(57)【要約】【課題】容器の材料の種類を限定することなく、メニスカスの形成の防止が図られた反応容器を提供する。【解決手段】反応容器１は、抗原抗体反応を用いる免疫測定に用いられる反応容器であって、抗体または抗原が表面に固相化された底面部１０と、底面部１０の周囲に設けられ、免疫測定の工程に対応する１段以上の液体収容部３１〜３４を形成する側壁部２０と、を有する。液体収容部は、当該液体収容部に対応する工程の予め定められた量の液体が注入された場合に、当該液体収容部の上端開口の周縁部が液体の液面と同レベルの水平面を形成するように形成される。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗原抗体反応を用いる免疫測定に用いられる反応容器であって、
抗体または抗原が表面に固相化された底面部と、
前記底面部の周囲に設けられ、前記免疫測定の工程に対応する１段以上の液体収容部を形成する側壁部と、
を有し、
前記液体収容部は、当該液体収容部に対応する工程の予め定められた量の液体が注入された場合に、当該液体収容部の上端開口の周縁部が前記液体の液面と同レベルの水平面を形成するように形成される、
ことを特徴とする反応容器。
【請求項２】
請求項１に記載の反応容器であって、
前記側壁部は、前記底面部および前記周縁部のうち少なくとも１つの外周側の側面が外側に向かって上昇する傾斜面となるように形成される、
ことを特徴とする反応容器。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗原抗体反応を用いる免疫測定に用いられる反応容器に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＥＬＩＳＡ（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）など、抗原抗体反応を用いる免疫測定法（イムノアッセイ）が知られている。
【０００３】
特許文献１には、多数のウェルが形成された免疫分析用のマイクロプレートにおいて、試料の節約や気泡の防止のために、各ウェルの周壁部を階段状に形成したものが記載されている。
【０００４】
特許文献２には、ＥＬＩＳＡテスト等に用いられる多数容器構造体であって、容器壁と容器底のために、物理的特性の異なる材料が使用され、分析される試料に依存して試料と容器壁の間に生じる界面張力が少なくともほぼ平らな試料表面を生じるように、容器壁の材料が選定され、容器底が試料の観察や評価に適した材料からなっているものが記載されている。
【０００５】
特許文献３には、生物組織の試料が底面に配置されるウェルが複数形成された試料プレートであって、ウェルの内周に階段状の隔壁、つまり段差を設けることによって、ウェル内の試薬の吸引量を調節できるようにしたものが記載されている。この試料プレートでは、所定の段上で吸引動作を行うことにより、段部の高さに応じた試薬を残すことができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開平９−１０１３０２号公報
【特許文献２】特開平７−１９０９２４号公報
【特許文献３】特開平８−２８５７４４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
ところで、免疫測定においては、例えばＥＬＩＳＡを用いた自動分析装置などにおいて、検体や試薬の微量化が求められている。この場合、検体や試薬を容器に注入することを考えると、微量液量ではメニスカスの影響が無視できなくなる。例えば、容器表面が疎水性の場合は、図１０に示されるように凸型のメニスカスが形成され、微量の液は容器底面全体に濡れ広がらず、容器底面の一部分しか覆わない。逆に親水性の場合は、図１１に示されるように凹型のメニスカスが形成され、微量の液は容器の縁にへばりつき底面の中央部には殆ど存在しないようになる。したがって、容器底面に抗体または抗原が固相化され、抗原抗体反応が容器底面で進行する構成では、メニスカスの形成は望ましくない。
