(57)【要約】  本発明は、構造式：2007503466.tif 000014［式中、R1〜R5 は、明細書の記載と同意義である］を有するエストロゲン受容体モジュレーターまたはその医薬上許容される塩に関する。
2007503466.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2007503466.tif 000013
［式中；
Ｒ１は、水素、ハロゲン、低級アルキル、ＣＮまたは低級アルコキシであり；
Ｒ２およびＲ３は、一緒になって、縮合アリールまたはヘテロアリール環を形成し；
Ｒ４は、水素、ハロゲン、低級アルキル、ＣＮまたは低級アルコキシであり；
Ｒ５は、各々同じであるかまたは異なっていてもよく、水素、低級アルキルおよび−Ｃ（Ｏ）Ｒ６から選択され；
Ｒ６は低級アルキルである］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項２】
Ｒ４が、水素またはハロゲンである、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１がハロゲンである、請求項１または請求項２記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２およびＲ３が、一緒になって、５−または６員環を形成する、請求項１〜３いずれか１項記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２およびＲ３が、一緒になって、フェニル、フランまたはチオフェン環を形成する、請求項１〜４いずれか１項記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１がＦであり、Ｒ４が水素またはＦである、請求項１〜５いずれか１項記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ５が各々Ｈである、請求項１〜６いずれか１項記載の化合物。
【請求項８】
（ａ）４−（４−ヒドロキシフェニル）−１−ナフトアルデヒドオキシム；
（ｂ）４−（３−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−ナフタレン−１−カルバルデヒドオキシム；
（ｃ）４−（４−ヒドロキシフェニル）−１−ベンゾチオフェン−７−カルバルデヒドオキシム；
（ｄ）７−（４−ヒドロキシフェニル）−１−ベンゾチオフェン−４−カルバルデヒドオキシム；
（ｅ）７−（４−ヒドロキシフェニル）−１−ベンゾフラン−４−カルバルデヒドオキシム；
（ｆ）４−（４−ヒドロキシフェニル）−ベンゾフラン−７−カルバルデヒドオキシム；
（ｇ）５−（４−ヒドロキシフェニル）−１−ベンゾフラン−７−カルバルデヒドオキシム；または
（ｈ）７−（４−ヒドロキシフェニル）−ベンゾフラン−５−カルバルデヒドオキシム、
の１つである請求項１記載の化合物。
【請求項９】
請求項１〜８いずれか１項記載の式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩および医薬上許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項１０】
阻害を必要とする哺乳類における骨粗鬆症の阻害方法であって、該哺乳類に有効量の請求項１〜８いずれか１項記載の式（Ｉ）で示される化合物を投与することを含む方法。
【請求項１１】
阻害を必要とする哺乳類における、変形性関節症、低カルシウム血症、高カルシウム血症、パジェット病、骨軟化症、骨灰分喪失、多発性骨髄腫または骨組織に悪影響を及ぼす癌の他の形態の阻害方法であって、該哺乳類に有効量の請求項１〜８いずれか１項記載の式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩を提供することを含む方法。
【請求項１２】
阻害を必要とする哺乳類における、良性または悪性の異常な組織成長の阻害方法であって、該哺乳類に有効量の請求項１〜８いずれか１項記載の式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩を提供することを含む方法。
【請求項１３】
異常な組織の成長が、前立腺肥大症、子宮平滑筋腫、乳癌、子宮内膜症、子宮内膜癌、多嚢胞性卵巣症候群、子宮内膜ポリープ、良性乳房疾患、腺筋症、卵巣癌、黒色腫、前立腺癌、結腸の癌、またはＣＮＳ癌である、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
哺乳類における、コレステロール、トリグリセライド、Ｌｐ（ａ）またはＬＤＬレベルの低下方法；または高コレステロール血症；高脂血症；心血管疾患；アテローム性動脈硬化症；末梢血管障害；再狭窄または血管痙攣の阻害方法；または免疫介在血管損傷を誘発する細胞事象からの血管壁損傷の阻害方法であって、該哺乳類に、有効量の請求項１〜８いずれか１項記載の式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩を投与することを含む方法。
【請求項１５】
哺乳類における、フリーラジカル誘発病態の阻害方法であって、該哺乳類に、有効量の請求項１〜８いずれか１項記載の式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩を投与することを含む方法。
【請求項１６】
哺乳類における、認知増強方法；または老年性認知症、アルツハイマー病、認知低下または神経変性障害の治療または阻害方法であって、該哺乳類に、有効量の請求項１〜８いずれか１項記載の式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩を投与することを含む方法。
【請求項１７】
哺乳類における、炎症性腸疾患、潰瘍性直腸炎、クローン病、結腸炎、のぼせ、膣または外陰皮膚萎縮、萎縮性膣炎、膣乾燥、掻痒、性交疼痛症、排尿困難、頻尿、尿失禁、尿管感染症、血管運動症状；男性型脱毛症；皮膚萎縮；座瘡；ＩＩ型糖尿病；機能不全性子宮出血；または不妊症の阻害方法であって、該哺乳類に、有効量の請求項１〜８いずれか１項記載の式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩を投与することを含む方法。
【請求項１８】
哺乳類における、白血病、子宮内膜剥離、慢性腎臓または肝臓疾患または凝固疾患または障害の阻害方法であって、該哺乳類に、有効量の請求項１〜８いずれか１項記載の式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩を投与することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、アリール−カルバルデヒドオキシム誘導体およびある種の態様において（ヒドロキシ−フェニル）−アリール−カルバルデヒドオキシム誘導体、そのエストロゲン様物質としての使用およびその調製方法に関する。
【０００２】
発明の背景
哺乳類の組織におけるエストロゲンの多面的発現効果は十分に立証されており、現在、エストロゲンは多くの臓器系に影響を及ぼすことが認識されている［Mendelsohn and Karas, New England Journal of Medicine 340: 1801-1811 (1999)、Epperson, et al., Psychosomatic Medicine 61: 676-697 (1999)、Crandall, Journal of Womens Health & Gender Based Medicine 8: 1155-1166 (1999)、Monk and Brodaty, Dementia & Geriatric Cognitive Disorders 11: 1-10 (2000)、Hurn and Macrae, Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism 20: 631-652 (2000)、Calvin, Maturitas 34: 195-210 (2000), Finking, et al., Zeitschrift fur Kardiologie 89: 442-453 (2000)、Brincat, Maturitas 35: 107-117 (2000)、Al-Azzawi, Postgraduate Medical Journal 77: 292-304 (2001)］。エストロゲンは、いくつかの方法で組織に効果を発揮することができる。恐らく、最も十分に特徴付けられている作用機序は遺伝子転写を変化させるエストロゲン受容体との相互作用である。エストロゲン受容体は、リガンド活性化転写因子であり、細胞核ホルモン受容体スーパーファミリーに属する。このファミリーの他のメンバーとしては、プロゲステロン受容体、アンドロゲン受容体、グルココルチコイド受容体および鉱質コルチコイド受容体が挙げられる。これらの受容体はリガンドと結合すると二量体化し、（応答配列として知られている）ＤＮＡの特異的配列に直接結合することにより、または、（ＡＰ１のような）他の転写因子と相互作用し、ついで、特異的ＤＮＡ配列に直接結合することにより、遺伝子転写を活性化することができる［Moggs and Orphanides, EMBO Reports 2: 775-781 (2001)、Hall, et al., Journal of Biological Chemistry 276: 36869-36872 (2001)、McDonnell, Principles Of Molecular Regulation. p351-361(2000)］。一群の「補調節」タンパク質は、また、リガンドと結合した受容体と相互作用することができ、その転写活性を調節することができる［McKenna, et al., Endocrine Reviews 20: 321-344 (1999)］。また、エストロゲン受容体は、リガンド依存性およびリガンド非依存性の両方の方法におけるＮＦκＢ−媒介転写を抑制することができる［Quaedackers, et al., Endocrinology 142: 1156-1166 (2001)、Bhat, et al., Journal of Steroid Biochemistry & Molecular Biology 67: 233-240 (1998)、Pelzer, et al., Biochemical & Biophysical Research Communications 286: 1153-7 (2001)］。
【０００３】
エストロゲン受容体はリン酸化によって活性化することもできる。このリン酸化は、ＥＧＦのような成長因子により媒介され、リガンドの不在下における遺伝子転写の変化を引き起こす［Moggs and Orphanides, EMBO Reports 2: 775-781 (2001)、Hall, et al., Journal of Biological Chemistry 276: 36869-36872 (2001)］。
【０００４】
あまり十分には特徴付けられていないが、エストロゲンが細胞に影響を及ぼすことができる手段は、いわゆる膜受容体を介するものである。かかる受容体の存在は議論の余地があるが、エストロゲンが細胞から非ゲノム応答を非常に迅速に誘発することができることは十分に立証されている。これらの効果の伝達の原因である分子は最終的には単離されていないが、少なくとも、該エストロゲン受容体の細胞核形態に関連があることを示唆する証拠がある［Levin, Journal of Applied Physiology 91: 1860-1867 (2001)、Levin, Trends in Endocrinology & Metabolism 10: 374-377 (1999)］。
【０００５】
今日までに、２つのエストロゲン受容体が見出された。最初のエストロゲン受容体は、約１５年前にクローン化され、現在、ＥＲαと称されている［Green, et al., Nature 320: 134-9 (1986)］。第２は、比較的最近見出され、ＥＲβと称されている［Kuiper, et al., Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 93: 5925-5930 (1996)］。ＥＲβにつにいての初期の研究は、種々のリガンドに対するその親和性を定義することに集中し、実際、ＥＲαとの差異がいくつか見出された。ＥＲβの組織分布は、齧歯類において十分にマッピングされており、ＥＲαと一致していない。マウスおよびラットの子宮のような組織はＥＲαを優先的に発現するが、これに対して、マウスおよびラットの肺はＥＲβを優先的に発現する［Couse, et al., Endocrinology 138: 4613-4621 (1997)、Kuiper, et al., Endocrinology 138: 863-870 (1997)］。同一臓器内であっても、ＥＲαおよびＥＲβの分布は区分され得る。例えば、マウスの卵巣において、ＥＲβは顆粒膜細胞中にて高度に発現され、ＥＲαは包膜細胞および間質細胞に制限される［Sar and Welsch, Endocrinology 140: 963-971 (1999)、Fitzpatrick, et al., Endocrinology 140:2581-2591 (1999)］。しかしながら、該受容体が共発現される例があり、ＥＲαおよびＥＲβがヘテロ二量体を形成することができるということがインビトロ研究により立証されている［Cowley, et al., Journal of Biological Chemistry 272: 19858-19862 (1997)］。
【０００６】
最も強力な内因性エストロゲンは、１７β−エストラジオールである。多数の化合物が１７β−エストラジオールの活性を模倣するかまたはブロックすることが開示されている。１７β−エストラジオールとほぼ同一の生物学的効果を有する化合物は「エストロゲン受容体アゴニスト」と称される。１７β−エストラジオールと組み合わせて投与した場合にその効果をブロックするものは「エストロゲン受容体アンタゴニスト」と称される。実際には、エストロゲン受容体アゴニストおよびエストロゲン受容体アンタゴニスト活性の間には連続体があり、実際、いくつかの化合物は、いくつかの組織においてエストロゲン受容体アゴニストとして振る舞い、他の組織においてはエストロゲン受容体アンタゴニストとして振る舞う。混合活性を有するこれらの化合物は選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭＳ）と称され、治療上有用な物質（例えば、ＥＶＩＳＴＡ）である［McDonnell, Journal of the Society for Gynecologic Investigation 7: S10-S15 (2000)、Goldstein, et al., Human Reproduction Update 6: 212-224 (2000)］。同一の化合物が細胞特異的効果（複数）を有することができる正確な理由は解明されていないが、受容体コンフォメーションの差異および／または補調節タンパク質の環境の差異が示唆されている。
【０００７】
エストロゲン受容体はリガンドと結合すると異なるコンフォメーションをとることが相当長い間知られてきた。しかしながら、これらの変化の重要性および機微はごく最近判明した。ＥＲαおよびＥＲβの三次元構造は種々のリガンドとの同時結晶化により説明されており、明らかに、受容体−補調節タンパク質相互作用に必要とされるタンパク質配列の立体的な障害となるエストロゲン受容体アンタゴニストの存在下におけるヘリックス１２の位置を変えることを示す［Pike, et al., Embo 18: 4608-4618 (1999)、Shiau, et al., Cell 95: 927-937 (1998)］。加えて、ファージディスプレイの技法を用いて、種々のリガンドの存在下においてエストロゲンと相互作用するペプチドが同定された［Paige, et al., Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 96: 3999-4004 (1999)］。例えば、完全エストロゲン受容体アゴニスト１７β−エストラジオールに結合したＥＲαとジエチルスチルベストロールに結合したＥＲαとを区別する一のペプチドが同定された。別のペプチドは、ＥＲαに結合したクロミフェンとＥＲβに結合したクロミフェンとを区別することが示された。これらのデータは、各リガンドが、異なる生物学的活性を有すると思われる固有かつ予測不可能なコンフォメーションで該受容体を配置する可能性があることを示している。
【０００８】
上記のとおり、エストロゲンは、生物学的プロセスのパノプリィに影響を及ぼす。加えて、ジェンダー差が記載されている場合（例えば、疾患の頻度、攻撃誘発に対する応答など）、該解釈は男女間のエストロゲンレベルの差異を含むことがある。
【０００９】
発明の概要
本発明は、アリール−カルバルデヒドオキシム誘導体、特にそのエストロゲン様物質としての使用に関する。一の態様において、本発明は、式：
【化１】
2007503466.tif 000003
［式中：
Ｒ１は、水素、ハロゲン、低級アルキル、ＣＮまたは低級アルコキシであり；
Ｒ２およびＲ３は、一緒になって、縮合アリールまたはヘテロアリール環を形成し；
Ｒ４は、水素、ハロゲン、低級アルキル、ＣＮまたは低級アルコキシであり；
Ｒ５は、水素、低級アルキルまたは−Ｃ（Ｏ）Ｒ６であり；
Ｒ６は、低級アルキルである］
で示されるアリール−カルバルデヒド誘導体その医薬上許容される塩に関する。いくつかの好ましい具体例において、Ｒ５はＨである。
【００１０】
別の態様において、本発明は、少なくとも１つの上記化合物および医薬上許容される担体を含む医薬組成物に関する。
さらに別の態様において、本発明は、限定するものではないが、炎症性腸疾患、例えばクローン病および結腸炎を含む疾患の治療または予防における、上記化合物の使用に関する。
【００１１】
発明の詳細な記載
本発明は、アリール−カルバルデヒドオキシム誘導体を提供する。これらの化合物は、好ましくは、エストロゲン様物質として作用し、炎症性腸疾患（クローン病および結腸炎を含む）のような疾患の治療および予防に有用である。一の態様において、本発明は、式Ｉ：
【化２】
2007503466.tif 000004
［式中：
Ｒ１は、水素、ハロゲン、低級アルキル、ＣＮまたは低級アルコキシであり；
Ｒ２およびＲ３は、一緒になって、縮合アリールまたはヘテロアリール環を形成し；
Ｒ４は、水素、ハロゲン、低級アルキル、ＣＮまたは低級アルコキシであり；
Ｒ５は、水素、低級アルキルまたは−Ｃ（Ｏ）Ｒ６であり；
Ｒ６は、低級アルキルである］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩に関する。いくつかの好ましい具体例において、Ｒ５はＨである。
【００１２】
ある種の好ましい具体例において、Ｒ１はハロゲンであり、Ｒ２およびＲ３は、一緒になって、５または６員の縮合環、例えばフェニル、フラン、チオフェンを形成し、Ｒ４はＨまたはハロゲンである。
【００１３】
医薬上許容される塩は、本発明の化合物が塩基性部分を含む場合、有機酸および無機酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、乳酸、クエン酸、酒石酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、マロン酸、マンデル酸、リンゴ酸、フタル酸、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸、メタンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ショウノウスルホン酸、および同様の公知の許容される助剤から形成され得る。塩は、また、本発明の化合物が酸性部分を含有する場合、有機塩基および無機塩基、例えば、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム、リチウムまたはカリウム）、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、炭素原子１〜６個を含有するアルキルアンモニウム塩、または各アルキル基中に炭素原子１〜６個を含有するジアルキルアンモニウム塩、各アルキル基中に炭素原子１〜６個を含有するトリアルキルアンモニウム塩から形成され得る。
