(57)【要約】【課題】優れたヒアルロニダーゼ活性阻害作用を有し、各種疾病の改善あるいは健康保持のための需要者の要求を満足させるに足る有用な新規なフキノール酸誘導体、それを有効成分とする健康食品、化粧品、ならびにその製造方法を提供する。【解決手段】サラシナショウマ属に属するサラシナショウマ、イヌショウマ、フブキショウマ、コウライショウマ、オオミツバショウマからなる群より選ばれる少なくとも１つの植物の地上部、地下部、もしくはこれらの混合部位を、水もしくは親水性有機溶媒またはこれらの混合溶媒で抽出することで、ヒアルロニダーゼ阻害活性の高いフキノール酸誘導体を得ることができる。 【選択図】図１
2011213605.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記構造式ＩまたはIIで示される新規フキノール酸誘導体。
【化１】
2011213605.tif 000015
(式Ｉ中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5の関係は下記のとおりである。
Ｒ1      Ｒ2      Ｒ3      Ｒ4      Ｒ5
ＯＨ      ＯＨ    ＯＣＨ3    ＯＨ    ＯＣＨ3 
Ｈ        ＯＨ      Ｈ        ＯＨ      Ｈ  
Ｈ        ＯＨ    ＯＣＨ3  ＯＣＨ3    Ｈ
Ｈ        ＯＨ    ＯＣＨ3    ＯＨ    ＯＣＨ3 
Ｈ        Ｈ        ＯＨ      ＯＨ      Ｈ    
Ｈ        Ｈ      ＯＣＨ3    ＯＨ      Ｈ    
Ｈ        Ｈ        ＯＨ    ＯＣＨ3    Ｈ    
Ｈ        Ｈ        Ｈ        ＯＨ      Ｈ    
Ｈ        Ｈ      ＯＣＨ3  ＯＣＨ3    Ｈ    
Ｈ        Ｈ      ＯＣＨ3    ＯＨ    ＯＣＨ3 
ＯＨ      ＯＨ    ＯＣＨ3  Ｏ-Ｇal      Ｈ    
Ｈ        ＯＨ    ＯＣＨ3  Ｏ-Ｇal      Ｈ    
Ｈ        ＯＨ    ＯＣＨ3  Ｏ-Ｇlc      Ｈ
Galはガラクトース、Glcはグルコースである。）
【化２】
2011213605.tif 000016
(式II中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5の関係は下記のとおりである。
Ｒ1      Ｒ２      Ｒ3      Ｒ4      Ｒ5
ＯＨ       ＯＨ      ＯＨ      ＯＨ      Ｈ
ＯＨ       ＯＨ    ＯＣＨ3    ＯＨ      Ｈ
ＯＨ       ＯＨ      ＯＨ    ＯＣＨ3    Ｈ
ＯＨ       ＯＨ      Ｈ        ＯＨ      Ｈ
ＯＨ       ＯＨ    ＯＣＨ3  ＯＣＨ3    Ｈ
ＯＨ       ＯＨ    ＯＣＨ3    ＯＨ    ＯＣＨ3
Ｈ        ＯＨ       ＯＨ      ＯＨ      Ｈ
Ｈ        ＯＨ     ＯＣＨ3    ＯＨ      Ｈ
Ｈ        ＯＨ       ＯＨ    ＯＣＨ3    Ｈ
Ｈ        ＯＨ      Ｈ        ＯＨ       Ｈ
Ｈ        ＯＨ     ＯＣＨ3  ＯＣＨ3    Ｈ
Ｈ        ＯＨ     ＯＣＨ3    ＯＨ    ＯＣＨ3 
Ｈ        Ｈ         ＯＨ      ＯＨ      Ｈ
Ｈ        Ｈ       ＯＣＨ3    ＯＨ      Ｈ
Ｈ        Ｈ         ＯＨ    ＯＣＨ3    Ｈ
Ｈ        Ｈ        Ｈ        ＯＨ       Ｈ
Ｈ        Ｈ       ＯＣＨ3  ＯＣＨ3    Ｈ
Ｈ        Ｈ       ＯＣＨ3    ＯＨ    ＯＣＨ3
ＯＨ      ＯＨ     ＯＣＨ3  Ｏ-Gal      Ｈ  
Ｈ      ＯＨ       ＯＣＨ3  Ｏ-Gal      Ｈ  
Ｈ      ＯＨ       ＯＣＨ3  Ｏ-Glc      Ｈ  
Galはガラクトース、Glcはグルコースである。）
【請求項２】
下記式（１）で表される請求項１記載の新規フキノール酸誘導体。
【化３】
2011213605.tif 000017
【請求項３】
下記式（２）で表される請求項１記載の新規フキノール酸誘導体。
【化４】
2011213605.tif 000018
【請求項４】
下記式（３）で表される請求項１記載の新規フキノール酸誘導体。
【化５】
2011213605.tif 000019
【請求項５】
下記式（４）で表される請求項１記載の新規フキノール酸誘導体。
【化６】
