(57)【要約】  本発明に従って、VEGFの発現を転写後に阻害する化合物を同定し、それを使用するための方法を提供する。本発明の一態様においては、VEGF産生の阻害、血管新生の阻害、および／または癌、糖尿病性網膜症もしくは滲出性黄斑変性の治療において有用な化合物を提供する。本発明の別の態様においては、本発明の化合物を用いる、VEGF産生の阻害、血管新生の阻害、および／または癌、糖尿病性網膜症もしくは滲出性黄斑変性の治療のための方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体におけるVEGF産生を阻害する方法であって、VEGFを阻害する量の式I：
【化１】
2007529533.tif 000043
(式中、
Xは水素、ヒドロキシル基、ハロゲン、C1-C6アルキル基、またはC6-C10アリール基で置換されていてもよいC1-C5アルコキシであり；
Wは酸素または硫黄原子であり；
R1は、C1-C8アルキル基；5〜12員ヘテロアリール基；または1個以上の独立に選択されたR0基で置換されていてもよいC6-C10アリール基であり；
R0はハロゲン；C1-C6アルキル(式中、アルキル基は1個以上の独立に選択されたハロゲン基で置換されていてもよい)；5〜12員ヘテロ環(式中、ヘテロ環はC1-C6アルキル基で置換されていてもよい)；5〜12員ヘテロアリール基；シアノ基；ニトロ基；アミノ基(式中、アミノ基は1個以上のC1-C6アルキル基で置換されていてもよい)；アミド基；エステル基；または-ORa基であり；
Raは水素；またはC1-C6アルキル(式中、アルキル基は1個以上の独立に選択されたハロゲン、C1-C4アルコキシ、5〜10員ヘテロアリール、5〜10員ヘテロ環、もしくはアミノ基(式中、ヘテロ環は-C(O)-Rc基もしくはヒドロキシル基で置換されていてもよいC1-C6アルキルで置換されていてもよい；アミノ基はC1-C4アルコキシ基で置換されていてもよい、1個以上の独立に選択されたC1-C6アルキル基で置換されていてもよい)で置換されていてもよい)であり；
R2は5〜12員ヘテロアリール基；C2-C8アルケニル基；C1-C8アルキル基(式中、アルキル基は1個以上の独立に選択されたハロゲン、C1-C4アルコキシ、5〜10員ヘテロ環、5〜10員ヘテロアリール、1個以上の独立に選択されたRbもしくは-C(O)-O-Rc基で置換されていてもよいC6-C8アリールである)；または1個以上の独立に選択されたRb基で置換されていてもよいC6-C10アリール基であり；
Rbはハロゲン；シアノ；ニトロ；C1-C4アルコキシ；C1-C6アルキル(式中、アルキルは1個以上のハロゲン基で置換されていてもよい)；-O-C(O)-Rc；または-C(O)-O-Rc基であり；ならびに
RcはヒドロキシルまたはC1-C6アルキル基である)
の化合物、または製薬上許容し得るその塩、水和物、溶媒和物、クラスレート、多型体、ラセミ体もしくは立体異性体を、それを必要とする被験体に投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
Xが水素、メチル、メトキシ、またはハロゲンである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
R1が1個以上の独立に選択されたR0基で置換されていてもよいC6-C8アリール基である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
R0がC1-C4アルコキシおよびハロゲンである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
R2がC3-C6シクロアルキル基または5〜12員ヘテロアリールである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
R2が1個以上の独立に選択されたRb基で置換されていてもよいC6-C8アリール基である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記化合物が式(I-a)：
【化２】
2007529533.tif 000044
(式中、mは0、1、2、または3である)
の化合物、または製薬上許容し得るその塩、水和物、溶媒和物、クラスレート、多型体、ラセミ体もしくは立体異性体である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記化合物が式(I-a)の化合物の10S、3aR異性体である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記化合物が式(I-b)：
【化３】
2007529533.tif 000045
(式中、
Xは水素、ヒドロキシル基、ハロゲン、C1-C6アルキル基、またはC6-C8アリール基で置換されていてもよいC1-C5アルコキシであり；
Wは酸素または硫黄原子であり；
R1はC1-C8アルキル基；ヘテロアリール基；または少なくとも1個のR0基で置換されていてもよい、C6-C8アリール基であり；
R0はハロゲン；1個以上のハロゲンで置換されていてもよいC1-C6アルキル；または-ORa；シアノ基；ニトロ基；アミノ基；アミノアルキル基；アミド基；エステル基であり；
Raは水素、ヘテロ環基で置換されていてもよいC1-C6アルキルであり；
R2はC6-C8アリール基もしくはアルコキシ基で置換されていてもよい、C2-C4アルキレン基、C1-C8アルキル基；C6-C8ヘテロアリール基；または1個以上のRb基で置換されていてもよいC6-C8アリール基であり；
Rbはハロゲン；1個以上のハロゲン基で置換されていてもよいC1-C6アルキル基；アルコキシ基；または-C(O)O-Rc基であり；ならびに
RcはC1-C6アルキルである)
の化合物、または製薬上許容し得るその塩、水和物、溶媒和物、クラスレート、多型体、ラセミ体もしくは立体異性体である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記化合物が式(I-b)の化合物の10S、3aR異性体である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
被験体における血管新生を阻害する方法であって、抗血管新生量の式I：
【化４】
2007529533.tif 000046
(式中、
Xは水素、ヒドロキシル基、ハロゲン、C1-C6アルキル基、またはC6-C10アリール基で置換されていてもよいC1-C5アルコキシであり；
Wは酸素または硫黄原子であり；
R1は、C1-C8アルキル基；ヘテロアリール基；または1個以上の独立に選択されたR0基で置換されていてもよいC6-C10アリール基であり；
R0はハロゲン；C1-C6アルキル(式中、アルキル基は1個以上の独立に選択されたハロゲン基で置換されていてもよい)；5〜12員ヘテロ環(式中、ヘテロ環はC1-C6アルキル基で置換されていてもよい)；5〜12員ヘテロアリール基；シアノ基；ニトロ基；アミノ基(式中、アミノ基は1個以上のC1-C6アルキル基で置換されていてもよい)；アミド基；エステル基；または-ORa基であり；
Raは水素；またはC1-C6アルキル(式中、アルキル基は1個以上の独立に選択されたハロゲン、C1-C4アルコキシ、5〜10員ヘテロアリール、5〜10員ヘテロ環、もしくはアミノ基(式中、ヘテロ環は-C(O)-Rc基もしくはヒドロキシル基で置換されていてもよいC1-C6アルキルで置換されていてもよい；アミノ基はC1-C4アルコキシ基で置換されていてもよい、1個以上の独立に選択されたC1-C6アルキル基で置換されていてもよい)で置換されていてもよい)であり；
R2は5〜12員ヘテロアリール基；C2-C8アルケニル基；C1-C8アルキル基(式中、アルキル基は1個以上の独立に選択されたハロゲン、C1-C4アルコキシ、5〜10員ヘテロ環、5〜10員ヘテロアリール、1個以上の独立に選択されたRbもしくは-C(O)-O-Rc基で置換されていてもよいC6-C8アリールである)；または1個以上の独立に選択されたRb基で置換されていてもよいC6-C10アリール基であり；
Rbはハロゲン；シアノ；ニトロ；C1-C4アルコキシ；C1-C6アルキル(式中、アルキルは1個以上のハロゲン基で置換されていてもよい)；-O-C(O)-Rc；または-C(O)-O-Rc基であり；ならびに
RcはヒドロキシルまたはC1-C6アルキル基である)
の化合物、または製薬上許容し得るその塩、水和物、溶媒和物、クラスレート、多型体、ラセミ体もしくは立体異性体を、それを必要とする被験体に投与することを含む、前記方法。
【請求項１２】
Xが水素、メチル、メトキシ、またはハロゲンである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
R1が1個以上の独立に選択されたR0基で置換されていてもよいC6-C8アリール基である、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
R0がC1-C4アルコキシおよびハロゲンである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
R2がC3-C6シクロアルキル基または5〜12員ヘテロアリールである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
R2が1個以上の独立に選択されたRb基で置換されていてもよいC6-C8アリール基である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
前記化合物が式(I-a)：
【化５】
2007529533.tif 000047
(式中、mは0、1、2、または3である)
の化合物、または製薬上許容し得るその塩、水和物、溶媒和物、クラスレート、多型体、ラセミ体もしくは立体異性体である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１８】
前記化合物が式(I-a)の化合物の10S、3aR異性体である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記化合物が式(I-b)：
【化６】
2007529533.tif 000048
(式中、
Xは水素、ヒドロキシル基、ハロゲン、C1-C6アルキル基、またはC6-C8アリール基で置換されていてもよいC1-C5アルコキシであり；
Wは酸素または硫黄原子であり；
R1はC1-C8アルキル基；ヘテロアリール基；または少なくとも1個のR0基で置換されていてもよい、C6-C8アリール基であり；
R0はハロゲン；1個以上のハロゲンで置換されていてもよいC1-C6アルキル；または-ORa；シアノ基；ニトロ基；アミノ基；アミノアルキル基；アミド基；エステル基であり；
Raは水素、ヘテロ環基で置換されていてもよいC1-C6アルキルであり；
R2はC6-C8アリール基もしくはアルコキシ基で置換されていてもよい、C2-C4アルキレン基、C1-C8アルキル基；C6-C8ヘテロアリール基；または1個以上のRb基で置換されていてもよいC6-C8アリール基であり；
Rbはハロゲン；1個以上のハロゲン基で置換されていてもよいC1-C6アルキル基；アルコキシ基；または-C(O)O-Rc基であり；ならびに
RcはC1-C6アルキルである)
の化合物、または製薬上許容し得るその塩、水和物、溶媒和物、クラスレート、多型体、ラセミ体もしくは立体異性体である、請求項１１に記載の方法。
【請求項２０】
前記化合物が式(I-b)の化合物の10S、3aR異性体である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
被験体における、癌、糖尿病性網膜症、慢性関節リウマチ、乾癬、アテローム性動脈硬化症、肥満、慢性炎症、および滲出性黄斑変性からなる群より選択される疾患または障害を治療するための方法であって、治療上有効量の式I：
【化７】
2007529533.tif 000049
(式中、
