(57)【要約】  下記式(Ｉ)の構造を有する化合物：【化１】2007510718.tif 000028（式中、基Ｒ1及びＲ4は本明細書で定義されるとおり）は抗-増殖薬として有用である。【選択図】なし
2007510718.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式Ｉの構造を有する化合物、その医薬的に許容しうる塩、エステル、又はプロドラッグ形態：
【化１】
2007510718.tif 000014
（式中、
Ｒ1はＯMe又はＲ2Ｒ3Ｎであり（Ｒ2及びＲ3は、独立的にＨ、Ｃ1-Ｃ8アルキル、Ｃ2-Ｃ8アルケニル、Ｃ2-Ｃ8アルキニル、シクロアルキル、ヘテロ環、アリール、又はヘテロアリールであり；或いはＲ2及びＲ3が、それらが結合している窒素と一緒に置換若しくは無置換３、４、５、６、又は７員環を形成している）；かつ
Ｒ4はＨ又はＣＨ2Ｃ(=Ｏ)Ｒ5である（Ｒ5は置換若しくは無置換フェニル基である））。
【請求項２】
Ｒ4がＨである、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ1がMeＯである、請求項２記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ1がＲ2Ｒ3Ｎであり、式中、Ｒ2はＨであり、かつＲ3は置換Ｃ1-Ｃ3アルキルである、請求項２記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ3が置換Ｃ2アルキル基である、請求項４記載の化合物。
【請求項６】
その置換基が、フルオロ、シクロアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、少なくとも１個の窒素環原子を有するヘテロシクロ、及び少なくとも１個の窒素環原子を有するヘテロアリールから成る群より選択される、請求項５記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ1がＲ2Ｒ3Ｎであり、式中、Ｒ2はＨであり、かつＲ3はアリルである、請求項２記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ1がＲ2Ｒ3Ｎであり、式中、Ｒ2及びＲ3はそれぞれＨである、請求項２記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ1がＲ2Ｒ3Ｎであり、式中、Ｒ2及びＲ3は、それらが結合している窒素と一緒に置換若しくは無置換の３、４、５、６、又は７員環を形成している、請求項２記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ1が、以下の基から成る群より選択される、請求項２記載の化合物。
【化２】
2007510718.tif 000015
【請求項１１】
Hsp90結合のＫdが４μM以下である、請求項２記載の化合物。
【請求項１２】
SKBr3細胞に対するIC50が300nM以下である、請求項２記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ4がＣＨ2Ｃ(=Ｏ)Ｒ5である、請求項１記載の化合物。
【請求項１４】
下記式I-bの構造を有する、請求項１記載の化合物。
【化３】
2007510718.tif 000016
【請求項１５】
下記式I-iの構造を有する、請求項１記載の化合物。
【化４】
2007510718.tif 000017
【請求項１６】
下記式I-jの構造を有する、請求項１記載の化合物。
【化５】
2007510718.tif 000018
【請求項１７】
標的細胞の増殖を阻害する方法であって、有効な量の、請求項１記載の構造を有する化合物と前記標的細胞を接触させることを含む方法。
【請求項１８】
前記標的細胞が癌細胞である、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
前記癌細胞が、乳癌、肺癌、卵巣癌、又は白血病細胞である、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
請求項１記載の化合物が下記式I-bの構造を有する、請求項１９記載の方法。
【化６】
2007510718.tif 000019
【請求項２１】
請求項１記載の化合物が下記式I-iの構造を有する、請求項１９記載の方法。
【化７】
2007510718.tif 000020
【請求項２２】
請求項１記載の化合物が下記式I-jの構造を有する、請求項１９記載の方法。
【化８】
2007510718.tif 000021
【請求項２３】
過剰増殖性疾患の治療方法であって、該過剰増殖性疾患に苦しむ患者に、治療的に有効な量の請求項１記載の化合物を投与することを含む方法。
【請求項２４】
前記過剰増殖性疾患が癌である、請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
前記癌が、乳癌、肺癌、卵巣癌、又は白血病である、請求項２４記載の方法。
【請求項２６】
請求項１記載の化合物が下記式I-bの構造を有する、請求項２５記載の方法。
【化９】
2007510718.tif 000022
【請求項２７】
請求項１記載の化合物が下記式I-iの構造を有する、請求項２５記載の方法。
【化１０】
2007510718.tif 000023
【請求項２８】
請求項１記載の化合物が下記式I-jの構造を有する、請求項２５記載の方法。
【化１１】
2007510718.tif 000024
【請求項２９】
過剰増殖性疾患の治療用薬物製造のための請求項１記載の化合物の使用。
【請求項３０】
前記過剰増殖性疾患が癌である、請求項２９記載の使用。
【請求項３１】
前記癌が、乳癌、肺癌、卵巣癌、又は白血病である、請求項３０記載の使用。
【請求項３２】
請求項１記載の化合物が下記式I-bの構造を有する、請求項３１記載の使用。
【化１２】
2007510718.tif 000025
【請求項３３】
請求項１記載の化合物が下記式I-iの構造を有する、請求項３１記載の使用。
【化１３】
2007510718.tif 000026
【請求項３４】
請求項１記載の化合物が下記式I-jの構造を有する、請求項３１記載の使用。
【化１４】
2007510718.tif 000027
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
〔発明の分野〕
この発明は、細胞毒性を有する11-O-メチルゲルダナマイシン化合物、その製造方法、及び過剰増殖性疾患、特に癌の治療のためのその使用に関する。
【０００２】
〔発明の背景〕
ゲルダナマイシンは、天然産物のアンサマイシンファミリーに属し、そのメンバーは、２つのメタ位で連結してマクロ環式ラクタムを形成しているベンゼノイド核（典型的にはベンゾキノン又はヒドロキノン核）を特徴とする。ゲルダナマイシンの他に、アンサマイシンとして、マクベシン、ハービマイシン、TAN-420、及びレブラスタチン(reblastatin)が挙げられる。
【０００３】
【化１】
2007510718.tif 000003
【０００４】
