(57)【要約】【課題】神経幹細胞および神経前駆細胞（まとめてＮＳＣと称する）に、一般に作用して、損傷を受けるか、欠けているか、もしくは瀕死であるニューロンまたは他の神経系細胞型を置換し得る子孫を産生する方法を提供すること。【解決手段】インビトロおよびインビボにおいて、神経発生を調節するための方法が開示される。上記方法は、神経幹細胞と有効な量のＦＴＹ７２０化合物とを接触させる工程を包含する。上記神経発生は、非胚性神経幹細胞または前駆細胞の増殖、分化、移動または生存の調節を含み得る。治療的に有効な量のＦＴＹ７２０化合物を被験体に投与する工程を包含する、神経障害（パーキンソン病、振せん麻痺障害、ハンティングトン病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、脊髄虚血、虚血性脳卒中、脊髄損傷、癌関連脳損傷、癌関連脊髄損傷およびシャイ−ドレーガー症候群など）の予防または処置のための方法もまた開示される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書中に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連した出願）
本願は、２００３年９月１２日に出願された特許文献１の利益を主張し、本明細書中に参考としてその全体が援用される。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、神経幹細胞および神経前駆細胞（まとめてＮＳＣと称する）に、一般に作用して、損傷を受けるか、欠けているか、もしくは瀕死であるニューロンまたは他の神経系細胞型を置換し得る子孫を産生する方法に関係する。さらに具体的には、本発明は、ＮＳＣをインビボまたはインビトロにおいてＦＴＹ７２０またはその誘導体で処置して、ＮＳＣの成長、分化、増殖、生存および移動を調節する方法を含む。これらの方法は、例えば、神経系障害の少なくとも１つの症状を減少させるために有用である。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
ここ数年の間に、神経幹細胞が成体哺乳動物の脳において存在することが立証された。新しいニューロンは上記成体哺乳動物の脳において産生されるという最初の示唆は、１９６０年代に実施された研究（ＡｌｔｍａｎおよびＤａｓ  １９６５（非特許文献１）；ＡｌｔｍａｎおよびＤａｓ  １９６７（非特許文献２））によってもたらされた。しかしながら、上記哺乳動物の中枢神経系（ＣＮＳ）内での神経発生は胚形成および周産期に制限されるという理論をひっくり返すために、さらに３０年間および精錬された技術手順を必要とした（総説についてはＭｏｍｍａ，Ｊｏｈａｎｓｓｏｎら  ２０００（非特許文献３）；ＫｕｈｎおよびＳｖｅｎｄｓｅｎ  １９９９（非特許文献４）を参照のこと）。神経疾患および神経損傷の処置は、従来は現存のニューロンの生存を保つことに注力していたが、神経障害および神経疾患の治療的処置のために神経発生を利用する可能性が、今日では存在する。
【０００４】
新しいニューロンの源は成体神経幹細胞（ＮＳＣ）であり、例えば、側脳室の内側を覆う上衣ゾーンおよび／または脳室下ゾーン（ＳＶＺ）内（Ｄｏｅｔｓｃｈ，Ｃａｉｌｌｅら  １９９９（非特許文献５）；Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ，Ｍｏｍｍａら  １９９９（非特許文献６））、ならびに海馬構成体の歯状回（Ｇａｇｅ，Ｋｅｍｐｅｒｍａｎｎら  １９９８（非特許文献７））に位置する。最近の研究は、成体のＣＮＳ内における、ＮＳＣの種々の付加的な部位についての可能性を明らかにしている（Ｐａｌｍｅｒ，Ｍａｒｋａｋｉｓら  １９９９（非特許文献８））。ＮＳＣの非対称的な分裂は、急速な分裂前駆体または前駆細胞の集団を産生すると同時に、それらの数を維持する（Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ，Ｍｏｍｍａら  １９９９（非特許文献６））。上記前駆体は、それらが分化してゆく細胞型およびそれらが最終的に脳において留まる位置の両方の面から、それらの増殖の程度およびそれらの運命を決定付ける、ある範囲の刺激（ｃｕｅ）に応答する。
【０００５】
成体における脳室系の上記ＮＳＣは、恐らく、神経管の内側を覆う胚性の脳室ゾーン幹細胞の相当物であり、それらの子孫は分化したニューロンおよびグリアとして上記ＣＮＳから移動する（Ｊａｃｏｂｓｏｎ  １９９１（非特許文献９））。ＮＳＣは、成体側脳室壁（ＬＶＷ）に残り、神経前駆体を産生し続け、この神経前駆体は、吻側細胞移動路（ｒｏｓｔｒａｌ  ｍｉｇｒａｔｏｒｙ  ｓｔｒｅａｍ）を下方に、嗅球の方へと移動し、嗅球においてそれらは顆粒細胞および糸球体周囲のニューロンに分化する（ＬｏｉｓおよびＡｌｖａｒｅｚ−Ｂｕｙｌｌａ  １９９３（非特許文献１０））。実質的なニューロンの死は、嗅球において起こり、このことが失われたニューロンの持続した置換についての必要性、すなわち、上記ＬＶＷに由来する上記移動前駆体によって充足させられる必要性を生み出す（Ｂｉｅｂｌ，Ｃｏｐｐｅｒら  ２０００（非特許文献１１））。この進行中の嗅球ニューロンの再集団化に加えて、他の脳領域から失われたニューロンは、上記ＬＶＷからの前駆体によって置換され得、この前駆体は、適切な神経突起を備えた、失われたニューロンの表現型へ分化し、正しい標的細胞型とシナプスを形成する強い兆候がある（Ｓｎｙｄｅｒ，Ｙｏｏｎら  １９９７（非特許文献１２）；Ｍａｇａｖｉ，Ｌｅａｖｉｔｔら  ２０００（非特許文献１３））。
【０００６】
インビトロの培養技術は、ＮＳＣの増殖および分化の調節に必要とされる外部のシグナルを同定するために確立された（Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ，Ｍｏｍｍａら  １９９９（非特許文献６）；Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ，Ｓｖｅｎｓｓｏｎら  １９９９（非特許文献１４））。分裂促進剤である、ＥＧＦおよび塩基性ＦＧＦは、上記脳室壁および海馬から単離された神経前駆体を、培養において非常に拡大させることを可能にした（ＭｃＫａｙ  １９９７（非特許文献１５）；Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ，Ｓｖｅｎｓｓｏｎら  １９９９（非特許文献１４））。分裂している前駆体は、未分化状態のままであり、神経球（ｎｅｕｒｏｓｐｈｅｒｅ）として公知大きな細胞塊に成長する。上記分裂促進剤の中止と組み合わせた血清の添加は、上記前駆体のニューロン、星状細胞、および希突起膠細胞の、脳の３種の細胞系統への分化を誘導する（Ｄｏｅｔｓｃｈ，Ｃａｉｌｌｅら  １９９９（非特許文献５）；Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ，Ｍｏｍｍａら  １９９９（非特許文献６））。特定の増殖因子を適用すると、何らかの方法で、各々の細胞型の比率に歪みが生じ得る。例えば、ＣＮＴＦは、神経前駆体を星状細胞になる結果へと方向付けるように作用する（Ｊｏｈｅ，Ｈａｚｅｌら  １９９６（非特許文献１６）；ＲａｊａｎおよびＭｃＫａｙ  １９９８（非特許文献１５））一方で、甲状腺ホルモンであるトリヨードサイロニン（Ｔ３）は、希突起膠細胞分化の促進を示した（Ｊｏｈｅ，Ｈａｚｅｌら  １９９６（非特許文献１６））。ＰＤＧＦによる神経前駆体のニューロンへの分化の亢進もまた、立証されている（Ｊｏｈｅ，Ｈａｚｅｌら  １９９６（非特許文献１６）；Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｐａｒｋら  １９９７（非特許文献１７））。
【０００７】
神経前駆体を増大させ、次いでそれらの細胞運命を操作する能力は、特定の細胞型が失われた神経疾患のための移植療法において非常に大きな意味を有し、もっともはっきりした例は、黒質におけるドパミン作用性ニューロンの変性によって特徴付けられるパーキンソン病（ＰＤ）である。ＰＤ患者のための以前の移植処置は、黒質のドパミン作用性ニューロンが終末分化を起こしつつあるときに前中脳から得られた胎児性の組織を用いていた（ＨｅｒｍａｎおよびＡｂｒｏｕｓ  １９９４（非特許文献１８））。上記細胞は線条に移植され、そこでそれらは、それら正常なシナプスの標的である、宿主線条体のニューロンとシナプスの接点を形成し、ドパミンターンオーバーおよびドパミン放出を、上記患者にとって有意な機能的利点である正常なレベルに回復させる（ＨｅｒｍａｎおよびＡｂｒｏｕｓ  １９９４（２６））（総説についてはＢｊｏｒｋｌｕｎｄおよびＬｉｎｄｖａｌｌ  ２０００（非特許文献１９）を参照のこと）。胎児性組織の移植は、提供者組織の不足により妨げられ、そして胎児性組織の使用は、道徳的問題を生じさせる。しかしながら、ＮＳＣのインビトロでの増大および操作は、神経変性疾患のための移植ベースの戦略のために良く特徴付けられた細胞（例えば、ＰＤのためのドパミン作用性の細胞）の範囲を潜在的に提供し得る。組織修復のための成体由来の幹細胞の使用は、胚細胞研究に関連する倫理的な問題を克服することを援助し得る。この目的のために、神経細胞型の増殖と分化を支配する因子および経路を同定することは、これらの原理を証明することになる。
【０００８】
最終的に、これらの増殖因子および分化因子の同定は、恐らく、神経疾患および神経障害の処置のための内因性の神経発生の刺激についての見識を提供する。ＥＧＦおよび塩基性ＦＧＦの両方の脳室内注入は、上記脳室壁細胞集団を増殖させることを示していた。ＥＧＦの場合は、隣接する線条体実質の中への前駆体の広範な移動が実証されている（Ｃｒａｉｇ，Ｔｒｏｐｅｐｅら  １９９６（非特許文献２０）；Ｋｕｈｎ，Ｗｉｎｋｌｅｒら  １９９７（非特許文献２１））。上記前駆体の分化は主にグリア系統への分化であり、そしてニューロンの産生は減少した（Ｋｕｈｎ，Ｗｉｎｋｌｅｒら  １９９７（非特許文献２１））。最近の研究は、成体ラットにおけるＢＤＮＦの脳室内注入が、上記嗅球および吻側移動路、ならびに実質構造（線条、中隔、視床および視床下部を含む）において、新たに産生されるニューロン数の増加を促進させることを見出した（Ｐｅｎｃｅａ，Ｂｉｎｇａｍａｎら  ２００１（非特許文献２２））。これらの研究は、上記ＬＶＷのＳＶＺ内の前駆体の増殖は刺激され得、そしてそれらの系統は、神経になる結果およびグリアになる結果を生み出すために操作され得ることを立証した。
【０００９】
現在、インビボにおいて神経発生に影響すると知られている因子の数は少なく、そしてそれらの効果は望ましくないか、または限定されている。神経幹細胞の活性、神経前駆体の増殖、および前駆体の望ましいニューロン細胞型への分化を選択的に刺激し得る因子の探索を、さらに拡大させる必要性がある。必要とされるものは、インビボにおける神経発生を促すための新たな方法および移植治療のための細胞を培養する方法である。
【００１０】
ＦＴＹ７２０（２−アミノ−２−［２−（４−オクチルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール）は、ミリオシン（ｍｙｒｉｏｃｉｎ）の化学修飾により得られる（Ａｄａｃｈｉ  Ｋら  １９９５（非特許文献２３））経口活性免疫抑制剤として同定された（例えば、特許文献２；特許文献３を参照のこと）。スフィンゴシンに関連する天然物であるミリオシンは、１９７２年に抗真菌性の抗生物質として初めて記載された。２０年より後、ミリオシンは、子嚢菌網であるＩｓａｒｉａ  ｓｉｎｃｌａｉｒｉｉより免疫抑制性代謝産物（ＩＳＰ−Ｉ）として、再発見された。ＦＴＹ７２０は活性免疫抑制剤として、現在、多発性硬化症（ＭＳ；Ｎｏｖａｒｔｉｓの第ＩＩ相治験は、Ｗｏｒｌｄ  Ｗｉｄｅ  Ｗｅｂ．ｉｄｄｂ．ｏｒｇ／において入手可能なＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  Ｄｒｕｇｓ  Ｄａｔａｂａｓｅ（ＩＤＤＢ）により公表される）の処置のために開発中である。最近の研究は、実験的自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）として公知のＭＳのために広く使用される動物モデルに基づき、ＦＴＹ７２０が、多発性硬化症の症状を緩和し得ることを示唆した。
Ｂｒｉｎｋｍａｎｎら（２００２）（非特許文献２４）は、ＥＡＥの誘導のその日から２週間にわたって、Ｗｉｓｔａｒラットを経口的にＦＴＹ７２０（０．３ｍｇ／ｋｇ／日）で処置した。これは、ＭＳ様症状の発症を完全に防いだ。Ｌｅｗｉｓラットにおいて、免疫原としてミエリン塩基性タンパク質を使用して、Ｆｕｊｉｎｏら（２００３）（非特許文献２５）もまた、ＦＴＹ７２０（経口的に１ｍｇ／ｋｇ／日）による、ＥＡＥ発症のほぼ完全な抑制を示した。これは、上記ＣＮＳの中への白血球浸潤の劇的な減少ならびに上記ＣＮＳにおけるＩＬ−２、ＩＬ−６、およびＩＮＦ−γの低下した発現に関連する。最終的に、ＳＪＬマウス（ＥＡＥを誘導しやすい系統）を使用し、Ｗｅｂｂら（２００４）（非特許文献２６）は、ヒトＭＳを厳密に模倣していると考えられる、再発−寛解ＥＡＥ（ｒｅｌａｐｓｉｎｇ−ｒｅｍｉｔｔｉｎｇ  ＥＡＥ）を誘導した。その著者らは、ＦＴＹ７２０処置が、上記動物の臨床的な状態を迅速にかつ持続して改善し、そしてあるミエリンおよび炎症性のタンパク質をコードするｍＲＮＡの発現における変化の逆転という結果を招くことを示した。
このようにして、ＦＴＹ７２０は、活性免疫抑制剤として十分に立証されている。Ｇタンパク質シグナル伝達のインヒビターである百日咳毒素を使用した実験は、ＦＴＹ７２０が、リンパ球上のＧタンパク質共役レセプター（ＧＰＣＲ）の機能を調節することにより、リンパ球再循環を変化させ得ることを示した。加えて、ＦＴＹ７２０は、Ｓ１Ｐレセプター（ＳＩＰＲ；Ｍａｎｄａｌａら  ２００２（非特許文献２７））に対して明確な親和性パターンを示すＳ１Ｐレセプターアゴニストとして同定された。そのＳ１ＰＲは、多くの生理学的過程（例えば、血管細胞系、血管透過性、心細胞系、およびリンパ球輸送）の調節に関係している（Ｆｕｋｕｓｈｉｍａ，Ｎ、Ｉｓｈｉｉ，Ｉ、２００１（非特許文献２８）；Ｇｏｅｔｚｌ，Ｅ．Ｊ＆Ａｎ，Ｓ．、１９９８（非特許文献２９）；Ｃｈｕｎ，Ｊ．、１９９９（非特許文献３０））。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】米国特許出願第６０／５０２，３８６号明細書
【特許文献２】国際公開第９４／０８９４３号パンフレット
【特許文献３】国際公開第９９／３６０６５号パンフレット
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ａｌｔｍａｎ，Ｊ．およびＧ．Ｄａｓ、「Ａｕｔｏｒａｄｉｏｇｒａｐｈｉｃ  ａｎｄ  ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ  ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｏｆ  ｐｏｓｔｎａｔａｌ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ」、Ｊ  Ｃｏｍｐ  Ｎｅｕｒｏｌ、１９６５年、第１２４巻、ｐ．３１９−３３５
【非特許文献２】Ａｌｔｍａｎ，Ｊ．およびＧ．Ｄａｓｈ、「Ｐｏｓｔｎａｔａｌ  ｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｇｕｉｎｅａ−ｐｉｇ」、Ｎａｔｕｒｅ、１９６７年、第２１４号、ｐ．１０９８−１１０１
【非特許文献３】Ｍｏｍｍａ，Ｓ．、Ｃ．Ｂ．Ｊｏｈａｎｓｓｏｎら、「Ｇｅｔ  ｔｏ  ｋｎｏｗ  ｙｏｕｒ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ」、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ、２０００年、第１０巻、第１号、ｐ．４５−９
【非特許文献４】Ｋｕｈｎ，Ｈ．Ｇ．およびＣ．Ｎ．Ｓｖｅｎｄｓｅｎ、「Ｏｒｉｇｉｎｓ，ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ，ａｎｄ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｏｆ  ａｄｕｌｔ  ｎｅｕｒａｌ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ」、Ｂｉｏｅｓｓａｙｓ、１９９９年、第２１巻、第８号、ｐ．６２５−３０
【非特許文献５】Ｄｏｅｔｓｃｈ，Ｆ．、Ｉ．Ｃａｉｌｌｅら、「Ｓｕｂｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  ｚｏｎｅ  ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ  ａｒｅ  ｎｅｕｒａｌ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｄｕｌｔ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｂｒａｉｎ」、Ｃｅｌｌ、１９９９年、第９７巻、第６号、ｐ．７０３−１６
【非特許文献６】Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ，Ｃ．Ｂ．、Ｓ．Ｍｏｍｍａら、「Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｅｕｒａｌ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｄｕｌｔ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｓｙｓｔｅｍ」、Ｃｅｌｌ、１９９９年、第９６巻、第１号、ｐ．２５−３４
