＲ５ｂの両方がフルオロである、請求項６で記載した式（Ｉ）の化合物；またはその塩、プロドラッグもしくは溶媒和物。
【請求項９】
化合物が以下のもの；
６−｛［（３−［（２，２−ジフルオロ−２−フェニルエチル）オキシ］−５−｛［（１Ｓ）−１−メチル−２−（メチルオキシ）エチル］オキシ｝フェニル）カルボニル］アミノ｝ピリジン−３−カルボン酸；
６−［（｛３−［（２，２−ジフルオロ−２−フェニルエチル）オキシ］−５−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝カルボニル）アミノ］ピリジン−３−カルボン酸；
６−｛［（３−［（２−シクロペンチリデンエチル）オキシ］−５−｛［（１Ｓ）−１−メチル−２−（メチルオキシ）エチル］オキシ｝フェニル）カルボニル］アミノ｝ピリジン−３−カルボン酸；および
６−｛［（３−［（２−シクロペンチリデンエチル）オキシ］−５−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝カルボニル）アミノ］ピリジン−３−カルボン酸；
またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグから選択される、請求項１で記載した式（Ｉ）の化合物。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１つで記載した式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを、薬剤的に受容できる希釈剤またはキャリアと一緒に含有する、医薬組成物。
【請求項１１】
薬物としての使用のための、請求項１〜９のいずれか１つで記載した式（Ｉ）の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ。
【請求項１２】
ＧＬＫにより媒介される疾患、とりわけ２型糖尿病の治療のための薬物の製造における使用のための、請求項１〜９のいずれか１つで記載した式（Ｉ）の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ。
【請求項１３】
有効量の、請求項１〜９のいずれか１つで記載した式（Ｉ）の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを、ＧＬＫ媒介疾患、とりわけ糖尿病の治療が必要な哺乳動物に投与することにより、かかる疾患を治療する方法。
【請求項１４】
糖尿病および肥満の組み合わせた治療または予防において使用のための薬物の製造における、請求項１〜９のいずれか１つで記載した式（Ｉ）の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグの使用。
【請求項１５】
肥満の治療または予防において使用のための薬物の製造における、請求項１〜９のいずれか１つで記載した、式（Ｉ）の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグの使用。
【請求項１６】
肥満および糖尿病の組み合わせた治療が必要な哺乳動物に、有効量の、請求項１〜９のいずれか１つで記載した式（Ｉ）の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを投与することによる、かかる治療のための方法。
【請求項１７】
肥満の治療が必要な哺乳動物に、有効量の、請求項１〜９のいずれか１つで記載した式（Ｉ）の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを投与することによる、かかる治療のための方法。
【請求項１８】
以下のことを含む、請求項１で記載した式（Ｉ）の化合物、またはその塩、プロドラッグもしくは溶媒和物の製造のための工程：
（ａ）式（ＩＩＩａ）の酸または活性化されたその誘導体と式（ＩＩＩｂ）の化合物：
【化５】
2007519618.tif 000051
（式中、Ｐ１は水素または保護基である）の反応；または
（ｂ）式（ＩＩＩｃ）の化合物：
【化６】
2007519618.tif 000052
（式中、Ｐ２は保護基である）の脱保護；または
（ｃ）式（ＩＩＩｄ）の化合物と式（ＩＩＩｅ）の化合物：
【化７】
2007519618.tif 000053
（式中、Ｘ１は脱離基であり、Ｘ２はヒドロキシル基であるか、またはＸ１はヒドロキシル基であり、Ｘ２は脱離基であり、そしてＰ１は水素または保護基である）の反応；または
（ｄ）式（ＩＩＩｆ）の化合物と式（ＩＩＩｇ）の化合物：
【化８】
2007519618.tif 000054
（式中：Ｘ３は脱離基であり、Ｘ４はヒドロキシル基であるか、またはＸ３はヒドロキシル基であり、Ｘ４は脱離基であり、ここでＰ１は水素または保護基である）の反応；または
（ｅ）式（ＩＩＩｈ）の化合物と式（ＩＩＩｉ）の化合物：
【化９】
2007519618.tif 000055
（式中：Ｘ５は脱離基であり、そしてＰ１は水素または保護基である）の反応；
およびその後、必要な場合：
ｉ）式（Ｉ）の化合物を別の式（Ｉ）の化合物に変換すること；
ｉｉ）いずれかの保護基を除去すること；
ｉｉｉ）その塩、プロドラッグまたは溶媒和物を形成すること。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グルコキナーゼ（ＧＬＫ）を介して媒介される疾患または医学的状態の治療または予防に有用で、インスリン分泌のためのグルコース閾値の低下を導く、ベンゾイルアミノピリジルカルボン酸の群に関する。さらに、該化合物は肝グルコース取り込みを増加させることにより血糖を低下させることが予想されている。そのような化合物は、２型糖尿病および肥満の治療に有用性がある可能性がある。本発明はまた、上記化合物を含む医薬組成物および上記化合物を使用することによる、ＧＬＫに媒介される疾患の治療方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
膵臓β細胞および肝実質細胞において、主要な細胞膜グルコーストランスポーターはＧＬＵＴ２である。生理的グルコース濃度において、ＧＬＵＴ２が膜を横切ってグルコースを輸送する速度は、これらの細胞における全体的なグルコース取り込み速度に対して律速ではない。グルコース取り込みの速度は、グルコキナーゼ（ＧＬＫ）によって触媒される、グルコースからグルコース−６−ホスフェート（Ｇ−６−Ｐ）へのりん酸化の速度によって限定される［１］。ＧＬＫはグルコースに対して高い（６〜１０ｍＭ）Ｋｍを有し、生理的濃度のＧ−６−Ｐによって阻害されない［１］。ＧＬＫ発現はいくつかの組織および細胞型、最も顕著には膵臓β細胞および肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ）に限定される［１］。これらの細胞では、ＧＬＫ活性はグルコース利用に関して律速であり、従ってグルコース誘発インスリン分泌および肝グリコーゲン合成の程度を調節する。これらの過程は全身のグルコースホメオスタシスの維持に重要であり、両方とも糖尿病では正常に機能しない［２］。
【０００３】
糖尿病の１種のサブタイプ、若年性２型成人発症型糖尿病（ＭＯＤＹ‐２）では、糖尿病はＧＬＫ機能損失突然変異によって引き起こされる［３、４］。ＭＯＤＹ‐２患者における高血糖症は膵臓および肝臓両方における不完全なグルコース利用の結果である［５］。ＭＯＤＹ‐患者の膵臓における不完全なグルコース利用は、グルコース刺激インスリン分泌のための閾値上昇を引き起こす。逆に、まれなＧＬＫの活性化突然変異はこの閾値を低下させ、その結果、家族性インスリン過剰症を引き起こす［６、６ａ、７］。ＭＯＤＹ‐２糖尿病で認められる低下したＧＬＫ活性に加え、肝グルコキナーゼ活性は２型糖尿病でも低下している［８］。重要なことには、ＧＬＫの全体的または肝選択的過剰発現は、疾患の食餌的および遺伝的モデルの両方において、糖尿病表現型の発生を妨害するか、または覆す［９〜１２］。さらに、フラクトースによる２型糖尿病の急性治療は、肝グルコース利用の刺激により耐糖性を改善する［１３］。この作用は、以下に記載の機序により、肝細胞におけるフラクトース誘発サイトソルＧＬＫ活性の上昇を介して媒介されると考えられている［１３］。
【０００４】
肝ＧＬＫ活性は、ＧＬＫ調節蛋白質（ＧＬＫＲＰ）との結合により阻害される。ＧＬＫ／ＧＬＫＲＰ複合体はＧＬＫＲＰへのフラクトース−６−ホスフェート（Ｆ６Ｐ）結合により安定化され、フラクトース−１−ホスフェート（Ｆ１Ｐ）によるこの糖ホスフェートの置換により脱安定化される。Ｆ１Ｐは食物フラクトースのフラクトキナーゼ媒介りん酸化により生成される。結果として、Ｆ６Ｐは吸収後状態において上昇するが、Ｆ１Ｐは食事後状態において優勢であるというように、ＧＬＫ／ＧＬＫＲＰ複合体統合性および肝ＧＬＫ活性は、食物摂取依存的様式で調節される。肝細胞と対照的に、膵臓β‐細胞はＧＬＫＲＰの非存在下においてＧＬＫを発現する。したがって、β‐細胞ＧＬＫ活性はその基質、グルコースの有効性によってもっぱら調節される。小分子は直接、またはＧＬＫ／ＧＬＫＲＰ複合体の脱安定化のいずれかによりＧＬＫを活性化することができる。前者のクラスの化合物は肝臓および膵臓の両方においてグルコース利用を刺激すると予想されるが、後者はもっぱら肝臓において作用すると予想されている。しかし、２型糖尿病は両方の組織における不完全なグルコース利用が特徴であるため、どちらの特徴を持つ化合物も、かかる疾患の治療に治療的利点を有すると予想される。
【０００５】
ＧＬＫおよびＧＬＫＲＰならびにＫＡＴＰチャンネルは、エネルギーバランスの調節および食物摂取の制御において重要な脳の領域である、視床下部のニューロンに発現される［１４〜１８］。これらのニューロンは、食欲亢進および食欲抑制神経ペプチドを発現することが示されていて［１５、１９、２０］、周囲のグルコース濃度の変化によって阻害されるか、または興奮する、視床下部内のグルコース感知ニューロンであると考えられている［１７、１９、２１、２２］。グルコースレベルの変化を感知するこれらのニューロンの能力は、多様な遺伝的および実験的に誘発された肥満モデルにおいて欠陥がある［２３〜２８］。グルコキナーゼの競合的拮抗剤である、グルコース類似体の脳室内（ｉｃｖ）注入は、痩せたラットにおいて食物摂取を刺激する［２９、３０］。対照的にグルコースのｉｃｖ注入は摂食を抑制する［３１］。したがって、ＧＬＫの小分子活性化剤はＧＬＫの中枢作用を介して、食物摂取および体重増加を減少させる可能性がある。したがって、ＧＬＫ活性化剤は、糖尿病に加え、肥満を含む摂食障害の治療において治療的用途を有する可能性がある。視床下部作用は、２型糖尿病の治療のためにグルコースホメオスタシスを正常化することにおいて肝臓および／または膵臓で作用する同種の化合物の作用に相加的または相乗的であることになる。したがって、ＧＬＫ／ＧＬＫＲＰ系は、（糖尿病および肥満の両方に利点を有する）潜在的な“ダイアベシティー（Ｄｉａｂｅｓｉｔｙ）”標的として記載することができる。
【０００６】
ＷＯ００５８２９３およびＷＯ０１／４４２１６（Ｒｏｃｈｅ）では、一連のベンジルカルバモイル化合物がグルコキナーゼ活性化剤として記載されている。そのような化合物がＧＬＫを活性化する機序は、ＧＬＫ活性がＮＡＤＨ産生に繋がり、次にそれを光学的に測定するアッセイにおいて、そのような化合物の直接作用を測定することにより評価される‐実施例Ａに記載のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイの詳細を参照されたい。本発明の多くの化合物は、公知のＧＬＫ活性化剤に比較して好ましい選択性を示すことができる。
【０００７】
ＷＯ９６２２２８２、ＷＯ９６２２２９３、ＷＯ９６２２２９４、ＷＯ９６２２２９５、ＷＯ９７４９７０７およびＷＯ９７４９７０８は、本発明に開示された化合物に構造的に類似するバソプレッシン薬として有用な化合物の製造に使用されるいくつかの中間体を開示する。構造的に類似した化合物は、ＷＯ９６４１７９５およびＪＰ８１４３５６５（バソプレッシン拮抗作用）、ＪＰ８３０１７６０（皮膚障害予防）ならびにＥＰ６１９１１６（骨疾患）にも開示される。
【０００８】
ＷＯ０１／１２６２１はｃ−ＪＵＮ  Ｎ−末端キナーゼの阻害剤としての、イソキサゾリルピリミジンおよび関連化合物、ならびにそのような化合物を含有する医薬組成物の製造を記載する。
【０００９】
Ｃｕｓｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ［Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ（１９９１）１（４），２１１-１４］は、ピリジン含有スチルベンおよびアミドの合成、および蛋白質‐チロシンキナーゼ阻害剤としてのそれらの評価を記載する。Ｒｏｇｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ［Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ（１９８１）２４（１１）１２８４-７］は、環状‐ＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤としてのメソイオンプリノン類似体を記載する。
【００１０】
