(57)【要約】      （修正有）【課題】微生物代謝産物の環境中で分解されやすいという特長を備え、環境負荷を考えた活性物質の製法及びそれらを有効成分として含有する農薬を提供する。【解決手段】除草活性又は植物生長調節活性を有する新規なＡ−８７７７４化合物又はその塩、それらを生産する微生物、それらの製法、それらを有効成分として含有する農薬（特に、除草剤又は植物生長調節剤）、それらを用いる方法、及び微生物の培養。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記性状：
１）分子量：６６８、
２）分子式：Ｃ18Ｈ29Ｎ4Ｏ17ＰＳ2、
３）重水中で測定したときの1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（δppm）：５．８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ）、５．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ）、４．５６（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）、４．４２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．２，２．９Ｈｚ）、４．３８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．２，３．７Ｈｚ）、４．３０〜４．２７（２Ｈ，ｍ）、４．２４〜４．２３（２Ｈ，ｍ）、４．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ）、３．９７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．７，２．１Ｈｚ）、３．６１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．３，１０．３Ｈｚ）、３．５５（１Ｈ，ｍ）、３．５２（１Ｈ，ｍ）、３．３３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．４，１．８Ｈｚ）、２．７２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．０，６．６Ｈｚ）、１．４２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）、
４）重水中で測定したときの13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（δppm）：１７８．６（ｓ）、１７４．０（ｓ）、１５４．８（ｓ）、９１．４（ｓ）、８９．２（ｄ）、８７．６（ｄ）、８０．８（ｄ）、７４．８（ｄ）、７３．５（ｄ）、７０．２（ｄ）、７０．２（ｄ）、７０．０（ｔ）、６３．７（ｄ）、６０．６（ｄ）、５３．８（ｔ）、３６．５（ｔ）、３０．３（ｔ）、１８．３（ｑ）、
５）ＫＢｒディスクで測定したときの赤外線吸収スペクトル（νmaxcm−１）：３４２３，１７０３，１６３９，１４８７，１４５０，１４０６，１３８３，１３３９，１２５８，１２１７，１１８４，１０８８，１０６７，９３７，８９９，８２７，５３６、及び
６）比旋光度：［α］D24＋４０．０°（ｃ，０．２２、Ｈ２Ｏ中）
を有する化合物Ａ−８７７７４−１又はその塩。
【請求項２】
下記性状：
１）分子量：６６６、
２）分子式：Ｃ18Ｈ27Ｎ4Ｏ17ＰＳ2、
３）重水中で測定したときの1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（δppm）：７．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ）、５．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ）、５．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ）、５．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ）、４．５７（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）、４．５５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ）、４．４６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．２，２．２Ｈｚ）、４．３４〜４．３２（３Ｈ，ｍ）、４．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ）、４．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ）、３．９６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．６，１．７Ｈｚ）、３．６１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．４，１０．１Ｈｚ）、３．３２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ）、１．４２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）、
４）重水中で測定したときの13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（δppm）：１７８．６（ｓ）、１６６．３（ｓ）、１５１．８（ｓ）、１４１．７（ｄ）、１０２．８（ｄ）、９１．３（ｓ）、８９．３（ｄ）、８９．２（ｄ）、８１．５（ｄ）、７４．８（ｄ）、７３．５（ｄ）、７３．４（ｄ）、６９．５（ｄ）、６９．４（ｔ）、６３．７（ｄ）、６０．６（ｄ）、５３．８（ｔ）、１８．３（ｑ）、
５）ＫＢｒディスクで測定したときの赤外線吸収スペクトル（νmaxcm−１）：３３９９，１７０６，１４５５，１４０５，１３４６，１２６６，１１８５，１０８７，１０６７，９３４，９００，８２６，５３４、及び
６）比旋光度：［α］D24＋４７．２°（ｃ，１．０、Ｈ２Ｏ中）
を有する化合物Ａ−８７７７４−２又はその塩。
【請求項３】
下記性状：
１）分子量：８２８、
２）分子式：Ｃ24Ｈ37Ｎ4Ｏ22ＰＳ2、
