(57)【要約】      （修正有）【課題】迅速性と長期持続性のいずれをも有し、微生物の効果的抑制を提供する、微生物の種々の菌株に対し向上した活性を有する抗微生物化合物の組合わせを提供する。【解決手段】（ａ）Ｎ−（ｎ−ブチル）−１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オン；および（ｂ）２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンを含み、Ｎ−（ｎ−ブチル）−１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オン対２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンの重量比が３６：１〜１１：１であり、かつ５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンを２重量％を超えないで含有する抗微生物組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）Ｎ−（ｎ−ブチル）−１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オン；および
（ｂ）２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン
を含み、Ｎ−（ｎ−ブチル）−１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オン対２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンの重量比が３６：１〜１１：１であり、かつ５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンを２重量％を超えないで含有する抗微生物組成物。
【請求項２】
（ａ）Ｎ−（ｎ−ブチル）−１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オン；ならびに
（ｂ）５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンおよび２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンの混合物
を含み、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン対２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンの重量比が４：１までであり、かつＮ−（ｎ−ブチル）−１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オン対、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンおよび２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンの混合物の重量比が７，４００：１〜６４：１である抗微生物組成物。
【請求項３】
該組成物が、ハロゲン化抗微生物化合物を２重量％を超えないで含有する請求項２に記載の抗微生物組成物。
【請求項４】
５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン対２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンの重量比が４：１〜１：１である請求項３に記載の抗微生物組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｎ−（ｎ−ブチル）−１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オンと選択された抗微生物化合物との組合わせであって、その組合わせが、個々の抗微生物化合物について観察される活性よりも大きな活性を有する組合わせに関する。
【背景技術】
【０００２】
少なくとも二つの抗微生物化合物を組合わせて使用することは、潜在的な市場を拡大させ、使用する濃度および費用を減少させ、および、廃棄物を減少させることができる。ある場合において、市販の抗微生物化合物は、特定の種類の微生物、たとえばある抗微生物化合物に対して耐性を有する微生物、に対して活性が弱いため、高い使用濃度においてさえ、効果的な微生物の抑制を提供することができない。異なる抗微生物化合物の組合わせが、しばしば、特定の最終的な使用環境における微生物の総合的な抑制を提供するために使用される。たとえば、国際特許出願公開第ＷＯ０２／１７７１６号は、Ｎ−（ｎ−ブチル）−１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オン（ｎ−ＢＢＩＴ）および２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン（ＭＩ）の相乗的な組合わせを開示するが、これはｎ−ＢＢＩＴ対ＭＩの比率が１０：１〜１．６７：１と限られた範囲に対してのみ開示されている。しかしながら、迅速性と長期持続性のいずれをも有し、微生物の効果的抑制を提供する、微生物の種々の菌株に対し向上した活性を有する抗微生物化合物のさらなる組合わせが必要とされている。更に、低レベルのハロゲン化された抗微生物化合物を含有する組合わせが必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】国際特許出願公開第０２／１７７１６号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明が解決しようとする課題は、かかる抗微生物化合物のさらなる組合わせを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、（ａ）Ｎ−（ｎ−ブチル）−１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オンおよび（ｂ）４，５−ジクロロ−２−ｎ−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オンを含む抗微生物組成物に関する。