ＷＯ００／２６２０２は、抗腫瘍剤としての２−アミノ−チアゾールの製造を記載する。ＧＢ  ２３３１７４８は、殺虫剤チアゾール誘導体の製造を記載する。ＷＯ９６／３６６１９は、消化管運動改善薬としてのアミノチアゾール誘導体の製造を記載する。ＵＳ  ５４６６７１５およびＵＳ  ５２５８４０７は、３，４−２置換フェノール免疫刺激剤の製造を記載する。ＪＰ  ５８０６９８１２は、ベンズアミド誘導体を含有する血糖降下剤を記載する。ＵＳ  ３９５０３５１は２−ベンズアミド−５−ニトロチアゾールを記載し、Ｃａｖｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ［Ｅｕｒ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ-Ｃｈｉｍ  Ｔｈｅｒ（１９７８）１３（６），５３９-４３］はこれらの化合物の生物学的重要性について検討する。
【発明の開示】
【００１１】
係属中の国際特許出願番号：ＰＣＴ／ＧＢ０２／０２８７３は、酵素グルコキナーゼ（ＧＬＫ）の活性化剤であるベンゾイルアミノピリジルカルボン酸の群を記載する。本発明者らは驚くべきことに、いくつかの選択されたこれらの化合物を見出していて、それらはＧＬＫ酵素に対する高い効果を維持しながら、改善された水溶性と低下した血漿結合レベルのために、経口投与後に高い血漿中薬物レベルを有する。このことが、化合物のこのサブグループを、ＧＬＫを介して媒介される疾患または医学的状態の治療または予防における用途にとりわけ適切にする。
【００１２】
したがって、本発明の第１の側面に従って、式（Ｉ）の化合物：
【００１３】
【化１】
2007519618.tif 000003
【００１４】
（式中：
Ｒ１は水素およびＣ１〜４アルキルから選択され；
Ｒ２はＲ４−Ｃ（Ｒ５ａＲ５ｂ）−、Ｒ４＝Ｃ（Ｒ６）−およびＲ７ａＣ（Ｒ７ｂ）＝Ｃ（Ｒ６）−から選択され；
Ｒ３−Ｘ−はメチル、メトキシメチルおよび：
【００１５】
【化２】
2007519618.tif 000004
【００１６】
から選択され；
Ｒ４はＣ１〜４アルキル、フェニル、Ｃ３〜６シクロアルキルおよびヘテロアリールから選択され、ここでＲ４は場合によりＲ８から独立して選択される１または２種の置換基によって置換され；
Ｒ５ａおよびＲ５ｂは水素、フルオロおよびＣ１〜４アルキルから独立して選択され；
Ｒ６は水素およびＣ１〜４アルキルから選択され；
Ｒ７ａおよびＲ７ｂはＣ１〜４アルキルから独立して選択され、ここでＲ７ａおよびＲ７ｂは場合によりＲ８から独立して選択される１または２種の置換基によって置換され；
Ｒ８はＣ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、フルオロおよびクロロから選択され；
ただし：
（ｉ）少なくともＲ５ａおよびＲ５ｂの１種はフルオロであり；そして
（ｉｉ）Ｒ２がＲ４＝Ｃ（Ｒ６）−の場合、Ｒ４はＣ３〜６シクロアルキルである）、またはその塩、プロドラッグもしくは溶媒和物が提供される。
【００１７】
式（Ｉ）の化合物は、本発明の範囲内である、塩を形成してもよい。薬剤的に受容できる塩が好ましいが、別の塩がたとえば、化合物を単離または精製することにおいて有用であってもよい。
【００１８】
本明細書では、“アルキル”という用語は、直鎖および分枝鎖アルキル基を共に包含する。たとえば、“Ｃ１〜４アルキル”はプロピル、イソプロピルおよびｔ−ブチルを包含する。疑いを避けるために、アルキル鎖はアルキル鎖の末端において、またはアルキル鎖の真ん中において分子の残部に結合することができる、すなわち、“アルキル”の定義は以下の構造：
【００１９】
【化３】
2007519618.tif 000005
【００２０】
を包含し、ここで：
【００２１】
【化４】
2007519618.tif 000006
【００２２】
は分子の残部への結合点を表す。
“ヘテロアリール”という用語は、５〜６炭素原子を含有する不飽和、単環を表し、少なくともその１原子は、窒素、硫黄または酸素によって置き換えられ、ここで複素環の硫黄原子はＳ（Ｏ）またはＳ（Ｏ）２に酸化されてもよい。ヘテロアリール環は、特記しない限り、窒素を介した結合が荷電した第４窒素を導く場合を除いては、炭素または窒素で結合してもよい。
【００２３】
ヘテロアリールの例としては、チエニル、フラニル、チアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、ピラゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリダジニルおよびピリミジニルが挙げられる。好ましいヘテロアリール環としては：チエニルが挙げられる。
【００２４】
“Ｃ３〜６シクロアルキル”という用語は、３〜６炭素原子、好ましくは５〜６炭素原子を含有する飽和炭素環を表す。Ｃ３〜６シクロアルキルの例としては、シクロヘキシル、シクロペンチル、シクロブチルまたはシクロプロピルが挙げられる。好ましくは、シクロペンチルまたはシクロヘキシル。最も好ましくはシクロペンチル。
【００２５】
Ｃ１〜４アルキルの例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｓｅｃ−ブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルが挙げられ；Ｃ１〜３アルコキシの例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、およびイソプロポキシが挙げられる。
【００２６】
先に定義したある種の式（Ｉ）の化合物が１以上の不斉炭素原子のために光学活性またはラセミ型で存在する限り、本発明はその定義において、ＧＬＫを直接刺激するか、またはＧＬＫ／ＧＬＫＲＰ相互作用を阻害する特性を有する、任意のそのような光学活性またはラセミ型を包含すると理解すべきである。光学活性型の合成は、当該技術分野で公知の有機化学の標準技術、たとえば光学的に活性な出発物質からの合成により、またはラセミ型の分割により実行することができる。また、ある種の化合物は互変異性体型で存在してもよいこと、そして本発明はまた、ＧＬＫを活性化する本発明の化合物の任意およびすべての互変異性体型に関することを理解すべきである。
【００２７】
式（Ｉ）の好ましい化合物は、以下のいずれか１以上のことが当てはまるものである：
（１）Ｒ２はＲ４−Ｃ（Ｒ５ａＲ５ｂ）−である；
（２）Ｒ２はＲ４−Ｃ（Ｒ５ａＲ５ｂ）−であり、そしてＲ４はフェニルである；
（３）Ｒ２はＲ４−Ｃ（Ｒ５ａＲ５ｂ）−であり、そしてＲ４はヘテロアリールである；
（４）Ｒ２はＲ４−Ｃ（Ｒ５ａＲ５ｂ）−であり、そしてＲ４はＣ３〜６シクロアルキルである；
（５）Ｒ２はＲ４−Ｃ（Ｒ５ａＲ５ｂ）−であり、そしてＲ５ａおよびＲ５ｂは両方ともフルオロである；
（６）Ｒ２はＲ４＝Ｃ（Ｒ６）−である；
（７）Ｒ２はＲ４＝Ｃ（Ｒ６）−であり、そしてＲ３−Ｘ−はメチルである；
（８）Ｒ２はＲ４＝Ｃ（Ｒ６）−であり、そしてＲ３−Ｘ−はメトキシメチルである；
（９）Ｒ２はＲ４−Ｃ（Ｒ５ａＲ５ｂ）−であり、そしてＲ３−Ｘ−はメチルである；
（１０）Ｒ２はＲ４−Ｃ（Ｒ５ａＲ５ｂ）−であり、そしてＲ３−Ｘ−はメトキシメチルである
（１１）Ｒ４は非置換である；
（１２）Ｒ３−Ｘ−はメチルである；
（１３）Ｒ３−Ｘ−はメトキシメチルである；
（１４）Ｒ２はＲ７ａＣ（Ｒ７ｂ）＝Ｃ（Ｒ６）−である。
【００２８】
本発明の別の態様に従って、本発明の化合物の以下の好ましい群が提供される：
（Ｉ）式（Ｉａ）の化合物：
【００２９】
【化５】
2007519618.tif 000007
【００３０】
（式中：Ｒ１およびＲ２は式（Ｉ）の化合物において先に定義したとおりである）またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ。
（ＩＩ）式（Ｉｂ）の化合物：
【００３１】
【化６】
2007519618.tif 000008
【００３２】
（式中：Ｒ１およびＲ２は式（Ｉ）の化合物において先に定義したとおりである）またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ。
（ＩＩＩ）式（Ｉｃ）の化合物：
【００３３】
【化７】
2007519618.tif 000009
【００３４】
（式中：Ｒ１およびＲ２は式（Ｉ）の化合物において先に定義したとおりである）またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ。
（ＩＶ）式（Ｉｄ）の化合物：
【００３５】
【化８】
2007519618.tif 000010
【００３６】
（式中：Ｒ１およびＲ２は式（Ｉ）の化合物において先に定義したとおりである）またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ。
（Ｖ）式（Ｉｅ）の化合物：
【００３７】
【化９】
2007519618.tif 000011
【００３８】
（式中：Ｒ１およびＲ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５ａおよびＲ５ｂは式（Ｉ）の化合物において先に定義したとおりである）またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ。
（ＶＩ）式（Ｉ）の化合物（式中：
Ｒ１は水素であり；；
Ｒ２はＲ４−Ｃ（Ｒ５ａＲ５ｂ）−およびＲ４＝Ｃ（Ｒ６）−から選択され；
Ｒ３−Ｘ−はメチルおよびメトキシメチルから選択され；
Ｒ４はフェニルおよびＣ３〜６シクロアルキルから選択され、ここでＲ４は場合によりＲ７から独立して選択される１または２種の置換基によって置換され、好ましくは非置換であり；
Ｒ５ａおよびＲ５ｂは水素およびフルオロから独立して選択され；
Ｒ６は水素であり；
Ｒ７はＣ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、フルオロおよびクロロから独立して選択され；
ただし：
（ｉ）少なくともＲ５ａおよびＲ５ｂの１種はフルオロであり、好ましくはＲ５ａおよびＲ５ｂは両方ともフルオロであり；
（ｉｉ）Ｒ２がＲ４＝Ｃ（Ｒ６）−の場合、Ｒ４はＣ３〜６シクロアルキルである。
【００３９】
本発明の別の側面では、実施例のいずれか１種、またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグが提供される。本発明の別の側面では、実施例のいずれか２種以上、またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグが提供される。
【００４０】
好ましい本発明の化合物は、以下のいずれか１種、２種またはそれ以上を包含する：
６−｛［（３−［（２，２−ジフルオロ−２−フェニルエチル）オキシ］−５−｛［（１Ｓ）−１−メチル−２−（メチルオキシ）エチル］オキシ｝フェニル）カルボニル］アミノ｝ピリジン−３−カルボン酸
６−［（｛３−［（２，２−ジフルオロ−２−フェニルエチル）オキシ］−５−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝カルボニル）アミノ］ピリジン−３−カルボン酸
６−｛［（３−［（２−シクロペンチリデンエチル）オキシ］−５−｛［（１Ｓ）−１−メチル−２−（メチルオキシ）エチル］オキシ｝フェニル）カルボニル］アミノ｝ピリジン−３−カルボン酸
６−｛［（３−（２−シクロペンチリデンエチル）オキシ］−５−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝カルボニル）アミノ］ピリジン−３−カルボン酸
またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ。
【００４１】
本発明の化合物は、プロドラッグの形状において投与されてもよい。プロドラッグは本発明の化合物を生じるために、体内で分解可能である、バイオプリカーサーまたは薬剤的に受容できる化合物（たとえば、本発明の化合物のエステルまたはアミド、とりわけｉｎ  ｖｉｖｏで加水分解可能なエステル）である。種々の形状のプロドラッグが当該技術分野で公知である。そのようなプロドラッグ誘導体の例については、以下を参照されたい；
ａ）Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ、Ｈ．  Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５）およびＭｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，４２巻，ｐ．３０９-３９６，Ｋ．  Ｗｉｄｄｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．編（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８５）；
ｂ）Ａ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｋｒｏｇｓｇａａｒｄ-Ｌａｒｓｅｎ編；
