(57)【要約】【課題】試料との反応が適切に行われるように、反応試薬の混合比を制御することが可能な反応液体クロマトグラフ装置における制御方法，反応液体クロマトグラフ装置、およびアミノ酸分析計を提供する。【解決手段】反応試薬の抵抗配管内の圧力損失値と反応試薬のうちのひとつの試薬の混合割合との関係を予め求めて記憶させ、分析時に記憶させた関係に実測した圧力損失値を当てはめてひとつの試薬の現在の混合割合を求め、この現在の混合割合と設定値との差に基づいて反応試薬の混合比を制御する。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料を分離分析した後、複数の試薬が混合した反応試薬と前記試料を化学反応させて前記試料の成分を分析する反応液体クロマトグラフ装置の制御方法において、
前記反応試薬が送液される抵抗配管内の圧力損失値と、前記反応試薬のうちの一つの試薬の混合割合との関係を予め求めて記憶させ、
前記反応試薬と前記試料を化学反応させて前記試料の成分を分析するときに、記憶させた前記関係に実測した前記圧力損失値を当てはめて前記一つの試薬の現在の混合割合を求め、
該現在の混合割合と設定値との差に基づいて前記反応試薬の複数の試薬の混合比を制御することを特徴とする反応液体クロマトグラフ装置の制御方法。
【請求項２】
試料を分離分析した後、複数の試薬が混合した反応試薬と前記試料を化学反応させて前記試料の成分を分析する反応液体クロマトグラフ装置において、
前記複数の試薬の送液量を変化させる開閉弁、
前記反応試薬を前記試料と混合させるために送液するポンプ、
前記ポンプの吐出側に配置された配管内の圧力を測定する圧力計、
前記配管内を流れる前記反応試薬の流れに抵抗を付与する抵抗配管、
前記圧力計により測定された圧力値から前記反応試薬の前記複数の試薬の混合割合を算出し表示するとともに、前記開閉弁の開度を前記混合割合が設定値に近づくように調整する制御装置とを備えたことを特徴とする反応液体クロマトグラフ装置。
【請求項３】
請求項２の記載において、前記制御装置は、前記反応試薬のうち一つの試薬のみを送液した場合の前記圧力計で測定した圧力損失値と、前記反応試薬を複数の混合割合にて調整し送液した場合の前記圧力計で測定した複数の圧力損失値と、前記混合割合とから、前記圧力損失値と前記混合割合との関係を算出し、
前記試料を前記反応試薬と化学反応させながら前記圧力計で測定した現在の圧力損失値と算出された前記関係とから前記混合割合と前記設定値との差を算出し、該差に基づいて前記開閉弁の開度を調整することを特徴とする反応液体クロマトグラフ装置。
【請求項４】
試料を複数の成分に分離する分離カラム、前記分離カラムで分離された前記試料と反応試薬とを混合する混合部、前記試料と前記反応試薬とが混合した混合溶液を加熱して反応させる反応カラム、前記反応カラムから送られる前記試料を検出する検出器、前記検出器から送られるデータに基づいて、前記試料の成分を特定するデータ処理装置を備えた反応液体クロマトグラフ装置において、
前記反応試薬を構成する第１の試薬と第２の試薬のそれぞれの流量を変更する開閉弁、
前記反応試薬を前記混合部へ送液する反応試薬ポンプ、
前記反応試薬ポンプと前記混合部との間に設けられた抵抗配管、
前記反応試薬ポンプの吐出側に設けられ、前記抵抗配管と前記反応試薬ポンプとの間の圧力値を測定する圧力計、
前記反応試薬のうちの前記第１の試薬の前記第２の試薬に対する混合量と、該混合量を複数変えた前記反応試薬を送液したときに前記圧力計で測定した複数の圧力値を、前記第２の試薬のみを送液したときの第１の圧力値で割った圧力比との関係を算出して記憶し、
続いて前記反応試薬を前記混合部へ送液して前記試料と反応させながら、前記圧力計で測定された現在の圧力値と算出された前記関係とから現在の混合量を算出し、表示させる反応試薬制御装置を備えたことを特徴とする反応液体クロマトグラフ装置。
【請求項５】
請求項４の記載において、
