(57)【要約】      （修正有）【課題】より効率的に免疫寛容を誘導するアレルギー予防剤を提供すること。【解決手段】抗原と抗体とを化学的に結合させて得られる複合体を含む、アレルギー予防剤。より具体的には、前記抗体に対する前記抗原のモル比が１〜５となるように前記抗原と前記抗体とが結合していて、前記抗原がスギ花粉に含まれるタンパク質、あるいは卵白に含まれるタンパク質であるところのオボアルブミンであるアレルギー予防剤、また前記抗体がＩｇＡであるアレルギー予防剤。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗原と抗体とを化学的に結合させて得られる複合体を含む、アレルギー予防剤。
【請求項２】
前記抗体に対する前記抗原のモル比が１〜５となるように前記抗原と前記抗体とが結合している、請求項１記載のアレルギー予防剤。
【請求項３】
前記抗体に対する前記抗原のモル比が５である、請求項２記載のアレルギー予防剤。
【請求項４】
前記抗原がタンパク質である、請求項１〜３のいずれか一項に記載のアレルギー予防剤。
【請求項５】
前記抗原がスギ花粉に含まれるタンパク質である、請求項４記載のアレルギー予防剤。
【請求項６】
前記抗原が卵白に含まれるタンパク質である、請求項４記載のアレルギー予防剤。
【請求項７】
前記抗原がオボアルブミンである、請求項６記載のアレルギー予防剤。
【請求項８】
前記抗体がＩｇＡである、請求項１〜７のいずれか一項に記載のアレルギー予防剤。
【請求項９】
前記抗体が、前記抗原に対する特異的結合性を有しない、請求項１〜８のいずれか一項に記載のアレルギー予防剤。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか一項に記載のアレルギー予防剤を含む食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アレルギー予防剤及びそれを含む食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
一般に、アレルギー疾患は、非自己の抗原に対し特異的に過剰の免疫応答を起こすために生じると考えられている。抗原刺激を加えても、その抗原に対応する免疫応答が起こらない現象を免疫寛容という。従来、このような免疫寛容を誘導することにより、アレルギー疾患の発症を予防する試みがなされている。
【０００３】
免疫寛容を誘導する方法としては、微量な抗原を長期間連続的に投与する方法が知られている。また、免疫寛容誘導剤として、抗原の代わりにビフィズス菌（特許文献１）、クラブシェラ属細菌（特許文献２）、特定構造を有する化合物（特許文献３）、形質転換植物（特許文献４）、特定のアミノ酸配列を有するペプチド組成物（特許文献５）等を用いて免疫寛容を誘導する方法も開示されている。
【０００４】
しかしながら、抗原を投与する方法は、アナフィラキシーショックなどの副作用が生じる可能性がある点で問題であった。また、上記従来の免疫寛容誘導剤の効果は必ずしも十分とはいえず、更なる改良が望まれていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平１０−３０９１７８号公報
【特許文献２】特開２０００−１４３５２２号公報
【特許文献３】特開２００１−２９４５２７号公報
【特許文献４】特開２００２−８５０６８号公報
【特許文献５】特開２００８−１９５６１８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
そこで、本発明は、より効率的に免疫寛容を誘導するアレルギー予防剤及びそれを含む食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決するべく鋭意検討を重ねた結果、抗原と抗体とを化学的に結合させて得られる複合体が、抗原のみよりも効率的に免疫寛容を誘導し得ることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち、本発明は、抗原と抗体とを化学的に結合させて得られる複合体を含む、アレルギー予防剤に関する。本発明のアレルギー予防剤によれば、より効率的に免疫寛容を誘導することが可能となる。特に、本発明のアレルギー予防剤は、上記複合体を構成する抗原に対して特異的に免疫寛容を誘導することができる。
