(57)【要約】  生物試料、特に全血を収集するための収集容器および方法は、タンパク質劣化および／または断片化を安定化し阻害するのに効果的な量で少なくとも１つの安定剤を含む。安定剤は、試料が貯蔵されたとき試料内のタンパク質劣化および／または断片化を阻害することによって、特に収集点で生物試料内のプロテアーゼを安定化することができる。安定剤は、少なくとも１つのプロテアーゼ阻害剤を含む、またはそれらからなる。
2007515635.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物試料を収集するための装置であって、
前記試料を受け取るために貯蔵部を有する容器と、
前記容器の前記貯蔵部内に、少なくとも１つのホスファターゼ阻害剤を含む少なくとも１つのタンパク質安定剤とを備えることを特徴とする装置。
【請求項２】
前記容器が、諸管、閉鎖系採血装置、収集バッグ、注射器、予め充填された注射器、カテーテル、マイクロタイタープレート、マルチウェル収集装置、フラスコ、スピナーフラスコ、ローラボトル、バイアル、ピペット、ピペットチップ、ならびに組織および他の生物試料収集容器からなるグループから選択されることを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項３】
前記容器は、第１の端部と第２の端部とを有する管であることを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項４】
前記容器内で配置された分離用部材をさらに備えることを特徴とする請求項３に記載の装置。
【請求項５】
前記分離用部材は機械的分離用要素であることを特徴とする請求項４に記載の装置。
【請求項６】
前記機械的分離用要素が、前記少なくとも１つの安定剤で少なくとも部分的に被覆されることを特徴とする請求項５に記載の装置。
【請求項７】
前記機械的分離用要素は、前記安定剤に対して実質的に不活性であることを特徴とする請求項５に記載の装置。
【請求項８】
前記分離用部材はゲルであることを特徴とする請求項４に記載の装置。
【請求項９】
前記ゲル分離用要素が、前記安定剤から物理的に分離されることを特徴とする請求項８に記載の装置。
【請求項１０】
前記タンパク質安定剤は、溶液、懸濁液もしくは他の液体、ペレット、タブレット、カプセル、噴霧乾燥材料、フリーズドライ材料、粉末、粒子、ゲル、結晶、または凍結乾燥材料からなるグループから選択された形態にあることを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項１１】
前記タンパク質安定剤が凍結乾燥されることを特徴とする請求項１０に記載の装置。
【請求項１２】
前記少なくとも１つのホスファターゼ阻害剤は、セリンホスファターゼ、スレオニンホスファターゼ、およびチロシンホスファターゼからなるグループから選択された少なくとも１つのホスファターゼを阻害することを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項１３】
前記安定剤は、少なくとも１つのプロテアーゼ阻害剤をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項１４】
前記安定剤は、ホスファターゼ阻害剤カクテルを含むことを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項１５】
前記安定剤は、３つ以上のホスファターゼ阻害剤を含むことを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項１６】
担持媒体をさらに備えることを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項１７】
安定化媒体をさらに備えることを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項１８】
前記安定化媒体はトレハロースであることを特徴とする請求項１７に記載の装置。
【請求項１９】
少なくとも１つの抗酸化剤をさらに備えることを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項２０】
少なくとも１つの還元剤をさらに備えることを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項２１】
少なくとも１つの緩衝剤をさらに備えることを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項２２】
前記第１の端部は開いた端部であり、前記第２の端部は閉じた端部であり、さらに前記第１の開いた端部を封止するための閉鎖手段を備えることを特徴とする請求項３に記載の装置。
【請求項２３】
前記第１の端部は開いた端部であり、前記第２の端部は開いた端部であり、さらに前記第１の開いた端部を封止するための第１の閉鎖手段と、前記第２の開いた端部を封止するための第２の閉鎖手段とを備えることを特徴とする請求項３に記載の装置。
【請求項２４】
前記タンパク質安定剤が凍結乾燥されることを特徴とする請求項３に記載の装置。
【請求項２５】
前記タンパク質安定剤は、３つ以上のホスファターゼ阻害剤を含むことを特徴とする請求項２４に記載の装置。
【請求項２６】
前記管は、抗凝固剤をさらに備えることを特徴とする請求項２４に記載の装置。
【請求項２７】
前記抗凝固剤が内部壁の少なくとも一部分上に噴霧乾燥されることを特徴とする請求項２６に記載の装置。
【請求項２８】
前記抗凝固剤は、ＥＤＴＡの塩を含むことを特徴とする請求項２６に記載の装置。
【請求項２９】
前記抗凝固剤は、ヘパリンを含むことを特徴とする請求項２６に記載の装置。
【請求項３０】
生物試料を収集し安定化するための管であって、
前記試料を受け取るために貯蔵部を画定する第１の端部、第２の端部、および少なくとも１つの内部壁と、
前記容器の前記貯蔵部内の、少なくとも１つのタンパク質安定剤であって、少なくとも１つのホスファターゼ阻害剤を含むタンパク質安定剤と、
前記貯蔵部内の揺変性ポリマーゲルと、
前記タンパク質安定剤と前記ゲルとの分離を維持するための要素とを備えることを特徴とする管。
【請求項３１】
前記分離を維持するための要素はカプセルであることを特徴とする請求項３０に記載の管。
【請求項３２】
前記第１の端部は開いた端部であり、前記第２の端部は閉じた端部であることを特徴とする請求項３１に記載の管。
【請求項３３】
前記第１の開いた端部を封止するための閉鎖手段をさらに備えることを特徴とする請求項３２に記載の管。
【請求項３４】
前記閉鎖手段は、前記試料を前記管に供給するために、針によって穿孔可能であることを特徴とする請求項３３に記載の管。
【請求項３５】
前記管が部分的に真空にされることを特徴とする請求項３３に記載の管。
【請求項３６】
前記タンパク質安定剤が凍結乾燥されることを特徴とする請求項３５に記載の管。
【請求項３７】
前記タンパク質安定剤は、３つ以上のホスファターゼ阻害剤を含むことを特徴とする請求項３６に記載の管。
【請求項３８】
前記内部壁の少なくとも一部分上に噴霧乾燥される抗凝固剤をさらに備えることを特徴とする請求項３６に記載の管。
【請求項３９】
前記剤は、少なくとも１つのプロテアーゼ阻害剤をさらに含むことを特徴とする請求項３０に記載の管。
【請求項４０】
前記第１の端部は開いた端部であり、前記第２の端部は開いた端部であることを特徴とする請求項３１に記載の管。
【請求項４１】
前記第１の開いた端部を封止するための第１の閉鎖手段と、前記第２の開いた端部を封止するための第２の閉鎖手段とをさらに備えることを特徴とする請求項４０に記載の管。
【請求項４２】
両閉鎖手段は、前記試料を前記管に供給するために、針によって穿孔可能であることを特徴とする請求項４１に記載の管。
【請求項４３】
前記管が部分的に真空にされることを特徴とする請求項４１に記載の管。
【請求項４４】
前記タンパク質安定剤が凍結乾燥されることを特徴とする請求項４３に記載の管。
【請求項４５】
前記タンパク質安定剤は、３つ以上のホスファターゼ阻害剤を含むことを特徴とする請求項４４に記載の管。
【請求項４６】
前記内部壁の少なくとも一部分上に噴霧乾燥される抗凝固剤をさらに備えることを特徴とする請求項４４に記載の管。
【請求項４７】
生物試料を収集し安定化するための管であって、
前記試料を受け取るために貯蔵部を画定する第１の端部、第２の端部、および少なくとも１つの内部壁と、
前記管の前記貯蔵部内の、少なくとも１つのタンパク質安定剤であって、少なくとも１つのホスファターゼ阻害剤を含むタンパク質安定剤と、
前記貯蔵部内の機械的分離用要素とを備えることを特徴とする管。
【請求項４８】
前記機械的分離用要素は、前記安定剤に対して実質的に不活性であることを特徴とする請求項４７に記載の管。
【請求項４９】
前記第１の端部は開いた端部であり、前記第２の端部は閉じた端部であることを特徴とする請求項４７に記載の管。
【請求項５０】
前記第１の開いた端部を封止するための閉鎖手段をさらに備えることを特徴とする請求項４９に記載の管。
