(57)【要約】      （修正有）【課題】既知の抗Ｂ型肝炎ウィルス活性を持つ、相乗的に有効量の薬剤を組合せて、あるいは交互に投与することより成る、ヒトのＢ型肝炎ウィルス感染の治療方法の提供。【解決手段】ＦＴＣをｐｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒ、ｆａｍｃｉｃｌｏｖｉｒまたはＢｉｓ−ＰＯＭ−ＰＭＥＡと組合せて、あるいは交互に投与することより成る、Ｂ型肝炎ウィルス感染の治療方法。さらに、Ｌ−ＦＭＡＵをＤＡＰＤ、ｐｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒ、またはＢｉｓ−ＰＯＭ−ＰＭＥＡと組合せて、あるいは交互に投与することより成る、Ｂ型肝炎ウィルス感染の治療方法。また、ＤＡＰＤをＢｉｓ−ＰＯＭ−ＰＭＥＡと組合せて、あるいは交互に投与することより成る、Ｂ型肝炎ウィルス感染の治療方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
β−２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−オキサチオラン（β−ＦＴＣ）またはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグの相乗効果的な量を、ｐｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒ、ｆａｍｃｉｃｌｏｖｉｒおよびビス−ＰＯＭ−ＰＭＥＡより成る群から選択される第２の抗Ｂ型肝炎剤の有効量と、組み合わせてまたは交互に投与することより成る、ヒトにおけるＢ型肝炎ウィルスの治療方法。
【請求項２】
β−ＦＴＣが（−）−光学異性体の形である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
第２の抗Ｂ型肝炎剤がｐｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
第２の抗Ｂ型肝炎剤がｆａｍｃｉｃｌｏｖｉｒである、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
第２の抗Ｂ型肝炎剤がビス−ＰＯＭ−ＰＭＥＡである、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
２’−フルオロ−５−メチル−β−Ｌ−アラビノフラノリルウリジン（Ｌ−ＦＭＡＵ）またはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグの相乗効果的な量を、式
【化１】
2011079840.tif 000006
（式中、ＲがＮＨ２、ＯＨ、ＣｌまたはＨである）の化合物、あるいはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグ、ｐｅｎｉｃｌｏｖｉｒ、および９−［２−（ホスホノメトキシ）エチル］アデニン（ＰＭＥＡ）またはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグより成る群から選択される第２の抗Ｂ型肝炎剤の有効量と、組み合わせてまたは交互に投与することより成る、ヒトにおけるＢ型肝炎ウィルスの治療方法。
【請求項７】
式
【化２】
2011079840.tif 000007
（式中、ＲがＯＨである）の化合物、あるいはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグが第２の抗Ｂ型肝炎剤である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
式
【化３】
2011079840.tif 000008
（式中、ＲがＮＨ２である）の化合物、あるいはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグが第２の抗Ｂ型肝炎剤である、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
第２の抗Ｂ型肝炎剤がｐｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒである、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
第２の抗Ｂ型肝炎剤がＰＭＥＡ、あるいはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグである、請求項６に記載の方法。
【請求項１１】
式
【化４】
2011079840.tif 000009
（式中、ＲがＮＨ２、ＯＨ、ＣｌまたはＨである）の化合物、あるいはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグの相乗効果的な量を、ＰＭＥＡ、あるいはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグより成る群から選択される第２の抗Ｂ型肝炎剤の有効量と、組み合わせてまたは交互に投与することより成る、ヒトにおけるＢ型肝炎ウィルスの治療方法。
【請求項１２】
ＲがＯＨである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ＲがＮＨ２である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
β−２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−オキサチオラン（β−ＦＴＣ）またはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグの相乗効果的な量を、ｐｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒ、ｆａｍｃｉｃｌｏｖｉｒおよびビス−ＰＯＭ−ＰＭＥＡより成る群から選択される第２の抗Ｂ型肝炎剤の有効量とともに、Ｂ型肝炎ウィルスの治療に使用すること。
【請求項１５】
２’−フルオロ−５−メチル−β−Ｌ−アラビノフラノリルウリジン（Ｌ−ＦＭＡＵ）またはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグの相乗効果的な量を、式
【化５】
2011079840.tif 000010
（式中、ＲがＮＨ２、ＯＨ、ＣｌまたはＨである）の化合物、あるいはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグ、ｐｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒ、および９−［２−（ホスホノメトキシ）エチル］アデニン（ＰＭＥＡ）またはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグより成る群から選択される第２の抗Ｂ型肝炎剤の有効量とともに、Ｂ型肝炎ウィルスの治療に使用すること。
【請求項１６】
式
【化６】
2011079840.tif 000011
（式中、ＲがＮＨ２、ＯＨ、ＣｌまたはＨである）の化合物、あるいはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグの相乗効果的な量を、ＰＭＥＡ、あるいはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグより成る群から選択される第２の抗Ｂ型肝炎剤の有効量とともに、Ｂ型肝炎ウィルスの治療に使用すること。