Xは水素、ヒドロキシル基、ハロゲン、C1-C6アルキル基、またはC6-C10アリール基で置換されていてもよいC1-C5アルコキシであり；
Wは酸素または硫黄原子であり；
R1は、C1-C8アルキル基；ヘテロアリール基；または1個以上の独立に選択されたR0基で置換されていてもよいC6-C10アリール基であり；
R0はハロゲン；C1-C6アルキル(式中、アルキル基は1個以上の独立に選択されたハロゲン基で置換されていてもよい)；5〜12員ヘテロ環(式中、ヘテロ環はC1-C6アルキル基で置換されていてもよい)；5〜12員ヘテロアリール基；シアノ基；ニトロ基；アミノ基(式中、アミノ基は1個以上のC1-C6アルキル基で置換されていてもよい)；アミド基；エステル基；または-ORa基であり；
Raは水素；またはC1-C6アルキル(式中、アルキル基は1個以上の独立に選択されたハロゲン、C1-C4アルコキシ、5〜10員ヘテロアリール、5〜10員ヘテロ環、もしくはアミノ基(式中、ヘテロ環は-C(O)-Rc基もしくはヒドロキシル基で置換されていてもよいC1-C6アルキルで置換されていてもよい；アミノ基はC1-C4アルコキシ基で置換されていてもよい、1個以上の独立に選択されたC1-C6アルキル基で置換されていてもよい)で置換されていてもよい)であり；
R2は5〜12員ヘテロアリール基；C2-C8アルケニル基；C1-C8アルキル基(式中、アルキル基は1個以上の独立に選択されたハロゲン、C1-C4アルコキシ、5〜10員ヘテロ環、5〜10員ヘテロアリール、1個以上の独立に選択されたRbもしくは-C(O)-O-Rc基で置換されていてもよいC6-C8アリールである)；または1個以上の独立に選択されたRb基で置換されていてもよいC6-C10アリール基であり；
Rbはハロゲン；シアノ；ニトロ；C1-C4アルコキシ；C1-C6アルキル(式中、アルキルは1個以上のハロゲン基で置換されていてもよい)；-O-C(O)-Rc；または-C(O)-O-Rc基であり；ならびに
RcはヒドロキシルまたはC1-C6アルキル基である)
の化合物、または製薬上許容し得るその塩、水和物、溶媒和物、クラスレート、多型体、ラセミ体もしくは立体異性体を、それを必要とする被験体に投与することを含む、前記方法。
【請求項２２】
Xが水素、メチル、メトキシ、またはハロゲンである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
R1が1個以上の独立に選択されたR0基で置換されていてもよいC6-C8アリール基である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
R0がC1-C4アルコキシおよびハロゲンである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
R2がC3-C6シクロアルキル基または5〜12員ヘテロアリールである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
R2が1個以上の独立に選択されたRb基で置換されていてもよいC6-C8アリール基である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２７】
前記化合物が式(I-a)：
【化８】
2007529533.tif 000050
(式中、mは0、1、2、または3である)
の化合物、または製薬上許容し得るその塩、水和物、溶媒和物、クラスレート、多型体、ラセミ体もしくは立体異性体である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２８】
前記化合物が式(I-a)の化合物の10S、3aR異性体である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記化合物が式(I-b)：
【化９】
2007529533.tif 000051
(式中、
Xは水素、ヒドロキシル基、ハロゲン、C1-C6アルキル基、またはC6-C8アリール基で置換されていてもよいC1-C5アルコキシであり；
Wは酸素または硫黄原子であり；
R1はC1-C8アルキル基；ヘテロアリール基；または少なくとも1個のR0基で置換されていてもよい、C6-C8アリール基であり；
R0はハロゲン；1個以上のハロゲンで置換されていてもよいC1-C6アルキル；または-ORa；シアノ基；ニトロ基；アミノ基；アミノアルキル基；アミド基；エステル基であり；
Raは水素、ヘテロ環基で置換されていてもよいC1-C6アルキルであり；
R2はC6-C8アリール基もしくはアルコキシ基で置換されていてもよい、C2-C4アルキレン基、C1-C8アルキル基；C6-C8ヘテロアリール基；または1個以上のRb基で置換されていてもよいC6-C8アリール基であり；
Rbはハロゲン；1個以上のハロゲン基で置換されていてもよいC1-C6アルキル基；アルコキシ基；または-C(O)O-Rc基であり；ならびに
RcはC1-C6アルキルである)
の化合物、または製薬上許容し得るその塩、水和物、溶媒和物、クラスレート、多型体、ラセミ体もしくは立体異性体である、請求項２１に記載の方法。
【請求項３０】
前記化合物が式(I-b)の化合物の5S、11aR異性体である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
(i)実質的に式(I)：
【化１０】
2007529533.tif 000052
(式中、
Xは水素、ヒドロキシル基、ハロゲン、C1-C6アルキル基、またはC6-C10アリール基で置換されていてもよいC1-C5アルコキシであり；
Wは酸素または硫黄原子であり；
R1は、C1-C8アルキル基；ヘテロアリール基；または1個以上の独立に選択されたR0基で置換されていてもよいC6-C10アリール基であり；
R0はハロゲン；C1-C6アルキル(式中、アルキル基は1個以上の独立に選択されたハロゲン基で置換されていてもよい)；5〜12員ヘテロ環(式中、ヘテロ環はC1-C6アルキル基で置換されていてもよい)；5〜12員ヘテロアリール基；シアノ基；ニトロ基；アミノ基(式中、アミノ基は1個以上のC1-C6アルキル基で置換されていてもよい)；アミド基；エステル基；または-ORa基であり；
Raは水素；またはC1-C6アルキル(式中、アルキル基は1個以上の独立に選択されたハロゲン、C1-C4アルコキシ、5〜10員ヘテロアリール、5〜10員ヘテロ環、もしくはアミノ基(式中、ヘテロ環は-C(O)-Rc基もしくはヒドロキシル基で置換されていてもよいC1-C6アルキルで置換されていてもよい；アミノ基はC1-C4アルコキシ基で置換されていてもよい、1個以上の独立に選択されたC1-C6アルキル基で置換されていてもよい)で置換されていてもよい)であり；
R2は5〜12員ヘテロアリール基；C2-C8アルケニル基；C1-C8アルキル基(式中、アルキル基は1個以上の独立に選択されたハロゲン、C1-C4アルコキシ、5〜10員ヘテロ環、5〜10員ヘテロアリール、1個以上の独立に選択されたRbもしくは-C(O)-O-Rc基で置換されていてもよいC6-C8アリールである)；または1個以上の独立に選択されたRb基で置換されていてもよいC6-C10アリール基であり；
Rbはハロゲン；シアノ；ニトロ；C1-C4アルコキシ；C1-C6アルキル(式中、アルキルは1個以上のハロゲン基で置換されていてもよい)；-O-C(O)-Rc；または-C(O)-O-Rc基であり；ならびに
RcはヒドロキシルまたはC1-C6アルキル基である)
の化合物、または製薬上許容し得るその塩、水和物、溶媒和物、クラスレートの10S、3aR異性体からなる薬剤を含む医薬組成物。
【請求項３２】
下記のもの：
【化１１】
2007529533.tif 000053
からなる群より選択される構造を有する化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願へのクロスリファレンス
本願は、2004年3月15日に出願されたU.S.暫定出願第60/552,724号に優先権を主張し、この出願は、引用することにより本明細書に組み入れられる。
【０００２】
発明の分野
本発明は、血管新生を抑制するための方法および化合物に関する。さらに詳細には、本発明は、血管新生を抑制するための方法および化合物に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
迷走性の血管新生は、悪性、虚血性、炎症性および免疫性の疾患を含む多くの病気の病因において不可欠の役割を演じる（Carmeliet, Nat. Med., 9(6):653-60 (2003), Ferrara, Semin. Oncol., 29(6 Suppl 16):10-4 (2002)）。これらの病気のうちで最もよく知られたものは、癌、滲出性黄斑変性および糖尿病性網膜症(DR)であり、最後の２つは、合衆国において失明の主な原因である（Witmer ら、 Prog. Retin Eye Res., 22(1):1-29 (2003), Clark ら、 Nat. Rev. Drug Discovery, 2:448-459 (2003)）。最近10年間に、血管新生の分子的な基礎の理解は著しく進展した。血管新生を刺激する多くのサイトカインおよび増殖因子、例えばVEGF、FGF-2、PDGF、IGF-1、TGF、TNF-α、G-CSFが同定された（Ferrara ら、Nat. Med., 5(12):1359-64 (1999), Kerbel ら、 Nat. Rev. Cancer, 2(10):727-39 (2002), Rofstad ら、Cancer Res., 60(17):4932-8 (2000)）。これらの増殖因子の中で、血管内皮増殖因子(VEGF)は、血管新生において中心的役割を演じる（Ferrara, Semin. Oncol., 29(6 Suppl 16):10-4 (2002)）。
【０００４】
VEGF-Aとしてまた知られるVEGFは最初に、血管浸透性を誘導する能力および血管内皮細胞の増殖を促進する能力について同定された（Leungら、 Science, 246:1306-1309 (1989), Plouet ら、EMBO J., 8:3801-3806 (1989), Connolly ら、J. Biol. Chem., 264:20017-20024 (1989)）。VEGF は、選択的スプライシングによって４つのイソ型を生じる１つの遺伝子によりエンコードされる（Tischer ら、 J. Biol. Chem., 266:11947-11954 (1991)）。全ての４つのイソ型は、同じ異常に長くかつGC豊富な5’-UTR、ならびに多数のRNA安定性決定基を含む3’-UTRを共にする。受容体VEGFR-2（KDRまたはFlk-1としてまた知られる）およびVEGFR-1（以前にFltlとして知られる）は、VEGFの２量体形態を認識する（Ortegaら、Front. Biosci., 4:D141-52 (1999), Sato ら、 Annals of New York Academy of Science, 902:201-207, (2000)）。非常に特異的なVEGFR-2受容体は、内皮細胞で発現される。VEGFR-2受容体に結合するVEGFは、受容体のチロシンキナーゼ活性を活性化させ、内皮細胞の増殖、分化および原始血管新生に至る（Shalabyら、Nature, 376:62-66, (1995)）。VEGFR-1は、おとりとして作用するか、またはVEGFR-2による発信経路を抑制することによって、内皮細胞の増殖を抑制する（Fongら、 Nature, 376:66-70 (1995)）。
【０００５】
