(57)【要約】  ビマトプロスト中間体の選択的酵素アセチル化方法が提供される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記成分：
（ａ）（S）−Ｉ、（1S, 5R, 6R, 7R）−６−[（3S）−３−ヒドロキシ−５−フェニル−１−ペンテニル]−７−[（４−ベンゾイル）オキシ]−２−オキサビシクロ[3, 3, 0]オクタン−３−オン、及び（R）−Ｉ、（1S, 5R, 6R, 7R）−６−[（3R）−３−ヒドロキシ−５−フェニル−１−ペンテニル]−７−[（４−ベンゾイル）オキシ]−２−オキサビシクロ[3, 3, 0]オクタン−３−オン、又は
（ｂ）（S）−III、（1S, 5R, 6R, 7R）−６−[（3S）−３−アセトキシ−５−フェニル−１−ペンテニル]−７−[（４−ベンゾイル）オキシ]−２−オキサビシクロ[3, 3, 0]オクタン−３−オン、及び（R）−III、（1S, 5R, 6R, 7R）−６−[（3S）−３−アセトキシ−５−フェニル−１−ペンテニル]−７−[（４−ベンゾイル）オキシ]−２−オキサビシクロ[3, 3, 0]オクタン−３−オン、
のいずれかを含んで成る混合物における（R）−エピマー基質の選択的転換方法であって、ここで（ａ）に関しては、前記混合物が、酵素の存在下でアセチル化剤と一緒にされ、アセチル化反応混合物が形成され、ここで（R）−Ｉ基質が（R）−III に選択的に転換され、そして（ｂ）に関しては、前記混合物が酵素の存在下でC1-6アルコールと一緒にされ、アルコーリシス反応混合物が形成され、ここで（R）−III 基質が（R）−Ｉに選択的に転換に転換される、
ことを特徴とする方法。
【請求項２】
前記反応混合物がさらに溶媒を含んで成る請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記溶媒が、C2-C8直鎖、枝分れ鎖、又は環状エーテル、C2-C8ケトン、塩素化されたC1-C4炭化水素、及びトリ（C1-C6アルキル）シリル基である請求項２記載の方法。
【請求項４】
前記溶媒が、メチルtert−ブチルエーテル（MTBE）、ジイソプロピルエーテル、メチルエチルケトン、ジクロロメタン、テトラクロロメタン、アセトン、メチルイソブチルケトン（MIBK）及びTHFから成る群から選択される請求項３記載の方法。
【請求項５】
前記溶媒が、MTBE又はメチルエチルケトンである請求項４記載の方法。
【請求項６】
前記基質が、約0.1〜約20重量/体積％の量で溶媒に存在する請求項２〜５のいずれか１項記載の方法。
【請求項７】
前記基質が、約0.1〜約３重量/体積％の量で溶媒に存在する請求項６記載の方法。
【請求項８】
前記（S）−I及び（R）−I、又は（R）−III 及び（S）−III が、溶解性限界まで、いずれの比率ででも存在する請求項１〜７のいずれか１項記載の方法。
【請求項９】
前記酵素が固定されているか又は天然のままである請求項１〜８のいずれか１項記載の方法。
【請求項１０】
前記酵素がリパーゼ酵素である請求項１〜９のいずれか１項記載の方法。
【請求項１１】
前記リパーゼ酵素が、微生物、哺乳類及び植物リパーゼから成る群から選択される請求項10記載の方法。
【請求項１２】
前記リパーゼが、カンジダ・アンタルクチカ（Candida anntarctica）、シュードモナスsp. (Pseudomonas sp.)、シュードモナス・セパシア（Pseudomonas cepacia）、アルカリゲネスsp. （Alcaligenes sp.）、シュードモナス・スツゼリ（Pseudomonas stutzeri）、カンジダ・ルゴサ（Candida rugosa）、アスペルギラス・ニガー（Aspergillus niger）及びムコル・メイヘイ（Mucor meihe）の少なくとも１つから単離される請求項11記載の方法。
【請求項１３】
前記リパーゼが、シュードモナス・セパシアリパーゼ、シュードモナス・スツゼリリパーゼ又はアルカリゲネスsp. リパーゼから単離される請求項12記載の方法。
【請求項１４】
前記アセチル化又はアルコーリシス反応混合物が、約10〜約250時間、撹拌される請求項１〜13のいずれか１項記載の方法。
【請求項１５】
前記アセチル化又はアルコーリシス反応混合物が、約24〜約60時間、撹拌される請求項14記載の方法。
