(57)【要約】【課題】広範な病気および疾患状態を寛解すること。【解決手段】本発明は、グレリンを用いて炎症誘発性のサイトカイン発現を阻害する方法を提供する。また、本発明により、グレリンまたはそのフラグメントを投与する工程を包含する、食欲の喪失を処置する方法が提供される。また、本発明により、グレリンまたはそのフラグメントを投与する工程を包含する、敗血症を処置する方法が提供される。本発明は、被験体における炎症を処置する方法を提供し、これは、有効量のグレリンを被験体に投与する工程を包含する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
（発明の背景）
炎症は、細胞および血管組織の損傷に対する反応を表す身体の複雑なステレオタイプの反応である。炎症の詳細なプロセスの発見は、炎症と免疫応答との間の密接な関係を明らかにした。炎症応答の主な特徴は、血管拡張（すなわち、乾癬した領域への血流を増加させるように血管が広がること）；血管透過性（拡散性成分がその部位に入ることを可能にする）；化学走性による細胞浸潤、または血管の壁を通って損傷部位への炎症細胞の指向性移動；多くの器官の生合成プロフィール、代謝プロフィールおよび異化プロフィールの変化；ならびに免疫系の細胞の活性化および血漿の複雑な酵素系の活性化である。
【０００２】
炎症の２つの形態（急性および慢性）が存在する。急性炎症は、数個の段階に分けられ得る。炎症応答の初期の全体の事象は、一時的な血管収縮（すなわち、血管壁の平滑筋の収縮によって引き起こされる血管の狭窄）であり、これは皮膚のブランチング（白化）として見られ得る。これは、数分後、数時間後および数日後に起こる数個の段階に続く。第一は、急性血管反応であり、これは組織損傷の数秒以内に続き、数分間続く。この結果、血管内皮の変化に起因して血管拡張および毛細血管透過性の増加が生じ、これは発赤を生じる血流（紅斑）の増加（充血）および組織への流体の進入（水腫）をもたらす。
【０００３】
急性血管反応は、急性細胞応答に続き得、これは次の数時間起こる。この段階の特徴は、組織における顆粒球（特に、好中球）の出現である。これらの細胞は、最初にそれら自体、血管内の内皮細胞に付着し（辺縁趨向）、次いで、周辺の組織に入る（漏出）。この段階の間、赤血球もまた組織に漏出し得、出血を生じ得る。血管が損傷すると、フィブリノゲンおよびフィブロネクチンが損傷部位に沈着し、血小板が凝集し活性化され、赤血球が「連銭」と呼ばれるものに一緒に重なって、出血を止めるのを補助し、血餅の形成を助ける。死細胞および瀕死の細胞は、膿形成の一因となる。損傷が十分に重篤である場合、慢性細胞応答がその後の数日間にわたって続き得る。炎症のこの段階の特徴は、マクロファージおよびリンパ球からなる単核細胞浸潤の出現である。マクロファージは、微生物の死滅、細胞の細胞残屑および組織残屑の除去、ならびに組織の再構築に関与する。
【０００４】
慢性炎症は、長期間（数週間、数ヶ月、または無期限でさえある）の炎症応答であり、その長期にわたる時間経過は、組織の炎症に対する原因となる刺激の持続によって引き起こされる。この炎症プロセスは、必然的に、組織損傷を引き起こし、そして治癒および修復の同時の試みを伴う。慢性炎症の正確な性質、程度および時間経過は可変性であり、原因因子とそれを除去するための身体の試みとの間のバランスに依存する。慢性炎症を生じる病因因子としては、以下が挙げられる。（ｉ）宿主防御を回避するかまたは宿主防御に抵抗し、それゆえ長期間組織に存在する感染性生物（ヒト結核菌、放線菌類、ならびに多くの真菌、原生動物、および後生動物の寄生虫が挙げられる）。このような生物は、一般に、食作用を回避し得るかまたは食細胞内で生存し得、そして急性組織損傷を引き起こす毒素をほとんど生成しない。（ｉｉ）生来抵抗性ではないが宿主防御から保護される損傷領域に存在する感染性生物。例は、水分が抜かれていない膿瘍腔内の膿で成長する細菌であり、この膿瘍腔内は、宿主免疫および血液に運ばれる治療因子（例えば、抗生物質）の両方から保護される。いくつかの場所は、特に、慢性的に膿瘍形成する傾向がある（例えば、骨および胸膜腔）。（ｉｉｉ）酵素による分解または食作用によって除去され得ない刺激性の非生存異物。例としては、創傷に移植される広範な物質（木のとげ、グリット、金属およびプラスチック）、吸入される広範な物質（シリカ粉塵および他の粒子もしくは繊維）、または故意に導入される広範な物質（外科的プロテーゼ、縫合糸など）が挙げられる。また、移植片も挙げられる。分解され得ない死んだ組織成分は同様の効果を有し得る（例えば、破裂性類表皮嚢胞または骨髄炎の死んだ骨（分離片）の破片に由来するケラチン鱗片）。（ｉｖ）いくつかの場合では、慢性炎症への刺激は正常な組織成分であり得る。これは、身体のそれ自体の組織への免疫応答の調節異常が理由で疾患プロセスが開始され、維持される炎症性疾患（すなわち、自己免疫疾患）で生じる。この応答は、高齢の被験体および老齢の被験体で見られる。（ｖ）慢性炎症病理学的プロセスによって特徴付けられる多くの疾患について、根本的な原因は未知のままである。その例はクローン病である（図１１）。
【０００５】
炎症および生得的な免疫の活性化は、遺伝子治療用のベクターとして使用される複製能力のないアデノウイルス（Ａｄ）に対する共通の応答である（非特許文献１；非特許文献２）。補体系は、生得的な免疫および炎症の中心となる（非特許文献３）。補体系は複数の膜結合因子および血液因子からなるので、この補体系は、静脈内投与されたベクターの送達に特に関連する。実際に、非特許文献４は、補体が、異なるアデノウイルス血清型でチャレンジしたときに、大多数のヒト血漿サンプルで活性化されたこと；補体活性化が抗Ａｄ抗体に完全に依存していたことを示した（Ｃｉｃｈｏｎ（２００１））。
【０００６】
補体媒介性不活性化は、多段階の酵素的カスケードであり、これは最終的に細胞膜の貫通およびその後の侵入する生物の溶解を媒介する細胞膜傷害複合体（ＭＡＣ）の形成を生じる。これは、抗原−抗体複合体（古典的経路）によって、またはある特定の多糖類、ウイルスおよび細菌によって活性化される抗体非依存性の経路（副経路）を介してのいずれかで惹起される。
【０００７】
ヒトの器官および細胞はそれ自体、補体媒介性溶解に対して保護されている。この保護は、補体不活性化因子の発現によって達成される。今までに。５つのヒト因子が公知である。ＣＤ３５（ＣＲ１）は細胞から放出され、主に外因的に作用する。対照的に、ＣＤ５９、ＣＤ４６（ＭＣＰ）、ＣＤ５５（ＤＡＦ）およびＨＲＦは、細胞膜に組み込まれている。ＣＤ４６（ＭＣＰ）は、古典的な膜貫通タンパク質であるが、ＨＲＦ、ＣＤ５９およびＣＤ５５は、ＧＰＩに固定されている。これらの因子は、２つの異なる段階で補体カスケードを妨げ得る：ＤＡＦ、ＣＲ１およびＭＣＰは、副経路および古典的経路の両方の初期段階で作用する。対照的に、ＣＤ５９はおよびＨＲＦは、チャネル形成および溶解を生じる両方の経路の最終段階である細胞膜傷害複合体の組み立てを阻害する。
【０００８】
初期の炎症誘発性カスケードは、内毒素（また、リポ多糖類またはＬＰＳとしても公知である）によって惹起され得る。ＬＰＳは、グラム陰性細菌の細胞壁の主な構成物質のうちの１つである。先天性免疫系による保存微生物生産物（例えば、ＬＰＳ）の認識は、種々のシグナル伝達経路をもたらす。これらのシグナル伝達経路は、炎症応答のレベルおよび期間を調節し得るサイトカインの誘導および分泌を媒介する。内毒素性ショックを伴う全身性炎症応答（ＬＰＳの存在のような誘因によって引き起こされる）は、炎症誘発性サイトカインおよび抗炎症性サイトカインのレベルによって制御される。先天性免疫系の細胞による炎症誘発性サイトカインの産生は、侵入する病原体に対する初期の宿主防御を媒介することにおいて重要な役割を果たし（非特許文献５）、宿主の炎症応答の性質または期間を調節できないことは、多くの場合、慢性得炎症性疾患で観察されるような有害な宿主効果を媒介し得る。さらに、敗血症の初期段階では、宿主の炎症応答は、宿主組織損傷および致死性のショックを媒介する炎症誘発性サイトカインの産生の優勢な増加を伴う活性化過剰状態にあると考えられている（非特許文献６）。このことについて、炎症誘発性サイトカインを抑制および／または抗炎症性サイトカインを増強する能力（すなわち、ＩＬ−１０）が、内毒素の毒性効果を大きく減少させることが示されている（非特許文献７；非特許文献８）。
【０００９】
グレリンは、胃のＸ／Ａ様細胞から主に分泌される２８個のアミノ酸がアシル化されたポリペプチドである（非特許文献９）。グレリンは、齧歯類（非特許文献１０、非特許文献１１）およびヒト（非特許文献１２）において成長ホルモン（ＧＨ）放出、エネルギーバランス、食物摂取および体重の長期間の調節に関与している。グレリン遺伝子は、１１７個のアミノ酸ペプチドをコードし、これは、ラットとヒトとの間で８２％の相同性を共有するプレ−プロ−グレリン（ｐｒｅ−ｐｒｏ−ｇｈｒｅｌｉｎ）である（非特許文献９）。グレリンは、唯一公知の循環食欲促進因子とみなされており、視床下部ＮＰＹ／Ｙ１経路の活性化を通じて食物摂取におけるレプチンにより誘導される減少への拮抗作用を発揮する（非特許文献１１、非特許文献１３）。グレリンの効果は、成長ホルモン分泌促進物質レセプターＧＨＳ−Ｒと呼ばれる７つの膜貫通Ｇタンパク質結合レセプターを介して媒介される（非特許文献１４）。このレセプターは、フグからヒトまで進化的に保存されており（非特許文献１５）、これは、グレリンが、生物の成長および発達において基本的な役割を果たすことを示す。ＧＨＳ−Ｒ１ａ型レセプターは、ＧＨ放出に関与しており、ＧＨＳ−Ｒ  １ｂとして識別されるスプライスされていない非機能的なレセプターｍＲＮＡ改変体は、リンパ器官を含む広範な組織内で同定されている（非特許文献１６）。ヘキサレリンは、合成類似化合物であり、ＧＨＳ−Ｒに結合してブタおよびウシの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）からのＧＨ分泌を誘導し、これは、ＧＨＳ−Ｒリガンドが免疫系にいくらかの直接的な影響を及ぼし得ることを示す（非特許文献１７）。さらに、リンパ系におけるＧＨＳ−Ｒの広範な組織分布は、グレリンおよびＧＨＳ−Ｒリガンドが内分泌系、神経系および免疫系の間のシグナル調節因子として機能し得ることを示唆する。
【００１０】
免疫細胞から放出される炎症性サイトカインは、中枢神経系（ＣＮＳ）で作用して、食物摂取およびエネルギー恒常性を制御することが示されている（非特許文献１８）。食物摂取の減少または食欲不振は、疾病、損傷または炎症の最も一般的な症状のうちの１つである（非特許文献１９）。ＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＴＮＦ−αのようなサイトカインは、炎症に関連するるいそう（非特許文献２０）、老化における慢性的な軽度の炎症（非特許文献２１、非特許文献２２）およびアテローム性動脈硬化症（非特許文献２３）に関与している。当該分野で必要とされていることは、広範な病気および疾患状態を寛解するために、グレリンのような外因性因子によって炎症性サイトカイン産生を調節することである。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｊｏｏｓｓ，Ｋ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．，２００３年，１０，ｐ．９５５−９６３
【非特許文献２】Ｚａｉｓｓ，Ａ．Ｋ．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，２００２年，７６，ｐ．４５８０−４５９０
【非特許文献３】Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｍ．Ｊ．Ｎ  Ｅｎｇ  Ｊ  Ｍｅｄ，２００１年，３４４，ｐ．１０５８−１０６６および１１４０−１１４４
【非特許文献４】Ｃｉｃｈｏｎら，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ，２００１年，８，ｐ．１７９４−１８００
【非特許文献５】Ｏ’Ｎｅｉｌｌ  ＬＡ，Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ  ＣＡ．，Ｔｈｅ  ＩＬ−１  ｒｅｃｅｐｔｏｒ／ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ：  ｃｒｕｃｉａｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｈｏｓｔ  ｄｅｆｅｎｓｅ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ．，２０００年５月，２１（５），ｐ．２０６−９
【非特許文献６】Ｃｏｈｅｎ，Ｊ  Ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ｓｅｐｓｉｓ．，Ｎａｔｕｒｅ，２００３年，４２０，ｐ．８８５−８９１
【非特許文献７】Ｂｅｒｇ  ＤＪ，Ｋｕｈｎ  Ｒ，Ｒａｊｅｗｓｋｙ  Ｋ，Ｍｕｌｌｅｒ  Ｗ，Ｍｅｎｏｎ  Ｓ，Ｄａｖｉｄｓｏｎ  Ｎ，Ｇｒｕｎｉｇ  Ｇ，Ｒｅｎｎｉｃｋ  Ｄ．Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１０  ｉｓ  ａ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ＬＰＳ  ｉｎ  ｍｕｒｉｎｅ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｅｎｄｏｔｏｘｉｃ  ｓｈｏｃｋ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｓｈｗａｒｔｚｍａｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．，１９９５年１１月，９６（５），ｐ．２３３９−４７
【非特許文献８】Ｈｏｗａｒｄ  Ｍ，Ｍｕｃｈａｍｕｅｌ  Ｔ，Ａｎｄｒａｄｅ  Ｓ，Ｍｅｎｏｎ  Ｓ．，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １０  ｐｒｏｔｅｃｔｓ  ｍｉｃｅ  ｆｒｏｍ  ｌｅｔｈａｌ  ｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．，１９９３年４月１日，１７７（４），ｐ．１２０５−８
【非特許文献９】Ｋｏｊｉｍａら、Ｎａｔｕｒｅ．，１９９９年，４０２，ｐ．６５６−６６０
【非特許文献１０】Ｔｓｃｈｏｐら、Ｎａｔｕｒｅ，２０００年，４０７，ｐ．９０８−９１３
【非特許文献１１】Ｎａｋａｚａｔｏら、Ｎａｔｕｒｅ．，２００１年，４０９，ｐ．１９４−１９８
【非特許文献１２】Ｃｕｍｍｉｎｇｓら、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，２００２年，３４６，ｐ．１６２３−１６３０
【非特許文献１３】Ｉｎｕｉ，Ａ．Ｇｈｒｅｌｉｎ  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，２００１年，２，ｐ．５５１−５６０
【非特許文献１４】Ｈｏｗａｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ．，１９９６年，２７３，ｐ．９７４−９７７
【非特許文献１５】Ｐａｌｙｈａら、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，２０００年，１４，ｐ．１６０−１６９
【非特許文献１６】Ｇｎａｎａｐａｖａｎら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．，２００２年，８７，ｐ．２９８８−２９９１
【非特許文献１７】Ｄａｎｔｚｅｒ，Ｒ．Ａｎｎ．ＮＹ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，２００１年，９３３，ｐ．２２２−２３４
【非特許文献１８】Ｈａｒｔ，ＢＬ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｂｉｏｂｅｈａｖ．Ｒｅｖ．，１９９８年，１２，ｐ．１２３−１３７
【非特許文献１９】Ｋｏｔｌｅｒ，Ｄ．Ｐ．Ａｎｎ．Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄ．，２０００年，１３３，ｐ．６２２−６３４
【非特許文献２０】Ｅｒｓｈｌｅｒら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．，２０００年，５１，ｐ．２４５−２７０
【非特許文献２１】Ｂｒｕｕｎｓｇａａｒｄら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．，２００１年，８，ｐ．１３１−１３６
【非特許文献２２】ＭｃＣａｒｔｙ，Ｍ．Ｆ．Ｍｅｄ．Ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ，１９９９年，５２，ｐ．４６５−４７７
【非特許文献２３】Ｂｏｃｈｋｏｖら、Ｎａｔｕｒｅ．，２００２年，４１９，ｐ．７７−８１
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
（発明の要旨）
本発明は、グレリンまたはそのフラグメントを投与する工程を包含する、炎症を処置する方法を提供する。
【００１３】
また、本発明により、グレリンまたはそのフラグメントを投与する工程を包含する、食欲の喪失を処置する方法が提供される。
【００１４】
また、本発明により、グレリンまたはそのフラグメントを投与する工程を包含する、敗血症を処置する方法が提供される。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
被験体の炎症を処置する方法であって、該被験体にグレリンの有効量を投与する工程を包
含する、方法。
（項目２）
被験体の炎症を処置する方法であって、該被験体に配列番号１またはそのフラグメントの
有効量を投与する工程を包含する、方法。
（項目３）
被験体の炎症を処置する方法であって、該被験体に配列番号２またはそのフラグメントの
有効量を投与する工程を包含する、方法。
（項目４）
前記炎症が感染プロセスと関連する、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記感染プロセスが、単純ヘルペス１型ウイルス、単純ヘルペス２型ウイルス、サイトメ
ガロウイルス、エプスタイン−バーウイルス、水痘‐帯状疱疹ウイルス、ヒトヘルペスウ
イルス６、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８、痘瘡ウイルス、水疱性口
内炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイ
ルス、Ｅ型肝炎ウイルス、ライノウイルス、コロナウイルス、インフルエンザＡ型ウイル
ス、インフルエンザＢ型ウイルス、麻疹ウイルス、ポリオーマウイルス、ヒトパピローマ
ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、アデノウイルス、コクサッキーウイルス、デング熱ウ
イルス、流行性耳下腺炎ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ラウス肉腫ウイル
ス、黄熱病ウイルス、エボラウイルス、マルブルクウイルス、ラッサ熱ウイルス、東馬脳
炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、マリーバレー熱ウイルス、
西ナイルウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ロタウイルスＡ、ロタウイルスＢ、ロタウ
イルス、シンドビスウイルス、サル免疫不全ウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス１型、
ハンタウイルス、風疹ウイルス、サル免疫不全ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス１型、お
よびヒト免疫不全ウイルス２型からなる群より選択されるウイルス感染である、項目４
に記載の方法。
（項目６）
前記感染プロセスが、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ，Ｍ．ｂｏｖｉｓ，Ｍ．ｂｏｖｉｓ
株ＢＣＧ，ＢＣＧ亜株，Ｍ．ａｖｉｕｍ，Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ，Ｍ．ａｆ
ｒｉｃａｎｕｍ，Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ，Ｍ．ｍａｒｉｎｕｍ，Ｍ．ｕｌｃｅｒａｎｓ，
Ｍ．ａｖｉｕｍ亜種「ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ，Ｎｏｃａｒｄｉａａｓｔｅｒ
ｏｉｄｅｓ，他のＮｏｃａｒｄｉａ種，Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ，
他のＬｅｇｉｏｎｅｌｌａ種，Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉ，他のＳａｌｍｏｎｅｌ
ｌａ種，Ｓｈｉｇｅｌｌａ種，Ｙｅｒｓｉｎｉａｐｅｓｔｉｓ，Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ
ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ，Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ，他のＰａｓｔｅ
ｕｒｅｌｌａ種，Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ，Ｌ
ｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ，Ｌｉｓｔｅｒｉａｉｖａｎｏｖｉｉ，Ｂｒ
ｕｃｅｌｌａａｂｏｒｔｕｓ，他のＢｒｕｃｅｌｌａ種，Ｃｏｗｄｒｉａｒｕｍｉｎａｎ
ｔｉｕｍ，Ｃｈｌａｍｙｄｉａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ，Ｃｈｌａｍｙｄｉａｔｒａｃｈｏ
ｍａｔｉｓ，Ｃｈｌａｍｙｄｉａｐｓｉｔｔａｃｉ，Ｃｏｘｉｅｌｌａｂｕｒｎｅｔｔｉ
，他のＲｉｃｋｅｔｔｓｉａｌ種，Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ種，Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕ
ｓａｕｒｅｕｓ，Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ，Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｃｏｃｃｕｓｐｙｏｇｅｎｅｓ，Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓａｇａｌａｃｔｉａｅ，
Ｂａｃｉｌｌｕｓａｎｔｈｒａｃｉｓ，Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ，Ｖｉｂｒｉｏ
ｃｈｏｌｅｒａｅ，Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ種，Ｎｅｉｓｅｒｒｉａｍｅｎｉｎｇｉ
ｔｉｄｉｓ，Ｎｅｉｓｅｒｒｉａｇｏｎｏｒｒｈｅａ，Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕ
ｇｉｎｏｓａ，他のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種，Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎ
ｚａｅ，Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｄｕｃｒｅｙｉ，他のＨｅｍｏｐｈｉｌｕｓ種，Ｃｌｏ
ｓｔｒｉｄｉｕｍｔｅｔａｎｉ，他のＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ種，Ｙｅｒｓｉｎｉａｅｎ
ｔｅｒｏｌｉｔｉｃａ，および他のＹｅｒｓｉｎｉａ種からなる群より選択される細菌感
染である、項目４に記載の方法。
（項目７）
前記感染プロセスが、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ，  Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ，
Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ，  Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ，  
Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ，  Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ，  および  Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈ
ｉｓｔｏｌｙｔｉｃａからなる群より選択される寄生虫感染である、項目４に記載の方
法。
（項目８）
前記感染プロセスが、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ，Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  
ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ，Ｈｉｓｔｏｐｌａｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ，Ａｓｐｅｒｇｉ
ｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ，Ｃｏｃｃｉｄｉｏｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ，Ｐａｒａｃ
ｏｃｃｉｄｉｏｄｅｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ，Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍ
ｉｔｉｄｉｓ，Ｐｎｅｏｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｎｉｉ，Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍ
ａｒｎｅｆｆｉ，およびＡｌｔｅｒｎａｒｉａ  ａｌｔｅｒｎａｔａからなる群より選択
される真菌感染である、項目４に記載の方法。
（項目９）
前記炎症が肝臓毒性と関連する、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記肝臓毒性が癌治療と関連する、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記癌治療がアポトーシス誘導である、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記癌治療が化学療法である、項目１０に記載の方法。
（項目１３）
前記癌治療が、化学療法およびアポトーシス誘導の併用である、項目１０に記載の方法
。
（項目１４）
前記炎症が炎症性疾患と関連する、項目１に記載の方法。
（項目１５）
前記炎症性疾患が、喘息、反応性関節炎、肝炎、脊椎関節炎、シェーグレン症候群、アル
ツハイマー病、およびアトピー性皮膚炎からなる群より選択される、項目１４に記載の
方法。
（項目１６）
前記炎症性疾患が自己免疫疾患と関連する、項目１４に記載の方法。
（項目１７）
前記自己免疫疾患が、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、全身性血管炎、インスリ
ン依存性真性糖尿病、多発性硬化症、実験的アレルギー性脳脊髄炎、乾癬、クローン病、
炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、アディソン病、円形脱毛症、セリアック病、甲状腺疾患、
および強皮症である、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記炎症が熱傷と関連する、項目１に記載の方法。
（項目１９）
前記炎症が肺炎症と関連する、項目１に記載の方法。
（項目２０）
前記炎症が癌と関連する、項目１に記載の方法。
（項目２１）
前記癌が、リンパ腫、白血病、菌状息肉腫、癌腫、腺癌、肉腫、神経膠腫、芽細胞腫、神
経芽細胞腫、プラスマ細胞腫、組織球腫、黒色腫、腺腫、低酸素性腫瘍、骨髄腫、エイズ
関連のリンパ腫もしくはエイズ関連の肉腫、転移性癌、膀胱癌、脳腫瘍、神経系癌、グリ
ア芽細胞腫、卵巣癌、皮膚癌、肝臓癌、口の扁平上皮癌、咽喉の扁平上皮癌、咽頭の扁平
上皮癌、および肺の扁平上皮癌、結腸癌、子宮頚部癌、乳癌、上皮癌、腎臓癌、泌尿生殖
器癌、肺癌、食道癌、頭頚部癌、造血性癌、精巣癌、結腸直腸癌、前立腺癌、および膵臓
癌からなる群より選択され得る、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
前記炎症が移植拒絶と関連する、項目１に記載の方法。
（項目２３）
被験体に有効量のグレリンを投与することによって、該被験体の食欲不振を処置する方法。
（項目２４）
前記食欲不振が疾患によって引き起こされる、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
前記疾患が食欲不振−悪液質症候群である、項目２３に記載の方法。
（項目２６）
前記食欲不振がアテローム性動脈硬化症によって引き起こされる、項目２３に記載の方
法。
（項目２７）
前記食欲不振が炎症によって引き起こされる、項目２３に記載の方法。
（項目２８）
前記炎症が軽度の炎症である、項目２３に記載の方法。
（項目２９）
前記軽度の炎症が加齢によって引き起こされる、項目２３に記載の方法。
（項目３０）
前記疾患が心理的疾患である、項目２４に記載の方法。
（項目３１）
前記心理的疾患が拒食症である、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
被験体の敗血症を処置する方法であって、該被験体に有効量のグレリンを投与する工程を
包含する、方法。
（項目３３）
前記敗血症が内毒血症である、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
体重１ｋｇあたり１ｍｇ〜５０ｍｇのグレリンが前記被験体に投与される、項目３２に
記載の方法。
（項目３５）
体重１ｋｇあたり１ｍｇ〜１５０ｍｇのグレリンが前記被験体に投与される、項目３２
に記載の方法。
（項目３６）
体重１ｋｇあたり約５ｍｇのグレリンが前記被験体に投与される、項目３２に記載の方法。
（項目３７）
サイトカインの分泌を阻害する方法であって、有効量のグレリンを投与する工程を包含す
る、方法。
（項目３８）
前記サイトカインが炎症部位で阻害される、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
前記サイトカインが、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＩＮＦ−γ、ＩＬ−１２および
ｐ４０からなる群より選択される、項目３７に記載の方法。
（項目４０）
前記サイトカインが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、および単核細胞からなる群より選択さ
れる細胞によって発現される、項目３７に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１（ａ−ｆ）は、ヒトＴ細胞における機能性ＧＨＳ−Ｒの発現を示す。（ａ）初代ヒトＴ細胞をＧＨＳ−Ｒについて標識し、そして脂質ラフトにおける亜細胞での局在が、休眠細胞および抗ＣＤ−３活性化細胞において可視化された。（ｂ）高度に精製されたヒト休眠Ｔ細胞のＧＨＳ−Ｒのフローサイトメトリー分析。特異的なＴ細胞標識化は、抗体特異的なブロッキングペプチドの存在下で打ち消される。コントロールＩｇＧにより染色されたＴ細胞は、特異的な標識のないことを示した。（ｃ）高度に精製された（＞９６％）活性化ＣＤ３＋ヒトＴ細胞のＧＨＳ−Ｒ発現のフロー分析。染色特異性は、抗体特異的ブロッキングペプチドの使用を介して示された。（ｄ）ＧＨＳ−Ｒ  ｍＲＮＡは、Ａｇｉｌｅｎｔ遺伝子チップ定量化および実時間ＲＴ−ＰＣＲを使用して評価する場合、Ｔ細胞活性化に際して上方制御され、値は平均±標準誤差（＊Ｐ＜０．０５）として表される。（ｅ）グレリンは培養されたヒトＴ細胞において細胞内カルシウム流動化を誘導する。Ｔ細胞を、グレリン（１００ｎｇ／ｍｌ）またはＳＤＦ−１（１００ｎｇ／ｍｌ）により６０秒刺激した。またＴ細胞をＧＨＳ−Ｒアンタゴニスト［Ｄ−Ｌｙｓ−３］−ＧＨＲＰ−６（１０−４Ｍ）により６０秒、続いてグレリン（１００ｎｇ／ｍｌ）により１８０秒刺激した。（ｆ）グレリンはヒトＴ細胞においてアクチン重合を生じる。細胞をグレリン（１００ｎｇ／ｍｌ）およびポジティブコントロールＳＤＦ−１（１００ｎｇ／ｍｌ）により２０分間処理し、そしてファロイジンＡＦ−５９４を用いてＦ−アクチンを染色した。
【図２】図２（ａ−ｂ）は、グレリンレセプターがヒト単球において発現される。（ａ）ヒトＰＢＭＣをＣＤ１４ＰＥおよびＧＨＳ−Ｒ  ＡＦ−４８８を用いて二重染色した。（ｂ）免疫蛍光標識は、精製された単球の細胞表面上にＧＨＳ−Ｒ発現のあることを明らかにし（上側パネル）、ネガティブコントロールは特異的な染色をいずれも示すことができなかった。
【図３】図３（ａ−ｄ）は、グレリンがヒトＰＢＭＣおよびＴ細胞からの炎症性サイトカインの発現を阻害することを示す。種々の用量のグレリン（閉じた円）の存在下または非存在下で、そして同時にＧＨＳ−Ｒアンタゴニスト［Ｄ−Ｌｙｓ−３］−ＧＨＲＰ−６（１０−４Ｍ；開いた円）と共に、２４時間、ヒトＰＢＭＣ（ｎ＝６）はＰＨＡ（１μｇ／ｍｌ）により刺激され（ａ−ｈ）、またＴ細胞は固定化抗ＣＤ３抗体を介して活性化された（ｅ−ｈ）。続いて収集された上清を、ＩＬ−１β（ａ、ｅ）、ＩＬ−６（ｂ、ｆ）およびＴＮＦ−α（ｃ、ｇ）およびＴＧＦ−β（ｄ）についてアッセイした。これらのサイトカインタンパク質のデータは平均±標準誤差として表され、６人の健常な成人ドナーを代表する（＊Ｐ＜０．０５）。（ｈ）ＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＴＮＦ−αの変化倍数。ＧＡＰＤＨにより規格化した後のＴ細胞におけるｍＲＮＡを、実時間ＲＴ−ＰＣＲにより測定した。
【図４】図４（ａ−ｅ）は、グレリンが、炎症性サイトカインのレプチン誘導性増加を示す。（ａ）ヒトＴ細胞表面上のレプチンレセプターの局在（Ｏｂ−Ｒ）。（ｂ−ｄ）ヒト成人ドナー（ｎ＝６）由来の、抗ＣＤ３  ｍＡｂ活性化Ｔ細胞を、種々の濃度のレプチンと共にインキュベートするか、または同時に種々の濃度のグレリンと生物学的に至適濃度のレプチン（１００ｎＭ）と共にインキュベートした。サイトカインの産生およびｍＲＮＡ発現を、培養２４時間後に評価した。試験したサイトカインは、（ｂ）ＩＬ−１β、（ｃ）ＩＬ−６、および（ｄ）ＴＮＦ−αであった。（ｅ）ＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＴＮＦ−αの変化倍数。ＧＡＰＤＨにより規格化した後の、実時間ＲＴ−ＰＣＲにより測定されたｍＲＮＡ発現。値は平均±標準誤差（＊Ｐ＜０．０５）として表される。
【図５】図５（ａ−ｇ）は、ヒトＴ細胞からグレリンが発現されそして分泌されることを示す。（ａ）休眠Ｔ細胞におけるグレリンおよびＧＨＳ−Ｒの同時発現（上側）；活性化Ｔ細胞はグレリンが強力ＧＭ１＋脂質ラフトに共存することを示す（中央）；プレ−プロ−グレリンは活性化されたヒトＴ細胞のゴルジ体において共存する（下側）。（ｂ）抗ＣＤ３  ｍＡｂ刺激されたＴ細胞からのグレリン分泌の動態。（ｃ）実時間ＲＴ−ＰＣＲによって評価された、Ｔ細胞活性化時のグレリンｍＲＮＡレベルの変化倍数。値は平均±標準誤差（＊Ｐ＜０．０５）として表される。（ｄ）固定化した抗ＣＤ３抗体の存在下、かつ異なる濃度のレプチンの存在下または非存在下において刺激されたＴ細胞において、培養の２４時間後にグレリン発現が定量化された。ＧＡＰＤＨにより規格化した後の、実時間ＲＴ−ＰＣＲにより測定されたグレリンｍＲＮＡの発現の変化倍数（閉じたバー）。グレリンタンパク質の産生をＥＩＡにより決定した（開いたバー）。（ｅ）ＧＡＰＤＨにより規格化した後のＧＨＳ−Ｒ遺伝子発現の変化倍数（ｎ＝６）。値は平均±標準誤差（＊Ｐ＜０．０５）として表される。（ｆ）食物摂取の制御における免疫−内分泌系を連結するシグナルとしてのグレリンの機能的役割に関する仮定モデル。（ｇ）リンパ器官と比較した、胃における比較上のグレリンｍＲＮＡ発現。
【図６】図６（ａ−ｆ）は、マウス内毒素血症モデルにおいて炎症性サイトカインの発現および食欲不振を阻害することを示す。ＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるＬＰＳおよびグレリンの投与の４時間後（４ｈ）および２４時間後（２４ｈ）の脾臓および肝臓における炎症性サイトカインｍＲＮＡについての実時間ＰＣＲ分析。サイトカインについてのＣｔ値は、ＧＡＰＤＨにより規格化され、そして屠殺したコントロール擬似物のＣｔ値を超える変化倍数（ｎ＝６）として表された。ＬＰＳ注射の４時間後および２４時間後に、グレリンは、脾臓においても肝臓においてもＩＬ−１β（ａ、ｄ）およびＩＬ−６（ｂ、ｅ）の転写を阻害した。脾臓において、ＴＮＦ−α発現がＬＰＳの注射の４時間後に減弱したが、グレリンは脾臓において２４時間でのＴＮＦ−α  ｍＲＮＡをさらに阻害することができなかった。しかしながら、グレリンは肝臓ではＴＮＦ−α  ｍＲＮＡを有意に抑制し続けた（ｃ、ｆ）。
【図７】図７（ａ−ｉ）は、ＬＰＳおよびグレリンの処置後の処置マウスの血清中のサイトカインレベルを示す。試験したサイトカインは、４時間におけるＩＬ−１β（ａ）、ＩＬ−６（ｂ）、およびＴＮＦ−α（ｃ）、ならびに２４時間におけるＩＬ−１β（ｄ）およびＩＬ−６（ｅ）であった。グレリンはＬＰＳチャレンジしたマウスにおける食物摂取を刺激する（ｆ）。グレリン処置は、末梢における基底のＩＬ−１βおよびＩＬαの分泌を阻害する（ｇ、ｈ）。グレリンはまた、ＬＰＳチャレンジの２４時間後の血清のＩＬ−１αレベルを阻害する（ｉ）。値は平均±標準誤差（＊Ｐ＜０．０５）として表される。
【図８】図８（ａ−ｄ）は、ＧＨＳ−Ｒ発現を示す。（ａ）活性化された精製ヒトＴ細胞におけるＧＨＳ−Ｒ発現であって、ヒト起源のＧＨＳ−ＲペプチドのＣ末端付近の領域の１８６−２６５アミノ酸を認識する抗体を利用する。（ｂ）休眠ヒトＴ細胞におけるＧＨＳ−Ｒの発現の示差パターン。下側のパネルは、休眠Ｔ細胞における点状のＧＨＳ−Ｒ発現を表し、ＧＭ−１ポジティブなラフトとのいくらか少ない共存を示す。（ｃ）抗ＣＤ３ｍＡｂおよびグレリン処理に対して応答したヒトＴ細胞の増殖（空いた円）およびＩＬ−２レベル（塗った円）。グレリンは、Ｔ細胞増殖にもＩＬ−２分泌にもいずれにも有意な効果（ｐ＜０．０５）を示さなかった。（ｄ）精製したＴ細胞における、抗グレリン標識化および抗プレ−プログレリン標識化の特異性。これらの画像は、同じ露光時間および同じゲインを使用して得た。
【図９】図９は、ヒトＰＢＭＣにおける総グレリンとアシル化グレリンが同時発現されることを示す。（ａ）抗ウサギ抗体、続いてＡＦ−５９４（赤）と結合体化した二次抗体を用いて、全グレリンが標識された。（ｂ）アシル化グレリンの発現は、抗モルモット抗体およびＡＦ−４８８（緑）と結合体化した特異的な二次抗体を使用して評価した。核をＤＡＰＩにより染色した。（ｃ）重ね合わせると、全グレリンを発現する細胞の約３０％がまたグレリンの活性なオクタノイル化形態を同時に発現することが表される。
【図１０】図１０は、Ｔ細胞由来のグレリンが炎症誘発性サイトカインおよび炎症誘発性ケモカインの恒常性の制御に重要であることを示す（ａ−ｂ）。Ｔ細胞におけるグレリン発現は、ｓｉＲＮＡを使用して下方制御された。グレリンレベルの低減は、ヒトＴ細胞の炎症誘発性サイトカインを増加させる。
【図１１】図１１は、クローン病を有する患者におけるグレリンレベルの減少を示す。
【図１２】図１２は、潰瘍性大腸炎におけるグレリン発現の減少を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
添付の図面（これらは、本明細書に組み込まれ、そして本明細書の一部を構成する）は、本発明のいくつかの実施形態を例示し、そしてその説明と一緒に本発明の原理を説明するのに役立つ。
【００１７】
（発明の詳細な説明）
本発明は、本発明の以下の好ましい実施形態についての詳細な説明を参照し、そして本明細書中に包含される実施例を参照し、そして図面および先の説明および以後の説明を参照して、より容易に理解され得る。
【００１８】
（Ａ．定義）
本方法および組成物が開示され記載される前に、他に特定されない限り、本発明は特定の方法にも特定の物質にも限定されず、また他に特定されない限り、特定の試薬にも限定されないことが理解される。なぜなら、無論、これらは変動し得るからである。また、本明細書中に使用される技術用語は、特定の実施形態を記載するのみの目的のためであって限定していることを意図されないことが、理解されるべきである。
【００１９】
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、その文脈が他を明確に示さない限り、複数の言及を含む。従って、例えば、「１つの物質」との言及が１つ以上の物質を含む、などである。
【００２０】
範囲は、「約」ある特定値から、および／または「約」特定の値までとして、本明細書中で表現され得る。このように範囲が表現される場合、別の実施形態においては、ある特定の値から、そして／または他の特定の値までを含む。同様に、値が概算値として表現される場合、先行詞「約」の使用により、特定の値が別の実施形態を形成することが理解される。おのおのの範囲の終点は他方の終点および他方の終点の独立性の両方に関して重要であることがさらに理解される。
用語「より高い（ｈｉｇｈｅｒ）」「増加する（ｉｎｃｒｅａｓｅｓ）」「上昇する（ｅｌｅｖａｔｅｓ）」または「上昇（ｅｌｅｖａｔｉｏｎ）」は、基底レベルより上へ増加すること、またはコントロールと比較した場合に増加することをいう。用語「低い（ｌｏｗ）」、「より低い（ｌｏｗｅｒ）」、「阻害する（ｉｎｈｉｂｉｔｓ）」、「阻害（ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）」、「減少させる（ｒｅｄｕｃｅｓ）」または「減少（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）」は、基底レベルより下へ減少すること、またはコントロールと比較した場合に減少することをいう。例えば、炎症または炎症を引き起こす薬剤の添加前、あるいは炎症の非存在下または炎症を引き起こす薬剤の添加の非存在下での基底レベルが、インビボでの正常レベルである。
【００２１】
用語「媒介する（ｍｅｄｉａｔｅ）」または「媒介（ｍｅｄｉａｔｉｏｎ）」および「調節する（ｍｏｄｕｌａｔｅ）」または「調節（ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ）」は、制御することまたは調節することを意味し、特に増加すること、増強すること、上昇すること、あるいは低下させること、阻害すること、または用語「媒介する」および「調節する」は全体的に相互交換可能に使用される。
【００２２】
「炎症」または「炎症性」は、傷害、感染または曝露に対する生きた組織の反応として定義される。炎症性応答を刺激するものは全て、炎症性であるといわれる。
【００２３】
「炎症性疾患」は、炎症と関連する任意の疾患状態として定義される。
【００２４】
「感染」または「感染プロセス」は、ある生物体が任意の型の外来物質または他の生物体により侵入されることとして定義される。感染の結果としては、その外来生物体の成長、毒素の産生、およびその宿主生物体への損傷が挙げられ得る。感染としては、例えば、ウイルス感染、細菌感染、寄生虫感染、および真菌感染などが挙げられる。
【００２５】
「肝臓毒性」は、肝臓における毒性物質の異常な蓄積として定義される。多くの診断基準が以下の毒性データの医療上の重要性を評価するために使用され得る：（ａ）傷害の型／重篤度、（ｂ）可逆性、（ｃ）特性の機構、（ｄ）種間の差異、（ｅ）毒性の感受性マーカーの利用能、（ｅ）安全マージン（無毒性用量／薬理学的活性用量）、および（ｆ）治療可能性。
【００２６】
「癌治療」は、癌と関連する症状を予防、処置または改善するのに有用な任意の処置または治療法として定義される。癌治療法としては、アポトーシス誘導、放射線治療、および化学療法が挙げられ得るが、これらに限定されない。
【００２７】
「移植」は、ある生物体から別の生物体へと器官または生体部分の移植として定義される。
【００２８】
「移植拒絶」は、被験体の生体における外来血液または外来組織の存在によって惹起される免疫応答として定義される。移植拒絶の１例において、移植された物質における外来抗原に対して抗体が形成される。
