(57)【要約】【課題】血液検体を短時間で処理することができ、安定した判定結果を得ることが可能な血球凝集像判定方法及び血球凝集像判定装置を提供すること。【解決手段】反応容器内における血液検体と試薬との反応による血球凝集像をもとに血液検体を陽性或いは陰性に判定する血球凝集像判定方法及び血球凝集像判定装置。血球凝集像判定装置１は、反応容器の底壁が遠心力によって外側を向くように反応容器を回転させる回転機構Ｒと、回転方向に沿った反応容器の前側部分が後側部分よりも鉛直方向下側に位置するように反応容器を傾斜させる傾斜装置７とを備えている。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
反応容器内における血液検体と試薬との反応による血球凝集像をもとに前記血液検体を陽性或いは陰性に判定する血球凝集像判定方法であって、
前記反応容器の底壁が遠心力によって外側を向くように前記反応容器を回転する遠心処理工程と、
前記遠心処理工程における回転方向に沿った前記反応容器の前側部分が後側部分よりも鉛直方向下側に位置するように前記反応容器を傾斜させる傾斜工程と、
を含むことを特徴とする血球凝集像判定方法。
【請求項２】
前記反応容器は、マイクロプレートに形成されたウェルであることを特徴とする請求項１に記載の血球凝集像判定方法。
【請求項３】
前記ウェルは、底壁内面に凹凸が形成され、
前記血球は、赤血球であることを特徴とする請求項１又は２に記載の血球凝集像判定方法。
【請求項４】
前記反応工程の後に、
前記反応容器の傾斜を解除する解除工程と、
傾斜を解除した前記反応容器を撮像する撮像工程と、
前記撮像工程で撮像された前記反応像を含む前記反応容器の映像を画像処理し、前記反応容器の映像にもとづく判定値を演算する画像処理工程と、
前記画像処理工程で演算した判定値をもとに前記血液検体の陽性或いは陰性を判定する判定工程と、
を更に含むことを特徴とする請求項１乃至３のいずれか一つに記載の血球凝集像判定方法。
【請求項５】
反応容器内における血液検体と試薬との反応による血球凝集像をもとに前記血液検体を陽性或いは陰性に判定する血球凝集像判定装置であって、
前記反応容器の底壁が遠心力によって外側を向くように前記反応容器を回転させる回転手段と、
回転方向に沿った前記反応容器の前側部分が後側部分よりも鉛直方向下側に位置するように前記反応容器を傾斜させる傾斜手段と、
を備えたことを特徴とする血球凝集像判定装置。
【請求項６】
前記反応容器は、マイクロプレートに形成されたウェルであることを特徴とする請求項５に記載の血球凝集像判定装置。
【請求項７】
前記ウェルは、底壁内面に凹凸が形成され、
前記血球は、赤血球であることを特徴とする請求項５又は６に記載の血球凝集像判定装置。
【請求項８】
前記回転手段は、
モータと、
前記モータによって回転されるロータと、
前記マイクロプレートを保持して前記ロータに水平軸の周りにスイング自在に支持されるバケットと、
を備えることを特徴とする請求項５乃至７のいずれか一つに記載の血球凝集像判定装置。
【請求項９】
前記複数のウェルを撮像する撮像手段と、
前記撮像手段が撮像した前記反応像を含む前記ウェル毎の映像を画像処理し、前記ウェル毎の映像にもとづく判定値を演算する画像処理手段と、
前記判定値をもとに前記血液検体の陽性或いは陰性を前記ウェル毎に判定する判定手段と、
を備えることを特徴とする請求項５乃至８のいずれか一つに記載の血球凝集像判定装置。
【請求項１０】
前記傾斜手段は、
前記バケットの外縁を把持する把持手段と、
前記把持手段を回動させて前記マイクロプレートの回転方向前側の短辺が鉛直方向下方となるように前記バケットを傾斜させる回動手段と、
前記回動手段を前記把持手段と共に昇降させる昇降手段と、
を備えることを特徴とする請求項５乃至９のいずれか一つに記載の血球凝集像判定装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医療分野において血液型や感染症等を判定する血球凝集像判定方法及び血球凝集像判定装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、抗原抗体反応による反応像に基づく血液の検査方法、例えば、血液型を判定する方法には、一般的に試験管法、カラム凝集法或いはプレート静置法が知られている。
【０００３】