前記反応試薬制御装置は、前記現在の混合量と、前記混合量の設定値との差を算出し、該差に基づいて前記開閉弁の開度を変更することを特徴とする反応液体クロマトグラフ装置。
【請求項６】
試料を分離分析した後、反応試薬ニンヒドリンと反応試薬緩衝液が混合した反応試薬と前記試料を化学反応させて前記試料の成分を分析するアミノ酸分析装置において、
前記反応試薬ニンヒドリンの送液量、および前記反応試薬緩衝液の送液量を変化させる開閉弁、
前記反応試薬を前記試料と混合させるために送液するポンプ、
前記ポンプの吐出側に配置された配管内の圧力を測定する圧力計、
前記配管内を流れる前記反応試薬の流れに抵抗を付与する抵抗配管、
前記圧力計により測定された圧力値から前記反応試薬の前記反応試薬ニンヒドリンと前記反応試薬緩衝液のうちのいずれかの混合割合を算出し表示するとともに、前記開閉弁の開度を前記混合割合が設定値に近づくように調整する制御装置とを備えたことを特徴とするアミノ酸分析計。
【請求項７】
請求項６の記載において、前記試料と前記反応試薬との化学反応の前に前記試料に含まれるアンモニアを除去するためのアンモニアフィルタカラムを備えたことを特徴とするアミノ酸分析計。
【請求項８】
試料を複数の成分に分離する分離カラム、前記分離カラムで分離された前記試料と反応試薬とを混合する混合部、前記試料と前記反応試薬とが混合した混合溶液を加熱して反応させる反応カラム、前記反応カラムから送られる前記試料を検出する検出器、前記検出器から送られるデータに基づいて、前記試料の成分を特定するデータ処理装置を備えたアミノ酸分析計において、
前記反応試薬を構成する反応試薬ニンヒドリンと反応試薬緩衝液のそれぞれの流量を変更する開閉弁、
前記反応試薬を前記混合部へ送液する反応試薬ポンプ、
前記反応試薬ポンプと前記混合部との間に設けられた抵抗配管、
前記反応試薬ポンプの吐出側に設けられ、前記抵抗配管と前記反応試薬ポンプとの間の圧力値を測定する圧力計、
前記反応試薬のうちの前記反応試薬ニンヒドリンの前記反応試薬緩衝液に対する混合量と、該混合量を複数変えた前記反応試薬を送液したときに前記圧力計で測定した複数の圧力値を、前記反応試薬緩衝液のみを送液したときの第１の圧力値で割った圧力比との関係を算出して記憶し、
続いて前記反応試薬を前記混合部へ送液して前記試料と反応させながら、前記圧力計で測定された現在の圧力値と算出された前記関係とから現在の混合量を算出し、表示させる反応試薬制御装置を備えたことを特徴とするアミノ酸分析計。
【請求項９】
請求項８の記載において、
前記反応試薬制御装置は、前記現在の混合量と、前記混合量の設定値との差を算出し、該差に基づいて前記開閉弁の開度を変更することを特徴とするアミノ酸分析計。
【請求項１０】
請求項８の記載において、前記試料と前記反応試薬との化学反応の前に前記試料に含まれるアンモニアを除去するためのアンモニアフィルタカラムを備えたことを特徴とするアミノ酸分析計。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、反応液体クロマトグラフ装置における制御方法，反応液体クロマトグラフ装置、およびアミノ酸分析計に関する。
【背景技術】
【０００２】
反応液体クロマトグラフ装置とは、分析対象試料を分離カラムにて複数の成分に分離した後、ラベル化剤などの反応試薬を用いて目的成分を誘導体化することで、目的成分を検出可能とした液体クロマトグラフ装置の一種である（例えば、特許文献１参照）。反応液体クロマトグラフ装置は、目的成分により専用機が開発されており、アミノ酸分析計，グリコヘモグロビン分析計，カテコールアミン分析計などが知られている。反応液体クロマトグラフ装置は、目的成分を検出するために最適な反応試薬を選択することが重要であり、これにより選択性が高く高精度な分析システムを実現することが可能である。しかし、反応液体クロマトグラフ装置には、通常の液体クロマトグラフ装置にはない反応工程が追加されているため、良好な分析結果を得るために反応条件を適切に制御する必要がある。特に、誘導体化のための反応試薬を複数混合して反応させるシステムにおいては、反応試薬の混合比を適正値に保つように制御することが重要である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２０００−４５９３１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