ｃ）Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，５章“Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ”，Ｈ．  Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編  ｐ．１１３-１９１（１９９１）；
ｄ）Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，８，１-３８（１９９２）；
ｅ）Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，７７，２８５（１９８８）；および
ｆ）Ｎ．Ｋａｋｅｙａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ，３２，６９２（１９８４）。
【００４２】
先に引用した文献の内容は参照として本明細書に援用される。
プロドラッグの例は、以下のとおりである。カルボキシまたはヒドロキシ基を含有する本発明の化合物のｉｎ−ｖｉｖｏでの加水分解可能なエステルは、たとえば、ヒトまたは動物体中で加水分解されて親酸またはアルコールを生じる、薬剤的に受容できるエステルである。適切な薬剤的に受容できるカルボキシのエステルには、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシメチルエステル、たとえばメトキシメチル、Ｃ１〜６アルカノイルオキシメチルエステル、たとえばピバロイルオキシメチル、フタリジルエステル、Ｃ３〜８シクロアルコキシカルボニルオキシＣ１〜６アルキルエステル、たとえば１−シクロヘキシルカルボニルオキシエチル；１，３−ジオキソレン−２−オニルメチルエステル、たとえば５−メチル−１，３−ジオキソレン−２−オニルメチル；およびＣ１〜６アルコキシカルボニルオキシエチルエステルが挙げられる。
【００４３】
ヒドロキシ基を含有する、本発明の化合物のｉｎ−ｖｉｖｏでの加水分解可能なエステルには、無機エステル、たとえばホスフェートエステル（ホスホロアミド環状エステルを含む）およびα−アシルオキシアルキルエステルならびに関連化合物が挙げられ、それらはエステルのｉｎ−ｖｉｖｏ加水分解の結果として、分解し、親ヒドロキシ基（または複数の基）を生じる。α−アシルオキシアルキルエステルの例としては、アセトキシメトキシ、および２，２−ジメチルプロピオニルオキシ‐メトキシが挙げられる。ヒドロキシについて選ばれたｉｎ−ｖｉｖｏ加水分解可能なエステル形成基としては、アルカノイル、ベンゾイル、フェニルアセチルならびに置換されたベンゾイルおよびフェニルアセチル、アルコキシカルボニル（アルキルカーボネートエステルを生じる）、ジアルキルカルバモイルおよびＮ−（ジアルキルアミノエチル）−Ｎ−アルキルカルバモイル（カーバメートを生じる）、ジアルキルアミノアセチルならびにカルボキシアセチルが挙げられる。
【００４４】
本発明の化合物の適切な薬剤的に受容できる塩としては、たとえば、十分に塩基性である、本発明の化合物の酸‐付加塩、たとえば、無機または有機酸、たとえば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸またはマレイン酸との酸‐付加塩が挙げられる。さらに、十分に酸性である、本発明のベンゾキサジノン誘導体の適切な薬剤的に受容できる塩としては、アルカリ金属塩、たとえばナトリウムまたはカリウム塩、アルカリ土類金属塩、たとえばカルシウムまたはマグネシウム塩、アンモニウム塩または生理的に受容できるカチオンを生じる有機塩基との塩、たとえばメチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、ピペリジン、モルホリンまたはトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミンとの塩が挙げられる。
【００４５】
本発明の別の態様は、先に定義した式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）もしくは（Ｉｅ）の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを、薬剤的に受容できる希釈剤またはキャリアと一緒に含有する医薬組成物である。
【００４６】
本発明の別の側面に従って、薬物として使用のための、先に定義した式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）または（Ｉｅ）の化合物が提供される。
さらに本発明に従って、ＧＬＫを介して媒介される疾患、とりわけ２型糖尿病の治療のための薬物の製造における使用のための式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）または（Ｉｅ）の化合物が提供される。
【００４７】
化合物は、このようにして使用するための医薬組成物として適切に製剤される。
本発明の別の側面に従って、ＧＬＫ媒介疾患、とりわけ糖尿病の治療が必要な哺乳動物に、有効量の式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）もしくは（Ｉｅ）の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを投与することによる、かかる疾患を治療する方法が提供される。
【００４８】
本発明の化合物または組成物により治療することができる具体的な疾患としては次のものが挙げられる：２型糖尿病における血糖の低下であって重い血糖低下のリスク（および１型を治療する可能性）がないもの、脂質代謝異常、肥満、インスリン耐性、メタボリックシンドロームＸ、耐糖性障害。
【００４９】
先に検討したように、したがってＧＬＫ／ＧＬＫＲＰ系は、（糖尿病と肥満の両方に利点を有する）潜在的な“ダイアベシティー”標的として記載することができる。したがって、本発明の別の側面に従って、糖尿病と肥満の組み合わせた治療または予防における使用のための薬物の製造における、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）もしくは（Ｉｅ）の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグの使用が提供される。
【００５０】
本発明の別の側面に従って、肥満の治療または予防における使用のための薬物の製造における、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）もしくは（Ｉｅ）の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグの使用が提供される。
【００５１】
本発明のさらに別の側面に従って、肥満および糖尿病の組み合わせ治療が必要な哺乳動物に、有効量の式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）もしくは（Ｉｅ）の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを投与することによる、かかる治療のための方法が提供される。
【００５２】
本発明のさらに別の側面に従って、肥満の治療が必要な哺乳動物に、有効量の式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）もしくは（Ｉｅ）の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを投与することによる、かかる治療のための方法が提供される。
【００５３】
本発明の組成物は、経口用途（たとえば錠剤、トローチ剤、硬もしくは軟カプセル剤、水性もしくは油性懸濁剤、乳濁剤、分散性粉末剤もしくは顆粒剤、シロップ剤またはエリキシル剤として）、局所用途（たとえば、クリーム剤、軟膏剤、ゲル剤、または水性もしくは油性溶液もしくは懸濁液として）、吸入による投与（たとえば微細に分割された粉末または液体エアゾールとして）、通気による投与（たとえば微細に分割された粉末として）または非経口投与（たとえば、静脈内、皮下、筋肉内もしくは筋肉内投与のための滅菌水性もしくは油性溶液として、または直腸内投与のための坐剤として）に適した形状中にあってもよい。
【００５４】
本発明の組成物は当該技術分野で公知の、慣用の医薬添加剤を使用して、慣用の手順によって得ることができる。したがって、経口用途を意図した組成物は、たとえば１種以上の着色剤、甘味剤、香味剤および／または保存剤を含んでいてもよい。
【００５５】
錠剤製剤のための適切な薬剤的に受容できる添加剤には、たとえば不活性希釈剤、たとえばラクトース、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウムまたは炭酸カルシウム、造粒および崩壊剤、たとえばコーンスターチまたはアルギン酸；結合剤、たとえばデンプン；潤滑剤、たとえばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルク；保存剤、たとえばエチルまたはプロピルｐ−ヒドロキシベンゾエート、および酸化防止剤、たとえばアスコルビン酸が挙げられる。錠剤製剤は、消化管内でのそれらの崩壊およびその後の活性成分の吸収を調節するか、またはそれらの安定性および／または外観を改善するかのいずれかのために被覆されなくても、被覆されてもよく、いずれの場合においても、当該技術分野で公知の慣用の被覆剤および手順を使用する。
【００５６】
経口用途のための組成物は、活性成分が不活性な固体希釈剤、たとえば炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリンと混合している硬ゼラチンカプセル剤の形状中にあってもよく、または活性成分が水またはオイル、たとえばピーナツオイル、流動パラフィン、またはオリーブオイルと混合している軟ゼラチンカプセル剤として存在してもよい。
【００５７】
水性懸濁剤は一般に、１種以上の懸濁化剤、たとえばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニル‐ピロリドン、トラガカントゴムおよびアラビアゴム；分散または湿潤剤、たとえばレシチンまたは脂肪酸とアルキレンオキシドとの縮合産物（たとえばポリオキシエチレンステアレート）、または長鎖脂肪族アルコールとエチレンオキシドの縮合産物、たとえばヘプタデカエチレンオキシセタノール、または脂肪酸とヘキシトールに由来する部分エステルとエチレンオキシドの縮合産物、たとえばポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート、または長鎖脂肪族アルコールとエチレンオキシドの縮合産物、たとえばヘプタデカエチレンオキシセタノール、または脂肪酸とヘキシトールに由来する部分エステルとエチレンオキシドの縮合産物、たとえばポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート、または脂肪酸と無水ヘキシトールに由来する部分エステルとエチレンオキシドの縮合産物、たとえば、ポリエチレンソルビタンモノオレエートと一緒に、微細な粉末にされた形状中に活性成分を含有する。水性懸濁剤はまた、１種以上の保存剤（たとえば、エチルまたはプロピルｐ−ヒドロキシベンゾエート）、酸化防止剤（たとえばアスコルビン酸）、着色剤、香味剤、および／または甘味剤（たとえばショ糖、サッカリンまたはアスパルテーム）を含んでいてもよい。
【００５８】
油性懸濁剤は植物油（たとえば落花生油、オリーブ油、ゴマ油またはココナッツ油）または鉱物油（たとえば流動パラフィン）中に活性成分を懸濁することにより製剤してもよい。油性懸濁剤はまた、造粘剤、たとえば蜜蝋、硬パラフィンまたはセチルアルコールを含有していてもよい。先に示したような甘味剤、および香味剤を添加して、風味のよい経口製剤を提供してもよい。これらの組成物は、アスコルビン酸のような酸化防止剤の添加によって保存することができる。
【００５９】
水の添加による水性懸濁剤の製造に適した分散性粉末剤または顆粒剤は一般に、分散または湿潤剤、懸濁化剤および１以上の保存剤と一緒に活性成分を含有する。適切な、分散または湿潤剤、および懸濁化剤はすでに先に述べたものによって例示されている。付加的な添加剤、たとえば甘味剤、香味剤および着色剤が存在してもよい。
【００６０】
本発明の医薬組成物はまた、水中油型乳剤の形状であってもよい。油相は植物油、たとえばオリーブ油または落花生油、もしくは鉱物油、たとえば流動パラフィン、またはこれらのいずれかの混合物であってもよい。適切な乳化剤は、たとえば、天然に存在するゴム、たとえば、アラビアゴムまたはトラガカントゴム、天然に存在するホスファチド、たとえばダイズ、レシチン、脂肪酸と無水ヘキシトールに由来するエステルおよび部分エステル（たとえば、ソルビタンモノオレエート）および上記の部分エステルとエチレンオキシドの縮合産物、たとえばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートであってもよい。乳剤はまた、甘味剤、香味剤および保存剤を含んでいてもよい。
【００６１】
シロップ剤およびエリキシル剤は甘味剤、たとえばグリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール、アスパルテームまたはショ糖と一緒に製剤されてもよく、そして粘滑剤、保存剤、香味および／または着色剤を含んでいてもよい。