2011213605.tif 000020
【請求項６】
下記式（５）で表される請求項１記載の新規フキノール酸誘導体。
【化７】
2011213605.tif 000021
【請求項７】
下記式（６）で表される請求項１記載の新規フキノール酸誘導体。
【化８】
2011213605.tif 000022
【請求項８】
下記式（７）で表される請求項１記載の新規フキノール酸誘導体。
【化９】
2011213605.tif 000023
【請求項９】
下記式（８）で表される請求項１記載の新規フキノール酸誘導体。
【化１０】
2011213605.tif 000024
【請求項１０】
下記式（９）で表される請求項１記載の新規フキノール酸誘導体。
【化１１】
2011213605.tif 000025
【請求項１１】
請求項１ないし１０の何れか１項記載の構造式で表される化合物をヒアルロニダーゼ阻害剤成分とする健康食品。
【請求項１２】
請求項１ないし１０の何れか１項記載の構造式で表される化合物をヒアルロニダーゼ阻害剤成分とする化粧品。
【請求項１３】
サラシナショウマ属に属するサラシナショウマ（Cimicifuga simplex Wormsk. ），イヌショウマ（C.Japonica（Thunb.）Spregel），フブキショウマ（C.dahurica（Turcz.）Maximmowicz），コウライショウマ（C.foetida Linne），オオミツバショウマ（C.heracleifolia Komarov（Ranunculaceae））からなる群より選ばれる少なくとも１つの植物の地上部、地下部、もしくはこれらの混合部位を、水もしくは親水性有機溶媒またはこれらの混合溶媒で抽出することを特徴とする請求項１ないし１０の何れか１項記載のフキノール酸誘導体の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なフキノール酸誘導体及びその用途ならびに製造方法に関するものであり、より詳しくは、ヒアルロニダーゼ阻害剤として有効な新規なフキノール酸誘導体とその抗炎症剤、抗アレルギー剤としての薬効作用を有する健康食品ならびに化粧品としての用途、およびその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒアルロニダーゼは、ヒアルロン酸の加水分解酵素であり、皮膚や関節その他動物組織に広く存在している。基質となるヒアルロン酸は、皮膚、靱帯、関節液、硝子体を構成する成分であり、生体における細胞の保護、水分の保持、柔軟性の維持、潤滑性の保持に重要な役割を果たしている。ところが、ヒアルロン酸量は、生体の老化または病的状態により減少することが知られており、その結果、皮膚においては、乾燥肌になり易く、また、ハリや弾力性の低下が起きる。関節においては、湿潤性悪化による関節痛などが引き起こされる。このようなヒアルロン酸欠乏状態に対して、ヒアルロニダーゼ阻害剤は、ヒアルロン酸の分解を抑制することから、生体におけるヒアルロン酸の維持に寄与するものである。
【０００３】
一方、炎症が起きたとき、ヒアルロニダーゼは、活性化されて、組織の構造を破壊し、炎症系細胞の浸透性を亢進するなど一連の生体アレルギー反応に関与すると考えられている。したがって、ヒアルロニダーゼの活性を阻害することは、抗炎症および抗アレルギー作用に寄与すると考えられる。事実、これまで抗炎症剤および抗アレルギー剤として、インドメタシン、アスピリン、クロモグリク酸ナトリウムなどの医薬品が開発されており、これらには、ヒアルロニダーゼ阻害活性が認められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平９−６７２５１号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】YAKUGAKUZASSI，VOL. 121（2000）No.7 497-521
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上記特許文献１には、ロズマリン酸を有効成分とする植物由来のヒアルロニダーゼ阻害剤が開示されている。また、上記非特許文献１には、サラシナショウマ属植物由来の成分のうち、トリテルペン類に関する報告が記載されているが、水溶性芳香族成分については未解決の部分が多く、これら先行技術文献の記載からも理解されるように、優れたヒアルロニダーゼ阻害活性を有し、かつ、人への適用に際して高い安全性を有するヒアルロニダーゼ阻害剤の開発が強く望まれているのが現状である。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の目的は、優れたヒアルロニダーゼ活性阻害作用を有し、化粧品産業または健康食品産業分野において、生産性に優れ、かつ、上述した各種疾病の改善あるいは健康保持のために求められる需要者の要求を満足させるに足る有用で新規なフキノール酸誘導体を提供することにある。
