(57)【要約】【課題】炎症性腸疾患の治療、改善に用いることのできる安全性に優れた改善剤を提供すること。【解決手段】魚類や軟体動物から抽出されるヒアルロン酸に対して結合活性を有するプロテオグリカンであって、ＧＰＣによる重量平均分子量は、それぞれ魚類が７０万から２００万ダルトン、軟体動物が３０万から２００万ダルトンである該プロテオグリカンを有効成分として含有することを特徴とする炎症性腸疾患改善剤より、上記課題を解決する。【選択図】図１
2011219449.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＧＰＣで測定した重量平均分子量（ＭＷ）が７０万ダルトンから２００万ダルトンの魚類の軟組織から抽出されるプロテオグリカンであって、該プロテオグリカンはヒアルロン酸に対する結合活性を有しているプロテオグリカンを有効成分として含有することを特徴とする炎症性腸疾患治療剤。
【請求項２】
魚類が鮭であることを特徴とする請求項１の炎症性腸疾患治療剤。
【請求項３】
ＧＰＣで測定した重量平均分子量（ＭＷ）が３０万ダルトンから２００万ダルトンの軟体動物の軟組織から抽出されるプロテオグリカンであって、該プロテオグリカンはヒアルロン酸に対する結合活性を有しているプロテオグリカンを有効成分として含有することを特徴とする炎症性腸疾患治療剤。
【請求項４】
軟体動物がイカであることを特徴とする請求項３の炎症性腸疾患治療剤。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、ヒアルロン酸結合活性を有したプロテオグリカンの炎症性腸疾患の改善効果を目的とした治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】  近年、我国の食生活は、高タンパク、高脂肪の欧米型に激変し、一方、精神的ストレスが増加した社会生活に変貌してきているが、それらを背景として腸の病気が急増している。なかでも、潰瘍性大腸炎やクーロン病等の炎症性腸疾患は、元々欧米に多い病気であるが、わが国でも、両疾患とも毎年１０％程度の割合で増加し、その患者数は、現在合計約２０万人と激増している。【０００３】  これら潰瘍病性大腸炎やクーロン病の原因については、細菌による感染説、免疫異常説などが有力視されているが未だ解明されていない。これらの疾患の治療には、現在、薬物療法として、サリチル酸製剤やステロイド薬や免疫抑制薬を使用している。
しかしながら、これらの薬剤には副作用があり、副作用に注意をしながら慎重に使用しなければいけないという問題があった。また、症状の増悪に精神的ストレスが大きく、抗不安薬や精神安定剤などを処方して不安を取り除くことも必要であった。【０００４】  また、薬剤を経直腸投与剤として、座剤、注腸剤で治療する試みも行われている（例えば特許文献１）。しかしながら、根本的な治療ができておらず、未だ不十分な状態が続いている。
【特許文献１】特開２００５−０８９３０６
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】  本発明は、このような炎症性疾患の治療、改善に用いることができる極めて安全性の高い、副作用の心配なく使用できる治療剤または健康食品として提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】  本発明者は、鋭意研究した結果、ＧＰＣで測定した重量平均分子量（ＭＷ）が７０万ダルトンから２００万ダルトンの魚類の軟組織から抽出されるプロテオグリカンであって、該プロテオグリカンはヒアルロン酸に対する結合活性を有しているプロテオグリカンを有効成分として含有することを特徴とする炎症性腸疾患治療剤に関する。当該炎症性腸疾患には、潰瘍性大腸炎、クーロン病等が含まれる。【０００７】  更に、本発明は、請求項２記載の通り魚類が鮭であることを特徴とする炎症性腸疾患治療剤に関する。【０００８】  また、更に、本発明は、ＧＰＣで測定した重量平均分子量（ＭＷ）が３０万ダルトンから２００万ダルトンの軟体動物の軟組織から抽出されるプロテオグリカンであって、該プロテオグリカンにはヒアルロン酸に対する結合活性を有しているプロテオグリカンを有効成分として含有することを特徴とする炎症性腸疾患治療剤に関する。【０００９】  また、更に、本発明は、請求項４記載の通り軟体動物がイカであることを特徴とする炎症性腸疾患治療剤に関する。【００１０】  プロテオグリカンとは、タンパク質と多糖の結合したものであり、コアタンパク質にグルコサミングルカン鎖が共有結合された複合体の総称である。
