(57)【要約】【課題】本発明の課題は、神経保護特性及び良好な輸送特性を示す新規鉄キレート剤等を提供することにある。【解決手段】神経保護特性及び良好な輸送特性を示す新規鉄キレート剤が、鉄過負荷及び酸化ストレスに関連する疾患、障害又は状態（例えば、神経変性疾患若しくは神経変性障害又は脳血管疾患若しくは脳血管障害、新生物疾患、血色素症、サラセミア、心血管疾患、糖尿病、炎症障害、アントラサイクリン心毒性、ウイルス感染、原生動物感染、酵母感染）の処置、加齢の遅延、並びに皮膚の加齢の予防及び／又は治療、並びに日光及び／又はＵＶ光に対する皮膚の保護のための鉄キレート化治療において有用である。鉄キレート剤機能は、８−ヒドロキシキノリン部分、ヒドロキシピリジノン部分又はヒドロキサメート部分によって提供され、神経保護機能が、例えば神経保護ペプチドによってこの化合物に付与され、抗アポトーシス機能及び神経保護機能を合せた機能がプロパルギル基によってこの化合物に付与される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物であって、鉄キレート剤機能、並びに前記化合物に神経保護機能を付与する残基、前記化合物に抗アポトーシス機能及び神経保護機能を合せた機能を付与する残基又はこれら両方の残基からなる群から選択される残基を含む、化合物。
【請求項２】
抗アポトーシス機能及び神経保護機能を合せた機能を付与する前記残基が、プロパルギル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記鉄キレート剤機能が、８−ヒドロキシキノリン残基、ヒドロキサメート残基及びピリジノン残基からなる群から選択される残基によって提供される、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
前記鉄キレート剤機能が、次式の８−ヒドロキシ−５−キノリン、３−ヒドロキシピリジン−４−オン又は１−ヒドロキシピリジン−２−オンの残基である、請求項３に記載の化合物：
【化１】
2011079834.tif 000099
（式中、Ｒは、キノリン環の位置５、位置６又は位置７、３−ヒドロキシ−４−ピリジノン（式中、Ｒ’は、Ｃ１〜Ｃ４低級アルキル、好ましくはメチルである）の位置１、位置２、位置５又は位置６、及び１−ヒドロキシ−２−ピリジノン環の位置４又は位置５において連結され得る、前記神経保護機能及び／又は神経保護機能及び抗アポトーシス機能を合せた機能を有する基を示す。
【請求項５】
前記鉄キレート剤機能が、８−ヒドロキシ−５−キノリニルメチレン基によって提供される、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
前記鉄キレート剤機能が、２−メチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン基によって提供される、請求項４に記載の化合物。
【請求項７】
前記化合物に神経保護機能を付与する前記残基が、神経保護ペプチド、神経保護類似体及びそれらの神経保護フラグメントからなる群から選択される、請求項１から６までのいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
前記神経保護ペプチドが、血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）、ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）、サブスタンスＰ又はエンケファリンである、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
前記神経保護ペプチドが、１つのアミノ酸残基がＬ−システイン残基又はＤ−システイン残基によって置換されたＶＩＰ、ＧｎＲＨ、サブスタンスＰ若しくはエンケファリン又はそれらのフラグメントの類似体である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
前記類似体が、アミノ末端にステアリル基又はＦｍｏｃ基を有し得る配列番号２のＶＩＰフラグメント類似体、配列番号４及び配列番号５のＧｎＲＨ類似体、配列番号７及び配列番号８のサブスタンスＰ類似体、並びに配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３及び配列番号１４のエンケファリン類似体からなる群から選択される、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
前記化合物に神経保護機能を付与する前記残基が、Ｌ−システイン残基若しくはＤ−システイン残基又はＬ−アラニン残基若しくはＤ−アラニン残基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
８−ヒドロキシ−５−キノリニルの鉄キレート剤機能、及び前記神経保護機能として神経保護ペプチド、神経保護類似体又はそれらの神経保護フラグメントの残基を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
前記神経保護ペプチドが、血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）、ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）、サブスタンスＰ又はエンケファリンである、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
前記神経保護ペプチドが、１つのアミノ酸残基がＬ−システイン残基又はＤ−システイン残基によって置換されたＶＩＰ、ＧｎＲＨ、サブスタンスＰ若しくはエンケファリン又はそれらのフラグメントの類似体である、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
前記類似体が、アミノ末端にステアリル基又はＦｍｏｃ基を有し得る配列番号２のＶＩＰフラグメント類似体、配列番号４及び配列番号５のＧｎＲＨ類似体、配列番号７及び配列番号８のサブスタンスＰ類似体並びに配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３及び配列番号１４のエンケファリン類似体からなる群から選択される、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
プロパルギル基をさらに含む、請求項１２から１５までのいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１７】
８−ヒドロキシ−５−キノリニルの鉄キレート剤機能及びＬ−システイン若しくはＤ−システイン又はＬ−アラニン若しくはＤ−アラニンの残基を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項１８】
プロパルギル基をさらに含む、請求項１７に記載の化合物。
【請求項１９】
８−ヒドロキシ−５−キノリニルの鉄キレート剤機能及びプロパルギル基を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項２０】
前記８−ヒドロキシ−５−キノリニルが、−Ｎ−原子を介して前記プロパルギル基に連結された８−ヒドロキシ−５−キノリニルメチレン基である、請求項１９に記載の化合物。
【請求項２１】
前記８−ヒドロキシ−５−キノリニルメチレン基が、エチレンジアミン残基、ピペラジン残基及び１，３，５−ペルヒドロトリアジン残基から選択されるリンカーを介して前記プロパルギル基に連結されている、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２２】
前記８−ヒドロキシ−５−キノリニルメチレン基が、ピペラジン残基を介して前記プロパルギル基に連結されている、請求項２１に記載の化合物。
【請求項２３】
前記８−ヒドロキシ−５−キノリニルメチレン基が、Ｌ−アラニン残基若しくはＤ−アラニン残基又はＬ−システイン残基若しくはＤ−システイン残基或いはそれらのエステルの−ＮＨ−基を介して前記プロパルギル基に連結されている、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２４】
ヒドロキサメートの鉄キレート剤機能、及び前記神経保護機能として神経保護ペプチド、神経保護類似体又はそれらの神経保護フラグメントの残基を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項２５】
前記神経保護ペプチドが、血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）、ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）、サブスタンスＰ又はエンケファリンである、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２６】
前記神経保護ペプチドが、１つのアミノ酸残基がＬ−システイン残基又はＤ−システイン残基によって置換されたＶＩＰ、ＧｎＲＨ、サブスタンスＰ若しくはエンケファリン又はそれらのフラグメントの類似体である、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２７】
前記類似体が、アミノ末端にステアリル基又はＦｍｏｃ基を有し得る配列番号２のＶＩＰフラグメント類似体、配列番号４及び配列番号５のＧｎＲＨ類似体、配列番号７及び配列番号８のサブスタンスＰ類似体並びに配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３及び配列番号１４のエンケファリン類似体からなる群から選択される、請求項２６に記載の化合物。
【請求項２８】
プロパルギル基をさらに含む、請求項２４から２７までのいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２９】
Ｎ−エチレン−２−ヒドロキシ−３−メチル−ピリジン−４−オンの鉄キレート剤機能、及び前記神経保護機能として神経保護ペプチド、神経保護類似体又はそれらの神経保護フラグメントの残基を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項３０】
前記神経保護ペプチドが、血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）、ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）、サブスタンスＰ又はエンケファリンである、請求項２９に記載の化合物。
【請求項３１】
前記神経保護ペプチドが、１つのアミノ酸残基がＬ−システイン残基又はＤ−システイン残基によって置換されたＶＩＰ、ＧｎＲＨ、サブスタンスＰ若しくはエンケファリン又はそれらのフラグメントの類似体である、請求項３０に記載の化合物。
【請求項３２】
前記類似体が、アミノ末端にステアリル基又はＦｍｏｃ基を有し得る配列番号２のＶＩＰフラグメント類似体、配列番号４及び配列番号５のＧｎＲＨ類似体、配列番号７及び配列番号８のサブスタンスＰ類似体並びに配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３及び配列番号１４のエンケファリン類似体からなる群から選択される、請求項３１に記載の化合物。
【請求項３３】
プロパルギル基をさらに含む、請求項２９から３２までのいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３４】
Ｎ−エチレン−２−ヒドロキシ−３−メチル−ピリジン−４−オンの鉄キレート剤機能、Ｌ−システイン若しくはＤ−システイン又はＬ−アラニン若しくはＤ−アラニンの残基及びプロパルギル基を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項３５】
ヒドロキサメートの鉄キレート剤機能及びプロパルギル基を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項３６】
前記ヒドロキサメートが、−Ｎ−原子を介して前記プロパルギル基に連結されたＣＯＮＨＯＨ−（ＣＨ２）２−基である、請求項３５に記載の化合物。
【請求項３７】
前記ヒドロキサメート基が、ピペラジン環を介して前記プロパルギル基に連結されている、請求項３５又は３６に記載の化合物。
【請求項３８】
化合物５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イルメチル］−８−ヒドロキシキノリンを除く、次式ＩからＩＶまでの化合物又はそれらの薬学的に許容される塩：
【化２】
2011079834.tif 000100
（式中、
Ｒ１は、Ｌ−Ｃｙｓ残基又はＤ−Ｃｙｓ残基の−Ｓ−原子を介してＣ原子に連結されたシステイン残基を含む神経保護ペプチドの類似体の残基であり、かつ前記ペプチドのアミノ末端は、Ｆｍｏｃ又はステアリルのような疎水性基によって任意選択で置換され；
Ｒ２はＨ又は−ＮＨ−Ｘであり；
Ｒ３は、
【化３】
2011079834.tif 000101
（ｉｉ）−ＣＲ５Ｒ６Ｒ７；（ｉｉｉ）−Ｎ（ＣＨ３）−Ｘ；（ｉｖ）−Ｎ（Ｒ８）−ＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）ＣＯＯＣ２Ｈ５；（ｖ）−Ｎ（Ｒ８）−ＣＨ２−ＣＯＯＣＨ２Ｃ６Ｈ５及び（ｖｉ）−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨＲ８’からなる群から選択される基であり；
Ｒ４は、（ｉ）Ｘ；（ｉｉ）ＣＯＯＣ２Ｈ５；（ｉｉｉ）（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｒ８；及び（ｉｖ）−ＣＯＯ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｒ８からなる群から選択される基であり；
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ４低級アルキル、好ましくはＣＨ３又はＣＯＯＣ２Ｈ５であり；
Ｒ６は、Ｈ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ−又はＣＯＯＣ２Ｈ５であり；
Ｒ７は、（ｉ）−ＮＨ−Ｒ８；（ｉｉ）−ＮＨ３＋；（ｉｉｉ）−ＮＨ−ＣＯＣＨ３、（ｉｖ）−ＮＨ−ＮＨ−Ｒ８及び（ｖ）−ＮＨ−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）−ＮＨ−Ｒ８からなる群から選択され；
Ｒ８はＨ又はＸであり；Ｒ’８は、Ｈ、Ｘ又はＦｍｏｃであり；
Ｒ９は、（ｉ）Ｈ；（ｉｉ）−ＣＯ−ＣＨ２−Ｒ１；（ｉｉｉ）−ＣＨ２−ＣＯＯＣＨ２Ｃ６Ｈ５；（ｉｖ）−ＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）ＣＯＯＣ２Ｈ５；
【化４】
2011079834.tif 000102
からなる群から選択され；
Ｒ１０は、Ｘ；−ＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）ＣＯＯＣ２Ｈ５又は
【化５】
2011079834.tif 000103
であり；
ｎは１から６までの整数であり；
Ｒ１１は、
2011079834.tif 000104
及び
【化６】
2011079834.tif 000105
からなる群から選択される基であり；
Ｒ１２は、Ｘ、Ｃ１〜Ｃ４低級アルキル、好ましくはＣＨ３、ＣＯＯＣ２Ｈ５又は−（ＣＨ２）２−ＯＨ−であり；
Ｒ１３は、Ｘ、−（ＣＨ２）２−ＯＸ−又は−ＣＯＯ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｘであり；
Ｘはプロパルギル基である）。
【請求項３９】
次式の式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩：
【化７】
2011079834.tif 000106
（式中、
Ｒ１は、Ｃｙｓ残基の−Ｓ−原子を介してＣ原子に連結されたＬ−システイン残基又はＤ−システイン残基を含む神経保護ペプチド又はそのフラグメントの類似体の残基であり、かつ前記ペプチドのアミノ末端は、Ｆｍｏｃ又はステアリルのような疎水性基によって任意選択で置換され；
Ｒ２はＨ又は−ＮＨ−Ｘであり；
Ｘはプロパルギル基である）。
【請求項４０】
Ｒ１が、１つのアミノ酸残基がＬ−システイン残基又はＤ−システイン残基によって置換された血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）、ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）、サブスタンスＰ若しくはエンケファリン又はそれらのフラグメントからなる群から選択される神経保護ペプチドの類似体であり、かつＲ２がＨである、請求項３９に記載の式Ｉの化合物。
【請求項４１】
前記類似体が、アミノ末端にステアリル基を有する配列番号２のＶＩＰフラグメント類似体（本明細書中で化合物Ｍ６と特定される、付録ＩＩ）又はＦｍｏｃ基を有する配列番号２のＶＩＰフラグメント類似体（Ｍ７、付録ＩＩ）、配列番号４のＧｎＲＨ類似体（Ｍ８、付録ＩＩ）又は配列番号５のＧｎＲＨ類似体（Ｍ２２、付録ＩＩ）の残基、配列番号７のサブスタンスＰ類似体（Ｍ２７、付録ＩＩ）又は配列番号８のサブスタンスＰ類似体（Ｍ２８、付録ＩＩ）の残基、並びに配列番号１１のエンケファリン類似体（Ｍ１９、付録ＩＩ）、配列番号１２のエンケファリン類似体（Ｍ２１、付録ＩＩ）、配列番号１３のエンケファリン類似体（Ｍ１８、付録ＩＩ）及び配列番号１４のエンケファリン類似体（Ｍ２０、付録ＩＩ）の残基からなる群から選択される、請求項４０に記載の化合物。
【請求項４２】
Ｒ１が、１つのアミノ酸残基がＬ−システイン残基又はＤ−システイン残基によって置換された血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）、ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）、サブスタンスＰ若しくはエンケファリン又はそれらのフラグメントからなる群から選択される神経保護ペプチドの類似体であり、かつＲ２が−ＮＨ−プロパルギルである、請求項３９に記載の式Ｉの化合物。
【請求項４３】
前記類似体が、アミノ末端にステアリル基を有する配列番号２のＶＩＰフラグメント類似体（Ｍ６Ａ、付録Ｉ）又はＦｍｏｃ基を有する配列番号２のＶＩＰフラグメント類似体（Ｍ７Ａ、付録Ｉ）の残基、配列番号４のＧｎＲＨ類似体（Ｍ８Ａ）又は配列番号５のＧｎＲＨ類似体（Ｍ２２Ａ、付録Ｉ）の残基、配列番号７のサブスタンスＰ類似体（Ｍ２７Ａ、付録Ｉ）又は配列番号８のサブスタンスＰ類似体（Ｍ２８Ａ、付録Ｉ）の残基、並びに配列番号１１のエンケファリン類似体（Ｍ１９Ａ、付録Ｉ）、配列番号１２のエンケファリン類似体（Ｍ２１Ａ、付録Ｉ）、配列番号１３のエンケファリン類似体（Ｍ１８Ａ、付録Ｉ）及び配列番号１４のエンケファリン類似体（Ｍ２０Ａ、付録Ｉ）の残基からなる群から選択される、請求項４２に記載の化合物。
【請求項４４】
化合物５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イルメチル］−８−ヒドロキシ−キノリンを除く、次式の式ＩＩの化合物又はその薬学的に許容される塩：
【化８】
2011079834.tif 000107
（式中、
Ｒ３は、
【化９】
2011079834.tif 000108
（ｉｉ）−ＣＲ５Ｒ６Ｒ７；（ｉｉｉ）−Ｎ（ＣＨ３）−Ｘ；（ｉｖ）−Ｎ（Ｒ８）−ＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）ＣＯＯＣ２Ｈ５；（ｖ）−Ｎ（Ｒ８）−ＣＨ２−ＣＯＯＣＨ２Ｃ６Ｈ５及び（ｖｉ）−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨＲ８’からなる群から選択される基であり；
Ｒ４は、（ｉ）Ｘ；（ｉｉ）ＣＯＯＣ２Ｈ５；（ｉｉｉ）（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｒ８及び（ｉｖ）−ＣＯＯ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｒ８からなる群から選択され；
Ｒ５はＨ、ＣＨ３又はＣＯＯＣ２Ｈ５であり；
Ｒ６はＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ−又はＣＯＯＣ２Ｈ５であり；
Ｒ７は、（ｉ）−ＮＨ−Ｒ８；（ｉｉ）−ＮＨ３＋；（ｉｉｉ）−ＮＨ−ＣＯＣＨ３；（ｉｖ）−ＮＨ−ＮＨ−Ｒ８；及び（ｖ）−ＮＨ−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）−ＮＨ−Ｒ８からなる群から選択され；
Ｒ８はＨ又はＸであり、Ｒ’８はＨ、Ｘ又はＦｍｏｃであり；
Ｘはプロパルギル基である）。
【請求項４５】
Ｒ４が−（ＣＨ２）２−ＯＨである化合物を除く、Ｒ３がピペラジン環である請求項４４に記載の式ＩＩの化合物。
【請求項４６】
本明細書中でＨＬＡ１６と称される化合物（付録ＩＶ）によって示される、Ｒ３がピペラジン環であり、Ｒ４が−ＣＯＯＣ２Ｈ５である、請求項４４に記載の式ＩＩの化合物。
【請求項４７】
本明細書中でＨＬＡ２０と称される化合物（付録ＩＩＩ）によって示される、Ｒ３がピペラジン環であり、Ｒ４がプロパルギル基である、請求項４４に記載の式ＩＩの化合物。
【請求項４８】
本明細書中でＨＬＡ１６ａ及びＭ１７と称される化合物（付録ＩＩＩ）によって示される、Ｒ３がピペラジン環である、請求項４４に記載の式ＩＩの化合物。
【請求項４９】
Ｒ３が−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨＲ８’である請求項４４に記載の式ＩＩの化合物であって、本明細書中でＤ−ＨＱ−ＣｙｓＯＨと称される化合物（Ｍ１１、付録ＩＩ）及びＬ−ＨＱ−ＣｙｓＯＨと称される化合物（Ｍ１２、付録ＩＩ）によって示される、Ｒ８’がＨである化合物、又は本明細書中でＤ−（ＨＱ−Ｐｒ）−ＣｙｓＯＨと称される化合物（Ｍ１１ａ、付録ＩＩＩ）及びＬ−（ＨＱ−Ｐｒ）−ＣｙｓＯＨと称される化合物（Ｍ１２ａ、付録ＩＩＩ）によって示される、Ｒ８’がプロパルギルである化合物、又は本明細書中でＭ１１Ｂ及びＭ１２Ｂと称される化合物（付録ＩＶ）によって示される、Ｒ８’がＦｍｏｃである化合物。
【請求項５０】
Ｒ３が基−ＣＲ５Ｒ６Ｒ７である請求項４４に記載の式ＩＩの化合物であって、Ｒ５がＨであり、Ｒ６がＣＯＯＨであり、Ｒ７が−ＮＨ−Ｒ８である、本明細書中でＤ−ＨＱ−Ａｌａと称される化合物（Ｍ９、付録ＩＶ）及びＬ−ＨＱ−Ａｌａと称される化合物（Ｍ１０、付録ＩＶ）によって示される、Ｒ８がＨである化合物、又は本明細書中でＤ−（ＨＱ−Ｐｒ）−Ａｌａと称される化合物（Ｍ９ａ、付録ＩＩＩ）及びＬ−（ＨＱ−Ｐｒ）−Ａｌａと称される化合物（Ｍ１０ａ、付録ＩＩＩ）によって示される、Ｒ８がプロパルギルである化合物；或いは本明細書中でＨＱ−Ａｌａと称される化合物（ＨＬＭ８、付録ＩＶ）によって示される、Ｒ５がＨであり、Ｈ６がＣＯＯ−であり、Ｒ７が−ＮＨ３＋である化合物；或いは本明細書中でＨＱ−ＡｌａＥｔと称される化合物（ＨＬＭ９、付録ＩＶ）によって示される、Ｒ５がＨであり、Ｒ６がＣＯＯＣ２Ｈ５であり、Ｒ７が−ＮＨ２である化合物；或いは本明細書中でＨＬＭ７と称される化合物（付録ＩＶ）によって示される、Ｒ５及びＲ６が共にＣＯＯＣ２Ｈ５であり、Ｒ７が−ＮＨ−ＣＯＣＨ３である化合物；或いは本明細書中でＭ３１と称される化合物（付録ＩＩＩ）によって示される、Ｒ５がＨであり、Ｒ６がＣＯＯＣ２Ｈ５であり、Ｒ７が−ＮＨ−プロパルギルである化合物。
【請求項５１】
Ｒ３が基−ＮＲ８−ＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）ＣＯＯＣ２Ｈ５である請求項４４に記載の式ＩＩの化合物であって、本明細書中でＭ３２と称される化合物（付録ＩＶ）によって示される、Ｒ８がＨである化合物、又は本明細書中でＭ３３と称される化合物（付録ＩＩＩ）によって示される、Ｒ８がプロパルギルである化合物。
【請求項５２】
本明細書中でＭ３０と称される化合物（付録ＩＩＩ）によって示される、Ｒ３が基−Ｎ（ＣＨ３）−プロパルギルである、請求項４４に記載の式ＩＩの化合物。
【請求項５３】
次式の式ＩＩＩの化合物又はその薬学的に許容される塩：
【化１０】
2011079834.tif 000109
（式中、
Ｒ９は、（ｉ）Ｈ；（ｉｉ）−ＣＯ−ＣＨ２−Ｒ１；（ｉｉｉ）−ＣＨ２−ＣＯＯＣＨ２Ｃ６Ｈ５；（ｉｖ）−ＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）ＣＯＯＣ２Ｈ５；
【化１１】
2011079834.tif 000110
からなる群から選択され；
Ｒ１０は、Ｘ；−ＣＨ２−ＣＨ（ＳＨ）ＣＯＯＣ２Ｈ５又は
【化１２】
2011079834.tif 000111
であり；
ｎは、１から６までの整数、好ましくは１又は２であり；
Ｒ１２は、Ｘ、Ｃ１〜Ｃ４低級アルキル、好ましくはメチル、ＣＯＯＣ２Ｈ５又は−（ＣＨ２）２−ＯＨ−であり；
Ｘはプロパルギル基である）。
【請求項５４】
Ｒ９が−ＣＯ−ＣＨ２−Ｒ１であり、式中、Ｒ１は、Ｌ−Ｃｙｓ残基又はＤ−Ｃｙｓ残基を含む、神経保護ペプチド又はそのフラグメントの類似体の残基である、請求項５３に記載の式ＩＩＩの化合物。
【請求項５５】
前記類似体が、アミノ末端にステアリル基を有する配列番号２のＶＩＰフラグメント類似体（Ｍ６Ｂ、付録Ｖ）又はＦｍｏｃ基を有する配列番号２のＶＩＰフラグメント類似体（Ｍ７Ｂ、付録Ｖ）の残基、配列番号４のＧｎＲＨ類似体（Ｍ８Ｂ、付録Ｖ）又は配列番号５のＧｎＲＨ類似体（Ｍ２２Ｂ、付録Ｖ）の残基、配列番号７のサブスタンスＰ類似体（Ｍ２７Ｂ、付録Ｖ）又は配列番号８のサブスタンスＰ類似体（Ｍ２８Ｂ、付録Ｖ）の残基、並びに配列番号１１のエンケファリン類似体（Ｍ１９Ｂ、付録Ｖ）、配列番号１２のエンケファリン類似体（Ｍ２１Ｂ、付録Ｖ）、配列番号１３のエンケファリン類似体（Ｍ１８Ｂ、付録Ｖ）及び配列番号１４のエンケファリン類似体（Ｍ２０Ｂ、付録Ｖ）の残基からなる群から選択される、請求項５４に記載の式ＩＩＩの化合物。
【請求項５６】
本明細書中でＭ３５、Ｍ３６、Ｍ３７、Ｍ３８、Ｍ３９、Ｍ４０、Ｍ４１、Ｍ４２、Ｍ４３、Ｍ４４、Ｍ４５及びＭ４６と称される化合物（付録Ｖ）によって示される、請求項５３に記載の式ＩＩＩの化合物。
【請求項５７】
次式の式ＩＶの化合物又はその薬学的に許容される塩：
【化１３】
2011079834.tif 000112
（式中、
Ｒ１１は、
2011079834.tif 000113
及び
【化１４】
2011079834.tif 000114
からなる群から選択され；
Ｒ１３は、Ｘ、−（ＣＨ２）２−ＯＸ又は−ＣＯＯ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｘであり；
Ｘはプロパルギル基である）。
【請求項５８】
本明細書中でＭ９ｂ、Ｍ１１ｂ、Ｍ１２ｂ、Ｍ１３ｂ、Ｍ１５ｂ、ＨＬＡ１６ｂ、Ｍ１７ａ、ＨＬＡ２０ａ、Ｍ３０ａ、Ｍ３１ａ、Ｍ３３ａ及びＭ３４ｂと称される化合物（付録ＶＩ）によって示される、請求項５７に記載の式ＩＶの化合物。
【請求項５９】
付録ＩＶ中のＶＫ−２８と称される化合物を除く、本明細書中で付録ＩからＶＩまでに示される、請求項３８から５７までのいずれか１項に記載の式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ又はＩＶの化合物。
【請求項６０】
請求項１から５９までのいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項６１】
鉄キレート化治療のための医薬組成物の調製のための、請求項１から５９までのいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項６２】
前記鉄キレート化治療が、鉄過負荷及び酸化ストレスに関連する疾患、障害及び状態の治療及び／又は予防のためのものである、請求項６１に記載の使用。
【請求項６３】
前記鉄過負荷及び酸化ストレスに関連する疾患、障害又は状態が、神経変性疾患若しくは神経変性障害又は脳血管疾患若しくは脳血管障害、新生物疾患、血色素症、サラセミア、心血管疾患、糖尿病、炎症障害、アントラサイクリン心毒性、ウイルス感染、原生動物感染、酵母感染、加齢の遅延、並びに皮膚の加齢の予防及び／又は治療、並びに日光及び／又はＵＶ光に対する皮膚の保護である、請求項６２に記載の使用。
【請求項６４】
パーキンソン病、アルツハイマー病、脳卒中、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症、フリードライヒ失調症、ハレルフォルデン−スパッツ病、癲癇及び神経外傷のような神経変性疾患、神経変性状態及び神経変性障害並びに脳血管疾患、脳血管状態及び脳血管障害の予防及び／又は治療における鉄キレート化及び神経保護ためのものである、請求項６３に記載の使用。
【請求項６５】
前記神経変性疾患が、パーキンソン病又はアルツハイマー病である、請求項６４に記載の使用。
【請求項６６】
前記脳血管障害が脳卒中である、請求項６４に記載の使用。
【請求項６７】
任意選択で１種又は複数の細胞傷害性抗癌薬物と組み合わせた、新生物疾患の処置における細胞増殖の阻害のためのものである、請求項６３に記載の使用。
【請求項６８】
血色素症及びサラセミアにおける鉄過負荷の予防及び／又は治療のためのものである、請求項６３に記載の使用。
【請求項６９】
心血管疾患の予防及び／又は治療のため、特に、再灌流損傷におけるフリーラジカルの発生に関連する損傷を予防するためのものである、請求項６３に記載の使用。
【請求項７０】
糖尿病の予防及び／又は治療のためのものである、請求項６３に記載の使用。
【請求項７１】
関節の炎症障害、特に慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）及び乾癬のような炎症障害の予防及び／又は治療のためのものである、請求項６３に記載の使用。
【請求項７２】
アントラサイクリン心毒性の予防及び／又は治療のためのものである、請求項６３に記載の使用。
【請求項７３】
抗ウイルス剤と任意選択で組み合わせた、レトロウイルス感染（例えば、ＨＩＶ−１）のようなウイルス感染の予防及び／又は治療のためのものである、請求項６３に記載の使用。
【請求項７４】
マラリアのような原生動物感染又はＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ感染のような酵母感染の予防及び／又は治療のためのものである、請求項６３に記載の使用。
【請求項７５】
神経変性疾患、神経変性障害又は神経変性状態のような加齢関連の疾患、障害又は状態の予防によって、加齢を遅延させるため及び／又は加齢プロセスを改善するためのものである、請求項６３に記載の使用。
【請求項７６】
加齢並びに／或いは日光及び／又はＵＶ光への曝露に関連する皮膚の加齢並びに／或いは皮膚損傷の予防及び／又は治療のためのものである、請求項６３に記載の使用。
【請求項７７】
加齢並びに／或いは日光及び／又はＵＶ光への曝露に関連する皮膚の加齢並びに／或いは皮膚損傷の予防及び／又は治療のための局所適用のための化粧品組成物の調製のための、請求項１から５９までのいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項７８】
心臓、肺又は腎臓のような移植が意図された器官の保存のための、請求項１から５９までのいずれか１項に記載の化合物のｅｘ  ｖｉｖｏでの使用。
【請求項７９】
有効量の請求項１から５９までのいずれか１項に記載の化合物又は請求項６０に記載の医薬組成物を、鉄キレート化治療を必要とする個体に投与するステップを含む、鉄キレート化治療のための方法。
【請求項８０】
鉄過負荷及び酸化ストレスに関連する疾患、障害又は状態の治療及び／又は予防のためのものである、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
神経変性疾患、神経変性状態又は神経変性障害の予防及び／又は治療のためのものである、請求項７９に記載の方法。
【請求項８２】
１種又は複数の化学療法剤と任意選択で組み合わせた、癌の予防及び／又は治療のためのものである、請求項７９に記載の方法。
【請求項８３】
血色素症患者又はサラセミア患者における鉄過負荷の予防及び／又は治療のためのものである、請求項７９に記載の方法。
【請求項８４】
心血管疾患の予防及び／又は治療のため、例えば再灌流損傷におけるフリーラジカルの発生に関連する損傷を予防するためのものである、請求項７９に記載の方法。
【請求項８５】
糖尿病の予防及び／又は治療のためのものである、請求項７９に記載の方法。
【請求項８６】
炎症障害の予防及び／又は治療のためのものである、請求項７９に記載の方法。
【請求項８７】
前記炎症障害が、関節の炎症障害、特に慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）又は乾癬である、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
アントラサイクリン新生物薬物での処置を受ける個体における、アントラサイクリン心毒性の予防及び／又は治療のためのものである、請求項７９に記載の方法。
【請求項８９】
ウイルス感染、原生動物感染又は酵母感染の予防及び／又は治療のためのものである、請求項７９に記載の方法。
【請求項９０】
前記ウイルス感染が、レトロウイルス感染（例えば、ＨＩＶ−１）であり、かつ前記化合物が、任意選択で抗ウイルス剤と組み合わせてＡＩＤＳ患者に投与される、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記原生動物感染が、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍによって引き起こされるマラリアであり、前記酵母感染がＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ感染である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９２】
健康な個体又は神経変性疾患、神経変性障害若しくは神経変性状態のような加齢関連疾患に罹患した個体において、加齢を遅延させるため及び／又は加齢プロセスを改善するための、請求項７９に記載の方法。
【請求項９３】
皮膚の加齢及び／又は加齢に関連する皮膚損傷の予防及び／又は治療のためのものである、請求項７９に記載の方法。
【請求項９４】
日光及び／又はＵＶ光への曝露に関連する皮膚損傷の予防及び／又は治療のためのものである、請求項７９に記載の方法。
【請求項９５】
新生物疾患、血色素症、サラセミア、心血管疾患、糖尿病、炎症障害、アントラサイクリン心毒性、ウイルス感染、原生動物感染、酵母感染から選択される鉄過負荷及び酸化ストレスに関連する疾患、障害又は状態の治療及び／又は予防、並びに皮膚の加齢の予防及び／又は治療、加齢の遅延、並びに日光及び／又はＵＶ光に対する皮膚の保護のための医薬組成物の調製のための、化合物５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イルメチル］−８−ヒドロキシキノリン（本明細書中でＶＫ−２８と特定される、付録ＩＶ）の使用。
【請求項９６】
鉄キレート化治療を必要とする個体に、神経変性疾患、神経変性状態又は神経変性障害の予防及び／又は治療を除く、鉄過負荷及び酸化ストレスに関連する疾患、障害又は状態の治療及び／又は予防のために、有効量の化合物５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イルメチル］−８−ヒドロキシキノリン（本明細書中でＶＫ−２８と特定される、付録ＩＶ）を投与するステップを含む、鉄キレート化治療のための方法。
【請求項９７】
加齢並びに／或いは日光及び／又はＵＶ光への曝露に関連する皮膚の加齢並びに／或いは皮膚損傷の予防及び／又は治療のための局所適用のための化粧品組成物の調製のための、化合物５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イルメチル］−８−ヒドロキシキノリン（本明細書中でＶＫ−２８と特定される、付録ＩＶ）の使用。
【請求項９８】
心臓、肺又は腎臓のような移植が意図された器官の保存のための、化合物５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イルメチル］−８−ヒドロキシキノリン（本明細書中でＶＫ−２８と特定される、付録ＩＶ）のｅｘ  ｖｉｖｏでの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、鉄に対する特異性を有し、かつ鉄キレート化治療による疾患、障害及び状態の治療に有用な両親媒性金属キレート剤に関する。１態様において、この鉄キレート剤は、所望の細胞膜、特に血液脳関門（ＢＢＢ）に、親油性媒体における輸送特性を提供するように設計される。別の態様において、これらのキレート剤は、鉄キレート剤機能並びに神経保護機能を付与する残基及び／又は抗アポトーシス機能及び神経保護機能の両方を付与する残基を有する多機能性化合物の一部である。本発明はさらに、鉄過負荷及び酸化ストレスに関連する疾患、障害及び状態、特にパーキンソン病、アルツハイマー病、脳卒中、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症、フリードライヒ失調症、ハレルフォルデン−スパッツ病、癲癇及び神経外傷のような神経変性疾患、神経変性状態及び神経変性障害の治療及び／又は予防のための医薬組成物及び方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
鉄は、高度に反応性かつ毒性のヒドロキシル基の産生を増強し、従って酸化損傷を刺激することが知られている。ヒトは過剰の鉄を排除する生理学的手段を有さないので、鉄は多数の疾患、障害及び状態に関連している。
【０００３】
身体が過剰量の鉄を蓄積する状態である遺伝性血色素症は、ヒトにおいて最も一般的な遺伝性疾患の１つである。米国において、百万人もの人々が血色素症の証拠を有しており、１０人に１人までの人々が、この障害の遺伝子を有する可能性がある。血色素症は、生涯にわたる食餌からの鉄の過剰な吸収によって特徴付けられ、鉄が身体器官中に蓄積し、最終的に炎症及び損傷を引き起こす。重篤かつ致死的でさえある健康上の影響が生じ得、これには、肝硬変、肝臓癌、心臓の異常（心不全を引き起こす）、糖尿病、性的不能及び関節炎が含まれる。
【０００４】
臨床的サラセミア（重症（マヨール）及び軽症（ミノール））は、ヘモグロビンの産生の欠損によって特徴付けられる遺伝性の障害であり、赤血球の産生の減少及び破壊の増大を引き起こす。鉄過負荷を生じる重篤なサラセミアでは、規則的な輸血及びフォレート補充が与えられる。通常、鉄は大量に摂取されるものではないので、身体は身体が受容した鉄を保持しかつそれ自体いずれの過剰な鉄を排除する手段も有さない。従って、鉄過負荷は、工業国においてサラセミア患者の間で主要な死亡原因である。
【０００５】
頻繁又は規則的な赤血球輸血を受ける、不十分な赤血球造血に起因する鉄吸収の増大と合せてｂ重症サラセミア（ＴＭ）又は不応性貧血（骨髄異形成症候群と同義）を有する患者は、鉄過負荷を迅速に発症する。鉄の毒性は、その負荷が、血液中の可動性細胞内プール又は遊離の非トランスフェリン結合プールを結合する組織結合能力又は血液結合能力を超える場合に始まり、未結合の鉄はヒドロキシラジカルの形成を加速して細胞に対する過酸化損傷を生じる。キレート化治療の不在下では、慢性的に輸血された患者は、膵臓、肝臓及び心臓の機能における進行性の悪化を必然的に受け、かつ通常、鉄過負荷の結果として、生命を脅かす不整脈又は難治性の心不全に罹患する。これは通常、重症サラセミアを有する、あまりキレート化されていないか又はキレート化されていない患者において、人生の次の１０年で生じる。
【０００６】
天然に存在するシデロホアであり、保存プールからそれ自体が迅速に更新される不安定な細胞内プール中の鉄をキレート化するデフェロキサミン（ＤＦＯ）は、１９６０年代初期に導入された。胃腸管からのＤＦＯの最小の吸収及びその短い血中半減期は、有効なキレート化治療の主な目的としての正味のネガティブな鉄バランスを達成するために、この薬物の緩徐な延長された非経口投与を必要とする。ＤＦＯが高価かつ不便であることが、経口的に活性な鉄キレート剤についての研究を導いており、デフェリプロン（ｄｅｆｅｒｉｐｒｏｎｅ）（Ｌ１）が重症サラセミア患者の経口処置のために過去数年間使用されているが、無顆粒球症の危険性は、この薬物の使用の注意深い評価を要求する。他の経口的に活性な鉄キレート剤は、過去十年間に臨床試験に達しているが、鉄キレート化治療におけるそれらの使用は、さらなる調査を必要とする。鉄過負荷の疾患、障害及び状態の処置のための、適切な、好ましくは経口的に有効な鉄キレート剤の同定は、なお未解決のままの問題である。
【０００７】
神経変性疾患（例えば、パーキンソン病（ＰＤ）及びアルツハイマー病（ＡＤ））は、現時点で治癒が得られない神経変性症候群である。両疾患は、最も広範な神経変性障害である。それぞれ、５０歳を超える年齢の集団の約０．５％及び４〜８％がこれらの疾患に罹患しており、それにより、より加齢した集団においてはさらに数が増えることを考慮すると、社会にとっての経済的負担の増大を形成する。従って、神経変性疾患を予防（神経保護）及び処置するのに有効な薬物の開発が、全社会にとって必須である。
【０００８】
ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及び関連の動物モデルを含む多数の研究により、フリーラジカル産生と神経変性疾患及び神経変性障害（例えば、パーキンソン病、アルツハイマー病及び脳卒中並びにＡＬＳ、多発性硬化症、フリードライヒ失調症、ハレルフォルデン−スパッツ病、癲癇及び神経外傷）との間の関連性が示されている。
【０００９】
この理由のために、８−ヒドロキシキノリン及びヒドロキシピリジノンが、抗酸化剤型の薬物として鉄結合のために提案されている。神経変性疾患における鉄蓄積は共通の特徴なので、本発明者らは、鉄蓄積が、神経変性のプロセスにおいて中心的な役割を有することを以前に示していた（Ｙｏｕｄｉｍ、１９８８）。本発明者ら（非特許文献１０）並びに他者（非特許文献８；非特許文献２５）は、アルツハイマー病及びパーキンソン病のための治療剤としての鉄キレート剤の開発をたびたび示唆してきた。
【００１０】
パーキンソン病では、酸素フリーラジカルの形成に対する脳の防御機構が欠損している。パーキンソン病の脳の黒質では、抗酸化酵素の活性が低下している。さらに、鉄濃度は、パーキンソン病の黒質緻密部中及び黒化したドパミンニューロン内で有意に上昇する。最近の研究はまた、脳中の白質路及び核における鉄の有意な蓄積が、神経変性障害及び運動障害の症状の発症に先行することを示している。実際、鉄はＢＢＢを横切らないので、神経変性部位での鉄の蓄積は、神経変性疾患の不思議の１つである。鉄が何処に由来するか、なぜ蓄積するかは未知である。
【００１１】
アルツハイマー病（ＡＤ）の病因及びコリン作用性ニューロン変性の機構は、不明のままである。それにもかかわらず、ＡＤの化学的病理学は、パーキンソン病に対する以下の多数の類似性を示す：いくつか挙げると、増大した鉄の関与、シトクロムＣの放出、α−シヌクレイン凝集の増大、酸化ストレス、過酸化水素の除去に必須の因子である組織還元型グルタチオン（ＧＳＨ）の喪失、ミトコンドリア複合体Ｉ活性の低下、脂質の過酸化の増大及びカルシウム結合タンパク質である２８ｋＤａのカルビンジンの喪失。これらの類似性には、疾患の進行性の性質、死につつあるニューロンの周囲及び頂部での反応性ミクログリアの増殖、酸化ストレスの発生及び炎症プロセスもまた含まれる。
【００１２】
酸素フリーラジカルは、タンパク質変性、酵素不活化及びＤＮＡ損傷に関連して、細胞膜の脂質の過酸化を生じ、最終的に神経変性疾患において細胞死を生じることが示されている。神経変性疾患の顕著な様相の１つは、神経変性部位での有意な量の鉄の蓄積及び沈着である。ＡＤでは、ミクログリア内及びニューロン内並びにプラーク及び変化において、鉄が蓄積する。最近の報告は、ＡＤの病原性が、鉄のような金属との異常な相互作用によって媒介され得る特徴的な新皮質のβアミロイド沈着に関連しているという証拠を提供している。実際、鉄は、βアミロイドタンパク質の凝集だけでなくα−シヌクレインの凝集をも引き起こし、より大きい神経毒性を促進すると考えられている。これは、キレート可能な遊離の鉄が、ニューロンのアポトーシスを引き起こす酸化ストレス及び炎症プロセスの誘導において中心的な役割を有し得るという概念を導いた。鉄及びラジカル酸素種は、ＡＤ脳におけるその増大がＡＤの病理の１つの特徴である細胞傷害性炎症促進性サイトカインであるＩＬ−１、ＩＬ−６及びＴＮＦ−αの促進を担うと考えられている炎症促進性転写因子であるＮＦκＢを活性化する。遷移金属として、鉄は過酸化水素とのＦｅｎｔｏｎ化学に関与して、全てのラジカル酸素種のうちで最も反応性の高い反応性ヒドロキシル基を発生させるので、これは論理的であるとみなされる。このラジカルは、細胞死の病理並びに多数の毒素及び神経毒（６−ヒドロキシドパミン、ＭＰＴＰ、カイナイト（ｋａｉｎｉｔｅ）、ＡＤのストレプトコジンモデル）の作用機構に関与している。さらに、このような毒素は、神経変性疾患（ＡＤ、パーキンソン病及びハンチントン舞踏病）の病理の多くを模倣し、その１つの特徴は、神経変性部位での鉄の蓄積であるが、他の金属の蓄積ではない。
【００１３】
ラットにおいて鉄により誘導された「パーキンソニズム」及び鉄キレート剤デスフェリオキサミンの黒質内投与が、黒質線条体のドパミンニューロンの６−ＯＨＤＡにより誘導された病変に対してラットを保護した、本発明者らの以前の研究（非特許文献２）において証明されたように、鉄単独又は神経毒（例えば、ドパミン作用性神経毒である６−ヒドロキシドパミン（６−ＯＨＤＡ））によりその結合部位から脱区画化された鉄は、酸化ストレス及び神経変性を誘導し得る。従って、黒質におけるドパミン作用性神経変性のプロセスの処置又は遅延が、ウィルソン病の処置において使用される銅キレート剤Ｄ−ペニシラミンと類似の様式で、血液脳関門を横切ることができる鉄キレート剤によって影響され得ることが示唆されている。パーキンソン病の処置のためのこの治療アプローチは、遅発性ジスキネジー、アルチハイマー病及びハレルフォルデン−スパッツ病のような他の金属関連の神経学的障害に適用され得る。
【００１４】
脳卒中は、今日の西洋社会における３番目の主要死亡原因であり、心臓疾患及び癌だけがこれを上回っている。この疾患の全体的な罹患率は、集団の０．５％〜０．８％である。脳卒中は、脳血管損傷から生じる神経学的障害（例えば、四肢の麻痺、言語障害及び記憶障害、視覚及び聴覚の欠損など）の突然の出現によって特徴付けられる。
【００１５】
出血及び虚血は、脳卒中の２つの主要原因である。脳への正常な血液供給の障害は、障害を受けた呼吸及びエネルギー代謝、ラクトアシドーシス（ｌａｃｔａｃｉｄｏｓｉｓ）、障害を受けた細胞カルシウムホメオスタシス、興奮性神経伝達物質の放出、上昇した酸化ストレス、フリーラジカルの形成などを含む、正常な細胞代謝への迅速な損傷と関連する。最終的に、これらの事象は、脳の細胞死及び神経学的機能不全を引き起こす。
【００１６】
脳卒中の処置は主に外科的である。損傷した領域において正常な血液灌流を回復し得る薬物、並びに細胞損傷に関連する上記に列挙された損傷事象を克服するように設計された薬物についての研究において、侵襲性の低い治療的介入においてかなりの試みが投入されている。
【００１７】
酸化ストレス及びフリーラジカル形成は、組織損傷及び細胞死において主要な役割を果たしている。これらのプロセスは、遷移金属イオン、主に鉄及び銅によって触媒される。脳卒中の場合、血管損傷が含まれるので、鉄は、鉄キレート剤によって予防され得るプロセスであるフリーラジカル形成のために利用可能である。実際、公知のフリーラジカルスカベンジャーであるラザロイド（ｌａｚａｒｏｉｄｅ）（２１−アミノステロイド）を用いると、動物において誘導された局所的及び全体的な虚血損傷の有意な改善が達成されている。
【００１８】
鉄キレート剤及びラジカルスカベンジャーは、神経変性の動物モデルにおいて強力な神経保護活性を有することが示されている。しかし、このような化合物での主要な問題点は、このような化合物がＢＢＢを横切らないことである。原型的な鉄キレート剤であるＤｅｓｆｅｒａｌ（デスフェリオキサミン）は、本発明者らによって、パーキンソン病の動物モデルにおいて高度に強力な神経保護剤であることが最初に示された（非特許文献２）。しかし、ＤｅｓｆｅｒａｌはＢＢＢを横切らず、かつ中心に注射される必要がある。Ｄｅｓｆｅｒａｌは、糖尿病のストレプトゾシンモデルに対しても保護する。
【００１９】
生きた生物中のフリーラジカルは、反応性の低い種（例えば、Ｈ２Ｏ２、［Ｏ２−］、チオール、過酸化脂質）との遷移金属イオン（特に銅及び鉄）の反応によって産生されると考えられている。抗酸化金属キレート剤は、遊離金属イオン（特に銅及び鉄）又は防御システムの酵素の活性中心由来の金属イオンを結合することによって、ｉｎ  ｖｉｖｏの酸化剤／抗酸化剤のバランスに影響を与え得、従って、ドパミン作用性及びコリン作用性の神経変性のプロセスに影響を与え得、神経変性疾患に対する大きな治療的可能性を有する。
【００２０】
加齢における鉄の蓄積及び結果として生じる酸化ストレスは、加齢及び加齢関連の神経変性障害における可能な原因因子であることが示唆されている（非特許文献６）。反応性酸化種が加齢プロセスにおいて中心的な役割を果たし、皮膚が身体の最も外側の障壁として酸化ストレスの種々の外因性供給源（特にＵＶ照射）へと曝露されるという証拠が増大している。これらは、光加齢と称される外来型の皮膚加齢を担うと考えられている（非特許文献２１）。従って、鉄キレート剤は、一般に首尾よい加齢に有利であること、局所適用される場合、首尾よい皮膚の加齢に有利であることが示唆されている（非特許文献２２）。
【００２１】
鉄は、酸素ラジカル産生へのその関与によって明らかに、加齢においてだけではなく、皮膚の光加齢における要因である。特定の局所的鉄キレート剤は、光保護的であることが見出された（非特許文献３；非特許文献１８）。皮膚線維芽細胞中の脂質及びタンパク質に対するＵＶＡ放射により誘導される酸化損傷は、鉄及び一重項酸素に依存することが示された（非特許文献２７）。従って鉄キレート剤は、ＵＶ放射曝露に対する保護を提供するために、任意選択で日焼け止め組成物と共に、化粧品製剤及び非化粧品製剤において使用され得る。
【００２２】
鉄過負荷に関連する他の疾患、障害又は状態には、以下が含まれる：（ｉ）ＨＩＶ感染及びＡＩＤＳを含むウイルス感染−酸化ストレス及び鉄は、ＨＩＶ−１の活性化において重要であることが記載されており、鉄キレート化は、抗ウイルス剤と組み合わせて、ウイルス疾患、特にＨＩＶ疾患の処置を改善するために付加され得る（非特許文献２６）；（ｉｉ）原生動物（例えば、マラリア）感染；（ｉｉｉ）酵母（例えば、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）感染；（ｉｖ）癌−いくつかの鉄キレート剤は抗腫瘍活性を示すことが示されており、単独でか又は他の抗癌治療と組み合わせてかのいずれかで、癌治療のために使用され得る（非特許文献５）；（ｖ）鉄キレート剤は、アントラサイクリン新生物薬物によって誘導された心毒性を予防し得る（非特許文献１６）；（ｖｉ）炎症障害−鉄及び酸化ストレスは、炎症性関節疾患（例えば、慢性関節リウマチ）に関連することが示されている（非特許文献１；非特許文献１７；非特許文献２０）；（ｖｉｉ）糖尿病−鉄キレート剤は、糖尿病モデルラットにおいて糖尿病を遅延させることが示されている（非特許文献２３）；（ｖｉｉｉ）鉄キレート剤は、例えば再灌流損傷におけるフリーラジカル発生に関連する損傷を予防するための、心血管疾患の処置のための潜在的な候補であることが記載されている（非特許文献１５；非特許文献９）；（ｉｘ）鉄キレート剤は、心臓、肺又は腎臓のような移植が意図された器官の保存のためにｅｘ  ｖｉｖｏで有用であり得る（非特許文献１６）。
【００２３】
抗酸化剤型薬物としてのキレート化剤の使用における主要な問題点の１つは、細胞膜又は他の生物学的障壁を介したこれらの配位子又はそれらの金属錯体の輸送が制限されていることである。
【００２４】
脳を作用部位として有する薬物は、一般に、最大のｉｎ  ｖｉｖｏの生物学的活性を得るために、血液脳関門（ＢＢＢ）を横切ることができなければならない。神経変性疾患において最もよく確立された鉄キレート化薬物であるＤｅｓｆｅｒａｌの有効性は、その効果のない輸送特性並びに高い脳毒性及び眼毒性によって制限される。
【００２５】
８−ヒドロキシキノリンは、鉄に対する強力なキレート化剤であり、かつそれら自体によってフリーラジカルを除去し得る２つの芳香族環を含む。本発明者らの以前のＰＣＴ公開ＷＯ  ００／７４６６４号（特許文献１）において、種々の鉄キレート剤が開示されており、パーキンソン病の予防におけるそれらの作用が示されている。リード化合物である５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イルメチル］−８−ヒドロキシキノリン（本明細書中でＶＫ−２８と称する）は、ＢＢＢを横切ることができ、かつパーキンソン病の動物モデルにおいて６−ヒドロキシドパミン（６−ＯＨＤＡ）に対して活性であることが示された。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２６】
【特許文献１】国際公開００／７４６６４号
【非特許文献】
【００２７】
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【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２８】
神経保護活性及び／又は血液脳関門を含む細胞膜を介した良好な輸送特性をも示す、新規の鉄キレート剤を提供することが、非常に所望される。
【課題を解決するための手段】
【００２９】
本発明は、鉄に対する特異性を有しかつ親油性媒体中で神経保護特性及び／又は良好な輸送特性を示す、両親媒性金属キレート剤に関する。
【００３０】
１態様において、本発明は、鉄キレート剤機能、並びに化合物に神経保護機能を付与する残基、化合物に抗アポトーシス機能及び神経保護機能を合せた機能を付与する残基又はこれら両方の残基からなる群から選択される残基を含む化合物と、その薬学的に許容される塩とを提供する。
【００３１】
この鉄キレート剤機能は好ましくは、８−ヒドロキシキノリン残基、ヒドロキサメート残基又はピリジノン残基によって提供され、この神経保護機能は、システイン残基若しくはアラニン残基、又は神経保護ペプチド、神経保護類似体若しくはそれらの神経保護フラグメントの残基によって提供され得、かつ抗アポトーシス機能及び神経保護機能を合せた機能は好ましくは、プロパルギル基によって提供される。
【００３２】
別の態様において、本発明は、本明細書中以下の記載及び特許請求の範囲に規定されるような、式ＩからＩＶまでの化合物及びそれらの薬学的に許容される塩を提供する。
【００３３】
鉄過負荷及び酸化ストレスに関連する疾患、障害及び状態（例えば、神経変性疾患及び神経変性障害並びに脳血管疾患及び脳血管障害、新生物疾患、血色素症、サラセミア、心血管疾患、糖尿病、炎症障害、アントラサイクリン心毒性、ウイルス感染、原生動物感染、酵母感染が含まれるが、これらに限定されない）の治療及び／又は予防のため、加齢を遅延させるため、加齢並びに／或いは日光及び／又はＵＶ光への曝露に関連する皮膚の加齢並びに／或いは皮膚損傷の予防及び／又は治療のために有用である。
【００３４】
さらなる態様において、本発明は、薬学的に許容される担体及び本発明の化合物を含む医薬組成物を提供する。
【００３５】
なお別の態様において、本発明は、本発明の化合物を含む化粧品組成物を提供する。
【００３６】
なおさらなる態様において、本発明は、鉄キレート化治療のための医薬組成物の調製のための本発明の化合物の使用を提供する。
【００３７】
なお別の態様において、本発明は、有効量の本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩を、鉄キレート化治療を必要とする個体に投与するステップを含む、鉄キレート化治療のための方法を提供する。
【００３８】
明細書の記載及び特許請求の範囲において使用される採用された呼称により規定される化合物の式は、本記載の末尾にて付録ＩからＶＩまでに示される。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１Ａ】鉄と予め錯体化したカルセイン（Ｆｅ−ＣＡＬ）溶液を使用した、本発明のキレート剤ＨＬＭ７、ＨＬＭ８、ＨＬＭ９、ＨＬＡ１６、ＨＬＡ２０；及び公知の鉄キレート剤デフェリプロン（Ｌ１）による鉄キレート化（溶液中）を示すグラフの図である。
【図１Ｂ】鉄と予め錯体化したカルセイン（Ｆｅ−ＣＡＬ）溶液を使用した、本発明のキレート剤ＨＬＡ１６、ＨＬＡ２０、Ｍ９、Ｍ１０；並びに公知の鉄キレート剤デフェリプロン（Ｌ１）及びＶＫ−２８による鉄キレート化（溶液中）を示すグラフの図である。
【図１Ｃ】鉄と予め錯体化したカルセイン（Ｆｅ−ＣＡＬ）溶液を使用した、本発明のキレート剤Ｍ７、Ｍ１１、Ｍ１２；並びに公知の鉄キレート剤デフェリプロン（Ｌ１）及びＶＫ−２８による鉄キレート化（溶液中）を示すグラフの図である。
【図２Ａ】本発明のキレート剤ＨＬＭ７、ＨＬＭ８、ＨＬＭ９、ＨＬＡ１６、ＨＬＡ２０；並びに公知の鉄キレート剤デフェリプロン（Ｌ１）及びサリチルアルデヒドイソニコチノイルヒドラゾン（ＳＩＨ）の、Ｋ５６２細胞への鉄透過を示す図である。
