【手続補正書】
【提出日】平成27年12月21日(2015.12.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の一般式［化１］で示される化合物。［化１］においてXは、水素又は、アルカリ金属又はアルカリ土類金属から選択される金属原子である。Ｒ１は、-CH2-CH2-CH2-CH(-CH3)-CH2-CH2-CH2-CH(-CH3)-CH2-CH2-CH2-CH(-CH3)-CH3又は、-CH2-CH2-CH=C(-CH3)-CH2-CH2-CH=C(-CH3)-CH2-CH2-CH=C(-CH3)-CH3のいずれかである。
【化１】
2016044171.tif 000001
【請求項２】
5,6-イソピデンアスコルビン酸と、ハロゲン化アセチル化合物を、DMFの溶媒に溶解し、塩基として炭酸水素カリウムの存在下で反応させる製造工程を含む、請求項１記載の化合物の製造方法。
【請求項３】
請求項１記載の化合物を配合したことを特徴とする外用組成物。
【請求項４】
請求項１記載の化合物を配合したことを特徴とする経口用組成物。
【請求項５】
請求項１記載の化合物を配合したことを特徴とするラジカル疾患治療薬。
【請求項６】
請求項１記載の化合物を配合したことを特徴とする細胞培養組成物。
【請求項７】
請求項１記載の化合物を配合したことを特徴とする抗ストレス用組成物。
【請求項８】
請求項１記載の化合物を配合したことを特徴とする液晶乳化組成物。
【請求項９】
請求項１記載の化合物から選択される一種以上の単独叉は複合化合物と、以下のグループAから選択される一種以上の単独又は混合化合物と、以下のグループBから選択される一種以上の単独又は混合化合物と、以下のグループCから選択される一種以上の単独又は混合化合物と、以下のグループDから選択される一種以上の単独又は混合化合物と、を同時に含有する液晶乳化組成物。
（界面活性剤:グループA）
ココイルグルタミン酸Na、ココイルグルタミン酸K、ココイルグルタミン酸Na、ココイルグルタミン酸TEA、ココイルグルタミン酸TEA、ラウロイルアスパラギン酸Na、ラウロイルグルタミン酸Na、ミリストイルグルタミン酸Na、パーム脂肪酸グルタミン酸Na，フォスファチジルコリン、リン脂質及びこれらの塩類。
（水溶性物質：グループB）
グリセリン、ジグリセリン、トリグリセリン、ポリグリセリン、メチルブタンジオール、ブチレングリコール、イソプレングリコール、ポリエチレングリコール、ペンタンジオール、ヘキサンジオール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、エチレングリコール、ジエチレングリコール、ネオペンチルグリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、キシリトール、ピロリドンカルボンナトリウム、ヒアルロン酸、カラギーナン、アルギン酸、寒天、フコイダン、ペクチン、ローカストビーンガム、キサンタンガム、トラガントガム、グアーガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アクリル酸・メタクリル酸共重合体、ポリグルタミン酸。
（脂質:グループC）
ミネラル油、スクワラン、スクワレン、パルミチン酸イソプロピル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸イソオクチル、ミリスチン酸イソトリデシル、ミリスチン酸オクタデシル、ミリスチン酸オクチルドデシル、イソステアリルコレステリルエステル、2-エチルヘキサン酸トリグリセリド、2-エチルヘキサン酸セチル、パーム油、ヒマワリ油、オリーブ油、ホホバ油、ツバキ油、流動パラフィン、グレープシード油、アボガド油、マカダミアナッツ油、アーモンド油、天然ビタミンE油、米胚芽油、丁字油、オレンジ油、トウヒ油、ステアリン酸及びパルミチン酸。
（抗酸化剤:グループD）
コウジ酸、アルブチン、アスコルビン酸リン酸エステルナトリウム、アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム、アスコルビン酸メチル、アスコルビン酸エチル、アスコルビン酸硫酸エステルナトリウム、アスコルビン酸グルコシド、アスコルビン酸リン酸パルミテートナトリウム、トコフェリルリン酸ナトリウム、（アスコルビル/トコフェリル）リン酸K、アスコルビルマレイン酸トコフェリル、カプリリルグリセリルアスコルベート、へキシルグリセリルアスコルベート、ミリスチルグリセリルアスコルベート、グリセリルアスコルベート、ビスグリセリルアスコルベート、ジグリセリルアスコルベート、イソステアリルアスコルビルリン酸ナトリウム、ステアリン酸アスコルビル、 パルミチン酸アスコルビル、ジパルミチン酸アスコルビル、エラグ酸、レゾルシノール、ブチルレゾルシノール、カミツレ抽出物、ソウハクヒ抽出液、ユキノシタ抽出液、米糠抽出物、ジアセトキシ安息香酸、アセトキシヒドロキシ安息香酸、胎盤抽出物、アスタキサンチン、カロチン、酢酸レチノール、パルミチン酸レチノール、レチノイン酸、トコフェリルリン酸Na、トコフェリルアセテート，トコフェリルニコチネート、トコフェリルリノレート、トコフェロール、ジイソプロピルアミンジクロロアセテート、アミノヒドロキシ酪酸、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル。
【請求項１０】
ビタミンEが、以下のビタミンE群から選択される１種または２種以上の混合物である請求項９記載の化合物。
（ビタミンE群）