【請求項５１】
前記閉鎖手段は、前記試料を前記管に供給するために、針によって穿孔可能であることを特徴とする請求項５０に記載の管。
【請求項５２】
前記管が部分的に真空にされることを特徴とする請求項５０に記載の管。
【請求項５３】
前記タンパク質安定剤が凍結乾燥されることを特徴とする請求項５２に記載の管。
【請求項５４】
前記タンパク質安定剤は、３つ以上のホスファターゼ阻害剤を含むことを特徴とする請求項５３に記載の管。
【請求項５５】
前記内部壁の少なくとも一部分上に噴霧乾燥される抗凝固剤をさらに備えることを特徴とする請求項５３に記載の管。
【請求項５６】
前記第１の端部は開いた端部であり、前記第２の端部は開いた端部であることを特徴とする請求項５５に記載の管。
【請求項５７】
前記第１の開いた端部を封止するための第１の閉鎖手段と、前記第２の開いた端部を封止するための第２の閉鎖手段とをさらに備えることを特徴とする請求項５６に記載の管。
【請求項５８】
両閉鎖手段は、前記試料を前記管に供給するために、針によって穿孔可能であることを特徴とする請求項５７に記載の管。
【請求項５９】
前記管が部分的に真空にされることを特徴とする請求項５７に記載の管。
【請求項６０】
前記タンパク質安定剤が凍結乾燥されることを特徴とする請求項５９に記載の管。
【請求項６１】
前記タンパク質安定剤は、３つ以上のホスファターゼ阻害剤を含むことを特徴とする請求項６０に記載の管。
【請求項６２】
前記内部壁の少なくとも一部分上に噴霧乾燥される抗凝固剤をさらに備えることを特徴とする請求項６０に記載の管。
【請求項６３】
後続の試験のために生物試料を収集し貯蔵するためのキットであって、
分離器要素を中に有する１次収集管と、
２次管とを備え、
前記１次収集管および前記２次管は、１つまたは複数のタンパク質安定剤を含み、前記剤は少なくとも１つのホスファターゼ阻害剤を含むことを特徴とするキット。
【請求項６４】
前記１つまたは複数のタンパク質安定剤は、溶液、懸濁液もしくは他の液体、ペレット、タブレット、カプセル、噴霧乾燥材料、フリーズドライ材料、粉末、粒子、ゲル、結晶、または凍結乾燥材料からなるグループから選択された形態にあることを特徴とする請求項６３に記載のキット。
【請求項６５】
前記１つまたは複数の安定剤が凍結乾燥されることを特徴とする請求項６４に記載のキット。
【請求項６６】
前記分離器要素は機械的分離用要素であることを特徴とする請求項６３に記載のキット。
【請求項６７】
前記機械的分離用要素が、前記１つまたは複数の安定剤で少なくとも部分的に被覆されることを特徴とする請求項６６に記載のキット。
【請求項６８】
前記機械的分離用要素は、前記１つまたは複数の安定剤に対して実質的に不活性であることを特徴とする請求項６７に記載のキット。
【請求項６９】
前記分離器要素はゲルであることを特徴とする請求項６３に記載のキット。
【請求項７０】
前記ゲルが、前記安定剤から物理的に分離されることを特徴とする請求項６９に記載のキット。
【請求項７１】
前記安定剤は、少なくとも１つのプロテアーゼ阻害剤をさらに含むことを特徴とする請求項６３に記載のキット。
【請求項７２】
前記１次または２次管、あるいは両方は、担持媒体をさらに含むことを特徴とする請求項６３に記載のキット。
【請求項７３】
前記１次または２次管、あるいは両方は、安定化媒体をさらに含むことを特徴とする請求項６３に記載のキット。
【請求項７４】
前記安定化媒体はトレハロースであることを特徴とする請求項７３に記載のキット。
【請求項７５】
前記１次または２次管、あるいは両方は、少なくとも１つの抗酸化剤をさらに備えることを特徴とする請求項６３に記載のキット。
【請求項７６】
前記１次または２次管、あるいは両方は、少なくとも１つの還元剤をさらに備えることを特徴とする請求項６３に記載のキット。
【請求項７７】
前記１次または２次管、あるいは両方は、少なくとも１つの緩衝剤をさらに備えることを特徴とする請求項６３に記載のキット。
【請求項７８】
管間移送装置をさらに備えることを特徴とする請求項６３に記載のキット。
【請求項７９】
前記第２の管が、前記第１の管から前記管間移送装置を介し、前記第２の管内に前記試料を引き込むために、ある圧力で維持されることを特徴とする請求項７８に記載のキット。
【請求項８０】
生物試料を安定化する方法であって、
試料収集容器を用意すること、および
前記試料がタンパク質安定剤と接触するように前記生物試料を前記収集容器内に配置し、前記剤は、少なくとも１つのホスファターゼ阻害剤を含むことを含むことを特徴とする方法。
【請求項８１】
前記試料収集容器は、前記生物試料を収集する前に前記安定剤を含むことを特徴とする請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記生物試料を前記容器内に配置すること、および前記試料を前記安定剤と接触することが、前記同じ収集容器内で実行されることを特徴とする請求項８０に記載の方法。
【請求項８３】
前記収集容器が真空にされ、所定の体積の前記試料を前記収集容器内に引き込むのに十分な所定の内部圧力を有することを特徴とする請求項８２に記載のキット。
【請求項８４】
前記安定剤は、溶液、懸濁液もしくは他の液体、ペレット、タブレット、カプセル、噴霧乾燥材料、フリーズドライ材料、粉末、粒子、ゲル、結晶、または凍結乾燥材料からなるグループから選択された形態にあることを特徴とする請求項８０に記載の方法。
【請求項８５】
前記安定剤が凍結乾燥されることを特徴とする請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
前記収集容器が、諸管、閉鎖系採血装置、収集バッグ、注射器、マイクロタイタープレート、マルチウェル収集装置、フラスコ、スピナーフラスコ、ローラボトル、およびバイアルからなるグループから選択されることを特徴とする請求項８０に記載の方法。
【請求項８７】
前記収集容器は管であることを特徴とする請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記収集容器は分離用部材を含むことを特徴とする請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記分離用部材が、前記安定剤で少なくとも部分的に被覆されることを特徴とする請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記分離用部材は機械的分離用要素であることを特徴とする請求項８８に記載の方法。
【請求項９１】
前記機械的分離用要素は、前記安定剤に対して実質的に不活性であることを特徴とする請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
前記分離用部材はゲルであることを特徴とする請求項８８に記載の方法。
【請求項９３】
前記安定剤は、少なくとも１つのプロテアーゼ阻害剤をさらに含むことを特徴とする請求項８０に記載の方法。
【請求項９４】
前記少なくとも１つのホスファターゼ阻害剤は、セリンホスファターゼ、スレオニンホスファターゼ、およびチロシンホスファターゼからなるグループから選択された少なくとも１つのホスファターゼを阻害することを特徴とする請求項８０に記載の方法。
【請求項９５】
前記安定剤は、３つ以上のホスファターゼ阻害剤を含むことを特徴とする請求項８０に記載の方法。
【請求項９６】
前記生物試料が、全血またはその成分、赤血球濃縮物、血小板濃縮物、白血球濃縮物、血漿、血清、尿、骨髄吸引液、脳脊髄液、組織、細胞、糞便、唾液および口腔分泌物、鼻分泌物、ならびにリンパ液からなるグループから選択されることを特徴とする請求項８０に記載の方法。
【請求項９７】
前記生物試料は全血であることを特徴とする請求項９６に記載の方法。
【請求項９８】
前記全血が、患者から前記収集容器内に直接収集されることを特徴とする請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
前記収集容器は、前記血液が前記患者から収集される前に前記安定剤を含むことを特徴とする請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
生物試料を収集するための収集容器を作製するための方法であって、
試料収集容器を用意すること、
少なくとも１つのホスファターゼ阻害剤を含む安定剤を前記容器内に配置すること、
前記安定剤を凍結乾燥すること、
前記容器を真空にし、封止すること、および
前記容器を滅菌することを含むことを特徴とする方法。
【請求項１０１】
前記安定剤は、３つ以上のホスファターゼ阻害剤を含むことを特徴とする請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
前記少なくとも１つのホスファターゼ阻害剤は、セリンホスファターゼ、スレオニンホスファターゼ、およびチロシンホスファターゼからなるグループから選択された少なくとも一つのホスファターゼを阻害することを特徴とする請求項１００に記載の方法。
【請求項１０３】