【００１４】
「アリール」なる用語は、６〜１０個の炭素原子のカルボサイクリック芳香環、例えばフェニルを意味する。「ヘテロアリール」なる用語は、酸素、窒素および硫黄から選択される１個以上の、例えば１〜３個のヘテロ原子を含有する、５または６員の芳香環を意味する。アリールおよびヘテロアリール基は、置換されていてもよい。
【００１５】
「アルキル」なる用語は、本明細書で用いられる場合、単独または他の基の一部として用いられても、置換または非置換の脂肪族炭化水素鎖を意味し、限定するものではないが、特記しない限り、１〜１２個の炭素原子、好ましくは、１〜６個の炭素原子を含有する、直鎖または分枝鎖を意味する。例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｉ−ブチルおよびｔ−ブチルが、「アルキル」なる用語に包含される。特に、「アルキル」の定義内には、置換されていてもよい脂肪族炭化水素鎖が含まれる。
【００１６】
本明細書の定義において用いられる炭素数は、炭素骨格および炭素枝を意味するが、置換基、例えばアルコキシ等の置換基の炭素原子は含まない。
【００１７】
「アルケニル」なる用語は、本明細書で用いられる場合、単独または他の基の一部として用いられても、置換または非置換の炭化水素鎖を意味し、限定するものではないが、２〜８個の炭素原子を有し、少なくとも一つの二重結合を含有する直鎖および分枝鎖を意味する。好ましくは、アルケニル基は、１または２個の二重結合を有する。かかるアルケニル基は、ＥまたはＺ立体配置で存在することができ、本発明の化合物は、両方の立体配置を含有する。特に、「アルケニル」の定義においては、置換されていてもよい脂肪族炭化水素鎖を含む。アルケニルに結合したヘテロ原子、例えばＯ、ＳまたはＮ−Ｒ１は、二重結合に結合した炭素原子に結合しない。
【００１８】
「フェニル」なる用語は、本明細書で用いられる場合、単独または他の基の一部として用いられても、置換または非置換のフェニル基を意味する。
【００１９】
置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびフェニルは、１個以上の置換基により置換されていてもよい。適当な任意の置換基は、独立して、ニトロ、シアノ、−Ｎ（Ｒ１１）（Ｒ１２）、ハロ、ヒドロキシ、カルボキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アルキルアルコキシ、アルコキシカルボニル、アルコキシアルコキシ、ペルフルオロアルキル、ペルフルオロアルコキシ、アリールアルキル、アルキルアリール、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アルキルチオ、−Ｓ（Ｏ）２−Ｎ（Ｒ１１）（Ｒ１２）、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ１１）（Ｒ１２）、（Ｒ１１）（Ｒ１２）Ｎ−アルキル、（Ｒ１１）（Ｒ１２）Ｎ−アルコキシアルキル、（Ｒ１１）（Ｒ１２）Ｎ−アルキルアリールオキシアルキル、−Ｓ（Ｏ）ｓ−アリール（ここに、ｓ＝０−２）または−Ｓ（Ｏ）ｓ−ヘテロアリール（ここに、ｓ＝０−２）から選択され得る。本発明のある種の具体例において、アルキル、アルケニル、アルキニルおよびシクロアルキルの好ましい置換基は、ニトロ、シアノ、−Ｎ（Ｒ１１）（Ｒ１２）、ハロ、ヒドロキシル、アリール、ヘテロアリール、アルコキシ、アルコキシアルキルおよびアルコキシカルボニルを含む。本発明のある種の具体例において、アリールおよびヘテロアリールの好ましい置換基は、−Ｎ（Ｒ１１）（Ｒ１２）、アルキル、ハロ、ペルフルオロアルキル、ペルフルオロアルコキシ、アリールアルキルおよびアルキルアリールを含む。
【００２０】
ハロゲンなる用語は、臭素、塩素、フッ素およびヨウ素を含む。
「低級アルキル」なる用語は、１〜６個の炭素原子、いくつかの具体例においては、１〜３個の炭素原子を有するアルキル基を意味する。
「低級アルコキシ」なる用語は、本明細書で用いられる場合、Ｒが１〜６個の炭素原子のアルキル基であるＲ−Ｏ−基を意味する。
【００２１】
本発明に従って使用する場合、本発明に含まれる化合物または物質を提供することに関する「与える」なる用語は、かかる化合物または物質を直接投与すること、または体内で該化合物または物質の有効量を形成するプロドラッグ、誘導体またはアナログを投与することのいずれをも意味する。
【００２２】
本発明の化合物は、少なくとも部分的にエストロゲン欠乏または過剰により媒介されるか、またはエストロゲン剤の使用により治療または阻害することができる、症状、障害または病態の治療または阻害に有用なエストロゲン受容体モジュレーターである。特に、本発明の化合物は、産生された内因性エストロゲンのレベルが大きく減少する、閉経期前後、閉経期または閉経後の患者の治療に有用である。閉経期は、一般的に、最後の自然月経期間として定義され、血流中に循環するエストロゲンの実質的な減少を引き起こす、卵巣機能の停止により特徴付けられる。本明細書で用いられる場合、また、閉経期は、外科的もしくは化学的であり得るか、または卵巣機能の早期減少または停止を誘発する病態により引き起こされうる、エストロゲン産生の減少状態を含む。
【００２３】
したがって、本発明の化合物は、骨粗鬆症の治療または阻害、および骨の純損失を誘発する、新しい骨組織の個々の形成および旧組織の再吸収の不均衡に由来する骨脱塩の阻害に有用である。かかる骨減少は、広範囲の人々、特に、両側卵巣摘出術を受けた、または長期のコルチコステロイド治療を受けた、性腺発育障害を経験した、およびクッシング症候群を患っている女性の閉経後の女性において生じる。歯および顎骨を含む骨の特別なニーズである、骨折、欠陥のある骨構造を有する個体、および骨関係の外科治療および／または人工装具の埋め込みを受けた人々における、置換もこれらの化合物を用いて解決することができる。これらの上記した問題に加えて、これらの化合物は、変形性関節症、低カルシウム血症、高カルシウム血症、パジェット病、骨軟化症、骨灰分喪失、多発性骨髄腫および骨組織に悪影響を与える癌の他の形態の治療または阻害に用いることができる。
【００２４】
また、本発明の化合物は、前立腺肥大症、子宮平滑筋腫、乳癌、子宮内膜症、子宮内膜癌、多嚢胞性卵巣症候群、子宮内膜ポリープ、良性乳房疾患、腺筋症、卵巣癌、黒色腫、前立腺癌、結腸の癌、ＣＮＳ癌、例えば神経膠腫または星状細胞芽腫を含む、良性または悪性の異常な組織成長の治療または阻害に有用である。
【００２５】
本発明の化合物は心臓保護剤であり、これらは、コレステロール、トリグリセライド、Ｌｐ（ａ）およびＬＤＬレベルの低下；高コレステロール血症；高脂血症；心血管疾患；アテローム性動脈硬化症；末梢血管障害；再狭窄および血管痙攣の阻害または治療；および免疫介在血管損傷を誘発する細胞事象からの血管壁損傷の阻害に有用である。これらの心臓保護特性は、閉経後の患者をエストロゲンを用いて治療して骨粗鬆症を阻害する場合、男性においてエストロゲン治療を必要とする場合に非常に重要である。
【００２６】
また、本発明の化合物は抗酸化剤であり、したがって、フリーラジカル誘発病態の治療または阻害に有用である。抗酸化剤療法を必要とする特定の健康状態は、癌、中枢神経系障害、アルツハイマー病、骨疾患、加齢、炎症性障害、末梢血管障害、関節リウマチ、自己免疫疾患、呼吸窮迫、肺気腫、再灌流後傷害の予防、ウィルス性肝炎、慢性活動性肝炎、結核、乾癬、全身性エリテマトーデス、成人呼吸窮迫症候群、中枢神経系外傷および卒中である。
【００２７】
また、本発明の化合物は、認知増強および老年性認知症、アルツハイマー病、認知力低下、神経変性障害の治療または阻害、神経変性疾患または認知増強に有用である。
【００２８】
また、本発明の化合物は、炎症性腸疾患、潰瘍性直腸炎、クローン病および結腸炎；更年期関連症状、例えば、ホットフラッシュ、膣または外陰アトピー、萎縮性膣炎、膣乾燥、掻痒、性交疼痛症、排尿困難、頻尿、尿失禁、尿管感染症を含む血管運動症状；ホットフラッシュ、筋痛症、関節痛、不眠症、刺激過敏等を含む血管運動症状；男性型脱毛症；皮膚萎縮；座瘡；ＩＩ型糖尿病；機能不全性子宮出血；および不妊症の治療または阻害に有用である。
【００２９】
本発明の化合物は、白血病、子宮内膜切除、慢性の腎疾患もしくは肝疾患、または凝固疾患もしくは障害のような、無月経が有利である病態に有用である。
【００３０】
本発明の化合物は、特にプロゲスチンと組み合わせると、避妊薬として使用することができる。
【００３１】
特定の病態または障害の治療または阻害のために投与する場合、有効な投与量は、使用される特定の化合物、投与の方法、処置される症状およびその重篤度、ならびに処置される個体に関する種々の身体的因子に応じて異なることは理解される。本発明の化合物の有効な投与は、約０．１ｍｇ／日〜約１，０００ｍｇ／日の経口投与量で投与され得る。好ましくは、投与は、約１０ｍｇ／日〜約６００ｍｇ／日、より好ましくは、約５０ｍｇ／日〜約６００ｍｇ／日であり、１回投与量または２回もしくはそれ以上の分割投与である。計画される日用量は、投与経路により異なると考えられる。
【００３２】
かかる用量は、経口投与、移植による投与、非経口投与（静脈注射、腹腔内注射および皮下注射を含む）、直腸投与、鼻内投与、膣投与、および経皮投与を含む、活性化合物をレシピエントの血流に導くのに有用な方法で投与され得る。
【００３３】
本発明の活性化合物を含む経口製剤は、錠剤、カプセル、頬側剤、トローチ、ロゼンジ、および経口溶液、懸濁液または溶液を含む慣用の経口剤を含む。カプセルは、活性化合物と、医薬上許容されるデンプン（例えば、コーンスターチ、ジャガイモデンプンまたはタピオカデンプン）、糖、人工甘味料、結晶性および微結晶性セルロースのような粉末セルロース、小麦粉、ゼラチン、ガムなどの不活性充填剤および／または希釈剤との混合物を含有し得る。有用な錠剤製剤は、慣用的な圧縮法、湿式造粒法または乾式造粒法により調製され、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、ラウリル硫酸ナトリウム、微結晶性セルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、アルギン酸、アカシアガム、キサンタンガム、クエン酸ナトリウム、複合ケイ酸塩、炭酸カルシウム、グリシン、デキストリン、シュークロース、ソルビトール、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、ラクトース、カオリン、マンニトール、塩化ナトリウム、タルク、乾燥スターチおよび粉糖を含むがこれらに限定されるものではない、医薬上許容される希釈剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、表面調節剤（界面活性剤を含む）、懸濁化剤または安定剤を用いることができる。表面調節剤の代表例としては、ポロキサマー１８８、塩化ベンザルコニウム、ステアリン酸カルシウム、セトステアリルアルコール、セトマクロゴール乳化ろう、ソルビタンエステル、コロイド状二酸化ケイ素、リン酸塩、ドデシル硫酸ナトリウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、およびトリエタノールアミンが挙げられるが、これらに限定されるものではない。経口製剤は、標準的な遅延放出型または徐放型処方を利用して活性化合物の吸収を変えることができる。経口製剤は、また、要すれば適当な可溶化剤または乳化剤を含む、水またはフルーツジュース中の活性成分を投与することからなり得る。
【００３４】
いくつかの場合には、当該化合物をエアゾールの剤形で気道に直接投与することが望ましい。
【００３５】
また、本発明の化合物は、非経口または腹腔内投与され得る。遊離塩基または医薬上許容される塩としてのこれらの活性化合物の溶液または懸濁液は、ヒドロキシ−プロピルセルロースのような界面活性剤と適当に混合した水中にて調製することができる。分散液は、油中のグリセロール、液体ポリエチレングリコールおよびそれらの混合物中にて調製することができる。通常の貯蔵および使用条件下にて、これらの製剤は、微生物の増殖を阻害するために保存剤を含有する。
【００３６】
注射用に適した医薬剤形は、滅菌注射用溶液または分散液の即時調製用の滅菌水溶液または分散液および滅菌粉末を含む。全て場合、製剤は、無菌でなければならず、容易な注射器操作性が存在する程度に流動性でなければならない。製造および貯蔵条件下で安定でなければならず、細菌および真菌のような微生物の汚染作用から保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコール）、それらの適当な混合物、および植物油を含有する溶媒または分散媒であり得る。
【００３７】
この開示目的のために、経皮投与は、上皮組織および粘膜組織を含む、身体の表面および身体の導管の内部表層を通過する全ての投与を包含すると理解される。かかる投与は、ローション、クリーム、フォーム、パッチ、懸濁液、溶液および坐剤（直腸用および膣用）にて本発明の化合物またはその医薬上許容される塩を用いて行うことができる。
【００３８】
経皮投与は、活性化合物および担体を含有する経皮パッチの使用により行うことができ、ここで、この担体は、該活性化合物に対して不活性であり、皮膚に対して非毒性であり、全身吸収用の薬剤を皮膚を介して血流中にデリバリーさせるものである。該担体は、クリームおよび軟膏、ペースト、ゲルおよび閉鎖性デバイスのような多くの剤形をとることができる。クリームおよび軟膏は、水中油型または油中水型の粘稠液体または半固体エマルジョンであり得る。活性成分を含有する石油または親水性石油中に分散させた吸収性粉末からなるペーストもまた適している。種々の閉鎖性デバイスは、担体を含むかまたは含まずに活性成分を含有するリザーバーを覆っている半透膜、または活性成分を含有するマトリックスのような、血流中に活性成分を放出するために使用され得る。他の閉鎖性デバイスは文献公知である。
【００３９】
坐剤製剤は、坐剤の融点を変えるためのワックスを添加したかまたは添加しないカカオ脂およびグリセリンを含む伝統的な物質から調製され得る。種々の分子量のポリエチレングリコールのような水溶性坐剤基剤を使用することもできる。
【００４０】
本発明の化合物の調製に用いられる試薬は、市販されているか、または文献に記載された標準的な方法で調製することができる。
【００４１】
いくつかの代表的な化合物の調製法を下記スキーム１〜７に記載する。
【化３】
2007503466.tif 000005
【００４２】
【化４】
2007503466.tif 000006
【００４３】
【化５】
2007503466.tif 000007
【００４４】
【化６】
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【００４５】
【化７】
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【００４６】
【化８】
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【００４７】
【化９】
2007503466.tif 000011
【００４８】
実施例１
４−ブロモナフタレン−１−カルバルデヒド
１５０ｍｌのフラスコに、１，４−ジブロモナフタレン（２．０ｇ、７．０ｍｍｏｌ）および無水エーテル（５０ｍｌ）を加えた。０℃に冷却した後、ｎ−ＢｕＬｉ（３．１ｍｌのヘキサン中２．５Ｍ、７．７ｍｍｏｌ）を滴下し、２０分間撹拌した後、無水ＤＭＦ（１．６２ｍｌ、２１ｍｍｏｌ）を加えた。ついで、反応物を常温に加温し、１時間後、反応物を水（１０ｍｌ）でクエンチし、１０分間撹拌し、エーテル（３×）で抽出した。エーテル層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、シリカプラグに通し、濃縮して、１．０２ｇ（６２％）の生成物を純粋な灰白色固体として得た：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．８０−７．８５（２Ｈ，ｍ），８．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），８．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），８．３２（１Ｈ，ｍ），９．２４（１Ｈ，ｍ），１０．４２（１Ｈ，ｓ）。
Ｃ１１Ｈ７ＢｒＯとして分析：
計算値：Ｃ：５６．２０Ｈ：３．００
実測値：Ｃ：５６．１３Ｈ：２．９８
【００４９】
実施例２
４−［４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ）−フェニル］−ナフタレン−１−カルバルデヒド
４−ブロモナフタレン−１−カルバルデヒド（５００ｍｇ、２．１３ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（３．５ｍｌ、２Ｎの水溶液、７．０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．１３０ｇ、０．１１ｍｍｏｌ）、４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラノキシ）ボロン酸（６８０ｍｇ、２．５５ｍｍｏｌ）およびエチレングリコールジエチルエーテル（５５ｍｌ）の混合物を、６時間加熱還流した。反応物を冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、シリカプラグに通して濃縮した。カラムクロマトグラフィー（２０％のＥｔＯＡｃ−ヘキサン）に付して、５１０ｍｇ（６６％）の生成物を黄色固体として得た：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．２８（６Ｈ，Ｓ），１．０１（９Ｈ，ｓ），７．０５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．４３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．６０−７．７０（２Ｈ，ｍ），７．７７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），８．２３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），９．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），１０．４３（１Ｈ，ｓ）。
【００５０】
実施例３
４−（４−ヒドロキシフェニル）−１−ナフトアルデヒドオキシム
