(57)【要約】【課題】製剤中のジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体を、溶出前処理で使用する試薬に影響されず、かつ簡便に行うことができる定量方法を確立する。 【解決手段】ジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体を含有する製剤を、界面活性剤とアルキルアミン誘導体を含有する抽出溶媒で溶解させ、抽出成分を乾燥後、ｄ−トリフルオロ酢酸を含有するｄ６−アセトンで溶解して、１Ｈ−ＮＭＲを測定することにより定量する。 【選択図】図６
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
トリフルオロ酢酸−ｄを含有するアセトン−ｄ６溶媒を用いて１Ｈ−ＮＭＲを測定することによる、アルキルアミン誘導体の存在下での、ジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体の定量方法。
【請求項２】
１Ｈ−ＮＭＲを用いた、製剤中のジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体の定量方法であって、
（工程１）定量する製剤を、アルキルアミン誘導体含有の抽出溶媒で抽出する工程
（工程２）工程１で得られた試料溶液を乾燥する工程
（工程３）工程２で得られた固体を、トリフルオロ酢酸−ｄを含有するアセトン−ｄ６に溶解する工程
（工程４）工程３で得られた試料溶液の１Ｈ−ＮＭＲを測定する工程
を含む方法。
【請求項３】
アルキルアミン誘導体が、ジエチルアミン又はトリエチルアミンである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
アルキルアミン誘導体含有の抽出溶媒に、更に界面活性剤が含まれている、請求項２又は請求項３に記載の方法。
【請求項５】
界面活性剤が、ポリソルベート８０またはドデシル硫酸ナトリウムである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
薬物含有の製剤を用い、ジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体と薬物を同時に定量する、請求項１から５の何れか1項に記載の方法。
【請求項７】
ジエチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体が、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥである、請求項１から６の何れか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
製剤中に用いられているジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体を、１Ｈ−ＮＭＲを用いて定量する方法に関する。また、ジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体の定量と同時に、製剤中に含まれる薬物を定量する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
医薬品の製剤においては、防湿や苦味マスクの目的で、種々の機能性添加剤が使用される。その中でもジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体は、その取り扱いやすさから汎用されている。
【０００３】
製剤中のジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体を定量する方法としては、製剤を溶解させた後にゲルろ過カラムクロマトグラフィーを用いて高分子量成分を定量する方法が知られている（非特許文献１）。また、もう一つの方法として、窒素含有率から定量する方法（非特許文献２）が知られている。
【０００４】
一方、１Ｈ−ＮＭＲを用いた有機化合物の定量方法はいくつか知られている（特許文献１−５）が、ジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体の定量方法に関しては、知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平１１−１７４１３９公報
【特許文献２】特開２００３−１８３３９２公報
【特許文献３】特開２００５−０６９９４１公報
【特許文献４】特開２００５−３３７９５８公報
【特許文献５】特開２００６−０５８２７１公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, Volume 49, Issue 2, 20 February 2009, Pages 240-246
【非特許文献２】医薬品添加物規格２００３  ７１ページ「アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ」
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明における課題は、製剤中のジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体薬物を、溶解処理で使用する試薬に影響されず、簡便に行うことができる定量方法を確立することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
