(57)【要約】本発明の一態様は、少なくとも一つのリガンドを含む二本鎖オリゴヌクレオチドに関する。一部の実施形態では、リガンドは、二本鎖オリゴヌクレオチドを構成する二本のオリゴヌクレオチド鎖のうち一方だけに結合している。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドのオリゴヌクレオチドの両方が独立して、結合リガンドを含む。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド鎖は少なくとも一つの修飾糖部分を含む。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドの鎖の一方または両方の中のリン酸結合が、ホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート結合で置換されている。好ましい一実施形態では、リガンドは、コレステロールまたは５β−コラン酸である。本発明の別の一態様は、少なくとも一つのリガンドを含む一本鎖オリゴヌクレオチドに関する。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは少なくとも一つの修飾糖部分を含む。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドのリン酸結合は、ホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート結合で置換されている。好ましい一実施形態では、リガンドは、コレステロールまたは５β−コラン酸である。リガンドは、オリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改善する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化学式Iで表される一本鎖オリゴヌクレオチド。
【化１】
2007535922.tif 000109
（Ｘは、Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）２、−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）２、または−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）２であり；
Ｍはそれぞれ独立して、アルカリ金属または総電荷＋１の遷移金属を表し；
ｎは１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４であり；
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ５はそれぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＯＲ７、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＳＲ７、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＮ（Ｒ７）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）２、−Ｎ（Ｒ７）２、−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ｖＯ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＳ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＯ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＮ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２、または−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＯＮ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２を表し；
Ａ１はそれぞれ独立して、
【化２】
2007535922.tif 000110
を表し；
Ｚ１はそれぞれ独立して、ＯまたはＳを表し；
Ｚ２はそれぞれ独立して、−ＯＨ、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−Ｏアラルキル、−ＳＨ、ＳＭ、−Ｓアルキル、−Ｓアリール、−Ｓアラルキル、−Ｎ（Ｒ３）Ｒ４、−（Ｃ（Ｒ７）２）ｍＮ（Ｒ７）２、−Ｎ（Ｒ７）（Ｃ（Ｒ７）２）ｍＮ（Ｒ７）２、またはアルキルを表し；
Ｒ３およびＲ４はＨまたはアルキルであり；またはＲ３およびＲ４は全体として３、４、５、６または７員環を成し；
Ｒ６はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキルまたはＮＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２を表し；
Ｒ７はそれぞれ独立して、Ｈまたはアルキルを表し；
Ａ２はそれぞれ独立して、
【化３】
2007535922.tif 000111
を表し；
Ａ３はそれぞれ独立して、
【化４】
2007535922.tif 000112
を表し；
Ａ４はそれぞれ独立して、結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アミノアルキルジラジカル、アルキニルジラジカル、アルキルアルキニルジラジカル、チオエーテル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ１Ｃ（Ｒ）２Ｂ２、Ｂ１Ｃ（Ｒ）（Ｂ２）２、Ｂ１Ｃ（Ｂ２）３、Ｂ１Ｎ（Ｒ）（Ｂ２）、Ｂ１Ｎ（Ｂ２）２を表し、または式：
【化５】
2007535922.tif 000113
を有し、
Ｂ１はそれぞれ独立して、Ａ３とＡ４の間の結合を表し；
Ｂ２はそれぞれ独立して、Ａ４とＡ５の間の結合を表し；
Ｒはそれぞれ独立して、水素またはアルキルを表し；
ｍはそれぞれ独立して、１、２、３、４、５、６、７または８を表し；
ｍ１はそれぞれ独立して、０、１、２、３、４、５、６、７または８を表し；
ｖはそれぞれ独立して、１、２、３または４を表し；
ｗは原子価則に従ってそれぞれ独立して、１、２または３を表し；
ただしＡ５が少なくとも１回出現することを条件とし；および
Ａ５はそれぞれ独立して、化合物Ｃ、化合物Ｃ、化合物Ｄ、化合物Ｄ'、あるいは、ステロイド、胆汁酸、脂質、葉酸、ピリドキサール、Ｂ１２、リボフラビン、ビオチン、芳香族化合物、多環式化合物、クラウンエーテル、インターカレーター、切断分子、タンパク質結合剤、糖質、または必要に応じて置換された飽和５員環の、ラジカルを表し；
化合物Ｃは：
【化６】
2007535922.tif 000114
で表され、
化合物Ｃ’は：
【化７】
2007535922.tif 000115
で表され、
ＣおよびＣ’について、
Ｒ２５はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、チオアルキル、アジド、−Ｎ（Ｒ２７）２、−ＣＯ２Ｒ ２７、−ＣＯＲ２７、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２７、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；
Ｒ２６はそれぞれ独立して、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；
Ｒ２７はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；
Ｒ２８はそれぞれ独立して、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２７、−Ｎ（Ｒ２７）Ｃ（Ｏ）Ｒ２７、−Ｎ（Ｒ２７）２、− ＣＯ２Ｒ ２７、−ＣＯＲ２７、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；および
ｐはそれぞれ独立して１、２、３、４、５、６または７を表し；
化合物Ｄは：
【化８】
2007535922.tif 000116
で表され、
化合物Ｄ'は：
【化９】
2007535922.tif 000117
で表され、
ＤおよびＤ'について、
Ｒ２９はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、チオアルキル、アジド、−Ｎ（Ｒ３０）２、−ＣＯ２Ｒ３０、−ＣＯＲ３０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ３０、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；
Ｒ３０はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；
Ｒ３１はそれぞれ独立して、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；
ｔはそれぞれ独立して、１、２、３、４、５、６または７を表す。）
【請求項２】
ｎが１８、１９、２０、２１または２２であることを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項３】
ｎが２０であることを特徴とする請求項１の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項４】
Ａ５が少なくとも２回出現することをを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項５】
Ａ５が少なくとも５回出現することを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項６】
Ａ５が少なくとも１０回出現することを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項７】
Ａ５がそれぞれ独立して、化合物Ｃ、化合物Ｄ、あるいは、コレステロール、５β−コラン酸、プロゲステロン、アルドステロン、デヒドロアルドステロン、イソアンドロステロン、エステロン、エストラジオール、エルゴステロール、デヒドロエルゴステロール、ラノステロール、４−コレステン−３−オン、ググルステロン、テストステロン、ノルテストステロン、フォルメスタン、ヒドロキシエクジソン、ケトエストリオール、コルチコステロン、ジエネストロール、ジヒドロキシプレグナノン、プレグナノン、コポルンモン、エキレニン、エキリン、エストリオール、エチニルエストラジオール、メストラノール、モキセストロール、ミタトリエンジオール、キネストラジオール、キネストロール、ヘルボル酸、プロトスタジエン、フシジン酸、シクロアルテノール、トリカロール、ククルビタニンセドレロン、ユーフォル、ダマレンジオール、パーケオール、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、パラメタゾン、ベタメタゾン、コルチゾン、フルオシノニド、フルオロメトロン、ハルシノニド、ブデソニド、またはそれら化合物の任意の１つがヒドロキシル、ハロゲン、アミノ、アルキルアミノ、アルキル、カルボン酸、エステル、アミド、カルボニル、アルコキシルもしくはシアノの一つ以上でさらに置換されたもの、のラジカルを表すことを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項８】
Ａ５がそれぞれ独立して、コレステロールまたは５β−コラン酸のラジカルを表すことを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項９】
Ａ５がそれぞれ独立して、
【化１０】
2007535922.tif 000118
を表し；
Ｒ２０はそれぞれ独立して、ヒドロキシル、アミノ、ハロゲン、アルコキシル、アルキル、アミノアルキル、アジド、カルボニル、アシルまたはアシルオキシを表し；Ｚ３はそれぞれ独立して、Ｏ、ＳまたはＮＲを表し；およびｙは原子価則に従ってそれぞれ独立して、１、２、３、４、５または６を表すことを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項１０】
Ａ５がそれぞれ独立して、コール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸、グリココール酸、グリコデオキシコール酸、タウロデオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸またはケノデオキシコール酸のラジカルを表すことを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項１１】
Ａ５がそれぞれ独立して、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、パルミトレイン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸、トリアシルグリセロール、ホスホアシルグリセロール、スフィンゴ脂質、モノテルペン、セスキテルペン、ジテルペン、セスタテルペン、トリテルペンまたはテトラテルペンのラジカルを表すことを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項１２】
Ａ５がそれぞれ独立して、必要に応じて置換されたフェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントレニル、ピレニル、ピリジニル、キノリニル、アクリジニル、フェナトリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、１，７−フェナントロリニル、インドリル、チアナフテニル、ベンズオキサゾリル、ベンゾフラニル、１，２−ベンズイソキサゾリル、ベンズイミダゾリル、ピロリル、チオフェニル、イソキサゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、テトラゾリルまたはフラニルを表すことを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項１３】
Ａ５がそれぞれ独立して、エリトロース、トレオース、リボース、アラビノース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトースまたはタロース；あるいは、それらのいずれかの間の１，４グリコシド結合によって形成された二糖または三糖；のラジカルを表すことを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項１４】
Ａ５がヘキソースまたはペントースであることを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項１５】
Ａ５が、
【化１１】
2007535922.tif 000119
で表され；
Ｒ４０がそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アラルキル、−Ｃ（Ｏ）アルキル、−Ｃ（Ｏ）アリール、−Ｃ（Ｏ）アラルキルまたはＳｉ（アルキル）３を表すことを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項１６】
Ａ５が、
【化１２】
2007535922.tif 000120
であることを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項１７】
Ａ５が、
【化１３】
2007535922.tif 000121
であり；および
Ａ４が、
【化１４】
2007535922.tif 000122
であることを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項１８】
Ａ５が、必要に応じて置換されたシクロペンタン、ピロリジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェンまたは１，１−ジフルオロシクロペンタンであることを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項１９】
Ａ５が化合物Ｃであることを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項２０】
Ａ５が、
【化１５】
2007535922.tif 000123
であることを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項２１】
Ａ５が化合物Ｄであることを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項２２】
Ａ５が、
【化１６】
2007535922.tif 000124
であることを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項２３】
Ａ５が多環式化合物のラジカルであることを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項２４】
Ａ５が、
【化１７】
2007535922.tif 000125
であり、
Ｒ３２はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、チオアルキル、アジド、−Ｎ（Ｒ３４）２、− ＣＯ２Ｒ ３４、−ＣＯＲ３４、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ３４、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；Ｒ３３は、アルキル、アルケニル、アリール、ハロゲンまたはアルコキシルで必要に応じて置換されたアリールであり；およびＲ３４はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アリールまたはアラルキルを表すことを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項２５】
Ａ５が、
【化１８】
2007535922.tif 000126
であることを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項２６】
Ａ５が、
【化１９】
2007535922.tif 000127
であり、
Ａ４が、
【化２０】
2007535922.tif 000128
であることを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項２７】
Ｒ２がそれぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｆまたは−Ｏアルキルを表すことを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項２８】
Ｒ２がそれぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、−ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＲ７、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＲ７、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（Ｒ７）２、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２または−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項２９】
Ｒ２がそれぞれ独立して、−ＮＨ２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３または−Ｎ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項３０】
Ｒ５がそれぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、−ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＲ７、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＲ７、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（Ｒ７）２、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨｓ）２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２または−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項３１】
Ｒ５がそれぞれ独立して、−ＮＨ２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３または−Ｎ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項３２】
Ｒ２およびＲ５がそれぞれ独立して、−ＮＨ２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３または−Ｎ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項３３】
Ｚ２がそれぞれ独立して、−ＯＨ、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−Ｏアラルキル、−ＳＨ、−ＳＭ、−Ｓアルキル、−Ｓアリール、−Ｓアラルキル、−Ｎ（Ｒ３）Ｒ４、−（Ｃ（Ｒ７）２）ｍＮ（Ｒ７）２、−Ｎ（Ｒ７）（Ｃ（Ｒ７）２）ｍＮ（Ｒ７）２またはメチルを表すことを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項３４】
Ｚ２がそれぞれ独立して、−ＯＨ、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリールまたは−Ｏアラルキルを表すことを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項３５】
Ａ２がそれぞれ独立して、
【化２１】
2007535922.tif 000129
を表すことを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項３６】
Ａ４がそれぞれ独立して、
【化２２】
2007535922.tif 000130
を表すことを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項３７】
Ａ４がそれぞれ独立して、
【化２３】
2007535922.tif 000131
を表し、および
Ａ５がステロイドであることを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項３８】
Ａ４がそれぞれ独立して、
【化２４】
2007535922.tif 000132
を表し、および
Ａ５がそれぞれ独立して、
【化２５】
2007535922.tif 000133
を表し、
Ｒ２０はそれぞれ独立して、ヒドロキシル、アミノ、ハロゲン、アルコキシル、アルキル、アミノアルキル、アジド、カルボニル、アシルまたはアシルオキシを表し；Ｚ３はそれぞれ独立して、Ｏ、ＳまたはＮＲを表し；およびｙは原子価則に従ってそれぞれ独立して、１、２、３、４、５または６を表すことを特徴とする請求項１記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項３９】
第一鎖および第二鎖を含み、該第一鎖および第二鎖が独立して下記の化学式IIで表されることを特徴とする二本鎖オリゴヌクレオチド。
【化２６】
2007535922.tif 000134
（Ｘは、Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）２、−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）２、または−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）２であり；
Ｍはそれぞれ独立して、アルカリ金属または総電荷＋１の遷移金属を表し；
ｎは１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４であり；
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ５はそれぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＯＲ７、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＳＲ７、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＮ（Ｒ７）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）２、−Ｎ（Ｒ７）２、−Ｓ（ｄ−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＯ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＳ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＯ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＮ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２または−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＯＮ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２を表し；
Ａ１はそれぞれ独立して、
【化２７】
2007535922.tif 000135
を表し；
Ｚ１はそれぞれ独立して、ＯまたはＳを表し；
Ｚ２はそれぞれ独立して、−ＯＨ、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−Ｏアラルキル、−ＳＨ、ＳＭ、−Ｓアルキル、−Ｓアリール、−Ｓアラルキル、−Ｎ（Ｒ３）Ｒ４、−（Ｃ（Ｒ７）２）ｍＮ（Ｒ７）２、−Ｎ（Ｒ７）（Ｃ（Ｒ７）２）ｍＮ（Ｒ７）２またはアルキルを表し；
Ｒ３およびＲ４はＨまたはアルキルであり；またはＲ３およびＲ４は全体として３、４、５、６または７員環を成し；
Ｒ６はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキルまたは−ＮＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２を表し；
Ｒ７はそれぞれ独立して、Ｈまたはアルキルを表し；
Ａ２はそれぞれ独立して、
【化２８】
2007535922.tif 000136
を表し；
Ａ３はそれぞれ独立して、
【化２９】
2007535922.tif 000137
を表し；
Ａ４はそれぞれ独立して、結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アミノアルキルジラジカル、アルキニルジラジカル、アルキルアルキニルジラジカル、チオエーテル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ１Ｃ（Ｒ）２Ｂ２、Ｂ１Ｃ（Ｒ）（Ｂ２）２、Ｂ１Ｃ（Ｂ２）３、Ｂ１Ｎ（Ｒ）（Ｂ２）、Ｂ１Ｎ（Ｂ２）２を表し、または式：
【化３０】
2007535922.tif 000138
を有し、
Ｂ１はそれぞれ独立して、Ａ３とＡ４の間の結合を表し；
Ｂ２はそれぞれ独立して、Ａ４とＡ５の間の結合を表し；
Ｒはそれぞれ独立して、水素またはアルキルを表し；
ｍはそれぞれ独立して、１、２、３、４、５、６、７または８を表し；
ｍ１はそれぞれ独立して、０、１、２、３、４、５、６、７または８を表し；
ｖはそれぞれ独立して、１、２、３または４を表し；
ｗは原子価則に従ってそれぞれ独立して、１、２または３を表し；
ただしＡ５が少なくとも１回出現することを条件とし；および
Ａ５はそれぞれ独立して、化合物Ｃ、化合物Ｄ、あるいは、ステロイド、胆汁酸、脂質、葉酸、ピリドキサール、Ｂ１２、リボフラビン、ビオチン、芳香族化合物、多環式化合物、クラウンエーテル、インターカレーター、切断分子、タンパク質結合剤、糖質、または必要に応じて置換された飽和５員環の、ラジカルを表し；
化合物Ｃは：
【化３１】
2007535922.tif 000139
で表され、および
化合物Ｃ’は：
【化３２】
2007535922.tif 000140
で表され、
ＣおよびＣ’について、
Ｒ２５はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、チオアルキル、アジド、−Ｎ（Ｒ２７）２、−ＣＯ２Ｒ２７、−ＣＯＲ２７、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２７、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；
Ｒ２６はそれぞれ独立して、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；
Ｒ２７はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；
Ｒ２８はそれぞれ独立して、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２７、−Ｎ（Ｒ２７）Ｃ（Ｏ）Ｒ２７、−Ｎ（Ｒ２７）２、−ＣＯ２Ｒ２７、−ＣＯＲ２７、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；および
ｐはそれぞれ独立して、１、２、３、４、５、６または７を表し；および
化合物Ｄは：
【化３３】
2007535922.tif 000141
で表され、および
化合物Ｄ'は：
【化３４】
2007535922.tif 000142
で表され、
ＤおよびＤ'について
Ｒ２９はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、チオアルキル、アジド、−Ｎ（Ｒ３０）２、−ＣＯ２Ｒ３０、−ＣＯＲ３０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ３０、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；
Ｒ３０はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；
Ｒ３１はそれぞれ独立して、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；および
ｔはそれぞれ独立して、１、２、３、４、５、６または７を表す。）
【請求項４０】
ｎが１８、１９、２０、２１または２２であることを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項４１】
ｎが２０であることを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項４２】
ｎが２０であり、かつ、第一鎖および第二鎖に２つのハイブリダイズしていないヌクレオチドが存在するように第一鎖および第二鎖がハイブリダイズしていることを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項４３】
第一鎖についてｎが２０であり、および第二鎖についてｎが２２であることを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項４４】
Ａ５が少なくとも２回出現することを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項４５】
Ａ５が少なくとも５回出現することを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項４６】
Ａ５が少なくとも１０回出現することを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項４７】
Ａ５が第一鎖にのみ存在することを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項４８】
第一鎖および第二鎖が、それぞれ少なくとも１回のＡ５の出現を含むことを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項４９】
Ａ５がそれぞれ独立して、化合物Ｃ、化合物Ｄ、あるいは、コレステロール、５β−コラン酸、プロゲステロン、アルドステロン、デヒドロアルドステロン、イソアンドロステロン、エステロン、エストラジオール、エルゴステロール、デヒドロエルゴステロール、ラノステロール、４−コレステン−３−オン、ググルステロン、テストステロン、ノルテストステロン、フォルメスタン、ヒドロキシエクジソン、ケトエストリオール、コルチコステロン、ジエネストロール、ジヒドロキシプレグナノン、プレグナノン、コポルンモン、エキレニン、エキリン、エストリオール、エチニルエストラジオール、メストラノール、モキセストロール、ミタトリエンジオール、キネストラジオール、キネストロール、ヘルボル酸、プロトスタジエン、フシジン酸、シクロアルテノール、トリカロール、ククルビタニンセドレロン、ユーフォル、ダマレンジオール、パーケオール、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、パラメタゾン、ベタメタゾン、コルチゾン、フルオシノニド、フルオロメトロン、ハルシノニド、ブデソニド、またはそれら化合物の任意の１つがヒドロキシル、ハロゲン、アミノ、アルキルアミノ、アルキル、カルボン酸、エステル、アミド、カルボニル、アルコキシルもしくはシアノの一つ以上でさらに置換されたもの、のラジカルを表すことを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項５０】
Ａ５がそれぞれ独立して、コレステロールまたは５β−コラン酸のラジカルを表すことを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項５１】
Ａ５がそれぞれ独立して
【化３５】
2007535922.tif 000143
を表し；
Ｒ２０はそれぞれ独立して、ヒドロキシル、アミノ、ハロゲン、アルコキシル、アルキル、アミノアルキル、アジド、カルボニル、アシルまたはアシルオキシを表し；Ｚ３はそれぞれ独立して、Ｏ、ＳまたはＮＲを表し；およびｙは原子価則に従ってそれぞれ独立して、１、２、３、４、５または６を表すことを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項５２】
Ａ５がそれぞれ独立して、コール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸、グリココール酸、グリコデオキシコール酸、タウロデオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸またはケノデオキシコール酸のラジカルを表すことを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項５３】
Ａ５がそれぞれ独立して、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、パルミトレイン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸、トリアシルグリセロール、ホスホアシルグリセロール、スフィンゴ脂質、モノテルペン、セスキテルペン、ジテルペン、セスタテルペン、トリテルペンまたはテトラテルペンのラジカルを表すことを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項５４】
Ａ５がそれぞれ独立して、必要に応じて置換された、フェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントレニル、ピレニル、ピリジニル、キノリニル、アクリジニル、フェナトリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、１，７−フェナントロリニル、インドリル、チアナフテニル、ベンズオキサゾリル、ベンゾフラニル、１，２−ベンズイソキサゾリル、ベンズイミダゾリル、ピロリル、チオフェニル、イソキサゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、テトラゾリルまたはフラニルを表すことを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項５５】
Ａ５がそれぞれ独立して、エリトロース、トレオース、リボース、アラビノース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトースまたはタロース；あるいはそれらのいずれかの間の１，４グリコシド結合によって形成された二糖または三糖；のラジカルを表すことを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項５６】
Ａ５がヘキソースまたはペントースであることを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項５７】
Ａ５が、
【化３６】
2007535922.tif 000144
であり；
Ｒ４０がそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アラルキル、−Ｃ（Ｏ）アルキル、−Ｃ（Ｏ）アリール、−Ｃ（Ｏ）アラルキルまたはＳｉ（アルキル）３を表すことを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項５８】
Ａ５が、
【化３７】
2007535922.tif 000145
であることを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項５９】
Ａ５が、
【化３８】
2007535922.tif 000146
であり；および
Ａ４が、
【化３９】
2007535922.tif 000147
であることを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項６０】
Ａ５が、必要に応じて置換された、シクロペンタン、ピロリジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェンまたは１，１−ジフルオロシクロペンタンであることを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項６１】
Ａ５が化合物Ｃであることを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項６２】
Ａ５が、
【化４０】
2007535922.tif 000148
であることを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項６３】
Ａ５が化合物Ｄであることを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項６４】
Ａ５が、
【化４１】
2007535922.tif 000149
であることを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項６５】
Ａ５が多環式化合物のラジカルであることを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項６６】
Ａ５が、
【化４２】
2007535922.tif 000150
であり、
Ｒ３２はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、チオアルキル、アジド、−Ｎ（Ｒ３４）２、−ＣＯ２Ｒ３４、−ＣＯＲ３４、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ３４、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；Ｒ３３は、アルキル、アルケニル、アリール、ハロゲンまたはアルコキシルで必要に応じて置換されたアリールであり；およびＲ３４はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アリールまたはアラルキルを表すことを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項６７】
Ａ５が、
【化４３】
2007535922.tif 000151
であることを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項６８】
Ａ５が、
【化４４】
2007535922.tif 000152
であり、および
Ａ４が、
【化４５】
2007535922.tif 000153
であることを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項６９】
Ｒ２がそれぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、または−Ｏアルキルを表すことを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項７０】
Ｒ２がそれぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、−ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＲ７、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＲ７、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（Ｒ７）２、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、または−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項７１】
Ｒ２がそれぞれ独立して、−ＮＨ２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、または−Ｎ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項７２】
Ｒ５がそれぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、−ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＲ７、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＲ７、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（Ｒ７）２、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、または−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項７３】
Ｒ５がそれぞれ独立して、−ＮＨ２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、または−Ｎ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項７４】
Ｒ２およびＲ５がそれぞれ独立して、−ＮＨ２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、または−Ｎ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項７５】
Ｚ２がそれぞれ独立して、−ＯＨ−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−Ｏアラルキル、−ＳＨ、−ＳＭ、−Ｓアルキル、−Ｓアリール、−Ｓアラルキル、−Ｎ（Ｒ３）Ｒ４、−（Ｃ（Ｒ７）２）ｍＮ（Ｒ７）２、−Ｎ（Ｒ７）（Ｃ（Ｒ７）２）ｍＮ（Ｒ７）２、またはメチルを表すことを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項７６】
Ｚ２がそれぞれ独立して、−ＯＨ、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、または−Ｏアラルキルを表すことを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項７７】
Ａ２がそれぞれ独立して、
【化４６】
2007535922.tif 000154
を表すことを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項７８】
Ａ４がそれぞれ独立して、
【化４７】
2007535922.tif 000155
を表すことを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項７９】
Ａ４がそれぞれ独立して、
【化４８】
2007535922.tif 000156
を表し、および
Ａ５がステロイドであることを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項８０】
Ａ４がそれぞれ独立して、
【化４９】
2007535922.tif 000157
を表し、および
Ａ５がそれぞれ独立して、
【化５０】
2007535922.tif 000158
を表し、
Ｒ２０はそれぞれ独立して、ヒドロキシル、アミノ、ハロゲン、アルコキシル、アルキル、アミノアルキル、アジド、カルボニル、アシルまたはアシルオキシを表し；Ｚ３はそれぞれ独立して、Ｏ、ＳまたはＮＲを表し；およびｙは原子価則に従ってそれぞれ独立して、１、２、３、４、５または６を表すことを特徴とする請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項８１】
望ましくない細胞増殖、関節炎、網膜血管新生、ウイルス感染、細菌感染、アメーバ感染、寄生虫感染、真菌感染、望ましくない免疫応答、喘息、狼瘡、多発性硬化症、糖尿病、急性疼痛、慢性疼痛、神経疾患、およびヘテロ接合性の消失によって特徴づけられる疾患より成る群から選択される疾患を患う患者を治療する方法であって、治療を必要とする患者に、請求項１または３９記載のオリゴヌクレオチドの治療的有効量を投与する工程を含むことを特徴とする治療方法。
【請求項８２】
前記疾患が、望ましくない細胞増殖であることを特徴とする請求項８１記載の方法。
【請求項８３】
前記疾患が、精巣癌、肺癌、乳癌、大腸癌、扁平上皮細胞癌、膵癌、白血病、黒色腫、バーキットリンパ腫、神経芽細胞腫、卵巣癌、前立腺癌、皮膚癌、非ホジキンリンパ腫、食道癌、子宮頚癌、基底細胞癌、腺癌、肝細胞癌、直腸結腸腺癌、肝癌、男性乳癌、食道の腺癌、胃の腺癌、結腸の腺癌、直腸の腺癌、胆嚢癌、過誤腫、神経膠腫、子宮体癌、急性白血病、慢性白血病、小児急性白血病、ユーイング肉腫、粘液性脂肪肉腫、脳癌、または上皮起源の腫瘍であることを特徴とする請求項８１記載の方法。
【請求項８４】
前記疾患が、関節リウマチまたは網膜血管新生であることを特徴とする請求項８１記載の方法。
【請求項８５】
前記疾患がウイルス感染であることを特徴とする請求項８１記載の方法。
【請求項８６】
前記疾患が、ヒトパピローマウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、Ｆ型肝炎ウイルス、Ｇ型肝炎ウイルス、Ｈ型肝炎ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、単純ヘルペスウイルス、ヘルペスサイトメガロウイルス、ヘルペスエプスタインバーウイルス、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、ＪＣウイルス、ミクソウイルス、ライノウイルス、コロナウイルス、西ナイルウイルス、セントルイス脳炎、ダニ媒介脳炎ウイルス遺伝子、マレー渓谷脳炎ウイルス遺伝子、デングウイルス遺伝子、サルウイルス４０、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、モロニーマウス白血病ウイルス、脳心筋炎ウイルス、麻疹ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、アデノウイルス、黄熱ウイルス、ポリオウイルスまたはポックスウイルスによって媒介される疾患であることを特徴とする請求項８１記載の方法。
【請求項８７】
前記疾患が、細菌感染、アメーバ感染、寄生虫感染または真菌感染であることを特徴とする請求項８１記載の方法。
【請求項８８】
前記疾患が、マラリア原虫（ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）、マイコバクテリウム・アルセランス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｕｌｃｅｒａｎｓ）、ヒト結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、ハンセン菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、クラミジア肺炎病原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）又は肺炎マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）によって媒介される疾患であることを特徴とする請求項８１記載の方法。
【請求項８９】
前記疾患が、望ましくない免疫応答、喘息、狼瘡、多発性硬化症または糖尿病であることを特徴とする請求項８１記載の方法。
【請求項９０】
前記疾患が、虚血、再灌流傷害、移植臓器または組織に対する反応、再狭窄、あるいは炎症性腸疾患であることを特徴とする請求項８１記載の方法。
【請求項９１】
前記疾患が、急性疼痛または慢性疼痛であることを特徴とする請求項８１記載の方法。
【請求項９２】
前記疾患が神経疾患であることを特徴とする請求項８１記載の方法。
【請求項９３】
前記疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病、または神経変性トリヌクレオチド反復疾患であることを特徴とする請求項８１記載の方法。
【請求項９４】
前記疾患が、ヘテロ接合性の消失によって特徴づけられる疾患であることを特徴とする請求項８１記載の方法。
【請求項９５】
前記オリゴヌクレオチドが、請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチドであることを特徴とする請求項８１記載の方法。
【請求項９６】
遺伝子サイレンシング法であって、請求項１または３９記載のオリゴヌクレオチドの治療的有効量を哺乳類細胞に投与して、望ましくない細胞増殖を促進する遺伝子、増殖因子遺伝子、増殖因子受容体遺伝子、キナーゼ遺伝子、Ｇタンパク質スーパーファミリー分子をコードする遺伝子、転写因子をコードする遺伝子、血管新生を媒介する遺伝子、ウイルス機能を媒介する細胞遺伝子のウイルス遺伝子、細菌病原体の遺伝子、アメーバ病原体の遺伝子、寄生虫病原体の遺伝子、真菌病原体の遺伝子、望ましくない免疫応答を媒介する遺伝子、疼痛の処理を媒介する遺伝子、神経疾患を媒介する遺伝子、ヘテロ接合性の消失によって特徴づけられる細胞にみられる対立遺伝子、または多型遺伝子の一つの対立遺伝子、の遺伝子発現を抑制することを特徴とする方法。
【請求項９７】
前記オリゴヌクレオチドが、請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチドであることを特徴とする請求項９６記載の方法。
【請求項９８】
遺伝子サイレンシング法であって、請求項１または３９に記載のオリゴヌクレオチドの治療的有効量を哺乳類細胞に投与して、ＰＤＧＦベータ遺伝子、Ｅｒｂ−Ｂ遺伝子、Ｓｒｃ遺伝子、ＣＲＫ遺伝子、ＧＲＢ２遺伝子、ＲＡＳ遺伝子、ＭＥＫＫ遺伝子、ＪＴＳＩＫ遺伝子、ＲＡＦ遺伝子、Ｅｒｋ１／２遺伝子、ＰＣＮＡ（ｐ２１）遺伝子、ＭＹＢ遺伝子、ＪＵＮ遺伝子、ＦＯＳ遺伝子、ＢＣＬ−２遺伝子、サイクリンＤ遺伝子、ＶＥＧＦ遺伝子、ＥＧＦＲ遺伝子、サイクリンＡ遺伝子、サイクリンＥ遺伝子、ＷＮＴ−Ｉ遺伝子、ベータ−カテニン遺伝子、ｃ−ＭＥＴ遺伝子、ＰＫＣ遺伝子、ＮＦＫＢ遺伝子、ＳＴＡＴ３遺伝子、サバイビン遺伝子、Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ遺伝子、トポイソメラーゼＩ遺伝子、トポイソメラーゼIIアルファ遺伝子、ｐ７３遺伝子における変異、ｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）遺伝子における変異、ｐ２７（ＫＩＰ１）遺伝子における変異、ＰＰＭ１Ｄ遺伝子における変異、ＲＡＳ遺伝子における変異、カベオリンＩ遺伝子における変異、ＭＩＢ Ｉ遺伝子における変異、ＭＴＡＩ遺伝子における変異、Ｍ６８遺伝子における変異、腫瘍抑制遺伝子における変異、ｐ５３腫瘍抑制遺伝子における変異、ｐ５３ファミリーメンバーＤＮ−ｐ６３における変異、ｐＲｂ腫瘍抑制遺伝子における変異、ＡＰＣ１腫瘍抑制遺伝子における変異、ＢＲＣＡ１腫瘍抑制遺伝子における変異、ＰＴＥＮ腫瘍抑制遺伝子における変異、ｍＬＬ融合遺伝子、ＢＣＲ／ＡＢＬ融合遺伝子、ＴＥＬ／ＡＭＬ１融合遺伝子、ＥＷＳ／ＦＬＩ１融合遺伝子、ＴＬＳ／ＦＵＳ１融合遺伝子、ＰＡＸ３／ＦＫＨＲ融合遺伝子、ＡＭＬ１／ＥＴＯ融合遺伝子、アルファｖ−インテグリン遺伝子、Ｆｌｔ−Ｉ受容体遺伝子、チューブリン遺伝子、ヒトパピローマウイルス遺伝子、ヒトパピローマウイルス複製に必要な遺伝子、ヒト免疫不全ウイルス遺伝子、ヒト免疫不全ウイルス複製に必要な遺伝子、Ａ型肝炎ウイルス遺伝子、Ａ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｂ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｂ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｃ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｃ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｄ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｄ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｅ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｅ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｆ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｆ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｇ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｇ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｈ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｈ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、呼吸器合胞体ウイルス遺伝子、呼吸器合胞体ウイルス複製に必要な遺伝子、単純ヘルペスウイルス遺伝子、単純ヘルペスウイルス複製に必要な遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルス遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルス複製に必要な遺伝子、ヘルペスエプスタインバーウイルス遺伝子、ヘルペスエプスタインバーウイルス複製に必要な遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス複製に必要な遺伝子、ＪＣウイルス遺伝子、ＪＣウイルス複製に必要なヒト遺伝子、ミクソウイルス遺伝子、ミクソウイルス遺伝子複製に必要な遺伝子、ライノウイルス遺伝子、ライノウイルス複製に必要な遺伝子、コロナウイルス遺伝子、コロナウイルス複製に必要な遺伝子、西ナイルウイルス遺伝子、西ナイルウイルス複製に必要な遺伝子、セントルイス脳炎遺伝子、セントルイス脳炎複製に必要な遺伝子、ダニ媒介脳炎ウイルス遺伝子、ダニ媒介脳炎ウイルス複製に必要な遺伝子、マレー渓谷脳炎ウイルス遺伝子、マレー渓谷脳炎ウイルス複製に必要な遺伝子、デングウイルス遺伝子、デングウイルス遺伝子複製に必要な遺伝子、サルウイルス４０遺伝子、サルウイルス４０複製に必要な遺伝子、ヒトＴ細胞白血病ウイルス遺伝子、ヒトＴ細胞白血病ウイルス複製に必要な遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルス遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルス複製に必要な遺伝子、脳心筋炎ウイルス遺伝子、脳心筋炎ウイルス複製に必要な遺伝子、麻疹ウイルス遺伝子、麻疹ウイルス複製に必要な遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルス遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルス複製に必要な遺伝子、アデノウイルス遺伝子、アデノウイルス複製に必要な遺伝子、黄熱ウイルス遺伝子、黄熱ウイルス複製に必要な遺伝子、ポリオウイルス遺伝子、ポリオウイルス複製に必要な遺伝子、ポックスウイルス遺伝子、ポックスウイルス複製に必要な遺伝子、マラリア原虫遺伝子、マラリア原虫遺伝子複製に必要な遺伝子、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ遺伝子、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ複製に必要な遺伝子、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ遺伝子、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ複製に必要な遺伝子、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ遺伝子、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ複製に必要な遺伝子、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ遺伝子、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ複製に必要な遺伝子、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ遺伝子、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ複製に必要な遺伝子、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ遺伝子、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ複製に必要な遺伝子、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ遺伝子、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ複製に必要な遺伝子、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ遺伝子、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、インテグリン遺伝子、セレクチン遺伝子、補体系遺伝子、ケモカイン遺伝子、ケモカイン受容体遺伝子、ＧＣＳＦ遺伝子、Ｇｒｏ１遺伝子、Ｇｒｏ２遺伝子、Ｇｒｏ３遺伝子、ＰＦ４遺伝子、ＭＩＧ遺伝子、胞体突起塩基性タンパク質遺伝子、ＭＩＰ−１Ｉ遺伝子、ＭＩＰ−１Ｊ遺伝子、ＲＡＮＴＥＳ遺伝子、ＭＣＰ−１遺伝子、ＭＣＰ−２遺伝子、ＭＣＰ−３遺伝子、ＣＭＢＫＲ１遺伝子、ＣＭＢＫＲ２遺伝子、ＣＭＢＫＲ３遺伝子、ＣＭＢＫＲ５ｖ、ＡＩＦ−１遺伝子、Ｉ−３０９遺伝子、イオンチャンネルの成分に対する遺伝子、神経伝達物質受容体に対する遺伝子、神経伝達物質リガンドに対する遺伝子、アミロイドファミリー遺伝子、プレセニリン遺伝子、ＨＤ遺伝子、ＤＲＰＬＡ遺伝子、ＳＣＡｌ遺伝子、ＳＣＡ２遺伝子、ＭＪＤ１遺伝子、ＣＡＣＮＬ１Ａ４遺伝子、ＳＣＡ７遺伝子、ＳＣＡ８遺伝子、ＬＯＨ細胞にみられる対立遺伝子、または多型遺伝子の一つの対立遺伝子の、遺伝子発現を抑制することを特徴とする方法。
