(57)【要約】      （修正有）【課題】ＣＤ４０細胞表面抗原を発現する新生物細胞を含む癌について被検体を処置する方法の提供。【解決手段】インターロイキン−２（ＩＬ−２）またはその生物学的に活性な改変体と少なくとも１つのアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントとの併用療法を包含する。これらの２つの治療因子は、２つの別個の薬学的組成物として同時に投与され、一方は、一定のＩＬ−２投薬レジメンまたは２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンにしたがって投与される、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体を含み、他方は、毎週の投薬レジメンにしたがって投与されるか、もしくは代替的に２週間に１度か、３週間に１度か、または４週間に１度投与される、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその適切な抗原結合フラグメントを含む。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書中に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、ＣＤ４０抗原を発現する新生物細胞（Ｂ細胞関連の癌および固形腫瘍が挙げられる）を含む癌に対する併用療法の方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
毎年、１００万人を超える米国人が、癌と診断される。白血病、リンパ腫、および骨髄腫が、米国だけで１００，０００を超える個体に生じる。乳癌、卵巣癌、および肺癌のような固形腫瘍は、さらにより多くの個体を冒す。これらの疾患と闘うために、免疫療法が、開発されてきた。一般的に、免疫療法は、標的腫瘍細胞に対する患者の抗腫瘍応答を促進する。サイトカイン療法は、特に腫瘍および腫瘍抗原に対する免疫学的監視を活性化する免疫療法の１つの方法である。あるいは、癌細胞は、抗体療法を使用して直接的に標的され得る。これらの抗体は、癌細胞上に発現される個々の細胞表面抗原に対して特異的であり、そしてその臨床試験結果は、有望である。成功した治療結果は、抗原（例えば、ＣＤ２０（正常なＢ細胞および多くのＢ細胞リンパ腫おいて発現される）およびＨＥＲ２（多くの乳癌において発現される））を標的する抗体を使用して得られてきた。
【０００３】
多くのパーセンテージの癌症例は、ＣＤ４０抗原を発現する新生物細胞の増殖によって特徴付けられる。ＣＤ４０は、正常なヒトＢ細胞および新生物のヒトＢ細胞、樹上細胞、他の抗原提示細胞（ＡＰＣ）、内皮細胞、単核細胞ならびに上皮細胞の表面上に存在する５５ｋＤａの細胞表面抗原である。Ｂ細胞の膜上のＣＤ４０に対するＣＤ４０リガンドの結合は、Ｂ細胞の活性化および増殖を刺激する正の同時刺激シグナルを提供し、高レベルの可溶性免疫グロブリンを分泌する形質細胞への、Ｂ細胞の成熟を生じる。低悪性度Ｂ細胞リンパ腫および高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病、およびホジキン病の患者由来の形質転換細胞は、ＣＤ４０を発現する。ＣＤ４０発現は、急性骨髄芽球性白血病の事例の３分の２およびエイズ関連リンパ腫の５０％において検出される。Ｂ細胞系統の数種の腫瘍に由来する悪性のＢ細胞は、高レベルのＣＤ４０を発現し、そして生存および増殖についてのＣＤ４０シグナル伝達に依存するようである。
【０００４】
ＣＤ４０発現はまた、多くの非Ｂ細胞癌において検出されてきた。ＣＤ４０を発現する癌としては、膀胱癌（非特許文献１；非特許文献２）、乳癌（非特許文献３；非特許文献４；前立腺癌（非特許文献５）、腎細胞癌（非特許文献６）、未分化型の鼻咽腔癌（ＵＮＰＣ）（非特許文献７）、扁平上皮癌（ＳＣＣ）（非特許文献８；非特許文献９）、甲状腺乳頭癌（非特許文献１０）、皮膚の悪性黒色腫（非特許文献１１）、卵巣癌（非特許文献１２）、肺癌（非特許文献１３）、頚癌（非特許文献１４）、胃癌（非特許文献１５）、肉腫（例えば、ヒトの骨肉腫およびユーイング肉腫について議論する非特許文献１６を参照のこと）、および肝臓癌（例えば、ヒトの肝細胞癌について議論する非特許文献１７を参照のこと）が挙げられる。これらの非Ｂ細胞癌におけるＣＤ４０の役割は、よく理解されていない。いくつかの研究は、形質転換細胞におけるＣＤ４０の連結が、アポトーシスによる細胞死を引き起こし得ることを示した。しかし、いくつかの癌（例えば、悪性黒色腫および肺癌）において、ＣＤ４０の発現は、負の予後を示すものであり得る（例えば、非特許文献１３；非特許文献１８を参照のこと）。
【０００５】
インターロイキン−２（ＩＬ−２）は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞およびＴ細胞の増殖ならびに機能の、強力な刺激因子であるサイトカインである（例えば、非特許文献１９；非特許文献２０）。ＩＬ−２は、単独か、またはリンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞もしくは腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）と組み合わされる場合のいずれかで、種々の悪性腫瘍に対して抗腫瘍活性を有する（例えば、非特許文献２１；非特許文献２２；非特許文献２３；非特許文献２４；および非特許文献２５を参照のこと）。ＩＬ−２の抗腫瘍活性は、悪性黒色腫および腎細胞癌を有する患者において最もよく記載されてきたが、リンパ腫を含む他の疾患もまた、ＩＬ−２による処置に対して応答するようである（例えば、非特許文献２６を参照のこと）。しかし、腫瘍の増殖に対する正の治療結果を達成するために使用される高用量のＩＬ−２は、頻繁に重篤な副作用を生じ、この副作用としては、毛細管漏出、低血圧および神経学的な変性が挙げられる（例えば、非特許文献２７；非特許文献２８；ならびに非特許文献２９を参照のこと）。さらに、ＩＬ−２に対する臨床上の応答は、変化しやすい。例えば、ＩＬ−２によって処置された腎細胞癌患者サブグループについての生存率の中央値は、危険因子に依存して２８ヶ月間と５ヶ月間との間であり得る（非特許文献３０）。
【０００６】
任意の１つの免疫療法剤は、上記患者に対して利点を与え得るが、さらなる方法が、毒性の減少、有効性の改良、および処置結果の改良のために必要である。さらに、多くの場合、癌は、単一の抗体療法もしくは単一のサイトカイン療法に対する初期耐性の結果か、または単一の抗体もしくは単一のサイトカインによる治療の１つ以上の時間経過の間に発生する耐性の結果のいずれかとして、単剤の腫瘍治療による処置に対して不応性になり得る。
【０００７】
したがって、単剤の腫瘍治療に対する処置結果を改良し得ると同時に、任意の１つの免疫療法剤の毒性を減少し得る併用免疫療法の発見は、特に固形腫瘍、骨髄腫、白血病およびリンパ腫に苦しむ癌患者の、死亡率ならびに罹患率を大きく減少させ得る。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｐａｕｌｉｅら、「Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．」、１９８９年、１４２：５９０−５９５
【非特許文献２】Ｂｒａｅｓｃｈ−Ａｎｄｅｒｓｅｎら、「Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．」、１９８９年、１４２：５６２−５６７
【非特許文献３】Ｈｉｒａｎｏら、「Ｂｌｏｏｄ」、１９９９年、９３：２９９９−３００７
【非特許文献４】Ｗｉｎｇｅｔｔら、「Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．Ｔｒｅａｔ．」、１９９８年、５０：２７−３６）
【非特許文献５】Ｒｏｋｈｌｉｎら、「Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．」、１９９７年、５７：１７５８−１７６８
【非特許文献６】Ｋｌｕｔｈら、「Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．」、１９９７年、５７：８９１−８９９
【非特許文献７】Ａｇａｔｈａｎｇｇｅｌｏｕら、「Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．」、１９９５年、１４７：１１５２−１１６０
【非特許文献８】Ａｍｏら、「Ｅｕｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．」、２０００年、１０：４３８−４４２
【非特許文献９】Ｐｏｓｎｅｒら、「Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．」、１９９９年、５：２２６１−２２７０
【非特許文献１０】Ｓｍｉｔｈら、「Ｔｈｙｒｏｉｄ」、１９９９年、９：７４９−７５５
【非特許文献１１】ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｏｏｒｄら、「Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．」、１９９６年、１４９：１９５３−１９６１
【非特許文献１２】Ｃｉａｒａｖｉｎｏら、「Ｅｕｒ．Ｊ．Ｇｙｎａｅｃｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．」、２００４年、２５：２７−３２
【非特許文献１３】Ｓａｂｅｌら、「Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．」、２０００年、４９：１０１−８
【非特許文献１４】Ａｌｔｅｎｂｅｒｇら、「Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．」、１９９９年、１６２：４１４０−４１４７
【非特許文献１５】Ｙａｍａｇｕｃｈｉら、「Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．」、２００３年、２３（６）：１６９７−７０２
【非特許文献１６】Ｌｏｌｌｉｎｉら、「Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．」、１９９８年、４（８）：１８４３−８４９
【非特許文献１７】Ｓｕｇｉｍｏｔｏら、「Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ」、１９９９年、３０（４）：９２０−２６
【非特許文献１８】Ｏｔｔａｉａｎｏら、「Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．」、２００４年、１０（８）：２８２４−２８３１
【非特許文献１９】Ｍｏｒｇａｎら、「Ｓｃｉｅｎｃｅ」、１９７６年、１９３：１００７−１０１１
【非特許文献２０】Ｗｅｉｌ−Ｈｉｌｌｍａｎら、「Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．」、１９８９年、４９（１３）：３６８０−３６８８
【非特許文献２１】Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら、「Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．」、１９８７年、３１６：８８９−８９７
【非特許文献２２】Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ、「Ａｎｎ．Ｓｕｒｇ．」、１９８８年、２０８：１２１−１３５
【非特許文献２３】Ｔｏｐａｌｉａｎら、「Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．」、１９８８年、６：８３９−８５３
【非特許文献２４】Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら、「Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．」、１９８８年、３１９：１６７６−１６８０
【非特許文献２５】Ｗｅｂｅｒら、「Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．」、１９９２年、１０：３３−４０
【非特許文献２６】ＤｕｔｃｈｅｒおよびＷｉｅｒｎｉｋ、「Ｓｅｍ．Ｏｎｃｏｌ．」、１９９３年、２０（６  補遺９）：３３−４０
【非特許文献２７】Ｄｕｇｇａｎら、「Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ」、１９９２年、１２：１１５−１２２
【非特許文献２８】Ｇｉｓｓｅｌｂｒｅｃｈｔら、「Ｂｌｏｏｄ」、１９９４年、８３：２０８１−２０８５
【非特許文献２９】ＳｚｎｏｌおよびＰａｒｋｉｎｓｏｎ、「Ｂｌｏｏｄ」、１９９４年、８３：２０２０−２０２２
【非特許文献３０】Ｐａｌｍｅｒら、「Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌ．」、１９９２年、３：４７５−８０
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、以下の項目を提供する。
（項目１）
ＣＤ４０抗原を発現する新生物細胞を含む癌についてヒト被検体を処置する方法であって、該方法は、該被検体に対して併用療法を施す工程を包含し、該療法は、インターロイキン−２（ＩＬ−２）もしくはその生物学的に活性な改変体との組み合わせての、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量の投与を包含し、ここで該抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＤ４０抗原に対して結合される場合に、有意なアゴニスト活性を有さず、該抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下：
ａ）モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９またはＣＨＩＲ−１２．１２；
ｂ）ハイブリドーマ細胞株５．９または１２．１２によって産生されるモノクローナル抗体；
ｃ）配列番号６に示される配列、配列番号７に示される配列、配列番号８に示される配列、配列番号６と配列番号７とに示される配列の両方、および配列番号６と配列番号８とに示される配列の両方からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；
ｄ）配列番号２に示される配列、配列番号４に示される配列、配列番号５に示される配列、配列番号２と配列番号４とに示される配列の両方、および配列番号２と配列番号５とに示される配列の両方からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；
ｅ）配列番号１に示される配列、配列番号３に示される配列、および配列番号１と配列番号３とに示される配列の両方からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子によってコードされるアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体；
ｆ）ハイブリドーマ細胞株５．９または１２．１２によって産生されるモノクローナル抗体に結合し得るエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｇ）配列番号１０または配列番号１２に示されるヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８７を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｈ）配列番号１０または配列番号１２に示されるヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８９を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｉ）競合結合アッセイにおいてモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９またはＣＨＩＲ−１２．１２と競合するモノクローナル抗体；
ｊ）前述の項目ａ）のモノクローナル抗体または前述の項目ｃ）〜ｉ）のいずれか１項のモノクローナル抗体であって、該抗体は組換え産生される、モノクローナル抗体；ならびに
ｋ）前述の項目ａ）〜ｊ）のいずれか１項のモノクローナル抗体の抗原結合フラグメントであるモノクローナル抗体であって、該フラグメントは該ヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合する能力を保持する、モノクローナル抗体
からなる群より選択される、方法。
（項目２）
上記併用療法は、相乗的な治療効果を提供する、項目１に記載の方法。
（項目３）
上記抗ＣＤ４０抗体の上記抗原結合フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、および単鎖Ｆｖフラグメントからなる群より選択される、項目１に記載の方法。
（項目４）
上記ＩＬ−２は、ヒトＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体である、項目１に記載の方法。
（項目５）
ヒトＩＬ−２の上記改変体は、デス−アラニル−１，セリン−１２５のヒトＩＬ−２である、項目４に記載の方法。
（項目６）
上記抗ＣＤ４０抗体は、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２である、項目５に記載の方法。
（項目７）
上記癌は、Ｂ細胞関連の癌または固形腫瘍である、項目１に記載の方法。
（項目８）
項目７に記載の方法であって、上記Ｂ細胞関連の癌は、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、中悪性度Ｂ細胞リンパ腫、低悪性度Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ性白血病、骨髄芽球性白血病、ホジキン病、プラズマ細胞種、濾胞性リンパ腫、濾胞性核切れ込み小細胞型リンパ腫、濾胞性大細胞型リンパ腫、濾胞性混合型核切れ込み小細胞型リンパ腫、びまん性核切れ込み小細胞型リンパ腫、びまん性小リンパ球性リンパ腫、前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、辺縁層リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、脾性リンパ腫、ヘアリーセル白血病、びまん性大細胞型リンパ腫、縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、血管内リンパ腫症、びまん性混合型リンパ腫、びまん性大細胞型リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、エイズ関連リンパ腫、およびマントル細胞リンパ腫からなる群より選択される、方法。
（項目９）
上記固形腫瘍は、膀胱癌、乳癌、肝臓癌、胃癌、結腸癌、前立腺癌、腎細胞癌、鼻咽腔癌、扁平上皮癌、甲状腺乳頭癌、黒色腫、卵巣癌、肺癌、頚癌、および肉腫からなる群より選択される、項目７に記載の方法。
（項目１０）
上記ＩＬ−２またはその改変体、および上記抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、連続して投与される、項目１に記載の方法。
（項目１１）
上記ＩＬ−２またはその改変体、および上記抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、同時に投与される、項目１に記載の方法。
（項目１２）
上記抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、処置期間全体にわたってかまたは該処置期間内の４週間〜１６週間の決められた持続期間の間、該処置期間の間の一定のＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のサイクルの投与との組み合わせで、１週間に１度、２週間に１度、３週間に１度、および４週間に１度からなる群より選択される投与計画にしたがって投与され、ここで該一定のＩＬ−２投薬レジメンは、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の一定な１週間の総用量が上記被検体に対して投与される、第１の期間、および該ＩＬ−２またはその生物学的改変体の投与が、該被検体に対して控えられる、第２の期間を含む、項目１に記載の方法。
（項目１３）
上記第１の期間は、約２週間〜約１２週間の持続期間を有し、そして上記第２の期間は、約１週間〜約４週間の持続期間を有する、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
上記第１の期間は、４週間の持続期間を有し、そして上記第２の期間は、１週間の持続期間を有する、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
上記抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの第１の投与は、上記処置期間の１日目に始まり、そして上記一定のＩＬ−２投薬レジメンの第１のサイクルは、該抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの該第１の投与の１０日以内に開始される、項目１３に記載の方法。
（項目１６）
上記一定のＩＬ−２投薬レジメンの上記第１のサイクルは、上記処置期間の８日目に開始される、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
上記処置期間は、上記一定のＩＬ−２投薬レジメンの上記第１のサイクルの完了後または該一定のＩＬ−２投薬レジメンの任意のその後のサイクルの完了後の４週間以内に開始される、該一定のＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のその後のサイクルを含み、上記抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの上記投与は、該処置期間全体を通して継続される、項目１５に記載の方法。
（項目１８）
上記ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの治療有効量は、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３０．０ｍｇ／ｋｇの範囲である、項目１２に記載の方法。
（項目１９）
ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の上記一定な１週間の総用量は、単回投与として投与されるか、または１週間に２回投与の投与計画、１週間に３回投与の投与計画、１週間に４回投与の投与計画、１週間に５回投与の投与計画、１週間に６回投与の投与計画、または１週間に７回投与の投与計画にしたがって投与される等用量の第１の系列に分割される、項目１２に記載の方法。
（項目２０）
上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体は、静脈内、筋肉内、および皮下からなる群より選択される経路によって投与される、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
項目１２に記載の方法であって、上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の上記一定な１週間の総用量は、同じ経路および同じ投与計画によって投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量に相当する量であり、該参照ＩＬ−２標準の該１週間の総用量は、約１１００μｇ（１８．０ＭＩＵ）〜約３３００μｇ（５４．０ＭＩＵ）の範囲であり、該ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の該一定な１週間の総用量は、参照ＩＬ−２標準の該１週間の総用量によって提供されるナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性の、少なくとも７０％を提供する、方法。
（項目２２）
上記参照ＩＬ−２標準の上記１週間の総用量は、約１１００μｇ（１８．０ＭＩＵ）〜約２５６７μｇ（４２．０ＭＩＵ）であり、そして参照ＩＬ−２標準の該１週間の総用量は、１週間に３回投与の投与計画にしたがって投与される３つの等用量に分割される、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
項目１に記載の方法であって、上記抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、処置期間全体にわたってか、または該処置期間内の４週間〜１６週間の決められた持続期間の間、該処置期間の間の２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のサイクルの投与との組み合わせで、１週間に１度、２週間に１度、３週間に１度、および４週間に１度からなる群より選択される投与計画にしたがって投与され、ここで該２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンは、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体のより高い１週間の総用量が上記被検体に対して投与される第１の期間、および該第１の期間後の、該ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体のより低い１週間の総用量が該被検体に対して投与される第２の期間を含む、方法。
（項目２４）
上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の第１の用量は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの第１の用量を投与する前に、上記被検体に対して投与される、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の上記第１の用量は、上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの上記第１の用量が上記被検体に対して投与される前に、最長１ヶ月間まで投与される、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の上記第１の用量は、上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの上記第１の用量が上記被検体に対して投与される前に、１週間投与される、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の第１の用量は、上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの第１の用量と同時に上記被検体に投与される、項目２３に記載の方法。
（項目２８）
上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の第１の用量は、上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの第１の用量が上記被検体に対して投与された後に、該被検体に対して、１週間投与される、項目２３に記載の方法。
（項目２９）
上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの上記治療有効量は、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３０．０ｍｇ／ｋｇの範囲である、項目２３に記載の方法。
（項目３０）
上記２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンは、合わせて４週間〜１６週間の持続期間を有する、項目２３に記載の方法。
（項目３１）
上記２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１の期間は、上記合わせて４週間〜１６週間の持続期間の内に少なくとも１週間の持続期間を有する、項目３０に記載の方法。
（項目３４）
上記ＩＬ−２の２つのレベルの投薬レジメンの上記第１の期間は、上記合わせて４週間〜１６週間の持続期間の半分である持続期間を有する、項目３０に記載の方法。
（項目３５）
項目２３に記載の方法であって、上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の上記のより高い１週間の総用量は、単回投与として投与されるか、または１週間に２回投与の投与計画、１週間に３回投与の投与計画、１週間に４回投与の投与計画、１週間に５回投与の投与計画、１週間に６回投与の投与計画、または１週間に７回投与の投与計画にしたがって投与される等用量の第１の系列に分割され、そして該ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の上記のより低い１週間の総用量は、単回投与として投与されるか、または１週間に２回投与の投与計画、１週間に３回投与の投与計画、１週間に４回投与の投与計画、１週間に５回投与の投与計画、１週間に６回投与の投与計画、または１週間に７回投与の投与計画にしたがって投与される等用量の第２の系列に分割される、方法。
（項目３６）
上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体は、静脈内、筋肉内、および皮下からなる群より選択される経路によって投与される、項目３５に記載の方法。
（項目３８）
上記等用量の第１の系列は、１週間に３回投与の投与計画にしたがって投与され、そして上記等用量の第２の系列は、１週間に３回投与の投与計画にしたがって投与される、項目３６に記載の方法。
（項目３９）
項目２３に記載の方法であって、ここで：
ａ）上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の上記のより高い１週間の総用量は、同じ経路および同じ投与計画によって投与される参照ＩＬ−２標準のより高い１週間の総用量に相当する量であり、該参照ＩＬ−２標準のより高い１週間の総用量は、約１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）〜約３３００μｇ（５４．０ＭＩＵ）の範囲であり、該ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の該より高い１週間の総用量は、該参照ＩＬ−２標準のより高い１週間の総用量によって提供されるナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性の、少なくとも７０％を提供し；
ｂ）上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の上記のより低い１週間の総用量は、同じ経路および同じ投与計画によって投与される該参照ＩＬ−２標準のより低い１週間の総用量に相当する量であり、該参照ＩＬ−２標準のより低い１週間の総用量は、約１１００μｇ（１８．０ＭＩＵ）〜約２３８４μｇ（３９．０ＭＩＵ）の範囲であり、該ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の該より低い１週間の総用量は、該参照ＩＬ−２標準のより低い１週間の総用量によって提供されるナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性の、少なくとも７０％を提供し；そして
ｃ）該ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体のより低い１週間の総用量は、該ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体のより高い１週間の総用量よりも低い、
方法。
（項目４０）
上記参照ＩＬ−２標準のより高い１週間の総用量は、約１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）〜約２５６７μｇ（４２．０ＭＩＵ）であり、そして上記参照ＩＬ−２標準のより低い１週間の総用量は、約１１００μｇ（１８．０ＭＩＵ）〜約１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）である、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
項目４０に記載の方法であって、上記参照ＩＬ−２標準のより高い１週間の総用量は、約２５６７μｇ（４２．０ＭＩＵ）であり、そして上記参照ＩＬ−２標準のより低い１週間の総用量は、約１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）であり、そして該参照ＩＬ−２標準のより高い１週間の総用量および該参照ＩＬ−２標準のより低い１週間の総用量はそれぞれ、１週間に３回投与の投与計画にしたがって投与される３つの等用量に分割される、方法。
（項目４２）
項目２３に記載の方法であって、該方法は、上記２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメン中における中断をさらに包含し、該中断は、該２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの上記第１の期間と該２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの上記第２の期間との間に、上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体を投与しない期間を含む、方法。
（項目４３）
上記中断は、約１週間〜約４週間の持続期間を有する、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
上記処置期間は、上記２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１のサイクルの完了後または該２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの任意のその後のサイクルの完了後、約１週間〜約４週間で開始される、該２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のその後のサイクルを含み、ここで上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの毎週の投与は、該処置期間全体にわたって継続される、項目２３に記載の方法。
（項目４５）
上記２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの少なくとも１つのサイクルは、該２つのレベルの投薬レジメン中に中断を含み、該中断は、該中断を含む該２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの任意の所定のサイクルの、第１の期間と第２の期間との間に、該ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体を投与しない期間を含む、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
ＣＤ４０抗原を発現する新生物細胞を含む癌についてヒト被検体を処置する方法であって、該方法は、該被検体に対して併用療法を施す工程を包含し、該療法は、インターロイキン−２（ＩＬ−２）またはその生物学的に活性な改変体との組み合わせでの、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量の投与を包含し、ここで該アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＣＤ４０抗原のドメイン２に特異的に結合し、そしてヒトＣＤ４０抗原のドメイン２に結合される場合に、有意なアゴニスト活性を有さない、方法。
（項目４７）
上記併用療法は、相乗的な治療効果を提供する、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、ヒト抗体である、項目４６に記載の方法。
（項目４９）
上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、組換え産生される、項目４６に記載の方法。
（項目５０）
上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、ハイブリドーマ細胞株５．９によって産生される抗体およびハイブリドーマ細胞株１２．１２によって産生される抗体からなる群より選択される抗体に関する結合特異性を有する、項目４６に記載の方法。
（項目５１）
上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、特許受託番号ＰＴＡ−５５４２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生される抗体、および特許受託番号ＰＴＡ−５５４３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生される抗体からなる群より選択される、項目４６に記載の方法。
（項目５２）
上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９に関する結合特異性を有する、項目４６に記載の方法。
（項目５３）
上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、配列番号１０または配列番号１２に示されるヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８７を含むエピトープに結合する、項目４６に記載の方法。
（項目５４）
項目４６に記載の方法であって、上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下：
ａ）配列番号２に示される配列、配列番号４に示される配列、配列番号５に示される配列、配列番号２と配列番号４とに示される配列の両方、および配列番号２と配列番号５とに示される配列の両方からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；
ｂ）配列番号１に示される配列、配列番号３に示される配列、および配列番号１と配列番号３とに示される配列の両方からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子によってコードされるアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体；
ｃ）ハイブリドーマ細胞株１２．１２によって産生されるモノクローナル抗体に結合し得るエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｄ）配列番号１０または配列番号１２に示されるヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８７を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｅ）競合結合アッセイにおいてモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２と競合するモノクローナル抗体；
ｆ）前述の項目ａ）〜ｅ）のいずれか１項のモノクローナル抗体であって、該抗体が組換え産生される、モノクローナル抗体；ならびに
ｇ）ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体の抗原結合フラグメントまたは前述の項目ａ）〜ｆ）のいずれか１項のモノクローナル抗体の抗原結合フラグメントであるモノクローナル抗体であって、該フラグメントは該ヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合する能力を保持する、モノクローナル抗体、
からなる群より選択される、方法。
（項目５５）
上記抗ＣＤ４０抗体の抗原結合フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、および単鎖Ｆｖフラグメントからなる群より選択される、項目４６に記載の方法。
（項目５６）
上記ＩＬ−２は、ヒトＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体である、項目４６に記載の方法。
（項目５７）
上記ヒトＩＬ−２の改変体は、デス−アラニル−１，セリン−１２５のヒトＩＬ−２である、項目４６に記載の方法。
（項目５８）
上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２である、項目５７に記載の方法。
（項目５９）
上記癌は、Ｂ細胞関連の癌または固形腫瘍である、項目４６に記載の方法。
（項目６０）
項目５９に記載の方法であって、上記Ｂ細胞関連の癌は、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、中悪性度Ｂ細胞リンパ腫、低悪性度Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ性白血病、骨髄芽球性白血病、ホジキン病、プラズマ細胞種、濾胞性リンパ腫、濾胞性核切れ込み小細胞型リンパ腫、濾胞性大細胞型リンパ腫、濾胞性混合型核切れ込み小細胞型リンパ腫、びまん性核切れ込み小細胞型リンパ腫、びまん性小リンパ球性リンパ腫、前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、辺縁層リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、脾性リンパ腫、ヘアリーセル白血病、びまん性大細胞型リンパ腫、縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、血管内リンパ腫症、びまん性混合細胞型リンパ腫、びまん性大細胞型リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、エイズ関連リンパ腫、およびマントル細胞リンパ腫からなる群より選択される、方法。
（項目６１）
上記固形腫瘍は、膀胱癌、乳癌、肝臓癌、胃癌、結腸癌、前立腺癌、腎細胞癌、鼻咽腔癌、扁平上皮癌、甲状腺乳頭癌、黒色腫、卵巣癌、肺癌、頚癌、および肉腫からなる群より選択される、項目５９に記載の方法。
（項目６２）
上記ＩＬ−２またはその改変体、および上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、連続して投与される、項目４６に記載の方法。
（項目６３）
上記ＩＬ−２またはその改変体、および上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、同時に投与される、項目４６に記載の方法。
（項目６４）
項目４６に記載の方法であって、上記抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、処置期間全体または該処置期間内の４週間〜１６週間の決められた持続期間の間、該処置期間の間の一定のＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のサイクルの投与との組み合わせで、１週間に１度、２週間に１度、３週間に１度、および４週間に１度からなる群より選択される投与計画にしたがって投与され、ここで該一定のＩＬ−２投薬レジメンは、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の一定な１週間の総用量が上記被検体に対して投与される、第１の期間、および該ＩＬ−２またはその生物学的改変体の投与が該被検体に対して控えられる、第２の期間を含む、方法。
（項目６５）
上記第１の期間は、約２週間〜約１２週間の持続期間を有し、そして上記第２の期間は、約１週間〜約４週間の持続期間を有する、項目６４に記載の方法。
（項目６６）
上記第１の期間は、４週間の持続期間を有し、そして上記第２の期間は、１週間の持続期間を有する、項目６５に記載の方法。
（項目６７）
上記抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの第１の投与は、上記処置期間の１日目に始まり、そして上記一定のＩＬ−２投薬レジメンの第１のサイクルは、該抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの該第１の投与の１０日以内に開始される、項目６５に記載の方法。
（項目６８）
上記一定のＩＬ−２投薬レジメンの第１のサイクルは、上記処置期間の８日目に開始される、項目６７に記載の方法。
（項目６９）
上記処置期間は、上記一定のＩＬ−２投薬レジメンの上記第１のサイクルの完了後または該一定のＩＬ−２投薬レジメンの任意のその後のサイクルの完了後の４週間以内に開始される、該一定のＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のその後のサイクルを含み、上記抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの上記投与は、該処置期間全体を通して継続される、項目６７に記載の方法。
（項目７０）
上記ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの治療有効量は、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３０．０ｍｇ／ｋｇの範囲である、項目６４に記載の方法。
（項目７１）
ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の上記一定な１週間の総用量は、単回投与として投与されるか、または１週間に２回投与の投与計画、１週間に３回投与の投与計画、１週間に４回投与の投与計画、１週間に５回投与の投与計画、１週間に６回投与の投与計画、または１週間に７回投与の投与計画にしたがって投与される等用量の第１の系列に分割される、項目６４に記載の方法。
（項目７２）
上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体は、静脈内、筋肉内、および皮下からなる群より選択される経路によって投与される、項目７１に記載の方法。
（項目７３）
項目６４に記載の方法であって、上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の上記一定な１週間の総用量は、同じ経路および同じ投与計画によって投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量に相当する量であり、該参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量は、約１１００μｇ（１８．０ＭＩＵ）〜約３３００μｇ（５４．０ＭＩＵ）の範囲であり、該ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の該一定な１週間の総用量は、参照ＩＬ−２標準の該１週間の総用量によって提供されるナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性の、少なくとも７０％を提供する、方法。
（項目７４）
上記参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量は、１１００μｇ（１８．０ＭＩＵ）〜２５６７μｇ（４２．０ＭＩＵ）であり、そして該参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量は、１週間に３回投与の投与計画にしたがって投与される３つの等用量に分割される、項目７３に記載の方法。
（項目７５）
項目４６に記載の方法であって、上記抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、処置期間の全体にわたって、該処置期間の間の２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のサイクルの投与との組み合わせでの、１週間に１度、２週間に１度、３週間に１度、および４週間に１度からなる群より選択される投与計画にしたがって投与され、ここで該２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンは、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体のより高い１週間の総用量が上記被検体に対して投与される、第１の期間、および該第１の期間後の、該ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体のより低い１週間の総用量が、該被検体に対して投与される第２の期間を含む、方法。
（項目７６）
上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の第１の用量は、上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの第１の用量を投与する前に、上記被検体に対して投与される、項目７５に記載の方法。
（項目７７）
上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の第１の用量は、上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの上記第１の用量が上記被検体に対して投与される前に、最長１ヶ月間まで投与される、項目７６に記載の方法。
（項目７８）
上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の第１の用量は、上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの上記第１の用量が上記被検体に対して投与される前に、１週間投与される、項目７７に記載の方法。
（項目７９）
上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の第１の用量は、上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの第１の用量と同時に上記被検体に投与される、項目７５に記載の方法。
（項目８０）
上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の第１の用量は、上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの第１の用量が上記被検体に対して投与された後に、該被検体に対して１週間投与される、項目７５に記載の方法。
（項目８１）
上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの上記治療有効量は、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３０．０ｍｇ／ｋｇの範囲である、項目７５に記載の方法。
（項目８２）
上記２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンは、合わせて４週間〜１６週間の持続期間を有する、項目７５に記載の方法。
（項目８３）
上記２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの上記第１の期間は、上記合わせて４週間〜１６週間の持続期間の内に少なくとも１週間の持続期間を有する、項目８２に記載の方法。
（項目８４）
ＩＬ−２の上記２つのレベルの投薬レジメンの上記第１の期間は、４週間〜１６週間の上記合わせた持続期間の半分である持続期間を有する、項目８２に記載の方法。
（項目８５）
項目７５に記載の方法であって、上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の上記のより高い１週間の総用量は、単回投与として投与されるか、または１週間に２回投与の投与計画、１週間に３回投与の投与計画、１週間に４回投与の投与計画、１週間に５回投与の投与計画、１週間に６回投与の投与計画、または１週間に７回投与の投与計画にしたがって投与される等用量の第１の系列に分割され、そして上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の上記のより低い１週間の総用量は、単回投与として投与されるか、または１週間に２回投与の投与計画、１週間に３回投与の投与計画、１週間に４回投与の投与計画、１週間に５回投与の投与計画、１週間に６回投与の投与計画、または１週間に７回投与の投与計画にしたがって投与される等用量の第２の系列に分割される、方法。
（項目８６）
上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体は、静脈内、筋肉内、および皮下からなる群より選択される経路によって投与される、項目８５に記載の方法。
（項目８７）
上記等用量の第１の系列は、１週間に３回投与の投与計画に従って投与され、そして上記等用量の第２の系列は、１週間に３回投与の投与計画にしたがって投与される、項目８６に記載の方法。
（項目８８）
項目７５に記載の方法であって、ここで：
ａ）上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体のより高い１週間の総用量は、同じ経路および同じ投与計画によって投与される参照ＩＬ−２標準のより高い１週間の総用量に相当する量であり、該参照ＩＬ−２標準のより高い１週間の総用量は、約１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）〜約３３００μｇ（５４．０ＭＩＵ）の範囲であり、該ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の該より高い１週間の総用量は、参照ＩＬ−２標準の該より高い１週間の総用量によって提供されるナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性の、少なくとも７０％を提供し；
ｂ）上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体のより低い１週間の総用量は、同じ経路および同じ投与計画によって投与される参照ＩＬ−２標準のより低い１週間の総用量に相当する量であり、該参照ＩＬ−２標準のより低い１週間の総用量は、約１１００μｇ（１８．０ＭＩＵ）〜約２３８４μｇ（３９．０ＭＩＵ）の範囲であり、該ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の該より低い１週間の総用量は、該参照ＩＬ−２標準の該より低い１週間の総用量によって提供されるナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性の、少なくとも７０％を提供し；そして
ｃ）該ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体のより低い１週間の総用量は、該ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体のより高い１週間の総用量よりも低い、
方法。
（項目８９）
上記参照ＩＬ−２標準のより高い１週間の総用量は、１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）〜２５６７μｇ（４２．０ＭＩＵ）であり、そして上記参照ＩＬ−２標準のより低い１週間の総用量は、１１００μｇ（１８．０ＭＩＵ）〜１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）である、項目８８に記載の方法。
（項目９０）
項目８９に記載の方法であって、上記参照ＩＬ−２標準のより高い１週間の総用量は、２５６７μｇ（４２．０ＭＩＵ）であり、そして上記参照ＩＬ−２標準のより低い１週間の総用量は、約１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）であり、そして該参照ＩＬ−２標準のより高い１週間の総用量および該参照ＩＬ−２標準のより低い１週間の総用量はそれぞれ、１週間に３回投与の投与計画にしたがって投与される３つの等用量に分割される、方法。
（項目９１）
項目７５に記載の方法であって、該方法は、上記２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメン中に中断をさらに包含し、該中断は、該２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの上記第１の期間と該２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの上記第２の期間との間に、上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体を投与しない期間を含む、方法。
（項目９２）
上記中断は、約１週間〜約４週間の持続期間を有する、項目９１に記載の方法。
（項目９３）
項目７５に記載の方法であって、上記処置期間は、上記２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１のサイクルの完了後または該２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの任意のその後のサイクルの完了後約１週間〜約４週間で開始される、該２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のその後のサイクルを含み、ここで上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの上記毎週の投与は、該処置期間全体にわたって継続される、方法。
（項目９４）
項目９３に記載の方法であって、上記２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの少なくとも１つのサイクルは、該２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメン中に中断を含み、該中断は、該中断を含む該２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの任意の所定のサイクルの、上記第１の期間と上記第２の期間との間に、該ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体を投与しない期間を含む、方法。
（項目９５）
上記抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、静脈内に投与されるか、または皮下に投与される、項目１〜項目９４のいずれか１項に記載の方法。
【００１０】
（発明の簡単な要旨）
ＣＤ４０細胞表面抗原を発現する新生物細胞を含む癌について被検体を処置する方法が、提供される。この方法は、インターロイキン−２（ＩＬ−２）またはその生物学的に活性な改変体と、少なくとも１つの抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントとの併用療法を包含する。これらの２つの薬剤を組み合わせて投与する工程は、いずれか単独の薬剤よりも大きい有効性を提供し、正の治療的応答を生じる。いくつかの実施形態において、相乗的な治療効果が起こり、本発明を単剤療法に対して不応性である標的の癌を処置するために特に有用にする。
【００１１】
本発明の方法にしたがって、その必要がある個体は、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体とアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントとの組み合わせを投与される。適切なインターロイキン分子としては、ヒトＩＬ−２およびその生物学的に活性な改変体（例えば、ＩＬ−２ムテインアルデスロイキン（デス−アラニル−１，セリン−１２５ヒトインターロイキン−２）が挙げられる。本発明の方法に使用するための適切なアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体としては、ヒト細胞の表面上に発現されるヒトＣＤ４０抗原に対して特異的に結合し得る、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが挙げられる。これらのアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、ヒト細胞上のＣＤ４０抗原に結合される場合（特に新生物のヒト細胞上のＣＤ４０抗原に結合される場合）に、有意なアゴニスト活性を有さないが、アンタゴニスト活性を示す。適切なモノクローナル抗ＣＤ４０抗体は、ヒトの定常領域を有し；好ましくは、それらはまた、全体かまたは部分的にヒト化されたフレームワーク領域を有し；そして最も好ましくは、完全ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【００１２】
このようなモノクローナルアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の例は、組換え産生され得る、ＣＨＩＲ−５．９およびＣＨＩＲ−１２．１２として本明細書中に示される抗体；１３１．２Ｆ８．５．９として示されるハイブリドーマ細胞株（本明細書中で細胞株５．９と称される）および１５３．８Ｅ２．Ｄ１０．Ｄ６．１２．１２と示されるハイブリドーマ細胞株（本明細書中で細胞株１２．１２と称される）によって産生されるモノクローナル抗体；配列番号６に示される配列、配列番号７に示される配列、配列番号８に示される配列、配列番号６と配列番号７とに示される配列の両方、配列番号６と配列番号８とに示される配列の両方からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；配列番号２に示される配列、配列番号４に示される配列、配列番号５に示される配列、配列番号２と配列番号４とに示される配列の両方、および配列番号２と配列番号５とに示される配列の両方からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；配列番号１に示される配列、配列番号３に示される配列、および配列番号１と配列番号３とに示される配列の両方からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子によってコードされるアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体；ならびにヒトＣＤ４０に対して特異的に結合する能力を保持するこれらのモノクローナル抗体の抗原結合フラグメントであり、そしてこれらは、ヒト細胞上のＣＤ４０抗原に結合される場合に、有意なアゴニスト活性を有さないが、アンタゴニスト活性を示す。このようなモノクローナル抗ＣＤ４０抗体の例としてはまた、ハイブリドーマ細胞株１２．１２またはハイブリドーマ細胞株５．９によって産生されるモノクローナル抗体に結合し得るエピトープに結合するモノクローナル抗体；配列番号１０または配列番号１２に示されるアミノ配列の残基８２〜８７を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；競合結合アッセイにおいてモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９と競合するモノクローナル抗体；ならびにＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体またはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体の抗原結合フラグメントであるモノクローナル抗体または上述のモノクローナル抗体のいずれかであって、ここで、このフラグメントはヒトＣＤ４０抗原に対して特異的に結合する能力を保持する。
【００１３】
いくつかの実施形態において、これらの２つの治療因子は、２つの別個の薬学的組成物として同時に投与され、このうち一方はＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体を含み、他方はアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその適切な抗原結合フラグメントを含み、ここでそれぞれは、特定の投薬レジメンにしたがって投与される。このアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含有する薬学的組成物は、毎週の投与計画にしたがって投与されるか、または代替的に、２週間に１度か、３週間に１度か、もしくは４週間に１度投薬（ｄｏｓｅ）される。このアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、処置期間全体にわたって投与されても処置期間内の決められた持続期間の間投薬されてもよい。ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体を含有する薬学的組成物は、一定のＩＬ−２投薬レジメンにしたがって投与されるか、または２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンにしたがって投薬される。
【００１４】
この一定のＩＬ−２投薬レジメンは、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の一定な１週間の総用量が、被検体に投与され、その後、ＩＬ−２投薬を行わない期間が続く。一定のＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のサイクルは、その必要がある被検体に対して投与される。一定のＩＬ−２投薬レジメンの各サイクルの間に投与されるべき１週間の総用量は、単回投与として投与され得る。あるいは、この一定のＩＬ−２投薬レジメンの各サイクルの間に投与される１週間の総用量は、１週間に２回投与の投与計画、１週間に３回投与の投与計画、１週間に４回投与の投与計画、１週間に５回投与の投与計画、１週間に６回投与の投与計画、または１週間に７回投与の投与計画にしたがって投与される等用量の系列に分割され得る。
【００１５】
上記２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンは、ＩＬ−２投薬の第１の期間を含み、ここでは、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の、より高い１週間の総用量が、この被検体に投与され、その後、ＩＬ−２投薬の第２の期間が続き、ここでは、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体のより低い１週間の総用量が、この被検体に投与される。ＩＬ−２投薬の第２の期間中の、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、ＩＬ−２投薬の第１の期間中に投与されるＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量より低い。ＩＬ−２投薬の第１の期間中および／またはＩＬ−２投薬の第２の期間中に投与されるべき１週間の総用量は、単回投与として投与され得る。あるいは、ＩＬ−２投薬の第１の期間および第２の期間の、いずれかまたは両方の間に投与される１週間の総用量は、１週間に２回投与の投与計画、１週間に３回投与の投与計画、１週間に４回投与の投与計画、１週間に５回投与の投与計画、１週間に６回投与の投与計画、または１週間に７回投与の投与計画にしたがって投与される等用量の系列に分割され得る。本発明の方法はまた、ＩＬ−２の２つのレベルの投薬レジメン中に中断を提供し、ここでこの被検体は、ＩＬ−２を投与しない期間を与えられ、そして必要に応じてこの２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１の期間と第２の期間との間に抗ＣＤ４０抗体投薬をしない期間を与えられる。これらの２つの治療因子による同時療法は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその適切な抗原結合フラグメントについて推奨される投薬レジメンとの組み合わせで、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のサイクルを投与する工程を包含する。
【００１６】
本発明の方法は、ＣＤ４０細胞表面抗原を発現する新生物細胞を含む癌について、個体を処置するために有用である。このような癌の例としては、固形腫瘍（例えば、肺癌、卵巣癌、膀胱癌、腎臓癌、肝臓癌、胃癌、前立腺癌、皮膚癌、および乳癌、ならびに肉腫）、およびＢ細胞関連の癌（例えば、非ホジキンリンパ腫（高悪性度リンパ腫、中悪性度リンパ腫、および低悪性度リンパ腫）、ホジキン病、急性リンパ性白血病、骨髄腫、慢性リンパ性白血病および骨髄芽球性白血病）が挙げられるが、これらに限定されない。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は、ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の軽鎖および重鎖についてのアミノ酸配列を示す。軽鎖のリーダー領域（配列番号２の残基１〜２０）、可変領域（配列番号２の残基２１〜１３２）および定常領域（配列番号２の残基１３３〜２３９）は図１Ａに示される。重鎖のリーダー領域（配列番号４の残基１〜１９）、可変領域（配列番号４の残基２０〜１３９）および定常領域（配列番号４の残基１４０〜４６９）は図１Ｂに示される。図１Ｂに示されるｍＡｂ  １２．１２の重鎖についての代替定常領域は、配列番号４の位置１５３におけるアラニン残基に対するセリン残基の置換を反映する。このｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の重鎖の改変体についての完全配列は、配列番号５に示される。
【図２】図２は、ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２に関する軽鎖についてのコード配列（図２Ａ；配列番号１）および重鎖についてのコード配列（図２Ｂ；配列番号３）を示す。
【図３】図３は、ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−５．９の軽鎖および重鎖についてのアミノ酸配列を示す。軽鎖のリーダー領域（配列番号６の残基１〜２０）、可変領域（配列番号６の残基２１〜１３２）および定常領域（配列番号６の残基１３３〜２３９）は図３Ａに示される。重鎖のリーダー領域（配列番号７の残基１〜１９）、可変領域（配列番号７の残基２０〜１４４）および定常領域（配列番号７の残基１４５〜４７４）は図３Ｂに示される。図３Ｂに示されるｍＡｂ  ＣＨＩＲ−５．９の重鎖についての代替定常領域は、配列番号７の位置１５８におけるアラニン残基に対するセリン残基の置換を反映する。このｍＡｂ  ＣＨＩＲ−５．９の重鎖の改変体についての完全配列は、配列番号８に示される。