【図２Ｂ】本発明のキレート剤ＨＬＡ１６、ＨＬＡ２０、Ｍ９、Ｍ１０；並びに公知の鉄キレート剤デフェリプロン（Ｌ１）及びＶＫ−２８の、Ｋ５６２細胞への鉄透過を示す図である。
【図２Ｃ】本発明のキレート剤Ｍ７、Ｍ１１、Ｍ１２；及び公知の鉄キレート剤サリチルアルデヒドイソニコチノイルヒドラゾン（ＳＩＨ）及びＶＫ−２８の、Ｋ５６２細胞への鉄透過を示す図である。
【図２Ｄ】本発明のキレート剤ＨＬＭ９、ＨＬＡ１６、ＨＬＡ２０；並びに公知の鉄キレート剤ＶＫ−２８、デスフェリオキサミンＢ（ＤＦＯ）及びサリチルアルデヒドイソニコチノイルヒドラゾン（ＳＩＨ）の、Ｋ５６２細胞への鉄透過を示す図である。
【図３】６−ＯＨ−ドパミンで処理した分化したニューロンＰ１９細胞に対する本発明のキレート剤ＨＬＭ７、ＨＬＭ８、ＨＬＭ９、ＨＬＡ１６、Ｍ７、ＨＬＡ２０及びアポモルヒネ（Ａｐｏ）の神経保護効果を示す図である。
【図４Ａ】公知のキレート剤ラサジリンと比較した、本発明のキレート剤Ｍ３２による、血清飢餓により誘導されたアポトーシスに対するＰＣ１２細胞の保護を示す図である。
【図４Ｂ】公知のキレート剤ラサジリン及びＶＫ−２８と比較した、本発明のキレート剤ＨＬＡ２０による、血清飢餓により誘導されたアポトーシスに対するＰＣ１２細胞の保護を示す図である。
【図５Ａ】ラット脳ＭＡＯ−Ｂに対するＨＬＡ２０及びＭ３２；及びＶＫ−２８のｉｎ  ｖｉｔｒｏの阻害作用を示すグラフの図である。
【図５Ｂ】ラット脳ＭＡＯ−Ｂに対するＭ３０及びＭ３１；及びプロパルギルアミン（Ｐ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏの阻害作用を示すグラフの図である。
【図５Ｃ】ラット脳ＭＡＯ−Ａに対するＭ３０及びＭ３１；及びプロパルギルアミン（Ｐ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏの阻害作用を示すグラフの図である。
【図５Ｄ】ラット脳ＭＡＯ−Ａに対するＭ３２及びＨＬＡ２０；及びＶＫ−２８のｉｎ  ｖｉｔｒｏの阻害作用を示すグラフの図である。
【図６】５．０μＭのＦｅ２ＳＯ４／５０μＭのアスコルビン酸の存在下での、本発明のキレート剤ＨＬＭ７、ＨＬＭ８、ＨＬＭ９、ＨＬＡ１６及びＨＬＡ２０による脂質過酸化の阻害を示す図である。結果は、平均±ＳＥＭ、ｎ＝３、ｐ＜０．０５である。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
１つの広い態様において、本発明は、鉄キレート剤機能、並びに化合物に神経保護機能を付与する残基、化合物に抗アポトーシス機能及び神経保護機能を合せた機能を付与する残基又はこれら両方の残基からなる群から選択される残基を含む化合物を提供する。
【００４１】
１つの最も好ましい実施形態において、抗アポトーシス機能及び神経保護機能を合せた機能を付与する残基は、抗パーキンソン薬物であるラサジリン［Ｎ−プロパルギル−（１Ｒ）−アミノインダン］の抗アポトーシス効果及び神経保護効果において重要な役割を果たすとして最近記載されたプロパルギル部分である（非特許文献２８）。
【００４２】
本発明の化合物における鉄キレート剤機能は、８−ヒドロキシキノリン残基、ヒドロキサメート残基及びピリジノン残基からなる群から選択される残基によって提供される。
【００４３】
１つの好ましい実施形態において、この鉄キレート剤機能は、神経保護機能並びに／又は抗アポトーシス機能及び神経保護機能を合せた機能を付与する残基がキノリン環の５位、６位又は７位を介して連結され得る８−ヒドロキシキノリン基によって提供される。より好ましい実施形態において、この鉄キレート化基は、次式の８−ヒドロキシ−５−キノリニル基であり、最も好ましくは、８−ヒドロキシ−５−キノリニルメチレン基である。
【００４４】
別の好ましい実施形態において、この鉄キレート剤機能は、次式：
【化１】
2011079834.tif 000002
の３−ヒドロキシピリジン−４−オン又は１−ヒドロキシピリジン−２−オンによって提供される。
【００４５】
上記の式において、Ｒは、キノリン環の位置５、位置６又は位置７、低級アルキル、好ましくはメチル基によってさらに置換され得る３−ヒドロキシ−４−ピリジノン環の位置１、位置２、位置５又は位置６、及び１−ヒドロキシ−２−ピリジノン環の位置４又は位置５において連結され得る、神経保護機能並びに／又は神経保護機能及び抗アポトーシス機能を合せた機能を有する基を示す。１つの好ましい実施形態において、この鉄キレート剤機能は、所望のさらなる官能基によって位置１にて置換された２−メチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン基によって提供される。
【００４６】
提唱されたＮ−ヒドロキシピリジン−２−オン及び３−ヒドロキシピリジン−４−オンは、以下の３つの理由のために、適切なタイプの候補鉄キレート剤である：（１）ヒドロキシピリジノンは、それらの特性及び生物学的試験の結果の両方を考慮すると、最も有望な経口鉄キレート剤である−１つのヒドロキシピリジノンであるデフェリプロン（ＣＰ２０又はＬ１）は、サラセミア、癌、白血病、血液透析及び他の患者において世界中で使用される経口鉄キレート化剤である（非特許文献２９）；（２）いくつかのヒドロキシピリジノン（例えば、ＣＰ２０、ＣＰ２４、ＣＰ９４）は、ＢＢＢを横切ることができることが証明されている（非特許文献７）；及び（３）ヒドロキシピリジノン間には、ＤＯＰＡ構造における鉄キレート剤基であるカテコールとの多数の構造的類似性が存在する。
【００４７】
別の実施形態において、鉄キレート化機能は、ヒドロキサメート基によって提供される。ヒドロキサメートは、鉄キレート剤として公知である。数十年にわたって、デスフェリオキサミンＢ（Ｄｅｓｆｅｒａｌ）は、その使用に関連する多くの問題点にもかかわらず、鉄過負荷処置のために選択される治療的鉄キレート剤であった。
【００４８】
本発明の１実施形態において、本発明の化合物に神経保護機能を付与する残基は、神経保護ペプチド、神経保護類似体及びそれらの神経保護フラグメントからなる群から選択される。
【００４９】
本発明の化合物において使用され得る神経保護ペプチドは、血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）、ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）、サブスタンスＰ及びエンケファリンであり得るが、これらに限定されない。
【００５０】
１つの好ましい実施形態において、この神経保護機能は、１つのアミノ酸残基が、鉄キレート化残基がＬ−Ｃｙｓ残基又はＤ−Ｃｙｓ残基の−Ｓ−原子を介して連結されるＬ−システイン残基又はＤ−システイン残基によって置換されたＶＩＰ、ＧｎＲＨ、サブスタンスＰ若しくはエンケファリン又はそれらのフラグメントの残基によって提供される。
【００５１】
本発明の１つの実施形態において、この神経保護ペプチドは、元々胃腸系から単離された塩基性の２８アミノ酸のペプチドである血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）であり、これは、ＨＩＶ由来のエンベロープタンパク質、テトロドトキシン及びβアミロイドペプチドを含む種々の神経毒性物質から中枢神経系中のニューロンを保護することが示されている。βアミロイドペプチドは、アルツハイマー病における脳アミロイドプラークの主要成分であり、神経毒性であること及びアルツハイマー病の発症及び進行に関連することが示されている。ＶＩＰはＢＢＢを横切らないので、それ自体可能性のある神経保護剤としての臨床的な使用にとっての限定を示す。ＶＩＰの親油性誘導体（例えば、ステアリル−ＶＩＰ）はＢＢＢを横切る。しかし、より効率的な透過のため及び経済的な観点から、生物学的障壁を介したよりよい透過を有しつつ、親ペプチド（ＶＩＰ）の活性を模倣するかなり小さい分子を有することが所望される。本発明者らの１人の研究室において、ＶＩＰの４アミノ酸の脂質誘導体（ステアリル−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−ＮＨ２−配列番号１）が、そのレセプターの結合及び活性化を介して親ペプチド（ＶＩＰ）の活性を超えること、及び神経変性疾患に対する薬物設計のためのリード化合物を提供することが見出された（非特許文献１４）。
【００５２】
従って、本発明の１実施形態において、この神経保護機能は、配列番号２：
Ｚ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−ＮＨ２（式中、ＺはＨ又はステアリル（Ｓｔ）若しくはＦｍｏｃのような疎水性基である）のＶＩＰフラグメントによって付与される。
【００５３】
１実施形態において、この鉄キレート剤は、８−ヒドロキシキノリニルメチル基であり、かつこの化合物は、式：
【化２】
2011079834.tif 000003
を有する。
【００５４】
このモデルにおいて、ペプチドＬｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−ＮＨ２（配列番号１）は、神経保護効果のためのコア活性部位である。Ｔｙｒの芳香族フェノール部分は、抗酸化活性部位として働く鉄キレート剤８−ヒドロキシキノリンによって置換される。疎水性基Ｒは、ＢＢＢを介した輸送特性を制御するために、分子全体の親油性を調整するために使用され得る。
【００５５】
８−ヒドロキシ−５−キノリニルメチル残基（ＨＱ）を含む上記式を含む化合物の例は、本明細書中で付録ＩＩにおいてＳｔＫＫＣ（ＨＱ）Ｌ（Ｍ６）及びＦｍｏｃ−ＫＫＣ（ＨＱ）Ｌ（Ｍ７）と称される化合物である。本明細書中で付録ＩにおいてＳｔＫＫＣ（ＨＱ−Ｐｒ）Ｌ（Ｍ６Ａ）及びＦｍｏｃ−ＫＫＣ（ＨＱ−Ｐｒ）Ｌ（Ｍ７Ａ）と称される対応する化合物は、さらに、キノリン環の５位で−ＣＨ２基に連結されたプロパルギルアミノ（Ｐｒ）基を有する。
【００５６】
配列番号２のＶＩＰフラグメント類似体を含む本発明のさらなる化合物の例は、アミノプロパルギル基もまた含む、本明細書中で付録ＶにおいてＭ６Ｂ及びＭ７Ｂと称されるヒドロキサメートである。
【００５７】
ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）は、ゴナドトロピンである黄体形成ホルモン（ＬＨ）及び卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の下垂体前葉からの放出を制御する、視床下部の神経分泌細胞において産生される神経ホルモンである。このペプチドは後に、脳において神経伝達物質及び／又は神経調節物質として機能し、かつ良好な輸送特性を有することが見出された（ＧｎＲＨはＢＢＢを横切ることができる）。現在、いくつかのＧｎＲＨ類似体が、避妊のため、並びに前立腺癌及び乳癌を含む種々のホルモン依存性の疾患の処置のために、臨床試験中であるか又は臨床的に使用されているかのいずれかである。抗酸化コアとしての鉄キレート剤（例えば、ヒドロキサメート、ピリジノン又は８−ヒドロキシキノリン）とのＧｎＲＨ類似体の組み合わせは、神経変性疾患の処置において保護剤として特に想定される。
【００５８】
ＧｎＲＨは、以下の配列のデカペプチドである（アミノ末端の５−オキソプロリンはしばしば、ピログルタミン酸−ｐＧｌｕと示される）：
５−オキソ−Ｐｒｏ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ２（配列番号３）。
【００５９】
位置５のアミノ酸残基（Ｔｙｒ）又は位置６のアミノ酸残基（Ｇｌｙ）がそれぞれＬ−Ｃｙｓ又はＤ−Ｃｙｓによって置換されたＧｎＲＨの２つの類似体を調製した。これらの改変は、ＧｎＲＨの生物活性に有意に影響を与えないことが予測される。さらに、これらの変化は、スーパーアゴニスト（ｓｕｐｅｒａｇｏｎｉｓｔ）を生じ得る。システイン位置（５又は６）でのこの類似体の遊離ＳＨ基は、これらの化合物を特定の化学的改変のための良好な候補にする。この変化（すなわち、位置６での変化）は、この類似体のタンパク質分解に対する安定性を改善するようにも働く。
【００６０】
得られたＧｎＲＧ類似体は、以下のような配列番号４及び配列番号５によって特定される配列を有する：
2011079834.tif 000004
【００６１】
Ｌ−Ｃｙｓ残基又はＤ−Ｃｙｓ残基のＳ原子に、鉄キレート剤機能が結合される。例えば、８−ヒドロキシ−５−キノリニルメチル残基（ＨＱ）を有する得られた化合物は、本明細書中で付録ＩＩにおいてＬ−Ｃｙｓ５（ＨＱ）ＧｎＲＨ（Ｍ８）及びＤ−Ｃｙｓ６（ＨＱ）ＧｎＲＨ（Ｍ２２）と称される化合物である。本明細書中で付録ＩにおいてＬ−Ｃｙｓ５（ＨＱ−Ｐｒ）ＧｎＲＨ（Ｍ８）及びＤ−Ｃｙｓ６（ＨＱ−Ｐｒ）ＧｎＲＨ（Ｍ２２）と称される対応する化合物はさらに、キノリン環の５位で−ＣＨ２基に連結されたプロパルギルアミノ（Ｐｒ）基を有する。
【００６２】
配列番号４又は配列番号５のＧｎＲＨ類似体を含む本発明のさらなる化合物の例は、プロパルギルアミノ基もまた含む、本明細書中で付録ＶにおいてＭ８Ｂ及びＭ２２Ｂと称されるヒドロキサメートである。
【００６３】
本発明によれば、類似のＣｙｓ含有ＧｎＲＨ類似体が、ＧｎＲＨの類似体（例えば、リュープロリド、ナファレリン、ゴセレリン、ヒストレリン（ｈｉｓｔｒｅｌｉｎ）及びＤ−Ｌｙｓ６ＧｎＲＨであるがこれらに限定されない）から開始して、次いでこれらをＨＱ残基、ピリジノン残基又はヒドロキサメート残基に結合させ、任意選択でプロパルギルアミノ残基に結合させることにより、調製され得る。
【００６４】
サブスタンスＰ（ＳＰ）は、脊椎動物の末梢神経系及び中枢神経系に広く分布するペプチド神経伝達物質である。ＳＰは、交感神経系においてニューロンニコチン性アセチルコリンレセプター（ｎＡＣｈＲ）の調節に関与している。サブスタンスＰ類似体は、神経変性疾患の制御において薬物として有用であり得る。
【００６５】
サブスタンスＰは、配列：
Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ２（配列番号６）
のウンデカペプチドである。
【００６６】
位置７のアミノ酸残基（Ｐｈｅ）又は位置８のアミノ酸残基（Ｐｈｅ）がＣｙｓによって置換されたサブスタンスＰの２つの類似体を調製し、以下の配列のペプチド：
2011079834.tif 000005
を得た。
【００６７】
Ｃｙｓ残基のＳ原子に、鉄キレート剤機能が結合される。例えば、８−ヒドロキシ−５−キノリニルメチル残基（ＨＱ）を有する得られた化合物は、本明細書中で付録ＩＩにおいてＣｙｓ７（ＨＱ）サブスタンスＰ（Ｍ２７）及びＣｙｓ８（ＨＱ）サブスタンスＰ（Ｍ２８）と称される化合物である。本明細書中で付録ＩにおいてＣｙｓ７（ＨＱ−Ｐｒ）サブスタンスＰ（Ｍ２７Ａ）及びＣｙｓ８（ＨＱ−Ｐｒ）サブスタンスＰ（Ｍ２８Ａ）と称される対応する化合物はさらに、キノリン環の５位で−ＣＨ２基に連結されたプロパルギルアミノ基（Ｐｒ）を有する。
【００６８】
配列番号７又は配列番号８のサブスタンスＰ類似体を含む本発明のさらなる化合物の例は、プロパルギルアミノ基もまた含む、本明細書中で付録ＶにおいてＭ２７Ｂ及びＭ２８Ｂと称されるヒドロキサメートである。
【００６９】
Ｍｅｔ５−エンケファリン及びＬｅｕ５−エンケファリンは、それぞれ以下の配列：
2011079834.tif 000006
の、エンドルフィンのクラスに属する２つの天然に存在するペンタペプチドである。
【００７０】
位置４のＰｈｅ残基又は位置１のＴｙｒ残基のいずれかがＣｙｓ残基で置換された、以下：
2011079834.tif 000007
のような、Ｍｅｔ５−エンケファリン（配列番号９）及びＬｅｕ５−エンケファリン（配列番号１０）の各々の２つの類似体が調製されている。
【００７１】
Ｃｙｓ残基のＳ原子に、鉄キレート剤機能が結合される。例えば、８−ヒドロキシ−５−キノリニルメチル残基（ＨＱ）を有する得られた化合物は、本明細書中で付録ＩＩにおいて配列番号１３についてＹＧＧＣ（ＨＱ）Ｌ（Ｍ１８）、配列番号１１についてＹＧＧＣ（ＨＱ）Ｍ（Ｍ１９）、配列番号１４についてＣ（ＨＱ）ＧＧＦＬ（Ｍ２０）及び配列番号１２についてＣ（ＨＱ）ＧＧＦＭ（Ｍ２１）と称される化合物である。本明細書中で付録ＩにおいてＹＧＧＣ（ＨＱ−Ｐｒ）Ｌ（Ｍ１８Ａ）、ＹＧＧＣ（ＨＱ−Ｐｒ）Ｍ（Ｍ１９Ａ）、Ｃ（ＨＱ−Ｐｒ）ＧＧＦＬ（Ｍ２０Ａ）及びＣ（ＨＱ−Ｐｒ）ＧＧＦＭ（Ｍ２１Ａ）と称される対応する化合物はさらに、キノリン環の５位で−ＣＨ２基に連結されたプロパルギルアミノ（Ｐｒ）基を有する。
【００７２】
配列番号１１〜１４のエンケファリン類似体を含む本発明のさらなる化合物の例は、プロパルギルアミノ基もまた含む、本明細書中で付録ＶにおいてＭ１８ＢＡ、Ｍ１９Ｂ、Ｍ２０Ｂ及びＭ２１Ｂと称されるヒドロキサメートである。
【００７３】
本発明の別の実施形態において、本発明の化合物に神経保護機能を付与する残基は、Ｌ−システイン残基若しくはＤ−システイン残基又はＬ−アラニン残基若しくはＤ−アラニン残基からなる群から選択される。
【００７４】
この神経保護機能がＬ−システイン又はＤ−システインである場合、鉄キレート剤機能は、Ｃｙｓ残基のＳ原子に結合される。例えば、８−ヒドロキシ−５−キノリニルメチル残基（ＨＱ）を有する得られた化合物は、本明細書中で付録ＩＩにおいてＤ−ＨＱ−ＣｙｓＯＨ（Ｍ１１）及びＬ−ＨＱ−ＣｙｓＯＨ（Ｍ１２）と称される化合物、並びに本明細書中で付録ＩＩＩにおいてＤ−（ＨＱ−Ｐｒ）−ＣｙｓＯＨ（Ｍ１１ａ）及びＬ−（ＨＱ−Ｐｒ）−ＣｙｓＯＨ（Ｍ１２ａ）と称される対応する化合物である。システイン残基を含む本発明のさらなる化合物の例は、プロパルギルアミノ基を含む、本明細書中で付録ＶＩにおいてＭ１１ｂ及びＭ１２ｂと称されるヒドロピリジノン誘導体である。
【００７５】
神経保護機能がＬ−アラニン又はＤ−アラニンである本発明の化合物の例は、本明細書中で付録ＩＶにおいてＤ−ＨＱ−Ａｌａ（Ｍ９）、Ｌ−ＨＱ−Ａｌａ（Ｍ１０）、内部塩ＨＱＡｌａ（ＨＬＭ８）及びエチルエステルＨＱＡｌａＥｔ（ＨＬＭ９）と称される８−ヒドロキシ−５−キノリニル残基（ＨＱ）を有する化合物、並びに本明細書中で付録ＩＩＩにおいてＤ−（ＨＱ−Ｐｒ）−Ａｌａ（Ｍ９ａ）、Ｌ−（ＨＱ−Ｐｒ）−Ａｌａ（Ｍ１０ａ）と称される対応する化合物である。さらなる例は、本明細書中で付録ＶＩにおいてＭ９ｂと称されるヒドロキシピリジノン誘導体である。
【００７６】
パーキンソン病は、脳におけるドパミン作用性機能の低下に関連し、この疾患の症状の多くがＬ−ＤＯＰＡ（Ｌ−ジヒドロキシフェニルアラニン）の経口投与によって緩和され得る。Ｌ−ＤＯＰＡは、脳においてＤＯＰＡデカルボキシラーゼによってドパミンへと転換される。リード化合物ＤＯＰＡの逆合成分析に基づいて、鉄キレート化基（カテコール）及びアミノ酸（アラニン）を含む上記の鉄キレート剤−ペプチド誘導体及び鉄キレート剤−アミノ酸誘導体は、別のクラスの抗パーキンソニズム剤を構成する抗酸化剤型薬物として有用な薬物候補であり得、また潜在的に他の神経変性疾患及び他の障害でも鉄キレート剤が有用である。
【００７７】
上記のように、作用部位として脳を有する薬物は、一般に、最大のｉｎ  ｖｉｖｏの生物学的活性を得るために、血液脳関門（ＢＢＢ）を横切ることができなければならない。本発明が、いくつかの神経変性疾患において脳に鉄キレート剤をもたらして、脳中に蓄積する鉄を結合して除去する場合、可能な解決の１つは、両親媒性挙動を担う特定の基を有する鉄キレート化分子を設計することである。このような両親媒性基は、親油性中心及び親水性中心を有する。両方の中心のサイズ及び構造は、分子全体の全体的な親油性を制御し、従って、その輸送特性を制御する。
【００７８】
本発明はさらに、鉄に対する特異性を有しかつ親油性媒体中で所望の血液脳関門（ＢＢＢ）輸送特性を提供するように設計された両親媒性金属キレート剤を提供する。
【００７９】
１実施形態において、本発明は、ＢＢＢを横切る鉄キレート化残基を含む化合物に関し、この鉄キレート化残基は、化合物５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イルメチル］−８−ヒドロキシ−キノリンを除く、以下に示されるようなエチレンジアミン部分又はピペラジン環若しくは１，３，５−ペルヒドロトリアジン環からなる群から選択されるリンカーを介して脂肪族鎖に連結された８−ヒドロキシ−５−キノリニルメチル基である。
【００８０】
この実施形態によれば、この分子の８−ヒドロキシキノリン部分は、鉄特異的キレート剤及びラジカルスカベンジャーの両方として働き、かつＲは異なる長さの脂肪族鎖であるが、リンカーがピペラジン環である場合には２−ヒドロキシエチル基ではない。
【化３】
2011079834.tif 000008
Ｒを変化させることによって、本発明者らは、分子全体のサイズ及び親油性を調整し得、従って、ＢＢＢを介した輸送特性を制御し得る。好ましい実施形態において、このリンカーはピペラジン環である。
【００８１】
リンカーがピペラジンである場合、上記の鉄キレート剤は、以下のスキームに記載されるように、ピペラジンをジ（ｔ−ブチル）ジカーボネート（Ｂｏｃ２Ｏ）と反応させ、その後Ｂｏｃ保護されたピペラジンをハライドＲ−Ｘ（Ｒはプロパルギル含有基であり、Ｘはハロゲンである）と反応させ、ＴＦＡを用いてＢｏｃ基を除去し、８−ヒドロキシ−５−クロロメチルキノリンと反応させることによって調製され得る：
【化４】
2011079834.tif 000009
【００８２】
ＢＢＢを介した薬物の輸送特性を制御することにおける重要な因子である分子全体の脂質可溶性は、ｎを変化させることによって調整され得る。脂肪族鎖はまた、Ｏ、Ｓ及びＮから選択されるヘテロ原子を含み得る。本発明に従うこのような化合物の例は、本明細書中で付録ＩＩＩにおいてＨＬＡ１６ａ、ＨＬＡ２０及びＭ１７と称される化合物である。プロパルギル基を有さない付録ＩＶ中の化合物ＨＬＡ１６もまた、本発明により想定される。
【００８３】
本発明は、化合物５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イルメチル］−８−ヒドロキシ−キノリンを除く、式Ｉ〜ＩＶの化合物：
【化５】
2011079834.tif 000010
を包含し、式中、
Ｒ１は、Ｃｙｓ残基の−Ｓ−原子を介してＣ原子に連結されたシステイン残基を含む神経保護ペプチド又はそのフラグメントの類似体の残基であり、かつこのペプチドのアミノ末端は、Ｆｍｏｃ又はステアリルのような疎水性基によって任意選択で置換され；
Ｒ２はＨ又は−ＮＨ−Ｘであり；
Ｒ３は、
【化６】
2011079834.tif 000011
（ｉｉ）−ＣＲ５Ｒ６Ｒ７；（ｉｉｉ）−Ｎ（ＣＨ３）−Ｘ；（ｉｖ）−Ｎ（Ｒ８）−ＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）ＣＯＯＣ２Ｈ５；（ｖ）−Ｎ（Ｒ８）−ＣＨ２−ＣＯＯＣＨ２Ｃ６Ｈ５及び（ｖｉ）−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨＲ８’からなる群から選択される基であり；
Ｒ４は、（ｉ）Ｘ；（ｉｉ）ＣＯＯＣ２Ｈ５；（ｉｉｉ）（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｒ８；及び（ｉｖ）−ＣＯＯ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｒ８からなる群から選択され；
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ４低級アルキル、好ましくはＣＨ３又はＣＯＯＣ２Ｈ５であり；
Ｒ６は、Ｈ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ−又はＣＯＯＣ２Ｈ５であり；
Ｒ７は、（ｉ）−ＮＨ−Ｒ８；（ｉｉ）−ＮＨ３＋；（ｉｉｉ）−ＮＨ−ＣＯＣＨ３、（ｉｖ）−ＮＨ−ＮＨ−Ｒ８及び（ｖ）−ＮＨ−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）−ＮＨ−Ｒ８からなる群から選択され；
Ｒ８はＨ又はＸであり；Ｒ’８は、Ｈ、Ｘ又はＦｍｏｃであり；
Ｒ９は、（ｉ）Ｈ；（ｉｉ）−ＣＯ−ＣＨ２−Ｒ１；（ｉｉｉ）−ＣＨ２−ＣＯＯＣＨ２Ｃ６Ｈ５；（ｉｖ）−ＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）ＣＯＯＣ２Ｈ５；
【化７】
2011079834.tif 000012
からなる群から選択され；
Ｒ１０は、Ｘ；−ＣＨ２−ＣＨ（ＳＨ）ＣＯＯＣ２Ｈ５又は
【化８】
2011079834.tif 000013
であり；
ｎは１から６までの整数であり；
Ｒ１１は、
2011079834.tif 000014
及び
【化９】
2011079834.tif 000015
からなる群から選択される基であり；
Ｒ１２は、Ｘ、Ｃ１〜Ｃ４低級アルキル、好ましくはメチル、ＣＯＯＣ２Ｈ５又は−（ＣＨ２）２−ＯＨであり；
Ｒ１３は、Ｘ、−（ＣＨ２）２−ＯＸ又は−ＣＯＯ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｘであり；
Ｘはプロパルギル基である。
【００８４】
１つの好ましい実施形態において、本発明の化合物は上記式Ｉの化合物：
【化１０】
2011079834.tif 000016
であり、
Ｒ１は、Ｃｙｓ残基の−Ｓ−原子を介してＣ原子に連結されたシステイン残基を含む神経保護ペプチド又はそのフラグメントの類似体の残基であり、かつこのペプチドのアミノ末端は、Ｆｍｏｃ又はステアリルのような疎水性基によって任意選択で置換され；
Ｒ２はＨ又は−ＮＨ−Ｘであり；
Ｘはプロパルギル基である。
【００８５】
Ｒ１は好ましくは、１つのアミノ酸残基がシステイン残基によって置換されたＶＩＰ、ＧｎＲＨ、サブスタンスＰ若しくはエンケファリン又はそれらのフラグメントの類似体の残基であり、より好ましくは、アミノ末端にステアリル基又はＦｍｏｃ基を有し得る配列番号２のＶＩＰフラグメント類似体、配列番号４及び配列番号５のＧｎＲＨ類似体、配列番号７及び配列番号８のサブスタンスＰ類似体、並びに配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３及び配列番号１４のエンケファリン類似体の残基である。
【００８６】
好ましい実施形態において、式Ｉの化合物は、Ｒ２がＨであり、かつＲ１がアミノ末端にステアリル基を有する配列番号２のＶＩＰフラグメント類似体（Ｍ６、付録ＩＩ）又はＦｍｏｃ基を有する配列番号２のＶＩＰフラグメント類似体（Ｍ７、付録ＩＩ）の残基、配列番号４のＧｎＲＨ類似体（Ｍ８、付録ＩＩ）又は配列番号５のＧｎＲＨ類似体（Ｍ２２、付録ＩＩ）の残基、配列番号７のサブスタンスＰ類似体（Ｍ２７、付録ＩＩ）又は配列番号８のサブスタンスＰ類似体（Ｍ２８、付録ＩＩ）の残基、並びに配列番号１１のエンケファリン類似体（Ｍ１９、付録ＩＩ）、配列番号１２のエンケファリン類似体（Ｍ２１、付録ＩＩ）、配列番号１３のエンケファリン類似体（Ｍ１８、付録ＩＩ）及び配列番号１４のエンケファリン類似体（Ｍ２０、付録ＩＩ）の残基からなる群から選択される化合物である。
【００８７】
より好ましい実施形態において、式Ｉの化合物は、Ｒ２がプロパルギルアミノ基であり、かつＲ１がアミノ末端にステアリル基を有する配列番号２のＶＩＰフラグメント類似体（Ｍ６Ａ、付録Ｉ）又はＦｍｏｃ基を有する配列番号２のＶＩＰフラグメント類似体（Ｍ７Ａ、付録Ｉ）の残基、配列番号４のＧｎＲＨ類似体（Ｍ８Ａ）又は配列番号５のＧｎＲＨ類似体（Ｍ２２Ａ、付録Ｉ）の残基、配列番号７のサブスタンスＰ類似体（Ｍ２７Ａ、付録Ｉ）又は配列番号８のサブスタンスＰ類似体（Ｍ２８Ａ、付録Ｉ）の残基、並びに配列番号１１のエンケファリン類似体（Ｍ１９Ａ、付録Ｉ）、配列番号１２のエンケファリン類似体（Ｍ２１Ａ、付録Ｉ）、配列番号１３のエンケファリン類似体（Ｍ１８Ａ、付録Ｉ）及び配列番号１４のエンケファリン類似体（Ｍ２０Ａ、付録Ｉ）の残基からなる群から選択される化合物である。
【００８８】
本発明の別の好ましい実施形態において、化合物５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イルメチル］−８−ヒドロキシ−キノリンを除く、式ＩＩ：
【化１１】
2011079834.tif 000017
の化合物が提供され、
Ｒ３は、
【化１２】
2011079834.tif 000018
（ｉｉ）−ＣＲ５Ｒ６Ｒ７；（ｉｉｉ）−Ｎ（ＣＨ３）−Ｘ；（ｉｖ）−Ｎ（Ｒ８）−ＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）ＣＯＯＣ２Ｈ５；（ｖ）−Ｎ（Ｒ８）−ＣＨ２−ＣＯＯＣＨ２Ｃ６Ｈ５及び（ｖｉ）−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨＲ８’からなる群から選択される基であり；
Ｒ４は、（ｉ）Ｘ；（ｉｉ）ＣＯＯＣ２Ｈ５；（ｉｉｉ）（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｒ８及び（ｉｖ）−ＣＯＯ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｒ８からなる群から選択され；
Ｒ５はＨ、ＣＨ３又はＣＯＯＣ２Ｈ５であり；
Ｒ６はＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ−又はＣＯＯＣ２Ｈ５であり；
Ｒ７は、（ｉ）−ＮＨ−Ｒ８；（ｉｉ）−ＮＨ３＋；（ｉｉｉ）−ＮＨ−ＣＯＣＨ３；（ｉｖ）−ＮＨ−ＮＨ−Ｒ８；及び（ｖ）−ＮＨ−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）−ＮＨ−Ｒ８からなる群から選択され；
Ｒ８はＨ又はＸであり、Ｒ’８はＨ、Ｘ又はＦｍｏｃであり；
Ｘはプロパルギル基である。
【００８９】
より好ましい実施形態において、Ｒ４が−（ＣＨ２）２−ＯＨである化合物を除き、式ＩＩの化合物中、Ｒ３は、脂肪族鎖Ｒ４が４位で窒素原子に連結されたピペラジン環である。この化合物５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イルメチル］−８−ヒドロキシ−キノリンは、本明細書中で付録ＩＶにおいてＶＫ−２８と特定され、ＷＯ  ００／７４６６４号から公知である。１つの好ましい実施形態において、本発明の８−ヒドロキシ−５−キノリニルメチルピペラジン化合物は、本明細書中でＨＬＡ１６と称される化合物（付録ＩＶ）によって示されるように、プロパルギル基を含まない（Ｒ４が−ＣＯＯＣ２Ｈ５であるか、又はＲ８がＨである）。別の好ましい実施形態において、本発明の８−ヒドロキシ−５−キノリニルメチルピペラジン化合物は、本明細書中でＨＬＡ１６ａ、ＨＬＡ２０及びＭ１７と称される化合物（付録ＩＩＩ）によって示されるように、プロパルギル基を含む（Ｒ８はＸである）。
【００９０】
別のより好ましい実施形態において、式ＩＩの化合物中、Ｒ３は−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨＲ８’であり、式中、本明細書中でＤ−ＨＱ−ＣｙｓＯＨと称される化合物（Ｍ１１、付録ＩＩ）及びＬ−ＨＱ−ＣｙｓＯＨと称される化合物（Ｍ１２、付録ＩＩ）によって示されるように、Ｒ８’はＨである（すなわち、Ｒ３はＬ−Ｃｙｓ又はＤ−Ｃｙｓの残基である）か、又は本明細書中でＤ−（ＨＱ−Ｐｒ）−ＣｙｓＯＨと称される化合物（Ｍ１１ａ、付録ＩＩＩ）及びＬ−（ＨＱ−Ｐｒ）−ＣｙｓＯＨと称される化合物（Ｍ１２ａ、付録ＩＩＩ）によって示されるように、Ｒ８’はプロパルギルであるか、又は本明細書中でＭ１１Ｂ及びＭ１２Ｂと称される化合物（付録ＩＶ）によって示されるように、Ｒ８’はＦｍｏｃである。
【００９１】
別のより好ましい実施形態において、式ＩＩの化合物中、Ｒ３は基−ＣＲ５Ｒ６Ｒ７であり、式中Ｒ５はＨであり、Ｒ６はＣＯＯＨであり、かつＲ７は−ＮＨ−Ｒ８であり、式中、本明細書中でＤ−ＨＱ−Ａｌａと称される化合物（Ｍ９、付録ＩＶ）及びＬ−ＨＱ−Ａｌａと称される化合物（Ｍ１０、付録ＩＶ）によって示されるように、Ｒ８はＨである（すなわち、Ｒ３はＬ−Ａｌａ又はＤ−Ａｌａの残基である）か、又は本明細書中でＤ−（ＨＱ−Ｐｒ）−Ａｌａと称される化合物（Ｍ９ａ、付録ＩＩＩ）及びＬ−（ＨＱ−Ｐｒ）−Ａｌａと称される化合物（Ｍ１０ａ、付録ＩＩＩ）によって示されるように、Ｒ８はプロパルギルであるか；或いは本明細書中でＨＱ−Ａｌａと称される化合物（ＨＬＭ８、付録ＩＶ）によって示されるように、Ｒ５はＨであり、Ｒ６はＣＯＯ−であり、Ｒ７は−ＮＨ３＋であるか；或いは本明細書中でＨＱ−ＡｌａＥｔと称される化合物（ＨＬＭ９、付録ＩＶ）によって示されるように、Ｒ５はＨであり、Ｒ６はＣＯＯＣ２Ｈ５であり、Ｒ７は−ＮＨ２であるか；或いは本明細書中でＨＬＭ７と称される化合物（付録ＩＶ）によって示されるように、Ｒ５及びＲ６は共にＣＯＯＣ２Ｈ５であり、Ｒ７は−ＮＨ−ＣＯＣＨ３であるか；或いは本明細書中でＭ３１と称される化合物（付録ＩＩＩ）によって示されるように、Ｒ５はＨであり、Ｒ６はＣＯＯＣ２Ｈ５であり、Ｒ７は−ＮＨ−プロパルギルである。
【００９２】
別のより好ましい実施形態において、式ＩＩの化合物中、Ｒ３は基−ＮＲ８−ＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）ＣＯＯＣ２Ｈ５であり、式中、それぞれ本明細書中でＭ３２と称される化合物（付録ＩＶ）及びＭ３３と称される化合物（付録ＩＩＩ）によって示されるように、Ｒ８はＨ又はプロパルギルである。
【００９３】
別のより好ましい実施形態において、式ＩＩの化合物中、本明細書中でＭ３０と称される化合物（付録ＩＩＩ）によって示されるように、Ｒ３は基−Ｎ（ＣＨ３）−プロパルギルである。
【００９４】
本発明のなお別の好ましい実施形態において、式ＩＩＩ：
【化１３】
2011079834.tif 000019
の化合物が提供され、式中、
Ｒ９は、（ｉ）Ｈ；（ｉｉ）−ＣＯ−ＣＨ２−Ｒ１；（ｉｉｉ）−ＣＨ２−ＣＯＯＣＨ２Ｃ６Ｈ５；（ｉｖ）−ＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）ＣＯＯＣ２Ｈ５；
【化１４】
2011079834.tif 000020
からなる群から選択され；
Ｒ１０は、Ｘ；−ＣＨ２−ＣＨ（ＳＨ）ＣＯＯＣ２Ｈ５又は
【化１５】
2011079834.tif 000021
であり；
ｎは、１から６までの整数、好ましくは１又は２であり；
Ｒ１２は、Ｘ、Ｃ１〜Ｃ４低級アルキル、好ましくはメチル、ＣＯＯＣ２Ｈ５又は−（ＣＨ２）２−ＯＨ−であり；
Ｘはプロパルギル基である。
【００９５】
１つの好ましい実施形態において、Ｒ９は−ＣＯ−ＣＨ２−Ｒ１であり、式中、Ｒ１は、Ｃｙｓ残基を含む神経保護ペプチド又はそのフラグメントの類似体の残基である。より好ましい実施形態において、式ＩＩＩの化合物は、プロパルギルアミノ基、並びにアミノ末端にステアリル基を有する配列番号２のＶＩＰフラグメント類似体（Ｍ６Ｂ、付録Ｖ）又はＦｍｏｃ基を有する配列番号２のＶＩＰフラグメント類似体（Ｍ７Ｂ、付録Ｖ）の残基、配列番号４のＧｎＲＨ類似体（Ｍ８Ｂ、付録Ｖ）又は配列番号５のＧｎＲＨ類似体（Ｍ２２Ｂ、付録Ｖ）の残基、配列番号７のサブスタンスＰ類似体（Ｍ２７Ｂ、付録Ｖ）又は配列番号８のサブスタンスＰ類似体（Ｍ２８Ｂ、付録Ｖ）の残基、並びに配列番号１１のエンケファリン類似体（Ｍ１９Ｂ、付録Ｖ）、配列番号１２のエンケファリン類似体（Ｍ２１Ｂ、付録Ｖ）、配列番号１３のエンケファリン類似体（Ｍ１８Ｂ、付録Ｖ）及び配列番号１４のエンケファリン類似体（Ｍ２０Ｂ、付録Ｖ）の残基からなる群から選択されるＲ１を含むヒドロキサメートである。
【００９６】
他の好ましい実施形態において、Ｒ９、Ｒ１０及びＲ１２は、本明細書中でＭ３５、Ｍ３６、Ｍ３７、Ｍ３８、Ｍ３９、Ｍ４０、Ｍ４１、Ｍ４２、Ｍ４３、Ｍ４４、Ｍ４５及びＭ４６と称される化合物（付録Ｖ）によって例示されるような、上記規定の通りのものである。
【００９７】
なお別の好ましい実施形態において、式ＩＶ：
【化１６】
2011079834.tif 000022
の化合物が提供され、式中、
Ｒ１１は、
2011079834.tif 000023
及び
【化１７】
2011079834.tif 000024
からなる群から選択され；
Ｒ１３は、Ｘ、−（ＣＨ２）２−ＯＸ又は−ＣＯＯ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｘであり；
Ｘはプロパルギル基である。
【００９８】
好ましい実施形態において、ピリジノン誘導体は、本明細書中でＭ９ｂ、Ｍ１１ｂ、Ｍ１２ｂ、Ｍ１３ｂ、Ｍ１５ｂ、ＨＬＡ１６ｂ、Ｍ１７ａ、ＨＬＡ２０ａ、Ｍ３０ａ、Ｍ３１ａ、Ｍ３３ａ及びＭ３４ｂと称される化合物によって例示され、それらの式は本明細書中で付録ＶＩ中に示される。Ｍｅ基が異なるアルキル（例えば、エチル）によって置換されているか、又はこの環が任意選択で置換されるさらなるアルキル基を含み得る、ピリジノンの他の誘導体が使用され得る。
【００９９】
以下のスキームＡ〜Ｄは、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ及びＩＶの化合物の調製のために使用され得る方法の例を示す。全ての出発物質は、これらのスキーム中に記載される手順、有機化学の当業者に周知の手順によって調製されるか、又は商業的に入手され得る。本発明の全ての最終化合物は、これらのスキーム中に記載される手順又は有機化学の当業者に周知の、その手順に類似の手順によって調製される。全ての改変ペプチドを、会社のプロトコルに従ってＦｍｏｃ化学を使用した固相ペプチド合成によって、自動又は手動で調製した。
【０１００】
式Ｉの化合物は、スキームＡに示される方法若しくは実施例中に与えられた方法又は類似の方法によって調製され得る。
【０１０１】
以下のスキームＡに示されるように、８−ヒドロキシキノリン（Ａ１）を塩酸及びホルムアルデヒドで処理して、５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリン（Ａ２）を生じる。Ａ２のクロロ基をプロパルギルアミンで置換して、５−（１−プロパルギルアミノ）メチル−８−ヒドロキシキノリン（Ａ３）を生じる。Ｎ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）を使用したＡ３の臭素化は、臭化物Ａ４を提供し、このＡ４を次いで、例えば、改変ペプチド［Ｄ−Ｃｙｓ６］ＧｎＲＨで処理して、標的化合物Ａ５（これは、付録Ｉ中の化合物Ｍ２２Ａである）を生じる。
（スキームＡ）
【化１８】
2011079834.tif 000025
【０１０２】
式ＩＩの化合物は、スキームＢに示される方法若しくは実施例に示される方法又は類似の方法によって調製され得る。
【０１０３】
以下のスキームＢに示されるように、５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリンＡ２（スキームＡ中に記載されるように調製される）中のクロロ基のシステインによる置換は、中間体Ｂ１を提供する。臭化プロパルギルによる中間体Ｂ１のアルキル化は、標的化合物Ｂ２（これは、付録ＩＩＩ中の化合物Ｍ１１ａ又はＭ１２ａである）を生成する。
（スキームＢ）
【化１９】
2011079834.tif 000026
【０１０４】
スキームＢに従う別の合成経路において、５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリンＡ２のＯＨ基は、そのアセチル誘導体Ｂ３として最初に保護される。ジエチルアセトアミドマロネートとの化合物Ｂ３の縮合は、塩基としてナトリウムエトキシドを用いてエタノール中で円滑に進行し、予測された縮合誘導体Ｂ４を生じる。化合物Ｂ４の脱炭酸により、アミノ酸誘導体Ｂ５を生じる。塩化チオニル及びエタノールの存在下でのＢ５のエステル化により、エチルエステル誘導体Ｂ６を生成する。化合物Ｂ６を、触媒としてα−キモトリプシンを使用して加水分解して、Ｌ−アミノ酸誘導体Ｂ６（α−キモトリプシンはＬ特異的であり、かつＬ形態のみを加水分解する）及びＤ−アミノ酸エステル誘導体Ｂ７の混合物を生じ、この混合物はＨＰＬＣによって分離され得る。臭化プロパルギルによるＬ−アミノ酸Ｂ８又はＤ−アミノ酸（エステルＢ７から得られる）の処理は、所望の化合物Ｂ９（これは、付録ＩＩＩ中の化合物Ｍ９ａ又はＭ３１である）を提供する。
【０１０５】
式ＩＩＩの化合物の生成のために、スキームＣに示される方法若しくは類似の方法又は実施例に与えられる方法が使用され得る。
（スキームＣ）
【化２０】
2011079834.tif 000027
【０１０６】
ヒドロキサメート（Ｃ２）は、商業的供給元から購入され得るか、又は有機化学の当業者に周知の手順によって調製され得るかのいずれかである。ジイソプロピルエチルアミンのような適切な塩基の存在下での臭化プロパルギル（Ｃ１）によるヒドロキサメート（Ｃ２）のアルキル化は、化合物Ｃ３を提供する。窒素の存在下で約０℃での化合物Ｃ３の塩化クロロアセチルとの反応は、Ｎ−クロロアセチル誘導体（Ｃ４）を生じる。例えば改変ペプチド［Ｄ−Ｃｙｓ６］ＧｎＲＨによるＣ４の処理とその後のヒドロキサメートの脱保護により、標的化合物Ｃ６（これは、付録Ｖ中の化合物Ｍ２２Ｂである）を生じる。
【０１０７】
式ＩＶの化合物は、スキームＤ中に示される方法若しくは実施例中に与えられる方法又は類似の方法によって製造され得る。
（スキームＤ）
【化２１】
2011079834.tif 000028
【０１０８】
出発物質１−クロロエチル−２−メチル−３−ヒドロキシピリジノン（Ｄ１）は、公知の手順によって調製され得る。システインによるＤ１の処理は、硫化物Ｄ２の形成を生じ、この硫化物Ｄ２を次いで、プロパルギルアミンでアルキル化して所望の化合物Ｄ４（これは、付録ＶＩ中のＭ１１ｂと称される化合物である）を生じる。
【０１０９】
スキームＤに従う別の合成経路において、化合物Ｄ１をプロパルギルピペラジンＤ７と直接反応させて、所望のキレート剤化合物Ｄ４（これは、付録ＶＩ中のＨＬＡ２０ａと称される化合物である）を生じる。
【０１１０】
プロパルギルピペラジン（Ｄ７）を、Ｎ−Ｂｏｃ−ピペラジン（Ｄ５）のプロパルギルアミンとの反応によって化合物Ｄ６を生じ、その後トリフルオロ酢酸を使用してＢｏｃ保護基を除去することによって調製する。
【０１１１】
式Ｉの化合物の薬学的に許容される塩、分子中に存在する任意のカルボキシ基及び塩基によって形成された両方の塩、並びに酸付加塩及び／又は塩基塩もまた本発明によって企図される。
【０１１２】
薬学的に許容される塩は、金属又はアミン（例えば、アルカリ金属及びアルカリ土類金属又は有機アミン）を用いて形成され得る。カチオンとして使用される金属の例は、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどである。適切なアミンの例は、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン及びプロカインである（例えば、Ｂｅｒｇｅ  Ｓ．Ｍ．ら、「薬学的塩（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ）」、（１９７７）Ｊ．ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、６６：１−１９を参照のこと）。これらの塩はまた、式−ＮＲＲ’Ｒ”＋Ｚ’の第４級塩のような薬学的に許容される第４級塩であり得、式中、Ｒ、Ｒ’及びＲ”は各々独立して水素、アルキル又はベンジルであり、かつＺは対イオンであり、これには、塩化物、臭化物、ヨウ化物、Ｏ−アルキル、トルエンスルホネート、メチルスルホネート、スルホネート、ホスフェート又はカルボキシレートが含まれる。
【０１１３】
これらの化合物の薬学的に許容される酸付加塩には、無機酸（例えば、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸など）由来の塩、並びに有機酸（例えば、脂肪族モノカルボン酸及び脂肪族ジカルボン酸、フェニル置換アルカノイック酸（ａｌｋａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）、ヒドロキシアルカノイック酸、アルカンジオイック酸（ａｌｋａｎｅｄｉｏｉｃ  ａｃｉｄ）、芳香族酸、脂肪族スルホン酸及び芳香族スルホン酸など）由来の塩が含まれる。従って、このような塩には、硫酸塩、ピロ硫酸塩、硫酸水素塩、亜硫酸、亜硫酸水素塩、硝酸塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩、プロピオン酸塩、カプリル酸塩、イソ酪酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、フタル酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩などが含まれる。アルギン酸塩などのようなアミノ酸の塩及びグルコン酸塩又はガラクツロン酸塩もまた企図される（例えば、Ｂｅｒｇｅ  Ｓ．Ｍ．ら、「薬学的塩（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ）」、（１９７７）Ｊ．ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、６６：１−１９を参照のこと）。
【０１１４】
上記塩基性化合物の酸付加塩は、従来の様式で遊離塩基形態を充分量の所望の酸と接触させて、塩を生成することによって調製される。この遊離塩基形態は、従来の様式でこの塩形態を塩基と接触させて、遊離塩基を単離することによって再生され得る。この遊離塩基形態は、特定の物理的特性（例えば、極性溶媒中での可溶性）において、そのそれぞれの塩形態とはいくらか異なるが、他の点では、これらの塩は、本発明の目的についてそのそれぞれの遊離塩基と等価である。
【０１１５】
上記酸性化合物の塩基付加塩は、従来の様式で遊離酸形態を充分量の所望の塩基と接触させて、塩を生成することによって調製される。この遊離酸形態は、従来の様式でこの塩形態を酸と接触させて、遊離酸を単離することによって再生され得る。この遊離酸形態は、特定の物理的特性（例えば、極性溶媒中での可溶性）において、そのそれぞれの塩形態とはいくらか異なるが、他の点では、これらの塩は、本発明の目的についてそのそれぞれの遊離酸と等価である。
【０１１６】
本発明の化合物は、細胞内の未結合の鉄を結合するのに適切な特異的な鉄キレート剤である。トランスフェリンに結合していない鉄は、毒性形態の鉄である。本発明の鉄キレート剤は、良好な輸送特性を有しかつ細胞膜を横切り、従って、細胞内の過剰な未結合の鉄をキレート化する。それらの鉄との錯体は細胞を自由に離れて迅速に排泄されることが予測される。これらの化合物又はこれらの化合物の少なくとも大部分はＢＢＢを横切ることができ、従って、神経変性疾患、神経変性障害及び神経変性状態の処置のための適切な候補であることがさらに予測される。
【０１１７】
別の態様において、本発明は、薬学的に許容される担体と組み合わせて、本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物に関する。
【０１１８】
さらなる態様において、本発明は、鉄キレート化治療のための医薬組成物の調製のための、神経保護的な鉄キレート剤としての本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【０１１９】
この医薬組成物は、鉄過負荷及び酸化ストレスに関連する疾患、障害及び状態の処置のための鉄キレート化治療における使用が意図されている。
【０１２０】
本発明の医薬組成物は、鉄過負荷及び酸化ストレスに関連する疾患、障害及び状態（例えば、神経変性疾患及び神経変性障害並びに脳血管疾患及び脳血管障害、新生物疾患、血色素症、サラセミア、心血管疾患、糖尿病、炎症障害、アントラサイクリン心毒性、ウイルス感染、原生動物感染及び酵母感染であるが、これらに限定されない）の治療及び／又は予防のため、加齢を遅延させるため、皮膚の加齢の予防及び／又は治療のため、並びに日光及び／又はＵＶ光に対する皮膚の保護のためのものである。
【０１２１】
１つの好ましい実施形態において、この医薬組成物は、パーキンソン病、アルツハイマー病、脳卒中、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症、フリードライヒ失調症、ハレルフォルデン−スパッツ病、癲癇及び神経外傷のような神経変性疾患、神経変性状態及び神経変性障害並びに脳血管疾患、脳血管状態及び脳血管障害の予防及び／又は治療における鉄キレート化及び神経保護のための使用のためのものである。１つの好ましい実施形態において、この医薬組成物はパーキンソン病の処置のためのものである。別の好ましい実施形態において、この医薬組成物は、アルツハイマー病の処置のためのものである。さらなる好ましい実施形態において、この医薬組成物は、脳血管障害、特に脳卒中の処置のためのものである。
【０１２２】
パーキンソン病及びアルツハイマー病のような疾患における本発明の鉄キレート剤の使用の「予防」態様は、さらなる神経変性及びこの疾患のさらなる進行の予防を含む。
【０１２３】
なお別の好ましい実施形態において、この医薬組成物は、新生物疾患（全てのタイプの癌が本発明によって包含される）の処置における細胞増殖の阻害のためのものである。本発明の鉄キレート剤は、単独でか又は１種若しくは複数の細胞傷害性抗癌薬物と組み合わせて使用され得る。
【０１２４】
別の好ましい実施形態において、この医薬組成物は、血色素症及びサラセミアにおける鉄過負荷の予防及び／又は治療のためのものである。
【０１２５】
なお別の好ましい実施形態において、この医薬組成物は、心血管疾患の予防及び／又は治療のため、例えば、再灌流損傷におけるフリーラジカルの発生に関連する損傷を予防するためのものである。
【０１２６】
なお別の好ましい実施形態において、この医薬組成物は、糖尿病の予防及び／又は治療のためのものである。
【０１２７】
なお別の好ましい実施形態において、この医薬組成物は、炎症障害の予防及び／又は治療のためのものである。１つの好ましい実施形態において、この炎症障害は、関節の炎症障害、特に慢性関節リウマチである。別の好ましい実施形態において、この炎症障害は炎症性腸疾患（ＩＢＤ）である。さらなる好ましい実施形態において、この炎症障害は乾癬である。
【０１２８】
なお別の好ましい実施形態において、この医薬組成物は、アントラサイクリン新生物薬物で処置される癌患者の場合の、アントラサイクリン心毒性の予防及び／又は治療のためのものである。
【０１２９】
なお別の好ましい実施形態において、この医薬組成物は、ウイルス感染、原生動物感染及び酵母感染の予防及び／又は治療のためのものである。１つの好ましい実施形態において、このウイルス感染はレトロウイルス感染（例えば、ＨＩＶ−１）であり、この化合物は、任意選択で抗ウイルス剤と組み合わせて、ＡＩＤＳの処置において使用される。別の好ましい実施形態において、この原生動物感染は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍによって引き起こされるマラリアである。さらなる好ましい実施形態において、この酵母感染はＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ感染である。
【０１３０】
なお別の好ましい実施形態において、この医薬組成物は、神経変性疾患、神経変性障害又は神経変性状態のような加齢関連の疾患、障害又は状態の予防によって、加齢を遅延させるため及び／又は加齢プロセスを改善するためのものである。
【０１３１】
なお別の好ましい実施形態において、この医薬組成物は、加齢並びに／或いは日光及び／又はＵＶ光への曝露に関連する皮膚の加齢並びに／或いは皮膚損傷の予防及び／又は治療のためのものである。
【０１３２】
なお別の好ましい実施形態において、本発明は、加齢並びに／或いは日光及び／又はＵＶ光への曝露に関連する皮膚の加齢並びに／或いは皮膚損傷の予防及び／又は治療のための局所適用のための化粧品組成物を提供する。この化粧品組成物は、ローション又はクリームの形態であってもよく、皮膚処置のための他の薬剤と共に投与されてもよい。
【０１３３】
別の実施形態において、この鉄キレート剤は、心臓、肺又は腎臓のような移植が意図された器官の保存のためのｅｘ  ｖｉｖｏでの使用のためのものである。
【０１３４】
なお別の態様において、本発明は、有効量の本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩を鉄キレート化治療を必要とする個体に投与するステップを含む、鉄キレート化治療のための方法を提供する。
【０１３５】
１実施形態において、本発明は、神経変性疾患、神経変性状態又は神経変性障害の予防及び／治療のための方法を提供し、この方法は、有効量の本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩を、このような予防及び／又は治療を必要とする個体に投与するステップを含む。
【０１３６】
なお別の実施形態において、本発明は、癌の予防及び／又は治療のための方法を提供し、この方法は、有効量の本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩を、癌の予防及び／又は治療を必要とする個体に投与するステップを含む。１つの好ましい実施形態において、本発明の鉄キレート剤は、１種又は複数の化学療法剤の投与の前か、投与と同時にか、又は投与の後に投与される。
【０１３７】
別の実施形態において、本発明は、血色素症患者又はサラセミア患者における鉄過負荷の予防及び／又は治療のための方法を提供し、この方法は、有効量の本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩をこの患者に投与するステップを含む。
【０１３８】
なお別の好ましい実施形態において、本発明は、心血管疾患の予防及び／又は治療のため、例えば再灌流損傷におけるフリーラジカルの発生に関連する損傷を予防するための方法を提供し、この方法は、有効量の本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩を、心血管疾患の予防及び／又は治療を必要とする個体に投与するステップを含む。
【０１３９】
なお別の好ましい実施形態において、本発明は、糖尿病の予防及び／又は治療のための方法を提供し、この方法は、有効量の本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩を、糖尿病の予防及び／又は治療を必要とする個体に投与するステップを含む。
【０１４０】
なお別の好ましい実施形態において、本発明は、炎症障害の予防及び／又は治療のための方法を提供し、この方法は、有効量の本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩を、炎症障害の予防及び／又は治療を必要とする個体に投与するステップを含む。１つの好ましい実施形態において、この炎症障害は、関節の炎症障害、特に慢性関節リウマチである。別の好ましい実施形態において、この炎症障害は炎症性腸疾患（ＩＢＤ）である。さらなる好ましい実施形態において、この炎症障害は乾癬である。
【０１４１】
なお別の好ましい実施形態において、本発明は、アントラサイクリン心毒性の予防及び／又は治療のための方法を提供し、この方法は、有効量の本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩を、アントラサイクリン新生物薬物での処置を受ける個体に投与するステップを含む。
【０１４２】
なお別の好ましい実施形態において、本発明は、ウイルス感染、原生動物感染又は酵母感染の予防及び／又は治療のための方法を提供し、この方法は、有効量の本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩を、そのような予防及び／又は治療を必要とする個体に投与するステップを含む。１つの好ましい実施形態において、このウイルス感染はレトロウイルス感染（例えば、ＨＩＶ−１）であり、この化合物は、任意選択で抗ウイルス剤と組み合わせてＡＩＤＳの処置において使用される。別の好ましい実施形態において、この原生動物感染は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍによって引き起こされるマラリアである。さらなる好ましい実施形態において、この酵母感染はＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ感染である。
【０１４３】
なお別の好ましい実施形態において、本発明は、加齢関連の疾患、障害又は状態の予防によって、加齢を遅延させるため及び／又は加齢プロセスを改善するための方法を提供し、この方法は、有効量の本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩を、それを必要とする個体に投与するステップを含む。この個体は実際には、健康な個体又は神経変性疾患、神経変性障害若しくは神経変性状態のような加齢関連疾患に罹患した個体であり得る。
【０１４４】
なお別の好ましい実施形態において、本発明は、加齢並びに／或いは日光及び／又はＵＶ光への曝露に関連する皮膚の加齢並びに／或いは皮膚損傷の予防及び／又は治療のための方法を提供し、この方法は、有効量の本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩を、そのような予防及び／又は治療を必要とする個体に投与するステップを含む。この化合物は、最も好ましくは医薬製剤又は化粧品製剤中で局所投与される。
【０１４５】
本発明はまた、新生物疾患、血色素症、サラセミア、心血管疾患、糖尿病、炎症障害、アントラサイクリン心毒性、ウイルス感染、原生動物感染、酵母感染から選択される鉄過負荷及び酸化ストレスに関連する疾患、障害又は状態の治療及び／又は予防、加齢の遅延、並びに皮膚の加齢の予防及び／又は治療、並びに日光及び／又はＵＶ光に対する皮膚の保護のための医薬組成物の調製のための、化合物５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イルメチル］−８−ヒドロキシキノリン（本明細書中でＶＫ−２８と特定される、付録ＩＶ）の使用を提供する。