ＭｅＯＨ（３．２ｍｌ）中の４−［４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ）−フェニル］−ナフタレン−１−カルバルデヒド（５１０ｍｇ、１．４０ｍｍｏｌ）、ヒドロキシルアミン塩酸塩（１９６ｍｇ、２．８２ｍｍｏｌ）および無水ピリジン（０．２２８ｍｌ、２．８２ｍｍｏｌ）の混合物を、３時間加熱還流した。ついで、混合物を減圧下で濃縮し、エーテル（５ｍｌ）中に溶解した。ついで、ＴＨＦ（５．１ｍｌ、４．２ｍｍｏｌ）中の１．０ＭのＴＢＡＦを加え、５分間撹拌した。反応物に、水（５ｍｌ）を加え、ついで、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機物を、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、シリカプラグに通した。溶媒を蒸発させ、カラムクロマトグラフィー（１０％のＭｅＯＨ−ＥｔＯＡｃ）により精製して、１５０ｍｇ（４１％）の生成物を白色固体として得た：ｍｐ２００．０−２００．５℃；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ６．９３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．２９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．４２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．５４（１Ｈ，ａｐｐｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）．７．６１（１Ｈ，ａｐｐｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３），７．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），８．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），８．８１（１Ｈ，ｓ），９．６６（１Ｈ，ｓ），１１．４５（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２６２（［Ｍ−Ｈ］−）。
Ｃ１７Ｈ１３ＮＯ２として分析：
計算値：Ｃ，７７．５５；Ｈ，４．９８；Ｎ，５．３２
実測値：Ｃ，７７．１８；Ｈ，４．９３；Ｎ，５．１４
【００５１】
実施例４
４−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−ナフタレン−１−カルバルデヒド
４−ブロモナフタレン−１−カルバルデヒド（５５０ｍｇ、２．３４ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（２．３４ｍｌ、２Ｎの水溶液、４．６８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．１３５ｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、３−フルオロ−４−メトキシボロン酸（４８０ｍｇ、２．８３ｍｍｏｌ）およびエチレングリコールジエチルエーテル（２５ｍｌ）の混合物を１２時間加熱還流した。反応物を冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、層を分離した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、シリカプラグに通し、濃縮して、８１０ｍｇの粗生成物を得、これをさらに生成することなく次の工程に用いた。分析試料を逆相ＨＰＬＣ（水−ＣＨ３ＣＮ−０．１％ＴＦＡ）により精製した：ｍｐ１３７−１３８℃；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ３．９５（３Ｈ，ｓ），７．３０−７．４７（３Ｈ，ｍ），７．６３−７．７１（３Ｈ，ｍ），７．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），８．２４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），９．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），１０．４４（１Ｈ，ｓ）。
Ｃ１８Ｈ１３ＦＯ２として分析
計算値：Ｃ，７７．１３；Ｈ，４．６７
実測値：Ｃ，７６．２３；Ｈ，４．７４
【００５２】
実施例５
４−（３−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−ナフタレン−１−カルバルデヒド
３５ｍｌのフラスコに、４−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−ナフタレン−１−カルバルデヒド（７２０ｍｇの約８０％純度、２．０５ｍｍｏｌ）およびピリジン塩酸塩（３ｇ、２６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１９５℃に２時間加温し、ついで、わずかに冷却し、残ったピリジン塩酸塩を水（５０ｍｌ）中に溶解した。水層を酢酸エチル（３×）で抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、シリカプラグに通し、濃縮して、５７０ｍｇ（９９％）の生成物を灰白色泡沫体として得、これをさらに生成することなく次の工程に用いた：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．１６（２Ｈ，ｍ），７．３５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．００Ｈｚ），７．６０−７．８０（３Ｈ，ｍ），７．９８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ）８．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），９．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４），１０．２４（１Ｈ，ｓ），１０．４３（１Ｈ，ｓ）。
【００５３】
実施例６
４−（３−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−ナフタレン−１−カルバルデヒドオキシム
ＭｅＯＨ（１３ｍｌ）中の４−（３−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−ナフタレン−１−カルバルデヒド（５７０ｍｇ、２．１３ｍｍｏｌ）、ヒドロキシルアミン塩酸塩（２９７ｍｇ、４．２７ｍｍｏｌ）および無水ピリジン（０．３５ｍｌ、４．２７ｍｍｏｌ）の混合物を、１．５時間加熱還流した。ついで、混合物をエーテルで希釈し、水で洗浄し、有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、シリカプラグに通して濃縮した。逆相ＨＰＬＣ（水−ＣＨ３ＣＮ−０．１％のＴＦＡ）により精製して、４００ｍｇ（６７％）の生成物を白色固体として得た：ｍｐ１８７−１８８℃；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．１２（２Ｈ，ｍ），７．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ），７．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），７．５３−７．６４（２Ｈ，ｍ）．７．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６），８．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），８．８１（１Ｈ，ｓ），１０．０８（１Ｈ，ｓ），１１．４６（１Ｈ，ｓ）；ＭＳｍ／ｚ２８２（［Ｍ＋Ｈ］＋）。
Ｃ１７Ｈ１２ＦＮＯ２として分析
計算値：Ｃ，７２．５９；Ｈ，４．３０；Ｎ，４．９８
実測値：Ｃ，７２．２１；Ｈ，４．３４；Ｎ，４．８３
【００５４】
実施例７
トリフルオロメタンスルホン酸４，５−ジヒドロ−１−ベンゾチオフェン−４−イルエステル
１０００ｍｌの丸底フラスコに、６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−４−オン（７．３６ｇ、４８．３５ｍｍｏｌ）、無水ＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍｌ）、２，６−ルチジン（６．７６ｍｌ、５８．０ｍｍｏｌ）を加え、溶液を０℃に冷却した。トリフルオロメタンスルホン酸無水物（１５ｇ、５３．２ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温に加温した。ついで２時間にわたって、さらなるＴｆ２Ｏ（０．６ｇ、２．１ｍｍｏｌ）を加え、反応物を飽和ＮａＨＣＯ３でクエンチした。水層をＣＨ２Ｃｌ２（３×）で抽出し、シリカプラグに通し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（１０％のＥｔＯＡｃ−ヘキサン）に付して、１０．１ｇ（７４％）の生成物を褐色油として得た１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ２．６２５（２Ｈ，ｍ），２．９２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），５．９３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．７Ｈｚ），６．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ），７．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ）。
【００５５】
実施例８
４−（４−メトキシフェニル）−１−ベンゾチオフェン
トリフルオロメタンスルホン酸４，５−ジヒドロ−１−ベンゾチオフェン−４−イルエステル（９．０ｇ、３１．７ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（３９．６ｍｌ２Ｎの水溶液、７９．２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１．８３ｇ、１．６ｍｍｏｌ）、４−メトキシボロン酸（５．７８ｍｇ、３８．０３ｍｍｏｌ）およびエチレングリコールジエチルエーテル（３５０ｍｌ）の混合物を、６時間加熱還流した。反応物を冷却し、反応物を冷却し、ＥｔＯＡｃを加え、層を分離した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、シリカプラグに通し、濃縮して、５．０ｇの固体（［６，７，６’，７’−テトラヒドロ−［４，４’］ビ［ベンゾ［ｂ］チオフェニル］に対して１．４４：１の比）を得た。この物質をトルエン（５０ｍｌ）に溶解し、活性化ＭｎＯ２（４．５ｇ）を加えた。混合物を一晩還流し、冷却し、濾過し、濃縮して、５ｇの固体を得た（［４，４’］ビ［ベンゾ［ｂ］チオフェニル］に対して１．４：１の比）。カラムクロマトグラフィー（３：９７ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に付して、８８０ｍｇの純粋な生成物を単離した：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ３．８３（３Ｈ，ｓ），７．０９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），７．４０−７．４５（２Ｈ，ｍ），７．５１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），７．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），７．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）。
【００５６】
実施例９
７−ブロモ−４−（４−メトキシフェニル）−１−ベンゾチオフェン
２５ｍｌの丸底フラスコに、４−（４−メトキシフェニル）−１−ベンゾチオフェン（５００ｍｇ、２．０８ｍｍｏｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）を加え、溶液を−２０℃（アセトン−水、ＣＯ２）に冷却した。臭素（８．３３ｍｌの０．２５ＭのＣＨ２Ｃｌ２中貯蔵液、２．０８ｍｍｏｌ）をゆっくりと０．５時間にわたって滴下し、反応物をさらに０．５時間撹拌した。ついで、反応物を水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、シリカプラグに通し、濃縮して、４６０ｍｇの橙色油を得た。３：９７のＥｔＯＡｃ−ヘキサンから再結晶して、３５０ｍｇ（５３％）の生成物を白色結晶として得た：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ３．８３（３Ｈ，ｓ），７．１０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），７．５１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），７．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），７．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ）。
Ｃ１５Ｈ１１ＢｒＯＳとして分析：
計算値：Ｃ：５６．４４Ｈ：３．４７
実測値：Ｃ：５６．２５Ｈ：３．４２
【００５７】
実施例１０
４−（４−メトキシフェニル）−１−ベンゾチオフェン−７−カルバルデヒド
２５ｍｌの丸底フラスコに、無水ＴＨＦ（１０ｍｌ）中の７−ブロモ−４−（４−メトキシフェニル）−１−ベンゾチオフェン（３００ｍｇ、０．９４ｍｍｏｌ）の加え、溶液を−７８℃に冷却した。ｎ−ＢｕＬｉ（０．３８ｍｌのヘキサン中２．５Ｍ、０．９４ｍｍｏｌ）を滴下し、溶液を１０分間撹拌し、ついで、無水ＤＭＦ（０．１５ｍｌ、１．９ｍｍｏｌ）を加え、同時に−７８℃とした。反応物を１５分間撹拌し、ついで、水（１０ｍｌ）でクエンチし、エーテルで抽出した。有機層を合し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、１８０ｍｇ（７１．４％）のアルデヒド生成物を、黄色油として得た。逆相ＨＰＬＣ（ＣＨ３ＣＮ０．１％ＴＦＡ、水０．１％ＴＦＡ）に付して、１６０ｍｇの８：３の所望の生成物および副生成物の混合物のシグナルピークとしての４−（４−メトキシフェニル）−１−ベンゾチオフェン−２−カルバルデヒドを得た。別の副生成物（７−ブロモ−４−（４−メトキシフェニル）−１−ベンゾチオフェン−２−カルバルデヒド、２０ｍｇ）を回収した：１ＨＮＭＲ（８：３の比の所望の生成物＋７−ブロモ−４−（４−メトキシフェニル）−１−ベンゾチオフェン−２−カルバルデヒド）（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ３．８６（３Ｈ，ｓ，主＋副），７．１４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，副），７．１４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，主），７．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，副），７．５４−７．６７（４Ｈ，ｍ，主＋副），７．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，主），８．０９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，ｍｉｎｏｒ），８．１９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），８．４１（１Ｈ，ｓ，副），１０．１４（１Ｈ，ｓ，副），１０．２７（１Ｈ，ｓ，主）。
Ｃ１６Ｈ１２Ｏ２Ｓとして分析：
計算値：Ｃ：７１．６２Ｈ：４．５１
実測値：Ｃ：７１．３２Ｈ：４．５０
【００５８】
実施例１１
４−（４−ヒドロキシフェニル）−１−ベンゾチオフェン−７−カルバルデヒド
１０ｍｌの丸底フラスコに、６２．５％の純度の４−（４−メトキシフェニル）−１−ベンゾチオフェン−７−カルバルデヒド（残りの３７．５％は４−（４−メトキシフェニル）−１−ベンゾチオフェン−２−カルバルデヒド）（１０２ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）およびＣＨ２Ｃｌ２（２ｍｌ）を加え、−７８℃に冷却した。ついで、ＢＢｒ３（０．８ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２中１．０Ｍ、０．８ｍｍｏｌ）を滴下すると、班の物が暗褐色に変わった。反応物を室温に加温し、１時間後、ＴＬＣにより反応が完了しているのを確認し、ついで、水（１５ｍｌ）を注いでクエンチした。混合物をエーテルで希釈し、層を分離し、水相をさらにエーテルで抽出した。有機層を合し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、シリカプラグに通し、濃縮して、緑色固体を得た。逆相ＨＰＬＣ（ＣＨ３ＣＮ０．１％ＴＦＡ、水０．１％ＴＦＡ）に付して、５０ｍｇ（５２％）の所望の生成物を黄色固体として得た：ｍｐ２０３−２０４℃；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ６．９６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．５０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），７．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．９７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），８．１６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），９．８４（１Ｈ，ｓ），１０．２５（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２５３（［Ｍ−Ｈ］）。
Ｃ１５Ｈ１０Ｏ２Ｓとして分析：
計算値：Ｃ：７０．８４Ｈ：３．９６
実測値：Ｃ：７０．５６Ｈ：３．８８
【００５９】
実施例１２
４−（４−ヒドロキシフェニル）−１−ベンゾチオフェン−７−カルバルデヒドオキシム
５ｍｌの丸底フラスコに、ＭｅＯＨ（１．０ｍｌ）中の４−（４−ヒドロキシフェニル）−１−ベンゾチオフェン−７−カルバルデヒド（４２．０ｍｇ、０．１６５ｍｍｏｌ）、ヒドロキシルアミン塩酸塩（２３ｍｇ、０．３３１ｍｍｏｌ）および無水ピリジン（０．０２７ｍｌ、０．３３１ｍｍｏｌ）を加え、１．５時間還流し、ついで、冷却した。ついで、混合物をエーテルで希釈し、水（２ｍｌ）で洗浄し、有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ついで、シリカプラグに通した。減圧下で濃縮して、３８ｍｇ（８５％）の生成物を白色固体として得た。さらにカラムクロマトグラフィー（３０％のＥｔＯＡｃ−ヘキサン）により精製して、下記分析に適合する２２ｍｇの生成物を得た：ｍｐ２２９．５−２３０．５℃；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ６．９２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．４１（３Ｈ，ａｐｐｔ），７．４９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ），７．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．８５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），８．４９（１Ｈ，ｓ），９．６８（１Ｈ，ｓ），１１．６２（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２６８（［Ｍ−Ｈ］）。