【請求項１６】
前記アセチル化又はアルコーリシス反応混合物が、約24〜約52時間、撹拌される請求項15記載の方法。
【請求項１７】
前記アセチル化又はアルコーリシス反応混合物が、約24〜約250時間、撹拌される請求項14記載の方法。
【請求項１８】
前記アセチル化又はアルコーリシス反応混合物が、約90〜約160時間、撹拌される請求項17記載の方法。
【請求項１９】
前記アセチル化又はアルコーリシス反応混合物が、約10℃〜約70℃の温度で撹拌される請求項１〜18のいずれか１項記載の方法。
【請求項２０】
前記アセチル化又はアルコーリシス反応混合物が、約25℃〜約55℃の温度で撹拌される請求項19記載の方法。
【請求項２１】
前記アセチル化剤が、C2-C6アルキルアセテート、C2-C6アルケニルアセテート又はC5-C8ベンゾイルアセテートである請求項１〜20のいずれか１項記載の方法。
【請求項２２】
前記アセチル化剤が、酢酸ビニル、酢酸エチル、酢酸ブチル、酪酸ビニル及びプロピオン酸ビニルから成る群から選択される請求項21記載の方法。
【請求項２３】
前記C1-6アルコールが、C2-5アルコールである請求項１〜22のいずれか１項記載の方法。
【請求項２４】
前記C1-6アルコールが、エタノール又はブタノールである請求項23記載の方法。
【請求項２５】
前記アセチル化剤又はC1-6アルコール及び前記基質が、少なくとも約1:1のアセチル化剤又はアルコール：基質のモル比で存在する請求項１〜24のいずれか１項記載の方法。
【請求項２６】
前記アセチル化剤又はC1-6アルコール及び前記基質が、少なくとも約2:1〜約3:1のアセチル化剤又はアルコール：基質のモル比で存在する請求項25記載の方法。
【請求項２７】
（ａ）における混合物がさらに、還元された（R）−Iを含んで成り、（R）−I及び還元された（R）−Iの両者が選択的にアセチル化される請求項１〜26のいずれか１項記載の方法。
【請求項２８】
前記分離が、クロマトグラフィー分離である請求項27記載の方法。
【請求項２９】
前記（R）−エピマーが、還元された形で存在する請求項１〜26のいずれか１項記載の方法。
【請求項３０】
前記（S）−I又は（S）−III が、還元された形で存在する請求項１〜26のいずれか１項記載の方法。
【請求項３１】
a. 請求項１〜30のいずれか１項記載の方法に従って、（R）−Ｉ、（1S, 5R, 6R, 7R）−６−[（3R）−３−ヒドロキシ−５−フェニル−１−ペンテニル]−７−[（４−ベンゾイル）オキシ]−２−オキサビシクロ[3, 3, 0]オクタン−３−オンを（R）−III、（1S, 5R, 6R, 7R）−６−[（3R）−３−アセトキシ−５−フェニル−１−ペンテニル]−７−[（４−ベンゾイル）オキシ]−２−オキサビシクロ[3, 3, 0]オクタン−３−オンに選択的に転換し；
b. (S)−Iを回収し；そして
c. (S)−Iをビマトプロスト（bimatoprost）に転換することを含んで成る、ビマトプロストの分離方法。
【請求項３２】
a. 請求項１〜30のいずれか１項記載の方法に従って、（R）−III、（1S, 5R, 6R, 7R）−６−[（3S）−３−アセトキシ−５−フェニル−１−ペンテニル]−７−[（４−ベンゾイル）オキシ]−２−オキサビシクロ[3, 3, 0]オクタン−３−オンを（R）−Ｉ、（1S, 5R, 6R, 7R）−６−[（3R）−３−ヒドロキシ−５−フェニル−１−ペンテニル]−７−[（４−ベンゾイル）オキシ]−２−オキサビシクロ[3, 3, 0]オクタン−３−オンに選択的に転換し；
b. (S)−IIIを回収し；
c. (S)−IIIを(S)−Iに転換し；そして
d. (S)−Iをビマトプロストに転換することを含んで成る、ビマトプロストの分離方法。
【請求項３３】
ビマトプロストの製造のためへの請求項１〜32のいずれか１項記載の方法の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野：
本発明のプロスタグランジンビマトプロスト（bimatoprost）に関する。特に、本発明は、ビマトプロスト中間体の選択的酵素アセチル化又はアルコーリシスのための方法に向けられる。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景：
