(57)【要約】      （修正有）【課題】血中におけるｎ-３またはｎ-６ ＰＵＦＡ（多価不飽和脂肪酸）の異常または低いレベルに関連する疾患または状態の予防、防止、改善または治療用処方物の提供。【解決手段】アラキドン酸(ＡＲＡ)を含有する食用処方物であって、それらは１日当たり１５０ｍｇ〜１ｇのＡＲＡを送達するのに適合しており、他のＰＵＦＡ、例えば、ドコサヘキサエン酸(ＤＨＡ)を含有していてもよい。ＤＨＡの用量は１日当たり４００〜６００ｍｇであり、ＡＲＡ：ＤＨＡの比率は１：５〜５：１である。処方物は、ＡＲＡ：ＤＨＡ＝１：１〜１：２の比率でＡＲＡおよびＤＨＡを含有する医薬組成物、または０.１〜５％のＡＲＡを含有する食料品である。かかる処方物は、例えば、妊娠している女性における、あるいは低いＡＲＡレベルに関連する疾患または状態を有する人々に対して、インビボＡＲＡレベルを上昇させるのに用いることができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
用量１５０ｍｇ〜１ｇ/日のアラキドン酸(ＡＲＡ)を送達するのに適合した量でＡＲＡを含有する食用処方物。
【請求項２】
２５０〜５００ｍｇ/日のＡＲＡを送達するのに適合した請求項１記載の処方物。
【請求項３】
さらにドコサヘキサエン酸(ＤＨＡ)を送達するのに適合した請求項１または２記載の処方物。
【請求項４】
用量４００〜６００ｍｇ/日のＤＨＡを送達するのに適合した前記請求項のいずれかに記載の処方物。
【請求項５】
ＡＲＡ：ＤＨＡの比率が１：５〜５：１、例えば、１：１〜１：２である前記請求項のいずれかに記載の処方物。
【請求項６】
１日当たり１回摂取されることを意図した１５０〜７００ｍｇのＡＲＡを含有する食用処方物。
【請求項７】
１日当たり２回摂取されることを意図した７５〜３５０ｍｇのＡＲＡを含有する食用処方物。
【請求項８】
食品または栄養サプリメントである前記請求項のいずれかに記載の食用処方物。
【請求項９】
医薬組成物である前記請求項のいずれかに記載の食用処方物。
【請求項１０】
ＡＲＡ：ＤＨＡ＝１：１〜１：２の比率でＡＲＡおよびＤＨＡを含有する医薬組成物。
【請求項１１】
０.１〜５％のＡＲＡを含有する食料品。
【請求項１２】
下記の女性用の食餌または栄養サプリメントとしてのＡＲＡの使用：
ａ．妊娠している年齢１５〜２０歳の女性；
ｂ．妊娠している年齢４０〜６０歳、例えば、年齢５０〜５５歳の女性；
ｃ．４番目、５番目またはそれ以降の子供を妊娠している女性；
ｄ．双子、三つ子または四つ子を妊娠している女性；
ｅ．妊娠している妊娠１〜３ヶ月の女性；
ｆ．体外人工授精(ＩＶＦ)の結果として妊娠している女性、またはＩＶＦ治療を受けているが、まだ妊娠していない女性；
ｇ．妊娠第２０週またはそれ以降の妊娠している女性；
ｈ．妊娠しているにもかかわらず、栄養不良であるか、乏しい栄養または少しの栄養しか摂取していないか、栄養不良または吸収不良に罹患しているか、あるいは１種またはそれ以上の必須脂肪酸が欠乏している女性；
ｉ．妊娠しようとしている女性；
ｊ．妊娠しており、胎児の健全な子宮内成長を促進しようとする女性；あるいは、
ｋ．授乳しており、その母乳中におけるＡＲＡまたはＥＰＡのレベルを上昇させようとする女性。
【請求項１３】
ＡＲＡが１５０〜７００ｍｇ/日、例えば、２５０〜５００ｍｇ/日で摂取される請求項１２記載の使用。
【請求項１４】
５０歳以上、好ましくは６５歳以上のヒト用の食餌または栄養サプリメントとしてのＡＲＡの使用。
【請求項１５】
妊娠または授乳している非ヒト哺乳動物用の食餌または栄養サプリメントとしてのＡＲＡの使用。
【請求項１６】
ｎ-３またはｎ-６ ＰＵＦＡの異常または低い血中レベルに関連する疾患または状態の予防、防止、改善または治療において補助を行う医薬品を製造するためのＡＲＡの使用。
【請求項１７】
前記疾患または状態が、神経疾患、例えば、精神分裂病、嚢胞性繊維症、突発性イムノグロブリンＡ腎症、多発性硬化症、色素性網膜炎、アッシャー症候群、セリアック病、黄斑変性、パーキンソン病、骨粗鬆症、アルツハイマー病またはフェニルケトン尿症である請求項１６記載の使用。
【請求項１８】
ヒトまたは非ヒトの雌哺乳動物における授乳および/または出産効率もしくは成功、あるいは受胎能力を促進するためのＡＲＡの使用。
【請求項１９】
血中ＡＲＡレベルを上昇させる比率のＡＲＡ：ＤＨＡでの食用処方物中におけるＡＲＡおよびＤＨＡの使用。
【請求項２０】
ＡＲＡ：ＤＨＡの比率が１：５〜５：１である請求項１９記載の使用。
【請求項２１】
ＡＲＡ：ＤＨＡの比率が１：１〜１：２である請求項２０記載の使用。
【請求項２２】
糖尿病患者、アルコール中毒者、薬物常用者、喫煙者、あるいは、免疫無防備状態であるか、または免疫レベルが異常な人に対する請求項１９〜２１のいずれかに記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、ヒトおよび動物の食餌における多価不飽和脂肪酸(ＰＵＦＡ)の供給に関する。さらに具体的には、本発明は、ｎ-６およびｎ-３系の多価不飽和脂肪酸、特にｎ-６脂肪酸のアラキドン酸(ＡＲＡ)およびｎ-３脂肪酸のドコサヘキサエン酸(ＤＨＡ)の供給、ならびに、そのバランスの取れた量の比率に関する。