ゲルダナマイシン及びその誘導体は最も広く研究されているアンサマイシンである。ゲルダナマイシンは初めは抗菌活性のスクリーニングの結果として同定されたが、ゲルダナマイシンについての現在の関心は、主にその腫瘍細胞に対する細胞毒性、ひいてはその抗癌薬としての可能性に基づいている。ゲルダナマイシンは、シグナル伝達、細胞周期制御及び転写調節に関与する重要なタンパク質を含む広範なタンパク質（“クライエントタンパク質”）のフォールディング、活性化及び構築に関係する熱ショックタンパク質-90（“Hsp90”）のインヒビターである。ゲルダナマイシンのHsp90への結合がHsp90-クライエントタンパク質相互作用を破壊し、該クライエントタンパク質の正確なフォールディングを妨げ、該クライエントタンパク質がプロテアソーム媒介破壊を受けやすくなるようにする。HSP90クライエントタンパク質のうち、多くの変異タンパク質又は過剰発現タンパク質は癌に関係する：p53、Bcr-Ablキナーゼ、Raf-1キナーゼ、Aktキナーゼ、Npm-Alkキナーゼp185ErbB2膜貫通キナーゼ、Cdk4、Cdk6、Wee1(細胞周期依存性キナーゼ)、HER2/Neu(ErbB2)、及び低酸素誘発因子-1α(HIF-1α)。しかし、ゲルダナマイシンの肝毒性と不十分なバイオアべイラビリティのため、その臨床候補としてはの研究は中断されている。
【０００５】
それにもかかわらず、ゲルダナマイシン様の生物活性を有するが、全範囲の特性がより良いゲルダナマイシン誘導体又は類似体（総称して“ゲルダナマイシン化合物”）開発の関心が持続している。ゲルダナマイシンの17位が魅力的な焦点であり、化学的に言えば、ゲルダナマイシン化合物の合成の焦点であった。17位のメトキシ基は求核試薬によって置換されやすく、17-置換-17-デメトキシゲルダナマイシン化合物への好都合な入口を与えるからである。さらに、構造-活性関係（SAR）の研究により、抗腫瘍活性を殺さずに構造的かつ立体的に多様な17-置換基を導入できることが分かった。例えば、Sasaki et al., US 4,261,989 (1981); Schnur et al., US 5,932,566 (1999); Schnur et al., J. Med. Chem., 38, 3806-3812 (1995); Schnur et al., J. Med. Chem., 38, 3813-3820 (1995); 及びSanti et al., US 2003/0114450 A1 (2003)を参照されたい。なお、これら開示は参照によって本明細書に取り込まれる。SAR推論は、Hsp90とゲルダナマイシン誘導体との錯体(17-DMAG、下記参照)のＸ線共結晶構造によって支持され、17-置換基が結合ポケットから溶媒中に突出することを示している(Jez et al., Chemistry & Biology, 10, 361-368 (2003))。従って、位置17は、可溶化基のような特性調節置換基を導入するための優れた位置である。最もよく知られている17-置換ゲルダナマイシンは、17-アリルアミノ-17-デメトキシゲルダナマイシン(“17-AAG”)であり、現在臨床試験を行っている。別の注意すべき17-置換ゲルダナマイシンは17-(2-ジメチルアミノエチル)アミノ-17-デメトキシゲルダナマイシン(“17-DMAG”)である(Snader et al., WO 02/079167 A1 (2002), 参照によって取り込まれる)。
【０００６】
【化２】
2007510718.tif 000004
【０００７】
上述したＸ線共結晶構造は、11-OH基が部分的に溶媒にさらされているが、まだHsp90のLys58とのH-結合受容体として作用することも示している。我々は、11-OMe基のような11位の小さいエーテル基はH-結合能を保持しながらHsp90との他の相互作用に入ることができ、化合物の物理的及び／又は薬理学的性質を高めることになると考える。
天然産物ハービマイシンＡ、マクベシンＩ及びII及びTAN-420Eは、それぞれ11-OMe基を有するが、その生合成の間、ゲルダナマイシンでは見られない15-OMe基のような１組の特有の官能性をもピックアップし、より低い細胞毒活性への傾向を有する。さらに重要なことに、それらはゲルダナマイシンのベンゾキノン-結合17-OMe基を欠いている。このような17-OMe基がないと、17-置換基の導入がさらに困難である。以下の文献を参照されたい：Muroi et al., Tetrahedron 37, 1123-1130 (1981); Shibata et al., J. Antibiotics 39 (11), 1630-1633 (1986); Tanida et al., US 4,540,517 (1985)。
【０００８】
文献は、位置C11にヒドロキシル以外の基を有する半合成ゲルダナマイシン化合物に関するいくつかの開示をも含む：Muroi et al., US 4,421,688 (1983); Schnur, US 5,387,584 (1995); Schnur et al., US 5,932,566 (1999); Welch et al., US 6,015,659 (2000); Whitesell et al., WO 94/08578 A2 (1994); Ho et al., WO 00/03737 A2 (2000); Snader et al., WO 02/36574 A1 (2002); Snader et al., WO 02/079167 A1 (2002); Santi et al., WO 03/013430 A2 (2003); Zhang et al., WO 03/066005 A2 (2003); Omura et al., JP 63-218620 (1988); Schnur et al., J. Med. Chem., 38, 3806-3812 (1995);及びSchnur et al., J. Med. Chem., 38, 3813-3820 (1995)（これら開示は、参照によって本明細書に取り込まれる）。これら参考文献のいくつかは、11-OH基が別の官能性（例えば、フルオロ、アシル、スルホニル、アリル）で置き換えられている具体的なゲルダナマイシン化合物の製法について述べている。他の文献は、位置C11における一連の官能性を示す一般式を開示しているが、それら官能性をどうやって導入するかについての事項は何ら提供していない。従って、先行技術は11-O-メチルゲルダナマイシン化合物の化学合成に関する具体的な開示を欠いている。
【０００９】
〔発明の概要〕
本発明は、下記式Ｉの構造を有する11-O-メチルゲルダナマイシン、並びにその医薬的に許容しうる塩、エステル、及びプロドラッグ形態を提供する。
【化３】
2007510718.tif 000005
式中、
Ｒ1はＯMe又はＲ2Ｒ3Ｎであり（Ｒ2及びＲ3は、独立的にＨ、Ｃ1-Ｃ8アルキル、Ｃ2-Ｃ8アルケニル、Ｃ2-Ｃ8アルキニル、シクロアルキル、ヘテロ環、アリール、又はヘテロアリールであり；或いはＲ2及びＲ3が、それらが結合している窒素と一緒に置換若しくは無置換３、４、５、６、又は７員環を形成している）；かつ