製剤中のジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体を定量する方法を鋭意研究した結果、ジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体を含有する製剤を、アルキルアミン誘導体を含有する抽出溶媒に溶解させ、得られた溶液を乾燥後、内部標準物質およびトリフルオロ酢酸−ｄを含有するアセトン−ｄ６に溶解して、１Ｈ−ＮＭＲを測定することにより、ジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体を簡便に定量することができることを見出し、本発明を完成させた。
【０００９】
すなわち本発明は、以下の発明を包含する。
［１］トリフルオロ酢酸−ｄを含有するアセトン−ｄ６溶媒を用いて１Ｈ−ＮＭＲを測定することによる、アルキルアミン誘導体の存在下での、ジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体の定量方法。
【００１０】
［２］１Ｈ−ＮＭＲを用いた、製剤中のジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体の定量方法であって、
（工程１）定量する製剤を、アルキルアミン誘導体含有の抽出溶媒で抽出する工程
（工程２）工程１で得られた試料溶液を乾燥する工程
（工程３）工程２で得られた固体を、トリフルオロ酢酸−ｄを含有するアセトン−ｄ６に溶解する工程
（工程４）工程３で得られた試料溶液の１Ｈ−ＮＭＲを測定する工程
を含む方法。
【００１１】
［３］アルキルアミン誘導体が、ジエチルアミン又はトリエチルアミンである、［２］に記載の方法。
【００１２】
［４］アルキルアミン誘導体含有の抽出溶媒に、更に界面活性剤が含まれている、［２］又は［３］に記載の方法。
【００１３】
［５］界面活性剤が、ポリソルベート８０またはドデシル硫酸ナトリウムである、［４］に記載の方法。
【００１４】
［６］薬物含有の製剤を用い、ジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体と薬物を同時に定量する、［１］から［５］の何れか1項に記載の方法。
【００１５】
［７］ジエチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体が、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥである、［１］から［６］の何れか１項に記載の方法
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、製剤中のジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体を、簡便な方法で正確に定量できる。ジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体を単独に定量することもでき、また、製剤中に含有する薬物を同時に定量することもできる。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本明細書中で用いられる「ジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体」とは、ジメチルアミノエチルメタクリレート・メチルメタクリレートコポリマーや、ジメチルアミノエチルメタクリレート・ブチルメタクリレート・メチルメタクリレートコポリマーなどの共重合体を意味し、好ましくはアミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ(商品名：オイドラギットＥ１００又はオイドラギットＥ ＰＯ)を意味する。
【００１８】
本明細書中で用いられる「界面活性剤」とは、錠剤や顆粒剤等の製剤を溶解する際に通常用いられる界面活性剤を意味し、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）やポリソルベート８０などが挙げられる。
【００１９】
本明細書中で用いられる「アルキルアミン誘導体」とは、錠剤や顆粒剤、散剤等の製剤を溶解する際に通常用いられるアルキルアミンを意味し、ジエチルアミン、トリエチルアミン等が挙げられ、好ましくはジエチルアミンである。
【００２０】
本明細書中で用いられる「トリフルオロ酢酸−ｄを含有するアセトン−ｄ６」における、トリフルオロ酢酸−dの含有量は、試料中のアミン成分を全て重水素イオン化するのに十分な量であれば、特に限定はない。好ましくは、１ｖ／ｖ％から８ｖ／ｖ％、更に好ましくは２ｖ／ｖ％から４ｖ／ｖ％の含有量のものを用いることができる。
【００２１】
本発明の方法は、以下の工程からなる。
（工程１）定量する製剤を、アルキルアミン誘導体が含有する抽出溶媒に溶解する工程
（工程２）工程１で得られた溶液を乾燥する工程
（工程３）工程２で得られた固体を、内部標準物質を含有するトリフルオロ酢酸−ｄを含有するアセトン−ｄ６に溶解する工程
（工程４）工程３で得られた試料溶液の１Ｈ−ＮＭＲを測定する工程
【００２２】
工程１は、測定すべき製剤を溶解させ、抽出溶媒(水、エタノール、又はそれらの混合液)に不溶な成分を除去する前処理工程である。すなわち、アルキルアミン誘導体を添加した抽出溶媒を測定対象に添加し、攪拌して抽出する。本前処理においては、可溶性成分を十分に溶解させるため、アルキルアミン誘導体含有の抽出溶媒を用いる。本工程において、アルキルアミン誘導体は、ジエチルアミンまたはトリエチルアミンが好ましい。抽出溶媒中の濃度は０．０１ｖ／ｖ％から１ｖ／ｖ％、更に好ましくは０．０５ｖ／ｖ％から０．５ｖ／ｖ％である。