【非特許文献７】Ｇａｇｅ，Ｆ．Ｈ．、Ｇ．Ｋｅｍｐｅｒｍａｎｎら、「Ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｄｕｌｔ  ｄｅｎｔａｔｅ  ｇｙｒｕｓ」、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ、１９９８年、第３６巻、第２号、ｐ．２４９−６６
【非特許文献８】Ｐａｌｍｅｒ，Ｔ．Ｄ．、Ｅ．Ａ．Ｍａｒｋａｋｉｓら、「Ｆｉｂｒｏｂｒａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−２  ａｃｔｉｖａｔｅｓ  ａ  ｌａｔｅｎｔ  ｎｅｕｒｏｇｅｎｉｃ  ｐｒｏｇｒａｍ  ｉｎ  ｎｅｕｒａｌ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ  ｆｒｏｍ  ｄｉｖｅｒｓｅ  ｒｅｇｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｄｕｌｔ  ＣＮＳ」、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、１９９９年、第１９巻、第１９号、ｐ．８４８７−９７
【非特許文献９】Ｊａｃｏｂｓｏｎ，Ｍ、「Ｈｉｓｔｏｓｅｎｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ｃｏｒｔｉｃａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ」、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１年、ｐ．４０１−４５１
【非特許文献１０】Ｌｏｉｓ，Ｃ．およびＡ．Ａｌｖａｒｅｚ−Ｂｕｙｌｌａ、「Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇ  ｓｕｂｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  ｚｏｎｅ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｄｕｌｔ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｆｏｒｅｂｒａｉｎ  ｃａｎ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ  ｉｎｔｏ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ａｎｄ  ｇｌｉａ」、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、１９９３年、第９０巻、第５号、ｐ．２０７４−７
【非特許文献１１】Ｂｉｅｂｌ，Ｍ、Ｃ．Ｍ．Ｃｏｏｐｅｒら、「Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ｒｅｖｅａｌｓ  ａ  ｓｅｌｆ−ｒｅｎｅｗｉｎｇ  ｃａｐａｃｉｔｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｄｕｌｔ  ｒａｔ  ｂｒａｉｎ」、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｌｅｔｔ、２０００年、第２９１巻、第１号、ｐ．１７−２０
【非特許文献１２】Ｓｎｙｄｅｒ，Ｅ．Ｙ．、Ｃ．Ｙｏｏｎら、「Ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ  ｎｅｕｒａｌ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ  ｃａｎ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ  ｔｏｗａｒｄ  ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ｕｎｄｅｒｇｏｉｎｇ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｄｕｌｔ  ｍｏｕｓｅ  ｎｅｏｃｏｒｔｅｘ」、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、１９９７年、第９４巻、第２１号、ｐ．１１６６３−８
【非特許文献１３】Ｍａｇａｖｉ，Ｓ．Ｓ．、Ｂ．Ｒ．Ｌｅａｖｉｔｔら、「Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｎｅｏｃｏｒｔｅｘ  ｏｆ  ａｄｕｌｔ  ｍｉｃｅ［コメントを参照のこと］」、Ｎａｔｕｒｅ、２０００年、第４０５巻、第６７８９号、ｐ．９５１−５
【非特許文献１４】Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ，Ｃ．Ｂ．、Ｍ．Ｓｖｅｎｓｓｏｎら、「Ｎｅｕｒａｌ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｄｕｌｔ  ｈｕｍａｎ  ｂｒａｉｎ」、Ｅｘｐ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ、１９９９年、第２５３巻、第２号、ｐ．７３３−６
【非特許文献１５】ＭｃＫａｙ，Ｒ．、「Ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｓｙｓｔｅｍ」、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９７年、第２７６巻、第５３０９号、ｐ．６６−７１
【非特許文献１６】Ｊｏｈｅ，Ｋ．、Ｔ．Ｇ．Ｈａｚｅｌら、「Ｓｉｎｇｌｅ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｄｉｒｅｃｔ  ｔｈｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｆｅｔａｌ  ａｎｄ  ａｄｕｌｔ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｓｙｓｔｅｍ」、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ、１９９６年、第１０巻、第２４号、ｐ．３１２９−４０
【非特許文献１７】Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｂ．Ｐ．、Ｊ．Ｋ．Ｐａｒｋら、「Ａ  ＰＤＧＦ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｉｍｍｅｄｉａｔｅ  ｅａｒｌｙ  ｇｅｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｉｎｉｔｉａｔｅｓ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  ｚｏｎｅ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌｓ」、Ｎｅｕｒｏｎ、１９９７年、第１８巻、第４号、ｐ．５５３−６２
【非特許文献１８】Ｈｅｒｍａｎ，Ｊ．Ｐ．およびＮ．Ｄ．Ａｂｒｏｕｓ、「Ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ  ｎｅｕｒａｌ  ｇｒａｆｔｓ  ａｆｔｅｒ  ｆｉｆｔｅｅｎ  ｙｅａｒｓ：ｒｅｓｕｌｔｓ  ａｎｄ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ」、Ｐｒｏｇ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ、１９９４年、第４４巻、第１号、ｐ．１−３５
【非特許文献１９】Ｂｊｏｒｋｌｕｎｄ，Ａ．およびＯ．Ｌｉｎｄｖａｌｌ、「Ｃｅｌｌ  ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｓｙｓｔｅｍ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ」、Ｎａｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、２０００年、第３巻、第６号、ｐ．５３７−４４
【非特許文献２０】Ｃｒａｉｇ、Ｃ．Ｇ．、Ｖ．Ｔｒｏｐｅｐｅら、「Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ｏｆ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｓｕｂｅｐｅｎｄｙｍａｌ  ｎｅｕｒａｌ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｃｅｌｌ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｄｕｌｔ  ｍｏｕｓｅ  ｂｒａｉｎ」、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、１９９６年、第１６巻、第８号、ｐ．２６４９−５８
【非特許文献２１】Ｋｕｈｎ，Ｈ．Ｇ．、Ｊ．Ｗｉｎｋｌｅｒら、「Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ａｎｄ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−２  ｈａｖｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｎｅｕｒａｌ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｄｕｌｔ  ｒａｔ  ｂｒａｉｎ」、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、１９９７年、第１７巻、第１５号、ｐ．５８２０−９
【非特許文献２２】Ｐｅｎｃｅａ，Ｖ．、Ｋ．Ｄ．Ｂｉｎｇａｍａｎら、「Ｉｎｆｕｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｒａｉｎ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  Ｆａｃｔｏｒ  ｉｎｔｏ  ｔｈｅ  Ｌａｔｅｒａｌ  Ｖｅｎｔｒｉｃｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｄｕｌｔ  Ｒａｔ  Ｌｅａｄｓ  ｔｏ  Ｎｅｗ  Ｎｅｕｒｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐａｒｅｎｃｈｙｍａ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｔｒｉａｔｕｍ，Ｓｅｐｔｕｍ，Ｔｈａｌａｍｕｓ，ａｎｄ  Ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ」、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、２００１年、第２１巻、第１７号、ｐ．６７０６−１７
【非特許文献２３】Ａｄａｃｈｉ，Ｋら、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、１９９５年、第５巻、第８号、ｐ．８５３−８５６
【非特許文献２４】Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ，Ｖ．、Ｄａｖｉｓ，Ｍ．Ｄ．、Ｈｅｉｓｅ，Ｃ．Ｅ．、Ａｌｂｅｒｔ，Ｒ．、Ｃｏｔｔｅｎｓ，Ｓ．、Ｈｏｆ，Ｒ．、Ｂｒｕｎｓ，Ｃ．、Ｐｒｉｅｃｓｃｈｌ，Ｅ．、Ｂａｕｍｒｕｋｅｒ，Ｔ．、Ｈｉｅｓｔａｎｄ，Ｐ．、Ｆｏｓｔｅｒ，Ｃ．Ａ．、Ｚｏｌｌｉｎｇｅｒ，Ｍ．およびＬｙｎｃｈ，Ｋ．Ｒ．、「Ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒ  ＦＴＹ７２０  ｔａｒｇｅｔｓ  ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ  １−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ」、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、２００２年、第２７７巻、ｐ．２１４５３−７
【非特許文献２５】Ｆｕｊｉｎｏ，Ｍ．、Ｆｕｎｅｓｈｉｍａ，Ｎ．、Ｋｉｔａｚａｗａ，Ｙ、Ｋｉｍｕｒａ，Ｈ．、Ａｍｅｍｉｙａ，Ｈ．、Ｓｕｚｕｋｉ，Ｓ．およびＬｉ，Ｘ．Ｋ．、「Ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ  ｉｎ  Ｌｅｗｉｓ  ｒａｔｓ  ｂｙ  ＦＴＹ７２０  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ」、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ、２００３年、第３０５巻、ｐ．７０−７
【非特許文献２６】Ｗｅｂｂ，Ｍ．、Ｔｈａｍ，Ｃ．Ｓ．、Ｌｉｎ，Ｆ．Ｆ．、Ｌａｒｉｏｓａ−Ｗｉｌｌｉｎｇｈａｍ，Ｋ．、Ｙｕ，Ｎ．、Ｈａｌｅ，Ｊ．、Ｍａｎｄａｌａ，Ｓ．、Ｃｈｕｎ，Ｊ．およびＲａｏ，Ｔ．Ｓ．、「Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ  １−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｇｏｎｉｓｔｓ  ａｔｔｅｎｕａｔｅ  ｒｅｌａｐｓｉｎｇ−ｒｅｍｉｔｔｉｎｇ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ  ｉｎ  ＳＪＬ  ｍｉｃｅ」、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ、２００４年、第１５３巻、ｐ．１０８−２１
【非特許文献２７】Ｍａｎｄａｌａ，Ｓ．、Ｈａｊｄｕ，Ｒ．、Ｂｅｒｇｓｔｒｏｍ，Ｊ、Ｑｕａｃｋｅｎｂｕｓｈ，Ｅ．、Ｘｉｅ，Ｊ．、Ｍｉｌｌｉｇａｎ，Ｊ．、Ｔｈｏｒｎｔｏｎ，Ｒ．、Ｓｈｅｉ，Ｇ．Ｊ．、Ｃａｒｄ，Ｄ．、Ｋｅｏｈａｎｅ，Ｃ．、Ｒｏｓｅｎｂａｃｈ，Ｍ．、Ｈａｌｅ，Ｊ．、Ｌｙｎｃｈ，Ｃ．Ｌ．、Ｒｕｐｐｒｅｃｈｔ，Ｋ．、Ｐａｒｓｏｎｓ，Ｗ．およびＲｏｓｅｎ，Ｈ．、「Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ  ｂｙ  ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ−１−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｇｏｎｉｓｔｓ」、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２００２年、第２９６号、ｐ．３４６−９
【非特許文献２８】Ｆｕｋｕｓｈｉｍａ，Ｎ．、Ｉｓｈｉｉ，Ｉ．、Ｃｏｎｔｏｓ，Ｊ．Ｊ．、Ｗｅｉｎｅｒ，Ｊ．Ａ．およびＣｈｕｎ，Ｊ．、「Ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ」、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ、２００１年、第４１巻、ｐ．５０７−３４
【非特許文献２９】Ｇｏｅｔｚｌ，Ｅ．Ｊ．およびＡｎ，Ｓ．、「Ｄｅｌｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｉｃ  ａｃｉｄ  ａｎｄ  ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ  １−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ」、ＦＡＳＥＢ  Ｊ．、１９９８年、第１２巻、ｐ．１５８９−９８
【非特許文献３０】Ｃｈｕｎ，Ｊ．、「Ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｎｅｕｒａｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ」、Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ、１９９９年、第１３巻、ｐ．１５１−６８
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
（発明の要旨）
本発明は、本明細書で示されるＦＴＹ７２０（２−アミノ−２−［２−（４−オクチルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール）が、成体の神経幹細胞または神経前駆細胞（ＮＳＣ）の神経発生を効果的に調節し得るという、驚くべき発見に基づく。したがって、ＦＴＹ７２０は、ＮＳＣの増殖、分化、移動、または生存を調節するために有用である。本明細書中で使用される場合、用語「ＦＴＹ７２０」は、ＦＴＹ７２０および本明細書中で詳細に記載される、その誘導体を含む。
【００１４】