DL-α-トコフェロール、DL-β-トコフェロール、DL-γ-トコフェロール、DL-δ-トコフェロール、D-α-トコフェロール、D-β-トコフェロール、D-γ-トコフェロール、D-δ-トコフェロール、α-トコフェロール、β-トコフェロール、γ-トコフェロール、δ-トコフェロール、DL-α-トコトリエノール、DL-β-トコトリエノール、DL-γ-トコトリエノール、DL-δ-トコトリエノール、D-α-トコトリエノール、D-β-トコトリエノール、D-γ-トコトリエノール、D-δ-トコトリエノール、α-トコトリエノール、β-トコトリエノール、γ-トコトリエノール、δ-トコトリエノール
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
従って、例えば皮膚組織に投与しても皮膚通過中の３から６時間ではビタミンCに変換されず、血流で他の組織へ拡散しタ-ゲット組織である皮膚組織でのビタミンC濃度が上昇せず十分な効果を発揮できない。そして一度拡散したビタミンCとビタミンEは主に肝臓で代謝され大部分が体外へ排出され再利用されない。培養細胞では２４時間以上培養しないと効果を発揮できず、これでは実際の皮膚に塗布した場合と実験条件が異なるため意味を持たない。
このように、従来のビタミンCとビタミンEを結合させた誘導体は、エステル結合が強すぎるか、叉は弱すぎるため投与組織で十分な効果を発揮できないという問題が存在した。我々はこの問題を解決する為に、ビタミンCとの化学結合が弱すぎず、又は強すぎないエステル構造をもつ分子の探索を行い、その結果-Ｏ-Ｃ(=Ｏ)-ＣＨ２-構造がもっとも優れた効果を発揮できることを見いだした。この構造は、ビタミンCの酸素とR-Ｏ-Ｃ(=Ｏ)-ＣＨ２-構造がエステルで結合するために、本発明者らはこれをアセチルエステル結合型ビタミンC誘導体と名付けた。さらに、アセチルエステル結合型ビタミンC誘導体にアルキルやアルコ-ルなどの炭化水素を結合させることによりアセチルエステル結合型ビタミンC誘導体に疎水性を増加させて、皮膚浸透性や細胞浸透性を高める工夫を行ったところ、脂溶性のビタミンEを結合させることが、毒性や効果の点から最も優れていることを見いだした。この構造は、ビタミンCの酸素とビタミンE-Ｏ-Ｃ(=Ｏ)-ＣＨ２-構造が２つのエステルで結合するために、本発明者らはこれをアセチルエステル結合型ビタミンCE誘導体と名付けた。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
即ち、これらの問題は、ビタミンC又はビタミンE誘導体のエステル構造の酵素的結合力の問題に起因するものであり、ここではリン酸エステルに対する生体酵素分解力に起因する。即ち、生体酵素に対して理想的な安定性と分解性をコントロ-ルできるエステル構造分子が見いだせればこの問題を解決できる。
このような状況下、本発明者らは、のビタミンCとＥ誘導体に関し鋭意研究を進めてきた結果、-Ｏ-Ｃ(=Ｏ)-ＣＨ２-のアセチルエステル構造を持つ化合物であるビタミンC誘導体叉はビタミンE誘導体であれば、エステル結合が弱すぎず、また強すぎず、前述のような従来の問題点を解決できる事を認めた。即ち、本発明のアセチルエステル結合型ビタミンCE誘導体を含む化合物の合成に成功しその効果を調べたところ、アセチルエステル構造が、適度な分解効率を持つことを見いだし本発明を完成させた。さらにこれら化合物が優れた抗酸化作用、ラジカルスカベンジャ-作用および抗炎症作用を有することを発見し、すぐれた組織タ-ゲット性能を持つビタミンCとビタミンE活性を有する理想的なビタミンCとビタミンE結合型誘導体であることを見いだし本発明に到達した。
一方、本発明者は、特許文献２２においてアスコルビン酸-2-リン酸トコフェロールなどの両親媒性物質を化粧品などに添加する場合、乳化安定性、微粒子形成能力、分散性の点から液晶構造を有する乳化物を作る事が好ましいことを見いだした。さらに液晶組成物の化粧品への応用は、皮膚の保湿性能などを向上することが見いださされ複数の特許が出願されている。又、これらの液晶構造の確認方法として偏光顕微鏡を使用したマルターゼクロス像の観察が行われている。即ち、液晶組成物は、偏光顕微鏡での観察で、ラメラ液晶に独特の形状であるマルターゼクロス像が確認できる。また、樹脂泡埋超薄切法や凍結切片法による透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）で液晶構造を確認することもできる。特許文献２３，特許文献２４，特許文献２５，特許文献２６、特許文献２７。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
即ち、従来のビタミンC又はビタミンEの誘導体問題点は、以下の点に集約される。
１）強過ぎるエステル結合を持つビタミンCとビタミンE結合型誘導体
結合が強すぎる場合は、物理的に安定であるが、タ-ゲット組織においてビタミンCとトコフェロ-ルに分離しにくくビタミンC活性とトコフェロ-ル活性が低いという問題がある。アスコルビン酸-2-グルコシドを分解する酵素は皮膚では極端に少なく、またアスコルビン酸の硫酸エステルやアルキル誘導体などは、生体中で加水分解酵素がほとんどないためにビタミンC活性が極めて低いという問題がある。
２）弱過ぎるエステル結合を持つビタミンCとビタミンE結合型誘導体
弱過ぎる結合を持つ場合は、ビタミンCとビタミンEが速やかに遊離してしまうため、ビタミンCとビタミンEが速やかに酸化分解されてしまい製剤中の安定性に大きな問題がある。弱すぎる結合を持つ誘導体の代表であるビタミンC-2-リン酸NaやビタミンC-2-リン酸Mg及びビタミンC-2-リン酸-6-パルミチン酸Na,ビタミンC-2-マレイン酸トコフェリルなどを１％以上含む水溶液は、４０℃２ヶ月で。褐変、異臭、分離、沈殿、力価低下のうち一つ以上の経時変化を生じる。さらに、遊離したビタミンCが一時的に大量に遊離するとプロオキシダントとなりやすく毒性を発揮してしまう問題がある。プロオキシダントは、活性酸素種の一種であり細胞毒性や炎症などの毒性発現の原因となる。そのため新しい誘導体には低い毒性と高い効果を同時に実現しなければならないという問題がある。