ビマトプロスト、すなわち（5Z）−７−［（1R, 2R, 3R, 5S）−３，５−ジヒドロキシ−２−［（1E, 3S）−３−ヒドロキシ−５−フェニル−１−ペンテニル］シクロペンチル］−５−N−エチルヘプテンアミドは、プロスタグランジンPGF2の合成誘導体である。それは眼内圧調節及び開放角緑内障の処理のために示されており、そしてLUMIGAN（商標）としてAllerganから入手できる：
【０００３】
【化１】
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【０００４】
（S）−I中間体、（1S, 5R, 6R, 7R）−６−[（3S）−３−ヒドロキシ−５−フェニル−１−ペンテニル]−７−[（４−ベンゾイル）オキシ]−２−オキサビシクロ[3, 3, 0]オクタン−３−オン：
【０００５】
【化２】
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【０００６】
化合物（S）−Iは、１対のエピマーの１つであり、そして従って、その対応する（R）−I化合物、（1S, 5R, 6R, 7R）−６−[（3R）−３−ヒドロキシ−５−フェニル−１−ペンテニル]−７−[（４−ベンゾイル）オキシ]−２−オキサビシクロ[3, 3, 0]オクタン−３−オン：
【０００７】
【化３】
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化合物（R）−Iとは、わずか１つの不斉炭素、すなわち３位置での炭素で異なる。
【０００８】
ビマトプロストの調製においては、（S）−I中間体のみが、薬剤の活性形に導く。１つの例においては、アメリカ特許第3,969,396号は、ビマトプロストの合成のための次の工程を開示する：
【０００９】
【化４】
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【００１０】
必要とされる立体化学を、例えばクロマトグラフィー及び結晶化により得るために使用される多くの方法が存在する。現在、（S）−I中間体の場合、ジアステレオマー混合物の最も広く実施される分離方法は、クロマトグラフィーを通してである。しかしながら、この立体選択的合成は、その多段階性質及び費用のために規模を拡大するには好ましくない方法である。クロマトグラフィー分離の困難性は、２種のエピマーがそれらの親和性において高く異ならず、そして従って、それらの滞留時間は、特に大規模に、１つのクロマトグラフィー段階において効果的な分離を可能にするには接近過ぎる事実に由来する。従って、エピマーの混合物からの（S）−I中間体の分離方法が強く所望される。本発明は、クロマトグラフィー分離の効能を高く改良することにより、そのような方法を提供する。
【発明の開示】
【００１１】
発明の要約：
本発明は、酵素、好ましくはリパーゼ酵素の存在下でビマトプロスト中間体の（R）エピマーの選択的転換、好ましくはアセチル化又はアルコーリシスのための方法に向けられる。
【００１２】
（R）エピマーは、（R）−Ｉ、（1S, 5R, 6R, 7R）−６−[（3R）−３−ヒドロキシ−５−フェニル−１−ペンテニル]−７−[（４−ベンゾイル）オキシ]−２−オキサビシクロ[3, 3, 0]オクタン−３−オン及び（R）−III、（1S, 5R, 6R, 7R）−６−[（3R）−３−アセトキシ−５−フェニル−１−ペンテニル]−７−[（４−ベンゾイル）オキシ]−２−オキサビシクロ[3, 3, 0]オクタン−３−オンから成る群から選択され、そして（S）エピマーは、（S）−Ｉ、（1S, 5R, 6R, 7R）−６−[（3S）−３−ヒドロキシ−５−フェニル−１−ペンテニル]−７−[（４−ベンゾイル）オキシ]−２−オキサビシクロ[3, 3, 0]オクタン−３−オン及び（S）−III、（1S, 5R, 6R, 7R）−６−[（3S）−３−アセトキシ−５−フェニル−１−ペンテニル]−７−[（４−ベンゾイル）オキシ]−２−オキサビシクロ[3, 3, 0]オクタン−３−オンから成る群から選択される。
【００１３】