前記安定剤は、プロテアーゼ阻害剤をさらに含むことを特徴とする請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
前記収集容器は管であることを特徴とする請求項１００に記載の方法。
【請求項１０５】
前記管内に分離用部材を配置することをさらに含むことを特徴とする請求項１０４に記載の方法。
【請求項１０６】
前記分離用部材は機械的分離用要素であることを特徴とする請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０７】
前記分離用部材はゲルであることを特徴とする請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０８】
抗凝固剤を前記管内に配置することをさらに含むことを特徴とする請求項１０４に記載の方法。
【請求項１０９】
前記抗凝固剤が、噴霧乾燥によって前記管内に配置されることを特徴とする請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
前記抗凝固剤は、ＥＤＴＡの塩を含むことを特徴とする請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１１】
前記抗凝固剤は、ヘパリンを含むことを特徴とする請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１２】
タンパク質分離のためのプロセスであって、
少なくとも１つのホスファターゼ阻害剤を含むタンパク質安定剤を備える容器を用意すること、
生物試料を前記容器に追加すること、および
前記タンパク質を前記生物試料から隔離することを含むことを特徴とするプロセス。
【請求項１１３】
前記収集容器は管であることを特徴とする請求項１１２に記載のプロセス。
【請求項１１４】
前記容器内に配置された分離用部材をさらに含むことを特徴とする請求項１１３に記載のプロセス。
【請求項１１５】
前記分離用部材は機械的分離用要素であることを特徴とする請求項１１４に記載のプロセス。
【請求項１１６】
前記機械的分離用要素が、前記少なくとも１つの安定剤で少なくとも部分的に被覆されることを特徴とする請求項１１５に記載のプロセス。
【請求項１１７】
前記分離用要素はゲルであり、ゲル分離用部材が前記安定剤から物理的に分離されることを特徴とする請求項１１４に記載のプロセス。
【請求項１１８】
前記安定剤は、少なくとも１つのプロテアーゼ阻害剤をさらに含むことを特徴とする請求項１１３に記載のプロセス。
【請求項１１９】
前記管が部分的に真空にされることを特徴とする請求項１１３に記載のプロセス。
【請求項１２０】
前記タンパク質安定剤が凍結乾燥されることを特徴とする請求項１１９に記載のプロセス。
【請求項１２１】
前記管は抗凝固剤をさらに備えることを特徴とする請求項１２０に記載のプロセス。
【請求項１２２】
前記抗凝固剤が前記管の内部壁の少なくとも一部分上に噴霧乾燥されることを特徴とする請求項１２１に記載のプロセス。
【請求項１２３】
前記抗凝固剤は、ＥＤＴＡの塩を含むことを特徴とする請求項１２１に記載のプロセス。
【請求項１２４】
前記抗凝固剤は、ヘパリンを含むことを特徴とする請求項１２１に記載のプロセス。
【請求項１２５】
前記少なくとも１つのホスファターゼ阻害剤は、セリンホスファターゼ、スレオニンホスファターゼ、およびチロシンホスファターゼからなるグループから選択された少なくとも１つのホスファターゼを阻害することを特徴とする請求項１１２に記載のプロセス。
【請求項１２６】
前記安定剤は、３つ以上のホスファターゼ阻害剤を含むことを特徴とする請求項１１２に記載のプロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生物試料、特に全血試料を患者から直接収集し安定化するための方法および装置を対象とする。具体的には、本発明は、生物試料を収集したとき直ちにタンパク質を安定化するために、またその保管中にタンパク質修飾を阻害するために、安定化添加剤が容れられている試料収集容器に関する。
【背景技術】
【０００２】
最近、プロテオミクスの研究が著しく増加している。プロテオミクスは、多数の意味を包含するが、タンパク質を、個別にであろうと、より一般的にであろうと、パターンとして見ることを必要とする。例えば、研究者は、ある種の病状を反映する可能性があるタンパク質プロフィルに関心がある。例えば、健康な個人のプロフィル対病気の個人のプロフィルが、病状の将来の指標として使用することができる違いを示す可能性がある。当技術分野で周知のように、質量分析は、そのようなプロフィルを見るために使用される重要なツールである。そのようなタンパク質研究における１つの挑戦課題は、広く翻訳後修飾と呼ばれる、タンパク質がその寿命内で受ける多数の修飾である。タンパク質の状態が時間の経過につれて変化することを考えると、個人のあるプロフィルが経時的に、確実に一貫したものとなるようにすることは困難である。したがって、病状を表すと考えられるプロフィルは、特定の諸条件について有効となる可能性があるにすぎず、したがって、診断ツールとして働くのに十分な根拠に基づいて再現可能でない。したがって、この可変性に対処することが可能な装置および／またはプロセスが望ましいことになる。
【０００３】
【特許文献１】米国特許第５８６０９３７号明細書
【特許文献２】米国特許第５９０６７４４号明細書
【特許文献３】米国特許第６５１６９５３号明細書
【特許文献４】米国特許第６４０６６７１号明細書
【特許文献５】米国特許第６４０９５２８号明細書
【特許文献６】米国特許第６４９７３２５号明細書
【特許文献７】米国特許第６５０６１６７号明細書
【特許文献８】米国特許第５０５３１３４号明細書
【特許文献９】米国特許第５８８２９２２号明細書
【特許文献１０】米国特許第５８０１０５５号明細書
【特許文献１１】米国特許第５６８１７４３号明細書
【特許文献１２】米国特許第６３５７５８３Ｂ１号明細書
【特許文献１３】米国特許第３９９５６３０号明細書
【特許文献１４】米国特許第６０２７４８１号明細書
【特許文献１５】米国特許第４９６４８６６号明細書
【特許文献１６】米国特許第４９８６８１８号明細書
【特許文献１７】米国特許第５６０７４００号明細書
【特許文献１８】米国特許第６２６３６４１Ｂ１号明細書
【特許文献１９】米国特許第４７３７１５２号明細書
【特許文献２０】米国特許第６２８０６８９Ｂ１号明細書
【特許文献２１】米国特許第６３４３７１７Ｂ１号明細書
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
細胞間の最も一般的な連絡機構は、標的細胞の表面上で特定の受容体タンパク質と相互作用しそれらを活性化する、ホルモン、神経伝達物質、および成長因子などシグナル伝達分子を、ある細胞タイプから解放することを必要とする。次いで、活性化された受容体は、最終的に細胞内で特定の機能プロセスと結合し生理応答を生み出す細胞内信号を生成する。受容体活性化をこれらの生理応答に結合する情報伝達（ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ）経路の研究は、現代生物学における最も活動的かつ重要な研究エリアの１つを代表する。情報伝達研究は、疾病研究、創薬および薬剤開発、ならびに診断学に欠かせないものである。細胞タンパク質のセリン、スレオニン、およびチロシン残基に対するリン酸の可逆結合は、すべてではないにしても大抵の情報伝達経路において重要な役割を果たす制御機構である。２つのタイプの酵素が、特定の細胞タンパク質のリン酸化の量および方向を制御する。すなわち、
プロテインキナーゼは、リン酸をタンパク質に追加する（リン酸化）
プロテインホスファターゼは、リン酸を除去する（脱リン酸化）
これらの経路作用は、生物試料が収集された後で、引き続き活性である。これらの可変の生体外修飾（ｅｘ−ｖｉｖｏ  ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）を理解しないと、特にリン酸除去により、研究結果が混乱する、または損なわれる可能性がある。プロテインホスファターゼは、それらの基質特異性、金属イオンに対する依存性、および阻害剤に対する感受性に基づいて分類される。ある種の化学薬品、プロテインホスファターゼ阻害剤は、一般に、リン酸基の除去を制限するために使用される。（プロテインホスファターゼ阻害剤はまた、疾病を治療するために使用される。）
【０００５】
数百の阻害剤が化学薬品供給者を介して入手可能であり、さらに一部の供給者は、２つから５つのどれかの阻害剤を予め混合して、阻害剤カクテルを提供している。これらの阻害剤の大部分が加えられる時までに、研究される多数の活動が「不自然なもの」、または生体外アーチファクト（ｅｘ  ｖｉｖｏ  ａｒｔｉｆａｃｔ）となることが残念である。ある種の研究にとって、生体内生理を厳密に表す形で細胞の状態を理解することができることは重要である。したがって、試料の切採または抽出の「タイムゼロ」に可能な限り近づいて脱リン酸化を調節することに価値がある。
【０００６】