【図４−１】図４は、ヒトＣＤ４０の短いアイソフォームについてのコード配列（図４Ａ；配列番号９）（アミノ酸配列は図４Ｂ；配列番号１０に示される）、およびヒトＣＤ４０の長いアイソフォームについてのコード配列（図４Ｃ；配列番号１１）（アミノ酸配列は図４Ｄ；配列番号１２に示される）を示す。
【図４−２】図４は、ヒトＣＤ４０の短いアイソフォームについてのコード配列（図４Ａ；配列番号９）（アミノ酸配列は図４Ｂ；配列番号１０に示される）、およびヒトＣＤ４０の長いアイソフォームについてのコード配列（図４Ｃ；配列番号１１）（アミノ酸配列は図４Ｄ；配列番号１２に示される）を示す。
【図５】図５は、ヒト非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）のＮａｍａｌｗａ異種移植片モデルを使用して、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ１２．１２とＩＬ−２との併用処置の、インビボでの増強された抗腫瘍活性を実証する。
【図６】図６は、示差走査熱分析（ＤＳＣ）によって測定された、様々なｐＨの処方物におけるＣＨＩＲ−１２．１２の熱融点を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
（発明の詳細な説明）
本発明は、ＣＤ４０抗原を発現する新生物細胞を含む癌について、ヒト被検体を処置するための方法に関し、この癌としては、固形腫瘍、リンパ腫（例えば、Ｂ細胞リンパ腫）、白血病、および骨髄腫が挙げられるが、これらに限定されない。この方法は、インターロイキン−２（ＩＬ−２）またはその生物学的に活性な改変体と少なくとも１つのアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントとの併用療法を包含し、これらの各々は、本明細書中に開示される特定の投薬レジメンにしたがって投与される。本発明のいくつかの実施形態において、これらの投薬レジメンは、この被検体が、抗ＣＤ４０抗体療法から外されるまで（例えば、この被検体が、完全寛解を示すか、または抗ＣＤ４０抗体毒性の１つ以上の症状を示す場合）か、または本明細書中の以下に記載されるＩＬ−２毒性の発生に起因して、ＩＬ−２療法から外されるまで続けられる。この被検体が、毒性に起因してＩＬ−２療法から外される場合、この抗ＣＤ４０抗体療法は、（推奨される抗体投薬レジメンに従って）継続されても継続されなくてもよく；そして上記抗体療法が継続されなかった場合に、ＩＬ−２の毒性症状が、一旦、弱まるかまたは消失すると、このＩＬ−２療法、またはこのＩＬ−２療法および抗ＣＤ４０抗体療法は、同じＩＬ−２投薬レジメンおよび同じ容量のＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体、低用量のこの治療因子による同じＩＬ−２投薬レジメン、または本明細書中に開示される異なるＩＬ−２投薬レジメンを使用して再開され得る。
【００１９】
本発明の他の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体療法についての投薬レジメンは、決められた期間（例えば、２週間〜１６週間）の間、続けられ、そして本明細書中に開示されるＩＬ−２投薬レジメンを組み合わせて投与され、ここで所定の治療期間は、この被検体が本明細書中に開示される投薬レジメンおよび用量にしたがって抗ＣＤ４０抗体療法およびＩＬ−２療法の両方を受容する、重複期間を含む。このような実施形態において、一般的に、抗ＣＤ４０抗体投与の持続期間は、約４週間〜約１２週間であり、この期間は、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、または１２週間を含む。ＩＬ−２投与の持続期間は、使用されるＩＬ−２投薬レジメンの関数である。
【００２０】
これらの２つの治療因子による併用療法は、抗腫瘍活性を提供する。「抗腫瘍活性」によって、細胞増殖の速度および、それによる存在する腫瘍の増殖速度もしくは治療中に生じる腫瘍の減少、および／または存在する新生物（腫瘍）細胞もしくは新しく形成される新生物細胞の破壊、そしてそれによる治療中の腫瘍全体の大きさの減少が意図される。ＩＬ−２（またはその改変体）と少なくとも１つのアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）との組み合わせによる治療を受ける被検体は、ＣＤ４０抗原を発現する新生物細胞を含む癌の処置に関して有益である生理学的応答を経験し、この癌としては、本明細書中の以下に記載されるようなＢ細胞関連の癌および固形腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２１】
本発明の方法が、存在する癌の処置に対して指向される一方で、この方法が治療中に生じるさらなる腫瘍の増殖を妨害するのに有用であり得ることが、認識される。ＩＬ−２（またはその生物学的に活性な改変体）とアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）との併用療法は、これらの治療因子のいずれかの単独使用によって提供される治療上の利点を上回る治療上の利点を提供する。さらに、これらの２つの治療因子は、単一の抗体療法または単一のサイトカイン療法に対する初期耐性の結果としてか、または単一の抗体または単一のサイトカインによる治療の１つ以上の経過の間に発生する耐性の結果としてのいずれかにより、これらのいずれかの因子単独による処置（すなわち、単剤療法）に対して不応性である腫瘍を処置するために組み合わせて使用され得る。なお他の実施形態において、これらの２つの治療因子による併用療法は、単剤療法に対して不応性であるかまたは非不応性（すなわち、応答性）である腫瘍に対して相乗的な治療効果を有する。
【００２２】
用語「腫瘍治療」は、任意の癌処置を意味することが意図され、この癌処置としては、化学療法、放射線治療、免疫療法、それらの組み合わせなどが挙げられる。腫瘍治療に使用される因子は、本明細書中で「腫瘍治療因子」といわれる。用語「免疫療法」は、免疫系が調節される任意の癌治療に適用でき、そしてこれらとしては、サイトカインの投与、抗体の投与、抗原の投与／ワクチン接種、免疫細胞の投与、免疫細胞の初回刺激、それらの組み合わせなどが挙げられる。
【００２３】
本明細書中で使用される場合、「腫瘍」とは、全ての新生物細胞の増殖（ｇｒｏｗｔｈ）および増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）（悪性であるか良性であるかにかかわらず）を指し、そして前癌性および癌性の細胞ならびに組織を指す。本明細書中で使用される場合、「新生物の」とは、異常な組織の増殖を生じる、無制御（ｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｅ）な細胞増殖または無秩序な細胞増殖（悪性であるか良性であるかにかかわらず）を指す
。「ＣＤ４０を発現する新生物細胞」によって、ＣＤ４０細胞表面抗原を発現する任意の新生物細胞（悪性であるか良性であるかにかかわらず）を指す。細胞におけるＣＤ４０発現を検出するための方法は、当該分野において周知であり、そしてＰＣＲ技術、免疫組織化学、フローサイトメトリー、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２４】
用語「癌」および「癌性の」とは、代表的に、無秩序な細胞増殖によって特徴付けられる哺乳動物中の生理学的状態を指すか、またはそれを記載する。癌の例としては、リンパ腫、白血病、骨髄腫、および固形腫瘍（肺癌、乳癌、卵巣癌、腎臓癌、肝臓癌、胃癌、結腸癌、前立腺癌、皮膚癌、肉腫などが挙げられるが、これらに限定されない）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２５】
癌に関連する「不応性」によって、特定の癌が特定の治療因子による治療に対して、耐性であるかまたは非応答性であることが意図される。癌は、特定の治療因子による処置の開始に由来してこの特定の治療因子による治療に対して不応性（すなわち、この治療因子に対する最初の曝露に非応答性）であり得るか、またはこの治療因子による第１の処置期間の過程にわたってか、またはこの治療因子によるその後の処置期間中のいずれかのこの治療因子に対する耐性の発達の結果としてのこの特定の治療因子による治療に対して不応性であり得るかのいずれかである。
【００２６】
本明細書中で使用される場合、用語「インターロイキン−２」（ＩＬ−２）とは、１３，０００ダルトン〜１７，０００ダルトンの範囲にある報告された分子量（ＧｉｌｌｉｓおよびＷａｔｓｏｎ（１９８０）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５９：１７０９）を有し、そして６〜８．５の範囲の等電点を有するサイトカインをいう。ＩＬ−２は、正常なＴ細胞によって天然に産生され、そして体内に低濃度で存在する。ＩＬ−２は、Ｍｏｒｇａｎら、（１９７６）Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９３：１００７−１００８によって最初に記載され、そして刺激されたＴリンパ球の増殖を誘導するその能力に起因して、元々は、Ｔ細胞増殖因子と呼ばれた。
【００２７】
「抗体」および「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は、同じ構造的特徴を有する糖タンパク質である。この用語は、同意語として使用される。いくつかの例では、免疫グロブリンの抗原特異性は、公知であり得る。
【００２８】
用語「抗体」は、最も広義に使用され、そして完全に組み立てられた抗体、抗原に結合し得る抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ’（ａｂ）２、Ｆｖ、単鎖抗体、二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ））および上記のものを含む組換えペプチドを網羅する。
【００２９】
用語「モノクローナル抗体」および「ｍＡｂ」とは、本明細書中で使用される場合、実質的に同質の抗体（すなわち、微量に存在し得る可能性のある天然に存在する変異を除いて集団を構成する個々の抗体が同一である）の集団から得られる抗体をいう。本明細書中で使用される場合、「抗ＣＤ４０抗体」とは、ＣＤ４０細胞表面抗原を特異的に認識する任意の抗原を包含し、これらとしては、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、単鎖抗体、ならびにＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖおよび親抗ＣＤ４０抗体の抗原結合機能を保持する他のフラグメントが挙げられる。本発明の方法を実施するために特に重要であるのは、本明細書中の以下に記載されるＣＨＩＲ５．９ヒト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体およびＣＨＩＲ１２．１２ヒト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体によって示される結合特性を有する抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【００３０】
「ネイティブな抗体」および「ネイティブな免疫グロブリン」は、通常は、２つの同一の軽（Ｌ）鎖と２つの同一の重（Ｈ）鎖とからなる、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体の糖タンパク質である。各々の軽鎖は、１つの共有ジスルフィド結合によって重鎖に連結されるが、ジスルフィド連結の数は様々な免疫グロブリンアイソタイプの重鎖の間で変わる。各々の重鎖および軽鎖はまた、規則的に間隔の空いた鎖内ジスルフィド架橋を有する。各々の重鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、次にいくつかの定常ドメインが続く。各々の軽鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、その他端に定常ドメインを有する；軽鎖の定常ドメインは重鎖の第一の定常ドメインと整列され、軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインと整列される。特定のアミノ酸残基が、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間で界面を形成すると考えられる。
【００３１】
用語「可変」とは、可変ドメインの特定の部分が抗体間で広範囲にわたって配列が異なる事実をいう。可変領域は、抗原結合特異性を与える。しかし、その可変性は、抗体の可変ドメインの全体にわたって均一に分布しない。可変性は、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインの両方で相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中する。可変ドメインのうちより高度に保存される部分は、フレームワーク（ＦＲ）領域と呼ばれる。ネイティブな重鎖および軽鎖の可変ドメインは、各々、４つのＦＲ領域を含み、これらの領域は、大部分はβシート配置をとり、βシート構造に結合する（場合によってはβシート構造の一部分を形成する）ループを形成する３つのＣＤＲによって結合される。各々の鎖におけるＣＤＲは、他の鎖由来のＣＤＲと共にＦＲ領域によって近接して一緒に保持され、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔら、（１９９１）ＮＩＨ  Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１−３２４２，Ｖｏｌ．Ｉ，６４７−６６９頁を参照のこと）。
【００３２】
定常ドメインは、抗原に対する抗体の結合に直接的に関連しないが、種々のエフェクター機能（例えば、Ｆｃレセプター（ＦｃＲ）結合、抗体依存性の細胞の毒性における抗体の関与、オプソニン作用、補体依存性細胞毒性の惹起、および肥満細胞脱顆粒）を示す。
【００３３】
用語「超可変領域」は、本明細書中で使用される場合、抗原結合を担う抗体のアミノ酸残基をいう。超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」に由来するアミノ酸残基（すなわち、軽鎖可変ドメインにおける残基２４〜３４（Ｌ１）、残基５０〜５６（Ｌ２）および残基８９〜９７（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメインにおける残基３１〜３５（Ｈ１）、残基５０〜６５（Ｈ２）および残基９５〜１０２（Ｈ３）；Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ））ならびに／あるいは「超可変ループ」に由来するアミノ酸残基（すなわち、軽鎖可変ドメインにおける残基２６〜３２（Ｌ１）、残基５０〜５２（Ｌ２）および残基９１〜９６（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメインにおける（Ｈ１）、残基５３〜５５（Ｈ２）および残基９６〜１０１（Ｈ３）；ＣｌｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７）を含む。「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書中で判断されるように、超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。
【００３４】
「抗体フラグメント」は、インタクトな抗体の一部、好ましくは、インタクトな抗体の抗原結合領域または可変領域を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖフラグメント；二重特異性抗体；直鎖状抗体（Ｚａｐａｔａら（１９９５）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．（１０）：１０５７−１０６２）；単鎖抗体分子；ならびに抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体が挙げられる。抗体のパパイン消化により、各々単一の抗原結合部位を有する２つの同一の抗原結合フラグメント（「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる）、および残りの「Ｆｃ」フラグメント（この名称は、容易に結晶化する能力を反映する）が生成される。ペプシン処理により、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントが得られ、これは、２つの抗原結合部位を有し、依然として抗原と架橋結合し得る。
【００３５】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位および抗原結合部位を含む最小の抗体フラグメントである。この領域は、強固に非共有結合している、１つの重鎖可変領域および１つの軽鎖可変領域からなる。この構成において、各々の可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ−ＶＬダイマーの表面における抗原結合部位を規定する。合わせて、６つのＣＤＲが抗体に対する抗原結合特異性を与える。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に対して特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）でも、抗原を認識し結合する能力を有するが、完全な結合部位よりは親和性は低い。
【００３６】
Ｆａｂフラグメントはまた、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第一の定常ドメイン（ＣＨ１）を含む。Ｆａｂフラグメントは、抗体のヒンジ領域由来の１以上のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端において、いくつかの残基が付加されている点でＦａｂ’フラグメントと異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、本明細書中で、定常ドメインのシステイン残基が遊離のチオール基を有するＦａｂ’についての呼称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントの重鎖ジスルフィド架橋を還元することにより生成される。抗体フラグメントの他の化学結合もまた公知である。
【００３７】
任意の脊椎動物種由来の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、２つの明らかに異なる型（カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる）の一方に割り当てられ得る。
【００３８】
それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、免疫グロブリンが異なるクラスに割り当てられ得る。ヒト免疫グロブリンの５つの主要なクラスが存在する：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ、そしてこれらの中のいくつかはさらにサブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）に分けられる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマおよびミューと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造および三次元配置は周知である。異なるアイソタイプは異なるエフェクター機能を有する。例えば、ヒトＩｇＧ１アイソタイプおよびＩｇＧ３アイソタイプは、抗体依存性の細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）の活性を媒介する。
【００３９】
語句「標識」とは、本明細書中で使用される場合、「標識された」抗体を生成するように抗体に直接的または間接的に結合される検出可能な化合物または組成物をいう。標識は、それ自体で検出可能である（例えば、放射性同位体標識もしくは蛍光標識）か、または酵素標識の場合には、検出可能な基質化合物もしくは組成物の化学的変化を触媒し得る。検出可能な標識として作用し得る放射性核種としては、例えば、Ｉ−１３１、Ｉ−１２３、Ｉ−１２５、Ｙ−９０、Ｒｅ−１８８、Ｒｅ−１８６、Ａｔ−２１１、Ｃｕ−６７、Ｂｉ−２１２、およびＰｄ−１０９が挙げられる。この標識はまた、毒素のような検出不可能な実体であってもよい。
【００４０】
用語「アンタゴニスト」は、最も広い意味で使用され、本明細書中に開示されるネイティブな標的の生物学的活性またはその転写もしくは翻訳を、部分的もしくは完全にブロック、阻害、または中和する任意の分子を包含する。
【００４１】
「キャリア」は、本明細書中で使用される場合、使用される投薬量および濃度でそのキャリアに曝露される細胞または哺乳動物に対して非毒性である、薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤または安定剤を包含する。多くの場合、生理学的に受容可能なキャリアは、ｐＨ緩衝化水溶液である。生理学的に受容可能なキャリアの例としては、緩衝液（例えば、リン酸、クエン酸、コハク酸および他の有機酸）；抗酸化物質（アルコルビン酸が挙げられる）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン）；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジン）；単糖類、二糖類および他の炭水化物（グルコース、マンノースまたはデキストリンが挙げられる）；キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）；糖アルコール（例えば、マンニトールまたはソルビトール）；塩を形成する対イオン（例えば、ナトリウム）；ならびに／あるいは非イオン性界面活性剤（例えば、ＴＷＥＥＮ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびＰｌｕｒｏｎｉｃｓ）が挙げられる。１以上のさらなる治療剤と「併用して」投与することは、同時（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ））投与および任意の順序での連続投与を包含する。
【００４２】
「宿主細胞」とは、本明細書中で使用される場合、組換えベクターまたは他の転移ポリヌクレオチドのためのレシピエントとして使用され得るかもしくは使用される単細胞性実体として培養された微生物または真核細胞もしくは細胞株をいい、トランスフェクトされた元の細胞の子孫を包含する。単一の細胞の子孫は、天然の変異、偶発的な変異または意図的な変異に起因して、形態またはゲノムもしくは全ＤＮＡ相補体において元の親と必ずしも完全に同一でなくてもよいことが理解される。
【００４３】
「ヒト効果細胞」は、１以上のＦｃＲを発現し、かつエフェクター機能を果たす白血球である。好ましくは、その細胞は、少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、抗原依存性の細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）のエフェクター機能を果たす。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、マクロファージ、好酸球および好中球が挙げられ、ＰＢＭＣおよびＮＫ細胞が好ましい。ＡＤＣＣ活性を有する抗体は、代表的には、抗体のＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ３アイソタイプである。ＩｇＧ１抗体およびＩｇＧ３抗体を単離することに加えて、このようなＡＤＣＣを媒介する抗体は、非ＡＤＣＣ抗体由来の可変領域ＩｇＧ１アイソタイプもしくはＩｇＧ３アイソタイプ定常領域に操作することによって作製され得ることに注意すること。
【００４４】
用語「Ｆｃレセプター」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合するレセプターを表すために使用される。好ましいＦｃＲは、ネイティブな配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体に結合するもの（γレセプター）であり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩサブクラスのレセプター（これらのレセプターの対立遺伝子改変体および代替的スプライス形態を含む）が挙げられる。ＦｃγＲＩＩレセプターとしてはＦｃγＲＩＩＡ（「活性化レセプター」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害レセプター」）が挙げられ、これらは、類似のアミノ酸配列を有し、その細胞質ドメインが主に異なる。活性化レセプターＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫レセプターチロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。阻害レセプターＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫レセプターチロシンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む（Ｄａｅｒｏｎ（１９９７）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３−２３４を参照のこと）。ＦｃＲは、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ（１９９１）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２；Ｃａｐｅｌら（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２５−３４；およびｄｅ  Ｈａａｓら（１９９５）Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０−３４１で概説される。他のＦｃＲ（将来同定されるものを含む）が、本明細書中の用語「ＦｃＲ」に包含される。この用語はまた、新生児レセプターであるＦｃＲｎを包含し、これは、母性ＩｇＧの胎児への転移を担う（Ｇｕｙｅｒら（１９７６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７およびＫｉｍら（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９）。
【００４５】
用語「相乗作用」は、それぞれの活性因子の各々の個々の効果の合計より大きい２つ以上の活性因子の合わせた効果を記載するのに使用される。したがって、２つ以上の因子の上記合わせた効果が、活性またはプロセス（例えば、腫瘍の増殖）の「相乗的な阻害」を生じる場合にそれは、この活性またはプロセスの阻害が、それぞれの活性因子の各々の阻害効果の合計より大きいことが意図される。用語「相乗的な治療効果」とは、２つ以上の治療の組み合わせによって観察される治療効果を指し、ここでこの治療効果（多くのパラメータのいずれかによって測定されるような）は、個々の各治療によって観察される個々の治療効果の合計より大きい。
【００４６】
用語「治療有効用量」、「治療有効量」、または「有効量」は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）またはインターロイキン−２（もしくはその改変体）の、少なくともこれらの２つの因子を含む併用療法の一部として投与される場合の新生物細胞を含む癌についての被検体の処置に関して正の治療的応答を生じる量を意味することが意図される。
【００４７】
（アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体とＩＬ−２との併用療法）
本発明は、新生物細胞の増殖によって特徴付けられる癌を有する被検体を処置するための方法に関する指向される。本発明の方法は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントとＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体とによる併用療法を包含する。本発明の方法は、ＣＤ４０細胞表面抗原を発現する新生物細胞を含む癌（例えば、多くの固形腫瘍およびＢ細胞リンパ腫）の処置について、特に有用である。
【００４８】
本発明の方法を使用して処置され得る固形腫瘍としては、卵巣癌、肺癌（例えば、扁平上皮癌型、腺癌型、および大細胞癌型の非小細胞肺癌、ならびに小細胞肺癌）、乳癌、結腸癌、腎臓癌（例えば、腎細胞癌が挙げられる）、膀胱癌、肝臓癌（例えば、肝細胞癌が挙げられる）、胃癌、頚癌、前立腺癌、鼻咽腔癌、甲状腺癌（例えば、甲状腺乳頭癌が挙げられる）、および皮膚癌（例えば、黒色腫）、ならびに肉腫（例えば、骨肉腫およびユーイング肉腫が挙げられる）が挙げられるが、これらに限定されない。Ｂ細胞関連の癌（例えば、リンパ腫）としては、本明細書中の以下に記載されるように、低悪性度Ｂ細胞リンパ腫、中悪性度Ｂ細胞リンパ腫および高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）誘導性のリンパ腫、およびエイズ関連リンパ腫、ならびにＢ細胞急性リンパ性白血病、骨髄腫、慢性リンパ性白血病、急性骨髄芽球性白血病などが挙げられる。
【００４９】
したがって、本発明の方法は、異常な、制御不可能なＢ細胞の増殖または蓄積に関する非ホジキンリンパ腫の処置における使用を見出す。本発明の目的に関して、このようなリンパ腫は、Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ分類スキームにしたがって呼ばれ、低悪性度、中悪性度、および高悪性度として分類されるＢ細胞リンパ腫である（「Ｔｈｅ
Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｊｅｃｔ」Ｃａｎｃｅｒ  ４９（１９８２）：２１１２−２１３５を参照のこと）。したがって、低悪性度Ｂ細胞リンパ腫としては、小リンパ球性の、濾胞性核切れ込み小細胞型リンパ腫、および濾胞性の核切れ込み小細胞型と大細胞型との混合型リンパ腫が挙げられ；中悪性度リンパ腫としては、濾胞性大細胞型リンパ腫、びまん性核切れ込み小細胞型リンパ腫、びまん性の小細胞型と大細胞型との混合型リンパ腫、びまん性大細胞型リンパ腫が挙げられ；そして高悪性度リンパ腫としては、バーキット型および非バーキット型の、大細胞型免疫芽球性リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫および非核切れ込み小細胞型リンパ腫が挙げられる。
【００５０】
本発明の方法が、Ｒｅｖｉｓｅｄ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ａｎｄ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｌｙｍｐｈｏｍ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ（ＲＥＡＬ）システムにしたがって分類されるＢ細胞リンパ腫の治療的処置に有用であることが、認識される。このようなＢ細胞リンパ腫としては、前駆Ｂ細胞新生物として分類されるリンパ腫（例えば、Ｂリンパ芽球性白血病／リンパ腫；末梢Ｂ細胞新生物（慢性リンパ性白血病／小リンパ球性リンパ腫、リンパ形質細胞様リンパ腫／免疫細胞腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、小胞中心リンパ腫（濾胞性）（びまん性小細胞型リンパ腫、びまん性の小細胞型と大細胞型との混合型、およびびまん性大細胞型リンパ腫が挙げられる）、辺縁層Ｂ細胞リンパ腫（結節外性、結節性、および脾臓型が挙げられる）、ヘアリーセル白血病、プラズマ細胞腫／骨髄腫、原発性縦隔リンパ腫の（胸腺の）サブタイプのびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、およびバーキット様の高悪性度Ｂ細胞リンパ腫が挙げられる）；急性白血病；急性リンパ性白血病；骨髄芽球性白血病；急性骨髄性白血病；前骨髄球性白血病；骨髄単球性白血病；単球性白血病；赤白血病；顆粒球性白血病（慢性骨髄性白血病）；慢性リンパ性白血病；真性赤血球増加症；多発性骨髄腫；ヴァルデンストレームマクログロブリン血症；Ｈ鎖病；および分類できない低悪性度Ｂ細胞リンパ腫または高悪性度Ｂ細胞リンパ腫が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５１】
特に、本発明の方法は、上に記載されたＣＤ４０抗原を発現する新生物細胞を含む固形腫瘍およびＢ細胞リンパ腫を処置するために有用である。「処置」は、本明細書中で、被検体に対するアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体もしくはその抗原結合フラグメントの適用または投与、あるいは被検体から単離された組織または細胞株に対するアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体もしくはその抗原結合フラグメントの適用または投与（この被検体またはこの被検体から単離した組織もしくは細胞株に対するＩＬ−２（またはその生物学的に活性な改変体）の適用あるいは投与と組み合わせた）として定義され、この被検体は、疾患、疾患の症状、または疾患についての素因を有し、ここでこの目的は、その疾患、その疾患の症状、もしくはその疾患についての素因を、治癒する（ｃｕｒｅ）か、治癒する（ｈｅａｌ）か、緩和するか、軽減するか、変化させるか、治療するか、寛解させるか、改善するか、またはそれらに影響をおよぼすことである。「処置」によって、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）とＩＬ−２（またはその生物学的に活性な改変体）との組み合わせが、単一の薬学的組成物の一部としてか、あるいは代替的にこのアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）またはＩＬ−２（もしくはその生物学的に活性な改変体）をいずれかを含有する個々の薬学的組成物の一部として、上記被検体またはこの被検体から単離した組織もしくは細胞株に対して適用されても投与されて得ることが意図され、この被検体は、疾患、疾患の症状、または疾患についての素因を有し、この目的は、その疾患、その疾患の症状、もしくはその疾患についての素因を、治癒する（ｃｕｒｅ）か、治癒する（ｈｅａｌ）か、緩和するか、軽減するか、変化させるか、治療するか、寛解させるか、改善するか、またはそれらに影響をおよぼすことである。
【００５２】
（腫瘍治療因子の簡単な説明）
本発明の方法に使用するのに適切なアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、ヒト細胞の表面上に発現されるヒトＣＤ４０抗原に、特異的に結合し、そしてヒトＣＤ４０発現細胞上のＣＤ４０抗原に結合される場合に有意なアゴニスト活性を有さないがアンタゴニスト活性を示し、これらの細胞としては、正常なヒト細胞および新生物（悪性であるか良性であるかにかかわらず）のヒト細胞が挙げられる。いくつかの実施形態において、ヒト細胞の表面上に提示されるＣＤ４０に対するそれらの結合は、これらのヒト細胞の増殖および分化の阻害を生じる。したがって、本発明の方法に使用するのに適切なアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体としては、細胞表面ＣＤ４０抗原を発現する、正常なヒト細胞および新生物のヒト細胞に対してアンタゴニスト活性を示し得る、これらのモノクローナル抗体が挙げられる。これらの抗ＣＤ４０抗体およびその抗原結合フラグメントは、本明細書中で、「アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体」と称される。このような抗体としては、以下に記載される完全ヒトモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９および完全ヒトモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２、ならびにモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９およびモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２の結合特性を有するモノクローナル抗体が挙げられるが、これらに限定されない。組換え産生され得るこれらのモノクローナル抗体は、以下に記載され、そして発明の名称「Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４０  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ」である、２００３年１１月４日、２００３年１１月２６日および２００４年４月２７日に出願され、それぞれ、米国特許出願第６０／５１７，３３７号（代理人事件番号ＰＰ２０１０７．００１（０３５７８４／２５８４４２））、同第６０／５２５，５７９号（代理人事件番号ＰＰ２０１０７．００２（０３５７８４／２７１５２５））、および同第６０／５６５，７１０号（代理人事件番号ＰＰ２０１０７．００３（０３５７８４／２７７２１４））と割り当てられた同時係属中の仮特許出願（その各々の内容はその全体が参考として本明細書中に援用される）で開示されている。
【００５３】
モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９およびモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２に加えて、本明細書中に記載される本発明の方法の実施において有用であり得る他のＣＤ４０抗体としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：（１）１３１．２Ｆ８．５．９（本明細書中で細胞株５．９と称される）および１５３．８Ｅ２．Ｄ１０．Ｄ６．１２．１２（本明細書中で細胞株１２．１２と称される）（それぞれ、特許受託番号ＰＴＡ−５５４２および特許受託番号ＰＴＡ−５５４３としてＡＴＣＣに寄託された）で表されるハイブリドーマ細胞株によって産生されるモノクローナル抗体；（２）配列番号２に示される配列、配列番号４に示される配列、配列番号５に示される配列、配列番号２と配列番号４とに示される配列の両方、および配列番号２と配列番号５とに示される配列の両方からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；（３）配列番号６に示される配列、配列番号７に示される配列、配列番号８に示される配列、配列番号６と配列番号７とに示される配列の両方、および配列番号６と配列番号８とに示される配列の両方からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；（４）配列番号１に示されるヌクレオチド配列、配列番号３に示されるヌクレオチド配列、および配列番号１と配列番号３とに示される配列の両方からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子によってコードされるアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体；（５）ハイブリドーマ細胞株５．９またはハイブリドーマ細胞株１２．１２によって産生されるモノクローナル抗体に結合し得るエピトープに結合するモノクローナル抗体；（６）配列番号１０または配列番号１２に示されるアミノ配列の残基８２〜８７を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；（７）競合結合アッセイにおいてモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２と競合するモノクローナル抗体；ならびに（８）ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体またはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体の抗原結合フラグメントまたは上述の項目（１）〜（７）のモノクローナル抗体の抗原結合フラグメントであるモノクローナル抗体（ここで、このフラグメントはヒトＣＤ４０抗原に対して特異的に結合する能力を保持する）。本明細書中に開示される方法において使用するのに適切なこれらの抗体の抗体および抗原結合フラグメントとしては、当該分野において周知でありかつ本明細書中の以下に記載される方法を使用して、組換え的に産生される抗体およびその抗原結合フラグメントが挙げられ、これらとしては、例えば、組換え産生されたモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９およびモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２が挙げられる。
【００５４】
本明細書中に開示される抗ＣＤ４０抗体のフラグメントは、それらが全長抗体の所望の親和性を保持する限り、本発明の方法において使用するのに適切である。したがって、抗ＣＤ４０抗体のフラグメントは、ＣＤ４０Ｂ細胞表面抗原に結合する能力を保持する。このようなフラグメントは、対応する全長抗体と同様な特性によって特徴付けられる。例えば、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体フラグメントは、ヒト細胞の表面上に発現されるヒトＣＤ４０抗原を特異的に結合し、そしてヒトＣＤ４０発現細胞上のＣＤ４０抗原に結合される場合に、有意なアゴニスト活性を有さないが、アンタゴニスト活性を示す。このようなフラグメントは、「抗原結合」フラグメントと称される。
【００５５】
上記されかつ本明細書中の以下に、より完全に記載されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を使用することに加えて、本発明の方法は、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２、およびそれらの各抗原に対するこれらの抗体の結合を競合的に妨害するかまたは同じエピトープに結合するモノクローナル抗体の結合特徴を有する抗体を使用して実施され得る。当業者は、抗体がＣＨＩＲ−５．９の結合またはＣＨＩＲ−１２．１２の結合を競合的に妨害するか否かを、標準的な方法を使用して決定し得る。
【００５６】
本発明の方法に使用するための上記ＩＬ−２、またはその生物学的に活性な改変体は、任意の供給源由来であり得るが、好ましくは組換えＩＬ−２であり、より詳しくは組換えヒトＩＬ−２である。「組換えＩＬ−２」によって、ネイティブな配列のＩＬ−２に匹敵する生物学的活性を有するＩＬ−２、および、例えば、Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら、（１９８３）Ｎａｔｕｒｅ  ３０２：３０５−３１０およびＤｅｖｏｓ（１９８３）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１１：４３０７−４３２３に記載されるような組換えＤＮＡ技術よって調製されたか、またはＷａｎｇら、（１９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２４：１４３１−１４３３によって記載される通りにＩＬ−２を変異によって変化させたＩＬ−２が意図される。一般的に、ＩＬ−２についてコードする遺伝子は、本明細書中に記載されるように、クローニングされ、次いで形質転換された生物（好ましくは微生物（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ））中で発現される。この宿主生物は、発現条件下でＩＬ−２を産生するために外来遺伝子を発現する。合成の組換えＩＬ−２はまた、真核生物（例えば、酵母またはヒト細胞）中で作製される。増殖させるプロセス、収穫するプロセス、破砕するプロセス、または細胞からＩＬ−２を抽出するためのプロセスは、例えば、米国特許第４，６０４，３７７号；同第４，７３８，９２７号；同第４，６５６，１３２号；同第４，５６９，７９０号；同第４，７４８，２３４号；同第４，５３０，７８７号；同第４，５７２，７９８号；同第４，７４８，２３４号；および同第４，９３１，５４３号に実質的に記載される（これらはその全体が本明細書によって参考として援用される）。
【００５７】
改変ＩＬ−２タンパク質の例については、欧州特許出願番号第１３６，４８９号；１９８３年２月３日出願の同第８３１０１０３５．０号（公開番号第９１５３９号の下で１９８３年１０月１９日に公開された）；１９８２年１２月２２日出願の同第８２３０７０３６．２号（公開番号第８８１９５号の下で１９８３年９月１４日に公開された）；１９８３年１０月１３日出願の欧州特許出願番号第８３３０６２２１．９号（公開番号第１０９７４８の下で１９８４年５月３０日に公開された、ベルギー特許第８９３，０１６号（同一人に所有される米国特許第４，５１８，５８４号）に記載される組換えＩＬ−２ムテインについての等価物である）；米国特許第４，７５２，５８５号およびＷＯ  ９９／６０１２８に記載されるムテイン；および本明細書中の実施例において使用されかつ米国特許第４，９３１，５４３号に記載されるＩＬ−２ムテインデス−アラニル−１，セリン−１２５ヒトＩＬ−２（「アルデスロイキン」とも称される）ならびにこの米国特許に記載される他のＩＬ−２ムテインを参照のこと（これらの全ては、本明細書中に参考として援用される）。発明の名称「Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２  Ｍｕｔｅｉｎｓ」である、２００４年３月５日に出願され、そして米国特許出願６０／５５０，８６８号と割り当てられた同時係属中の仮特許出願；および発明の名称「Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２  Ｍｕｔｅｉｎｓ」である、２００４年７月７日に出願され米国特許出願６０／５８５，９８０と割り当てられた同時係属中の仮特許出願（これらの内容は、その全てが本明細書中に参考として援用される）に記載されるＩＬ−２ムテインも参照のこと。さらに、ＩＬ−２は、上昇した溶解性および変化した薬物動態プロフィールを提供するためにポリエチレングリコールによって修飾され得る（その全体が本明細書中に参考として援用される米国特許第４，７６６，１０６号を参照のこと）。ＩＬ−２の適切な改変体が、より完全に議論される以下も参照のこと。
【００５８】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ＩＬ−２（例えば、ヒトＩＬ−２）と抗ＣＤ４０モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２との併用療法を包含する。他の実施形態において、本発明の方法は、ＩＬ−２（例えば、ヒトＩＬ−２）と抗ＣＤ４０モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９との併用療法を包含する。なお他の実施形態において、本発明の方法は、ＩＬ−２（例えば、ヒトＩＬ−２）と抗ＣＤ４０モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２または抗ＣＤ４０モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９の抗原フラグメントとの併用療法を包含する。
【００５９】
代替的な実施形態において、本発明の方法は、ＩＬ−２の生物学的に活性な改変体（例えば、ＩＬ−２ムテインデス−アラニル−１，セリン−１２５ヒトＩＬ−２（「アルデスロイキン」とも称され、これは商品名Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）（Ｃｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）で市販される処方物として商業的に入手可能である））と抗ＣＤ４０モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２または抗ＣＤ４０モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９との併用療法を包含する。他の実施形態において、本発明の方法は、ＩＬ−２の生物学的に活性な改変体（例えば、ＩＬ−２ムテインデス−アラニル−１，セリン−１２５ヒトＩＬ−２と抗ＣＤ４０モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２の抗原結合フラグメントまたは抗ＣＤ４０モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９の抗原結合フラグメントとの併用療法を包含する。本明細書中に記載される併用療法は、上記ＣＤ４０抗原が上記処置プロセスにおいて標的される限り、他のバリエーションを包含する。
【００６０】
（臨床上の有効性の測定）
本発明の方法にしたがって、本明細書中の他所で定義されるようなＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体および少なくとも１つのアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＤ４０抗原を発現する新生物細胞を含む癌に対する正の治療的応答を促す組み合わせで使用される。「正の治療的応答」によって、これらの投与される治療因子の合わせた抗腫瘍活性と関連した、疾患の改善、および／または疾患に関連した症状の改善が意図される。したがって、例えば、正の治療的応答は、以下の１つ以上の疾患の改善に言及する：（１）腫瘍の大きさの減少；（２）多くの癌（すなわち、新生物）細胞の減少；（３）新生物細胞の死の増加；（４）新生物細胞の生存の阻害；（４）腫瘍の増殖の阻害（すなわち、ある程度の遅滞、好ましくは停止）；（５）癌細胞の末梢器官中への浸潤の阻害（すなわち、ある程度の遅滞、好ましくは停止）；（６）腫瘍転移の阻害（すなわち、ある程度の遅滞、好ましくは停止）；（７）さらなる腫瘍の増殖の妨害；（８）上昇した患者生存率；ならびに（９）その癌に関連した１つ以上の症状からのある程度の軽減。このような治療的応答は、改善の程度に応じてさらに特徴付けられ得る。したがって、例えば、その疾患の改善は、完全寛解のように特徴付けられ得る。「完全寛解」によって、任意の事前の異常なＸ線写真所見、骨髄、脳脊髄液（ＣＳＦ）の正常化を伴う、臨床的に検出可能な疾患の欠如が意図される。このような応答は、本発明の方法にしたがう治療後、少なくとも１ヶ月間持続する必要がある。完全寛解は、腫瘍状態の評価が、最初の応答の評価後、少なくとも１ヶ月間において繰り返し行われない場合には確認できないか、あるいは疾患の改善は、部分寛解として分類される。「部分寛解」によって、新しい病巣の非存在下での測定可能な全ての腫瘍負荷（すなわち、その被検体に存在する腫瘍細胞の数）の少なくとも約５０％の減少および少なくとも１ヶ月間の持続が意図される。このような応答は、測定可能な腫瘍にのみ適用できる。
【００６１】
複数のパラメータは、処置の有効性を示し得る。これらとしては、腫瘍塊の大きさの減少；腫瘍の転移性侵襲の減少；腫瘍の増殖速度の減少；腫瘍関連の後遺症（例えば、悪液質および腹水の産生）の重症度または出現の減少；腫瘍に関連した合併症（例えば、病理的な骨折、溶血性貧血、前リンパ球性への移行（ｐｒｏｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ）およびリヒター症候群など）の減少および／または妨害；化学療法および他の処置に対するその腫瘍の感作；患者生存率の増加；改善された予後の観察される臨床上の関連性（例えば、増加した腫瘍浸潤性リンパ球および減少した腫瘍血管新生）の増加などが挙げられるが、これらに限定されない。したがって、いくつかの実施形態において、治療的組み合わせの投与は、処置を受ける患者（すなわち、被検体）における１つ以上のこれらのパラメータを改善するという結果をもたらす。他の実施形態において、この患者の改善は、いくつかのパラメータに関して相乗的であるが、他のパラメータに関しては相加的である。
【００６２】
腫瘍応答は、スクリーニング技術（例えば、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）スキャン、Ｘ線写真による画像化、コンピュータ断層映像（ＣＴ）スキャン、フローサイトメトリーまたは蛍光活性細胞分析分離（ＦＡＣＳ）分析、生物発光の画像化（例えば、ルシフェラーゼによる画像化、骨のスキャンの画像化、および骨髄穿刺（ＢＭＡ）を含む腫瘍生検の標本化）を使用して、腫瘍の形態学（すなわち、全体の腫瘍負荷、腫瘍の大きさなど）における変化について評価され得る。これらの正の治療的応答に加えて、処置を受ける被検体は、その疾患に関連した症状の改善に関する有益な効果を経験し得る。したがって、Ｂ細胞の腫瘍に関して、この被検体は、いわゆるＢ症状（すなわち、寝汗、発熱、体重減少、および／または蕁麻疹）の低下を経験し得る。
【００６３】
臨床上の有効性を予測する１つの方法は、適切なモデル（例えば、１つ以上のマウスの癌モデルにおけるＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体とアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントとの組み合わせの使用）におけるこれらの２つの治療因子による併用療法の効果を測定することである。リンパ腫に関して、これらのモデルとしては、例えば、ヌードマウスの異種移植片腫瘍モデル（例えば、ＮａｍａｌｗａおよびＤａｕｄｉとして公知であるヒトのバーキットリンパ腫細胞株を使用するモデル）が挙げられる。したがって、いくつかの実施形態において、これらの２つの治療因子の組み合わせの抗腫瘍活性は、本明細書中の以下の実施例に記載されるようなヒトＮＨＬのＮａｍａｌｗａ異種移植片モデルにおいてアッセイされる。このＮａｍａｌｗａ細胞株は、ヌードマウス中に移植される場合に、悪性のリツキシマブ耐性腫瘍を生じる。
【００６４】
他の実施形態において、これらの２つの治療的因子の組み合わせの抗腫瘍活性は、発明の名称「Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４０  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ」である、２００４年４月２７日に出願され、そして米国特許出願第６０／５６５，７１０号（代理人事件番号ＰＰ２０１０７．００３（０３５７８４／２７７２１４））と割り当てられた同時継続中の出願（その全体が本明細書中に参考として援用される）に記載されるＤａｕｄｉヒトリンパ腫細胞株を使用する病期にある（ｓｔａｇｅｄ）ヌードマウスの異種移植片腫瘍モデルにおいてアッセイされる。病期にあるヌードマウスの異種移植片腫瘍モデルは一般的に、病期にないモデルより、所与の治療プロトコルの治療的有効性を区別するのに有効である。病期にないモデルにおいて、治療的投薬は一般的に、腫瘍播種の約１日以内かつ明らかな腫瘍が存在する前に開始される。病期にあるモデルにおける上昇した抗腫瘍活性を示す併用治療レジメンの能力は、その併用治療レジメンが治療的に有効であることを、強力に示唆する。
【００６５】
他の腫瘍モデルは、当該分野において周知である。例えば、多発性骨髄腫（ＭＭ）に関して、腫瘍モデルとしては、細胞株が免疫不全マウス中で増殖され、次いでこのマウスが目的の治療薬によって処置されるモデル、および患者の骨髄腫細胞が免疫不全マウスの胎仔とともに移植され、次いでこのマウスが目的の治療薬によって処置されるモデルが挙げられるが、これらに限定されない。したがって、例えば、これらの２つの治療因子の組み合わせの抗腫瘍活性は、ヒトＭＭ細胞株ＩＭ−９を使用する、ヒトＭＭ  ＩＭ−９異種移植片モデルにおいてインビボでアッセイされ得る。この様式において、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体とアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントとの併用療法の有効性は、病期にない条件の生存モデルを使用して評価され得、これらの治療因子による処置は、ＩＭ−９腫瘍細胞の静脈内播種の１日後に開始する。代替的に、この併用療法の有効性は、病期にある皮下モデルを使用して評価され得、このＩＭ−９細胞は、ＳＣＩＤマウスにＳＣで注射され、次いでこれらの治療因子による組み合わせ処置は、一旦その腫瘍が測定可能な大きさに到達すると開始する。
【００６６】
ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体とアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントとの併用療法の抗腫瘍活性は、マウス固形腫瘍モデルにおいて評価され得る。例としては、ＣＤ４０を発現するヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ  １１６を使用する異種移植片結腸癌モデル；卵巣癌細胞株ＳＫＯＶ３ｉ．ｐ．１を使用する卵巣癌の病期にない（予防的な）正所性マウスモデル；および卵巣癌細胞株ＳＫＯＶ３ｉ．ｐ．１を使用する卵巣癌の病期にある（治療的な）マウスモデルが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、発明の名称「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  Ｓｏｌｉｄ  Ｔｕｍｏｒｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ＣＤ４０  Ｃｅｌｌ−Ｓｕｒｆａｃｅ  Ａｎｔｉｇｅｎ」である、２００４年４月２７日に出願され、そして米国特許出願第６０／５６５，６３４（代理人事件番号ＰＰ２１５６６．００１（０３５７８４／２７１７２１））と割り当てられた同時継続出願（その全体が本明細書中に参考として援用される）に開示されるこれらのモデルの使用を参照のこと。
【００６７】
（投与の様式）
本明細書中に記載される併用療法を実施する目的に関して、治療上活性な成分のようなこれらの２つの分類の治療因子（すなわち、サイトカインおよび抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメント）を含有する薬学的組成物は、当該分野において公知である受容可能な方法のいずれかを使用して投与され得る。したがって、例えば、ＩＬ−２（もしくはその生物学的に活性な改変体）を含有する薬学的組成物、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）を含有する薬学的組成物、またはＩＬ−２（もしくはその改変体）およびアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）を含有する薬学的組成物は、任意の注射の形態（静脈内（ＩＶ）注射、腫瘍内（ＩＴ）注射、腹腔内（ＩＰ）注射、筋肉内（ＩＭ）注射、または皮下（ＳＣ）注射が挙げられる）によって投与され得る。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２（またはその生物学的に活性な改変体を含有する薬学的組成物は、ＩＶ注射、ＩＭ注射、ＩＰ注射、またはＳＣ注射によって投与され、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）を含有する薬学的組成物は、ＩＶ注射、ＩＰ注射、またはＳＣ注射によって投与される。他の実施形態において、ＩＬ−２（またはその生物学的に活性な改変体）を含有する薬学的組成物は、ＩＶ注射、ＩＴ注射、またはＳＣ注射によって投与され、そしてアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）を含有する薬学的組成物は、ＩＶ注射またはＳＣ注射によって投与される。
【００６８】
本発明のいくつかの実施形態において、ＩＬ−２またはその改変体を含有する薬学的組成物は、ＳＣ注射によって投与され、そして抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含有する薬学的組成物は、静脈内に投与される。静脈内に投与される場合に、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含有するこの薬学的組成物は約１時間〜約１０時間の期間にわたる注入によって投与され得る。いくつかの実施形態にいて、注入は、約２時間〜約８時間の期間にわたって起こるか、約３時間〜約７時間の期間にわたって起こるか、約４時間〜約６時間の期間にわたって起こるか、または約６時間の期間にわたって起こり、これらは、投与されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体に依存する。
【００６９】
（併用療法）
本発明の方法は、併用療法を使用する工程を包含する。用語「併用」は、最も広義に使用され、そして被検体が少なくとも２つの治療レジメンによって処置されることを意味する。したがって、「併用療法」は、被検体が、少なくとも２の腫瘍治療レジメンによって処置され、より詳しくは、少なくとも１つのアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントとの組み合わせで、少なくともＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体によって処置されることを意味することが意図されるが、これらの２つの治療因子の組み合わせの有益な効果が達成される限り、異なる腫瘍治療レジメンの投与の時期は、変更され得る。
【００７０】
アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントとの組み合わせにおけるＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体による処置は、同時的（併用）であるか、連続的（いずれかの順序で経時的）であるか、またはそれらの組み合わせであり得る。したがって併用療法を受ける被検体は、両物質の組み合わせの治療効果が治療を受ける被検体にもたらされる限り、同じ時間（すなわち、同時に）か、異なる時間（すなわち、同じ日かまたは異なる日におけるいずれかの順序で経時的に）にてこれらの治療因子の両方による処置を受容し得る。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体と抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントとの組み合わせは、１回の投薬で同時に与えられるが、他の投薬としては、同じ日かまたは異なる日におけるいずれかの順序での経時的投与が挙げられる。経時的投与は、その被検体が投与された第１の治療因子に対して応答するか否かにかかわらず行われ得る。これらの２つの治療因子が同時に投与される場合に、それらは、ＩＬ−２（もしくはその生物学的に活性な改変体）またはアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）のいずれかを各々が含む別個の薬学的組成物として投与されてもこれらの治療因子の両方を含む単一の薬学的組成物として投与されてもよい。
【００７１】
この併用療法の効果はまた、ＩＬ−２（もしくはその生物学的に活性な改変体）および／または上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）のいずれかの投与の時期を変えることによって最適化され得る。したがって、いくつかの実施形態において、このＩＬ−２（またはその生物学的に活性な改変体）（例えば、デス−アラニルＣ１２５ＳヒトＩＬ−２ムテイン）は、このアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２もしくはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９）（またはその抗原結合フラグメント）と同時に投与される。他の実施形態において、このＩＬ−２（またはその生物学的に活性な改変体）（例えば、デス−アラニルＣ１２５ＳヒトＩＬ−２ムテイン）が、最初に投与され、その後このアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２もしくはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９）（またはその抗原結合フラグメント）が、次に投与される。なお他の実施形態において、このアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２もしくはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９）（またはその抗原結合フラグメント）が、最初に投与され、そしてこのＩＬ−２（またはその生物学的に活性な改変体）（例えば、デス−アラニルＣ１２５ＳヒトＩＬ−２ムテイン）が次に投与される。いくつかの実施形態において、このＩＬ−２（またはその生物学的に活性な改変体）（例えば、デス−アラニルＣ１２５ＳヒトＩＬ−２ムテイン）とアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２もしくはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９）（またはその抗原結合フラグメント）との組み合わせは、１回の投薬によって同時に与えられるが、他の投薬としては、同じ日かまたは異なる日におけるいずれかの順序での経時的投与が挙げられる。これまでに記載されるように、このＩＬ−２（またはその生物学的に活性な改変体）（例えば、デス−アラニルＣ１２５ＳヒトＩＬ−２ムテイン）およびこのアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２もしくはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９）（またはその抗原結合フラグメント）が、同時に投与される場合に、それらは、ＩＬ−２（もしくはその生物学的に活性な改変体）またはアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）のいずれかを各々が含む別個の薬学的組成物として投与されてもこれらの治療因子の両方を含む単一の薬学的組成物として投与されてもよい。
【００７２】
有効量の、ＩＬ−２（またはその生物学的に活性な改変体）と少なくとも１つのアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）との組み合わせによる治療は、ＣＤ４０抗原を発現する新生物細胞を含む癌に対する正の治療的応答を促し、これらの癌としては、本明細書中の他所に定義されるようなＢ細胞関連のリンパ腫および固形腫瘍が挙げられる。これらの抗腫瘍因子の両方による同時治療は、これらの因子の各々の抗腫瘍活性を増強し、そのことによって、ＩＬ−２（またはその生物学的に活性な改変体）単独の投与またはアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）単独の投与によって観察される治療的応答に対して改良される正の治療的応答を提供する。正の治療的応答の改良は、本質的に相加的であっても本質的に相乗的であってもよい。相乗的である場合、ＩＬ−２（またはその生物学的に活性な改変体）と少なくとも１つアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）とによる同時治療は、別個のＩＬ−２（またはその生物学的に活性な改変体）成分とアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）成分とによって達成される正の治療応答の合計より大きい正の治療的応答を生じる。
【００７３】
さらに、上記処置は、これらの用量の組み合わせが、任意の１つ以上の多くの治療パラメータの処置において有効である限り、用量および投薬レジメンを変えることによって達成され得る。これらの処置レジメンは、以下に記載されるような、治療効果を最大にする用量および投与計画に基づく。当業者は、任意の１つのモノクローナル抗体の用量または任意の１つのサイトカイン（例えば、ＩＬ−２）の用量が、個別に投与される場合に治療的に有効であり得ないが、他の因子と組み合わせて投与される場合に、治療的に有効である。したがって、いくつかの実施形態において、ＩＬ−２とアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体との組み合わせの治療有効用量は、単独で投与される場合に、治療的に有効であり得ないか、または互いに組み合わせて投与された場合より治療的に有効でない個々の活性因子の用量を含み得る。
【００７４】
これらの２つの治療因子の合わせた投与がこれらの因子の両方の有効性を増強することに起因して、ＩＬ−２単独の特定の用量によって達成される正の治療的応答と同様の正の治療的応答は、この因子のより低い用量によって達成され得る。この有意性は、２倍である。第１に、ＩＬ−２またはその改変体によるＢ細胞の悪性疾患または固形腫瘍の処置に関する大きな治療上の利点は、高用量のＩＬ−２投与に、通常伴う毒性応答を最小にするＩＬ−２用量において現実化され得る。このような毒性応答としては、慢性疲労、悪心、低血圧、発熱、悪寒、体重増加、痒みまたは発疹、呼吸困難（ｄｙｓｐｒｅａ）、窒素血、錯乱、血小板減少、心筋梗塞、胃腸に対する毒性、および血管漏出症候群症候群が挙げられるが、これらに限定されない（例えば、Ａｌｌｉｓｏｎら、（１９８９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．７（１）：７５−８０を参照のこと）。第２に、モノクローナル抗体による腫瘍細胞表面上の特定の分子の標的は、この抗体によって認識されないか、またはその結合に影響されず、その結果、腫瘍の回避、および有効な治療的処置の喪失を生じるクローンについて選択できる。ＩＬ−２（もしくはその改変体）と組み合わせて投与されたアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはそのフラグメント）の改良された抗腫瘍活性は、モノクローナル抗体の増加した効力、モノクローナル抗体の投与頻度の減少、および／またはモノクローナル抗体のより低い用量に表れ、それらによって腫瘍の回避を減少させる。さらに、モノクローナル抗体のＡＤＣＣ活性はまた、好中球集団（ｐｏｌｕｌａｔｉｏｎ）および単球／マクロファージ集団由来の活性から生じ得る。例えば、Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｉｌｉｚａｌｉｔｕｒｒｉら、（２００３）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．９（１６，Ｐｔ  １）：５８６６−５８７３；およびＵｃｈｉｄａら、（２００４）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９（１２）：１６５９−１６６９）を参照のこと。ＩＬ−２がこれらの細胞集団を活性化することが公知であるので、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体をとの上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の併用療法は、抗体のＡＤＣＣ媒介性の抗腫瘍活性を向上させ得る。
