(57)【要約】【課題】ＧＩＰ上昇抑制剤を評価又は選択する方法の提供。【解決手段】以下の工程（Ａ）〜（Ｄ）：（Ａ）ＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質が発現可能な哺乳動物由来の組織又は細胞に、被験物質を接触させる工程、（Ｂ）当該哺乳動物由来の組織又は細胞におけるＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質の発現量を測定する工程、（Ｃ）上記（Ｂ）で測定した発現量を、被験物質をＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質が発現可能な哺乳動物由来の組織又は細胞に接触させない対照群におけるＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質の発現量と比較する工程、（Ｄ）上記（Ｃ）の結果に基づいて、ＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質の発現量を減少させる被験物質をＧＩＰ上昇抑制剤として評価又は選択する工程、を含む、ＧＩＰ上昇抑制剤の評価又は選択方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の工程（Ａ）〜（Ｄ）：
（Ａ）ＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質が発現可能な哺乳動物由来の組織又は細胞に、被験物質を接触させる工程、
（Ｂ）当該哺乳動物由来の組織又は細胞におけるＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質の発現量を測定する工程、
（Ｃ）上記（Ｂ）で測定した発現量を、被験物質をＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質が発現可能な哺乳動物由来の組織又は細胞に接触させない対照群におけるＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質の発現量と比較する工程、
（Ｄ）上記（Ｃ）の結果に基づいて、ＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質の発現量を減少させる被験物質をＧＩＰ上昇抑制剤として評価又は選択する工程、
を含む、ＧＩＰ上昇抑制剤の評価又は選択方法。
【請求項２】
以下の工程（Ａ）〜（Ｄ）：
（Ａ）被験物質を非ヒト哺乳動物に投与する工程、
（Ｂ）当該非ヒト哺乳動物から採取した小腸におけるＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質の発現量を測定する工程、
（Ｃ）上記（Ｂ）で測定した発現量を、被験物質を投与しない対照群の非ヒト哺乳動物から採取した小腸におけるＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質の発現量と比較する工程、
（Ｄ）上記（Ｃ）の結果に基づいて、ＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質の発現量を減少させる被験物質をＧＩＰ上昇抑制剤として評価又は選択する工程、
を含む、ＧＩＰ上昇抑制剤の評価又は選択方法。
【請求項３】
下記一般式（１）
【化１】
2011080803.tif 000004
（式中、ＲＣＯは脂肪酸残基を示す。）
で表される化合物を有効成分とするＧＩＰ上昇抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＦＡＴ／ＣＤ３６阻害作用を指標としたＧＩＰ上昇抑制剤の評価又は選択方法、並びにＧＩＰ上昇抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＧＩＰ（ガストリックインヒビトリーポリペプチド又はグルコースディペンデントインスリノトロピックポリペプチド）は、グルカゴン・セクレチンファミリーに属する消化管ホルモンの１つである。ＧＩＰはＧＬＰ−１（グルカゴン様ペプチド１）と共にインクレチンと称され、脂質や糖質の摂食時に小腸に存在するＫ細胞より分泌され、膵β細胞においてグルコースによるインスリン分泌を促進することや、脂肪組織において糖質や脂質の取り込みを亢進することが報告されている。そのため、ＧＩＰの上昇を抑制することは肥満の予防もしくは改善に有効であると考えられる。