【０００２】
本発明は、部分的には、ｎ-６およびｎ-３系の至適なバランスが健康および慢性疾患の防止に重要な役割を果たし得るという発見に基づいている。この主な理由は、この２つの系がＣ１８前駆体から長鎖メンバーを形成するために同じ酵素に対して拮抗するということである。その結果として、また、これは従来技術の組成物に生じることであるが、一方の系の過剰なメンバーが他方の系の量を減少させる傾向にある。さらに、２つの系のメンバーは、場合によっては、身体の本質的な機能、例えば、血液凝固および免疫応答に悪影響を与え得る。
【０００３】
食餌にＣ１８ ｎ-６脂肪酸であるリノール酸を供給することは、この脂肪酸が通常の植物油、例えば、コーン油および大豆油に豊富に存在することから、技術的には比較的容易である。また、Ｃ１８ ｎ-３脂肪酸であるα-リノレン酸を含有する植物油、例えば、菜種油が利用可能であるが、それらの安定性が低いので、それほど容易に用いられない。このことから、現代の食餌では、通常、ｎ-３系よりｎ-６系が過剰になる。
【０００４】
それゆえ、ｎ-３脂肪酸は、比較的に欠乏していると疑われる多くの場合に補給すべきであると言われている。一般的には、これはＣ１８前駆体を供給することによって達成することができない。そのＣ２０およびＣ２２誘導体への変換効率が低いからである。それゆえ、Ｃ２０およびＣ２２ ｎ-３脂肪酸(ＥＰＡおよびＤＨＡ)は、それ自体を供給すべきであるということで意見が一致している。
【０００５】
多くの場合、この補給の背後にある原理は、長鎖ｎ-６脂肪酸であるＡＲＡの作用を低減することである。魚油または微生物(藻類)油に由来するｎ-３ ＰＵＦＡの添加は、実際、ＡＲＡレベルを低下させる。魚油の場合、このことは魚油が少量のＡＲＡを含有するという事実にもかかわらず発生する。
【０００６】
このようなＡＲＡ含量の低下は、必ずしも望ましいわけではない。かくして、本発明は、ＡＲＡレベルに悪影響を与えることなく、動物のＤＨＡおよび/またはＥＰＡ状態を強化しうるか、あるいは逆に、ＤＨＡおよび/またはＥＰＡ状態に影響を与えることなく、ＡＲＡを強化しうる調製品を提供しようとするものである。
【０００７】
ＡＲＡおよびｎ-３ ＰＵＦＡの両方を含有する調製品の使用は、以前、乳幼児用フォーミュラへのＰＵＦＡの供給において記載されたことがある。この背後にある原理は、ヒト母乳は乳幼児の発達に有用であると考えられるＡＲＡおよびＤＨＡを相当量含有しているということである。
【０００８】
対照的に、成人の栄養摂取にとって、このようなＰＵＦＡの天然源は存在しないが、ＡＲＡおよびＤＨＡの両方はヒト食餌の成分として見出すことができる。しかし、多数の理由から、これらのＰＵＦＡレベルは至適以下であると思われる。さらに、様々な集団は様々なレベルのこれらＰＵＦＡを有し、このことは適当な用量に影響を与え得る。天然由来のモデルが存在しないので、用いるべきＰＵＦＡの相対的な量を決定する必要があり、本発明は、この問題を扱い、幾つかの応用のためにＰＵＦＡの様々な処方物および比率を提供しようとするものである。
【背景技術】
【０００９】
（背景技術）
エム・マクリデス(M. Makrides)ら[ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・ケミカル・ニュートリション(European Journal of Chemical Nutrition)50：352-357(1996)]は、ＤＨＡの内部摂取(１日当たり０〜１.３ｇのＤＨＡ)を変化させることの母乳脂肪酸に対する影響を評価する研究に言及している。授乳する母親に供給された食餌中のＤＨＡは、母乳ＤＨＡに対する強い特異的な用量依存性の影響を与えたが、ＡＲＡレベルに影響を与えなかった。この研究では、マルテック・コーポレイション(Martek Corporation)(アメリカ合衆国)から商標名ニューロミンズ(NEUROMINSTM)で利用可能な藻類油が用いられた。
【００１０】
WO-A-92/12711(マルテック(Martek))は、ＡＲＡおよびＤＨＡを、例えば、ＡＲＡ：ＤＨＡ＝３：１〜２：１の比率で、特に乳幼児用フォーミュラ中におけるこれらのＰＵＦＡレベルをヒト母乳(ＡＲＡレベルが０.５〜０.６％)に匹敵する量で提供するように含有する配合油に言及している。
【００１１】
多数のＰＵＦＡ含有組成物が現在市販されている。エファナタル(EFANATALTM)はカプセルであり、１日当たり２カプセルを服用することにより、ＤＨＡ(１２５ｍｇ)、ＡＲＡ(８.６ｍｇ)およびＧＬＡ(４０ｍｇ)を毎日摂取することになる。このカプセルは、魚油を主成分とする油を含有する。本出願人は、カプセル中のＡＲＡ含量に対するＤＨＡ含量が高すぎるので、これがインビボＡＲＡレベルを低下させることを見出した。かくして、この製品は、それがＡＲＡを含有するという事実にもかかわらず、実際には、ＡＲＡを上昇させるよりむしろＡＲＡを低下させる組成物である。この製品と本発明の製品との比較は、後に示す。
【００１２】