本発明は、試料が、収集装置に接触したとき直ちに阻害剤と接触し、脱リン酸化活動が調節されるように、１つまたは複数の予め装填されたプロテインホスファターゼ阻害剤を含む広範な収集装置を含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
この発明は、多数の異なる形態にある諸実施形態によって満たされるが、本開示は本発明の原理の例示とみなすべきであり、示されている、また述べられている諸実施形態に本発明を限定しないものとすることを理解して、本明細書では、本発明の好ましい実施形態について詳細に述べる。当業者なら、本発明の精神から逸脱することなしに、多数の変形形態をなすことができる。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲とその均等物によって計られる。
【０００８】
本発明は、生物試料内のタンパク質を安定化し、下流解析（ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ  ａｎａｌｙｓｉｓ）をよりよく可能にするための方法および装置を対象とする。より具体的には、本発明は、貯蔵中の生物試料内のリン酸化カスケードを阻害するための方法および装置を対象とする。本発明によれば、本装置は、試料を収集したとき直ちに生物試料と混合するためにホスファターゼ阻害剤を含むある量の安定剤（ｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）を容れた容器を備える。また、本発明によれば、本方法は、ホスファターゼトリガを阻害することによって１つまたは複数のリン酸化カスケードのトリガを防止する、または阻害するのに十分な量の安定剤を容れた試料収集容器を用意すること、および生物試料を容器に追加することを含む。
【０００９】
任意のタンパク質含有生物試料と共に本発明を使用することが可能であるが、生物試料は、患者から抜き取られた任意の体液であることが好ましい。最も好ましくは、生物試料は、全血またはその成分である。他の生物試料の諸例には、赤血球濃縮物、血小板濃縮物、白血球濃縮物、血漿、血清、尿、骨髄吸引液、脳脊髄液、組織、細胞、糞便、唾液および口腔分泌物、鼻分泌物、リンパ液など、細胞含有成分が含まれる。
【００１０】
本発明の試料収集システムは、それだけには限らないが、試験管および遠心分離管など諸管、収集バッグなど閉鎖系採血装置、注射器、特に予め充填された注射器、中心静脈などのカテーテル、マイクロタイターおよび他のマルチウェルプレート、アレイ、チュービング、実験室容器例えばフラスコ、スピナーフラスコ、ローラボトル、バイアル、顕微鏡スライド、顕微鏡スライドアセンブリ、カバースリップ、フィルム、ならびに多孔基材（ｐｏｒｏｕｓ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）およびアセンブリなど、ピペットおよびピペットチップなど、組織および他の生物試料収集容器、生物試料を保持するのに適した任意の他の容器、ならびに試料を移送する際に必要とされる容器および要素を含めて、任意の収集装置を包含することができる。本発明の一態様では、血液成分を分離するために分離用部材（例えば、機械的分離用要素、ゲル、またはフィルタ機構）を有する試料収集管が使用される。そのような態様では、管の内部および／または分離用部材の外部は、安定剤で処理することができる。本発明によれば、収集装置は、生物試料を安定化するために安定剤を容れる。
【００１１】
本発明で使用される収集装置を製造するために、しばしばプラスチックまたはガラスが使用される。収集装置を製造するために使用されるいくつかの好ましい材料には、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリスチレン、ポリカーボネート、セルロース誘導体が含まれる。また、ポリテトラフルオロエチレンおよび他のフッ化ポリマーなど、より高価なプラスチックを使用することもできる。上述の材料に加えて、本発明で使用される収集装置用の他の好適な材料の諸例には、ポリオレフィン、ポリアミド、ポリエステル、シリコーン、ポリウレタン、エポキシ、アクリル系誘導体、ポリアクリレート、ポリスルフォン、ポリメタクリレート、ＰＥＥＫ、ポリイミド、ならびにフルオロポリマー、例えばＰＴＦＥ、Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標）、ＦＥＰ  Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標）、Ｔｅｆｚｅｌ（登録商標）、ポリ（フッ化ビニリデン）、ＰＶＤＦ、およびパーフルオロアルコキシ樹脂が含まれる。また、収集装置を製造するために、石英ガラスを含むガラス製品も使用される。１つの例示的なガラス製品は、（ニューヨーク州コーニングのＣｏｒｎｉｎｇ  Ｇｌａｓｓから入手可能な）ＰＹＲＥＸ（登録商標）である。本発明の諸実施形態に従って、セラミック収集装置を使用することができる。また、紙および強化紙容器などセルロース製品を使用し、本発明による収集装置を形成することもできる。
【００１２】
本発明の安定剤は、リン酸化活動とその関連の修飾、または生物試料貯蔵中のタンパク質の破壊を阻害することができる１つまたは複数のホスファターゼ阻害剤を含む。安定剤は、血液試料など生物試料を安定化し、生物試料内に存在するタンパク質の修飾、劣化、および／または断片化を阻害する、または防止する安定な組成物を作り出す。本発明の一実施形態によれば、収集装置は、好ましくは製造者によって、安定剤で予め処理され、いつでも使用できる形態で包装される。典型的には、包装済み収集装置は滅菌されたものであり、やはり滅菌包装材料内で包装される。
【００１３】
本発明は、製薬会社、バイオテクノロジー会社、開発業務受託機関、大学研究者、研究病院、およびタンパク質の研究に関心がある任意の施設および個人によって使用される可能性がある。本発明は、下流解析のために研究者がタンパク質試料を都合よく容易に保護し加工することを可能にすることになる。本発明による収集装置は、それだけには限らないが、タンパク質バンキング（ｐｒｏｔｅｉｎ  ｂａｎｋｉｎｇ）、タンパク質の識別および特徴付け、タンパク質発現、タンパク質定量、タンパク質間相互作用、タンパク質機能アッセイの開発、タンパク質標的の発見および妥当性検査、毒性予測（ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ  ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ）、薬物作用の決定、薬剤妥当性検査、３Ｄタンパク質構造解析およびコンピュータモデリングを含めて、解析諸目的の助けとなる前置（ｆｒｏｎｔ−ｅｎｄ）の試料収集装置として働くことになる。臨床使用もまた企図されている。
【００１４】
安定剤は、少なくとも１つのホスファターゼ阻害剤を含む、またはそれからなることが好ましい。好適な諸例には、セリンまたはスレオニンホスファターゼ（例えば、ＰＰＰファミリまたはＰＰＭファミリ）および／あるいはチロシンホスファターゼ（ＰＴＰファミリ）の阻害剤が含まれる。例えば、ＰＰ１ホスファターゼの阻害剤は、カリキュリンＡ、ノジュラリン、ＮＩＰＰ−１、ミクロキスチンＬＲ、トートマイシン、オカダ酸、カンタリジンを含む。ＰＰ２Ａの阻害剤は、カリキュリンＡ、ミクロキスチンＬＲ、オカダ酸、ホストリエシン、トートマイシン、カンタリジン、エンドタール、ノジュラリンを含む。ＰＰ２Ｂの阻害剤は、シクロスポリンＡ、ＦＫ５０６／イムノフィリン複合体、シペルメトリン、デルタメトリン、フェンバレレートを含む。ＰＴＰの阻害剤は、ｂｐＶ（ｐｈｅｎ）、デホスタチン、ｍｐＶ（ｐｉｃ）ＤＭＨＶ、オルトバナジン酸ナトリウムを含む。したがって、ホスファターゼおよび阻害剤は、当技術分野で周知であり、例えば米国カリフォルニア州サンディエゴのＣａｌｂｉｏｃｈｅｍから市販されている。
【００１５】
また、一般にそのような阻害剤の商業供給者によって「カクテル」と呼ばれるホスファターゼ阻害剤の組合せも、安定剤として使用することができる。そのような「カクテル」は、概して、ある範囲の当該のタンパク質を安定化させる点で有利であり、したがって、３つ以上のホスファターゼ阻害剤を含有する安定剤は、概して望ましいものである。
【００１６】
さらに、タンパク質安定性をさらに促進するために、プロテアーゼ阻害剤をホスファターゼ阻害剤と共に含むことが望ましい可能性がある。諸例には、セリンプロテアーゼ、システインプロテアーゼ、アスパラギン酸プロテアーゼ、メタロプロテアーゼ、チオールプロテアーゼ、エキソペプチダーゼなどが含まれる。これらのうち、セリンプロテアーゼ阻害剤とシステインプロテアーゼ阻害剤が特に注目されるものであり、メタロプロテアーゼ阻害剤およびアスパラギン酸阻害剤もまた有意である。セリンプロテアーゼ阻害剤の非限定的な諸例には、アンチパイン、アプロチニン、キモスタチン、エラスタチナール、フッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ）、ＡＰＭＳＦ、ＴＬＣＫ、ＴＰＣＫ、ロイペプチン、大豆トリプシン阻害剤が含まれる。システインプロテアーゼの阻害剤には、例えば、ＩＡＡ（インドール酢酸）およびＥ−６４が含まれる。アスパラギン酸プロテアーゼ阻害剤の好適な諸例には、ペプスタチンおよびＶｄＬＰＦＦＶｄＬが含まれる。メタロプロテアーゼの阻害剤の非限定的な諸例には、ＥＤＴＡ、ならびに１，１０−フェナントロリンおよびホスフォラモドン（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｏｄｏｎ）が含まれる。エキソペプチダーゼの阻害剤には、例えば、アマスタチン、ベスタチン、ジプロチン（ｄｉｐｒｏｔｉｎ）Ａ、ジプロチンＢが含まれる。プロテアーゼ阻害剤の追加の好適な諸例には、α２マクログロブリン、大豆またはライ豆トリプシン阻害剤、膵臓プロテアーゼ阻害剤、卵白オボスタチン、卵白シスタチンが含まれる。
