(57)【要約】【課題】神経障害性疼痛の抑制作用を有する新規な成分を開示し、この成分を有効に利用できるようにした新規な神経障害性疼痛抑制薬とすることである。【解決手段】化１の式で表わされ、リン酸エステル部が分岐したアルキル基を有するＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルまたはその有機塩または無機塩からなるアスコルビン酸誘導体の１種以上を有効成分として含有する神経障害性疼痛抑制薬とする。    【化１】2011168549.tif 000005（式中、Ｒ1、Ｒ２は、水素（Ｈ）または２位で分岐した炭素数４〜３０のアルキル基を表わす。ただし、Ｒ１＝Ｒ２＝水素（Ｈ）である場合を除く。）【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化１の式で表わされ、リン酸エステル部が分岐したアルキル基を有するＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルまたはその塩からなるアスコルビン酸誘導体の１種以上を有効成分として含有する神経障害性疼痛抑制薬。
【化１】
2011168549.tif 000004
（式中、Ｒ1、Ｒ２は、水素（Ｈ）または分枝を有する炭素数３〜３０のアルキル基を表わす。ただし、Ｒ１＝Ｒ２＝水素（Ｈ）である場合を除く。）
【請求項２】
化１の式中のＲ1またはＲ２が、２位で分岐した炭素数４〜３０のアルキル基である請求項１に記載の神経障害性疼痛抑制薬。
【請求項３】
分枝したアルキル基が、２−ヘプチルウンデシル基、２−オクチルデシル基、２−オクチルドデシル基、２−ヘキシルデシル基、２−ヘキシルドデシル基、２−イソヘプチルイソウンデシル基、１６−メチルヘプタデシル基または２−（１，３，３−トリメチル−ｎ−ブチル）−５，７，７−トリメチル−ｎ−オクチル基である請求項１に記載の神経障害性疼痛抑制薬。
【請求項４】
塩が、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルのナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩もしくはカルシウム塩からなる無機塩である請求項１〜３のいずれかに記載の神経障害性疼痛抑制薬。
【請求項５】
塩が、Ｌ−アルギニン、Ｌ−リジン、グアニンもしくは塩基性有機アミン類からなる有機塩である請求項１〜３のいずれかに記載の神経障害性疼痛抑制薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、神経障害性疼痛の症状を改善し、または同症状の疾患治療に用いる神経障害性疼痛抑制薬に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
一般に医学分野における疼痛状態の治療は、非常に重要なものであり、いわゆる疼痛療法は世界的に求められている。
【０００３】
患者に適した疼痛状態の特定の治療または特定の疼痛状態の治療にも関する差し迫った要件は、応用鎮痛剤の分野においてまたは痛覚に関する基本的研究に基づいて、近年および何年もかけて著された多数の科学的著作に列挙されている。
【０００４】
疼痛は、国際疼痛研究学会（ＩＡＳＰ）によって、「実際のまたは潜在的な組織損傷に関連した不快な感覚的および情緒的な経験」と定義され、またはそのような損傷に関しては記述されている。また、疼痛は常に主観的なものであるが、その原因または症候群を分類することができる。サブタイプとしての「神経障害性疼痛（Neuropathic pain）」は、ＩＡＳＰによって、「神経系の一次病巣または機能不全により開始されまたは引き起こされる疼痛」と定義される(IASP,Classification of chronic pain, 2nd Edition,IASP Press(2002),210)。
【０００５】
神経障害性疼痛（ニューロパチー）は、末梢および中枢神経の損傷や機能障害によって生じる難治性の痛みで、臨床においては糖尿病性ニューロパチー、帯状疱疹後神経痛、三叉神経痛など病原性のものや、抗がん剤などの薬剤による副作用によって生じるものがよく知られている。
【０００６】
この神経障害性疼痛に対しては、NSAIDsやオピオイドなど既存の鎮痛薬が効きにくいといわれており、臨床的に有効な治療薬の開発が急務となっている。現在、臨床的には、神経障害性疼痛に対して抗うつ薬や抗てんかん薬の利用が試みられている。
【０００７】
以下の表１に示すように、日本ではテグレトールアール（カルバマゼピン）が三叉神経痛に対して適応が認められているのを除き、抗うつ薬、抗てんかん薬は、痛みに対して保険適応が認められていないため、鎮痛補助剤として処方されている。
【０００８】
【表１】
2011168549.tif 000002
【０００９】
一方、米国や欧州では、抗てんかん薬であるガバペンチンの帯状疱疹後神経痛に対する適応が認められ、また類似薬のプレガバリンが神経障害性疼痛治療薬として認可されている。
【００１０】