また、ＧＩＰは、胃酸分泌抑制作用や胃運動抑制作用を有することが知られている（非特許文献１〜３）ことから、ＧＩＰの上昇抑制は、食後の消化促進や胃もたれの改善に有効であると考えられる。
従って、ＧＩＰの上昇を抑制する物質を、高感度で短期間に評価できる指標が望まれるところである。
【０００３】
これまでの研究によって、ＧＩＰの機能を阻害する物質として、３−ブロモ−５−メチル−２−フェニルピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−オール（ＢＭＰＰ）が知られ、食後ＧＩＰの分泌を抑制するものとして、グアガム等が知られている（特許文献１、非特許文献４〜９）。また、近年では、ＧＩＰ受容体アンタゴニストである（Ｐｒｏ３）ＧＩＰが知られている。しかしながら、これらの物質は、安全性や効果の面で十分とはいえない。
【０００４】
一方、Ｋ細胞には、糖質輸送蛋白質であるＳＧＬＴ１が発現していることが報告されている（非特許文献１０）が、脂質代謝に関与する蛋白質発現については殆ど知られていない。更には、糖質や脂質によるＧＩＰ分泌機序については、未だ明らかにされていない。
脂質によるＧＩＰ分泌のためには脂質の吸収、脂質の感知、いずれかが関わっているとされているが、どちらが寄与しているのかは論争中である。近年、腸管内分泌細胞特異的に中・長鎖脂肪酸のレセプターであるＧＰＲ４０やＧＰＲ１２０が発現していることが見出され、Ｋ細胞において、このレセプターによる脂肪酸の感知がＧＩＰの分泌に必要である可能性が示唆されている（非特許文献１０〜１１）。
【０００５】
食事として摂取した脂質は、小腸内でリパーゼにより加水分解されモノアシルグリセロールと脂肪酸となった後、小腸上皮細胞に吸収される。通常その多くは小腸上皮細胞内において再度トリグリセリドに合成され、カイロミクロンとなり肝臓や脂肪組織等へ血中を運ばれる。
小腸における脂肪酸の吸収に関与しているといわれている蛋白質としてＦＡＴ／ＣＤ３６（ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｓｅ）が知られている（非特許文献１２）。ＦＡＴ／ＣＤ３６は８８−ｋＤの膜貫通型蛋白質であり、脂肪細胞においてその機能を阻害することで、脂肪酸取り込みを減少させることが報告されている（非特許文献１３）。また、白色脂肪組織においてＦＡＴ／ＣＤ３６の遺伝子発現を抑制することで脂肪の蓄積を抑制できるといわれている（特許文献２）。しかし、小腸においては、ＦＡＴ／ＣＤ３６のノックアウトマウスにおいて総脂質吸収量が変わらないとの報告もあり（非特許文献１４）、ＦＡＴ／ＣＤ３６の小腸における脂肪酸吸収への寄与度は不明である。
Ｋ細胞は管腔に直接面するｏｐｅｎ型の内分泌細胞であることから、小腸管腔の刺激を直接受けると考えられている（非特許文献１５）。現在、Ｋ細胞でのＦＡＴ／ＣＤ３６の発現の有無については未だ明らかにされていない。さらにＧＩＰ分泌とＦＡＴ／ＣＤ３６の関連についても明らかにされていない。
【０００６】
ＦＡＴ／ＣＤ３６の機能を阻害する物質としては、Ｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ  ｏｌｅａｔｅ（ＳＳＯ）、Ｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ  ｐａｌｍｉｔａｔｅ（ＳＳＰ）等が知られている。これらはＨａｒｍｏｎ  ＣＭらにより合成され（非特許文献１６）、脂肪細胞においてＦＡＴ／ＣＤ３６特異的に結合し、脂肪酸取り込みを減少させることが報告されている（非特許文献１３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第０１／８７３４１号パンフレット
【特許文献２】特開２００４−３５９６２２号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｊ．Ｃ．Ｂｒｏｗｎら、Ｃａｎａｄｉａｎ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ. １９６９，４７：１１３−１１４
【非特許文献２】Ｊ．Ｍ．Ｆａｌｋｏら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．１９７５，４１：２６０−２６５
【非特許文献３】織田敏次ら、消化管  機能と病態、１９８１年、中外医学社、Ｐ２０５−２１６
【非特許文献４】Ｇａｔｅｎｂｙ  ＳＪら、Ｄｉａｂｅｔ  Ｍｅｄ.  １９９６，１３：３５８−３６４
【非特許文献５】Ｅｌｌｉｓ  ＰＲら、Ｂｒ  Ｊ  Ｎｕｔｒ.  １９９５，７４：５３９−５５６