３）重水中で測定したときの1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（δppm）：７．７４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ）、５．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ）、５．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ）、５．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ）、５．０１（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）、４．５７（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）、４．５７（１Ｈ，ｍ）、４．５０〜４．４８（３Ｈ，ｍ）、４．４１（１Ｈ，ｍ）、４．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ）、４．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ）、４．０４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．３，１．８Ｈｚ）、３．９６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．５，１．３Ｈｚ）、３．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ）、３．８５（１Ｈ，ｍ）、３．７１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．３，４．４Ｈｚ）、３．６３〜３．６１（３Ｈ，ｍ）、３．３２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ）、１．４２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）、
４）重水中で測定したときの13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（δppm）：１７８．６（ｓ）、１６６．３（ｓ）、１５１．８（ｓ）、１４１．６（ｄ）、１０２．９（ｄ）、１００．３（ｄ）、９１．３（ｓ）、８９．２（ｄ）、８９．１（ｄ）、８０．２（ｄ）、７４．８（ｄ）、７４．１（ｄ）、７３．８（ｄ）、７３．５（ｄ）、７２．２（ｄ）、７０．３（ｄ）、６９．９（ｄ）、６９．３（ｔ）、６６．８（ｄ）、６３．７（ｄ）、６１．０（ｔ）、６０．６（ｄ）、５３．７（ｔ）、１８．３（ｑ）、
５）ＫＢｒディスクで測定したときの赤外線吸収スペクトル（νmaxcm−１）：３３９６，１７０５，１４０２，１３４０，１２６５，１１８４，１０９０，１０６３，９３７，８９９，８２５，５３８、及び
６）比旋光度：［α］D24＋７８．７°（ｃ，１．０、Ｈ２Ｏ中）
を有する化合物Ａ−８７７７４−３又はその塩。
【請求項４】
ストレプトマイセス属に属し、請求項１、２又は３記載の化合物を生産することを特徴とする微生物。
【請求項５】
ストレプトマイセス・エスピー（Streptomyces sp.）ＳＡＮＫ  ６１８０５（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０８４０）。
【請求項６】
請求項４又は５記載の微生物を培養し、培養物から請求項１、２又は３記載の化合物を採取することを特徴とする請求項１、２又は３記載の化合物の製法。
【請求項７】
請求項１、２又は３記載の化合物を有効成分として含有する農薬。
【請求項８】
請求項１、２又は３記載の化合物を有効成分として含有する除草剤。
【請求項９】
請求項１、２又は３記載の化合物を有効成分として含有する植物生長調節剤。
【請求項１０】
雑草の除草方法であって、請求項１、２又は３記載の化合物を雑草又は土壌に処理する方法。
【請求項１１】
雑草が、畑作雑草及び／又は水田雑草である請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
植物生長を調節する方法であって、請求項１、２又は３記載の化合物を植物体に処理する方法。
【請求項１３】
請求項４又は５記載の微生物を培養することにより、得ることができる培養物。
【請求項１４】
請求項１３記載の培養物を含有する農薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ａ−８７７７４化合物又はその塩、それらを生産する微生物、それらの製法、それらを有効成分として含有する農薬（特に、除草剤又は植物生長調節剤）、それらを用いる方法、及び微生物の培養物に関する。
【背景技術】
【０００２】
微生物は様々な生理活性物質を生産し、その一部は農業分野において生産性向上のために有効に利用されている。例えば、ミルベマイシン類、アベルメクチン類やスピノシン類が殺虫剤として、ブラストサイジンやカスガマイシンが殺菌剤として実用化されている。
【０００３】
一方、除草剤の分野ではビアラホスが商品化されている。
【０００４】
微生物代謝産物は、農薬として使用された場合、環境中で分解されやすいという利点を有しており、これは環境負荷を考えた場合、これからの農薬が備えるべき望ましい性質と言える。しかし、除草活性を有する化合物としては、先の化合物以外は実用化に至っておらず、新規な活性物質の製造が望まれている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
発明の目的は、除草活性又は植物生長調節活性を有する新規なＡ−８７７７４化合物又はその塩、それらを生産する微生物、それらの製法、それらを有効成分として含有する農薬（特に、除草剤又は植物生長調節剤）、それらを用いる方法、及び微生物の培養物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記問題点に鑑み、微生物代謝産物の探索を鋭意進めた結果、ストレプトマイセス（Streptomyces）に属する微生物の培養液中に極めて強い除草活性を有する複数の化合物が存在することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち、本発明は、Ａ−８７７７４−１、Ａ−８７７７４−２又はＡ−８７７７４−３で表されるＡ−８７７７４化合物又はその塩、当該化合物を生産する微生物、当該化合物の製法、当該化合物を有効成分として含有する農薬（特に除草剤及び植物生長調節剤）、当該化合物を用いる除草方法及び植物生長を調節する方法、当該微生物を培養することにより得ることができる培養物、当該培養物を含有する農薬を提供する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の新規なＡ−８７７７４化合物は、優れた除草作用又は植物生長調節作用を有しており、農薬（特に、除草剤又は植物生長調節剤）として、有用である。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は、化合物Ａ−８７７７４−１の1Ｈ−核磁気共鳴スペクトルを示す。
【図２】図２は、同化合物の１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトルを示す。
【図３】図３は、同化合物の赤外吸収スペクトルを示す。
【図４】図４は、化合物Ａ−８７７７４−２の1Ｈ−核磁気共鳴スペクトルを示す。
【図５】図５は、同化合物の１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトルを示す。
【図６】図６は、同化合物の赤外吸収スペクトルを示す。
【図７】図７は、化合物Ａ−８７７７４−３の1Ｈ−核磁気共鳴スペクトルを示す。