【請求項９９】
前記オリゴヌクレオチドが、請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチドであることを特徴とする請求項９８記載の方法。
【請求項１００】
遺伝子サイレンシング法であって、請求項１または３９記載のオリゴヌクレオチドの治療的有効量を哺乳類に投与して、望ましくない細胞増殖を促進する遺伝子、増殖因子または増殖因子受容体遺伝子、キナーゼ遺伝子、Ｇタンパク質スーパーファミリー分子をコードする遺伝子、転写因子をコードする遺伝子、血管新生を媒介する遺伝子、ウイルス機能を媒介する細胞遺伝子のウイルス遺伝子、細菌病原体の遺伝子、アメーバ病原体の遺伝子、寄生虫病原体の遺伝子、真菌病原体の遺伝子、望ましくない免疫応答を媒介する遺伝子、疼痛の処理を媒介する遺伝子、神経疾患を媒介する遺伝子、ヘテロ接合性の消失によって特徴づけられる細胞にみられる対立遺伝子、または多型遺伝子の一つの対立遺伝子の、遺伝子発現を抑制することを特徴とする方法。
【請求項１０１】
前記オリゴヌクレオチドが、請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチドであることを特徴とする請求項１００記載の方法。
【請求項１０２】
遺伝子サイレンシング法であって、請求項１または３９記載のオリゴヌクレオチドの治療的有効量を哺乳類に投与して、ＰＤＧＦベータ遺伝子、Ｅｒｂ−Ｂ遺伝子、Ｓｒｃ遺伝子、ＣＲＫ遺伝子、ＧＲＢ２遺伝子、ＲＡＳ遺伝子、ＭＥＫＫ遺伝子、ＪＫＫ遺伝子、ＲＡＦ遺伝子、Ｅｒｋ１／２遺伝子、ＰＣＮＡ（ｐ２１）遺伝子、ＭＹＢ遺伝子、ＪＵＮ遺伝子、ＦＯＳ遺伝子、ＢＣＬ−２遺伝子、サイクリンＤ遺伝子、ＶＥＧＦ遺伝子、ＥＧＦＲ遺伝子、サイクリンＡ遺伝子、サイクリンＥ遺伝子、ＷＮＴ−Ｉ遺伝子、ベータ−カテニン遺伝子、ｃ−ＭＥＴ遺伝子、ＰＫＣ遺伝子、ＮＦＫＢ遺伝子、ＳＴＡＴ３遺伝子、サバイビン遺伝子、Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ遺伝子、トポイソメラーゼＩ遺伝子、トポイソメラーゼIIアルファ遺伝子、ｐ７３遺伝子における変異、ｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）遺伝子における変異、ｐ２７（ＫＩＰ１）遺伝子における変異、ＰＰＭ１Ｄ遺伝子における変異、ＲＡＳ遺伝子における変異、カベオリンＩ遺伝子における変異、ＭＩＢ Ｉ遺伝子における変異、ＭＴＡＩ遺伝子における変異、Ｍ６８遺伝子における変異、腫瘍抑制遺伝子における変異、ｐ５３腫瘍抑制遺伝子における変異、ｐ５３ファミリーメンバーＤＮ−ｐ６３における変異、ｐＲｂ腫瘍抑制遺伝子における変異、ＡＰＣ１腫瘍抑制遺伝子における変異、ＢＲＣＡ１腫瘍抑制遺伝子における変異、ＰＴＥＮ腫瘍抑制遺伝子における変異、ｍＬＬ融合遺伝子、ＢＣＲ／ＡＢＬ融合遺伝子、ＴＥＬ／ＡＭＬ１融合遺伝子、ＥＷＳ／ＦＬＩ１融合遺伝子、ＴＬＳ／ＦＵＳ１融合遺伝子、ＰＡＸ３／ＦＫＨＲ融合遺伝子、ＡＭＬ１／ＥＴＯ融合遺伝子、アルファｖ−インテグリン遺伝子、Ｆｌｔ−Ｉ受容体遺伝子、チューブリン遺伝子、ヒトパピローマウイルス遺伝子、ヒトパピローマウイルス複製に必要な遺伝子、ヒト免疫不全ウイルス遺伝子、ヒト免疫不全ウイルス複製に必要な遺伝子、Ａ型肝炎ウイルス遺伝子、Ａ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｂ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｂ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｃ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｃ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｄ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｄ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｅ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｅ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｆ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｆ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｇ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｇ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｈ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｈ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、呼吸器合胞体ウイルス遺伝子、呼吸器合胞体ウイルス複製に必要な遺伝子、単純ヘルペスウイルス遺伝子、単純ヘルペスウイルス複製に必要な遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルス遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルス複製に必要な遺伝子、ヘルペスエプスタインバーウイルス遺伝子、ヘルペスエプスタインバーウイルス複製に必要な遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス複製に必要な遺伝子、ＪＣウイルス遺伝子、ＪＣウイルス複製に必要なヒト遺伝子、ミクソウイルス遺伝子、ミクソウイルス遺伝子複製に必要な遺伝子、ライノウイルス遺伝子、ライノウイルス複製に必要な遺伝子、コロナウイルス遺伝子、コロナウイルス複製に必要な遺伝子、西ナイルウイルス遺伝子、西ナイルウイルス複製に必要な遺伝子、セントルイス脳炎遺伝子、セントルイス脳炎複製に必要な遺伝子、ダニ媒介脳炎ウイルス遺伝子、ダニ媒介脳炎ウイルス複製に必要な遺伝子、マレー渓谷脳炎ウイルス遺伝子、マレー渓谷脳炎ウイルス複製に必要な遺伝子、デングウイルス遺伝子、デングウイルス遺伝子複製に必要な遺伝子、サルウイルス４０遺伝子、サルウイルス４０複製に必要な遺伝子、ヒトＴ細胞白血病ウイルス遺伝子、ヒトＴ細胞白血病ウイルス複製に必要な遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルス遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルス複製に必要な遺伝子、脳心筋炎ウイルス遺伝子、脳心筋炎ウイルス複製に必要な遺伝子、麻疹ウイルス遺伝子、麻疹ウイルス複製に必要な遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルス遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルス複製に必要な遺伝子、アデノウイルス遺伝子、アデノウイルス複製に必要な遺伝子、黄熱ウイルス遺伝子、黄熱ウイルス複製に必要な遺伝子、ポリオウイルス遺伝子、ポリオウイルス複製に必要な遺伝子、ポックスウイルス遺伝子、ポックスウイルス複製に必要な遺伝子、マラリア原虫遺伝子、マラリア原虫遺伝子複製に必要な遺伝子、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ遺伝子、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ複製に必要な遺伝子、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ遺伝子、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ複製に必要な遺伝子、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ遺伝子、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ複製に必要な遺伝子、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ遺伝子、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ複製に必要な遺伝子、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ遺伝子、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ複製に必要な遺伝子、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ遺伝子、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ複製に必要な遺伝子、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ遺伝子、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ複製に必要な遺伝子、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ遺伝子、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ複製に必要な遺伝子、インテグリン遺伝子、セレクチン遺伝子、補体系遺伝子、ケモカイン遺伝子、ケモカイン受容体遺伝子、ＧＣＳＦ遺伝子、Ｇｒｏ１遺伝子、Ｇｒｏ２遺伝子、Ｇｒｏ３遺伝子、ＰＦ４遺伝子、ＭＩＧ遺伝子、胞体突起塩基性タンパク質遺伝子、ＭＩＰ−１Ｉ遺伝子、ＭＩＰ−１Ｊ遺伝子、ＲＡＮＴＥＳ遺伝子、ＭＣＰ−１遺伝子、ＭＣＰ−２遺伝子、ＭＣＰ−３遺伝子、ＣＭＢＫＲ１遺伝子、ＣＭＢＫＲ２遺伝子、ＣＭＢＫＲ３遺伝子、ＣＭＢＫＲ５ｖ、ＡＩＦ−１遺伝子、Ｉ−３０９遺伝子、イオンチャンネルの成分に対する遺伝子、神経伝達物質受容体に対する遺伝子、神経伝達物質リガンドに対する遺伝子、アミロイドファミリー遺伝子、プレセニリン遺伝子、ＨＤ遺伝子、ＤＲＰＬＡ遺伝子、ＳＣＡｌ遺伝子、ＳＣＡ２遺伝子、ＭＪＤ１遺伝子、ＣＡＣＮＬ１Ａ４遺伝子、ＳＣＡ７遺伝子、ＳＣＡ８遺伝子、ＬＯＨ細胞にみられる対立遺伝子、または多型遺伝子の一つの対立遺伝子の、遺伝子発現を抑制することを特徴とする��法。
【請求項１０３】
前記哺乳類が、霊長類、ウマ、イヌまたはネコであることを特徴とする請求項１０２記載の方法。
【請求項１０４】
前記哺乳類がヒトであることを特徴とする請求項１０２記載の方法。
【請求項１０５】
前記オリゴヌクレオチドが、請求項３９記載の二本鎖オリゴヌクレオチドであることを特徴とする請求項１０２記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本明細書は、共に参照により本開示に含まれる、２００４年４月３０日出願の米国仮特許出願第６０／５６６，７１０号；および２００４年１０月２０日出願の米国仮特許出願第６０／６２０，２７６号に基づく優先権の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
オリゴヌクレオチド化合物は医療において重要な治療上の用途を有する。オリゴヌクレオチドは、特定の疾患の原因である遺伝子の発現を抑制できる。遺伝子サイレンシングは、翻訳を阻害することによってタンパク質の生成を妨げる。重要なことに、遺伝子サイレンシング剤は、疾患に関連するタンパク質の機能を阻害する従来の低分子有機化合物の、有望な代替物である。ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、およびマイクロＲＮＡは、遺伝子サイレンシングによってタンパク質の生成を妨げるオリゴヌクレオチドである。
【０００３】
ｓｉＲＮＡ
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は線虫Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ（非特許文献１；非特許文献２）の研究において最初に発見された、進化上保存された遺伝子サイレンシング機構である。その機構は適当な分子機械を発現している細胞へｄｓＲＮＡを導入することによって誘発され、分子機械は次いで対応する内因性ｍＲＮＡを分解する。その機構は、リボヌクレアーゼを相同ｍＲＮＡ標的へ導く短いＲＮＡへのｄｓＲＮＡの変換を含む（要約、非特許文献３）。この過程は、ウイルスに対する正常な防御、およびトランスポゾンの流動化に関係する。
【０００４】
二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）は天然に稀であり、および酵母またはウイルスといった一部の微生物においてのみ見出されている。近年の報告は、ｄｓＲＮＡが発現の調節の現象に、および細胞によるインターフェロンの合成の開始に関与していることを示す（非特許文献４；非特許文献５）。加えて、ｄｓＲＮＡは抗増殖特性を有すると報告されており、これは治療用途の想定も可能にする（非特許文献６）。たとえば、合成ｄｓＲＮＡはマウスにおいて腫瘍増殖を阻害すること（非特許文献７）、白血病マウスの治療において活性であること（非特許文献８）；およびマウス皮膚において化学的に誘導された腫瘍形成を阻害すること（非特許文献９）が示されている。
【０００５】
ｄｓＲＮＡを用いた処理は、無脊椎生物において遺伝子機能を分析するための重要な方法になっている。たとえば、Ｄｚｉｔｏｖｅｖａらは、麻酔したＤｒｏｓｏｐｈｉｌａの腹部へｄｓＤＮＡを注射することによってＲＮＡｉを誘導できること、およびこの方法はまた標的中枢神経系で発現されている遺伝子を標的にできることを示した（非特許文献１０）。導入遺伝子および内因性遺伝子の両方を、それぞれのｄｓＤＮＡの腹部内注射によってＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ成虫において発現抑制に成功した。さらに、Ｅｌｂａｓｈｉｒらは、ｄｓＲＮＡプロセシングの方向が、センスまたはアンチセンス標的ＲＮＡが低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）−タンパク質複合体によって切断されうるかどうかを決定するという証拠を与えた（非特許文献１１）。
【０００６】
二つの近年の報告が、ＲＮＡｉは線虫Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓにおける遺伝子の機能を試験するための迅速な方法を提供することを明らかにし；およびＣ．ｅｌｅｇａｎｓ 第Ｉおよび第III染色体上の遺伝子の大部分が現在ＲＮＡｉ表現型について試験されている（非特許文献１２；非特許文献１３；非特許文献１４）。機能消失情報を得るための迅速な手法として用いられる場合、ＲＮＡｉは卵巣転写産物のランダムな組を分析するのに用いられ、およびＣ．ｅｌｅｇａｎｓ胚形成において必須の役割を有する８１個の遺伝子を同定している（非特許文献１５）。ＲＮＡｉはまた、Ｓａｒｃｏｐｈａｇａ蛹の血球タンパク質を破壊するのに用いられている（非特許文献１６）。
【０００７】
無脊椎動物におけるＲＮＡｉのように、植物における転写後遺伝子サイレンシング（ＰＴＧＳ）はＲＮＡ分解機構である。植物では、これは転写および転写後レベルの両方で起こりうる；しかし、無脊椎動物では転写後ＲＮＡｉだけが現在までに報告されている（非特許文献１７）。実際、共に局所の開始部位から生物内で広がる二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）が関与し、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）の蓄積に相関し、および、推定されるＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ、ＲＮＡヘリカーゼおよびＰＡＺおよびＰｉｗｉドメインを含む機能未知のタンパク質を必要とする。
【０００８】
ＲＮＡｉとＰＴＧＳとの間で明らかであるいくつかの違いが非特許文献１８によって報告された。最初に、植物でのＰＴＧＳは、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓには存在せずおよびしたがってＲＮＡｉには必要でない少なくとも二つの遺伝子−ＳＧＳ３（コイルがコイルしたドメインを含む機能未知のタンパク質をコードする）およびＭＥＴ１（ＤＮＡ−メチルトランスフェラーゼをコードする）−を必要とする。次に、ＰＴＧＳ異常を示すＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ変異体のすべてが、ククモウイルスＣＭＶによる感染に著しく高感受性であり、ＰＴＧＳはウイルスに対する植物の耐性のための機構に関与することを示す。ＲＮＡｉ媒介発癌遺伝子サイレンシングはまた、植物えい瘤腫瘍形成に対する耐性を与えることが報告されている（非特許文献１９）。
【０００９】
ＲＮＡｉは、サイレンシングトリガーと相同であるメッセンジャーＲＮＡを破壊する配列特異的多成分ヌクレアーゼであるＲＮＡ誘導性サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）によって媒介される。ＲＩＳＣは二本鎖ＲＮＡトリガーに由来する低分子ＲＮＡ（約２２ヌクレオチド）を含むことが知られているが、しかしこの活性のタンパク質成分は不明のままである。Ｈａｍｍｏｎｄら（非特許文献２０）は、ＲＮＡｉエフェクターヌクレアーゼの培養Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ細胞からの生化学的精製を報告し，および活性画分のリボ核タンパク質複合体のタンパク質ミクロシークエンシングは、この複合体の一つの成分が、Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ、および Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓにおける遺伝子サイレンシングに必須である、タンパク質のＡｒｇｏｎａｕｔｅファミリーのメンバーであることを示した。この観察は、多様な生物からのＲＮＡｉの遺伝子分析と、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｉｎ ｖｉｔｒｏ系から生じるＲＮＡｉの生化学モデルとの間の繋がりを示唆する。
【００１０】
Ｓｖｏｂｏｄａらは非特許文献２１において、ＲＮＡｉはマウス卵母細胞において不活性な母性ｍＲＮＡの機能を試験するのに適当なおよび頑健な手法を提供することを報告した。Ｍｏｓ（最初の名称はｃ−ｍｏｓ）および組織プラスミノーゲン活性化因子ｍＲＮＡは不活性な母性ｍＲＮＡであって卵母細胞成熟中に動員され、およびＭｏｓ ｍＲＮＡの翻訳の結果としてＭＡＰキナーゼの活性化が生じる。マウス卵母細胞においてＭｏｓまたはＴＰＡ ｍＲＮＡへ向けられたｄｓＲＮＡは、時間および濃度の両方に依存的に標的ｍＲＮＡを特異的に減少させ、およびＭＡＰ キナーゼ 活性の出現を阻害した。非特許文献２２も参照。
【００１１】
干渉ＲＮＡ技術における進歩にかかわらず、薬理特性が改善されたｓｉＲＮＡ複合体が必要とされている。特に、オリゴヌクレオチド配列は血清溶解度が不良であり、細胞分布および取り込みが不良であり、および腎臓から速やかに排泄される。天然のホスホジエステル（Ｐ＝Ｏ）骨格を有するオリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼ媒介分解に感受性であることが知られている。非特許文献２３を参照。オリゴヌクレオチドの安定性は、Ｐ＝Ｏ結合をｉｎ ｖｉｖｏでヌクレアーゼによる分解により感受性が低いＰ＝Ｓ結合へ変換することによって高められている。代替的に、リン酸基を、天然のリン酸よりも酵素分解を受けにくいホスホロアミデートへ変換できる。非特許文献２４を参照。オリゴヌクレオチドの糖基への修飾は、酵素分解に対する安定性を与えることができる。たとえば、リボ核酸を含むオリゴヌクレオチドは、糖の２’−ＯＨ基がメトキシエトキシ基へ変換されている場合、核酸分解をより受けにくい。非特許文献２５およびそれに引用された文献を参照。
【００１２】
ｓｉＲＮＡ化合物は様々な診断および治療目的に有望な物質である。ｓｉＲＮＡ化合物は、遺伝子の機能を同定するために用いることができる。加えて、ｓｉＲＮＡ化合物は、疾患の原因となる遺伝子を発現抑制することによって作用する新しい型の薬剤として非常に大きな潜在性を提供する。中枢神経系疾患、炎症性疾患、代謝障害、癌、感染症、および眼疾患を含む多数の疾患の治療のための干渉ＲＮＡ治療剤を開発するために現在研究が行われている。
【００１３】
一本鎖オリゴヌクレオチドの細胞取り込みを増加させることに関して、複合体を介した膜透過性およびオリゴヌクレオチドの細胞デリバリーを高めることを含め、いくらかの進歩が成されている。特許文献３でＭ．Ｍａｎｏｈａｒａｎは、血清、血管、または細胞のタンパク質を結合するリガンドがオリゴヌクレオチド上の一つ以上の部位への選択的結合部分を介して結合しうる組成物を記載する。これらの部位は、２’位、３’位、５’位、ヌクレオチド間結合、および任意のヌクレオチド残基の核酸塩基原子のうち一つ以上を含むがそれらに限定されない。
【００１４】
アンチセンスＲＮＡ
アンチセンス法は、ｍＲＮＡまたはＤＮＡへの、これらの細胞内核酸のたとえばタンパク質合成のような正常な必須機能が破壊されるような、相対的に低分子のオリゴヌクレオチドの相補的ハイブリダイゼーションである。ハイブリダイゼーションは、ＲＮＡまたは一本鎖ＤＮＡへのオリゴヌクレオチドの、ワトソン・クリック塩基対を介した配列特異的水素結合である。そのような塩基対は互いに相補的であると言われる。Ｃｏｈｅｎ（非特許文献２６）によって考察された、核酸機能の破壊を与える天然に生じる現象は、二種類のものであると考えられている。一つ目の、ハイブリダイゼーション停止は、オリゴヌクレオチド阻害剤が標的核酸に結合しおよびしたがって、単純な立体障害によって、必須のタンパク質（ほとんどの場合リボソーム）の核酸への結合を妨げる終止現象を表す。メチルホスホネートオリゴヌクレオチド（非特許文献２７）、およびα−アノマーオリゴヌクレオチドは、最も良く研究された二種類のアンチセンス剤であり、ハイブリダイゼーション停止によって核酸機能を破壊すると考えられている。アンチセンスオリゴヌクレオチドが核酸機能を破壊するもう一つの方法は、標的ｍＲＮＡへのハイブリダイゼーション後の、細胞内ＲＮアーゼＨによる標的ＲＮＡの酵素的切断による。２’−デオキシリボフラノシルオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドアナログは標的ＲＮＡとハイブリダイズし、およびこの二本鎖はＲＮＡ鎖を切断するためのＲＮアーゼＨ酵素を活性化して、従ってＲＮＡの正常な機能を破壊する。ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、この型のアンチセンス終止現象によって作動するアンチセンス剤の最も著名な例である。
【００１５】
診断、研究用途および潜在的な治療目的のためのアンチセンス剤としてのオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチドアナログの用途に、相当な研究が向けられている。ｉｎ ｖｉｖｏで一部しか克服されていない主要な問題の一つは、オリゴヌクレオチドの迅速な分解および排出によって重度に妨げられている、効率的な細胞取り込みである。細胞取り込みの一般的に受け入れられた過程は、温度ならびに血清および血管外液中のオリゴヌクレオチドの濃度に依存する、受容体媒介エンドサイトーシスによる。
【００１６】
核酸およびオリゴヌクレオチドの膜貫通デリバリーの改善を狙った努力は、タンパク質キャリヤー、抗体キャリヤー、リポソームデリバリー系、エレクトロポレーション、直接注入、細胞融合、ウイルスベクター、およびリン酸カルシウム媒介形質転換を利用してきた。しかし、これらの方法の多くは、膜貫通輸送が可能である細胞の種類によって、およびそのような輸送を達成するのに必要な条件によって、制限される。オリゴヌクレオチドの膜貫通デリバリーのために特に魅力的な一つの選択肢は、オリゴヌクレオチドの生理化学的特性の修飾である。
【００１７】
マイクロＲＮＡ
マイクロＲＮＡは、生物において天然に産生される低分子ＲＮＡの大きな群であり、少なくともその一部は、標的遺伝子の発現を調節する。マイクロＲＮＡはダイサーによって約７０ヌクレオチドの一本鎖ヘアピン前駆体転写物から形成される。多くの場合、マイクロＲＮＡは、以前は知られた機能を持たなかった、ＤＮＡ配列の一部から転写される。マイクロＲＮＡはタンパク質へ翻訳されず、それどころか特定のメッセンジャーＲＮＡと結合して翻訳を遮断する。マイクロＲＮＡは標的と不正確に塩基対形成して翻訳を阻害すると考えられている。マイクロＲＮＡファミリーの最初に発見されたメンバーはｌｅｔ−７およびｌｉｎ−４である。ｌｅｔ−７遺伝子は、虫発生中に内因性タンパク質をコードする遺伝子の発現を調節する、低分子の高度に保存されたＲＮＡ種をコードする。活性ＲＮＡ種は最初７０ｎｔまでの前駆体として転写され、それが転写後プロセシングされて成熟２１ｎｔ形になる。ｌｅｔ−７およびｌｉｎ−４の両方がヘアピンＲＮＡ前駆体として転写され、ダイサー酵素によって成熟形へプロセシングされる（Ｌａｇｏｓ−Ｑｕｉｎｔａｎａ ｅｔ ａｌ，２００１）。
【００１８】
改良された薬理特性を有するオリゴヌクレオチド複合体が必要とされている。特に、天然オリゴヌクレオチド配列はｉｎ ｖｉｖｏでは速やかに分解および排出されることが知られている。本発明のリガンド複合化オリゴヌクレオチド化合物は天然オリゴヌクレオチドよりも顕著に安定であり、血清中のオリゴヌクレオチドの濃度増大を可能にする。 
【特許文献１】米国特許第６，６５６，７３０号明細書
【非特許文献１】Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ，Ｃｅｌｌ ７５：８４３ （１９９３）
【非特許文献２】Ｒｅｉｎｈａｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ４０３：９０１ （２０００）
【非特許文献３】Ｒｕｖｋｕｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９４：７９７ （２００１）
【非特許文献４】Ｄｅｃｌｅｒｑ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．７８：２９１ （１９８１）
【非特許文献５】Ｗｕ− Ｌｉ，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：５４７０ （１９９０）
【非特許文献６】Ａｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，ＵＳＡ ８８：９０６ （１９９１）
【非特許文献７】Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，６２：３５７−３６１ （１９６９）
【非特許文献８】Ｚｅｌｅｚｎｉｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．１３０：１２６−１２８ （１９６９）
【非特許文献９】Ｇｅｌｂｏｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ１６７：２０５−２０７（１９７０）
【非特許文献１０】Ｄｚｉｔｏｖｅｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ６（６）：６６５−６７０ （２００１）
【非特許文献１１】Ｅｌｂａｓｈｉｒ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．１５（２）： １８８−２００ （２００１）
【非特許文献１２】Ｂａｒｓｔｅａｄ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．５（ｌ）：６３−６６ （２００１）
【非特許文献１３】Ｔａｖｅｍａｒａｋｉｓ，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．２４（２）：１８０−１８３ （２０００）
【非特許文献１４】Ｚａｍｏｒｅ，Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．８（９）：７４６−７５０ （２００１）
【非特許文献１５】Ｐｉａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．１０（２４）：１６１９−１６２２ （２０００）
【非特許文献１６】Ｎｉｓｈｉｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２６８（２０）：５２９５−５２９９ （２００１）
【非特許文献１７】Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ４０９（６８１８）：２９５−２９６ （２００１）
【非特許文献１８】Ｖａｕｃｈｅｒｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ．１１４（Ｐｔ １７）：３０８３−３０９１ （２００１）
【非特許文献１９】Ｅｓｃｏｂａｒ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９８（２３）：１３４３７−１３４４２ （２００１）
【非特許文献２０】Ｈａｍｍｏｎｄ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９３（５５３２）： １１４６−１１５０ （Ａｕｇｕｓｔ ２００１）
【非特許文献２１】Ｓｖｏｂｏｄａ ｅｔ ａｌ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ １２７（１９）：４１４７−４１５６ （２０００）
【非特許文献２２】Ｓｖｏｂｏｄａ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２８７（５）： １０９９− １１０４ （２００１）
【非特許文献２３】Ｌ．Ｌ．Ｃｕｍｍｉｎｓ ｅｔ ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９５，２３，２０１９
【非特許文献２４】Ｕｈｌｍａｎｎ，Ｅ．； Ｐｅｙｍａｎ，Ａ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９０，９０，５４４
【非特許文献２５】Ｍ．Ｍａｎｏｈａｒａｎ ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ．２００２，３，１２５７
【非特許文献２６】Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ： Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，１９８９，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．
【非特許文献２７】Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９８７） Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ，２：１１７−１２８
【非特許文献２８】Ｖ．Ａｍｂｒｏｓ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２００３，１３，８０７
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１９】
本発明の一態様は、少なくとも一つのリガンドを含む二本鎖オリゴヌクレオチドに関する。一部の実施形態では、リガンドは二本鎖オリゴヌクレオチドを構成する二本のオリゴヌクレオチド鎖のうち一方だけに結合している。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドの両方のオリゴヌクレオチドが独立して、結合したリガンドを含む。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド鎖は少なくとも一つの修飾糖部分を含む。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドの鎖の一方または両方の中のリン酸結合が、ホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート結合で置換されている。好ましい一実施形態では、リガンドはコレステロールまたは５β−コラン酸である。
【００２０】
本発明の別の一態様は、少なくとも一つのリガンドを含む一本鎖オリゴヌクレオチドに関する。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは少なくとも一つの修飾糖部分を含む。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドのリン酸結合は、ホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート結合で置換されている。好ましい一実施形態では、リガンドはコレステロールまたは５β−コラン酸である。リガンドは、オリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改善する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
本発明は、改良された薬物動態学的特性を有するリガンド複合化オリゴヌクレオチド化合物およびその調製のための方法を提供する。本発明のオリゴヌクレオチドは、一本鎖および二本鎖オリゴヌクレオチドを含む。複合化したオリゴヌクレオチド剤は、核酸、たとえば、プレｍＲＮＡ、ｍＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ｍｉ−ＲＮＡ前駆体（プレｍｉＲＮＡ）、またはＤＮＡ、またはタンパク質を標的としおよび結合することによって、阻害またはアップレギュレートして、遺伝子発現を修飾できる。本発明のオリゴヌクレオチド剤は、修飾ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、おとりＲＮＡ、ＤＮＡ、およびアプタマーを含む。そのような化合物は、リガンドをオリゴヌクレオチドへ共有結合することによって調製される。リガンドは、一つ以上の血清、血管または細胞タンパク質と可逆的に結合するため、オリゴヌクレオチドの薬理特性を改善する。この可逆的結合は、減少尿中排泄を減少させ、血清半減期を増大させ、およびそのように複合化したオリゴマー化合物の分布を大幅に増加させると予想される。
【００２２】
オリゴヌクレオチドの治療効果は、それが細胞核酸と相互作用しおよびその機能を効果的に打ち消す際に実現される。好ましい標的は、疾患状態の原因であるタンパク質をコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡである。ｍＲＮＡ機能とのそのような干渉の全体的効果は、タンパク質の発現の調節であり、ここで「調節」とはタンパク質の発現における増加（刺激）または減少（阻害）のどちらかを意味する。本発明との関連で、阻害は遺伝子発現の調節の好ましい形である。にもかかわらず、究極の目標はそのようなタンパク質の量を調節することである。投与後に標的核酸に到達するためには、オリゴヌクレオチドは、血清中での迅速な分解、血清中での短い半減期、および腎臓による速やかなろ過とその後の尿中排泄といった固有の要因を克服できるべきである。これらの固有の要因を克服するオリゴヌクレオチドは、血清半減期、分布、細胞取り込みが増加しており、およびしたがって改善された効力を有する。
【００２３】
これらの薬物動態学的パラメーターの強化は、血漿タンパク質と結合する選ばれた薬物分子について示されている（Ｏｌｓｏｎ ａｎｄ Ｃｈｒｉｓｔ，Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９６，３１：３２７）。ほとんどのものよりもよく研究されている二種類のタンパク質が、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）およびα−ｌ−酸性糖タンパク質である。ＨＡＳは、典型的には１０４から１０６Ｍ−１の範囲の結合定数を有する様々な内因性および外因性リガンドと結合する。α−ｌ−酸性糖タンパク質とのリガンドについての結合定数は、ＨＡＳについてのものと同様である。
【００２４】
本発明の好ましい一実施形態では、リガンド複合化オリゴヌクレオチドによって標的にされるタンパク質は血清タンパク質である。複合化したオリゴマー化合物によって標的にされる血清タンパク質は免疫グロブリン（抗体）であることが好ましい。好ましい免疫グロブリンは、免疫グロブリンＧおよび免疫グロブリンＭである。免疫グロブリンは、脊椎動物の血清および組織中に現れることが知られている。
【００２５】
本発明の別の一実施形態では、リガンド複合化オリゴヌクレオチドによって標的にされる血清タンパク質はリポタンパク質である。リポタンパク質は、一般的に２０，０００を上回る分子量を持ち脂質を有する血中タンパク質であり、および特異的細胞表面受容体によって見分けられる。血清中のリポタンパク質との結合は、最初に半減期および分布といった薬物動態学的パラメーターを増加させる。次の考慮すべき事項は、リポタンパク質が受容体媒介エンドサイトーシスを介して細胞取り込みを増大させる能力である。
【００２６】
さらに別の一実施形態では、リガンド複合化オリゴヌクレオチド化合物によって標的にされる血清タンパク質はα−２−マクログロブリンである。さらに別の一実施形態では、リガンド複合化したオリゴマー化合物によって標的にされる血清タンパク質はα−１−糖タンパク質である。
【００２７】
少なくとも治療目的では、オリゴヌクレオチド化合物は、分布および細胞取り込みを可能にするために、血清中でのある程度の安定性を有すべきである。血清中のアンチセンス剤の治療レベルの長期維持は、おそらく分布および細胞取り込みに顕著な効果を有し、および特異的細胞受容体を標的とする複合体群とは異なり、血清安定性の増大はおそらくすべての細胞に作用する。
【００２８】
本発明との関連で、ｓｉＲＮＡは二本鎖オリゴヌクレオチドを含み、ただし「オリゴヌクレオチド」の語はリボ核酸またはデオキシリボ核酸のオリゴマーまたはポリマーをいう。この語は、天然に存在する核酸塩基、糖および糖間の共有（骨格）結合から成るオリゴヌクレオチド、および、同様に機能する天然に存在しない部分を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む。そのような修飾または置換されたオリゴヌクレオチドは、たとえば、細胞取り込みの増大、標的への結合の増大、およびヌクレアーゼ存在下での安定性の増大といった望ましい特性のために、しばしば天然形よりも好ましい。本発明のオリゴヌクレオチドは、好ましくは約５ないし約５０ヌクレオシドを含む。そのようなオリゴヌクレオチドは、約８ないし約３０ヌクレオシドを含むことがより好ましく、１５から２５ヌクレオシドが特に好ましい。
【００２９】
オリゴヌクレオチドとは、ヌクレオチドまたはヌクレオシドとして総称的に知られる反復単位のポリマーである。非修飾（天然に存在する）ヌクレオチドは三つの成分を有する：（１）含窒素塩基、その窒素原子のうちの一つが（２）環状５炭糖と結合し、および糖の５位炭素とエステル化された（３）リン酸。オリゴヌクレオチド鎖へ組み込まれる場合、第一のヌクレオチドのリン酸もまた、第二の、隣接するヌクレオチドの糖の３位炭素とエステル化される。非修飾オリゴヌクレオチドの「骨格」は、（２）および（３）、すなわち、第一のヌクレオチドの糖のＣ５（５’）位と第二の隣接するヌクレオチドのＣ３（３’）位との間のホスホジエステル結合によって結合した糖から成る。「ヌクレオシド」とは、（１）核酸塩基および（２）糖の、リン酸部分の非存在下での組み合わせである（Ｋｏｒｎｂｅｒｇ，ＤＮＡ 複製，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，１９８０，ｐａｇｅｓ ４−７）。オリゴヌクレオチドの骨格は、一連の塩基を特定の順序に配置する；この一連の塩基の表記は、従来５’から３’の順に表記されるが、ヌクレオチド配列として知られる。
【００３０】
オリゴヌクレオチドは、特定の核酸と特異的ハイブリダイゼーションを行うのに十分な同一性および数のヌクレオシドまたはヌクレオチド配列を含みうる。遺伝子のセンス鎖の一部と特異的にハイブリダイゼーションするそのようなオリゴヌクレオチドは、一般的に「アンチセンス」と表される。本発明との関連で、「ハイブリダイゼーション」は、相補的ヌクレオシドまたはヌクレオチド間の水素結合を意味し、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ、Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎまたは逆Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎ水素結合でありうる。たとえば、アデニンおよびチミンは、水素結合の形成を介して対合する相補的核酸塩基である。「相補的」とはここでは、二つのヌクレオチド間の正確な対合の能力をいう。たとえば、オリゴヌクレオチドの一定位置のヌクレオチドが、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子の同一位置のヌクレオチドと水素結合できるならば、そのオリゴヌクレオチドおよびそのＤＮＡまたはＲＮＡはその位置で互いに相補的であると考えられる。各分子の対応する位置の十分な数が、互いに水素結合できるヌクレオチドによって占められている場合、オリゴヌクレオチドおよびＤＮＡまたはＲＮＡは互いに相補的である。このように、「特異的にハイブリダイズ可能な」および「相補的」とは、オリゴヌクレオチドとＤＮＡまたはＲＮＡ標的との間に安定なおよび結合が起こるような、十分な程度の相補性または正確な対合を示すのに用いられる語である。オリゴヌクレオチドは、特異的にハイブリダイズ可能となるために標的ＤＮＡ配列と１００％相補的である必要は無いことが本分野で理解されている。標的ＤＮＡまたはＲＮＡ分子とのオリゴヌクレオチドの結合が標的ＤＮＡまたはＲＮＡの正常な機能に干渉して機能の減少または消失を引き起こし、および特異的結合が望まれる条件下、すなわち、ｉｎ ｖｉｖｏ検定または治療処置の場合には生理条件下、またはｉｎ ｖｉｔｒｏ検定の場合にはその検定が実施される条件下で、非標的配列とのオリゴヌクレオチドの非特異的結合を回避するのに十分な程度の相補性がある場合、オリゴヌクレオチドは特異的にハイブリダイズ可能である。
【００３１】
本発明のリガンド複合化オリゴヌクレオチドは、リガンドをオリゴヌクレオチドへ、たとえば、オリゴヌクレオチド剤に組み込まれた化学的に修飾されたモノマーのようなモノマーを介して結合させることによって調製されうる。好ましい一実施形態では、そのカップリングは下記の通りテザーまたはリンカー（または両方）により、およびその複合体は下記によって表される式を有する：
リガンド−[リンカー]optional−[テザー]optional−オリゴヌクレオチド剤
ほとんどの場合で、実施形態はいくつかのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド剤に関して記載される一方、本発明はまた下記の構造を有するモノマーサブユニットを含む：
リガンド−[リンカー]optional−[テザー]optional−モノマー
モノマーを作製およびオリゴヌクレオチド剤へ組み込む方法、およびそれらの物質を使用する方法が本発明に含まれる。好ましい実施形態では、ｔｈｅ糖、たとえば、オリゴヌクレオチド剤のヌクレオチド（たとえば、リボヌクレオチド、デオキシヌクレオチド、または修飾ヌクレオチド）サブユニットのうち一つ以上のリボース糖は、別の部分、たとえば、非糖質キャリヤーと置換されうる。一部の場合には、非糖質は環状である。サブユニットの糖がそのように置換されたヌクレオチドサブユニットを、ここでは糖置換修飾サブユニット（ＳＲＭＳ）という。これはしばしばテザーと呼ばれる。環状キャリヤーは炭素環式環系、すなわち、すべての環原子が炭素原子でよく、またはヘテロ環系、すなわち、一つ以上の環原子がヘテロ原子、たとえば、窒素、酸素、または硫黄でよい。環状キャリヤーは単環系でよく、または二つ以上の環、たとえば縮合環を含みうる。環状キャリヤーは完全に飽和した環系でよく、または一つ以上の二重結合を含みうる。
【００３２】
本発明のオリゴヌクレオチド剤は、核酸標的化（ＮＡＴ）オリゴヌクレオチド剤およびタンパク質−標的化（ＰＴ）オリゴヌクレオチド剤を含む。ＮＡＴおよびＰＴオリゴヌクレオチド剤は、リボ核酸（ＲＮＡ）またはデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはＤＮＡおよびＲＮＡの組み合わせ（キメラ）修飾の一本鎖オリゴマーまたはポリマーをいう。この語は、天然に存在する核酸塩基、糖、およびヌクレオシド間（骨格）共有結合から成るオリゴヌクレオチド、および、同様に機能する天然に存在しない部分を有するオリゴヌクレオチドを含む。そのような修飾または置換されたオリゴヌクレオチドは、たとえば、細胞取り込みの増大、核酸標的への親和性の増大、および／またはヌクレアーゼ存在下での安定性の増大といった望ましい特性のために、しばしば天然形よりも好ましい。特異的ＲＮＡまたはＤＮＡ標的に結合するように設計されたＮＡＴは、実質的な相補性を有し、たとえば、標的核酸の少なくとも１０、２０、または３０またはより多数の塩基と少なくとも７０、８０、９０、または１００％相補的であり、およびアンチセンスＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、および、発現を調節できる他の非二本鎖構造を含む。他のＮＡＴオリゴヌクレオチド剤は、外部ガイド配列（ＥＧＳ）オリゴヌクレオチド（オリゴザイム）、ＤＮＡザイム、およびリボザイムを含む。これらのＮＡＴは、標的に対しＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ相補性によって結合するのでもそうでなくてもよい。ＰＴオリゴヌクレオチド剤はタンパク質標的と、好ましくは三次元相互作用によって結合し、およびタンパク質活性を調節する。それらはおとりＲＮＡ、アプタマー、などを含む。
【００３３】
本発明の一本鎖オリゴヌクレオチド化合物は、好ましくは約８ないし約５０核酸塩基（すなわち約８ないし約５０個の結合したヌクレオシド）を含む。ＮＡＴオリゴヌクレオチド剤は好ましくは長さ約１５ヌクレオチド、またはより好ましくは長さ約３０ヌクレオチドである。ＰＴオリゴヌクレオチド剤は好ましくは長さ約１８ヌクレオチド、またはより好ましくは長さ約２３ヌクレオチドである。特に好ましい化合物は、ｍｉＲＮＡおよびアンチセンスオリゴヌクレオチド、さらにより好ましくは約１２ないし約３０核酸塩基を含むものである。
【００３４】
理論に限定されることを望まない一方、オリゴヌクレオチド剤は切断依存性または切断非依存性機構を含む一つ以上のいくつかの機構によって作用しうる。切断を基礎とする機構は、ＲＮアーゼＨ依存性である可能性がありおよび／またはＲＩＳＣ複合体機能を含みうる。切断非依存性機構は、ｍｉＲＮＡによって媒介されるような占有を基礎とする翻訳停止、またはアプタマーがするようなオリゴヌクレオチド剤のタンパク質への結合を含む。オリゴヌクレオチド剤はまた、プレｍＲＮＡ中のスプライス部位の選択を変えることによって、遺伝子の発現を変化させるのに使用できる。スプライシングの阻害はまた、不適切にプロセシングされたメッセージの分解を結果として生じる可能性があり、そのようにして遺伝子発現をダウンレギュレートする。Ｋｏｌｅおよび共同研究者ら（Ｓｉｅｒａｋｏｗｓｋａ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９６，９３：１２８４０−１２８４４）は、２’−Ｏ−Ｍｅホスホロチオエートオリゴヌクレオチドが異常なベータ−グロビンスプライシングを細胞系において訂正できたことを示した。完全に修飾された２’−メトキシエチルオリゴヌクレオチドおよびペプチド核酸（ＰＮＡ）は、ＩＬ−５受容体−αプレｍＲＮＡのスプライシングを再指示できた（Ｋａｒｒａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０００，５８：３８０−３８７； Ｋａｒｒａｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００１，４０：７８５３−７８５９）。
【００３５】
マイクロＲＮＡ
オリゴヌクレオチド剤はマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）を含む。マイクロＲＮＡは、たとえば標的ｍＲＮＡの翻訳の阻害によって、または分解を通じて、細胞において特定遺伝子の転写後サイレンシングを引き起こす能力がある低分子非コードＲＮＡ分子である。ｍｉＲＮＡは、標的核酸と完全に相補的であり、または非相補の領域を含むことができ、結果として非相補の領域に「バルジ」を生じる。非相補の領域（バルジ）には、二本鎖形成を可能にするための十分な相補性、好ましくは完全な相補性の領域が隣接しうる。好ましくは、相補性領域は少なくとも長さ８から１０ヌクレオチド（たとえば、長さ８、９、または１０ヌクレオチド）である。ｍｉＲＮＡは、マイクロＲＮＡが標的核酸と完全に相補的ではない場合のように翻訳を抑制することによって、またはｍｉＲＮＡが標的と完全な相補性で結合する場合にのみ起こると考えられている標的ＲＮＡ分解を生じることによって、遺伝子発現を阻害できる。本発明はまた、標的と結合した際にバルジを形成してもしなくてもよいｍｉＲＮＡの二本鎖前駆体を含みうる。
【００３６】
ｍｉＲＮＡまたはプレｍｉＲＮＡは長さ約１８〜１００ヌクレオチド、およびより好ましくは長さ約１８〜８０ヌクレオチドでありうる。成熟ｍｉＲＮＡは、約１９〜３０ヌクレオチド、好ましくは約２１〜２５ヌクレオチド、特に２１、２２、２３、２４、または２５ヌクレオチドの長さを有しうる。マイクロＲＮＡ前駆体は約７０〜１００ヌクレオチドの長さおよびヘアピン立体構造を有しうる。マイクロＲＮＡはｉｎ ｖｉｖｏでプレｍｉＲＮＡから、特異的に高分子プレｍｉＲＮＡを機能するｍｉＲＮＡへプロセシングするダイサーおよびドローシャと呼ばれる酵素によって生じうる。本発明で扱われるマイクロＲＮＡまたは前駆体ｍｉＲＮＡは、ｉｎ ｖｉｖｏで細胞系によって合成でき、または化学的に合成できる。マイクロＲＮＡは、希望の特性を与える修飾を含むように合成できる。たとえば、修飾は安定性、標的核酸とのハイブリダイゼーション熱力学、特定の組織または細胞型への標的化、またはたとえばエンドサイトーシス依存性または非依存性機構による細胞透過性を改善しうる。修飾はまた、増加配列特異性を増加させ、および結果として部位を外れた標的化を減少させうる。合成および化学修飾の方法は下により詳細に記載される。
【００３７】
特に、本発明で扱われるｍｉＲＮＡまたはプレｍｉＲＮＡは、標的核酸との非相補性を有する内部（すなわち非末端）領域中のオリゴヌクレオチド上に化学修飾を有しうる。たとえば、修飾ヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡのバルジを形成する領域に組み込むことができる。修飾は、たとえばリンカーによって、ｍｉＲＮＡと結合するリガンドを含みうる。修飾は、たとえば、治療ｍｉＲＮＡの薬物動態または安定性を改善でき、または標的核酸へのｍｉＲＮＡのハイブリダイゼーション特性（たとえば、ハイブリダイゼーション熱力学）を改善できる。一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡのバルジ領域に組み込まれたかまたはテザー（繋留）された修飾またはリガンドの方向は、バルジ領域の空間を占めるような向きであることが好ましい。この方向は、ハイブリダイゼーション特性の改善または他のｍｉＲＮＡの望ましい特性を促進する。たとえば、修飾は、核酸鎖上の修飾塩基または糖、または介入物として機能するリガンドを含みうる。これらは好ましくはバルジ中に位置する。介入物は、芳香族、たとえば、多環式芳香族またはヘテロ環芳香族化合物でありうる。多環式介入物は積層能力を持つ可能性があり、および２、３、または４縮合環を有する系を含みうる。ユニバーサル塩基もまたｍｉＲＮＡに組み込まれうる。
【００３８】
一実施形態では、ｍｉＲＮＡまたはプレｍｉＲＮＡはアミノグリコシドリガンドを含むことができ、それはｍｉＲＮＡにハイブリダイゼーション特性の改善または配列特異性の改善を生じうる。典型的なアミノグリコシドは、グリコシル化ポリリジン；ガラクトシル化ポリリジン；ネオマイシンＢ；トブラマイシン；カナマイシンＡ；およびアミノグリコシドのアクリジン複合体、たとえばＮｅｏ−Ｎ−アクリジン、Ｎｅｏ−Ｓ−アクリジン、Ｎｅｏ−Ｃ−アクリジン、Ｔｏｂｒａ−Ｎ−アクリジン、およびＫａｎａＡ−Ｎ−アクリジンを含む。アクリジンアナログの使用は、配列特異性を増大させうる。たとえば、ネオマイシンＢはＤＮＡに比較してＲＮＡに対し高い親和性を有するが、しかし配列特異性は低い。アクリジンアナログであるＮｅｏ−Ｓ−アクリジンは、ＨＩＶＲｅｖ−応答配列（ＲＲＥ）に対して親和性が増大している。一部の実施形態では、アミノグリコシドリガンドのグアニジンアナログ（グアニジノグリコシド）がオリゴヌクレオチド剤に繋留されている。グアニジノグリコシドでは、アミノ酸上のアミン基がグアニジン基に交換されている。グアニジンアナログの付加は、オリゴヌクレオチド剤の細胞透過性を増大しうる。
【００３９】
一実施形態では、リガンドは、標的核酸の切断によって標的遺伝子阻害に寄与する切断基を含みうる。好ましくは、切断基はバルジ領域に位置するような方法でｍｉＲＮＡに繋留され、そこで切断基は標的ＲＮＡに接近およびそれを切断できる。切断基は、たとえば、ブレオマイシン（たとえば、ブレオマイシン−Ａ５、ブレオマイシン−Ａ２、またはブレオマイシン−Ｂ２）、ピレン、フェナントロリン（たとえば、Ｏ−フェナントロリン）、ポリアミン、トリペプチド（たとえば、ｌｙｓ−ｔｙｒ−ｌｙｓトリペプチド）、または金属イオンキレート基でありうる。金属イオンキレート基は、たとえば、Ｌｕ（III）またはＥＵ（III）大環状複合体、Ｚｎ（II）２，９−ジメチルフェナントロリン誘導体、Ｃｕ（II）テルピリジン、またはアクリジンを含むことができ、バルジの部位での標的ＲＮＡの選択的切断をＬｕ（III）のような遊離金属イオンによって促進できる。一部の実施形態では、ペプチドリガンドは、たとえばバルジ領域で、標的ＲＮＡの切断を促進するようにｍｉＲＮＡまたはプレｍｉＲＮＡに繋留されうる。たとえば、１，８−ジメチル−１，３，６，８，１０，１３−ヘキサアザシクロテトラデカン（サイクラム）は、標的ＲＮＡ切断を促進するために、ペプチドと（たとえば、アミノ酸誘導体によって）複合化されうる。本発明で扱われる方法および組成物は、切断または非切断依存性機構によって標的遺伝子を阻害するｍｉＲＮＡを含む。
【００４０】
ｍｉＲＮＡまたはプレｍｉＲＮＡは、二本鎖を形成するための十分な相補性の領域（たとえば、長さ７、８、９、１０、または１１ヌクレオチドの領域）に隣接される、非相補の領域（たとえば、長さ３、４、５、または６ヌクレオチドの領域）を含むように設計および合成されうる。ヌクレアーゼ耐性および／または標的への結合親和性の増大のために、ｍｉＲＮＡ配列は２’−Ｏ−メチル、２’−フッ素、２’−Ｏ−メトキシエチル、２’−Ｏ−アミノプロピル、２’−アミノ、および／またはホスホロチオエート結合を含みうる。フラノース糖がオリゴヌクレオチド骨格に含まれることはまた、ヌクレオチド鎖切断を減少させうる。ｍｉＲＮＡまたはプレｍｉＲＮＡは、３’−陽イオン基を含めることによって、またはヌクレオシドを３’末端にて３’−３’結合で逆転させることによってさらに修飾されうる。別の選択肢では、３’末端はアミノアルキル基、たとえば、３’−Ｃ５−アミノアルキルｄＴを用いてブロックされうる。他の３’−複合体は３’−５’ヌクレオチド鎖末端切断を阻害しうる。理論に縛られない一方、ナプロキセンまたはイブプロフェンといった３’−複合体は、エキソヌクレアーゼをオリゴヌクレオチドの３’末端との結合から立体的にブロックすることによって、ヌクレオチド鎖末端切断を阻害しうる。低分子アルキル鎖、アリール基、またはヘテロ環複合体または修飾糖（Ｄ−リボース、デオキシリボース、グルコースなど）さえも、３’−５’−エキソヌクレアーゼをブロックできる。
【００４１】
一実施形態では、ｍｉＲＮＡまたはプレｍｉＲＮＡは、たとえば上記の標的化修飾のような、標的化を改善する修飾を含む。ｍｉＲＮＡ分子を特定の細胞型へ標的化する修飾の例は、ガラクトース、Ｎ−アセチルガラクトサミン、マンノースのような糖；葉酸のようなビタミン；ＲＧＤおよびＲＧＤミミックのような他のリガンド；および、ナプロキセン、イブプロフェンまたは他の公知のタンパク質結合分子を含む低分子を含む。
【００４２】
ｍｉＲＮＡまたはプレｍｉＲＮＡは、本分野で公知の手順を用いて、化学合成および／または酵素的ライゲーション反応を用いて構築されうる。たとえば、ｍｉＲＮＡまたはプレｍｉＲＮＡは、天然に存在するヌクレオチド、または分子の生物学的安定性を増大するように、またはｍｉＲＮＡまたはプレｍｉＲＮＡおよび標的核酸の間に形成される二本鎖の物理的安定性を増大するように設計されたさまざまに修飾されたヌクレオチドを用いて化学合成でき、たとえば、ホスホロチオエート誘導体およびアクリジン置換ヌクレオチドを使用できる。他の適当な核酸修飾が本明細書に記載される。代替的に、ｍｉＲＮＡまたはプレｍｉＲＮＡ核酸を、核酸がアンチセンス方向にサブクローニングされた発現ベクターを用いて生物学的に作製でき、すなわち、その挿入された核酸から転写されるＲＮＡは目的の標的核酸に対してアンチセンス方向となる。
【００４３】
アンチセンス核酸配列
本発明で扱われる一本鎖オリゴヌクレオチド剤はアンチセンス核酸を含む。「アンチセンス」核酸は、遺伝子発現産物をコードする「センス」核酸と相補的である、たとえば、二本鎖ｃＤＮＡ分子のコード鎖と相補的、またはたとえば、プレｍＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、またはプレｍｉＲＮＡのようなＲＮＡ配列と相補的であるヌクレオチド配列を含む。したがって、アンチセンス核酸は、センス核酸標的と水素結合を形成できる。
【００４４】
ｃＤＮＡ分子のセンス鎖の配列といったコード鎖配列を考えると、アンチセンス核酸は、ＷａｔｓｏｎおよびＣｒｉｃｋ塩基対形成の規則に従って設計できる。アンチセンス核酸分子は、たとえばプレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡといったＲＮＡのコード領域または非コード領域の一部と相補的でありうる。たとえば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、プレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡの翻訳開始部位周辺の領域、たとえば、５’ＵＴＲと相補的でありうる。アンチセンスオリゴヌクレオチドは長さ約１０から２５ヌクレオチド{たとえば、長さ１１、１２、１３、１４、１５、１６、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４ヌクレオチド）でありうる。アンチセンスオリゴヌクレオチドはまた、ｍｉＲＮＡまたはプレｍｉＲＮＡと相補的でありうる。
【００４５】
アンチセンス核酸は、本分野で公知の手順を用いて、化学合成および／または酵素的ライゲーション反応を用いて構築されうる。たとえば、アンチセンス核酸は、天然に存在するヌクレオチド、または分子の生物学的安定性を増大するように、またはアンチセンスおよび標的核酸の間に形成される二本鎖の物理的安定性を増大するように設計されたさまざまに修飾されたヌクレオチドを用いて化学合成でき、たとえば、ホスホロチオエート誘導体およびアクリジン置換ヌクレオチドを使用できる。他の適当な核酸修飾が本明細書に記載される。代替的に、アンチセンス核酸を、核酸がアンチセンス方向にサブクローニングされた発現ベクターを用いて生物学的に作製でき、すなわち、その挿入された核酸から転写されるＲＮＡは目的の標的核酸に対してアンチセンス方向となる。