【００６２】
医薬組成物はまた、滅菌注射用水性または油性懸濁剤の形状であってもよく、それらは先に述べられている１種以上の適切な分散または湿潤剤および懸濁化剤を使用して、公知の手順に従って製剤されてもよい。滅菌注射用製剤はまた、非毒性の非経口的に受容できる希釈剤または溶媒中の滅菌注射用溶液または懸濁液、たとえば１，３−ブタンジオール中の溶液であってもよい。
【００６３】
吸入による投与のための組成物は、微細に分割された固体を含有するエアゾールまたは液体小滴いずれかとして活性成分を投薬するように準備された、慣用の加圧エアゾールの形状中にあってもよい。慣用のエアゾール噴射剤、たとえば揮発性フッ素化炭化水素または炭化水素が使用されてもよく、そしてエアゾール装置は、活性成分の計量された量を投薬するように、都合よく準備される。
【００６４】
製剤に関するそれ以上の情報については、読者はＣｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｃｏｒｗｉｎ  Ｈａｎｓｃｈ；編集委員長），Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ  １９９０の５巻、２５．２章を参照されたい。
【００６５】
単一剤形を製造するために１種以上の添加剤と組み合わせた活性成分の量は、治療される受容者および具体的な投与経路に依存して必然的に変化することになる。たとえば、ヒトへの経口投与を意図した製剤は一般に、適切で都合のよい添加剤の量と一緒に調合された０．５ｍｇ〜２ｇまでの活性剤を含有することになり、そのような添加剤は全組成物の重量の５〜９８パーセントまで変化してもよい。単位剤形は一般に、約１ｍｇ〜約５００ｍｇの活性成分を含有することになる。投与経路および投与計画に関するそれ以上の情報については、読者はＣｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｃｏｒｗｉｎ  Ｈａｎｓｃｈ；編集委員長），Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ  １９９０の５巻、２５．３章を参照されたい。
【００６６】
式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）または（Ｉｅ）の化合物の治療または予防目的のための投与量のサイズは、医薬品の公知の原則に従って、状態の性質および重症度、動物または患者の年齢および性、ならびに投与経路に従って自然に変化することになる。
【００６７】
式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）または（Ｉｅ）の化合物を治療または予防目的に使用することにおいて、分割された投与量が必要な場合、それはたとえば体重１ｋｇにつき、０．５ｍｇ〜７５ｍｇの範囲で１日投与量が受け取れるように投与される。一般に、非経口経路が使用される場合、より少ない投与量が投与されることになる。したがって、たとえば、静脈内投与の場合、体重１ｋｇにつき、０．５ｍｇ〜３０ｍｇの範囲の投与量が一般に使用されることになる。同様に、吸入による投与の場合、体重１ｋｇにつき、０．５ｍｇ〜２５ｍｇの範囲の投与量が使用されることになる。しかし、経口投与が好ましい。
【００６８】
本明細書に記載されたＧＬＫ活性を高めるは、単独の療法として適用してもよく、または本発明の主題に加え、１種以上の別の物質および／または処置を包含してもよい。そのような共同治療は処置の個々の成分の同時、連続または別個の投与により行うことができる。同時治療は単一の錠剤または別々の錠剤の状態であってもよい。たとえば、糖尿病の治療では、化学療法は以下の主要な治療カテゴリーを包含することができる：
１）インスリンおよびインスリン類似体；
２）スルホニルウレア（たとえばグリベンクラミド、グリピジド）、食事グルコース調節剤（たとえばレパグリニド、ナテグリニド）を含む、インスリン分泌促進剤；
３）インクレチン作用を改善する物質（たとえばジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害剤、およびＧＬＰ−１アゴニスト）；
４）ＰＰＡＲガンマアゴニストを含むインスリン増感剤（たとえばピオグリタゾンおよびロシグリタゾン）、およびＰＰＡＲアルファおよびガンマ活性を併せ持つ物質；
５）肝グルコースバランスを調節する物質（たとえば、メトホルミン、フラクトース、１，６−ビスホスファターゼ阻害剤、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤、グリコーゲンシンターゼキナーゼ阻害剤）；
６）腸からのグルコースの吸収を減少させるように設計された物質（たとえばアカルボース）；
７）腎臓によるグルコースの再吸収を妨害する物質（ＳＧＬＴ阻害剤）；
８）長期高血糖症の合併症を治療するように設計された物質（たとえば、アルドースレダクターゼ阻害剤）；
９）抗‐肥満剤（たとえばシブトラミンおよびオルリスタット）；
１０）抗‐脂質代謝異常剤、たとえばＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤（たとえばスタチン）；ＰＰＡＲαアゴニスト（フィブレート、たとえばゲムフィブロジル）；胆汁酸隔離剤（コレスチラミン）；コレステロール吸収阻害剤（植物スタノール、合成阻害剤）；胆汁酸吸収阻害剤（ＩＢＡＴｉ）ならびにニコチン酸および類似体（ナイアシンおよび徐放製剤）；
１１）抗高血圧剤、たとえばβブロッカー（たとえばアテノロール、インデラル）；ＡＣＥ阻害剤（たとえばリシノプリル）；カルシウムアンタゴニスト（たとえばニフェジピン）；アンギオテンシン受容体アンタゴニスト（たとえばカンデサルタン）、αアンタゴニストおよび利尿剤（たとえばフロセミド、ベンズチアジド）；
１２）鬱血調節剤、たとえば抗血栓剤、線維素溶解の活性化剤および抗血小板剤；トロンビンアンタゴニスト；第Ｘａ因子阻害剤；第ＶＩＩａ因子阻害剤）；抗血小板剤（たとえばアスピリン、クロピドグレル）；抗凝固剤（ヘパリンおよび低分子量類似体、ヒルジン）およびワルファリン；
１３）グルカゴンの作用に拮抗する物質；および
１４）抗‐炎症剤、たとえば非ステロイド抗‐炎症剤（たとえば、アスピリン）およびステロイド抗‐炎症剤（たとえばコルチゾン）。
【００６９】
本発明の別の側面に従って、以下に示された実施例の最終生成物として製造される個々の化合物、ならびにその塩、溶媒和物およびプロドラッグが提供される。
本発明の化合物、またはその塩はそのような化合物、または構造的に関連した化合物の製造に適用できることが公知のいずれかの工程によって製造することができる。官能基は、慣用の方法を使用して、保護し、そして脱保護することができる。アミノおよびカルボン酸保護基のような保護基（ならびに製造の方法および最終的な脱保護）の例に関しては、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，２版，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１を参照されたい。
【００７０】
式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）または（Ｉｅ）の化合物の合成の工程は本発明の別の態様として提供される。したがって、本発明の別の側面に従って、以下のことを含む、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）または（Ｉｅ）の化合物の製造のための工程が提供される：
（ａ）式（ＩＩＩａ）の酸または活性化されたその誘導体と式（ＩＩＩｂ）の化合物：
【００７１】
【化１０】
2007519618.tif 000012
【００７２】
［式中、Ｐ１は水素または、Ｃ１〜４アルキル、（好ましくはメチルまたはエチル）のような保護基である］の反応；または
（ｂ）式（ＩＩＩｃ）の化合物：
【００７３】
【化１１】
2007519618.tif 000013
【００７４】
（式中、Ｐ２は保護基である）の脱保護；または
（ｃ）式（ＩＩＩｄ）の化合物と式（ＩＩＩｅ）の化合物：
【００７５】
【化１２】
2007519618.tif 000014
【００７６】
（式中、Ｘ１は脱離基であり、Ｘ２はヒドロキシル基であるか、またはＸ１はヒドロキシル基であり、Ｘ２は脱離基であり、そしてＰ１は水素または保護基である）の反応；または
（ｄ）式（ＩＩＩｆ）の化合物と式（ＩＩＩｇ）の化合物：
【００７７】
【化１３】
2007519618.tif 000015
【００７８】
（式中：Ｘ３は脱離基であり、Ｘ４はヒドロキシル基であるか、またはＸ３はヒドロキシル基であり、Ｘ４は脱離基であり、ここでＰ１は水素または保護基である）の反応；または
（ｅ）式（ＩＩＩｈ）の化合物と式（ＩＩＩｉ）の化合物：
【００７９】
【化１４】
2007519618.tif 000016
【００８０】
（式中：Ｘ５は脱離基であり、そしてＰ１は水素または保護基である）の反応；
およびその後、必要な場合：
ｉ）式（Ｉ）の化合物を別の式（Ｉ）の化合物に変換すること；
ｉｉ）いずれかの保護基を除去すること；
ｉｉｉ）その塩、プロドラッグまたは溶媒和物を形成すること。
【００８１】
工程ａ）〜ｅ）の適切な脱離基は当業者に公知であり、そしてたとえば活性化されたヒドロキシ脱離基（たとえばメシレートおよびトシレート基）およびフルオロ、クロロまたはブロモのようなハロ脱離基が挙げられる。
【００８２】
式（ＩＩＩａ）〜（ＩＩＩｉ）の化合物は市販されているか、または当該技術分野で公知のいずれか都合のよい工程によって、および／または本明細書の実施例に説明されるように製造することができる。一般に、いずれかのアリール−Ｏまたはアルキル−Ｏ結合が、場合により適切な塩基の存在下で、求核置換または金属に触媒される工程によって形成されてもよいことは理解されるであろう。
【００８３】
Ｐ１が保護基である場合、Ｐ１は好ましくはＣ１〜４アルキル、たとえばメチルまたはエチルである、上記の反応の具体的な反応条件は以下のとおりであり、：
工程ａ）‐アミノ基とカルボン酸からアミドを形成するカップリング反応は、当該技術分野で公知である。たとえば、
（ｉ）ＤＭＡＰの存在下、ＤＣＭ、クロロホルムまたはＤＭＦのような適切な溶媒中、室温で、ＥＤＡＣと行われる適切なカップリング反応、たとえばカルボジイミドカップリング反応を使用するもの；または
（ｉｉ）カルボキシル基が、メチレンクロリドのような適切な溶媒の存在下で、オキザリルクロリドとの反応により酸クロリドに活性化される反応。次に酸クロリドはトリエチルアミンまたはピリジンのような、塩基の存在下、クロロホルムまたはＤＣＭのような適切な溶媒中、０℃〜室温の温度で、式ＩＩＩｂの化合物と反応することができる。
工程ｂ）‐脱保護反応は当該技術分野で公知である。Ｐ１の例としてはＣ１〜６アルキルおよびベンジルが挙げられる。Ｐ１がＣ１〜６アルキルである場合、反応はＴＨＦ／水のような適切な溶媒中、水酸化ナトリウムの存在下で行うことができる。
工程ｃ）‐式（ＩＩＩｄ）および（ＩＩＩｅ）の化合物は、ＤＭＦまたはＴＨＦのような適切な溶媒中で、場合により金属触媒、たとえば酢酸パラジウム（ＩＩ）、パラジウム炭素、酢酸銅（ＩＩ）またはヨウ化銅（Ｉ）を使用し、０〜１００℃の範囲の温度で、水素化ナトリウムまたはｔｅｒｔ−ブトキシドカリウムのような塩基と反応することができる；あるいは、式（ＩＩＩｄ）および（ＩＩＩｅ）の化合物は、ＴＨＦまたはＤＣＭのような適切な溶媒中、トリフェニルホスフィンのような適切なホスフィン、およびジエチルアゾジカルボキシレートのようなアゾジカルボキシレートと一緒に反応することができる；
工程ｄ）‐式（ＩＩＩｄ）および（ＩＩＩｅ）の化合物は、ＴＨＦまたはＤＭＦのような適切な溶媒中で、場合により金属触媒、たとえば酢酸パラジウム（ＩＩ）、パラジウム炭素、酢酸銅（ＩＩ）またはヨウ化銅（Ｉ）を使用し、０〜１００℃の範囲の温度で、水素化ナトリウムまたはｔｅｒｔ−ブトキシドカリウムのような塩基と一緒に反応してもよく、あるいは式（ＩＩＩｄ）および（ＩＩＩｅ）の化合物は、ＤＭＦまたはＴＨＦのような適切な溶媒中で、適切なホスフィン、たとえばトリフェニルホスフィン、およびアゾジカルボキシレート、たとえばジエチルアゾジカルボキシレートと一緒に反応してもよい；
工程ｅ）‐式（ＩＩＩｈ）の化合物と式（ＩＩＩｉ）の化合物の反応は、ＤＭＦのような極性溶媒、またはＴＨＦのような非極性溶媒中で、場合により金属触媒、たとえば酢酸パラジウム（ＩＩ）、パラジウム炭素、酢酸銅（ＩＩ）またはヨウ化銅（Ｉ）を使用し、０〜１００℃間の温度で、水素化ナトリウムまたはｔｅｒｔ−ブトキシドカリウムのような強塩基と行うことができる。
【００８４】
製造工程中、分子内の官能基に保護基を使用することが好都合であろう。保護基は、問題となっている保護基の除去に関して文献に記載されているか、または当業者に公知のいずれか都合のよい方法により、適宜除去してもよく、そのような方法は分子のいずれか他の部位の基をできるだけ妨害せずに、保護基を除去するように選択される。
【００８５】
保護基の具体的な例は、便宜上、以下に示され、そこでは“低級”は適用される基が好ましくは１〜４炭素原子を有することを示す。これらの例が網羅的でないことは理解されるであろう。保護基の除去のための具体的な方法が以下に示される場合、これらは同じ様に網羅するものではない。具体的に述べられていない保護基の使用および脱保護の方法は、もちろん本発明の範囲内である。