【図８】図８は、同化合物の１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトルを示す。
【図９】図９は、同化合物の赤外吸収スペクトルを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明の新規な化合物Ａ−８７７７４−１は、以下の性状：
１）分子量：６６８、
２）分子式：Ｃ18Ｈ29Ｎ4Ｏ17ＰＳ2、
３）重水中で測定したときの1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（δppm）：５．８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ）、５．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ）、４．５６（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）、４．４２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．２，２．９Ｈｚ）、４．３８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．２，３．７Ｈｚ）、４．３０〜４．２７（２Ｈ，ｍ）、４．２４〜４．２３（２Ｈ，ｍ）、４．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ）、３．９７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．７，２．１Ｈｚ）、３．６１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．３，１０．３Ｈｚ）、３．５５（１Ｈ，ｍ）、３．５２（１Ｈ，ｍ）、３．３３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．４，１．８Ｈｚ）、２．７２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．０，６．６Ｈｚ）、１．４２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）、
４）重水中で測定したときの13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（δppm）：１７８．６（ｓ）、１７４．０（ｓ）、１５４．８（ｓ）、９１．４（ｓ）、８９．２（ｄ）、８７．６（ｄ）、８０．８（ｄ）、７４．８（ｄ）、７３．５（ｄ）、７０．２（ｄ）、７０．２（ｄ）、７０．０（ｔ）、６３．７（ｄ）、６０．６（ｄ）、５３．８（ｔ）、３６．５（ｔ）、３０．３（ｔ）、１８．３（ｑ）、
５）ＫＢｒディスクで測定したときの赤外線吸収スペクトル（νmaxcm−１）：３４２３，１７０３，１６３９，１４８７，１４５０，１４０６，１３８３，１３３９，１２５８，１２１７，１１８４，１０８８，１０６７，９３７，８９９，８２７，５３６、及び
６）比旋光度：［α］D24＋４０．０°（ｃ，０．２２、Ｈ２Ｏ中）
を有する。
【００１１】
本発明の新規な化合物Ａ−８７７７４−２は、以下の性状：
１）分子量：６６６、
２）分子式：Ｃ18Ｈ27Ｎ4Ｏ17ＰＳ2、
３）重水中で測定したときの1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（δppm）：７．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ）、５．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ）、５．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ）、５．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ）、４．５７（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）、４．５５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ）、４．４６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．２，２．２Ｈｚ）、４．３４〜４．３２（３Ｈ，ｍ）、４．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ）、４．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ）、３．９６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．６，１．７Ｈｚ）、３．６１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．４，１０．１Ｈｚ）、３．３２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ）、１．４２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）、
４）重水中で測定したときの13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（δppm）：１７８．６（ｓ）、１６６．３（ｓ）、１５１．８（ｓ）、１４１．７（ｄ）、１０２．８（ｄ）、９１．３（ｓ）、８９．３（ｄ）、８９．２（ｄ）、８１．５（ｄ）、７４．８（ｄ）、７３．５（ｄ）、７３．４（ｄ）、６９．５（ｄ）、６９．４（ｔ）、６３．７（ｄ）、６０．６（ｄ）、５３．８（ｔ）、１８．３（ｑ）、
５）ＫＢｒディスクで測定したときの赤外線吸収スペクトル（νmaxcm−１）：３３９９，１７０６，１４５５，１４０５，１３４６，１２６６，１１８５，１０８７，１０６７，９３４，９００，８２６，５３４、及び
６）比旋光度：［α］D24＋４７．２°（ｃ，１．０、Ｈ２Ｏ中）
を有する。
【００１２】
本発明の新規な化合物Ａ−８７７７４−３は、以下の性状：
１）分子量：８２８、
２）分子式：Ｃ24Ｈ37Ｎ4Ｏ22ＰＳ2、