Ｒ4はＨ又はＣＨ2Ｃ(=Ｏ)Ｒ5である（Ｒ5は置換若しくは無置換フェニル基である）。
【００１０】
別の態様では、この発明は標的細胞の増殖を阻害する方法であって、有効な量の、式Ｉの構造を有する化合物と標的細胞を接触させることを含む方法を提供する。標的細胞は、癌細胞、特に乳癌、肺癌、卵巣癌、又は白血病細胞でよい。
別の態様では、この発明は過剰増殖性疾患の治療方法であって、該過剰増殖性疾患に苦しむ患者に、治療的に有効な量の、式Ｉの構造を有する化合物を投与することを含む方法を提供する。そのように治療する過剰増殖性疾患は、癌、特に乳癌、肺癌、卵巣癌、又は白血病でよい。
別の態様では、この発明は、過剰増殖性疾患（癌、特に乳癌、肺癌、卵巣癌、又は白血病でよい）の治療用薬物製造のための、式Ｉの構造を有する化合物の使用を提供する。
【００１１】
〔発明の詳細な説明〕
〔定義〕
“アルキル”は、鎖中に指定数の炭素原子を有する（例えば“Ｃ1-Ｃ8アルキル”におけるように）、任意に置換されていてもよい直鎖若しくは分岐鎖炭化水素成分を意味し、炭素原子の数が指定されていない場合は、鎖中に５個までの炭素原子を有する。
“アルケニル”は、鎖中に少なくとも１個の炭素-炭素二重結合と指定数の炭素原子を有する（例えば“Ｃ2-Ｃ8アルケニル”におけるように）、任意に置換されていてもよい直鎖若しくは分岐鎖炭化水素成分を意味し、炭素原子の数が指定されていない場合は、鎖中に５個までの炭素原子を有する。
“アルキルアリール”、“アリールアルキル”、“ヘテロシクロアルキル”、“アルキルヘテロアリール”、“アルキルヘテロ環”などは、アリール、ヘテロ環式、又はヘテロアリール基を意味し、場合によっては、ベンジル、フェネチル等のように直接アルキル成分に結合していてもよい。
“アリール”は、環部分に６〜12個の炭素原子を有する単環式又は二環式炭素環系を意味し、例えばフェニル、ナフチル、及びビフェニル成分などであり、それぞれ任意に１以上の位置で置換されていてもよい。
“シクロアルキル”は、任意に置換されていてもよい飽和環式炭化水素環系を意味し、好ましくは１〜３個の環を含み、１つの環につき３〜７個の炭素を含み、さらに不飽和なＣ3-Ｃ7炭素環式環と縮合していてもよい。シクロアルキル環系の例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロデシル、シクロドデシル、及びアダマンチルが挙げられる。
“ハロゲン”又は“ハロ”は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素を意味する。
【００１２】
“へテロ環”、“ヘテロ環式”又は“ヘテロシクロ”は、少なくとも１個の炭素原子含有環中に少なくとも１個のヘテロ原子を有する、任意に置換されていてもよい、完全飽和若しくは不飽和の芳香族若しくは非芳香族環系、例えば、４〜７員単環式、７〜11員二環式、又は10〜15員三環式環系を意味する。“ヘテロアリール”は、該環系がアリールであるヘテロ環を意味する。ヘテロ原子を含有するヘテロ環式基の各環は、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１、２又は３個のヘテロ原子を有し、Ｎ及びＳは、任意に酸化されていてもよく、Ｎは任意に四級化されていてもよい。
単環式ヘテロ環式環系の例として、ピロリジニル、ピロリル、インドリル、ピラゾリル、オキセタニル、ピラゾリニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、オキサゾリル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリニル、イソオキサゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、チアゾリジニル、イソチアゾリル、イソチアゾリジニル、フリル、テトラヒドロフリル、チエニル、オキサジアゾリル、ピペリジニル、ピペラジニル、2-オキソピペラジニル、2-オキソピペリジニル、2-オキソピロリジニル、2-オキソアゼピニル、アゼピニル、4-ピペリドニル、ピリジニル、N-オキソ-ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、テトラヒドロチオピラニルスルホン、モルフォリニル、チオモルフォリニル、チオモルフォリニルスルホキシド、チオモルフォリニルスルホン、1,3-ジオキソラン及びテトラヒドロ-1,1-ジオキソチエニル、ジオキサニル、イソチアゾリジニル、チエタニル(thietanyl)、チイラニル(thiirany)、トリアジニル、及びトリアゾリル等が挙げられる。好ましいヘテロシクロ基として、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、チエニル、フラニル、キノリニル、イソキノリニル等が挙げられる。
【００１３】
例えば、“置換若しくは無置換”又は“任意に置換されていてもよい”という表現を用いて、基が置換されていることがあると示されている場合、該基は、１個以上の独立的に選択される置換基、好ましくは全部で１〜５個、さらに好ましくは全部で１又は２個の置換基を有しうる。本技術の当業者は、置換基及び置換パターンを選択して化学的に安定、かつ本分野で公知の技術及び本明細書で述べる方法で合成可能な化合物を提供できることを理解すべきである。好適な置換基の例として、ここで指定される置換基に加え、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ハロ、トリフルオロメトキシ、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロオキシ、アルカノイル、アルカノイルオキシ、アミノ、アルキルアミノ 四級アンモニウム、アラルキルアミノ、シクロアルキルアミノ、ヘテロシクロアミノ、ジアルキルアミノ、アルカノイルアミノ、チオ、アルキルチオ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクロチオ、ウレイド、ニトロ、シアノ、カルボキシ、カルボキシルアルキル、カルバミル、アルコキシカルボニル、アルキルチオノ、アリールチオノ、アルキルスルホニル、スルホンアミド、アリールオキシ等が挙げられる。置換基は、さらに、例えばハロ、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ；アリール、置換アリール、置換アルキル、置換アラルキル等で置換されていてもよい。
【００１４】
“医薬的に許容しうるエステル”は、インビボ加水分解して（例えば人体内で）、その親化合物又は塩を生成し、或いはそれ自体で親化合物の活性と同様の活性を有するエステルを意味する。好適なエステル群として、限定するものではないが、医薬的に許容しうる脂肪族カルボン酸、特にアルカン酸、アルケン酸、シクロアルカン酸及びアルカンジオン酸（各アルキル又はアルケニル成分は、好ましくは６個以下の炭素原子を有する）から誘導されるエステルが挙げられる。エステルの例として、ギ酸エステル、酢酸エステル、プロピオン酸エステル、酪酸エステル、アクリル酸エステル、クエン酸エステル、コハク線エステル、及びエチルコハク酸エステルが挙げられる。