【００２９】
全体を通して使用される場合、「被験体」によって個体が意味される。従って、この「被験体」としては、家庭内動物（例えば、猫、イヌ、など）、家畜（例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギなど）、研究室動物（例えば、マウス、ウサギ、ラット、モルモットなど）、および鳥類が挙げられる。好ましくは、被験体は霊長類であり、そしてより好ましくはヒトである。
【００３０】
用語「コントロールレベル」または「コントロール細胞」は、変化が測定される標準として定義され、例えば、これらのコントロールは実験に供されないが、その代わりに規定の組のパラメーターに供されるか、またはこれらのコントロールは処置前レベルもしくは処置後レベルに基づく。
【００３１】
「処置すること」によって、被験体に本発明の物質の投与の際に疾患状態（すなわち、炎症応答）の改善が観察および／または検出されることが意味される。処置は、当該分野で公知の技術により検出される場合に、疾患症状（単数または複数）のポジティブな変化から、炎症応答の完全な回復までの範囲であり得る（例えば、疾患の重篤度または強度の低減、被験体の状態を示す医療的パラメーターの変更、苦痛の緩和または機能増加もしくは機能増強）。
【００３２】
「防止すること」によって、本発明の物質の被験体への投与後、その被験体が炎症症状を進行しないことを意味する。
【００３３】
（Ｂ．組成物）
開示される組成物を調製するために使用される成分および組成物自体が開示される。これらの物質および他の物質が本明細書中で開示され、そしてこれら物質の組み合わせ、これら物質のサブセット、これら物質の相互作用、これら物質の群などが開示される場合に、これら化合物の種々の個別の組み合わせおよび順列ならびに集合的な組み合わせおよび順列の各々についての特定の言及が明確に開示され得なくとも、各々は本明細書中で特に企図されそして開示されることが理解される。例えば、特定のペプチドが開示および考察され、そしてペプチドを含む多くの分子に対してなされ得る多くの改変が考察される場合、ペプチド内のアミノ酸と改変（特に反対に示されない限り、可能性のあるもの）との各々の組み合わせおよび順列、ならびにそれらのすべての組み合わせおよび順列が特に企図される。従って、分子Ａ、ＢおよびＣのクラスおよび分子Ｄ、ＥおよびＦのクラスが開示され、そして組み合わせ分子Ａ〜Ｄ例が開示される場合、各々は個別に記載されていなくても、各々は個別にかつ集合的に組み合わせを意味することが企図され、Ａ−Ｅ、Ａ−Ｆ、Ｂ−Ｄ、Ｂ−Ｅ、Ｂ−Ｆ、Ｃ−Ｄ、Ｃ−ＥおよびＣ−Ｆが開示されるとみなされる。同様に、これらの任意のサブセットまたは組み合わせもまた開示される。従って、例えば、Ａ−Ｅ、Ｂ−ＦおよびＣ−Ｅのサブグループが開示されるとみなされる。この概念は、本出願の全ての局面に適用され、その局面としては、これらの開示される組成物を作製および使用する方法における工程が挙げられるが、これに限定されない。従って、実施され得るさらなる種々の工程が存在する場合、これらのさらなる工程の各々は、開示される方法の任意の特定の実施形態により実施されるか、または開示される方法の実施形態の任意の特定の組み合わせにより実施され得る。
【００３４】
（１．グレリン）
用語「グレリン」は、上記に開示される任意のグレリン分子またはその機能性フラグメントを指すように全体を通して使用される。本発明は、被験体において炎症を処置する方法を含み、この方法は、被験体に有効量の配列番号１またはそのフラグメントを被験体に投与する工程を包含する。配列番号１は全長のグレリンを表す（受託番号ＡＢ０２９４３４）。また、被験体において炎症を処置する方法が企図され、この方法は、配列番号３（全長のグレリンのアミノ酸１〜１８）の有効量、またはそのフラグメントの配列番号４（全長のグレリンのアミノ酸１〜１４）の有効量、またはそのフラグメントの配列番号５（全長のグレリンのアミノ酸１〜１０）の有効量、またはそのフラグメントの配列番号６（全長のグレリンのアミノ酸１〜５）の有効量を被験体に投与する工程を包含する。また、機能性グレリン分子である上記配列のうちのいずれかの長さのフラグメントを投与する工程が企図される。
【００３５】
グレリンは、機能性の細胞表面ＧＨＳ−Ｒを介して、ヒトＰＢＭＣおよびＴ細胞による炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＴＮＦ−α）の発現および産生に対して、特異的阻害効果および選択的阻害効果の両方を働かせる。初代ヒトＴ細胞および培養されたヒトＴ細胞におけるＧＨＳ−Ｒは、他の古典的ＧＰＣＲと同様に、その天然のリガンドであるグレリンとの連結の際に強力な細胞内カルシウム放出を惹起し、そして細胞内で活性化の際にＧＭ１脂質ラフトと優先的に会合される。Ｔ細胞における機能性ＧＨＳ−Ｒの発現と一貫して、グレリンは、Ｔ細胞内でアクチン重合を能動的に誘導する。ケモカイン（ＳＤＦ−１）と同様に、グレリン処置は、白血球の細胞性分極を導き、そして休眠リンパ球での直鎖状の皮質性形態から、分極した活性化Ｔ細胞での先端および接触領域においてより集中した形態への、アクチンの分布の変化を導く（Ｔａｕｂら、Ｓｃｉｅｎｃｅ．２６０：３５５−３５８（１９９３），Ｉｎｕｉ，Ａ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５９：４４９３−４５０１（１９９９））。これらのＧＰＣＲ様の再分布様式は、免疫細胞のシグナル伝達および輸送におけるＧＨＳ−Ｒに対する重要な役割を示す。
【００３６】
以前には、グレリンは胃の内分泌様細胞により産生されるのみであり、次いで循環中に放出されると考えられていた。多くの分析技術により、グレリンはＴ細胞およびＰＢＭＣの両方によって、多くの免疫由来サイトカインと同様の様式で内在性に産生され分泌されることが実証されている。ヒトドナー由来の試験した大部分のＴ細胞は、低レベルの内在性グレリンを構成的に発現し、細胞の活性化の際に有意に増加されることを見出した。活性化Ｔ細胞は、グレリンタンパク質を発現し、産生する。このことは、Ｔ細胞内でプレ−プロペプチドが能動的に切断されて、活性なグレリンペプチドを生じなければならないことを示す。いくつかのサイトカイン（例えば、ＴＧＦ−β）およびホルモン（例えば、ＴＳＨ）と同様に、これらの前駆体タンパク質は、合成され、続いて必要時での迅速な切断および使用のために保管される。さらに、Ｔ細胞レセプターリガンドを介した活性化後のＴ細胞からの、成熟型グレリンの発現および分泌が実証されている。ヒト被験体において、胃切除術は循環中のグレリンの３５％〜５０％のみの減少を生じること、およびグレリンレベルは胃切除術前のレベルの２／３まで増加することを考えると、循環中のグレリンを維持するために他の組織が補償することを示している（Ｈｏｓｏｄａ  Ｈら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２００３  Ｊａｎ  ３；２７８（１）：６４−７０）。Ｔ細胞からのグレリンの分泌は、免疫細胞由来のグレリンが循環中のグレリンのうちの残りの濃度の一部を構成することを示している。さらに、グレリンはまた、３番目のセリン残基のヒドロキシル基がｎ−オクタン酸によりアセチル化され、そしてこのアセチル化がこのポリペプチドの生物学的活性のいくらかに重要である、単なる公知のホルモンとみなされる（Ｋｏｊｉｍａら（１９９９））。Ｎ末端アセチル化されたペプチドは、コレステロールに富んだミクロ領域において優先的に凝集することが公知であり（Ｂａｓａら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．３４３：２５−２８（２００３））、そしてグレリンは活性化Ｔ細胞において免疫反応性であり、コレステロールに富んだＧＭ１＋領域内で高度に共存する。これらの結果は、グレリンが原形質膜に特異的に標的化され、そのグレリン自身の膜貫通レセプターとの相互作用を促進し、レセプター−リガンド相互作用を最適に媒介することを示す。このような経路は、免疫応答の制御におけるグレリンの役割を示す。さらに、グレリン産生の局在性は、局所的なミクロ環境内での進行中の応答およびレプチン媒介性応答の迅速な制御において重要な役割を果たす。
【００３７】
（２．ホモロジー／同一性）
本明細書中に開示される遺伝子および開示されるタンパク質の任意の公知の改変体および誘導体、または生じ得る改変体および誘導体を規定する１つの方法は、特定の既知の配列に対する相同性に関してそれらの改変体および誘導体を定義することを介することが、理解される。用語「グレリン」は、任意のグレリン分子またはその機能性フラグメントを指すため、全体にわたって使用される。「フラグメント」は、参照配列の任意の下位部分として定義される。例えば、配列番号２はグレリンをコードする核酸分子のうちの特定の配列をしめし、そして配列番号１は、配列番号２によりコードされるタンパク質（グレリンタンパク質）の特定の配列を示す。本発明の方法は、配列番号１により示される全長のグレリン（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＢ０２９４３４）、およびそのフラグメントを使用することを含む。また、配列番号１より長い配列が含まれ、そして機能性グレリン分子の前および／または機能性グレリン分子の後のアミノ酸を含む。本明細書中に開示される方法に有用である、配列番号１のフラグメントの例および配列番号１の機能性分子より長い配列としては、以下が挙げられる：アミノ酸１−５（配列番号６に示される）、アミノ酸１−６、アミノ酸１−７、アミノ酸１−８、アミノ酸１−９、アミノ酸１−１０（配列番号５に示される）、アミノ酸１−１１、アミノ酸１−１２、アミノ酸１−１３、アミノ酸１−１４（配列番号４に示される）、アミノ酸１−１５、アミノ酸１−１６、アミノ酸１−１７、アミノ酸１−１８（配列番号３に示される）、アミノ酸１−１９、アミノ酸１−２０、アミノ酸１−２１、アミノ酸１−２２、アミノ酸１−２３、アミノ酸１−２４、アミノ酸１−２５、アミノ酸１−２６、アミノ酸１−２７、アミノ酸１−２８、アミノ酸１−２９、アミノ酸１−３０、アミノ酸１−３１、アミノ酸１−３２、アミノ酸１−３３、アミノ酸１−３４、アミノ酸１−３５、アミノ酸１−３６、アミノ酸１−３７、アミノ酸１−３８、アミノ酸１−３９、アミノ酸１−４０、アミノ酸１−４１、アミノ酸１−４２、アミノ酸１−４３、アミノ酸１−４４、アミノ酸１−４５、アミノ酸１−４６、アミノ酸１−４７、アミノ酸１−４８、アミノ酸１−４９、アミノ酸１−５０、アミノ酸１−７５、アミノ酸１−１００、アミノ酸１−１２５、アミノ酸１−１５０、アミノ酸１−１７５、アミノ酸１−２００、アミノ酸１−２２５、アミノ酸１−２５０、アミノ酸１−３００、アミノ酸１−３５０、アミノ酸１−４００、アミノ酸１−４５０、およびアミノ酸１−５００、ならびにこれらの間の全ての長さのフラグメント。
【００３８】
また、本明細書中のこれらの遺伝子および他の遺伝子ならびにタンパク質改変体が特に開示され、これらは提示された配列に対して、少なくとも７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の相同性を有する。当業者は、２つのタンパク質または核酸（例えば、遺伝子）の相同性を決定する方法を容易に理解する。例えば、相同性が最高レベルであるように２つの配列を整列させた後、相同性が計算され得る。
【００３９】
相同性を計算する別の方法は、公知のアルゴリズムにより実施され得る。比較のための最適な配列整列は、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ  Ａｄｖ．  Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所相同性アルゴリズム、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０））の相同性整列アルゴリズム、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：２４４４（１９８８））の類似性検索方法、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）におけるこれらのアルゴリズムのコンピューター実行物（ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴＡ）、または目視検査（ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ）によって実行され得る。
【００４０】
同じ型の相同性は、例えば、Ｚｕｋｅｒ，Ｍ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：４８−５２，（１９８９）、Ｊａｅｇｅｒら  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：７７０６−７７１０（１９８９）、Ｊａｅｇｅｒら  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８３：２８１−３０６（１９８９）（これらは、核酸の整列に関する少なくとも材料について、本明細書中で参考として援用される）において開示されるアルゴリズムによって、核酸に対して得られ得る。
【００４１】
（３．核酸）
核酸ベースの種々の分子が本明細書中で開示され、例えばグレリンおよび本明細書中に開示される任意の他のタンパク質をコードする、例えば核酸、ならびに種々の機能性核酸が挙げられる。開示される核酸は、例えば、ヌクレオチド、ヌクレオチドアナログ、またはヌクレオチド置換体から構成される。これらの分子および他の分子の非限定的な例は本明細書中に考察される。例えば、ベクターが細胞中で発現される場合、発現されるｍＲＮＡは代表的にはＡ、Ｃ、ＧおよびＵから構成されることが理解される。同様に、例えば、アンチセンス分子が細胞内または例えば外因性の送達を介して細胞環境に導入される場合、細胞内環境におけるアンチセンス分子の分解を低減するヌクレオチドアナログからそのアンチセンス分子が構成されることが有利であることが、理解される。
【００４２】
（ａ．ヌクレオチドおよび関連分子）
ヌクレオチドは、塩基部分、糖部分およびリン酸部分を含む分子である。ヌクレオチドは、リン酸部分および糖部分を介して一緒に連結されて、ヌクレオチドの連結を形成し得る。ヌクレオチドの塩基部分は、アデニン−９−イル（Ａ）、シトシン−１−イル（Ｃ）、グアニン−９−イル（Ｇ）、ウラシル−１−イル（Ｕ）、およびチミン−１−イル（Ｔ）であり得る。ヌクレオチドの糖部分は、リボースまたはデオキシリボースである。ヌクレオチドのリン酸部分は、５価のリン酸である。ヌクレオチドの非限定的な例は、３’−ＡＭＰ（３’−アデノシン一リン酸）または５’−ＧＭＰ（５’−グアノシン一リン酸）である。
【００４３】
ヌクレオチドアナログは、塩基部分、糖部分またはリン酸部分のいずれかにいくつかの型の改変を含むヌクレオチドである。ヌクレオチドに対する改変は当該分野で公知であり、例えば、５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、および２−アミノアデニンが挙げられ、そして糖部分またはリン酸部分における改変が挙げられる。
【００４４】
ヌクレオチド置換体は、ヌクレオチドと同様の機能特性を有するが、リン酸部分を含まない分子であり、例えばペプチド核酸（ＰＮＡ）である。ヌクレオチド置換体は、ワトソン−クリック様式またはフーグスティーン様式で核酸を認識するが、リン酸部分以外の部分を介して互いと連結される分子である。ヌクレオチド置換体は、適切な標的核酸と相互作用する場合に二重ヘリックス様構造に適応し得る。
【００４５】
他の型の分子（結合体）をヌクレオチドまたはヌクレオチドアナログに連結して、例えば細胞取り込みを増強させることもまた可能である。結合体は、ヌクレオチドまたはヌクレオチドアナログに科学的に連結され得る。このような結合体としては、脂質部分（例えば、コレステロール部分）が挙げられる（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６，６５５３−６５５６（１９８９））が、これに限定されない。
【００４６】
ワトソン−クリック相互作用は、ヌクレオチド、ヌクレオチドアナログまたはヌクレオチド置換体のワトソン−クリック面との少なくとも１つの相互作用である。ヌクレオチド、ヌクレオチドアナログまたはヌクレオチド置換体のワトソン−クリック面としては、プリン塩基のヌクレオチド、ヌクレオチドアナログまたはヌクレオチド置換体のＣ２位、Ｎ１位およびＣ６位、ならびにピリミジン塩基のヌクレオチド、ヌクレオチドアナログまたはヌクレオチド置換体のＣ２位、Ｎ３位およびＣ４位が挙げられる。
【００４７】
フーグスティーン相互作用は、ヌクレオチドまたはヌクレオチドアナログのフーグスティーン面に生じる相互作用であり、これは二重鎖ＤＮＡの主要な溝の中に露出される。このフーグスティーン面としては、プリンヌクレオチドのＮ７位およびプリンヌクレオチドのＣ６位における反応基（ＮＨ２またはＯ）が挙げられる。
【００４８】
（ｂ．配列）
例えば、グレリンおよび本明細書中に開示される他のタンパク質に関して種々の配列が存在し、これらはＧｅｎｂａｎｋにて開示され、そしてこれらの配列および他の配列は、本明細書中でその全体およびそれらに含まれる個々の部分配列について、参考として援用される。
【００４９】
種々の配列が本明細書中で提供され、これらのものおよび他のものは、Ｇｅｎｂａｎｋ（ｗｗｗ．ｐｕｂｍｅｄ．ｇｏｖ）に見出され得る。当業者は、配列の不一致および差異を解決する方法、ならびに特定の配列に関係する組成物および方法を他の関連配列に適用する方法を理解する。プライマーおよび／またはプローブは、本明細書中に開示される、そして当該分野で公知である情報を与えられて、任意の配列に対して設計され得る。
【００５０】
（４．ペプチド）
（ａ．ペプチド改変体）
本明細書中で考察されるように、公知であり本明細書中で企図されるグレリンタンパク質の多くの改変体が存在する。さらに、公知の機能性グレリン種改変体に対して、グレリンタンパク質の誘導体が存在し、これら誘導体も開示される方法および組成物において機能する。タンパク質の改変体または誘導体は当業者に周知であり、そしてアミノ酸配列改変体を含み得る。例えば、アミノ酸配列が代表的に３つのクラス：置換改変体、挿入改変体、および欠失改変体のうちの１つ以上に別れ得る。挿入としては、アミノ末端融合および／またはカルボキシル末端融合、ならびに１アミノ酸残基または複数アミノ酸残基の内部配列挿入が挙げられる。挿入は、通常、アミノ末端融合またはカルボキシル末端融合よりも少ない挿入であり、例えば、１〜４残基のオーダーである。インビトロで架橋することにより標的配列に対する免疫原性を付与するのに十分に大きいポリペプチドを融合することによるか、または融合物をコードするＤＮＡにより形質転換された組換え細胞培養物によって、免疫原性融合タンパク質誘導体（例えば、実施例に記載されるもの）が作製される。欠失は、タンパク質配列からの１つ以上のアミノ酸残基の除去により特徴付けられる。代表的に、約２〜６残基までがタンパク質分子内のいずれか１つの部位において欠失される。これらの改変体は、通常、タンパク質をコードするＤＮＡ内のヌクレオチドの部位特異的変異誘発によって調製され、これによって改変体をコードするＤＮＡを生じ、その後組換え細胞培養物においてそのＤＮＡを発現させる。既知の配列を有するＤＮＡ内の所定の部位における置換変異を作製するための技術は周知であり、例えばＭ１３プライマー変異誘発およびＰＣＲ変異誘発である。アミノ酸置換は代表的に、単独の残基のものであるが、複数の異なる部位において同時に起り得る；挿入は通常約１〜１０アミノ酸残基のオーダーであり；そして欠失はおよそ１〜３０残基に及ぶ。欠失または挿入は、好ましくは、隣接した対（すなわち、２残基の欠失または２残基の挿入）においてなされる。置換、欠失、挿入またはこれらの任意の組み合わせを組み合わせて、最終構築物に到達し得る。これらの変異誘発はリーディングフレームの外の配列に設定してはならない。そして好ましくはｍＲＮＡの二次構造を生じ得る相補的領域を形成しない。置換改変体は、少なくとも１つの残基が取り除かれており、かつその位置に異なる残基が挿入されているものである。このような置換は一般的に以下の表１および表２に従って作製され、そして保存的置換といわれる。
【００５１】
【表１】
2011079868.tif 000002
【００５２】
【表２】
2011079868.tif 000003
【００５３】
機能または免疫学的同一性の実質的な変化は、表２中の置換よりも保存的でない置換を選択すること、すなわち、以下を維持する効果がより有意に異なる残基を選択することによって、作製される：（ａ）置換領域内のペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷または疎水性、または（ｃ）側鎖の嵩高さ。一般にタンパク質の特性に最大の変化を生じることが期待される置換は、（ａ）親水性残基（例えば、セリル残基またはトレオニル残基）が疎水性残基（例えば、ロイシル残基、イソロイシル残基、フェニルアラニル残基、バリル残基、またはアラニル残基）の代わりに（または疎水性残基によって）置換される置換；（ｂ）システインまたはプロリンが他のいずれかの残基の代わりに（または他のいずれかの残基によって）置換される置換；（ｃ）正に帯電した側鎖を有する残基（例えば、リジル残基、アルギニル残基またはヒスチジル残基）が負に帯電した側鎖を有する残基（例えば、グルタミル残基またはアスパルチル残基）の代わりに（または負に帯電した側鎖を有する残基によって）置換される置換；あるいは（ｄ）嵩高い側鎖を有する残基（例えば、フェニルアラニン）が側鎖を有さない残基（例えば、この場合、グリシン）の代わりに（または側鎖を有さない残基によって）置換される置換、（ｅ）硫酸化および／またはグリコシル化に対する部位の数を増加することによる置換、である。
【００５４】
例えば、１つのアミノ酸を生物学的および／または化学的に類似である別のものと置き換えることは、保存的置換として当業者に公知である。例えば、保存的置換は、１つの疎水性残基を別のものへと置き換えること、または１つの極性残基を別のものへと置き換えることである。この保存的置換としては、例えば、Ｇｌｙ、Ａｌａ；Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ；Ａｓｐ、Ｇｌｕ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ｌｙｓ、Ａｒｇ；およびＰｈｅ、Ｔｙｒのような組合せが挙げられる。各々の明確に開示された配列のこのような保存的置換された改変体は、本明細書中に提供されるモザイクポリペプチド内に包含される。
【００５５】