反応液体クロマトグラフ装置では、適正な分析結果を得るためには分析中に反応装置に送り込む反応試薬の混合比を決められた値に保つことが重要である。反応試薬の混合系には通常、混合比を規定し制御するための流量制御機構を具備しており、反応装置へ送り込む複数の反応試薬それぞれの送液量を制御している。流量制御機構として最も一般的なものとしてはプロポーショナルバルブを用いたもので、電磁弁の開閉時間によって比較的容易に複数の試薬の混合比を任意に設定することが可能である。
【０００５】
しかしながら、反応試薬間に粘性の違いによってそれぞれの配管にて大きな流路抵抗差が発生した場合、実際の反応試薬の混合比が電磁弁の開閉時間の比と必ずしも一致しないことがある。この場合、反応試薬の混合比が適正な値からずれているため、試料との反応が適切に行われず、分析結果に差異が発生する要因となる。よって電磁弁の開閉時間の制御とは別の手段で反応試薬の混合比の正しさを検証する必要がある。
【０００６】
反応試薬の混合比を測定する方法としては、それぞれの反応試薬を送液する流路配管に流量計を挿入し、混合前の各反応試薬の送液流量を測定する方法が考えられるが、システムが大掛かりとなる上に流量計の校正等メンテナンスが煩雑となるため、イニシャルコストおよびランニングコストともに大幅に増加し、得られる効果に対してコストが釣り合わないため、現実的ではない。
【０００７】
本発明は、試料との反応が適切に行われるように、反応試薬の混合比を制御することが可能な反応液体クロマトグラフ装置における制御方法，反応液体クロマトグラフ装置、およびアミノ酸分析計を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題を解決するために、本発明の実施態様は、反応試薬の抵抗配管内の圧力損失値と反応試薬のうちの一つの試薬の混合割合との関係を予め求めて記憶させ、分析時に記憶させた関係に実測した圧力損失値を当てはめて一つの試薬の現在の混合割合を求め、この現在の混合割合と設定値との差に基づいて反応試薬の混合比を制御するように構成する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、試料との反応が適切に行われるように、反応試薬の混合比を制御することが可能な反応液体クロマトグラフ装置における制御方法，反応液体クロマトグラフ装置、およびアミノ酸分析計を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】アミノ酸分析計の概要を示す構成図である。
【図２】反応試薬制御装置で実行される反応試薬の混合比の制御手順を示すフローチャートである。
【図３】回帰直線式の一例をグラフ化した関係図である。
【図４】反応試薬の混合比に対する圧力値の実測値を示す一覧表である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本発明の実施例を図面を用いて説明する。
【００１２】
〔実施例〕
はじめに、本発明の原理を説明する。反応液体クロマトグラフ装置は、分析対象試料を分離カラムにて複数の成分に分離した後、ラベル化剤などの反応試薬を用いて目的成分を誘導体化することで、目的成分を検出可能とした液体クロマトグラフ装置である。本発明の実施例では、反応試薬を混合して反応装置に送液するポンプの吐出側に抵抗配管を設置し、かつ抵抗配管に発生する圧力損失を測定する圧力計を備え、反応試薬の混合溶液がこの配管を流れるときに生ずる圧力損失を圧力計で測定し、この圧力損失値を用いて、以下に述べる方法にて反応試薬の混合比を算出する構成を備えている。液体クロマトグラフ用の送液ポンプは、送液圧を制御するための圧力計を具備していることが通例であり、本発明の実施例では、この圧力計を流用する。