【００７５】
ＩＬ−２（もしくはその改変体）のある量と組み合わせて投与されるべき少なくとも１つのアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）の量および他の治療因子の有効性を増強するのに必要なこれらの治療因子のいずれかの量は、本明細書中に示される開示によって与えられる過度の実験を伴わずに、当業者によって容易に決定される。投与の様式ならびに組み合わせて投与されるＩＬ−２（またはその改変体）およびアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）のそれぞれの量に影響する要因としては、治療に供される特定のリンパ腫または固形腫瘍、疾患の重症度、疾患の経緯、ならびに年齢、身長、体重、健康状態、および治療を受ける個体の生理的状態が挙げられるが、これらに限定されない。同様に、併用療法において投与されるべきこれらの治療因子の量は、投与の様式、およびその被検体がこれらの治療因子の各々の単回投与をうけるか複数の用量をうけるかに依存する。
【００７６】
（併用ＩＬ−２／アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体療法についての例示的プロトコル）
本発明のいくつかの実施形態において、併用療法は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）を含有する薬学的組成物の推奨される治療有効用量と組み合わせて、ＩＬ−２（またはその生物学的に活性な改変体を含有する薬学的組成物の推奨される１週間の総用量を投与することによって達成され、各組成物は、特定の投薬レジメンにしたがって投与される。「治療有効用量または治療有効量」によって、これらの２つの治療因子の他方の治療有効用量または治療有効量と共に投与される場合に、ＣＤ４０細胞表面抗原を発現する新生物細胞を含む癌の処置に関する正の治療的応答を生じるこれらの２つの治療因子の一方の量が意図される。予め上記されるように、別個の薬学的組成物の投与は、両方の物質の組み合わせの治療効果が治療を受ける被検体に生じる限り、同じ時間であっても異なる時間であってもよい。
【００７７】
本発明のいくつかの実施形態にしたがって、本明細書中の以下に定義されるようにアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの１つ以上の１週間の用量による処置を受けるヒト被検体はまた、一定のＩＬ−２投薬レジメンにしたがうか、または２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンにしたがって、本明細書中の以下に定義されるようにＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体を投与される。この併用療法の重要な局面は、これらの治療因子の両方が、各々、本明細書中に開示される特定の投薬レジメンにしたがってその被検体に投与される期間の重複期間である。したがって、併用療法がこれらの２つの治療因子による投薬の、この重複期間を含む場合、この併用療法はまた、「同時治療」といわれる。その被検体に投与される第１の治療有効用量は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）であっても、ＩＬ−２（またはその生物学的に活性な改変体）であってもよい。アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）およびＩＬ−２（またはその生物学的に活性な改変体）の両方が、その被検体に投与されることが計画される日々において、これらの治療因子は、同じ時間（すなわち、同時の投与）か、または異なる時間（いずれかの順序での経時的な投与）のいずれかにおいて投与され得る。好ましい投薬レジメンに関する以下の議論は、本明細書中に定義されるようなＩＬ−２との組み合わせにおける、本明細書中に定義されるようなアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の投薬に言及するが、そのプロトコル（すなわち、処置の開始、抗体処置およびＩＬ−２処置の持続期間、抗体投薬レジメンおよびＩＬ−２投薬レジメン、ＩＬ−２投薬の中断、併用ＩＬ−２／アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体療法のその後の過程ＩＬ−２投与計画など）は、本明細書中に定義されるようなＩＬ−２との組み合わせにおける本明細書中に定義されるようなアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の抗原結合フラグメントによる投薬、本明細書中に定義されるようなＩＬ−２の生物学的に活性な改変体との組み合わせにおける本明細書中に定義されるようなアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の抗原結合フラグメントによる投薬、または本明細書中に定義されるようなＩＬ−２の生物学的に活性な改変体との組み合わせにおける、本明細書中に定義されるようなアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体による投薬に等しく適用できる。
【００７８】
（同時療法：処置の開始）
ＩＬ−２およびアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体による同時療法が、一定のＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のサイクルを含む場合、処置期間の開始において上記被検体に投与されるべき最初の治療因子は、この被検体が、両方の治療因子が本明細書中に開示される特定の投薬レジメンに各々したがって被検体に投与されている間に重複期間を有する限り、ＩＬ−２またはアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体のいずれかであり得る。
【００７９】
したがって、１つの実施形態において、これらの２つの治療因子の同時療法は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量の投与を開始する前に一定のＩＬ−２投薬レジメンを開始する工程を包含し、これは、毎週か、または代替的に、２週間に１度か、３週間に１度か、もしくは４週間に１度投与される。この様式において、ＩＬ−２の第１の用量は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の第１の用量が投与される前に最長１ヶ月間まで投与される。「最長１ヶ月間まで」によって、ＩＬ−２の第１の用量が、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体投与を開始する少なくとも１日前に投与されるが、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体投与を開始する１ヶ月（すなわち、３０日）以上前に投与されないことが意図される。したがって、ＩＬ−２投与は、例えば、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の第１の治療有効用量を投与する１日前か、２日前か、３日前か、４日前か、５日前か、６日前か、７日前（すなわち、１週間前）か、１０日前か、１４日前（すなわち、２週間前）か、１７日前か、２１日前（すなわち、３週間前）か、２４日前か、２８日前（４週間前）か、または最長で１ヶ月前（すなわち、３０日前もしくは３１日前）までに始まる。
【００８０】
別の実施形態において、一定のＩＬ−２投薬レジメンおよびアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体投与は、一定のＩＬ−２投薬レジメンおよびアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体投与は、同じ日において同じ時間（すなわち、同時の投与）かまたは異なる時間（すなわち、いずれかの順序での経時的な投与）で始まる。したがって、例えば、１つの実施形態において、これら２つの治療因子による同時療法が、処置期間の１日目に始まる場合、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の第１の治療有効用量およびＩＬ−２の第１の用量は、この処置期間の第１日目において両方投与される。１つのこのような実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の上記用量は、最初に投与され、その後、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の上記用量の投与完了約１０分間〜約４時間以内（例えば、約１０分間以内、１５分間以内、２０分間以内、２５分間以内、３０分間以内、４５分間以内、６０分間以内、９０分間以内、１２０分間以内、１５０分間以内、１８０分間以内、２１０分間以内、または２４０分間以内）にＩＬ−２の用量が投与される。
【００８１】
代替的な実施形態において、処置期間の開始においてその被検体に対して投与されるべき最初の治療因子は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体であり、一方、一定のＩＬ−２投薬の第１のサイクルは、例えば、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の第１の治療有効用量の投与後１０日以内（例えば、１日以内、２日以内、３日以内、４日以内、５日以内、６日以内、７日以内、８日以内、９日以内、または１０日以内）に第１のＩＬ−２用量の投与によって開始される。いくつかの実施形態において、一定のＩＬ−２投与の第１のサイクルは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の第１の治療有効用量の投与の７日以内（例えば、１日以内、２日以内、３日以内、４日以内、５日以内、６日以内、または７日以内）にＩＬ−２の第１の用量を投与することによって開始される。したがって、例えば、１つの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効量は、処置期間の第１日目に投与され、そして一定のＩＬ−２投薬の第１のサイクルは、７日より後に開始される（すなわち、処置期間の第８日目に、ＩＬ−２の最初の容量を投与することによって）。
【００８２】
一定のＩＬ−２投薬の第１のサイクルの完了後、毎週の投与計画か、または代替的に、２週間に１度の投与計画か、３週間に１度の投与計画か、もしくは４週間毎の投与計画にしたがうアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量を受容しているヒト被検体は一定のＩＬ−２投薬の１つ以上のその後のサイクルを投与され得る。一定のＩＬ−２投薬の第２のサイクルおよびその後のサイクルの全ての間、一般的に、その被検体に投与されるべき第１の治療因子は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体であり、このアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の上記用量の投与の２４時間以内（例えば、０．５時間以内、１時間以内、２時間以内、４時間以内、８時間以内、１２時間以内、１６時間以内、２０時間以内、または２４時間以内）にＩＬ−２の第１の用量を投与することによって開始される一定のＩＬ−２投薬の第２のサイクルまたはその後のサイクルを伴う。アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体およびＩＬ−２の両方が、その被検体に投与されるように計画される日々において、これらの治療因子は、同じ時間（すなわち、同時の投与）または異なる時間（すなわち、いずれかの順序での経時的な投与）のいずれかにて投与され得る。１つのこのような実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の上記用量は、最初に投与され、その後、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の投与完了の約１０分間〜約４時間以内（例えば、１０分間以内、１５分間以内、２０分間以内、２５分間以内、３０分間以内、４５分間以内、６０分間以内、９０分間以内、１２０分間以内、１５０分間以内、１８０分間以内、２１０分間以内、または２４０分間以内）にＩＬ−２の用量が投与される。
【００８３】
ＩＬ−２およびアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体による同時療法は、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のサイクルを包含し、処置期間の開始において被検体に投与されるべき最初の治療因子は、この被検体が、両方の治療因子が本明細書中に開示される特定の投薬レジメンに各々したがって被検体に投与されている期間に重複期間を有する限り、ＩＬ−２またはアンタゴニスト抗ＣＤ４−抗体のいずれかであり得る。
【００８４】
したがって、１つの実施形態において、これら２つの治療因子による同時療法は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量の投与を開始する前に、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンを開始する工程を包含し、この抗体の治療有効用量は、毎週の投与計画か、または代替的に、２週間に１度の投与計画か、３週間に１度の投与計画か、もしくは４週間毎の投与計画にしたがって投与される。この様式において、ＩＬ−２の第１の用量は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の第１の用量が投与される前に、最長１ヶ月間まで投与される。「最長１ヶ月間まで」によって、ＩＬ−２の第１の用量が、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体投与を開始する少なくとも１日前に投与されるが、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体投与を開始する１ヶ月（すなわち、３０日）以上前に投与されないことが意図される。したがって、ＩＬ−２投与は、例えば、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の第１の治療有効用量を投与する１日前か、２日前か、３日前か、４日前か、５日前か、６日前か、７日前（すなわち、１週間前）か、１０日前か、１４日前（すなわち、２週間前）か、１７日前か、２１日前（すなわち、３週間前）か、２４日前か、２８日前（４週間前）か、または最長で１ヶ月前（すなわち、３０日前もしくは３１日前）までに始まる。
【００８５】
他の実施形態において、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンおよびアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体投与は、同じ日において同じ時間（すなわち、同時の投与）かまたは異なる時間（すなわち、いずれかの順序での経時的な投与）で始まる。したがって、例えば、１つの実施形態において、これら２つの治療因子による同時療法が、処置期間の１日目に始まる場合、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の第１の治療有効用量およびＩＬ−２の第１の
用量は、この処置期間の第１日目において両方投与される。１つのこのような実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の上記用量が最初に投与され、その後、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の用量の投与完了後、約１０分間〜約４時間以内（例えば、約１０分間以内、１５分間以内、２０分間以内、２５分間以内、３０分間以内、４５分間以内、６０分間以内、９０分間以内、１２０分間以内、１５０分間以内、１８０分間以内、２１０分間以内、または２４０分間以内）にＩＬ−２の用量が投与される。
【００８６】
代替的な実施形態において、アンタゴニストＣＤ４０抗体の第１の治療有効用量は、例えば、処置期間の１日目に被検体に投与され、そして２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量の投与の１０日以内にＩＬ−２の第１の用量を投与することによって開始される。このような実施形態において、好ましくは２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の第１の治療有効用量の投与の７日以内（例えば、１日以内、２日以内、３日以内、４日以内、５日以内、６日以内、または７日以内）にＩＬ−２の第１の用量を投与することによって開始される。
【００８７】
疾患の重症度、患者の健康状態、および患者の疾患の病歴に依存して、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のサイクルは、アンタゴニストＣＤ４０抗体療法と同時に投与され得、この抗体の治療有効用量は、毎週投与されるか、または代替的に２週間に１度か、３週間に１度か、または４週間に１度投与される。
【００８８】
（抗体処置およびＩＬ−２処置の持続期間）
本発明の方法にしたがって、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量は、一定のＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のサイクルと組み合わせてか、または２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のサイクルと組み合わせて、毎週投与されるか、または代替的に２週間に１度か、３週間に１度か、または４週間に１度投与される。被検体が、本明細書中に示される様式で、これらの２つの治療因子による同時療法を受ける場合に、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体投与の持続期間およびＩＬ−２投薬レジメンの任意の所定のサイクルのいずれかの持続期間は、患者の全身的健康状態、疾患の進行の病歴、および特定のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体／ＩＬ−２投与プロトコルに関する許容度に依存する。
【００８９】
したがって、いくつかの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量は、処置期間を通して、毎週（すなわち、１週間に１度）投与されるかまたは２週間に１度〜４週間に１度（例えば、２週間に１度か、３週間に１度か、または４週間に１度）され、この処置期間は、一定のＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のサイクルまたは２つのレベルの投薬レジメンの１つ以上のサイクルを含む。
【００９０】
あるいは、抗ＣＤ４０抗体療法は、処置期間内に決められた持続期間を有し得る。この様式において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量は、一定のＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のサイクルと組み合わせてか、または２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のサイクルと組み合わせて、約４週間〜約１６週間（４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、または１６週間を含む）の決められた期間の間、毎週投与されるか、または２週間に１度か、３週間に１度か、または４週間に１度投与される。したがって、例えば、ＩＬ−２との同時療法中に、この抗体は、４週間または８週間の持続期間について毎週投与され、この被検体は、それぞれ、４回または８回の抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量を受容する。同様に、この抗体が４週〜８週の持続期間の間に、２週間に１度投与される場合、例えば、この被検体は、ＩＬ−２との同時療法中に、それぞれ、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量を２回または４回うける。この抗体は、６週間の持続期間、９週間の持続期間、１２週間の持続期間、または１５週間の持続期間について、３週間に１度投与され、例えば、この被検体は、それぞれ、治療有効用量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を、２回、３回、４回または５回受容する。同様に、この抗体は、ＩＬ−２との同時療法中に、８週間の持続期間、１２週間の持続期間、または１６週間の持続期間について４週間に１度投与され、この被検体は、それぞれ、治療有効用量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を、２回、３回、または４回受容し得る。
【００９１】
これらの２つの治療因子による同時療法の間のＩＬ−２投与の持続期間は、使用されるＩＬ−２投薬レジメンの関数である。一般的に、ＩＬ−２は、本開示のプロトコルにしたがって投与され、そして被検体は、ＩＬ−２の毒性症状が発症しない限り、必要な場合、一定のＩＬ−２投薬レジメンまたは２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの、１つ以上のサイクルを繰り返す。このような毒性症状が発症する場合、この被検体は、観察された任意の毒性症状が完全に消失するまでＩＬ−２投薬から外され得る。このようなＩＬ−２の毒性症状としては、慢性疲労、悪心、低血圧、発熱、悪寒、体重増加、痒みまたは発疹、呼吸困難、窒素血、錯乱、血小板減少、心筋梗塞、胃腸に対する毒性、および血管漏出症候群症候群が挙げられるが、これらに限定されない（例えば、Ａｌｌｉｓｏｎら、（１９８９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．７（１）：７５−８０を参照のこと）。この被検体は、これらのＩＬ−２の毒性症状の兆候および症状の消失後に、必要な場合、これらの２つの治療因子による同時療法が再開し得る。これらの２つの治療因子による同時療法の再開は、その被検体の全身的健康状態、対応する疾患の状態、および特定のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体／ＩＬ−２投与プロトコルに対する許容度に依存して、本明細書中に開示されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体／ＩＬ−２投与プロトコル（すなわち、一定のＩＬ−２投薬レジメンを伴うアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体または２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンを伴うアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体）のいずれかを伴い得る。
【００９２】
（一定のＩＬ−２投薬レジメン）
本発明のいくつかの実施形態において、これらの２つの治療因子による同時療法を受ける被検体は、本明細書中に開示されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の投与計画（すなわち、処置期間を通してかもしくは本明細書中に上記される処置期間中の決められた持続期間の間、毎週投与されるか、または２週間に１度か、３週間に１度か、４週間に１度投与されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量）と組み合わせて、一定のＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のサイクルを投与される。「一定のＩＬ−２投薬レジメン」によって、上記被検体が、ＩＬ−２投与の任意の所定のサイクルの過程にわたって一定な１週間の総用量を投与されることが意図される。一定のＩＬ−２投薬レジメンの１つの完全なサイクルは、約２週間〜約１２週間の期間（例えば、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、または１２週間）について、ＩＬ−２の一定な１週間の総用量を投与し、その後、約１週間〜約４週間（１週間、２週間、３週間、または４週間が挙げられる）の持続期間を有する、ＩＬ−２投薬を行わない期間が続く工程を包含する。したがって、一定のＩＬ−２投薬レジメンの各サイクルは、この被検体がＩＬ−２の一定な１週間の総用量を投与される第１の期間、およびＩＬ−２投薬が控えられる第２の期間（すなわち、ＩＬ−２投与からの「休息」期間または「休暇」）を含む。好ましくは、この被検体は、少なくとも４週間〜約１２週間までの間、ＩＬ−２の一定な１週間の総用量を投与され、その後、ＩＬ−２投薬は、約１週間〜約４週間の間、控えられる。本明細書中で上記されるように、これらの治療因子のいずれかは、この同時療法プロトコルを開始するために最初に投与される。
【００９３】
上記被検体が、一定のＩＬ−２投薬レジメンの各サイクル中に、処置期間（すなわち、被検体がこれらの２つの治療因子による同時治療を受ける期間）を通してアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体療法を受容する場合、この被検体は、このアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体について推奨される投薬レジメンをとどめ、したがって毎週の投与計画によるか、または２週間に１度の投与計画、３週間に１度の投与計画、または４週間に１度の投与計画によるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量を受容する。
【００９４】
あるいは、上記被検体が、処置期間を通して決められた持続期間の間、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を受容する場合、この処置期間は、約４週間〜約１６週間の決められた持続期間の間、抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量を投与する（この抗体は、１週間毎に１度、２週間に１度、３週間に１度、または４週間に１度投与される）工程、および一定のＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のサイクルを投与する工程を包含する。したがって、例えば、いくつかの実施形態において、この被検体は、一定のＩＬ−２投薬レジメンの少なくとも１つのサイクルと組み合わせて、４週間または８週間の決められた持続期間の間、１週間に１度、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量を投与される。このような実施形態において、一定のＩＬ−２投薬レジメンの完全な各サイクルは、約２週間〜約１２週間の期間（例えば、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、または１２週間）について、ＩＬ−２の一定な１週間の総用量を投与し、（その後、約１週間〜約４週間（１週間、２週間、３週間、または４週間が挙げられる）の持続期間を有する、ＩＬ−２投薬を行わない期間が続く工程を包含する。
【００９５】
主治医の裁量において、毎週のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体投与、または２週間に１度のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体投与、３週間に１度のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体投与、または４週間に１度のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体投与を受ける被検体は、このアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体／一定のＩＬ−２投薬プロトコルが良好に許容され、そしてこの被検体が、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の毒性症状および／またはＩＬ−２の毒性症状のいずれかのごくわずかな兆候しか示さない場合、１２週間を越える長期間（例えば、さらなる１週間〜８週間について）の間、ＩＬ−２の一定な１週間の総用量の受容を継続し得る。このような実施形態において、ＩＬ−２投薬の終わりに、約１週間〜約４週間、ＩＬ−２投薬が、一定のＩＬ−２投薬レジメンのその後のサイクルを開始する前に、この被検体にこの治療因子を投与されるのが控えられる。
【００９６】
１つの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体およびＩＬ−２による同時療法が必要な被検体は、この処置期間の１日目に始まり、処置期間にわたって１週間に一度、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量を投与されるか、またはこの処置期間にわたって３週間に１度、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量を投与され、そして一定のＩＬ−２投薬レジメンの第１のサイクルは、同じ処置期間の３日目、４日目、５日目、６日目、７日目、８日目、９日目、または１０日目に開始される。１つのこのような実施形態において、一定のＩＬ−２投薬レジメンの第１のサイクルは、この処置期間の８日目（すなわち、開始から２週間目にて）に始まり、そして約４週間〜約１２週間のＩＬ−２投与の持続期間を有し、その後、約１週間〜約４週間の持続期間を有するＩＬ−２投与しない期間が続く。一定のＩＬ−２投薬レジメンのこの第１のサイクルの終わりには、この被検体は、本明細書中にされるような一定のＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のその後のサイクルを受容する。
【００９７】
別の実施形態において、この被検体は、この処置期間の１日目に始まり、処置期間にわたって１週間に一度、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量を投与されるか、またはこの処置期間にわたって３週間に１度、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量を投与され、そして一定のＩＬ−２投薬レジメンの第１のサイクルは、この処置期間の８日目（すなわち、開始から２週間目にて）に始まり、そして約４週間のＩＬ−２投与の持続期間を有し、その後、１週間の持続期間を有するＩＬ−２投与しない期間が続く。主治医の裁量において、その後、この被検体は、この一定のＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のその後のサイクル（すなわち、ＩＬ−２が１週間投与されなかった後の、一定な１週間のＩＬ−２の総用量の４週間にわたる投与）を投与される。処置期間全体の間、この被検体は、１週間に１回投与の投与計画か、または３週間に１回投与の投与計画にしたがってアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量を受容し続ける（但し、この被検体がアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の症状を示さないという条件で）。したがって、例えば、この被検体が、処置期間の８日目（すなわち、２週間目の第１日目）に始まるＩＬ−２投与の第１のサイクルを伴って、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の毎週（すなわち、１週間に１回）の投与と組み合わせて、一定のＩＬ−２投薬レジメンの３つのサイクルを受ける場合、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量は、処置の各週の１日目（１週間目〜１６週間目の第１日目）に、この被検体に投与され、そしてＩＬ−２の一定な１週間の総用量は、２週間目〜５週間目の間か、７週間目〜１０週間目の間か、または１２週間目〜１５週間目の間に投与され、ＩＬ−２が投与されない期間は、６週間目、１１週間目、および１６週間目の間に生じる。
【００９８】
代替的な実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体とＩＬ−２との同時療法が必要な被検体は、処置期間の１日目に始まり、４週間または８週間の決められた持続期間の間、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量を１週間に１度投与されるか、またはアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量を２週間に１度投与され、そして一定のＩＬ−２投薬レジメンの第１のサイクルは、同じ処置期間の３日目、４日目、５日目、６日目、７日目、８日目、９日目、または１０日目に始まって開始される。１つのこのような実施形態において、一定のＩＬ−２投薬レジメンの第１のサイクルは、処置期間の８日目（すなわち、開始から２週間目にて）に始まり、そして約４週間〜約１２週間のＩＬ−２投与の持続期間を有し、その後、約１週間〜約４週間の持続期間を有するＩＬ−２投与しない期間が続く。一定のＩＬ−２投薬レジメンのこの第１のサイクルの終わりは、この被検体は、本明細書中に上記されるような一定のＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のその後のサイクルを受容する。
【００９９】
別の実施形態において、上記被検体は、処置期間の１日目に始まり、４週間または８週間の決められた持続期間の間、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量を、１週間に一度か、または２週間に１度投与され、一定のＩＬ−２投薬レジメンの第１のサイクルは、この処置期間の８日目（すなわち、開始から２週間目にて）に始まり、そして４週間のＩＬ−２投与の持続期間を有し、その後、１週間の持続期間を有するＩＬ−２投与しない期間が続く。主治医の裁量において、その後、この被検体は、この一定のＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のその後のサイクル（すなわち、ＩＬ−２が１週間投与されなかった後の、一定な１週間の総用量の４週間にわたる投与）を投与される。したがって、例えば、この被検体が、処置期間の８日目（すなわち、２週間目の第１日目）に始まるＩＬ−２投与の第１のサイクルを伴って、４週間の決められた持続時間についてアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の毎週（すなわち、１週間に１回）の投与と組み合わせて、一定のＩＬ−２投薬レジメンの３つのサイクルを受ける場合、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量は、処置の１週間目〜４週間目の１日目（１週間目〜１６週間目の第１日目）に、この被検体に投与され、そしてＩＬ−２の一定な１週間の総用量は、２週間目〜５週間目の間か、７週間目〜１０週間目の間か、または１２週間目〜１５週間目の間に投与され、ＩＬ−２が投与されない期間は、６週間目、１１週間目、および１６週間目の間に生じる。あるいは、この被検体が、処置期間の８日目（すなわち、２週間目の第１日目）に始まるＩＬ−２投与の第１のサイクルを伴って、８週間の決められた持続時間についてアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の毎週（すなわち、１週間に１回）の投与と組み合わせて、一定のＩＬ−２投薬レジメンの３つのサイクルを受ける場合、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量は、処置の１週間目〜８週間目の１日目（１週間目〜１６週間目の第１日目）に、この被検体に投与され、そしてＩＬ−２の一定な１週間の総用量は、２週間目〜５週間目の間か、７週間目〜１０週間目の間か、または１２週間目〜１５週間目の間に投与され、ＩＬ−２が投与されない期間は、６週間目、１１週間目、および１６週間目の間に生じる。
【０１００】
（２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメン）
本発明の他の実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体とＩＬ−２との同時療法は、処置期間を通してかまたはこの処置期間内の決められた持続期間の間、この処置期間の過程の間に「２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメン」の１つ以上のサイクルと組み合わせて、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効量を、１週間に１度か、２週間に１度か、３週間に１度か、または４週間に１度投与する工程を包含する。「２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメン」によって、ＩＬ−２とアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体との同時療法を受ける被検体が、ＩＬ−２投薬の２回の期間中にＩＬ−２を投与されることが意図され、この２回の期間は、合わせて約２週間〜約１６週間（２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間または１６週間を含む）の合わせた持続期間を有する。１つの実施形態において、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンは、合わせて約４週間〜約１２週間の持続期間を有し；他の実施形態において、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンは、合わせて約４週間〜約８週間の持続期間（約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、または約８週間を含む）を有する２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１の期間および第２の期間中に投与されるべきＩＬ−２の、１週間の総用量は、ＩＬ−２より高い１週間の総用量が、第１の期間中に与えられ、そしてＩＬ−２のより低い１週間の総用量が、第２の期間中に与えられるように選択される。
【０１０１】
２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの所定のサイクルのいずれかに関する、第１の期間および第２の期間の個々の持続期間は、個体の健康状態および疾患の進行の病歴に依存して変化し得る。一般的に、この被検体は、４週間〜１６週間の２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの内に、少なくとも１週間の間、ＩＬ−２のより高い１週間の用量を投与される。１つの実施形態において、ＩＬ−２のより高い１週間の総用量は、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの前半の間に投与され、より低い用量がこの２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの後半の間に投与される。したがって、例えば、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの１つの完全なサイクルが、合わせて８週間の持続期間を有する場合、ＩＬ−２のより高い１週間の総用量は、ＩＬ−２投薬の前半４週間に投与され、そしてＩＬ−２のより低い１週間の総用量は、ＩＬ−２投薬の後半４週間で投与される。
【０１０２】
この被検体が、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの各サイクルの間に、処置期間を通して（すなわち、被検体がこれらの２つの治療因子による同時療法を受ける期間の間）アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体療法を受容する場合、この被検体は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体について推奨される投薬レジメンをとどめ、したがって毎週の投与計画によるか、または２週間に１度の投与計画、３週間に１度の投与計画、または４週間に１度の投与計画によるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量を受容する。
【０１０３】
あるいは、上記被検体が、処置期間を通して決められた持続期間の間、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を受容する場合、この処置期間は、約４週間〜約１６週間の決められた持続期間の間、抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量を投与する（この抗体は、１週間に１度、２週間に１度、３週間に１度、または４週間に１度投与される）工程、および２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のサイクルを投与する工程を包含する。したがって、例えば、いくつかの実施形態において、この被検体は、本明細書中の上記で定義されるような２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの少なくとも１つのサイクルと組み合わせて、４週間または８週間の決められた持続期間の間、１週間に１度、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量を投与される。
【０１０４】
具体的な投薬レジメンは、本明細書中の以下に開示されるが、本発明がアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体、ならびにＩＬ−２のより高い１週間の総用量に対する最初の曝露およびＩＬ−２のより低い１週間の総用量に対するその後の曝露を提供する２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のサイクルによる同時療法を提供する任意の投与プロトコルを包含することが認識される。理論に拘束されないが、ＩＬ−２投薬の最初の段階の間にＩＬ−２のより高い用量を投与する工程は、ＩＬ−２投薬のその後の週の間のより低い用量によって維持され得るＮＫ細胞活性の最初の刺激を提供すると考えられる。ＩＬ−２の副作用が用量関連性である場合、低められたＩＬ−２の用量は、長い処置期間中のこの治療因子の耐容性を増加する。
【０１０５】
したがって、本発明の方法は、合わせて約２週間〜約１６週間（２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、または１６週間を含む）の持続期間を有する２つのレベルのＩＬ−２投薬と組み合わせて、少なくとも１つのアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量が、処置期間を通して１週間に１度投与されるか、またはこの処置期間を通して２週間に１度か、３週間に１度か、または４週間に１度投与される処置レジメンを企図する。いずれかの因子は、この２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンについて上記で説明される通りに最初に投与され得る。例えば、１つの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量が最初（例えば、処置期間の１日目）に投与され、その後１０日以内に２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンが開始され、好ましくはアンタゴニスト抗ＣＤ４−抗体の第１の投与の７日以内（例えば、１日以内、２日以内、３日以内、４日以内、５日以内、６日以内、または７日以内）に開始される。２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの間に、ＩＬ−２のより高い１週間の総用量は、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１の期間中（例えば、ＩＬ−２−投与の最初の１週間〜４週間にわたって）に投与され、そしてＩＬ−２のより低い１週間の総用量は、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第２の期間の間（すなわち、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの残りの過程にわたって）に投与される。
【０１０６】
１つの実施形態において、本発明の方法は、この処置期間の過程の間に２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のサイクルと組み合わせて、少なくとも１つのアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を含有する薬学的組成物の治療有効用量を処置期間を通して毎週（すなわち、１週間に１度）投与する工程、またはアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効量をこの処置期間を通して３週間に１度投与する工程を提供し、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの各サイクルは、合わせて４週間〜８週間（４週間、５週間、６週間、７週間、または８週間を含む）の持続期間を有する。したがって、例えば、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体が１週間に１度投与されるべき場合、少なくとも１つのアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量は、この処置期間の各週の１日目に投与され、そして４週間〜８週間の２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１のサイクルは、同じ処置期間の３日目、４日目、５日目、６日目、７日目、８日目、９日目、または１０日目に始まって開始される。
【０１０７】
１つのこのような実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を含有する薬学的組成物の治療有効用量は、処置期間の１日目に始まりかつこの処置期間を通じて継続して毎週投与され、そして２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１のサイクルは、同じ処置期間の８日目に始まり、そして８週間（すなわちこの処置期間の２週間目〜９週間目の間）継続する。
【０１０８】
あるいは、本発明の方法は、その必要がある被検体のための処置レジメンを企図し、ここで合わせて約２週間〜約１６週間（２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、または１６週間を含む）の持続期間を有する２つのレベルのＩＬ−２投薬と組み合わせて、４週間または８週間の決められた持続期間の間、少なくとも１つのアンタゴニスト抗ＣＤ
４０抗体が、１週間に１度投与されるか、または２週間に１度投与される。いずれかの因子は、上記で説明される通り、この２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンについて最初に投与され得る。例えば、１つの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量は、最初（例えば、処置期間の１日目に）に投与され、その後、１０日以内に２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンが開始され、好ましくはアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の第１の投与の７日以内（例えば、１日以内、２日以内、３日以内、４日以内、５日以内、６日以内、または７日以内）に開始される。２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの間に、ＩＬ−２のより高い１週間の総用量が、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１の期間中（例えば、ＩＬ−２−投与の最初の１週間〜４週間にわたって）に投与され、そしてＩＬ−２のより低い１週間の総用量が、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第２の期間の間（すなわち、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの残りの過程にわたって）に投与される。
【０１０９】
１つの実施形態において、本発明の方法は、この処置期間の過程の間に２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のサイクルと組み合わせて、少なくとも１つのアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を含有する薬学的組成物の治療有効用量を、４週間もしくは８週間の決められた持続期間の間、毎週（すなわち１週間に１度）かまたは２週間に１度投与する工程を提供し、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの各サイクルは、合わせて４週間〜８週間（４週間、５週間、６週間、７週間、または８週間を含む）の持続期間を有する。したがって、例えば、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、４週間の持続期間について１週間に１度投薬されるべき場合、少なくとも１つのアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量は、この処置期間の１週間目〜４週間目の１日目に投与され、そして４週間〜８週間の２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１のサイクルは、同じ処置期間の３日目、４日目、５日目、６日目、７日目、８日目、９日目、または１０日目に始まって開始される。
【０１１０】
１つのこのような実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を含有する薬学的組成物の治療有効用量は、処置期間の１日目に始まり、そして４週間の決められた期間について毎週投与され、そして２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１のサイクルは、同じ処置期間の８日目に始まり、そして８週間（すなわちこの処置期間の２週間目〜９週間目の間）継続する。
【０１１１】
（ＩＬ−２投薬の中断）
本発明の方法はまた、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のサイクルの投与との組み合わせで、本明細書中で推奨される投与計画にしたがうアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を受ける被検体が、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの任意の所定のサイクルの期間のいずれかの第１の期間の終わりと２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの特定のサイクルの第２の期間の開始との間に、「休薬期間」、またはＩＬ−２投薬、もしくはＩＬ−２投薬およびアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体投薬を行わない期間を与えられる実施形態を企図する。これらの実施形態において、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンは、中断される（例えば、ＩＬ−２投薬が、より高い１週間の総用量が投与される２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの所定のサイクルの第１の期間後に、約１週間〜約４週間の期間の間控えられる）。ＩＬ−２投薬を行わないこの期間の間に、この被検体は、本明細書中で推奨される投与計画にしたがうアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量を受容し続け得るか、あるいは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体投薬もまた、中止され得る。ＩＬ−２投薬におけるこの中断の長さは、その被検体の健康状態、疾患の進行の病歴、および２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの任意の所定のサイクルの第１の期間中に受容される最初のＩＬ−２／抗体療法に対する被検体の応答性に依存する。一般的に、この被検体が、ＩＬ−２のより低い１週間の総用量がアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量の毎週の投与と組み合わせて投与される２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第２の期間を施される場合に、ＩＬ−２投薬は、約１週間〜約４週間の期間について中断される。２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの任意の所定のサイクルを完了するために、被検体は、より高い１週間の総用量の第１の期間およびより低い１週間の総用量の第２の期間の療法を投与される必要がある。
【０１１２】
この休薬期間（すなわち、ＩＬ−２投与を行わない期間、またはＩＬ−２およびアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体投与を行わない期間）の間に、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞数は、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメン、または２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンおよびアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の毎週の投与が再開されるべきときを決定するためにモニタリングされる。２００細胞数／μｌを超えるＮＫ細胞レベルは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体療法についての正の臨床的応答に影響する重要な要因である。したがって、任意のＩＬ−２投薬の所定のサイクルの間、その終わり、およびその後におけるＮＫ細胞数のモニタリングは、ＩＬ−２療法がＩＬ−２投薬を行わない期間後に再開されるべきとき（アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体投与を行わない期間を含んでも含まなくてもよい）を決定する手段を提供する。
【０１１３】
この様式において、ＮＫ細胞数は、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの間、および休薬期間が開始される前の２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１の期間の終わりにて隔週で測定されるかまたは月１回測定される。ＮＫ細胞数が、受容可能な閾値を上回る場合、この２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンは、中断され得る。「受容可能な閾値」によって、処置を受ける被検体が、約１５０細胞／μｌ以上、好ましくは２００細胞／μｌ以上であるＮＫ細胞数を有することが意図される。ＩＬ−２投薬の中断（アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体投与の中断を含んでも含まなくてもよい）後、次いでＮＫ細胞数は、１週間に１度かもしくは１週間に２度測定されるか、またはそれより少ない頻度（例えば、２週間に１度または３週間に１度）でモニタリングされ得る。約１５０細胞／μｌの受容可能な閾値より下に減少するＮＫ細胞数（例えば、１５０細胞／μｌ未満のＮＫ細胞数）は、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメン、または休薬期間がまたアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体投与を行わない期間を含む２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンおよびアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体投薬レジメンを再開するために必要であることを示す。好ましくは２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンは、ＮＫ細胞数が、約２００細胞／μｌの閾値より下（すなわち、２００細胞／μｌ未満のＮＫ細胞数）に減少するときに再開される。このときにおいて、その被検体は、ＩＬ−２のより低い１週間の総用量がアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体と組み合わせて投与される２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第２の期間を投与され、この抗体の治療有効用量は、１週間に１度投与されるか、または２週間に１度か、３週間に１度か、もしくは４週間に１度投与される。
【０１１４】
被検体の全身的健康状態、臨床的応答、およびこれらの２つの治療因子による同時療法の耐容性に依存して、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１のサイクルの完了後に、この被検体は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量（この抗体の治療有効用量は、１週間に１度投与されるか、または２週間に１度か、３週間に１度か、もしくは４週間に１度投与される）の投与と組み合わせて、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のその後のサイクルを投与され得る。このような実施形態において、主治医は、連続的なサイクルの間に、休薬期間またはＩＬ−２投与を行わない期間を許容し得る。したがって、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの任意の所定のサイクル（それ自体は、ＩＬ−２投薬の第１の期間と第２の期間との間にＩＬ−２投与を行わない期間を含んでも含まなくてもよい）の完了のとき、この被検体は、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンのその後のサイクルを開始する前にＩＬ−２投与の休止を与えられ得る。一般的に、２つのレベルのＩＬ−２投薬の所定のサイクルのいずれかの間のＩＬ−２投与を行わない期間は、約１週間〜約４週間（１週間、２週間、３週間、または４週間を含む）である。ＩＬ−２休薬期間中に、この被検体は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量を受容し続け得、これは、１週間に１度投与され得るか、または２週間に１度か、３週間に１度か、もしくは４週間に１度投与され得るか、あるいは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体投薬は、中止されてもよい。
【０１１５】
（併用ＩＬ−２／アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体療法のその後の過程）
これまでに言及した投薬レジメンにしたがう治療を受ける被検体が、部分寛解、または長期の寛解後の再発を示す場合、同時療法のその後の過程が、疾患の完全寛解を達成するのに必要であり得る。したがって、第１の処置期間（この処置期間を通してかまたはこの処置期間内の決められた持続期間の間、抗ＣＤ４０抗体と組み合わせた一定のＩＬ−２投薬レジメンまたは２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンを包含し得る）からの休薬期間に続いて、被検体は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体投与と組み合わせて、一定のＩＬ−２投薬レジメンまたは２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンのいずれかを含む１つ以上のさらなる処置期間を受容し得、この抗体は、さらなる処置期間を通して投与され得るかまたはこの処置期間内の決められた持続期間の間投与され得る。処置期間の間のこのような休薬の期間は、本明細書中で中断の期間といわれる。中断の期間の長さが、これらの２つの治療因子による同時療法の以前の処置期間のいずれかによって達成される腫瘍応答の程度（すなわち、完全  対  部分）に依存する。
【０１１６】
したがって、例えば、被検体が、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の毎週の投薬と２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンとの同時療法（２つのレベルのＩＬ−２投薬の第１の期間と第２の期間との間に休薬期間を含んでも含まなくてもよい）を受ける場合、それらの処置レジメンは、複数の処置時間を含み得、処置時間の各々は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の毎週投与と２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンとの同時療法を含む。これらの複数の処置時間は、本明細書中で維持サイクルといわれ、各維持サイクルは、完了した２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンと組み合わせたアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体投与を含む。「完了した２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメン」によって、この被検体が、より高い１週間の総用量の第１の期間およびより低い１週間の総用量の第２の期間の両方を投与されたことが意図される。複数の維持サイクルについての必要性は、休薬期間が正当化されるときおよびこのような休薬期間を終了する必要があるときを決定するために使用される様式と同様の様式でＮＫ細胞数をモニタリングすることによって評価され得る。したがって、所定の維持サイクルのいずれかにおける２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの完了において、処置を行う医師は、ＮＫ細胞数の測定値を得る。その後、この指標は、所定の２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの完了後に月１回の間隔（すなわち、１ヶ月に一度）で測定される。休薬期間と同様に、受容可能な閾値を下回る（すなわち、約１５０細胞／μｌを下回り、好ましくは約２００細胞／μｌを下回る）まで減少するＮＫ細胞数は、その被検体に別の維持サイクルを投与する必要を示す。維持サイクルの間の持続期間は、約１ヶ月間〜約６ヶ月間（１ヶ月間、１．５ヶ月間、２ヶ月間、２．５ヶ月間、３ヶ月間、３．５ヶ月間、４ヶ月間、４．５ヶ月間、５ヶ月間、５．５ヶ月間、６ヶ月間、または約１ヶ月間〜約６ヶ月間の範囲内に収まる他のこのような期間が挙げられる）であり得る。
【０１１７】
したがって、本発明の投与方法は、ＣＤ４０発現細胞を含む癌（例えば、Ｂ細胞関連の癌（例えば、リンパ腫、骨髄腫、および白血病）、ならびに固形腫瘍（例えば、腎臓癌（例えば、腎細胞癌が挙げられる）、膀胱癌、肝臓癌（例えば、肝細胞癌が挙げられる）、胃癌、頚癌、前立腺癌、鼻咽腔癌、甲状腺癌（例えば、甲状腺乳頭癌）、および皮膚癌（例えば、黒色腫）、ならびに肉腫（例えば、骨肉腫およびユーイング肉腫が挙げられる））を処理するための改良された手段を提供する。理論に拘束されないが、その間に中断を含む一定のＩＬ−２投与計画は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体療法の間のＩＬ−２の投与頻度の減少、および長期のＩＬ−２療法のより良い耐容性を可能にする断続的な投与計画を提供する。２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンは、患者にＩＬ−２のより高い１週間の総用量を与える機会を提供し、この総用量は、ＩＬ−２投薬のその後の週の間に、より低い用量によって維持され得るＮＫ細胞数の増大を提供する。この投与プロトコルは、より高い１週間の総用量のＩＬ−２投与計画およびより低い１週間の総用量のＩＬ−２投与計画の間のＩＬ−２休薬期間、ならびに２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの完了したサイクルの間のＩＬ−２休薬期間を提供するさらなる利点を有し、この休薬期間は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体とＩＬ−２との同時療法の増加した耐容性に寄与する。
【０１１８】
これまでに言及された投薬レジメンにしたがう治療を受ける被検体が、部分寛解、または長期の寛解後の再発を示す場合に、この被検体は、単一の治療因子としてか、または別の腫瘍治療と組み合わせてアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を受容することが認識される。したがって、ＣＤ４０を発現する新生物細胞を含む癌の処置のために予めＩＬ−２とアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体との同時療法を受けた被検体、およびこの癌のさらなる処置が必要である被検体は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体およびＩＬ−２によるさらなる同時療法の前にか、もしくはその代わりの手段として、単独のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体か、またはアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体および少なくとも１つの他の腫瘍治療による治療を受け得る。腫瘍治療の他の型としては、本明細書中の以下に記載される型が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１９】
（ＩＬ−２投与計画）
一定のＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のサイクルまたは２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの１つ以上のサイクルと組み合わせて、本明細書中で推奨される投与計画にしたがうアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体による同時療法を受けるヒト被検体のために、ＩＬ−２投薬の期間中に投与されるべきＩＬ−２の１週間の総用量は、単回投与として投与されても１週間に２回投与の投与計画、１週間に３回投与の投与計画、１週間に４回投与の投与計画、１週間に５回投与の投与計画、１週間に６回投与の投与計画、または１週間に７回投与の投与計画にしたがって投与される等用量の系列に分割されてもよい。より高い１週間の総用量は、第１の期間中に投与されるべきであり、そしてより低い１週間の総用量は、第２の期間中に投与されるべきであり、１週間の総用量が両方の投薬期間の過程にわたって同じ様式で投与されることは、必要ではない。したがって、例えば、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１の期間中のより高い１週間の総用量は、単回投与として投与されても１週間に２回投与の投与計画、１週間に３回投与の投与計画、１週間に４回投与の投与計画、１週間に５回投与の投与計画、１週間に６回投与の投与計画、または１週間に７回投与の投与計画にしたがって投与される等用量の系列に分割されてもよい。同様に、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第２の期間中のより低い１週間の総用量は、単回投与として投与されても１週間に２回投与の投与計画、１週間に３回投与の投与計画、１週間に４回投与の投与計画、１週間に５回投与の投与計画、１週間に６回投与の投与計画、または１週間に７回投与の投与計画にしたがって投与される等用量の系列に分割されてもよい。
【０１２０】
本発明の目的のために、「１週間に２回投与の投与計画、１週間に３回投与の投与計画、１週間に４回投与の投与計画、１週間に５回投与の投与計画、１週間に６回投与の投与計画、または１週間に７回投与の投与計画」は、１週間の総用量が、それぞれ、２つの等用量、３つの等用量、４つの等用量、５つの等用量、６つの等用量、または７つの等用量に分割されることを意図され、この等用量は、７日間の期間の過程にわたって被検体に２４時間の期間あたり１等用量を超えないで投与される。この等用量の系列は、１週間あたりに投与される等用量の総数に依存して、連続した日に投与されても１日以上の日数が任意の２つの連続した用量の間に生じるように投与されてもよい。
