(57)【要約】【課題】  この発明はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１とＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列の精製ポリペプチドを製すること。そして通常のアジュバンドおよび／または脱脂効果がある薬剤および腎性疾患を処置する薬剤を製剤するために通常の佐薬および／またはキャリア物質と組み合わせてポリペプチドを利用する。【解決手段】  精製ポリペブチドを製造するために、ポリペプチドのアミノ酸配列をＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３のアミノ酸配列と同じにし、ポリペプチドが低濃度のリポプロティン（ＬＤＬ）および／または酸化ＬＤＬ（ｏｘＬＤＬ）、特にＬＤＬコレステロールおよび／または酸化ＬＤＬコレステロール（ｏｘＬＤＬコレステロール）と結合させる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリペプチドのアミノ酸配列をＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３のアミノ酸配列と同一のものとし、ポリペプチドが低濃度のリポプロテイン（ＬＤＬ）および／または酸化ＬＤＬ（ｏｘＬＤＬ）、特にＬＤＬコレステロールおよび／または酸化ＬＤＬコレステロール（ｏｘＬＤＬコレステロール）と結合することを特徴とする精製ポリペプチド。
【請求項２】
前記ポリペプチドまたは前記ポリペプチドの断片と低濃度リポプロテイン（ＬＤＬ）および極く低濃度のリポプロテイン（ＶＬＤＬ）と、それぞれの酸化形体（ｏｘＬＤＬおよびｏｘＶＬＤＬ）との結合を高濃度のリポプロテイン（ＨＤＬ）との結合よりも強力なものとすることを特徴とする請求項１に記載の精製ポリペプチド。
【請求項３】
前記ポリペプチドまたは前記ポリペプチドの断片と、人体および動物体に生ずる低濃度のリポプロテイン（ＬＤＬ）および／または酸化低濃度リポプロテイン（ｏｘＬＤＬ）とを相補的な炭水化物構造のものとすることを特徴とする前記各項中のいずれかの１項に記載のポリペプチド。
【請求項４】
前記ポリペプチドを抗体または抗体の機能的な断片とすることを特徴とする前記各項中のいずれかの１項に記載の精製ポリペプチド。
【請求項５】
前記ポリペプチドをＶＬ，ＶＨ，ＦＶ１，Ｆｃ，Ｆａｂ，Ｆａｂ’，及びＦ（ａｂ’）２から成る類中の一つの機能的な断片とすることを特徴とする前記請求項中のいずれかの１項に記載の精製ポリペプチド。
【請求項６】
前記軽鎖（ＶＬ）の可変領域のアミノ酸配列をＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１と同一および／または重鎖（ＶＨ）の可変領域のアミノ酸配列をＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３と同一とすることを特徴とする前記請求項５に記載の精製ポリペプチド。
【請求項７】
前記軽鎖（ＶＬ）の可変領域の核酸配列をＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２および／または前記重鎖（ＶＨ）の可変領域の核酸配列をＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４と同一とすることを特徴とする前記請求項５に記載の精製ポリペプチド。
【請求項８】
前記断片がＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の、或いはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３のアミノ酸配列の断片を含有することを特徴とする前記請求項５に記載の精製ポリペプチド。
【請求項９】
前記断片がＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３のアミノ酸配列と同一のものとすることを特徴とする前記請求項５に記載の精製ポリペプチド。
【請求項１０】
前記ポリペプチドをＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸配列と同一のものとすることを特徴とする請求項１に記載の精製ポリペプチド。
【請求項１１】
前記ポリペプチドをＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３のアミノ酸配列と同一のものとすることを特徴とする請求項１に記載の精製ポリペプチド。
【請求項１２】
前記ポリペプチドがＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のヌクレオチド６７−９９（ＣＤＲ１），１４５−１６５（ＣＤＲ２）および２６２−２８８（ＣＤＲ３）と同一のものとすることを特徴とする前記請求項１および３のいずれかの一項とする精製ポリペプチド。
【請求項１３】
前記ポリペプチドがＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４のヌクレオチド９１−１０５（ＣＤＲ１），１４８−１９８（ＣＤＲ２）および２９５−３３０（ＣＤＲ３）と同一のものとすることを特徴とする前記請求項１および３のいずれかの一項とする精製ポリペプチド。
【請求項１４】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸配列を含む精製ポリペプチド。