【００４６】
アンチセンス剤は、リボヌクレオチドのみ、デオキシリボヌクレオチドのみ{たとえば、オリゴデオキシヌクレオチド）、またはデオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドの両方を含みうる。たとえば、リボヌクレオチドのみから成るアンチセンス剤は、相補的ＲＮＡとハイブリダイズでき、および標的ＲＮＡ転写物への翻訳機構の接近を妨害し、それによってタンパク質合成を妨害する。デオキシリボヌクレオチドのみ、またはデオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドを含むアンチセンス分子、たとえば、アンチセンス剤の５’および３’末端でＲＮＡ配列に隣接されるＤＮＡ配列は、相補的ＲＮＡとハイブリダイズでき、およびそのＲＮＡ標的は次いでＲＮアーゼＨのような酵素によって切断されうる。標的ＲＮＡの分解は翻訳を妨げる。隣接するＲＮＡ配列は、２’−Ｏ−メチル化ヌクレオチド、およびホスホロチオエート結合を含むことができ、および内部ＤＮＡ配列はホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含むことができる。ＲＮアーゼＨ活性による標的化が望まれる場合、内部ＤＮＡ配列は好ましくは少なくとも長さ５ヌクレオチドである。
【００４７】
ヌクレアーゼ耐性の増加については、アンチセンス剤はさらに、ヌクレオシドを３’末端にて３’−３’結合で逆転させることによってさらに修飾されうる。別の選択肢では、３’末端はアミノアルキル基を用いてブロックされうる。一部の場合には、アンチセンスオリゴヌクレオチド剤は、標的化を改善する修飾、たとえば標的化修飾を含む。
【００４８】
おとり核酸
本発明で扱われるオリゴヌクレオチド剤は、おとりＲＮＡのようなおとり核酸でありうる。おとり核酸は天然核酸に似るが、しかし天然核酸の活性を阻害または妨害するように修飾されている。たとえば、おとりＲＮＡはリガンドのための天然結合ドメインを模倣でき、および特異的リガンドの結合に関して天然結合標的と競合できる。ＨＩＶトランス活性化応答（ＴＡＲ）ＲＮＡの過剰発現は「おとり」として作用できおよびＨＩＶｔａｔタンパク質と効率的に結合でき、それによってＨＩＶｔａｔタンパク質がＨＩＶＲＮＡにコードされたＴＡＲ配列と結合するのを妨げることが示されている。一実施形態では、おとりＲＮＡは標的化を改善する修飾を含む。ｍｉＲＮＡおよびアンチセンスＲＮＡについて上に記載される、および本明細書で別に記載される化学修飾もまた、おとり核酸での使用に適している。
【００４９】
アプタマー
本発明のオリゴヌクレオチド剤はまたアプタマーを含む。アプタマーは、有機低分子、またはたとえば転写または翻訳因子のようなタンパク質といった、非核酸リガンドに結合し、および次いでその活性を修飾する。アプタマーは、非核酸リガンド上の標的となる結合部位の認識を導く特異的構造へ折りたたまれることが可能である。アプタマーは本明細書に記載の修飾のうち任意のものを含みうる。一部の場合には、アプタマーは、は、標的化を改善する修飾、たとえば標的化修飾を含む。ｍｉＲＮＡおよびアンチセンスＲＮＡについて上に記載される、および本明細書で別に記載される化学修飾もまた、おとり核酸での使用に適している。
【００５０】
本発明のオリゴヌクレオチドのその他の特性
ＮＡＴ（「核酸標的化」）するオリゴヌクレオチド剤は、オリゴヌクレオチド剤が標的核酸と二本鎖を形成するように、標的遺伝子に対し十分な相補性の領域を含み、およびヌクレオチドに関して十分な長さである。オリゴヌクレオチド剤は標的となる分子の機能を調節できる。たとえば、標的となる分子がｍＲＮＡまたはプレｍＲＮＡである場合、ＮＡＴは遺伝子発現を阻害できる；標的がｍｉＲＮＡである場合、ＮＡＴはｍｉＲＮＡ機能を阻害しおよびそのようにしてその特定のｍｉＲＮＡによって標的にされるｍＲＮＡの発現をアップレギュレートする。代替的に、標的がスプライシングに影響するプレｍＲＮＡの領域である場合、ＮＡＴはスプライス部位の選択に、およびしたがってｍＲＮＡ配列に影響しうる；ＮＡＴがｍｉＲＮＡとして機能する場合、標的となるｍＲＮＡの発現は阻害される。説明の便宜上、ヌクレオチドまたはリボヌクレオチドの語は時々本明細書で、オリゴヌクレオチド剤の一つ以上のモノマーサブユニットについて用いられる。「リボヌクレオチド」または「ヌクレオチド」の語は、修飾ＲＮＡまたはヌクレオチド代用物の場合には、一つ以上の位置での、修飾ヌクレオチドまたは代用物置換部分もまたいうことができると解される。
【００５１】
ＮＡＴオリゴヌクレオチド剤は、標的ＲＮＡと少なくとも部分的に、および一部の実施形態では完全に、相補的な領域であるかまたはそれを含む。オリゴヌクレオチド剤と標的との間に完全な相補性がある必要は無いが、しかし対応はオリゴヌクレオチド剤またはその切断産物が、標的遺伝子発現を調節（たとえば阻害）することができるために十分でなければならない。
【００５２】
オリゴヌクレオチド剤は、下記の特性のうち好ましくは一つ以上を有する：（１）一つ以上のリン酸基または一つ以上のリン酸基アナログを含む５’修飾を有する；（２）非常に多数の塩基にさえの修飾にかかわらず、特異的に塩基対形成しおよび十分な熱力学的安定性の相同な標的ＲＮＡと二本鎖構造を生じ、標的にされるＲＮＡの活性の調節を可能にする；および（３）非常に多数またはすべてのヌクレオシドにさえの修飾にかかわらず、なお「ＲＮＡ様」特性を有する、すなわち、リボヌクレオチドだけを基礎としない、または一部だけがリボヌクレオチドを基礎とする内容であっても、ＲＮＡ分子の全体的な構造的、化学的および物理的特性を有する。たとえば、すべてのヌクレオチド糖が２’−フルオロ基を２’−水酸基の代わりに含みうる。このデオキシリボヌクレオチド含有剤はなおＲＮＡ様特性を示すと予想できる。理論に縛られることを望まない一方、電気陰性なフッ素は、リボースのＣ２’位に結合する場合、アキシアル方向を優先する。フッ素のこの空間的優先傾向は、糖がＣ３’エンド歪みを取ることを強制できる。これは、ＲＮＡ分子に観察されるのと同一の歪み形式であり、およびＲＮＡに特徴的なＡファミリー型らせんを生じる。さらに、フッ素は、良好な水素結合受容体であるため、ＲＮＡ構造を安定化することが知られている水分子と同一の水素結合相互作用に参加できる。一般的に、２’−糖位置の修飾部分が、デオキシリボヌクレオチドの２’−Ｈ部分よりもリボヌクレオチドの２’−ＯＨ部分に特徴的である水素結合に入れることが好ましい。好ましいオリゴヌクレオチド剤は：Ｃ３’エンド歪みを糖の全部または少なくとも約５０、７５、８０、８５、９０または９５％に示す；ＲＮＡに特徴的なＡファミリー型らせんを生じることができるように、Ｃ３’エンド歪みを十分な量の糖に示す；一般的にＣ３’エンド歪み構造でない糖を約２０、１０、５、４、３、２または１個しか持たない。一部の場合には、オリゴヌクレオチドはＣ３’エンド糖歪みを示しおよび２’位で修飾されている。典型的な修飾は、２’−ＯＨ、２’−Ｏ−Ｍｅ、２’−Ｏ−メトキシエチル、２’−Ｏ−アミノプロピル、２’−Ｆ、２’−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨＭｅ、２’−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ（Ｍｅ）２、およびＬＮＡを含む。一部の場合には、修飾の性質にかかわらず、およびオリゴヌクレオチド剤はデオキシヌクレオチドまたは修飾デオキシヌクレオチドを含みうるとはいえ、ＤＮＡ分子、または分子中のヌクレオチドの５０、６０または７０％より大がデオキシリボヌクレオチドである任意の分子、または２’位がデオキシである修飾デオキシリボヌクレオチドは、オリゴヌクレオチド剤の定義から除外されるのが好ましい。Ｃ２’エンド糖歪みを示す糖部分を伴う一部の好ましい２’−修飾は、２’−Ｈ、Ｔ−Ｍｅ、２’−Ｓ−Ｍｅ、２’−エチニル、および２’−ａｒａ−Ｆを含む。他の糖修飾はＬ−糖および２’−５’結合糖を含む。
【００５３】
ここでは，「特異的にハイブリダイズ可能な」および「相補的」とは、本発明の化合物と標的ＲＮＡ分子との間に安定なおよび特異的な結合が生じるような、十分な程度の相補性を示すのに用いられる語である。この命名はまた、ＮＡＴオリゴヌクレオチド剤が標的ＲＮＡへ結合する場合にも適用される。特異的結合は、特異的結合が望まれる条件下で、すなわち、ｉｎ ｖｉｖｏ検定または治療処置の場合には生理条件下で、またはｉｎ ｖｉｔｒｏ検定の場合には検定が実施される条件下で、非標的配列に対して相補性の十分な欠如を必要とする。標的にされる標的と標的にされない配列との間の単一のミスマッチは、ｍＲＮＡのｓｉＲＮＡ標的化のための識別を与えるのに十分であることが示されている（Ｂｒｕｍｍｅｌｋａｍｐ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ，２００２，２：２４３）。
【００５４】
一部の場合には、ＮＡＴオリゴヌクレオチド剤は、標的ＲＮＡに対して「十分に相補的」であり、そのためオリゴヌクレオチド剤が標的ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質の産生を阻害するほどである。標的ＲＮＡは、対象にとって内因性であるプレｍＲＮＡ、ｍＲＮＡ、またはｍｉＲＮＡでありうる。別の一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は標的ＲＮＡと「正確に相補的」（ＳＲＭＳ含有サブユニットを除く）であり、たとえば、標的ＲＮＡおよびオリゴヌクレオチド剤は、アニーリングして正確な相補性の領域においてＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対だけからできたハイブリッドを形成できる。「十分に相補的な」標的ＲＮＡは、標的ＲＮＡと正確に相補的である領域（たとえば、少なくとも約７ヌクレオチドの）を含みうる。さらに、一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は特異的に一ヌクレオチドの差異を識別する。この場合、オリゴヌクレオチド剤は、一ヌクレオチドの差異の領域に正確な相補性が見られる場合にのみ遺伝子発現をダウンレギュレートする。
【００５５】
考察されるオリゴヌクレオチド剤は、それ以外は未修飾であるＲＮＡおよびＤＮＡならびに修飾されているＲＮＡおよびＤＮＡを含む。修飾ＲＮＡおよびＤＮＡの例は、効率を改善する修飾、およびヌクレオシド代用物のポリマーを含む。未修飾ＲＮＡとは、核酸の成分、すなわち糖、塩基、およびリン酸部分が、天然に存在するもの、好ましくは人体に天然に存在するものと同一または本質的に同一である分子をいう。文献は、修飾ＲＮＡとして、稀なまたは異常なしかし天然に存在するＲＮＡに言及している。Ｌｉｍｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９４，２２，２１８３−２１９６を参照。そのような稀なまたは異常なＲＮＡは、しばしば修飾ＲＮＡと言われるが、典型的には転写後修飾の結果であり、およびここでは未修飾ＲＮＡという語の範囲内にある。修飾ＲＮＡとはここでは、一つ以上の核酸の成分、すなわち糖、塩基、およびリン酸部分が、天然に存在するもの、好ましくは人体に天然に存在するものと異なる分子をいう。「修飾ＲＮＡ」と呼ばれる一方、それらはもちろん、修飾のために、厳密に言ってＲＮＡではない分子を含む。ヌクレオシド代用物とは、リボリン酸骨格が、塩基を正しい空間関係で提示することが可能である非リボリン酸構造で置換されている分子であり、そのためハイブリダイゼーションはリボリン酸骨格で見られるものと実質的に同様であり、たとえば、リボリン酸骨格の非荷電ミミックである。
【００５６】
糖置換モノマーサブユニット（ＳＲＭＳ）
サブユニットの糖がそのように置換されているヌクレオチドサブユニットは、ここでは糖置換修飾サブユニット（ＳＲＭＳ）という。ＳＲＭＳは、二つの「骨格結合点」（水酸基）、「テザー（繋留）結合点」、および介在するテザーを介してＳＲＭＳと間接的に結合するリガンドを含む。ＳＲＭＳはオリゴヌクレオチド剤の５’−または３’末端サブユニットでよく、および二つ以上の未修飾または修飾リボヌクレオチドと隣接して位置しうる。代替的に、ＳＲＭＳは一つ以上の未修飾または修飾リボヌクレオチドと隣接して位置する内部の位置を占める可能性がある。二個以上のＳＲＭＳがオリゴヌクレオチド剤に存在しうる。ある部分（たとえば、コレステロールのような親油性部分）にテザーされたＳＲＭＳを含めるのに好ましい位置は、３’末端、５’末端、または内部位置である。
【００５７】
リガンド
様々なものがオリゴヌクレオチド剤に繋留されうる。オリゴヌクレオチド剤に繋留されたリガンドは、本剤に有益な作用を有しうる。たとえば、リガンドは、安定性、標的核酸とのハイブリダイゼーション熱力学、特定の組織または細胞型への標的化、またはたとえばエンドサイトーシス依存性または非依存性機構による、細胞透過性を改善しうる。リガンドおよび随伴する修飾はまた、配列特異性を増大し、および結果的に、部位を外れた標的化を減少させうる。繋留されたリガンドは、介入物として機能しうる一つ以上の修飾塩基または糖を含みうる。これらは、好ましくはｍｉＲＮＡ／標的二本鎖のバルジでのように、内部領域に位置する。介入物はまた、多環式芳香族またはヘテロ環芳香族化合物を含む芳香族基でありうる。多環式介入物は積層能力を持つ可能性があり、および２、３または４縮合環を有する系を含みうる。ユニバーサル塩基もまたリガンド上に含まれうる。
【００５８】
一実施形態では、リガンドは、標的核酸の切断によって標的遺伝子阻害に寄与する切断基を含みうる。切断基は、ブレオマイシン（たとえば、ブレオマイシン−Ａ５、ブレオマイシン−Ａ２、またはブレオマイシン−Ｂ２）、ピレン、フェナントロリン（たとえば、Ｏ−フェナントロリン）、ポリアミン、トリペプチド（たとえば、ｌｙｓ−ｔｙｒ−ｌｙｓトリペプチド）、または金属イオンキレート基でありうる。金属イオンキレート基は、Ｌｕ（III）またはＥＵ（III）大環状複合体、Ｚｎ（II）２，９−ジメチルフェナントロリン誘導体、Ｃｕ（II）テルピリジン、またはアクリジンを含むことができ、バルジの部位での標的ＲＮＡの選択的切断をＬｕ（III）のような遊離金属イオンによって促進できる。一部の場合には、ペプチド リガンドは標的ＲＮＡの切断を促進するようにｍｉＲＮＡに繋留されうる。一部の場合には、切断は バルジ領域で起こりうる。たとえば、１，８−ジメチル−１，３，６，８，１０，１３−ヘキサアザシクロテトラデカン（サイクラム）は、標的ＲＮＡ切断を促進するために、ペプチドとたとえばアミノ酸誘導体によって、複合化されうる。
【００５９】
繋留されたリガンドは、オリゴヌクレオチド剤に改善されたハイブリダイゼーション特性または改善された配列特異性を持たせることができるアミノグリコシドリガンドでありうる。典型的なアミノグリコシドは、グリコシル化ポリリジン、ガラクトシル化ポリリジン、ネオマイシンＢ、トブラマイシン、カナマイシンＡ、アミノグリコシドのアクリジン複合体、たとえばＮｅｏ−Ｎ−アクリジン、Ｎｅｏ−Ｓ−アクリジン、Ｎｅｏ−Ｃ−アクリジン、Ｔｏｂｒａ−Ｎ−アクリジン、およびＫａｎａＡ−Ｎ−アクリジンを含む。アクリジンアナログの使用は、配列特異性を増大させうる。たとえば、ネオマイシンＢはＤＮＡに比較してＲＮＡに対し高い親和性を有するが、しかし配列特異性は低い。アクリジンアナログであるＮｅｏ−Ｓ−アクリジンは、ＨＩＶＲｅｖ−応答配列（ＲＲＥ）に対して親和性が増大している。一部の実施形態では、アミノグリコシドリガンドのグアニジンアナログ（グアニジノグリコシド）がオリゴヌクレオチド剤に繋留されている。グアニジノグリコシドでは、アミノ酸上のアミン基がグアニジン基に交換されている。グアニジンアナログの付加は、オリゴヌクレオチド剤の細胞透過性を増大しうる。繋留されたリガンドは、オリゴヌクレオチドの細胞取り込みを促進しうるポリアルギニンペプチド、ペプトイドまたはペプチドミメティックでありうる。
【００６０】
好ましい部分は、好ましくは共有結合によって、直接にまたは介在するテザーを介して、ＳＲＭＳキャリヤーと結合しているリガンドである。好ましい実施形態では、リガンドは介在するテザーを介してキャリヤーと結合している。上記で考察した通り、リガンドまたは繋留されたリガンドは、ＳＲＭＳモノマーが成長中の鎖に組み込まれる場合、ＳＲＭＳモノマー上に存在しうる。一部の実施形態では、リガンドは「前駆体」ＳＲＭＳモノマーが成長中の鎖に組み込まれた後、「前駆体」ＳＲＭＳに組み込まれうる。たとえば、アミノ末端のあるテザー（すなわち、随伴するリガンドを持たない）またはＴＡＰ−（ＣＨ２）ｎＮＨ２を有するＳＲＭＳモノマーが、成長中のオリゴヌクレオチド鎖に組み込まれうる。以降の操作で、求電子基を有するリガンドを前駆体ＳＲＭＳへ、リガンドの求電子基を前駆体ＳＲＭＳテザーの末端求核基と結合することによって、続いて付加できる。代表的な求電子基は、ペンタフルオロフェニルエステルまたはアルデヒドを含む。本発明に従う他の求電子基は当業者によって容易に決定されうる。
【００６１】
ペプチド複合体を有するオリゴヌクレオチドの調製
ペプチド複合体を有するオリゴヌクレオチドは、リガンドを持つオリゴヌクレオチドの調製について下に記載するのと同様の手順を用いて調製されうる。オリゴヌクレオチドペプチド複合体の合成および精製は、確立された方法によって実施されうる。それぞれ参照により本開示に含まれるＴｒｕｆｅｒｔ ｅｔ ａｌ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９９６，５２，３００５；およびＭａｎｏｈａｒａｎ，“Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｉｎ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，” ｉｎ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｄｒｕｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｅｄ．Ｓ．Ｔ．Ｃｒｏｏｋｅ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，２００１を参照。一部の場合には、ペプチドミメティックを修飾して、明確なおよび特異的な好ましい立体配座を取る制約されたペプチドを作製することができ、これはペプチドの効力および選択性を増大させる。たとえば、制約されたペプチドはアザペプチドでありうる（Ｇａｎｔｅ ｉｎ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ １９８９，４０５−４１３）。アザペプチドは、アミノ酸のα−炭素を窒素原子と置換することによって、アミノ酸側鎖の構造を変えることなく合成される。たとえば、アザペプチドは、従来のペプチド合成カップリング法でヒドラジンを用いることによって、たとえばヒドラジンをたとえばクロロギ酸フェニルのような「カルボニル供与体」と反応させることによって、合成されうる。
【００６２】
細胞への移行を促進するためのリガンドとの複合化
オリゴヌクレオチド剤は、細胞への移行、たとえばエンドサイトーシスまたは非エンドサイトーシス機構を、促進するために修飾されうる。細胞透過性を増加させるリガンドは、オリゴヌクレオチド剤へいくつかの方法によって結合されうる。リガンド結合の一例は、たとえばピロリンを基礎とするＳＲＭＳのような、ＳＲＭＳへの結合による。
【００６３】
一実施形態では、オリゴヌクレオチドは、幅広い細胞型への取り込みを促進するアルギニンと複合化されうる。理論に縛られない一方、取り込みの促進は、非エンドサイトーシス経路によると考えられている。別の一実施形態では、オリゴヌクレオチドは、細胞透過性を促進するため、アミノグリコシドのグアニジウムアナログと複合化されうる。
【００６４】
別の一実施形態では、オリゴヌクレオチドは親油性部分と複合化されうる。親油性部分は、ピロリンを基礎とするＳＲＭＳの窒素原子に結合されうる。親油性部分の例は、コレステロール、脂質、オレイル、レチニルまたはコレステリル残基を含む。他の親油性部分は、コール酸、アダマンタン酢酸、１−ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３−ビス−Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３−プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３−（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３−（オレオイル）コレン酸、ジメトキシトリチルまたはフェノキサジンを含む。コレステロールは特に好ましい例である。
【００６５】
細胞透過性を促進するリガンドは、３’末端、５’末端、または内部に結合されうる。リガンドは、３’末端、５’末端、または内部結合にて、たとえばピロリンを基礎とするＳＲＭＳのような、ＳＲＭＳへ結合されうる。結合は直接または繋留分子を介しうる。ここで考察されるテザー、スペーサーまたはリンカーは、部分をＳＲＭＳへ結合するのに使用されうる。
【００６６】
本発明のリガンド複合化オリゴヌクレオチドの合成
本発明のオリゴヌクレオチド化合物は、溶液相または固相有機合成を用いて調製されうる。有機合成は、非天然または修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドが容易に調製されうるという長所を提供する。重要なことに、Ｃ５位で修飾されているピリミジンヌクレオチドが、オリゴヌクレオチド配列に組み込まれうる。非天然核酸塩基および必要に応じて非天然糖部分を含む本発明の二本鎖オリゴヌクレオチドは、二段階手順を用いて調製されうる。まず、二本鎖分子の各鎖が別々に調製される。次いで、成分鎖がアニーリングされる。
【００６７】
本発明のリガンド複合化オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドへの結合分子の結合に由来するもののような突出した反応性官能基を有するオリゴヌクレオチドを用いることによって合成されうる。この反応性オリゴヌクレオチドは、市販のリガンド、任意の様々な保護基を有する合成されたリガンド、または結合部分が付加されたリガンドと直接反応させることができる。本発明の方法は、一部の好ましい実施形態では、リガンドと適当に複合体化されておりおよびさらに固相担体材料へ結合されうるヌクレオシドモノマーの使用によって、リガンド複合化オリゴヌクレオチドの合成を円滑にする。必要に応じて固相担体へ結合された、そのようなリガンド−ヌクレオシド複合体はヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチドの５’位置にある結合部分との選択された血清結合リガンドの反応を介して、本発明の方法の一部の好ましい実施形態に従って調製される。一部の場合には、オリゴヌクレオチドの３’末端に結合したリガンドを有するオリゴヌクレオチドが、まずモノマー構築単位を一定の孔を持つガラス担体へ長鎖アミノアルキル基を介して共有結合によって結合することにより調製される。次いで、ヌクレオチドが、標準的な固相合成法によって、固相担体へ結合されたモノマー構築単位へ結合される。モノマー構築単位は、ヌクレオシドまたは固相合成に適合した他の有機化合物でありうる。
【００６８】
本発明の複合体に用いられるオリゴヌクレオチドは、固相合成のよく知られた方法によって便利におよび定型的に作製されうる。そのような合成のための装置は、たとえば、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を含むいくつかの販売者によって販売されている。本分野で公知であるそのような合成のための任意の他の方法を、加えてまたは代替的に用いることができる。ホスホロチオエートおよびアルキル化誘導体といった、他のヌクレオチドを調製するのに同様の方法を用いることもまた知られている。
【００６９】
特定の修飾オリゴヌクレオチドの合成に関する教示は、下記の米国特許に見出すことができる：ポリアミン複合化したオリゴヌクレオチドに対する米国特許第５，１３８，０４５号および第５，２１８，１０５号明細書；キラルリン結合を有するオリゴヌクレオチドの調製のためのモノマーに対する米国特許第５，２１２，２９５号明細書；修飾骨格を有するオリゴヌクレオチドに対する米国特許第５，３７８，８２５号および第５，５４１，３０７号明細書；骨格修飾オリゴヌクレオチドおよび還元的カップリングによるその調製に対する米国特許第５，３８６，０２３号明細書；３−デアザプリン環系を基礎とする修飾核酸塩基およびその合成方法に対する米国特許第５，４５７，１９１号明細書；Ｎ−２置換プリンを基礎とする修飾核酸塩基に対する米国特許第５，４５９，２５５号明細書；キラルリン結合を有するオリゴヌクレオチドの調製のための製法に対する米国特許第５，５２１，３０２号明細書；ペプチド核酸に対する米国特許第５，５３９，０８２号明細書；β−ラクタム骨格を有するオリゴヌクレオチドに対する米国特許第５，５５４，７４６号明細書；オリゴヌクレオチドの合成のための方法および材料に対する米国特許第５，５７１，９０２号明細書；アルキルチオ基を有しそのような基がヌクレオシドの任意の様々な位置に結合した他の部分とのリンカーとして用いられることを特徴とするヌクレオシドに対する米国特許第５，５７８，７１８号明細書；高いキラル純度のホスホロチオエート結合を有するオリゴヌクレオチドに対する米国特許第５，５８７，３６１号および第５，５９９，７９７号明細書；２’−Ｏ−アルキルグアノシン、および２，６−ジアミノプリン化合物を含む関連化合物の調製のための製法に対する米国特許第５，５０６，３５１号明細書；Ｎ−２置換プリンを有するオリゴヌクレオチドに対する米国特許第５，５８７，４６９号明細書；３−デアザプリンを有するオリゴヌクレオチドに対する米国特許第５，５８７，４７０号明細書；共に複合化４’−デスメチルヌクレオシドアナログに対する米国特許第５，２２３，１６８号明細書および米国特許第５，６０８，０４６号明細書；骨格修飾オリゴヌクレオチドアナログに対する米国特許第５，６０２，２４０号明細書および第５，６１０，２８９号明細書；特にＴ−フルオロ−オリゴヌクレオチドを合成する方法に対する米国特許第６，２６２，２４１号明細書、および第５，４５９，２５５号明細書。
【００７０】
本発明のリガンド複合化オリゴヌクレオチドおよびリガンド分子を有する配列特異的に結合したヌクレオシドでは、オリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオシドは、適当なＤＮＡ合成装置で、標準的なヌクレオチドまたはヌクレオシド前駆体、または既に結合部分を有するヌクレオチドまたはヌクレオシド複合体前駆体、既にリガンド分子を有するリガンド−ヌクレオチドまたはヌクレオシド−複合体前駆体、または非ヌクレオシドリガンドを有する構築単位を利用して組み立てることができる。
【００７１】
既に結合部分を有するヌクレオチド複合体前駆体を用いる時、配列特異的に結合したヌクレオシドの合成は典型的には完了し、およびリガンド分子が次いで結合部分と反応させられ、リガンド複合化オリゴヌクレオチドを形成する。ステロイド、ビタミン、脂質およびレポーター分子といった様々な分子を有するオリゴヌクレオチド複合体は以前に記載されている（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＣＴ出願国際公開第９３／０７８８３号パンフレットを参照）。好ましい一実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドまたは結合ヌクレオシドは、市販のおよびオリゴヌクレオチド合成に通常用いられる標準的なホスホロアミダイトおよび標準的でないホスホロアミダイトに加えて、リガンド−ヌクレオシド複合体に由来するホスホロアミダイトを用いて、自動合成装置によって合成される。
【００７２】
オリゴヌクレオチドのヌクレオシドへの２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−エチル、２’−Ｏ−プロピル、２’−Ｏ−アリール、２’−Ｏ−アミノアルキルまたは２’−デオキシ−２’−フルオロ基の組み込みは、オリゴヌクレオチドに高いハイブリダイゼーション特性を与える。さらに、ホスホロチオエート骨格を含むオリゴヌクレオチドは、高いヌクレアーゼ 安定性を有する。このように、本発明の官能化された結合ヌクレオシドは、ホスホロチオエート 骨格 または２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−エチル、２’−Ｏ−プロピル、２’−Ｏ− アミノアルキル、２’−Ｏ−アリール または ２’−デオキシ−２’−フルオロ 基のどちらかまたは両方を含むように増加させることができる。
【００７３】
一部の好ましい実施形態では、アミノ基を５’末端に有する本発明の官能化ヌクレオシド配列は、ＤＮＡ合成装置を用いて調製され、および次いで選択されたリガンドの活性エステル誘導体と反応させられる。活性エステル誘導体は当業者によく知られている。代表的な活性エステルは、Ｎ−ヒドロスクシンイミドエステル、テトラフルオロフェノールエステル、ペンタフルオロフェノールエステルおよびペンタクロロフェノールエステルを含む。アミノ基および活性エステルの反応は、選択されたリガンドが結合基を介して５’位に結合したオリゴヌクレオチドを生じる。５’末端のアミノ基は、５’−Ａｍｉｎｏ−ＭｏｄｉｆｉｅｒＣ６試薬を用いて調製されうる。好ましい一実施形態では、リガンド分子は、リガンドが５’−水酸基に直接、またはリンカーを介して間接的に結合していることを特徴とするリガンド−ヌクレオシドホスホロアミダイトの使用によって、５’位でオリゴヌクレオチドと複合化されうる。そのようなリガンド−ヌクレオシドホスホロアミダイトは、典型的には自動合成手順の最後に用いられ、リガンドを５’末端に有するリガンド複合化オリゴヌクレオチドを与える。
【００７４】
本発明の方法の好ましい一実施形態では、リガンド複合化オリゴヌクレオチドの調製は、リガンド分子を構築するための適当な前駆体分子の選択で始まる。典型的には、前駆体は、一般的に用いられるヌクレオシドの、適当に保護された誘導体である。たとえば、本発明のリガンド複合化オリゴヌクレオチドの合成のための合成前駆体は、分子の核酸塩基部分で保護されうる２’−アミノアルコキシ−５’−ＯＤＭＴ−ヌクレオシド、２’−６−アミノアルキルアミノ−５’−ＯＤＭＴ−ヌクレオシド、５’−６−アミノアルコキシ−２’−デオキシ−ヌクレオシド、５’−６−アミノアルコキシ−２−ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ−ヌクレオシド、３’−６−アミノアルコキシ−５’−ＯＤＭＴ−ヌクレオシド、および３’−アミノアルキルアミノ−５’−ＯＤＭＴ−ヌクレオシドを含むがそれらに限定されない。そのようなアミノ結合保護ヌクレオシド前駆体の合成のための方法は当業者に公知である。
【００７５】
多くの場合で、本発明の化合物の調製中に保護基が用いられる。ここでは、「保護」の語は、指定部分がそれに付属した保護基を有することを意味する。本発明の一部の好ましい実施形態では、化合物は一つ以上の保護基を含む。様々な保護基を本発明の方法に用いることができる。一般的に、保護基は、特定の反応条件に対して不活性である化学官能性を与え、および分子のそのような官能性から実質的に分子の残りを損傷することなく付加および除去されうる。
【００７６】
代表的なヒドロキシル保護基は、たとえば、Ｂｅａｕｃａｇｅ ｅｔ ａｌ．によって開示される（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９２，４８：２２２３−２３１１）。他のヒドロキシル保護基、および他の代表的な保護基は、Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｃｈａｐｔｅｒ ２，２ｄ ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１，およびＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｅｋｓｔｅｉｎ，Ｆ．Ｅｄ．，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ，１９９１に開示される。
【００７７】
ヒドロキシル保護基の例は、ｔ−ブチル、ｔ−ブトキシメチル、メトキシメチル、テトラヒドロピラニル、１−エトキシエチル、１−（２−クロロエトキシ）エチル、２−トリメチルシリルエチル、ｐ−クロロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、ベンジル、２，６−ジクロロベンジル、ジフェニルメチル、ｐ，ｐ’−ジニトロベンズヒドリル、ｐ−ニトロベンジル、トリフェニルメチル、トリメチルシリル、トリエチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、トリフェニルシリル、ギ酸ベンゾイル、酢酸、クロロ酢酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸、ピバロン酸、安息香酸、ｐ−フェニル安息香酸、炭酸９−フルオレニルメチル、メシル酸およびトシル酸を含むがそれらに限定されない。
【００７８】
酸処理に対して安定なアミノ保護基は、塩基処理で選択的に除去され、および置換に選択的に用いることができる反応性アミノ基を作製するのに使用される。そのような基の例は、Ｆｍｏｃ（Ｅ．Ａｔｈｅｒｔｏｎ ａｎｄ Ｒ．Ｃ．Ｓｈｅｐｐａｒｄ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，Ｓ．Ｕｄｅｎｆｒｉｅｎｄ，Ｊ．Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ，Ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｒｌａｎｄｏ，１９８７，ｖｏｌｕｍｅ ９，ｐ．１）およびＮｓｃ基に例示される様々な置換スルホニルエチルカルバメート（Ｓａｍｕｋｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９９４，３５：７８２１； Ｖｅｒｈａｒｔ ａｎｄ Ｔｅｓｓｅｒ，Ｒｅｃ．Ｔｒａｖ．Ｃｈｉｍ．Ｐａｙｓ−Ｂａｓ，１９８７，１０７：６２１）である。
【００７９】
他のアミノ保護基は、カルバメート保護基、たとえば２−トリメチルシリルエトキシカルボニル（Ｔｅｏｃ）、１−メチル−１−（４−ビフェニリル）エトキシカルボニル（Ｂｐｏｃ）、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、アリールオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、およびベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）；アミド保護基、たとえばホルミル、アセチル、トリハロアセチル、ベンゾイル、およびニトロフェニルアセチル；スルホンアミド保護基、たとえば２−ニトロベンゼンスルホニル；およびイミンおよび環状イミド保護基、たとえばフタルイミドおよびジチアスクシノイルを含むがそれらに限定されない。これらのアミノ保護基の同等物もまた本発明の化合物および方法によって包含される。多数の固相担体が市販されており、および当業者は固相合成段階に使用すべき固相担体を容易に選択できる。一部の実施形態では、ユニバーサル担体が用いられる。ユニバーサル担体は、オリゴヌクレオチドの３’末端に位置する異常なまたは修飾されたヌクレオシドを有するオリゴヌクレオチドの調製を可能にする。Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｓｕｐｐｏｒｔ ５００およびＵｎｉｖｅｒｓａｌ Ｓｕｐｐｏｒｔ IIは、Ｇｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ社（２２８２５ Ｄａｖｉｓ Ｄｒｉｖｅ，Ｓｔｅｒｌｉｎｇ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ）から市販されているユニバーサル担体である。ユニバーサル担体についてさらに詳細は、Ｓｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｉｎ ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ，１９９４，Ｅｄ．Ｒｏｇｅｒ Ｅｐｔｏｎ，Ｍａｙｆｌｏｗｅｒ Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ，１１５−１２４]； Ａｚｈａｙｅｖ，Ａ．Ｖ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９９９，５５，７８７−８００；およびＡｚｈａｙｅｖ ａｎｄ Ａｎｔｏｐｏｌｓｋｙ Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ２００１，５７，４９７７−４９８６を参照。加えて、塩基性加水分解をより容易に受けるｓｙｎ−１，２−アセトキシリン酸基を介してオリゴヌクレオチドが固相担体へ結合している場合、オリゴヌクレオチドはユニバーサル担体からより穏和な反応条件下で切断されうることが報告されている。Ｇｕｚａｅｖ，Ａ．Ｌ； Ｍａｎｏｈａｒａｎ，Ｍ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００３，１２５，２３８０を参照。
【００８０】
本発明の化合物の治療的使用
本発明の好ましい一実施形態では、ヌクレオシドに結合したリガンドは、オリゴヌクレオチド治療剤または診断剤の薬物動態学的特性を高める。好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチドはｓｉＲＮＡである。そのような薬物動態学的特性の改善は、アンチセンス化合物の血清タンパク質との結合の増加、アンチセンス化合物の血漿濃度の増大、組織分布の増加、アンチセンス化合物の血清タンパク質との結合能力の増加、および半減期の増大を含む。
【００８１】
本発明は、血清中でのオリゴヌクレオチドの濃度を高めるための方法を提供する。そのような方法によると、リガンドがオリゴヌクレオチドと複合化し、そのようにして複合化オリゴヌクレオチドを形成する。この複合化オリゴヌクレオチドは次いで血清に添加される。
【００８２】
本発明はさらに、オリゴヌクレオチドに対する血清の容量を高めるための方法を提供する。そのような方法によると、リガンドがオリゴヌクレオチドと複合化し、そのようにして複合化オリゴヌクレオチドを形成する。この複合化オリゴヌクレオチドは次いで血清に添加される。
【００８３】
本発明はまた、血管系の一部へのオリゴヌクレオチドの結合を増加させるための方法を提供する。そのような方法によると、一部が循環する血清中に、および一部が血管系の非循環部分に存在する血管タンパク質が選択される。次いで、たとえばナプロキセンのようなリガンドが、オリゴヌクレオチドと複合化して複合化オリゴヌクレオチドを形成し、それが次いで血管系に添加される。
【００８４】
本発明はさらに、細胞におけるオリゴヌクレオチドの細胞取り込みを促進するための方法を提供する。そのような方法によると、細胞タンパク質が選択される。この細胞タンパク質は、細胞膜上に存在しおよび一部が細胞外へ伸長しそのためこの細胞タンパク質の一部が細胞膜の外側へ伸長するタンパク質である。次に、リガンドがオリゴヌクレオチドと複合化して複合化オリゴヌクレオチドを形成する。この複合化オリゴヌクレオチドが次いで、オリゴヌクレオチドの細胞取り込みを促進すべき細胞と接触させられる。好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチドはｓｉＲＮＡである。
【００８５】
本発明はまた、生物を本発明のオリゴヌクレオチドと接触させることを含み、前記オリゴヌクレオチドがリガンドと複合化している、オリゴヌクレオチドの細胞取り込みを増加させるための方法を提供する。本発明の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチドによって標的にされるタンパク質は血清タンパク質である。リガンド複合化オリゴヌクレオチド化合物によって標的にされる血清タンパク質は免疫グロブリン（抗体）であることが好ましい。好ましい免疫グロブリンは、免疫グロブリンＧおよび免疫グロブリンＭである。免疫グロブリンは、脊椎動物の血清および組織中に現れることが知られている。
【００８６】
本発明の別の一実施形態では、オリゴヌクレオチドによって標的にされる血清タンパク質は、リポタンパク質である。リポタンパク質は、一般的に２０，０００を上回る分子量を有し脂質を持ちおよび特異的細胞表面受容体によって認識される血中タンパク質である。血清中でのリポタンパク質との結合はまず、半減期および分布といった薬物動態学的パラメーターを増加させる。次の考慮すべき事項は、リポタンパク質が受容体媒介エンドサイトーシスを介して細胞取り込みを増大させる能力である。
【００８７】
さらに別の一実施形態では、リガンド複合化オリゴヌクレオチド化合物によって標的にされる血清タンパク質は、α−２−マクログロブリンである。さらに別の一実施形態では、リガンド複合化オリゴヌクレオチドによって標的にされる血清タンパク質は、α−１−糖タンパク質である。
【００８８】
遺伝子および疾患
本発明の一態様は、望ましくない細胞増殖、たとえば、悪性または非悪性細胞増殖の危険があるかまたはそれに罹患した対象を治療する方法に関する。本方法は、望ましくない細胞増殖を促進する遺伝子とオリゴヌクレオチドが相同でありおよびたとえば切断によってその遺伝子を発現抑制できることを特徴とするリガンド複合化オリゴヌクレオチド剤を提供すること；およびそのリガンド複合化オリゴヌクレオチド剤の治療上有効な用量を、対象、好ましくはヒト対象へ投与することを含む。
【００８９】
好ましい一実施形態では、遺伝子は増殖因子または増殖因子受容体遺伝子、キナーゼ、たとえば、タンパク質チロシン、セリンまたはスレオニンキナーゼ遺伝子、アダプタータンパク質遺伝子、Ｇタンパク質スーパーファミリー分子をコードする遺伝子、または転写因子をコードする遺伝子である。
【００９０】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＰＤＧＦベータ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＰＤＧＦベータ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、精巣癌および肺癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【００９１】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＥｒｂ−Ｂ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＥｒｂ−Ｂ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、乳癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【００９２】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＳｒｃ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＳｒｃ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、大腸癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【００９３】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＣＲＫ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＣＲＫ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、大腸癌および肺癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【００９４】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＧＲＢ２遺伝子を発現抑制し、およびしたがって望ましくないＧＲＢ２発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、扁平上皮細胞癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【００９５】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＲＡＳ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＲＡＳ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、膵癌、大腸癌および肺癌、および慢性白血病を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【００９６】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＭＥＫＫ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＭＥＫＫ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、扁平上皮細胞癌、黒色腫または白血病を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【００９７】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＪＮＫ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＪＮＫ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、膵癌または乳癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【００９８】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＲＡＦ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＲＡＦ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、肺癌または白血病を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【００９９】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＥｒｋ１／２遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＥｒｋ１／２発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、肺癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１００】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＰＣＮＡ（ｐ２１）遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＰＣＮＡ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、肺癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１０１】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＭＹＢ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＭＹＢ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、大腸癌または慢性骨髄性白血病を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１０２】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はｃ−ＭＹＣ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないｃ−ＭＹＣ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、バーキットリンパ腫または神経芽細胞腫を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１０３】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＪＵＮ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＪＵＮ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、卵巣癌、前立腺癌または乳癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１０４】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＦＯＳ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＦＯＳ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、皮膚癌または前立腺癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１０５】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＢＣＬ−２遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＢＣＬ−２発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、肺癌または前立腺癌または非ホジキンリンパ腫を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１０６】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はサイクリンＤ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないサイクリンＤ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、食道癌および大腸癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１０７】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＶＥＧＦ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＶＥＧＦ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、食道癌および大腸癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１０８】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＥＧＦＲ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＥＧＦＲ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、乳癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１０９】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はサイクリンＡ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないサイクリンＡ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、肺癌および子宮頸癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１１０】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はサイクリンＥ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないサイクリンＥ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、肺癌および乳癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１１１】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＷＮＴ−１遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＷＮＴ−１発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、基底細胞癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１１２】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はベータ−カテニン遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないベータ−カテニン発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、腺癌または肝細胞癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１１３】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はｃ−ＭＥＴ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないｃ−ＭＥＴ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、肝細胞癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１１４】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＰＫＣ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＰＫＣ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、乳癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１１５】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＮＦＫＢ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＮＦＫＢ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、乳癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１１６】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＳＴＡＴ３遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＳＴＡＴ３発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、前立腺癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１１７】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はサバイビン遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないサバイビン発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、子宮頸癌または膵癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１１８】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＨｅｒ２／Ｎｅｕ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＨｅｒ２／Ｎｅｕ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、乳癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１１９】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はトポイソメラーゼＩ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないトポイソメラーゼＩ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、卵巣癌および大腸癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１２０】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はトポイソメラーゼIIアルファ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないトポイソメラーゼII発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、乳癌および大腸癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１２１】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はｐ７３遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないｐ７３発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、結腸直腸腺癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１２２】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、肝癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１２３】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はｐ２７（ＫＩＰ１）遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないｐ２７（ＫＩＰ１）発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、肝癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１２４】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＰＰＭ１Ｄ遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＰＰＭ１Ｄ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、乳癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１２５】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＲＡＳ遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＲＡＳ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、乳癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１２６】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はカベオリンＩ遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないカベオリンＩ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、食道扁平上皮細胞癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１２７】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＭＩＢ Ｉ遺伝子における突然変異を発現抑制し、および したがって、望ましくないＭＩＢ Ｉ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、男性乳癌（ＭＢＣ）を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１２８】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＭＴＡＩ遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＭＴＡＩ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、卵巣癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１２９】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＭ６８遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＭ６８発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、食道、胃、大腸、および直腸のヒト腺癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１３０】
