(57)【要約】【課題】  高分子量多量体の割合が高いＶＷＦを含有する血漿タンパク質濃縮物の使用。【解決手段】  高分子量多量体の割合が高いＶＷＦを含有する血漿タンパク質濃縮物の使用は、出血性素質を抑制し、ならびに、外科的処置、特に体外循環、を必要としている、後天性フォン・ウィルブランド症候群、好ましくは心血管系疾患、における、手術前、手術中および手術後の失血を減少する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
出血性素質を抑制し、ならびに、外科的処置を必要とする後天性フォン・ウィルブランド症候群、特に心血管系疾患における、手術前、手術中および手術後の失血を減少するための医薬組成物を製造するために、高分子量多量体の割合が高いＶＷＦを含有する血漿タンパク質濃縮物を使用する方法。
【請求項２】
患者が、軽度、中程度および重篤な大動脈弁狭窄症（それぞれ、０〜２５ｍｍＨｇ、２５〜５０ｍｍＨｇおよび＞５０ｍｍＨｇ）に起因する、非生理的な高い剪断速度を生じる臨床症状、ならびに、心室中隔欠損症、動脈管開存症または他の著しい圧勾配を有する先天性心血管系疾患を有するものから選ばれる、請求項１の方法。
【請求項３】
患者が以下：
・ＶＷＦ：ＲＣｏ／ＶＷＦ：Ａｇ比が＜０.８、もしくは好ましくは＜０.７、もしくはさらに好ましくは＜０.６、または
・ＶＷＦ：ＣＢ／ＶＷＦ−Ａｇ比が＜０.８、もしくは好ましくは＜０.７、もしくはさらに好ましくは＜０.６、または
・コラーゲン／ＡＤＰカートリッジを用いたＰＦＡ−１００(R)（Dade Behring Diagnostics）で上昇した閉鎖時間が、＞１００秒超（３.２％クエン酸加血液）、もしくは、＞１２０秒超（３.８％クエン酸加血液）、または、
・ゲルを基礎とした多量体の分析で、ＶＷＦ−ＨＭＷＭの割合が８０％未満、もしくは好ましくは７０％未満、もしくはさらに好ましくは６０％未満
を有する者から選ばれる、請求項１の方法。
【請求項４】
医薬組成物がボーラス注入または連続注入に適している、請求項１または２の方法。
【請求項５】
医薬組成物が、さらに、ＶＷＦ：ＲＣｏのトルフレベルが７０％を超える、もしくは１００％を超える、もしくは１５０％を超える投与量である、継続した反復投与に、または、トラフレベルが７０％を超える、もしくは１００％を超える、もしくは１５０％を超えるような継続した連続注入に適切である、請求項４の方法。
【請求項６】
体外循環に関連したＶＷＦの質および量の欠陥または欠失を克服するための、体外循環を使用した処置または介入を必要とする疾患のための、請求項１の使用の方法。
【請求項７】
医薬組成物がボーラス注入または連続注入に適している、請求項６の方法。
【請求項８】
医薬組成物が、さらに、ＶＷＦ：ＲＣｏのトルフレベルが７０％を超える、もしくは１００％を超える、もしくは１５０％を超える投与量である、継続した反復投与に適している、請求項６の方法。
【請求項９】
プロタミンがへパリンの効果を中和するために用いられる症状における、請求項１の使用の方法。
【請求項１０】
医薬組成物がボーラス注入または連続注入に適している、請求項９の方法。
【請求項１１】
医薬組成物が、さらに、ＶＷＦ：ＲＣｏのトルフレベルが７０％を超える、もしくは１００％を超える、もしくは１５０％を超える継続した反復投与に適切である、請求項１０の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高分子量多量体の割合が高いＶＷＦを含有する血漿タンパク質濃縮物の使用に関し、出血性素質を抑制し、ならびに、外科的処置、特に体外循環を必要としている、後天性フォン・ウィルブランド症候群、好ましくは心血管系疾患における、手術前、手術中および手術後の失血を減少させるものである。