また、本発明の他の目的は、上記新規なヒアルロニダーゼ阻害剤の有効な用途である健康食品および化粧品を提供することにある。
さらに、本発明の他の目的は、上記新規なヒアルロニダーゼ阻害剤の製造方法を提供することにある。
【０００８】
すなわち、本発明によれば、下記構造式ＩまたはIIで示される新規フキノール酸誘導体が提供される。
【化１】
2011213605.tif 000003
(式Ｉ中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5の関係は下記のとおりである。
Ｒ1      Ｒ2      Ｒ3      Ｒ4      Ｒ5
ＯＨ      ＯＨ    ＯＣＨ3    ＯＨ    ＯＣＨ3 
Ｈ        ＯＨ      Ｈ        ＯＨ      Ｈ  
Ｈ        ＯＨ    ＯＣＨ3  ＯＣＨ3    Ｈ
Ｈ        ＯＨ    ＯＣＨ3    ＯＨ    ＯＣＨ3 
Ｈ        Ｈ        ＯＨ      ＯＨ      Ｈ    
Ｈ        Ｈ      ＯＣＨ3    ＯＨ      Ｈ    
Ｈ        Ｈ        ＯＨ    ＯＣＨ3    Ｈ    
Ｈ        Ｈ        Ｈ        ＯＨ      Ｈ    
Ｈ        Ｈ      ＯＣＨ3  ＯＣＨ3    Ｈ    
Ｈ        Ｈ      ＯＣＨ3    ＯＨ    ＯＣＨ3 
ＯＨ      ＯＨ    ＯＣＨ3  Ｏ-Ｇal      Ｈ    
Ｈ        ＯＨ    ＯＣＨ3  Ｏ-Ｇal      Ｈ    
Ｈ        ＯＨ    ＯＣＨ3  Ｏ-Ｇlc      Ｈ
Galはガラクトース、Glcはグルコースである。）
【化２】
2011213605.tif 000004
(式II中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5の関係は下記のとおりである。
Ｒ1      Ｒ２      Ｒ3      Ｒ4      Ｒ5
ＯＨ       ＯＨ      ＯＨ      ＯＨ      Ｈ
ＯＨ       ＯＨ    ＯＣＨ3    ＯＨ      Ｈ
ＯＨ       ＯＨ      ＯＨ    ＯＣＨ3    Ｈ
ＯＨ       ＯＨ      Ｈ        ＯＨ      Ｈ
ＯＨ       ＯＨ    ＯＣＨ3  ＯＣＨ3    Ｈ
ＯＨ       ＯＨ    ＯＣＨ3    ＯＨ    ＯＣＨ3
Ｈ        ＯＨ       ＯＨ      ＯＨ      Ｈ
Ｈ        ＯＨ     ＯＣＨ3    ＯＨ      Ｈ
Ｈ        ＯＨ       ＯＨ    ＯＣＨ3    Ｈ
Ｈ        ＯＨ      Ｈ        ＯＨ       Ｈ
Ｈ        ＯＨ     ＯＣＨ3  ＯＣＨ3    Ｈ
Ｈ        ＯＨ     ＯＣＨ3    ＯＨ    ＯＣＨ3 
Ｈ        Ｈ         ＯＨ      ＯＨ      Ｈ
Ｈ        Ｈ       ＯＣＨ3    ＯＨ      Ｈ
Ｈ        Ｈ         ＯＨ    ＯＣＨ3    Ｈ
Ｈ        Ｈ        Ｈ        ＯＨ       Ｈ
Ｈ        Ｈ       ＯＣＨ3  ＯＣＨ3    Ｈ
Ｈ        Ｈ       ＯＣＨ3    ＯＨ    ＯＣＨ3
ＯＨ      ＯＨ     ＯＣＨ3  Ｏ-Gal      Ｈ  
Ｈ      ＯＨ       ＯＣＨ3  Ｏ-Gal      Ｈ  
Ｈ      ＯＨ       ＯＣＨ3  Ｏ-Glc      Ｈ  
Galはガラクトース、Glcはグルコースである。）
【０００９】
また、本発明によれば、下記式（１）で表される上記新規フキノール酸誘導体が提供される。
【化３】
2011213605.tif 000005
【００１０】
また、本発明によれば、下記式（２）で表される上記新規フキノール酸誘導体が提供される。。
【化４】
2011213605.tif 000006
【００１１】
また、本発明によれば、下記式（３）で表される上記新規フキノール酸誘導体が提供される。
【化５】
2011213605.tif 000007
【００１２】
また、本発明によれば、下記式（４）で表される上記新規フキノール酸誘導体が提供される。
【化６】
2011213605.tif 000008
【００１３】
また、本発明によれば、下記式（５）で表される上記新規フキノール酸誘導体が提供される。
【化７】
2011213605.tif 000009
【００１４】
また、本発明によれば、下記式（６）で表される上記新規フキノール酸誘導体が提供される。
【化８】