Ｃ１５Ｈ１１ＮＯ２Ｓとして分析：
計算値：Ｃ：６６．９０Ｈ：４．１２Ｎ：５．２０
実測値：Ｃ：６６．４２Ｈ：４．２５Ｎ：４．８７
【００６０】
実施例１３
（２−ブロモ−フェニルスルファニル）−アセトアルデヒドジメチルアセタール
２００ｍｌのフラスコに、２−ブロモベンゼンチオール（１０．０ｇ、５２．９ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（８．０５ｇ、５８．２ｍｍｏｌ）およびアセトン（８５ｍｌ）を加えた。混合物を１５分間撹拌し、ブロモアセトアルデヒドジメチルアセタール（６．８ｍｌ、５８．２ｍｍｏｌ）を滴下した。反応を３日間進行させ、ついで、濾過剤で濾過し、濃縮した。クロマトグラフィー（５％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン〜１５％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に付して、１３．２５ｇ（９０％）の純度の生成物を黄色油として得た：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ３．２０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ），３．３０（６Ｈ，ｓ），４．５８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ），７．１１（１Ｈ，ｍ），７．４０（２Ｈ，ｍ），７．６１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）；
Ｃ１０Ｈ１３ＢｒＯ２Ｓとして分析：
計算値：Ｃ：４３．３３Ｈ：４．７３
実測値：Ｃ：４３．４０Ｈ：４．９５。
【００６１】
実施例１４
７−ブロモ−１−ベンゾチオフェン
５００ｍｌの三首フラスコに、１５ｇのポリリン酸（ＰＰＡ）、ついで、クロロベンゼン（２５０ｍｌ）を量り取った。混合物を還流した後、（２−ブロモ−フェニルスルファニル）−アセトアルデヒドジメチルアセタール（６０ｍｌのクロロベンゼン中８．０ｇ、２８．９ｍｍｏｌ）を、２．５時間にわたって、滴下漏斗を用いて滴下し、さらに２４時間還流した。反応物を冷却した後、シリカプラグで濾過し、濃縮して、６．０４ｇの琥珀色の油を得た。カラムクロマトグラフィー（１００％ヘキサン）によりさらに精製して、５．４７ｇ（８９％）の生成物を透明な油として得た：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．３７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．６３（２Ｈ，ｍ），７．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），７．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ）。
Ｃ８Ｈ５ＢｒＳとして分析：
計算値：Ｃ：４５．０９Ｈ：２．３６
実測値：Ｃ：４５．４１Ｈ：２．３７
【００６２】
実施例１５
７−（４−メトキシフェニル）−１−ベンゾチオフェン
５０ｍｌの丸底フラスコに、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（１０７ｍｇ、０．１１７ｍｍｏｌ）、ＫＦ（２．２５ｇ、３．９ｍｍｏｌ）、４−メトキシフェニルボロン酸（２．１４ｇ、１４．１ｍｍｏｌ）を加え、フラスコを窒素でパージした。ついで、無水ＴＨＦ（２５ｍｌ）を、ついで、５ｍｌのＴＨＦ中の７−ブロモ−１−ベンゾチオフェン（２．５ｇ、１１．７３ｍｍｏｌ）を、ついで、さらにＰ（Ｃｙ）３（１００ｍｇ、０．３５２ｍｍｏｌ）を加えた。常温で４時間後、生成物は観察されなかった。６０℃に一晩加熱して、約５０％進行した。さらに２％のＰｄ２（ｄｂａ）３（２１５ｍｇ）、０．１等量のボロン酸（２６ｍｇ）およびＴＨＦを加えた後２時間以内に反応は完了した。反応物を冷却し、エーテルで希釈し、シリカプラグで濾過し、濃縮して、３．３３ｇの琥珀色油を得た。カラムクロマトグラフィー（ローディング：５％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン〜１０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、２．７５ｇ（９７．５％）の生成物を淡黄色固体として得た：ｍｐ７４−７５℃；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ３．８４（３Ｈ，ｓ），７．１１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），７．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），７．４８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．５４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），７．６７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），７．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），７．８６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，０．８Ｈｚ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２３９（［Ｍ−Ｈ］）
Ｃ１５Ｈ１２ＯＳとして分析：
計算値：Ｃ：７４．９７Ｈ：５．０３
実測値：Ｃ：７４．５４Ｈ：４．８６
【００６３】
実施例１６
４−ブロモ−７−（４−メトキシフェニル）−１−ベンゾチオフェン
ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍｌ）中の７−（４−メトキシフェニル）−１−ベンゾチオフェン（５００ｍｇ、２．０８ｍｍｏｌ）の−２０℃の溶液に、Ｂｒ２（８．３３ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２中０．２５Ｍ貯蔵液、２．０８ｍｍｏｌ）を４５分にわたって加えた。反応物をさらに０．５時間撹拌し、水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、シリカプラグに通し、濃縮して、６６０ｍｇ（１００％）の生成物を黄色固体として得た。さらにヘキサン中３％のＥｔＯＡｃから再結晶して精製した：ｍｐ１０３−１０４℃；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ３．８４（３Ｈ，ｓ），７．１２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），７．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），７．５４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），７．６５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），７．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），７．９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ）。
Ｃ１５Ｈ１１ＢｒＯＳとして分析：
計算値：Ｃ：５６．４４Ｈ：３．４７
実測値：Ｃ：５６．８３Ｈ：３．４８
【００６４】
実施例１７
７−（４−メトキシフェニル）−１−ベンゾチオフェン−４−カルバルデヒド
２５ｍｌの丸底フラスコに、無水ＴＨＦ（１０ｍｌ）中の４−ブロモ−７−（４−メトキシフェニル）−１−ベンゾチオフェン（３００ｍｇ、０．９４ｍｍｏｌ）を加え、溶液を−１００℃（Ｎ２、エーテル）に冷却した。ついで、ＢｕＬｉ（０．３８ｍｌ、ヘキサン中２．５Ｍ、０．９４ｍｍｏｌ）を滴下し、溶液を１０分間撹拌し、ついで、無水ＤＭＦ（０．１５ｍｌ、１．９ｍｍｏｌ）を加え、同時に−１００℃に冷却した。反応物を１５分間撹拌し、ついで、水（１０ｍｌ）でクエンチし、エーテルで抽出した。有機層を合し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、６０ｍｇ（２４％）の生成物を黄色固体として得た。注：この反応は−８０℃（ＣＯ２、エーテル）でも進行し、定量的な収率で、約６０％のアルデヒド生成物が得られる：ｍｐ９８−９９℃；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ３．８６（３Ｈ，ｓ），７．１６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．７５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），８．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），８．１５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ），８．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），１０．３０（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２６９（［Ｍ＋Ｈ］＋）。
Ｃ１６Ｈ１２Ｏ２Ｓとして分析：
計算値：Ｃ：７１．６２Ｈ：４．５１
実測値：Ｃ：７１．２９Ｈ：４．５０
【００６５】
実施例１８
７−（４−ヒドロキシフェニル）−１−ベンゾチオフェン−４−カルバルデヒド
５０ｍｌの丸底フラスコに、ＣＨ２Ｃｌ２（８．５ｍｌ）中の７−（４−メトキシフェニル）−１−ベンゾチオフェン−４−カルバルデヒド（４２０ｍｇ、１．５７ｍｍｏｌ）を加え、溶液を−７８℃に冷却した。溶液に、ＢＢｒ３（３．１４ｍｌ、ＣＨ２Ｃｌ２中１．０Ｍ、３．１３ｍｍｏｌ）を滴下すると、反応物は暗褐色となった。この反応物を常温に加温すると、暗緑色に変わり、反応はＴＬＣにより１時間で完了したことを観察した。反応を水（１５ｍｌ）でクエンチした後、エーテルで抽出し、有機相を合し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、４６０ｍｇ（＞９５％）の生成物をわずかに不純物を含む緑色固体として得た。逆相ＨＰＬＣ（ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ含有水）を用いて、分析試料（１２０ｍｇ）をわずかに黄色の固体として得た：ｍｐ２０２−２０４℃；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ６．９７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６），７．６４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），８．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），８．１４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），８．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），９．９２（１Ｈ，ｓ），１０．２９（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２５３（［Ｍ−Ｈ］）。
Ｃ１５Ｈ１０Ｏ２Ｓとして分析：
計算値：Ｃ：７０．８４Ｈ：３．９６
実測値：Ｃ：６９．３４Ｈ：３．９７
【００６６】
実施例１９
７−（４−ヒドロキシフェニル）−１−ベンゾチオフェン−４−カルバルデヒドオキシム
１０ｍｌの丸底フラスコに、７−（４−ヒドロキシフェニル）−１−ベンゾチオフェン−４−カルバルデヒド（６１．７ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、ヒドロキシルアミン塩酸塩（３４ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）およびＭｅＯＨ（１．５ｍｌ）中の無水ピリジン（０．０４ｍｌ、０．４９ｍｍｏｌ）を加え、１時間加熱還流し、ついで、冷却した。ついで、混合物をエーテルで希釈し、水で希釈し、有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ついで、シリカプラグに通した。減圧下で濃縮して、６０ｍｇのわずかに黄色の固体を得、カラムクロマトグラフィー（４０％のＥｔＯＡｃ−ヘキサン）により精製して、５０ｍｇ（９２％）の生成物をわずかに黄色の固体として得た：ｍｐ２３０−２３１℃；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ６．９３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５５Ｈｚ），７．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６３），７．５７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５３Ｈｚ），７．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７１Ｈｚ），７．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６１Ｈｚ），８．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６４Ｈｚ），８．５７（１Ｈ，ｓ），９．７７（１Ｈ，ｓ），１１．４１（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２７０（［Ｍ＋Ｈ］＋）。
Ｃ１５Ｈ１１ＮＯ２Ｓとして分析
計算値：Ｃ：６６．９０Ｈ：４．１２Ｎ：５．２０
実測値：Ｃ：６５．７８Ｈ：４．１６Ｎ：４．８５
【００６７】
実施例２０
１−ブロモ−２−（２，２−ジメトキシ−エトキシ）−４−メチルベンゼン
無水エタノール（４０ｍｌ）、ナトリウムエトキシド（３１．７ｍｌ２１％ｗｔ．、８６．９４ｍｍｏｌ）および２−ブロモ−５−メチルフェノール（Gewali, Mohan B.; Ronald, Bruce P. J. Org. Chem. 1980, 45, 2224-2229）（１６．２５ｇ、８６．９４ｍｍｏｌ）の溶液に、２−ブロモ−１，１−ジメトキシエタン（１６．１７ｇ、９５．６４ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を一晩加熱還流し、減圧下で減少させ、および水およびエーテル間で分配した。水層をエーテルで抽出し、有機層をシリカプラグに通し、濃縮して、８．７１ｇ（３６％）の所望の生成物を淡黄色油として得た：１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ２．１９（３Ｈ，ｓ），３．３３（６Ｈ，ｓ），３．９６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ），４．６４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ），６．９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．０８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１．５Ｈｚ），７．３５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ）。
【００６８】
実施例２１
７−ブロモ−４−メチルベンゾフラン
５００ｍｌの丸底フラスコに、１５．６ｇのポリリン酸（ＰＰＡ）および無水クロロベンゼン（２６０ｍｌ）を加えた。混合物を還流温度にし、クロロベンゼン（６０ｍｌ）中の１−ブロモ−２−（２，２−ジメトキシ−エトキシ）−４−メチルベンゼン（８．１１ｇ、２９．５ｍｍｏｌ）を２時間にわたって滴下した。反応物を３時間加熱還流し、室温に冷却し、シリカプラグに通し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（１００％ヘキサン）に付して、４．６７ｇ（７５％）の生成物を白色ワックス状固体として得た：ｍｐ３２−３３℃；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ２．４６（３Ｈ，ｓ），７．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），７．１６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），７．４３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），８．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ）；ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ２１０（［Ｍ＋］）。
Ｃ９Ｈ７ＢｒＯとして分析：
計算値：Ｃ：５１．２２Ｈ：３．３４
実測値：Ｃ：５０．８３Ｈ：３．０８
【００６９】
実施例２２
７−（４−メトキシフェニル）−４−メチルベンゾフラン
４−メトキシフェニルボロン酸（１．５１ｇ、９．９５ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（１０．６６ｍｌ２Ｎの水溶液、２１．３２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．４１１ｇ、０．３５５ｍｍｏｌ）、７−ブロモ−４−メチルベンゾフラン（１．５ｇ、７．１１ｍｍｏｌ）およびエチレングリコールジエチルエーテル（７５ｍｌ）の混合物を一晩加熱還流した。反応物を冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、層を分離した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、シリカプラグに通し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（１０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に付して、１．５９ｇ（９４％）の生成物を白色ワックス状固体として得た：ｍｐ３９−４０℃；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ２．５１（３Ｈ，ｓ），７．０７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ），７．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．７９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），８．０４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２３９（［Ｍ＋Ｈ］＋）。
Ｃ１６Ｈ１４Ｏ２として分析：
計算値：Ｃ：８０．６５Ｈ：５．９２
実測値：Ｃ：８０．８９Ｈ：５．８５