30年以上前、腫瘍血管新生の抑制が癌の治療のために有効なアプローチであり得ることが提案された（Folkman, N. Engl. J. Med., 285(21):1182-6 (1971)）。VEGFおよびその受容体は、腫瘍血管新生、特に腫瘍の増殖の初期の段階で中心的役割を有することが証明された（Hanahan ら、Cell, 86:353-364, 1996)）。確かに、VEGF発現の量の増加は、初期の腫瘍組織における微小管の密度に関連していた（Gasparini ら、 J. Natl. Cancer Inst., 89:139-147 (1997)）。その上、VEGFの転写物の量の増加は、普通の固体腫瘍の実質的に全てにおいて見出される（Ferrara ら、 Endocr. Rev., 18:4-25, 1997)）。一般に、腫瘍を有する患者は、腫瘍のない人に比べて高濃度のVEGFを有し、血清/血漿中の高いVEGF濃度は、予後がよくないことに関連する（Dirixら、 Br. J. Cancer, 76:238-243 (1997)）。腫瘍血管新生におけるVEGFの役割と矛盾せずに、VEGFヌル胚幹細胞は、ヌードマウスにおいて腫瘍を形成する能力の劇的減少を示した（Carmeliet ら、Nature, 380:435-439 (1996)）。腫瘍形成におけるVEGFの関連についての直接の証拠は、ヌードマウスに移植されたヒト異種移植片中のVEGFに対する特異的抗体を使用することによって証明された（Kimら、Nature, 362:841-844 (1993), Hichlin ら、Drug Discovery Today, 6:517-528 (2001)）。これらの研究において、腫瘍増殖の抑制は、抗体-処理した腫瘍における血管新生の減少と明確に関連していた。可溶性受容体を用いたその後の実験は、腫瘍増殖におけるVEGF活性の重要性を実証し（Linら、Cell Growth Differ., 9(1):49-58 (1998)）、特異的抗体処理によるVEGFの不活化は直接に、腫瘍に関連した新生血管形成のほぼ完全な抑制を生じることを証明した（Borgstromら、Prostate, 35:1-10 (1998), Yuan ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93:14765-14770 (1996)）。
【０００６】
滲出性黄斑変性および糖尿病性網膜症において、予備臨床実験および臨床試験は、VEGFの過剰生産は、迷走性の網膜または脈絡膜新生血管形成のために不可欠であることを証明した（Witmerら、Prog. Retin Eye Res., 22(1):1-29 (2003)において概説）。目の中のVEGFの量が、糖尿病性網膜症および湿性形態黄斑変性のような疾患を有する患者における活性な網膜／脈絡膜新生血管形成(CNV)に強く関連する証拠が得られた（Funatsu ら、Am. J. Ophthalmol., 133(4):537-43 (2002), Lipら、Ophthalmology, 108(4):705-10 (2001)）。そのほかに、トランスジェニックマウスを使用した研究は、網膜色素上皮細胞または光受容体細胞におけるVEGFの過剰発現は、脈絡膜または網膜の新生血管形成を生じることを証明した（Schwesingerら、Am. J. Pathol., 158(3):1161-72 (2001), Ohno-Matsui ら、Am. J. Pathol., 160(2):711-9 (2002)）。最近の研究においては、抗体、可溶性受容体、受容体拮抗物質またはsiRNAを中和することは、動物モデルおよび診療所においてVEGF仲介の血管新生を減らすのに効果があることがわかった（Eyetech Study Group, 22(2):143-52 (2002), Krzystolikら、Arch. Ophthalmol., 120(3):338-46 (2002), Shenら、Lab Invest., 82(2):167-82 (2002), Honda ら、Gene Ther., 7(11):978-85 (2000), Saishin ら、J. Cell Physiol., 195(2):241-8 (2003)）。
【０００７】
VEGFの発現は、サイトカイン、増殖因子、ステロイドホルモンおよび化学物質を包含する多数の因子および剤、ならびにrasのような腫瘍遺伝子または腫瘍抑制遺伝子VHLの活性を調節する変異によって調節される（Maxwellら、Nature, 399:271-275 (1999), Rakら、Cancer Res., 60:490-498 (2000)）。それにもかかわらず、低酸素症は、VEGF発現を調節するための最も重要な生理的信号である。低酸素症は、VEGF転写物の転写速度および安定性の両方を増加させることによって、高められたVEGF発現を生じる（Ikeda ら、J. Biol. Chem. 270:19761-19766 (1995), Steinら、 Mol. Cell. Biol. 18:3112-3119 (1998), Levyら、 J. Biol. Chem. 271:2746-2753 (1996)）。低酸素症誘発因子1α(HIF-1α)は、VEGFプロモーターに位置する低酸素症応答要素(HRE)に結合することによって、低酸素症になっている細胞におけるVEGF遺伝子発現を増加させる転写因子である（Liuら、Circ. Res., 77:638-643 (1995), Semenza, Annu. Rev. Cell. Dev. Biol., 5:551-578 (1999)）。VEGFmRNAの安定性はまた、3’-UTR中の要素への因子の結合の結果として、大きく高められる（Goldbergら、J. Biol. Cell. J. Biol. Chem., 277(16):13635-40 (2002)）。その上、VEGF転写物の翻訳開始は、独自に調節される。低酸素条件下では、キャップ-依存性翻訳開始プロセスにより仲介されるほとんどの細胞性転写物の翻訳は、大きく損なわれる（Kraggerudら、 Anticancer Res., 15:683-686 (1995)）。しかしながら、VEGFmRNAの翻訳の開始は、低酸素条件下で独自であり、そこでそれは、VEGFの5’-UTR内の内部リボソーム侵入部位(IRES)を経て仲介される（Steinら、Mol. Cell. Biol. 18:3112-3119 (1998), Levyら、 J. Biol. Chem. 271:2746-2753 (1996), Huezら、 Mol. Cell. Biol., 18:6178-6190 (1998), Akiriら、 Oncogene, 17:227-236 (1998)）。
【０００８】
腫瘍の増殖は、新生血管形成の防止によって抑制することができることを示す、大量の実験による証拠がある（Linら、Cell Growth Differ., 9(1):49-58 (1998), Zhuら、 Invest. New Drugs, 17:195-212 (1999)）。腫瘍血管は一般に未熟であり、絶えず改造作用を受ける（Carmeliet, Nat. Med., 9(6):653-60 (2003), Carmelietら、 Nature, 407:249-257 (2000)）。活性で迷走性の血管新生は、種々のサイトカイン、増殖因子およびステロイドホルモンを含む、前血管新生(proangiogenic)および抗-血管新生の因子の正常なバランスの破壊の結果である。腫瘍血管新生の調節の複雑さにもかかわらず、蓄積された証拠は、１つの前血管新生因子を標的にすることは、腫瘍血管新生を抑制し、腫瘍の増殖を抑制するのに十分であり得ることを示す（Kimら、 Nature, 362:841-844 (1993), Millauerら、Nature, 367:576-579 (1994), Fong ら、Cancer Res., 59:99-106 (1999)）。多くの血管新生標的の中で、VEGFおよびその受容体は最も魅力的である（Carmeliet, Nat. Med., 9(6):653-60 (2003), Ortegaら、Front. Biosci., 4:D141-52 (1999)）。先に記載したように、VEGFを特異的に標的にするモノクローナル抗体を用いた治療は、ヌードマウスに移植されたヒト異種移植片における腫瘍の増殖を抑制した。その後、VEGF信号伝達を不活化することを示された種々のアプローチが腫瘍モデルで試験され、癌腫、肉腫および神経膠腫を含む広範囲の腫瘍細胞系統において非常に有効であることがわかった（Ferraraら、Endocr. Rev., 18:4-25, 1997), Kimら、 Nature, 362:841-844 (1993), Millauerら、 Nature, 367:576-579 (1994), Fongら、Cancer Res., 59:99-106 (1999), Gengら、Cancer Res., 61:2413-2419 (2001)）。その他に、抗-VEGF抗体によるVEGFの抑制は、十分に成長したげっ歯動物または霊長類において有意の副作用を生じなかった（Ryanら、 Toxicol. Pathol., 27:78-86 (1999), Ferraraら、Nat. Med., 4:336-340 (1998)）。一緒に考慮すると、これらの結果は、VEGFは腫瘍治療の発展のための有効な標的であることを示す。実際に、多数の臨床試験がVEGF抑制剤を用いて進行中である（Matter, Drug Discovery Today, 6:1005-1024 (2001), Hichlinら、Drug Discovery Today, 6:517-528 (2001)）。        
幾つかの前-血管新生因子が、滲出性の年齢に関連する黄斑変性の病理に関係しているが、VEGFは、この病気の病原性および展開に最も不可欠であると思われる（Witmerら、Prog. Retin Eye Res., 22(1):1-29 (2003), Holashら、 Science, 284:1994-1998 (1999)）。予備臨床実験および臨床試験からのデータは、VEGF単独の妨害が病気の進行を緩和するかまたは安定にするのに十分であることを証明した（Eyetech Study Group, 22(2):143-52 (2002), Krzystolikら、 Arch. Ophthalmol., 120(3):338-46 (2002), Shen ら、Lab Invest., 82(2):167-82 (2002), Hondaら、Gene Ther., 7(11):978-85 (2000), Saishinら、 J. Cell Physiol., 195(2):241-8 (2003)）。例えば、特異的チロシンキナーゼ阻害剤によるVEGFR信号伝達の抑制は、未熟モデルのネズミ網膜症における網膜の新生血管形成を完全に防止するのに十分である（Ozaki H, Seo MS, Ozaki ら、 Am. J. Pathol., 156(2):697-707 (2000)）。さらには、ネズミVEGFに対して向けられた小干渉RNA(siRNA)は、マウスモデルにおいてレーザー光凝固術後に目の新生血管形成を有意に抑制することが最近証明された（Reichら、Mol. Vis. 30;9:210-6 (2003)）。これらの結果は、VEGF発現の選択的抑制が達成可能であり、目の新生血管疾患、例えば滲出性黄斑変性および糖尿病性網膜症の治療のためにこのアプローチの確証を提供することを示す。
【０００９】