３）重水中で測定したときの1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（δppm）：７．７４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ）、５．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ）、５．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ）、５．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ）、５．０１（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）、４．５７（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）、４．５７（１Ｈ，ｍ）、４．５０〜４．４８（３Ｈ，ｍ）、４．４１（１Ｈ，ｍ）、４．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ）、４．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ）、４．０４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．３，１．８Ｈｚ）、３．９６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．５，１．３Ｈｚ）、３．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ）、３．８５（１Ｈ，ｍ）、３．７１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．３，４．４Ｈｚ）、３．６３〜３．６１（３Ｈ，ｍ）、３．３２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ）、１．４２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）、
４）重水中で測定したときの13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（δppm）：１７８．６（ｓ）、１６６．３（ｓ）、１５１．８（ｓ）、１４１．６（ｄ）、１０２．９（ｄ）、１００．３（ｄ）、９１．３（ｓ）、８９．２（ｄ）、８９．１（ｄ）、８０．２（ｄ）、７４．８（ｄ）、７４．１（ｄ）、７３．８（ｄ）、７３．５（ｄ）、７２．２（ｄ）、７０．３（ｄ）、６９．９（ｄ）、６９．３（ｔ）、６６．８（ｄ）、６３．７（ｄ）、６１．０（ｔ）、６０．６（ｄ）、５３．７（ｔ）、１８．３（ｑ）、
５）ＫＢｒディスクで測定したときの赤外線吸収スペクトル（νmaxcm−１）：３３９６，１７０５，１４０２，１３４０，１２６５，１１８４，１０９０，１０６３，９３７，８９９，８２５，５３８、及び
６）比旋光度：［α］D24＋７８．７°（ｃ，１．０、Ｈ２Ｏ中）
を有する。
【００１３】
Ａ−８７７７４化合物の塩は、Ａ−８７７７４化合物の除草作用又は植物生長調節作用を損なわない限り任意の塩であることができる。Ａ−８７７７４化合物の塩は、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩のようなアルカリ金属又はアルカリ土類金属との塩；アンモニウム塩；又はイソプロピルアミン及びトリエチルアミンのような有機アミンとの塩であり得、好ましくは、ナトリウム塩である。
【００１４】
本発明のＡ−８７７７４化合物は、微生物を培養して、その培養物から単離することができる。
【００１５】
本発明の化合物Ａ−８７７７４の製造法において用いられるストレプトマイセス（Streptomyces）属に属する菌株としては、例えば、ストレプトマイセス・エスピー（Streptomyces sp.）ＳＡＮＫ  ６１８０５株を挙げることができる。ＳＡＮＫ  ６１８０５株の菌学的特徴は、次のとおりである。なお、ＳＡＮＫ  ６１８０５株の形態的性質、各種培養基上の諸性質、生理学的性質、化学分類学的性質及び１６ＳｒＲＮＡ遺伝子などの分類学的解析は、「放線菌の分類と同定」（日本放線菌学会編、日本学会事務センター刊、２００１年）に記載された方法に従った。
【００１６】
１．形態学的特徴
ＳＡＮＫ  ６１８０５株は、ＩＳＰ〔インターナショナル・ストレプトマイセス・プロジェクト（International Streptomyces Project）〕規定の寒天培地上２８℃で１４日間培養後、顕微鏡で観察した。基生菌糸は良好に伸長、分岐し、薄黄味茶、黄味茶乃至灰味黄茶色を示す。ノカルディア（Nocardia）属菌株様の菌糸断裂やジグザグ伸長は観察されない。気菌糸は単純分岐し、白、茶味灰乃至灰味黄茶を示す。気菌糸の先端に１０乃至５０個又はそれ以上の胞子連鎖を形成し、胞子連鎖の形態は直鎖状まれにらせん状を示す。走査型電子顕微鏡による観察での表面構造は平滑（smooth）状を示す。胞子は楕円形であり、その大きさは０．４乃至０．８×０．８乃至１．２μmである。また、気菌糸の車軸分岐、菌核や胞子のうなどの特殊器官は観察されない。
【００１７】
２．各種培養基上の諸性質
各種培養基上で、２８℃で１４日培養後の性状を表１に示す。色調の表示はマンセル方式による日本色彩研究所版「標準色票」のカラーチップ・ナンバーを表す。
【００１８】
【表１】
2011078407.tif 000002
【００１９】
１）「Ｇ」、「ＡＭ」、「Ｒ」及び「ＳＰ」は、それぞれ、「生育」、「気菌糸」、「裏面」及び「可溶性色素」を示す。
２）性状の欄の括弧内の表示はマンセル方式による色調表示である。
【００２０】
３．生理学的性質
２８℃で培養した後、２乃至２１日間観察したＳＡＮＫ  ６１８０５株の生理学的性質を表２に示す。
【００２１】
【表２】
2011078407.tif 000003
【００２２】
１）「培地１」は「トリプトン・イーストエキス・ブロス（ＩＳＰ１）」を示す。
２）「培地２」は、「ペプトン・イーストエキス・鉄寒天（ＩＳＰ６）」を示す。
３）「培地３」は、「チロシン寒天（ＩＳＰ７）」を示す。
４）「培地４」は、「イーストエキス・麦芽エキス寒天（ＩＳＰ２）」を示す。
また、プリドハム・ゴトリーブ寒天培地（ＩＳＰ９）を使用して、２８℃で、１４日間培養した後に観察したＳＡＮＫ  ６１８０５株の炭素源の資化性を表３に示す。
【００２３】
【表３】
2011078407.tif 000004
【００２４】
「＋」は、「利用する」を示し、「±」は、「弱く利用する」を示し、「−」は、「利用しない」を示す。
【００２５】
４．菌体成分について
ＳＡＮＫ  ６１８０５株の化学分類学的性状は、「放線菌の分類と同定」（Identification Manual of Actinomycetes）〔日本放線菌学会編、日本学会事務センター、49-82頁(2001)〕に従い検討した。その結果、細胞壁からＬＬ−ジアミノピメリン酸が検出され、全細胞中の糖成分として特徴的なパターンは認められなかった。主要メナキノン分子種として、ＭＫ−９（Ｈ6）、ＭＫ−９（Ｈ8）が検出された。
【００２６】
５．１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子解析
ＳＡＮＫ  ６１８０５株の１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列（1325bp）を解読し、データベース検索を行った結果、ＳＡＮＫ  ６１８０５株はストレプトマイセス属のクラスターに含まれた。
【００２７】
ＩＳＰ〔インターナショナル・ストレプトマイセス・プロジェクト（International Streptomyces Project）〕基準、ワックスマン著、ジ・アクチノミセテス（S. A. Waksman、The Actinomycetes）第２巻、ブキャナンとギボンズ編、バージーズ・マニュアル（R. E. Buchanan and N. E. Gibbons、Bergey's Manual of Determinative Bacteriology）第８版（1974年）、バージーズ・マニュアル（Bergey's Manual of Systematic Bacteriology）第 4 巻（1989年）、及びストレプトマイセス（Streptomyces）属放線菌に関する最近の文献によって同定を行い、本菌株が放線菌の中でもストレプトマイセス（Streptomyces）属に属すると判断した。そこで、本菌株をストレプトマイセス・エスピー（Streptomyces sp.）ＳＡＮＫ  ６１８０５株と命名した。