好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は腫瘍抑制因子遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、アポトーシス活性を促進する方法として化学療法と組み合わせて用いることができる。
【０１３１】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はｐ５３腫瘍抑制因子遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないｐ５３発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、胆嚢癌、膵癌および肺癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１３２】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はｐ５３ファミリーメンバーＤＮ−ｐ６３における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＤＮ−ｐ６３発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、扁平上皮細胞癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１３３】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はｐＲｂ腫瘍抑制因子遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないｐＲｂ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、口腔扁平上皮細胞癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１３４】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＡＰＣ１腫瘍抑制因子遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＡＰＣ１発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、大腸癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１３５】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＢＲＣＡ１腫瘍抑制因子遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＢＲＣＡ１発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、乳癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１３６】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＰＴＥＮ腫瘍抑制因子遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＰＴＥＮ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、過誤腫、神経膠腫、および前立腺癌および子宮体癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１３７】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＭＬＬ融合遺伝子、たとえばＭＬＬ−ＡＦ９を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＭＬＬ融合遺伝子発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、急性白血病を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１３８】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＢＣＲ／ＡＢＬ融合遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＢＣＲ／ＡＢＬ融合遺伝子発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、急性および慢性白血病を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１３９】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＴＥＬ／ＡＭＬ１融合遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＴＥＬ／ＡＭＬ１融合遺伝子発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、小児急性白血病を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１４０】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＥＷＳ／ＦＬＩ１融合遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＥＷＳ／ＦＬＩ１融合遺伝子発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、ユーイング肉腫を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１４１】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＴＬＳ／ＦＵＳ１融合遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＴＬＳ／ＦＵＳ１融合遺伝子発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、粘液性脂肪肉腫を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１４２】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＰＡＸ３／ＦＫＨＲ融合遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＰＡＸ３／ＦＫＨＲ融合遺伝子発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、粘液性脂肪肉腫を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１４３】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＡＭＬ１／ＥＴＯ融合遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＡＭＬ１／ＥＴＯ融合遺伝子発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、急性白血病を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１４４】
本発明の別の一態様は、血管新生阻害によって利益を受ける可能性がある疾患または障害、たとえば、癌の危険があるかまたはそれに罹患した対象、たとえばヒトを治療する方法に関する。本方法は、血管新生を媒介する遺伝子とオリゴヌクレオチドが相同でありおよびたとえば切断によってその遺伝子を発現抑制できることを特徴とするリガンド複合化オリゴヌクレオチド剤を提供すること；およびそのリガンド複合化オリゴヌクレオチド剤の治療上有効な用量を、対象、好ましくはヒト対象へ投与することを含む。
【０１４５】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はアルファｖ−インテグリン遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないアルファＶインテグリンによって特徴づけられる疾患、たとえば、脳腫瘍または上皮起源の腫瘍を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１４６】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＦｌｔ−１受容体遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＦｌｔ−１受容体によって特徴づけられる疾患、たとえば、癌および関節リウマチを有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１４７】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はチューブリン遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないチューブリンによって特徴づけられる疾患、たとえば、癌および網膜血管新生を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１４８】
本発明の別の一態様は、ウイルスに感染したかまたはウイルス感染に伴う障害または疾患の危険があるかまたはそれに罹患した対象を治療する方法に関する。本方法は、たとえば侵入または増殖のようなウイルス機能を媒介する細胞遺伝子のウイルス遺伝子とオリゴヌクレオチドが相同でありおよびたとえば切断によってその遺伝子を発現抑制できることを特徴とするリガンド複合化オリゴヌクレオチド剤を提供すること；およびそのリガンド複合化オリゴヌクレオチド剤の治療上有効な用量を、対象、好ましくはヒト対象へ投与することを含む。
【０１４９】
したがって、本発明は、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）に感染したかまたはＨＰＶに媒介される疾患、たとえば子宮頸癌の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を提供する。ＨＰＶは子宮頸癌の９５％と関連し、およびしたがって抗ウイルス治療はこれらの癌およびウイルス感染の他の症状を治療するための魅力的な方法である。
【０１５０】
好ましい一実施形態では、ＨＰＶ遺伝子の発現が低減される。別の好ましい一実施形態では、ＨＰＶ遺伝子はＥ２、Ｅ６またはＥ７の群のうちの一つである。
【０１５１】
好ましい一実施形態では、ＨＰＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１５２】
本発明はまた、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染したかまたはＨＩＶに媒介される疾患、たとえば、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を含む。好ましい一実施形態では、ＨＩＶ遺伝子の発現が低減される。別の好ましい一実施形態では、ＨＩＶ遺伝子はＣＣＲ５、ＧａｇまたはＲｅｖである。好ましい一実施形態では、ＨＩＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。別の好ましい一実施形態では、遺伝子はＣＤ４またはＴｓｇ１０１である。
【０１５３】
本発明はまた、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）に感染したかまたはＨＢＶに媒介される疾患、たとえば、肝硬変および肝細胞癌の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を含む。好ましい一実施形態では、ＨＢＶ遺伝子の発現が低減される。別の好ましい一実施形態では、標的とされるＨＢＶ遺伝子は、ＨＢＶコアタンパク質の尾部領域、プレｃｒｅｇｉｏｕｓ（プレｃ）領域、またはｃｒｅｇｉｏｕｓ（ｃ）領域の群のうち一つをコードする。別の好ましい一実施形態では、標的にされるＨＢＶ−ＲＮＡ配列はポリ（Ａ）尾部から成る。好ましい実施形態では、ＨＢＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１５４】
本発明はまた、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）に感染したかまたはＨＡＶに媒介される疾患の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を提供する。好ましい一実施形態では、ＨＡＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１５５】
本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染したかまたはＨＣＶに媒介される疾患、たとえば、肝硬変の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を提供する。好ましい一実施形態では、ＨＣＶ遺伝子の発現が低減される。別の好ましい一実施形態では、ＨＣＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１５６】
本発明はまた、Ｄ、Ｅ、Ｆ、ＧまたはＨ型肝炎を含む肝炎ウイルス株の群のいずれかに感染した患者、または任意のこれらの肝炎株に媒介される疾患の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を提供する。好ましい一実施形態では、Ｄ、Ｅ、Ｆ、ＧまたはＨ型肝炎遺伝子の発現が低減される。別の好ましい一実施形態では、Ｄ、Ｅ、Ｆ、ＧまたはＨ型肝炎複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１５７】
本発明の方法はまた、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）に感染したかまたはＲＳＶに媒介される疾患、たとえば乳児下気道感染症および小児喘息、肺炎およびたとえば高齢者における他の合併症、の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を提供する。好ましい一実施形態では、ＲＳＶ遺伝子の発現が低減される。別の好ましい一実施形態では、標的とされるＨＢＶ遺伝子は遺伝子Ｎ、ＬまたはＰの群のうち一つをコードする。好ましい一実施形態では、ＲＳＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１５８】
本発明の方法は、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）に感染したかまたはＨＳＶに媒介される疾患、たとえば性器ヘルペスおよびヘルペスおよび主に免疫低下患者における生命に関わるまたは視覚障害を生じる疾患の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を提供する。好ましい一実施形態では、ＨＳＶ遺伝子の発現が低減される。別の好ましい一実施形態では、標的とされるＨＳＶ遺伝子はＤＮＡポリメラーゼまたはヘリカーゼ−プライマーゼをコードする。好ましい一実施形態では、ＨＳＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１５９】
本発明はまた、ヘルペスサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）に感染したかまたはＣＭＶに媒介される疾患、たとえば、先天性ウイルス感染、および免疫低下患者における合併症の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を提供する。好ましい一実施形態では、ＣＭＶ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、ＣＭＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１６０】
本発明の方法はまた、ヘルペス・エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）に感染したかまたはＥＢＶに媒介される疾患、たとえば、ＮＫ／Ｔ−細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、およびホジキン病の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を提供する。好ましい一実施形態では、ＥＢＶ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、ＥＢＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１６１】
本発明の方法はまた、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、別名ヒトヘルペスウイルス８に感染した患者、またはＫＳＨＶに媒介される疾患、たとえば、カポジ肉腫、多中心性キャッスルマン病およびＡＩＤＳ関連原発性滲出性リンパ腫の危険があるかまたはそれに罹患した患者の治療を提供する。好ましい一実施形態では、ＫＳＨＶ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、ＫＳＨＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１６２】
本発明はまた、ＪＣウイルス（ＪＣＶ）に感染した患者またはこのウイルスに関連する疾患または障害、たとえば、進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）を治療するための方法を含む。好ましい一実施形態では、ＪＣＶ遺伝子の発現が低減される。好ましい実施形態では、ＪＣＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１６３】
本発明の方法はまた、ミクソウイルスに感染したかまたはミクソウイルスに媒介される疾患、たとえば、インフルエンザの危険があるかまたはそれに罹患した患者の治療を提供する。好ましい一実施形態では、ミクソウイルス遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、ミクソウイルス複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１６４】
本発明の方法はまた、ライノウイルスに感染したかまたはライノウイルスに媒介される疾患、たとえば、感冒の危険があるかまたはそれに罹患した患者の治療を提供する。好ましい一実施形態では、ライノウイルス遺伝子の発現が低減される。好ましい実施形態では、ライノウイルス複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１６５】
本発明の方法はまた、コロナウイルスに感染したかまたはコロナウイルスに媒介される疾患、たとえば、感冒の危険があるかまたはそれに罹患した患者の治療を提供する。好ましい一実施形態では、コロナウイルス遺伝子の発現が低減される。好ましい実施形態では、コロナウイルス複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１６６】
本発明の方法はまた、西ナイル・フラビウイルスに感染したかまたは西ナイルウイルスに媒介される疾患の危険があるかまたはそれに罹患した患者の治療を提供する。好ましい一実施形態では、西ナイルウイルス遺伝子の発現が低減される。別の好ましい一実施形態では、西ナイルウイルス遺伝子はＥ、ＮＳ３またはＮＳ５を含む群のうちの一つである。好ましい一実施形態では、西ナイルウイルス複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１６７】
本発明の方法はまた、セントルイス脳炎フラビウイルスに感染したかまたはこのウイルスに関連する疾患、たとえば、ウイルス性出血熱または神経疾患の危険があるかまたはそれに罹患した患者の治療を提供する。好ましい一実施形態では、セントルイス脳炎遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、セントルイス脳炎ウイルス複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１６８】
本発明の方法はまた、ダニ媒介脳炎フラビウイルスに感染したかまたはダニ媒介脳炎ウイルスに媒介される疾患、たとえば、ウイルス性出血熱および神経疾患の危険があるかまたはそれに罹患した患者の治療を提供する。好ましい一実施形態では、ダニ媒介脳炎ウイルス遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、ダニ媒介脳炎ウイルス複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１６９】
本発明の方法はまた、一般的にウイルス性出血熱および神経疾患を結果として生じるマレー渓谷脳炎フラビウイルスに感染した患者を治療する方法を提供する。好ましい一実施形態では、マレー渓谷脳炎ウイルス遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、マレー渓谷脳炎ウイルス複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１７０】
本発明はまた、デング・フラビウイルスに感染した患者、またはこのウイルスに関連する疾患または障害、たとえば、デング出血熱を治療するための方法を含む。好ましい一実施形態では、デングウイルス遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、デングウイルス複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１７１】
本発明の方法はまた、サルウイルス４０（ＳＶ４０）に感染したかまたはＳＶ４０に媒介される疾患、たとえば、腫瘍形成の危険があるかまたはそれに罹患した患者の治療を提供する。好ましい一実施形態では、ＳＶ４０遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、ＳＶ４０複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１７２】
本発明はまた、ヒトＴ細胞白血病ウイルス（ＨＴＬＶ）に感染した患者、またはこのウイルスに関連する疾患または障害、たとえば、白血病およびミエロパシーを治療するための方法を含む。好ましい一実施形態では、ＨＴＬＶ遺伝子の発現が低減される。別の好ましい一実施形態では、ＨＴＬＶ１遺伝子はＴａｘ転写活性化因子である。好ましい一実施形態では、ＨＴＬＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１７３】
本発明の方法はまた、モロニーマウス白血病ウイルス（Ｍｏ−ＭｕＬＶ）に感染したかまたはＭｏ−ＭｕＬＶに媒介される疾患、たとえば、Ｔ細胞白血病の危険があるかまたはそれに罹患した患者の治療を提供する。好ましい一実施形態では、Ｍｏ−ＭｕＬＶ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、Ｍｏ−ＭｕＬＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１７４】
本発明の方法はまた、脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）に感染したかまたはＥＭＣＶに媒介される疾患、たとえば心筋炎の危険があるかまたはそれに罹患した患者の治療を提供する。ＥＭＣＶはマウスおよびブタで心筋炎に繋がり、およびヒト心筋細胞を感染させる能力がある。このウイルスは、したがって、異種移植を受ける患者にとって重要である。好ましい一実施形態では、ＥＭＣＶ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、ＥＭＣＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１７５】
本発明はまた、麻疹ウイルス（ＭＶ）に感染したかまたはＭＶに媒介される疾患、たとえば、麻疹の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を含む。好ましい一実施形態では、ＭＶ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、ＭＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１７６】
本発明はまた、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）に感染したかまたはＶＺＶに媒介される疾患、たとえば水痘または帯状疱疹の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を含む。好ましい一実施形態では、ＶＺＶ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、ＶＺＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１７７】
本発明はまた、アデノウイルスに感染したかまたはアデノウイルスに媒介される疾患、たとえば気道感染の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を含む。好ましい一実施形態では、アデノウイルス遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、アデノウイルス複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１７８】
本発明は、黄熱ウイルス（ＹＦＶ）に感染したかまたはＹＦＶに媒介される疾患、たとえば気道感染の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を含む。好ましい一実施形態では、ＹＦＶ遺伝子の発現が低減される。別の好ましい一実施形態では、好ましい遺伝子はＥ、ＮＳ２ＡまたはＮＳ３遺伝子を含む群のうちの一つである。好ましい一実施形態では、ＹＦＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１７９】
本発明の方法はまた、ポリオウイルスに感染したかまたはポリオウイルスに媒介される疾患、たとえば、ポリオの危険があるかまたはそれに罹患した患者の治療を提供する。好ましい一実施形態では、ポリオウイルス遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、ポリオウイルス複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１８０】
本発明の方法はまた、ポックスウイルスに感染したかまたはポックスウイルスに媒介される疾患、たとえば天然痘の危険があるかまたはそれに罹患した患者の治療を提供する。好ましい一実施形態では、ポックスウイルス遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、ポックスウイルス複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１８１】
別の一態様では、本発明は、病原体、たとえば、細菌、アメーバ、寄生虫または真菌病原体に感染した対象を治療する方法を扱う。本方法は、病原体遺伝子とオリゴヌクレオチドが相同でありおよびたとえば切断によってその遺伝子を発現抑制できることを特徴とするリガンド複合化オリゴヌクレオチド剤を提供すること；およびそのリガンド複合化オリゴヌクレオチド剤の治療上有効な用量を、対象、好ましくはヒト対象へ投与することを含む。
【０１８２】
標的遺伝子は、増殖、細胞壁合成、タンパク質合成、転写、エネルギー代謝、たとえば、クレブス回路、または毒素産生に関与するものでありうる。したがって、本発明は、マラリアを引き起こすマラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）に感染した患者を治療する方法を提供する。好ましい一実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ遺伝子の発現が低減される。別の好ましい一実施形態では、遺伝子は頂端膜抗原１（ＡＭＡ１）である。好ましい一実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１８３】
本発明はまた、マイコバクテリウム・アルセランス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ）に感染した患者、またはこの病原体に関連する疾患または障害、たとえばブルーリ潰瘍を治療するための方法を含む。好ましい一実施形態では、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１８４】
本発明はまた、ヒト結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）に感染した患者、またはこの病原体に関連する疾患または障害、たとえば結核を治療するための方法を含む。好ましい一実施形態では、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１８５】
本発明はまた、ハンセン菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ）に感染した患者、またはこの病原体に関連する疾患または障害、たとえばハンセン病を治療するための方法を含む。好ましい一実施形態では、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１８６】
本発明はまた、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）に感染した患者、またはこの病原体に関連する疾患または障害、たとえば皮膚および粘膜の感染を治療するための方法を含む。好ましい一実施形態では、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１８７】
本発明はまた、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に感染した患者、またはこの病原体に関連する疾患または障害、たとえば肺炎または小児下気道感染を治療するための方法を含む。好ましい一実施形態では、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１８８】
本発明はまた、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）に感染した患者、またはこの病原体に関連する疾患または障害、たとえば連鎖球菌性扁桃腺炎または猩紅熱を治療するための方法を含む。好ましい一実施形態では、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１８９】
本発明はまた、クラミジア肺炎病原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に感染した患者、またはこの病原体に関連する疾患または障害、たとえば肺炎または小児下気道感染を治療するための方法を含む。好ましい一実施形態では、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１９０】
本発明はまた、肺炎マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に感染した患者、またはこの病原体に関連する疾患または障害、たとえば肺炎または小児下気道感染を治療するための方法を含む。好ましい一実施形態では、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１９１】
本発明の別の一態様は、望ましくない免疫応答によって特徴づけられる疾患または障害、たとえば炎症性疾患または障害、または自己免疫疾患または障害の危険があるかまたはそれに罹患した対象、たとえばヒトを治療する方法に関する。本方法は、望ましくない免疫応答を媒介する遺伝子とオリゴヌクレオチド剤が相同でありおよびたとえば切断によってその遺伝子を発現抑制できることを特徴とするリガンド複合化オリゴヌクレオチド剤を提供すること；および前記リガンド複合化オリゴヌクレオチド剤の治療上有効な用量を、対象、好ましくはヒト対象へ投与することを含む。好ましい一実施形態では、疾患または障害は、虚血または再灌流傷害、たとえば、急性心筋梗塞に随伴する虚血または再灌流傷害、不安定狭心症、心肺バイパス、外科的介入、たとえば血管形成術、たとえば経皮経管冠動脈形成術、移植臓器または組織、たとえば移植心または血管組織に対する反応；または血栓溶解である。好ましい一実施形態では、疾患または障害は、再狭窄、たとえば、外科的介入、たとえば血管形成術、たとえば、経皮経管冠動脈形成術に随伴する再狭窄である。好ましい一実施形態では、疾患または障害は炎症性腸疾患、たとえば、クローン病または潰瘍性大腸炎である。好ましい一実施形態では、疾患または障害は、感染または傷害に随伴する炎症である。好ましい一実施形態では、疾患または障害は、喘息、狼瘡、多発性硬化症、糖尿病、たとえばII型糖尿病、関節炎、たとえば、関節リウマチまたは乾癬性関節炎である。特に好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は、インテグリンまたはその共リガンド、たとえば、ＶＬＡ４、ＶＣＡＭ、ＩＣＡＭを発現抑制する。特に好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は、セレクチンまたはその共リガンド、たとえば、Ｐ−セレクチン、Ｅ−セレクチン（ＥＬＡＭ）、Ｉ−セレクチン、Ｐ−セレクチン糖タンパク質−１（ＰＳＧＬ−１）を発現抑制する。特に好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は、補体系の成分、たとえば、Ｃ３、Ｃ５、Ｃ３ａＲ、Ｃ５ａＲ、Ｃ３コンバターゼ、Ｃ５コンバターゼを発現抑制する。
【０１９２】
特に好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は、ケモカインまたはその受容体、たとえば、ＴＮＦＩ、ＴＮＦＪ、ＩＬ−１Ｉ、ＩＬ−１Ｊ、ＩＬ−２、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−４、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦＲＩ、ＴＮＦＲII、ＩｇＥ、ＳＣＹＡ１１、ＣＣＲ３を発現抑制する。
【０１９３】
別の実施形態ではオリゴヌクレオチド剤は、ＧＣＳＦ、Ｇｒｏ１、Ｇｒｏ２、Ｇｒｏ３、ＰＦ４、ＭＩＧ、胞体突起塩基性タンパク質（ＰＰＢＰ）、ＭＩＰ−１Ｉ、ＭＩＰ−１Ｊ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２、ＭＣＰ−３、ＣＭＢＫＲ１、ＣＭＢＫＲ２、ＣＭＢＫＲ３、ＣＭＢＫＲ５、ＡＩＦ−１、Ｉ−３０９を発現抑制する。
【０１９４】
本発明の別の一態様は、急性疼痛または慢性疼痛の危険があるかまたはそれに罹患した対象、たとえばヒトを治療する方法を扱う。本方法は、リガンドが芳香族基でありおよび疼痛の処理を媒介する遺伝子とオリゴヌクレオチドが相同でありおよびたとえば切断によってその遺伝子を発現抑制できることを特徴とするリガンド複合化オリゴヌクレオチド剤を提供すること；および前記リガンド複合化オリゴヌクレオチド剤の治療上有効な用量を、対象、好ましくはヒト対象へ投与することを含む。特に好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はイオンチャンネルの成分を発現抑制する。特に好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は神経伝達物質受容体またはリガンドを発現抑制する。
【０１９５】
本発明の別の一態様は、神経疾患または障害の危険があるかまたはそれに罹患した対象、たとえばヒトを治療する方法に関する。本方法は、リガンドが芳香族基でありおよび神経疾患または障害を媒介する遺伝子とオリゴヌクレオチドが相同でありおよびたとえば切断によってその遺伝子を発現抑制できることを特徴とするリガンド複合化オリゴヌクレオチド剤を提供すること；および前記リガンド複合化オリゴヌクレオチド剤の治療上有効な用量を、対象、好ましくはヒト対象へ投与することを含む。好ましい一実施形態では、疾患または障害はアルツハイマー病またはパーキンソン病である。特に好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は、アミロイドファミリー遺伝子、たとえばＡＰＰ；プレセニリン遺伝子、たとえばＰＳＥＮ１およびＰＳＥＮ２、またはＩ−シヌクレインを発現抑制する。好ましい一実施形態では、疾患または障害は、神経変性トリヌクレオチド反復障害、たとえば、ハンチントン病、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症または脊髄小脳変性症、たとえば、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３（マシャド・ジョセフ病）、ＳＣＡ７またはＳＣＡ８である。
【０１９６】
特に好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＨＤ、ＤＲＰＬＡ、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＭＪＤ１、ＣＡＣＮＬ１Ａ４、ＳＣＡ７、ＳＣＡ８を発現抑制する。
【０１９７】
ヘテロ接合性の消失（ＬＯＨ）は、ＬＯＨの領域のたとえば遺伝子の配列について、ヘミ接合性を結果として生じうる。これは、正常状態細胞と疾患状態細胞、たとえば癌細胞との間の重大な遺伝的差異を結果として生じる可能性があり、および正常状態細胞と疾患状態細胞、たとえば癌細胞との間の有用な差を提供する。この差は、遺伝子または他の配列が正倍数細胞ではヘテロ接合性であるがしかしＬＯＨを有する細胞ではヘミ接合性であるために起こりうる。ＬＯＨの領域はしばしば、その遺伝子の消失が望ましくない増殖を促進する遺伝子、たとえば腫瘍抑制因子遺伝子、および、たとえば他の遺伝子、一部の場合には正常な機能たとえば増殖に必須である遺伝子を含む他の配列を含む。本発明の方法は、一部が、本発明のリガンド複合化オリゴヌクレオチド剤を用いた、必須遺伝子の一つの対立遺伝子の特異的切断またはサイレンシングに依存する。オリゴヌクレオチド剤は、ＬＯＨを有する細胞に見られる必須遺伝子の単一の対立遺伝子を標的にするがしかしＬＯＨを示さない細胞に存在するもう一方の対立遺伝子を発現抑制しないように選択される。本質的に、そのオリゴヌクレオチド剤は二つの対立遺伝子を識別し、選択された対立遺伝子を優先的に発現抑制する。本質的に、多形、たとえばＬＯＨに影響される必須遺伝子のＳＮＰが、ＬＯＨを有する細胞、たとえば、ＬＯＨを有する癌細胞によって特徴づけられる疾患についての標的として用いられる。たとえば、当業者は、腫瘍抑制因子遺伝子に近接しおよび腫瘍抑制因子遺伝子を含むＬＯＨ領域内にある、必須遺伝子を同定できる。ヒトＲＮＡポリメラーゼIIの大サブユニットをコードする遺伝子ＰＯＬＲ２Ａは、腫瘍抑制因子遺伝子ｐ５３の近傍に位置する遺伝子であるが、そのような遺伝子である。それはしばしば癌細胞ではＬＯＨの領域内に存在する。ＬＯＨ領域内に存在しおよび多数の癌細胞型では消失している他の遺伝子は、複製タンパク質Ａ７０−ｋＤａサブユニット、複製タンパク質Ａ３２−ｋＤ、リボヌクレオチドレダクターゼ、チミジンシンターゼ、ＴＡＴＡ関連因子２Ｈ、リボソームタンパク質Ｓ１４、真核開始因子５Ａ、アラニルｔＲＮＡシンターゼ、システイニルｔＲＮＡシンターゼ、ＮａＫＡＴＰアーゼ、アルファ−１サブユニット、およびトランスフェリン受容体を含む群を含む。
【０１９８】
したがって、本発明の別の一態様は、ＬＯＨによって特徴づけられる疾患、たとえば癌を治療する方法に関する。本方法はｃｏｍｐｒｉｓｅｓ 必要に応じて、ＬＯＨの領域中の遺伝子の対立遺伝子の遺伝子型を決定すること、 および 好ましくは正常細胞中のその遺伝子の両方の対立遺伝子の遺伝子型を決定すること； ＬＯＨ 細胞にみられる対立遺伝子を優先的に切断または発現抑制するリガンド複合化オリゴヌクレオチド剤を提供すること；および前記リガンド複合化オリゴヌクレオチド剤の治療上有効な用量を、対象、好ましくはヒトへ投与することを含む。
【０１９９】
本発明はまた、ここで開示されるリガンド複合化オリゴヌクレオチド剤、たとえば多形遺伝子の一つの対立遺伝子を優先的に発現抑制、たとえば切断できるオリゴヌクレオチド剤を含む。
【０２００】
別の一態様では、本発明は、リガンド複合化オリゴヌクレオチド剤を用いて二つ以上の遺伝子を切断または発現抑制する方法を提供する。これらの実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は、二つ以上の遺伝子に見出される配列と十分なホモロジーを有するように選択される。たとえば、配列ＡＡＧＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＡＣＡＴＧＧＡＧＡＴはマウス・ラミンＢ１、ラミンＢ２、ケラチン複合体２遺伝子１およびラミンＡ／Ｃ間で保存されている。したがって、この配列を標的とするオリゴヌクレオチド剤は、その遺伝子の集合全体を効果的に発現抑制する。
【０２０１】
本発明はまた、二つ以上の遺伝子を発現抑制できる、リガンド複合化オリゴヌクレオチド剤を含む。
【０２０２】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチドはｓｉＲＮＡである。
【０２０３】
本発明の化合物
本発明の化合物は、リガンドが共有結合によって、ピリミジンを持つヌクレオチドのＣ５位に結合していることを特徴とする、リガンドを持つオリゴヌクレオチドに関する。一部の実施形態では、本発明の化合物は、リガンドが二本の鎖のうち一方だけの、少なくとも一つのヌクレオシドに結合していることを特徴とする、二本鎖オリゴヌクレオチド配列に関する。一部の実施形態では、本発明の化合物は、両方の鎖の少なくとも一つのヌクレオシドが結合したリガンドを含むことを特徴とする、二本鎖オリゴヌクレオチド配列に関する。好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチドはｓｉＲＮＡである。一部の実施形態では、本発明は少なくとも一つのリガンドを含む一本鎖オリゴヌクレオチドに関する。リガンドはオリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改善する。
【０２０４】
ヌクレオシドは、リンを含むまたはリンを含まない共有結合ヌクレオシド間結合によって結合される。特定のために、リガンド複合化ヌクレオシドは、リガンドを持つヌクレオシドまたはリガンド−ヌクレオシド複合体と特徴づけることができる。ヌクレオシドと配列内で複合化したリガンドを有する結合ヌクレオシドは、複合化していない同様のオリゴヌクレオチドと比較して生物学的活性の増大を示す。
【０２０５】
本発明のリガンド複合化オリゴヌクレオチドはまた、リガンドがヌクレオシドまたはヌクレオチドと直接結合していることを特徴とし、リンカー基が単に結合であることを特徴とする、オリゴヌクレオチドおよび結合ヌクレオシドの複合体を含む。リガンドは好ましく、結合基を介して、リガンドのカルボキシル、アミノまたはオキソ基で結合されうる。典型的な結合基は、エステル、アミドまたはカルバメート基でありうる。
【０２０６】
本発明のリガンド複合化オリゴヌクレオチドにおける使用のために想定される好ましい修飾ヌクレオチドの具体例は、修飾骨格または非天然ヌクレオシド間結合を含むヌクレオチドを含む。ここで定義される通り、修飾骨格またはヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチドは、リン原子を骨格中に保持するもの、およびリン原子を骨格中に持たないものを含む。本発明の目的のためには、リン原子を糖間骨格に有しない修飾オリゴヌクレオチドもまたオリゴヌクレオシドであると考えることができる。
【０２０７】
具体的なオリゴヌクレオチド化学修飾が以下に記載される。所定の化合物中のすべての位置が均一に修飾されている必要は無く、および実際、下記の修飾のうち二つ以上が、単一のｓｉＲＮＡ化合物に、またはその単一のヌクレオチドにさえも組み込まれうる。好ましい修飾ヌクレオシド間結合または骨格は、たとえば、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチルおよび３’−アルキレンホスホネートを含む他のアルキルホスホネートおよびキラルホスホネート、ホスフィネート、３’−アミノホスホロアミデートおよびアミノアルキルホスホロアミデートを含むホスホロアミデート、チオノホスホロアミデート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、および通常の３’−５’結合を持つボラノホスフェート、これらの２’−５’結合アナログ、および隣接するヌクレオシド単位の対が３’−５’から５’−３’または２’−５’から５’−２’へ結合していることを特徴とする逆極性を持つものを含む。様々な塩、混合塩および遊離酸型もまた含まれる。
【０２０８】
上記のリン原子を含む結合の調製を教示する代表的な米国特許は、それぞれ参照により本開示に含まれる、米国特許第３，６８７，８０８号；第４，４６９，８６３号；第４，４７６，３０１号；第５，０２３，２４３号；第５，１７７，１９６号；第５，１８８，８９７号；第５，２６４，４２３号；第５，２７６，０１９号；第５，２７８，３０２号；第５，２８６，７１７号；第５，３２１，１３１号；第５，３９９，６７６号；第５，４０５，９３９号；第５，４５３，４９６号；第５，４５５，２３３号；第５，４６６，６７７号；第５，４７６，９２５号；第５，５１９，１２６号；第５，５３６，８２１号；第５，５４１，３０６号；第５，５５０，１１１号；第５，５６３，２５３号；第５，５７１，７９９号；第５，５８７，３６１号；第５，６２５，０５０号；および第５，６９７，２４８号明細書を含むがそれらに限定されない。
【０２０９】
リン原子を含まない好ましい修飾ヌクレオシド間結合または骨格（すなわち、オリゴヌクレオシド）は、短鎖アルキルまたはシクロアルキル糖間結合、混合したヘテロ原子およびアルキルまたはシクロアルキル糖間結合、または一つ以上の短鎖ヘテロ原子またはヘテロ環糖間結合によって形成される骨格を有する。これらは、モルホリノ結合（ヌクレオシドの糖部分から一部構成される）；シロキサン骨格；スルフィド、スルホキシドおよびスルホン骨格；ホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格；メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格；アルケン含有骨格；スルファミン酸骨格；メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ骨格；スルホン酸およびスルホンアミド骨格；アミド骨格を有するもの；および混合したＮ、Ｏ、ＳおよびＣＨ２成分部分を有するその他のものを含む。
【０２１０】
上記のオリゴヌクレオシドの調製を教示する代表的な米国特許は、それぞれ参照により本開示に含まれる、米国特許第５，０３４，５０６号；第５，１６６，３１５号；第５，１８５，４４４号；第５，２１４，１３４号；第５，２１６，１４１号；第５，２３５，０３３号；第５，２６４，５６２号；第５，２６４，５６４号；第５，４０５，９３８号；第５，４３４，２５７号；第５，４６６，６７７号；第５，４７０，９６７号；第５，４８９，６７７号；第５，５４１，３０７号；第５，５６１，２２５号；第５，５９６，０８６号；第５，６０２，２４０号；第５，６１０，２８９号；第５，６０２，２４０号；第５，６０８，０４６号；第５，６１０，２８９号；第５，６１８，７０４号；第５，６２３，０７０号；第５，６６３，３１２号；第５，６３３，３６０号；第５，６７７，４３７号；および第５，６７７，４３９号明細書を含むがそれらに限定されない。
【０２１１】
他の好ましいオリゴヌクレオチドミメティックでは、糖およびヌクレオシド間結合の両方、すなわち、ヌクレオシド単位の骨格が新規の基で置換されている。核酸塩基単位は、適当な核酸標的化合物とのハイブリダイゼーションのために維持されている。優れたハイブリダイゼーション特性を有することが示されている一つのそのようなオリゴヌクレオチド、すなわちオリゴヌクレオチドミメティックは、ペプチド核酸（ＰＮＡ）と呼ばれている。ＰＮＡ化合物では、オリゴヌクレオチドの糖骨格は、アミドを含む骨格、特にアミノエチルグリシン骨格で置換されている。核酸塩基は維持されており、および骨格のアミド部分の原子と直接的にまたは間接的に結合している。ＰＮＡ化合物の調製を教示する代表的な米国特許は、それぞれ参照により本開示に含まれる、米国特許第５，５３９，０８２号；第５，７１４，３３１号；および第５，７１９，２６２号明細書を含むがそれらに限定されない。ＰＮＡ化合物のさらなる教示は、Ｎｉｅｌｓｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９１，２５４，１４９７に見出すことができる。
【０２１２】
本発明の一部の好ましい実施形態は、ホスホロチオエート結合を有するオリゴヌクレオチドおよびヘテロ原子骨格を有するオリゴヌクレオシド、および特に上記で参照される米国特許第５，４８９，６７７号明細書の−ＣＨ２−ＮＨ−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｏ−ＣＨ２−［メチレン（メチルイミノ）またはＭＭＩ骨格という］、−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−、および−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ２−［ただし天然ホスホジエステル骨格は−Ｏ−Ｐ−Ｏ−ＣＨ２−と表される］、および上記で参照される米国特許第５，６０２，２４０号明細書のアミド骨格を使用する。上記で参照される米国特許第５，０３４，５０６号明細書のモルホリノ骨格構造を持つオリゴヌクレオチドもまた好ましい。
【０２１３】
本発明のリガンド複合化オリゴヌクレオチドに用いられるオリゴヌクレオチドは、追加でまたは代替的に、核酸塩基（本分野ではしばしば単に「塩基」と呼ばれる）修飾または置換を含みうる。ここでは，「未修飾」または「天然」核酸塩基は、プリン塩基アデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ）、およびピリミジン塩基チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、およびウラシル（Ｕ）を含む。修飾核酸塩基は、他の合成および天然核酸塩基、たとえば５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの６−メチルおよび他のアルキル誘導体、アデニンおよびグアニンの２−プロピルおよび他のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミンおよび２−チオシトシン、５−ハロウラシルおよびシトシン、５−プロピニルウラシルおよびシトシン、６−アゾウラシル、シトシンおよびチミン、５−ウラシル（シュードウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒドロキシルおよび他の８−置換アデニンおよびグアニン、５−ハロ特に５−ブロモ、５−トリフルオロメチルおよび他の５−置換ウラシルおよびシトシン、７−メチルグアニンおよび７−メチルアデニン、８−アザグアニンおよび８−アザアデニン、７−デアザグアニンおよび７−デアザアデニンおよび３−デアザグアニンおよび３−デアザアデニンを含む。
【０２１４】
他の核酸塩基は、米国特許第３，６８７，８０８号明細書に開示されるもの、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ Ｏｆ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｐａｇｅｓ ８５８− ８５９，Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ，Ｊ．Ｌ，ｅｄ．Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９０に開示されるもの、Ｅｎｇｌｉｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９１，３０，６１３に開示されるもの、およびＳａｎｇｈｖｉ，Ｙ．Ｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ １５，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐａｇｅｓ ２８９−３０２，Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．ａｎｄ Ｌｅｂｌｅｕ，Ｂ．，ｅｄ．，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，１９９３によって開示されるものを含む。これらの核酸塩基の一部は、本発明のオリゴヌクレオチドの結合親和性を高めるのに特に有用である。これらは、２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシルおよび５−プロピニルシトシンを含む５−置換ピリミジン、６−アザピリミジンおよびＮ−２、Ｎ−６および０−６置換プリンを含む。５−メチルシトシン置換は、核酸二本鎖安定性を０．６〜１．２℃高めることが示されており（前掲書、２７６〜２７８頁）および現在好ましい塩基置換であり、２’−メトキシエチル糖修飾と組み合わせた場合はさらにより特に好ましい。
【０２１５】
上記の修飾核酸塩基および他の修飾核酸塩基の調製を教示する代表的な米国特許は、それぞれ参照により本開示に含まれる、上記の米国特許第３，６８７，８０８号明細書、および米国特許第４，８４５，２０５号；第５，１３０，３０２号；第５，１３４，０６６号；第５，１７５，２７３号；第５，３６７，０６６号；第５，４３２，２７２号；第５，４５７，１８７号；第５，４５９，２５５号；第５，４８４，９０８号；第５，５０２，１７７号；第５，５２５，７１１号；第５，５５２，５４０号；第５，５８７，４６９号；第５，５９４，１２１号、第５，５９６，０９１号；第５，６１４，６１７号；第５，６８１，９４１号；および第５，８０８，０２７号明細書を含むがそれらに限定されない。
【０２１６】
本発明のリガンド複合化オリゴヌクレオチドに用いられるオリゴヌクレオチドは、追加でまたは代替的に一つ以上の置換糖部分を含みうる。好ましいオリゴヌクレオチドは下記のうち一つを２’位に含む：ＯＨ；Ｆ；Ｏ−、Ｓ−またはＮ−アルキル、Ｏ−、Ｓ−またはＮ−アルケニル、あるいはＯ、Ｓ−またはＮ−アルキニル、ただしアルキル、アルケニルおよびアルキニルは置換または非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキルまたはＣ２〜Ｃ１０アルケニルおよびアルキニルでありうる。特に好ましいのはＯ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２、およびＯ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３］）２であり、ただしｎおよびｍは１ないし約１０である。他の好ましいオリゴヌクレオチドは下記のうち一つを２’位に含む：Ｃ１〜Ｃ１０低級アルキル、置換低級アルキル、アルカリル、アラルキル、Ｏ−アルカリルまたはＯ−アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、インターカレーター、オリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改善するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改善するための基、および同様の特性を有する他の置換基。好ましい修飾は、２’−メトキシエトキシ［２’−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、別名２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）または２’−ＭＯＥ］（Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，１９９５，７８，４８６）、すなわち、アルコキシアルコキシ基を含む。他の好ましい修飾は、参照により本開示に含まれる１９９８年１月３０日出願の米国特許第６，１２７，５３３号明細書に記載のＴ−ジメチルアミノオキシエトキシ、すなわち、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２基、別名２’−ＤＭＡＯＥを含む。
【０２１７】
他の好ましい修飾は２’−メトキシ（２’−Ｏ−ＣＨ３）、２’−アミノプロポキシ（２’−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）ＮＨ２）および２−フルオロ（２’−Ｆ）を含む。同様の修飾はまた、オリゴヌクレオチドの他の位置、特に３’末端ヌクレオチドの糖の３’位または２’−５’結合オリゴヌクレオチドに行うことができる。
【０２１８】
ここでは、「糖置換基」または「２’−置換基」の語は、酸素原子を含むかまたは含まない、リボフラノシル部分の２’位に結合された基を含む。糖置換基は、フルオロ、Ｏ−アルキル、Ｏ−アルキルアミノ、Ｏ−アルキルアルコキシ、保護Ｏ−アルキルアミノ、Ｏ−アルキルアミノアルキル、Ｏ−アルキルイミダゾールおよび式（Ｏ−アルキル）ｍのポリエーテルを含むがそれらに限定されず、ただしｍは１から約１０である。これらのポリエーテルのうち好ましいのは、直鎖および環状ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、および（ＰＥＧ）を含む基、たとえばクラウンエーテルおよびそれぞれ参照により本開示に含まれるＯｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．（Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ １９９２，９：９３）； Ｒａｖａｓｉｏ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９１，５６：４３２９）； およびＤｅｌｇａｒｄｏ ｅｔ．ａｌ．（Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ １９９２，９：２４９）によって開示されるものである。他の糖修飾がＣｏｏｋ（Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ，１９９１，６：５８５−６０７）によって開示されている。フルオロ、Ｏ−アルキル、Ｏ−アルキルアミノ、Ｏ−アルキルイミダゾール、Ｏ−アルキルアミノアルキル、およびアルキルアミノ置換が、参照により本開示に含まれる表題“Ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｈａｖｉｎｇ Ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ（ｓ） ｗｉｔｈ ２’ ａｎｄ ５’ Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ”の米国特許第６，１６６，１９７号明細書に記載されている。