１つの実施形態において、本発明は、被験体における神経組織中の細胞と、神経発生を調節するために十分な量のＦＴＹ７２０を含む組成物とを接触させる工程を包含する、被験体における神経発生を調節するための方法を包含する。
【００１５】
特定の実施形態において、本発明は、神経系障害（例えば、神経変性疾患、神経疾患、精神疾患、または損傷を含む神経系の他の状態）の症状を緩和するために、ＦＴＹ７２０を含む組成物を被験体に投与する方法を包含する。
【００１６】
さらなる実施形態において、本発明は、神経系障害の症状を緩和するために十分な量のＦＴＹ７２０を含む組成物を被験体に投与する工程を包含する、被験体における神経系障害の症状を緩和するための方法を包含する。
【００１７】
本発明の種々の局面において、ＦＴＹ７２０は、インビトロまたはインビボにおいてＮＳＣの活性（すなわち、成長、増殖、分化、移動、または生存）を増大させるために使用され得る。
【００１８】
特定の局面において、ＦＴＹ７２０は、他の増殖因子とともに、または他の増殖因子なしで神経球培養物を産生、維持、成長および増大させるために使用され得る。
【００１９】
加えて、ＦＴＹ７２０は、本発明の上記方法での使用のために、組成物（例えば、薬学的組成物または実験用組成物）へと処方され得る。
【００２０】
１つの実施形態において、本発明は、哺乳動物のＮＳＣ（例えば、成体または他の非胚性細胞）を含む細胞集団と、ＦＴＹ７２０を含む組成物とを接触させる工程を包含する、哺乳動物の成体のＮＳＣ活性を調節するための方法を包含し、処置された細胞は、無処置の細胞と比較して改善された増殖または神経発生を示す。
【００２１】
もう１つの実施形態において、本発明は、１個以上のＮＳＣと、ＦＴＹ７２０を含む組成物とを接触させる工程を包含する、初代の哺乳動物ＮＳＣ（例えば、成体または他の非胚性細胞）を刺激して神経球を形成させるように増殖させるための方法を包含し、この接触された細胞は、ＮＳＣの増殖および神経球の形成の増大を示す。
【００２２】
さらなる実施形態において、本発明は：
（ａ）ＮＳＣを含む細胞集団と、ＦＴＹ７２０を含む組成物とを接触させる工程；
（ｂ）工程（ａ）の上記接触させた細胞集団を単離し、その結果ＮＳＣに富む細胞集団を産生する工程
を包含する、ヒトＮＳＣに富む細胞集団を産生するための方法を包含する。
【００２３】
さらなる実施形態において、本発明は、非胚性神経幹細胞と、その細胞の増殖を増大させるために十分な量のＦＴＹ７２０を含む組成物とを接触させる工程を包含する、インビトロにおいて非胚性神経幹細胞の増殖を増大させるための方法を包含する。
【００２４】
もう１つの実施形態において、本発明は、上述の方法によって産生されたヒトＮＳＣに富む細胞集団を含む、細胞培養物を含む。
【００２５】
さらにもう１つの実施形態において、本発明は、非胚性神経幹細胞と、その細胞の増殖を増大させるために十分な量のＦＴＹ７２０を含む組成物とを接触させる工程を包含する、非胚性神経幹細胞の増殖を増大させる方法を包含する。
【００２６】
さらなる実施形態において、本発明は、ＦＴＹ７２０の治療的に有効な量を投与する工程を包含する、哺乳動物の神経組織に位置するＮＳＣのインサイチュ活性を増大させるための方法を包含し、上記投与は、上記神経組織における上記細胞の成長、増殖、分化、移動、または生存を増大させる。
【００２７】
本発明はまた、他の幹細胞集団（例えば、造血幹細胞、膵幹細胞、皮膚幹細胞、および腸幹細胞）の増殖を増大させるために、ＦＴＹ７２０を含む組成物を被験体に投与する方法を包含する。
【００２８】
１つの実施形態において、本発明は、神経系障害を患っている被験体に神経発生を増大させるために十分な量のＦＴＹ７２０を含む組成物を投与する（例えば、全身経路または局所経路を介して）工程を包含する、神経系障害を患っている被験体における神経発生を増大させる方法を包含する。
【００２９】
もう１つの実施形態において、本発明は、神経系障害の症状を緩和するために十分な量のヒトＮＳＣに富む細胞集団（上述の方法により産生されたもの）を投与する工程を包含する、被験体における神経系障害の症状を緩和するための方法を包含する。
【００３０】
さらなる実施形態において、本発明は、神経系障害の症状を緩和するために十分な量の以下を含む組成物：
（ａ）成体または他の非胚性組織から得られた、単離されたＮＳＣの集団；および
（ｂ）他の増殖因子を添加した、または他の増殖因子の添加なしのＦＴＹ７２０；
を投与する工程を包含する、被験体における神経系障害の症状を緩和する方法を包含する。
【００３１】
本発明はさらに、認知能力を増大させるために、被験体にＦＴＹ７２０を含む組成物を投与する方法を包含する。
【００３２】
特定の局面において、本発明のＦＴＹ７２０組成物および他の組成物（例えば、ＮＳＣに富む細胞集団）は、被験体の脊髄の中に、例えば、注射、注入、または他の手段により投与される。
【００３３】
さらなる局面において、ＦＴＹ７２０は、単独で、または１種以上の増殖因子（例えば、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＧＦ−α、ＦＧＦ−１、ＦＧＦ−２、ＮＧＦ、ＰＡＣＡＰなど）、または１種以上の抗うつ剤、抗不安処置の薬剤、抗精神病処置の薬剤、てんかん処置の薬剤、アルツハイマー処置の薬剤、パーキンソン処置の薬剤、ドパミンレセプターアゴニスト、精神安定薬、鎮静薬、リチウム、もしくは他の治療剤と組み合わせて使用され得る。
【００３４】
特定の局面において、上記ＦＴＹ７２０化合物は、０．１ｎｇ／ｋｇ／日〜１ｍｇ／ｋｇ／日、１ｎｇ／ｋｇ／日〜１μｇ／ｋｇ／日、１ｍｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日、または１０ｍｇ／ｋｇ／日〜１００ｍｇ／ｋｇ／日の量で投与され得る。好ましくは、ＦＴＹ７２０は、０．３ｍｇ〜１０ｍｇの用量で投与される。さらに好ましくは、ＦＴＹ７２０は、１ｎｇ／ｋｇ／日〜１ｍｇ／ｋｇ／日または１μｇ／ｋｇ／日〜０．１ｍｇ／ｋｇ／日の用量で被験体に投与される。ある局面において、上記ＦＴＹ７２０組成物は、０．０００１ｎＭ〜０．１ｎＭ、０．００１ｎＭ〜１０ｎＭ、０．１ｎＭ〜１ｎＭ、１ｎＭ〜１０ｎＭ、１０ｎＭ〜１００ｎＭ、または１μＭ〜１０μＭの標的組織濃度を達成する量で投与され得る。好ましくは、ＦＴＹ７２０は、０．００１ｎＭ〜０．０５ｎＭまたは０．０２ｎＭ〜０．０４ｎＭの標的組織濃度を得るように投与される。
本発明は例えば、以下の項目を提供する：
（項目１）
被験体において神経発生を調節するための方法であって、該被験体における神経組織の中の細胞と、神経発生を調節するために十分な量のＦＴＹ７２０またはその誘導体を含む組成物とを接触させる工程を包含する、方法。
（項目２）
項目１に記載の方法であって、神経発生の調節は、神経幹細胞または神経前駆細胞の増殖、分化、移動、または生存の調節である、方法。
（項目３）
項目２に記載の方法であって、前記神経幹細胞または前記神経前駆細胞は、非胚性細胞である、方法。
（項目４）
神経幹細胞の増殖を増大させるための方法であって、該方法は、該細胞と、該細胞の増殖を増大させるために十分な量のＦＴＹ７２０またはその誘導体を含む組成物とを接触させる工程を包含する、方法。
（項目５）
項目４に記載の方法であって、前記細胞は、非胚性細胞である、方法。
（項目６）
項目４に記載の方法であって、前記誘導体は、ＦＴＹ７２０Ｐである、方法。
（項目７）
項目４に記載の方法であって、前記ＦＴＹ７２０または前記誘導体は、０．００１ｎＭ〜０．０５ｎＭの濃度を得るように前記細胞に加えられる、方法。
（項目８）
項目４に記載の方法であって、前記ＦＴＹ７２０または前記誘導体は、０．０２ｎＭ〜０．０４ｎＭの濃度を得るように前記細胞に加えられる、方法。
（項目９）
項目４に記載の方法であって、前記細胞は、哺乳動物の細胞である、方法。
（項目１０）
項目９に記載の方法であって、前記細胞は、ヒトの細胞である、方法。
（項目１１）
項目１０に記載の方法であって、前記細胞は、成人の細胞である、方法。
（項目１２）
項目４に記載の方法であって、前記細胞はさらに、１つ以上の増殖因子と接触させられる、方法。
（項目１３）
被験体において神経系障害の症状を緩和するための方法であって、該方法は、該被験体に該症状を緩和させるために十分な量のＦＴＹ７２０またはその誘導体を含む組成物を投与する工程を包含する、方法。
（項目１４）
項目１３に記載の方法であって、前記誘導体は、ＦＴＹ７２０Ｐである、方法。
（項目１５）
項目１３に記載の方法であって、前記神経系障害は、神経変性障害、神経幹細胞障害、神経前駆体障害、虚血性障害、神経の外傷および損傷、情動障害、神経心理学的障害、網膜の変性疾患、網膜の損傷および外傷、ならびに学習障害および記憶障害からなる群より選択される、方法。
（項目１６）
項目１３に記載の方法であって、前記神経系障害は、パーキンソン病、振せん麻痺障害、ハンティングトン病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、脊髄虚血、虚血性脳卒中、脊髄損傷、癌関連脳損傷、および癌関連脊髄損傷、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上麻痺、レヴィー小体病、脳卒中、大脳梗塞、多発梗塞性痴呆、および老人性痴呆からなる群より選択される、方法。
（項目１７）
項目１３に記載の方法であって、前記ＦＴＹ７２０または前記誘導体は、１ｎｇ／ｋｇ／日〜１ｍｇ／ｋｇ／日の濃度で投与される、方法。
（項目１８）
項目１３に記載の方法であって、前記ＦＴＹ７２０または前記誘導体は、１μｇ／ｋｇ／日〜０．１ｍｇ／ｋｇ／日の濃度で投与される、方法。
（項目１９）
項目１３に記載の方法であって、前記ＦＴＹ７２０または前記誘導体は、５μｇ／ｋｇ〜約０．０７ｍｇ／ｋｇの濃度で投与される、方法。
（項目２０）
項目１３に記載の方法であって、前記ＦＴＹ７２０または前記誘導体は、０．３ｍｇ〜１０ｍｇの量で投与される、方法。
（項目２１）
項目１３に記載の方法であって、前記被験体は、哺乳動物である、方法。
（項目２２）
項目２１に記載の方法であって、前記被験体は、ヒトである、方法。
（項目２３）
項目２２に記載の方法であって、前記被験体は、成人である、方法。
（項目２４）
項目１３に記載の方法であって、前記被験体はさらに、１つ以上の増殖因子を投与される、方法。
（項目２５）
項目１３に記載の方法であって、前記被験体はさらに、抗うつ薬、抗不安処置の薬剤、抗精神病処置の薬剤、てんかん処置の薬剤、アルツハイマー処置の薬剤、パーキンソン処置の薬剤、ＭＡＯインヒビター、セロトニン取込み遮断薬、ノルアドレナリン取込み遮断薬、ドパミン取込み遮断薬、ドパミンアゴニスト、Ｌ−ドパ、精神安定薬、鎮静薬、およびリチウムからなる群より選択される１種以上の薬剤を投与される、方法。
（項目２６）
項目１３に記載の方法であって、前記組成物は、全身に投与される、方法。
（項目２７）
項目１３に記載の方法であって、前記組成物は、経口経路、皮下経路、腹腔内経路、筋内経路、脳室内経路、クモ膜下腔内経路、頭蓋内経路、口腔経路、粘膜経路、経鼻経路、および直腸経路からなる群より選択される経路により投与される、方法。
（項目２８）
項目１３に記載の方法であって、前記組成物は、経鼻噴霧剤または鼻用坐剤として処方される、方法。
（項目２９）
項目２８に記載の方法であって、前記組成物は、乾燥散剤吸入器または水溶液ベースの吸入器によって投与される、方法。
（項目３０）
項目１３に記載の方法であって、前記ＦＴＹ７２０またはその誘導体は、前記被験体の中枢神経系に投与される、方法。
（項目３１）
インビトロにおいて非胚性神経幹細胞の増殖を増大させるための方法であって、該方法は、該細胞と、該細胞の増殖を増大させるために十分な量のＦＴＹ７２０またはその誘導体を含む組成物とを接触させる工程を包含する、方法。
（項目３２）
項目３１に記載の方法であって、前記誘導体は、ＦＴＹ７２０Ｐである、方法。
（項目３３）
項目３１に記載の方法であって、前記ＦＴＹ７２０または前記誘導体は、０．００１ｎＭ〜０．０５ｎＭの濃度で前記細胞に加えられる、方法。
（項目３４）
項目３１に記載の方法であって、前記ＦＴＹ７２０または前記誘導体は、０．０２ｎＭ〜０．０４ｎＭの濃度で前記細胞に加えられる、方法。
（項目３５）
項目３１に記載の方法であって、前記細胞は、哺乳動物の細胞である、方法。
（項目３６）
項目３５に記載の方法であって、前記細胞は、ヒトの細胞である、方法。
（項目３７）
項目３６に記載の方法であって、前記細胞は、成人の細胞である、方法。
（項目３８）
項目３１に記載の方法であって、前記細胞はさらに、１つ以上の増殖因子と接触させられる、方法。
本発明の他の実施形態、目的、局面、特徴、および利点は、添付している明細書および特許請求の範囲より明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１Ａ】ＦＴＹ７２０は、インビトロにおいて懸濁培養物または接着性細胞として成長させたマウスＮＳＣを増殖させる。図１Ａは、ＡＴＰアッセイについての結果を示す。
【図１Ｂ】ＦＴＹ７２０は、インビトロにおいて懸濁培養物または接着性細胞として成長させたマウスＮＳＣを増殖させる。図１Ｂは、ＢｒｄＵ取り込みについての結果を示す。
【図２】ＡＴＰアッセイにより測定した、ＮＳＣのインビトロ増殖に対するＦＴＹ７２０濃度の効果。ＥＣ５０値は、０．０２ｎＭにおいて計算した（０．０４ｎＭにおいて最大）。
【図３Ａ】成体マウスの脳の矢状切片。図３Ａ：Ｓ１Ｐ１は、吻側細胞移動路に拡がるＬＶＷのＳＶＺにおいて発現される。
【図３Ｂ】成体マウスの脳の矢状切片。図３Ｂ：Ｓ１Ｐ５は、海馬の歯状回およびＣＡ１〜ＣＡ３、ならびに脈絡叢において発現される。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
（発明の詳細な説明）
（定義）
本開示の全体にわたって、用語「神経幹細胞」（ＮＳＣ）は、「神経前駆細胞」、「ニューロン前駆細胞」、「神経前駆体細胞」、および「ニューロン前駆体細胞」を含む（全てはＮＰＣとして本明細書で言及される）。これらの細胞は、非胚性（例えば、成体）の細胞であり、持続して細胞増殖を起こすその能力、それら自体の正確な複製物を再生する能力（自己再生）、多数の局所的細胞の子孫を産生する能力、および損傷または疾患に応答して新しい細胞を精巧に作り上げる能力により、同定され得る。
用語「ＮＰＣ」は、ニューロン細胞（例えば、ニューロン前駆体または成熟したニューロン）またはグリア細胞（例えば、グリア前駆体、成熟した星状細胞、または成熟した希突起膠細胞）のいずれかの子孫を産生し得る細胞を意味する。代表的には、上記細胞は、上記神経細胞系統の特徴である表現形マーカーの一部を発現する。上記細胞はまた、ある様式で分化または再プログラムされた場合を除き、インビトロにおいて単独で培養された場合、他の胚の胚葉の子孫を通常産生しない。
【００３７】
ＮＳＣを含む細胞集団は、神経組織（例えば、ヒト組織（例えば、非胚性（例えば、胎児、成人）の脳、神経細胞培養物、または神経球））から獲得され得る。例えば、上記ＮＳＣは、硬膜、末梢神経、または神経節により囲まれた組織に由来し得る。上記ＮＳＣは、哺乳動物の脳の側脳室壁に由来し得る。上記ＮＳＣは、代替的に、組織（例えば、膵臓、皮膚、筋肉、成体の骨髄、肝臓、および臍帯組織または臍帯血）起源の幹細胞に由来し得る。上記ＮＳＣは、上記方法の適用の後、無処置の細胞と比較して、特性（例えば、生存、増殖、または移動）の改善を示す。
【００３８】
本明細書で使用される場合、用語「神経球」とは、ＮＳＣからなる細胞の塊をいう。「ＮＳＣ活性」、「ＮＳＣの活性」という語句、および同様の表現法は、ＮＳＣの成長、増殖、分化、移動、または生存を意味する。
【００３９】
用語「処置」は、その用語の本発明に関する種々の文法的形態において、神経障害の有害な効果、障害の進行、障害の病原因子（例えば、細胞欠損、薬物、毒物、細菌またはウィルス）、損傷、外傷、または他の異常な状態を、予防、治療、改善（ｒｅｖｅｒｓｅ）、減弱、緩和、寛解、最小化、抑制、または停止することをいう。神経障害の症状としては、緊張、異常運動、異常行動、チック、多動、好戦的であること、反抗的であること、拒絶症、記憶障害、感覚障害、認知障害、幻覚、急性妄想、自分の面倒を自分でみる能力が乏しいこと、ならびに時々の離脱症および引きこもりが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の方法の一部が上記病原因子に対する反作用を含むため、当業者は、本発明化合物が上記病原因子の作用前または作用と同時に投与される局面（予防的な処置）、および本発明の化合物が上記病原因子の作用の後（かなり後も同様）に投与される局面において、それらは同等に効果的であると認識する。
【００４０】
特定の例によれば、ある薬剤の「治療的に有効な量」は、処置を必要とする患者の症状を改善するために十分な量、または疾患およびその合併症を少なくとも部分的に阻止するために十分な量であるように決定されるべきである。このような使用のために効果的である量は、上記疾患の重症度および上記患者の全身的な健康状態に依存する。単回投与または複数回投与は、上記患者によって必要とされる、または許容される投与量および投与回数に依存して要求され得る。本開示において、「障害」は、「疾患」と同様な意味を有するものとする。
【００４１】
本発明において、「標的」組織としては、脳室壁、脳室系の壁に近接する空間（ｖｏｌｕｍｅ）、梨状皮質、海馬白板を含む海馬構成体、線条、黒質、網膜、扁桃、マイネルト基底核、脊髄、視床、視床下部、中隔および大脳皮質が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４２】