【請求項１５】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３のアミノ酸配列を含む精製ポリペプチド。
【請求項１６】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３のアミノ酸配列を含む精製ポリペプチド。
【請求項１７】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸配列の
Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｃｙｓ（ＣＤＲ１）、または
Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ＣＤＲ２）、または
Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−ｌｌｅ−Ｖａｌ−Ｖａｌ（ＣＤＲ３）および／またはＳｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ｈｉｓ（ＣＤＲ１）または
Ｖａｌ−ｌｌｅ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ（ＣＤＲ２）または
Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ（ＣＤＲ３）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３から成る相補性決定領域（ＣＤＲｓ）またはその機能的なフラグメント。
【請求項１８】
前記ポリペプチドを請求項１９に記載の方法によって発生することが出来るポリペプチドとすることを特徴とする前記請求項のいずれかの一項による精製ポリペプチド。
【請求項１９】
ハイブリドーマ細胞をハイブリドーマ細胞ＨＡＢ−１とヒトの脾臓、リンパ節あるいは血液から得られるＢ−リンパ球についてのサブクロン（ｓｕｂｃｌｏｎｅ）の溶融によって取得することを特徴とするハイブリドーマ  テクノロジーにより抗体を発生する方法。
【請求項２０】
前記ポリペプチドをモノクロナールの抗体とすることを特徴とする前記請求項１，１７および１９のいずれかの一項に記載の精製ポリペプチド。
【請求項２１】
前記ポリペプチドをヒトのクーロン性の抗体とすることを特徴とする請求項２０に記載の精製ポリペプチド。
【請求項２２】
脂肪分を下げる効果のある薬剤を製造するために通常の免疫増進薬および／または担体物質を組み合せるようにする前記請求項のうちのいずれかの一項によるポリペプチドの使用。
【請求項２３】
血液中の低濃度リポプロテイン（ＬＤＬ）、および／または酸化ＬＤＬ（ｏｘＬＤＬ）を減少する薬剤を製造するために、前記請求項１乃至２２のうちのいずれかの一項によるポリペプチドの使用。
【請求項２４】
ＬＤＬコレステロールおよび／または酸化ＬＤＬコレステロール（ｏｘＬＤＬコレステロール）を減少する薬剤を製造するために、前記請求項１乃至２４のいずれかの一項によるポリペプチドの使用。
【請求項２５】
腎臓病の治療用の薬剤を製造するために前記請求項１乃至２２のいずれかの一項によるポリペプチドの使用。
【請求項２６】
糸球体ネクローシスの治療用の薬剤を製造するために前記請求項２５によるポリペプチドの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  この発明は精製ポリペプチド（ＳＡＭ−６．１０）とこれに通常の免疫増進剤および／または担体とを組み合せて脂肪を軽減する効果と腎臓疾患を治療する薬剤を製造することに関する。
【背景技術】
【０００２】  躰内の余分なコレステロール（高リポタンパク血症）は血管の内部の層の硬化（動脈プラーク）を招き、動脈壁を次第に硬化し、しかも厚くする。それが過激になると、血管を閉塞したり、あるいはプラークを破裂させて血栓症を招くおそれがある。その二次疾患による動脈硬化症（冠動脈疾患，心臓発作，末梢動脈閉塞症および発作）は多くの場合、死に至らせる。医療に費やされる費用全体の半分以上は動脈硬化症の結果によるものである。動脈硬化症の原因を明確にするために、多くの学説が出ているが、脂質の説が最も重要視できるものと思われる。【０００３】  一般的に、血液中のＬＤＬコレステロールのレベルまたは酸化ＬＤＬコレステロールのレベルが高い場合と血管硬化の危険性が高いと言うことができる。例えば、心臓発作を招くからである。太りすぎや高コレステロール血症も動脈硬化症になる最も危険な要因である。【０００４】  定義と用語
コレステロールのような脂肪は水にも、血漿にも溶けない。それでも各個人の躰の中に送り込まれると、すぐにその脂肪は蛋白質と結合してしまいます。そうして出来た脂質（脂肪）と蛋白質とから成る化合物をリポタンパクと言う。【０００５】  血漿の「リポタンパク」は高分子量の水溶性複合体で、脂質（コレステロール，トリグリセリドとリン脂質）とアポリポタンパクとから成っている。コレステロールを含有するリポタンパクＬＤＬコレステロールは動脈硬化を招き、「悪い」コレステロールとされており、コレステロールが酸化した形であると躰に対して最も恐ろしいものである。【０００６】  「コレステロール」は体内に偏在して合成され、細胞膜とリポタンパクとの最も主要な成分である。内因性によって合成されるトリグリセリドとリポタンパクとは対照的に、コレステロール分子は再度分解されることがなく、コレステロールは肝臓内で胆汁酸に変わるか、消化器の中に変化することなく排出される。【０００７】  コレステロールは血漿中に２５乃至４０％遊離（エステル化しない）コレステロールとして存在し、またその６０乃至７５％が不飽和脂肪酸でエステル化される。