【００１３】
粘性のある反応試薬を流路抵抗のある抵抗配管に流した場合、この抵抗配管にて発生する圧力損失Ｐは次の式（１）で表される。
【００１４】
Ｐ＝Ｒ・ｖ＝ρ・ｋ・ｖ                                          ・・・（１）
ここで、Ｒは流路抵抗、ｖは送液流量、ρは反応試薬の粘性に関する係数、ｋは抵抗配管の形状に関する係数である。
【００１５】
２つの反応試薬に有意な粘性の違いがある場合、それぞれ片方の試薬のみを送液流量ｖにて送液した場合の抵抗配管における圧力損失値を、それぞれＰ１，Ｐ２（但しＰ１＜Ｐ２）とし、２つの反応試薬の重量の混合比をｘ：（１−ｘ）とし、この混合比で混合した混合反応液を送液流量ｖにて送液した場合の抵抗配管での圧力損失値Ｐ(ｘ)は、Ｐ１＜Ｐ(ｘ)＜Ｐ２となり、これは圧力損失値Ｐ１の反応試薬の混合割合ｘの関数である。このとき、Ｐ(ｘ)をＰ１またはＰ２にて除算すると、式（２）になる。
【００１６】
Ｐ(ｘ)／Ｐ２＝ρ(ｘ)・ｋ・ｖ／（ρ２・ｋ・ｖ）＝ρ(ｘ)／ρ２    ・・・（２）
ここで、ρ２は反応試薬２の粘性に関する係数であり、定数とする。
【００１７】
この圧力比Ｐ(ｘ)／Ｐ２の値は、送液流量や抵抗配管形状によらず、混合反応試薬の粘性のみで決まり、測定の際に誤差が入り込む要因が少なくなるため、圧力損失値Ｐ(ｘ)をそのまま管理指標として用いるよりも適切である。
【００１８】
反応システムの設計における反応試薬の混合比をａ：（１−ａ）と設定したとき、混合割合ｘが混合割合の設定値ａの近傍にて混合割合ｘに対し線形関数とみなすことができる場合、圧力比Ｐ(ｘ)／Ｐ２は、式（３）で表すことができる。
【００１９】
Ｐ(ｘ)／Ｐ２＝ｋ′（ｘ−ａ）＋Ｐ(ａ)／Ｐ２＝ｋ′ｘ＋ｈ′        ・・・（３）
【００２０】
実際に、混合比を変えた反応試薬を複数準備し、検量線を作成することにより、係数ｋと係数ｈとを決定すれば、以後、圧力損失値Ｐ(ｘ)と圧力損失値Ｐ２を実測することにより、下記の式（４）に示す式（３）の逆関数から混合割合ｘを算出することができる。
【００２１】
ｘ＝ｋ（Ｐ(ｘ)／Ｐ２）＋ｈ                                      ・・・（４）
【００２２】
この混合割合ｘと設定値ａとを比較するモニタリングをリアルタイムで実行することにより、反応試薬の混合比が設定通りになっているかどうかを確認することができる。また、この混合割合ｘを設定値ａと比較して、差が大きい場合は電磁弁の開閉動作をリアルタイムで制御して、この差が小さくなるように混合割合ｘを変更することで、反応試薬の混合比を設定通りに維持することができる。
【００２３】
本発明の一実施例として、アミノ酸分析計を挙げる。アミノ酸分析計は、たん白加水分解物アミノ酸，血清，尿などの生体液等に含まれるアミノ酸類縁物等を自動的に定性，定量する装置である。
【００２４】
図１は、アミノ酸分析計の概要を示す構成図である。複数の容器１内には緩衝液あるいは溶離液がはいっており、電磁弁２の開閉が制御されて、溶離液ポンプ３で後段へ送られる。アミノ酸分析計の場合、アンモニアフィルタカラム４が設置されており、溶離液中のアンモニアを除去することで、アンモニアが目的成分の検出を妨害することを防止している。試料供給装置であるオートサンプラ５には、分析対象の試料を複数セットすることができ、一定時間ごとに自動的に分離カラム６に試料が導入されるように制御される。分離カラム６を通過する試料の環境が一定温度になるように、恒温装置７が設けられている。分離カラム６は、イオン交換クロマトグラフィーカラムであり、試料がアミノ酸成分に分離展開され、時間差を伴って溶出される。その後、混合部８で後述する反応試薬ニンヒドリンと反応試薬緩衝液が混合した反応試薬の溶液と混合され、反応装置９に送られる。反応装置９を通過する試料の環境が一定温度になるように、恒温装置１０が設けられている。加熱されたアミノ酸は、混合部８で混合された反応試薬との反応によって、ルーへマン紫の色素となって発色し、順に検出器１１に送られ、５７０ｎｍと４４０ｎｍの波長で比色される。その後、試料は、排液装置１２から排出される。