エファマリン(EFAMARINETM)もカプセルであり、主として魚油およびマツヨイグサ油を含有している。ＥＰＡ(３４ｍｇ)、ＤＨＡ(２２ｍｇ)およびＧＬＡ(６８ｍｇ)を毎日摂取するように１日当たり２カプセルを服用しなければならない。
【００１３】
エファレックス(EFALEXTM)は配合油であり、茶さじ１杯(５ｍｌ)を１日当たり２回服用することを意図し、茶さじ１杯当たりＤＨＡ(１００ｍｇ)、ＧＬＡ(２１ｍｇ)、ＡＲＡ(８ｍｇ)およびタイム油(６ｍｇ)を与える。
【発明の概要】
【００１４】
（発明の開示）
本発明の第１の態様は、１日当たり用量１５０ｍｇ〜１ｇ(のＡＲＡ)を送達するのに適合した量でＡＲＡを含有する食用処方物に関する。
【００１５】
好ましくは、上記処方物は、１日当たり２５０〜９００ｍｇ、例えば、１日当たり２００〜７００ｍｇ、至適には１日当たり２５０〜４００または５００ｍｇのＡＲＡを送達するのに適合している。
【００１６】
食用処方物としては、食餌サプリメント、ならびに(医薬)処方物および調製品、例えば、錠剤、丸剤およびカプセルが挙げられる。さらに、(固形または液状)食料品、例えば、乳製品(マーガリン、バター、牛乳、ヨーグルト)、パン、ケーキ；ドリンク類、例えば、飲料(お茶、コーヒー、ココア、チョコレートドリンク)、フルーツジュース、ソフトドリンク(例えば、炭酸飲料)；菓子；油性食品(スナック、サラダドレッシング、マヨネーズ)、スープ、ソース、炭水化物に富む食品(ご飯、麺類、パスタ)、魚入り食品、ベビーフード(例えば、乳幼児用フォーミュラ、液状または粉末として)、ペットフード、および調理済み食品または電子レンジで調理可能な食品が挙げられる。
【００１７】
ＡＲＡは、任意の適当な起源に由来することができる。天然物(例えば、植物または海産物)の起源に由来していても、また、微生物起源に由来するか、あるいは微生物、例えば、真菌類、細菌類または酵母に由来していてもよい。
【００１８】
適当な真菌類は、ムコラレス(Mucorales)目、例えば、モルチエレラ(Mortierella)、ピチウム(Pythium)またはエントモフトラ(Entomophthora)に属するものである。ＡＲＡの好ましい起源は、モルチエレラ・アルピナ(Mortierella alpina)またはピチウム・インシジオスム(Pythium insidiosum)由来である。適当な市販品の入手可能なＡＲＡ油としては、ＤＳＭ/ヒストブロカデス(Gist-brocades)(ウォーターリングセヴェーグ(Wateringseweg)、P.O. Box. １、2600MA、デルフト(Delft)、オランダ)から商標名オプティマール(OPTIMARTM)で入手可能なもの、およびマルテック・コーポレイション(Martek Corporation)(ドビン・ロード(Dobbin Road)6480番、コロンビア(Columbia)、メリーランド州21045、アメリカ合衆国)から商標名アラスコ(ARASCOTM)で入手可能なものが挙げられる。
【００１９】
ＡＲＡに加えて、１種またはそれ以上の付加的なＰＵＦＡを供給してもよい。これは、ＡＲＡに加えて別のｎ-６ ＰＵＦＡ(例えば、Ｃ１８、Ｃ２０またはＣ２２脂肪酸)であってもよいし、ｎ-３脂肪酸(例えば、Ｃ１８、Ｃ２０またはＣ２２脂肪酸)、特にＥＰＡおよび/またはＤＨＡであってもよい。本発明に用いうる各ＰＵＦＡは、リン脂質として、あるいはトリグリセリドとして、遊離の脂肪酸、脂肪酸エステル(例えば、メチルまたはエチルエステル)の形態でありうる。
【００２０】
上記処方物がｎ-３脂肪酸を含有すれば、これはＥＰＡまたはＤＨＡであることが好ましい。それがＤＨＡであれば、上記処方物は、好ましくはＡＲＡに対して特定されているのと同じ用量、例えば、１日当たり４００〜６００ｍｇのＤＨＡを送達するように適合されている。あるいは、また、加えて、上記処方物がＥＰＡを含有すれば、それは、好ましくは１日当たり用量１５０ｍｇ〜１ｇのＥＰＡ、例えば、１日当たり用量２５０〜５００ｍｇのＥＰＡを送達するように適合されている。
【００２１】
上記処方物が１日に１回服用(食事または摂取)すべきであれば、それは１５０ｍｇ〜１ｇのＡＲＡを含有することができる。１日に２回であれば、上記処方物は、７５ｍｇ〜０.５ｇのＡＲＡを有することができ、１日に３回の場合には、５０ｍｇ〜３３０ｇのＡＲＡ含量など、より頻繁に投与する場合には、比例配分すればよい。存在しうる他のＰＵＦＡ、例えば、ＤＨＡに同じ計算を適用することができる。
【００２２】
上記処方物が１種より多くのＰＵＦＡを含有すれば、各ＰＵＦＡの量は相対的に比率で表現することができる。例えば、ｎ-３ ＰＵＦＡがさらに供給されるのであれば、ＡＲＡ ｎ-３ ＰＵＦＡ(例えば、ＤＨＡまたはＥＰＡ)の比率は、１：５〜５：１、好ましくは２：１〜１：３、至適には１：１〜１：２とすることができる。ＰＵＦＡの相対的な量は、個体の状態に留意しながら、ＰＵＦＡレベルを補給するようにバランスさせる、すなわち増加させる(あるいは、少なくとも有意に減少させないようにする)ことができる。
【００２３】