【００１７】
安定剤は、それだけには限らないが、溶液、懸濁液または他の液体、ペレット、タブレット、カプセル、噴霧乾燥材料、フリーズドライ材料、粉末、粒子、ゲル、結晶、基質結合添加剤（ｓｕｂｓｔｒａｔｅ−ｂｏｕｎｄ  ａｄｄｉｔｉｖｅ）、緩衝マトリクス（ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｍａｔｒｉｘ）、または凍結乾燥材料を含めて、任意の好適な形態にあるものとすることができる。多数の阻害剤の半減期は短いため、安定剤は、阻害剤の貯蔵寿命を最適化するような形態で収集装置内に導入することが好ましい。凍結乾燥は、良好な安定性をもたらし、後続の滅菌をも可能にする点で特に有用であると思われる。これらはどちらも、自動化、標準化、臨床実施から見て重要である。
【００１８】
安定剤は、収集装置の任意の表面上に位置することができる。また、安定剤は、ストッパ、そのような装置を閉じるための封止上に、または機械的な構成要素表面および下表面上に、あるいは他の、そのような装置内で配置されたインサート上に位置することができる。安定剤は、収集装置の少なくとも１つの内部壁に沿ったどこかに、または貯蔵部（ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ  ｐｏｒｔｉｏｎ）内のどこかに位置することが好ましい。さらに、一部のホスファターゼ阻害剤は、感光性を示す可能性がある。したがって、その阻害剤を光から保護することが望ましい可能性がある。そのような阻害剤には、不透明の管、例えば観察窓を有する、または有していない琥珀色の管の使用が有利となる（Ｋｉｒｋ、Ｓｃｏｔｔは、独立請求項のために琥珀色の管上の窓を考慮している）。別法として、阻害剤を、例えば粉末形態で、光にさらされることから保護するカプセル内に配置し、次いでそのカプセルを管内に配置することもまた、この問題に対処することになる。また、阻害剤をカプセル化すると、阻害剤と容器内の他の要素との望ましくない相互作用を防止することができる。試料収集時に溶解するカプセル材料は、当技術分野で周知である。
【００１９】
安定剤は、任意の数の方法によって収集装置に適用することができる。例えば、安定剤は、収集装置の内部壁の表面を覆って、噴霧乾燥する、または軽く分注する、または凍結乾燥することができる。別法として、安定剤は、ゲルまたは液体形態にあるときなど、例えば、収集装置の貯蔵部内に配置することができる。収集装置に安定剤を供給するさらに他の方法も可能である。典型的には、所望の量の安定剤を容器内に配置するために、その安定剤の固体形態を再構築し、次いで、適切な量の液体を容器内に分注する。液体は、噴霧乾燥することも、容器の底部内に配置することも、その後で凍結乾燥することもできる。
【００２０】
安定剤の量および位置は、適用の形態（ｍｏｄｅ  ｏｆ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ）、使用される特定の安定剤、収集装置の内部容積および内部圧力、ならびに容器内に引き込まれる生物試料の体積を含めて、いくつかの変数によって決定される。
【００２１】
安定剤の濃度は、タンパク質を安定化するのに、またタンパク質劣化を阻害する、または防止するのに十分なものである。
【００２２】
安定剤に加えて、本発明の装置はまた、担持媒体（例えば、水またはアルコール）、安定化媒体（例えば、ポリビニルピロリドン、トレハロース、マンニトールなど）、および／または生物試料を処理するための１つまたは複数の他の添加剤を含むことができる。好適な添加剤には、それだけには限らないが、フェノール、フェノール／クロロホルム混合物、アルコール、アルデヒド、ケトン、有機酸、有機酸の塩、ハロゲンのアルカリ金属塩、有機キレート剤、蛍光染料、抗体、結合剤、抗凝固剤、例えばクエン酸塩ナトリウム、ヘパリン、カリウムＥＤＴＡなど、ならびに、通常、解析用の生物試料を処理するために使用される任意の他の試薬または試薬の組合せが含まれる。他の潜在的な添加剤は、タンパク質構造を保存する、例えば、スルフヒドリル基結合を保存する助けとなる可能性がある抗酸化剤および還元剤を含む。また、緩衝剤または糖化合物を含むことも有利である可能性がある。他の添加剤グループまたは化学的性質は、標本マトリクス内で保存添加剤または安定化添加剤の可溶性を高めるものを含む。担持媒体および添加剤は、タンパク質を劣化しないことが好ましい。安定剤がタブレット形態にある場合、望むなら、当業者に周知の医薬品タブレット分解材料を含むことができる。
【００２３】
本発明の方法は、生物試料を得ること、および安定剤を容れた容器内に生物試料を導入することを含む。好ましい実施形態では、生物試料は、どのような介在プロセスステップもなしに、患者から直接収集容器内に抜き取られる。全血試料を収集するときなど、生物試料を患者から直接収集し、安定剤を容れた容器内に試料を直接導入することにより、そうでない場合には、安定剤と組み合わせる前に試料が貯蔵されるとき発生するタンパク質の修飾、劣化、および／または断片化が実質的に低減される、または防止される。本発明の方法は、開放収集システムとも、開口が閉鎖手段によって閉じられる閉鎖収集システムとも有用である。
【００２４】
好ましい一実施形態では、本発明の収集装置は、患者から全血試料を直接抜き取り、収集点で直ちにタンパク質を安定化するためのものである。装置は、血液を収集するための真空システムとすることができる。別法として、装置は、血液を収集するための部分的真空または非真空システムとすることができる。真空システムの好適な例は、閉管である。手動の注射器抜取りは、部分的真空システムと非真空システム双方の好適な例である。非真空システムはまた、自動抜取りシステムを含むことができる。真空システムが特に好ましい。
【００２５】
そのいくつかの図全体にわたって同様な符号が同様な部分を指す図面を参照すると、図１は、内部チャンバ１４を画定する容器１２を含む典型的な採血装置１０を示す。図の実施形態では、容器１２は、側壁１６、閉じた底端部１８、および開いた頂端部２０を有する中空管である。任意選択で、分離用部材１３が容器チャンバ１４内に設けられる。分離用部材１３は、例えば遠心分離によって試料の成分を分離する際に助けとなるように働く。容器１２は、好適な体積の生体液、好ましくは血液を収集するために寸法設定される。滅菌製品が要求される場合には、開いた端部２０を覆い容器１２を閉じるための閉鎖手段２２が必要である。従来の管には、通常、ねじ蓋が十分である。真空収集管には、概して、必要とされる貯蔵期間中に真空を保つために、耐密嵌合するエラストマー性の栓が使用される。閉鎖物２２は、容器１２を効果的に閉じ、生物試料をチャンバ１４内で保持することが可能な封止を形成することが好ましい。閉鎖物２２は、それだけには限らないが、ゴム閉鎖物、金属封止、金属バンド付きゴム封止、様々なポリマーおよび設計の封止を含めて、様々な形態のうちの１つとすることができる。保護シールド２４が、閉鎖物２２の上に重なることができる。容器２２はまた、本発明に従って安定剤を容れる。
【００２６】
容器１２は、ガラス、プラスチック、または他の好適な材料製とすることができる。好ましくは、容器１２は透明である。容器１２用の好適な透明熱可塑性材料の非限定的な諸例は、ポリカーボネート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエチレンテレフタレートである。プラスチック材料は、酸素不透過性材料とすることができ、あるいは、酸素不透過性または半透過性層を含むことができる。別法として、容器１２は、透水性および透気性プラスチック材料製とすることができる。安定剤は、任意の適切な手段を使用して容器に設けることができる。一態様では、安定剤は、液体溶液内にあり、容器内に配置される。その後で、溶液は、例えばフリーズドライなど当技術分野で周知である方法によって凍結乾燥することができる。例えば、溶液を凍結し、次いで、凍結後徐々に暖め、同時に真空を適用することによって、フリーズドライ粉末は、収集管内に残る。また、フリーズドライ前に、賦形剤、例えばＰＶＰまたはトレハロースなど添加剤を安定剤溶液に追加し、得られる安定剤が容器内でペレット化するようにすることができる。安定化溶液を追加した後で、真空乾燥を使用することもできる。他の態様では、安定剤は、液体または固体エアロゾルの形に形成され、容器の内部の１つまたは複数の表面上に噴霧される。
