(57)【要約】【課題】皮膚に対して有効な高濃度で化粧料中に、結晶を析出させることなく安定的に配合することを可能にし、保存安定性が高く肌荒れ改善効果に優れた水中油型乳化化粧料を提供する。【解決手段】次の成分（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）及び（Ｄ）を含有することを特徴とする水中油型乳化化粧料。（Ａ）バイオサーファクタント（Ｂ）ＨＬＢ８以下のポリグリセリン脂肪酸エステル（Ｃ）水溶性高分子（Ｄ）グリセリン及び／又はジグリセリン【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の成分（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）及び（Ｄ）を含有することを特徴とする水中油型乳化化粧料。
（Ａ）バイオサーファクタント
（Ｂ）ＨＬＢ８以下のポリグリセリン脂肪酸エステル
（Ｃ）水溶性高分子
（Ｄ）グリセリン及び／又はジグリセリン
【請求項２】
バイオサーファクタントが、マンノース骨格を有することを特徴とする請求項１に記載の水中油型乳化化粧料。
【請求項３】
バイオサーファクタントが、マンノース骨格の１位の水酸基に糖アルコールがグリコシド結合していることを特徴とする請求項２に記載の水中油型乳化化粧料。
【請求項４】
マンノース骨格を有するバイオサーファクタントがマンノシルエリスリトールリピッド（ＭＥＬ）、マンノシルマンニトールリピッド（ＭＭＬ）、マンノシルソルビトールリピッド（ＭＳＬ）、マンノシルアラビトールリピッド（ＭＡｒａＬ）及びマンノシルリビトールリピッド（ＭＲＬ）からなる群より選ばれた１種以上の化合物であることを特徴とする請求項２または３に記載の水中油型乳化化粧料。
【請求項５】
ＭＥＬが、マンノシルエリスリトールリピッドＡ（ＭＥＬ−Ａ）、マンノシルエリスリトールリピッドＢ（ＭＥＬ−Ｂ）、マンノシルエリスリトールリピッドＣ（ＭＥＬ−Ｃ）、マンノシルエリスリトールリピッドＤ（ＭＥＬ−Ｄ）、ＭＥＬ−Ａのトリアシル体、ＭＥＬ−Ｂのトリアシル体、ＭＥＬ−Ｃのトリアシル体及びＭＥＬ−Ｄのトリアシル体からなる群より選ばれた１種以上の化合物であることを特徴とする請求項４に記載の水中油型乳化化粧料。
【請求項６】
バイオサーファクタントが、飽和脂肪酸及び／又は不飽和脂肪酸を含有していることを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の水中油型乳化化粧料。
【請求項７】
（Ａ）成分の含有量が０．５〜１０重量％で、且つ、前記（Ａ）成分に対する前記（Ｂ）成分の配合重量比（（Ｂ）／（Ａ））が０．２〜１であることを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載の水中油型乳化化粧料。
【請求項８】
（Ｂ）ポリグリセリン脂肪酸エステルが炭素数１６〜２２の直鎖又は分岐鎖の、飽和又は不飽和の脂肪酸及び重合度２〜１０のポリグリセリンから構成されることを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の水中油型乳化化粧料。
【請求項９】
（Ｃ）水溶性高分子がイオン性であることを特徴とする請求項１〜８のいずれかに記載の水中油型乳化化粧料。
【請求項１０】
（Ｅ）グリセリン誘導体及び／又はアミノ酸誘導体から成る液状油を含有することを特徴とする請求項１〜９のいずれかに記載の水中油型乳化化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は水中油型乳化化粧料、更に詳しくは、結晶を析出させることなく安定に配合して、肌荒れ改善効果に優れた、特に化粧料として有用な水中油型乳化化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、肌にうるおいを与え、肌を柔軟にするには、角質層の水分が重要であることが知られている。そして、当該水分の保持は、角質層に含まれている水溶性成分、すなわち遊離アミノ酸、有機酸、尿素又は無機イオンによるものであるとされ、これらの物質は単独であるいは組み合わせて薬用水中油型乳化化粧料あるいは水中油型乳化化粧料に配合して、肌あれの改善又は予防の目的で使用されている。
【０００３】
また、これとは別に水と親和性が高い多くの保湿性物質が開発され、同様の目的で使用されている。
【０００４】
更に、近年では、角質細胞間に存在する脂質が高い保湿能を有することが見出され、当該角質細胞間脂質成分の類似構造物質で構成される人工細胞間脂質によって、肌にうるおいを与え、柔軟化させることが行われ、比較的高い効果が得られている。
【０００５】
ところで、近年、様々な分野で両親媒性物質が利用されている。両親媒性物質とは親水性と親油性との二つの異なる性質を併せ持つ物質のことであって、このような性質を有する物質は界面活性物質と呼ばれている。例えば、糖脂質は、糖の性質に由来する親水性と脂質の性質に由来する親油性との二つの性質を併せ持ったものであり、界面活性物質の一例である。
【０００６】
石油化学工業の発展によって合成界面活性剤が開発され、生体成分由来の界面活性物質に比べて合成界面活性剤の生産量は飛躍的に増加し、今や日常生活には無くてはならない物質となった。
【０００７】
しかしながら、合成界面活性剤は生分解性が低いので、合成界面活性剤の使用量の拡大に伴って環境汚染が深刻な問題になりつつある。そこで、環境に対する負荷を低減するために、安全性が高いとともに生分解性が高いバイオサーファクタントが再び見直されており、様々な種類のバイオサーファクタントの開発が望まれるようになった。
【０００８】
上記バイオサーファクタントとしては、糖脂質系、アシルペプタイド系、リン脂質系、脂肪酸系および高分子化合物系の５種類のバイオサーファクタントを挙げることができる。
【０００９】
上記バイオサーファクタントのうち、リン脂質系バイオサーファクタントであるレシチンは、古くから乳化剤として用いられているばかりでなく、水に懸濁させると、当該リン脂質が会合して二重膜を形成し、水相を閉じこめたベシクルを形成することが知られている。このベシクルはリポソームとも呼ばれ、生体膜のモデルまたは化粧品や薬物の担体として利用されている。なお、リン脂質系以外のバイオサーファクタントにおいてベシクルを形成するものは、ほとんど知られていないのが現状である。
【００１０】
一方、糖脂質系のバイオサーファクタントとしては、細菌または酵母によって生産される、多くの種類のバイオサーファクタントが報告されている。糖脂質系のバイオサーファクタントは、生分解性が高く、低毒性であって環境に優しいばかりでなく、優れた生理機能を有している。例えば、糖脂質系のバイオサーファクタントは、それ自体が保湿効果が高いことが知られており、化粧品等の成分として用いることが期待されている。
【００１１】