【００２５】
電磁弁２，溶離液ポンプ３，オートサンプラ５，恒温装置７，恒温装置１０，検出器１１，排液装置１２の稼動は、プロセッサを備えた制御装置１３により、予め設定された手順で稼動するように制御される。検出器１１で検出された試料の可視吸光度のデータは、データ処理装置１４に送信され、計算処理され、試料の成分が特定されてレポート出力される。
【００２６】
反応試薬ニンヒドリンは容器１５に、反応試薬緩衝液は容器１６にはいっており、容器１５からの流量は電磁弁１７の開度で、容器１６からの流量は電磁弁１８の開度で制御される。反応試薬ニンヒドリンと反応試薬緩衝液が混合した反応試薬は、反応試薬ポンプ１９により、圧力計２０と抵抗配管２１を通過して混合部８へ送られる。圧力計２０は、反応試薬ポンプ１９の吐出側に内蔵された圧力計を流用することができる。圧力計２０で測定された反応試薬の圧力の値が、プロセッサを備えた反応試薬制御装置２２へ送られる。電磁弁１７，１８の開度、反応試薬ポンプ１９の稼動は、反応試薬制御装置２２により制御される。
【００２７】
反応試薬ニンヒドリンと反応試薬緩衝液の混合比は、それぞれの流路に取り付けられた電磁弁１７，１８の開度により規定される。アミノ酸分析計は、反応試薬ニンヒドリンと反応試薬緩衝液が混合した反応試薬の混合比が、１：１となったときに反応が最適となるように反応条件が設定されている。しかしながら、反応試薬ニンヒドリンは反応試薬緩衝液よりも粘性が大きく、電磁弁１７，１８の位置から混合部８までの配管内の流路抵抗によって、電磁弁１７，１８の位置で混合比が１：１であったとしても、混合部８では混合比が１：１からずれてしまう可能性がある。本発明の実施例では、反応試薬のそれぞれの成分の粘性を考慮して、混合部８で、反応試薬ニンヒドリンと反応試薬緩衝液との混合比が１：１になるようにするため、圧力計２０で計測される反応試薬の圧力を用いて、電磁弁１７，１８のそれぞれの開度を制御するようにした。圧力計２０は、反応試薬ポンプ１９の吐出側流路に設けられ、抵抗配管２１で発生する圧力損失Ｐ(ｘ)を測定する。
【００２８】
図２は、反応試薬制御装置２２で実行される反応試薬の混合比の制御手順を示すフローチャートである。はじめに、前処理を行う。電磁弁１７を全閉、電磁弁１８を全開とし、反応試薬ポンプ１９を作動させて、容器１６内の反応試薬緩衝液Ｒ２のみを送液し、圧力計２０で圧力値Ｐ２を測定し（ステップ２０１）、圧力値Ｐ２を格納する（ステップ２０２）。次に、反応試薬ニンヒドリンＲ１と反応試薬緩衝液Ｒ２のプレミックス溶液を数種類の混合比で準備する。例えば、反応試薬ニンヒドリンＲ１の混合割合をｘとすると、反応試薬緩衝液Ｒ２の混合割合は（ｘ−１）となるので、反応試薬中の反応試薬ニンヒドリンＲ１の混合割合ｘを５種類、例えば、ｘ＝０.４，０.４５，０.５，０.５５，０.６として、５種類の混合比の反応試薬を、電磁弁１７，１８の開度を変えてつくる。そして、それぞれを送液して、圧力計２０で検量線設定用の圧力値Ｐｃｉ(ｘ)を測定し、反応試薬制御装置２２に設けられた記憶装置へ格納する（ステップ２０３）。次に、それぞれの圧力値Ｐｃｉ(ｘ)について、反応試薬制御装置２２のプロセッサで圧力比Ｐｃｉ(ｘ)／Ｐ２を計算する（ステップ２０４）。
【００２９】
次に、反応試薬制御装置２２のプロセッサは、圧力比Ｐｃｉ(ｘ)／Ｐ２と混合割合ｘとの関係を示す式（５）に示す回帰直線式における係数ｋと係数ｈを、測定した圧力比Ｐｃｉ(ｘ)／Ｐ２に基づいて算出し、検量線を決定し（ステップ２０５）、反応試薬制御装置２２に設けられた記憶装置へ格納する（ステップ２０６）。
【００３０】
ｘ＝ｋ（Ｐｃｉ(ｘ)／Ｐ２）＋ｈ                                  ・・・（５）
【００３１】