本願全体を通して、用語「注射」は、当該分野において公知である全ての形態の注射、および少なくともより一般に記載される注射の方法（例えば、皮下注射、腹腔内注射、筋内注射、脳室内（例えば、側脳室内）注射、実質内注射、クモ膜下腔内注射、および頭蓋内注射）を包含する。注射以外の方法によって投与される場合は、全ての公知の手段が検討され、その手段としては、口腔経路、経鼻経路、肺経路、または直腸粘膜経路を通じた投与が挙げられる。
【００４３】
用語「単離された」または「実質的に精製された」は、本発明のある薬剤（例えば、ＦＴＹ７２０）に適用される場合は、上記薬剤が、自然状態で関連しているか、または合成の間における他の成分を本質的に含まないことを意味する。それは均質な状態であることが好ましいが、乾燥物または水溶液のいずれかの状態もあり得る。純度および均質性は、代表的には、分析化学技術（例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィ）を使用して決定される。調製物中に存在する主な化学種（ｓｐｅｃｉｅｓ）である薬剤は、実質的に精製される。
【００４４】
「薬学的組成物」とは、例えば、被験体（特にヒト被験体）における投与のために有用である組成物をいう。本発明の薬学的組成物は、その意図する投与経路と適合するように処方される。このような処方物は、当該分野において周知である。治療的に有効な量の上記ＦＴＹ７２０を含む処方物としては、例えば、錠剤、アンプル剤、カプセル剤、滅菌溶液、液体懸濁液、または凍結乾燥バージョンが挙げられ、そして必要に応じて本明細書中で詳細に記載されるような、安定剤または賦形剤を含む。凍結乾燥された組成物は、適切な希釈剤（例えば、注射用水、食塩水、０．３％グリシンなど）で、宿主体重について１日あたり約５μｇ／ｋｇ〜約０．０７ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、１ｎｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、または１μｇ／ｋｇ〜０．１ｍｇ／ｋｇ、もしくはそれより多い水準に、再構成される。
【００４５】
「経口」投与とは、口を介した摂取によるか、または胃腸系の任意の他の部分を介した処方物の送達（例えば、食道または坐剤を介した投与（ｓｕｐｐｏｓｉｔｏｒｙ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ））をいう。
【００４６】
「非経口」投与とは、胃腸管を介した経路以外による組成物（例えば、神経発生調節剤を含む組成物）の送達をいう。特定の局面において、非経口投与は、静脈内、皮下、筋内または髄内（すなわち、クモ膜下腔内）への注射もしくは注入によってなされ得る。
【００４７】
「局所的」投与とは、薬剤を、皮膚または粘膜の外面を通過させて基調組織に入るように、皮膚または粘膜の外面（鼻、腸および口の表面膜を含む）に薬学的組成物を適用させることをいう。口の粘膜への適用もまた、経口投与の一形態と考えられ得る。薬学的組成物の局所的投与は、結果として、上記粘膜および周囲の組織へのＦＴＹ７２０の標的化された分布をもたらし得る。上記薬学的組成物はまた、血流に入るために局所的に適用され得、そしてＦＴＹ７２０の全身分布という結果を導く。
【００４８】
本明細書で使用される場合、用語「ＦＴＹ７２０」には、ＦＴＹ７２０および本明細書中に詳細に記述されるようなＦＴＹ７２０誘導体が含まれるが、Ｓ１Ｐは除外される。ＦＴＹ７２０誘導体は、例えば、ＦＴＹ７２０のリン酸エステル代謝産物およびそれらの薬学的に受容可能な塩、ＦＴＹ７２０ホスフェート生物学的同配体（ｂｉｏｉｓｏｓｔｅｒｅ）、ならびにインビトロおよびインビボにおいて、細胞の境界および血液脳関門を越えてＮＳＣにアクセスする移入をさらに促進するように修飾されたＦＴＹ７２０を包含する。非修飾ＦＴＹ７２０またはＦＴＹ７２０Ｐ（以下を参照のこと）もまた、血液脳関門を越えるために使用され得る。
【００４９】
（本発明のＦＴＹ７２０化合物）
本発明は、ＦＴＹ７２０（２−アミノ−２−［２−（４−オクチルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール）およびその誘導体を利用する組成物および方法を包含する。例えば、表１；米国特許第６，００４，５６５号、同６，４７６，００４号、ＷＯ  ９９／３６０６５、およびＷＯ  ９４／０８９４３を参照のこと。これらは本明細書中に参考としてその全体が援用される。ＦＴＹ７２０誘導体は、上記ＦＴＹ７２０分子の任意の化学修飾物を包含するが（例えば、表２を参照のこと）、ただし、上記誘導体はＳ１Ｐではない。誘導体の限定されない例としては、例えば、ＦＴＹ７２０のリン酸エステル代謝産物、ＦＴＹ７２０の薬学的に受容可能な塩、ＦＴＹ７２０ホスフェート生物学的同配体、ならびに上記化合物の細胞膜および血液脳関門の通過が促進されるようにリン酸基が修飾された化合物が挙げられる。非修飾ＦＴＹ７２０およびＦＴＹ７２０Ｐ（以下を参照のこと）はまた、上記血液脳関門を通過させるために使用され得る。必要に応じて、ＦＴＹ７２０は、投与後のＦＴＹ７２０の半減期を向上させるためにポリエチレングリコール化（ｐｅｇｙｌａｔｅ）され得る。タンパク質および試薬をポリエチレングリコール化する方法は、当業者に周知であり、そして、例えば、米国特許第５，１６６，３２２号、同第５，７６６，８９７号、同第６，４２０，３３９号および同第６，５５２，１７０号に記載される。
【００５０】
【表１】
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表１：ＦＴＹ７２０構造体（ＦＴＹ７２０、ＦＴＹ７２０Ｐ、Ｒ−ＡＡＬ、およびＲ−ＡＦＤを含む）（Ｂｒｉｎｋｍａｎｎら、２００２）。
【００５１】
本発明の方法に従って、ＦＴＹ７２０は、安定剤（例えば、シクロデキストリン（例えば、天然のシクロデキストリン、分枝したシクロデキストリン、アルキル−シクロデキストリンおよびヒドロキシアルキル−シクロデキストリン；例えば、欧州特許第１０５０３０１号を参照のこと））と組み合わせて使用され得る。ＦＴＹ７２０はまた、糖（例えば、単糖類、二糖類、および糖アルコール（Ｄ−マンニトール、グルコース、Ｄ−キシリトール、Ｄ−マルトース、Ｄ−ソルビトール、乳糖、果糖およびショ糖））とともに使用され得、この糖はＦＴＹ７２０の投与に時折関連する副作用を減少させ得る。加えて、ＦＴＹ７２０は、１種以上の増殖因子（例えば、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＧＦ−α、ＦＧＦ−１、ＦＧＦ−２、ＮＧＦ、ＰＡＣＡＰなど）、または１種以上の抗うつ剤、抗不安処置の薬剤、抗精神病処置の薬剤、てんかん処置の薬剤、アルツハイマー処置の薬剤、パーキンソン処置の薬剤、ドパミンレセプターアゴニスト、精神安定薬、鎮静薬、リチウム、もしくは本明細書中に詳細に記載される他の治療剤と組み合わせて使用され得る。
【００５２】
ＦＴＹ７２０は現在、免疫抑制剤としてＮｏｖａｒｔｉｓにより開発中である。これらの研究において、ＦＴＹ７２０は、肝臓移植後および腎臓移植後の同種移植片拒絶を効率よく防止することが示されており、かつシクロスポリンＡとともに投与した場合は相乗効果を示す（Ｂｒｉｎｋｍａｎｎら、２００１において総説される）。あるＴ細胞エピトープに対する抗体を除外して、移植において使用される他の免疫抑制剤はすべて、Ｔ細胞の攻撃的応答を減少させる有毒な物質である。ＦＴＹ７２０は新しい型の免疫抑制剤であり、循環から二次リンパ器官へとリンパ球を再分布させることにより作用する（Ｃｈｉｂａ，Ｋ．ら、１９９９）。
【００５３】
この機序により、ＦＴＹ７２０は、自己免疫を含む種々の疾患（例えば、以下についての種々の動物モデル：移植片対宿主病（例えば、Ｍａｓｕｂｕｃｈｉ，Ｙ．ら、１９９６）、Ｉ型糖尿病（Ｍａｋｉ，Ｔ．ら、２００２；Ｙａｎｇ，Ｚ．、２００３）、慢性関節リウマチ（Ｍａｔｓｕｕｒａ，Ｍ．、Ｉｍａｙｏｓｈｉ，Ｔ．  ＆  Ｏｋｕｍｏｔｏ，Ｔ．、２０００；Ｍａｔｓｕｕｒａ，Ｍ．、Ｉｍａｙｏｓｈｉ，Ｔ．、Ｃｈｉｂａ，Ｋ．  ＆  Ｏｋｕｍｏｔｏ，Ｔ．、２０００）および多発性硬化症（ＭＳ）（Ｗｅｂｂ，Ｍ．ら、２００４；Ｂｒｉｎｋｍａｎｎら、２００２；Ｆｕｊｉｎｏら、２００３））の症状を、首尾よく緩和し得る。糖尿病に対しては、Ｙａｎｇら（２００３）は、ＦＴＹ７２０は、非肥満性糖尿病マウスにおける自己免疫性糖尿病を防ぐことを示した。循環するリンパ球の数は、ＦＴＹ７２０によって有意に減少した。加えて、単核細胞の島細胞の中への浸潤（Ｉ型糖尿病の特徴）は、急に減少した。ＦＴＹ７２０が種々の細胞株においてアポトーシスを誘導することは公知であるため、ＦＴＹ７２０はまた、癌の処置のためにも開発されている。最近、ＦＴＹ７２０がヒト肝癌細胞株におけるアポトーシスの強力な誘導物質であることが報告されており、これは恐らく、Ａｋｔ経路の下方制御を介している（Ｌｅｅら、２００４）。
【００５４】
ＦＴＹ７２０は、免疫抑制剤としての使用に関して第ＩＩＩ相研究にあり、かつＭＳの免疫学的ベースの処置に関して第ＩＩ相研究にある。その両親媒性特性に起因して、ＦＴＹ７２０は、優れた経口バイオアベイラビリティー（ラットにおいて８０％、イヌにおいて６０％、およびサルにおいて４０％）を示す。ＦＴＹ７２０は、主にＣＹＰ４Ｆ３によって、対応するカルボン酸へと代謝されることが示されている。０．１ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇの単回経口投与量後のラットにおけるＴ１／２は、それぞれ、１８．１時間および２１．６時間であった。０．３ｍｇ／ｋｇ／日でのＦＴＹ７２０の単回経口投与後の薬物動態的研究は、３６＋／−１２時間のＴ１／２を示した。腎臓移植患者の第Ｉ相研究において、０．２５ｍｇ〜３ｍｇの経口投与量後９６時間の間の、ＦＴＹ７２０の全血レベルの測定は、ＦＴＹ７２０が上記投与量に比例したＣｍａｘおよびＡＵＣで緩徐に吸収される結果を示し、線形的な薬物動態を示した。
【００５５】
このようにして、ＦＴＹ７２０は、活性な免疫抑制剤および抗癌／抗増殖剤として確立された。したがって、ＦＴＹ７２０は、薬学的処方物および実験用処方物のための有用な化合物である。ＦＴＹ７２０は、免疫抑制のために経口的に投与された場合に、治療的に効果的であってかつよく耐えられることが示されている。唯一観察された副作用は、軽度かつ一過性の徐脈であった。その作用機序によって予想された通り、ＦＴＹ７２０はまた、末梢のリンパ球数の減少に関連している（例えば、Ｔｅｄｅｓｃｏ−Ｓｉｌｖａ  Ｈら、２００４を参照のこと）。さらに、ＦＴＹ７２０の幅広い範囲の投与量は、本明細書中に記載される処置方法のために、安全に使用され得る。ラットモデルにおいて、ＬＤ５０は、３００ｍｇ／ｋｇ〜６００ｍｇ／ｋｇ程度に高いと計算された（ＩＤＤＢ；ｗｏｒｌｄ  ｗｉｄｅ  ｗｅｂ．ｉｄｄｂ．ｏｒｇ／において入手可能）。イヌモデルにおいて、２００ｍｇ／ｋｇの投薬量未満では死亡例は観察されなかった（ＩＤＤＢ）。霊長類は、３ｍｇ／ｋｇで処置され、毒性は観察されなかった（ＩＤＤＢ）。ＰＩ腎臓移植患者において、０．２５ｍｇ〜３．５ｍｇ（単回投与量）の薬物の投与は、深刻な有害事象を生じなかった。したがって、本発明の特定の局面に従って、ヒト被験体の処置のためのＦＴＹ７２０投与量は、約５μｇ／ｋｇ〜約０．０７ｍｇ／ｋｇの範囲にわたり得る。加えて、非修飾ＦＴＹ７２０およびＦＴＹ７２０Ｐは、上記血液脳関門を通過し得る。
【００５６】
驚くべきことに、本発明の実験は、公知の免疫抑制剤および抗癌剤ＦＴＹ７２０がＮＳＣ／ＮＰＣの活性を刺激するように作用し、そしてそれゆえ、インビボにおいて神経発生を刺激するための、およびインビトロにおいてＮＳＣを培養するために使用され得ることを示す。
【００５７】
（ＦＴＹ７２０およびＳ１Ｐレセプター）
ＦＴＹ７２０と内在性のリゾリン脂質スフィンゴシンとはいくつかの構造的特徴を共有し、このような構造的特徴としては、親油性テール、２−アミノ基、およびリン酸ヘッド基（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｈｅａｄ  ｇｒｏｕｐ）が挙げられる（表２）。スフィンゴシンおよびＦＴＹ７２０は、インビボにおいてリン酸化された結果、それぞれ、スフィンゴシン−１−リン酸（Ｓ１Ｐ）およびＦＴＹ７２０Ｐとなる。Ｓ１ＰおよびＦＴＹ７２０Ｐの両方は、一群のＧタンパク質共役レセプター（Ｓ１Ｐ１〜Ｓ１Ｐ５と命名されているＳ１Ｐレセプター（Ｓ１ＰＲ））に対するリガンドである。これらは、以前はＥＤＧレセプター（ＥＤＧ１＝Ｓ１Ｐ１；ＥＤＧ３＝Ｓ１Ｐ３；ＥＤＧ５＝Ｓ１Ｐ２；ＥＤＧ６＝Ｓ１Ｐ４；ＥＤＧ８＝Ｓ１Ｐ５）と呼ばれていた。
【００５８】
【表２】
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表２：Ｓ１Ｐ（上）およびＦＴＹ７２０Ｐ（下）の構造。
【００５９】
本明細書で示されるように、神経形成領域または関連する細胞／組織における、すべてのＳ１ＰレセプターのｍＲＮＡ発現、特にＳ１Ｐ１およびＳ１Ｐ５のｍＲＮＡ発現は、高度かつ神経形成領域（側脳室壁（ＬＶＷ）または海馬）選択的に発現している。加えて、Ｓ１Ｐレセプターは、成体マウスの脳の側脳室壁（ＬＶＷ）およびインビトロにおいて培養した成体マウスＮＳＣにおいて、発現している。さらに、Ｓ１Ｐ１は、ＬＶＷの脳室下ゾーン（ＳＶＺ）において特異的に発現しており、そしてＳ１ＰＲ５は、海馬の歯状回において発現している。
【００６０】
ＦＴＹ７２０およびそのリン酸化代謝産物は、脳において発現する少なくとも２種のＳ１Ｐレセプターの高親和性リガンドとして特徴付けられている（Ｍａｎｄａｌａら、２００２）。ＦＴＹ７２０に関して報告されている最も低いＥＣ５０値は、Ｓ１Ｐ１およびＳ１Ｐ５に対するＥＣ５０値である。ＦＴＹ７２０のリン酸化形態であるＦＴＹ７２０Ｐに関しては、ピコモルの親和性が報告されている（表３を参照のこと）。しかしながら、ＦＴＹ７２０は、Ｓ１Ｐと比較すると、異なりかつ予想外の結合および活性を示す。ＦＴＹ７２０Ｐは、Ｓ１Ｐと比較すると、Ｓ１Ｐ１レセプターに対してより高い親和性で結合するが、Ｓ１Ｐ３レセプターに対してより低い親和性で結合する（表３）。ＦＴＹ７２０Ｐが、Ｓ１Ｐ２を除いたすべてのＳ１ＰＲに結合する（表３；Ｆｕｊｉｎｏ，Ｍ．ら、２００３において総説される）一方で、Ｓ１ＰはＳ１Ｐ４を除いたすべてのＳ１ＰＲに結合する。加えて、Ｓ１Ｐが、１００ｎＭ〜３μＭの濃度で神経前駆細胞において利用されている（Ｈａｒａｄａら、２００１）一方で、本発明は、ＦＴＹ７２０は０．０２ｎＭ〜０．０４ｎＭのＥＣ５０値で神経幹細胞において効果的であると立証する（図２）。したがって、ＦＴＹ７２０は、標的ＮＳＣにおいて、０．００１ｎＭ〜０．０５ｎＭの濃度で活性である。これらのデータと、本明細書以下で開示するインサイチュハイブリダイゼーションの結果とをひとまとめにして考えると、ＦＴＹ７２０がＳ１Ｐ１および／またはＳ１Ｐ５を介して増殖を仲介することが示唆される。Ｓ１ＰおよびＦＴＹ７２０の結合特徴における相違は、ＦＴＹ７２０に関連した有意に低い毒性および副作用事象を説明し得る。
【００６１】
【表３】
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表３：Ｓ１Ｐレセプターに関する結合データ。＊［γ−３５Ｓ］ＧＴＰγＳ結合アッセイ（ｎＭ）。＊＊示されたＳ１Ｐレセプターを発現する安定にトランスフェクトされたＣＨＯ細胞の膜に対するＳ１３３Ｐ結合の競合（ｎＭ）。＃Ｍａｎｄａｌａら、２００２；＃＃Ｂｒｉｎｋｍａｎｎら、２００２；＃＃＃Ｎｏｖａｒｔｉｓデータ。
【００６２】
（Ｓ１ＰＲのクローニングおよび発現）
すべてのＳ１ＰＲは、単一のエキソンによりコードされている。Ｓ１Ｐ１は、クローニングされた最初のＳ１ＰＲであった。それは、もともとは内皮細胞の分化の際に誘導される転写産物として発見された。このことが、以前の名前であるＥＤＧ（内皮分化遺伝子）のもととなった。ヒトおよびマウス両方のＳ１Ｐ１は３８２アミノ酸を含み、約４３ｋＤａの見かけ上の分子量を有する。Ｓ１Ｐ２（ヒトでは３５３アミノ酸；マウスでは３５２アミノ酸）は、後にラット脳およびラット脈管平滑筋細胞より単離され、Ｓ１Ｐ３は、ヒトゲノムライブラリーより単離された。Ｓ１Ｐ４は、インビトロにおいて分化した、ヒト樹状細胞およびマウス樹状細胞よりクローニングされた。Ｓ１Ｐ５は、ＰＣ１２細胞ｃＤＮＡライブラリーよりクローニングされた、ｎｒｇ−１と呼ばれる遺伝子と対応することが示された。最初にＳ１ＰＲが唯一のＳ１ＰＲでなくなった（ｄｅｏｒｐｈａｎｉｚｅ）際、Ｓ１Ｐ１はＳ１Ｐによって活性化されることが発見された。配列分析は、上記Ｓ１ＰＲがカンナビノイドレセプターと約２０％のアミノ酸相同性、およびリゾホスファチジン酸レセプター（ＬＰＡ１〜３、以前はＥＤＧ２、４、７と呼ばれていた）と約３０％の同一性を示すことを明らかにした。
【００６３】
マウスＳ１Ｐ１は、主に脳、心臓、肺、および脾臓において発現しているが、より少ない程度で腎臓、胸腺、および筋肉においても発現している。Ｓ１Ｐ１は、ＣＮＳにおいてＳ１Ｐ５とともに顕著な発現を示す。Ｓ１Ｐ５は、脳において発現することが見い出された。Ｓ１Ｐ２およびＳ１Ｐ３は密接に関係し（９２％の配列同一性）、かつ同様な組織分布を共有している。これらのレセプターは、心臓および肺において発現するが、腎臓、肝臓、胸腺、脾臓、精巣および脳でも発現している。Ｓ１Ｐ４はもっぱらリンパ組織において発現し（Ｇｒａｌｅｒ，ら、２００２）、Ｓ１Ｐ５はもっぱら脳において発現する（Ｇｌｉｃｋｍａｎら、１９９９）。
【００６４】
