(57)【要約】【課題】胃および／または小腸の潰瘍性障害に対し患者を予防的および／または治療的に処置するために使用されるホップ（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｌｕｓ）抽出物またはその誘導体を提供すること。【解決手段】潰瘍性障害は、化学的誘発、環境的誘発、感染誘発、および／またはストレス誘発によるタイプのものであってもよい。本発明はまた、ホップ抽出物またはその誘導体の有効量を、鎮痛化合物および／または抗炎症化合物と組み合わせて含む製薬組成物を提供する。本発明はさらに、胃および／または小腸の潰瘍性障害を著明に緩和する、および／または治療的に処置する用法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
非ステロイド性抗炎症化合物による治療を受けている個体において、非ステロイド性抗炎症化合物に伴う胃毒性を緩和するための組成物であって、前記組成物は、還元型イソα酸、テトラヒドロイソα酸、およびヘキサヒドロイソα酸からなる群より選択される化合物を含有し、ここで、前記組成物は、前記個体に対する投与に適している、組成物。
【請求項２】
胃潰瘍の徴候または症状を呈する個体において、胃潰瘍を治療、予防、または寛解するための組成物であって、前記組成物は、還元型イソα酸、テトラヒドロイソα酸、およびヘキサヒドロイソα酸からなる群より選択される化合物を含有し、ここで、前記組成物は、前記個体に対する投与に適している、組成物。
【請求項３】
前記胃潰瘍は、食物、香草、細菌、真菌、または薬剤によって誘発されたものである、請求項２の組成物。
【請求項４】
還元型イソα酸、テトラヒドロイソα酸、およびヘキサヒドロイソα酸からなる群より選択される前記化合物は、ジヒドロ−イソフムロン、ジヒドロ−イソコフムロン、ジヒドロ−イソアドフムロン、テトラヒドロ−イソフムロン、テトラヒドロ−イソコフムロン、テトラヒドロ−イソアドフムロン、ヘキサヒドロ−イソ フムロン、ヘキサヒドロ−イソコフムロン、およびヘキサヒドロ−イソアドフムロンからなる群より選択される化合物を含む、請求項１および２のいずれか１項の組成物。
【請求項５】
前記組成物は、０．５〜１００００ｍｇの、還元型イソα酸、テトラヒドロイソα酸、およびヘキサヒドロイソα酸からなる群より選択される前記化合物を含む、請求項１および２のいずれか１項の組成物。
【請求項６】
前記組成物は、５０〜７５００ｍｇの、還元型イソα酸、テトラヒドロイソα酸、およびヘキサヒドロイソα酸からなる群より選択される前記化合物を含む、請求項１および２のいずれか１項の組成物。
【請求項７】
前記組成物は、０．００１〜１０重量パーセントの、還元型イソα酸、テトラヒドロイソα酸、およびヘキサヒドロイソα酸からなる群より選択される前記化合物を含む、請求項１および２のいずれか１項の組成物。
【請求項８】
前記組成物は、０．１〜１重量パーセントの、還元型イソα酸、テトラヒドロイソα酸、およびヘキサヒドロイソα酸からなる群より選択される前記化合物を含む、請求項１および２のいずれか１項の組成物。
【請求項９】
前記非ステロイド性抗炎症化合物は、サリチル酸、サリチル酸メチル、ジフルニサル、サルサラート、オルサラジン、スルファサラジン、アセトアニリド、アセトアミノフェン、フェナセチン、メフェナム酸、メクロフェナム酸ナトリウム、トルメチン、ケトロラク、ジクロフェナク、イブプロフェン、ナプロキセン、ダ プロキセンナトリウム、フェノプロフェン、ケトプロフェン、フルルビオプロフェン、オキサプロジン、ピロキシカム、メロキシカム、テノキシカム、アムピロキシカム、ドロキシカム、ピボキシカム、フェニルブタゾン、オキシフェンブタゾン、アニトピリン、アミノピリン、ジピロン、セレコキシブ、ロフェコキシ ブ、ナブメトン、アパゾン、ニメンスリド、インドメタシン、スリンダク、およびエトドラクからなる群より選択される、請求項１の組成物。
【請求項１０】
前記組成物は、製薬学的に受容可能なキャリアをさらに含む、請求項１および２のいずれか１項の組成物。
【請求項１１】
前記組成物は、経口的、局所的、非経口的、または直腸経由の投与用に処方される、請求項１および２のいずれか１項の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の背景）
本発明は、ホップ（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｌｕｓ）の抽出物またはその誘導体を含む製薬組成物に関する。本発明はまた、胃病、特に、非ステロイド性抗炎症剤によって引き起こされるがそれに限定されない胃病の治療、予防、または緩和のために用いる、ホップから得られた、または誘導された組成物の使用法に関する。  
【背景技術】
【０００２】
プロスタグランジン（ＰＧ）は、細胞の周辺環境における多様な生理的変化に影響を及ぼすパラクライン性およびオートクライン性の介在因子として働く遍在的ホルモンである。ＰＧの多様な生理的変化としては、炎症反応、例えば、関節リューマチおよび変形性関節症、血圧調節、血小板凝集、分娩誘発、および、疼痛と発熱の悪化が挙げられる。３０年前、アスピリンおよび他の非ステロイド性鎮痛剤がＰＧ産生を抑制することが発見されたが、この発見によって、ＰＧ合成が薬剤開発の標的になることになった。現在、ＰＧＡからＰＧＩと表される９種の異なる化学的クラスに分類される、少なくとも１６種類のＰＧがある。ＰＧは、プロスタサイクリン、トロンボキサン、およびロイコトリエンが含まれ、２０炭素原子含有化合物からなるエイコサノイドと呼ばれるさらに大きいファミリの一部である。生産される一連のＰＧ類は、ある特定の細胞タイプにおける下流の酵素機構によって異なる。例えば、内皮細胞は主にＰＧＩ２を生産するが、血小板は主にＴＸＡ２を生産する。
【０００３】
全てのＰＧ類の生合成においてアラキドン酸が主要基質となる。シクロオキシゲナーゼ（プロスタグランジンエンドペルオキシド合成酵素、ＥＣ１．１４．９９１、ＣＯＸ）は、アラキドン酸からプロスタグランジンＨ２（ＰＧＨ２）への代謝における律速段階を触媒し、プロスタグランジンＨ２はさらに代謝されて様々のプロスタグランジン類、プロスタサイクリン、およびトロンボキサンＡ２を生産するのであるが（図１参照）、この行程において、１９９０年代初期、ＣＯＸには二つのアイソフォームがあることが明らかにされた。これらは一般にＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２と呼ばれる。その後、ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２タンパクは、鳥類および哺乳類の遥か以前に分かれたそれぞれ別々の遺伝子から誘導されることが確かめられた。ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２経路を通じて生産されるＰＧは同一分子であり、従って同じ生物作用を有する。しかしながら、ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２は、独自のパターンの、異なる量のエイコサノイド類を生産する可能性があり、従って、この二つのアイソフォームの活性の相対的変化は、全く異なる生物学的反応をもたらす可能性がある。現在では、ＣＯＸ阻害剤の有効性のみならず副作用においても、ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２の組織分布および調節の差が決定的に重要であると考えられている。
【０００４】
一般的に支持されている概念（ＣＯＸドグマ）は、ＣＯＸ−１は大抵の組織に構成的に発現されるが、ＣＯＸ−２は、マイトゲン、サイトカイン、および細菌性リポポリサッカリド（ＬＰＳ）などの前炎症刺激が、インビトロでは細胞において、インビボでは炎症部位において誘因となって誘発される酵素である。主にこの発現性の差に基づいて、ＣＯＸ−１はハウスキーピング酵素に分類され、胃粘膜の細胞保護、腎血流の調節、および血小板凝集の調節のような生理的機能の維持に関わっていると考えられている。ＣＯＸ−２の方は主に炎症を媒介すると考えられている。ただし、脳、腎臓、および消化管ではＣＯＸ−２の構成的発現が認められる。
【０００５】
プロスタグランジン（ＰＧ）は、ヒトの胃粘膜のホメオスタシスの維持に重要な役割を果たしていると考えられている。現在のドグマでは、ＣＯＸ−１は、正常な胃粘膜において粘膜のホメオスタシスを維持するためＰＧの合成を担っており、ＣＯＸ−２は、正常な胃粘膜でも低レベルで発現されているが、潰瘍治癒過程において内毒素に曝されたり、サイトカインによって刺激されると発現が誘発されるとしている。現在では、ＣＯＸ−１もＣＯＸ−２も、正常な胃粘膜において重要な生理的役割を果たしていると考えられている。
【０００６】
ＣＯＸによるＰＧの産生を阻害する化合物は、疼痛および炎症の沈静において重要な薬剤となっている。これらの薬剤はまとめて、非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）と呼ばれるが、その主な適応症は変形性関節炎および関節リューマチであり、特に、アスピリンの用途は、心臓血管系疾患の予防にまで拡張されている。過去１０年間、ＣＯＸ−２の酵素活性に対する直接の阻害剤である新規の分子を開発するためにかなりの努力が払われてきた。これは、もしもそのような化合物が得られたならば、それは慢性的に使用しても胃に対する刺激作用が比較的少ないだろうという推測に基づくものであった。
【０００７】
ＣＯＸ−２選択性（すなわち、胃に対する低刺激性）を確かめるうえでの主要な問題点は、定量法における違いが、得られる結果に深刻な影響を及ぼすことがあり得ることである。表１に、多くのインビトロアッセイの分類を示す。これらは、ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２に対する、ＮＳＡＩＤおよび天然化合物の相対的抑制活性を調べ、比較するためにこれまでに開発されたものである。これらの試験システムは、三つのグループに分類することが可能である。すなわち、（１）動物酵素、動物細胞または細胞株を用いるシステム、（２）ヒト細胞株、またはヒト血小板および単球を用いるアッセイ、および、（３）ヒト細胞を用いる最近開発されたモデルであって、ＮＳＡＩＤおよび食物サプリメントの抗炎症作用および副作用の標的細胞を表すモデルである。一般的に、ヒトの細胞株、またはヒトの血小板および単球を用いるモデルが現在の標準であり、有効性を確認された標的細胞モデルはすぐに採用される趨勢には無い。胃に対する刺激可能性の評価を可能とするヒト胃細胞株に対する需要は重要かつ切実である。
【０００８】
使用される酵素は、動物起源、またはヒト起源であってもよく、生得のものであっても組み換えによるものであってもよく、ミクロソーム標本において精製酵素として使用されてもよく、全体細胞アッセイで使用されてもよい。他のシステム変数としては、アラキドン酸の供給源が挙げられる。ＰＧ合成は、内因的に放出されたアラキドン酸、または、外から添加されたアラキドン酸に基づいて測定することが可能である。後者の場合、様々の実験室で様々な濃度が用いられている。
【０００９】
ＣＯＸ−２選択性に関する理想的なアッセイがもしあるとするならば、それは下記の特性を持つものであろう。すなわち、（１）発現に関して正常な生理的調節下にある、生得のヒト酵素を含む全体細胞が使用されること、（２）その細胞は、化合物の抗炎症作用および副作用について標的細胞でもあること、（３）ＣＯＸ−２は、構成的に発現される点ではなく、むしろ誘発されて炎症過程を促進する点を見なければならないこと、および、（４）ＰＧ合成は、外来的に添加されたアラキドン酸に基づいてではなく、内在性保存体から放出されたアラキドン酸に基づいて測定すること、である。
【００１０】
（表１．  抗炎症化合物のＣＯＸ−２選択性を評価するインビトロアッセイのための試験システムの分類）
【００１１】
【表１】
2011126919.tif 000002
＋Ｐａｉｒｅｔ，Ｍ．ａｎｄ  ｖａｎ  Ｒｙｎ，Ｊ．（１９９８）Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｏｄｅｌｓ  ｕｓｅｄ  ｔｏ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ  ｔｈｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−１  ａｎｄ  ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２  ｂｙ  ｎｏｎ−ｓｔｅｒｏｉｄａｌ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｒｕｇｓ．Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｒｅｓ  ４７，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  ２Ｓ９３−Ｓ１０１より引用。なお、引用することにより本明細書に含める。
【００１２】
ＣＯＸ−２選択性に関する理想的アッセイを開発した研究室はまだない。処方（Ｒｘ）製剤および一般向け（ＯＴＣ）製剤のためにもっとも広く使用される全細胞システムとしては、ウィリアムハーベイ研究所が開発したヒト全血アッセイがある［Ｗａｒｎｅｒ，Ｔ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄ  ｄｒｕｇ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｆｏｒ  ｃｙｃｌｏ−ｏｘｙｇｅｎａｓｅ−１  ｒａｔｈｅｒ  ｔｈａｎ  ｃｙｃｌｏ−ｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２  ａｒｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｈｕｍａｎ  ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ：ａ  ｆｕｌｌ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９６，７５６３−７５６８］。これまでの所、どの方式よりもこのアッセイ方式が、臨床関連を支持する数多くのデータを生み出している。しかしながら、正常胃粘膜におけるＣＯＸ−２の構成的発現の役割に関する新しい研究から、ＣＯＸ−２が存在しない場合のＣＯＸ−１抑制をモデル化するのに血小板を用いる意味の再検討が求められている。血小板研究に基づいて胃毒性を外挿するやり方は、もはや健全な分子的基盤に基づいていないことが明らかである。シクロオキシゲナーゼ阻害剤の標的組織に対する毒性の可能性を確かなものとするためには、ヒト胃粘膜細胞株においてその有効性が明らかにされなければならないということは、安全で効果的な抗炎症剤を開発するためには必要不可欠な要件である。
【００１３】
炎症治療用の理想的処方がもしあるとすれば、それは、胃粘膜細胞においてＰＧＥ２合成を抑制することはないが、ＣＯＸ−２の誘発と活性は抑制するものであろう。しかしながら、従来の非ステロイド性抗炎症剤は、胃のＰＧＥ２合成に影響を及ぼすことなくＣＯＸ−２を抑制するという特異性を欠いており、長期に渡って使用した場合消化器系に損傷を与える危険性があった。事実、最近開発された抗炎症剤、例えば、ロフェコキシブ（Ｖｉｏｘｘ（登録商標）、メルク社）やセレコキシブ（Ｃｅｌｅｂｒｅｘ（登録商標）、ファイザー社）は、誘発性自然出血および延引する胃潰瘍治癒という形で、胃に対する毒性作用をもたらしている。
【００１４】
（ＮＳＡＩＤ毒性）
ＮＳＡＩＤは、重大な健康上の問題、例えば、胃出血および腎損傷を含む問題を引き起こすことが知られている。米国には、千３百万人を超えるＮＳＡＩＤの常用者がおり、毎年７千万通のＮＳＡＩＤ処方箋が書かれており、かつ、毎年３百億個の一般大衆薬のＮＳＡＩＤ錠剤が売られている。ＮＳＡＩＤ誘発性疾患は、年間１０万３千件の入院事例の原因となっており、毎年推定１万６千５百の死亡例の原因となっている。ＮＳＡＩＤの慢性的服用者全体の内の２０％が胃潰瘍を発症すると予想される。ＮＳＡＩＤ服用者は、上部消化器出血、穿孔、またはその両方を患う危険度がより高く、３倍〜４倍高い。重篤なＮＳＡＩＤ誘発性合併症による入院患者の内の８１％は、それ以前に消化器症状がなかった。６０歳を超える人々の場合、ＮＳＡＩＤ服用に伴う合併症に罹る確率は有意に高い。さらに、米国では、薬剤による全ての毒性反応の内の２１％は、ＮＳＡＩＤ服用によるものである。
【００１５】
セレコキシブやロフェコキシブのような新規の選択的ＣＯＸ−２阻害剤は、大抵のＮＳＡＩＤに対してより安全な代替薬となることがこれまでにも示されている。しかしながら、最近の研究によって、選択的ＣＯＸ−２阻害剤は、消化器毒性を完全に除去するものではないことが明らかにされている。実際、消化管の炎症または潰瘍の場合、ＣＯＸ−２の処方阻害剤は潰瘍の治癒を遅らせる。
【００１６】
上記から、胃粘膜において、ＰＧＥ２の合成にはほとんど、または全く影響を及ぼすことはないが、ＣＯＸ−２によるプロスタグランジンの合成を特異的に抑制または阻止する化合物の天然処方を特定することができたならば、それは有用なことであろう。このような処方がもし得られたならば、関節組織の健康の維持に、関節炎、またはその他の炎症性病態の治療のために有用と考えられるが、そのような処方はこれまで発見されていない。「特異的または選択的ＣＯＸ−２阻害剤」という用語は、ＣＯＸ−１に対してよりはＣＯＸ−２の方を選択的に阻害する化合物または化合物の混合物を包括するように造られたものである。しかしながら、しかじかの計算された選択性から、胃に対する低い刺激性が得られるという含意があっても、試験試料が胃細胞において評価されていない限り、「選択的ＣＯＸ−２阻害剤」という用語は、消化器細胞に対する安全性の保証とはならない。標的組織、炎症細胞、および胃粘膜細胞における化合物の作用を調べて始めて、低い胃刺激作用の可能性を持つ薬剤が特定される。
【００１７】
従って、炎症細胞においてＣＯＸ−２酵素活性の発現は特異的に抑制または阻止するが、一方、胃粘膜細胞におけるＰＧＥ２合成に対してはほとんど、または全く影響を及ぼすことがなく、そのために消化器不調を伴わずにその処方薬を服用することが可能な組成物を特定することができたならば、それは有用であろう。さらに、このような処方剤は、胃における、既存の潰瘍性病態の治癒も考慮するものでなければならない。本発明は、この要求を満足するものであり、それと同時に関連する利点をも提供するものである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１８】
（発明の要旨）
本発明は、消化器刺激作用を伴う胃病および／または胃腸病を緩和、抑制、または予防するための、ホップから単離または誘導した画分を用いた組成物および方法を提供する。この組成物は、所期の作用を強化し、かつ、別成分、例えば、非ステロイド性抗炎症剤、スパイス、またはその他の消化器刺激性薬剤の不快作用を抑制するために、他の成分と組み合わせることも可能である。本発明はまた、胃腸病、または、潰瘍性障害を含む胃毒性を低減するための方法を提供する。
例えば、本発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
ホップから単離または誘導された画分、および、非アスピリン、非ステロイド性抗炎症化合物を含む組成物。
（項目２）
ホップから単離または誘導される画分は、α酸、イソα酸、還元型イソα酸、テトラヒドロイソα酸、ヘキサヒドロイソα酸、β酸、およびホップかすからなる群より選択される、項目１の組成物。
（項目３）
ホップから単離または誘導される前記画分は、下式：
【化１】
2011126919.tif 000003
を持つ上位分子種の化合物を含み、
式中Ｒ’は、カルボニル、ヒドロキシル、ＯＲ、およびＯＣＯＲからなる群より選択され、Ｒはアルキルであり、
Ｒ”は、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３からなる群より選択され、
Ｒ、Ｔ、Ｘ、およびＺは、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、およびπ軌道からなる群より独立して選択されるが、ただし、もしもＲ、Ｔ、Ｘ、またはＺの内の一つがπ軌道である場合、隣接のＲ、Ｔ、Ｘ、またはＺもπ軌道であって二重結合を形成することを条件とする、
、項目１の組成物。
（項目４）
ホップから単離または誘導される前記画分は、下式：
【化２】
2011126919.tif 000004
を持つ分子種Ａの化合物を含み、
式中Ｒ’は、カルボニル、ヒドロキシル、ＯＲ、およびＯＣＯＲからなる群より選択され、Ｒはアルキルであり、
Ｒ”は、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３からなる群より選択される
、項目１の組成物。
（項目５）
ホップから単離または誘導される前記画分は、下式：
【化３】
2011126919.tif 000005
を持つ分子種Ｂの化合物を含み、
式中Ｒ’は、カルボニル、ヒドロキシル、ＯＲ、およびＯＣＯＲからなる群より選択され、Ｒはアルキルであり、
Ｒ”は、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３からなる群より選択される
、項目１の組成物。
（項目６）
ホップから単離または誘導される前記画分は、フムロン、コフムロン、アドフムロン、イソフムロン、イソコフムロン、イソアドフムロン、ジヒドロ−イソフムロン、ジヒドロ−イソコフムロン、ジヒドロ−イソアドフムロン、テトラヒドロ−イソフムロン、テトラヒドロ−イソコフムロン、テトラヒドロ−イソアドフムロン、ヘキサヒドロ−イソフムロン、ヘキサヒドロ−イソコフムロン、およびヘキサヒドロ−イソアドフムロンからなる群より選択される化合物を含む、項目１の組成物。
（項目７）
前記組成物は、約０．５〜１００００ｍｇの、ホップから単離または誘導される前記画分を含む、項目１の組成物。
（項目８）
前記組成物は、約５０〜７５００ｍｇの、ホップから単離または誘導される前記画分を含む、項目７の組成物。
（項目９）
前記組成物は、約０．００１〜１０重量パーセントの、ホップから単離または誘導される前記画分を含む、項目１の組成物。
（項目１０）
前記組成物は、約０．１〜１重量パーセントの、ホップから単離または誘導される前記画分を含む、項目９の組成物。
（項目１１）
前記非アスピリン、非ステロイド性抗炎症化合物は、サリチル酸、サリチル酸メチル、ジフルニサル、サルサラート、オルサラジン、スルファサラジン、アセトアニリド、アセトアミノフェン、フェナセチン、メフェナム酸、メクロフェナム酸ナトリウム、トルメチン、ケトロラク、ジクロフェナク、イブプロフェン、ナプロキセン、ダプロキセンナトリウム、フェノプロフェン、ケトプロフェン、フルルビオプロフェン、オキサプロジン、ピロキシカム、メロキシカム、テノキシカム、アムピロキシカム、ドロキシカム、ピボキシカム、フェニルブタゾン、オキシフェンブタゾン、アニトピリン、アミノピリン、ジピロン、セレコキシブ、ロフェコキシブ、ナブメトン、アパゾン、ニメンスリド、インドメタシン、スリンダク、およびエトドラクからなる群より選択される、項目１の組成物。