【００２３】
また、難溶性成分などの場合、界面活性剤を加えてもよい。本工程において界面活性剤を用いる場合には、界面活性剤はポリソルベート８０またはドデシル硫酸ナトリウムを用いることが好ましい。抽出溶媒中の濃度は０％から３ｗ／ｖ％、更に好ましくは０％から１．５ｗ／ｖ％である。
【００２４】
工程２は、工程１で得られた溶液を乾燥する工程である。加熱することなく減圧下で乾燥するのが好ましく、また試料の分解を抑制する観点から、凍結乾燥または３０℃以下で遠心エバポレーターを用いて乾燥する方法がより好ましい。更に好ましくは、２５℃以下で遠心エバポレーターを用いて乾燥する方法である。
【００２５】
工程３は、工程２で得られた固体を、トリフルオロ酢酸−ｄを含有するアセトン−ｄ６に溶解する工程である。これらの重水素化試薬は、通常の１Ｈ−ＮＭＲ用のものでよい。１Ｈ−ＮＭＲを測定するに当たり、試料溶液は０．３から０．７ｍＬ用いる。したがって、アセトン−ｄ６も０．７から０．８ｍＬ程度使用する。
本工程においては、固体試料を十分に溶解させるという観点から、トリフルオロ酢酸−ｄをあらかじめアセトン−ｄ６に溶解して用いることが好ましい。
【００２６】
また、重水素化溶媒には予め内部標準物質を添加しておく。内部標準物質としては１〜８ｐｐｍ以外の範囲に特徴的なシグナルを有する物質が使用できる。好ましくは１,４−ビス−トリメチルシリルベンゼン−ｄ４(１,４−ＢＴＭＳＢ−ｄ４)、２,２−ジメチル−２−シラペンタン−５−スルホン酸ナトリウム−ｄ６（ＤＳＳ−ｄ６）、２,６−ジクロロベンズアルデヒドなどが挙げられ、さらに好ましくは、２，６−ジクロロベンズアルデヒドである。
【００２７】
工程４は、工程３で得られた試料溶液を用いて、１Ｈ−ＮＭＲを測定する工程である。測定は、通常の１Ｈ−ＮＭＲ測定装置を用いて行えば良い。本発明の方法で１Ｈ−ＮＭＲを測定すると、ジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体のジメチルアミノ基は、3.1ｐｐｍ付近に、他のピークと分離して観察される。そのピークの積分値と、内部標準物質の積分値（２,６−ジクロロベンズアルデヒドの場合は、１０．４５ｐｐｍ付近のアルデヒド由来ピークを用いる）の比（以下、積分比という）を用いることにより、ジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体の定量が可能となる。また、薬物の場合は、他の成分由来のピークと分離する薬物由来ピークを同定し、そのピークの積分値を用いて、同様の操作を行い定量する。
【００２８】
なお、定量に際しては、あらかじめ、質量の分かっているジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体や薬物を用いて検量線を作製しておく必要がある。その質量と上述の積分比から検量線を作成しておく。その検量線から、ジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体質量および薬物の、測定試料中の質量を導く。また、定量の正確性の観点から、検量線作製に際しても、工程１から工程３に示した前処理を行って試料溶液を作製後、検量線作製のための測定を行うのが好ましい。薬物に関しては、その分子量から、物質量に換算することも容易である。
【００２９】
製剤中のジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体を定量する方法として、製剤を溶解させた後にゲルろ過カラムクロマトグラフィーを用いて高分子量成分を定量する方法が知られているが、ゲルろ過カラムクロマトグラフィーを用いる方法は、一定範囲の分子量を有する高分子を定量するのみである。そのため、他に高分子成分を含有する製剤においては正確な定量値が得られない虞があり、また共重合体が分解等起こして低分子化してしまうと、同様に正確な定量値は得られない虞がある。また、窒素含有率から定量する方法が知られているが、窒素含有率から定量する方法では、測定方法が煩雑であり、また原薬その他成分に窒素が含有していると正確に定量ができない虞がある。
【００３０】
本発明の方法は、試料の調製も簡便であり、ジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体の分子量に左右されず、また配合する薬物の定量も正確に行うことができる。それらを同時に定量することも可能である。さらに、試料の調製の際、アルキルアミン誘導体や界面活性剤を用いて製剤を溶解させるが、それらの前処理で用いる試薬にも影響されず、定量することができる。
【実施例】
【００３１】
以下、本発明について実施例を示して説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００３２】
［参考例１］溶媒及び酸の検討
各種重水素化溶媒と二種の重水素化酸(重塩酸、トリフルオロ酢酸−ｄ)を用いて、ジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体が均一に溶解するのか、及びジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体のジメチルアミノ基が他のピークと分離して観測されるかを確認した。
【００３３】
（重クロロホルム）
アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ（商品名：オイドラギットＥ