【非特許文献６】Ｓｉｍｏｅｓ  Ｎｕｎｅｓ  Ｃら、Ｒｅｐｒｏｄ  Ｎｕｔｒ  Ｄｅｖ.  １９９２，３２：１１−２０
【非特許文献７】Ｍｏｒｇａｎ  ＬＭら、Ｂｒ  Ｊ  Ｎｕｔｒ．  １９９０，６４：１０３−１１０
【非特許文献８】Ｒｅｑｕｅｊｏ  Ｆら、Ｄｉａｂｅｔ  Ｍｅｄ．  １９９０，７：５１５−５２０
【非特許文献９】Ｍｏｒｇａｎ  ＬＭら、Ｂｒ  Ｊ  Ｎｕｔｒ.  １９８５，５３：４６７−４７５
【非特許文献１０】Ｐａｒｋｅｒ  ＨＥら、Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ.  ２００９，５２：２８９−２９８
【非特許文献１１】Ｅｄｆａｌｋ  Ｓら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ.  ２００８，５７：２２８０−２２８７
【非特許文献１２】Ｎｉｏｔ Iら、Ｐｒｏｇ  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ.  ２００９，４８：１０１−１１５
【非特許文献１３】Ｃｏｏｒｔ ＳＬら、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ.  ２００２，２３９：２１３−２１９
【非特許文献１４】Ｇｏｕｄｒｉａａｎ  ＪＲら、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ.  ２００２，２３９：１９９−２０２
【非特許文献１５】Ｂｕｃｈａｎ  ＡＭら、Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  １９９９，２７７：Ｇ１１０３−Ｇ１１０７
【非特許文献１６】Ｈａｒｍｏｎ  ＣＭら、Ｊ  Ｍｅｍｂｒ  Ｂｉｏｌ．  １９９１，１２１：２６１−２６８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、ＧＩＰ上昇抑制剤を評価又は選択する方法を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者等は、ＧＩＰを分泌するＫ細胞にＦＡＴ／ＣＤ３６が発現していることを見出した。そして、当該ＦＡＴ／ＣＤ３６を阻害することによって血中ＧＩＰ濃度が低下すること、さらにそこからＦＡＴ／ＣＤ３６を阻害する物質は、ＧＩＰ上昇抑制剤として有用であり、また、ＦＡＴ／ＣＤ３６の発現抑制作用を指標として、ＧＩＰ上昇抑制剤を評価又は選択が可能になることを見出した。
【００１１】
すなわち、本発明は、以下の工程（Ａ）〜（Ｄ）：
（Ａ）ＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質が発現可能な哺乳動物由来の組織又は細胞に、被験物質を接触させる工程、
（Ｂ）当該哺乳動物由来の組織又は細胞におけるＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質の発現量を測定する工程、
（Ｃ）上記（Ｂ）で測定した発現量を、被験物質をＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質が発現可能な哺乳動物由来の組織又は細胞に接触させない対照群におけるＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質の発現量と比較する工程、
（Ｄ）上記（Ｃ）の結果に基づいて、ＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質の発現量を減少させる被験物質をＧＩＰ上昇抑制剤として評価又は選択する工程、
を含む、ＧＩＰ上昇抑制剤の評価又は選択方法、を提供するものである。
【００１２】
また、本発明は、以下の工程（Ａ）〜（Ｄ）：
（Ａ）被験物質を非ヒト哺乳動物に投与する工程、
（Ｂ）当該非ヒト哺乳動物から採取した小腸におけるＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質の発現量を測定する工程、
（Ｃ）上記（Ｂ）で測定した発現量を、被験物質を投与しない対照群の非ヒト哺乳動物から採取した小腸におけるＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質の発現量と比較する工程、
（Ｄ）上記（Ｃ）の結果に基づいて、ＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質の発現量を減少させる被験物質をＧＩＰ上昇抑制剤として評価又は選択する工程、