代表的な糖脂質系バイオサーファクタントの一つにマンノシルエリスリトールリピッド（以下「ＭＥＬ」と示すことがある）がある。ＭＥＬは、Ustilago nuda（ウスチラゴ・ヌーダ）とShizonella melanogramma（シゾネラ・メラノグラマ）から発見された物質である（非特許文献１及び２参照）。その後、イタコン酸生産の変異株であるCandida属酵母（特許文献２及び非特許文献３参照）、Candida antarctica（キャンデダ・アンタークチカ）（現在はPseudozyma antarctica（シュードザイマ・アンタークチカ））（非特許文献４及び５参照）、Kurtzmanomyces（クルツマノマイセス）属（非特許文献６参照）等の酵母らによっても生産されることが報告されている。現在では、長時間の連続培養・生産を行うことで１００ｇ／Ｌ以上の生産が可能となっている。
【００１２】
ＭＥＬには糖骨格のエリスリトールの光学異性体として、以下の一般式（１）に示されるような４−Ｏ−β−Ｄ−マンノピラノシル−ｍｅｓｏ−エリスリトール構造と１−Ｏ−β−Ｄ−マンノピラノシル−ｍｅｓｏ−エリスリトール構造（下記一般式（２））が存在する。
【００１３】
【化１】
2011168548.tif 000002
【００１４】
【化２】
2011168548.tif 000003
【００１５】
この１−Ｏ−β−Ｄ−マンノピラノシル−ｍｅｓｏ−エリスリトール構造を有するＭＥＬの１種を合成し、これとの比較によって従来のＭＥＬの糖骨格が上記一般式（１）の構造であることが証明されている（非特許文献７）。ごく最近、従来の４−Ｏ−β−Ｄ−マンノピラノシル−ｍｅｓｏ−エリスリトール構造を有するＭＥＬに対して、その光学異性体である上記一般式（２）の１−Ｏ−β−Ｄ−マンノピラノシル−ｍｅｓｏ−エリスリトール構造を有するＭＥＬをシュードザイマ・ツクバエンシス（Pseudozyma tsukubaensis）等の微生物を用いて生産することによって、量産できることが判明した（特許文献３）。
【００１６】
従来の４−Ｏ−β−Ｄ−マンノピラノシル−ｍｅｓｏ−エリスリトール構造を有するＭＥＬについては、抗菌性、抗腫瘍性、糖タンパク結合能をはじめ、様々な生理活性を有することが報告されている（非特許文献８）。また、この従来のＭＥＬは極めて特異な自己集合特性を示し、分子構造の僅かな違いが自己集合体の形成に多大な影響を与えるばかりでなく、それを活用したベシクル形成について、希薄溶液（６．３×１０−２ｗｔ％以下）においてのみ報告されている（非特許文献９）。さらに、従来のＭＥＬの両連続スポンジ構造を用いた液晶乳化技術（特許文献４）についても報告している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１７】
【特許文献１】特許３０９５４２０号明細書
【特許文献２】特公昭５７−１４５８９６号公報
【特許文献３】ＷＯ２００８／０１８４４８
【特許文献４】特開２００７−１８１７８９号公報
【非特許文献】
【００１８】
【非特許文献１】アール．エイチ．ハスキンス（R. H. Haskins），ジェイ．エー．トーン（J. A. Thorn），B. Boothroyd，「カナデアン ジャーナル オブ ケミストリー（Can. J. Microbiol.）」，１巻，ｐ７４９−７５６（１９５５）．
【非特許文献２】ジー．デム（G. Deml），ティ．アンケ（T. Anke），エフ．オーバーウインカー（F. Oberwinkler），ビー．エム．ジアネッティー（B. M. Giannetti），ダブリュ．ステグリッチ（W. Steglich），「フィトケミストリー（Phytochemistry）」，１９巻，ｐ８３−８７（１９８０）．
【非特許文献３】ティ．ナカハラ（T. Nakahara），エイチ．カワサキ（H. Kawasaki），ティ．スギサワ（T. Sugisawa），ワイ．タカモリ（Y. Takamori），ティ．タブチ（T. Tabuchi），「ジャーナル オブ ファーメンテーション テクノロジー（J. Ferment.Technol.）」，（日本），日本発酵工学会，６１巻，ｐ１９−２３（１９８３）．
【非特許文献４】ディ．キタモト（D. Kitamoto），エス．アキバ（S. Akiba），シー．ヒオキ（C. Hioki），ティ．タブチ（T. Tabuchi）「アグリカリチュラル アンド バイオロジカル ケミストリー（Agric. Biol. Chem.）」，（日本），日本農芸化学会，５４巻．ｐ３１−３６（１９９０）．
【非特許文献５】エイチ．エス．キム（H.-S. Kim），ビー．ディ．ユーン（B.-D. Yoon），ディ．エイチ．チョン（D.-H. Choung），エイチ．エム．オー（H.-M. Oh），ティ．カツラギ（T. Katsuragi），ワイ．タニ（Y. Tani）「アプライド マイクロバイオロジー アンド バイオテクノロジー（Appl. Microbiol. Biotechnol.）」，（ドイツ），スプリンガー−バーラグ（Springer-Verlag），５２巻，ｐ７１３−７２１（１９９９）．
【非特許文献６】角川（K. kakukawa），玉井（M. Tamai），今村（K. Imamura），宮本（K. Miyamoto），三好（S. Miyoshi），森永（Y. Morinaga），鈴木（O. Suzuki），宮川（T. Miyakawa）「バイオサイエンス，バイオテクノロジー アンド バイオケミストリー（Biosci. Biotechnol. Biochem.）」，（日本），日本農芸化学会，６６巻，ｐ１８８−１９１（２００２）．
【非特許文献７】ディ．クリッチ（D. Crich），エム．エー．モーラ（M. A. Mora），アール．クルツ（R. Cruz）「テトラヘドロン（Tetrahedron）」，（オランダ），エルゼビア（Elsevier），５８巻，ｐ３５−４４（２００２）．
【非特許文献８】北本  大「オレオサイエンス」，（日本），日本油化学会，３巻，ｐ６６３−６７２（２００３）．
【非特許文献９】ティ．イムラ（T. Imura），エヌ．オオタ（N. Ohta），ケー．イノウエ（K. Inoue），エヌ．ヤギ（N. Yagi），エイチ．ネギシ（H. Negishi），エイチ．ヤナギシタ（H. Yanagishita），ディ．キタモト（D. Kitamoto）「ケミストリー ア ヨーロピアン ジャーナル（Chem. Eur. J）」，（米国），ワイリー（Wiley），１２巻，ｐ２４３４−２４４０（２００６）．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
本発明は、皮膚に対して有効な高濃度で化粧料中に、結晶を析出させることなく安定的に配合することを可能にし、経時保存安定性が高く肌荒れ改善効果に優れた水中油型乳化化粧料を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
かかる実情において、本発明者らは上記問題点を解決すべく鋭意研究を行ったところ、バイオサーファクタント、例えば上述のＭＥＬを用いて、疎水性ポリグリセリン脂肪酸エステル、水溶性高分子、及び特定のグリセリン類を組み合わせて配合することにより、上記課題を解決できることを見出し、本発明を完成した。
【００２１】
すなわち、本発明は以下のような構成からなる。
（１）次の成分（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）及び（Ｄ）を含有することを特徴とする水中油型乳化化粧料。
（Ａ）バイオサーファクタント
（Ｂ）ＨＬＢ８以下のポリグリセリン脂肪酸エステル