【０１４６】
本発明はさらに、鉄キレート化治療を必要とする個体に、神経変性疾患、神経変性状態又は神経変性障害の予防及び／又は治療を除く、鉄過負荷及び酸化ストレスに関連する疾患、障害又は状態の治療及び／又は予防のために、有効量の化合物５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イルメチル］−８−ヒドロキシキノリン（本明細書中でＶＫ−２８と特定される、付録ＩＶ）を投与するステップを含む、鉄キレート化治療のための方法を提供する。
【０１４７】
本発明はなおさらに、加齢並びに／或いは日光及び／又はＵＶ光への曝露に関連する皮膚の加齢並びに／或いは皮膚損傷の予防及び／又は治療のための局所適用のための化粧品組成物の調製のための、化合物５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イルメチル］−８−ヒドロキシキノリン（本明細書中でＶＫ−２８と特定される、付録ＩＶ）の使用を提供する。
【０１４８】
本発明はなおさらに、心臓、肺又は腎臓のような移植が意図された器官の保存のための、化合物５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イルメチル］−８−ヒドロキシキノリン（本明細書中でＶＫ−２８と特定される、付録ＩＶ）のｅｘ  ｖｉｖｏでの使用を提供する。
【０１４９】
本発明の医薬組成物を調製するために、当該分野で周知の方法が使用され得る。固体又は液体のいずれかである不活性な薬学的に許容される担体が使用され得る。固体形態の調製物には、粉末、錠剤、分散性顆粒、カプセル剤、カシェ剤及び坐剤が含まれる。
【０１５０】
固体担体は、希釈剤、香味剤、可溶化剤、滑沢剤、懸濁剤、結合剤又は錠剤崩壊剤としても作用し得る１種又は複数の物質であり得、カプセル化材料でもあり得る。
【０１５１】
液体の医薬組成物には、溶液、懸濁物及びエマルジョンが含まれる。例として、非経口注射のための水又は水−プロピレングリコール溶液が言及され得る。液体調製物はまた、ポリエチレングリコール水溶液中の溶液で製剤化され得る。経口使用のための水溶液は、活性成分を水中に溶解し、適切な色素、香味剤、安定剤及び増粘剤を所望に応じて添加することによって調製され得る。経口使用のための水性懸濁物は、微細に分割された活性成分を、粘性材料（すなわち、天然ゴム又は合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び他の周知の懸濁剤）と共に水中に分散させることによって作製され得る。
【０１５２】
好ましくは、この医薬組成物は、単位投薬形態で存在する。このような形態において、この調製物は、適切な量の活性成分を含む単位用量に細分される。この単位投薬形態は、包装された調製物であり得、この包装は、バイアル又はアンプル中に別個の量の調製物包装（例えば、包装された錠剤、カプセル剤及び粉末）を含む。この単位投薬形態はまた、それ自体カプセル剤、サシェ剤又は錠剤であり得るか、或いは適切な数の任意のこれらの包装形態であり得る。
【０１５３】
パーキンソン病の処置のための治療的使用において、本発明の薬学的方法において利用される化合物は、１日当たり１ｍｇ／Ｋｇ〜２０ｍｇ／Ｋｇの投薬レベルで患者に投与され得る。
【０１５４】
脳卒中の処置のための治療的使用において、体重１Ｋｇ当たり約１００ｍｇ〜約５００ｍｇの１つ又は複数の投薬が、脳卒中事象後可能な限り直ぐに患者に投与され得る。
【０１５５】
しかし、この投薬量は、患者の要求、処置される状態の重篤度及び使用される化合物に依存して変動し得る。特定の状況のために最適な投薬量の決定は、当業者の技術範囲内である。
【０１５６】
以下の実施例は、本発明に従う化合物を調製するための特定の方法を示す。これらの実施例は、本発明の範囲の例示として意図されるのであって、限定として意図されるものではない。
【０１５７】
（実施例）
以下の実施例は、本発明の化合物の合成（化学物質の項）及びそれらの生物学的活性（生物学の項）を記載する。
【０１５８】
（Ｉ．化学物質の項）
（ｉ）付録Ｉ〜ＶＩＩ
本発明の化合物の構造式は、本明細書中で付録Ｉ〜ＶＩ中に示される。付録ＶＩＩは、いくつかの中間体化合物の式を含む。以下の実施例における化合物のよりよい特定のために、可能である場合、本明細書中で使用される化合物の呼称及びそれぞれの付録は、化合物の名称の近傍の括弧内に与えられる。適切な場合、上記スキームＡ〜Ｄ中に与えられる呼称は、出発化合物又は中間体について使用される。
【０１５９】
付録の内容は以下の通りである：
付録Ｉ−化合物Ｍ６Ａ、Ｍ７Ａ、Ｍ８Ａ、Ｍ１８Ａ、Ｍ１９Ａ、Ｍ２０Ａ、Ｍ２１Ａ、Ｍ２２Ａ、Ｍ２７Ａ、Ｍ２８Ａ。
付録ＩＩ−化合物Ｍ６、Ｍ７、Ｍ８、Ｍ１１、Ｍ１２、Ｍ１８、Ｍ１９、Ｍ２０、Ｍ２１、Ｍ２２、Ｍ２７、Ｍ２８。
付録ＩＩＩ−化合物ＨＬＡ１６ａ、ＨＬＡ２０、Ｍ９ａ、Ｍ１０ａ、Ｍ１１ａ、Ｍ１２ａ、Ｍ１３ａ、Ｍ１５ａ、Ｍ１７、Ｍ３０、Ｍ３１、Ｍ３３、Ｍ３４。
付録ＩＶ−化合物ＶＫ−２８（公知）、ＨＬＡ１６、ＨＬＭ７、ＨＬＭ８、ＨＬＭ９、Ｍ９、Ｍ１０、Ｍ１１Ｂ、Ｍ１２Ｂ、Ｍ１３、Ｍ１５、Ｍ３２。
付録Ｖ−化合物Ｍ６Ｂ、Ｍ７Ｂ、Ｍ８Ｂ、Ｍ１８Ｂ、Ｍ１９Ｂ、Ｍ２０Ｂ、Ｍ２１Ｂ、Ｍ２２Ｂ、Ｍ２７Ｂ、Ｍ２８Ｂ、Ｍ３５、Ｍ３６、Ｍ３６ａ、Ｍ３７〜４６。
付録ＶＩ−化合物Ｍ９ｂ、Ｍ１１ｂ、Ｍ１２ｂ、Ｍ１３ｂ、Ｍ１５ｂ、ＨＬＡ１６ｂ、Ｍ１７ａ、ＨＬＡ２０ａ、Ｍ３０ａ、Ｍ３１ａ、Ｍ３３ａ、Ｍ３４ｂ。
付録ＶＩＩ−中間体Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ４、Ｈ５、Ｈ６。
【０１６０】
（ｉｉ）概説
化学合成のための出発物質を、以下の会社から得た：Ａｌｄｒｉｃｈ（ＵＳＡ）、Ｅ．Ｍｅｒｃｋ（Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｆｌｕｋａ（Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）。
【０１６１】
陽子ＮＭＲスペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ  ＷＨ−２７０  ＮＭＲ分光計、Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＰＸ−２５０  ＮＭＲ分光計又はＢｒｕｋｅｒ  ＡＭＸ−４００  ＮＭＲ分光計で測定した。フラッシュカラムクロマトグラフィー分離を、シリカゲルＭｅｒｃｋ  ６０（２３０〜４００メッシュのＡＳＴＭ）で実施した。ＵＶ／ＶＩＳスペクトルを、Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ  ８４５０Ａダイオードアレイ分光光度計で測定した。ＴＬＣを、Ｅ．Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０Ｆ２５４プレートで実施した。ＴＬＣプレートの染色を、以下によって実施した：（ｉ）塩基性水性１％  ＫＭｎＯ４；（ｉｉ）ＥｔＯＨａｂｓ中０．３％のニンヒドリン。テトラヒドロフランをＬｉＡｌＨ４上で蒸留し、Ａｌ２Ｏ３カラムを通過させた。質量スペクトル（ＤＩ、ＥＩ−ＭＳ）を、ＶＧ−ｐｌａｔｆｏｒｍ−ＩＩエレクトロスプレー単一四極子質量分析計（Ｍｉｃｒｏ  Ｍａｓｓ、ＵＫ）で測定した。
【実施例１】
【０１６２】
Ｄ−Ｎ−プロパルギル−３−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル）アラニン（Ｍ９ａ、付録ＩＩＩ）及びＬ−Ｎ−プロパルギル−３−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル）アラニン（Ｍ１０ａ、付録ＩＩＩ）の合成。
【０１６３】
本明細書中の式ＩＩのこれらの鏡像異性体を、以下のステップによって、上記スキームＢ中に示される方法によって調製した：
（ｉ）５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリノリン（ｈｙｄｒｏｘｙｑｕｉｎｏｌｉｎｏｌｉｎｅ）（Ａ２）の合成。
【０１６４】
１４．６ｇ（０．１ｍｏｌｅ）の８−ヒドロキシキノリノリン、１６ｍｌの３２％塩酸及び１６ｍｌ（０．１ｍｌ）の３７％ホルムアルデヒドの混合物を、０℃で塩化水素ガスで６時間処理した。この溶液を、攪拌せずに室温で２時間静置させた。黄色固体をフィルタ上で収集して乾燥させて、粗製５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリンヒドロクロリド（Ａ２）を得た：２．１６ｇ；
2011079834.tif 000029
【０１６５】
（ｉｉ）８−（５−クロロメチル）キノリルアセテート（Ｂ３）の合成。
【０１６６】
乾燥ＤＭＦ（５ｍｌ）中の上記ステップ（ｉ）で得た粗製Ａ２（２３０ｍｇ、１ｍｍｏｌｅ）の攪拌溶液に、０℃でピリジン（０．３ｍｌ、２．５ｍｍｏｌ）及び塩化アセチル（０．６ｍｌ、８ｍｍｏｌｅ）を、Ｎ２下で同時にゆっくりと添加した。この反応混合物を０℃で１時間攪拌し、室温で１時間攪拌した。０℃に冷却した後、１０ｍｌの水を添加し、得られた混合物を０℃で２０分間攪拌した。次いで、この混合物をクロロホルム（３×２０ｍｌ）で抽出した。合せた有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３（２×２０ｍｌ）、ブライン（２×２０ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。エバポレーションにより、化合物（Ｂ３）（粗製）（１８０ｍｇ、７５％）を黄褐色固体として得た。ｍ．ｐ．＝１１９〜１２０℃、Ｒｆ０．７５（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ：ＮＨ３  ９：１：０．２５）。
2011079834.tif 000030
【０１６７】
（ｉｉｉ）ジエチル８−ヒドロキシキノリン−５−イル−メチル−アセトアミドマロネート（ＨＬＭ７、付録ＩＶ）の合成。
【０１６８】
エタノール（５０ｍｌ）中のアセトアミドマロネート（１８３ｍｇ、０．８４２ｍｍｏｌ）及び金属ナトリウム（３４ｍｇ、０．８４２ｍｍｏｌｅ）の溶液に、ＣＨＣｌ３（５ｍｌ）中の８−（５−クロロメチル）キノリルアセテート（Ｂ３）（１８０ｍｇ、７６５ｍｍｏｌｅ）を添加した。この混合物を還流下で５時間攪拌し、冷却し、減圧下でエバポレートした。水（２０ｍｌ）を残渣に添加し、この混合物をＣＨＣｌ３：ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍｌ、１：１）で抽出した。有機層をブライン（２×２０ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。エバポレーションにより、表題化合物（ＨＬＭ７）：（１７０ｍｇ、５９％）を黄褐色固体（粗製）として得た。ｍ．ｐ．＝１５３〜１５４℃、Ｒｆ０．２５（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ：ＮＨ３  ９：１：０．２５）。
2011079834.tif 000031
【０１６９】
（ｉｖ）ＤＬ−３−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル）アラニン（ＨＬＭ８、付録ＩＶ）の合成。
【０１７０】
上記（ｉｉｉ）で得たジエチル（８−ヒドロキシキノリン−５−イル−メチル）−アセトアミドマロネート（ＨＬＭ７）（８．９ｇ、２１．９ｍｍｏｌ）を、６Ｎ  ＨＣｌ（１５０ｍｌ）中に溶解し、得られた混合物を１０時間還流した。この反応混合物を乾燥するまでエバポレートし、溶媒を減圧下で除去した。残渣をＨ２Ｏ中に再度溶解して濾過した。この溶液のｐＨを１０％ＮａＯＨで５〜５．５の間に調整した。黄色沈殿物を濾過によって収集し、水で完全に洗浄し、水（ｐＨ＝５．５）から再結晶化し、次いでアセトンで洗浄して表題化合物（ＨＬＭ８）（３．８ｇ、収率６５％）、純度１００％を得て、ＨＰＬＣ［（Ｃ１８；溶媒Ａ＝水、０．１％  ｖ／ｖ  ＴＦＡ；溶媒Ｂ＝ＭｅＣＮ：水＝３：１、０．１％  ｖ／ｖ  ＴＦＡ；ｔＲ＝１８．２分（５５分間にわたり直線勾配０〜８０％のＢ）］によってチェックした。ｍ．ｐ．＝１９４℃（分解）。
2011079834.tif 000032
【０１７１】
（ｖ）ＤＬ−３−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル）アラニンエチルエステル（ＨＬＭ９、付録ＩＶ）の合成。
【０１７２】
無水エタノール（２６ｍｌ）中のＤＬ−３−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル）アラニン（ＨＬＭ８）（２．１９ｇ、７．０４ｍｍｏｌ）の攪拌スラリーに、０℃で、ＣａＣｌ２チューブによってＮ２中で大気の湿気から保護して、塩化チオニルを滴下した（１．１ｍｌ、１４．１ｍｍｏｌ）。この反応混合物を０℃で３０分間攪拌し、室温で３０分間攪拌し、次いで一晩還流した。この溶液を減圧下で乾燥するまでエバポレートした。その残渣を無水エタノール中に溶解し、乾燥するまで再度エバポレートした。エステル化の完了を確実にするために、全操作を反復した。エステルＨＬＭ９（黄色固体、１．６７ｇ、収率９２％）（これは、ＨＰＬＣによって約１％の遊離アミノ酸を含むことが示された）を、ＦＣ（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ：ＡｃＯＨ  ９：１．５：１．５）によってさらに精製した。
2011079834.tif 000033
【０１７３】
（ｖｉ）Ｌ−３−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル）アラニン（Ｍ１０、付録ＩＶ）及びＤ−３−（８−ヒドロキシ−キノリン−５−イル）アラニンエチルエステル（Ｂ７、スキームＢ）の合成。
【０１７４】
上記１（ｖ）で得たＤＬ−３−（８−ヒドロキシ−キノリン−５−イル）アラニンエチルエステル（ＨＬＭ９）（８９．２ｍｇ）を、５ｍｌの水中に溶解し、この溶液のｐＨを、０．２ＭのＮａＯＨで約６．４に調整し、α−キモトリプシン（０．９ｍｇ）を添加し、ｐＨを０．２ＭのＮａＯＨの添加によって一定に維持しながら、この混合物を室温で６時間インキュベートした。消化後、この混合物を乾燥するまで凍結乾燥し、半調製的ＨＰＬＣ［Ｃ１８；溶媒Ａ＝水、０．１％  ｖ／ｖ  ＴＦＡ；溶媒Ｂ＝ＭｅＣＮ：水＝３：１、０．１％  ｖ／ｖ  ＴＦＡ；ｔＲ＝１８．０分（５５分間にわたり直線勾配０〜８０％のＢ）］によって分離した。α−キモトリプシンはＬ形態に特異的なので、Ｌ−３−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル）アラニン（Ｍ１０）が得られた：２７．６ｍｇ、３５％、純度１００％、［α］Ｄ２０＝＋１３．５（Ｄ−３−（８−ヒドロキシ−キノリン−５−イル）アラニンエチルエステル（Ｂ７）を回収した：３９．２ｍｇ、８８％の回収）。
2011079834.tif 000034
【０１７５】
（ｖｉｉ）Ｄ−３−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル）アラニン（Ｍ９、付録ＩＶ）の合成。
【０１７６】
エチルエステルの加水分解のために、３３．４ｍｇのステップ１（ｖｉ）で回収したＤ−３−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル）アラニンエチルエステル（Ｂ７）を、１１ｍｌの０．２Ｍ  ＮａＯＨ中に溶解し、この溶液を室温で６時間攪拌した。その水を凍結乾燥によって除去し、生成物を半調製的ＨＰＬＣ［（Ｃ１８；溶媒Ａ＝水、０．１％  ｖ／ｖ  ＴＦＡ；溶媒Ｂ＝ＭｅＣＮ：水＝３：１、０．１％  ｖ／ｖ  ＴＦＡ；ｔＲ＝１８．４分（５５分間にわたり直線勾配０〜８０％のＢ）］によって精製して、表題化合物Ｍ９を得た：２６．８ｍｇ、８９％、純度９９．１％。［α］Ｄ２０＝−１０．３。
2011079834.tif 000035
【０１７７】
（ｖｉｉｉ）Ｄ−Ｎ−プロパルギル−３−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル）アラニン（Ｍ９ａ、付録ＩＩＩ）の合成。
【化２２】
2011079834.tif 000036
【０１７８】
ＮａＨＣＯ３（１７ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）及び上記ステップ（ｖｉｉ）からの化合物Ｍ９（２３．２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）の混合物を、５ｍｌのＤＭＳＯ中に溶解し、この溶液を室温で２時間攪拌した。この溶液に、臭化プロパルギル（１１．９ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加し、この溶液を室温で２４時間攪拌した。溶媒を減圧によって除去し、粗製生成物を、半調製的ＨＰＬＣ［（Ｃ１８；溶媒Ａ＝水、０．１％  ｖ／ｖ  ＴＦＡ；溶媒Ｂ＝ＭｅＣＮ：水＝３：１、０．１％  ｖ／ｖ  ＴＦＡ；ｔＲ＝２２．４分（５５分間にわたって直線勾配０〜８０％のＢ）］によって精製して、表題化合物Ｍ９ａを得た：１９ｍｇ、収率７０％。［α］Ｄ２０＝−１２．３。
2011079834.tif 000037
【０１７９】
（ｉｘ）Ｌ−Ｎ−プロパルギル−３−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル）アラニン（Ｍ１０ａ、付録ＩＩＩ）の合成。
【化２３】
2011079834.tif 000038
【０１８０】
表題化合物を、上記ステップ（ｖｉｉｉ）の手順を使用して合成した。収率７８％。［α］Ｄ２０＝＋１５．３。
2011079834.tif 000039
【実施例２】
【０１８１】
５−（４−プロパルギルピペラジン−１−イルメチル）−８−ヒドロキシ−キノリン（ＨＬＡ２０、付録ＩＩＩ）の合成。
【０１８２】
表題化合物を、Ｎ−プロパルギルピペラジンとの５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリノリン（Ａ２）の反応によって以下のように調製した：
（ｉ）ｔｅｒｔ−ブチル１−ピペラジンカルボキシレート（Ｄ５、スキームＤ）の合成。
【０１８３】
ＭｅＯＨ（２５ｍｌ）中のジ（ｔｅｒｔ−ブチル）ジカーボネート（２．９３ｇ、１２．７７ｍｍｏｌｅ）の溶液を、ＭｅＯＨ（５０ｍｌ）中のピペラジン（２．００ｇ、２３．２２ｍｍｏｌｅ）の攪拌溶液に０℃でゆっくりと添加した。次いでこの混合物を室温で２日間攪拌し、溶媒を減圧下で除去した。粗製固体を温めながらＥｔ２Ｏ（１００ｍｌ）中に再度溶解し、白色沈殿物を濾過して除いた。その生成物を、１Ｍクエン酸溶液（３×５０ｍｌ）を用いて母液から抽出し、その水層をＥｔ２ＯＡｃ（３×５０ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＣＯ３（ｐＨ１１）で塩基性化し、Ｅｔ２ＯＡｃ（３×５０ｍｌ）で抽出した。その有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させて、減圧下でエバポレートし、蝋状の白色固体としてｔｅｒｔ−ブチル１−ピペラジンカルボキシレート（Ｄ５）を得た（粗製、１．５７ｇ、６６％）、ｍｐ＝５３〜４５℃。
2011079834.tif 000040
【０１８４】
（ｉｉ）ｔｅｒｔ−ブチル４−プロパルギルピペラジン−１−カルボキシレート（Ｄ６、スキームＤ）の合成。
【０１８５】
臭化プロパルギル（３５６．９ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を、ＣＨＣｌ３（２５ｍｌ）中の上記ステップ２（ｉ）で得たｔｅｒｔ−ブチル１−ピペラジンカルボキシレート（５５８．８ｍｇ、３ｍｍｏｌｅ）及びジイソプロピルエチルアミン（４０７．１ｍｇ、３．１５ｍｍｏｌ）の混合物に、０℃でゆっくりと添加した。この混合物を室温で２４時間攪拌した。次いで５０ｍｌのＣＨＣｌ３を添加し、この溶液を５％  ＮａＨＣＯ３（３×５０ｍｌ）、ブライン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。この溶液を濾過し、乾燥するまでエバポレートした。その残渣をベンゼン−ヘキサン（１：１）の混合物から結晶化して、ｔｅｒｔ−ブチル４−プロパルギルピペラジン−１−カルボキシレート（Ｄ６）（粗製３３７ｍｇ、８６％）を得た。
2011079834.tif 000041
【０１８６】
（ｉｉｉ）Ｎ−プロパルギルピペラジン（Ｄ７、スキームＤ）の合成。
【０１８７】
上記ステップ２（ｉｉ）のｔｅｒｔ−ブチル４−プロパルギルピペラジン−１−カルボキシレート（５７０ｍｇ、２．５４５ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１０ｍｌ）及び水（２．５ｍｌ）中に溶解した。次いでこの混合物を室温で一晩攪拌した。この溶液を、減圧下で乾燥するまでエバポレートした。その残渣を水（１０ｍｌ）中に溶解し、次いでＮａ２ＣＯ３（ｐＨ１１）で塩基性化し、Ｅｔ２ＯＡｃ（３×５０ｍｌ）で抽出した。その有機層をブライン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で一晩乾燥させた。減圧下でのエバポレーションにより、白色固体としてＮ−プロパルギルピペラジン（Ｄ７）（粗製、１９３ｍｇ、収率６２％）を得た。
2011079834.tif 000042
【０１８８】
（ｉｖ）５−（４−プロパルギルピペラジン−１−イルメチル）−８−ヒドロキシキノリン（ＨＬＡ２０、付録ＩＩＩ）の合成。
【０１８９】
６ｍｌのＣＨＣｌ３中の５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリンヒドロクロリド（Ａ２）（３２３ｍｇ、１．４０７ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．２６ｍｌ、１．４７７ｍｍｏｌ、１．０５当量）の混合物に、０℃で上記ステップ２（ｉｉｉ）で得たＮ−プロパルギルピペラジン（１７３ｍｇ、１．４０７ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。この混合物を室温で２４時間攪拌した。次いで１０ｍｌのＣＨＣｌ３を添加し、この溶液を５％  ＮａＨＣＯ３（３×５０ｍｌ）、ブライン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。粗製生成物をＦＣによって精製して、表題化合物（ＨＬＡ２０）を白色固体として得た（３３７ｍｇ、収率８６％）。
2011079834.tif 000043
【実施例３】
【０１９０】
５−（４−プロパルギルアミノエトキシカルボニル−ピペラジン−１−イルメチル）−８−ヒドロキシキノリン（ＨＬＡ１６ａ、付録ＩＩＩ）の合成。
【０１９１】
（ｉ）エチル４−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−１−ピペラジンカルボキシレート（ＨＬＡ１６、付録ＩＶ）の合成。
【０１９２】
５０ｍｌのＣＨＣｌ３中の５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリンヒドロクロリド（Ａ２）（２．３６ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（３．６ｍｌ、２０．４ｍｍｏｌ、２当量）の混合物に、０℃でエチル１−ピペラジンカルボキシレート（１．５ｍｌ、１０．２ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。この混合物を室温で２４時間攪拌し、次いで１００ｍｌのＣＨＣｌ３を添加し、この溶液を５％  ＮａＨＣＯ３（３×５０ｍｌ）、ブライン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。この溶液を濾過し、乾燥するまでエバポレートした。その残渣をベンゼン−ヘキサン（１：１）の混合物から結晶化して、表題化合物ＨＬＡ１６を白色固体として得た（１．３８ｇ、収率４２％、ｍ．ｐ．＝９２〜９３℃）。
2011079834.tif 000044
【０１９３】
（ｉｉ）代替的な方法において、表題化合物ＨＬＡ１６ａを、Ｎ−プロパルギルアミノエトキシカルボニル−ピペラジンとの５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリンの反応によって以下のように調製する：
（ｉｉａ）Ｎ−プロパルギルアミノエトキシカルボニルピペラジン（Ｈ１、付録ＶＩＩ）の合成。
【化２４】
2011079834.tif 000045
【０１９４】
２−クロロエチルクロロホルメート（４２９ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を、ＣＨＣｌ３（２５ｍｌ）中の実施例２のステップ（ｉｉ）のように得たｔｅｒｔ−ブチル１−ピペラジンカルボキシレート（５５９ｍｇ、３ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（４０７ｍｇ、３．１５ｍｍｏｌ）の混合物に０℃でゆっくりと添加した。この混合物を室温で２４時間攪拌した。次いでＣＨＣｌ３（５０ｍｌ）を添加し、この溶液を５％  ＮａＨＣＯ３（３×５０ｍｌ）、ブライン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。この溶液を濾過し、乾燥するまでエバポレートした。その残渣を室温でＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍｌ）中に溶解し、プロパルギルアミン（０．２０５ｍｌ、１６５ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を添加した。室温で２４時間の攪拌後、溶媒を減圧によって除去し、その残渣に２０ｍｌのＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＴＥＳ：チオアニソール（８５：５：５：５）の溶液を添加した。次いで、この混合物を室温で２時間攪拌した。この溶液を減圧下で乾燥するまでエバポレートした。得られた残渣を水（１０ｍｌ）中に溶解し、次いでＮａ２ＣＯ３（ｐＨ１１）で塩基性化し、Ｅｔ２ＯＡｃ（３×５０ｍｌ）で抽出した。その有機層をブライン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で一晩乾燥させた。減圧下でのエバポレーションにより、表題化合物Ｈ１を得た：（２５１ｍｇ、総収率４０％）。
2011079834.tif 000046
【０１９５】
（ｉｉｂ）５−（４−プロパルギルアミノエトキシカルボニル−ピペラジン−１−イルメチル）−８−ヒドロキシキノリン（ＨＬＡ１６ａ、付録ＩＩＩ）の合成。
【化２５】
2011079834.tif 000047
【０１９６】
５ｍｌのＣＨＣｌ３中の５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリンヒドロクロリド（Ａ２）（１９４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．３４８ｍｌ、２ｍｍｏｌ、２当量）の混合物に、室温でＨ１（２２１ｍｇ、１ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。この混合物を室温で２４時間攪拌した。次いで１０ｍｌのＣＨＣｌ３を添加し、この溶液を５％  ＮａＨＣＯ３（３×１０ｍｌ）、ブライン（２×１０ｍｌ）で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。この溶液を濾過し、乾燥するまでエバポレートした。その残渣をトルエン−ヘキサン（１：１）の混合物から結晶化して、表題化合物ＨＬＡ１６ａを白色固体として得た（１８４ｍｇ、収率５０％）。
2011079834.tif 000048
【実施例４】
【０１９７】
Ｎ−プロパルギルＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｌ−システイン（Ｍ１２ａ、付録ＩＩＩ）及びＮ−プロパルギルＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｄ−システイン（Ｍ１１ａ、付録ＩＩＩ）の合成。
【０１９８】
これらの表題化合物を、本明細書中で上記したスキームＢ中に示される第一の経路に従って調製した。
【０１９９】
（ｉ）Ｓ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｌ−システイン（Ｍ１２、付録ＩＩ）の合成。
【０２００】
Ｌ−システインヒドロクロリド水和物（３７ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＳＯ（３ｍｌ）中に溶解した。この溶液に粉末化したＫＯＨ（３６ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を室温で３０分間攪拌した。次いで、粉末化した５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリンヒドロクロリド（Ａ２）（６５ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を添加した。この懸濁物を室温で１２時間攪拌し、２Ｎ  ＨＣｌを添加し、ｐＨを５に調整した。その沈殿物を水及びアセトンで洗浄した。粗製生成物を、半調製的ＨＰＬＣによってさらに精製して、化合物Ｍ１２を得た：５３ｍｇ（６１％）。ＨＰＬＣ（ｔＲ）：３８．１分（直線勾配：最初の４分間にわたり５０％のＢ、６０分間にわたり１００％のＢまで直線的に増大）［α］Ｄ２０＝＋２０．５°（ｃ＝１．０、Ｈ２Ｏ）；
2011079834.tif 000049
【０２０１】
（ｉｉ）Ｓ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｄ−システイン（Ｍ１１、付録ＩＩ）の合成。
【０２０２】
化合物Ｍ１１を、Ｍ１２について上記した４（ｉ）に記載される方法と同様に調製したが、出発物質としてＬ−システインの代わりにＤ−システインを使用した。
2011079834.tif 000050
【０２０３】
（ｉｉｉ）Ｎ−プロパルギルＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｌ−システイン（Ｍ１２ａ、付録ＩＩＩ）の合成。
【化２６】
2011079834.tif 000051
【０２０４】
５ｍｌのＤＭＳＯ中のＮａＨＣＯ３（３４ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）及び化合物Ｍ１２（５４ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）の攪拌混合物に、臭化プロパルギル（２４ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加し、この溶液を室温で２４時間攪拌した。溶媒を減圧によって除去し、粗製生成物を結晶化し（ｐＨ５．５）、次いで半調製的ＨＰＬＣ［（Ｃ１８；溶媒Ａ＝水、０．１％  ｖ／ｖ  ＴＦＡ；溶媒Ｂ＝ＣＨ３ＣＮ：水＝３：１、０．１％  ｖ／ｖ  ＴＦＡ；ｔＲ＝２４．４分（５５分間にわたり直線勾配０〜８０％のＢ）］によってさらに精製して、表題化合物Ｍ１２ａを得た：３７ｍｇ、収率６０％。［α］Ｄ２０＝−１６．３（ｃ＝１．０、０．１Ｎ  ＨＣｌ）。質量分析：Ｃ１６Ｈ１６Ｎ２Ｏ３Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝３１７．３８、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝３１７．３０。
2011079834.tif 000052
【０２０５】
（ｉｖ）Ｎ−プロパルギルＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｄ−システイン（Ｍ１１ａ、付録ＩＩＩ）の合成。
【化２７】
2011079834.tif 000053
【０２０６】
表題化合物Ｍ１１ａを、Ｍ１２ａについての手順に従って調製したが、出発物質としてＭ１２の代わりにＭ１１を使用した。収率７０％。［α］Ｄ２０＝−１８．３（ｃ＝１．０、０．１Ｎ  ＨＣｌ）。質量分析：Ｃ１６Ｈ１６Ｎ２Ｏ３Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝３１７．３８、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝３１７．３１。
2011079834.tif 000054
【実施例５】
【０２０７】
Ｎ−プロパルギルＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｌ−システイン（Ｍ１２ａ、付録ＩＩＩ）及びＮ−プロパルギルＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｄ−システイン（Ｍ１１ａ、付録ＩＩＩ）の合成−方法Ｂ。
【０２０８】
これらの表題化合物は、化合物Ｍ１１及びＭ１２のＮ−９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｎ−Ｆｍｏｃ）誘導体の調製、Ｆｍｏｃ保護基の除去及び臭化プロパルギルとの反応からなる別の方法によって調製し得る。
【０２０９】
（ｉ）Ｎ−９−Ｆｍｏｃ−Ｓ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｌ−システイン（Ｍ１１Ｂ、付録ＩＶ）の合成。
【０２１０】
実施例４（ｉ）で得た粗製化合物Ｍ１１（２７．５ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を、１０％  ＮａＣＯ３（１２ｍｌ）中に溶解した。この溶液を攪拌し、そのｐＨを小部分の１０％  ＮａＣＯ３を使用して約８に調整した。この溶液に、ジオキサン（２ｍｌ）中の（９−フルオレニルメチル）スクシンイミジルカーボネート（３６．６ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、１．１当量）を滴下した。この反応混合物を室温で１２時間攪拌した。ジオキサンを室温で減圧下でエバポレートし、その水相をＥｔ２Ｏ（３×３０ｍｌ）で抽出した。この水相を１０％  ＫＨＳＯ４でｐＨ２〜３に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（３×３０ｍｌ）で抽出した。合せたＥｔＯＡｃ部分をＮａＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。その残渣を、半調製的ＨＰＬＣによってさらに精製して、表題化合物を得た：２６ｍｇ（５０％）。ＨＰＬＣ（ｔＲ）：３８．１分（直線勾配：最初の４分間にわたって５０％のＢ、６０分間で１００％のＢまで直線的に増大）。
2011079834.tif 000055
【０２１１】
（ｉｉ）Ｎ−９−Ｆｍｏｃ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｄ−システイン（Ｍ１２Ｂ、付録ＩＶ）の合成。
【０２１２】
化合物Ｍ１２Ｂを、適切な出発物質を使用して、上記ステップ５（ｉ）に記載されるような化合物Ｍ１１Ｂを合成するための方法によって調製した。
2011079834.tif 000056
【０２１３】
（ｉｉｉ）Ｎ−プロパルギルＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｌ−システイン（Ｍ１２ａ、付録ＩＩＩ）の合成。
【０２１４】
表題化合物を、化合物Ｍ１２ＢからのＦｍｏｃ基の除去及び臭化プロパルギルとのその反応によって得る。
【０２１５】
（ｉｖ）Ｎ−プロパルギルＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｄ−システイン（Ｍ１１ａ、付録ＩＩＩ）の合成。
【０２１６】
この化合物を、化合物Ｍ１１ＢからのＦｍｏｃ基の除去及び臭化プロパルギルとのその反応によって得る。
【実施例６】
【０２１７】
Ｎ−（４−プロパルギルピペラジン−１−イルエチル）−２−メチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン（ＨＬＡ２０ａ、付録ＶＩ）の合成。
【０２１８】
表題化合物を、Ｎ−（２−クロロエチル）−２−メチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン（Ｈ２、付録ＶＩＩ）（Ｂｉｊａｙａ  Ｌ．Ｒａｉ、Ｌｏｔｆｏｌｌａｈ  Ｄｅｋｈｏｒｄｉ、Ｈｉｃｈａｍ  Ｋｈｏｄｒ、Ｙｉ  Ｊｉｎ、Ｚｕｄｏｎｇ  Ｌｉｕ及びＲｏｂｅｒｔ  Ｃ．ＨｉｄｅｒのＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９８、４１、３３４７−３３５９に記載されるように調製した）のＮ−プロパルギルピペラジン（実施例２のステップ（ｉｉｉ）と同様に得た）との反応によって、スキームＤに記載されるように調製した：
【化２８】
2011079834.tif 000057
【０２１９】
６ｍｌのＣＨＣｌ３中のＨ２（３７５ｍｇ、２ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．３５２ｍｌ、２ｍｍｏｌ、１当量）の混合物に、０℃でＮ−プロパルギルピペラジン（２４５ｍｇ、２ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。次いで、この混合物を室温で２４時間攪拌した。ＣＨＣｌ３（１０ｍｌ）を添加し、この溶液を５％  ＮａＨＣＯ３（３×５０ｍｌ）、ブライン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。粗製生成物をＦＣによって精製して、表題化合物ＨＬＡ２０ａを得た：３３７ｍｇ、収率６０％。
2011079834.tif 000058
【実施例７】
【０２２０】
Ｎ−（Ｎ−メチル−プロパルギルアミノエチル））−２−メチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン（Ｍ３０ａ、付録ＶＩ）の合成。
【０２２１】
表題化合物を、Ｈ２と、出発物質としてのＮ−プロパルギルピペラジンの代わりのＮ−メチル−プロパルギルアミンとの反応によって、スキームＤに記載されるように調製した：
【化２９】
2011079834.tif 000059
【０２２２】
ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍｌ）中のＮ−メチル−プロパルギルアミンヒドロクロリド（２１２ｍｇ、２ｍｍｏｌｅ）の溶液を、６ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２中のＨ２（３７５ｍｇ、２ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．３５２ｍｌ、２ｍｍｏｌ、１当量）の攪拌溶液に０℃でゆっくりと添加した。次いで、この混合物を室温で一晩攪拌し、その溶媒を減圧下で除去した。粗製固体を１０ｍｌのＣＨＣｌ３中に再度溶解し、次いで５％  ＮａＨＣＯ３（３×３０ｍｌ）、ブライン（２×２０ｍｌ）で洗浄した。その有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下でエバポレートして表題化合物Ｍ３０ａを得た。
2011079834.tif 000060
【実施例８】
【０２２３】
Ｎ−（４−プロパルギルアミノエトキシカルボニル−ピペラジン−１−イルメチル））−２−メチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン（ＨＬＡ１６ｂ、付録ＶＩ）の合成。
【化３０】
2011079834.tif 000061
【０２２４】
表題化合物ＨＬＡ１６ｂを、実施例７中のＭ３０ａについての手順に従って合成したが、出発物質としてＮ−メチルプロパルギルアミンの代わりにＮ−プロパルギルアミノエトキシカルボニルピペラジン（Ｈ１）を使用した。収率６４％。
2011079834.tif 000062
【実施例９】
【０２２５】
Ｎ−プロパルギル−Ｓ−（２−メチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン−１−イルエチル）−Ｌ−システイン（Ｍ１２ｂ、付録ＶＩ）及びＮ−プロパルギル−Ｓ−（２−メチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン−１−イルエチル）−Ｄ−システイン（Ｍ１１ｂ、付録ＶＩ）の合成。
【０２２６】
表題化合物を、Ｄ１のシステインとの反応、及び得られたＤ２の臭化プロパルギルとのさらなる反応によって、本明細書中で上記したスキームＤ中に示された第一の経路に従って以下のように調製した：
【０２２７】
（ｉ）Ｓ−（２−メチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン−１−イルエチル）−Ｌ−システイン（Ｌ−Ｈ３、付録ＶＩＩ）の合成。
【化３１】
2011079834.tif 000063
【０２２８】
Ｌ−システインヒドロクロリド水和物（３７ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＳＯ（３ｍｌ）中に溶解した。この溶液に粉末化したＫＯＨ（３６ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を室温で３０分間攪拌した。次いで、ＤＭＳＯ中のＨ２（６４ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を添加した。室温で２４時間の攪拌後、２Ｎ  ＨＣｌをこの反応混合物に添加し、そのｐＨを５．５に調整した。その沈殿物を水及びアセトンで洗浄した。粗製生成物を、半調製的ＨＰＬＣによってさらに精製して、表題化合物Ｌ−Ｈ３を得た：６４ｍｇ（７０％）。ＨＰＬＣ（ｔＲ）：３２．１分（直線勾配：最初の４分間にわたって５０％のＢ、６０分間で１００％のＢまで直線的に増大）［α］Ｄ２０＝−２０．５°（ｃ＝１．０、Ｈ２Ｏ）。
2011079834.tif 000064
【０２２９】
（ｉｉ）Ｎ−プロパルギル−Ｓ−（２−メチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン−１−イルエチル）−Ｌ−システイン（Ｍ１２ｂ、付録ＶＩ）の合成。
【化３２】
2011079834.tif 000065
【０２３０】
ＮａＨＣＯ３（３４ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）及びＬ−Ｈ３（７５ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）の混合物を、５ｍｌのＤＭＳＯ中に溶解し、この溶液を室温で２時間攪拌した。この溶液に、臭化プロパルギル（２４ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加し、この溶液を室温で２４時間攪拌した。溶媒を減圧によって除去し、粗製生成物を水（ｐＨ５．５）中で結晶化し、半調製的ＨＰＬＣ［（Ｃ１８；溶媒Ａ＝水、０．１％  ｖ／ｖ  ＴＦＡ；溶媒Ｂ＝ＣＨ３ＣＮ：水＝３：１、０．１％  ｖ／ｖ  ＴＦＡ；ｔＲ＝２０．４分（５５分間にわたり直線勾配０〜８０％のＢ）］によってさらに精製して、表題化合物Ｍ１２ｂを得た：３７ｍｇ、収率６０％。［α］Ｄ２０＝−１６．３。
2011079834.tif 000066
【０２３１】
（ｉｉｉ）Ｓ−（２−メチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン−１−イルエチル）−Ｄ−システイン（Ｄ−Ｈ３、付録ＶＩＩ）の合成。
【化３３】
2011079834.tif 000067
【０２３２】
表題化合物を、Ｌ−Ｈ３についての手順に従って調製したが、出発物質としてＬ−システインの代わりにＤ−システインを使用した。収率７１％。ＨＰＬＣ（ｔＲ）：３２．１分（直線勾配：最初の４分間にわたり５０％のＢ、６０分間で１００％のＢまで直線的に増大）［α］Ｄ２０＝＋１９．５°（ｃ＝１．０、Ｈ２Ｏ）。
2011079834.tif 000068
【０２３３】
（ｉｖ）Ｎ−プロパルギルＳ−（２−メチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン−１−イルエチル）−Ｄ−システイン（Ｍ１１ｂ、付録ＶＩ）の合成。
【化３４】
2011079834.tif 000069
【０２３４】
表題化合物Ｍ１１ｂを、Ｍ１２ｂについての手順に従って合成したが、出発化合物としてＳ−（２−メチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン−１−イルエチル）−Ｌ−システインの代わりにＳ−（２−メチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン−１−イルエチル）−Ｄ−システイン（Ｄ−Ｈ３）を使用した。収率７０％、［α］Ｄ２０＝＋１７．３。
2011079834.tif 000070
【実施例１０】
【０２３５】
Ｎ−プロパルギルグリシンヒドロキサメート（Ｍ３７、付録Ｖ）の合成。
【化３５】
2011079834.tif 000071
【０２３６】
臭化プロパルギル（３５６．９ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を、ＣＨＣｌ３（２０ｍｌ）中のグリシンヒドロキサメート（２７０ｍｇ、３ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（４０７．１ｍｇ、３．１５ｍｍｏｌ）の混合物に０℃でゆっくりと添加した。この混合物を室温で２４時間攪拌し、ＣＨＣｌ３（５０ｍｌ）を添加した。この溶液を５％  ＮａＨＣＯ３（３×５０ｍｌ）、ブライン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。この溶液を濾過し、乾燥するまでエバポレートして表題化合物Ｍ３７を得た：１９２ｍｇ、収率５０％。
2011079834.tif 000072
【実施例１１】
【０２３７】
Ｎ−（４−メチルピペラジン−１−イルメチルカルボニル），Ｎプロパルギルグリシンヒドロキサメート（Ｍ３８、付録Ｖ）の合成。
【０２３８】
表題化合物を、Ｎ−ｔ−ブトキシ２−（Ｎ−クロロアセチル，Ｎ−プロパルギル）アミノ−アセトアミド（Ｈ４、付録ＶＩＩ）のＮ−メチルピペラジンとの反応によって調製した。化合物Ｈ４を、Ｎ−ｔ−ブトキシ２−アミノ−アセトアミドの塩化クロロアセチル及び臭化プロパルギルとの反応によって以下のように得た：
（ｉ）Ｎ−ｔ−ブトキシ２−（Ｎ−クロロアセチル−Ｎ−プロパルギル）アミノ−アセトアミド（Ｈ４）の合成。
【化３６】
2011079834.tif 000073
【０２３９】
臭化プロパルギル（３５６．９ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を、ＣＨＣｌ３（２０ｍｌ）中の２−アミノ−Ｎ−ｔ−ブトキシ−アセトアミド（４３８．６ｍｇ、３ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（４０７．１ｍｇ、３．１５ｍｍｏｌ）の混合物に０℃でゆっくりと添加した。この混合物を室温で２４時間攪拌し、ＣＨＣｌ３（５０ｍｌ）を添加した。この溶液を５％  ＮａＨＣＯ３（３×５０ｍｌ）、ブライン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。この溶液を濾過し、乾燥するまでエバポレートした。その残渣をＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍｌ）中のジイソプロピルエチルアミン（２５８ｍｇ、２ｍｍｏｌ）に室温で溶解し、塩化クロロアセチル（０．２３９ｍＬ、３３９ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を３０分間にわたって０℃でゆっくりと添加した。室温で２時間の攪拌後、溶媒を減圧によって除去した。得られた残渣をＥｔ２ＯＡｃ（６０ｍｌ）中に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３（２×５０ｍｌ）、ブライン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で一晩乾燥させた。減圧下でのエバポレーションによって、表題化合物Ｈ４を得た：３９０ｍｇ、収率５０％。
2011079834.tif 000074
【０２４０】
（ｉｉ）Ｎ−（４−メチルピペラジン−１−イルメチルカルボニル）−Ｎ−プロパルギルグリシンヒドロキサメート（Ｍ３８、付録Ｖ）の合成。
【化３７】
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【０２４１】
Ｎ−メチルピペラジン（１００ｍｇ、１ｍｍｏｌ、１当量）を、クロロホルム（５ｍｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（０．３４８ｍｌ、２ｍｍｏｌ、２当量）及び上記のステップ（ｉ）で得たＨ４（２６１ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に室温で添加した。室温で２４時間攪拌した後、１０ｍｌのＣＨＣｌ３を添加し、この溶液を５％  ＮａＨＣＯ３（３×１０ｍｌ）、ブライン（２×１０ｍｌ）で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。この溶液を濾過し、乾燥するまでエバポレートした。その残渣を、ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＴＥＳ：チオアニソール（８５：５：５：５）の溶液（５ｍｌ）中に溶解し、室温で１時間攪拌した。減圧下での溶媒の除去後、その残渣をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）中に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３（３×２０ｍｌ）、ブライン（２×１０ｍｌ）で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。減圧下でのエバポレーションにより、表題化合物Ｍ３８を得た：１６０ｍｇ、収率６０％。
2011079834.tif 000076
【実施例１２】
【０２４２】
Ｎ−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イルメチルカルボニル），Ｎ−プロパルギルグリシンヒドロキサメート（Ｍ３９、付録Ｖ）の合成。
【化３８】
2011079834.tif 000077
【０２４３】
表題化合物Ｍ３９を、上記実施例１１中のＭ３８についての手順に従って合成したが、出発物質としてＮ−メチルピペラジンの代わりに４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジンを使用した。収率７２％。質量分析：Ｃ１３Ｈ２２Ｎ４Ｏ４について計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝２９９．３４、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝２９９．４０。
2011079834.tif 000078
【実施例１３】
【０２４４】
Ｎ−［４−エトキシカルボニルピペラジン−１−イルメチルカルボニル），Ｎ−プロパルギルグリシンヒドロキサメート（Ｍ４０、付録Ｖ）の合成。
【化３９】
2011079834.tif 000079
【０２４５】
表題化合物Ｍ４０を、上記実施例１１に記載されるように調製したが、出発物質としてＮ−メチルピペラジンの代わりに４−エトキシカルボニルピペラジンを使用した。収率７８％。質量分析：Ｃ１４Ｈ２２Ｎ４Ｏ５について計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝３２７．３５、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝３２７．２８。
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【実施例１４】
【０２４６】
一般的ペプチド合成
付録Ｉに示されるような式Ｉの本発明の化合物の調製において使用されるペプチドを、以下に記載される一般的な方法によって調製する。
【０２４７】
他のように記述されない限り、全ての化学物質及び試薬は分析等級のものであった。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）用のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）は、Ｍｅｒｃｋ（Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から得た。Ｎ−９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）保護されたアミノ酸誘導体及びＲｉｎｋアミド樹脂は、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ（Ｌａｕｆｅｌｆｉｎｇｅｎ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）から購入した。
【０２４８】
これらのペプチドを、会社のプロトコルに従ってＦｍｏｃ化学を使用して固相ペプチド合成によって手動で調製した。Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−アミノ酸誘導体をこの合成において使用した。Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）及びベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）並びに必要に応じて１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）の組み合わせを、カップリング剤として利用した。Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）及びＤＭＦを溶媒として使用した。各カップリングの前に、α−アミノ基の脱保護を、２０％ピペリジンとの反応によって達成した。全ての合成したペプチドを脱保護し、ＴＦＡ：トリエチルシラン（ＴＥＳ）：チオアニソール：水（８５：５：５：５）の溶液を使用して樹脂から切断した。切断混合物を濾過し、ペプチドを、過酸化物を含まない乾燥エーテルで０℃でこの溶液から沈殿させた。沈殿したペプチドを、冷乾燥エーテルで洗浄し、水又は水／アセトニトリル溶液中に溶解し、凍結乾燥した。この粗製ペプチドを、２つのモデル５１０ポンプ、モデル６８０自動勾配制御装置及びモデル４４１吸光度検出器からなるＷａｔｅｒｓシステム（Ｗａｔｅｒｓ、Ｍｉｌｏｒｄ、ＭＡ）で実施した半調製的ＨＰＬＣ精製に供した。カラム流出液を２１４／２５４ｎｍでのＵＶ吸光度によってモニタリングした。使用したＨＰＬＣの予めパックされたカラム（Ｍｅｒｃｋ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）は、半調製的精製についてはＬｉｃｈｒｏｓｏｒｂ  ＲＰ−１８（７ｍ）を含むＬｉｃｈｒｏＣＡＲＴ  ２５０−１０ｍｍ、分析的分離についてはＬｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒ  １００  ＲＰ−１８、２５０−４  ｍｍ（５ｍ）であった。０．１％  ＴＦＡを含む水中のアセトニトリルの勾配を使用して分離を達成した。精製されたペプチドを含む溶液を一晩凍結乾燥した。全てのペプチドの分子量を、質量分析によって確認した。質量分析を、電子スプレーイオン化法を利用してＭｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ  ＬＣＺ４０００（Ｍａｎｃｈｅｓｔｅｒ、ＵＫ）で実施した。アミノ酸組成の分析のために、ペプチドを減圧下で２４時間１００℃で６Ｎ  ＨＣｌ中で加水分解し、その加水分解物をＤｉｏｎｅｘ  Ａｕｔｏｍａｔｉｃ  Ａｍｉｎｏ  Ａｓｉｄ  Ａｎａｌｙｚｅｒを用いて分析した。
【実施例１５】
【０２４９】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基を含むＶＩＰ類似体誘導体−Ｆｍｏｃ−ＫＫＣ（ＨＱ）Ｌ−ＮＨ２（Ｍ７、付録ＩＩ）の合成。
【０２５０】
血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）は、アルツハイマー病のモデルにおいてβアミロイド毒性に対する神経保護を提供することが知られる２８マーのペプチドである。ＶＩＰの作用部位のマッピングは、４アミノ酸のペプチド（Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ）を導く。このＶＩＰフラグメントの類似体を、８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）残基への連結のためにＴｙｒ残基をＣｙｓ残基によって置換することによって調製し、このようにして本発明の化合物Ｍ７（付録ＩＩ）及びＭ７Ａ（付録Ｉ）を得た（以下の実施例１６を参照のこと）。両方の化合物Ｍ７及びＭ７Ａにはそれぞれ、付録ＩＩ及びＩ中の同じ意味Ｆｍｏｃ−ＫＫＣ（ＨＱ）Ｌ−ＮＨ２が与えられているが、Ｍ７Ａの構造式から、これが８−ヒドロキシキノリニル（ＨＱ）基の位置５においてメチレン基に連結されたプロパルギルアミノ基を有することが明らかである。