VEGF活性を抑制するのに３つのアプローチが使用され、それは、(1)  特異的抗体、可溶性VEGF受容体またはVEGF/VEGFR相互作用に対するアプタマーオリゴを使用することによるVEGF活性の中和（Kimら、Nature, 362:841-844 (1993), Linら、 Cell Growth Differ., 9(1):49-58 (1998), Borgstromら、Prostate, 35:1-10 (1998), Zhuら、Invest. New Drugs, 17:195-212 (1999), Millauerら、Nature, 367:576-579 (1994), Asanoら、Jpn. J. Cancer Res., 90(1):93-100 (1999), Brekkenら、Cancer Res., 60(18):5117-24 (2000)）；(2)  特異的な小分子チロシンキナーゼ阻害剤によるVEGFRが仲介する信号変換の抑制（Fongら、Cancer Res., 59:99-106 (1999), Wedgeら、 Cancer Res., 60(4):970-5 (2000), Lairdら、 Cancer Res., 60(15):4152-60 (2000)）；および(3)  アンチセンス、siRNAまたはリボザイムを用いることによるVEGF/VEGFR発現の抑制（Reich ら、 Mol. Vis. 30;9:210-6 (2003), Parryら、Nucleic Acids Res., 27:2569-2577 (1999), Ellis ら、Surgery, 120:871-878 (1996), Filleur ら、 Cancer Res., 63(14):3919-22 (2003)）を含む。これらのアプローチの全てがin vivoでの血管新生の有意の抑制を示すが、それらは全て、有意の制限を有する。例えば、治療タンパク質（抗体および可溶性受容体）またはオリゴ（アンチセンス、siRNAおよびリボザイム）は、通常非経口投与を必要とし、製造するのに高くつく、透過性に乏しい大きい分子である。慢性的な目の新生血管形成の治療のために、多数回の注入は、可能性のある合併症、例えば網膜剥離および処置に関連する感染のために非実用的であり得る。さらには、チロシンキナーゼ阻害剤は、限定された特異性の可能性を有する。VEGFは、正常な目および他の組織において低濃度で構成的に発現され、かくして、特にその多くがまた高血圧であるAMDおよびRDを有する患者にとって、抗体またはチロシンキナーゼ阻害剤を全身に投与することによってVEGFの機能を完全に抑制することは有害であり得る（Gilesら、Cancer, 97(8):1920-8 (2003), Sugimotoら、J. Biol. Chem., 278(15):12605-8 (2003), Bergslandら、American Society of Clinical Oncology 36th Annual Meeting, 20-23 May, 2000, New Orleans, LA, USA, Abstract 939), DeVoreら、American Society of Clinical Oncology 36th Annual Meeting, 20-23 May, 2000, New Orleans, LA, USA, Abstract 1896）。
【００１０】
かくして、新規な抗-血管新生薬剤の開発のために、先導する分子を開発し、特性決定し、かつ最適化することの必要性が存続する。したがって、本発明の目的は、そのような化合物を提供することである。
【００１１】
ここで言及した全ての文書は、引用することによって、ここに全部記載したかのように、本願に組み入れられる。
【発明の開示】
【００１２】
発明の概要
本発明に従って、転写後にVEGFの発現を阻害する化合物を同定し、およびそれらの使用のための方法を提供する。
【００１３】
本発明の一態様においては、VEGF産生の阻害、血管新生の阻害、および／または癌、糖尿病性網膜症もしくは滲出性黄斑変性の治療において有用である式(I)の化合物を提供する。
【００１４】
本発明の別の態様においては、本明細書に記載の化合物を用いる、VEGF産生の阻害、血管新生の阻害、および／または癌、糖尿病性網膜症、慢性関節リウマチ、乾癬、アテローム性動脈硬化症、慢性炎症、他の慢性炎症に関連する疾患および障害、肥満、もしくは滲出性黄斑変性の治療のための方法を提供する。
【００１５】
一実施形態においては、本発明は、VEGF発現を阻害する量の少なくとも1種の本発明の化合物を、それを必要とする被験体に投与することを含む、VEGF産生を阻害するための方法に関する。
【００１６】
別の実施形態においては、抗血管新生量の少なくとも1種の本発明の化合物を、それを必要とする被験体に投与することを含む、血管新生を阻害するための方法を提供する。
【００１７】
さらに別の実施形態においては、治療上有効量の少なくとも1種の本発明の化合物を、それを必要とする被験体に投与することを含む、癌、糖尿病性網膜症、慢性関節リウマチ、乾癬、アテローム性動脈硬化症、慢性炎症、他の慢性炎症に関連する疾患および障害、肥満、または滲出性黄斑変性の治療のための方法を提供する。
【００１８】
本発明のこれらの態様および他の態様は、以下の好ましい実施形態および詳細な説明を参照すればより明確に理解されるであろう。
【００１９】
発明の詳細な説明
血管新生の鍵となる因子である血管内皮細胞増殖因子(VEGF)の異常な上方調節は、癌、糖尿病性網膜症、慢性関節リウマチ、乾癬、アテローム性動脈硬化症、慢性炎症、他の慢性炎症に関連する疾患および障害、肥満、または滲出性黄斑変性などの疾患状態の病因に対する重要な寄与因子である。本発明に従って、転写後にVEGFの発現を阻害する化合物を同定し、およびそれらの使用のための方法を提供する。本発明の化合物は、VEGF発現の阻害のためのナノモル濃度〜ナノモル濃度以下の活性を有する。
【００２０】
A. 本発明の化合物
本発明の一態様においては、VEGF産生の阻害、血管新生の阻害、および／または癌、糖尿病性網膜症もしくは滲出性黄斑変性の治療において有用である化合物を提供する。特定の実施形態においては、本発明の化合物はVEGF産生を特異的に阻害するが、他の実施形態においては、本発明の化合物はVEGF発現ならびにFGF-2などの他の血管新生因子の発現を阻害する。この点において、腫瘍増殖を阻害する方法においては全ての血管新生阻害剤が好ましいが、眼の新生血管障害の治療にとってはVEGF特異的阻害剤が好ましい(Eyetech Stydy 基, 22(2): 143-52 (2002))。
【００２１】
本発明の化合物は一般的にはキラルであり、そのようなものとして、ラセミ混合物として、または鏡像異性的に純粋な組成物として存在してもよい。例えば、この化合物は鏡像異性的に純粋な組成物中の(R,R)、(R,S)、(S,R)または(S,S)異性体として存在してもよい。好ましい実施形態においては、本発明の化合物は、10R、3aR；10R、3aS；10S、3aR；または10S、3aS1異性体であり、より好ましくは10S、3aR異性体である。
【００２２】
本明細書で用いる「鏡像異性的に純粋な」とは、実質的に単一の異性体からなる、好ましくは、90％、92％、95％、98％、99％または100％の単一の異性体からなる組成物を指す。
【００２３】
VEGF産生の阻害において有用な本発明の好ましい化合物としては、以下に示される式(I)：
【化１】
2007529533.tif 000002
【００２４】
(式中、
Xは水素、ヒドロキシル基、ハロゲン、C1-C6アルキル基、またはC6-C10アリール基で置換されていてもよいC1-C5アルコキシであり；
Wは酸素または硫黄原子であり；
R1は、C1-C8アルキル基；ヘテロアリール基；または1個以上の独立に選択されたR0基で置換されていてもよいC6-C10アリール基であり；
R0はハロゲン；C1-C6アルキル(式中、アルキル基は1個以上の独立に選択されたハロゲン基で置換されていてもよい)；5〜12員ヘテロ環(式中、ヘテロ環はC1-C6アルキル基で置換されていてもよい)；5〜12員ヘテロアリール基；シアノ基；ニトロ基；アミノ基(式中、アミノ基は1個以上のC1-C6アルキル基で置換されていてもよい)；アミド基；エステル基；または-ORa基であり；
Raは水素；またはC1-C6アルキル(式中、アルキル基は1個以上の独立に選択されたハロゲン、C1-C4アルコキシ、5〜10員ヘテロアリール、5〜10員ヘテロ環、もしくはアミノ基(式中、ヘテロ環は-C(O)-Rc基もしくはヒドロキシル基で置換されていてもよいC1-C6アルキルで置換されていてもよい；アミノ基はC1-C4アルコキシ基で置換されていてもよい、1個以上の独立に選択されたC1-C6アルキル基で置換されていてもよい)で置換されていてもよい)であり；
R2は5〜12員ヘテロアリール基；C2-C8アルケニル基；C1-C8アルキル基(式中、アルキル基は1個以上の独立に選択されたハロゲン、C1-C4アルコキシ、5〜10員ヘテロ環、5〜10員ヘテロアリール、1個以上の独立に選択されたRbもしくは-C(O)-O-Rc基で置換されていてもよいC6-C8アリールである)；または1個以上の独立に選択されたRb基で置換されていてもよいC6-C10アリール基であり；
Rbはハロゲン；シアノ；ニトロ；C1-C4アルコキシ；C1-C6アルキル(式中、アルキルは1個以上のハロゲン基で置換されていてもよい)；-O-C(O)-Rc；または-C(O)-O-Rc基であり；ならびに
RcはヒドロキシルまたはC1-C6アルキル基である)
のものが挙げられる。
【００２５】
当業者には明らかであるように、式(I)の化合物は少なくとも2個の立体中心(例えば、R1置換基で)を含み、ラセミ混合物として、または鏡像異性的に純粋な組成物として存在してもよい。上記で考察したように、好ましい実施形態においては、式(I)の化合物は鏡像異性的に純粋な組成物である。より具体的には、好ましい実施形態においては、本発明の化合物は5R、11aR；5R、11aS；5S、11aR；または5S、11aS異性体であり、より好ましくは5S、11aR異性体である。この点において、本発明の化合物は、本質的に5R、11aR；5R、11aS；5S、11aR；または5S、11aS異性体、およびより好ましくは5S、11aR異性体からなる鏡像異性的に純粋な組成物として存在してもよい。
【００２６】
本明細書で用いる用語「アルキル」とは、一般的にはメチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、n-ペンチル、n-ヘキシル、シクロヘキシル、n-ヘプチル、オクチル、n-オクチルなどの直鎖、分枝鎖または環式配置の飽和炭化水素ラジカルを指す。いくつかの実施形態においては、アルキル置換基はC1-C8、C1-C6またはC1-C4アルキル基を含んでもよい。アルキル基は1個以上のハロゲンまたはアルコキシ基で置換されていてもよい。例えば、アルキル基はハロアルキル、ジハロアルキル、またはトリハロアルキルであってもよい。
【００２７】
本明細書で用いる「アルケニル」とは、一般的には3-プロペニルなどのC2-C8およびC2-C6アルケニル基などの、1個以上の炭素-炭素二重結合を有する線状、分枝状または環式アルケンラジカルを指す。
【００２８】
本明細書で用いる「アルキニル」とは、一般的にはヘキサ-3-インなどのC2-C8およびC2-C6アルキニル基などの、1個以上の炭素-炭素三重結合を有する線状、分枝状または環式アルキンラジカルを指す。
【００２９】
本明細書で用いる「アリール」とは、炭素環式芳香環構造を指す。アリール基の範囲に含まれるのは、5〜12個の炭素原子を有する芳香環である。アリール環構造としては、モノ-、ビ-、またはトリ環式化合物などの、1個以上の環構造を有する化合物が挙げられる。アリール基の例としては、フェニル、トリル、アントラセニル、フルオレニル、インデニル、アズレニル、フェナントレニル(すなわち、フェナントレン)、およびナフチル(すなわち、ナフタレン)環構造が挙げられる。特定の実施形態においては、アリール基は置換されていてもよい。
【００３０】
本明細書で用いる「ヘテロアリール」とは、環中の1個以上の原子、ヘテロ原子が炭素以外の元素である環式芳香環構造を指す。ヘテロ原子は典型的にはO、SまたはN原子である。ヘテロアリールの範囲内に含まれ、独立に選択可能なものは、O、N、およびSヘテロアリール環構造である。環構造はモノ-、ビ-、またはトリ-環式化合物などの1個以上の環構造を有する化合物を含んでもよい。いくつかの実施形態においては、ヘテロアリール基を、1個以上のヘテロ原子、2個以上のヘテロ原子、3個以上のヘテロ原子、または4個以上のヘテロ原子を含むヘテロアリール基から選択することができる。ヘテロアリール環構造を、5個以上の原子、6個以上の原子、または8個以上の原子を含むものから選択することができる。ヘテロアリール環構造の例としては、アクリジン、ベンズイミダゾール、ベンゾキサゾール、ベンゾジオキソール、ベンゾフラン、ジヒドロ-クロメン-4-オンリー、1,3-ジアジン、1,2-ジアジン、1,2-ジアゾール、1,4-ジアザナフタレン、フラン、フラザン、イミダゾール、インドール、イソキサゾール、イソキノリン、イソチアゾール、イソインドリル、オキサゾール、プリン、ピリダジン、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピロール、キノリン、キノキサリン、チアゾール、チオフェン、1,3,5-トリアジン、1,2,4-トリアジン、1,2,3-トリアジン、テトラゾールおよびキナゾリンが挙げられる。特定の実施形態においては、ヘテロアリールは置換されていてもよい。