（Ｃ）水溶性高分子
（Ｄ）グリセリン及び／又はジグリセリン
（２）バイオサーファクタントが、マンノース骨格を有することを特徴とする（１）の水中油型乳化化粧料。
（３）バイオサーファクタントが、マンノース骨格の１位の水酸基に糖アルコールがグリコシド結合していることを特徴とする（２）の水中油型乳化化粧料。
（４）マンノース骨格を有するバイオサーファクタントがマンノシルエリスリトールリピッド（ＭＥＬ）、マンノシルマンニトールリピッド（ＭＭＬ）、マンノシルソルビトールリピッド（ＭＳＬ）、マンノシルアラビトールリピッド（ＭＡｒａＬ）及びマンノシルリビトールリピッド（ＭＲＬ）からなる群より選ばれた１種以上の化合物であることを特徴とする（２）または（３）の水中油型乳化化粧料。
（５）ＭＥＬが、マンノシルエリスリトールリピッドＡ（ＭＥＬ−Ａ）、マンノシルエリスリトールリピッドＢ（ＭＥＬ−Ｂ）、マンノシルエリスリトールリピッドＣ（ＭＥＬ−Ｃ）、マンノシルエリスリトールリピッドＤ（ＭＥＬ−Ｄ）、ＭＥＬ−Ａのトリアシル体、ＭＥＬ−Ｂのトリアシル体、ＭＥＬ−Ｃのトリアシル体及びＭＥＬ−Ｄのトリアシル体からなる群より選ばれた１種以上の化合物であることを特徴とする（４）の水中油型乳化化粧料。
（６）バイオサーファクタントが、飽和脂肪酸及び／又は不飽和脂肪酸を含有していることを特徴とする（１）〜（５）のいずれかの水中油型乳化化粧料。
（７）（Ａ）成分の含有量が０．５〜１０重量％で、且つ、前記（Ａ）成分に対する前記（Ｂ）成分の配合重量比（（Ｂ）／（Ａ））が０．２〜１であることを特徴とする（１）〜（６）のいずれかの水中油型乳化化粧料。
（８）（Ｂ）ポリグリセリン脂肪酸エステルが炭素数１６〜２２の直鎖又は分岐鎖の、飽和又は不飽和の脂肪酸及び重合度２〜１０のポリグリセリンから構成されることを特徴とする（１）〜（７）のいずれかの水中油型乳化化粧料。
（９）（Ｃ）水溶性高分子がイオン性であることを特徴とする（１）〜（８）のいずれかの水中油型乳化化粧料。
（１０）（Ｅ）グリセリン誘導体及び／又はアミノ酸誘導体から成る液状油を含有することを特徴とする（１）〜（９）のいずれかの水中油型乳化化粧料。
【発明の効果】
【００２２】
本発明の水中油型乳化化粧料は、バイオサーファクタントを含有するため、保存安定性が高く、肌荒れ改善効果に優れた、特に化粧料として有用である水中油型乳化化粧料が提供される。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明の水中油型乳化化粧料は、バイオサーファクタント、特にＭＥＬを含むものである。それ故、本発明の水中油型乳化化粧料は、優れた特性を示すという効果を奏する。
【００２４】
（バイオサーファクタント）
本発明の化粧料に固形脂の一部として使用される（Ａ）バイオサーファクタントとは、生物によって生み出される界面活性能力や乳化能力を有する物質の総称であり、優れた界面活性や、高い生分解性を示すばかりでなく、様々な生理作用を有していることから合成界面活性剤とは異なる挙動・機能を発現する可能性がある。
【００２５】
上記バイオサーファクタントとしては、マンノシルエリスリトールリピッド（ＭＥＬ）、ＭＥＬ以外のマンノシルアルジトールリピッド（ＭＡＬ）としては、マンノシルマンニトールリピッド（ＭＭＬ）、マンノシルソルビトールリピッド（ＭＳＬ）、マンノシルアラビトールリピッド（ＭＡｒａＬ）、マンノシルリビトールリピッド（ＭＲＬ）などが挙げられ、なかでも、ラメラ構造又は／及びベシクルを形成するバイオサーファクタントを利用するのが好ましく、ＭＥＬが特に好ましい。
【００２６】
（ＭＥＬ)
ＭＥＬの構造を一般式（３）に示す。一般式（３）中、置換基Ｒ１は、同一でも異なっていてもよい炭素数４〜２４の脂肪族アシル基である。ＭＥＬは、マンノースの４位及び６位のアセチル基の有無に基づいて、ＭＥＬ−Ａ、ＭＥＬ−Ｂ、ＭＥＬ−Ｃ及びＭＥＬ−Ｄの４種類に分類される。
【００２７】
【化３】
2011168548.tif 000004
【００２８】
具体的には、ＭＥＬ−Ａは、一般式（３）中、置換基Ｒ２およびＲ３がともにアセチル基である。ＭＥＬ−Ｂは、一般式（３）中、置換基Ｒ２はアセチル基であり、置換基Ｒ３は水素である。ＭＥＬ−Ｃは、一般式（３）中、置換基Ｒ２が水素であり、置換基Ｒ３はアセチル基である。ＭＥＬ−Ｄは、一般式（３）中、置換基Ｒ２及びＲ３がともに水素である。
【００２９】
上記ＭＥＬ−Ａ〜ＭＥＬ−Ｄにおける置換基Ｒ１の炭素数は、ＭＥＬ生産培地に含有させる油脂類であるトリグリセリドを構成する脂肪酸の炭素数、および、使用するＭＥＬ生産菌の脂肪酸の資化の程度によって変化する。また、上記、トリグリセリドが不飽和脂肪酸残基を有する場合、ＭＥＬ生産菌が上記不飽和脂肪酸の二重結合部分まで資化しなければ、置換基Ｒ１として不飽和脂肪酸残基を含ませることも可能である。以上の説明から明らかなように、得られるＭＥＬは、通常、置換基Ｒ１の脂肪酸残基部分が異なる化合物の混合物の形態である。
【００３０】
本発明の組成物には一般式（４）または一般式（５）に示されている構造を有するマンノシルエリスリトールリピッドが含まれている。尚、一般式（４）中、置換基Ｒ１は同一でも異なっていてもよい炭素数４〜２４の脂肪族アシル基であり、置換基Ｒ２は同一でも異なっていてもよい水素またはアセチル基であり、置換基Ｒ３は水素または炭素数２〜２４の脂肪族アシル基である。また、一般式（５）中、置換基Ｒ１は同一でも異なっていてもよい炭素数４〜２４の脂肪族アシル基であり、置換基Ｒ２は同一でも異なっていてもよい水素またはアセチル基であり、置換基Ｒ３は水素または炭素数２〜２４の脂肪族アシル基である。
【００３１】
一般式（４）及び一般式（５）における置換基Ｒ１は、同一でも異なっていてもよい炭素数４〜２４の脂肪族アシル基である。置換基Ｒ１の炭素数は上記範囲内であれば特に限定されないが、８個〜１４個であることがさらに好ましい。
【００３２】
また、上記一般式（４）及び一般式（５）中の置換基Ｒ１は、飽和脂肪族アシル基であっても不飽和脂肪族アシル基であってもよく、特に限定されるものではない。不飽和結合を有している場合、例えば、複数の二重結合を有していても良い。炭素鎖は直鎖であっても分岐鎖状であってもよい。また、酸素原子含有炭化水素基の場合、含まれる酸素原子の数及び位置は特に限定されない。
【００３３】
【化４】
2011168548.tif 000005
【００３４】
【化５】
2011168548.tif 000006
【００３５】
ＭＥＬ以外のＭＡＬ（マンノシルアルジトールリピッド）の構造は一般式(６)に示す（式中、置換基Ｒ２は同一でも異なっていてもよい水素またはアセチル基である）。エリスリトール以外の糖アルコール（アルジトール）としては、マンニトール、アラビトール、リビトール、ソルビトールが付加している（ｎ＝４：マンニトール、ソルビトール、n=２：アラビトール、リビトール)。一般式（６）に対応させれば、ＭＡＬはマンノースの２位、３位に炭素数２〜２０、好ましくは炭素数４〜１８、より好ましくは炭素数６〜１４の飽和又は不飽和の直鎖又は分枝を有するアルカノイル基を有する（式中、置換基Ｒ２は同一でも異なっていてもよい水素またはアセチル基である）
【００３６】
【化６】
2011168548.tif 000007