置換変異誘発または欠失性変異誘発は、Ｎ−グリコシル化（Ａｓｎ−Ｘ−Ｔｈｒ／Ｓｅｒ）またはＯ−グリコシル化（ＳｅｒまたはＴｈｒ）のための部位を挿入するために使用され得る。システインの欠失または他の不安定な残基の欠失もまた所望され得る。潜在的なタンパク質分解部位（例えば、Ａｒｇ）の欠失または置換は、例えば、塩基性残基のうちの１つを欠失することによるか、または残基をグルタミニル残基またはヒスチジル残基により置換することによって達成され得る。
【００５６】
特定の翻訳後の誘導体化は、発現されるポリペプチドにおける組換え宿主細胞の作用の結果である。グルタミニル残基またはアスパラギニル残基は、しばしば、対応するグルタミル残基またはアスパリル残基へと翻訳後に脱アミノ化される。あるいは、これらの残基は穏やかな酸性条件下で脱アミノ化される。他の翻訳後修飾としては、プロリンおよびリジンのヒドロキシル化、セリル残基またはトレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リジン側鎖、アルギニン側鎖およびヒスチジン側鎖のｏ−アミノ基のメチル化（Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ＆  Ｃｏ．，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ  ｐｐ７９−８６（１９８３））、Ｎ末端アミンのアセチル化、およびいくつかの場合、Ｃ末端カルボキシルのアミド化、が挙げられる。
【００５７】
本明細書中に開示されるタンパク質の改変体または誘導体を規定する１つの方法は、特異的な既知配列に対するホモロジー／同一性に関してその改変体および誘導体を規定することによることが理解される。例えば、配列番号１、３、４、５および６は、グレリンの特定の配列を記載する。本明細書中に開示されるこれらのタンパク質および他のタンパク質の改変体が、特に開示され、これらの改変体は、提示される配列に対して、少なくとも５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のホモロジーを有する。当業者は、２つのタンパク質のホモロジーを決定する方法を容易に理解する。例えば、ホモロジーは、そのホモロジーが最も高いレベルであるように２つの配列を整列させた後に計算され得る。
【００５８】
ホモロジーを計算する別の方法は、公開されたアルゴリズムにより実施され得る。比較のための配列の最適な整列は、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎの局所的ホモロジーアルゴリズム（Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１））によるか、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈのホモロジー整列アルゴリズム（Ｊ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０））によるか、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎの類似性検索方法（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：２４４４（１９８８））によるか、これらのアルゴリズムのコンピューターによる実行（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ内のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）によるか、または目視検査（ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ）によって、行われ得る。
【００５９】
核酸に関する類似の型のホモロジーは、例えば、Ｚｕｋｅｒ，Ｍ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：４８−５２（１９８９）に開示されるアルゴリズム、Ｊａｅｇｅｒら  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：７７０６−７７１０（１９８９）に開示されるアルゴリズム、Ｊａｅｇｅｒら  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８３：２８１−３０６（１９８９）に開示されるアルゴリズムによって得られ得、これらは、核酸の整列のための少なくとも材料について、本明細書中で参考として援用される。
【００６０】
保存的変異誘発およびホモロジーの記載は、任意の組合せにおいて（例えば、改変体が保存的置換されている場合で、特定の配列に対して少なくとも７０％のホモロジーを有する実施形態において）一緒に組み合わされ得ることが理解される。
【００６１】
本明細書は種々のタンパク質および種々のタンパク質配列を考察するので、それらのタンパク質配列をコードする核酸もまた開示されることが理解される。これは、特定のタンパク質配列に関する全ての縮重配列、すなわち、１つの特定のタンパク質をコードする配列を有する核酸、ならびにそのタンパク質配列の開示される改変体および誘導体をコードする全ての核酸（縮重核酸が挙げられる）を包含する。従って、各々特定の核酸配列が本明細書中に記され得なくとも、その開示されるタンパク質配列を介して各々配列および全ての配列が本明細書中に実際に開示されそして記載されることが、理解される。例えば、配列番号１に記載されるタンパク質配列をコードし得る多くの核酸配列のうちの１つが、配列番号２に記載される。アミノ酸配列は、生物体内でどの特定のＤＮＡ配列がそのタンパク質をコードするかを示さない（ここで、開示されるタンパク質の特定の改変体が本明細書中で開示される）が、そのタンパク質が発生する特定の配列中のそのタンパク質をコードする既知の核酸配列もまた公知であり、本明細書中に開示され記載されることが理解される。
【００６２】
開示される組成物中に組み込まれ得る多くのアミノ酸アナログおよびペプチドアナログが存在することが理解される。例えば、表１および表２に示されるアミノ酸以外の、Ｄアミノ酸または異なる官能性置換基を有するアミノ酸が存在する。天然に存在するペプチドの逆向きの立体異性体およびペプチドアナログの立体異性体が開示される。これらのアミノ酸は、アミノ酸の選択によりｔＲＮＡ分子を変更すること、および例えばアンバーコドンを利用して部位特異的な方法でペプチド鎖中にアミノ酸アナログを挿入する遺伝子構築物を操作することによって、ポリペプチド中に容易に組み込まれ得る（Ｔｈｏｒｓｏｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．７７：４３−７３（１９９１）、Ｚｏｌｌｅｒ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３：３４８−３５４（１９９２）；Ｉｂｂａ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＆  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｒｒｉｎｇ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １３：１９７−２１６（１９９５）、Ｃａｈｉｌｌら、ＴＩＢＳ，１４（１０）：４００−４０３（１９８９）；Ｂｅｎｎｅｒ，ＴＩＢ  Ｔｅｃｈ，１２：１５８−１６３（１９９４）；ＩｂｂａおよびＨｅｎｎｅｃｋｅ，Ｂｉｏ／ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１２：６７８−６８２（１９９４）、これらの全ては、アミノ酸アナログのための少なくとも材料に関して、本明細書中に援用される）。
【００６３】
ペプチドに似ているが、天然のペプチド結合を介しては繋がれない分子が作製され得る。例えば、アミノ酸またはアミノ酸アナログに対する連結としては、以下が挙げられ得る：ＣＨ２ＮＨ−−、−−ＣＨ２Ｓ−−、−−ＣＨ２−−ＣＨ２  −−、−−ＣＨ＝ＣＨ−−（シスおよびトランス）、−−ＣＯＣＨ２−−、−−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−−および−−ＣＨ  Ｈ２ＳＯ-（これらはおよびその他は、Ｓｐａｔｏｌａ  Ａ．Ｆ．、Ｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  Ｂ．Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ編、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  ｐ．２６７（１９８３）；Ｓｐａｔｏｌａ  Ａ．Ｆ．、Ｖｅｇａ  Ｄａｔａ  Ｖｏｌ．１，Ｉｓｓｕｅ  ３、Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｂａｃｋｂｏｎｅ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ（包括的なレビュー）（Ｍａｒｃｈ  １９８３）；Ｍｏｒｌｅｙ  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ｐｐ．４６３−４６８（１９８０）；Ｈｕｄｓｏｎ，Ｄ．ら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｅｐｔ  Ｐｒｏｔ  Ｒｅｓ  １４：１７７−１８５（１９７９）、（−−ＣＨ２ＮＨ−−、ＣＨ２ＣＨ２−−）；Ｓｐａｔｏｌａら、Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ  ３８：１２４３−１２４９（１９８６）（−−ＣＨＨ２−−Ｓ）；Ｈａｎｎ  Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ  Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．Ｉ３０７−３１４（１９８２）（−−ＣＨ−−ＣＨ−−、シス体およびトランス体）；Ａｌｍｑｕｉｓｔら、Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２３：１３９２−１３９８（１９８０）（−−ＣＯＣＨ２−−）；Ｊｅｎｎｉｎｇｓ−Ｗｈｉｔｅら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ  ２３：２５３３（１９８２）（−−ＣＯＣＨ２−−）；Ｓｚｅｌｋｅら、欧州特許出願番号ＥＰ  ４５６６５  ＣＡ（１９８２）：９７：３９４０５（１９８２）（−−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−−）；Ｈｏｌｌａｄａｙら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ．Ｌｅｔｔ  ２４：４４０１−４４０４（１９８３）（−−Ｃ（ＯＨ）ＣＨ２−−）；ならびにＨｒｕｂｙ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ  ３１：１８９−１９９（１９８２）、（−−ＣＨ２−−Ｓ−−）；これらの各々は、本明細書中で参考として援用される。特に好ましい非ペプチド結合は、−−ＣＨ２ＮＨ−−である。ペプチドアナログ（例えば、ｂ−アラニン、ｇ−アミノ酪酸など）は結合した原子の間の１つより多い結合を有し得ることが理解される。
【００６４】
アミノ酸アナログおよびペプチドアナログは、しばしば、所望の特性（例えば、より経済的な生産、より大きな化学物質安定性、薬理学的特性（半減期、吸収、力価、効力、など）の増強、特異性の変更（例えば、広範囲な生物学的活性）、抗原性の低下、など）を増強している。
【００６５】
Ｄ−アミノ酸は、より安定なペプチドを作製するために使用され得る。なぜなら、Ｄアミノ酸はペプチダーゼなどによって認識されないからである。コンセンサス配列のうちの１つ以上のアミノ酸を同じ型のＤ−アミノ酸で系統的に置換すること（例えば、Ｌ−リジンの位置にＤ−リジンを置換すること）は、より安定性のペプチドを作製するために使用され得る。システイン残基は、環化するかまたは２つ以上のペプチドを一緒に結合するために使用され得る。このことは、ペプチドを特定の構造に抑制するのに有益であり得る（ＲｉｚｏおよびＧｉｅｒａｓｃｈ  Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６１：３８７（１９９２）、これは、本明細書中で参考として援用される）。
【００６６】
（Ｃ．処置方法および予防方法）
（１．炎症）
本発明は、被験体における炎症を処置する方法を提供し、これは、有効量のグレリンを被験体に投与する工程を包含する。炎症は、多くの異なる疾患および障害と関連し得る。炎症の例としては、肝炎と関連した炎症、肺と関連した炎症、熱傷と関連した炎症、および感染性プロセスに関連した炎症が挙げられるが、これらに限定されない。炎症はまた、肝臓毒性に関連し得、このことは次いで癌治療（例えば、アポトーシス誘導もしくは化学治療法、またはこれら２つの組み合わせ）に関連し得る。
【００６７】
ＮＦκＢ経路の阻害は、グレリンの保護効果の主要なメディエーターのうちの１つとして同定されている（実施例８）。グレリンによって制御されるＮＦκＢ制御遺伝子は、ＴＲＣＰ、ＴＯＭ１、ＡＰ２、ＧＡＢ１およびＴＡＮＫと同定された。従って、ＴＲＣＰ、ＴＯＭ１、ＡＰ２、ＧＡＢ１およびＴＡＮＫをグレリンを用いて標的化する工程を包含する、炎症を処置する方法が開示される。
【００６８】
炎症は、炎症性疾患と関連し得る。炎症性疾患の例としては、喘息、全身性エリテマトーデス、慢性関節リウマチ、反応性関節炎、脊椎関節炎、全身性脈管炎、インスリン依存性糖尿病、多発性硬化症、実験的アレルギー性脳脊髄炎、シェーグレン症候群、対宿主性移植片病、炎症性腸疾患（クローン病、潰瘍性大腸炎が挙げられる）、および強皮症が挙げられるが、これらに限定されない。また、炎症性疾患として、自己免疫疾患（例えば、重症筋無力症）、ギヤン−バレー症、原発性胆汁性肝硬変、肝炎、溶血性貧血、ブドウ膜炎、グレーヴズ病、悪性貧血、血小板減少症、橋本甲状腺炎、卵巣炎、精巣炎、副腎疾患、抗リン脂質症候群、ヴェーゲナー肉芽腫症、ベーチェット病、多発性筋炎、皮膚筋炎、多発性硬化症、白斑、強直性脊椎炎、尋常性天疱瘡、乾癬、疱疹状皮膚炎、アディソン病、グッドパスチャー症候群、バーゼドー病、血小板減少症、アレルギー、および心筋症が挙げられる。
【００６９】
炎症はまた、癌と関連し得る。癌の型の例としては、リンパ腫（ホジキンおよび非ホジキン）、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、白血病（例えば、骨髄性白血病および他の型の白血病）、菌状息肉腫、癌、腺癌、肉腫、神経膠腫、芽細胞腫、神経芽細胞腫、プラスマ細胞腫、組織球腫、黒色腫、腺腫、低酸素性腫瘍、骨髄腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫またはＡＩＤＳ関連肉腫、転移性癌、膀胱癌、脳の癌、神経系の癌、頭部および頸部の扁平上皮癌、神経芽細胞腫、グリア芽細胞腫、卵巣癌、皮膚癌、肝癌、口内、喉、咽頭および肺の扁平上皮癌、結腸癌、頸部の癌、乳癌、子宮頸癌、上皮癌、腎臓癌、尿生殖器の癌、肺癌、食道癌、頭部および頸部の癌、造血の癌、精巣癌、結腸直腸癌、前立腺癌、ならびに膵臓癌が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７０】
炎症部位における活性化細胞もまた処置され得る。「活性化細胞」は、炎症応答に関与する細胞として規定される。このような細胞の例としては、Ｔ細胞およびＢ細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞、マスト細胞、好酸球、好中球、クップファー細胞、抗原提示細胞、ならびに脈管内皮細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７１】
（２．感染）
炎症は、被験体における感染性プロセスによって引き起こされ得る。炎症が感染性プロセスと関連する場合、この感染性プロセスは、ウイルス感染と関連し得る。ウイルス感染の例としては、１型単純疱疹ウイルス、２型単純疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス、エプスタイン−バーウイルス、水痘−帯状疱疹ウイルス、ヒトヘルペスウイルス６、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８、痘瘡ウイルス、水疱性口内炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、ライノウイルス属、コロナウイルス属、インフルエンザウイルスＡ型、インフルエンザウイルスＢ型、麻疹ウイルス、ポリオーマウイルス属、ヒト乳頭腫ウイルス、ＲＳウイルス、アデノウイルス、コクサッキーウイルス、デング熱ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ラウス肉腫ウイルス、黄熱病ウイルス、エボラウイルス、マルブルクウイルス、ラッサ熱ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、マリーバレー脳炎ウイルス、ウエストナイル脳炎ウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ロタウイルスＡ群、ロタウイルスＢ群、ロタウイルスＣ群、シンドビスウイルス、サル免疫不全ウイルス（Ｓｉｍｉａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｃｉｒｕｓ）、ヒトＴ細胞白血病ウイルス１型、ハンタウイルス属、風疹ウイルス、サル免疫不全ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス１型、およびヒト免疫不全ウイルス２型が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７２】
炎症が感染性プロセスと関連する場合、この感染性プロセスは細菌感染と関連し得る。細菌感染プロセスは、グラム陽性細菌またはグラム陰性細菌のいずれかによって引き起こされ得る。グラム陽性細菌は、以下からなる群より選択され得る：Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍ．ｂｏｖｉｓ、Ｍ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｍ．ｂｏｖｉｓ株ＢＣＧ、ＢＣＧ亜株、Ｍ．ａｖｉｕｍ、Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ、Ｍ．ａｆｒｉｃａｎｕｍ、Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ、Ｍ．ｍａｒｉｎｕｍ、Ｍ．ｕｌｃｅｒａｎｓ、Ｍ．ａｖｉｕｍ  ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ  ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｑｕｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｉｖａｎｏｖｉｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｎｏｃａｒｄｉａ  ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓおよび他のＮｏｃａｒｄｉａ種、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｖｉｒｉｄａｎｓ群、Ｐｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ種、Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ種、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ
ｉｓｒａｅｌｉｉおよび他のＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ種、ならびにＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓ。
【００７３】
グラム陰性細菌としては、以下からなる群より選択され得る：Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、他のＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ種、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、他のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ種、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ種、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ、他のＰａｓｔｅｕｒｅｌｌａ種、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、他のＬｅｇｉｏｎｅｌｌａ種、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ、他のＳａｌｍｏｎｅｌｌａ種、Ｓｈｉｇｅｌｌａ種  Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ、他のＢｒｕｃｅｌｌａ種、Ｃｈｌａｍｙｄｉ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｃｏｘｉｅｌｌａ  ｂｕｒｎｅｔｔｉ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｎｅｉｓｅｒｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｎｅｉｓｅｒｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｅａ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｄｕｃｒｅｙｉ、他のＨｅｍｏｐｈｉｌｕｓ種、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｌｉｔｉｃａ、他のＹｅｒｓｉｎｉａ種、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｅ．ｈｉｒａｅおよび他のＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ種、ならびに他のＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃａｅ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓおよび他のＢｒｕｃｅｌｌａ種、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｆｕｓｏｂａｓｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ、Ｐｒｏｖｅｔｅｌｌａ種  およびＣｏｗｄｒｉａ  ｒｕｍｉｎａｎｔｉｕｍ。