これら二つの形のコレステロールは共に、トータルコレステロールとして知られている。コレステロールは水に良く溶けるため、コレステロールはアポリポタンパクと複合して血漿中に送り込まれる。血液中でコレステロールの全体の約７０パーセントが低濃度のリポタンパク（ＬＤＬ）を介して移送される。【０００８】  「トリグリセリド」は３種類の脂肪酸残基を有するグリセリンのエステルである。コレステロールと同様にして、トリグリセリドは溶解性が低いためにアポリポタンパク質に血漿結合をして送り込まれる。【０００９】  「リポタンパク質」は肝臓あるいは消化管内で合成され、血液中にコレステロールのような脂肪性の物質として送り込まれる。【００１０】  リポタンパク質はその濃度に応じて５階級、すなわちキロミクロン、極めて低濃度のリポタンパク（ＶＤＬ）、低濃度のリポタンパク（ＬＤＬ）と高濃度のリポタンパク（ＨＤＬ）とに区分されている。キロミクロンは、断食中の血清中の生理的な分布が他のリポタンパクと異なって頗る低いために、外因性グリセリドを輸送する賦形剤である。その他のポリタンパクの生理的分布は、次の通りである。すなわち、ＶＬＤＬ１０％，ＬＤＬ７０％、そしてＨＤＬ２０％である。ＶＬＤＬはＬＤＬと内因性グリセリドを輸送する賦形剤である。ＬＤＬはＶＬＤＬを加水分解させることによって生成される。ＬＤＬとＨＤＬとは共に、細胞コレステロールホメオスタシーシスの調節細胞であって、ＨＤＬもまたリポタンパクを（トリグリセライドをグリセロールと遊離脂肪酸とに分ける）調節脂肪分解物である。ＬＤＬは直径が約２０ｎｍである。ＨＤＬは最も小さくて（７−１０ｎｍ）であり、最もタンパク質に富むリポタンパクである。天然のＬＤＬ（ＬＤＬ）を除いて、酸化ＬＤＬ（ｏｘＬＤＬ）もまた血清中に検出することができる。ｏｘＬＤＬは内因性血漿タンパクと相互作用をなし、特に、特有のリガンドによって糖タンパクとなり、ｏｘＬＤＬ糖タンパク複合体となる。【００１１】  「アポリポタンパク」はリポタンパク質の一成分で���り、外殻の一種として、疎水脂質を構成するリポタンパク質のコアを包囲している。アポタンパクＢのみを含有しているＬＤＬを除いて、各々のリポタンパク質は相互に異なる構成のものである。【００１２】  リポタンパク質移送
コレステロールは２種類のリポタンパク質ＬＤＬとＨＤＬを介して主として移送される。ＬＤＬはこれについて特異の受容体を持っている末梢細胞に、主にコレステロールを輸送する役目を果す。ＨＤＬは過剰肝細胞や血管壁からコレステロールの除去を加速し、それを肝臓へ戻す。【００１３】  病理学
リピド代謝障害の病理について考慮するならば、これは一般的に、ＨＤＬコレステロールに還元して結合しているＬＤＬコレステロールを高め動脈硬化の恐れを頗る顕著に高める。病理学では、ＬＤＬ、すなわちその粒子は動脈硬化プラークの形成に極めて関係が深い。それゆえ、ＨＤＬがそれに反する役目を果す。全体のコレステロール／ＨＤＬコレステロール、そして、とくにＬＤＬコレステロール／ＨＤＬコレステロールが心臓発作の危険を判断する検出ファクターである。（疫学的学門（フラミングハム学門）もまたＨＤＬコレステロールの防御効果に関連している。）冠状動脈破裂の継発症は心臓疾患と末梢動脈疾患との外に、心臓と脳梗塞（脳卒中）とを含んでいる。【００１４】  ｏｘＬＤＬは、ＬＤＬと同様に、動脈硬化症のプラークを生ずる虞れがあり、ｏｘＬＤＬは躰に対して最大の危険をもたらす。【００１５】  しかしｏｘＬＤＬはまた、その他の疾病についても重要な役を演ずる。慢性腎臓不全症と糖尿病の患者では、ｏｘＬＤＬ糖タンパク質の複合体が健康そうな人たちよりも遥かに多いのである。【００１６】  ＬＤＬもまた肝臓による、そして大食細胞によって血液の循環から除かれる。大食細胞とは免疫系統の細胞で、大きな粒子の食菌作用をすることができる。【００１７】  「清掃細胞行路」とは細胞抱き込み粒子（食菌作用）を説明するための周知のモデルである。固体粒子（血液成分屑、異物、バクテリア、あるいはＬＤＬプラーク）を食細胞の内部に編入し、それから後に、細胞内の頓挫を食菌作用で行なう。食細胞は主として組織マクロファージと移動性血状単核細胞とから成っている。【００１８】  粒子がＦｃと膜の補体レセプターとに結合して食細胞の細胞膜に付着した後の食菌作用で、収縮性の構成が細胞質内において活性化される。細胞膜の局所逆位が細胞質の空胞中に粒子を封入させる。【００１９】  いわゆるスカベンジャー食細胞が髄質から成る線維中に、それに沿ってリンパ節に見出される。【００２０】  輸入管からリンパ節の導出端に至るリンパ管の通路は特別の抗原を食細胞によって除去する。【００２１】  多形核白血球とマクロファージなどの食細胞に細胞が接着することはバクテリア（および他の抗原）の表面に免疫グロブリン（１ｇ）が接着することによって増加する。このように細胞の接着が増加すると、免疫グロブリンのＦｃ成分が食細胞のＦｃレセプターに接着することにより作用すると思慮される。抗原が抗体の接着（または結合）によって「食欲増進」をそそった後、抗原と抗体の複合体が食細胞によって取り上げられ、食細胞によって速やかに摂取される。免疫グロブリンによる抗体の被覆物もまたオプソニン媒介中間（Ｆｃ）接着として知られ、免疫に対する反応に重要な役を演ずる。【００２２】  菌体の表面に結合している抗体は細胞外の液体の特別の成分を固定することができる。一般的な用語で述べると、これらの成分は「補体」と名付けられている。動物実験によって、抗体で被われた細胞の食菌作用は補体を欠く動物では遅滞していることが判った。したがって、オプソニン作用は抗体と補体との間に相乗作用を伴うことが明らかである。【００２３】  ＬＤＬコレステロールを減少させるための従来の技術での薬剤はコレス���ロール合成（ＣＳＥ）のための鍵酵素を抑制することによって作用する。