2011213605.tif 000010
【００１５】
また、本発明によれば、下記式（７）で表される上記新規フキノール酸誘導体が提供される。
【化９】
2011213605.tif 000011
【００１６】
また、本発明によれば、下記式（８）で表される上記新規フキノール酸誘導体が提供される。
【化１０】
2011213605.tif 000012
【００１７】
また、本発明によれば、下記式（９）で表される上記新規フキノール酸誘導体が提供される。
【化１１】
2011213605.tif 000013
【００１８】
また、本発明によれば、上記化合物をヒアルロニダーゼ阻害剤成分とする健康食品が提供される。
【００１９】
また、本発明によれば、上記化合物をヒアルロニダーゼ阻害剤成分とする化粧品が提供される。
【００２０】
また、本発明によれば、サラシナショウマ属に属するサラシナショウマ（Cimicifuga simplex Wormsk. ），イヌショウマ（C.Japonica（Thunb.）Spregel），フブキショウマ（C.dahurica（Turcz.）Maximmowicz），コウライショウマ（C.foetida Linne），オオミツバショウマ（C.heracleifolia Komarov（Ranunculaceae））からなる群より選ばれる少なくとも１つの植物の地上部、地下部、もしくはこれらの混合部位を、水もしくは親水性有機溶媒またはこれらの混合溶媒で抽出することを特徴とする上記フキノール酸誘導体の製造方法が提供される。
【００２１】
上記構造式で示されるフキノール酸誘導体は、サラシナショウマ属の植物に由来する新規な化合物であり、この植物の葉、茎などを含む地上部および根茎などを含む地下部に含有している。サラシナショウマ属植物の根茎は、「ショウマ（升麻）」と称され、すでに薬用に供せられている。このサラシナショウマ属植物は、これまでの報告から薬用成分として、トリテルペン類と水溶性芳香族成分とに大別することができる。つぎに、サラシナショウマ属植物の水溶性溶媒による抽出物、すなわち、水溶性芳香族成分が、ヒアルロン酸の加水分解酵素であるヒアルロニダーゼを強力に阻害する性質があることをつきとめた。その後、その水溶性芳香族成分を単離し、それらの単離した水溶性芳香族成分の構造式を同定し、その結果、新規なフキノール酸誘導体が得られた。さらに、それぞれの単離水溶性芳香族成分におけるヒアルロニダーゼ阻害活性を測定した。
【００２２】
本発明のフキノール酸誘導体は、本発明者によってはじめて見出された新規化合物であり、サラシナショウマ属に属するサラシナショウマ、イヌショウマ、フブキショウマ、コウライショウマ、オオミツバショウマの地上部および地下部を原料とする。本発明の新規なフキノール酸誘導体は、例えば、上記原料を細断して放置して乾燥させ、溶媒にて抽出する方法を挙げることによって製造することが出来る。溶媒としては水やメタノール、エタノール、アセトンなどの親水性有機溶媒が使用される。原料であるサラシナショウマ属植物と溶媒との比率は、特に限定しないが、サラシナショウマ属植物１部に対して、溶媒１ないし１００部である。ただし、この比率は、操作上あるいは抽出効率の面から、溶媒３ないし１５部が好ましい。この時の抽出温度は、２０℃程度の室温から常圧下での溶媒の沸点の範囲とするのが、作業工程上有利となる。また、抽出時間は、抽出温度により異なるが、有効成分が抽出されるまで一定の時間が必要となる。なお、抽出作業の効率から１時間から３日程度の抽出時間を設定するのが好ましい。
【００２３】
上記により得られた抽出液は、さらに液−液抽出、樹脂吸着などの精製操作により油溶性の成分が除去される。この油溶性成分除去抽出液は、カラムクロマトグラフィーに付され、さらに、各種の分取りクロマトグラフィーが施されることにより、水溶性芳香族成分が単離される。この単離水溶性芳香族成分は、機器分析、例えば、ＮＭＲ解析によって上記構造式が得られたのである。
【発明の効果】
【００２４】
本発明によれば、サラシナショウマ属植物に上記構造式による新規なフキノール酸誘導体が含有することが明確になり、この新規なフキノール酸誘導体を含有している化合物についてのヒアルロニダーゼ阻害活性も明らかになって、将来的にこれら化合物の合成も可能になる効果がある。
【００２５】
また、本発明によれば、新規なフキノール酸誘導体を含んだ健康食品により、老化や病気により起こる生体ヒアルロン酸量の低下を押さえ、生体ヒアルロン酸量の維持に寄与して、人の健康状態を維持する効果がある。
【００２６】
また、本発明によれば、新規なフキノール酸誘導体を含んだ化粧品により、老化や病気によって起こる生体ヒアルロン酸量の低下を押さえ、生体ヒアルロン酸量の維持に寄与して、人の肌の健康状態を維持する効果がある。
【００２７】