を含む、ＧＩＰ上昇抑制剤の評価又は選択方法、を提供するものである。
【００１３】
また、本発明は、下記一般式（１）
【００１４】
【化１】
2011080803.tif 000002
【００１５】
（式中、ＲＣＯは脂肪酸残基を示す。）
で表される化合物を有効成分とするＧＩＰ上昇抑制剤を提供するものである。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、各種物質の、血中ＧＩＰ上昇抑制効果をより正確に評価することができ、優れたＧＩＰ上昇抑制剤の選択が可能となる。また、本発明のＧＩＰ上昇抑制剤は、肥満の発症可能性の低下、予防もしくは改善、食後の消化促進や胃もたれの改善をするための素材として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】マウス小腸組織切片におけるＦＡＴ／ＣＤ３６の発現を示す図である。
【図２】乳剤還流開始後の血中ＧＩＰの経時曲線を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明は、ＦＡＴ／ＣＤ３６阻害作用を指標として、各種物質のＧＩＰ上昇抑制作用を評価し、又当該評価結果に基づいてＧＩＰ上昇抑制剤を選択するものである。ＦＡＴ／ＣＤ３６は、小腸上皮細胞に発現し、小腸における脂肪酸吸収に関与すると考えられている蛋白質であるが、本発明者らによって、Ｋ細胞に発現していることが新たに判明した。また、後述の実施例に示すように、ＦＡＴ／ＣＤ３６を阻害することによって血中ＧＩＰ濃度が低下したことから、ＦＡＴ／ＣＤ３６がＧＩＰ分泌に関わっていることが判明した。すなわち、ＦＡＴ／ＣＤ３６発現量と、ＧＩＰ分泌量と間には正の相関関係がある。このことから、ＦＡＴ／ＣＤ３６を阻害する物質は、ＧＩＰ上昇抑制剤として有用であり、また、各種物質のＧＩＰ上昇抑制効果を、ＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又は蛋白質の発現量を測定することで評価でき、ＧＩＰ上昇抑制剤を選択できると考えられる。
【００１９】
なお、本発明において「ＧＩＰ上昇抑制」とは、脂質及び糖質を含む食事、特に脂質を多く含む食事、そのなかでもトリアシルグリセロールを多く含む食事を摂取することにより、小腸に存在するＫ細胞から分泌されたＧＩＰの上昇を抑制することをいう。すなわち、「ＧＩＰ上昇抑制」とは、主として、食後に生じるＧＩＰ上昇を抑制することをいう。そして、本発明における「ＧＩＰ上昇抑制作用」は、Ｋ細胞からのＧＩＰ分泌を抑制することでＧＩＰ上昇を抑制するＧＩＰ分泌抑制作用、及び血中ＧＩＰ濃度を低下させることによりＧＩＰ上昇を抑制するＧＩＰ低下作用のいずれをも含む概念である。
【００２０】
本発明において、ＧＩＰ上昇抑制剤の評価又は選択は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで行うことも、ｉｎ  ｖｉｖｏで行うこともできる。
【００２１】
本発明方法をｉｎ  ｖｉｔｒｏで行う場合、用いられる哺乳動物由来の組織又は細胞は、ＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質が発現可能なものである。なかでも哺乳動物由来の小腸組織又は細胞が好ましい。
例えば、小腸組織としては哺乳動物由来の小腸培養組織が挙げられ、細胞としては、小腸培養細胞としてＣａｃｏ−２細胞、ＩＥＣ−６細胞、ＩＥＣ−１８細胞、ＳＴＣ−１細胞、ＧＬＵＴａｇ細胞、小腸以外の培養細胞として３Ｔ３−Ｌ１細胞などが挙げられる。また、哺乳類動物由来の小腸初期培養細胞であってもよい。組織又は細胞は、正常組織又は細胞の他、該当遺伝子を導入したものであってもよい。哺乳動物としては、特に限定されないが、例えば、ヒト、マウス、ラット、ウサギ等が挙げられる。
【００２２】
当該哺乳動物由来の組織又は細胞と被験物質との接触は、例えば被験物質を所定の濃度になるように予め培養液中に添加した後、組織又は細胞を培養液に載置すること、或いは、組織又は細胞が載置された培養液に、被験物質を所定の濃度になるように添加することにより行うことができる。接触後、例えば室温（２５℃）〜３７℃で通常３〜４８時間程度、好ましくは６〜２４時間程度培養するのが好ましい。
【００２３】