【請求項１７】
ｐｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒ、ｆａｍｃｉｃｌｏｖｉｒおよびビス−ＰＯＭ−ＰＭＥＡより成る群から選択される第２の抗Ｂ型肝炎剤の有効量と相乗的に組み合わせたβ−２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−オキサチオラン（β−ＦＴＣ）またはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグの有効量より成る、製薬組成物。
【請求項１８】
第２の抗Ｂ型肝炎剤がｐｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
第２の抗Ｂ型肝炎剤がｆａｍｃｉｃｌｏｖｉｒである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
第２の抗Ｂ型肝炎剤がビス−ＰＯＭ−ＰＭＥＡである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
式
【化７】
2011079840.tif 000012
（式中、ＲがＮＨ２、ＯＨ、ＣｌまたはＨである）の化合物、あるいはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグ、ｐｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒ、および９−［２−（ホスホノメトキシ）エチル］アデニン（ＰＭＥＡ）またはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグより成る群から選択される第２の抗Ｂ型肝炎剤の有効量と相乗的に組み合わせた２’−フルオロ−５−メチル−β−Ｌ−アラビノフラノリルウリジン（Ｌ−ＦＭＡＵ）またはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグの有効量より成る、製薬組成物。
【請求項２２】
ＲがＮＨ２である、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
ＲがＯＨである、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２４】
ＰＭＥＡ、あるいはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグより成る群から選択される第２の抗Ｂ型肝炎剤の有効量と相乗的に組み合わせた、式
【化８】
2011079840.tif 000013
（式中、ＲがＮＨ２、ＯＨ、ＣｌまたはＨである）の化合物、あるいはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグの有効量より成る、製薬組成物。
【請求項２５】
ＲがＮＨ２である、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
ＲがＯＨである、請求項２４に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、それを必要とする宿主に、既知の抗Ｂ型肝炎活性を備えたヌクレオシドの有効な組合せを投与することを含む、Ｂ型肝炎ウィルス（「ＨＢＶ」とも呼ばれる）の治療方法の分野にある。
【背景技術】
【０００２】
ＨＢＶは、タバコに次いでヒトのガンの第２位の原因である。ＨＢＶが直接、腫瘍発生を誘発するか、間接的に慢性炎症を通じて腫瘍発生を誘発し、感染に伴う細胞再生が誘発されるにもかかわらず、ＨＢＶがガンを引き起こす機構は不明である。
【０００３】
Ｂ型肝炎ウィルスは世界的な流行レベルに達している。宿主が感染に気づかない２〜３ヶ月の潜伏期間の後、ＨＢＶ感染は急性肝炎および肝臓損傷につながり、腹痛、黄疸、特定の酵素の血中濃度の上昇が起こることがある。ＨＢＶは劇症肝炎を引き起こすことがあり、非常に進行が早い、この疾病の致命的な形では、肝臓の大部分が破壊されることが多い。
【０００４】
患者は通常、急性肝炎は回復する。しかし一部の患者では、血中に高濃度のウィルス性抗原が長期あるいは際限なく続き、慢性感染を引き起こす。慢性感染は、慢性の持続性肝炎につながることがある。慢性持続性ＨＢＶに感染した患者は、発展途上国に最も多い。１９９１年半ばまでに、アジアだけでＨＢＶの慢性キャリアは約２億２５００万人に達し、世界では約３億人のキャリアがいる。慢性持続性肝炎は、疲労、肝硬変、肝細胞ガン、原発性肝臓ガンを引き起こすことがある。
【０００５】
西欧の先進工業国では、ＨＢＶ感染のハイリスクグループには、ＨＢＶキャリアまたはその血液サンプルに接触した人々が含まれる。ＨＢＶの疫学は、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）と非常に似ており、このことでＨＢＶ感染がＡＩＤＳやＡＩＤＳ関連合併症の患者によく見られることの説明がつく。しかし、ＨＢＶはＨＩＶよりも伝染性が高い。
【０００６】
しかし、さらに最近では、遺伝子工学によってワクチンも製造されており、現在広く使われている。あいにく、ワクチンはすでにＨＢＶに感染した患者には役にたたない。遺伝子工学によって作成されたタンパク質、α−インターフェロンによる日常の治療も見込みがあるが、この治療法は治療を受けた患者の約３分の１にしか効果がない。さらにインターフェロンは経口投与できない。
【０００７】
ＨＢＶに対して活性を示す、多くの合成ヌクレオシドが確認されている。Ｌｉｏｔｔａらの米国特許５，５３９，１１６で特許請求された、３ＴＣとして知られるＢＣＨ−１８９の（−）鏡像異性体は、米国食品医薬品局がＢ型肝炎の治療として承認されている。ＢｉｏＣｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａ，Ｉｎｃ．が提出したＥＰＡ  ０４９４１１９Ａ１も参照すること。
【０００８】
Ｌｉｏｔｔａらの米国特許５，８１４，６３９および５，９１４，３３１で特許請求されたβ−２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−オキサチオラン（「ＦＴＣ」）は、ＨＢＶに対する活性を示す。Ｆｕｒｍａｎらの「シス−５−フルオロ−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−オキサチオラン−５−イル］−シトシンの（−）および（＋）鏡像異性体の抗Ｂ型肝炎ウィルス活性、細胞傷害性および同化特性」Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、１９９２年１２月、２６８６−２６９２ページ；Ｃｈｅｎｇら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｖｏｌｕｍｅ  ２６７（２０）、１３９３８−１３９４２（１９９２）を参照すること。
【０００９】
米国特許Ｎｏ．５，５６５，４３８、５，５６７，６８８および５，５８７，３６２（Ｃｈｕら）は、Ｂ型肝炎およびＥＢウイルス治療用の２’−フルオロ−５−メチル−β−Ｌ−アラビノフラノリルウリジン（Ｌ−ＦＭＡＵ）を開示している。