３）すぐれた細胞膜通過性を有する脂肪酸などの炭化水素側鎖を有するビタミンC誘導体は、その高い界面活性作用の為に細胞膜破壊性を有し高い細胞毒性を有する。又、脂肪酸エステルのビタミンC誘導体などが皮膚に炎症を発生させることが報告されており(非特許文献１８)、毒性を発現する脂肪酸を持たない疎水性の側鎖を採用する必要がある。ビタミンCに修飾する疎水基としてビタミンEが優れている点がいくつか存在する。最大の理由はビタミンCから生体内で遊離た後、ビタミンEとして有効利用されるという点である。さらに、ビタミンC存在下では、ビタミンEはたとえラジカルをスカベンジング後にビタミンEラジカルになったとしてもリサイクルされるためプロオキシダントの問題が発生しにくいというメリットもある。ビタミンCの側鎖が脂肪酸であった場合は、遊離後有効利用されるのは難しく、むしろ脂質過酸化物となり細胞にダメ-ジを与える物質の一つに変化する危険性が高いという問題が残る。
４）製造上の問題
さらに、ビタミンCとビタミンEを-Ｏ-Ｃ(=Ｏ)-ＣＨ２-構造により結合させた誘導体を合成するには、ビタミンCが水溶性であり、ビタミンEなどが脂溶性であるため、誘導体合成反応が進みにくく、収率が低く、コスト的に高くつくという問題がある。さらに、ビタミンCとビタミンEが酸化しやすいため反応中に分解し、収率がさらに低くなる。特にビタミンCは、水酸基が４つもあるために特定の場所に反応させることが困難であり、ビタミンCの特定の炭素の位置に側鎖を修飾することが極めて困難であるという問題がある。本発明では低コストで効率よく特定の炭素の位置、特にビタミンCの反応性の最も強力な２位と３位にビタミンEを選択的に修飾する製造方法の開発技術が求められた。
５）効果の問題
上記の１）２）３）の問題は、効果の発現にも極めて大きく関ってくる問題とも言える。ビタミンCとビタミンEが弱い結合の場合は、製剤中での安定性が悪い為に、流通途中や製品の保存中に酸化分解される可能性が高く実際に使用する時に力価の低下が避けられない。強い結合の場合は、生体中での酵素分解効率が低くなり、タ-ゲット組織に到達してもビタミンCとビタミンEに変換される前に拡散してしまい、タ-ゲット組織で濃度を上昇させることができない。さらに、脂肪酸などビタミンCに遊離してから脂質過酸化物の原因物質となるような場合は、細胞毒性を高めて本来の効果を低下させてしまうなどの問題を伴う為である。これらの効果を下げてしまう問題点を抜本的に解決しなければ高い効果が得られるビタミンCとビタミンEの誘導体は得られない。
このような状況下、本発明者らは種々検討を重ねた結果、本発明のアセチルエステル結合型ビタミンCE誘導体は、その結合が弱過ぎず、又強過ぎずその為に生理活性が高く且つ安定性に優れていて、安全性が高く、組織タ-ゲット性能を持つことを見出し、さらに製造上の多くの問題を解決して本発明を完成させた。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
ビタミンCとビタミンEを併用させるメリットは極めて大きく、色素沈着症、紫外線照射障害、虚血性再かん流疾患などの様々なラジカル疾患などにその併用効果が広く認められているため、ビタミンCとビタミンEを結合させた誘導体が他の脂肪酸などと組み合わせたビタミンC誘導体に比較し遥かに効果的な優位性を持つことが期待されたが、問題はその適度な結合力であった。本発明は、その結合力を-Ｏ-Ｃ(=Ｏ)-ＣＨ２-構造にすることにより極めて理想的な形とすることに成功し、さらに、その合理的な製造方法を見いだすに至り本発明を解決することができた。
アセチルエステル結合型ビタミンC誘導体のうち、ビタミンCと結合させる炭化水素がビタミンEではなく脂肪酸の場合では、ビタミンCが攻撃されやすく、プロオキシダントを生じやすく紫外線照射下などのラジカル大量発生組織では細胞毒性を上昇させることが判明した。又、アルキル基では、ビタミンC分離後に栄養素やメリットのある物質に変換されにくいためほとんどが生体外異物として代謝されるしかない。
一方本発明のアセチルエステル結合型ビタミンCE誘導体の場合、生体内エステラ-ゼで分解された後、ビタミンCとビタミンEの２種類の抗酸化剤が共存するために、プロオキシダント化が抑制され毒性が低い状態でビタミンCの効果を発揮できることが判明した。
又、本発明のアセチルエステル結合型ビタミンCE誘導体の結合は、ビタミンC-2-リン酸やビタミンC-2-リン酸-6-パルミチン酸塩などよりも強い結合の為に、製剤中での安定性が劇的に向上した。さらに、生体中ではアセチルトランスフェラ-ゼなどの生体内アセチル基転移酵素などによりビタミンCとビタミンEに分離することが推定され、実際に生体内利用性能がビタミンCのアルキル誘導体よりも驚く程向上した。
製造方法については、5,6-イソプロピリデンビタミンCと、ハロゲン化アセチル化合物を、前記化合物と反応生成物を生成しないアルカリ触媒、酸触媒及び相間移動触媒から選ばれる触媒の存在下、反応させ、得られた5,6-イソプロピリデンアセチルエステル結合型ビタミンCE誘導体の5,6-イソプロピリデンを加水分解して, 5,6-イソプロピリデンアセチルエステル結合型ビタミンCE誘導体が得られることを見いだした。
本発明の5,6-イソプロピリデンアセチルエステル結合型ビタミンCE誘導体も、安定した抗酸化力を持つ事が確認され、酵素分解に置ける従来の問題点も持たない事から、化粧品、医薬品、食品添加物、飼料添加物として利用することが可能である。