“医薬的に許容しうる塩”は、医薬製剤に好適な化合物の塩を意味する。好適な医薬的に許容しうる塩として、酸付加塩が挙げられ、例えば、化合物の溶液を塩酸、臭化水素酸、硫酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、安息香酸、酢酸、クエン酸、酒石酸、リン酸、炭酸などのような医薬的に許容しうる酸の溶液と混合することによって調製できる。化合物が１以上の酸性成分を備える場合、該化合物の溶液を、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化テトラアルキルアンモニウム、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、アンモニア、アルキルアミン等の医薬的に許容しうる塩基の溶液と処理することによって医薬的に許容しうる塩を生成することができる。
【００１５】
本発明は、その範囲内でこの発明の化合物のプロドラッグを包含する。プロドラッグとは、一般的に、必要化合物に容易にインビボ変換しうる、その化合物の機能的誘導体である。従って、本発明の治療方法では、用語“投与”は、記載されている種々の障害の、具体的に開示した化合物、又は具体的に開示されないが、投与が必要な被験者に投与後、指定化合物にインビボ変換する化合物による治療を包含するものである。適切なプロドラッグ誘導体の選択及び調製の通常の手順は、例えば、文献Design of Prodrugs, Bundgaard, ed., Elsevier, 1985に記載されている。
特定の立体異性体を具体的に示していない限り（例えば、構造式中の関係のある立体中心での太字又は破線結合によって）、純粋な化合物のみならずその混合物として、すべての立体異性体が本発明の範囲に含まれる。特に言及しない限り、個々のエナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体、並びにその組合せ及び混合物がすべて本発明に包含される。多形性結晶形及び溶媒和物もこの発明の範囲に包含される。
【００１６】
〔化合物及び方法〕
ゲルダナマイシンは、産生性生物、ストレプトマイセス・ヒグロスコピカス・バル・ゲルダナス(Streptomyces hygroscopicus var. geldanus) NRRL 3602を培養することによって得られる周知の天然産物である。ゲルダナマイシンの化学修飾によって半合成的に本発明の化合物を調製することができる。
実施態様について述べると、式Ｉにおいて、一実施態様では、Ｒ4がＨで、Ｒ1は、上記“発明の概要”セクションで定義したとおりである。
別の実施態様では、Ｒ1がＲ2Ｒ3Ｎである。好ましくはこの実施態様ではＲ4はＨである。
別の実施態様では、Ｒ1がMeＯである。好ましくはこの実施態様ではＲ4はＨである。
別の実施態様では、Ｒ1がＲ2Ｒ3Ｎであり、式中、Ｒ2はＨであり、かつＲ3は置換Ｃ1-Ｃ3アルキル（好ましくは、置換Ｃ2アルキル基）である。置換基は、好ましくは、フルオロ、シクロアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、少なくとも１個の窒素環原子を有するヘテロシクロ、及び少なくとも１個の窒素環原子を有するヘテロアリールから成る群より選択される。好ましくはこの実施態様ではＲ4はＨである。
別の実施態様では、Ｒ1がＲ2Ｒ3Ｎであり、式中、Ｒ2はＨであり、かつＲ3はＣ2-Ｃ4アルケニル基、好ましくはアリルである。好ましくはこの実施態様ではＲ4はＨである。
別の実施態様では、Ｒ1がＲ2Ｒ3Ｎであり、式中、Ｒ2及びＲ3はそれぞれＨである。好ましくはこの実施態様ではＲ4はＨである。
別の実施態様ででは、Ｒ1がＲ2Ｒ3Ｎであり、式中、Ｒ2及びＲ3は、それらが結合している窒素と一緒に置換若しくは無置換の３、４、５、６、又は７員環（好ましくは、３、４、５、又は６員環）を形成している。好ましくはこの実施態様ではＲ4はＨである。
式Ｉの構造を有する具体的化合物として、Ｒ1が下表１に示されるとおりで、かつＲ4がＨの場合の化合物が挙げられる。
【００１７】
【表１】
2007510718.tif 000006
【００１８】
従って、Ｒ1は、以下の基から成る群より選択されうる。
【化４】
2007510718.tif 000007
【００１９】
化合物I-a〜I-jの全構造は以下のとおりである。
【化５】
2007510718.tif 000008
【００２０】
【化６】
2007510718.tif 000009
【００２１】
２つの方法のどちらか一方で化合物Ｉを調製できる。スキーム１に示される方法Ａでは（Ｒ4がＨの場合を示してある）、まずゲルダナマイシンをテトラフルオロホウ酸トリメチルオキソニウムとの処理によって化合物I-e（11-O-メチル-ゲルダナマイシン）に変換する。次に対応するアミンＲ2Ｒ3ＮＨとの処理によって本発明の他の化合物Ｉ（基Ｒ1がＲ2Ｒ3Ｎの化合物）に変換する。
【００２２】
【化７】
2007510718.tif 000010
【００２３】
スキーム２に示される方法Ｂでは（Ｒ4がＨの場合を示してある）、方法Ａの２つの工程を逆にする。まずアミンＲ2Ｒ3ＮＨとの処理によってゲルダナマイシンを化合物II（17-アミノ-17-デメトキシゲルダナマイシン）に変換する。次に、テトラフルオロホウ酸トリメチルオキソニウムとの処理によって、化合物IIを化合物Ｉ（式中、Ｒ1はＲ2Ｒ3Ｎである）に変換する。
【００２４】
【化８】
2007510718.tif 000011
【００２５】
当業者には、方法Ａ又は方法Ｂのどちらかで調製できる化合物Ｉもあるが、テトラフルオロホウ酸トリメチルオキソニウムによるメチル化に感受性の基Ｒ2又はＲ3を有する化合物Ｉは方法Ａによってより好適に調製されることが分かるだろう。
Ｒ4がＣＨ2Ｃ(Ｃ=Ｏ)Ｒ5の化合物は、アルキル化基による22位の窒素（“N22”）のアルキル化で調製することができる。方法Ａを利用する場合、Ｒ2及びＲ3基がアルキル化に感受性のときは、アルキル化は、好ましくは化合物I-eの段階（すなわち、17-ＯMe基のアミンＲ2Ｒ3ＮＨによる置換前）で行って、Ｒ2又はＲ3基の同時アルキル化を回避する。当然、Ｒ2基もＲ3基もアルキル化に感受性でない場合は、スキーム１に示される第２工程の完了後のN22アルキル化が実行可能である。方法Ｂを使用する場合、基Ｒ2及びＲ3はアルキル化に感受性であるはずがないので（上記参照）、17-ＯMe置換の前後のとちらかでN22アルキル化を行うことができる。
一般的に、N22アルキル化は、DMF又はDMSOのような極性溶媒中、アルコキシド等の塩基との処理後、５〜65℃で所望のフェナシルハライドを添加することによって達成することができる。或いは、無水炭酸カリウムとフェナシルハライドの存在下でアセトン中で還流させることによってもアルキル化を達成できる。N22アルキル化については、Schnurらの米国特許第5,932,566号(1999)（この開示は参照によって本明細書に取り込まれる）にさらに詳述されている。
【００２６】