このプロテオグリカンはヒアルロン酸やコラーゲンと共に、生体の皮膚、軟骨、血管等に広く分布し、特に軟骨を構成する重要成分であり、生命維持に大きな役割を果たしている。【００１１】  近年、鮭等の軟骨から安価に大量抽出する技術が確立されたが、例えば、酢酸で精製する方法はその工程でプロテオグリカンの一部分解が起こり、また、ヒアルロン酸と結合活性を有する部位を持つプロテオグリカンは得られていなかった。【００１２】  そこで、例えば、特許第４２１９９７４号により、希アルカリ溶液で抽出することにより、本発明のヒアルロン酸と結合活性を有する部位を持ったプロテオグリカンを製造することができる。【００１３】  本発明のヒアルロン酸に対する結合活性を有するプロテオグリカンの好ましい分子量の範囲はＧＰＣによる重量平均分子量で、魚類の場合は、７０万ダルトンから２００万ダルトン、軟体動物の場合は３０万ダルトンから２００万ダルトンである。重量平均分子量が魚類の場合は７０万ガルトン以下、軟体動物の場合は３０万ダルトン以下では、それぞれのプロテオグリカンのヒアルロン酸に対する結合活性部位が欠落したものとなる。
また、両者とも２００万ダルトン以上のものは、製造により高純度のものを得るのが難しく好ましくない。【００１４】  本発明のヒアルロン酸に対する結合活性を有するプロテオグリカンが保水性、血色改善効果はあることが知られているが、炎症性腸疾患治療の効果の作用については不明である。
（１）プロテオグリカンのヒアルロン酸と結合活性を有する部位は、リンクプロテインと呼ばれるタンパク質と推定されるが、この部位は、特異構造を持っており、生体のヒアルロン酸と一層強く結合して、巨大会合体を形成する。
（２）該プロテオグリカンは、魚類から抽出精製した重量平均分子量が７０万から２００万ダルトン、及び軟体動物から抽出した重量平均分子量が３０万から２００万ダルトンの分子量を持っており、これらの分子量サイズを持つことにより免疫細胞に応答しやすいこと。
（３）また、免疫、炎症に関与しているサイトカイン（細胞から分泌されるタンパク質であって、細胞に情報伝達をする役割を果たしている）が抱き込まれている可能性がある。
これらに作用によって、免疫バランスを正常化させ潰瘍性大腸炎やクーロン病などの炎症性腸疾患治療に効果を発現しているものと推定される。
【発明の効果】
【００１５】  本発明によれば、魚類から抽出精製した重量平均分子量が７０万から２００万ダルトン、及び軟体動物から抽出した重量平均分子量が３０万から２００万ダルトンのヒアルロン酸と結合活性を有するプロテオグリカンは、潰瘍性大大腸炎やクーロン病などの炎症性腸疾患治療という新規医薬用途に提供できる。【００１６】  従来の治療薬のような、副作用もなく、極めて安全性が高く、炎症性腸疾患の患者はむろん、健常者でも健康食品として摂取可能である。【００１７】  また、軽症から中程度の患者用として副作用の少ない炎症性腸疾患治療薬５−アミノサリチル酸等の治療薬との併用も可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】本発明に使用されるプロテオグリカンに関する参考例１のＥＬＩＳＡ法による測定結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】  以下、本発明の実施の形態について説明する。
本発明の有効成分のヒアルロン酸と結合活性を有するプロテオグリカンは、魚類や軟体動物の軟組織、具体的には、鮭、サメ、エイ、イカ、タコ等の軟組織を公知の方法により精製されて製造されても良い。例えば、特許第４２１９９７４号記載の希アルカリを用いる方法で製造することができる。
【００２０】  本発明において、プロテオグリカンの製造に利用される上記生物の軟組織とは、魚類の場合、例えば、鮭の頭部の鼻軟骨、軟体動物の場合、例えばイカの顎軟骨や表皮、肝臓などの内臓外皮があげられる。
【００２１】  本発明の分子量の測定は高速液体クロマトグラフィーのＧＰＣ（ゲルパーミエーションクロマトグラフィー）モードで測定した。
【００２２】  また、本発明のプロテオグリカンのヒアルロン酸との結合活性の有無については、ＥＬＩＳＡ法を用いた。ＥＬＩＳＡ法は、特定タンパク質の検出に用いられる免疫科学的方法であり、感度が良く特異性が高い。動物に異種タンパクが進入すると、そのタンパク質と特異的に結合するタンパク質である「抗原抗体複合体」が出来る。その抗原抗体複合体に対して測定しやすい酵素を共有結合で付けた第二の抗体を結合させ、その酵素を定量することで、目的のタンパク量を測定する原理を用いる。