【０００６】
本発明は、更に、（ａ）Ｎ−（ｎ−ブチル）−１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オンおよび（ｂ）２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンを含み、Ｎ−（ｎ−ブチル）−１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オン対２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンの重量比が１００：１〜２０：１、または１：１〜１：５０である抗微生物組成物に関する。
【０００７】
本発明は、更に、（ａ）Ｎ−（ｎ−ブチル）−１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オン；ならびに（ｂ）５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンおよび２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンとの混合物を含み、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン対２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンの重量比が４：１までである抗微生物組成物に関する。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
「ＭＩ」は、２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンであり、２−メチル−３−イソチアゾロンの名称で呼ばれることもある。「ＣＭＩ」は、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンである。「ＤＣＯＩＴ」は、４，５−ジクロロ−２−ｎ−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オンである。「ｎ−ＢＢＩＴ」は、Ｎ−（ｎ−ブチル）−１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オンである。
【０００９】
本明細書において、下記の用語は、文脈が明らかに他を示していない限り、示された定義を有する。用語「抗微生物化合物」は、存在位置（ｌｏｃｕｓ）における微生物の増殖を阻止し、または制御することができる化合物をいう。抗微生物化合物には、施用される投与レベル、系条件および望まれる微生物制御のレベルに応じて、殺菌剤、静菌剤（ｂａｃｔｅｒｉｓｔａｔ）、殺真菌剤、静真菌剤（ｆｕｎｇｉｓｔａｔ）、殺藻剤、静藻剤（ａｌｇｉｓｔａｔ）が含まれる。用語「微生物」には、たとえば、真菌（たとえば酵母およびカビ）、細菌ならびに藻が含まれる。用語「存在位置」は、微生物による汚染を受ける産業システムまたは製品をいう。下記の略語は、本明細書全体を通して使用される。すなわち、ｐｐｍ＝百万当たりの重量部（重量／重量）、ｍＬ＝ミリリットル、ＡＴＣＣ＝アメリカ菌株寄託機関（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）、およびＭＩＣ＝最小阻止濃度、である。他に明記しない限り、温度は摂氏度（℃）であり、パーセンテージ（％）の記載は重量による。本発明の組成物における抗微生物化合物のパーセンテージは、組成物中の活性成分の総重量、すなわち、任意量の溶媒、担体、分散剤、安定剤および存在することができるその他の物質を除く抗微生物化合物自体の総重量を基準とする。「無塩」は、組成物が、その組成物の重量を基準にして０または０．５％まで、好ましくは０または０．１％まで、より好ましくは０または０．０１％までの金属塩を含有することを意味する。
【００１０】
予期せずして、本発明の組成物が、個々での抗微生物化合物の活性成分レベルよりも低い活性成分レベルを組み合わせた場合に、向上した抗微生物の効力を提供することを見出した。本発明の一態様において、ハロゲン化３−イソチアゾロンを含有するこれらの抗微生物組成物は、ハロゲン化３−イソチアゾロンを比較的低いレベル、すなわち、好ましくは５％を超えないレベル、より好ましくは２％を超えないレベル、最も好ましくは１．２％を超えないレベルで含有する。他の好ましいレベルは、０．５％を超えず、および他の好ましいレベルは０．１％を超えない。ハロゲン化３−イソチアゾロンの存在に依存した抗微生物組成物は、化学的劣化を被りやすく、上述した金属塩安定剤をはじめとする追加の安定剤成分を必要とすることがあり、塩安定剤はしばしば完成した処方物において許容できない特性を生じる。この理由のために、実質的にハロゲン化３−イソチアゾロンを含まないが、それでもハロゲン化３−イソチアゾロンによってもたらされる抗微生物の防御の程度を与える抗微生物処方物を提供することが望ましい。本発明の一態様において、ハロゲン化された抗微生物化合物の全てのレベルの合計は、５％を超えず、より好ましくは２％を超えず、より好ましくは１．２％を超えない。他の好ましいレベルは、０．５％を超えず、および他の好ましいレベルは０．１％を超えない。