さらに、5,6-イソプロピリデンビタミンCと、ハロゲン化アセチル化合物を、前記化合物をDMSO, THF,  CH2Cl2, DMFから選択される極性の高い溶剤の一種以上の溶媒に溶解し、t-BuOK,ピリジン、KHCO3、K2CO3、Na2CO3、NaHCO3、CsCO3から選ばれる一種以上の塩基の存在下で反応させ、得られた5,6-イソプロピリデンアセチルエステル結合型ビタミンCE誘導体の5,6-イソプロピリデンを加水分解することにより本発明のアセチルエステル結合型ビタミンCE誘導体が効率的に得られることを見いだした。
ビタミンCの２，３位の水酸基のpKa はそれぞれ4.2, 11.8 であり、生体内では主としてモノアニオンとして存在している。ビタミンCの２位の水酸基は３位の水酸基よりも反応性が高く、ラジカルに２位の水酸基から電子または水素を供与してラジカルを速やかに安定化し、自身はモノアニオンラジカルビタミンCH・-となる。モノアニオンラジカルは二分子不均化反応によりモノアニオンとデヒドロビタミンCになる。
2位と３位が保護されていないビタミンCは2位と3位の両方でラジカルを補足することが可能である（非特許文献１９）。2位のビタミンCラジカルは酸素と反応しやすく，ス-パ-オキシドを発生する反応系が知られており（非特許文献２０），生体中のpHでは、2位のビタミンCラジカルは，3位のビタミンCラジカルに比較しより酸化反応を促進する可能性が高いと考えられる。ビタミンC-2-Gluの方がよりチミン分解抑制効果が高くなると推定される。ビタミンCリン酸塩（ビタミンC-2-P）など多くのビタミンC誘導体は2位のみが保護され，3位には還元性のO-が残っているために，酵素的加水分解によるビタミンCへの変換がなくともスカベンジャ-としての効果を発揮できると考えられる。さらにビタミンC-2-リン酸のようなビタミンC誘導体は，2位がエステル修飾されることにより酸化反応を誘導するビタミンCの欠点（自らがプロオキシダントとなり酸化反応を促進する）を補ってくれる。また，生体内では本誘導体は酵素分解を受けて徐々にビタミンCに変換され，生体内においてビタミンCの除放性能を持つためビタミンCのような投与時の高濃度化を避けることができることも大きなメリットのひとつである。ちなみに，ビタミンC-2-グルコシドはヒト血清中で酵素的加水分解を受けにくい性質を持っている。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
［非特許文献１８］Swinnen I. and Goossens A., Contact Dermatitis,64, 237〜244（2011）
［非特許文献１９］Farhataziz Ross A. B., Selected Specific rates of reactions of transients from Water in Aqueous Solutions. III. Hdroxyl Radical and PerhydroxylRadical and Their Radical Ions. NSRDS-NBS 59 Washington（1977）
［非特許文献２０］Antunes F., Salvador A. et al., Free Radic. Biol Med.21（7）, 917〜943（1996）
従って、安定性の良好な２位のアセチルエステル結合型ビタミンCE誘導体だけを得る為には、２位のアセチルエステル結合型ビタミンCE誘導体を効率的に生産できる反応系が必要である。叉は、２位と３位の混合アセチルエステル結合型ビタミンCE誘導体の中から２位だけの誘導体を効率的に選択分種しなければならない。
従来の、ビタミンCE誘導体の合成方法では、２位と３位の混合ビタミンCE誘導体の中から２位だけの誘導体を得る為にクロマト分離などの方法を用いて分離していたため製造が煩雑で効率が悪かった。又、２位の誘導体を得る合成反応も多数存在していたがいずれも収率が悪く問題があった。
そこで、本発明者らは多くの検討を重ねた結果、5,6-イソプロピリデンビタミンCと、ハロゲン化アセチル化合物を、ジメチルスルホキシド（DMSO）、ジメチルホルムアミド（DMF）THF、CH2Cl2などの極性の高い溶媒に溶解し、塩基としてKHCO3の存在下で反応させる製造工程を含む、5,6-イソプロピリデンビタミンCの３位の炭素位置のみが高収率でアセチル化合物で修飾されたビタミンCアセチルトコフェリルジエステル誘導体の製造方法を見いだした。
5,6-イソプロピリデンビタミンCと、ハロゲン化アセチル化合物を、前記化合物を以下ジメチルスルホキシド（DMSO）、ジメチルホルムアミド（DMF）THF、CH2Cl2などの極性の高い溶剤から選択される一種以上の溶媒に溶解し、塩基としてt-BuOKの存在下で反応させる製造工程を含む、5,6-イソプロピリデンビタミンCの２位の炭素位置のみが高収率でアセチル化合物で修飾されたビタミンCアセチルトコフェリルジエステル誘導体の製造方法を見いだした。
既存のラジカル疾患治療薬は製剤化中での安定性に問題があり、特に患部に到達する前に他の臓器で反応、失活してしまうためデリバリーシステム上の問題があった。また、上記の他の医薬品成分は体内に投与すると頭痛、吐気、嘔吐、食欲不振、悪心、発疹、筋痙攣等の副作用を伴うという問題があった。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
本発明は、以下の項目から構成される。
（１）