【０１２１】
したがって、例えば、ＩＬ−２の２つの等用量の系列が、１週間あたり（すなわち、７日間にわたって）に投与され、そしてその週の第１の等用量が、１日目に投与される場合、ＩＬ−２の第２の等用量は、その週の２日目、３日目、４日目、５日目、６日目または７日目に投与され得る。１つの実施形態において、ＩＬ−２の１週間の総用量は、７日間の期間内にその被検体に投与される２つの等用量に分割され、この期間は、投薬と投薬との間に最小で７２時間および投薬と投薬との間に最大で９６時間を許容する。
【０１２２】
同様に、ＩＬ−２の３つの等用量の系列が、１週間あたりに投与され、そしてその週の第１の等用量が、１日目に投与される場合、第２の等用量の投与と第３の等用量の投与との間が約２４時間である限り、第２の等用量は、その週の２日目、３日目、４日目、５日目、または６日目に投与され得、そして第３の等用量は、その週の３日目、４日目、５日目、６日目または７日目に投与され得る。１つの実施形態において、ＩＬ−２の１週間の総用量は、７日間の期間内にその被検体に投与される３つの等用量に分割され、この期間は、用量と用量との間に最小で２５時間および用量と用量との間に最大で７２時間を許容する。
【０１２３】
ＩＬ−２の４つの等用量の系列が、１週間あたりに投与され、そしてその週の第１の等用量が、１日目に投与される場合、任意の２つの連続した用量の投与の間（すなわち、第１の等用量と第２の等用量との間、第２の等用量と第３の等用量との間、および第３の等用量と第４の等用量との間）が約２４時間である限り、第２の等用量は、その週の２日目、３日目、４日目、または５日目に投与され得、そして第３の等用量は、その週の３日目、４日目、５日目、または６日目に投与され得、そして第４の等用量は、その週の４日目、５日目、６日目、または７日目に投与され得る。
【０１２４】
ＩＬ−２の５つの等用量の系列が、１週間あたりに投与され、そしてその週の第１の等用量が、１日目に投与される場合、任意の２つの連続した用量の投与の間（すなわち、第１の等用量と第２の等用量との間、第２の等用量と第３の等用量との間、第３の等用量と第４の等用量との間、および第４の等用量と第５の等用量との間）が約２４時間である限り、第２の等用量は、その週の２日目、３日目、または４日目に投与され得、そして第３の等用量は、その週の３日目、４日目、または５日目に投与され得、第４の等用量は、その週の４日目、５日目、または６日目に投与され得、そして第５の等用量は、その週の５日目、６日目、または７日目に投与され得る。
【０１２５】
ＩＬ−２の６つの等用量の系列が、１週間あたりに投与され、そしてその週の第１の等用量が、１日目に投与される場合、任意の２つの連続した用量の投与の間（すなわち、第１の等用量と第２の等用量との間、第２の等用量と第３の等用量との間、第３の等用量と第４の等用量との間、および第４の等用量と第５の等用量との間、および第５の等用量と第６の等用量との間）が約２４時間である限り、第２の等用量は、その週の２日目または３日目に投与され得、そして第３の等用量は、その週の３日目または４日目に投与され得、第４の等用量は、その週の４日目または５日目に投与され得、第５の等用量は、その週の５日目または６日目に投与され得、そして第６の等用量は、その週の６日目または７日目に投与され得る。
【０１２６】
１つの実施形態において、ＩＬ−２の１週間の総用量は、７つの等用量に分割され、これは、７日間の期間にわたって毎日投与される、それぞれの連続した投薬の間は約２４時間である。
【０１２７】
一定のＩＬ−２投薬レジメン全体にわたって同じ投与計画に従うか、または２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１の期間および第２の期間の両方について同じ投与計画に従う必要はない。したがってこの投与計画は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体療法と組み合わせた長期のＩＬ−２療法に関する個体の許容度を適応させ、そしてこれらの２つの治療因子による同時療法に対して個体の応答性を反映させる調整され得る。一定のＩＬ−２投薬レジメンおよび２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの２回の期間中の好ましい投与計画は、患者の病歴および本明細書中に提供される指針を与えられる主治医によって、容易に決定される。
【０１２８】
（併用ＩＬ−２／アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体療法に使用するためのアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体用量の範囲）
本発明の目的に関して、本明細書中に開示されるようなＩＬ−２療法と組み合わせた、本明細書中の他所で定義されるようなアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの治療有効用量は、約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ〜約１２ｍｇ／ｋｇの範囲である。したがって、例えば、任意の１つのアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはそのフラグメント（例えば、抗ＣＤ４０モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２もしくは抗ＣＤ４０モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９またはその抗原結合フラグメント）は、０．００３ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、または約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの範囲内に収まる他のこのような用量であり得る。アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの同じ治療有効用量は、各週の抗体投薬を通して投与され得る。あるいは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの異なる治療有効用量は、処置期間の過程にわたって使用され得る。
【０１２９】
したがって、いくつかの実施形態において、本明細書中の他所で定義されるようなアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの最初の治療有効用量は、より低い投薬用量範囲（すなわち、約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ）にあり得、その後、より高い投薬範囲（すなわち、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ）内にある用量を伴う。
【０１３０】
代替的な実施形態において、本明細書中の他所で定義されるようなアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの最初の治療有効用量は、さらに高い投薬範囲（すなわち、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ）にあり得、その後、より低い投薬用量範囲（すなわち、０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ）内にあるその後の用量を伴う。したがって、１つの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの最初の治療有効用量は、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ（約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、および約３５ｍｇ／ｋｇが挙げられる）であり、そしてアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントのその後の治療有効用量は、約５ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ（約５ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１２ｍｇ／ｋｇ、および約１５ｍｇ／ｋｇが挙げられる）である。
【０１３１】
本発明のいくつかの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体療法は、ＩＬ−２／アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の併用療法が必要な被検体に対して、この抗体またはその抗原結合フラグメントの「負荷用量」を投与することによって開始される。「負荷用量」によって、この被検体に投与されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの最初の用量が意図され、投与される抗体またはその抗原結合フラグメントの用量は、より高い投薬範囲（すなわち、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ）内に収まる。「負荷用量」は、完全な「負荷用量」が約２４時間の期間内に投与される限り、単一の投与（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＩＶで投与される単一の注入）として投与されても複数の投与（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＩＶで投与される複数の注入）として投与されてもよい。「負荷用量」の投与後、次いでこの被検体は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの治療有効用量を１回以上投与される。その後の治療有効用量は、毎週の投与計画にしたがって投与されても、本明細書中に上記されるように２週間に１度か、３週間に１度かまたは４週間に１度投与されてもよい。このような実施形態において、一般的に、その後の治療有効用量は、より低い投薬範囲（すなわち、０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ）内に収まる。
【０１３２】
あるいは、いくつかの実施形態において、「負荷用量」の後、その後の治療有効用量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、「保全計画」にしたがって投与され、この抗体またはその抗原結合フラグメントの治療有効用量は、１ヶ月間に１度か、６週間毎に１度か、２ヶ月毎に１度か、１０週間毎に１度か、３ヶ月毎に１度か、１４週間に１度か、４ヶ月毎に１度か、１８週間毎に１度か、５ヶ月毎に１度か、２２週間に１度か、６ヶ月毎に１度か、７ヶ月毎に１度か、８ヶ月毎に１度か、９ヶ月毎に１度か、１０ヶ月毎に１度か、１１ヶ月毎に１度か、１２ヶ月毎に１度投与される。このような実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの治療有効用量は、特にその後の用量がより頻繁な間隔（例えば、２週間に１度〜１ヶ月毎に１度）で投与される場合に、より低い投薬範囲（すなわち、０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ）に収まるか、特にその後の用量がより少ない頻度の間隔（例えば、その後の用量が、約１ヶ月間〜約１２ヶ月間空けて投与される）で投与される場合に、より高い投薬範囲（すなわち、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ）内に収まる。
【０１３３】
（併用ＩＬ−２／アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体療法に使用するためのＩＬ−２の用量範囲）
アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体療法と組み合わせて投与されるべきＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の治療有効用量の以下の議論の目的に関して、商品名Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）（Ｃｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）で市販されるＩＬ−２の薬学的組成物は、参照ＩＬ−２標準として使用される。「参照ＩＬ−２標準」によって、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体療法と組み合わせてＣＤ４０を発現する細胞を含む癌を有する被検体に投与されるべきＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の治療有効用量の決定についての基礎として機能するＩＬ−２の処方物が意図される。このＩＬ−２製品に使用される活性部分は、組換えヒトＩＬ−２ムテインアルデスロイキン（デス−アラニル−１，セリン−１２５ヒトインターロイキン−２といわれる；本明細書中に参考として援用される米国特許出願第４，９３１，５４３号を参照のこと）である。
【０１３４】
したがって、例えば、ＩＬ−２の供給源が、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）である場合、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体療法と組み合わせて投与されるべきＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の１週間の総用量は、治療および推奨されるＩＬ−２投薬レジメン（例えば、一定のＩＬ−２投薬レジメン対２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメン）を受ける患者の病歴に依存して、約１８百万国際単位（ＭＩＵ）〜約５４ＭＩＵである。ＩＬ−２のより高い用量が、投与されるべき場合、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の１週間の総用量は、約４２．０ＭＩＵ〜約５４．０ＭＩＵの範囲（４２．０ＭＩＵ、４３．５ＭＩＵ、４５．０ＭＩＵ、４６．５ＭＩＵ、４８．０ＭＩＵ、４９．５ＭＩＵ、５１．０ＭＩＵ、５２．５ＭＩＵ、および５４．０ＭＩＵならびにこの範囲内に収まる他のこのような値が挙げられる）である。ＩＬ−２の中間程度の用量が、投与されるべき場合、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の１週間の総用量は、約３０．０ＭＩＵ〜約４２．０ＭＩＵの範囲（約３０．０ＭＩＵ、３１．５ＭＩＵ、３３．０ＭＩＵ、３４．５ＭＩＵ、３６．０ＭＩＵ、３７．５ＭＩＵ、３９．０ＭＩＵ、４０．５ＭＩＵ、および４２．０ＭＩＵならびにこの範囲内に収まる他のこのような値が挙げられる）である。ＩＬ−２のより低い用量が、投与されるべき場合、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の１週間の総用量は、約１８．０ＭＩＵ〜約３０．０ＭＩＵの範囲（約１８．０ＭＩＵ、１９．５ＭＩＵ、２１．０ＭＩＵ、２２．５ＭＩＵ、２４．０ＭＩＵ、２５．５ＭＩＵ、２７．０ＭＩＵ、２８．５ＭＩＵ、および３０．０ＭＩＵならびにこの範囲内に収まる他のこのような値が挙げられる）である。
【０１３５】
（一定のＩＬ−２投薬レジメンについて推奨される用量）
Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２が、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体療法と組み合わせて一定のＩＬ−２投薬レジメンにしたがって投与されるべき場合、この参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量は、約１８．０ＭＩＵ〜約５４．０ＭＩＵである。したがって、例えば、いくつかの実施形態において、一定のＩＬ−２投薬レジメンの一部として１週間あたりに投与されるべきＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の全量は、約１８．０ＭＩＵ、約２０ＭＩＵ、約２２．０ＭＩＵ、約２４．０ＭＩＵ、約２６．０ＭＩＵ、約２８．０ＭＩＵ、約３０．０ＭＩＵ、約３２．０ＭＩＵ、約３４．０ＭＩＵ、約３６．０ＭＩＵ、約３８．０ＭＩＵ、約４０．０ＭＩＵ、約４２．０ＭＩＵ、約４４．０ＭＩＵ、約４６．０ＭＩＵ、約４８．０ＭＩＵ、約５０．０ＭＩＵ、約５２．０ＭＩＵ、または約５４．０ＭＩＵ、および約１８ＭＩＵ〜約５４ＭＩＵの範囲内に収まる他のこのような用量である。いくつかの実施形態において、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の１週間の総用量は、約４２．０ＭＩＵ〜約５４．０ＭＩＵの範囲内（例えば、４２．０ＭＩＵ、４４．０ＭＩＵ、４６．０ＭＩＵ、４８．０ＭＩＵ、５０．０ＭＩＵ、５２．０ＭＩＵ、または５４．０ＭＩＵ）に収まる。他の実施形態において、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の１週間の総用量は、約３０．０ＭＩＵ〜約４２．０ＭＩＵの範囲内（例えば、３０．０ＭＩＵ、３２．０ＭＩＵ、３４．０ＭＩＵ、３６．０ＭＩＵ、３８．０ＭＩＵ、４０．０ＭＩＵ、または４２．０ＭＩＵ）に収まる。代替的な実施形態において、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の１週間の総用量は、約１８．０ＭＩＵ〜約３０．０ＭＩＵの範囲内（例えば、１８．０ＭＩＵ、２０．０ＭＩＵ、２２．０ＭＩＵ、２４．０ＭＩＵ、２６．０ＭＩＵ、２８．０ＭＩＵ、または３０．０ＭＩＵ）に収まる。
【０１３６】
これまでに記載されたように、一定のＩＬ−２投薬レジメン中のＩＬ−２の１週間の総用量は、単回投与として投与されても１週間に２回投与の投与計画、１週間に３回投与の投与計画、１週間に４回投与の投与計画、１週間に５回投与の投与計画、１週間に６回投与の投与計画、または１週間に７回投与の投与計画にしたがって投与される等用量の系列に分割されてもよい。したがって、例えば、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の１週間の総用量が、５４．０ＭＩＵである場合、それぞれの週の間に投与されるべきこのＩＬ−２の供給源の３つの等用量は、１８．０ＭＩＵであり得、そしてそれぞれの週の間に投与されるべきこのＩＬ−２の供給源の２つの等用量は、２７．０ＭＩＵであり得る。同様に、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の１週間の総用量が、４２．０ＭＩＵである場合、それぞれの週の間に投与されるべきこのＩＬ−２の供給源の３つの等用量は、１４．０ＭＩＵであり得、そしてそれぞれの週の間に投与されるべきこのＩＬ−２の供給源の２つの等用量は、２１．０ＭＩＵであり得る。Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の１週間の総用量が、３０．０ＭＩＵである場合、それぞれの週の間に投与されるべきこのＩＬ−２の供給源の３つの等用量は、１０．０ＭＩＵであり得、そしてそれぞれの週の間に投与されるべきこのＩＬ−２の供給源の２つの等用量は、１５．０ＭＩＵであり得る。同様に、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の１週間の総用量が、１８．０ＭＩＵである場合、それぞれの週の間に投与されるべきこのＩＬ−２の供給源の３つの等用量は、６．０ＭＩＵであり得、そしてそれぞれの週の間に投与されるべきこのＩＬ−２の供給源の２つの等用量は、９．０ＭＩＵであり得る。
【０１３７】
本発明の方法にしたがって、上記被検体は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの治療有効用量と組み合わせて、この一定のＩＬ−２投薬レジメンを投与され、この抗体またはその抗原結合フラグメントの治療有効用量は、本明細書中に開示される投薬レジメンにしたがって（すなわち、処置期間を通してかもしくは処置期間内の決められた持続期間の間、１週間に１度、２週間に１度、３週間に１度、または４週間に１度）投与される。投与されるべき抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの治療有効用量は、約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの範囲（約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇが挙げられる）である。したがって、例えば、いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの全量は、約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、または約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの範囲内に収まる他のこのような用量である。
【０１３８】
したがって、例えば、いくつかの実施形態において、一定のＩＬ−２投薬レジメンの一部として１週間あたりに投与されるべきＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の全量は、約４２．０ＭＩＵ、約４４．０ＭＩＵ、約４６．０ＭＩＵ、約４８．０ＭＩＵ、約５０．０ＭＩＵ、約５２．０ＭＩＵ、または約５４．０ＭＩＵであり、そして一定のＩＬ−２投薬レジメンと組み合わせて投与されるべきアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの治療有効用量は、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、または約５０ｍｇ／ｋｇであり、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントのこの用量は、処置期間を通してかもしくは処置期間内の決められた持続期間の間、１週間に１度か、２週間に１度か、３週間に１度か、もしくは４週間に１度投与される。１つのこのような実施形態において、一定のＩＬ−２投薬レジメンの一部として１週間あたりに投与されるべきＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の全量は、約４２ＭＩＵであり、そして一定のＩＬ−２投薬レジメンと組み合わせて投与されるべきアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの治療有効用量は、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、または約３５ｍｇ／ｋｇであり、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントのこの用量は、処置期間を通してかもしくは処置期間内の決められた持続期間の間、１週間に１度か、２週間に１度か、３週間に１度か、もしくは４週間に１度投与される。好ましい実施形態において、４２．０ＭＩＵのＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の１週間の総用量は、それぞれ、１週間に２回投与の投与計画かもしくは１週間に３回投与の投与計画にしたがって投与される、２つの等用量または３つの等用量に分割される。この様式において、一定のＩＬ−２投薬レジメンの各週の間に投与されるべきこのＩＬ−２の供給源の２つの等用量は、２１．０ＭＩＵであり得、そして一定のＩＬ−２投薬レジメンの各週の間に投与されるべきこのＩＬ−２の供給源の３つの等用量は、１４．０ＭＩＵであり得る。
【０１３９】
他の実施形態において、一定のＩＬ−２投薬レジメンの一部として１週間あたりに投与されるべきＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の全量は、約３０．０ＭＩＵ、約３２．０ＭＩＵ、約３４．０ＭＩＵ、約３６．０ＭＩＵ、約３８．０ＭＩＵ、約４０．０ＭＩＵ、または約４２．０ＭＩＵであり、そして一定のＩＬ−２投薬レジメンと組み合わせて投与されるべきアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの治療有効用量は、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、または約５０ｍｇ／ｋｇであり、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントのこの用量は、処置期間を通してかもしくは処置期間内の決められた持続期間の間、１週間に１度か、２週間に１度か、３週間に１度か、もしくは４週間に１度投与される。１つのこのような実施形態において、一定のＩＬ−２投薬レジメンの一部として１週間あたりに投与されるべきＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の全量は、約３０．０ＭＩＵであり、そして一定のＩＬ−２投薬レジメンと組み合わせて投与されるべきアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの治療有効用量は、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、または約３５ｍｇ／ｋｇであり、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントのこの用量は、処置期間を通してかもしくは処置期間内の決められた持続期間の間、１週間に１度か、２週間に１度か、３週間に１度か、もしくは４週間に１度投与される。好ましい実施形態において、３０．０ＭＩＵのＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の１週間の総用量は、それぞれ、１週間に２回投与の投与計画かもしくは１週間に３回投与の投与計画にしたがって投与される、２つの等用量または３つの等用量に分割される。この様式において、一定のＩＬ−２投薬レジメンの各週の間に投与されるべきこのＩＬ−２の供給源の２つの等用量は、１５．０ＭＩＵであり得、そして一定のＩＬ−２投薬レジメンの各週の間に投与されるべきこのＩＬ−２の供給源の３つの等用量は、１０．０ＭＩＵであり得る。
【０１４０】
なお他の実施形態において、一定のＩＬ−２投薬レジメンの一部として１週間あたりに投与されるべきＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の全量は、約１８．０ＭＩＵ、約２０ＭＩＵ、約２２．０ＭＩＵ、約２４．０ＭＩＵ、約２６．０ＭＩＵ、約２８．０ＭＩＵ、または約３０．０ＭＩＵであり、そして一定のＩＬ−２投薬レジメンと組み合わせて投与されるべきアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの治療有効用量は、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、または約５０ｍｇ／ｋｇであり、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントのこの用量は、処置期間を通してかもしくは処置期間内の決められた持続期間の間、１週間に１度か、２週間に１度か、３週間に１度か、もしくは４週間に１度投与される。１つのこのような実施形態において、一定のＩＬ−２投薬レジメンの一部として１週間あたりに投与されるべきＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の全量は、約１８．０ＭＩＵであり、そして一定のＩＬ−２投薬レジメンと組み合わせて投与されるべきアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの治療有効用量は、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、または約３５ｍｇ／ｋｇであり、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントのこの用量は、処置期間を通してかもしくは処置期間内の決められた持続期間の間、１週間に１度か、２週間に１度か、３週間に１度か、もしくは４週間に１度投与される。好ましい実施形態において、１８．０ＭＩＵのＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の１週間の総用量は、それぞれ、１週間に２回投与の投与計画かもしくは１週間に３回投与の投与計画にしたがって投与される、２つの等用量または３つの等用量に分割される。この様式において、一定のＩＬ−２投薬レジメンの各週の間に投与されるべきこのＩＬ−２の供給源の２つの等用量は、９．０ＭＩＵであり得、そして一定のＩＬ−２投薬レジメンの各週の間に投与されるべきこのＩＬ−２の供給源の３つの等用量は、６．０ＭＩＵであり得る。
【０１４１】
（２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンについて推奨される用量）
Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２が、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体と組み合わせて、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンにしたがって投与されるべきである場合、このＩＬ−２投薬レジメンの第１の期間中に投与される参照ＩＬ−２標準のより高い１週間の総用量は、約３０．０ＭＩＵ〜約５４．０ＭＩＵであり、そしてこのＩＬ−２投薬レジメンの第２の期間中に投与される参照ＩＬ−２標準のより低い１週間の総用量は、約１８．０ＭＩＵ〜約３９．０ＭＩＵである。これまでに記載されたように、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１の期間中（例えば、この投薬レジメンの前半の間）に投与される１週間の総用量は、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第２の期間中（例えば、この投薬レジメンの後半の間）に投与される１週間の総用量より常に高い。
【０１４２】
したがって、いくつかの実施形態において、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１の期間中に投与されるＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２のより高い１週間の総用量は、約３０．０ＭＩＵ〜約５４．０ＭＩＵ（約３０．０ＭＩＵ、約３２．０ＭＩＵ、約３５．０ＭＩＵ、約３７．０ＭＩＵ、約４０．０ＭＩＵ、約４２．０ＭＩＵ、約４５．０ＭＩＵ、約４７．０ＭＩＵ、約５０．０ＭＩＵ、約５２．０ＭＩＵ、または約５４．０ＭＩＵおよびこのより高い投薬範囲内に収まる他のこのような値が挙げられる）であり；そしてＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２のより低い１週間の総用量は、約１８．０ＭＩＵ〜約３９．０ＭＩＵ（約１８．０ＭＩＵ、約２０．０ＭＩＵ、約２３．０ＭＩＵ、約２５．０ＭＩＵ、約２７．０ＭＩＵ、約３０．０ＭＩＵ、約３２．０ＭＩＵ、約３５．０ＭＩＵ、約３７．０ＭＩＵ、または約３９．０ＭＩＵおよびこのより低い投薬範囲内に収まる他のこのような値が挙げられる）である。
【０１４３】
これまでに記載されたように、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１の期間および第２の期間中の１週間の総用量は、単回投与として投与されるか、または１週間に２回投与の投与計画、１週間に３回投与の投与計画、１週間に４回投与の投与計画、１週間に５回投与の投与計画、１週間に６回投与の投与計画、または１週間に７回投与の投与計画にしたがって投与される等用量の系列に分割される。したがって、例えば、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１の期間中のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の１週間の総用量が、４２．０ＭＩＵである場合、各週の間に投与されるべきこの参照ＩＬ−２標準の３つの等用量は、１４．０ＭＩＵであり得、そして各週の間に投与されるべきこの参照ＩＬ−２標準の２つの等用量は、２１．０ＭＩＵであり得る。同様に、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第２の期間中のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の１週間の総用量が、３０．０ＭＩＵである場合、各週の間に投与されるべきこの参照ＩＬ−２標準の３つの等用量は、１０．０ＭＩＵであり得、そして各週の間に投与されるべきこの参照ＩＬ−２標準の２つの等用量は、１５．０ＭＩＵであり得る。
【０１４４】
本発明の方法にしたがって、上記被検体は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの治療有効用量と組み合わせてこの２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンを投与され、この抗体またはその抗原結合フラグメントの治療有効用量は、処置期間を通してかまたは処置期間内の決められた持続期間の間、１週間に１度か、２週間に１度か、３週間に１度か、もしくは４週間に１度投与される。投与されるべき抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの治療有効用量は、約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの範囲（約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇが挙げられる）である。したがって、例えば、いくつかの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの治療有効用量は、約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、または約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの範囲内に収まる他のこのような用量である。
【０１４５】
１つの実施形態において、上記されるようなアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの治療有効用量は、処置期間を通してかまたは処置期間内の決められた持続期間について、１週間に１度か、２週間に１度か、３週間に１度か、もしくは４週間に１度投与され、そしてこのアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体投薬レジメンと組み合わせて投与されるべきである２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンは、合わせて４週間〜８週間の持続期間を有し、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１の期間中に投与されるＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２のより高い１週間の総用量は、約３０．０ＭＩＵ〜約５４．０ＭＩＵ（例えば、約３０．０ＭＩＵ、約３２．０ＭＩＵ、約３４．０ＭＩＵ、約３６．０ＭＩＵ、約３８．０ＭＩＵ、約４０．０ＭＩＵ、約４２．０ＭＩＵ、約４５．０ＭＩＵ、約４７．０ＭＩＵ、約５０．０ＭＩＵ、約５２．０ＭＩＵ、または約５４．０ＭＩＵ）であり、そして２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第２の期間中に投与されるＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２のより低い１週間の総用量は、約１８．０ＭＩＵ〜約３９ＭＩＵ（例えば、約１８．０ＭＩＵ、約２０．０ＭＩＵ、約２２．０ＭＩＵ、約２４．０ＭＩＵ、約２６．０ＭＩＵ、約２８．０ＭＩＵ、約３０．０ＭＩＵ、約３２．０ＭＩＵ、約３５．０ＭＩＵ、約３７．０ＭＩＵ、または約３９．０ＭＩＵ）である。１つのこのような実施形態において、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１の期間中に投与されるＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２のより高い１週間の総用量は、４２．０ＭＩＵであり、そして２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第２の期間中に投与されるＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２のより低い１週間の総用量は、３０．０ＭＩＵである。
【０１４６】
したがって、例えば、いくつかの実施形態において、上記被検体は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの毎週の投与および合わせて８週間の持続期間を有する２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンによる同時療法を受ける。この特定の実施形態において、ＩＬ−２投薬は、２週間目の１日目（すなわち、この処置期間の１日目のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントによる最初の投薬後の８日目）に始まる。この様式において、この処置期間の２週間目〜５週間目の間に投与されるべきＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の１週間の総用量は、約３０．０ＭＩＵ〜約５４．０ＭＩＵ（例えば、約３０．０ＭＩＵ、約３２．０ＭＩＵ、約３５．０ＭＩＵ、約３７．０ＭＩＵ、約４０．０ＭＩＵ、約４２．０ＭＩＵ、約４５．０ＭＩＵ、約４７．０ＭＩＵ、約５０．０ＭＩＵ、約５２．０ＭＩＵ、もしくは約５４．０ＭＩＵ、またはこのより高い投薬範囲内に収まる他のこのような値）である。この実施形態において、この処置期間の６週間目から９週間目の間に投与されるべきＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の１週間の総用量は、約１８．０ＭＩＵ〜約３９．０ＭＩＵ（例えば、約１８．０ＭＩＵ、約２０．０ＭＩＵ、約２２．０ＭＩＵ、約２４．０ＭＩＵ、約２６．０ＭＩＵ、約２８．０ＭＩＵ、約３０．０ＭＩＵ、約３２．０ＭＩＵ、約３５．０ＭＩＵ、約３７．０ＭＩＵ、または約３９．０ＭＩＵ、およびこの範囲内に収まる他のこのような値）である。これまでに記載されたように、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１の期間および第２の期間中に投与されるべき１週間の総用量は、より高い１週間の総用量が２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１の期間（例えば、９週間の処置期間の２週間目〜５週間目）中に投与され、そしてより低い１週間の総用量が２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第２の期間（例えば、同じ９週間の処置期間の６週間目〜９週間目）中に投与されるように、これらの範囲内から選択される。したがって、例えば、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１の期間中のＩＬ−２の１週間の総用量が、約４２．０ＭＩＵ〜約５４．０ＭＩＵである場合、ＩＬ−２投薬の第２の期間中のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の１週間の総用量は、好ましくは約１８．０ＭＩＵ〜約３９．０ＭＩＵの範囲内に収まる。
【０１４７】
したがって、毎週のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体投薬と２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンとの同時療法による処置期間の持続期間が、約９週間である場合、１つの実施形態において、処置期間の２週間目〜５週間目の間の、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の１週間の総用量は、約３０．０ＭＩＵ〜約５４．０ＭＩＵであるか、または約３０．０ＭＩＵ〜約４２．０ＭＩＵであり、そしてこの処置期間の６週間目〜９週間目の間の、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の１週間の総用量は、約１８．０ＭＩＵ〜約３０．０ＭＩＵである。
【０１４８】
１つの実施形態において、２週間目〜５週間目の間の、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の１週間の総用量は、約４２．０ＭＩＵであり、そして６週間目〜９週間目の間の、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の１週間の総用量は、約３０．０ＭＩＵである。この実施形態において、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２のより高い１週間の総用量およびより低い１週間の総用量の各々は、１週間に２回投与の投与計画にしたがって投与される２つの等用量に分割され、この２つの等用量は、７日間の期間内に被検体に投与され、この期間は、用量と用量との間に最小で７２時間および用量と用量との間に最大で９６時間を許容する。代替的な実施形態において、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２のより高い１週間の総用量およびより低い１週間の総用量の各々は、１週間に３回投与の投与計画にしたがって投与される３つの等用量に分割され、この３つの等用量は、７日間の期間内に被検体に投与され、この期間は、用量と用量との間に最小で２５時間および用量と用量との間に最大で７２時間を許容する。上記されるように、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンと組み合わせて投与されるべきアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの治療有効用量は、約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、または約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの範囲内に収まる他のこのような用量であり、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントのこの用量は、処置期間を通してかまたはこの処置期間内の４週間から８週間の決められた持続期間の間のいずれかにおいて、毎週投与される。代替的な実施形態において、この抗体またはその抗原結合フラグメントの治療有効用量は、処置期間を通して１週間に１度か、２週間に１度か、３週間に１度か、もしくは４週間に１度投与されるか、またはこの処置期間内の４週間〜８週間の決められた持続期間の間、２週間に１度投与され、この被検体はまた、上記される２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンを投与される。
【０１４９】
（ＩＬ−２投薬についての絶対的用量に対する相対的用量）
Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の前述の１週間の総用量は、ＭＩＵに関して表され、これは、１週間の基準において、ヒト被検体に投与されるべき全量または絶対的用量を示す。人間に投与されるべきＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の対応する相対的な１週間の総用量は、容易に算出され得る。平均的な人間は、約１．７ｍ２の体表面積を有する。したがって、投与されるべきＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の絶対的な１週間の総用量は、約４２．０ＭＩＵ〜約５４．０ＭＩＵであり、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の対応する相対的な１週間の総用量は、約２４．７ＭＩＵ／ｍ２〜約３１．８ＭＩＵ／ｍ２である。同様に、絶対的な１週間の総用量が、約３０．０ＭＩＵ〜４２．０ＭＩＵである場合、対応する相対的な１週間の総用量は、約１７．６ＭＩＵ／ｍ２〜約２４．７ＭＩＵ／ｍ２である。絶対的な１週間の総用量が、約１８．０ＭＩＵ〜約３０．０ＭＩＵである場合、対応する相対的な１週間の総用量は、約１０．６ＭＩＵ／ｍ２〜約１７．６ＭＩＵ／ｍ２である。
【０１５０】
ＩＬ−２の生物学的活性に対する国際単位（ＩＵ）は、世界保健機関（ＷＨＯ）のＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓによって１９８８年に確立された。ＷＨＯに属するＮａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌ（ＮＩＢＳＣ）によって提供されるＩＬ−２の生物学的な標準物質は、ネイティブなヒトのジャーカット細胞由来のＩＬ−２の１アンプルあたり１００国際単位を有する。ＩＬ−２製品の活性は、ＨＴ−２細胞増殖によるインビトロの効力検定においてこの国際標準に対して測定され得る。したがって、例えば、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２は、ＨＴ−２細胞増殖アッセイ（例えば、ＧｅａｒｉｎｇおよびＴｈｏｒｐｅ、（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １１４：３−９；Ｎａｋａｎｉｓｈｉら、（１９８４）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６０（６）：１６０５−１６２１を参照のこと）によって決定されるようにこのＩＬ−２製品の１ｍｇあたり約１６．３６ＭＩＵの生物学的活性を有する。この製品に使用される活性部分は、組換えヒトＩＬ−２ムテインアルデスロイキン（デス−アラニル−１，セリン−１２５ヒトインターロイキン−２とも称される；本明細書中に参考として援用される米国特許第４，９３１，５４３号を参照のこと）である。この情報を使用して、推奨される治療的に有効なＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２絶対的用量が、マイクログラムで算出され得る。
【０１５１】
したがって、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の絶対的な１週間の総用量は、約１８．０ＭＩＵ〜約５４．０ＭＩＵである場合、マイクログラムでのＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の絶対的な１週間の総用量は、この製品の約１１００μｇ〜約３３００μｇである。同様に、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の絶対的な１週間の総用量は、約１８．０ＭＩＵ〜約３０．０ＭＩＵである場合、マイクログラムでのＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の絶対的な１週間の総用量は、この製品の約１１００μｇ〜約１８３４μｇである。Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の絶対的な１週間の総用量は、約３０．０ＭＩＵ〜約４２．０ＭＩＵである場合、マイクログラムでのＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の絶対的な１週間の総用量は、この製品の約１８３３μｇ〜約２５６７μｇである。したがって、ＭＩＵで表されるＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の絶対的な１週間の総用量が与えられる場合、当業者は、この特定のＩＬ−２製品のμｇで表される対応する絶対的な１週間の総用量を容易に計算し得る。
【０１５２】
（異なるアルデスロイキン処方物についてのＩＬ−２用量の算出）
本発明を記載する目的のために、ＩＬ−２の用量は、参照ＩＬ−２標準としてのＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２を使用して示されてきた。当業者は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２について２４時間の間に収集された薬物動態（ＰＫ）データおよびＰＫデータに対する血清濃度−時間曲線（ＡＵＣ）の比較に基づく変換係数を使用して、異なるアルデスロイキン処方物および異なる投与経路について対応する用量を容易に決定し得る。ＰＫデータを使用して、参照ＩＬ−２標準の単回投与を投与されたヒト被検体におけるＩＬ−２への曝露が、決定された。これらの被検体は、それらが外因性のＩＬ−２療法をこれまでに受容しなかった（すなわち、これらの被検体がＩＬ−２療法に対してナイーブである）ように選択された。「外因性のＩＬ−２療法」によって、被検体が、天然に存在するＩＬ−２の身体での産生によって生じる曝露と対照的にＩＬ−２の外因性の供給源に対して曝されることによる、任意の干渉が意図される。これらの被検体の一部は、参照ＩＬ−２標準の４．５ＭＩＵの単回投与を受容する一方で、他の被検体は、参照ＩＬ−２標準の７．５ＭＩＵまたは１８．０ＭＩＵの単回投与を受容した。
【０１５３】
参照ＩＬ−２標準の単回投与の投与後、血清中のＩＬ−２の曝露は、最初に注入後１０時間〜１２時間にわたってモニタリングされ、次いで２４時間に対して外挿され、そしてその２４時間の間に収集されたデータについて生じる血清濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）が、算出された。この血清濃度−時間曲線下面積は、本明細書中でＡＵＣ０−２４と称される。この様式においてＩＬ−２の曝露を測定するための方法は、当該分野において周知である。例えば、Ｇｕｓｔａｖｓｏｎ、（１９９８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓｐｏｎｓｅ
Ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ  １９９８：４４０−４４９；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、（１９８７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４７：４２０２−４２０７；Ｋｉｒｃｈｎｅｒら、（１９９８）Ｂｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４６：５−１０；Ｐｉｓｃｉｔｅｌｌｉら、（１９９６）Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ  １６（５）：７５４−７５９；および以下の実施例８を参照のこと。したがって、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の４．５ＭＩＵ（２７５μｇ）の用量を受容するこれらの被検体に関して、ＡＵＣ０−２４値は、５１ＩＵ＊時／ｍｌ（ＳＤ＝１４）であり；Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の７．５ＭＩＵ（４５８μｇ）の用量を受容するこれらの被検体に関して、ＡＵＣ０−２４値は、７９ＩＵ＊時／ｍｌ（ＳＤ＝２９）であり；Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の１８．０ＭＩＵ（１１００μｇ）の用量を受容するこれらの被検体に関して、ＡＵＣ０−２４値は、３４４ＩＵ＊時／ｍｌ（ＳＤ＝１２７）であった。このようなＡＵＣ０−２４データは、参照ＩＬ−２標準（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２）について決定され、本明細書中に記載される治療有効用量は、約２３ＩＵ＊時間／１ｍｌ血清〜約５９８２３ＩＵ＊時間／１ｍｌ血清の範囲内のＩＬ−２の曝露を生じる（以下の実施例８を参照のこと）。
【０１５４】
個々の用量から得た個々のＡＵＣ０−２４の合計は、分割された個々の用量における１週間の総ＡＵＣ０−２４を含む。例えば、１８ＭＩＵの用量が、１週間に３回投与される場合、個々のＡＵＣ０−２４は、３４４ＩＵ＊時／ｍｌと見積もられ、そして１週間の総ＡＵＣ０−２４は、以下の表１に示されるような用量によって上昇したＡＵＣ０−２４の線形仮説に基づいて、１０３２ＩＵ＊時／ｍｌと見積もられる。
【０１５５】
（表１：Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の投与後に得られたＡＵＣ０−２４値）
【０１５６】
【表１】
2011126900.tif 000002
【０１５７】
１０３２ＩＵ＊時／ｍｌの同じ１週間の総ＡＵＣ０−２４はまた、２７ＭＩＵにて１週間に２回の投薬または約１１ＭＩＵにて１週間に５回の投薬によって得られ得る。
【０１５８】
任意の他のアルデスロイキン処方物に関して、本発明の方法において使用するための比較可能な推奨される用量は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２についてのこのＡＵＣ０−２４データに基づいて決定され得る。この様式において、目的のアルデスロイキン処方物の単回投与が、ヒト被検体に投与される。この初回のＩＬ−２の曝露後の血清中のＩＬ−２のレベルは、ＰＫデータを収集することおよび目的のアルデスロイキン処方物についてＡＵＣ０−２４を得ることによって決定される。「初回のＩＬ−２の曝露」によって、ＩＬ−２の曝露を測定するのに使用される被検体が、上記されるようなＩＬ−２の外来性の供給源による治療を受けなかったことが意図される。その後、このＡＵＣ０−２４は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２について推奨される用量に相当する、目的のアルデスロイキン処方物の用量を算出するのに使用され得る変換係数を決定するために、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２についてのＡＵＣ０−２４と比較される。例えば、以下の実施例８に示される代表的なモノマーのＩＬ−２処方物（Ｌ２−７００１）についての算出を参照のこと。したがって、本発明の方法に使用される他のアルデスロイキンのいずれかに関して、一定のＩＬ−２投薬レジメンの間か、または２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの間に投与されるべきＩＬ−２の１週間の総用量は、ヒトのＰＫデータから得られる血清濃度−時間曲線下面積によって決定されるような、参照ＩＬ−２標準（すなわち、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２）の推奨される１週間の総用量に対して等価な量である。
【０１５９】
（異なるＩＬ−２分子についてのＩＬ−２用量の算出）
ＩＬ−２の生物学的に活性な改変体は、変化した固有の生物学的活性を有し得る。例えば、発明の名称「Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２  Ｍｕｔｅｉｎｓ」である、２００４年３月５日に出願され、そして米国特許出願第６０／５５０，８６８号を割り当てられた同時係属中の仮特許出願；および発明の名称「Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２  Ｍｕｔｅｉｎｓ」である、２００４年７月７日に出願され、そして米国特許出願第６０／５８５，９８０号を割り当てられた同時係属中の仮特許出願（これらの内容は、その全体が本明細書中に参考として援用される）に記載されるＩＬ−２ムテインを参照のこと。アルデスロイキン以外のＩＬ−２改変体の用量または本明細書中に開示されるアルデスロイキンの用量に相当するネイティブな配列のＩＬ−２の用量を見積もるために、ＩＬ−２改変体またはネイティブな配列のＩＬ−２の相対的な生物学的活性が、その生物学的効果を試験することによって決定されるべきである。
【０１６０】
本発明のＩＬ−２またはその改変体の相対的な生物学的活性は、リンホカイン活性化キラー細胞（ＬＡＫ）活性および抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介するヒトＮＫ細胞の増殖を活性化および／または達成する能力である。このような活性は、Ｎａｇｌｅｒら、（１９８９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４３：３１８３−３１９１に開示されるアッセイのような標準的なアッセイを使用して測定される。アルデスロイキンではないＩＬ−２改変体の適切な用量またはネイティブな配列のＩＬ−２の適切な用量を決定するために、目的のＩＬ−２分子（すなわち、アルデスロイキン以外のＩＬ−２改変体またはネイティブな配列のＩＬ−２）の一連の用量が、同じ投与経路によってヒト被検体に投与され、そして被検体から新しく単離されたＰＢＭＣ（末梢血単核球）は、例えば、上述のＮａｇｌｅｒら、（１９８９）に記載されるようなＫ５６２細胞に対するＮＫ細胞障害性について試験される。試験されるＩＬ−２分子のＮＫ刺激効果は、試験されるＩＬ−２分子について記載される同じ手順を使用する同じ投与経路によって、同じμｇの量で投与される場合に、参照ＩＬ−２標準（すなわち、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）中に処方されるようなアルデスロイキン）のＮＫ刺激効果と比較される。あるいは、適切な用量は、目的のＩＬ−２分子の一連の用量に供される未処理のヒトＰＢＭＣを使用して、インビトロで決定され得る。目的のＩＬ−２分子（すなわち、アルデスロイキン以外のＩＬ−２改変体またはネイティブな配列のＩＬ−２）は、参照ＩＬ−２標準（すなわち、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）中に処方されるようなアルデスロイキン）の同じ量のＮＫ細胞刺激能力の、好ましくは少なくとも１００％であるＮＫ細胞刺激能力を有するか、または参照ＩＬ−２標準の同じ量のＮＫ細胞刺激能力の９５％、９０％、８０％、７０％または６０％のＮＫ細胞刺激能力を有する。ＩＬ−２改変体は、十分に生物学的に活性（同じ経路によって投与される、同じ用量の参照ＩＬ−２標準の少なくとも５０％のＮＫ刺激活性を有するとして定義される）であるべきである。
【０１６１】
したがって、被検体が、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体と一定のＩＬ−２投薬レジメンとの併用療法を受容する場合、任意のＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、約１１００μｇ（すなわち、１８．０ＭＩＵ）〜約３３００μｇ（すなわち、約５４．０ＭＩＵ）の範囲にあり、好ましくは約１１００μｇ〜約２５６７μｇ（すなわち、約４２．０ＭＩＵ）の範囲にある参照ＩＬ−２標準（すなわち、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）中に処方されるようなアルデスロイキン）の１週間の総用量に対して等価な量であり、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、参照ＩＬ−２標準（すなわち、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）中に処方されるようなアルデスロイキン）の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも５０％を提供する量である。
【０１６２】
いくつかの実施形態において、一定のＩＬ−２投薬レジメンにおいて投与されるべきＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、約１１００μｇ〜約３３００μｇの範囲において投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも６０％（例えば、約１１００μｇ（１８．０ＭＩＵ）、約１２２２μｇ（２０．０ＭＩＵ）、約１３４５μｇ（２２．０ＭＩＵ）、約１４６７μｇ（２４．０ＭＩＵ）、約１５８９μｇ（２６．０ＭＩＵ）、約１７１１μｇ（２８．０ＭＩＵ）、１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）、約１９５６μｇ（３２．０ＭＩＵ）、約２０７８μｇ（３４．０ＭＩＵ）、約２２００μｇ（３６．０ＭＩＵ）、約２３２３μｇ（３８．０ＭＩＵ）、約２４４５μｇ（４０．０ＭＩＵ）、約２５６７μｇ（４２．０ＭＩＵ）、約２６８９μｇ（４４．０ＭＩＵ）、約２８１２μｇ（４６．０ＭＩＵ）、約２９３４μｇ（４８．０ＭＩＵ）、約３０５６μｇ（５０．０ＭＩＵ）、約３１７８μｇ（５２．０ＭＩＵ）、または約３３００μｇ（５４．０ＭＩＵ）で投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも６０％）を提供する量である。他の実施形態において、一定のＩＬ−２投薬レジメンにおいて投与されるべきＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、約１１００μｇ〜約３３００μｇの範囲において投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも７０％（例えば、約１１００μｇ（１８．０ＭＩＵ）、約１２２２μｇ（２０．０ＭＩＵ）、約１３４５μｇ（２２．０ＭＩＵ）、約１４６７μｇ（２４．０ＭＩＵ）、約１５８９μｇ（２６．０ＭＩＵ）、約１７１１μｇ（２８．０ＭＩＵ）、１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）、約１９５６μｇ（３２．０ＭＩＵ）、約２０７８μｇ（３４．０ＭＩＵ）、約２２００μｇ（３６．０ＭＩＵ）、約２３２３μｇ（３８．０ＭＩＵ）、約２４４５μｇ（４０．０ＭＩＵ）、約２５６７μｇ（４２．０ＭＩＵ）、約２６８９μｇ（４４．０ＭＩＵ）、約２８１２μｇ（４６．０ＭＩＵ）、約２９３４μｇ（４８．０ＭＩＵ）、約３０５６μｇ（５０．０ＭＩＵ）、約３１７８μｇ（５２．０ＭＩＵ）、または約３３００μｇ（５４．０ＭＩＵ）で投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも７０％）を提供する量である。
【０１６３】
いくつかの実施形態において、一定のＩＬ−２投薬レジメンにおいて投与されるべきＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、約１１００μｇ〜約３３００μｇの範囲において投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも８０％（例えば、約１１００μｇ（１８．０ＭＩＵ）、約１２２２μｇ（２０．０ＭＩＵ）、約１３４５μｇ（２２．０ＭＩＵ）、約１４６７μｇ（２４．０ＭＩＵ）、約１５８９μｇ（２６．０ＭＩＵ）、約１７１１μｇ（２８．０ＭＩＵ）、１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）、約１９５６μｇ（３２．０ＭＩＵ）、約２０７８μｇ（３４．０ＭＩＵ）、約２２００μｇ（３６．０ＭＩＵ）、約２３２３μｇ（３８．０ＭＩＵ）、約２４４５μｇ（４０．０ＭＩＵ）、約２５６７μｇ（４２．０ＭＩＵ）、約２６８９μｇ（４４．０ＭＩＵ）、約２８１２μｇ（４６．０ＭＩＵ）、約２９３４μｇ（４８．０ＭＩＵ）、約３０５６μｇ（５０．０ＭＩＵ）、約３１７８μｇ（５２．０ＭＩＵ）、または約３３００μｇ（５４．０ＭＩＵ）で投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも８０％）を提供する量である。代替的な実施形態において、一定のＩＬ−２投薬レジメンにおいて投与されるべきＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、約１１００μｇ〜約３３００μｇの範囲において投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも９０％（例えば、約１１００μｇ（１８．０ＭＩＵ）、約１２２２μｇ（２０．０ＭＩＵ）、約１３４５μｇ（２２．０ＭＩＵ）、約１４６７μｇ（２４．０ＭＩＵ）、約１５８９μｇ（２６．０ＭＩＵ）、約１７１１μｇ（２８．０ＭＩＵ）、１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）、約１９５６μｇ（３２．０ＭＩＵ）、約２０７８μｇ（３４．０ＭＩＵ）、約２２００μｇ（３６．０ＭＩＵ）、約２３２３μｇ（３８．０ＭＩＵ）、約２４４５μｇ（４０．０ＭＩＵ）、約２５６７μｇ（４２．０ＭＩＵ）、約２６８９μｇ（４４．０ＭＩＵ）、約２８１２μｇ（４６．０ＭＩＵ）、約２９３４μｇ（４８．０ＭＩＵ）、約３０５６μｇ（５０．０ＭＩＵ）、約３１７８μｇ（５２．０ＭＩＵ）、または約３３００μｇ（５４．０ＭＩＵ）で投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも９０％）を提供する量である。
【０１６４】
なお他の実施形態において、一定のＩＬ−２投薬レジメンにおいて投与されるべきＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、約１１００μｇ〜約３３００μｇの範囲において投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも９５％（例えば、約１１００μｇ（１８．０ＭＩＵ）、約１２２２μｇ（２０．０ＭＩＵ）、約１３４５μｇ（２２．０ＭＩＵ）、約１４６７μｇ（２４．０ＭＩＵ）、約１５８９μｇ（２６．０ＭＩＵ）、約１７１１μｇ（２８．０ＭＩＵ）、１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）、約１９５６μｇ（３２．０ＭＩＵ）、約２０７８μｇ（３４．０ＭＩＵ）、約２２００μｇ（３６．０ＭＩＵ）、約２３２３μｇ（３８．０ＭＩＵ）、約２４４５μｇ（４０．０ＭＩＵ）、約２５６７μｇ（４２．０ＭＩＵ）、約２６８９μｇ（４４．０ＭＩＵ）、約２８１２μｇ（４６．０ＭＩＵ）、約２９３４μｇ（４８．０ＭＩＵ）、約３０５６μｇ（５０．０ＭＩＵ）、約３１７８μｇ（５２．０ＭＩＵ）、または約３３００μｇ（５４．０ＭＩＵ）で投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも９５％）を提供する量である。
【０１６５】
いくつかの実施形態において、一定のＩＬ−２投薬レジメンにおいて投与されるべきＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、約１１００μｇ〜約３３００μｇの範囲において投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも１００％（例えば、約１１００μｇ（１８．０ＭＩＵ）、約１２２２μｇ（２０．０ＭＩＵ）、約１３４５μｇ（２２．０ＭＩＵ）、約１４６７μｇ（２４．０ＭＩＵ）、約１５８９μｇ（２６．０ＭＩＵ）、約１７１１μｇ（２８．０ＭＩＵ）、１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）、約１９５６μｇ（３２．０ＭＩＵ）、約２０７８μｇ（３４．０ＭＩＵ）、約２２００μｇ（３６．０ＭＩＵ）、約２３２３μｇ（３８．０ＭＩＵ）、約２４４５μｇ（４０．０ＭＩＵ）、約２５６７μｇ（４２．０ＭＩＵ）、約２６８９μｇ（４４．０ＭＩＵ）、約２８１２μｇ（４６．０ＭＩＵ）、約２９３４μｇ（４８．０ＭＩＵ）、約３０５６μｇ（５０．０ＭＩＵ）、約３１７８μｇ（５２．０ＭＩＵ）、または約３３００μｇ（５４．０ＭＩＵ）で投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも１００％）を提供する量である。
【０１６６】
同様の様式において、被検体が、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体と２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンとの併用療法を受容する場合に、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１の期間中かまたは第２の期間中に投与されるべき任意のＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの間に投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量と等価な量として表され得る。したがって、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１の期間中に投与されるべき任意のＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、約１８３４μｇ（すなわち、３０．０ＭＩＵ）〜約３３００μｇ（すなわち、約５４．０ＭＩＵ）の範囲にある参照ＩＬ−２標準（すなわち、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）中に処方されるようなアルデスロイキン）の１週間の総用量と等価な量であり、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、参照ＩＬ−２標準（すなわち、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）中に処方されるようなアルデスロイキン）の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも５０％を提供する量である。同様に、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第２の期間中に投与されるべき任意のＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、約１１００μｇ（すなわち、１８．０ＭＩＵ）〜約２３８４μｇ（すなわち、約３９．０ＭＩＵ）の範囲にある参照ＩＬ−２標準（すなわち、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）中に処方されるようなアルデスロイキン）の１週間の総用量と等価な量であり、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の総用量は、参照ＩＬ−２標準（すなわち、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）中に処方されるようなアルデスロイキン）の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも５０％を提供する量である。これまでに記載されたように、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１の期間中（例えば、この投薬レジメンの前半の間）に投与される１週間の総用量は、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第２の期間中（例えば、この投薬レジメンの後半の間）に投与される１週間の総用量より常に高い。