【０００８】
メニスカスの形成を防止するために、容器壁の材料を選定することとすると、容器の材料の種類が限定されてしまう。
【０００９】
そこで、本発明は、容器の材料の種類を限定することなく、メニスカスの形成の防止が図られた反応容器を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明に係る反応容器は、抗原抗体反応を用いる免疫測定に用いられる反応容器であって、抗体または抗原が表面に固相化された底面部と、前記底面部の周囲に設けられ、前記免疫測定の工程に対応する１段以上の液体収容部を形成する側壁部と、を有し、前記液体収容部は、当該液体収容部に対応する工程の予め定められた量の液体が注入された場合に、当該液体収容部の上端開口の周縁部が前記液体の液面と同レベルの水平面を形成するように形成される、ことを特徴とする。
【００１１】
本発明の一態様では、前記側壁部は、前記底面部および前記周縁部のうち少なくとも１つの外周側の側面が外側に向かって上昇する傾斜面となるように形成される。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、容器の材料の種類を限定することなく、メニスカスの形成の防止が図られた反応容器を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】本実施の形態に係る反応容器の構造の一例を示す斜視図である。
【図２】本実施の形態に係る反応容器の構造の一例を示す断面図である。
【図３】本実施の形態に係る反応容器の構造の一例を示す上面図である。
【図４】本実施の形態に係る反応容器の構造の一例を示す側面図である。
【図５】本実施の形態に係る反応容器を用いる免疫測定の手順の一例を示すフローチャートである。
【図６】反応容器の構造の別の一例を示す斜視図である。
【図７】反応容器の構造の別の一例を示す断面図である。
【図８】反応容器の構造のさらに別の一例を示す斜視図である。
【図９】反応容器の構造のさらに別の一例を示す断面図である。
【図１０】凸型のメニスカスを示す図である。
【図１１】凹型のメニスカスを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明の実施の形態を図面に従って説明する。
【００１５】
図１、２、３、４は、それぞれ本実施の形態に係る反応容器１の構造の一例を示す斜視図、断面図、上面図、側面図である。この反応容器１は、ＥＬＩＳＡなど、抗原抗体反応を用いる免疫測定法（イムノアッセイ）に用いられるものである。
【００１６】
図１〜４に示されるように、反応容器１は、底面部１０および側壁部２０を有する。
【００１７】
底面部１０の表面には、抗体または抗原が固相化される。例えば、サンドイッチＥＬＩＳＡにおいて、底面部１０の表面には、一次抗体が固相化される。
【００１８】
側壁部２０は、底面部１０の周囲に設けられ、免疫測定の工程に対応する１段以上の液体収容部を形成する。図１〜４の例では、側壁部２０は、複数段（具体的には４段）の液体収容部３１，３２，３３，３４を形成する。すなわち、反応容器１は、側壁部２０が複数の段を持つ構造となっている。液体収容部３１，３２，３３，３４のそれぞれの上端開口の周囲には、周縁部３１ａ，３２ａ，３３ａ，３４ａが形成されている。
【００１９】
メニスカスの形成を防止する観点より、液体収容部は、当該液体収容部に対応する工程の予め定められた量の液体が注入された場合に、当該液体収容部の上端開口の周縁部が当該液体の液面と同レベルの水平面を形成するように形成される。
【００２０】
具体的には、液体収容部の容量は、当該液体収容部に対応する工程の予め定められた液量と等しくなっており、当該液体収容部の上端開口の周縁部は水平面状に形成されている。ここで、液体収容部の容量は、上記予め定められた液量と厳密に等しくなくても、略等しければよく、例えばやや少な目になっていてもよい。
【００２１】