例えば、ある種のコレステロール合成抑制物質は商品名「リポベイ（Ｌｉｐｏｂａｙ）として知られている物質である。ＣＳＥ抑制物質の副作用は、とくに、胃腸病、睡眠障害、めまい、視力障害、アレルギー性反応、脱毛等が挙げられる。これに対する対策は、専ら試験段階であって、特に、重症の家族性の高コレステロール血症の場合に限って、体細胞の遺伝子治療法がある。この治療法はＬＤＬレセプターの遺伝子を自律肝臓細胞へ転移することから成っている。【００２４】  これまでに、脂肪を減らす働きをする物質は無く、副作用が殆んど無い物質も見当らない。特に、リポプロテインの細胞についての激しい蓄積を招かせる抗体を知られていない。腎臓病（腎臓の糸球濾過系統の細胞の脂質誘導の損傷）の有害な作用は周知であるが、腎臓の抗体を基礎とする病気、とくに糸球体腎炎の抗体を基本とする治療法は全く存在しない。【００２５】  この発明の目的はヒト及び動物のＬＤＬコレステロールまたはｏｘＬＤＬコレステロールを、梗塞の危険を減じて最も進んだ結果に至らせること無く減少させる薬剤の製造に関する新規な物質の生成にある。【００２６】  この目的を達成するために、ポリペプチドを提案する。そのアミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３のアミノ酸配列と同様であって、低濃度のリポプロテイン（ＬＤＬ）および／または酸化したＬＤＬ（ｏｘＬＤＬ）、とくにＬＤＬコレステロールおよび／または酸化ＬＤＬコレステロール（ｏｘＬＤＬコレステロール）に結合している。【００２７】  この発明の要旨はヒトの単クローン性の抗体（ＳＡＭ６．１０）の軽いチェイン（ＶＬ）または重いチェイン（ＶＨ）に全体的または部分的に一致する配列の精製ポリペプチドが低濃度リポタンパク質（ＬＤＬ）および／またはｏｘＬＤＬの減少に寄与することを示すものである。前記ポリペプチドを該当する薬剤の製剤に脂肪還元剤として使用することを提案するという発明はポリペプチドの生化学的な説明の過程の中で行なわれている。好都合なことに、この発明によるポリペプチドの結合あるいはＬＤＬおよび／またはｏｘＬＤＬおよびＶＬＤＬにポリペプチドの一部が結合し、ＬＤＬの前駆細胞がＨＤＬに結合するよりも強力なのである。この性質の結果として、この発明によるポリペプチドはＬＤＬ／ＨＤＬおよび／またはｏｘＬＤＬ／ＨＤＬのそれぞれの指数について低い値に導いているので、梗塞の危険を最小限にする。【００２８】  ポリペプチドが低密度のリポタンパク質（ＬＤＬおよび／またはｏｘＬＤＬ）に特に結合すること、またはＬＤＬコレステロールおよび／またはｏｘＬＤＬコレステロールが結合することは、ＥＬＩＳＡ法によって実験的に証明されている。それと同じ実験で、この発明による物質の高濃度のリポタンパク質との結合は、弱いものである。【００２９】  この発明による抗体は、これを表示する通常の命名法によるＶＬ，ＶＨ，ＦＶ，Ｆｃ，Ｆａｂ，Ｆａｂ’，Ｆ（ａｂ’）２と名付けられているグループから成っている。前記グループはまた、断片として知られている。単一の断片は、この発明によるポリペプチドの脂肪減量効果の目的��ある。この発明による物質のさらなる開発によって、その物質はヒトの単クローンの抗体である。【００３０】  「機能的な断片」という用語は、この発明の趣旨からして、生物学的活動度の少くとも一部であり、エンタイアー・ポリペプチドとしても示される。抗体の場合に、これは、例えば、すべてのＣＤＲ領域が特異な結合に必要なわけではないことが判っている。すなわち、抗体の特異な結合は、１つのＣＤ領域で行うことが出来るものである。ただし、合わせて３ＣＤの領域が存在する。抗体に抗原が特異的に結合することは、例えば、アポトーシスの誘発、あるいは細胞増殖の抑制を招くことができる。機能的な断片の生物学的活動度は当業者に周知である多くの方法で測定することが出来る。抗体とＬＤＬとの間、特にＬＤＬコレステロールとの間の相互作用を測定する方法はＥＬＩＳＡ法である。【００３１】  ポリペプチド配列の相補性−決定領域（ＣＤＲｓ）は、アミノ酸配列
Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｃｙｓ（ＣＤＲ１）、
Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ＣＤＲ２）および
軽鎖の可変領域（ＶＬ）のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のＧｆｎ−Ａｌａ−ＴｒｐＡｓｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−ｌｌｅ−Ｖａｌ（ＣＤＲ３）に全く等しいアミノ酸配列を含んでいる；図２を参照のこと。【００３２】  ペプチド配列の相補性−決定領域（ＣＤＲｓ）は、
Ｓｅｒ−Ｔｒｖ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ｈｉｓ  （ＣＤＲ１）、