【００３７】
（式中、置換基Ｒ１は同一でも異なっていてもよい炭素数２〜２０、好ましくは炭素数４〜１８、より好ましくは炭素数６〜１４の飽和又は不飽和の直鎖又は分枝を有するアルカノイル基を有し、式中、置換基Ｒ２は同一でも異なっていてもよい水素またはアセチル基である。好ましくは、式中、置換基Ｒ２のどちらもアセチル基である化合物である。）  
【００３８】
（トリアシル体）
本発明に用いられるバイオサーファクタントは、ＭＥＬのトリアシル体及びＭＥＬ以外のＭＡＬのトリアシル体でもよい。トリアシル体のバイオサーファクタントは、ＭＥＬやＭＥＬ以外のＭＡＬよりもさらに高い疎水性を有するバイオサーファクタントである。例えば、ＭＥＬ生産菌の培養液にも存在するし、大量に得る時は、酵素を用いてＭＥＬを種々の植物油と反応することによって製造することもできる。
【００３９】
ＭＥＬのトリアシル体、すなわちトリアシルマンノシルエリスリトールリピッド（トリアシルＭＥＬと称することがある）は、一般式（４）または一般式（５）中、置換基Ｒ１およびＲ３がいずれも脂肪族アシル基であればトリアシルＭＥＬとなり、置換基Ｒ２は同一でも異なっていてもよい水素またはアセチル基である。トリアシルＭＥＬもＭＥＬと同様、マンノースの４位及び６位のアセチル基の有無に基づいて、トリアシルＭＥＬ−Ａ、トリアシルＭＥＬ−Ｂ、トリアシルＭＥＬ−Ｃ及びトリアシルＭＥＬ−Ｄの４種類に分類される。
【００４０】
【化７】
2011168548.tif 000008
【００４１】
【化８】
2011168548.tif 000009
【００４２】
トリアシルＭＥＬは、ジアシルＭＥＬとは異なった性質を示す。具体的には、高い疎水性を有することからエモリエント剤として従来のＭＥＬと比べても種々のオイル成分と馴染みやすい点で優れている。
【００４３】
本発明に好ましく用いられるバイオサーファクタントは、一般式（７）または一般式（８）にて示される構造を有するＭＥＬ−Ｂである。
【００４４】
【化９】
2011168548.tif 000010
【００４５】
【化１０】
2011168548.tif 000011
【００４６】
（一般式（７）及び一般式（８）中、置換基Ｒ１は同一でも異なっていてもよい炭素数４〜２４の脂肪族アシル基である）
【００４７】
なお、上記バイオサーファクタントは、単独で使用してもよいが、２種以上のバイオサーファクタントを併用することもできる。
【００４８】
（バイオサーファクタントの製造方法）
バイオサーファクタントの製造方法は特に制限されるものはないが、微生物を用いた発酵方法を任意に選択して行えば良い。例えばＭＥＬ (ＭＥＬ−Ａ、ＭＥＬ−Ｂ、ＭＥＬ−Ｃ)の培養生産は常法に従って、Pseudozyma antarctica(NBRC 1073)により生産することができ、微生物としてはPseudozyma  antarctica、Pseudozyma  sp.等を用いることができる。いずれの微生物でも容易にＭＥＬ混合物が得られることは周知の事実である。ＭＥＬ混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーを用いて精製し、ＭＥＬ−Ａ、ＭＥＬ−Ｂ及びＭＥＬ−Ｃを単離することが出来る。また、ＭＥＬ−Ｂを生産する菌としては、Pseudozyma antarctica 、及びPseudozyma tsukubaensisが知られており、その菌を用いてもよい。ＭＥＬ−Ｃを生産する菌としては、Pseudozyma hubeiensis、Pseudozyma graminicola等が知られており、その菌を用いてもよい。ＭＥＬを生産する能力を有する微生物としては特に限定するものではなく、目的に応じて適宜使用することができる。
【００４９】
バイオサーファクタントを生産するときの発酵培地は、酵母エキス、ペプトン等のＮ源、グルコース、グリセロール、フルクトース等のＣ源、及び硝酸ナトリウム、リン酸水素二カリウム、硫酸マグネシウム７水塩等の無機塩類からなる一般的な組成の培地を用いることができ、これにオリーブ油、ダイズ油、ヒマワリ油、トウモロコシ油、キャノーラ油、ココナッツ油等の油脂類、並びに、流動パラフィン、テトラデカン等の炭化水素等の非水溶性基質の単独或いは２種以上を添加したものを使用することができる。
【００５０】
ｐＨや温度等の発酵条件や培養時間等は任意に設定でき、発酵後の培養液をそのまま本発明のバイオサーファクタントとして使用することが可能である。また、発酵後の培養液を必要に応じて濾過、遠心分離、抽出、精製、滅菌等の任意の操作を適宜加えることも可能であり、得られたエキスを希釈、濃縮、乾燥することもできる。
【００５１】
原料とする油脂類としては植物油脂が好ましい。植物油脂は特に限定されず、目的に応じて適宜選定することができる。例えば、大豆油、菜種油、コーン油、ピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、パーム油などが挙げられ、これらの中でも、大豆油、オリーブ油がバイオサーファクタント（特にＭＥＬ）の生産効率（生産量、生産速度、及び収率）を向上させることができる点で特に好ましい。これらは、１種を単独で、または２種以上を併用しても構わない。
【００５２】
無機窒素源としては特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば、硝酸アンモニウム、尿素、硝酸ナトリウム、塩化アンモニウム、硫安等が挙げられる。
【００５３】
バイオサーファクタントの回収、精製方法には特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。例えば、培養液を遠心分離して油分を回収し、酢酸エチル等の有機溶媒で抽出濃縮することにより回収することができる。
【００５４】
抽出溶媒としては、水、アルコール類（例えば、メタノール、無水エタノール、エタノールなどの低級アルコール、またはプロピレングリコール、１，３-ブチレングリコールなどの多価アルコール）、アセトンなどのケトン類、ジエチルエーテル、ジオキサン、アセトニトリル、酢酸エチルなどのエステル類、キシレン、ベンゼン、クロロホルムなどの有機溶媒を、単独であるいは２種類以上の混液を任意に組み合わせて使用することができ、また、各々の溶媒抽出物が組み合わされたものでも使用することができる。
【００５５】
抽出方法は特に制限されるものはないが、通常、常温から常圧下での溶媒の沸点の範囲であればよく、抽出後は濾過またはイオン交換樹脂を用い、吸着・脱色・精製して溶液状、ペースト状、ゲル状、粉末状とすればよい。多くの場合は、そのままの状態で利用できるが、必要であれば、その効力に影響のない範囲でさらに脱臭、脱色などの精製処理を加えてもよい。脱臭・脱色等の精製処理手段としては、活性炭カラムなどを用いればよく、抽出物質により一般的に適用される通常の手段を任意に選択して行えばよい。必要に応じて、シリカゲルカラムを用いて精製することにより、純度の高いバイオサーファクタントを得ることができる。
【００５６】
（トリアシル体製造方法）
バイオサーファクタントのトリアシル体を得る方法を、ＭＥＬのトリアシル体を製造する方法を例として説明するが、本発明に用いられるバイオサーファクタントのトリアシル体はトリアシルＭＥＬに限定されない。