【００３１】
本明細書で用いる「ヘテロ環」とは、環中の1個以上の原子、ヘテロ原子が炭素以外の元素である環式環構造を指す。ヘテロ原子は典型的には、O、SまたはN原子である。ヘテロ環の範囲内に含まれ、独立に選択可能であるものは、O、N、およびSへテロ環構造である。この環構造は、モノ-、ビ-、またはトリ環式化合物などの1個以上の環構造を有する化合物を含んでもよい。いくつかの実施形態においては、ヘテロ環基を、1個以上のヘテロ原子、2個以上のヘテロ原子、3個以上のヘテロ原子、または4個以上のヘテロ原子を含むヘテロ環基から選択することができる。ヘテロ環基の例としては、モルホリニル、ピロリジノニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ヒダントイニル、バレロラクタミル、オキシラニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロピリジニル、テトラヒドロプリミジニル、テトラヒドロチオフェニルまたはテトラヒドロチオピラニルなどが挙げられる。特定の実施形態においては、ヘテロ環は置換されていてもよい。
【００３２】
本明細書で用いる「アルカノイル」とは、一般的には-C(O)-R構造を有する基を指す。特定の実施形態においては、Rは水素、アルキル、4-モルホリニル基、またはチアゾールアミノ基であってよい。
【００３３】
本明細書で用いる「アルコキシ」とは、一般的には-O-R構造を有する基を指す。特定の実施形態においては、RはC1-C5アルキル基などのアルキル基であってよい。
【００３４】
本発明の目的のために、ハロ置換基を、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、およびアスタチンなどのハロゲンから独立に選択することができる。
【００３５】
特定の好ましい実施形態においては、Xは水素、メチル、メトキシまたはハロゲン、好ましくはメチルまたはハロゲン、およびより好ましくはメチル、ブロミドまたはクロリドであってよい。
【００３６】
R1は、好ましくは少なくとも1個のR0基で置換されていてもよい、C6-C8アリール基であってよい。次いで、R0は好ましくはヒドロキシル、C1-C6アルキル、アルコキシ、またはハロゲン、より好ましくはメトキシ、プロピル、またはハロゲン、およびより好ましくはメトキシ、クロリド、またはフルオリドであってよい。あるいは、R0は、好ましくは-ORaであってよく、ここで、Raはヘテロ環基で置換されていてもよいC1-C6アルキルであり、より好ましくはRaはメチルまたはエチル-ピペリジンである。あるいは、R1はベンゾジオキソール基であってよい。
【００３７】
R2は、好ましくはC3-C6シクロアルキル基であってよい。別の実施形態においては、R2は好ましくは、ヘテロアリールであり、より好ましくはピリジン基である。あるいは、R2は好ましくは少なくとも1個のRb基で置換されていてもよいC6-C8アリール基であってよい。好ましいRb基はフルオリド、メチル、イソ-ブチルおよびメトキシである。
【００３８】
好ましいR1置換基としては、以下のものが挙げられる(式中、＊は足場分子への付着の結合を示す)。
【表１】
2007529533.tif 000003
【００３９】
他の好ましいR1置換基としては、以下のものが挙げられる(式中、＊は足場分子への付着の結合を示す)。
【表２】
2007529533.tif 000004
【００４０】
2007529533.tif 000005
【００４１】
好ましいR2置換基としては、以下のものが挙げられる(式中、＊は足場分子への付着の結合を示す)。
【表３】
2007529533.tif 000006
【００４２】
2007529533.tif 000007
【００４３】
他の好ましいR2置換基としては、以下のものが挙げられる(式中、＊は足場分子への付着の結合を示す)。
【表４】
2007529533.tif 000008
【００４４】
2007529533.tif 000009
【００４５】
式(I)内の好ましいクラスの化合物としては、好ましい実施形態を含む、以下に示される式(I-a)：
【化２】
2007529533.tif 000010
【００４６】
(式中、
X、W、R2、R0は式(I)に関して上記の通りであり、mは0、1、2、または3である)
の化合物が挙げられる。
【００４７】
本発明の範囲内の別の好ましいクラスの化合物としては、式(I-b)：
【化３】
2007529533.tif 000011
【００４８】
(式中、
Xは水素、ヒドロキシル基、ハロゲン、C1-C6アルキル基、またはC6-C8アリール基で置換されていてもよいC1-C5アルコキシであり；
Wは酸素または硫黄原子であり；
R1はC1-C8アルキル基；ヘテロアリール基；または少なくとも1個のR0基で置換されていてもよい、C6-C8アリール基であり；
R0はハロゲン；1個以上のハロゲンで置換されていてもよいC1-C6アルキル；または-ORa；シアノ基；ニトロ基；アミノ基；アミノアルキル基；アミド基；エステル基であり；
Raは水素、ヘテロ環基で置換されていてもよいC1-C6アルキルであり；
R2はC6-C8アリール基もしくはアルコキシ基で置換されていてもよい、C2-C4アルキレン基、C1-C8アルキル基；C6-C8ヘテロアリール基；または1個以上のRb基で置換されていてもよいC6-C8アリール基であり；
Rbはハロゲン；1個以上のハロゲン基で置換されていてもよいC1-C6アルキル基；アルコキシ基；または-C(O)O-Rc基であり；ならびに
RcはC1-C6アルキルである)
の化合物が挙げられる。
【００４９】
また本発明の範囲内に含まれるのは、本明細書に記載の化合物の製薬上許容し得る塩、水和物、溶媒和物、クラスレート、多形体、ラセミ体および立体異性体である。
【００５０】
本発明の目的のために、X、R1、R2、R0、Ra、Rb、RcおよびWを含む1個以上の官能基が式(I-a)および(I-b)などの式(I)の分子に組み入れられる場合、開示されたものの中に任意の位置に出現する各官能基を、独立に選択し、かつ好適な場合、独立に置換することができる。さらに、より一般的な置換基を、本発明の分子中の任意の位置について説明する場合、この一般的な置換基をより特異的な置換基と置換することができ、また得られる分子は本発明の分子の範囲内にあることが理解される。
【００５１】
本発明の好ましい化合物としては、以下のものが挙げられる。
【表５】
2007529533.tif 000012
【００５２】
2007529533.tif 000013
【００５３】
2007529533.tif 000014
【００５４】
2007529533.tif 000015
【００５５】
2007529533.tif 000016
【００５６】
2007529533.tif 000017
【００５７】
2007529533.tif 000018
【００５８】
2007529533.tif 000019
【００５９】
2007529533.tif 000020
【００６０】
2007529533.tif 000021
【００６１】
2007529533.tif 000022
【００６２】
2007529533.tif 000023
【００６３】
2007529533.tif 000024
【００６４】
2007529533.tif 000025
【００６５】
2007529533.tif 000026
【００６６】
特定の実施形態においては、好ましい化合物としては、約2μM未満、より好ましくは約2〜約0.04μM(200 nM〜40 nM)；より好ましくは約0.04μM〜約0.008μM(40 nM〜8 nM)；およびより好ましくは約0.008μM未満(<8 nM)の実施例2に記載のVEGF ELISAアッセイにおけるEC50を有するものが挙げられる。特に好ましい化合物は、化合物番号1〜27、特に、1、2、8、14、16および17である。一実施形態においては、本発明の好ましい化合物はラセミ混合物を形成し、別の実施形態においては、本発明の化合物は鏡像異性的に純粋な組成物である。より好ましくは、本発明の化合物は、鏡像異性的に純粋な組成物中の5S、11aR異性体である。
【００６７】
上記化合物は、本発明の方法において用いることができる例を提供するためだけに列挙されたものである。例の開示に基づくと、当業者は本明細書に記載の方法において有用である本発明の特許請求の範囲内に含まれることが意図される他の化合物を認識することができるであろう。
【００６８】
B. 本発明の化合物の調製
本発明の化合物を、当業界で公知の任意の様式で製造することができる。例えば、本発明の化合物を、以下の一般的なスキームに従って調製することができる。より具体的には、スキームIを用いて、式(I)の化合物を作製することができる。
【化４】
2007529533.tif 000027
【００６９】
より具体的には、特定の実施形態においては、式(I-a)の好ましい化合物を調製するためのスキームIの例示的方法は、以下の手順Iに記載のように、遊離アミンPictet-Spengler反応の生成物／中間体の形成を含む。
【化５】
2007529533.tif 000028
【００７０】
一実施形態においては、手順Iは所望のアルデヒド(B)を、0.1N硫酸中の5-置換トリプトファンHCl(A)の懸濁液に添加することを含む。次いで、この溶液を約110〜120℃で、反応が十分に完了するまで、密閉した反応容器中、例えば、約15分〜約20時間、攪拌することができる。反応の完了後、反応混合物を室温まで冷却し、沈降した塩を濾過することができる。次いで、濾過された残渣をエーテル、EtOAcまたはDCMとDMFの混合物で洗浄し、乾燥すれば、対応する酸塩として生成物(III)が得られる。あるいは、所望のアルデヒド(B)を、酢酸中の5-置換トリプトファン(A)の懸濁液に添加し、反応が十分に完了するまで、例えば、約15分〜約20時間、還流することができる。反応の完了後、反応混合物を室温まで冷却し、対応する酸塩を濾過することができる。次いで、濾過された残渣を酢酸、次いでDCMで洗浄し、乾燥すれば、塩として生成物(C)が得られる。遊離アミン(C)を、EtOAcで抽出し、水性水酸化アンモニウムまたは1M水性水酸化ナトリウムで洗浄することにより取得することができる。次いで、遊離アミン反応性生物／中間体、またはその塩を用いて、式Iaの他の好ましい化合物を形成させることができる。
【００７１】
特定の好ましい実施形態においては、当業界で公知の任意の方法を用いて、本発明の化合物を鏡像異性的に純粋な組成物に分解するか、または鏡像異性的に純粋な組成物として合成することができる。例えば、本発明の化合物を、鏡像異性混合物の直接的結晶化、鏡像異性体のジアステレオ異性体塩形成、ジアステレオ異性体の形成および分離またはラセミ混合物の酵素的分解により分解することができる。
【００７２】
例えば、本発明の鏡像異性的に純粋な化合物を、スキームIIまたはスキームIIIに記載のものと類似する様式で得られた鏡像異性的に純粋な出発材料から合成することができる(例えば、Inte J of Pep and Pro Res, 130(1), 13-21(1987)に記載の手順を参照)。
【化６】
2007529533.tif 000029
【００７３】