図３は、回帰直線式の一例をグラフ化した関係図である。反応試薬ニンヒドリンＲ１の量であるｘの５種類の値に対してそれぞれ圧力値Ｐｃｉ(ｘ)を測定し、Ｐｃｉ(ｘ)／Ｐ２の値を求め、グラフ上に黒いひし形で示すようにプロットする。これらのプロットした点から直線近似により、図中に直線で示される回帰直線を求める。以上で、前処理が終了する。
【００３２】
次に、前処理の結果に基づいて、リアルタイム処理を行う。はじめに、リアルタイム処理の実行の可否を判定する（ステップ２０７）。前述のように、反応試薬ニンヒドリンＲ１と反応試薬緩衝液Ｒ２とが混合した反応試薬の混合比が１：１となったときに反応が最適となるように反応条件が設定されている。したがって、デフォールトとして、反応試薬の混合比を１：１とするので、反応試薬ニンヒドリンＲ１の混合割合ｘ＝０.５に対応する電磁弁１７の開度、反応試薬緩衝液Ｒ２の混合割合（１−ｘ）＝０.５に対応する電磁弁１８の開度を調整し、分析を開始する（ステップ２０８）。圧力計２０で圧力値Ｐ(ｘ)を測定するタイミングをあらかじめ設定しておくことで、反応試薬の混合割合をディスプレイ等に表示させ、混合割合や混合比をリアルタイムで監視することができるようになる。分析が終了したら監視を終了させるため、ここで、処理を継続するか終了するかを判定する（ステップ２０９）。
【００３３】
リアルタイム処理では、反応試薬制御装置２２は、圧力計２０で測定した圧力値Ｐ(ｘ)と検量線とから混合割合ｘを求め、混合割合の設定値０.５とのずれを監視する。ずれが大きい場合は、電磁弁１７，１８の開度を調整して、混合割合ｘが設定値０.５に近づくように制御する。
【００３４】
はじめに、圧力値Ｐ(ｘ)を圧力計２０で測定し（ステップ２１０）、前処理のステップ２０１で測定した圧力値Ｐ２でこの圧力値Ｐ(ｘ)を除して圧力比Ｐ(ｘ)／Ｐ２を求める（ステップ２１１）。
【００３５】
前処理のステップ２０５で求めた検量線と比較するために、ｘ＝ｋ（Ｐ(ｘ)／Ｐ２）＋ｈを計算する（ステップ２１２）。係数ｋと係数ｈは、ステップ２０６で記憶装置へ格納した値を使用する。
【００３６】
求めた混合割合ｘの値と設定値０.５とを比較する（ステップ２１３）。例えば、図２に示す例では、設定値０.５に対して、ｘ＝０.４５からｘ＝０.５５の範囲を許容範囲としている。反応試薬制御装置２２は、この混合割合ｘの値が設定値に対してどのような状況であるかを、ディスプレイへ表示したり、プリント出力したりして、装置の使用者が監視できるようにする。また、混合割合ｘのみでなく、混合割合（１−ｘ）を混合割合ｘとともに表示したり、混合比ｘ：（１−ｘ）を表示させてもよい。
【００３７】
混合割合ｘの値が、許容範囲内の場合は、ステップ２０９に戻って、監視を継続する。混合割合ｘの値が、許容範囲を超える場合は、装置を停止させて使用者へメッセージを表示させてもよいが、以下のように、自動で混合比を補正するように制御することができる。
【００３８】
はじめに、混合割合ｘの設定値０.５との差Δｘ＝（ｘ−０.５）を求め（ステップ２１４）、混合部８で反応試薬の２つの試薬の混合比が１：１になるように、反応試薬ニンヒドリンＲ１の電磁弁１７と、反応試薬緩衝液Ｒ２の電磁弁１８の開度を変えて補正する（ステップ２１５）。例えば、反応試薬緩衝液Ｒ２の流量を増やす場合は、反応試薬緩衝液Ｒ２の現在の電磁弁１８の開度に差Δｘを加えた分だけ開くように設定し、反応試薬ニンヒドリンＲ１の現在の電磁弁１７の開度に差Δｘを減じた分だけ閉めるように設定する。そして、ステップ２０９に戻る。
【００３９】
以上の制御により、図１に示した混合部８での、反応試薬ニンヒドリンＲ１と反応試薬緩衝液Ｒ２とが混合した反応試薬の混合比が、１：１になるように、リアルタイムで制御することができる。
【００４０】
次に、本発明を実際のアミノ酸分析計へ適用した事例を説明する。図４は、反応試薬の混合比に対する圧力値の実測値を示す一覧表であり、反応試薬として、反応試薬ニンヒドリンＲ１と反応試薬緩衝液Ｒ２の混合溶液を用いている。
【００４１】