（R）エピマーが（R）−Iである場合、（S）エピマーは（S）−Iであり、そして（R）−Iエピマーのみがアセチル化剤の存在下で、アセチル化された化合物（R）−III にアセチル化される。（R）エピマーが（R）−III である場合、（S）エピマーは（S）−III であり、そして（R）−III エピマーは好ましくは、C1-6アルコールの存在下でアルコーリシスにより（R）−Iに転換される。
【００１４】
さらなる観点においては、本発明は、
（ａ）（R）及び（S）エピマーを含んで成る混合物における（R）エピマーを選択的に転換し；
（ｂ）前記（S）−I中間体を回収し、又は他方では、（S）−III 中間体を回収し、そして次に（S）−III 中間体を（S）−I中間体に転換することにより（S）−I中間体を得；そして
（ｃ）前記（S）−I中間体をビマトプロストに転換することを含んで成る、ビマトプロストの調製方法に向けられる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
発明の特定の記載：
本明細書に置いて使用される場合、用語“（S）−I”とは、化合物（1S, 5R, 6R, 7R）−６−[（3S）−３−ヒドロキシ−５−フェニル−１−ペンテニル]−７−[（４−ベンゾイル）オキシ]−２−オキサビシクロ[3, 3, 0]オクタン−３−オンを意味する。
本明細書に置いて使用される場合、用語“（S）−III”とは、化合物（1S, 5R, 6R, 7R）−６−[（3S）−３−アセトキシ−５−フェニル−１−ペンテニル]−７−[（４−ベンゾイル）オキシ]−２−オキサビシクロ[3, 3, 0]オクタン−３−オンを意味する。
【００１６】
本明細書に置いて使用される場合、用語“（R）−I”とは、化合物（1S, 5R, 6R, 7R）−６−[（3R）−３−ヒドロキシ−５−フェニル−１−ペンテニル]−７−[（４−ベンゾイル）オキシ]−２−オキサビシクロ[3, 3, 0]オクタン−３−オンを意味する。
本明細書に置いて使用される場合、用語“（R）−III”とは、化合物（1S, 5R, 6R, 7R）−６−[（3R）−３−アセトキシ−５−フェニル−１−ペンテニル]−７−[（４−ベンゾイル）オキシ]−２−オキサビシクロ[3, 3, 0]オクタン−３−オンを意味する。
【００１７】
本明細書に置いて使用される場合、用語“還元された（R）−I”とは、化合物（1S, 5R, 6R, 7R）−６−[（3R）−３−ヒドロキシ−５−フェニル−１−ペンテニル]−７−[（４−ベンゾイル）オキシ]−２−オキサビシクロ[3, 3, 0]オクタン−３−オンを意味する。
本明細書に置いて使用される場合、用語“還元された（R）−III”とは、化合物（1S, 5R, 6R, 7R）−６−[（3R）−３−アセトキシ−５−フェニル−１−ペンテニル]−７−[（４−ベンゾイル）オキシ]−２−オキサビシクロ[3, 3, 0]オクタン−３−オンを意味する。
【００１８】
本明細書に置いて使用される場合、用語“還元された（S）−III”とは、化合物（1S, 5R, 6R, 7R）−６−[（3S）−３−アセトキシ−５−フェニル−１−ペンテニル]−７−[（４−ベンゾイル）オキシ]−２−オキサビシクロ[3, 3, 0]オクタン−３−オンを意味する。
本明細書に置いて使用される場合、用語“還元された（S）−I”とは、化合物（1S, 5R, 6R, 7R）−６−[（3S）−３−ヒドロキシ−５−フェニル−１−ペンテニル]−７−[（４−ベンゾイル）オキシ]−２−オキサビシクロ[3, 3, 0]オクタン−３−オンを意味する。
【００１９】
当業者により理解されるように、（S）−I及び（R）−Iは、（S）−III 及び（R）−III のように、エピマーである。すなわち、（S）−Iは、（R）−Iとは形状的に異なり、そして（S）−III は不斉炭素の１つのみ、すなわち、３位置での炭素で（R）−III とは形状的に異なる。すべての他の同等の不斉炭素の形状は、個々の化合物において同じである。化合物の絶対形状の割り当ては、Resulなど., J. Med. Chem. 36: 243-248, 1993により決定されるように、化合物I及びIII のｐ−フェニルベンゾイル誘導体との類似性に基づかれる。
【００２０】
本明細書において使用される場合、用語“酵素的”及び“酵素的に”とは、それぞれの工程が酵素により行われることを意味する。好ましい酵素はリパーゼである。酵素は天然のままか又は固定され得る。酵素を固定するための方法は、当業界において良く知られている。