【００８６】
カルボキシ保護基はエステル形成脂肪族またはアルアリファチックアルコールまたはエステル形成シラノール（上記アルコールまたはシラノールは好ましくは１〜２０炭素原子を含有する）の残基であってもよい。カルボキシ保護の例としては、直鎖または分枝鎖（１〜１２Ｃ）アルキル基（たとえば、イソプロピル、ｔ−ブチル）；低級アルコキシ低級アルキル基（たとえばメトキシメチル、エトキシメチル、イソブトキシメチル；低級脂肪族アシルオキシ低級アルキル基（たとえばアセトキシメチル、プロピオニルオキシメチル、ブチリルオキシメチル、ピバロイルオキシメチル）；低級アルコキシカルボニルオキシ低級アルキル基（たとえば、１−メトキシカルボニルオキシエチル、１−エトキシカルボニルオキシエチル）；アリール低級アルキル基（たとえば、ｐ−メトキシベンジル、ｏ−ニトロベンジル、ｐ−ニトロベンジル、ベンズヒドリルおよびフタリジル）；トリ（低級アルキル）シリル基（たとえばトリメチルシリルおよびｔ−ブチルジメチルシリル）；トリ（低級アルキル）シリル低級アルキル基（たとえば、トリメチルシリルエチル）；および（２〜６Ｃ）アルケニル基（たとえばアリルおよびビニルエチル）が挙げられる。
【００８７】
カルボキシ保護基の除去にとりわけ適切な方法には、たとえば、酸‐、金属‐または酵素‐に触媒される加水分解が挙げられる。
ヒドロキシ保護基の例としては、低級アルケニル基（たとえば、アリル）；低級アルカノイル基（たとえば、アセチル）；低級アルコキシカルボニル基（たとえば、ｔ−ブトキシカルボニル）；低級アルケニルオキシカルボニル基（たとえば、アリルオキシカルボニル）；アリール低級アルコキシカルボニル基（たとえば、ベンゾイルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ｏ−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル）；トリ低級アルキル／アリールシリル基（たとえば、トリメチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル）；アリール低級アルキル基（たとえば、ベンジル）基；およびトリアリール低級アルキル基（たとえばトリフェニルメチル）が挙げられる。
【００８８】
アミノ保護基の例としては、ホルミル、アラルキル基（たとえば、ベンジルおよび置換されたベンジル、たとえばｐ−メトキシベンジル、ニトロベンジルおよび２，４−ジメトキシベンジル、およびトリフェニルメチル）；ジ−ｐ−アニシルメチルおよびフリルメチル基；低級アルコキシカルボニル（たとえばｔ−ブトキシカルボニル）；低級アルケニルオキシカルボニル（たとえばアリルオキシカルボニル）；アリール低級アルコキシカルボニル基（たとえば、ベンジルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ｏ−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル；トリアルキルシリル（たとえば、トリメチルシリル、およびｔ−ブチルジメチルシリル）；アルキリデン（たとえばメチリデン）；ベンジリデンおよび置換されたベンジリデン基が挙げられる。
【００８９】
ヒドロキシおよびアミノ保護基の除去に適切な方法には、たとえば、酸‐、塩基、金属‐もしくは酵素‐に触媒される加水分解、またはｏ−ニトロベンジルオキシカルボニルのような基に対しては光分解、またはシリル基にはフルオリドイオンによるものが挙げられる。
【００９０】
アミド基の保護基の例としては、アラルコキシメチル（たとえば、ベンジルオキシメチルおよび置換されたベンジルオキシメチル）；アルコキシメチル（たとえば、メトキシメチルおよびトリメチルシリルエトキシメチル）；トリアルキル／アリールシリル（たとえば、トリメチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル）；トリアルキル／アリールシリルオキシメチル（たとえば、ｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル、ｔ−ブチルジフェニルシリルオキシメチル）；４−アルコキシフェニル（たとえば、４−メトキシフェニル）；２，４−ジ（アルコキシ）フェニル（たとえば、２，４−ジメトキシフェニル）；４−アルコキシベンジル（たとえば、４−メトキシベンジル）；２，４−ジ（アルコキシ）ベンジル（たとえば、２，４−ジ（メトキシ）ベンジル；およびアルク−１−エニル（たとえば、アリル、ブト−１−エニルおよび置換されたビニル、たとえば２−フェニルビニル）が挙げられる。
【００９１】
アラルコキシメチル基は、アミド基を適切なアラルコキシメチルクロリドと反応させることにより、アミド基に導入し、接触水素添加により除去することができる。アルコキシメチル、トリアルキル／アリールシリルおよびトリアルキル／シリルオキシメチル基は、アミドを適切なクロリドと反応させることにより導入し、酸、またはシリル含有基の場合にはフルオリドイオンにより除去することができる。アルコキシフェニルおよびアルコキシベンジル基は好都合には適切なハロゲン化物によるアリール化またはアルキル化により導入し、セリウムアンモニウムニトレートによる酸化によって除去する。最後に、アルク−１−エニル基は、アミドを適切なアルデヒドと反応させ、酸により除去することができる。
【実施例】
【００９２】
以下の実施例は、説明のためだけであって、本出願の範囲を限定することを意図しない。例示されたそれぞれの化合物は、本発明の具体的で独立した側面を表す。以下の限定的でない実施例では、特記しない限り：
（ｉ）留去はロータリーエバポレーションにより真空下で行い、乾燥剤のような残存する固体の除去後に、ろ過により後処理を行った；
（ｉｉ）操作は１８〜２５℃の範囲の室温において、アルゴンまたは窒素のような不活性ガスの雰囲気下で行った；
（ｉｉｉ）収率は説明のためだけに示し、必ずしも最大収率ではない；
（ｉｖ）式（Ｉ）の最終生成物の構造は、核（一般にプロトン）磁気共鳴（ＮＭＲ）および質量分析技術によって確かめ；プロトン磁気共鳴化学シフト値はデルタスケールで測定し、ピーク多重度は以下のように示す：ｓ、一重項；ｄ、二重項；ｔ、三重項；ｍ、多重項；ｂ、ブロード；ｑ、四重項、ｑｕｉｎ、五重項；
（ｖ）中間体は一般に完全には解析せず、純度は薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、赤外（ＩＲ）またはＮＭＲ分析によって評価した； 
（ｖｉ）Ｉｓｏｌｕｔｅシリカカートリッジは、Ｆｌａｓｈｍａｓｔｅｒ  ２システム；Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｈｅｎｇｏｅｄ，  Ｍｉｄ  Ｇｌａｍｏｒｇａｎ，  Ｗａｌｅｓ  ＵＫ  ＣＦ８２  ８ＡＵを使用して溶出されるＩＳＴ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｏｒｂｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ），Ｈｅｎｇｏｅｄ，Ｍｉｄ  Ｇｌａｍｏｒｇａｎ，Ｗａｌｅｓ  ＵＫ，ＣＦ８２  ７ＲＪのプレパックシリカカートリッジ（１ｇ〜７０ｇまで）を表す。
【００９３】
（ｖｉｉ）Ｂｉｏｔａｇｅカートリッジは、ｂｉｏｔａｇｅポンプおよびフラクションコレクター系を使用して溶出される、プレパックシリカカートリッジ（４０ｇ〜４００ｇまで）；Ｂｉｏｔａｇｅ  ＵＫ  Ｌｔｄ，Ｈｅｒｔｆｏｒｄ，Ｈｅｒｔｓ，ＵＫを表す。
【００９４】
（ｖｉｉｉ）セライトは珪藻土を表す。
略語
ＤＣＭ          ジクロロメタン；
ＤＥＡＤ        ジエチルジアゾカルボキシレート；
ＤＩＡＤ        ジ−ｉ−プロピルアゾジカルボキシレート；
ＤＩＰＥＡ      ジ−イソプロピルエチルアミン
ＤＭＳＯ        ジメチルスルホキシド；
ＤＭＦ          ジメチルホルムアミド；
ＥＤＡＣ        １−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド
塩酸塩；
LCMS          液体クロマトグラフィー／質量分析；
RT              室温；および
THF            テトラヒドロフラン。
【００９５】
実施例１
６−｛［（３−［（２，２−ジフルオロ−２−フェニルエチル）オキシ］−５−｛［（１Ｓ）−１−メチル−２−（メチルオキシ）エチル］オキシ｝フェニル）カルボニル］アミノ｝ピリジン−３−カルボン酸
【００９６】
【化１５】
2007519618.tif 000017
【００９７】
ＴＨＦ（５ｍｌ）中のメチル６−｛［（３−［（２，２−ジフルオロ−２−フェニルエチル）オキシ］−５−｛［（１Ｓ）−１−メチル−２−（メチルオキシ）エチル］オキシ｝フェニル）カルボニル］アミノ｝ピリジン−３−カルボキシレート（３７５ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）の溶液に、蒸留水（１．９ｍＬ）および水酸化ナトリウム溶液（１Ｍを１．９ｍｌ、約２．５当量）を添加した。溶解度を高めるためにメタノール（２滴）を添加し、混合物を周囲温度で２時間撹拌した。反応混合物は塩酸（１Ｍを１．９ｍｌ）で中和し、ＴＨＦは真空下で部分的に除去し；さらに水を添加し、得られた固体をろ過し、さらに蒸留水で洗浄した。部分的に乾燥した後、固体をアセトニトリル（４ｍｌ）に懸濁し、約１時間、穏やかに撹拌し；固体をろ過し、さらにアセトニトリルで洗浄し、乾燥して、６−｛［（３−［（２，２−ジフルオロ−２−フェニルエチル）オキシ］−５−｛［（１Ｓ）−１−メチル−２−（メチルオキシ）エチル］オキシ｝フェニル）カルボニル］アミノ｝ピリジン−３−カルボン酸を無色固体として得た。
１ＨＮＭＲd（ｄ６−ＤＭＳＯ）：１．２（ｄ，３Ｈ），３．２５（ｓ，３Ｈ），３．４−３．５５（ｍ，２Ｈ），４．６-４．８（ｍ，３Ｈ），６．７５（ｍ，１Ｈ），７．２５（ｄ，２Ｈ），７．５５（ｍ，３Ｈ），７．６５（ｍ，２Ｈ），８．３（ｓ，２Ｈ），８．８５（ｓ，１Ｈ），１１．０５（ｂｒｓ，１Ｈ）；
ｍ／ｚ４８７（Ｍ＋Ｈ）＋，４８５（Ｍ−Ｈ）−
実施例１の製造のための中間体は下記のスキーム：
【００９８】
【化１６】
2007519618.tif 000018
【００９９】
に従って、以下に記載のように製造した：
メチル６−｛［（３−［（２，２−ジフルオロ−２−フェニルエチル）オキシ］−５−｛［（１Ｓ）−１−メチル−２−（メチルオキシ）エチル］オキシ｝フェニル）カルボニル］アミノ｝ピリジン−３−カルボキシレート
【０１００】
【化１７】
2007519618.tif 000019
【０１０１】
アセトン（７ｍｌ）およびＤＭＦ（２ｍＬ）中のメチル６−｛［（３−ヒドロキシ−５−｛［（１Ｓ）−１−メチル−２−（メチルオキシ）エチル］オキシ｝フェニル）カルボニル］アミノ｝ピリジン−３−カルボキシレート（３６０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の溶液は、炭酸カリウム（４１４ｍｇ、３ｍｍｏｌ、３当量）および２，２−ジフルオロ−２−フェニルエチルトリフルオロメタンスルホネート（４３２ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ、１．５当量）で順次処理した。得られた懸濁液は、付加的なスルホネート試薬（２日にわたり２５０ｍｇを２回）を添加しながら、周囲温度で３日間撹拌した。
【０１０２】
反応混合物はエチルアセテートで希釈し、水（２回）およびブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、留去して茶色オイルとして粗生成物（１ｇ）を得た。これをクロマトグラフィー（１０ｇＩｓｏｌｕｔｅシリカカートリッジ，１５％〜２０％に増加するエチルアセテートを含有するヘキサンで溶出）にかけ、無色ゴム状物として、メチル６−｛［（３−［（２，２−ジフルオロ−２−フェニルエチル）オキシ］−５−｛［（１Ｓ）−１−メチル−２−（メチルオキシ）エチル］オキシ｝フェニル）カルボニル］アミノ｝ピリジン−３−カルボキシレートを得た。
１ＨＮＭＲd（ｄ６−ＤＭＳＯ）：１．２（ｄ，３Ｈ），３．２５（ｓ，３Ｈ），３．４−３．５（ｍ，２Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），４．６−４．８（ｍ，３Ｈ），６．８（ｓ，１Ｈ），７．２５（ｄ，２Ｈ），７．５５（ｍ，３Ｈ），７．６５（ｍ，２Ｈ），８．３５（ｓ，２Ｈ），８．９（ｓ，１Ｈ），１１．１（ｂｒｓ，１Ｈ）；
ｍ／ｚ４９９（Ｍ＋Ｈ）＋，５０１（Ｍ−Ｈ）−
メチル６−｛［（３−ヒドロキシ−５−｛［（１Ｓ）−１−メチル−２−（メチルオキシ）エチル］オキシ｝フェニル）カルボニル］アミノ｝ピリジン−３−カルボキシレート
【０１０３】
【化１８】
2007519618.tif 000020
【０１０４】