本発明は、増殖性疾患、例えば、限定するものではないが、頭、首、鼻腔、副鼻腔、鼻咽頭、口腔、口咽頭、喉頭、下咽頭、唾液腺、及び傍神経節腫を含む頭頚部癌；肝臓及び胆管系の癌、特に肝細胞癌；腸癌、特に結腸直腸癌；トリート(treat)卵巣癌；小細胞及び非-小細胞肺癌；乳癌；肉腫、例えば線維肉腫、悪性線維性組織球腫、胎児性横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、神経線維肉腫、骨肉腫、滑膜肉腫、脂肪肉腫、及び胞状軟部肉腫；中枢神経系の新生物、特に脳癌；リンパ腫、例えばホジキンリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、ろ胞性リンパ腫、粘膜関連リンパ様組織リンパ腫、外套細胞リンパ腫、B-系列大細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、及びT-細胞未分化大細胞リンパ腫などの疾患の治療方法も包含する。臨床的には、本明細書で述べる方法の実施と組成物の使用は、癌腫の大きさ若しくは数の減少及び／又は関連症候の減少（当てはまる場合）をもたらす。病理学的には、本明細書で述べる方法の実施と組成物の使用は、病理学的に関連する応答、例えば癌細胞増殖の阻害、癌若しくは腫瘍の大きさの低減、さらなる転移の防止、及び腫瘍血管新生の阻害などをもたらす。このような疾患の治療方法は、被験者に、治療的に有効な量の本発明の配合物を投与することを含む。必要に応じて本方法を繰り返してよい。
【００２７】
併用療法で本発明の方法及び組成物を使用することができる。すなわち、１以上の他の所望の治療若しくは医療処置と同時、その前又はその後に本発明の化合物及び組成物を投与することができる。併用療法における治療と処置の特定の組合せは、治療及び／又は処置の適合性並びに達成すべき所望の治療効果を考慮する。従って、本明細書で述べる組成物を他の治療様式、例えば外科手術及び／又は放射線と併用することができる。本発明のいくつかの実施態様では、下痢、吐き気、嘔吐などの本発明の化合物又は組成物によって生じる可能性のある副作用を和らげるための薬剤又は処置をさらに含める。下痢はオピオイド（例えばコデイン、ジフェノキシレート、ジフェノキシン及びロエラミド(loeramide)）、次サリチル酸ビスマス、及びオクトレオチドのような止痢薬で治療できる。吐き気及び嘔吐は、デキサメタゾン、メトクロプラミド、ジフェニルヒドラミン、ロラゼパム、オンダンセトロン、プロクロルペラジン、チエチルペラジン及びドロナビノールのような制吐薬で治療できる。
【００２８】
１つの好ましい併用療法では、この発明の化合物を他の抗癌薬又は細胞毒性薬と組み合わせて投与する。組み合わせて使用する抗癌薬又は細胞毒性薬としては、他のHsp90インヒビター；微小管安定剤、インターカレーター、DNA架橋剤、アルキル化薬、代謝拮抗薬、血管新性インヒビター、トポイソメラーゼインヒビター、ヌクレオシド類似体、及びチロシンキナーゼインヒビターが挙げられる。そのように併用しうる特有の抗癌薬として、ゲルダナマイシン、17-AAG、17-DMAG、エポチロン、ディスコンデルモリド(discodermolide)、パクリタキセル、ドセタキセル、イマチニブ、ゲフィチニブ、ビンカアルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチン）、ミトマイシンC、ビカルタミド、シスプラチン、フルオルラシル(fluoruracil)、ゲムシタビン、イリノテカン、メトトレキセート、カペシタビン(capecitabine)、ドキソルビシン、フロクスウリジン、オキサリプラチン、シスプラチン、ブレオマイシン、ブスルファン、ヒドロキシウレア、チオテパ、カンプトセシン、インターフェロン、インターロイキン等が挙げられる。
【００２９】
特に、同時投与される抗癌薬又は細胞毒性薬はタンパク質キナーゼインヒビターでよく、キナゾリン、特に4-アニリノキナゾリン、例えばIressa(AstraZeneca；N-(3-クロロ-4-フルオロフェニル)-7-メトキシ-6-[3-(4-モルフォリニル)プロポキシ]-4-キナゾリナミン)及びTarceva(Roche/Genentech；N-(3-エチニルフェニル)-6,7-ビス(2-メトキシエトキシ)-4-キナゾリナミンモノハイドロクロライド)；フェニルアミノ-ピリミジン、例えばGleevec(Novartis；4-[(4-メチル-1-ピペラジニル)メチル]- N-[4-メチル-3-[[4-(3-ピリジニル)-2-ピリジニル]アミノ]フェニル]ベンズアミド)；ピロロ-及びピラゾロピリミジン、例えばBIBX 1382(Boehringer Ingelheim；N8-(3-クロロ-4-フルオロフェニル)-N-2-(1-メチル-4-ピペリジニル)-ピリミド[5,4-d]ピリミジン-2,8-ジアミン)；インドール及びオキシドール、例えばSemaxinib(Pharmacia；3-[(3,5-ジメチル-1H-ピロール-2-イル)メチレン]-1,3-ジヒドロ-2H-インドール-2-オン)；マロノニトリルベンジリデン；フラボン、例えばフラボピリドール(Aventis；2-(2-クロロフェニル)-5,7-ジヒドロキシ-8-[(3S,4R)-3-ヒドロキシ-1-メチル-4-ピペリジニル]-4H-1-ベンゾピラン-4-オン)；スタウロスポリン、例えばCEP-701(Cephalon)；抗体、例えばHerceptin(Genentech)；及びリボザイム、例えばAngiozyme(Ribozyme Pharmaceuticals)が挙げられる。
【００３０】
本発明の別の局面では、細胞の過剰増殖を特徴とする癌以外の障害を治療する。このような障害の例として、限定するものではないが、萎縮性胃炎、炎症性溶血性貧血、移植片拒絶反応、炎症性好中球減少症、水疱性類天疱瘡、小児脂肪便症、脱髄性脳症、皮膚筋炎、炎症性腸疾患(潰瘍性結腸炎及びクローン病)、多発性硬化症、心筋炎、筋炎、鼻ポリープ、慢性副鼻腔炎、尋常性天疱瘡、原発性糸球体腎炎、乾癬、外科的癒着、狭窄又は再狭窄、強膜炎、強皮症、湿疹(アトピー性皮膚炎、刺激性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎を含む)、歯周疾患（すなわち、歯周炎）、多発性嚢胞腎、及びＩ型糖尿病が挙げられる。他の例として、血管炎(例えば、巨細胞性動脈炎(側頭動脈炎、Takayasu動脈炎)、結節性多発性動脈炎、アレルギー性脈管炎及び肉芽腫症(チャーグ-ストラウス病)、多発性血管炎重複症候群、過敏性血管炎(ヘーノホ-シェーンライン紫斑病)、血清病、薬物性血管炎、感染性血管炎、新生物性血管炎、結合組織障害と関係ある血管炎、補体系の先天性欠損と関係ある血管炎、ウェゲネル肉芽腫症、川崎病、中枢神経系の血管炎、バーガー病及び全身性硬化症)；胃腸管疾患(例えば、膵炎、クローン病、潰瘍性結腸炎、潰瘍性直腸炎、一次硬化性胆管炎、特発性(ideopathic)を含む何らかの原因の良性狭窄症(例えば、胆管、食道、十二指腸、小腸又は結腸の狭窄症)；呼吸器疾患(例えば、喘息、過敏性肺臓炎、アスベスト症、珪肺及び他の形態の塵肺症、慢性気管支炎及び慢性閉塞性気道疾患)；鼻涙管疾患(例えば、特発性を含むすべての原因の狭窄症)；及び耳管疾患(例えば、特発性を含むすべての原因の狭窄症)が挙げられる。
【００３１】