このように、神経障害性疼痛の治療薬の開発は、始まったばかりであるが、日本においてはその開発が遅れている現状である。また、現在神経障害性疼痛の治療への応用が試みられている上記の薬はすべて経口薬であり、塗布薬としては欧米においてカプサイシンクリーム（トウガラシ成分）の使用例があるものの日本では市販されておらず、その有効性も十分には確立されていない。
【００１１】
近畿大学薬学部病態薬理学研究室では、生体内で酵素的に産生されるガス状情報伝達物質である硫化水素（Ｈ２Ｓ）の痛覚への関与を検討し、Ｈ２Ｓ供与体であるＮａＨＳをラットやマウスの足底内や脊髄内へ投与することにより、痛覚過敏が誘発されることが見出され、この効果が知覚神経上に存在するＴ型Ｃａ2+チャネルの活性化を介して生じることが明らかになった。
【００１２】
一方、培養神経系細胞においては、ＮａＨＳがＴ型Ｃａ2+チャネルを介する膜電流を増強することがパッチクランプ法により証明された。ＮａＨＳによる痛覚過敏は、３つあるＴ型Ｃａ2+チャネルのサブタイプ、Ｃａv３．１、３．２、３．３のうち、Ｃａv３．２を介して起こることが、アンチセンス法を用いたＣａv３．２遺伝子ノックダウン法により明らかにされた（KawabataらPain 2007;132:74-81、MaedaらPain 2009；142：127.）。
【００１３】
さらに、硫化水素／Ｃａv３．２Ｔ型Ｃａ2+チャネル系は、膵炎に伴う痛みや腸の痛みの他（MatsunamiらGut 2009;58:751.、NishimuraらGut 2009;58:762.）、神経障害性疼痛の発現にも関与することが明らかにされた（TakahashiらJ Pharmacol Sci 2009;109 (Suppl 1):190）。
【００１４】
また、アスコルビン酸が、Ｔ型Ｃａ2+チャネルのうちＣａv３．２を特異的に阻害することをNelsonら（NelsonらJ Neurosci 2007;27:12577-83）が報告している（非特許文献１）。
しかし、アスコルビン酸は、熱や酸化に対して非常に不安定であり、不活性化されたり分解されたりしやすいため、必ずしも十分な生理作用が得られない場合がある。
【００１５】
このように酸化されやすく不安定性なＬ−アスコルビン酸を安定化するために、酸化されやすいジオール部をリン酸エステル化した誘導体が知られており（特許文献１）、またグルコシド化した誘導体も知られている（特許文献２）。
また、リン酸エステル部が分岐したアルキル基を有するＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルまたはその塩からなるアスコルビン酸誘導体（後述する化１参照）は、美白化粧品として生体浸透性が好ましいことが知られている（特許文献３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】特公昭５２−１８１９１号公報
【特許文献２】特開平０３−１３９２８８号公報
【特許文献３】ＷＯ２００５/０９２９０５
【非特許文献】
【００１７】
【非特許文献１】ネルソン等、ジャーナル  オブ  ニューロサイエンス、２００７年、第２７巻、ｐ．１２５７７−１２５８３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
しかし、下記の化１の式で示されるアスコルビン酸誘導体は、アスコルビン酸と同等にＴ型Ｃａ2+チャネルのうちＣａv３．２を特異的に阻害するかどうか、またはそれによる薬理作用が認知されておらず、神経障害性疼痛の抑制、すなわち鎮痛作用のある医薬品の成分としての利用が全くなされていなかった。
【００１９】
そこで、この発明の課題は、神経障害性疼痛の抑制作用を有する新規な成分を提示し、この成分を有効に利用して新規な神経障害性疼痛抑制薬を得ることである。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
本願の発明者等は、知覚神経上に存在するＣａｖ３．２Ｔ型Ｃａ2+チャネルが、神経障害性疼痛の発現にも関与する知見に着目し、特定のアスコルビン酸誘導体が特異的かつ顕著にＣａｖ３．２Ｔ型Ｃａ2+チャネル阻害活性を有するものであることを発見し、この発明を完成させたものである。
【００２１】
すなわち、この発明においては、下記の化１の式で表わされ、リン酸エステル部が分岐したアルキル基を有するＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルまたはその塩からなるアスコルビン酸誘導体の１種以上を有効成分として含有する神経障害性疼痛抑制薬としたことにより前記課題を解決した。
【００２２】
【化１】
2011168549.tif 000003
【００２３】
（式中、Ｒ1、Ｒ２は、水素（Ｈ）または分枝を有する炭素数３〜３０のアルキル基を表わす。ただし、Ｒ１＝Ｒ２＝水素（Ｈ）である場合を除く。）
【００２４】
上記したアスコルビン酸誘導体は、分子構造の所定位置（２位）にリン酸エステル部を有し、その部分に分岐したアルキル基を有するため、適度な脂溶性があって生体内に取り込まれやすいという特性を有する。特に、化１の式中のＲ1またはＲ２が、２位で分岐した炭素数４〜３０のアルキル基である場合に上記特性が顕著に奏される。
【００２５】