【００７０】
実施例２３
７−（４−メトキシフェニル）−ベンゾフラン−４−カルバルデヒド
四塩化炭素（１５０ｍｌ）中の７−（４−メトキシフェニル）−４−メチルベンゾフラン（１．２７ｇ、５．３４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮＢＳ（１．０５ｇ、５．８７ｍｍｏｌ）およびＡＩＢＮ（５０ｍｇ）を加えた。溶液を２時間還流温度にし、室温に冷却し、固体を濾過した。ついで、溶液を濃縮し、無水ＣＨ３ＣＮ（５０ｍｌ）を加えた。ついで、ベンゼン亜セレン酸カリウム（Syper, Ludwik; Mlochowski, Jacek Synthesis 1984, 9, 747-752）（１．３３ｇ、５．８７ｍｍｏｌ）およびＫ２ＨＰＯ４（０．９３ｇ、５．３４ｍｍｏｌ）を加え、反応物を１時間加熱還流し、ついで、室温に冷却した。ついで、溶液をシリカプラグに通し、プラグを３０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで洗浄し、ついで、ＣＨ３ＣＮを減圧下で揮散させた。クロマトグラフィー（１００％ＣＨ２Ｃｌ２）により、Ｐｈ２Ｓｅ２副生成物を除去して、１．０ｇ（７５％）の生成物を白色固体として得た：ｍｐ１４３−１４４℃；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ３．８５（３Ｈ，ｓ），７．１５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），７．５７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ），７．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．９６（３Ｈ，ａｐｐｔ），８．３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ），８．０４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２５３（［Ｍ＋Ｈ］＋）。
Ｃ１６Ｈ１２Ｏ３として分析：
計算値：Ｃ：７６．１８Ｈ：４．７９
実測値：Ｃ：７５．７１Ｈ：４．９６
【００７１】
実施例２４
７−（４−ヒドロキシフェニル）−ベンゾフラン−４−カルバルデヒド
２５ｍｌの丸底フラスコに、無水ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）中の７−（４−メトキシフェニル）−ベンゾフラン−４−カルバルデヒド（４５０ｍｇ、１．７９ｍｍｏｌ）の−７８℃に冷却した溶液、ついで、ＢＢｒ３（３．５７ｍｌ、ＣＨ２Ｃｌ２中１．０Ｍ、３．５７ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温に加温し、１時間撹拌した。ついで、反応物を水でクエンチし、エーテルで希釈し、有機層を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。溶液をシリカプラグに通し、濃縮した。クロマトグラフィー（１：１のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に付して、３９０ｍｇ（９２％）の生成物を淡緑色固体として得た：ｍｐ１７９−１８０℃；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ６．９６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），７．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ），７．７１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．８４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），７．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），８．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），９．９３（１Ｈ，ｓ）１０．２２（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２３９（［Ｍ＋Ｈ］＋）。
Ｃ１５Ｈ１０Ｏ３として分析：
計算値：Ｃ：７５．６２Ｈ：４．２３
実測値：Ｃ：７５．４８Ｈ：４．２９
【００７２】
実施例２５
７−（４−ヒドロキシフェニル）−１−ベンゾフラン−４−カルバルデヒドオキシム
１５ｍｌの丸底フラスコに、７−（４−ヒドロキシフェニル）−ベンゾフラン−４−カルバルデヒド（２５０ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）、ヒドロキシルアミン塩酸塩（１４６ｍｇ、２．１０ｍｍｏｌ）、無水ＭｅＯＨ（６．５ｍｌ）および無水ピリジン（０．１７ｍｌ、２．１０ｍｍｏｌ）を加えた。ついで、フラスコをシールし、６８℃に１時間加熱し、室温に冷却し、エーテルで希釈し、層を分離した。エーテル層を水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、シリカプラグに通し、濃縮して、２５０ｍｇ（９４％）の生成物を黄色固体として得た。さらに、分析用にクロマトグラフィー（１：１のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製した：ｍｐ２１６−２１７℃；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ６．９２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），７．３６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ），７．４９（２Ｈ，ａｐｐｓ），７．７４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），８．１４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ），８．４２（１Ｈ，ｓ），９．７３（１Ｈ，ｓ）１１．３６（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２５４（［Ｍ＋Ｈ］＋）。
Ｃ１５Ｈ１１ＮＯ３として分析：
計算値：Ｃ：７１．１４Ｈ：４．３８Ｎ：５．５３
実測値：Ｃ：７０．５３Ｈ：４．３２Ｎ：５．４０
【００７３】
実施例２６
４’−メトキシ−４−メチル−ビフェニル−３−オール
４−メトキシフェニルボロン酸（４．５５ｇ、２１．３８ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（３２．１ｍｌ２Ｎの水溶液、６４．２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１．２４ｇ、１．０７ｍｍｏｌ）、５−ヨウド−２−メチルフェノール（Hodgson, Moore J. Chem. Soc. 1926, 2038）（５．０ｇ、２１．３８ｍｍｏｌ）およびエチレングリコールジエチルエーテル（２２５ｍｌ）の混合物を一晩加熱還流した。反応物を冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、層を分離した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、シリカプラグに通し、濃縮した。クロマトグラフィー（３０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に付して、１．６４ｇ（３６％）の生成物を白色固体として、および２ｇの４−メトキシビフェニルを望ましくない副生成物として得た：ｍｐ１４６−１４７℃；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ２．１３（３Ｈ，ｓ），３．７８（３Ｈ，ｓ），６．９４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２．７Ｈｚ），７．００（３Ｈ，ｍ），７．０９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．４８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ），９．３６（１Ｈ，ｓ）。
Ｃ１４Ｈ１４Ｏ２として分析：
計算値：Ｃ：７８．４８Ｈ：６．５９
実測値：Ｃ：７７．７１Ｈ：６．５１
【００７４】
実施例２７
３−（２，２−ジメトキシ−エトキシ）−４’−メトキシ−４−メチル−ビフェニル
ＮａＨ（３５７ｍｇ（６００ｍｇ、鉱油中６０％、ヘキサンで３回洗浄）、１４．８６ｍｍｏｌ）に、乾燥ＴＨＦ（１００ｍｌ）、４’−メトキシ−４−メチル−ビフェニル−３−オール（１．５９ｇ、７．４３ｍｍｏｌ）および２−ブロモ−１，１−ジメトキシエタン（１．７６ｇ、１０．４０ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を６０℃で一晩撹拌し、冷却し、シリカプラグに通し、濃縮して、１．６６ｇ（７４％）の生成物を白色固体として得た：ｍｐ３９−４０℃；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ２．１７（３Ｈ，ｓ），３．３８（６Ｈ，ｓ），３．７９（３Ｈ，ｓ），４．０９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ），４．７３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ），７．００（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．０９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１．５Ｈｚ），７．１５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ），７．１８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．６２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３０３（［Ｍ＋Ｈ］＋）。
Ｃ１８Ｈ２２Ｏ４として分析：
計算値：Ｃ：７１．５０Ｈ：７．３３
実測値：Ｃ：７１．４６Ｈ：７．０４
【００７５】
実施例２８
４−（４−メトキシフェニル）−７−メチルベンゾフラン
ポリリン酸（約０．５ｇ）およびクロロベンゼンの混合物を還流温度にし、クロロベンゼン（１２ｍｌ）中の３−（２，２−ジメトキシ−エトキシ）−４’−メトキシ−４−メチル−ビフェニル（１．６１ｇ、５．３３ｍｍｏｌ）を滴下した。４時間後、反応物を冷却し、シリカプラグ（プラグはエーテルで洗浄した）に通し、濃縮して、１．２６ｇ（１００％）の生成物を淡褐色固体として得た：ｍｐ４０−４１℃；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ２．５０（３Ｈ，ｓ），３．８２（３Ｈ，ｓ），７．０３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），７．０７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ），７．１９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．２３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．５６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ），８．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ）。
Ｃ１６Ｈ１４Ｏ２として分析：
計算値：Ｃ：８０．１４Ｈ：５．９２
実測値：Ｃ：８０．１４Ｈ：５．７８
【００７６】
実施例２９
４−（４−メトキシフェニル）−ベンゾフラン−７−カルバルデヒド
２５０ｍｌの丸底フラスコに、４−（４−メトキシフェニル）−７−メチルベンゾフラン（６００ｍｇ、２．５２ｍｍｏｌ）、ＣＣｌ４（７０ｍｌ）、ＮＢＳ（４９０ｍｇ、２．７７ｍｍｏｌ）および触媒量のＡＩＢＮ（２５ｍｇ）を加えた。反応物を２時間還流し、ついで、反応物を冷却し、固体を濾過し、溶液を濃縮した。ＣＨ３ＣＮ（３０ｍｌ）、Ｋ２ＨＰＯ４（４４０ｍｇ、２．５３ｍｍｏｌ）およびベンゼン亜セレン酸カリウム（６３０ｍｇ、２．７７ｍｍｏｌ）を加え、反応物を２時間還流した。反応物を冷却し、シリカプラグ（３０％のＥｔＯＡｃ／ｈｅｘで洗浄した）に通し、濃縮して、８１０ｍｇの橙色固体を得た。さらに、クロマトグラフィー（１００％ＣＨ２Ｃｌ２）により精製して、５００ｍｇ（７８％）の生成物を黄褐色固体として得た：ｍｐ１０４−１０５℃；１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ３．８５（３Ｈ，ｓ），７．１４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），７．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．６９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），８．２６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），１０．３６（１Ｈ，ｓ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ２５３．０８６２２（［Ｍ＋Ｈ］＋）。
Ｃ１６Ｈ１２Ｏ３として分析：
計算値：Ｃ：７６．１８Ｈ：４．７９
実測値：Ｃ：７５．６１Ｈ：４．７３
【００７７】
実施例３０
４−（４−ヒドロキシフェニル）−ベンゾフラン−７−カルバルデヒド
１００ｍｌの丸底フラスコに、４−（４−メトキシフェニル）−ベンゾフラン−７−カルバルデヒド（４８０ｍｇ、１．９０ｍｍｏｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（１２ｍｌ）を加え、溶液を−７８℃に冷却した。ついで、ＢＢｒ３（３．８ｍｌ、ＣＨ２Ｃｌ２中１．０Ｍ、３．８ｍｍｏｌ）を滴下し、反応物を室温に加温した。１．５時間後、反応物を水（１５ｍｌ）でクエンチし、エーテル（３×）で抽出し、シリカプラグに通し、濃縮して、１６０ｍｇ（３５％）の生成物を泡沫体として得た。クロマトグラフィー（１：１のＥｔＯＡｃ：ヘキサン）により精製して、分析試料を得た：ｍｐ１８４−１８５℃；１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ６．９６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ），７．５２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．５８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），８．２４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），９．８４（１Ｈ，ｓ），１０．３５（１Ｈ，ｓ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ２３９．０７０２７（［Ｍ＋Ｈ］＋）。
Ｃ１５Ｈ１０Ｏ３として分析：
計算値：Ｃ：７５．６２Ｈ：４．２３
実測値：Ｃ：７４．５２Ｈ：４．２７
【００７８】
実施例３１
４−（４−ヒドロキシフェニル）−ベンゾフラン−７−カルバルデヒドオキシム
１０ｍｌの丸底フラスコに、４−（４−ヒドロキシフェニル）−ベンゾフラン−７−カルバルデヒド（１００ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）、ヒドロキシルアミン塩酸塩（５８ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）およびＭｅＯＨ（３．５ｍｌ）中の無水ピリジン（０．０７ｍｌ、０．８４ｍｍｏｌ）を加え、１．５時間還流し、ついで、冷却した。ついで、混合物をエーテルで希釈し、水で洗浄し、有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ついで、シリカプラグに通した。溶液を減圧下で濃縮し、カラムクロマトグラフィー（５０％のＥｔＯＡｃ−ヘキサン）により精製して、３０ｍｇ（２８％）の生成物をわずかに黄色の固体として得た。望ましくない副生成物としての４−（７−ジメトキシメチルベンゾフラン−４−イル）−フェノールを単離した（６０ｍｇ）。副生成物（６０ｍｇ、０．２１２ｍｍｏｌ）を、６５℃にＭｅＯＨ（２ｍｌ）中のヒドロキシルアミン塩酸塩（１５ｍｇ、０．２１２ｍｍｏｌ）と一晩シールしたフラスコ中で加熱することにより望ましい生成物に変換した。ついで、反応物をエーテル／水で希釈し、有機層をシリカプラグに通し、濃縮して、４０ｍｇ（７５％）の生成物を純粋な白色固体として得た：ｍｐ２１９−２２０℃；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ６．９２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），７．３４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．５０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．６１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），８．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），８．４４（１Ｈ，ｓ），９．７２（１Ｈ，ｓ），１１．５３（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２５４（［Ｍ＋Ｈ］＋）。
Ｃ１５Ｈ１１ＮＯ３として分析：
計算値：Ｃ：７１．１４Ｈ：４．３８Ｎ：５．５３
実測値：Ｃ：７１．０７Ｈ：４．４１Ｎ：５．５１
【００７９】
実施例３２
１−（２，２−ジメチルオキシ−エトキシ）−４−ヨウド−２−メチルベンゼン
１Ｌの丸底フラスコに、無水ＤＭＦ（３００ｍｌ）中の４−ヨウド−２−メチルフェノール（１０．０ｇ、４２．７ｍｍｏｌ）の０℃に冷却した溶液を加えた。ついで、ＮａＨ（３．４２ｇ、鉱油中６０％、８５．５ｍｍｏｌ）を少量ずつゆっくりと加え、反応物を室温に加温し（約０．５ｈ）、ついで、２−ブロモ−１，１−ジメトキシエタン（１０．１ｍｌ、８５．５ｍｍｏｌ）を加え、ついで、一晩撹拌した。反応物を０℃に冷却し、５％のＮａＯＨ（３００ｍｌ）をゆっくりと加え、混合物をエーテル（１．５Ｌ）で希釈した。層を分離し、水層をエーテル（３×５００ｍｌ）で洗浄した。有機層を、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、シリカプラグに通し、減圧下で濃縮した。クロマトグラフィー（３０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に付して、１２．４９（９１％）の生成物を透明油として得た：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ２．１１（３Ｈ，ｓ），３．３５（６Ｈ，ｓ），３．９５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ），４．６８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ），６．８０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．４３−７．４８（２Ｈ，ｍ）。
Ｃ１１Ｈ１５ＩＯ３として分析：
計算値：Ｃ：４１．０１Ｈ：４．６９
実測値：Ｃ：４０．７３Ｈ：４．６２
【００８０】
実施例３３
５−ヨウド−７−メチル−ベンゾフラン
１Ｌの三首フラスコに、ＰＰＡ（２．０ｇ）、無水クロロベンゼン（３００ｍｌ）を加え、混合物を還流温度にした。ついで、クロロベンゼン（８０ｍｌ）中の１−（２，２−ジメチルオキシ−エトキシ）−４−ヨウド−２−メチルベンゼン（１１．１６ｇ、３４．６６ｍｍｏｌ）を滴下漏斗を用いて２時間にわたってゆっくり加えた。ついで、反応物を冷却し、シリカプラグ（クロロベンゼンで洗浄した）に通し、濃縮して、生成物と４−ヨウド−２−メチルフェノールの混合物を得た。カラムクロマトグラフィー（１００％ヘキサン）に付して、４．４９ｇ（５３％）の生成物を透明油として得た：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ２．４４（３Ｈ，ｓ），６．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），７．４６（１Ｈ，ｂｒｓ），７．８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ），８．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ）；ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ２５８（［Ｍ］＋）。
Ｃ９Ｈ７ＩＯとして分析：
計算値：Ｃ：４１．８９Ｈ：２．７３
実測値：Ｃ：４１．４６Ｈ：２．６３
【００８１】
実施例３４
５−（４−メトキシフェニル）−７−メチル−ベンゾフラン
４−メトキシフェニルボロン酸（４．６４ｇ、３０．５４ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（３１ｍｌ、２Ｎの水溶液、６１．０９ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．８８ｇ、０．７６ｍｍｏｌ）、５−ヨウド−７−メチル−ベンゾフラン（３．９４ｇ、１５．２７ｍｍｏｌ）およびエチレングリコールジエチルエーテル（１６０ｍｌ）の混合物を、１．５時間還流した。反応物を冷却し、エーテル／水（１Ｌ／５０ｍｌ）を加え、層を分離した。さらに水層をエーテル（２×５００ｍｌ）で抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、シリカプラグに通し、濃縮して、６．５４ｇの茶色固体を得た。１ＨＮＭＲでの分析により、望ましい生成物と４−メトキシ−ビフェニルが、約１：１の比（６．５４ｇ約３．６９ｇ生成物、９９％収率）であることが示され、カラムクロマトグラフィーにより分離できず、次の工程を行った、逆相ＨＰＬＣ（ＣＨ３ＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）に付して分析試料を白色固体として得た：ｍｐ８２−８３℃；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ２．５２（３Ｈ，ｓ），３．８０（３Ｈ，ｓ），６．９７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ），７．１２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），７．３８（１Ｈ，ｓ），７．６０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），７．６６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ），８．０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ）；ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ２３８（［Ｍ］＋）。
Ｃ１６Ｈ１４Ｏ２として分析：
計算値：Ｃ：８０．６５Ｈ：５．９２
実測値：Ｃ：８０．５２Ｈ：５．５５
【００８２】
実施例３５
５−（４−メトキシ−フェニル）−ベンゾフラン−７−カルバルデヒド
四塩化炭素（１９０ｍｌ）中の５−（４−メトキシフェニル）−７−メチル−ベンゾフラン（１．６０ｇ、２．８３ｇ、４−メトキシ−ビフェニル６．７２ｍｍｏｌと１：１の比）の溶液に、ＮＢＳ（１．３２ｇ、７．４０ｍｍｏｌ）およびＡＩＢＮ（５０ｍｇ）を加えた。溶液を２時間還流温度にし、室温に冷却し、固体を濾過した。ついで、溶液を濾過し、無水ＣＨ３ＣＮ（８０ｍｌ）を加えた。ついで、ベンゼン亜セレン酸カリウム（２．１４ｇ、９．４１ｍｍｏｌ）およびＫ２ＨＰＯ４（１．１７ｇ、６．７２ｍｍｏｌ）を加え、ついで、反応物を１時間加熱還流し、ついで、室温に冷却した。ついで、溶液をシリカプラグに通し、減圧下で濃縮した。クロマトグラフィー（１００％ＣＨ２Ｃｌ２）に付して８５０ｍｇ（５０％）の生成物を白色固体として得た：ｍｐ９４−９５℃；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ３．８２（３Ｈ，ｓ），７．０８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．１４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），７．７１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），８．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ），８．２１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），８．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ），１０．３７（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２５３（［Ｍ＋Ｈ］＋）。
Ｃ１６Ｈ１２Ｏ３として分析：
計算値：Ｃ：７６．１８Ｈ：４．７９
実測値：Ｃ：７４．９６Ｈ：４．３２
【００８３】
実施例３６
５−（４−ＯＨ−フェニル）−ベンゾフラン−７−カルバルデヒド
１０ｍｌの丸底フラスコに５−（４−メトキシ−フェニル）−ベンゾフラン−７−カルバルデヒド（１００ｍｇ、０．３９５ｍｍｏｌ）およびピリジン塩酸塩（６００ｍｇ、５．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１９５℃に１時間還流し、若干冷却し、ついで、水を加えて、残ったピリジン塩酸塩を溶解した。水層をＥｔＯＡｃで抽出し、シリカプラグに通し、濃縮した。さらに、カラムクロマトグラフィーにより精製して、７６ｍｇ（８１％）の生成物を黄色固体として得た：ｍｐ１４８−１４９℃；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ６．８６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），７．０９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），７．５５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），８．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ），８．１６（２Ｈ，ａｐｐｄ），９．５６（１Ｈ，ｓ），１０．３２（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２３７（［Ｍ−Ｈ］−）。
Ｃ１５Ｈ１０Ｏ３として分析：
計算値：Ｃ：７５．６２Ｈ：４．２３
実測値：Ｃ：７４．８８Ｈ：４．０８
【００８４】
実施例３７
５−（４−ヒドロキシフェニル）−１−ベンゾフラン−７−カルバルデヒドオキシム
１０ｍｌの丸底フラスコに、５−（４−ヒドロキシフェニル）−ベンゾフラン−７−カルバルデヒド（７６ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）、ヒドロキシルアミン塩酸塩（４４．４ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）、無水ＭｅＯＨ（２ｍｌ）および無水ピリジン（０．０６ｍｌ、０．６７ｍｍｏｌ）を加えた。ついで、反応物を６８℃に加熱し、反応を５分間行った。ついで、反応物を室温に冷却し、エーテルで希釈し、層を分離した。エーテル層を水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、シリカプラグに通し、濃縮して、２０ｍｇ（２５％）の生成物を黄色固体として得た：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ６．８６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．０３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ），７．５１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ），７．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ），８．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ），８．４５（１Ｈ，ｓ）９．５６（１Ｈ，ｓ），１１．５７（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２５４（［Ｍ＋Ｈ］＋）。
Ｃ１５Ｈ１１ＮＯ３として分析：
計算値：Ｃ：７１．１４Ｈ：４．３８Ｎ：５．５３
実測値：Ｃ：６９．６７Ｈ：４．２３Ｎ：５．１５
【００８５】
実施例３８
２−ブロモ−１−（２，２−ジメチルオキシ−エトキシ）−４−メチルベンゼン
２Ｌの丸底フラスコに、無水ＤＭＦ（９４０ｍｌ）中の２−ブロモ−４−メチルフェノール（２５ｇ、１３３．６６ｍｍｏｌ）の０℃に冷却した溶液を加えた。ついで、ＮａＨ（１０．７ｇ、鉱油中６０％、２６７．３ｍｍｏｌ）を少量ずつゆっくりと加え、反応物を室温に加温し（約０．５ｈ）、ついで、２−ブロモ−１，１−ジメトキシエタン（３１．６ｍｌ、２６７．４ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を３時間室温に加温し、ついで、４時間１００℃にした。反応物を冷却し、シリカプラグに通し、濃縮した。褐色混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、再びシリカプラグに通し、褐色固体を除去し、濃縮して、２４．０ｇ（６５％）の琥珀色の油を得た：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ２．２３（３Ｈ，ｓ），３．３７（６Ｈ，ｓ），４．００（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ），４．６８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ），７．０３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．１２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１．７Ｈｚ），７．４０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ）。
【００８６】
実施例３９
７−ブロモ−５−メチルベンゾフラン
２Ｌの丸底フラスコに、ＰＰＡ（３ｇ）、無水クロロベンゼン（１．０Ｌ）を加え、混合物を還流し、ついで、クロロベンゼン（２００ｍｌ）中の２−ブロモ−１−（２，２−ジメチルオキシ−エトキシ）−４−メチルベンゼン（２２．９ｇ、８３．３ｍｍｏｌ）を滴下漏斗で２時間にわたってゆっくり滴下した。ついで、反応物を冷却し、シリカプラグ（クロロベンゼンで洗浄した）に通し、濃縮して、生成物と４−ヨウド−２−メチルフェノールの混合物を得た。カラムクロマトグラフィー（１０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に付して、１１．５４ｇ（６６％）の生成物を透明油として得た：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ２．４０（３Ｈ，ｓ），７．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），７．３９（１Ｈ，ｓ），７．４５（１Ｈ，ｓ），８．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ）。
Ｃ９Ｈ７ＢｒＯとして分析：
計算値：Ｃ：５１．２２Ｈ：３．３４
実測値：Ｃ：５２．５４Ｈ：３．５８
【００８７】
実施例４０
７−（４−メトキシフェニル）−５−メチル−ベンゾフラン
４−メトキシフェニルボロン酸（４．７６ｇ、３１．３ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（３２．６２Ｎの水溶液、６５．２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１．５ｇ、１．３ｍｍｏｌ）、７−ブロモ−５−メチルベンゾフラン（５．５ｇ、２６．１ｍｍｏｌ）およびエチレングリコールジエチルエーテル（２７５ｍｌ）の混合物を、１２時間加熱還流した。反応物を冷却し、エーテル（５００ｍｌ）を加え、層を分離した。水層をさらにエーテルで抽出し、有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、シリカプラグに通し、濃縮して、７．１６ｇの褐色油を得た。さらに、カラムクロマトグラフィー（１０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、５．６２ｇ（９１％）の生成物を透明油として得た：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ３．４４（３Ｈ，ｓ），３．８２（３Ｈ，ｓ），６．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），７．１０８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．３０（１Ｈ，ｓ），７．３８（１Ｈ，ｓ），７．８１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），８．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ）。
【００８８】
実施例４１
７−（４−メトキシフェニル）−ベンゾフラン−５−カルバルデヒド
四塩化炭素（５６０ｍｌ）中の７−（４−メトキシフェニル）−５−メチル−ベンゾフラン（４．６６ｇ、１９．５８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮＢＳ（３．８３ｇ、２１．５４ｍｍｏｌ）およびＡＩＢＮ（７５ｍｇ）を加えた。溶液を４時間還流温度にし、室温に冷却し、半分まで減少させ、固体を濾過した。ついで、溶液を濃縮して、黄色固体を得、無水ＣＨ３ＣＮ（２３０ｍｌ）を加えた。ついで、ベンゼン亜セレン酸カリウム（５．３４ｇ、２３．５ｍｍｏｌ）およびＫ２ＨＰＯ４（４．０９ｇ、２３．４８ｍｍｏｌ）を加え、ついで、反応物を１．５時間還流し、ついで、室温に冷却した。ついで、溶液をシリカプラグに通し、減圧下で濃縮した。クロマトグラフィー（１００％ＣＨ２Ｃｌ２）に付して、３．３ｇ（６７％）の生成物を淡橙色固体として得た：ｍｐ７９−８０℃；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ３．８５（３Ｈ，ｓ），７．１３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．２３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），７．８８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），８．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ），８．２３（２Ｈ，ｍ），１０．１３（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２５３（［Ｍ＋Ｈ］＋）。
Ｃ１６Ｈ１２Ｏ３として分析：
計算値：Ｃ：７６．１８Ｈ：４．７９
実測値：Ｃ：７５．４４Ｈ：４．８５
【００８９】
実施例４２
７−（４−ヒドロキシフェニル）−ベンゾフラン−５−カルバルデヒド
１０ｍｌの丸底フラスコに、７−（４−メトキシフェニル）−ベンゾフラン−５−カルバルデヒド（０．５０ｇ、１．９８ｍｍｏｌ）およびピリジン塩酸塩（１．２ｇ、５．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１９０℃に２時間加熱し、若干冷却し、ついで、水（１０ｍｌ）を加えて残ったピリジン塩酸塩を溶解した。水層をＥｔＯＡｃ（３×）で抽出し、シリカプラグに通し、濃縮して、４５０ｍｇ（９６％）の粗生成物を淡黄色泡沫体として得た。この反応からの粗物質を第２のバッチ（１ｇのスケール反応）と合し、カラムクロマトグラフィー（１：１のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、７６０ｍｇの生成物を黄色固体として得た：ｍｐ１５４−１５５℃；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ６．９５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．２１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），７．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ），８．１９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ），８．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），９．８１（１Ｈ，ｓ），１０．１２（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２３７（［Ｍ−Ｈ］−）。
Ｃ１５Ｈ１０Ｏ３として分析：
計算値：Ｃ：７５．６２Ｈ：４．２３
実測値：Ｃ：７５．１９Ｈ：４．０１
【００９０】
実施例４３
７−（４−ヒドロキシフェニル）−ベンゾフラン−５−カルバルデヒドオキシム