【０２５１】
Ｒｉｎｋアミド樹脂（７１ｍｇ、３３μｍｏｌｅ）に、ＮＭＰ中２０％のピペリジン２ｍｌを添加した。５分間の攪拌後、この溶液を排水し、この樹脂をＤＭＦで３回洗浄した。この樹脂に、１ｍｌのＤＭＦ中のＦｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（４７ｍｇ、１３２μｍｏｌｅ、４当量）及びＰｙＢＯＰ（６９ｍｇ、１３２μｍｏｌｅ、４当量）、並びにＮＭＭ（２９μｌ、２６４μｍｏｌ、８当量）を添加した。次いで得られた混合物を１時間攪拌した。その液体を排出し、第二のカップリングを同量のＦｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、ＰｙＢＯＰ及びＮＭＭを用いて実施した。第三のカップリングを、ＤＣＣ／ＨＯＢｔ活性化を介して実施した。Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（４７ｍｇ、１３２μｍｏｌｅ、４当量）、ＨＯＢｔ（１８ｍｇ、１３２μｍｏｌ、４当量）及びＤＣＣ（１３２μｍｌの１Ｎ  ＤＭＦ、１３２μｍｏｌ、４当量）を、１ｍｌのＤＭＦ中に溶解した。１時間の冷却後、沈殿したジシクロヘキシルウレア（ＤＣＵ）を除去し、この溶液を樹脂に添加した。一晩攪拌して溶液を排水した後、この樹脂を洗浄した（ＤＭＦ×３、ＤＣＭ×３）。ネガティブニンヒドリン試験が、カップリング反応の完了を示した。それぞれＦｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｍｍｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨを用いた次の３回のカップリングサイクルを、上記の手順（ＰｙＢＯＰ及びＤＣＣの両方）に従って実施した。全４回のカップリングサイクルの完了時に、得られた樹脂をＴＦＡ：ＴＥＳ：ＤＣＭ（ジクロロメタン）（１：５：９４  ｖ／ｖ）の溶液で処理して、Ｍｍｔ（４−メトキシトリチル）保護基を除去した。
【０２５２】
ＤＭＦ／ＤＣＭ（１ｍｌ）中の５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリン（３２ｍｇ、１６５μｍｏｌ、５当量）及びＮＭＰ（１７ｍｇ、２０μｌ、５当量）の溶液をこの樹脂に添加し、この混合物を一晩攪拌した。ネガティブＤＴＮＢ（５，５’−ジチオ−ビス−（２−ニトロベンゾエート））試験が、反応の完了を示した。得られたＨＱ改変ペプチドを、ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＴＥＳ：チオアニソール（８５：５：５：５）の溶液を使用して樹脂から切断し、エーテルで沈殿させた。粗製ＨＱ改変表題ペプチドＭ７を、上記のように半調製的ＨＰＬＣによってさらに精製した。収率：４．８ｍｇ（５．５μｍｏｌ；開始アミノ酸樹脂充填に基づいて１６．７％）。質量分析：ｍ／ｚ  ８７０．６（ＭＨ＋）計算値８７０．１。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ｌｅｕ  １．００、Ｌｙｓ  ２．１６。Ｃｙｓは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。
【実施例１６】
【０２５３】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基及びプロパルギルアミノ基を含むＶＩＰ類似体誘導体−Ｆｍｏｃ−ＫＫＣ（ＨＱ）Ｌ−ＮＨ２（Ｍ７Ａ、付録Ｉ）の合成。
【０２５４】
（ｉ）５−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル，Ｎ−プロパルギル）アミノメチル−８−ｔ−ブトキシ−キノリン（Ｈ５、付録ＶＩＩ）の合成。
【化４０】
2011079834.tif 000081
【０２５５】
５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリンを５−クロロメチル−８−ｔ−ブトキシ−キノリンとして保護し、プロパルギルアミンを公知の手順に従ってＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−プロパルギルアミンへと転換した。
【０２５６】
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）プロパルギルアミン（３１０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を、窒素下で、ＤＭＦ（５ｍｌ）中のＮａＨ（８８ｍｇの油中６０％分散物、２．２ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に３０分間かけて一部ずつ添加した。Ｈ２ガスエボリューションを停止させた後、ＤＭＦ（２ｍｌ）中の５−クロロメチル−８−Ｏ−ｔ−ブチル−キノリン（６００ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）を、３０℃を下回る温度（冷水浴）で滴下した。攪拌を３時間続け、反応混合物をＥｔＯＡｃ（３×３０ｍｌ）とＨ２Ｏ（５０ｍｌ）との間で分配した。合せたＥｔＯＡｃ溶液を水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、淡黄色の固体になるまでエバポレートし、これをヘキサンで洗浄して減圧乾燥させ、表題化合物を得た：４４３ｍｇ（６０％）、
2011079834.tif 000082
【０２５７】
（ｉｉ）５−（プロパルギルアミノブロモメチル）−８−ヒドロキシキノリン（Ｈ６、付録ＶＩＩ）の合成。
【化４１】
2011079834.tif 000083
【０２５８】
上記ステップ（ｉ）からの化合物Ｈ５（３６８ｍｇ、１ｍｍｏｌ）及びＮ−ブロモスクシンイミド（２３１ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を、５ｍｌのＣＣｌ４中に溶解した。この溶液に過酸化ベンゾイル（２．５ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）を添加し、この反応混合物を１２時間還流で加熱した。還流後、この溶液を０℃まで冷却し、固体沈殿物を濾過した。濾液を１Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３水溶液、飽和ＮａＳ２Ｏ３水溶液及びブラインで洗浄した。有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、減圧下で乾燥するまでエバポレートした。残渣をＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＴＥＳ：チオアニソール（８５：５：５：５）の溶液（５ｍｌ）中に溶解した。１時間後、ＨＰＬＣは、保護基の完全な除去を示した。この溶液を乾燥するまでエバポレートし、その残渣を水（１０ｍｌ）中に溶解し、次いでＮａ２ＣＯ３（ｐＨ１１）で塩基性化し、Ｅｔ２ＯＡｃ（３×５０ｍｌ）で抽出した。その有機層をブライン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で一晩乾燥させた。減圧下でのエバポレーションにより、表題化合物Ｈ６を得た：２１８ｍｇ、収率７５％。
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【０２５９】
（ｉｉｉ）８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基及びプロパルギルアミノ基を含むＶＩＰ類似体誘導体−Ｍ７Ａ（付録Ｉ、スキームＡ）の合成。
【０２６０】
ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２（１ｍｌ）中の上記ステップ（ｉｉ）のＨ６（４８ｍｇ、０．１６５ｍｍｏｌ、５当量）及びＮＭＰ（１７ｍｇ、０．０２０ｍｌ、５当量）の溶液を、上記実施例１５で得た樹脂（０．０３３ｍｍｏｌ、１当量）に添加し、この混合物を一晩攪拌した。ネガティブＤＴＮＢ試験が、反応の完了を示した。得られたＨＱ改変ペプチドを、ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＴＥＳ：チオアニソール（８５：５：５：５）の溶液を使用して樹脂から切断し、エーテルで沈殿させた。粗製ＨＱ改変表題ペプチドＭ７Ａを、半調製的ＨＰＬＣ（ｔＲ）：３５．１分（直線勾配：最初の４分間にわたり５０％のＢ、６０分間で１００％のＢまで直線的に増大）によってさらに精製した。収率：６ｍｇ（５．５μｍｏｌ；開始アミノ酸樹脂充填に基づいて１６．７％）。質量分析：Ｃ４９Ｈ６３Ｎ９Ｏ７Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝９２３．６８、実測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝９２３．９１。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ｌｅｕ  １．００、Ｌｙｓ  ２．１０。Ｃｙｓは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。
【実施例１７】
【０２６１】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基を含むＶＩＰ類似体誘導体−ステアリル−ＫＫＣ（ＨＱ）Ｌ−ＮＨ２（Ｍ６、付録ＩＩ）の合成。
【０２６２】
Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｃｙｓ（Ｍｍｔ）−Ｌｅｕ−［Ｒｉｎｋアミド樹脂］３３ｍｏｌを、実施例１５で上記されるように合成した。Ｆｍｏｃ基の除去後、上記の手順に従って遊離Ｎ末端官能基をステアリン酸（３８ｍｇ、１３２μｍｏｌ、４当量）とカップリングした。ネガティブニンヒドリン試験が、カップリング反応の完了を示した。このペプチドを、ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＴＥＳ：チオアニソール（８５：５：５：５）の溶液を使用して樹脂から切断し、エーテルで沈殿させた。ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２（１ｍｌ）中の５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリン（３２ｍｇ、１６５μｍｏｌ、５当量）及びＮＭＰ（１７ｍｇ、２０μｌ、５当量）の溶液をこの粗製ペプチドに添加した。この混合物を室温で一晩攪拌した。ネガティブＤＴＮＢ試験が、反応の完了を示した。反応完了時にこの溶液を排水し、粗製ペプチドを半調製的ＨＰＬＣによってさらに精製して４．６ｍｇ（５．０μｍｏｌ；開始アミノ酸樹脂充填に基づいて１５．３％）を得た。ＨＰＬＣ（ｔＲ）：３８．１分（直線勾配：最初の４分間にわたり５０％のＢ、６０分間で１００％のＢまで直線的に増大）、同じ条件でＳｔ−ＫＫＣＬＮＨ２についてｔＲ＝４７．５分。質量分析：ｍ／ｚ  ９１４．９（ＭＨ＋）、（計算値９１４．３）。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ｌｅｕ  １．００、Ｌｙｓ  ２．２１。Ｃｙｓは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。
【実施例１８】
【０２６３】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基及びプロパルギルアミノ基を含むＶＩＰ類似体誘導体−ステアリル−ＫＫＣ（ＨＱ）Ｌ−ＮＨ２（Ｍ６Ａ、付録Ｉ）の合成。
【０２６４】
上記の実施例１７で得た樹脂（３３μｍｏｌ、１当量）に、ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２（１ｍｌ）中の５−（プロパルギルアミノブロモメチル）−８−ヒドロキシキノリンＨ６（４８ｍｇ、０．１６５ｍｍｏｌ、５当量）及びＮＭＰ（１７ｍｇ、０．０２０ｍｌ、５当量）の溶液を添加した。次いでこの混合物を一晩攪拌した。ネガティブＤＴＮＢ試験が、この反応の完了を示した。得られたＨＱ改変ペプチドを、ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＴＥＳ：チオアニソール（８５：５：５：５）の溶液を使用して樹脂から切断し、エーテルで沈殿させた。粗製ＨＱ改変ペプチドＭ６Ａを、半調製的ＨＰＬＣ（ｔＲ）：４０．１分（直線勾配：最初の４分間にわたり５０％のＢ、６０分間で１００％のＢまで直線的に増大）によってさらに精製した。収率：５．８ｍｇ（６μｍｏｌ；開始アミノ酸樹脂充填に基づいて１８％）。質量分析：Ｃ５２Ｈ８７Ｎ９Ｏ６Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝９６７．３７、実測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝９６７．２１。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ｌｅｕ  １．００、Ｌｙｓ  ２．２０。Ｃｙｓは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。
【実施例１９】
【０２６５】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基を含むサブスタンスＰ類似体誘導体−［Ｃｙｓ７（ＨＱ）］−サブスタンスＰ（Ｍ２７、付録ＩＩ）の合成。
【０２６６】
［Ｃｙｓ７］−サブスタンスＰ（９．０ｍｇ、６．９μｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（３５０μｌ）中に溶解し、ＮＭＭ（７．６μｌ、６９μｍｏｌ、１０当量）を添加した。室温で１時間攪拌した後、１５０μｌの混合溶媒（ＤＭＦ：ＤＭＳＯ：ＣＨ３ＣＮ  ３：３：１）中の５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリンヒドロクロリド（１．５ｍｇ、７．６μｍｏｌ、１．１当量）を滴下した。この反応混合物を室温で一晩攪拌した。反応の進行を、分析的ＨＰＬＣによってモニタリングした。必要に応じて、さらなる５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリンヒドロクロリドを反応の完了のために添加した。反応の完了時に、この粗製ペプチドを氷冷ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル／石油エーテルで沈殿させ、遠心分離によって収集し、次いで半調製的ＨＰＬＣによって精製した。ｔＲ＝３２．２７分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；４５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）、（同じ条件で［Ｃｙｓ７］−サブスタンスＰについてｔＲ＝３２．２８分）。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ｌｙｓ  １．００、Ａｒｇ  １．０９、Ｇｌｕ  ２．０３、Ｇｌｙ  １．３２、Ｐｒｏ  １．９３、Ｌｅｕ  １．０１、Ｐｈｅ  ０．９６、Ｃｙｓ  ０．９２。Ｃｙｓを、標準参照としてＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｌ−システインを使用して検出した。Ｍｅｔは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。質量分析：Ｃ６７Ｈ１０１Ｎ１９Ｏ１４Ｓ２について計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４６１．７７、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４６１．１５。
【実施例２０】
【０２６７】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基を含むサブスタンスＰ類似体誘導体−［Ｃｙｓ８（ＨＱ）］−サブスタンスＰ（Ｍ２８、付録ＩＩ）の合成。
【０２６８】
化合物Ｍ２８を、標準的な出発物質を使用して、化合物Ｍ２７について上記実施例１９に記載された方法によって合成した。粗製ペプチドＭ２８を、半調製的ＨＰＬＣによってさらに精製した。ｔＲ＝３２．１０分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；４５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）、（同じ条件で［Ｃｙｓ８］−サブスタンスＰについてｔＲ＝３２．８９分）。質量分析：Ｃ６７Ｈ１０１Ｎ１９Ｏ１４Ｓ２について計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４６１．７７、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４６１．１７。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ｌｙｓ  １．００、Ａｒｇ  １．１８、Ｇｌｕ  １．９６、Ｇｌｙ  １．２２、Ｐｒｏ  １．７７、Ｌｅｕ  ０．９２、Ｐｈｅ  ０．９１、Ｃｙｓ  ０．９６。Ｃｙｓを、標準参照としてＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｌ−システインを使用して検出した。Ｍｅｔは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。
【実施例２１】
【０２６９】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基及びプロパルギルアミノ基を含むサブスタンスＰ類似体誘導体−［Ｃｙｓ７（ＨＱ）］−サブスタンスＰ（Ｍ２７Ａ、付録Ｉ）の合成。
【０２７０】
ＤＭＦ（３５０μｌ）中の［Ｃｙｓ７］−サブスタンスＰ（９．０ｍｇ、６．９μｍｏｌ、１当量）に、ＮＭＭ（７．６μｌ、６９μｍｏｌ、１０当量）を添加した。室温で１時間攪拌した後、１５０μｌの混合溶媒（ＤＭＦ：ＤＭＳＯ：ＣＨ３ＣＮ  ３：３：１）中の５−（プロパルギルアミノ−ブロモメチル）−８−ヒドロキシキノリンＨ６（２．２ｍｇ、７６μｍｏｌ、１．１当量）の溶液を滴下した。この反応混合物を室温で一晩攪拌した。反応の進行を、分析的ＨＰＬＣによってモニタリングした。必要に応じて、さらなる５−（プロパルギルアミノ−ブロモメチル）−８−ヒドロキシキノリンを反応の完了のために添加した。反応の完了時に、この粗製ペプチドを氷冷ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル／石油エーテルで沈殿させ、遠心分離によって収集し、次いで半調製的ＨＰＬＣによって精製した。ｔＲ＝３５．２７分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；４５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）、（同じ条件で［Ｃｙｓ７］−サブスタンスＰについてｔＲ＝３２．２８分）。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ｌｙｓ  １．００、Ａｒｇ  １．１０、Ｇｌｕ  ２．０１、Ｇｌｙ  １．３２、Ｐｒｏ  １．９３、Ｌｅｕ  １．０３、Ｐｈｅ  ０．９６、Ｃｙｓ  ０．９９。Ｃｙｓを、標準参照としてＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル−（プロパルギルアミノ−メチル）−Ｌ−システインを使用して検出した。Ｍｅｔは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。質量分析：Ｃ７０Ｈ１０４Ｎ２０Ｏ１４Ｓ２について計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１５１４．７８、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝１５１４．２５。
【実施例２２】
【０２７１】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基及びプロパルギルアミノ基を含むサブスタンスＰ類似体誘導体−［Ｃｙｓ８（ＨＱ）］−サブスタンスＰ（Ｍ２８Ａ、付録Ｉ）の合成。
【０２７２】
表題化合物Ｍ２８Ａを、上記実施例２１中のＭ２７Ａについての手順に従って合成したが、出発物質として［Ｃｙｓ７］−サブスタンスＰの代わりに［Ｃｙｓ８］−サブスタンスＰを使用した。収率７５％。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ｌｙｓ  １．００、Ａｒｇ  １．０８、Ｇｌｕ  ２．１１、Ｇｌｙ  １．２２、Ｐｒｏ  １．９３、Ｌｅｕ  １．０１、Ｐｈｅ  １．０４、Ｃｙｓ  ０．９９。Ｃｙｓを、標準参照としてＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル−（プロパルギルアミノメチル）−Ｌ−システインを使用して検出した。Ｍｅｔは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。質量分析：Ｃ７０Ｈ１０４Ｎ２０Ｏ１４Ｓ２について計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１５１４．７８、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝１５１４．８８。
【実施例２３】
【０２７３】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基を含むＧｎＲＨ類似体誘導体−［Ｌ−Ｃｙｓ５（ＨＱ）］ＧｎＲＨ（Ｍ８、付録ＩＩ）の合成。
【０２７４】
化合物Ｍ８を、適切な出発物質を使用して、上記実施例１９に記載される化合物Ｍ２７を合成するための方法に従って合成した。粗製ペプチドＭ８を、半調製的ＨＰＬＣによってさらに精製した。ｔＲ＝２６．０２分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；４５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜７５％）（同じ条件下で［Ｃｙｓ５］ＧｎＲＨについてｔＲ＝２７．５４分）。質量分析：Ｃ５９Ｈ７８Ｎ１８Ｏ１３Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１２７９．４３、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝１２７９．８６。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ａｒｇ  １．００、Ｓｅｒ  １．０９、Ｇｌｕ  ０．９２、Ｇｌｙ  ２．２１、Ｈｉｓ  ０．８８、Ｐｒｏ  ０．８９、Ｌｅｕ  ０．８９、Ｃｙｓ  ０．８５。Ｃｙｓを、標準参照としてＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｌ−システインを使用して検出した。
【実施例２４】
【０２７５】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基を含むＧｎＲＨ類似体誘導体−［Ｄ−Ｃｙｓ６（ＨＱ）］ＧｎＲＨ（Ｍ２２、付録ＩＩ）の合成。
【０２７６】
化合物Ｍ２２を、適切な出発物質を使用して、上記実施例１９に記載される化合物Ｍ２７を合成するための方法に従って合成した。反応の完了時に、粗製ペプチドＭ２２を、氷冷ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（３ｍｌ）を用いて沈殿させた。遠心分離後、固体をＤＤＷ中に溶解し、調製的ＨＰＬＣによって精製してｍｇ（ｍｍｏｌ；％）を得た。ｔＲ＝３０．８２分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；４５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）、（同じ条件下で［Ｄ−Ｃｙｓ６］ＧｎＲＨについてｔＲ＝３２．５７分）。質量分析：Ｃ６６Ｈ８４Ｎ１８Ｏ１４Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１３８６．５５、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝１３８６．７１。
【実施例２５】
【０２７７】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基及びプロパルギルアミノ基を含むＧｎＲＨ類似体誘導体−［Ｌ−Ｃｙｓ５（ＨＱ−Ｐｒ）］ＧｎＲＨ（Ｍ８Ａ、付録Ｉ）の合成。
【０２７８】
［Ｃｙｓ５］ＧｎＲＨ（７．７ｍｇ、６．９μｍｏｌ）をＤＭＦ（３５０μｌ）中に溶解し、ＮＭＭ（７．６μｌ、６９μｍｏｌ、１０当量）を添加した。室温で１時間攪拌した後、１５０μｌの混合溶媒（ＤＭＦ：ＤＭＳＯ：ＣＨ３ＣＮ  ３：３：１）中の５−（プロパルギル−アミノブロモメチル）−８−ヒドロキシキノリンＨ６（２．２ｍｇ、７６μｍｏｌ、１．１当量）を滴下した。この反応混合物を室温で一晩攪拌した。反応の進行を、分析的ＨＰＬＣによってモニタリングした。必要に応じて、さらなるＨ６を反応の完了のために添加した。反応の完了時に、この粗製ペプチドを氷冷ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル／石油エーテルで沈殿させ、遠心分離によって収集した。この粗製ペプチドＭ８Ａを半調製的ＨＰＬＣによってさらに精製した。ｔＲ＝３０．１２分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；Ｂ＝４５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜７５％）、（同じ条件下で［Ｃｙｓ５］ＧｎＲＨについてｔＲ＝２７．５４分）。収率：７．２ｍｇ（５．４μｍｏｌ；７８％）。質量分析：Ｃ６２Ｈ８１Ｎ１９Ｏ１３Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１３３２．４６、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝１３３２．６６。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ａｒｇ  １．００、Ｓｅｒ  １．０９、Ｇｌｕ  ０．９９、Ｇｌｙ  ２．２１、Ｈｉｓ  ０．９８、Ｐｒｏ  ０．８９、Ｌｅｕ  ０．８９、Ｃｙｓ  ０．８５。Ｃｙｓを、標準参照としてＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル−（プロパルギルアミノメチル）−Ｌ−システインを使用して検出した。
【実施例２６】
【０２７９】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基及びプロパルギルアミノ基を含むＧｎＲＨ類似体誘導体−［Ｄ−Ｃｙｓ６（ＨＱ−Ｐｒ）］ＧｎＲＨ（Ｍ２２Ａ、付録Ｉ）の合成。
【０２８０】
表題化合物Ｍ２２Ａを、上記実施例２３中のＭ２７Ａについての手順に従って合成したが、出発物質として［Ｃｙｓ５］ＧｎＲＨの代わりに［Ｄ−Ｃｙｓ６］ＧｎＲＨを使用した。収率７０％。質量分析：Ｃ６９Ｈ８７Ｎ２０Ｏ１３Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４３９．５６、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４３９．６６。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ａｒｇ  １．００、Ｓｅｒ  １．０９、Ｇｌｕ  ０．９９、Ｔｙｒ  １．０３、Ｇｌｙ  １．１１、Ｈｉｓ  ０．９８、Ｐｒｏ  ０．９９、Ｌｅｕ  ０．８９、Ｃｙｓ  ０．８５。Ｃｙｓを、標準参照としてＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル−（プロパルギルアミノメチル）−Ｌ−システインを使用して検出した。
【実施例２７】
【０２８１】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基を含むエンケファリン類似体誘導体−ＹＧＧＣ（ＨＱ）Ｌ（Ｍ１８）、ＹＧＧＣ（ＨＱ）Ｍ（Ｍ１９）、Ｃ（ＨＱ）ＧＧＦＬ（Ｍ２０）、Ｃ（ＨＱ）ＧＧＦＭ（Ｍ２１）（付録ＩＩ）の合成。
【０２８２】
（ｉ）化合物Ｍ１８、Ｍ１９、Ｍ２０、Ｍ２１の合成のための一般手順
ＤＭＦ（１５０μｌ）中のＣｙｓ１Ｍｅｔ５−エンケファリン又はＣｙｓ１Ｌｅｕ５−エンケファリン（２５μｍｏｌ）の溶液に、ＮＭＭ（２６μｌ、２５０μｍｏｌ）を添加した。室温で１時間攪拌した後、２５０μｌの混合溶媒（ＤＭＦ：ＤＭＳＯ：ＣＨ３ＣＮ  ３：３：１）中の５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリンヒドロクロリド（６１ｍｇ、２５μｍｏｌ）を滴下した。この反応混合物を室温で一晩攪拌した。反応の進行を、分析的ＨＰＬＣによってモニタリングした。必要に応じて、さらなる５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリンヒドロクロリドを反応の完了のために添加した。反応の完了時に、この粗製ペプチドを氷冷ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル／石油エーテルで沈殿させ、遠心分離によって収集し、次いで半調製的ＨＰＬＣ（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；５５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）によって精製した。
【０２８３】
（ｉｉ）［Ｃｙｓ４（ＨＱ）］−Ｌｅｕ５−エンケファリン（Ｍ１８、付録ＩＩ）質量分析：Ｃ３２Ｈ４０Ｎ６Ｏ８Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝６６９．７６、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝６６９．６２。
【０２８４】
（ｉｉｉ）［Ｃｙｓ４（ＨＱ）］−Ｍｅｔ５−エンケファリン（Ｍ１９、付録ＩＩ）ＨＰＬＣ。ｔＲ＝２６．４３分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；５５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）（同じ条件で［Ｃｙｓ１］−Ｌｅｕ５−エンケファリンについてｔＲ＝２３．８７分）。質量分析：Ｃ３２Ｈ４０Ｎ６Ｏ８Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝６８７．８０、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝６８７．７９。
【０２８５】
（ｉｖ）［Ｃｙｓ１（ＨＱ）］−Ｌｅｕ５−エンケファリン（Ｍ２０、付録ＩＩ）ＨＰＬＣ。ｔＲ＝２９．５６分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；５５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）（同じ条件下で［Ｃｙｓ１］−Ｌｅｕ５−エンケファリンについてｔＲ＝２７．９２分）。質量分析：Ｃ３２Ｈ４０Ｎ６Ｏ７Ｓについて計算値ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝６５３．７６、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝６５３．４８。
【０２８６】
（ｖ）［Ｃｙｓ１（ＨＱ）］−Ｍｅｔ５−エンケファリン（Ｍ２１、付録ＩＩ）質量分析：Ｃ３１Ｈ３８Ｎ６Ｏ７Ｓ２について計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝６７１．８０、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝６７１．４３。
【実施例２８】
【０２８７】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基及びプロパルギルアミノ基を含むエンケファリン類似体誘導体−ＹＧＧＣ（ＨＱ）Ｌ（Ｍ１８Ａ）、ＹＧＧＣ（ＨＱ）Ｍ（Ｍ１９Ａ）、Ｃ（ＨＱ）ＧＧＦＬ（Ｍ２０Ａ）、Ｃ（ＨＱ）ＧＧＦＭ（Ｍ２１Ａ）（付録Ｉ）の合成。
【０２８８】
（ｉ）化合物Ｍ１８Ａ、Ｍ１９Ａ、Ｍ２０Ａ、Ｍ２１Ａ（付録Ｉ、スキームＣ）の合成のための一般手順
改変エンケファリンペプチド（［Ｃｙｓ４］−Ｌｅｕ５−エンケファリン、［Ｃｙｓ４］−Ｍｅｔ５−エンケファリン、［Ｃｙｓ１］−Ｌｅｕ５−エンケファリン又は［Ｃｙｓ１］−Ｍｅｔ５−エンケファリン）（２５μｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１５０μｌ）中に溶解し、ＮＭＭ（２６μｌ、２５０μｍｏｌ）を添加した。室温で１時間攪拌した後、２５０μｌの混合溶媒（ＤＭＦ：ＤＭＳＯ：ＣＨ３ＣＮ  ３：３：１）中の５−（プロパルギルアミノブロモメチル）−８−ヒドロキシ−キノリンＨ６（２５μｍｏｌ）を滴下した。この反応混合物を室温で一晩攪拌した。反応の進行を、分析的ＨＰＬＣによってモニタリングした。必要に応じて、さらなるＨ６を反応の完了のために添加した。反応の完了時に、この粗製ペプチドを氷冷ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル／石油エーテルで沈殿させ、遠心分離によって収集し、次いで半調製的ＨＰＬＣ（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；５５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）によって精製した。
【０２８９】
（ｉｉ）［Ｃｙｓ４（プロパルギル−ＨＱ）］−Ｌｅｕ５−エンケファリン（Ｍ１８Ａ、付録Ｉ）収率７０％、ＨＰＬＣ。ｔＲ＝２８．４３分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；５５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）（同じ条件で［Ｃｙｓ４］−Ｌｅｕ５−エンケファリンについてｔＲ＝２５．８７分）質量分析：Ｃ３５Ｈ４３Ｎ７Ｏ８Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝７２２．８０、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝７２２．６２。
【０２９０】
（ｉｉｉ）［Ｃｙｓ４（プロパルギル−ＨＱ）］−Ｍｅｔ５−エンケファリン（Ｍ１９Ａ、付録Ｉ）収率６０％、ＨＰＬＣ。ｔＲ＝２７．８３分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；５５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）（同じ条件で［Ｃｙｓ４］−Ｍｅｔ５−エンケファリンについてｔＲ＝２３．８７分）。質量分析：Ｃ３５Ｈ４３Ｎ７Ｏ８Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝７４０．８４、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝７４０．７０。
【０２９１】
（ｉｖ）［Ｃｙｓ１（プロパルギル−ＨＱ）］−Ｌｅｕ５−エンケファリン（Ｍ２０Ａ、付録Ｉ）収率７２％、ＨＰＬＣ。ｔＲ＝３０．１６分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；５５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）（同じ条件下で［Ｃｙｓ１］−Ｌｅｕ５−エンケファリンについてｔＲ＝２７．９２分）。質量分析：Ｃ３５Ｈ４３Ｎ７Ｏ７Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝７０６．８０、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝７０６．８８。
【０２９２】
（ｖ）［Ｃｙｓ１（プロパルギル−ＨＱ）］−Ｍｅｔ５−エンケファリン（Ｍ２１Ａ、付録Ｉ）収率７８％、ＨＰＬＣ。ｔＲ＝２７．２６分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；５５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）（同じ条件下で［Ｃｙｓ１］−Ｌｅｕ５−エンケファリンについてｔＲ＝２５．９０分）。質量分析：Ｃ３４Ｈ４１Ｎ７Ｏ７Ｓ２について計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝７２４．８４、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝７２４．９４。
【実施例２９】
【０２９３】
プロパルギルアミノ基及びヒドロキサメート基を含むＶＩＰ類似体誘導体、ＧｎＲＨ類似体誘導体及びサブスタンスＰ類似体誘導体−化合物Ｍ６Ｂ、Ｍ７Ｂ、Ｍ８Ｂ、Ｍ２２Ｂ、Ｍ２７Ｂ及びＭ２８Ｂ（ｎ＝１）（付録Ｖ、スキームＣ）の合成。
【０２９４】
（ｉ）ヒドロキサメート化合物Ｍ６Ｂ、Ｍ７Ｂ、Ｍ８Ｂ、Ｍ２２Ｂ、Ｍ２７Ｂ及びＭ２８Ｂ（ｎ＝１）（付録Ｖ）の合成のための一般手順
改変ペプチド（７μｍｏｌ、１当量）（上記のように合成したＳｔ−ＫＫＣＬ−ＮＨ２、Ｆｍｏｃ−ＫＫＣＬ−ＮＨ２、［Ｃｙｓ５］ＧｎＲＨ、［Ｄ−Ｃｙｓ６］ＧｎＲＨ、［Ｃｙｓ７］−サブスタンスＰ又は［Ｃｙｓ８］−サブスタンスＰ）を、ＤＭＦ（３５０μｌ）中に溶解し、ＮＭＭ（７．６μｌ、７０μｍｏｌ、１０当量）を添加した。室温で１時間攪拌した後、１５０μｌのＤＭＦ中のＮ−ｔ−ブトキシ２−（Ｎ−クロロアセチル−Ｎ−プロパルギル）−アミノ−アセトアミド（Ｈ４）（２ｍｇ、７．７μｍｏｌ、１．１当量）を滴下した。この反応混合物を室温で一晩攪拌した。反応の進行を、分析的ＨＰＬＣによってモニタリングした。必要に応じて、さらなるＨ４を反応の完了のために添加した。反応の完了時に、溶媒を減圧下で除去した。その残渣にＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＴＥＳ：チオアニソール（８５：５：５：５）の溶液（２ｍＬ）を添加した。この混合物を１時間攪拌し、次いで氷冷ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル／石油エーテルで沈殿させ、遠心分離によって収集した。この粗製改変ペプチドを、半調製的ＨＰＬＣによってさらに精製した。
【０２９５】
（ｉｉ）化合物Ｍ６Ｂ（ｎ＝１）（付録Ｖ）の合成
収率７１％、ＨＰＬＣ（ｔＲ）：２５．１分（直線勾配：最初の４分間にわたり５０％のＢ、４０分間で１００％のＢまで直線的に増大）。質量分析：Ｃ４６Ｈ８５Ｎ９Ｏ８Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝９２５．２９、実測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝９２５．２１。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ｌｅｕ  １．００、Ｌｙｓ  ２．２０。Ｃｙｓは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。
【０２９６】
（ｉｉｉ）化合物Ｍ７Ｂ（ｎ＝１）（付録Ｖ）の合成
収率：６８％。ＨＰＬＣ（ｔＲ）：２５．１分（直線勾配：最初の４分間にわたり５０％のＢ、５０分間で１００％のＢまで直線的に増大）。質量分析：Ｃ４３Ｈ６１Ｎ９Ｏ９Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝８８１．０７、実測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝８８１．１５。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ｌｅｕ  １．００、Ｌｙｓ  ２．１５。Ｃｙｓは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。
【０２９７】
（ｉｖ）化合物Ｍ８Ｂ（ｎ＝１）（付録Ｖ）の合成
収率：７０％。ＨＰＬＣ  ｔＲ＝２９．１分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；４５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜７５％）、（同じ条件下で［Ｃｙｓ５］ＧｎＲＨについてｔＲ＝２７．５４分）。質量分析：Ｃ５６Ｈ７９Ｎ１９Ｏ１５Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１２９１．５７、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝１２９１．６６。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ａｒｇ  １．００、Ｓｅｒ  １．１２、Ｇｌｕ  ０．９５、Ｇｌｙ  ２．１６、Ｈｉｓ  ０．９８、Ｐｒｏ  ０．８９、Ｌｅｕ  ０．９９。Ｃｙｓは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。
【０２９８】
（ｖ）化合物Ｍ２２Ｂ（ｎ＝１）（付録Ｖ）の合成
収率７５％。ＨＰＬＣ  ｔＲ＝２５．１分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；４５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜１００％）、（同じ条件下で［Ｄ−Ｃｙｓ６］−ＧｎＲＨについてｔＲ＝２３．５４分）。質量分析：Ｃ６３Ｈ８５Ｎ１９Ｏ１６Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１３９７．５３、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝１３９７．６１。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ａｒｇ  １．００、Ｓｅｒ  １．０９、Ｇｌｕ  ０．９９、Ｔｙｒ  １．０３、Ｇｌｙ  １．１１、Ｈｉｓ  ０．９８、Ｐｒｏ  ０．９９、Ｌｅｕ  ０．８９。Ｃｙｓは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。
【０２９９】
（ｖｉ）化合物Ｍ２７Ｂ（ｎ＝１）（付録Ｖ）の合成
収率６０％。ＨＰＬＣ。ｔＲ＝３３．２７分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；４５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）、（同じ条件で［Ｃｙｓ７］−サブスタンスＰについてｔＲ＝３２．２８分）。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ｌｙｓ  １．００、Ａｒｇ  １．１０、Ｇｌｕ  ２．０１、Ｇｌｙ  １．３２、Ｐｒｏ  １．９３、Ｌｅｕ  １．０３、Ｐｈｅ  ０．９６。Ｃｙｓ及びＭｅｔは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。質量分析：Ｃ６４Ｈ１０２Ｎ２０Ｏ１６Ｓ２について計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４７２．７５、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４７２．５５。
【０３００】
（ｖｉｉ）化合物Ｍ２８Ｂ（ｎ＝１）（付録Ｖ）の合成
収率６５％。ＨＰＬＣ。ｔＲ＝３２．９１分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；４５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）、（同じ条件で［Ｃｙｓ８］−サブスタンスＰについてｔＲ＝３１．２８分）。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ｌｙｓ  １．００、Ａｒｇ  １．０８、Ｇｌｕ  ２．１１、Ｇｌｙ  １．２２、Ｐｒｏ  １．９３、Ｌｅｕ  １．０１、Ｐｈｅ  １．０４、Ｃｙｓ  ０．９９。Ｃｙｓ及びＭｅｔは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。質量分析：Ｃ６３Ｈ１００Ｎ２０Ｏ１６Ｓ２について計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４５８．７３、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４５８．８４。
【０３０１】
ＩＩ  生物学の項
方法
（ａ）金属結合特性
８−ヒドロキシキノリンは、鉄に対する強力なキレート剤であり、銅よりも鉄に対して高い特異性を有することが知られている。神経変性疾患と関連すると考えられているのは、脳における過剰な鉄イオンの貯蔵及び鉄により媒介されるフリーラジカルの発生であるので、これは、抗酸化型薬物のための重要な前提条件である。従って、銅よりも鉄に対して高い特異性を有するキレート剤のみが銅の代わりに鉄をキレート化し、潜在的な神経保護効果を有することが予測される。８−ヒドロキシキノリンと抗酸化能力を有するその誘導体のキレート化特性との間の可能な相関、及びその誘導体と抗酸化特性を有する最もよく確立された鉄キレート化薬物であるデスフェラールとの間の相関を議論するために、新たに合成した化合物の安定定数の信頼性のある測定値が必要である。分光光度法を、これらの化合物の鉄錯体安定定数の測定のために使用した。
【０３０２】
（ｂ）分配係数
オクタノールと水との間の分配係数（Ｐｏｗ）又は分布比（Ｄｏｗ）は、化合物の疎水性の最も一般的に使用される尺度である。Ｄｏｗは、合理的に低い濃度でではあるが、溶質の濃度に依存し得る。この溶質が両方の相において同じ形態である場合、Ｄｏｗは一定になり、分配係数Ｐｏｗと称される。Ｐｏｗは、物理−化学的特性及び生物学的系における多数の有機化合物の挙動を決定する際に重要な役割を果たす。Ｐｏｗは、疎水性の尺度として、定量的な構造−活性関係の研究に適用される。全ての分配測定を、１−オクタノール／水フラスコ攪拌手順を使用して（Ｌｅｏ，ＡＪ．１９９１、「疎水性パラメータ：測定及び計算（Ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ  ｐａｒａｍｅｔｅｒ：ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎ）」、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２０２：５４４−９１）、又は単にＨＰＬＣカラムからの溶質の溶出時間によって実施する。その後、鉄錯体の輸送特性を、オクタノール／水系よりもかなり良好に生体膜を模倣する水／脂質膜系（リポソーム）において試験する（非特許文献４）。
【０３０３】
１−オクタノール（Ｒｉｅｄｅｌ−ｄｅＨａｅｎ、合成等級（２５０〜２７０ｎｍ  ａｂｓ．＜０．０６）及びガラス蒸留脱イオン水を、分配溶液として使用した。Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ  ８４５０Ａダイオードアレイ分光光度計を、標準溶液及び分配した溶液中で、試験した化合物の定量的決定のために使用した。水相ストック溶液を、過剰の１−オクタノールと共に攪拌して予め飽和させ、次いで使用前に一晩静置させた。１−オクタノールストック溶液もまた、１０ｍＭ  ＮａＯＨで予め飽和させ、一晩静置した。１０ｍｌのストッパー付遠心管中で実験を実施した。これらの管を５分間穏やかに反転し、次いで完全な相分離を確実にするために、これらを１，０００〜２，０００ｇで２０分間遠心分離した。水相及び有機相を別々に取り出し、ＵＶ分光光度法によって分析した。
【０３０４】
（ｃ）抗酸化特性
生物学的系において発生したフリーラジカル及び反応性酸素種は、他の因子のなかでもとりわけ、神経変性疾患の原因であると考えられている。これらの化合物がＦｅｎｔｏｎ反応及びＦｅｎｔｏｎ型反応においてフリーラジカル及び反応性酸素種の形成速度を低下させる能力又はそれらの全体的な収率を低下させる能力は、抗酸化型薬物のための重要な前提条件である。従って、これらの化合物の抗酸化特性の信頼性のある測定値が必要である。フリーラジカルが長い寿命を有する場合、直接電子スピン共鳴（ＥＳＲ）分光学が、この種を同定するための簡便な方法であり得る。しかし、不安定なフリーラジカルについて、スーパーオキシド（Ｏ２−）又はヒドロキシル基（．ＯＨ）と同様、他の方法が使用されるべきである。Ｆｅｎｔｏｎ反応及びＦｅｎｔｏｎ型反応に対するこれらの化合物の影響を、デオキシリボースアッセイ及びスピントラッピング法によって測定する。
【０３０５】
デオキシリボースアッセイ（非特許文献２４）は、マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）（これは、加熱下で低いｐＨでチオバルビツール酸（ＴＢＡ）と反応してピンク色の色素を生じる）の形成を引き起こす、ヒドロキシル基によるデオキシリボースの破壊に基づく。この色素の可視光吸収スペクトルは、５３２ｎｍで最大の、非常に強く鋭い吸光度を示す。
【０３０６】
「スピントラッピング」法は、反応系中の低濃度のフリーラジカルを検出及び同定するために開発された。これは、ＥＰＲ（電子常磁性共鳴）技術によって容易に観察可能であるより安定なラジカル生成物を形成するための、反磁性化合物とのフリーラジカルＸ．の反応を含む。この方法は、開始フリーラジカルを「トラップ（捕捉）」するために、長寿命ニトロキシドとしてニトロン化合物又はニトロソ化合物を使用するステップからなる。
【０３０７】
（ｄ）ミトコンドリア単離：
オスＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（３００〜３５０ｇ）を断頭し、脳を直ぐに単離して氷冷等張１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．５）（０．２５Ｍのスクロース、２ｍＭ  ＥＤＴＡ及び脂肪酸を含まない２％ウシ血清アルブミンを含む）（単離緩衝液）中で冷却し、モーター付の５０ｍｌのガラス−テフロン（登録商標）ホモジナイザー（Ｈｅｉｄｏｌｆ、Ｇｅｒｍａｎｙ）で、１：１０（ｗ／ｖ）の比の単離緩衝液中で２００ｒｐｍでホモジナイズする。このホモジネートを１０００ｇで１０分間遠心分離し、次いで得られた上清を１０，０００ｇで１０分間遠心分離する。そのペレットを１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、０．２５Ｍスクロースで洗浄し、再度１０，０００ｇで１０分間遠心分離する。次いでこのステップをもう３回反復する。そのペレットを、１ｍｌ当たり５０ｍｇ〜６０ｍｇのタンパク質の最終濃度で、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、０．２５Ｍスクロース中に再懸濁する。これらのサンプルを使用するまで−１８℃で保存する。
【０３０８】
（ｅ）脂質過酸化の阻害
これらの化合物が鉄及びアスコルベートによって開始されるような脂質過酸化を阻害する能力を、マロンジアルデヒド手順を使用して脳ミトコンドリア調製物において試験する（非特許文献１３；非特許文献２）。
【０３０９】
これらの実験を三連で実施する。７．５μＭのミトコンドリア調製物（０．２５ｍｇのタンパク質）を、７５０μｌの２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）（２５ｐＭアスコルビン酸を含む）中に懸濁する。試験すべき薬物サンプルを、水又はエタノール中に溶解し、この懸濁物に添加する。反応を２．５μＭ又は５μＭのＦｅＳＯ４（１ｍＭのストック溶液由来）の添加及び室温で２時間のインキュベーションによって開始する。この反応を、７５０μｌの２０％（ｗ／ｖ）トリクロロ酢酸の添加によって停止させる。これらのサンプルを１２，０００ｇで１０分間遠心分離する。５００μｌの上清を、５００μｌの０．５％（ｗ／ｖ）チオバルビツール酸と混合し、３０分間９５℃に加熱する。チオバルビツール酸誘導体の吸収を、Ｘ＝５３２ｎｍで光度測定により測定する。ブランク分析は、ミトコンドリアの発光又はＦｅＳＯ４の発光、或いはインキュベーション後の薬物の添加に基づく。
【０３１０】
（ｆ）神経保護効果
鉄キレート剤の神経保護効果を、ｉｎ  ｖｉｖｏ及びｉｎ  ｖｉｔｒｏの両方の系において決定する。
【０３１１】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ実験について、ラット褐色細胞腫タイプ１２（ＰＣ１２）細胞及びヒト神経芽細胞腫ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞を使用して、鉄及びβアミロイドの毒性に応じたキレート剤の神経保護作用を試験する。これらの細胞はドパミンニューロン及びコリン作用性ニューロンのモデルとして使用されるので、細胞生存率を、ＭＴＴ（臭化２，５−ジフェニルテトラゾリウム）試験及びＬＤＨ（乳酸デヒドロゲナーゼ）試験、並びにＨＰＬＣによるドパミン及びチロシンヒドロキシラーゼの測定及びウェスタンによるαアミロイド（可溶性）の放出の測定において試験する。
【０３１２】
ｉｎ  ｖｉｖｏの保護を、ドパミンニューロンのマーカーである線条体のドパミン及びチロシンヒドロキシラーゼを測定することによって、ＰＤ（パーキンソン病）のＭＰＴＰ（１−メチル−４−フェニル−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン）動物モデル（神経変性の非常に生存力のある充分確立されたモデル）において試験する。
【０３１３】
（ｇ）ＰＣ１２細胞培養
ラット褐色細胞腫起源のラットＰＣ１２細胞を、５％ＣＯ２、９５％空気の加湿環境において、グルコース（１ｍｇ／１ｍｌ）、５％ウシ胎仔血清、１０％ウマ血清及び１％のストレプトマイシン／ペニシリンの混合物を補充したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ、ＧＩＢＣＯ、ＢＲＬ）を含む増殖培地中で３７℃で増殖させた。コンフルエントに達したところで培養液を除去し、細胞を激しい洗浄によって剥離させ、２００ｇで５分間遠心分離し、完全血清内容物を含むＤＭＥＭ中に再懸濁した。０．５×１０４細胞／ウェルを、コラーゲン（１０μｇ／ｃｍ２を、処置の前に２４時間付着させた）で予め被覆したマイクロタイタープレート（９６ウェル）中に配置した。
【０３１４】
（ｈ）細胞生存率についてのＭＴＴ試験
（ｇ）に記載されるようなＰＣ１２細胞の付着の２４時間後、この培地を、０．１％  ＢＳＡを含むＤＭＥＭで置換した。１時間のインキュベーション後に試験化合物を細胞に添加した。２４時間のインキュベーション後、細胞を、以前に記載されたようなＭＴＴ試験に供した（非特許文献１１）。吸収を、バックグラウンド読み取りの自動差し引き後に、λ＝５７０／６５０ｎｍでＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｄｕａｌ  Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ  Ｅｌｉｚａ−Ｒｅａｄｅｒにおいて決定した。結果を未処理の混合物の百分率として表す。
【実施例３０】
【０３１５】
溶液中の鉄キレート化
鉄結合を、鉄によりクエンチされたカルセイン（ＣＡＬ）（動的蛍光金属センサー（ｍｅｔａｌｌｏｓｅｎｓｏｒ）である）の蛍光を回復するキレート剤の能力によって決定した。これらのキレート剤の鉄除去特性を、鉄塩を遊離ＣＡＬと混合することによって溶液中で評価した。
【０３１６】
鉄と予め錯体化したカルセイン（Ｆｅ−ＣＡＬ）溶液（Ｈｅｐｅｓ  ２０ｍＭ緩衝化生理食塩水（ｐＨ７．４）＝ＨＢＳ中）１μＭを、室温で示された濃度の異なるキレート剤の存在下でインキュベートし、蛍光強度（４７５ｎｍ−＞５２０ｎｍ）を、１００μｌの最終容量で９６ウェルの培養プレート（Ｎｕｎｃ）を使用して、Ｔｅｃａｎ蛍光プレートリーダーにおいて経時的に追跡した。キレート剤によるＦｅ−ＣＡＬ由来の鉄の時間依存的な錯体化を、蛍光デクエンチング（ｄｅｑｕｅｎｃｈｉｎｇ）によって追跡した。結果を図１Ａ〜１Ｃに示す。１時間のインキュベーション後に得られた蛍光強度を、キレート剤濃度の関数として示す。