ヒト投与では、任意的に、医薬的に許容しうる担体と共に有効量の本発明の化合物を使用する。本組成物は乾燥状態でも溶液でもよい。現状を治療するため、或いは症状の発生を未然に防ぐため予防的に反応しうる処置でよい。本発明の化合物を薬物製造に使用できる。本化合物は、経口、局所、又は非経口（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、経皮）投与しうる。
本発明の化合物は、医薬的に許容しうる担体と一緒に組成物の状態で使用しうる。本化合物は、その遊離形態でよく、或いは妥当な場合は、そのプロドラッグ、塩及びエステルのような医薬的に許容しうる誘導体としてでもよい。
組成物は、固体、半固体、又は液体状態などのいずれの適切な状態でもよい。一般に、医薬製剤は、有機若しくは無機担体又は外部、腸内、若しくは腸管外投与に適した賦形剤との混合物中の活性成分として１種以上の本発明の化合物を含む。例えば、錠剤、ペレット剤、カプセル剤、座剤、ペッサリー剤、液剤、乳剤、懸濁剤、及び用途に適したいずれかの他の剤形に適した通常の無毒の医薬的に許容しうる担体と活性成分を配合することができる。使用可能な担体として、水、グルコース、ラクトース、アカシアゴム、ゼラチン、マンニトール、デンプンペースト、マグネシウムトリシリケート、タルク、トウモロコシデンプン、ケラチン、コロイドシリカ、ジャガイモデンプン、尿素、及び他の製剤の製造で使うのに適した固体、半固体、又は液状形態の他の担体が挙げられる。さらに、補助的な安定化剤、増粘剤及び着色剤や香料を使用することができる。
適用可能な場合、本発明の化合物をマイクロカプセル及びナノ粒子として製剤化することができる。一般的なプロトコールは、例えば、Boschらの米国特許第5,510,118号(1996)；De Castroの米国特許第5,534,270号(1996)；及びBagchiらの米国特許第5,662,883号(1997)に記載されている（これらすべて参照によって本明細書に取り込まれる）。体積に対する表面積の比率を高めることによって、該製剤は、そうでなければ経口送達には受け入れられないであろう化合物の経口送達を可能にする。
【００３２】
本発明の化合物の用量レベルは、１日当たり体重１kgに対して約0.1mg〜約100mg、好ましくは１日当たり体重１kgに対して約１mg〜約50mgのオーダーである。さらに好ましくは１日当たり体重１kgに対して約５mg〜約20mgであり、これは患者の体重を70kgと仮定した場合、１日当たり患者に対して350mg〜1400mgに相当する。さらに、本発明の化合物を間欠ベース、すなわち半週、週、半月、又は月間隔で投与することができる。
単一剤形を生成するために担体材料と配合しうる活性成分の量は、治療宿主及び投与の特定態様によって変わる。例えば、ヒトへの経口投与を意図した製剤は、総組成物の約５〜95％で変化しうる担体材料を含有しうる。単位剤形は、一般的に約５mg〜約500mgの活性成分を含む。
しかし、いずれかの特定患者に特有の用量レベルは種々の因子によって決まることが分かるだろう。これら因子として、利用する特有化合物の活性；被験者の年齢、体重、全身の健康状態、性別、及び食事制限；投与時間と投与経路及び薬物の排出率；治療に複合製剤を使用するか；及び療法が求められている特定の疾患又は状態が挙げられる。
本発明の実施は、以下の実施例を参照してさらによく理解でるだろう。なお、実施例は説明のために提供したものであり、本発明を限定するものではない。
【００３３】
実施例１：方法Ａによる化合物の合成
方法Ａの以下の説明を本発明の化合物の合成に適用できる。
ジクロロメタン中のゲルダナマイシン(1当量)の懸濁液(ゲルダナマイシン１mmol当たり20mL)にテトラフルオロホウ酸トリメチルオキソニウム(3当量)とN,N,N',N'-テトラメチルナフタレン-1,8-ジアミン(3.5当量)を加えた。40℃で2時間撹拌後、懸濁液を酢酸エチルで希釈し、順次0.1M 塩酸水溶液、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液、及び塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄した。有機溶液を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過かつ蒸発乾固させて褐色固体を得た。シリカゲル上フラッシュクロマトグラフィーで精製(ジクロロメタン/酢酸エチル/メタノールの混合溶媒で溶出)して11-O-メチル-ゲルダナマイシン(化合物I-e)を黄色固体として得た。エレクトロスプレーイオン化飛行時間型質量分析(“ESI TOF MS”) m/z 597.2770, C30H42N2O9Na [M+Na]+についての計算値597.2783。13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ(77.0ppmのCDCl3に対して) 12.2, 13.9, 16.0, 21.5, 29.5, 32.5, 33.7, 36.5, 56.2, 57.4, 59.4, 61.5, 78.9, 79.4, 81.7, 83.3, 111.0, 125.7, 128.1, 130.5, 131.9, 134.5, 136.6, 137.8, 155.9, 156.9, 168.6, 183.9, 184.1。
【００３４】
11-O-メチルゲルダナマイシンの他の化合物Ｉへの変換は以下のように達成した。1,2-ジクロロエタン中の11-O-メチルゲルダナマイシン(1当量)の溶液にアミンＲ2Ｒ3ＮＨ(１〜２当量)を加えた(その塩酸塩を使用する場合はトリエチルアミンを用いてアミンを遊離させた)。TLCでモニターしながら反応が完了するまで混合物を20℃で撹拌した。混合物を回転式エバポレーターで濃縮し、酢酸エチルに再懸濁させ、順次、水、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液及び塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄した。有機溶液を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過かつ蒸発乾固させた。粗生成物をC-18カラム上HPLCで、0.1%(v)酢酸を含有する水/アセトニトリルの勾配を利用して溶出することで精製した。11-O-メチル-17-(置換)アミノ-17-デメトキシゲルダナマイシン生成物(化合物Ｉ,Ｒ1はＲ2Ｒ3Ｎに相当)を紫色固体として得た。
【００３５】
実施例２：方法Ｂによる化合物の合成
方法Ｂの以下の説明を本発明の化合物の合成に適用できる。
1,2-ジクロロエタン中のゲルダナマイシン(1当量)の溶液にアミンＲ2Ｒ3ＮＨ(約２当量)を加えた(その塩酸塩を使用する場合はトリエチルアミンを用いてアミンを遊離させた)。TLCでモニターしながら反応が完了するまで混合物を20℃で撹拌した。混合物を回転式エバポレーターで濃縮し、酢酸エチルに再懸濁させ、順次、水、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液と塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄した。有機溶液を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過かつ蒸発乾固させた。粗生成物をシリカゲル上フラッシュクロマトグラフィーで精製した(ジクロロメタン中の1〜10%のメタノールを用いて溶出した)。17-(置換)アミノ-17-デメトキシゲルダナマイシン生成物(化合物II)を紫色固体として得た。