ＰＯ、デグサ製、 ５ｍｇ）を重クロロホルム７５０μＬに溶解してアミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ重クロロホルム溶液とし、１Ｈ−ＮＭＲを測定した。また、ポリソルベート８０（５
ｍｇ）を重クロロホルム（７５０μＬ）に溶解してポリソルベート８０重クロロホルム溶液とし、１Ｈ−ＮＭＲを測定したところ、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥの定量対象シグナル（２．２８ｐｐｍ）と、ポリソルベート８０のシグナル（２．３２ｐｐｍ）が重なり、定量不可能であった。
【００３４】
アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ重クロロホルム溶液に重塩酸（７μＬ）を添加したところ、白濁し、透明のゲル状物質が内壁に付着した。
アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ重クロロホルム溶液にトリフルオロ酢酸−ｄ（７μＬ）を添加したところ、白濁し、透明のゲル状物質が内壁に付着した。
【００３５】
（重メタノール）
アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ（商品名：オイドラギットＥ
ＰＯ、デグサ製、 ５ｍｇ）を重メタノール（７５０μＬ）に溶解してアミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ重メタノール溶液とし、１Ｈ−ＮＭＲを測定した。また、ポリソルベート８０
（５ ｍｇ）を重メタノール（７５０μＬ）に溶解してポリソルベート８０重メタノール溶液とし、１Ｈ−ＮＭＲを測定したところ、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥの定量対象シグナル（２．３４ｐｐｍ）と、ポリソルベート８０のシグナル（２．３３ｐｐｍ）が重なり、定量不可能であった。
【００３６】
アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ重メタノール溶液（７５０μＬ）に重塩酸（７μＬ）を添加して１Ｈ−ＮＭＲを測定した。また、ポリソルベート８０重メタノール溶液（７５０μＬ）に重塩酸（７μＬ）を添加して１Ｈ−ＮＭＲを測定し、ジエチルアミンの重メタノール溶液（７５０μＬ）に重塩酸（７μＬ）を添加して１Ｈ−ＮＭＲを測定したところ、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥの定量対象シグナル（３．０４ｐｐｍ）と、ジエチルアミンのシグナル（３．０３ｐｐｍ）が重なり、定量不可能であった。
【００３７】
アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ重メタノール溶液（３５０μＬ）とポリソルベート８０重メタノール溶液（３５０μＬ）を混和し、トリフルオロ酢酸−ｄ（７μＬ）及びジエチルアミン（７μＬ）を添加して1H-NMRを測定したところ、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥの定量対象シグナル(２．８４ｐｐｍ)と、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥのシグナル(２．９２ｐｐｍ)が接近し、定量不可能であった。 
【００３８】
（重水）
アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ（商品名：オイドラギットＥ
ＰＯ、デグサ製、 ５ｍｇ）に重水（７５０μＬ） を加えたところ、溶解しなかったため測定不可能であった。この液に重塩酸（７μＬ）を添加したところ溶解した。しかし、さらにジエチルアミン（７μＬ）を添加して１Ｈ−ＮＭＲを測定したところ、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥの定量対象ピーク（２．８８ｐｐｍ）とジエチルアミンのピーク（２．９３ｐｐｍ）が重なり、定量不可能であった。
【００３９】
アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ（商品名：オイドラギットＥ
ＰＯ、デグサ製、５ ｍｇ） に重水３５０μＬとトリフルオロ酢酸−ｄ（７μＬ）を加えてアミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ重水溶液とした。また、ポリソルベート８０
（５ ｍｇ）に重水３５０μＬとトリフルオロ酢酸−ｄ（７μＬ）を加えてポリソルベート８０重水溶液とした。アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ重水溶液（３５０μＬ）とポリソルベート８０重水溶液（３５０μＬ）を混和し、ジエチルアミン（７μＬ）を添加して１Ｈ−ＮＭＲを測定したところ、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥの定量対象シグナル(２．８３ｐｐｍ)と、ジエチルアミンのシグナル(２．８９ｐｐｍ)が重なり、定量不可能であった。
【００４０】
（ジメチルスルホキシド−ｄ６）
アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ（商品名：オイドライギットＥ
ＰＯ、デグサ製、 ５ｍｇ） にジメチルスルホキシド−ｄ６ （７５０μＬ） を加えたところ、溶解しなかった。
【００４１】
アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ（商品名：オイドラギットＥ