好ましくは、ＰＵＦＡは油中に存在する。これは純粋な油、加工油(例えば、化学的および/または酵素的に処理した油)または濃縮油でありうる。この油は１０〜１００％のＰＵＦＡを含有しうるが、所望のＰＵＦＡ、例えば、ＡＲＡの含量は、微生物油であれば、２０〜４５％、至適には３０〜４５％であればよい。もちろん、この油は、１種またはそれ以上のＰＵＦＡをこれら百分率の濃度範囲内で含有しうる。この油は、単独の細胞または微生物起源に由来する単独油であってもよいし、これらまたは他の(例えば、植物または海産物)起源に由来する２種またはそれ以上の油の配合油または混合油であってもよい。この油は、例えば、１種またはそれ以上の酸化防止剤(例えば、トコフェロール、ビタミンＥ、パルミチン酸塩またはエステル)を、５０〜８００ｐｐｍ、例えば、１００〜７００ｐｐｍの濃度で含有していてもよい。ＰＵＦＡを製造する適当な方法は、国際特許出願第PCT/EP97/01446(WO-A-97/36996)号、第PCT/EP97/01448(WO-A-97/37032)号およびに第PCT/US92/00517(WO-A-92/13086)号に記載されている。
【００２４】
本発明の第２の態様は、ＡＲＡおよびＤＨＡをＡＲＡ：ＤＨＡ＝１：１〜１：２の比率で含有する(医薬)組成物に関する。このＰＵＦＡの比率は、良好なバランスを提供し、インビボＤＨＡレベルを、非常に高いＤＨＡ含量によりＡＲＡレベルを低下させることなく、上昇させることが判明した。ＤＨＡは、天然物(例えば、海産物)起源に由来することも、微生物起源(例えば、藻類)に由来することができる。
【００２５】
第３の態様は、０.１〜３または５％のＡＲＡを含有する食用処方物(例えば、食料品)に関する。好ましくは、この量は０.５〜１.５または２％、至適には０.３〜０.８％である。適当な食料品は、第１の態様に関連して、すでに考察されている。乳幼児用フォーミュラを製造する好ましい方法は、国際出願第PCT/EP97/01447(WO-A-97/35487)号および第PCT/EP97/01449(WO-A-97/35488)号に記載されている。
【００２６】
適当な処方物としては、例えば、経口的に服用される油を挙げることができる。この油は、そのまま服用してもよいし、例えば、カプセル被膜に入れ、かくして、カプセルの形態であってもよい。被膜またはカプセルは、ゼラチンおよび/またはグリセリンを含有していてもよい。この処方物は、他の成分、例えば、香味剤(例えば、レモンまたはライム香料)を含有していてもよい。
【００２７】
本発明は、正常な健康で十分に食事をした (通常は、適当な食餌療法を行っても、有益であると期待されない)個体のＰＵＦＡレベルを向上させるのに用いられる。しかし、ＰＵＦＡレベルが低いまたは不足している個体に用いることもできる。
【００２８】
かくして、本発明の第４の態様は、下記の女性に対するＡＲＡの(例えば、食餌または栄養サプリメントとしての、あるいは、医薬品を製造するための)使用に関する：
【００２９】
ａ．妊娠している年齢１５〜２０歳の女性；
ｂ．妊娠している年齢４０〜６０歳、例えば、年齢５０〜５５歳の女性；
ｃ．４番目、５番目またはそれ以降の子供を妊娠している女性；
ｄ．双子、三つ子または四つ子を妊娠している女性；
ｅ．妊娠している妊娠１〜３ヶ月の女性；
ｆ．体外人工授精(ＩＶＦ)の結果として妊娠しているか、あるいはＩＶＦ治療を受けているが、まだ妊娠していない女性；
ｇ．妊娠第２０週またはそれ以降の妊娠している女性；
ｈ．妊娠しているにもかかわらず、栄養不良であるか、乏しい栄養または少しの栄養しか摂取していないか、栄養不良または吸収不良に罹患しているか、あるいは１種またはそれ以上の必須脂肪酸(例えば、ＰＵＦＡ)が欠乏している女性；
ｉ．妊娠しようとしている女性；
ｊ．妊娠しており、胎児の健全な子宮内成長を促進しようとする女性；あるいは、
ｋ．授乳しており、その母乳中におけるＡＲＡまたはＥＰＡのレベルを上昇させようとする女性。
【００３０】
(ｈ)の場合、これらの条件は、西欧では比較的まれであるが、アフリカや幾つかのアジアの国々(例えば、パキスタン)の女性に見出しうる。
【００３１】
妊娠している女性の場合、(ｊ)の胎児に対する利益は、母親と胎児との間における体液の輸送には個体差があるので、必ずしも予期できないし、直ちに明白であるとも限らない。胎盤と胎児との結合(臍帯)は大きさおよび生理学的状態が変化することができ、それゆえ、従来は、母親にＰＵＦＡを補給しても、必ずしも胎児がこれらのＰＵＦＡを受け取り、それゆえ胎児も利益を得ることを示さなかった。
【００３２】
第５の態様は、５０歳以上、好ましくは６５歳以上のヒト(男性または女性)に対するＡＲＡの(食餌または栄養サプリメントとしての)使用に関する。
【００３３】
第６の態様は、妊娠または授乳している非ヒト哺乳動物に対するＡＲＡの(食餌または栄養サプリメントとしての)使用に関する。
【００３４】
ＡＲＡは、好ましくは１日当たり１５０〜７００ｍｇ、至適には１日当たり２５０〜５００ｍｇで摂取される。
【００３５】
本発明の第７の態様は、例えば、血中におけるｎ-３またはｎ-６ ＰＵＦＡの異常または低いレベルに関連する疾患または状態の予防、防止、改善または治療用(において補助を行う)医薬品を製造するためのＡＲＡの使用に関する。それゆえ、本発明は、ＡＲＡレベルの低い被験者、例えば、リノール酸(ＬＡ)をＡＲＡに変換できないか、あるいは効果的に変換できない被験者への使用を提供する。それゆえ、適当な患者は、Δ６不飽和化酵素が機能不全、不十分または欠乏していればよい。