２５ｍｌの丸底フラスコに、７−（４−ヒドロキシフェニル）−ベンゾフラン−５−カルバルデヒド（４００ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ）、ヒドロキシルアミン塩酸塩（２３４ｍｇ、３．３６ｍｍｏｌ）、無水ＭｅＯＨ（１０．４ｍｌ）および無水ピリジン（０．２７２ｍｌ、３．３６ｍｍｏｌ）を加えた。ついで、反応物を６８℃に加熱し、反応物を１時間還流した。ついで、反応物を室温に冷却し、エーテルで希釈し、層を分離した。エーテル層を水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、シリカプラグに通し、濃縮して、４１０ｍｇ（９６％）の生成物を黄色固体として得た。粗物質は、１ＨＮＭＲ（約４％のｃｉｓ異性体が検出された）およびＬＣ−ＭＳ（１のピーク）によって純粋であることが示された：ｍｐ１９２−１９４℃：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ６．９２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），７．６９−７．７２（３Ｈ，ｍ），７．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ），８．０９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ），８．２７（１Ｈ，ｓ），９．７４（１Ｈ，ｓ），１１．１４（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２５４（［Ｍ＋Ｈ］＋）。
Ｃ１５Ｈ１１ＮＯ３として分析：
計算値：Ｃ：７１．１４Ｈ：４．３８Ｎ：５．５３
実測値：Ｃ：７０．８２Ｈ：４．２２Ｎ：５．４５
【００９１】
実施例４４
本発明の代表的化合物を、ＥＲαおよびＥＲβの両方に関して、１７β−エストラジオールと競合する能力を評価した。この試験方法は、特定の化合物が、エストロゲン受容体に結合するかどうか（したがって、「エストロゲン様」であるかどうか）およびＥＲαまたはＥＲβに対して選択的であるかどうかを測定するための方法である。値を下記表を示し、ＩＣ５０として記録した。１７β−エストラジオールは、比較用の標準的基準として含まれる。用いられる方法は、以下に簡潔に記載する。ヒトＥＲαまたはＥＲβのエストロゲン受容体リガンド結合ドメイン（Ｄ、ＥおよびＦ）を発現するイー・コリの粗溶解物を調製した。受容体および化合物の両方を、１ｍＭのＥＤＴＡを補足した１ＸのダルベッコＰＢＳ（ＤＰＢＳ）中に希釈した。高結合マスクマイクロタイタープレートを用いて、１００μＬの受容体（１μＧ／ｗｅｌｌ）を、２ｎＭの［３Ｈ］−１７β−エストラジオールおよび種々の濃度の化合物と合した。室温にて５〜１５時間後、プレートをＤＰＢＳ／１ｍＭのＥＤＴＡで洗浄し、結合放射活性を液体シンチレーション計数により測定した。ＩＣ５０を、総１７β−エストラジオール結合の５０％を減少させる化合物の濃度として測定した。得られた結果を下記表に記載する。
【００９２】
【表１】
2007503466.tif 000012
【００９３】
標準的な薬理学的試験方法において得られた結果は、本発明の化合物が、ＥＲβ受容体に対して幾分強い選択的親和性を有する、エストロゲン化合物であることを示している。本発明の化合物は、ＥＲαよりもＥＲβに対して高い選択的親和性を有するものから、両受容体に対してほぼ同等の親和性を有するものまである。したがって、本発明の化合物は、少なくとも一部は、受容体親和性選択性プロフィールに基づいた範囲の活性に及ぶであろう。加えて、各々の新規受容体リガンド複合体は特異的であり、かくして様々な共調節性タンパク質との相互作用も特異的であるので、本発明の化合物は、それらがおかれる細胞の状況に基づいて異なる調節作用を示すであろう。例えば、ある細胞型において、ある化合物がエストロゲンアゴニストとして作用し、一方他の組織においてはアンタゴニストとして作用することも起こりうる。そのような活性を有する化合物は、時にＳＥＲＭｓ（選択的エストロゲン受容体モジュレーター）と呼ばれてきた。しかしながら、多くのエストロゲンとは異なり、ＳＥＲＭｓの多くは子宮の湿性重量の増加を引き起こさない。これらの化合物は子宮においては抗エストロゲン性であり、子宮組織におけるエストロゲンアゴニストの栄養作用に完全に拮抗し得る。しかしながら、これらの化合物は、骨、心臓血管および中枢神経系においてはエストロゲンアゴニストとして作用する。これらの化合物はこのような組織選択性を有しているので、（骨または心臓血管のような特定の組織における）エストロゲン欠乏または（子宮または乳腺における）エストロゲン過剰によって引き起こされたまたはそれと関連する、哺乳類の病態または症候群の治療または予防に有用である。
【００９４】
さらにそのような細胞特異的調節の他に、本発明の化合物はまた、ある受容体タイプに対してはアゴニストとして作用し、他の受容体に対してはアンタゴニストとして作用し得る。例えば、化合物がＥＲβのアンタゴニストであり、他方ＥＲαのアゴニストであるということがあり得るということが示されている（Meyers, Marvin J.; Sun, Jun; Carlson, Kathryn E.; Katzenellenbogen, Benita S.; Katzenellenbogen, John A..  J. Med. Chem. (1999), 42(13), 2456-2468）。このようなＥＲＳＡＡ（エストロゲン受容体選択性アゴニストアンタゴニスト）活性は、この一連の化合物において薬学上明確なエストロゲン活性を与える。
【００９５】
標準的な薬理学的試験操作は、所定の試験化合物の活性プロフィールを決定するために容易に利用できる。次の実施例は、いくつかの代表的な試験操作を簡潔に要約している。ＳＥＲＭｓについての標準的な薬理学的試験操作はまた、米国特許第４，４１８，０６８号および５，９９８，４０２号において与えられる。
【００９６】
実施例４５
ラットの子宮肥大／抗子宮肥大試験操作
本化合物のエストロゲン様および抗エストロゲン性は、（L.J.Black and R.L.Goode, Life Sciences, 26, 1453 (1980)に以前記述された）幼若なラットの子宮肥大アッセイ（４日間）において決定され得る。スプレーグ・ドーレイラット（雌、１８日齢）を、六つの群で検査した。動物を、注射ビヒクルとしての５０％ＤＭＳＯ／５０％食塩水と共に、１０μＧの化合物、１００μＧの化合物、抗エストロゲン性を検査するための（１μＧの１７βエストラジオールを加えた１００μＧの化合物）、１μＧの１７βエストラジオール毎日静脈注射によって処理する。４日目に、動物をＣＯ２での窒息によって殺し、子宮を除去して過剰な脂質を剥がし、全ての体液を除去し、湿性重量を決定する。小断片の角質を組織学に供し、相補的成分３遺伝子発現を評価するために残りを用いてトータルＲＮＡを単離する。
【００９７】
実施例４６
６週で卵巣切除したラット検査操作−骨および心臓保護
メスのスプレーグ・ドーレイＣＤラット、卵巣摘出群または偽手術を、Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｆａｒｍ社から手術後１日で得る（体重の範囲２４０−２７５ｇ）。それらを、ケージあたり３または４匹のラットずつ、１２時間／１２時間（明／暗）のスケジュールで部屋に収容し、食料（Ｐｕｒｉｎａ  ５Ｋ９６Ｃラット食物）および水を自由に与える。全ての研究についての処理は、動物の到着後１日目から始め、指示されるように１週間に付き７日間で６週間投薬する。何ら処理を受けていない年齢の一致した偽手術した一群のラットを各研究について無傷のエストロゲンを十分与えた対照群に供する。
【００９８】
全ての処理は、生理食塩水中の１％ツゥイーン８０中で、処理体積を体重１００ｇあたり０．１ｍＬにする規定された濃度で調製する。１７β−エストラジオールをコーンオイル（２０μｇ／ｍＬ）中に溶解し、ラットあたり０．１ｍＬを皮下投与する。全ての用量は、グループの平均体重測定に従って、３週間間隔で調節する。
【００９９】
処理開始後５週間および研究の終了前１週間に、各々のラットを骨塩密度（ＢＭＤ）について評価する。脛骨近位部の総密度および骨梁密度を、ＸＣＴ−９６０Ｍ（ｐＱＣＴ；Stratec Medizintechnik, Pforzheim, Germany）を用いて麻酔したラットにおいて評価する。測定は次のように実行する：スキャンの１５分前に、各々のラットに４５ｍｇ／ｋｇのケタミン、８．５ｍｇ／ｋｇのキシラジンおよび１．５ｍｇ／ｋｇのアセプロマジンを腹膜内注射して麻酔する。
【０１００】
右の後肢に直径２５ｍｍのポリカーボネートチューブを通し、足関節を９０°の角度で、膝関節を１８０°の角度でアクリルフレームに貼り付ける。ポリカーボネートチューブを、ｐＱＣＴの開口部に垂直に維持する摺動性プラットホームに固定する。プラットホームを、大腿骨の遠位末端および脛骨の近位末端がスキャン範囲にあるように調節する。二次元スカウトビューを、１０ｍｍの長さおよび０．２ｍｍの線分解能で実行する。スカウトビューがモニター上で表示された後、脛骨の近位末端の位置を確認する。ｐＱＣＴスキャンを、この地点から３．４ｍｍ遠位から開始する。ｐＱＣＴスキャンは１ｍｍの厚さであり、０．１４０ｍｍのボクセル（三次元ピクセル）サイズを有し、スライスを介して１４５の映像からなる。
【０１０１】
ｐＱＣＴスキャンが完了した後、画像をモニター上に表示する。脛骨を含むが腓骨は除いた関心のある領域の概略を述べる。軟部組織は、反復アルゴリズムを用いて自動的に除去する。残りの骨密度（総密度）を、ｍｇ／ｃｍ３単位で報告する。骨の外層５５％を、同心らせん状に剥離する。残りの骨密度（骨梁密度）を、ｍｇ／ｃｍ３単位で報告する。ＢＭＤ評価の１週間後、ラットを二酸化炭素での窒息によって安楽死させ、血液をコレステロール決定のために収集した。子宮を摘出して、重量を量る。総コレステロールを、コレステロール／ＨＰキットを用いたＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍ  Ｈｉｔａｃｈｉ９１１臨床用分析器を用いて決定する。統計量を、Ｄｕｎｎｅｔテストによる一元配置分散分析を用いて比較した。
【０１０２】
実施例４７
ＭＣＦ−７／ＥＲＥ抗増殖検査操作
検査化合物の保存溶液（通常０．１Ｍ）を、ＤＭＳＯ中で調製し、その後ＤＭＳＯで１０ないし１００倍に希釈し、１または１０ｍＭの作用溶液を作る。ＤＭＳＯ保存液を、４℃（０．１Ｍ）または−２０℃（＜０．１Ｍ）のいずれかで保存する。ＭＣＦ−７細胞を、成長培地［１０％（体積／体積）の熱で不活化した胎児牛血清、１％（体積／体積）のペニシリン−ストレプトマイシン、および２ｍＭのグルタマックス−１を含むＤ−ＭＥＭ／Ｆ−１２培地］を用いて１週間に二回継代する。細胞を、５％ＣＯ２／９５％加湿した空気の培養器内で３７℃で、通気孔のあるフラスコ内で維持する。処理の１日前に、細胞を、成長培地を用いて、ウェルあたり２５，０００個で９６ウェルプレートで平板培養し、３７℃で一晩中インキュベートする。
【０１０３】
細胞を、実験培地［１０％（体積／体積）の熱不活化チャコール処理（Charcoal stripped）胎児牛血清、１％（体積／体積）のペニシリン−ストレプトマイシン、２ｍＭのグルタマックス−１、１ｍＭのピルビン酸ナトリウムを含み、フェノールレッド不含のＤ−ＭＥＭ／Ｆ−１２培地］中で、アデノウィルス５−ＥＲＥ−ｔｋ−ルシフェラーゼの１：１０希釈液をウェルあたり５０μｌ用いて、３７℃で２時間感染させる。ついで、該ウェルを、実験培地１５０μｌを用いて一度洗浄する。最後に、細胞を、ウェルあたり１５０μλのビヒクル（０．１％以下  体積／体積  ＤＭＳＯ）または実験培地中に１０００倍以上に希釈される化合物を用いて、８ウェル／処理で、繰り返し２４時間３７℃で処理する。
【０１０４】
検査する化合物の最初のスクリーニングを、単独で（アゴニスト法）または０．１ｎＭの１７βエストラジオールと組み合わせて（ＥＣ８０；アンタゴニスト法）検査する、１μＭの単回投与で行う。各々９６のウェルプレートはまた、ビヒクル対照群（０．１％  体積／体積  ＤＭＳＯ）およびアゴニスト対照群（０．１または１ｎＭの１７βエストラジオールのいずれか）を含む。投薬反応実験を、１０−１４から１０−５Ｍまで対数的に増加する活性のある化合物について、アゴニスト法および／またはアンタゴニスト法のいずれかで実行する。これらの投薬反応曲線から、ＥＣ５０およびＩＣ５０値を、各々算出する。各々の処理群における最終的なウェルには、ＥＲアンタゴニスト対照群として５μｌの３×１０−５ＭＩＣＩ−１８２，７８０（１０−６Ｍの最終濃度）を含む。
【０１０５】
処理後、１Ｘ細胞培養溶解試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）をウェルあたり２５μｌを用いて、細胞を攪拌器上で１５分間溶解する。細胞溶解物（２０μｌ）を、９６ウェルの照度計プレートに移し、ルシフェラーゼ活性を、ＭｉｃｒｏＬｕｍａｔＬＢ９６Ｐ照度計（ＥＧ＆Ｇ  Ｂｅｒｔｈｏｌｄ）中で、ルシフェラーゼ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）をウェルあたり１００μｌ用いて測定する。基質の注入に先立って、各々のウェルについて１秒バックグラウンド測定を行う。基質の注入後、ルシフェラーゼ活性を、１秒間の猶予の後、１０秒間測定する。データを照度計からマッキントッシュパーソナルコンピューターに転送し、ＪＭＰソフトウェア（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）を用いて分析する；このプログラムは、各々のウェルについてのルシフェラーゼ測定から、読み取られたバックグラウンドを減算し、その後各々の処理の平均および標準偏差を決定する。
【０１０６】
ルシフェラーゼデータを対数に変換し、Ｈｕｂｅｒ  Ｍ−エスティメーターを中心から離れた変換した観測量を減量するために用いる。ＪＭＰソフトウェアを、一元ＡＮＯＶＡ（Ｄｕｎｎｅｔテスト）変換して定量したデータを分析するために用いる。化合物による治療を、アゴニスト法におけるビヒクル対照群結果、またはアンタゴニスト法における陽性アゴニスト対照群結果（０．１ｎＭの１７βエストラジオール）と比較する。最初の単回投薬実験について、化合物による治療結果が適切な対照群（ｐ＜０．０５）と十分異なっていれば、結果は１７βエストラジオール対照群に比較したパーセンテージとして報告される［すなわち、（（化合物−ビヒクル対照群）／（１７βエストラジオール対照群−ビヒクル対照群））×１００］。ＪＭＰソフトウェアはまた、非線形投薬反応曲線からＥＣ５０および／またはＩＣ５０値を決定するために用いられる。
【０１０７】
実施例４８
ＬＤＬの酸化の阻害−抗酸化活性
豚の大動脈を屠殺場から得て、洗浄し、冷却したＰＢＳ中に移し、大動脈の内皮細胞を採取する。細胞を採取するために、大動脈の肋間の脈管を結紮し、大動脈の一方の末端をクランプする。新鮮な、濾過滅菌した０．２％のコラゲナーゼ（Ｓｉｇｍａ  タイプＩ）を脈管中に配置し、脈管の他方の末端をその後クランプして閉鎖系を形成する。大動脈を３７℃で１５−２０インキュベートし、その後コラゲナーゼ溶液を収集し、２０００ｘｇで５分間遠心する。各々のペレットを、チャコール処理ＦＢＳ（５％）、Ｎｕ血清（５％）、Ｌ−グルタミン（４ｍＭ）、ペニシリン−ストレプトマイシン（１０００Ｕ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌ）およびゲンチマイシン（７５μｇ／ｍｌ）を補足し、フェノールレッドを含まないＤＭＥＭ／ＨａｍＦ１２培地を含む、７ｍＬの内皮細胞培養培地中に懸濁し、１００ｍｍペトリ皿に播種し、５％ＣＯ２中で３７℃でインキュベートする。２０分後、細胞をＰＢＳですすぎ、新鮮な培地を加え、この操作を２４時間で再び繰り返した。細胞はおよそ１週間後に集密状態となる。内皮細胞に慣例的に１週間に２回養分を与え、集密状態になった時にはトリプシン処理し、１：７の比率で蒔く。１２．５μｇ／ｍｌのＬＤＬの細胞媒介性酸化は、評価すべき化合物（５μＭ）の存在下で４時間３７℃で可能となる。結果は、遊離アルデヒドの分析のためのＴＢＡＲＳ（チオバルビツール酸反応物質）法によって測定される、酸化過程の阻害のパーセンテージとして表現される（Yagi K., Biochem Med 15:212-216 (1976)）。
【０１０８】
実施例４９
Ｄ１２視床下部細胞検査操作
Ｄ１２視床下部細胞を、ＲＣＦ１７親細胞系からサブクローニングし、凍結させて保存する。それらを、１０％胎児牛血清（ＦＢＳ）を加えた、ＤＭＥＭ：Ｆ１２（１：１）、グルタマックス−１（２ｍＭ）、ペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）−ストレプトマイシン（１００ｍｇ／ｍｌ）中で慣例的に成長させる。細胞を、２−１０％チャコール処理ＦＢＳを含み、フェノールレッドを含まない培地（ＤＭＥＭ：Ｆ１２、グルタマックス、ペニシリン−ストレプトマイシン）中で、サブコンフルエント密度（１−４×１０６細胞／１５０ｍｍディッシュ）で培養する。細胞を、２％ＣＳＳ血清を含む培地で２４時間後再び養分を与える。アゴニスト活性について検査するために、細胞を１０ｎｍの１７βエストラジオールまたは様々な用量の検査する化合物（１ｍＭまたは１ｐＭから１ｍＭの範囲）で処理する。アンタゴニスト活性について検査するために、様々な用量（１００ｐＭないし１ｍＭ）の検査する化合物なしでまたはその存在下で、細胞を０．１ｎｍの１７βエストラジオールで処理する。対照群のディッシュをまた、陰性対照群としてＤＭＳＯで処理する。ホルモン付加の４８時間後、細胞を溶解させ、結合検査操作を実行する。
【０１０９】
各々の結合検査操作について、１００−１５０ｍｇのタンパク質を、１０ｎＭの３Ｈ−Ｒ５０２０および１００倍過剰Ｒ５０２０を用いて１５０ｍｌの体積でインキュベートする。３倍体反応（Ｒ５０２０を含む三つ、Ｒ５０２０なしの三つ）を、９６ウェルプレート中で調製する。タンパク質抽出物を最初に加え、続いて３Ｈ−Ｒ５０２０または１００ｘ非標識Ｒ５０２０を加えた３Ｈ−Ｒ５０２０を加える。反応は、室温で１−２時間実行される。反応は、１００ｍｌの冷５％チャコール（Ｎｏｒｉｔ  ＳＸ−４）、ｐＨ７．４のＴＥ中０．５％デキストラン６９Ｋ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を付加することによって停止する。室温で５分後、結合したおよび結合していないリガンドを、遠心することにより分離する（５分、１０００ＲＣＦ、４℃）。上澄み溶液（〜１５０ｍｌ）を除去し、シンチレーションバイアルに移す。シンチレーション流体（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｒｅａｄｙ  Ｐｒｏｔｅｉｎ＋）を付加した後、試料をシンチレーションカウンターで１分間カウントする。
【０１１０】
実施例５０
ＣＮＳ視索前野におけるプロゲステロン受容体
６０日齢のメスのスプレーグ・ドーレイラットを、卵巣切除する。動物を、１２時間明るく、１２時間暗い光周期を有し、水および齧歯類の食物を自由に利用できる動物保育設備中に収容する。
【０１１１】
卵巣切除した動物を、無作為に、ビヒクル（５０％ＤＭＳＯ、４０％ＰＢＳ、１０％エタノールビヒクル）、１７βエストラジオール（２００ｎｇ／ｋｇ）または検査すべき化合物を用いて注射される群に分ける。追加の動物を、１７βエストラジオールの注射に先立って、検査する化合物で注射し、本化合物のアンタゴニスト特性を評価する。皮下注射の６時間後、動物を致死量のＣＯ２で安楽死させ、その脳を収集して凍結させる。
【０１１２】
動物から収集した組織を、低温保持装置上で−１６℃で切断し、シランで被覆した顕微鏡スライド上で収集する。切片を固定したスライドをその後４２℃に維持したスライド加温器上で乾燥させ、−８０℃で乾燥したスライドボックス内で保存する。プロセシングに先立って、乾燥したスライドボックスをゆっくり室温まで温め（−２０℃で１２−１６時間；４℃で２時間；室温で１時間）、スライド上での結露形成を除去し、それによって組織およびＲＮＡの分解を最小限にする。乾燥したスライドを金属のラックに載せ、４％パラホルムアルデヒド（ｐＨ９．０）中で５分間後固定し、前に記述したようにプロセシングする。
【０１１３】