【００５７】
例えば、トリアシルＭＥＬを得るためには、上記のようにして微生物を発酵して製造した培養液からトリアシルＭＥＬ画分を精製して得ることができる。また、大量に得るためには、ＭＥＬを有機溶媒に溶かし、植物油などの脂肪酸誘導体を添加、加水分解酵素の存在下でエステル化反応またはエステル交換反応を行う。
【００５８】
ＭＥＬのエリスリトール部に導入される脂肪酸は長鎖炭化水素の1価のカルボン酸であればよい。また、飽和脂肪酸であっても不飽和脂肪酸であってもよい。不飽和脂肪酸の場合、複数の二重結合を有していてもよい。炭素鎖は直鎖状であってもよく分岐鎖状であってもよい。さらに、脂肪酸の誘導体である脂肪酸誘導体を本発明に使用してもよいし、脂肪酸と脂肪酸誘導体の混合物を本発明に使用してもよい。ＭＥＬのエリスリトール部に導入される脂肪酸または脂肪酸誘導体は、油類、高級脂肪酸、合成エステル由来であることが好ましい。
【００５９】
「油類」としては、植物油、動物油、鉱物油及びその硬化油であればよい。具体的には、アボカド油、オリーブ油、ゴマ油、ツバキ油、月見草油、タートル油、マカデミアンナッツ油、トウモロコシ油、ミンク油、ナタネ油、卵黄油、パーシック油、小麦胚芽油、サザンカ油、ヒマシ油、アマニ油、サフラワー油、綿実油、エノ油、大豆油、落花生油、茶実油、カヤ油、コメヌカ油、キリ油、ホホバ油、カカオ脂、ヤシ油、馬油、パーム油、パーム核油、牛脂、羊脂、豚脂、ラノリン、鯨ロウ、ミツロウ、カルナウバロウ、モクロウ、キャンデリラロウ、スクワラン等の動植物油及びその硬化油。流動パラフィン、ワセリン等の鉱物油、トリパルミチン酸グリセリン等の合成トリグリセリンが挙げられる。好ましくはアボカド油、オリーブ油、ゴマ油、ツバキ油、月見草油、タートル油、マカデミアンナッツ油、トウモロコシ油、ミンク油、ナタネ油、卵黄油、パーシック油、小麦胚芽油、サザンカ油、ヒマシ油、アマニ油、サフラワー油、綿実油、エノ油、大豆油、落花生油、茶実油、カヤ油、コメヌカ油、より好ましくはオリーブ油、大豆油である。
【００６０】
「高級脂肪酸」としては、例えばカプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、１２−ヒドロキシステアリン酸、イソステアリン酸、ウンデシン酸、トール酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸などが挙げられる。好ましくはラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ステアリン酸、ウンデシレン酸、より好ましくはオレイン酸、リノール酸、ウンデシレン酸である。
【００６１】
「合成エステル」としては、例えば、カプロン酸メチル、カプリル酸メチル、カプリン酸メチル、ラウリン酸メチル、ミリスチン酸メチル、パルミチン酸メチル、オレイン酸メチル、リノール酸メチル、リノレン酸メチル、ステアリン酸メチル、ウンデシン酸メチル、カプロン酸エチル、カプリル酸エチル、カプリン酸エチル、ラウリン酸エチル、ミリスチン酸エチル、パルミチン酸エチル、オレイン酸エチル、リノール酸エチル、リノレン酸エチル、ステアリン酸エチル、ウンデシン酸エチル、カプロン酸ビニル、カプリル酸ビニル、カプリン酸ビニル、ラウリン酸ビニル、ミリスチン酸ビニル、パルミチン酸ビニル、オレイン酸ビニル、リノール酸ビニル、リノレン酸ビニル、ステアリン酸ビニル、ウンデシン酸ビニル、オクタン酸セチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸ミリスチル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、オレンイ酸デシル、ジメチルオクタン酸、乳酸セチル、乳酸ミリスチル等が挙げられる。好ましくはラウリン酸メチル、ミリスチン酸メチル、パルミチン酸メチル、オレイン酸メチル、リノール酸メチル、リノレン酸メチル、ステアリン酸メチル、ウンデシレン酸メチル、より好ましくはオレイン酸メチル、リノール酸メチル、ウンデシレン酸メチルである。
【００６２】
トリアシルＭＥＬは、上述のようにＭＥＬを有機溶媒に溶解して反応させることにより生産することができる。有機溶媒としては、ＭＥＬを可溶化できるものであれば限定されない。全部を可溶化できなくても一部を可溶化できるものであればよい。また、有機溶媒は複数の有機溶媒の混合物でもよい。具体的には、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、アセトン、プロパノン、ブタノン、ペンタン−２−オン、１，２−エタンジオール、２，３−ブタンジオール、ジオキサン、アセトニトリル、２−メチル−ブタン−２−オール、第３級ブタノール、２−メチルプロパノール、４−ヒドロキシ−２−メチルペンタノン、テトラヒドロフラン、ヘキサン、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、ピリジン、メチルエチルケトンなどを挙げることができる。好ましくはアセトン、テトラヒドロフラン、第３級ブタノール、アセトニトリル、ジオキサン、より好ましくはアセトンである。
【００６３】
加水分解酵素としては、リパーゼ、プロテアーゼ、エステラーゼが挙げられる。これらの中から選択される少なくとも１種を用いることが好ましく、複数の加水分解酵素を用いてもよい。好ましくはリパーゼ、エステラーゼ、より好ましくはリパーゼである。
【００６４】
具体的には、例えば、ＭＥＬ生産微生物の培養液から精製したＭＥＬを有機溶媒（例えば、アセトン）に溶解し、これに市販のリパーゼ（例えば、ノボザイム４３５（ノボザイムズ社製）など）及び植物油脂を添加する。
【００６５】
この製造方法の場合、反応温度は１０〜１００℃、好ましくは２０〜５０℃、より好ましくは２５〜４０℃で、１日〜７日間攪拌すればよい。また、反応液にモレキュラーシーブスを添加してもよい。この製造方法により、材料として添加したＭＥＬがほぼ定量的にトリアシル体となる。
【００６６】
トリアシルＭＥＬの精製は、上述のＭＥＬの精製に準じて行うことができる。
【００６７】
（飽和脂肪酸側鎖有するＭＥＬの製造方法）
飽和側鎖有するＭＥＬの製造は、上述のバイオサーファクタントの製造方法に準じて行うことができる。その際、原料とする油脂類としては、オリーブ油、飽和脂肪酸あるいはそのエステル体、流動パラフィン、テトラデカン等の炭化水素等の非水溶性基質の単独あるいは２種以上を添加することにより行う。飽和側鎖有するＭＥＬの精製は、上述のＭＥＬの精製に準じて行うことができる。
【００６８】
（ＭＭＬ等のＭＡＬの製造方法）
ＭＭＬ等のエリスリトール以外のアルジトールを有するＭＡＬの製造は、上述のバイオサーファクタントの製造方法に準じて行うことができる。その際、原料としては、マンニトール、アラビトール、リビトール、ソルビトール等のアルジトールの単独あるいは２種以上を添加することにより行う。ＭＭＬ等のエリスリトール以外のアルジトールを有するＭＡＬの精製は、上述のＭＥＬの精製に準じて行うことができる。
【００６９】