Ｖａｌ−ｌｌｅ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ（ＣＤＲ２）およびＬ鎖（ＶＨ）の可変領域のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３のＡｓｐ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ（ＣＤＲ３）と本質的に同一なアミノ酸配列を具備している。図４を参照。【００３３】  ポリペプチドあるいは核酸配列は、参考文献または核酸配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２と４）に示されているアミノ酸配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１および３）と［同じである］少くとも７５％，８０％，８５％または９０％のものであれば、「全く同一」と言える。ポリペプチドまたは核酸配列の一層の発展に伴って、少くとも９５％，９８％，９９％または１００％のものは引用文献に示すものと比較して同一であると述べることができる。ポリペプチドについては、比較部分の範囲が一般的に少くとも５，１０，１５逐次的アミノ酸で、好ましくは、少くとも２０または２５逐次アミノ酸であることが望ましい。【００３４】  この発明に基づくポリペプチドはハイブリドーマ技術（雑誌「Ｎａｔｕｒｅ」１９７５年第
2007537995.tif 000002
た方法で生成することができ、単クーロン抗体を分離する。これは制限のない生育性で再現性のミエローマ細胞（例えばＨＡＢ−１）で正常のリンパ球の細胞融合によって得られる細胞のハイブリッドの試験管内での分離に基づくものであって、再現性のものである。この手段で生成されたハイブリドーマ細胞は両親細胞の性質を具備する。同様にして、これらの細胞に抗体（例えばＳＡＭ６．１０）を生成するリンパ球の可動性を備え、果しなく骨髄腫細胞を分裂させて、それにより多量の抗体を生成する。融合に基づく各雑種の細胞は単クローン性の抗体を生成し、その特異性が最初のリンパ球細胞によって決定される。この選択の培養とその分離とは極めて激しい反応をして抗体を誘導し、専ら特別の抗原決定因子と反応する。【００３５】  低濃度のリポプロテイン（ＬＤＬ）準位（またはＬＤＬコレステロール準位）、または血漿中のそれぞれの酸化した形状の還元の証拠は検出可能範囲の低下でＨＤＬ準位でなく動物実験によって確認される。これらの重要な特徴は動物の生命の機能について、抗体の投与中には、何等の影響を及ぼさないので、この発明による物質は副作用が全く無いと言える。（この発明による抗体の機構は周知のスカベンジャー径路の機構による相似性により説明をすることが出来る。）【００３６】  この発明による薬剤を使用するための指示は腎性疾患、とくに糸球体腎炎（糸球体硬化症）の治療である。【００３７】  この発明によるポリペプチドは、鈍化したものを提供することを考慮して、（例えば、親和性クロマトグラフィー，ゲル濾過）の当業者が従来周知の凡ゆる方法で、薬剤を製造するに当って純枠なものにすることが望ましい。この発明による物質の適用としては、ＬＤＬまたはＬＤＬ−コレステロールの選択的な還元に重きを置いて脂肪軽減効果を最も重視する。ＬＤＬおよび／またはｏｘＬＤＬの結合がＨＤＬよりも更に強力であるという性質によって、この発明によるポリペプチドをＬＤＬ／ＨＤＬおよび／またはｏｘＬＤＬ／ＨＤＬの比率について低い値にし、それによって梗塞の危険を最小限に抑える。【００３８】  薬剤を製造する佐薬と担体物質とは当業者の周知するところで、通常の手段で製薬することが出来る。（レミングトン（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ）を参照：ザ．サイエンス．アンド．プラクティス．オブ．ファーマシイ（Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）（第２０版）、発行所エイ．アール．ゲエンナロ．リピンコット．ウィリアムズ．アンド．ウイルキンス社（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ）、２００番および製剤技術のエンサイクロペティア（Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、著者ジェイ．スワーブリック（Ｊ．Ｓｗａｒｂｒｉｃｋ）およびジェイ．シー．ボィラン（Ｊ．Ｃ．Ｂｏｙｌａｎ）、１９９８−１９９９、マーセル  デッカー，ニューヨーク（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。【００３９】  材料と方法
リンパ球の不死化と抗体の一次試験リンパ球は標準プロトコルと培養とによってヘテロミエロマ（ｈｅｔｅｒｏｍｙｅｌｏｍａ）ＨＡＢ−１（ファラー（Ｆａｌｌｅｒ）外、１９９０）で溶融することにより永久増殖細胞になる。要約すると、リンパ球はＰＥＧによってＨＡＢ−１細胞で癒合される。トリオム（ｔｒｉｏｍ）は４枚の２４−ウエル平板（ｆｏｕｒ  ２４−ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅｓ）にシードされる。平均的な成長頻度は成長クーロン分泌免疫グロブリンの８０−９０％；５０％である。分泌したヒトの単クーロン性抗体は複基準を決めるためにＥＬＩＳＡで行った。ヒトの単クーロン抗体は免疫組織化学、遺伝、バイオケミカルおよび分子バイオケミカル技術によって更に分析される。【００４０】  必要物質；
・ＲＰＭＩ  １６４０（ＰＡＡコンパニー）付録なし
ＲＰＭＩ  １６４０ＨＡＴ補遺（ＨＡＴ−補遺、ＰＡＡコンパニー）及び１０％ＦＣＳ，１％グルタミンと１％ペニシリン／ストレプトマイシン
・洗浄（Ｗａｓｈ）ＨＡＢ−１（融合パートナー）ＲＰＭＩで２倍補遺なし
・５分間１，５００ｒｐｍで遠心分離
・凍結したリンパ球を（脾臓、リンパ結節、または血液から）解凍し、サプリメント無しでＲＰＭＩを以て２度洗浄；さらに遠心分離
・１０ｍｌＲＰＭＩの２個の粒剤の各々に補充すること無く懸濁して、ノイバウエル計算盤において計数
・Ｈａｂ−１を１：２−１：３の割合でリンパ球に溶融する