【０００２】
本発明は、後天性フォン・ウィルブランド症候群（ＶＷＳ）、特に大動脈弁狭窄症（aortic stenosis）のような心血管系疾患でみられるような、ＶＷＳ２Ａ型、における、ま
たは体外循環（ＥＣＣ）の間におこる、出血性素質を抑制するために、高分子量多量体の割合が高いフォン・ウィルブランド因子（ＶＷＦ）を含有する血漿タンパク質濃縮物を、予防的および治療目的で使用するものである。適切なＶＷＦ濃縮物の予防的使用により、多くの出血性エピソード（bleeding episodes）、および、体外循環（ＥＣＣ）を伴う心
臓外科手術のような外科的処置中の失血を最小限にすることができる。
【背景技術】
【０００３】
ヒトは、生理的条件下では血液を液体の状態のままで維持し、一方、血管の損傷に対しては、血管壁の欠損部位を密封して対処できる備えを有する、巧妙な止血システムを進化させてきた。この密閉過程の最初の段階は、第一次止血と呼ばれており、ＶＷＦが介在する血管損傷部位への血小板の結合を含んでいる。この反応は、血管の創傷端への血小板の付着、付着した血小板の内皮下露出面への展開、貯蔵されている血小板成分の分泌、および、大きな血小板凝集塊の形成、を含んでいる。第二次止血と呼ばれる過程の中では、この血小板の膜は、血液凝固因子の吸着と濃縮化のために利用できるようになり、それによりフィブリン網の形成がもたらされ、その網形成なしには脆弱である、血小板による血栓を、強化する。
【０００４】
ＶＷＦは第一次止血の最初の段階で必須の役割を担っている。ＶＷＦは、無傷の内皮には結合しないが、露出した内皮下表面にはそのコラーゲン受容体を介して接着する。この接着によりＶＷＦがほぐれ（unfolding）、そのＡ１ドメインが血小板ＧＰ１ｂと結合で
きるような構造をとるようになる。ＶＷＦがＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａのような他の血小板受容体とも相互作用をすることができるがゆえに、および、血小板が、例えば狭窄した血管において生じる高い剪断速度（shear rate）の条件下で、特異的なコラーゲン受容体のような他の受容体を介して内皮下へ接着することもできるがゆえに、このＶＷＦ−Ａ１と血小板ＧＰＩｂとの相互作用は、血小板を傷害内皮に繋ぎ止めるためには必須である。血小板がＧＰＩｂを介してＶＷＦ−Ａ１に結合した後、このＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体は血小板表面に露出され、フィブリノゲンと結合し、そして、それに続く血小板凝集を導く。
【０００５】
ＶＷＦは内皮細胞および巨核球において、２２個のアミノ酸のシグナルペプチド、７４１個のアミノ酸のプロペプチド、および、２０５０個のアミノ酸の成熟型ＶＷＦ、から成る、２８１３個のアミノ酸長を有するプレプロペプチドとして産生される。
【０００６】
小胞体でシグナルペプチドが切断された後、２個のＶＷＦ単量体の間にＣ末端のジスルフィド架橋が形成される。続いて分泌経路を輸送されている間に、１２個のＮ−結合型および１０個のＯ−結合型の糖側鎖が付加される。さらに重要なことに、７４１個のアミノ酸長のプロペプチドが後期ゴルジ装置において酵素フリンにより切断除去され、ＶＷＦ二量体がＮ末端のジスルフィド架橋を介して重合化する。このプロペプチドおよびＶＷＦの高分子量多量体（ＶＷＦ−ＨＭＷＭ）は内皮細胞のワイベル−パラード（Weibel-Pallade
）小体または血小板のα顆粒で貯蔵される。
【０００７】