（項目１２）
前記非アスピリン、非ステロイド性抗炎症化合物は、サリチル酸、サリチル酸メチル、イブプロフェン、ナプロキセン、ダプロキセンナトリウム、フェノプロフェン、ケトプロフェン、フルルビオプロフェン、およびオキサプロジンからなる群より選択される、項目１の組成物。
（項目１３）
前記組成物は、製薬学的に受容可能なキャリアをさらに含む、項目１の組成物。
（項目１４）
前記組成物は、経口的、局所的、非経口的、または直腸経由の投与用に処方される、項目１の組成物。
（項目１５）
ホップから単離された還元型イソα酸、および非ステロイド性抗炎症化合物を含む組成物。
（項目１６）
還元型イソα酸は、ジヒドロ−イソフムロン、ジヒドロ−イソコフムロン、およびジヒドロ−イソアドフムロンから選択される、項目１５の組成物。
（項目１７）
哺乳動物において鎮痛および抗潰瘍作用をもたらす方法であって、該哺乳動物に対し、鎮痛および抗潰瘍作用をもたらすのに十分な量の、ホップから単離または誘導された画分と、非ステロイド性抗炎症化合物とを投与することを含み、ホップから単離または誘導された前記画分の投与によって、前記非ステロイド性抗炎症化合物に伴う胃毒性が緩和される、方法。
（項目１８）
ホップから単離または誘導される前記画分は、下式：
【化４】
2011126919.tif 000006
を持つ上位分子種の化合物を含み、
式中Ｒ’は、カルボニル、ヒドロキシル、ＯＲ、およびＯＣＯＲからなる群より選択され、Ｒはアルキルであり、
Ｒ”は、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３からなる群より選択され、
Ｒ、Ｔ、Ｘ、およびＺは、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、およびπ軌道からなる群より独立して選択されるが、ただし、もしもＲ、Ｔ、Ｘ、またはＺの内の一つがπ軌道である場合、隣接のＲ、Ｔ、Ｘ、またはＺもπ軌道であって二重結合を形成することを条件とする、
、項目１７の方法。
（項目１９）
ホップから単離または誘導される前記画分は、下式：
【化５】
2011126919.tif 000007
を持つ分子種Ａの化合物を含み、
式中Ｒ’は、カルボニル、ヒドロキシル、ＯＲ、およびＯＣＯＲからなる群より選択され、Ｒはアルキルであり、
Ｒ”は、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３からなる群より選択される
、項目１７の方法。
（項目２０）
ホップから単離または誘導される前記画分は、下式：
【化６】
2011126919.tif 000008
式を持つ分子種Ｂの化合物を含み、
式中Ｒ’は、カルボニル、ヒドロキシル、ＯＲ、およびＯＣＯＲからなる群より選択され、Ｒはアルキルであり、
Ｒ”は、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３からなる群より選択される
、項目１７の方法。
（項目２１）
ホップから単離または誘導される前記画分は、フムロン、コフムロン、アドフムロン、イソフムロン、イソコフムロン、イソアドフムロン、ジヒドロ−イソフムロン、ジヒドロ−イソコフムロン、ジヒドロ−イソアドフムロン、テトラヒドロ−イソフムロン、テトラヒドロ−イソコフムロン、テトラヒドロ−イソアドフムロン、ヘキサヒドロ−イソフムロン、ヘキサヒドロ−イソコフムロン、およびヘキサヒドロ−イソアドフムロンからなる群より選択される化合物を含む、項目１７の方法。
（項目２２）
前記組成物は、約０．５〜１００００ｍｇの、ホップから単離または誘導される前記画分を含む、項目１７の方法。
（項目２３）
前記組成物は、約５０〜７５００ｍｇのホップ誘導体を含む、項目２２の方法。
（項目２４）
前記組成物は、約０．００１〜１０重量パーセントのホップ誘導体を含む、項目１７の方法。
（項目２５）
前記組成物は、約０．１〜１重量パーセントのホップ誘導体を含む、項目２４の方法。
（項目２６）
前記非ステロイド性抗炎症化合物は、サリチル酸、サリチル酸メチル、ジフルニサル、サルサラート、オルサラジン、スルファサラジン、アセトアニリド、アセトアミノフェン、フェナセチン、メフェナム酸、メクロフェナム酸ナトリウム、トルメチン、ケトロラク、ジクロフェナク、イブプロフェン、ナプロキセン、ダプロキセンナトリウム、フェノプロフェン、ケトプロフェン、フルルビオプロフェン、オキサプロジン、ピロキシカム、メロキシカム、テノキシカム、アムピロキシカム、ドロキシカム、ピボキシカム、フェニルブタゾン、オキシフェンブタゾン、アニトピリン、アミノピリン、ジピロン、セレコキシブ、ロフェコキシブ、ナブメトン、アパゾン、ニメンスリド、インドメタシン、スリンダク、およびエトドラクからなる群より選択される、項目１７の方法。
（項目２７）
前記非ステロイド性抗炎症化合物は、サリチル酸、サリチル酸メチル、イブプロフェン、ナプロキセン、ダプロキセンナトリウム、フェノプロフェン、ケトプロフェン、フルルビオプロフェン、およびオキサプロジンからなる群より選択される、項目２６の方法。
（項目２８）
前記組成物は、製薬学的に受容可能なキャリアをさらに含む、項目１７の方法。
（項目２９）
前記組成物は、経口的、局所的、非経口的、または直腸経由で投与される、項目１７の方法。
（項目３０）
ホップから単離または誘導された前記画分が、前記非ステロイド性抗炎症化合物と同時に投与される、項目１７の方法。
（項目３１）
ホップから単離または誘導された前記画分が、前記非ステロイド性抗炎症化合物の投与後に投与される、項目１７の方法。
（項目３２）
ホップから単離または誘導された前記画分が、前記非ステロイド性抗炎症化合物の投与前に投与される、項目１７の方法。
（項目３３）
非ステロイド性抗炎症化合物に伴う胃毒性を緩和する方法であって、非ステロイド性抗炎症化合物による治療を受ける個体に対してホップから単離または誘導された画分を投与することを含む方法。
（項目３４）
胃腸病を緩和する方法であって、胃腸病に関連する徴候または症状を呈する個体に対しホップから単離または誘導された画分を投与することを含む方法。
（項目３５）
前記胃腸病は潰瘍形成を含む、項目３４の方法。
（項目３６）
前記潰瘍形成は、食物、香草、細菌、真菌、または薬剤によって誘発されたものである、項目３５の方法。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】図１は、シクロオキシゲナーゼ−２の誘発、および、シクロオキシゲナーゼ酵素によるアラキドン酸およびその他のエイコサノイド類への代謝を示す。非ステロイド性抗炎症剤の作用は、シクロオキシゲナーゼ酵素を直接抑制することによる。
【図２】図２は、ホップから得られる画分および化合物の概略を示す。
【図３】図３は、ホップから単離または誘導される例示の画分を示す。図３Ａは、α酸分子種（ＡＡ）および、代表的な分子類、フムロン（Ｒ＝−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、コフムロン（Ｒ＝−ＣＨ（ＣＨ３）２）、およびアドフムロン（Ｒ＝−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）を示す。図３Ｂは、イソα酸分子種（ＩＡＡ）、および代表的分子類、イソフムロン（Ｒ＝−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、イソコフムロン（Ｒ＝−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、およびイソアドフムロン（Ｒ＝−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）を示す。図３Ｃは、還元型異性化イソα酸分子種（ＲＩＡＡ）、および代表的分子類、ジヒドロ−イソフムロン（Ｒ＝−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、ジヒドロ−イソコフムロン（Ｒ＝−ＣＨ（ＣＨ３）２）、およびジヒドロ−イソアドフムロン（Ｒ＝−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）を示す。図３Ｄは、テトラヒドロイソα酸分子種（ＴＨＩＡＡ）、および代表的分子類、テトラヒドロ−イソフムロン（Ｒ＝−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、テトラヒドロ−イソコフムロン（（Ｒ＝−ＣＨ（ＣＨ３）２）、およびテトラヒドロ−イソアドフムロン（Ｒ＝−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）を示す。図３Ｅは、ヘキサヒドロイソα酸（ＨＨＩＡＡ）分子種で、代表的分子類は、ヘキサヒドロ−イソフムロン（Ｒ＝−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、ヘキサヒドロ−イソコフムロン（Ｒ＝−ＣＨ（ＣＨ３）２）、およびヘキサヒドロ−イソアドフムロン（Ｒ＝−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）である分子種を示す。
【図４】図４は、ヒトＡＧＳ胃粘膜細胞におけるＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２の構成的発現を示す代表的イムノブロットである。ヒトＡＧＳ胃細胞株は、６−ウェルプレートにおいて、加湿インキュベーターで５％ＣＯ２を通じながら３７℃で２４時間培養した。細胞は、氷上で溶解バッファーにて溶解し、タンパク濃度を定量した。細胞溶解物の５０μｇを可溶化し、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を含む１０％ポリアクリルアミドゲルにて分画し、ニトロセルロース膜に転送した。この膜をブロッキングバッファーにインキュベートし、次に、それぞれの一次抗体と室温で１時間インキュベートした。一次抗体とのインキュベーション後、ブロットをＴｒｉｓバッファー生食液で３回洗浄し、二次抗体と１時間インキュベートした。タンパクバンドは、増強化学発光を用いて視像化した。
【図５】図５は、対数ＩＣ５０比（ＡＧＳ／ＷＨＭＡ  ＣＯＸ−２）の比較を示す。０の右側の数値は、消化器作用の確率が減少することを示し、一方、０の左側の数値は、消化器作用の確率の増大を示す。
【図６】図６は、代表的分子種Ａの還元型異性化α酸（ＲＩＡＡ）分子による、ＡＧＳ胃粘膜細胞におけるＰＧＥ２生合成の抑制パーセントを示す。図６Ａは、イブプロフェン、およびＲＩＡＡ：イブプロフェン併用において、試験材料が５μｇ／ｍＬ（灰色バー）、および０．５μｇ／ｍＬ（白色バー）の場合を示す。図６Ｂは、アスピリン、およびＲＩＡＡ：アスピリン併用において、試験材料が５μｇ／ｍＬ（縞状バー）、および０．５μｇ／ｍＬ（白色バー）の場合を示す。
【図７】図７は、代表的分子種Ｂのテトラヒドロイソα酸（ＴＨＩＡＡ）分子およびＮＳＡＩＤによる、ＡＧＳ胃粘膜細胞におけるＰＧＥ２生合成の抑制パーセントを示す。図７Ａは、イブプロフェン、およびＴＨＩＡＡ：イブプロフェン併用において、試験材料が５μｇ／ｍＬ（灰色バー）、および０．５μｇ／ｍＬ（白色バー）の場合を示す。図７Ｂは、アスピリン、およびＴＨＩＡＡ：アスピリン併用において、試験材料が５μｇ／ｍＬ（縞状バー）、および０．５μｇ／ｍＬ（白色バー）の場合を示す。
【図８】図８は、対数ＩＣ５０比（ＡＧＳ／ＣＯＸ−２）の比較を示す。図８Ａは、イブプロフェン、ＲＩＡＡ、および、ＲＩＡＡ：イブプロフェンの１：１併用を示す。図８Ｂは、アスピリン、ＲＩＡＡ、および、ＲＩＡＡ：アスピリンの１：１併用を示す。０の右側の数値は、消化器作用の確率が減少することを示し、一方、０の左側の数値は、消化器作用の確率の増大を示す。
【図９】図９は、対数ＩＣ５０比（ＡＧＳ／ＣＯＸ−２）の比較を示す。図９Ａは、イブプロフェン、ＴＨＩＡＡ、ＴＨＩＡＡ：イブプロフェンの１：１００併用、および、ＴＨＩＡＡ：イブプロフェンの１：１併用を示す。図９Ｂは、アスピリン、ＴＨＩＡＡ、ＴＨＩＡＡ：アスピリンの１：１００併用、および、ＴＨＩＡＡ：アスピリンの１：１併用を示す。０の右側の数値は、消化器作用の確率が減少することを示し、一方、０の左側の数値は、消化器作用の確率の増大を示す。
【図１０】図１０は、ホップ抽出物と抗炎症剤とを含む組成物を比較する臨床治験の模式図である。２６人の被験者をスクリンーニングし、２３人の被験者が治験に参加し、２１人の被験者が治験を完了した。治験を完了しなかった者の内、３名は個人的な理由で抜けた。その２名はアーム２から、１名はアーム１から抜けた。訪問は下記のように行われた。訪問１回目（Ｖ１）、投薬Ａが０日。Ｖ２は、投薬Ａが７±１日。Ｖ３は、投薬Ａが１４±１日。休薬期間、２１±１日。Ｖ４は、投薬Ｂが０日。Ｖ５は、投薬Ｂが７±１日。Ｖ６は、投薬Ｂの後１４±１日。
【図１１】図１１は、臨床治験を完了した被験者（Ｎ＝２１）の個々のカルプロテクチン濃度を示す。基礎値１は、Ｖ１の平均値であり、基礎値２は、２１日間の休薬期間後の値である。ＩＰ２００３−００１ＣＴおよびナプロキセンに関する７日および１４日データも示してある（参照範囲＜５０μｇ／ｇ大便）。
【図１２】図１２は、臨床治験を完了した被験者（Ｎ＝２１）におけるカルプロテクチンのプールデータの平均（±標準偏差）を示す。基礎値１は、Ｖ１の平均値であり、基礎値２は、２１日間の休薬期間後の値である。基礎値１と基礎値２の間には有意な差は見られなかった。また、基礎値１とＩＰ２００３−００１ＣＴ投薬７日および１４日の間にも有意差は見られなかった。一方、ナプロキセンの７日および１４日投薬時の数値は、基礎値１よりも有意に上昇していた（ｐ＜０．０５）（参照範囲＜５０μｇ／ｇ大便）。
【図１３】図１３は、その基礎値が、＜５０μｇ／ｇ大便という参照範囲内にある被験者（Ｎ＝１５）の個々のカルプロテクチン濃度を示す。基礎値１は、Ｖ１の平均値であり、基礎値２は、２１日間の休薬期間後の値である。ＩＰ２００３−００１ＣＴおよびナプロキセンに関する７日および１４日データも示してある。
【図１４】図１４は、その基礎値が、＜５０μｇ／ｇ大便という参照範囲内にある被験者（Ｎ＝１５）のカルプロテクチン平均（±標準偏差）濃度を示す。基礎値１は、Ｖ１の平均値であり、基礎値２は、２１日間の休薬期間後の値である。ＩＰ２００３−００１ＣＴおよびナプロキセンに関する７日および１４日データも示してある。
【図１５】図１５は、その基礎値が、＞５０μｇ／ｇ大便という参照範囲上にある被験者（Ｎ＝６）の個々のカルプロテクチン濃度を示す。基礎値１は、両Ｖ１の平均値であり、基礎値２は、２１日間の休薬期間後の値である。ＩＰ２００３−００１ＣＴおよびナプロキセンに関する７日および１４日データも示してある。
【図１６】図１６は、その基礎値が参照範囲を上回る、すなわち、＞５０μｇ／ｇ大便である被験者（Ｎ＝６）の便中カルプロテクチンの平均濃度を示す。基礎値１は、両Ｖ１値の平均であり、基礎値２は、２１日間の休薬期間後の値である。ＩＰ２００３−００１ＣＴおよびナプロキセンに関する７日および１４日データも示してある。
【図１７】図１７は、臨床治験を受けた被験者におけるカルプロテクチンのプールデータの（平均±標準偏差）を示す。基礎値１は、Ｖ１基礎値の平均であり、基礎値２は、全ての休薬期間後の値の平均である。ＩＰ２００３−００１ＣＴおよびナプロキセンに関する７日および１４日データも、それぞれ、この分析のためにプールされた。基礎値１、基礎値２、およびＩＰ２００３−００１の間には有意差は観察されなかった。一方、ナプロキセンによるカルプロテクチンの濃度は、投薬後有意に上昇した（ｐ＜０．０５、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ／Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ順位和）。
【図１８】図１８は、ＡＧＳ細胞モデルにおいてＵｌｔｒａＩｎｆｌａｍＸ（登録商標）によるＰＧＥ２合成に対する抑制濃度中央値を示す。
【図１９】図１９は、ＡＧＳ細胞モデルにおいてＵｌｔｒａＩｎｆｌａｍＸ成分によるＰＧＥ２合成に対する抑制濃度中央値の期待値と観測値を示す。ＩＣ５０値は、３回の独立アッセイの平均に基づいて計算した。ＡＧＳ細胞はプレートに撒き、８０％集密度に達するまで育成した。細胞を洗浄し、試験材料を、Ａ２３１８７による処理の６０分前に加えた。３０分後、培養液を取り出し、ＰＧＥ２定量のために用いた。複合体におけるＩＣ５０観測値および期待値は、全体サンプル（９種成分）の重量に基づき、複合活性体のＩＣ５０観測値および推定値は、複合体サンプルにおける４種の活性成分のパーセント重量に基づく（４５．３％）。
【図２０】図２０は、処方薬（Ｒｘ）、一般大衆薬（ＯＴＣ）、および、栄養補助食品健康教育法（ＤＳＨＥＡ）の化合物のＣＯＸ−２選択性を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
（発明の詳細な説明）
本発明は、非ステロイド性抗炎症剤（ＮＡＳＡＩＤ）の消化器毒性を修飾するための組成物および方法を提供する。特に、本発明は、ホップ（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｓ）から単離、または誘導された成分の精製物であって、ＮＳＡＩＤの消化器毒性に対する修飾作用を有する物質を提供する。具体的に言うと、ホップ誘導体は、ＮＳＡＩＤによる胃のＰＧＥ２抑制を下げ、ＮＳＡＩＤの治療係数を好転させる。本発明の組成物および方法は、ホップ誘導体は、炎症を起こした、標的細胞に対する、ＮＳＡＩＤの作用を強化するという利点を持ち、この点でＮＳＡＩＤの治療係数をさらに向上させる。ホップ誘導体はまた、ＮＳＡＩＤの投与によって誘発される胃潰瘍の治療、寛解、または予防のために投与することも可能である。
【００２１】
本発明は、胃および／または小腸の潰瘍型障害について患者を予防的におよび／または治療的に処置するのに使用されるホップ（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｌｕｓ）抽出物およびその誘導体を提供する。潰瘍性障害は、化学的に誘発されるタイプおよび／またはストレスによって誘発されるタイプであってもよい。本発明はまた、ホップ抽出物またはその誘導体の有効量を、鎮痛剤および／または抗炎症化合物と組み合わせて含む製薬組成物を提供する。本発明はさらに、胃および／または小腸の潰瘍型障害を著明に低減する、および／または治療的に処置する、ホップ抽出物またはその誘導体の用法を提供する。
【００２２】
本明細書の開示によれば、ホップ誘導体は、胃粘膜細胞のＰＧＥ２合成に対するＮＳＡＩＤの抑制作用を効果的に下げる。さらに、イブプロフェン、アスピリン、およびインドメタシン、またはその他の化学薬品のような鎮痛剤および／または抗炎症剤によって造り出される、化学的誘発による潰瘍形成が、上記薬剤を、ホップ誘導体と組み合わせて投与することによって著明に低減されることが判明している。さらに、例えば、サリチル酸のような有機酸、およびその他の鎮痛剤および／または抗炎症剤の毒性が、ホップ抽出物と組み合わせて投与されると相当なレベルにまで低下することが認められている。本発明の組成物および方法は、上記鎮痛剤および／または抗炎症剤をそのホップ誘導体と組み合わせて用いても、そのことによって、鎮痛剤および／または抗炎症剤本来の有利な活性が悪影響を被ることが無い点において有利である。
【００２３】
本明細書におけるさらに別の開示によれば、ホップ誘導体は鎮痛活性を持つこと、および、ホップ誘導体と鎮痛剤の併用によって鎮痛効果の増大がもたらされることも判明している。さらに、ホップ誘導体を含む製剤は、ストレス誘発性消化器潰瘍形成の予防または緩和においても著明な効果を持つことが判明している。さらにまた、ホップ誘導体は、潰瘍の治癒に有効であることも判明している。さらに、ホップ誘導体を潰瘍の治療に用いる場合には何時でも、ホップ誘導体の前記鎮痛活性が、潰瘍に伴う疼痛の解除にも効果的であることが理解されるであろう。
【００２４】
ホップ誘導体の急性毒性は極めて低い。従って、要すれば、相対的にかなり高用量のホップ誘導体であっても、ホップによる毒性作用を呈することなく使用することが可能である。毒性用量は、本発明に従って考慮される治療用量よりはかなり高い。
【００２５】
本発明は、胃および／または小腸の潰瘍型障害について患者を予防的におよび／または治療的に処置するのに使用されるホップ抽出物およびその誘導体を提供する。潰瘍性障害は、化学的に誘発されるタイプおよび／またはストレスによって誘発されるタイプであってもよい。本発明はまた、ホップ抽出物またはその誘導体の有効量を、鎮痛剤および／または抗炎症化合物と組み合わせて含む製薬組成物を提供する。本発明はさらに、胃および／または小腸の潰瘍型障害を著明に低減する、および／または治療的に処置する、ホップ抽出物またはその誘導体の用法を提供する。
【００２６】
本明細書で使用される「食物サプリメント」という用語は、生理学的に構造または機能変化をもたらすように食される組成物を指す。「治療組成物」という用語は、病気の処置または予防のために、または、病気に関連する徴候または症状を緩和するために投与される化合物を指す。
【００２７】
本明細書で使用される「有効量」という用語は、選択された結果を実現するのに必要な量を意味する。この量は、従来技術において通常の錬度を有する当業者であれば面倒な実験をせずとも簡単に確定することが可能である。
【００２８】
本明細書で使用される「実質的に」という用語は、大部分は指定された通りであるが、全体は必ずしもそうではないことを意味する。
【００２９】
本明細書で使用される「ＣＯＸ阻害剤」という用語は、ＣＯＸ−２酵素の活性または発現を抑制することが可能な、または、疼痛および腫脹を含む、重篤な炎症性反応の程度を抑制または低減することが可能な、化合物からなる組成物を指す。
【００３０】
本明細書で使用される「誘導体」という用語、または「誘導された」物質とは、別の物質と構造的に関連する化学的物質、および、その別の物質から獲得することが理論的に可能とされる化学的物質を指す。誘導体は、化学反応を介して獲得される化合物を含んでもよい。化合物の誘導体を製造する方法は当業者にはよく知られている。
【００３１】
本明細書で使用される「炎症細胞」という用語は、炎症信号、例えば、インターロイキン、腫瘍壊死因子、ブラディキニン、ヒスタミン、または細菌由来成分に反応してプロスタグランジンの合成に関与する、免疫系における細胞構成員、例えば、Ｂリンパ球とＴリンパ球、好中球またはマクロファージを指す。
【００３２】
本明細書で使用される「標的細胞」という用語は、その細胞においてＰＧＥ２、またはその他のプロスタグランジン合成の抑制が望まれる細胞集団、例えば、炎症細胞または腫瘍細胞を指す。別に、「非標的細胞」とは、その細胞においてＰＧＥ２、またはその他のプロスタグランジン合成の抑制が望まれていない細胞集団、例えば、胃粘膜細胞、神経細胞、または腎臓細胞を指す。