Ｃｈａｅらは最近、Ｓ１Ｐ１の発現をより詳細に検出するために、上記Ｓ１Ｐ１遺伝子座の中にβ−ガラクトシダーゼをノックインさせたβ−ガラクトシダーゼレポーター遺伝子発現系を使用した。成体マウスの脳において、Ｓ１Ｐ１は、プルキンエ細胞、ニューロン細胞体、ならびに星状細胞によって発現されることが見い出された（Ｃｈａｅら、２００４）。Ｂｅｅｒらによる研究においては、神経系におけるＳ１ＰＲ  ｍＲＮＡの分布が調査された。彼らは、Ｓ１Ｐ３がニューロン細胞に限定されることを示した。先の研究に合致し、Ｓ１Ｐ４  ｍＲＮＡはＣＮＳで全く検出されなかった（Ｂｅｅｒら、２０００）。上記マウス脳におけるＳ１Ｐ３の発現は、第４脳室脈絡叢、間脳の散在細胞に制限することが見い出された（ＭｃＧｉｆｆｅｒｔら、２００２）。ノザンブロット分析およびＥＳＴ発現プロファイリングにより、ラットＳ１Ｐ５発現は、下位脳領域（中脳、脳橋、髄質および脊髄を含む）において特に多量であることが立証された（Ｇｌｉｃｋｍａｎら、１９９９）。ヒトＳ１Ｐ５発現もまた、脳、肺、脾臓、および末梢血白血球に局在している（Ｉｍら、２００１）。加えて、Ｓ１Ｐ５は、脳梁、海馬（海馬采）および白質に局在している（Ｉｍら、２０００）。
【００６５】
ＦＴＹ７２０は、リンパ球および他の細胞株において、アポトーシスを誘導すると報告されている。これは、細胞内のＣａ２＋レベルの急激な上昇に関連し、そしてＰＴＸ非依存性様式において、ホスホリパーゼＣに依存している（Ｓｈｉｎｏｍｉｙａら、１９９７）。この機序は、上記Ｓ１Ｐ１レセプターを迂回し得る。Ｓ１ＰＲおよびそれらの推定される役割に関する付加的な情報は、一般に入手可能である（総説については、Ｔｏｍａｎら、２００２を参照のこと）。
【００６６】
（本発明により処置される疾患および障害）
本発明は、神経系障害（ただし、その障害は多発性硬化症（ＭＳ）ではない）を患う被験体に、治療的に有効な量のＦＴＹ７２０を投与することによって、この神経系障害の１つ以上の症状を緩和する方法を包含する。
【００６７】
ＭＳが病状およびこの病状の進行における基本的な相違（例えば、ｗｏｒｌｄ  ｗｉｄｅ  ｗｅｂ．ｃｎｓｏｎｌｉｎｅ．ｏｒｇ／において入手可能な、Ｃ．Ｐｌａｎｋ、Ｔｈｅ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃ  Ｓｔｕｄｙを参照のこと）によって、他の運動ニューロン疾患（例えば、筋萎縮性側索硬化症、すなわちＡＬＳ）と区別され得ることは、注目されるべきことである。ＡＬＳの病状における主な特徴は、脊髄の前角および脳幹の運動核における運動神経細胞の減少である。比較すると、ＭＳは主にミエリンの疾患であり、神経細胞の疾患ではない。上記ミエリンは、軸索、すなわち神経細胞の長い突起を取り囲む。ミエリンは神経系の全体にわたって生じるため、病変は複数の部位に起こり得、そして代表的には複数の部位におこる。しかしながら、上記疾患は、末梢神経のミエリンではなく、中枢のミエリンにのみ発症する。中枢神経組織の他の要素（実際の神経細胞、それらの突起および軸円柱部、ならびに支持組織を含む）は、ＭＳにおいて比較的影響されない。上記軸索を覆うミエリンの破壊は、結果として上記軸索自体の有意な逆行性変性を招かない。すなわち、驚くべきことに神経細胞はＭＳにおける破壊の有意な証拠を示さない。ＭＳのもう１つの著しい特徴は、ＦＴＹ７２０での処置によって標的とされている、自己免疫である。
【００６８】
本発明によれば、神経系障害の限定されない例としては、例えば、少なくとも以下が挙げられる：神経変性障害、神経幹細胞障害、神経前駆体障害、虚血性の障害、神経外傷および神経損傷、情動障害、神経精神障害、網膜の変性疾患、網膜損傷および網膜外傷、ならびに学習障害および記憶障害。精神分裂病および他の精神病、脳回欠損症候群、うつ病、双極性うつ病、双極性障害、不安症候群、不安障害、恐怖症、ストレスおよび関連した症候群、認識機能障害、攻撃性、薬物乱用およびアルコール乱用、強迫性行動症候群、季節性気分障害、境界性人格障害、脳性麻痺もまた、挙げられる。本発明のさらなる局面において、神経系の障害としては、少なくとも、痴呆、てんかん、てんかんに関連する損傷、および側頭葉てんかんが挙げられる。脊髄損傷、脳損傷、脳外科手術、脳損傷に関連する外傷、脊髄損傷に関連した外傷、癌処置に関連した脳損傷、癌処置に関連した脊髄損傷、感染症に関連した脳損傷、炎症に関連した脳損傷、感染症に関連した脊髄損傷、炎症に関連した脊髄損傷、環境毒に関連した脳損傷、環境毒に関連した脊髄損傷、自閉症、注意欠陥障害、ナルコレプシー、睡眠障害、および認識障害もまた、挙げられる。
【００６９】
本発明の特定の局面において、神経系の障害としては、少なくとも、パーキンソン病（振せん麻痺）（原発性パーキンソン病、続発性振せん麻痺、および脳炎後振せん麻痺を含む）；薬物性運動障害（振せん麻痺、急性失調症、遅発性ジスキネジー、および神経弛緩薬性悪性症候群を含む）；ハンティングトン病（ハンティングトン舞踏病；慢性進行性舞踏病；遺伝性舞踏病）；せん妄（急性錯乱状態）；痴呆；アルツハイマー病；非アルツハイマー痴呆（レヴィー小体痴呆、血管性痴呆、ビンスヴァンガー痴呆（皮質下性動脈硬化性脳障害）、ボクサー痴呆（ｄｅｍｅｎｔｉａ  ｐｕｇｉｌｉｓｔｉｃａ）、正常圧水頭症、全身不全麻痺、前頭側頭骨性痴呆（ｆｒｏｎｔｏｔｅｍｐｏｒａｌ  ｄｅｍｅｎｔｉａ）、多発脳梗塞性痴呆、およびＡＩＤＳ痴呆を含む）；加齢性記憶障害（ＡＡＭＩ）；健忘症（例えば、逆行性健忘症、前向性健忘症、全健忘症、モダリティー特異的健忘症、一過性健忘症、安定健忘症、および進行性健忘症、ならびに外傷性健忘症、そしてコルサコフ病）が挙げられる。
【００７０】
他の特定の障害としては、特発性起立性低血圧、シャイ−ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺（スティール−リチャードソン−オルスゼフスキー症候群）；小脳の構造損傷（例えば、梗塞、出血、または腫瘍に関連した構造損傷）；脊髄小脳変性（フリートライヒ運動失調に関連する脊髄小脳変性、無β−リポ蛋白血症（例えば、バッセン−コルンツヴァイク症候群、ビタミンＥ欠乏症）に関連する脊髄小脳変性、レフサム病（フィタン酸蓄積症）に関連する脊髄小脳変性、小脳性運動失調に関連する脊髄小脳変性、多系統萎縮症（オリーブ橋小脳萎縮）に関連する脊髄小脳変性、毛細血管拡張性運動失調に関連する脊髄小脳変性、およびミトコンドリア多系統障害（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｍｕｌｔｉｓｙｓｔｅｍ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）に関連する脊髄小脳変性）；急性播種性脳脊髄炎（感染後脳脊髄炎）；副腎脳白質ジストロフィおよび副腎脊髄神経障害；レーバー遺伝性視神経萎縮；ＨＴＬＶ関連ミエロパシー；運動ニューロン障害（例えば、筋萎縮性側索硬化症、進行性球麻痺、進行性筋萎縮、原発性側索硬化症および進行性偽球麻痺、ならびに脊髄性筋萎縮症（例えば、Ｉ型脊髄性筋萎縮症（ヴェルドニッヒ−ホフマン病）、ＩＩ型（中間）脊髄性筋萎縮症、ＩＩＩ型脊髄性筋萎縮症（ヴォールファルト−クーゲルベルク−ヴェランデル病）、およびＩＶ型脊髄性筋萎縮症）が挙げられる。
【００７１】
さらなる特定の障害としては、叢障害（例えば、神経叢障害および急性上腕神経叢炎（神経痛性筋萎縮症））；末梢性神経障害（例えば、単神経障害、多発性単神経障害、および多発性神経障害（尺骨神経麻痺、手根管症候群、腓骨神経麻痺、橈骨神経麻痺、ギヤン−バレー症候群、慢性再発性多発性神経障害、遺伝性運動神経障害および遺伝性感覚神経障害（例えば、Ｉ型およびＩＩ型（シャルコー−マリー−ツース病、腓骨筋萎縮症）ならびにＩＩＩ型（肥厚性間質性ニューロパシー、ドゥジュリーヌ−ソッタ病））を含む））；神経筋伝達の障害（例えば、重症筋無力症）；神経眼科学的障害（例えば、ホルナー症候群、核間性眼筋麻痺、注視麻痺、およびパリノー症候群）；脳神経麻痺、三叉神経痛（疼痛性チック）；ベル麻痺；および舌咽神経痛；放射能に誘導される神経系損傷；化学療法に誘導される神経障害（例えば、脳障害）；タキソール神経障害；ビンクリスチン神経障害；糖尿病性神経障害；自律性神経障害；多発性神経障害；、ならびに単神経障害；そして虚血性症候群（例えば、一過性虚血性発作、鎖骨下動脈盗血症候群、ドロップアタック、虚血性脳卒中、脊髄虚血、出血性脳卒中、および脳梗塞）が挙げられる。
【００７２】
また、同時係属中の米国出願第０９／９９８，８６１号、同第１０／２４６，０９１号、同第１０／２９１，２９０号、同１０／２９１，１７１号、および同１０／４２９，０６２号（これらは本明細書中に参考として援用される）において開示される神経系障害も含まれる。
【００７３】
（本発明の薬学的組成物）
本発明は、ＦＴＹ７２０を含む組成物を神経系障害を患う被験体に投与してＮＳＣ活性を刺激し、それによって、神経系における損傷を受けたかまたは失われたニューロンを置換する方法を包含する。このような方法に従って、ＦＴＹ７２０は、インビボにおいてＮＳＣまたはＮＰＣ活性を調節するために、適切な投与経路を通じて適切な処方物で提供される。
【００７４】
１つの局面において、本発明は、所望の神経表現型を得るために、ＦＴＹ７２０組成物を投与して上衣細胞および脳室下ゾーンの神経発生（すなわち、細胞の成長、増殖、移動、生存および／または分化）を促進することによって、被験体における神経変性疾患の１つ以上の症状を処置するための再生方法を包含する。例としては、ＦＴＹ７２０は、１つ以上の部位（例えば、細胞が損傷を受けるかもしくは失われた領域または損傷を受けていない領域）において、神経発生を増大させるために使用され得る。上衣幹細胞のインビボにおける刺激は、適切な処方物で上記細胞に局所的にＦＴＹ７２０を投与することによって達成される。神経発生の増大によって、損傷を受けるかまたは失われたニューロンは、疾患状態にある脳機能を増強するために置換され得る。
【００７５】
特定の局面において、本発明は、ＦＴＹ７２０組成物を哺乳動物に投与する方法を包含する。用語「哺乳動物」とは、哺乳類に分類される任意の哺乳動物をいい、哺乳動物としては、ヒト、ウシ、ウマ、イヌ、ヒツジ、ネコ、ウサギ、マウス、およびラットが挙げられる。好ましい局面において、上記哺乳動物はヒトである。
【００７６】
本発明によって含まれるものは、神経系障害の処置のために有用である薬学的組成物である。例えば、上記組成物はＦＴＹ７２０化合物を含み、上記組成物は、単独で、または１種以上のさらなる薬剤の全身的もしくは局所的な共投与（ｃｏ−ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）との組み合わせで、投与され得る。このような薬剤としては、増殖因子、保存剤、脳室壁透過性増大因子、幹細胞分裂促進剤、生存因子、グリア細胞系抑止剤（ｇｌｉａｌ  ｌｉｎｅａｇｅ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ）、抗アポトーシス剤、抗ストレス剤、神経保護剤（ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）、および抗発熱剤が挙げられる。上記薬学的組成物は、細胞が損傷を受けたかまたは失われた部位を標的とし、成長、増殖、生存、移動させるかまたは所望の神経表現型に分化させるために、細胞（例えば、上衣細胞および脳室下ゾーン細胞）を刺激することによって、優先的に神経系疾患を処置する。
【００７７】
神経系障害を患う被験体を処置するための方法もまた、提供される。この方法は、ＦＴＹ７２０を含む効果的な量の薬学的組成物を、上記被験体に
（１）単独で、０．００１ｎｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の投与量範囲で、好ましくは０．０１ｎｇ／ｋｇ／日〜５ｍｇ／ｋｇ／日の投与量範囲で、好ましくは０．１ｎｇ／ｋｇ／日〜１ｍｇ／ｋｇ／日の投与量範囲で、好ましくは１００ｎｇ／ｋｇ／日〜１ｍｇ／ｋｇ／日の投与量範囲で、もっとも好ましくは１ｎｇ／ｋｇ／日〜１ｍｇ／ｋｇ／日または１μｇ／ｋｇ／日〜０．１ｍｇ／ｋｇ／日で、
（２）脳室壁透過性増大因子と組み合わせて、または
（３）局所性または全身性の共投与薬剤と組み合わせて
投与する工程を包含する。
【００７８】
投与経路の例としては、経口経路、皮下経路、腹腔内経路、筋内経路、脳室内経路（例えば、脳室内）、実質内経路、クモ膜下腔内経路、頭蓋内経路、口腔内経路、粘膜経路、経鼻経路、および直腸経路が挙げられる。非経口調製物は、アンプル、使い捨ての注射器もしくはガラス製またはプラスチック製の複数回投与量バイアルにより、送達のために処方され得る。加えて、本発明の薬学的組成物および神経発生調節剤は、点眼剤、眼軟膏剤、または点鼻剤として送達され得る。本発明の組成物が点眼剤または点鼻剤の形態で使用される場合、用いられる溶媒としては、滅菌蒸留水または、特に注入用の蒸留水が挙げられる。その活性化合物の濃度は、通常は０．０１ｗ／ｖ％〜２．０ｗ／ｖ％の範囲に及び、そして使用の目的に依存して増加または減少され得る。上記点眼剤または上記点鼻剤は、種々の添加剤（例えば、緩衝剤、等張剤、可溶化剤、保存剤、増粘剤、キレート剤、ｐＨ調整剤、または芳香剤）をさらに含み得る。
【００７９】
それら点眼剤および点鼻剤のための、上記保存剤としては、例えば、四級アンモニウム塩（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウムまたは塩化セチルピリジニウム）、パラヒドロキシ安息香酸エステル（例えば、パラヒドロキシ安息香酸メチル、パラヒドロキシ安息香酸エチル、パラヒドロキシ安息香酸プロピルまたはパラヒドロキシ安息香酸ブチル）、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、ソルビン酸またはそれらの塩、チメロサール、クロロブタノール、デヒドロ酢酸ナトリウム、メチルパラベンもしくはプロピルパラベンが挙げられ得る。上記増粘剤としては、例えば、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピル−メチルセルロース、もしくはカルボキシメチルセルロースまたはそれらの塩が挙げられ得る。上記キレート剤としては、エデト酸二ナトリウムまたはクエン酸などが挙げられ得る。上記ｐＨ調整剤としては、塩酸、クエン酸、リン酸、酢酸、酒石酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウムまたは炭酸水素ナトリウムなどが挙げられ得る。上記芳香剤としては、１−メントール、ボルネオール、樟脳（例えば、ＤＬ−樟脳）、ユーカリ油などが挙げられ得る。上記点眼剤および上記点鼻剤は、代表的には、約ｐＨ４〜約ｐＨ８．５に調整され得る。
【００８０】
加えて、本発明の薬学的組成物および神経発生調節剤は、鼻投与または肺投与により送達され得る。エーロゾル化された治療剤の呼吸器送達は、数多くの参考文献において記載される（例えば、Ｇａｎｓｓｌｅｎ  １９２５；Ｌａｕｂｅら  １９９３；Ｅｌｌｉｏｔｔら  １９８７；Ｗｉｇｌｅｙら  １９７１；Ｃｏｌｔｈｏｒｐｅら  １９９２；Ｇｏｖｉｎｄａ  １９５９；Ｈａｓｔｉｎｇｓら  １９９２；Ｎａｇａｎｏら  １９８５；Ｓａｋｒ  １９９２；およびＹｏｓｈｉｄａら  １９８７を参照のこと）。乾燥粉末治療剤の肺送達は、米国特許第５，２５４，３３０号において記載される。計量式吸入器は、例えば、ＬｅｅおよびＳｃｉａｒａ  １９７６において記載される。組換えインスリンの気管支内投与は、Ｓｃｈｌｕｔｉｔｅｒら  １９８４；およびＫｏｈｌｅｒら  １９８７において簡単に記載される。種々の薬剤の鼻腔内送達および呼吸器送達は、米国特許第５，０１１，６７８号およびＮａｇａｉら  １９８４において記載される。
【００８１】
非経口適用、皮内適用、または皮下適用のために使用される溶液または懸濁液は、以下の成分を含み得る：滅菌希釈剤（例えば、注射用水）、食塩水、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒；抗細菌剤（例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン）；抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウム）；キレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸）；緩衝剤（例えば、酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩）；および張度の調整のための薬剤（例えば、塩化ナトリウムまたはブドウ糖）。そのｐＨは、酸または塩基（例えば、塩酸または水酸化ナトリウム）で調整され得る。上記非経口調製物は、アンプル、使い捨ての注射器またはガラス製もしくはプラスチック製の複数回投与量バイアルの中に封入され得る。
【００８２】
注入可能用途のために適切な薬学的組成物としては、滅菌水溶液（水溶性である場合）または滅菌分散剤、および滅菌注入可能水溶液または滅菌注入可能分散剤の即時調製のための滅菌散剤が挙げられる。静脈内投与については、適切なキャリアとしては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、ＮＪ）またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。すべての場合において、上記組成物は無菌でなくてはならず、そして容易に注入できる（ｅａｓｙ  ｓｙｒｉｎｇａｂｉｌｉｔｙ  ｅｘｉｓｔ）程度に流動性であるべきである。上記組成物は製造条件下および貯蔵条件下で安定でなくてはならず、そして微生物（例えば、細菌および真菌）の混入作用を防止して保存しなくてはならない。
【００８３】