ここで、ＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質が発現可能な組織或いは細胞の播種時の濃度は、細胞が増殖可能な濃度であれば特に限定されない。また、被験物質の添加濃度は、０．００００１〜１０質量％（乾燥残分）とするのが好ましく、特に０．０００１〜３質量％（乾燥残分）とするのが好ましい。
【００２４】
被験物質としては、特に限定されず、例えば動植物抽出物、化合物、化学物質等を用いることができる。
【００２５】
ＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質が発現可能な組織又は細胞を培養する培地は、当該組織又は細胞を培養できる常用の培地を用いることができ、例えば１０％ＦＢＳ含有Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ等が挙げられる。細胞継代、増殖時にはこれらの培地に、血清、増殖因子、インスリン等の増殖添加剤や抗菌剤等を添加することが好ましい。
次いで、組織又は細胞を回収してＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質の発現量を測定する。
【００２６】
本発明方法をｉｎ  ｖｉｖｏで行う場合、用いられる非ヒト哺乳動物としては、性別、月齢を問わず、いかなる種類の動物でもよい。例えば、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、ネコ、イヌ又はサルを挙げることができるが、入手が容易であり、取り扱い易いラットやマウスなどのげっ歯類が好ましい。
【００２７】
当該非ヒト哺乳動物への被験物質の投与方法としては、例えば、経口投与、消化管内投与、腹腔内投与、血管内投与、皮内投与、皮下投与等が挙げられる。ＧＩＰは十二指腸および空腸のＫ細胞より分泌されることから、カニュレーション等を用い、十二指腸や空腸に直接還流させる方法、あるいは簡便さや侵襲性が低いなどの点から、経口投与する方法が好ましい。
【００２８】
被験物質の投与量は、０．０００４ｍｇ／ｇ体重以上、好ましくは０．０４〜２ｍｇ／ｇ体重である。また、投与回数は通常１回であるが、間隔をあけて数回に分けて投与してもよい。
【００２９】
次いで、被験物質の投与１〜３６０分後、好ましくは５〜１２０分後に、非ヒト哺乳動物から小腸を採取し、ＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質の発現量を測定する。小腸の採取は麻酔下もしくは安楽死直後に開腹し、胃の幽門より下部を採取する。
【００３０】
ＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子の発現量の測定は、ｍＲＮＡレベルで検出する場合は、例えば細胞からｔｏｔａｌ  ＲＮＡを抽出して、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法、ＲＮＡ分解酵素プロテクションアッセイ法、或いはノーザンブロット解析法等を利用して、ＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子から転写されたｍＲＮＡを検出定量することにより行うことができる。
【００３１】
また、ＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質の発現量の測定は、通常の免疫測定法により行うことができ、例えばＲＩＡ法、ＥＩＡ法、ＥＬＩＳＡ、バイオアッセイ法、ウェスタンブロット等により行うことができるが、ウェスタンブロットが安価・簡便で望ましい。
【００３２】
ＧＩＰ上昇抑制剤の評価は、被験物質と接触させたＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質が発現可能な哺乳動物由来の組織又は細胞におけるＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質の発現量を、被験物質に接触させない対照群（対照組織、細胞）におけるＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質発現量と比較し、その発現量が減少した場合、被験物質にはＧＩＰ上昇抑制効果があると評価でき、また、斯かる物質を選択することができる。
【００３３】
また、被験物質を投与した非ヒト哺乳動物から採取した小腸におけるＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質の発現量を、被験物質を投与しない対照群の非ヒト哺乳動物から採取した小腸におけるＦＡＴ／ＣＤ３６遺伝子又はＦＡＴ／ＣＤ３６蛋白質発現量と比較し、その発現量が減少した場合、被験物質にはＧＩＰ上昇抑制効果があると評価でき、また、斯かる物質を選択することができる。