【００３３】
本明細書で使用される「ホップ抽出物」という用語は、（１）ホップ植物産品を溶媒に暴露すること、（２）溶媒を、ホップ植物産品から分離すること、および、（３）溶媒を除去すること、によって得られる固体材料を指す。
【００３４】
本明細書で使用される「溶媒」という用語は、ホップ植物産品から固体材料を抽出するのに必要な特性を有する、水性または有機性の液体を指す。溶媒の例としては、水、水蒸気、過熱水、メタノール、エタノール、ヘキサン、クロロフォルム、塩化メチレン、超臨界液体ＣＯ２、液体Ｎ２、または上記物質の併合体が挙げられるが、ただしこれらに限定されない。
【００３５】
本明細書で使用される「ＣＯ２抽出物」という用語は、ホップ植物産品を、液体または超臨界ＣＯ２調製品に暴露し、次いでＣＯ２を除去することによって得られる固体材料を指す。
【００３６】
本明細書で使用される「消費されたホップ」という用語は、ホップ抽出物から得られる、固体で、好水性の残渣を指す。
【００３７】
本明細書で使用される「α酸」という用語は、一括してフムロンという名前で呼ばれる化合物であって、ホップ植物産品から単離が可能な化合物、特に、フムロン、コフムロン、アドフムロン、フルポン、およびイソプレフムロンを含む化合物を指す。
【００３８】
本明細書で使用される「イソα酸」という用語は、ホップ植物産品から単離され、その後、異性体誘導によって得られる化合物を指す。α酸の異性体誘導は、煮沸のように熱的に行われてもよい。イソα酸の例としては、イソフムロン、イソコフムロン、およびイソアドフムロンが挙げられるが、ただしこれらに限定されない。
【００３９】
本明細書で使用される「イソα還元酸」という用語は、ホップ植物産品から単離され、その後異性体誘導によって調製され、還元されたもので、シスおよびトランス形を含むα酸を指す。イソα還元酸（ＲＩＡＡ）の例としては、ジヒドロ−イソフムロン、ジヒドロ−イソコフムロン、およびジヒドロ−イソアドフムロンが挙げられるが、ただしこれらに限定されない。
【００４０】
本明細書で使用される「テトラヒドロイソα酸」という用語は、あるクラスのイソα還元酸を指す。テトラヒドロイソα酸（ＴＨＩＡＡ）の例としては、テトラヒドロイソフムロン、テトラヒドロイソコフムロン、およびテトラヒドロイソアドフムロンが挙げられるが、ただしこれらに限定されない。
【００４１】
本明細書で使用される「ヘキサヒドロイソα酸」という用語は、あるクラスのイソα還元酸を指す。ヘキサヒドロイソα酸（ＨＨＩＡＡ）の例としては、ヘキサヒドロイソフムロン、ヘキサヒドロイソコフムロン、およびヘキサヒドロイソアドフムロンが挙げられるが、ただしこれらに限定されない。
【００４２】
本明細書で使用される「β酸画分」という用語は、一括してルプロンという名前で呼ばれる化合物であって、特に、ルプロン、コルプロン、アドルプロン、テトラヒドロイソフムロン、およびヘキサヒドロコルプロンを含む化合物を指す。
【００４３】
本明細書で使用される「必須油画分」という用語は、複数成分、特に、ミルセン、フムレン、β−カリオフィレン、ウンデカン−２−オン、および２−メチル−ブツ−３−エン−オルを含む複数成分からなる複合混合物を指す。
【００４４】
本明細書で使用される、複数化合物の「接合体」とは、モノ−またはジ−サッカリド、アミノ酸、硫酸塩、コハク酸塩、酢酸塩、およびグルタチオンからなる群より選択される一つの化合物に共有的に結合される、または共役結合される化合物を意味する。このモノ−またはジ−サッカリドは、グルコース、マンノース、リボース、ガラクトース、ラムノース、アラビノース、マルトース、およびフルクトースからなる群より選択される一つの化合物であってもよい。
【００４５】
本発明は、ＮＳＡＩＤの投与に関連する毒性を低減させるためのホップ抽出物の用法に関する。何らかの形でのホップ抽出は、１５０年前１９世紀初期に遡る。当時、水とエタノールによる抽出が先ず試みられた。今日でも、エタノール抽出物はヨーロッパでは市販されているが、際立って広く行われている抽出物は、有機溶媒（例えば、ヘキサン）抽出物およびＣＯ２（超臨界および液体）抽出物である。ＣＯ２（通常６０バール気圧で５０〜１０℃）は液状であり、ホップの軟性樹脂および油分に対して極めて特異的な、比較的穏やかな、非極性溶媒である。臨界点、典型的には３００バール気圧および６０℃であるが、この点を超えると、ＣＯ２は、気体と液体両方の性質を兼ね、遥かに強力な溶媒となる。各種抽出物の組成を表２において比較する。
【００４６】
もっとも単純な場合、ホップ抽出は、粉砕、ペレット成形、そのホップの再粉砕によるルプリンの展開、充填カラムに対する溶媒通過による樹脂成分の収集、そして、最後に溶媒の除去による全体または「純粋」樹脂抽出物の生産を含む。
【００４７】
（表２．  ホップ抽出物（パーセントｗ／ｗ））
【００４８】
【表２】
2011126919.tif 000009
主な有機性の抽出媒体は強力な溶媒であり、実質的に全てのルプリン成分の他に、植物色素、クチクルワックス、水、および水溶性物質を抽出する。
【００４９】
超臨界ＣＯ２は、有機溶媒よりも選択性が高く、タンニンおよびワックスの抽出量はより少なく、水分の抽出量も、従って水溶性成分の抽出量も少ない。超臨界ＣＯ２は確かに、若干の、クロロフィルのような植物色素を抽出するのであるが、有機溶媒の抽出量よりは少ない。液体ＣＯ２は、ホップ市販のために使用される溶媒の内でもっとも選択性が高く、従って、全体樹脂および油分抽出物としてもっとも純粋なものを生産する。液体ＣＯ２は、硬い樹脂またはタンニンをほとんど抽出せず、植物ワックスの抽出レベルは遥かに低く、植物色素は全く抽出せず、水分および水溶性物質の抽出量も低い。
【００５０】
このように選択性が高く、溶媒性が穏やかであるために、液体ＣＯ２の絶対収率、すなわち、単位重量当たりのホップの抽出物は、上述の他の溶媒を用いた場合よりも少ない。さらに、液体ＣＯ２によるα酸の収率（８９−９３％）は、超臨界ＣＯ２（９１−９４％）、または有機溶媒（９３−９６％）の場合よりも低い。抽出の後では、溶媒除去の過程があり、これは、有機溶媒の場合、加熱して蒸発させることを含む。それにも拘わらず、抽出物の中には微量の溶媒が実際に残る。一方、ＣＯ２の除去は、単に圧を解除してＣＯ２を揮発させるだけである。
【００５１】
図３に示すように、ホップのＣＯ２抽出物は、ホップ油分、β酸、およびα酸を含む複数の成分に分画することが可能である。ホップ油分としては、フムレン、β−カリオフィレン、ミクレン、ファルネセン、γ−カジネン、α−セリネン、およびα−カジネンが挙げられるが、ただしこれらに限定されない。β酸としては、一括してルプロンと呼ばれる、ルプロン、コルプロン、アドルプロン、テトラヒドロイソフムロン、およびヘキサヒドロコルプロンが挙げられるが、ただしこれらに限定されない。β酸は、異性体誘導し、還元することも可能である。β酸を還元すると、テトラβ酸が得られる。α酸としては、フムロン、コフムロン、アドフムロン、フルポン、およびイソプレフムロンが挙げられるが、ただしこれらに限定されない。α酸は、異性体誘導し、還元することも可能である。イソα酸を還元して、還元型イソα酸、テトラヒドロイソα酸、およびヘキサヒドロイソα酸が得ることも可能である。
【００５２】
ホップ抽出物において骨再吸収の抑制因子としてフムロンが特定されたことがＴｏｂｅ等によって報告されている（Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  ６１（１）：１５８−１５９（１９９７））。同じ研究グループによるその後の研究によって、フムロンの作用メカニズムは、ＴＮＦαによるＭＣ３Ｔ３、Ｅｌ細胞刺激後のＣＯＸ−２遺伝子の転写抑制によることが明らかにされた（Ｙａｍａｍｏｔｏ，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４６５：１０３−１０６（２０００））。フムロン（ｈｕｍｕｌｏｎｅ）（ｈｕｍｕｌｏｎとも書く）の作用は、グルココルチコイドのものと類似するが、フムロンは、グルココルチコイド受容体を介して機能するものではないことが結論された。これらの結果は、フムロンが、ＭＣ３Ｔ３細胞（骨芽細胞）において遺伝子レベルでＰＧＥ２合成を抑制することを明らかにしたものではあるが、当業者であれば、この結果が、免疫炎症細胞、またはその他の細胞株でも見られるとは必ずしも限らないと考えるであろう。本明細書で開示されるように、ホップ化合物および誘導体は、標的および非標的細胞において高度の組織選択性を示す。さらに、本発明において記述されるホップ誘導体は、α酸フムロンとは構造的に異なる。
【００５３】
本発明は、ホップ（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｌｕｓ）から単離または誘導された少なくとも一つの画分を含む組成物を提供する。ホップから単離または誘導された画分の例としては、α酸、イソα酸、還元型イソα酸、テトラヒドロイソα酸、ヘキサヒドロイソα酸、β酸、および消費されたホップが挙げられる。ホップから単離または誘導される画分としては、コフムロン、アドフムロン、イソフムロン、イソコフムロン、イソアドフムロン、ジヒドロ−イソフムロン、ジヒドロ−イソコフムロン、ジヒドロ−イソアドフムロン、テトラヒドロ−イソフムロン、テトラヒドロ−イソコフムロン、テトラヒドロ−イソアドフムロン、ヘキサヒドロ−イソフムロン、ヘキサヒドロ−イソコフムロン、およびヘキサヒドロ−イソアドフムロンが挙げられるが、ただしこれらに限定されない。好ましい化合物はさらに、置換基、例えば、ハロゲン、エーテル、およびエステルを担持していてもよい。
【００５４】
ホップから単離または誘導される画分の化合物は、下記の上位分子種によって表すことが可能である。
【００５５】
【化７】
2011126919.tif 000010
式中Ｒ’は、カルボニル、ヒドロキシル、ＯＲ、およびＯＣＯＲからなる群より選択され、Ｒはアルキルであり、Ｒ”は、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３からなる群より選択され、かつ、式中Ｒ、Ｔ、Ｘ、およびＺは、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、およびπ軌道からなる群より独立して選択されるが、ただし、もしもＲ、Ｔ、Ｘ、またはＺの内の一つがπ軌道である場合、隣接のＲ、Ｔ、Ｘ、またはＺもπ軌道であって二重結合を形成することを条件とする。
【００５６】
別の実施態様では、ホップから単離または誘導される画分の化合物は、下記の分子種によって表される。
【００５７】
【化８】
2011126919.tif 000011
式中Ｒ’は、カルボニル、ヒドロキシル、ＯＲ、およびＯＣＯＲからなる群より選択され、Ｒはアルキルであり、Ｒ”は、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３からなる群より選択される。例示の分子Ａの構造は、イソα酸、例えば、イソフムロン、イソコフムロン、イソアドフムロン等のイソα酸、および、還元型イソα酸、例えば、ジヒドロ−イソフムロン、ジヒドロ−イソコフムロン、ジヒドロイソアドフムロン等の還元型イソα酸、および、二重結合のエーテルまたはエステル接合体またはハロゲン化修飾体を含む。
【００５８】
さらに別の実施態様では、ホップから単離または誘導される画分の化合物は、下記の分子種によって表される。
【００５９】
【化９】
2011126919.tif 000012
式中Ｒ’は、カルボニル、ヒドロキシル、ＯＲ、およびＯＣＯＲからなる群より選択され、Ｒはアルキルであり、Ｒ”は、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３からなる群より選択される。例示の分子Ｂの構造は、ヒドロイソα、例えば、テトラヒドロ−イソフムロン、テトラヒドロ−イソコヒムロン、およびテトラヒドロ−イソアドフムロン等のようなヒドロイソα、ヘキサヒドロイソα酸、例えば、ヘキサヒドロイソフムロン、ヘキサヒドロ−イソコフムロン、およびヘキサヒドロ−イソアドフムロンのようなヘキサヒドロイソα酸、および、エーテルまたはエステル接合体を含む。
【００６０】
図３に示すように、ホップから単離または誘導される成分の化合物の例としては、フムロン、コフムロン、アドフムロン、イソフムロン、イソコフムロン、イソアドフムロン、ジヒドロ−イソフムロン、ジヒドロ−イソコフムロン、ジヒドロ−イソアドフムロン、テトラヒドロ−イソフムロン、テトラヒドロ−イソコフムロン、テトラヒドロ−イソアドフムロン、ヘキサヒドロ−イソフムロン、ヘキサヒドロ−イソコフムロン、およびヘキサヒドロ−イソアドフムロンが挙げられるが、ただしこれらに限定されない。好ましい化合物は、前述の式で示しように、置換基を担持してもよい。
【００６１】
ホップ誘導体は、植物中に自然に見られ、食品や飲み物にも認められる既知の化合物である。この誘導体は、既知の抽出および処理法から任意に選ばれる方法によって調製することが可能である。ホップ誘導体は、任意の既知のやり方で植物材料から直接調製することが可能である。ホップ誘導体は、従来技術で既知の方法によって、例えば、有機水溶性溶媒、例えば、水溶性アルコールからの再結晶によって精製することが可能である。ホップ誘導体の合成修飾体は、薬剤修飾に関する製薬技術で既知の方法に従って調製することが可能である。
【００６２】
本発明はまた、鎮痛性および／または炎症性化合物または薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤ、および、ホップから単離または誘導された画分または化合物を含む組成物を提供する。例えば、本発明は、本明細書に開示されるような、ホップから単離または誘導される画分または化合物、および、１種以上の鎮痛性および／または炎症性化合物または薬剤、例えば、ＮＳＡＩＤを含む組成物を提供する。ある特定の実施態様では、本発明は、ホップから単離されたイソα酸または還元型イソα酸、および、非ステロイド性抗炎症剤を含む組成物を提供する。このイソα酸は、イソフムロン、イソコフムロン、およびイソアドフムロンの内から選んでもよい。本発明の別の実施態様では、還元型イソα酸は、ジヒドロ−イソフムロン、ジヒドロ−イソコフムロン、およびジヒドロ−アドフルムロンの内から選ぶことが可能である。
【００６３】
例示の鎮痛性および／または抗炎症性化合物または薬剤としては下記の物質が挙げられる。すなわち、サリチル酸塩アルピリン、サリチル酸、サリチル酸メチル、ジフルニサル、サルサラート、オルサラジン、およびスルファサラジン；パラ−アミノフェノール誘導体アセトアニリド、アセトアミノフェン、およびフェナセチン；フェナム酸塩メフェナム酸、メクロフェナム酸、およびメクロフェナム酸ナトリウム；ヘテロアリール酢酸誘導体トルメチン、ケトロラク、およびジクロフェナク；プロピオン酸誘導体イブプロフェン、ナプロキセン、ダプロキセンナトリウム、フェノプロフェン、ケトプロフェン、フルルビオプロフェン／フルルビプロフェン、およびオキサプロジン；オキシカムによって代表されるエノール酸誘導体ピロキシカム、メロキシカム、テノキシカム、アムピロキシカム、ドロキシカム、およびピボキシカム；ピラゾロン誘導体フェニルブタゾン、オキシフェンブタゾン、アニトピリン、アミノピリン、およびジピロン；コキシブ類、セレコキシブ、およびロフェコキシブ；ナブメトン；アパゾン；ニメンスリド；インドメタシン；スリンダク；エトドラク；ジフルニサル、イソブチルフェニルプロピオン酸、および、疼痛および炎症性病態の治療に用いられ、消化器損傷の原因となる、または増悪する他の任意の物質が挙げられるが、ただしこれらに限定されない。本明細書で用いる場合、非アスピリン性、非ステロイド性抗炎症化合物は、アスピリン、アセチルサリチル酸を特定的に除く。
【００６４】
さらに本発明によれば、ホップ誘導体の有効量を、要すれば随意に製薬希釈剤またはアジュバントと組み合わせて含む製薬組成物が提供される。さらに本発明によれば、ホップ誘導体の有効量を、有効で、かつ、耐用される量および濃度の、１種以上の鎮痛化合物および／または抗炎症化合物（単数または複数）と組み合わせて含む製薬組成物が提供される。
【００６５】
本発明はさらに、ストレス病態の治療に効果的な１種以上の適合的化合物（単複）と組み合わせて、有効量のホップ誘導体を含む製薬組成物を提供する。このような組成物は、例えば、化学的に誘発されたものであれ、ストレスによって誘発されたものであれ、潰瘍の治療のために、また、消化器潰瘍の形成を抑制するために使用することが可能である。
【００６６】
（用量）
さらに本発明によれば、ホップ誘導体の有効量を含む経口剤形の製薬処方が提供される。この経口剤形は、消化管の所望の部位、例えば、胃および／または十二指腸のいずれかにおいて、既知の処方技術を用いて、例えば、徐放性錠剤を用いて活性成分を放出するように構成される。さらにまた本発明によれば、有効量のホップ誘導体と、潰瘍形成を予防するのに有効な既知の化合物および／または潰瘍を治療的に処置するのに有効な既知の化合物および／または潰瘍と関連する症状を緩和するのに有効な既知の化合物（単複）、例えば、好酸剤、例えば、水酸化アルミニウムとを含む製薬組成物が提供される。毒性が低いために、有効な結果を生ずるために、要求される特定の作用に応じて高用量のホップ誘導体を用いることが可能である。
【００６７】
ホップ誘導体は経口投与に特に好適である。従って、ホップ誘導体は、経口服用用に処方されてもよい。すなわち、錠剤、被覆錠剤、糖剤、カプセル、散剤、顆粒剤、および可溶性錠剤、および、液状剤形、例えば、懸濁剤、分散剤または溶液、要すれば随意にさらに別の活性成分と一緒に、例えば、１種以上の鎮痛剤および／または抗炎症化合物（単複）と組み合わせて処方してもよい。
【００６８】
本発明は、本明細書に開示されるような製薬組成物の調製法、および、そのように調製された場合の組成物にも拡張される。組成物は、ホップ誘導体を、製薬学的に受容可能なキャリアまたは補助剤と、また、要すれば随意に鎮痛剤および／または抗炎症物質および／またはその他の化合物（単複）と共に混合することを含む方法によって製造されてもよい。製薬組成物を調製する方法は当業者には既知である（例えば、Ｇｅｎａｒｒｏ，ｅｄ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ（１９９０）参照）。
【００６９】
選択される用量レベルは、特定の組成物の活性、投与ルート、治療または予防される病態の重度、および、治療される患者の病態および既往に依存する。しかしながら、組成物の用量を、所望の治療効果を発揮するのに必要とされるものよりも低いレベルから始め、所望の効果が実現されるまで用量を徐々に増していくことは、従来技術の範囲内にある。要すれば、１日当たりの有効量は、投与のために複数用量に分割してもよい。すなわち、１日当たり２回〜４回の別々の用量に分割してもよい。しかしながら、いずれの患者であれ特定の患者における特定の用量レベルは、様々の因子、例えば、体重、一般的健康状態、食事、投与時間とルート、他の組成物との組み合わせ、および、治療または予防の対象となる特定の病態の重度を含む多様な因子に依存することが理解されよう。有効用量は、胃病を引き起こすＮＳＡＩＤの前に、一緒に、または、後で投与してよい。
【００７０】
本発明は、ホップ画分、ホップ化合物、またはホップ誘導体を、単独で、または、１種以上のＮＳＡＩＤと組み合わせて輸送することを含む方法を提供する。例えば、本発明の組成物の１日当たり用量は、ホップ画分、例えば、α酸、イソα酸、還元型イソα酸、テトラヒドロイソα酸、ヘキサヒドロイソα酸、β酸、ホップかす、またはその他の画分を、１日当たり約０．５〜約１０，０００ｍｇ輸送するように処方されてもよい。特に、組成物の１日当たり有効用量は、ホップ画分、例えば、α酸、イソα酸、還元型イソα酸、テトラヒドロイソα酸、ヘキサヒドロイソα酸、β酸、ホップかす、またはその他の画分を、１日当たり約５０〜約７５００ｍｇ輸送するように処方されてもよい。例えば、組成物の１日当たり有効用量は、約１００ｍｇ〜約５０００ｍｇ、約２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約３００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約５００〜約１０００ｍｇのホップ画分を１日当たり輸送するように処方されてもよい。ある実施態様は、１日当たり、約０．５〜約５００ｍｇのイソα酸または還元型イソα酸、例えば、約５０〜約３００ｍｇ、または約１００〜約２００ｍｇのイソα酸または還元型イソα酸を含む組成物を提供する。別の実施態様では、本発明は、１日当たり、約１０〜約３０００ｍｇの還元型イソα酸、テトラヒドロキシイソα酸、またはヘキサヒドロイソα酸、例えば、約５０〜約２０００ｍｇ、約１００〜約１０００ｍｇ、約２００〜約７５０ｍｇ、または約２５０〜約５００ｍｇの還元型イソα酸、テトラヒドロイソα酸、またはヘキサヒドロイソα酸を含む組成物を提供する。さらに別のある実施態様は、１日当たり、約５０〜約７５００ｍｇのホップかす、例えば、約１００〜約６０００ｍｇ、約２００〜約５０００ｍｇ、約３００〜約３０００ｍｇ、約５００〜約２０００ｍｇ、または約１０００〜約１５００ｍｇのホップかすを含む組成物を提供する。
【００７１】
局所塗布用実施態様の組成物は、約０．００１〜約１０重量パーセント、約０．０１〜約５重量パーセント、または約０．１〜約１重量パーセントのホップ誘導体を含んでもよい。このような組成物は、血清濃度として、約０．０００１〜約１０μＭの範囲の、例えば、約０．００１〜約５μＭ、約０．０１〜約１μＭ、または約０．１〜約０．５μＭの、ホップから単離または誘導される画分、またはその接合体をもたらすことが可能である。
【００７２】
（処方）
本発明の組成物は、食物サプリメントまたは製薬組成物として投与することが可能である。本組成物は、望むままに、適当な剤形において、経口的に、局所に、経皮的に、経粘膜的に、非経口的等のルートを通じて投与してよい。食物サプリメント用の組成物は、各種の添加物、例えば、中間代謝産物、ビタミンおよびミネラルのような他の天然成分を始め、不活性成分、例えば、錠剤やカプセルの製造における標準的賦形剤であるタルクおよびステアリン酸マグネシウムのような添加物を含んでもよい。例えば、一つの実施態様は、本発明の組成物からなる活性成分を、グルコサミンまたはコンドロイチン硫酸と組み合わせて含む。
【００７３】
本明細書で用いる「製薬学的に受容可能なキャリア」とは、固体に投与することが適切な、溶媒、分散剤、コーティング、等張剤および吸収遅延剤、甘味剤等を含む。これら製薬学的受容可能なキャリアは、広範な材料、例えば、希釈剤、結合剤および接着剤、潤滑剤、崩壊剤、着色剤、充填剤、芳香剤、甘味剤、および雑補助剤、例えば、特定の治療組成物を調製するのに必要とされるバッファーおよび吸収剤等の材料から調製されてもよい。製薬学的活性物質のためにこのような媒体および薬剤を使用することは従来技術でよく知られる。処方は、活性成分と適合する成分を含むことは理解されている。一つの実施態様では、タルクおよびステアリン酸マグネシウムが処方に含まれる。本発明の組成物を、食餌バーまたは機能食品として製造する場合に影響を及ぼすことが知られる他の成分としては、芳香剤、糖類、アミノ糖類、タンパク、および／またはでん粉修飾体を始め、脂肪および油分が挙げられる。