ＰＯ、デグサ製、 ５ｍｇ） にジメチルスルホキシド（７５０μＬ）を加え、さらに塩酸（７μＬ）を添加したところ、溶解しなかった。
【００４２】
アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ（商品名：オイドラギットＥ
ＰＯ、デグサ製、 ５ｍｇ） にジメチルスルホキシド（７５０μＬ）を加え、さらにトリフルオロ酢酸（７μＬ）を添加したところ、溶解しなかった。
【００４３】
（重トルエン）
アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ（商品名：オイドラギットＥ
ＰＯ、デグサ製、 ５ｍｇ）を重トルエン（７５０μＬ） に溶解し、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ重トルエン溶液とし、１Ｈ−ＮＭＲを測定した。また、ポリソルベート８０
（５ ｍｇ）を重トルエン７５０μＬ に溶解し、ポリソルベート８０重トルエン溶液とし、１Ｈ−ＮＭＲを測定したところ、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥの定量対象シグナル（２．１４ｐｐｍ）と、ポリソルベート８０のシグナル（２．１４ｐｐｍ）が重なり、定量不可能であった。
【００４４】
アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ（商品名：オイドラギットＥ
ＰＯ、デグサ製、 ５ｍｇ） にトルエン（７５０μＬ）を加え、さらに塩酸（７μＬ）を添加したところ、溶解しなかった。
【００４５】
アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ（商品名：オイドラギットＥ
ＰＯ、デグサ製、 ５ｍｇ） にトルエン（７５０μＬ）を加え、さらにトリフルオロ酢酸（７μＬ）を添加したところ、溶解しなかった。
【００４６】
（重アセトニトリル）
アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ（商品名：オイドラギットＥ
ＰＯ、デグサ製、 ５ｍｇ）を重アセトニトリル（３５０μＬ）に溶解し、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ重アセトニトリル溶液とした。また、ポリソルベート８０
（５ ｍｇ）を重アセトニトリル（３５０μＬ）に溶解し、ポリソルベート８０重アセトニトリル溶液とした。アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ重アセトニトリル溶液（３５０μＬ）とポリソルベート８０重アセトニトリル溶液（３５０μＬ）を混和し、さらにジエチルアミン（７μＬ）を添加し、１Ｈ−ＮＭＲを測定したところ、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥの定量対象ピーク（２．６２ｐｐｍ）とジエチルアミンのピーク（２．５５ｐｐｍ）が接近し、定量不可能であった。
【００４７】
また、この液にさらに重塩酸を添加したところ、白濁し、透明のゲル状物質が内壁に付着した。
アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ重アセトニトリル溶液（３５０μＬ）と、ポリソルベート８０重アセトニトリル溶液（３５０μＬ）を混和し、トリフルオロ酢酸−ｄ（７μＬ）及びジエチルアミン（７μＬ）を添加し、１Ｈ−ＮＭＲを測定したところ、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥの定量対象ピーク（２．８９ｐｐｍ）とジエチルアミンのピーク（２．９８ｐｐｍ）が接近し、定量不可能であった。
【００４８】
（重アセトン）
アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ（商品名：オイドラギットＥ
ＰＯ、デグサ製、 ５ｍｇ）を重アセトン（３５０μＬ）に溶解し、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ重アセトン溶液とした。また、ポリソルベート８０ （５ｍｇ）を重アセトン（３５０μＬ）に溶解し、ポリソルベート８０重アセトン溶液とした。アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ重アセトン溶液（３５０μＬ）とポリソルベート８０重アセトン溶液（３５０μＬ）を混和し、さらにジエチルアミン（７μＬ）を添加し、１Ｈ−ＮＭＲを測定したところ、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥの定量対象ピーク（２．２７ｐｐｍ）とポリソルベート８０のピーク（２．３１ｐｐｍ）が重なり、定量不可能であった。
【００４９】
また、この液にさらに重塩酸（７μＬ）を添加したところ、白濁し、透明のゲル状物質が内壁に付着した。
【００５０】
アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ重アセトン溶液（３５０μＬ）と、ポリソルベート８０重アセトン溶液（３５０μＬ）を混和し、トリフルオロ酢酸−ｄ（７μＬ）及びジエチルアミン（７μＬ）を添加し、１Ｈ−ＮＭＲを測定したところ、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥの定量対象ピーク（３．１１ｐｐｍ）と重なるピークは皆無であり、定量可能であると判断した。
【表１】
2011089811.tif 000003
【００５１】