【００３６】
ＰＵＦＡ欠乏の(マウス)モデルは、確立され、栄養不良の影響を真似るために用いられている。このモデルは、母親および胎児の両方に対する、妊娠期間中を含めて、本発明の処方物の有利な効果を示している。また、乏しい胎盤輸送や子宮内での成長の遅れを刺激することを可能にし、本発明の様々な態様で述べた個体(および妊娠していれば、胎児)における本発明の処方物を用いた補給の利益を示している。
【００３７】
本出願人は、幾つかの疾患または状態、特に神経疾患が低いインビボＰＵＦＡレベル、特に低い血中ＡＲＡレベルと関連していることを見出した。それゆえ、ＡＲＡの投与またはＰＵＦＡのバランスが、これらの疾患または状態の予防、防止、改善または治療において補助を行い得ると考えられる。問題の疾患としては、神経疾患、例えば、精神分裂病、嚢胞性繊維症、突発性イムノグロブリンＡ腎症、多発性硬化症、色素性網膜炎、アッシャー症候群、セリアック病、黄斑変性、パーキンソン病、骨粗鬆症、アルツハイマー病またはフェニルケトン尿症が挙げられる。
【００３８】
第８の態様は、所望により、ＤＨＡと共に、ヒトまたは非ヒトの雌哺乳動物における授乳および/または出産効率もしくは成功、あるいは受胎能力を促進するためのＡＲＡの使用に関する。
【００３９】
本発明の第９の態様は、血中ＡＲＡレベルを上昇させる比率のＡＲＡ：ＤＨＡでの(食用処方物中における)ＡＲＡおよびＤＨＡの使用に関する。好ましくは、ＡＲＡ：ＤＨＡの比率は１：５〜５：１、例えば、１：１〜１：２である。
【００４０】
本発明は、特に、ＡＲＡレベルの低い人々、例えば、糖尿病患者、アルコール中毒者、薬物常用者、喫煙者、あるいは、免疫レベルが異常または低いか、あるいは免疫無防備状態の被験者に対する応用である。
【００４１】
第４〜第９の態様の使用としては、ＡＲＡ(および所望により、ＤＨＡ)を、そのまま、あるいは処方物で、被験者(個体、ヒトまたは動物)に投与する方法(ここで、かかる被験者は、投与を必要としているか、あるいは投与により利益を得るものとする)、あるいは特定の目的を持った医薬品の製造におけるそれらの使用が挙げられる。処方物は、必要ならば、ＧＬＡおよび/またはＤＧＬＡを除外してもよい。
【００４２】
ＡＲＡ(および存在すれば、ＤＨＡ)の用量または量は、好ましくは必須脂肪酸(ＥＦＡ)充足指数(２０：４ ｎ-６(ＡＲＡ)のレベルを２０：３ ｎ-９脂肪酸(ミード(mead)酸)のレベルで割った値として定義される)および/またはＥＦＡバランス指数(２２：６ ｎ-３(ＤＨＡ)のレベルを２２：５ ｎ-６のレベルで割った値として定義される)を上昇させるようなものである。ここで、レベルとしては、血液(例えば、赤血球)、脳、胎盤、肝臓、腸、血漿または胎児中のレベルが挙げられる。
【００４３】
本発明のある態様の好ましい特徴および特性は、必要な変更を加えて、別の態様に等しく適用可能である。
【実施例】
【００４４】
実施例
以下の実施例は、本発明を単に例示するために提供されるのであって、限定的に解釈すべきではない。
【００４５】
実施例１〜３：バランスした比率のＰＵＦＡを含有する組成物の製造
本実施例は、単独のカプセルに入れることができるｎ-６およびｎ-３油の配合について説明する。
【００４６】
本組成物は、ｎ-６ ＰＵＦＡに富む１種の油をｎ-３ ＰＵＦＡに富む３種の異なる油と併用することにより製造した。ｎ-６ ＰＵＦＡに富む油は、糸状菌モルチエレラ・アルピナ(Mortierella alpina)の発酵により誘導され、約４０％のＡＲＡを主要な脂肪酸として含有していた。ｎ-３ ＰＵＦＡに富む油としては、３種の異なる起源：高ＥＰＡ(約４５％)低ＤＨＡ(約１０％)魚油(プロノヴァ(Pronova)(ノルウェー)から商標名エパックス(EPAXTM)、商品番号EPAx4510TGで入手可能)、高ＤＨＡ(約５０％)低ＥＰＡ(約２０％)魚油(やはりプロノヴァ(Pronova)から同じ商標名、商品番号EPAx2050TGで入手可能)、および、４０％ＤＨＡを主要脂肪酸として含有するが、実質的にＥＰＡを有しない、単細胞藻類クリプテコジウム・コーニィー(Cryphtecodium cohnii)の発酵により誘導された油(マルテック・コーポレイション(Martek Corporation)(コロンビア州、アメリカ合衆国)から商標名ダスコ(DHASCOTM)で入手可能)であった。
【００４７】
これらの油を適当量だけ混合して、所望の量および比率のｎ-３およびｎ-６ ＰＵＦＡを得た。ここで、３つの配合油(実施例１〜３)に関するＡＲＡ：ＤＨＡの比率は、１：１であった。この手順の間に、酸化に感受性を有する油は、酸素を含まない窒素ガスの雰囲気(ブランケット)により、環境中の酸素から保護した。引き続いて、これらの油を用いて、軟質ゼラチンカプセルを製造した。各カプセルは、４００ｍｇのＡＲＡおよび４００ｍｇのＤＨＡを有していた。
【００４８】
実施例４：妊娠している女性への妊娠初期または後期段階のバランスしたＰＵＦＡの供給