【００７４】
本発明の実施態様の食物サプリメント、ローション、または治療組成物は、当業者に既知の任意のやり方で処方することが可能である。一つの実施態様では、組成物は、当業者に利用可能な技術を用いて、カプセルまたは錠剤として処方される。カプセルまたは錠剤形では、成人ヒトまたは動物に対して好ましい１日当たり用量は、１〜６個のカプセルまたは錠剤に含めることが可能である。組成物はまた、他の適当な剤形、例えば、注入液または懸濁液、スプレー液または懸濁液、ローション、ガム、ローゼンジ、食品、またはスナック品目のような形に処方することも可能である。食品、スナック、ガム、またはローゼンジ品目は、摂食可能な成分、例えば、甘味剤、芳香剤、油分、でん粉、タンパク、果物または果物エキス、野菜または野菜エキス、穀粒、動物脂肪またはタンパクを含む、任意の摂食可能成分を含むことが可能である。従って、本発明の組成物は、シリアルや、チップス、バー、ガムドロップのようなスナック品目、チューイングキャンディーまたはゆっくり溶けるローゼンジとして処方することも可能である。本発明の組成物は、急性、慢性両方の炎症性疾患の治療に使用することが可能である。本発明の組成物の処方の内特に有用なものは、炎症反応を緩和し、患部組織の治癒を促進し、あるいは、患部組織に対するそれ以上の損傷を予防することが可能である。製薬学的に受容可能なキャリアも、本発明の組成物および処方において使用が可能である。
【００７５】
本発明はまた、胃および小腸の潰瘍型障害に対して、特に、急性および慢性の胃および十二指腸潰瘍および関連病態を患っている、または、そのような潰瘍および病態に対して過敏である患者の治療法であって、その患者に対して、ホップ誘導体の有効量を、要すれば随意に、添加活性成分、例えば、鎮痛性および／または抗炎症性化合物または薬剤のような添加成分と一緒に投与することを含む治療法を提供する。
【００７６】
本発明の成分は、例えば、被験体の炎症の治療のために、および、その他の炎症関連性障害、例えば、疼痛および頭痛の治療のための鎮痛剤として、あるいは、発熱の治療のための解熱剤として使用することも可能である。本発明の組成物は、関節炎、例えば、関節リューマチ、脊椎関節障害、通風関節炎、変形性関節炎、全身性エリテマトーデス、および若年性関節炎を含む関節炎を治療するために使用することが可能である。
【００７７】
本発明の成分は、哺乳動物におけるＮＳＡＩＤ誘発性胃病の予防または治療に使用することが可能である。例えば、アスピリンの慢性的経口投与は、潰瘍の発生を伴う。本発明の組成物と共に投与されると、潰瘍発生は緩和または回避される。
【００７８】
本明細書に開示される通り、胃のＰＧＥ２生合成に対するＮＳＡＩＤ抑制は、ホップ誘導体に対して同時に暴露されると著明に緩和される（実施例５および６を参照）。本明細書においてさらに開示されるように、ホップ誘導体とＮＳＡＩＤの併用は、治療係数の増加を示す（実施例７および８を参照）。ホップ誘導体はまた、潰瘍形成を低減し、ＮＳＡＩＤ誘発性の胃損傷を抑制することが判明した（実施例９および１０参照）。従って、ＮＳＡＩＤの抗炎症作用に否定的影響を及ぼすことなく、胃潰瘍形成を緩和、予防、または留保することが可能である。本発明の組成物はＮＳＡＩＤ胃障害に干渉することが可能なので、実施態様は、各種疾患、例えば、自己免疫疾患、炎症性疾患、神経疾患、感染および循環器病、および、ガンのような各種疾患（ただしこれらに限定されない）の治療および予防に有効である可能性がある。
【００７９】
本発明は、本明細書に開示されるように、ホップから単離または誘導された画分を、第二成分と組み合わせて含む組成物を提供する。一つの実施態様では、本発明は、ホップから単離または誘導された画分と、非アスピリン非ステロイド性抗炎症化合物とを含む組成物を提供する。ホップから単離または誘導される画分は、α酸、イソα酸、還元型イソα酸、テトラヒドロイソα酸、ヘキサヒドロイソα酸、β酸、およびホップかすからなる群より選択されてもよい。
【００８０】
ホップから単離または誘導される画分は、下式を有する上位分子種化合物であってもよい。
【００８１】
【化１０】
2011126919.tif 000013
式中Ｒ’は、カルボニル、ヒドロキシル、ＯＲ、およびＯＣＯＲからなる群より選択され、Ｒはアルキルであり、Ｒ”は、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３からなる群より選択され、かつ、式中Ｒ、Ｔ、Ｘ、およびＺは、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、およびπ軌道からなる群より独立して選択されるが、ただし、もしもＲ、Ｔ、Ｘ、またはＺの内の一つがπ軌道である場合、隣接のＲ、Ｔ、Ｘ、またはＺもπ軌道であって二重結合を形成することを条件とする。
【００８２】
さらに別の実施態様では、ホップから単離または誘導される画分は、下式を持つ分子種Ａの化合物を含んでもよい。
【００８３】
【化１１】
2011126919.tif 000014
式中Ｒ’は、カルボニル、ヒドロキシル、ＯＲ、およびＯＣＯＲからなる群より選択され、Ｒはアルキルであり、Ｒ”は、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３からなる群より選択される。
【００８４】
さらに別の実施態様では、ホップから単離または誘導される画分は、下式を持つ子種Ｂの化合物であってもよい。
【００８５】
【化１２】
2011126919.tif 000015
式中Ｒ’は、カルボニル、ヒドロキシル、ＯＲ、およびＯＣＯＲからなる群より選択され、Ｒはアルキルであり、Ｒ”は、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３からなる群より選択される。
【００８６】
さらに別の実施態様では、ホップから単離または誘導される画分は、フムロン、コフムロン、アドフムロン、イソフムロン、イソコフムロン、イソアドフムロン、ジヒドロ−イソフムロン、ジヒドロ−イソコフムロン、ジヒドロ−イソアドフムロン、テトラヒドロ−イソフムロン、テトラヒドロ−イソコフムロン、テトラヒドロ−イソアドフムロン、ヘキサヒドロ−イソフムロン、ヘキサヒドロ−イソコフムロン、およびヘキサヒドロ−イソアドフムロンからなる群より選択される化合物であってもよい。本発明の組成物は、本明細書に開示されるように、特定範囲の複数の活性成分を含んでもよい。
【００８７】
ホップから単離または誘導される画分を含む本発明の組成物は、非アスピリン性、非ステロイド性抗炎症化合物と組み合わせてもよい。そのような化合物は、サリチル酸、サリチル酸メチル、ジフルニサル、サルサラート、オルサラジン、スルファサラジン、アセトアニリド、アセトアミノフェン、フェナセチン、メフェナム酸、メクロフェナム酸ナトリウム、トルメチン、ケトロラク、ジクロフェナク、イブプロフェン、ナプロキセン、ダプロキセンナトリウム、フェノプロフェン、ケトプロフェン、フルルビオプロフェン、オキサプロジン、ピロキシカム、メロキシカム、テノキシカム、アムピロキシカム、ドロキシカム、ピボキシカム、フェニルブタゾン、オキシフェンブタゾン、アニトピリン、アミノピリン、ジピロン、セレコキシブ、ロフェコキシブ、ナブメトン、アパゾン、ニメンスリド、インドメタシン、スリンダク、およびエトドラクからなる群より選択され得る。本発明の組成物はさらに、製薬学的に受容可能なキャリアを含んでもよい。このような組成物は、経口用、局所用、非経口用、または直腸経由用の投与のために処方されてもよい。
【００８８】
別の実施態様では、本発明は、ホップから単離された還元型イソα酸、および非ステロイド性抗炎症化合物を含む組成物を提供する。この還元型イソα酸は、例えば、ジヒドロ−イソフムロン、ジヒドロ−イソコフムロン、およびジヒドロ−イソアドフムロンであってもよい。
【００８９】
本発明はさらに、本明細書に開示される、本発明の組成物を使用する方法を提供する。一つの実施態様では、本発明は、哺乳動物において鎮痛および抗潰瘍作用をもたらす方法であって、該哺乳動物に対し、鎮痛および抗潰瘍作用をもたらすのに十分な量の、ホップから単離または誘導された画分と、非ステロイド性抗炎症化合物とを投与する方法を提供する。この方法では、ホップから単離または誘導された画分の投与によって、該非ステロイド性抗炎症化合物に伴う胃毒性が緩和される。本明細書に開示されるように、ホップから単離または誘導された画分は、非ステロイド性抗炎症化合物と同時に投与することが可能である。あるいは別に、ホップから単離または誘導された画分は、非ステロイド性抗炎症化合物の投与後に、または、非ステロイド性抗炎症化合物の投与前に投与してもよい。
【００９０】
別の実施態様では、非ステロイド性抗炎症化合物によって現に治療されている個体に対しホップから単離または誘導された画分を投与することによって、非ステロイド性抗炎症化合物に伴う胃毒性を緩和する方法を提供する。さらに、本発明は、胃腸病に関連する徴候または症状を呈する個体に対しホップから単離または誘導された画分を投与することによって胃腸病を緩和する方法を提供する。この胃腸病は、例えば、潰瘍形成を含んでもよい。この潰瘍形成は、例えば、食物、香草、細菌、真菌、または薬剤によって誘発されたものであってもよい。本発明の方法は、本明細書に開示される通り、胃病、胃腸病、消化器刺激因子に伴う胃の不調または不快を緩和するのに使用が可能である。
【００９１】
一つの実施態様では、本発明は、ＮＳＡＩＤのような非ステロイド性抗炎症化合物に伴う胃毒性を緩和する方法であって、非ステロイド性抗炎症化合物によって現に治療される個体に対してホップから単離または誘導された画分を投与することによって胃毒性を緩和する方法を提供する。この方法は、消化器刺激因子に伴う胃毒性または胃腸病を緩和するためにも同様に使用が可能である。非ステロイド性抗炎症化合物に伴う胃毒性を緩和するためには、ホップの各種誘導体、またはホップから単離または誘導される画分の使用が可能である。ホップから単離または誘導される画分、例えば、イソα酸または還元型イソα酸を、ＮＳＡＩＤのような非ステロイド性抗炎症化合物と同時に投与することが可能である。このような同時投与は、同じ処方として、または別々の処方として行われてもよい。あるいは別に、ホップ誘導体、またはホップから単離または誘導された画分は、非ステロイド性抗炎症化合物が投与された後に、例えば、非ステロイド性抗炎症化合物の投与後、数分から数時間、数日後に投与してもよい。ホップから単離または誘導される画分は、非ステロイド性抗炎症化合物の服用による胃病が発症してから投与してもよい。さらに、ホップ誘導体、またはホップから単離または誘導される画分は、非ステロイド性抗炎症化合物が投与される前に、例えば、非ステロイド性抗炎症化合物誘発性胃病の開始の重度を予防または緩和するための予防手段として投与することも可能である。このような投与は、非ステロイド性抗炎症化合物投与の数分、数時間、数日前であることが可能である。ホップから単離または誘導された画分を、非ステロイド性抗炎症化合物の投与前に投与する場合、投与は、ホップから単離または誘導された画分の投与が、非ステロイド性抗炎症化合物誘発性胃病を緩和する、または、非ステロイド性抗炎症化合物誘発性胃病の開始の重度を低減させるのに効果的な時間枠で行われることが理解される。一般に、ホップから単離または誘導される画分は、非ステロイド性抗炎症化合物の最初の投与の前７日以内に、例えば、非ステロイド性抗炎症化合物の最初の投与前６日以内、５日以内、４日以内、３日以内、または２日以内に投与される。特に、ホップから単離または誘導される画分は、非ステロイド性抗炎症化合物投与後２４時間以内に投与することが可能である。
【００９２】
ヒトの治療用に有用である他に、本発明の実施態様はまた、他の動物、例えば、ウマ、イヌ、ネコ、鳥、ヒツジ、ブタ等を含む動物の治療にも有用である。炎症治療用処方は、ＣＯＸ−２誘発および活性を抑制することが可能であるが、胃粘膜のＰＧＥ２合成にはほとんど影響を及ぼさない。過去を通覧すると、炎症治療のために用いられたＮＳＡＩＤは、胃粘膜細胞のＰＧＥ２合成には影響を及ぼさないが、ＣＯＸ−２は抑制するという特異性を欠いていた。従って、これらの薬剤は、長期に渡って服用すると、消化器系を刺激し、損傷した。このような不適応例は本発明には伴わない。従って、記載の処方は、長期に渡って服用しても、胃病は全く、またはごく限局したものしか見られない。投与は、熟練した当業者によって利用が可能な任意の方法によって、例えば、経口、局所、経皮、経粘膜、または非経口ルートによって行うことが可能である。
【００９３】
本明細書で使用される「炎症を緩和する」とは、炎症反応を低減、緩和、または抑制することである。当業者であれば、炎症反応に伴う徴候または症状の低下は簡単に認識することが可能である。炎症を緩和するとは、炎症に伴う徴候または症状の重度を下げるばかりでなく、炎症に関連する症状が全く、またはほとんど見られなくなるほど炎症を抑制することを指すことも可能である。本明細書で使用される「胃病」とは胃の病気を指す。本明細書で使用される「胃腸病」とは、消化管、すなわち、口から肛門まで延び、消化や食物吸収、および残余の不用物の除去のために働く管状の通路の障害を指す。本明細書で使用される「潰瘍性障害」とは、消化器潰瘍を含む障害を指す。消化器潰瘍は、例えば、潰瘍誘発性薬物のような潰瘍性物質に対する暴露、潰瘍性環境刺激、細菌感染、例えば、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ感染のような感染症、またはストレス誘発性潰瘍によって起こる可能性がある。このような潰瘍誘発性物質としては、例えば、非ステロイド性抗炎症化合物すなわちＮＳＡＩＤのような薬剤または化合物、食品、香料、細菌、真菌、または、その他の、潰瘍を誘発する刺激物である可能性がある。例えば、薬剤フォスマックスは、骨粗しょう症を治療するのに用いられるが、消化器副作用を引き起こす。従って、本発明の組成物は、薬剤のような消化器刺激因子によって引き起こされる胃腸病を緩和するために用いることが可能である。本発明は、例として、ＮＳＡＩＤに伴う胃病を緩和する場合について説明してきたけれども、本明細書に開示される組成物および方法は、同じように、様々の消化器刺激因子に伴う胃病および／または胃腸病を緩和するために使用することが可能であることが理解される。
【００９４】
本明細書に開示されるように、ホップから単離または誘導された画分を、要すれば随意に他の成分と組み合わせて含む、本発明の組成物は、胃病および／または胃腸病に伴う徴候または症状を緩和することが可能である。本発明の組成物は、化学的、環境的、感染による、および／または、感情的ストレスによる有害刺激に伴う胃腸病を緩和するために効果的に使用することが可能であることは当業者には理解される。例えば、本発明の組成物は、消化器刺激因子に関連する胃病および／または胃腸病を緩和するのに使用することが可能である。そのような刺激因子としては、例えば、食品の風味を増すために使用されるスパイス、香料、アルコール、タバコ、ストレス、またはその他のよく知られた消化器刺激因子が挙げられる。いくつかの消化器刺激因子は当業者にはよく知られるが、例えば、食品、およびスパイスを含む香料；ストレスおよび生活習慣、薬、Ｈ．ｐｙｒｏｌｉのような細菌、および潰瘍形成等が挙げられるが、ただしこれらに限定されない（例えば、Ｍｙｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．８２：２１１−２１４（１９８７）；Ｐｉｐｐａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｓｕｐｐｌ．１６７：３２−３５（１９８９）；Ｓｉｖｒｉ，Ｆｕｎｄａｍ．Ｃｌｉｎｉｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１８：２３−３１（２００４）；Ｂｅｒｍｅｊｏ  ｅｔ
ａｌ．，Ｒｅｖ．Ｅｓｐ．Ｅｎｆｅｒｍ．Ｄｉｇ．９５：６２１−６２４および６２５−６２８（２００３）を参照）。
【００９５】
本明細書に開示されるように、様々なスパイスが、ＡＧＳ細胞モデルにおいてＰＧＥ２を抑制することが判明している（実施例１４−１６を参照）。ＲＩＡＡ、またはその他のホップ誘導体と組み合わせると、これらのスパイスの胃毒性はより低くなることが予想される。例えば、ＲＡＷおよびＡＧＳ細胞モデルで分析した場合、ジンジャーもカプサイシンも抑制活性を示す。従って、ＲＩＡＡ、またはホップから単離または誘導されるその他の画分は、非標的細胞（例えば、胃細胞）の活性には拮抗し、標的細胞（例えば、炎症細胞）では協調することが可能である。従って、ホップから単離または誘導される画分を含む本発明の組成物は、スパイスのような胃刺激因子と関連する胃毒性および／または胃不快を低減するために使用が可能である。例えば、ローズマリーについてはＩＣ５０は４であるが、ＲＩＡＡではＩＣ５０＞２５が観察されており、それらの組み合わせではＩＣ５０＞２５が得られている。これは、ＲＩＡＡがスパイスの安全性を高めることが可能であることを示す。従って、本発明の組成物は、スパイスと共に摂取すること、あるいは、食物の摂取の前にスパイスと混合すること、または食物に添加することが可能である。さらに、本発明の組成物は、スパイス摂取に伴う胃不調を緩和するためにチューイングガムとして投与することも可能である。この投与は、胃毒性および／または胃病を誘発する、他の胃刺激因子に対しても同様に使用することが可能である。
【００９６】
抗菌活性を有する、ホップから単離または誘導された画分を含む本発明の組成物は、潰瘍を消滅させ、胃の治癒を促進するために使用することが可能である。本発明の別の実施態様では、口内潰瘍に対する歯科的塗布を含めた、皮膚または組織の潰瘍または外傷を治療するための軟膏、低アレルゲンペーストまたはクリームとして使用することが可能である。
【００９７】
本明細書で開示されるように、ホップから単離または誘導される画分は、胃病、例えば、胃または小腸に形成される潰瘍に伴う徴候または症状を緩和するために使用することが可能である。例えば、本発明は、胃病に関連する徴候または症状を呈する個体に対してホップから単離または誘導される画分を投与することによって、胃病に伴う徴候または症状を緩和する方法を提供する。
【００９８】
ホップから単離または誘導される画分に加えてさらに、本発明の組成物は、第２の成分を含んでもよい。そのような第２成分の例としては、ローズマリー、またはローズマリーから得られた抽出物または化合物がある。従って、本発明の組成物は、ホップから単離または誘導された画分を含み、さらに、有効量の、ローズマリー、ローズマリー抽出物、またはローズマリーから誘導される化合物を含むことが可能である。従って、ホップから単離または誘導される画分の他に、本発明の組成物はさらに、ローズマリー、ローズマリー抽出物、または、ローズマリーまたはローズマリー抽出物の中に認められることが知られるその他の化合物を含むことが可能である。そのような化合物としては、１，８−シネオール、１９−α−ヒドロキシウルソール酸、２−β−ヒドロキシオレアノール酸、３−Ｏ−アセチルオレアノール酸、３−Ｏ−アセチルウルソール酸、６−メトキシ−ルテオリン−７−グルコシド、６−メトキシルテオリン、６−メトキシルテオリン−７−グルコシド、メトキシルテオリン−７−メチルエーテル、７−エトキシ−ローズマノール、７−メトキシ−ローズマノール、α−アミリン、α−フムレン、α−ヒドロキシヒドロカフェイン酸、α−ピネン、α−テルピネン、α−テルピネニル酢酸、α−テルピネオール、α−スジョン、アピゲニン、アピゲニン−７−グルコシド、クルクメン、ベンジル−アルコール、β−アミレノン、β−アミリン、β−エレメン、β−ピネン、ベツリン、ベツリン酸、ボルネオール、ボルニル−酢酸、カフェイン酸、カムフェン、カンフル、カルノシン酸、カルノソル、カルバクロール、カルボン、カリオフィレン、カリオフィレン−オキシド、クロロゲン酸、ジオスメチン、γ−テルピネン、ヘスペリジン、イソボルネオール、リモネン、ルテオリン、ルテオリン−３’−Ｏ−（３”−Ｏ−アセチル）−β−Ｄ−グルクロニド、ルテオリン−３’−Ｏ−（４”−Ｏ−アセチル）−β−Ｄ−グルクロニド、ルテオリン−３’−Ｏ−β−Ｄ−グルクロニド、ルテオリン−７−グルコシド、メチル−ユーゲノール、ミルセン、ネオ−クロロゲン酸、ネペチン、オクタン酸、オレアノール酸、ｐ−シメン、ピペリテノン、ローズマノール、ローズマル酸、ローズマリシン、ローズマリジフェノール、ローズマリン酸、ローズマリノール、ローズマリキノン、サビネン、サビニル酢酸、サリチル酸塩、サリチル酸−２−β−Ｄ−グルコシド、スクアレン、テルピネン−４−オル、テルピノレン、チモール、トランス−アネトール、トランス−カルベオール、ウルソール酸、ベルベノン、およびジンジベレンが挙げられる。
【００９９】
ホップおよびローズマリーから単離または誘導される画分、またはそれらから誘導される抽出物または化合物を含む組成物において、該組成物は、１日当たり約０．５〜５０００ｍｇのローズマリー、ローズマリーの抽出物、またはローズマリー由来の化合物を輸送するように処方されてもよい。特に、１日当たりの有効用量は、１日当たり約５〜２０００ｍｇのローズマリー、ローズマリーの抽出物、またはローズマリー由来の化合物を輸送するように処方されてもよい。例えば、組成物は、１日当たり有効用量を、１日に１回または２回投与によって供給するように処方されてもよい。ある特定の実施態様では、組成物は、１日に１回または２回投与される、約７５ｍｇのローズマリー抽出物、またはローズマリー由来化合物または誘導体を含むことが可能である。
【０１００】
本発明の組成物はさらに、オレアノール酸のようなトリテルペンを含むことが可能である。ある特定の実施態様では、組成物は、約０．０１〜５００ｍｇのローズマリー抽出物および約０．０１〜５００ｍｇのオレアノール酸を含むことが可能である。例えば、ある特定の実施態様は、標的組織において、組織ｇ当たり０．１〜１０μｇのローズマリー抽出物、組織ｇ当たり０．１〜２５μｇのオレアノール酸の濃度を実現可能とする組成物を提供する。
【０１０１】
さらに別の実施態様では、本発明の組成物はさらに、１８−ａ−グリシルレチニン酸、１８−β−グリシルレチニン酸、２−ａ−３−ａ−ジヒドロオキシウルス−１２−３ｎ−２８−オン酸、３−ａ−ヒドロキシウルソール酸、３−オキソ−ウルソール酸、ベツリン、ベツリン酸、セラストロール、エブリコ酸、フリエデリン、グリシルリジン、ギプソゲニン、オレアノール酸、オレアノール酸−３−酢酸、ブクリョウ酸、ショウ（松）リョウ酸、ソフォラジオール、ソヤサポゲノールＡ、ソヤサポゲノールＢ、トリプテリン、トリプトフェノリド、ケツレイ酸、ウルソール酸、ウルソール酸−３−酢酸、ウバオール、およびβ−シトステロールからなる群より選択されるトリテルピン分子種を含むことが可能である。トリテルピン分子種は、要すれば随意に、モノ−またはジサッカリド、アミノ酸、硫酸塩、コハク酸塩、酢酸塩、およびグルタチオンからなる群より選択される物質に接合されてもよい。