【００２８】
以上の結果から、本菌株をストレプトマイセス・エスピー（Streptomyces sp.）ＳＡＮＫ  ６１８０５株（以下、本明細書において、「ＳＡＮＫ  ６１８０５株」という。）と同定した。なお、本菌株は平成１９年（２００７年）６月１９日に、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（住所：日本国茨城県つくば市東１−１−１  中央第６）に国際寄託され、その受託番号はＦＥＲＭ  ＢＰ−１０８４０である。
【００２９】
周知のとおり、放線菌は、自然界において又は人工的な操作（例えば、紫外線照射、放射線照射、化学薬品処理等）により、変異を起こし易く、本発明のＳＡＮＫ  ６１８０５株も同様に変異を起こし易い。本発明にいうＳＡＮＫ  ６１８０５株は、そのすべての変異株を包含する。また、これらの変異株の中には、遺伝学的方法、例えば組み換え、形質導入、形質転換等により得られたものも包含される。即ち、化合物Ａ−８７７７４−１、Ａ−８７７７４−２又はＡ−８７７７４−３を生産する、ＳＡＮＫ  ６１８０５株及びその変異株及びそれらと明確に区別されない菌株は、すべてＳＡＮＫ  ６１８０５株に包含されるものである。
【００３０】
本発明のＡ−８７７７４化合物を生産する菌株（生産菌）を培養するに際し、使用される培地は、炭素源、窒素源、無機イオン及び有機栄養源から選択されたものを適宜含有する培地であり得、合成又は天然培地の何れをも含む。
【００３１】
該栄養源は、従来真菌類及び放線菌類の菌株の培養に利用されている公知のものであり得、微生物が資化できる炭素源、窒素源及び無機塩を含む。
【００３２】
具体的には、炭素源は、例えば、グルコース、フルクトース、マルトース、スクロース、マンニトール、グリセロール、デキストリン、オート麦、ライ麦、トウモロコシ澱粉、ジャガイモ、トウモロコシ粉、大豆粉、綿実油、水飴、糖蜜、大豆油、クエン酸又は酒石酸であり得、単一に、あるいは併用して使用され得る。該炭素源は、一般には、培地量の１〜１０重量％の範囲で用いられるが、この範囲に限定されない。
【００３３】
また、窒素源は、一般に、蛋白質又はその水解物を含有する物質であり得る。好ましい窒素源は、例えば、大豆粉、フスマ、落花生粉、綿実粉、スキムミルク、カゼイン加水分解物、ファーマミン、魚粉、コーンスチープリカー、ペプトン、肉エキス、生イースト、乾燥イースト、イーストエキス、マルトエキス、ジャガイモ、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム又は硝酸ナトリウムであり得、単一に、あるいは併用して使用され得る。該窒素源は、培地量の０．２〜６重量％の範囲で用いられることが好ましい。
【００３４】
更に、栄養無機塩は、ナトリウム、アンモニウム、カルシウム、ホスフェート、サルフェート、クロライド又はカーボネートのイオンを得ることのできる通常の塩類であり得る。また、該栄養無機塩は、カリウム、カルシウム、コバルト、マンガン、鉄、亜鉛、ニッケル又はマグネシウムのような微量の金属でもあり得る。
【００３５】
尚、液体培養に際しては、シリコーン油、植物油又は界面活性剤のような消泡剤を使用することができる。
【００３６】
Ａ−８７７７４化合物を生産する菌株（生産菌、特にＳＡＮＫ  ６１８０５株）を培養して、化合物Ａ−８７７７４−１、Ａ−８７７７４−２又はＡ−８７７７４−３を生産するための培地のｐＨは、好ましくは５．０〜８．０である。
【００３７】
Ａ−８７７７４化合物を生産するための培養温度は、生産菌（特にＳＡＮＫ  ６１８０５株）が目的物質を生産する範囲内で適宜変更し得るが、好ましくは、２２〜３６℃である。
【００３８】
Ａ−８７７７４化合物は、生産菌（特にＳＡＮＫ  ６１８０５株）を好気的に培養し、培養物から採取することにより得られる。そのような培養法は、通常用いられる好気的培養法、例えば固体培養法、振とう培養法又は通気攪拌培養法であり得る。
【００３９】
Ａ−８７７７４化合物は、生産菌（特にＳＡＮＫ  ６１８０５株）の培養液を液体と菌体に分離して、又は分離せずに、その物理化学的性質を利用して、濾液又は培養液から抽出することができ、好ましくは、液体と菌体に分離した後、抽出する。分離は、例えば、遠心分離法又は珪藻土を濾過助剤とする濾過法により行うことができる。
【００４０】
Ａ−８７７７４化合物を菌体から抽出する場合は、菌体に水溶液又は水溶性有機溶媒を添加し、攪拌した後、混合物を、例えば遠心分離法又は珪藻土を濾過助剤とする濾過法に付すことにより、液相を分離する。得られた液相から水溶性有機溶媒を留去し（好ましくは、減圧で留去し）、その後、下記培養液の濾液と同様の操作を行い、化合物Ａ−８７７７４−１、Ａ−８７７７４−２又はＡ−８７７７４−３を得ることができる。抽出に用いられる水溶性有機溶媒は、メタノール、エタノール、アセトン、アセトニトリル又はテトラヒドロフラン或はこれらの混合溶媒であり得、水溶性有機溶媒の添加割合は、０乃至９５容積％である。
【００４１】
Ａ−８７７７４化合物は水溶性物質であり、その物理化学的性状を利用することにより、これらを濾液から抽出・精製することができる。吸着剤としては、例えば活性炭、あるいは合成吸着剤が使用される。このような合成吸着剤は、例えば、ダイヤイオンＨＰ−２０のようなＨＰシリーズ（三菱化学製）又はアンバーライトＸＡＤ−２のようなＸＡＤシリーズ（オルガノ社製）であり得る。Ａ−８７７７４化合物を含む液から上記の如き吸着剤の層を通過させて、含まれる不純物を吸着させて取り除くか、Ａ−８７７７４化合物を一旦吸着させた後、有機溶媒で溶出することもできる。溶出有機溶媒は、例えば、メタノール、エタノール、アセトン、アセトニトリル又はテトラヒドロフランのような水溶性有機溶媒であり得、また、水とこれらの水溶性有機溶媒との混合溶媒、さらに酢酸、蟻酸又はアンモニア水を加えてｐＨを調節した溶媒も使用され得る。また、吸着剤を用いずに、水不混和性の有機溶媒、例えば、酢酸エチル、トルエン、クロロホルム、塩化メチレン又はブタノールなどを、単独で又は組み合わせて使用し、Ａ−８７７７４化合物を含む水溶液中に含まれる不純物を抽出し、除去することも可能である。
【００４２】
このようにして得られるＡ−８７７７４化合物の抽出分画を、通常の有機化合物の精製に用いられる方法に供すことにより、さらに精製することができる。そのような精製方法は、例えば、吸着、分配、陽イオン交換、陰イオン交換、ゲル濾過のようなカラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー又は高速液体クロマトグラフィーであり得る。これらのクロマトグラフィーに用いる担体は、例えば、シリカゲル、アルミナ、フロリジル、セルロース、活性炭、ダウエックス５０Ｗ、アンバーライトＣＧ−４００、セファデックスＬＨ−２０、セファデックスＧ−２５又はシリカゲルＣ１８であり得、これらを単独に又は任意の順序で組み合わせて用いることにより、Ａ−８７７７４化合物を効率よく、単離・精製することができる。