試験管法は、試薬血球５０μＬとサンプル血漿５０μＬを内径１０ｍｍの試験管に分注し、遠心分離処理（９００Ｇ〜１０００Ｇ、１５秒）することによって管底に血球と血漿との凝集反応によって形成される血球ペレットを沈殿させる。その後、試験管を揺り動かすことにより管底に沈殿した血球ペレットを血球凝集塊又は非凝集血球として再浮遊させた血球凝集塊又は非凝集血球をもとに目視判定した凝集（陽性）又は非凝集（陰性）の結果から血液型を判定している（例えば、非特許文献１参照）。
【０００４】
カラム凝集法は、不活性粒子と水性媒体とを充填したカラムを使用し、検査対象の血液をカラムへ分注した際の水性媒体中の担体結合抗体と抗原との凝集反応による複合体又は担体結合抗原と抗体との凝集反応による複合体を光学的に可視化することによって判定した凝集（陽性）又は非凝集（陰性）の結果から血液型を判定している（例えば、特許文献１参照）。
【０００５】
プレート静置法は、マトリクス状に配置された複数のウェルを有するマイクロプレートを使用し、各ウェルに分注された血液検体と試薬との血球凝集像をもとに判定した凝集（陽性）又は非凝集（陰性）の結果から血液型を判定している（例えば、特許文献２参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特許第３２９９７６８号公報
【特許文献２】特公昭６３−６０８５４号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】日本臨床衛生検査技師会ライブラリーＸII「輸血検査の実際」改定第３版Ｐ．１６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
ところで、試験管法は、１つの血液検体当たり３〜４分の短時間で処理することができる。しかし、試験管法は、試験管を揺り動かして沈殿した血球ペレットを再浮遊させることから、試験管の揺動操作に熟練を要し、揺動の習熟度によって反応像に差が生じ、異なる判定結果になる場合が生ずるという問題があった。
【０００９】
また、カラム凝集法は、揺動操作に熟練を要することはないが、凝集反応による複合体を可視化するためにカラムを１０分間遠心分離処理する必要があり、処理に時間が掛かるという問題があった。特に、プレート静置法は、マイクロプレートを静置してウェル内で凝集反応を行わせるため、反応処理に６０分程度の時間を要していた。
【００１０】
本発明は、上記に鑑みてなされたものであって、血液検体を短時間で処理することができ、安定した判定結果を得ることが可能な血球凝集像判定方法及び血球凝集像判定装置を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
上述した課題を解決し、目的を達成するために、本発明の血球凝集像判定方法は、反応容器内における血液検体と試薬との反応による血球凝集像をもとに前記血液検体を陽性或いは陰性に判定する血球凝集像判定方法であって、前記反応容器の底壁が遠心力によって外側を向くように前記反応容器を回転する遠心処理工程と、前記遠心処理工程における回転方向に沿った前記反応容器の前側部分が後側部分よりも鉛直方向下側に位置するように前記反応容器を傾斜させる傾斜工程と、を含むことを特徴とする。
【００１２】
また、本発明の血球凝集像判定方法は、上記の発明において、前記反応容器は、マイクロプレートに形成されたウェルであることを特徴とする。
【００１３】
また、本発明の血球凝集像判定方法は、上記の発明において、前記ウェルは、底壁内面に凹凸が形成され、前記血球は、赤血球であることを特徴とする。
【００１４】
また、本発明の血球凝集像判定方法は、上記の発明において、前記反応工程の後に、前記反応容器の傾斜を解除する解除工程と、傾斜を解除した前記反応容器を撮像する撮像工程と、前記撮像工程で撮像された前記反応像を含む前記反応容器の映像を画像処理し、前記反応容器の映像にもとづく判定値を演算する画像処理工程と、前記画像処理工程で演算した判定値をもとに前記血液検体の陽性或いは陰性を判定する判定工程と、を更に含むことを特徴とする。
【００１５】
また、上述した課題を解決し、目的を達成するために、本発明の血球凝集像判定装置は、反応容器内における血液検体と試薬との反応による血球凝集像をもとに前記血液検体を陽性或いは陰性に判定する血球凝集像判定装置であって、前記反応容器の底壁が遠心力によって外側を向くように前記反応容器を回転させる回転手段と、回転方向に沿った前記反応容器の前側部分が後側部分よりも鉛直方向下側に位置するように前記反応容器を傾斜させる傾斜手段と、を備えたことを特徴とする。