【００１０】
Ｅｍｏｒｙ大学およびジョージア大学研究財団による米国特許Ｎｏ．５，７６７，１２２は、次の式の、鏡像異性的に純粋なβ−Ｄ−ジオキソラニルヌクレオシドを開示および特許請求している：
【００１１】
【化１】
2011079840.tif 000002
式中、ＲはＮＨ２、ＯＨ、ＣｌまたはＨである。ＤＡＰＤおよびＦＴＣの組合せを用いたＨＢＶ感染の治療方法は、Ｒａｙｍｏｎｄ  Ｆ．Ｓｃｈｉｎａｚｉらによる米国特許Ｎｏ．５，６８４，０１０で特許請求されている。
【００１２】
ｐｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒ（２−アミノ−１，９−ジヒドロ−９−［４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］−６Ｈ−プリン−６−オン；ＰＣＶ）は、Ｂ型肝炎に対する活性を確立した。米国特許Ｎｏ．５，０７５，４４５および５，６８４，１５３を参照すること。
【００１３】
ａｄｅｆｏｖｉｒ（９−［２−（ホスホノメトキシ）エチル］アデニン、ＰＭＥＡまたは［［２−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）エトキシ］メチルリン酸とも呼ばれる）も、Ｂ型肝炎に対する活性を確立した。米国特許Ｎｏ．５，６４１，７６３および５，１４２，０５１を参照すること。
【００１４】
エール大学およびジョージア大学研究財団はＷＯ  ９２／１８５１７で、Ｌ−ＦＤＤＣ（５−フルオロ−３’−チア−２’，３’−ジデオキシシチジン）の、Ｂ型肝炎ウィルス治療への使用を開示している。
【００１５】
ｖｏｎ  Ｊａｎｔａ−Ｌｉｐｉｎｓｋｉらは、３’−フルオロ−修飾β−２’−デオキシリボヌクレオシド５’−三リン酸塩の、Ｂ型肝炎ポリメラーゼ抑制への使用を開示している（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，４１，２０４０−２０４６）。特に、３’−デオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−チミジン（β−Ｌ−ＦＴＴＰ）、２’，３’−ジデオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−５’−シチジン（β−Ｌ−ＦｄＣＴＰ）および２’，３’−ジデオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−５−メチルシチジン（β−Ｌ−ＦＭｅｔｈＣＴＰ）の５’−三リン酸塩が、ＨＢＶ  ＤＮＡポリメラーゼの有効な抑制剤として開示された。
【００１６】
抗ウィルス剤による長期の治療の後に、ＨＢＶの薬剤耐性変異体が生じることが認識されている。薬剤耐性は最も一般的には、ウィルスのライフサイクルで使用される酵素をコードする遺伝子の突然変異によって発生し、最も一般的にはＨＢＶ、ＤＮＡポリメーラーゼの場合においてである。近年、ＨＢＶ感染に対する薬剤の有効性が、主な薬剤とは異なる突然変異を誘起する、第２あるいは第３の抗ウィルス化合物と組合せて投与することにより、増強可能であることが証明されている。あるいは、このような組合せ療法によって、薬剤の薬物動力学、生物分布または他のパラメータを変更できる。一般に組合せ療法は、ウィルスに対して複数のストレスを同時に引き起こす。
【００１７】
米国特許Ｎｏ．５，８０８，０４０は、Ｌ−ＦＭＡＵは、ＦＴＣ、３ＴＣ、ｃａｒｂｏｖｉｒ、ａｃｙｃｌｏｖｉｒ、インターフェロン、ＡＺＴ、ＤＤＩ（２’，３’−ジデオキシイノシン）、ＤＤＣ（２’，３’−ジデオキシシチジン）、Ｌ−ＤＤＣ、Ｌ−Ｆ−ＤＤＣおよびＤ４Ｔと組合せて投与できることを開示している。
【００１８】
米国特許Ｎｏ．５，６７４，８４９は、ウィルス疾病治療のために、オリゴヌクレオチドと組合せてヌクレオシドを使用することを開示している。
【００１９】
米国特許Ｎｏ．５，６８４，０１０は、次の式の化合物とＦＴＣ、３ＴＣ、ｃａｒｂｏｖｉｒまたはインターフェロンとを組合せて、あるいは交互に投与することを含む、Ｂ型肝炎の治療方法を開示している：
【００２０】
【化２】
2011079840.tif 000003
（ここでＲは、ＮＨ２、ＯＨまたはＣｌである）。
【００２１】
ＷＯ  ９８／２３２８５は、患者に有効または予防的な量のｐｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒ（またはｆａｍｃｉｃｌｏｖｉｒなどの生理前駆物質）およびα−インターフェロンを患者に投与することより成る、人または動物の患者におけるＢ型肝炎ウィルス感染の治療または予防方法を開示している。
【００２２】
Ｂ型肝炎ウィルスが世界的な流行レベルに達し、感染した患者に重篤な、そして多くは悲惨な影響を及ぼすという事実を考慮すると、Ｂ型肝炎ウィルス感染者のための、宿主に対する毒性の低い、新しい有効な治療法を提供する強い必要性が残っている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２３】
【特許文献１】米国特許第５，５３９，１１６号明細書
【特許文献２】欧州特許出願公開第０４９４１１９号
【特許文献３】米国特許第５，８１４，６３９号明細書
【特許文献４】米国特許第５，９１４，３３１号明細書
【特許文献５】米国特許第５，５６５，４３８号明細書
【特許文献６】米国特許第５，５６７，６８８号明細書
【特許文献７】米国特許第５，５８７，３６２号明細書
【特許文献８】米国特許第５，７６７，１２２号明細書
【特許文献９】米国特許第５，６８４，０１０号明細書
【特許文献１０】米国特許第５，０７５，４４５号明細書
【特許文献１１】米国特許第５，６８４，１５３号明細書
【特許文献１２】米国特許第５，６４１，７６３号明細書
【特許文献１３】米国特許第５，１４２，０５１号明細書
【特許文献１４】国際公開第９２／１８５１７号
【特許文献１５】米国特許第５，８０８，０４０号明細書
【特許文献１６】米国特許第５，６７４，８４９号明細書
【特許文献１７】国際公開第９８／２３２８５号
【非特許文献】
【００２４】
【非特許文献１】Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、１９９２年１２月、２６８６−２６９２ページ
【非特許文献２】Ｃｈｅｎｇら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｖｏｌｕｍｅ  ２６７（２０）、１３９３８−１３９４２（１９９２）
【非特許文献３】Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，４１，２０４０−２０４６
【発明の概要】
【００２５】
したがって、本発明の目的は、相乗効果的な量の抗ＨＢＶ薬剤の組合せを投与することより成る、Ｂ型肝炎ウィルスおよび関連症状に感染したヒト患者またはその他の宿主のための新しい治療方法を提供することである。
【００２６】
発明の要約
Ｂ型肝炎活性を備えた薬剤のある組合せが相乗効果的であり、そのため有効な組合せまたは交互投与パターンで投与すると、患者に対する効果が高められることがわかっている。
【００２７】