【０３１７】
対応するキレート剤についての、対応する最大半減のデクエンチングレベル（μＭ）は以下の通りであった（序列は、最も速い作用から最も遅い作用の順である）：
図１Ａ：ＤＦＯ（０．５）（示さず）＞＞ＨＬＡ１６（３．５）＝ＨＬＡ２０（３．５）＞ＨＬＭ７（５．０）＞ＨＬＭ８（６．０）＞ＨＬＭ９（７．２）＞Ｌ１（８．３）。
図１Ｂ：ＤＦＯ（０．５）（示さず）＞＞ＨＬＡ１６（４．４）＞ＶＫ−２８（５．２）＞ＨＬＡ２０（５．４）＞Ｌ１（８．４）＞Ｍ９（９．７）＞Ｍ１０（９．８５）
図１Ｃ：ＤＦＯ（０．５）（示さず）＞＞ＶＫ−２８（３．２）＞Ｍ７（３．４）＞Ｍ１１（５．４）＞Ｍ１２（６）＞Ｌ１（６．６）。
ＤＦＯ＝デスフェリオキサミンＢ
Ｌ１＝１，２−ジメチル−３−ヒドロキシ−ピリジン−４−オン（デフェリプロン）
【実施例３１】
【０３１８】
Ｋ５６２細胞へのキレート剤の鉄透過
キレート剤の鉄除去特性を、透過性ＣＡＬ−ＡＭプローブでの充填、遊離ＣＡＬのインサイチュ形成及び細胞質ゾルの不安定な鉄の結合によって、ヒト赤白血病Ｋ５６２細胞において評価した。カルセイン−ＡＭは、カルセインと比較して増強された疎水性に起因して、生存細胞の細胞膜を容易に通過する。カルセイン−ＡＭが細胞質へと透過すると、細胞中のエステラーゼによって、細胞の内側に留まるｐＨ非依存的な細胞質ゾル蛍光マーカーである親カルセインへと加水分解される。所定のキレート剤の存在下での蛍光の時間依存的な回復は、鉄／ＣＡＬ含有区画を横切るキレート剤の能力についての連続的な測定を提供した。
【０３１９】
カルセイン取り込み及び細胞内蛍光を、以下のように決定した：Ｋ５６２赤白血病細胞に、３７℃で５分間の０．２５ｍＭの蛍光プローブＣＡＬ−ＡＭとのインキュベーションによってカルセイン（ＣＡＬ）を予め充填し、微量の細胞外関連の蛍光をクエンチするために、抗ＣＡＬ抗体を含むＨＢＳ培地で洗浄及びインキュベートした。これらの懸濁物を９６ウェルプレート中に配置し（１００μｌの最終容量）、この系を３７℃に維持しながら上記のように分析した。示された時間で、示されたキレート剤を、５μＭの最終濃度に達するように添加した。
【０３２０】
結果を２Ａ〜２Ｄに示す。最大半減時間の値（秒）及び蛍光回復の率は以下の通りであった：
図２Ａ：ＳＩＨ：（１２５、１）＞ＨＬＡ２０（１７５、１）＞ＨＬＡ１６（２２５、０．９５）＞ＨＬＭ９（２００、０．５０）、ＨＬＭ８（６００、０．４）、Ｌ１（ＮＤ）ＤＦＯ＞＞（示さず）
図２Ｂ：ＨＬＡ１６（２２０、１）＞ＨＬＡ２０（３９０、１）＞Ｍ１０（１０５０）＞ＶＫ−２８（１２５０、）＞＞、Ｌ１及びＭ９（ＮＤ）＞＞＞）＞＞ＤＦＯ（示さず）
図２Ｃ：ＳＩＨ：（１００、１）＞ＶＫ−２８（１５００、？）＞＞Ｍ１１、Ｍ１２、Ｍ７（ＮＤ）＞＞）＞＞ＤＦＯ（示さず）
図２Ｄは、Ｋ５６２細胞における鉄キレート剤ＨＬＡ２０、ＨＬＡ１６、ＨＬＭ９、ＶＫ−２８の相対的な透過性を示す（値は、ＳＩＨで得られた値と比較して与えられる。１．０は０．００５秒−１の見かけの速度定数を示す（５μＭのキレート剤溶液について１２５秒の入来のｔ１／２と等しい））。
ＳＩＨ＝サリチルアルデヒドイソニコチノイルヒドラゾン。
【実施例３２】
【０３２１】
分化したＰ１９細胞の神経保護
この実験を、ニューロン細胞に分化したＰ１９マウス胚性癌腫細胞で実施した。
【０３２２】
９６ウェルの培養プレート中で増殖した分化したＰ１９ニューロン細胞を、５μＭの示されたキレート剤（ＨＬＭ７、ＨＬＭ８、ＨＬＭ９、ＨＬＡ１６、ＨＬＡ２０、Ｍ７、ＶＫ−２８、ＤＦＯ）又は１ｍＭのアポモルヒネ（Ａｐｏ）のいずれかを含む完全培地中の５０μＭの６−ＯＨＤＡ（６−ヒドロキシドパミン）で６時間処理した。これらの細胞を、５％のＡｌａｍａｒ  ｂｌｕｅを含む新たな培地で引き続いて洗浄及び再懸濁し、４時間インキュベートし、その蛍光を４５０ｎｍの励起及び５９０ｎｍの発光でモニタリングした（Ｔｅｃａｎ  Ｓａｆｉｒｅ蛍光プレートリーダー）。結果を図３に示す。データは、６−ＯＨＤＡで処理していない系と比較した％活性と等しい％保護として与える。
【実施例３３】
【０３２３】
血清飢餓により誘導されたアポトーシスに対するＰＣ１２細胞の神経保護
ＰＣ１２細胞を、無血清培地単独中又は異なる濃度のキレート剤ＶＫ−２８、Ｍ３２、ＨＬＡ２０及びラサジリンを含む無血清培地中で増殖させた。２４時間のインキュベーション後、これらの細胞をＭＴＴ試験に供した。
【０３２４】
結果を図４Ａ〜４Ｂに示す。細胞生存率を、コントロール群として働きかつ１００％とされる、血清を補充した培地中で培養した細胞の百分率として示した。無血清培地中で増殖したＰＣ１２細胞は、（２４時間の時点で）３８％の細胞生存率を有し、これをポジティブコントロールとして使用した。実験データは、平均±ＳＤ（ｒ＝６）として示す。
【０３２５】
図４Ａ〜４Ｂ中に示されるように、キレート剤ＶＫ−２８、ＨＬＡ２０及びＭ３２は全て、血清を引き揚げた後のＰＣ１２細胞の死に対して保護した。２４時間のインキュベーション後、０．１μＭのＶＫ−２８、０．１μＭのＨＬＡ２０又は０．１μＭのＭ３２を含む無血清培地中で増殖したＰＣ１２細胞の生存率は、キレート剤を含まない無血清培地中で増殖したＰＣ１２細胞の生存率とは有意に異なった（Ｐ＜０．０１）。生存細胞の数は、無血清コントロール群（３８％）と比較して、ぞれぞれ８０％、６５％及び５９％まで上昇した。１０倍又は１００倍の濃度のキレート剤ＨＬＡ２０（１μＭ又は１０μＭ）及びＭ３２（１μＭ又は１０μＭ）で、血清の引き揚げにより誘導されるＰＣ１２細胞の死に対する保護に有意な変化は存在しなかった。１μＭの濃度でも、ＶＫ−２８は、血清の引き揚げによって誘導されるＰＣ１２のアポトーシスに対する良好な阻害活性を示した。しかし、１０μＭの濃度で、ＶＫ２８の毒性はますます優勢になった。この濃度は、無血清培地において約７５％のＰＣ１２細胞の死を引き起こした。
【実施例３４】
【０３２６】
ラット脳におけるＭＡＯ活性に対する阻害効果
モノアミンオキシダーゼ（ＭＡＯ）（生体アミンの代謝的分解において重要な役割を果たす酵素）は、２つの機能的形態（ＭＡＯ−Ａ及びＭＡＯ−Ｂ）で存在する。２つの同位酵素は、異なる基質特異性及びインヒビター特異性を有する。
【０３２７】
ｉ．脳ＭＡＯの調製
ラットを断頭し、その脳を計量した氷冷スクロース緩衝液（０．３２Ｍ）中に迅速に採取し、それらの重量を決定した。全ての引き続く手順を０〜４℃で実施した。これらの脳を、Ｔｅｆｌｏｎガラスホモジナイザーで０．２５Ｍスクロース（２０部のスクロースに対して１部の組織）中でホモジナイズし、その後スクロース緩衝液を添加して１０％ホモジネートの最終濃度にした。これらのホモジネートを６００ｇで１５分間遠心分離した。上清画分を取り出し、４５００ｇで３０分間遠心分離し、そのペレットを０．３２Ｍスクロース緩衝液中に希釈し、後のＭＡＯのアッセイのために凍結して保持した。タンパク質濃度を、標準としてウシ血清アルブミンを使用して、５９５ｎｍでＢｒａｄｆｏｒｄ試薬を用いて決定した。
【０３２８】
ｉｉ．ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＭＡＯ阻害活性の決定
ＭＡＯ−Ａ及びＭＡＯ−Ｂの活性を、Ｔｉｐｔｏｎ及びＹｏｕｄｉｍ（１９８３）の適合型方法によって決定した。試験化合物を、０．０５Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中の適切な希釈の酵素調製物（ＭＡＯ−Ｂアッセイについて７０μｇのタンパク質、ＭＡＯ−Ａアッセイについて１５０μｇのタンパク質）に添加した。この混合物を、０．０５Ｍデプレニル／セレジリン（ＭＡＯ−Ｂの特異的インヒビター（ＭＡＯ−Ａの決定のため）又は０．０５Ｍクロルジリン（ｃｌｏｒｇｙｌｉｎ）（ＭＡＯ−Ａの特異的インヒビター（ＭＡＯ−Ｂの決定のため）と共にインキュベートした。インキュベーションを３７℃で１時間実施し、その後ＭＡＯ−Ａの決定のために１４Ｃ−５−ヒドロキシトリプタミンビノキサレート（ｂｉｎｏｘａｌａｔｅ）（１００Ｍ）又はＭＡＯ−Ｂの決定のために１４Ｃ−フェニルエチルアミン１００Ｍを添加し、それぞれ３０分間又は２０分間インキュベーションを続けた。この反応を２Ｍの氷冷クエン酸で停止させ、代謝物を抽出し、ｃｐｍ単位で液体シンチレーション計数によって決定した。
【０３２９】
ｉｉｉ．鉄キレート剤によるＭＡＯ−Ａ及びＭＡＯ−Ｂの阻害
ＭＡＯ−Ａ及びＭＡＯ−Ｂの活性を、種々の濃度の試験化合物とのインキュベーション後に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでラット脳ホモジネートにおいて決定した。試験した化合物の阻害活性を図５Ａ〜５Ｄに示す。
【０３３０】
１つの実験において、ＨＬＡ２０、Ｍ３２、ＶＫ−２８、Ｍ３０、Ｍ３１及びプロパルギルアミン（Ｐ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害活性を、ラット脳ＭＡＯ−Ｂに対して試験した。これらの試験化合物を、１０−７Ｍのクロルジリンを含む緩衝液に添加し、組織ホモジネートと共に３７℃で６０分間インキュベートし、その後１４Ｃ−β−フェニル−エチルアミンを添加した。結果を図５Ａ〜５Ｂに示す。試験化合物の存在下でのＭＡＯ−Ｂ活性は、コントロールサンプル中のＭＡＯ−Ｂ活性の百分率として示した。平均値は、±ｓ．ｅ．平均で示される。
【０３３１】
別の実験において、ＨＬＡ２０、Ｍ３２、ＶＫ−２８、Ｍ３０、Ｍ３１及びプロパルギルアミン（Ｐ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害活性を、ラット脳ＭＡＯ−Ａに対して試験した。これらの試験化合物を、１０−７Ｍのデプレニルを含む緩衝液に添加し、組織ホモジネートと共に３７℃で６０分間インキュベートし、その後１４Ｃ−５−ヒドロキシトリプタミンを添加した。結果を図５Ｃ〜５Ｄに示す。試験化合物の存在下でのＭＡＯ−Ａ活性は、コントロールサンプル中のＭＡＯ−Ａ活性の百分率として示した。平均値は、±ｓ．ｅ．平均で示される。
【０３３２】
これらの実験結果は、試験化合物間で阻害活性において明確な差異が存在することを示した。鉄キレート剤Ｍ３０は、０．１μＭ未満のＩＣ５０値でＭＡＯ−Ａ及びＭＡＯ−Ｂの両方の活性の有意な阻害を引き起こしたが、キレート剤Ｍ３２及びＭ３１は、ＭＡＯ−Ａに対してほとんど何の影響も有さず、かつＭＡＯ−Ｂ活性に対して乏しい阻害効果を有した（それぞれ、１００μＭで１７．２％及び１４．２％の阻害）。ＶＫ−２８及びＨＬＡ２０は、ＭＡＯ−Ａに対して類似の穏やかな阻害活性（それぞれ、１００μＭで１５．１％及び２６．１％の阻害）を示したが、ＭＡＯ−Ｂ活性に対して、ＨＬＡ２０は、ＶＫ−２８の阻害効果よりも強力な阻害効果を示した（ＨＬＡ２０について４２．０％の阻害及びＶＫ−２８について１３．３％の阻害）。プロパルギルアミン（Ｐ）は、それぞれ６６．３μＭ及び１０．１μＭのＩＣ５０値で、濃度依存的な様式でＭＡＯ−Ａ活性及びＭＡＯ−Ｂ活性の両方を優先的に阻害した。
【実施例３５】
【０３３３】
キレート剤の輸送特性
親油性は、薬物の吸収及び分布において重要な役割を果たす。ｎ−オクタノール／水分布係数の対数（ｌｏｇＤ）は、薬物候補の親油性の最も一般に使用される尺度である。本明細書中で、本発明者らはｌｏｇＤを決定するためにｎ−オクタノール／水攪拌フラスコ手順を使用した。結果（表１）は、試験キレート剤の分布係数（ｌｏｇＤ）が、ｐＨ値及び試験した化合物によって大きく変動することを示した。酸性溶液及び塩基性溶液において、全ての試験化合物は、良好な親水性といわれる低いｌｏｇＤ値を有する。これは、塩化オキシニウム（ｏｘｉｎｉｕｍ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）誘導体の形成（酸中）及びナトリウムオキシネート（ｓｏｄｉｕｍ  ｏｘｉｎａｔｅ）誘導体の形成（塩基中）によって説明され得る。表１は、水中でのキレート剤の親油性の順序を示す：ＨＬＭ７（２．１９）＞ＨＬＡ１６（１．７９）＞ＨＬＡ２０（１．５７）＞ＨＬＭ９（−１．７０）＞ＨＬＭ８（＜−２）。これらのデータは、ＨＬＭ９及びＨＬＭ８が、それらの高い親水性に起因して生物学的膜を介した乏しい透過性を有し得、他方でＨＬＭ７、ＨＬＡ１６及びＨＬＡ２０が、それらの脂質可溶性に起因して生物学的膜を横切ることができる可能性があることを示唆している。
【表１】
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【実施例３６】
【０３３４】
脳ミトコンドリア画分における脂質過酸化の阻害
新規キレート剤のラジカル除去特性／抗酸化剤特性を、脂質過酸化アッセイによって決定した。この系は、フリーラジカル損傷から生物学的脂質を保護する抗酸化剤の能力を測定するために使用されている。本研究において、ミトコンドリアにおけるＭＤＡの形成を、５０μＭのアスコルビン酸及び５μＭのＦｅＳＯ４で誘導した。図６に示されるように、試験した全てのキレート剤が脂質過酸化を阻害した。この阻害は用量依存的であった。顕著な阻害効果が２５μＭで全てのキレート剤で観察され、ラジカル損傷を９０％〜９７％低下させた。１０μＭほどの低い化合物濃度で、これらのキレート剤は、ラジカル形成を顕著に低下させた（約４０％の阻害）。この阻害は、試験化合物のラジカル除去特性及び鉄キレート化特性に起因し得る。
【実施例３７】
【０３３５】
局所的光保護
本発明の鉄キレート剤によって提供される局所的光保護のレベルを決定するために、モルモットを試験化合物で局所的に処置し、次いで異なる線量のＵＶ放射に曝露させ、サンプロテクションファクター（ＳＰＦ）を決定する。無毛マウスを、試験化合物で局所的に処置し、次いで紅斑を起こさない線量のＵＶ放射への長期間の曝露に供する。マウスを、皮膚の皺形成及び皮膚の腫瘍について評価する。
【０３３６】
別の実験において、モルモットを試験化合物、日焼け止め及びこれら２つの組み合わせで局所的に処置し、次いで種々の線量のＵＶ放射に曝露して、サンプロテクションファクター（ＳＰＦ）を決定する。無毛マウスを、試験化合物、日焼け止め及びこれら２つの組み合わせで局所的に処置し、次いで紅斑未満の線量のＵＶ放射への長期間の曝露に供する。マウスを、皮膚の皺形成及び皮膚の腫瘍について評価する。
（参考文献）
2011079834.tif 000086
2011079834.tif 000087
2011079834.tif 000088
2011079834.tif 000089
【表２】
2011079834.tif 000090
【表３】
2011079834.tif 000091
【表４】
2011079834.tif 000092
【表５】
2011079834.tif 000093
【表６】
2011079834.tif 000094
【表７】
2011079834.tif 000095
【表８】
2011079834.tif 000096
【表９】
2011079834.tif 000097
【表１０】
2011079834.tif 000098
【図２Ｄ】
2011079834.tif 000115
【図３】
2011079834.tif 000116
【図１Ａ】
2011079834.tif 000117
【図１Ｂ】
2011079834.tif 000118
【図１Ｃ】
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【図２Ａ】
2011079834.tif 000120
【図２Ｂ】
2011079834.tif 000121
【図２Ｃ】
2011079834.tif 000122
【図４Ａ】
2011079834.tif 000123
【図４Ｂ】
2011079834.tif 000124
【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
2011079834.tif 000126
【図５Ｃ】
2011079834.tif 000127
【図５Ｄ】
2011079834.tif 000128
【図６】
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【配列表】
2011079834000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成22年11月22日(2010.11.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式ＩＩからＩＶまでの化合物又はそれらの薬学的に許容される塩：
【化１】
2011079834.tif 000130
[式中、
Ｒ３は、−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−Ｒ８’であり、
Ｒ８’はＨ、Ｘ又はＦｍｏｃであり、
Ｒ９は
（ｉ）Ｈ、
（ｉｉ）−ＣＯ−ＣＨ２−Ｒ１（Ｒ１は、Ｚ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−ＮＨ２（ここでＺはステアリル又はＦｍｏｃである）である配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号１１；配列番号１２；配列番号１３及び配列番号１４で表されるペプチドから選択されるペプチドであり、該ペプチドは、ペプチド内のＬ−又はＤ−システインの−ＳＨ基を介して−ＣＯ−ＣＨ２−基に結合している）、
（ｉｉｉ）−ＣＨ２−ＣＯＯＣＨ２Ｃ６Ｈ５、
（iｖ）
【化２】
2011079834.tif 000131
（ｖ）
【化３】
2011079834.tif 000132
（ｖｉ）
【化４】
2011079834.tif 000133
であり；
Ｒ１０は、Ｘ、−ＣＨ２−ＣＨ（ＳＨ）ＣＯＯＣ２Ｈ５又は
【化５】
2011079834.tif 000134
であり；
ｎは１であり；
Ｒ１１は、
（ｉ）−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−Ｘ、
（ｉｉ）−Ｎ（Ｘ）−ＣＨ２ＣＯＯ−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ５、
（ｉｉｉ）−Ｎ（ＣＨ３）−Ｘ、
（ｉｖ）−Ｎ（Ｘ）−ＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）ＣＯＯＣ２Ｈ５、  
（ｖ）−ＣＨ２−ＮＨ−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）−ＮＨ−Ｘ、
（ｖｉ）−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−ＮＨ−Ｘ、  
（ｖｉｉ）−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−Ｘ、
（ｖｉｉｉ）−ＣＨ（ＣＯＯＣ２Ｈ５Ｈ）−ＮＨ−Ｘ  及び
（ｉｘ）
【化６】
2011079834.tif 000135
からなる群から選択される基であり；
Ｒ１２は、Ｘ、ＣＨ３、ＣＯＯＣ２Ｈ５又は−（ＣＨ２）２−ＯＨであり；
Ｒ１３は、Ｘ、−（ＣＨ２）２−ＯＸ、又は−ＣＯＯ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｘであり；
Ｘはプロパルギル基である］。
【請求項２】
本明細書中、並びに付録ＩＩにおいてＭ１１、Ｍ１２；
付録ＩＩＩにおいてＭ１１ａ、Ｍ１２ａ；及び
付録ＩＶにおいてＭ１１Ｂ、Ｍ１２Ｂ；
と特定される化合物から選択される、請求項１に記載された、式ＩＩの化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
本明細書中及び付録ＶにおいてＭ６Ｂ、Ｍ７Ｂ、Ｍ８Ｂ、Ｍ１８Ｂ、Ｍ１９Ｂ、Ｍ２０Ｂ、Ｍ２１Ｂ、Ｍ２２Ｂ、Ｍ２７Ｂ、Ｍ２８Ｂ、Ｍ３５、Ｍ３６、Ｍ３７、Ｍ３８、Ｍ３９、Ｍ４０、Ｍ４１、Ｍ４４、Ｍ４５及びＭ４６と特定される化合物から選択される、請求項１に記載された、式ＩＩＩの化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
本明細書中及び付録ＩＶにおいてＭ９ｂ、Ｍ１１ｂ、Ｍ１２ｂ、Ｍ１３ｂ、Ｍ１５ｂ、ＨＬＡ１６ｂ、Ｍ１７ａ、ＨＬＡ２０ａ、Ｍ３０ａ、Ｍ３１ａ、Ｍ３３ａ及びＭ３４ｂと特定される化合物から選択される、請求項１に記載された、式ＩＶの化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項５】
請求項１から４までのいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、鉄に対する特異性を有し、かつ鉄キレート化治療による疾患、障害及び状態の治療に有用な両親媒性金属キレート剤に関する。１態様において、この鉄キレート剤は、所望の細胞膜、特に血液脳関門（ＢＢＢ）に、親油性媒体における輸送特性を提供するように設計される。別の態様において、これらのキレート剤は、鉄キレート剤機能並びに神経保護機能を付与する残基及び／又は抗アポトーシス機能及び神経保護機能の両方を付与する残基を有する多機能性化合物の一部である。本発明はさらに、鉄過負荷及び酸化ストレスに関連する疾患、障害及び状態、特にパーキンソン病、アルツハイマー病、脳卒中、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症、フリードライヒ失調症、ハレルフォルデン−スパッツ病、癲癇及び神経外傷のような神経変性疾患、神経変性状態及び神経変性障害の治療及び／又は予防のための医薬組成物及び方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
鉄は、高度に反応性かつ毒性のヒドロキシル基の産生を増強し、従って酸化損傷を刺激することが知られている。ヒトは過剰の鉄を排除する生理学的手段を有さないので、鉄は多数の疾患、障害及び状態に関連している。
【０００３】
身体が過剰量の鉄を蓄積する状態である遺伝性血色素症は、ヒトにおいて最も一般的な遺伝性疾患の１つである。米国において、百万人もの人々が血色素症の証拠を有しており、１０人に１人までの人々が、この障害の遺伝子を有する可能性がある。血色素症は、生涯にわたる食餌からの鉄の過剰な吸収によって特徴付けられ、鉄が身体器官中に蓄積し、最終的に炎症及び損傷を引き起こす。重篤かつ致死的でさえある健康上の影響が生じ得、これには、肝硬変、肝臓癌、心臓の異常（心不全を引き起こす）、糖尿病、性的不能及び関節炎が含まれる。
【０００４】
臨床的サラセミア（重症（マヨール）及び軽症（ミノール））は、ヘモグロビンの産生の欠損によって特徴付けられる遺伝性の障害であり、赤血球の産生の減少及び破壊の増大を引き起こす。鉄過負荷を生じる重篤なサラセミアでは、規則的な輸血及びフォレート補充が与えられる。通常、鉄は大量に摂取されるものではないので、身体は身体が受容した鉄を保持しかつそれ自体いずれの過剰な鉄を排除する手段も有さない。従って、鉄過負荷は、工業国においてサラセミア患者の間で主要な死亡原因である。
【０００５】
頻繁又は規則的な赤血球輸血を受ける、不十分な赤血球造血に起因する鉄吸収の増大と合せてｂ重症サラセミア（ＴＭ）又は不応性貧血（骨髄異形成症候群と同義）を有する患者は、鉄過負荷を迅速に発症する。鉄の毒性は、その負荷が、血液中の可動性細胞内プール又は遊離の非トランスフェリン結合プールを結合する組織結合能力又は血液結合能力を超える場合に始まり、未結合の鉄はヒドロキシラジカルの形成を加速して細胞に対する過酸化損傷を生じる。キレート化治療の不在下では、慢性的に輸血された患者は、膵臓、肝臓及び心臓の機能における進行性の悪化を必然的に受け、かつ通常、鉄過負荷の結果として、生命を脅かす不整脈又は難治性の心不全に罹患する。これは通常、重症サラセミアを有する、あまりキレート化されていないか又はキレート化されていない患者において、人生の次の１０年で生じる。
【０００６】
天然に存在するシデロホアであり、保存プールからそれ自体が迅速に更新される不安定な細胞内プール中の鉄をキレート化するデフェロキサミン（ＤＦＯ）は、１９６０年代初期に導入された。胃腸管からのＤＦＯの最小の吸収及びその短い血中半減期は、有効なキレート化治療の主な目的としての正味のネガティブな鉄バランスを達成するために、この薬物の緩徐な延長された非経口投与を必要とする。ＤＦＯが高価かつ不便であることが、経口的に活性な鉄キレート剤についての研究を導いており、デフェリプロン（ｄｅｆｅｒｉｐｒｏｎｅ）（Ｌ１）が重症サラセミア患者の経口処置のために過去数年間使用されているが、無顆粒球症の危険性は、この薬物の使用の注意深い評価を要求する。他の経口的に活性な鉄キレート剤は、過去十年間に臨床試験に達しているが、鉄キレート化治療におけるそれらの使用は、さらなる調査を必要とする。鉄過負荷の疾患、障害及び状態の処置のための、適切な、好ましくは経口的に有効な鉄キレート剤の同定は、なお未解決のままの問題である。
【０００７】
神経変性疾患（例えば、パーキンソン病（ＰＤ）及びアルツハイマー病（ＡＤ））は、現時点で治癒が得られない神経変性症候群である。両疾患は、最も広範な神経変性障害である。それぞれ、５０歳を超える年齢の集団の約０．５％及び４〜８％がこれらの疾患に罹患しており、それにより、より加齢した集団においてはさらに数が増えることを考慮すると、社会にとっての経済的負担の増大を形成する。従って、神経変性疾患を予防（神経保護）及び処置するのに有効な薬物の開発が、全社会にとって必須である。
【０００８】
ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及び関連の動物モデルを含む多数の研究により、フリーラジカル産生と神経変性疾患及び神経変性障害（例えば、パーキンソン病、アルツハイマー病及び脳卒中並びにＡＬＳ、多発性硬化症、フリードライヒ失調症、ハレルフォルデン−スパッツ病、癲癇及び神経外傷）との間の関連性が示されている。
【０００９】
この理由のために、８−ヒドロキシキノリン及びヒドロキシピリジノンが、抗酸化剤型の薬物として鉄結合のために提案されている。神経変性疾患における鉄蓄積は共通の特徴なので、本発明者らは、鉄蓄積が、神経変性のプロセスにおいて中心的な役割を有することを以前に示していた（Ｙｏｕｄｉｍ、１９８８）。本発明者ら（非特許文献１０）並びに他者（非特許文献８；非特許文献２５）は、アルツハイマー病及びパーキンソン病のための治療剤としての鉄キレート剤の開発をたびたび示唆してきた。
【００１０】
パーキンソン病では、酸素フリーラジカルの形成に対する脳の防御機構が欠損している。パーキンソン病の脳の黒質では、抗酸化酵素の活性が低下している。さらに、鉄濃度は、パーキンソン病の黒質緻密部中及び黒化したドパミンニューロン内で有意に上昇する。最近の研究はまた、脳中の白質路及び核における鉄の有意な蓄積が、神経変性障害及び運動障害の症状の発症に先行することを示している。実際、鉄はＢＢＢを横切らないので、神経変性部位での鉄の蓄積は、神経変性疾患の不思議の１つである。鉄が何処に由来するか、なぜ蓄積するかは未知である。
【００１１】
アルツハイマー病（ＡＤ）の病因及びコリン作用性ニューロン変性の機構は、不明のままである。それにもかかわらず、ＡＤの化学的病理学は、パーキンソン病に対する以下の多数の類似性を示す：いくつか挙げると、増大した鉄の関与、シトクロムＣの放出、α−シヌクレイン凝集の増大、酸化ストレス、過酸化水素の除去に必須の因子である組織還元型グルタチオン（ＧＳＨ）の喪失、ミトコンドリア複合体Ｉ活性の低下、脂質の過酸化の増大及びカルシウム結合タンパク質である２８ｋＤａのカルビンジンの喪失。これらの類似性には、疾患の進行性の性質、死につつあるニューロンの周囲及び頂部での反応性ミクログリアの増殖、酸化ストレスの発生及び炎症プロセスもまた含まれる。
【００１２】
酸素フリーラジカルは、タンパク質変性、酵素不活化及びＤＮＡ損傷に関連して、細胞膜の脂質の過酸化を生じ、最終的に神経変性疾患において細胞死を生じることが示されている。神経変性疾患の顕著な様相の１つは、神経変性部位での有意な量の鉄の蓄積及び沈着である。ＡＤでは、ミクログリア内及びニューロン内並びにプラーク及び変化において、鉄が蓄積する。最近の報告は、ＡＤの病原性が、鉄のような金属との異常な相互作用によって媒介され得る特徴的な新皮質のβアミロイド沈着に関連しているという証拠を提供している。実際、鉄は、βアミロイドタンパク質の凝集だけでなくα−シヌクレインの凝集をも引き起こし、より大きい神経毒性を促進すると考えられている。これは、キレート可能な遊離の鉄が、ニューロンのアポトーシスを引き起こす酸化ストレス及び炎症プロセスの誘導において中心的な役割を有し得るという概念を導いた。鉄及びラジカル酸素種は、ＡＤ脳におけるその増大がＡＤの病理の１つの特徴である細胞傷害性炎症促進性サイトカインであるＩＬ−１、ＩＬ−６及びＴＮＦ−αの促進を担うと考えられている炎症促進性転写因子であるＮＦκＢを活性化する。遷移金属として、鉄は過酸化水素とのＦｅｎｔｏｎ化学に関与して、全てのラジカル酸素種のうちで最も反応性の高い反応性ヒドロキシル基を発生させるので、これは論理的であるとみなされる。このラジカルは、細胞死の病理並びに多数の毒素及び神経毒（６−ヒドロキシドパミン、ＭＰＴＰ、カイナイト（ｋａｉｎｉｔｅ）、ＡＤのストレプトコジンモデル）の作用機構に関与している。さらに、このような毒素は、神経変性疾患（ＡＤ、パーキンソン病及びハンチントン舞踏病）の病理の多くを模倣し、その１つの特徴は、神経変性部位での鉄の蓄積であるが、他の金属の蓄積ではない。
【００１３】
ラットにおいて鉄により誘導された「パーキンソニズム」及び鉄キレート剤デスフェリオキサミンの黒質内投与が、黒質線条体のドパミンニューロンの６−ＯＨＤＡにより誘導された病変に対してラットを保護した、本発明者らの以前の研究（非特許文献２）において証明されたように、鉄単独又は神経毒（例えば、ドパミン作用性神経毒である６−ヒドロキシドパミン（６−ＯＨＤＡ））によりその結合部位から脱区画化された鉄は、酸化ストレス及び神経変性を誘導し得る。従って、黒質におけるドパミン作用性神経変性のプロセスの処置又は遅延が、ウィルソン病の処置において使用される銅キレート剤Ｄ−ペニシラミンと類似の様式で、血液脳関門を横切ることができる鉄キレート剤によって影響され得ることが示唆されている。パーキンソン病の処置のためのこの治療アプローチは、遅発性ジスキネジー、アルチハイマー病及びハレルフォルデン−スパッツ病のような他の金属関連の神経学的障害に適用され得る。
【００１４】
脳卒中は、今日の西洋社会における３番目の主要死亡原因であり、心臓疾患及び癌だけがこれを上回っている。この疾患の全体的な罹患率は、集団の０．５％〜０．８％である。脳卒中は、脳血管損傷から生じる神経学的障害（例えば、四肢の麻痺、言語障害及び記憶障害、視覚及び聴覚の欠損など）の突然の出現によって特徴付けられる。
【００１５】
出血及び虚血は、脳卒中の２つの主要原因である。脳への正常な血液供給の障害は、障害を受けた呼吸及びエネルギー代謝、ラクトアシドーシス（ｌａｃｔａｃｉｄｏｓｉｓ）、障害を受けた細胞カルシウムホメオスタシス、興奮性神経伝達物質の放出、上昇した酸化ストレス、フリーラジカルの形成などを含む、正常な細胞代謝への迅速な損傷と関連する。最終的に、これらの事象は、脳の細胞死及び神経学的機能不全を引き起こす。
【００１６】
脳卒中の処置は主に外科的である。損傷した領域において正常な血液灌流を回復し得る薬物、並びに細胞損傷に関連する上記に列挙された損傷事象を克服するように設計された薬物についての研究において、侵襲性の低い治療的介入においてかなりの試みが投入されている。
【００１７】
酸化ストレス及びフリーラジカル形成は、組織損傷及び細胞死において主要な役割を果たしている。これらのプロセスは、遷移金属イオン、主に鉄及び銅によって触媒される。脳卒中の場合、血管損傷が含まれるので、鉄は、鉄キレート剤によって予防され得るプロセスであるフリーラジカル形成のために利用可能である。実際、公知のフリーラジカルスカベンジャーであるラザロイド（ｌａｚａｒｏｉｄｅ）（２１−アミノステロイド）を用いると、動物において誘導された局所的及び全体的な虚血損傷の有意な改善が達成されている。
【００１８】
鉄キレート剤及びラジカルスカベンジャーは、神経変性の動物モデルにおいて強力な神経保護活性を有することが示されている。しかし、このような化合物での主要な問題点は、このような化合物がＢＢＢを横切らないことである。原型的な鉄キレート剤であるＤｅｓｆｅｒａｌ（デスフェリオキサミン）は、本発明者らによって、パーキンソン病の動物モデルにおいて高度に強力な神経保護剤であることが最初に示された（非特許文献２）。しかし、ＤｅｓｆｅｒａｌはＢＢＢを横切らず、かつ中心に注射される必要がある。Ｄｅｓｆｅｒａｌは、糖尿病のストレプトゾシンモデルに対しても保護する。
【００１９】
生きた生物中のフリーラジカルは、反応性の低い種（例えば、Ｈ２Ｏ２、［Ｏ２−］、チオール、過酸化脂質）との遷移金属イオン（特に銅及び鉄）の反応によって産生されると考えられている。抗酸化金属キレート剤は、遊離金属イオン（特に銅及び鉄）又は防御システムの酵素の活性中心由来の金属イオンを結合することによって、ｉｎ  ｖｉｖｏの酸化剤／抗酸化剤のバランスに影響を与え得、従って、ドパミン作用性及びコリン作用性の神経変性のプロセスに影響を与え得、神経変性疾患に対する大きな治療的可能性を有する。
【００２０】
加齢における鉄の蓄積及び結果として生じる酸化ストレスは、加齢及び加齢関連の神経変性障害における可能な原因因子であることが示唆されている（非特許文献６）。反応性酸化種が加齢プロセスにおいて中心的な役割を果たし、皮膚が身体の最も外側の障壁として酸化ストレスの種々の外因性供給源（特にＵＶ照射）へと曝露されるという証拠が増大している。これらは、光加齢と称される外来型の皮膚加齢を担うと考えられている（非特許文献２１）。従って、鉄キレート剤は、一般に首尾よい加齢に有利であること、局所適用される場合、首尾よい皮膚の加齢に有利であることが示唆されている（非特許文献２２）。
【００２１】
鉄は、酸素ラジカル産生へのその関与によって明らかに、加齢においてだけではなく、皮膚の光加齢における要因である。特定の局所的鉄キレート剤は、光保護的であることが見出された（非特許文献３；非特許文献１８）。皮膚線維芽細胞中の脂質及びタンパク質に対するＵＶＡ放射により誘導される酸化損傷は、鉄及び一重項酸素に依存することが示された（非特許文献２７）。従って鉄キレート剤は、ＵＶ放射曝露に対する保護を提供するために、任意選択で日焼け止め組成物と共に、化粧品製剤及び非化粧品製剤において使用され得る。
【００２２】
鉄過負荷に関連する他の疾患、障害又は状態には、以下が含まれる：（ｉ）ＨＩＶ感染及びＡＩＤＳを含むウイルス感染−酸化ストレス及び鉄は、ＨＩＶ−１の活性化において重要であることが記載されており、鉄キレート化は、抗ウイルス剤と組み合わせて、ウイルス疾患、特にＨＩＶ疾患の処置を改善するために付加され得る（非特許文献２６）；（ｉｉ）原生動物（例えば、マラリア）感染；（ｉｉｉ）酵母（例えば、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）感染；（ｉｖ）癌−いくつかの鉄キレート剤は抗腫瘍活性を示すことが示されており、単独でか又は他の抗癌治療と組み合わせてかのいずれかで、癌治療のために使用され得る（非特許文献５）；（ｖ）鉄キレート剤は、アントラサイクリン新生物薬物によって誘導された心毒性を予防し得る（非特許文献１６）；（ｖｉ）炎症障害−鉄及び酸化ストレスは、炎症性関節疾患（例えば、慢性関節リウマチ）に関連することが示されている（非特許文献１；非特許文献１７；非特許文献２０）；（ｖｉｉ）糖尿病−鉄キレート剤は、糖尿病モデルラットにおいて糖尿病を遅延させることが示されている（非特許文献２３）；（ｖｉｉｉ）鉄キレート剤は、例えば再灌流損傷におけるフリーラジカル発生に関連する損傷を予防するための、心血管疾患の処置のための潜在的な候補であることが記載されている（非特許文献１５；非特許文献９）；（ｉｘ）鉄キレート剤は、心臓、肺又は腎臓のような移植が意図された器官の保存のためにｅｘ  ｖｉｖｏで有用であり得る（非特許文献１６）。
【００２３】
抗酸化剤型薬物としてのキレート化剤の使用における主要な問題点の１つは、細胞膜又は他の生物学的障壁を介したこれらの配位子又はそれらの金属錯体の輸送が制限されていることである。
【００２４】
脳を作用部位として有する薬物は、一般に、最大のｉｎ  ｖｉｖｏの生物学的活性を得るために、血液脳関門（ＢＢＢ）を横切ることができなければならない。神経変性疾患において最もよく確立された鉄キレート化薬物であるＤｅｓｆｅｒａｌの有効性は、その効果のない輸送特性並びに高い脳毒性及び眼毒性によって制限される。
【００２５】
８−ヒドロキシキノリンは、鉄に対する強力なキレート化剤であり、かつそれら自体によってフリーラジカルを除去し得る２つの芳香族環を含む。本発明者らの以前のＰＣＴ公開ＷＯ  ００／７４６６４号（特許文献１）において、種々の鉄キレート剤が開示されており、パーキンソン病の予防におけるそれらの作用が示されている。リード化合物である５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イルメチル］−８−ヒドロキシキノリン（本明細書中でＶＫ−２８と称する）は、ＢＢＢを横切ることができ、かつパーキンソン病の動物モデルにおいて６−ヒドロキシドパミン（６−ＯＨＤＡ）に対して活性であることが示された。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２６】
【特許文献１】国際公開００／７４６６４号
【非特許文献】
【００２７】
【非特許文献１】Andrews FJ, Morris CJ, Kondratowicz G, Blake DR. (1987) "Effect of iron chelation on inflammatory joint disease". Ann Rheum Dis. 46 (4): 327-33.
【非特許文献２】Ben-Shachar, D, Eshel, G, Finberg, JP and Youdim, MB. (1991). "The iron chelator desferrioxamine (Desferal) retards 6-hydroxydopamine-induced degeneration of nigrostriatal dopamine neurons." J Neurochem,56: 1441-1444.
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【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２８】
神経保護活性及び／又は血液脳関門を含む細胞膜を介した良好な輸送特性をも示す、新規の鉄キレート剤を提供することが、非常に所望される。
【００２９】
本発明は、鉄に対する特異性を有しかつ親油性媒体中で神経保護特性及び／又は良好な輸送特性を示す、両親媒性金属キレート剤に関する。
【００３０】
１態様において、本発明は、鉄キレート剤機能、並びに化合物に神経保護機能を付与する残基、化合物に抗アポトーシス機能及び神経保護機能を合せた機能を付与する残基又はこれら両方の残基からなる群から選択される残基を含む化合物と、その薬学的に許容される塩とを提供する。
【００３１】
この鉄キレート剤機能は好ましくは、８−ヒドロキシキノリン残基、ヒドロキサメート残基又はピリジノン残基によって提供され、この神経保護機能は、システイン残基若しくはアラニン残基、又は神経保護ペプチド、神経保護類似体若しくはそれらの神経保護フラグメントの残基によって提供され得、かつ抗アポトーシス機能及び神経保護機能を合せた機能は好ましくは、プロパルギル基によって提供される。
【００３２】
別の態様において、本発明は、本明細書中以下の記載及び特許請求の範囲に規定されるような、式ＩからＩＶまでの化合物及びそれらの薬学的に許容される塩を提供する。
【００３３】
鉄過負荷及び酸化ストレスに関連する疾患、障害及び状態（例えば、神経変性疾患及び神経変性障害並びに脳血管疾患及び脳血管障害、新生物疾患、血色素症、サラセミア、心血管疾患、糖尿病、炎症障害、アントラサイクリン心毒性、ウイルス感染、原生動物感染、酵母感染が含まれるが、これらに限定されない）の治療及び／又は予防のため、加齢を遅延させるため、加齢並びに／或いは日光及び／又はＵＶ光への曝露に関連する皮膚の加齢並びに／或いは皮膚損傷の予防及び／又は治療のために有用である。
【００３４】
さらなる態様において、本発明は、薬学的に許容される担体及び本発明の化合物を含む医薬組成物を提供する。
【００３５】
なお別の態様において、本発明は、本発明の化合物を含む化粧品組成物を提供する。
【００３６】
なおさらなる態様において、本発明は、鉄キレート化治療のための医薬組成物の調製のための本発明の化合物の使用を提供する。
【００３７】
なお別の態様において、本発明は、有効量の本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩を、鉄キレート化治療を必要とする個体に投与するステップを含む、鉄キレート化治療のための方法を提供する。
【００３８】
明細書の記載及び特許請求の範囲において使用される採用された呼称により規定される化合物の式は、本記載の末尾にて付録ＩからＶＩまでに示される。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１Ａ】鉄と予め錯体化したカルセイン（Ｆｅ−ＣＡＬ）溶液を使用した、本発明のキレート剤ＨＬＭ７、ＨＬＭ８、ＨＬＭ９、ＨＬＡ１６、ＨＬＡ２０；及び公知の鉄キレート剤デフェリプロン（Ｌ１）による鉄キレート化（溶液中）を示すグラフの図である。
【図１Ｂ】鉄と予め錯体化したカルセイン（Ｆｅ−ＣＡＬ）溶液を使用した、本発明のキレート剤ＨＬＡ１６、ＨＬＡ２０、Ｍ９、Ｍ１０；並びに公知の鉄キレート剤デフェリプロン（Ｌ１）及びＶＫ−２８による鉄キレート化（溶液中）を示すグラフの図である。
【図１Ｃ】鉄と予め錯体化したカルセイン（Ｆｅ−ＣＡＬ）溶液を使用した、本発明のキレート剤Ｍ７、Ｍ１１、Ｍ１２；並びに公知の鉄キレート剤デフェリプロン（Ｌ１）及びＶＫ−２８による鉄キレート化（溶液中）を示すグラフの図である。
【図２Ａ】本発明のキレート剤ＨＬＭ７、ＨＬＭ８、ＨＬＭ９、ＨＬＡ１６、ＨＬＡ２０；並びに公知の鉄キレート剤デフェリプロン（Ｌ１）及びサリチルアルデヒドイソニコチノイルヒドラゾン（ＳＩＨ）の、Ｋ５６２細胞への鉄透過を示す図である。
【図２Ｂ】本発明のキレート剤ＨＬＡ１６、ＨＬＡ２０、Ｍ９、Ｍ１０；並びに公知の鉄キレート剤デフェリプロン（Ｌ１）及びＶＫ−２８の、Ｋ５６２細胞への鉄透過を示す図である。
【図２Ｃ】本発明のキレート剤Ｍ７、Ｍ１１、Ｍ１２；及び公知の鉄キレート剤サリチルアルデヒドイソニコチノイルヒドラゾン（ＳＩＨ）及びＶＫ−２８の、Ｋ５６２細胞への鉄透過を示す図である。
【図２Ｄ】本発明のキレート剤ＨＬＭ９、ＨＬＡ１６、ＨＬＡ２０；並びに公知の鉄キレート剤ＶＫ−２８、デスフェリオキサミンＢ（ＤＦＯ）及びサリチルアルデヒドイソニコチノイルヒドラゾン（ＳＩＨ）の、Ｋ５６２細胞への鉄透過を示す図である。
【図３】６−ＯＨ−ドパミンで処理した分化したニューロンＰ１９細胞に対する本発明のキレート剤ＨＬＭ７、ＨＬＭ８、ＨＬＭ９、ＨＬＡ１６、Ｍ７、ＨＬＡ２０及びアポモルヒネ（Ａｐｏ）の神経保護効果を示す図である。
【図４Ａ】公知のキレート剤ラサジリンと比較した、本発明のキレート剤Ｍ３２による、血清飢餓により誘導されたアポトーシスに対するＰＣ１２細胞の保護を示す図である。
【図４Ｂ】公知のキレート剤ラサジリン及びＶＫ−２８と比較した、本発明のキレート剤ＨＬＡ２０による、血清飢餓により誘導されたアポトーシスに対するＰＣ１２細胞の保護を示す図である。
【図５Ａ】ラット脳ＭＡＯ−Ｂに対するＨＬＡ２０及びＭ３２；及びＶＫ−２８のｉｎ  ｖｉｔｒｏの阻害作用を示すグラフの図である。
【図５Ｂ】ラット脳ＭＡＯ−Ｂに対するＭ３０及びＭ３１；及びプロパルギルアミン（Ｐ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏの阻害作用を示すグラフの図である。
【図５Ｃ】ラット脳ＭＡＯ−Ａに対するＭ３０及びＭ３１；及びプロパルギルアミン（Ｐ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏの阻害作用を示すグラフの図である。
【図５Ｄ】ラット脳ＭＡＯ−Ａに対するＭ３２及びＨＬＡ２０；及びＶＫ−２８のｉｎ  ｖｉｔｒｏの阻害作用を示すグラフの図である。
【図６】５．０μＭのＦｅ２ＳＯ４／５０μＭのアスコルビン酸の存在下での、本発明のキレート剤ＨＬＭ７、ＨＬＭ８、ＨＬＭ９、ＨＬＡ１６及びＨＬＡ２０による脂質過酸化の阻害を示す図である。結果は、平均±ＳＥＭ、ｎ＝３、ｐ＜０．０５である。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
１つの広い態様において、本発明は、鉄キレート剤機能、並びに化合物に神経保護機能を付与する残基、化合物に抗アポトーシス機能及び神経保護機能を合せた機能を付与する残基又はこれら両方の残基からなる群から選択される残基を含む化合物を提供する。
【００４１】
１つの最も好ましい実施形態において、抗アポトーシス機能及び神経保護機能を合せた機能を付与する残基は、抗パーキンソン薬物であるラサジリン［Ｎ−プロパルギル−（１Ｒ）−アミノインダン］の抗アポトーシス効果及び神経保護効果において重要な役割を果たすとして最近記載されたプロパルギル部分である（非特許文献２８）。
【００４２】
本発明の化合物における鉄キレート剤機能は、８−ヒドロキシキノリン残基、ヒドロキサメート残基及びピリジノン残基からなる群から選択される残基によって提供される。
【００４３】
１つの好ましい実施形態において、この鉄キレート剤機能は、神経保護機能並びに／又は抗アポトーシス機能及び神経保護機能を合せた機能を付与する残基がキノリン環の５位、６位又は７位を介して連結され得る８−ヒドロキシキノリン基によって提供される。より好ましい実施形態において、この鉄キレート化基は、次式の８−ヒドロキシ−５−キノリニル基であり、最も好ましくは、８−ヒドロキシ−５−キノリニルメチレン基である。
【００４４】
別の好ましい実施形態において、この鉄キレート剤機能は、次式：
【化１】
2011079834.tif 000136
の３−ヒドロキシピリジン−４−オン又は１−ヒドロキシピリジン−２−オンによって提供される。
【００４５】
上記の式において、Ｒは、キノリン環の位置５、位置６又は位置７、低級アルキル、好ましくはメチル基によってさらに置換され得る３−ヒドロキシ−４−ピリジノン環の位置１、位置２、位置５又は位置６、及び１−ヒドロキシ−２−ピリジノン環の位置４又は位置５において連結され得る、神経保護機能並びに／又は神経保護機能及び抗アポトーシス機能を合せた機能を有する基を示す。１つの好ましい実施形態において、この鉄キレート剤機能は、所望のさらなる官能基によって位置１にて置換された２−メチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン基によって提供される。
【００４６】
提唱されたＮ−ヒドロキシピリジン−２−オン及び３−ヒドロキシピリジン−４−オンは、以下の３つの理由のために、適切なタイプの候補鉄キレート剤である：（１）ヒドロキシピリジノンは、それらの特性及び生物学的試験の結果の両方を考慮すると、最も有望な経口鉄キレート剤である−１つのヒドロキシピリジノンであるデフェリプロン（ＣＰ２０又はＬ１）は、サラセミア、癌、白血病、血液透析及び他の患者において世界中で使用される経口鉄キレート化剤である（非特許文献２９）；（２）いくつかのヒドロキシピリジノン（例えば、ＣＰ２０、ＣＰ２４、ＣＰ９４）は、ＢＢＢを横切ることができることが証明されている（非特許文献７）；及び（３）ヒドロキシピリジノン間には、ＤＯＰＡ構造における鉄キレート剤基であるカテコールとの多数の構造的類似性が存在する。
【００４７】
別の実施形態において、鉄キレート化機能は、ヒドロキサメート基によって提供される。ヒドロキサメートは、鉄キレート剤として公知である。数十年にわたって、デスフェリオキサミンＢ（Ｄｅｓｆｅｒａｌ）は、その使用に関連する多くの問題点にもかかわらず、鉄過負荷処置のために選択される治療的鉄キレート剤であった。
【００４８】
本発明の１実施形態において、本発明の化合物に神経保護機能を付与する残基は、神経保護ペプチド、神経保護類似体及びそれらの神経保護フラグメントからなる群から選択される。
【００４９】
本発明の化合物において使用され得る神経保護ペプチドは、血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）、ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）、サブスタンスＰ及びエンケファリンであり得るが、これらに限定されない。
【００５０】
１つの好ましい実施形態において、この神経保護機能は、１つのアミノ酸残基が、鉄キレート化残基がＬ−Ｃｙｓ残基又はＤ−Ｃｙｓ残基の−Ｓ−原子を介して連結されるＬ−システイン残基又はＤ−システイン残基によって置換されたＶＩＰ、ＧｎＲＨ、サブスタンスＰ若しくはエンケファリン又はそれらのフラグメントの残基によって提供される。
【００５１】
本発明の１つの実施形態において、この神経保護ペプチドは、元々胃腸系から単離された塩基性の２８アミノ酸のペプチドである血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）であり、これは、ＨＩＶ由来のエンベロープタンパク質、テトロドトキシン及びβアミロイドペプチドを含む種々の神経毒性物質から中枢神経系中のニューロンを保護することが示されている。βアミロイドペプチドは、アルツハイマー病における脳アミロイドプラークの主要成分であり、神経毒性であること及びアルツハイマー病の発症及び進行に関連することが示されている。ＶＩＰはＢＢＢを横切らないので、それ自体可能性のある神経保護剤としての臨床的な使用にとっての限定を示す。ＶＩＰの親油性誘導体（例えば、ステアリル−ＶＩＰ）はＢＢＢを横切る。しかし、より効率的な透過のため及び経済的な観点から、生物学的障壁を介したよりよい透過を有しつつ、親ペプチド（ＶＩＰ）の活性を模倣するかなり小さい分子を有することが所望される。本発明者らの１人の研究室において、ＶＩＰの４アミノ酸の脂質誘導体（ステアリル−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−ＮＨ２−配列番号１）が、そのレセプターの結合及び活性化を介して親ペプチド（ＶＩＰ）の活性を超えること、及び神経変性疾患に対する薬物設計のためのリード化合物を提供することが見出された（非特許文献１４）。
【００５２】
従って、本発明の１実施形態において、この神経保護機能は、配列番号２：
Ｚ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−ＮＨ２（式中、ＺはＨ又はステアリル（Ｓｔ）若しくはＦｍｏｃのような疎水性基である）のＶＩＰフラグメントによって付与される。
【００５３】
１実施形態において、この鉄キレート剤は、８−ヒドロキシキノリニルメチル基であり、かつこの化合物は、式：
【化２】
2011079834.tif 000137
を有する。
【００５４】
このモデルにおいて、ペプチドＬｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−ＮＨ２（配列番号１）は、神経保護効果のためのコア活性部位である。Ｔｙｒの芳香族フェノール部分は、抗酸化活性部位として働く鉄キレート剤８−ヒドロキシキノリンによって置換される。疎水性基Ｒは、ＢＢＢを介した輸送特性を制御するために、分子全体の親油性を調整するために使用され得る。
【００５５】
８−ヒドロキシ−５−キノリニルメチル残基（ＨＱ）を含む上記式を含む化合物の例は、本明細書中で付録ＩＩにおいてＳｔＫＫＣ（ＨＱ）Ｌ（Ｍ６）及びＦｍｏｃ−ＫＫＣ（ＨＱ）Ｌ（Ｍ７）と称される化合物である。本明細書中で付録ＩにおいてＳｔＫＫＣ（ＨＱ−Ｐｒ）Ｌ（Ｍ６Ａ）及びＦｍｏｃ−ＫＫＣ（ＨＱ−Ｐｒ）Ｌ（Ｍ７Ａ）と称される対応する化合物は、さらに、キノリン環の５位で−ＣＨ２基に連結されたプロパルギルアミノ（Ｐｒ）基を有する。
【００５６】
配列番号２のＶＩＰフラグメント類似体を含む本発明のさらなる化合物の例は、アミノプロパルギル基もまた含む、本明細書中で付録ＶにおいてＭ６Ｂ及びＭ７Ｂと称されるヒドロキサメートである。
【００５７】
ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）は、ゴナドトロピンである黄体形成ホルモン（ＬＨ）及び卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の下垂体前葉からの放出を制御する、視床下部の神経分泌細胞において産生される神経ホルモンである。このペプチドは後に、脳において神経伝達物質及び／又は神経調節物質として機能し、かつ良好な輸送特性を有することが見出された（ＧｎＲＨはＢＢＢを横切ることができる）。現在、いくつかのＧｎＲＨ類似体が、避妊のため、並びに前立腺癌及び乳癌を含む種々のホルモン依存性の疾患の処置のために、臨床試験中であるか又は臨床的に使用されているかのいずれかである。抗酸化コアとしての鉄キレート剤（例えば、ヒドロキサメート、ピリジノン又は８−ヒドロキシキノリン）とのＧｎＲＨ類似体の組み合わせは、神経変性疾患の処置において保護剤として特に想定される。
【００５８】
ＧｎＲＨは、以下の配列のデカペプチドである（アミノ末端の５−オキソプロリンはしばしば、ピログルタミン酸−ｐＧｌｕと示される）：
５−オキソ−Ｐｒｏ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ２（配列番号３）。
【００５９】
位置５のアミノ酸残基（Ｔｙｒ）又は位置６のアミノ酸残基（Ｇｌｙ）がそれぞれＬ−Ｃｙｓ又はＤ−Ｃｙｓによって置換されたＧｎＲＨの２つの類似体を調製した。これらの改変は、ＧｎＲＨの生物活性に有意に影響を与えないことが予測される。さらに、これらの変化は、スーパーアゴニスト（ｓｕｐｅｒａｇｏｎｉｓｔ）を生じ得る。システイン位置（５又は６）でのこの類似体の遊離ＳＨ基は、これらの化合物を特定の化学的改変のための良好な候補にする。この変化（すなわち、位置６での変化）は、この類似体のタンパク質分解に対する安定性を改善するようにも働く。
【００６０】
得られたＧｎＲＧ類似体は、以下のような配列番号４及び配列番号５によって特定される配列を有する：
2011079834.tif 000138
【００６１】
Ｌ−Ｃｙｓ残基又はＤ−Ｃｙｓ残基のＳ原子に、鉄キレート剤機能が結合される。例えば、８−ヒドロキシ−５−キノリニルメチル残基（ＨＱ）を有する得られた化合物は、本明細書中で付録ＩＩにおいてＬ−Ｃｙｓ５（ＨＱ）ＧｎＲＨ（Ｍ８）及びＤ−Ｃｙｓ６（ＨＱ）ＧｎＲＨ（Ｍ２２）と称される化合物である。本明細書中で付録ＩにおいてＬ−Ｃｙｓ５（ＨＱ−Ｐｒ）ＧｎＲＨ（Ｍ８）及びＤ−Ｃｙｓ６（ＨＱ−Ｐｒ）ＧｎＲＨ（Ｍ２２）と称される対応する化合物はさらに、キノリン環の５位で−ＣＨ２基に連結されたプロパルギルアミノ（Ｐｒ）基を有する。
【００６２】
配列番号４又は配列番号５のＧｎＲＨ類似体を含む本発明のさらなる化合物の例は、プロパルギルアミノ基もまた含む、本明細書中で付録ＶにおいてＭ８Ｂ及びＭ２２Ｂと称されるヒドロキサメートである。
【００６３】
本発明によれば、類似のＣｙｓ含有ＧｎＲＨ類似体が、ＧｎＲＨの類似体（例えば、リュープロリド、ナファレリン、ゴセレリン、ヒストレリン（ｈｉｓｔｒｅｌｉｎ）及びＤ−Ｌｙｓ６ＧｎＲＨであるがこれらに限定されない）から開始して、次いでこれらをＨＱ残基、ピリジノン残基又はヒドロキサメート残基に結合させ、任意選択でプロパルギルアミノ残基に結合させることにより、調製され得る。
【００６４】
サブスタンスＰ（ＳＰ）は、脊椎動物の末梢神経系及び中枢神経系に広く分布するペプチド神経伝達物質である。ＳＰは、交感神経系においてニューロンニコチン性アセチルコリンレセプター（ｎＡＣｈＲ）の調節に関与している。サブスタンスＰ類似体は、神経変性疾患の制御において薬物として有用であり得る。
【００６５】
サブスタンスＰは、配列：
Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ２（配列番号６）
のウンデカペプチドである。
【００６６】
位置７のアミノ酸残基（Ｐｈｅ）又は位置８のアミノ酸残基（Ｐｈｅ）がＣｙｓによって置換されたサブスタンスＰの２つの類似体を調製し、以下の配列のペプチド：
2011079834.tif 000139
を得た。
【００６７】
Ｃｙｓ残基のＳ原子に、鉄キレート剤機能が結合される。例えば、８−ヒドロキシ−５−キノリニルメチル残基（ＨＱ）を有する得られた化合物は、本明細書中で付録ＩＩにおいてＣｙｓ７（ＨＱ）サブスタンスＰ（Ｍ２７）及びＣｙｓ８（ＨＱ）サブスタンスＰ（Ｍ２８）と称される化合物である。本明細書中で付録ＩにおいてＣｙｓ７（ＨＱ−Ｐｒ）サブスタンスＰ（Ｍ２７Ａ）及びＣｙｓ８（ＨＱ−Ｐｒ）サブスタンスＰ（Ｍ２８Ａ）と称される対応する化合物はさらに、キノリン環の５位で−ＣＨ２基に連結されたプロパルギルアミノ基（Ｐｒ）を有する。
【００６８】
配列番号７又は配列番号８のサブスタンスＰ類似体を含む本発明のさらなる化合物の例は、プロパルギルアミノ基もまた含む、本明細書中で付録ＶにおいてＭ２７Ｂ及びＭ２８Ｂと称されるヒドロキサメートである。
【００６９】
Ｍｅｔ５−エンケファリン及びＬｅｕ５−エンケファリンは、それぞれ以下の配列：
2011079834.tif 000140
の、エンドルフィンのクラスに属する２つの天然に存在するペンタペプチドである。
【００７０】
位置４のＰｈｅ残基又は位置１のＴｙｒ残基のいずれかがＣｙｓ残基で置換された、以下：
2011079834.tif 000141
のような、Ｍｅｔ５−エンケファリン（配列番号９）及びＬｅｕ５−エンケファリン（配列番号１０）の各々の２つの類似体が調製されている。
【００７１】