上述のように好ましい作用のあるアスコルビン酸誘導体は、分枝したアルキル基が、２−ヘプチルウンデシル基、２−オクチルデシル基、２−オクチルドデシル基、２−ヘキシルデシル基、２−ヘキシルドデシル基、２−イソヘプチルイソウンデシル基、１６−メチルヘプタデシル基または２−（１，３，３−トリメチル−ｎ−ブチル）−５，７，７−トリメチル−ｎ−オクチル基であるものが代表的なものである。
【００２６】
同様に、上述のように好ましい作用のあるアスコルビン酸誘導体の塩とするためには、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルのナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩またはカルシウム塩などの無機塩もしくはＬ−アルギニン、Ｌ−リジン、グアニン、塩基性有機アミン類などからなる有機塩であることが好ましい。
【発明の効果】
【００２７】
この発明は、リン酸エステル部が分岐したアルキル基を有するＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルまたはその塩からなるアスコルビン酸誘導体の１種以上を有効成分として含有する神経障害性疼痛抑制薬としたので、生体中のＴ型Ｃａ2+チャネルのうちＣａv３．２に対する特異的な阻害効果を充分に発現することができ、神経障害性疼痛の抑制作用を有する新規な神経障害性疼痛抑制薬となる利点がある。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】実施例１の疼痛抑制効果を示し、侵害受容閾値（％）と塗布後経過時間（分）との関係を示す図表(ａ)、同図表における時間閾値曲線下面積を示す図表（ｂ）
【図２】比較例１の疼痛抑制効果を示し、侵害受容閾値（％）と塗布後経過時間（分）との関係を示す図表(ａ)、同図表における時間閾値曲線下面積を示す図表（ｂ）
【図３】比較例２の疼痛抑制効果を示し、侵害受容閾値（％）と塗布後経過時間（分）との関係を示す図表(ａ)、同図表における時間閾値曲線下面積を示す図表（ｂ）
【図４】比較例３の疼痛抑制効果を示し、侵害受容閾値（％）と塗布後経過時間（分）との関係を示す図表(ａ)、同図表における時間閾値曲線下面積を示す図表（ｂ）
【図５】実施例２、３の疼痛抑制効果を示し、侵害受容閾値（％）と塗布後経過時間（分）との関係を示す図表(ａ)、同図表における時間閾値曲線下面積を示す図表（ｂ）
【図６】比較例４、５の疼痛抑制効果を示し、侵害受容閾値（％）と塗布後経過時間（分）との関係を示す図表(ａ)、同図表における時間閾値曲線下面積を示す図表（ｂ）
【発明を実施するための形態】
【００２９】
この発明に用いる、前記化１の式で示されるＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステル、すなわち２−（分枝型アルキル）−Ｌ−アスコルビルホスフェートは、大略以下の方法で製造でき、その詳細は特許文献３にも記載されている通りである。
【００３０】
先ず、トルエン、クロロベンゼン、ジクロロベンゼンなどから選ばれる非極性溶媒を用いて、トリメチルアミン、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンなどから選ばれる塩基の存在下で、分枝型アルカノールとオキシ塩化リンを−２０〜２０℃において反応させて、モノアルキルジクロロホスフェートもしくはジアルキルモノクロロホスフェートを製造する。取り出しについては蒸留により単離するか、または上記の非極性溶媒の溶液として次工程へ進んでも良い。
【００３１】
そして、別途、Ｌ−アスコルビン酸とアセトンを反応させて得た５，６−Ｏ−イソプロピリデン−Ｌ−アスコルビン酸と、前記した工程で得たモノアルキルジクロロホスフェートもしくはジアルキルモノクロロホスフェートを反応させ、この反応物を酸で加水分解し、定法により精製することで前記の化１の式で示されるＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルを製造できる。
【００３２】
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルの具体的な化合物例としては、以下の通りであり、２−（２−メチルデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−エチルデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−プロピルデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−ブチルデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−ペンチルデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−ヘキシルデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−ヘプチルデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−オクチルデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−ノニルデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−メチルウンデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−エチルウンデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−プロピルウンデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−ブチルウンデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−ペンチルウンデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−ヘキシルウンデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−ヘプチルウンデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−オクチルウンデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−ノニルウンデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−デシルウンデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−メチルドデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−エチルドデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−プロピルドデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−ブチルドデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−ペンチルドデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−ヘキシルドデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−ヘプチルドデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−オクチルドデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−ノニルドデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−デシルドデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−ウンデシルドデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（２−イソヘプチルイソウンデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−（１６−メチルヘプタデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−メチルデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−エチルデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−プロピルデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−ブチルデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−ペンチルデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−ヘキシルデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−ヘプチルデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−オクチルデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−ノニルデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−メチルウンデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−エチルウンデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−プロピルウンデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−ブチルウンデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−ペンチルウンデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−ヘキシルウンデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−ヘプチルウンデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−オクチルウンデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−ノニルウンデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−デシルウンデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−メチルドデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−エチルドデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−プロピルドデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−ブチルドデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−ペンチルドデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−ヘキシルドデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−ヘプチルドデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−オクチルドデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−ノニルドデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−デシルドデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−ウンデシルドデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（２−イソヘプチルイソウンデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス（１６−メチルヘプタデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート、２−ビス［２−（１，３，３−トリメチル−ｎ−ブチル）−５，７，７−トリメチル−ｎ−オクチル］−Ｌ−アスコルビルホスフェートなどが挙げられる。
【００３３】
上記化合物は、２位で分枝したアルキル基を有するが、例えば２−［２−（１，３，３−トリメチル−ｎ−ブチル）−５，７，７−トリメチル−ｎ−オクチル］−Ｌ−アスコルビルホスフェートなどのように上記以外の位置で分枝したアルキル基も含むものであってもよい。
【００３４】
この発明のアスコルビン酸誘導体は、いずれも後に説明するように神経障害性疼痛抑制作用を有するものであるが、アスコルビン酸誘導体の塩も使用可能であり、例えばナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アルギニン等の塩基性アミノ酸、トリエタノールアミン等の有機アミンなどを用いることができる。
【００３５】
この発明に用いるアスコルビン酸誘導体は、生体中のＣａv３．２Ｔ型Ｃａ2+チャネルを特異的に阻害することに由来する神経障害性疼痛抑制薬に有効成分として含有される。そのような製剤例としては、皮膚外用剤やハップ剤が挙げられる。
【００３６】
この発明に用いるアスコルビン酸誘導体の有効投与量は、選択される化合物の相対的効力、治療される障害の重症度および罹患者の体重に応じて異なるが、敢えて効果を発現する投与量例として、１０ｎｍｏｌ／ｐａｗ以上であることが好ましい。また後述する実施例で採用した２０〜６０ｎｍｏｌ／ｐａｗを有効投与量例として挙げられる他、１０〜２０００ｎｍｏｌ／ｐａｗなども好ましい有効投与量例として採用できる。
また、上記数値から換算すれば、この発明に係るアスコルビン酸誘導体の有効投与（塗布）量は、成人（約６０ｋｇ）に対し有効濃度として０．１〜２０重量％程度を含有する外用剤とし、これを症状に応じて適宜な回数だけ塗布して用いることができ、例えば１日に１〜１０回、通常５〜６回（数回）程度の投与回数は好ましい。
【００３７】
また、この発明に係る神経障害性疼痛抑制薬は、一般的なアスコルビン酸を用いた医薬と同程度に安全性の高いものであり、以下に説明するような任意の製剤形態を採用可能であると共に、一般的な医薬品組成物と同様に有効成分と共に少なくとも１種以上の補助材料もしくは添加剤またはそれらを併用して添加することもできる。
【００３８】
すなわち、この発明の外用剤組成物の剤型は、需要者の要望や目的に応じて変更すればよく、例えばクリーム状、乳液状、液状、ゲル状、軟膏状、パック状、スティック状、パウダー状等の外用剤の形態を選択的に採用することができる。
【００３９】