ＴＨＦ（８５ｍＬ）中のメチル６−［（｛３−｛［（１Ｓ）−１−メチル−２−（メチルオキシ）エチル］オキシ｝−５−［（フェニルメチル）オキシ］フェニル｝カルボニル）アミノ］ピリジン−３−カルボキシレート（０．０３８ｍｏｌ）の撹拌溶液に、メタノール（８５ｍＬ）を添加した。パラジウムチャコール触媒（１０％ｗ／ｗを１．７ｇ）をアルゴン雰囲気下で添加し、得られた懸濁液は水素雰囲気中で、一晩、周囲温度で撹拌した。触媒はセライトでろ過し、ＴＨＦで洗浄し、ろ液を留去して、薄茶色の固体を得た。これをエーテルで粉砕して所望する化合物（収率７２％）を得た。
１ＨＮＭＲd（ｄ６−ＤＭＳＯ）：１．２５（ｄ，３Ｈ），３．３（ｓ，３Ｈ），３．４５（ｍ，２Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），４．６５（ｍ，１Ｈ），６．５５（ｍ，１Ｈ），６．９５（ｍ，１Ｈ），７．１（ｍ，１Ｈ），８．３（ｍ，２Ｈ），８．９（ｍ，１Ｈ），１１．０，（ｓ，１Ｈ）．
ｍ／ｚ３６１（Ｍ＋Ｈ）＋，３５９（Ｍ−Ｈ）−
メチル６−［（｛３−｛［（１Ｓ）−１−メチル−２−（メチルオキシ）エチル］オキシ｝−５［（フェニルメチル）オキシ］フェニル｝カルボニル）アミノ］ピリジン−３−カルボキシレート
【０１０５】
【化１９】
2007519618.tif 000021
【０１０６】
ＤＭＦ（１ｍＬ）を含有するＤＣＭ（２５０ｍＬ）中の３−｛［（１Ｓ）−１−メチル−２−（メチルオキシ）エチル］オキシ｝−５−［（フェニルメチル）オキシ］安息香酸（７５．９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、アルゴン下でオキザリルクロリド（１５１．７ｍｍｏｌ）を滴下して加え、得られた溶液を４時間撹拌した。次に溶液を真空下で留去し、さらに
ＤＣＭ（３ｘ１００ｍＬ）と共沸させ、残渣を高真空下で乾燥し、酸クロリドを得て、性状を調べずにそれを使用した。
【０１０７】
上記の酸クロリド（約７５．９ｍｍｏｌ）はＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶解し、アルゴン下でＴＨＦ（１００ｍＬ）およびピリジン（１００ｍＬ）混合物中のメチル６−アミノニコチネート（９１．1ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に添加した。反応混合物は一晩撹拌し、その後溶媒の大部分を真空下で除去した。残渣はエチルアセテート（２５０ｍＬ）に溶解し、懸濁液は１Ｍクエン酸（２回、洗浄液が酸性になるまで）およびブラインで順次洗浄し；得られた溶液は乾燥（ＭｇＳＯ４）し、留去して茶色のゴム状物として粗生成物を得た。これをクロマトグラフィー（４００ｇＢｉｏｔａｇｅシリカカートリッジ、２０％ｖ／ｖエチルアセテートを含有するヘキサンで溶出）にかけ、所望する化合物を得た（収率５０％）。
１ＨＮＭＲd（ｄ６−ＤＭＳＯ）：１．２１（ｄ，３Ｈ），３．４７（ｍ，２Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），３．７２（ｍ，１Ｈ），５．１６（ｓ，２Ｈ），６．７８（ｔ，１Ｈ），７．２３（ｓ，１Ｈ），７．２９（ｓ，１Ｈ），７．３１−７．４９（ｍ，５Ｈ），８．３２（ｓ，２Ｈ），８．９０（見かけ上ｔ，１Ｈ），１１．１５（ｓ，１Ｈ）。
ｍ／ｚ４５１．５（Ｍ＋Ｈ）＋，４４９．５（Ｍ−Ｈ）−
３−｛［（１Ｓ）−１−メチル−２−（メチルオキシ）エチル］オキシ｝−５−［（フェニルメチル）オキシ］安息香酸
【０１０８】
【化２０】
2007519618.tif 000022
【０１０９】
ＴＨＦ（２３２ｍＬ）およびメタノール（２３２ｍＬ）の混合物中のメチル３−｛［（１Ｓ）−１−メチル−２−（メチルオキシ）エチル］オキシ｝−５−［（フェニルメチル）オキシ］ベンゾエート（７７．４ｍｍｏｌ）の溶液は、水酸化ナトリウム（２Ｎ）（２３２ｍｍｏｌ）の溶液で処理し、反応混合物は周囲温度で４時間撹拌した。得られた溶液は水（２５０ｍＬ）で希釈し、大部分の有機溶媒は真空下で除去した。得られた懸濁液はジエチルエーテル（３ｘ２００ｍＬ）で洗浄し、洗浄液は廃棄した。得られた水溶液は塩酸溶液（２Ｍ）でｐＨ４に酸性化し、エチルアセテート（２ｘ２００ｍＬ）で抽出し、抽出物を合わせてブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、留去して所望する化合物（収率９９％）を得た。
１ＨＮＭＲd（ｄ６−ＤＭＳＯ）：１．２０（ｄ，３Ｈ），３．４６（ｍ，２Ｈ），４．６４（ｍ，１Ｈ），５．１５（ｓ，２Ｈ），６．８３（見かけ上ｔ，１Ｈ），７．０６（ｓ，１Ｈ），７．１３（ｓ，１Ｈ），７．３０−７．４９（ｍ，５Ｈ），１２．６７（ｂｒｓ，１Ｈ）。
メチル３−｛［（１Ｓ）−１−メチル−２−（メチルオキシ）エチル］オキシ｝−５−［（フェニルメチル）オキシ］ベンゾエート
【０１１０】
【化２１】
2007519618.tif 000023
【０１１１】
ＴＨＦ中のメチル３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］ベンゾエート（７７．４ｍｍｏｌ）の溶液に、ポリマーに支持されたトリフェニルホスフィン（３ｍｍｏｌ／ｇ負荷を５１．７ｇ、１５５ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−（−）−１−メトキシ−２−プロパノール（１０２ｍｍｏｌ）を添加した。撹拌溶液はアルゴンで覆い、氷浴で冷やし；ジイソプロピルアゾジカルボキシレート（１１６ｍｍｏｌ）の溶液を１０分間かけてシリンジから滴下して加えた。添加後、溶液を２０分間撹拌し、その後ろ過し、ＴＨＦ（５００ｍＬ）で残渣を洗浄し；ろ液および洗浄液を合わせ、留去して未精製の所望する化合物を得て、それ以上精製せずにそれを次の段階に使用した。
【０１１２】
１ＨＮＭＲd（ｄ６−ＤＭＳＯ）：３．２６（ｓ，３Ｈ），３．４４（ｍ，２Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），４．６３（ｍ，１Ｈ），５．１４（ｓ，２Ｈ），６．８５（ｓ，１Ｈ），７．０５（ｓ，１Ｈ），７．１１（ｓ，１Ｈ），７．３０−７．４７（ｍ，５Ｈ）；スペクトルは少量のビス（１−メチルエチル）ヒドラジン−１，２−ジカルボキシレートに一致するシグナルも含有した。
メチル３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］ベンゾエート
【０１１３】
【化２２】
2007519618.tif 000024
【０１１４】
ＤＭＦ（６Ｌ）中のメチル３，５−ジヒドロキシベンゾエート（５．９５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、炭酸カリウム（９ｍｏｌ）を添加し、懸濁液はアルゴン下、周囲温度で撹拌した。これに、ベンジルブロミド（８．４２ｍｏｌ）を１時間かけて、わずかに発熱反応を伴いながら、ゆっくり添加し、反応混合物は周囲温度で一晩撹拌した。それを塩化アンモニウム溶液（５Ｌ）続いて水（３５Ｌ）で注意深く冷やした。水性懸濁液はＤＣＭ（１ｘ３Ｌおよび２ｘ５Ｌ）で抽出した。合わせた抽出物は水（１０Ｌ）で洗浄し、一晩乾燥（ＭｇＳＯ４）した。溶液は真空下で留去し、粗生成物は３バッチでクロマトグラフィー（フラッシュカラム、３ｘ２ｋｇシリカ、１０％ＤＣＭを含有するヘキサン、純粋なＤＣＭ、５０％エチルアセテートを含有するＤＣＭからなるグラジエントで溶出）にかけ、出発物質を除去し；次に未精製の溶出液を１７５ｇバッチでクロマトグラフィー（ＡｍｉｃｏｎＨＰＬＣ、５ｋｇ順相シリカ、２０％ｖ／ｖエチルアセテートを含有するイソ‐ヘキサンで溶出）にかけ、所望する化合物（収率２１％）を得た。
１ＨＮＭＲd（ｄ６−ＤＭＳＯ）：３．８（ｓ，３Ｈ），５．１（ｓ，２Ｈ），６．６５（ｍ，１Ｈ），７．０（ｍ，１Ｈ），７．０５（ｍ，１Ｈ），７．３−７．５（ｍ，５Ｈ），９．８５（ｂｒｓ，１Ｈ）。
【０１１５】
必要な出発物質２，２−ジフルオロ−２−フェニルエチルトリフルオロメタンは下記のスキーム： 
【０１１６】
【化２３】
2007519618.tif 000025
【０１１７】
に従って、以下に記載のように製造した：
２，２−ジフルオロ−２−フェニルエチルトリフルオロメタンスルホネート
【０１１８】
【化２４】
2007519618.tif 000026
【０１１９】
冷却し、撹拌したＤＣＭ（５０ｍｌ）中の２，２−ジフルオロ−２−フェニルエタノール（１．６ｇ、１０ｍｍｏｌ）およびジ−イソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ、２．１ｍｌ、１２ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液に、トリフルオロメタン無水スルホン酸（２．０ｍｌ、１２ｍｍｏｌ、１．２当量）を添加し、溶液を２時間撹拌した。さらに、ＤＩＰＥＡ（０．５ｍｌ、３ｍｍｏｌ）および無水トリフル酸（０．５ｍｌ、３ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物をさらに２時間撹拌した。次にそれを水（２回）およびブラインで順次洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、留去して暗茶色オイルとして粗生成物を得た；これをクロマトグラフィー（２０％Ｉｓｏｌｕｔｅシリカカートリッジ、５％ｖ／ｖエチルアセテートを含有するヘキサンで溶出）にかけ、薄茶色オイルとして２，２−ジフルオロ−２−フェニルエチルトリフルオロメタンスルホネートを得て、それを性状解析せずに、すぐに使用した。
【０１２０】
必要な２，２−ジフルオロ−２−フェニルエタノールは、メチルα、αジフルオロフェニルアセテートから出発し、ＷＯ９８／２０８７８に記載された方法に従って製造した（ＷＪ  Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．（１９８０），４５，２８８３−２８８７）。
【０１２１】
先に記載の方法に類似の方法を使用して、実施例１．１がさらに製造された：
【０１２２】
【表１】
2007519618.tif 000027
【０１２３】
特記しない限り、実施例１．１の製造のための適切な中間体は、実施例１の製造のための中間体製造に使用した方法に類似の方法を使用して製造した：
メチル６−｛［（３−（２，２−ジフルオロ−２−フェニルエチル）オキシ］−５−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝カルボニル）アミノ］ピリジン−３−カルボキシレート
【０１２４】
【化２５】
2007519618.tif 000028
【０１２５】
１ＨＮＭＲd（ｄ６−ＤＭＳＯ）：１．２５（ｄ，６Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），４．６-４．８（ｍ，３Ｈ），６．７５（ｍ，１Ｈ），７．２（ｍ，１Ｈ），７．２５（ｍ，１Ｈ），７．４５−７．５５（ｍ，３Ｈ），７．６５（ｍ，２Ｈ），８．３５（ｍ，２Ｈ），８．９（ｓ，１Ｈ），１１．１（ｂｒｓ，１Ｈ）；ｍ／ｚ４７１（Ｍ＋Ｈ）＋
メチル６−［（｛３−ヒドロキシ−５−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝カルボニル）アミノ］ピリジン−３−カルボキシレート
【０１２６】
【化２６】
2007519618.tif 000029
【０１２７】
１ＨＮＭＲd（ｄ６−ＤＭＳＯ）：１．２５（ｄ，６Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），４．６５（ｍ，１Ｈ），６．５５（ｍ，１Ｈ），６．９５（ｍ，１Ｈ），７．１（ｍ，１Ｈ），８．３（ｓ，２Ｈ），８．９（ｓ，１Ｈ），９．７（ｓ，１Ｈ），１１．０，（ｓ，１Ｈ）．
ｍ／ｚ３３１（Ｍ＋Ｈ）＋，３２９（Ｍ−Ｈ）−
メチル６−［（｛３−ベンジルオキシ−５−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝カルボニル）アミノ］ピリジン−３−カルボキシレート
【０１２８】
【化２７】
2007519618.tif 000030
【０１２９】
１ＨＮＭＲd（ｄ６−ＤＭＳＯ）：１．２５（ｄ，６Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），４．７（ｍ，１Ｈ），５．２（ｓ，２Ｈ），６．７５（ｍ，１Ｈ），７．２（ｍ，１Ｈ），７．３−７．５（ｍ，６Ｈ），８．３５（ｓ，２Ｈ），８．９０（ｓ，１Ｈ），１１．１５（ｂｒｓ，１Ｈ）
３−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［（フェニルメチル）オキシ］安息香酸
【０１３０】
【化２８】
2007519618.tif 000031
【０１３１】
１ＨＮＭＲd（ｄ６−ＤＭＳＯ）：１．２５（ｄ，６Ｈ），４．６５（ｍ，１Ｈ），５．１５（ｓ，２Ｈ），６．８（ｍ，１Ｈ），７．０５（ｍ，１Ｈ），７．１５（ｍ，１Ｈ），７．３０〜７．５（ｍ，５Ｈ），１２．９５（ｓｂｒ，１Ｈ）
メチル３−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［（フェニルメチル）オキシ］ベンゾエート
【０１３２】
【化２９】
2007519618.tif 000032
【０１３３】