本発明の方法は、リパーゼ酵素の存在下でのビマトプロスト中間体の（R）エピマーの選択的転換、好ましくはアセチル化又はアルコーリシスのための方法に向けられる。本発明の方法は、非常に選択的であり、その結果、好ましくは、（S）−I中間体又は（S）−III 及びその（R）エピマーの混合物においては、（R）エピマーのみが転換される。
【００２１】
本発明の１つの態様、好ましくはビマトプロストの調製方法においては、本発明は、酵素の存在下で、（R）及び（S）エピマーを含んで成る混合物における（R）エピマーの選択的転換に向けられる。（R）エピマーは、（R）−I及び（R）−III から成る群から選択され、そして（S）エピマーは、（S）−I及び（S）−III から成る群から選択される。
【００２２】
この態様の１つの観点においては、（R）エピマーは主に（R）−Iを含んで成り、（S）エピマーは主に、（S）−Iを含んで成り、そして（R）−Iエピマーは好ましくは、アセチル化剤の存在下でのアセチル化により（R）−III に転換される。好ましくは、本発明によれば、いずれかの比での（S）−I及び（R）−Iを含んで成る混合物が、アセチル化剤、有機溶媒及び酵素と共に混合され、ここでアセチル化剤はまた、溶媒とにも使用され得る。本発明のアセチル化反応は、次の反応スキームに従って進行する：
【００２３】
【化５】
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【００２４】
好ましくは、基質、反応体、及びアセチル化のための反応条件は次の通りである。（R, S）−I基質は、いずれかの相対的量で、及び溶媒における溶解性限界までのいずれかの濃度で（R）−I及び（S）−Iエピマーを含むことができる。好ましくは、基質は、約0.1〜約20重量/体積％、好ましくは約0.1〜約３重量/体積％の量で溶媒に存在する。還元された（R）−I、すなわち二重結合を有さない（R）−Iはまた、基質としても使用され得る。
【００２５】
有用なアセチル化剤は、C2-C6アルキルアセテート、C2-C6アルケニルアセテート又はC5-C8ベンゾイルアセテート、好ましくは酢酸ビニル、酢酸エチル、酢酸エチルフェニル、酢酸ブチル、酪酸ビニル、プロピオン酸ビニル及びビニルベンゾエートを包含するが、但しそれらだけには限定されず、ここで酢酸ビニルが最も好ましい。アセチル化剤：基質のモル比は好ましくは、実質的に理論値、すなわち１：１〜無限の範囲であり、ここでアセチル化剤は溶媒として使用され得る。より好ましくは、アセチル化剤：基質のモル比は、約２：１〜約３：１である。
【００２６】
得られる混合物は好ましくは、約10℃〜約70℃、より好ましくは約25℃〜55℃の温度で撹拌され、その結果、反応は室温で行われ得る。使用される温度に依存して、時間は、約10〜約100時間、より好ましくは約24〜約60時間、及び最も好ましくは約24〜約52時間の範囲であろう。反応型はバッチ又はカラムであり得る。
【００２７】
より好ましくは、元の反応混合物からの（S）−Iは、実質的に未反応のまま存在し、その結果、０〜10％の転換率、好ましくは０〜５％の転換率、より好ましくは０〜２％の転換率、及び最も好ましくはほぼ０の転換率が存在する。
【００２８】
本態様のもう１つの観点においては、（R）エピマーは（R）−III であり、（S）エピマーは（S）−III であり、そして（R）−III エピマーは好ましくはC1-6アルコール、好ましくはC2-5アルコール、最も好ましくはブタノール又はエタノールの存在下で、次のスキームに従って、アルコーリシスにより（R）−Iに転換される：
【００２９】
【化６】
2007537733.tif 000008
【００３０】
次に、その得られる反応混合物は、好ましくは約24〜約250時間、撹拌される。好ましくは、その混合物は、約10℃〜約70℃の温度で撹拌される。
【００３１】
好ましくは、得られる反応混合物は、約40％〜約50％、より好ましくは約45％〜約50％の高い収率で（R）−III を含むであろう。より好ましくは、元の反応混合物からの（S）−Iは実質的に未反応のまま存続し、その結果、０〜10％の転換率、好ましくは０〜５％の転換率、より好ましくは０〜２％の転換率、及び最も好ましくは、ほぼ０の転換率が存在する。選択的アルコーリシスは、単純なクロマトグラフィー分離による（R）−III 化合物からの（S）−Iの分離を可能にする。本発明によれば、（R）−鏡像異性体のみが反応し、（R）−Iの形成を導く。従って、（S）−III は（R）−III から容易に分離され、そして次に、加水分解され、（S）−Iが生成される。