【００２３】  治療剤として本発明の有効成分であるヒアルロン酸と結合活性を有するプロテオグリカンを使用する場合は、顆粒、カプセル、錠剤または水溶液として製剤化することができる。例えば、錠剤にする場合は、添加剤として例えば、でんぷん、ブドウ糖、乳糖、果糖、炭酸マグネシウム、メチルセルロース、ＣＭＣ、アラビアゴム、ポリエチレングリコール等を用いる公知方法で経口摂取可能な形にすることが出来る。
【００２４】  また、サプリメント等の健康食品の形態とすることも可能で、薬理効果のある機能食品として摂取しても良い。
【００２５】  本発明の有効成分であるヒアルロン酸と結合活性を有するプロテオグリカンを炎症性腸疾患の改善剤として使用する場合、投与量は、投与する患者の症状、年齢、性別、体重等により異なり、経口投与では、本発明の有効成分であるヒアルロン酸と結合活性を有するプロテオグリカンを好ましくは１〜３００ｍｇ／日程度である。
【参考例１】
【００２６】  特許第４２１９９７４号記載の方法より鮭の鼻軟骨から抽出したプロテオグリカンをＧＰＣにより重量平均分子量を測定した結果、１２０万ダルトンであった。
【００２７】このプロテオグリカン（ＰＧ）の所定濃度の溶液を調整し、ＥＬＩＳＡ法試験により、ヒアルロン酸に対する結合活性を評価した。各種ＰＧ溶液を調整後、ＥＬＩＳＡプレートの表面にヒアルロン酸を固定し、これに上記の調整液を添加し１時間反応させた後、洗浄した。ついで、抗コンドロイチン硫酸抗体液を添加し、更に１時間反応させた後、再洗浄した。次いで、ＨＲＰ標識２次抗体溶液を添加し、更に１時間反応させた後洗浄した。発色基質溶液を添加し、３０分反応させた後、反応停止し、吸光度を測定した。その結果、図１に示すように、本発明のプロテオグリカン（ＰＧ）には、ヒアルロン酸に対する結合活性を示す発色基質溶液の発色が見られた。一方、従来の公知技術（特開２００２−６９０９７）により鮭の軟骨より酢酸で抽出精製されたプロテオグリカンは、同じくＥＬＩＳ法試験により、ヒアルロン酸に対する結合活性を測定したところ、活性を示さない結果となった。
【実施例１】
【００２８】  参考例１で示す鮭の鼻軟骨から調整したプロテオグリカン（ＧＰＣによる重量平均分子量１２０万ダルトン）の粉末を７０ｍｇ秤量し、ゼラチン製のカプセルに充填し、カプセル剤をつくった。
【実施例２】
【００２９】  参考例１と同様な製法で作製した鮭の鼻軟骨から調整したヒアルロン酸に対する結合活性を有するプロテオグリカン（ＧＰＣによる重量平均１２０万ダルトン）の粉末１００ｍｇと乳糖、バインダーを混合して、該プロテオグリカン含有の０．５ｇ／個の錠剤をつくった。
【実施例３】
【００３０】  スルメイカの顎軟骨を原料として参考例１と同様な方法で調整したヒアルロン酸に対する結合活性を有するプロテオグリカン（ＧＰＣによる重量平均分子量３０万ダルトン）の粉末１００ｍｇをヒドロキシプロピルメチルセルロース製のカプセルに充填し、カプセル剤をつくった。
【試験例１】
【００３１】１５歳の女性、クーロン病で、罹病期間２年。治療薬として、ペンタサ（登録商標：５−アミノサリチル酸製剤）とガスター（登録商標：活性ビタミン注射剤）、ラックビー（登録商標：整腸剤）、酸化マグネシウム（下剤）、ラキソベロン（登録商標：下剤）を併用して治療していたが、肛門の周囲膿症の手術をしたり、膿を抜く手術したが病状完治せず。本発明の参考例１に示すプロテオグリカンのカプセル剤をプロテオグリカンの有効成分７０ｍｇ／回で、２回／日投与で、１年間服用継続した。本発明のプロテオグリカン服用中は一度も膿症の手術は無くなり、整腸剤の併用のみで、病状現われなくなった。食欲も旺盛になり体重が回復した。本発明のプロテオグリカン投与による副作用は全く無かった。
【試験例２】
【００３２】３１歳の女性、潰瘍性大腸炎で、罹病期間６年。治療薬として、ペンタサ（登録商標：５−アミノサリチル酸製剤）とイムラン（登録商標：免疫抑制剤）、プレドニン（登録商標：副腎皮質ステロイド剤）を併用して治療していた。時々血便もあった。実施例１と同じく本発明の参考例１に示す製法で調整したヒアルロン酸に対する結合活性を有する１２０万ダルトンのプロテオグリカン含有の錠剤を、プロテオグリカン有効成分１００ｍｇ／回、２回／日投与、ペンタサのみ併用で１年７ヶ月服用継続した。食事制限して一時体重が５３ｋｇにまで減少していたが、正常値（６５ｋｇ）まで回復した。試験例１と同様に本発明のプロテオグリカン投与による副作用は全く無かった。
【図１】
2011219449.tif 000003