下記の一般式［化１］叉は［化２］で表されることを特徴とする（Ｒ５-Ｏ-Ｃ(=Ｏ)-ＣＨ２-）のアセチルエステル構造を持つ化合物又はその薬理学的に許容できる塩。式中、Ｒ１Ｒ2は、Ｈ、叉はＲ５-Ｏ-Ｃ(=Ｏ)-ＣＨ２-であり、ここでＲ５は、炭化水素,溶媒可溶性炭化水素、ベンゼン環、クロマン環、ベンゾピラン、ビタミンE及びそれらの塩であり、（Ｒ５-Ｏ-Ｃ(=Ｏ)-ＣＨ２-）構造中のＲ５が-Ｏ-Ｃ(=Ｏ)-ＣＨ２-と結合するＲ５側の原子は酸素ではない。但し、Ｒ１Ｒ２は同時にＨではない。さらに、Ｒ３Ｒ４は、同時にＨか、叉はＲ３Ｒ４は同時に一つのイソピリデン基を構成する炭化水素である。尚、Ｒ５がビタミンEの場合、ビタミンEのクロマン環の６位の炭素が、［化３］の通り（Ｒ５-Ｏ-Ｃ(=Ｏ)-ＣＨ２-）のＲ５と接触する酸素と結合する。
Ｒ６は、
-CH2-CH2-CH2-CH(-CH3)-CH2-CH2-CH2-CH(-CH3)-CH2-CH2-CH2-CH(-CH3)-CH3又は、-CH2-CH2-CH=C(-CH3)-CH2-CH2-CH=C(-CH3)-CH2-CH2-CH=C(-CH3)-CH3のいずれかである。
【化１】
2016044171.tif 000002
【化２】
2016044171.tif 000003
式中、Xはハロゲン。
【化３】
2016044171.tif 000004
（２）
下記の一般式［化４］ビタミンC-3-アセチルエステルビタミンE、［化５］ビタミンC-2-アセチルエステルビタミンEから選択される１種叉は２種以上の混合物である（１）の化合物。［化４］及び［化５］においてＲ６は、
-CH2-CH2-CH2-CH(-CH3)-CH2-CH2-CH2-CH(-CH3)-CH2-CH2-CH2-CH(-CH3)-CH3又は、-CH2-CH2-CH=C(-CH3)-CH2-CH2-CH=C(-CH3)-CH2-CH2-CH=C(-CH3)-CH3のいずれかである。
【化４】
2016044171.tif 000005
【化５】
2016044171.tif 000006
（３）
ハロゲノアセチルビタミンEと5,6-イソプロピリデンビタミンCを、DMSO、THF、CH2Cl2、DMFの４種の溶媒から選択される一種以上の単独叉は混合溶媒に溶解し、t-BuOK、ピリジン、KHCO3、K2CO3、Na2CO3、NaHCO3、CsCO3の７種の物質から選ばれる一種以上の単独叉は混合塩基の存在下で反応させた後、5,6-イソプロピリデンアセチルエステル結合型ビタミンCE誘導体の5,6-イソプロピリデンを加水分解する工程を有することを特徴とする（２）の化合物の製造方法。ここで、DMSOはジメチルスルホキシド、DMFは、ジメチルホルムアミド、THFはテトラヒドロフラン、t-BuOKはカリウム ターシャリーブトキシドである。
（４）
以下構造式［化６］で示されるハロゲノアセチルビタミンEから選択される一種叉は２種以上の混合物である（１）の化合物。［化６］でＸは、ハロゲン原子を表す。
Ｒ６は、
-CH2-CH2-CH2-CH(-CH3)-CH2-CH2-CH2-CH(-CH3)-CH2-CH2-CH2-CH(-CH3)-CH3又は、-CH2-CH2-CH=C(-CH3)-CH2-CH2-CH=C(-CH3)-CH2-CH2-CH=C(-CH3)-CH3のいずれかである。
【化６】
2016044171.tif 000007
（５）
ビタミンEを可溶化溶媒に溶解し、アルカリ触媒、酸触媒及び相間移動触媒から選択される一種以上の単独叉は混合触媒とハロゲン化アセチルを加えて反応させる製造工程を含む（４）の化合物の合成法。
（６）
下記の一般式［化７］で示される化合物から選択される１種または２種以上の混合物である5,6-イソピリデン-ビタミンC -3-アセチルエステルビタミンEである（１）の化合物。
Ｒ６は、
-CH2-CH2-CH2-CH(-CH3)-CH2-CH2-CH2-CH(-CH3)-CH2-CH2-CH2-CH(-CH3)-CH3又は、-CH2-CH2-CH=C(-CH3)-CH2-CH2-CH=C(-CH3)-CH2-CH2-CH=C(-CH3)-CH3
のいずれかである。
【化７】
2016044171.tif 000008
（７）
5,6-イソピリデン-ビタミンCと、ハロゲン化アセチル化合物を、前記化合物をDMFの溶媒に溶解し、塩基として炭酸水素カリウムの存在下で反応させる製造工程を含む、（６）の5,6-イソピリデン-ビタミンC -3-アセチルエステルビタミンEの製造方法。
（８）
下記の一般式［化８］で示される化合物から選択される１種または２種以上の混合物であることを特徴とする（Ｒ５-Ｃ(=Ｏ)-ＣＨ２-）構造を有するイソピリデンビタミンC-2-アセチルエステルビタミンEである（１）の化合物。このときＲ６は、
-CH2-CH2-CH2-CH(-CH3)-CH2-CH2-CH2-CH(-CH3)-CH2-CH2-CH2-CH(-CH3)-CH3又は、-CH2-CH2-CH=C(-CH3)-CH2-CH2-CH=C(-CH3)-CH2-CH2-CH=C(-CH3)-CH3のいずれかである。
【化８】
2016044171.tif 000009
（９）
5,6-イソプロピリデンアスコルビン酸と、ハロゲノアセチルエステルビタミンEをDMSO、THF、CH2Cl2、DMFから選択される一種以上の単独叉は混合溶媒に溶解し、塩基としてt-BuOKの存在下で反応させる製造工程を含む、（８）の5,6-イソピリデンビタミンC-２-アセチルエステルビタミンEの製造方法。
（１０）
(１)記載の化合物を配合したことを特徴とする外用組成物。
（１１）
(１)記載の化合物を配合したことを特徴とする経口用組成物。
（１２）
(１)記載の化合物を配合したことを特徴とするラジカル疾患治療薬。
（１３）
(１)記載の化合物を配合したことを特徴とする細胞培養組成物。
（１４）
(１)記載の化合物を配合したことを特徴とする抗ストレス用組成物。
（１５）
(１）記載の化合物を配合したことを特徴とする液晶乳化組成物。
（１６）