【００１６】
また、本発明の血球凝集像判定装置は、上記の発明において、前記反応容器は、マイクロプレートに形成されたウェルであることを特徴とする。
【００１７】
また、本発明の血球凝集像判定装置は、上記の発明において、前記ウェルは、底壁内面に凹凸が形成され、前記血球は、赤血球であることを特徴とする。
【００１８】
また、本発明の血球凝集像判定装置は、上記の発明において、前記回転手段は、モータと、前記モータによって回転されるロータと、前記マイクロプレートを保持して前記ロータに水平軸の周りにスイング自在に支持されるバケットと、を備えることを特徴とする。
【００１９】
また、本発明の血球凝集像判定装置は、上記の発明において、前記複数のウェルを撮像する撮像手段と、前記撮像手段が撮像した前記反応像を含む前記ウェル毎の映像を画像処理し、前記ウェル毎の映像にもとづく判定値を演算する画像処理手段と、前記判定値をもとに前記血液検体の陽性或いは陰性を前記ウェル毎に判定する判定手段と、を備えることを特徴とする。
【００２０】
また、本発明の血球凝集像判定装置は、上記の発明において、前記傾斜手段は、前記バケットの外縁を把持する把持手段と、前記把持手段を回動させて前記マイクロプレートの回転方向前側の短辺が鉛直方向下方となるように前記バケットを傾斜させる回動手段と、前記回動手段を前記把持手段と共に昇降させる昇降手段と、を備えることを特徴とする。
【発明の効果】
【００２１】
本発明によれば、反応容器の底壁が遠心力によって外側を向くように反応容器を回転し、回転方向に沿った反応容器の前側部分が後側部分よりも鉛直方向下側に位置するように反応容器を傾斜させるので、血液検体を短時間で処理することができ、安定した判定結果を得ることが可能な血球凝集像判定方法及び血球凝集像判定装置を提供することができるという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】図１は、本発明の実施の形態に係る血球凝集像判定装置の概略構成図である。
【図２】図２は、ロータの斜視図である。
【図３】図３は、バケットを取り付けたロータの斜視図である。
【図４】図４は、マイクロプレートをセットしたバケットを取り付けたロータの平面図である。
【図５】図５は、マイクロプレートの平面図である。
【図６】図６は、図５のＣ−Ｃ線に沿った断面図である。
【図７】図７は、マイクロプレートに形成されたウェルの断面を拡大して示した斜視図である。
【図８】図８は、本発明の実施の形態に係る血球凝集像判定方法を説明するフローチャートである。
【図９】図９は、血球凝集像判定装置におけるロータの回転に伴うバケットの姿勢を模式的に説明する正面図である。
【図１０】図１０は、傾斜装置によってバケットをロータから外した状態を模式的に示す正面図である。
【図１１】図１１は、傾斜装置によってバケットを傾斜させた状態を模式的に示す正面図である。
【図１２】図１２は、プレート静置法で処理した場合における血漿（血清）が陰性の際のウェルの反応像を示す図である。
【図１３】図１３は、プレート静置法で処理した場合における血漿（血清）が弱陽性の場合のウェルの反応像を示す図である。
【図１４】図１４は、プレート静置法で処理した場合における血漿（血清）が強陽性の場合のウェルの反応像を示す図である。
【図１５】図１５は、血球凝集像判定装置によって遠心処理を施した直後のマイクロプレートをＣＣＤカメラで撮像した本発明の実施例を示す図である。
【図１６】図１６は、遠心処理の後、更に２分間傾斜させた後のマイクロプレートをＣＣＤカメラで撮像した本発明の実施例を示す図である。
【図１７】図１７は、図１６に示す映像の判定結果を赤血球浮遊液の濃度と共に併記した本発明の実施例を示す図である。
【図１８】図１８は、図１７に示す映像中、５行２列目の強陽性のウェルを拡大した図である。
【図１９】図１９は、図１７に示す映像中、５行３列目の弱陽性のウェルを拡大した図である。
【図２０】図２０は、図１７に示す映像中、５行５列目の陰性のウェルを拡大した図である。
【図２１】図２１は、遠心処理を施した直後のマイクロプレートをＣＣＤカメラで撮像した本発明の比較例を示す図である。