評価に際しては、必ずしも統計学的な手法を用いる必要はないが、統計学的に有意差の有無を検定して評価することが好ましい。
このようにして評価又は選択された物質は、例えば、食後のＧＩＰを減少させ、肥満の発症可能性の低下、予防もしくは改善、消化促進や胃もたれの改善をするための医薬、食品等に有効成分として配合して使用するための素材となり得る。
【００３４】
ＦＡＴ／ＣＤ３６を阻害する物質は、後記実施例に示すように、食後血中ＧＩＰ濃度を低下させる作用を示した。従って、ＦＡＴ／ＣＤ３６阻害剤は、ＧＩＰ上昇抑制剤として使用することができ、また、ＧＩＰ上昇抑制剤を製造するために使用することができる。このとき、当該ＧＩＰ上昇抑制剤には、当該ＦＡＴ／ＣＤ３６を阻害する物質を単独で、又はこれ以外に、必要に応じて適宜選択した担体等の、配合すべき後述の対象物において許容されるものを使用してもよい。なお、当該製剤は配合すべき対象物に応じて常法により製造することができる。
【００３５】
ここで、ＦＡＴ／ＣＤ３６阻害剤は、ＦＡＴ／ＣＤ３６阻害作用を有するものであればよく、例えば、下記一般式（１）で表される化合物が挙げられる。
【００３６】
【化２】
2011080803.tif 000003
【００３７】
（式中、ＲＣＯは脂肪酸残基を示す。）
【００３８】
一般式（１）中、ＲＣＯで表される脂肪酸残基の炭素数に特に制限はないが、炭素数６〜２４、更に炭素数１４〜２４、特に炭素数１６〜２２が好ましい。脂肪酸残基としては、飽和のもの、不飽和のもの及び水酸基が置換していてもよいものが挙げられ、例えば、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリル酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、リシノール酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、アラキドン酸由来等のアシル基が挙げられる。
【００３９】
一般式（１）で表される化合物は、塩であってもよく、塩としては、例えば、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニア、有機アミン化合物等との塩が挙げられる。
【００４０】
ＦＡＴ／ＣＤ３６阻害剤の具体例としては、Ｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ  ｏｌｅａｔｅ（ＳＳＯ）、Ｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ  ｐａｌｍｉｔａｔｅ（ＳＳＰ）等が挙げられる。これらは、例えば、Ｈａｒｍｏｎ  ＣＭら、Ｊ  Ｍｅｎｂ  ｂｏｉｌ  １９９１，１２１：２６１−２６８記載の方法により得ることができる。具体的には、０．２５ ｍｍｏｌのオレイン酸もしくはパルミチン酸、０．２５ ｍｍｏｌのＮ−Ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ  ｓｏｄｉｕｍ  ｓａｌｔ、０.２７５ ｍｍｏｌのジクロロヘキシルカルボジイミドを０．５ ｍｌのＮ,Ｎ-ジメチルホルムアミド中で一晩撹拌する。その後沈殿したジシクロヘキシル尿素をフィルタレーションにより除去し、ろ液を３℃で４時間静置する。８倍量の酢酸エチルを添加し、フィルタレーションして得る。
【００４１】
そして、前述のとおり、ＧＩＰ上昇を抑制することは、肥満の発症可能性の低下、予防又は改善に有効であり、胃酸分泌の抑制及び胃運動の抑制を軽減させることから、ＦＡＴ／ＣＤ３６阻害剤は、肥満の発症可能性の低下、予防又は改善剤、消化促進剤及び胃もたれ改善剤ともなり得、当該ＧＩＰ上昇抑制剤、肥満の発症可能性の低下、予防又は改善剤、消化促進剤及び胃もたれ改善剤（以下、「ＧＩＰ上昇抑制剤等）とする）は、肥満の発症可能性の低下、予防又は改善、食後の消化促進や胃もたれを改善するための、ヒト又は動物用の、各種食品、医薬品、医薬部外品、ペットフード等の有効成分として配合して使用できる。
【００４２】
本発明のＧＩＰ上昇抑制剤等を医薬品の有効成分として用いる場合、当該医薬品は任意の投与形態で投与され得る。投与形態としては、経口、経腸、経粘膜、注射等が挙げられる。経口投与のための製剤の剤型としては、例えば錠剤、被覆錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、粉剤、徐放性製剤、懸濁液、エマルジョン剤、内服液、糖衣錠、丸剤、細粒剤、シロップ剤、エリキシル剤等が挙げられる。非経口投与としては、静脈内注射、筋肉注射剤、吸入、輸液、坐剤、吸入薬、経皮吸収剤、点眼剤、点鼻剤等が挙げられる。