【０２１９】
本発明に従う他の糖置換基は、２’−ＳＲおよび２’−ＮＲ２基を含み、ただし各Ｒは、独立して、水素、保護基または置換または非置換アルキル、アルケニルまたはアルキニルである。２’−ＳＲヌクレオシドは、参照により本開示に含まれる１９９７年９月２３日出願の米国特許第５，６７０，６３３号明細書に開示される。２’−ＳＲモノマー合成素子の組み込みはＨａｍｍ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９７，６２：３４１５−３４２０）によって開示される。２’−ＮＲヌクレオシドはＧｏｅｔｔｉｎｇｅｎ，Ｍ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９６，６１，６２７３−６２８１；およびＰｏｌｕｓｈｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９９６，３７，３２２７−３２３０によって開示される。本発明に従う他の代表的な２’−置換基は式ＩまたはIIのうちの一つを有するものを含み： 
【化１】
2007535922.tif 000002
ここで、
ＥはＣ１〜Ｃ１０アルキル、Ｎ（Ｑ３）（Ｑ４）またはＮ＝Ｃ（Ｑ３）（Ｑ４）である；各Ｑ３およびＱ４は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、ジアルキルアミノアルキル、窒素保護基、繋留されたまたは繋留されない複合体基、固相担体へのリンカー；またはＱ３およびＱ４は、共に、窒素保護基または環構造を形成し必要に応じて少なくとも一つの追加のＮおよびＯから選択されるヘテロ原子を含む；
ｑ１は１ないし１０の整数である；
ｑ２は１ないし１０の整数である；
ｑ３は０または１である；
ｑ４は０、１または２である；
各Ｚ１、Ｚ２およびＺ３は、独立して、Ｃ４〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ５〜Ｃ１４アリールまたはＣ３〜Ｃ１５ヘテロシクリルであり、ただし前記ヘテロシクリル基中のヘテロ原子は酸素、窒素および硫黄から選択される；
Ｚ４は ＯＭ１、ＳＭ１またはＮ（Ｍ１）２である；各Ｍ１は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ（＝ＮＨ）Ｎ（Ｈ）Ｍ２、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｍ２またはＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｍ２である； Ｍ２は ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルである； および
Ｚ５は、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ１〜Ｃ１０ハロアルキル、Ｃ２〜Ｃ１０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１０アルキニル、Ｃ６〜Ｃ１４アリール、Ｎ（Ｑ３）（Ｑ４）、ＯＱ３、ハロ、ＳＱ３またはＣＮである。
【０２２０】
式Ｉの代表的な２’−Ｏ−糖置換基は、参照により本開示に含まれる表題“Ｃａｐｐｅｄ ２’−Ｏｘｙｅｔｈｏｘｙ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ”の米国特許第６，１７２，２０９号明細書に開示される。式IIの代表的な環状２’−Ｏ−糖置換基は、参照により本開示に含まれる表題“ＲＮＡ Ｔａｒｇｅｔｅｄ ２’−Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｔｈａｔ ａｒｅ Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌｌｙ Ｐｒｅｏｒｇａｎｉｚｅｄ”の１９９８年７月２７日出願の米国特許第６，２７１，３５８号明細書に開示される。
【０２２１】
リボシル環にＯ−置換を有する糖もまた本発明に従う。環Ｏについて代表的な置換は、Ｓ、ＣＨ２、ＣＨＦ、およびＣＦ２を含むがそれらに限定されない。たとえば、Ｓｅｃｒｉｓｔ ｅｔ ａｌ．，Ａｂｓｔｒａｃｔ ２１，Ｐｒｏｇｒａｍ ＆ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ，Ｔｅｎｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｏｕｎｄｔａｂｌｅ，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｒｉｄ ｔｈｅｉｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐａｒｋ Ｃｉｔｙ，Ｕｔａｈ，Ｓｅｐ．１６−２０，１９９２を参照。
【０２２２】
オリゴヌクレオチドはまた、シクロブチル部分のような糖ミメティックを、ペントフラノシル糖の代わりに有しうる。そのような修飾糖構造の調製を教示する代表的な米国特許は、それぞれ参照により本開示に含まれる、米国特許第４，９８１，９５７号；第５，１１８，８００号；第５，３１９，０８０号；第５，３５９，０４４号；第５，３９３，８７８号；第５，４４６，１３７号；第５，４６６，７８６号；第５，５１４，７８５号；第５，５１９，１３４号；第５，５６７，８１１号；第５，５７６，４２７号；第５，５９１，７２２号；第５，５９７，９０９号；第５，６１０，３００号；第５，６２７，０５３１号；第５，６３９，８７３号；第５，６４６，２６５号；第５，６５８，８７３号；第５，６７０，６３３号；第５，７００，９２０号；および第５，８５９，２２１号明細書を含むがそれらに限定されない。
【０２２３】
追加の修飾はまた、オリゴヌクレオチドの他の位置、特に３’末端ヌクレオチドの糖の３’位に行うことができる。たとえば、本発明のリガンド複合化オリゴヌクレオチドの一つの追加の修飾は、オリゴヌクレオチドの活性、細胞分布または細胞取り込みを増大する一つ以上の追加の非リガンド部分または複合体をオリゴヌクレオチドへ化学的に結合することを含む。そのような部分は、脂質部分、たとえばコレステロール部分（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ，１９８９，８６，６５５３）、コール酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ，１９９４，４，１０５３）、チオエーテル、たとえば、ヘキシル−Ｓ−トリチルチオール（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．ＮＹ．Ａｃａｄ．Ｓｄ．，１９９２，６６０，３０６； Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．，１９９３，３，２７６５）、チオコレステロール （Ｏｂｅｒｈａｕｓｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９２，２０，５３３）、脂肪族鎖、たとえば、ドデカンジオールまたはウンデシル残基（Ｓａｉｓｏｎ−Ｂｅｈｍｏａｒａｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，１９９１，１０，１１１； Ｋａｂａｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，１９９０，２５９，３２７； Ｓｖｉｎａｒｃｈｕｋ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，１９９３，７５，４９）、リン脂質、たとえば、ジ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロールまたはトリエチルアンモニウムｌ，２−ジ−Ｏ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロ−３−Ｈ−ホスホネート（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９９５，３６，３６５１； Ｓｈｅａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９０，１８，３７７７）、ポリアミン またはポリエチレン グリコール 鎖 （Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ＆ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９５，１４，９６９）、または アダマンタン 酢酸 （Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ，１９９５，３６，３６５１）、パルミチル部分（Ｍｉｓｈｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１９９５，１２６４，２２９）、またはオクタデシルアミンまたはヘキシルアミノ−カルボニル−オキシコレステロール部分（Ｃｒｏｏｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｌｉｅｒ．，１９９６，２７７，９２３）を含むがそれらに限定されない。
【０２２４】
そのようなオリゴヌクレオチド複合体の調製を教示する代表的な米国特許は、それぞれ参照により本開示に含まれる、米国特許第４，８２８，９７９号；第４，９４８，８８２号；第５，２１８，１０５号；第５，５２５，４６５号；第５，５４１，３１３号；第５，５４５，７３０号；第５，５５２，５３８号；第５，５７８，７１７号、第５，５８０，７３１号；第５，５８０，７３１号；第５，５９１，５８４号；第５，１０９，１２４号；第５，１１８，８０２号；第５，１３８，０４５号；第５，４１４，０７７号；第５，４８６，６０３号；第５，５１２，４３９号；第５，５７８，７１８号；第５，６０８，０４６号；第４，５８７，０４４号；第４，６０５，７３５号；第４，６６７，０２５号；第４，７６２，７７９号；第４，７８９，７３７号；第４，８２４，９４１号；第４，８３５，２６３号；第４，８７６，３３５号；第４，９０４，５８２号；第４，９５８，０１３号；第５，０８２，８３０号；第５，１１２，９６３号；第５，２１４，１３６号；第５，０８２，８３０号；第５，１１２，９６３号；第５，２１４，１３６号；第５，２４５，０２２号；第５，２５４，４６９号；第５，２５８，５０６号；第５，２６２，５３６号；第５，２７２，２５０号；第５，２９２，８７３号；第５，３１７，０９８号；第５，３７１，２４１号、第５，３９１，７２３号；第５，４１６，２０３号、第５，４５１，４６３号；第５，５１０，４７５号；第５，５１２，６６７号；第５，５１４，７８５号；第５，５６５，５５２号；第５，５６７，８１０号；第５，５７４，１４２号；第５，５８５，４８１号；第５，５８７，３７１号；第５，５９５，７２６号；第５，５９７，６９６号；第５，５９９，９２３号；第５，５９９，９２８号；および第５，６８８，９４１号明細書を含むがそれらに限定されない。
【０２２５】
本発明はまた、オリゴヌクレオチド内の特定位置に関して実質的にキラルに純粋であるオリゴヌクレオチドを用いる組成物を含む。実質的にキラルに純粋なオリゴヌクレオチドの例は、少なくとも７５％ＳｐまたはＲｐであるホスホロチオエート結合を持つもの（Ｃｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，５８７，３６１号明細書）および実質的にキラルに純粋な（ＳｐまたはＲｐ）アルキルホスホネート、ホスホロアミデートまたはホスホトリエステル結合を持つもの（Ｃｏｏｋ、米国特許第５，２１２，２９５号および第５，５２１，３０２号明細書）を含むがそれらに限定されない。
【０２２６】
本発明はさらに、リボザイムを用いるリガンド複合化オリゴヌクレオチドを包含する。高度に特異的なエンドリボヌクレアーゼ活性を触媒する合成ＲＮＡ分子およびその誘導体は、リボザイムとして知られる（一般的に、Ｈａｓｅｌｏｆｆらへ１９９６年８月６日発行の米国特許第５，５４３，５０８号明細書、およびＧｏｏｄｃｈｉｌｄらへ１９９６年８月１３日発行の米国特許第５，５４５，７２９号明細書を参照）。切断反応はＲＮＡ分子自身によって触媒される。天然に存在するＲＮＡ分子では、自己触媒切断の部位はＲＮＡ二次構造の高度に保存された領域内に位置する（Ｂｕｚａｙａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９８６，８３，８８５９； Ｆｏｒｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，１９８７，５０，９）。天然に存在する自己触媒ＲＮＡ分子を修飾して、高度な特異性で特定の細胞または病原性ＲＮＡ分子を標的にすることができるリボザイムが作製されてきた。したがって、リボザイムはアンチセンスオリゴヌクレオチドと同じ一般的目的を果たし（すなわち、特異的遺伝子の発現の調節）および、オリゴヌクレオチドのように、一本鎖の重要な部分を持つ核酸である。すなわち、リボザイムはオリゴヌクレオチドと実質的な化学的および機能的同一性を有し、およびしたがって本発明の目的に関して同等物と考えられる。
【０２２７】
一部の場合には、オリゴヌクレオチドは非リガンド基によって修飾されうる。いくつかの非リガンド分子が、オリゴヌクレオチドの活性、細胞分布または細胞取り込みを高めるためにオリゴヌクレオチドと複合化されており、およびそのような複合化を実施するための手順は科学文献において利用可能である。そのような非リガンド部分は、脂質部分、たとえばコレステロール（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｄ．ＵＳＡ，１９８９，８６：６５５３）、コール酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９４，４：１０５３）、チオエーテル、たとえば、ヘキシル−Ｓ−トリチルチオール（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．ＮＹ．Ａｃａｄ．Ｓｄ．，１９９２，６６０：３０６； Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．，１９９３，３：２７６５）、チオコレステロール（Ｏｂｅｒｈａｕｓｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９２，２０：５３３）、脂肪族鎖、たとえば、ドデカンジオールまたはウンデシル残基（Ｓａｉｓｏｎ−Ｂｅｈｍｏａｒａｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，１９９１，１０：１１１； Ｋａｂａｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，１９９０，２５９：３２７； Ｓｖｉｎａｒｃｈｕｋ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，１９９３，７５：４９）、リン脂質、たとえば、ジ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロールまたはトリエチルアンモニウム１，２−ジ−Ｏ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロ−３−Ｈ−ホスホネート（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９９５，３６：３６５１； Ｓｈｅａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９０，１８：３７７７）、ポリアミンまたはポリエチレングリコール鎖（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ＆ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９５，１４：９６９）、またはアダマンタン酢酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ，１９９５，３６：３６５１）、パルミチル部分（Ｍｉｓｈｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１９９５，１２６４：２２９）、またはオクタデシルアミンまたはヘキシルアミノ−カルボニル−オキシコレステロール部分（Ｃｒｏｏｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，１９９６，２７７：９２３）を含んでいる。そのようなオリゴヌクレオチド複合体の調製を教示する代表的な米国特許は上に列記されている。典型的な複合体化手順は、アミノリンカーを配列の一つ以上の位置に持つオリゴヌクレオチドの合成を含む。アミノ基はその後、複合化された分子と、適当なカップリング試薬または活性化試薬を用いて反応させられる。複合化反応は、固相担体とまだ結合しているオリゴヌクレオチドを用いて、または液相中でのオリゴヌクレオチドの切断後に実施されうる。ＨＰＬＣによるオリゴヌクレオチド複合体の精製は、典型的には純粋な複合体を与えることができる。
【０２２８】
代替的に、複合化された分子は、ホスフィチル化されうる、分子中に存在するアルコール基によって、またはアルコール基を持つリンカーの結合によって、ホスホロアミダイトのような構築単位へ変換されうる。
【０２２９】
重要なことに、これらの手法のそれぞれはリガンド複合化オリゴヌクレオチドの合成に用いることができる。アミノ結合オリゴヌクレオチドは、カップリング試薬の使用によって、またはリガンドのＮＨＳまたはペントフルオロフェノラートエステルとしての活性化後に、リガンドと直接カップリングされうる。リガンドホスホロアミダイトは、カルボキシル基の一つへのアミノヘキサノールリンカーの結合に続く末端アルコール官能基のホスフィチル化によって合成されうる。たとえばシステアミンのような他のリンカーもまた、合成オリゴヌクレオチド上に存在するクロロアセチルリンカーへの複合化に使用されうる。
【０２３０】
説明のために、リガンドを持つヌクレオチドは三つの領域：リガンド、リンカー、およびヌクレオチドに分けることができる。本発明では、リガンドはリンカーを介してヌクレオチドと結合している。リンカーの目的は、リガンドをヌクレオチドへ共有結合によって結合することである。リンカーの構造は、リガンドを結合するために用いられる官能基によって決定される。好ましい一実施形態では、リンカーは固相合成法に従う。個々の可変領域のより詳細な考察を下記に示す。
2007535922.tif 000003
【０２３１】
リガンド
本発明では、リガンドは、オリゴヌクレオチドにリガンドが結合された場合にオリゴヌクレオチドへ薬理特性の改善を与える様々な有機化合物でありうる。たとえば、リガンドはステロイド、胆汁酸、脂質、葉酸、ピリドキサール、Ｂ１２、リボフラビン、ビオチン、芳香族化合物、多環式化合物、クラウンエーテル、インターカレーター(intercalator)、切断分子(cleaver molecule)、タンパク質結合剤または糖質でありうる。一部の実施形態では、ステロイドはコレステロールである。リガンドはまた、ビタミン、ペプチド、テルペンまたはアミノ酸でありうる。
【０２３２】
多数のステロイドが本分野で公知でありおよび本発明に従う。代表的なステロイドの例は、コレステロール、５β−コラン酸、プロゲステロン、アルドステロン、デヒドロアルドステロン、イソアンドロステロン、エステロン、エストラジオール、エルゴステロール、デヒドロエルゴステロール、ラノステロール、４−コレステン−３−オン、ググルステロン、テストステロン、ノルテストステロン、フォルメスタン、ヒドロキシエクジソン、ケトエストリオール、コルチコステロン、ジエネストロール、ジヒドロキシプレグナノン、プレグナノン、コポルンモン、エキレニン、エキリン、エストリオール、エチニルエストラジオール、メストラノール、モキセストロール、ミタトリエンジオール、キネストラジオール、キネストロール、ヘルボル酸、プロトスタジエン、フシジン酸、シクロアルテノール、トリカロール、ククルビタニンセドレロン、ユーフォル、ダマレンジオール、パーケオール、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、パラメタゾン、ベタメタゾン、コルチゾン、フルオシノニド、フルオロメトロン、ハルシノニド、およびブデソニド、またはそれらのうちヒドロキシル、ハロゲン、アミノ、アルキルアミノ、アルキル、カルボン酸、エステル、アミド、カルボニル、アルコキシル、またはシアノの一つ以上でさらに置換された任意のものを含む。
【０２３３】
多数の胆汁酸が本分野で公知でありおよび本発明に従う。胆汁酸はほとんどの脊椎動物の胆汁中にグリシンまたはタウリンと複合して存在し、およびその一部は医薬用途が見出される。したがって、一部の胆汁酸は（固有の薬理特性のため）胆汁分泌促進剤として用いられる（たとえば、Ｊａｍｅｓ Ｅ．Ｆ．Ｒｅｙｎｏｌｄｓ （ｅｄｉｔｏｒ） Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ Ｔｈｅ Ｅｘｔｒａ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ，３０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ （１９９３），ｐａｇｅ １３４１を参照）。胆汁酸の代表的な例は、コール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸、グリココール酸、グリコデオキシコール酸、タウロデオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸、およびケノデオキシコール酸を含む。本発明に従う他の胆汁酸は、米国特許第５，６４１，７６７号；第５，６５６，２７７号；第５，６１０，１５１号；第５，４２８，１８２号；および第３，９１０，８８８号明細書に記載されたものを含む。
【０２３４】
多数の脂質が本分野で公知でありおよび本発明に従う。脂質の代表的な例は、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、パルミトレイン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸、トリアシルグリセロール、ホスホアシルグリセロール、スフィンゴ脂質、モノテルペン、セスキテルペン、ジテルペン、セスタテルペン、トリテルペン、およびテトラテルペンを含む。
【０２３５】
多数の芳香族化合物が本分野で公知でありおよび本発明に従う。芳香族化合物の代表的な例は、必要に応じて置換されたフェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントレニル、ピレニル、ピリジニル、キノリニル、アクリジニル、フェナトリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、１，７−フェナントロリニル、インドリル、チアナフテニル、ベンズオキサゾリル、ベンゾフラニル、１，２−ベンズイソキサゾリル、ベンズイミダゾリル、ピロリル、チオフェニル、イソキサゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、およびフラニルを含む。
【０２３６】
多数の糖質が本分野で公知でありおよび本発明に従う。糖質の代表的な例は、エリトロース、トレオース、リボース、アラビノース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトース、およびタロース；またはそれらのいずれかの間の１，４グリコシド結合によって形成された二糖または三糖を含む。一部の場合には、糖質はヘキソースまたはペントースである。一部の場合には、糖質は下記に示す糖質のうちの一つから選択される。
【化２】
2007535922.tif 000004
【０２３７】
一部の場合には、上述の糖質は、グリコシル酸素原子に結合したカルボキシアルキルテザーを有する。グリコシル酸素原子に結合したカルボキシアルキルを持つ上記のような糖質の調製に関する手順については、Ｖａｌｅｎｔｉｊｎ ｅｔ ａｌ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９９７，５３，７５９； Ｗｉｊｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｒｅｃｕｅｉｌ ｄｅｓ Ｔｒａｖａｕｘ Ｃｈｉｍｉｑｕｅｓ ｄｅｓ Ｐａｙｓ−Ｂａｓ，１９９６，１１５，３９７； および次式を参照。
【化３】
2007535922.tif 000005
【０２３８】
塩化オキサリル
２−メチル−２−ブテン
多数の多環式化合物が本分野で公知でありおよび本発明に従う。多環式化合物の代表的な種類は、第一のおよび第二の環が独立して、Ｏ、ＮまたはＳより成る群から選択される０、１、２または３個のヘテロ原子を含む３、４、５または６員飽和または不飽和炭素環であることを特徴とする二環式化合物を含む。一部の場合には、第一の環は芳香族環である。一部の場合には、第二の環は芳香族環である。一部の場合には、両方の環が飽和である。一部の場合には、第一の環はヘテロ原子を含まない。一部の場合には、第二の環はヘテロ原子を含まない。一部の場合には、第一の環は窒素原子を含む。一部の場合には、第二の環は窒素原子を含む。一部の場合には、多環式化合物は、第一の、第二の、および第三の環が独立して、Ｏ、ＮまたはＳより成る群から選択される０、１、２または３個のヘテロ原子を含む３、４、５または６員飽和または不飽和炭素環であることを特徴とする三環式化合物である。一部の場合には、第一の環は芳香族環である。一部の場合には、第二の環は芳香族環である。一部の場合には、第三の環は芳香族環である。一部の場合には、三つの環すべてが飽和である。一部の場合には、第一の環はヘテロ原子を含まない。一部の場合には、第二の環はヘテロ原子を含まない。一部の場合には、第三の環はヘテロ原子を含まない。一部の場合には、第一の環は窒素原子を含む。一部の場合には、第二の環は窒素原子を含む。一部の場合には、第三の環は窒素原子を含む。一部の場合には、多環式化合物は架橋多環式化合物である。一部の場合には、多環式化合物はビシクロ［２．２．１］ヘプタン、ビシクロ［２．２．２］オクタン、ビシクロ［３．２．１］オクタン、ビシクロ［３．２．２］ノナン、またはビシクロ［３．３．１］ノナンである。
【０２３９】
多数のクラウンエーテルが本分野で公知でありおよび本発明に従う。クラウンエーテルは、二つ以上の炭素原子によってそれぞれ隣と分離された４〜２０個の酸素原子を含む、大環状ポリエーテル中性化合物である。大環状ポリエーテルは、アルカリ金属および他の金属の塩およびアンモニウム塩と安定な複合体を形成することが見出されている；“Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃ ｐｏｌｙｅｔｈｅｒｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ”，Ｃ．Ｊ．Ｐｅｄｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｅｄ．，Ｖｏｌ．１１，ｐａｇｅ １６，（１９７２）および米国特許第３，５６２，２９５号および第３，６８７，９７８号明細書。大環状ポリエーテルの立体モデルは王冠様の概観を与えるため、それらは一般的にＮ−クラウン−Ｍポリエーテルと表され、ただしＮはポリエーテル環中の原子の総数でありおよびＭはポリエーテル環中の酸素原子の数である。エチレンオキサイドの環状四量体（［１２］−クラウン−４）およびプロピレンオキサイドの環状四量体（［１６］−クラウン−４）から６０員ポリエーテル環（ジベンゾ［６０］−クラウン−２０）での範囲の大きさのクラウンポリエーテルが報告されている。好ましいクラウンエーテルは１２−クラウン−４、１５−クラウン−５、および１８−クラウン−６を含む。
【０２４０】
多数のオリゴヌクレオチドインターカレーターが本分野で公知でありおよび本発明に従う。インターカレーターの一つの種類は、二本鎖ＤＮＡに非共有結合で結合しおよびＤＮＡの二重らせんの塩基対の間に挿入される平らな分子によって特徴づけられるＤＮＡインターカレーターである。インターカレーターの代表的な例は、ｐ−カルボキシメチジウム、ｐ−カルボキシエチジウム、アクリジンおよびエリプチシンを含む。
【０２４１】
多数のオリゴヌクレオチド切断分子が本分野で公知でありおよび本発明に従う。切断分子はオリゴヌクレオチド鎖を切断できる化合物である。糖ペプチド抗生物質であるブレオマイシンは、ＤＮＡと結合しおよび二価鉄イオンおよび分子酸素の存在に依存する反応でＤＮＡを切断することが知られている。"Ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ： Ｃｈｅｍｉｃａｌ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｓｐｅｃｔｓ"； Ｈｅｃｈｔ，Ｓ．Ｍ．，Ｅｄ．； Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ： Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７９； Ｓａｕｓｖｉｌｌｅ，Ｅ．Ａ．； Ｐｅｉｓａｃｈ，Ｊ．； Ｈｏｒｗｉｔｚ，Ｓ．Ｂ．"Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ" １９７８，１７，２７４０．Ｂｕｒｇｅｒ，Ｒ．Ｍ．； Ｐｅｉｓａｃｈ，Ｊ； Ｈｏｒｗｉｔｚ，Ｓ．Ｂ．"Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ" １９８１，２８，７１５；およびＬｏｗｎ，Ｊ．Ｗ．； Ｓｉｍ，Ｓ．Ｆ．"Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．" １９７７，７７，１１５０．抗腫瘍剤ストレプトニグリンもまた、酸素および一価銅イオンを用いてＤＮＡ中で一本鎖切断を引き起こすことができる。Ｃｏｎｅ，Ｒ； Ｈａｓａｎ，Ｓ．Ｋ．； Ｌｏｗｎ，Ｊ．Ｗ．； Ｍｏｒｇａｎ，Ａ．Ｒ．"Ｃａｎ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．" １９７６，５４，２１９．近年、１−１０フェナントロリン−一価銅複合体が酸素の存在下でＤＮＡを切断することが示されている。Ｓｉｇｍａｎ，Ｄ．Ｓ．； Ｇｒａｈａｍ，Ｄ．Ｒ．； Ｄ'Ａｕｒｏｒａ，Ｖ．； Ｓｔｅｒｎ，Ａ．Ｍ．"Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．" １９７９，２５４，１２２６９； Ｇｒａｈａｍ，Ｄ．Ｒ； Ｍａｒｓｈａｌｌ，Ｌ．Ｅ．； Ｒｅｉｃｈ，Ｋ．Ａ； Ｓｉｇｍａｎ，Ｄ．Ｓ．"Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．" １９８０，１０２，５４１９； Ｍａｒｓｈａｌｌ，Ｌ．Ｅ．； Ｇｒａｈａｍ，Ｄ．Ｒ．； Ｒｅｉｃｈ，Ｋ．Ａ．； Ｓｉｇｍａｎ，Ｄ．Ｓ．"Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ" １９８１，２０，２４４；およびＱｕｅ，Ｂ．Ｇ．； Ｄｏｗｎｅｙ，Ｋ．Ｍ．； Ｓｏ．，Ａ．Ｇ．"Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ" １９８０，１９，５９８７．加えて、メチジウム、エチジウム、およびシスプラチンはオリゴヌクレオチド配列を切断することが知られている。
【０２４２】
多数の飽和５員環が本分野で公知でありおよび本発明に従う。好ましい飽和５員環は、必要に応じて置換されたシクロペンタン、ピロリジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、および１，１−ジフルオロシクロペンタンである。
【０２４３】
一部の場合には、リガンドは下に示すラジカルのうちの一つから選択される。
【化４】
2007535922.tif 000006
【０２４４】
リンカー
本発明の好ましい一実施形態では、リガンドは結合基を介してオリゴヌクレオチドと結合し、リガンド複合化オリゴヌクレオチドを形成する。本発明の好ましいリンカーは、アルキルリンカー、アルケニルリンカー、α，β−不飽和アミドリンカー、α，β−不飽和エステルリンカー、ケトンリンカー、チオエーテルリンカー、アミノアルキルリンカー、６−アミノアルコキシリンカー、６−アミノアルキルアミノリンカー、システアミン、ヘテロ二官能性リンカー、ホモ二官能性リンカー、およびユニバーサルテザー（３−ジメトキシトリチルオキシ−２−アミノプロパノールに由来）を含むがそれらに限定されない。本発明のリガンド複合化オリゴヌクレオチドの合成に特に好ましいテザーはα，β−不飽和アミドリンカーである。様々なヘテロ二官能性およびホモ二官能性テザーはＰｉｅｒｃｅ Ｃｏ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，１１１．）から入手可能である。そのようなヘテロ二官能性およびホモ二官能性テザーは、ヌクレオシドとリガンドを結合するのに有用な伸長テザーを形成するための６−アミノアルコキシおよび６−アミノアルキルアミノ部分との組み合わせで特に有用である。
【０２４５】
一部の場合には、リガンド分子の複合化は、ヌクレオシド上のアミノテザーへのリガンドの複合化によって達成される。これはいくつかの方法で達成できる。たとえば、本発明のリガンド−ヌクレオシド複合体は、ＥＤＣ／スルホ−ＮＨＳ（すなわち１−エチル−３（３−ジメチルアミノプロピルカルボジイミド／Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミド）を用いてヌクレオシドへのリガンド分子の複合化によって、リガンドのカルボン酸官能基をヌクレオシド上の結合基のアミノ官能基と複合化して調製できる。
【０２４６】
本発明のリガンド複合化オリゴヌクレオチドは、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）またはスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロ−ヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）といったヘテロ二官能性テザーを介したヌクレオシド配列へのリガンド分子の複合化によって、リガンド分子上の求核位置をヌクレオシド配列上のテザー基のアミノ官能基へ結合して調製されうる。この機構によって、ＭＢＳまたはＳＭＣＣマレイミドリンカーとの、結合したヌクレオシド上のテザーのアミノ基の反応により、オリゴヌクレオシド−マレイミド複合体が形成される。その複合体は次いでリガンドと反応させられる。
【０２４７】
代替的に、リガンド複合化オリゴヌクレオチドは、ジスクシンイミジルスベラート（ＤＳＳ）といったホモ二官能性テザーを介したオリゴヌクレオチドまたはヌクレオシドへのリガンド分子の複合化によって、リガンド上のアミノ官能基をオリゴヌクレオチド配列上のテザー基のアミノ官能基へ結合して調製されうる。この機構によって、ジスクシンイミジルスベラートテザーとの、ヌクレオシド配列上のテザーのアミノ基の反応により、オリゴヌクレオシド−スクシンイミジル複合体が形成される。ジスクシンイミジルスベラートテザーはヌクレオシド上のアミンテザーとカップリングし、テザーの大きさを伸長する。伸長したテザーは次いでリガンド分子のアミノ基と反応させられる。
【０２４８】
リガンドを持つヌクレオチド
本発明のリガンドを持つヌクレオチドは、ピリミジン塩基のＣ５位がリンカーと共有結合を形成するように修飾されていることを特徴とする、ピリミジンを持つヌクレオチド、一部の場合には、ピリミジンを持つヌクレオチドの塩基はＣ５−修飾チミン、シトシンまたはウラシルである。上記の通り、ヌクレオチドの塩基、糖またはリン酸部分は、非天然置換基を組み込むように修飾されうる。
【０２４９】
本発明に従うＣ５修飾ピリミジンヌクレオシドおよびヌクレオチドの代表的な一覧を下記に示す。
2007535922.tif 000007
2007535922.tif 000008
2007535922.tif 000009
2007535922.tif 000010
2007535922.tif 000011
2007535922.tif 000012
2007535922.tif 000013
2007535922.tif 000014
2007535922.tif 000015
【０２５０】
オリゴヌクレオチドのその他の性質
ｓｉＲＮＡ剤は標的遺伝子を発現抑制するために十分なホモロジーの領域を含むべきであり、およびｓｉＲＮＡ剤またはその断片が標的遺伝子のダウンレギュレーションを媒介できるようにヌクレオチドに関して十分な長さであるべきである。「リボヌクレオチド」または「ヌクレオチド」の語は、修飾ＲＮＡまたはヌクレオチド代用物の場合、修飾ヌクレオチド、または一つ以上の位置での代用物置換部分もいうことができると理解される。したがって、ｓｉＲＮＡ剤は、標的ＲＮＡと少なくとも部分的に相補的である領域であるかまたはそれを含む。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡ剤は標的ＲＮＡと完全に相補的である。ｓｉＲＮＡ剤と標的との間に完全な相補性が存在する必要は無いが、しかし対応は、ｓｉＲＮＡ剤、またはその切断産物が、標的ＲＮＡのＲＮＡｉ切断によるような配列特異的サイレンシングを導くことができるために十分でなければならない。相補性、すなわち標的鎖とのホモロジーの程度は、アンチセンス鎖において非常に重要である。完全な相補性が、特にアンチセンス鎖ではしばしば望まれる一方、一部の実施形態は標的ＲＮＡに関して一つ以上のしかし好ましくは６、５、４、３、２、またはそれ未満のミスマッチを含みうる。ミスマッチは末端領域においてはほとんど許容され、およびもしあれば好ましくは末端領域または領域に、たとえば、５’および／または３’末端の６、５、４、または３ヌクレオチド以内に存在する。センス鎖は、分子の全体的な二本鎖性を維持するためには、アンチセンス鎖と十分に相補的でありさえすればよい。
【０２５１】
加えて、ｓｉＲＮＡ剤はしばしば修飾されているかまたはヌクレオシド代用物を含む。ｓｉＲＮＡ剤の一本鎖領域はしばしば修飾されているかまたはヌクレオシド代用物を含み、たとえば、対形成しない領域またはヘアピン構造の領域、たとえば、二つの相補的領域と結合する領域は、修飾またはヌクレオシド代用物を有しうる。ｉＲＮＡ剤の一つ以上の３’−または５’末端を、たとえば、エキソヌクレアーゼに対して安定化するため、またはアンチセンスｓｉＲＮＡ剤がＲＩＳＣに入るのを助けるための修飾もまた好まれる。修飾は、Ｃ３（またはＣ６、Ｃ７、Ｃ１２）アミノリンカー、チオールリンカー、カルボキシルリンカー、非ヌクレオチドスペーサー（Ｃ３、Ｃ６、Ｃ９、Ｃ１２、脱塩基、メチレングリコール、ヘキサエチレングリコール）、ホスホロアミダイトとして与えられおよび他のＤＭＴ保護水酸基を有しＲＮＡ合成中に複数カップリングを可能にする特別のビオチンまたはフルオレセイン試薬を含みうる。
【０２５２】
ｓｉＲＮＡ剤は：インターフェロン反応を引き起こすために十分長い分子（ダイサーによって切断されうる（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．２００１．Ｎａｔｕｒｅ，４０９：３６３−３６６）およびＲＩＳＣ（ＲＮＡｉ誘導性サイレンシング複合体）に入ることができる）；および、インターフェロン反応を引き起こさないために十分短い分子（その分子もまたダイサーによって切断されうるおよび／またはＲＩＳＣに入ることができる）、たとえば、ＲＩＳＣへの進入を可能にするサイズである分子、たとえば、ダイサー切断産物に似た分子を含む。インターフェロン反応を引き起こさないために十分短い分子はここではｓｉＲＮＡ剤または低分子ｉＲＮＡ剤という。「ｓｉＲＮＡ剤または低分子ｓｉＲＮＡ剤」はここでは、ヒト細胞において有害なインターフェロン反応を引き起こさないほど十分に短いｓｉＲＮＡ剤をいい、たとえば、それは６０塩基対未満の、しかし好ましくは５０、４０または３０塩基対未満の二本鎖領域を有する。ｓｉＲＮＡ剤、またはその切断産物は、たとえば、標的ＲＮＡ、好ましくは内因性または病原体標的ＲＮＡに関してＲＮＡｉを誘導することによって、標的遺伝子をダウンレギュレートできる。
【０２５３】
ｓｉＲＮＡ剤の各鎖は長さ３０、２５、２４、２３、２２、２１または２０ヌクレオチド以下でありうる。鎖は好ましくは少なくとも長さ１９ヌクレオチドである。たとえば、各鎖は長さ２１ないし２５ヌクレオチドでありうる。好ましいｓｉＲＮＡ剤は１７、１８、１９、２９、２１、２２、２３、２４または２５塩基対の二本鎖領域、および一つ以上のオーバーハング、好ましくは２〜３ヌクレオチドの一つまたは二つの３’オーバーハングを有する。
【０２５４】
標的ＲＮＡとのホモロジーおよび標的遺伝子をダウンレギュレートする能力に加えて、ｓｉＲＮＡ剤は、好ましくは下記の特性のうち好ましくは一つ以上を有する：
（１）非常に多数またはすべてのヌクレオシドにさえの修飾にかかわらず、正しい塩基対を形成できおよび相同標的ＲＮＡと二本鎖構造を形成できるように、たとえば標的ＲＮＡの切断による標的のダウンレギュレーションを可能にするのに十分である、塩基（または修飾塩基）を適切な三次元組織で提示できるアンチセンス鎖を有する；
（２）非常に多数またはすべてのヌクレオシドにさえの修飾にかかわらず、なお「ＲＮＡ様」特性を有する、すなわち、リボヌクレオチドだけを基礎としない、または一部だけがリボヌクレオチドを基礎とする内容であっても、ＲＮＡ分子の全体的な構造的、化学的および物理的特性を有する。たとえば、ｓｉＲＮＡ剤は、たとえばすべてのヌクレオチド糖がたとえばＴフルオロを２’ヒドロキシルの代わりに含む、センスおよび／またはアンチセンス鎖を含みうる。このデオキシリボヌクレオチド含有剤はなおＲＮＡ様特性を示すと予想できる。理論に縛られることを望まない一方、電気陰性なフッ素は、リボースのＣ２’位に結合する場合、アキシアル方向を優先する。フッ素のこの空間的優先傾向は、今度は、糖がＣ３’エンド歪みを取ることを強制できる。これは、ＲＮＡ分子に観察されるのと同一の歪み形式であり、およびＲＮＡに特徴的なＡファミリー型らせんを生じる。さらに、フッ素は、良好な水素結合受容体であるため、ＲＮＡ構造を安定化することが知られている水分子と同一の水素結合相互作用に参加できる。一般的に、２’−糖位置の修飾部分が、デオキシリボヌクレオチドのＨ部分よりもリボヌクレオチドのＯＨ部分に特徴的である水素結合に入れることが好ましい。好ましいｓｉＲＮＡ剤は：Ｃ３’エンド歪みを糖の全部または少なくとも約５０、７５、８０、８５、９０または９５％に示す；ＲＮＡに特徴的なＡファミリー型らせんを生じることができるように、Ｃ３’エンド歪みを十分な量の糖に示す；一般的にＣ３’エンド歪み構造でない糖を約２０、１０、５、４、３、２または１個しか持たない。
【０２５５】
「一本鎖ｉＲＮＡ剤」とはここでは、単一の分子から成るｉＲＮＡ剤である。それは鎖内対形成によって生じた二本鎖領域を含む可能性があり、たとえば、それはヘアピンまたはパンハンドル構造でありうるかまたはそれを含みうる。一本鎖ｉＲＮＡ剤は好ましくは標的分子に関してアンチセンスである。一本鎖ｉＲＮＡ剤は、ＲＩＳＣに入ることができおよび標的ＲＮＡのＲＩＳＣ媒介切断に関与できるように、十分な長さであるべきである。一本鎖ｉＲＮＡ剤は、少なくとも長さ１４、およびより好ましくは少なくとも１５、２０、２５、２９、３５、４０または５０ヌクレオチドである。好ましくは長さ２００、１００または６０ヌクレオチド未満である。
【０２５６】
ヘアピンｉＲＮＡ剤は、１７、１８、１９、２９、２１、２２、２３、２４または２５塩基対以上の二本鎖領域を持つ。二本鎖領域は好ましくは長さ２００、１００または５０以下である。二本鎖領域に好ましい範囲は、長さ１５〜３０、１７から２３、１９から２３、および１９から２１塩基対である。ヘアピンは好ましくは一本鎖オーバーハングすなわち末端非対合領域を、好ましくは３’、および好ましくはヘアピンのアンチセンス側に有する。好ましいオーバーハングは長さ２〜３ヌクレオチドである。
【０２５７】
本発明の化合物は下記により詳細に記載される。重要なことには、下記の実施形態は単に本発明の一部の態様および実施形態の説明の目的で含められており、および本発明を限定することは意図されない。
【０２５８】
本発明の一実施態様は、
【化５】
2007535922.tif 000016
で表され、 
ＸはＨ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）２、−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）２または−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）２であり；
Ｍはそれぞれ独立して、アルカリ金属または総電荷＋１の遷移金属を表し；
ｎは１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４であり；
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ５はそれぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＯＲ７、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＳＲ７、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＮ（Ｒ７）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）２、−Ｎ（Ｒ７）２、−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ｖＯ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＳ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＯ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＮ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２、または−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＯＮ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２を表し；
Ａ１はそれぞれ独立して、
【化６】
2007535922.tif 000017
を表し；
Ｚ１はそれぞれ独立して、ＯまたはＳを表し；
Ｚ２はそれぞれ独立して、−ＯＨ、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−Ｏアラルキル、−ＳＨ、ＳＭ、−Ｓアルキル、−Ｓアリール、−Ｓアラルキル、−Ｎ（Ｒ３）Ｒ４、−（Ｃ（Ｒ７）２）ｍＮ（Ｒ７）２、−Ｎ（Ｒ７）（Ｃ（Ｒ７）２）ｍＮ（Ｒ７）２、またはアルキルを表し；
Ｒ３およびＲ４はＨまたはアルキルであり；またはＲ３およびＲ４は全体として３、４、５、６または７員環を成し；
Ｒ６はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、または−ＮＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２を表し；
Ｒ７はそれぞれ独立して、Ｈまたはアルキルを表し；
Ａ２はそれぞれ独立して、
【化７】
2007535922.tif 000018
を表し；
Ａ３はそれぞれ独立して
【化８】
2007535922.tif 000019
を表し；
Ａ４はそれぞれ独立して、結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アミノアルキルジラジカル、アルキニルジラジカル、アルキルアルキニルジラジカル、チオエーテル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ１Ｃ（Ｒ）２Ｂ２、Ｂ１Ｃ（Ｒ）（Ｂ２）２、Ｂ１Ｃ（Ｂ２）３、Ｂ１Ｎ（Ｒ）（Ｂ２）、Ｂ１Ｎ（Ｂ２）２を表し、または式：
【化９】
2007535922.tif 000020
を有し、
Ｂ１はそれぞれ独立して、Ａ３とＡ４の間の結合を表し；
Ｂ２はそれぞれ独立して、Ａ４とＡ５の間の結合を表し；
Ｒはそれぞれ独立して、水素またはアルキルを表し；
ｍはそれぞれ独立して、１、２、３、４、５、６、７または８を表し；
ｍ１はそれぞれ独立して、０、１、２、３、４、５、６、７または８を表し；
ｖはそれぞれ独立して、１、２、３または４を表し；
ｗは原子価則に従ってそれぞれ独立して、１、２または３を表し ；
ただしＡ５が少なくとも１回出現することを条件とし；および
Ａ５はそれぞれ独立して、化合物Ｃ、化合物Ｃ、化合物Ｄ、化合物Ｄ'、あるいはステロイド、胆汁酸、脂質、葉酸、ピリドキサール、Ｂ１２、リボフラビン、ビオチン、芳香族化合物、多環式化合物、クラウンエーテル、インターカレーター、切断分子、タンパク質結合剤、糖質、または必要に応じて置換された飽和５員環のラジカルを表し；化合物Ｃは：
【化１０】
2007535922.tif 000021
で表され、および
化合物Ｃ’は：
【化１１】
2007535922.tif 000022
で表されることを特徴とし、
ＣおよびＣ’について下記を特徴とし
Ｒ２５はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、チオアルキル、アジド、−Ｎ（Ｒ２７）２、− ＣＯ２Ｒ ２７、−ＣＯＲ２７、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２７、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；
Ｒ２６はそれぞれ独立して、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；
Ｒ２７はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；
Ｒ２８はそれぞれ独立して、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２７、−Ｎ（Ｒ２７）Ｃ（Ｏ）Ｒ２７、−Ｎ（Ｒ２７）２、− ＣＯ２Ｒ ２７、−ＣＯＲ２７、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；および
ｐはそれぞれ独立して、１、２、３、４、５、６または７を表し；および
化合物Ｄは：
【化１２】
2007535922.tif 000023
で表され、および
化合物Ｄ'は：
【化１３】
2007535922.tif 000024
で表され、
ＤおよびＤ'について下記を特徴とし
Ｒ２９はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、チオアルキル、アジド、−Ｎ（Ｒ３０）２、−ＣＯ２Ｒ３０、−ＣＯＲ３０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ３０、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；
Ｒ３０はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；
Ｒ３１はそれぞれ独立して、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；および
ｔはそれぞれ独立して、１、２、３、４、５、６または７を表す、
一本鎖オリゴヌクレオチドに関する。
【０２５９】
一部の実施形態では本発明は、ｎが１８、１９、２０、２１または２２であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２６０】
一部の実施形態では本発明は、ｎが２０であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２６１】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が少なくとも２回出現することを特徴とする上記化合物に関する。
【０２６２】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が少なくとも５回出現することを特徴とする上記化合物に関する。
【０２６３】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が少なくとも１０回出現することを特徴とする上記化合物に関する。
【０２６４】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５がそれぞれ独立して、化合物Ｃ、化合物Ｄ、あるいは、コレステロール、５β−コラン酸、プロゲステロン、アルドステロン、デヒドロアルドステロン、イソアンドロステロン、エステロン、エストラジオール、エルゴステロール、デヒドロエルゴステロール、ラノステロール、４−コレステン−３−オン、ググルステロン、テストステロン、ノルテストステロン、フォルメスタン、ヒドロキシエクジソン、ケトエストリオール、コルチコステロン、ジエネストロール、ジヒドロキシプレグナノン、プレグナノン、コポルンモン、エキレニン、エキリン、エストリオール、エチニルエストラジオール、メストラノール、モキセストロール、ミタトリエンジオール、キネストラジオール、キネストロール、ヘルボル酸、プロトスタジエン、フシジン酸、シクロアルテノール、トリカロール、ククルビタニンセドレロン、ユーフォル、ダマレンジオール、パーケオール、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、パラメタゾン、ベタメタゾン、コルチゾン、フルオシノニド、フルオロメトロン、ハルシノニド、ブデソニド、もしくはそれらの任意の化合物の１つがヒドロキシル、ハロゲン、アミノ、アルキルアミノ、アルキル、カルボン酸、エステル、アミド、カルボニル、アルコキシルまたはシアノの一つ以上でさらに置換されたもの、のラジカルを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０２６５】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５がそれぞれ独立して、コレステロールまたは５β−コラン酸のラジカルを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０２６６】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５がそれぞれ独立して
【化１４】
2007535922.tif 000025
を表し；
Ｒ２０はそれぞれ独立して、ヒドロキシル、アミノ、ハロゲン、アルコキシル、アルキル、アミノアルキル、アジド、カルボニル、アシル、またはアシルオキシを表し；Ｚ３はそれぞれ独立して、Ｏ、Ｓ、またはＮＲを表し；およびｙは原子価則に従ってそれぞれ独立して、１、２、３、４、５、または６を表す
ことを特徴とする上記化合物に関する。
【０２６７】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５がそれぞれ独立して、コール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸、グリココール酸、グリコデオキシコール酸、タウロデオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸、またはケノデオキシコール酸のラジカルを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０２６８】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５がそれぞれ独立して、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、パルミトレイン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸、トリアシルグリセロール、ホスホアシルグリセロール、スフィンゴ脂質、モノテルペン、セスキテルペン、ジテルペン、セスタテルペン、トリテルペンまたはテトラテルペンのラジカルを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０２６９】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５がそれぞれ独立して、必要に応じて置換されたフェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントレニル、ピレニル、ピリジニル、キノリニル、アクリジニル、フェナトリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、１，７−フェナントロリニル、インドリル、チアナフテニル、ベンズオキサゾリル、ベンゾフラニル、１，２−ベンズイソキサゾリル、ベンズイミダゾリル、ピロリル、チオフェニル、イソキサゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、テトラゾリルまたはフラニルを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０２７０】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５がそれぞれ独立して、エリトロース、トレオース、リボース、アラビノース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトースまたはタロース；あるいはそれらのいずれかの間の１，４グリコシド結合によって形成された二糖または三糖のラジカルを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０２７１】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５がヘキソースまたはペントースであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２７２】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化１５】
2007535922.tif 000026
であることを特徴とし；Ｒ４０がそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アラルキル、−Ｃ（Ｏ）アルキル、−Ｃ（Ｏ）アリール、−Ｃ（Ｏ）アラルキルまたはＳｉ（アルキル）３を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０２７３】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化１６】
2007535922.tif 000027
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２７４】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化１７】
2007535922.tif 000028
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２７５】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化１８】
2007535922.tif 000029
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２７６】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化１９】
2007535922.tif 000030
であり；およびＡ４が、
【化２０】
2007535922.tif 000031