【０１６７】
したがって、いくつかの実施形態において、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１の期間中に投与されるべきＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、約１８３４μｇ（すなわち、３０．０ＭＩＵ）〜約３３００μｇ（すなわち、約５４．０ＭＩＵ）の範囲において投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも６０％（例えば、１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）、約１９５６μｇ（３２．０ＭＩＵ）、約２０７８μｇ（３４．０ＭＩＵ）、約２２００μｇ（３６．０ＭＩＵ）、約２３２３μｇ（３８．０ＭＩＵ）、約２４４５μｇ（４０．０ＭＩＵ）、約２５６７μｇ（４２．０ＭＩＵ）、約２６８９μｇ（４４．０ＭＩＵ）、約２８１２μｇ（４６．０ＭＩＵ）、約２９３４μｇ（４８．０ＭＩＵ）、約３０５６μｇ（５０．０ＭＩＵ）、約３１７８μｇ（５２．０ＭＩＵ）、または約３３００μｇ（５４．０ＭＩＵ）で投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも６０％）を提供する量である。これらの実施形態に関して、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第２の期間中に投与されるべきＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、約１１００μｇ（すなわち、１８．０ＭＩＵ）〜約２３８４μｇ（すなわち、約３９．０ＭＩＵ）の範囲において投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも６０％（例えば、約１１００μｇ（１８．０ＭＩＵ）、約１２２２μｇ（２０．０ＭＩＵ）、約１４０６μｇ（２３．０ＭＩＵ）、約１５２８μｇ（２５．０ＭＩＵ）、約１６５０μｇ（２７．０ＭＩＵ）、１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）、約１９５６μｇ（３２．０ＭＩＵ）、約２１３９μｇ（３５．０ＭＩＵ）、約２２６２μｇ（３７．０ＭＩＵ）、または約２３８４μｇ（３９．０ＭＩＵ）で投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも６０％）を提供する量である。あるいは、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第２の期間中に投与されるべきＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、約１１００μｇ（すなわち、１８．０ＭＩＵ）〜約２３８４μｇ（すなわち、約３９．０ＭＩＵ）の範囲において投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも７０％か、少なくとも８０％か、少なくとも９０％か、少なくとも９５％か、または１００％さえも（例えば、約１１００μｇ（１８．０ＭＩＵ）、約１２２２μｇ（２０．０ＭＩＵ）、約１４０６μｇ（２３．０ＭＩＵ）、約１５２８μｇ（２５．０ＭＩＵ）、約１６５０μｇ（２７．０ＭＩＵ）、１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）、約１９５６μｇ（３２ＭＩＵ）、約２１３９μｇ（３５．０ＭＩＵ）、約２２６２μｇ（３７．０ＭＩＵ）、または約２３８４μｇ（３９．０ＭＩＵ）で投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも７０％か、少なくとも８０％か、少なくとも９０％か、少なくとも９５％か、または１００％さえも）提供する量である。
【０１６８】
他の実施形態において、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１の期間中に投与されるべきＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、約１８３４μｇ（すなわち、３０．０ＭＩＵ）〜約３３００μｇ（すなわち、約５４．０ＭＩＵ）の範囲において投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも７０％（例えば、１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）、約１９５６μｇ（３２．０ＭＩＵ）、約２０７８μｇ（３４．０ＭＩＵ）、約２２００μｇ（３６．０ＭＩＵ）、約２３２３μｇ（３８．０ＭＩＵ）、約２４４５μｇ（４０．０ＭＩＵ）、約２５６７μｇ（４２．０ＭＩＵ）、約２６８９μｇ（４４．０ＭＩＵ）、約２８１２μｇ（４６．０ＭＩＵ）、約２９３４μｇ（４８．０ＭＩＵ）、約３０５６μｇ（５０．０ＭＩＵ）、約３１７８μｇ（５２．０ＭＩＵ）、または約３３００μｇ（５４．０ＭＩＵ）で投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも７０％）を提供する量である。これらの実施形態に関して、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第２の期間中に投与されるべきＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、約１１００μｇ（すなわち、１８．０ＭＩＵ）〜約２３８４μｇ（すなわち、約３９．０ＭＩＵ）の範囲において投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも６０％（例えば、約１１００μｇ（１８．０ＭＩＵ）、約１２２２μｇ（２０．０ＭＩＵ）、約１４０６μｇ（２３．０ＭＩＵ）、約１５２８μｇ（２５．０ＭＩＵ）、約１６５０μｇ（２７．０ＭＩＵ）、１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）、約１９５６μｇ（３２ＭＩＵ）、約２１３９μｇ（３５．０ＭＩＵ）、約２２６２μｇ（３７．０ＭＩＵ）、または約２３８４μｇ（３９．０ＭＩＵ）で投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも６０％）を提供する量である。あるいは、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第２の期間中に投与されるべきＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、約１１００μｇ（すなわち、１８．０ＭＩＵ）〜約２３８４μｇ（すなわち、約３９．０ＭＩＵ）の範囲において投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも７０％か、少なくとも８０％か、少なくとも９０％か、少なくとも９５％か、または１００％さえも（例えば、約１１００μｇ（１８．０ＭＩＵ）、約１２２２μｇ（２０．０ＭＩＵ）、約１４０６μｇ（２３．０ＭＩＵ）、約１５２８μｇ（２５．０ＭＩＵ）、約１６５０μｇ（２７．０ＭＩＵ）、１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）、約１９５６μｇ（３２ＭＩＵ）、約２１３９μｇ（３５．０ＭＩＵ）、約２２６２μｇ（３７．０ＭＩＵ）、または約２３８４μｇ（３９．０ＭＩＵ）で投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも７０％か、少なくとも８０％か、少なくとも９０％か、少なくとも９５％か、または１００％さえも）提供する量である。
【０１６９】
なお他の実施形態において、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１の期間中に投与されるべきＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、約１８３４μｇ（すなわち、３０．０ＭＩＵ）〜約３３００μｇ（すなわち、約５４．０ＭＩＵ）の範囲において投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも８０％（例えば、１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）、約１９５６μｇ（３２．０ＭＩＵ）、約２０７８μｇ（３４．０ＭＩＵ）、約２２００μｇ（３６．０ＭＩＵ）、約２３２３μｇ（３８．０ＭＩＵ）、約２４４５μｇ（４０．０ＭＩＵ）、約２５６７μｇ（４２．０ＭＩＵ）、約２６８９μｇ（４４．０ＭＩＵ）、約２８１２μｇ（４６．０ＭＩＵ）、約２９３４μｇ（４８．０ＭＩＵ）、約３０５６μｇ（５０．０ＭＩＵ）、約３１７８μｇ（５２．０ＭＩＵ）、または約３３００μｇ（５４．０ＭＩＵ）で投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも８０％）を提供する量である。これらの実施形態に関して、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第２の期間中に投与されるべきＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、約１１００μｇ（すなわち、１８．０ＭＩＵ）〜約２３８４μｇ（すなわち、約３９．０ＭＩＵ）の範囲において投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも６０％（例えば、約１１００μｇ（１８．０ＭＩＵ）、約１２２２μｇ（２０．０ＭＩＵ）、約１４０６μｇ（２３．０ＭＩＵ）、約１５２８μｇ（２５．０ＭＩＵ）、約１６５０μｇ（２７．０ＭＩＵ）、１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）、約１９５６μｇ（３２．０ＭＩＵ）、約２１３９μｇ（３５．０ＭＩＵ）、約２２６２μｇ（３７．０ＭＩＵ）、または約２３８４μｇ（３９．０ＭＩＵ）で投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも６０％）を提供する量である。あるいは、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第２の期間中に投与されるべきＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、約１１００μｇ（すなわち、１８．０ＭＩＵ）〜約２３８４μｇ（すなわち、約３９．０ＭＩＵ）の範囲において投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも７０％か、少なくとも８０％か、少なくとも９０％か、少なくとも９５％か、または１００％さえも（例えば、約１１００μｇ（１８．０ＭＩＵ）、約１２２２μｇ（２０．０ＭＩＵ）、約１４０６μｇ（２３．０ＭＩＵ）、約１５２８μｇ（２５．０ＭＩＵ）、約１６５０μｇ（２７．０ＭＩＵ）、１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）、約１９５６μｇ（３２．０ＭＩＵ）、約２１３９μｇ（３５．０ＭＩＵ）、約２２６２μｇ（３７．０ＭＩＵ）、または約２３８４μｇ（３９．０ＭＩＵ）で投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも７０％か、少なくとも８０％か、少なくとも９０％か、少なくとも９５％か、または１００％さえも）提供する量である。
【０１７０】
代替的な実施形態において、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１の期間中に投与されるべきＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、約１８３４μｇ（すなわち、３０．０ＭＩＵ）〜約３３００μｇ（すなわち、約５４．０ＭＩＵ）の範囲において投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも９０％（例えば、１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）、約１９５６μｇ（３２．０ＭＩＵ）、約２０７８μｇ（３４．０ＭＩＵ）、約２２００μｇ（３６．０ＭＩＵ）、約２３２３μｇ（３８．０ＭＩＵ）、約２４４５μｇ（４０．０ＭＩＵ）、約２５６７μｇ（４２．０ＭＩＵ）、約２６８９μｇ（４４．０ＭＩＵ）、約２８１２μｇ（４６．０ＭＩＵ）、約２９３４μｇ（４８．０ＭＩＵ）、約３０５６μｇ（５０．０ＭＩＵ）、約３１７８μｇ（５２．０ＭＩＵ）、または約３３００μｇ（５４．０ＭＩＵ）で投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも９０％）を提供する量である。これらの実施形態に関して、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第２の期間中に投与されるべきＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、約１１００μｇ（すなわち、１８．０ＭＩＵ）〜約２３８４μｇ（すなわち、約３９．０ＭＩＵ）の範囲において投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも６０％（例えば、約１１００μｇ（１８．０ＭＩＵ）、約１２２２μｇ（２０．０ＭＩＵ）、約１４０６μｇ（２３．０ＭＩＵ）、約１５２８μｇ（２５．０ＭＩＵ）、約１６５０μｇ（２７．０ＭＩＵ）、１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）、約１９５６μｇ（３２ＭＩＵ）、約２１３９μｇ（３５．０ＭＩＵ）、約２２６２μｇ（３７．０ＭＩＵ）、または約２３８４μｇ（３９．０ＭＩＵ）で投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも６０％）を提供する量である。あるいは、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第２の期間中に投与されるべきＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、約１１００μｇ（すなわち、１８．０ＭＩＵ）〜約２３８４μｇ（すなわち、約３９．０ＭＩＵ）の範囲において投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも７０％か、少なくとも８０％か、少なくとも９０％か、少なくとも９５％か、または１００％さえも（例えば、約１１００μｇ（１８．０ＭＩＵ）、約１２２２μｇ（２０．０ＭＩＵ）、約１４０６μｇ（２３．０ＭＩＵ）、約１５２８μｇ（２５．０ＭＩＵ）、約１６５０μｇ（２７．０ＭＩＵ）、１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）、約１９５６μｇ（３２ＭＩＵ）、約２１３９μｇ（３５．０ＭＩＵ）、約２２６２μｇ（３７．０ＭＩＵ）、または約２３８４μｇ（３９．０ＭＩＵ）で投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも７０％か、少なくとも８０％か、少なくとも９０％か、少なくとも９５％か、または１００％さえも）提供する量である。
【０１７１】
さらに他の実施形態において、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１の期間中に投与されるべきＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、約１８３４μｇ（すなわち、３０．０ＭＩＵ）〜約３３００μｇ（すなわち、約５４．０ＭＩＵ）の範囲において投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも９５％（例えば、１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）、約１９５６μｇ（３２．０ＭＩＵ）、約２０７８μｇ（３４．０ＭＩＵ）、約２２００μｇ（３６．０ＭＩＵ）、約２３２３μｇ（３８．０ＭＩＵ）、約２４４５μｇ（４０．０ＭＩＵ）、約２５６７μｇ（４２．０ＭＩＵ）、約２６８９μｇ（４４．０ＭＩＵ）、約２８１２μｇ（４６．０ＭＩＵ）、約２９３４μｇ（４８．０ＭＩＵ）、約３０５６μｇ（５０．０ＭＩＵ）、約３１７８μｇ（５２．０ＭＩＵ）、または約３３００μｇ（５４．０ＭＩＵ）で投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも９５％）を提供する量である。これらの実施形態に関して、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第２の期間中に投与されるべきＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、約１１００μｇ（すなわち、１８．０ＭＩＵ）〜約２３８４μｇ（すなわち、約３９．０ＭＩＵ）の範囲において投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも６０％（例えば、約１１００μｇ（１８．０ＭＩＵ）、約１２２２μｇ（２０．０ＭＩＵ）、約１４０６μｇ（２３．０ＭＩＵ）、約１５２８μｇ（２５．０ＭＩＵ）、約１６５０μｇ（２７．０ＭＩＵ）、１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）、約１９５６μｇ（３２ＭＩＵ）、約２１３９μｇ（３５．０ＭＩＵ）、約２２６２μｇ（３７．０ＭＩＵ）、または約２３８４μｇ（３９．０ＭＩＵ）で投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも６０％）を提供する量である。あるいは、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第２の期間中に投与されるべきＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、約１１００μｇ（すなわち、１８．０ＭＩＵ）〜約２３８４μｇ（すなわち、約３９．０ＭＩＵ）の範囲において投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも７０％か、少なくとも８０％か、少なくとも９０％か、少なくとも９５％か、または１００％さえも（例えば、約１１００μｇ（１８．０ＭＩＵ）、約１２２２μｇ（２０．０ＭＩＵ）、約１４０６μｇ（２３．０ＭＩＵ）、約１５２８μｇ（２５．０ＭＩＵ）、約１６５０μｇ（２７．０ＭＩＵ）、１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）、約１９５６μｇ（３２ＭＩＵ）、約２１３９μｇ（３５．０ＭＩＵ）、約２２６２μｇ（３７．０ＭＩＵ）、または約２３８４μｇ（３９．０ＭＩＵ）で投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも７０％か、少なくとも８０％か、少なくとも９０％か、少なくとも９５％か、または１００％さえも）提供する量である。
【０１７２】
いくつかの実施形態において、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第１の期間中に投与されるべきＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、約１８３４μｇ（すなわち、３０．０ＭＩＵ）〜約３３００μｇ（すなわち、約５４．０ＭＩＵ）の範囲において投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の１００％（例えば、１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）、約１９５６μｇ（３２．０ＭＩＵ）、約２０７８μｇ（３４．０ＭＩＵ）、約２２００μｇ（３６．０ＭＩＵ）、約２３２３μｇ（３８．０ＭＩＵ）、約２４４５μｇ（４０．０ＭＩＵ）、約２５６７μｇ（４２．０ＭＩＵ）、約２６８９μｇ（４４．０ＭＩＵ）、約２８１２μｇ（４６．０ＭＩＵ）、約２９３４μｇ（４８．０ＭＩＵ）、約３０５６μｇ（５０．０ＭＩＵ）、約３１７８μｇ（５２．０ＭＩＵ）、または約３３００μｇ（５４．０ＭＩＵ）で投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の１００％）を提供する量である。これらの実施形態に関して、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第２の期間中に投与されるべきＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、約１１００μｇ（すなわち、１８．０ＭＩＵ）〜約２３８４μｇ（すなわち、約３９．０ＭＩＵ）の範囲において投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも６０％（例えば、約１１００μｇ（１８．０ＭＩＵ）、約１２２２μｇ（２０．０ＭＩＵ）、約１４０６μｇ（２３．０ＭＩＵ）、約１５２８μｇ（２５．０ＭＩＵ）、約１６５０μｇ（２７．０ＭＩＵ）、１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）、約１９５６μｇ（３２ＭＩＵ）、約２１３９μｇ（３５．０ＭＩＵ）、約２２６２μｇ（３７．０ＭＩＵ）、または約２３８４μｇ（３９．０ＭＩＵ）で投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも６０％）を提供する量である。あるいは、２つのレベルのＩＬ−２投薬レジメンの第２の期間中に投与されるべきＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の１週間の総用量は、約１１００μｇ（すなわち、１８．０ＭＩＵ）〜約２３８４μｇ（すなわち、約３９．０ＭＩＵ）の範囲において投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも７０％か、少なくとも８０％か、少なくとも９０％か、少なくとも９５％か、または１００％さえも（例えば、約１１００μｇ（１８．０ＭＩＵ）、約１２２２μｇ（２０．０ＭＩＵ）、約１４０６μｇ（２３．０ＭＩＵ）、約１５２８μｇ（２５．０ＭＩＵ）、約１６５０μｇ（２７．０ＭＩＵ）、１８３４μｇ（３０．０ＭＩＵ）、約１９５６μｇ（３２ＭＩＵ）、約２１３９μｇ（３５．０ＭＩＵ）、約２２６２μｇ（３７．０ＭＩＵ）、または約２３８４μｇ（３９．０ＭＩＵ）で投与される参照ＩＬ−２標準の１週間の総用量のＮＫ刺激活性の少なくとも７０％か、少なくとも８０％か、少なくとも９０％か、少なくとも９５％か、または１００％さえも）提供する量である。
【０１７３】
（併用ＩＬ−２／抗ＣＤ４０抗体療法と共に使用するためのさらなる腫瘍治療）
当業者は、本明細書中に開示される併用療法の方法が、腫瘍治療の他の形態の前に使用されても後に使用されてもそれと同時に使用されてもよいことを認識する。このような腫瘍治療としては、化学療法レジメン（例えば、ＣＶＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチンおよびプレドニゾン）、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾン）、ＩＣＥ（イホスファミド、カルボプラチン、およびエトポシド）、ミトザントロン、シタラビン、ＤＶＰ（ダウノルビシン、プレドニゾン、およびビンクリスチン）、ＡＴＲＡ（全トランス型レチノイン酸）、イダルビシン、ホエルザー（ｈｏｅｌｚｅｒ）の化学療法レジメン、Ｌａ  Ｌａの化学療法レジメン、ＡＢＶＤ（アドリアマイシン、ブレオマイシン、ビンブラスチン、およびダカルバジン）ＣＥＯＰ（シクロホスファミド、エピルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾン）、ＣＥＯＰ−ＢＥ（シクロホスファミド、エピルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン、ブレオマイシン、およびエトポシド）、２-ＣｄＡ（２-クロロデオキシアデノシン（２−ＣＤＡ））、ＦＬＡＧ  ＆  ＩＤＡ（フルダラビン、シタラビン、およびイダルビシン（その後のＧ−ＣＳＦ処置を伴うか、またはこれを伴わない））、ＶＡＤ（ビンクリスチン、ドキソルビシン、およびデキサメタゾン）、Ｍ  ＆  Ｐ（メルファランおよびプレドニゾン）、Ｃ−Ｗｅｅｋｌｙ（シクロホスファミドおよびプレドニゾン）、ＡＢＣＭ（アドリアマイシン（ドキソルビシン）、ＢＣＮＵ、シクロホスファミド、およびメルファラン）、ＭＯＰＰ（ナイトロジェンマスタード、オンコビン、プロカルバジン、およびプレドニゾン）ＤＨＡＰ（デキサメタゾン、高用量のａｒａ−Ｃ、およびプラチノール）、フルダラビンおよびシクロホスファミドによる処置）。あるいは、このような腫瘍治療としては、外科手術もしくは外科的手順、放射線療法（骨髄破壊的な治療を含む）、または他の抗癌モノクローナル抗体治療が挙げられ得る。したがって、本発明の方法は、このような腫瘍治療後のインビボかまたはエキソビボのいずれかで、残存する腫瘍細胞を殺傷する同時処置としての使用を見出す。
【０１７４】
この様式において、ＩＬ−２（もしくはその生物学的に活性な改変体）および本明細書中に記載されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体、またはその抗原結合フラグメントによる併用療法は、少なくとも１つの他の癌治療と組み合わせて使用され得、この癌治療としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：外科手術または外科的手順（例えば、脾摘出、肝切除、リンパ節切除、白血球分離、骨髄移植など）、放射線療法；必要に応じて自系の骨髄移植と組み合わせられる化学療法（ここで適切な化学療法剤としては、フルダラビンまたはリン酸フルダラビン、クロラムブシル、ビンクリスチン、ペントスタチン、２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン）、シクロホスファミド、ドキソルビシン、プレドニゾン、およびそれらの組み合わせ（例えば、ＣＡＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシンに加えてプレドニゾン）、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾンに加えてドキソルビシン）、ＶＡＤ（ビンクリスチン、ドキソルビシンに加えてデキサメタゾン）、ＭＰ（メルファランに加えてプレドニゾン）のようなアントラサイクリンを含むレジメン）ならび化学療法（例えば、ミトキサントロン、ダウノルビシン、イダルビシン、アスパラギナーゼおよび代謝拮抗物質（シタラビン、メトトレキサート、５−フルオロウラシルデカルバジン、６−チオグアニン、６−メルカプトプリン、およびネララビンが挙げられるが、これらに限定されない））において使用される他の細胞毒性因子および／または他の治療因子が挙げられるが、これらに限定されない）；他の抗癌モノクローナル抗体治療（例えば、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標））または悪性のＢ細胞上のＣＤ５２細胞表面糖タンパク質を標的する他の抗ＣＤ５２抗体；リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、完全ヒト抗体ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０、Ｒ−１５９４、ＩＭＭＵ−１０６、ＴＲＵ−０１５、ＡＭＥ−１３３、トシツモマブ／Ｉ−１３１トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））、または悪性のＢ細胞上のＣＤ２０抗原を標的する任意の他の治療用抗ＣＤ２０抗体；抗ＣＤ１９抗体（例えば、ＭＴ１０３（二重特異性抗体））；抗ＣＤ２２抗体（例えば、ヒト化モノクローナル抗体エプラツズマブ）；ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））またはヒトの血管内皮増殖因子を標的する他の抗癌抗体；悪性のＢ細胞上のＣＤ２２抗原を標的する抗ＣＤ２２抗体（例えば、モノクローナル抗体ＢＬ−２２、αＣＤ２２毒素）；マクロファージコロニー刺激因子を標的するα−Ｍ−ＣＳＦ抗体；多発性骨髄腫において過剰発現される核のレセプター活性化因子κＢ（ＲＡＮＫ）およびそのリガンド（ＲＡＮＫＬ）を標的する抗体；悪性のＢ細胞上のＣＤ２３抗原を標的する抗ＣＤ２３抗体（例えば、ＩＤＥＣ−１５２）；ＣＤ８０抗原を標的する抗ＣＤ８０抗体（例えば、ＩＤＥＣ−１１４）；悪性のＢ細胞上のＣＤ３８抗原を標的する抗ＣＤ３８抗体；悪性のＢ細胞上で発現される主要組織適合遺伝子複合体のクラスＩＩレセプターを標的する抗体（抗ＭＨＣ抗体）；悪性のＢ細胞上のＣＤ４０抗原を標的する他の抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＳＧＮ−４０）；ならびに腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導性リガンドレセプター１（ＴＲＡＩＬ−Ｒ１）を標的する抗体（例えば、アゴニストのヒトモノクローナル抗体ＨＧＳ−ＥＴＲ１多くの固形腫瘍および造血器官の腫瘍上で発現されるＴＲＡＩＬ−Ｒ２）；小分子に基づく癌治療（微小管インヒビターおよび／またはトポイソメラーゼインヒビターが挙げられるが、これらに限定されない（例えば、有糸分裂インヒビタードラスチンおよびドラスチンアナログ））；チューブリン結合因子Ｔ９００６０７；ＸＬ１１９；およびトポイソメラーゼインヒビターアミノカンプトテシン）、ＳＤＸ−１０５（塩酸ベンダムスチン）、イキサベピロン（ＢＭＳ−２４７５５０とも称されるエポチロンアナログ）、プロテインキナーゼＣインヒビター（例えば、ミドスタウリン（（ＰＫＣ−４１２、ＣＧＰ  ４１２５１、Ｎ−ベンゾイルスタウロスポリン）、ピクサントロン（ｐｉｘａｎｔｒｏｎｅ）、エロキサチン（抗新生物剤）、ガナイト（ｇａｎｉｔｅ）（硝酸ガリウム）、Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標）（サリドマイド）、サリドマイドの免疫調節性誘導体（例えば、レブリミド（かつてのレビミド）、ＡｆｆｉｎｉｔａｋＴＭ（プロテインキナーゼＣ−αのアンチセンスインヒビター）、ＳＤＸ−１０１（悪性リンパ球のアポトーシスを誘導するＲ−エトドラク）、クロファラビンのような第２世代プリンヌクレオチドアナログ、癌細胞によるタンパク質Ｂｃｌ−２の産生に関するインヒビター（例えば、アンチセンス因子オブリマーセン（ｏｂｌｉｍｅｒｓｅｎ）およびＧｅｎａｓｅｎｓｅ（登録商標））、プロテアソームインヒビター（例えば、ＶｅｌｃａｄｅＴＭ（ボルテゾミブ））、小分子キナーゼインヒビター（例えば、ＣＨＩＲ−２５８）、小分子ＶＥＧＦインヒビター（例えば、ＺＤ−６４７４）、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）９０の小分子インヒビター（例えば、１７−ＡＡＧ）、スペロイルアニリドヒドロキサム酸（ｓｕｂｅｒａｎｉｌｏｈｙｄｒｏｘａｍｉｃ  ａｃｉｄ）（ＳＡＨＡ）およびＦＲ−９０１２２８）のようなヒストンデアセチラーゼ（例えば、ハイブリッド／極性細胞分化ＨＰＣ）因子の小分子インヒビター、ならびにアポトーシス因子（例えば、Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標）（三酸化ヒ素）およびＸｃｙｔｒｉｎ（登録商標）（モテキサフィン（ｍｏｔｅｘａｆｉｎ）ガドリニウム））；ワクチン／免疫療法に基づく癌治療（ワクチンアプローチ（例えば、Ｉｄ−ＫＬＨ、オンコファージ、ビタレチン（ｖｉｔａｌｅｔｈｉｎｅ））、個別化免疫療法または活性イディオタイプ免疫療法（例えば、ＭｙＶａｘ（登録商標）個別化免疫療法、正式名称ＧＴＯＰ−９９）、Ｐｒｏｍｕｎｅ（登録商標）（ＣｐＧ  ７９０９、ｔｏｌｌ様レセプター９（ＴＬＲ９）に対する合成アゴニスト）、インターフェロン−α療法、およびＩＬ−１２療法が挙げられるが、これらに限定されない）；ステロイド療法；または他の癌治療；さらなる癌治療は、ＩＬ−２／アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体併用療法前、この併用療法の間、またはこの併用療法後に投与される。したがって、この併用療法が、化学療法、放射線療法、他の抗癌抗体療法、小分子に基づく癌治療、またはワクチン／��疫療法に基づく癌治療のような別の治療因子の投与と組み合わされるＩＬ−２／アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体併用療法を含む場合、本発明の方法は、別個の処方物または単一の薬学的処方物を使用する共投与を包含するか、これらを使用するいずれかの順序での連続投与を包含する。本発明の方法が、併用治療レジメンを包含する場合、これらの治療は、同時に提供され得る（すなわち、ＩＬ−２／アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体併用療法は、同時に投与されるか、または他の癌治療と同じ時間枠内で投与される（すなわち、この治療は、同時に行われるが、ＩＬ−２／アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体併用療法は、他の癌治療として厳密には同じ時間に投与されない））。あるいは、ＩＬ−２／アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体併用療法はまた、他の癌治療の前か、後に投与され得る。異なる癌治療の連続的な投与は、処置される被検体が、寛解または再発の可能性を減少する治療の第１の過程に対して応答するか否かに関わらず実施され得る。
【０１７５】
したがって、例えば、いくつかの実施形態において、本明細書中に開示されるＩＬ−２／アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体併用療法を受ける被検体はまた、ＦＣＲ（フルダラビン、シクロホスファミド、およびリツキシマブ）による治療を受ける。他の実施形態において、本明細書中に開示されるＩＬ−２／アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体併用療法を受ける被検体はまた、ＣＨＯＰ−Ｒ（ＣＨＯＰにリツキシマブを加える）またはＣＦＡＲ（フルダラビン、シクロホスファミド、リツキシマブ、およびアレムツズマブ）による治療を受ける。代替的な実施形態において、本明細書中に開示されるＩＬ−２／アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体併用療法を受ける被検体はまた、ＦＣ（フルダラビン、シクロホスファミド）および悪性のＢ細胞上のＣＤ２０抗原を標的する他の抗ＣＤ２０抗体のいずれか（完全ヒト抗体ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０、Ｒ−１５９４、ＩＭＭＵ−１０６、ＴＲＵ−０１５、ＡＭＥ−１３３、トシツモマブ／Ｉ−１３１トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、およびイブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））が挙げられるが、これらに限定されない）による処置を受ける。なお他の実施形態において、本明細書中に開示されるＩＬ−２／アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体併用療法を受ける被検体はまた、ＣＨＯＰに他の抗ＣＤ２０抗体を加えたものかまたはＣＦＡ（フルダラビン、シクロホスファミド、およびアレムツズマブ）に他の抗ＣＤ２０抗体を加えたものによる治療を受け、他の抗ＣＤ２０抗体（完全ヒト抗体ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０、Ｒ−１５９４、ＩＭＭＵ−１０６、ＴＲＵ−０１５、ＡＭＥ−１３３、トシツモマブ／Ｉ−１３１トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、およびイブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））が挙げられるが、これらに限定されない）は、悪性のＢ細胞上のＣＤ２０抗原を標的とする。
【０１７６】
（インターロイキン−２およびその生物学的に活性な改変体）
本明細書中に示される薬学的処方物中に示されるＩＬ−２および本発明の方法に使用されるべきであるＩＬ−２は、ネイティブであっても組換え技術によって得られてもよく、そして任意の供給源（例えば、ラット、ウサギ、霊長類、ブタ、およびヒトのような哺乳動物の供給源を含む）由来であり得る。処置を受ける被検体が、ヒト被検体である場合、好ましくはＩＬ−２は、ヒトの供給源に由来し、そしてこれとしては、組換え産生されるヒトＩＬ−２（例えば、微生物宿主によって産生される組換えＩＬ−２ポリペプチド）を含む。
【０１７７】
ヒトＩＬ−２は、最初に前駆体ポリペプチド（配列番号１４に示される）として翻訳され、これは、配列番号１３に示されるようなヌクレオチド配列によってコードされる。この前駆体ポリペプチドは、配列番号１４の残基１〜２０における単一の配列を含む。用語「成熟ヒトＩＬ−２」とは、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を指し、これは、配列番号１５に示されるようなヌクレオチド配列によってコードされる。用語「デス−アラニル−１，Ｃ１２５ＳヒトＩＬ−２」および「デス−アラニル−１，セリン−１２５ヒトＩＬ−２」とは、成熟ヒトＩＬ−２配列のアミノ酸位置１２５のシステインのセリンへの置換を有する成熟ヒトＩＬ−２のムテインを指し、これは、成熟ヒトＩＬ−２配列の位置１（すなわち、配列番号１６の位置１）にあるＮ末端のアラニンを欠く。デス−アラニル−１，Ｃ１２５ＳヒトＩＬ−２は、配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有し、これは、配列番号１７に示されるようなヌクレオチド配列によってコードされる。「アルデスロイキン」と称されるＥ．ｃｏｌｉで組換え産生されるデス−アラニル−１，Ｃ１２５ＳヒトＩＬ−２ムテインは、商品名Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）（Ｃｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）で市販される処方物として商業的に入手可能である。Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２は、本明細書中に記載される併用ＩＬ−２／アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体療法のプロトコルについて適切なＩＬ−２投薬範囲を決定するための参照ＩＬ−２標準として機能する。
【０１７８】
（ＩＬ−２の生物学的に活性な改変体）
本発明の方法に有用な薬学的組成物は、ＩＬ−２の生物学的に活性な改変体を含有し得る。このような改変体は、改変ポリペプチドを含有する薬学的組成物が被検体に投与される場合に、ネイティブなポリペプチドを含有する薬学的組成物と同じ治療効果を有するように、ネイティブなポリペプチドの所望の生物学的活性を含むべきである。改変ポリペプチドは、ネイティブなポリペプチドについて観察される様式と同様の様式で、薬学的組成物中の治療上活性な成分として機能する。方法は、改変ポリペプチドが所望の生物学的活性を維持し、そのことによって薬学的組成物中で治療上活性な成分として機能するか否かを決定するために、当該分野において利用できる。生物学的活性は、ネイティブなポリペプチドまたはネイティブなタンパク質の活性を測定するために、具体的に設計されたアッセイ（本発明のアッセイを含む）を使用して測定され得る。さらに、生物学的に活性なネイティブなポリペプチドに対して産生される抗体は、改変ポリペプチドに結合するそれらの能力について試験され得、有効な結合は、ネイティブなポリペプチドのコンホメーションと同様のコンホメーションを有するポリペプチドを示す。
【０１７９】
本発明の目的に関して、目的のＩＬ−２の生物学的活性は、リンホカイン活性化キラー細胞（ＬＡＫ）活性および抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を媒介するためにナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化および／または増殖させるＩＬ−２の活性である。したがって、本発明の方法に使用するためのＩＬ−２改変体（例えば、ヒトＩＬ−２のムテイン）は、リンホカイン活性化キラー細胞（ＬＡＫ）活性および抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を媒介するためにナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化および／または増殖させる。ＮＫ細胞は、「ＮＫ細胞感受性の」標的（例えば、ヒト赤白血病のＫ５６２細胞株）といわれるインビトロの特定の細胞標的に対する自発的かまたは天然の細胞障害性を媒介する。ＩＬ−２による活性化の後、ＮＫ細胞はＬＡＫ活性を獲得する。このようなＬＡＫ活性は、多種多様な腫瘍細胞、および通常、休眠（非活性化）ＮＫ細胞によって溶解に対して抵抗性である他の「ＮＫ非感受性の」標的（例えば、Ｄａｕｄｉ  Ｂ細胞リンパ腫株）を殺傷するＮＫ細胞を活性化するＩＬ−２の能力によってアッセイされ得る。同様に、ＡＤＣＣ活性は、「ＮＫ非感受性の」標的細胞（例えば、Ｄａｕｄｉ  Ｂ細胞リンパ腫株）、または至適濃度の関連する腫瘍細胞に特異的な抗体の存在下でＮＫ細胞を休眠させることによって容易に溶解されない他の標的細胞を溶解するＮＫ細胞を活性化するＩＬ−２の能力によってアッセイされ得る。ＮＫ／ＬＡＫ細胞およびＡＤＣＣの細胞障害活性を形成および測定するための方法は、当該分野において公知である。例えば、本明細書中に参考として援用されるＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ：Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎｓ，補遺１７，Ｕｎｉｔ  ７．７，７．１８，および７．２７  （Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９９６）を参照のこと。
【０１８０】
本発明の目的に関して、本発明の方法に使用するためのＩＬ−２改変体によって活性化されたＮＫ細胞は、抗体の存在下（ＡＤＣＣ活性）または非存在下（ＬＡＫ活性）でＮＫ非感受性細胞（より詳しくはＢ細胞特異的抗体（リツキシマブを含む）の存在下でＮＫ非感受性のＤａｕｄｉ細胞）の特異的溶解活性を実証し、これは、標準４−ｈｒ５１Ｃｒ放出の細胞障害性アッセイ（本明細書中に参考として援用されるＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ：Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎｓ，Ｕｎｉｔ  ７．７，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  Ｓｅｃｔｉｏｎ  １７，７．１８．１（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９９６）を参照のこと）において１２．５：１〜５０：１の間の比で標的に対してエフェクターを使用して測定される場合、休眠（すなわち、非活性化）ＮＫ細胞の溶解活性の基準線より、少なくとも約２０％大きいか、少なくとも約２５％大きいか、または３０％大きいか、または３５％大きいか、または４０％大きい。いくつかの実施形態において、これらのＩＬ−２改変体に活性化されたＮＫ細胞の特異的溶解活性は、上記の通りに測定された場合、休眠ＮＫ細胞の溶解活性の基準線より少なくとも約４５％大きいか、少なくとも約５０％大きいか、少なくとも約５５％大きいか、少なくとも約６０％大きいか、少なくとも約６５％大きいか、少なくとも約７０％大きいか、少なくとも約７５％大きいか、または少なくとも約８０％大きい。
【０１８１】
ネイティブなＩＬ−２か天然に存在するＩＬ−２の、適切な生物学的に活性な改変体は、そのペプチドのフラグメント、アナログ、および誘導体であり得る。「フラグメント」によってインタクトなポリペプチド配列およびインタクトなポリペプチド構造の一部のみからなるポリペプチドが意図され、そしてこれはネイティブなポリペプチドのＣ末端欠失体またはＮ末端欠失体であり得る。「アナログ」によって、ネイティブなポリペプチドまたはネイティブなポリペプチドのフラグメントのいずれかのアナログが意図され、このアナログは、１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、または欠失を有するネイティブなポリペプチド配列およびポリペプチド構造を含む。本明細書中に記載されるような「ムテイン」、および１つ以上のペプトイド（ｐｅｐｔｏｉｄ）（ペプチド模倣体）を有するペプチドは、用語アナログによっても包含される（国際公開番号ＷＯ  ９１／０４２８２を参照のこと）。「誘導体」によって、ネイティブなポリペプチドの所望の生物学的活性が維持される限り、目的のネイティブなポリペプチド、ネイティブなポリペプチドのフラグメント、もしくはこれらのそれぞれのアナログの適切な修飾（例えば、グリコシル化、リン酸化、ポリマー結合（例えば、ポリエチレングリコール））、または他の外来の部分の付加が意図される。ポリペプチドフラグメント、ポリペプチドアナログ、およびポリペプチド誘導体を作製するための方法は、当該分野で一般的に利用可能である。
【０１８２】
例えば、ポリペプチドのアミノ酸配列改変体は、目的のネイティブなポリペプチドをコードするクローニングされたＤＮＡ配列中の変異によって調製され得る。変異誘発およびヌクレオチド配列変更についての方法は、当該分野で周知である。例えば、以下を参照のこと：ＷａｌｋｅｒおよびＧａａｓｔｒａ（編）（１９８３）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ
Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；Ｋｕｎｋｅｌ（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：４８８−４９２；Ｋｕｎｋｅｌら（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５４：３６７−３８２；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；米国特許第４，８７３，１９２号；およびこれらにおいて引用される参考文献（これらは、本明細書において参考として援用される）。目的のポリペプチドの生物学的活性に影響しない適切なアミノ酸置換基に関しての指針は、Ｄａｙｈｏｆｆら（１９７８）、Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）（本明細書において参考として援用される）のモデルにおいて見出され得る。１つのアミノ酸を類似の特性を有する別のアミノ酸で交換するような、保存的置換が好まれ得る。保存的置換の例としては、Ｇｌｙ⇔Ａｌａ、Ｖａｌ⇔Ｉｌｅ⇔Ｌｅｕ、Ａｓｐ⇔Ｇｌｕ、Ｌｙｓ⇔Ａｒｇ、Ａｓｎ⇔Ｇｌｎ、およびＰｈｅ⇔Ｔｒｐ⇔Ｔｙｒが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８３】
目的のＩＬ−２ポリペプチドの改変体の構築において、改変は、改変体が所望の活性を有し続けるようになされる。明らかに、上記改変ポリペプチドをコードするＤＮＡ中に作製された任意の変異は、リーディングフレームの外の配列に位置してはならず、そして好ましくは、ｍＲＮＡ二次構造を生じ得る相補的領域を生じない。欧州特許出願公開第７５，４４４号を参照のこと。
【０１８４】
さらに、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の定常領域が変異されて、多くの方法でエフェクター機能を変更し得る。例えば、米国特許第６，７３７，０５６Ｂ１号および米国特許出願公開第２００４／０１３２１０１Ａ１号を参照のこと。これらは、Ｆｃレセプターへの抗体結合を最適化するＦｃ変異体を開示する。
【０１８５】
ＩＬ−２の生物学的に活性な改変体は、一般的に、比較の基準として機能する参照ポリペプチド分子のアミノ酸配列に対して、少なくとも７０％の配列同一性、好ましくは少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９０％〜９５％以上の配列同一性を有し、そして最も好ましくは少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する。したがって、ＩＬ−２参照分子が、ヒトＩＬ−２であり、その生物学的に活性な改変体は、ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列に対して、少なくとも７０％の配列同一性、好ましくは少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９０％〜９５％以上の配列同一性を有し、そして最も好ましくは少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する。
【０１８６】
本発明の目的のために、アフィンギャップサーチを使用したＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎホモロジーサーチアルゴリズム（１２のギャップオープンペナルティおよび２のギャップ伸長ペナルティ、６２のＢＬＯＳＵＭマトリックスを使用）を使用して、配列同一性％が決定される。このＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎホモロジーサーチアルゴリズムは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２−４８９において教示される。改変体は、例えば、わずか１〜１５アミノ酸残基、わずか１〜１０アミノ酸残基（例えば、６〜１０）、わずか５、わずか４、３、２、またはさらに１アミノ酸残基だけ上記参照ＩＬ−２配列と異なる。
【０１８７】
２つのアミノ酸配列の最適アラインメントに関して、上記改変アミノ酸配列の隣接するセグメントは、上記参照アミノ酸配列に対して、アミノ酸残基の付加またはアミノ酸残基の欠失を有し得る。上記参照アミノ酸配列を比較するために使用される隣接するセグメントは、少なくとも２０個の連続するアミノ酸残基を含み、そして３０個、４０個、５０個、１００個またはそれ以上のアミノ酸残基であり得る。保存的な残基置換またはギャップに関連する配列同一性に対する補正がなされ得る（Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎホモロジーサーチアルゴリズムを参照のこと）。
【０１８８】
ＩＬ−２活性を有するポリペプチドの正確な化学的構造は、多くの因子に依存する。イオン化可能なアミノ基およびカルボニル基が分子中に存在する場合、特定のポリペプチドは、酸性塩もしくは塩基性塩として、または中性形態で得られ得る。適切な環境状態に配置された場合に、その生物学的活性を保持するこのような調製物の全ては、本明細書において使用されるＩＬ−２活性を有するポリペプチドの定義の中に含まれる。さらに、上記ポリペプチドの一次アミノ酸配列は、糖部分を使用した誘導体化（グリコシル化）または他の補助的な分子（例えば、脂質、リン酸、アセチル基など）によって増加され得る。上記ポリペプチドの一次アミノ酸配列は、糖類との結合体化によってもまた増加され得る。このような増加の特定の局面は、産生する宿主の翻訳後の処理システムを通じて達成され；他のこのような改変も、インビトロで導入され得る。とにかく、このような改変は、上記ポリペプチドのＩＬ−２活性が破壊されない限り、本明細書において使用されるＩＬ−２ポリペプチドの定義の中に含まれる。このような改変体は、種々のアッセイにおいて、上記ポリペプチドの活性を増強させるか、または弱めるかのいずれかによって、その活性に量的または質的に影響し得ることが予想される。さらに、上記鎖中の個々のアミノ酸残基は、酸化、還元、または他の誘導体化によって改変され得、そして上記ポリペプチドは、活性を保持するフラグメントを得るために切断され得る。活性を破壊しないこのような変更は、本明細書において使用される目的のＩＬ−２ポリペプチドの定義から上記ポリペプチド配列を除かない。
【０１８９】
当該分野は、ポリペプチド改変体の調製および使用に関する実質的な指針を提供する。ＩＬ−２改変体の調製において、当業者は、ネイティブのタンパク質のヌクレオチドまたはアミノ酸配列に対するどの修飾が、本発明の方法において使用される薬学的組成物の治療上活性な成分として使用するために適切である改変体を生じるかを容易に決定し得る。
【０１９０】
改変ＩＬ−２タンパク質の例としては、欧州特許（ＥＰ）出願公開第ＥＰ  １３６，４８９号を参照のこと（これは、天然に存在するＩＬ−２のアミノ酸配列における、以下の１つ以上の変更を開示する：Ａｓｎ２６からＧｌｎ２６；Ｔｒｐ１２１からＰｈｅ１２１；Ｃｙｓ５８からＳｅｒ５８またはＡｌａ５８、Ｃｙｓ１０５からＳｅｒ１０５またはＡｌａ１０５；Ｃｙｓ１２５からＳｅｒ１２５またはＡｌａ１２５；Ａｒｇ１２０後の全ての残基の欠失；およびそのＭｅｔ−１形態）；ならびに１９８３年１０月１３日に出願された欧州特許出願第８３３０６２２１．９号（１９８４年５月３０日に出願公開番号ＥＰ  １０９，７４８の下で公開された）（ベルギー特許第８９３，０１６号の等価物であり、同一人に所有される一般的に米国特許第４，５１８，５８４号（ネイティブなヒトＩＬ−２にしたがって番号付けられる位置１２５のシステインが削除されるかまたは中性アミノ酸に置換される組換えヒトＩＬ−２ムテイン；アラニル−ｓｅｒ１２５−ＩＬ−２；およびデス−アラニル−ｓｅｒ１２５−ＩＬ−２を開示する）に認められる）に記載される組換えＩＬ−２ムテイン。米国特許第４，７５２，５８５号もまた参照のこと（これは、以下の改変ＩＬ−２タンパク質を開示する：ａｌａ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ａｌａ１０４  ＩＬ−２、ａｌａ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、ｖａｌ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ｖａｌ１０４  ＩＬ−２、ｖａｌ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  ａｌａ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  ａｌａ１０４  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  ａｌａ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  ｖａｌ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  ｖａｌ１０４  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  ｖａｌ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  ａｌａ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  ａｌａ１０４  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  ａｌａ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  ｖａｌ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  ｖａｌ１０４  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  ｖａｌ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  ａｌａ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  ａｌａ１０４  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  ａｌａ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  ｖａｌ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  ｖａｌ１０４  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  ｖａｌ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  デス−ｓｅｒ４  ａｌａ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  デス−ｓｅｒ４  ａｌａ１０４  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  デス−ｓｅｒ４  ａｌａ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  ��ス−ｓｅｒ４  ｖａｌ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  デス−ｓｅｒ４  ｖａｌ１０４  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  デス−ｓｅｒ４  ｖａｌ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  デス−ｓｅｒ４  デス−ｓｅｒ５  ａｌａ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  デス−ｓｅｒ４  デス−ｓｅｒ５  ａｌａ１０４  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  デス−ｓｅｒ４  デス−ｓｅｒ５  ａｌａ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  デス−ｓｅｒ４  デス−ｓｅｒ５  ｖａｌ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  デス−ｓｅｒ４  デス−ｓｅｒ５  ｖａｌ１０４  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  デス−ｓｅｒ４  デス−ｓｅｒ５  ｖａｌ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  デス−ｓｅｒ４  デス−ｓｅｒ５  デス−ｓｅｒ６  ａｌａ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  デス−ｓｅｒ４  デス−ｓｅｒ５  デス−ｓｅｒ６  ａｌａ１０４  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  デス−ｓｅｒ４  デス−ｓｅｒ５  デス−ｓｅｒ６  ａｌａ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  デス−ｓｅｒ４  デス−ｓｅｒ５  デス−ｓｅｒ６  ｖａｌ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  デス−ｓｅｒ４  デス−ｓｅｒ５  デス−ｓｅｒ６  ｖａｌ１０４  ＩＬ−２、およびデス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  デス−ｓｅｒ４  デス−ｓｅｒ５  デス−ｓｅｒ６  ｖａｌ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２）ならびに米国特許第４，９３１，５４３号（本明細書中の実施例に使用されるデス−アラニル−１，セリン−１２５ヒトＩＬ−２、ならびに他のＩＬ−２ムテインを開示する）を参照のこと。
【０１９１】
位置１０４のメチオニンが保存的アミノ酸によって置換された組換えＩＬ−２ムテインを開示する、欧州特許出願公開第２００，２８０号（１９８６年１２月１０日出願）も参照のこと。例としては、以下のムテインが挙げられる：ｓｅｒ４  デス−ｓｅｒ５  ａｌａ１０４  ＩＬ−２；デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  デス−ｓｅｒ４  デス−ｓｅｒ５  ａｌａ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２；デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  デス−ｓｅｒ４  デス−ｓｅｒ５  ｇｌｕ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２；デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  デス−ｓｅｒ４  デス−ｓｅｒ５  ｇｌｕ１０４  ＩＬ−２；  デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  デス−ｓｅｒ４  デス−ｓｅｒ５  ｇｌｕ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２；デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  デス−ｓｅｒ４  デス−ｓｅｒ５  デス−ｓｅｒ６  ａｌａ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２；デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  デス−ｓｅｒ４  デス−ｓｅｒ５  デス−ｓｅｒ６  ａｌａ１０４  ＩＬ−２；  デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  デス−ｓｅｒ４  デス−ｓｅｒ５  デス−ｓｅｒ６  ａｌａ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２；デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  デス−ｓｅｒ４  デス−ｓｅｒ５  デス−ｓｅｒ６  ｇｌｕ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２；デス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  デス−ｓｅｒ４  デス−ｓｅｒ５  デス−ｓｅｒ６  ｇｌｕ１０４  ＩＬ−２；およびデス−ａｌａ１  デス−ｐｒｏ２  デス−ｔｈｒ３  デス−ｓｅｒ４  デス−ｓｅｒ５  デス−ｓｅｒ６  ｇｌｕ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２。欧州特許出願公開第ＥＰ  １１８，６１７号および米国特許第５，７００，９１３号（これらは、Ｎ末端アミノ酸として、ネイティブなＩＬ−２のメチオニンの代わりにアラニンを有する非グリコシル化ヒトＩＬ−２改変体；プロリンがＮ末端アミノ酸であるように最初のメチオニンが削除された非グリコシル化ヒトＩＬ−２；およびＮ末端メチオニンアミノ酸とＮ末端プロリンアミノ酸との間にアラニンが挿入された非グリコシル化ヒトＩＬ−２を開示する）も参照のこと。
【０１９２】
他のＩＬ−２ムテインとしては、報告によると、ＮＫ細胞よりもＴ細胞レセプターを発現する細胞によって発現される高親和性のＩＬ−２レセプターに対する選択的活性を有し、そしてＩＬ−２毒性を減少させる、ＷＯ  ９９／６０１２８に開示されるもの（位置２０のアスパラギン酸のヒスチジンもしくはイソロイシンによる置換、位置８８のアスパラギンのアルギニン、グリシン、もしくはイソロイシンによる置換、または位置１２６のグルタミンのロイシンもしくはグルタミン酸による置換）；ネイティブなＩＬ−２と比較した場合に、高親和性のＩＬ−２レセプターに対する減少した結合を示すが、ＬＡＫ細胞を刺激する能力を維持する、米国特許第５，２２９，１０９号に開示されるムテイン（位置３８のアルギニンのアラニンによる置換、または位置４２のフェニルアラニンのリジンによる置換）；血管漏出症候群の軽減を生じると特許請求される、国際公開番号ＷＯ  ００／５８４５６に開示されるムテイン（Ｄはアスパラギン酸であり、（ｘ）はロイシン、イソロイシン、グリシン、またはバリンであり、そして（ｙ）は、バリン、ロイシンもしくはセリンである、ネイティブなＩＬ−２中に天然に存在する（ｘ）Ｄ（ｙ）配列を変化または欠失している）；報告によると、ＮＫ細胞およびＬＡＫ細胞の誘導を刺激する、国際公開番号ＷＯ  ００／０４０４８に開示されるＩＬ−２  ｐ１−３０ペプチド（ＩＬ−２のａ−へリックスＡ全体を含み、そしてＩＬ−２レセプターのｂ鎖と相互作用する、ＩＬ−２の最初の３０アミノ酸に対応するペプチド）；ならびに報告によると、血管からの出血を誘導し得ないが、ＬＡＫ細胞の産生する能力を保持する、ＷＯ  ００／０４０４８にまた開示されるＩＬ−２  ｐ１−３０ペプチドの変異形態（位置２０のアスパラギン酸のリジンによる置換）が挙げられる。さらに、ＩＬ−２は、向上した溶解性および変化した薬物動態プロフィールを提供するようにポリエチレングリコールによって改変され得る（米国特許第４，７６６，１０６号を参照のこと）。
【０１９３】
発明の名称「Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２  Ｍｕｔｅｉｎｓ」であって、２００４年３月５日に出願され、そして米国特許出願第６０／５５０，８６８と割り当てられた同時係属中の仮特許出願；および発明の名称「Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ
Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２  Ｍｕｔｅｉｎｓ」であって、２００４年７月７日に出願され、そして米国特許出願第６０／５８５，９８０号と割り当てられた同時係属中の仮特許出願（これらの内容はその全体が参考として本明細書中に援用される）に記載されるＩＬ−２ムテインも参照のこと。これらの出願は、減少した毒性が予測される改良された機能プロフィールを有するＩＬ−２のムテインを開示する。ムテインは、ＮＫ細胞の増殖を維持するかまたは増加させ、ＮＫ細胞媒介性のＮＫの細胞溶解機能、ＬＡＫの細胞溶解機能、およびＡＤＣＣの細胞溶解機能を維持し、デス−アラニル−１，Ｃ１２５ＳヒトＩＬ−２もしくはデス−アラニル−１，Ｃ１２５ＳヒトＩＬ−２ムテインと比べてＴ細胞増殖機能を維持する一方で、ＮＫ細胞による、より低いレベルの炎症誘発性のサイトカイン産生を誘導する。これらの改良されたＩＬ−２ムテインの例としては、Ｔ７Ａ、Ｌ３６Ｇ、Ｐ６５Ｅ、Ｒ８１Ｌ、Ｔ７Ｄ、Ｌ３６Ｈ、Ｐ６５Ｆ、Ｒ８１Ｍ、Ｔ７Ｒ、Ｌ３６Ｉ、Ｐ６５Ｇ、Ｒ８１Ｎ、Ｋ８Ｌ、Ｌ３６Ｋ、Ｐ６５Ｈ、Ｒ８１Ｐ、Ｋ９Ａ、Ｌ３６Ｍ、Ｐ６５Ｉ、Ｒ８１Ｔ、Ｋ９Ｄ、Ｌ３６Ｎ、Ｐ６５Ｋ、Ｄ８４Ｒ、Ｋ９Ｒ、Ｌ３６Ｐ、Ｐ６５Ｌ、Ｓ８７Ｔ、Ｋ９Ｓ、Ｌ３６Ｒ、Ｐ６５Ｎ、Ｎ８８Ｄ、Ｋ９Ｖ、Ｌ３６Ｓ、Ｐ６５Ｑ、Ｎ８８Ｈ、Ｋ９Ｗ、Ｌ３６Ｗ、Ｐ６５Ｒ、Ｎ８８Ｔ、Ｔ１０Ｋ、Ｌ３６Ｙ、Ｐ６５Ｓ、Ｖ９１Ａ、Ｔ１０Ｎ、Ｒ３８Ｄ、Ｐ６５Ｔ、Ｖ９１Ｄ、Ｑ１１Ａ、Ｒ３８Ｇ、Ｐ６５Ｖ、Ｖ９１Ｅ、Ｑ１１Ｒ、Ｒ３８Ｎ、Ｐ６５Ｗ、Ｖ９１Ｆ、Ｑ１１Ｔ、Ｒ３８Ｐ、Ｐ６５Ｙ、Ｖ９１Ｇ、Ｅ１５Ａ、Ｒ３８Ｓ、Ｌ６６Ａ、Ｖ９１Ｑ、Ｈ１６Ｄ、Ｌ４０Ｄ、Ｌ６６Ｆ、Ｖ９１Ｗ、Ｈ１６Ｅ、Ｌ４０Ｇ、Ｅ６７Ａ、Ｖ９１Ｎ、Ｌ１９Ｄ、Ｌ４０Ｎ、Ｌ７２Ｇ、Ｌ９４Ａ、Ｌ１９Ｅ、Ｌ４０Ｓ、Ｌ７２Ｎ、Ｌ９４Ｉ、Ｄ２０Ｅ、Ｔ４１Ｅ、Ｌ７２Ｔ、Ｌ９４Ｔ、Ｉ２４Ｌ、Ｔ４１Ｇ、Ｆ７８Ｓ、Ｌ９４Ｖ、Ｋ３２Ａ、Ｆ４２Ａ、Ｆ７８Ｗ、Ｌ９４Ｙ、Ｋ３２Ｗ、Ｆ４２Ｅ、Ｈ７９Ｆ、Ｅ９５Ｄ、Ｎ３３Ｅ、Ｆ４２Ｒ、Ｈ７９Ｍ、Ｅ９５Ｇ、Ｐ３４Ｅ、Ｆ４２Ｔ、Ｈ７９Ｎ、Ｅ９５Ｍ、Ｐ３４Ｒ、Ｆ４２Ｖ、Ｈ７９Ｐ、Ｔ１０２Ｓ、Ｐ３４Ｓ、Ｋ４３Ｈ、Ｈ７９Ｑ、Ｔ１０２Ｖ、Ｐ３４Ｔ、Ｆ４４Ｋ、Ｈ７９Ｓ、Ｍ１０４Ｇ、Ｐ３４Ｖ、Ｍ４６Ｉ、Ｈ７９Ｖ、Ｅ１０６Ｋ、Ｋ３５Ｄ、Ｅ６１Ｋ、Ｌ８０Ｅ、Ｙ１０７Ｈ、Ｋ３５Ｉ、Ｅ６１Ｍ、Ｌ８０Ｆ、Ｙ１０７Ｋ、Ｋ３５Ｌ、Ｅ６１Ｒ、Ｌ８０Ｇ、Ｙ１０７Ｌ、Ｋ３５Ｍ、Ｅ６２Ｔ、Ｌ８０Ｋ、Ｙ１０７Ｑ、Ｋ３５Ｎ、Ｅ６２Ｙ、Ｌ８０Ｎ、Ｙ１０７Ｒ、Ｋ３５Ｐ、Ｋ６４Ｄ、Ｌ８０Ｒ、Ｙ１０７Ｔ、Ｋ３５Ｑ、Ｋ６４Ｅ、Ｌ８０Ｔ、Ｅ１１６Ｇ、Ｋ３５Ｔ、Ｋ６４Ｇ、Ｌ８０Ｖ、Ｎ１１９Ｑ、Ｌ３６Ａ、Ｋ６４Ｌ、Ｌ８０Ｗ、Ｔ１２３Ｓ、Ｌ３６Ｄ、Ｋ６４Ｑ、Ｌ８０Ｙ、Ｔ１２３Ｃ、Ｌ３６Ｅ、Ｋ６４Ｒ、Ｒ８１Ｅ、Ｑ１２６Ｉ、Ｌ３６Ｆ、Ｐ６５Ｄ、Ｒ８１Ｋ、およびＱ１２６Ｖが挙げられるが、これらに限定されず、残基の位置は、配列番号１６に示される成熟ヒトＩＬ−２配列内の位置に対して相対的である。これらの組み合わせのＩＬ−２ムテインの例としては、１９Ｄ４０Ｄ、１９Ｄ８１Ｋ、３６Ｄ４２Ｒ、３６Ｄ６１Ｒ、３６Ｄ６５Ｌ、４０Ｄ３６Ｄ���４０Ｄ６１Ｒ、４０Ｄ６５Ｙ、４０Ｄ７２Ｎ、４０Ｄ８０Ｋ、４０Ｇ３６Ｄ、４０Ｇ６５Ｙ、８０Ｋ３６Ｄ、８０Ｋ６５Ｙ、８１Ｋ３６Ｄ、８１Ｋ４２Ｅ、８１Ｋ６１Ｒ、８１Ｋ６５Ｙ、８１Ｋ７２Ｎ、８１Ｋ８８Ｄ、８１Ｋ９１Ｄ、８１Ｋ１０７Ｈ、８１Ｌ１０７Ｈ、９１Ｎ９５Ｇ、１０７Ｈ３６Ｄ、１０７Ｈ４２Ｅ、１０７Ｈ６５Ｙ、１０７Ｒ３６Ｄ、１０７Ｒ７２Ｎ、４０Ｄ８１Ｋ１０７Ｈ、４０Ｇ８１Ｋ１０７Ｈ、および９１Ｎ９４Ｙ９５Ｇが挙げられるが、これらに限定されず、残基の位置は、配列番号１６に示される成熟ヒトＩＬ−２配列内の位置に対して相対的である。