【０００９】
上記複合体においては、抗体に対する抗原のモル比が１〜５となるように抗原と抗体とが結合していることが好ましい。特に、上記モル比は５であることが好ましい。
【００１０】
抗原としてはタンパク質が挙げられ、中でも、スギ花粉に含まれるタンパク質（スギ花粉抗原）であるｃｒｙｊ１や、卵白に含まれるタンパク質であるオボアルブミンが挙げられる。
【００１１】
抗体としてはＩｇＡが挙げられる。上記抗体は、抗原に対する特異的結合性を有しないものであることが好ましい。
【００１２】
また、本発明は、上記アレルギー予防剤を含む食品に関する。本発明の食品を摂取することにより、簡易且つ効率的に免疫寛容を誘導することが可能となる。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、より効率的に免疫寛容を誘導するアレルギー予防剤及びそれを含む食品を提供することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】対照群及び試験群の血清中のｃｒｙｊ１特異的ＩｇＧ１濃度（μｇ／ｍｌ）を示すグラフである。
【図２】ＯＶＡ対照群、１：１試験群及び１：５試験群の血清中のＯＶＡ特異的ＩｇＧ濃度（μｇ／ｍｌ）を示すグラフである。
【図３】ＯＶＡ対照群、１：１試験群及び１：５試験群の血清中のＯＭ特異的ＩｇＧ濃度（μｇ／ｍｌ）を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、本発明を実施するための形態について詳細に説明する。ただし、本発明は以下の実施形態に限定されるものではない。
【００１６】
本実施形態に係るアレルギー予防剤は、抗原と抗体とを化学的に結合させて得られる複合体を含む。
【００１７】
上記複合体は、例えば、抗原と抗体とをリンカーを介して共有結合させることにより得られる。リンカーとしては、Ｓｕｌｆｏ−ＬＣ−ＳＰＤＰ試薬（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ社製）等が挙げられる。
【００１８】
上記複合体においては、抗体に対する抗原のモル比が１〜５となるように抗原と抗体とが結合していることが好ましい。特に、抗体：抗原のモル比が１：５であると免疫寛容誘導効果が優れるため好ましい。
【００１９】
上記複合体を構成する抗原としては、特に制限されないが、スギ花粉抗原や食物成分に含まれる抗原が挙げられる。スギ花粉抗原を上記抗原として用いることにより、スギ花粉による花粉症を予防するのに好適なアレルギー予防剤が得られる。また、食物成分に含まれる抗原を上記抗原として用いることにより、食物アレルギーの発症を予防するのに好適なアレルギー予防剤が得られる。食物成分としては、植物性食物又は動物性食物に由来する食物成分が挙げられる。植物性食物としては、小麦、ライ麦、大麦、オート麦、トウモロコシ、米、ソバ、キビ、アワ、ヒエなどの穀類、アーモンド、ココナッツ、ピーナッツ、大豆、エンドウ、インゲン、ハシバミ、ブラジルナッツなどの豆あるいはナッツ類、イチゴ、オレンジ、キウイ、ジャガイモ、セロリ、タマネギ、トマト、パセリ、ニンジン、ニンニク、マンゴ、メロン、リンゴ、カボチャ、グレープフルーツ、サクランボ、ナシ、サツマイモ、タケノコ、ホウレンソウなどの果物・野菜類、その他ゴマ、マスタードなどが例示できる。また、その他の植物由来のアレルゲンとして、ゴムラテックスなどを例示できる。動物性食物としては、豚肉、鶏肉、羊肉などの肉類、タラ、カニ、エビ、マグロ、サケ、ムラサキガイ、ロブスター、サバ、アジ、イワシ、イカ、タコなどの魚介類、その他、卵白、卵黄、牛乳、チーズ等が例示できる。
【００２０】
中でも、上記抗原としては、卵、小麦等に含まれるタンパク質が挙げられる。卵に含まれるタンパク質としては、卵白に含まれるタンパク質であるオボアルブミン（ＯＶＡ：Ｏｖａｌｂｕｍｉｎ）やオボムコイド（ＯＭ：Ｏｖｏｍｕｃｏｉｄ）が挙げられる。小麦に含まれるタンパク質としてはグルテンが挙げられる。
【００２１】