また、本発明方法によれば、新規なフキノール酸誘導体を効率よく生産することができる効果がある。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】本発明の実施の形態を示すフキノール酸誘導体（１）のＮＭＲスペクトルチャートである（実施例１）。
【図２】本発明の実施の形態を示すフキノール酸誘導体（２）のＮＭＲスペクトルチャートである（実施例１）。
【図３】本発明の実施の形態を示すフキノール酸誘導体（３）のＮＭＲスペクトルチャートである（実施例１）。
【図４】本発明の実施の形態を示すフキノール酸誘導体（４）のＮＭＲスペクトルチャートである（実施例１）。
【図５】本発明の実施の形態を示すフキノール酸誘導体（５）のＮＭＲスペクトルチャートである（実施例１）。
【図６】本発明の実施の形態を示すフキノール酸誘導体（６）のＮＭＲスペクトルチャートである（実施例２）。
【図７】本発明の実施の形態を示すフキノール酸誘導体（７）のＮＭＲスペクトルチャートである（実施例２）。
【図８】本発明の実施の形態を示すフキノール酸誘導体（８）のＮＭＲスペクトルチャートである（実施例２）。
【図９】本発明の実施の形態を示すフキノール酸誘導体（９）のＮＭＲスペクトルチャートである（実施例２）。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
以下に、図面を参照して本発明を実施するための形態を説明する。
【実施例１】
【００３０】
＜オオミツバショウマ由来のフキノール酸誘導体（１）から（５）の製造例＞
オオミツバショウマの地下部である根茎を刻んだ乾燥物１５４ｇを、８０％アセトン１Ｌで１．５時間加熱還流により抽出した。８０％アセトン抽出液を減圧下で濃縮し２５ｇの黒褐色の濃縮物を得た。この濃縮物に熱水１Ｌを加えて溶かし、さらに、エーテルを加えて５時間攪拌することにより、水不溶成分をエーテル層に取り込み、水層約１Ｌを得た。塩酸で弱酸性にｐＨ調整したのち、ダイアイオンＨＰ−２０を充填したカラムに付し、水約５Ｌを付加して充分に水洗したのち、メタノールで有用成分を溶出させ溶出液２Ｌを得た。メタノール溶出液を減圧下で濃縮し、４．８７ｇの褐色の濃縮残さ物を得た。オクタデシルシリカゲルを充填した成分分取用のカラムで濃縮残さ物の精製操作を施し、フランクションＡないしＺ、ａないしｌの計３８個の分画物を得た。これらのうち、フランクションW,ｅ，ｆ，ｃ，ａ，ｉ，ｊ,kからそれぞれ既知成分フキノール酸８６ｍｇ、シミシフジン酸Ａ８８ｍｇ、シミシフジン酸Ｂ３０２ｍｇ、シミシフジン酸Ｃ７．３ｍｇ、シミシフジン酸Ｄ１３６ｍｇ、シミシフジン酸Ｅ１７０ｍｇ、シミシフジン酸Ｆ６５５ｍｇ、シミシフジン酸Ｇ１９．７ｍｇを得た。
【００３１】
さらに、ｈからフキノール酸誘導体（５）２３．４ｍｇを得た。
また。残りの各フランクションからさらに分離精製操作を施し、フランクションＮからは、Cosmosil ５ PE-MS カラムを用いて、フキノール酸誘導体（１）９．１ｍｇを得た
。フランクションＳからは、それぞれDevelosil C30-UG-５ カラムを用いて、フキノール酸誘導体（２）２５．８ｍｇを得た。フランクションＲおよびｄからは、それぞれDevelosil 5PE-MSカラムを用いてフキノール酸誘導体（３）３．４ｍｇ、フキノール酸誘導体（４）５．４ｍｇを得た。
【００３２】
以下に、採取したフキノール酸誘導体（１）から（５）の物性値を示す。
（１）：pale brown powder；［α］D−5.1（c 0.79, MeOH）；UV（MeOH）λmax（logε）291（4.15）, 320（4.14）nm；1H NMR, 図１；HRFABMS m/z 609. 1451（calcd for C27H30O16 - H, 609. 1456）
（２）：pale brown powder；［α］D−5.0（c 1. 39, MeOH）；UV（MeOH）λmax（logε）219（4. 30）, 296（4. 16）, 321 （4. 19） nm；1H NMR, 図２；HRFABMS m/z 593. 1525（calcd for C27H30O15 - H, 593. 1507）
（３）：brown powder；［α］D−8.3（c 0. 42, MeOH）；UV（MeOH）λmax（logε）219（4. 26）, 293（4. 09）, 319 （4. 10） nm；1H NMR, 図３；HRFABMS m/z 593. 1517（calcd for C27H30O15 - H, 593. 1507）
（４）：pale brown powder；［α］D＋45.3（c ０. 96, MeOH）；UV（MeOH）λmax（logε）293sh（3. 78）, 331（4. 10） nm；1H NMR, 図４；HRFABMS m/z 477. 1023（calcd for C22H22O12 - H, 477. 1033）
（５）：brown powder；［α］D＋19.4（c 0. 49, MeOH）；UV（MeOH）λmax（logε）225（4. 22）, 329（4. 04）nm；1H NMR, 図５；HRFABMS m/z 461. 1084（calcd for 