本実施例は、妊娠している女性に対して分娩(出産)までの妊娠期間中の第６週から第１５週または第２０週から第２５週のいずれかにＡＲＡおよびＤＨＡを補給する試験に関する。ＡＲＡの起源は、ＤＳＭ/ヒストブロカデス(Gist-brocades)(デルフト(Delft)、オランダ)から商標名オプティマール(OPTIMARTM)で入手可能な、３８％のＡＲＡを含有するトリグリセリド油であった。これは、真菌モルチエレラ・アルピナ(Mortierella alpina)により産生される油である。ＤＨＡについては、ＤＨＡに富む食用の魚油、またはマルテック・コーポレイション(Martek Corporation)から商標名ダスコ(DHASCOTM)で入手可能な藻類由来の油のいずれかを採用した。
【００４９】
それゆえ、出産時および引き続く授乳期間の間に測定した母親の脂肪酸状態が補給を受けていない対照グループと同程度かどうかを調べるために、妊婦への妊娠期間中のＡＲＡおよびＤＨＡの補給を研究した。測定は、母親の赤血球のＡＲＡおよびＤＨＡ値、臍帯動脈および静脈血管壁のＡＲＡおよびＤＨＡ含量、母乳のＡＲＡおよびＤＨＡ含量について行った。
【００５０】
この研究は、ケースを制御した研究であり、１０人の妊娠している女性が参加した。ある実験グループ(５人の女性からなる)には、１日当たり１個またはそれ以上のゼラチンカプセル(各々、２５０ｍｇのＡＲＡを含有)の油(３８％のＡＲＡを含有)および１日当たり１個のカプセル(各々、５００ｍｇのＤＨＡを含有)の油(２５％のＤＨＡを含有)を投与した。対照グループには、同量の偽薬ゼラチンカプセルを投与して、毎日のカロリー摂取の差をなくすようにした。実験グループおよび対照グループのビタミンＥ摂取は同一であり、カプセルは朝食の間に服用した。
【００５１】
血液試料を試験の開始時および妊娠の終了時に採取した。赤血球中の脂肪酸は、水素炎イオン化によるキャピラリーガスクロマトグラフィーを用いて(リン脂質として)測定した。
【００５２】
補給を行った女性は、妊娠期間中および出産時に赤血球中におけるＤＨＡおよびＡＲＡのレベルが両方とも有意に高いことが判明した。注目すべきことは、これらの高いレベルが、授乳期間の間に、母親の赤血球およびその母乳の両方において明らかに持続したことである。母乳中のＡＲＡレベルは、０.８％〜１.０％のＡＲＡまで上昇していることが判明した。加えて、新生児の血中ＡＲＡレベルは、対照グループより高いことが判明した。この発見は、最少限の栄養摂取状態にある母親およびその子供にとって重要な意味を有する。
【００５３】
実施例５：年配者へのバランスしたＰＵＦＡの供給
本出願人は、パーキンソン病およびアルツハイマー病などの疾患が低ＰＵＦＡ状態と関連していることが判明している集団(年配者の集団については少なくない)のｎ-３ ＰＵＦＡ状態を強化する必要性に気づいている。これは、部分的には、Δ６不飽和化酵素が不十分または欠乏しているからであると考えられる。しかし、ＡＲＡレベルの低下が免疫系に負の影響を与えうるので、特に年配者には、注意が必要である。
【００５４】
ｎ-３およびｎ-６ ＰＵＦＡをＤＨＡ：ＡＲＡ＝２：１の比率で含有する処方物を実施例１に従って調製した。これらのカプセルを健康な年配の男性および女性(年齢が少なくとも６５歳)のグループに１日当たり用量１ｇのｎ-３ ＰＵＦＡを与えた。
【００５５】
１ヶ月後、被験者の赤血球のＰＵＦＡ状態を評価した。すべての場合において、ＤＨＡレベルが上昇しているのに対し、ＡＲＡレベルは、一定のままであるか、あるいは、幾つかの場合において、わずかに上昇を示していることが判明した。かくして、バランスした処方物の使用により、患者のｎ-３ ＰＵＦＡ状態を、ＡＲＡ状態を損なうことなく、強化することができた。
【００５６】
実施例６：妊娠している女性へのＰＵＦＡの供給
ＰＵＦＡを含有するカプセルを２種類調製した。第１の種類は、カプセル１個当たり５００ｍｇのＡＲＡを含有するものであった。これらは１日当たり１回服用すべきものであった。ＡＲＡは、ＤＳＭ/ヒストブロカデス(Gist-brocades)(デルフト(Delft)、オランダ)から商標名オプティマール(OPTIMARTM)で入手可能な微生物油として供給された。これらのカプセルは、ゼラチンコートを有し、２０ｍｇのビタミンＥを含有していた。マルテック・コーポレイション(Martek Corporation)(コロンビア州、アメリカ合衆国)から入手可能な微生物油(商標名ダスコ(DHASCOTM))として存在するＤＨＡを同量(５００ｍｇ)含有する同様のカプセルも調製した。これらのカプセルも１日当たり１回服用するように設計した。
【００５７】
試験は、妊娠している女性に１日当たり１個のＡＲＡカプセルまたは１日当たり１個のＡＲＡカプセルおよび１個のＤＨＡカプセルを摂取させることにより行った。この研究に選ばれた女性は、血中ＡＲＡレベルの比較的低いことが判明している人々であった。それゆえ、妊娠している多数の女性を血中インビボＡＲＡレベルについて試験し、この研究に参加する許可を得た。第１の女性グループは、年齢１５歳から２０歳までのティーンエージャーであった。これらの女性全員について、今回が最初の妊娠であった。早期の成熟ゆえに、彼女らは食事へのＡＲＡ補給およびＡＲＡ＋ＤＨＡ補給の両方から利益を得ることが判明した。両方の療法（regime）がインビボＡＲＡのレベルを増加させた。