ＤＭＦ（２５０ｍｌ）中のメチル３−イソプロピルオキシ−５−ジヒドロキシ−ベンゾエート（２５．０ｇ．１１９ｍｍｏｌ）の溶液は、炭酸カリウム（４１．１ｇ、２９７ｍｍｏｌ、２．５当量）およびベンジルブロミド（１７ｍｌ、１４３ｍｍｏｌ、１．２当量）で処理し、得られた懸濁液は６０℃で５時間加熱した。溶媒は真空下で除去し、残渣は水（２００ｍｌ）に懸濁した；これをエチルアセテート（２ｘ２５０ｍｌ）で抽出した。合わせた抽出物は水（４ｘ１５０ｍｌ）およびブライン（２ｘ１００ｍｌ）で順次洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、留去して黄色オイルとしてメチル３−イソプロピルオキシ−５−ベンジルオキシベンゾエート（３７．５ｇ）を得て、それには痕跡量のエチルアセテート、ベンジルアルコールおよびベンジルブロミドが含まれていた。
１ＨＮＭＲd（ｄ６−ＤＭＳＯ）：１．２（ｄ，６Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），４．６５（ｍ，１Ｈ），５．１５（ｓ，２Ｈ），６．８５（ｍ，１Ｈ），７．０５（ｍ，１Ｈ），７．１５（ｍ，１Ｈ），７．３−７．５（ｍ，５Ｈ）。
メチル３−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−ヒドロキシベンゾエート
【０１３４】
【化３０】
2007519618.tif 000033
【０１３５】
１ＨＮＭＲd（ｄ６−ＤＭＳＯ）：１．２（ｄ，６Ｈ），３．８（ｓ，３Ｈ），４．５５（ｍ，１Ｈ），６．５５（ｍ，１Ｈ），６．９（ｍ，１Ｈ），６．９５（ｍ，１Ｈ）。
【０１３６】
実施例２
６−｛［（３−（２−シクロペンチリデンエチル）オキシ］−５−｛［（１Ｓ）−１−メチル−２−（メチルオキシ）エチル］オキシ｝フェニル）カルボニル］アミノ｝ピリジン−３−カルボン酸
【０１３７】
【化３１】
2007519618.tif 000034
【０１３８】
実施例２は実施例１の製造に類似した方法を使用して、対応するエステル、メチル６−｛［（３−（２−シクロペンチリデンエチル）オキシ］−５−｛［（１Ｓ）−１−メチル−２−（メチルオキシ）エチル］オキシ｝フェニル）カルボニル］アミノ｝ピリジン−３−カルボキシレートから製造した。
１ＨＮＭＲd（ｄ６−ＤＭＳＯ）：１．２４（ｓ，３Ｈ），１．５５−１．７２（ｍ，４Ｈ），２．３０（見かけ上ｑ，４Ｈ），３．３０（ｓ，３Ｈ  溶媒ピークにより不明瞭），３．４９（ｑｄ，２Ｈ），４．５７（ｄ，２Ｈ），４．７５（ｍ，１Ｈ），５．５５（ｍ，１Ｈ），６．７０（ｓ，１Ｈ），７．１８（ｓ，１Ｈ），７．２２（ｓ，１Ｈ），８．３１（ｓ，２Ｈ），８．９０（ｓ，１Ｈ），１１．０９（ｓ，１Ｈ），１３．１７（ｓ  ｂｒ，１Ｈ）
ｍ／ｚ４４１．５（Ｍ＋Ｈ）＋，４３９．５（Ｍ−Ｈ）−
実施例２の製造のための中間体は、下記のスキーム： 
【０１３９】
【化３２】
2007519618.tif 000035
【０１４０】
に従って、以下に記載のように製造した：
メチル６−｛［（３−（２−シクロペンチリデンエチル）オキシ］−５−｛［（１Ｓ）−１−メチル−２−（メチルオキシ）エチル］オキシ｝フェニル）カルボニル］アミノ｝ピリジン−３−カルボキシレート
【０１４１】
【化３３】
2007519618.tif 000036
【０１４２】
ＤＣＭ（３０ｍｌ）中のメチル６−｛［（３−ヒドロキシ−５−｛［（１Ｓ）−１−メチル−２−（メチルオキシ）エチル］オキシ｝フェニル）カルボニル］アミノ｝ピリジン−３−カルボキシレート（９００ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）、２−シクロペンチリデンエタノール（３８２ｍｇ、３．４ｍｍｏｌ、１．４当量）およびポリマーに支持されたトリフェニルホスフィン（およそ３ｍｍｏｌ／ｇ、１．５ｇ、およそ３当量）の撹拌懸濁液に、アルゴン下で、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルアゾジカルボキシレート（ＤＴＡＤ、１．２９ｇ、５．６ｍｍｏｌ、２．２当量）を添加し、反応混合物は周囲温度で一晩撹拌した。レジンはろ過により除去し、エチルアセテートおよびＴＨＦで洗浄し；ろ液および洗浄液を合わせて真空下で留去し、残渣を粉砕（エーテル／イソヘキサン１：１）してメチル６−｛［（３−（２−シクロペンチリデンエチル）オキシ］−５−｛［（１Ｓ）−１−メチル−２−（メチルオキシ）エチル］オキシ｝フェニル）カルボニル］アミノ｝ピリジン−３−カルボキシレートを得た。
１ＨＮＭＲd（ｄ６−ＤＭＳＯ）：１．２２（ｄ，３Ｈ），１．６０（ｍ，４Ｈ），２．２９（ｄ，４Ｈ），３．３（ｓ，３Ｈ），３．４７（ｍ，２Ｈ），３．４５（ｄ，２Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），４．７１（ｍ，１Ｈ），５．５３（ｍ，１Ｈ），６．６８（ｍ，１Ｈ），７．１８（ｓ，１Ｈ），７．２０（ｓ，１Ｈ），８．３３（ｓ，２Ｈ），８．９０（ｓ，１Ｈ），１１．１２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）
ｍ／ｚ４５５．５（Ｍ＋Ｈ）＋
メチル６−｛［（３−ヒドロキシ−５−｛［（１Ｓ）−１−メチル−２−（メチルオキシ）エチル］オキシ｝フェニル）カルボニル］アミノ｝ピリジン−３−カルボキシレート
【０１４３】
【化３４】
2007519618.tif 000037
【０１４４】
これは上記の実施例１の中間体に記載されたとおりに製造した。
２−シクロペンチリデンエタノール
【０１４５】
【化３５】
2007519618.tif 000038
【０１４６】
これは国際特許出願番号ＷＯ０１／６８６０３、６３ページに記載されたとおりに製造した。
先に記載の方法に類似の方法を使用して、実施例２．１がさらに製造された：
【０１４７】
【表２】
2007519618.tif 000039
【０１４８】
実施例２．１の製造のための適切な中間体は、実施例２の製造のための中間体の製造に使用した方法に類似の方法を使用して製造した：
メチル６−｛［（３−（２−シクロペンチリデンエチル）オキシ］−５−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝カルボニル）アミノ］ピリジン−３−カルボキシレート
【０１４９】
【化３６】
2007519618.tif 000040
【０１５０】
１ＨＮＭＲd（ｄ６−ＤＭＳＯ）：１．２７（ｄ，６Ｈ），１．６０（ｍ，４Ｈ），２．２８（ｍ，４Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），４．５４（ｄ，２Ｈ），４．７０（７重項，１Ｈ），５．５２（ｍ，１Ｈ），６．６３（ｔ，１Ｈ），７．１５（ｍ，２Ｈ），８．３２（ｓ，２Ｈ），８．８８（ｓ，１Ｈ），１１．１０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）
ｍ／ｚ４２５（Ｍ＋Ｈ）＋
メチル６−［（｛３−ヒドロキシ−５−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝カルボニル）アミノ］ピリジン−３−カルボキシレート
【０１５１】
【化３７】
2007519618.tif 000041
【０１５２】
これは上記の実施例１．１の中間体に記載されたとおりに製造した。
生物学的
試験：
本発明の化合物の生物学的作用は、以下の方法で試験することができる：
（１）ＧＬＫの酵素活性は、ＧＬＫ、ＡＴＰおよびグルコースをインキュベートすることにより測定することができる。生成物形成速度は、Ｇ−６−Ｐデヒドロゲナーゼ、ＮＡＤＰ／ＮＡＤＰＨ系にアッセイをカップリングし、３４０ｎｍの光学密度の直線状増加を測定することにより、決定することができる（Ｍａｔｓｃｈｉｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ  １９９３）。化合物によるＧＬＫの活性化は、Ｂｒｏｃｋｌｅｈｕｒｓｔ  ｅｔ  ａｌ（Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ２００４，５３，５３５−５４１）に記載のように、ＧＬＫＲＰの存在下、または非存在下でこのアッセイを使用して、評価することができる。
【０１５３】
（２）ＧＬＫとＧＬＫＲＰ（ＲＰ＝調節蛋白質）間の結合相互作用を測定するためのＧＬＫ／ＧＬＫＲＰ結合アッセイ。該方法を使用して、ＧＬＫとＧＬＫＲＰ間の相互作用を調節することにより、ＧＬＫを調節する化合物を同定することができる。ＧＬＫＲＰとＧＬＫは、場合により試験化合物の存在下において、阻害濃度のＦ−６−Ｐと共にインキュベートし、ＧＬＫとＧＬＫＲＰ間の相互作用の程度を測定する。Ｆ−６−Ｐに取って代わるか、またはいずれか別の方法でＧＬＫ／ＧＬＫＲＰ相互作用を減少させる化合物は、形成されるＧＬＫ／ＧＬＫＲＰ複合体の量の減少により、検出されることになる。Ｆ−６−Ｐ結合を促進するか、またはいずれか別の方法でＧＬＫ／ＧＬＫＲＰ相互作用を促進する化合物は、形成されるＧＬＫ／ＧＬＫＲＰ複合体の量の増加によって検出されることになる。そのような結合アッセイの具体的な例を以下に記載する。
【０１５４】
ＧＬＫ／ＧＬＫＲＰシンチレーション近接アッセイ
ＷＯ０１／２０３２７（その内容は参照として本明細書に援用される）に記載のように、組換えヒトＧＬＫおよびＧＬＫＲＰを使用して、“ｍｉｘ  ａｎｄ  ｍｅａｓｕｒｅ”９６ウェルＳＰＡ（シンチレーション近接アッセイ）を開発した。ＧＬＫ（ビオチン化）およびＧＬＫＲＰは、阻害濃度の放射標識した［３Ｈ］Ｆ−６−Ｐ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｃｕｓｔｏｍ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ＴＲＱ８６８９）の存在下で、ストレプトアビジンに結合したＳＰＡビーズ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）とインキュベートし、シグナルを生じる。Ｆ−６−Ｐに取って代わるか、またはいずれか別の方法でＧＬＫ／ＧＬＫＲＰ相互作用を中断する化合物は、このシグナル消失を引き起こすことになる。
【０１５５】
結合アッセイは、室温で２時間行われた。反応混合物は、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、２ｍＭ  ＡＴＰ、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．５ｍＭ  ＤＴＴ、組換えビオチン化ＧＬＫ（０．１ｍｇ）、組換えＧＬＫＲＰ（０．１ｍｇ）、０．０５ｍＣｉ［３Ｈ］Ｆ−６−Ｐ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を含有し、最終容量は１００ｍｌとした。インキュベーション後、ＧＬＫ／ＧＬＫＲＰ複合体形成の程度は、０．１ｍｇ／ウェル  アビジン結合ＳＰＡビーズ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）の添加、およびＰａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔ  ＮＸＴでのシンチレーション計数により決定した。
【０１５６】
（３）ＧＬＫＲＰとＦ−６−Ｐ間の結合相互作用を測定するためのＦ−６−Ｐ／ＧＬＫＲＰ結合アッセイ。この方法を使用して、化合物の作用機序に関する付加的な情報を提供することができる。ＧＬＫ／ＧＬＫＲＰ結合アッセイにおいて同定された化合物は、Ｆ−６−Ｐに取って代わるか、またはいずれか別の方法でＧＬＫとＧＬＫＲＰの相互作用を変化させることにより、ＧＬＫとＧＬＫＲＰの相互作用を調節することができる。たとえば、蛋白質‐蛋白質相互作用は一般に複数の結合部位を介した相互作用によって起こることが公知である。したがって、ＧＬＫとＧＬＫＲＰ間の相互作用を変化させる化合物は、１以上のいくつかの異なる結合部位に結合することにより作用できる可能性がある。
【０１５７】
Ｆ−６−Ｐ／ＧＬＫＲＰ結合アッセイは、ＧＬＫＲＰ上のＦ−６−Ｐの結合部位からＦ−６−Ｐに取って代わることによってＧＬＫとＧＬＫＲＰの相互作用を調節する化合物だけを同定する。
【０１５８】
ＧＬＫＲＰはＧＬＫの非存在下で、試験化合物と阻害濃度のＦ−６−Ｐと共にインキュベートし、Ｆ−６−ＰとＧＬＫＲＰ間の相互作用の程度を測定する。ＧＬＫＲＰへのＦ−６−Ｐの結合に取って代わる化合物は、形成されるＧＬＫＲＰ／Ｆ−６−Ｐ複合体の量の変化によって検出することができる。そのような結合アッセイの具体的な例を、以下に記載する。
【０１５９】
Ｆ−６−Ｐ／ＧＬＫＲＰシンチレーション近接アッセイ
ＷＯ０１／２０３２７（その内容は参照として本明細書に援用される）に記載のように、組換えヒトＧＬＫＲＰを使用して、“ｍｉｘ  ａｎｄ  ｍｅａｓｕｒｅ”９６ウェルシンチレーション近接アッセイを開発した。ＦＬＡＧ‐標識ＧＬＫＲＰは、阻害濃度の放射標識［３Ｈ］Ｆ−６−Ｐの存在下において、蛋白質Ａに被覆されたＳＰＡビーズ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）、および抗‐ＦＬＡＧ抗体と共にインキュベートする。シグナルが生成される。Ｆ−６−Ｐ結合に取って代わる化合物は、このシグナル消失を引き起こすことになる。このアッセイとＧＬＫ／ＧＬＫＲＰ結合アッセイの組み合わせにより、観察者は、Ｆ−６−Ｐに取って代わることによってＧＬＫ／ＧＬＫＲＰ相互作用を中断する化合物を同定することになる。