C22H22O11 - H, 461. 1084）
【実施例２】
【００３３】
＜サラシナショウマ由来のフキノール酸誘導体（６）から（９）の製造例＞
サラシナショウマの地上部である葉、茎を刻んだ乾燥物２．４ｋｇを８０％アセトン１０Ｌで２時間加熱還流により抽出した。８０％アセトン抽出液を減圧下で濃縮し５３４ｇの黒褐色の濃縮物を得た。この濃縮物１２５ｇに熱水１Ｌを加えて溶かし、塩酸で弱酸性にｐＨ調整したのち、ダイアイオンＨＰ−２０を充填したカラムに付し、水約５Ｌを付加して充分に水洗した。つぎに、４０％メタノールで有用成分を溶出させ、その溶出分を減圧下で濃縮し、１４．９７ｇの褐色の濃縮残さ物を得た。オクタデシルシリカゲルを充填した成分分取用のカラムで濃縮残さ物に精製操作を施し、フランクションＡないしＺ、ａないしｚ、アないしエの計５６個の分画物を得た。これらの分画物のうち、フランクション−イ，ｘ，Ｉ，アから実施例１で示した精製用カラムを適宜用いて精製操作を施し、フキノール酸誘導体（６）、（７）、（８）、（９）を、それぞれ16.5ｍｇ、３ｍｇ、４．９ｍｇ、７ｍｇ得た。
【００３４】
以下に、採取したフキノール酸誘導体（６）から（９）の物性値を示す。
（６）：brown powder；［α］D＋15. 5（c 0. 42, MeOH）；UV（MeOH）λmax（logε）
304（3. 80）, 330（3. 88）nm；1H NMR, 図９；HRFABMS m/z 401. 0875（calcd for
C20H18O9 - H, 401. 0873）
（７）：pale brown powder；［α］D＋52. 1（c ０. 24, MeOH）；UV（MeOH）λmax（logε）226（4. 40）, 316（4. 40） nm；1H NMR, 図１０；HRFABMS m/z 401. 0907
（calcd for C20H18O 9- H, 401. 0873）
（８）：pale brown powder；［α］D −43. 2（c 1. 03, MeOH）；UV（MeOH）λmax
（logε）259（3. 76）, 322（3. 23） nm；1H NMR, 図１１；
（９）：white powder；［α］D ＋31.3（c 0. 99, MeOH）；UV（MeOH）λmax（logε）220（4. 31）, 325（4. 24） nm；1H NMR, 図１２；
【実施例３】
【００３５】
＜フキノール酸誘導体含有のイヌショウマエキスの製造例＞
イヌショウマの地上部である葉、茎を刻んだ乾燥物５ｋｇに２０％エタノール５０Ｌを添加し、室温下で１２時間浸漬した。この浸漬液をろ過し、そのろ液を８０℃で減圧下に濃縮して、さらに乾燥後７５０ｇのエキス分を得た。
【実施例４】
【００３６】
以上により得たフキノール酸誘導体（１）ないし（９）、フキノール酸誘導体含有のサラシナショウマエキスおよびイヌショウマエキス、ならびに比較対照として、市販しているクロモグリク酸ナトリウム、インドメタシン、ロスマリン酸について、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用を測定した。以下に、試験方法を示す。
【００３７】
上記の各被験試料に対して、まず、被験試料を溶解した０．１mol／L酢酸緩衝液（pH 3.5）０．２mLに、ヒアルロニダーゼ溶液（Type lV-S（from bovine testis；SIGMA 400 NF units/mL）０．１mLを加え、３７℃で２０分間反応させた。さらに、活性化剤として２．５mmol/L  塩化カルシウム０．２mLを加え、３７℃で２０分間反応させた。これに０．４mg/mLヒアルロン酸ナトリウム溶液（from rooster comb）０．５mLを加え、３７℃で４０分間反応させた。その後、０．４mol/L 水酸化ナトリウム溶液０．２mLを加えて反応を止め冷却したのち、反応溶液にホウ酸溶液０．２mLを加え、３分間煮沸した。氷冷後、p-DABA試薬６mLを加え、３７℃で２０分間反応させた。その後、波長５８５nmにおける吸光度を測定した。上記と同様の方法で空試験を行い補正した。なお、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）の計算方法は以下のとおりである。
【００３８】
ヒアルロニダーゼ活性阻害率（％）＝｛１−（St−Sb）／（Ct−Cb）｝×１００
St：被験試料溶液の波長５８５nmにおける吸光度
Sb：被験試料溶液ブランクの波長５８５nmにおける吸光度
Ct：コントロール溶液の波長５８５nmにおける吸光度
Cb：コントロール溶液ブランクの波長５８５nmにおける吸光度
以上の試験結果を表１に示す。
【００３９】
【表１】
2011213605.tif 000014
【００４０】