一旦血漿中に分泌されれば、タンパク質分解酵素であるＡＤＡＭＴＳ１３が、ＶＷＦをそのＡ１ドメイン内において切断する。血漿ＶＷＦは、そのために、５００ｋＤａの単一二量体から、１０,０００ｋＤａを超える分子量の２０個を超える二量体から成っている
多量体に至る範囲の、全ての範囲の多量体から構成されている。このＶＷＦ−ＨＭＷＭはそれにより最も強力な止血活性を有し、これはリストセチン補因子活性（ＶＷＦ：ＲＣｏ）として測定することができる。ＶＷＦ：ＲＣｏ／ＶＷＦ抗原の割合が高くなればそれだけ、高分子量多量体の相対量は多くなる。このＶＷＦ−ＨＭＷＭ含量の測定の代替法は、ＶＷＦ−ＨＭＷＭが失われたときに同時に減少するＶＷＦ抗原に対するＶＷＦコラーゲン結合アッセイ（ＶＷＦ：ＣＢ）の割合、もしくは、血小板機能アナライザーＰＦＡ−１００における封鎖時間（closure time）の上昇の測定、またはゲルを基礎とする多量体の分析である。
【０００８】
ＶＷＦにおける欠陥は、フォン・ウィルブランド疾患（ＶＷＤ）の原因であり、多少にかかわらず、明瞭な出血性表現型（bleeding phenotype）により特徴づけられる。ＶＷＤ３型は、ＶＷＦが完全に欠失している最も重篤な型であり、ＶＷＦ１型は、ＶＷＦの質的な欠失に関し、その表現型は非常に軽いものでる。ＶＷＤ２型は、ＶＷＦの質的な欠陥に関し、ＶＷＤ３型と同じ程度に重篤である。ＶＷＤ２型には多くの亜型があり、その中のあるものは、高分子量多量体の欠失または減少に関連している。フォン・ウィルブランド疾患２ａ型（ＶＷＳ−２ａ）は、中間体および大型の多量体の両方の欠失により特徴づけられる。ＶＷＳ−２Ｂは最も高い分子量の多量体の欠失により特徴づけられる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、出血性素質をもたらす、特に心血管系疾患（例えば、大動脈弁狭窄症）での、後天性ＶＷＳにおいて、高分子量多量体の割合が高いＶＷＦを含有する血漿タンパク質濃縮物の投与により、失血が減少または抑制できるという、驚くべき発見に関している。
【００１０】
出血の発生と心疾患との関連性に関しては、過去において、いくつもの刊行物で議論されてきている。
【００１１】
・Heyde (N Engl J Med. 1958; 259:196) は、大動脈弁狭窄症と胃腸管（ＧＩ）出血の発生との説明できない関連性について記載している（Heyde症候群）。
・何人かの著者は、心臓外科手術に伴う出血を治療するための、デスモプレッシンの使用について、一致しない結果を発表している。Ozkisacik等（J Cardiovasc Surg. 2001; 42:741-7）は、デスモプレッシンで治療された心肺バイパス術を受けた患者群では、デスモプレッシン投与群でＶＷＦレベルは上昇したものの、失血についても輸血数についても対照群と変わらなかったことを見出している。デスモプレッシンは、血圧の僅かな上昇または一過性の低下のいずれかを生じさせ、同時に心拍数の補償性の増加をもたらすために、心臓外科手術、および、冠動脈不全患者の治療のためには推奨されない。
・Warkentin等（Lancet, 1992; 340:35-7）は、狭窄した動脈弁が、ＶＷＳ−２ａの欠
陥と均等である、最も大きいＶＷＦ多量体の可逆的欠失をもたらす可能性を提案している。
・Pareti等（Circulation, 2000, 102:1290-1295）は、大動脈弁狭窄症の正常化が、ＶＷＦ−ＨＭＷＭの同時的増加を伴った、剪断誘導性の血小板凝集の増加をもたらすことを見出した。Paretiは、出血傾向を有する心臓病患者において、ＶＷＦ−ＨＭＷＭのパターンが、出血傾向を有さない同患者と同じように異常ではあるが、そうしたデータにもかかわらず、大型のＶＷＦ多量体の血漿レベルを正常化するために、適切なＶＷＦ濃縮物を用いて、心臓病患者での出血性合併症を治療することが有利であると、そうした治療の効果