本発明のある好ましい実施形態において、実質的に好ましくは、（−）光学異性体、あるいはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグの形式で、β−２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−オキサチオラン（ＦＴＣ）の相乗効果的な有効量を、Ｐｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒ（２−アミノ−１，９−ジヒドロ−９−［４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］−６Ｈ−プリン−６−オン、「ＰＣＶ」とも呼ばれる）とともに投与することより成る、ヒトにおけるＨＢＶ感染および関連症状の治療方法が開示されている。Ｆａｍｃｉｃｌｏｖｉｒ、すなわちＰｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒの他の生理前駆物質は、本発明のどの実施形態においてもＰｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒの代わりに使用できる。
【００２８】
本発明の別の好ましい実施形態は、実質的に好ましくは、（−）光学異性体、あるいはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはそのプロドラッグの形式で、β−２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−オキサチオラン（ＦＴＣ）の相乗効果的な有効量を、９−［２−（ホスホノメトキシ）エチル］アデニン（ＰＭＥＡ、以下ではビス−ＰＯＭ−ＰＭＥＡまたはＢＰ−ＰＭＥＡとも呼ばれる）あるいはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグとともに、任意の製薬的に許容可能な担体の形で投与することより成る、ヒトのＨＢＶ感染および関連症状の治療方法である。
【００２９】
本発明のまた別の好ましい実施形態では、２’−フルオロ−５−メチル−β−Ｌ−アルビノフラノリルウリジン（Ｌ−ＦＭＡＵ）、あるいはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグの相乗効果的な有効量を、実質的に純粋な形で、またはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグの形で、式
【００３０】
【化３】
2011079840.tif 000004
の化合物：
好ましくはβ−Ｄ−（２Ｒ，４Ｒ）−２−アミノ−９−［（２−ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］プリン（ＤＡＰＤ）と組合せて任意の製薬的に許容可能な担体の形で投与すること、または交互に投与することより成る、ヒトのＨＢＶ感染および関連症状の治療方法が開示されている。
【００３１】
本発明のさらに別の好ましい実施形態では、２’−フルオロ−５−メチル−β−Ｌ−アルビノフラノリルウリジン（Ｌ−ＦＭＡＵ）、あるいはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグの相乗効果的な有効量を、Ｐｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒ、あるいはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグとともに、任意の製薬的に許容可能な担体の形で投与することより成る、ヒトのＨＢＶ感染および関連症状の治療方法が開示されている。
【００３２】
本発明のまたさらに別の好ましい実施例では、２’−フルオロ−５−メチル−β−Ｌ−アルビノフラノリルウリジン（Ｌ−ＦＭＡＵ）、あるいはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグの相乗効果的な有効量を、９−［２−（ホスホノメトキシ）エチル］アデニン（ＰＭＥＡ）あるいはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグとともに、任意の製薬的に許容可能な担体の形で投与することより成る、ヒトのＨＢＶ感染および関連症状の治療方法が開示されている。
【００３３】
本発明の別の好ましい実施形態は、式
【００３４】
【化４】
2011079840.tif 000005
の化合物、（ここでＲはＮＨ２、ＯＨ、ＨまたはＣｌ（本明細書では集合的にＤＡＰＤ化合物と呼ばれる））、好ましくはβ−Ｄ−（２Ｒ，４Ｒ）−２−アミノ−９−［（２−ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］プリン（ＤＡＰＤ）の実質的に純粋な形で、またはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグの形の相乗効果的な有効量を、ＰＭＥＡ、あるいはその製薬的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラッグとともに、任意の製薬的に許容可能な担体の形で投与することより成る、ヒトのＨＢＶ感染および関連症状の治療方法より成る。
【００３５】
発明の詳細な説明
本明細書で使用されているように、「単離鏡像異性体」とは、約９５〜１００％、またはさらに好ましくは９７％を超えるそのヌクレオシドの単一鏡像異性体を含む、ヌクレオシド組成物を指す。
【００３６】
「実質的に純粋な形」という用語、すなわち逆鏡像異性体がないことは、ある鏡像異性体のヌクレオシド組成物が、もう一方の鏡像異性体を約５％を以上、さらに好ましくは約２％以上含んでおらず、最も好ましくは１％未満存在することを指す。
【００３７】
化合物またはその製薬的に許容可能なエステルまたは塩の相乗効果的な組合せは、抗ＨＢＶ抗体陽性およびＨＢＶ陽性症状、ＨＢＶによって引き起こされる慢性肝臓炎、肝硬変、急性肝炎、劇症肝炎、慢性持続性肝炎および疲労などの、ＨＢＶ感染および他の関連症状の予防および治療にも有用である。これらの相乗的処方は、抗ＨＢＶ抗体またはＨＢＶ抗原陽性の人々、またはＨＢＶに暴露された人々の臨床疾患を予防的に防止または遅延するためにも使用できる。
【００３８】
活性化合物は、たとえばハロゲン化酸または酸無水物などの適切なエステル化剤と反応させて、製薬的に許容可能なエステルに変換できる。化合物またはその製薬的に許容可能な誘導体は、従来方法、たとえば、適切な塩基を用いた処理によって、その製薬的に許容可能な塩に変換できる。化合物のエステルまたは塩は、たとえば加水分解によって親化合物に変換できる。
【００３９】
「相乗的組合せ」という用語は、生体内で、あるいは生体外で、本明細書で説明した方法によって測定したような相乗効果を生じる薬剤の組合せを指す。
【００４０】
Ｉ．活性化合物、およびその生理学的に許容可能な塩
明細書で開示する活性化合物は、Ｂ型肝炎に対する既知の活性を持つ、治療用ヌクレオシドあるいは環式または非環式ヌクレオシド類似体である。ヌクレオシドのある組合せがモノセラピーや他の組合せに勝る効果を与えることが明らかになっている。既知の抗ＨＢＶ薬剤の組合せすべてが、メリットをもたらすわけではなく、薬剤が相反して作用する場合が多い。
【００４１】