【００１１】
本発明の一態様において、抗微生物組成物は、Ｎ−（ｎ−ブチル）−１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オン；２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンおよび５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンを含む。２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンおよび５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンは、任意の比率で存在することができる。好ましい組成物は、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンおよび２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンを４：１までの比率で含有する。市販の製品はこれらの化合物を約３：１の比率で含有する。一つの好ましい態様において、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン対２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンの比は４：１〜１：１である。
【００１２】
本発明の一態様において、抗微生物組成物は、Ｎ−（ｎ−ブチル）−１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オンおよび２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンを含む。この態様において、好ましくは５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンのレベルは５％を超えず、より好ましくは２％を超えず、最も好ましくは１．２％を超えない。他の好ましい制限は、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンのレベルは０．５％を超えず、および他の好ましい制限は０．１％を超えないことである。配合されたハロゲン化抗微生物化合物のレベルの合計は、５％を超えず、より好ましくは２％より高くなく、より好ましくは１．２％より高くない。他の好ましい制限は、ハロゲン化抗微生物化合物のレベルは０．５％より高くなく、および他の好ましい制限は０．１％より高くないことである。好ましくは、Ｎ−（ｎ−ブチル）−１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オン対２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンの重量比は１：１〜１：４０である。他の好ましい重量比は１：１〜１：３５、および他の好ましい重量比は１：１．５〜１：３０である。
【００１３】
本発明の一態様において、抗微生物組成物は、Ｎ−（ｎ−ブチル）−１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オンおよび４，５−ジクロロ−２−ｎ−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オンを含む。好ましくは、Ｎ−（ｎ−ブチル）−１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オン対４，５−ジクロロ−２−ｎ−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オンの重量比は、６，０００：１〜３０：１である。他の好ましい重量比は３，０００：１〜３５：１、他の好ましい重量比は３００：１〜３０：１および他の好ましい重量比は３００：１〜３５：１である。
【００１４】
本発明の１態様において、抗微生物組成物は、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンおよび２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンの混合物をそれぞれ４：１までの重量比で含む。好ましくは、Ｎ−（ｎ−ブチル）−１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オン対前記の５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンおよび２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンの混合物の重量比は、１２，０００：１〜５０：１である。他の好ましい重量比は、７，５００：１〜６０：１であり、他の好ましい重量比は９００：１〜１００：１、および他の好ましい重量比は３００：１〜１００：１である。本発明の一態様において、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン対２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンの重量比は、約３：１である。