(１) 記載の化合物から選択される一種以上の単独叉は複合化合物と以下のグループAから選択される一種以上の単独又は混合化合物とグループBから選択される一種以上の単独又は混合化合物と以下のグループCから選択される一種以上の単独又は混合化合物とグループDから選択される一種以上の単独又は混合化合物を同時に含有する液晶乳化組成物。
（界面活性剤:グループA）
ココイルグルタミン酸Na、ココイルグルタミン酸K、ココイルグルタミン酸Na、ココイルグルタミン酸TEA、ココイルグルタミン酸TEA、ラウロイルアスパラギン酸Na、ラウロイルグルタミン酸Na、ミリストイルグルタミン酸Na、パーム脂肪酸グルタミン酸Na，フォスファチジルコリン、リン脂質及びこれらの塩類
（水溶性物質：グループB）
グリセリン、ジグリセリン、トリグリセリン、ポリグリセリン、メチルブタンジオール、ブチレングリコール、イソプレングリコール、ポリエチレングリコール、ペンタンジオール、ヘキサンジオール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、エチレングリコール、ジエチレングリコール、ネオペンチルグリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、キシリトール、ピロリドンカルボンナトリウム、ヒアルロン酸、カラギーナン、アルギン酸、寒天、フコイダン、ペクチン、ローカストビーンガム、キサンタンガム、トラガントガム、グアーガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アクリル酸・メタクリル酸共重合体、ポリグルタミン酸。
（脂質:グループC）
ミネラル油、スクワラン、スクワレン、パルミチン酸イソプロピル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸イソオクチル、ミリスチン酸イソトリデシル、ミリスチン酸オクタデシル、ミリスチン酸オクチルドデシル、イソステアリルコレステリルエステル、2-エチルヘキサン酸トリグリセリド、2-エチルヘキサン酸セチル、パーム油、ヒマワリ油、オリーブ油、ホホバ油、ツバキ油、流動パラフィン、グレープシード油、アボガド油、マカダミアナッツ油、アーモンド油、天然ビタミンE油、米胚芽油、丁字油、オレンジ油、トウヒ油、ステアリン酸及びパルミチン酸。
（抗酸化剤:グループD）
コウジ酸、アルブチン、アスコルビン酸リン酸エステルナトリウム、アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム、アスコルビン酸メチル、アスコルビン酸エチル、アスコルビン酸硫酸エステルナトリウム、アスコルビン酸グルコシド、アスコルビン酸リン酸パルミテートナトリウム、トコフェリルリン酸ナトリウム、（アスコルビル/トコフェリル）リン酸K、アスコルビルマレイン酸トコフェリル、カプリリルグリセリルアスコルベート、へキシルグリセリルアスコルベート、ミリスチルグリセリルアスコルベート、グリセリルアスコルベート、ビスグリセリルアスコルベート、ジグリセリルアスコルベート、イソステアリルアスコルビルリン酸ナトリウム、ステアリン酸アスコルビル、 パルミチン酸アスコルビル、ジパルミチン酸アスコルビル、エラグ酸、レゾルシノール、ブチルレゾルシノール、カミツレ抽出物、ソウハクヒ抽出液、ユキノシタ抽出液、米糠抽出物、ジアセトキシ安息香酸、アセトキシヒドロキシ安息香酸、胎盤抽出物、アスタキサンチン、カロチン、酢酸レチノール、パルミチン酸レチノール、レチノイン酸、トコフェリルリン酸Na、トコフェリルアセテート，トコフェリルニコチネート、トコフェリルリノレート、トコフェロール、ジイソプロピルアミンジクロロアセテート、アミノヒドロキシ酪酸、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル。
（１７）
ビタミンEが、以下のビタミンE群から選択される１種または２種以上の混合物である１の化合物。
（ビタミンE群）
DL-α-トコフェロール、DL-β-トコフェロール、DL-γ-トコフェロール、DL-δ-トコフェロール、D-α-トコフェロール、D-β-トコフェロール、D-γ-トコフェロール、D-δ-トコフェロール、α-トコフェロール、β-トコフェロール、γ-トコフェロール、δ-トコフェロール、DL-α-トコトリエノール、DL-β-トコトリエノール、DL-γ-トコトリエノール、DL-δ-トコトリエノール、D-α-トコトリエノール、D-β-トコトリエノール、D-γ-トコトリエノール、D-δ-トコトリエノール、α-トコトリエノール、β-トコトリエノール、γ-トコトリエノール、δ-トコトリエノール
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
本発明請求項１の溶媒可溶性炭化水素の溶媒とは、塩化メチレン、DMSO、THF、CH2Cl2、DMFなどの単独溶媒叉は混合溶媒を４０℃に加熱するとき、DL-α-トコフェロールを１重量％以上溶解可能な溶媒である。従って、本発明の溶媒可溶性炭化水素とは、この溶媒に４０℃で１％重量以上溶解可能な炭化水素化合物である。ちなみにビタミンEは、炭化水素、溶媒可溶性炭化水素、ベンゼン環、クロマン環、ベンゾピランのいずれにも該当する。本発明の溶媒可溶性炭化水素が、溶媒に４０℃で１％重量以上溶解しない場合でも、本発明に使用可能であるが、反応効率が低下し製造コストが高騰するため使用が困難となる。
本発明の合成に使用されるビタミンCとしては、L-アスコルビン酸叉はその塩がある。ここでいう塩とはナトリウム塩やカリウム塩などのアルカリ金属塩およびカルシウム塩やマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩が挙げられるが、これら以外の塩であっても薬理学的に許容できる塩であればいずれのものであってもよい。