【０１９４】
本明細書中で使用される場合、用語ＩＬ−２はまた、投薬頻度を減少させるかまたはＩＬ−２の耐容性を改良する、第２のタンパク質に融合したＩＬ−２またはポリプロリンもしくは水溶性ポリマーに共有結合したＩＬ−２を含む、ＩＬ−２融合体またはＩＬ−２結合体を含むことが意図される。例えば、ＩＬ−２（または本明細書中に定義されるその改変体）は、当該分野で公知の方法（ＷＯ  ０１／７９２５８を参照のこと）を使用して、ヒトアルブミンまたはアルブミンフラグメントに融合され得る。あるいは、このＩＬ−２は、ポリプロリンまたはポリエチレングリコールホモポリマーおよびポリオキシエチル化ポリオールに共有結合され得、当該分野において公知の方法を使用して、このホモポリマーは、アルキル基によって１つの末端にて、置換されないかまたは置換され、そしてポリオール（ｐｏｐｌｙｏｌ）は、置換されない。（例えば、米国特許第４，７６６，１０６号、同第５，２０６，３４４号、および同第４，８９４，２２６号を参照のこと）
（ＩＬ−２またはその改変体の薬学的処方物）
治療上活性な成分としてＩＬ−２またはその適切な生物学的に活性な改変体を含有する任意の薬学的組成物は、本発明の方法に使用され得る。このような薬学的組成物は、当該分野で公知であり、そしてそれらとしては、米国特許第４，６０４，３７７号；同第４，７４５，１８０号；同第４，７６６，１０６号；同第４，８１６，４４０号；同第４，８９４，２２６号；同第４，９３１，５４４号；同第４，９９２，２７１号；同第５，０７８，９９７号；および同第６，５２５，１０２号（本明細書中に参考として援用される）に開示されるものが挙げられるが、これらに限定されない。したがって、ＩＬ−２またはその改変体を含有する液体、凍結乾燥または噴霧乾燥した組成物は、本発明の方法に従い、その後の被験体への投与のために、水系もしくは非水系の溶液または懸濁液として調製され得る。これらの組成物の各々は、治療的または予防的に活性な成分として、ＩＬ−２またはその改変体を含有する。「治療的または予防的に活性な成分」により、ＩＬ−２またはその改変体が、組成物中に特異的に組み込まれて、薬学的組成物が被験体に投与されるときに、この被験体内の疾患もしくは状態の、処置、予防または診断に関して、所望の治療的または予防的な応答をもたらすことが意図される。好ましくは、薬学的組成物は、適切な安定化剤、充填剤、またはこれらの両方を含有し、調製および保存の間の、タンパク質の安定性および生物学的活性の喪失に伴う問題を最小限にする。
【０１９５】
例えば、米国特許第４，６０４、３７７号は、ＩＬ−２の治療量（これは、非ＩＬ−２タンパク質およびエンドトキシンを実質的に含まない）、薬理学的に受容可能な水溶性キャリア、およびＩＬ−２を可溶化するのに十分な量の表面活性剤（例えば、ドデシル硫酸ナトリウム）を有するＩＬ−２処方物を示す。他の成分は、例えば、糖を含む。米国特許第４，７６６，１０６号は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）修飾型ＩＬ−２を含む処方物を示す。欧州特許出願公開番号２６８，１１０号は、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（Ｔｗｅｅｎ−８０）、モノステアリン酸ポリエチレングリコール、およびオクチルフェノキシポリエトキシエタノール化合物（Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ４０５）からなる群より選択される種々の非イオン性界面活性剤によって処方されるＩＬ−２を示す。米国特許第４，９９２，２７１号は、ヒト血清アルブミンを含むＩＬ−２処方物を開示し、そして同第５，０７８，９９７号は、ヒト血清アルブミンおよびアミノ酸を含むＩＬ−２処方物を開示する。米国特許第６，５２５，１０２号は、ポリペプチドの主要な安定化剤として機能するアミノ酸塩基、および（このポリペプチドの安定性について受容可能なｐＨの範囲内にこの溶液を緩衝化する）酸および／またはその塩を含むＩＬ−２処方物を開示する。同時継続中の米国特許出願第１０／４０８，６４８号は、肺への送達に適したＩＬ−２処方物を開示する。上記の特許および特許出願の全ては、その全体が本明細書によって参考として援用される。
【０１９６】
（アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体およびその適切な改変体）
モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９およびモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２は、本発明の方法において使用するのに適切なアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を示す。ＣＨＩＲ−５．９抗体およびＣＨＩＲ−１２．１２抗体は、ハイブリドーマ細胞株１３１．２Ｆ８．５．９（本明細書中で細胞株５．９と称される）および１５３．８Ｅ２．Ｄ１０．Ｄ６．１２．１２（本明細書中で細胞株１２．１２と称される）から産生されるＩｇＧ１アイソタイプの完全ヒト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体である。これらの細胞株は、ヒトＩｇＧ１重鎖遺伝子座およびヒトκ鎖遺伝子座を含む免疫異種マウス（ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）技術（Ａｂｇｅｎｉｘ；Ｆｒｅｍｏｎｔ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ））由来の脾細胞を用いて作製された。その脾臓細胞は、マウス骨髄腫ＳＰ２／０細胞と融合された（Ｓｉｅｒｒａ  ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ）。得られたハイブリドーマは数回サブクローニングされて、安定なモノクローナル細胞株５．９およびモノクローナル細胞株１２．１２が作製された。本発明の他の抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座についてトランスジェニックであるマウスを用いてか、または当該分野で公知および／もしくは本明細書中に記載される他の方法によって同様に調製され得る。
【０１９７】
ＣＨＩＲ−１２．１２抗体の可変領域のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列、ならびにＣＨＩＲ−５．９抗体の可変領域のアミノ酸配列は、開示される。具体的には、ｍＡｂ
ＣＨＩＲ−１２．１２の軽鎖ならびに重鎖についてのリーダー領域、可変領域および定常領域のアミノ酸配列が、それぞれ、本明細書中で図１Ａおよび図１Ｂに示される。また、配列番号２（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の軽鎖についての完全配列）、配列番号４（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の重鎖についての完全配列）、および配列番号５（配列番号４に示されるｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の重鎖の改変体についての完全配列、ここで、この改変体は配列番号４の位置１５３においてアラニン残基に対するセリン置換を含む）を参照のこと。ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２についての軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列は、それぞれ、図２Ａおよび図２Ｂに示される。また、配列番号１（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の軽鎖についてのコード配列）、および配列番号３（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の重鎖についてのコード配列）を参照のこと。ＣＨＩＲ−５．９  ｍＡｂの軽鎖ならびに重鎖についてのリーダー領域、可変領域および定常領域のアミノ酸配列は、それぞれ、図３Ａおよび図３Ｂに示される。また、配列番号６（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−５．９の軽鎖についての完全配列）、配列番号７（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−５．９の重鎖についての完全配列）、および配列番号８（配列番号７に示されるｍＡｂ  ＣＨＩＲ−５．９の重鎖の改変体についての完全配列、ここで、配列番号７の位置１５８においてアラニン残基に対するセリン置換を含む）を参照のこと。さらに、ＣＨＩＲ−５．９抗体およびＣＨＩＲ−１２．１２抗体を発現するハイブリドーマは、それぞれ、ＰＴＡ−５５４２およびＰＴＡ−５５４３の特許寄託表示でＡＴＣＣに寄託されている。
【０１９８】
アンタゴニスト活性に加えて、抗ＣＤ４０抗体は、腫瘍細胞に対する別の作用機構を有し得る。例えば、ネイティブなＣＨＩＲ−５．９抗体およびＣＨＩＲ−１２．１２抗体は、ＡＤＣＣ活性を有する。あるいは、ＣＨＩＲ−５．９抗体およびＣＨＩＲ−１２．１２抗体の可変領域は、ＡＤＣＣ活性を有する別の抗体アイソタイプとして発現され得る。ＣＨＩＲ−５．９およびＣＨＩＲ−１２．１２のネイティブな形態、組換え形態、または抗原結合フラグメントはまた、細胞毒、治療因子または放射性同位元素に結合することが可能である。
【０１９９】
ＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体およびＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体は、ＥＬＩＳＡ型アッセイにおいて可溶性ＣＤ４０に結合し、フローサイトメトリーアッセイによって決定されるように細胞表面ＣＤ４０に対するＣＤ４０リガンドの結合を妨げ、予め結合したＣＤ４０リガンドを置き換える。抗体ＣＨＩＲ−５．９および抗体ＣＨＩＲ−１２．１２は、互いにＣＤ４０への結合に対して競合するが１５Ｂ８とは競合せず、この１５Ｂ８は、発明の名称「Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４０  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」である、２０００年１０月２日に出願された米国仮特許出願番号第６０／２３７，５５６号および発明の名称「Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４０  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」である、２００１年１０月２日に出願されたＰＣＴ国際出願番号第ＰＣＴ／ＵＳ０１／３０８５７（代理人事件番号ＰＰ１６０９２．００３）に記載される抗ＣＤ４０モノクローナル抗体であり、これらの両方が参考としてその全体が本明細書中で援用される。健常なヒト被験体由来のＢ細胞の増殖における効果についてインビトロで試験される場合、ＣＨＩＲ−５．９およびＣＨＩＲ−１２．１２は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体として作用する。さらに、ＣＨＩＲ−５．９およびＣＨＩＲ−１２．１２は、健常な被験体由来のヒトリンパ球の強力な増殖を誘導しない。これらの抗体は、抗体依存性の細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）によってＣＤ４０を発現する標的細胞を殺傷し得る。ＢｉａｃｏｒｅＴＭアッセイによって決定されるように、ヒトＣＤ４０に対するＣＨＩＲ−５．９の結合親和性は１．２×１０−８Ｍであり、ＣＨＩＲ−１２．１２の結合親和性は５×１０−１０Ｍである。
【０２００】
本発明の方法において使用するのに適切なアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０細胞表面抗原に対して強力な単一部位結合親和性を示す。本発明のモノクローナル抗体は、少なくとも１０−５Ｍ、少なくとも３×１０−５Ｍ、好ましくは少なくとも１０−６Ｍ〜１０−７Ｍ、より好ましくは１０−８Ｍ〜約１０−１２ＭのＣＤ４０に対する解離平衡定数（ＫＤ）を示し、これはＢｉａｃｏｒｅＴＭのような標準的なアッセイを用いて測定される。Ｂｉａｃｏｒｅ分析は当該分野で公知であり、詳細は「ＢＩＡａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｈａｎｄｂｏｏｋ」に提供されている。ＷＯ  ０１／２７１６０に記載される方法が結合親和性を調節するために使用され得る。
【０２０１】
「ＣＤ４０抗原」、「ＣＤ４０細胞表面抗原」、「ＣＤ４０レセプター」または「ＣＤ４０」によって、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）レセプターファミリーに属する膜貫通糖タンパク質が意図される（例えば、米国特許第５，６７４，４９２号および同第４，７０８，８７１号；Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃら（１９８９）ＥＭＢＯ  ８：１４０３；Ｃｌａｒｋ（１９９０）Ｔｉｓｓｕｅ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ  ３６：３３；Ｂａｒｃｌａｙら（１９９７）Ｔｈｅ  Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｆａｃｔｓ  Ｂｏｏｋ（第２版；Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）を参照のこと）。ヒトＣＤ４０の２つのアイソフォーム（この遺伝子の代替スプライス転写産物改変体によってコードされる）が同定されている。第１のアイソフォーム（「長いアイソフォーム」または「アイソフォーム１」としてもまた公知である）は、２７７個のアミノ酸の前駆ポリペプチド（配列番号１２（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＣＡＡ４３０４５として最初に報告され、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿００１２４１においてアイソフォーム１として同定された）、配列番号１１（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｘ６０５９２およびＮＭ＿００１２５０を参照のこと）によってコードされる）として発現され、これは最初の１９残基によって表されるシグナル配列を有する。第２のアイソフォーム（「短いアイソフォーム」または「アイソフォーム２」としてもまた公知である）は、２０３個のアミノ酸の前駆ポリペプチド（配列番号１０（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿６９０５９３）、配列番号９（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＭ＿１５２８５４）によってコードされる）として発現され、これも最初の１９残基によって表されるシグナル配列を有する。ヒトＣＤ４０のこれら２つのアイソフォームの前駆ポリペプチドは、共通してその最初の１６５残基（すなわち、配列番号１０および配列番号１２の残基１〜１６５）を共有する。短いアイソフォームの前駆ポリペプチド（配列番号１０に示される）は、コードセグメントを欠失する転写産物改変体（配列番号９）（これは、翻訳のフレームシフトをもたらす）によってコードされ、得られるＣＤ４０アイソフォームは、ＣＤ４０の長いアイソフォームに含まれるもの（配列番号１２の残基１６６〜２７７に示されるＣ末端）とは異なる、より短いＣ末端（配列番号１０の残基１６６〜２０３）を含む。本発明の目的のために、用語「ＣＤ４０抗原」、「ＣＤ４０細胞表面抗原」、「ＣＤ４０レセプター」または「ＣＤ４０」は、ＣＤ４０の短いアイソフォームおよび長いアイソフォームの両方を包含する。本発明の抗ＣＤ４０抗体は、本明細書中で以下に示されるようにヒトＣＤ４０のエピトープに結合し、このヒトＣＤ４０は、この細胞表面抗原の短いアイソフォームまたは長いアイソフォームのいずれかのうちの同じ位置に存在する。
【０２０２】
ＣＤ４０抗原は、本明細書中で他の部分に記載されるように、種々の細胞型の表面に提示される。「表面に提示される」および「表面に発現される」により、ＣＤ４０抗原のうちの全てまたは一部が、細胞の外側に曝露されることが意図される。提示または発現されたＣＤ４０抗原は、完全にまたは部分的にグリコシル化され得る。
【０２０３】
「アゴニスト活性」により、その物質がアゴニストとして機能することが意図される。アゴニストは細胞上の同種レセプターと結合し、レセプターの天然のリガンドにより惹起されるものと類似かまたは同じ反応もしくは活性を惹起し；例えば、これは、シグナルを細胞に伝達する。ＣＤ４０のアゴニストは、以下の応答のうちのいずれかまたはすべてを誘導するが、これらに限定されない：Ｂ細胞の増殖および／または分化、抗体産生、細胞間接着、Ｂ細胞の記憶形成、アイソタイプの切り換え、ＭＨＣクラスＩＩおよびＣＤ８０／８６の細胞表面発現の上方制御、ならびに、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、およびＴＮＦなどのような炎症誘発性サイトカインの分泌。「アンタゴニスト活性」により、その物質がアンタゴニストとして機能することが意図される。ＣＤ４０のアンタゴニストは、アゴニストリガンド（特に、ＣＤ４０Ｌ）に対するＣＤ４０レセプターの結合により誘導される応答のうちのいずれかの誘導を妨げるかまたは減少させる。アンタゴニストは、アゴニスト結合に対する応答のうちのいずれか１以上の誘導を、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、好ましくは４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、より好ましくは７０％、８０％、８５％、そして最も好ましくは９０％、９５％、９９％、または１００％減少させ得る。抗ＣＤ４０抗体およびＣＤ４０−リガンドの結合特異性およびアンタゴニスト活性を測定するための方法は、当業者に公知であり、それらとしては、標準的な競合結合アッセイ、Ｂ細胞による免疫グロブリン分泌をモニタリングするためのアッセイ、Ｂ細胞増殖アッセイ、Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ様Ｂ細胞増殖アッセイ、抗体産生についてのＴ細胞ヘルパーアッセイ、Ｂ細胞増殖の同時刺激アッセイ、およびＢ細胞活性化マーカーの上方制御についてのアッセイが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、ＷＯ  ００／７５３４８、および米国特許第６，０８７，３２９号（参考として本明細書中に援用される）に開示されるアッセイを参照のこと。
【０２０４】
「有意な」アゴニスト活性により、Ｂ細胞応答アッセイのようなアッセイで測定されるように、中性物質またはネガティブコントロールによって誘導されるアゴニスト活性より、少なくとも３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％大きいアゴニスト活性が意図される。好ましくは、「有意な」アゴニスト活性は、Ｂ細胞応答アッセイで測定されるように、中性物質またはネガティブコントロールにより誘導されるアゴニスト活性より少なくとも２倍もしくは少なくとも３倍大きいアゴニスト活性である。したがって、例えば、目的のＢ細胞応答がＢ細胞増殖である場合、「有意な」アゴニスト活性は中性物質またはネガティブコントロールにより誘導されるＢ細胞増殖レベルよりも少なくとも２倍大きいかまたは少なくとも３倍大きいＢ細胞増殖レベルの誘導である。１つの実施形態において、ＣＤ４０に結合しない非特異的免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ１）は、ネガティブコントロールとしての役割を果たす。「有意なアゴニスト活性を有さない」物質は、Ｂ細胞応答アッセイで測定されるように、中性物質またはネガティブコントロールにより誘導されるアゴニスト活性よりも高くて約２５％上回るアゴニスト活性、好ましくは、中性物質またはネガティブコントロールにより誘導されるアゴニスト活性よりも高くて約２０％上回る、約１５％上回る、約１０％上回るか、約５％上回るか、約１％上回るか、約０．５％上回るか、または高くて約０．１％上回るアゴニスト活性を示す。本発明の方法において有用なアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、ヒト細胞上のＣＤ４０抗原に結合される場合に、上記のように有意なアゴニスト活性を有さない。本発明の１つの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、１つの細胞応答において有意なアゴニスト活性を有さない。本発明の別の実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、１より多いＢ細胞応答（例えば、増殖および分化、または増殖、分化、ならびに抗体産生）のアッセイにおいて有意なアゴニスト活性を有さない。
【０２０５】
ＣＤ４０に対するモノクローナル抗体は、当該分野において公知である。例えば、ＭｃＭｉｃｈａｅｌ編、（１９８７；１９８９）「Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  ＩＩＩ  ａｎｄ  ＩＶ（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；米国特許第５，６７４、４９２号；同第５，８７４，０８２号；同第５，６７７，１６５号；同第６，０５６，９５９号；ＷＯ  ００／６３３９５；国際公開番号ＷＯ  ０２／２８９０５および同ＷＯ  ０２／２８９０４；Ｇｏｒｄｏｎら、（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：１４２５；Ｖａｌｌｅら、（１９８９）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９：１４６３；Ｃｌａｒｋら、（１９８６）ＰＮＡＳ  ８３：４４９４；Ｐａｕｌｉｅら、（１９８９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４２：５９０；Ｇｏｒｄｏｎら、（１９８７）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：１５３５；Ｊａｂａｒａら、（１９９０）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７２：１８６１；Ｚｈａｎｇら、（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：１８３６；Ｇａｓｃａｎら、（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８；Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕら、（１９９１）Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ３：８；およびＢａｎｃｈｅｒｅａｕら、（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５１：７０（これらの全ては、本明細書中に参考として援用される）におけるＢ細胞抗原についての節を参照のこと。本発明の方法に対して特に重要であるのは、上記のモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９およびモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２の結合特性を共有するアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体である。このような抗体としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：（１）１３１．２Ｆ８．５．９（本明細書中で細胞株５．９と称される）および１５３．８Ｅ２．Ｄ１０．Ｄ６．１２．１２（本明細書中で細胞株１２．１２と称される）（それぞれ、特許受託番号ＰＴＡ−５５４２および特許受託番号ＰＴＡ−５５４３としてＡＴＣＣに寄託された）で表されるハイブリドーマ細胞株によって産生されるモノクローナル抗体；（２）配列番号２に示される配列、配列番号４に示される配列、配列番号５に示される配列、配列番号２と配列番号４とに示される配列の両方、および配列番号２と配列番号５とに示される配列の両方からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；（３）配列番号６に示される配列、配列番号７に示される配列、配列番号８に示される配列、配列番号６と配列番号７とに示される配列の両方、および配列番号６と配列番号８とに示される配列の両方からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；（４）配列番号１に示されるヌクレオチド配列、配列番号３に示されるヌクレオチド配列、および配列番号１と配列番号３とに示される配列の両方からなる群より選択される核酸配列を含む核酸分子によってコードされるアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体；（５）ハイブリドーマ細胞株５．９またはハイブリドーマ細胞株１２．１２によって産生されるモノクローナル抗体に結合し得るエピトープに結合するモノクローナル抗体；（６）配列番号１０または配列番号１２に示されるアミノ配列の残基８２〜８７を含む���ピトープに結合するモノクローナル抗体；（７）競合結合アッセイにおいてモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２と競合するモノクローナル抗体；ならびに（８）ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体またはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体の抗原結合フラグメントであるモノクローナル抗体または上述の項目（１）〜（７）のモノクローナル抗体の抗原結合フラグメントであって、ここで、このフラグメントはヒトＣＤ４０抗原に対して特異的に結合する能力を保持する。
【０２０６】
抗ＣＤ４０抗体の作製。本発明の方法において使用するためのアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、当業者に公知の任意の抗体作製方法を使用して作製され得る。したがって、ポリクローナル血清は、従来の方法によって調製され得る。一般的に、ＣＤ４０抗原を含む溶液が最初に使用されて、適切な動物（好ましくは、マウス、ラット、ウサギ、またはヤギ）を免疫化する。入手可能な血清の量、および標識された抗ウサギ抗体および抗ヤギ抗体が利用できることに起因して、ウサギまたはヤギが、ポリクローナル血清の調製に好ましい。
【０２０７】
ポリクローナル血清は、トランスジェニック動物（好ましくは、ヒト免疫グロブリン座を有するマウス）において調製され得る。好ましい実施形態において、ＣＤ４０を発現するＳｆ９細胞が、免疫原として使用される。免疫化はまた、生理的食塩水（好ましくは、フロイント完全アジュバントのようなアジュバント）中の抗原を含む溶液を混合または乳化し、そしてその混合物またはエマルジョンを非経口的（一般的には、皮下または筋肉内）に注射することによって、実施され得る。１回の注射あたり５０〜２００μｇの用量が、代表的に十分である。免疫化は、一般的に、生理的食塩水中のタンパク質の１回以上の注射によって、好ましくはフロイント不完全アジュバントを使用して、２〜６週間後にブーストされる。あるいは、本発明の目的がインビボの免役化と等しいと考えられる場合、当該分野で公知の方法を使用したインビトロの免疫化によって、抗体が作製され得る。ポリクローナル抗血清は、免役化された動物の血液をガラスまたはプラスチックの容器に採取し、その血液を２５℃で１時間インキュベートし、次いで４℃で２〜１８時間インキュベートすることによって得られる。この血清は、遠心分離（例えば、１，０００×ｇで１０分間）によって回収される。１回の採血あたり約２０〜５０ｍｌが、ウサギから得られ得る。
【０２０８】
Ｓｆ９（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞の作製は、米国特許第６，００４，５５２号によって開示され、本明細書中に参考として援用される。手短に言えば、ヒトＣＤ４０をコードする配列を、輸送ベクターを使用してバキュロウイルスに再結合（ｒｅｃｏｍｂｉｎｅ）させた。上記プラスミドを、野生型バキュロウイルスＤＮＡを用いてＳｆ９細胞に同時トランスフェクトした。バキュロウイルスに感染した組換えＳｆ９細胞を同定して、クローン的に精製した。
【０２０９】
好ましくは、上記抗体は、本質的にモノクローナル抗体である。モノクローナル抗体は特異性が高く、単一の抗原部位（すなわち、上記ＣＤ４０細胞表面抗原）に対して指向する。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対して指向する異なる抗体を代表的に包含する従来の（ポリクローナル）抗体の調製とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向する。修飾語句「モノクローナル」は、実質的に同質である抗体の集団（例えば、Ｂ細胞のクローンの集団によって作製される集団）から得られる場合の抗体の性質を示し、いずれかの特定の方法による抗体の作製を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ方法によって作製されても、組換えＤＮＡ方法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）によって作製されてもよい。「モノクローナル抗体」はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８；Ｍａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７；および米国特許第５，５１４，５４８号において記載される技術を使用したファージ抗体ライブラリーから単離され得る。
【０２１０】
「エピトープ」によって、抗体が作製され、そしてその抗体が結合する抗原分子の部分が意図される。エピトープは、直鎖状のアミノ酸残基（すなわち、エピトープ内の残基が、直鎖状様式で互いに連続して配置される）、非直鎖状のアミノ酸残基（本明細書において「非直鎖状エピトープ」といわれ；これらのエピトープは、連続的には配置されない）、または直鎖状アミノ酸残基と非直鎖状アミノ酸残基との両方を含み得る。
【０２１１】
モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９６の方法、またはその改変を使用して調製され得る。代表的には、マウスが、抗原を含む溶液を使用して免疫化される。免疫化は、生理的食塩水（好ましくは、フロイント完全アジュバントのようなアジュバント）中の抗原を含む溶液を混合または乳化し、そしてその混合物またはエマルジョンを非経口的に注射することによって実施され得る。当該分野において公知な任意の免疫化法が、本発明の抗体を得るために使用され得る。動物を免疫化した後、脾臓（そして必要に応じて、１または数個の大きなリンパ節）が回収され、そして単一の細胞に解離される。上記脾臓細胞は、目的の抗原でコーティングされたプレートまたはウェルに細胞懸濁液を適用することによって、スクリーニングされ得る。膜に結合された上記抗原に特異的な免疫グロブリンを発現するＢ細胞は、プレートに結合し、リンスで除かれない。得られたＢ細胞、または全ての解離された脾臓細胞は、次いでミエローマ細胞との融合が誘導されてハイブリドーマを形成し、そして選択培地中で培養される。得られた細胞は、連続希釈によってプレートされ、そして目的の抗原に特異的に結合する（かつ、無関係の抗原に結合しない）抗体の産生についてアッセイされる。選択されたモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を分泌（ｓｅｃｒｅｔｅ）するハイブリドーマは、次いでインビトロ（例えば、組織培養ボトルまたは中空繊維反応器において）、またはインビボ（例えば、マウスの腹水）のいずれかで培養される。
【０２１２】
本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体が、組換えＤＮＡ方法を使用して調製される場合、モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合し得るオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）を使用して容易に単離され、かつ配列決定される。本明細書におい記載されるハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好ましい供給源として機能する。一旦単離されると、上記ＤＮＡは、発現ベクター中に配置され得、次いでこの発現ベクターは、別に免疫グロブリンタンパク質を産生しない宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または骨髄腫細胞）にトランスフェクトされ、組換え宿主細胞においてモノクローナル抗体の合成を得る。抗体をコードする細菌のＤＮＡにおける組換え発現に関する概説の論文としては、Ｓｋｅｒｒａら（１９９３）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：２５６およびＰｈｉｃｋｔｈｕｎ（１９９２）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．１３０：１５１が挙げられる。ハイブリドーマの使用に代わるものとして、抗体は、米国特許第５，５４５，４０３号；同第５，５４５，４０５号；および同第５，９９８，１４４号（これらは、本明細書において参考として援用される）に開示されるように、ＣＨＯ細胞株のような細胞株において産生され得る。手短に言えば、上記細胞株は、それぞれ軽鎖および重鎖を発現し得るベクターを用いてトランスフェクトされる。別個のベクター上の２つのタンパク質をトランスフェクトすることによって、キメラ抗体が産生され得る。別の利点は、上記抗体の正しいグリコシル化である。
【０２１３】
いくつかの実施形態において、上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２抗体またはＣＨＩＲ−５．９抗体）またはその抗原結合フラグメントは、グルタミン合成をマーカーとして使用するＧＳ遺伝子発現系（Ｌｏｎｚａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｐｏｒｔｓｍｏｕｔｈ，Ｎｅｗ  Ｈａｍｐｓｈｉｒｅ）を使用してＣＨＯ細胞中で産生され得る。米国特許第５，１２２，４６４号；同第５，５９１，６３９号；同第５，６５８，７５９号；同第５，７７０，３５９号；同第５，８２７，７３９号；同第５，８７９，９３６号；同第５，８９１，６９３号；および同第５，９８１，２１６号もまた参照のこと；これらの内容は、その全体が参考として援用される。
【０２１４】
本明細書において使用される場合、用語「抗原エピトープ」は、抗ＣＤ４０モノクローナル抗体と免疫反応をし得る三次元の分子構造（直鎖状またはコンホメーションの構造のいずれか）をいう。抗原エピトープは、タンパク質、タンパク質フラグメント、ペプチド、炭水化物、脂質、および他の分子を含み得るが、本発明の目的のためには、最も一般的なタンパク質、短いオリゴペプチド、オリゴペプチドの模倣体（ｍｉｍｉｃ）（すなわち、ＣＤ４０抗原の抗体結合特性を模倣する有機化合物）、またはそれらの組み合わせである。適切なオリゴペプチド模倣体は、特に、ＰＣＴ出願ＵＳ  ９１／０４２８２に記載される。
【０２１５】
さらに、用語「抗体」は、本明細書において使用される場合、キメラ抗ＣＤ４０抗体を包含する。本発明の方法で使用するためのこのようなキメラ抗ＣＤ４０抗体は、抗ＣＤ４０モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはＣＨＩＲ−５．９の結合特性を有する。「キメラ」抗体によって、最も好ましくは組換えデオキシリボ核酸技術を使用して誘導され、そしてヒト（免疫学的に「関連した」種（例えば、チンパンジー）を含む）と非ヒトの両方の構成要素を含む抗体が意図される。したがって、上記キメラ抗体の定常領域は、最も好ましくは、天然のヒト抗体の定常領域と実質的に同一であり；上記キメラ抗体の可変領域は、最も好ましくは非ヒト供給源に由来し、そしてＣＤ４０細胞表面抗原に対して所望の抗原特異性を有する。上記非ヒト供給源は、ヒトＣＤ４０細胞表面抗原またはヒトＣＤ４０細胞表面抗原を含む物質に対する抗体を作製するために使用され得る任意の脊椎動物供給源であり得る。このような非ヒト供給源としては、げっ歯類（例えば、ウサギ、ラット、マウスなど；例えば、米国特許第４，８１６，５６７号（本明細書において、参考として援用される）を参照のこと）および非ヒト霊長類（例えば、旧世界サル、サルなど；例えば、米国特許第５，７５０，１０５号および同第５，７５６，０９６号（本明細書において、参考として援用される）を参照のこと）が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書において使用される場合、語句「免疫学的に活性」とは、キメラ抗ＣＤ４０抗体をいう際に使用される場合、ヒトＣＤ４０に結合するキメラ抗体を意味する。
【０２１６】
ヒト化抗ＣＤ４０抗体は、本発明の方法における使用に適切な、さらなる抗ＣＤ４０抗体を表す。「ヒト化」によって、非ヒト免疫グロブリン配列に由来する最小の配列を含む抗ＣＤ４０抗体の形態が意図される。大部分については、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリンであり（レシピエント抗体）、このヒト化抗体において、レシピエントの超可変領域（相補性決定領域またはＣＤＲとしても公知）からの残基は、非ヒト種（例えば、所望の特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類）の超可変領域に由来する残基によって置換される（ドナー抗体）。語句「相補性決定領域」とは、ネイティブな免疫グロブリン結合部位の天然のＦｖ領域の結合親和性および結合特異性を一緒に規定するアミノ酸配列をいう。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７；Ｋａｂａｔら（１９９１）米国保健省（Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）、ＮＩＨ公開番号９１−３２４２を参照のこと。語句「定常領域」とは、エフェクター機能を与える抗体分子の部分をいう。ヒト疾患の治療において使用するための非免疫原性抗体の作製に関する先行する研究において、マウスの定常領域は、ヒト定常領域によって置換された。この対象のヒト化抗体の定常領域は、ヒト免疫グロブリンに由来した。しかしながら、これらのヒト化抗体は、ヒトにおいて好ましくなく、かつ危険な可能性のある免疫応答を依然として誘発し、そして親和性が喪失した。本発明の方法において使用するためのヒト化抗ＣＤ４０抗体は、本明細書中に記載されたＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体およびＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体によって示される結合特性と類似した結合特性を有する。
【０２１７】
ヒト化は、本質的に、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者の方法（Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６）に従って、げっ歯類もしくは変異体げっ歯類のＣＤＲまたはげっ歯類もしくは変異体げっ歯類のＣＤＲ配列を、ヒト抗体の対応する配列と置換することによって実施され得る。米国特許第５，２２５，５３９号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号；および同第５，８５９，２０５号もまた参照のこと；これらは、本明細書において参考として援用される。いくつかの場合において、ヒト免疫グロブリンの１以上の可変領域のフレームワーク領域内の残基は、対応する非ヒト残基によって置換される（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号；および同第６，１８０，３７０号を参照のこと）。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体においては見出されない残基を含み得る。これらの改変は、抗体性能をさらに洗練させるため（例えば、所望の親和性を得るため）になされる。一般的に、上記ヒト化抗体は、少なくとも１つの、そして代表的には２つの可変領域の全てを実質的に含み、この抗体において、非ヒト免疫グロブリンに対応する超可変領域の全てまたは実質的に全て、ならびに上記フレームワーク領域の全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン配列のものである。上記ヒト化抗体はまた、必要に応じて、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）（代表的には、ヒト免疫グロブリンの定常領域）の少なくとも一部分を含む。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３３１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９；およびＰｒｅｓｔａ（１９９２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６を参照のこと；これらは、本明細書において参考として援用される。従って、このような「ヒト化」抗体は、実質的に決してインタクトでないヒト可変領域が、非ヒト種からの対応する配列によって置換されている抗体を包含し得る。実際には、ヒト化抗体は、代表的に、いくつかのＣＤＲ残基およびおそらくいくつかのフレームワーク残基が、げっ歯類抗体におけるアナログ部位からの残基によって置換されるヒト抗体である。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号；同第５，８５９，２０５号を参照のこと。米国特許第６，１８０，３７０号および国際公開第０１／２７１６０号もまた参照のこと。ここで、ヒト化抗体および所定の抗原に対して改善された親和性を有するヒト化抗体を作製するための技術が、開示される。
【０２１８】
用語抗ＣＤ４０抗体によって、不活化された内因性免疫グロブリン（Ｉｇ）座によって特徴付けられる非ヒト哺乳動物宿主（より具体的には、トランスジェニックマウス）において産生される異種抗ＣＤ４０抗体または改変抗ＣＤ４０抗体もまた包含される。このようなトランスジェニック動物において、宿主免疫グロブリンの軽鎖サブユニットおよび重鎖サブユニットの発現に対して適切な内因性遺伝子は、非機能的になり、アナログのヒト免疫グロブリン座で置換される。これらのトランスジェニック動物は、軽鎖または重鎖の宿主の免疫グロブリンサブユニットが実質的にない場合に、ヒト抗体を産生する。例えば、米国特許第５，８７７，３９７号および同第５，９３９，５９８号（本明細書において参考として援用される）を参照のこと。
【０２１９】
好ましくは、トランスジェニックマウスを免疫化することによって、ＣＤ４０に対する完全ヒト抗体が得られる。このようなマウスの１つは、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）技術（Ａｂｇｅｎｉｘ；Ｆｒｅｍｏｎｔ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を使用して得られ、米国特許第６，０７５，１８１号、同第６，０９１，００１号および同第６，１１４，５９８号（これらの全ては、本明細書において参考として援用される）に開示される。本明細書において開示される抗体を作製するために、ヒトＩｇＧ１重鎖遺伝子座およびヒトκ軽鎖遺伝子座についてのトランスジェニックマウスが、ヒトＣＤ４０を発現するＳｆ９細胞で免疫化され得る。マウスはまた、他のアイソタイプについてのトランスジェニックであってもよい。本発明の方法において有用な完全ヒト抗体は、ＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体およびＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体によって示される結合特性と類似の結合特性によって特徴付けられる。
【０２２０】
抗体の適切な抗原結合フラグメントは、全長抗体の一部分（一般的には、抗原結合領域またはその可変領域）を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、およびＦｖフラグメント、ならびに単鎖抗体分子が挙げられるが、これらに限定されない。「Ｆａｂ」によって、軽鎖と重鎖の一部とからなる免疫グロブリンの一価の抗原結合フラグメントが意図される。Ｆ（ａｂ’）２によって、両方の軽鎖と両方の重鎖の一部を含む免疫グロブリンの二価の抗原結合フラグメントが意図される。「単鎖Ｆｖ」または「ｓＦｖ」抗体フラグメントによって、抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含み、これらのドメインが一本のポリペプチド鎖中に提示されるフラグメントが意図される。例えば、米国特許第４，９４６，７７８号、同第５，２６０，２０３号、同第５，４５５，０３０号および同第５，８５６，４５６号（これらは、本明細書において参考として援用される）を参照のこと。一般的に、上記Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に、ｓＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にするためのポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓＦｖの概要については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（１９９４）、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、第１１３巻、ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ（編）（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、ｐｐ．２６９−３１５を参照のこと。
【０２２１】
抗体または抗体フラグメントは、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４（１９９０）および米国特許第５，５１４，５４８号において記載される技術を使用して作製された抗体ファージライブラリーから単離され得る。Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８およびＭａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７は、それぞれ、ファージライブラリーを使用したマウス抗体およびヒト抗体の単離を記載する。以下の刊行物は、鎖シャフリングによる高親和性（ｎＭ範囲）のヒト抗体の作製（Ｍａｒｋｓら（１９９２）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３）、ならびに非常に広範なファージライブラリーを構築するためのストラテジーとしての、組み合わせ感染およびインビボの再組換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら（１９９３）Ｎｕｃｌｅｉｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２１：２２６５−２２６６）を記載する。したがって、これらの技術は、モノクローナル抗体を単離するための伝統的なモノクローナル抗体のハイブリドーマ技術に対する実行可能な代替案である。
【０２２２】
種々の技術が、抗体フラグメントの作製のために開発されている。伝統的には、これらのフラグメントは、インタクトな抗体のタンパク質分解性消化を介して得られた（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏら（１９９２）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４：１０７−１１７（１９９２）およびＢｒｅｎｎａｎら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１を参照のこと）。しかし、これらのフラグメントは、現在は、組換え宿主細胞によって直接的に産生され得る。例えば、この抗体フラグメントは、上記に記載の抗体ファージライブラリーから単離され得る。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収され得、化学的に結合されてＦ（ａｂ’）２フラグメントを形成する（Ｃａｒｔｅｒら（１９９２）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７）。別のアプローチに従って、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、組換え宿主細胞の培養物から直接単離され得る。抗体フラグメントを作製するための他の技術は、当業者には明らかである。
【０２２３】
本発明の方法において有用な抗体としては、非ＣＤＲ領域において異なる本明細書中に開示されたＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体およびＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体のようなアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体；ならびに１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換を有する抗体が挙げられる。本発明はまた、免疫化された（ヒト化）アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を包含し、この抗体は、例えば、国際公開第９８／５２９７６号および同第００３４３１７号（本明細書において参考として援用される）に記載されたとおりに作製され得る。この様式において、本発明の方法を実施するために有用な抗体内の残基が改変されて、その結合特異性および生物学的活性を保持しながら、抗体を、ヒトに対して免疫原性がないか、または免疫原性が低いようにする。ここで、このような活性は、本明細書の他で記述されるアッセイによって測定される。特許請求の範囲の範囲内には、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはそのフラグメントを含む融合タンパク質もまた包含され、この融合タンパク質は、当該分野で公知のように、合成されても、対応するポリヌクレオチドベクターから発現されてもよい。このような融合タンパク質は、以下に記述される抗体の結合体化への参照とともに記載される。
【０２２４】
本発明の方法の実施において有用な抗体は、例えば、欧州特許出願公開第０  ９８３  ３０３  Ａ１号、国際公開第００／３４３１７号および同第９８／５２９７６号（本明細書において参考として援用される）において記載される方法を使用して作製される配列のバリエーションを有し得る。例えば、ＣＤＲ内の配列は、抗体をＭＨＣクラスＩＩに結合させ、好ましくないヘルパーＴ細胞応答を誘発し得ることが示されている。保存的置換は、上記抗体の結合活性は保持させるが、好ましくないＴ細胞応答を誘発するその能力を失わせ得る。任意のこのような保存的置換または非保存的置換は、当該分野で認められた方法（例えば、本明細書中で他の部分に記載される方法）を使用して作製され得、そして生じた抗体は、本発明の範囲内である。この改変抗体は、本明細書において記載された方法を使用して、通常、アンタゴニスト活性、親和性、および特異性について試験され得る。
【０２２５】
上記の方法のいずれか、または本明細書中に開示されない任意の他の方法によって作製されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、少なくとも１つの以下の生物学的活性を有する場合に、本発明の範囲内に納まる：Ｔ細胞によって刺激される正常なヒト末梢Ｂ細胞による免疫グロブリン分泌の阻害；ジャーカットＴ細胞によって刺激される正常なヒト末梢Ｂ細胞の増殖阻害；ＣＤ４０Ｌを発現する細胞または可溶性ＣＤ４０によって刺激される正常なヒト末梢Ｂ細胞の増殖阻害；および以下に記載されるような悪性のヒトＢ細胞の増殖阻害。これらのアッセイは、同時継続中の仮出願（いずれも、発明の名称「Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４０  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ
Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ」であり、それぞれ、２００３年１１月４日、２００３年１１月２６日、および２００４年４月２７日出願、割り当てられた米国特許出願第６０／５１７，３３７号（代理人事件整理番号：ＰＰ２０１０７．００１（０３５７８４／２５８４４２））、同第６０／５２５，５７９号（代理人事件整理番号：ＰＰ２０１０７．００２（０３５７８４／２７１５２５））、および同第６０／５６５，７１０号（代理人事件整理番号：ＰＰ２０１０７．００３（０３５７８４／２７７２１４））において記載されるように実施され得る。これらの特許文献の各々の内容は、その全体が、本明細書中に参考として援用される。Ｓｃｈｕｌｔｚｅら（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９２：８２００−８２０４；Ｄｅｎｔｏｎら（１９９８）Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２：６−１５；Ｅｖａｎｓら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：６８８−６９７；Ｎｏｅｌｌｅ（１９９８）Ａｇｅｎｔｓ  Ａｃｔｉｏｎｓ  Ｓｕｐｐｌ．４９：１７−２２；Ｌｅｄｅｒｍａｎら（１９９６）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．３：７７−８６；Ｃｏｌｉｇａｎら（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３：１２；Ｋｗｅｋｋｅｂｏｏｍら（１９９３）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７９：４３９−４４４；ならびに米国特許第５，６７４，４９２号および同第５，８４７，０８２号（本明細書において参考として援用される）において記載されるアッセイもまた参照のこと。
【０２２６】
本明細書において同定されるＣＤ４０抗原エピトープに特異的なアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を検出するための代表的なアッセイは、「競合的結合アッセイ」である。競合的結合アッセイは、そのアッセイにおいて、未知のものが検出されて、特異的な抗体に対する標識された既知のリガンドの結合を阻害するその能力によって定量される血清学的アッセイである。これはまた、競合的阻害アッセイともいわれる。代表的な競合的結合アッセイにおいて、標識されたＣＤ４０ポリペプチドは、例えば、本発明のモノクローナル抗体の１つ以上のエピトープに対して惹起されたモノクローナル抗体と組み合わせて、サンプル中の候補抗体によって沈殿される。目的のエピトープと特異的に反応する抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０タンパク質または目的のＣＤ４０タンパク質の特定のエピトープを含むタンパク質のフラグメントに対して調製された一連の抗体をスクリーニングすることによって同定され得る。例えば、ヒトＣＤ４０について、目的のエピトープとしては、図４Ｂ（配列番号１０）に記載されたヒトＣＤ４０の短いアイソフォーム（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿６９０５９３を参照のこと）（図４Ａに記載される配列（配列番号９；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＭ＿１５２８５４もまた参照のこと）によってコードされる）、もしくは図４Ｄ（配列番号１２）に記載されたヒトＣＤ４０の長いアイソフォーム（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＣＡＡ４３０４５およびＮＰ＿００１２４１を参照のこと）（図４Ｃに記載される配列（配列番号１１；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｘ６０５９２およびＮＭ＿００１２５０もまた参照のこと）によってコードされる）の直鎖状アミノ酸残基および／または非直鎖状アミノ酸残基を含むエピトープが挙げられる。あるいは、以前に同定された適切なアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を用いた競合的結合アッセイは、以前に同定された抗体に匹敵するモノクローナル抗体を選択するために使用され得る。
【０２２７】
任意の以前に記載されたアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）は、本発明の方法において使用される前に結合体化され得る。結合体化された抗体を作製するための方法は、当該分野で公知である。従って、上記抗ＣＤ４０抗体は、間接的標識または間接的標識アプローチを使用して標識され得る。「間接的標識」または「間接的標識アプローチ」によって、キレート剤は抗体に共有結合され、そして少なくとも１つの放射性核種が、キレート剤にいれられることが意図される。例えば、ＳｒｉｖａｓｔａｖａおよびＭｅａｓｅ（１９９１）Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏ．１８：５８９−６０３（本明細書中に参考として援用される）に記載されるキレート剤および放射性核種を参照のこと。適切な標識としては、発蛍光団、発色団、放射活性原子（特に、３２Ｐおよび１２５Ｉ）、高電子密度試薬、酵素、および特異的結合パートナーを有するリガンドが挙げられる。酵素は、代表的に、それらの活性によって検出される。例えば、西洋わさびペルオキシダーゼは、通常、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を青色色素に変換する能力によって検出され、分光光度計で定量可能である。「特異的結合パートナー」とは、例えば、抗原およびその特異的なモノクローナル抗体の場合のように、高い特異性でリガンド分子に結合し得るタンパク質をいう。他の特異的な結合パートナーとしては、ビオチンとアビジンまたはストレプトアビジン、ＩｇＧとプロテインＡ、および当該分野で公知の多くのレセプター−リガンド対が挙げられる。同じ標識は１または数種の異なる様式において機能し得るので、上記の説明は、種々の標識を別個のクラスに分類することを意味しないことが理解されるべきである。例えば、１２５Ｉは、放射活性標識としてか、または高電子密度試薬として機能し得る。ＨＲＰは、酵素としてか、またはｍＡｂに対する抗原として機能し得る。さらに、所望の効果のために種々の標識を組み合わせることもできる。例えば、ｍＡｂおよびアビジンもまた、本発明の実施において標識を必要とする：従って、ビオチンでｍＡｂを標識し、１２５Ｉで標識したアビジンまたはＨＰＲで標識した抗ビオチンｍＡｂを用いて、その存在を検出し得る。他の交換および可能性は、当業者には容易に明らかであり、本発明の範囲内の等価物として考えられる。
【０２２８】
あるいは、抗ＣＤ４０抗体は、「直接的標識」または「直接的標識アプローチ」を使用して標識され得、放射性核種は、抗体に対して（代表的には、アミノ酸残基を介して）直接的に共有結合される。好ましい放射性核種は、ＳｒｉｖａｓｔａｖａおよびＭｅａｓｅ（１９９１）上述に提供される。間接的標識アプローチは、特に好まれる。例えば、リンカーが抗体に対して放射活性標識を結合するために使用される、国際公開番号ＷＯ  ００／５２０３１および同ＷＯ  ００／５２４７３、；および米国特許第６，０１５，５４２号に記載される抗体の標識された形態（本明細書中に参考として援用される）も参照のこと。
【０２２９】
さらに、抗体（またはそのフラグメント）は、治療的部分（例えば、細胞毒、治療因子、または放射活性金属イオンもしくは放射性同位体）に対して結合体化され得る。細胞毒または細胞毒性因子としては、細胞に有害な任意の因子が挙げられる。例としては、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムブロマイド、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトザントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、糖質コルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、ならびにそれらのアナログまたはホモログが挙げられる。治療因子としては、代謝拮抗物質（例えば、フルダラビン、２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン）、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、およびシス−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前のアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ））、および有糸分裂阻害剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）が挙げられるが、これらに限定されない。放射性同位体としては、Ｉ−１３１、Ｉ−１２３、Ｉ−１２５、Ｙ−９０、Ｒｅ−１８８、Ｒｅ−１８６、Ａｔ−２１１、Ｃｕ−６７、Ｂｉ−２１２、Ｂｉ−２１３、Ｐｄ−１０９、Ｔｃ−９９、Ｉｎ−１１１などが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の結合体は、所与の生物学的反応を修飾するために使用され得；その薬物部分は、伝統的な化学的治療因子に限定されるものとして解釈されるべきではない。例えば、薬物部分は、所望の生物学的活性を有するタンパク質またはポリペプチドであり得る。例えば、このようなタンパク質としては、毒素（例えば、アブリン、リシンＡ、シュードモナス外毒素またはジフテリア毒素）；タンパク質（例えば、腫瘍壊死因子、インターフェロン−α、インターフェロン−β、神経発育因子、血小板由来成長因子、組織プラスミノゲン賦活剤）；または例えば、リンホカイン、インターロイキン−１（「ＩＬ−１」）、インターロイキン−２（「ＩＬ−２」）、インターロイキン−６（「ＩＬ−６」）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（「ＧＭ−ＣＳＦ」）、顆粒球コロニー刺激因子（「Ｇ−ＣＳＦ」）、もしくは他の成長因子のような生物学的反応修飾物質が挙げられる。
【０２３０】
抗体に対するこのような治療部分を結合体化するための技術は、周知である。例えば、Ａｒｎｏｎら（１９８５）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙの「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」，Ｒｅｉｓｆｅｌｄら（編）（Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．），ｐｐ．２４３−２５６；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら（編）（１９８７），Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙの「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」，Ｒｏｂｉｎｓｏｎら（編）（第２版；Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．），ｐｐ．６２３−６５３；Ｔｈｏｒｐｅ（１９８５）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ’８４の「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ」：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａら（編）ｐｐ．４７５−５０６（Ｅｄｉｔｒｉｃｅ  Ｋｕｒｔｉｓ，Ｍｉｌａｎｏ，Ｉｔａｌｙ，１９８５）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙの「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」，Ｂａｌｄｗｉｎら（編）（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８５），ｐｐ．３０３−３１６；およびＴｈｏｒｐｅら（１９８２）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９−１５８を参照のこと。
【０２３１】
あるいは、抗体は、第２の抗体に結合体化されて、米国特許第４，６７６，９８０号に記載されるような抗体ヘテロ結合体（ｈｅｔｅｒｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）を形成し得る。さらに、リンカーが、上記標識と本発明の抗体との間に使用され得る（例えば、米国特許第４，８３１，１７５号を参照のこと）。抗体またはその抗原結合フラグメントは、放射性のヨウ素、放射性のインジウム、放射性のイットリウム、または当該分野で公知である他の放射性粒子によって直接的に標識され得る（米国特許第５，５９５，７２１号）。処置は、同日かまたは異なる日に、いずれかの順序で、同時または引き続いて投与される結合体化抗体および非結合体化抗体を用いた、処置の組み合わせからなり得る（ＷＯ  ００／５２０３１およびＷＯ  ００／５２４７３）。
【０２３２】
（アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の生物学的に活性な改変体）
本発明の方法において有用な薬学的組成物は、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の生物学的に活性な改変体を含有し得る。このような改変体は、この改変体ポリペプチドを含有する薬学的組成物が、被検体に対して投与される場合にネイティブなポリペプチドを含有する薬学的組成物と同じ治療効果を有するように、ネイティブのポリペプチドの所望の生物学的活性を維持するべきである。すなわち、改変抗ＣＤ４０抗体は、ネイティブなアンタゴニスト抗体（例えば、それぞれ、ハイブリドーマ細胞株５．９またはハイブリドーマ細胞株１２．１２によって発現されるようなＣＨＩＲ−５．９またはＣＨＩＲ−１２．１２）において観察されるものと同様の様式において、上記薬学的組成物中の治療上活性な成分として機能する。方法は、改変抗ＣＤ４０抗体が所望の生物学的活性を維持し、したがって薬学的組成物中の治療上活性な成分として機能するか否かを決定するために当該分野において利用可能である。抗体改変体の生物学的活性は、ネイティブなアンタゴニスト抗体の活性を測定するために、具体的に設計されたアッセイを使用して測定され得、このアッセイとしては、本発明に記載されるアッセイが挙げられる。アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の生物学的に活性な適切な改変体は、親抗体（すなわち、親アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体）の所望の結合特性を維持する。抗体改変体を作製するための方法は、当該分野において一般的に利用可能である。
【０２３３】
例えば、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、本明細書において記載されるＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体またはＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体）のアミノ酸配列の改変体は、ＩＬ−２について本明細書中に上記される変異誘発およびヌクレオチド配列変更についての方法を使用して調製され得る。例えば、以下を参照のこと：ＷａｌｋｅｒおよびＧａａｓｔｒａ（編）（１９８３）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；Ｋｕｎｋｅｌ（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：４８８−４９２；Ｋｕｎｋｅｌら（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ
Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５４：３６７−３８２；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；米国特許第４，８７３，１９２号；およびこれらにおいて引用される参考文献（これらは、本明細書において参考として援用される）。目的のポリペプチドの生物学的活性に影響しない適切なアミノ酸置換基に関しての指針は、Ｄａｙｈｏｆｆら（１９７８）、Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）（本明細書において参考として援用される）のモデルにおいて見出され得る。１つのアミノ酸を類似の特性を有する別のアミノ酸で交換するような、保存的置換が好まれ得る。保存的置換の例としては、Ｇｌｙ⇔Ａｌａ、Ｖａｌ⇔Ｉｌｅ⇔Ｌｅｕ、Ａｓｐ⇔Ｇｌｕ、Ｌｙｓ⇔Ａｒｇ、Ａｓｎ⇔Ｇｌｎ、およびＰｈｅ⇔Ｔｒｐ⇔Ｔｙｒが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２３４】