【００５８】
第２のやはり妊娠している女性グループを試験した。これらの女性は年齢４０歳から５０歳であった。妊娠中、彼女らの血中インビボレベルは、やはり両方の補給投与計画の下で上昇していることが判明した。この研究に選ばれた半数の女性は、４人目の子供を宿していた。
【００５９】
各々双子を妊娠している３人の女性を、１日当たり１個のＡＲＡカプセルおよび１個のＤＨＡカプセルを用いた補給用に選んだ。彼女らのインビボＡＲＡレベルは、おそらく母親の血液中のＡＲＡが両方の胎児に吸収され消費されていることから、比較的低いことが判明した。これらの女性には、ＡＲＡおよびＤＨＡカプセルを用いて補給を行い、血中ＡＲＡレベルが上昇することが判明した。
【００６０】
実施例７：ＰＵＦＡ含量の低い被験者へのＡＲＡおよびＤＨＡの供給
今回はＡＲＡカプセルが２５０ｍｇのＡＲＡしか含有しないこと以外は、実施例６に記載したものと同じカプセルを用いた。これらのカプセルは、被験者およびその状態によって、毎日１回または２回服用することができた。
【００６１】
この研究には、血中ＰＵＦＡレベルが比較的低い多数の人々を選んだ。ＰＵＦＡ含量が低い理由は、必ずしも直ちに明白ではなかった。しかし、多数の疾患または悪い状態が低いＰＵＦＡレベルをもたらすことが判明しており、それゆえ、正しい用量のＡＲＡまたはＡＲＡ：ＤＨＡのバランスのいずれかを提供すれば、インビボＡＲＡレベルを上昇させることができ、この状態の症状の幾つかを緩和しうると考えられた。これらの状態の幾つかは、前駆体のＡＲＡ自体への変換の悪い効率、例えば、Δ６不飽和化酵素の欠陥または欠乏をもたらすと考えられた。低いＰＵＦＡレベルを生じることが多いことが本出願人により見出された状態としては、嚢胞性繊維症、多発性硬化症、セリアック病および骨粗鬆症が挙げられる。加えて、アルコール中毒、薬物に対する嗜癖の治療を受けている患者や免疫無防備状態にある患者(ＡＩＤＳ患者)についても、ＰＵＦＡレベルの低いことが判明した。
【００６２】
それゆえ、毎日１個または２個のＡＲＡカプセルを服用させて、ＡＲＡ：ＤＨＡ含量が１：１または１：２になるように研究を行った。ほとんどすべての場合に、これらのカプセルを(少なくとも３週間)服用している患者は、いずれも、試験の終了時に血中インビボＡＲＡレベルが上昇していることが判明した。
【００６３】
実施例８：乳幼児用フォーミュラへのＰＵＦＡの供給
０.５％のＡＲＡおよび０.５％のＤＨＡを含有する固形(粉末)および液状の乳幼児用フォーミュラ・ベビーフードを調製した。このフォーミュラを、子供に母乳を与えないと決めていた母親により赤ん坊に最初の３ヶ月間定期的に与えた。対照として、これらの子供の血中インビボＡＲＡレベルを同じ期間にわたり母乳を与えられていた子供と比較した。それを哺乳瓶で与えられていた乳幼児では、ＡＲＡレベルが母乳を与えられていた乳幼児に匹敵することが判明した。
【００６４】
比較例９および実施例１０
比較試験のために、母乳を与える多数の女性を選んだ。あるグループの女性には、(１２５ｍｇのＤＨＡ、８.６ｍｇのＡＲＡおよび４０ｍｇのＧＬＡを毎日摂取させるために)１日当たり２個のエファナタル(EFANATALTM)カプセルを与えた。比較のために、第２のグループの女性には、カプセル１個当たり１５０ｍｇのＡＲＡを含有する同様に調製したカプセル(ゼラチン/グリセリン被膜を有する)を与えた(１日当たり２カプセルずつ、３００ｍｇのＡＲＡを毎日摂取させた)。この第２のグループでは、カプセル１個当たりＤＨＡを５００ｍｇ含有する第３のカプセルも１日当たり１個ずつ服用させた。
【００６５】
子供を出産した後、授乳している両方のグループの女性のＡＲＡレベルを比較した。母親の母乳中におけるＡＲＡレベルも比較した。
【００６６】
第１のエファナタル(EFANATALTM)グループでは、エファナタル(EFANATALTM)の消費を伴う試験を開始してからわずか２週間後に、血中ＡＲＡレベルの減少は著しいが、母乳中におけるＡＲＡレベルの減少は少ないことが判明した。対照的に、１日当たりＡＲＡのカプセルを２個ずつとＤＨＡのカプセルを１個ずつ服用している女性は、血中ＡＲＡレベルが上昇し、母乳中におけるＡＲＡレベルも約０.７％まで上昇していることが判明した。
【００６７】
実施例１１：ＡＲＡおよびＤＨＡの補給によるマウス妊娠期間の脂肪酸欠乏の改善
ヒトおよび非ヒト哺乳動物の妊娠期間の主要な問題は、子宮内での成長の遅れの発生である。この状態は出産後の乳幼児に対する有意な健康リスクに関連しており、かかる健康リスクは成人まで存続するかもしれない。この状態は明らかに健康な女性の妊娠期間中でさえ発展することができ、予測することが困難である。一般的には、それは胎盤の交換機能が劣っていることにより、例えば、胎盤が小さすぎるか、あるいは悪い生理学的状態にあることから起こると考えられている。
【００６８】