【００２７】
チャンバ１４内の圧力は、所定の体積の生物試料をチャンバ１４内に引き込むように選択される。閉鎖物２２は、大気圧と大気圧未満の圧力との間の内部圧力差を維持することが可能である弾性材料製であることが好ましい。閉鎖物２２は、当技術分野で周知のように、容器１２内に生物試料を導入するために針２６または他のカニューレによって穿孔することができるようなものである。好ましくは、閉鎖物２２は再封止可能である。閉鎖物２２用の好適な材料には、例えば、シリコーンゴム、天然ゴム、スチレン・ブタジエンゴム、エチレン−プロピレンコポリマー、ポリクロロプレンが含まれる。
【００２８】
容器１２の好適な諸例には、単一壁管および多層管が含まれる。好適な容器１２のより特有の例は、Ｃｏｈｅｎの特許文献１に開示されており、その全体を参照により本明細書に組み込む。
【００２９】
本発明による装置のための有用な製造プロセスは、収集容器を得ること、少なくとも１つのホスファターゼ阻害剤をその容器に追加すること、その少なくとも１つの阻害剤を凍結乾燥すること、その容器を真空にすること、その容器を滅菌することを含む。少なくとも１つの阻害剤は、溶液の形態で容器内に分注することができる。阻害剤を収集容器に追加した後で、望むなら、分離用部材を容器に追加することができる。
【００３０】
指摘したように、容器１２はまた、ゲル、機械的または他の分離用部材（例えば、フィルタ機構）を含むことができる。そのような場合には、安定剤は、分離媒体の外部表面上で噴霧乾燥および／または凍結乾燥することができる。また、容器１２は、血漿分離用の収集装置とすることができる。そのような収集装置は、安定剤に加えて、血漿を人または動物の全血から分離するための要素を備える。血漿を全血から分離するための要素は、ゲル配合物、機械的媒体、またはフィルタ機構など、分離用部材とすることができる。ゲルは、揺変性ポリマーゲル配合物であることが望ましい。ゲルは、ホモポリマーまたはコポリマーとすることができ、例えばポリシロキサンなどシリコーンを主成分とするゲル、あるいは、例えばポリアクリル酸、ポリエステル、ポリオレフィン、酸化シス・ポリブタジエン、ポリブテン、エポキシ化大豆油と塩素化炭化水素のブレンド、二価酸とプロパンジオールのコポリマー、水素化シクロペンタジエン（ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｅｄ  ｃｙｃｌｏｐｅｎｔａｄｉｅｎｅ）、αオレフィンのジアルキルマレートとのコポリマーなど有機炭化水素を主成分とするゲルを含むことができる。ゲルは、密度分離媒体として働くことによって、血漿を管内の血液試料の細胞から隔離することが望ましい。好適な血漿分離管の例は、Ｃａｒｒｏｌｌらの特許文献２に開示されており、その全体を参照により本明細書に組み込む。このようにして、安定化は、血漿を血液から分離するための遠心分離前、遠心分離中、遠視分離後にもたらされる可能性がある。ゲル分離用材料の場合には、安定剤とゲルとの物理的／化学的分離を提供すること、例えば、上記で論じたようにカプセルの使用が望ましい可能性がある。例えば、安定剤の一部分がゲル内に組み込まれる、またはゲルと反応する場合、安定剤の有効性が低下する可能性がある。同じ理由で、機械的分離用要素が使用される場合、その要素は、安定剤に対して実質的に不活性であることが望ましく、これは、そのような分離器の有意な利点を反映する。分離用要素なしの遠心分離に対して、血漿管内で分離用要素を設けることは、特に有利である。具体的には、細胞溶解により当該のタンパク質を劣化するプロテアーゼが解放されるため、細胞（すなわち、血餅）と血漿との分離が良好であるほど、血漿試料内のタンパク質の安定性が良好となる。有用な機械的分離器は、例えば特許文献３、４、５、６に見出され、それらの内容は、それらの全体を参照により本明細書に組み込む。有用なフィルタ機構は、例えば特許文献７に見出され、その内容は、それらの全体を参照により本明細書に組み込む。イシモトらは、下流管からフィルタによって分離された上流管を含み、それらの管が互いに脱着可能であり真空にされる、血液分離用管を開示している。血液収集中には、血液は、静脈内穿刺を介して患者から除去され、血圧と管内側の負圧とを介して上流管内に移送される。その開示によれば、血液が２つの管の間のフィルタに接触したとき、上流管と下流管の間で圧力差が生み出されると仮定される。したがって、全血を分離するために遠心分離が必要とされない。いくつかの提案されているフィルタには、膜、ガラス繊維、抗血球抗体が付着された孔の��きなフィルタ紙、細胞を凝集するためにカチオン高分子物質を含浸されたフィルタ、および積層多層フィルタが含まれる。
【００３１】
また、容器１２は、リンパ球および単球を、より重い相の全血の試料から遠心分離によって分離するための収集管であって、安定剤に加えて、液体密度勾配媒体と、遠心分離前に液体密度勾配媒体が血液試料と混合するのを防止するための手段とを備える収集管とすることができる。好適なリンパ球／単球収集管の例は、Ｌｕｄｅｒｅｒらの特許文献８に開示されており、その全体を参照により本明細書に組み込む。
【００３２】
他の実施形態では、本発明は、１つまたは複数の安定剤を含む少なくとも２つの容器を有するキットを提供する。例えば、キットは、１次収集管、例えば、分離用要素を有する血漿分離用管と、試験のための、例えば収集された血漿を注ぐ、または他の方法で分注するための２次管とを備えることができる。当該のタンパク質が全体にわたって確実に安定なままとなっているように、どちらも安定剤を有することになる。管は諸段を有することができ、それによって、ある段で、ある種のタンパク質が分離され、または除去され、別の段で安定化される。任意選択で、キットは、注ぐ必要を、または他の安全でない移送慣行を防止するために、管間移送装置を含むことができ、その場合には、２次管は、血漿を引き込むために減圧されることになる。そのようなキットを使用する人は、試料を１次管に収集し、遠心分離し、当該の試料を２次試験管に移送し、試験を実施することになる。２次試験管は、所望の試験に応じて、様々なサイズのものとすることができる。
【００３３】
他の実施形態では、容器は、閉鎖物を有する２つの開いた端部を有する管である。そのような管では、例えば、分離用要素を中に有する血漿分離用管について、血漿試料または血餅試料を採取することができることになる。
【００３４】
他の実施形態では、本発明の収集装置は、例えば、シングルまたはマルチウェルプレート、マイクロタイタープレート、組織培養プレートなど、試験プレートを備える。典型的な試験プレートは、概して、円筒形であることが好ましい１つまたは複数のウェルを備える。図２に示されているように、試験プレート３０は、上部表面３２と下部表面３４とを含む。さらに、試験プレート３０は、プレートの上部表面３２からプレートの下部表面３４に延びる側壁３８をそれぞれが備えるいくつかのウェル３６を含む。各ウェルは、頂部分４０と底部分４４とを備える。頂部分４０は、底部分４４に延びる開いた端部４２を備え、底部分４４は、閉じた端部４６を備える。底部分４４は、平坦なもの、円錐形（尖端）のもの、または丸いものとすることができる。各ウェル３６の容量は、典型的には、数ミリリットル（ｍｌ）から約０．５ｍｌ未満に及ぶ。ウェル３６は、それぞれ、本発明に従って安定剤を収容することができる。
【００３５】
試験プレート３０内のウェル３６の数は、重要ではない。ウェルの数はいくつでもよいが、ウェル６個、１２個、２４個、４８個、９６個の試験プレートが一般に知られており、使用可能である。図２では、例示のためにすぎないが、ウェル６個の試験プレートが示されており、本発明は、ウェルの数に依存しない。最も標準的なマルチウェルプレートは、使用される個々のウェルを明確に識別することができるように、直交する行と列で配列されたウェルを有する。当然ながら、試験プレート３０内のウェルの配列は、本発明を本質的に限定するものではない。というのは、任意の配列のウェルが本発明によって企図されているからである。
【００３６】
プレート３０は、真空成形、シートモールディング、射出成形、または他の類似の技法によって、熱可塑性材料から形成することができる。好適な熱可塑性材料には、それだけには限らないが、ポリスチレン、塩化ビニル、ポリカーボネート、ポリエチレンテレフタレートなどが含まれる。好ましくは、プレート３０は透明である。
【００３７】
側壁３８が、壁を囲み、試験プレート３０の外側境界を形成している。本実施形態では、試験プレート３０は、６つの側壁を有する。周知の試験プレートは、矩形または四辺形であるが、本発明のためには、プレートは、任意の実際的な構成で作製することができる。複数のウェルを含む好適な試験プレートの諸例は、Ｔｙｎｄｏｒｆらの特許文献９、Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎの特許文献１０、およびＢｒｉａｎらの特許文献１１に開示されており、そのそれぞれは、その全体を参照により本明細書に組み込む。
【００３８】