ＩＬ−２の改変体と同様に、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の改変体は、改変体が所望の活性（すなわち、類似の結合親和性）を保有し続け、そしてヒト細胞の表面上に発現されたヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合することができ、そして有意なアゴニスト活性を有さないが、ヒトＣＤ４０発現細胞上のＣＤ４０抗原に結合された場合に、アンタゴニスト活性を示すように作製される。ＩＬ−２と同様に、上記改変ＣＤ４０ポリペプチドをコードするＤＮＡ中に作製された任意の変異は、リーディングフレームの外の配列に位置してはならず、そして好ましくは、ｍＲＮＡ二次構造を生じ得る相補的領域を作製しない。欧州特許出願公開第７５，４４４号を参照のこと。
【０２３５】
好ましくは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の改変体は、比較の基礎として機能する参照ポリペプチド分子（例えば、本明細書において記載されるＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体またはＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体のような参照アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体分子）のアミノ酸配列に対してか、あるいは参照抗体分子のより短い部分に対して、少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９０％〜９５％以上の配列同一性、そして最も好ましくは少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。より好ましくは、上記分子は、少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を共有する。
【０２３６】
本発明の目的のために、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体についての配列同一性％は、ＩＬ−２について記載される様式で決定される。この様式では、アフィンギャップサーチを使用したＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎホモロジーサーチアルゴリズム（１２のギャップオープンペナルティおよび２のギャップ伸長ペナルティ、６２のＢＬＯＳＵＭマトリックスを使用）を使用して、配列同一性％が決定される。改変体は、例えば、わずか１〜１５アミノ酸残基、わずか１〜１０アミノ酸残基（例えば、６〜１０）、わずか５、わずか４、３、２、またはさらに１アミノ酸残基だけ上記参照アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体と異なる。
【０２３７】
本明細書中に予め上記されるように、任意の２つのアミノ酸配列の最適なアライメントに関して、上記改変アミノ酸配列の隣接するセグメントは、上記参照アミノ酸配列（例えば、抗体ＣＨＩＲ１２．１２および抗体ＣＨＩＲ−５．９）について、アミノ酸残基の付加またはアミノ酸残基の欠失を有し得る。上記参照アミノ酸配列を比較するために使用される隣接するセグメントは、少なくとも２０個の連続するアミノ酸残基を含み、そして３０個、４０個、５０個またはそれ以上のアミノ酸残基であり得る。保存的な残基置換またはギャップに関連する配列同一性に対する補正が、なされ得る（Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎホモロジーサーチアルゴリズムを参照のこと）。
【０２３８】
ＩＬ−２と同様に、特に、悪性Ｂ細胞上のＣＤ４０抗原に結合された場合、ＣＤ４０を特異的に結合し、かつアンタゴニスト活性を保持し得るポリペプチドの正確な化学的構造は、多くの因子に依存する。イオン化可能なアミノ基およびカルボニル基が分子中に存在する場合、特定のポリペプチドは、酸性塩もしくは塩基性塩として、または中性形態で得られ得る。適切な環境状態に配置された場合に、その生物学的活性を保持するこのような調製物の全ては、本明細書において使用されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の定義の中に含まれる。さらに、上記ポリペプチドの一次アミノ酸配列は、糖部分を使用した誘導体化（グリコシル化）または他の補助的な分子（例えば、脂質、リン酸、アセチル基など）によって増加され得る。上記ポリペプチドの一次アミノ酸配列は、糖類との結合体化によってもまた増加され得る。このような増加の特定の局面は、産生する宿主の翻訳後の処理システムを通じて達成され；他のこのような改変も、インビトロで導入され得る。とにかく、このような改変は、上記抗ＣＤ４０抗体の結合特性（アンタゴニスト活性を含む）が破壊されない限り、本明細書において使用される抗ＣＤ４０抗体の定義の中に含まれる。このような改変体は、種々のアッセイにおいて、上記ポリペプチドの活性を増強させるか、または弱めるかのいずれかによって、その活性に量的または質的に影響し得ることが予想される。さらに、上記鎖中の個々のアミノ酸残基は、酸化、還元、または他の誘導体化によって改変され得、そして上記ポリペプチドは、活性を保持するフラグメントを得るために切断され得る。無修飾抗体の所望の活性を破壊しないこのような変更は、本明細書において使用される目的の抗ＣＤ４０抗体の定義から上記ポリペプチド配列を除かない。
【０２３９】
予め上記されるように、当該分野は、ポリペプチド改変体の調製および使用に関する実質的な指針を提供する。抗体改変体の調製において、当業者は、ネイティブのタンパク質のヌクレオチドまたはアミノ酸配列に対するどの修飾が、本発明の方法において使用される薬学的組成物の治療上活性な成分として使用するために適切である改変体を生じるかを容易に決定し得る。
【０２４０】
（アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の薬学的処方物）
本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、治療上有効である濃度において投与されて、慢性リンパ性白血病を防止または処置する。この目的を達成するために、上記抗体は、当該分野で公知の種々の受容可能な賦形剤を使用して処方され得る。代表的には、上記抗体は、例えば、静脈内注射、腹腔内注射、または皮下注射のいずれかの注射によって投与される。この投与を達成するための方法は、当業者に公知である。局所投与もしくは経口投与され得る組成物、または粘膜を通過して透過し得る組成物を得ることもまた可能であり得る。
【０２４１】
本発明の薬学的組成物は、意図される投与の経路と適合するように処方される。可能な投与の経路の例としては、非経口投与（例えば、静脈内（ＩＶ）、筋肉内（ＩＭ）、皮内、皮下（ＳＣ）、または注入）、経口投与および肺投与（例えば、吸入）、鼻投与、経皮（局所）投与、経粘膜投与ならびに直腸投与が挙げられる。非経口適用、皮内適用、もしくは皮下適用に使用される溶液または懸濁液は、以下の成分を含み得る：滅菌希釈液（例えば、注射用水）、生理的食塩溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒；抗菌剤（例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン）；抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム）；キレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸）；緩衝剤（例えば、酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩、および張度調節のための薬剤（例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロース））。ｐＨは、酸または塩基（例えば、塩酸または水酸化ナトリウム）で調節され得る。この非経口調製物は、アンプル、使い捨てシリンジ、またはガラス製もしくはプラスチック製の複数用量バイアルの中に封じ込められ得る。
【０２４２】
上記抗体は、代表的には、標準的技術によって、薬学的に受容可能な緩衝剤（例えば、滅菌生理的食塩水、滅菌緩衝水、プロピレングリコール、前述のものの組み合わせなど）内に提供される。上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）は、別個の薬学的組成物中に処方されても、同時投与のためにＩＬ−２もしくはその生物学的に活性な改変体を含む単一の薬学的組成物内に処方されてもよい。非経口的に投与可能な薬剤を調製するための方法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版；Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，１９９０）（本明細書において参考として援用される）において記載される。例えば、本発明の方法において使用するために適切な安定化抗体の薬学的処方物を記載するＷＯ  ９８／５６４１８もまた参照のこと。
【０２４３】
本発明の方法において使用するための、本明細書中に記載される薬学的組成物中に存在する上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、ネイティブであっても組換え技術によって得られてもよく、そして哺乳動物の供給源（例えば、マウス、ラット、ウサギ、霊長類、ブタ、およびヒト）のような任意の供給源由来であってもよい。好ましくは、このようなポリペプチドは、ヒトの供給源に由来し、そしてより好ましくは組換えの、ハイブリドーマ細胞株から得たヒトタンパク質である。
【０２４４】
治療上活性な成分として本明細書中に記載される結合特性を有するアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を含有する、あらゆる薬学的組成物が、本発明の方法において使用され得る。従って、１種以上の本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を含有する液体、凍結乾燥または噴霧乾燥した組成物は、本発明の方法に従う、その後の被験体への投与のために、水系もしくは非水系の溶液または懸濁液として調製され得る。これらの組成物の各々は、治療的または予防的に活性な成分として、少なくとも１種の本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を含有する。「治療的または予防的に活性な成分」により、抗ＣＤ４０抗体が、組成物中に特異的に組み込まれて、薬学的組成物が被験体に投与されるときに、この被験体内の疾患もしくは状態の、処置、予防または診断に関して、所望の治療的または予防的な応答をもたらすことが意図される。好ましくは、薬学的組成物は、適切な安定化剤、充填剤、またはこれらの両方を含有し、調製および保存の間の、タンパク質の安定性および生物学的活性の喪失に伴う問題を最小限にする。
【０２４５】
処方用物質（ｆｏｒｍｕｌａｎｔ）が、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を含有する薬学的組成物に添加され得る。これらの処方用物質としては、油、ポリマー、ビタミン、炭水化物、アミン酸（ａｍｉｎｅ  ａｃｉｄ）、塩、緩衝液、アルブミン、界面活性剤、または充填剤が挙げられ得るがこれらに限定されない。好ましくは、炭水化物としては、糖または糖アルコール（例えば、単糖類、二糖類、もしくは多糖類、または水溶性グリカン）が挙げられる。糖類またはグリカンとしては、フルクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、スクロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、αおよびβシクロデキストリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、ならびにカルボキシメチルセルロース、またはこれらの混合物が挙げられ得る。「糖アルコール」は、ヒドロキシル基を有するＣ４〜Ｃ８炭化水素として定義され、そして、糖アルコールとしては、ガラクチトール、イノシトール、マンニトール、キシリトール、ソルビトール、グリセロールおよびアラビトールが挙げられる。これらの糖または糖アルコールは、個別または組み合わせで使用され得る。糖または糖アルコールの濃度は、１．０％ｗ／ｖと７％ｗ／ｖとの間であり、より好ましくは、２．０％ｗ／ｖと６．０％ｗ／ｖとの間である。好ましくは、アミノ酸としては、左旋（Ｌ）形態のカルニチン、アルギニンおよびベタインが挙げられる；しかし、他のアミノ酸も添加され得る。好ましいポリマーとしては、２，０００と３，０００との間の平均分子量を有するポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、または、３，０００と５，０００との間の平均分子量を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられる。処方物中に添加され得る界面活性剤としては、欧州特許第２７０，７９９号および同第２６８，１１０号に示される。
【０２４６】
さらに、抗体は、例えば、その循環半減期を増加させるために、ポリマーへの共有結合によって化学修飾され得る。好ましいポリマー、およびこのポリマーをペプチドに結合させる方法は、米国特許第４，７６６，１０６号；同第４，１７９，３３７号；同第４，４９５，２８５号；および同第４，６０９，５４６号（これらは、全て、その全体が本明細書中に参考として援用される）に示される。好ましいポリマーは、ポリオキシエチル化ポリオールおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。ＰＥＧは、室温で水溶性であり、一般式：Ｒ（Ｏ−−ＣＨ２−−ＣＨ２）ｎＯ−−Ｒを有する。この式において、Ｒは、水素、またはアルキル基もしくはアルカノール基のような保護基であり得る。好ましくは、この保護基は、１個と８個の間の炭素を有し、より好ましくは、この保護基はメチルである。記号ｎは、正の整数であり、好ましくは、１と１，０００との間、より好ましくは、２と５００との間である。ＰＥＧは、１，０００と４０，０００との間、より好ましくは、２，０００と２０，０００との間、最も好ましくは、３，０００と１２，０００との間の好ましい平均分子量を有する。好ましくは、ＰＥＧは、少なくとも１つのヒドロキシ基を有し、より好ましくは、それは、末端のヒドロキシ基である。好ましくはインヒビター上の遊離アミノ基と反応するように活性化されるのは、このヒドロキシ基である。しかし、反応基の型および量は、本発明の共有結合化ＰＥＧ／抗体を達成するために変動し得ることが理解される。
【０２４７】
水溶性のポリオキシエチル化ポリオールもまた、本発明において有用である。これらとしては、ポリオキシエチル化ソルビトール、ポリオキシエチル化グルコース、ポリオキシエチル化グリセロール（ＰＯＧ）などが挙げられる。ＰＯＧが好ましい。１つの理由は、ポリオキシエチル化グリセロールのグリセロール骨格が、例えば、動物およびヒトのモノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリドにおいて天然に存在するものと同じ骨格であるからである。従って、この分枝形成は、必ずしも身体において外来因子として認識されない。ＰＯＧは、ＰＥＧと同じ範囲の好ましい分子量を有する。ＰＯＧの構造は、Ｋｎａｕｆら（１９８８）Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２６３：１５０６４−１５０７０に示され、ＰＯＧ／ＩＬ−２結合体の考察については、米国特許第４，７６６，１０６号に見られ、これらは、いずれも、その全体が本明細書により参考として援用される。
【０２４８】
循環半減期を増加するための別の薬物送達系は、リポソームである。リポソーム送達系を調製する方法は、Ｇａｂｉｚｏｎら（１９８２）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４２：４７３４；Ｃａｆｉｓｏ（１９８１）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  ６４９：１２９；およびＳｚｏｋａ（１９８０）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｅｎｇ．９：４６７において議論されている。他の薬物送達系が当該分野で公知であり、例えば、Ｐｏｚｎａｎｓｋｙら（１９８０）Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｒ．Ｌ．Ｊｕｌｉａｎｏ編，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｎ．Ｙ．）ｐｐ．２５３−３１５；Ｐｏｚｎａｎｓｋｙ（１９８４）Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｖｓ  ３６：２７７に記載される。
【０２４９】
薬学的組成物に組み込まれる処方用物質は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの安定性のために提供されるべきである。すなわち、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、その物理的および／または化学的安定性を保持し、そして、所望の生物学的活性（すなわち、本明細書において上で定義される１種以上のアンタゴニスト活性（Ｔ細胞により刺激された正常なヒト末梢Ｂ細胞による免疫グロブリン分泌の阻害；Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞により刺激された正常なヒト末梢Ｂ細胞の生存および／または増殖の阻害；ＣＤ４０Ｌ発現細胞もしくは可溶性ＣＤ４０リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）により刺激された正常ヒト末梢Ｂ細胞の生存および／または増殖の阻害；ｓＣＤ４０Ｌもしくは固相ＣＤ４０Ｌにより刺激された、あらゆる細胞における「生き残った」抗アポトーシス細胞内シグナルの阻害；ｓＣＤ４０Ｌまたは固相ＣＤ４０Ｌとのライゲーションに対する任意の細胞におけるＣＤ４０シグナル伝達の阻害；ならびに、本明細書中の他の部分で言及した、ヒト悪性Ｂ細胞の増殖の阻害が挙げられるがこれらに限定されない））を有するべきである。
【０２５０】
タンパク質の安定性をモニターするための方法は、当該分野で周知である。例えば、Ｊｏｎｅｓ（１９９３）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．１０：２９−９０；Ｌｅｅ編（１９９１）Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；および本明細書中、以下に開示される安定性アッセイを参照のこと。一般に、タンパク質の安定性は、特定の時間にわたって、選択された温度において測定される。好ましい実施形態において、安定な抗体の薬学的処方物は、室温（約２５℃）において、少なくとも１ヶ月、少なくとも３ヶ月、もしくは少なくとも６ヶ月保存した場合に、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの安定性を提供し、そして／あるいは、２〜８℃において、少なくとも６ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１８ヶ月、少なくとも２４ヶ月、安定である。
【０２５１】
薬学的組成物中に処方される場合、抗体のようなタンパク質は、その薬学的組成物中で、沈殿、凝集および／または変性の、目に見える徴候（すなわち、変色または透明度の喪失）または（例えば、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）またはＵＶ光散乱を使用して）測定可能な徴候を示さない場合に、所定の時点において、その物理的安定性を保持すると考えられる。化学的安定性に関して、薬学的組成物中に処方される場合、抗体のようなタンパク質は、その薬学的組成物中で、化学的安定性の測定が、そのタンパク質（すなわち、抗体）が、目的の生物学的活性を保持することを暗示する場合に、所定の時点において、その化学的安定性を保持すると考えられる。化学的安定性の変化をモニターするための方法は、当該分野で周知であり、この方法としては、例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ＳＥＣおよび／またはマトリックス支援レーザー脱離イオン化／飛行時間質量分析を使用する、タンパク質の化学的に変更された形態（例えば、クリッピングからの結果）を検出するための方法；および、例えば、イオン交換クロマトグラフィーを使用する、分子の電荷の変化に伴う分解（例えば、脱アミドに伴う分解）を検出する方法が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、本明細書中で、以下に開示される方法を参照のこと。
【０２５２】
薬学的組成物中に処方される場合、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体、またはその抗原結合フラグメントは、所望の生物学的活性に適切なアッセイにおいて測定されるとき、その時点での所望の生物学的活性が、その薬学的組成物が調製された時点で示される所望の生物学的活性の約３０％以内、好ましくは、約２０％以内である場合に、所定の時点において所望の生物学的活性を保持すると考えられる。本明細書中に開示されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体およびその抗原結合フラグメントの所望の生物学的活性を測定するためのアッセイは、本明細書中の実施例に記載されるようにして実施され得る。また、Ｓｃｈｕｌｔｚｅら（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９２：８２００−８２０４；Ｄｅｎｔｏｎら（１９９８）Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２：６−１５；Ｅｖａｎｓら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４：６８８−６９７；Ｎｏｅｌｌｅ（１９９８）Ａｇｅｎｔｓ  Ａｃｔｉｏｎｓ  Ｓｕｐｐｌ．４９：１７−２２；Ｌｅｄｅｒｍａｎら（１９９６）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ，Ｈｅｍａｔｏｌ．３：７７−８６；Ｃｏｌｉｇａｎら（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３：１２；Ｋｗｅｋｋｅｂｏｏｍら（１９９３）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７９：４３９−４４４；ならびに米国特許第５，６７４，４９２号および同第５，８４７，０８２号に記載されるアッセイもまた参照のこと（これらは、本明細書中に参考として援用される）。
【０２５３】
本発明のいくつかの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体、もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）、またはその抗原結合フラグメントは、液体薬学的処方物中に処方される。アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、当該分野で公知の任意の方法を使用して調製され得、これらの方法としては、本明細書において上で開示された方法が挙げられる。１つの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体、もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）、またはその抗原結合フラグメントは、ＣＨＯ細胞株において組換え的に産生される。
【０２５４】
その調製および精製の後、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書中に示される様式で液体薬学的処方物として処方され得る。アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントが、その処方前に保存される場合、これらは、例えば、≦−２０℃において凍結され、次いで、さらなる処方のために、室温にて融解され得る。この液体薬学的処方物は、治療有効量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。この処方物中に存在する抗体またはその抗原結合フラグメントの量は、投与経路および所望の投薬用量を考慮に入れる。
【０２５５】
この様式において、液体薬学的組成物は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２抗体もしくはＣＨＩＲ−５．９抗体）またはその抗原結合フラグメントを、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約４０．０ｍｇ／ｍｌ、約１．０ｍｇ／ｍｌ〜約３０．０ｍｇ／ｍｌ、約５．０ｍｇ／ｍｌ〜約２５．０ｍｇ／ｍｌ、約５．０ｍｇ／ｍｌ〜約２０．０ｍｇ／ｍｌ、または約１５．０ｍｇ／ｍｌ〜約２５．０ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。いくつかの実施形態において、この液体薬学的組成物は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約５．０ｍｇ／ｍｌ、約５．０ｍｇ／ｍｌ〜約１０．０ｍｇ／ｍｌ、約１０．０ｍｇ／ｍｌ〜約１５．０ｍｇ／ｍｌ、約１５．０〜約２０．０ｍｇ／ｍｌ、約２０．０ｍｇ／ｍｌ〜約２５．０ｍｇ／ｍｌ、約２５．０ｍｇ／ｍｌ〜約３０．０ｍｇ／ｍｌ、約３０．０ｍｇ／ｍｌ〜約３５．０ｍｇ／ｍｌ、約３５．０〜約４０．０ｍｇ／ｍｌ、約４０．０〜約４５．０ｍｇ／ｍｌ、または約４５．０ｍｇ／ｍｌ〜約５０．０ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。他の実施形態において、この液体薬学的組成物は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを、約１５．０ｍｇ／ｍｌ、約１６．０ｍｇ／ｍｌ、約１７．０ｍｇ／ｍｌ、約１８．０ｍｇ／ｍｌ、約１９．０ｍｇ／ｍｌ、約２０．０ｍｇ／ｍｌ、約２１．０ｍｇ／ｍｌ、約２２．０ｍｇ／ｍｌ、約２３．０ｍｇ／ｍｌ、約２４．０ｍｇ／ｍｌ、または約２５．０ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。この液体薬学的組成物は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２抗体もしくはＣＨＩＲ−５．９抗体）またはその抗原結合フラグメント、およびこの処方物のｐＨをｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０の範囲（ｐＨ約５．０、ｐＨ約５．１、ｐＨ約５．２、ｐＨ約５．３、ｐＨ約５．４、ｐＨ約５．５、ｐＨ約５．６、ｐＨ約５．７、ｐＨ約５．８、ｐＨ約５．９、ｐＨ約６．０、ｐＨ約６．１、ｐＨ約６．２、ｐＨ約６．３、ｐＨ約６．４、ｐＨ約６．５、ｐＨ約６．６、ｐＨ約６．７、ｐＨ約６．８、ｐＨ約６．９、ｐＨ約７．０、およびｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０の範囲内の他のこのような値が含まれる）に維持する緩衝液を含む。いくつかの実施形態において、緩衝液は、処方物のｐＨを、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約６．５、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約６．０、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約５．５、ｐＨ約５．５〜ｐＨ約７．０、ｐＨ約５．５〜ｐＨ約６．５、またはｐＨ約５．５〜ｐＨ約６．０の範囲に維持する。
【０２５６】
液体抗ＣＤ４０抗体処方物のｐＨをｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０の範囲に維持する任意の適切な緩衝液は、その抗体の物理化学的安定性および所望の生物学的活性が本明細書において上に言及されたように維持される限り、処方物において使用され得る。適切な緩衝液としては、従来の酸およびその塩が挙げられるがこれらに限定されず、ここで、対イオンは、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、またはマグネシウムであり得る。薬学的な液体処方物を緩衝するために使用され得る従来の酸およびその塩の例としては、コハク酸またはコハク酸塩、クエン酸またはクエン酸塩、酢酸または酢酸塩、酒石酸または酒石酸塩、リン酸またはリン酸塩、グルコン酸またはグルコン酸塩、グルタミン酸またはグルタミン酸塩、アスパラギン酸またはアスパラギン酸塩、マレイン酸またはマレイン酸塩、およびリンゴ酸またはリンゴ酸塩の緩衝液が挙げられるがこれらに限定されない。処方物内の緩衝液の濃度は、約１ｍＭ〜約５０ｍＭ（約１ｍＭ、約２ｍＭ、約５ｍＭ、約８ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、または約１ｍＭ〜約５０ｍＭの範囲内の他のこのような値を含む）であり得る。いくつかの実施形態において、処方物内の緩衝液の濃度は、約５ｍＭ〜約１５ｍＭ（約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、または約５ｍＭ〜約１５ｍＭの範囲内の他のこのような値を含む）であり得る。
【０２５７】
本発明のいくつかの実施形態において、液体薬学的処方物は、治療有効量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（たとえば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）またはその抗原結合フラグメント、およびこの処方物のｐＨをｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０、好ましくは、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約６．５の範囲に維持する濃度のコハク酸緩衝液またはクエン酸緩衝液を含む。「コハク酸緩衝液」または「クエン酸緩衝液」によって、それぞれ、コハク酸の塩またはクエン酸の塩を含む緩衝液が意図される。好ましい実施形態において、コハク酸またはクエン酸の対イオンは、ナトリウムカチオンであり、従って、緩衝液は、それぞれ、コハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムである。しかし、任意のカチオンが、有効であると予想される。他の可能なコハク酸カチオンまたはクエン酸カチオンとしては、カリウム、アンモニウム、カルシウム、およびマグネシウムが挙げられるがこれらに限定されない。上記のように、処方物内のコハク酸緩衝液またはクエン酸緩衝液の濃度は、約１ｍＭ〜約５０ｍＭ（約１ｍＭ、約２ｍＭ、約５ｍＭ、約８ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、または約１ｍＭ〜約５０ｍＭの範囲内の他のこのような値を含む）であり得る。いくつかの実施形態において、処方物内の緩衝液の濃度は、約５ｍＭ〜約１５ｍＭ（約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、または約１５ｍＭを含む）である。他の実施形態において、液体薬学的処方物は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体、もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）、またはその抗原結合フラグメントを、０．１ｍｇ／ｍｌ〜約５０．０ｍｇ／ｍｌ、または約５．０ｍｇ／ｍｌ〜約２５．０ｍｇ／ｍｌの濃度で、そして、コハク酸緩衝液またはクエン酸緩衝液（例えば、コハク酸ナトリウム緩衝液またはクエン酸ナトリウム緩衝液）を、約１ｍＭ〜約２０ｍＭ、約５ｍＭ〜約１５ｍＭ、好ましくは、約１０ｍＭの濃度で含む。
【０２５８】
液体薬学的処方物が等張付近であることが望ましい場合、治療有効量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体、もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）、またはその抗原結合フラグメント、およびこの処方物のｐＨをｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０の範囲内に維持するための緩衝液を含む液体薬学的処方物は、さらに、この処方物を等張付近にするために十分な量の等張化剤を含み得る。「等張付近（ｎｅａｒ  ｉｓｏｔｏｎｉｃ）」により、水溶性処方物が、約２４０ｍｍｏｌ／ｋｇ〜約３６０ｍｍｏｌ／ｋｇ、好ましくは約２４０ｍｍｏｌ／ｋｇ〜約３４０ｍｍｏｌ／ｋｇ、より好ましくは約２５０ｍｍｏｌ／ｋｇ〜約３３０ｍｍｏｌ／ｋｇ、なおより好ましくは約２６０ｍｍｏｌ／ｋｇ〜約３２０ｍｍｏｌ／ｋｇ、なおより好ましくは約２７０ｍｍｏｌ／ｋｇ〜約３１０ｍｍｏｌ／ｋｇの浸透圧を有することが意図される。溶液の等張度を測定する方法は、当業者に公知である。例えば、Ｓｅｔｎｉｋａｒら（１９５９）Ｊ．Ａｍ．Ｐｈａｒｍ．Ａｓｓｏｃ．４８：６２８を参照のこと。
【０２５９】
当業者は、薬学的組成物に等張性を提供するのに有用な、種々の薬学的に受容可能な溶質に精通している。等張化剤は、本発明の液体薬学的処方物の浸透圧を、体液の浸透圧にほぼ等しい値に調節し得る任意の試薬であり得る。生理学的に受容可能な等張化剤の使用が望ましい。従って、治療有効量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体、もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）、またはその抗原結合フラグメント、およびこの処方物のｐＨをｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０の範囲内に維持するための緩衝液を含む液体薬学的処方物は、さらに、等張性を提供するために使用され得る成分（例えば、塩化ナトリウム；アミノ酸（例えば、アラニン、バリンおよびグリシン）；糖類および糖アルコール（ポリオール）（グルコース、デキストロース、フルクトース、スクロース、マルトース、マンニトール、トレハロース、グリセロール、ソルビトールおよびキシリトールが挙げられるがこれらに限定されない）；酢酸、他の有機酸またはその塩、および比較的少量のクエン酸またはリン酸）を含み得る。当業者は、液体処方物の最適な張度を提供するために適切なさらなる薬剤を知っている。
【０２６０】
いくつかの好ましい実施形態において、治療有効量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体、もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）、またはその抗原結合フラグメント、およびこの処方物のｐＨを、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０の範囲内に維持するための緩衝液を含む液体薬学的処方物は、さらに、等張化剤として塩化ナトリウムを含む。処方物中の塩化ナトリウムの濃度は、張度に対する他の成分の寄与に依存する。いくつかの実施形態において、塩化ナトリウムの濃度は、約５０ｍＭ〜約３００ｍＭ、約５０ｍＭ〜約２５０ｍＭ、約５０ｍＭ〜約２００ｍＭ、約５０ｍＭ〜約１７５ｍＭ、約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約７５ｍＭ〜約１７５ｍＭ、約７５ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約１００ｍＭ〜約１７５ｍＭ、約１００ｍＭ〜約２００ｍＭ、約１００ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約１２５ｍＭ〜約１７５ｍＭ、約１２５ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約１３０ｍＭ〜約１７０ｍＭ、約１３０ｍＭ〜約１６０ｍＭ、約１３５ｍＭ〜約１５５ｍＭ、約１４０ｍＭ〜約１５５ｍＭ、または約１４５ｍＭ〜約１５５ｍＭである。１つのこのような実施形態において、塩化ナトリウムの濃度は、約１５０ｍＭである。他のこのような実施形態において、塩化ナトリウムの濃度は、約１５０ｍＭであり、緩衝液は、約５ｍＭ〜約１５ｍＭの濃度のコハク酸ナトリウム緩衝液またはクエン酸ナトリウム緩衝液であり、この液体薬学的処方物は、治療有効量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体、もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）、またはその抗原結合フラグメントを含み、そして、この処方物は、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約６．０、またはｐＨ約５．５〜ｐＨ約６．５のｐＨを有する。他の実施形態において、液体薬学的処方物は、ｐＨ約５．５のｐＨにおいて、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約５０．０ｍｇ／ｍｌ、または約５．０ｍｇ／ｍｌ〜約２５．０ｍｇ／ｍｌの濃度のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体、もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）、またはその抗原結合フラグメント、約１５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウム、および約１０ｍＭのコハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムを含む。
【０２６１】
本発明の液体薬学的処方物の処理の間の凍結融解または機械的なせん断に起因するタンパク質の分解は、溶液−空気界面における表面張力を低下させるために、処方物内に界面活性剤を組み込むことによって、阻害され得る。こうして、いくつかの実施形態において、液体薬学的処方物は、治療有効量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）またはその抗原結合フラグメント、処方物のｐＨをｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０の範囲内に維持するための緩衝液を含み、そしてさらに、界面活性剤を含む。他の実施形態において、液体薬学的処方物は、治療有効量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体、もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）、またはその抗原結合フラグメント、処方物のｐＨをｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０の範囲内に維持するための緩衝液、約５０ｍＭ〜約３００ｍＭの濃度の等張化剤（例えば、塩化ナトリウム）を含み、そしてさらに、界面活性剤を含む。
【０２６２】
使用される代表的な界面活性剤は、非イオン性界面活性剤であり、これらとしては、以下が挙げられる：ポリオキシエチレンソルビトールエステル（例えば、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ  ８０）およびポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ  ２０））；ポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレンエステル（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８）；ポリオキシエチレンアルコール（例えば、Ｂｒｉｊ  ３５）；シメチコン；ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ４００）；リゾホスファチジルコリン；およびポリオキシエチレン−ｐ−ｔ−オクチルフェノール（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００）。界面活性剤または乳化剤による伝統的な安定化については、例えば、Ｌｅｖｉｎｅら（１９９１）Ｊ．Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．４５（３）：１６０−１６５（本明細書中に参考として援用される）に記載される。本発明を実施する際に使用される好ましい界面活性剤は、ポリソルベート８０である。界面活性剤が含まれる場合、界面活性剤は、代表的に、約０．００１％（ｗ／ｖ）〜約１．０％（ｗ／ｖ）、約０．００１％（ｗ／ｖ）〜約０．５％（ｗ／ｖ）、約０．００１％（ｗ／ｖ）〜約０．４％（ｗ／ｖ）、約０．００１％（ｗ／ｖ）〜約０．３％（ｗ／ｖ）、約０．００１％（ｗ／ｖ）〜約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．５％（ｗ／ｖ）、約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）〜約０．５％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）〜約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．０３％（ｗ／ｖ）〜約０．５％（ｗ／ｖ）、約０．０３％（ｗ／ｖ）〜約０．３％（ｗ／ｖ）、約０．０５％（ｗ／ｖ）〜約０．５％（ｗ／ｖ）、または約０．０５％（ｗ／ｖ）〜約０．２％（ｗ／ｖ）の量で添加される。
【０２６３】
こうして、いくつかの実施形態では、液体薬学的処方物は、治療有効量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体、もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）、またはその抗原結合フラグメントを含み、緩衝液は、約１ｍＭ〜約５０ｍＭ、約５ｍＭ〜約２５ｍＭ、または約５ｍＭ〜約１５ｍＭの濃度のコハク酸ナトリウム緩衝液またはクエン酸ナトリウム緩衝液であり；この処方物は、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約６．０、またはｐＨ約５．５〜ｐＨ約６．５のｐＨを有し；そして、この処方物は、さらに、約０．００１〜約１．０％、または約０．００１％〜約０．５％の量の界面活性剤（例えば、ポリソルベート８０）を含む。このような処方物は、必要に応じて、約５０ｍＭ〜約３００ｍＭ、約５０ｍＭ〜約２００ｍＭまたは約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度の等張化剤（例えば、塩化ナトリウム）を含み得る。他の実施形態において、液体薬学的処方物は、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約５０．０ｍｇ／ｍｌ、または約５．０ｍｇ／ｍｌ〜約２５．０ｍｇ／ｍｌ（約２０．０ｍｇ／ｍｌを含む）の濃度のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体、もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）、またはその抗原結合フラグメント；約５０ｍＭ〜約２００ｍＭの塩化ナトリウム（約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む）；約５ｍＭ〜約２０ｍＭのコハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウム（約１０ｍＭのコハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムを含む）；約５０ｍＭ〜約２００ｍＭ（約１５０ｍＭを含む）の濃度の塩化ナトリウム；および必要に応じて、約０．００１％〜約１．０％（約０．００１％〜約０．５％を含む）の量の界面活性剤（例えば、ポリソルベート８０）；を含み、ここで、この液体薬学的処方物は、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約６．０、約ｐＨ５．０〜ｐＨ約５．５，ｐＨ約５．５〜ｐＨ約６．５、またはｐＨ約５．５〜ｐＨ約６．０のｐＨを有する。
【０２６４】
液体薬学的処方物は、本質的に、保存料、および本明細書において上記された他のキャリア、賦形剤または安定化剤を含まなくてもよい。あるいは、この処方物は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの物理化学的安定性に悪影響を及ぼさないという条件で、１種以上の保存剤（例えば、抗細菌剤）、本明細書において上記の薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤または安定化剤を含み得る。受容可能なキャリア、賦形剤および安定化剤の例としては、さらなる緩衝化剤、共溶媒、界面活性剤、抗酸化剤（アスコルビン酸およびメチオニンを含む）、キレート化剤（例えば、ＥＤＴＡ）、金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）、および生分解性ポリマー（例えば、ポリエステル）が挙げられるがこれらに限定されない。薬学的に受容可能なキャリア、安定化剤、および等モル化剤（ｉｓｏｍｏｌｙｔｅ）の処方および選択の詳細な議論は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版；Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，１９９０）（本明細書中に参考として援用される）に見出され得る。
【０２６５】
本明細書中に記載される液体薬学的処方物または他の薬学的組成物が調製された後、これらは、分解を防ぐために凍結乾燥され得る。液体組成物を凍結乾燥するための方法は、当業者に公知である。使用の直前に、組成物は、さらなる成分を含み得る滅菌希釈剤（例えば、Ｒｉｎｇｅｒ溶液、蒸留水または滅菌生理食塩水）で再構成され得る。再構成の上に、組成物は、好ましくは、当業者に公知の方法を使用して、被験体に投与される。
【０２６６】
（医薬の製造におけるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の使用）
本発明はまた、被検体中のＣＤ４０を発現する癌を処置する医薬の製造における、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの使用を提供し、ここで医薬は、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体を用いる処置と共働する。「ＣＤ４０を発現する癌」によって、ＣＤ４０細胞表面抗原を発現する新生物細胞を含む任意の癌が、意図される。本明細書中で上記されるように、このような癌としては、Ｂ細胞関連の癌（
例えば、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、中悪性度Ｂ細胞リンパ腫、低悪性度Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ性白血病、骨髄芽球性白血病、ホジキン病、プラズマ細胞種、濾胞性リンパ腫、濾胞性核切れ込み小細胞型リンパ腫、濾胞性大細胞型リンパ腫、濾胞性混合型核切れ込み小細胞型リンパ腫、びまん性核切れ込み小細胞型リンパ腫、びまん性小リンパ球性リンパ腫、前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、辺縁層リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、脾性リンパ腫、ヘアリーセル白血病、びまん性大細胞型リンパ腫、縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、血管内リンパ腫症、びまん性混合型リンパ腫、びまん性大細胞型リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、エイズ関連リンパ腫、およびマントル細胞リンパ腫）；およびＣＤ４０抗原を発現する固形腫瘍（卵巣癌、肺癌（例えば、扁平上皮癌型、腺癌型、および大細胞癌型の非小細胞肺癌、ならびに小細胞肺癌））、乳癌、結腸癌、腎臓癌（例えば、腎細胞癌が挙げられる）、膀胱癌、肝臓癌（例えば、肝細胞癌が挙げられる）、胃癌、頚癌、前立腺癌、鼻咽腔癌、甲状腺癌（例えば、甲状腺乳頭癌が挙げられる）、および皮膚癌（例えば、黒色腫）、ならびに肉腫（例えば、骨肉腫およびユーイング肉腫が挙げられる）が挙げられるが、これらに限定されない）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２６７】
「共働する（ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ）」によって、上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬が、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体を用いる被検体の処置前か、処置中か、または処置後のいずれかで使用されるべきことが意図される。１つのこのような実施形態において、本発明は、被検体中のＣＤ４０を発現する癌を処置するための医薬の製造におけるモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９の使用を提供し、ここでこの医薬は、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体（例えば、ヒトＩＬ−２またはデス−アラニル−１，セリン−１２５ヒトＩＬ−２ムテイン）を用いる処置と共働し、ここでこの医薬は、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体を用いる被検体の処置前か、処置中か、または処置後のいずれかで使用されるべきである。
【０２６８】
いくつかの実施形態において、上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、本明細書中に開示されるモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９）、またはその抗原結合フラグメントを含む医薬は、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体、および少なくとも１つの他の型の癌治療を用いる処置と共働する。他の癌治療の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：本明細書中で上記される治療、すなわち、外科手術または外科的手順（例えば、脾摘出、肝切除、リンパ節切除、白血球分離、骨髄移植など）、放射線療法；必要に応じて自系の骨髄移植と組み合わせられる化学療法において使用される他の細胞毒性因子および／または他の治療因子（ここで適切な化学療法剤としては、フルダラビンまたはリン酸フルダラビン、クロラムブシル、ビンクリスチン、ペントスタチン、２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン）、シクロホスファミド、ドキソルビシン、プレドニゾン、およびそれらの組み合わせ（例えば、ＣＡＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシンに加えてプレドニゾン）、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾンに加えてドキソルビシン）、ＶＡＤ（ビンクリスチン、ドキソルビシンに加えてデキサメタゾン）、ＭＰ（メルファランに加えてプレドニゾン）のようなアントラサイクリンを含むレジメン）ならびに化学療法（例えば、ミトキサントロン、ダウノルビシン、イダルビシン、アスパラギナーゼおよび代謝拮抗物質（シタラビン、メトトレキサート、５−フルオロウラシルデカルバジン、６−チオグアニン、６−メルカプトプリン、およびネララビンが挙げられるが、これらに限定されない））；他の抗癌モノクローナル抗体治療（例えば、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標））または悪性のＢ細胞上のＣＤ５２細胞表面糖タンパク質を標的する他の抗ＣＤ５２抗体；リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、完全ヒト抗体ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０、Ｒ−１５９４、ＩＭＭＵ−１０６、ＴＲＵ−０１５、ＡＭＥ−１３３、トシツモマブ／Ｉ−１３１トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））、または悪性のＢ細胞上のＣＤ２０抗原を標的する任意の他の治療用抗ＣＤ２０抗体；抗ＣＤ１９抗体（例えば、ＭＴ１０３（二重特異性抗体））；抗ＣＤ２２抗体（例えば、ヒト化モノクローナル抗体エプラツズマブ）；ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））またはヒトの血管内皮増殖因子を標的する他の抗癌抗体；悪性のＢ細胞上のＣＤ２２抗原を標的する抗ＣＤ２２抗体（例えば、モノクローナル抗体ＢＬ−２２、αＣＤ２２毒素）；マクロファージコロニー刺激因子を標的するα−Ｍ−ＣＳＦ抗体；多発性骨髄腫において過剰発現される核のレセプター活性化因子κＢ（ＲＡＮＫ）およびそのリガンド（ＲＡＮＫＬ）を標的する抗体；悪性のＢ細胞上のＣＤ２３抗原を標的する抗ＣＤ２３抗体（例えば、ＩＤＥＣ−１５２）；ＣＤ８０抗原を標的する抗ＣＤ８０抗体（例えば、ＩＤＥＣ−１１４）；悪性のＢ細胞上のＣＤ３８抗原を標的する抗ＣＤ３８抗体；悪性のＢ細胞上で発現される主要組織適合遺伝子複合体のクラスＩＩレセプターを標的する抗体（抗ＭＨＣ抗体）；悪性のＢ細胞上のＣＤ４０抗原を標的する他の抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＳＧＮ−４０）；ならびに腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導性リガンドレセプター１（ＴＲＡＩＬ−Ｒ１）を標的する抗体（例えば、アゴニストのヒトモノクローナル抗体ＨＧＳ−ＥＴＲ１）、ならびに固形腫瘍および造血器官の多くの腫瘍上で発現されるＴＲＡＩＬ−Ｒ２）；小分子に基づく癌治療（微小管インヒビターおよび／またはトポイソメラーゼインヒビター（例えば、有糸分裂インヒビタードラスチンおよびドラスチンアナログ）が挙げられるが、これらに限定されない）；チューブリン結合因子Ｔ９００６０７；ＸＬ１１９；およびトポイソメラーゼインヒビターアミノカンプトテシン）、ＳＤＸ−１０５（塩酸ベンダムスチン）、イキサベピロン（ＢＭＳ−２４７５５０とも称されるエポチロンアナログ）、プロテインキナーゼＣインヒビター（例えば、ミドスタウリン（（ＰＫＣ−４１２、ＣＧＰ  ４１２５１、Ｎ−ベンゾイルスタウロスポリン）、ピクサントロン（ｐｉｘａｎｔｒｏｎｅ）、エロキサチン（抗新生物剤）、ガナイト（ｇａｎｉｔｅ）（硝酸ガリウム）、Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標）（サリドマイド）、サリドマイドの免疫調節性誘導体（例えば、レブリミド（かつてのレビミド）、ＡｆｆｉｎｉｔａｋＴＭ（プロテインキナーゼＣ−αのアンチセンスインヒビター）、ＳＤＸ−１０１（悪性リンパ球のアポトーシスを誘導するＲ−エトドラク）、クロファラビンのような第２世代プリンヌクレオチドアナログ、癌細胞によるタンパク質Ｂｃｌ−２の産生に関するインヒビター（例えば、アンチセンス因子オブリマーセン（ｏｂｌｉｍｅｒｓｅｎ）およびＧｅｎａｓｅｎｓｅ（登録商標））、プロテアソームインヒビター（例えば、ＶｅｌｃａｄｅＴＭ（ボルテゾミブ））、小分子キナーゼインヒビター（例えば、ＣＨＩＲ−２５８）、小分子ＶＥＧＦインヒビター（例えば、ＺＤ−６４７４）、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）９０の小分子インヒビター（例えば、１７−ＡＡＧ）、スペロイルアニリドヒドロキサム酸（ｓｕｂｅｒａｎｉｌｏｈｙｄｒｏｘａｍｉｃ  ａｃｉｄ）（ＳＡＨＡ）およびＦＲ−９０１２２８）のようなヒストンデアセチラーゼ（例えば、ハイブリッド／極性細胞分化ＨＰＣ）因子の小分子インヒビター、ならびにアポトーシス因子（例えば、Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標）（三酸化ヒ素）およびＸｃｙｔｒｉｎ（登録商標）（モテキサフィン（ｍｏｔｅｘａｆｉｎ）ガドリニウム））；ワクチン／免疫療法に基づく癌治療（ワクチンアプローチ（例えば、Ｉｄ−ＫＬＨ、オンコファージ、ビタレチン（ｖｉｔａｌｅｔｈｉｎｅ））、個別化免疫療法または活性イディオタイプ免疫療法（例えば、ＭｙＶａｘ（登録商標）個別化免疫療法、正式名称ＧＴＯＰ−９９）、Ｐｒｏｍｕｎｅ（登録商標）（ＣｐＧ  ７９０９、ｔｏｌｌ様レセプター９（ＴＬＲ９）に対する合成アゴニスト）、インターフェロン−α療法、ＩＬ−１２療法、ＩＬ−１５療法、およびＩＬ−２１療法が挙げられるが、これらに限定されない）；ステロイド療法；または他の癌治療；ここで、ＩＬ−２もしくはその生物学的に活性な改変体およびさらなる癌治療または複��のさらなる癌治療を用いる処置は、本明細書の上記で記載されるような、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬による被検体の処置前か、処置中か、処置後に行う。上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬が、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体および少なくとも１つの他の癌治療と共働する場合に、この医薬の使用は、複数の他の癌治療のいずれかまたは両方を用いる被検体の処置前か、処置中か、処置後であり得る。
【０２６９】
本発明はまた、本明細書中の上記で定義されるような、被検体中のＣＤ４０を発現する癌を処置するための医薬の製造における、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの相乗的な組み合わせの使用を提供し、この医薬は、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体による処置と共働する。「相乗的な組み合わせ（ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）」によって、上記医薬は、この医薬が、本明細書中の上記で示した様式においてＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体を用いる処置と共働する場合に相乗的な治療効果を提供するアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの量を含むことが意図される。「相乗的な治療効果」とは、２つ以上の治療（この場合において、このアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体療法およびＩＬ−２療法）の組み合わせによって観察される治療効果を指し、ここでこの治療効果（本明細書中で上記される効力の測定を含む、多くのパラメータのいずれかによって測定されるよう）は、個々の各治療によって観察される個々の各治療効果の合計より大きい。
【０２７０】
１つのこのような実施形態において、本発明は、被検体中のＣＤ４０を発現する癌を処置するための医薬の製造における上記モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９の相乗的な組み合わせの使用を提供し、この医薬は、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体（例えば、ヒトＩＬ−２またはデス−アラニル−１，セリン−１２５ヒトＩＬ−２ムテイン）を用いる処置と共働し、この医薬は、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体を用いる被検体の処置前か、処置中か、または処置後のいずれかで使用されるべきである。いくつかの実施形態において、上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、本明細書中に開示されるモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９）、またはその抗原結合フラグメントの相乗的組み合わせを含む医薬は、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体、および少なくとも１つの上記の他の型の癌治療を用いる処置と共働する。
【０２７１】
本発明はまた、本明細書中の上記で定義されるような、被検体中のＣＤ４０を発現する癌を処置するための医薬の製造における、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、本明細書中に開示されるモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９）またはその抗原結合フラグメントの使用を提供し、この医薬は、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体を用いて事前に処置された被験体において使用される。「事前に処置された（ｐｒｅｔｒｅａｔｅｄ）」または「事前の処置（ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」によって、被験体が、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬を受容する前に、ＩＬ−２療法を受容している（すなわち、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体によって処置されている）ことが意図される。「事前に処置された」または「事前の処置」は、このアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、本明細書中で開示されるモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９）、またはその抗原結合フラグメントを含む医薬を用いる処置の開始前、２年以内、１８ヶ月以内、１年以内、６ヶ月以内、２ヶ月以内、６週間以内、１ヶ月以内、４週間以内、３週間以内、２週間以内、１週間以内、６日以内、５日以内、４日以内、３日以内、２日以内、または、さらに１日以内に、ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の単独かまたは他の癌治療との組み合わせで処置された被験体を含む。被験体は、前のＩＬ−２療法、または前のＩＬ−２と他の癌治療による事前の処置に対する応答者であった必要はない。従って、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬を受容する被験体は、事前のＩＬ−２療法による事前の処置か、または事前の処置が、癌治療の１つがＩＬ−２療法である複合的な癌治療（例えば、ＩＬ−２療法および他の抗癌抗体療法（例えば、リツキシマブまたは他の抗ＣＤ２０抗体療法）；ＩＬ−２療法と外科手術；ＩＬ−２療法と化学療法；またはＩＬ−２療法、化学療法、および他の抗癌抗体療法）を含んだ１つ以上の事前の癌治療に対して、応答していても応答し損なっていてもよい。
【０２７２】
したがって、いくつかの実施形態において、本発明は、本明細書中の上記で定義されるような、ＣＤ４０を発現する癌に対する処置が必要な被検体において使用される医薬の製造におけるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、本明細書中に開示されるモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９）、またはその抗原結合フラグメントの使用を提供し、この被検体は、ＩＬ−２療法によって事前に処置されているか、またはＩＬ−２療法および１つ以上の以下に挙げる他の癌治療によって事前に処理されている：外科手術または外科的手順（例えば、脾摘出、肝切除、リンパ節切除、白血球分離、骨髄移植など）、放射線療法；必要に応じて自系の骨髄移植と組み合わせての化学療法（ここで適切な化学療法剤としては、フルダラビンまたはリン酸フルダラビン、クロラムブシル、ビンクリスチン、ペントスタチン、２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン）、シクロホスファミド、ドキソルビシン、プレドニゾン、およびそれらの組み合わせ（例えば、ＣＡＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシンに加えてプレドニゾン）、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾンに加えてドキソルビシン）、ＶＡＤ（ビンクリスチン、ドキソルビシンに加えてデキサメタゾン）、ＭＰ（メルファランに加えてプレドニゾン）のようなアントラサイクリンを含むレジメン）ならびに化学療法において使用される他の細胞毒性因子および／または他の治療因子（例えば、ミトキサントロン、ダウノルビシン、イダルビシン、アスパラギナーゼおよび代謝拮抗物質（シタラビン、メトトレキサート、５−フルオロウラシルデカルバジン、６−チオグアニン、６−メルカプトプリン、およびネララビンが挙げられるが、これらに限定されない）））；他の抗癌モノクローナル抗体治療（例えば、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標））または悪性のＢ細胞上のＣＤ５２細胞表面糖タンパク質を標的する他の抗ＣＤ５２抗体；リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、完全ヒト抗体ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０、Ｒ−１５９４、ＩＭＭＵ−１０６、ＴＲＵ−０１５、ＡＭＥ−１３３、トシツモマブ／Ｉ−１３１トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））、または悪性のＢ細胞上のＣＤ２０抗原を標的する任意の他の治療用抗ＣＤ２０抗体；抗ＣＤ１９抗体（例えば、ＭＴ１０３（二重特異性抗体））；抗ＣＤ２２抗体（例えば、ヒト化モノクローナル抗体エプラツズマブ）；ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））またはヒトの血管内皮増殖因子を標的する他の抗癌抗体；悪性のＢ細胞上のＣＤ２２抗原を標的する抗ＣＤ２２抗体（例えば、モノクローナル抗体ＢＬ−２２、αＣＤ２２毒素）；マクロファージコロニー刺激因子を標的するα−Ｍ−ＣＳＦ抗体；多発性骨髄腫において過剰発現される核のレセプター活性化因子κＢ（ＲＡＮＫ）およびそのリガンド（ＲＡＮＫＬ）を標的する抗体；悪性のＢ細胞上のＣＤ２３抗原を標的する抗ＣＤ２３抗体（例えば、ＩＤＥＣ−１５２）；ＣＤ８０抗原を標的する抗ＣＤ８０抗体（例えば、ＩＤＥＣ−１１４）；悪性のＢ細胞上のＣＤ３８抗原を標的する抗ＣＤ３８抗体；悪性のＢ細胞上で発現される主要組織適合遺伝子複合体のクラスＩＩレセプターを標的する抗体（抗ＭＨＣ抗体）；悪性のＢ細胞上のＣＤ４０抗原を標的する他の抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＳＧＮ−４０）；ならびに腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導性リガンドレセプター１（ＴＲＡＩＬ−Ｒ１）を標的する抗体（例えば、アゴニストのヒトモノクローナル抗体ＨＧＳ−ＥＴＲ１）、ならびに固形腫瘍および造血器官の多くの腫瘍上で発現されるＴＲＡＩＬ−Ｒ２）；小分子に基づく癌治療（微小管インヒビターおよび／またはトポイソメラーゼインヒビターが挙げられるが、これらに限定されない（例えば、有糸分裂インヒビタードラスチンおよびドラスチンアナログ））；チューブリン結合因子Ｔ９００６０７；ＸＬ１１９；およびトポイソメラーゼインヒビターアミノカンプトテシン）、ＳＤＸ−１０５（塩酸ベンダムスチン）、イキサベピロン（ＢＭＳ−２４７５５０とも称されるエポチロンアナログ）、プロテインキナーゼＣインヒビター（例えば、ミドスタウリン（（ＰＫＣ−４１２、ＣＧＰ  ４１２５１、Ｎ−ベンゾイルスタウロスポリン）、ピクサントロン（ｐｉｘａｎｔｒｏｎｅ）、エロキサチン（抗新生物剤）、ガナイト（ｇａｎｉｔｅ）（硝酸ガリウム）、Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標）（サリドマイド）、サリドマイドの免疫調節性誘導体（例えば、レブリミド（かつてのレビミド）、ＡｆｆｉｎｉｔａｋＴＭ（プロテインキナーゼＣ−αのアンチセンスインヒビター）、ＳＤＸ−１０１（悪性リンパ球のアポトーシスを誘導するＲ−エトドラク）、クロファラビンのような第２世代プリンヌクレオチドアナログ、癌細胞によるタンパク質Ｂｃｌ−２の産生に関するインヒビター（例えば、アンチセンス因子オブリマーセン（ｏｂｌｉｍｅｒｓｅｎ）およびＧｅｎａｓｅｎｓｅ（登録商標））、プロテアソームインヒビター（例えば、ＶｅｌｃａｄｅＴＭ（ボルテゾミブ））、小分子キナーゼインヒビター（例えば、ＣＨＩＲ−２５８）、小分子ＶＥＧＦインヒビター（例えば、ＺＤ−６４７４）、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）９０の小分子インヒビター（例えば、１７−ＡＡＧ）、スペロイルアニリドヒドロキサム酸（ｓｕｂｅｒａｎｉｌｏｈｙｄｒｏｘａｍｉｃ