この発明の外用剤組成物は前記の有効成分の他に、通常の医薬部外品、医薬品等に用いられる各種成分、例えば油性成分、乳化剤、保湿剤、増粘剤、薬効成分、防腐剤、顔料、粉体、ｐＨ調整剤、紫外線吸収剤、抗酸化剤、香料等を適宜配合することができる。
【００４０】
補助材料または添加剤は、担体、賦形剤、支持材料、滑剤、充填剤、溶媒、希釈剤、着色剤、砂糖などの味覚調整剤、酸化防止剤、および結合剤から選択し、一種以上を用いることができる。
なお、この発明に係る神経障害性疼痛抑制薬は、皮膚外用に向けたものであり、特にクリーム製剤または液状の形をとることが好ましい。
【００４１】
このような製剤形態で用いられる神経障害性疼痛抑制薬は、皮膚に浸透して生体内に広く分布するフォスファターゼによって速やかにＬ−アスコルビン酸及びアシルリン酸化合物などに分解され、Ｌ−アスコルビン酸本来の優れたＣａv３．２Ｔ型Ｃａ2+チャネル阻害活性効果を有するものである。
【実施例】
【００４２】
［実施例１〜３および比較例１〜５］
有効成分として用いる薬剤として、両親媒性アスコルビン酸（２−［２−（１，３，３−トリメチル−ｎ−ブチル）−５，７，７−トリメチル−ｎ−オクチル］−Ｌ−アスコルビルホスフェート）（HBCサイエンス社製：disodium isostearyl 2−0−1−ascorbyl phosphate）（以下、ＤＩ−ＶＣＰと略称する。）、硫化水素ナトリウム（キシダ化学社製：NaHS）またはアスコルビン酸（Sigma Ltd. St Louis, MO, USA）を使用して以下の製剤を行なった。
【００４３】
すなわち、ＤＩ−ＶＣＰ配合の軟膏またはアスコルビン酸配合の軟膏を以下の手順で作製した。
５％（w/w）セタノール（キシダ化学社製）含有ソルベース（明治薬品社製）１ｇ当り、０．８または２．４mM ＤＩ−ＶＣＰ水溶液１００μＬを加えて軟膏とした。同様に２．４mMアスコルビン酸水溶液を用いた軟膏剤も作製した。
【００４４】
得られたＤＩ−ＶＣＰ配合の軟膏（以下、ＤＩ−ＶＣＰ軟膏と称する。）２５０ｍｇ／ｐａｗ（２０または６０ｎｍｏｌ／ｐａｗ）またはアスコルビン酸配合の軟膏（以下、アスコルビン酸軟膏と称する。）を２５０ｍｇ／ｐａｗ(６０ｎｍｏｌ／ｐａｗ)それぞれ実験動物として採用したラットの片側後肢に塗布し、以下の機械的侵害受容閾値の測定実験、およびパクリタキセル誘起神経障害性疼痛モデル実験を行ない、結果を図１〜６に示した。
【００４５】
上記実験動物としてのラットは、雄性Wistar系ラット（日本 SLC, 浜松）を使用し、固形飼料（ＭＦオリエンタル酵母工業社製）および水道水を自由に摂取させ、約２４℃で１２時間の明暗サイクルに保持された部屋で飼育したものを使用した。
【００４６】
［機械的侵害受容閾値の測定実験］
機械的侵害受容閾値の測定は、Randall-Selitto法により行った。圧刺激鎮痛効果測定装置（MK-300, 室町機械, 東京）を使用し、ラットの右後肢に３０ｇ／ｓで機械的圧刺激を与え、もがき反応もしくは鳴き声を指標として機械的侵害受容閾値を測定した。また、後肢の損傷を防ぐため、加える圧刺激は５００ｇを限度とした。得られた結果は薬物投与前またはパクリタキセル投与開始前の機械的侵害受容閾値を１００％とし、以下の数式により算出した値で示した。
機械的侵害受容閾値ＡＩＣ（％ baseline）＝{得られた閾値/（ＮａＨＳ投与前またはパクリタキセル投与開始前の閾値）}×１００
【００４７】
［パクリタキセル誘起神経障害性疼痛モデルの作成］
パクリタキセル（以下、ＰＴＸと略記する。）誘起神経障害性疼痛モデルの作製はPolomanoら（PolomanoらPain 2001;94:293-304）の方法に従って行った。パクリタキセル投与前にベースライン閾値を測定後、パクリタキセル注射液（ブリストル・マイヤーズ社製）６ｍｇ／ｍＬを生理食塩水で３倍希釈し、２ｍｇ／ｋｇの用量で投与初日を０日目とし、続いて２、４および６日目の、計４回ラットに腹腔内投与した(合計８ｍｇ／ｋｇ)。各投与前および１０、１４日目にも痛覚閾値を測定して経過観察を行い、１４日目以降に痛覚閾値の低下を確認した後、以降の実験に使用した。コントロール群にはパクリタキセル注射液の溶媒 (Cremophor EL (polyethoxylated castor oil)/ethanol; ５０／５０％)を３倍希釈して同様のスケジュールで投与した。
【００４８】
［投与方法］
ＮａＨＳ誘起神経障害性疼痛実験では、ＤＩ−ＶＣＰ軟膏またはアスコルビン酸軟膏を６０ｎｍｏｌ／ｐａｗの用量で塗布し、その９０分後にＮａＨＳを１ｎｍｏｌ／ｐａｗ （１０μＭ溶液，１００ μＬ／ｐａｗ）の用量でラットの足底皮下へ投与した。
【００４９】
パクリタキセル誘起神経障害性疼痛モデルラット実験では、ＤＩ−ＶＣＰ軟膏またはアスコルビン酸軟膏を２０または６０ｎｍｏｌ／ｐａｗの用量でラットの片側後肢に塗布した。
【００５０】
図１〜６に示される結果を要約すると以下の通りである。
［実施例１および比較例１について］