ラットのＰＲｃＤＮＡ９の８１５ｂｐ断片（リガンド結合ドメイン）を含むプラスミドを線状にし、ラットのＰＲｍＲＮＡの一部に相補的な、Ｓ３５−ＵＴＰ標識プローブを生成するために用いられる。プロセシングした切片を固定したスライドを、リボプローブ（４−６ｘ１０  ６  ＤＰＭ／スライド）および５０％ホルムアルデヒドを含む２０ｍｌのハイブリダイゼーションミックスを用いてハイブリダイゼーションし、５５℃の加湿したチャンバー内で一晩中インキュベートする。午前中に、スライドを、２ｘＳＳＣ（０．１５ＭのＮａＣｌ、０．０１５Ｍのクエン酸ナトリウム；ｐＨ７．０）／１０ｍＭＤＴＴ中に浸した金属のラックに置く。ラックを、全て大きな容器に移し、２ｘＳＳＣ／１０ｍＭＤＴＴ中で室温で緩やかに攪拌しながら１５分間洗浄する。その後スライドをＲＮＡアーゼ緩衝剤中で３７℃で３０分間洗浄し、ＲＮＡアーゼＡ（２ｍｇ／ｍｌ）で３７℃で３０分間処理し、１５分間室温の１ＸＳＳＣ中で洗浄する。その後、スライドを、非特異的標識を除去するために６５℃で０．１ＸＳＳＣ中で洗浄し（２Ｘ３０分）、室温の０．１ＸＳＳＣ中で１５分間すすぎ、徐々に変化する一連のアルコール：酢酸アンモニウム（７０％、９５％および１００％）を用いて脱水する。空気乾燥したスライドを、３日間Ｘ線フィルムに向かい合わせ、その後写真のように加工する。全ての動物に由来するスライドをハイブリダイゼーションし、洗浄し、感光させ、アッセイの間の条件の変化による相違を排除するために写真のように加工する。
【０１１４】
実施例５１
ラットのホットフラッシュ−ＣＮＳの影響
卵巣切除したメスの６０日齢スプレーグ・ドーレイラットを、手術後に得る。手術は、最初の処理に最低限８日間先立ってなされる。動物を、１２時間明／暗周期の下で個別に収容し、標準的なラットの食物および水を制限無く与える。
【０１１５】
二つの対照群が、各々の研究に含まれる。用量を、ごま油中１０％ＤＭＳＯ中で（皮下投与実験）、または食塩水中１．０％ツゥイーン８０中で（経口投与実験）のいずれかで、ｍｇ／ｋｇ平均グループ体重に基づいて調製する。動物に、０．０１から１０ｍｇ／ｋｇ平均グループ体重の範囲の用量の検査する化合物を投与する。ビヒクルおよびエチニルエストラジオール（ＥＥ）対照（０．１ｍｇ／ｋｇ皮下投与、または０．３ｍｇ／ｋｇ経口投与）対照群が、各々の検査に含まれる。化合物をそのアンタゴニスト活性について検査する場合、ＥＥは、皮下投与または経口投与研究についてそれぞれ、０．１または０．３ｍｇ／ｋｇを共投与する。検査する化合物を、尾の皮膚温度が測定される日まで投与する。
【０１１６】
４日間の馴化後、動物を、関心のある化合物で毎日一度処理する。１０の動物／処理グループが存在する。化合物の投与は、０．１ｍｌを頸の首筋に皮下注射することによって、または０．５ｍｌの体積を経口投与することのいずれかによる。処理の３日目に、モルヒネのペレット（７５ｍｇ硫酸モルヒネ）を、皮下に埋め込む。処理の５日目に、一つまたは二つの追加のモルヒネのペレットを埋め込む。８日目に、動物のおよそ半分に、ケタミン（８０ｍｇ／ｋｇ、筋肉内）を注射し、ＭａｃＬａｂ  Ｄａｔａ  Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＡＰＩ社、Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）に結合した熱電対を、尾の根本からおよそ１インチの尾に貼り付ける。この機構は、尾の皮膚の温度の継続的な測定を可能にした。基準の温度を１５分間測定し、その後モルヒネの効果をブロックするためにナロキソン（１．０ｍｇ／ｋｇ）を皮下投与し（０．２ｍｌ）、尾の皮膚の温度をその１時間後に測定する。９日目に、残りの動物を同様に計画し、分析する。
【０１１７】
実施例５２
単離したラットの大動脈輪における血管運動神経機能
スプレーグ・ドーレイラット（２４０−２６０グラム）を４グループに分ける：
１．正常の卵巣切除していないもの（無傷）
２．卵巣切除し（ｏｖｅｘ）、ビヒクル処理したもの
３．卵巣切除し、１７βエストラジオールで処理したもの（１ｍｇ／ｋｇ／日）
４．検査する化合物によって処理した卵巣切除した動物（すなわち１ｍｇ／ｋｇ／日）
動物を、処理におよそ３週間先立って卵巣切除する。各々の動物は、胃管栄養によって、１％ツゥイーン８０と共に、蒸留して脱イオン化した水中に懸濁した硫酸１７βエストラジオールまたは検査する化合物のいずれか１ｍｇ／ｋｇ／日を与えられる。ビヒクル処理動物は、薬剤処理群において用いられた適当な体積のビヒクルを与えられる。
【０１１８】
動物をＣＯ２吸入および放血によって安楽死させる。胸部大動脈を速やかに除去し、３７℃の生理的溶液中に、次の組成物（ｍＭ）と共に入れる：ＮａＣｌ（５４．７）、ＫＣｌ（５．０）、ＮａＨＣＯ３（２５．０）、ＭｇＣｌ２  ２Ｈ２Ｏ（２．５）、Ｄ−グルコース（１１．８）およびＣａＣｌ２（０．２）、９５％／５％のＣＯ２−Ｏ２でガス処理し、最終的なｐＨが７．４。動脈血管外膜を外表面から除去し、脈管を２−３ｍｍの幅の輪に切断する。輪を、一方の末端を浴の底に結び、他方の末端を力変換器に結んで、１０ｍＬの組織浴に吊す。１グラムの静止張力がその輪にかかる。輪は１時間で平衡に達し、シグナルを得て分析する。
【０１１９】
平衡も達した後、輪を高濃度のフェニレフリン（１０−８〜１０−４Ｍ）に曝し、張力を記録する。その後、浴を新しい緩衝剤で３回すすぐ。洗浄後、２００ｍＭのＬ−ＮＡＭＥを組織浴に加え、３０分間平衡状態とする。ついで、フェニルフリン濃度反応曲線を繰り返す。
【０１２０】
実施例５３
８本の放射状迷路−認識力の向上
到着時に重さが２５０ｇであった、オスのスプレーグ・ドーレイ、ＣＤラット（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、Ｋｉｎｇｓｔｏｎ、ニューヨーク）が用いられる。ラットを、標準的な実験室の食物および水を自由に与えて、１週間ケージあたり６匹収容する。収容するのは、２２℃に維持されたコロニールームであり、午前６時に点灯する１２時間の明／暗周期を有していた。設備に慣らした後、動物を個別に収容し、自由に餌を与えた重量の８５％に維持する。一度安定した体重に達すると、ラットは８本の放射状迷路に順応する。
【０１２１】
迷路の構造は、Peele and Baron（Pharmacology, Biochemistry and Behavior, 29:143-150, 1988）の迷路に適合する。迷路を７５．５ｃｍの高さまで上昇させ、互いに等距離に、中央から８本の放射状に離れるように取り囲む円形の領域からなる。各々のアームは、５８ｃｍの長さ×１３ｃｍの高さである。各々のセッションの開始に先立って、迷路の中央部分に動物を閉じこめるために、透明のプレキシグラスシリンダーを取り付ける。迷路の各々のアームは、データ取得単位にインターフェースで接続した３セットの光電池を備えており、それはまたコンピューターにインターフェースで接続する。光電池は迷路内のラットの運動を追跡するために用いられる。各々のアームの末端にある食物カップの上に位置するペレット供給器は、アームの外層の光電池が所定のセッションにおいて最初に活性化された場合に、二つの４５ｍｇのチョコレートペレットを与える。迷路は、視覚的な手がかりを与えるために、各々の壁に黒および白の幾何学的ポスターを有する検査室に位置している。全ての訓練および検査操作の間、ホワイトノイズが聴取される（約７０ｄｂ）。
【０１２２】
訓練操作は、五つの段階からなり、各々が毎日５分または１０分続くセッションを有する。ラットを迷路の中央部に配置する時、およびセッションを始めるためにシリンダーを上げる時の間には、１０秒間の遅れが必要とされる。第１段階の間、食物を制限したラットの組は、迷路の８つのアームの至る所に４５ｍｇのチョコレート食物ペレットが撒き散らされた迷路に、１０分間おく。第２段階の間、各々のラットを、中央の光電池から各々のアームの食物カップにペレットを撒き散らした迷路に、１０分間個別におく。第３段階の間、各々のラットを、食物ペレットが各々のアームにおける食物カップ内およびその周囲のみに位置している迷路に、１０分間おく。第４段階において、各々のラットに、各々のアームから二つのペレットを収集するために１０分間与える。一つのアームに再び入ることは、過誤とみなす。ラットを、三日連続の訓練で全過誤が２未満またはちょうど２となるような基準成績に達するまで、この方法で毎日訓練する。馴化および訓練の総時間は、およそ３週間である。
【０１２３】
検査する化合物を、リン酸緩衝食塩水中で調製し、１ｍｌ／ｋｇの体積で投与する。臭化水素酸スコポラミン（０．３ｍｇ／ｋｇ、皮下投与）は、過誤率を増加させる（記憶の損失）障害薬の役割を果たす。検査する化合物は、全ての検査日に最初に迷路に曝露させる３０分前に、スコポラミンと同時に腹膜内に与える。
【０１２４】
検査する化合物を評価するために、最小限の動物の数で高い実験効率を達成するように、繰り返し測定で８ｘ８で平衡を保ったラテン方格を計画する。８つの実験セッションには、週二日各々のセッション内で無作為化した８つの処理（ビヒクル、スコポラミン、スコポラミンと組み合わせた３用量の検査する化合物）を行う。各々の処理の後に、あらゆる他の処理を同回数行う。それゆえに、全ての処理の残存効果を評価でき、直接の処理効果を除去し得る。ＡＮＯＶＡの後、多重比較を、調節した方法でＤｕｎｎｅｔ両側検定を用いて実行する。
【０１２５】
最初の曝露の間の５分間以内に４つの正しい選択をしなかった動物、または二度目の曝露の最後までに全部で８つの選択をしなかった動物は、そのセッションについて「時間切れ」とみなす。検査する化合物の一回より多くの用量の投与の後に「時間切れ」となった全ての動物は、分析から除外される。
【０１２６】
実施例５４
神経保護
一次皮質ニューロン培養における時間依存性の細胞死の阻害
一次皮質ニューロンを、Monyer et al. 1989, Brain Research 483:347-354に記述されている方法の変法を用いて、０−１日齢のラットの脳から生成した。分散させた脳組織を、ＤＭＥＭ／１０％ＰＤＨＳ（妊娠ドナーウマ血清）において三日間増殖させ、その後混合しているグリア細胞を除去するためにシトシンアラビノシド（ＡＲＣ）によって二日間処理した。５日目に、ＡＲＣ培地を除去し、ＤＭＥＭ／１０％ＰＤＨＳで置換した。ニューロン細胞を使用前にさらに４−７日間培養した。
【０１２７】
対照群の一次ニューロン培養は、培養中１２日目および１８日目の間で、進行性の細胞死を示す。検査する化合物を９日目にＤＭＥＭおよび１０％ＰＤＨＳ中で維持した６つの培養に加え、残りの培養を対照群として維持した後、１２の培養を酵素乳酸脱水素酵素（ＬＤ）の濃度を１２日目および１６日目に評価した。ＬＤを、Wroblewski et al. 1955, Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 90:210-213による方法の変法を用いてアッセイした。ＬＤは、臨床上および組織生存力を決定するための基礎研究上の両方で一般に用いられる、細胞質基質酵素である。培地のＬＤの増加は、直接細胞死に関連している。
【０１２８】
低血糖によって誘発される細胞傷害に対する神経保護
ＡＴＣＣから得られたＣ６グリオーマ細胞は、ＦＡＬＣＯＮ２５ｃｍ２組織培養フラスコ中で、１×１０６細胞／ｍｌの濃度のＦＢＳを有するＲＰＭＩ培地中で平板培養に付した。低血糖の開始の４時間前に、維持培地を廃棄し、単層を適切な培地で二度洗浄し、その後血清を含まないでまたは検査する化合物を加えて血清は含まないで、３７℃で４時間インキュベートした。クレブリンゲルリン酸緩衝剤を、適切なグルコース処理を加える前に、単層を二度洗浄するために用いた。ＲＰＭＩ培地は、１ｍｌあたり２ｍｇのグルコースを含み；フラスコを、各々１００％グルコース（２ｍｇ／ｍｌ）、８０％グルコース（１．６ｍｇ／ｍｌ）、６０％グルコース（１．２ｍｇ／ｍｌ）、または０％グルコース（緩衝剤）、または検査する化合物を補足した緩衝剤を入れた、６のグループに分けた。全てのフラスコを２０時間インキュベートし、その後トリパンブルーを利用して、総細胞数、生細胞数および死細胞数について評価した。
【０１２９】
興奮毒性アミノ酸に対する神経保護
ＳＫ−Ｎ−ＳＨ神経芽腫細胞を含む５つの培養ディッシュを、検査する化合物を用いて処理し、５つの培養ディッシュを、ＲＰＭＩ培地で処理した。４時間後、全ての細胞を、ＮＭＤＡ（５００ｍｕＭ）を用いて５分間処理した。その後総生細胞および死細胞を決定した。
【０１３０】
酸素−グルコース欠乏に対する神経保護
アポトーシスを測定するための濃縮核の分析：皮質ニューロンを、Ｅ１８ラット胎児から調製し、ポリ−Ｄ−リシン（１０ｎｇ／ｍｌ）および１００，０００細胞／ウェルの濃度の血清で予め被覆した８ウェルのチャンバースライド中に入れる。細胞を、１０％ＦＣＳを含む高グルコースＤＭＥＭ中に入れ、１０％ＣＯ２／９０％空気で３７℃でインキュベーター中に保存する。その翌日、血清を、培養培地をＢ２７補剤を含む高グルコースＤＭＥＭで置換することによって除去し、細胞を実験の日までさらに培地を交換することなしにインキュベーター中に保存する。６日目に、スライドを二つの群：対照群およびＯＧＤ群に分ける。対照群中の細胞は、グルコースおよびカスタムＢ２７（抗酸化剤なし）を含むＤＭＥＭを与えられる。ＯＧＤ群中の細胞は、１５分間真空下で脱気された、カスタムＢ２７を含むグルコース不含ＤＭＥＭを与えられる。細胞を、１０分間気密なチャンバー中で９０％Ｎ２／１０％ＣＯ２で洗い流し、３７℃で６時間インキュベートする。６時間後、対照およびＯＧＤの細胞を共に、グルコース含有のＤＭＥＭ中にビヒクル（ＤＭＳＯ）または試験化合物のいずれかを含有する培地の、カスタムＢ２７との置き換えに付す。細胞を、通常の酸素環境の３７℃のインキュベーターに戻す。２４時間後、細胞を、４％ＰＦＡ中で１０分間４℃で固定し、Ｔｏｐｒｏ（蛍光核結合色素）を用いて染色する。アポトーシスは、Ｌａｓｅｒ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒを用いて、濃縮核を測定することによって評価される。
【０１３１】
細胞死の指標としてのＬＤＨ遊離の測定：皮質ニューロンを、Ｅ１８ラット胎児から調製し、ポリ−Ｄ−リシン（１０ｎｇ／ｍｌ）および１５００００細胞／ウェルの濃度の血清で予め被覆した４８ウェルの培養プレート中に入れる。細胞を、１０％ＦＣＳを含む高グルコースＤＭＥＭ中に入れ、１０％ＣＯ２／９０％空気で３７℃でインキュベーター中に保存する。その翌日、血清を、培養培地をＢ２７補剤を含む高グルコースＤＭＥＭで置換することによって除去する。６日目に、細胞を二つの群：対照群およびＯＧＤ群に分ける。対照群中の細胞は、グルコースおよびカスタムＢ２７（抗酸化剤なし）を含むＤＭＥＭを与えられる。ＯＧＤ群中の細胞は、１５分間真空下で脱気された、カスタムＢ２７を含むグルコース不含ＤＭＥＭを与えられる。細胞を、１０分間気密なチャンバー中で９０％Ｎ２／１０％ＣＯ２で洗い流し、３７℃で６時間インキュベートする。６時間後、対照およびＯＧＤの細胞を共に、グルコース含有のＤＭＥＭ中にビヒクル（ＤＭＳＯ）または試験化合物のいずれかを含有する培地の、カスタムＢ２７との置き換えに付す。細胞を、通常の酸素環境の３７℃のインキュベーターに戻す。２４時間後、細胞死を、細胞のＬＤＨ（乳酸脱水素酵素）の培養培地への遊離を測定することによって評価される。ＬＤＨアッセイのために、５０μｌの培地のアリコートを、９６ウェルプレートに移す。０．１Ｍのリン酸カリウム緩衝剤（ｐＨ７．５）１４０μｌおよび０．２ｍｇ／ｍｌのＮＡＤＨ１００μｌを加えた後、プレートを暗所で室温で２０分間放置する。反応は、ピルビン酸ナトリウム１０μｌを加えることによって開始される。プレートは、Ｔｈｅｒｍｏｍａｘプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）で、即座に３４０ｎＭで読み取られる。ＮＡＤＨ濃度の指標である吸光度は、６秒ごとに５分間記録され、ＮＡＤＨ消失率を示す勾配が、ＬＤＨ活性を算出するために用いられる。
ＬＤＨ活性（Ｕ／ｍｌ）＝（ΔＡ／分）（ＴＣＦ）（２０）（０．０８３３）／（０．７８）
式中：０．０８３３＝比例定数
０．７８＝計器光路長
【０１３２】
実施例 55
ＨＬＡラットテスト操作−クローン病および炎症性腸疾患
オスのＨＬＡ−Ｂ２７ラットを、Ｔａｃｏｎｉｃから得て、食物（ＰＭＩ  Ｌａｂ  ｄｉｅｔ  ５００１）および水を制限無く得られるようにする。研究の開始において、ラットは２２−２６週齢である。
【０１３３】
ラットは、以下で列挙した処方の一つを、毎日一度７日間皮下投与する。各々の群において５匹のラットがおり、最後の用量を安楽死させる２時間前に投与する。
ビヒクル（５０％ＤＭＳＯ／５０％ダルベッコＰＢＳ）
１７α−エチニル−１７βエストラジオール（１０μｇ／ｋｇ）
検査する化合物
【０１３４】
排泄物の質を毎日観察し、次の尺度に従って等級付けする：下痢＝３；軟便＝２；正常の便＝１。検査操作の最後に、血清を収集し、−７０℃で保存する。結腸の断片を組織学的な分析のために調製し、追加の切片をミエロペルオキシダーゼ活性について分析する。
【０１３５】
次の方法は、ミエロペルオキシダーゼ活性を測定するために用いられる。結腸組織を採取し、液体窒素中で急速冷凍する。全結腸の代表的な試料は、試料間で一致していることを保証するために用いられる。組織は、使用するまで−８０℃で保存する。次に、組織を計量し（およそ５００ｍｇ）、５ｍＭのＨ２ＫＰＯ４（ｐＨ６）洗浄緩衝剤重量／体積１：１５中で均質化する。組織を、Ｓｏｒｖａｌｌ  ＲＣ  ５Ｂ遠心分離機中で、４５分間２−８℃で２０，０００×ｇで遠心する。その後上澄みを廃棄する。組織を再び懸濁し、５０ｍＭのＨ２ＫＰＯ４２．５ｍｌ（１：５  重量／体積）中で、１０ｍＭのＥＤＴＡおよび０．５％のＨｅｘ臭化アンモニウムと共に均質化し、細胞内ＭＰＯの安定化を助ける。組織を液体窒素中で冷凍し、３７℃の水浴中で溶解し、細胞膜の溶解を確実にするために１５秒間超音波処理する。この操作を３回反復する。その後試料を氷上に２０分間おき、１２０００×ｇで１５分間２−８℃で遠心する。上澄みを、これらの工程の後に分析する。
【０１３６】
試験混合物は、２．９ｍｌの５０ｍＭのＨ２ＫＰＯ４を０．０００５％Ｈ２Ｏ２を含む０．１６７ｏ−ジアニシジンと一緒に反応管に加えることによって調製される。過酸化水素が分解されると、ｏ−ジアニシジンが酸化され、濃度依存的に４６０ｎｍにて吸光する。混合物を２５℃まで加熱する。１００μＬの組織上澄みを反応管に加え、１分間２５℃でインキュベートし、その後１ｍｌを使い捨てのプラスチックのキュベットに移す。ＯＤを、２分の反応時間ごとに、反応混合物２．９ｍｌおよび０．５％臭化アンモニウム溶液１００μｌを含むブランクに対して、４６０ｎｍで測定する。
【０１３７】
酵素活性単位を、４６０ｎｍにおける吸光度を、精製したヒトＭＰＯ３１．１単位／ガラス瓶を用いて用意した標準曲線と比較することによって、定量化する。ＭＰＯを再び溶解し、５０ｍＭのＨ２ＫＰＯ４を、１０ｍＭのＥＤＴＡおよび０．５％のＨｅｘ臭化アンモニウムと共に用いて、四つの既知の濃度に連続的に希釈する。試料の吸光度を、この曲線に対して比較し、活性を決定する。
【０１３８】
組織学的分析は、次のように実行する。結腸組織を、１０％中性緩衝ホルマリン中に浸す。各々の結腸の試料を、評価のために四つの試料に分配する。ホルマリン固定した組織を、パラフィン包埋のために真空浸透処理装置中で加工処理する。試料を５μｍに細分し、その後、Ｂｏｕｇｈｔｏｎ−Ｓｍｉｔｈの後修正された尺度を用いて、盲検的に組織学的評価をするために、ヘマトキシリンおよびエオジン（Ｈ＆Ｅ）で染色する。スコアの記録が完了した後試料を明らかにし、データを表に記入し、多重平均比較を用いてＡＮＯＶＡ線型モデル化することによって分析する。
【０１３９】
本明細書において引用されている、全ての特許、出版物および他の文書は、出典明示により本明細書の一部とする。
【国際調査報告】
2007503466.tif 000015
2007503466.tif 000016
2007503466.tif 000017