これらの方法および他の反応方法は、当業者により認識されるように、本発明の化合物を調製するのに有用であり得る。上記のスキームおよび手順に対する種々の改変は当業者には明らかであり、本発明は、本発明の化合物の調製方法により特異的に制限されるものではない。
【００７４】
C. 本発明の方法
本発明の別の態様においては、本発明の化合物を用いる、VEGF産生の阻害、血管新生の阻害、および／または癌、糖尿病性網膜症、慢性関節リウマチ、乾癬、アテローム性動脈硬化症、慢性炎症、他の慢性炎症に関連する疾患および障害、肥満、もしくは滲出性黄斑変性の治療のための方法を提供する。
【００７５】
一実施形態においては、本発明は、VEGF発現を阻害する量の少なくとも1種の本発明の化合物を、それを必要とする被験体に投与することを含む、VEGF産生を阻害するための方法に関する。
【００７６】
別の実施形態においては、抗血管新生量の少なくとも1種の本発明の化合物を、それを必要とする被験体に投与することを含む、血管新生を阻害するための方法を提供する。
【００７７】
さらに別の実施形態においては、治療上有効量の少なくとも1種の本発明の化合物を、それを必要とする被験体に投与することを含む、癌、糖尿病性網膜症、慢性関節リウマチ、乾癬、アテローム性動脈硬化症、慢性炎症、他の慢性炎症に関連する疾患および障害、肥満、または滲出性黄斑変性の治療のための方法を提供する。
【００７８】
理論により制限されることを意図しないが、本発明の方法はVEGFの活性を調節する複数の機構を介して作用すると考えられる。好ましい実施形態においては、本発明の方法は治療上有効量の少なくとも1種の本発明の化合物を投与することを含み、ここで該化合物は10S、3aR異性体である。
【００７９】
本発明の方法に従って、前記化合物を、当業界で公知の任意の薬剤送達経路を介して被験体に投与することができる。特定の例示的な投与経路としては、経口、眼、直腸、頬、局所、鼻、眼、皮下、筋肉内、静脈内(ボーラスおよび輸液)、大脳内、経皮、および経肺投与が挙げられる。
【００８０】
本明細書で用いる用語「VEGFを阻害する量」、「抗血管新生量」、および「治療上有効量」とは、同定された疾患もしくは症状を治療、軽減、もしくは防止するか、または検出可能な治療効果もしくは阻害効果を示す薬剤の量を指す。この効果を、例えば、以下の実施例に開示されるアッセイにより検出することができる。被験体のための正確な有効量は、被験体の体重、大きさ、および健康；症状の性質および程度；ならびに投与のために選択された治療剤もしくは治療剤の組合せに依存するであろう。所与の状況のための治療上有効量を、医師の技術および判断のうちにある日常的な実験により決定することができる。
【００８１】
任意の化合物について、治療上有効量を、例えば、新生物細胞の細胞培養アッセイ、または動物モデル、通常はラット、マウス、ウサギ、イヌもしくはブタにおいて最初に評価することができる。動物モデルを用いて、好適な濃度範囲および投与経路を決定することもできる。次いで、そのような情報を用いて、ヒトにおいて有用な用量および投与経路を決定することができる。治療／予防の有効性および毒性、例えば、ED50(50％の集団において治療上有効な用量)およびLD50(50％の集団に対して致死的な用量)を、細胞培養物または実験動物において標準的な製薬手順により決定することができる。治療作用と毒性作用の間の用量比が治療指数であり、比ED50/LD50として表すことができる。大きい治療指数を示す医薬組成物が好ましい。細胞培養アッセイおよび動物試験から得られたデータを、ヒトの使用のための用量範囲を処方するのに用いることができる。そのような組成物に含まれる用量は、毒性がほとんどないか、または全くないED50を含む循環濃度の範囲内にあるのが好ましい。この用量は、用いる剤形、患者の感受性、および投与経路に応じてこの範囲内で変化してもよい。
【００８２】
より具体的には、本発明の化合物に関して観察される濃度-生物学的作用の関係は、約0.1μg/mL〜約100μg/mL、好ましくは約5μg/mL〜約50μg/mL、より好ましくは約5μg/mL〜約10μg/mLの範囲の最初の標的血漿濃度を示す。そのような血漿濃度を達成するために、本発明の化合物を、投与経路に応じて、0.1μg〜100,000 mgで変化する用量で投与することができる。特定の用量および送達方法に関するガイダンスは文献に提供されており、当業界の実務者にとって一般的に利用可能である。一般的には、この用量は、約40〜約100 kgの体重の患者にとって単回、分割、または連続的用量で、約1 mg／日〜約10 g／日、または約0.1 g〜約3 g／日、または約0.3 g〜約3 g／日の範囲にあるであろう(この体重範囲より上または下の患者、特に、40 kg以下の子供については、用量を調整することができる)。
【００８３】
正確な用量を、治療を必要とする被験体に関する因子に照らして、医師により決定することができる。用量および投与を調整して、十分なレベルの活性薬剤を提供するか、または所望の効果を維持する。考慮することができる因子としては、疾患状態の重篤度、被験体の一般的な健康、年齢、体重、および被験体の性別、食事、投与の時間および頻度、薬剤の組合せ、反応感受性、ならびに治療に対する寛容／応答が挙げられる。長時間作用する医薬組成物を、特定の製剤の半減期および消失速度に応じて、3〜4日毎、毎週、または2週間毎に1回、投与することができる。
【００８４】
D. 本発明の化合物の代謝物
また本発明の範囲内にあるのは、本明細書に記載の化合物のin vivoでの代謝生成物である。そのような生成物は、例えば、主に酵素的プロセスに起因する、投与された化合物の酸化、還元、加水分解、アミド化、エステル化などから得られる。従って、本発明は、本発明の化合物を、その代謝生成物を得るのに十分な時間、哺乳動物組織または哺乳動物と接触させることを含むプロセスにより産生される化合物を含む。典型的には、そのような生成物を、放射標識(例えば、C14またはH3)された本発明の化合物を調製すること、検出可能な用量(例えば、約0.5 mg/kgを超える量)で、それをラット、マウス、モルモット、サルなどの哺乳動物、またはヒトに投与すること、十分な時間、代謝を発生させること(典型的には、約30秒〜30時間)、および尿、血液または他の生物学的サンプルからその転換生成物を単離することにより同定する。これらの生成物は標識されているので、容易に単離することができる(他は、代謝物中で生存するエピトープに結合することができる抗体の使用により単離する)。代謝物の構造を、従来の様式で、例えば、MSまたはNMR分析により決定する。一般的には、代謝物の分析を、当業者には公知の従来の薬剤代謝試験と同じ方法で行うことができる。転換生成物がin vivoで認められない限り、これらがそれ自身、生物学的活性を有していなくても、本発明の化合物の治療用量のための診断アッセイにおいて有用である。
【００８５】
E. 本発明の医薬組成物
本発明の化合物を生で投与することができるが、医薬組成物として該化合物を製剤化するのが好ましい。そのようなものとして、本発明のさらに別の態様においては、本発明の方法において有用な医薬組成物を提供する。本発明の医薬組成物を、特定の投与様式および剤形に応じて、担体、溶媒、安定剤、アジュバント、希釈剤などの製薬上許容し得る賦形剤と共に製剤化することができる。一般的には、医薬組成物を、製剤および投与経路に応じて、約3〜約11のpH、好ましくは約3〜7のpHの範囲であってよい、生理学的に適合可能なpHを達成するように製剤化するべきである。代替的な実施形態においては、pHを約5.0〜約8.0の範囲に調整するのが好ましい。
【００８６】
より具体的には、本発明の医薬組成物は、治療上または予防上有効量の少なくとも1種の本発明の化合物と共に1種以上の製薬上許容し得る賦形剤を含む。必要に応じて、本発明の医薬組成物は本発明の化合物の組合せを含んでもよく、または癌、糖尿病性網膜症、もしくは滲出性黄斑変性の治療に有用な第2の活性成分を含んでもよい。
【００８７】
例えば、非経口もしくは経口投与のための、本発明の製剤は、最も典型的には固体、液体溶液、乳濁液または懸濁液であるが、経肺投与のための吸入可能な製剤は一般的には液体または粉末であり、粉末製剤が一般的には好ましい。本発明の好ましい医薬組成物を、投与前に生理学的に適合可能な溶媒を用いて再構成される凍結乾燥固体として製剤化することもできる。本発明の代替的な医薬組成物を、シロップ、クリーム、軟膏、錠剤などとして製剤化することができる。
【００８８】
用語「製薬上許容し得る賦形剤」とは、本発明の化合物などの薬剤の投与のための賦形剤を指す。この用語は過度の毒性なしに投与することができる任意の製薬賦形剤を指す。製薬上許容し得る賦形剤を、投与される特定の組成物、ならびに該組成物を投与するのに用いられる特定の方法により部分的に決定する。従って、本発明の医薬組成物の様々な好適な製剤が存在する(例えば、Remington's Pharmaceutical Sciencesを参照)。
【００８９】
好適な賦形剤は、タンパク質、多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマー性アミノ酸、アミノ酸コポリマー、および不活性ウイルス粒子などの大きく、ゆっくり代謝される大分子を含む担体分子であってよい。他の賦形剤の例としては、アスコルビン酸などの抗酸化剤；EDTAなどのキレート化剤；デキストリン、ヒドロキシアルキルセルロース、ヒドロキシアルキルメチルセルロース、ステアリン酸などの炭水化物；油、水、生理食塩水、グリセロールおよびエタノールなどの液体；湿潤剤または乳化剤；pH緩衝物質などが挙げられる。リポゾームも製薬上許容し得る賦形剤の定義内に含まれる。
【００９０】
本発明の医薬組成物を、意図される投与方法にとって好適な任意の形態で製剤化することができる。経口使用を意図する場合、例えば、錠剤、トローチ剤、ロゼンジ剤、水性もしくは油性懸濁液、非水性溶液、分散性粉末剤もしくは顆粒剤(微小化粒子もしくはナノ粒子など)、乳濁液、硬いか、もしくは柔らかいカプセル剤、シロップ剤またはエリキシル剤を調製することができる。経口使用を意図する組成物を、医薬組成物の製造のための当業界で公知の任意の方法に従って調製することができ、そのような組成物は、風味のよい調製物を提供するための、甘味料、香料、着色料および保存料などの1種以上の薬剤を含んでもよい。
【００９１】
錠剤と共に用いるのに特に好適な製薬上許容し得る賦形剤としては、例えば、セルロース、炭酸カルシウムもしくは炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムもしくはリン酸ナトリウムなどの不活性希釈剤；クロスカルメロースナトリウム、架橋ポビドン、トウモロコシスターチ、もしくはアルギン酸などの崩壊剤；ポビドン、スターチ、ゼラチンもしくはアカシアなどの結合剤；ならびにステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸もしくはタルクなどの潤滑剤が挙げられる。錠剤はコーティングされていなくてもよく、またはマイクロカプセル化などの公知の技術によりコーティングして、胃腸管における崩壊および吸収を遅延させることによって、より長い時間に渡る持続的作用を提供することができる。例えば、モノステアリン酸グリセリルもしくはジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延材料を単独で、またはワックスと共に用いることができる。
【００９２】
経口使用のための製剤を、活性成分を、例えば、セルロース、ラクトース、リン酸カルシウムもしくはカオリンなどの不活性固体希釈剤と混合した硬質ゼラチンカプセルとして、または活性成分を、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ピーナッツ油、液体パラフィンもしくはオリーブ油などの水性もしくは油性媒体と混合した柔質ゼラチンカプセルとして提供することもできる。
【００９３】
別の実施形態においては、本発明の医薬組成物を、懸濁液の製造にとって好適な少なくとも1種の製薬上許容し得る賦形剤との混合物中の本発明の化合物を含む懸濁液として製剤化することができる。さらに別の実施形態においては、本発明の医薬組成物を、好適な賦形剤の添加による、懸濁液の調製にとって好適な分散性粉末剤および顆粒剤として製剤化することができる。