［参考例２］検量線の作成
アセトン−ｄ６とトリフルオロ酢酸−ｄを用いて、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ及び測定対象の薬物（ケトプロフェンおよびインドメタシン）の検量線を作製した。
２,６−ジクロロベンズアルデヒドを採取し、アセトン−ｄ６ に溶解し、トリフルオロ酢酸−ｄを加えて混和し、更にアセトン−ｄ６を加えて正確に体積を一定値とした液を内部標準物質添加アセトン−
ｄ ６溶液とした。また、測定時においては、内部標準物質(２、６−ジクロロベンズアルデヒド)のアルデヒドのプロトンを「１」とし、これを基準とした際の測定対象のピークとの積分比を「積分比の実測値」とした。
【００５２】
ところで、検量線を作成した際の内部標準物質採取量と、試料の測定日が異なる場合、試料から得られた積分比を補正しなくてはならない。検量線作成が２回以上にわたる場合、内部標準物質の採取量の違いを考慮して、補正する必要がある。補正後の積分比（補正積分比）は、第１回目の内部標準物質採取量を「基準内部標準物質採取量」、それ以後の内部標準物質採取量を「内部標準物質採取量」とし、式１から算出される。
【００５３】
（式１）
補正積分比＝積分比の実測値×内部標準物質採取量(ｍｇ)÷基準内部標準物質採取量(ｍｇ)
【００５４】
（アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ）
ポリソルベート８０
（１．３５ ｇ） にエタノール(９９．５)を加えて正確に１０００
ｍＬ とした液に、ジエチルアミン （１ ｍＬ） を添加し、抽出溶媒とした。
また、２,６−ジクロロベンズアルデヒド（５０．１９ ｍｇ）を採取し、アセトン−ｄ６ （４ ｍＬ）を加えて溶かし、トリフルオロ酢酸−ｄ（５０
μＬ）を加えて混和し、更にアセトン−ｄ６を加えて正確に５ ｍＬとした液を内部標準物質添加アセトン−ｄ６溶液とした。
【００５５】
アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ（商品名：オイドラギットＥ
ＰＯ、デグサ製、 ６７．１４ ｍｇ、２２５．１３ ｍｇ又は２７０．３７ ｍｇ）に、それぞれ抽出溶媒８０ ｍＬ を加え、室温にて３０分間攪拌後、超音波で３分間放置し、さらに室温にて１０分間攪拌した。この液に更に抽出溶媒を加えて正確に１００
ｍＬ とした後、遠心分離（毎分３０００回転、３分）し、得られた上澄みをメンブランフィルター（口径０．４５ μｍ、水系/非水系、２５Ｐ、ジーエルサイエンス製）でろ過し、ろ液を正確に２
ｍＬ 採取して遠心エバポレーター（２０℃、２時間）にて減圧下溶媒留去した。得られた残渣に内部標準物質添加アセトン−ｄ６溶液を７５０ μＬ加えて溶解し、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ標準液１から３を作製した（含量の少ないものから１とする））。
【００５６】
アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ標準液１から３の１Ｈ−ＮＭＲを測定し、内部標準物質（２,６−ジクロロベンズアルデヒド）由来の１０．４５ｐｐｍ付近のピークの積分値に対する、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ由来の３．１ｐｐｍ付近のピークの積分値の比を、「積分比の実測値」とした。なお、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ標準液1及び３については、内部標準物質採取量が５０．０８ｍｇの際の内部標準物質添加アセトン− ｄ ６溶液を用いているため、式１にしたがって補正した値を検量線作製に用いた。
【００５７】
測定の結果、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ標準液１から３の積分比は、それぞれ０．６３、２．１６、２．５８となった。ｘ軸を各標準液中のアミノアルキルメタクリレートコポリマーＥの質量（採取量÷５０）、ｙ軸を積分比として、これらの数値を用いて、回帰分析の手法により、原点を通る直線を作成した。その結果、相関係数１．００、傾き０．４７８、
の直線が得られた（図１）。 
【００５８】
（ケトプロフェン）
ポリソルベート８０
（１．３５ ｇ） にエタノール(９９．５)を加えて正確に１０００
ｍＬ とした液に、ジエチルアミン （1 ｍＬ） を添加し、抽出溶媒とした。
また、２,６−ジクロロベンズアルデヒド（５０．１９ ｍｇ）を採取し、アセトン−ｄ６ （４ ｍＬ）を加えて溶かし、トリフルオロ酢酸−ｄ（５０
μＬ）を加えて混和し、更にアセトン−ｄ６を加えて正確に５ ｍＬとした液を内部標準物質添加アセトン− ｄ ６溶液とした。
【００５９】
ケトプロフェン
（６０．１０ ｍｇ、７４．７５ ｍｇ又は９０．００ ｍｇ）に抽出溶媒８０ ｍＬ を加え、室温にて３０分間攪拌後、超音波で３分間放置し、さらに室温にて１０分間攪拌した。この液に更に抽出溶媒を加えて正確に１００
ｍＬ とした後、遠心分離（毎分３０００回転、３分）し、得られた上澄みをメンブランフィルター（口径０．４５ μｍ、水系/非水系、２５Ｐ、ジーエルサイエンス製）でろ過し、ろ液を正確に２
ｍＬ 採取して遠心エバポレーター（２０℃、２時間）にて減圧下溶媒留去した。得られた残渣に内部標準物質添加アセトン−ｄ６溶液を７５０ μＬ加えて溶解し、ケトプロフェン標準液１から３（含量の少ないものから１とする）とした。
【００６０】