【００７４】
上記の例のグラム陽性細菌およびグラム陰性細菌は、限定していることを意図されないが、全てのグラム陽性細菌およびグラム陰性細菌ならびにグラム試験非応答性細菌を含むより大きな集団のうちの代表であることを意図される。他の種の細菌の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：Ａｂｉｏｔｒｏｐｈｉａ、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ、Ａｃｉｄａｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｕｌｕｍ、Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ、Ａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ａｅｒｏｍｏｎａｓ、Ａｆｉｐｉａ、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ、Ａｌｌｏｉｏｃｏｃｃｕｓ、Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ、Ａｍｙｃｏｌａｔａ、Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ、Ａｎａｅｒｏｂｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ、Ａｎａｅｒｏｒｈａｂｄｕｓ、Ａｒａｃｈｎｉａ、Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ａｒｃｏｂａｃｔｅｒ、Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ、Ａｔｏｐｏｂｉｕｍ、Ａｕｒｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｂａｌｎｅａｔｒｉｘ、Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ、Ｂｅｒｇｅｙｅｌｌａ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｂｉｌｏｐｈｉｌａ  Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ、Ｂｒａｃｈｙｓｐｉｒａ、Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｂｒｅｖｕｎｄｉｍｏｎａｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ、Ｂｕｔｔｉａｕｘｅｌｌａ、Ｂｕｔｙｒｉｖｉｂｒｉｏ、Ｃａｌｙｍｍａｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｃａｐｎｏｃｙｔｏｐｈａｇａ、Ｃａｒｄｉｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｃａｔｏｎｅｌｌａ、Ｃｅｄｅｃｅａ、Ｃｅｌｌｕｌｏｍｏｎａｓ、Ｃｅｎｔｉｐｅｄａ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ、Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｃｈｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｃｈｒｙｓｅｏｍｏｎａｓ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ、Ｃｏｍａｍｏｎａｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｃｏｘｉｅｌｌａ、Ｃｒｙｐｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｄｅｌｆｔｉａ、Ｄｅｒｍａｂａｃｔｅｒ、Ｄｅｒｍａｔｏｐｈｉｌｕｓ、Ｄｅｓｕｌｆｏｍｏｎａｓ、Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏ、Ｄｉａｌｉｓｔｅｒ、Ｄｉｃｈｅｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｄｏｌｏｓｉｃｏｃｃｕｓ、Ｄｏｌｏｓｉｇｒａｎｕｌｕｍ、Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ、Ｅｇｇｅｒｔｈｅｌｌａ、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ、Ｅｉｋｅｎｅｌｌａ、Ｅｍｐｅｄｏｂａｃｔｅｒ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｅｒｗｉｎｉａ、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｅｗｉｎｇｅｌｌａ、Ｅｘｉｇｕｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｆａｃｋｌａｍｉａ、Ｆｉｌｉｆａｃｔｏｒ、Ｆｌａｖｉｍｏｎａｓ、Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ、Ｇｅｍｅｌｌａ、Ｇｌｏｂｉｃａｔｅｌｌａ、Ｇｏｒｄｏｎａ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｈａｆｎｉａ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ、Ｈｅｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｈｏｌ���ｅｍａｎｉａ  Ｉｇｎａｖｉｇｒａｎｕｍ、Ｊｏｈｎｓｏｎｅｌｌａ、Ｋｉｎｇｅｌｌａ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｋｏｃｕｒｉａ、Ｋｏｓｅｒｅｌｌａ、Ｋｕｒｔｈｉａ、Ｋｙｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｌａｕｔｒｏｐｉａ、Ｌｅｃｌｅｒｃｉａ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ、Ｌｅｍｉｎｏｒｅｌｌａ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ、Ｌｅｐｔｏｔｒｉｃｈｉａ、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｌｉｓｔｏｎｅｌｌａ、Ｍｅｇａｓｐｈａｅｒａ、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｍｉｔｓｕｏｋｅｌｌａ、Ｍｏｂｉｌｕｎｃｕｓ、Ｍｏｅｌｌｅｒｅｌｌａ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ、Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ、Ｍｙｒｏｉｄｅｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ、Ｎｏｃａｒｄｉａ、Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ、Ｏｃｈｒｏｂａｃｔｒｕｍ、Ｏｅｓｋｏｖｉａ、Ｏｌｉｇｅｌｌａ、Ｏｒｉｅｎｔｉａ、Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｐａｎｔｏｅａ、Ｐａｒａｃｈｌａｍｙｄｉａ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ、Ｐｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ、Ｐｌｅｓｉｏｍｏｎａｓ、Ｐｏｒｐｈｙｒｉｍｏｎａｓ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｐｓｅｕｄｏｎｏｃａｒｄｉａ、Ｐｓｅｕｄｏｒａｍｉｂａｃｔｅｒ、Ｐｓｙｃｈｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｒａｈｎｅｌｌａ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ、Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  Ｒｏｃｈａｌｉｍａｅａ  Ｒｏｓｅｏｍｏｎａｓ、Ｒｏｔｈｉａ、Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｓｅｌｅｎｏｍｏｎａｓ、Ｓｅｒｐｕｌｉｎａ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、Ｓｈｅｗｅｎｅｌｌａ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｓｉｍｋａｎｉａ、Ｓｌａｃｋｉａ、Ｓｐｈｉｎｇｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ、Ｓｐｉｒｉｌｌｕｍ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ、Ｓｔｏｍａｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、Ｓｕｃｃｉｎｉｖｉｂｒｉｏ、Ｓｕｔｔｅｒｅｌｌａ、Ｓｕｔｔｏｎｅｌｌａ、Ｔａｔｕｍｅｌｌａ、Ｔｉｓｓｉｅｒｅｌｌａ、Ｔｒａｂｕｌｓｉｅｌｌａ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ、Ｔｒｏｐｈｅｒｙｍａ、Ｔｓａｋａｍｕｒｅｌｌａ、Ｔｕｒｉｃｅｌｌａ、Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ、Ｖａｇｏｃｏｃｃｕｓ、Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａ、Ｖｉｂｒｉｏ、Ｗｅｅｋｓｅｌｌａ、Ｗｏｌｉｎｅｌｌａ、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ、Ｘｅｎｏｒｈａｂｄｕｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ、およびＹｏｋｅｎｅｌｌａ。
【００７５】
炎症が感染性プロセスと関連する場合、この感染性プロセスは、寄生虫感染と関連し得る。寄生虫感染の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ種（例えば、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｍａｌａｒｉａｅおよび他のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ種）、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ種（例えば、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｍａｊｏｒ）、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ（例えばＳｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍａｎｓｏｎｉおよび他のＳｈｉｓｔｏｓｏｍａ種）、ならびにＥｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ。
【００７６】
炎症が感染性プロセスと関連する場合、この感染性プロセスは真菌感染と関連し得る。真菌感染の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｄｅｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍｉｔｉｄｉｓ、Ｐｎｅｏｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｎｉｉ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍａｒｎｅｆｆｉ、およびＡｌｔｅｒｎａｒｉａ  ａｌｔｅｒｎａｔａ。
【００７７】
（３．敗血症）
さらに、感染は敗血症と関連し得る。敗血症は、全身性炎症応答症候群（ＳＩＲＳ）としても公知であり、毒素産生細菌により血流の感染を激化することによって引き起こされる重篤な疾病である。敗血症は、入院患者１００人毎に２人に起こる。この敗血症は細菌感染によって引き起こされて、体内のどこかで開始し得る。共通の部位としては、腎臓（上部尿路感染）、肝臓または胆嚢、腸（通常、腹膜炎と一緒に見られる）、皮膚（蜂巣炎）、および肺（細菌性肺炎）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７８】
マウスにおけるＬＰＳ誘発性内毒素血症は、敗血症ショックを誘発するための良好に認識されるモデルであり、そしてまた、炎症誘発性メディエーターの過剰な産生に起因する食欲不振と関連する。大部分のデータにもかかわらず、全身性炎症応答症候群（ＳＩＲＳ）の原因は未知のままであり、そして種々の治療的アプローチが最小限に有益な結果を得ている（Ｒｉｅｄｅｍａｎｎら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１２：４６０−４６７（２００３）、Ｌｕｈｅｓｈｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９６：７０４７−７０５２（１９９９））。ＬＰＳは単核細胞に直接作用するが、生じた内毒素血症もまた、種々の広範な細胞および組織に影響を与え、難治性の異化作用状態と関連する。
【００７９】
ＬＰＳチャレンジしたマウスにおけるグレリン注入は、循環ならびに肝臓、脾臓、肺および腸膜間のリンパ節において、炎症誘発性サイトカインであるＩＬ−１αおよびＩＬ−１β、ＩＬ−６ならびにＴＮＦ−αの有意な阻害へと導くことを実証した。さらに、ＬＰＳ誘発性内毒素血症は、グレリン分泌の阻害を生じ（Ｈａｔａｙａら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．１４４：５３６５−５３７１（２００３））、そしてグレリンの注入は、敗血症の動物において体重を増加させる（Ｍｕｒｒａｙら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．１２５：１４９２−１５０２（２００３））。従って、ＬＰＳチャレンジの後でのグレリンの分泌阻害は、進行中の炎症性損傷を悪化させ、そして異化状態の進行を促進する。さらに、ＬＰＳ誘発性炎症性の食欲不振はまた、グレリン処置マウスにおいて有意に低下されることが実証された。従って、グレリンおよび合成ＧＨＳの封入体は、ＳＩＲＳの処置における候補物である。グレリンはまた、慢性的状態（例えば、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ感染）において制御的な役割を果たし、ここで、持続性の胃腸性疾患は、より低レベルのグレリンと関連しており（４９）、感染レベルの矯正はグレリン分泌の上方制御に導く。
【００８０】
髄膜炎もまた、敗血症に伴い得る。小児において、敗血症は骨の感染に付随する（骨髄炎）。入院患者において、感染の共通部位としては、静脈、手術傷、手術ドレーン、および褥瘡性潰瘍またはとこずれとして公知の皮膚の故障部位が、挙げられる。感染はしばしば、陽性の血液培養物によって確認されるが、血液培養物は、抗生物質を服用している個人では陰性であり得る。敗血症において、血圧低下はショックを生じる。主要な器官および組織（腎臓、肝臓、肺および中枢神経系が挙げられる）は、正常に機能することを停止する。敗血症はしばしば、特に弱化した免疫系または他の医療的疾病を有する人々において、生命を脅かすものである。
【００８１】
（４．移植）
炎症は、移植またはインプラントのレシピエントにおける移植拒絶と関連し得る。上記に開示されるように、「移植拒絶」は、被験体の体内での外来の血液または組織の存在により惹起される免疫応答として定義される。移植拒絶の１例において、移植される物質における外来抗原に対して抗体が形成される。移植は、例えば、組織移植、細胞移植、または器官移植（例えば、肝臓、腎臓、皮膚、角膜、膵臓、膵臓の島細胞、目、心臓、または生体の移植可能な任意の他の器官）であり得る。
【００８２】
移植免疫学は、同種移植片または異種移植片が取り出され、次いでレシピエントに移植された後に起る、広く連続した事象をいう。組織は、移植片部位および移植部位の両方において損傷を受ける。炎症性反応が即座に続き、生化学的カスケードの活性化を行う。このような炎症反応は本明細書中に教示される方法を使用して軽減され得る。炎症反応において、抗原が認識されて、一連の特異的細胞応答または非特異的細胞応答が起る。組織損傷の抗原（すなわち、虚血、低体温、再灌流損傷）とは無関係な原因は、移植片が回収される場合の機械的外傷の結果であり、そして血液供給の破綻である。対照的に、組織損傷の抗原依存性の原因は、免疫媒介性損傷を含む。
【００８３】
マクロファージ放出サイトカイン（例えば、腫瘍壊死因子、インターロイキン−１）、これらは炎症性内皮応答を刺激することによって炎症の強さを高める；これらの内皮性の変化は、移植部位に多くのＴ細胞を補充するのに役立つ。
【００８４】
損傷を受けた組織は、炎症誘発性メディエーター（例えば、ハーゲマン因子（因子ＸＩＩ）であり、これはいくつかの生化学的カスケードを惹起する）を放出する。凝固カスケードは、フィブリンおよびいくつかの関連するフィブリノペプチドを誘導し、これらは局所的血管透過性を促進し、そして好中球およびマクロファージを誘引する。キニンカスケードは、主としてブラジキニンを産生し、これが血管拡張、平滑筋収縮、および血管透過性の増大を促進する。
【００８５】
拒絶は、ドナー組織により発現される非自己抗原に対する、レシピエントの自己免疫応答の結果である。超急性拒絶において、移植被験体は、同種抗原に対して血清学的に予め感受性にされる（すなわち、移植片抗原は非自己として認識される）。組織学的に、多形核白血球（ＰＭＮ）は、移植片脈管構造内に存在し、そして広範なミクロトロンビン形成および血小板蓄積と関連する。白血球の浸潤は、ほとんど起らないかまたはまったく起らない。超急性拒絶は、移植片の移植の数分〜数時間内で現れる。超急性拒絶は、抗ドナー抗体に対する、移植片レシピエントの慣用的な移植前スクリーニングの導入以来、比較的稀になった。
【００８６】
急性拒絶において、移植片抗原は、Ｔ細胞によって認識される；生じたサイトカインの放出は、最終的に、組織の歪曲、不十分な脈管、および細胞の破壊へと導く。組織学的には、白血球は、等価な数のマクロファージおよびＴ細胞で存在し、これによって優勢にされる。これらのプロセスは、移植の２４時間以内に起り得、そして数日〜数週間の期間にわたって起り得る。
【００８７】
慢性的な拒絶において、病理学的な組織リモデリングは、移植周辺（ｐｅｒｉｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）および移植後の外傷より生じる。サイトカインおよび組織増殖因子は、平滑筋細胞の増殖を誘導し、遊走を誘導し、そして新規マトリクス物質の産生を誘導する。間隙性の線維芽細胞もまた、コラーゲン産生を誘導される。組織学的には、亢進性の新規内膜（ｎｅｏｉｎｔｉｍａｌ）形成が大動脈内および中血管内で起り、そしてより少ない程度で移植片の静脈内で起る。白血球の浸潤は通常、穏やかであるかまたは存在すらしない。これらは全て、血流の低下を生じ、続いて領域的な組織虚血、線維症、および細胞死を生じる（Ｐｒｅｓｃｉｌｌａら、ｅｍｅｄｉｃｉｎｅのウェブサイト、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ、更新日２００３年６月２０日）。
【００８８】
移植拒絶は、移植の１〜１０分以内、または移植の１０分〜１時間以内、または移植の１時間〜１０時間以内、または１０時間〜２４時間以内、移植の２４時間〜４８時間以内、移植の４８時間〜１ヶ月以内、移植の１ヶ月〜１年以内、移植の１年〜５年以内、または移植後さらに長くに起り得る。
【００８９】
炎症に供される動物はいずれも本方法により処置され得る。従って、被験体は、任意の哺乳動物であり得、好ましくはヒトであり得、そしてこの被験体としては、マウス、ラット、ウシ、モルモット、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、ヤギ、ヒツジ、サル、ウマおよびチンパンジーが挙げられ得るが、これらに限定されない。
【００９０】
（５．食欲の不振）
本発明は、有効量のグレリンを被験体に投与することによって、その被験体の食欲の不振を処置する方法を提供する。食欲の不振は、広範な種々の物質、疾患および障害によって引き起こされ得る。このようなものの例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：感情的な動揺、神経質、孤独、緊張、不安、死別反応、うつ、神経性食欲不振、神経性悪液質症候群、急性および慢性の感染（上記のとおり）、ＨＩＶ、妊娠、癌、動脈硬化、炎症（急性および慢性の両方、ならびに軽度の炎症）、甲状腺機能亢進症、医薬品およびストリートドラッグ、化学治療剤、アンフェタミン、交感神経作用物（エフェドリンが挙げられる）、抗生物質、咳および風邪の調製物、コデイン、モルヒネ、デメロール、およびジギタリス。実施例７において示されるように、グレリン処置は、ＬＰＳ誘発性の食欲不振を有意に弱め、そして非ＬＰＳ処置マウスの食欲増進を生じた。
【００９１】