ａｃｉｄ）（ＳＡＨＡ）およびＦＲ−９０１２２８）のようなヒストンデアセチラーゼ（例えば、ハイブリッド／極性細胞分化ＨＰＣ）因子の小分子インヒビター、ならびにアポトーシス因子（例えば、Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標）（三酸化ヒ素）およびＸｃｙｔｒｉｎ（登録商標）（モテキサフィン（ｍｏｔｅｘａｆｉｎ）ガドリニウム））；ワクチン／免疫療法に基づく癌治療（ワクチンアプローチ（例えば、Ｉｄ−ＫＬＨ、オンコファージ、ビタレチン（ｖｉｔａｌｅｔｈｉｎｅ））、個別化免疫療法または活性イディオタイプ免疫療法（例えば、ＭｙＶａｘ（登録商標）個別化免疫療法、正式名称ＧＴＯＰ−９９）、Ｐｒｏｍｕｎｅ（登録商標）（ＣｐＧ  ７９０９、ｔｏｌｌ様レセプター９（ＴＬＲ９）に対する合成アゴニスト）、インターフェロン−α療法、ＩＬ−１２療法、ＩＬ−１５療法、およびＩＬ−２１療法が挙げられるが、これらに限定されない）；ステロイド療法；または他の癌治療。
【０２７３】
本発明はまた、本明細書中の上記で定義されるような、被検体中のＣＤ４０を発現する癌を処置するための医薬の製造におけるＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の使用を提供し、この医薬は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを用いる処置と共働する。これらの実施形態において、「共働する」は、上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体を含む医薬が、上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを用いる被検体の処置前か、処置中か、処置後のいずれかで使用されるべきであることを意図される。１つのこのような実施形態において、本発明は、被検体中のＣＤ４０を発現する癌を処置するための医薬の製造におけるＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体（例えば、ヒトＩＬ−２またはデス−アラニル−１，セリン−１２５ヒトＩＬ−２ムテイン）の使用を提供し、この医薬は、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９を用いる処置と共働し、この医薬は、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９を用いる被検体の処置前か、処置中か、または処置後のいずれかで使用されるべきである。
【０２７４】
いくつかの実施形態において、上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体を含む医薬は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）またはその抗原結合フラグメント、および少なくとも１つの他の型の癌治療を用いる処置と共働する。他の癌治療の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：本明細書中で上記される治療、すなわち、外科手術または外科的手順（例えば、脾摘出、肝切除、リンパ節切除、白血球分離、骨髄移植など）、放射線療法；必要に応じて自系の骨髄移植と組み合わせての化学療法（ここで適切な化学療法剤としては、以下が挙げられるが、これらに限定されないフルダラビンまたはリン酸フルダラビン、クロラムブシル、ビンクリスチン、ペントスタチン、２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン）、シクロホスファミド、ドキソルビシン、プレドニゾン、およびそれらの組み合わせ（例えば、ＣＡＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシンに加えてプレドニゾン）、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾンに加えてドキソルビシン）、ＶＡＤ（ビンクリスチン、ドキソルビシンに加えてデキサメタゾン）、ＭＰ（メルファランに加えてプレドニゾン）のようなアントラサイクリンを含むレジメン）ならびに化学療法において使用される他の細胞毒性因子および／または他の治療因子（例えば、ミトキサントロン、ダウノルビシン、イダルビシン、アスパラギナーゼおよび代謝拮抗物質（シタラビン、メトトレキサート、５−フルオロウラシルデカルバジン、６−チオグアニン、６−メルカプトプリン、およびネララビンが挙げられるが、これらに限定されない））が挙げられるが、これらに限定されない）；他の抗癌モノクローナル抗体治療（例えば、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標））または悪性のＢ細胞上のＣＤ５２細胞表面糖タンパク質を標的する他の抗ＣＤ５２抗体；リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、完全ヒト抗体ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０、Ｒ−１５９４、ＩＭＭＵ−１０６、ＴＲＵ−０１５、ＡＭＥ−１３３、トシツモマブ／Ｉ−１３１トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））、または悪性のＢ細胞上のＣＤ２０抗原を標的する任意の他の治療用抗ＣＤ２０抗体；抗ＣＤ１９抗体（例えば、ＭＴ１０３（二重特異性抗体））；抗ＣＤ２２抗体（例えば、ヒト化モノクローナル抗体エプラツズマブ）；ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））またはヒトの血管内皮増殖因子を標的する他の抗癌抗体；悪性のＢ細胞上のＣＤ２２抗原を標的する抗ＣＤ２２抗体（例えば、モノクローナル抗体ＢＬ−２２、αＣＤ２２毒素）；マクロファージコロニー刺激因子を標的するα−Ｍ−ＣＳＦ抗体；多発性骨髄腫において過剰発現される核のレセプター活性化因子κＢ（ＲＡＮＫ）およびそのリガンド（ＲＡＮＫＬ）を標的する抗体；悪性のＢ細胞上のＣＤ２３抗原を標的する抗ＣＤ２３抗体（例えば、ＩＤＥＣ−１５２）；ＣＤ８０抗原を標的する抗ＣＤ８０抗体（例えば、ＩＤＥＣ−１１４）；悪性のＢ細胞上のＣＤ３８抗原を標的する抗ＣＤ３８抗体；悪性のＢ細胞上で発現される主要組織適合遺伝子複合体のクラスＩＩレセプターを標的する抗体（抗ＭＨＣ抗体）；悪性のＢ細胞上のＣＤ４０抗原を標的する他の抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＳＧＮ−４０）；ならびに腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導性リガンドレセプター１（ＴＲＡＩＬ−Ｒ１）を標的する抗体（例えば、アゴニストのヒトモノクローナル抗体ＨＧＳ−ＥＴＲ１）、ならびに固形腫瘍および造血器官の多くの腫瘍上で発現されるＴＲＡＩＬ−Ｒ２）；小分子に基づく癌治療（微小管インヒビターおよび／またはトポイソメラーゼインヒビターが挙げられるが、これらに限定されない（例えば、有糸分裂インヒビタードラスチンおよびドラスチンアナログ））；チューブリン結合因子Ｔ９００６０７；ＸＬ１１９；およびトポイソメラーゼインヒビターアミノカンプトテシン）、ＳＤＸ−１０５（塩酸ベンダムスチン）、イキサベピロン（ＢＭＳ−２４７５５０とも称されるエポチロンアナログ）、プロテインキナーゼＣインヒビター（例えば、ミドスタウリン（（ＰＫＣ−４１２、ＣＧＰ  ４１２５１、Ｎ−ベンゾイルスタウロスポリン）、ピクサントロン（ｐｉｘａｎｔｒｏｎｅ）、エロキサチン（抗新生物剤）、ガナイト（ｇａｎｉｔｅ）（硝酸ガリウム）、Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標）（サリドマイド）、サリドマイドの免疫調節性誘導体（例えば、レブリミド（かつてのレビミド）、ＡｆｆｉｎｉｔａｋＴＭ（プロテインキナーゼＣ−αのアンチセンスインヒビター）、ＳＤＸ−１０１（悪性リンパ球のアポトーシスを誘導するＲ−エトドラク）、クロファラビンのような第２世代プリンヌクレオチドアナログ、癌細胞によるタンパク質Ｂｃｌ−２の産生に関するインヒビター（例えば、アンチセンス因子オブリマーセン（ｏｂｌｉｍｅｒｓｅｎ）およびＧｅｎａｓｅｎｓｅ（登録商標））、プロテアソームインヒビター（例えば、ＶｅｌｃａｄｅＴＭ（ボルテゾミブ））、小分子キナーゼインヒビター（例えば、ＣＨＩＲ−２５８）、小分子ＶＥＧＦインヒビター（例えば、ＺＤ−６４７４）、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）９０の小分子インヒビター（例えば、１７−ＡＡＧ）、スペロイルアニリドヒドロキサム酸（ｓｕｂｅｒａｎｉｌｏｈｙｄｒｏｘａｍｉｃ  ａｃｉｄ）（ＳＡＨＡ）およびＦＲ−９０１２２８）のようなヒストンデアセチラーゼ（例えば、ハイブリッド／極性細胞分化ＨＰＣ）因子の小分子インヒビター、ならびにアポトーシス因子（例えば、Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標）（三酸化ヒ素）およびＸｃｙｔｒｉｎ（登録商標）（モ
テキサフィン（ｍｏｔｅｘａｆｉｎ）ガドリニウム））；ワクチン／免疫療法に基づく癌治療（ワクチンアプローチ（例えば、Ｉｄ−ＫＬＨ、オンコファージ、ビタレチン（ｖｉｔａｌｅｔｈｉｎｅ））、個別化免疫療法または活性イディオタイプ免疫療法（例えば、ＭｙＶａｘ（登録商標）個別化免疫療法、正式名称ＧＴＯＰ−９９）、Ｐｒｏｍｕｎｅ（登録商標）（ＣｐＧ  ７９０９、ｔｏｌｌ様レセプター９（ＴＬＲ９）に対する合成アゴニスト）、インターフェロン−α療法、ＩＬ−１２療法、ＩＬ−１５療法、およびＩＬ−２１療法が挙げられるが、これらに限定されない）；ステロイド療法；または他の癌治療が挙げられるが、これらに限定されず；ここで、上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体もしくはその抗原結合フラグメントおよびさらなる癌治療または複数のさらなる癌治療を用いる処置、は、本明細書の上記で記載されるような、上記ＩＬ−２またはその改変体を含む医薬による被検体の処置前か、処置中か、処置後に行われる。上記ＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体を含む医薬が、上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントおよび少なくとも１つの他の癌治療と共働する場合に、この医薬の使用は、複数の他の癌治療のいずれかまたは両方を用いる被検体の処置前か、処置中か、処置後であり得る。
【０２７５】
以下の実施例は、例示の目的で提供され、限定を目的とするものではない。
【実施例】
【０２７６】
（導入部）
以下の実施例で使用されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、ＣＨＩＲ−５．９およびＣＨＩＲ−１２．１２である。ＣＨＩＲ−５．９抗ＣＤ４０抗体およびＣＨＩＲ−１２．１２抗ＣＤ４０抗体は、ヒトＩｇＧ１重鎖遺伝子座およびヒトＫ軽鎖遺伝子座を有するトランスジェニックマウス（ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）（Ａｂｇｅｎｉｘ；Ｆｒｅｍｏｎｔ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ））の免疫化により作製されるヒトＩｇＧ１サブタイプ抗ヒトＣＤ４０モノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。ＣＤ４０細胞外ドメインを発現するＳＦ９昆虫細胞を、免疫原として使用した。
【０２７７】
簡単に述べると、免疫化マウスに由来する脾細胞を、ｄｅ  Ｂｏｅｒら（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１１３：１４３により以前に記載されたとおりに、５０％ポリエチレングリコールを使用して、１０：１の比で、ＳＰ  ２／０マウス骨髄腫細胞またはＰ３  ｘ  ６３Ａｇ８．６５３マウス骨髄腫細胞と融合させた。融合した細胞を、ヒポキサンチン（０．１ｍＭ）、アミノプテリン（０．０１ｍＭ）、チミジン（０．０１６ｍＭ）および０．５ｎｇ／ｍｌのｈＩＬ−６（Ｇｅｎｚｙｍｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）を補充した完全ＩＭＤＭ培地中に再懸濁した。この融合した細胞を、次いで、各ウェルが、平均して１つの増殖するハイブリドーマを含むように、９６ウェル組織培養プレートのウェル間に分配した。
【０２７８】
１０〜１４日後、ハイブリドーマ集団の上清を、特異的抗体の産生についてスクリーニングした。ハイブリドーマクローンによる特異的抗体の産生をスクリーニングするために、各ウェルからの上清を、プールし、まず、ＥＬＩＳＡによって、抗ＣＤ４０活性の特異性について試験した。次いで、陽性のものを、標準的なＦＡＣＳアッセイを用いる、ＥＢＶ−形質転換Ｂ細胞の蛍光細胞染色のために使用した。陽性のハイブリドーマ細胞を、０．５ｎｇ／ｍｌのｈＩＬ−６を含有するＩＭＤＭ／ＦＢＳ中で限界希釈することによって、２回クローニングした。
【０２７９】
合計３１匹のマウスの脾臓を、マウス骨髄腫ＳＰ２／０細胞と融合させて、ＥＬＩＳＡにおいて組換えＣＤ４０を認識する８９５の抗体を作製した。Ａｂｇｅｎｉｘ  ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）技術（Ａｂｇｅｎｉｘ；Ｆｒｅｍｏｎｔ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を使用して産生されたハイブリドーマの平均約１０％が、ヒトκ鎖の代わりにマウスλ軽鎖を含み得る。これらのマウスλ軽鎖を含有する抗体を選択した。細胞表面ＣＤ４０への結合もまた示す２６０の抗体のサブセットを、さらなる分析のために選択した。一連のサブクローニング手順の間に選択された安定なハイブリドーマを、結合アッセイおよび機能アッセイにおけるさらなる特徴付けに使用した。選択プロセスのさらなる詳細については、同時継続中の仮出願（いずれも、発明の名称「Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４０  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ」であり、それぞれ、２００３年１１月４日、２００３年１１月２６日、および２００４年４月２７日出願、割り当てられた米国特許出願第６０／５１７，３３７号（代理人事件整理番号：ＰＰ２０１０７．００１（０３５７８４／２５８４４２））、同第６０／５２５，５７９号（代理人事件整理番号：ＰＰ２０１０７．００２（０３５７８４／２７１５２５）））および同第６０／５６５，７１０号（代理人事件整理番号：ＰＰ２０１０７．００３（０３５７８４／２７７２１４）））を参照のこと。これらの特許文献の各内容は、その全体が、本明細書中に参考として援用される。
【０２８０】
７つの他のハイブリドーマからのクローンを、アンタゴニスト活性を有するものとして同定した。その相対アンタゴニスト能およびＡＤＣＣ活性に基づいて、２つのハイブリドーマクローンを、さらなる評価のために選択した（表２、以下）。これらを、１３１．２Ｆ８．５．９（５．９）および１５３．８Ｅ２．Ｄ１０．Ｄ６．１２．１２（１２．１２）と名付けた。
【０２８１】
【表２】
2011126900.tif 000003
【０２８２】
マウスハイブリドーマ株１３１．２Ｆ８．５．９（ＣＭＣＣ＃１２０４７）およびハイブリドーマ株１５３．８Ｅ２．Ｄ１０．Ｄ６．１２．１２（ＣＭＣＣ＃１２０５６）は、それぞれ、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ；１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ  ２０１１０−２２０９（ＵＳＡ））に、特許寄託番号ＰＴＡ−５５４２およびＰＴＡ−５５４３の下、寄託されている。
【０２８３】
候補抗体の可変領域をコードするｃＤＮＡを、ＰＣＲにより増幅し、クローニングし、そして、配列決定した。ＣＨＩＲ−１２．１２抗体の軽鎖および重鎖についてのアミノ酸配列を、それぞれ、図１Ａおよび１Ｂに示す。配列番号２（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の軽鎖）および配列番号４（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の重鎖）もまた参照のこと。ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の重鎖の改変体を、図１Ｂに示す（配列番号５もまた参照のこと）。この改変体は、配列番号４の第１５３位のアラニン残基の代わりにセリン残基を有するという点で配列番号４と異なる。ＣＨＩＲ−１２．１２抗体の軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、それぞれ、図２Ａおよび２Ｂに示す。配列番号１（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の軽鎖のコード配列）および配列番号３（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の重鎖のコード配列）もまた参照のこと。ＣＨＩＲ−５．９抗体の軽鎖および重鎖についてのアミノ酸配列を、それぞれ、図３Ａおよび３Ｂに示す。配列番号６（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−５．９の軽鎖）および配列番号７（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−５．９の重鎖）もまた参照のこと。ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−５．９の重鎖の改変体を、図３Ｂに示す（配列番号８もまた参照のこと）。この改変体は、配列番号７の第１５８位のアラニン残基の代わりにセリン残基を有するという点で配列番号７と異なる。
【０２８４】
個々のハイブリドーマに由来する抗体について予測されるとおり、相補性決定領域（ＣＤＲ）内のヌクレオチド配列に実質的なバリエーションが存在する。ＶＨのＣＤＲ３領域内の多様性は、抗体特異性を最も有意に決定するものと考えられる。
【０２８５】
ＦＡＣＳ分析により示されるように、ＣＨＩＲ−５．９およびＣＨＩＲ−１２．１２は、ヒトＣＤ４０に特異的に結合し、そして、ＣＤ４０−リガンド結合を妨げ得る。両方のｍＡｂが、細胞表面のＣＤ４０に予め結合したＣＤ４０リガンドと競合し得る。ＣＨＩＲ−５．９のヒトＣＤ４０への結合親和性は、１．２×１０−８Ｍであり、ＣＨＩＲ−１２．１２のヒトＣＤ４０への結合親和性は、５×１０−１０Ｍである。
【０２８６】
ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体およびＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体は、強力なアンタゴニストであり、正常なＢ細胞のインビトロＣＤ４０リガンド媒介性の増殖を阻害し、そしてＮＨＬ患者およびＣＬＬ患者から得た癌細胞のインビトロＣＤ４０リガンド媒介性の増殖を阻害する。インビトロにおいて、両方の抗体は、ＡＤＣＣによって、ＮＨＬ患者から得た原発性癌細胞を殺傷する。用量依存性の抗腫瘍活性を、異種移植片ヒトリンパ腫モデルにおいて見出した。これらの結果、およびこれらの結果を得るために使用したアッセイのより詳細な説明については、同時継続中の仮出願（いずれも、発明の名称「Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４０  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ」であり、それぞれ、２００３年１１月４日、２００３年１１月２６日、および２００４年４月２７日出願、割り当てられた米国特許出願第６０／５１７，３３７号（代理人事件整理番号：ＰＰ２０１０７．００１（０３５７８４／２５８４４２））、同第６０／５２５，５７９号（代理人事件整理番号：ＰＰ２０１０７．００２（０３５７８４／２７１５２５）））および同第６０／５６５，７１０号（代理人事件整理番号：ＰＰ２０１０７．００３（０３５７８４／２７７２１４）））を参照のこと。これらの特許文献の各内容は、その全体が、本明細書中に参考として援用される。
【０２８７】
（実施例１：ＣＨＩＲ−５．９およびＣＨＩＲ−１２．１２は、ＣＤ４０上で１５Ｂ８とは異なるエピトープに結合する）
候補モノクローナル抗体であるＣＨＩＲ−５．９およびＣＨＩＲ−１２．１２は、ＣＤ４０への結合については互いに競合するが、１５Ｂ８（ＩｇＧ２抗ＣＤ４０  ｍＡｂ）への結合については競合しない（国際公開第ＷＯ０２／２８９０４号を参照のこと）。Ｂｉａｃｏｒｅを用いた抗体の競合結合研究を、アミンカップリングによりプロテインＡが固定化されたＣＭ５バイオセンサチップを用いて設計し、このプロテインＡを用いて、抗ＣＤ４０、ＣＨＩＲ−１２．１２または１５Ｂ８のいずれかを捕捉した。種々の濃度のＣＤ４０−ｈｉｓで、標準の会合／解離結合曲線を観察する（データ示さず）。競合研究のために、ＣＨＩＲ−１２．１２または１５Ｂ８のいずれかを、プロテインＡの表面上で捕捉した。引き続いて、種々の濃度のＣＤ４０−ｈｉｓ／ＣＨＩＲ−５．９  Ｆａｂ複合体（１００ｎＭ  ＣＤ４０：１μＭ  ＣＨＩＲ−５．９  Ｆａｂ）を、修飾した表面を横切って流した。ＣＨＩＲ−１２．１２の場合、複合体の会合は観察されず、ＣＨＩＲ−５．９が、ＣＨＩＲ−１２．１２のＣＤ４０−ｈｉｓへの結合をブロックすることを示す。１５Ｂ８については、Ｆａｂ  ＣＨＩＲ−５．９複合体の会合が観察され、ＣＨＩＲ−５．９は、１５Ｂ８のＣＤ４０結合部位への結合をブロックしないことを示す。しかし、複合体が解離する速度（ｏｆｆ  ｒａｔｅ）は、劇的に増加した（データ示さず）。
【０２８８】
１５Ｂ８およびＣＨＩＲ−１２．１２は、ＣＤ４０−ｈｉｓ結合について競合しないことがまた決定された。この実験は、プロテインＡバイオセンサチップ上にＣＨＩＲ−１２．１２を捕捉し、コントロールｈＩｇＧ１で残留のプロテインＡの部位をブロックし、ＣＤ４０−ｈｉｓを結合させ、次いで、１５Ｂ８を修飾された表面上を流すことによって構成された。１５Ｂ８は、これらの条件下で結合し、ＣＨＩＲ−１２．１２は、１５Ｂ８が
ＣＤ４０に結合することをブロックしないことを示した。
【０２８９】
（実施例２：ＣＨＩＲ−１２．１２  ｍＡｂおよびＣＨＩＲ−５．９  ｍＡｂの結合特性）
プロテインＡを、アミンカップリングにより、ＣＭ５バイオセンサチップ上に固定化した。ヒト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体（１．５μｇ／ｍｌ）を、この修飾したバイオセンサの表面に１０μｌ／ｍｌで、１．５分間捕捉した。組換え可溶性ＣＤ４０−ｈｉｓを、種々の濃度で、バイオセンサの表面上に流した。抗体および抗原を、０．０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．００５％  Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  Ｐ２０（ＨＢＳ−ＥＰ）中に希釈した。動力学定数および親和性定数を、１：１の相互作用モデル／全体的なフィットを用いて、Ｂｉａｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用して決定した。
【０２９０】
以下の表３に示すように、ＣＨＩＲ−５．９およびＣＨＩＲ−１２．１２の解離する速度には１２１倍の差があり、結果として、ＣＨＩＲ−１２．１２について親和性が２４倍高かった。
【０２９１】
【表３】
2011126900.tif 000004
【０２９２】
（実施例３：モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２およびモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９についてのエピトープの特徴付け）
モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２およびモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９により認識されるＣＤ４０上のエピトープの位置を決定するために、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウェスタンブロット分析を実施した。精製したＣＤ４０（０．５μｇ）を、還元条件および非還元条件下で、４〜１２％のＮＵＰＡＧＥゲル上で分離し、ＰＶＤＦメンブレンに移し、そして、１０μｇ／ｍｌ濃度のモノクローナル抗体でプローブした。ブロットを、アルカリホスファターゼ結合体化抗ヒトＩｇＧでプローブし、そして、アルカリホスファターゼについてのＷｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｕｅ（登録商標）安定化基質（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて発色させた。
【０２９３】
結果は、抗ＣＤ４０モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２が、ＣＤ４０の非還元型形態および還元型形態の両方の上にあるエピトープを認識し、ＣＤ４０の非還元型形態が、ＣＤ４０の還元型形態よりも高い強度を示すことを示す（表４；ブロットは示さず）。認識が、ＣＤ４０の両方の形態について陽性であるという事実は、この抗体が、線形配列であるコンホメーションのエピトープの一部と相互作用することを示す。モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９は、主に、ＣＤ４０の非還元型形態を認識し、この抗体が、一次コンホメーションのエピトープと相互作用することを示唆する（表４；ブロットは示さず）。
【０２９４】
【表４】
2011126900.tif 000005
【０２９５】
ＣＤ４０上の抗原性領域をマッピングするために、ＣＤ４０の４つの細胞外ドメインをクローニングし、そして、ＧＳＴ融合タンパク質として昆虫細胞において発現させた。４つのドメインの分泌を、ＧＰ６７分泌シグナルで確認した。昆虫細胞の上清を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウェスタンブロット分析により分析し、エピトープを含むドメインを同定した。
【０２９６】
モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２は、還元条件および非還元条件の両方の下で、ドメイン２上のエピトープを認識する（表５；ブロットは示さず）。対照的に、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９は、ドメイン２に対して、非常に弱い認識を示す（表５；ブロットは示さず）。これらの抗体のいずれもが、この分析において、ドメイン１、３または４を認識しない。
【０２９７】
【表５】
2011126900.tif 000006
【０２９８】
ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２により認識されるエピトープをより正確に規定するために、ペプチドを、ＣＤ４０の細胞外ドメイン２から合成し、これは、配列ＰＣＧＥＳＥＦＬＤＴＷＮＲＥＴＨＣＨＱＨＫＹＣＤＰＮＬＧＬＲＶＱＱＫＧＴＳＥＴＤＴＩＣＴ（配列番号１０または配列番号１２に示される配列の残基６１〜１０４）に対応する。１アミノ酸オフセット（ｏｆｆｓｅｔ）を有する３５の１０マーペプチドを含むＳＰＯＴメンブレン（Ｓｉｇｍａ）を作製した。ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２および抗ヒトＩｇＧβ−ガラクトシダーゼを二次抗体として用いるウェスタンブロット分析を実施した。このブロットを、細片に分け、ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−５．９で再度プローブして、この抗体により認識される領域を決定した。
【０２９９】
１０μｇ／ｍｌの抗ＣＤ４０モノクローナル抗体ＣＨＩＲ１２．１２でプローブするＳＰＯＴ分析では、スポット１８〜２２の反応が陽性であった。これらのペプチドによりカバーされる配列領域を、表６に示す。
【０３００】
【表６】
2011126900.tif 000007
【０３０１】
これらの結果は、以下の線形エピトープに対応する：ＹＣＤＰＮＬ（配列番号１０または配列番号１２に示す配列の残基８２〜８７）。このエピトープは、Ｙ８２、Ｄ８４およびＮ８６を含み、これらは、ＣＤ４０−ＣＤ４０リガンドの相互作用に関与すると予測されている。
【０３０２】
ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−５．９を用いるＳＰＯＴ分析は、表７に示されるスポット２０〜２２により表されるペプチドの弱い認識を示し、これは、そのＣＤ４０への結合において、領域ＹＣＤＰＮＬＧＬ（配列番号１０または配列番号１２に示す配列の残基８２〜８９）が関与することを示唆した。ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２およびｍＡｂ  ＣＨＩＲ−５．９は、ＢＩＡＣＯＲＥ分析においてＣＤ４０への結合に関して、互いに競合することに注意すべきである。
【０３０３】
【表７】
2011126900.tif 000008
【０３０４】
ＳＰＯＴ分析により同定した線形エピトープは、ＣＤ４０  Ｂ１モジュールの内部である。ＣＤ４０  Ｂ１モジュールの配列は、ＨＫＹＣＤＰＮＬＧＬＲＶＱＱＫＧＴＳＥＴＤＴＩＣ（配列番号１０または配列番号１２の残基８０〜１０３）である。
【０３０５】
線形エピトープ内でＣＨＩＲ−１２．１２について同定されたのはＣ８３である。このシステイン残基がＣ１０３とジスルフィド結合を形成することは公知である。ＣＨＩＲ−１２．１２  ｍＡｂのコンホメーションのエピトープは、このジスルフィド結合（Ｃ８２−Ｃ１０３）および／またはＣ１０３にコンホメーション的に近い周囲のアミノ酸を含むようである。
【０３０６】
（実施例４：ＣＨＩＲ−１２．１２とＩＬ−２との併用療法は、動物モデルにおいて相加的な抗腫瘍活性を示す）
ＣＨＩＲ−１２．１２  ｍＡｂは、２つの抗腫瘍機構（増殖／生存シグナルの遮断およびＡＤＣＣの誘導）のいずれか／両方によって、腫瘍の負荷を軽減する所望の薬理学的効果を生じることが予想される。現在入手可能なヒトリンパ腫の異種移植片モデルは、発生初期の癌細胞とは対照的に、それらの増殖および生存ついてのＣＤ４０刺激に依存しない長期のリンパ腫細胞株を使用する。したがって、腫瘍の増殖／生存シグナルの遮断に基づくこれらのｍＡｂの抗腫瘍活性の構成要素は、これらのモデルにおける抗腫瘍効力に対して寄与することが予想されない。これらのモデルにおけるその効力は、上記ＡＣＤＤ（ＣＨＩＲ−１２．１２  ｍＡｂに関する第２の抗腫瘍機構）に依存する。
【０３０７】
ＣＨＩＲ−１２．１２  ｍＡｂとＩＬ−２とを用いる併用療法を、病期にあるヒトＮＨＬ  Ｎａｍａｌｗａ異種移植片モデルにおいて評価した。一貫した腫瘍増殖を確認するために、Ｔ細胞欠損ヌードマウスを，３Ｇｙで全身被爆（ｗｈｏｌｅ−ｂｏｄｙ  ｉｒｒａｄｉａｔｅｄ）させ、腫瘍播種の１日前にその免疫系をさらに抑制した。腫瘍細胞を、マウス１匹あたり５×１０６個にて右側面の皮下に播種した。処置を、腫瘍の体積が約１００〜２００ｍｍ３に達したとき（腫瘍の播種の約７日後）に開始した。腫瘍を有するマウスを、以下の通りに処置した：（１）１０ｍｇ／ｋｇのＩｇＧ１を腹腔内に、１週間に１回で４週間投与；（２）１ｍｇ／ｋｇのＣＨＩＲ−１２．１２  ｍＡｂを腹腔内に、１週間に１回で４週間投与；（３）０．５ｍｇ／ｋｇのＩＬ−２を皮下に、８日間、毎日投与；（４）０．５ｍｇ／ｋｇのＩＬ−２を皮下に、８日間、毎日投与に加えて、１ｍｇ／ｋｇのＣＨＩＲ−１２．１２  ｍＡｂを腹腔内に、１週間に１回で４週間投与、および（５）０．５ｍｇ／ｋｇのＩＬ−２を皮下に、８日間、毎日投与に加えて、１０ｍｇ／ｋｇのＣＨＩＲ−１２．１２  ｍＡｂを腹腔内に、１週間に１回で４週間投与。腫瘍の体積を、１週間に２回記録した。データを、ＡＮＯＶＡを使用して分析した。
【０３０８】
ＣＨＩＲ−１２．１２およびＩＬ−２は両方とも単独で、Ｎａｍａｌｗａ腫瘍の増殖を阻害した（Ｎ＝１０マウス／群）。ＣＨＩＲ−１２．１２とＩＬ−２との組み合わせは、相加的な抗腫瘍活性を生じた（図５）。
【０３０９】
（実施例５：ＣＨＩＲ−１２．１２は、正常ヒトＢ細胞におけるＣＤ４０Ｌが媒介するＣＤ４０の生き残りおよび細胞のシグナル伝達経路を遮断する）
可溶性ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）は、Ｂ細胞を活性化し、機能的な応答の種々の局面（生き残りおよび増殖の増強、ならびにＮＦκＢ、ＥＲＫ／ＭＡＰＫ、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、およびｐ３８シグナル伝達経路の活性化を含む）を誘導する。さらに、ＣＤ４０Ｌ媒介性のＣＤ４０刺激は、正常なＢ細胞における切断型ＰＡＲＰの減少および抗アポトーシスタンパク質ＸＩＡＰおよびＭｃｌ−１の誘導により、生き残りシグナルを与える。ＣＤ４０Ｌ媒介性のＣＤ４０刺激はまた、ＴＲＡＦ２およびＴＲＡＦ３を補充して、ＣＤ４０の細胞質ドメインに結合する。
【０３１０】
以下の研究は、ＣＨＩＲ−１２．１２が、正常なヒトＢ細胞へのこれらの刺激効果の全てを直接阻害したことを実証する。例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２処理により、時間依存的かつ用量依存的な様式でのカスパーゼ−９、カスパーゼ−３、およびＰＡＲＰの切断の増加、ならびに、ＸＩＡＰおよびＭｃｌ−１の減少を生じ、Ｂ細胞のアポトーシスを修復した。ＣＨＩＲ−１２．１２での処理はまた、ＣＤ４０Ｌ媒介性のＣＤ４０刺激に応答して、ＩκＢキナーゼ（ＩＫＫ）αおよびβのリン酸化（ＮＦκＢ経路）、ＥＲＫ、Ａｋｔおよびｐ３８も阻害した。さらに、ＣＨＩＲ−１２．１２が、最初のＣＤ４０Ｌ媒介性のＣＤ４０刺激なしではこれらのアポトーシス効果を誘発しなかったことが見出された。
【０３１１】
（ＣＨＩＲ−１２．１２は、ＰＡＲＰの切断を誘導することにより、ＣＤ４０リガンドにより媒介される生き残りを阻害した）
これらの実験において、健康なドナーからの０．６×１０６個の正常なヒトＢ細胞（８５％〜９５％の間の純度（％））を、１μｇ／ｍｌのｓＣＤ４０Ｌ（Ａｌｅｘｉｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｂｉｎｇｈａｍ，Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，ＵＫ）で刺激した。次いで、ＣＨＩＲ−１２．１２（１０μｇ／ｍｌ）およびコントロールのＩｇＧを添加した。細胞を、０分、２０分、２時間、６時間、１８時間および２６時間で回収した。切断型カスパーゼ−９、切断型カスパーゼ−３、切断型ＰＡＲＰおよびβ−アクチンコントロールを、細胞溶解物において、ウェスタンブロットにより検出した。
【０３１２】
簡単に述べると、ＣＤ４０Ｌ媒介性のＣＤ４０刺激は、切断型カスパーゼ−９、切断型カスパーゼ−３、または切断型ＰＡＲＰの経時的な増加を生じなかったので、生き残りシグナルを提供したことが観察され、これらの細胞は、アポトーシスを受けなかったことを示した。しかし、ＣＨＩＲ−１２．１２での処理は、これらの切断生成物の増加をもたらし、ＣＨＩＲ−１２．１２処理が、ｓＣＤ４０Ｌで刺激した正常なＢ細胞における生き残りシグナル伝達に対するＣＤ４０Ｌ結合の効果を抑止し、Ｂ細胞アポトーシスを修復したことを示した（データ示さず）。
【０３１３】
（ＣＨＩＲ−１２．１２は、「生き残った」抗アポトーシスタンパク質の発現を阻害した）
これらの実験において、健康なドナーからの０．６×１０６個の正常なヒトＢ細胞（８５％〜９５％の間の純度（％））を、１μｇ／ｍｌのｓＣＤ４０Ｌ（Ａｌｅｘｉｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｂｉｎｇｈａｍ，Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，ＵＫ）で刺激した。次いで、ＣＨＩＲ−１２．１２（１０μｇ／ｍｌ）およびコントロールのＩｇＧを添加した。細胞を、０分、２０分、２時間、６時間、１８時間および２６時間において回収した。Ｍｃｌ−１、ＸＩＡＰ、ＣＤ４０およびβ−アクチンコントロールを、細胞溶解物において、ウェスタンブロットにより検出した。
【０３１４】
簡単に述べると、ｓＣＤ４０Ｌ刺激は、Ｍｃｌ−１およびＸＩＡＰの経時的な持続性の発現を生じた。しかし、ｓＣＤ４０Ｌで刺激した細胞のＣＨＩＲ１２．１２での処理は、これらのタンパク質の発現の経時的な減少を生じた（データ示さず）。Ｍｃｌ−１およびＸＩＡＰは、アポトーシス経路を遮断し得る「生き残り」シグナルであるので、これらの結果は、ＣＨＩＲ−１２．１２処理が、ｓＣＤ４０Ｌで刺激した正常なＢ細胞におけるアポトーシスに対する障壁を取り除くことを示す。
【０３１５】
（ＣＨＩＲ−１２．１２での処理は、正常なＢ細胞において、ＩＫＫα（Ｓｅｒ１８０）およびＩＫＫβ（Ｓｅｒ１８１）のリン酸化を阻害した）
これらの実験において、健康なドナーからの１．０×１０６個の正常なヒトＢ細胞（８５％〜９５％の間の純度（％））を、１μｇ／ｍｌのｓＣＤ４０Ｌ（Ａｌｅｘｉｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｂｉｎｇｈａｍ，Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，ＵＫ）で刺激した。次いで、ＣＨＩＲ−１２．１２（１０μｇ／ｍｌ）およびコントロールのＩｇＧを添加した。細胞を、０分および２０分で回収した。リン酸化ＩＫＫα（Ｓｅｒ１８０）およびＩＫＫβ（Ｓｅｒ１８１）および総ＩＫＫβコントロールを、細胞溶解物において、ウェスタンブロットにより検出した。
【０３１６】
簡単に述べると、ｓＣＤ４０Ｌによる刺激は、ＩＫＫα（Ｓｅｒ１８０）およびＩＫＫβ（Ｓｅｒ１８１）の経時的なリン酸化を生じた；しかし、ＣＨＩＲ−１２．１２での処理は、正常なＢ細胞におけるｓＣＤ４０Ｌ刺激に対するこの応答を抑止した（データ示さず）。
【０３１７】
（ＣＨＩＲ−１２．１２での処理は、ＣＤ４０リガンドにより媒介される生き残りを、用量依存性の様式で阻害した）
これらの実験において、健康なドナーからの０．６×１０６個の正常なヒトＢ細胞（８５％〜９５％の間の純度（％））を、１μｇ／ｍｌのｓＣＤ４０Ｌ（Ａｌｅｘｉｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｂｉｎｇｈａｍ，Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，ＵＫ）で刺激した。ＣＨＩＲ−１２．１２（０．０１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、０．２μｇ／ｍｌ、０．５μｇ／ｍｌ、１．０μｇ／ｍｌ）およびコントロールのＩｇＧを次いで添加した。細胞を、２４時間で回収した。切断型ＰＡＲＰおよびβアクチンコントロールを、細胞溶解物において、ウェスタンブロットにより検出した。
【０３１８】
簡単に述べると、ＣＨＩＲ−１２．１２処理は、ｓＣＤ４０Ｌ刺激した細胞において、用量依存性の様式で、ＰＡＲＰの切断の増加を生じ、それゆえ、ｓＣＤ４０Ｌで刺激した正常なＢ細胞において、生き残りシグナル伝達経路を抑止した（データ示さず）。
【０３１９】
（ＣＨＩＲ−１２．１２は、「生き残った」抗アポトーシスタンパク質の発現を、用量依存性の様式で阻害した）
これらの実験において、健康なドナーからの０．６×１０６個の正常なヒトＢ細胞（８５％〜９５％の間の純度（％））を、１μｇ／ｍｌのｓＣＤ４０Ｌ（Ａｌｅｘｉｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｂｉｎｇｈａｍ，Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，ＵＫ）で刺激した。ＣＨＩＲ−１２．１２（０．５μｇ／ｍｌ、２μｇ／ｍｌ、および１０μｇ／ｍｌ）およびコントロールのＩｇＧを添加した。細胞を、２２時間で回収した。Ｍｃｌ−１、ＸＩＡＰ、切断型ＰＡＲＰおよびβアクチンコントロールを、細胞溶解物において、ウェスタンブロットにより検出した。
【０３２０】
簡単に述べると、ＣＨＩＲ−１２．１２処理は、ｓＣＤ４０Ｌで刺激した細胞において、用量依存性の様式で、Ｍｃｌ−１およびＸＩＡＰの発現を減少し、そして、切断型ＰＡＲＰの発現を増加し、従って、ｓＣＤ４０Ｌで刺激した正常なＢ細胞におけるアポトーシス経路に対するこれらの障壁を抑止した（データ示さず）。
【０３２１】
（ＣＨＩＲ−１２．１２は、可溶性ＣＤ４０Ｌシグナル伝達の非存在下では、抗アポトーシスタンパク質、切断型ＰＡＲＰおよびＸＩＡＰの発現に影響を及ぼさなかった）
これらの実験において、健康なドナーからの１．０×１０６個の正常なヒトＢ細胞（８５％〜９５％の間の純度（％））を、ＣＨＩＲ−１２．１２（１０μｇ／ｍｌ）およびコントロールのＩｇＧのみで処理した（すなわち、細胞は、抗体を添加する前に、ｓＣＤ４０Ｌで事前に刺激されなかった）。細胞を、０時間、４時間、１４時間および１６時間にて回収した。ＸＩＡＰ、切断型ＰＡＲＰおよびβアクチンコントロールを、細胞溶解物において、ウェスタンブロットにより検出した。
【０３２２】
簡単に述べると、これらの結果は、ｓＣＤ４０Ｌ刺激なしでは、細胞は、ＩｇＧ処理コントロール細胞およびＣＨＩＲ−１２．１２細胞の両方において、増加する濃度の切断型ＰＡＲＰを発現したが、ＸＩＡＰの発現は一定のままであったことを示す（データ示さず）。これらのデータは、ＣＨＩＲ−１２．１２が、ＣＤ４０Ｌ刺激なしで、正常なヒトＢ細胞においてアポトーシスを誘導しないことを示す。
【０３２３】
（ＣＨＩＲ−１２．１２は、正常なＢ細胞において、ＩＫＫα（Ｓｅｒ１８０）およびＩＫＫβ（Ｓｅｒ１８１）、Ａｋｔ、ＥＲＫならびにｐ３８のリン酸化を阻害する）
これらの実験において、健康なドナーからの１．０×１０６個の正常なヒトＢ細胞（８５％〜９５％の間の純度（％））を、１％  ＦＢＳ含有培地中で血清飢餓状態にし、そして、１μｇ／ｍｌのｓＣＤ４０Ｌ（Ａｌｅｘｉｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｂｉｎｇｈａｍ，Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，ＵＫ）で刺激した。この培養物を、ＣＨＩＲ−１２．１２（１μｇ／ｍｌおよび１０μｇ／ｍｌ）およびコントロールのＩｇＧで処理した。細胞を、０分および２０分にて回収した。ホスホ−ＩＫＫα、ホスホ−ＩＫＫβ、総ＩＫＫβ、ホスホ−ＥＲＫ、総ＥＲＫ、ホスホ−Ａｋｔ、総Ａｋｔ、ホスホ−ｐ３８、および総ｐ３８を、細胞溶解物において、ウェスタンブロットにより検出した。
【０３２４】
簡単に述べると、ｓＣＤ４０Ｌ刺激は、ＩＫＫα／βのリン酸化、ＥＲＫのリン酸化、Ａｋｔのリン酸化、およびｐ３８のリン酸化の増加を生じ、従って、細胞の生き残りおよびまたは増殖をもたらした。ＣＨＩＲ−１２．１２での細胞の処理は、ｓＣＤ４０Ｌ刺激の、正常なＢ細胞におけるこれらのシグナル伝達経路に対する効果を抑止した（データ示さず）。
【０３２５】
（ＣＨＩＲ−１２．１２は、ＣＤ４０シグナル伝達カスケードにおけるＰＩ３ＫおよびＭＥＫ／ＥＲＫのような複数のシグナル伝達経路を阻害する）
これらの実験において、健康なドナーからの１．０×１０６個の正常なヒトＢ細胞（８５％〜９５％の間の純度（％））を、１％  ＦＢＳ含有培地中で血清飢餓状態にし、そして、１μｇ／ｍｌのｓＣＤ４０Ｌ（Ａｌｅｘｉｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｂｉｎｇｈａｍ，Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，ＵＫ）で刺激した。この培養物をまた、ＣＨＩＲ−１２．１２（１μｇ／ｍｌおよび１０μｇ／ｍｌ）、Ｗｏｒｔｍａｎｉｎ（一種のＰＩ３Ｋ／Ａｋｔインヒビター；１μＭおよび１０μＭ）、ＬＹ２９４００２（一種のＰＩ３Ｋ／Ａｋｔインヒビター；１０μＭおよび３０μＭ）およびＰＤ９８０９５（一種のＭＥＫインヒビター；１０μｇ／ｍｌおよび３０μｇ／ｍｌ）で処理した。細胞を、０分および２０分にて回収した。ホスホ−ＥＲＫ、ホスホ−Ａｋｔ、総Ａｋｔ、ホスホ−ＩＫＫα／β、および全体を、細胞溶解物において、ウェスタンブロットにより検出した。
【０３２６】
簡単に述べると、これらの結果は、ＣＨＩＲ−１２．１２が、これらのシグナル伝達分子の全てのリン酸化を抑止したことを示す一方で、シグナル伝達インヒビターは、特定のシグナル伝達の抑止のみを示し、ＣＨＩＲ−１２．１２が、ＣＤ４０Ｌ刺激により媒介されるこれらのシグナル伝達分子の上流を阻害するようであることを示した（データ示さず）。
【０３２７】
（ＣＨＩＲ−１２．１２は、正常なＢ細胞において、シグナル伝達分子であるＴＲＡＦ２およびＴＲＡＦ３の、ＣＤ４０の細胞質ドメインへの結合を阻害する）
これらの実験において、健康なドナーからの４．０×１０６個の正常なヒトＢ細胞（８５％〜９５％の間の純度（％））を、１％  ＦＢＳ含有培地中で４時間、血清飢餓状態にし、そして、１μｇ／ｍｌのｓＣＤ４０Ｌ（Ａｌｅｘｉｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｂｉｎｇｈａｍ，Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，ＵＫ）で２０分間刺激した。細胞を、０分および２０分にて回収した。ＣＤ４０を、ポリクローナル抗ＣＤ４０（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＣＡ）を用いて免疫沈降させ、そして、ウェスタンブロットにおいて、抗ＴＲＡＦ２  ｍＡｂ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＣＡ）、抗ＴＲＡＦ３  ｍＡｂ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＣＡ）および抗ＣＤ４０  ｍＡｂ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＣＡ）を用いて、プローブした。
【０３２８】
簡単に述べると、この結果は、ＴＲＡＦ２およびＴＲＡＦ３が、ｓＣＤ４０Ｌ刺激の後に、ＣＤ４０と共沈殿したことを示す。対照的に、ＣＨＩＲ−１２．１２での処理は、ｓＣＤ４０Ｌで刺激した正常なＢ細胞において、ＣＤ４０−ＴＲＡＦ２／３シグナル伝達複合体の形成を抑止した。ＣＤ４０の発現には変化はなかった（データ示さず）。
【０３２９】
理論に束縛されないが、これらの実験の結果、および上に概説した実施例の結果は、ＣＨＩＲ−１２．１２抗体が、固有の特性の組み合わせを有する二重作用（ｄｕａｌ  ａｃｔｉｏｎ）アンタゴニスト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体であることを示している。この完全ヒトモノクローナル抗体は、Ｂ細胞の生き残りおよび増殖のためのＣＤ４０Ｌ媒介性のＣＤ４０シグナル伝達経路を遮断する；このアンタゴニスト性は、最終的に細胞死をもたらす。ＣＨＩＲ−１２．１２はまた、エフェクター細胞による認識および結合を媒介し、抗体依存性の細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を開始する。ＣＨＩＲ−１２．１２がいったんエフェクター細胞に結合すると、細胞溶解酵素が放出され、Ｂ細胞のアポトーシスおよび溶解をもたらす。ＣＨＩＲ−１２．１２は、前臨床の腫瘍モデルで比較した場合、リツキシマブよりも強力な抗腫瘍抗体である。
【０３３０】
（実施例６：アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体のための液体薬学的処方物）
タンパク質の安定性は、安定化または不安定化を生じる溶液のｐＨに伴って変化するタンパク質の表面電荷として、溶液のｐＨに対して敏感であることが公知である。したがって、処方物の最適でないｐＨは、静電的相互作用を変化させ、凝集、沈殿などのようなアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の物理学的分解をもたらす。ｐＨ条件における変化はまた、共有結合の切断を生じ、断片化、脱アミノ化などのような化学的分解をもたらす。したがって、この研究を、凝集、断片化および脱アミノ化に起因するアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の分解を最小化する、溶液の最適なｐＨを同定するために設計した。
【０３３１】
本研究の目的は、この抗体についての最適な溶液環境を選択するために、生物物理学的方法および生化学的方法の両方により、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体ＣＨＩＲ−１２．１２の安定性に対する溶液のｐＨの効果を調べることであった。示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）の結果は、ＣＨＩＲ−１２．１２のコンホメーションの安定性が、ｐＨ５．５〜６．５を有する処方物において最適であることを示した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析、サイズ排除ＨＰＬＣ（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）分析、およびカチオン交換ＨＰＬＣ（ＣＥＸ−ＨＰＬＣ）分析の組み合わせに基づくと、ＣＨＩＲ−１２．１２の物理化学的な安定性は、ｐＨ約５．０〜５．５において最適である。これらの結果を鑑みて、この抗体を含有する１つの推奨される液体薬学的処方物は、約１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム中に処方された約２０ｍｇ／ｍｌのＣＨＩＲ−１２．１２を含有し、ｐＨ約５．５のｐＨを有する処方物である。
【０３３２】
（材料および方法）
処方物の研究において使用されるＣＨＩＲ−１２．１２抗体は、ＣＨＯ細胞培養手順により作製されたヒトモノクローナル抗体である。このＭＡｂは、１５０ｋＤａの分子量を有し、ジスルフィド結合により互いに連結された２つの軽鎖および２つの重鎖から構成される。この抗体は、種々の癌および自己免疫性／炎症性疾患の処置のために、ＣＤ４０を発現する細胞（正常および悪性のＢ細胞を含む）上のＣＤ４０細胞表面レセプターに対して標的される。
【０３３３】
この研究のために使用される抗ＣＤ４０薬物原料（ｄｒｕｇ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅ）は、ＣＨＯに由来する精製抗ＣＤ４０（ＣＨＩＲ−１２．１２）のバルクロットであった。この薬物原料の組成は、１０ｍＭのクエン酸ナトリウム、１５０ｍＭの塩化ナトリウム（ｐＨ６．５）中９．７ｍｇ／ｍｌのＣＨＩＲ−１２．１２抗体であった。この研究におけるコントロールサンプルは、一般に認められた薬物原料であり、その後、≦−６０℃にて凍結し、室温で融解し、そして、所定の時点において、安定性サンプルとともに試験した。この安定性サンプルは、異なるｐＨ溶液に対する薬物原料の透析により調製したものであり、そして、各サンプルにおけるＣＨＩＲ−１２．１２の濃度を、表８に示すように、ＵＶ２８０により測定した。
【０３３４】
【表８】
2011126900.tif 000009
【０３３５】
種々の処方物におけるＣＨＩＲ−１２．１２抗体の物理化学的安定性を、以下のプロトコルを用いてアッセイした。
【０３３６】
（示差走査熱量測定法（ＤＳＣ））
異なる処方のサンプルのコンホメーションの安定性を、１℃／分で、１５℃から９０℃まで加熱しながら、ＭｉｃｒｏＣａｌ  ＶＰ−ＤＳＣを用いてモニターした。
【０３３７】
（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）
断片化および凝集を、非還元条件および還元条件下で、４〜２０％のＴｒｉｓ−グリシンゲルを用いて評価した。タンパク質を、クマシーブルー染色により検出した。
【０３３８】
（サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ））
タンパク質の断片化および凝集をまた、０．７ｍｌ／分の流速で、１００ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．０）を移動相として用いて、Ｔｏｓｏｈａａｓ  ＴＳＫ−ＧＥＬ  ３０００ＳＷＸＬカラムを備えるＷａｔｅｒ  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ＨＰＬＣにより測定した。
【０３３９】
（カチオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ−ＨＰＬＣ））
分解に関連する電荷の交換を、０．５ｍｌ／分の流速で、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３）を移動相Ａとして、そして、５００ｍＭのＮａＣｌを含有する５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３）を移動相Ｂとして用いて、Ｄｉｏｎｅｘ  Ｐｒｏｐａｃ  ＷＣＸ−１０カラムを備える、Ｗａｔｅｒｓ  ６００ｓ  ＨＰＬＣシステムを使用して測定した。
【０３４０】
（結果および考察）
（コンホメーション安定性研究）
ＣＨＩＲ−１２．１２の熱によるアンフォールディングは、少なくとも２つの熱遷移（ｔｈｅｒｍａｌ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ）を明らかにし、おそらく、それぞれ、ＦａｂドメインおよびＦｃドメインのアンフォールディング融解を表す。高温では、タンパク質は、おそらく凝集して、ＤＳＣシグナルの喪失をもたらした。処方物のスクリーニングの目的で、最も低い熱遷移温度を、この研究において、融点Ｔｍとして規定した。図６は、処方物のｐＨの関数としての熱融点を示す。ｐＨ５．５〜６．５の処方物は、より高い熱融点により実証されるように、より高いコンホメーション安定性を有する抗ＣＤ４０を提供した。
【０３４１】
（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析）
ｐＨ４．５〜９．０のＣＨＩＲ−１２．１２処方物サンプルを、４０℃にて２ヶ月間インキュベートし、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析に供した（データ示さず）。非還元条件下では、ｐＨ５．５を上回る処方物において、２３ｋＤａおよび２７ｋＤａの分子量（ＭＷ）を有する種が観察され、そして、全ての処方物において、５１ｋＤａのＭＷを有する種が観察されたが、ｐＨ５．０〜５．５においては少ないようであった。１００ｋＤａのＭＷを有する種が、ｐＨ７．５およびｐＨ９．０において見られ得た。
【０３４２】
還元条件下では、ＣＨＩＲ−１２．１２は、それぞれ、５０ｋＤａのＭＷおよび２４ｋＤａのＭＷを有する、遊離重鎖および遊離軽鎖に還元された。１００ｋＤａの種は、完全には還元性ではなく、そして、溶液のｐＨの増加に伴って増加するようであり、非ジスルフィド共有結合が、この分子において生じている可能性を示唆する。ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいて未知の正体を有する他の種が存在しなかったので、各処方物の安定性の比較は、残存するＣＨＩＲ−１２．１２の純度に基づく。ｐＨ５．０〜６．０の処方物は、ＣＨＩＲ−１２．１２に対して、より安定な環境を提供した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって、わずかな凝集が検出された（データ示さず）。
【０３４３】
（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ分析）
ＳＥＣ−ＨＰＬＣ分析は、主ピーク種としてインタクトなＣＨＩＲ−１２．１２を、主ピーク種とは別個の前ピーク種として凝集種を、主ピーク種の後にあるショルダーピークとして大きなフラグメントの種を検出し、そして、小さなフラグメントの種を、主ピーク後の種として検出した。５℃および２５℃で３ヶ月間インキュベートした後、無視できる量（＜１．０％）のタンパク質のフラグメントおよび凝集を、上記処方物中で検出し、そして、ＣＨＩＲ−１２．１２主ピーク種は、９９％以上純粋なままであった（データ示さず）。しかし、タンパク質のフラグメントは、４０℃で保存すると、次第に進展し、表９に示すように、ｐＨ４．５およびｐＨ６．５〜９．０においては、より多くのフラグメントが形成された。ＣＨＩＲ−１２．１２処方物を４０℃にて３ヶ月間インキュベートした後、約２〜３％の凝集を、ｐＨ７．５およびｐＨ９．０において検出したが、他のｐＨの処方物においては、１％未満の凝集を検出した（データ示さず）。ＳＥＣ−ＨＰＬＣの結果は、ＣＨＩＲ−１２．１２が、ｐＨ約５．０〜６．０において、より安定であることを示す。
【０３４４】
【表９】
2011126900.tif 000010
【０３４５】
（ＣＥＸ−ＨＰＬＣ分析）
ＣＥＸ−ＨＰＬＣ分析は、インタクトなＣＨＩＲ−１２．１２を主ピーク種として検出し、酸性改変体は、主ピーク種よりも速く溶出し、そして、Ｃ末端リジン付加改変体は、主ピーク後の種として溶出した。表１０は、残存する主ピークＣＨＩＲ−１２．１２種および酸性改変体の百分率の、溶液のｐＨに対する依存性を示す。コントロールサンプルは、すでに、高い度合の酸性種（約３３％）を含んでおり、おそらくこれは、初期段階での
発酵および精製のプロセスに起因するものである。より高いｐＨ溶液に対するＣＨＩＲ−１２．１２の感受性は、２つの事実により証明される。第一に、ｐＨ９．０（ｔ＝０）の最初の処方物サンプルは、すでに、コントロールよりも１２％多い酸性種を生じていた。第２に、酸性種の百分率は、ｐＨの増加に伴って急激に増加した。電荷の変化に関連する分解は、脱アミノ化に起因するようである。上記のデータは、ＣＨＩＲ−１２．１２のこの型の分解が、ｐＨ約５．０〜５．５において最小であったことを示す。
【０３４６】
【表１０】
2011126900.tif 000011
【０３４７】
（結論）
ｐＨは、ＣＨＩＲ−１２．１２のコンホメーションの安定性および物理化学的な安定性に有意な効果を有する。電荷の変化に関連する分解は、ＣＨＩＲ−１２．１２についての主な分解経路であると決定され、これは、ｐＨ５．０〜５．５において最小であった。全体的な安定性のデータに基づいて、この抗体を含有する１つの推奨される液体薬学的処方物は、約１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム中に処方された約２０ｍｇ／ｍｌのＣＨＩＲ−１２．１２を含有し、ｐＨ約５．５のｐＨを有する処方物である。
【０３４８】
（実施例７：ＩＬ−２およびアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を用いる臨床研究）
（臨床の目的）
全体的な目的は、細胞をアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体、およびＩＬ−２またはその生物学的に活性な改変体の組み合わせを用いて、ＣＤ４０を発現する固形腫瘍およびＢ細胞関連の癌を標的することにより、これらに対する有効な治療を提供することである。これらの腫瘍としては、固形腫瘍（例えば、膀胱癌、乳癌、前立腺癌、腎細胞癌、鼻咽腔癌、扁平上皮癌、甲状腺乳頭癌、黒色腫、卵巣癌、肺癌、頚癌、胃癌、肝臓癌、および肉腫）が挙げられる。Ｂ細胞関連の癌としては、Ｂ細胞リンパ腫、慢性リンパ性リンパ腫（ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｙｐｈｏｍａ）（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、および全身性キャッスルマン病が挙げられるが、これらに限定されない。活性のいくつかの基準が、第Ｉ相において得られ得るにもかかわらず、これらの疾患についてのシグナルが、第ＩＩ相において決定される。最初のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２、および最初のＩＬ−２製品Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）であり、これらは、組換え産生されたＩＬ−２ムテインである、デス−アラニル−１，セリンー１２５ヒトＩＬ−２を含む。
【０３４９】
（第Ｉ相）
・安全性および薬物動態学を評価する−悪性腫瘍におけるこれらの２つの腫瘍治療の用量の段階的拡大。
・安全性、許容性、およびそれぞれの標的の血清マーカー（すなわち、ＣＤ４０）における変化に基づいて、各腫瘍治療の用量を選択する。一般に、組み合わせて使用されるこれらの抗体の各々についてのＭＴＤが求められるが、他の有効性の指標（ＣＤ４０＋の枯渇など）は、用量決定に適切であり得る。
・特に異なる指標（例えば、ＣＬＬの組み合わせ用量は、ＮＨＬに対する用量とは異なり得る）に対する２以上の組み合わせの用量を考える。したがって、第ＩＩ相では、いくつかの用量決定が、必要であり得る。
・患者に、毎週投薬し、リアルタイム薬物動態学（Ｐｋ）のサンプリングをする。最初の４週のサイクルは、許容される最大投薬である。Ｐｋは、疾患の状態、ＣＤ４０の密度などに依存して大きく変動し得る。
・この治験は、ＣＤ４０＋固形腫瘍およびＢ細胞リンパ腫、ＣＬＬ、ならびに強力な他の悪性腫瘍を有する被験体に対して公開される。
・研究を中止するかまたは継続するかの決定は、安全性、用量、および事実上特に相乗的である抗腫瘍活性の予備的な評価に基づく。
・応答速度により決定された併用療法の活性は、第ＩＩ相で決定される。
・第ＩＩ相のための組み合わせの用量を特定する。
【０３５０】
（第ＩＩ相）
数回の治験を、固形腫瘍およびＢ細胞リンパ腫、ＣＬＬ、および多発性骨髄腫（ＭＭ）における濃縮を伴う上記の腫瘍の型について開始する。別個の治験は、ＣＤ４０がリンパ腫の悪性度に依存する異なる機能を有し得るように、低悪性度ＮＨＬおよび中悪性度／高悪性度ＮＨＬにおいて必要とされ得る。２以上の用量の組み合わせ、および２以上の計画が、無作為化された第ＩＩ相の設定において試験され得る。
【０３５１】
各疾患において、以下の、現行の標準的な医療が機能しない集団を対象とする：
・ＣＬＬ：Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）および化学療法に対して耐性であった患者
・低悪性度ＮＨＬ：Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）またはＣＨＯＰ−Ｒによる治療に失敗した患者
・中悪性度ＮＨＬ：ＣＨＯＰ−Ｒによる治療に失敗した患者
・多発性骨髄腫：化学療法に失敗した患者、デキサメタゾンにサリドマイドを加えた治療に失敗した患者、または高用量の化学療法に幹細胞移植を加えた治療に失敗した患者。
【０３５２】
＊研究を中止するかまたは継続するかの決定は、第ＩＩ相における治療概念の証明に基づく
＊臨床上の効果の早期の指標として、代理マーカーが使用され得るか否かを決定する
＊第ＩＩＩ相のための用量を特定する。
【０３５３】
（第ＩＩＩ相）
第ＩＩＩ相は、第ＩＩ相においてシグナルがどこで検出されるか、そして、どのような競合する治療が、標準的なものと考えられるかに依存する。標準的な治療が存在しない疾患の段階にシグナルがある場合、単群の、十分に制御された研究が、中心的な治験として機能し得る。標準的であると考えられる競合薬剤が存在する場合は、直接比較する研究が行なわれる。
【０３５４】
（実施例８：ＩＬ−２の薬学的処方物についてのＩＬ−２血清濃度−時間曲線の算出）
４５０万国際単位（ＭＩＵ）（約２７５μｇのタンパク質に相当する）で皮下（ＳＣ）投与されたＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の血清濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）を、未公開のＨＩＶ研究から得たデータを使用して決定した。血清濃度時間プロフィールを、８人のＩＬ−２ナイーブのＨＩＶ患者においてこの研究における最初のＩＬ−２の投薬への曝露後に測定した。各患者に関して、そのＡＵＣを、最後の測定可能な濃度まで線形台形規則を使用して算出し、そしてこれを２４時間に対して外挿した（Ｗｉｎｎｏｎｌｉｎソフトウェアバージョン３．１、Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）。その平均ＡＵＣ０−２４、ＳＤ、ならびに４．５ＭＩＵ用量における９５％信頼限界の下限および上限を、表１１に示す。
【０３５５】
１８ＭＩＵ（１１００μｇ）に相当する用量でＳＣに投与されたＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２のＡＵＣ０−２４値を、このＩＬ−２製品をＳＣに投与した異なる３つの研究から得たデータを使用して推定した。２つは、公開された研究であり、そのうち１つはＨＩＶ患者（Ｎ＝３）における研究（Ｐｉｓｃｉｔｅｌｌｉら、（１９９６）Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ  １６（５）：７５４−７５９）であり、もう１つは癌患者（Ｎ＝７）における研究（Ｋｉｒｃｈｎｅｒら、（１９９８）Ｂｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４６：５−１０）である。３番目は、血清濃度時間データをＩＬ−２のＳＣ投薬後の６人の癌患者から入手した未公開の研究である。癌患者およびＨＩＶ患者におけるＡＵＣの類似性を、予め確立した（未公開データ）。これらの３つの研究において実際に投与された用量は、１８ＭＩＵと３４ＭＩＵとの間の範囲であった。２つの公開された治験に関して、２４時間までのＡＵＣ（ＡＵＣ０−２４）値を、１８およびＭＩＵにおける実際の用量の商と、ＡＵＣとを乗算することによって１８ＭＩＵ用量に対して標準化した。例えば、２０ＭＩＵ用量に対するＡＵＣ０−２４を、４００であると算出した場合に、標準化されたＡＵＣ０−２４は、４００＊１８／２０＝３６０であり得る。上記未公開の癌患者研究に関して、個々のＡＵＣ値を、最後の測定可能な濃度まで線形台形規則を使用して血清濃度時間データから算出し、そして２４時間に対して外挿し（Ｗｉｎｎｏｎｌｉｎソフトウェアバージョン３．１、Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）、その後、上記の通りに１８ＭＩＵ用量に対して標準化した。３つの研究全てについて、全体の平均およびＳＤを、方程式１および方程式２を使用して、それぞれ、平均と分散との加重平均として算出した。
【０３５６】
【数１】
2011126900.tif 000012
【０３５７】
全体の平均ＡＵＣ、ＳＤ、および１８ＭＩＵにおける９５％信頼限界の下限および上限はまた、表１１に示される。
【０３５８】
（表１１：皮下に投与されたＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の単回の用量の投与に対する初回の曝露後に得られる平均（±ＳＤ）ＡＵＣ０−２４）
【０３５９】
【表１１】
2011126900.tif 000013
【０３６０】
Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２と同様に、Ｌ２−７００１（モノマーのＩＬ−２の液体処方物）を５０μｇ〜１８０μｇの範囲の用量でＨＩＶ患者に投与した（未公開データ）。この研究から得られたＡＵＣによって測定された曝露を、表１２に示した。これらの曝露指数（ｅｘｐｏｓｕｒｅ  ｖａｌｕｅｓ）は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２を使用して生じた曝露指数の範囲内であった（表１１）。
【０３６１】
（表１２：モノマーのＩＬ−２処方物Ｌ２−７００１の単回の用量の投与に対する初回の曝露後に得られる平均（±ＳＤ）ＡＵＣ０−２４）
【０３６２】
【表１２】
2011126900.tif 000014
【０３６３】
ＩＬ−２の曝露データ（ＡＵＣ）を、組換えヒトネイティブＩＬ−２を、０．１ＭＵ〜３．０ＭＵの範囲の用量で８人の癌患者に対してＳＣに投与した場合の公開文献から得た。０．３ＭＵ用量レベル、１ＭＵ用量レベル、および３ＭＵ用量レベルについて報告された平均（％ＣＶ）ＡＵＣは、１２０（３８）Ｕ＊時／ｍｌ、１７７（３６）Ｕ＊時／ｍｌ、および３５９（４６）Ｕ＊時／ｍｌであった（Ｇｕｓｔａｖｓｏｎ（１９９８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ  １９９８年：４４０−４４９）。Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、１９８７年  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４７：４２０２−４２０７に記載されるように、この研究において測定された単位を、ＷＨＯによって後に国際単位（ＩＵ）として採択された（ＧｅａｒｉｎｇおよびＴｈｏｒｐｅ（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １１４：３−９）、ＢＲＭＰ単位（Ｒｏｓｓｉｏら、（１９８６）Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５（補遺１）：Ｓ１３−Ｓ１８）に対して標準化した。この研究条件下で生じたＡＵＣ値はまた、確立されたＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の曝露に、よく一致する。
【０３６４】
本明細書中に示される本発明の多くの改変および他の実施形態は、（上述の明細書および添付の図面に提示される教示の利益を有する）本発明が属する分野の当業者に想到される。したがって、本発明は、開示される特定の実施形態に限定されるべきではないこと、そして、改変および他の実施形態が、添付の特許請求の範囲および本明細書中に開示される実施形態の範囲内に含まれるべく意図されることが理解されるべきである。特定の用語が本明細書において使用されるが、これらは、一般的かつ説明的な意味のみで使用されているのであり、限定する目的で使用されているわけではない。
【０３６５】
明細書中で言及された全ての刊行物および特許出願は、本発明が属する分野の当業者の技術水準を示している。全ての刊行物および特許出願は、あたかも各個々の刊行物または特許出願が、具体的かつ個別に参考として援用されるように示されるのと同じ程度まで、本明細書中に参考として援用される。
【０３６６】
【表１３−１】
2011126900.tif 000015
【０３６７】
【表１３−２】
2011126900.tif 000016
【０３６８】
【表１３−３】
2011126900.tif 000017
【図１】
2011126900.tif 000018
【図２】
2011126900.tif 000019
【図３】
2011126900.tif 000020
【図４−１】
2011126900.tif 000021
【図４−２】
2011126900.tif 000022
【図５】
2011126900.tif 000023
【図６】
2011126900.tif 000024
【配列表】
2011126900000001.app
【外国語明細書】
2011126900000001.pdf