ジクロロメタン(ゲルダナマイシン１mmol当たり20mL)中の17-(置換)アミノ-17-デメトキシゲルダナマイシン(化合物II,1当量)の溶液にテトラフルオロホウ酸トリメチルオキソニウム テトラ(3当量)とN,N,N',N'-テトラメチル-ナフタレン-1,8-ジアミン(3.5当量)を加えた。40℃で2時間撹拌後、懸濁液を酢酸エチルで希釈し、順次、0.1M 塩酸水溶液、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液、及び塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄した。有機溶液を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過かつ蒸発乾固させた。粗生成物をC-18カラム上HPLCで、水/アセトニトリルの勾配を利用して溶出することで精製した。11-O-メチル-17-(置換)アミノ-17-デメトキシゲルダナマイシン生成物(化合物Ｉ,Ｒ1はＲ2Ｒ3Ｎに相当)を紫色固体として得た。
【００３６】
実施例３：化合物I-a
化合物I-a(11-O-メチル-17-(1-アゼチジニル)-17-デメトキシゲルダナマイシン)を方法Ａと方法Ｂの両一般手順で調製した：ESI TOF MS m/z 622.3094; C32H45N3O8Na [M+Na]+についての計算値 622.3099。13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 12.3, 14.1, 16.4, 18.5, 21.5, 30.0, 33.6, 33.9, 36.3, 56.1, 57.6, 58.4 (2C), 59.8, 78.7, 79.6, 82.0, 83.5, 108.7, 109.4, 125.9, 127.8, 129.9, 132.1, 134.9, 136.3, 139.9, 145.7, 155.8, 168.8, 177.7, 186.2。
実施例４：化合物I-b
化合物I-b(11-O-メチル-17-(2-ジメチルアミノethyl)アミノ-17-デメトキシゲルダナマイシン)を方法Ａと方法Ｂの両一般手順に従って調製した。ESI TOF MS m/z 631.3692; C33H51N4O8 [M+H]+についての計算値 631.3701。13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ(77.0ppmのCDCl3に対して) 12.3, 14.1, 16.4, 21.6, 30.4, 33.6, 33.9, 36.4, 42.5, 44.8, 56.1, 57.4, 57.5, 59.8, 78.7, 79.5, 82.1, 83.5, 108.0, 108.7, 125.9, 127.8, 130.0, 132.1, 134.8, 136.4, 140.7, 145.1, 155.9, 168.7, 179.3, 184.4。
実施例５：化合物I-c
化合物I-c(11-O-メチル-17-(2-フルオロエチル)アミノ-17-デメトキシゲルダナマイシン)を方法Ａと方法Ｂの両一般手順で調製した：ESI TOF MS m/z 628.3030; C31H44FN3O8Na [M+Na]+についての計算値 628.3005。13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 12.2, 14.0, 16.3, 21.4, 30.5, 33.6, 33.8, 36.3, 45.5 (d, 2JC-F = 20 Hz), 56.0, 57.4, 59.6, 78.7, 79.3, 81.6 (d, 1JC-F = 171 Hz), 81.8, 83.2, 108.0, 109.6, 125.7, 127.9, 129.6, 132.1, 134.5, 136.5, 140.4, 144.5, 155.9, 168.6, 180.0, 183.9。
【００３７】
実施例６：化合物I-d
化合物I-d(11-O-メチル-17-(2-(1-アジリジニル)エチル)アミノ-17-デメトキシゲルダナマイシン)を方法Ａの一般手順に従って調製した：ESI TOF MS m/z 629.3529; C33H49NO8 [M+H]+についての計算値 629.3545。13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ(77.0ppmのCDCl3に対して) 184.2, 179.6, 168.7, 155.9, 144.9, 140.7, 136.4, 134.7, 132.1, 130.0, 127.9, 125.8, 108.6, 107.9, 83.4, 81.9, 79.5, 78.8, 60.0, 59.7, 57.5, 56.1, 45.2, 36.4, 33.8, 33.4, 30.5, 27.3, 27.1, 21.5, 16.3, 14.0, 12.2。
実施例７：化合物I-f
化合物I-f(11-O-メチル-17-アミノ-17-デメトキシゲルダナマイシン)を方法Ａと方法Ｂの両一般手順で調製した：ESI TOF MS m/z 582.2821, C29H41N3O8Na [M+Na]+についての計算値 582.2786。13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ (77.0ppmのCDCl3に対して) 12.2, 13.9, 15.9, 22.2, 29.7, 32.9, 33.6, 36.3, 56.3, 57.5, 59.4, 79.0, 79.6, 81.6, 83.1, 108.0, 110.4, 125.9, 128.1, 130.4, 132.1, 134.6, 136.5, 140.1, 145.6, 155.9, 168.6, 179.6, 183.4。
実施例８：化合物I-g
化合物I-g(11-O-メチル-17-allylアミノ-17-デメトキシゲルダナマイシン)を方法Ａと方法Ｂの両一般手順で調製した：ESI TOF MS m/z 622.3090, C32H45N3O8Na [M+Na]+についての計算値 622.3099。13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ (77.0ppmのCDCl3に対して) 12.2, 13.9, 16.2, 21.4, 30.5, 33.5, 33.7, 36.3, 47.4, 56.1, 57.4, 59.5, 78.9, 79.5, 81.8, 83.2, 107.9, 108.8, 117.9, 125.8, 127.9, 129.9, 132.2, 132.9, 134.6, 136.4, 140.7, 144.4, 155.9, 168.6, 179.9, 184.1。