本発明において、（Ｂ）成分のポリグリセリン脂肪酸エステルは、（Ａ）成分のアミド化合物の極性に近いことが好ましく、ＨＬＢは８以下である。更に１〜７であることが好ましく、特に３〜６であることが好ましい。ポリグリセリン脂肪酸エステルの極性はアミド化合物との極性が近いことにより、アミド化合物の結晶化を抑制すると考えられている。ここで、ＨＬＢは、例えば、界面活性剤の性質と応用（刈米孝夫著、昭和５５年、幸書房発行）ｐ．８９〜９７に記載されたＨＬＢ既知の乳化剤Ｂとの混合物の乳化試験によるＨＬＢの測定方法により次式によって求められる。
ＨＬＢｏ＝（Ｗａ×ＨＬＢａ＋Ｗｂ×ＨＬＢｂ）／（Ｗａ＋Ｗｂ）
Ｗａ：ポリグリセリン脂肪酸エステルの重量％
Ｗｂ：ＨＬＢ既知の乳化剤の重量％
ＨＬＢａ：ポリグリセリン脂肪酸エステルのＨＬＢ値
ＨＬＢｂ：ＨＬＢ既知の乳化剤のＨＬＢ値
ＨＬＢｏ：乳化する油剤の所要ＨＬＢ値
ここで、ＷａとＷｂは最適な乳化状態を示す場合の配合比を用いる。既知の乳化剤としては、ＨＬＢ９以上のノニオン乳化剤が使用されており、例えばモノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０ＥＯ）（ＨＬＢ１４．９）等が挙げられる。また、乳化する油剤としては一般的な炭化水素油やエステル油等が使用されており、例えば流動パラフィン（所要ＨＬＢ１０）が挙げられる。
【００７０】
（Ｂ）成分のＨＬＢ８以下のポリグリセリン脂肪酸エステルとしては、炭素数１６〜２２の直鎖又は分岐鎖の、飽和又は不飽和の脂肪酸および重合度２〜１０のポリグリセリンから構成されるものが好ましく、更には、炭素数１６〜２２の直鎖飽和脂肪酸および重合度５〜１０のグリセリンから構成されるものが特に好ましい。
【００７１】
炭素数１６〜２２の直鎖飽和脂肪酸としては、例えば、ステアリン酸、ベヘニン酸等が挙げられる。
【００７２】
また、重合度５〜１０のポリグリセリンの例としては、ペンタグリセリン、ヘキサグリセリン、デカグリセリン等が挙げられる。
【００７３】
好適に用いられるポリグリセリン脂肪酸エステルの具体的な例としては、トリミリスチン酸ペンタグリセリル、トリステアリン酸ペンタグリセリル、ヘキサステアリン酸ペンタグリセリル、トリステアリン酸ヘキサグリセリル、ペンタステアリン酸ヘキサグリセリル、ヘキサステアリン酸ヘキサグリセリル、オクタステアリン酸ヘキサグリセリル、トリステアリン酸デカグリセリル、ペンタステアリン酸デカグリセリル、ヘプタステアリン酸デカグリセリル、デカステアリン酸デカグリセリル、ヘプタベヘニン酸デカグリセリル、ドデカベヘニン酸デカグリセリル等が挙げられる。
【００７４】
市販品としては、サンソフトＱ−１８５Ｓ（ペンタステアリン酸デカグリセリル、ＨＬＢ４．５）、サンソフトＱ−１８１０Ｓ（デカステアリン酸デカグリセリル、ＨＬＢ３．０）、サンソフトＡ−１８６Ｅ（ヘキサステアリン酸ペンタグリセリル、ＨＬＢ４．０）、サンファットＰＳ−６６（ヘキサステアリン酸ヘキサグリセリル、ＨＬＢ４．０）、サンファットＰＳ−６８（オクタステアリン酸ヘキサグリセリル、ＨＬＢ３．５）（以上太陽化学）など；ＴＳ−７５０（トリステアリン酸デカグリセリル、ＨＬＢ３）（以上、阪本薬品工業）；デカグリン５Ｓ（ペンタステアリン酸デカグリセリル、ＨＬＢ３．５）（以上、日光ケミカルズ）；等が挙げられる。
【００７５】
上記ポリグリセリン脂肪酸エステル（Ｂ）は、単独又は２種以上を組み合わせて用いても良い。
【００７６】
本発明の水中油型乳化化粧料中におけるポリグリセリン脂肪酸エステル（Ｂ）の含有量は、必要な剤型、使用感、保存安定性に応じて適宜選択することができるが、保存安定性の点から、全組成中に０．１〜１０重量％が好ましく、０．２〜５重量％が更に好ましい。
【００７７】
また、（Ａ）成分に対する（Ｂ）成分の配合重量比（（Ｂ）／（Ａ））が０．２〜１、更に０．５〜１であることが好ましい。成分（Ｂ）の配合量が少なすぎる場合には、成分（Ａ）の安定化が図れない場合があり、反対に成分（Ｂ）の配合量が多すぎる場合には、製剤の分離安定性が損なわれる場合がある。
【００７８】
（Ｃ）成分の水溶性高分子は、油相の周囲に保護コロイドを形成することにより、油相間におけるアミド化合物の分子凝集・結晶化を抑制すると考えられる。保護コロイド作用を有する水溶性高分子としては、カルボキシビニルポリマー、アルキル変性カルボキシビニルポリマー、グアーガム、キサンタンガム、カラギーナン、ペクチン等のアニオン性高分子；カチオン化セルロース、カチオン化グアーガム等のカチオン性高分子；ヒドロキシエチルセルロース、ローカストビーンガム、ポリエチレングリコール等の非イオン性高分子；等が挙げられる。中でも、静電的反発力が働く点からイオン性であることが好ましく、特に、静電的反発力の働くカルボキシビニルポリマー、アルキル変性カルボキシビニルポリマー等のアニオン性高分子であることが好ましい。
【００７９】
水溶性高分子（Ｃ）は、単独又は２種以上を組み合わせて用いても良い。
【００８０】
本発明の水中油型乳化化粧料中における水溶性高分子（Ｃ）の含有量は、必要な剤型、使用感、保存安定性に応じて適宜選択することができるが、保存安定性の点から、全組成中に０．０２〜２重量％が好ましく、０．０５〜１重量％が更に好ましい。
【００８１】
（Ｄ）成分のグリセリン及び／又はジグリセリン（以下、グリセリン類とする）は、ＨＬＢ８以下のポリグリセリン脂肪酸エステルと併用することにより、（Ａ）成分であるアミド化合物の結晶化抑制効果を高める成分である。
【００８２】
グリセリン類は２種以上を併用しても良く、その含有量は、必要な剤型、使用感、保存安定性に応じて適宜選択することができるが、保存安定性の点から、全組成中に１〜３０重量％が好ましく、２〜２０重量％が更に好ましい。
【００８３】
本発明においては、グリセリン及び／又はジグリセリン以外の多価アルコールとして、例えば、プロピレングリコール、ジプリピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等をグリセリン類の効果を損なわない範囲で後述する水相に併用することも可能である。
【００８４】
本発明に係る水中油型乳化化粧料の水相連続相に含まれる水の含有量は、全組成中に１０〜９８重量％、好ましくは４０〜９５重量％である。水以外の水相成分としては、前記グリセリン類以外の多価アルコールのほか、通常化粧料に使用できる水溶性の成分を含んでも良い。
【００８５】
水中油型化粧料を構成する油相分散相に含まれる油性成分としては、一般に化粧料に使用される液状、半固体及び固体状の、合成及び天然由来の油性成分、例えば炭化水素油、エステル油、エーテル油、シリコーン油、フッ素油等が挙げられる。
【００８６】
液状油としては、例えば、ホホバ油等の植物油、液状ラノリン等の動物油；流動パラフィン、スクワラン等の炭化水素油；脂肪酸エステル、多価アルコール脂肪酸エステル、グリセリン誘導体；アミノ酸誘導体等のエステル油；ジメチルポリシロキサン、ジメチルシクロポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、メチルハイドロジェンポリシロキサン、高級アルコール変性オルガノポリシロキサン等のシリコーン油；フルオロポリエーテル、パーフルオロアルキルエーテルシリコーン等のフッ素油等が挙げられる。
【００８７】
固型又は半固型の油性成分としては、例えばホホバワックス等の植物油；グリセリンモノステアリルエーテル、グリセリンモノセチルエーテル等のアルキルグリセリルエーテル；セタノール、ステアリルアルコール、ベヘニルアルコール等の高級アルコールが挙げられる。