上記キャリアは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの適切な混合物を含む、溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、被覆物（例えば、レシチン）の使用、分散剤の場合において要求される粒子サイズの維持、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。微生物の混入作用の予防は、種々の抗細菌剤および抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなど）の使用によって達成され得る。多くの場合において、１種以上の等張剤（例えば、糖、多価アルコール（例えば、マンニトール（ｍａｎｉｔｏｌ）、ソルビトール）、および塩化ナトリウム）を上記組成物中に含むことが好ましい。上記注入可能組成物の長期吸収は、吸収を遅延させる薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウム、およびゼラチン）を上記組成物中に含ませることにより、もたらされ得る。
【００８４】
滅菌注入可能溶液は、必要とされる量のＦＴＹ７２０を必要に応じて上で列挙された成分の１つまたはその組み合わせを含む適切な溶媒の中に取り込むことにより調製され得、続いて濾過滅菌され得る。一般に、分散剤は、基本の分散媒質および上で列挙されたものからの必要とされる他の成分を含む無菌のビヒクルの中に、ＦＴＹ７２０を取り込むことにより調製される。滅菌注入可能溶液の上記調製のための滅菌散剤の場合、調製方法は真空乾燥および凍結乾燥であり、これにより、前もって濾過滅菌されたそれらの溶液より、上記活性成分＋任意のさらなる所望の成分の粉末が得られる。
【００８５】
経口組成物は、不活性な希釈剤または可食性キャリアを一般に含む。それらは、ゼラチンカプセルに封入されてもよく、または圧縮されて錠剤にされてもよい。経口治療剤投与の目的のために、ＦＴＹ７２０は賦形剤とともに取り込まれ得、そして錠剤、トローチ剤、またはカプセル剤の形態で使用され得る。経口組成物はまた、含そう薬としての使用のために流体キャリアを用いて調製され得、ここで、上記流体キャリア中のＦＴＹ７２０は、経口的に適用され、そして口腔内をすすぎ（ｓｗｉｓｈ）、そして吐き出すか、または飲み込まれる。薬学的に適合性の結合剤および／または補助物質は、上記組成物の一部として含まれ得る。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などは、以下の成分のいずれか、または同様の性質の化合物を含み得る：結合剤（例えば、微結晶性セルロース、トラガカントゴムまたはゼラチン）；賦形剤（例えば、デンプンまたは乳糖）、崩壊剤（例えば、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、またはコーンスターチ）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅ）；流動促進剤（ｇｌｉｄａｎｔ）（例えば、コロイド状二酸化ケイ素）；甘味剤（例えば、ショ糖またはサッカリン）；または芳香剤（例えば、ペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジ芳香剤）。
【００８６】
吸入による投与のため、本発明の組成物は、ヒト呼吸器系（例えば、鼻、口、気管、気管支、および肺胞の部位）に吸入器またはネブライザーを使用して、エーロゾル化された形態で送達され得る。例えば、定量吸入器、乾燥粉末吸入器、または水ベースの吸入器が使用され得る。
【００８７】
全身性の投与はまた、経粘膜（ｔｒａｎｓｍｕｃｏｓａｌ）手段または経皮手段によってなされ得る。経粘膜投与または経皮投与については、透過させるべき関門に対して適切である浸透剤が、処方物中に使用される。このような浸透剤は、当該分野において一般に公知であり、そしてこのような浸透剤としては、例えば、経粘膜投与については、界面活性剤、胆汁酸塩、およびフンジン酸誘導体が挙げられる。経粘膜投与は、経鼻スプレーまたは鼻用坐剤（ｎａｓａｌ  ｓｕｐｐｏｓｉｔｏｒｙ）の使用を通じてなされ得る。経皮投与については、本発明のＦＴＹ７２０組成物は、軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、軟膏剤（ｓａｌｖｅ）、ゲル剤、またはクリーム剤、当該分野において一般に公知であるような外用適用のための他の手段（例えば、欧州特許第０８１２５８８号を参照のこと）へと処方され得る。上記ＦＴＹ７２０組成物はまた、点鼻剤またはスプレー剤、または坐剤（例えば、従来の坐剤基剤（例えば、カカオ脂および他のグリセリド））または直腸送達のための保持浣腸の形態で調製され得る。
【００８８】
１つの実施形態において、ＦＴＹ７２０は、この化合物を身体からの急速な除去から保護するキャリアを用いて調製される（例えば、制御放出処方物（インプラントおよびマイクロカプセル送達系が挙げられる））。生分解性の生体適合性ポリマー（例えば、エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸）は、使用され得る。このような処方物の調製のための方法は、当業者に明らかである。上記物質はまた、Ａｌｚａ  ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃより商業的に入手可能である。リポソーム懸濁剤（モノクローナル抗体で細胞を標的としたリポソームを含む）もまた、薬学的に受容可能なキャリアとして使用され得る。これらは、当業者に公知である方法に従って（例えば、米国特許第４，５２２，８１１号において記載される通りに）調製され得る。
【００８９】
加えて、上記活性化合物の懸濁剤は、適切な油性注入懸濁剤として調製され得る。適切な親油性の溶媒またはビヒクルとしては、脂肪油（例えば、ゴマ油）、または合成脂肪酸エステル（例えば、オレイン酸エチル、トリグリセリド、またはリポソーム）が挙げられる。非脂質性ポリカチオンアミノポリマーもまた、送達のために使用され得る。必要に応じて、上記懸濁剤はまた、適切な安定剤または上記化合物の溶解度を増大させて高度に濃縮された溶液の上記調製物を可能にするための薬剤を含み得る。
【００９０】
投与の容易さ、および投与量の均一性のために、経口組成物または非経口組成物を投与量単位形態で処方することは、特に有利である。本明細書中で使用する場合、投与量単位形態とは、処置されるべき被験体についての単位投与量として適切な物理的に別個の単位をいい；各々の単位は、必要とされる薬学的キャリアと共に、所望の治療効果を生み出すように計算された、所定量のＦＴＹ７２０を含む。本発明の上記投与量単位形態の詳細は、ＦＴＹ７２０および達成されるべき特定の治療的効果の独特の特性、ならびにこのような活性な化合物を個体の処置のために配合する技術固有の制限によって決定され、そしてこれらに直接的に依存する。
【００９１】
上記薬学的組成物は、投与のための指示書とともに、容器、包み（ｐａｃｋ）、分配器（ｄｉｓｐｅｎｓｅｒ）の中に封入され得る。
【００９２】
もう１つの実施形態において、上記試薬は、少なくとも９０％の純度のＦＴＹ７２０を含む組成物において投与される。
【００９３】
好ましくは、ＦＴＹ７２０は、最大の安定性および処方に関する最小の副作用を提供する媒体において処方される。ＦＴＹ７２０に加えて、本発明の組成物は、代表的には１つ以上のタンパク質キャリア、緩衝剤、等張塩、および安定剤を含む。
【００９４】
一部の例において、ＦＴＹ７２０は、ポンプデバイスに連結したカテーテルを移植する外科的手段により投与され得る。上記ポンプデバイスはまた、移植され得るか、または体外に置かれ得る。上記試薬の投与は、間欠性のパルスにおいて、または持続した注入としてなされ得る。脳の別々の領域への注入のためのデバイスは、当該分野において公知である（例えば、米国特許第６，０４２，５７９号；同第５，８３２，９３２号；および同４，６９２，１４７号を参照のこと）。
【００９５】
ＦＴＹ７２０組成物は、脂質の投与のために、任意の従来の形態で投与され得る。ＦＴＹ７２０は、血液−脳関門を通過し得るかまたは回避し得る、当該分野において公知である任意の方法によって投与され得る。上記血液−脳関門を通る通過を亢進させるための方法としては、因子のサイズを最小化する方法、より容易に通過し得る疎水性の因子を提供する方法、上記タンパク質試薬または他の薬剤と上記血液−脳関門を通過する実質的な透過係数を有するキャリア分子とを結合させる方法が、挙げられる（例えば、米国特許第５，６７０，４７７号を参照のこと）。
【００９６】
試薬、誘導体、および共投与薬剤は、投与に適切である薬学的組成物の中に取り込まれ得る。このような組成物は、代表的には、ＦＴＹ７２０および薬学的に受容可能なキャリアを含み得る。本明細書で使用する場合、「薬学的に受容可能なキャリア」は、薬学的投与に適合する、任意およびすべての溶媒、分散媒、剤皮、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを包含すると解釈される。薬学的に活性な物質についてのこのような媒体および薬剤の使用は、当該分野において周知である。任意の従来の媒体または薬剤が上記活性化合物と適合しない場合を除き、上記組成物におけるそれらの使用が予期される。
【００９７】
補助的な活性化合物もまた、上記組成物の中に取り込まれ得る。修飾は、ＦＴＹ７２０分子の溶解度またはクリアランスに影響するように、ＦＴＹ７２０に対して行われ得る。ペプチド分子もまた、酵素分解に対する耐性を増大させるように、Ｄ−アミノ酸を用いて合成され得る。一部の場合、上記組成物は、１種以上の可溶化剤、保存剤、および透過増強剤（ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ  ｅｎｈａｎｃｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）とともに共投与され得る。薬学的に受容可能なキャリアの例としては、乳糖、ブドウ糖、ショ糖、ソルビトール、マンニトール、コーンスターチ、結晶性セルロース、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギネート、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴム、ゼラチン、血清（ｓｙｒｕｍ）、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシ安息香酸メチルエステル、ヒドロキシ安息香酸プロピルエステル、滑石、ステアリン酸マグネシウム、不活性ポリマー、水および鉱油が挙げられる。
【００９８】
例えば、上記組成物は、保存剤またはキャリア（例えば、タンパク質、炭水化物、および上記薬学的組成物の密度を増大するための化合物）を含み得る。上記組成物はまた、等張塩および酸化還元調節剤を含み得る。
【００９９】
一部の実施形態において、投与される組成物は、上記試薬および上記脳室壁の透過性を増大させる１種以上の薬剤（例えば、「脳室壁透過性エンハンサー」）を含む。このような組成物は、注入された組成物が上記脳室壁よりもより深く浸透することを援助し得る。適切な脳室壁透過性エンハンサーの例としては、例えば、リポソーム、ＶＥＧＦ（脈管内皮増殖因子）、ＩＬ−ｓ、ＴＮＦα、ポリオキシエチレン、脂肪酸のポリオキシエチレンエーテル、ソルビタンモノオレエート、ソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンモノラウレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、フシジン酸およびその誘導体、ＥＤＴＡ、ＥＤＴＡ二ナトリウム、コール酸および誘導体、デオキシコール酸、グリココール酸、グリコデオキシコール酸、タウロコール酸、タウロデオキシコール酸、コール酸ナトリウム、グリココール酸ナトリウム、グリココレート、デオキシコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、グリコデオキシコール酸ナトリウム、タウロデオキシコール酸ナトリウム、ケノデオキシコール酸、ウロスデオキシコール酸、サポニン、グリシルリチン酸、グリシルリチン酸アンモニウム、デカメトニウム、臭化デカメトニウム、臭化ドデシルトリメチルアンモニウム、およびジメチル−β−シクロデキストリンまたは他のシクロデキストリンが挙げられる。
【０１００】
（本発明の治療方法および用途）
本発明はまた、治療的目的のため、ＦＴＹ７２０を投与してＮＳＣの活性を刺激する方法を包含する。本発明の方法は、神経路に影響する種々の神経系疾患、神経系障害、および神経系損傷の処置を可能にするために、インビボにおいてＮＳＣを修飾または操作するために使用され得る。１つの局面において、本発明の方法は、ＮＳＣと、上記ＮＳＣの成長、増殖、分化、または生存を刺激するのに十分な量のＦＴＹ７２０を含む組成物とを接触させる工程を包含する。特定の局面において、ＦＴＹ７２０は、上記Ｓ１ＰＲシグナル伝達経路の活性を刺激する。本発明の方法は、インビトロ（例えば、細胞をＦＴＹ７２０とともに培養することによる）または、代替的に、インビボ（被験体へとＦＴＹ７２０を投与することによる）において実施され得る。このようにして、本発明は、障害（特に神経系障害）に悩まされる個体を処置する方法を提供する。上記方法は、異常な細胞増殖、異常な細胞分化、異常な細胞移動、または異常な細胞生存によって特徴付けられる障害に対して、特に有用である。
【０１０１】
本発明の種々の局面において、標的組織に対するＦＴＹ７２０の効果、およびその投与が特定の障害の処置のために指示されるかどうかを決定するために、適切なインビトロまたはインビボにおけるアッセイが実施され得る。例えば、インビトロにおけるアッセイは、その被験体の障害に関与する代表的な幹細胞または新たに分化した細胞を用いて、ＦＴＹ７２０が上記細胞型に対する所望の効果を発揮するかを決定するために、実施され得る。治療に使用するための、ＦＴＹ７２０組成物は、ヒト被験体での試験に先立って適切な動物モデル系において試験され得、その適切な動物モデルとしては、ラット、マウス、ニワトリ、ウシ、サル、ウサギなどが挙げられるが、これらに限定されない。同様に、インビボにおける試験に関しては、ヒト被験体に対する投与に先立って、当該分野において公知である任意の動物モデル系が使用され得る。
【０１０２】
上記開示された方法は、非胚性（例えば、成体）の脳の脳室の内側を覆う組織の中に位置する上記ＮＳＣを巧みに利用している。その脳室系は、ほぼすべての脳領域において見い出されているため、罹患した領域へのより容易なアクセスを可能にする。これらの方法に従って、神経系疾患についての治療は、罹患した領域に近い脳室を取り囲む幹細胞が、必要に応じて操作または改変されるように調整（ｔａｉｌｏｒ）され得る。ＮＳＣ活性は、上記細胞をＦＴＹ７２０を含む組成物に曝すことにより、インビボにおいて変更され得る。
【０１０３】
本発明の１つの局面において、あるデバイスは、上記ＦＴＹ７２０組成物を脳室、すなわち、上記神経幹細胞に投与するために、移植され得る。もう１つの局面において、浸透ポンプに接続されたカニューレは、上記組成物を送達するために使用され得る。あるいは、上記組成物は、脳室の中に直接注入され得る。次に、上記神経幹細胞の子孫は、障害または疾患の結果として損傷を受けた領域の中に移動し得る。多くの脳領域に対して脳室が非常に近接していることにより、幹細胞またはそれらの子孫の中へのＦＴＹ７２０の拡散が可能になる。
【０１０４】
さらなる局面において、本発明のＦＴＹ７２０組成物は、本明細書中に記載されるように、局所的または全身的に投与される薬剤と組み合わせて局所的に投与され得る。このような薬剤としては、例えば、１種以上の増殖因子、幹細胞分裂促進剤、生存因子、グリア細胞系列抑止剤（ｇｌｉａｌ−ｌｉｎｅａｇｅ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、抗アポトーシス剤、抗ストレス剤、神経保護剤、および抗発熱剤、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。上記薬剤は、ＦＴＹ７２０の投与前、投与と投与の間または投与後に、投与され得る。
【０１０５】
投与は、任意の手段によってなされ得る。好ましくは、ＦＴＹ７２０組成物は、全身的に投与される。経口投与および注射は、特に好ましい。上記投与は、注入によってなされ得る。その送達は、皮下、腹腔内、筋内、脳室内（例えば、側脳室内）、実質内、クモ膜下腔内、および頭蓋内への送達であり得る。別の例としては、投与は経口的または経鼻的になされ得る。投与は、吸入送達（例えば、エーロゾル（例えば、乾燥粉末スプレーもしくは水ベースのスプレー、またはネブライザー））、ペプチド融合体送達、またはミセル送達を介して実施され得る。
【０１０６】
前脳に主に罹患するハンティングトン病、アルツハイマー病、パーキンソン病、および他の神経障害の処置のために、ＦＴＹ７２０は、単独で、またはインビボにおけるＮＳＣの改変または操作に効果を及ぼすために上記前脳の脳室に送達されるさらなる薬剤とともに、投与され得る。例えば、パーキンソン病は、脳（特に線条）におけるドパミンの低いレベルの結果である。したがって、上記線条の病変領域において、患者自身の静止幹細胞を誘導してインビボで分裂させ始めること、およびそれらの細胞の子孫を誘導してドパミン作動性細胞に分化させ、このようにしてドパミンのレベルを局所的に上昇させことが有利である。
【０１０７】