【００９４】
懸濁液と組合わせた使用に好適な賦形剤としては、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴム、アカシアゴムなどの懸濁剤、天然のホスファチド(例えば、レシチン)、アルキレンオキシドと脂肪酸(例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン)との縮合生成物、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコール(例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール)との縮合生成物、エチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導された部分エステル(例えば、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン)との縮合生成物などの分散剤または湿潤剤；ならびにカルボマー、蜜蝋、硬質パラフィンもしくはセチルアルコールなどの増ちょう剤が挙げられる。また、懸濁液は酢酸、メチルおよび／もしくはn-プロピルp-ヒドロキシ安息香酸などの1種以上の保存剤；1種以上の着色料；1種以上の香料；ならびにスクロースもしくはサッカリンなどの1種以上の甘味料を含んでもよい。
【００９５】
本発明の医薬組成物はまた、水中油乳濁液の形態にあってもよい。油相は、オリーブ油もしくはピーナッツ油などの野菜油、液体パラフィンなどの鉱物油、またはこれらの混合物であってよい。好適な乳化剤としては、アカシアゴムおよびトラガカントゴムなどの天然ゴム；大豆レシチン、脂肪酸から誘導されるエステルもしくは部分エステルなどの天然ホスファチド；モノオレイン酸ソルビタンなどのヘキシトール無水物；ならびにこれらの部分エステルと、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンなどのエチレンオキシドとの縮合生成物が挙げられる。乳濁液はまた、甘味料および香料を含んでもよい。シロップ剤およびエリキシル剤を、グリセロール、ソルビトールまたはスクロースなどの甘味料と共に製剤化することができる。そのような製剤はまた、緩和剤、保存剤、香料または着色料を含んでもよい。
【００９６】
従って、本発明の医薬組成物は、滅菌注入可能な水性乳濁液または油性懸濁液などの、滅菌注入可能な調製物の形態にあってよい。この乳濁液または懸濁液を、上記の好適な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用いて当業界で公知の方法に従って製剤化することができる。また、滅菌注入可能な調製物は1,2-プロパン-ジオール中の溶液などの、非毒性の非経口的に許容し得る希釈剤または溶媒中の滅菌注入可能な溶液または懸濁液であってもよい。滅菌注入可能な調製物を凍結乾燥された粉末として調製することもできる。特に用いることができる許容し得るビヒクルおよび溶媒は、水、リンゲル液、および等張性塩化ナトリウム溶液である。さらに、滅菌固定された油を、溶媒または懸濁媒体として用いることができる。この目的のために、合成モノ-またはジ-グリセリドなどの、任意のブランドの固定油を用いることができる。さらに、同様に、オレイン酸などの脂肪酸を注入可能な調製物中で用いることができる。
【００９７】
一般的には、本発明の方法において有用な本発明の化合物は、実質的に水に不溶性であり、多くの製薬上許容し得るプロトン溶媒および野菜油にほとんど不溶性である。しかしながら、一般的には、前記組成物は中鎖脂肪酸(例えば、カプリル酸およびカプリン酸)またはトリグリセリドに可溶性であり、中鎖脂肪酸のプロピレングリコールエステル中で高い可溶性を有する。また本発明に包含されるのは、例えば、エステル化、グリコシル化、PEG化などにより、送達にとってより好適となるように(例えば、可溶性、生物活性、風味のよさの増加、副反応の減少など)する化学的もしくは生化学的部分の置換または付加により改変された化合物である。
【００９８】
好ましい実施形態においては、本発明の化合物を、低い溶解性の化合物にとって好適な液体基剤の製剤中、経口投与のために製剤化することができる。液体基剤の製剤は、一般的にはそのような化合物の経口生体利用率を増加させることができる。そのようなものとして、本発明の好ましい医薬組成物は治療上または予防上有効量の本発明の化合物と共に、中鎖脂肪酸またはそのプロピレングリコールエステル(例えば、カプリルおよびカプリン脂肪酸などの食用脂肪酸のプロピレングリコールエステル)からなる群より選択される少なくとも1種の製薬上許容し得る賦形剤およびポリオキシル40水素化カストル油などの製薬上許容し得る界面活性剤を含む。
【００９９】
別の好ましい実施形態においては、シクロデキストリンを水性の可溶性増強剤として添加することができる。好ましいシクロデキストリンとしては、α-、β-およびγ-シクロデキストリンのヒドロキシプロピル、ヒドロキシエチル、グルコシル、マルトシルおよびマルトトリオシル誘導体が挙げられる。特に好ましいシクロデキストリン可溶性増強剤はヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン(HPBC)であり、上記の組成物のいずれかに添加して、本発明の化合物の水性の可溶性特性をさらに改良することができる。一実施形態においては、前記組成物は0.1〜20％のヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン、より好ましくは1〜15％のヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン、およびさらにより好ましくは2.5〜10％のヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンを含む。用いる可溶性増強剤の量は、前記組成物中の本発明の化合物の量に依存するであろう。
【０１００】
F. 組合せ治療
本発明のいずれかの化合物と、治療を必要とする患者への同時的または連続的投与を意図された、単回投与剤形、または個別の投与剤形の化合物などの、癌の治療において有用な1種以上の他の活性成分とを組合わせることも可能である。連続的に投与する場合、この組合せを2回以上の投与で投与することができる。代替的な実施形態においては、本発明の1種以上の化合物と1種以上の追加の活性成分を異なる経路により投与することができる。
【０１０１】
当業者であれば、種々の活性成分を、本発明の化合物のVEGF阻害活性および／もしくは抗血管新生活性を増加させるか、または相乗的に増強する本発明の化合物と組合わせて投与することができることを認識できるであろう。
【０１０２】
本発明の方法に従って、活性成分の組合せを、(1)共に製剤化し、混合製剤中で同時に投与するか、もしくは送達する；(2)個別の製剤として交互に、または平行して送達する；または(3)当業界で公知の任意の他の組合せ治療計画により投与することができる。交互的治療で送達する場合、本発明の方法は、例えば、別々の溶液、乳濁液、懸濁液、錠剤、ピルもしくはカプセル剤で、または別々のシリンジ中の異なる注入液により、前記活性成分を投与または送達することを含んでよい。一般的には、交互的治療の間、各活性成分の有効用量を連続的、すなわち一連的に投与するが、同時的治療においては、2種以上の活性成分の有効用量を一緒に投与する。様々な順序の断続的な組合せ治療を用いることもできる。
【０１０３】
本発明の理解を援助するために、以下の実施例が含まれる。本発明に関する実験は、勿論、当業者の認識範囲内にあり、本明細書に記載の本発明の範囲内、および以下の特許請求の範囲内にあると考えられる、本発明および現在公知であるか、または後に開発される本発明のそのような変更を特異的に限定するものとして解釈されるべきではない。
【実施例】
【０１０４】
本発明を、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるものではなく、本発明をより完全に例示するために提供される、以下の非限定的な実施例を参照してより詳細に説明する。実施例は本発明の特定の化合物の調製、ならびにin vitroおよび／またはin vivoでのこれらの化合物の試験を例示する。当業者であれば、これらの実施例に記載の技術は本発明の実施において良好に機能する本発明者らにより記載される技術であり、そのようなものとして、その実施のための好ましい様式を構成することを理解できるであろう。しかしながら、当業者は本発明の開示に照らして、開示される特定の方法において多くの変更を行い、本発明の精神および範囲を逸脱することなく同様の、もしくは類似した結果を依然として取得することができることを理解することが理解されるべきである。
【０１０５】
実施例1：本発明の化合物の調製
式Iの化合物を、スキームIに従って調製することができる。例えば、化合物23、33、35および40を以下のように調製することができる。以下の表4に記載のものなどの、本発明の他の好ましい化合物を同様に調製することができる。
【０１０６】
実施例1A：化合物2(ラセミ体)の合成
【化７】
2007529533.tif 000030
【０１０７】
スキームIに従って、p-アニサルデヒド(2.16 g, 15,9 mmol, 1.93 mL)を、室温にて、100 mLの酢酸中の5-ブロモトリプトファン(3 g, 10.6 mmol)の懸濁液に添加する。次いで、反応混合物をシリコン油浴中、125℃で加熱して還流し、約3時間20分間、その温度を維持する。得られた溶液を減圧下で濃縮する。残渣をジクロロメタン、ジエチルエーテルおよびヘキサンで磨砕して粉末状の褐色固体を得る。次いで、所望の生成物の得られた酸塩を回収し、ヘキサンで3回洗浄した後、精製することなく次の工程で用いる。
【０１０８】
回収された褐色固体を60 mLのアセトン中に懸濁する。この懸濁液をトリエチルアミン(14.37 mmol, 2 mL)およびシクロヘキシルイソチオシアネート(2.03 g, 14.37 mmol, 2.04 mL)で処理して、均質な溶液を得る。反応混合物を約70℃で約2.5時間還流した後、減圧下で濃縮する。残渣を、ヘキサン中の10％〜15％〜20％のEtOAcを含むシリカゲル上で精製して、4.13 gの所望の生成物(82％)、MS(MH+) m/z = 525.23, Rt:4.23を得る。
【０１０９】
実施例1B：化合物14の合成
【化８】
2007529533.tif 000031
【０１１０】
スキームIに従って、p-アニサルデヒド(0.18 ml, 1.5 mmol)を、AcOH(1.5 ml)中の5-ブロモトリプトファン(283 mg, 1.0 mmol)に添加し、キャップ付きチューブ中、約110℃に加熱する。約2.5時間後、反応混合物を室温まで冷却し、回転式蒸発装置上で濃縮する。濃い油残渣をCH3CN(2 ml)中で攪拌し、褐色固体を沈降させる。固体を濾過し、CH3CN(2 x)で洗浄したところ、明褐色粉末として、化合物5(0.20 g、50％収率)が得られる。この生成物はLC-MSによると95％の純度であり、3％の4および2％のp-アニサルデヒドを含み、これをさらに精製することなく用いる。MS(ES+) m/z:401/403.13, Rt:2.45分。
【０１１１】
2-ブタノン(1.5 ml)およびTEA(0.2 ml)中の5(55.5 mg, 1.5 mmol)の溶液に、シクロヘキシルイソシアネートを加える。混合物をキャップ付きチューブ中、100℃で加熱する。2時間後、反応混合物を室温まで冷却し、回転式蒸発装置上で濃縮した。残渣を塩化メチレン中の2％ EtOAcを用いてクロマトグラフィーにかけたところ、白色粉末(45 mg, 59％収率)として6が得られた。MS(ES+) m/z: 508/510.23, Rt: 4.20分。
【０１１２】
実施例1C：化合物16の合成
【化９】