【００４３】
上記のようにして生産菌（特にＳＡＮＫ  ６１８０５株）を培養することにより得ることができる培養物から得られる本発明のＡ−８７７７４化合物は、優れた除草活性を有するので、農薬、特に除草剤として、雑草又は土壌に処理することにより、農園芸分野での有害雑草、特に畑作雑草又は水田雑草を除草するために使用される。
【００４４】
そのような有害な畑作雑草は、例えば、イヌホウズキ及びチョウセンアサガオのようなナス科雑草、イチビ及びアメリカキンゴジカのようなアオイ科雑草、マルバアサガオ及びセイヨウヒルガオのようなヒルガオ科雑草、イヌビユ及びアオゲイトウのようなヒユ科雑草、オナモミ、ブタクサ、ノボロギク及びヒメジョンのようなキク科雑草、カラシナ及びナズナのようなアブラナ科雑草、シロザ及びコアカザのようなアカザ科雑草、フィールドパンジーのようなスミレ科雑草、ハコベのようなナデシコ科雑草、シロツメクサ、クサネム及びエビスグサのようなマメ科雑草、スベリヒユのようなスベリヒユ科雑草、オオイヌノフグリのようなゴマノハグサ科雑草、ホトケノザのようなシソ科雑草、コニシキソウのようなトウダイグサ科雑草、イヌビエ、セイバンモロコシ、メヒシバ、オヒシバ、スズメノカタビラ、ススメノテッポウ、カラスムギ、ボウムギ、ライグラス、エノコログサ及びギョウギシバのようなイネ科雑草、コゴメガヤツリ及びキハマスゲのようなカヤツリグサ科雑草、ツユクサ及びマルバツユクサのようなツユクサ科雑草、スギナのようなトクサ科雑草であり得る。また、有害な水田雑草はタイヌビエのようなイネ科雑草、ホタルイ、ミズガヤツリ、マツバイ、クログワイ及びシズイのようなカヤツリグサ科雑草、オモダカ及びウリカワのようなオモダカ科雑草アゼナ、コナギ、キカシグサ及びミゾハコベのような広葉雑草であり得る。
【００４５】
このような雑草に対するＡ−８７７７４化合物の除草活性は、対象雑草の発芽後に茎葉部に薬液を処理し、又は対象雑草の発芽前に対象雑草の種子又は塊茎が存在する土壌に薬液を処理し、その後の雑草の生育を対照の無処理群と比較することにより、評価することができる。
【００４６】
Ａ−８７７７４化合物は、畑地及び水田のみならず、果樹園、桑園、非農耕地及び山林においても使用することができる。
【００４７】
更に、本発明のＡ−８７７７４化合物は、植物を枯死させることなく、その生長を調節又は抑制する作用も有するので、植物生長調節剤として使用される。Ａ−８７７７４化合物を、適当な時期、濃度で植物体に処理することにより植物生長を調節することができるので、例えば水稲の短捍化による倒伏防止、芝生の生育抑制による刈込回数の低減等の種々の有用性が期待される。
【００４８】
Ａ−８７７７４化合物は、農薬製剤として慣用される製剤にして施用することができる。そのような製剤は、例えば、乳剤、水和剤、顆粒水和剤、水溶剤、液剤、粉剤、粒剤、懸濁剤、フロアブル剤、ドライフロアブル剤、又はポリマー物質によるカプセル剤であり得る。
【００４９】
これら製剤は、適当な添加剤及び担体を含有しても良く、固形剤に含有させるそのような添加剤及び担体は、例えば、大豆粉、小麦粉、澱粉及び結晶セルロースのような植物性粉末；珪藻土、燐灰土、石膏、タルク、ベントナイト、ゼオライト及びクレイのような鉱物性粉末；安息酸ソーダ、尿素、炭酸カルシウム及び芒硝のような有機若しくは無機化合物であり得る。また、液状剤に含有させる添加剤及び担体は、例えば、大豆油、ナタネ油及び綿実油のような植物油；鉱物油；ケロシン、キシレン及びトルエンのような芳香族炭化水素類；ホルムアミド及びジメチルホルムアミドのようなアミド類；エチレングリコールアセテート及びコハク酸ジエチルのようなエステル類；メチルイソブチルケトン及びアセトンのようなケトン類；エチレングリコールエチルエーテルのようなエーテル類；エチレングリコール及びイソプロパノールのようなアルコール類；ジメチルスルホキシド；トリクロルエチレン；又は水であり得る。液状剤を均一且つ安定にするために、界面活性剤を添加しても良い。
【００５０】
適当な非イオン性界面活性剤としては、例えば、脂肪酸のスクロースエステル、ラウリルアルコール、ステアリルアルコール及びオレイルアルコールのような高級脂肪族アルコールの酸化エチレン重合付加物；イソオクチルフェノール及びノニルフェノールのようなアルキルフェノールの酸化エチレン重合付加物；ブチルナフトール及びオクチルナフトールのようなアルキルナフトールの酸化エチレン重合付加物；パルミチン酸、ステアリン酸及びオレイン酸のような高級脂肪酸の酸化エチレン重合付加物；ステアリル燐酸及びジラウリル燐酸のようなモノ若しくはジアルキル燐酸の酸化エチレン重合付加物；ドデシルアミン及びステアリン酸アミドのような高級脂肪族アミンの酸化エチレン重合付加物；ソルビタンのような多価アルコールの高級脂肪酸エステル；及びその酸化エチレン重合付加物並びに酸化エチレンと酸化プロピレンの共重合体であり得る。
【００５１】
適当な陰イオン性界面活性剤としては、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム及びオレイルアルコール硫酸エステルアミン塩のようなアルキル硫酸エステル塩；スルホコハク酸ジオクチルエステルナトリウム、オレイン酸ナトリウム及びステアリン酸ナトリウムのような脂肪酸塩類；イソプロピルナフタレンスルホン酸ナトリウム、メチレンビスナフタレンスルホン酸ナトリウム、リグニンスルホン酸ナトリウム及びドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムのようなアルキルアリールスルホン酸塩であり得る。また、適当な陽イオン性界面活性剤としては、例えば、高級脂肪族アミン、第４級アンモニウム塩類、アルキルピリジニウム塩類であり得る。
【００５２】
農薬製剤におけるＡ−８７７７４化合物の含有量は、剤型等に依存するが、例えば、上限は１００重量％、下限は０．０１重量％であり、好ましくは、０．１乃至５０重量％である。Ａ−８７７７４化合物の農薬としての施用量は、対象雑草、生長調節の対象植物体、剤型、製剤中の含有量にもよるが、１０アールあたり１０００ｇ乃至０．１ｇであり、好ましくは、１００ｇ乃至１ｇの範囲であり得る。
【００５３】
次に実施例及び試験例を挙げて、本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００５４】
実施例１
化合物Ａ−８７７７４−１及びＡ−８７７７４−２の単離
（１）ＳＡＮＫ  ６１８０５株の培養
下記培地組成で示される培地８０mLを５００mL容三角フラスコに入れ、１２１℃で、３０分間加熱滅菌した。それぞれの培地にStreptomyces sp. ＳＡＮＫ  ６１８０５株をスラントより1白金耳接種し、２８℃で、２１０rpmで３日間回転振盪培養し、種培養液を得た。同じ組成の培地８０mLを５００mL容三角フラスコ１００本に入れ、１２１℃で、３０分間加熱滅菌し、これを室温まで冷却した。これに上記種培養液０．５mLを接種し、２８℃で、２１０rpmで８日間回転振盪培養した。
【００５５】
培地組成
可溶性澱粉                    ４０ｇ