【図２２】図２２は、傾斜装置によって２分間傾斜させた後のマイクロプレートをＣＣＤカメラで撮像した本発明の比較例を示す図である。
【図２３】図２３は、４行１列目のウェルの拡大図である。
【図２４】図２４は、４行２列目のウェルの拡大図である。
【図２５】図２５は、４行４列目のウェルの拡大図である。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
以下に、本発明の血球凝集像判定方法及び血球凝集像判定装置に係る実施の形態を図面に基づいて詳細に説明する。なお、この実施例によりこの発明が限定されるものではない。
【００２４】
図１は、本発明の実施の形態に係る血球凝集像判定装置の概略構成図である。血球凝集像判定装置１は、図１に示すように、筐体２、ロータ３、モータ６、傾斜装置７、ＣＣＤカメラ８、画像処理部１１及び制御部１２を備えている。
【００２５】
筐体２は、上方へ開閉自在に被着される蓋としてドア２ａを有しており、チャンバ２ｂ内にロータ３が配置されている。
【００２６】
図２は、ロータ３の斜視図である。ロータ３は、図２に示すように、本体３ａの両側にヨーク３ｂが形成されたＨ字形の部材であり、本体３ａの中央に挿通孔３ｃが形成されている。また、ヨーク３ｂは、内側の互いに対向する位置に、それぞれ内側へ突出し、バケット４を水平に支持する水平軸であるトラニオンピン３ｄが設けられている。ロータ３は、図２に示すトラニオンピン３ｄによって本体３ａを挟む両側にバケット４をバランスさせて保持する。
【００２７】
図３は、バケット４を取り付けたロータ３の斜視図である。図４は、マイクロプレート５をセットしたバケット４を取り付けたロータ３の平面図である。バケット４は、図３に示すように、上部が解放され、底面に開口４ａが形成された直方体形状の箱体である。バケット４は、図４に示すように、トラニオンピン３ｄによって挟まれる両側中央からロータ３の外周側へ僅かに変位した位置に係合溝４ｂが形成されている。バケット４は、係合溝４ｂにトラニオンピン３ｄを係合させることにより、図３に示すように、ロータ３に支持され、トラニオンピン（図示せず）を中心として矢印Ａsで示すようにスイングする。そして、バケット４は、図４に示すように、マイクロプレート５を保持し、ロータ３と共に挿通孔３ｃを中心として矢印Ａrで示す方向へ回転する。このとき、バケット４は、係合溝４ｂがロータ３の外周側へ僅かに変位している。このため、ロータ３が回転すると、バケット４は、ロータ３の内周側がトラニオンピン３ｄを中心としてマイクロプレート５と共に下方へスイングする。
【００２８】
ここで、図５は、マイクロプレートの平面図であり、図６は、図５のＣ−Ｃ線に沿った断面図である。また、図７は、マイクロプレートに形成されたウェルの断面を拡大して示した斜視図である。以下、図５〜図７を参照してマイクロプレート５の構造について説明する。
【００２９】
マイクロプレート５は、図５に示すように、１２×１０個のウェル５ａがマトリックス状に配列形成されている。ウェル５ａは、分注された血液検体と試薬とを反応させる微小な反応容器であり、図６に示すように、内面が略円錐形の底壁５ｂを有している。このとき、ウェル５ａは、図７に示すように、マイクロプレート５の上面における直径をＤ(＝６ｍｍ)、底壁５ｂの内面部分の深さをＨとすると、内面の平均傾斜角度θ〔＝tan−１{Ｈ／(Ｄ／２)}〕が３０度に設定されている。また、底壁５ｂの内面には、同心円上に形成した複数の段部からなり、高さｈがｈ＝１６μｍに設定された凹凸５ｃが形成されている。
【００３０】
モータ６は、図１に示すように、ロータ３及びバケット４と共にマイクロプレート５を回転させる回転機構Ｒを構成しており、ロータ３を回転させて各ウェル５ａに分注された血液検体或いは試薬に含まれる血球を底壁５ｂ側へ移動させる。モータ６は、挿通孔３ｃに挿通した回転軸６ａの上端に螺着するナット（図示せず）によって、ロータ３が取り付けられている。
【００３１】
傾斜装置７は、バケット４毎に設けられ、バケット４の回転方向に沿って前側に位置する短辺Ｓs（図４参照）を鉛直方向下方にしてマイクロプレート５を傾斜させる傾斜手段である。傾斜装置７は、図１に示すように、チャンバ２ｂ側面のバケット４を臨む位置に設けられ、チャック７１、回動モータ７２及び昇降装置７３を備えている。
【００３２】