【０１０２】
ある特定の実施態様では、組成物は、約０．５〜１０００ｍｇ、または約５０〜７５００ｍｇの、ホップ単離または誘導画分を含むことが可能である。さらに、本組成物は、ホップ単離または誘導画分の他に、約０．５〜５０００ｍｇの第２成分、約５〜２０００ｍｇの第２成分を含むことが可能である。ただし、この第２成分は、ローズマリー、ローズマリー由来の抽出物、およびリーズマリー由来の化合物からなる群より選択される。さらに、本組成物は、約０．００１〜１０重量パーセントの、ホップ単離または誘導画分を含む第１成分、あるいは、約０．１〜１重量パーセントの第１成分を含むことが可能である。本成分はまた、ローズマリー、ローズマリー抽出物、およびリーズマリー由来化合物からなる群より選択される第２成分を約０．００１〜１０重量パーセントで、または、第２成分を約０．１〜１重量パーセントで含むことが可能である。別の実施態様では、第１のホップ成分の、第２のローズマリー成分に対する比は、約１００：１〜約１：１００、または、約５０：１〜約１：５０の範囲にあってもよい。
【０１０３】
本明細書に開示されるように（実施例１３参照）、ホップ単離または誘導画分を含む組成物は、消化器炎症を示すインジケーターであるカルプロテクチン便中濃度を増すＮＳＡＩＤのような抗炎症剤と違って、便中のカルプロテクチンを増加させない。ホップ単離または誘導画分を含むこの組成物はまた、調べた特定の実施態様において（実施例１３）、ローズマリー抽出物とオレオノール酸を含んでいた。従って、ホップ単離または誘導画分を含む組成物は、ＮＳＡＩＤ同様ＰＧＥ２合成を抑制し、一方消化器炎症を抑制するのに使用が可能である。
【０１０４】
カルプロテクチンは、カルシウム結合タンパクであって、抗菌性、抗真菌性、および抗増殖性を持ち、かつ、変形および正常細胞においてアポトーシスを増進することが判明しているタンパクである（Ｙｕｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２６：７５３−７６０（２００３）；Ｐｏｕｉｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．１８：７５６−７６２（２００３））。カルプロテクチンの活性の少なくともある部分は、それが亜鉛を秘匿する能力を持ち、そのために亜鉛の局所的欠損をもたらすことと関わりがあるようである。しかしながら、データはまた、カルプロテクチンは、亜鉛独立性の活性も持っていることを示している。
【０１０５】
カルプロテクチンは、好中球の原形質タンパクの４０％を占めるが、好中球は炎症部位に侵入し、そこにおいてカルプロテクチンを放出する（Ｙｕｉ  ｅｔ  ａｌ．，上記、２００３；Ｐｏｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，上記、２００３）。カルプロテクチンはまた、血中の単球、および急性炎症部位における組織のマクロファージの中に認められるが、一方、慢性的炎症中に存在するマクロファージや、滞在性マクロファージは、カルプロテクチンについて陰性である（Ｙｕｉ  ｅｔ  ａｌ．，上記、２００３）。カルプロテクチンはまた、粘膜の扁平上皮細胞や、サイトカインによって刺激された培養ケラチノサイト中にも認められている。これは、他の細胞も、炎症時にこの細胞を生産する可能性のあることを示唆する（Ｓｃｈｊｅｒｖｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１４９：４８４−４９１（２００３））。
【０１０６】
カルプロテクチンは、血漿、尿、および、他のいくつかの体液中に検出される。正常の個人では、好中球は、その寿命の末期において消化管の粘膜を貫いて移動する。従って、低レベルの便中カルプロテクチンは全身に存在する。４４．Ｔｉｂｂｌｅ  ａｎｄ  Ｂｊａｒｎａｓｏｎ，Ｄｒｕｇｓ  Ｔｏｄａｙ，３７：８５−９６（２００１）。分解に対して抵抗性を示すので、カルプロテクチンは大便サンプルにおいて定量が可能であり、その結果は再現的である。（Ｒｏｓｅｔｈ，ＡＧ．Ｄｉｇｅｓｔ．Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓ．３５：６０７−６０９（２００３））
カルプロテクチンが、消化器炎症を患う患者において上昇することが示されて以来、診断テストとしての便中カルプロテクチンに対する興味は増している。例えば、便中カルプロテクチンは、炎症性の大腸疾患（ＩＢＤ、＞１００μｇ／ｇ大便）において有意に増加する。かつ、病気の潜伏期に渡って、活性を持つＩＢＤとカルプロテクチンの増加の間には正の相関が観察された（Ｃｏｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉｇｅｓｔ．Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓ．３５：６４２−６４７（２００３））。研究から、便中カルプロテクチンは、結腸ガンと関連する増大する炎症反応でもあることが示された。健康な被験者と、過敏性大腸症候群（非炎症性疾患）とＩＢＤを有する被験者との比較から、臓器疾患の存在を示すカットオフは６０μｇ／ｇ大便の付近にあることが示された（Ｃｏｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，上記、２００３；Ｃａｒｒｏｃｃｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．４９：８６１−８６７（２００３））。
【０１０７】
非ステロイド性抗炎症薬剤ＮＳＡＩＤは、消化器損傷を誘発する可能性があり、長期の服用は、高いパーセントの患者において胃・十二指腸領域に炎症性変化を引き起こす。ある研究では、６ヶ月以上規則的にＮＳＡＩＤを服用した患者の内最大６５％が胃腸病を発症することが示された（Ｔｉｂｂｌｅ  ａｎｄ  Ｂｊａｒｎａｓｏｎ、上記、２００１）。ＮＳＡＩＤを服用する場合、消化管に対する損傷は急速に起こるもののようである。例えば、一つの研究によれば、被験者の１９％は、ナプロキセン服用（５００ｍｇ、１日２回）後４週間以内に胃・十二指腸潰瘍を発症し、患者の４１％が１２週間の服用後に潰瘍を発症した（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．９６：１０１９−１０２７（２００１））。
【０１０８】
便中カルプロテクチンは、消化器炎症のインジケーターであるので、いくつかの報告が、ＮＳＡＩＤによる損傷を検出するのに便中カルプロテクチンの使用が可能かどうかを調べている。一つの研究において、便中カルプロテクチンが、７日間のナプロキセン服用後２倍に増加し、結果は再現的であった（Ｍｅｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．３１：３３９−３４４（１９９６））。この著者はまた、内視鏡検査で評価した場合、カルプロテクチンの増加は、胃・十二指腸粘膜の炎症と正の相関を持つと報告している。しかしながら、ナプロキセンを用いて調べたその後の研究では、カルプロテクチンの増加は再現されたが、内視鏡所見は再現されなかった（Ｓｈａｈ
ｅｔ  ａｌ．，Ｇｕｔ  ４８：３３９−３４６（２００１））。便中カルプロテクチンは、ＮＳＡＩＤを慢性的に服用する患者の４４％で増加することが判明し、この増加は、１１１Ｉｎ−標識白血球の４日間の排泄と有意に相関した（Ｔｉｂｂｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｕｔ  ４５：３６２−３６６（１９９９））。これらをまとめると、上記研究は、便中カルプロテクチンは、ＮＳＡＩＤ服用の場合に見られるような、炎症による胃・十二指腸損傷に関する、感度の高い、早期段階用のマーカーとなり得ることを示唆する。以上から、消化器炎症の尺度としての有効性を見るために、ホップ単離または誘導画分を含む組成物の、カルプロテクチンに対する作用を定量する目的で、臨床治験を実行した（実施例１３参照）。
【０１０９】
（ＡＧＳ細胞株によるアッセイ）
ＣＯＸ−２の発見は、ＣＯＸ−１によって胃および腎臓において造られる保護的プロスタグランジン（ＰＧ）を取り出すことなく、炎症を緩和する薬剤を設計することを可能にした。本明細書に開示されるように、本発明の組成物について、インビトロの動物細胞を用い、細胞保護作用を持ち胃・十二指腸粘膜の健康性維持において一役買っているＰＧＥ２を終末点として用いてＣＯＸ−２およびＣＯＸ−１抑制作用を評価することが可能である。第二に、結果を確認するために様々な細胞タイプが使用される。特異的なＣＯＸ−２活性を持つが、ＣＯＸ−１抑制は限られる組成物を指示するのにスクリーニング過程を用いることが可能である。本発明の実施態様の組成物は、２種類の細胞タイプにおいて試験することが可能である。すなわち、１）一成分を超える成分を含む組成物について最適量および比を定量し特定するためのヒト肺細胞およびその他の細胞株、２）ヒト胃上皮細胞（ＡＧＳ細胞株）、消化管細胞株、および、典型的にはＣＯＸ−１抑制に関連する毒性を評価するためのモデル系であって、外傷（潰瘍のような）治癒のためには必要な系。以上から、ＣＯＸ−２を抑制するか、ＣＯＸ−２誘発を抑制することが可能な、本発明の実施態様の組成物は、ＡＧＣ細胞においては低い活性化しか持たないか、または全く活性を持たないが、ヒト肺細胞、または他の細胞株では良好な活性を持つ組成物を選択することによって選別することが可能である。
【０１１０】
本明細書に開示するように、ホップから単離または誘導された１種以上の画分の効力を示すために利用が可能なアッセイは様々ある（実施例参照）。本明細書に開示されるように、ホップの単離または誘導画分は、本明細書に例示されるものを含めて当業者に既知の様々なアッセイを用いて、その胃毒性および／または胃病の緩和活性を評価することが可能であることが当業者には理解されよう。
【０１１１】
下記の実施例は、本発明を具体的に説明することを意図するもので、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【実施例】
【０１１２】
（実施例１）  
（ＡＧＳ胃粘膜細胞は、シクロオキシゲナーゼ−１とシクロオキシゲナーゼ−２の両方を構成的に発現する）
要約−本実施例は、ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２の構成的発現を示すヒトＡＧＳ胃粘膜細胞株が、シクロオキシゲナーゼ抑制性化合物による消化器毒性を評価するためのモデルとなることを実証する。
【０１１３】
本実施例に使用された装置は下記を含む。すなわち、ＯＨＡＳモデル＃Ｅ０１１４０分析用天秤、Ｆｏｒｍａモデル＃Ｆ１２１４生物汚染保護キャビネット（Ｍａｒｉｅｔｔａ、オハイオ州）、０．１〜１００μＬを移送するための各種ピペット（ＶＷＲ、ロチェスター、ニューヨーク州）、手動細胞計数カウンター（ＶＷＲ、カタログ＃２３６０９−１０２、ロチェスター、ニューヨーク州）、Ｆｏｒｍａモデル＃Ｆ３２１０  ＣＯ２インキュベーター（Ｍａｒｉｅｔｔａ、オハイオ州）、血球計数器（Ｈａｕｓｓｅｒ、モデル＃１４９２、Ｈｏｒｓｈａｍ、ペンシルバニア州）、ライカのモデル＃ＤＭＩＬ倒立顕微鏡（ウェッツラー、ドイツ）、ＰＵＲＥＬＡＢプラス水純化システム（Ｕ．Ｓ．Ｆｉｌｔｅｒ、ローウェル、マサチューセッツ州）、４℃冷蔵庫（Ｆｏｒｍａ、モデル＃Ｆ３７７５、Ｍａｒｉｅｔｔａ、オハイオ州）、渦巻き流ミキサー（ＶＷＲ、カタログ＃３３９９４−３０６、ロチェスター、ニューヨーク州）、および、３７℃水浴（Ｓｈｅｌ  Ｌａｂ、モデル＃１２０３、Ｃｏｒｎｅｌｉｕｓ、オレゴン州）である。
【０１１４】
薬品および試薬−プロスタグランジンＥ２  ＥＩＡキットモノクロナールをＣａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ（アンアーバー、ミシガン州）から購入した。抗ＣＯＸ−１および抗ＣＯＸ−２ウサギポリクロナール抗血清を、Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（シティ、ニューヨーク州）から入手した。ロバ抗ヤギＩｇＧ−ＨＲＰを、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（シティ、カリフォルニア州）から入手した。熱で不活性化した仔牛血清（ＦＢＳ−ＨＩカタログ＃３５−０１１ＣＶ）、および、ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭカタログ＃１０−０１３ＣＶ）をＭｅｄｉａｔｅｃｈ（Ｈｅｒｎｄｏｎ、バージニア州）から購入した。標準試薬は全てＳｉｇｍａ（セントルイス、ミズーリ州）から入手し、市販のものの内で最高純度のものとした。
【０１１５】
細胞培養−ヒト胃粘膜細胞株ＡＧＳは、米国標準培養体保存施設（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１７３９、Ｍａｎａｓｓａｓ、バージニア州）より入手、供給者の指示に従って準備培養を行った。通例として、細胞は、５０単位のペニシリン／ｍＬ、５０μｇのストレプトマイシン／ｍＬ、５％ピルビン酸ナトリウム、および５％Ｌ−グルタミンを添加した、１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ１６４０において、５％ＣＯ２を通じながら３７℃で培養した。指数関数的に成長する細胞を６ウェルプレートに撒き、集密化するまで育成した。培養上清の２０μＬ分液をサンプルしＰＧＥ２含量を定量した。次に細胞をＰＢＳで洗浄し、掻き落とし、細胞溶解して、イムノブロッティングで調べた。
【０１１６】
タンパクアッセイ−細胞溶解物のタンパク濃度は、ＮａｎｏＯｒａｎｇｅタンパク定量キットを用い、メーカーの与えてくれた手順に従って、ウシ血清アルブミンを標準（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、オレゴン州）として定量した。蛍光は、パッカードのＦｌｕｏｒｏＣｏｕｎｔモデルＢＦ１００００フルオロメーターを用いて定量した。すなわち、励起フィルターを４８５ｎｍに、発光フィルターを５７０ｎｍにセットし、パッカードのＰｌａｔｅＲｅａｄｅｒ３．０バージョンソフトウェアを用いて定量した。パッカードＰｌａｔｅＲｅａｄｅｒに付属のＩ−Ｓｍａｒｔプログラムを用いてタンパク濃度を計算した。
【０１１７】
イムノブロッティング−ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２のウェスタンブロッティングを、ＰＡＧＥｒＴＭ  Ｇｏｌｄ  Ｐｒｅｃａｓｔゲル（Ｂｉｏ  Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、ロックランド、メーン州）を用いて行った。約６０μｇのタンパクを含むＡＧＳ細胞溶解産物を、Ｌａｅｍｍｌｉのサンプルバッファーと共に、合計３０μＬ容量として、ゲルのウェルに負荷した。垂直のミニゲル電気泳動チャンバーは、Ｓａｖａｎｔ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｉｎｃ．（Ｈｏｌｂｒｏｏｋ、ニューヨーク州）によって製造されたものである、モデルＭＶ１２０。ゲルに、室温でプレート当たり４０ｍＡ（定電流）で、ブロモフェノールの青色染色がゲルの底部に達するまで、約１時間通電した。次に、ゲルを、一晩、５００ｍＡ、４℃で、フッ化ポリビニール転写膜（Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、アンアーバー、ニューヨーク州）にブロットした。精密タンパク標準分子量マーカー、未染色、広範囲（ＢｉｏＲａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，カリフォルニア州）を用いた。タンパクの視像化のために、ウェスタンブロット検出用の、ＢｉｏＷｅｓｔ（登録商標）長時間化学発光基質、非放射性、西洋ワサビペルオキシダーゼ基質キットを用いた。ウェスタンブロット画像を、ＵＶＰ  Ｅｐｉ  Ｃｈｅｍｉ  ＩＩ  Ｄａｒｋｒｏｏｍ（ＢｉｏＩｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）によって獲得し、分析し、ＬａｂＷｏｒｋｓ（登録商標）Ｉｍａｇｅ  Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＢｉｏＩｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）によって強調した。
【０１１８】
ＰＧＥ２アッセイ−ＰＧＥ２の定量のためには、市販の、非放射性手法を用い（Ｃａｙｍｅｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、アンアーバー、ミシガン州）、メーカーの推薦する手順にそのまま従った。手短に言うと、２５μＬの培養液を、ＰＧＥ２標準サンプルの連続希釈液と一緒に、適当量のアセチルコリンエステラーゼ標識トレーサーおよびＰＧＥ２抗血清と混ぜ、室温で１８時間インキュベートした。ウェルを空け、洗浄バッファーで洗った後に、アセチルコリンエステラーゼの基質を含む２００μＬのＥｌｌｍａｎ試薬を加えた。反応を、穏やかな攪拌器において室温で１時間実行し、４１５ｎｍにおける吸収度を定量した。ＰＧＥ２濃度は、１０５細胞当たりのピコグラムとして表した。
【０１１９】
結果−図４に見られるように、ＡＧＳ細胞は、ＣＯＸ−１とＣＯＸ−２の両方を構成的に発現するが、ただしＣＯＸ−１の発現の方が、ＣＯＸ−２の発現よりも約４倍大きい。１８時間期間のＡＧＳ細胞におけるＰＧＥ２合成は６６０ｐｇ／１０５細胞であった。従って、本実施例は、ＡＧＳヒト胃粘膜細胞株は、ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２の構成的発現を実現しており、シクロオキシゲナーゼ抑制性化合物の消化器毒性を評価するためのモデルとなり得ることを実証する。
【０１２０】
過去において、古典的なＣＯＸ−２仮説は、消化器粘膜におけるＣＯＸ−２発現の役割を過小評価していた。本実施例にも、文献にも証明されている通り、正常の胃粘膜においては、ＣＯＸ−１が主要ＣＯＸアイソフォームであるが、動物においてもヒトにおいても、胃粘膜の特定部位では、検出可能な量のＣＯＸ−２  ｍＲＮＡおよびタンパクが構成的に発現されるし、また、誘発可能であることを示す証拠がますます増えている（Ｈａｌｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｕｔ  ４９：４４３−４５３（２００１））。ラットにおける最近の研究で、ＣＯＸ−１またはＣＯＸ−２の選択的抑制は潰瘍性ではないが、ＣＯＸ−１とＣＯＸ−２の両方が合わせて抑制されると、インドメタシンのようなＮＳＡＩＤの作用とよく似た、重度の病巣が胃および小腸に誘発されることが示された。この観察は、消化器粘膜の健全性の維持においてＣＯＸ−２が重要な役割を果たしていることを示唆する。
【０１２１】
（実施例２）
（非ステロイド性抗炎症剤によるＡＧＳ胃粘膜細胞およびＡ５４９肺細胞におけるＰＧＥ２合成の抑制）
要約−本実施例は、複数のＮＳＡＩＤによる、ＡＧＳ胃細胞およびＡ５４９肺細胞におけるＰＧＥ２合成の抑制は、それらＮＳＡＩＤの、観察された相対的な臨床的胃毒性と相関することを具体的に示す。
【０１２２】
薬品−ロフェコキシブ錠剤およびセレコキシブカプセルの市販処方を用いた。ＰＧＥ２
ＥＩＡキットはＣａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ（アンアーバー、ミシガン州）から入手した。抗ＣＯＸ−１および抗ＣＯＸ−２ウサギポリクロナール抗血清は、Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｗａｌｔｈａｍ、マサチューセッツ州）から入手し、ロバ抗ヤギＩｇＧ−ＨＲＰを、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（サンタクルス、カリフォルニア州）から入手した。熱で不活性化した仔牛血清（ＦＢＳ−ＨＩカタログ＃３５−０１１ＣＶ）、および、ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭカタログ＃１０−０１３ＣＶ）をＭｅｄｉａｔｅｃｈ（Ｈｅｒｎｄｏｎ、バージニア州）から購入した。ＩＬ−１β、および標準薬品、および非ステロイド抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）は、別様に指示しない限り、全てＳｉｇｍａ（セントルイス、ミズーリ州）から入手し、市販のものの内で最高純度のものとした。他の全ての薬品は、実施例１に記載される供給業者から入手した。
【０１２３】
細胞−Ａ５４９（ヒト肺上皮、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−１８５）およびＡＧＳ（ヒト胃粘膜（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１７３９）は、米国標準培養体保存施設（Ｍａｎａｓｓａｓ、バージニア州）より入手し、供給者の指示に従って準備培養を行った。通例として、細胞は、５０単位のペニシリン／ｍＬ、５０μｇのストレプトマイシン／ｍＬ、５％ピルビン酸ナトリウム、および５％Ｌ−グルタミンを添加した、１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ１６４０において、５％ＣＯ２を通じながら３７℃で培養した。実験当日、指数関数的に成長する細胞を収集し、血清無添加ＲＰＭＩ１６４０にて洗浄した。
【０１２４】
対数期のＡ５４９およびＡＧＳ細胞を、９６ウェル組織培養プレートにおいて、ウェル当たり０．２ｍＬの培養液で、ウェル当たり８ｘ１０４個の細胞の割合で撒いた。Ａ５４９細胞における試験化合物によるＰＧＥ２抑制の定量については、Ｗａｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．の手法−ＷＨＭＡ−ＣＯＸ−２プロトコールという名前でも知られる（Ｗａｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．  ９６，７５６３−７５６８（１９９９））をそのまま用いた。手短に言うと、Ａ５４９細胞をプレート撒布の２４時間後に、インターロイキン−１β（１０ｎｇ／ｍＬ）を加え、ＣＯＸ−２の発現を誘発した。２４時間後、細胞を、血清無添加ＲＰＭＩ１６４０で洗浄し、ＤＭＳＯおよび血清無添加ＲＰＭＩに溶解させた試験物質を、最終濃度２５、５．０、０．５および０．０５μｇ／ｍＬに達するまでウェルに加えた。各濃度について二重に試行を行った。試験ウェルに含まれるものと等量のＤＭＳＯをコントロールウェルに加えた。６０分後、Ａ２３１８７（５０μＭ）をウェルに加えアラキドン酸を放出させた。３０分後、２５μＬの培養液をウェルからサンプルしＰＧＥ２定量を行った。