上記複合体を構成する抗体としては、特に制限されないが、ＩｇＡ、ＩｇＧ等が挙げられ、ＩｇＡが好ましい。上記抗体は、抗原に対する特異的結合性を有しないものであることが好ましい。上記抗体が抗原に対する特異的結合性を有するものであると、抗原と抗体とを化学的に結合させる際に、抗原抗体反応により通常の免疫複合体が生じてしまうため、抗原と抗体とを化学的に結合させた複合体（偽免疫複合体）が得られにくくなる。
【００２２】
本実施形態に係るアレルギー予防剤は、常法に従って種々の形態で投与される。その投与形態としては例えば、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、シロップ剤等の形態が好ましく、これらの形態によって経口的に安全に投与することができる。これらの各種製剤は常法に従って、主薬に賦形剤、結合剤、崩壊剤、コーティング剤、潤滑剤、安定剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、希釈剤などの医薬の製剤技術分野において通常使用しうる既知の補助剤を用いて製剤化することができる。また、上記アレルギー予防剤を含む食品を摂取することにより経口投与することも可能である。その食品としては例えば、乳飲料、発酵乳、コーヒー・紅茶などの嗜好飲料、スープ類・シチュー類・缶詰類などの加工食品、アイスクリーム・ラクトアイス・アイスミルク・氷菓・ゼリーなどの冷菓類、カスタードクリーム・バタークリームなどの各種クリームを使用したデザート類、チョコレート・キャンディー・タブレット・クッキー・ビスケット・チューインガムなどの菓子類、牛乳羹・錦玉などの和菓子類等が挙げられる。
【００２３】
上記アレルギー予防剤の投与量は、上記複合体を構成する抗原に特異的な免疫寛容を誘導するために必要な量であって、かつ薬理学的に問題の生じない量であればよい。好ましくは、患者（体重７０ｋｇ）一人あたり１０μｇ〜１０ｍｇ、更に好ましくは０．１ｍｇ〜０．５ｍｇの投与量単位で投与することができる。
【００２４】
投与回数は特に制限されず、好ましくは一日あたり１回〜５回、更に好ましくは１日あたり１回〜３回である。投与方法は特に制限されず、現在までに公知の、または将来開発される投与方法を適宜採用することができる。例えば経口投与、腹腔内投与、静脈内投与、経皮的投与、吸入投与などが挙げられるが、経口投与が好ましい。
【実施例】
【００２５】
以下、実施例を挙げて本発明についてより具体的に説明する。ただし、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００２６】
（実験１）スギ花粉抗原に対する免疫寛容
［偽免疫複合体（ｐＩＣ：Ｐｓｅｕｄｏ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｏｍｐｌｅｘ）の作製］
特異性不明なＩｇＡ産生ハイブリドーマを培養し、その培養上清からモノクローナルＩｇＡをｐｒｏｔｅｉｎ  Ｌを用いてアフィニティークロマトグラフィーより精製した。精製したＩｇＡが、スギ花粉抗原（ｃｒｙｊ１）に対する特異的結合性を有しないことを確認した。
【００２７】
Ｓｕｌｆｏ−ＬＣ−ＳＰＤＰ試薬（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ社製）を用いて、精製したＩｇＡとｃｒｙｊ１とを結合させ、ｐＩＣを作製した。その際、ＩｇＡ：ｃｒｙｊ１のモル比が１：１となるように結合させた。その後、ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｌを用いてｐＩＣを精製した。
【００２８】
［マウスを用いた経口免疫寛容試験］
（試験群）
５匹のＢａｌｂ／ｃマウス（「試験群」とする。）に、精製したｐＩＣ（ＩｇＡ：ｃｒｙｊ１のモル比が１：１）をＩｇＡ等量として１００ｎｇずつ、６日間連続で経口投与した。
（対照群）
さらに、別の５匹のＢａｌｂ／ｃマウス（「対照群」とする。）に、０．４７μｇのｃｒｙｊ１及び１．５μｇのＩｇＡからなる混合物を、６日間連続で経口投与した。
【００２９】
その後、試験群及び対照群のそれぞれに対し、スギ花粉１０μｇを水酸化アルミニウムとともに腹腔内投与し、その１４日後にスギ花粉１０μｇを水酸化アルミニウムとともに再度腹腔内投与した。その後、各群について、血清中のｃｒｙｊ１特異的ＩｇＧ１の濃度（μｇ／ｍｌ）をＥＬＩＳＡ法により定量した。結果を図１に示す。
【００３０】