グルコース                    １０ｇ
大豆粉                        １０ｇ
イーストエキス                  ４．５ｇ
コーンスチープリカー            ２．５ｇ
リン酸二水素カリウム            ０．５ｇ
リン酸マグネシウム八水和物      ０．０５ｇ
硫酸亜鉛七水和物                ０．０１ｇ
硫酸ニッケル六水和物            ０．００１ｇ
塩化コバルト六水和物            ０．００１ｇ
ＣＢ−４４２（消泡剤）          ０．０５ｇ
水道水                          １０００mL
滅菌前ｐＨ                      ７．５
【００５６】
（２）化合物Ａ−８７７７４−１及びＡ−８７７７４−２の単離
下記の方法にて活性成分の単離を行った。単離にあたっては、４cm角のポットに入れた水田土で７日間栽培したカラシナに、それぞれの分画画分の０．５mL溶液を散布し、その除草効果にて活性成分を追跡した。
上記（１）で得られた培養液８Ｌを遠心分離機（７５００×ｇ）によって、菌体と液体部とに分けた。菌体部をメタノールと攪拌した後、珪藻土上で濾過した。濾液を減圧下で濃縮した後、培養液液体部と合わせて５Ｌまで濃縮し、ダイヤイオンＨＰ−２０カラム（内径６cm、長さ３１cm）に通し、通過した液とカラムを洗浄した水２．８Ｌを合わせた。これをＤｏｗｅｘ  ５０Ｗ×８カラム（Ｈ＋型：内径６cm、長さ３３cm）に通し、通過した液とカラムを洗浄した水２Ｌを合わせた。次に、これを活性炭カラム（内径６cm、長さ２０cm）に通し、活性成分を吸着させた。カラムを１Ｌの水、２Ｌのメタノール／水（３／１）で洗浄した後、２．５Ｌのメタノール／２．８％アンモニア水（４／１）で活性成分を溶出した。溶出液から、減圧下で溶媒を留去して得た固形物を水８０mLに溶解し、Ａｍｂｅｒｉｔｅ  ＣＧ−４００  ｔｙｐｅＩカラム（Ｃｌ−型：内径４cm、長さ２２cm）に通した。カラムを１Ｌの０．０２Ｎ−ＨＣｌ、１Ｌの０．０１Ｍ−ＮａＣｌを含む０．０２Ｎ−ＨＣｌで順次洗浄した後、１．３Ｌの０．６Ｍ−ＮａＣｌを含む０．０２Ｎ−ＨＣｌで活性成分を溶出した。ＮａＣｌを除くため、これを再度活性炭カラム（内径３cm、長さ２０cm）に通し、カラムを１Ｌの水で洗浄した後、１．５Ｌのメタノール／２．８％アンモニア水（４／１）で活性成分を溶出し、減圧下で溶媒を留去して、３８３mgの固形物を得た。
【００５７】
この固形物をセファデックスＧ−２５カラムクロマトグラフィーで精製した。すなわち、アセトニトリル、水及び酢酸の混合溶媒（容量混合比：７３／２７／０．１）で平衡化したセファデックスＧ−２５カラム（内径２．５cm、長さ４１cm）に、固形物を１mLの水に溶解してから載せ、同じ混合溶媒で溶出し、溶出液を１２mLずつ分画した。除草活性を有する活性成分は、４９から８９番目に溶出したので、この分画の溶媒を減圧下で留去し、固形物１３０mgを得た。
【００５８】
この固形物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により精製した。ＨＰＬＣカラムとしては資生堂ＣＡＰＣＥＬＬ−ＰＡＫ  Ｃ１８  ＵＧ１２０Å（内径２cm、長さ２５cm）を用い、溶離液としてはアセトニトリル、水及び酢酸の混合溶媒（容量混合比：４／９６／０．１）を用い、カラムオーブン温度４０℃、流速１５mL／分で溶出させることにより、保持時間５．６〜９．６分に溶出する化合物Ａ−８７７７４−２の白色粉末１１．３mgと、５．６分以前に溶出する化合物Ａ−８７７７４−１を含む画分８１．３mgを得た。後者を再度、資生堂ＣＡＰＣＥＬＬ−ＰＡＫ  Ｃ１８  ＵＧ１２０Å（内径１cm、長さ２５cm）とアセトニトリル、水及び酢酸の混合溶媒（容量混合比：３／９７／０．１）を用いたＨＰＬＣ（カラムオーブン温度４０℃、流速５mL／分）にて精製し、１３．４〜１６．６分に溶出する化合物Ａ−８７７７４−１の白色粉末２．４mgを得た。
【００５９】
この化合物Ａ−８７７７４−１及びＡ−８７７７４−２は、前述した、分子量、分子式、重水中で測定したときの１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル、重水中で測定したときの１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル、ＫＢｒディスクで測定したときの赤外線吸収スペクトル及び比旋光度を有していた。化合物Ａ−８７７７４−１の1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル、１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル及び赤外吸収スペクトルを、それぞれ、図１、図２及び図３に示し、化合物Ａ−８７７７４−２の1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル、１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル及び赤外吸収スペクトルを、それぞれ、図４、図５及び図６に示す。なお、内部標準物質として、Ａ−８７７７４−１及びＡ−８７７７４−２の1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル及び１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトルには、メタノールを添加した。
測定装置は、下記の通りである。
核磁気共鳴スペクトル：ＪＥＯＬ  ＥＣＡ５００
赤外吸収スペクトル：ＳＨＩＭＡＤＺＵ  ＦＴＩＲ−８４００
比施光度：ＪＡＳＣＯ  ＤＩＰ−３６０
また、ＮＭＲの測定条件は、下記の通りである。
周波数    １Ｈ：５００．１６ＭＨｚ，１３Ｃ：１２５．７７ＭＨｚ
測定温度，積算回数：
Ａ−８７７７４−１    １Ｈ：２３．９℃，８回，
１３Ｃ：２４．６℃，２１６００回，
Ａ−８７７７４−２    １Ｈ：２３．１℃，８回，
１３Ｃ：２４．６℃，４６０００回
【００６０】
実施例２
化合物Ａ−８７７７４−３の単離
（１）ＳＡＮＫ  ６１８０５株の培養
上記の実施例１（１）と同じ組成の培地８０mLを５００mL容三角フラスコ４本に入れ、１２１℃で、３０分間加熱滅菌した。それぞれの培地にStreptomyces sp. ＳＡＮＫ  ６１８０５株をスラントより1白金耳接種し、２８℃で、２１０rpmで回転振盪培養した。７日目と１４日目にグリセロールを２％相当になるように添加し、２２日間培養を行った。
【００６１】
（２）化合物Ａ−８７７７４−３の単離