【００３８】
実施例９：化合物I-h
化合物I-h(11-O-メチル-17-(2-(4-イミダゾリル)エチル)アミノ-17-デメトキシゲルダナマイシン)を方法Ａの一般手順で調製した：ESI TOF MS m/z 654.3529, C34H48N5O8 [M+H]+についての計算値 654.3497。13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ (77.0ppmのCDCl3に対して) 12.3, 14.0, 16.3, 21.4, 27.8, 30.6, 33.5, 33.8, 36.3, 45.1, 56.2, 57.6, 59.6, 78.9, 79.6, 81.9, 83.3, 107.9, 108.8, 114.7, 125.9, 127.9, 129.9, 132.2, 134.7, 135.4, 136.1, 136.5, 140.8, 144.9, 155.9, 168.7, 179.5, 184.3。
実施例10：化合物 I-i
化合物I-i(11-O-メチル-17-(2-(1-アゼチジニル)エチル)アミノ-17-デメトキシゲルダナマイシン)を方法Ａの一般手順で調製した：ESI TOF MS m/z 643.3716, C34H51N4O8 [M+H]+についての計算値 643.3701。13C NMR (CDCl3, 100MHz) δ (77.0ppmのCDCl3に対して) 12.2, 14.0, 16.3, 17.6, 21.5, 30.5, 33.5, 33.8, 36.4, 43.0, 55.0, 56.1, 57.5, 57.8, 59.6, 78.8, 79.5, 81.9, 83.4, 107.9, 108.6, 125.8, 127.8, 129.9, 132.1, 134.7, 136.4, 140.7, 145.1, 155.9, 168.7, 179.3, 184.3。
実施例11：化合物I-j
化合物I-j(11-O-メチル-17-(2-(1-ピロリジニル)エチル)アミノ-17-デメトキシゲルダナマイシン)を方法Ａの一般手順で調製した：ESI TOF MS m/z 657.3846, C35H53N4O8 [M+H]+についての計算値 657.3858。13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ (77.0ppmのCDCl3に対して) 12.2, 13.9, 16.2, 21.5, 23.5, 30.5, 33.3, 33.7, 36.3, 43.7, 53.5, 54.1, 56.1, 57.4, 59.6, 78.8, 79.5, 81.8, 83.3, 107.9, 108.6, 125.8, 127.8, 130.0, 132.1, 134.7, 136.4, 140.6, 145.2, 155.9, 168.6, 179.1, 184.4。
【００３９】
実施例12：生物活性
Carrerasらの手順（Anal. Biochem., 317 (1), 40-46 (June 2003), “ゲルダナマイシン-熱ショックタンパク質90相互作用のフィルター結合アッセイ”）に従ってHsp90結合性を決定した。
SKBr3細胞(ATCC HTB-30)、乳癌細胞系で細胞毒性を決定した。5%二酸化炭素雰囲気の加湿インキュベーター内、10%ウシ胎児血清(Hyclone #SH30070.03)と2mM L-グルタミンを有するMcCoy's 5A変性培地(Invitrogen #16600082)中でSKBr3細胞を維持した。細胞を96-ウェルマイクロタイターバックプレートに、１ウェルにつき50μL当たり4,000個の細胞を一晩プレートした。Biomek 2000装置で、ディーパー-1000μL-培地及びディーパー-1000μL-希釈のプロトコールを用いて、細胞培養基中の試験化合物(10μM〜0.1pM)の一連の10倍希釈物を調製した。細胞を含有するウェルに50μLの各希釈物を添加した。各化合物又は対照(培地のみ)について二通り試験した。各アッセイでは、ウェルは最終体積100μL(50μLの細胞と50μLの化合物希釈物)を含んでいた。72時間インキュベートした後、プレートを室温で30分間放置した。各ウェルにCellTiter-Glo発光試薬(Promega #G7573)(100μL)を添加した。ウェルの中身を5分間混合し、プレートを室温でさらに30分間維持した。Wallac VICTOR2 Multilabel Counter(PerkinElmer)を用いて発光を記録し、Kaleidagraphソフトウェア(Synergy Software)を用いてIC50値を決定した。
【００４０】
化合物I-a〜I-jのHsp90結合性及び細胞毒性データをゲルダナマイシン自体のデータと共に表２に示す。
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【００４１】
データは、この発明の化合物がSKBr3に対して有意なHsp90結合活性と細胞毒性を示すことを教示している。好ましい実施態様では、この発明の化合物は４μM以下のHsp90結合のＫdを有する。別の好ましい実施態様では、この発明の化合物はSKBr3細胞に対して300nM以下のIC50を有する。
他のタイプの癌細胞に対するこの発明の化合物の有効性を実証するさらなるデータを表３に与える。(MCF-7は、別のヒト乳癌細胞系である。SKOV-3はヒト卵巣癌細胞系である。A-549はヒト肺癌系である。CCRF-CEM、CCRF-CEM/タキソール、CCRF-CEM/VBL、及びCCRF-CEM/VP-16は白血病細胞系であり、後の３つはそれぞれパクリタキセル、ビンブラスチン、及びVP-16(エトポシド)の亜系統である。)
【００４２】
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【００４３】
本発明の上記詳細な説明は、本発明の特定の部分又は局面と主に又は排他的に関係する節を包含する。これは明瞭さと簡便さのためであり、特定の特徴はそれが開示されている節だけではなくそれを越えて関係しうること、及び本明細書の開示は異なる節で見出される情報の適宜の組合せをすべて包含することを理解すべきである。同様に、本明細書では種々の図解と説明を本発明の特有の実施態様に関係づけてあるが、特有の特徴が特定の図解又は実施態様の文脈で開示されている場合、該特徴は、別の特徴と組み合わせて別の図解又は実施態様の文脈で、或いは本発明において一般に適宜拡張しても使用しうることを理解すべきである。
さらに、本発明を特に一定の好ましい実施態様に関して述べたが、本発明は、このような好ましい実施態様に限定されない。正確に言えば、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によって定義される。
【国際調査報告】
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