条件として、反応試薬緩衝液Ｒ２のみを送液したとき、流量は毎分０.３５ミリリットル、圧力計２０で計測された圧力値はＰ２＝１０.２メガパスカルである。反応試薬ニンヒドリンＲ１と反応試薬緩衝液Ｒ２のプレミックス溶液を図４に示すように５種類準備し、これらを毎分０.３５ミリリットルで送液したときの圧力値Ｐｃｉ(ｘ)を測定した。この値を、図３に示すようなグラフにプロットし、圧力比Ｐｃｉ(ｘ)／Ｐ２と混合割合ｘの回帰直線を最小自乗法で計算して、係数ｋと係数ｈを求めた。
【００４２】
ｋ＝−１.３８
ｈ＝１.６０
【００４３】
したがって、式（５）に示した混合割合ｘは、式（６）に示す関係式で得ることができる。
【００４４】
ｘ＝−１.３８（Ｐ(ｘ)／１０.２）＋１.６０                      ・・・（６）
【００４５】
次に、リアルタイム処理に移り、初期設定値ｘ＝０.５のときに、圧力計２０で測定された圧力値Ｐ(ｘ)が８.０メガパスカルであったとすると、混合割合ｘは式（７）で求められる。
【００４６】
ｘ＝−１.３８×（８.０／１０.２）＋１.６０
＝０.５２                                                     ・・・（７）
【００４７】
混合割合ｘの許容範囲を図２に示した例のように、０.４５＜ｘ＜０.５５とすれば、式（７）で求められた混合割合は、許容範囲内であると判定される。
【００４８】
その後、圧力計２０で測定された圧力値Ｐ(ｘ)が７.０メガパスカルであったとすると、混合割合ｘは式（８）で求められる。
【００４９】
ｘ＝−１.３８×（７.０／１０.２）＋１.６０
＝０.６５                                                     ・・・（８）
【００５０】
混合割合ｘの許容範囲を図２に示した例のように、０.４５＜ｘ＜０.５５とすれば、式（８）で求められた混合割合は、許容範囲をはずれていると判定される。
【００５１】
このように、混合割合が許容範囲をはずれている場合は、図２で説明したように、自動的に弁の開度を調整してもよいし、装置を安価に構成する場合は、装置を自動的に停止させて混合割合の異常を使用者に知らせるようにしてもよい。
【００５２】
混合割合ｘが設定値０.５よりも大きいということは、反応試薬の反応試薬ニンヒドリンＲ１の量が多く、反応試薬緩衝液Ｒ２の量が少ないことを意味するので、式（９）で差Δｘを求め、反応試薬緩衝液Ｒ２の現在の電磁弁１８の開度に差Δｘを加えた分だけ開くように設定し、反応試薬ニンヒドリンＲ１の現在の電磁弁１７の開度に差Δｘを減じた分だけ閉めるように設定する。これにより、混合部８における反応試薬の混合比を１：１に近づけるように補正することができる。
【００５３】
Δｘ＝ｘ−０.５＝０.６５−０.５＝０.１５                        ・・・（９）
【００５４】
本発明の実施例によれば、反応試薬の混合比が適正であるかどうかをリアルタイムに監視でき、適正でない場合は、装置を自動的に停止させたり、反応試薬の容器の弁の開度を調整して、混合比が適正になるようにリアルタイムで補正することができる。その結果、反応液体クロマトグラフ装置やアミノ酸分析計の分析結果の信頼性の低下を防ぐことができる。
【００５５】
また、反応試薬の混合比のデータが記録し保存されるので、装置の自動運転の場合に不具合が生じたときに、追跡調査の助けとすることができる。
【符号の説明】
【００５６】
１  容器
２  電磁弁
３  溶離液ポンプ
４  アンモニアフィルタカラム
５  オートサンプラ
６  分離カラム
７，１０  恒温装置
８  混合部
９  反応装置
１１  検出器
１２  排液装置
１３  制御装置
１４  データ処理装置
１５，１６  容器
１７，１８  電磁弁
１９  反応試薬ポンプ
２０  圧力計
２１  抵抗配管
２２  反応試薬制御装置
【図１】
2011069675.tif 000003
【図２】
2011069675.tif 000004
【図３】
2011069675.tif 000005
【図４】
2011069675.tif 000006