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２７７】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化２１】
2007535922.tif 000032
であり；およびＡ４が、
【化２２】
2007535922.tif 000033
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２７８】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が必要に応じて置換されたシクロペンタン、ピロリジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、または１，１−ジフルオロシクロペンタンであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２７９】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が化合物Ｃであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２８０】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が化合物Ｃ’であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２８１】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化２３】
2007535922.tif 000034
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２８２】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化２４】
2007535922.tif 000035
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２８３】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が化合物Ｄであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２８４】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が化合物Ｄ’であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２８５】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化２５】
2007535922.tif 000036
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２８６】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化２６】
2007535922.tif 000037
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２８７】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が多環式化合物のラジカルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２８８】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化２７】
2007535922.tif 000038
であることを特徴とし、Ｒ３２はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、チオアルキル、アジド、−Ｎ（Ｒ３４）２、− ＣＯ２Ｒ ３４、−ＣＯＲ３４、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ３４、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；Ｒ３３は、アルキル、アルケニル、アリール、ハロゲンまたはアルコキシルで必要に応じて置換されたアリールであり；およびＲ３４はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アリールまたはアラルキルを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０２８９】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化２８】
2007535922.tif 000039
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２９０】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化２９】
2007535922.tif 000040
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２９１】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化３０】
2007535922.tif 000041
であり；およびＡ４が、
【化３１】
2007535922.tif 000042
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２９２】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化３２】
2007535922.tif 000043
であり；およびＡ４が、
【化３３】
2007535922.tif 000044
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２９３】
一部の実施形態では本発明は、Ｒ２がそれぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、または−Ｏアルキルを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０２９４】
一部の実施形態では本発明は、Ｒ２がそれぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、−ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＲ７、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＲ７、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（Ｒ７）２、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、または−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０２９５】
一部の実施形態では本発明は、Ｒ２がそれぞれ独立して、−ＮＨ２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、または−Ｎ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０２９６】
一部の実施形態では本発明は、Ｒ５がそれぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、−ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＲ７、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＲ７、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（Ｒ７）２、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨｓ）２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、または−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０２９７】
一部の実施形態では本発明は、Ｒ５がそれぞれ独立して、−ＮＨ２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、または−Ｎ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０２９８】
一部の実施形態では本発明は、Ｒ２およびＲ５がそれぞれ独立して、−ＮＨ２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、または−Ｎ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０２９９】
一部の実施形態では本発明は、Ｚ２がそれぞれ独立して、−ＯＨ、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−Ｏアラルキル、−ＳＨ、−ＳＭ、−Ｓアルキル、−Ｓアリール、−Ｓアラルキル、−Ｎ（Ｒ３）Ｒ４、−（Ｃ（Ｒ７）２）ｍＮ（Ｒ７）２、−Ｎ（Ｒ７）（Ｃ（Ｒ７）２）ｍＮ（Ｒ７）２、またはメチルを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３００】
一部の実施形態では本発明は、Ｚ２がそれぞれ独立して、−ＯＨ、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、または−Ｏアラルキルを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３０１】
一部の実施形態では本発明は、Ａ２がそれぞれ独立して、
【化３４】
2007535922.tif 000045
を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３０２】
一部の実施形態では本発明は、Ａ４がそれぞれ独立して
【化３５】
2007535922.tif 000046
を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３０３】
一部の実施形態では本発明は、Ａ４がそれぞれ独立して
【化３６】
2007535922.tif 000047
を表し、およびＡ５がステロイドであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３０４】
一部の実施形態では本発明は、Ａ４がそれぞれ独立して
【化３７】
2007535922.tif 000048
を表し、およびＡ５がそれぞれ独立して
【化３８】
2007535922.tif 000049
を表し、Ｒ２０はそれぞれ独立して、ヒドロキシル、アミノ、ハロゲン、アルコキシル、アルキル、アミノアルキル、アジド、カルボニル、アシルまたはアシルオキシを表し；Ｚ３はそれぞれ独立して、Ｏ、ＳまたはＮＲを表し；およびｙは原子価則に従ってそれぞれ独立して、１、２、３、４、５または６を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３０５】
一部の実施形態では本発明は、
第一鎖および第二鎖を含み、第一鎖および第二鎖が独立して
【化３９】
2007535922.tif 000050
で表されることを特徴とし、
ＸはＨ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）２、−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）２、または−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）２であり；
Ｍはそれぞれ独立して、アルカリ金属または総電荷＋１の遷移金属を表し；
ｎは１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４であり；
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ５はそれぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＯＲ７、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＳＲ７、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＮ（Ｒ７）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）２、−Ｎ（Ｒ７）２、−Ｓ（ｄ−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＯ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＳ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＯ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＮ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２、または−Ｏ（Ｃ（Ｒ７）２）ＶＯＮ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２を表し；
Ａ１はそれぞれ独立して、
【化４０】
2007535922.tif 000051
を表し；
Ｚ１はそれぞれ独立して、ＯまたはＳを表し；
Ｚ２はそれぞれ独立して、−ＯＨ、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−Ｏアラルキル、−ＳＨ、ＳＭ、−Ｓアルキル、−Ｓアリール、−Ｓアラルキル、−Ｎ（Ｒ３）Ｒ４、−（Ｃ（Ｒ７）２）ｍＮ（Ｒ７）２、−Ｎ（Ｒ７）（Ｃ（Ｒ７）２）ｍＮ（Ｒ７）２、またはアルキルを表し；
Ｒ３およびＲ４はＨまたはアルキルであり；またはＲ３およびＲ４は全体として３、４、５、６または７員環を成し；
Ｒ６はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、または−ＮＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２を表し；
Ｒ７はそれぞれ独立して、Ｈまたはアルキルを表し；
Ａ２はそれぞれ独立して、
【化４１】
2007535922.tif 000052
を表し；
Ａ３はそれぞれ独立して
【化４２】
2007535922.tif 000053
を表し；
Ａ４はそれぞれ独立して、結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アミノアルキルジラジカル、アルキニルジラジカル、アルキルアルキニルジラジカル、チオエーテル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ１Ｃ（Ｒ）２Ｂ２、Ｂ１Ｃ（Ｒ）（Ｂ２）２、Ｂ１Ｃ（Ｂ２）３、Ｂ１Ｎ（Ｒ）（Ｂ２）、Ｂ１Ｎ（Ｂ２）２を表し、または式：
【化４３】
2007535922.tif 000054
を有し、
Ｂ１はそれぞれ独立して、Ａ３とＡ４の間の結合を表し；
Ｂ２はそれぞれ独立して、Ａ４とＡ５の間の結合を表し；
Ｒはそれぞれ独立して、水素またはアルキルを表し；
ｍはそれぞれ独立して、１、２、３、４、５、６、７または８を表し；
ｍ１はそれぞれ独立して、０、１、２、３、４、５、６、７または８を表し；
ｖはそれぞれ独立して、１、２、３または４を表し；
ｗは原子価則に従ってそれぞれ独立して、１、２または３を表し；
ただしＡ５が少なくとも１回出現することを条件とし；および
Ａ５はそれぞれ独立して、化合物Ｃ、化合物Ｄ、あるいは、ステロイド、胆汁酸、脂質、葉酸、ピリドキサール、Ｂ１２、リボフラビン、ビオチン、芳香族化合物、多環式化合物、クラウンエーテル、インターカレーター、切断分子、タンパク質結合剤、糖質、または必要に応じて置換された飽和５員環のラジカルを表し；化合物Ｃは：
【化４４】
2007535922.tif 000055
で表され、および
化合物Ｃ’は：
【化４５】
2007535922.tif 000056
で表されることを特徴とし、
ＣおよびＣ’について下記を特徴とし
Ｒ２５はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、チオアルキル、アジド、−Ｎ（Ｒ２７）２、−ＣＯ２Ｒ２７、−ＣＯＲ２７、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２７、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；
Ｒ２６はそれぞれ独立して、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；
Ｒ２７はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；
Ｒ２８はそれぞれ独立して、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２７、−Ｎ（Ｒ２７）Ｃ（Ｏ）Ｒ２７、−Ｎ（Ｒ２７）２、−ＣＯ２Ｒ２７、−ＣＯＲ２７、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；および
ｐはそれぞれ独立して、１、２、３、４、５、６または７を表し；および
化合物Ｄは：
【化４６】
2007535922.tif 000057
で表され、および
化合物Ｄ'は：
【化４７】
2007535922.tif 000058
で表され、
ＤおよびＤ'について下記を特徴とし
Ｒ２９はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、チオアルキル、アジド、−Ｎ（Ｒ３０）２、−ＣＯ２Ｒ３０、−ＣＯＲ３０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ３０、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；
Ｒ３０はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；
Ｒ３１はそれぞれ独立して、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；および
ｔはそれぞれ独立して、１、２、３、４、５、６または７を表す、
二本鎖オリゴヌクレオチドに関する。
【０３０６】
一部の実施形態では本発明は、ｎが１８、１９、２０、２１または２２であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３０７】
一部の実施形態では本発明は、ｎが２０であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３０８】
一部の実施形態では本発明は、ｎが２０であり、および第一鎖および第二鎖に２つのハイブリダイズしていないヌクレオチドが存在するように第一鎖および第二鎖がハイブリダイズしていることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３０９】
一部の実施形態では本発明は、第一鎖についてｎが２０であり、および第二鎖についてｎが２２であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３１０】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が少なくとも２回出現することを特徴とする上記化合物に関する。
【０３１１】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が少なくとも５回出現することを特徴とする上記化合物に関する。
【０３１２】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が少なくとも１０回出現することを特徴とする上記化合物に関する。
【０３１３】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が第一鎖にのみ存在することを特徴とする上記化合物に関する。
【０３１４】
一部の実施形態では本発明は、第一鎖および第二鎖がそれぞれＡ５の少なくとも一つの存在を含むことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３１５】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５がそれぞれ独立して、化合物Ｃ、化合物Ｄ、あるいは、コレステロール、５β−コラン酸、プロゲステロン、アルドステロン、デヒドロアルドステロン、イソアンドロステロン、エステロン、エストラジオール、エルゴステロール、デヒドロエルゴステロール、ラノステロール、４−コレステン−３−オン、ググルステロン、テストステロン、ノルテストステロン、フォルメスタン、ヒドロキシエクジソン、ケトエストリオール、コルチコステロン、ジエネストロール、ジヒドロキシプレグナノン、プレグナノン、コポルンモン、エキレニン、エキリン、エストリオール、エチニルエストラジオール、メストラノール、モキセストロール、ミタトリエンジオール、キネストラジオール、キネストロール、ヘルボル酸、プロトスタジエン、フシジン酸、シクロアルテノール、トリカロール、ククルビタニンセドレロン、ユーフォル、ダマレンジオール、パーケオール、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、パラメタゾン、ベタメタゾン、コルチゾン、フルオシノニド、フルオロメトロン、ハルシノニド、ブデソニド、またはそれらの任意の１つがヒドロキシル、ハロゲン、アミノ、アルキルアミノ、アルキル、カルボン酸、エステル、アミド、カルボニル、アルコキシル、またはシアノの一つ以上でさらに置換されたものの、ラジカルを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３１６】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５がそれぞれ独立して、コレステロールまたは５β−コラン酸のラジカルを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３１７】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５がそれぞれ独立して
【化４８】
2007535922.tif 000059
を表し、
Ｒ２０はそれぞれ独立して、ヒドロキシル、アミノ、ハロゲン、アルコキシル、アルキル、アミノアルキル、アジド、カルボニル、アシルまたはアシルオキシを表し；Ｚ３はそれぞれ独立して、Ｏ、ＳまたはＮＲを表し；およびｙは原子価則に従ってそれぞれ独立して、１、２、３、４、５または６を表すことを特徴とする請求項３９の二本鎖オリゴヌクレオチド。
【０３１８】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５がそれぞれ独立して、コール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸、グリココール酸、グリコデオキシコール酸、タウロデオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸またはケノデオキシコール酸のラジカルを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３１９】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５がそれぞれ独立して、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、パルミトレイン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸、トリアシルグリセロール、ホスホアシルグリセロール、スフィンゴ脂質、モノテルペン、セスキテルペン、ジテルペン、セスタテルペン、トリテルペンまたはテトラテルペンのラジカルを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３２０】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５がそれぞれ独立して、必要に応じて置換されたフェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントレニル、ピレニル、ピリジニル、キノリニル、アクリジニル、フェナトリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、１，７−フェナントロリニル、インドリル、チアナフテニル、ベンズオキサゾリル、ベンゾフラニル、１，２−ベンズイソキサゾリル、ベンズイミダゾリル、ピロリル、チオフェニル、イソキサゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、テトラゾリルまたはフラニルを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３２１】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５がそれぞれ独立して、エリトロース、トレオース、リボース、アラビノース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトースまたはタロース；またはそれらのいずれかの間の１，４グリコシド結合によって形成された二糖または三糖のラジカルを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３２２】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５がヘキソースまたはペントースであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３２３】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化４９】
2007535922.tif 000060
であることを特徴とし；Ｒ４０がそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アラルキル、−Ｃ（Ｏ）アルキル、−Ｃ（Ｏ）アリール、−Ｃ（Ｏ）アラルキルまたはＳｉ（アルキル）３を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３２４】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化５０】
2007535922.tif 000061
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３２５】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化５１】
2007535922.tif 000062
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３２６】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化５２】
2007535922.tif 000063
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３２７】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化５３】
2007535922.tif 000064
であり；およびＡ４が、
【化５４】
2007535922.tif 000065
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３２８】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化５５】
2007535922.tif 000066
であり；およびＡ４が、
【化５６】
2007535922.tif 000067
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３２９】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が必要に応じて置換されたシクロペンタン、ピロリジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェンまたは１，１−ジフルオロシクロペンタンであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３３０】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が化合物Ｃであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３３１】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が化合物Ｃ’であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３３２】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化５７】
2007535922.tif 000068
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３３３】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化５８】
2007535922.tif 000069
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３３４】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が化合物Ｄであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３３５】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が化合物Ｄ’であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３３６】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化５９】
2007535922.tif 000070
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３３７】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化６０】
2007535922.tif 000071
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３３８】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が多環式化合物のラジカルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３３９】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化６１】
2007535922.tif 000072
であることを特徴とし、Ｒ３２はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、チオアルキル、アジド、−Ｎ（Ｒ３４）２、−ＣＯ２Ｒ３４、−ＣＯＲ３４、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ３４、アルキル、アルケニル、アリールまたはアラルキルを表し；Ｒ３３は、アルキル、アルケニル、アリール、ハロゲンまたはアルコキシルで必要に応じて置換されたアリールであり；およびＲ３４はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アリールまたはアラルキルを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３４０】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化６２】
2007535922.tif 000073
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３４１】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化６３】
2007535922.tif 000074
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３４２】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化６４】
2007535922.tif 000075
であり、およびＡ４が、
【化６５】
2007535922.tif 000076
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３４３】
一部の実施形態では本発明は、Ａ５が、
【化６６】
2007535922.tif 000077
であり、およびＡ４が、
【化６７】
2007535922.tif 000078
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３４４】
一部の実施形態では本発明は、Ｒ２がそれぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、または−Ｏアルキルを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３４５】
一部の実施形態では本発明は、Ｒ２がそれぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、−ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＲ７、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＲ７、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（Ｒ７）２、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、または−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３４６】
一部の実施形態では本発明は、Ｒ２がそれぞれ独立して、−ＮＨ２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、または−Ｎ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３４７】
一部の実施形態では本発明は、Ｒ５がそれぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、−ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＲ７、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＲ７、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（Ｒ７）２、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、または−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３４８】
一部の実施形態では本発明は、Ｒ５がそれぞれ独立して、−ＮＨ２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、または−Ｎ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３４９】
一部の実施形態では本発明は、Ｒ２およびＲ５がそれぞれ独立して、−ＮＨ２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、または−Ｎ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３５０】
一部の実施形態では本発明は、Ｚ２がそれぞれ独立して、−ＯＨ−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−Ｏアラルキル、−ＳＨ、−ＳＭ、−Ｓアルキル、−Ｓアリール、−Ｓアラルキル、−Ｎ（Ｒ３）Ｒ４、−（Ｃ（Ｒ７）２）ｍＮ（Ｒ７）２、−Ｎ（Ｒ７）（Ｃ（Ｒ７）２）ｍＮ（Ｒ７）２、またはメチルを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３５１】
一部の実施形態では本発明は、Ｚ２がそれぞれ独立して、−ＯＨ、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、または−Ｏアラルキルを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３５２】
一部の実施形態では本発明は、Ａ２がそれぞれ独立して、
【化６８】
2007535922.tif 000079
を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３５３】
一部の実施形態では本発明は、Ａ４がそれぞれ独立して、
【化６９】
2007535922.tif 000080
を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３５４】
一部の実施形態では本発明は、Ａ４がそれぞれ独立して、
【化７０】
2007535922.tif 000081
を表し、およびＡ５がステロイドであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３５５】
一部の実施形態では本発明は、
Ａ４がそれぞれ独立して、
【化７１】
2007535922.tif 000082
を表し、およびＡ５がそれぞれ独立して、
【化７２】
2007535922.tif 000083
を表し、Ｒ２０はそれぞれ独立して、ヒドロキシル、アミノ、ハロゲン、アルコキシル、アルキル、アミノアルキル、アジド、カルボニル、アシルまたはアシルオキシを表し；Ｚ３はそれぞれ独立して、Ｏ、ＳまたはＮＲを表し；およびｙは原子価則に従ってそれぞれ独立して、１、２、３、４、５または６を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３５６】
本発明の方法
本発明の一態様は、
治療を必要とする患者へオリゴヌクレオチドの治療的有効量を投与する段階を含み、オリゴヌクレオチドは上記式Ｉによって表される一本鎖オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドは第一鎖および第二鎖を含むオリゴヌクレオチドであることを特徴とし、第一鎖および第二鎖は上記式ＩＩによって独立して表されることを特徴とし、
望ましくない細胞増殖、関節炎、網膜血管新生、ウイルス感染、細菌感染、アメーバ感染、寄生虫感染、真菌感染、望ましくない免疫応答、喘息、狼瘡、多発性硬化症、糖尿病、急性疼痛、慢性疼痛、神経疾患、およびヘテロ接合性の消失によって特徴づけられる疾患より成る群から選択される疾患の患者を治療する方法に関する。
【０３５７】
一部の実施形態では本発明は、疾患が望ましくない細胞増殖であることを特徴とする上記方法に関する。
【０３５８】
一部の実施形態では本発明は、疾患が精巣癌、肺癌、乳癌、大腸癌、扁平上皮細胞癌、膵癌、白血病、黒色腫、バーキットリンパ腫、神経芽細胞腫、卵巣癌、前立腺癌、皮膚癌、非ホジキンリンパ腫、食道癌、子宮頚癌、基底細胞癌、腺癌、肝細胞癌、直腸結腸腺癌、肝癌、男性乳癌、食道の腺癌、胃の腺癌、結腸の腺癌、直腸の腺癌、胆嚢癌、過誤腫、神経膠腫、子宮体癌、急性白血病、慢性白血病、小児急性白血病、ユーイング肉腫、粘液性脂肪肉腫、脳癌、または上皮起源の腫瘍であることを特徴とする上記方法に関する。
【０３５９】
一部の実施形態では本発明は、疾患が関節リウマチまたは網膜血管新生であることを特徴とする上記方法に関する。
【０３６０】
一部の実施形態では本発明は、疾患がウイルス感染であることを特徴とする上記方法に関する。
【０３６１】
一部の実施形態では本発明は、疾患が、ヒトパピローマウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、Ｆ型肝炎ウイルス、Ｇ型肝炎ウイルス、Ｈ型肝炎ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、単純ヘルペスウイルス、ヘルペスサイトメガロウイルス、ヘルペスエプスタインバーウイルス、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、ＪＣウイルス、ミクソウイルス、ライノウイルス、コロナウイルス、西ナイルウイルス、セントルイス脳炎、ダニ媒介脳炎ウイルス遺伝子、マレー渓谷脳炎ウイルス遺伝子、デングウイルス遺伝子、サルウイルス４０、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、モロニーマウス白血病ウイルス、脳心筋炎ウイルス、麻疹ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、アデノウイルス、黄熱ウイルス、ポリオウイルス、またはポックスウイルスによって媒介される疾患であることを特徴とする上記方法に関する。
【０３６２】
一部の実施形態では本発明は、疾患が細菌感染、アメーバ感染、寄生虫感染または真菌感染であることを特徴とする上記方法に関する。
【０３６３】
一部の実施形態では本発明は、疾患が、マラリア原虫（ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）、マイコバクテリウム・アルセランス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｕｌｃｅｒａｎｓ）、ヒト結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、ハンセン菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、クラミジア肺炎病原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）又は肺炎マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）によって媒介される疾患であることを特徴とする上記方法に関する。
【０３６４】
一部の実施形態では本発明は、疾患が望ましくない免疫応答、喘息、狼瘡、多発性硬化症または糖尿病であることを特徴とする上記方法に関する。
【０３６５】
一部の実施形態では本発明は、疾患が虚血、再灌流傷害、移植臓器または組織に対する反応、再狭窄または炎症性腸疾患であることを特徴とする上記方法に関する。
【０３６６】
一部の実施形態では本発明は、疾患が急性疼痛または慢性疼痛であることを特徴とする上記方法に関する。
【０３６７】
一部の実施形態では本発明は、疾患が神経疾患であることを特徴とする上記方法に関する。
【０３６８】
一部の実施形態では本発明は、疾患がアルツハイマー病、パーキンソン病または神経変性トリヌクレオチド反復疾患であることを特徴とする上記方法に関する。
【０３６９】
一部の実施形態では本発明は、疾患がヘテロ接合性の消失によって特徴づけられる疾患であることを特徴とする上記方法に関する。
【０３７０】
一部の実施形態では本発明は、オリゴヌクレオチドが第一鎖および第二鎖を含むオリゴヌクレオチドであることを特徴とし、第一鎖および第二鎖は上記式ＩＩによって独立して表されることを特徴とする上記方法に関する。
【０３７１】
本発明の別の態様は、
望ましくない細胞増殖を促進する遺伝子、増殖因子遺伝子、増殖因子受容体遺伝子、キナーゼ遺伝子、Ｇタンパク質スーパーファミリー分子をコードする遺伝子、転写因子をコードする遺伝子、血管新生を媒介する遺伝子、ウイルス機能を媒介する細胞遺伝子のウイルス遺伝子、細菌病原体の遺伝子、アメーバ病原体の遺伝子、寄生虫病原体の遺伝子、真菌病原体の遺伝子、望ましくない免疫応答を媒介する遺伝子、疼痛の処理を媒介する遺伝子、神経疾患を媒介する遺伝子、ヘテロ接合性の消失によって特徴づけられる細胞にみられる対立遺伝子、または多型遺伝子の一つの対立遺伝子の発現を抑制するために、哺乳類細胞へオリゴヌクレオチドの治療的有効量を投与し、オリゴヌクレオチドは上記式Ｉによって表される一本鎖オリゴヌクレオチド、またはオリゴヌクレオチドは第一鎖および第二鎖を含むオリゴヌクレオチドであることを特徴とし、第一鎖および第二鎖は上記式ＩＩによって独立して表されることを特徴とする
段階を含む、遺伝子サイレンシングの方法に関する。
【０３７２】
一部の実施形態では本発明は、オリゴヌクレオチドは第一鎖および第二鎖を含むオリゴヌクレオチドであることを特徴とし、第一鎖および第二鎖は上記式ＩＩによって独立して表されることを特徴とする上記方法に関する。
【０３７３】
一部の実施形態では本発明は、
ＰＤＧＦベータ遺伝子、Ｅｒｂ−Ｂ遺伝子、Ｓｒｃ遺伝子、ＣＲＫ遺伝子、ＧＲＢ２遺伝子、ＲＡＳ遺伝子、ＭＥＫＫ遺伝子、ＪＮＫ遺伝子、ＲＡＦ遺伝子、Ｅｒｋ１／２遺伝子、ＰＣＮＡ（ｐ２１）遺伝子、ＭＹＢ遺伝子、ＪＵＮ遺伝子、ＦＯＳ遺伝子、ＢＣＬ−２遺伝子、サイクリンＤ遺伝子、ＶＥＧＦ遺伝子、ＥＧＦＲ遺伝子、サイクリンＡ遺伝子、サイクリンＥ遺伝子、ＷＮＴ−Ｉ遺伝子、ベータ−カテニン遺伝子、ｃ−ＭＥＴ遺伝子、ＰＫＣ遺伝子、ＮＦＫＢ遺伝子、ＳＴＡＴ３遺伝子、サバイビン遺伝子、Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ遺伝子、トポイソメラーゼＩ遺伝子、トポイソメラーゼIIアルファ遺伝子、ｐ７３遺伝子における変異、ｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）遺伝子における変異、ｐ２７（ＫＩＰ１）遺伝子における変異、ＰＰＭ１Ｄ遺伝子における変異、ＲＡＳ遺伝子における変異、カベオリンＩ遺伝子における変異、ＭＩＢ Ｉ遺伝子における変異、ＭＴＡＩ遺伝子における変異、Ｍ６８遺伝子における変異、腫瘍抑制遺伝子における変異、ｐ５３腫瘍抑制遺伝子における変異、ｐ５３ファミリーメンバーＤＮ−ｐ６３における変異、ｐＲｂ腫瘍抑制遺伝子における変異、ＡＰＣ１腫瘍抑制遺伝子における変異、ＢＲＣＡ１腫瘍抑制遺伝子における変異、ＰＴＥＮ腫瘍抑制遺伝子における変異、ｍＬＬ融合遺伝子、ＢＣＲ／ＡＢＬ融合遺伝子、ＴＥＬ／ＡＭＬ１融合遺伝子、ＥＷＳ／ＦＬＩ１融合遺伝子、ＴＬＳ／ＦＵＳ１融合遺伝子、ＰＡＸ３／ＦＫＨＲ融合遺伝子、ＡＭＬ１／ＥＴＯ融合遺伝子、アルファｖ−インテグリン遺伝子、Ｆｌｔ−Ｉ受容体遺伝子、チューブリン遺伝子、ヒトパピローマウイルス遺伝子、ヒトパピローマウイルス複製に必要な遺伝子、ヒト免疫不全ウイルス遺伝子、ヒト免疫不全ウイルス複製に必要な遺伝子、Ａ型肝炎ウイルス遺伝子、Ａ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｂ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｂ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｃ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｃ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｄ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｄ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｅ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｅ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｆ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｆ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｇ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｇ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｈ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｈ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、呼吸器合胞体ウイルス遺伝子、呼吸器合胞体ウイルス複製に必要な遺伝子、単純ヘルペスウイルス遺伝子、単純ヘルペスウイルス複製に必要な遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルス遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルス複製に必要な遺伝子、ヘルペスエプスタインバーウイルス遺伝子、ヘルペスエプスタインバーウイルス複製に必要な遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス複製に必要な遺伝子、ＪＣウイルス遺伝子、ＪＣウイルス複製に必要なヒト遺伝子、ミクソウイルス遺伝子、ミクソウイルス遺伝子複製に必要な遺伝子、ライノウイルス遺伝子、ライノウイルス複製に必要な遺伝子、コロナウイルス遺伝子、コロナウイルス複製に必要な遺伝子、西ナイルウイルス遺伝子、西ナイルウイルス複製に必要な遺伝子、セントルイス脳炎遺伝子、セントルイス脳炎複製に必要な遺伝子、ダニ媒介脳炎ウイルス遺伝子、ダニ媒介脳炎ウイルス複製に必要な遺伝子、マレー渓谷脳炎ウイルス遺伝子、マレー渓谷脳炎ウイルス複製に必要な遺伝子、デングウイルス遺伝子、デングウイルス遺伝子複製に必要な遺伝子、サルウイルス４０遺伝子、サルウイルス４０複製に必要な遺伝子、ヒトＴ細胞白血病ウイルス遺伝子、ヒトＴ細胞白血病ウイルス複製に必要な遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルス遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルス複製に必要な遺伝子、脳心筋炎ウイルス遺伝子、脳心筋炎ウイルス複製に必要な遺伝子、麻疹ウイルス遺伝子、麻疹ウイルス複製に必要な遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルス遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルス複製に必要な遺伝子、アデノウイルス遺伝子、アデノウイルス複製に必要な遺伝子、黄熱ウイルス遺伝子、黄熱ウイルス複製に必要な遺伝子、ポリオウイルス遺伝子、ポリオウイルス複製に必要な遺伝子、ポックスウイルス遺伝子、ポックスウイルス複製に必要な遺伝子、マラリア原虫遺伝子、マラリア原虫遺伝子複製に必要な遺伝子、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ遺伝子、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ複製に必要な遺伝子、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ遺伝子、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ複製に必要な遺伝子、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ遺伝子、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ 複製に必要な遺伝子、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ遺伝子、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ複製に必要な遺伝子、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ遺伝子、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ複製に必要な遺伝子、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ遺伝子、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ複製に必要な遺伝子、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ遺伝子、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ複製に必要な遺伝子、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ遺伝子、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ複製に必要な遺伝子、インテグリン遺伝子、セレクチン遺伝子、補体系遺伝子、ケモカイン遺伝子、ケモカイン受容体遺伝子、ＧＣＳＦ遺伝子、Ｇｒｏ１遺伝子、Ｇｒｏ２遺伝子、Ｇｒｏ３遺伝子、ＰＦ４遺伝子、ＭＩＧ遺伝子、胞体突起塩基性タンパク質遺伝子、ＭＩＰ−１Ｉ遺伝子、ＭＩＰ−１Ｊ遺伝子、ＲＡＮＴＥＳ遺伝子、ＭＣＰ−１遺伝子、ＭＣＰ−２遺伝子、ＭＣＰ−３遺伝子、ＣＭＢＫＲ１遺伝子、ＣＭＢＫＲ２遺伝子、ＣＭＢＫＲ３遺伝子、ＣＭＢＫＲ５ｖ、ＡＩＦ−１遺伝子、Ｉ−３０９遺伝子、イオンチャンネルの成分に対する遺伝子、神経伝達物質受容体に対する遺伝子、神経伝達物質リガンドに対する遺伝子、アミロイドファミリー遺伝子、プレセニリン遺伝子、ＨＤ遺伝子、ＤＲＰＬＡ遺伝子、ＳＣＡｌ遺伝子、ＳＣＡ２遺伝子、ＭＪＤ１遺伝子、ＣＡＣＮＬ１Ａ４遺伝子、ＳＣＡ７遺伝子、ＳＣＡ８遺伝子、ＬＯＨ細胞にみられる対立遺伝子、または多型遺伝子の一つの対立遺伝子の発現を抑制するために、哺乳類細胞へオリゴヌクレオチドの治療的有効量を投与し、オリゴヌクレオチドは上記式Ｉによって表される一本鎖オリゴヌクレオチド、���たはオリゴヌクレオチドは第一鎖および第二鎖を含むオリゴヌクレオチドであることを特徴とし、第一鎖および第二鎖は上記式ＩＩによって独立して表されることを特徴とする
段階を含む、遺伝子サイレンシングの方法に関する。
【０３７４】
一部の実施形態では本発明は、オリゴヌクレオチドは第一鎖および第二鎖を含むオリゴヌクレオチドであることを特徴とし、第一鎖および第二鎖は上記式ＩＩによって独立して表されることを特徴とすることを特徴とする上記方法に関する。
【０３７５】
本発明の別の態様は、
望ましくない細胞増殖を促進する遺伝子、増殖因子または増殖因子受容体遺伝子、キナーゼ遺伝子、Ｇタンパク質スーパーファミリー分子をコードする遺伝子、転写因子をコードする遺伝子、血管新生を媒介する遺伝子、ウイルス機能を媒介する細胞遺伝子のウイルス遺伝子、細菌病原体の遺伝子、アメーバ病原体の遺伝子、寄生虫病原体の遺伝子、真菌病原体の遺伝子、望ましくない免疫応答を媒介する遺伝子、疼痛の処理を媒介する遺伝子、神経疾患を媒介する遺伝子、ヘテロ接合性の消失によって特徴づけられる細胞にみられる対立遺伝子、または多型遺伝子の一つの対立遺伝子の発現を抑制するために、哺乳類へオリゴヌクレオチドの治療的有効量を投与し、オリゴヌクレオチドは上記式Ｉによって表される一本鎖オリゴヌクレオチド、またはオリゴヌクレオチドは第一鎖および第二鎖を含むオリゴヌクレオチドであることを特徴とし、第一鎖および第二鎖は上記式ＩＩによって独立して表されることを特徴とする
段階を含む、遺伝子サイレンシングの方法に関する。
【０３７６】
一部の実施形態では本発明は、オリゴヌクレオチドは第一鎖および第二鎖を含むオリゴヌクレオチドであることを特徴とし、第一鎖および第二鎖は上記式ＩＩによって独立して表されることを特徴とすることを特徴とする上記方法に関する。
【０３７７】
本発明の別の態様は、
一部の実施形態では本発明は、