軽度の炎症は、加齢と関連し得、この加齢は炎症性サイトカイン（ＩＬ−６が挙げられる）の増加と関連する。加齢に伴う炎症性メディエーターの増加は、「加齢の食欲不振」およびフレイルティー（ｆｒａｉｌｉｔｙ）と関連する（Ｅｒｓｈｌｅｒ，Ｗ．Ｂ．およびＫｅｌｌｅｒ，Ｔ．Ｅ．２０００．Ａｇｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｌａｔｅ  ｌｉｆｅ  ｄｉｓｅａｓｅｓ，ａｎｄ  ｆｒａｉｌｔｙ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．５１：２４５−２７０）。か弱い被験体および加齢の被験体のグレリン補充治療は、進行性の炎症障害を低減し得、食事摂取の向上および同化プロセスを促進する。
【００９２】
（６．サイトカイン）
また、サイトカインの分泌を阻害する方法が開示され、この方法は、有効量のグレリンを投与することを含む。例えば、サイトカインは炎症部位において阻害され得る。このサイトカインは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、および単核細胞からなる群より選択される細胞によって発現され得る。
【００９３】
本発明の方法において使用され得るサイトカインおよび免疫調節剤の例としては、体液性炎症に関係するもの（例えば、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３およびトランスホーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β））、および細胞性炎症に寄与するもの（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、インターフェロン（ＩＦＮ）、ＩＦＮ−γ誘導因子（ＩＧＩＦ）、ＴＧＦ−β、ならびにＴＮＦ−αおよびＴＮＦ−β）が挙げられるが、これらに限定されない。本発明に従って、グレリンを使用してサイトカインおよび／または免疫モジュレーターを調節し得、疾患の急性エピソードを処置すること、および／または非炎症性状況にある被験体の状態を維持することの両方をなし得る。
【００９４】
サイトカインは、細胞によって作製されるタンパク質であり、これは他の細胞の挙動に影響を与える。リンパ球によって作製されるサイトカインは、しばしば、リンホカインまたはインターロイキン（ＩＬ）と呼ばれる。サイトカインは、それらが影響を与える細胞上の特異的なサイトカインレセプターに作用する。レセプターへの結合は、その細胞において活性（例えば、増殖、分化、または死）を誘導する。いくつかのサイトカイン、とりわけＩＬ−１、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、ＩＬ−８および他のケモカイン、ＧＣＳＦ、ならびにＧＭ−ＣＳＦは、急性炎症反応を媒介する、重要な役割を果たす。これらの中でも、ＩＬ−１（αおよびβ）およびＴＮＦは、非常に強力な炎症性分子である：これらは、細菌性のリポポリサッカライドの皮下注入によって動物において誘導される急性炎症を媒介する、主なサイトカインであり、そして敗血症の主要なメディエーターのうちの２つである。
【００９５】
慢性的な炎症は、急性炎症の後に発症し、そして数週間または数ヶ月間、いくつかの例では数年間続き得る。この状態の炎症の間、サイトカインの相互作用は、炎症部位への単核細胞の化学走性を生じ、次いでその場所でマクロファージ活性化因子（ＭＡＦ）（例えば、ＩＦＮ−γ、ＭＣＰ−１および他の分子）がマクロファージを活性化するが、遊走阻害因子（ＭＩＦ）（例えば、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＦＮ−γ）はマクロファージをその炎症部位に保持する。マクロファージは、長期的に低レベルのＩＬ−１およびＴＮＦ（これらは、いくらかの生じた臨床症状（例えば、食欲不振、悪液質、発熱、眠気、および白血球増加）を担う）を合成することにより、炎症プロセスに寄与する。慢性的な炎症プロセスを媒介することが公知であるサイトカインは、体液性炎症に関係するもの（例えば、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３およびトランスホーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β））、および細胞性炎症に寄与するもの（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、インターフェロン（ＩＦＮ）、ＩＦＮ−γ誘導因子（ＩＧＩＦ）、ＴＧＦ−β、ならびにＴＮＦ−αおよびＴＮＦ−β）に分けられ得る（Ｆｅｇｈａｌｉら、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ２、ｄ１２−２６（Ｊａｎｕａｒｙ  １、１９９７））。
【００９６】
生得的な免疫系の細胞による、炎症誘発性サイトカインの産生は、侵入する病原体に対する初期の宿主の防御を媒介する、重要な役割を果たす。さらに、宿主の炎症応答の性質または持続期間を制御できないことは、しばしば、慢性の炎症性疾患において見られるような、有害な宿主の作用を媒介し得る。例えば、敗血症の初期段階において、宿主の炎症応答は、炎症誘発性サイトカインの産生の優勢な増加を伴う超活性状態にあり、この炎症誘発性サイトカインが宿主の組織損傷および致命的なショックを媒介すると考えられている。従って、生来の免疫系が炎症誘発性サイトカインおよび抗炎症性サイトカインの産生レベルを指示する能力は、宿主の炎症応答の性質を制限するかまたは調節するのに重要である。
【００９７】
免疫系、特に白血球による炎症性サイトカインの産生は、食欲不振−悪液質症候群の発症に重要な役割を果たす（Ｈａｒｔら（１９８８）、Ｋｏｔｌｅｒら（２０００）、Ｅｒｓｈｌｅｒら（２０００））。炎症性食欲不振に関連するとみなされるサイトカインの例としては、ＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＴＮＦ−αが挙げられる。末梢投与されたグレリンは、ＩＬ−１β誘発性食欲不振をブロックすることが本明細書中で示され、そして食物摂取を促進しそしてエネルギー消費を低下させることによって正のエネルギーバランスを生じる。炎症誘発性サイトカインの発現に対するグレリンの阻害効果は、サイトカイン誘発性食欲不振の制御において、グレリンおよびＧＨＳ−Ｒの制御的役割を示す。さらに、ＩＬ−１βおよびレプチンとの併用はまた、胃におけるグレリンの発現を阻害することを示されており（Ｃｏｈｅｎ，Ｊ  Ｎａｔｕｒｅ  ４２０：８８５−８９１（２００３））、そして胃のグレリン発現は、レプチン欠失マウスにおいて増加された。レプチンおよびグレリンは、視床下部レベルにおいて食物摂取に対する相互に関係するアンタゴニスト作用を表すとみなされる（Ｎａｋａｚａｔｏら（２００１）、Ｉｎｕｉ，Ａ（２００１））、レプチンは、サイトカインのｇｐ１３０ファミリーの一員であり、強力なＴｈ１応答を誘導し（Ｈｏｓｏｄａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：６４−７０（２００３））、そして炎症誘発性の誘発因子としてみなされている（Ｌｏｆｆｒｅｄａ，Ｓ．ら、ＦＡＳＥＢ  Ｊ．１２：５７−６５（１９９８）；Ｚａｒｋｅｓｈ−Ｅｓｆａｈａｎｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：４５９３−４５９９（２００１）、Ｌｏｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ．３９４：８９７−９０１（１９９８）、Ｈｏｓｏｄａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：６４−７０（２００３）、Ｄｉｘｉｔら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．１４４：５５９５−５６０３（２００３））。食事摂取に対するレプチンの作用は、部分的に、視床下部におけるＩＬ−１βレベルの増加によって制御される（Ｊａｎｉｋら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．８２：３０８４−３０８６（１９９７））。同様に、ＩＬ−１の食欲不振作用は、レプチンレベルの増加を介して媒介される（Ｌａｍｂｅｒｔら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９８：４６５２−４６５７（２００１））。
【００９８】
レプチンは、ヒトＴ細胞およびＰＢＭＣによるＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＴＮＦ−αのｍＲＮＡ発現および分泌を直接誘導し得ることが実証されている。レプチンおよびいくつかの他のｇｐ１３０リガンド（ＬＩＦ、ＣＮＴＦおよびＩＬ−５が挙げられる）は、宿主の代謝に対して同様の効果を表す  （Ｂｅｒｅｔｔａら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ．２３：９７５−９８４（２００２）、Ｗａｌｌｅｎｉｕｓら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．８：７５−７９（２００２））。さらに、ＩＬ−６−／−欠失マウスは、レプチン欠失マウスと同様の様式で、肥満を進行する（Ｌａｖｉａｎｏら、Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ．１８：１００−１０５（２００２））。レプチンは、悪液質との関連することが示されているが、レプチンのレベルは、多くの癌関連性のるいそう状態において上昇されず（Ｄｏｅｈｎｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１４５：７２７−７３５（２００１））、このことは脂肪組織における組織的な低下に起因する可能性が最も高い。しかしながら、慢性の心不全患者に見られる悪液質は、高レプチン血症（ｈｙｐｅｒｌｅｐｔｉｎｅｍｉａ）と関連する（Ｎａｇａｙａ、Ｎ．ら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．１０４：１４３０−１４３５（２００１））。対象的に、グレリンは、ラットにおいて、慢性心不全と関連する悪液質を減少させる（Ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｅｒｇｈｅら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．８４：１３１１−１３２３（１９９９））。そしてＧＨＳ−Ｒアナログ、ＧＨＲＰ−２は、るいそう状態を有する重篤な病気の患者において、タンパク質の高異化、骨格筋のタンパク質分解、および骨粗鬆症を打ち消す（Ｓａｎｎａら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１１：２４１−２５０（２００３））。さらに、マウスの多発性硬化症（ＭＳ）モデルにおけるレプチンの循環レベルの増加は、炎症性食欲不振および疾患感受性を調節する（Ｓｕｎ，Ｙ．ら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２３：７９７３−７９８１（２００３））。飢餓誘発性のレプチンレベルの抑制は、このモデルにおいて、ＥＡＥの発症を劇的に低下させた（Ｓｕｎ、Ｙ．ら、（２００３））。空腹時は、血清レプチンレベルの低下およびグレリン循環レベルの強力な増加と関連するだけでなく（Ｃｕｍｍｉｎｇｓら（２００２）、Ｉｎｕｉ、Ａ．（２００１））、ＭＳマウスモデルにおける観察される空腹時の抗炎症効果もまたグレリンによって媒介される。飢えの制御は種の生存にとって最も重要であると考えると、代償機構の複雑な回路は、これらの制御因子の１つ以上の欠失に対する保護を進化させている。
【００９９】
グレリン機能は、活性化によって誘導されるサイトカイン発現を制御するだけでなく、これらの同じ炎症性調節因子のレプチン誘導性の発現を制御する免疫系における、ウイルス対抗する調節シグナルとして機能する。免疫細胞による、ＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＴＮＦ−αの発現に対するこれらのホルモンの相互的な制御効果は、るいそう疾患、加齢およびフレイルティーの進行に広範な関連を有する。肥満の処置のためにグレリンレベルを低下させるためまたはＧＨＳ−Ｒをブロックするために提案される介入は、進行性の炎症性傷害の悪化（ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ）を引き起こし得るか、または免疫の縮退へと導き得る。これに対して、免疫系内でのグレリンの新規の抗炎症作用は、広範な炎症状態および癌と関連する食欲不振−悪液質症候群の対応において、利点を有する。
【０１００】
（７．処置）
本明細書中に開示される因子および方法は、炎症に直面しているかまたは炎症の危険性がある被験体、および食欲の不振に直面している被験体に有益である。本明細書中に開示される因子および方法は、炎症の重篤度または持続期間を低減させるので、炎症の低減により利益を受け得る被験体はいずれも、本明細書中に開示される方法および因子によって処置され得る。
【０１０１】
本明細書中に開示される因子を、薬学的に受容可能なキャリア中に含む組成物は、経口的、非経口的（例えば、静脈内）、筋肉内注射によって、腹腔内注射によって、経皮的に、体外的に、局所的などにより投与され得るが、局所的な鼻腔内投与または吸入による投与が代表的に好ましい。本明細書中で使用される場合、「局所的鼻腔内投与」は、一方または両方の鼻孔を介した鼻および鼻腔内への組成物の送達を意味し、そして核酸およびベクターのスプレー機構または液滴機構による送達またはエアロゾルを介した送達を含み得る。後者の送達は、多数の動物が同時に処置されるべき場合に有効であり得る。吸入による組成物の投与は、噴霧機構または液滴機構による送達を介した鼻または口を通してであり得る。送達はまた、挿管を介した呼吸系（例えば、肺）のいずれかの領域に対して直接的であり得る。必要とされる組成物の正確な量は、被験体の種、年齢、体重および一般的状態、処置される障害の重篤度、使用される特定の核酸またはベクター、投与形態などに依存して、被験体ごとに変動する。従って、全ての組成物に対して正確な量を特定することは可能ではない。しかしながら、適切な量は、本明細書中の教示を受けて、慣用的な実験のみを使用して、当業者により決定され得る。
【０１０２】
組成物の非経口投与は、使用される場合、一般的に注射により特徴付けられる。注射物は、従来の形態である、液体溶液もしくは懸濁物、注射の前の液体中への懸濁による溶液に適した固体形態として、またはエマルジョンのいずれかとして、調製され得る。ごく最近改良された非経口投与のアプローチは、一定用量が維持されるような遅放出性の系または徐放性の系の使用を含む。例えば、米国特許第３，６１０，７９５号を参照のこと（これは、教示される方法に関して、その全体が本明細書中で参考として援用される）。
【０１０３】
組成物は溶液中または懸濁物中（例えば、ミクロカプセル、リポソームまたは細胞に取り込まれる）に存在し得る。これらの組成物は、抗体、レセプター、またはレセプターリガンドを介して特定の細胞に標的化され得る。以下の参照は、所定の組織に対して特定のタンパク質を標的化するために、本技術を使用する例である（Ｓｅｎｔｅｒら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．２：４４７−４５１（１９９１）；Ｂａｇｓｈａｗｅ、Ｋ．Ｄ．，Ｂｒ．Ｊ．、Ｃａｎｃｅｒ  ６０：２７５−２８１（１９８９）；Ｂａｇｓｈａｗｅら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ５８：７００−７０３（１９８８）；Ｓｅｎｔｅｒら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．４：３−９（１９９３）；Ｂａｔｔｅｌｌｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３５：４２１−４２５（１９９２）；ＰｉｅｔｅｒｓｚおよびＭｃＫｅｎｚｉｅ、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ．Ｒｅｖｉｅｗｓ  １２９：５７−８０（１９９２）；ならびにＲｏｆｆｌｅｒら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ４２：２０６２−２０６５（１９９１））：「ステルス」および他の抗体結合体化リポソームのようなビヒクル（結腸癌に対する液体媒介性の薬物標的化が挙げられる）、細胞の特異的リガンドを介したレセプター媒介性のＤＮＡ標的化、リンパ球に向けられる腫瘍標的化、およびインビボでのマウスの神経膠腫細胞への高度に特異的なレトロウイルス標的化。一般的に、レセプターは、構成的にかまたはリガンド誘導されるかのいずれかでエンドサイトーシスの経路に関与する。これらのレセプターは、クラスリンで被覆されたピット内でクラスター形成し（ｃｌｕｓｔｅｒ）、クラスリンで被覆された小胞を介して細胞に侵入し、酸性化されたエンドソーム（ここでレセプターが仕分けられる）を通過し、次いで細胞表面へと再利用されるか、細胞内で保存されるか、またはリソソーム内で分解されるかのいずれかになる。この内部移行経路は、種々の機能（例えば、栄養分の取り込み、活性化されたタンパク質の除去、高分子のクリアランス、ウイルスおよび毒素の日和見性の侵入、リガンドの解離および分解、ならびにレセプターレベルの制御）に役立つ。多くのレセプターは、細胞型、レセプター濃度、リガンドの型、リガンドの結合価、およびリガンド濃度に依存して、１つより多くの細胞内経路に従う。細胞媒介性エンドサイトーシスの分子機構および細胞内機構は、概説されている（ＢｒｏｗｎおよびＧｒｅｅｎｅ、ＤＮＡ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １０：６，３９９−４０９（１９９１））。
【０１０４】
（ａ．薬学的に受容可能なキャリア）
本明細書中に開示されるグレリンまたはそのフラグメントの投与は、他の治療剤と組み合わせて起こり得る。従って、本発明の薬剤は、単独で投与され得るかまたは１つ以上の治療剤と組み合わせて投与され得る。例えば、被験体は、開示される薬剤単独で処置され得るか、または化学治療剤、抗体、抗ウイルス剤、ステロイド性抗炎症剤および非ステロイド性抗炎症剤、従来の免疫治療剤、サイトカイン、ケモカイン、および／または増殖因子と組み合わせて処置され得る。組み合わせは、一括して（例えば、混合物として）か、同時ではあるが別々に（例えば、同じ被験体に別々の静脈ラインを介して）か、または連続して（例えば、化合物または薬剤のうちの１つが最初に投与され、続いて第二のものが投与される）かのいずれかで投与され得る。従って、用語「組み合わせ」または「組み合された」は、２つ以上の薬剤を、一括投与、同時投与、または連続投与のいずれかを言及するために使用される。
【０１０５】
本明細書中に開示される薬物の送達は、薬学的に受容可能なキャリアと治療的に組み合わせて使用され得る。薬学的キャリアは、当業者に公知である。これらはほぼ代表的にヒトに対する薬物の投与のための標準的なキャリアであり、滅菌水、生理食塩水、および生理学的ｐＨに緩衝化された溶液のような溶液が挙げられる。これらの組成物は、筋肉内投与されるかまたは皮下投与される。他の化合物は、当業者に使用される標準的手順に従って投与される。
【０１０６】
薬学的組成物は、最適な分子に加えて、キャリア、増粘剤、希釈剤、緩衝剤、保存剤、表面活性化薬などを含み得る。１つ以上の成分（例えば、薬学的組成物はまた、抗菌剤、抗炎症剤、麻酔剤など）を含み得る。
【０１０７】
薬学的組成物は、局所的処置が所望されるかまたは全身性の処置が所望されるのかに依存して、そして処置されるべき領域に依存して、多くの方法で投与され得る。投与は、局所的か、経口か、吸入によるか、または非経口的であり得、例えば、点滴静注、皮下注射、腹腔内注射、または筋肉内注射により得る。開示される化合物は、非経口、腹腔内、筋肉内、皮下、腔内、または経皮的に投与され得る。
【０１０８】
非経口投与のための調製物としては、滅菌した水性溶液または非水性溶液、懸濁物、およびエマルジョンが挙げられる。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油（例えば、オリーブ油）、および注射可能な有機エステル（例えば、オレイン酸エチル）である。水性キャリアとしては、水、アルコール性／水性溶液、エマルジョンまたは懸濁物が挙げられ、生理食塩水および緩衝化媒体が挙げられる。非経口性ビヒクルとしては、塩化ナトリウム溶液、リンガー液のブドウ糖溶液、ブドウ糖および塩化ナトリウム溶液、乳酸加リンガー液、または不揮発性油が挙げられる。静脈内ビヒクルとしては、流体および栄養分の補充物（ｒｅｐｒｅｎｉｓｈｅｒ）、電解質補充物（例えば、リンガー液のブドウ糖に基づいた補充物、などが挙げられる。保存剤および他の添加剤（例えば、抗菌剤、酸化防止剤、キレート剤、および不活性ガスなど）もまた存在し得る。
局所投与のための調製物としては、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、液滴、坐薬、スプレー、液体および粉体が挙げられる。従来の薬学的キャリア、水、粉末または油性ベース、増粘剤などは、必須であり得るかまたは所望可能であり得る。
【０１０９】
経口投与のための組成物としては、粉末または顆粒、水媒体または非水性媒体中の懸濁物または溶液、カプセル、サシェ（ｓａｃｈｅｔ）、あるいは錠剤が挙げられる。増粘剤、矯味矯臭剤、希釈剤、乳化剤、分散補助剤、または結合剤は、所望可能であり得る。
【０１１０】
組成物のいくつかは、潜在的に、薬学的に受容可能な酸付加塩または塩基付加塩として投与され得る。これら塩は無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、過塩素酸、硝酸、チオシアン酸、硫酸およびリン酸）および有機酸（例えば、蟻酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸およびフマル酸）との反応によって形成されるか、または無機塩基（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カリウム）および有機塩基（例えば、モノアルキルアミン、ジアルキルアミン、トリアルキルアミンおよびアリールアミン、ならびに置換されたエタノールアミン）との反応によって形成される。
【０１１１】
（ｂ．投与量）