Ｃｙｓ残基のＳ原子に、鉄キレート剤機能が結合される。例えば、８−ヒドロキシ−５−キノリニルメチル残基（ＨＱ）を有する得られた化合物は、本明細書中で付録ＩＩにおいて配列番号１３についてＹＧＧＣ（ＨＱ）Ｌ（Ｍ１８）、配列番号１１についてＹＧＧＣ（ＨＱ）Ｍ（Ｍ１９）、配列番号１４についてＣ（ＨＱ）ＧＧＦＬ（Ｍ２０）及び配列番号１２についてＣ（ＨＱ）ＧＧＦＭ（Ｍ２１）と称される化合物である。本明細書中で付録ＩにおいてＹＧＧＣ（ＨＱ−Ｐｒ）Ｌ（Ｍ１８Ａ）、ＹＧＧＣ（ＨＱ−Ｐｒ）Ｍ（Ｍ１９Ａ）、Ｃ（ＨＱ−Ｐｒ）ＧＧＦＬ（Ｍ２０Ａ）及びＣ（ＨＱ−Ｐｒ）ＧＧＦＭ（Ｍ２１Ａ）と称される対応する化合物はさらに、キノリン環の５位で−ＣＨ２基に連結されたプロパルギルアミノ（Ｐｒ）基を有する。
【００７２】
配列番号１１〜１４のエンケファリン類似体を含む本発明のさらなる化合物の例は、プロパルギルアミノ基もまた含む、本明細書中で付録ＶにおいてＭ１８ＢＡ、Ｍ１９Ｂ、Ｍ２０Ｂ及びＭ２１Ｂと称されるヒドロキサメートである。
【００７３】
本発明の別の実施形態において、本発明の化合物に神経保護機能を付与する残基は、Ｌ−システイン残基若しくはＤ−システイン残基又はＬ−アラニン残基若しくはＤ−アラニン残基からなる群から選択される。
【００７４】
この神経保護機能がＬ−システイン又はＤ−システインである場合、鉄キレート剤機能は、Ｃｙｓ残基のＳ原子に結合される。例えば、８−ヒドロキシ−５−キノリニルメチル残基（ＨＱ）を有する得られた化合物は、本明細書中で付録ＩＩにおいてＤ−ＨＱ−ＣｙｓＯＨ（Ｍ１１）及びＬ−ＨＱ−ＣｙｓＯＨ（Ｍ１２）と称される化合物、並びに本明細書中で付録ＩＩＩにおいてＤ−（ＨＱ−Ｐｒ）−ＣｙｓＯＨ（Ｍ１１ａ）及びＬ−（ＨＱ−Ｐｒ）−ＣｙｓＯＨ（Ｍ１２ａ）と称される対応する化合物である。システイン残基を含む本発明のさらなる化合物の例は、プロパルギルアミノ基を含む、本明細書中で付録ＶＩにおいてＭ１１ｂ及びＭ１２ｂと称されるヒドロピリジノン誘導体である。
【００７５】
神経保護機能がＬ−アラニン又はＤ−アラニンである本発明の化合物の例は、本明細書中で付録ＩＶにおいてＤ−ＨＱ−Ａｌａ（Ｍ９）、Ｌ−ＨＱ−Ａｌａ（Ｍ１０）、内部塩ＨＱＡｌａ（ＨＬＭ８）及びエチルエステルＨＱＡｌａＥｔ（ＨＬＭ９）と称される８−ヒドロキシ−５−キノリニル残基（ＨＱ）を有する化合物、並びに本明細書中で付録ＩＩＩにおいてＤ−（ＨＱ−Ｐｒ）−Ａｌａ（Ｍ９ａ）、Ｌ−（ＨＱ−Ｐｒ）−Ａｌａ（Ｍ１０ａ）と称される対応する化合物である。さらなる例は、本明細書中で付録ＶＩにおいてＭ９ｂと称されるヒドロキシピリジノン誘導体である。
【００７６】
パーキンソン病は、脳におけるドパミン作用性機能の低下に関連し、この疾患の症状の多くがＬ−ＤＯＰＡ（Ｌ−ジヒドロキシフェニルアラニン）の経口投与によって緩和され得る。Ｌ−ＤＯＰＡは、脳においてＤＯＰＡデカルボキシラーゼによってドパミンへと転換される。リード化合物ＤＯＰＡの逆合成分析に基づいて、鉄キレート化基（カテコール）及びアミノ酸（アラニン）を含む上記の鉄キレート剤−ペプチド誘導体及び鉄キレート剤−アミノ酸誘導体は、別のクラスの抗パーキンソニズム剤を構成する抗酸化剤型薬物として有用な薬物候補であり得、また潜在的に他の神経変性疾患及び他の障害でも鉄キレート剤が有用である。
【００７７】
上記のように、作用部位として脳を有する薬物は、一般に、最大のｉｎ  ｖｉｖｏの生物学的活性を得るために、血液脳関門（ＢＢＢ）を横切ることができなければならない。本発明が、いくつかの神経変性疾患において脳に鉄キレート剤をもたらして、脳中に蓄積する鉄を結合して除去する場合、可能な解決の１つは、両親媒性挙動を担う特定の基を有する鉄キレート化分子を設計することである。このような両親媒性基は、親油性中心及び親水性中心を有する。両方の中心のサイズ及び構造は、分子全体の全体的な親油性を制御し、従って、その輸送特性を制御する。
【００７８】
本発明はさらに、鉄に対する特異性を有しかつ親油性媒体中で所望の血液脳関門（ＢＢＢ）輸送特性を提供するように設計された両親媒性金属キレート剤を提供する。
【００７９】
１実施形態において、本発明は、ＢＢＢを横切る鉄キレート化残基を含む化合物に関し、この鉄キレート化残基は、化合物５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イルメチル］−８−ヒドロキシ−キノリンを除く、以下に示されるようなエチレンジアミン部分又はピペラジン環若しくは１，３，５−ペルヒドロトリアジン環からなる群から選択されるリンカーを介して脂肪族鎖に連結された８−ヒドロキシ−５−キノリニルメチル基である。
【００８０】
この実施形態によれば、この分子の８−ヒドロキシキノリン部分は、鉄特異的キレート剤及びラジカルスカベンジャーの両方として働き、かつＲは異なる長さの脂肪族鎖であるが、リンカーがピペラジン環である場合には２−ヒドロキシエチル基ではない。
【化３】
2011079834.tif 000142
Ｒを変化させることによって、本発明者らは、分子全体のサイズ及び親油性を調整し得、従って、ＢＢＢを介した輸送特性を制御し得る。好ましい実施形態において、このリンカーはピペラジン環である。
【００８１】
リンカーがピペラジンである場合、上記の鉄キレート剤は、以下のスキームに記載されるように、ピペラジンをジ（ｔ−ブチル）ジカーボネート（Ｂｏｃ２Ｏ）と反応させ、その後Ｂｏｃ保護されたピペラジンをハライドＲ−Ｘ（Ｒはプロパルギル含有基であり、Ｘはハロゲンである）と反応させ、ＴＦＡを用いてＢｏｃ基を除去し、８−ヒドロキシ−５−クロロメチルキノリンと反応させることによって調製され得る：
【化４】
2011079834.tif 000143
【００８２】
ＢＢＢを介した薬物の輸送特性を制御することにおける重要な因子である分子全体の脂質可溶性は、ｎを変化させることによって調整され得る。脂肪族鎖はまた、Ｏ、Ｓ及びＮから選択されるヘテロ原子を含み得る。本発明に従うこのような化合物の例は、本明細書中で付録ＩＩＩにおいてＨＬＡ１６ａ、ＨＬＡ２０及びＭ１７と称される化合物である。プロパルギル基を有さない付録ＩＶ中の化合物ＨＬＡ１６もまた、本発明により想定される。
【００８３】
本発明は、化合物５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イルメチル］−８−ヒドロキシ−キノリンを除く、式Ｉ〜ＩＶの化合物：
【化５】
2011079834.tif 000144
を包含し、式中、
Ｒ１は、Ｃｙｓ残基の−Ｓ−原子を介してＣ原子に連結されたシステイン残基を含む神経保護ペプチド又はそのフラグメントの類似体の残基であり、かつこのペプチドのアミノ末端は、Ｆｍｏｃ又はステアリルのような疎水性基によって任意選択で置換され；
Ｒ２はＨ又は−ＮＨ−Ｘであり；
Ｒ３は、
【化６】
2011079834.tif 000145
（ｉｉ）−ＣＲ５Ｒ６Ｒ７；（ｉｉｉ）−Ｎ（ＣＨ３）−Ｘ；（ｉｖ）−Ｎ（Ｒ８）−ＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）ＣＯＯＣ２Ｈ５；（ｖ）−Ｎ（Ｒ８）−ＣＨ２−ＣＯＯＣＨ２Ｃ６Ｈ５及び（ｖｉ）−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨＲ８’からなる群から選択される基であり；
Ｒ４は、（ｉ）Ｘ；（ｉｉ）ＣＯＯＣ２Ｈ５；（ｉｉｉ）（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｒ８；及び（ｉｖ）−ＣＯＯ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｒ８からなる群から選択され；
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ４低級アルキル、好ましくはＣＨ３又はＣＯＯＣ２Ｈ５であり；
Ｒ６は、Ｈ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ−又はＣＯＯＣ２Ｈ５であり；
Ｒ７は、（ｉ）−ＮＨ−Ｒ８；（ｉｉ）−ＮＨ３＋；（ｉｉｉ）−ＮＨ−ＣＯＣＨ３、（ｉｖ）−ＮＨ−ＮＨ−Ｒ８及び（ｖ）−ＮＨ−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）−ＮＨ−Ｒ８からなる群から選択され；
Ｒ８はＨ又はＸであり；Ｒ’８は、Ｈ、Ｘ又はＦｍｏｃであり；
Ｒ９は、（ｉ）Ｈ；（ｉｉ）−ＣＯ−ＣＨ２−Ｒ１；（ｉｉｉ）−ＣＨ２−ＣＯＯＣＨ２Ｃ６Ｈ５；（ｉｖ）−ＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）ＣＯＯＣ２Ｈ５；
【化７】
2011079834.tif 000146
からなる群から選択され；
Ｒ１０は、Ｘ；−ＣＨ２−ＣＨ（ＳＨ）ＣＯＯＣ２Ｈ５又は
【化８】
2011079834.tif 000147
であり；
ｎは１から６までの整数であり；
Ｒ１１は、
2011079834.tif 000148
及び
【化９】
2011079834.tif 000149
からなる群から選択される基であり；
Ｒ１２は、Ｘ、Ｃ１〜Ｃ４低級アルキル、好ましくはメチル、ＣＯＯＣ２Ｈ５又は−（ＣＨ２）２−ＯＨであり；
Ｒ１３は、Ｘ、−（ＣＨ２）２−ＯＸ又は−ＣＯＯ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｘであり；
Ｘはプロパルギル基である。
【００８４】
１つの好ましい実施形態において、本発明の化合物は上記式Ｉの化合物：
【化１０】
2011079834.tif 000150
であり、
Ｒ１は、Ｃｙｓ残基の−Ｓ−原子を介してＣ原子に連結されたシステイン残基を含む神経保護ペプチド又はそのフラグメントの類似体の残基であり、かつこのペプチドのアミノ末端は、Ｆｍｏｃ又はステアリルのような疎水性基によって任意選択で置換され；
Ｒ２はＨ又は−ＮＨ−Ｘであり；
Ｘはプロパルギル基である。
【００８５】
Ｒ１は好ましくは、１つのアミノ酸残基がシステイン残基によって置換されたＶＩＰ、ＧｎＲＨ、サブスタンスＰ若しくはエンケファリン又はそれらのフラグメントの類似体の残基であり、より好ましくは、アミノ末端にステアリル基又はＦｍｏｃ基を有し得る配列番号２のＶＩＰフラグメント類似体、配列番号４及び配列番号５のＧｎＲＨ類似体、配列番号７及び配列番号８のサブスタンスＰ類似体、並びに配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３及び配列番号１４のエンケファリン類似体の残基である。
【００８６】
好ましい実施形態において、式Ｉの化合物は、Ｒ２がＨであり、かつＲ１がアミノ末端にステアリル基を有する配列番号２のＶＩＰフラグメント類似体（Ｍ６、付録ＩＩ）又はＦｍｏｃ基を有する配列番号２のＶＩＰフラグメント類似体（Ｍ７、付録ＩＩ）の残基、配列番号４のＧｎＲＨ類似体（Ｍ８、付録ＩＩ）又は配列番号５のＧｎＲＨ類似体（Ｍ２２、付録ＩＩ）の残基、配列番号７のサブスタンスＰ類似体（Ｍ２７、付録ＩＩ）又は配列番号８のサブスタンスＰ類似体（Ｍ２８、付録ＩＩ）の残基、並びに配列番号１１のエンケファリン類似体（Ｍ１９、付録ＩＩ）、配列番号１２のエンケファリン類似体（Ｍ２１、付録ＩＩ）、配列番号１３のエンケファリン類似体（Ｍ１８、付録ＩＩ）及び配列番号１４のエンケファリン類似体（Ｍ２０、付録ＩＩ）の残基からなる群から選択される化合物である。
【００８７】
より好ましい実施形態において、式Ｉの化合物は、Ｒ２がプロパルギルアミノ基であり、かつＲ１がアミノ末端にステアリル基を有する配列番号２のＶＩＰフラグメント類似体（Ｍ６Ａ、付録Ｉ）又はＦｍｏｃ基を有する配列番号２のＶＩＰフラグメント類似体（Ｍ７Ａ、付録Ｉ）の残基、配列番号４のＧｎＲＨ類似体（Ｍ８Ａ）又は配列番号５のＧｎＲＨ類似体（Ｍ２２Ａ、付録Ｉ）の残基、配列番号７のサブスタンスＰ類似体（Ｍ２７Ａ、付録Ｉ）又は配列番号８のサブスタンスＰ類似体（Ｍ２８Ａ、付録Ｉ）の残基、並びに配列番号１１のエンケファリン類似体（Ｍ１９Ａ、付録Ｉ）、配列番号１２のエンケファリン類似体（Ｍ２１Ａ、付録Ｉ）、配列番号１３のエンケファリン類似体（Ｍ１８Ａ、付録Ｉ）及び配列番号１４のエンケファリン類似体（Ｍ２０Ａ、付録Ｉ）の残基からなる群から選択される化合物である。
【００８８】
本発明の別の好ましい実施形態において、化合物５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イルメチル］−８−ヒドロキシ−キノリンを除く、式ＩＩ：
【化１１】
2011079834.tif 000151
の化合物が提供され、
Ｒ３は、
【化１２】
2011079834.tif 000152
（ｉｉ）−ＣＲ５Ｒ６Ｒ７；（ｉｉｉ）−Ｎ（ＣＨ３）−Ｘ；（ｉｖ）−Ｎ（Ｒ８）−ＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）ＣＯＯＣ２Ｈ５；（ｖ）−Ｎ（Ｒ８）−ＣＨ２−ＣＯＯＣＨ２Ｃ６Ｈ５及び（ｖｉ）−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨＲ８’からなる群から選択される基であり；
Ｒ４は、（ｉ）Ｘ；（ｉｉ）ＣＯＯＣ２Ｈ５；（ｉｉｉ）（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｒ８及び（ｉｖ）−ＣＯＯ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｒ８からなる群から選択され；
Ｒ５はＨ、ＣＨ３又はＣＯＯＣ２Ｈ５であり；
Ｒ６はＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ−又はＣＯＯＣ２Ｈ５であり；
Ｒ７は、（ｉ）−ＮＨ−Ｒ８；（ｉｉ）−ＮＨ３＋；（ｉｉｉ）−ＮＨ−ＣＯＣＨ３；（ｉｖ）−ＮＨ−ＮＨ−Ｒ８；及び（ｖ）−ＮＨ−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）−ＮＨ−Ｒ８からなる群から選択され；
Ｒ８はＨ又はＸであり、Ｒ’８はＨ、Ｘ又はＦｍｏｃであり；
Ｘはプロパルギル基である。
【００８９】
より好ましい実施形態において、Ｒ４が−（ＣＨ２）２−ＯＨである化合物を除き、式ＩＩの化合物中、Ｒ３は、脂肪族鎖Ｒ４が４位で窒素原子に連結されたピペラジン環である。この化合物５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イルメチル］−８−ヒドロキシ−キノリンは、本明細書中で付録ＩＶにおいてＶＫ−２８と特定され、ＷＯ  ００／７４６６４号から公知である。１つの好ましい実施形態において、本発明の８−ヒドロキシ−５−キノリニルメチルピペラジン化合物は、本明細書中でＨＬＡ１６と称される化合物（付録ＩＶ）によって示されるように、プロパルギル基を含まない（Ｒ４が−ＣＯＯＣ２Ｈ５であるか、又はＲ８がＨである）。別の好ましい実施形態において、本発明の８−ヒドロキシ−５−キノリニルメチルピペラジン化合物は、本明細書中でＨＬＡ１６ａ、ＨＬＡ２０及びＭ１７と称される化合物（付録ＩＩＩ）によって示されるように、プロパルギル基を含む（Ｒ８はＸである）。
【００９０】
別のより好ましい実施形態において、式ＩＩの化合物中、Ｒ３は−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨＲ８’であり、式中、本明細書中でＤ−ＨＱ−ＣｙｓＯＨと称される化合物（Ｍ１１、付録ＩＩ）及びＬ−ＨＱ−ＣｙｓＯＨと称される化合物（Ｍ１２、付録ＩＩ）によって示されるように、Ｒ８’はＨである（すなわち、Ｒ３はＬ−Ｃｙｓ又はＤ−Ｃｙｓの残基である）か、又は本明細書中でＤ−（ＨＱ−Ｐｒ）−ＣｙｓＯＨと称される化合物（Ｍ１１ａ、付録ＩＩＩ）及びＬ−（ＨＱ−Ｐｒ）−ＣｙｓＯＨと称される化合物（Ｍ１２ａ、付録ＩＩＩ）によって示されるように、Ｒ８’はプロパルギルであるか、又は本明細書中でＭ１１Ｂ及びＭ１２Ｂと称される化合物（付録ＩＶ）によって示されるように、Ｒ８’はＦｍｏｃである。
【００９１】
別のより好ましい実施形態において、式ＩＩの化合物中、Ｒ３は基−ＣＲ５Ｒ６Ｒ７であり、式中Ｒ５はＨであり、Ｒ６はＣＯＯＨであり、かつＲ７は−ＮＨ−Ｒ８であり、式中、本明細書中でＤ−ＨＱ−Ａｌａと称される化合物（Ｍ９、付録ＩＶ）及びＬ−ＨＱ−Ａｌａと称される化合物（Ｍ１０、付録ＩＶ）によって示されるように、Ｒ８はＨである（すなわち、Ｒ３はＬ−Ａｌａ又はＤ−Ａｌａの残基である）か、又は本明細書中でＤ−（ＨＱ−Ｐｒ）−Ａｌａと称される化合物（Ｍ９ａ、付録ＩＩＩ）及びＬ−（ＨＱ−Ｐｒ）−Ａｌａと称される化合物（Ｍ１０ａ、付録ＩＩＩ）によって示されるように、Ｒ８はプロパルギルであるか；或いは本明細書中でＨＱ−Ａｌａと称される化合物（ＨＬＭ８、付録ＩＶ）によって示されるように、Ｒ５はＨであり、Ｒ６はＣＯＯ−であり、Ｒ７は−ＮＨ３＋であるか；或いは本明細書中でＨＱ−ＡｌａＥｔと称される化合物（ＨＬＭ９、付録ＩＶ）によって示されるように、Ｒ５はＨであり、Ｒ６はＣＯＯＣ２Ｈ５であり、Ｒ７は−ＮＨ２であるか；或いは本明細書中でＨＬＭ７と称される化合物（付録ＩＶ）によって示されるように、Ｒ５及びＲ６は共にＣＯＯＣ２Ｈ５であり、Ｒ７は−ＮＨ−ＣＯＣＨ３であるか；或いは本明細書中でＭ３１と称される化合物（付録ＩＩＩ）によって示されるように、Ｒ５はＨであり、Ｒ６はＣＯＯＣ２Ｈ５であり、Ｒ７は−ＮＨ−プロパルギルである。
【００９２】
別のより好ましい実施形態において、式ＩＩの化合物中、Ｒ３は基−ＮＲ８−ＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）ＣＯＯＣ２Ｈ５であり、式中、それぞれ本明細書中でＭ３２と称される化合物（付録ＩＶ）及びＭ３３と称される化合物（付録ＩＩＩ）によって示されるように、Ｒ８はＨ又はプロパルギルである。
【００９３】
別のより好ましい実施形態において、式ＩＩの化合物中、本明細書中でＭ３０と称される化合物（付録ＩＩＩ）によって示されるように、Ｒ３は基−Ｎ（ＣＨ３）−プロパルギルである。
【００９４】
本発明のなお別の好ましい実施形態において、式ＩＩＩ：
【化１３】
2011079834.tif 000153
の化合物が提供され、式中、
Ｒ９は、（ｉ）Ｈ；（ｉｉ）−ＣＯ−ＣＨ２−Ｒ１；（ｉｉｉ）−ＣＨ２−ＣＯＯＣＨ２Ｃ６Ｈ５；（ｉｖ）−ＣＨ（ＣＨ２ＳＨ）ＣＯＯＣ２Ｈ５；
【化１４】
2011079834.tif 000154
からなる群から選択され；
Ｒ１０は、Ｘ；−ＣＨ２−ＣＨ（ＳＨ）ＣＯＯＣ２Ｈ５又は
【化１５】
2011079834.tif 000155
であり；
ｎは、１から６までの整数、好ましくは１又は２であり；
Ｒ１２は、Ｘ、Ｃ１〜Ｃ４低級アルキル、好ましくはメチル、ＣＯＯＣ２Ｈ５又は−（ＣＨ２）２−ＯＨ−であり；
Ｘはプロパルギル基である。
【００９５】
１つの好ましい実施形態において、Ｒ９は−ＣＯ−ＣＨ２−Ｒ１であり、式中、Ｒ１は、Ｃｙｓ残基を含む神経保護ペプチド又はそのフラグメントの類似体の残基である。より好ましい実施形態において、式ＩＩＩの化合物は、プロパルギルアミノ基、並びにアミノ末端にステアリル基を有する配列番号２のＶＩＰフラグメント類似体（Ｍ６Ｂ、付録Ｖ）又はＦｍｏｃ基を有する配列番号２のＶＩＰフラグメント類似体（Ｍ７Ｂ、付録Ｖ）の残基、配列番号４のＧｎＲＨ類似体（Ｍ８Ｂ、付録Ｖ）又は配列番号５のＧｎＲＨ類似体（Ｍ２２Ｂ、付録Ｖ）の残基、配列番号７のサブスタンスＰ類似体（Ｍ２７Ｂ、付録Ｖ）又は配列番号８のサブスタンスＰ類似体（Ｍ２８Ｂ、付録Ｖ）の残基、並びに配列番号１１のエンケファリン類似体（Ｍ１９Ｂ、付録Ｖ）、配列番号１２のエンケファリン類似体（Ｍ２１Ｂ、付録Ｖ）、配列番号１３のエンケファリン類似体（Ｍ１８Ｂ、付録Ｖ）及び配列番号１４のエンケファリン類似体（Ｍ２０Ｂ、付録Ｖ）の残基からなる群から選択されるＲ１を含むヒドロキサメートである。
【００９６】
他の好ましい実施形態において、Ｒ９、Ｒ１０及びＲ１２は、本明細書中でＭ３５、Ｍ３６、Ｍ３７、Ｍ３８、Ｍ３９、Ｍ４０、Ｍ４１、Ｍ４２、Ｍ４３、Ｍ４４、Ｍ４５及びＭ４６と称される化合物（付録Ｖ）によって例示されるような、上記規定の通りのものである。
【００９７】
なお別の好ましい実施形態において、式ＩＶ：
【化１６】
2011079834.tif 000156
の化合物が提供され、式中、
Ｒ１１は、
2011079834.tif 000157
及び
【化１７】
2011079834.tif 000158
からなる群から選択され；
Ｒ１３は、Ｘ、−（ＣＨ２）２−ＯＸ又は−ＣＯＯ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−Ｘであり；
Ｘはプロパルギル基である。
【００９８】
好ましい実施形態において、ピリジノン誘導体は、本明細書中でＭ９ｂ、Ｍ１１ｂ、Ｍ１２ｂ、Ｍ１３ｂ、Ｍ１５ｂ、ＨＬＡ１６ｂ、Ｍ１７ａ、ＨＬＡ２０ａ、Ｍ３０ａ、Ｍ３１ａ、Ｍ３３ａ及びＭ３４ｂと称される化合物によって例示され、それらの式は本明細書中で付録ＶＩ中に示される。Ｍｅ基が異なるアルキル（例えば、エチル）によって置換されているか、又はこの環が任意選択で置換されるさらなるアルキル基を含み得る、ピリジノンの他の誘導体が使用され得る。
【００９９】
以下のスキームＡ〜Ｄは、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ及びＩＶの化合物の調製のために使用され得る方法の例を示す。全ての出発物質は、これらのスキーム中に記載される手順、有機化学の当業者に周知の手順によって調製されるか、又は商業的に入手され得る。本発明の全ての最終化合物は、これらのスキーム中に記載される手順又は有機化学の当業者に周知の、その手順に類似の手順によって調製される。全ての改変ペプチドを、会社のプロトコルに従ってＦｍｏｃ化学を使用した固相ペプチド合成によって、自動又は手動で調製した。
【０１００】
式Ｉの化合物は、スキームＡに示される方法若しくは実施例中に与えられた方法又は類似の方法によって調製され得る。
【０１０１】
以下のスキームＡに示されるように、８−ヒドロキシキノリン（Ａ１）を塩酸及びホルムアルデヒドで処理して、５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリン（Ａ２）を生じる。Ａ２のクロロ基をプロパルギルアミンで置換して、５−（１−プロパルギルアミノ）メチル−８−ヒドロキシキノリン（Ａ３）を生じる。Ｎ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）を使用したＡ３の臭素化は、臭化物Ａ４を提供し、このＡ４を次いで、例えば、改変ペプチド［Ｄ−Ｃｙｓ６］ＧｎＲＨで処理して、標的化合物Ａ５（これは、付録Ｉ中の化合物Ｍ２２Ａである）を生じる。
（スキームＡ）
【化１８】
2011079834.tif 000159
【０１０２】
式ＩＩの化合物は、スキームＢに示される方法若しくは実施例に示される方法又は類似の方法によって調製され得る。
【０１０３】
以下のスキームＢに示されるように、５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリンＡ２（スキームＡ中に記載されるように調製される）中のクロロ基のシステインによる置換は、中間体Ｂ１を提供する。臭化プロパルギルによる中間体Ｂ１のアルキル化は、標的化合物Ｂ２（これは、付録ＩＩＩ中の化合物Ｍ１１ａ又はＭ１２ａである）を生成する。
（スキームＢ）
【化１９】
2011079834.tif 000160
【０１０４】
スキームＢに従う別の合成経路において、５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリンＡ２のＯＨ基は、そのアセチル誘導体Ｂ３として最初に保護される。ジエチルアセトアミドマロネートとの化合物Ｂ３の縮合は、塩基としてナトリウムエトキシドを用いてエタノール中で円滑に進行し、予測された縮合誘導体Ｂ４を生じる。化合物Ｂ４の脱炭酸により、アミノ酸誘導体Ｂ５を生じる。塩化チオニル及びエタノールの存在下でのＢ５のエステル化により、エチルエステル誘導体Ｂ６を生成する。化合物Ｂ６を、触媒としてα−キモトリプシンを使用して加水分解して、Ｌ−アミノ酸誘導体Ｂ６（α−キモトリプシンはＬ特異的であり、かつＬ形態のみを加水分解する）及びＤ−アミノ酸エステル誘導体Ｂ７の混合物を生じ、この混合物はＨＰＬＣによって分離され得る。臭化プロパルギルによるＬ−アミノ酸Ｂ８又はＤ−アミノ酸（エステルＢ７から得られる）の処理は、所望の化合物Ｂ９（これは、付録ＩＩＩ中の化合物Ｍ９ａ又はＭ３１である）を提供する。
【０１０５】
式ＩＩＩの化合物の生成のために、スキームＣに示される方法若しくは類似の方法又は実施例に与えられる方法が使用され得る。
（スキームＣ）
【化２０】
2011079834.tif 000161
【０１０６】
ヒドロキサメート（Ｃ２）は、商業的供給元から購入され得るか、又は有機化学の当業者に周知の手順によって調製され得るかのいずれかである。ジイソプロピルエチルアミンのような適切な塩基の存在下での臭化プロパルギル（Ｃ１）によるヒドロキサメート（Ｃ２）のアルキル化は、化合物Ｃ３を提供する。窒素の存在下で約０℃での化合物Ｃ３の塩化クロロアセチルとの反応は、Ｎ−クロロアセチル誘導体（Ｃ４）を生じる。例えば改変ペプチド［Ｄ−Ｃｙｓ６］ＧｎＲＨによるＣ４の処理とその後のヒドロキサメートの脱保護により、標的化合物Ｃ６（これは、付録Ｖ中の化合物Ｍ２２Ｂである）を生じる。
【０１０７】
式ＩＶの化合物は、スキームＤ中に示される方法若しくは実施例中に与えられる方法又は類似の方法によって製造され得る。
（スキームＤ）
【化２１】
2011079834.tif 000162
【０１０８】
出発物質１−クロロエチル−２−メチル−３−ヒドロキシピリジノン（Ｄ１）は、公知の手順によって調製され得る。システインによるＤ１の処理は、硫化物Ｄ２の形成を生じ、この硫化物Ｄ２を次いで、プロパルギルアミンでアルキル化して所望の化合物Ｄ４（これは、付録ＶＩ中のＭ１１ｂと称される化合物である）を生じる。
【０１０９】
スキームＤに従う別の合成経路において、化合物Ｄ１をプロパルギルピペラジンＤ７と直接反応させて、所望のキレート剤化合物Ｄ４（これは、付録ＶＩ中のＨＬＡ２０ａと称される化合物である）を生じる。
【０１１０】
プロパルギルピペラジン（Ｄ７）を、Ｎ−Ｂｏｃ−ピペラジン（Ｄ５）のプロパルギルアミンとの反応によって化合物Ｄ６を生じ、その後トリフルオロ酢酸を使用してＢｏｃ保護基を除去することによって調製する。
【０１１１】
式Ｉの化合物の薬学的に許容される塩、分子中に存在する任意のカルボキシ基及び塩基によって形成された両方の塩、並びに酸付加塩及び／又は塩基塩もまた本発明によって企図される。
【０１１２】
薬学的に許容される塩は、金属又はアミン（例えば、アルカリ金属及びアルカリ土類金属又は有機アミン）を用いて形成され得る。カチオンとして使用される金属の例は、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどである。適切なアミンの例は、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン及びプロカインである（例えば、Ｂｅｒｇｅ  Ｓ．Ｍ．ら、「薬学的塩（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ）」、（１９７７）Ｊ．ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、６６：１−１９を参照のこと）。これらの塩はまた、式−ＮＲＲ’Ｒ”＋Ｚ’の第４級塩のような薬学的に許容される第４級塩であり得、式中、Ｒ、Ｒ’及びＲ”は各々独立して水素、アルキル又はベンジルであり、かつＺは対イオンであり、これには、塩化物、臭化物、ヨウ化物、Ｏ−アルキル、トルエンスルホネート、メチルスルホネート、スルホネート、ホスフェート又はカルボキシレートが含まれる。
【０１１３】
これらの化合物の薬学的に許容される酸付加塩には、無機酸（例えば、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸など）由来の塩、並びに有機酸（例えば、脂肪族モノカルボン酸及び脂肪族ジカルボン酸、フェニル置換アルカノイック酸（ａｌｋａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）、ヒドロキシアルカノイック酸、アルカンジオイック酸（ａｌｋａｎｅｄｉｏｉｃ  ａｃｉｄ）、芳香族酸、脂肪族スルホン酸及び芳香族スルホン酸など）由来の塩が含まれる。従って、このような塩には、硫酸塩、ピロ硫酸塩、硫酸水素塩、亜硫酸、亜硫酸水素塩、硝酸塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩、プロピオン酸塩、カプリル酸塩、イソ酪酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、フタル酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩などが含まれる。アルギン酸塩などのようなアミノ酸の塩及びグルコン酸塩又はガラクツロン酸塩もまた企図される（例えば、Ｂｅｒｇｅ  Ｓ．Ｍ．ら、「薬学的塩（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ）」、（１９７７）Ｊ．ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、６６：１−１９を参照のこと）。
【０１１４】
上記塩基性化合物の酸付加塩は、従来の様式で遊離塩基形態を充分量の所望の酸と接触させて、塩を生成することによって調製される。この遊離塩基形態は、従来の様式でこの塩形態を塩基と接触させて、遊離塩基を単離することによって再生され得る。この遊離塩基形態は、特定の物理的特性（例えば、極性溶媒中での可溶性）において、そのそれぞれの塩形態とはいくらか異なるが、他の点では、これらの塩は、本発明の目的についてそのそれぞれの遊離塩基と等価である。
【０１１５】
上記酸性化合物の塩基付加塩は、従来の様式で遊離酸形態を充分量の所望の塩基と接触させて、塩を生成することによって調製される。この遊離酸形態は、従来の様式でこの塩形態を酸と接触させて、遊離酸を単離することによって再生され得る。この遊離酸形態は、特定の物理的特性（例えば、極性溶媒中での可溶性）において、そのそれぞれの塩形態とはいくらか異なるが、他の点では、これらの塩は、本発明の目的についてそのそれぞれの遊離酸と等価である。
【０１１６】
本発明の化合物は、細胞内の未結合の鉄を結合するのに適切な特異的な鉄キレート剤である。トランスフェリンに結合していない鉄は、毒性形態の鉄である。本発明の鉄キレート剤は、良好な輸送特性を有しかつ細胞膜を横切り、従って、細胞内の過剰な未結合の鉄をキレート化する。それらの鉄との錯体は細胞を自由に離れて迅速に排泄されることが予測される。これらの化合物又はこれらの化合物の少なくとも大部分はＢＢＢを横切ることができ、従って、神経変性疾患、神経変性障害及び神経変性状態の処置のための適切な候補であることがさらに予測される。
【０１１７】
別の態様において、本発明は、薬学的に許容される担体と組み合わせて、本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物に関する。
【０１１８】
さらなる態様において、本発明は、鉄キレート化治療のための医薬組成物の調製のための、神経保護的な鉄キレート剤としての本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【０１１９】
この医薬組成物は、鉄過負荷及び酸化ストレスに関連する疾患、障害及び状態の処置のための鉄キレート化治療における使用が意図されている。
【０１２０】
本発明の医薬組成物は、鉄過負荷及び酸化ストレスに関連する疾患、障害及び状態（例えば、神経変性疾患及び神経変性障害並びに脳血管疾患及び脳血管障害、新生物疾患、血色素症、サラセミア、心血管疾患、糖尿病、炎症障害、アントラサイクリン心毒性、ウイルス感染、原生動物感染及び酵母感染であるが、これらに限定されない）の治療及び／又は予防のため、加齢を遅延させるため、皮膚の加齢の予防及び／又は治療のため、並びに日光及び／又はＵＶ光に対する皮膚の保護のためのものである。
【０１２１】
１つの好ましい実施形態において、この医薬組成物は、パーキンソン病、アルツハイマー病、脳卒中、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症、フリードライヒ失調症、ハレルフォルデン−スパッツ病、癲癇及び神経外傷のような神経変性疾患、神経変性状態及び神経変性障害並びに脳血管疾患、脳血管状態及び脳血管障害の予防及び／又は治療における鉄キレート化及び神経保護のための使用のためのものである。１つの好ましい実施形態において、この医薬組成物はパーキンソン病の処置のためのものである。別の好ましい実施形態において、この医薬組成物は、アルツハイマー病の処置のためのものである。さらなる好ましい実施形態において、この医薬組成物は、脳血管障害、特に脳卒中の処置のためのものである。
【０１２２】
パーキンソン病及びアルツハイマー病のような疾患における本発明の鉄キレート剤の使用の「予防」態様は、さらなる神経変性及びこの疾患のさらなる進行の予防を含む。
【０１２３】
なお別の好ましい実施形態において、この医薬組成物は、新生物疾患（全てのタイプの癌が本発明によって包含される）の処置における細胞増殖の阻害のためのものである。本発明の鉄キレート剤は、単独でか又は１種若しくは複数の細胞傷害性抗癌薬物と組み合わせて使用され得る。
【０１２４】
別の好ましい実施形態において、この医薬組成物は、血色素症及びサラセミアにおける鉄過負荷の予防及び／又は治療のためのものである。
【０１２５】
なお別の好ましい実施形態において、この医薬組成物は、心血管疾患の予防及び／又は治療のため、例えば、再灌流損傷におけるフリーラジカルの発生に関連する損傷を予防するためのものである。
【０１２６】
なお別の好ましい実施形態において、この医薬組成物は、糖尿病の予防及び／又は治療のためのものである。
【０１２７】
なお別の好ましい実施形態において、この医薬組成物は、炎症障害の予防及び／又は治療のためのものである。１つの好ましい実施形態において、この炎症障害は、関節の炎症障害、特に慢性関節リウマチである。別の好ましい実施形態において、この炎症障害は炎症性腸疾患（ＩＢＤ）である。さらなる好ましい実施形態において、この炎症障害は乾癬である。
【０１２８】
なお別の好ましい実施形態において、この医薬組成物は、アントラサイクリン新生物薬物で処置される癌患者の場合の、アントラサイクリン心毒性の予防及び／又は治療のためのものである。
【０１２９】
なお別の好ましい実施形態において、この医薬組成物は、ウイルス感染、原生動物感染及び酵母感染の予防及び／又は治療のためのものである。１つの好ましい実施形態において、このウイルス感染はレトロウイルス感染（例えば、ＨＩＶ−１）であり、この化合物は、任意選択で抗ウイルス剤と組み合わせて、ＡＩＤＳの処置において使用される。別の好ましい実施形態において、この原生動物感染は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍによって引き起こされるマラリアである。さらなる好ましい実施形態において、この酵母感染はＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ感染である。
【０１３０】
なお別の好ましい実施形態において、この医薬組成物は、神経変性疾患、神経変性障害又は神経変性状態のような加齢関連の疾患、障害又は状態の予防によって、加齢を遅延させるため及び／又は加齢プロセスを改善するためのものである。
【０１３１】
なお別の好ましい実施形態において、この医薬組成物は、加齢並びに／或いは日光及び／又はＵＶ光への曝露に関連する皮膚の加齢並びに／或いは皮膚損傷の予防及び／又は治療のためのものである。
【０１３２】
なお別の好ましい実施形態において、本発明は、加齢並びに／或いは日光及び／又はＵＶ光への曝露に関連する皮膚の加齢並びに／或いは皮膚損傷の予防及び／又は治療のための局所適用のための化粧品組成物を提供する。この化粧品組成物は、ローション又はクリームの形態であってもよく、皮膚処置のための他の薬剤と共に投与されてもよい。
【０１３３】
別の実施形態において、この鉄キレート剤は、心臓、肺又は腎臓のような移植が意図された器官の保存のためのｅｘ  ｖｉｖｏでの使用のためのものである。
【０１３４】
なお別の態様において、本発明は、有効量の本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩を鉄キレート化治療を必要とする個体に投与するステップを含む、鉄キレート化治療のための方法を提供する。
【０１３５】
１実施形態において、本発明は、神経変性疾患、神経変性状態又は神経変性障害の予防及び／治療のための方法を提供し、この方法は、有効量の本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩を、このような予防及び／又は治療を必要とする個体に投与するステップを含む。
【０１３６】
なお別の実施形態において、本発明は、癌の予防及び／又は治療のための方法を提供し、この方法は、有効量の本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩を、癌の予防及び／又は治療を必要とする個体に投与するステップを含む。１つの好ましい実施形態において、本発明の鉄キレート剤は、１種又は複数の化学療法剤の投与の前か、投与と同時にか、又は投与の後に投与される。
【０１３７】
別の実施形態において、本発明は、血色素症患者又はサラセミア患者における鉄過負荷の予防及び／又は治療のための方法を提供し、この方法は、有効量の本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩をこの患者に投与するステップを含む。
【０１３８】
なお別の好ましい実施形態において、本発明は、心血管疾患の予防及び／又は治療のため、例えば再灌流損傷におけるフリーラジカルの発生に関連する損傷を予防するための方法を提供し、この方法は、有効量の本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩を、心血管疾患の予防及び／又は治療を必要とする個体に投与するステップを含む。
【０１３９】
なお別の好ましい実施形態において、本発明は、糖尿病の予防及び／又は治療のための方法を提供し、この方法は、有効量の本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩を、糖尿病の予防及び／又は治療を必要とする個体に投与するステップを含む。
【０１４０】
なお別の好ましい実施形態において、本発明は、炎症障害の予防及び／又は治療のための方法を提供し、この方法は、有効量の本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩を、炎症障害の予防及び／又は治療を必要とする個体に投与するステップを含む。１つの好ましい実施形態において、この炎症障害は、関節の炎症障害、特に慢性関節リウマチである。別の好ましい実施形態において、この炎症障害は炎症性腸疾患（ＩＢＤ）である。さらなる好ましい実施形態において、この炎症障害は乾癬である。
【０１４１】
なお別の好ましい実施形態において、本発明は、アントラサイクリン心毒性の予防及び／又は治療のための方法を提供し、この方法は、有効量の本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩を、アントラサイクリン新生物薬物での処置を受ける個体に投与するステップを含む。
【０１４２】
なお別の好ましい実施形態において、本発明は、ウイルス感染、原生動物感染又は酵母感染の予防及び／又は治療のための方法を提供し、この方法は、有効量の本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩を、そのような予防及び／又は治療を必要とする個体に投与するステップを含む。１つの好ましい実施形態において、このウイルス感染はレトロウイルス感染（例えば、ＨＩＶ−１）であり、この化合物は、任意選択で抗ウイルス剤と組み合わせてＡＩＤＳの処置において使用される。別の好ましい実施形態において、この原生動物感染は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍによって引き起こされるマラリアである。さらなる好ましい実施形態において、この酵母感染はＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ感染である。
【０１４３】
なお別の好ましい実施形態において、本発明は、加齢関連の疾患、障害又は状態の予防によって、加齢を遅延させるため及び／又は加齢プロセスを改善するための方法を提供し、この方法は、有効量の本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩を、それを必要とする個体に投与するステップを含む。この個体は実際には、健康な個体又は神経変性疾患、神経変性障害若しくは神経変性状態のような加齢関連疾患に罹患した個体であり得る。
【０１４４】
なお別の好ましい実施形態において、本発明は、加齢並びに／或いは日光及び／又はＵＶ光への曝露に関連する皮膚の加齢並びに／或いは皮膚損傷の予防及び／又は治療のための方法を提供し、この方法は、有効量の本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩を、そのような予防及び／又は治療を必要とする個体に投与するステップを含む。この化合物は、最も好ましくは医薬製剤又は化粧品製剤中で局所投与される。
【０１４５】
本発明はまた、新生物疾患、血色素症、サラセミア、心血管疾患、糖尿病、炎症障害、アントラサイクリン心毒性、ウイルス感染、原生動物感染、酵母感染から選択される鉄過負荷及び酸化ストレスに関連する疾患、障害又は状態の治療及び／又は予防、加齢の遅延、並びに皮膚の加齢の予防及び／又は治療、並びに日光及び／又はＵＶ光に対する皮膚の保護のための医薬組成物の調製のための、化合物５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イルメチル］−８−ヒドロキシキノリン（本明細書中でＶＫ−２８と特定される、付録ＩＶ）の使用を提供する。
【０１４６】
本発明はさらに、鉄キレート化治療を必要とする個体に、神経変性疾患、神経変性状態又は神経変性障害の予防及び／又は治療を除く、鉄過負荷及び酸化ストレスに関連する疾患、障害又は状態の治療及び／又は予防のために、有効量の化合物５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イルメチル］−８−ヒドロキシキノリン（本明細書中でＶＫ−２８と特定される、付録ＩＶ）を投与するステップを含む、鉄キレート化治療のための方法を提供する。
【０１４７】
本発明はなおさらに、加齢並びに／或いは日光及び／又はＵＶ光への曝露に関連する皮膚の加齢並びに／或いは皮膚損傷の予防及び／又は治療のための局所適用のための化粧品組成物の調製のための、化合物５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イルメチル］−８−ヒドロキシキノリン（本明細書中でＶＫ−２８と特定される、付録ＩＶ）の使用を提供する。
【０１４８】
本発明はなおさらに、心臓、肺又は腎臓のような移植が意図された器官の保存のための、化合物５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イルメチル］−８−ヒドロキシキノリン（本明細書中でＶＫ−２８と特定される、付録ＩＶ）のｅｘ  ｖｉｖｏでの使用を提供する。
【０１４９】
本発明の医薬組成物を調製するために、当該分野で周知の方法が使用され得る。固体又は液体のいずれかである不活性な薬学的に許容される担体が使用され得る。固体形態の調製物には、粉末、錠剤、分散性顆粒、カプセル剤、カシェ剤及び坐剤が含まれる。
【０１５０】
固体担体は、希釈剤、香味剤、可溶化剤、滑沢剤、懸濁剤、結合剤又は錠剤崩壊剤としても作用し得る１種又は複数の物質であり得、カプセル化材料でもあり得る。
【０１５１】
液体の医薬組成物には、溶液、懸濁物及びエマルジョンが含まれる。例として、非経口注射のための水又は水−プロピレングリコール溶液が言及され得る。液体調製物はまた、ポリエチレングリコール水溶液中の溶液で製剤化され得る。経口使用のための水溶液は、活性成分を水中に溶解し、適切な色素、香味剤、安定剤及び増粘剤を所望に応じて添加することによって調製され得る。経口使用のための水性懸濁物は、微細に分割された活性成分を、粘性材料（すなわち、天然ゴム又は合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び他の周知の懸濁剤）と共に水中に分散させることによって作製され得る。
【０１５２】
好ましくは、この医薬組成物は、単位投薬形態で存在する。このような形態において、この調製物は、適切な量の活性成分を含む単位用量に細分される。この単位投薬形態は、包装された調製物であり得、この包装は、バイアル又はアンプル中に別個の量の調製物包装（例えば、包装された錠剤、カプセル剤及び粉末）を含む。この単位投薬形態はまた、それ自体カプセル剤、サシェ剤又は錠剤であり得るか、或いは適切な数の任意のこれらの包装形態であり得る。
【０１５３】
パーキンソン病の処置のための治療的使用において、本発明の薬学的方法において利用される化合物は、１日当たり１ｍｇ／Ｋｇ〜２０ｍｇ／Ｋｇの投薬レベルで患者に投与され得る。
【０１５４】
脳卒中の処置のための治療的使用において、体重１Ｋｇ当たり約１００ｍｇ〜約５００ｍｇの１つ又は複数の投薬が、脳卒中事象後可能な限り直ぐに患者に投与され得る。
【０１５５】
しかし、この投薬量は、患者の要求、処置される状態の重篤度及び使用される化合物に依存して変動し得る。特定の状況のために最適な投薬量の決定は、当業者の技術範囲内である。
【０１５６】
以下の実施例は、本発明に従う化合物を調製するための特定の方法を示す。これらの実施例は、本発明の範囲の例示として意図されるのであって、限定として意図されるものではない。
【０１５７】
（実施例）
以下の実施例は、本発明の化合物の合成（化学物質の項）及びそれらの生物学的活性（生物学の項）を記載する。
【０１５８】
（Ｉ．化学物質の項）
（ｉ）付録Ｉ〜ＶＩＩ
本発明の化合物の構造式は、本明細書中で付録Ｉ〜ＶＩ中に示される。付録ＶＩＩは、いくつかの中間体化合物の式を含む。以下の実施例における化合物のよりよい特定のために、可能である場合、本明細書中で使用される化合物の呼称及びそれぞれの付録は、化合物の名称の近傍の括弧内に与えられる。適切な場合、上記スキームＡ〜Ｄ中に与えられる呼称は、出発化合物又は中間体について使用される。
【０１５９】
付録の内容は以下の通りである：
付録Ｉ−化合物Ｍ６Ａ、Ｍ７Ａ、Ｍ８Ａ、Ｍ１８Ａ、Ｍ１９Ａ、Ｍ２０Ａ、Ｍ２１Ａ、Ｍ２２Ａ、Ｍ２７Ａ、Ｍ２８Ａ。
付録ＩＩ−化合物Ｍ６、Ｍ７、Ｍ８、Ｍ１１、Ｍ１２、Ｍ１８、Ｍ１９、Ｍ２０、Ｍ２１、Ｍ２２、Ｍ２７、Ｍ２８。
付録ＩＩＩ−化合物ＨＬＡ１６ａ、ＨＬＡ２０、Ｍ９ａ、Ｍ１０ａ、Ｍ１１ａ、Ｍ１２ａ、Ｍ１３ａ、Ｍ１５ａ、Ｍ１７、Ｍ３０、Ｍ３１、Ｍ３３、Ｍ３４。
付録ＩＶ−化合物ＶＫ−２８（公知）、ＨＬＡ１６、ＨＬＭ７、ＨＬＭ８、ＨＬＭ９、Ｍ９、Ｍ１０、Ｍ１１Ｂ、Ｍ１２Ｂ、Ｍ１３、Ｍ１５、Ｍ３２。
付録Ｖ−化合物Ｍ６Ｂ、Ｍ７Ｂ、Ｍ８Ｂ、Ｍ１８Ｂ、Ｍ１９Ｂ、Ｍ２０Ｂ、Ｍ２１Ｂ、Ｍ２２Ｂ、Ｍ２７Ｂ、Ｍ２８Ｂ、Ｍ３５、Ｍ３６、Ｍ３６ａ、Ｍ３７〜４６。
付録ＶＩ−化合物Ｍ９ｂ、Ｍ１１ｂ、Ｍ１２ｂ、Ｍ１３ｂ、Ｍ１５ｂ、ＨＬＡ１６ｂ、Ｍ１７ａ、ＨＬＡ２０ａ、Ｍ３０ａ、Ｍ３１ａ、Ｍ３３ａ、Ｍ３４ｂ。
付録ＶＩＩ−中間体Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ４、Ｈ５、Ｈ６。
【０１６０】
（ｉｉ）概説
化学合成のための出発物質を、以下の会社から得た：Ａｌｄｒｉｃｈ（ＵＳＡ）、Ｅ．Ｍｅｒｃｋ（Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｆｌｕｋａ（Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）。
【０１６１】
陽子ＮＭＲスペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ  ＷＨ−２７０  ＮＭＲ分光計、Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＰＸ−２５０  ＮＭＲ分光計又はＢｒｕｋｅｒ  ＡＭＸ−４００  ＮＭＲ分光計で測定した。フラッシュカラムクロマトグラフィー分離を、シリカゲルＭｅｒｃｋ  ６０（２３０〜４００メッシュのＡＳＴＭ）で実施した。ＵＶ／ＶＩＳスペクトルを、Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ  ８４５０Ａダイオードアレイ分光光度計で測定した。ＴＬＣを、Ｅ．Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０Ｆ２５４プレートで実施した。ＴＬＣプレートの染色を、以下によって実施した：（ｉ）塩基性水性１％  ＫＭｎＯ４；（ｉｉ）ＥｔＯＨａｂｓ中０．３％のニンヒドリン。テトラヒドロフランをＬｉＡｌＨ４上で蒸留し、Ａｌ２Ｏ３カラムを通過させた。質量スペクトル（ＤＩ、ＥＩ−ＭＳ）を、ＶＧ−ｐｌａｔｆｏｒｍ−ＩＩエレクトロスプレー単一四極子質量分析計（Ｍｉｃｒｏ  Ｍａｓｓ、ＵＫ）で測定した。
【実施例１】
【０１６２】
Ｄ−Ｎ−プロパルギル−３−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル）アラニン（Ｍ９ａ、付録ＩＩＩ）及びＬ−Ｎ−プロパルギル−３−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル）アラニン（Ｍ１０ａ、付録ＩＩＩ）の合成。
【０１６３】
本明細書中の式ＩＩのこれらの鏡像異性体を、以下のステップによって、上記スキームＢ中に示される方法によって調製した：
（ｉ）５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリノリン（ｈｙｄｒｏｘｙｑｕｉｎｏｌｉｎｏｌｉｎｅ）（Ａ２）の合成。
【０１６４】
１４．６ｇ（０．１ｍｏｌｅ）の８−ヒドロキシキノリノリン、１６ｍｌの３２％塩酸及び１６ｍｌ（０．１ｍｌ）の３７％ホルムアルデヒドの混合物を、０℃で塩化水素ガスで６時間処理した。この溶液を、攪拌せずに室温で２時間静置させた。黄色固体をフィルタ上で収集して乾燥させて、粗製５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリンヒドロクロリド（Ａ２）を得た：２．１６ｇ；
2011079834.tif 000163
【０１６５】
（ｉｉ）８−（５−クロロメチル）キノリルアセテート（Ｂ３）の合成。
【０１６６】
乾燥ＤＭＦ（５ｍｌ）中の上記ステップ（ｉ）で得た粗製Ａ２（２３０ｍｇ、１ｍｍｏｌｅ）の攪拌溶液に、０℃でピリジン（０．３ｍｌ、２．５ｍｍｏｌ）及び塩化アセチル（０．６ｍｌ、８ｍｍｏｌｅ）を、Ｎ２下で同時にゆっくりと添加した。この反応混合物を０℃で１時間攪拌し、室温で１時間攪拌した。０℃に冷却した後、１０ｍｌの水を添加し、得られた混合物を０℃で２０分間攪拌した。次いで、この混合物をクロロホルム（３×２０ｍｌ）で抽出した。合せた有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３（２×２０ｍｌ）、ブライン（２×２０ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。エバポレーションにより、化合物（Ｂ３）（粗製）（１８０ｍｇ、７５％）を黄褐色固体として得た。ｍ．ｐ．＝１１９〜１２０℃、Ｒｆ０．７５（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ：ＮＨ３  ９：１：０．２５）。
2011079834.tif 000164
【０１６７】
（ｉｉｉ）ジエチル８−ヒドロキシキノリン−５−イル−メチル−アセトアミドマロネート（ＨＬＭ７、付録ＩＶ）の合成。
【０１６８】
エタノール（５０ｍｌ）中のアセトアミドマロネート（１８３ｍｇ、０．８４２ｍｍｏｌ）及び金属ナトリウム（３４ｍｇ、０．８４２ｍｍｏｌｅ）の溶液に、ＣＨＣｌ３（５ｍｌ）中の８−（５−クロロメチル）キノリルアセテート（Ｂ３）（１８０ｍｇ、７６５ｍｍｏｌｅ）を添加した。この混合物を還流下で５時間攪拌し、冷却し、減圧下でエバポレートした。水（２０ｍｌ）を残渣に添加し、この混合物をＣＨＣｌ３：ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍｌ、１：１）で抽出した。有機層をブライン（２×２０ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。エバポレーションにより、表題化合物（ＨＬＭ７）：（１７０ｍｇ、５９％）を黄褐色固体（粗製）として得た。ｍ．ｐ．＝１５３〜１５４℃、Ｒｆ０．２５（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ：ＮＨ３  ９：１：０．２５）。
2011079834.tif 000165
【０１６９】
（ｉｖ）ＤＬ−３−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル）アラニン（ＨＬＭ８、付録ＩＶ）の合成。
【０１７０】
上記（ｉｉｉ）で得たジエチル（８−ヒドロキシキノリン−５−イル−メチル）−アセトアミドマロネート（ＨＬＭ７）（８．９ｇ、２１．９ｍｍｏｌ）を、６Ｎ  ＨＣｌ（１５０ｍｌ）中に溶解し、得られた混合物を１０時間還流した。この反応混合物を乾燥するまでエバポレートし、溶媒を減圧下で除去した。残渣をＨ２Ｏ中に再度溶解して濾過した。この溶液のｐＨを１０％ＮａＯＨで５〜５．５の間に調整した。黄色沈殿物を濾過によって収集し、水で完全に洗浄し、水（ｐＨ＝５．５）から再結晶化し、次いでアセトンで洗浄して表題化合物（ＨＬＭ８）（３．８ｇ、収率６５％）、純度１００％を得て、ＨＰＬＣ［（Ｃ１８；溶媒Ａ＝水、０．１％  ｖ／ｖ  ＴＦＡ；溶媒Ｂ＝ＭｅＣＮ：水＝３：１、０．１％  ｖ／ｖ  ＴＦＡ；ｔＲ＝１８．２分（５５分間にわたり直線勾配０〜８０％のＢ）］によってチェックした。ｍ．ｐ．＝１９４℃（分解）。
2011079834.tif 000166
【０１７１】
（ｖ）ＤＬ−３−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル）アラニンエチルエステル（ＨＬＭ９、付録ＩＶ）の合成。
【０１７２】
無水エタノール（２６ｍｌ）中のＤＬ−３−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル）アラニン（ＨＬＭ８）（２．１９ｇ、７．０４ｍｍｏｌ）の攪拌スラリーに、０℃で、ＣａＣｌ２チューブによってＮ２中で大気の湿気から保護して、塩化チオニルを滴下した（１．１ｍｌ、１４．１ｍｍｏｌ）。この反応混合物を０℃で３０分間攪拌し、室温で３０分間攪拌し、次いで一晩還流した。この溶液を減圧下で乾燥するまでエバポレートした。その残渣を無水エタノール中に溶解し、乾燥するまで再度エバポレートした。エステル化の完了を確実にするために、全操作を反復した。エステルＨＬＭ９（黄色固体、１．６７ｇ、収率９２％）（これは、ＨＰＬＣによって約１％の遊離アミノ酸を含むことが示された）を、ＦＣ（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ：ＡｃＯＨ  ９：１．５：１．５）によってさらに精製した。
2011079834.tif 000167
【０１７３】
（ｖｉ）Ｌ−３−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル）アラニン（Ｍ１０、付録ＩＶ）及びＤ−３−（８−ヒドロキシ−キノリン−５−イル）アラニンエチルエステル（Ｂ７、スキームＢ）の合成。
【０１７４】
上記１（ｖ）で得たＤＬ−３−（８−ヒドロキシ−キノリン−５−イル）アラニンエチルエステル（ＨＬＭ９）（８９．２ｍｇ）を、５ｍｌの水中に溶解し、この溶液のｐＨを、０．２ＭのＮａＯＨで約６．４に調整し、α−キモトリプシン（０．９ｍｇ）を添加し、ｐＨを０．２ＭのＮａＯＨの添加によって一定に維持しながら、この混合物を室温で６時間インキュベートした。消化後、この混合物を乾燥するまで凍結乾燥し、半調製的ＨＰＬＣ［Ｃ１８；溶媒Ａ＝水、０．１％  ｖ／ｖ  ＴＦＡ；溶媒Ｂ＝ＭｅＣＮ：水＝３：１、０．１％  ｖ／ｖ  ＴＦＡ；ｔＲ＝１８．０分（５５分間にわたり直線勾配０〜８０％のＢ）］によって分離した。α−キモトリプシンはＬ形態に特異的なので、Ｌ−３−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル）アラニン（Ｍ１０）が得られた：２７．６ｍｇ、３５％、純度１００％、［α］Ｄ２０＝＋１３．５（Ｄ−３−（８−ヒドロキシ−キノリン−５−イル）アラニンエチルエステル（Ｂ７）を回収した：３９．２ｍｇ、８８％の回収）。
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【０１７５】
（ｖｉｉ）Ｄ−３−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル）アラニン（Ｍ９、付録ＩＶ）の合成。
【０１７６】
エチルエステルの加水分解のために、３３．４ｍｇのステップ１（ｖｉ）で回収したＤ−３−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル）アラニンエチルエステル（Ｂ７）を、１１ｍｌの０．２Ｍ  ＮａＯＨ中に溶解し、この溶液を室温で６時間攪拌した。その水を凍結乾燥によって除去し、生成物を半調製的ＨＰＬＣ［（Ｃ１８；溶媒Ａ＝水、０．１％  ｖ／ｖ  ＴＦＡ；溶媒Ｂ＝ＭｅＣＮ：水＝３：１、０．１％  ｖ／ｖ  ＴＦＡ；ｔＲ＝１８．４分（５５分間にわたり直線勾配０〜８０％のＢ）］によって精製して、表題化合物Ｍ９を得た：２６．８ｍｇ、８９％、純度９９．１％。［α］Ｄ２０＝−１０．３。