ケトプロフェン標準液１から３の１Ｈ−ＮＭＲを測定し、内部標準物質（２,６−ジクロロベンズアルデヒド）由来の１０．４５ｐｐｍ付近のピークの積分値に対する、ケトプロフェン由来の７．７８ｐｐｍから７．８１ｐｐｍ付近に現れるマルチプレットの積分値の比を、「積分比の実測値」とした。また、ケトプロフェン標準液１及び３については、内部標準物質採取量が５０．０８ｍｇの際の内部標準物質添加アセトン−
ｄ ６溶液を用いているため、式１にしたがって補正した値を検量線作製に用いた。
【００６１】
測定の結果、ケトプロフェン標準液１から３の積分比は、それぞれ０．３４、０．４２、０．５２となった。ｘ軸を各標準液中のケトプロフェンの物質量（採取量÷５０÷分子量×１０００、単位＝１０−３ｍｍｏｌ）、ｙ軸を積分比として、これらの数値を用いて、回帰分析の手法により、原点を通る直線を作成した。その結果、相関係数１．００、傾き０．０７２５
の直線が得られた（図２）。
【００６２】
（インドメタシン）
ポリソルベート８０
（１．３５ ｇ） にエタノール（９９．５）を加えて正確に１０００ ｍＬ とした液に、ジエチルアミン （１ ｍＬ） を添加し、抽出溶媒とした。
【００６３】
また、２,６−ジクロロベンズアルデヒド（５０．０５ ｍｇ）を採取し、アセトン−ｄ６ （４ ｍＬ）を加えて溶かし、トリフルオロ酢酸−ｄ（５０
μＬ）を加えて混和し、更にアセトン−ｄ６を加えて正確に（５ ｍＬ）とした液を内部標準物質添加アセトン− ｄ ６溶液とした。
【００６４】
インドメタシン
（６０．２５ ｍｇ、７５．３０ ｍｇ又は９０．０９ ｍｇ）に抽出溶媒８０ ｍＬ を加え、室温にて３０分間攪拌後、超音波で３分間放置し、更に室温にて１０分間攪拌した。この液に抽出溶媒を加えて正確に１００
ｍＬ とした後、遠心分離（毎分３０００回転、３分）し、得られた上澄みをメンブランフィルター（口径０．４５ μｍ、水系/非水系、２５Ｐ、ジーエルサイエンス製）でろ過し、ろ液を正確に２
ｍＬ 採取して遠心エバポレーター（２０℃、２時間）にて溶媒留去した。得られた残渣に内部標準物質添加アセトン−ｄ６溶液を７５０ μＬ加えて溶解し、インドメタシン標準液１から３（含量の少ないものから１とする）とした。
【００６５】
インドメタシン標準液１から３の１Ｈ−ＮＭＲを測定し、内部標準物質（２,６−ジクロロベンズアルデヒド）由来の１０．４５ｐｐｍ付近のピークの積分値に対する、インドメタシン由来の７．１ｐｐｍ付近のピークの積分値の比を、「積分比の実測値」とした。また、インドメタシン標準液１及び３については、内部標準物質採取量が５０．０８ｍｇの際の内部標準物質添加アセトンｄ−６溶液を用いているため、式１にしたがって補正した値を検量線作製に用いた。
【００６６】
測定の結果、インドメタシン標準液１から３の積分比は、それぞれ０．０９、０．１１、０．１３となった。ｘ軸を各標準液中のインドメタシンの物質量（採取量÷５０÷分子量×１０００、単位＝１０−３ｍｍｏｌ）、ｙ軸を積分比として、これらの数値を用いて、回帰分析の手法により、原点を通る直線を作成した。その結果、相関係数１．００、傾き０．０２６１の直線が得られた（図３）。
【００６７】
［参考例３］製剤の作製
表２の処方に準じて各成分を秤量し、メノウで粉砕混合して散剤とした。作製した散剤について１Ｈ−ＮＭＲにて定量した。
【表２】
2011089811.tif 000004
【００６８】
（定量値の計算方法）
１．補正積分比の算出
試料の１Ｈ−ＮＭＲを測定し、内部標準物質（２,６−ジクロロベンズアルデヒド）由来の１０．４５ｐｐｍ付近のピークの積分値に対する、測定対象由来のピークの積分値の比を、「積分比の実測値」とした。
【００６９】
試料測定と検量線作成では、異なる内部標準物質添加アセトンｄ−６溶液を用いる場合が多い。そのような場合には、それぞれの内部標準物質採取量から換算して、積分比を補正する必要がある。検量線作成時（複数回にわたる場合は、その初回時）の内部標準物質採取量を「基準内部標準物質採取量」、試料測定の際の内部標準物質採取量を「内部標準物質採取量」とした場合、補正した積分比は上述の式１から算出される。
式１により得られた補正積分比を用い、以下の計算手法により定量値を得た。
【００７０】
２．測定対象の定量
（アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ）
下記式２にしたがって計算した。
【００７１】
(式２)
アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥの定量値（ｍｇ）＝補正積分比÷傾き×換算係数
【００７２】
ここで、傾きは検量線（参考例２）から求められる。また、換算係数は、定量に用いた溶液量に対する抽出工程で作製した全溶液量の比率であり、１Ｈ−ＮＭＲの積分値から全量に換算するために用いる。例えば、全量１００ｍＬのうち２ｍＬを用いて定量を行った場合には、換算係数は５０である。
【００７３】
（各薬物成分）
下記式３にしたがって計算した。
【００７４】
（式３）
定量値（ｍｇ）＝補正積分比÷傾き÷１０００×分子量×換算係数
【００７５】
ここで、傾きは検量線（参考例２）から求められるものであり、換算係数は式２と同様である。なお、参考例２において、薬物成分の検量線は、横軸を物質量(１０−３ｍｍｏｌ)で作製したため、ｍｇでの定量値に換算するため、１０００で除し、分子量を乗じている。
【実施例１】
【００７６】
処方１（ケトプロフェン散剤）における定量
ポリソルベート８０
（１．３５ ｇ） にエタノール（９９．５）を加えて正確に１０００ ｍＬ とした液に、ジエチルアミン １ ｍＬ を添加し、抽出溶媒とした。
また、２,６−ジクロロベンズアルデヒド（５０．０５ｍｇ）を採取し、アセトン−ｄ６ （４ ｍＬ）を加えて溶かし、トリフルオロ酢酸−ｄ（５０