【００１５】
本発明の組成物における抗微生物化合物は、「そのまま」使用することもでき、または最初に溶媒または固形担体と処方することもできる。好適な溶媒としては、たとえば、水；グリコール類、たとえばエチレングリコール、プロピレングリコール、ジエチレングリコール、ジプロピレングリコール、ポリエチレングリコールおよびポリプロピレングリコール；グリコールエーテル類；アルコール類、たとえばメタノール、エタノール、プロパノール、フェネチルアルコールおよびフェノキシプロパノール；ケトン類、たとえばアセトンおよびメチルエチルケトン；エステル類、たとえば酢酸エチル、酢酸ブチル、クエン酸トリアセチルおよびグリセロールトリアセテート；炭酸塩、たとえば炭酸プロピレンおよび炭酸ジメチル；ならびにこれらの混合物が挙げられる。溶媒は水、グリコール類、グリコールエーテル類、エステル類およびこれらの混合物から選択されるのが好ましい。好適な固形担体としては、たとえば、シクロデキストリン、シリカ、珪藻土、ワックス、セルロース物質、アルカリおよびアルカリ土類（たとえば、ナトリウム、マグネシウム、カリウム）金属塩（たとえば、塩化物、硝酸塩、臭化物、硫酸塩）および木炭が挙げられる。
【００１６】
抗微生物成分が溶媒中で処方される場合、その処方物には任意に界面活性剤を含ませることが出来る。かかる処方物が界面活性剤を含む場合、それらは一般的にエマルション濃厚体、エマルション、マイクロエマルション濃厚体またはマイクロエマルションの形態である。エマルション濃厚体は、充分な量の水の添加によりエマルションを形成する。マイクロエマルション濃厚体は、充分な量の水の添加によりマイクロエマルションを形成する。かかるエマルションおよびマイクロエマルション濃厚体は、一般的に当該技術分野でよく知られている（かかる処方物は界面活性剤を含まないことが好ましい）。種々のマイクロエマルションおよびマイクロエマルション濃厚体の調製の更なる一般的および具体的な詳細について、米国特許第５，４４４，０７８号を参照することができる。
【００１７】
抗微生物化合物は、また、分散液の形態で処方することができる。この分散液の溶媒成分は、有機溶媒または水とすることができるが、水が好ましい。かかる分散液は、補助剤、たとえば、共溶媒、増粘剤、凍結防止剤、分散剤、充填剤、顔料、界面活性剤、バイオ分散剤、スルホコハク酸塩、テルペン、フラノン、ポリカチオン、安定剤、スケール防止剤および防食添加剤を含有することができる。
【００１８】
複数の抗微生物化合物は、別個にまたは一緒に処方することができる。両方の抗微生物化合物のそれぞれが最初に溶媒と処方される場合、第一の抗微生物化合物について使用される溶媒は、他方の市販の抗微生物化合物を処方するのに使用される溶媒と同一であっても、または異なっていてもよい。二つの溶媒は混和性であることが望ましい。他の方法においては、第一の抗微生物化合物と他方の抗微生物化合物とを直接組み合わせて、その後に溶媒をその混合物に添加することができる。
【００１９】
当業者は、本発明の複数の抗微生物化合物を順に、または同時に存在位置に添加することができ、または存在位置に添加される前に組み合わせることができることを認識する。第一の抗微生物化合物および第二の抗微生物化合物が同時に存在位置に添加されるか、または存在位置に添加される前に組み合わせることが望ましい。複数の抗微生物化合物が存在位置に添加される前に組み合わされる場合、かかる組み合わせ物には補助剤、たとえば、溶媒、増粘剤、凍結防止剤、着色剤、金属イオン封鎖剤（たとえば、エチレンジアミン四酢酸、エチレンジアミン二コハク酸、イミノ二コハク酸およびそれらの塩）、分散剤、界面活性剤、バイオ分散剤、スルホコハク酸塩、テルペン、フラノン、ポリカチオン、安定剤、スケール防止剤および防食添加剤を任意に含ませることができる。
【００２０】
本発明の抗微生物組成物は微生物の増殖を阻止するために、本組成物の抗微生物的に有効な量を、微生物攻撃にさらされる存在位置の上、存在位置の中、または存在位置に、導入することにより使用することができる。好適な存在位置としては、たとえば：冷却塔；空気清浄機；鉱物スラリー；廃水処理；観賞用噴水；逆浸透濾過；限外濾過；バラスト水；蒸発式凝縮器；熱交換器；パルプおよび紙加工液；プラスチック；乳濁液；分散液；塗料；ラテックス；ワニス等のコーティング；建築製品、たとえばマスチック材、コーキング材およびシーラント；建築用接着剤、たとえばセラミック接着剤、カーペット裏あて用接着剤および積層用接着剤；工業用または消費者用接着剤；写真用化学薬品；印刷液；家庭用品、たとえば浴室および台所洗剤；化粧品；洗面用品；シャンプー；石鹸；洗剤；工業用クリーナー；フロアポリッシュ；洗濯用すすぎ水；金属加工液；コンベヤー潤滑油；作動液；皮革および皮革製品；織物；織物製品；木材および木材製品、たとえば合板、チップボード、フレークボード、積層梁、配向ストランドボード、硬質繊維板およびパーティクルボード；石油加工油；燃料；油田液（ｏｉｌｆｉｅｌｄ  ｆｌｕｉｄ）、たとえば注入水、フラクチャー液（ｆｒａｃｔｕｒｅ  ｆｌｕｉｄ）および掘穿泥水が挙げられる；農業用補助剤保存；界面活性剤保存；医療用機器；診断試薬保存；食品保存、たとえばプラスチックまたは紙食品ラップ等：ならびに温泉が挙げられる。
【００２１】