通常、上記ドパミン作動性ニューロンの細胞体は、軸索が線条に向かって突出して、黒質に、および中脳に近接した領域に位置する。本発明の方法および組成物は、パーキンソン病の処置のための、薬物の使用および多量の胚組織の議論のある使用に対する代替手段を提供する。上記側脳室へのＦＴＹ７２０を含む組成物の投与により、線条においてドパミン細胞が産生され得る。
【０１０８】
筋萎縮性側索硬化症または他の運動ニューロン疾患（多発性硬化症を除く）の処置のために、ＦＴＹ７２０は、全身（または、例えば、中心管）に、単独で、またはさらなる薬剤とともに送達され得る。
【０１０９】
直接に脳室を囲む神経系組織の処置に加え、ＦＴＹ７２０は、神経系全体（例えば、ＣＮＳ）にわたる循環のために、単独で、またはさらなる薬剤とともに腰槽に投与され得る。
【０１１０】
他の局面において、神経保護剤もまた、ＦＴＹ７２０の注入前、注入と注入との間、および／または注入後に、全身的にまたは局所的に共投与され得る。神経保護剤としては、抗酸化剤（還元活性を有する薬剤（例えば、セレン、ビタミンＥ、ビタミンＣ、グルタチオン、システイン、フラボノイド、キノリン、還元活性を有する酵素など））、Ｃａチャンネル調節因子、Ｎａチャンネル調節因子、グルタミン酸レセプター調節因子、セロトニンレセプターアゴニスト、リン脂質、不飽和脂肪酸および多価不飽和脂肪酸、エストロゲンおよび選択的エストロゲンレセプター調節因子（ＳＥＲＭ）、プロゲスチン、甲状腺ホルモンおよび甲状腺ホルモン模倣化合物、シクロスポリンＡおよび誘導体、サリドマイドおよび誘導体、メチルキサンチン、ＭＡＯインヒビター；セロトニン取込み遮断薬、ノルアドレナリン取込み遮断薬およびドパミン取込み遮断薬；ドパミンアゴニスト、Ｌ−ドパ、ニコチンおよび誘導体、ならびにＮＯシンターゼ調節因子が挙げられる。
【０１１１】
本発明のあるＦＴＹ７２０組成物は、静脈内注射の後、発熱性があり得る（Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｇｕｌ．Ｉｎｔｅｇｒ．Ｃｏｍｐ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２０００  ２７８：Ｒ１２７５-８１）。したがって、本発明の一部の局面において、抗発熱剤（ａｎｔｉｐｙｒｏｇｅｎｉｃ  ａｇｅｎｔ）（例えば、ｃｏｘ２インヒビター、インドメタシン、サリチル酸（ｓａｌｉｓｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）誘導体、および他の一般的な抗炎症性／抗発熱性化合物）は、上記ＦＴＹ７２０組成物の投与前、投与と投与の間、および／または投与後に、全身的にまたは局所的に投与され得る。
【０１１２】
本発明のもう１つの局面において、抗アポトーシス剤（カスパーゼインヒビターならびにアポトーシス誘発酵素およびアポトーシス誘発因子のアンチセンス調節のために有用である薬剤を含む）は、ＦＴＹ７２０の投与前、投与と投与との間、および／または投与後に、全身的にまたは局所的に共投与され得る。
【０１１３】
ストレス症候群は神経発生を低下させるため、一部の局面において、ＦＴＹ７２０の投与前、投与と投与との間、および／または投与後に、全身的にまたは局所的に投与される抗ストレス薬（例えば、抗グルココルチコイド（例えば、ＲＵ４８６）およびベータ遮断薬）で被験体を処置することが望まれ得る。
【０１１４】
ＦＴＹ７２０の投薬形態の調製のための方法は、当業者に公知であるか、または明らかである。投与されるべきＦＴＹ７２０の量は、被験体の正確なサイズおよび状態に依存するが、例えば、０．００１ｍｌ〜１０ｍｌの体積中に、１ｎｇ〜１ｍｇ、１μｇ〜０．１ｍｇ、１ｍｇ〜１００ｍｇ、または好ましくは０．３ｍｇ〜１０ｍｇである。処置の期間および試薬の投与時間もまた、上記被験体のサイズおよび状態、病気の重症度ならびに使用される特定の組成および方法によって、変化する。
神経系障害を有する被験体を処置するための前述の方法の各々の有効性は、上記障害を評価するための標準化された任意の公知の試験により、評価され得る。
【実施例】
【０１１５】
本実施例は、本発明の好ましい実施形態をより完全に例示するために示される。これらの実施例は、添付される特許請求の範囲によって包含されるような本発明の範囲を限定するとは決して解釈されるべきでない。
【０１１６】
本明細書で示される実験データは、インビトロで増殖したＮＳＣの増殖によって示されるように、ＦＴＹ７２０が神経発生の調節に対してポジティブな効果を有することを立証する。
【０１１７】
（実施例１：神経球培養）
５〜６週齢マウスの側脳室の前側壁を、４．５ｍｇ／ｍｌのグルコースおよび８０ユニット／ｍｌのＤＮａｓｅを含むＤＭＥＭ中の、０．８ｍｇ／ｍｌのヒアルロニダーゼおよび０．５ｍｇ／ｍｌのトリプシンで、３７℃で２０分間、酵素学的に解離させた。その細胞を、穏やかに粉砕（ｔｒｉｔｕｒａｔｅ）し、２０ｎｇ／ｍｌのＥＧＦ（そうでないと明記しない限り）、１００ユニット／ｍｌのペニシリン、および１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを含む、３容量の神経球培地（ＤＭＥＭ／Ｆ１２、Ｂ２７補充物、１２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ  ７．４）と混合した。７０μｍストレーナーに通した後、上記細胞を１６０×ｇで５分間、ペレット化（ｐｅｌｌｅｔ）した。引き続いてその上清を取り除き、そして上記細胞を上述ように補充し神経球培地で再懸濁し、培養皿にプレーティングし、そして３７℃でインキュベートした。神経球培養物は、プレーティングの約７日間の後に、分離できる状態となった。
【０１１８】
上記神経球培養物を離けるために、神経球を１６０×ｇで５分間遠心分離することによって収集した。その馴化上清（馴化培地）を取り出し、そして保存した。上記神経球を０．５ｍｌのＨＢＳＳ（１×）中トリプシン／ＥＤＴＡに再懸濁し、３７℃で２分間インキュベートし、そして分離を援助するために穏やかに粉砕した。さらに３７℃で３分間インキュベートおよび粉砕した後、３容量の氷冷ＮＳＰＨ−培地−ＥＧＦを加えて、さらなるトリプシン活性を停止させた。上記細胞を２２０×ｇで４分間ペレット化し、そして新鮮な神経球培地および馴化培地の１：１混合物中で再懸濁した。ＥＧＦを２０ｎｇ／ｍｌになるまで補充し、そして上記培養物をプレーティングし、そして３７℃でインキュベートした。
【０１１９】
（実施例２：ＲＴ−ＰＣＲ分析）
神経球を、上述のようにしてＬＶＷより調製した。最初に分けてから３日間の後、上記神経球を収集し、そしてＱＩＡＧＥＮのＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔを製品の使用説明書に従って使用して総ＲＮＡを単離した。ＬＶＷおよびＲＯＢの総ＲＮＡを、神経球の総ＲＮＡの方法と同じ方法で調製した。ＲＴ−ＰＣＲに先立って、総ＲＮＡを３７℃で１５分間ＤＮａｓｅ（Ａｍｂｉｏｎ）処理（５μｇ総ＲＮＡあたり１ユニット）し、続いて７５℃で１０分間熱失活させた。８種のＥＤＧ／Ｓ１Ｐレセプターに対応するｍＲＮＡの存在を検出するために、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのＯｎｅ−Ｓｔｅｐ  ＲＴ−ＰＣＲ  Ｋｉｔを使用した。手短に言えば、５８℃のアニーリング温度で、１２．５ｎｇの総ＲＮＡを各々の反応において使用した。上記総ＲＮＡへのゲノムの混入が偽陽性の結果を引き起こしたのではないことをさらに保証するために、Ｔａｑポリメラーゼのみを用いた同じ反応を、実験ＲＴ−ＰＣＲと平行して実施した。その反応物を、臭化エチジウムを含む１．０％アガロースゲル上で電気泳動し、そしてＵＶ光下でバンドを可視化した。上記所望の遺伝子のＰＣＲ産物の見込まれた長さに対応するバンドを、クローニングベクターｐＧＥＭ−Ｔｅａｓｙの中へクローン化した。構築物を配列決定して、それらの同一性を確認した。プライマー配列を、以下に示す。
【０１２０】
【表３−Ａ】
2011126918.tif 000005
（実施例３：細胞の成長）
細胞を、１０ｎＭのＦＴＹ７２０を補充したか、またはＦＴＹ７２０を含まない（対照細胞）ＤＭＥＭ／Ｆ１２中に、１０，０００細胞／ウェルの密度で、懸濁細胞として蒔いた。接着性の細胞を、ポリ−Ｄ−リジン上に１％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）を補充したＤＭＥＭ／Ｆ１２中に、３０，０００細胞／ウェルの密度で蒔いた。これらの細胞が接着したら（４時間後）、その培地を無血清培地と交換し、そして１０ｎＭのＦＴＹ７２０を加えた。
【０１２１】
（実施例４：細胞内ＡＴＰ−増殖アッセイ）
細胞内ＡＴＰレベルは、細胞数と相関することが以前に示された（Ｃｒｏｕｃｈ，Ｋｏｚｌｏｗｓｋｉら  １９９３）。以下の実験を、４つの平行した実験の組み合わせで実施した（すなわち、４連で実施した）ため、その細胞は種々のアッセイで使用され得た。ＦＴＹ７２０を添加し、そして細胞を３７℃で３日間インキュベートした。細胞を、Ｔｒｉｓ−ＥＤＴＡ緩衝液中の０．１％のＴｒｉｔｏｎ−Ｘ１００で溶解した。細胞内ＡＴＰを、製造業者の使用説明書（ＢｉｏＴｈｅｍａ、Ｓｗｅｄｅｎ）に従って、ＡＴＰ−ＳＬキットを使用して測定した。細胞内ＡＴＰは、細胞数と相関することが示された（Ｃｒｏｕｃｈ，Ｓ．Ｐ．、Ｋｏｚｌｏｗｓｋｉ，Ｒ．、１９９３）。各々の実験について、神経発生の徴候についてウェルを目視検査し、そして計数して、上記アッセイの結果を確認した。結果は、再現性があり、そして統計学的に有意であった。
【０１２２】
（実施例５：ＢｒｄＵ取り込み−増殖アッセイ）
細胞増殖を測定するために、ＤＮＡ合成が一般に使用される。このような測定に関しては、有糸分裂がに活性な細胞のＤＮＡを標識するために、３Ｈ−チミジンが慣習的に用いられる。この実験においては、３Ｈ−チミジンを、５−ブロモ−２−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）により置き換えた。そのピリミジン類似体がＤＮＡの中に取り込まれた後に、ＢｒｄＵを、免疫学的測定法により検出した。ＥＬＩＳＡキットは、Ｒｏｃｈｅ、Ｇｅｒｍａｎｙより提供された。
【０１２３】
（実施例６：乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）アッセイ）
３日間の間に起こった細胞の死を、培地中への乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の漏出量として測定した。生存可能な細胞は、ＬＤＨを漏出せず；細胞膜が損傷を受け死んだ細胞のみが、ＬＤＨを漏出する。総ＬＤＨ（培地＋細胞）に対する培地中のＬＤＨの比率は、細胞死の百分率を示す。このようにして、処理された細胞および未処理の細胞は、上記ＡＴＰ増殖アッセイにおいて観察された異なった結果の原因としてアポトーシスを除外するために、比較され得る。ＬＤＨの量を、製品（Ｐｒｏｍｅｇａ、ＵＳＡ（Ｃｈｅｎら、２００４もまた、参照のこと））の使用説明書に従って測定した。
【０１２４】
（実施例７：インサイチュハイブリダイゼーション）
成体マウスの脳全体の切片（１４μｍ）を、−１７℃にてクリオスタットで切断し、顕微鏡スライド（Ｓｕｐｅｒｆｒｏｓｔ  Ｐｌｕｓ；ＢＤＨ、ＵＫ）上において解凍し、そして４％のホルムアルデヒド中で５分間固定した。試料を、０．２ＭのＨＣｌ中で１５分間除タンパク質処理し、０．１Ｍのトリエタノールアミン緩衝液（ｐＨ  ８．０）中の０．２５％の無水酢酸中で２０分間処理し、そして、ハイブリダイゼーションの前に、５分間のクロロホルム工程を含むエタノール濃度の上昇系列中で脱水した。マウスＳ１ＰＲ  ｍＲＮＡを検出するために、Ｓ１Ｐ１に対して特異的なアンチセンスｃＲＮＡプローブ、Ｓ１Ｐ５に対して特異的なアンチセンスｃＲＮＡプローブを、対応するＯＲＦ  ｃＤＮＡを含むプラスミド（ｐＧＥＭ−Ｔｅａｓｙ）より転写し、同時にそれらを［α−３５Ｓ］ＵＴＰで標識した（表４を参照のこと）。
【０１２５】
【表４】
2011126918.tif 000006
緩衝液１ｍｌあたり、５２％のホルムアミド、１０％の硫酸デキストラン、２０８ｍＭのＮａＣｌ、２％の５０×デンハルト溶液（１％のフィコール、１％のポリビニルピロリドン、１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））、１０ｍＭのＴｒｉｓ  ｐＨ  ８．０、１ｍＭのＥＤＴＡ、５００ｎｇ／ｍｌの酵母ｔＲＮＡ、１０ｍＭのジチオトレイトール（ＤＴＴ）および２０×１０６ｃｐｍのプローブを含むハイブリダイゼーション緩衝液の中で、切片を上記プローブとともに５５℃で１６時間インキュベートした。ハイブリダイゼーション後、上記切片を０．５ＭのＮａＣｌ中の１０μｇ／ｍｌのＲＮａｓｅ  Ａで、３７℃で３０分間処理した。試料を、室温にて４×クエン酸ナトリウム食塩水（ＳＳＣ；１×ＳＳＣは、０．１５Ｍの塩化ナトリウムおよび０．０１５Ｍのクエン酸三ナトリウム、ｐＨ  ７．０である）で２０分間、２×ＳＳＣで１０分間、１×ＳＳＣで１０分間、そして０．５×ＳＳＣで１０分間洗浄した。高ストリンジェンシー洗浄を、０．１×ＳＳＣの中で、７０℃で３０分間実施した。すべての洗浄工程は、１ｍＭのＤＴＴの添加を含んでいた。
【０１２６】
上記切片をエタノール濃度の上昇系列中で脱水し、一晩乾燥させ、そしてオートラジオグラフィのフィルム（Ｂｅｔａ−ｍａｘ、Ａｍｅｒｓｈａｍ）とともに、３週間にわたってカセット中に取り付けた。上記フィルムをＫｏｄａｋ  Ｄ−１９現像液中で現像し、１：３に希釈されたＫｏｄａｋ  ＲＡ−３０００中で固定し、リンスし、そして乾燥させた。次に切片を、１：１に希釈したＫｏｄａｋ  ＮＴＢ−２核追跡乳濁液（ｎｕｃｌｅａｒ  ｔｒａｃｋ  ｅｍｕｌｓｉｏｎ）の中に浸漬し、６週間曝露し、Ｋｏｄａｋ  Ｄ−１９中で３分間現像し、Ｋｏｄａｋ  ＲＡ−３０００固定液中で固定し、そしてクレシルバイオレットで対比染色した。そのハイブリダイゼーションの特異性を、同じプラスミドより転写したセンスプローブを使用して試験した。この条件下では、ハイブリダイゼーションシグナルは得られなかった。上記乳濁液に浸漬した切片を、Ｎｉｋｏｎ  Ｅ６００顕微鏡を使用して分析した。
【０１２７】
（実施例８：インビボにおける増殖実験）
これらの研究のために、１１．６ｍｇのＦＴＹ７２０を、０．１％のマウス血清を含むリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中に溶解し、０．５ｍｇ／ｍｌの濃度にした。その溶液を、ＰＢＳ＋０．１％マウス血清中において０．２５ｍｇ／ｍｌまでさらに希釈した。ＢｒｄＵを、６．２５ｍｇ／ｍｌの最終濃度となるように加えた。成体（＞８週齢）のオスのＣ５７ＢＬ６マウスは、７日間にわたり、２４時間毎に１回の２００μｌのＩＰ注入を受けた。次いでこのマウスをＣＯ２で屠殺した。１つのコホートの動物を、屠殺の前にさらに１４日間生存させておいた。対照注入は、ＰＢＳ＋０．１％マウス血清中の同じ濃度のＢｒｄＵからなっていた。その脳を解剖して取り出し、そして急速凍結させた。０．５ｍｇ／ｍｌの上記ＦＴＹ７２０溶液は、４°または−２０°で貯蔵した後、沈殿物を示した。０．２５ｍｇ／ｍｌにさらに希釈し、ボルテックスし、そして３７°まで加温した後で、沈殿物の量は有意に減少した。
【０１２８】
（実施例９：発現分析についての結果）
これらの研究は、上記成体マウスの脳における、ＦＴＹ７２０Ｐ応答性レセプターのｍＲＮＡおよびタンパク質の発現パターンを調査した。その結果は、Ｓ１Ｐ１およびＳ１Ｐ５は、成体マウスの脳の神経原性領域において発現されることを示した。ＲＴ−ＰＣＲを使用することにより、すべてのＳ１ＰＲ  ｍＲＮＡが、側脳室壁組織またはこの組織由来の培養した神経幹細胞（ＮＳＣ）に由来する神経球のいずれかにおいて発現されることが見出された（表５）。
【０１２９】
【表５】
2011126918.tif 000007
表５．ＲＴ−ＰＣＲによって（１〜３のスケールにおいて）評価した発現レベル。インサイチュハイブリダイゼーションの結果を、図３に示す。
【０１３０】
インサイチュハイブリダイゼーション技術を、上記Ｓ１ＰＲレセプタータンパク質が発現している脳領域を調査するためにも使用した。ラットの胚性の脳においてこの技術を使用して他者により実施された以前の研究は、側脳室壁（ＬＶＷ）の脳室下ゾーン（ＳＶＺ）において、Ｓ１Ｐ１が大部分は発現されることを明らかにした。対照的に、Ｓ１Ｐ３は主に点状パターンで散在し、そして脈管内皮マーカーと共存し、このことは、新脈管形成における役割を示す（ＭｃＧｉｆｆｅｒｔら、２００２）。本明細書で示されるデータは、成体マウスの脳におけるＳ１Ｐ１の発現が、ＬＶＷの上記ＳＶＺに制限され、吻側細胞移動路の中に拡大することを示す。上記Ｓ１Ｐ５レセプターは、脈絡叢、海馬（歯状回およびＣＡ１〜ＣＡ３）、および梨状皮質において発現し、それらは成体の神経発生の別の領域である。上記成体マウスの脳において、Ｓ１Ｐ２またはＳ１Ｐ３についてのハイブリダイゼーションは、観察されなかった。特に、上記Ｓ１Ｐ１レセプターおよびＳ１Ｐ５レセプターは、ＦＴＹ７２０Ｐと最高の親和性で結合することが見出された（表３）。したがって、これら２つのレセプターは、本明細書において立証されるようなＦＴＹ７２０による増殖誘導についての最も有望な標的である。
【０１３１】
（実施例１０：インビトロにおける増殖アッセイについての結果）