μＬ）を加えて混和し、さらにアセトン−ｄ６を加えて正確に５ ｍＬとした液を内部標準物質添加アセトン−ｄ６溶液とした。
【００７７】
処方１の散剤の全量に抽出溶媒８０
ｍＬ を加え、室温にて３０分間攪拌後、超音波で３分間放置し、さらに室温にて１０分間攪拌した。この液に抽出溶媒を加えて正確に１００ ｍＬ とした後、遠心分離（毎分３０００回転、３分）し、得られた上澄みをメンブランフィルター（口径０．４５
μｍ、水系/非水系、２５Ｐ、ジーエルサイエンス製）でろ過し、ろ液を正確に２
mL 採取して遠心エバポレーター（２０℃、２時間）にて減圧下溶媒留去した。得られた残渣に内部標準物質添加アセトン−ｄ６溶液を７５０ μＬ加えて溶解し、１Ｈ−ＮＭＲにて定量を行った。積分値の実測値は、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ由来の３．１ｐｐｍ付近のピークが２．１６、ケトプロフェン由来の７．７８ｐｐｍから７．８１ｐｐｍ付近に現れるマルチプレットが０．４３であった。式２及び式３に従って定量値を算出した結果、ケトプロフェンの定量値は７５．４１ｍｇ、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥの定量値は２２４．９０ｍｇであった。
【００７８】
なお、本実施例においては、以下の数値を用いた。
換算係数＝５０、傾き＝０．４７８（アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ）および０．０７２５（ケトプロフェン）、
基準内部標準物質採取量＝５０．１９ ｍｇ、ケトプロフェン分子量＝２５４．３０
【実施例２】
【００７９】
処方２（インドメタシン散剤）における定量
実施例１と同様の方法で処方２について１Ｈ−ＮＭＲを測定した。積分値の実測値は、ジアミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ由来の３．１ｐｐｍ付近のピークが１．０８、インドメタシン由来の７．１ｐｐｍ付近のピークが０．１１であった。式２及び式３に従って定量値を算出した結果、インドメタシンの定量値は７５．４０ｍｇ、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥの定量値は１１２．９７ｍｇであった。何れも散剤作成時に秤量した値に対してほぼ１００％の定量値が得られた。なお、本実施例においては、以下の数値を用いた。
【００８０】
換算係数＝５０、傾き＝０．４７８（ジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体）および０．０２６１（インドメタシン）、
基準内部標準物質採取量＝５０．１９ ｍｇ、インドメタシン分子量＝３５７．８０
【表３】
2011089811.tif 000005
【００８１】
以上のように、本発明の方法で定量を行った場合、製剤作成時に秤量した各成分の値に対して、ほぼ１００％の定量値が得られた。このことは、製剤中でのアミノアルキルメタクリレートコポリマーＥと主薬の２成分同時定量が可能であることを示している（表３）。
【００８２】
トリフルオロ酢酸−ｄとアセトン−ｄ６を用いた場合には、ジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体のジメチルアミノ基のピークが、他のピークから明確に分離し、定量が可能となった。酸として重塩酸（ＤＣｌ）を用いた場合や、他の重水素化溶媒を用いた場合には、試料が溶解されなかったり、ジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体のジメチルアミノ基のピークが、他のピーク（特にジエチルアミン等由来のもの）と分離せず、正確な定量はできなかった。
【図面の簡単な説明】
【００８３】
【図１】アセトン−ｄ６溶媒中の、アミノアルキルメタクリレートコポリマーE（商品名：オイドラギットＥ ＰＯ、デグサ製）の１Ｈ−ＮＭＲ（ポリソルベート８０含む）
【図２】アセトン−ｄ６とトリフルオロ酢酸−ｄを用いた場合の、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ（商品名：オイドラギットＥＰＯ、デグサ製）の１Ｈ−ＮＭＲ（ポリソルベート８０含む）
【図３】アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ標準液を用いて作製した検量線
【図４】ケトプロフェン標準液を用いて作製した検量線
【図５】イブプロフェン標準液を用いて作製した検量線
【図６】実施例１における１Ｈ−ＮＭＲ
【図７】実施例２における１Ｈ−ＮＭＲ
【産業上の利用可能性】
【００８４】
本発明は、製剤中のジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体を簡便に定量することができ、医薬製剤分析において有用な技術である。したがって、産業上利用可能である。
【図１】
2011089811.tif 000006
【図２】
2011089811.tif 000007
【図３】
2011089811.tif 000008
【図４】
2011089811.tif 000009
【図５】
2011089811.tif 000010
【図６】
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【図７】
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