好ましくは、本発明の抗微生物組成物は、乳濁液、分散液、塗料、ラテックス、家庭用品、化粧品、洗面用品、シャンプー、石鹸、洗剤、切削液および工業用クリーナーの１以上から選択される存在位置における微生物の増殖を阻止するために使用される。特に本抗微生物組成物は、乳濁液、分散液、塗料およびラテックスにおいて有用である。
【００２２】
本発明の相乗的な組成物がパーソナルケア組成物に使用される場合、処方組成物は、また、ＵＶ線−吸収剤、界面活性剤、レオロジー改良剤または増粘剤、芳香剤、加湿剤、湿潤剤、皮膚軟化剤、コンディショニング剤、乳化剤、静電防止補助剤、顔料、染料、付色剤、着色剤、酸化防止剤、還元剤および酸化剤から選択される１以上の成分も含むことができる。
【００２３】
存在位置における微生物の増殖を阻止または制御するために必要な本発明の組成物の具体的な量は、保護される特定の存在位置に依存する。典型的には、存在位置における微生物の増殖を制御するための本発明の組成物の量は、その存在位置において０．１〜１０，０００ｐｐｍの本組成物の活性成分を提供すれば充分である。本組成物の活性成分は、少なくとも０．５ｐｐｍ、より好ましくは少なくとも１ｐｐｍ、より好ましくは少なくとも１０ｐｐｍ、最も好ましくは少なくとも５０ｐｐｍの量でその存在位置において存在するのが好ましい。本組成物の活性成分は、５，０００ｐｐｍを超えない、より好ましくは３，０００ｐｐｍを超えない、より好ましくは１，０００ｐｐｍを超えない、最も好ましくは５００ｐｐｍを超えない量でその存在位置において存在するのが好ましい。
【実施例】
【００２４】
本発明の組合わせの相乗作用が、広範囲の濃度および化合物の比率を試験することにより実証された。
【００２５】
相乗作用の測定方法の一つは、Ｋｕｌｌ，Ｆ．Ｃ．；Ｅｉｓｍａｎ，Ｐ．Ｃ．；Ｓｙｌｗｅｓｔｒｏｗｉｃｚ，Ｈ．Ｄ．およびＭａｙｅｒ，Ｒ．Ｌ．によりＡｐｐｌｉｅｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  第９巻：５３８〜５４１頁（１９６１）において記載された工業的に承認された方法であり、下記の式により決定される比率を使用する：
Ｑａ／ＱＡ＋Ｑｂ／ＱＢ＝相乗指数（「ＳＩ」）
ここで、
ＱＡ＝単独で作用して、エンドポイントを実現した化合物Ａ（第一成分）の濃度（ｐｐｍ）；（化合物ＡのＭＩＣ）。
Ｑａ＝混合物中で、エンドポイントを実現した化合物Ａの濃度（ｐｐｍ）。
ＱＢ＝単独で作用して、エンドポイントを実現した化合物Ｂ（第二成分）の濃度（ｐｐｍ）；（化合物ＢのＭＩＣ）。
Ｑｂ＝混合物中で、エンドポイントを実現した化合物Ｂの濃度（ｐｐｍ）。
【００２６】
Ｑａ／ＱＡとＱｂ／ＱＢの合計が１より大きい場合は、拮抗作用が示されている。合計が１に等しい場合は相加性が示され、１より小さい場合は相乗作用が認められる。ＳＩが低いほど、その特定の混合物によって示される相乗作用は大きくなる。抗微生物化合物の最小阻止濃度（ＭＩＣ）は、添加された微生物の増殖を妨ぐ特定の設定条件下で試験された最小濃度である。
【００２７】
相乗試験は、試験微生物の最適な増殖のために企図された培地で、標準マイクロタイタープレート分析（１２カラム（１〜１２）×８列（Ａ〜Ｈ））を使用して遂行された。完全栄養培地（ｆｕｌｌ−ｓｔｒｅｎｇｔｈ  ｎｕｔｒｉｅｎｔ  ｍｅｄｉｕｍ）、細菌についてはトリプチケースソイ培地（ＴＳＢ）、または真菌についてはポテトデキストロース培地（ＰＤＢ）が試験に使用された。増殖培地（１６０μＬ）を、プレートのカラム２〜６および８〜１２に分配した。各増殖培地について、合計４０プレートが作られた。Ｎ−（ｎ−ブチル）−１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オンのストック溶液が、ＤＥＮＳＩＬ  ＤＧ２０（活性成分（ＡＩ）、ｎ−ＢＢＩＴ、プロピレングリコール中２０％、Ａｖｅｃｉａ  Ｉｎｃ．より入手）から総生成物重量を基準にして次の濃度で調製された。すなわち、５，０００ｐｐｍ（４０ｇ増殖培地中０．２ｇのＤＥＮＳＩＬ  ＤＧ２０）、４，０００ｐｐｍ、３，５００ｐｐｍ、３，０００ｐｐｍ、２，５００ｐｐｍ、２，０００ｐｐｍ、１，５００ｐｐｍ、１，０００ｐｐｍおよび９００ｐｐｍの濃度で調製された。イソチアゾロンストック溶液は、次のように調製された。すなわち、ＫＡＴＨＯＮ  ＬＸ（１．９７％活性、３：１ＣＭＩ／ＭＩ混合物）は、１４４ｐｐｍ、３６ｐｐｍ、１０ｐｐｍ、５ｐｐｍおよび１ｐｐｍの活性成分濃度に調製された。ＲＯＺＯＮＥ２０００（２０％活性、ＤＣＯＩＴ）は、１４４ｐｐｍ、３６ｐｐｍ、１０ｐｐｍ、５ｐｐｍおよび１ｐｐｍの活性成分濃度に調製された。ＲＯＣＩＭＡ５５０（９．５％活性、ＭＩ）は、４，８００ｐｐｍ、２，４００ｐｐｍ、９００ｐｐｍ、３６０ｐｐｍおよび１８０ｐｐｍの活性成分濃度に調製された。ＤＥＮＳＩＬ  ＤＧ２０のストック溶液は、下記のようにマイクロタイタープレートのカラム１および７の各ウェルに分配された。
１Ａ、７Ａ−４，０００ｐｐｍストック
１Ｂ、７Ｂ−３，５００ｐｐｍ
１Ｃ、７Ｃ−３，０００ｐｐｍ
１Ｄ、７Ｄ−２，５００ｐｐｍ
１Ｅ、７Ｅ−２，０００ｐｐｍ
１Ｆ，７Ｆ−１，５００ｐｐｍ
１Ｇ、７Ｇ−１，０００ｐｐｍ
１Ｈ、７Ｈ−９００ｐｐｍ  