【０１２５】
これらの実験では非刺激ＡＧＳ細胞を用いた。９６ウェル微量滴定プレートに撒布後、細胞を、血清無添加ＲＰＭＩ１６４０で洗浄し、ＤＭＳＯおよび血清無添加ＲＰＭＩに溶解させた試験物質を、最終濃度２５、５．０、０．５および０．０５μｇ／ｍＬに達するまでウェルに加えた。各濃度について二重に試行を行った。試験ウェルに含まれるものと等量のＤＭＳＯをコントロールウェルに加えた。６０分後、カルシウムイオノフォアであるＡ２３１８７（５０μＭ）を、最終濃度５０μＭに達するまでウェルに加えた。Ａ２３１８７添加の３０分後、２５μＬの培養液をウェルからサンプルしＰＧＥ２定量を行った。
【０１２６】
細胞生存率−細胞生存率は、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）による比色定量にて評価した（Ｓｉｇｍａ、セントルイス、ミズーリ州）。ＰＧＥ２定量のためのサンプリング後、ウェルにＭＴＴ溶液を直接加えた。５８０ｎｍにおける各ウェルの吸収度をＥＬＩＳＡプレートリーダーにて読み取った。いずれの化合物についても試験した最高濃度においても毒性は観察されなかった。
【０１２７】
ＰＧＥ２アッセイ−ＰＧＥ２の定量のためには、市販の、非放射性手法を用い（Ｃａｙｍｅｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、アンアーバー、ミシガン州）、メーカーの推薦する手順にそのまま従った。手短に言うと、５０μＬの培養上清を、ＰＧＥ２標準サンプルの連続希釈液と一緒に、適当量のアセチルコリンエステラーゼ標識トレーサーおよびＰＧＥ２抗血清と混ぜ、室温で１８時間インキュベートした。その後、ＰＧＥ２アッセイ微量定量ウェルを空け、洗浄バッファーで洗った後に、アセチルコリンエステラーゼの基質を含む２００μＬのＥｌｌｍａｎ試薬を加えた。反応を、穏やかな攪拌器において室温で１時間実行し、その後、４１５ｎｍにおける吸収度をＢｉｏ−Ｔｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  ＥＬＩＳＡプレートリーダー（モデル＃Ｅｌｘ８００、Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、バーモント州）にて定量した。このアッセイに関するメーカーの仕様として、アッセイ間変動係数＜１０％、ＰＧＤ２とＰＧＦ２α間の交差反応の可能性１％未満、１０−１０００ｐｇ／ｍＬにおける直線性が与えられた。ＰＧＥ２濃度は、１０５細胞当たりのＰＧＥ２のピコグラムとして表した。
【０１２８】
計算−ＰＧＥ２合成における抑制濃度中央値（ＩＣ５０）は、Ｃａｌｃｕｓｙｎ（ＢＩＯＳＯＦＴ、Ｆｅｒｇｕｓｏｎ、ミズーリ州）を用いて計算した。この統計ソフトウェアパッケージは、Ｃｈｏｕ  ａｎｄ  Ｔａｌａｌｙ，Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ．２２：２７−５５（１９８４）によって記載される中央作用法を用いて、複数の薬剤用量−作用計算を実行する。なお、上記文献を参照することにより本明細書に含める。
【０１２９】
手短に言うと、この分析では、「用量」と「作用」を、考えられるもっとも単純な形：ｆａ／ｆｕ＝（Ｃ／Ｃｍ）ｍで相関させる。式中、Ｃは化合物の濃度または用量であり、Ｃｍは、効果的用量の中央値で効力を表す。Ｃｍは、中央値−作用プロットにおけるｘ−交点から求められる。試験物質の濃度によって影響される割合はｆａであり、その濃度によって影響されない割合はｆｕ（ｆｕ＝１−ｆａ）である。指数ｍは、用量−作用曲線のＳ字性または形を表すパラメータである。これは、中央値−作用プロットの勾配から推定される。
【０１３０】
中央値−作用プロットは、ｘ＝ｌｏｇ（Ｃ）対ｙ＝ｌｏｇ（ｆａ／ｆｕ）のグラフであり、Ｃｈｏｕの中央値−作用方程式の対数形に基づく。中央値−作用方程式に対するデータの適合度は、中央値−作用プロットの直線的相関係数で表した。通常、酵素または受容体システムから得られた実験データはｒ＞０．９６であり、組織培養データはｒ＞０．９０であり、動物システムのデータはｒ＞０．８５である。ここに報告される細胞使用実験では、直線相関係数は全て０．９０を超えていた。実験は、三つの異なる日付において３回繰り返された。各用量におけるパーセント抑制を、その３回の独立実験について平均し、報告される抑制濃度中央値を計算するのに用いた。消化器安全性に関する治療係数（ＴＩ）は、比ＡＧＳ（ＩＣ５０）／Ａ５４９（ＩＣ５０）として計算した。ＡＧＳモデルによるインビトロのＴＩランキングと、臨床的に評価されたＮＳＡＩＤ胃病のランキングとの相関の度合いを定量するために、Ｓｐｅａｒｍａｎの順位相関ｒｓを用いた。第Ｉ種誤差の確率を指定の５％レベルに設定した。
【０１３１】
結果−高い特異性を持つＣＯＸ−１阻害剤であるジイソフルオロフォスフェート（ＤＩＦＰ）は、Ａ５４９細胞において、６．５μｇ／ｍＬの抑制濃度中央値を示し、ＡＧＳ細胞では、２５μｇ／ｍＬのテストした最高濃度において僅かにＰＧＥ２合成を抑制した。用量−反応曲線を外挿したところ、ＤＩＦＰにおいては、３５９μｇ／ｍＬのＡＧＳ  ＩＣ５０の推定値が得られた（表３）。３種のＣＯＸ−２選択的薬剤については、１よりも大きな標的細胞選択性を示した化合物はただロフェコキシブだけであった（ＡＧＳ  ＩＣ５０／Ａ５４９  ＩＣ５０＞１）。セレコキシブとニメンスリドは、いずれも酵素活性では高いＣＯＸ−２選択性を示したのであるが、驚くべきことにＡ５４９標的細胞におけるよりも、ＡＧＳ胃細胞においてより大きなＰＧＥ２抑制を示した。
【０１３２】
明らかにされている臨床的胃毒性と一致して、イブプロフェン、アスピリン、およびインドメタシンは全て、標的Ａ５４９細胞におけるよりも、ＡＧＳ細胞株においてより大きくＰＧＥ２合成を抑制した。サリチル酸とアセトアミノフェンは、両方の細胞モデルにおいて比較的不活性であった。図５は、前記ＮＳＡＩＤについて計算された対数ＴＩを比較し、序列化したものである。０の右側の数値は、消化器作用の確率の低下を示し、一方、０の左側の数値は、消化器作用の確率の上昇を示す。ＡＧＳ胃細胞モデルにおいて、ＧＩ毒性の序列推定は、ＮＳＡＩＤの臨床的序列と有意に相関した。すなわち、それぞれ、ｒｓ＝０．９３３、ｐ＜０．０１；０．７８３、ｐ＜０．０１；０．６８３、ｐ＝０．０５である。ＧＩ毒性の低いものから高いものへＮＳＡＩＤを序列化すると、ロフェコキシブ＜アセトアミノフェン＜ニメンスリド＜セレコキシブ＜サリチル酸＜イブプロフェン＜アスピリン＜ナプロキセン＜インドメタシンであった。
【０１３３】
これらの結果は、ＰＧＥ２合成を抑制する可能性のある抗炎症剤の消化器毒性の可能性について評価するためにＡＧＳ胃粘膜細胞株の使用が有効であることを実証する。結果はまた、ＣＯＸ−抑制化合物の作用における細胞特異性を明らかにする。ＩＣ５０  ＡＧＳ／ＩＣ５０  Ａ５４９において１という比は、ＡＧＳ細胞とＡ５４９細胞の両方においてＩＣ５０が同じであることを示す。この比が、ＩＣ５０  ＡＧＳ／ＩＣ５０  Ａ５４９において１よりも高い場合、ＰＧＥ２の抑制が、ＡＧＳ細胞ではより低いことになる。ＡＧＳ細胞におけるＰＧＥ２の抑制が低いことは好ましい。なぜなら、ＡＧＳ細胞株はより多くのＣＯＸ−１を発現することとなり、これは粘膜のホメオスタシスを維持することになるからである。
【０１３４】
（表３．  Ａ５４９（標的）およびＡＧＳ（非標的）細胞モデルにおける、選択されたＮＳＡＩＤによる、ＰＧＥ２合成抑制濃度の中央）
【０１３５】
【表３】
2011126919.tif 000016
＋カッコ内数値は、ＩＣ５０推定値の９５％信頼区間である。
＋＋ＤＩＦＰ＝ジイソフルオロフォスフェート。
【０１３６】
（実施例３）
（被刺激および未刺激マウスマクロファージにおける、ホップ（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｓ）化合物および誘導体によるＰＧＥ２合成の抑制）
要約−本実施例は、ホップ画分および誘導体は、ＲＡＷ２６４．７マウスマクロファージモデルにおいて、ＣＯＸ−１のＰＧＥ２合成に対してよりも、ＣＯＸ−２のＰＧＥ２合成の方を優先的に抑制することを具体的に示す。
【０１３７】
薬品および試薬−細菌のリポポリサッカリド（ＬＰＳ；Ｂ  Ｅ．ｃｏｌｉ  ０５５：Ｂ５）はＳｉｇｍａ（セントルイス、ミズーリ州）より入手した。ホップ画分（１）αホップ（１％α酸；ＡＡ）、（２）アロマホップＯＥ（１０％β酸および２％異性化α酸）、（３）イソホップ（異性化α酸；ＩＡＡ）、（４）β酸液（β酸；ＢＡ）、（５）ヘキサホップ・ゴールド（ヘキサヒドロ異性化α酸；ＨＨＩＡＡ）、（６）レジホップ（還元型異性化α酸；ＲＩＡＡ）、（７）テトラホップ（テトラヒドロ−イソ−α酸；ＴＨＩＡＡ）、および（８）ホップかすは、Ｂｅｔａｔｅｃｈ  Ｈｏｐｓ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（ワシントンＤ．Ｃ．，米国）から入手した。ホップかすは、等量の絶対アルコールによって２度抽出した。４０℃で加熱してエタノールを除去した。これを粘ちょうな褐色残渣が得られるまで行った。この残渣をＤＭＳＯに溶解し、これをＲＡＷ２６４．７細胞の試験に用いた。別様に銘記しない限り、全ての標準試薬はＳｉｇｍａ（セントルイス、ミズーリ州）から入手し、市販のものの内で最高純度のものとした。他の全ての薬品および装置は、実施例１および２に記載される通りである。
【０１３８】
細胞培養−ＲＡＷ２６４．７細胞は、米国標準培養体保存施設（カタログ番号＃ＴＩＢ−７１、Ｍａｎａｓｓａｓ、バージニア州）より入手し、イーグル培地のダルベッコの改訂版（ＤＭＥＭ、Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ、Ｈｅｒｎｄｏｎ、バージニア州）で育成し、対数期に維持した。ＤＭＥＭ培養液は、５０ｍＬの熱不活性化ＦＢＳおよび５ｍＬのペニシリン／ストレプトマイシン／ｍＬを、５００ｍＬの瓶入りＤＭＥＭに添加して調製し、４℃に保存した。使用前、温水にて３７℃に温めた。
【０１３９】
実験１日目、対数期のＲＡＷ２６４．７細胞を、午前中、９６ウェル組織培養プレートに、ウェル当たり０．２ｍＬの培養液に懸濁させたウェル当たり８×１０４個の細胞を撒いた。１日目の終わりに（撒布後６〜８時間）、各ウェルから１００μＬの培養液を除去し、１００μＬの新鮮培養液と交換した。
【０１４０】
ＲＡＷ２６４．７細胞におけるＣＯＸ−２発現を誘発するのに使用されるＬＰＳの保存液１．０ｍｇ／ｍＬを、１．０ｍｇのＬＰＳを１ｍＬのＤＭＳＯに溶解して調製した。これを、溶解するまで渦流攪拌し、４℃で保存した。使用前、これを室温で、または３７℃の温水浴で融解した。
【０１４１】
実験２日目、試験材料を、ＤＭＳＯに溶解した１０００Ｘ保存液として調製した。１．７ｍＬの微量遠心管において、ＦＢＳ無添加の１ｍＬ  ＤＭＥＭを加え、０．０５、０．１０、０．５、および１．０μｇ／ｍＬの試験濃度を調製した。試験材料の１０００Ｘ  ＤＭＳＯ保存液の２μＬを、ＦＢＳ無添加の培養液１ｍＬに加えた。この管は、最終的に２倍に濃縮された試験材料濃度を含むことになるが、これをインキュベーターに１０分置き、３７℃に平衡させた。
【０１４２】
ＣＯＸ−２関連ＰＧＥ２合成については、１日目に調製した細胞プレートの各ウェルから１００μＬの培養液を除去し、試験化合物の、平衡させた２Ｘ最終濃度液の１００μＬと交換した。次に、細胞を９０分インキュベートした。２０μＬのＬＰＳを、刺激の対象となる各ウェルの細胞に加え、最終的に、１０ｎｇ  ＬＰＳ／ｍＬの濃度とし、細胞を４時間インキュベートした。ＬＰＳ刺激後、細胞の外見を観察し、生存率を実施例２に記載したように定量した。どの化合物についても試験した最高濃度でも毒性は観察されなかった。各ウェルから２５μＬの培養液上清を、透明な微量遠心管に移し、培養液中に放出されたＰＧＥ２を定量した。ＰＧＥ２は、実施例１に前述したように、定量し報告した。
【０１４３】
ＣＯＸ−１関連ＰＧＥ２合成については、１日目に調製した細胞プレートの各ウェルから１００μＬの培養液を除去し、試験化合物の、平衡させた２Ｘ最終濃度液の１００μＬと交換した。次に、細胞を９０分インキュベートした。ＬＰＳ刺激の代わりに、細胞を、１００μＭのアラキドン酸と１５分インキュベートした。各ウェルから２５μＬの培養液上清を、透明な微量遠心管に移し、培養液中に放出されたＰＧＥ２を定量した。細胞の外見を観察し、生存率を実施例２に記載したように定量した。どの化合物についても試験した最高濃度でも毒性は観察されなかった。各ウェルから２５μＬの培養液上清を、透明な微量遠心管に移し、培養液中に放出されたＰＧＥ２を定量した。ＰＧＥ２は、実施例１に前述したように、定量し報告した。ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２による、ＰＧＥ２合成の抑制濃度中央値（ＩＣ５０）を、実施例２に記載するやり方で計算した。
【０１４４】
（表４．  ＲＡＷ２６４．７細胞における、ホップ画分および誘導体によるＣＯＸ−２およびＣＯＸ−１抑制）
【０１４５】
【表４】
2011126919.tif 000017
表４に見られるように、この標的マクロファージモデルにおいて、全てのホップ画分および誘導体は、ＣＯＸ−１に対して、ＣＯＸ−２の方を選択的に抑制した。これは、新しい、予期しない発見であった。ホップ誘導体ＩＡＡおよびＲＩＡＡのＣＯＸ−２選択性の程度は、それぞれ、１４４倍および８７倍であるが、これは予想しないものであった。このＲＡＷ２６４．７細胞モデルでは、分子種Ａ化合物の方が、分子種Ｂ化合物よりもＣＯＸ−２に対してより大きな選択性を示した、すなわち、それぞれ、ＣＯＸ−２抑制の方が１１６倍または１６倍大きかった。α酸、β酸、およびホップかすも、高度に選択的なＣＯＸ−２阻害剤であった。すなわち、ＣＯＸ−１／ＣＯＸ−２比は、それぞれ、３０、５４、および２４であった。このように高度のＣＯＸ−２選択性が、低い抑制濃度中央値と組み合わさって得られることは、他の供給源から得られた天然の産物では従来報告されたことがない。アロマホップは、ＣＯＸ−２選択性がもっとも低く、ＣＯＸ−１／ＣＯＸ−２比が２．６で、臨床的には低い胃毒性が明らかにされているＮＳＡＩＤであるアセトアミノフェン（実施例２）とほぼ同等である。
【０１４６】
（実施例４）
（胃粘膜細胞における、ホップ（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｓ）化合物および誘導体によるＰＧＥ２合成抑制の欠如）
要約−本実施例は、ＡＧＳヒト胃粘膜細胞株における、ホップ画分によるＰＧＥ２抑制の欠如を具体的に示すものであるが、これは、画分中の化合物の胃刺激性の低度を物語る。
【０１４７】
薬品および試薬は、実施例３に記載する通りに使用した。ＡＧＳ細胞は、実施例２に記載する通りに、育成し、ホップ化合物および誘導体の試験に用いた。ＰＥＧ２は、実施例１において前述したように定量し報告した。ＡＧＳ細胞におけるＰＧＥ２合成の抑制濃度の中央値を、実施例２において前述したように計算した。
【０１４８】
（表５．  ＡＧＳ細胞モデルにおける、ホップ誘導体による、ＰＧＥ２合成に対する抑制濃度中央値（ＩＣ５０））
【０１４９】
【表５−１】
2011126919.tif 000018
【０１５０】
【表５−２】
2011126919.tif 000019
＋ＩＣ５０は、３回の独立アッセイの平均に基づいて計算した。ＡＧＳ細胞を撒布し、８０％集密度に達するまで育成した。細胞を洗浄し、試験材料を、Ａ２３１８７投与の６０分前に加えた。３０分後、培養液を抽出し、ＰＧＥ２を定量した。
【０１５１】
ＡＧＳ細胞における、ホップ誘導体によるＰＧＥ２合成抑制濃度の中央値を表３に示す。一般に、分子種Ｂ構造の方が、分子種Ａ構造およびα酸よりも抑制性が低かった。分子種Ｂグループでは、ＴＨＩＡＡおよびＨＨＩＡＡのＩＣ５０値は、それぞれ、５１および３４μｇ／ｍＬであった。分子種ＡグループのＩＡＡ、イソリッチ、およびＲＩＡＡのＩＣ５０値は、それぞれ、１６、９．２および２１μｇ／ｍＬであり、分子種ＢのＩＣ５０値よりも平均して６３％低かった。比較的高いＩＣ５０値を持つ、ホップ誘導体、βスタッブ（７３μｇ／ｍＬ）、タンニン抽出物＃４４１１（５９μｇ／ｍＬ）、アロマホップ（４３μｇ／ｍＬ）、および＃１１１５ホップかす（３５μｇ／ｍＬ）は、胃粘膜にたいして非刺激性として順位づけされてもよいと考えられる。思いがけなくも、ホップ誘導体は、比較的新しい、ＣＯＸ−２に対し高度の選択性を持つ薬剤であるロフェコキシブおよびセレコキシブを含め全てが、どのＮＳＡＩＤよりも、ＡＧＳ胃粘膜細胞に対して実質的に抑制性が低かった。
【０１５２】
（実施例５）
（分子種Ａのホップ誘導体とイブプロフェンまたはアスピリンの組み合わせはＡＧＳ胃粘膜細胞におけるＰＧＥ２合成の抑制を低下させる）
要約−本実施例は、ＮＳＡＩＤであるイブプロフェンおよびアスピリンによる胃のＰＧＥ２に対する抑制に対して、分子種Ａのホップ分子種が拮抗作用を呈することを示す。この作用の意味は、分子種Ａのホップ誘導体は、ＮＳＡＩＤによる胃障害を緩和するように働くということである。
【０１５３】
方法−薬品および試薬は、実施例２および３に記載する通りに使用した。ＡＧＳ細胞は育成して、実施例２に記載するように、分子種Ａホップ誘導体ＲＩＡＡ、および、ＲＩＡＡ：イブプロフェンの併用、および、ＲＩＡＡ：アスピリンの併用を試験するために用いた。ＲＩＡＡ：ＮＳＡＩＤ併用は、１、９、５０、９１、および９９パーセントのＲＩＡＡを含むように処方した。５０、５、０．５、および０．０５μｇ／ｍＬの試験材料の濃度は二重に定量した。ＰＧＥ２は、実施例１に記載するように定量し、報告した。ＡＧＳ細胞におけるＰＧＥ２合成に対する抑制濃度の中央値（ＩＣ５０）は、実施例２に記載する通りに計算した。
【０１５４】
試験処方の協調作用または拮抗作用は、結合示数（ＣＩ）パラメータおよびＣａｌｃｕＳｙｎ（ＢＩＯＳＯＦＴ、Ｆｅｒｇｕｓｏｎ，ミズーリ州）ソフトウェアを用いて定量した。Ｃｈｏｕ−ＴａｌａｌａｙのＣＩは、複数の薬剤−作用に基づき、酵素速度論モデルから導かれる（Ｃｈｏｕ  ａｎｄ  Ｔａｌａｌａｙ，Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ．２２：２７−５５（１９８４））。この方程式は、協調作用または拮抗作用よりはむしろ加重作用のみを決定する。一方、本明細書で用いる協調作用は、ＣｈｏおよびＴａｌａｌａｙによって提案される予期される加重作用を上回るもの、拮抗作用は、予期される加重作用を下回るものと定義される。同じ作用様式を持つが互いに排除的な化合物同士において、または、互いに排除的ではないが、完全に独立した作用様式を持つ薬剤同士において、加重作用をＣＩ＝１と表すことによって、下記の関係式が得られた。ＣＩ＜１、＝１、および＞１で、それぞれ、協調作用、加重性、および、拮抗作用を示す。
【０１５５】
結果−図６Ａおよび６Ｂは、ＡＧＳ胃粘膜細胞における、それぞれ、イブプロフェン、ＲＩＡＡ、および、ＲＩＡＡ：イブプロフェン併用（図６Ａ）、そして、アスピリン、ＲＩＡＡ、および、ＲＩＡＡ：アスピリン併用（図６Ｂ）によるＰＧＥ２パーセント抑制を示す。思いがけず、イブプロフェンまたはアスピリンと組み合わせた僅かに１％のＲＩＡＡの併用が、いずれのＮＳＡＩＤのＰＧＥ２抑制作用も低下させる。ＲＩＡＡとイブプロフェンまたはアスピリンにおけるＣＩを計算すると、ＲＩＡＡ：ＮＳＡＩＤ組み合わせの１００：１〜１：１０までの全用量−反応曲線に渡って極端に強力な協調作用のあることが示された（表６）。１００：１のＲＩＡＡ：ＮＳＡＩＤ組み合わせでは、用量−反応を計算するほどＰＧＥ２生合成の抑制が十分ではなかった。
【０１５６】
（表６．  ＡＧＳ胃粘膜細胞モデルにおけるＲＩＡＡ：イブプロフェンおよびＲＩＡＡ：アスピリン併用の結合示数値）
【０１５７】
【表６】
2011126919.tif 000020
＋ＣＩ＜１、＝１、および＞１は、それぞれ、協調作用、加重性、および拮抗作用を示す。
＋＋ＮＤＲは、５０、５、０．５、および０．０５μｇ試験材料／ｍＬの用量範囲において、５０μｇ／ｍＬに対する用量−反応無しを示す。
【０１５８】
ホップから単離または誘導された各種画分と、ＮＳＡＩＤのような各種非ステロイド性抗炎症化合物について同様の実験を行った。
【０１５９】
（実施例６）
（分子種Ｂのホップ誘導体とイブプロフェンまたはアスピリンの組み合わせはＡＧＳ胃粘膜細胞におけるＰＧＥ２合成の抑制を低下させる）
要約−本実施例は、ＮＳＡＩＤであるイブプロフェンおよびアスピリンによる胃のＰＧＥ２に対する抑制に対して、分子種Ｂのホップ分子種が拮抗作用を呈することを示す。この作用の意味は、分子種Ｂのホップ誘導体は、ＮＳＡＩＤによる胃障害を緩和するように働くということである。
【０１６０】
方法−薬品および試薬は、実施例２、３および５に記載する通りに使用した。ＡＧＳ細胞は育成して、実施例２に記載するように、分子種Ｂホップ誘導体ＴＨＩＡＡ、および、ＴＨＩＡＡ：イブプロフェンの併用、および、ＴＨＩＡＡ：アスピリンの併用を試験するために用いた。ＴＨＩＡＡ：ＮＳＡＩＤ併用は、１、９、５０、９１、または９９パーセントのＴＨＩＡＡを含むように処方した。５０、５、０．５、および０．０５μｇ／ｍＬの試験材料の濃度は二重に定量した。ＰＧＥ２は、実施例１に記載するように定量し、報告した。ＡＧＳ細胞におけるＰＧＥ２合成に対する抑制濃度の中央値（ＩＣ５０）は、実施例２に記載する通りに計算した。試験処方の協調作用または拮抗作用は、実施例５に記載する通りに結合示数（ＣＩ）を用いて定量した。
【０１６１】
結果−図７Ａおよび７Ｂは、ＡＧＳ胃粘膜細胞における、それぞれ、イブプロフェン、ＴＨＩＡＡ、および、ＴＨＩＡＡ：イブプロフェン併用（図７Ａ）、そして、アスピリン、ＲＩＡＡ、および、ＲＩＡＡ：アスピリン併用（図７Ｂ）によるＰＧＥ２パーセント抑制を示す。ＴＨＩＡＡのイブプロフェンとの組み合わせは、ＮＳＡＩＤによるＰＧＥ２抑制の減衰という点では、ＲＩＡＡのイブプロフェンとの組み合わせと定性的に同様であった。しかしながら、ＴＨＩＡＡ：イブプロフェンのＣＩは、５０パーセント抑制未満の用量−応答曲線部分においてのみ拮抗作用を示した。図７Ｂのグラフで見られるように、ＴＨＩＡＡ：アスピリン併用は、５および０．５の試験材料濃度の両方においてＡＧＳ胃粘膜細胞におけるＰＧＥ２抑制を増加させるようである。ＣＩの計算によって、ＴＨＩＡＡ：アスピリンの併用は、ＰＧＥ２の抑制が４０％未満となる、用量−応答曲線の低濃度末端では拮抗的であることが明らかになった。４０パーセントレベルの上では、ＴＨＩＡＡとアスピリンの併用において強力な協調作用が見られた。
【０１６２】
（表７．  ＡＧＳ胃粘膜細胞モデルにおけるＴＨＩＡＡ：イブプロフェンおよびＴＨＩＡＡ：アスピリン併用の結合示数値）
【０１６３】
【表７】
2011126919.tif 000021
＋ＣＩ＜１、＝１、および＞１は、それぞれ、協調作用、加重性、および拮抗作用を示す。
＋＋ＮＤＲは、５０、５、０．５、および０．０５μｇ試験材料／ｍＬの用量範囲において、５０μｇ／ｍＬに対する用量−反応無しを示す。