【００３２】
好ましくは、アセチル化及びアルコーリシスの両者においては、酵素は、微生物、例えばカンジダ・アンタルクチカ（Candida anntarctica）、シュードモナスsp. (Pseudomonas sp.)、シュードモナス・セパシア（Pseudomonas cepacia）、アルカリゲネスsp. （Alcaligenes sp.）、シュードモナス・スツゼリ（Pseudomonas stutzeri）、カンジダ・ルゴサ（Candida rugosa）、アスペルギラス・ニガー（Aspergillus niger）及びムコル・メイヘイ（Mucor meihe）からであり、及び微生物、哺乳類及び植物起源の他のリパーゼである。より好ましくは、酵素は、シュードモナス・スツゼリリパーゼ又はアルカリゲネスsp. リパーゼである。
【００３３】
アセチル化及びアルコーリシスの両者における有用な溶媒は、C2-C8直鎖、枝分れ鎖、又は環状エーテル、好ましくはC2-C6エーテル、C2-C8ケトン、好ましくはC2-C4ケトン、塩素化されたC1-C4炭化水素、及びトリ（C1-C6アルキル）シリル基を包含するが、但しそれらだけには限定されず、ここでメチルtert−ブチルエーテル（MTBE）、ジイソプロピルエーテル、メチルエチルケトン、ジクロロメタン、テトラクロロメタン、アセトン、メチルイソブチルケトン（MIBK）及びTHFがより好ましく、そしてMTBE及びメチルエチルケトンが最も好ましい。
【００３４】
選択的転換の場合、酵素は、当業者に知られているような適切な手段により、例えば濾過又は遠心分離により分離され、そして濾液が濃縮される。
アルコール形とエステル形との間の極性における新規のより大きな差異のために、例えば（R）−I及び（S）−Iを含んで成る混合物における（R）−III 中間体への（R）−I中間体の選択的アセチル化の場合、選択的にエステル化されたエピマー、又はアルコーリシスに選択的にゆだねられたエピマーは現在、溶出時間を十分に解決し、それにより、混合物の完全な分離を可能にするが、しかしながら、例えばカラムクロマトグラフィーにより１回の通過で調製する。
【００３５】
さらなる態様においては、本発明は、
a. 本発明の方法に従って、（R）−Ｉ、（1S, 5R, 6R, 7R）−６−[（3R）−３−ヒドロキシ−５−フェニル−１−ペンテニル]−７−[（４−ベンゾイル）オキシ]−２−オキサビシクロ[3, 3, 0]オクタン−３−オンを（R）−III、（1S, 5R, 6R, 7R）−６−[（3R）−３−アセトキシ−５−フェニル−１−ペンテニル]−７−[（４−ベンゾイル）オキシ]−２−オキサビシクロ[3, 3, 0]オクタン−３−オンに選択的に転換し；
b. (S)−Iを回収し；そして
c. (S)−Iをビマトプロストに転換する、
ことを含んで成る、ビマトプロストの分離方法に向けられる。
【００３６】
さらなる態様においては、本発明は、
a. 本発明の方法に従って、（R）−III、（1S, 5R, 6R, 7R）−６−[（3S）−３−アセトキシ−５−フェニル−１−ペンテニル]−７−[（４−ベンゾイル）オキシ]−２−オキサビシクロ[3, 3, 0]オクタン−３−オンを（R）−Ｉ、（1S, 5R, 6R, 7R）−６−[（3R）−３−ヒドロキシ−５−フェニル−１−ペンテニル]−７−[（４−ベンゾイル）オキシ]−２−オキサビシクロ[3, 3, 0]オクタン−３−オンに選択的に転換し；
b. (S)−IIIを回収し； 
c. (S)−IIIを(S)−Iに転換し；そして
d. (S)−Iをビマトプロストに転換する、
ことを含んで成る、ビマトプロストの分離方法に向けられる。
【００３７】
（S）−Iは、当業界において知られているいずれかの手段、例えばCorey, E. J., J. A. C. S., 91, 5675（1969）に開示される手段によりビマトプロストに転換され得る。分離された（S）−III （エステル）は、当業者に良く知られている方法により、所望する（S）−I(アルコール)に転換され得る。