５，０００ｐｐｍのストック溶液は、１Ａ、７Ａにおいて緑膿菌（Ｐｓ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に対し試験が行われた。９００ｐｐｍのストックは、この有機体に対して試験は行われなかった。４０μＬのアリコートが、カラム１における各ウェルからカラム２へ移され、そしてカラム５まで順に希釈された。カラム５からのアリコートは廃棄された。カラム６は対照であった。同一手順が、カラム７からカラム１１まで繰り返され、カラム１１からのアリコートは廃棄された。この手順の終了時点で、各ウェルは１６０μＬの溶液を含んでいなければならない。
【００２８】
イソチアゾロンストック溶液は、各ウェルが望ましい濃度のイソチアゾロンおよびＤＥＮＳＩＬ  ＤＧ２０を含有するよう種々のカラムに添加された。ＤＥＮＳＩＬ  ＤＧ２０単独ならびにイソチアゾロン単独は、対照として含められていた。１１ｐｐｍ（活性成分基準で）の１．５％ＫＡＴＨＯＮ  ＬＸとＤＥＮＳＩＬ  ＤＧ２０との組合わせの例は、下記の通りである：
【００２９】
【表１】
2011126902.tif 000002
【００３０】
ＤＥＮＳＩＬ  ＤＧ２０単独（カラム１〜５）；未処理対照（カラム６）；組合わせ評価（カラム７〜１１）；１．５％ＫＡＴＨＯＮ  ＬＸ対照（カラム１２）。
接種物（１０μＬ）が、カラム１〜１２の各ウェルに分配された。そのプレートを培養した（細菌プレートは３０℃で４８時間、真菌プレートは２５℃で、７日間）。各殺生物剤のＭＩＣを、そのプレートから決定し、その後ＳＩを決定した。
【００３１】
以下の濃度のイソチアゾロンおよびＤＥＮＳＩＬ  ＤＧ２０が、上記のように、マイクロタイタープレートのカラム１〜５において評価された。
【００３２】
【表２】
2011126902.tif 000003
【００３３】
評価される抗微生物剤の濃度は、それらの効力に応じて、異なる試験有機体に対して若干変化し得る（薬剤が細菌に対してより効果的である場合には、細菌に対してより低濃度が使用された。反対に、細菌に対して薬剤がより少ない効果しかない場合には、より高い濃度が必要とされた）。下記の表は、ｎ−ＢＢＩＴと他のイソチアゾロン（ＩＴＡ）との組合わせについてのデータを、それらの相乗指数（ＳＩ）およびｎ−ＢＢＩＴ：ＩＴＡの比率と共に要約したものである。ｎ−ＢＢＩＴおよびＩＴＡの全ての量は、活性成分のｐｐｍとして報告されている。種々の有機体に対する試験結果は、報告される真菌（Ｆ）に対する結果、次いで細菌（Ｂ）に対する結果に分類されている。
【００３４】
【表３】
2011126902.tif 000004
【００３５】
【表４】
2011126902.tif 000005
【００３６】
【表５】
2011126902.tif 000006
【００３７】
細菌
緑膿菌（Ｐｓ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）−Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（ＡＴＣＣ＃１５４４２）
黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）−Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＡＴＣＣ＃６５３８）
肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）−Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（ＡＴＣＣ＃１３５８３）
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）−Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ
（ＡＴＣＣ＃８７３９）
プロテウスミラビリス（Ｐ．ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）−Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｍｉｒａｂｉｌｉｓ（ＡＴＣＣ＃不明）
真菌
アスペルギルスニガー（Ａ．ｎｉｇｅｒ）−Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ
（ＡＴＣＣ＃１６４０４）
フザリウムモニリホルメ（Ｆ．ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ）−Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ（ＡＴＣＣ＃５８９２９）
グリオクラヂウムビリジエ（トリコデルマビリジエ）（Ｇ．ｖｉｒｄｉｅ）（Ｔ．ｖｉｒｄｉｅ）−Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ  ｖｉｒｉｄｉｅ（Ｔｒｉｃｏｄｅｒｍａ  ｖｉｒｉｄｉｅ）（単離）
カンジダアルビカンス（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ）−Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ
（ＡＴＣＣ＃１０２３１）
【００３８】
細菌についての典型的な接触時間は２４〜４８時間でありおよび真菌については３〜７日間である。細菌接種物は、マイクロタイタープレートの１ウェル当たり約１×１０６〜１×１０７ｃｆｕ／ｍｌである。真菌接種物は、マイクロタイタープレートの１ウェル当たり約１×１０５〜１×１０６ｃｆｕ／ｍｌである。
【外国語明細書】
2011126902000001.pdf
2011126902000002.pdf
2011126902000003.pdf