活性化合物は、レシピエントへの投与時に、直接または間接的に親化合物を与えることのできる誘導体として、あるいはそれ自体活性を示す誘導体として投与できる。限定しない例は、活性化合物（または「生理学的に許容可能な誘導体」と呼ばれる）の製薬的に許容可能な塩（または「生理学的に許容可能な塩」と呼ばれる）、および５’およびＮ４シトシニルまたはＮ６−アデニルアシル化（エステル化）誘導体である。ある実施例においてアシル基は、エステル基の非カルボニル部分が直鎖、分岐または環式アルキルまたは低級アルキル、メトキシメチルを含むアルコキシアルキル、ベンゾイルを含むアラルキル、フェノキシメチルなどのアリロキシアルキル、任意にハロゲンで置換されたフェニルを含むアリル、Ｃ１〜Ｃ４アルキルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシより選択されるカルボン酸エステルであるか、これに限定されるわけではないが、一、二または三リン酸エステル、トリチルまたはモノメトキシトリチル、置換ベンゾイル、トリアルキルシリル（たとえばジメチル−５−フブチルシリル）またはジフェニルメチルシリルを含めたリン酸メタンスルホニルを含む、アルキルまたはアラルキルスルホニルなどのスルホン酸エステルである。エステル中のアリル基は随意にフェニル基を含む。
【００４２】
活性化合物の、特にＮ４シトシニルまたはＮ６アデニルおよび５’−Ｏ位置における修飾は、活性種の代謝の生体有用性および速度に影響を与えることがあるため、活性種の送出を制御する。さらに修飾は、化合物の抗ウイルス活性に影響を与え、場合によっては親化合物以上に活性を増加させる。このことは、本明細書で説明する方法あるいは当業者に周知の他の方法によって、誘導体を調製し、抗ウィルス活性を試験すれば簡単に評価できる。
【００４３】
プロドラッグ
本明細書で説明する抗Ｂ型肝炎剤はいずれも、ヌクレオシドの活性、生体有用性、安定性を向上させる、あるいはヌクレオシドの特性を変化させるプロドラッグとして投与できる。多数のヒドロキシル結合プロドラッグリガンドが知られている。一般に、ヌクレオシドのヒドロキシ、一、二または三リン酸のアルキル化、アシル化または他の親油性修飾は、ヌクレオチドの安定性を向上させる。ヒドロキシルまたはリン酸塩部分の１個以上の水素を置換できる置換基の例は、アルキル、アリル、ステロイド、糖類を含む炭水化物、１，２−ジアクリルグリセロールおよびアルコールである。Ｒ．Ｊｏｎｅｓ  ａｎｄ  Ｎ．Ｂｉｓｃｈｏｆｂｅｒｇｅｒ，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２７（１９９５）１−１７に多数記載されている。これらのいずれも、望ましい効果を達成するために、開示したヌクレオシドと組合せて使用できる。
【００４４】
ヌクレオシドに、このましくはヌクレオシドの５’−ＯＨまたは（ＰＭＥＡまたはＰｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒなどの）アクリルヌクレオシド類似体のヒドロキシルに、共有結合によって組み込み可能である適切な親油性置換基を開示している、米国特許の制限しない例は、米国特許Ｎｏ．５，１４９，７９４（１９９２年９月２２日、Ｙａｔｖｉｎら）；５，１９４，６５４（１９９３年３月１６日、Ｈｏｓｔｅｔｌｅｒら）；５，２２３，２６３（１９９３年６月２３日、Ｈｏｓｔｅｔｌｅｒら）；５，２５６，６４１（１９９３年１０月２６日、Ｙａｔｖｉｎら）；５，４１１，９４７（１９９５年５月２日、Ｈｏｓｔｅｔｌｅｒら）；５，４６３，０９２（１９９５年１０月３１日、Ｈｏｓｔｅｔｌｅｒら）；５，５４３，３８９（１９９６年８月６日、Ｙａｔｖｉｎら）；５，５４３，３９０（１９９６年８月６日、Ｙａｔｖｉｎら）；５，５４３，３９１（１９９６年８月６日、Ｙａｔｖｉｎら）；５，５５４，７２８（１９９６年９月１０日、Ｂａｓａｖａら）を含む。
【００４５】
本発明の活性化合物に付加可能な親油性置換基または親油性調製物を開示している外国特許出願としては、ＷＯ８９／０２７３３、ＷＯ９０／００５５５、ＷＯ９１／１８９１４、ＷＯ９３／００９１０、ＷＯ９４／２６２７３、ＷＯ／１５１３２、ＥＰ  ０  ３５０  ２８７、ＥＰ  ９３９１７０５４．４、ＷＯ  ９１／１９７２１が挙げられる。
【００４６】
ＩＩ．活性化合物の調製
本発明の相乗的組成物で使用される治療用ヌクレオシドおよびその調製プロセスは、当業界で周知である。
【００４７】
β−２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−オキサチオラン（ＦＴＣ）およびその鏡像異性体は、米国特許Ｎｏ．５，２０４，４６６、５，７００，９３７、５，７２８，５７５および５，８２７，７２７で開示された方法によって調製できる。
【００４８】
２’−フルオロ−５−メチル−β−Ｌ−アラビノフラノリルウリジン（Ｌ−ＦＭＡＵ）は、Ｃｈｕらへの米国特許Ｎｏ．５，５６５，４３８、５，５６７，６６８および５，５８７，３６２で開示された方法によって調製できる。
【００４９】
（２Ｒ，４Ｒ）−２−アミノ−９−［（２−ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−ｌｙ］プリン（ＤＡＰＤ）を含むＤＡＰＤ化合物の調製方法は、米国特許Ｎｏ．５，７６７，１２２；５，６８４，０１０；５，４４４，０６３および５，１７９，１０４に開示されている。
【００５０】
Ｐｅｎｃｙｃｌｏｖｉｒは、米国特許Ｎｏ．５，０７５，４４５および５，６８４，１５３に開示された方法によって調製できる。
【００５１】
ＰＭＥＡは、米国特許Ｎｏ．５，６４１，７６３および５，１４２，０５１に開示された方法によって調製できる。
【００５２】
活性ヌクレオシドの一、二および三リン酸誘導体は、公表された方法によって説明されているように調製できる。一リン酸塩は、Ｉｍａｉら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，３４（６），１５４７−１５５０（１９６９年６月）の手順に従って調製できる。二リン酸塩は、Ｄａｖｉｓｓｏｎら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５２（９），１７９４−１８０１（１９８７）の手順に従って調製できる。三リン酸塩は、Ｈｏａｒｄら，Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．，８７（８），１７８５−１７８８（１９６５）の手順に従って調製できる。
【００５３】
ＩＩＩ．組合せ療法
抗ウィルス剤による長期の治療の後に、ＨＢＶの薬剤耐性変異体が生じることが認識されている。薬剤耐性は最も一般的には、ウィルスのライフサイクルで使用される酵素をコードする遺伝子の突然変異によって発生し、最も一般的にはＨＢＶ、ＤＮＡポリメーラーゼの場合においてである。近年、ＨＢＶ感染に対する薬剤の有効性が、主な薬剤とは異なる突然変異を誘起する第２あるいは第３の抗ウィルス化合物と組合せて投与することにより、延長、増強および回復可能であることが証明されている。あるいは、このような組合せ療法によって、薬剤の薬物動力学、生物分布または他のパラメータを変更できる。一般に組合せ療法は、ウィルスに対して複数のストレスを同時に引き起こす。
【実施例１】
【００５４】
試験化合物：ＤＡＰＤ、ＤＸＧ、（−）−β−ＦＴＣ、Ｌ−ＦＭＡＵ
ＤＭＶＩアッセイ対照：未処理細胞、３ＴＣ（ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ）、ｐｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒ（ＰＣＶ）