図１、２は、ＮａＨＳ足底皮下投与により誘起される痛覚過敏に対するアスコルビン酸軟膏およびＤＩ−ＶＣＰ軟膏塗布の効果を示している。ＮａＨＳ１ｎｍｏｌ／ｐａｗおよび生理食塩水は投与容量１００μＬ／ｐａｗで足底皮下投与した。disodium isostearyl 2-O-l-ascorbyl phosphate(ＤＩ−ＶＣＰ)含有軟膏またはアスコルビン酸含有軟膏は、６０ｎｍｏｌ／ｐａｗの用量でＮａＨＳ投与９０分前にラット右後肢表面に塗布した（塗布量２５０ｍｇ／ｐａｗ）。図中の各折れ線は６−８例の平均値±標準誤差を示し、＊および**は生理食塩水含有軟膏塗布後に生理食塩水足底内投与群に対する有意差を示す（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１，Ｔｕｋｅｙ法）。＃＃は生理食塩水含有軟膏塗布後にＮａＨＳ投与群に対する有意差を示す（Ｐ＜０．０１，Ｔｕｋｅｙ法）。
【００５１】
ＤＩ−ＶＣＰ軟膏を６０ｎｍｏｌ／ｐａｗの用量でラット片側後肢に塗布したところ、ＮａＨＳ足底皮下投与による痛覚過敏が阻止された（図１）。一方、アスコルビン酸軟膏を６０ｎｍｏｌ／ｐａｗの用量になるように、ラットの片側後肢に塗布したところ、ＮａＨＳ足底皮下投与による痛覚過敏は影響を受けなかった（図２）。
【００５２】
［比較例２および比較例３について］
図３、４は、パクリタキセル誘起神経障害性疼痛に対するアスコルビン酸軟膏塗布の影響を示している。パクリタキセルは、投与初日を０日目として、その後２、４および６日目に２ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内投与した。パクリタキセル投与１４日後以降のラットに対し、アスコルビン酸含有軟膏を６０ｎｍｏｌ／ｐａｗの用量でラット右後肢表面に塗布した（塗布量２５０ｍｇ／ｐａｗ）。図中の各折れ線は５−７例の平均値±標準誤差を示し、＊および**はコントロールにおける生理食塩水含有軟膏塗布群に対する有意差を示す（Ｐ＜０．０５，  Ｐ＜０．０１，Ｔｕｋｅｙ法）。
アスコルビン酸軟膏を６０ｎｍｏｌ／ｐａｗの用量になるように、パクリタキセル処置ラットの片側後肢に塗布したところ、処置側（図３）、反対側（図４）ともに痛覚閾値に影響は認められなかった。
【００５３】
［実施例２、３および比較例４、５について］
図５、６は、パクリタキセル誘起神経障害性疼痛に対するＤＩ−ＶＣＰ軟膏塗布の効果を示している。パクリタキセルは、投与初日を０日目として、その後２、４および６日目に２ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内投与した。パクリタキセル投与１４日後以降のラットに対し、アスコルビン酸含有軟膏を６０ｎｍｏｌ／ｐａｗの用量でラット右後肢表面に塗布した（塗布量２５０ｍｇ／ｐａｗ）。図中の各折れ線は５−７例の平均値±標準誤差を示し、＊および**はコントロールにおける生理食塩水含有軟膏塗布群に対する有意差を示し、＃および＃＃はパクリタキセル投与群の生理食塩水塗布群に対する有意差を示す（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１，Ｔｕｋｅｙ法）。
【００５４】
ＤＩ−ＶＣＰ軟膏を２０ｎｍｏｌ／ｐａｗ（実施例２）および６０ｎｍｏｌ／ｐａｗ（実施例３）の用量になるよう、ラット片側後肢に塗布したところ、処置側では用量依存的に痛覚閾値の上昇が認められ、特に６０ｎｍｏｌ／ｐａｗでは塗布後８０分から有意な鎮痛効果が認められた。この鎮痛効果は４時間以上の長時間にわたって持続し、２４時間後には消失していた（図５）。一方、塗布反対側の痛覚閾値への影響は見られなかった（図６）。
【００５５】
以上の結果から総合すれば、従来のＣａv３．２Ｔ型Ｃａ2+チャネルを選択的に阻害するアスコルビン酸は軟膏として局所塗布しても無効であったのに対し、Ｃａv３．２を活性化するＮａＨＳの足底皮下投与により誘起される痛覚過敏を抑制し、さらに、抗癌剤（パクリタキセル）により誘起される神経障害性疼痛を長時間抑制した。
【００５６】
Ｔ型Ｃａ2+チャネルは、癌化学療法に伴う神経障害性疼痛に限らず、外科的手法により作成される神経障害性疼痛や糖尿病性ニューロパチーの病態にも関与することが報告されていることより、ＤＩ−ＶＣＰの局所塗布剤（軟膏等）は種々の原因によって発症する神経障害性疼痛の新たな治療薬として臨床的に応用できるものと考えられた。
【００５７】
従って、この発明に係るアスコルビン酸誘導体含有の神経障害性疼痛抑制薬は、皮膚に浸透して生体内に広く分布するフォスファターゼによって速やかにＬ−アスコルビン酸及びアシルリン酸化合物などに分解され、Ｌ−アスコルビン酸本来の優れたＣａv３．２Ｔ型Ｃａ2+チャネル阻害活性効果を有することが確認された。
【００５８】
この発明に用いる所定のアスコルビン酸誘導体を有効成分とする実施例である神経障害性疼痛抑制薬の代表的な処方例を以下に示す。各行右端の数値は配合割合（重量％）である。
［処方例1］（外用軟膏）
２−［２−（１，３，３−トリメチル−ｎ−ブチル）−５，７，７−トリメチル−ｎ−オクチル］−Ｌ−アスコルビルホスフェート(ＤＩ−ＶＣＰ)                    ２．０
ワセリン                                                              ２５．０ 
ステアルルアルコール                                                  ２０．０