上記表１によれば、本発明のフキノール酸誘導体（４）、（５）、（６）、（８）、（９）、ならびにサラシナショウマエキス、イヌショウマエキス、クロモグリク酸ナトリウム、インドメタシンには、強いヒアルロニダーゼ活性阻害作用が認められた。
また、本発明のフキノール酸誘導体（７）、ロスマリン酸には、中程度のヒアルロニダーゼ活性阻害作用が認められた。
そして、本発明のフキノール酸誘導体（１）、（２）、（３）、は、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用ＩＣ５０を算出できる程度の作用が認められた。
【００４１】
上記フキノール酸誘導体は食品に添加して、ヒアルロニダーゼ阻害剤成分を有する健康食品を得ることができる。フキノール酸誘導体を食品に添加する場合は、食品に対して０
．００１ないし１０．０重量％程度の配合が可能である。好ましい配合量は０．１ないし３．０重量％の範囲である。また、食品にフキノール酸誘導体と共にその他の公知の動植物由来のエキス成分を添加したり、必要に応じて公知の賦形剤、香料、着色剤などの添加剤を併用してもよい。
以下に、健康食品の処方例を示す。
【００４２】
処方例１＜美容健康茶＞
１．ローズヒップ                                     １．５０（ｇ／包）
２．レモングラス                                     ０．２０    〃
３．リコリス                                         ０．０５    〃
４．カワラケツメイ                                   ０．５０    〃
５．本発明のサラシナショウマエキス                   ０．７５    〃
【００４３】
処方例２＜錠剤サプリメント＞
１．白桃花末                                         ５０．０（ｍｇ／包）
２．甘草末                                             ５．０    〃
３．ハブ茶末                                           ５．０    〃
４．緑茶末                                           １０．０    〃
５．霊芝末                                           ８０．０    〃
６．乳糖                                             ８０．０    〃
７．フキノール酸誘導体含有サラシナショウマエキス     ５０．０    〃
８．セルロース                                         ５．０    〃
９．ショ糖脂肪酸エステル                             １０．０    〃
【００４４】
処方例３＜パウダー状健康食品＞
１．コラーゲン                                       ８０．００（重量％）
２．ヒアルロン酸                                       １．００    〃
３．本発明のイヌショウマエキス                         ９．００    〃
４．デキストリン                                     １０．００    
【００４５】
また、上記フキノール酸誘導体は化粧品に添加して、ヒアルロニダーゼ阻害剤成分を有する化粧品を得ることができる。フキノール酸誘導体を化粧品、例えば、クリーム、ローション、乳液、パック、ジェル、エッセンス、ファンデーション、サンケア、ヘヤケアなどに添加する場合は、化粧品に対して０．００１ないし５．０重量％程度の配合が可能である。好ましい配合量は０．０１ないし１．０重量％の範囲である。また、化粧品にフキノール酸誘導体と共にその他の公知の動植物由来のエキス成分を添加したり、公知の有効成分や界面活性剤、油脂などの基剤成分の他、必要に応じて公知の保湿剤、増粘剤、キレート剤、ｐＨ調整剤、香料、着色剤などの添加剤を併用してもよい。
以下に、化粧品の処方例を示す。
【００４６】
処方例４＜化粧水＞
１．フキノール酸誘導体４                               ０．１０（重量％）
２．エタノール                                         ５．００    〃
３．パラオキシ安息香酸エステル                         ０．１０    〃
４．水溶性コラーゲン                                   ２．００    〃
５．クエン酸                                           ０．１０    〃