【００８８】
油性成分は１種又は２種以上を用いても良く、油性成分の総含有量は、全組成中に０．１〜３０重量％である。
【００８９】
本発明の油性成分としては特に、（Ｅ）グリセリン誘導体及び／又はアミノ酸誘導体からなる液状油を含むことが、経時での（Ａ）成分の結晶析出が更に抑制される点から好ましい。
【００９０】
（Ｅ）グリセリン誘導体及び／又はアミノ酸誘導体からなる液状油としては、炭素数６〜３０のグリセリン脂肪酸エステル、炭素数６〜２４のアルキルグリセリルエーテル、炭素数６〜２４のアルキルアミノ酸エステル等が含まれる。グリセリン誘導体としては、例えばモノイソステアリン酸グリセリル、モノイソステアリン酸モノミリスチン酸グリセリル、ジイソステアリン酸グリセリル、トリイソステアリン酸グリセリル、トリカプリル酸グリセリル、オリーブ油等が挙げられる。アミノ酸誘導体としては、Ｎ−ラウロイル−Ｌ−グルタミン酸エステル等が挙げられる。
【００９１】
グリセリン誘導体及び／又はアミノ酸誘導体からなる液状油（Ｅ）は、単独又は２種以上を組み合わせて用いても良い。その含有量は、剤型等により異なるが、保存安定性の点から全組成中に０．１〜１０重量％であることが好ましく、０．５〜５重量％であることが更に好ましい。
【００９２】
本発明に係る水中油型乳化化粧料には、乳化剤として界面活性剤を含有することができる。界面活性剤としては特に制限が無く、非イオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤等の界面活性剤を少なくとも１種含有することが好ましい。特に親水性の界面活性剤が好ましい。更に、皮膚への刺激性が低い点から非イオン性界面活性剤を含有することが好ましく、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、脂肪酸モノグリセライド、ポリグリセリン脂肪酸エステル、グリセリルエーテル、アルキルポリグルコシド、ショ糖脂肪酸エステル等の非イオン性界面活性剤が特に好ましい。
【００９３】
乳化剤の含有量は、剤型等により異なるが、安定性の点から全組成中に０．５〜１０重量％であることが好ましく、１〜５重量％であることが更に好ましい。
【００９４】
本発明に係る水中油型乳化化粧料には、上記成分以外に、必要に応じて通常の化粧料に配合される成分を配合することができる。例えば、炭素数１〜４の低級アルコール、各種の薬効剤、紫外線吸収剤、紫外線散乱剤、酸化防止剤、防腐剤、殺菌剤、塩類、アミノ酸、糖類、各種エキス、キレート剤、ｐＨ調整剤、増粘剤、色素、香料等を本発明の目的及び効果を損なわない質的及び量的範囲内で配合することができる。
【００９５】
本発明の水中油型乳化化粧料は、上記各材料を用いて常法に従って製造することができ、ローション、ジェル、クリーム、ＵＶケア化粧料、エアゾールフォーム等の任意の剤型とすることができる。
【００９６】
以下、本発明を実施例に基づき、より詳細に説明する。なお、本発明は、特に実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００９７】
（ＭＥＬ−Ａ及びトリアシルＭＥＬ−Ａの製造）
種菌培養はPseudozyma antarctica NBRC 10736のコロニーを種培地（２０ｍｌ／５００ｍｌ坂口フラスコ）に１  ｌｏｏｐ植菌して実施した。３０℃にて一晩培養した。得られた培養液を種菌とした。種培地組成は４％  Ｇｌｕｃｏｓｅ、０．３％  ＮａＮＯ３、０．０２％  ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．０２％  ＫＨ２ＰＯ４、０．１％  ｙｅａｓｔ  ｅｘｔｒａｃｔであった。培養は上記種菌７５ｍｌを生産培地１．５Ｌ（５Ｌ−ｊａｒ）に植菌し、３０℃、３００ｒｐｍ（攪拌回転）、０．５Ｌ／ｍｉｎ（Ａｉｒ）の条件で５Ｌ−ｊａｒを用いて培養した。生産培地組成は、３％  ダイズ油、０．０２％  ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．０２％  ＫＨ２ＰＯ４、０．１％  ｙｅａｓｔ  ｅｘｔｒａｃｔであった。培養液２５０ｍｌを遠心（６５００ｒｐｍ、３０ｍｉｎ）し、上清を取り除き、沈殿（菌体）を回収した。沈殿に、５０ｍｌの酢酸エチルを加え、十分攪拌後、遠心（８５００ｒｐｍ、３０ｍｉｎ）し、沈殿と上清に分け、上清をエバポーレーターで濃縮した。シリカゲルを用いて、クロロホルム：アセトン＝１：０、クロロホルム：アセトン＝９：１、クロロホルム：アセトン１：１、クロロホルム：アセトン＝３：７、クロロホルム：アセトン＝０：１で溶出しＭＥＬ−Ａ及びトリアシルＭＥＬ−Ａ画分を得た。
【実施例２】
【００９８】
（ＭＥＬ−Ｂ及びトリアシルＭＥＬ−Ｂの製造）
０．２ｍｌのPseudozyma tsukubaensisフローズンストックを２０ｍｌのＹＭ培地／５００ｍｌ容坂口フラスコに植菌し、２６℃、１８０ｒｐｍ、１晩培養させ、種種菌とした。０．２ｍｌの種種菌を再度、２０ｍｌのＹＭ種培地／５００ｍｌ容坂口フラスコに植菌し、２６℃、１８０ｒｐｍ、１晩培養させ、種菌とした。２０ｍｌの種菌を２ＬのＹＭ培地／５Ｌ  Ｊａｒに植菌し、２６℃  ３００ｒｐｍ（１／４ＶＶＭ、０．５Ｌ  ａｉｒ／ｍｉｎ）で８日間培養した。培養液を７，９００ｒｐｍ  ６０ｍｉｎ  ４℃で遠心し、菌体（ＭＥＬ−Ｂを含む）と上清に分離した。菌体画分にそれぞれ８０ｍｌの酢酸エチルを加え、菌体が十分懸濁するように上下に攪拌した後、７，９００ｒｐｍ  ３０ｍｉｎ  ４℃で遠心した。得られた上清に等量の飽和食塩水を加え攪拌し酢酸エチル層を得た。酢酸エチル層に無水硫酸Ｎａを適量加え、３０分間精置させた後、エバポレートしＭＥＬ−Ｂ粗精製品を得た。得られたＭＥＬ−Ｂ粗精製品を、シリカゲルカラムを用いて、ヘキサン：アセトン＝５：１、ヘキサン：アセトン＝１：１で溶出しＭＥＬ−Ｂ及びトリアシルＭＥＬ−Ｂ画分精製品を得た。
【実施例３】
【００９９】
（ＭＥＬ−Ｃ及びトリアシルＭＥＬ−Ｃの製造）
０．２ｍｌのPseudozyma hubeiensisフローズンストックを２０ｍｌのＹＭ種培地／５００ｍｌ容坂口フラスコに植菌し、２６℃、１８０ｒｐｍ、１晩培養させ、種種菌とした。０．２ｍｌの種種菌を再度、２０ｍｌのＹＭ種培地／５００ｍｌ容坂口フラスコに植菌し、２６℃、１８０ｒｐｍ、１晩培養させ、種菌とした。２０ｍｌの種菌を２ＬのＹＭ培地／５Ｌ  Ｊａｒに植菌し、２６℃  ３００ｒｐｍ（１／４ＶＶＭ、０．５Ｌ  ａｉｒ  ／ｍｉｎ）で８日間培養した。培養液を７，９００ｒｐｍ  ６０ｍｉｎ  ４℃で遠心し、菌体（ＭＥＬ−Ｃを含む）と上清に分離した。菌体画分にそれぞれ８０ｍｌの酢酸エチルを加え、菌体が十分懸濁するように上下に攪拌した後、７，９００ｒｐｍ  ３０ｍｉｎ  ４℃で遠心した。得られた上清に等量の飽和食塩水を加え攪拌し酢酸エチル層を得た。酢酸エチル層に無水硫酸Ｎａを適量加え、３０分間精置させた後、エバポレートしＭＥＬ−Ｂ粗精製品を得た。得られたＭＥＬ−Ｃ粗精製品を、シリカゲルカラムを用いて、ヘプタン：酢酸エチル＝１：１、ヘプタン：酢酸エチル＝１：２、ヘプタン：酢酸エチル＝１：３で溶出しＭＥＬ−Ｃ及びトリアシルＭＥＬ−Ｃ画分精製品を得た。