を証明するデータを示すことなしに、結論している。
・Veyradier等（Thromb. Haemost. 2000, 84:175-82）は、後天性ＶＷＳの原因の一つ
として、大動脈弁狭窄症に起因する高い剪断ストレスを挙げている。治療の代替法としては、弁置換が示唆されている。デスモプレッシンおよびＶＷＦ濃縮物の注入は、部分的に有効であるに過ぎず、ＶＷＦの短半減期のために単独では不十分であると見なされている。
・Veyradier等（Gastroenterology 2001, 120: 346-353）は、消化管出血とＶＷＦ−ＨＭＷＭの欠失との間の関連性について、出血性の消化管の血管異形成（angiodysplasia）を伴った患者９名中８名においてＶＷＦ−ＨＭＷ多量体のレベルが減少しているという、さらなる証拠を加えている。
・Vincentelli等（NEJM 2003, 349:343-349）は、弁置換の３時間後という早い時点で
、ＶＷＦ−ＨＭＷＭが再出現したことを示している。この著者はまた、増加した出血性素質を、大動脈弁狭窄症に起因する高い剪断速度によるＶＷＦ−ＨＭＷＭの欠失と関連づけており、出血の制御のための治療上の可能性は限定的であり、最良の治療選択枝としては弁置換を推奨するに至っている。
・Warkentin（Transfusion Medicine Reviews 2003, 17:272-286）は、心血管系疾患において、血管異形成から二次的に生じる急性出血に対する治療の選択枝として、ソマトスタチン、オクトレオチドおよびｒＦＶＩＩａの使用について議論している。この著者は、心血管系疾患への適応ではデスモプレッシンおよびＦＶＩＩＩ／ＶＷＦ濃縮物のようなＶＷＤのための伝統的な治療法にはほとんど経験がないと述べており、因子濃縮物は相対的にＶＷＦ−ＨＭＷＭで不足しており、そのために、もし利益があるとしても最小限であろうと指摘するに至っている。
【００１２】
結論として、先行技術は、血管性狭窄による高い剪断速度がＶＷＦ−ＨＭＷＭの選択的な欠失をもたらし、その結果ＶＷＳ−２Ａの症状に似た出血性表現型を呈することを、示唆している。ＶＷＦ濃縮物を用いた出血性素質の抑制は現在に至るまで成功していない。それゆえに、ＶＷＦ濃縮物を用いたそうした出血性素質の抑制に関して、患者の選択、投与量、治療の様相（modality）（ボーラス（bolus）、反復投与、連続注入、ならびに、
投与時期および投与期間）についても、先行技術には何ら教唆がない。
【００１３】
機械的乱流のために、心臓外科でも用いられる体外循環（ＥＣＣ）は、また、本質的にＶＷＦ−ＨＭＷＭの消失をもたらす。さらに、ＥＣＣの間に、血液と心肺機器の合成的表面との相互作用が、血小板の活性化、およびその結果としてのα顆粒の放出を促進する。そのために、手術直後の時期には、そうした貯蔵用オルガネラにはＶＷＦが乏しく、もはや第一次止血に対処することはできない。さらに、心臓外科処置後にへパリンを中和するためにするプロタミンの注入は、血小板へのＶＷＦの結合に負の影響を及ぼす（Barstad
等、2000、 Thromb Haemost 83:334-7）。全てのそうした機構は、第一次止血に負の影響を及ぼし、そして、心臓外科におけるVWF濃縮物注入の予防的、手術前、手術中および手
術後の好ましい効果を与える。
【００１４】
特定の患者の選択基準、予防および治療のガイドラインに従って、ＶＷＦ濃縮物が、出血性素質を抑制し、ならびに、外科的処置、特に体外循環、を必要としている、後天性フォン・ウィルブランド症候群、好ましくは心血管系疾患、における、手術前、手術中および手術後の失血を減少するために、成功裡に使用できるという驚くべき発見を成したことが、本発明の要諦である。