ビタミンEには、複数の種類が存在することが知られており、大きく分けてトコフェロ-ルとトコトリエノ-ルが存在するが、本発明に使用可能なビタミンEは、トコフェロ-ルとトコトリエノ-ルのどちらでも、その塩でも良くその構造は、以下の通りである。本発明に使用できるビタミンEは、光学活性によりD型とL型が存在するが、本発明にはどちらの型も使用でき、又、その混合タイプのDL型やall-rac型も使用できる。さらに、以下の化学式と表１に示す通りビタミンEは、メチル基の位置によりα, β, γ, δの4種がある。また、トコトリエノ-ルもトコフェロ-ルと同様のビタミンE活性を持つため本発明に使用することができる。以下に本発明で使用できるトコフェロ-ルとトコトリエノ-ルの構造を示す。
本発明のアセチルエステル構造を持つ化合物の合成に使用可能なビタミンEの塩とは、ビタミンEの持つHO-のHがナトリウム塩やカリウム塩などのアルカリ金属塩およびカルシウム塩やマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩に置き換わったものであり、上記以外のアンモニウム塩などの塩であっても薬理学的に許容できる塩であればいずれのものであってもよい。さらに、本発明の合成に使用できるビタミンEは、旋光性が異なる d型（dextro-rotatory = 右旋性 (+)）、及びl型（levo-rotatory = 左旋性 (−)）のどちらも使用できる。加えて、グリセルアルデヒドに対応させることで名づけるD/L 表記法のD型及びL型のいずれの立体異性体も使用できる。更にそれらの混合物であるラセミ混合物（rac-として表記）やDL型（DL-として表記）も本発明の製造原料として使用することができる。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
【化９】
2016044171.tif 000010
ビタミンE
上記ビタミンEのR6が 
-CH2-CH2-CH2-CH(-CH3)-CH2-CH2-CH2-CH(-CH3)-CH2-CH2-CH2-CH(-CH3)-CH3
であるとき、トコフェロールの構造を示す。また、R６が又は、-CH2-CH2-CH=C(-CH3)-CH2-CH2-CH=C(-CH3)-CH2-CH2-CH=C(-CH3)-CH3
であるとき、トコトリエノールの構造を示す。以下、同様な式でR6をビタミンEを構成する炭化水素と称するが、具体的には、Ｒ６は、
-CH2-CH2-CH2-CH(-CH3)-CH2-CH2-CH2-CH(-CH3)-CH2-CH2-CH2-CH(-CH3)-CH3又は、-CH2-CH2-CH=C(-CH3)-CH2-CH2-CH=C(-CH3)-CH2-CH2-CH=C(-CH3)-CH3のいずれかである。
上記トコフェロール及びトコトリエノールの構造式において、R1,R2,R3は、そのα、β、γ、δの各タイプにより次の化学構造を有する。即ち、α型：R1=CH3、R2=CH3、R3=CH3。β型：R1=CH3、R2=H、R3=CH3。γ型：R1=H、R2=CH3、R3=CH3。        
δ型：R1=H、R2=H、R3=CH3である。
本名発明のビタミンCとは、L-アスコルビン酸とD-アスコルビン酸であるが、生物活性の問題からL-アスコルビン酸が望ましい。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
本発明のアセチルエステル構造を持つ化合物に使用できるビタミンEは、上記に記載された全てのビタミンEを使用することができる。本発明に使用できるビタミンEの例として具体的には、トコフェロ-ル及びトコトリエノ-ルであり、それぞれについてαβγδの４種の全てが使用できる。即ち、D-α-トコフェロ-ル、D-β-トコフェロ-ル、D-γ-トコフェロ-ル、D-δ-トコフェロ-ル、D-α-トコトリエノ-ル、D-β-トコトリエノ-ル、D-γ-トコトリエノ-ル、D-δ-トコトリエノ-ル、L-α-トコフェロ-ル、L-β-トコフェロ-ル、L-γ-トコフェロ-ル、L-δ-トコフェロ-ル、L-α-トコトリエノ-ル、L-β-トコトリエノ-ル、L-γ-トコトリエノ-ル、L-δ-トコトリエノ-ル、及びこれらの混合タイプである、DL-α-トコフェロ-ル、DL-β-トコフェロ-ル、DL-γ-トコフェロ-ル、DL-δ-トコフェロ-ル、DL-α-トコトリエノ-ル、DL-β-トコトリエノ-ル、DL-γ-トコトリエノ-ル、DL-δ-トコトリエノ-ルであり、これらの中から選択される１種叉は２種以上の混合物でもよい。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
本発明のアセチルエステル構造を持つ化合物は、例えば次の合成法により、またはこれに準じて適宜合成することができる。
本発明の製造方法を以下に記載するが、ビタミンCの5,6位の水酸基の保護基としては、以下のイソプロピリデン基に限定されず、例えばベンジリデン基などのアシル基でも可能であるが、イソプロピリデン基が一般的である。これらの保護基は、反応液を酸性とすることにより容易に離脱させることができる。酸性とするにあたっては、例えば塩酸、リン酸、硫酸などの無機酸または酢酸、クエン酸などの有機酸などの一般的な酸性化合物を用いることができる。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