ａ．  ＩＣ６０に対する拮抗作用；ｂ．  ＩＣ７０に対する拮抗作用；ｃ．  ＩＣ６５に対する拮抗作用；ＩＣ５０に対する拮抗作用
ｅ．  ＩＣ４０に対する拮抗作用；ｆ．  ＩＣ３５に対する拮抗作用。
【０１６４】
ホップから単離または誘導された各種画分と、ＮＳＡＩＤのような各種非ステロイド性抗炎症化合物について同様の実験を行った。
【０１６５】
（実施例７）
（分子種Ａのホップ誘導体とイブプロフェンまたはアスピリンの組み合わせは治療係数の増加を示す）
要約−本実施例は、分子種Ａの代表的な分子ＲＩＡＡとの併用は、イブプロフェンとアスピリン両方の治療係数を増加することを示す。
【０１６６】
方法−薬品および試薬は、実施例２および３に記載する通りに使用した。ＲＡＷ２６４．７およびＡＧＳ細胞は育成して、実施例２および３に記載するように、分子種Ａホップ誘導体ＲＩＡＡ、および、ＲＩＡＡ：イブプロフェンの併用、および、ＲＩＡＡ：アスピリンの併用を試験するために用いた。ＲＩＡＡ：ＮＳＡＩＤ併用は、５０パーセントのＲＩＡＡを含むように処方した。５０、５、０．５、および０．０５μｇ／ｍＬの試験材料の濃度は二重に定量した。ＰＧＥ２は、実施例１に記載するように定量し、報告した。ＡＧＳ細胞におけるＰＧＥ２合成に対する抑制濃度の中央値（ＩＣ５０）は、実施例１に記載する通りに計算した。対数ＩＣ５０比（ＡＧＳ／ＣＯＸ−２）のプロットは、実施例２に記載する通りに行った。
【０１６７】
結果−図８に見られるように、試験処方におけるＲＩＡＡの増加と共に、胃毒性を誘発する能力は、イブプロフェン（図８Ａ）でも、アスピリン（図８Ｂ）でも低減させられた。
【０１６８】
ホップから単離または誘導された各種画分と、ＮＳＡＩＤのような各種非ステロイド性抗炎症化合物について同様の実験を行った。
【０１６９】
（実施例８）
（分子種Ａのホップ誘導体とイブプロフェンまたはアスピリンの組み合わせは治療係数の増加を示す）
要約−本実施例は、分子種Ｂの代表的な分子ＴＨＩＡＡとの併用は、イブプロフェンとアスピリン両方の治療係数を増加することを示す。精しく言うと、ホップ誘導体のＴＨＩＡＡ分子種は、用量−応答曲線の４０％未満の部分においてのみ拮抗的ではあるが、全体作用は、標的細胞におけるＮＳＡＩＤの効力を増し、これは、ＮＳＡＩＤの治療係数において思いがけず大きな、正の増加をもたらした。
【０１７０】
方法−薬品および試薬は、実施例２および３に記載する通りに使用した。ＲＡＷ２６４．７およびＡＧＳ細胞は育成して、実施例２および３に記載するように、分子種Ｂホップ誘導体ＴＨＩＡＡ、および、ＴＨＩＡＡ：イブプロフェンの併用、および、ＴＨＩＡＡ：アスピリンの併用を試験するために用いた。ＴＨＩＡＡ：ＮＳＡＩＤ併用は、１または５０パーセントのＴＨＩＡＡを含むように処方した。５０、５、０．５、および０．０５μｇ／ｍＬの試験材料の濃度は二重に定量した。ＰＧＥ２は、実施例１に記載するように定量し、報告した。対数ＩＣ５０比（ＡＧＳ／ＣＯＸ−２）のプロットは、実施例２に記載する通りに行った。
【０１７１】
結果−図９に見られるように、試験処方におけるＴＨＩＡＡの増加と共に、胃毒性を誘発する能力は、イブプロフェン（図９Ａ）でも、アスピリン（図９Ｂ）でも低減させられた。
【０１７２】
ホップから単離または誘導された各種画分と、ＮＳＡＩＤのような各種非ステロイド性抗炎症化合物について同様の実験を行った。
【０１７３】
（実施例９）
（分子種Ａおよび分子種Ｂホップ誘導体の、ストレス誘発性潰瘍に対する活性）
ストレス誘発性潰瘍を、ラットを焼き石膏バンデージに２４時間封入することによって、ラットにおいて実験的に誘発した。化合物のストレス誘発性潰瘍の形成に対する作用を、ラットをバンデージに封入する１時間前、およびラットの封入６時間後に、試験化合物を投与して評価した。２４時間後、バンデージを除き、その胃傷害を、未処置ラットと比べて評価した。ホップ誘導体は、実施例３で前述したように使用した。
【０１７４】
ｋｇ当たり１００ｍｇの試験材料でラットを処置すると、潰瘍スコアの全体平均値の抑制が得られた。
【０１７５】
（実施例１０）
（ラットにおける、非ステロイド性抗炎症剤投与による胃損傷に対する分子種Ａおよび分子種Ｂホップ誘導体の影響）
非ステロイド性抗炎症剤による胃損傷を、ある用量の試験材料の投与後に、比較的高い用量のＮＳＡＩＤを投与することによって評価した。さらに５時間後、胃損傷の程度を定量し、パーセント抑制を計算した。ホップ誘導体は、実施例３で前述した通りに使用した。
【０１７６】
全てのホップ誘導体において、ＮＳＡＩＤ誘発性胃損傷に対する実質的な抑制が観察された。
【０１７７】
（実施例１１）
（ラットにおける分子種Ａおよび分子種Ｂの急性毒性）
ホップ誘導体の急性毒性をラットで調べた。１０匹の、若い、Ｆｉｓｈｅｒ３４４雄性ラット、平均体重１００ｇに、５０００ｍｇ試験材料／ｋｇ体重で経口投与し、１４日間観察し、死亡ラットの数を定量した。ホップ誘導体の急性毒性の低いことは、ラットに対し５０００ｍｇ試験材料／ｋｇ体重で経口投与した場合でも、致死率が見られないことによって示された。
【０１７８】
（実施例１２）
（ホップ誘導体と組み合わせて投与された場合のアスピリン急性毒性の低下）
アスピリンの急性毒性を低下させる、ホップ誘導体の能力をマウスで試験した。グループ当たりの平均体重１２ｇの、１０匹の、若い、雄性・雌性マウスに対し、体重ｋｇ当たり５０、１００、５００、１０００、または５０００ｍｇの試験材料を経口的に投与し、１４日間観察した。致死用量中央値を、実施例２に記載するやり方で計算した。アスピリン、または、アルピリンとホップ誘導体とを１：１比で雄性・雌性マウスに経口投与したところ、ホップ誘導体に強力な保護作用のあることが示された。ホップのアスピリンとの併用は、アスピリンの全ての用量において致死率を下げる、または阻止する。
【０１７９】
上記から、これまでに示した種々の処方の内でも、開示の上位分子種と記述されるホップ誘導体を第１活性成分として、第２成分としてＮＳＡＩＤを含む処方が開示された。本発明の精神から逸脱することなく、明白な性質を持つ各種変更および修正を実行することが可能であることは当業者には直ちに明白であろう。そのような変更および修正としては、例えば、カプセル、錠剤、散剤、ローション、食品、またはバー製造過程を変えるために添加される無毒の成分を始めとして、ビタミン、芳香剤、およびキャリアが挙げられるが、ただしこれらに限定されない。他の、同様の変更または修正として、香草、または、本明細書に開示される好ましい実施態様の組み合わせを含む、他の植物性産品が挙げられよう。当業者には明白なように、本明細書に記載される実施態様について、その他にも、様々な修正および変更を、本発明の範囲から逸脱することなく実行することが可能である。本明細書に記載される特定の実施態様は、ただ例示の目的のためにのみ提供されるものである。
【０１８０】
結論として、一つの実施態様は、ＮＳＡＩＤ誘発性胃障害を治療または予防するための組成物である。本組成物は、少なくとも１種のホップ誘導体、およびＮＳＡＩＤを含む。投与は経口的でも非経口的でもよい。
【０１８１】
（実施例１３）
（ホップ抽出物を含む組成物、対、抗炎症剤の作用の比較）
本実施例は、ホップ抽出物と、非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、ナプロフェンとを含む組成物の、便中カルプロテクチンに対する作用を評価するための、ランダム化交差試験について説明する。
【０１８２】
治験設計−治験は、ＩＰ２００３−００１ＣＴとナプロキセンの、便中カルプロテクチンに対する作用を比較するためのランダム化交差試験である。被験者は、訪問０回目（Ｖ０）で選別した。治験参加用に選別されると、被験者は訪問１回目（Ｖ１）に再訪した。Ｖ０とＶ１の間に、２個の便中カルプロテクチンの基礎サンプルを獲得した。被験者をランダム化し、治験のアーム１かアーム２のいずれかに配置した。全ての被験者に対して、治験開始から、治験全期間の終了時までの１週間アルコールの摂取を断つように指示した。
【０１８３】
アーム１被験者は、Ｖ１に、２錠（１日当たり２回）のＩＰ２００３−００１ＣＴを割り当てられ、これを合計１４日間服用した。訪問２回目（Ｖ２）はＶ１の１日後、訪問３回目（Ｖ３）はＶ１の１４日後に行われた。２１日間の休薬期間の後、被験者は、訪問４回目（Ｖ４）のために再訪し、ナプロキセン５００ｍｇ、１日当たり２回を１４日間割り当てられた。被験者は、７日後、訪問５回目のために（Ｖ５；合計４２日）、合計４９日後、最終訪問である訪問６回目（Ｖ６）のために再訪した。
【０１８４】
アーム２被験者は、Ｖ１に、ナプロキセン５００ｍｇ、１日当たり２回を割り当てられ、これを合計１４日間服用した。訪問２回目（Ｖ２）はＶ１の７日後、訪問３回目（Ｖ３）はＶ１の１４日後に行われた。２１日間の休薬期間の後、被験者は、訪問４回目（Ｖ４）のために再訪し、２錠（１日当たり２回）のＩＰ２００３−００１ＣＴを１４日間割り当てられた。被験者は、７日後、訪問５回目のために（Ｖ５；合計４２日）、合計４９日後、最終訪問である訪問６回目（Ｖ６）のために再訪した。
【０１８５】
ランダム化は、コンピュータ生成ランダム表（マイクロソフト、エクセル）を用いて実行した。被験者は、治験参加時（Ｖ１）にどちらかのアームに割り当てられた。
【０１８６】
被験者は新聞およびラジオ広告で募集した。１８〜４５歳の男性について最初電話またはｅ−メールによって選別した。参加基準としては、ボディマス指数（ＢＭＩ）が２０と２９ｋｇ／ｃｍ２の間にあること、最近も、過去も胃腸病の徴候の無いこと、および、正規の標準血液試験によって健康と判定されたことがある。
【０１８７】
スクリーニング用臨床検査が、全体血球数（ＣＢＣ）、腎臓または肝臓機能マーカー、または血糖値において異常を示した場合、その被験者を除外した。現在処方薬を服用している被験者、および、治験開始前の２週間内にＮＳＡＩＤまたはアスピリンを服用したことのある被験者、あるいは、治験開始前の４週間内にコルチコステロイドの経口剤を服用したことのある患者は除外した。排除基準はまた、サプリメント中の成分、ナプロキセン、ＮＳＡＩＤ、またはアスピリンに対するアレルギー；胃潰瘍、胃炎、食道炎、あるいは、肝臓、腎臓、または心臓病の既往；出血性障害の既往；コントロールされていない高血圧症（血圧（ＢＰ）＞１４０／９０）；糖尿病；ＨＩＶ；未処置の内分泌性、神経性、または感染性障害の既往；重度の精神病の既往、または、過去１０年以内の実際の自殺衝動を含んでいた。
【０１８８】
試験製剤−ＩＰ２００３−０１の各錠剤は、２００ｍｇの還元型イソα酸（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｓコーン抽出物由来のマグネシウム塩）、２００ｍｇのローズマリー抽出物（Ｒｏｓｅｍａｒｉｎｕｓ  ｏｆｆｉｃｉａｌｉｓ）、および、４０ｍｇのオレアノール酸（オリーブの葉の抽出物Ｏｌｅａ  ｅｕｒｏｐｅａ）に、微小結晶セルロース、シリカ、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ケイ酸カルシウムからなる賦形剤を加えたもの、を含んでいた。錠剤の成分の内二つ、すなわち、ローズマリーおよびオレアノール酸は、米国食品薬品局（ＦＤＡ）による一般に安全と見なされる物品リスト（ＧＲＡＳ）の中に含まれている。ホップの還元型イソ−α酸（ＲＩＡＡ）は、ビール製造において、天然の、泡安定化、および苦味付与化合物として用いられる食品級物質であり、安全利用の歴史を持つ。
【０１８９】
ナプロキセン（２−ナフタレン酢酸、５メトキシ−α−メチル−（＋））は、鎮痛および解熱性を持つＮＳＡＩＤである。ナプロキセンは、消化管によって急速にかつ完全に吸収される。ナプロキセンのピーク血漿濃度は投与２〜４時間後に達成され、定常状態は、通常、４〜５用量後に実現される。関節炎患者における臨床実験では、ナプロキセンは、痛みと関節の強張りを鎮める点で、アスピリンおよびインドメタシンに匹敵することが示された。ナプロキセンにおいて３％以上の出現率を見る有害反応としては、便秘、胸焼け、腹痛、悪心、消化不良、下痢、胃炎、頭痛、朦朧、眠気、浮揚感、眩暈、痒み、皮膚発疹、斑状出血、発汗、紫斑、耳鳴り、聴覚障害、視覚障害、浮腫、呼吸困難、動悸、および、渇きが挙げられる。
【０１９０】
臨床および検査室分析−血液を、Ｖ０において選別用臨床検査のために、Ｖ１、Ｖ３、Ｖ４、およびＶ６において高感度Ｃ反応性タンパク（ｈｓＣＲＰ）用として採取した。被験者の検査基礎値を監視するためにＶ３およびＶ６に、追跡用ＣＢＣ、包括的代謝パネル／完全代謝プロフィール（ＣＭＰ）を実行した。スクリーニングおよびｈｓＣＲＰ検査時に、ＣＢＣおよび化学パネルを含む一般臨床検査をＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ（Ｔａｃｏｍａ、ワシントン州）が実行した。
【０１９１】
便中カルプロテクチンの定量を、ＰｈｉＣａｌ酵素イムノアッセイ（Ｇｒｅａｔ  Ｓｍｏｋｉｅｓ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ａｓｈｅｖｉｌｌｅ、ノースカロライナ州）を用いて行った。試験感度は、１５μｇ／ｇ大便（６．２５ｎｇ／ｍＬと等価）であり、試験は、２５０μｇ／ｇ大便（１００．００ｎｇ／ｍＬと等価）まで直線的であった。試行内変動は６％変動係数（ＣＶ）であり、日変動は１４％ＣＶであった。
【０１９２】
被験者にはキットを与え、自宅で大便サンプルを得て、それを各訪問時に持参するようにした。大便サンプルは、メーカー（Ｇｒｅａｔ  Ｓｍｏｋｉｅｓ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）の支給する文献に記載される通りに行った。Ｖ１において被験者から２個の大便サンプルを、個人内変動と基礎値定量のために収集した。１個のサンプルを、Ｖ２、Ｖ３、Ｖ４、Ｖ５、およびＶ６に収集した。
【０１９３】
Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３、Ｖ４、Ｖ５、およびＶ６の前に、各被験者は、朝の第１回目の尿を収集した。尿は凍結し、炎症仲介物の評価のために使用した。
【０１９４】
各訪問時に生命徴候および一般的身体検査を実行した。Ｖ２、Ｖ３、Ｖ４、Ｖ５、およびＶ６において、一般的な耐性アンケートも入手した。これは、ＩＰ２００３−００１およびナプロキセンに対する耐性を評価するためであった。
【０１９５】
統計学的方法−データは、ＪＭＰ統計パッケージ（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃａｒｙ，ノースカロライナ州）を用いて一方向変動分析（ＡＮＯＶＡ）によって分析した。有意差はｐ＜０．０５と定めた。生命徴候および一般臨床検査データは、別様に注記しない限り、平均±平均の標準誤差（ｓｅｍ）として表した。
【０１９６】
カルプロテクチンデータは下記のように分析した。検出限界未満の入力（＜１５μｇ／ｇ大便）は１５に変換した。データはＡＮＯＶＡ（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ／Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ順位和テスト）によって分析した。データはまた、等分散性を確保するために対数に変換し、全ての統計試験はこの変換データに基づいて確認された。局外データについてＧｒｕｂｂ試験を行った。その後の比較のためにＴｕｋｅｙのＨＳＤ試験を用いた。
【０１９７】
結果−被験者−２６人の被験者が治験のためにスクリーニングされ、２４人の被験者が参加のために選別された（図１）。被験者は全て自由意志で治験に参加し、インフォームドコンセントに署名した。これらの被験者の内、１２名はアーム１に割り当てられ、１１名がアーム１を終了した。１２人の被験者がアーム２に割り当てられ、１０名がアーム２を終了した。３人の被験者が実験から退去した。１名はアーム１から、２名はアーム２からである。退去の理由は個人的なものであった（スケジュールが合わない、および、個人的な障害）。治験の間不快事象は報告されなかった。
【０１９８】
アーム１の被験者の年齢は１９歳〜４４歳の範囲にあり、ＢＭＩでは２０〜２７ｋｇ／ｍ２の範囲にあった。アーム２の被験者の年齢は２５歳〜４５歳の範囲にあり、ＢＭＩでは２４〜３１ｋｇ／ｍ２の範囲にあった。被験者の人口構成を表８にまとめた。
（表８．  治験を終了した被験者における平均（±標準偏差）年齢、ＢＭＩ、およびカルプロテクチン基礎値）
【０１９９】
【表８】
2011126919.tif 000022
臨床観察−アーム１またはアーム２のいずれの被験者においても生命徴候（血圧または拍動）において有意な変化は観察されなかった。アーム１被験者の血圧測定値は、Ｖ１では１２５／６８±９／８（Ｎ＝１２）、Ｖ６では１２３／６８±１２／８であり（Ｎ＝１０，一人の被験者は記録されなかった）、Ｖ１とＶ６の訪問時に有意な変化は無かった。アーム２の血圧測定値は、Ｖ１では１２３／７２±７／１２（Ｎ＝１２）、Ｖ６では１１９／６８±７／９（Ｎ＝１０）であり、Ｖ１とＶ６の訪問時に有意な変化は無かった。体重においても臨床的に有意な変化は認められなかった。ただし、アーム１を完了した１１人の被験者の内５名は、Ｖ１とＶ６の間に、平均３ポンドの増加に対して約５ポンドの増加を示した（表９）。
【０２００】
（表９．  治験のアーム１（Ｎ＝１１）およびアーム２（Ｎ＝１０）を完了した被験者における平均（±標準偏差）体重）
【０２０１】
【表９】
2011126919.tif 000023
ＣＲＰ−全ての被験者−急性相反応物質、高感度ｃ−反応性タンパク（ＣＲＰ）を炎症のマーカーと考えた。ＣＲＰが＜１ｍｇ／Ｌの数値を最適とし、一方、＞３．９ｍｇ／ＬのＣＲＰ値を上昇と判定した。１．１ｍｇ／Ｌ〜３．９ｍｇ／Ｌの数値をやや上昇と判定した。
【０２０２】
治験を終了した被験者のＶ１におけるＣＲＰ値は、＜０．２ｍｇ／Ｌ〜２．８ｍｇ／Ｌの範囲にあった。１ｍｇ／Ｌよりも高い値を示したのは僅かに７人の被験者だけであった。アーム１の２人の被験者を除いては、ＣＲＰ値にほとんど変化は認められなかった（表１０）。上記２名は、Ｖ６においてのみ上昇値を示した（１９．８ｍｇ／Ｌと２３．４ｍｇ／Ｌ）。
【０２０３】
（表１０．  治験のアーム１（Ｎ＝１１）およびアーム２（Ｎ＝１０）を終了した被験者の平均（±標準偏差）ＣＲＰ値（ｍｇ／Ｌ））
【０２０４】
【表１０】
2011126919.tif 000024
便中カルプロテクチン−２個の便中カルプロテクチンサンプルを、試験物質を服用し切る前に被験者から入手した。上記基礎サンプルは、相互に４日以内に入手した。便中カルプロテクチンの基礎値を表１１に示す。全ての被験者における便中カルプロテクチンの平均基礎値は、３７±８μｇ／ｇ大便であった。１０人の被験者は約４０μｇ／ｇ大便の平均基礎値を持ち、数人の被験者は、検出レベル未満の数値を持っていた（１５μｇ／ｇ大便）。
【０２０５】
（表１１．  Ｖ１前における被験者のカルプロテクチンの基礎値データ（μｇ／ｇ大便）を示す。独立に４日以内に採取した大便サンプルを示す。＜１７または＜１６（検出レベル未満であることを示す）と報告されたデータは１５に変換された。ＮＤは実行せずを表す。）
【０２０６】
【表１１−１】
2011126919.tif 000025
【０２０７】
【表１１−２】
2011126919.tif 000026
治験時のアーム１被験者の便中カルプロテクチンデータを表１２に示す。基礎値１（４７±１３μｇ／ｇ大便）と、被験者がＩＰ２００３−００１を服用しているＶ２とＶ３（それぞれ、３６±７μｇ／ｇ大便および３６±６μｇ／ｇ大便）の間には有意差は認められなかった。交差間における休薬期間値も、最初の基礎値と一致し、４６±１４μｇ／ｇ大便であった。一方、ナプロキセン服用時には、便中カルプロテクチンは、それぞれ、Ｖ５およびＶ６において９３±２４μｇ／ｇ大便、および７７±１４μｇ／ｇに増加した。
【０２０８】
（表１２．  治験のアーム１を終了した被験者における個別のカルプロテクチンデータ（μｇ／ｇ大便）。Ｖ１は２個の基礎値の平均である。Ｖ２およびＶ３は、ＩＰ２００３−００１服用時に見られたものである。Ｖ４は、２１日間の休薬期間後のカルプロテクチン値である。Ｖ５およびＶ６は、ナプロキセン服用時に見られた。＜１７または＜１６と報告されたデータは１５（最低検出レベルを示す）に変換された。）
【０２０９】
【表１２−１】
2011126919.tif 000027
【０２１０】
【表１２−２】
2011126919.tif 000028
治験時のアーム２被験者の便中カルプロテクチンデータを表１３に示す。これらの被験者の基礎値１は２７±６．４μｇ／ｇ大便であった。Ｖ２およびＶ３におけるナプロキセン服用時の便中カルプロテクチン値は、それぞれ、９３±３２μｇ／ｇ大便、および９６±２６μｇ／ｇ大便に増加した。便中プロテクチン値は、休薬期後ほぼ基礎値１に減少し（３２±５．９μｇ／ｇ大便）、Ｖ４の、ＩＰ１００３−００１服用時にもこの値の周囲に留まった（３９±７．８μｇ／ｇ大便）。これらの被験者ではＩＰ２００３−００１服用１４日に若干の増加が認められた（６４±３０μｇ／ｇ大便）。ただしこの値でもなお、治験のナプロキセン服用相時に観察されたものを下回っていたが、これは主に一人の被験者データによるものであった（＃１５１７、図２参照）。被験者＃１５１７を除外した、Ｖ６における被験者の便中カルプロテクチンの平均値は４８±１７μｇ／ｇ大便であった。
【０２１１】
（表１３．  治験のアーム２を終了した被験者における個別のカルプロテクチンデータ（μｇ／ｇ大便）。Ｖ１は２個の基礎値の平均である。Ｖ２およびＶ３は、ナプロキセン服用時に見られたものである。Ｖ４は、２１日間の休薬期間後のカルプロテクチン値である。Ｖ５およびＶ６は、ＩＰ２００３−００１服用時に見られた。＜１７または＜１６と報告されたデータは１５（検出未満を示す）に変換された。）
【０２１２】
【表１３−１】
2011126919.tif 000029
【０２１３】
【表１３−２】
2011126919.tif 000030
各アーム毎の各投薬のデータを対合Ｔ−試験（ＶｉとＶｉ＋１）を用いて分析したところ、便中カルプロテクチンは、７日および１４日のナプロキセン投薬において有意に（ｐ＜０．０５）に増加することが示された。一方、ＩＰ２００３−００１の服用は、基礎値からの有意な差をもたらさなかった。基礎値１および基礎値２も有意に異ならなかった。プールしたデータのグラフを図２および３に示す。
【０２１４】
データを再見すると、ある被験者では、カルプロテクチン基礎レベルが参照範囲を超えていることが示された。ある文献は、これは、一次的な上部呼吸器感染（ＵＲＩ）、アルコール摂取、粘膜に影響を及ぼすその他の薬剤の服用、以前に検出されなかった消化器炎症の存在によるものであると示唆している（Ｔｉｂｂｌｅ  ａｎｄ  Ｂｊａｒｎａｓｏｎ、上記、２００１；Ｍｅｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，上記、１９９６；Ｔｉｂｂｌｅ  ｅｔ