一つの態様では、各段の液体収容部が、当該液体収容部の周縁部が液面と同レベルの水平面を形成するように形成される。ただし、このように形成されるのは全部の段でなくてもよく、１段以上の液体収容部のうち少なくとも１つの液体収容部について、上記のように形成されればよい。
【００２２】
好適な一態様では、反応容器１の内側の表面は疎水性である。ただし、親水性であってもよい。
【００２３】
液体収容部の段数や、各液体収容部のサイズ（例えば内径、深さ）など、反応容器１の段構造は、反応系に合わせて適宜設定されればよい。一例を挙げると、反応容器１のサイズは、例えば、底面部１０の直径が８ｍｍ、４段目の液体収容部３４の上端開口の直径が１２ｍｍ、１段目の深さが０．２ｍｍ、全体の深さ（４段目の液体収容部３４の上端開口から底面部１０までの深さ）が１．６ｍｍ程度である。
【００２４】
図５は、本実施の形態に係る反応容器１を用いる免疫測定の手順の一例を示すフローチャートである。以下、図５を参照して、免疫測定の手順の一例を説明する。ここでは、サンドイッチＥＬＩＳＡを例にとり、底面部１０の表面には一次抗体が固相化されているものとする。なお、以下の測定は、例えば自動分析装置によって実行される。
【００２５】
まず、反応容器１に、稀釈用のバッファ液を分注し（Ｓ１）、血清や尿など、測定対象となる抗原を含む検体を分注する（Ｓ２）。例えば、バッファ液は９μＬであり、検体は１μＬである。
【００２６】
ここで、１段目の液体収容部３１の容量はバッファ液および検体の分注量と等しいか、やや少な目になっており、液体収容部３１にバッファ液および検体を分注すると、液面の縁がちょうど１段目の液体収容部３１の周縁部３１ａの位置に達する。このとき、周縁部３１ａは液面と同レベルの水平面となっているので、液面は略平坦となり、実質的にメニスカスは形成されない。これにより、分注された液が、底面部１０の表面全体を覆うようになる。
【００２７】
なお、分注の方式としては、例えば、非接触で微小量の分注が可能なインクジェット方式を用い、反応容器１または分注ノズルを水平方向に移動させて、分注領域に液滴をまんべんなく分注する。このとき、液が液体収容部３１の外にはみ出ないように、分注および水平移動が制御される。
【００２８】
上記検体の分注後、数分間インキュベートして、一次反応させ、一次抗体に抗原を結合させる（Ｓ３）。
【００２９】
次に、一次洗浄（Ｂ／Ｆ分離）を行って、未反応の抗原などを除去する（Ｓ４、Ｓ５）。ここでは、一次洗浄を２回に分けて行い、１回目および２回目の洗浄を行う。１回目の洗浄では、反応容器１に最大５０μＬの洗浄液を溜める。この洗浄液の量は、２段目の液体収容部３２の容量より大きく、かつ３段目の液体収容部３３の容量未満である。したがって、１回目の洗浄では、洗浄液の液面は２段目と３段目の間まで達する。２回目の洗浄では、反応容器１に最大１５０μＬの洗浄液を溜める。この洗浄液の量は、３段目の液体収容部３３の容量より大きく、かつ４段目の液体収容部３４の容量未満である。したがって、２回目の洗浄では、洗浄液の液面は３段目と４段目の間まで達する。
【００３０】
次に、酵素標識された二次抗体の溶液を反応容器１に分注する（Ｓ６）。この二次抗体溶液の分注量は例えば３０μＬである。
【００３１】
ここで、２段目の液体収容部３２の容量は二次抗体溶液の分注量と等しいか、やや少な目になっており、二次抗体溶液の液面の縁はちょうど２段目の液体収容部３２の周縁部３２ａの位置に達する。このとき、周縁部３２ａは液面と同レベルの水平面となっているので、液面は略平坦となり、実質的にメニスカスは形成されない。なお、分注の方式は、上記検体の場合と同様である。
【００３２】
上記二次抗体溶液の分注後、数分間インキュベートして、二次反応させ、抗原に二次抗体を結合させる（Ｓ７）。これにより、一次抗体／目的とする抗原／二次抗体複合体が生成される。
【００３３】
次に、二次洗浄（Ｂ／Ｆ分離）を行って、未反応の二次抗体などを除去する（Ｓ８、Ｓ９）。ここでは、二次洗浄を２回に分けて行い、１回目および２回目の洗浄を行う。洗浄液の液量は一次洗浄と同様である。具体的には、１回目の洗浄では、反応容器１に最大５０μＬの洗浄液が溜められ、洗浄液の液面は２段目と３段目の間まで達する。２回目の洗浄では、反応容器１に最大１５０μＬの洗浄液が溜められ、洗浄液の液面は３段目と４段目の間まで達する。