窒素雰囲気などの無酸素状態下で、ビタミンEを塩化メチレンなど５％重量以上溶解できる溶媒に溶解し、ピリジンなどのアルカリ触媒、酸触媒及び相間移動触媒とブロモアセチルブロミドなどのハロゲン化アセチルを加えて室温で撹拌する。反応終了後、クロロホルムや酢酸エチルなどを加えて薄め、有機層を水と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、硫酸ナトリウムをろ過などで除去する。無水硫酸ナトリウムで乾燥しないで抽出溶媒を留去した残渣に１-プロパノ-ルまたは１-プロパノ-ルと前記のｎ-ヘキサン、シクロヘキサン、石油エ-テルなどの１種以上の有機溶媒との混液を添加し、本化合物を結晶化後に溶媒を留去し、得られた残留物をカラムクロマトグラフィ-などで精製し［化６］で示されるハロゲン化ビタミンEアセチルモノエステルを油状物として得ることができる。ハロゲン化アセチルがブロモアセチルブロミドを使用して反応させた場合は、［化６］のＸは、Br（臭素）となる。
ビタミンC-3-アセチルエステルビタミンEの製造方法は以下の通りであル。5,6-イソプロピリデンビタミンCとハロゲン化ビタミンEアセチルモノエステルをジメチルスルホキシド（DMSO 、Dimethyl sulfoxide）、ジメチルホルムアミド（DMF、N,N-dimethylformamide）、テトラヒドロフラン（THF、tetrahydrofuran、Oxolane）、CH2Cl2などの極性の高い溶剤に溶解し、炭酸水素カリウム、炭酸ナトリウムや炭酸カリウムなどの炭酸アルカリ化合物を加えて撹拌し、この反応混合物に水を加え、クロロホルムや酢酸エチルなどを加えて薄め、有機層を水と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、硫酸ナトリウムをろ過などで除去する。無水硫酸ナトリウムで乾燥しないで抽出溶媒を留去した残渣に１-プロパノ-ルまたは１-プロパノ-ルと前記のｎ-ヘキサン、シクロヘキサン、石油エ-テルなどの１種以上の有機溶媒との混液を添加し、本化合物を結晶化させてもよい。得られた残留物をカラムクロマトグラフィ-などで精製し以下［化１１］で示される5,6-イソプロピリデンビタミンC-3-アセチルエステルビタミンEを固体として得ることができる。このときＲ６は、ビタミンEを構成する炭化水素である。
【化１１】
2016044171.tif 000011
5,6-イソプロピリデンビタミンC-3-アセチルエステルビタミンEをメタノ-ルなどの適当な溶媒に溶解し、塩酸などの前記記載の一般的な酸性化合物を加えて加温して反応撹拌する。その後ろ過し固体を集め、クロロホルムや酢酸エチルなどを加えて薄め、有機層を水と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、硫酸ナトリウムをろ過などで除去する。無水硫酸ナトリウムで乾燥しないで抽出溶媒を留去した残渣に１-プロパノ-ルまたは１-プロパノ-ルと前記のｎ-ヘキサン、シクロヘキサン、石油エ-テルなどの１種以上の有機溶媒との混液を添加し、本化合物を結晶化させてもよい。
溶媒を留去し、ろ過によって集めた固体とあわせ、得られた残留物をカラムクロマトグラフィ-などで精製しビタミンC-3-アセチルエステルビタミンEを固体として得ることができる。このときＲ６は、ビタミンEを構成する炭化水素である。
【化１２】
2016044171.tif 000012
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
本発明のビタミンC-２-アセチルエステルビタミンEの製造方法は以下の通りである。低酸素状態で、t-BuOK（カリウム ターシャリーブトキシド、potassium tert-butoxide、potassium 2-methylpropan-2-olate）をDMSO、DMF、THF、CH2Cl2などの極性の高い溶剤から選ばれる１種以上の溶媒に懸濁させて冷却し、5,6-イソプロピリデンビタミンCを溶解させた前記極性の高い溶媒を滴下した。その後、ハロゲン化ビタミンEアセチルモノエステルの前記極性の高い溶媒を加えて撹拌する。HClなどの前記記載の一般的な酸性化合物と水を加え、クロロホルムや酢酸エチルなどを加えて薄め、有機層を水と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、硫酸ナトリウムをろ過などで除去する。無水硫酸ナトリウムで乾燥しないで抽出溶媒を留去した残渣に１-プロパノ-ルまたは１-プロパノ-ルと前記のｎ-ヘキサン、シクロヘキサン、石油エ-テルなどの１種以上の有機溶媒との混液を添加し、本化合物を結晶化させてもよい。
ろ過後に溶媒を留去し、得られた残留物をカラムクロマトグラフィ-などで精製し5,6-イソプロピリデンビタミンC-２-アセチルエステルビタミンEを個体として得ることができる。このときＲ６は、ビタミンEを構成する炭化水素である。
【化１３】
2016044171.tif 000013
5,6-イソプロピリデンビタミンC-２-アセチルエステルビタミンEをアルコ-ルなどの適当な溶媒に溶解し、HClなどの前記記載の一般的な酸性化合物を加えて撹拌反応させる。反応混合物に水を加えクロロホルムや酢酸エチルなどを加えて薄め、有機層を水と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、硫酸ナトリウムをろ過などで除去する。無水硫酸ナトリウムで乾燥しないで抽出溶媒を留去した残渣に１-プロパノ-ルまたは１-プロパノ-ルと前記のｎ-ヘキサン、シクロヘキサン、石油エ-テルなどの１種以上の有機溶媒との混液を添加し、本化合物を結晶化させてもよい。乾燥剤をろ過した後に溶媒を留去し、得られた残留物をカラムクロマトグラフィ-などで精製しL-ビタミンC-２-アセチルエステルビタミンEを個体として得ることができる。このときＲ６は、ビタミンEを構成する炭化水素である。
【化１４】
2016044171.tif 000014