アッセイ方法の詳細は、Ｋｏｒｂａ  ａｎｄ  Ｇｅｒｉｎ，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ．１９：５５−７０（１９９２）およびＫｏｒｂａ，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ．２９：４９−５２（１９９６）に記載されている。抗ウィルス評価は、４種類の試験濃縮物それぞれにつき、６個の個別の培養物に対して実施した。ウェルはすべてプレート内に、同じ濃度で同じ時間に播種した。
【００５５】
細胞内および細胞外ＨＢＶ  ＤＮＡの両方の濃度の固有変化により、これらのＨＢＶ  ＤＮＡが未処理細胞内で生成する平均レベルよりも、ＨＢＶビリオンＤＮＡでは３倍を超えて低下することのみが、一般に、統計的に有意であると考えられる（Ｋｏｒｂａ  ａｎｄ  Ｇｅｒｉｎ，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ．１９：５５−７０，１９９２）。未処理細胞の細胞外ＨＢＶビリオンＤＮＡの通常値は、８０〜１５０ｐｇ／ｍｌ培養液の範囲である（平均は約９２ｐｇ／ｍｌ）。
【００５６】
参考のために、これらの実験のためにハイブリダイゼーション分析を実施した方法により、３ｘ１０５ウィルス粒子／ｍｌと等価の、約１．０ｐｇの細胞外ＨＢＶ  ＤＮＡ／ｍｌ培養液が生じた。
【００５７】
観測された抗ウィルス効果が細胞生存性に対する一般的効果によるものであるかどうかを評価するために、毒性分析を実施した。使用した方法は、ＨＳＶおよびＨＩＶを含む各種のウィルス−宿主系における細胞生存性のための、標準的な、広範に使用されるアッセイである、中性赤色染料の摂取であった。詳細な手順は、毒性表の解説に記載する。
【００５８】
実験パラメータ
試験化合物は、良好な包装状態で室温にて固体物質として受入れた。試験化合物は、１００ｍＭ（ＤＡＰＤ、ＦＴＣ、Ｌ−ＦＭＡＵ）または５０ｍＭ（ＤＸＧ）で１００％組織培養級のＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｏｒｐ．）に溶解させた。試験化合物は、その日の一定分量を、各チューブ内で調製し、−２０℃で保管した。処理日ごとに、試験化合物のその日の一定分量を、室温で培養液中に懸濁させ、ただちに細胞培養物に加えた。
【００５９】
抗ウィルス試験分析では、集密培養物は９６ウェル平底組織培養プレートに保持した。各薬剤処理ごとに、２つの個別の（複製）プレートを用いた。各プレートにつき、抗ウィルス剤の各希釈物によって、合計３種類の培養物が処理された（希釈液につき、６個の培養物）。培養物は、試験化合物を連続９日間投与して処理した。培養液は、毎日新しい試験化合物と交換した。細胞外（ビリオン）ＨＢＶ  ＤＮＡ濃度のみ追跡した。
【００６０】
毒性分析は、９６ウェル平底組織培養プレートで実施した。毒性分析用の細胞は培養し、抗ウィルス評価で用いたのと同じスケジュールおよび同一培養条件下で、試験化合物を用いて処理した。各化合物は、３個作成した培養物それぞれについて、４種類の濃度で試験を行った。中性赤色染料の摂取を用いて、最後の処理の２４時間後の毒性の相対濃度を決定した。吸収された染料の５１０ｎＭ（Ａ５１０）における吸光度を定量分析に使用した。値は、試験化合物と同一の９６ウェルプレートで保持された未処理細胞の、９個の個別の培養物において、Ａ５１０の平均値のパーセンテージ（±標準偏差）として表した。
【００６１】
６個の連続３倍希釈物を薬剤の各組合せに用い、８個の個別の培養物を組合せの各希釈物に使用したことを除いて、１次分析形式を使用して組合せ処理を実施した。化合物は、ＥＣ９０値に基づいて、ほぼ等しい抗ウィルス効果を与えるよう設計したモル比で混合した。これらのモル比は、一連の希釈物を通じて維持した。対応するモノセラピーは、標準一次アッセイ形式を用いた組合せ処理に並行して実施した。
【００６２】
報告目的で、組合せ処理用に報告されたＳＩ、ＥＣ５０、ＥＣ９０およびＣＣ５０の値は、組合せ混合物用に挙げた最初の化合物の値である。混合物における第２の化合物の濃度、ＳＩ、ＥＣ５０、ＥＣ９０およびＣＣ５０の値は、その特定の混合物用に設計したモル比を用いて計算できる。本報告のために実施したような組合せ分析の設計についての詳細は、ＢＥ  Ｋｏｒｂａ（１９９６）  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ．２９：４９に記載されている。
【００６３】
相乗作用、相加性または拮抗作用の分析は、ＣａｌｃｕＳｙｎＴＭプログラム（Ｂｉｏｓｏｆｔ，Ｉｎｃ．）を用いたデータの分析によって決定した。このプログラムは、ＣｈｏｕとＴａｌａｌａｙによる広く受入れられている方法を、モンテカルロ統計パッケージを用いた統計的評価と組合せて使用して、薬剤の相互作用を評価する。データは、半有効、用量効果プロット、等ボログラム、および組合せ指数［ＣＩ］プロットを含む複数の各種形式で、標準偏差とともに表示した。後者の分析では、１．０を超えるＣＩは拮抗作用を、１．０未満のＣＩは相乗効果を示す。
【００６４】
組合せ処理と関連付けられた毒性分析では、実験計画は、混合物中の毒性が高いほうの化合物の毒性、あるいは（たとえば、試験化合物ではなく、ＤＭＳＯによる毒性を引き起こさずに、培養物に添加できたＤＭＳＯの総量に関連する）ストック濃度のどちらかによって制限される。
【００６５】
抗ウィルス評価
アッセイ対照：  通常の変化内で、細胞外ＨＢＶ（ビリオン）ＤＮＡの濃度は、抗原投与期間を通じて、未処理細胞内で一定を保っていた。陽性処理対照、３ＴＣ（ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ）［（−）β，Ｌ，２’，３’−ジデオキシ−３’  チアクチジン］およびｐｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒ［ＰＣＶ］（両方ともカリフォルニア州ラブレアのＭｏｒａｖｅｃｋ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓより購入）は、使用した濃度において、ＨＢＶ  ＤＮＡ複製の著しい低下を引き起こした。これらの分析における３ＴＣの観測された活性は、以前の実験と矛盾がなかった。以前の実験では、２．２．１５細胞［ＥＣ９０］の９日間連続処理の後の未処理細胞における平均濃度を基準として、約０．１５〜０．２μＭ  ３ＴＣによって、ＨＢＶビリオンＤＮＡが９０％低下した（たとえば、Ｋｏｒｂａ  ａｎｄ  Ｂｏｙｄ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．（１９９６）  ４０：１２８２−１２８４）。これらの分析におけるＰＣＶの観測された活性は、以前報告されたよりも高かった（約０．７〜０．９ｕＭのＥＣ９０、Ｋｏｒｂａ  ａｎｄ  Ｂｏｙｄ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．（１９９６）  ４０：１２８２−１２８４）。しかし、これらの実験に使用したＰＣＶの調製は、その他の複数の別個の実験で、本明細書で報告した範囲の抗ＨＢＶ活性を一貫して生成している。
【００６６】
試験化合物：試験化合物ＤＡＰＤ、ＦＴＣ、ＤＸＧ、Ｌ−ＦＭＡＵは、２．２．１５細胞によって生成された細胞外（ビリオン）ＨＢＶ  ＤＮＡ濃度を著しく、選択的に低下させた。