チャック７１は、図１に示すように、バケット４の長辺側外縁を２本の把持爪７１ａ（図１０参照）によって把持する。回動モータ７２は、回動軸７２ａ（図１０参照）を有しており、回動軸７２ａの端部に設けたチャック７１を回動させてマイクロプレート５の回転方向前側の短辺Ｓs（図４参照）が鉛直方向下方となるようにバケット４を傾斜させる。昇降装置７３は、ボールねじを使用した回動モータ７２の昇降手段であり、スライダ（図示せず）に回動モータ７２が取り付けられている。
【００３３】
ＣＣＤカメラ８は、マイクロプレート５の複数のウェル５ａを撮像する撮像手段であり、撮像した複数のウェル５ａの画像信号を画像処理部１１へ出力する。ＣＣＤカメラ８は、図１に示すように、ドア２ａ下面のロータ３によって回転されるマイクロプレート５を臨む位置に設けられている。このとき、傾斜装置７とＣＣＤカメラ８は、マイクロプレート５の回転軌跡に沿って中心角９０度離れた位置に配置される。
【００３４】
照明９は、チャンバ２ｂの内壁下部に設けてマイクロプレート５を下方から照明する蛍光灯等の照明手段である。
【００３５】
画像処理部１１は、ＣＣＤカメラ８から入力される複数のウェル５ａの前記画像信号をもとに各ウェル５ａの映像を画像処理して判定値をウェル５ａ毎に演算し、得られたウェル５ａ毎の判定値信号を判定部１２ａへ出力する。
【００３６】
制御部１２は、血球凝集像判定装置１を構成する各部への動作タイミングの指示やデータの転送等を行って各部を制御し、血球凝集像判定装置１全体の動作を統括的に制御する。制御部１２は、ウェル５ａ毎の判定結果や複数のウェル５ａにおける判定結果に基づく各血液検体の血液型に関する判定結果の他、血球凝集像判定装置１の動作に必要な各種データを保持するメモリを内蔵したマイクロコンピュータ等で構成され、図１に示すように、判定部１２ａを有している。判定部１２ａは、画像処理部１１から入力されるウェル５ａ毎の判定値をもとに最も凝集が生じている場合を強陽性として血液検体を強陽性、弱陽性或いは陰性の３段階にウェル５ａ毎に判定する。
【００３７】
以上のように構成される血球凝集像判定装置１は、例えば、血液型を判定する際は、マイクロプレート５の複数のウェル５ａに原液又は生理食塩水で所定濃度に希釈した血漿を分注し、所定倍率で希釈した血球を分注した際の血漿と血球の反応に伴う凝集像をもとにマイクロプレート５のウェル５ａ毎に血液検体の陽性或いは陰性を判定する。
【００３８】
ここで、血漿と血球とが反応して凝集像を形成した場合は陽性、非凝集の場合は陰性である。また、赤血球の血液型を調べるＡＢＯ表検査の場合は、血液から採取した赤血球が血液検体となり、型判定用の抗Ａ抗体，抗Ｂ抗体を試薬として使用する。また、血漿（血清）の血液型を調べるＡＢＯ裏検査の場合、血漿（血清）が血液検体となり、血液型が既知のＡ型赤血球，Ｂ型赤血球を生理食塩水にそれぞれ浮遊させたＡ型赤血球浮遊液，Ｂ型赤血球浮遊液を試薬として使用する。以下、血漿（血清）の血液型を調べるＡＢＯ裏検査の場合を例に説明する。
【００３９】
先ず、複数のウェル５ａのそれぞれに判定対象の血漿（血清）とＡ型赤血球浮遊液，Ｂ型赤血球浮遊液とを分注し、分注後のマイクロプレート５をバケット４に装着する。そして、血球凝集像判定装置１のドア２ａを上方へ開き、それぞれにマイクロプレート５を装着した２つのバケット４をチャンバ２ｂ内のロータ３に保持させる。
【００４０】
このとき、バケット４は、係合溝４ｂ（図１０参照）をトラニオンピン３ｄに係合させて、図４に示すように、トラニオンピン３ｄに支持される。このため、ロータ３は、回転中心となるロータ３の挿通孔３ｃに対して２つのマイクロプレート５を点対称に保持する。
【００４１】
次に、作業者は、血球凝集像判定装置１のドア２ａを閉じ、血球凝集像判定装置１のスイッチをオンし、血球凝集処理判定ボタンを押下する。すると、血球凝集像判定装置１は、予め設定されたプログラムに従ってモータ６を駆動してロータ３を回転させ、マイクロプレート５に遠心処理を施す。以下、本発明の血球凝集像判定方法を図８に示すフローチャートに基づいて詳細に説明する。
【００４２】