【００１５】
正常なＶＷＦ−ＨＭＷＭ含量を再構成することが必要なので、全てのＶＷＦ濃縮物が、記載された適応症の出血の抑制のために、同様に好適なわけではない。例えば、Humate(R)／Haemate(R)（Aventis Behring GmbH、Emil-von-Behring-Strase 76, 35041 Marburg, Germany）は、正常ヒト血漿中のＶＷＦ−ＨＭＷＭを１００％としたとき、８３％〜９４
％のＶＷＦ−ＨＭＷＭを含有することが示されており、一方、現在市販されている他のＶＷＦ濃縮物は、正常ヒト血漿中のＶＷＦ−ＨＭＷＭを１００％としたとき、３.９％〜３５.９％のＶＷＦ−ＨＭＷＭを含有しているに過ぎない（Metzner等、Haemophilia 1998、
Walter等、J. Thromb. Haemost., 2003）。そのために、本発明に関して、ＶＷＦ濃縮物は、正常ヒト血漿中のＶＷＦ−ＨＭＷＭを１００％としたとき、７５％超の含量を有するものが好ましく、５０％を超える含量のものはより少し好ましく、５０％未満の含量のものはさらにより少し好ましい。
【００１６】
本発明は、ＶＷＦ−ＨＭＷＭの同時的な欠失と関連する後天性ＶＷＳ、および／または、好ましくはＥＣＣを必要とする好ましくは心血管系または腎疾患の臨床症状における損傷した血小板ＧＰＩｂ−ＶＷＦ相互作用、および／または、硫酸プロタミンの投与による、出血性素質に対して、そうした治療に感受性のある患者を選択するための特定のガイドラインを適用した、予防及び治療に関している。
【００１７】
例えば、後天性（例えば、弁狭窄症において）または先天性（例えば、心室中隔欠損症（ＶＳＤ）、動脈管開存症（ＰＤＡ））の心血管系疾患でみられる、非生理的な高い剪断速度によるような、ＶＷＦ−ＨＭＷＭの選択的な欠失をもたらす臨床症状において、０〜２５ｍｍＨｇの平均勾配を有する軽度の大動脈弁狭窄症、２５〜５０ｍｍＨｇの中程度の大動脈弁狭窄症、および、＞５０ｍｍＨｇの重度の大動脈弁狭窄症における、非制限的な症例を介して、患者を選択することができる。
【００１８】
代りに、以下の項目の診断によりＶＷＦ−ＨＭＷＭを欠失とされる患者を選択することによっても、患者を選択できる：
・ＶＷＦ：ＲＣｏ／ＶＷＦ：Ａｇ比が＜０.８、もしくは好ましくは＜０.７、もしくはさらに好ましくは＜０.６、または
・ＶＷＦ：ＣＢ／ＶＷＦ−Ａｇ比が＜０.８、もしくは好ましくは＜０.７、もしくはさらに好ましくは＜０.６、または
・コラーゲン／ＡＤＰカートリッジを用いたＰＦＡ−１００(R)（Dade Behring Diagnostics）で上昇した閉鎖時間が、＞１００秒超（３.２％クエン酸加血液）、もしくは、＞１２０秒超（３.８％クエン酸加血液）、または、
・ゲルを基礎とした多量体の分析で、ＶＷＦ−ＨＭＷＭの割合が８０％未満、もしくは好ましくは７０％未満、もしくはさらに好ましくは６０％未満が示されること。
【００１９】
そうして選択された患者は、ＶＷＦ−ＨＭＷＭ比が５０％未満、または好ましくは５０％を超える、またはさらに好ましくは７５％を超えるＶＷＦ濃縮物を静脈内に注入することにより治療することができる。
【００２０】
そうした患者に対するＶＷＦの投与量は、連続注入（ＣＩ）により、少なくともＶＷＦ：ＲＣｏが７０％を超える、もしくは好ましくは１００％を超える、もしくはさらに好ましくは１５０％を超えるように、または、継続した反復投与を伴うボーラス注入（bolus infusion）により、ＶＷＦ：ＲＣｏがトラフレベルで７０％を超える、もしくは好ましくは１００％を超える、もしくはさらに好ましくは１５０％を超えるように、または、最初のボーラスと継続するＣＩと組合わされた場合は、トラフレベルが７０％を超える、もしくは好ましくは１００％を超える、もしくはさらに好ましくは１５０％を超えるように、設定されるべきである。