【００３８】
本発明の方法が例えば他のプロスタグランジンの調製方法において有用であり得る、（R）−III を形成するための還元された（R）−Iのアセチル化により、還元された（S）−Iを選択的に回収するために、下記式：
【００３９】
【化７】
2007537733.tif 000009
【００４０】
で表される還元された（R）−I及び還元された（S）−I中間体の混合物に適用され得ることは、当業者に明らかである。
次の非制限的例は、本発明の好ましい態様の単なる例示であり、そして本発明を制限するものではない。
【実施例】
【００４１】
例１．シュードモナス・スツゼリリパーゼを用いての（S）−I及び（R）−Iエピマーの選択的アセチル化：
（S）−I及び（R）−Iエピマーの選択的アセチル化を、等モル量の（S）−I及び（R）−I、すなわち化合物IのC3エピマーを含む混合物10mg（0.025mモル）を、0,3ml（3.2mモル）の酢酸ビニル、6mlのMTBE、及び100mgのシュードモナス・スツゼリリパーゼ（TL, Meito Sangyo, Japan）を含むバイアル中に導入することにより実施した。得られるバッチ混合物を、室温で46時間、撹拌した。撹拌されたバッチの分析は、反応の後、混合物が48モル％の（R）−III 、２モル％の未反応（R）−I及び50モル％の未反応（S）−Iを含むことを示した。
【００４２】
（R）−Iエピマーのアセチル化は96％の収率を伴って進行したが、元の反応混合物における（S）−Iエピマーは反応条件下でアセチル化されず、このことは、リパーゼ酵素の選択性を示す。アセチル化された生成物を、未反応アルコールから、シリカゲルを用いてのクロマトグラフィー方法により分離した。混合物を、溶離剤としてヘキサン及びTHFを用いる、シリカに基づくカラム（Phenomenex Kromasil 5 sil 100A 250mm×4.6mm×5μm）を備えはHewlett Packard 1090 Series II液体クロマトグラフィーを用いて分析した。分離のために使用されるグラジエントは、次の通りであった：
【００４３】
【表１】
2007537733.tif 000010
【００４４】
それらの溶出条件下で、（S）−I及び（R）−Iエピマーを、それぞれ20.6分及び26.7分で溶出し、そして（S）−III 及び（R）−III エピマーを、それぞれ10.9分及び11.16分で溶出した。化合物I及びIIのクロマトグラフィーが、図１として提供される。
【００４５】
例２．非選択的反応による比較例：
比較のために、非選択的反応を、35モル％の（S）−I及び65モル％の（R）−Iを含む、化合物Iエピマーの富化された混合物10mg（0.025mモル）を、0.03ml（0.32mモル）の酢酸ビニル、3mlのMTBE及び4.6mlのCLEC−PC（シュートモナス・セパシアからの架橋されたリパーゼ、Altus, USA）を含むバイアル中に導入することにより、固定された形で異なった酵素により行った。得られるバッチ混合物を、室温で48時間、撹拌した。その混合物のHPLC分析は、反応の後、そのバッチが８モル％の（S）−III 、６モル％の（R）−III 、69モル％の（R）−I及び27モル％の（S）−Iを含むことを示した。（S）−Iエピマーのアセチル化は、約23％の収率で進行し、そして（R）−Iエピマーのアセチル化は、約９％の収率を伴って進行した。
【００４６】
例３．アルカリゲネスsp. リパーゼを用いての（S）−I及び（R）−Iエピマーの選択的アセチル化：
選択性をまた、アルカリゲネスsp. リパーゼからの酵素を用いて見出した。反応を、35モル％の（S）−I及び65モル％の（R）−Iを含む、化合物Iエピマーの富化された混合物10mg（0.025mモル）を、0.03ml（0.32mモル）の酢酸ビニル、3mlのMTBE及び34mlのリパーゼPL（アルカリゲネスsp.、Meito Sangyo、Japan）を含むバイアル中に導入することにより行った。得られるバッチ混合物を、室温で48時間、撹拌した。反応の後、そのバッチのHPLC分析は、その混合物が６モル％の（R）−III 、59モル％の（R）−I、及び35モル％の非反応性（S）−Iを含むことを示した。（R）−Iのアセチル化は、約９％の収率を伴ってで進行した。しかしながら、例１におけるように、（S）−Iは反応せず、このことは、酵素の選択性を示す。