他の実施例では、本発明による収集装置は、生物試料を収集、移送、分注するための試料収集アセンブリとすることができる。収集アセンブリは、概して、個々の生物試料を収集するために、複数の試料ウェルを含む。試料ウェルは、離隔された向きで、試料トレイ内で支持される。試料トレイは、試料トレイを封入し、試料ウェルの安全かつ効率的な輸送を可能にするケース内で支持することができる。試料トレイは、その複数の試料トレイを封入する第１の位置から、試料をトレイから手動で分注することができるように、試料ウェルのうち１つを外部からアクセス可能にする第２の位置に移動するために、ケース内で移動可能に収容される。
【００３９】
図３ａおよび図３ｂに示されているように、試料トレイ５０は、標本収集ウェル５２を形成する複数の、長手方向で離隔された凹部を含む。試料トレイ５０は、適切に変形可能なプラスチック材料から形成することができる。ウェル５２は、底５４と、開いた端部５６とを有する。試料ウェルは、端部の開いたカップのような部材の形状とすることができることが企図されている。ウェル５２は、十分な深さを有し、好適な体積の生物試料を保持するように構築される。ウェル５２は、それぞれ、本発明に従って安定剤を収容することができる。本発明のトレイ５０は、図では、単一行のウェル５２が形成されているが、本発明は、特定の試験状況にとって望ましい任意の数で、また任意のアレイで設けることができることを企図している。試料収集アセンブリは、試料収集ケース５７を含むことができる。ウェル５２内で生物試料を収集したとき、試料トレイ５０を試料収集ケース５７の開いた端部５８内に、次いで試料収集ケース５７の内部５９内に、壁５２のすべてが封入されるまで挿入することができる。好適な試料収集アセンブリは、Ｒａｉｎｅｎの特許文献１２に開示されており、その全体を参照により本明細書に組み込む。
【００４０】
図４に示されているように、本発明の他の実施形態によれば、収集装置は、注射器、より好ましくは、本発明に従って安定剤で予め充填された注射器を含む。典型的な注射器は、相対向する近位端部と遠位端部とを有し、生物試料など物質を受け取るために、その端部間に少なくとも１つのチャンバが形成された、概して円筒形の胴部を備える。プランジャは、典型的には、胴部内で封止可能に配置され、胴部に対して移動可能であり、封止手段は、胴部の遠位端部に近接して封止可能に配置することができる。図４を参照すると、注射器６０が示されており、注射器６０は、開いた近位端部６４と遠位端部６６とを有する細長い胴部または円筒６２を含み、少なくとも１つの中空チャンバ６８が、生物試料を受け取るために近位端部と遠位端部の間で形成されている。図の実施形態では、遠位端部６６は、針ガード７０を含む。針ガードは、貯蔵中に、注射器ならびに針を滅菌状態で保つ。
【００４１】
注射器の胴部は、安定剤を含む。注射器の胴部は、安定剤で予め充填されることが好ましい。その用語が当技術分野で周知である予め充填された注射器（プレフィルドシリンジ）は、製造者によって充填され、いつでも使用できる状態でヘルスケア提供者に対して出荷される注射器である。
【００４２】
プランジャ７２は、開いた近位端部６４に位置することができる。プランジャ７２は、例えば螺合によってプランジャに固定されるプランジャロッド７４によって移動させることができる。プランジャが位置する同じ端部で、胴部は、いわゆるスナップキャップ原理に従って胴部に固定されるフィンガグリップ７６を有することができる。フィンガグリップ７６は、わずかに弾性の材料、例えばプラスチックからなることが好ましい。他の実施形態（図示せず）では、フィンガグリップは、径方向で外向きに突出する、胴部のフランジのような部分である。当然ながら、当業者に周知の他の構造が可能である。
【００４３】
胴部を閉じるストッパ７８は、プランジャから離れて胴部の端部内に位置することができる。プランジャおよびストッパは、好ましくは弾性材料から作製され、最も好ましくは、医薬品質のゴムから作製される。
【００４４】
図の実施形態では、注射針８０は、針ホルダ８２によって胴部に固定される。針ホルダは首部８４を有し、首部８４は、針、シャフト８６、カラー８８を保持する。針ホルダは、例えばプラスチックなど、変形に対して抵抗があるわずかに弾性の材料から作製されることが好ましく、スナップキャップ構造によって胴部の端部に固定される。別法では、針ホルダは、ねじまたは接着連結によって、あるいは、胴部がカラーをも備えるときには締結リングによって、胴部に固定することができる。後者の実施形態では、針ホルダもまた、胴部のカラーの周りでフランジ付きとすることができる。
【００４５】
この実施形態で示されている注射器胴部はロック式のルアータイプカラー８８を含むが、カラーを備えない注射器胴部、偏心して位置決めされたノズルを有する注射器胴部、および、針カニューレまたは針カニューレアセンブリを永続的に、または着脱可能に受けるように適合された、様々な他のノズルのような構造を含むことは、本発明の範囲内である。注射器胴部の内部と流体連通して注射器胴部の遠位端部上に開口があることが必要とされるにすぎない。
【００４６】
シャフト８６の内部壁および首部８４の後方面内に、１つまたは複数のスロット９０を陥凹することができる。そのスロットは、カニューレの後方端部内に延びる。断面では、スロットは円の一部とすることができるが、サイズが、十分な注射液が容易に通過することができるようなものである限り、他の形状も可能である。これは、スロットの直径、またはスロットの断面全体が少なくともカニューレのものと同程度である場合に達成される。針ホルダ８２のシャフト８６は、ストッパ７８が軸方向で前方に摺動したとき、摩擦でシャフトによって受け取られるように、したがって、シャフト内で陥凹されたスロット９０は別として、シャフトの内径が胴部６２の内径とほぼ同程度であるように構築される。針ホルダ８２のシャフト８６は、ストッパ７８よりわずかに長く、その結果、胴部に隣接するスロットの一部９２は、ストッパが針ホルダの首部の後方壁に接して前方に移動されたとき、自由である。望むなら、針ガード７０は、プランジャロッドとしても働くように構築することができる。その場合には、注射器の使用前に、針ガードは、針から除去され、注射器の他端部でプランジャに固定される。
【００４７】
概して、針保護物を備える注射器は、針保護物が以前に除去されたかどうかを示す安全部材を有する。キャップの形態にあるそのような安全部材は、例えば特許文献１３に述べられている。
【００４８】
他の実施形態では、注射器は、針が定位置にある状態で貯蔵されない、すなわち、当技術分野で周知のように針なし注射器である。これは、図５に示されている。そのような注射器の場合、使用前に針が、針ハブによって針ホルダ８２の首部８４上で位置決めされる。この連結のために、いわゆるルアーコーンが使用されることが好ましい。この実施形態では、針ホルダの首部内の開口９４は、保護キャップ９６によって外側で閉じられ、注射器ならびに針ホルダの滅菌状態を確保する。針ホルダ内で陥凹されたスロット９０は、首部開口の端部内に突出する。
【００４９】
好適な注射器の例は、Ｂａｒｒｅｌｌｅらの特許文献１４に開示されており、その全体を参照により本明細書に組み込む。好適な注射器の他の例は、例えば、Ｓｚｗａｒｃの特許文献１５、Ｉｍｂｅｒｔらの特許文献１６、Ｔｈｉｂａｕｌｔらの特許文献１７、およびＯｄｅｌｌらの特許文献１８に開示されており、そのそれぞれは、その全体を参照により本明細書に組み込む。
【００５０】
他の実施形態では、本発明の収集装置は、カテーテルを含む。当技術分野で周知のように、カテーテルは、患者が薬剤または他の物質の反復投与を必要とするとき、一般に使用される。カテーテルは、注射を繰り返すことなしに患者の血流または身体の他の領域内に直接、薬剤を反復して連続的に投薬することを可能にする。典型的には、カテーテルは、中空の管腔（ｔｕｂｕｌａｒ  ｌｕｍｅｎ）と、近位端部と、遠位端部とを有する。開いたものとすることも閉じたものとすることもできるカテーテルの遠位端部は、患者の静脈または動脈内に挿入される。
【００５１】
図６ａは、例示的なカテーテルアセンブリを示し、このカテーテルアセンブリは、そこを介する管腔１０４を描く円筒形の側壁１０２と、近位端部１０６と、この図の実施形態では、患者内へのカテーテルの挿入を容易にするために丸い外部表面１１０を有する、閉じた遠位端部１０８とを有する可撓性カテーテル１００を含む。図６ｂに示されているように、カテーテル１００は、側壁１０２を介して、遠位端部１０８に隣接してスリット１１２を含み、側壁内で形成された２つの対向する面１１４および１１６によって画定される。カテーテル１００は、本発明に従って、好ましくはカテーテルの管腔内で、安定剤を含む。
【００５２】
カテーテルの近位端部は、そこを介する導管１２０を有するカテーテルハウジング１１８に連結される。カテーテルハウジング内の導管１２０とカテーテル内の管腔１０４は、流体連通する。そこを介する通路１２４を有する弁制御ノブ１２２がカテーテルハウジング１１８に回転可能に連結され、その結果、通路１２４が導管１２０と流体連通する。弁制御ノブ１２２とカテーテルハウジング１１８は、近位フランジ１２６によって、カテーテルハウジング上で共に保持され、カテーテルハウジングは、弁制御ノブ内の回転溝１２８に係合する。この構造は、弁制御ノブがカテーテルハウジングに対して回転することを可能にするが、２つの要素が分解しないように保つ。好適なカテーテルの例は、Ａｌｃｈａｓの特許文献１９に開示されており、その全体を参照により本明細書に組み込む。