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【０１７７】
（ｖｉｉｉ）Ｄ−Ｎ−プロパルギル−３−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル）アラニン（Ｍ９ａ、付録ＩＩＩ）の合成。
【化２２】
2011079834.tif 000170
【０１７８】
ＮａＨＣＯ３（１７ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）及び上記ステップ（ｖｉｉ）からの化合物Ｍ９（２３．２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）の混合物を、５ｍｌのＤＭＳＯ中に溶解し、この溶液を室温で２時間攪拌した。この溶液に、臭化プロパルギル（１１．９ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加し、この溶液を室温で２４時間攪拌した。溶媒を減圧によって除去し、粗製生成物を、半調製的ＨＰＬＣ［（Ｃ１８；溶媒Ａ＝水、０．１％  ｖ／ｖ  ＴＦＡ；溶媒Ｂ＝ＭｅＣＮ：水＝３：１、０．１％  ｖ／ｖ  ＴＦＡ；ｔＲ＝２２．４分（５５分間にわたって直線勾配０〜８０％のＢ）］によって精製して、表題化合物Ｍ９ａを得た：１９ｍｇ、収率７０％。［α］Ｄ２０＝−１２．３。
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【０１７９】
（ｉｘ）Ｌ−Ｎ−プロパルギル−３−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル）アラニン（Ｍ１０ａ、付録ＩＩＩ）の合成。
【化２３】
2011079834.tif 000172
【０１８０】
表題化合物を、上記ステップ（ｖｉｉｉ）の手順を使用して合成した。収率７８％。［α］Ｄ２０＝＋１５．３。
2011079834.tif 000173
【実施例２】
【０１８１】
５−（４−プロパルギルピペラジン−１−イルメチル）−８−ヒドロキシ−キノリン（ＨＬＡ２０、付録ＩＩＩ）の合成。
【０１８２】
表題化合物を、Ｎ−プロパルギルピペラジンとの５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリノリン（Ａ２）の反応によって以下のように調製した：
（ｉ）ｔｅｒｔ−ブチル１−ピペラジンカルボキシレート（Ｄ５、スキームＤ）の合成。
【０１８３】
ＭｅＯＨ（２５ｍｌ）中のジ（ｔｅｒｔ−ブチル）ジカーボネート（２．９３ｇ、１２．７７ｍｍｏｌｅ）の溶液を、ＭｅＯＨ（５０ｍｌ）中のピペラジン（２．００ｇ、２３．２２ｍｍｏｌｅ）の攪拌溶液に０℃でゆっくりと添加した。次いでこの混合物を室温で２日間攪拌し、溶媒を減圧下で除去した。粗製固体を温めながらＥｔ２Ｏ（１００ｍｌ）中に再度溶解し、白色沈殿物を濾過して除いた。その生成物を、１Ｍクエン酸溶液（３×５０ｍｌ）を用いて母液から抽出し、その水層をＥｔ２ＯＡｃ（３×５０ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＣＯ３（ｐＨ１１）で塩基性化し、Ｅｔ２ＯＡｃ（３×５０ｍｌ）で抽出した。その有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させて、減圧下でエバポレートし、蝋状の白色固体としてｔｅｒｔ−ブチル１−ピペラジンカルボキシレート（Ｄ５）を得た（粗製、１．５７ｇ、６６％）、ｍｐ＝５３〜４５℃。
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【０１８４】
（ｉｉ）ｔｅｒｔ−ブチル４−プロパルギルピペラジン−１−カルボキシレート（Ｄ６、スキームＤ）の合成。
【０１８５】
臭化プロパルギル（３５６．９ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を、ＣＨＣｌ３（２５ｍｌ）中の上記ステップ２（ｉ）で得たｔｅｒｔ−ブチル１−ピペラジンカルボキシレート（５５８．８ｍｇ、３ｍｍｏｌｅ）及びジイソプロピルエチルアミン（４０７．１ｍｇ、３．１５ｍｍｏｌ）の混合物に、０℃でゆっくりと添加した。この混合物を室温で２４時間攪拌した。次いで５０ｍｌのＣＨＣｌ３を添加し、この溶液を５％  ＮａＨＣＯ３（３×５０ｍｌ）、ブライン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。この溶液を濾過し、乾燥するまでエバポレートした。その残渣をベンゼン−ヘキサン（１：１）の混合物から結晶化して、ｔｅｒｔ−ブチル４−プロパルギルピペラジン−１−カルボキシレート（Ｄ６）（粗製３３７ｍｇ、８６％）を得た。
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【０１８６】
（ｉｉｉ）Ｎ−プロパルギルピペラジン（Ｄ７、スキームＤ）の合成。
【０１８７】
上記ステップ２（ｉｉ）のｔｅｒｔ−ブチル４−プロパルギルピペラジン−１−カルボキシレート（５７０ｍｇ、２．５４５ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１０ｍｌ）及び水（２．５ｍｌ）中に溶解した。次いでこの混合物を室温で一晩攪拌した。この溶液を、減圧下で乾燥するまでエバポレートした。その残渣を水（１０ｍｌ）中に溶解し、次いでＮａ２ＣＯ３（ｐＨ１１）で塩基性化し、Ｅｔ２ＯＡｃ（３×５０ｍｌ）で抽出した。その有機層をブライン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で一晩乾燥させた。減圧下でのエバポレーションにより、白色固体としてＮ−プロパルギルピペラジン（Ｄ７）（粗製、１９３ｍｇ、収率６２％）を得た。
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【０１８８】
（ｉｖ）５−（４−プロパルギルピペラジン−１−イルメチル）−８−ヒドロキシキノリン（ＨＬＡ２０、付録ＩＩＩ）の合成。
【０１８９】
６ｍｌのＣＨＣｌ３中の５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリンヒドロクロリド（Ａ２）（３２３ｍｇ、１．４０７ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．２６ｍｌ、１．４７７ｍｍｏｌ、１．０５当量）の混合物に、０℃で上記ステップ２（ｉｉｉ）で得たＮ−プロパルギルピペラジン（１７３ｍｇ、１．４０７ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。この混合物を室温で２４時間攪拌した。次いで１０ｍｌのＣＨＣｌ３を添加し、この溶液を５％  ＮａＨＣＯ３（３×５０ｍｌ）、ブライン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。粗製生成物をＦＣによって精製して、表題化合物（ＨＬＡ２０）を白色固体として得た（３３７ｍｇ、収率８６％）。
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【実施例３】
【０１９０】
５−（４−プロパルギルアミノエトキシカルボニル−ピペラジン−１−イルメチル）−８−ヒドロキシキノリン（ＨＬＡ１６ａ、付録ＩＩＩ）の合成。
【０１９１】
（ｉ）エチル４−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−１−ピペラジンカルボキシレート（ＨＬＡ１６、付録ＩＶ）の合成。
【０１９２】
５０ｍｌのＣＨＣｌ３中の５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリンヒドロクロリド（Ａ２）（２．３６ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（３．６ｍｌ、２０．４ｍｍｏｌ、２当量）の混合物に、０℃でエチル１−ピペラジンカルボキシレート（１．５ｍｌ、１０．２ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。この混合物を室温で２４時間攪拌し、次いで１００ｍｌのＣＨＣｌ３を添加し、この溶液を５％  ＮａＨＣＯ３（３×５０ｍｌ）、ブライン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。この溶液を濾過し、乾燥するまでエバポレートした。その残渣をベンゼン−ヘキサン（１：１）の混合物から結晶化して、表題化合物ＨＬＡ１６を白色固体として得た（１．３８ｇ、収率４２％、ｍ．ｐ．＝９２〜９３℃）。
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【０１９３】
（ｉｉ）代替的な方法において、表題化合物ＨＬＡ１６ａを、Ｎ−プロパルギルアミノエトキシカルボニル−ピペラジンとの５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリンの反応によって以下のように調製する：
（ｉｉａ）Ｎ−プロパルギルアミノエトキシカルボニルピペラジン（Ｈ１、付録ＶＩＩ）の合成。
【化２４】
2011079834.tif 000179
【０１９４】
２−クロロエチルクロロホルメート（４２９ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を、ＣＨＣｌ３（２５ｍｌ）中の実施例２のステップ（ｉｉ）のように得たｔｅｒｔ−ブチル１−ピペラジンカルボキシレート（５５９ｍｇ、３ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（４０７ｍｇ、３．１５ｍｍｏｌ）の混合物に０℃でゆっくりと添加した。この混合物を室温で２４時間攪拌した。次いでＣＨＣｌ３（５０ｍｌ）を添加し、この溶液を５％  ＮａＨＣＯ３（３×５０ｍｌ）、ブライン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。この溶液を濾過し、乾燥するまでエバポレートした。その残渣を室温でＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍｌ）中に溶解し、プロパルギルアミン（０．２０５ｍｌ、１６５ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を添加した。室温で２４時間の攪拌後、溶媒を減圧によって除去し、その残渣に２０ｍｌのＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＴＥＳ：チオアニソール（８５：５：５：５）の溶液を添加した。次いで、この混合物を室温で２時間攪拌した。この溶液を減圧下で乾燥するまでエバポレートした。得られた残渣を水（１０ｍｌ）中に溶解し、次いでＮａ２ＣＯ３（ｐＨ１１）で塩基性化し、Ｅｔ２ＯＡｃ（３×５０ｍｌ）で抽出した。その有機層をブライン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で一晩乾燥させた。減圧下でのエバポレーションにより、表題化合物Ｈ１を得た：（２５１ｍｇ、総収率４０％）。
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【０１９５】
（ｉｉｂ）５−（４−プロパルギルアミノエトキシカルボニル−ピペラジン−１−イルメチル）−８−ヒドロキシキノリン（ＨＬＡ１６ａ、付録ＩＩＩ）の合成。
【化２５】
2011079834.tif 000181
【０１９６】
５ｍｌのＣＨＣｌ３中の５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリンヒドロクロリド（Ａ２）（１９４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．３４８ｍｌ、２ｍｍｏｌ、２当量）の混合物に、室温でＨ１（２２１ｍｇ、１ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。この混合物を室温で２４時間攪拌した。次いで１０ｍｌのＣＨＣｌ３を添加し、この溶液を５％  ＮａＨＣＯ３（３×１０ｍｌ）、ブライン（２×１０ｍｌ）で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。この溶液を濾過し、乾燥するまでエバポレートした。その残渣をトルエン−ヘキサン（１：１）の混合物から結晶化して、表題化合物ＨＬＡ１６ａを白色固体として得た（１８４ｍｇ、収率５０％）。
2011079834.tif 000182
【実施例４】
【０１９７】
Ｎ−プロパルギルＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｌ−システイン（Ｍ１２ａ、付録ＩＩＩ）及びＮ−プロパルギルＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｄ−システイン（Ｍ１１ａ、付録ＩＩＩ）の合成。
【０１９８】
これらの表題化合物を、本明細書中で上記したスキームＢ中に示される第一の経路に従って調製した。
【０１９９】
（ｉ）Ｓ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｌ−システイン（Ｍ１２、付録ＩＩ）の合成。
【０２００】
Ｌ−システインヒドロクロリド水和物（３７ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＳＯ（３ｍｌ）中に溶解した。この溶液に粉末化したＫＯＨ（３６ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を室温で３０分間攪拌した。次いで、粉末化した５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリンヒドロクロリド（Ａ２）（６５ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を添加した。この懸濁物を室温で１２時間攪拌し、２Ｎ  ＨＣｌを添加し、ｐＨを５に調整した。その沈殿物を水及びアセトンで洗浄した。粗製生成物を、半調製的ＨＰＬＣによってさらに精製して、化合物Ｍ１２を得た：５３ｍｇ（６１％）。ＨＰＬＣ（ｔＲ）：３８．１分（直線勾配：最初の４分間にわたり５０％のＢ、６０分間にわたり１００％のＢまで直線的に増大）［α］Ｄ２０＝＋２０．５°（ｃ＝１．０、Ｈ２Ｏ）；
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【０２０１】
（ｉｉ）Ｓ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｄ−システイン（Ｍ１１、付録ＩＩ）の合成。
【０２０２】
化合物Ｍ１１を、Ｍ１２について上記した４（ｉ）に記載される方法と同様に調製したが、出発物質としてＬ−システインの代わりにＤ−システインを使用した。
2011079834.tif 000184
【０２０３】
（ｉｉｉ）Ｎ−プロパルギルＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｌ−システイン（Ｍ１２ａ、付録ＩＩＩ）の合成。
【化２６】
2011079834.tif 000185
【０２０４】
５ｍｌのＤＭＳＯ中のＮａＨＣＯ３（３４ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）及び化合物Ｍ１２（５４ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）の攪拌混合物に、臭化プロパルギル（２４ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加し、この溶液を室温で２４時間攪拌した。溶媒を減圧によって除去し、粗製生成物を結晶化し（ｐＨ５．５）、次いで半調製的ＨＰＬＣ［（Ｃ１８；溶媒Ａ＝水、０．１％  ｖ／ｖ  ＴＦＡ；溶媒Ｂ＝ＣＨ３ＣＮ：水＝３：１、０．１％  ｖ／ｖ  ＴＦＡ；ｔＲ＝２４．４分（５５分間にわたり直線勾配０〜８０％のＢ）］によってさらに精製して、表題化合物Ｍ１２ａを得た：３７ｍｇ、収率６０％。［α］Ｄ２０＝−１６．３（ｃ＝１．０、０．１Ｎ  ＨＣｌ）。質量分析：Ｃ１６Ｈ１６Ｎ２Ｏ３Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝３１７．３８、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝３１７．３０。
2011079834.tif 000186
【０２０５】
（ｉｖ）Ｎ−プロパルギルＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｄ−システイン（Ｍ１１ａ、付録ＩＩＩ）の合成。
【化２７】
2011079834.tif 000187
【０２０６】
表題化合物Ｍ１１ａを、Ｍ１２ａについての手順に従って調製したが、出発物質としてＭ１２の代わりにＭ１１を使用した。収率７０％。［α］Ｄ２０＝−１８．３（ｃ＝１．０、０．１Ｎ  ＨＣｌ）。質量分析：Ｃ１６Ｈ１６Ｎ２Ｏ３Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝３１７．３８、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝３１７．３１。
2011079834.tif 000188
【実施例５】
【０２０７】
Ｎ−プロパルギルＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｌ−システイン（Ｍ１２ａ、付録ＩＩＩ）及びＮ−プロパルギルＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｄ−システイン（Ｍ１１ａ、付録ＩＩＩ）の合成−方法Ｂ。
【０２０８】
これらの表題化合物は、化合物Ｍ１１及びＭ１２のＮ−９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｎ−Ｆｍｏｃ）誘導体の調製、Ｆｍｏｃ保護基の除去及び臭化プロパルギルとの反応からなる別の方法によって調製し得る。
【０２０９】
（ｉ）Ｎ−９−Ｆｍｏｃ−Ｓ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｌ−システイン（Ｍ１１Ｂ、付録ＩＶ）の合成。
【０２１０】
実施例４（ｉ）で得た粗製化合物Ｍ１１（２７．５ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を、１０％  ＮａＣＯ３（１２ｍｌ）中に溶解した。この溶液を攪拌し、そのｐＨを小部分の１０％  ＮａＣＯ３を使用して約８に調整した。この溶液に、ジオキサン（２ｍｌ）中の（９−フルオレニルメチル）スクシンイミジルカーボネート（３６．６ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、１．１当量）を滴下した。この反応混合物を室温で１２時間攪拌した。ジオキサンを室温で減圧下でエバポレートし、その水相をＥｔ２Ｏ（３×３０ｍｌ）で抽出した。この水相を１０％  ＫＨＳＯ４でｐＨ２〜３に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（３×３０ｍｌ）で抽出した。合せたＥｔＯＡｃ部分をＮａＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。その残渣を、半調製的ＨＰＬＣによってさらに精製して、表題化合物を得た：２６ｍｇ（５０％）。ＨＰＬＣ（ｔＲ）：３８．１分（直線勾配：最初の４分間にわたって５０％のＢ、６０分間で１００％のＢまで直線的に増大）。
2011079834.tif 000189
【０２１１】
（ｉｉ）Ｎ−９−Ｆｍｏｃ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｄ−システイン（Ｍ１２Ｂ、付録ＩＶ）の合成。
【０２１２】
化合物Ｍ１２Ｂを、適切な出発物質を使用して、上記ステップ５（ｉ）に記載されるような化合物Ｍ１１Ｂを合成するための方法によって調製した。
2011079834.tif 000190
【０２１３】
（ｉｉｉ）Ｎ−プロパルギルＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｌ−システイン（Ｍ１２ａ、付録ＩＩＩ）の合成。
【０２１４】
表題化合物を、化合物Ｍ１２ＢからのＦｍｏｃ基の除去及び臭化プロパルギルとのその反応によって得る。
【０２１５】
（ｉｖ）Ｎ−プロパルギルＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｄ−システイン（Ｍ１１ａ、付録ＩＩＩ）の合成。
【０２１６】
この化合物を、化合物Ｍ１１ＢからのＦｍｏｃ基の除去及び臭化プロパルギルとのその反応によって得る。
【実施例６】
【０２１７】
Ｎ−（４−プロパルギルピペラジン−１−イルエチル）−２−メチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン（ＨＬＡ２０ａ、付録ＶＩ）の合成。
【０２１８】
表題化合物を、Ｎ−（２−クロロエチル）−２−メチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン（Ｈ２、付録ＶＩＩ）（Ｂｉｊａｙａ  Ｌ．Ｒａｉ、Ｌｏｔｆｏｌｌａｈ  Ｄｅｋｈｏｒｄｉ、Ｈｉｃｈａｍ  Ｋｈｏｄｒ、Ｙｉ  Ｊｉｎ、Ｚｕｄｏｎｇ  Ｌｉｕ及びＲｏｂｅｒｔ  Ｃ．ＨｉｄｅｒのＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９８、４１、３３４７−３３５９に記載されるように調製した）のＮ−プロパルギルピペラジン（実施例２のステップ（ｉｉｉ）と同様に得た）との反応によって、スキームＤに記載されるように調製した：
【化２８】
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【０２１９】
６ｍｌのＣＨＣｌ３中のＨ２（３７５ｍｇ、２ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．３５２ｍｌ、２ｍｍｏｌ、１当量）の混合物に、０℃でＮ−プロパルギルピペラジン（２４５ｍｇ、２ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。次いで、この混合物を室温で２４時間攪拌した。ＣＨＣｌ３（１０ｍｌ）を添加し、この溶液を５％  ＮａＨＣＯ３（３×５０ｍｌ）、ブライン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。粗製生成物をＦＣによって精製して、表題化合物ＨＬＡ２０ａを得た：３３７ｍｇ、収率６０％。
2011079834.tif 000192
【実施例７】
【０２２０】
Ｎ−（Ｎ−メチル−プロパルギルアミノエチル））−２−メチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン（Ｍ３０ａ、付録ＶＩ）の合成。
【０２２１】
表題化合物を、Ｈ２と、出発物質としてのＮ−プロパルギルピペラジンの代わりのＮ−メチル−プロパルギルアミンとの反応によって、スキームＤに記載されるように調製した：
【化２９】
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【０２２２】
ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍｌ）中のＮ−メチル−プロパルギルアミンヒドロクロリド（２１２ｍｇ、２ｍｍｏｌｅ）の溶液を、６ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２中のＨ２（３７５ｍｇ、２ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．３５２ｍｌ、２ｍｍｏｌ、１当量）の攪拌溶液に０℃でゆっくりと添加した。次いで、この混合物を室温で一晩攪拌し、その溶媒を減圧下で除去した。粗製固体を１０ｍｌのＣＨＣｌ３中に再度溶解し、次いで５％  ＮａＨＣＯ３（３×３０ｍｌ）、ブライン（２×２０ｍｌ）で洗浄した。その有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下でエバポレートして表題化合物Ｍ３０ａを得た。
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【実施例８】
【０２２３】
Ｎ−（４−プロパルギルアミノエトキシカルボニル−ピペラジン−１−イルメチル））−２−メチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン（ＨＬＡ１６ｂ、付録ＶＩ）の合成。
【化３０】
2011079834.tif 000195
【０２２４】
表題化合物ＨＬＡ１６ｂを、実施例７中のＭ３０ａについての手順に従って合成したが、出発物質としてＮ−メチルプロパルギルアミンの代わりにＮ−プロパルギルアミノエトキシカルボニルピペラジン（Ｈ１）を使用した。収率６４％。
2011079834.tif 000196
【実施例９】
【０２２５】
Ｎ−プロパルギル−Ｓ−（２−メチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン−１−イルエチル）−Ｌ−システイン（Ｍ１２ｂ、付録ＶＩ）及びＮ−プロパルギル−Ｓ−（２−メチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン−１−イルエチル）−Ｄ−システイン（Ｍ１１ｂ、付録ＶＩ）の合成。
【０２２６】
表題化合物を、Ｄ１のシステインとの反応、及び得られたＤ２の臭化プロパルギルとのさらなる反応によって、本明細書中で上記したスキームＤ中に示された第一の経路に従って以下のように調製した：
【０２２７】
（ｉ）Ｓ−（２−メチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン−１−イルエチル）−Ｌ−システイン（Ｌ−Ｈ３、付録ＶＩＩ）の合成。
【化３１】
2011079834.tif 000197
【０２２８】
Ｌ−システインヒドロクロリド水和物（３７ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＳＯ（３ｍｌ）中に溶解した。この溶液に粉末化したＫＯＨ（３６ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を室温で３０分間攪拌した。次いで、ＤＭＳＯ中のＨ２（６４ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を添加した。室温で２４時間の攪拌後、２Ｎ  ＨＣｌをこの反応混合物に添加し、そのｐＨを５．５に調整した。その沈殿物を水及びアセトンで洗浄した。粗製生成物を、半調製的ＨＰＬＣによってさらに精製して、表題化合物Ｌ−Ｈ３を得た：６４ｍｇ（７０％）。ＨＰＬＣ（ｔＲ）：３２．１分（直線勾配：最初の４分間にわたって５０％のＢ、６０分間で１００％のＢまで直線的に増大）［α］Ｄ２０＝−２０．５°（ｃ＝１．０、Ｈ２Ｏ）。
2011079834.tif 000198
【０２２９】
（ｉｉ）Ｎ−プロパルギル−Ｓ−（２−メチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン−１−イルエチル）−Ｌ−システイン（Ｍ１２ｂ、付録ＶＩ）の合成。
【化３２】
2011079834.tif 000199
【０２３０】
ＮａＨＣＯ３（３４ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）及びＬ−Ｈ３（７５ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）の混合物を、５ｍｌのＤＭＳＯ中に溶解し、この溶液を室温で２時間攪拌した。この溶液に、臭化プロパルギル（２４ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加し、この溶液を室温で２４時間攪拌した。溶媒を減圧によって除去し、粗製生成物を水（ｐＨ５．５）中で結晶化し、半調製的ＨＰＬＣ［（Ｃ１８；溶媒Ａ＝水、０．１％  ｖ／ｖ  ＴＦＡ；溶媒Ｂ＝ＣＨ３ＣＮ：水＝３：１、０．１％  ｖ／ｖ  ＴＦＡ；ｔＲ＝２０．４分（５５分間にわたり直線勾配０〜８０％のＢ）］によってさらに精製して、表題化合物Ｍ１２ｂを得た：３７ｍｇ、収率６０％。［α］Ｄ２０＝−１６．３。
2011079834.tif 000200
【０２３１】
（ｉｉｉ）Ｓ−（２−メチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン−１−イルエチル）−Ｄ−システイン（Ｄ−Ｈ３、付録ＶＩＩ）の合成。
【化３３】
2011079834.tif 000201
【０２３２】
表題化合物を、Ｌ−Ｈ３についての手順に従って調製したが、出発物質としてＬ−システインの代わりにＤ−システインを使用した。収率７１％。ＨＰＬＣ（ｔＲ）：３２．１分（直線勾配：最初の４分間にわたり５０％のＢ、６０分間で１００％のＢまで直線的に増大）［α］Ｄ２０＝＋１９．５°（ｃ＝１．０、Ｈ２Ｏ）。
2011079834.tif 000202
【０２３３】
（ｉｖ）Ｎ−プロパルギルＳ−（２−メチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン−１−イルエチル）−Ｄ−システイン（Ｍ１１ｂ、付録ＶＩ）の合成。
【化３４】
2011079834.tif 000203
【０２３４】
表題化合物Ｍ１１ｂを、Ｍ１２ｂについての手順に従って合成したが、出発化合物としてＳ−（２−メチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン−１−イルエチル）−Ｌ−システインの代わりにＳ−（２−メチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン−１−イルエチル）−Ｄ−システイン（Ｄ−Ｈ３）を使用した。収率７０％、［α］Ｄ２０＝＋１７．３。
2011079834.tif 000204
【実施例１０】
【０２３５】
Ｎ−プロパルギルグリシンヒドロキサメート（Ｍ３７、付録Ｖ）の合成。
【化３５】
2011079834.tif 000205
【０２３６】
臭化プロパルギル（３５６．９ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を、ＣＨＣｌ３（２０ｍｌ）中のグリシンヒドロキサメート（２７０ｍｇ、３ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（４０７．１ｍｇ、３．１５ｍｍｏｌ）の混合物に０℃でゆっくりと添加した。この混合物を室温で２４時間攪拌し、ＣＨＣｌ３（５０ｍｌ）を添加した。この溶液を５％  ＮａＨＣＯ３（３×５０ｍｌ）、ブライン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。この溶液を濾過し、乾燥するまでエバポレートして表題化合物Ｍ３７を得た：１９２ｍｇ、収率５０％。
2011079834.tif 000206
【実施例１１】
【０２３７】
Ｎ−（４−メチルピペラジン−１−イルメチルカルボニル），Ｎプロパルギルグリシンヒドロキサメート（Ｍ３８、付録Ｖ）の合成。
【０２３８】
表題化合物を、Ｎ−ｔ−ブトキシ２−（Ｎ−クロロアセチル，Ｎ−プロパルギル）アミノ−アセトアミド（Ｈ４、付録ＶＩＩ）のＮ−メチルピペラジンとの反応によって調製した。化合物Ｈ４を、Ｎ−ｔ−ブトキシ２−アミノ−アセトアミドの塩化クロロアセチル及び臭化プロパルギルとの反応によって以下のように得た：
（ｉ）Ｎ−ｔ−ブトキシ２−（Ｎ−クロロアセチル−Ｎ−プロパルギル）アミノ−アセトアミド（Ｈ４）の合成。
【化３６】
2011079834.tif 000207
【０２３９】
臭化プロパルギル（３５６．９ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を、ＣＨＣｌ３（２０ｍｌ）中の２−アミノ−Ｎ−ｔ−ブトキシ−アセトアミド（４３８．６ｍｇ、３ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（４０７．１ｍｇ、３．１５ｍｍｏｌ）の混合物に０℃でゆっくりと添加した。この混合物を室温で２４時間攪拌し、ＣＨＣｌ３（５０ｍｌ）を添加した。この溶液を５％  ＮａＨＣＯ３（３×５０ｍｌ）、ブライン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。この溶液を濾過し、乾燥するまでエバポレートした。その残渣をＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍｌ）中のジイソプロピルエチルアミン（２５８ｍｇ、２ｍｍｏｌ）に室温で溶解し、塩化クロロアセチル（０．２３９ｍＬ、３３９ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を３０分間にわたって０℃でゆっくりと添加した。室温で２時間の攪拌後、溶媒を減圧によって除去した。得られた残渣をＥｔ２ＯＡｃ（６０ｍｌ）中に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３（２×５０ｍｌ）、ブライン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で一晩乾燥させた。減圧下でのエバポレーションによって、表題化合物Ｈ４を得た：３９０ｍｇ、収率５０％。
2011079834.tif 000208
【０２４０】
（ｉｉ）Ｎ−（４−メチルピペラジン−１−イルメチルカルボニル）−Ｎ−プロパルギルグリシンヒドロキサメート（Ｍ３８、付録Ｖ）の合成。
【化３７】
2011079834.tif 000209
【０２４１】
Ｎ−メチルピペラジン（１００ｍｇ、１ｍｍｏｌ、１当量）を、クロロホルム（５ｍｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（０．３４８ｍｌ、２ｍｍｏｌ、２当量）及び上記のステップ（ｉ）で得たＨ４（２６１ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に室温で添加した。室温で２４時間攪拌した後、１０ｍｌのＣＨＣｌ３を添加し、この溶液を５％  ＮａＨＣＯ３（３×１０ｍｌ）、ブライン（２×１０ｍｌ）で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。この溶液を濾過し、乾燥するまでエバポレートした。その残渣を、ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＴＥＳ：チオアニソール（８５：５：５：５）の溶液（５ｍｌ）中に溶解し、室温で１時間攪拌した。減圧下での溶媒の除去後、その残渣をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）中に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３（３×２０ｍｌ）、ブライン（２×１０ｍｌ）で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。減圧下でのエバポレーションにより、表題化合物Ｍ３８を得た：１６０ｍｇ、収率６０％。
2011079834.tif 000210
【実施例１２】
【０２４２】
Ｎ−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イルメチルカルボニル），Ｎ−プロパルギルグリシンヒドロキサメート（Ｍ３９、付録Ｖ）の合成。
【化３８】
2011079834.tif 000211
【０２４３】
表題化合物Ｍ３９を、上記実施例１１中のＭ３８についての手順に従って合成したが、出発物質としてＮ−メチルピペラジンの代わりに４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジンを使用した。収率７２％。質量分析：Ｃ１３Ｈ２２Ｎ４Ｏ４について計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝２９９．３４、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝２９９．４０。
2011079834.tif 000212
【実施例１３】
【０２４４】
Ｎ−［４−エトキシカルボニルピペラジン−１−イルメチルカルボニル），Ｎ−プロパルギルグリシンヒドロキサメート（Ｍ４０、付録Ｖ）の合成。
【化３９】
2011079834.tif 000213
【０２４５】
表題化合物Ｍ４０を、上記実施例１１に記載されるように調製したが、出発物質としてＮ−メチルピペラジンの代わりに４−エトキシカルボニルピペラジンを使用した。収率７８％。質量分析：Ｃ１４Ｈ２２Ｎ４Ｏ５について計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝３２７．３５、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝３２７．２８。
2011079834.tif 000214
【実施例１４】
【０２４６】
一般的ペプチド合成
付録Ｉに示されるような式Ｉの本発明の化合物の調製において使用されるペプチドを、以下に記載される一般的な方法によって調製する。
【０２４７】
他のように記述されない限り、全ての化学物質及び試薬は分析等級のものであった。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）用のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）は、Ｍｅｒｃｋ（Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から得た。Ｎ−９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）保護されたアミノ酸誘導体及びＲｉｎｋアミド樹脂は、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ（Ｌａｕｆｅｌｆｉｎｇｅｎ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）から購入した。
【０２４８】
これらのペプチドを、会社のプロトコルに従ってＦｍｏｃ化学を使用して固相ペプチド合成によって手動で調製した。Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−アミノ酸誘導体をこの合成において使用した。Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）及びベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）並びに必要に応じて１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）の組み合わせを、カップリング剤として利用した。Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）及びＤＭＦを溶媒として使用した。各カップリングの前に、α−アミノ基の脱保護を、２０％ピペリジンとの反応によって達成した。全ての合成したペプチドを脱保護し、ＴＦＡ：トリエチルシラン（ＴＥＳ）：チオアニソール：水（８５：５：５：５）の溶液を使用して樹脂から切断した。切断混合物を濾過し、ペプチドを、過酸化物を含まない乾燥エーテルで０℃でこの溶液から沈殿させた。沈殿したペプチドを、冷乾燥エーテルで洗浄し、水又は水／アセトニトリル溶液中に溶解し、凍結乾燥した。この粗製ペプチドを、２つのモデル５１０ポンプ、モデル６８０自動勾配制御装置及びモデル４４１吸光度検出器からなるＷａｔｅｒｓシステム（Ｗａｔｅｒｓ、Ｍｉｌｏｒｄ、ＭＡ）で実施した半調製的ＨＰＬＣ精製に供した。カラム流出液を２１４／２５４ｎｍでのＵＶ吸光度によってモニタリングした。使用したＨＰＬＣの予めパックされたカラム（Ｍｅｒｃｋ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）は、半調製的精製についてはＬｉｃｈｒｏｓｏｒｂ  ＲＰ−１８（７ｍ）を含むＬｉｃｈｒｏＣＡＲＴ  ２５０−１０ｍｍ、分析的分離についてはＬｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒ  １００  ＲＰ−１８、２５０−４  ｍｍ（５ｍ）であった。０．１％  ＴＦＡを含む水中のアセトニトリルの勾配を使用して分離を達成した。精製されたペプチドを含む溶液を一晩凍結乾燥した。全てのペプチドの分子量を、質量分析によって確認した。質量分析を、電子スプレーイオン化法を利用してＭｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ  ＬＣＺ４０００（Ｍａｎｃｈｅｓｔｅｒ、ＵＫ）で実施した。アミノ酸組成の分析のために、ペプチドを減圧下で２４時間１００℃で６Ｎ  ＨＣｌ中で加水分解し、その加水分解物をＤｉｏｎｅｘ  Ａｕｔｏｍａｔｉｃ  Ａｍｉｎｏ  Ａｓｉｄ  Ａｎａｌｙｚｅｒを用いて分析した。
【実施例１５】
【０２４９】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基を含むＶＩＰ類似体誘導体−Ｆｍｏｃ−ＫＫＣ（ＨＱ）Ｌ−ＮＨ２（Ｍ７、付録ＩＩ）の合成。
【０２５０】
血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）は、アルツハイマー病のモデルにおいてβアミロイド毒性に対する神経保護を提供することが知られる２８マーのペプチドである。ＶＩＰの作用部位のマッピングは、４アミノ酸のペプチド（Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ）を導く。このＶＩＰフラグメントの類似体を、８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）残基への連結のためにＴｙｒ残基をＣｙｓ残基によって置換することによって調製し、このようにして本発明の化合物Ｍ７（付録ＩＩ）及びＭ７Ａ（付録Ｉ）を得た（以下の実施例１６を参照のこと）。両方の化合物Ｍ７及びＭ７Ａにはそれぞれ、付録ＩＩ及びＩ中の同じ意味Ｆｍｏｃ−ＫＫＣ（ＨＱ）Ｌ−ＮＨ２が与えられているが、Ｍ７Ａの構造式から、これが８−ヒドロキシキノリニル（ＨＱ）基の位置５においてメチレン基に連結されたプロパルギルアミノ基を有することが明らかである。
【０２５１】
Ｒｉｎｋアミド樹脂（７１ｍｇ、３３μｍｏｌｅ）に、ＮＭＰ中２０％のピペリジン２ｍｌを添加した。５分間の攪拌後、この溶液を排水し、この樹脂をＤＭＦで３回洗浄した。この樹脂に、１ｍｌのＤＭＦ中のＦｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（４７ｍｇ、１３２μｍｏｌｅ、４当量）及びＰｙＢＯＰ（６９ｍｇ、１３２μｍｏｌｅ、４当量）、並びにＮＭＭ（２９μｌ、２６４μｍｏｌ、８当量）を添加した。次いで得られた混合物を１時間攪拌した。その液体を排出し、第二のカップリングを同量のＦｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、ＰｙＢＯＰ及びＮＭＭを用いて実施した。第三のカップリングを、ＤＣＣ／ＨＯＢｔ活性化を介して実施した。Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（４７ｍｇ、１３２μｍｏｌｅ、４当量）、ＨＯＢｔ（１８ｍｇ、１３２μｍｏｌ、４当量）及びＤＣＣ（１３２μｍｌの１Ｎ  ＤＭＦ、１３２μｍｏｌ、４当量）を、１ｍｌのＤＭＦ中に溶解した。１時間の冷却後、沈殿したジシクロヘキシルウレア（ＤＣＵ）を除去し、この溶液を樹脂に添加した。一晩攪拌して溶液を排水した後、この樹脂を洗浄した（ＤＭＦ×３、ＤＣＭ×３）。ネガティブニンヒドリン試験が、カップリング反応の完了を示した。それぞれＦｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｍｍｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨを用いた次の３回のカップリングサイクルを、上記の手順（ＰｙＢＯＰ及びＤＣＣの両方）に従って実施した。全４回のカップリングサイクルの完了時に、得られた樹脂をＴＦＡ：ＴＥＳ：ＤＣＭ（ジクロロメタン）（１：５：９４  ｖ／ｖ）の溶液で処理して、Ｍｍｔ（４−メトキシトリチル）保護基を除去した。
【０２５２】
ＤＭＦ／ＤＣＭ（１ｍｌ）中の５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリン（３２ｍｇ、１６５μｍｏｌ、５当量）及びＮＭＰ（１７ｍｇ、２０μｌ、５当量）の溶液をこの樹脂に添加し、この混合物を一晩攪拌した。ネガティブＤＴＮＢ（５，５’−ジチオ−ビス−（２−ニトロベンゾエート））試験が、反応の完了を示した。得られたＨＱ改変ペプチドを、ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＴＥＳ：チオアニソール（８５：５：５：５）の溶液を使用して樹脂から切断し、エーテルで沈殿させた。粗製ＨＱ改変表題ペプチドＭ７を、上記のように半調製的ＨＰＬＣによってさらに精製した。収率：４．８ｍｇ（５．５μｍｏｌ；開始アミノ酸樹脂充填に基づいて１６．７％）。質量分析：ｍ／ｚ  ８７０．６（ＭＨ＋）計算値８７０．１。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ｌｅｕ  １．００、Ｌｙｓ  ２．１６。Ｃｙｓは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。
【実施例１６】
【０２５３】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基及びプロパルギルアミノ基を含むＶＩＰ類似体誘導体−Ｆｍｏｃ−ＫＫＣ（ＨＱ）Ｌ−ＮＨ２（Ｍ７Ａ、付録Ｉ）の合成。
【０２５４】
（ｉ）５−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル，Ｎ−プロパルギル）アミノメチル−８−ｔ−ブトキシ−キノリン（Ｈ５、付録ＶＩＩ）の合成。
【化４０】
2011079834.tif 000215
【０２５５】
５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリンを５−クロロメチル−８−ｔ−ブトキシ−キノリンとして保護し、プロパルギルアミンを公知の手順に従ってＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−プロパルギルアミンへと転換した。
【０２５６】
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）プロパルギルアミン（３１０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を、窒素下で、ＤＭＦ（５ｍｌ）中のＮａＨ（８８ｍｇの油中６０％分散物、２．２ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に３０分間かけて一部ずつ添加した。Ｈ２ガスエボリューションを停止させた後、ＤＭＦ（２ｍｌ）中の５−クロロメチル−８−Ｏ−ｔ−ブチル−キノリン（６００ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）を、３０℃を下回る温度（冷水浴）で滴下した。攪拌を３時間続け、反応混合物をＥｔＯＡｃ（３×３０ｍｌ）とＨ２Ｏ（５０ｍｌ）との間で分配した。合せたＥｔＯＡｃ溶液を水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、淡黄色の固体になるまでエバポレートし、これをヘキサンで洗浄して減圧乾燥させ、表題化合物を得た：４４３ｍｇ（６０％）、
2011079834.tif 000216
【０２５７】
（ｉｉ）５−（プロパルギルアミノブロモメチル）−８−ヒドロキシキノリン（Ｈ６、付録ＶＩＩ）の合成。
【化４１】
2011079834.tif 000217
【０２５８】
上記ステップ（ｉ）からの化合物Ｈ５（３６８ｍｇ、１ｍｍｏｌ）及びＮ−ブロモスクシンイミド（２３１ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を、５ｍｌのＣＣｌ４中に溶解した。この溶液に過酸化ベンゾイル（２．５ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）を添加し、この反応混合物を１２時間還流で加熱した。還流後、この溶液を０℃まで冷却し、固体沈殿物を濾過した。濾液を１Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３水溶液、飽和ＮａＳ２Ｏ３水溶液及びブラインで洗浄した。有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、減圧下で乾燥するまでエバポレートした。残渣をＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＴＥＳ：チオアニソール（８５：５：５：５）の溶液（５ｍｌ）中に溶解した。１時間後、ＨＰＬＣは、保護基の完全な除去を示した。この溶液を乾燥するまでエバポレートし、その残渣を水（１０ｍｌ）中に溶解し、次いでＮａ２ＣＯ３（ｐＨ１１）で塩基性化し、Ｅｔ２ＯＡｃ（３×５０ｍｌ）で抽出した。その有機層をブライン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で一晩乾燥させた。減圧下でのエバポレーションにより、表題化合物Ｈ６を得た：２１８ｍｇ、収率７５％。
2011079834.tif 000218
【０２５９】
（ｉｉｉ）８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基及びプロパルギルアミノ基を含むＶＩＰ類似体誘導体−Ｍ７Ａ（付録Ｉ、スキームＡ）の合成。
【０２６０】
ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２（１ｍｌ）中の上記ステップ（ｉｉ）のＨ６（４８ｍｇ、０．１６５ｍｍｏｌ、５当量）及びＮＭＰ（１７ｍｇ、０．０２０ｍｌ、５当量）の溶液を、上記実施例１５で得た樹脂（０．０３３ｍｍｏｌ、１当量）に添加し、この混合物を一晩攪拌した。ネガティブＤＴＮＢ試験が、反応の完了を示した。得られたＨＱ改変ペプチドを、ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＴＥＳ：チオアニソール（８５：５：５：５）の溶液を使用して樹脂から切断し、エーテルで沈殿させた。粗製ＨＱ改変表題ペプチドＭ７Ａを、半調製的ＨＰＬＣ（ｔＲ）：３５．１分（直線勾配：最初の４分間にわたり５０％のＢ、６０分間で１００％のＢまで直線的に増大）によってさらに精製した。収率：６ｍｇ（５．５μｍｏｌ；開始アミノ酸樹脂充填に基づいて１６．７％）。質量分析：Ｃ４９Ｈ６３Ｎ９Ｏ７Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝９２３．６８、実測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝９２３．９１。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ｌｅｕ  １．００、Ｌｙｓ  ２．１０。Ｃｙｓは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。
【実施例１７】
【０２６１】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基を含むＶＩＰ類似体誘導体−ステアリル−ＫＫＣ（ＨＱ）Ｌ−ＮＨ２（Ｍ６、付録ＩＩ）の合成。
【０２６２】
Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｃｙｓ（Ｍｍｔ）−Ｌｅｕ−［Ｒｉｎｋアミド樹脂］３３ｍｏｌを、実施例１５で上記されるように合成した。Ｆｍｏｃ基の除去後、上記の手順に従って遊離Ｎ末端官能基をステアリン酸（３８ｍｇ、１３２μｍｏｌ、４当量）とカップリングした。ネガティブニンヒドリン試験が、カップリング反応の完了を示した。このペプチドを、ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＴＥＳ：チオアニソール（８５：５：５：５）の溶液を使用して樹脂から切断し、エーテルで沈殿させた。ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２（１ｍｌ）中の５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリン（３２ｍｇ、１６５μｍｏｌ、５当量）及びＮＭＰ（１７ｍｇ、２０μｌ、５当量）の溶液をこの粗製ペプチドに添加した。この混合物を室温で一晩攪拌した。ネガティブＤＴＮＢ試験が、反応の完了を示した。反応完了時にこの溶液を排水し、粗製ペプチドを半調製的ＨＰＬＣによってさらに精製して４．６ｍｇ（５．０μｍｏｌ；開始アミノ酸樹脂充填に基づいて１５．３％）を得た。ＨＰＬＣ（ｔＲ）：３８．１分（直線勾配：最初の４分間にわたり５０％のＢ、６０分間で１００％のＢまで直線的に増大）、同じ条件でＳｔ−ＫＫＣＬＮＨ２についてｔＲ＝４７．５分。質量分析：ｍ／ｚ  ９１４．９（ＭＨ＋）、（計算値９１４．３）。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ｌｅｕ  １．００、Ｌｙｓ  ２．２１。Ｃｙｓは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。
【実施例１８】
【０２６３】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基及びプロパルギルアミノ基を含むＶＩＰ類似体誘導体−ステアリル−ＫＫＣ（ＨＱ）Ｌ−ＮＨ２（Ｍ６Ａ、付録Ｉ）の合成。
【０２６４】
上記の実施例１７で得た樹脂（３３μｍｏｌ、１当量）に、ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２（１ｍｌ）中の５−（プロパルギルアミノブロモメチル）−８−ヒドロキシキノリンＨ６（４８ｍｇ、０．１６５ｍｍｏｌ、５当量）及びＮＭＰ（１７ｍｇ、０．０２０ｍｌ、５当量）の溶液を添加した。次いでこの混合物を一晩攪拌した。ネガティブＤＴＮＢ試験が、この反応の完了を示した。得られたＨＱ改変ペプチドを、ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＴＥＳ：チオアニソール（８５：５：５：５）の溶液を使用して樹脂から切断し、エーテルで沈殿させた。粗製ＨＱ改変ペプチドＭ６Ａを、半調製的ＨＰＬＣ（ｔＲ）：４０．１分（直線勾配：最初の４分間にわたり５０％のＢ、６０分間で１００％のＢまで直線的に増大）によってさらに精製した。収率：５．８ｍｇ（６μｍｏｌ；開始アミノ酸樹脂充填に基づいて１８％）。質量分析：Ｃ５２Ｈ８７Ｎ９Ｏ６Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝９６７．３７、実測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝９６７．２１。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ｌｅｕ  １．００、Ｌｙｓ  ２．２０。Ｃｙｓは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。
【実施例１９】
【０２６５】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基を含むサブスタンスＰ類似体誘導体−［Ｃｙｓ７（ＨＱ）］−サブスタンスＰ（Ｍ２７、付録ＩＩ）の合成。
【０２６６】