先ず、血球凝集像判定装置１は、制御部１２の制御のもとに、ロータ３を回転させてマイクロプレート５に遠心処理を施す（ステップＳ１００）。この遠心処理によって血球を底壁５ｂ側へ偏らせるが、制御部１２は、血球が完全に底壁５ｂに押圧されることがないようにモータ６によるマイクロプレート５の回転を制御する。このような制御をするうえで、制御部１２は、例えば、ロータ３が毎分１０００回転（２００Ｇ）の回転数で、１５秒間回転するようにモータ６を制御した。このとき、各ウェル５ａにおいては、血漿（血清）中に存在する抗体と赤血球表面に存在する抗原決定基との抗原抗体反応による凝集反応が開始している。このため、底壁５ｂ側へ移動する血球には非凝集赤血球の他に、凝集反応によって生ずる凝集塊が含まれている。
【００４３】
ここで、図９は、血球凝集像判定装置１におけるロータ３の回転に伴うバケット４の姿勢を説明する正面図である。モータ６の回転開始時、バケット４は、ロータ３の上面とバケット４の上面が面一の状態にある。モータ６の回転数の増加に伴い、バケット４は、作用する遠心力によりトラニオンピン３ｄを中心として下部がロータ３の外方へスイングし、図９（ａ）に示すように、ロータ３の内周側が下がり、外周側が上昇する。そして、回転数が更に増加し、モータ６の回転数が毎分１０００回転に達すると、制御部１２は、モータ６を停止させる。このため、下部がロータ３の外方へスイングするバケット４は、図９（ｂ）に示すロータ３の上面に対して直交状態になる直前に回転数が減少し始める。従って、マイクロプレート５は、各ウェル５ａ内の赤血球が底壁５ｂ側へ移動される。
【００４４】
次に、血球凝集像判定装置１は、マイクロプレート５の回転方向前側の短辺Ｓs（図４参照）が鉛直方向下方となるようにマイクロプレート５を傾斜させる（ステップＳ１０２）。
【００４５】
ここで、図１０は、傾斜装置７によってバケット４をロータ３から外した状態を示す正面図である。図１１は、傾斜装置７によってバケット４を傾斜させた状態を示す正面図である。以下、傾斜装置７によるマイクロプレート５の傾斜動作を図１０，図１１を参照して説明する。
【００４６】
先ず、血球凝集像判定装置１は、傾斜装置７を駆動してチャック７１によってバケット４の長辺側外縁を２本の把持爪７１ａによって把持した後、昇降装置７３によって回動モータ７２を上昇させ、図１０に示すように、バケット４をロータ３から外す。その後、血球凝集像判定装置１は、回動モータ７２を駆動してチャック７１を回動させ、図１１に示すように、マイクロプレート５の回転方向前側の短辺Ｓs（図４参照）が鉛直方向下方となるようにバケット４を水平面に対して９０°に保持して２分間傾斜させる。
【００４７】
２分経過後、血球凝集像判定装置１は、上記とは逆に傾斜装置７を駆動してバケット４をロータ３に保持させ、マイクロプレート５の傾斜を解除する（ステップＳ１０４）。これにより、マイクロプレート５は、バケット４と共に水平状態に保持される（図４参照）。
【００４８】
次いで、血球凝集像判定装置１は、マイクロプレート５の複数のウェル５ａをＣＣＤカメラ８に撮像させる（ステップＳ１０６）。このとき、マイクロプレート５は、図１に示したように、照明９によって下方から照明されているので、複数のウェル５ａを鮮明に撮像することができる。その後、ＣＣＤカメラ８から入力される複数のウェル５ａの画像信号をもとに画像処理部１１に反応像を含むウェル５ａ毎の映像を画像処理させる（ステップＳ１０８）。
【００４９】
画像処理部１１は、例えば、ウェル５ａの周辺部における平均光量Ｌpと中心部における平均光量Ｌcの比の値Ｌp／Ｌｃを１０倍した凝集反応の判定パラメータＰ／Ｃを判定値として演算する。このとき、血漿（血清）が、例えば、赤血球に対して陰性の場合、赤血球は、凝集反応を起すことなくウェル５ａの底壁５ｂ中央の最深部に集まる。このため、ウェル５ａの反応像は、図１２に示すように、ウェル５ａの周辺部Ｐにおける平均光量Ｌpがウェル５ａの中心部Ｃにおける平均光量Ｌcに比べて大きくなる。この結果、判定パラメータＰ／Ｃの値は、４０以上となる。ここで、図１２及び以下に示す図１３，図１４は、プレート静置法で反応させた場合における血球凝集反応像を示している。
【００５０】
一方、血漿（血清）が、例えば、赤血球に対して弱い反応性を示す弱陽性検体の場合、赤血球は、凝集と非凝集の中間となる。このため、弱陽性の血漿（血清）を同様に処理した場合、図１３に示すように、ウェル５ａの反応像は、ウェル５ａの周辺部Ｐにおける平均光量Ｌpとウェル５ａの中心部Ｃにおける平均光量Ｌcとの差が、図１２に示した陰性検体の場合に比べて小さくなる。この結果、判定パラメータＰ／Ｃの値は、１５〜３０の範囲となる。
【００５１】