【００５３】
他の実施形態では、本発明の収集装置は、ピペットを含む。実験室設定では、ある容器から、ある体積の生体液を抽出するために、また抽出された体積の一部またはすべてを別の容器内に移送および分注するために、ピペットを使用することが周知である。典型的には、ピペットは、概して中空の管状部材であり、ある量の流体媒体を中空管内に抽出する、または吸い出すために、開いた上端部またはマウスピース部で吸引を加えることによって使用される。マウスピース開口を閉じることによって維持される圧力差により、ピペット内で液体が保持され、流体媒体を別の容器に移送することが可能になる。マウスピースを選択的に開くことにより、ピペット内に容れられたある量の流体媒体を分注することが可能になる。分注される流体の量のある程度の精度が、テーパ形端部分によって、滴下により失われる流体の量を低減することにより実現される。
【００５４】
次に図７を参照すると、例示的なピペット２００が示されている。ピペット２００は、概して均一な厚さの管状壁２０２によって画定される、概して細長い管状部材である。管状壁２０２内では、所与の体積の流体媒体、例えば生物試料を収容するために、ピペット内部２０４が画定される。ピペット２００は、内部２０４と同一の広がりを有する細長い、概して円筒形の本体部分２０６を含む。ピペット本体２０６は、本発明に従って、安定剤で予め充填することができる。
【００５５】
生体液を吸い出し、分注するために、ピペット２００は、本体２０６の一端で分注部分２０８と、他端でマウスピース２１０とを含む。分注部分２０８とマウスピース２１０は、共にピペット２００の内部２０４と連通しており、それにより、マウスピース２１０を使用してピペット２００の内部２０４内で選択的圧力差を生み出すことによって、分注部分２０８を介して流体の吸出しおよび分散を可能にする。そのような圧力差は、マウスピース２１０を開くこと、および閉じることによって手動で生み出すことができ、あるいは、機械的なピペット補助物の使用によって生み出すことができる。
【００５６】
ピペット２００は、ガラス、またはポリカーボネート、ポリエチレン、ポリエステル、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリスルフォン、ポリウレタン、エチレン酢酸ビニルなどから構築することができる。熱可塑性ピペットは、多数の使用について大幅にガラスピペットに取って代わっている。ピペット２００の材料は、透明、半透明、または不透明とすることができる。
【００５７】
好適なピペットの諸例は、例えば、Ｓｔｅｖｅｎｓの特許文献２０、およびＺｈａｎｇらの特許文献２１に開示されており、そのどちらも、それらの全体を参照により本明細書に組み込む。
【００５８】
また、本発明の収集装置は、例えば、採血バッグ、血漿バッグ、軟膜バッグ、血小板バッグなど、生物試料を保持するのに適した収集バッグを含むことができる。説明を容易にするために、次に、採血バッグについて、図８を参照して述べる。
【００５９】
図８は、収集された血液を収容するための採血バッグ３００を示す。採血バッグ３００は、以下でより具体的に述べるが、可撓性を有する樹脂製シート材料の１対の同一に切断された小片を重ね合わせ、シート材料の各小片の封止部分３０４の周縁部を互いに融着する（すなわち、熱融着、高周波融着など）または接着によって接合することによって形成された本体３０２を有する。収集された血液を収容する血液収容部分３０６が、本体３０２の封止部分３０４で囲まれた内部部分に形成される。採血バッグ３００は、本発明に従って、安定剤を容れることが好ましい。
【００６０】
血液収容部分３０６と連通する可撓性管３０８の一端は、本体３０２とその上部部分で連結される。採血針３１０は、ハブ３１２を介して可撓性管３０８の他端で設置される。採血針３１０を覆うべきキャップ３１４は、ハブ３１２上で設置することができる。それぞれピールタブで封止された２つの開口３１６および３１８は、開けることができるように本体３０２の上部部分に形成することができる。
【００６１】
採血バッグ３００の本体３０２を構成するシートの材料の組成、特性などは、指定されたものに限定されない。この場合には、採血バッグ３００を構成するシート材料として、軟質ポリ塩化ビニル、またはそれらの主成分として軟質ポリ塩化ビニルを含有する材料が使用されることが好ましい。例えば、その主成分として軟質ポリ塩化ビニル、および少量の高分子材料、ポリマーブレンド、ポリマーアロイなどを含有するコポリマーを使用することができる。軟質ポリ塩化ビニル用の可塑剤として、フタル酸ジオクチル（ＤＥＨＰ、ジ（２−エチルヘキシル）フタレート）および（ＤｎＤＰ、ジ（ｎ−デシル）フタレート）を使用することができることが好ましい。ポリ塩化ビニル内のそのような可塑剤の含有量は、ポリ塩化ビニルの１００重量部に基づいて、約３０から７０重量部の範囲内にあるものとすることが好ましい。
【００６２】
採血バッグ３００のシート材料に効果的に使用可能である他の物質は、ポリオレフィン、すなわち、エチレン、プロピレン、ブタジエン、イソプレンなどオレフィンまたはジオレフィンの単独重合または共重合の生成物である。典型的な諸例には、ポリエチレン、ポリプロピレン、エチレン酢酸ビニルコポリマー（ＥＶＡ）、ＥＶＡと様々な熱可塑性エラストマーとの間で形成されたポリマーブレンド、ならびにそれらの任意の組合せが含まれる。ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリブチレンテレフタレート（ＰＢＴ）、ポリ−１，４−シクロヘキサンジメチルテレフタレート（ＰＣＨＴ）、ポリ塩化ビニリデンなどポリエステルもまた、使用可能である。
【００６３】
他の実施形態では、本発明の収集装置は、安定剤を容れた実験室容器とすることができる。本発明に従って使用することができる特定の容器には、例えば、バイアル、フラスコ、スピナーフラスコ、ローラボトル、顕微鏡スライド、顕微鏡スライドアセンブリ、解析装置用の試料チャンバ、テープ、ラミネート、アレイ、チュービングなどが含まれる。本発明による実験室容器は、少なくとも１つの操作表面を有する。本発明による多数の容器は、生物試料を容れる貯蔵部を画定する少なくとも１つの内部壁と、その貯蔵部と連通する少なくとも１つの開口とを有する。
【００６４】
実験室容器を製造するために、しばしばプラスチックまたはガラスが使用される。実験室容器を製造するために使用されるいくつかの好ましい材料には、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリスチレン、ポリカーボネート、セルロース誘導体が含まれる。ポリプロピレンは安価であるため、ごくわずかな、正確な量の生物試料を取り扱い輸送するために使用される実験室容器にとって特に好ましい材料である。
【００６５】
本発明の実験室容器用の他の好適な材料の諸例には、ポリオレフィン、ポリアミド、ポリエステル、シリコーン、ポリウレタン、エポキシ、アクリル系誘導体、ポリアクリレート、ポリエステル、ポリスルフォン、ポリメタクリレート、ＰＥＥＫ、ポリイミド、フルオロポリマーが含まれる。石英ガラスを含むガラス製品もまた、実験室容器を製造するために使用される。
【００６６】
様々な実施形態を選んで本発明を実証したが、添付の特許請求の範囲に規定されている本発明の範囲から逸脱することなしに、様々な修正および追加を加えることができることは、当業者には理解されよう。
【図面の簡単な説明】
【００６７】
【図１】典型的な採血管の透視図である。
【図２】試験プレートの斜視図である。
【図３ａ】試料収集アセンブリの斜視図である。
【図３ｂ】試料収集アセンブリの断面図である。
【図４】注射器の長手方向断面図である。
【図５】注射器の他の実施形態の長手方向断面図である。
【図６ａ】カテーテルアセンブリの側面図である。
【図６ｂ】カテーテルの部分側面図である。
【図７】ピペットの斜視図である。
【図８】採血バッグを示す透視図である。
【図１】
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【図２】
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【図３ａ】
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【図３ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６ａ】
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【図６ｂ】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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