本発明の物質は、有効量または有効濃度で送達され得る。有効濃度または有効量の物質とは、炎症応答または食欲の低下において処置または予防を生じるものである。当業者は、当該分野で公知の方法および本明細書中に提供される方法に従って、有効濃度または有効量を決定する方法が分かる。当業者は、インビトロアッセイを使用して、特定の物質のインビボ投与量を、投与の濃度および時間経過を含め、最適化し得る。
【０１１２】
物質の投与のための投与量範囲は、その障害の症状が影響を受ける、所望の効果を生じるのに十分に大きい範囲である。例えば、投与量範囲は、例えば体重１ｋｇあたり０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．７ｍｇ、０．８ｍｇ、０．９ｍｇ、１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ、１６ｍｇ、１７ｍｇ、１８ｍｇ、１９ｍｇもしくは２０ｍｇまたはこの間のいずれかの量のグレリンであり得る。特に、投与され得るグレリンの量は、体重１ｋｇあたり約０．５ｍｇまたは体重１ｋｇあたり１ｍｇ〜１５ｍｇであり得る。
【０１１３】
投与量は、副作用（例えば、所望されない交差反応、アナフィラキシー性反応、など）を引き起こさない程度であるべきである。一般に、投与量は、患者における年齢、状態、性別および疾患の程度により変動し、そして当業者によって決定され得る。投与量は、任意の配合禁忌の場合に、個々の医者によって調節され得る。投与量は変動し得、そして毎日の１用量以上の投与用量で１日または数日間投与され得る。
【０１１４】
例えば、サイトカインの活性を調節する物質を用いた、炎症によって特徴付けられる障害を有するヒトの処置の効力を評価するため、以下の研究が実施され得る。その障害の制御のための（非経口または経口での）標準的な医療治療法（プレドニゾンおよび／または当該分野で公知の免疫調節因子が挙げられる）を失敗に終わらせた患者（例えば、肺の活発な炎症を有する患者）が、選択され得る。薬物の効力は、モニタリングされ得る。患者は、２つの異なるプロトコルへと無作為化され得る。１つのプロトコルにおいて、被験体は、最初の薬物療法を依然として受け得、そして第二のプロトコルにおいて、被験体は、サイトカイン活性を調節する物質（例えば、グレリン）を受容後にその被験体の薬物療法が次第に弱められ得る。
【０１１５】
１つの例において、グレリンは、炎症または食欲不振の症状が鎮静化するまで、２時間の期間にわたって注入され得るかまたは体重１ｋｇあたり約０．５ｍｇの週当たりの用量が毎回２時間の期間にわたって注入され得る。被験体の血圧、心拍数および体温が、その２時間の注入前、およびその注入の間に３０分間隔でモニタリングされ得る。被験体はまた、日常的な炎症のモニタリングを受け得る。
【０１１６】
上記のように、本明細書中に開示される薬剤は、他の形態の治療物と一緒に投与され得る。例えば、この分子は、抗体、抗生物質、または他の上記のような癌処置プロトコル、またはウイルスベクターと共に投与され得る。上記のように薬剤（因子）がベクター中に存在する場合、治療目的のための核酸を含むベクターはまた、グレリンまたはそのフラグメントを含み得る。
【０１１７】
（Ｃ．送達のための核酸アプローチ）
本発明の物質（グレリンが挙げられる）はまた、物質（例えば、グレリン）をコードする核酸調製物（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）として、患者または被験体にインビボおよび／またはエキソビボで投与され得、その結果、その患者自身の細胞またはその被験体自身の細胞は、その核酸を取り込み、そしてそのコードされた物質を産生および分泌する。
【０１１８】
本発明の核酸は、裸のＤＮＡまたはＲＮＡの形態で存在し得るか、またはこの核酸を細胞へと送達するために、この核酸はベクター中に存在し得る。これによって、当業者に十分に理解されるように、ＤＮＡフラグメントはプロモーターの転写制御下にある。ベクターは、例えばアデノウイルスベクター（Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｌａｖａｌ，Ｑｕｅｂｅｃ，Ｃａｎａｄａ）のような市販の調製物であり得る。この核酸またはベクターの細胞への送達は、種々の機構を介し得る。一例として、送達は、市販のリポソーム調製物（例えば、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ，ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ，Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）、ＳＵＰＥＲＦＥＣＴ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎｃ．Ｈｉｌｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、およびＴＲＡＮＳＦＥＣＴＡＭ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｂｉｏｔｅｃ，Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用したリポソーム、および当該分野で標準的な手順に従って開発された他のリポソームを介し得る。さらに、本発明の核酸またはベクターは、エレクトロポレーションによってインビボで送達され得る。この技術に関して、Ｇｅｎｅｔｒｏｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から利用可能であり、そしてＳＯＮＯＰＯＲＡＴＩＯＮ  ｍａｃｈｉｎｅ（ＩｍａＲｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ．，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）の手段によって利用可能である。
【０１１９】
一例として、ベクターの送達は、ウイルス系（例えば、組換えウイルスゲノムをパッケージングし得るレトロウイルスベクター系）を介し得る（例えば、Ｐａｓｔａｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：４４８６，１９８８；Ｍｉｌｌｅｒら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．６：２８９５，（１９８６）を参照のこと）。次いで、この組換えレトロウイルスを使用して感染し得、これによって本発明の広範な中和抗体（またはその活性なフラグメント）をコードする核酸を、この感染された細胞に送達し得る。改変された核酸を哺乳動物細胞中に導入する正確な方法は、無論、レトロウイルスベクターの使用に限定されない。他の技術は、この手順に関して広範に利用可能であり、アデノウイルスベクターの使用（Ｍｉｔａｎｉら，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．５：９４１−９４８，（９９４））、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターの使用（Ｇｏｏｄｍａｎら，Ｂｌｏｏｄ  ８４：１４９２−１５００（１９９４））、レンチウイルスベクターの使用（Ｎａｉｄｉｎｉら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７２：２６３−２６７（１９９６））、および偽レトロウイルスベクターの使用（Ａｇｒａｗａｌら，Ｅｘｐｅｒ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２４：７３８−７４７（１９９６））が挙げられる。例えばリポソーム送達およびレセプター媒介性機構および他のエンドサイトーシス機構のような、物理的な移入技術もまた使用され得る（いくつかの例を挙げるとすると、例えば、Ｓｃｈｗａｒｔｚｅｎｂｅｒｇｅｒら，Ｂｌｏｏｄ  ８７：４７２−４７８，（１９９６）を参照のこと）。本発明は、これらの方法または他の通常使用される遺伝子移送方法のいずれかと組み合わせて使用され得る。
【０１２０】
一例として、本発明の抗体をコードする核酸は、アデノウイルスベクターにおいて被験体の細胞に送達される場合、ヒトに対するアデノウイルスの投与のための投与量は、注射あたり１０７〜１０９プラーク形成単位（ｐｆｕ）の範囲であり得るが、注射あたり１０１２ｐｆｕほど高くあり得る（Ｃｒｙｓｔａｌ，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．８：９８５−１００１（１９９７）；ＡｌｖａｒｅｚおよびＣｕｒｉｅｌ，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．８：５９７−６１３，（１９９７））。被験体は、坦懐の注射を受け得るか、またはさらなる注射が必要とされる場合、その被験体は６ヶ月間の間隔で（または熟練者により決定されるように他の適切な間隔で）無期限の期間および／またはその処置の効力が確立されるまで繰り返され得る。
【０１２１】
本発明の核酸またはベクターの非経口投与は、使用される場合、一般的に注射によって特徴付けられる。注射物は、従来の形態（液体もしくは懸濁物、注射前に液体中へ懸濁した液体に適した固体として、またはエマルジョンとしてのいずれか）で調製され得る。ごく最近に、非経口投与のために改良されたアプローチは、一定量の投薬量が維持されるように、遅滞性放出または徐放性の系の使用を含む。例えば、米国特許第３，６１０，７９５号を参照のこと（これは、本明細書中で参考として援用される）。適切な処方物および治療化合物の投与の種々の経路についての考察に関しては、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（第１９版）Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９９５）を参照のこと。
【０１２２】
以下の実施例は、本命再書中に特許請求される化合物、組成物、物品、デバイスおよび／または方法が作製されそして評価される方法を当業者に提供するために記載され、そしてこれら実施例は、純粋に本発明の例示であることが意図され、そして本発明者らが自分たちの発明とみなす範囲を限定することは意図されない。数値（例えば、量、温度など）に関する正確性を確実にするための努力がなされているが、いくらかの誤差および偏差は考慮されるべきである。他に示されない限り、部分は重量による部分であり、温度は摂氏（℃）であるかまたは周囲温度であり、そして圧力は大気圧または大気圧付近である。
【実施例】
【０１２３】
（実施例１：一般的方法）
（ヒト被験体）  ＰＢＭＣおよびＴ細胞の単離のため、２２歳〜３７歳の間の６人の健常な男性ドナーからフェレーシスパックを調製した。
【０１２４】
（マウス）  ８〜１０週齢の雄性の２０ｇ〜２２ｇのＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ，Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）のを使用した。Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｕｎｃｉｌの生命科学の研究室動物資源委員会のケアに関して、委員会より提案されるガイドラインに従って、動物の苦痛およびストレスを最小にした。各々の動物は、研究室げっ歯類用の食餌を与え、水を自由に取らせた。
【０１２５】
（ＬＰＳ誘導性炎症）  マウスにおける内毒素ショックを、以前に記載されるように（Ｂｏｃｈｋｏｖら、２００２．Ｎａｔｕｒｅ．４１９：７７−８）、１０μｇのＬＰＳ（Ｅ．ｃｏｌｉ血清型０５５：Ｂ５、Ｓｉｇｍａ）の腹腔内注射（ｉ．ｐ．）によって誘導した。また、動物にＬＰＳ投与の２４時間前および３０分前にＰＢＳ中のグレリンのｉ．ｐ．単回注射（体重１ｋｇあたり５ｍｇ）を行った。ＬＰＳチャレンジの４時間後および２４時間後にマウスを屠殺しそして内臓器官および血清を収集した。
【０１２６】
（Ｔ細胞の単離および培養）  末梢血単球細胞（ＰＢＭＣ）を、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度遠心分離によって得た。高アフィニティーネガティブ選択を介したヒトＴ細胞富化（ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ）カラム（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）を製造業者の指示書に従って使用してＰＢＭＣからＴ細胞を精製した。フロー分析は、代表的に、９０％超の純度を明らかにした。プレートに結合した抗ヒトＣＤ３抗体（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）（２００ｎｇ／ｍｌ）を用いて、ＡＩＭ−Ｖ無血清培地中の３×１０６細胞／ｍｌの濃度で、Ｔ細胞を２４時間刺激した。
【０１２７】
（免疫蛍光染色）  細胞染色を、以前に記載されるように（１７）実施した。簡潔に述べると、細胞をヒト抗ＧＨＳ−ＲヤギＩｇＧ、抗ＧＨＳ−ＲウサギＩｇＧ（ヒトＧＨＳ−ＲのＣ末端付近の１８６−２０２アミノ酸を認識する）（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）、抗グレリンウサギＩｇＧ、抗プログレリン前駆体（ｐｒｅ−ｐｒｏ−ｇｈｒｅｌｉｎ）ウサギＩｇＧ（Ｐｈｏｅｎｉｘ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ，Ｂｅｌｍｏｎｔ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）の異なる組み合わせと共に、４℃で一晩インキュベートした。脂質ラフト（ＬＩｐｉｄ  ｒａｆｔ）を、コレラ毒素−Ａｌｅｘａフルオロ（ＡＦ）５９４（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇｏｎ）を２０μｇ／ｍｌで４５分間使用して可視化した。ヤギ抗マウスＧｏｌｇｉｎ−９７（ゴルジ体のマーカー）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇｏｎ）を用いてゴルジ体を染色した。その後、細胞を、ＡＦ−４８８と結合体化した適切な二次抗体、およびＡＦ−５９４と結合体化した適切な二次抗体を用いて標識した。二塩酸４’，６−ジアミノジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）（１μｇ／ｍｌ）を使用して核を対比染色した。１００倍の対象についてＺｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｖｅｒｔ  Ｓ１００顕微鏡（Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ，Ｔｈｏｒｎｗｏｏｄ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）上でのＳｐｏｔ  Ａｄｖａｎｃｅｄソフトウェアによって、画像を得た。
【０１２８】
（フローサイトメトリー分析）  熱不活性化した２％ＦＢＳを含むＰＢＳ中のヒトＰＢＭＣ（１×１０６）を、１％パラホルムアルデヒドを使用して固定化し、そしてについて染色した。ＣＤ３抗体、ＣＤ４抗体、ＣＤ８  ＰＥおよびＣＤ１４  ＰＥ結合体化抗体（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）について染色し、そして氷上で３０分間インキュベートした。細胞をＰＢＳで洗浄し、次いでＧＨＳ−Ｒおよびグレリンについて染色し、続けてＡＦ−４８８と結合体化した特定の二次抗体について染色し、そしてＦＡＣＳｃａｎにて分析した。
【０１２９】
（細胞内カルシウム動態）  グレリンおよびＳＤＦ−１に応答した細胞内カルシウムの放出の測定を、以前に記載されたように（Ｓｈｅｒｍａｎ−Ｂａｕｓｔら  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ．４：３７７−３８６（２００３）実施した。細胞を、５μＭ  Ｆｕｒａ−２  ＡＭを含むＰＢＳ中で室温で３０分間インキュベートした。続いてこれらの細胞を洗浄し、次いで、ＰＢＳ中に１×１０６／ｍＬに再懸濁した。２ｍＬの細胞懸濁物の全てを、ＬＳ５０Ｂ分光光度計（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ，Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）を使用して、室温で連続撹拌するキュベット中に配置した。蛍光を、λｅｘ１＝３４０ｎｍ、λｅｘ２＝３８０ｎｍ、λｅｍ＝５１０ｎｍにおいてモニタリングした。これらのデータを、３４０ｎｍおよび３８０ｎｍにおいて励起された蛍光の相対比として提供される。
【０１３０】
（アクチン重合）  ヒトＴ細胞を、グレリン（１００ｎｇ／ｍｌ）またはポジティブコントロールＳＤＦ−１（１００ｎｇ／ｍｌ）のいずれかと２０分間インキュベートした。その後、細胞を固定化し、そして２％パラホルムアルデヒド０．１％  Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００中で透過させ、そしてファロイジンＡＦ−５９４を使用して核を、そしてＤＡＰＩによって核を染色した。
【０１３１】
（サイトカインの評価）  ２４時間後のＴ細胞の上清中のＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＴＮＦ−αを製造業者（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ，Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）の取り扱いプロトコルに従って市販のＥＬＩＳＡキットを使用して、評価した。血清、サイトカインを、Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ  Ｍｏｕｓｅ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ１８−Ｐｌｅｘ  Ｐａｎｅｌを使用して製造業者（Ｂｉｏｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）の指示書に従って分析した。
【０１３２】
（実時間ＲＴ−ＰＣＲ分析）  ＲＴ−ＰＣＲを以前に記載されるように実施した（Ｎａｇａｓａｗａら、Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７１：２１１−２２８（１９９９））。全ＲＮＡ（２μｇ）およびオリゴ−ｄＴプライマーを使用して、製造業者の指示に従って一本鎖Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎキット（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，Ｍａｒｙｌａｎｄ）を使用してｃＤＮＡを合成した。ＳＹＢＲグリーンＭａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）、１μｌ  ｃＤＮＡおよび最終濃度０．３μＭの遺伝子特異的プライマーを使用して、ＰＣＲを設定した。Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ＧｅｎｅＡｍｐ  ７７００  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒにおいて熱サイクリングを実行し、そしてＧｅｎｅＡｍｐ  ７７００  ＳＤＳソフトウェアを使用してＳＹＢＲグリーン色素強度を分析した。ヒトＩＬ−１β遺伝子、ヒトＩＬ−６遺伝子、ヒトＴＮＦ−α遺伝子およびコントロールとしてのグリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）に対するプライマーをＢｉｏｓｏｕｒｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，ＣＡより購入し、ヒトＧＨＳ−Ｒ  １ａおよびヒトグレリンを、以前に記載されるように（Ｇｎａｎａｐａｖａｎら（２００２））使用した。ＡＢＩプリズムソフトウェア（ＰＥ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、マウスＩＬ−１βプライマー、マウスＩＬ−６プライマー、マウスＴＮＦ−αプライマー、ＧＡＰＤＨプライマーおよびヒトＧＨＳ−Ｒ  １ａプライマーを設計した。ＧＨＳ−Ｒ１ａ増幅のＰＣＲ産物を、Ａｇｉｌｅｎｔ  ２１００  Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を使用して定量した。プライマーは、必要時に利用可能である。ＰＣＲ産物は、遺伝子  対  ｃＤＮＡテンプレートからは生成されなかった。
【０１３３】
（統計学的分析）  結果を平均±標準誤差（ＳＥＭ）として表した。統計学的分析を、１次元ＡＮＯＶＡにより行った。処置群の間の有意な差異は、Ｓｔｕｄｅｎｔ−Ｎｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌｓ検定により決定し、統計学的有意さをＰ＜０．０５と推測した。
【０１３４】
（実施例２：ＧＨＳ−Ｒは、ヒトＴ細胞上に発現される機能性レセプターである）
以前の結果は、リンパ器官におけるＧＨＳ−ＲのｍＲＮＡ発現のみを説明したが、本研究は、生成されたヒトＴ細胞におけるＧＨＳ−Ｒタンパク質の発現および空間的局在について焦点を当てた。ＧＨＳ−Ｒは、半月形、点状またはびまん性の表現型から広がる休眠ヒトＴ細胞において、不均一な（ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ）部分細胞性の（ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ）形態を表した（図１ａ上側、図８ｂ）。休眠ヒトＴ細胞において、グレリンレセプターの大部分はＧＭ１＋脂質ラフトから離れている（図１ａ上側）。しかしながら、ＴＣＲの連結を介したＴ細胞の活性化の際、劇的なＧＨＳ−Ｒの部分細胞性の劇的な再構築が観察され、このことは脂質ラフトの分極したキャップ表現型および凝集を示す（図１ａ下側）。フローサイトメトリー分析は、ブロッキングペプチドの使用により示されたように、高度に精製された休眠ヒトＴ細胞のうちの３０％までがＧＨＳ−Ｒに対する特異的な染色を示した（図１ｂ）。ヒトＰＢＭＣにおいて、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＧＨＳ−Ｒの発現は、これらの免疫細胞の部分集合において優先的な発現様式で察されるのではない。高度に精製されたヒトＴ細胞において、ＧＨＳ−Ｒ発現は、細胞の活性化の際、有意に上昇する（図１ｃ）。そして抗体特異的ブロッキングペプチドの存在下で、このＧＨＳ−Ｒの標識化は、ほぼ完全に除去された。さらに、Ｔ細胞の活性化の際、Ａｇｉｌｅｎｔ遺伝子チップ技術および実時間ＲＴ−ＰＣＲを使用するＰＣＲ産物の定量分析によって示されるように、ＧＨＳ−Ｒ遺伝子発現の顕著な上方制御も存在する（図１ｄ）。脂質ラフト内のＧＨＳ−Ｒの存在およびＴ細胞活性化の際のＧＨＳ−Ｒ遺伝子の特異的活性化は、Ｔ細胞機能におけるこれらレセプターの役割を示す。ヒトＧＨＳ−ＲのＣ末端領域から近位の１８６〜２６５アミノ酸残基を認識する二次抗体を利用して、活性化Ｔ細胞において、グレリンレセプターに対する同様な染色様式を観察した（図８ａ）。