ＰＤＧＦベータ遺伝子、Ｅｒｂ−Ｂ遺伝子、Ｓｒｃ遺伝子、ＣＲＫ遺伝子、ＧＲＢ２遺伝子、ＲＡＳ遺伝子、ＭＥＫＫ遺伝子、ＪＮＫ遺伝子、ＲＡＦ遺伝子、Ｅｒｋ１／２遺伝子、ＰＣＮＡ（ｐ２１）遺伝子、ＭＹＢ遺伝子、ＪＵＮ遺伝子、ＦＯＳ遺伝子、ＢＣＬ−２遺伝子、サイクリンＤ遺伝子、ＶＥＧＦ遺伝子、ＥＧＦＲ遺伝子、サイクリンＡ遺伝子、サイクリンＥ遺伝子、ＷＮＴ−Ｉ遺伝子、ベータ−カテニン遺伝子、ｃ−ＭＥＴ遺伝子、ＰＫＣ遺伝子、ＮＦＫＢ遺伝子、ＳＴＡＴ３遺伝子、サバイビン遺伝子、Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ遺伝子、トポイソメラーゼＩ遺伝子、トポイソメラーゼIIアルファ遺伝子、ｐ７３遺伝子における変異、ｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）遺伝子における変異、ｐ２７（ＫＩＰ１）遺伝子における変異、ＰＰＭ１Ｄ遺伝子における変異、ＲＡＳ遺伝子における変異、カベオリンＩ遺伝子における変異、ＭＩＢ Ｉ遺伝子における変異、ＭＴＡＩ遺伝子における変異、Ｍ６８遺伝子における変異、腫瘍抑制遺伝子における変異、ｐ５３腫瘍抑制遺伝子における変異、ｐ５３ファミリーメンバーＤＮ−ｐ６３における変異、ｐＲｂ腫瘍抑制遺伝子における変異、ＡＰＣ１腫瘍抑制遺伝子における変異、ＢＲＣＡ１腫瘍抑制遺伝子における変異、ＰＴＥＮ腫瘍抑制遺伝子における変異、ｍＬＬ融合遺伝子、ＢＣＲ／ＡＢＬ融合遺伝子、ＴＥＬ／ＡＭＬ１融合遺伝子、ＥＷＳ／ＦＬＩ１融合遺伝子、ＴＬＳ／ＦＵＳ１融合遺伝子、ＰＡＸ３／ＦＫＨＲ融合遺伝子、ＡＭＬ１／ＥＴＯ融合遺伝子、アルファｖ−インテグリン遺伝子、Ｆｌｔ−Ｉ受容体遺伝子、チューブリン遺伝子、ヒトパピローマウイルス遺伝子、ヒトパピローマウイルス複製に必要な遺伝子、ヒト免疫不全ウイルス遺伝子、ヒト免疫不全ウイルス複製に必要な遺伝子、Ａ型肝炎ウイルス遺伝子、Ａ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｂ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｂ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｃ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｃ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｄ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｄ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｅ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｅ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｆ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｆ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｇ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｇ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、Ｈ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｈ型肝炎ウイルス複製に必要な遺伝子、呼吸器合胞体ウイルス遺伝子、呼吸器合胞体ウイルス複製に必要な遺伝子、単純ヘルペスウイルス遺伝子、単純ヘルペスウイルス複製に必要な遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルス遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルス複製に必要な遺伝子、ヘルペスエプスタインバーウイルス遺伝子、ヘルペスエプスタインバーウイルス複製に必要な遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス複製に必要な遺伝子、ＪＣウイルス遺伝子、ＪＣウイルス複製に必要なヒト遺伝子、ミクソウイルス遺伝子、ミクソウイルス遺伝子複製に必要な遺伝子、ライノウイルス遺伝子、ライノウイルス複製に必要な遺伝子、コロナウイルス遺伝子、コロナウイルス複製に必要な遺伝子、西ナイルウイルス遺伝子、西ナイルウイルス複製に必要な遺伝子、セントルイス脳炎遺伝子、セントルイス脳炎複製に必要な遺伝子、ダニ媒介脳炎ウイルス遺伝子、ダニ媒介脳炎ウイルス複製に必要な遺伝子、マレー渓谷脳炎ウイルス遺伝子、マレー渓谷脳炎ウイルス複製に必要な遺伝子、デングウイルス遺伝子、デングウイルス遺伝子複製に必要な遺伝子、サルウイルス４０遺伝子、サルウイルス４０複製に必要な遺伝子、ヒトＴ細胞白血病ウイルス遺伝子、ヒトＴ細胞白血病ウイルス複製に必要な遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルス遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルス複製に必要な遺伝子、脳心筋炎ウイルス遺伝子、脳心筋炎ウイルス複製に必要な遺伝子、麻疹ウイルス遺伝子、麻疹ウイルス複製に必要な遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルス遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルス複製に必要な遺伝子、アデノウイルス遺伝子、アデノウイルス複製に必要な遺伝子、黄熱ウイルス遺伝子、黄熱ウイルス複製に必要な遺伝子、ポリオウイルス遺伝子、ポリオウイルス複製に必要な遺伝子、ポックスウイルス遺伝子、ポックスウイルス複製に必要な遺伝子、マラリア原虫遺伝子、マラリア原虫遺伝子複製に必要な遺伝子、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ遺伝子、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ複製に必要な遺伝子、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ遺伝子、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ複製に必要な遺伝子、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ遺伝子、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ複製に必要な遺伝子、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ遺伝子、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ複製に必要な遺伝子、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ遺伝子、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ複製に必要な遺伝子、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ遺伝子、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ複製に必要な遺伝子、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ遺伝子、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ複製に必要な遺伝子、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ遺伝子、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ複製に必要な遺伝子、インテグリン遺伝子、セレクチン遺伝子、補体系遺伝子、ケモカイン遺伝子、ケモカイン受容体遺伝子、ＧＣＳＦ遺伝子、Ｇｒｏ１遺伝子、Ｇｒｏ２遺伝子、Ｇｒｏ３遺伝子、ＰＦ４遺伝子、ＭＩＧ遺伝子、胞体突起塩基性タンパク質遺伝子、ＭＩＰ−１Ｉ遺伝子、ＭＩＰ−１Ｊ遺伝子、ＲＡＮＴＥＳ遺伝子、ＭＣＰ−１遺伝子、ＭＣＰ−２遺伝子、ＭＣＰ−３遺伝子、ＣＭＢＫＲ１遺伝子、ＣＭＢＫＲ２遺伝子、ＣＭＢＫＲ３遺伝子、ＣＭＢＫＲ５ｖ、ＡＩＦ−１遺伝子、Ｉ−３０９遺伝子、イオンチャンネルの成分に対する遺伝子、神経伝達物質受容体に対する遺伝子、神経伝達物質リガンドに対する遺伝子、アミロイドファミリー遺伝子、プレセニリン遺伝子、ＨＤ遺伝子、ＤＲＰＬＡ遺伝子、ＳＣＡｌ遺伝子、ＳＣＡ２遺伝子、ＭＪＤ１遺伝子、ＣＡＣＮＬ１Ａ４遺伝子、ＳＣＡ７遺伝子、ＳＣＡ８遺伝子、ＬＯＨ細胞にみられる対立遺伝子、または多型遺伝子の一つの対立遺伝子の発現を抑制するために、哺乳類へオリゴヌクレオチドの治療的有効量を投与し、オリゴヌクレオチドは上記式Ｉによって表される一本鎖オリゴヌクレオチド、また��オリゴヌクレオチドは第一鎖および第二鎖を含むオリゴヌクレオチドであることを特徴とし、第一鎖および第二鎖は上記式ＩＩによって独立して表されることを特徴とする
段階を含む、遺伝子サイレンシングの方法に関する。
【０３７８】
一部の実施形態では本発明は、哺乳類が霊長類、ウマ、イヌまたはネコであることを特徴とする上記方法に関する。
【０３７９】
一部の実施形態では本発明は、哺乳類がヒトであることを特徴とする上記方法に関する。
【０３８０】
一部の実施形態では本発明は、オリゴヌクレオチドは第一鎖および第二鎖を含むオリゴヌクレオチドであることを特徴とし、第一鎖および第二鎖は上記式ＩＩによって独立して表されることを特徴とすることを特徴とする上記方法に関する。
【０３８１】
定義
便宜上、本明細書、実施例、および付属の請求項で用いられる一部の用語をここに集める。「発現抑制する」の語は、少なくとも部分的に抑制することを意味する。たとえば、一部の場合では、本発明の二本鎖オリゴヌクレオチドの投与によって、遺伝子は少なくとも約２５％、３５％、または５０％抑制される。好ましい一実施形態では、本発明の二本鎖オリゴヌクレオチドの投与によって、遺伝子は少なくとも約６０％、７０％、または８０％抑制される。より好ましい一実施形態では、本発明の二本鎖オリゴヌクレオチドの投与によって、遺伝子は少なくとも約８５％、９０％、または９５％抑制される。非常に好ましい一実施形態では、本発明の二本鎖オリゴヌクレオチドの投与によって、遺伝子は少なくとも約９８％または９９％抑制される。
【０３８２】
上記の化合物の考えられる同等物は、化合物がシグマ受容体と結合する効力に悪影響を与えない置換基の一つ以上の単純な改変がなされていることを特徴とする、他の面ではそれに相当し、およびその同一の一般的特性（たとえば、鎮痛剤として機能）を有する化合物を含む。一般的に、本発明の化合物は、たとえば下記の通りの一般反応手順に説明される方法またはその改変によって、容易に入手可能な開始材料、試薬および従来の合成手順を用いて調製されうる。これらの反応では、それ自身公知であるがここでは言及されない変形を利用することもまた可能である。
【０３８３】
本発明の一部の化合物は、特定の幾何異性形または立体異性形で存在しうる。別に指定されない限り、本発明はシスおよびトランス異性体、Ｒ−およびＳ−鏡像異性体、ジアステレオマー、（Ｄ）−異性体、（Ｌ）−異性体、そのラセミ混合物、および他のその混合物を含むそのような化合物すべてを、本発明の範囲内にあると考える。追加の不斉炭素原子が、アルキル基のような置換基に存在しうる。そのような異性体すべて、およびその混合物は、本発明に包含されることが意図される。
【０３８４】
たとえば、本発明の化合物の特定の鏡像異性体が望まれる場合、不斉合成によって調製でき、またはキラル助剤を用いた誘導体化によって調製でき結果として生じるジアステレオマー混合物は分離されおよび補助基は切断されて目的の鏡像異性体を与える。代替的に、分子がアミノ基のような塩基性官能基を含む場合、またはカルボン酸基のような酸性官能基を含む場合、適当な光学的に活性な酸または塩基を用いてジアステレオマー塩が形成され、次いで分別再結晶またはクロマトグラフィー法によって、そのように形成されたジアステレオマーの分割、およびその後の純粋な鏡像異性体の回収を実施する。
【０３８５】
本発明の目的のためには、化学元素はＰｅｒｉｏｄｉｃ Ｔａｂｌｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｌｅｍｅｎｔｓ，ＣＡＳ ｖｅｒｓｉｏｎ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ，６７ｔｈ Ｅｄ．，１９８６−８７，内表紙に従って同定される。
【０３８６】
「ヘテロ原子」の語は本分野で知られており、および炭素または水素以外の任意の原子をいう。ヘテロ原子の例はホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄およびセレンを含む。
【０３８７】
「アルキル」の語は本分野で知られており、および直鎖アルキル基、分枝鎖アルキル基、シクロアルキル（脂環式）基、アルキル置換シクロアルキル基、およびシクロアルキル置換アルキル基を含む飽和脂肪族基を含む。一部の実施形態では、直鎖または分枝鎖アルキルは骨格中に約３０以下の炭素原子（たとえば、直鎖についてＣ１〜Ｃ３０、分枝鎖についてＣ３〜Ｃ３０）、および代替的に、約２０以下を有する。同様に、シクロアルキルは環構造中に約３ないし約１０個の炭素原子、および代替的に環構造中に約５、６または７個の炭素を有する。
【０３８８】
炭素の数が別に指定されない限り、「低級アルキル」は上で定義された通りのしかし１ないし約１０個の炭素、代替的に１ないし約６個の炭素原子を骨格構造中に有するアルキル基をいう。同様に、「低級アルケニル」および「低級アルキニル」は同様の鎖長を有する。
【０３８９】
「アラルキル」の語は本分野で知られており、およびアリール基（たとえば、芳香族またはヘテロ芳香族基）で置換されたアルキル基をいう。
【０３９０】
「アルケニル」および「アルキニル」の語は本分野で知られており、および上記のアルキルと長さおよび可能な置換で同様であるがしかし少なくとも一つの二重または三重結合をそれぞれ含む不飽和脂肪族基をいう。
【０３９１】
「アリール」の語は本分野で知られており、および０ないし４個のヘテロ原子を含みうる５、６および７員単環芳香族基、たとえば、ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、ピレン、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、トリアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジンおよびピリミジン、など、をいう。ヘテロ原子を環構造中に有するそれらのアリール基はまた、「アリールヘテロ環」または「ヘテロ芳香族」ともいう。芳香族環は、一つ以上の環位置にて、上記のような置換基、たとえば、ハロゲン、アジド、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、アルコキシル、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、ホスホネート、ホスフィネート、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、アルキルチオ、スルホニル、スルホンアミド、ケトン、アルデヒド、エステル、ヘテロシクリル、芳香族またはヘテロ芳香族部分、−ＣＦ３、−ＣＮ、などで置換されうる。「アリール」の語はまた、環のうちの少なくとも一つが芳香族であることを特徴とする二つの隣接する環（その環は「縮合環」である）に二個以上の炭素が共通している、二つ以上の環を有する多環式環系を含み、たとえば、他方の環はシクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリールおよび／またはヘテロシクリルでありうる。
【０３９２】
オルト、メタおよびパラの語は本分野で知られており、およびそれぞれ１，２−、１，３−および１，４−二置換ベンゼンをいう。たとえば、１，２−ジメチルベンゼンおよびオルト−ジメチルベンゼンの名称は同義である。
【０３９３】
「ヘテロシクリル」、「ヘテロアリール」、または「ヘテロ環基」の語は本分野で知られており、および環構造が０ないし４個のヘテロ原子を含む３〜約１０員環構造、代替的に３〜約７員環をいう。ヘテロ環はまた多環でありうる。ヘテロシクリル基は、たとえば、チオフェン、チアントレン、フラン、ピラン、イソベンゾフラン、クロメン、キサンテン、フェノキサンテン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、イソチアゾール、イソキサゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドリジン、イソインドール、インドール、インダゾール、プリン、キノリジン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、ピリミジン、フェナントロリン、フェナジン、フェナルサジン、フェノチアジン、フラザン、フェノキサジン、ピロリジン、オキソラン、チオラン、オキサゾール、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、ラクトン、アゼチジノンおよびピロリジノンのようなラクタム、スルタム、スルトン、などを含む。ヘテロ環は、一つ以上の位置にて、上記のような置換基、たとえば、ハロゲン、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、ホスホネート、ホスフィネート、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、アルキルチオ、スルホニル、ケトン、アルデヒド、エステル、ヘテロシクリル、芳香族またはヘテロ芳香族部分、−ＣＦ３、−ＣＮ、などで置換されうる。
【０３９４】
「ポリシクリル」または「多環式基」の語は本分野で知られており、および二つの隣接する環に二個以上の炭素が共通している、二つ以上の環（たとえば、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリールおよび／またはヘテロシクリル）をいい、たとえば、その環は「縮合環」である。隣接しない原子を介して結合している環は「架橋」環という。多環の各環は、上記のような置換基、たとえば、ハロゲン、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、ホスホネート、ホスフィネート、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、アルキルチオ、スルホニル、ケトン、アルデヒド、エステル、ヘテロシクリル、芳香族またはヘテロ芳香族部分、−ＣＦ３、−ＣＮ、などで置換されうる。
【０３９５】
「炭素環」の語は本分野で知られており、および環の各原子が炭素である芳香族または非芳香族環をいう。
【０３９６】
「ニトロ」の語は本分野で知られており、および−ＮＯ２をいう；「ハロゲン」の語は本分野で知られており、および−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒまたは−Ｉをいう；「スルフヒドリル」の語は本分野で知られており、および−ＳＨをいう；「ヒドロキシル」の語は−ＯＨを意味する；および「スルホニル」の語は本分野で知られており、および−ＳＯ２−をいう。「ハロゲン化物」は対応するハロゲンの陰イオンを表し、および「擬似ハロゲン化物」はＣｏｔｔｏｎおよびＷｉｌｋｉｎｓｏｎ著の“Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”の５６０頁に示される定義を有する。
【０３９７】
「アミン」および「アミノ」の語は本分野で知られており、および非置換および置換アミンの両方、たとえば次の一般式で表されうる部分をいう：
【化７３】
2007535922.tif 000084
ここでＲ５０、Ｒ５１およびＲ５２はそれぞれ独立して、水素、アルキル、アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ６１を表し、またはＲ５０およびＲ５１は結合するＮ原子と共に環構造に４ないし８原子を有するヘテロ環を完成する；Ｒ６１はアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロ環または多環を表す；およびｍは０または１から８の範囲の整数である。他の実施形態では、Ｒ５０およびＲ５１（および必要に応じてＲ５２）はそれぞれ独立して、水素、アルキル、アルケニル、または−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ６１を表す。したがって、「アルキルアミン」の語は、結合した置換または非置換アルキルを有する、すなわち、Ｒ５０およびＲ５１のうち少なくとも一つがアルキル基である、上で定義された通りのアミン基を含む。
【０３９８】
「アシルアミノ」の語は本分野で知られており、および次の一般式で表されうる部分をいう：
【化７４】
2007535922.tif 000085
ここでＲ５０は上で定義された通りであり、およびＲ５４は水素、アルキル、アルケニルまたは−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ６１を表し、ｍおよびＲ６１は上で定義される通りである。
【０３９９】
「アミド」の語はアミノ置換カルボニルとして本分野で知られており、および次の一般式で表されうる部分を含む：
【化７５】
2007535922.tif 000086
ここでＲ５０およびＲ５１は上で定義された通りである。本発明においてアミドの一部の実施形態は、不安定でありうるイミドを含まない。
【０４００】
「アルキルチオ」の語は、結合した硫黄ラジカルを有する、上で定義された通りのアルキル基をいう。一部の実施形態では、「アルキルチオ」部分は−Ｓ−アルキル、−Ｓ−アルケニル、−Ｓ−アルキニル、および−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ６１のうちの一つによって表され、ここでｍおよびＲ６１は上で定義される。代表的なアルキルチオ基はメチルチオ、エチルチオ、などを含む。
【０４０１】
「カルボキシル」の語は本分野で知られており、および次の一般式で表されうるような部分を含む：
【化７６】
2007535922.tif 000087
ここでＸ５０は結合であるかまたは酸素または硫黄を表し、およびＲ５５およびＲ５６は水素、アルキル、アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ６１または医薬として許容される塩を表し、Ｒ５６は水素、アルキル、アルケニルまたは−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ６１を表し、ここでｍおよびＲ６１は上で定義される。Ｘ５０が酸素でありおよびＲ５５またはＲ５６が水素でない場合、式は「エステル」を表す。Ｘ５０が酸素でありおよびＲ５５が上で定義される通りである場合、その部分はここではカルボン酸基と呼ばれ、および特にＲ５５が水素である場合、式は「カルボン酸」を表す。Ｘ５０が酸素でありおよびＲ５６が水素である場合、式は「ギ酸」を表す。一般的に、上式の酸素原子が硫黄で置換される場合、式は「チオールカルボニル」基を表す。Ｘ５０が硫黄でありおよびＲ５５またはＲ５６が水素でない場合、式は「チオールエステル」を表す。Ｘ５０が硫黄でありおよびＲ５５が水素である場合、式は「チオールカルボン酸」を表す。Ｘ５０が硫黄でありおよびＲ５６が水素である場合、式は「チオールギ酸」を表す。一方、Ｘ５０が結合でありおよびＲ５５が水素でない場合、上式は「ケトン」基を表す。Ｘ５０が結合でありおよびＲ５５が水素である場合、上式は「アルデヒド」基を表す。
【０４０２】
「カルバモイル」の語は−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲＲ’を表し、ここでＲおよびＲ’は独立してＨ、脂肪族基、アリール基またはヘテロアリール基である。
【０４０３】
「オキソ」の語はカルボニル酸素（＝Ｏ）をいう。
【０４０４】
「オキシム」および「オキシムエーテル」の語は本分野で知られており、および次の一般式で表される部分をいう：
【化７７】
2007535922.tif 000088
ここでＲ７５は水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、または−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ６１である。その部分は、ＲがＨである場合には「オキシム」であり；およびＲがアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、または−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ６１である場合には「オキシムエーテル」である。
【０４０５】
「アルコキシル」または「アルコキシ」の語は本分野で知られており、および、結合した酸素ラジカルを有する、上で定義された通りのアルキル基をいう。代表的なアルコキシル基は、メトキシ、エトキシ、プロピルオキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシなどを含む。「エーテル」は酸素によって共有結合した二つの炭化水素である。したがって、アルキルをエーテルにするアルキルの置換基は、アルコキシルであるかまたはそれに類似しており、たとえば−Ｏ−アルキル、−Ｏ−アルケニル、−Ｏ−アルキニル、ｍおよびＲ６１が上記で定義される−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ６１のうちの一つで表されうる通りである。
【０４０６】
「スルホネート」の語は本分野で知られており、以下の一般式によって表される部分をいう：
【化７８】
2007535922.tif 000089
ここでＲ５７は電子対、水素、アルキル、シクロアルキルまたはアリールである。
【０４０７】
「スルフェート」の語は本分野で知られており、以下の一般式で表される部分を含む：
【化７９】
2007535922.tif 000090
ここで、Ｒ５７は上記で定義された通りである。
【０４０８】
「スルホンアミド」の語は本分野で知られており、以下の一般式で表される部分を含む：
【化８０】
2007535922.tif 000091
ここで、Ｒ５０およびＲ５６は上記で定義された通りである。
【０４０９】
「スルファモイル」の語は本分野で知られており、以下の一般式によって表される部分をいう：
【化８１】
2007535922.tif 000092
ここでＲ５０およびＲ５１は上記で定義された通りである。
【０４１０】
「スルホニル」の語は本分野で知られており、および一般式によって表されうる部分をいう：
【化８２】
2007535922.tif 000093
ここで、Ｒ５８は水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールのうち一つである。
【０４１１】
「スルホキシド」の語はは本分野で知られており、および一般式によって表されうる部分をいう：
【化８３】
2007535922.tif 000094
ここでＲ５８は上記で定義された通りである。
【０４１２】
「ホスホリル」の語は本分野で知られており、および式によって一般的に表されうる：
【化８４】
2007535922.tif 000095
ここで、Ｑ５０はＳまたはＯを表し、およびＲ５９は低級アルキルまたはアリールを表す。たとえばアルキルを置換するために用いるときに、ホスホリルアルキルのホスホリル基は一般式によって表してもよい：
【化８５】
2007535922.tif 000096
ここでＱ５０およびＲ５９は、それぞれ独立して、上で定義された通りであり、およびＱ５１はＯ、ＳまたはＮを表す。Ｑ５０がＳである場合、ホスホリル部分は「ホスホロチオレート」である。
【０４１３】
「ホスホラミダイト」の語は、本分野で知られており、および一般式に表されうる：
【化８６】
2007535922.tif 000097
ここで、Ｑ５１、Ｒ５０、Ｒ５１およびＲ５９は、上で定義された通りである。
【０４１４】
「ホスホナミダイト」の語は、本分野で知られており、および一般式に表されうる：
【化８７】
2007535922.tif 000098
ここで、Ｑ５１、Ｒ５０、Ｒ５１およびＲ５９は、上で定義された通りであり、よびＲ６０は低級アルキルまたはアリールを表す。
【０４１５】
アルケニルおよびアルキニル基に対する相同的置換を行って、たとえば、アミノアルケニル、アミノアルキニル、アミドアルケニル、アミドアルキニル、イミノアルケニル、イミノアルキニル、チオアルケニル、チオアルキニル、カルボニル置換アルケニルまたはアルキニルを生じてもよい。
【０４１６】
各表現、たとえばアルキル、ｍ、ｎ、などの定義は、それが任意の構造において二回以上起こる場合、同一構造の他の場所での定義から独立しているとことが意図されている。
【０４１７】
「セレノアルキル」の語は、本分野で知られており、および置換されたセレノ基が結合したアルキル基ををいう。アルキルを置換しうる典型的な「セレノエーテル」は、Ｓｅ―アルキル、―Ｓｅ―アルケニル、―Ｓｅ―アルキニル、および−Ｓｅ―（ＣＨ２）ｍ―Ｒ６１、ｍおよび上で定義されているＲ６１の一つから選択される。
【０４１８】
トリフリル、トシル、メシルおよびノンアフリルの語は、本分野で知られており、および、トリフルオロメタンスルホニル、トルエンスルホニル、メタンスルホニルおよびノンアフルオロブタンスルホニル基ををそれぞれいう。トリフレート、トシレート、メシラートおよびノンアフレートの語は、本分野で知られており、およびトリフルオロメタンスルホン酸エステル、Ｐ−トルエンスルホン酸エステル、メタンスルホン酸エステル、およびノンアフルオロブタンスルホン酸エステルの官能基、およびその基を含む分子をそれぞれいう。
【０４１９】
省略形Ｍｅ、Ｅｔ、Ｐｈ、Ｔｆ、Ｎｆ、ＴｓおよびMsは、メチル、エチル、フェニル、トリフルオロメタンスルホニル、ノンアフルオロブタンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニルおよびメタンスルホニルをそれぞれ表す。当業者である有機化学者によって利用される省略形のより包括的なリストが、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｊｏｕｒｎａｌの各巻の第一号に示される；このリストは、典型的にはＳｔａｎｄａｒｄ  Ｌｉｓｔ  ｏｆ  Ａｂｂｒｅｖｉａｔｉｏｎｓという題名の表中に示される。
【０４２０】
本発明の組成物に含まれる一部の化合物は、特定の幾何異性形または立体異性形態で存在しうる。加えて、本発明のポリマーは、光学的活性であってもよい。本発明はシス―およびトランス異性体、Ｒ―およびＳ―鏡像異性体、ジアステレオマー、（Ｄ）―異性体、（Ｌ）−異性体、、そのラセミ混合物、および他のその混合物を含む、そのような化合物すべてを、本発明の範囲内にあると考える。追加の不斉炭素原子が、アルキル基のような置換基に存在しうる。そのような異性体すべて、およびそれらの混合物は、本発明に包含されることが意図される。
【０４２１】
たとえば、本発明の化合物の特定の鏡像異性体が望まれる場合、不斉合成によって、またはキラル助剤を用いた誘導体化によって調製でき結果として生じるジアステレオマー混合物は分離されおよび補助基は切断されて純粋な目的の鏡像異性体を与える。代替的に、分子がアミノのような塩基性官能基またはカルボキシルのような酸性官能基を含む場合、適当な光学的に活性な酸または塩基を用いてジアステレオマー塩が形成され、次いで、当業に公知の分別再結晶またはクロマトグラフィ法によって、そのように形成されたジアステレオマーの分割、およびその後の純粋な鏡像異性体の回収を実施する。
【０４２２】
「置換」または「で置換された」は、このような置換が被置換原子および置換基の許容原子価に従うこと、および置換によって、転位、環化、除去または他の反応などによる変化を自発的に受けない安定した化合物となることとの潜在的な条件を含むことが理解されるであろう。
【０４２３】
「置換される」の語も、有機化合物のすべての許容される置換基を含むと考えられている。広い態様において許容される置換基は、有機化合物の非環式および環式、分枝および非分枝、炭素環式および複素環式、芳香族および非芳香族置換基を含む。例示的な置換置は、たとえば、本明細書中に上記に記載されている置換置を含む。許容される置換基は、一つでも二つ以上でもよく、および適当な有機化合物と同じでも異なってもよい。本発明の目的のために、窒素のようなヘテロ原子は、水素置換基および／または本明細書中に記載されヘテロ原子の原子価を満たす有機化合物の任意の許容される置換基を有してもよい。本発明は、いかなる方法によっても、有機化合物の許容される置換基によって制限されることを意図されていない。
【０４２４】
本明細書で用いられる「保護基」の句は、望まない化学変換から潜在的に反応性官能基を保護する一時的な置換基を意味する。このような保護基の例は、カルボン酸のエステル、アルコールのシリル・エーテル、およびアルデヒドのアセタールおよびケトンのケタールを含む。保護基の化学分野が再検討されてきた（Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．Ｗｕｔｓ；Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ  ｅｄ。；Ｗｉｌｅｙ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９１）を参照）。本発明の化合物の保護された形態は、本発明の範囲内に含まれる。
【０４２５】
医薬品組成物
別の実施形態では、本発明は上記の化合物の一つ以上の治療的有効量を含み、一つ以上の薬学的に許容可能なキャリヤー（添加物）および／または希釈剤とともに処方される、薬学的に許容可能な組成物を提供する。後に詳述するように、本発明の医薬品組成物は、下記に適合した固体または液体剤型での投与のために特別に処方してもよい：（１）経口投与、たとえば水薬（水性または非水性の溶液または懸濁液）、たとえば、口腔、舌下、および全身吸収をねらった錠剤、ボーラス、粉末、顆粒剤、舌への塗布のためのペースト； （２）たとえば無菌溶液または懸濁液、または徐放性製剤として、たとえば、皮下、筋肉内、静脈内または硬膜外注射による非経口投与；（３）たとえば、皮膚に塗布されるクリーム、軟膏または徐放性パッチまたはスプレーとしての局所塗布；（４）たとえば、膣坐薬、クリームまたは発泡体としての経膣的または経直腸的；（５）舌下；（６）視覚的；（７）経皮的；（８）または経鼻的。
【０４２６】
ここで用いられる「治療的有効量」の句は、本発明の化合物を含む化合物、材料または組成物の量であって、任意の薬物治療に適用可能な合理的な利点／リスクの比率で少なくとも動物細胞の部分母集団において、一定の目的の治療効果を生じるために有効な、本発明の化合物を含む化合物、材料または組成物の量を意味する。
【０４２７】
「薬学的に許容可能な」の句はここでは、堅実な医学判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応または他の問題または合併症なしに、合理的な利点／危険率に相応して、ヒトおよび動物の組織と接触した使用に適している、化合物、材料、組成物および／または剤型をいうよう使用される。
【０４２８】
ここで用いられる「薬学的に許容可能なキャリヤー」は、一器官または体の一部から、他の器官または体の一部に、対象化合物を運搬または輸送することに関与する、液体または固体の充填材、希釈剤、賦形剤、製造補助剤（たとえば、潤滑油、タルク・マグネシウム、ステアリン酸カルシウムまたはステアリン酸亜鉛）または封入材を含む溶媒といった、薬学的に許容可能な材料、組成物または溶媒を意味する。各キャリヤーは、製剤の他の成分と適合性を持つおよび、患者に有害でないという意味において「許容可能」でなければならない。薬学的に許容可能なキャリヤーとして役立ちうるいくつかの材料の例は、下記を含む：（１）ラクトース、ブドウ糖および蔗糖といった糖；（２）コーンスターチおよびポテトデンプンといったデンプン；（３）セルロース、およびカルボキシメチル・セルロース・ナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロースなどその誘導体；（４）トラガカント末；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）カカオバターおよび坐薬ワックスといった賦形剤；（９）落花生油、綿実油、サフラワー油、胡麻油、オリーブ油、トウモロコシ油および大豆油といった、油；（１０）プロピレングリコールといった、グリコール；（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコールといった多価アルコール；（１２）オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルといったエステル類；（１３）寒天；（１４）水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムといった緩衝剤；（１５）アルギン酸；（１６）ピロゲン―自由水；（１７）等張性食塩水；（１８）リンガー溶液；（１９）エチルアルコール；（２０）ｐＨ緩衝液；（２１）ポリエステル、ポリカーボネートおよび／またはポリ無水物；および（２２）医薬組成物において使用される適合性を持つ他の非毒性物質。
【０４２９】
上で述べられるように、本化合物の一部の実施形態は、アミノまたはアルキルアミノといった塩基性官能基を含んでもよく、および、したがって、薬学的に許容可能な酸により薬学的に許容可能な塩類を形成することができる。
【０４３０】
上記に記載のとおり、本化合物の一部の実施形態は、アミノまたはアルキルアミノといった塩基性の官能基を含んでもよく、および、したがって、薬学的に許容可能な酸により薬学的に許容可能な塩類を形成することができる。「薬学的に許容可能な塩類」の用語は、この点において、本発明の化合物の比較的非毒性の、無機および有機の酸付加塩をいう。これらの塩類は、投与媒体または剤型製造工程においてｉｎ  ｓｉｔｕで、または本発明の精製済化合物を遊離塩基の形で適切な有機酸または無機酸と別々に反応させ、および、このように形成された塩をその後の精製の間に分離するこによって、調製してもよい。代表的な塩類は、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、ベンゾアート、乳酸塩、リン酸塩、トシレート、クエン酸塩、マレアート、フマル酸エステル、琥珀酸塩、酒石酸塩、ナプチレート、メシラートを含む、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸、およびラウリルスルホネート塩などを含む。（（Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９７７）“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ”，  Ｊ．Ｐｈａｒｍ．ＳｃＬ６６：１−１９）を参照。）
対象化合物の薬学的に許容可能な塩類は、たとえば、非毒性の有機酸または無機酸由来の化合物の従来の非毒性塩類または４原子アンモニウム塩を含む。たとえば、このような従来の非毒性塩類は、塩酸塩、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、窒素酸などといった無機酸から誘導された塩類、および、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パルミチン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタン硫酸、ジスルホン酸エタン、シュウ酸、イソチオン酸などといった有機酸から調製される塩類を含む。
【０４３１】
他の場合には本発明の化合物は、一つ以上の酸性官能基を含んでもよく、および、したがって薬学的に許容可能な塩基とともに、薬学的に許容可能な塩類を形成することができる。これらの例において「薬学的に許容可能な塩類」の語は、本発明の化合物の比較的非毒性の、無機および有機の塩基付加塩をいう。
【０４３２】
これらの塩類は、投与媒体または剤型製造工程においてｉｎ  ｓｉｔｕで、または本発明の精製済化合物を遊離塩基の形で適切な有機酸または無機酸と別々に反応させ、および、このように形成された塩をその後の精製の間に分離するこによって、調製してもよい。代表的な塩類は、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、ベンゾアート、乳酸塩、リン酸塩、トシレート、クエン酸塩、マレアート、フマル酸エステル、琥珀酸塩、酒石酸塩、ナプチレート、メシラートを含む、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸、およびラウリルスルホネート塩などを含む。これらの塩類も、同様に、投与媒体または剤型製造工程においてｉｎ  ｓｉｔｕで、または本発明の精製済化合物を遊離酸形態で、薬学的に許容可能な金属陽イオンの水酸化物、炭酸塩または重炭酸塩といった適切な塩基と、アンモニアと、または薬学的に許容可能な第一級、第二級または第三級有機アミンと別々に反応させることができる。代表的なアルカリ又はアルカリ金属土類塩には、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、アルミニウム塩などがある。塩基付加塩の形成のために有用な代表的有機アミンには、エチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン等が含まれる。（たとえば、上記Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，を参照。）
ラウリン硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムといった湿潤剤、乳化剤および潤滑油、および着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味料、調味料および芳香剤、防腐剤および酸化防止剤もまた組成物中に存在しうる。
【０４３３】
薬学的に許容可能な酸化防止剤の例は、下記を含む：（１）アスコルビン酸、塩酸システイン、硫化水素ナトリウム、異性重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムといった水溶性酸化防止剤；（２）パルミチン酸アスコルビル、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）レシチン、プロピル没食子酸塩、アルファトコフェロールといった油溶性酸化防止剤；および（３）クエン酸、エチレンジアミン４酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸といった金属キレート剤。
【０４３４】
本発明の製剤は、経口、経鼻、（口腔および舌下を含む）局所、直腸、経膣および／または非経口投与に適している製剤を含む。製剤は、単位剤型において便利に提示してもよく、および薬学分野で公知の任意の方法によって調製してもよい。キャリヤー材料と組み合わせて単回分の剤型を生じることができる活性成分の量は、治療される宿主および特定の投与様式によって、変化する。キャリヤー材料と組み合わせて単回分の剤型を生じることができる活性成分の量は、一般的に治療効果を生じる化合物の量である。一般的に、１００％のうち、この量は、活性成分の約０．１％から約９９％まで、好ましくは約５％から約７０％まで、最も好ましくは約１０％から約３０％までである。
【０４３５】
一部の実施形態では、本発明の製剤は、シクロデクストリン、セルロース、リポソーム、胆汁酸などミセル形成剤、およびたとえばポリエステルおよびポリ無水物など重合キャリヤーより成る群から選択される賦形剤、および本発明の化合物を含む。一部の実施形態では、上述した製剤によって、経口的に本発明の化合物が生物的に利用可能になる。
【０４３６】
これらの製剤または組成物を調製する方法は、キャリヤーおよび、任意の一つ以上の副成分と、本発明の化合物を関連付ける段階を含む。一般的に、製剤は、本発明の化合物を、液体キャリヤー、細分化した固体キャリヤー、またはその両方と一様におよび緊密に会合させることによって、および次いで、必要に応じて、製品を成形することによって調製される。
【０４３７】
経口投与に適している本発明の調製物は、カプセル、カシェ剤、丸薬、錠剤（通常蔗糖およびアカシアまたはトラガカントゴムである調味基剤を用いた）菱形剤、粉末、顆粒剤の剤型で、または水性または非水性液体中の溶液または懸濁液として、または水中油または油中水液体エマルジョンとして、またはエリキシルまたはシロップとして、または（たとえばゼラチンおよびグリセリンまたは蔗糖およびアカシアといった不活性基材を用いて）芳香錠として、および／またはうがい薬などとして、それぞれ本発明の化合物の所定量を含んで存在しうる。本発明の化合物は、ボーラス、舐剤またはペーストとして投与してもよい。
【０４３８】
経口投与（カプセル、錠剤、ピル、糖衣錠、粉末、顆粒、トローチなど）のための本発明の固体の剤型において、活性成分は、クエン酸ナトリウムまたはリン酸ニカルシウム、および／または下記の任意といった一つ以上の薬学的に許容可能なキャリヤーと混合される；（１）たとえば澱粉、ラクトース、蔗糖、ブドウ糖、マンニトールおよび／またはケイ酸といった充填材または増量剤；（２）カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、蔗糖および／またはアカシアといった、結合剤；（３）グリセロールのような湿潤剤；（４）たとえば寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカ澱粉、アルギン酸、特定のケイ酸塩および炭酸ナトリウムといった崩壊剤；（５）パラフィンのような溶液遅延剤；（６）第四アンモニウム化合物のような吸収加速剤、およびポロキサマーおよびラウリル硫酸塩ナトリウムといった界面活性剤；（７）セチルアルコール、モノステアリン酸グリセロールおよび非イオン界面活性剤など、湿潤剤；（８）カオリンおよびベントナイト粘土といった吸収剤；（９）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリン硫酸ナトリウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸およびそれらの混合物といった潤滑油；（１０）着色剤；および（１１）クロスポビドンまたはエチルセルロースといった徐放剤。カプセル、錠剤およびピルの場合、医薬品組成物は、緩衝剤も含みうる。似た種類の固体の組成物は、ラクトースまたは乳糖および高分子量ポリエチレングリコールといった賦形剤を使って、柔らかいおよび殻の固いゼラチンカプセル中で充填材として使用してもよい。
【０４３９】
錠剤は、必要に応じて一つ以上の副成分とともに、圧縮または成形によって製作してもよい。圧縮錠剤は、結合剤（たとえば、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、潤滑油、不活性希釈剤、防腐剤、崩壊剤（たとえば、グリコール酸ナトリウム澱粉または架橋ナトリウム・カルボキシメチル・セルロース）、界面活性剤または薬品分散剤を用いて、調製してもよい。成形された錠剤は、適切な機械中で不活性な液体希釈剤で湿らせた粉末化合物の混合物を成形することによって製作してもよい。
【０４４０】
本発明の医薬品組成物の錠剤、および糖衣錠、カプセル、ピルおよび顆粒剤といった他の固体剤型は、腸溶コーティングおよび医薬品処方技術において周知の他のコーティングといった、コーティングおよびシェルで必要に応じて分割または調製してもよい。これらは、たとえば、目的の放出特性を提供するために比率を変化させる際のヒドロキシプロピルメチルセルロースを用いて、剤型内の活性成分、他のポリマーマトリックス、リポソームおよび／または微小球体の放出を遅延または制御するよう処方してもよい。それらは、急速な放出、たとえば冷凍乾燥用に処方してもよい。それらは、たとえば、細菌保持フィルタによるろ過によって、または殺菌水中に溶解可能な無菌の固体組成物の形で薬剤を殺菌剤を組み込むことによって、または他の注射可能な殺菌媒体によって使用直前に殺菌してもよい。これらの組成物は、乳白剤を必要に応じて含んでもよく、および、消化管の所定部分において必要に応じて遅延した方法で活性成分のみをまたは活性部分を優先的に放出する組成物であってもよい。用いることができる封入組成物の例は、ポリマー物質およびワックスを含む。活性成分は、適宜上記の賦形剤の一つ以上とともに、マイクロカプセル化した剤型であってもよい。
【０４４１】
本発明の化合物の経口投与のための液体剤型は、薬学的に許容可能なエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップおよびエリキシルを含む。液体剤型は活性成分のほかに、たとえば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレン・グリコール、油（特に、綿実、落花生類、穀物油、胚種油、オリーブ、キャスタおよび胡麻油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル、およびそれらの混合物といった、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤といった、当業において一般的に使用される不活性希釈剤を含んでもよい。
【０４４２】
経口用組成物は、不活性希釈剤のほかに、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、甘味料、調味料、着色剤、芳香剤、保存剤といった補助剤を含んでもよい。
【０４４３】
懸濁剤は、活性化合物のほかに、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンのエステル、微晶質セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天、およびトラガカントゴム、ならびにそれらの混合物といった懸濁剤を含んでもよい。
【０４４４】
直腸または経膣投与のための本発明の医薬品組成物の処方は、本発明の化合物の一つ以上を、たとえば、カカオバター、ポリエチレングリコール、坐薬ワックスまたはサリチル酸塩を含む一つ以上の適切な非刺激性賦形剤またはキャリヤーと混合することによって調製でき、および、室温では固体であるが体温では液体でありおよびしたがって、直腸または膣の空腔中に溶解しおよび活性化合物を放出する坐薬として示されてもよい。
【０４４５】
経膣投与に適している本発明の処方は、当業において適切であることが公知であるキャリヤーを含む、膣坐薬、タンポン、クリーム、ゲル類、ペースト、発泡体またはスプレー処方も含む。
【０４４６】
本発明の化合物の局所性または経皮投与のための剤型は、粉末、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション剤、ゲル類、溶液、パッチおよび吸入剤を含む。活性化合物は無菌条件下で、薬学的に許容可能なキャリヤーおよび必要となりうる任意の防腐剤、緩衝剤または推進剤と混合してもよい。
【０４４７】
軟膏、ペースト、クリームおよびゲル類は、本発明の活性化合物のほかに、動物性および植物性脂肪、油、ワックス、パラフィン、澱粉、トラガカントゴム、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン類、ベントナイト、ケイ酸、タルクおよび酸化亜鉛、またはそれらの混合物といった賦形剤を含んでもよい。
【０４４８】
粉末およびスプレーは、本発明の化合物のほかに、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウムおよびポリアミド粉末、またはこれらの物質の混合物といった賦形剤を含んでもよい。スプレーはさらに、クロロフルオロハイドロカーボンのような一般的な推進剤、また、ブタン及びプロパンといった揮発性の置換されていない炭化水素を含みうる。
【０４４９】
経皮パッチは、本発明の化合物の体への制御された伝達を提供するという追加的な利点がある。このような剤型は、化合物を適当な媒体中で溶解または分散させることによって作製してもよい。吸収促進薬もまた、皮膚全体の化合物の流量を増加させるために用いてもよい。このような流量の速度は、律速膜を提供するかまたはポリマーマトリックスまたはゲル中で化合物を分散させることによって制御できる。
【０４５０】
眼科用の処方、眼軟膏剤、粉末、溶液なども、本発明の範囲内であると考えられる。
【０４５１】
非経口投与に適した本発明の医薬品組成物は、本発明の一つ以上の化合物を、一つ以上の薬学的に許容可能な無菌の等張性の水性または非水性溶液、分散液、懸濁液またはエマルジョン、または使用直前に無菌の注射可能な溶液または分散液中で再構成できる無菌粉末と組み合わせて含んでよく、および、糖、アルコール類、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、意図された受容体の血液または懸濁剤または増粘剤によって製剤を等張性にする溶質を含みうる。
【０４５２】
本発明の医薬品組成物において適用してもよい適当な水性および非水性のキャリヤーの例は、水、エタノール、（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、などといった）多価アルコール、およびそれらの適切な混合物、オリーブ油のような植物油、およびオレイン酸エチルのような注射可能な有機エステルを含む。
【０４５３】
たとえば、レシチンのようなコーティング材料を使用することにより、また、分散の場合には必要な粒子サイズを維持することにより、および界面活性剤の使用により、適切な流動度が維持できる。
【０４５４】
これらの組成物は、防腐剤、湿潤剤、乳化剤および分散助剤といった補助剤を含んでもよい。微生物の対象化合物に対する作用の防止は、たとえばパラベン、クロロブタノール、ソルビン酸フェノール、など様々な抗菌剤および抗真菌薬の含有によって保証しうる。組成物に、糖、塩化ナトリウム、などといった等張性薬剤を含むことも望ましいかもしれない。加えて、モノステアリン酸ナトリウムおよびゼラチンといった吸収を遅延させる薬剤を含むことによって、注射可能な医薬品形態の長期の吸収がもたらされうる。
【０４５５】
場合によっては、薬剤の効果を延長する、皮下または筋肉内注入からの薬剤の吸収を遅らせることが望ましい。これは、水溶性の低い結晶性またはアモルファス材料の液体懸濁液を用いて達成することができる。次いで、薬剤の吸収速度は薬剤の溶解速度に依存し、溶解速度は結晶のサイズ及び結晶の形状に依存する。代替的に、非経口的に投与される剤型の吸収の遅延は、薬剤を油媒体中に溶解または懸濁することによって達成される。
【０４５６】
注射可能なデポー剤型は、ポリ乳酸−ポリグリコライドのような生分解性ポリマー中の対象化合物のマイクロカプセルマトリックスを形成することによって作製される。ポリマーに対する薬剤の比率および適用される特定のポリマーの性質に応じて、薬剤放出速度を制御できる。他の生分解性ポリマーの例は、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）を含む。注射可能なデポー処方は、薬剤を体組織と適合性を持つリポソームまたはマイクロエマルジョンに取り込むことによっても調製できる。
【０４５７】
本発明の化合物がヒトおよび動物に医薬品として投与されるである場合、それらは、それ自体で、またはたとえば、薬学的に許容可能なキャリヤーと組み合わせたたとえば活性成分の０．１〜９９％（より好ましくは、１０〜３０％）を含む医薬品組成物として投与することができる。
【０４５８】
本発明の調製物は、経口的、非経口的、局所的、または経直腸的に投与してもよい。それらは、もちろん投与経路ごとに適切な剤型で投与される。たとえば、それらは、錠剤またはカプセル剤の形で、注射、吸入、目薬、軟膏、坐薬、などによって、注射、注入または吸入による投与によって；ローション剤または軟膏によって局所的に；および坐薬によって経直腸的に投与される。経口投与が好ましい。
【０４５９】
ここで用いられる「非経口投与」および「非経口的に投与される」の句は、腸内および局所性投与以外の、通常は注射による投与様式を意味し、および静脈内、筋肉内、動脈内、クモ膜下腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹膜内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、蜘蛛膜下、脊椎内、および、胸骨内の注射および注入を含むが、それらに限定されない。
【０４６０】
ここで用いられる「全身投与」、「全身的に投与される」、「末梢投与」、および「末梢的に投与される」は、中枢神経系への直接投与以外への化合物、薬剤または他の材料の、その結果患者の神経系に進入し、および、次いで代謝およびその他の類似の過程を受けるようにする、たとえば皮下投与を意味する。
【０４６１】
これらの化合物は治療のために、経口的、スプレーなど経鼻的、経直腸的、経膣的、非経口的、大槽内および局所的を含む任意の適切な投与経路によって、口腔内および舌下を含む粉末、軟膏またはドロップ剤によって、ヒトおよび他の動物に対して投与してもよい。
【０４６２】
選択される投与経路に関係なく、適切な水和物の形態および／または本発明の医薬品組成物の形態で用いることができる本発明の化合物は、当業者に公知の従来の方法によって薬学的に許容可能な剤型へと処方される。
【０４６３】
本発明の医薬品組成物の活性成分の実際の用量レベルは、患者への毒性なしに、特定の患者、組成物および投与様式に対して目的の治療的反応を達成するために効果的な活性成分の量を得るために変化させてももよい
選択された用量レベルは、使用される本発明の特定の化合物またはそのエステル、塩またはアミドの活性、投与経路、投与時間、使用されている特定の化合物の排出または代謝の速度、吸収の速度および程度、治療の期間、他の薬剤、化合物および／または使用される特定の化合物と組み合わせて用いられる材料、治療する患者の年齢、性別、体重、状態、健康状態および既往歴、および医学では周知の類似の因子を含む様々な因子に依存する。
【０４６４】
当業の医師または獣医師は、必要な医薬品組成物の有効な量を容易に決定しおよび処方することができる。たとえば、医師または獣医師は、医薬品組成物中に使用される本発明の化合物の用量を、目的の治療効果を達成するために必要なレベルよりも低いレベルから始め、および、目的の効果が達成されるまで、徐々に用量を増加させることができるであろう。
【０４６５】
一般的に、本発明の化合物の適切な日用量は、化合物の治療的効果を生じるのに効果的な最小用量である。一般的にこのような有効な量は、上記の因子に依存する。一般的に、指示された鎮痛効果のために用いられる場合、本発明の化合物の患者に対しての経口、静脈内、脳室内および、皮下の用量は１日あたり約０．０００１から約１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲にある。
【０４６６】
所望の場合、活性化合物の有効な日用量は、一日全体において適切な間隔で、下位用量以上２、３、４、５、６回以上の小用量として、必要に応じて単位剤型で分割投与してもよい。好ましい投薬は、一日一回投与である。
【０４６７】
本発明の化合物は単独で投与できる一方、化合物は医薬品処方（組成物）として投与するのが好ましい。
【０４６８】
他の医薬品と同様、本発明による化合物は、ヒトまたは獣医学における使用のための任意の便利な方法での投与のために処方してもよい。
【０４６９】
別の態様では、本発明は、上述の、治療的有効量の一つ以上の対象化合物を含み、一つ以上の薬学的に許容可能なキャリヤー（添加物）および／または希釈剤とともに処方された薬学的に許容可能な組成物を提供する。後述するように、本発明の医薬品組成物は、下記に適合した固体または液体剤型での投与のために、特別に処方してもよい：（１）経口投与、たとえば水薬（水性または非水性溶液または懸濁液）、錠剤、たとえば、口腔、舌下、および全身吸収を目標としたもの、ボーラス、粉末、顆粒剤、舌への塗布のためのペースト；（２）たとえば、皮下、筋肉内、静脈内または硬膜外注射によって、たとえば無菌溶液または懸濁液、または徐放性製剤としての非経口投与；（３）たとえば、皮膚に塗布されるクリーム、軟膏または徐放性パッチまたはスプレーとしての局所塗布；（４）たとえば、膣坐薬、クリームまたは発泡体としての、経膣的または経直腸的；（５）舌下；（６）視覚的；（７）経皮的；（８）または経鼻的。
【０４７０】
「治療」の語は、予防、治療および治癒を包含するよう意図されている。
【０４７１】
この治療を受ける患者は、霊長類、特にヒトおよび、ウマ、ウシ、ブタおよびヒツジといった哺乳類、および一般的な家禽およびペットなど、治療を必要とする任意の動物である。
【０４７２】
本発明の化合物は、それ自体、または薬学的に許容可能なキャリヤーとの混合物において投与することができ、および、ペニシリン、セファロスポリン、アミノグリコシドおよびグリコペプチドといった抗菌薬に組み合わせて投与することもできる。したがって併用治療は、最初に投与されたものの治療的効果が後続のものが投与されても完全に消失しない方法での、活性化合物の連続的、同時および別々の投与を含む。
【０４７３】
動物飼料に対する本発明の活性化合物の追加は、有効な量の活性化合物を含む適当な予混合物を調製し、および予混合物を完全な飼料に組み込むことによって好ましくは達成される。
【０４７４】
代替的に、活性成分を含む中間の濃縮物または補助食品は、食料に混和することができる。このような食品予混合物および完全な飼料が調製および投与できる方法が、参照書籍に記載されている（“Ａｐｐｌｉｅｄ Ａｎｉｍａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ”， Ｗ．Ｈ． Ｆｒｅｅｄｍａｎ ａｎｄ ＣＯ．， Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ， Ｕ．Ｓ．Ａ．， １９６９または“Ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ Ｆｅｅｄｓ ａｎｄ Ｆｅｅｄｉｎｇ” Ｏ ａｎｄ Ｂ ｂｏｏｋｓ， Ｃｏｒｖａｌｌｉｓ， Ｏｒｅ．， Ｕ．Ｓ．Ａ．， １９７７など）。
【０４７５】
ミセル
近年、医薬品業界は、いくつかの親油性（水不溶性）医薬品の生物学的利用能を改善するために、マイクロ乳化技術を導入した。その例はトリメトリン（Ｄｏｒｄｕｎｏｏ，Ｓ．Ｋ．ｅｔ  ａｌ， Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（１７（１２）， １６８５−１７１３， １９９１）およびＲＥＶ５９０１（Ｓｈｅｅｎ，Ｐ． Ｃ， ｅｔ  ａｌ，Ｊ  Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ  ８０（７）７１２−７１４、１９９１））を含む。とりわけ、マイクロ乳化は循環系ではなくリンパ系に優先的に吸収を導くことによって生物学的利用能の向上を提供し、それによって、肝臓を迂回し、および肝胆汁性血行における化合物の破壊を防止する。
【０４７６】
発明の一態様において、処方は、本発明の化合物および少なくとも一つの両親媒性キャリヤーから形成され、ミセルが約１００ｎｍ未満の平均直径を有するミセルを含む。より好ましい実施形態は約５０ｎｍ未満の平均直径を有するミセルを提供し、および、さらに好ましい実施形態は約３０ｎｍ未満またはさらには約２０ｎｍ未満の平均直径を有するミセルを提供する。
【０４７７】
すべての適切な両親媒性キャリヤーが考えられる一方、現在において好ましいキャリヤーは、一般的に安全であると認められる（ＧＲＡＳ）状態を有し、および、本発明の化合物を可溶化し、および後の段階で溶液が（ヒト消化管において見いだされる相のような）複雑な水相と接触する際に後の段階でマイクロ乳化する両方ができるキャリヤーである。通常、これらの要件を満たす両親媒性成分は、２〜２０のＨＬＢ（親水性親油性バランス）値を有し、および、それらの構造は、Ｃ−６からＣ−２０の範囲の直鎖脂肪族化合物ラディカルを含む。その例は、ポリエチレングリコール化された脂肪グリセリドおよびポリエチレングリコールである。
【０４７８】
特に好ましい両親媒性キャリヤーは、たとえば完全または部分的に水素化された様々な植物油から得られるキャリヤーといった、飽和および単不飽和ポリエチレングリコール化脂肪酸グリセリドである。このような油は有利には、対応する脂肪酸のトリ−、ジ−、およびモノ−脂肪酸グリセリドおよびジ−およびモノ−ポリエチレングリコール・エステルから成ってもよく、特に好ましい脂肪酸組成物は、カプリン酸を４〜１０％、カプリン酸を３〜９％、ラウリン酸を４０〜５０％、ミリスチン酸を１４〜２４％、パルミチン酸を４〜１４およびステアリン酸を５〜１５％含む。両親媒性キャリヤーの別の有用な種類は、飽和または一不飽和脂肪酸（ＳＰＡＮ−シリーズ）または対応するエトキシル化類似体（ＴＷＥＥＮ−シリーズ）を伴う、部分的にエステル化されたソルビタンおよび／またはソルビトールを含む。