【００６７】
ＤＡＰＤの抗ウィルス活性は、ＦＴＣを用いた共処理によって向上した。ＤＡＰＤの抗ウィルス活性は、最高濃度を除いて、試験を行ったすべての濃度において、３：１または１：１のモル比で相乗的であった。ＦＴＣの相対濃度が上昇するにつれて、２つの薬剤の共働効果は低下した。１：３のモル比では、２つの薬剤は拮抗的であるように見えた。
【００６８】
ＤＡＰＤおよびＰＣＶは、３種類のモル比すべてと、すべての濃度で拮抗的に見えた。
【００６９】
１：１０および１：１のモル比では、ＤＡＰＤおよびＬ−ＦＭＡＵは拮抗的に見えた。１：３のモル比（ＥＣ９０に基づく、ほぼ等力の作用強度）では、２つの薬剤の相互作用はさらに複雑であった。ＤＡＰＤおよびＬ−ＦＭＡＵは、低濃度における相加的相互作用については適度に相乗作用を示したが、濃度が高くなるにつれて、拮抗的相互作用がますます進行した。しかしその後の試験では、ＤＡＰＤがＬ−ＦＭＡＵと相乗的であることが示された。
【００７０】
Ｌ−ＦＭＡＵの抗ウィルス活性は、ＦＴＣを用いた共処理によって向上した。ＤＡＰＤおよびＦＴＣの抗ウィルス活性は、最高濃度を除く試験を行ったすべての濃度において、３：１または１０：１のモル比にて適度な相乗効果を示した。ＦＴＣの相対濃度が上昇するにつれて、２つの薬剤の共働効果は低下した。１：１のモル比では、２つの薬剤は拮抗的であるように見えた。
【００７１】
Ｌ−ＦＭＡＵの抗ウィルス活性は、ＰＣＶを用いた共処理によって向上した。ＤＡＰＤおよびＰＣＶの抗ウィルス活性は、試験を行ったすべての濃度において、３：１または１：１のモル比にて弱い相乗効果を示した。ＰＣＶの相対濃度が上昇するにつれて、２つの薬剤の共働効果は低下した。１：１０のモル比では、２つの薬剤は拮抗的であるように見えた。
【００７２】
毒性評価
３ＴＣ、ＰＣＶ、またはいずれの試験化合物についても、抗ウィルス評価に使用した濃度では、著しい毒性（未処理細胞で見られる、５０％を超える染料吸収レベルの低下）は見られなかった。
【００７３】
いずれの組合せ処理も、各種混合物中の薬剤の毒性特性を高めるようには見えなかった。一部の組合せ混合物の毒性特性は、その値が各混合物について挙げられた第１の混合物の濃度の因数として報告されているため、対応するモノセラピーより見かけ上は高かった。このことは特に、ＰＣＶを含む混合物で顕著である。しかし、混合物中の第２の化合物（たとえばＰＣＶ）に基づいて毒性特性を再計算すると、見かけ上の毒性はすべてさらに毒性の高い化合物によるものであり、これらの組合せでは毒性の向上が存在しないことが明らかになった。
【実施例２】
【００７４】
与えられた試験化合物：（−）−β−ＦＴＣ
ＤＭＶＩアッセイ対照：未処理細胞、３ＴＣ（ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ）、ｐｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒ（ＰＣＶ）
アッセイ方法の詳細は上に示した。試験化合物は、良好な包装状態で室温にて固体物質として受入れた。試験化合物は、１００ｍＭで１００％組織培養級のＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｏｒｐ．）に溶解させた。試験化合物は、その日の一定分量を、各チューブ内で調製し、−２０℃で保管した。
【００７５】
試験化合物：試験化合物ＦＴＣは、２．２．１５細胞によって生成された細胞外（ビリオン）ＨＢＶ  ＤＮＡ濃度を著しく、選択的に低下させた。
【００７６】
ＤＡＰＤの抗ウィルス活性は、ＦＴＣを用いた共処理によって向上した。組合せ療法の抗ウィルス活性は、試験を行ったすべての濃度において、相乗的であった。ＰＣＶの相対濃度が上昇するにつれて、２つの薬剤の共働効果は低下した。
【００７７】
毒性評価
３ＴＣ、ＰＣＶ、またはいずれの試験化合物についても、抗ウィルス評価に使用した濃度では、著しい毒性（未処理細胞で見られる、５０％を超える染料吸収レベルの低下）は見られなかった（表Ｓ１、Ｔ１）。
【００７８】
いずれの組合せ処理も、各種混合物中の薬剤の毒性特性を高めるようには見えなかった。一部の組合せ混合物の毒性特性は、その値が各混合物について挙げられた第１の混合物の濃度の因数として報告されているため、対応するモノセラピーより見かけ上は高かった。
【実施例３】
【００７９】
ＰＭＥＡを用いた組合せ療法
与えられた試験化合物：  ＰＭＥＡ、（−）−β−ＦＴＣ、ＤＡＰＤ、Ｌ−ＦＭＡＵ
ＤＭＶＩアッセイ対照：  未処理細胞、３ＴＣ（ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ）
アッセイ方法の詳細は上に示した。（ビス−ＰＯＭ−ＰＭＥＡを除く）試験化合物は、良好な包装状態でドライアイス上の粉末物質として受入れ、−２０℃で保管した。試験化合物ビス−ＰＯＭ−ＰＭＥＡは、１００ｍＭのＤＭＳＯ溶液として受入れた。試験化合物は、その日の一定分量を、各チューブ内で調製し、−２０℃で保管した。処理日ごとに、試験化合物のその日の一定分量を、室温で培養液中に懸濁させ、ただちに細胞培養物に加えた。
【００８０】
試験化合物（１次分析）：試験化合物はすべて、２．２．１５細胞によって生成された細胞外（ビリオン）ＨＢＶ  ＤＮＡ濃度を著しく、選択的に低下させた。しかし試験化合物（−）−β−ＦＴＣ、ＤＡＰＤおよびＬ−ＦＭＡＵの作用強度は、以前の分析で見られるよりも低かった。これは、ＤＡＰＤおよびＬ−ＦＭＡＵで最も明確であった。
【００８１】
ビス−ＰＯＭ−ＰＭＥＡ（ＢＰ−ＰＭＥＡ）＋ＦＴＣ  ＢＰ−ＰＭＥＡおよびＦＴＣの混合物は、全体的に適度な相乗的な抗ＨＢＶ活性を生じた。混合物の作用強度は、ＦＴＣの相対割合が増加するにつれて上昇した。しかし、最も好ましい全体的な相互作用は、ＦＴＣ濃度が比例して低くなる場合に生じた。同じ相対相乗度は、３０：１混合物のすべての濃度で一般に見られた。比較的相乗効果の高い相互作用は、１０：１および３：１混合物の低い濃度で見られ、３：１混合物の最高濃度で中程度から強度の拮抗性が見られた。
【００８２】
ＢＰ−ＰＭＥＡ＋ＤＡＰＤ  ＢＰ−ＰＭＥＡおよびＤＡＰＤの混合物は、比較的低濃度のＤＡＰＤでは、中程度から弱い相乗効果の抗ＨＢＶ特性を、比較的高濃度のＤＡＰＤでは、中程度から強度の拮抗性を生じた。混合物の作用強度も、ＤＡＰＤの相対割合が増加するにつれて低下した。各種混合物の低濃度において、比較的強い相乗相互作用が見られた。
【００８３】
ＢＰ−ＰＭＥＡ＋Ｌ−ＦＭＡＵ  ＢＰ−ＰＭＥＡおよびＬ−ＦＭＡＵの混合物は、比較的低濃度のＬ−ＦＭＡＵで中程度の相乗効果の抗ＨＢＶ特性を、比較的高濃度のＬ−ＦＭＡＵでは、相加的から弱い拮抗性を生じた。混合物の作用強度は、Ｌ−ＦＭＡＵの最高相対濃度（１：１モル比）で最も低かった。全体的に最も好ましい相互作用は、２つの化合物のモル比が３：１のときに見られた。各種混合物の低濃度において、比較的強い相乗相互作用が見られた。
【００８４】
毒性評価
３ＴＣ、またはいずれの試験化合物、または化合物混合物についても、抗ウィルス評価に使用した濃度では、著しい毒性（未処理細胞で見られる、５０％を超える染料吸収レベルの低下）は見られなかった。
【００８５】
いずれの化合物混合物も、薬剤の毒性特性を高めるようには見えなかった。化合物混合物で見られる毒性パターンは、モノセラピーで見られるパターンに似ているか、一致していた。
【００８６】