プロピレングリコール                                                  １２．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                                          ４．０
モノステアリン酸グリセリン                                              １．０
パラオキシ安息香酸メチル                                                ０．１
パラオキシ安息香酸プロピル                                              適量
精製水                                                                  残余
【００５９】
［処方例２］（ゲル状薬剤）  
２−ビス（２オクチルドデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート            ５．０
グリセリン                                                            １５．０
エタノール                                                              ５．０
カルボキシビニルポリマー                                                １．５
水酸化ナトリウム                                                        ０．２
防腐剤                                                                  適量
製水                                                                    残余
【００６０】
［処方例３］（液状薬剤）
２−（２−ヘキシルデシル）−Ｌ−アスコルビルホスフェート                ５．０
グリセリン                                                            １０．０
プロピレングリコール                                                    ５．０
防腐剤                                                                  適量
精製水                                                                  残余
【図１】
2011168549.tif 000006
【図２】
2011168549.tif 000007
【図３】
2011168549.tif 000008
【図４】
2011168549.tif 000009
【図５】
2011168549.tif 000010
【図６】
2011168549.tif 000011
【手続補正書】
【提出日】平成23年5月20日(2011.5.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化１の式で表わされ、リン酸エステル部が分岐したアルキル基を有するＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルまたはその塩からなるアスコルビン酸誘導体の１種以上の０．１〜２０重量％を有効成分として含有する神経障害性疼痛抑制性の皮膚外用剤。
【化１】
2011168549.tif 000012
（式中、Ｒ1、Ｒ２は、水素（Ｈ）または分枝を有する炭素数３〜３０のアルキル基を表わす。ただし、Ｒ１＝Ｒ２＝水素（Ｈ）である場合を除く。）
【請求項２】
化１の式中のＲ1またはＲ２が、２位で分岐した炭素数４〜３０のアルキル基である請求項１に記載の神経障害性疼痛抑制性の皮膚外用剤。
【請求項３】
分枝したアルキル基が、２−ヘプチルウンデシル基、２−オクチルデシル基、２−オクチルドデシル基、２−ヘキシルデシル基、２−ヘキシルドデシル基、２−イソヘプチルイソウンデシル基、１６−メチルヘプタデシル基または２−（１，３，３−トリメチル−ｎ−ブチル）−５，７，７−トリメチル−ｎ−オクチル基である請求項１に記載の神経障害性疼痛抑制性の皮膚外用剤。
【請求項４】
塩が、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルのナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩もしくはカルシウム塩からなる無機塩である請求項１〜３のいずれかに記載の神経障害性疼痛抑制性の皮膚外用剤。
【請求項５】
塩が、Ｌ−アルギニン、Ｌ−リジン、グアニンもしくは塩基性有機アミン類からなる有機塩である請求項１〜３のいずれかに記載の神経障害性疼痛抑制性の皮膚外用剤。