［Ｃｙｓ７］−サブスタンスＰ（９．０ｍｇ、６．９μｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（３５０μｌ）中に溶解し、ＮＭＭ（７．６μｌ、６９μｍｏｌ、１０当量）を添加した。室温で１時間攪拌した後、１５０μｌの混合溶媒（ＤＭＦ：ＤＭＳＯ：ＣＨ３ＣＮ  ３：３：１）中の５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリンヒドロクロリド（１．５ｍｇ、７．６μｍｏｌ、１．１当量）を滴下した。この反応混合物を室温で一晩攪拌した。反応の進行を、分析的ＨＰＬＣによってモニタリングした。必要に応じて、さらなる５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリンヒドロクロリドを反応の完了のために添加した。反応の完了時に、この粗製ペプチドを氷冷ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル／石油エーテルで沈殿させ、遠心分離によって収集し、次いで半調製的ＨＰＬＣによって精製した。ｔＲ＝３２．２７分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；４５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）、（同じ条件で［Ｃｙｓ７］−サブスタンスＰについてｔＲ＝３２．２８分）。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ｌｙｓ  １．００、Ａｒｇ  １．０９、Ｇｌｕ  ２．０３、Ｇｌｙ  １．３２、Ｐｒｏ  １．９３、Ｌｅｕ  １．０１、Ｐｈｅ  ０．９６、Ｃｙｓ  ０．９２。Ｃｙｓを、標準参照としてＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｌ−システインを使用して検出した。Ｍｅｔは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。質量分析：Ｃ６７Ｈ１０１Ｎ１９Ｏ１４Ｓ２について計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４６１．７７、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４６１．１５。
【実施例２０】
【０２６７】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基を含むサブスタンスＰ類似体誘導体−［Ｃｙｓ８（ＨＱ）］−サブスタンスＰ（Ｍ２８、付録ＩＩ）の合成。
【０２６８】
化合物Ｍ２８を、標準的な出発物質を使用して、化合物Ｍ２７について上記実施例１９に記載された方法によって合成した。粗製ペプチドＭ２８を、半調製的ＨＰＬＣによってさらに精製した。ｔＲ＝３２．１０分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；４５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）、（同じ条件で［Ｃｙｓ８］−サブスタンスＰについてｔＲ＝３２．８９分）。質量分析：Ｃ６７Ｈ１０１Ｎ１９Ｏ１４Ｓ２について計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４６１．７７、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４６１．１７。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ｌｙｓ  １．００、Ａｒｇ  １．１８、Ｇｌｕ  １．９６、Ｇｌｙ  １．２２、Ｐｒｏ  １．７７、Ｌｅｕ  ０．９２、Ｐｈｅ  ０．９１、Ｃｙｓ  ０．９６。Ｃｙｓを、標準参照としてＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｌ−システインを使用して検出した。Ｍｅｔは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。
【実施例２１】
【０２６９】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基及びプロパルギルアミノ基を含むサブスタンスＰ類似体誘導体−［Ｃｙｓ７（ＨＱ）］−サブスタンスＰ（Ｍ２７Ａ、付録Ｉ）の合成。
【０２７０】
ＤＭＦ（３５０μｌ）中の［Ｃｙｓ７］−サブスタンスＰ（９．０ｍｇ、６．９μｍｏｌ、１当量）に、ＮＭＭ（７．６μｌ、６９μｍｏｌ、１０当量）を添加した。室温で１時間攪拌した後、１５０μｌの混合溶媒（ＤＭＦ：ＤＭＳＯ：ＣＨ３ＣＮ  ３：３：１）中の５−（プロパルギルアミノ−ブロモメチル）−８−ヒドロキシキノリンＨ６（２．２ｍｇ、７６μｍｏｌ、１．１当量）の溶液を滴下した。この反応混合物を室温で一晩攪拌した。反応の進行を、分析的ＨＰＬＣによってモニタリングした。必要に応じて、さらなる５−（プロパルギルアミノ−ブロモメチル）−８−ヒドロキシキノリンを反応の完了のために添加した。反応の完了時に、この粗製ペプチドを氷冷ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル／石油エーテルで沈殿させ、遠心分離によって収集し、次いで半調製的ＨＰＬＣによって精製した。ｔＲ＝３５．２７分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；４５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）、（同じ条件で［Ｃｙｓ７］−サブスタンスＰについてｔＲ＝３２．２８分）。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ｌｙｓ  １．００、Ａｒｇ  １．１０、Ｇｌｕ  ２．０１、Ｇｌｙ  １．３２、Ｐｒｏ  １．９３、Ｌｅｕ  １．０３、Ｐｈｅ  ０．９６、Ｃｙｓ  ０．９９。Ｃｙｓを、標準参照としてＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル−（プロパルギルアミノ−メチル）−Ｌ−システインを使用して検出した。Ｍｅｔは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。質量分析：Ｃ７０Ｈ１０４Ｎ２０Ｏ１４Ｓ２について計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１５１４．７８、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝１５１４．２５。
【実施例２２】
【０２７１】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基及びプロパルギルアミノ基を含むサブスタンスＰ類似体誘導体−［Ｃｙｓ８（ＨＱ）］−サブスタンスＰ（Ｍ２８Ａ、付録Ｉ）の合成。
【０２７２】
表題化合物Ｍ２８Ａを、上記実施例２１中のＭ２７Ａについての手順に従って合成したが、出発物質として［Ｃｙｓ７］−サブスタンスＰの代わりに［Ｃｙｓ８］−サブスタンスＰを使用した。収率７５％。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ｌｙｓ  １．００、Ａｒｇ  １．０８、Ｇｌｕ  ２．１１、Ｇｌｙ  １．２２、Ｐｒｏ  １．９３、Ｌｅｕ  １．０１、Ｐｈｅ  １．０４、Ｃｙｓ  ０．９９。Ｃｙｓを、標準参照としてＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル−（プロパルギルアミノメチル）−Ｌ−システインを使用して検出した。Ｍｅｔは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。質量分析：Ｃ７０Ｈ１０４Ｎ２０Ｏ１４Ｓ２について計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１５１４．７８、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝１５１４．８８。
【実施例２３】
【０２７３】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基を含むＧｎＲＨ類似体誘導体−［Ｌ−Ｃｙｓ５（ＨＱ）］ＧｎＲＨ（Ｍ８、付録ＩＩ）の合成。
【０２７４】
化合物Ｍ８を、適切な出発物質を使用して、上記実施例１９に記載される化合物Ｍ２７を合成するための方法に従って合成した。粗製ペプチドＭ８を、半調製的ＨＰＬＣによってさらに精製した。ｔＲ＝２６．０２分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；４５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜７５％）（同じ条件下で［Ｃｙｓ５］ＧｎＲＨについてｔＲ＝２７．５４分）。質量分析：Ｃ５９Ｈ７８Ｎ１８Ｏ１３Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１２７９．４３、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝１２７９．８６。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ａｒｇ  １．００、Ｓｅｒ  １．０９、Ｇｌｕ  ０．９２、Ｇｌｙ  ２．２１、Ｈｉｓ  ０．８８、Ｐｒｏ  ０．８９、Ｌｅｕ  ０．８９、Ｃｙｓ  ０．８５。Ｃｙｓを、標準参照としてＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イルメチル）−Ｌ−システインを使用して検出した。
【実施例２４】
【０２７５】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基を含むＧｎＲＨ類似体誘導体−［Ｄ−Ｃｙｓ６（ＨＱ）］ＧｎＲＨ（Ｍ２２、付録ＩＩ）の合成。
【０２７６】
化合物Ｍ２２を、適切な出発物質を使用して、上記実施例１９に記載される化合物Ｍ２７を合成するための方法に従って合成した。反応の完了時に、粗製ペプチドＭ２２を、氷冷ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（３ｍｌ）を用いて沈殿させた。遠心分離後、固体をＤＤＷ中に溶解し、調製的ＨＰＬＣによって精製してｍｇ（ｍｍｏｌ；％）を得た。ｔＲ＝３０．８２分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；４５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）、（同じ条件下で［Ｄ−Ｃｙｓ６］ＧｎＲＨについてｔＲ＝３２．５７分）。質量分析：Ｃ６６Ｈ８４Ｎ１８Ｏ１４Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１３８６．５５、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝１３８６．７１。
【実施例２５】
【０２７７】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基及びプロパルギルアミノ基を含むＧｎＲＨ類似体誘導体−［Ｌ−Ｃｙｓ５（ＨＱ−Ｐｒ）］ＧｎＲＨ（Ｍ８Ａ、付録Ｉ）の合成。
【０２７８】
［Ｃｙｓ５］ＧｎＲＨ（７．７ｍｇ、６．９μｍｏｌ）をＤＭＦ（３５０μｌ）中に溶解し、ＮＭＭ（７．６μｌ、６９μｍｏｌ、１０当量）を添加した。室温で１時間攪拌した後、１５０μｌの混合溶媒（ＤＭＦ：ＤＭＳＯ：ＣＨ３ＣＮ  ３：３：１）中の５−（プロパルギル−アミノブロモメチル）−８−ヒドロキシキノリンＨ６（２．２ｍｇ、７６μｍｏｌ、１．１当量）を滴下した。この反応混合物を室温で一晩攪拌した。反応の進行を、分析的ＨＰＬＣによってモニタリングした。必要に応じて、さらなるＨ６を反応の完了のために添加した。反応の完了時に、この粗製ペプチドを氷冷ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル／石油エーテルで沈殿させ、遠心分離によって収集した。この粗製ペプチドＭ８Ａを半調製的ＨＰＬＣによってさらに精製した。ｔＲ＝３０．１２分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；Ｂ＝４５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜７５％）、（同じ条件下で［Ｃｙｓ５］ＧｎＲＨについてｔＲ＝２７．５４分）。収率：７．２ｍｇ（５．４μｍｏｌ；７８％）。質量分析：Ｃ６２Ｈ８１Ｎ１９Ｏ１３Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１３３２．４６、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝１３３２．６６。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ａｒｇ  １．００、Ｓｅｒ  １．０９、Ｇｌｕ  ０．９９、Ｇｌｙ  ２．２１、Ｈｉｓ  ０．９８、Ｐｒｏ  ０．８９、Ｌｅｕ  ０．８９、Ｃｙｓ  ０．８５。Ｃｙｓを、標準参照としてＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル−（プロパルギルアミノメチル）−Ｌ−システインを使用して検出した。
【実施例２６】
【０２７９】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基及びプロパルギルアミノ基を含むＧｎＲＨ類似体誘導体−［Ｄ−Ｃｙｓ６（ＨＱ−Ｐｒ）］ＧｎＲＨ（Ｍ２２Ａ、付録Ｉ）の合成。
【０２８０】
表題化合物Ｍ２２Ａを、上記実施例２３中のＭ２７Ａについての手順に従って合成したが、出発物質として［Ｃｙｓ５］ＧｎＲＨの代わりに［Ｄ−Ｃｙｓ６］ＧｎＲＨを使用した。収率７０％。質量分析：Ｃ６９Ｈ８７Ｎ２０Ｏ１３Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４３９．５６、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４３９．６６。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ａｒｇ  １．００、Ｓｅｒ  １．０９、Ｇｌｕ  ０．９９、Ｔｙｒ  １．０３、Ｇｌｙ  １．１１、Ｈｉｓ  ０．９８、Ｐｒｏ  ０．９９、Ｌｅｕ  ０．８９、Ｃｙｓ  ０．８５。Ｃｙｓを、標準参照としてＳ−（８−ヒドロキシキノリン−５−イル−（プロパルギルアミノメチル）−Ｌ−システインを使用して検出した。
【実施例２７】
【０２８１】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基を含むエンケファリン類似体誘導体−ＹＧＧＣ（ＨＱ）Ｌ（Ｍ１８）、ＹＧＧＣ（ＨＱ）Ｍ（Ｍ１９）、Ｃ（ＨＱ）ＧＧＦＬ（Ｍ２０）、Ｃ（ＨＱ）ＧＧＦＭ（Ｍ２１）（付録ＩＩ）の合成。
【０２８２】
（ｉ）化合物Ｍ１８、Ｍ１９、Ｍ２０、Ｍ２１の合成のための一般手順
ＤＭＦ（１５０μｌ）中のＣｙｓ１Ｍｅｔ５−エンケファリン又はＣｙｓ１Ｌｅｕ５−エンケファリン（２５μｍｏｌ）の溶液に、ＮＭＭ（２６μｌ、２５０μｍｏｌ）を添加した。室温で１時間攪拌した後、２５０μｌの混合溶媒（ＤＭＦ：ＤＭＳＯ：ＣＨ３ＣＮ  ３：３：１）中の５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリンヒドロクロリド（６１ｍｇ、２５μｍｏｌ）を滴下した。この反応混合物を室温で一晩攪拌した。反応の進行を、分析的ＨＰＬＣによってモニタリングした。必要に応じて、さらなる５−クロロメチル−８−ヒドロキシキノリンヒドロクロリドを反応の完了のために添加した。反応の完了時に、この粗製ペプチドを氷冷ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル／石油エーテルで沈殿させ、遠心分離によって収集し、次いで半調製的ＨＰＬＣ（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；５５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）によって精製した。
【０２８３】
（ｉｉ）［Ｃｙｓ４（ＨＱ）］−Ｌｅｕ５−エンケファリン（Ｍ１８、付録ＩＩ）質量分析：Ｃ３２Ｈ４０Ｎ６Ｏ８Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝６６９．７６、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝６６９．６２。
【０２８４】
（ｉｉｉ）［Ｃｙｓ４（ＨＱ）］−Ｍｅｔ５−エンケファリン（Ｍ１９、付録ＩＩ）ＨＰＬＣ。ｔＲ＝２６．４３分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；５５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）（同じ条件で［Ｃｙｓ１］−Ｌｅｕ５−エンケファリンについてｔＲ＝２３．８７分）。質量分析：Ｃ３２Ｈ４０Ｎ６Ｏ８Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝６８７．８０、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝６８７．７９。
【０２８５】
（ｉｖ）［Ｃｙｓ１（ＨＱ）］−Ｌｅｕ５−エンケファリン（Ｍ２０、付録ＩＩ）ＨＰＬＣ。ｔＲ＝２９．５６分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；５５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）（同じ条件下で［Ｃｙｓ１］−Ｌｅｕ５−エンケファリンについてｔＲ＝２７．９２分）。質量分析：Ｃ３２Ｈ４０Ｎ６Ｏ７Ｓについて計算値ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝６５３．７６、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝６５３．４８。
【０２８６】
（ｖ）［Ｃｙｓ１（ＨＱ）］−Ｍｅｔ５−エンケファリン（Ｍ２１、付録ＩＩ）質量分析：Ｃ３１Ｈ３８Ｎ６Ｏ７Ｓ２について計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝６７１．８０、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝６７１．４３。
【実施例２８】
【０２８７】
８−ヒドロキシキノリン（ＨＱ）基及びプロパルギルアミノ基を含むエンケファリン類似体誘導体−ＹＧＧＣ（ＨＱ）Ｌ（Ｍ１８Ａ）、ＹＧＧＣ（ＨＱ）Ｍ（Ｍ１９Ａ）、Ｃ（ＨＱ）ＧＧＦＬ（Ｍ２０Ａ）、Ｃ（ＨＱ）ＧＧＦＭ（Ｍ２１Ａ）（付録Ｉ）の合成。
【０２８８】
（ｉ）化合物Ｍ１８Ａ、Ｍ１９Ａ、Ｍ２０Ａ、Ｍ２１Ａ（付録Ｉ、スキームＣ）の合成のための一般手順
改変エンケファリンペプチド（［Ｃｙｓ４］−Ｌｅｕ５−エンケファリン、［Ｃｙｓ４］−Ｍｅｔ５−エンケファリン、［Ｃｙｓ１］−Ｌｅｕ５−エンケファリン又は［Ｃｙｓ１］−Ｍｅｔ５−エンケファリン）（２５μｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１５０μｌ）中に溶解し、ＮＭＭ（２６μｌ、２５０μｍｏｌ）を添加した。室温で１時間攪拌した後、２５０μｌの混合溶媒（ＤＭＦ：ＤＭＳＯ：ＣＨ３ＣＮ  ３：３：１）中の５−（プロパルギルアミノブロモメチル）−８−ヒドロキシ−キノリンＨ６（２５μｍｏｌ）を滴下した。この反応混合物を室温で一晩攪拌した。反応の進行を、分析的ＨＰＬＣによってモニタリングした。必要に応じて、さらなるＨ６を反応の完了のために添加した。反応の完了時に、この粗製ペプチドを氷冷ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル／石油エーテルで沈殿させ、遠心分離によって収集し、次いで半調製的ＨＰＬＣ（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；５５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）によって精製した。
【０２８９】
（ｉｉ）［Ｃｙｓ４（プロパルギル−ＨＱ）］−Ｌｅｕ５−エンケファリン（Ｍ１８Ａ、付録Ｉ）収率７０％、ＨＰＬＣ。ｔＲ＝２８．４３分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；５５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）（同じ条件で［Ｃｙｓ４］−Ｌｅｕ５−エンケファリンについてｔＲ＝２５．８７分）質量分析：Ｃ３５Ｈ４３Ｎ７Ｏ８Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝７２２．８０、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝７２２．６２。
【０２９０】
（ｉｉｉ）［Ｃｙｓ４（プロパルギル−ＨＱ）］−Ｍｅｔ５−エンケファリン（Ｍ１９Ａ、付録Ｉ）収率６０％、ＨＰＬＣ。ｔＲ＝２７．８３分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；５５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）（同じ条件で［Ｃｙｓ４］−Ｍｅｔ５−エンケファリンについてｔＲ＝２３．８７分）。質量分析：Ｃ３５Ｈ４３Ｎ７Ｏ８Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝７４０．８４、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝７４０．７０。
【０２９１】
（ｉｖ）［Ｃｙｓ１（プロパルギル−ＨＱ）］−Ｌｅｕ５−エンケファリン（Ｍ２０Ａ、付録Ｉ）収率７２％、ＨＰＬＣ。ｔＲ＝３０．１６分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；５５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）（同じ条件下で［Ｃｙｓ１］−Ｌｅｕ５−エンケファリンについてｔＲ＝２７．９２分）。質量分析：Ｃ３５Ｈ４３Ｎ７Ｏ７Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝７０６．８０、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝７０６．８８。
【０２９２】
（ｖ）［Ｃｙｓ１（プロパルギル−ＨＱ）］−Ｍｅｔ５−エンケファリン（Ｍ２１Ａ、付録Ｉ）収率７８％、ＨＰＬＣ。ｔＲ＝２７．２６分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；５５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）（同じ条件下で［Ｃｙｓ１］−Ｌｅｕ５−エンケファリンについてｔＲ＝２５．９０分）。質量分析：Ｃ３４Ｈ４１Ｎ７Ｏ７Ｓ２について計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝７２４．８４、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝７２４．９４。
【実施例２９】
【０２９３】
プロパルギルアミノ基及びヒドロキサメート基を含むＶＩＰ類似体誘導体、ＧｎＲＨ類似体誘導体及びサブスタンスＰ類似体誘導体−化合物Ｍ６Ｂ、Ｍ７Ｂ、Ｍ８Ｂ、Ｍ２２Ｂ、Ｍ２７Ｂ及びＭ２８Ｂ（ｎ＝１）（付録Ｖ、スキームＣ）の合成。
【０２９４】
（ｉ）ヒドロキサメート化合物Ｍ６Ｂ、Ｍ７Ｂ、Ｍ８Ｂ、Ｍ２２Ｂ、Ｍ２７Ｂ及びＭ２８Ｂ（ｎ＝１）（付録Ｖ）の合成のための一般手順
改変ペプチド（７μｍｏｌ、１当量）（上記のように合成したＳｔ−ＫＫＣＬ−ＮＨ２、Ｆｍｏｃ−ＫＫＣＬ−ＮＨ２、［Ｃｙｓ５］ＧｎＲＨ、［Ｄ−Ｃｙｓ６］ＧｎＲＨ、［Ｃｙｓ７］−サブスタンスＰ又は［Ｃｙｓ８］−サブスタンスＰ）を、ＤＭＦ（３５０μｌ）中に溶解し、ＮＭＭ（７．６μｌ、７０μｍｏｌ、１０当量）を添加した。室温で１時間攪拌した後、１５０μｌのＤＭＦ中のＮ−ｔ−ブトキシ２−（Ｎ−クロロアセチル−Ｎ−プロパルギル）−アミノ−アセトアミド（Ｈ４）（２ｍｇ、７．７μｍｏｌ、１．１当量）を滴下した。この反応混合物を室温で一晩攪拌した。反応の進行を、分析的ＨＰＬＣによってモニタリングした。必要に応じて、さらなるＨ４を反応の完了のために添加した。反応の完了時に、溶媒を減圧下で除去した。その残渣にＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＴＥＳ：チオアニソール（８５：５：５：５）の溶液（２ｍＬ）を添加した。この混合物を１時間攪拌し、次いで氷冷ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル／石油エーテルで沈殿させ、遠心分離によって収集した。この粗製改変ペプチドを、半調製的ＨＰＬＣによってさらに精製した。
【０２９５】
（ｉｉ）化合物Ｍ６Ｂ（ｎ＝１）（付録Ｖ）の合成
収率７１％、ＨＰＬＣ（ｔＲ）：２５．１分（直線勾配：最初の４分間にわたり５０％のＢ、４０分間で１００％のＢまで直線的に増大）。質量分析：Ｃ４６Ｈ８５Ｎ９Ｏ８Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝９２５．２９、実測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝９２５．２１。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ｌｅｕ  １．００、Ｌｙｓ  ２．２０。Ｃｙｓは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。
【０２９６】
（ｉｉｉ）化合物Ｍ７Ｂ（ｎ＝１）（付録Ｖ）の合成
収率：６８％。ＨＰＬＣ（ｔＲ）：２５．１分（直線勾配：最初の４分間にわたり５０％のＢ、５０分間で１００％のＢまで直線的に増大）。質量分析：Ｃ４３Ｈ６１Ｎ９Ｏ９Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝８８１．０７、実測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝８８１．１５。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ｌｅｕ  １．００、Ｌｙｓ  ２．１５。Ｃｙｓは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。
【０２９７】
（ｉｖ）化合物Ｍ８Ｂ（ｎ＝１）（付録Ｖ）の合成
収率：７０％。ＨＰＬＣ  ｔＲ＝２９．１分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；４５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜７５％）、（同じ条件下で［Ｃｙｓ５］ＧｎＲＨについてｔＲ＝２７．５４分）。質量分析：Ｃ５６Ｈ７９Ｎ１９Ｏ１５Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１２９１．５７、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝１２９１．６６。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ａｒｇ  １．００、Ｓｅｒ  １．１２、Ｇｌｕ  ０．９５、Ｇｌｙ  ２．１６、Ｈｉｓ  ０．９８、Ｐｒｏ  ０．８９、Ｌｅｕ  ０．９９。Ｃｙｓは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。
【０２９８】
（ｖ）化合物Ｍ２２Ｂ（ｎ＝１）（付録Ｖ）の合成
収率７５％。ＨＰＬＣ  ｔＲ＝２５．１分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；４５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜１００％）、（同じ条件下で［Ｄ−Ｃｙｓ６］−ＧｎＲＨについてｔＲ＝２３．５４分）。質量分析：Ｃ６３Ｈ８５Ｎ１９Ｏ１６Ｓについて計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１３９７．５３、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝１３９７．６１。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ａｒｇ  １．００、Ｓｅｒ  １．０９、Ｇｌｕ  ０．９９、Ｔｙｒ  １．０３、Ｇｌｙ  １．１１、Ｈｉｓ  ０．９８、Ｐｒｏ  ０．９９、Ｌｅｕ  ０．８９。Ｃｙｓは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。
【０２９９】
（ｖｉ）化合物Ｍ２７Ｂ（ｎ＝１）（付録Ｖ）の合成
収率６０％。ＨＰＬＣ。ｔＲ＝３３．２７分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；４５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）、（同じ条件で［Ｃｙｓ７］−サブスタンスＰについてｔＲ＝３２．２８分）。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ｌｙｓ  １．００、Ａｒｇ  １．１０、Ｇｌｕ  ２．０１、Ｇｌｙ  １．３２、Ｐｒｏ  １．９３、Ｌｅｕ  １．０３、Ｐｈｅ  ０．９６。Ｃｙｓ及びＭｅｔは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。質量分析：Ｃ６４Ｈ１０２Ｎ２０Ｏ１６Ｓ２について計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４７２．７５、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４７２．５５。
【０３００】
（ｖｉｉ）化合物Ｍ２８Ｂ（ｎ＝１）（付録Ｖ）の合成
収率６５％。ＨＰＬＣ。ｔＲ＝３２．９１分（直線勾配：ｔ  ５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％；４５分間にわたり１．０ｍｌ／分でＢ＝０％〜５８％）、（同じ条件で［Ｃｙｓ８］−サブスタンスＰについてｔＲ＝３１．２８分）。６Ｍ  ＨＣｌで１１０℃で２２時間にわたる加水分解後のアミノ酸分析：Ｌｙｓ  １．００、Ａｒｇ  １．０８、Ｇｌｕ  ２．１１、Ｇｌｙ  １．２２、Ｐｒｏ  １．９３、Ｌｅｕ  １．０１、Ｐｈｅ  １．０４、Ｃｙｓ  ０．９９。Ｃｙｓ及びＭｅｔは、加水分解の酸性条件下でのその破壊に起因して、検出できなかった。質量分析：Ｃ６３Ｈ１００Ｎ２０Ｏ１６Ｓ２について計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４５８．７３、実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４５８．８４。
【０３０１】
ＩＩ  生物学の項
方法
（ａ）金属結合特性
８−ヒドロキシキノリンは、鉄に対する強力なキレート剤であり、銅よりも鉄に対して高い特異性を有することが知られている。神経変性疾患と関連すると考えられているのは、脳における過剰な鉄イオンの貯蔵及び鉄により媒介されるフリーラジカルの発生であるので、これは、抗酸化型薬物のための重要な前提条件である。従って、銅よりも鉄に対して高い特異性を有するキレート剤のみが銅の代わりに鉄をキレート化し、潜在的な神経保護効果を有することが予測される。８−ヒドロキシキノリンと抗酸化能力を有するその誘導体のキレート化特性との間の可能な相関、及びその誘導体と抗酸化特性を有する最もよく確立された鉄キレート化薬物であるデスフェラールとの間の相関を議論するために、新たに合成した化合物の安定定数の信頼性のある測定値が必要である。分光光度法を、これらの化合物の鉄錯体安定定数の測定のために使用した。
【０３０２】
（ｂ）分配係数
オクタノールと水との間の分配係数（Ｐｏｗ）又は分布比（Ｄｏｗ）は、化合物の疎水性の最も一般的に使用される尺度である。Ｄｏｗは、合理的に低い濃度でではあるが、溶質の濃度に依存し得る。この溶質が両方の相において同じ形態である場合、Ｄｏｗは一定になり、分配係数Ｐｏｗと称される。Ｐｏｗは、物理−化学的特性及び生物学的系における多数の有機化合物の挙動を決定する際に重要な役割を果たす。Ｐｏｗは、疎水性の尺度として、定量的な構造−活性関係の研究に適用される。全ての分配測定を、１−オクタノール／水フラスコ攪拌手順を使用して（Ｌｅｏ，ＡＪ．１９９１、「疎水性パラメータ：測定及び計算（Ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ  ｐａｒａｍｅｔｅｒ：ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎ）」、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２０２：５４４−９１）、又は単にＨＰＬＣカラムからの溶質の溶出時間によって実施する。その後、鉄錯体の輸送特性を、オクタノール／水系よりもかなり良好に生体膜を模倣する水／脂質膜系（リポソーム）において試験する（非特許文献４）。
【０３０３】
１−オクタノール（Ｒｉｅｄｅｌ−ｄｅＨａｅｎ、合成等級（２５０〜２７０ｎｍ  ａｂｓ．＜０．０６）及びガラス蒸留脱イオン水を、分配溶液として使用した。Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ  ８４５０Ａダイオードアレイ分光光度計を、標準溶液及び分配した溶液中で、試験した化合物の定量的決定のために使用した。水相ストック溶液を、過剰の１−オクタノールと共に攪拌して予め飽和させ、次いで使用前に一晩静置させた。１−オクタノールストック溶液もまた、１０ｍＭ  ＮａＯＨで予め飽和させ、一晩静置した。１０ｍｌのストッパー付遠心管中で実験を実施した。これらの管を５分間穏やかに反転し、次いで完全な相分離を確実にするために、これらを１，０００〜２，０００ｇで２０分間遠心分離した。水相及び有機相を別々に取り出し、ＵＶ分光光度法によって分析した。
【０３０４】
（ｃ）抗酸化特性
生物学的系において発生したフリーラジカル及び反応性酸素種は、他の因子のなかでもとりわけ、神経変性疾患の原因であると考えられている。これらの化合物がＦｅｎｔｏｎ反応及びＦｅｎｔｏｎ型反応においてフリーラジカル及び反応性酸素種の形成速度を低下させる能力又はそれらの全体的な収率を低下させる能力は、抗酸化型薬物のための重要な前提条件である。従って、これらの化合物の抗酸化特性の信頼性のある測定値が必要である。フリーラジカルが長い寿命を有する場合、直接電子スピン共鳴（ＥＳＲ）分光学が、この種を同定するための簡便な方法であり得る。しかし、不安定なフリーラジカルについて、スーパーオキシド（Ｏ２−）又はヒドロキシル基（．ＯＨ）と同様、他の方法が使用されるべきである。Ｆｅｎｔｏｎ反応及びＦｅｎｔｏｎ型反応に対するこれらの化合物の影響を、デオキシリボースアッセイ及びスピントラッピング法によって測定する。
【０３０５】
デオキシリボースアッセイ（非特許文献２４）は、マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）（これは、加熱下で低いｐＨでチオバルビツール酸（ＴＢＡ）と反応してピンク色の色素を生じる）の形成を引き起こす、ヒドロキシル基によるデオキシリボースの破壊に基づく。この色素の可視光吸収スペクトルは、５３２ｎｍで最大の、非常に強く鋭い吸光度を示す。
【０３０６】
「スピントラッピング」法は、反応系中の低濃度のフリーラジカルを検出及び同定するために開発された。これは、ＥＰＲ（電子常磁性共鳴）技術によって容易に観察可能であるより安定なラジカル生成物を形成するための、反磁性化合物とのフリーラジカルＸ．の反応を含む。この方法は、開始フリーラジカルを「トラップ（捕捉）」するために、長寿命ニトロキシドとしてニトロン化合物又はニトロソ化合物を使用するステップからなる。
【０３０７】
（ｄ）ミトコンドリア単離：
オスＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（３００〜３５０ｇ）を断頭し、脳を直ぐに単離して氷冷等張１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．５）（０．２５Ｍのスクロース、２ｍＭ  ＥＤＴＡ及び脂肪酸を含まない２％ウシ血清アルブミンを含む）（単離緩衝液）中で冷却し、モーター付の５０ｍｌのガラス−テフロン（登録商標）ホモジナイザー（Ｈｅｉｄｏｌｆ、Ｇｅｒｍａｎｙ）で、１：１０（ｗ／ｖ）の比の単離緩衝液中で２００ｒｐｍでホモジナイズする。このホモジネートを１０００ｇで１０分間遠心分離し、次いで得られた上清を１０，０００ｇで１０分間遠心分離する。そのペレットを１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、０．２５Ｍスクロースで洗浄し、再度１０，０００ｇで１０分間遠心分離する。次いでこのステップをもう３回反復する。そのペレットを、１ｍｌ当たり５０ｍｇ〜６０ｍｇのタンパク質の最終濃度で、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、０．２５Ｍスクロース中に再懸濁する。これらのサンプルを使用するまで−１８℃で保存する。
【０３０８】
（ｅ）脂質過酸化の阻害
これらの化合物が鉄及びアスコルベートによって開始されるような脂質過酸化を阻害する能力を、マロンジアルデヒド手順を使用して脳ミトコンドリア調製物において試験する（非特許文献１３；非特許文献２）。
【０３０９】
これらの実験を三連で実施する。７．５μＭのミトコンドリア調製物（０．２５ｍｇのタンパク質）を、７５０μｌの２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）（２５ｐＭアスコルビン酸を含む）中に懸濁する。試験すべき薬物サンプルを、水又はエタノール中に溶解し、この懸濁物に添加する。反応を２．５μＭ又は５μＭのＦｅＳＯ４（１ｍＭのストック溶液由来）の添加及び室温で２時間のインキュベーションによって開始する。この反応を、７５０μｌの２０％（ｗ／ｖ）トリクロロ酢酸の添加によって停止させる。これらのサンプルを１２，０００ｇで１０分間遠心分離する。５００μｌの上清を、５００μｌの０．５％（ｗ／ｖ）チオバルビツール酸と混合し、３０分間９５℃に加熱する。チオバルビツール酸誘導体の吸収を、Ｘ＝５３２ｎｍで光度測定により測定する。ブランク分析は、ミトコンドリアの発光又はＦｅＳＯ４の発光、或いはインキュベーション後の薬物の添加に基づく。
【０３１０】
（ｆ）神経保護効果
鉄キレート剤の神経保護効果を、ｉｎ  ｖｉｖｏ及びｉｎ  ｖｉｔｒｏの両方の系において決定する。
【０３１１】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ実験について、ラット褐色細胞腫タイプ１２（ＰＣ１２）細胞及びヒト神経芽細胞腫ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞を使用して、鉄及びβアミロイドの毒性に応じたキレート剤の神経保護作用を試験する。これらの細胞はドパミンニューロン及びコリン作用性ニューロンのモデルとして使用されるので、細胞生存率を、ＭＴＴ（臭化２，５−ジフェニルテトラゾリウム）試験及びＬＤＨ（乳酸デヒドロゲナーゼ）試験、並びにＨＰＬＣによるドパミン及びチロシンヒドロキシラーゼの測定及びウェスタンによるαアミロイド（可溶性）の放出の測定において試験する。
【０３１２】
ｉｎ  ｖｉｖｏの保護を、ドパミンニューロンのマーカーである線条体のドパミン及びチロシンヒドロキシラーゼを測定することによって、ＰＤ（パーキンソン病）のＭＰＴＰ（１−メチル−４−フェニル−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン）動物モデル（神経変性の非常に生存力のある充分確立されたモデル）において試験する。
【０３１３】
（ｇ）ＰＣ１２細胞培養
ラット褐色細胞腫起源のラットＰＣ１２細胞を、５％ＣＯ２、９５％空気の加湿環境において、グルコース（１ｍｇ／１ｍｌ）、５％ウシ胎仔血清、１０％ウマ血清及び１％のストレプトマイシン／ペニシリンの混合物を補充したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ、ＧＩＢＣＯ、ＢＲＬ）を含む増殖培地中で３７℃で増殖させた。コンフルエントに達したところで培養液を除去し、細胞を激しい洗浄によって剥離させ、２００ｇで５分間遠心分離し、完全血清内容物を含むＤＭＥＭ中に再懸濁した。０．５×１０４細胞／ウェルを、コラーゲン（１０μｇ／ｃｍ２を、処置の前に２４時間付着させた）で予め被覆したマイクロタイタープレート（９６ウェル）中に配置した。
【０３１４】
（ｈ）細胞生存率についてのＭＴＴ試験
（ｇ）に記載されるようなＰＣ１２細胞の付着の２４時間後、この培地を、０．１％  ＢＳＡを含むＤＭＥＭで置換した。１時間のインキュベーション後に試験化合物を細胞に添加した。２４時間のインキュベーション後、細胞を、以前に記載されたようなＭＴＴ試験に供した（非特許文献１１）。吸収を、バックグラウンド読み取りの自動差し引き後に、λ＝５７０／６５０ｎｍでＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｄｕａｌ  Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ  Ｅｌｉｚａ−Ｒｅａｄｅｒにおいて決定した。結果を未処理の混合物の百分率として表す。
【実施例３０】
【０３１５】
溶液中の鉄キレート化
鉄結合を、鉄によりクエンチされたカルセイン（ＣＡＬ）（動的蛍光金属センサー（ｍｅｔａｌｌｏｓｅｎｓｏｒ）である）の蛍光を回復するキレート剤の能力によって決定した。これらのキレート剤の鉄除去特性を、鉄塩を遊離ＣＡＬと混合することによって溶液中で評価した。
【０３１６】
鉄と予め錯体化したカルセイン（Ｆｅ−ＣＡＬ）溶液（Ｈｅｐｅｓ  ２０ｍＭ緩衝化生理食塩水（ｐＨ７．４）＝ＨＢＳ中）１μＭを、室温で示された濃度の異なるキレート剤の存在下でインキュベートし、蛍光強度（４７５ｎｍ−＞５２０ｎｍ）を、１００μｌの最終容量で９６ウェルの培養プレート（Ｎｕｎｃ）を使用して、Ｔｅｃａｎ蛍光プレートリーダーにおいて経時的に追跡した。キレート剤によるＦｅ−ＣＡＬ由来の鉄の時間依存的な錯体化を、蛍光デクエンチング（ｄｅｑｕｅｎｃｈｉｎｇ）によって追跡した。結果を図１Ａ〜１Ｃに示す。１時間のインキュベーション後に得られた蛍光強度を、キレート剤濃度の関数として示す。
【０３１７】
対応するキレート剤についての、対応する最大半減のデクエンチングレベル（μＭ）は以下の通りであった（序列は、最も速い作用から最も遅い作用の順である）：
図１Ａ：ＤＦＯ（０．５）（示さず）＞＞ＨＬＡ１６（３．５）＝ＨＬＡ２０（３．５）＞ＨＬＭ７（５．０）＞ＨＬＭ８（６．０）＞ＨＬＭ９（７．２）＞Ｌ１（８．３）。
図１Ｂ：ＤＦＯ（０．５）（示さず）＞＞ＨＬＡ１６（４．４）＞ＶＫ−２８（５．２）＞ＨＬＡ２０（５．４）＞Ｌ１（８．４）＞Ｍ９（９．７）＞Ｍ１０（９．８５）
図１Ｃ：ＤＦＯ（０．５）（示さず）＞＞ＶＫ−２８（３．２）＞Ｍ７（３．４）＞Ｍ１１（５．４）＞Ｍ１２（６）＞Ｌ１（６．６）。
ＤＦＯ＝デスフェリオキサミンＢ
Ｌ１＝１，２−ジメチル−３−ヒドロキシ−ピリジン−４−オン（デフェリプロン）
【実施例３１】
【０３１８】
Ｋ５６２細胞へのキレート剤の鉄透過
キレート剤の鉄除去特性を、透過性ＣＡＬ−ＡＭプローブでの充填、遊離ＣＡＬのインサイチュ形成及び細胞質ゾルの不安定な鉄の結合によって、ヒト赤白血病Ｋ５６２細胞において評価した。カルセイン−ＡＭは、カルセインと比較して増強された疎水性に起因して、生存細胞の細胞膜を容易に通過する。カルセイン−ＡＭが細胞質へと透過すると、細胞中のエステラーゼによって、細胞の内側に留まるｐＨ非依存的な細胞質ゾル蛍光マーカーである親カルセインへと加水分解される。所定のキレート剤の存在下での蛍光の時間依存的な回復は、鉄／ＣＡＬ含有区画を横切るキレート剤の能力についての連続的な測定を提供した。
【０３１９】
カルセイン取り込み及び細胞内蛍光を、以下のように決定した：Ｋ５６２赤白血病細胞に、３７℃で５分間の０．２５ｍＭの蛍光プローブＣＡＬ−ＡＭとのインキュベーションによってカルセイン（ＣＡＬ）を予め充填し、微量の細胞外関連の蛍光をクエンチするために、抗ＣＡＬ抗体を含むＨＢＳ培地で洗浄及びインキュベートした。これらの懸濁物を９６ウェルプレート中に配置し（１００μｌの最終容量）、この系を３７℃に維持しながら上記のように分析した。示された時間で、示されたキレート剤を、５μＭの最終濃度に達するように添加した。
【０３２０】
結果を２Ａ〜２Ｄに示す。最大半減時間の値（秒）及び蛍光回復の率は以下の通りであった：
図２Ａ：ＳＩＨ：（１２５、１）＞ＨＬＡ２０（１７５、１）＞ＨＬＡ１６（２２５、０．９５）＞ＨＬＭ９（２００、０．５０）、ＨＬＭ８（６００、０．４）、Ｌ１（ＮＤ）ＤＦＯ＞＞（示さず）
図２Ｂ：ＨＬＡ１６（２２０、１）＞ＨＬＡ２０（３９０、１）＞Ｍ１０（１０５０）＞ＶＫ−２８（１２５０、）＞＞、Ｌ１及びＭ９（ＮＤ）＞＞＞）＞＞ＤＦＯ（示さず）
図２Ｃ：ＳＩＨ：（１００、１）＞ＶＫ−２８（１５００、？）＞＞Ｍ１１、Ｍ１２、Ｍ７（ＮＤ）＞＞）＞＞ＤＦＯ（示さず）
図２Ｄは、Ｋ５６２細胞における鉄キレート剤ＨＬＡ２０、ＨＬＡ１６、ＨＬＭ９、ＶＫ−２８の相対的な透過性を示す（値は、ＳＩＨで得られた値と比較して与えられる。１．０は０．００５秒−１の見かけの速度定数を示す（５μＭのキレート剤溶液について１２５秒の入来のｔ１／２と等しい））。
ＳＩＨ＝サリチルアルデヒドイソニコチノイルヒドラゾン。
【実施例３２】
【０３２１】
分化したＰ１９細胞の神経保護
この実験を、ニューロン細胞に分化したＰ１９マウス胚性癌腫細胞で実施した。
【０３２２】
９６ウェルの培養プレート中で増殖した分化したＰ１９ニューロン細胞を、５μＭの示されたキレート剤（ＨＬＭ７、ＨＬＭ８、ＨＬＭ９、ＨＬＡ１６、ＨＬＡ２０、Ｍ７、ＶＫ−２８、ＤＦＯ）又は１ｍＭのアポモルヒネ（Ａｐｏ）のいずれかを含む完全培地中の５０μＭの６−ＯＨＤＡ（６−ヒドロキシドパミン）で６時間処理した。これらの細胞を、５％のＡｌａｍａｒ  ｂｌｕｅを含む新たな培地で引き続いて洗浄及び再懸濁し、４時間インキュベートし、その蛍光を４５０ｎｍの励起及び５９０ｎｍの発光でモニタリングした（Ｔｅｃａｎ  Ｓａｆｉｒｅ蛍光プレートリーダー）。結果を図３に示す。データは、６−ＯＨＤＡで処理していない系と比較した％活性と等しい％保護として与える。
【実施例３３】
【０３２３】
血清飢餓により誘導されたアポトーシスに対するＰＣ１２細胞の神経保護
ＰＣ１２細胞を、無血清培地単独中又は異なる濃度のキレート剤ＶＫ−２８、Ｍ３２、ＨＬＡ２０及びラサジリンを含む無血清培地中で増殖させた。２４時間のインキュベーション後、これらの細胞をＭＴＴ試験に供した。
【０３２４】
結果を図４Ａ〜４Ｂに示す。細胞生存率を、コントロール群として働きかつ１００％とされる、血清を補充した培地中で培養した細胞の百分率として示した。無血清培地中で増殖したＰＣ１２細胞は、（２４時間の時点で）３８％の細胞生存率を有し、これをポジティブコントロールとして使用した。実験データは、平均±ＳＤ（ｒ＝６）として示す。
【０３２５】
図４Ａ〜４Ｂ中に示されるように、キレート剤ＶＫ−２８、ＨＬＡ２０及びＭ３２は全て、血清を引き揚げた後のＰＣ１２細胞の死に対して保護した。２４時間のインキュベーション後、０．１μＭのＶＫ−２８、０．１μＭのＨＬＡ２０又は０．１μＭのＭ３２を含む無血清培地中で増殖したＰＣ１２細胞の生存率は、キレート剤を含まない無血清培地中で増殖したＰＣ１２細胞の生存率とは有意に異なった（Ｐ＜０．０１）。生存細胞の数は、無血清コントロール群（３８％）と比較して、ぞれぞれ８０％、６５％及び５９％まで上昇した。１０倍又は１００倍の濃度のキレート剤ＨＬＡ２０（１μＭ又は１０μＭ）及びＭ３２（１μＭ又は１０μＭ）で、血清の引き揚げにより誘導されるＰＣ１２細胞の死に対する保護に有意な変化は存在しなかった。１μＭの濃度でも、ＶＫ−２８は、血清の引き揚げによって誘導されるＰＣ１２のアポトーシスに対する良好な阻害活性を示した。しかし、１０μＭの濃度で、ＶＫ２８の毒性はますます優勢になった。この濃度は、無血清培地において約７５％のＰＣ１２細胞の死を引き起こした。
【実施例３４】
【０３２６】
ラット脳におけるＭＡＯ活性に対する阻害効果
モノアミンオキシダーゼ（ＭＡＯ）（生体アミンの代謝的分解において重要な役割を果たす酵素）は、２つの機能的形態（ＭＡＯ−Ａ及びＭＡＯ−Ｂ）で存在する。２つの同位酵素は、異なる基質特異性及びインヒビター特異性を有する。
【０３２７】
ｉ．脳ＭＡＯの調製
ラットを断頭し、その脳を計量した氷冷スクロース緩衝液（０．３２Ｍ）中に迅速に採取し、それらの重量を決定した。全ての引き続く手順を０〜４℃で実施した。これらの脳を、Ｔｅｆｌｏｎガラスホモジナイザーで０．２５Ｍスクロース（２０部のスクロースに対して１部の組織）中でホモジナイズし、その後スクロース緩衝液を添加して１０％ホモジネートの最終濃度にした。これらのホモジネートを６００ｇで１５分間遠心分離した。上清画分を取り出し、４５００ｇで３０分間遠心分離し、そのペレットを０．３２Ｍスクロース緩衝液中に希釈し、後のＭＡＯのアッセイのために凍結して保持した。タンパク質濃度を、標準としてウシ血清アルブミンを使用して、５９５ｎｍでＢｒａｄｆｏｒｄ試薬を用いて決定した。
【０３２８】
ｉｉ．ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＭＡＯ阻害活性の決定
ＭＡＯ−Ａ及びＭＡＯ−Ｂの活性を、Ｔｉｐｔｏｎ及びＹｏｕｄｉｍ（１９８３）の適合型方法によって決定した。試験化合物を、０．０５Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中の適切な希釈の酵素調製物（ＭＡＯ−Ｂアッセイについて７０μｇのタンパク質、ＭＡＯ−Ａアッセイについて１５０μｇのタンパク質）に添加した。この混合物を、０．０５Ｍデプレニル／セレジリン（ＭＡＯ−Ｂの特異的インヒビター（ＭＡＯ−Ａの決定のため）又は０．０５Ｍクロルジリン（ｃｌｏｒｇｙｌｉｎ）（ＭＡＯ−Ａの特異的インヒビター（ＭＡＯ−Ｂの決定のため）と共にインキュベートした。インキュベーションを３７℃で１時間実施し、その後ＭＡＯ−Ａの決定のために１４Ｃ−５−ヒドロキシトリプタミンビノキサレート（ｂｉｎｏｘａｌａｔｅ）（１００Ｍ）又はＭＡＯ−Ｂの決定のために１４Ｃ−フェニルエチルアミン１００Ｍを添加し、それぞれ３０分間又は２０分間インキュベーションを続けた。この反応を２Ｍの氷冷クエン酸で停止させ、代謝物を抽出し、ｃｐｍ単位で液体シンチレーション計数によって決定した。
【０３２９】
ｉｉｉ．鉄キレート剤によるＭＡＯ−Ａ及びＭＡＯ−Ｂの阻害
ＭＡＯ−Ａ及びＭＡＯ−Ｂの活性を、種々の濃度の試験化合物とのインキュベーション後に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでラット脳ホモジネートにおいて決定した。試験した化合物の阻害活性を図５Ａ〜５Ｄに示す。
【０３３０】
１つの実験において、ＨＬＡ２０、Ｍ３２、ＶＫ−２８、Ｍ３０、Ｍ３１及びプロパルギルアミン（Ｐ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害活性を、ラット脳ＭＡＯ−Ｂに対して試験した。これらの試験化合物を、１０−７Ｍのクロルジリンを含む緩衝液に添加し、組織ホモジネートと共に３７℃で６０分間インキュベートし、その後１４Ｃ−β−フェニル−エチルアミンを添加した。結果を図５Ａ〜５Ｂに示す。試験化合物の存在下でのＭＡＯ−Ｂ活性は、コントロールサンプル中のＭＡＯ−Ｂ活性の百分率として示した。平均値は、±ｓ．ｅ．平均で示される。
【０３３１】
別の実験において、ＨＬＡ２０、Ｍ３２、ＶＫ−２８、Ｍ３０、Ｍ３１及びプロパルギルアミン（Ｐ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害活性を、ラット脳ＭＡＯ−Ａに対して試験した。これらの試験化合物を、１０−７Ｍのデプレニルを含む緩衝液に添加し、組織ホモジネートと共に３７℃で６０分間インキュベートし、その後１４Ｃ−５−ヒドロキシトリプタミンを添加した。結果を図５Ｃ〜５Ｄに示す。試験化合物の存在下でのＭＡＯ−Ａ活性は、コントロールサンプル中のＭＡＯ−Ａ活性の百分率として示した。平均値は、±ｓ．ｅ．平均で示される。
【０３３２】
これらの実験結果は、試験化合物間で阻害活性において明確な差異が存在することを示した。鉄キレート剤Ｍ３０は、０．１μＭ未満のＩＣ５０値でＭＡＯ−Ａ及びＭＡＯ−Ｂの両方の活性の有意な阻害を引き起こしたが、キレート剤Ｍ３２及びＭ３１は、ＭＡＯ−Ａに対してほとんど何の影響も有さず、かつＭＡＯ−Ｂ活性に対して乏しい阻害効果を有した（それぞれ、１００μＭで１７．２％及び１４．２％の阻害）。ＶＫ−２８及びＨＬＡ２０は、ＭＡＯ−Ａに対して類似の穏やかな阻害活性（それぞれ、１００μＭで１５．１％及び２６．１％の阻害）を示したが、ＭＡＯ−Ｂ活性に対して、ＨＬＡ２０は、ＶＫ−２８の阻害効果よりも強力な阻害効果を示した（ＨＬＡ２０について４２．０％の阻害及びＶＫ−２８について１３．３％の阻害）。プロパルギルアミン（Ｐ）は、それぞれ６６．３μＭ及び１０．１μＭのＩＣ５０値で、濃度依存的な様式でＭＡＯ−Ａ活性及びＭＡＯ−Ｂ活性の両方を優先的に阻害した。
【実施例３５】
【０３３３】
キレート剤の輸送特性
親油性は、薬物の吸収及び分布において重要な役割を果たす。ｎ−オクタノール／水分布係数の対数（ｌｏｇＤ）は、薬物候補の親油性の最も一般に使用される尺度である。本明細書中で、本発明者らはｌｏｇＤを決定するためにｎ−オクタノール／水攪拌フラスコ手順を使用した。結果（表１）は、試験キレート剤の分布係数（ｌｏｇＤ）が、ｐＨ値及び試験した化合物によって大きく変動することを示した。酸性溶液及び塩基性溶液において、全ての試験化合物は、良好な親水性といわれる低いｌｏｇＤ値を有する。これは、塩化オキシニウム（ｏｘｉｎｉｕｍ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）誘導体の形成（酸中）及びナトリウムオキシネート（ｓｏｄｉｕｍ  ｏｘｉｎａｔｅ）誘導体の形成（塩基中）によって説明され得る。表１は、水中でのキレート剤の親油性の順序を示す：ＨＬＭ７（２．１９）＞ＨＬＡ１６（１．７９）＞ＨＬＡ２０（１．５７）＞ＨＬＭ９（−１．７０）＞ＨＬＭ８（＜−２）。これらのデータは、ＨＬＭ９及びＨＬＭ８が、それらの高い親水性に起因して生物学的膜を介した乏しい透過性を有し得、他方でＨＬＭ７、ＨＬＡ１６及びＨＬＡ２０が、それらの脂質可溶性に起因して生物学的膜を横切ることができる可能性があることを示唆している。
【表１】
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【実施例３６】
【０３３４】
脳ミトコンドリア画分における脂質過酸化の阻害
新規キレート剤のラジカル除去特性／抗酸化剤特性を、脂質過酸化アッセイによって決定した。この系は、フリーラジカル損傷から生物学的脂質を保護する抗酸化剤の能力を測定するために使用されている。本研究において、ミトコンドリアにおけるＭＤＡの形成を、５０μＭのアスコルビン酸及び５μＭのＦｅＳＯ４で誘導した。図６に示されるように、試験した全てのキレート剤が脂質過酸化を阻害した。この阻害は用量依存的であった。顕著な阻害効果が２５μＭで全てのキレート剤で観察され、ラジカル損傷を９０％〜９７％低下させた。１０μＭほどの低い化合物濃度で、これらのキレート剤は、ラジカル形成を顕著に低下させた（約４０％の阻害）。この阻害は、試験化合物のラジカル除去特性及び鉄キレート化特性に起因し得る。
【実施例３７】
【０３３５】
局所的光保護
本発明の鉄キレート剤によって提供される局所的光保護のレベルを決定するために、モルモットを試験化合物で局所的に処置し、次いで異なる線量のＵＶ放射に曝露させ、サンプロテクションファクター（ＳＰＦ）を決定する。無毛マウスを、試験化合物で局所的に処置し、次いで紅斑を起こさない線量のＵＶ放射への長期間の曝露に供する。マウスを、皮膚の皺形成及び皮膚の腫瘍について評価する。
【０３３６】
別の実験において、モルモットを試験化合物、日焼け止め及びこれら２つの組み合わせで局所的に処置し、次いで種々の線量のＵＶ放射に曝露して、サンプロテクションファクター（ＳＰＦ）を決定する。無毛マウスを、試験化合物、日焼け止め及びこれら２つの組み合わせで局所的に処置し、次いで紅斑未満の線量のＵＶ放射への長期間の曝露に供する。マウスを、皮膚の皺形成及び皮膚の腫瘍について評価する。
（参考文献）
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【表２】
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【表３】
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【表４】
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【表５】
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【表６】
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【表７】
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【表８】
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【表９】
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【表１０】
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