【００４３】
また、斯かる製剤では、本発明のＧＩＰ上昇抑制剤等を単独で、又は他の薬学的に許容される担体と組み合わせて使用してもよい。斯かる担体としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、希釈剤、浸透圧調整剤、流動性促進剤、吸収助剤、ｐＨ調整剤、乳化剤、防腐剤、安定化剤、酸化防止剤、着色剤、紫外線吸収剤、保湿剤、増粘剤、光沢剤、活性増強剤、抗炎症剤、殺菌剤、矯味剤、矯臭剤、増量剤、界面活性剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、香料、被膜剤等が挙げられる。
【００４４】
これらの投与形態のうち、経口投与が好ましく、ＧＩＰ上昇抑制剤等を含む経口投与用製剤中のＦＡＴ／ＣＤ３６阻害剤の含有量は、通常、製剤全質量の０．００１〜１００質量％であり、０．０１〜２０質量％であるのが好ましく、０．１〜５質量％であるのがより好ましい。
【００４５】
また、本発明のＧＩＰ上昇抑制剤等を食品の有効成分として配合して用いる場合、一般食品のほか、肥満の発症可能性の低下、予防や改善、食後の消化促進や胃もたれの改善をコンセプトとし、必要に応じてその旨表示した美容食品、病者用食品、栄養機能食品又は特定保健用食品等の機能性食品に応用できる。
【００４６】
本発明のＧＩＰ上昇抑制剤等を食品の有効成分として用いる場合、当該食品の形態は、固形、半固形または液状であり得る。食品の例としては、パン類、麺類、クッキー等の菓子類、ゼリー類、乳製品、冷凍食品、インスタント食品、でんぷん加工製品、加工肉製品、その他加工食品、コーヒー飲料等の飲料、スープ類、調味料、栄養補助食品等、及びそれらの原料が挙げられる。また、上記の経口投与製剤と同様、錠剤形態、丸剤形態、カプセル形態、液剤形態、シロップ形態、粉末形態、顆粒形態等であってもよい。
【００４７】
種々の形態の食品を調製するには、ＧＩＰ上昇抑制剤等を単独で、又は他の食品材料や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、紫外線吸収剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等を適宜組み合わせて用いることができる。
【００４８】
また、ＧＩＰ上昇抑制剤等を含む食品中におけるＦＡＴ／ＣＤ３６阻害剤の含有量は、その使用形態により異なるが、通常、飲料の形態では、通常０．００１〜２０質量％であり、０．０１〜１０質量％が好ましく、０．１〜５質量％がより好ましい。また、錠剤や加工食品などの固形食品形態では、通常０．００１〜１００質量％であり、０．０１〜２０質量％が好ましく、０．１〜５質量％がより好ましい。
【００４９】
上記製剤の投与量は、患者の状態、体重、性別、年齢又はその他の要因に従って変動し得るが、経口投与の場合の成人１人当たりの１日の投与量は、通常、ＦＡＴ／ＣＤ３６阻害剤として０．１〜２０ｇが好ましい。また、上記製剤は、任意の投与計画に従って投与され得るが、１日１回〜数回に分けて投与することが好ましい。
【実施例】
【００５０】
実施例１  Ｋ細胞におけるＦＡＴ/ＣＤ３６の発現
（１）方法
Ｃ５７ＢＬ/６Ｊマウス（雄）（日本クレア）より採取した十二指腸を４％ Ｐａｒａｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ水溶液で固定後、凍結切片を作製し、免疫染色を行った。
ＧＩＰおよびＦＡＴ/ＣＤ３６における抗体を用いて二重蛍光染色を行い、Ｋ細胞におけるＦＡＴ/ＣＤ３６の発現を検討した。一次抗体として、ＧＩＰの抗体にはＲａｂｂｉｔ ａｎｔｉ−ＧＩＰ(ｐｏｒｃｉｎｅ) ｓｅｒｕｍ(Ｐｅｎｉｎｓｕｌａ製）を用いた。また、ＦＡＴ／ＣＤ３６の抗体にはＧｏａｔ ａｎｔｉ−ＣＤ３６(ｈｕｍａｎ)ＩｇＧ（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ製）を用いた。また二次抗体にはＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８ Ｄｏｎｋｅｙ Ａｎｔｉ−Ｒａｂｂｉｔ ＩｇＧ (Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ製)、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５６８ Ｄｏｎｋｅｙ Ａｎｔｉ−ｇｏａｔ ＩｇＧ,(Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ製)を用いた。