ＩＶ．製薬組成物の調製
ＨＢＶ感染に起因する、本明細書に記載のいずれかの疾病に罹患している人は、患者に有効量の確認された相乗的抗ＨＢＶ剤を、組合せまたは交互療法のために組合せ剤形または交互剤形により、随意に製薬的に許容可能な担体または希釈剤中で、患者に投与することによって治療できる。活性物質は、適切な経路によって、たとえば経口的、非経口的、皮内、皮下または局所的に、液体または固体形状で投与できる。
【００８７】
活性成分は、製薬的に許容可能な担体または希釈液に含まれており、生体内でのウィルス複製、特にＨＢＶ複製を抑制するために、治療される患者に有毒作用をもたらさずに、深刻な患者に治療上有効量の化合物を送達する。「抑制量」とは、たとえば、本明細書に記載したアッセイなどによって測定された抑制効果を及ぼすのに十分な活性成分の量を意味する。
【００８８】
上記の症状すべてに対する化合物の好ましい用量は、１日体重１ｋｇ当たり約１〜５０ｍｇ／ｋｇの範囲であり、好ましくは１〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲であり、さらに一般的には、１日につきレシピエントの体重１ｋｇ当たり０．１〜約１００ｍｇの範囲である。製薬的に許容可能な誘導体の有効用量範囲は、送達する親ヌクレオシドの重量に基づいて計算できる。誘導体がそれ自体活性を示す場合、有効用量は、上のように誘導体の重量を用いて、あるいは当業者に既知の他の手段によって、概算できる。
【００８９】
化合物は、これに限定されるわけではないが、ユニット投薬形当たり活性成分７〜３０００ｍｇ、好ましくは７０〜１４００ｍｇを含む、ユニットまたは適切な投薬形で都合よく投与される。経口投薬量は通常５０〜１０００ｍｇが都合よく、さらに一般的には５０〜３００ｍｇである。
【００９０】
活性成分は理想的には、約０．２〜７０μＭの、好ましくは約１．０〜１０μＭの活性成分のピークプラズマ濃度を達成するよう投与する必要がある。これはたとえば、活性成分の、随意に食塩水中の、０．１〜５％溶液の静脈注射によって行うか、活性成分の丸薬として投与してもよい。
【００９１】
薬剤組成物の活性化合物濃度は、薬剤の吸収、不活性化および排泄速度はもちろんのこと、当業者に周知の他の要因によっても変化する。投与量の値は、緩和させる症状の重症度によっても変わることに注意すべきである。さらに、個別の必要性と組成物の投与と監視を行う人の専門的判断にしたがって、特定の被検者について、時間とともに投与量計画を調整する必要があり、本明細書で示す濃度範囲は単なる好例であり、請求する組成物の範囲または実施を制限するものではないことを理解されたい。活性成分は一度に投与するか、いくつかの少量の用量に分割して、様々な時間間隔で投与してもよい。
【００９２】
活性成分を投与する好ましい方式は、経口である。経口組成物は通常、不活性希釈剤または食用担体を含む。組成物はゼラチンカプセルで包囲するか、圧縮して錠剤にしてもよい。治療用経口投与のために、活性化合物を賦形剤と組み合わせて、錠剤、トローチまたはカプセルの形で使用することもできる。製薬的に適合性の結合剤および／または補助物質を組成物の一部として含めることもできる。
【００９３】
錠剤、丸薬、カプセル、トローチなどは、以下の成分のいずれか、または同様の性質の化合物を含むことができる：微結晶性セルロース、トラガカントゴムまたはゼラチンなどの結合剤；デンプンまたはラクトースなどの賦形剤；アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌまたはコーンスターチなどの砕解剤；ステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅなどの潤滑剤；コロイド状二酸化ケイ素などの滑り剤；スクロースまたはサッカリンなどの甘味料；ペパーミント、サリチル酸メチルまたはオレンジ香料などの香料。投与ユニット形状がカプセルである場合、上の種類の物質に加えて、脂肪油などの液体担体を含むことができる。さらに、投与ユニット形状は、たとえば糖、シェラック、または腸溶性剤のコーティングなどの、投与ユニットの物理形状を変更する他の各種物質を含むことができる。
【００９４】
化合物は、エリキシル剤、懸濁液、シロップ、オブラート、チューインガムなどの成分として投与できる。シロップは活性化合物以外に、甘味料としてのスクロースと、ある保存料、染料および着色料、香料を含んでいてもよい。
【００９５】
化合物、あるいはその製薬的に許容可能な誘導体または塩も、上でさらに詳細に述べたような抗生物質、抗真菌剤、抗炎症剤、プロテアーゼ阻害剤、あるいは他のヌクレオシドまたはヌクレオシド抗ウィルス剤などの、望ましい作用を損なわない他の活性物質、または望ましい作用を補足する物質と混合することができる。非経口、皮内、皮下または局所用途に用いる溶液または懸濁液は、以下の成分を含むことができる：注射用水、食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたはその他の合成溶媒などの無菌希釈剤；ベンゾイルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミンテトラ酢酸などのキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩などの緩衝剤、塩化ナトリウムやブドウ糖などの張力調整剤。親製剤は、ガラスやプラスチック製のアンプル、使い捨て注射器または複数回投与用バイアルに入れることができる。
【００９６】
静脈注射によって投与する場合、好ましい担体は生理的食塩水またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）である。
【００９７】
好ましい実施形態では、活性化合物は、インプラントやマイクロカプセル化送達システムを含む制御放出処方などの、化合物が人体から急速に消滅するのを防ぐ担体を用いて調製する。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用できる。このような処方の調製方法は、当業者には明らかとなる。物質はまた、Ａｌｚａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから購入できる。
【００９８】
リポソーム懸濁液（ウィルス抗原に対するモノクローナル抗体によって、感染細胞を標的としたリポソームを含む）も、製薬的に許容可能な担体として好ましい。これらは、たとえば米国特許Ｎｏ．４，５２２，８１１に記載されているように、当業者に周知の方法によって調製できる。たとえば、リポソーム処方は、ステアロイルホスファチジルエタノールアミン、ステアロイルホスファチジルコリン、アラカドイルホスファチジルコリンおよびコレステロールなどの適切な脂質を無機溶媒に溶解して調製し、次に蒸発させると、容器表面上に乾燥した脂質の薄い膜が残る。そして、活性化合物またはその一リン酸、二リン酸および／または三リン酸誘導体の水溶液を容器に入れる。次に容器を手で回して、容器の側面から脂質物質を剥がし、脂質集合体を分散させて、リポソーム懸濁液を生成させる。
【００９９】
本発明は、好ましい実施例に関して記載されている。発明の変形および修正は、本発明の上述の詳細な説明によって当業者には明らかとなる。これらの変形および修正はすべて、本発明の範囲に含まれるものである。
【外国語明細書】
2011079840000001.pdf