・複数の細胞ペレットを二度洗浄した後に、これらのペレットを混合し、毎分１，５００回転で８分間遠心分離した
・５０ｍｌ試験管をゆっくりと回転し、前以て３７℃に加熱しておいたＰＥＧ（ポリエチレングリコール１５００）に注意深く滴下する
・少しばかりを細懸濁して、３７℃の温度の水槽中で、正しく９０回、これを回転する
・次で、補充することなくＲＰＭＩでＰＥＧを洗い流す（２個の１０ｍｌピペット）
・５分間１，５００ｒｐｍの回転数で遠心分離
・ハット（ＨＡＴ）補足培地（ＨＡＴ＝ピポキサンチン，アミノプテリン，チミジンの略）で、ＲＰＭＩの容器当たり１ｍｌの２４培地を平らにする
・ペレットをＨＡＴサプリメントを用いてＲＰＭＩにて溶解する
・細胞の２分の１−ｍｌのピペットを各々の場合２４−ウェルプレートにピペットする
・恒温器に溶融プレートを配置する
・１週間に１度ＨＡＴサプリメントでＲＰＭＩで培養液を交換する【００４１】  ＳＡＭ６．１０抗体の浄化
ＦＰＬＣを介してカチオン−交換により培養浮遊物の浄化【００４２】  この発明のために、ＳＡＭ−６．１０  １ｇＭ抗体を製するハイブリドーマを特別の血精遊離媒質（ＡＩＭＶ媒質，Ｇｉｂｃｏ）と培養上澄み中の１ｇＭ含量をネフェロメトリーによって決定した。精製するために、培養上澄みを５．９のｐＨに調節し、その溶液を濾過した。結合するために、特別の陽イオンのカラム（ＨｉｔｒａｐＴＭＳＰＦＦ列，５ｍｌ，アマーシャム  ビオスシエンス）（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を用いた。カラムはその精製の開始時に濾過した緩衝液Ａ（２０ｍＭリン酸塩緩衝液、ｐＨ５．９）で平衡させられた。次で氷で冷却した培養上澄みを１ｍｌ／ｍｉｎの流速でカラムに塗布した。上澄みを塗布した後に、カラムを流速毎分２ｍｌで２０分間一定の基定線に達するまで洗浄したので、すべての結合したタンパク質が除去されたわけではなかった。その後に、カラムに付着した抗体を緩衝剤Ｂ（２０ｍＭリン酸塩緩衝剤、１Ｍ  Ｎａｃｌ，ｐＨ８．０）で溶出して、一部分を集めた。個々の部分におけるＳＡＭ−６．１０抗体（１ｇＭ）含量を比濁計で調べ、精製された抗体の無傷のままの状態をＳＤＳ−ＰＡＧＥとをウェスターンブロット分析とでテストした。【００４３】  ｏｘＬＤＬの測定
測定をスウェーデンのメルコディア，ウブサラ（Ｍｅｒｃｏｄｉａ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）からの酸化ＬＤＬ  ＥＬＩＳＡテストの手段で行った。
テストの原則：酸化ＬＤＬ  ＥＬＩＳＡは固形の２−サイト酵素免疫アッセイ。これは直接サンドゥイッチ技術を基本とするもので、この技術において、２種の単クーロン抗体が酸化ＬＤＬアポリポタンパク質Ｂの特異の抗原に対して送られる。培養中に試料の酸化ＬＤＬがミクロン滴定プレトのウェルに結合している抗酸化ＬＤＬと反応する。洗浄した後に、試料中の非反応成分を除去し、ペルオキシダーセ共役抗ヒトアポリポタンパクＢ抗体が固体相に結合されている酸化ＬＤＬを検出する。アンバウンド酵素で標識された抗体を除く、二番目のインキューベーションと洗浄、それにより自由になっている酵素で標識された抗体を取り除き、配合体が３，３′，５，５′テトラメチルベンジデン（ＴＭＢ）と反応して配合体が検出される。この反応は比色分析最端点を定めるために酸の添加によって停止し、その最端は分光測光器により、４５０ｎｍと読み取れる。【００４４】  ＳＡＭ−６とｏｘＬＤＬの結合の測定
ＥＬＩＳＡプレート（ベクトン  ディキインソン  ラバレ  ユーロップ，フランス）（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｌａｂａｒｅ  Ｅｕｒｏｐ，Ｆｒａｎｃｅ）を異なる割合に酸化されたＬＤＬの断片で４℃で一夜の間に培養した。非特異性の結合サイトを１０％ＦＣＳを含有するＲＰＭＩ  １６４０媒体で１時間遮断した。次で、このプレートを３７℃の温度で１時間６０μｇ／ｍｌ  ＳＡＭ−６抗体で培養した。ＰＢＳで３回洗浄した後に、ＥＬＩＳＡプレートをＨＲＰ−結合二次抗体で１時間培養した（ラビット  アンティヒト  ＩｇＭ，ダコ  ハンブルグ，ドイツ，１：１０００イン  ピービーエス）（ｒａｂｂｉｔ  ａｎｔｉｈｕｍａｎ  ＩｇＭ，Ｄａｋｏ  Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ，１：１０００ｉｎＰＢＳ）。次で、このプレートを再度ＰＢＳとクエン酸塩緩衝液で洗浄し、ＯＰＤ（ダコ−シトマーション，グロストラプ，デンマーク）（Ｄａｋｏ  Ｃｙｔｏｍａｔｉｏｎ，Ｇｌｏｓｔｒｕｐ，Ｄｅｎｍａｒｋ）を加え、色彩変化は４９０ｎｍであることがＥＬＩＳＡ読み取り器で測定された。【００４５】  流量細胞計算器
使用した癒着性細胞はトリプシン／ＥＤＴＡで処理して培養瓶の底から剥離された。反応は１０ｍｌ  ＲＰＭＩ  １６４０培養液（＋補充液）で停止されて、細胞は１０００×ｇで、５分間かけて小球形にした。細胞をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ０．０１％Ｎａアジ化合物）に懸濁したＰＢＳで２度洗浄し、３０分間氷の上に置き、細胞膜を再構成した。次で、細胞を１×１０６細胞／ｍｌの濃度に調節し、細胞懸濁液の２００μｌをＦＡＣＳ反応容器に移した。それによって試験管１本当りの細胞の数は２×１０５となった。細胞を４℃の温度で５分間かけ、毎分１４００回転で小球のペレットにした。これらのペレットを氷上において１５分間、最初の抗体に浮遊させて培養した。最初の抗体として、ＦＡＣＳ緩衝剤中の１００μｇ／ｍｌ  ＳＡＭ−６抗体（総容量２００μｌ）または１００ｍｇ／ｍｌ  ＬＤＬを用いた。