常法に従い、４％ Ｐａｒａｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ水溶液において４℃にて１０分間固定し、ＰＢＳ洗浄後、一次抗体（１００倍ブロッキング液：１０％  Ｄｏｎｋｅｙ  Ｓｅｒｕｍ  ｉｎ  ＰＢＳ）において室温で３時間反応させた。再度ＰＢＳ洗浄した後、二次抗体（５００倍ブロッキング液）を室温で１時間反応させ、ＰＢＳ洗浄後、Ｐｒｏｌｏｎｇ  Ｇｏｌｄ  ａｎｔｉｆａｄｅ  ｒｅａｇｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ＤＡＰＩ （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ製）にて核染色および封入し、顕微鏡下で観察した（４０５ｎｍ、４８８ｎｍ、５６８ｎｍのレーザー使用）。
【００５１】
（２）結果
染色像を図１に示した。マウス小腸において、絨毛に存在する細胞の管腔側に連続的にＦＡＴ／ＣＤ３６の発現（赤色染色）が認められた。また、ＧＩＰ陽性であるＫ細胞(緑色染色)においてもＦＡＴ／ＣＤ３６の発現が認められた。
【００５２】
実施例２  ＦＡＴ／ＣＤ３６阻害がＧＩＰ分泌に及ぼす影響
（１）ＳＳＯの製造
０．２５ ｍｍｏｌのオレイン酸(Ｓｉｇｍａ製)、０．２５ ｍｍｏｌのＮ−Ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ  ｓｏｄｉｕｍ  ｓａｌｔ（Ｓｉｇｍａ製)、０.２７５ ｍｍｏｌのジクロロヘキシルカルボジイミド（Ｓｉｇｍａ製）を０．５ ｍｌのＮ,Ｎ-ジメチルホルムアミド（Ｓｉｇｍａ製）中で一晩撹拌した。その後、沈殿したジシクロヘキシル尿素をフィルタレーションにより除去し、濾液を３℃で４時間静置した。８倍量の酢酸エチルを添加し、フィルタレーションしてＳＳＯを得た。ＳＳＯはナトリウム塩として合成し、収量９４４．８ ｍｇ、収率７８％であった。尚、質量及びＮＭＲ分析によりＳＳＯの合成を確認した。
【００５３】
（２）方法
１７時間絶食した１０〜１１週令のＳＤ系ラット（雄）(日本クレア)を７％ウレタン+１．５％抱水クロラールで麻酔下、３７℃保温パット上で開腹し、胃幽門より十二指腸にカニューレを挿入した。試験群には３７℃の合成した２００μＭ ＳＳＯを０．２％ＢＳＡ(Ｓｉｇｍａ製)を含むＫｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ液（Ｓｉｇｍａ製）に溶解したＳＳＯ液、対照群にはＫｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ液（０．２％ＢＳＡ)を流速３ｍＬ／ｈで６０分間還流した。その後、尾静脈より初期採血を行い、引き続き、１０％トリオレイン乳剤（０．２％卵黄レシチン（和光純薬工業（株））で乳化）を流速３ｍＬ／ｈで３０分還流（脂質負荷量：１５０ｍｇ／ｒａｔ)した。還流開始から、５、１０、３０分後に尾静脈より採血を行い、血中ＧＩＰ量を測定した。血中ＧＩＰ濃度は、Ｒａｔ／Ｍｏｕｓｅ ＧＩＰ（Ｔｏｔａｌ）ＥＬＩＳＡ キット（Ｌｉｎｃｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ／Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ ｃｏ.製)を用いて測定した。
【００５４】
（３）結果
サンプル還流開始後から３０分後までの血中ＧＩＰ分泌量を図２に示した。なお、群間の統計学的有意差については、対照群に対するｔ検定を行ない、両側検定でｐ値が０．０５以下の場合には、グラフ上に＊を示した。
【００５５】
図２の結果から、ＳＳＯによりＦＡＴ／ＣＤ３６阻害処理した試験群は、対照群に比べ、乳剤還流開始後３０分値において、有意に血中ＧＩＰ濃度が低かった。この結果から、ＦＡＴ／ＣＤ３６阻害剤は、食後ＧＩＰ上昇抑制効果を有することが分かった。
ＧＩＰを分泌するＫ細胞にＦＡＴ／ＣＤ３６発現が認められたことから、Ｋ細胞のＦＡＴ／ＣＤ３６を阻害することがＧＩＰ上昇抑制に寄与していると考えられた。
【図１】
2011080803.tif 000005
【図２】
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