【０４７９】
市販の両親媒性キャリヤーは、Ｇｅｌｕｃｉｒｅシリーズ、Ｌａｂｒａｆｉｌ、Ｌａｂｒａｓｏｌ、またはＬａｕｒｏｇｌｙｃｏｌ（すべてフランス、Ｓａｉｎｔ Ｐｒｉｅｓｔ， Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社により製造および販売される）、モノオレイン酸ＰＥＧ、ジオレイン酸ＰＥＧ、モノラウリン酸ＰＥＧおよびジラウリン酸ＰＥ、レシチン、ポリソルベート８０、など（米国および世界の多くの企業によって生産および販売される）を含むよう、特に考えられている。
【０４８０】
ポリマー
本発明の使用に適している親水性ポリマーは、容易に水溶性であり、小嚢形成脂質に共有結合しうり、および、毒性作用なしに生体内に認容される（すなわち、生物学的適合性である）ポリマーである。適切なポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ乳酸塩（ポリ乳酸とも称される）、ポリグリコール酸（ポリグリコライドとも称される）、ポリ乳酸−ポリグリコール酸共重合体、およびポリビニルアルコールを含む。好ましいポリマーは約１００ないし１２０ダルトンから約５，０００ないし１０，０００のダルトンまでの分子量を有し、およびより好ましくは、約３００ダルトンから約５，０００ダルトンまでのポリマーである。特に好ましい実施態様では、ポリマーは、約１００から約５，０００ダルトンの分子量を有し、およびより好ましくは、約３００から約５，０００ダルトンの分子量を有するポリエチレングリコールである。特に好ましい実施態様では、ポリマーは、７５０ダルトンのポリエチレングリコール（ＰＥＧ（７５０））である。ポリマーは、その中のモノマーの数によっても定義してよい；本発明の好ましい実施例は、少なくとも約３個のモノマーから成るポリマーを利用し、このようなＰＥＧポリマーは３個のモノマー（約１５０ダルトン）から成る。
【０４８１】
本発明の使用に適しうる他の親水性ポリマーは、ポリビニルピロリドン、ポリメトキサゾリン、ポリエチルオキサゾリン、ヒドロキシプロピル・メタクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリメチルアクリルアミド、および、ヒドロキシメチル・セルロースまたはヒドロキシエチル・セルロースといった誘導体化されたセルロース含む。
【０４８２】
一部の実施形態では、本発明の処方は、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアルキレン、アクリル酸エステルおよびメタクリル酸エステルのポリマー、ポリビニールのポリマー、ポリグリコライド、ポリシロキサン、ポリウレタンおよびその共重合体、セルロース、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、乳酸およびグリコール酸のポリマー、ポリ無水物、ポリ（オルト）エステル、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）ポリヒアルロン酸多糖類、タンパク質、ポリシアノアクリレートおよびその配合物、混合物、共重合体より成る群から選択される生物学的適合性のポリマーを含む。
【０４８３】
シクロデクストリン
シクロデクストリンは、６個、７個または８個のグルコース単位から成り、それぞれ、ギリシア文字α、β、またはγによって指示される環状オリゴ糖である。６個未満のグルコース単位を有するシクロデクストリンが存在することは公知でない。グルコース単位は、α−１，４−グルコシド結合によって連結される。糖単位のいす形配座の結果として、すべての二水酸基（Ｃ−２位、Ｃ−３位で）はリングの片側に位置する一方、Ｃ−６位のすべての一水酸基は反対側に位置する。その結果、外表面は親水性であり、シクロデクストリンを水溶化する。対照的に、シクロデクストリンはＣ−３位およびＣ−５位の水素原子によっておよびエーテル様酸素によって連結されるため、シクロデクストリンの空洞は疎水性である。これらのマトリックスによって、たとえば１７βエストラジオールのようなステロイド化合物を含む様々な比較的疎水性の化合物との複合体形成を可能にする。（ｖａｎ  Ｕｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．， Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｔｉｓｓ． Ｏｒｇ． Ｃｕｌｔ． ３８：１−３−１１３（１９９４）を参照）。複合体形成は、ファン・デル・ワールス相互作用によっておよび水素結合形成によって起こる。シクロデクストリンの化学作用の概説は、Ｗｅｎｚ，  Ａｇｎｅｗ． Ｃｈｅｍ． Ｉｎｔ． Ｅｄ．  Ｅｎｇｌ．，  ３３：８０３−８２２（１９９４）を参照のこと。
【０４８４】
シクロデクストリン誘導体の物理化学的特性は、置換の種類および程度に強く依存する。たとえば、それらの水中の可溶性は、不溶性（たとえば、トリアセチル−β−シクロデクストリン）から１４７％可溶性（ｗ／ｖ）（Ｇ−２−β−シクロデクストリン）にわたる。加えて、それらは、多くの有機溶剤に溶解する。シクロデクストリンの特性は、可溶性を増減させることによる様々な処方成分の可溶性の制御を可能にする。
【０４８５】
多数のシクロデクストリンおよびそれらを調製する方法が開示されてきた。たとえば、Ｐａｒｍｅｔｅｒ（Ｉ）ｅｔ ａｌ．（米国特許第３，４５３，２５９号）およびＧｒａｍｅｒａ  ｅｔ ａｌ．（米国特許第３，４５９，７３１号）は、電気的中性のシクロデクストリンを記載した。他の誘導体は、陽イオン特性を有するシクロデクストリン［Ｐａｒｍｅｔｅｒ（II）米国特許番号第３，４５３，２５７号］、不溶性架橋シクロデキストリン（Ｓｏｌｍｓ，  米国特許番号第３，４２０，７８８号）、および陰イオン特性を有するシクロデクストリン［Ｐａｒｍｅｔｅｒ（III），米国特許番号第３，４２６，０１１号］を含む。陰イオン特性を有するシクロデクストリン誘導体の中で、カルボン酸、亜リン酸、亜ホスフィン酸、ホスホン酸、リン酸、チオホスホン酸、チオスルフィン酸およびスルホン酸が、親のシクロデクストリンに追加された［上記Ｐａｒｍｅｔｅｒ（III）を参照のこと］。さらにその上、スルホアルキル・エーテル・シクロデクストリン誘導体が、Ｓｔｅｌｌａらによって記載された（米国特許番号第５，１３４，１２７号）。
【０４８６】
リポソーム
リポソームは、水性の内部区画を囲んでいる少なくとも一つの脂質二分子層膜から成る。リポソームは、膜の種類によっておよびサイズによって特徴づけてもよい。小さい単層膜ベシクル（ＳＵＶ）は単一の膜を有し、および、典型的には直径０．０２および０．０５のμｍの範囲にあり；大きい単層膜ベシクル（ＬＵＶＳ）は、典型的には０．０５μｍのＯｌｉｇｏｌａｍｅｌｌａｒの大きいベシクルよりも大きく、および、多重膜ベシクルは、複数の通常は同心の膜層を有し、典型的には０．１μｍよりも大きい。いくつかの非同心の膜を有する、すなわち、いくつかのより小さい小嚢がより大きな小嚢内に含まれているリポソームは、多重膜ベシクルと呼ばれる。
【０４８７】
本発明の一態様は、本発明の化合物を含むリポソームを含む処方に関し、リポソーム膜はリポソームに増加した輸送力を有するを提供するよう処方される。代替的にまたはそれに加えて本発明の化合物は、リポソームの二分子層内に含まれるかその上に吸着されてもよい。本発明の化合物は、脂質界面活性剤によって凝集し、およびリポソームの内部空間内で運搬してもよい；これらの場合、リポソーム膜は、活性剤−界面活性剤の凝集の崩壊効果に抗するために処方される。
【０４８８】
本発明の一実施例によれば、リポソームの脂質二分子層は、ＰＥＧ鎖が脂質二分子層の内面からリポソームによって封入される内部空間へと延びる、および脂質二分子層の外側から周囲の環境へと延びる脂質を含むポリエチレングリコール（ＰＥＧ）によって誘導体化される。
【０４８９】
本発明のリポソーム内に含まれる活性剤は、可溶化された形態である。界面活性剤および活性剤（たとえば目的の活性剤を含むエマルジョンまたはミセル）の凝集は、本発明によるリポソームの内部空間内に取り込まれうる。界面活性剤は、活性剤を分散させおよび可溶化するために作用し、および、鎖長が変化する（たとえば約Ｃ１４から約２０まで）生物学的適合性のあるリソフォスファチジルコリン（ＬＰＣ）を含むがそれに限らない、任意の適切な脂肪族、脂環式、または芳香族の界面活性剤から選択してもよい。
【０４９０】
ＰＥＧ−脂質のようなポリマー誘導れた脂質は、ミセル／膜融合を阻害するために作用するので、および、界面活性剤分子へのポリマーの付加によって界面活性剤のＣＭＣを減少させおよびミセル形成を助けるので、ミセル形成のために活用することもできる。マイクロモル範囲のＣＭＣを有する界面活性剤が好まれ；より高いＣＭＣ界面活性剤を利用して、本発明のリポソーム内に取り込まれるミセルを調製してもよいが、しかし、ミセル界面活性剤モノマーは、リポソームの二分子層安定性に影響を及ぼし、および、目的の安定性のリポソームを設計する際の因子となりうる。
【０４９１】
本発明によるリポソームは、当業において公知の様々な技術のうち任意のものによって調製することができる。たとえば、米国特許第４，２３５，８７１号；ＰＣＴ出願国際公開９６／１４０５７号パンフレット；Ｎｅｗ ＲＲＣ（Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ）：Ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ， ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ社， Ｏｘｆｏｒｄ（１９９０），３３〜１０４ページ； Ｌａｓｉｃ  ＤＤ， Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｆｒｏｍ  ｐｈｙｓｉｃｓ  ｔｏ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ， Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ ＢＶ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９９３を参照。
【０４９２】
たとえば本発明のリポソームは、たとえば、前もって形成されたリポソームを脂質−グラフトポリマーから成るミセルへと、リポソーム中で望まれる誘導体化された脂質の最終モル比に対応する脂質濃度で露出させるような、親水性ポリマーで誘導体化した脂質を前もって形成したリポソームへと放散することによって調製してもよい。親水性ポリマーを含むリポソームは、従来技術において公知の均質化、脂質−場間の水和、または押出技術によって形成できる。
【０４９３】
他の典型的な処方手順において、活性剤はまず、リソフォスファチジルコリンまたは容易に疎水性分子を可溶化する他の低ＣＭＣ界面活性剤（ポリマーグラフト化脂質を含む）の超音波処理によって分散される。次いで、結果として生じる活性剤のミセル懸濁液を用いて、適切なモル比のポリマーグラフト化脂質またはコレステロールを含む乾燥脂質試料を再水和する。次いで、脂質および活性剤の懸濁液は公知である押出技術を用いてリポソームへと形成され、および、結果として生じるリポソームは、標準的なコラム分離によってカプセル化されていない溶液から分離される。
【０４９４】
本発明の一態様において、リポソームは、選択されたサイズ範囲内の実質的に均一なサイズを有するよう調製される。一つの効果的なサイジング方法は、選択された均一の孔径を有する一連のポリカーボネート膜を介してリポソームの水性懸濁液を押し出すことを含む；膜の孔径は、その膜を介した押出によって生じる最大サイズのリポソームとおよそ一致する。たとえば、米国特許第４，７３７，３２３号（１９８８年４月１２日）を参照のこと。
【０４９５】
放出調節因子
本発明の処方の放出特性は、封入材、封入された薬剤の濃度、および放出調節因子の存在に依存する。たとえば放出は、たとえば、胃など低いｐＨでのみまたは腸など高いｐＨでのみ放出するｐＨ感受性コーティングを用いて、ｐＨ依存性となるよう操作できる。腸溶コーティングを用いて胃の通過後まで放出の発生を防止することができる。異なる材料に封入されるシアナミドの複数のコーティングまたは混合物を用いて、胃内での最初の放出を、続いて後に腸内での放出を得ることができる。放出は塩類または造孔剤の包含によっても操作することができ、これによってカプセルからの拡散により、水の取り込みまたは薬剤の放出を増大できる、薬剤の可溶性を修正する賦形剤を用いて、放出速度を制御することもできる。マトリックスの分解またはマトリックスからの放出を促進する薬剤を、組み込むこともできる。それらは、化合物に応じて、薬剤に付加し、他の位相として（すなわち、微粒子として）付加することができ、またはポリマー相において共溶解することができる。量はすべての場合において、０．１〜３０％（ｗ／ｗポリマー）内にあるべきである。分解促進剤の種類は、硫酸アンモニウムおよび塩化アンモニウムといった無機塩類、クエン酸、安息香酸およびアスコルビン酸といった有機酸、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、炭酸亜鉛および亜鉛水酸化物といった無機塩基、および、硫酸プロタミン、スペルミン、コリン、エタノールアミン、ジエタノールアミンおよびトリエタノールアミン、およびたとえばＴｗｅｅｎ（登録商標）およびＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）といった界面活性剤、といった有機塩基を含む。微細構造をマトリックス（すなわち、無機塩類および糖といった水溶性化合物）に加える造孔剤は、微粒子として付加される。範囲は、０．１〜３０％（ｗ／ｗポリマー）内にあるべきである。
【０４９６】
取り込みは、粒子の腸内滞留時間を変更することによって操作することもできる。これは、たとえば、粘膜粘着性ポリマーで粒子を被覆することによって、または封入材として選択することによって達成することができる。例は、キトサン、セルロース、および特にポリアクリレートといった遊離カルボキシル基を備える大部分のポリマーを含む（本明細書中では、ポリアクリレートは、シアノアクリレートおよびメタクリル酸塩といった、アクリル酸塩基および修飾アクリル酸塩基を含むポリマーををいう）。
【実施例】
【０４９７】
ここで一般的に記載されている本発明は、下記の実施例を参照することでより容易に理解され、実施例は、本発明の一部の実施態様および実施形態の説明だけのために単に含まれ、および本発明を制限するよう意図され内ことが容易に理解される。
【０４９８】
実施例１
ウリジン類似体を含むヌクレオシド−リガンド複合体の調製のための手順
【化８８】
2007535922.tif 000099
（i）２ａに対して：クロロギ酸コレステリル、ＴＥＡ／ジクロロメタン；２ｂに対して：５βコラン酸ペンタフルオロフェノールエステル、ＴＥＡ／ジクロロメタン；（ii）（ａ）無水コハク酸、ＤＭＡＰ／ジクロロエタンおよび（ｂ）ＤＴＮＰ、ＤＭＡＰ、Ｐｈ３Ｐ、アミノアルキル固相担体；（iii）Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノβ−塩化シアノエチルホスホンアミド｛［（ＣＨ３）２ＣＨ］２Ｎ−Ｐ（Ｃｌ）− ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮ｝ＤＩＥＡ／ジクロロメタンまたは２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ´，Ｎ´−テトライソプロパノールフォスファンホスファン、テトラゾール（またはテトラゾールジイソプロプルアンモニウム塩）／アセトニトリル。
【０４９９】
化合物５１ａの調製：
Ｃｈｅｍ  Ｇｅｎｅｓ社からのＤＭＴ−ｄＴ−Ｃ５−アミノ・リンカー（５０、１．００ｇ、１．４３ｍｍｏｌ）を、ＴＥＡ（１．０ｍｌ）の存在下でジクロロメタン（１０ｍｌ）中でコレステリル・クロロホルメート（０．７７ｇ、１．７１ｍｍｏｌ）とともに周囲温度で２時間かくはんした。反応の完了は、ＴＣＬモニタリングによって確認した。反応混合物をより多くのジクロロメタンを加えることによって５０ｍＬまで希釈し、および連続的にＮａＨＣＯ３溶液および水によって洗浄し、標準的な精密検査に供した。得られた残渣は、シリカゲル・フラッシュ・カラム・クロマトグラフィによって精製し、５１ａ（０．６６ｇ、３７．７５％）を提供した。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ１１．６１（ｓ，１Ｈ，Ｄ２−Ｏと交換可能）、８．０１−７．９８（ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ）＝５．３９Ｈｚ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能）、７．９２（ｓ、１Ｈ）、７．３７−６．９９（ｍ，１２Ｈ）、６．８７−６．８３（ｍ，４Ｈ）、６．１７−６．１４（ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ）＝６．６４Ｈｚ，１Ｈ）、５．３０（ｓ，ＩＨ）、５．２８−５．２７（ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ）＝４．５６Ｈｚ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能）、４．３２−４．２０（ｍ，２Ｈ）、３．８７−３．８４（ｍ，１Ｈ）、３．７１−３．６３（ｍ，７Ｈ）、３．２１−３．０３（ｍ，４Ｈ）、２．９５−２．８８（ｍ，２Ｈ）、２．３３−２．１３（ｍ，４Ｈ）、１．９７−１．７３（ｍ，５Ｈ）、１．５４−０．８２（ｍ，４０Ｈ）、０．６３（ｓ，  ３Ｈ）。
【０５００】
化合物５２ａの調製：
化合物５１ａ（０．５５ｇ、０．４９５ｍｍｏｌ）および無水コハク酸（０．０７５ｇ、０．７４９ｍｍｏｌ）を、ＤＭＡＰ（０．１８ｇ、１．４９ｍｍｏｌ）の存在下で無水ジクロロメタン（５ｍｌ）中で懸濁させ、周囲温度で終夜かくはんした。反応の完了を確認した後、反応混合物を、ジクロロメタンを加えることによって５０ｍＬまで希釈し、および希釈したクエン酸溶液で洗浄した；有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥しおよび減圧して蒸発した。得られた残渣を、シリカゲル・フラッシュ・カラム・クロマトグラフィ、溶離剤であるジクロロメタン中６％メタノールで精製し、対応するコハク酸誘導体（０．５０ｇ、８３．４％）を提供した。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ１２．２４（ｂｓ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能）、δ１１．６４（ｓ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能）、８．０２−７．９９（ｂｍ，２Ｈ）、７．３６−７．００（ｍ，１２Ｈ）、６．８７−６．８１（ｍ，４Ｈ）、６．１５−６．１１（ｔ，  Ｊ（Ｈ，Ｈ）＝６．８４Ｈｚ，ＩＨ）、５．３０（ｂｓ，１Ｈ）、５．１７−５．１４（ｂｍ，１Ｈ）、４．３１−４．２４（ｍ，１Ｈ）、４．０５（ｂｍ、１Ｈ）、３．７０−３．６６（ｍ，８Ｈ）、３．３４−３．０８（ｍ，６Ｈ）、２．９４−２．８８（ｍ，４Ｈ）、２．３１−２．１３（ｍ，３Ｈ）、１．９６−１．７１（ｂｍ，５Ｈ）、１．５５−．８０（ｍ，４０Ｈ）、０．６３（ｓ，３Ｈ）。
【０５０１】
このように得られたコハク酸エステルは、Ｋｕｍａｒら（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ａｎｄ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，  １９９６， １５， ８７９）の文献に記載のように、長鎖アミノアルキル制御されたガラス担体と負荷１５５μＭ／ｇで接合し、負荷７８．４２μＭ／ｇの目的のＣＰＧ固相担体５２ａ（１．７０ｇ）を得る。担体３ａの負荷を、文献（Ｐｒａｋａｓｈ ｅｔ ａｌ， Ｊ．  Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ．， ２００２， ６７， ３５７）に記載の通り決定した。
【０５０２】
化合物５３ａの調製：
ホスホラミダイト５３ａを、化合物５１ａから、報告された手順（Ｒａｊｅｅｖ ｅｔ ａｌ， Ｏｒｇ． Ｌｅｔｔ．， ２００３， ５， ３００５）に従って、ジイソプロプルアンモニウムテトラゾールの存在下でアセトニトリル中で、２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ´−テトライソプロパノールフォスファンホスファンと反応させることによって調製する。
【０５０３】
化合物５１ｂの調製：
５β−コラン酸（５．００ｇ、１３．８７ｍｍｏｌ、Ｓｉｇｍａ社から購入）、ペンタフルオロフェノール（２．８１ｇ、１５．２７ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ社から購入）、およびＤＭＡＰ（０．２０ｇ、１．６４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン中に溶解し、および、Ｎ，Ｎ´−ジシクロヘキシカルボジイミド（ＤＣＣ、２．８６ｇ、１３．８６ｍｍｏｌ）を周囲温度で溶液に加えた。反応混合物を４時間かくはんした。反応からＮ，Ｎ´−ジシクロヘキシル尿素をろ過して取り除き、および、ろ液を蒸発して５β−コラン酸のペンタフルオロフェノールエステルを得た。このように得られたエステル（０．９０ｇ、１．７０８ｍｍｏｌ）は、ＴＥＡの存在下でジクロロメタン（８ｍＬ）中で２時間化合物５０（１．００ｇ、１．４３１ｍｍｏｌ）でかくはんした。ＴＬＣ分析で明らかなように、反応は２時間後に完了した。反応混合物は、より多くのジクロロメタンを加えることによって５０ｍＬまで希釈し、およびＮａＨＣＯ３溶液によって洗浄し、標準的な精密検査に供した。残渣は、シリカゲル・フラッシュ・カラム・クロマトグラフィ、溶出物３−４％エタノールによって精製し、５１ｂ（１．４６ｇ、９８．０４％）を提供した。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ１１．６２（ｂｓ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能）、８．０３−８．００（ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ）＝５．３８Ｈｚ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能），７．９２（ｓ，ＩＨ），７．７４−７．７１（ｔ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能）；７．３７−７．０２（ｍ，１１Ｈ）、６．８８−６．８４（ｍ，４Ｈ）、６．１７−６．１４（ｔ，Ｊ（Ｈ．Ｈ）＝６．３５，６．６９Ｈｚ，１Ｈ）、４．２２−４．１９（ｍ，１Ｈ）、３．８８−３．８５（ｍ，１Ｈ）、３．７０−３．６９（ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ）＝３．９１  Ｈｚ，６Ｈ）；３．２０−２．８９（ｍ，６Ｈ）、２．３３−２．２７（ｍ，１Ｈ）、２．１８−２．１２（ｍ，１Ｈ）、２−０８−２．００（ｍ，１Ｈ）、１．９９−１．８４（ｍ，２Ｈ）、１．８４−１．５６（ｍ，６Ｈ）、１．５４−０．９４（ｍ，３３Ｈ）、０．８７−０．７９（ｍ，７Ｈ）、０．５７（ｓ，３Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ１７３．５，１６６．１，１６２．２，１５８．５，１４９．７，１４５．２，１４２．９，１３６．０，１３５．９，１３２．５，１３０．１，１２８．４，１２８．１，１２７．２，１２２．４，１１３．６，１０９．８，１０７．３，８６．１，８５．９，８５．４，７０．６，６４．２，５６．５，５６．０，５５．４，５５．２，４６．２，４３．５，４２．７，４０．４，３８．７，３７．５，３５．８，３５．３，３２．９，３２．１，２９．５，２９．４，２８．２，２７．５，２７．１，２６．９，２６．６，２６．５，２４．４，２４．３，２１．２，２０．９，１８．６，１２．２，９．１。
【０５０４】
化合物５２ｂの調製：
化合物５２ａの合成のための上記記載の通りに、化合物５１ｂから化合物５２ｂを調製した。調製される担体５２ｂ（２．７ｇ）の負荷を８１μＭ／ｇと決定した。
【０５０５】
化合物５３ｂの調製：
ホスホラミダイト５３ｂを、報告された手順（Ｒａｊｅｅｖ ｅｔ ａｌ， Ｏｒｇ． Ｌｅｔｔ， ２００３， ５， ３００５）に従って、アンモニウムテトラゾールジイソプロプルの存在下でアセトニトリル中で、２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ´，Ｎ´−テトライソプロピルフォスファンと反応することによって化合物５１ｂから調製する。
【０５０６】
実施例２
生物学的検定のために用いられるｓｉＲＮＡ二本鎖を、下記に一覧化する。
【表１−１】
2007535922.tif 000100
【表１−２】
2007535922.tif 000101
【表１−３】
2007535922.tif 000102
【表１−４】
2007535922.tif 000103
ａセンス鎖は、上記の５’から３’の間に記載される。アンチセンス鎖は、下記の３’ から５’に記載される。オリゴヌクレオチドは、配列中でｄＴによって示される二個の３’デオキシチミジンを除いてリン酸ジエステルＲＮＡである。ｄｔは２´−デオキシウリジンのＣ５位でのコレステロール複合を表し、およびｄｃは２´−デオキシシチジンのＣ５位でのコレステロール複合を表す。ｄｔは２´−デオキシウリジンのＣ５位での５β−コラン酸複合を表し、およびｄｃは２´−デオキシシチジンのＣ５位での５β−コラン酸複合を表す。スクランブルされた配列は、センス鎖の配列をランダム化することによって生成した。
【０５０７】
ｂＰＴＥＮ配列はアンチセンス鎖上では（３’ｄＴｄＴを除いて）薬理活性を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドの配列と同一である。［１］
ｃｃ−ｒａｆ配列はアンチセンス鎖上では（３’ｄＴｄＴを除いて）薬理活性を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドの配列と同一である。［２］
ｄＨ−ｒａｓ配列はアンチセンス鎖上では（３’ｄＴｄＴを除いて）薬理活性を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドの配列と同一である。［３］
ｅＡｐｏ−Ｂ配列はアンチセンス鎖上では（３’ｄＴｄＴを除いて）薬理活性を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドの配列と同一である。［４］
参照文献
［１］Ｍ． Ｂｕｔｌｅｒ， Ｒ． Ａ． ＭｃＫａｙ， Ｉ． Ｊ．Ｐｏｐｏｆｆ，Ｗ． Ａ． Ｇａａｒｄｅ， Ｄ． Ｗｉｔｃｈｅｌｌ， Ｓ． Ｆ． Ｍｕｒｒａｙ， Ｎ． Ｍ． Ｄｅａｎ， Ｓ． Ｂｈａｎｏｔ， Ｂ． Ｐ． Ｍｏｎｉａ， Ｄｉａｂｅｔｅｓ． ２００２ ５１， １０２８．
［２］Ｂ． Ｐ． Ｍｏｎｉａ， Ｈ． Ｓａｓｍｏｒ， Ｊ． Ｆ． Ｊｏｈｎｓｔｏｎ， Ｓ． Ｍ． Ｆｒｅｉｅｒ， Ｅ． Ａ． Ｌｅｓｎｉｋ， Ｍ． Ｍｕｌｌｅｒ， Ｔ． Ｇｅｉｇｅｒ， Ｋ−Ｈ． Ａｌｔｍａｎｎ， Ｈ． Ｍｏｓｅｒ， Ｄ．，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ， ＵＳＡ １９９６ ９３， １５４８１．
［３］Ｌ． Ｍ． Ｃｏｗｓｅｒｔ， Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ １９９７ １２， ３５９．
［４］Ｒ． Ｍ． Ｃｒｏｏｋｅ， Ｍ． Ｊ． Ｇｒａｈａｍ， ＰＣＴ国際出願  （２００３），国際公開第２００３０９７６６２ Ａｌ ２００３１１２７号
実施例３
オリゴヌクレオチド：合成、精製および分析：
合成：
待機段階に後述する２、３の修正を加えた、製造業者によって書かれた標準的な９３段階のサイクルを用いて、３９４ＡＢＩ機上、設計済のＲＮＡ分子を合成する。目的のオリゴヌクレオチドの合成のために、固相担体５２ａおよび５２ｂおよびホスホラミダイト５３ａおよび５３ｂを市販のＤＮＡおよびＲＮＡホスホラミダイトとともに用いる。高速の保護基を有する商業的なホスホラミダイト（５´−Ｏ−ジメトキシトリチルＮ６−フェノキシアセチル−２' − Ｏ−ｔ − ブチルジメチルシリルアデノシン−３´−Ｏ−Ｎ，Ｎ´−ジイソプロピル−シアノエチルホスホラミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシトキシチル−Ｎ４−アセチル−２’−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリルシチジン−３´−Ｏ−Ｎ、Ｎ´−ジイソプロピル−２−シアノエチルホスホラミダイト、５´−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ２−ｐ−イソプロピルフェノキシアセチル−２´−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリルグアノシン−３´−Ｏ−Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピル−２−シアノエチルホスホアミダイト、および５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリルウレジン−３’−Ｏ−Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピル−２−シアノエチルホスホラミドはＰｉｅｒｃｅ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩまたはＰｏｌｉｇｏ ＬＬＣ社、Ｂｏｕｌｄｅｒ、Ｃｏｌｏｒａｄｏのいずれかから購入する。すべての２´−Ｏ−Ｍｅアミダイトは、Ｇｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ社から受領する。すべてのアミダイトは、アセトニトリル（ＣＨ３ＣＮ）中で０．１５Ｍの濃度および８〜１５分の結合時間で用いられる。活性剤は５−（エチルチオ）−ｌＨ−テトラゾール（０．２５Ｍ）であり、ＰＯ酸化のためにイオジン／水／ピリジンが用いられ、および、ＰＳ酸化のために、無水アセトニトリル中２％のＢｅａｕｃａｇｅ試薬（Ｉｙｅｒ ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ， １９９０， １１２， １２５３）が用いられる。硫化時間は、約６分である。
【０５０８】
脱保護−Ｉ（核酸塩基脱保護）：
合成の完了後、担体を、ねじ蓋付バイアル（ＶＷＲ Ｃａｔ＃２０１７０−２２９）またはねじ蓋付ＲＮａｓｅ遊離マイクロヒュージ管に移す。オリゴヌクレオチドを、エタノール・アンモニア混合物［アンモニア：エタノール（３：１）］１．０ｍＬでの塩基およびリン酸基の、５５℃で１５時間の同時の脱保護によって担体から切断する。バイアルは氷上で短時間で冷却され、および次にエタノール・アンモニア混合物を新規のマイクロヒュージ管へと移す。ＣＰＧをＲＮａｓｅ遊離脱イオン水の一部２×０．１ｍＬで洗浄される。洗浄の組み合わせ、１０分間の乾燥アイスバス上の冷却、およびその後の高速掃除機中での乾燥。
【０５０９】
脱保護−II（２’ＴＢＤＭＳ基の除去）：
得られた白い残渣は、トリエチルアミン、トリエチルアミン・トリヒドロフルオリド（ＴＥＡ・３ＨＦ）およびＮＭＰ（４：３：７）４００μｌ中で再懸濁され、および５０℃で一夜加熱して２位にｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）基を除去する（Ｗｉｎｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．， １９９５， ２３， ２６７７）。次いで反応は、４００μｌのイソプロポキシトリメチルシラン（ｉＰｒＯＭｅ３Ｓｉ、Ａｌｄｒｉｃｈ社から購入で急冷し、およびさらに蓋をｌ０分間開けたままヒートブロック上でインキュベートした；（これによって、不安定なフッ化イソプロポキシトリメチルシリル付加物を蒸発させる）。残渣のクエンチ剤を高速掃除機中で乾燥することによって除去する。ジエチルエーテル中の３％トリエチルアミン溶液１．５ｍｌを加え、およびオリゴヌクレオチドを遠心分離によってペレットで取り出す。ペレットによる取出しを妨げずに上澄みをピペットで取り出し、およびペレットを高速掃除機中で乾燥して、白いけばだった材料として天然オリゴヌクレオチドを得る。
【０５１０】
天然オリゴマーまたは生分析の計量
試料はＲＮａｓｅ遊離脱イオン水（１．０ｍＬ）中で溶解し、および下記の通りに数量化する：最初にブランキングを水（ＩｍＬ）のみで実施する；試料２０μＬおよび水９８０μＬをマイクロヒュージ管中でよく混合し、キュベットへ移動し、および吸収度測定値を２６０ｎｍで得る。粗材料を乾燥しおよび−２０℃で保存する。
【０５１１】
オリゴマーの精製：
ＰＡＧＥ精製
合成されるオリゴマーのＰＡＧＥ精製は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ他（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，コールドスプリングハーバー，ニューヨーク，１９８９）の報告のように実施する。１２％の変性ゲルを、非修飾および修飾オリゴヌクレオチドの精製のために調製する。濃縮物１２０ｍＬ、希釈剤１０５ｍＬおよび緩衝剤２５ｍＬの混合物（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）に、ＴＥＭＥＤ５０μＬおよび１０％ＡＰＳを１．５ｍＬ加える。ゲルを注入した後、混合物を０．５時間放置して重合させる。オリゴヌクレオチドを、水２０μＬおよびホルムアミド８０μＬ中に懸濁させる。左側のレーンにゲル追跡染料を、その後試料をゲル上にゆっくりと負荷する。ゲルをＩＸ ＴＢＥ緩衝剤で３６Ｗで４〜６時間流す。ひとたび投入が完了すると、ゲルを調製用ＴＬＣプレートへと移し、および紫外線下で見る。バンドを切断し、ＲＮａｓｅ遊離水中で浸漬および圧壊し、精製されたオリゴヌクレオチドを含むバイアルを撹拌器中に一夜放置する。溶離液を除去し、より多くのＲＮａｓｅ遊離水で残渣を洗浄し、洗浄の組み合わせおよび凍結乾燥の組み合わせによって純粋なオリゴヌクレオチドを得る。
【０５１２】
精製されたオリゴマーの脱塩：
精製された乾燥オリゴマーを、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５ Ｍ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）を用いて脱塩する。カートリッジを、ＲＮａｓｅ遊離脱イオン水１０ｍｌで三度調整する。最後に、精製されたオリゴマーをＲＮａｓｅ遊離水２．５ｍＬ中で溶解し、カートリッジを通過して非常に遅く液滴溶出を伴う。塩のないオリゴマーをＲＮａｓｅ遊離水３．５ｍＬでねじ蓋付バイアルへ直接溶出する。
【０５１３】
分析
毛管ゲル電気泳動（ＣＧＥ）およびエレクトロスプレーＬＣ／ＭＳ
約０．１０ＯＤのオリゴマーを最初に乾燥し、次いで、水（５０μＬ）中で再溶解し、およびＣＧＥおよびＬＣ／ＭＳ分析のために指定されたバイアル中においてピペットで取り出す。
【０５１４】
実施例４
リガンド結合ｓｉＲＮＡ二本鎖のｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞培養活性
デュアル・ルシフェラーゼ遺伝子抑制検定：
ｓｉＲＮＡｓのｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性は、高処理量の９６ウェル・プレート形式のルシフェラーゼ抑制検定を用いて決定される。検定は２つの可能な形式のうち一つで実施する。第一の形式では最初に、ＨｅＬａＳＳ６細胞を、ホタル（標的）およびウミシイタケ（対照）ルシフェラーゼをコード化するプラスミドで一時的に形質転換する。ＤＮＡ形質転換は、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）およびプラスミドｇＷｉｚ−Ｌｕｃ（Ａｌｄｅｖｒｏｎ社、Ｆａｒｇｏ、ＮＤ）（２００ｎｇ／ウェル）およびｐＲＬ−ＣＭＶ（Ｐｒｏｍｅｇａ社、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）（２００ｎｇ／ウェル）を用いて実施される。２時間後にプラスミド形質転換媒体を除去し、および、ホタル・ルシフェラーゼ標的ｓｉＲＮＡｓを様々な濃度で細胞に加える。第２の形式では、（ホタル・ルシフェラーゼおよびウミシイタケ・ルシフェラーゼの両方を安定的に発現する）ＨｅＬａ Ｄｕａｌ−ｌｕｃ細胞をｓｉＲＮＡｓを標的とするホタル・ルシフェラーゼで直接形質転換する。ＳｉＲＮＡ形質転換は、ＴｒａｎｓＩＴ−ＴＫＯ（Ｍｉｒｕｓ社、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）またはＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００のどちらかを用いて、製造業者のプロトコルに従って実施する。２４時間後、プレート照度計（ＶＩＣＴＯＲ２、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）およびＤｕａｌ−Ｇｌｏ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙキット（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を用いて、ホタル・ルシフェラーゼおよびウミシイタケ・ルシフェラーゼの両方の発現について細胞を分析する。ホタル・ルシフェラーゼ／ウミシイタケ・ルシフェラーゼの発現比率を用いて、模擬処理した（ｓｉＲＮＡでない）対照に対する遺伝子抑制のパーセントを決定する。
【０５１５】
実施例５
リガンド結合ｓｉＲＮＡｓの血清安定性
検定
センス（Ｓ）またはアンチセンス鎖（ＡＳ）が微量の５´−３２Ｐ標識材料（たとえば、３２Ｐ−Ｓ／ＡＳおよびＳ／３２Ｐ−ＡＳ）のｓｉＲＮＡ二本鎖を、ｌμＭのストック濃度で調製する。末端標識したセンスまたはアンチセンス鎖の存在によって、ｓｉＲＮＡ二本鎖との関連で各鎖のモニタリングを可能にする。したがって、被験ｓｉＲＮＡ配列ごとに２個の二本鎖調製物を作製する。ｓｉＲＮＡ二本鎖を、９０％ヒト血清中で最終濃度１００ｎＭ二本鎖でインキュベートする。簡潔には、１μＭｓｉＲＮＡ二本鎖２μＬを、１００％オフ・ザ・クロットヒト血清１８μＬと３７℃で混合する。典型的な時間的経過において、アリコート２μＬを、１０秒、１５分、３０分、１時間、２時間および４時間の時点で除去し、および、９０％ホルムアミド、５０ｍＭ ＥＤＴＡ、１０ｍＭ   ＤＴＴおよび染料キシレン・シアノールおよびブロモフェノール・ブルーを含む停止混合物１８μＬ中で直ちに急冷する。試料を、対照試料（４時間の緩衝剤単独のインキュベーション）およびマーカーとして用いた部分的なアルカリの加水分解ラダーとともに変性ポリアクリルアミドゲル上で分離する。ゲルを、放射線標識したｓｉＲＮＡおよびその分解断片の検出を可能にするＦｕｊｉ画像プレートに露出する。
【０５１６】
実施例６
Ｃ５−ステロイド結合ピリミジンを含むｓｉＲＮＡのプラズマ・タンパク質への結合アフィニティ分析。
【０５１７】
方法１
結合アフィニティの測定：
ｓｉＲＮＡｓのプラズマ・タンパク質への結合親和性を測定するために、ｓｉＲＮＡ二本鎖のセンス鎖の５’末端を、標準的手順を用いたＴ４ポリヌクレオチドキナーゼを用いて３２Ｐで標識する。表Ｉに示すｓｉＲＮＡ二本鎖それぞれを、この検定で試験する。組み込まれていない標識をＧ２５コラムを用いて除去し、および、標識をポリアクリルアミドゲル電気泳動によって確認する。標識ＲＮＡ（５０ｎＭ）および相補鎖（５０ｎＭ）の結合濃縮物を、プラズマ・タンパク質の濃度を増加させて、０．１ｍＭのＥＤＴＡおよび０．００５％のＴｗｅｅｎ８０を含むリン酸緩衝緩衝食塩水で２５℃で１時間インキュベートする。インキュベーション後、３０，０００（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）の分子量カットオフを有する低結合、再生セルロース・フィルター膜へと試料を投入する。試料をマイクロヒュージ（５４１５Ｃ；ＮＹＣｅｎｔｒｉｆｕｇｅ；Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ社、Ｗｅｓｔｂｕｒｙ、ＮＹ）中で、３０００ｒｐｍ／分（７３５ｇ）で３〜６分間穏やかに回転させ、ろ液中に負荷された体積の２０％まで回収を可能にする。
【０５１８】
ろ液および最初の（未ろ過）溶液由来のアリコートに存在する放射能を、シンチレーションカウンタ（モデルＬＳ６０００ＩＣ、Ｂｅｃｋｍａｎ社、Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ、ＣＡ）を用いて測定する。ろ液アリコート中で得られたカウントは、遊離（非結合）ＲＮＡを表し、および適切な計算を実施して遊離ＲＮＡの濃度を得る。さらなる計算によって、タンパク質に結合するＲＮＡの濃度を生じる。Ｒ． Ｚｉｎｉ， Ｊ． Ｂａｒｒｅ， Ｆ． Ｂｒｅｅ， Ｊ． Ｐ．  Ｔｉｌｌｅｍｅｎｔ， Ｂ． Ｓｅｂｉｌｌｅ， Ｊ． Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．１９８１， ２１６， １９１およびＡ． Ｎ． Ｋｕｚｎｅｔｓｏｖ， Ｇ． Ｖ．  Ｇｙｕｌ'ｋｈａｎｄａｎｙａｎ， Ｂ． Ｅｂｅｒｔ，  Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．（Ｍｏｓｃｏｗ）  １９７７， １１，  １０５７．を参照。
【０５１９】
プラズマ・タンパク質と結合するｓｉＲＮＡの程度は、平衡ろ過法を用いて決定する。結合したＲＮＡの断片を濃度に対してプロットする。平衡定数（Ｋｄ）を、結合ｓｉＲＮＡ（ｆ結合）の断片の非線形回帰分析法から遊離タンパク質濃度（ｆ遊離）の関数として決定する。したがって、データは、二状態モデルに適用することができる：
【化８９】
2007535922.tif 000104
ここで、Ｏは非結合ｓｉＲＮＡであり、Ａは非結合タンパク質であり、ＯＡはｓｉＲＮＡ−タンパク質複合体であり、および、ＫＡは平衡関連定数である。被験オリゴヌクレオチドの一覧を実施例４に示す。
【０５２０】
方法２
ｓｉＲＮＡで治療したＢａｌｂ−ＣマウスのｍＲＮＡ発現の抑制：
メスのＢＡＬＢ／ｃマウス（６週齢、Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ社、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）を、国立衛生研究所規則を満たす条件下で各ケージに３匹ずつ飼育する。非結合およびスクランブルされた対照を含むｓｉＲＮＡｓ（表Ｉ、ｓｉＲＮＡ  １０１−１４０）およびｓｉＲＮＡを含まない媒体を、０．９％ＮａＣｌ中で指示された用量で一日一回３日間腹腔内投与し、および組織を分析のために採る。
【０５２１】
全ｍＲＮＡを、４Ｍイソチオシアン酸グアニジン中での急速な組織の均質化によって、マウス肝臓から抽出し、次いで塩化セシウム勾配上で遠心分離を実施する。ＲＮＡ（２０〜４０μｇ）を、１．１％ホルムアルデヒドを含む１．２％アガロースゲル中で分解し、およびナイロン膜へと移す。ブロットを、記載された放射線標識したヒトｃＤＮＡプローブでハイブリダイゼーションした。ｍＲＮＡ翻訳へとハイブリダイゼーションしたプローブを、ＰｈｏｓＰｈｏｒｌｍａｇｅｒ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ社）を用いて視覚化しおよび定量化する。ブロットから放射線標識したプローブを揮散した後、ブロットＧ３ＰＤＨ ｃＤＮＡで再プローブし、等しい負荷を確認する。
【０５２２】
方法３
ヌードマウス中のヒト腫瘍細胞のｓｉＲＮＡ治療−腹腔内注射：
ヒト肺癌Ａ５４９細胞を採り、および、５×１０６個の細胞（２００μＬ）をヌードマウスの内股に皮下注射した。触診可能な腫瘍は約１ヵ月で発症する。ｃ−ｒａｆおよびＨ−ｒａｓメッセージを標的とし、ステロイド／脂質結合ＲＮＡおよびスクランブルされた対照を含むｓｉＲＮＡ（表Ｉ、ｓｉＲＮＡ  １２７−１４０）およびｓｉＲＮＡを含まない媒体をマウスに、２０ｍｇ／体重ｋｇの用量で約１０週間一日おきに腹膜内投与する。この期間、マウスの腫瘍成長を監視する。
【０５２３】
方法４
ヌードマウス中の乳癌細胞のｓｉＲＮＡでの治療：
ヒト乳癌ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を採り、および、５×１０６個の細胞（２００μＬ）を無胸腺ヌードマウスの乳房脂肪体に皮下注射する。触診可能な腫瘍は約１ヵ月で発症する。ｃ−ｒａｆおよびＨ−ｒａｓメッセージを標的とし、ステロイド／脂質結合ＲＮＡおよびスクランブルされた対照を含むｓｉＲＮＡ（表Ｉ、ｓｉＲＮＡ １２７−１４０）およびｓｉＲＮＡを含まない媒体をマウスに、５、１０および２５ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、約２０日間毎日腹膜内投与する。この期間、マウスの腫瘍成長を監視する。
【０５２４】
方法５
ヌードマウス中のヒト腫瘍細胞のｓｉＲＮＡでの治療：
ヒト肺癌Ａ５４９細胞を採り、および、５×１０６個の細胞（２００μＬ）をヌードマウスの内股に皮下注射する。触診可能な腫瘍は、触診可能な腫瘍は約１ヵ月で発症する。ｃ−ｒａｆおよびＨ−ｒａｓメッセージを標的とし、コレステロールまたはコラン酸−結合ＲＮＡおよびスクランブルされた対照を含むｓｉＲＮＡ（表Ｉ、ｓｉＲＮＡ  １２７−１４０）、およびｓｉＲＮＡを含まない媒体をマウスに、２０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、約１０週間一日おきに、腹膜内投与する。腫瘍細胞接種の１週間後に薬物治療を開始し、および週に２回４週間投与する。マウスの腫瘍成長を合計９週間監視する。
【０５２５】
方法６
ｓｉＲＮＡｓで治療したＨｅｐ  Ｇ−２細胞およびＢａｌｂ−Ｃマウス中でのＡｐｏ−Ｂ ｍＲＮＡ発現の抑制：
ｓｉＲＮＡ（表Ｉ、ｓｉＲＮＡ  １４１−１４６）によるＡｏｐ−Ｂ  ｍＲＮＡ発現の抑制をｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで評価する。ＨＥＰ−Ｇ２細胞中のメッセージ・レベルへのｓｉＲＮＡ治療の効果を治療後に分析する。（Ｙａｏ， Ｚ．Ｑ．；Ｚｈｏｕ， Ｙ．Ｘ．； Ｇｕｏ， Ｊ．； Ｆｅｎｇ， Ｚ．Ｈ．； Ｆｅｎｇ， Ｘ．Ｍ．； Ｃｈｅｎ， Ｃ．Ｘ．； Ｊｉａｏ， Ｊ．Ｚ．； Ｗａｎｇ， Ｓ．Ｑ． Ａｃｔａ Ｖｉｒｏｌ． １９９６ Ｆｅｂ；４０（ｌ）： ３５−９． “Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｂｙ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ．”の手順に従う。）
メスのＢＡＬＢ／ｃマウス（６週齢、Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ社、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）を、国立衛生研究所規則を満たす条件下で各ケージに３匹ずつ飼育する。非結合およびスクランブルされた対照を含むｓｉＲＮＡｓ（表Ｉ、ｓｉＲＮＡ  １０１−１４０）およびｓｉＲＮＡを含まない媒体を、０．９％ＮａＣｌ中で指示された用量で一日一回３日間腹腔内投与し、および組織を分析のために採る。
【０５２６】
全ｍＲＮＡを、４Ｍイソチオシアン酸グアニジン中での急速な組織の均質化によって、マウス肝臓から抽出し、次いで塩化セシウム勾配上で遠心分離を実施する。ＲＮＡ（２０〜４０μｇ）を、１．１％ホルムアルデヒドを含む１．２％アガロースゲル中で分解し、およびナイロン膜へと移す。ブロットを、記載された放射線標識したヒトｃＤＮＡプローブでハイブリダイゼーションした。ｍＲＮＡ翻訳へとハイブリダイゼーションしたプローブを、ＰｈｏｓＰｈｏｒｌｍａｇｅｒ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ社）を用いて視覚化しおよび定量化する。ブロットから放射線標識したプローブを揮散した後、ブロットＧ３ＰＤＨ ｃＤＮＡで再プローブし、等しい負荷を確認する。
【０５２７】
実施例７
表ＩＩ（下記）は、ｄＵコラン酸（Ｌ１７、５２ｂの複合体）およびｄＵコレステロール（Ｌ１９、５２ａの複合体）の結合ｓｉＲＮＡを示す。ここで、「ｄ」はデオキシを示し；「ｓ」はホスホロチオレート結合を示し；および下付き文字「ｏ」は２´−ＯＭｅを示す。
【表２】
2007535922.tif 000105
【０５２８】
実施例８
表III（下記）は、ＨｅＬａ Ｄｕａｌ Ｌｕｃ細胞系（ｄＵコレステロール）のｓｉＲＮＡ抑制を示す。ここで、「Ｌ１９」は、（５２ａによるｄＴ ＣＰＧ担体の置換によって得た）ｄＵコレステロールを示し；「ｄ」は、デオキシを示し；「ｓ」はホスホロチオレート結合を示し；および下付き文字「ｏ」は２´−ＯＭｅを示す。ＩＣ５０では、「ａ」は、「安定したＨｅＬａ Ｄｕａｌ Ｌｕｃ細胞系中で形質転換されたｓｉＲＮＡによる抑制」であり；「ｂ」は「ＨｅＬａ ＳＳ６細胞系中で形質転換されたｓｉＲＮＡの一過性の遊離取り込みによる抑制」；および「ｃ」は、「安定したＨｅＬａ ｄｕａｌ Ｌｕｃ細胞系中でのｓｉＲＮＡの遊離取り込みによる抑制」を示す。加えて、「ｎａ」は、不活性を示し；および「ｎｄ」は未決定を示す。ＩＣ５０を実施例４のように計算した。
【表３】
2007535922.tif 000106
【０５２９】
実施例９
表ＩＶおよびＶ（下記）は、ＨｅＬａ Ｄｕａｌ Ｌｕｃ細胞系のｓｉＲＮＡ抑制を示す。ここで、「Ｌ１７」は（５２ｂによるｄＴ ＣＰＧ担体の置換によって得た）ｄＵコラン酸を示し；「ｄ」はデオキシを示し；下付き文字「Ｆ」は、２−フルオル糖を示し；「ＭｅＵ」は、５−メチル−ウリジンを示し；「ｓ」はホスホロチオレート結合を示し；および下付き文字「ｏ」は２´−ＯＭｅを示す。ＩＣ５０では、「ａ」は、「安定したＨｅＬａ Ｄｕａｌ Ｌｕｃ細胞系中で形質転換されたｓｉＲＮＡによる抑制」であり；「ｂ」は「ＨｅＬａ ＳＳ６細胞系中で形質転換されたｓｉＲＮＡの一過性の遊離取り込みによる抑制」；および「ｃ」は、「安定したＨｅＬａ ｄｕａｌ Ｌｕｃ細胞系中でのｓｉＲＮＡの遊離取り込みによる抑制」を示す。加えて、「ｎａ」は、不活性を示し；および「ｎｄ」は未決定を指示する。ＩＣ５０を実施例４のように計算した。
【０５３０】
表Ｖでは、有効性を対照（非修飾）二本鎖９に対して「＋＋＋」と設定し、および他の二本鎖（１０−１２）を相応に評価する。
【表４】
2007535922.tif 000107
【表５】
2007535922.tif 000108
【０５３１】
参照による組み込み
本明細書中に引用される特許および刊行物のすべては、参照により本開示に含まれる。
【０５３２】
等価物
当業者は、本明細書中に記載された本発明の特定の実施形態への多くの等価物を認識しおよびまたは定型的な実験のみを用いて確認することができる。これら等価物は、下記の請求項に包含されるよう意図されている。
【図面の簡単な説明】
【０５３３】
【図１】図１は固相オリゴヌクレオチド合成のための手順を示す。
【図２】図２はウリジンアナログを含むヌクレオシド−リガンド複合体を調製するための一般的手順を示す。注：（i）実施例を参照（ii）ＴＢＤＭＳ−Ｃｌ、ＡｇＮＯ３、Ｐｙ／ＴＨＦまたはＴＢＤＭＳ−Ｃｌ、イミダゾール／Ｐｙ（iii）ホスフィチル化：Ｙ＝Ｍｅ（またはＥｔ）について：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ、メチル（またはエチル）ホスホンアミド塩化物{[（ＣＨ３）２ＣＨ]２Ｎ−Ｐ（Ｃｌ）−ＣＨ３}、ＤＩＥＡ／ジクロロメタン；Ｙ＝ＯＣＨ３について：クロロＮ，Ｎ−ジイソプロピルメトキシホスホロアミダイト{[（ＣＨ３）２ＣＨ]２Ｎ−Ｐ（Ｃｌ）−ＯＣＨ３}、ＤＩＥＡ／ジクロロメタン；Ｙ＝ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮについて： Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノβ−シアノエチルホスホンアミド塩化物{[（ＣＨ３）２ＣＨ]２Ｎ−Ｐ（Ｃｌ）−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮ）、ＤＩＥＡ／ジクロロメタンまたは２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ’−テトライソプロピルホスファン、テトラゾール（またはテトラゾールジイソプロピルアンモニウム塩）／アセトニトリル；（iv）（ａ）無水コハク酸、ＤＭＡＰ／ジクロロエタンおよび（ｂ）ＤＴＮＰ、ＤＭＡＰ、Ｐｈ３Ｐ、アミノアルキル固相担体。
【図３】図３はシチジンアナログを含むヌクレオシド−リガンド複合体を調製するための一般的手順を示す。注：（i）（ａ）ＴＥＡ、トリアゾール、ＰＯＣｌ３／ＭｅＣＮ、−１０℃；（ｂ）ＮＨ３；（ｃ）安息香酸無水物／Ｐｙ（ii）ＴＢＤＭＳ−Ｃｌ、ＡｇＮＯ３、Ｐｙ／ＴＨＦまたはＴＢＤＭＳ−Ｃｌ、イミダゾール／Ｐｙ（iii）ホスフィチル化：Ｙ＝Ｍｅ（またはＥｔ）について：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ，メチル（またはエチル）ホスホンアミド塩化物{[（ＣＨ３）２ＣＨ]２Ｎ−Ｐ（Ｃｌ）−ＣＨ３）、ＤＩＥＡ／ジクロロメタン；Ｙ＝ＯＣＨ３について：クロロＮ，Ｎ−ジイソプロピルメトキシホスホロアミダイト{[（ＣＨ３）２ＣＨ]２Ｎ−Ｐ（Ｃｌ）−ＯＣＨ３）、ＤＩＥＡ／ジクロロメタン；Ｙ＝ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮについて：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノβ−シアノエチルホスホンアミド塩化物{[（ＣＨ３）２ＣＨ]２Ｎ−Ｐ（Ｃｌ）−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮ）、ＤＩＥＡ／ジクロロメタンまたは２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ’−テトライソプロピルホスファン、テトラゾール（またはテトラゾールジイソプロピルアンモニウム塩）／アセトニトリル；（iv）（ａ）無水コハク酸、ＤＭＡＰ／ジクロロエタンおよび（ｂ）ＤＴＮＰ、ＤＭＡＰ、Ｐｈ３Ｐ、アミノアルキル固相担体。
【図４】図４はリガンドが糖質であることを特徴とするヌクレオシド−リガンド複合体を調製するための一般的手順を示す。注：（i）化合物ＡまたはＢまたはＣ、ＤＣＣ、ＤＭＡＰ、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、続いて１−５およびＴＥＡの添加を実施（ii）ＴＢＤＭＳ−Ｃｌ、ＡｇＮＯ３、Ｐｙ／ＴＨＦまたはＴＢＤＭＳ−Ｃｌ、イミダゾール／Ｐｙ（iii）ホスフィチル化：Ｙ＝Ｍｅ（またはＥｔ）について：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ、メチル（またはエチル）ホスホンアミド塩化物{[（ＣＨ３）２ＣＨ]２Ｎ−Ｐ（Ｃｌ）−ＣＨ３}、ＤＩＥＡ／ジクロロメタン；Ｙ＝ＯＣＨ３について：クロロ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルメトキシホスホロアミダイト{[（ＣＨ３）２ＣＨ]２Ｎ−Ｐ（Ｃｌ）−ＯＣＨ３}、ＤＩＥＡ／ジクロロメタン；Ｙ＝ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮについて：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノβ−シアノエチルホスホンアミド塩化物{[（ＣＨ３）２ＣＨ]２Ｎ−Ｐ（Ｃｌ）−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮ）、ＤＩＥＡ／ジクロロメタンまたは２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスファン、テトラゾール（またはテトラゾールジイソプロピルアンモニウム塩）／アセトニトリル；（iv）（ａ）無水コハク酸、ＤＭＡＰ／ジクロロエタンおよび（ｂ）ＤＴＮＰ、ＤＭＡＰ、Ｐｈ３Ｐ、アミノアルキル固相担体。
【図５】図５はリガンドがビオチンアナログであることを特徴とするヌクレオシド−リガンド複合体を調製するための一般的手順を示す。注：（i）（ａ）ビオチンＮＨＳエステルＴＥＡ；（ｂ）ＴＭＳＣｌおよび次いで塩化４−ｔｅｒｔ−ブチルベンゾイル、ＤＭＡＰ／Ｐｙ（ii）ＴＢＤＭＳＣｌ、ＡｇＮＯ３、Ｐｙ／ＴＨＦまたはＴＢＤＭＳ−Ｃｌ、イミダゾール／Ｐｙ（iii）ホスフィチル化：Ｙ＝Ｍｅ（またはＥｔ）について：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ、メチル（またはエチル）ホスホンアミド塩化物{[（ＣＨ３）２ＣＨ]２Ｎ−Ｐ（Ｃｌ）−ＣＨ３）、ＤＩＥＡ／ジクロロメタン；Ｙ＝ＯＣＨ３について：クロロＮ，Ｎ−ジイソプロピルメトキシホスホロアミダイト{[（ＣＨ３）２ＣＨ]２Ｎ−Ｐ（Ｃｌ）−ＯＣＨ３）、ＤＩＥＡ／ジクロロメタン；Ｙ＝ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮについて：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノβ−シアノエチルホスホンアミド塩化物{[（ＣＨ３）２ＣＨ]２Ｎ−Ｐ（Ｃｌ）−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮ）、ＤＩＥＡ／ジクロロメタンまたは２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ、Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスファン、テトラゾール（またはテトラゾールジイソプロピルアンモニウム塩）／アセトニトリル；（iv）（ａ）無水コハク酸、ＤＭＡＰ／ジクロロエタンおよび（ｂ）ＤＴＮＰ、ＤＭＡＰ、Ｐｈ３Ｐ、アミノアルキル固相担体。
【図６】図６はヌクレオシド−リガンド複合体を調製するための一般的手順を示す。注：（i）（ａ）化合物１６１、ＤＣＣ、ＤＭＡＰ、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、その後１〜５およびＴＥＡを添加、または（ｂ）化合物１６２、炭酸Ｎ，Ｎ−ジスクシンイミジル、ＴＥＡ、その後１〜５を添加（ii）ＴＢＤＭＳ−Ｃｌ、ＡｇＮＯ３、Ｐｙ／ＴＨＦまたはＴＢＤＭＳ−Ｃｌ、イミダゾール／Ｐｙ（iii）ホスフィチル化：Ｙ＝Ｍｅ（またはＥｔ）について：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ、メチル（またはエチル）ホスホンアミド塩化物{[（ＣＨ３）２ＣＨ]２Ｎ−Ｐ（Ｃｌ）−ＣＨ３）、ＤＩＥＡ／ジクロロメタン；Ｙ＝ＯＣＨ３について：クロロ−ＨＮ−ジイソプロピルメトキシホスホロアミダイト{[（ＣＨ３）２ＣＨ]２Ｎ−Ｐ（Ｃｌ）−ＯＣＨ３）、ＤＩＥＡ／ジクロロメタン；Ｙ＝ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮについて：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノβ−シアノエチルホスホンアミド塩化物{[（ＣＨ３）２ＣＨ]２Ｎ−Ｐ（Ｃｌ）−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮ}、ＤＩＥＡ／ジクロロメタンまたは２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスファン、テトラゾール（またはテトラゾールジイソプロピルアンモニウム塩）／アセトニトリル；（iv）（ａ）無水コハク酸、ＤＭＡＰ／ジクロロエタンおよび（ｂ）ＤＴＮＰ、ＤＭＡＰ、Ｐｈ３Ｐ、アミノアルキル固相担体。
【図１】
2007535922.tif 000159
【図２】
2007535922.tif 000160
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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