ａｌ．，上記、１９９９）。従って、二つの基礎値が参照範囲を下回る（＜５０μｇ／ｇ大便）被験者と、少なくとも一つの基礎値が参照範囲を超える（≧５０μｇ／ｇ大便）被験者とによって層化された。
【０２１５】
治験を完了した２１人の被験者の内、１５名は、二つの基礎値が参照範囲未満であった。図４と５に示すように、ＩＰ２００３−００１の７日および１４日後には、それぞれ、３０±４μｇ／ｇ大便および４０±１１μｇ／ｇ大便が示されるがいずれも有意差は認められなかった。このデータセットにおいて、ただ一人の被験者において、１４日目にカルプロテクチンの著明な上昇が認められた。それとは対照的に、ナプロキセン服用後の便中カルプロテクチンは、７日および１日後に、それぞれ、７６±１９μｇ／ｇ大便および６０±１０μｇ／ｇ大便と有意に上昇した（図５においてデータは平均±標準偏差としてグラフ化されていることに注意）。
【０２１６】
治験を完了した２１人の被験者の内６名は、少なくとも一つの基礎値が参照範囲を上回っていた。これらの被験者では、カルプロテクチンの基礎レベル（Ｖ１およびＶ４）は、７４±１９μｇ／ｇ大便および７７±２０μｇ／ｇ大便であった。図６および７に示すように、ＩＰ２００３−００１服用後の便中カルプロテクチンは、これらの被験者の基礎値同様、比較的安定しており、７日および１４日値は、それぞれ、５５±１２μｇ／ｇ大便および９３±４９μｇ／ｇ大便であった。ただ一人の被験者は、４日目にカルプロテクチンの著明な上昇レベルを示した。このデータセットにおいて、ＩＰ２００３−００１服用後１４日目カルプロテクチンレベルにおける上昇は、この被験者のデータが主な寄与因子であった。一方、前のグループで観察されたように、ナプロキセン投与後の便中カルプロテクチンは、７日目および１４日目に、それぞれ、１３６±４６μｇ／ｇ大便および１３１±３８μｇ／ｇ大便に上昇した。ただしこの変化は有意では無かった（図７におけるデータは平均±標準偏差としてグラフ化されていることに注意）。
【０２１７】
最後に、７日および１４日投薬データは、特定の投薬内では一致しているので、分析のために７日データと１４日データをプールした。表１４に示すように、基礎値の間には差は認められなかった。しかしながら、ナプロキセン投与後における便中カルプロテクチンは、基礎値から有意に上昇していた（８９±１１μｇ／ｇ大便；ｐ＜０．０５）。一方、ＩＰ２００３−００１投薬後の便中カルプロテクチン値は有意に上昇しなかった（４０±８．２μｇ／ｇ大便；有意では無い）。
【０２１８】
（表１４．  治験被験者のカルプロテクチンのプールデータ（平均±標準偏差）。カッコ内の数字は、各状態におけるデータポイント数を示す。基礎値１は、Ｖ１基礎値全ての平均である。基礎値２は、休薬値全ての平均である。ＩＰ２００３−００１およびナプロキセンの７日および１４日データは、本分析のためにそれぞれプールされた。＊は、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ／Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ順位和試験によって基礎値と有意に異なるとされたデータである。）
【０２１９】
【表１４】
2011126919.tif 000031
要約−消化器炎症のマーカー、すなわち、便中カルプロテクチンによる評価を用いて、ＩＰ２００３−０１の消化器健康度に対する作用を調べた。このランダム化交差試験において、２１人の健康な被験者が、ＩＰ２００３−００１（２錠を１日２回）、または、消化器炎症を起こし、便中カルプロテクチンの上昇を招くことが報告されている対照物質、ナプロキセン（５００ｍｇ、１日２回）を１４日間服用した。交差服用の間に２１日間の休薬期間を設けたが、カルプロテクチンレベルにおいて、この二つの基礎値の間には有意差は観察されなかった。便中カルプロテクチン評価を、治験の各アームの投薬時の７日および１４日に実行し、基礎値と比較した。
【０２２０】
ＩＰ２００３−００１の投薬では、７または１４日後に有意な上昇は得られなかった。ただ二人の被験者だけが、ＩＰ２００３−００１の服用後に、カルプロテクチン値において著明な上昇を示した。一方、ナプロキセン服用は、被験者の５０％以上において、７日および１４日評価のいずれにおいても便中カルプロテクチンにおいて著明な上昇をもたらした。（注：ナプロキセン服用後に観察された増加は、５００ｍｇ１日２回服用で７および１４日後に報告された２倍増加−Ｍｅｌｉｎｇ等、上記、１９９６−とほぼ同じ桁の増加である）。
【０２２１】
カルプロテクチンは、消化器炎症のマーカーであるから、これらのデータは、ＩＰ２００３−００１は、標準的ＮＳＡＩＤと比べて、ほとんどあるいは全く消化器炎症をもたらさないことを示し、カルプロテクチンは、一般にＮＳＡＩＤがもたらす潰瘍の危険度を持たないことを示唆する。
【０２２２】
（実施例１４）
（ＡＧＳ胃粘膜細胞モデルにおいてＵＬＴＲＡＩＮＦＬＡＭＸ（登録商標）抗炎症性成分を試験する）
ＵｌｔｒａＩｎｆｌａｍＸは、肺、関節、および消化管の慢性的炎症状態治癒用の栄養学的サポートとして設計された、低アレルギー性、栄養強化、菜食者用飲用混合液である。ＵｌｔｒａＩｎｆｌａｍＸは、包括的な削ぎ落とし、またはダイエットプログラムの一部であると同時に、抗炎症性生活習慣プログラムに参加した患者のための栄養学的サポートとして使用が可能である。ＵｌｔｒａＩｎｆｌａｍＸは、慢性的使用を意図して設計されており、その成分のいくつかは抗炎症性を有しているので、非ステロイド性抗炎症化合物に特徴的な消化器毒性を誘発する成分が、これらの成分に見つかる可能性を評価するのは興味がある。この実験の目的は、ＵｌｔｒａｉｎｆｌａｍＸの複数の抗炎症性成分同士を、組み合わせて、および、個別に、最近開発されたたヒト胃粘膜細胞株アッセイを用いて、ＰＧＥ２生合成の抑制作用について調べることであった。
【０２２３】
試験材料は、ＵｌｔｒａＩｎｆｌａｍＸの、抗炎症性活性成分、クルクミン、ジンジャー根、ローズマリー抽出物とルチン、および、それぞれ、２：１：１：２の比で処方されたこれらの成分からなる複合体を含む。最低４種の濃度、５０、５、０．５、および０．０５μｇ試験材料／ｍＬを用い、濃度当たり二つの複製について３回の独立実験を行い、ＡＧＳ細胞におけるＰＧＥ２抑制に関する用量−反応曲線を計算した。カルシウムイオノフォアＡ２３１８７を用いてアラキドン酸放出を誘発し、ＡＧＳ細胞を試験材料に暴露６０分後に加えた。９５％信頼区間を含む、抑制濃度中央値（ＩＣ５０）を、３回の独立実験の平均値に基づいて計算した。試験成分の協調作用または拮抗作用を、結合示数（ＣＩ）パラメータによって定量した。これについては下記にさらに詳述する。
【０２２４】
試験材料および薬品−クルクミン、ジンジャー根、ローズマリー抽出物、およびルチンを含む、ＵｌｔｒａＩｎｆｌａｍＸの抗炎症性成分は、Ｍｅｔａｇｅｎｉｃｓ（Ｇｉｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ワシントン州）から支給された。市販のＵｌｔｒａＩｎｆｌａｍＸにおける比（それぞれ２：１：１：２）に処方されるこれらの材料の複合体もまたＭｅｔａｇｅｎｉｃｓから供給された。
【０２２５】
ＰＧＥ２  ＥＩＡキットはＣａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（アンアーバー、ミシガン州）から入手した。熱で不活性化した仔牛血清（ＦＢＳ−ＨＩカタログ＃３５−０１１ＣＶ）、および、ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭカタログ＃１０−０１３ＣＶ）はＭｅｄｉａｔｅｃｈ（Ｈｅｒｎｄｏｎ、バージニア州）から購入した。ＩＬ−１β、アスピリン、および全ての標準薬品、別様に指示しない限り、全てＳｉｇｍａ（セントルイス、ミズーリ州）から入手し、市販のものの内で最高純度のものとした。供給業者の詳細なリストは、付属の付録の、各標準的操作手順と共に提示される。
【０２２６】
細胞培養−ＡＧＳヒト胃粘膜細胞株（米国標準培養体保存施設、Ｍａｎａｓｓａｓ、バージニア州）を培養し、ＡＴＣＣの推薦法に従って維持した。準備培養を行ったＡＧＳ細胞を、２０％ＦＢＳ、５０単位のペニシリン／ｍＬ、５０μｇのストレプトマイシン／ｍＬを添加したＩＭＤＭ中で育成し、各実験前に対数期に維持した。ＰＧＥ２アッセイでは、９６ウェルプレートにおいて、ウェル当たり２００μＬ培養液に懸濁した、ウェル当たり約１０５個の細胞を撒いた。細胞を、８０％集密度に達するまで育成し、試験薬剤を添加する前にＩＭＤＡにて３回洗浄した。試験材料は、ＦＢＳまたはペニシリン／ストレプトマイシン無添加のＩＭＤＡ培養液２００μＬに溶解して加えた。試験材料の添加６０分後、カルシウムイオノフォア添加によってアラキドン酸を誘発した。
【０２２７】
Ａ２３１８７のＤＭＳＯ液。３７℃におけるインキュベーションをさらに３０分行った。５０マイクロリットルの培養液を、ＰＧＥ２定量のためにサンプルした。
【０２２８】
ＰＧＥ２の定量−ＰＧＥ２の定量のためには、市販の、非放射性手法を用い（Ｃａｙｍｅｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、アンアーバー、ミシガン州）、メーカーの推薦する手順にそのまま従った。要約すると、５０μＬの培養上清を、ＰＧＥ２標準サンプルの連続希釈液と一緒に、適当量のアセチルコリンエステラーゼ標識トレーサーおよびＰＧＥ２抗血清と混ぜ、室温で１８時間インキュベートした。その後、ＰＧＥ２アッセイ微量滴定プレートを空け、洗浄バッファーで洗った後に、アセチルコリンエステラーゼの基質を含む２００μＬのＥｌｌｍａｎ試薬を加えた。反応を、穏やかな攪拌器において室温で１時間実行し、その後、４１５ｎｍにおける吸収度をＢｉｏ−Ｔｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  ＥＬＩＳＡプレートリーダー（モデル＃Ｅｌｘ８００、Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、バーモント州）にて定量した。このアッセイに関するメーカーの仕様として、アッセイ間変動係数＜１０％、ＰＧＤ２とＰＧＦ２α間の交差反応の可能性１％未満、および、１０−１０００ｐｇ／ｍＬにおける直線性が与えられた。ＰＧＥ２濃度は、ｍＬ当たりのＰＧＥ２のピコグラムとして表した。
【０２２９】
細胞生存率−細胞生存率は目視によって評価した。いずれの試験材料についても試験した濃度において細胞生存率に影響を及ぼさなかった。
【０２３０】
計算−最低４種の濃度、５０、５、０．５、および０．０５μｇ試験材料／ｍＬを用い、濃度当たり二つの複製について３回の独立実験を行い、ＣａｌｃｕＳｙｎ（ＢＩＯＳＯＦＴ、Ｆｅｒｇｕｓｏｎ、ミズーリ州）を用い、用量−反応曲線、および９５％信頼区間を含む抑制濃度中央値（ＩＣ５０）を計算した。この統計ソフトウェアパッケージは、Ｃｈｏｕ  ａｎｄ  Ｔａｌａｌｙによって記載される中央作用法を用いて、複数の薬剤用量−作用計算を実行する（Ｃｈｏｕ，Ｊ．Ｔｈｅｏｒ．Ｂｉｏｌ．３５：２８５−２９７（１９７２）；Ｃｈｏｕ，Ｊ．Ｔｈｅｏｒ．Ｂｉｏｌ．５９：２５３−２７６（１９７６）；Ｃｈｏｕ  ａｎｄ  Ｔａｌａｌａｙ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６４３８−６４４２（１９７７）；Ｃｈｏｕ  ａｎｄ  Ｔａｌａｌａｙ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１１５：２０７−２１６（１９８１）；Ｃｈｏｕ  ａｎｄ  Ｔａｌａｌａｙ，Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ．２２：２７−５５（１９８４））。各用量における抑制割合を、３回の独立実験において平均し、それを用いて用量−反応曲線を計算し、抑制濃度の中央値を記録した。全ての実験においてアスピリンを陽性コントロールとして用いた。全ての試験材料について、０．９５以下の決定係数を持つ完全な用量−反応曲線が得られた。
【０２３１】
試験成分の協調作用または拮抗作用は、結合示数（ＣＩ）パラメータを用いて定量した。Ｃｈｏｕ−ＴａｌａｌａｙのＣＩは、複数の薬剤−作用に基づき、酵素速度論モデルから導かれる（Ｃｈｏｕ、上記、１９７２；Ｃｈｏｕ、上記、１９７６；Ｃｈｏｕ  ａｎｄ
Ｔａｌａｌａｙ、上記、１９７７；Ｃｈｏｕ  ａｎｄ  Ｔａｌａｌａｙ、上記、１９８１；Ｃｈｏｕ  ａｎｄ  Ｔａｌａｌｙ，上記、１９８４）。この方程式は、協調作用または拮抗作用よりはむしろ加重作用のみを決定する。一方、協調作用は、予期される加重作用を上回るもの、拮抗作用は、予期される加重作用を下回るものと定義される。同じ作用様式を持つが互いに排除的な化合物同士において、または、互いに排除的ではないが、完全に独立した作用様式を持つ薬剤同士において、加重作用をＣＩ＝１と表すことによって、下記の関係式が得られる。すなわち、ＣＩ＜１、＝１、および＞１で、それぞれ、協調作用、加重性、および、拮抗作用を示す。さらに、複合体の抑制濃度の予期される中央値の推定を、関係式：１／ＩＣ５０＝Ａ／ＩＣ５０Ａ＋Ｂ／ＩＣ５０Ｂ＋．．．＋Ｎ／ＩＣ５０Ｎを用いて行った。式中、Ａ，ＢおよびＮは、各成分の相対的割合であり、Ａ＋Ｂ＋．．．＋Ｎ＝１である。
【０２３２】
結果−ＵｌｔｒａＩｎｆｌａｍＸ成分のＣＯＸ−２抑制活性−ＡＧＳ細胞モデルにおける試験材料によるＰＧＥ２合成抑制濃度の中央値を表１５に示す。陽性コントロールであるアスピリンのＩＣ５０は１．２μｇ／ｍＬ（９５％信頼区間＝０．３７−４．１）であり、ＡＧＳ細胞において以前に報告された値Ａ２３１８７における２．９μｇ／ｍＬと一致していた。ＵｌｔｒａＩｎｆｌａｍＸの抗炎症成分については、クルクミンとジンジャー根が、最低のＩＣ５０を示し、それぞれ、２．９と４．１μｇ／ｍＬであった。反応スペクトラムの他の末端では、ルチンとローズマリー抽出物が、ＡＧＳ細胞においてＰＧＥ２合成に対する抑制性がもっとも低く、それぞれ、ＩＣ５０は２０と４３μｇ／ｍＬであった。
【０２３３】
（表１５．  ＡＧＳ細胞モデルにおけるＵｌｔｒａＩｎｆｌａｍＸ成分の、ＰＧＥ２合成に対する抑制濃度中央値（ＩＣ５０））
【０２３４】
【表１５】
2011126919.tif 000032
＋数値は、３回の独立アッセイの平均として計算したものである。ＡＧＳ細胞をプレートに撒いた後８０％集密度に達するまで育成した。細胞を洗浄し、試験材料を、Ａ２３１８７による処理の６０分前に加えた。３０分後、培養液を取り出し、ＰＧＥ２定量に用いた。
【０２３５】
実験はまた、４種の活性成分からなる複合体についても行われた。複合体については、全体サンプル（９種の成分）の重量に基づいてＩＣ５０について観察値と期待値が得られた、観察値１４μｇ／ｍＬ、期待値１１μｇ／ｍＬ。複合活性成分については、複合サンプルにおける４種の活性成分の重量％（４５．３％）に基づいて観察値と期待値が得られた、観察値６．５μｇ／ｍＬ、期待値５．７μｇ／ｍＬである。
【０２３６】
抗炎症性成分からなる複合体は、１４μｇ／ｍＬのＩＣ５０を示した。５０、７５および９０パーセント抑制において計算した複合処方のＣＩは７．３、１２７、および２２５０であった（表１６）。これらの高いＣＩ値は、成分同士の間における極めて強力な拮抗作用を示す。このような拮抗作用は非常に望ましい。なぜならそれは、個々の成分に比べて、複合体について期待される消化器毒性の方が低下することを示すからである。各成分のＩＣ５０値と、それら成分の相対的量に基づいて、複合体の期待ＩＣ５０は５．７μｇ／ｍＬと推定された。この予測値は、複合体の７．０μｇ／ｍＬの９５％信頼区間の最低推定値を下回るが、これは、拮抗作用計算およびＣＩ値を支持するものである（図１８参照）。
【０２３７】
（表１６．  クルクミン、ジンジャー根、ローズマリー抽出物、ルチン、および、２：１：１：２の比で含むＵｌｔｒａＩｎｆｌａｍＸ複合体の用量−反応曲線について計算した結合示数（ＣＩ））
【０２３８】
【表１６】
2011126919.tif 000033
ＣＩは、ヒトＡＧＳ胃粘膜細胞におけるＰＧＥ２生合成に対する５０、７５、および９０％抑制について計算した。
【０２３９】
２．９μｇ／ｍＬのＩＣ５０を持つクルクミン、および、４．１μｇ／ｍＬのＩＣ５０を持つジンジャー根は、ＡＧＳ胃粘膜細胞モデルにおけるＰＧＥ２合成に対する抑制作用においてアスピリンと近似していた。ルチンとローズマリー抽出物は、ＰＧＥ２合成に対する抑制がもっとも低く、それぞれ、２０および４３μｇ／ｍＬであった。この成分同士の結合は、例外的に強力な拮抗作用を示すが、これは、組成物の方が、その成分に対して、期待される消化器毒性が低下することを示す。
【０２４０】
複合体として、ＵｌｔｒａＩｎｆｌａｍＸの抗炎症成分は、１４μｇ／ｍＬのＡＧＳ  ＩＣ５０を持つが、比較的低い胃毒性を持つものと分類されてもよいかも知れない。しかし全体的に見てみると、この値は、ＡＧＳモデルに基づいて推定した場合胃毒性の可能性を表す。なぜなら、この値は、アスピリンよりも１２倍低く、ロフェコキシブよりも２．５倍低いだけだからである。
【０２４１】
各成分のＩＣ５０値と、それらの成分の相対的量に基づいて、複合体のＩＣ５０期待値は５．７μｇ／ｍＬと推定された。５０、７５および９０パーセント抑制において計算した複合処方のＣＩは７．３、１２７、および２２５０であった。これらの高いＣＩ値は、成分同士の間における極めて強力な拮抗作用を示す。このような拮抗作用は非常に望ましい。なぜならそれは、個々の成分に比べて、複合体について期待される消化器毒性の方が低下することを示すからである。
【０２４２】
試験材料の成分を表１７に示す。
【０２４３】
（表１７．  複合試験材料における特に強調される成分）
【０２４４】
【表１７】
2011126919.tif 000034
＋抗炎症成分と予想される。
【０２４５】
複合体サンプルは、全部で９種の成分からなる、試験材料の総計重量に基づいて１４μｇ／ｍＬのＩＣ５０観察値を示した。この値は、９種全ての成分の結合について期待されるＩＣ５０の推定値１１μｇ／ｍＬよりも大きい。ＩＣ５０を、４種の、個別に試験した成分だけに基づいて計算すると、観察値は６．５μｇ／ｍＬであるのに対して、ＩＣ５０の期待値は５．７μｇ／ｍＬであった（図１９参照）。
【０２４６】
複合体の結合示数（ＣＩ）計算値を表１８に示す。
【０２４７】
（表１８．  完全複合材料（９種の成分）と、４種の、抗炎症作用を持つと予想される成分、クルクミン、ジンジャー根、ローズマリー抽出物、およびルチンからなる複合体の用量−反応曲線について計算した結合示数（ＣＩ））
【０２４８】
【表１８】
2011126919.tif 000035
ＣＩは、ヒトＡＧＳ胃粘膜細胞におけるＰＧＥ２生合成に対する５０、７５、および９０％抑制について計算した。両方の計算組において、ＣＩ値は、ＩＣ５０の開始時には協調作用を示すが、用量を増すにつれて急激に増加する。
【０２４９】
表１９は、天然の抗炎症剤における香草の量的割合を示す。
【０２５０】
（表１９．  天然産物による抗炎症剤における香草の量的割合）
【０２５１】
【表１９】
2011126919.tif 000036
＋下記に挙げる賦形剤成分を含めた完全処方（１２６７ｍｇ）におけるサプリメントの割合を示す。
＋＋ＮＡ＝活性無し。カッコ内の数値は、ＩＣ５０計算値の９５％信頼区間である。
＋＋＋不活性成分、ジヒドロリン酸カルシウム（４５６ｍｇ）、ステアリン酸マグネシウム（７５ｍｇ）、カボシル（５ｍｇ）、シロイド（２４５ｍｇ）、およびステアリン酸（１４９ｍｇ）も含んでいた。
【０２５２】
市販の抗炎症製剤のスパイス成分について、ＲＡＷ２６４．７細胞系において、ＣＯＸ１またはＣＯＸ２活性を定量する条件下で、個別に、また、組み合わせた状態で試験した。図２０に示すように、比較的高い胃毒性を持つバー（ＣＯＸ１を促進）はゼロの左側に現れ、胃毒性が比較的低いバー（ＣＯＸ２活性を促進）は右に現れる。これらのデータから、カイエンペッパー、ボスウェリン、およびジンジャーのようなペッパーは、上の分割的併用（インフラボノイドＩＣ）で見られるものよりも、個別に予測されるＣＯＸ１活性の方が予想外に高いことが示され、また、結合作用は、各種スパイス成分の間にも存在し、ＣＯＸ２選択性を増し、胃毒性に対する予測値を低くすることが実証される。
【０２５３】
表２０および２１は、ＲＩＡＡ：ローズマリー併用において予想される胃毒性が低下することを示す。
【０２５４】
（表２０．  ＲＡＷおよびＡＧＳ細胞モデルにおける、選択された天然成分の、ＰＧＥ２合成に対する抑制濃度中央値（ＩＣ５０））
【０２５５】
【表２０】
2011126919.tif 000037
＋数値は、３回の独立アッセイの平均として計算したものである。ＡＧＳ細胞をプレートに撒いた後８０％集密度に達するまで育成した。細胞を洗浄し、試験材料を、Ａ２３１８７による処理の６０分前に加えた。３０分後、培養液を取り出し、ＰＧＥ２定量に用いた。
【０２５６】
（表２１．  ＡＧＳ細胞モデルにおける、ＲＩＡＡとローズマリーの選択された併用剤の、ＰＧＥ２合成に対する抑制濃度中央値（ＩＣ５０））
【０２５７】
【表２１】
2011126919.tif 000038
＋数値は、３回の独立アッセイの平均として計算したものである。ＡＧＳ細胞をプレートに撒いた後８０％集密度に達するまで育成した。細胞を洗浄し、試験材料を、Ａ２３１８７による処理の６０分前に加えた。３０分後、培養液を取り出し、ＰＧＥ２定量に用いた。
＋＋ＲＡＷ細胞における相互作用は仮定せず、個々の成分の調和平均に基づいて推定した。
【０２５８】
本出願を通じて、各種出版物を参照した。これらの出版物の開示は、その全体を、参照することにより本出願に含める。これは、本発明の関わる従来技術の状態をより完全に記載するためである。本発明は、前述の実施例に基づいて説明されてきたけれども、本発明の精神から逸脱することなく様々の修正の実行が可能であることを理解しなければならない。
【図１】
2011126919.tif 000039
【図２】
2011126919.tif 000040
【図３】
2011126919.tif 000041
【図４】
2011126919.tif 000042
【図５】
2011126919.tif 000043
【図６】
2011126919.tif 000044
【図７】
2011126919.tif 000045
【図８】
2011126919.tif 000046
【図９】
2011126919.tif 000047
【図１０】
2011126919.tif 000048
【図１１】
2011126919.tif 000049
【図１２】
2011126919.tif 000050
【図１３】
2011126919.tif 000051
【図１４】
2011126919.tif 000052
【図１５】
2011126919.tif 000053
【図１６】
2011126919.tif 000054
【図１７】
2011126919.tif 000055
【図１８】
2011126919.tif 000056
【図１９】
2011126919.tif 000057
【図２０】
2011126919.tif 000058
【外国語明細書】
2011126919000001.pdf