図１は、対照群及び試験群の血清中のｃｒｙｊ１特異的ＩｇＧ１濃度（μｇ／ｍｌ）を示すグラフである。図１に示すように、ｃｒｙｊ１及びＩｇＡからなる混合物を経口投与した対照群と比べて、ｃｒｙｊ１とＩｇＡとを化学的に結合させて得たｐＩＣを経口投与した試験群では、血清中のｃｒｙｊ１特異的ＩｇＧ１濃度が顕著に低かった。すなわち、対照群と比べて試験群ではｃｒｙｊ１特異的ＩｇＧ１の産生（スギ花粉抗原に対する免疫応答）が抑制された。
【００３１】
以上の結果から、スギ花粉抗原とＩｇＡとを化学的に結合させて得たｐＩＣは、当該スギ花粉抗原特異的に経口免疫寛容を誘導し得ることが判明した。
【００３２】
（実験２）ＯＶＡ抗原に対する免疫寛容
［偽免疫複合体（ｐＩＣ：Ｐｓｅｕｄｏ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｏｍｐｌｅｘ）の作製］
特異性不明なＩｇＡ産生ハイブリドーマを培養し、その培養上清からモノクローナルＩｇＡをｐｒｏｔｅｉｎ  Ｌを用いてアフィニティークロマトグラフィーより精製した。精製したＩｇＡが、オボアルブミン（ＯＶＡ：Ｏｖａｌｂｕｍｉｎ）に対する特異的結合性を有しないことを確認した。
【００３３】
Ｓｕｌｆｏ−ＬＣ−ＳＰＤＰ試薬（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ社製）を用いて、精製したＩｇＡとＯＶＡとを結合させ、ｐＩＣを作製した。その際、ＩｇＡ：ＯＶＡのモル比が１：１又は１：５となるように結合させた。その後、ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｌを用いてｐＩＣを精製した。
【００３４】
［マウスを用いた経口免疫寛容試験］
（１：１試験群）
５匹のＢａｌｂ／ｃマウス（「１：１試験群」とする。）に、精製したｐＩＣ（ＩｇＡ：ＯＶＡのモル比が１：１）をＩｇＡ等量として１００ｎｇずつ、６日間連続で経口投与した。
（１：５試験群）
別の５匹のＢａｌｂ／ｃマウス（「１：５試験群」とする。）に、精製したｐＩＣ（上記モル比が１：５）をＩｇＡ等量として１００ｎｇずつ、６日間連続で経口投与した。
（ＯＶＡ対照群）
さらに、別の５匹のＢａｌｂ／ｃマウス（「ＯＶＡ対照群」とする。）に、ＯＶＡを１７５ｎｇずつ、６日間連続で経口投与した。なお、ＯＶＡ対照群におけるＯＶＡ投与量（１７５ｎｇ）は、ＩｇＡ：ＯＶＡのモル比が１：５であるｐＩＣにおいて、ＩｇＡ１００ｎｇに対して結合し得るＯＶＡの最大量である。
【００３５】
その後、１：１試験群、１：５試験群及びＯＶＡ対照群のそれぞれに対し、卵白タンパク質５０μｇをフロイント完全アジュバントとともに腹腔内投与し、その１４日後に卵白タンパク質５０μｇをフロイント不完全アジュバントとともに再度腹腔内投与した。その後、各群について、血清中のＯＶＡ特異的ＩｇＧ及びオボムコイド（ＯＭ：Ｏｖｏｍｕｃｏｉｄ）特異的ＩｇＧの濃度（μｇ／ｍｌ）をＥＬＩＳＡ法により定量した。結果を図２及び図３に示す。
【００３６】
図２は、ＯＶＡ対照群、１：１試験群及び１：５試験群の血清中のＯＶＡ特異的ＩｇＧ濃度（μｇ／ｍｌ）を示すグラフである。図２に示すように、ＯＶＡを単独で経口投与した対照群と比べて、ＯＶＡとＩｇＡとを化学的に結合させて得たｐＩＣを経口投与した試験群では、血清中のＯＶＡ特異的ＩｇＧ濃度が顕著に低かった。すなわち、対照群と比べて試験群ではＯＶＡ特異的ＩｇＧの産生（ＯＶＡ抗原に対する免疫応答）が抑制された。
【００３７】
図３は、ＯＶＡ対照群、１：１試験群及び１：５試験群の血清中のＯＭ特異的ＩｇＧ濃度（μｇ／ｍｌ）を示すグラフである。図３に示すように、ＯＭ特異的ＩｇＧ濃度については、対照群と試験群との間に顕著な差は見られなかった。
【００３８】
以上の結果から、ＯＶＡとＩｇＡとを化学的に結合させて得たｐＩＣは、ＯＶＡ特異的に経口免疫寛容を誘導し得ることが判明した。
【産業上の利用可能性】
【００３９】
本発明のアレルギー予防剤は、スギ花粉抗原や、卵白、小麦等の食品アレルゲンに対し、安全に効率よく経口免疫寛容を誘導し得るアレルギー予防剤として好適に用いられる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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