１００μｇ／ｍｌクロムピュア（Ｃｈｒｏｍｐｕｒｅ）ヒト１ｇＭがアイソタイプ制御として作用した。その代りとして、細胞を３０分間ＬＤＬで先行培養し、それから１００μｇ／ｍｌ  ＳＡＭ−６抗体を１５分添加した。【００４６】  培養した後に、細胞を遠心分離機で分離し；上澄みを除去して、小粒を５００μｌ冷却ＦＡＣＳ緩衝剤で洗った。これをＦＩＴＣ結合二次抗体（ラビット抗ヒト１ｇＭ，ＦＩＴＣ結合，ＳＡＭ−６またはクロムピュア（Ｃｈｒｏｍｐｕｒｅ）ヒト１ｇＭについて１：５０）で１５分間光を通すことなく培養した。再度洗浄後、細胞を２００μｌ冷却ＦＡＣＳ中に浮遊させておき、測定するまで氷の上に蓄えておき、光線が当らないようにした。その測定は流動細胞メーター（ＦＡＣＳｃａｎ；ベクトン  ディキンソン（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ），ＵＳＡ）を用いて行った。【００４７】  ＳＡＭ６．１０抗体のインビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）効果を説明するための動物実験【００４８】  実験１：５００μｇ精製ＳＡＭ６．１０
抗体をマウスの腹腔内に注入した。血清中のＬＤＬ濃度を（下記に示す方法で）２日後に測定した。【００４９】  実験２：前記実験と同じ。【００５０】  実験３：１ｍｇの精製ＳＡＭ６．１０抗体をマウスの腹腔内に注入した。血清中のＬＤＬ濃度を１４日後に測定した。
実験結果Ａ：通常値に制御のマウス
実験結果Ｂ：通常値に制御のマウス【００５１】  ＬＤＬの血清濃度はＳＡＭ６．１０で処理したネズミでは激減した。（図１０と１１参照）。【００５２】  毒性
精製したＳＡＭ６．１０抗体５００μｇと１ｍｇとをそれぞれネズミの腹腔内に注入した。
・激しい毒性なし
・潜伏性の毒性なし（３ヵ月間）。【００５３】  前記実験１，２および３によって死んだネズミの臓器類は除いて調査した。肝臓、肺臓、心臓、脾臓、小腸、大腸、腎臓、胃および脳髄は何等の形態変化を示さなかった。諸器官を何等かの脂質の蓄積の存在の有無について免疫組織化学的に更に調べた。ズダンＩＩＩについての汚染はどの器官についても脂質の蓄積を見なかった。【００５４】  犠牲となったマウスの器官を、そのままの形に定着させて、パラフィン中に包埋した。顕微鏡試験のために、これら標本を、次に示す目録に従ってスウダン（Ｓｕｄａｎ）ＩＩＩ染料で着色した。【００５５】  パラフィン部分の／マクロファージに関するズダンＩＩＩ染色
パラフィンの除去
・キシレン１  ５分
・キシレン２  ５分
・１００％  エタノール１  ５分
・１００％  エタノール２  ５分
・メタノール  ７０ｍｌ
＋Ｈ２Ｏ２  ５００μｌ  ５分
・９０％  エタノール１  ３分
・９０％  エタノール２  ３分
・８０％  エタノール１  ３分
・８０％  エタノール２  ３分
・７０％  エタノール１  ３分
・７０％  エタノール２  ３分
・ＰＢＳに関する配置部分
・ズダンＩＩＩで１５分培養する部分
・蒸留水で洗浄
・６０％イソプロパノールに浸す
・蒸留水で洗浄
・６分間血液で対比染色
・１０分間液体漬部分を蒸留水で洗浄し、グリセリン・ゼラチンを付ける【００５６】  大食細胞をスーダン（Ｓｕｄａｎ）ＩＩＩで染色するために、粘着性の大食細胞を標本を乗せるスライド上で成長させ、それから該当する試薬を用いて処理した。染色は次のように行なわれた。すなわち、
・細胞を６０％イソプロパノールに（６分間）定着
・２０分間スーダンＩＩＩで培養
・蒸留水で洗浄
・６分間ヘーマラウン（ｈｅａｍａｌａｕｎ）で対比染色
・浸漬部分を１０分間蒸留水で洗浄し、グリセリンゼラチンに載せる【００５７】  血液の試料中のリピドの測定
血清中の数多のリピドの測定をモジュラー（ＭＯＤＵＬＡＲ）ＤＰ８００装置（ローシュ）（Ｒｏｃｈｅ）で自動的に行なった。ＬＤＬコレステロール値の測定を、試料を前処理することなく酵素の比色分析（ＣＨＯＤ／ＰＡＰ）で行なった。【００５８】  血清中のリピド濃度を決定するための試験基準：
ＨＤＬ，ＶＬＤＬおよびカイロミクロンを洗剤１で選択的に加水分解した。これらのリポタンパク質中に遊離されたコレステロールは、直ちにコレステロールエステラーゼ（ＣＥ）とコレステロール酸化酵素（ＣＨＯＤ）との酵素の作用の結果として過酸化水素が生成された。その後者はペルオキシダーセ（ＰＯＤ）の存在により、４−アミノアンチピリジンで無色の生成物を形成する。この段階中において、ＬＤＬ粒子はそのままで変化しなかった。ＬＤＬコレステロールの反応は洗浄剤２と結合剤Ｎ，Ｎ−ビス（４−スルホブチル）−ｍ−トルイジン（ＤＳＢｍＴ）の添加によって抑制された。第二の洗浄剤はＬＤＬ粒子中にコレステロールを遊離する。酵素の反応によって、染料が結合物質の存在中に形成された。形成された赤色キニーネイミン染料の量はＬＤＬコレステロールの濃度に正比例した。これは５５２ｎｍで死滅が増加することによって確認される。【００５９】  酵素標識免疫吸着測定法（エライザ  ＬＤＬ／ＨＤＬ）
−  ＬＤＬ（ヒトのプラズマ，シグマ，ＰＢＳについて１０μｇ／ｍｌ）またはＨＤＬ（ヒトのＨＤＬ，ケミコン（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ），ＰＢＳについて１０μｇ／ｍｌ）でエライザ平板を前もって被覆→容器当り５０μｌ
−  容器をカバーし、一晩中４℃の温度で保存
−  翌日、ＰＢＳで板を２回洗浄
−  各容器中のＲＰＭＩのピペット１００ｎｌ，１時間室温で培養する
−  次でＰＢＳで２回洗浄
−  それぞれの陽性制御をピペット５０μｌ  ２回行う（二重測定）