2007529533.tif 000032
【０１１３】
スキームIに従って、p-アニサルデヒド(0.25 ml, 2.0 mmol)を、0.1 N H2SO4(5 ml)中の化合物1(218 mg, 1.0 mmol)の懸濁液に添加する。反応混合物を一晩、約100℃に加熱する。次いで、反応混合物を室温まで冷却し、濾過し、固体を水(2 x)、ヘキサン(3 x)およびエーテル(2 x)で洗浄し、空気中で乾燥すると、褐色粉末(320 mg, 95％収率)として2が得られる。生成物はLC-MSにより4.7％のp-アニサルデヒドを含んでいたが、さらに精製することなくこれを用いる。MS(ES+) m/z: 337.25, Rt: 2.36分。
【０１１４】
次いで、シクロヘキシルチオイソシアネート(28μl、0.2 mmol)を、10 mlのスクリューチューブ中、アセトン(2.0 ml)中の2(67 mg, 0.2 mmol)およびDMSO(0.4 ml)の混合物に添加する。このチューブにキャップを付け、混合物を約70℃(熱遮断温度)で約36時間加熱する。次いで、反応混合物を乾燥するまで濃縮し、クロマトグラフィーにかけると(ヘキサン中の10％ EtOAc)、黄色固体として3(化合物16)(55 mg、60％収率)が得られる。MS(ES+) m/z: 460.27, Rt: 4.64分。
【０１１５】
実施例1D：化合物17の合成
【化１０】
2007529533.tif 000033
【０１１６】
再度、式Iに従って、化合物11を、化合物7(0.72 g, 3.0 mmol)およびピペロナールから合成すると、0.87 gの収量、79％収率の8が得られる。生成物8はLC-MSにより96％の純度であり、これをさらに精製することなく用いる。MS(ES+) m/z: 371.18。次いで、SOCl2(0.15 ml, 2.0 mmol)を、室温にて、MeOH中の8(0.66 g, 1.78 mmol)の懸濁液に添加する。固体を溶解し、得られた溶液を一晩、約65℃に加熱する。反応混合物を室温まで冷却し、乾燥するまで回転式蒸発装置上で濃縮する。粗生成物9を、さらに精製することなく10の合成に用いる。
【０１１７】
次いで、TEA(0.74 ml, 5.34 mmol)を、約0℃にて、CH2Cl2中の粗い9の懸濁液に加え、透明な溶液を得る。塩化クロロアセチル(0.34 ml, 4.27 mmol)を前記溶液に添加する。約30分後、反応混合物を水で希釈し、EtOAcで抽出する。合わせた有機相を濃縮し、塩化メチレン中の5％ EtOAcを用いてクロマトグラフィーにかけると、褐色の油として10(0.63 g, 8からの全体の収率77％)が得られる。MS(ES+) m/z: 461.16, Rt: 3.56分。
【０１１８】
次いで、シクロヘキシルアミン(34μl, 0.3 mmol)をエタノール(2 ml)中の10(46 mg, 0.1 mmol)の溶液に添加する。混合物を一晩還流し、室温まで冷却し、回転式蒸発装置上で濃縮する。残渣を、塩化メチレン中の5％ EtOAcを用いてクロマトグラフィーにかけると、白色粉末として11(23 mg, 47％収率)が得られる。MS(ES+) m/z: 492.31, Rt: 3.57分。
【０１１９】
実施例1E：キラル出発材料の調製
本発明の化合物を、必要に応じて、鏡像異性的に純粋な出発材料を用いることにより、鏡像異性的に純粋な組成物として調製する、好ましくは以下のように調製することができる。
【０１２０】
5-ブロモトリプトファンの酵素的分解
【化１１】
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【０１２１】
スキームIIに従って、ラセミ体エステル(4.15 g, 13.34 mmol)をアセトニトリル(60 ml)に溶解し、水(20 ml)で希釈する。混合物のpHを、1N HClを用いて7.0に調整する。塩化カルシウム(230 mg)およびα-キモトリプシン(40 mg)を添加する。混合物のpHを、自動化力価測定装置の使用により、分解を通して0.5 N NAOHを用いて7.0に維持する。反応をLC-MSによりモニターする。約3時間後、追加のα-キモトリプシン(30 mg)を添加し、非対称的加水分解をさらに約3時間のうちに完了させる。得られた白色の雲状混合物を回転式蒸発装置上で濃縮してアセトニトリルを除去し、EtOAc(100 ml)で希釈し、5 N NaOHによりpH = 12-13に塩基性化する。次いで、混合物をセライトを通して濾過する。水性画分をEtOAc(3 x)で抽出する。合わせた有機相を0.5 N NaOHで洗浄し、Na2SO4上で乾燥し、濃縮すると、褐色固体として未加水分解D-異性体(1.97 g, 48％収率)が得られる。キラルクロマトグラフィー、97％純度および>99％ ee。合わせた水相をpH = 6.0に酸性化する。得られた白色固体を濾過し、水(2 x)で洗浄し、オーブン(95℃)中で乾燥すると、S-異性体(1.54 g, 42％収率)が得られる。LC-MS: 100％純度。
【０１２２】
5-ブロモトリプトファンのキラル合成
あるいは、鏡像異性的に純粋な出発材料を、以下のようにスキームIIIに従って合成することができる(例えば、Taniguchi, M.; Hino, T. Tetrahedron 1981, 37, 1487; Irie, K.; Ishida, A.; Nakamura, T.; Oh-Ishi, T. Chem. Pharm. Bull. 1984, 32, 2126を参照)。
【化１２】
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【０１２３】
メチル-5-ブロモ-(D)-トリプトファンエステルを同じ順序で調製することもできる。
【０１２４】
実施例2：低酸素誘導性内因性VEGF発現に対する効果を評価するためのアッセイ
低酸素誘導性内因性VEGF発現を調節する本発明の化合物の能力を以下のように分析することができる。VEGFタンパク質レベルをELISAアッセイ(R＆D System)によりモニターすることができる。簡単に述べると、HeLa細胞を、本発明の化合物の存在下または非存在下、低酸素条件(1％ O2, 5％ CO2, 窒素で平衡化)下で24〜48時間培養することができる。次いで、条件化培地をELISAによりアッセイし、VEGF濃度を、各アッセイの標準的なELISA曲線から算出することができる。
【０１２５】
用量応答分析をELISA分析および上記の条件を用いて実施することができる。用量応答ELISAのための条件は上記のものと同様である。例えば、一連の7個の異なる濃度を分析することができる。平行して、用量応答細胞毒性アッセイをELISAと同じ条件下でCellTiter Glo (Promega)を用いて行って、VEGF発現の阻害が細胞毒性に起因するものではないことを確認することができる。用量応答曲線を、阻害率(％)対化合物の濃度を用いてプロットし、EC50およびCC50値を、最大の阻害を100％および最小の阻害を0％と設定して各化合物について作製することができる。本発明の好ましい化合物は、50未満、好ましくは10未満、より好ましくは2未満、さらにより好ましくは0.5未満、およびさらにより好ましくは0.01未満のEC50を有するであろう。
【０１２６】
図1は、本発明の典型的な化合物、化合物2が低酸素条件下で腫瘍細胞中の内因性VEGF産生を阻害する能力を示す。ELISAのEC50は0.0025であるが、そのCC50(0.22μM細胞毒性)は20 nmより大きい。一連の好ましい本発明の化合物のEC50を表4に提供する。
【表６】
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【０１２７】
2007529533.tif 000037
【０１２８】
2007529533.tif 000038
【０１２９】
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【０１３０】
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【０１３１】
2007529533.tif 000041
【０１３２】
2007529533.tif 000042
【０１３３】
表中、
1 *, > 1μM(1000 nM)
2 *, 0.2〜1μM(200 nM〜1000 nM)
3 *, 0.04μM〜0.2μM(40 nM〜200 nM)
4 *, 0.008μM〜0.04μM (8 nM〜40 nM)
5 *, < 0.008μM (<8 nM)である。
【０１３４】
実施例3：本発明の化合物はin vivoでの腫瘍増殖PDモデルにおけるVEGF発現および腫瘍増殖を阻害する
本発明の化合物はまた、腫瘍内VEGFレベルを評価する以下の薬力学モデルにおける活性も示す。簡単に述べると、HT1080細胞(ヒト線維肉腫細胞系)をヌードマウスに皮下的に埋め込むことができる。7日後、マウスに、7日間に渡って、所望の用量、例えば、200 mg/kg/日で経口的に化合物を投与することができる。次いで、腫瘍をマウスから切り出し、プロテイナーゼ阻害剤を含むTris-HClバッファー中で均質化することができる。Moulderら、Cancer Res. 61(24):8887-95 (2001)。続いて、腫瘍内VEGFレベルをヒトVEGF ELISAキット(R&D System)を用いて測定する。ホモジェネートのタンパク質濃度をBio-Rad Proteinアッセイキットを用いて測定し、腫瘍内VEGFレベルをタンパク質濃度に対して正規化する。
【０１３５】
本発明の好ましい化合物は、100 mm3の腫瘍上で1週間用いる場合、ビヒクルで処理した対照群(データは示さない)と比較して、少なくとも50％、腫瘍増殖を一般的に阻害するであろう。
【０１３６】
実施例4：本発明の化合物はPDE5の活性に影響しない
本発明の化合物を、ホスホジエステラーゼ5(PDE5)活性に対するその効果を評価するために試験する。PDE5活性に対する効果を、Molecular Devicesから入手したHigh-Efficiency Fluorescence Polarization Assay(HEFP)キットを用いて決定する。HEFPアッセイは、基質としてフルオレセイン標識されたcGMPの誘導体を用いることによりPDE-5の活性を測定するものである。PDE-5により加水分解される場合、フルオレセイン標識されたcGMP誘導体は結合試薬に結合することができる。cGMP基質：結合試薬複合体は高度に極性化された蛍光状態をもたらす。
【０１３７】
図2はPDE-5活性に対する本発明の化合物の結果を示す。組換えPDE5(CalBioChem)とcGMP基質を混合した後、混合物を、化合物もしくは陽性対照(Tadalafil)の存在下または非存在下、室温にて45分間インキュベートする。反応を、結合試薬の添加に際して停止させる。蛍光極性化を、製造業者により推奨される設定を用いて、Viewlux上で決定する。図2から明らかであるように、本発明の化合物は陽性対照と比較してPDE-5の活性を阻害しない。
【０１３８】
本明細書で引用される全ての刊行物および特許出願は、それぞれ個々の刊行物または特許出願が特異的かつ個別に参照により組み入れられると示された場合と同じ程度に参照により本明細書に組み入れられるものとする。
【０１３９】
特定の実施形態を上記で詳細に説明してきたが、当業者であれば、教示から逸脱することなく、実施形態において多くの変更が可能であることを明確に理解できるであろう。そのような変更は全て本発明の特許請求の範囲内に包含されることを意図される。
【図面の簡単な説明】
【０１４０】
【図１】本発明の特定の化合物によるVEGF発現の阻害を示す。
【図２】ホスホジエステラーゼ5(PDE-5)の活性が本発明の特定の化合物により影響されないことを示す。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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