【００４７】
例４．（S）−I及び（R）−Iエピマーの選択的アセチル化：
選択性をまた、（S）−I及び（R）−Iエピマーの等モル混合物188mg（0.465mモル）を、188mg（2.2mモル）の酢酸ビニル及び63mgのシュードモナス・スツゼリリパーゼ（TL, Meito Sangyo, Japan）を含むバイアル中に導入することにより、溶媒としての酢酸ビニルと共に、50℃での高濃度の（S）−I及び（R）−Iエピマーを用いて見出した。得られるバッチ混合物を50℃で24時間、撹拌し、そして10.3モル％の（R）−III 、39.7モルの未反応（R）−I、及び50モル％の未反応（S）−Iを、反応の後、含むことを見出した。（R）−Iのアセチル化は約21％の収率で進行した。しかしながら、再び（S）−Iエピマーは、その反応条件下でアセチル化されなかった。
【００４８】
例５．（S）−I及び（R）−Iエピマーの選択的アセチル化：
アセチル化剤として酢酸エチルを用いての（R）−Iの選択的アセチル化を、35モル％の（S）−I及び65モル％の（R）−Iを含む富化されたエピマー混合物10.5mg（0.026mモル）を、0.03ml（0.32mモル）の酢酸エチル、4mlのMTBE及び20mgのシュードモナス・スツゼリリパーゼ（TL、Meito Sangyo, Japan）を含むバイアル中に導入することにより行った。得られるバッチ混合物を室温で24時間、撹拌し、そしてHPLC分析に基づいて、４モル％の（R）−III 、61モル％の未反応（R）−I、及び35モル％の未反応（S）−Iを含むことを見出した。（R）−Iのアセチル化は、約６％の収率で進行した。しかしながら、再び（S）−Iエピアーは、その反応条件下でアセチル化されなかった。
【００４９】
例６．（S）−I及び（R）−Iエピマーの選択的アセチル化：
異なった溶媒の使用の効果を、35モル％の（S）−I及び65モル％の（R）−Iを含む富化されたエピマー混合物10.5mg（0.026mモル）を、0.03ml（0.32mモル）の酢酸エチル、3mlのメチルエチルケトン、及び100mgのシュードモナス・スツゼリリパーゼ（TL、Meito Sangyo, Japan）を含むバイアル中に導入し、そして得られるバッチ混合物を室温で52時間、撹拌することにより調べた。得られる混合物のHPLC分析は、16.8モル％の（R）−III 、48.2モル％の未反応（R）−I、及び35モル％の未反応（S）−Iを含むことを見出した。（R）−Iのアセチル化は、約26％の収率で進行した。しかしながら、再び（S）−Iエピアーは、その反応条件下でアセチル化されなかった。
【００５０】
例７．（S）−III 及び（R）−III エピマーの選択的アルコーリシス：
（R）−III 及び（S）−III のアルコーリシスの選択性を、（R）−III及び（S）−IIIの等モル混合物17.7mg（0.039mモル）、50μｌのエタノール、3.5mlのMTBE及び150mgのシュードモナス・スツゼリリパーゼ（TL、Meito Sangyo, Japan）を、バイアル中に導入し、そして得られるバッチ混合物を室温で124時間、撹拌することにより調べた。そのような方法により生成される混合物のHPLC分析は、その混合物が、４モル％の（R）−I、46モル％の未反応（R）−III、及び50モル％の未反応（S）−IIIを含むことを示した。（R）−IIIのアセチル化は、約８％の収率で進行した。しかしながら、再び（S）−IIIエピアーは、その反応条件下でアセチル化されなかった。
【００５１】
本明細書に開示される発明は上記に言及される目的を実現するために十分に計算されていることは明らかであるが、多くの修飾及び態様が当業者により考案され得ることは理解されるであろう。従って、そのようなすべての修飾及び態様は、本発明の範囲内で行われる。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】図１は、（R）−I、（R）−III、（S）−I及び（S）−III の混合物のHPLCクロマトグラムを示す。
【図１】
2007537733.tif 000011
【国際調査報告】
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