そして、血漿（血清）が、例えば、赤血球に対して強い反応性を示す強陽性検体の場合、赤血球表面の抗原と血漿（血清）中の抗体との反応によって微小な凝集塊が生ずる。このため、強陽性の血漿（血清）を同様に処理した場合、図１４に示すように、ウェル５ａ全体に粒子状に分散する。従って、強陽性の場合、ウェル５ａの反応像は、ウェル５ａの周辺部Ｐにおける平均光量Ｌpとウェル５ａの中心部Ｃにおける平均光量Ｌcとは殆ど等しくなる。この結果、判定パラメータＰ／Ｃの値は、１０〜１５の範囲となる。なお、判定パラメータＰ／Ｃの値が３０〜４０の範囲は、自動判定不可とする。
【００５２】
画像処理後、判定部１２ａは、画像処理部１１が演算した判定パラメータＰ／Ｃをもとにウェル５ａ毎に血漿（血清）の陽性或いは陰性を判定する（ステップＳ１１０）。そして、判定部１２ａは、ウェル５ａ毎に判定した判定結果をもとに血漿（血清）の血液型を判定する（ステップＳ１１２）。
【００５３】
このようにして血液型の判定が終了した後、作業者は、血球凝集像判定装置１のドア２ａを上方へ開き、マイクロプレート５を保持したバケット４をロータ３から外す。次に、バケット４からマイクロプレート５を取り出した後、複数のウェル５ａのそれぞれに判定対象の新たな血漿（血清）とＡ型赤血球浮遊液，Ｂ型赤血球浮遊液とが分注された新たなマイクロプレート５をバケット４に保持させる。そして、上記と同様にして、新たなマイクロプレート５を保持したバケット４をチャンバ２ｂ内のロータ３に支持させて、血球凝集像判定方法を繰り返す。
【００５４】
以上のように、本発明によれば、マイクロプレート５を回転させて血球をマイクロプレート５の底壁５ｂ側へ偏らせた後、マイクロプレート５の回転方向前側の辺が鉛直方向下方となるようにマイクロプレート５を傾斜させて試薬と血液検体とを反応させ、反応像をもとにウェル５ａ毎に血液検体の陽性或いは陰性を判定する。このとき、本発明は、血球をマイクロプレート５の底壁５ｂ側へ移動させる遠心処理に１５秒、マイクロプレート５を傾斜させて試薬と血液検体とを反応させるのに２分あればよい。このため、試薬と検体の分注、バケットへのプレートの脱着等、これらの他に判定に要する時間を考慮しても、本発明は、従来から行われている試験管法、カラム凝集法或いはプレート静置法に比べ、血液検体を短時間で処理することができ、安定した判定結果を得ることが可能である。また、本発明は、血液検体と試薬を分注したマイクロプレートの遠心処理と、傾斜処理とによって血液検体の陽性或いは陰性を判定するので、従来から使用されている試験管法やカラム凝集法に比べて安価に判定することができる。
【００５５】
（実施例）
以下、本発明の実施例を説明する。図１５は、血球凝集像判定装置１によって遠心処理を施した直後のマイクロプレート５をＣＣＤカメラ８で撮像した図である。このとき、図中矢印で示す右方向がマイクロプレート５の回転方向である。また、マイクロプレート５は、上から４行目と５行目、左から２列目〜５列目のウェル５ａの計８つのウェル５ａに判定対象の血漿（血清）と、試薬としての赤血球浮遊液とがそれぞれ２５μＬずつ分注されている。そして、上から４行目のウェル５ａには０．４３％の赤血球浮遊液が分注され、５行目のウェル５ａには０．８５％の赤血球浮遊液が分注されている。
【００５６】
一方、図１６は、遠心処理の後、更に２分間傾斜させた後のマイクロプレート５をＣＣＤカメラ８で撮像した図である。また、図１７は、図１６に示す映像の判定結果を赤血球浮遊液の濃度と共に併記した図である。このとき、ＣＣＤカメラ８が撮像した反応像を含むマイクロプレート５の上記計８つのウェル５ａ毎の映像を画像処理部１１によって画像処理し、得られたウェル５ａ毎の判定値をもとに判定部１２ａが血漿（血清）の陽性或いは陰性を判定した。その判定パラメータとして、ウェル５ａ中心部の透過光量が適用可能だが、他のパラメータと組み合わせて判定しても良い。更に、図１８乃至図２０は、図１７に示す映像中、５行２列目の強陽性のウェル５ａ（Ｗ2）を拡大した映像、５行３列目の弱陽性のウェル５ａ（Ｗ3）を拡大した映像及び５行５列目の陰性のウェル５ａ（Ｗ5）を拡大した図である。
【００５７】
図１８乃至図２０に示す図から明らかなように、本発明によれば、血液検体を短時間で処理することができ、安定した判定結果を得ることが可能なうえ、血液検体の強陽性、弱陽性及び陰性を視覚によって明確に相互に判別することができ、特に、従来から判別し難いと言われている弱陽性と陰性とを視覚によって明確に判別することができた。