【００２１】
このようなＶＷＦ濃縮物のそうした投与量の投与は、手術前、手術中および手術後の、または他のＥＣＣでの、ＶＷＦ−ＨＭＷＭの特異的な欠失の原因を取り除き、ボーラス注射、好ましくは反復投与、もしくはさらに好ましくは連続注入によって適用する。
【００２２】
実施例１：
弁置換の外科処置を受けている大動脈弁狭窄症患者を以下の分析に付した：
１．最も好ましくは、＞５０ｍｍＨｇの圧勾配を有する患者を治療の対象と考えた。心臓弁経由圧勾配（transvalvular pressure gradient）の平均勾配を測定するために、超
音波心臓検査システムまたは他の適切な方法を用いた。
２．場合によっては、＞２５ｍｍＨｇの圧勾配を有する患者を、VWF多量体分析に従っ
て、さらに選択した。
ａ．ＶＷＦ：ＲＣｏ／ＶＷＦ−Ａｇ（Metzner等、Haemophilia 1998, 4:25-32に記載された方法に従う）または、
ｂ．ＶＷＦ：ＣＢ／ＶＷＦ−Ａｇ Ａｇ（Neugebauer等、Thromb. Haemost., 2002 88:871-2に記載された方法に従う）または、
ｃ．ＰＦＡ−１００のコラーゲン／ＡＤＰカートリッジでの上昇した閉鎖時間（Fressinaud等、Blood. 1998 91:1325-31）または、
ｄ．ＳＤＳ−ＰＡＧＥ Ａｇ（Budde等、Thromb. Haemost., 1990 63(2):312-5に記載された方法に従う）
【００２３】
最も好ましい患者は、以下の性質を有しており、
ａ）ＶＷＦ：ＲＣｏ／ＶＷＦ：Ａｇ比が＜０.６、または
ｂ）ＶＷＦ：ＣＢ／ＶＷＦ−Ａｇ比が＜０.６、または
ｃ）コラーゲン／ＡＤＰカートリッジを用いたＰＦＡ−１００で上昇した閉鎖時間が、１００秒（３.２％クエン酸加血液）より多い、もしくは、１２０秒（３.８％クエン酸加血液）より多く、または、
ｄ）ＶＷＦ−ＨＭＷＭ比が、ゲルをベースにした多量体の分析で６０％未満。
次に、連続注入（ＣＩ）により、少なくともＶＷＦ：ＲＣｏが７０％を超える、もしくは好ましくは１００％を超える、もしくはさらに好ましくは１５０％を超えるように、または、継続した反復投与を伴うボーラス注入により、ＶＷＦ：ＲＣｏがトラフレベルで７０％を超える、もしくは好ましくは１００％を超える、もしくはさらに好ましくは１５０％を超えるような投与量の、適切なＶＷＦ濃縮物で、外科処置の開始３０分前に注入された。最初のボーラス注射後の反復投与を、トラフレベルが７０％を超える、もしくは好ましくは１００％を超える、もしくはさらに好ましくは１５０％を超えるように、ＣＩで置き換えることもできる。適切なＶＷＦ濃縮物のＣＩは手術から約４時間後に中止する。
【手続補正書】
【提出日】平成23年6月6日(2011.6.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
後天性フォン・ウィルブランド症候群における、出血性素質を抑制するための医薬組成物を製造するために、正常ヒト血漿中のＶＷＦの高分子多量体（ＶＷＦ−ＨＭＷＭ）の含量を１００％としたときに５０％を超える含量の前記ＶＷＦ−ＨＭＷＭを含むＶＷＦ濃縮物を使用する方法であって、患者のＶＷＦ：ＲＣｏ／ＶＷＦ：Ａｇ比が＜０.８である前記方法。
【請求項２】