６．クエン酸ナトリウム                                 ０．３０    〃
７．１，３−ブチレングリコール                         ４．００    〃
８．エデト酸ニナトリウム                               ０．０１    〃
９．精製水                                             適    量
【００４７】
処方例５＜パック＞
１．フキノール酸誘導体６                               ０．１０（重量％）
２．ポリエチレングリコール１５００                     ５．００    〃
３．ステアリン酸ジエタノールアミド                     ５．００    〃
４．ステアリン酸                                       ５．００    〃
５．ミリスチン酸                                       ５．００    〃
６．ヤシ油                                             ５．００    〃
７．天然ビタミンＥ                                   １０．００    〃
８．パラオキシ安息香酸エステル                         ０．０４    〃
９．ｄｌ−ピロリドンカルボン酸ナトリウム液             ５．００    〃
１０．エデト酸ニナトリウム                             ０．０１    〃
１１．精製水                                           適    量
【００４８】
処方例６＜乳液＞
１．フキノール酸誘導体９                               ０．０１（重量％）
２．モノステアリン酸グリセリン                         １．５０    〃
３．バチルアルコール                                   ３．５０    〃
４．ステアリン酸                                       ０．５０    〃
５．ミリスチン酸                                       ０．５０    〃
６．アボガド油                                         ４．００    〃
７．メトキシ桂皮酸オクチル                             ２．００    〃
８．天然ビタミンＥ                                     ０．０４    〃
９．パラオキシ安息香酸エステル                         ０．２０    〃
１０．ヒアルロン酸ナトリウム                           ５．００    〃
１１．オウゴンエキス                                   ０．１４    〃
１２．グルコン酸                                       ０．５０    〃
１３．カルボキシビニルポリマー                         ０．３０    〃
１４．精製水                                           適    量
なお、上記した精製水の適量とは、処方全体で１００％重量となる割合を示す。
【００４９】
以上、本発明の実施例を説明したが、具体的な構成はこれに限定されず、本発明の要旨を逸脱しない範囲での変更は、適宜可能であることが理解されるべきである。
【産業上の利用可能性】
【００５０】
本発明によって提供される新規なフキノール酸誘導体は、化粧品産業または健康食品産業分野において、生産性に優れ、かつ、各種疾病の改善あるいは健康保持のために求められる需要者の要求を満足させるに足る有用なヒアルロニダーゼ阻害剤を得たい場合や、このヒアルロニダーゼ阻害剤を利用した健康食品および化粧品を得たい場合に、利用可能性が極めて高くなる。
【図１】
2011213605.tif 000026
【図２】
2011213605.tif 000027
【図３】
2011213605.tif 000028
【図４】
2011213605.tif 000029
【図５】
2011213605.tif 000030
【図６】
2011213605.tif 000031
【図７】
2011213605.tif 000032
【図８】
2011213605.tif 000033
【図９】
2011213605.tif 000034