【０１６０】
結合アッセイは、室温で２時間行われた。反応混合物は、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、２ｍＭ  ＡＴＰ、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．５ｍＭ  ＤＴＴ、組換えＦＬＡＧ標識ＧＬＫＲＰ（０．１ｍｇ）、抗‐ＦＬＡＧ  Ｍ２抗体（０．２ｍｇ）（ＩＢＩ  Ｋｏｄａｋ）、０．０５ｍＣｉ［３Ｈ］Ｆ−６−Ｐ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を含有し、最終容量は１００ｍｌとした。インキュベーション後、Ｆ−６−Ｐ／ＧＬＫＲＰ複合体形成の程度は、０．１ｍｇ／ウェル  蛋白質Ａ結合ＳＰＡビーズ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）の添加、およびＰａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔ  ＮＸＴでのシンチレーション計数により決定した。
【０１６１】
組換えＧＬＫおよびＧＬＫＲＰの産生
ｍＲＮＡの調製
ヒト肝総ｍＲＮＡは、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  Ｊ，Ｆｒｉｔｓｃｈ  ＥＦ＆Ｍａｎｉａｔｉｓ  Ｔ，１９８９に記載のように、４Ｍグアニジンイソチオシアネート、２．５ｍＭシトレート、０．５％サルコシル、１００ｍＭ  ｂ‐メルカプトエタノール中で、ポリトロンによりホモゲナイズし、その後５．７Ｍ  ＣｓＣｌ、２５ｍＭ酢酸ナトリウム、１３５，０００ｇ（最大）での遠心分離により調製した。
ＰｏｌｙＡ＋ｍＲＮＡはＦａｓｔＴｒａｃｋ（登録商標）ｍＲＮＡ単離キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して直接調製した。
【０１６２】
ＧＬＫおよびＧＬＫＲＰ  ｃＤＮＡ配列のＰＣＲ増幅
ヒトＧＬＫおよびＧＬＫＲＰ  ｃＤＮＡは、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ＆Ｍａｎｉａｔｉｓ，１９８９に記載された、確立された技術を使用して、ヒト肝ｍＲＮＡからＰＣＲにより得た。ＰＣＲプライマーは、Ｔａｎｉｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ  １９９１およびＢｏｎｔｈｒｏｎ，Ｄ．Ｔ．ｅｔ  ａｌ  １９９４（後に  Ｗａｒｎｅｒ，Ｊ．Ｐ．１９９５において修正された）に示されたＧＬＫおよびＧＬＫＲＰ  ｃＤＮＡ配列に従って設計した。
【０１６３】
ＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＩＩベクターにおけるクローニング
ＧＬＫおよびＧＬＫＲＰ  ｃＤＮＡは、Ｙａｎｉｓｃｈ−Ｐｅｒｒｏｎ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ（１９８５）によって使用されたものに類似した組換えクローニングベクター系、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＩＩ、（Ｓｈｏｒｔ  ｅｔ  ａｌ  １９９８）（バクテリオファージＴ３およびＴ７プロモーター配列が隣接した、複数の特有の制限部位を含有するポリリンカーＤＮＡフラグメント、線維状ファージ複製起点、およびアンピシリン薬剤耐性マーカー遺伝子を持つ、ｃｏｌＥＩを基礎にしたレプリコンを含有する）を使用して、大腸菌にクローニングした。
【０１６４】
形質転換
大腸菌形質転換は、一般にエレクトロポレーションにより行った。ＤＨ５ａまたはＢＬ２１（ＤＥ３）菌株の４００ｍＬ培養物は、Ｌ‐ブロス中でＯＤ６００が０．５になるまで培養し、２，０００ｇで遠心分離することにより採取した。細胞は氷冷脱イオン水で２回洗浄し、１ｍｌの１０％グリセロールに再懸濁し、−７００Ｃでアリコートを保存した。ライゲーションミックスはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｖシリーズ（登録商標）膜（０．００２５ｍｍポアサイズ）を使用して脱塩した。細胞４０ｍｌは、０．２ｃｍのエレクトロポレーションキュベット中で、１ｍｌのライゲーションミックスまたはプラスミドＤＮＡと共に１０分間、氷上でインキュベートし、Ｇｅｎｅ  Ｐｕｌｓｅｒ（登録商標）装置（ＢｉｏＲａｄ）を使用して、０．５ｋＶｃｍ−１、２５０ｍＦ、２５０？で標識した。形質転換体は、テトラサイクリン１０ｍｇ／ｍｌまたはアンピシリン１００ｍｇ／ｍｌを補足したＬ−寒天培地上で選択した。
【０１６５】
発現
ＧＬＫは大腸菌ＢＬ２１細胞中で、ベクターｐＴＢ３７５ＮＢＳＥから発現され、Ｎ−末端メチオニンのすぐ隣に６−Ｈｉｓタグを含有する組換え蛋白質が産生された。あるいは、別の適切なベクターはｐＥＴ２１（＋）ＤＮＡ、Ｎｏｖａｇｅｎ、カタログ番号６９７７０３である。６−Ｈｉｓタグを使用して、Ｑｉａｇｅｎから購入した、ニッケル‐ニトリロトリ酢酸アガロースを充填したカラム（カタログ番号３０２５０）で組換え蛋白質を精製した。
【０１６６】
ＧＬＫＲＰは大腸菌ＢＬ２１細胞中で、ベクターｐＦＬＡＧ  ＣＴＣ（ＩＢＩ  Ｋｏｄａｋ）から発現され、Ｃ−末端ＦＬＡＧタグを含有する組換え蛋白質が産生された。蛋白質は、初めにＤＥＡＥセファロースイオン交換により、続いてＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入したＭ２抗‐ＦＬＡＧ免疫アフィニティーカラム（カタログ番号Ａ１２０５）での最終精製のためのＦＬＡＧタグの使用により精製した。
【０１６７】
ＧＬＫのビオチン化：
ＧＬＫは、Ｓｉｇｍａ‐Ａｌｄｒｉｃｈから購入した、ビオチンアミドカプロエートＮ−ヒドロキシスクシニミドエステル（ビオチン‐ＮＨＳ）（カタログ番号Ｂ２６４３）との反応によりビオチン化した。手短に言えば、標的蛋白質（ＧＬＫ）の遊離アミノ基は、定義されたモル比でビオチン‐ＮＨＳと反応して安定なアミド結合を形成し、共有結合したビオチンを含有する生成物を生じる。過剰な、結合しないビオチン‐ＮＨＳは透析により生成物から除去される。具体的には、７．５ｍｇのＧＬＫが４ｍＬの２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．３、０．１５Ｍ  ＫＣｌ、１ｍＭジチオスレイトール、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２（バッファーＡ）中の０．３１ｍｇのビオチン‐ＮＨＳに添加された。この反応混合物は、付加的な２２ｍｇのビオチン‐ＮＨＳを含有するバッファーＡ１００ｍＬに対して透析した。４時間後、過剰なビオチン‐ＮＨＳをバッファーＡに対する十分な透析により除去した、
【０１６８】
ラットへの経口投与後の血漿中レベルおよび血漿蛋白質結合の測定
ラットへの化合物の投与および血漿試料採取
遊星歯車で粉砕した化合物［Ｐｕｌｕｅｒｉｓｅｔｔｅ  ７  Ｍｉｌｌ（Ｇｌｅｎ  Ｃｒｅｓｔｏｎ  Ｌｔｄ，Ｓｔａｎｍｏｒｅ，Ｍｉｄｄｌｅｓｅｘ，ＵＫ）中、１５分間、５００ｒｐｍ、５ジルコニウムボール］は、０．５％  ＨＰＭＣ  Ｔｗｅｅｎに懸濁し、高脂肪食（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ、Ｄ１２４５１、１４日間随意に摂食）で飼育された雌Ａｌｄｅｒｌｅｙ  Ｐａｒｋ  ＺｕｃｋｅｒまたはＡｌｄｅｒｌｅｙ  Ｐａｒｋ  Ｗｉｓｔａｒラットに、投与量０．３〜１０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｌｓ／ｋｇの割合で経口胃管投与した。
【０１６９】
血漿試料は、以下のような覚醒血液採取または末梢血採取のいずれかにより得た：
覚醒血液採取（化合物レベルまたは血液化学のため）‐静脈内血液試料は、６００μｌ  Ｓｔａｒｓｔｅｄｔ  Ｍｕｌｔｉｖｅｔｔｅ（ＥＤＴＡ）および２２Ｇ針を使用して、必要な時点で尾静脈から採取した。試料は氷上に維持し、採取後１５〜３０分間以内に３０００ｒｐｍで１０分間、遠心分離した。血漿は吸引し、−２０℃で保存した。
【０１７０】
化合物レベルまたは血液化学のための末梢血採取‐実験終了時に、動物はＣＯ２／Ｏ２への暴露により安楽死させた。血液試料は心臓穿刺により採取した。試料は氷上に維持し、採取後１５〜３０分間以内に３０００ｒｐｍで１０分間、遠心分離した。血漿は吸引し、−２０℃で保存した。
【０１７１】
ラット血漿における化合物レベルの測定
ラット血漿２５μｌは９６ウェル蛋白質沈殿プレート（Ｖａｒｉａｎ  ｉｎｃ．Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）のウェルに添加した。それぞれのウェルに、内部標準として作用する１ｕｇ／ｍｌの（３−イソプロポキシ−５−ベンジルオキシ−ベンゾイル）アミノピリジン３−カルボン酸を含有する、アセトニトリル５００μｌを添加し、血漿蛋白質を沈殿させた。次に血漿溶媒混合物を真空下で沈殿プレートを通して吸引し、溶出液を集めた。溶出液は遠心エバポレーターを使用して蒸発乾固し、２００μｌのメタノール：水：ギ酸（６０：４０：０．１）に溶解した。
【０１７２】
溶解した試料は、次にタンデム質量分析検出の付いた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ−ＭＳ−ＭＳ）を使用して分析した。ＨＰＬＣは、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｐｒｏｄｉｇｙ  Ｃ８、５０ｘ４．６、５mｍ．カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ，Ｍａｃｃｌｅｓｆｉｅｌｄ，ＵＫ）を使用し、流速１ｍｌ／分で、注入量１０μｌを使用し、以下のグラジエント溶出特性を使用して行った：
【０１７３】
【表３】
2007519618.tif 000042
【０１７４】
質量分析はＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ＡＰＩ３０００質量分析計（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）を使用して行った。試料を分析する前に、質量分析計は試験化合物の構造に対して最適化された。
【０１７５】
試験試料の濃度は、試験試料のピーク高対内部標準のピーク高の比から決定した。試験試料の濃度は、内部標準として（３−イソプロポキシ−５−ベンジルオキシ−ベンゾイル）アミノピリジン３−カルボン酸を使用し、先に記載のように処理されたラット血漿試料に添加された公知の濃度の試験試料を使用することにより作製された、比を濃度に関連させる標準曲線を参照して計算した。
【０１７６】
化合物の血漿蛋白質結合の測定
化合物の血漿蛋白質結合は、平衡透析技術（Ｗ．Ｌｉｎｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，１９９６，６７７，１−２８）を使用して測定した。化合物は、血漿および等張リン酸バッファーｐＨ７．４（透析セル中それぞれ１ｍｌ）と共に３７℃で１８時間、濃度２０μＭで透析した。Ｓｐｅｃｔｒｕｍ（登録商標）２０−セル平衡ダイアライザーをテフロン、半微量透析セルおよびＳｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ（登録商標）２膜ディスク［分子量カットオフ１２〜１４０００ダルトン、４７ｍｍ］（ＰｅｒＢｉｏ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＵＫ  Ｌｔｄ，Ｔａｔｔｅｎｈａｌｌ，Ｃｈｅｓｈｉｒｅにより供給）と一緒に使用した。血漿およびバッファー試料は透析後除去し、ＨＰＬＣＵＶ／ＭＳ（ＵＶおよび質量分析を伴った高速液体クロマトグラフィー）を使用して、分析し、血漿中の％遊離レベルを得た。
【０１７７】
本発明の化合物は約２００ｎＭ未満のＥＣ５０でグルコキナーゼを活性化させ、約０．０５％〜約１％の血漿中遊離百分率、およびラット体重１キログラムにつき化合物１ｍｇの標準化投与量に関して、約０．５μＭ〜約１０μＭのピーク血中レベル（結合および遊離を共に含む）を有する。
たとえば、実施例２は以下の値を有する：
【０１７８】
【表４】
2007519618.tif 000043
【０１７９】
参考文献
【０１８０】
【表５Ａ】
2007519618.tif 000044
【０１８１】
【表５Ｂ】
2007519618.tif 000045
【０１８２】
【表５Ｃ】
2007519618.tif 000046
【国際調査報告】
2007519618.tif 000056
2007519618.tif 000057
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