【実施例４】
【０１００】
（オリーブ油を用いたＭＥＬの製造）
実施例１におけるＭＥＬの製造では、生産原料にダイズ油を用いたが、その代わりにオリーブ油を用いて実施例１と同様の方法で培養しＭＥＬ−Ａ、ＭＥＬ−Ｂ、ＭＥＬ−Ｃを単離精製する。この時得られるＭＥＬ画分を、実施例１のＭＥＬと区別するためＭＥＬ−Ａ（ＯＬ）、ＭＥＬ−Ｂ（ＯＬ）、ＭＥＬ−Ｃ（ＯＬ）と呼ぶ。
【実施例５】
【０１０１】
（マンノシルマンニトールリピッド（ＭＭＬ）の製造）
シュードザイマ・パラアンタクティカ（Pseudozyma parantarctica）JCM 11752株の培養を行った。すなわち、保存培地（麦芽エキス３ｇ／Ｌ、酵母エキス３ｇ／Ｌ、ペプトン５ｇ／Ｌ、グルコース１０ｇ／Ｌ、寒天３０ｇ／Ｌ）に保存しておいたシュードザイマ・パラアンタクティカ（Pseudozyma parantarctica）JCM 11752株を、グルコース２０ｇ／Ｌ、酵母エキス１ｇ／Ｌ、硝酸ナトリウム３ｇ／Ｌ、リン酸２水素カリウム ０．３ｇ／Ｌ、及び硫酸マグネシウム０．３ｇ／Ｌの組成の液体培地２ｍＬが入った試験管に１白金耳接種し、３０℃で１日間振とう培養を行った。続いて、得られた菌体培養液を、植物油脂としてオリーブ油５０ｇ／Ｌ、糖アルコールとしてマンニトール１００ｇ／Ｌ、酵母エキス１ｇ／Ｌ、硝酸ナトリウム３ ｇ／Ｌ、リン酸２水素カリウム０．３ｇ／Ｌ、及び硫酸マグネシウム０．３ｇ／Ｌの組成の液体培地３０ｍＬの入った坂口フラスコに接種して、３４℃で７日間培養を行った。上記の培養液を採取し、培養液中のマンノシルアルジトールリピッドを酢酸エチルで抽出し、シリカゲルクロマトで精製後、１３Ｃ−ＮＭＲと１Ｈ−ＮＭＲで生産物の構造解析を行い、構造を確認した。
【実施例６】
【０１０２】
（マンノシルアラビトールリピッド（ＭＡｒａＬ）の製造）
実施例５の培養を糖アルコールとしてアラビトール１００ｇ／Ｌを含む培地で行う以外は、実施例５と同様に培養しＭＡｒａＬを製造した。
【実施例７】
【０１０３】
（マンノシルソルビトールリピッド（ＭＳＬ）の製造）
実施例５の培養を糖アルコールとしてソルビトール１００ｇ／Ｌを含む培地で行う以外は、実施例５と同様に培養しＭＳＬを製造した。
【実施例８】
【０１０４】
（マンノシルリビトールリピッド（ＭＲＬ）の製造）
実施例５の培養を糖アルコールとしてリビトール１００ｇ／Ｌを含む培地で行う以外は、実施例５と同様に培養しＭＲＬを製造した。
【実施例９】
【０１０５】
（水中油型乳化化粧料の調製）
表１に示す割合に従って、精製水に成分（１１）〜（１３）を加えて８０℃で加熱溶解したものに、成分（９）〜（１０）を加え８０℃で溶解し、水相を調整した。別途、８０℃で成分（１）〜（８）を均一に混合し油相を調製した。８０℃で、この油相を、先に調整した水相に加え予備乳化を行った。成分（１４）を加えた後、ホモミキサーにて乳化粒子を均一に調製した後、脱気、ろ過を行い、水中油型乳化化粧料を得た。この水中油型乳化化粧料を用いて結晶析出の有無、肌荒れ改善効果を評価した。
【０１０６】
なお、使用した材料の由来を以下に示す。
＊１ ペンタステアリン酸デカグリセリル（日光ケミカルズ）
＊２ モノステアリン酸デカグリセリル（日光ケミカルズ）
＊３ ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（花王）
＊４ カーボポール９８１（ＮｏｖｅｏｎＩｎｃ）
＊５ ＨＥＣダイセルＳＥ６００（ダイセル化学工業）
【０１０７】
【表１】
2011168548.tif 000012
【０１０８】
（評価）
各実施例及び比較例で得られた水中油型乳化化粧料について、下記の手順により結晶析出の有無、肌荒れ改善効果を評価した。評価結果は表１に示す。
【０１０９】
（１）結晶析出の有無（結晶析出スコア）
表１の化粧料を、−５℃、２５℃、５０℃の各温度で６ヶ月間保存し、保存１ヶ月後、３ヵ月後、６ヵ月後、化粧料中における結晶の析出の有無を目視及び触感で評価した。結晶析出が確認できない場合を○、結晶の析出が確認できる場合を×とした。
【０１１０】
（２）肌荒れ改善効果（肌荒れスコア）
冬季に頬部に肌荒れ（下記基準値２）を起こしている２０〜５０歳の女性１０名を被験者とし、左右の頬に異なる化粧料を２週間塗布した。２週間の塗布終了後、肌荒れを肉眼で観察し、下記基準により判定した。肌荒れスコアは平均値で示した。肌荒れスコアが低いほど、肌荒れ改善効果が高いことを示す。
０：肌荒れを認めない
１：かすかな肌荒れを認める
２：肌荒れを認める
３：ややひどい肌荒れを認める
【０１１１】
本発明品１〜１６はいずれも、結晶析出の有無、肌荒れ改善効果において良好な評価であった。特に、（Ｃ）成分としてイオン性水溶性高分子を用い、且つ、（Ｅ）成分を用いた実施例１〜４は、結晶の析出が全く無く、保存安定性に優れるものであった。また、（Ａ）成分を０．５重量％用いた実施例１〜３、５、６は肌荒れ改善効果に優れるものであった。ＨＬＢ８以上のポリグリセリン脂肪酸エステルを用いた比較品１は、１ヵ月後には全て結晶が析出し保存安定性に劣り、且つ、肌荒れ改善効果の点においても劣るものであった。（Ｃ）成分を使用しなかった比較品２は、１ヵ月後には全て結晶が析出し保存安定性に劣り、且つ、肌荒れ改善効果の点においても劣るものであった。（Ｄ）成分を使用しなかった比較品３は、５０℃１ヵ月後には結晶が析出し、また−５℃、２５℃でも３ヵ月後には結晶が析出し保存安定性に劣るものであった。さらに、肌荒れ改善効果の点において劣るものであった。
【実施例１０】
【０１１２】
（乳液の調製）
表２に示す組成に従って、乳液を調製した。
【０１１３】
【表２】
2011168548.tif 000013
【０１１４】
得られた乳液は、肌荒れ改善効果が高く（肌荒れスコア０．５）、−５℃、２５℃、５０℃６ヶ月間結晶が析出しなかった。
【実施例１１】
【０１１５】
（サンスクリーン乳液の調製）
表３に示す組成に従って、サンスクリーン乳液を調製した。
【０１１６】
【表３】
2011168548.tif 000014
【０１１７】
得られたサンスクリーン乳液は、肌荒れ改善効果が高く（肌荒れスコア０．８）、−５℃、２５℃、５０℃６ヶ月結晶が析出しなかった。
【０１１８】
本発明に係る水中油型乳化化粧料は、結晶性が高く配合が困難であるが皮膚のバリア機能や保湿機能に優れる（Ａ）バアイオサーファクタントに、（Ｂ）ＨＬＢ８以下のポリグリセリン脂肪酸エステル、（Ｃ）水溶性高分子、及び（Ｄ）グリセリン及び／又はジグリセリンを組み合わせて配合するため、バアイオサーファクタントが皮膚に対して性能を発揮するのに充分な量を、安定的に配合することが可能であり、０．５重量％以上の濃度にしても、高い安定性が得られる。従って、本発明に係る水中油型乳化化粧料は、保存安定性が高く、肌荒れ改善効果に優れる。本発明に係る水中油型乳化化粧料に、更に（Ｅ）グリセリン誘導体及び／又はアミノ酸誘導体から成る液状油を配合することがよりしい。
【産業上の利用可能性】
【０１１９】
本発明の水中油型乳化化粧料は、結晶を析出させることがなく、保存安定性が高く、肌荒れ改善効果に優れることから、特に医薬品や化粧品に関する産業界において、大きく寄与することが期待される。