ＦＴＹ７２０Ｐは、成体の神経幹細胞のインビトロにおける増殖を誘導すると決定された。上記ＡＴＰアッセイを使用して、ＦＴＹ７２０処理した懸濁細胞および接着性細胞において、細胞内ＡＴＰレベル（およびそれゆえ、細胞数）における、それぞれ、２５％および４２％の増加が見られた。増殖を確認するために、ＢｒｄＵの取り込みを、ＤＮＡ合成を評価するために使用した。ＦＴＹ７２０処理した懸濁細胞および接着性細胞において、ＢｒｄＵの取り込みにおいて、それぞれ５２％および２７１％の増加が測定された。ＡＴＰおよびＢｒｄＵ取り込みにおけるこれらの増加は、統計学的に有意であると決定された（図１）。別々の実験において、ＮＳＣについての用量応答曲線を作成（ｐｅｒｆｏｒｍ）したところ、それにより、ＦＴＹ７２０の非常に低いＥＣ５０（０．０２ｎＭ（図２））が明らかとなった。ＦＴＹ７２０についての上記ＥＣ５０値はＥＧＦについてのＥＣ５０値と同等な範囲にあり、このことは、ＦＴＹ７２０がＮＳＣについての非常に強力な有糸分裂促進剤であることを示している。細胞数の相違がアポトーシスレベルにおける相違の結果ではなかったことを確実にするために、ＬＤＨレベル（細胞死を測定するアッセイ）を測定した。対照細胞とＦＴＹ７２０処理細胞との間におけるＬＤＨレベルの有意な変化は、観察されなかった。
【０１３２】
（実施例１１：ＦＴＹ７２０を特徴付けるためのインビボにおける実験）
神経発生のＦＴＹ７２０刺激を特徴付けるために、インビボにおける研究が実施され得る。このような研究は、神経発生に対する増殖因子の影響を試験するために使用される上記脳室内注入実験においてモデル化され得る。ＥＧＦおよび塩基性ＦＧＦの両方の注入は、脳室壁細胞の集団を増殖させることが示されており、そしてＥＧＦの場合では、隣接する線条体実質の中への前駆体の広範な移動が示されている（Ｃｒａｉｇ，Ｃ．Ｇ．、Ｖ．Ｔｒｏｐｅｐｅら、１９９６；Ｋｕｈｎ，Ｈ．Ｇ．、Ｊ．Ｗｉｎｋｌｅｒら、１９９７）。ニューロンの産生が減少している間は、上記前駆体の分化は、主にグリア系列への分化である（Ｋｕｈｎ，Ｈ．Ｇ．、Ｊ．Ｗｉｎｋｌｅｒら  １９９７）。最近の研究は、成体ラットにおけるＢＤＮＦの脳室内注入が、嗅球ならびに吻側細胞移動路、および実質構造（線条、中隔、視床および視床下部を含む）において新たに生成されるニューロンの数の増加を促進させることを発見した（Ｐｅｎｃｅａ，Ｖ．、Ｋ．Ｄ．Ｂｉｎｇａｍａｎら、２００１）。
【０１３３】
神経発生に対するＦＴＹ７２０の効果を決定するために、上記化合物は、ある範囲の濃度でマウスおよび／またはラット中に、全身的または局所的（例えば、鼻腔内、経口、腹腔内、または静脈内）に投与され得る。げっ歯類の側脳室の中への化合物の注入、ならびに新しいニューロンおよびグリアの検出に関する基本的な実験設定を、以下に記載する。
【０１３４】
上記Ｓ１Ｐレセプターを介したＦＴＹ７２０活性の役割の証拠は、これらの分子を単独で、または組み合わせのいずれかについてノックアウトマウスを使用することによって、獲得され得る。成体マウスの脳におけるＳ１Ｐ１およびＳ１Ｐ５についての発現パターン、ならびに他のＳ１ＰＲと比較して高いＦＴＹ７２０Ｐ親和性（表３）により、Ｓ１Ｐ１および／またはＳ１Ｐ５を神経幹細胞におけるＦＴＹ７２０の有望な標的となり、このことは本明細書において示されたデータと一致する。ＦＴＹ７２０の脳室内注入あり、または脳室内注入無しのＳ１Ｐレセプターノックアウトマウスを使用した実験は、神経発生における各々のレセプターの正確な役割を解読することを補助する。これらの研究は、上記ＥＤＧレセプターファミリーのメンバーの１つ以上を介して機能するＦＴＹ７２０の効果を決定するために使用され得る。
【０１３５】
（実施例１２：ＦＴＹ７２０についての臨床適用）
上記Ｓ１ＰＲ（例えば、Ｓ１Ｐ１またはＳ１Ｐ５）を介してＮＳＣを増殖させるＦＴＹ７２０の能力を特徴付けることが、１つの目標である。ＦＴＹ７２０で誘導される神経幹細胞活性の刺激は、多くの神経系の障害（例えば、パーキンソン病、アルツハイマー病、うつ病のすべての形態、認知障害、精神分裂病、ハンティングトン病、および脊髄損傷のような外傷）の症状を緩和することにおいて、有益である。神経幹細胞活性の誘導に加えて、ＦＴＹ７２０の抗炎症活性はまた、パーキンソン病を処置することに相乗様式で作用し得る。
【０１３６】
最近の研究は、鼻へ適用すること、すなわち「鼻から吸い込むこと（ｓｎｉｆｆｉｎｇ）」による、脳室系へ化合物を送達する代替的なアプローチの可能性を強調した（Ｂｏｒｎ，Ｊ．、Ｔ．Ｌａｎｇｅら、２００２）。この送達の手段は、鼻腔内注入と同様であるが、適用された化合物の全身性の副作用を本質的に回避する。上述の実験からの成功した結果は、この適用アプローチを評価するために行われる。種々の疾患と取り組むために、ＦＴＹ７２０組成物は、げっ歯類疾患モデルおよび非ヒト霊長類疾患モデルにおいて、処置として特徴付けられ得る。
【０１３７】
（動物モデル）
ＦＴＹ７２０は、回復を立証するための以下のＣＮＳ疾患／ＣＮＳ障害／ＣＮＳ外傷の動物モデルが特徴付けられる。例示的なモデルを、以下に列挙する；付加的な／改変されたモデルもまた、使用される：
（てんかんのモデル）例えば、電気ショック誘導性痙攣（Ｂｉｌｌｉｎｇｔｏｎ  Ａら、Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ  ２０００年１１月２７日；１１（１７）：３８１７−２２）、ペンチレンテトラゾール誘導性痙攣（Ｇａｍａｎｉｅｌ  Ｋら、Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ  Ｌｅｕｋｏｔ  Ｅｓｓｅｎｔ  Ｆａｔｔｙ  Ａｃｉｄｓ  １９８９年２月；３５（２）：６３−８）またはカイニン酸誘導性痙攣（Ｒｉｂａｎ  Ｖら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ２００２；１１２（１）：１０１−１１）；
（精神病／精神分裂病のモデル）例えば、アンフェタミン誘導性常同症／歩行運動モデル（Ｂｏｒｉｓｏｎ  ＲＬ  ＆  Ｄｉａｍｏｎｄ  ＢＩ、Ｂｉｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  １９７８年４月；１３（２）：２１７−２５）、ＭＫ−８０１誘導性常同症モデル（Ｔｉｅｄｔｋｅら、Ｊ  Ｎｅｕｒａｌ  Ｔｒａｎｓｍ  Ｇｅｎ  Ｓｅｃｔ  １９９０；８１（３）：１７３−８２）、ＭＡＭ（メチルアゾキシメタノール）誘導性モデル（Ｆｉｏｒｅ  Ｍら、Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １９９９年６月；３８（６）：８５７−６９；Ｔａｌａｍｉｎｉ  ＬＭら、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ  １９９９年１１月１３日；８４７（１）：１０５−２０）またはリーラーモデル（Ｂａｌｌｍａｉｅｒ  Ｍら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２００２年４月；１５（１７）：１１９７−２０５）；
（パーキンソン病のモデル）例えば、ＭＰＴＰ誘導性変性（Ｓｃｈｍｉｄｔ  ＆  Ｆｅｒｇｅｒ、Ｊ  Ｎｅｕｒａｌ  Ｔｒａｎｓｍ  ２００１；１０８（１１）：１２６３−８２）、６−ＯＨドパミン誘導性変性（Ｏ’Ｄｅｌｌ  ＆  Ｍａｒｓｈａｌｌ、Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ  １９９６年１１月４日；７（１５−１７）：２４５７−６１）；
（アルツハイマー病のモデル）例えば、脳弓采損傷モデル（Ｋｒｕｇｅｌら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｄｅｖ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２００１年６月；１９（３）：２６３−７７）、基底前脳損傷モデル（Ｍｏｙｓｅ  Ｅら、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ  １９９３年４月２日；６０７（１−２）：１５４−６０）；
（脳卒中のモデル）例えば、局所虚血（Ｓｃｈｗａｒｔｚ  ＤＡら、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ  Ｍｏｌ  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ  ２００２年５月３０日；１０１（１−２）：１２−２２）；総体虚血（２−脈管閉塞または４−脈管閉塞）（Ｒｏｏｆ  ＲＬら、Ｓｔｒｏｋｅ  ２００１年１１月；３２（１１）２６４８−５７；Ｙａｇｉｔａ  Ｙら、Ｓｔｒｏｋｅ  ２００１年８月；３２（８）；１８９０−６）；
（筋萎縮性側索硬化症のモデル）例えば、ｐｍｎマウスモデル（Ｋｅｎｎｅｌ  Ｐら、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｓｃｉ  ２０００年１１月１日；１８０（１−２）：５５−６１）；
（不安のモデル）例えば、高架式十字迷路試験（ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｐｌｕｓ−ｍａｚｅ  ｔｅｓｔ）（Ｈｏｌｍｅｓ  Ａら、Ｂｅｈａｖ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２００１年１０月；１１５（５）：１１２９−４４）、ガラス玉覆い隠し試験（ｍａｒｂｌｅ  ｂｕｒｙｉｎｇ  ｔｅｓｔ）（Ｂｒｏｅｋｋａｍｐら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  １９８６年７月３１日；１２６（３）２２３−９）、オープンフィールド試験（Ｐｅｌｌｅｙｍｏｕｎｔｅｒら、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ  ２００２年７月；３０２（１）：１４５−５２）；
（うつ病のモデル）例えば、学習性無力試験（ｌｅａｒｎｅｄ  ｈｅｌｐｌｅｓｓｎｓｓ  ｔｅｓｔ）、強制水泳試験（ｆｏｒｃｅｄ  ｓｗｉｍ  ｔｅｓｔ）（Ｓｈｉｒａｙａｍａ  Ｙら、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２００２年４月１５日；２２（８）３２５１−６１）、球切除（ｂｕｌｂｅｃｔｏｍｙ）（Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒら、Ｐｒｏｇ  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  １９８８；１２（１）：４１−５１）；
（学習／記憶についてのモデル）例えば、Ｍｏｒｒｉｓ水迷路試験（Ｍｏｒｒｉｓ  ｗａｔｅｒ  ｍａｚｅ  ｔｅｓｔ）（Ｓｃｈｅｎｋ  Ｆ  ＆  Ｍｏｒｒｉｓ  ＲＧ、Ｅｘｐ  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ  １９８５；５８（１）：１１−２８）；
（ハンティングトン病についてのモデル）例えば、キノリン酸注入（Ｍａｒｃｏ  Ｓら、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  ２００２年３月；５０（４）：３２３−３２）、トランスジェニック／ノックイン（Ｍｅｎａｌｌｅｄ  ＬＢおよびＣｈｅｓｓｅｌｅｔ  ＭＦ、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｓｃｉ．  ２００２年１月；２３（１）：３２−９に概説される）；ならびに
（加齢についてのモデル）老年のマウス／ラットを使用する。
【０１３８】
これらのモデルは、投与されるＦＴＹ７２０組成物および送達系（意図される組成物の処方を含む）に従うべき方法に必要とされる任意の特定の適応について意図される。
【０１３９】
健常モデルおよび／または疾患モデル／外傷モデル／障害モデルを使用する、インビボにおいて関連するリガンド／レセプターの役割の研究を、以下のプロトコル（脳室内投与）に従って実施する。以下のプロトコルではラットについて記載されているが、マウスについても利用可能である：
（神経発生−化合物のインビボ試験：）
（動物：）オスのラット（マウスについては相当するプロトコルもまた使用される）。動物舎：１２時間明期／暗期体制；飼料：標準的な固形飼料；自由に摂食および飲水；標準的なケージ中に５匹の動物；
（化合物投与：）ＢｒｄＵまたは３Ｈ−チミジンもしくは他の増殖マーカーおよび関連する化合物の、１〜１４日間にわたる浸透圧ミニポンプによる脳注入。注入後０〜４週間の間の生存。
【０１４０】
（手術：）Ｐｅｎｃｅａ  Ｖら（２００１）にある通りの、動物取り扱いおよび手術法。
【０１４１】
（ポンプの除去：）ポンプの挿入から１〜１４日間の後：動物の麻酔下。
【０１４２】
（脳試料収集：）動物のナルコーシス；ＮａＣｌでの経噴門灌流；パラホルムアルデヒド（４％）溶液での灌流；脳を取り出し、パラホルムアルデヒド（４％）溶液中で一晩保存；４℃の３０％ショ糖溶液中に移す；嗅球（ＯＢ）を分離；メチルブタンの中で−８０℃にて凍結させ、そして−８０℃のフリーザーの中で保存する。
【０１４３】
（切片化：）クリオトームでの同側ＯＢの矢状切片化および残りの脳の冠状切片化。
【０１４４】
（免疫組織化学：）増殖性脳領域、細胞移動路（ｍｉｇｒａｔｏｒｙ  ｓｔｒｅａｍ）、および臨床的に関連する領域に関して、分析および定量化を行う（これらの領域のすべてではなく、一部についてを、以下に例示する）。
【０１４５】
以下の抗体の１種または数種を使用した、ＤＡＢ（ジアミンベンジジン）または蛍光の可視化：ニューロンマーカーとして、ＮｅｕＮ、Ｔｕｊ１、抗チロシン水酸化酵素、抗ＭＡＰ−２など；神経膠マーカーとして、抗ＧＦＡＰ、抗Ｓ１００など；希突起神経膠細胞マーカーとして、抗ＧａｌＣ、抗ＰＬＰなど。ＢｒｄＵ可視化について：抗ＢｒｄＵ。
【０１４６】
（定量：）Ｉ）同側脳領域における、ＤＡＢ−ＢｒｄＵ免疫組織化学および立体解析学的定量。ＩＩ）４週間生存群：同側半球；ａ）ＤＡＢ免疫組織化学（立体解析学）による、背側の海馬歯状回、背側の海馬ＣＡ１／白板、嗅球（ＯＢ）、脳室下ゾーン（ＳＶＺ）、および線条体のＢｒｄＵ陽性細胞の定量化；ｂ）すべての（ＯＢ、ＤＧ、ＣＡ１／白板、ＳＶＺ、壁−対−線条体）構造体についての共焦点顕微鏡での二重染色の定量：系列マーカーでの二重染色の、ＢｒｄＵ＋の検査。さらなる実験の詳細は、Ｐｅｎｃｅａ  Ｖら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ９月１日（２００１），２１（１７）：６７０６−１７において見出され得る。
【０１４７】
（鑑別分析：）定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＱＰＣＲ）またはレーザー走査サイトメトリー（ＬＳＣ）が、実施され得る。マイクロアレイ分析およびＳＥＬＤＩ（表面増強レーザー脱着／イオン化）質量分光法を用いるプロテオミクスベースの研究もまた、使用され得る。
【０１４８】
本発明の１つ以上の実施形態の詳細は、添付した上述の記載において示されている。本明細書に記載された方法および材料と同様または等価である任意の方法および材料は、本発明の実施または試験において使用され得るが、好ましい方法および材料はここに記載される。本発明の他の特徴、目的、および利点は、明細書および特許請求の範囲から明らかである。
【０１４９】
本願の明細書および添付した特許請求の範囲において、単数形は、文脈がそうでないことを明らかに示すのでない限り、複数の対象物を含む。他に定義されている場合を除き、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解される意味と同様の意味を有する。そうでないことが明らかに記述されている場合を除き、本明細書で使用または意図されている技術は、当業者に周知である標準的な方法論である。
【０１５０】
（参考文献）
【０１５１】
【表６−１】
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【０１５２】
【表６−２】
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【０１５３】
【表６−３】
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【０１５４】
【表６−４】
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【０１５５】
【表６−５】
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【０１５６】
【表６−６】
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【０１５７】
【表６−７】
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【０１５８】
【表６−８】
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本明細書中で引用されるすべての特許および刊行物は、本明細書中に参考文献として援用される（２００３年９月１２日出願の米国特許出願第６０／５０２，３８６号、２００３年５月８日出願の米国特許出願第１０／４３４，９４３号、２００２年７月２日出願の米国特許出願第６０／３９３，１５９号、および２００２年５月８日出願の同６０／３７９，１１４号により、以前の開示を含む）。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【配列表】
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【外国語明細書】
2011126918000001.pdf