【０１３５】
７回膜貫通型ＧＰＣＲの連結は、代表的に、イノシトール三リン酸の生成による細胞内貯蔵からのカルシウムの流動を生じる（Ｋｏｊｉｍａら（１９９９）、Ｓｈｅｒｍａｎ−Ｂａｕｓｔら（２００３））。グレリンは、ＧＨＳ−Ｒをトランスフェクトされたチャイニーズハムスター卵母細胞（ＣＨＯ細胞）において細胞内カルシウムの放出を誘導することが以前に示されている（Ｋｏｊｉｍａら（１９９９））。ここで、培養したヒトＴ細胞を使用して、全長のグレリンタンパク質およびグレリン１−１８フラグメントの両方に応答した細胞内［Ｃａ２＋］の有意かつ特異的な上昇を示した（図１ｅ）。［Ｄ−Ｌｙｓ−３］−ＧＨＲＰ−６（高選択性のＧＨＳ−Ｒアンタゴニスト）を用いた前処理がＴ細胞からのグレリン媒介性の細胞内カルシウム放出を顕著に減少させるので、このグレリン誘導性のカルシウム流動はＧＨＳ−Ｒ特異的であることを見出した（図１ｅ）。興味深いことに、グレリン処置により誘導される細胞内カルシウム流動化は、ポジティブコントロールの間質細胞由来因子１（ＳＤＦ−１）（これは、細胞表面のＧＰＣＲのＣＸＣＲ４に特異的に結合し、そしてこれを介してシグナル伝達する、潜在的なＴ細胞ケモカインリガンドである）に応答して観察される細胞内カルシウム流動と同じ規模である（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｍａｄｒｉｄら、ＥＭＢＯ  Ｊ．１８：５０１−５１１（１９９９））。さらにカルシウム流動化において、ＧＰＣＲの連結はしばしば、劇的なアクチン骨格および細胞表面分子の再構築を伴い、そして分極化を導き、そして多くの場合、免疫細胞の指向性の遊走を導く（Ｔａｕｂら（１９９３）、Ｉｎｕｉ，Ａ（１９９９））。ここで、グレリンは、ＳＤＦ−１処置細胞とよく類似した様式で、Ｆアクチンの典型的な分極化を有するラメリポディウムの広範な膜構造の特徴の顕著な増加を誘導した（図１ｆ）。併せると、これらのデータは、ヒトＴ細胞および単核細胞部分集合の表面上での機能性ＧＨＳ−Ｒの存在を実証し、そして免疫系におけるグレリンおよびＧＨＳ−Ｒの生物学的役割を示唆する。
【０１３６】
（実施例３：ヒト単核細胞において発現されるグレリンのｍＲＮＡおよびタンパク質）
単核細胞のなかでも、単球は炎症促進性サイトカインの重要な供給源を構築し、このため、本発明者らは単球におけるＧＨＳ−Ｒの発現を試験することにする。フローサイトメトリー分析は、約２１％のＣＤ１４＋細胞がＧＨＳ−Ｒを発現することを明らかにした（図２ａ）。免疫蛍光顕微鏡を使用して、分散したＧＨＳ−Ｒ発現を、精製された単球の細胞表面上に検出し（図２ｂ上側）、そしてコントロールＩｇＧが特異的な標識化のないことを示した（図２ｂ下側）。同様に、ＧＨＳ−Ｒ発現を、樹状細胞由来の未成熟単球および成熟単球において観察した。実時間ＲＴ−ＰＣＲ分析も、単球におけるＧＨＳ−Ｒ１ａ  ｍＲＮＡの存在を初代ヒトＴ細胞と同等のレベルで示した。
【０１３７】
（実施例４：グレリンは炎症促進性サイトカイン発現を選択的に阻害する）
古典的炎症促進性サイトカインのＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＴＮＦ−αは、食欲不振−悪液質症候群の発症において重要な役割を果たすことが公知である（Ｉｎｕｉら  １９９９．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５９：４４９３−４５０１）。食欲不振−悪液質症候群は、タンパク質、炭水化物および脂肪の代謝変化と関係する複雑な多因子性の代謝状態であり、食欲不振、負のエネルギー平衡、体重減少および筋肉るいそうを生じる（Ｋｏｔｌｅｒら  ２０００．Ａｎｎ．Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄ．１３３：６２２−６３４）。代謝活性を調節することにおける炎症促進性サイトカインにより果たされる重要な役割を考慮すると、グレリンが活性化されたＰＢＭＣおよびＴ細胞によりＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＴＮＦ−αの産生を調節する能力を試験した。健常な男性被験体に由来するヒトＰＢＭＣを、ポリクローナルマイトゲン、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）を用いて刺激し、そしてグレリンおよびＧＨＳ−Ｒアンタゴニストの存在下または非存在下で２４時間インキュベートし、その後上清を収集し、そしてサイトカインのレベルについて試験した。グレリン処置は、１ｎｇ／ｍｌ〜１００ｎｇ／ｍｌにわたるグレリンのレベルにおいて、ＰＢＭＣによるＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＴＮＦ−αの産生の有意な阻害を生じた（図３ａ−ｃ）；しかしながら、グレリン処置は試験したいずれの濃度においてもこれらのＰＢＭＣによるＴＧＦ−β産生を変更することが不成功だった（図３ｄ）。この効果は、ＧＨＳ−Ｒ特異的であることを見出した。なぜなら、ＧＨＳ−Ｒアンタゴニストのこれらの培養物への添加はこのグレリン媒介性阻害を減少させ、そして同様のサイトカイン産生に対するグレリンの効果は、コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）により刺激したＰＢＭＣおよびＬＰＳ処置した単球を使用して観察されたからである。さらに、固定化された抗ＣＤ−３抗体を用いてグレリンの存在下で２４時間刺激した初代ヒトＴ細胞は、ＩＬ−１βおよびＩＬ−６の有意な用量依存性阻害を示した（図３ｅ−ｇ）。乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の測定およびトリパンブルー除外を使用した細胞計数がコントロール細胞とホルモン処置細胞との間の有意差をいずれも示すことができなかったので、このグレリン媒介性阻害は、Ｔ細胞またはＰＢＭＣに対するこのホルモンの細胞溶解性効果のいずれにもよらなかったこともまた、注意されるべきである。実時間ＲＴ−ＰＣＲ分析を使用して、グレリンは全てのドナーにおいてＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＴＮＦ−αのｍＲＮＡ発現を有意に阻害することを実証した。このことは、サイトカイン産生の低減を示す（図３ｈ）。これらの結果は、グレリンが炎症性サイトカインの発現の転写制御において役割を果たすことを示す。
【０１３８】
（実施例５：グレリンはレプチン媒介性の炎症促進性サイトカインの発現を阻害する）
レプチンおよびグレリンが炎症性サイトカインの産生を制御する作用機構を決定した。ヒトＴ細胞におけるＯｂ−Ｒタンパク質の空間的局在（図４ａ）を実証し、そしてＩＬ−１β（図４ｂ）、ＩＬ−６（図４ｃ）およびＴＮＦ−α（図４ｄ）のタンパク質発現およびｍＲＮＡ発現の初代ヒトＴ細胞による有意な用量依存性増加（図４ｅ）およびＰＢＭＣによる有意な用量依存性増加を、レプチンが直接誘導することもまた実証した。これらの培養物へグレリンを共同性に追加する際、種々の濃度のグレリンに応答して、Ｔ細胞によるレプチン誘導性のサイトカインタンパク質発現およびサイトカイン遺伝子発現について、用量依存性の阻害を観察した（図４ｂ−ｅ）。このことは、グレリンおよびレプチンが、食物摂取に対して視床下部においてそれらの効果が類似であるが、免疫系において炎症性サイトカインの発現に対してアンタゴニスト効果を相互に関係して働かせることを示す。従って、レプチンおよびグレリンの循環レベルの変化は、免疫細胞集団による種々のサイトカイン産生に対して有意な影響を及ぼす。このような相互的な免疫調節効果は、免疫細胞の恒常性を維持するのに重要であり、従って、疾病および病理を生じるかまたは増幅させる異常なサイトカイン産生を防止する。
【０１３９】
（実施例６：ヒトＴ細胞はグレリンを発現し、そしてこのグレリンを能動的に分泌する）
グレリンは、専ら胃により産生され、続いて末梢の循環へと分泌されると考えられていた（Ｋｏｊｉｍａら、１９９９．Ｎａｔｕｒｅ．４０２：６５６−６６０）。しかしながら、末梢のグレリンレベルは胃切除後、徐々に増加することが実証されており、このことは胃由来のグレリンに代わってグレリンのさらなる細胞性の供給源が補償することを示す（Ｄｉｘｉｔら、２００３．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．１４４：５５９５−５６０３）。
【０１４０】
リンパ球は、ＧＨのような多くの十分に特徴付けられたホルモンを産生することが公知である（Ｈｏｓｏｄａら、２００３．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：６４−７０）。このＧＨは、免疫系に多くのオートクライン効果およびパラクライン効果を働かせる（Ｔａｕｂら、１９９４．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９４：２９３−３００）。サイトカインの発現に対するグレリンの潜在的効果を仮定すると、免疫細胞により内在性に産生されたグレリンの存在の可能性が仮定される。免疫反応性グレリンおよびＧＨＳ−Ｒの存在は、広範に分布した表現形を有する休眠Ｔ細胞において本明細書中で実証され（図５ａ上側）、同時に局在する領域から、Ｔ細胞におけるグレリンに関するリガンド−レセプター相互作用およびオートクラインの役割が示される。ＴＣＲの連結の際、内在性免疫反応性グレリンの空間的局在における明確な変化が観察され、このことは発現表現形の分極を生じる。グレリンはＧＭ１＋脂質ラフト内で特異的に会合するようである（図５中央）。このことは、活性化の際、グレリンが産生されそして脂質ラフトおよびそれ自身の特異的なレセプターへと特異的に標的化されることを示す。ヒトＴ細胞によるグレリン合成のさらなる支持を受け、グレリンの１１７アミノ酸のプレ−プロ形態がまた同時発現され、そしてゴルジ装置内で同時局在されることが見出された図５ａ下側）。このゴルジ装置内で、プレ−プログレリンは、おそらくは、分泌前に切断されてその成熟形態へと処理される。初代Ｔ細胞におけるグレリンおよびプレ−プログレリンの両方は、抗体特異的ブロッキングペプチドの添加の際に打ち消した（図８ｄ）。
【０１４１】
これらの知見は、成熟グレリンタンパク質についての、種々のＴ細胞部分セットのフローサイトメトリー分析によってさらに支持され、ここで、Ｔ細胞の大部分はグレリン陽性のようであり、ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞部分集合においもＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞部分集合においても優先的な発現はない（図５ｂ）。Ｔ細胞による細胞内グレリンの発現に加え、これらの細胞のＴＣＲ連結は、培養上清中へと分泌されるグレリンタンパク質の実質的なレベルを生じ、そのレベルは４８時間でピークとなり、その後低下する（図５ｂ）。さらに、Ｔ細胞活性化は、実時間ＲＴ−ＰＣＲ分析によって実証されたように、５倍より多くのグレリンｍＲＮＡ発現を誘導した（図５ｃ）。
【０１４２】
Ｔ細胞によるグレリンの存在および分泌が仮定される場合、局所的なミクロ環境でのグレリン濃度は、胃から末梢循環中への放出の際に代表的に見られるは古典的な希釈効果を受けずに、有意に高レベルに達し得る。従って、Ｔ細胞由来のグレリンは、免疫のミクロ環境内または免疫器官内で細胞機能を制御する重要な役割に役立ち得る。レプチン媒介性の炎症性サイトカイン発現に対するグレリンの特異的なアンタゴニスト効果を仮定して、Ｔ細胞におけるグレリン発現およびＧＨＳ−Ｒ発現に対するレプチンの可能性ある相互制御効果を試験した。レプチンは、ヒトＴ細胞培養物において、グレリンタンパク質産生にもグレリン遺伝子発現にも、任意の有意な効果を働かせるのに失敗した（図５ｄ）。さらに、レプチン処置は、実時間ＲＴ−ＰＣＲにより測定されると、ヒトＴ細胞によるＧＨＳ−Ｒ  ｍＲＮＡ発現の有意な増加を生じた（図５ｅ）。従って、グレリンによるレプチン誘導性サイトカイン発現の下方制御は、相互的な制御性シグナル伝達経路を構築し、これによってこれらのホルモンは、免疫系内の互いの活性を制御する（図５ｆ）。さらに、ヒトの胃とリンパ器官とにおいてグレリン発現の実時間ＰＣＲ分析を比較すると、胃がＴ細胞、脾臓および胸腺より１１倍高いグレリンの発現を有することを明らかにした（図５ｇ）。リンパ器官および小腸は、胎盤と比較して５倍高いグレリンのｍＲＮＡレベルを発現した。
【０１４３】
（実施例７：グレリンは内毒素チャレンジに応答した炎症性サイトカインの発現および食欲不振を下方制御する）
細菌のリポ多糖（ＬＰＳ）は、内毒素ショックの病因における主要な成分であり、これは主に単球に作用し、インビボで急性期型応答を惹起してＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＴＮＦ−αの過剰産生を生じる。これらの近位のサイトカインの増幅は、広範な炎症促進性作用および食欲不振誘発性作用を有し（Ｋｏｔｌｅｒら、２０００．Ａｎｎ．Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄ．１３３：６２２−６３４）、このことは敗血症および多臓器不全の病因に寄与する（Ｃｏｈｅｎら、２００３．Ｎａｔｕｒｅ  ４２０：８８５−８９１；Ｒｉｅｄｅｍａｎｎら、２００３．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１２：４６０−４６７）。グレリンが炎症性サイトカインのインビボ発現を調節する能力を試験する試みにおいて、ＬＰＳの投与前および投与後にマウスをグレリンにより処置した。図６に示されるように、グレリンは、ＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＴＮＦ−αのインビボ発現を阻害することにより、ＬＰＳ誘発性内毒素血症に対して強力な抗炎症効果を働かせた。これらの内毒素処置したマウスの脾臓および肝臓由来のｍＲＮＡの実時間ＰＣＲ分析は、ＬＰＳ投与の４時間後でのこれらのサイトカイン遺伝子の強力な発現（図６ａ−ｃ）と、２４時間までのｍＲＮＡ発現の有意な消滅（図６ｄ−ｆ）を明らかにした。グレリンで処置し、エンドトキシンでチャレンジしたマウスは、ＩＬ−１βおよびＩＬ−６のｍＲＮＡ発現の減弱を、４時間および２４時間後の脾臓および肝臓の両方で実証した（図ａ−ｆ）。ＴＮＦ−α  ｍＲＮＡの減少を、４時間目に脾臓および肝臓の両方において観察し（図６ｃ）、またＴＮＦ−αの発現をＬＰＳ投与の２４時間後の肝臓において阻害し、そして脾臓において変化のないままであった（図６ｆ）。炎症促進性サイトカインの同様の阻害を、ＬＰＳチャレンジの４〜２４時間後にグレリン処置したマウスの肺および腸膜間リンパ節において観察した。
【０１４４】
循環中の血清サイトカインレベルを測定するため、マウスをＬＰＳ処置、ＬＰＳの４時間後または２４時間後のいずれかのグレリン処置で処置した。血清サイトカインの分析は、グレリン処置の４時間後における循環中のＴＮＦ−αに有意な変化がある（図７ｃ）が、ＩＬ−１β（図７ａ）にもＩＬ−６（図７ｂ）にも変化のないことを明らかにした；しかしながら、ＩＬ−１βおよびＩＬ−６の有意な阻害をＬＰＳチャレンジの２４時間後に観察した（図７ｄ、７ｅ）。ＴＮＦ−αの血清中のレベルは、ＬＰＳチャレンジの２４時間後においては検出不能であった。内毒素誘発性食欲不振に対するグレリンの効果を試験するため、食物摂取をまたグレリンおよび／またはＬＰＳの投与の２４時間後に評価した。ＬＰＳチャレンジしたマウスは、擬似マウスと比較して食物消費の劇的な縮小を示し（８０％）、予めのグレリン処置はＬＰＳ誘発性食欲不振の有意な減少を生じた（図７ｆ）。期待したように、ＬＰＳチャレンジなしでグレリン処置したコントロールマウスはまた、擬似コントロールと比較して食物摂取の有意な増加（３０％）を示した。血清中のＩＬ−１βレベルおよびＩＬ−１αレベルもグレリン単独を注射したこれらのマウスにおいて、擬似コントロールマウスと比較した場合に有意の阻害された（図７ｇ、図７ｈ）。そして血清中のＩＬαレベルはＬＰＳとグレリンとの処置の２４時間後に阻害された（図７ｈ）。
【０１４５】
（実施例８：ＬＰＳにより誘導されたマウス内毒素血症における、グレリンの保護効果と関連した全体的な遺伝子発現プロフィール）
マウスにおいて、１０μｇのＬＰＳ（Ｅ．ｃｏｌｉ血清型０５５：Ｂ５）の腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によって内毒素ショックを誘導した。動物はまた、ＬＰＳの投与の２４時間前および３０分前に、ＰＢＳ中のグレリン単回（０．５ｍ／ｋｇ）の腹腔内注射を受けた。マウスをＬＰＳチャレンジの４時間後および２４時間後に屠殺し、そして内臓器官および血清を収集した。擬似マウスおよび処置マウスの脾臓からＲＮＡを抽出し、そしてＮＩＡマウス１７Ｋアレイを用いた遺伝子アレイに利用した。マイクロアレイフィルター上のハイブリダイゼーションスポットを、ａｒｒａｙ  ｐｒｏソフトウェアを使用して分析し、次いで像の平均強度を決定した。各スポットの多様な強度をフィルター全体にわたって規格化し、そして種々の条件の間で比較的過剰発現遺伝子および比較的発現不足の遺伝子を、平均１．５倍の変化率により決定した。
【０１４６】
（結果）  遺伝子発現を以下の条件の間で比較した：１）擬似  対  グレリン；２）ＬＰＳ（４時間）対ＬＰＳ（４時間）＋グレリン；および３）ＬＰＳ（２４時間）対ＬＰＳ（２４時間）＋グレリン。
【０１４７】
（擬似  対  グレリン）  グレリン遺伝子アレイにおいて上方制御される既知の７１個の遺伝子および上方制御される５１個のＥＳＴを、擬似の遺伝子アレイと比較した。抗炎症性標的遺伝子の中で、ＰＡＣＡＰレセプターおよびＣＤ２２は共に上方制御された。下方制御される合計１３４個の既知遺伝子および下方制御される９４個のＥＳＴが存在した。抗炎症性標的遺伝子としては、リポタンパク質リパーゼ、脂肪酸合成酵素、Ｓ−アデノシルホモシステイン加水分解酵素、末梢ベンゾジアゼピンレセプター、ＴＡＮＫ、血清グルココルチコイドキナーゼ（ｄｉｎａｓｅ）（ＳＧＫ）、およびリゾホスホリパーゼ１が挙げられる。
【０１４８】
（ＬＰＳ  ４時間  対  ＬＰＳ  ４時間＋グレリン）  グレリンで処置した内毒素血症のマウスを、４時間の時点で遺伝子発現を測定し、そしてグレリンで処置しなかった４時間の時点での内毒素血症マウスと比較した。グレリンアレイにおいて合計で７２個の上方制御される既知遺伝子および７６個の上方制御されるＥＳＴが存在した。抗炎症性標的遺伝子のなかでも、ＩＧＦ−１、エストロゲンレセプター１（α）、およびＴＩＭＰ４が上方制御された。下方に制御される合計で１５６個の既知遺伝子が存在し、そして９５個の下方制御されるＥＳＴが存在した。抗炎症性標的遺伝子の中で、カルモジュリン１、チオレドキシンレダクターゼ、グルタミン酸システインリガーゼ、炭酸脱水酵素２、スクアレンエポキシダーゼ、ＧＡＢ１およびＴｒｃｐが下方制御された。
【０１４９】
（ＬＰＳ  ２４時間  対  ＬＰＳ  ２４時間＋グレリン）  グレリンで処置した内毒素血症マウスにおいて、２４時間の時点での遺伝子発現を測定し、グレリンで処置されていない内毒素血症マウスと比較した。上方制御される全部で１４３個の既知遺伝子および上方制御される１１８個のＥＳＴが存在した。抗炎症性標的遺伝子の中で、Ｔｏｍ１（Ｍｙｂ１の標的）、チオレドキシンレダクターゼ、グルタミン酸−システインリガーゼ（触媒サブユニット）、およびグルココルチコイド誘導遺伝子１を検出した。下方制御される合計１６８個の既知遺伝子および下方制御される１８７個のＥＳＴが存在した。抗炎症性標的遺伝子の中で、ロイコトリエンＡ４加水分解酵素、ＰＥＣＡＭ、ＬＰＳで誘導されるＴＮ因子、ＴＡＮＫおよびＳｔａｒを全て検出した。
【０１５０】
全体的に、内毒素血症モデルにおいて、ＮＦκＢ経路の阻害が、グレリンの保護効果の主要なメディエーターのうちの１つとして同定した。グレリンによって制御されるＮＦκＢ制御遺伝子を、ＴＲＣＰ、ＴＯＭ１、ＡＰ２、ＧＡＢ１およびＴＡＮＫとして同定した。
【０１５１】
（実施例９：潰瘍性大腸炎およびクローン病を有する被験体において、グレリンレベルは低下される）
血清グレリンレベルは、クローン病を有する患者において低下する（図１１）。クローン病を有する１５人の被験体およびそれを有さない１３人の被験体にて行った研究において、グレリンレベルはクローン病を有する患者において有意により低いことが見出された。グレリン発現はまた、潰瘍性大腸炎を有する被験体において有意に少ない（図１２）。
【０１５２】
【表３】
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【０１５３】
【表４】
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【０１５４】
【表５】
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【０１５５】
【表６】
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【０１５６】
【表７】
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【０１５７】
【表８】
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【０１５８】
【表９】
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【０１５９】
【表１０】
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【０１６０】
【表１１】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【配列表】
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【外国語明細書】
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