患者が、軽度、中程度および重篤な大動脈弁狭窄症（それぞれ、０〜２５ｍｍＨｇ、２５〜５０ｍｍＨｇおよび＞５０ｍｍＨｇ）に起因する、非生理的な高い剪断速度を生じる臨床症状、ならびに、心室中隔欠損症、動脈管開存症または他の著しい圧勾配を有する先天性心血管系疾患を有するものから選ばれる、請求項１の方法。
【請求項３】
患者が以下：
・ＶＷＦ：ＲＣｏ／ＶＷＦ：Ａｇ比が＜０.７、または
・ＶＷＦ：ＣＢ／ＶＷＦ−Ａｇ比が＜０.８、または
・コラーゲン／ＡＤＰカートリッジを用いたＰＦＡ−１００(R)（Dade Behring Diagnostics）で上昇した閉鎖時間が、＞１００秒超（３.２％クエン酸加血液）、または、
・ゲルを基礎とした多量体の分析で、ＶＷＦ−ＨＭＷＭの割合が８０％未満
を有する者から選ばれる、請求項１の方法。
【請求項４】
患者が以下：
・ＶＷＦ：ＲＣｏ／ＶＷＦ：Ａｇ比が＜０.６、または
・ＶＷＦ：ＣＢ／ＶＷＦ−Ａｇ比が＜０.７、または
・コラーゲン／ＡＤＰカートリッジを用いたＰＦＡ−１００(R)（Dade Behring Diagnostics）で上昇した閉鎖時間が、＞１２０秒超（３.８％クエン酸加血液）、または、
・ゲルを基礎とした多量体の分析で、ＶＷＦ−ＨＭＷＭの割合が７０％未満
を有する者から選ばれる、請求項３の方法。
【請求項５】
患者が以下：
・ＶＷＦ：ＣＢ／ＶＷＦ−Ａｇ比が＜０.６、または
・ゲルを基礎とした多量体の分析で、ＶＷＦ−ＨＭＷＭの割合が６０％未満
を有する者から選ばれる、請求項４の方法。
【請求項６】
医薬組成物がボーラス注入または連続注入に適している、請求項１または２の方法。
【請求項７】
医薬組成物が、さらに、ＶＷＦ：ＲＣｏのトルフレベルが７０％を超える投与量である、継続した反復投与に、または、トラフレベルが７０％を超えるような継続した連続注入に適切である、請求項６の方法。
【請求項８】
医薬組成物が、さらに、ＶＷＦ：ＲＣｏのトルフレベルが１００％を超える投与量である、継続した反復投与に、または、トラフレベルが１００％を超えるような継続した連続注入に適切である、請求項７の方法。
【請求項９】
医薬組成物が、さらに、ＶＷＦ：ＲＣｏのトルフレベルが１５０％を超える投与量である、継続した反復投与に、または、トラフレベルが１５０％を超えるような継続した連続注入に適切である、請求項８の方法。
【請求項１０】
体外循環に関連したＶＷＦの質および量の欠陥または欠失を克服するための、体外循環を使用した処置または介入を必要とする疾患のための、請求項１の使用の方法。
【請求項１１】
医薬組成物がボーラス注入または連続注入に適している、請求項１０の方法。
【請求項１２】
医薬組成物が、さらに、ＶＷＦ：ＲＣｏのトルフレベルが７０％を超える投与量である、継続した反復投与に適している、請求項１０の方法。
【請求項１３】
医薬組成物が、さらに、ＶＷＦ：ＲＣｏのトルフレベルが１００％を超える投与量である、継続した反復投与に適している、請求項１２の方法。
【請求項１４】
医薬組成物が、さらに、ＶＷＦ：ＲＣｏのトルフレベルが１５０％を超える投与量である、継続した反復投与に適している、請求項１３の方法。
【請求項１５】
プロタミンがへパリンの効果を中和するために用いられる症状における、請求項１の使用の方法。
【請求項１６】
医薬組成物がボーラス注入または連続注入に適している、請求項１５の方法。
【請求項１７】
医薬組成物が、さらに、ＶＷＦ：ＲＣｏのトルフレベルが７０％を超える継続した反復投与に適切である、請求項１６の方法。
【請求項１８】
医薬組成物が、さらに、ＶＷＦ：ＲＣｏのトルフレベルが１００％を超える、継続した反復投与に適切である、請求項１７の方法。
【請求項１９】
医薬組成物が、さらに、ＶＷＦ：ＲＣｏのトルフレベルが１５０％を超える継続した反復投与に適切である、請求項１８の方法。