【００３４】
次に、発光基質を反応容器１に分注する（Ｓ１０）。この発光基質の分注量は例えば５０μＬである。この分注量は、２段目の液体収容部３２の容量より大きく、かつ３段目の液体収容部３３の容量未満である。したがって、発光基質の液面は２段目と３段目の間まで達する。ただし、発光基質の分注量は、発光基質の液面がちょうど３段目の液体収容部３３の周縁部３３ａの位置に達する液量とされてもよい。
【００３５】
上記発光基質の分注後、数分間インキュベートして、酵素と発光基質を反応させる（Ｓ１１）。
【００３６】
そして、光電子増倍管などの光検出器によって、反応容器１内の液体の発光量を測定する（Ｓ１２）。
【００３７】
ところで、図１〜４に示される構造では、反応容器１は直角の隅部を含み、この隅部に洗浄液が残る可能性がある。
【００３８】
そこで、好適な一態様では、側壁部２０は、底面部１０および周縁部のうち少なくとも１つの外周側の側面が外側に向かって上昇する傾斜面となるように形成される。傾斜面は、望ましくは曲面であり、より望ましくは緩やかに上昇する曲面である。例えば、図６，７に示されるように、反応容器１は、多段のお椀状の構造を有する。
【００３９】
なお、反応容器１の段構造は、図１〜４のような階段状に限られず、例えば図８，９に示されるような、側面にアンダーカットやシボ加工を持つ構造など、階段状以外の構造とされてもよい。
【００４０】
以上説明した本実施の形態によれば、以下の効果が得られ得る。
【００４１】
（１）本実施の形態に係る反応容器は、抗原抗体反応を用いる免疫測定に用いられる反応容器であって、抗体または抗原が表面に固相化された底面部と、当該底面部の周囲に設けられ、免疫測定の工程に対応する１段以上の液体収容部を形成する側壁部とを有する。そして、上記液体収容部は、当該液体収容部に対応する工程の予め定められた量の液体が注入された場合に、当該液体収容部の上端開口の周縁部が液体の液面と同レベルの水平面を形成するように形成される。このため、免疫測定の少なくとも１つの工程において、予め定められた量の液体を注入した場合に、液面が略平坦となり、実質的にメニスカスが形成されない。これにより、底面部の表面全体に均一に液体が行き渡り、均一な抗原抗体反応が得られる。
【００４２】
（２）反応容器の形状によりメニスカスの形成を防止するので、容器の材料を選択することによってメニスカスの形成を防止する場合と比較して、容器の材料の種類が制限されない。また、複数の種類の部材を組み合わせて用いたり、一部分だけ親水性処理をしたりする必要がない。
【００４３】
（３）容量の小さな反応容器でも、液がはねたり、あふれたりしないよう洗浄することができる。
【００４４】
（４）液量に対する固相化面積の割合が大きくなるので、反応が早く進む。
【００４５】
（５）複数段の液体収容部を形成することにより、複数種類の液量に対応することができる。例えば、複数の液体（検体や試薬）の異なる分注量に対応できる。
【００４６】
（６）一つの態様では、側壁部は、底面部および周縁部のうち少なくとも１つの外周側の側面が外側に向かって上昇する傾斜面となるように形成される。この態様によれば、反応容器の隅の部分に洗浄液が残ることを回避または軽減することができる。
【００４７】
なお、本発明は、上記実施の形態に限定されるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲内で種々変更することができる。
【符号の説明】
【００４８】
１  反応容器、１０  底面部、２０  側壁部、３１〜３４  液体収容部、３１ａ〜３４ａ  周縁部。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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