陽性対照：ヒトに対するモノクロナール抗体とマウスの免疫グロブリンＧ２ａ：ＰＢＳの割合１：１０００
−  ５０μｌ  ＲＰＭＩを負の調節として一緒に行う（二重測定）
−  サンプル（上澄み液ＳＡＭ６．１０）のピペット５０μｌを並べ合わせて（二重測定）
−  恒温器において１時間培養する
−  ＰＢＳで２回洗う
−  ＰＢＳ／０．０５％で２回洗う  トゥイーン（Ｔｗｅｅｎ）
−  ＰＢＳで２回洗う
−  それぞれの二次のＡＫ（接合したペルオキシダーゼ）のピペット５０μｌ：ＰＢＳ／０．０５％トゥイーン（ＳＡＭ６．１０について）のラビット抗ヒトＰＢＳ／０．０５％について１ｇＭ  １：１０００トゥイーン（ＳＡＭ６．１０について）ＰＢＳトゥイーンについてラビット抗マウスＩｇＧｓ  １：１０００（ＬＤＬの陽性対照について）
−  恒温器内で１時間培養
−  ＰＢＳで２回洗浄
−  ＰＢＳ／０．０５％トゥイーンで１回洗う
−  ＰＢＳで２回洗浄
−  クエン酸塩で２回洗浄
−  効果判定のため：ＯＰＤ錠剤（Ｄａｋｏ，Ｈｕｍｂｕｒｇ，ハンブルグ）を緩衝液＋Ｈ２Ｏ２（３ｍｌクエン酸塩＋１錠＋５μｌ  Ｈ２Ｏ２）
−  各容器に５０μｌの染料をピペットで入れる
−  陽性の反応（黄色に着色）をしたときに、１０μｌ  ３ＭＨ２ＳＯ４で停止する【００６０】  図面についての説明
配列の記載事項
図１は軽鎖（ＶＬ）の可変領域のアミノ酸配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）を示す。【００６１】  図２は軽鎖（ＶＬ）の可変領域のヌクレオチド酸の配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）を示す。相補性決定領域（ＣＤＲｓ）は水平線で示し、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のヌクレオチド６７−６９（ＣＤＲ１），１４５−１６５（ＣＤＲ２）および２６２−２８８（ＣＤＲ３）と殆んど同じである。【００６２】  図３は重鎖（ＶＨ）の可変領域のアミノ酸の配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）を示す。【００６３】  図４は重鎖（ＶＨ）の可変領域のヌクレオチド酸の配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）を示す。代償性−決定領域（ＣＤＲｓ）は水平線で示してあり、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４のヌクレオチド９１−１０５（ＣＤＲ１），１４８−１９８（ＣＤＲ２）および２９５−３３０（ＣＤＲ３）と殆んど同一である。【００６４】  細胞−生物学的検査
これから後に述べる図は、この発明を限定する意図のものでは無くて、実例について、その可能性を立証するものである。【００６５】  図５は硫酸銅溶液によって培養時間に応ずるｏｘＬＤＬの測定を示す。実験において、ＬＤＬ（シグマ，タウフキルヘン，ドイツ）（Ｓｉｇｍａ，Ｔａｕｆｋｉｒｃｈｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を、２０μＭ  ＣｕＳＯ４を用いて３時間と１５時間、それぞれ培養した。酸化されたＬＤＬの量を、使用法の説明に従って、メルコディア（Ｍｅｒｃｏｄｉａ）酸化ＬＤＬ  ＥＬＩＳＡで決定された。酸化ＬＤＬの量は培養時間を長くすることによって増加し、酸化された形で既に部分的に存在する銅イオンで処理されなかった各ＬＤＬの部分で、培養時間を増加することにより酸化ＬＤＬの量が増加することが、はっきりと判った。１５時間の培養後に、酸化したＬＤＬの割合が約２倍になった。【００６６】  図６はＳＡＭ−６のｏｘＬＤＬとの結合を証明する。ＥＬＩＳＡ結合の試験によってＳＡＭ−６とｏｘＬＤＬとの結合を証明するために、ＥＬＩＳＡプレートを、検出に必要とされる一次抗体ＳＡＭ−６と二次抗体アンチヒューマン（ａｎｔｉ−ｈｕｍａｎ）ＩｇＭとを添加する以前に、異なる度合に酸化されたＬＤＬの小部分で前以て被覆され、検出に必要とされる二次抗体を添加した。その結果、酸化した形で存在する多量のＬＤＬと、この発明による抗体ＳＡＭ−６の更に強力な結合とを招いた。【００６７】  図７はＦＡＣＳ分析の結果を示す。この分析のために用いた細胞はマウス大食細胞ラインＰ３８８Ｄ１（１Ｌ−１）（ＤＳＭＺ受理番号ＡＣＣ２８８）のものである。
【図面の簡単な説明】
【００６８】
【図１】軽鎖（ＶＬ）の可変領域のアミノ酸の配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）を示す。
【図２】軽鎖（ＶＬ）の可変領域のヌクレオチド酸の配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）を示す。
【図３】重鎖（ＶＨ）可変領域のアミノ酸の配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）を示す。
【図４】重鎖（ＶＨ）の可変領域のヌクレオチド酸の配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）を示す。
【図５】硫酸銅溶液によって培養時間に応ずるｏｘＬＤＬの測定を示す。
【図６】ＳＡＭ−６のｏｘＬＤＬとの結合を証明する。
【図７】ＦＡＣＳ分析の結果を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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