【００５８】
（比較例）
ここで、本発明の血球凝集像判定方法と本発明に対する比較例としての試験管法とを使用し、血液検体をそれぞれ３回ずつ判定した。試験管法では凝集の強さを「１＋」、「２＋」といった形式で表現するが、「２＋」は比較的容易に陰性と判別可能な弱陽性像だが、「１＋」は陰性との判別に技量を要する弱陽性像である（非特許文献１参照）。弱陽性の血液検体の試験管法の判定結果は、「２＋」や「１＋」と変動したが、本発明の血球凝集像判定方法では、陰性との判別が容易な反応像が常に形成され、弱陽性の血液検体の判定結果における再現性が試験管法に比べて勝っていた。
【００５９】
また、本発明の他の比較例として、底壁の内面が滑らかなＵ字形に加工され、隣接するウェルが接近している点を除き、マイクロプレート５と同数のウェルＷを有するマイクロプレートを用い、血球凝集像判定装置１によって上記と同一条件で血球凝集像判定方法を実行した。その結果を図２１乃至図２５に示す。
【００６０】
図２１は、遠心処理を施した直後のマイクロプレートをＣＣＤカメラ８で撮像した図である。このとき、図中矢印で示す右方向がマイクロプレートの回転方向である。また、マイクロプレートは、上下に隣り合う２行の計１６のウェルＷに判定対象の血漿（血清）と、試薬としての赤血球浮遊液とがそれぞれ２５μＬずつ分注されている。このとき、上側のウェルＷには１．７％の赤血球浮遊液が分注され、下側のウェルＷには０．８５％の赤血球浮遊液が分注されている。また、左側の４列は原液の血漿（血清）を使用し、右側の４列は生理食塩水によって希釈した２倍希釈の血漿（血清）を使用した。
【００６１】
図２２は、傾斜装置７によって２分間傾斜させた後のマイクロプレートをＣＣＤカメラ８で撮像した図である。
【００６２】
ここで、図２３は、図２２の４行１列目のウェルＷ1の拡大図であり、図２４は、同じく４行２列目のウェルＷ2の拡大図である。また、図２５は、同じく４行４列目のウェルＷ4の拡大図である。図２３乃至図２５から明らかなように、底壁の内面が滑らかなＵ字形のウェルＷを有するマイクロプレートの場合、ウェルＷ1の弱陽性検体凝集反応像は、ウェル中心部に集まった血球沈渣から右方向に血球粒子の流れ出しが見られるが、ウェルＷ4の陰性検体非凝集像でも同程度の血球粒子の流れ出しが見られ、視覚情報によるウェルＷ2とウェルＷ4との判別は困難であった。従って、マイクロプレート５のウェル５ａは、底壁５ｂの内面に凹凸５ｃを形成しておくことが望ましいことが分かった。
【００６３】
尚、本発明の血球凝集像判定方法においては、マイクロプレート５の遠心処理と、傾斜処理とを行った後、マイクロプレート５を血球凝集像判定装置１から取り出し、目視によって陽性或いは陰性の判定を行ってもよい。但し、血球凝集像判定装置１で判定を行うと、一定した基準に基づく判定結果が得られるという利点がある。
【００６４】
また、上記実施の形態は、画像処理部１１が反応像判定パラメータＰ／Ｃを判定値として演算したが、これに限定されるものではなく、例えば、中心部Cにおける平均光量Lc或いはその他の判定パラメータを使用してもよく、これらの判定パラメータを組み合わせて用いることによって血液検体の陽性或いは陰性の判定を行ってもよい。
【００６５】
更に、上記実施の形態は、反応容器としてマイクロプレート５のウェル５ａを使用したが、ウェル５ａに代えて、ウェル５ａが個々に独立した反応容器を使用してもよい。
【産業上の利用可能性】
【００６６】
以上のように、本発明の血球凝集像判定方法及び血球凝集像判定装置は、血液検体を簡易、かつ、短時間で処理して判定するのに有用である。
【符号の説明】
【００６７】
１  血球凝集像判定装置
２  筐体
３  ロータ
３ｄ  トラニオンピン
４  バケット
４ｂ  係合溝
５  マイクロプレート
５ａ  ウェル
５ｂ  底壁
５ｃ  凹凸
６  モータ
７  傾斜装置
８  ＣＣＤカメラ
９  照明
１１  画像処理装置
１２  制御部
１２ａ  判定部
７１  チャック
７２  回動モータ
７３  昇降装置
Ｓs  短辺
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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