上記（１）で得られた培養液３２０mLを遠心分離機（７５００×ｇ）によって、菌体と液体部とに分けた。菌体部をメタノールと攪拌した後、珪藻土上で濾過した。濾液を減圧下で濃縮した後、培養液液体部と合わせて濃縮した。これを活性炭カラム（内径１．６cm、長さ１６cm）に通し、活性成分を吸着させた。カラムを１２０mLの水、メタノール／水（１／１）、メタノールで順次洗浄した後、１２０mLのメタノール／２．８％アンモニア水（４／１）で活性成分を溶出した。これを濃縮した後、３mLの水に溶解し、Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ×８カラム（Ｈ＋型：内径１．２cm、長さ９．５cm）に通し、通過した液とカラムを洗浄した水５０mLを合わせた。次に、これをＡｍｂｅｒｉｔｅ  ＣＧ−４００  ｔｙｐｅＩカラム（Ｃｌ−型：内径１．８cm、長さ１２cm）に通した。カラムに６０mLの０．０２Ｎ−ＨＣｌ、８０mLの０．０１Ｍ−ＮａＣｌを含む０．０２Ｎ−ＨＣｌ、２００mLの０．６Ｍ−ＮａＣｌを含む０．０２Ｎ−ＨＣｌを順次流し、２０mLずつ分取したところ、活性成分が５から１４番目の画分に溶出した。ＮａＣｌを除くためこの画分を再度活性炭カラム（内径１．２cm、長さ１０cm）に通し、カラムを５０mLの水で洗浄した後、５０mLのメタノール／２．８％アンモニア水（４／１）で活性成分を溶出し、減圧下で溶媒を留去して、２３７mgの固形物を得た。
【００６２】
この固形物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により精製した。ＨＰＬＣカラムとして資生堂ＣＡＰＣＥＬＬ−ＰＡＫ  Ｃ１８  ＵＧ１２０Å（内径２cm、長さ２５cm）を用い、溶離液としてアセトニトリル、水及び酢酸の混合溶媒（容量混合比：３／９７／０．４）を用い、カラムオーブン温度４０℃、流速１０mL／分で溶出させることにより、保持時間１２．５〜１６．８分に溶出する化合物Ａ−８７７７４−３の白色粉末７．３mgを得た。
【００６３】
この化合物Ａ−８７７７４−３は、前述した、分子量、分子式、重水中で測定したときの１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル、重水中で測定したときの１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル、ＫＢｒディスクで測定したときの赤外線吸収スペクトル及び比旋光度を有していた。化合物Ａ−８７７７４−３の1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル、１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル及び赤外吸収スペクトルを、それぞれ、図７、図８び図９に示す。なお、内部標準物質として、Ａ−８７７７４−３の1Ｈ−核磁気共鳴スペクトルにはアセトンを添加し、Ａ−８７７７４−３の１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトルには、酢酸を添加した。
測定装置は、下記の通りである。
核磁気共鳴スペクトル：ＪＥＯＬ  ＥＣＡ５００
赤外吸収スペクトル：ＳＨＩＭＡＤＺＵ  ＦＴＩＲ−８４００
比施光度：ＪＡＳＣＯ  ＤＩＰ−３６０
また、ＮＭＲの測定条件は、下記の通りである。
周波数    １Ｈ：５００．１６ＭＨｚ，１３Ｃ：１２５．７７ＭＨｚ
測定温度，積算回数：
Ａ−８７７７４−３    １Ｈ：２３．１℃，６４回，
１３Ｃ：２３．９℃，４８０００回
【００６４】
試験例１
茎葉散布試験
化合物Ａ−８７７７４−１、Ａ−８７７７４−２及びＡ−８７７７４−３を０．１％（Ｗ／Ｖ）のニューコール１２００を含む水溶液に溶かして、１００及び５０mg／Ｌの溶液を調製した。４cm角のポットに粒状の水田土を入れ、カラシナ、イチビ、アオゲイトウ及びイヌビエの種子を播種し、温室内で７日間栽培した植物体に、この試験液０．５mLを散布し、１４日後に除草効力を調査した。除草効力は５（枯死）〜０（活性なし）の６段階で評価した。これらの結果は表４に示す。
【００６５】
【表４】
2011078407.tif 000005
【００６６】
これらの結果から、Ａ−８７７７４化合物はいずれも優れた除草効果を示すことが分かった。
【００６７】
試験例２
茎葉散布試験
水田土壌を入れたプラスチックポット〔１０cm×１５cm×３cm（高さ）〕に表２に示した供試植物を播種し、播種後１４日目にＡ−８７７７４−２を植物に散布した。薬液は０．０１％（ｖ／ｖ）のグラミンＳを含む水溶液に溶かした１００mg／Ｌの液を調製し、２０００Ｌ／ha換算の液量で散布を行った。（投与量２００ｇ／ha）。除草効力は１４日後に調査し、５（枯死）〜０（活性なし）の６段階で評価した。これらの結果は表５に示す。
【００６８】
【表５】
2011078407.tif 000006
【００６９】
これらの結果から、化合物Ａ−８７７７４−２は幅広い雑草に優れた除草効果を示すことが分かった。
【００７０】
試験例３
茎葉散布試験
水田土壌を入れたプラスチックポット〔１０cm×１５cm×３cm（高さ）〕に９種の供試植物を播種し、播種後１４日目に０．１％（ｗ／ｖ）のニューユール１２００を含む水溶液に溶かしたＡ−８７７７４−２の６２．５mg／Ｌ、又はＡ−８７７７４−３の２５０mg、６２．５mg／Ｌの液を２０００Ｌ／ha換算の液量で植物に散布した。投与量はそれぞれ１２５ｇ／ha、５００ｇ／ha、１２５ｇ／haとなった。除草効力は１５日後に調査し、５（枯死）〜０（活性なし）の６段階で評価した。これらの結果は表６に示す。
【００７１】
【表６】
2011078407.tif 000007
【００７２】
これらの結果から、化合物Ａ−８７７７４−３も幅広い雑草に優れた除草効果を示すことが分かった。
【００７３】
試験例４
土壌処理試験
水田土壌を入れたプラスチックポット〔１０cm×１５cm×３cm（高さ）〕に７種の供試植物を播種し、１日後にＡ−８７７７４−２又はＡ−８７７７４−３の５０mg／Ｌ又は１２．５mg／Ｌの薬液を滴下処理し、１４日後に生育抑制程度を調査した。薬液の投与量はそれぞれ５００ｇ／ha、１２５ｇ／haになるようにした。除草効力は５（発芽しない）〜０（活性なし）の６段階で評価した。これらの結果は表７に示す。
【００７４】
【表７】
2011078407.tif 000008
【００７５】
これらの結果から、化合物Ａ−８７７７４化合物は土壌処理においても優れた除草効果を示すことが分かった。
【００７６】
試験例５
水田処理試験
水田土壌を入れた直径６cmの容器を湛水し、代かきした後に、６種の水田雑草の種子又は塊茎を植え付けた。２日後にＡ−８７７７４−２又はＡ−８７７７４−３の５０mg／Ｌの薬液を滴下処理し、２６日後に生育抑制程度を調査した。薬液の投与量は５００ｇ／haになるようにした。除草効力は５（発芽しない）〜０（活性なし）の６段階で評価した。これらの結果は表８に示す。
【００７７】
【表８】
2011078407.tif 000009
【００７８】
これらの結果から、化合物Ａ−８７７７４化合物は水田雑草に対しても優れた除草効果を示すことが分かった。
【産業上の利用可能性】
【００７９】
本発明の新規化合物Ａ−８７７７４−１、Ａ−８７７７４−２及びＡ−８７７７４−３は、優れた除草作用及び植物生長調節活性を有し、農薬（特に、農園芸用除草剤及び植物生長調節剤）として、有用である。
【受託番号】
【００８０】
ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０８４０
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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