この非予測性は、この状態に対する信頼できる動物モデルの発達を妨害してきた。原則として、臍帯静脈の血流を減少させることにより、例えば、その太さを鉗子で制限することにより、悪い胎盤機能を刺激することはできた。この方法の問題は、妊娠している動物の手術が必要であり、胎児および母親の両方に悪影響を与え得ること、および、この方法で血流を均一に減少させるのが困難なことである。それゆえ、異なるモデルが開発されてきた。悪い胎盤機能は、胎児への必須脂肪酸(ＥＦＡ)の供給減少として解釈される。「自然な」状態では、これは、健康な母親の血液中において、血流が減少するが、それ以外の生理学的濃度は正常である場合に起こる。本実施例では、母親の血液中における必須脂肪酸の濃度を減少させるが、胎盤を通る血流は正常に保つことにより、この状態を刺激した。この目的のために、妊娠しているマウスの脂肪酸欠乏の初期段階を誘発した。この段階では、欠乏は生化学的パラメーターで表されるが、機能的欠陥は明らかではない。かくして、妊娠が正常に進行しながら、胎児への必須脂肪酸の供給を制限することが保証された。
【００６９】
この試験では、８〜１０週齢の雌マウス４０匹にマウス用の普通の食餌を１週間与えた。引き続いて、マウスを８つの実験グループに分割した：ＲＤ１〜４およびＥＦＡＤ１〜４。ＲＤグループには、６.５％の脂肪を含有する普通の食餌を与え続けた。ＥＦＡＤグループには、必須脂肪酸を欠いた食餌を与えた。番号１〜４は、表１に示すように、様々な脂質の補給を表す。以前の実施例に記載したように、ＡＲＡはＤＳＭ(デルフト(Delft))から、ＤＨＡはプロノヴァ(Pronova)から入手した。
【００７０】
【表１】
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【００７１】
ＲＤ(普通の食餌)およびＥＦＡＤ(必須脂肪酸欠乏)食餌ならびに油サプリメントの脂肪酸組成を表２に示す。
【００７２】
【表２】
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【００７３】
２つの付加的な対照グループを含めた。一方のグループ(ＲＤ０)には、脂質サプリメントを与えなかった。第２のグループには、ＲＤ０と同じ食餌を与えたが、妊娠していない(ＮＰ)外集団として役立てた。これら動物は、無制限に食餌に近づけるようにした。
【００７４】
実験グループは、下記に示す時間予定表に従って処理した。
【００７５】
【表３】
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【００７６】
フォリゴナン(FolligonanTM)およびコーラロン(ChorulonTM)(オルガノン(Organon)(オランダ)から入手可能)でホルモン処理することにより、雌の排卵過剰を誘発した。この方法は、雄に短時間曝露することと組み合わせて、妊娠の妥当な確率を与えたが、保証はない。妊娠しているマウスおよびその胎児の両方の様々な組織または切片の脂肪酸組成をガスクロマトグラフィーで測定した。様々な組織の画分、均質化および抽出は、当該分野で公知の方法で行った。
【００７７】
平均して、これらの動物は、様々なＲＤおよびＥＦＡＤグループの間で有意な差はなく、１日当たり３.９ｇの食餌を消費した。ＰＵＦＡの食餌用量を表４に示す。
【００７８】
【表４】
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【００７９】
まず、ＥＦＡＤが雌マウスの血液中における生化学的に関連した必須脂肪酸の欠乏を実際に誘発するかどうかを確認した。ＲＤ０およびＮＰ(データを示していない)と比較すると分かるように、同じ食餌グループの妊娠しているマウスと妊娠していないマウスとの間には、様々な脂肪酸の血中レベルに少しの差しかなかった。それゆえ、妊娠している動物と妊娠していない動物との間に有意な差が存在する場合を除いて、これら２つのグループを比較して統計学的な比較能力を増大させた。それらの場合、妊娠している個体の値を用いた。結果を表５に示す。
【００８０】
【表５】
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【００８１】
ＥＦＡＤは、アラキドン酸を除いて、必須脂肪酸のレベルが著しく低下した。しかし、アラキドン酸のレベルが維持されているにもかかわらず、(ｎ-６)必須脂肪酸の欠乏は著しかった。このことは、ＥＦＡ充足指数、すなわちアラキドン酸(２０：４ ｎ-６)のレベルとその非必須類似体であるミード(mead)酸(２０：３ ｎ-９)との間の比率から明らかに分かる。この後者の脂肪酸は、必須脂肪酸が正常な生合成の基質として不十分である場合にだけ蓄積する。この場合、非必須脂肪酸であるオレイン酸(１８：１ ｎ-９)がその代わりに長鎖化され、不飽和化されて、生理学的なＰＵＦＡのｎ-９類似体が形成される。このＥＦＡ充足指数がＥＦＡＤ供給マウスにおいて劇的に低下していることは、表５から明らかである。
【００８２】
別の指数は、ｎ-３およびｎ-６必須脂肪酸の正確なバランスを示している。このＥＦＡバランス指数は、ＤＨＡ(２２：６ ｎ-３)とアラキドン酸(２２：４ ｎ-６)との比率である。この指数もＥＦＡＤグループにおいて強く減少した。
【００８３】
従って、これらのデータは、ＥＦＡＤ食餌が意図されたように明確な生化学的ＥＦＡ欠乏を実際に誘発したことを示している。
【００８４】
次いで、食餌へのアラキドン酸および/またはＤＨＡの添加が雌マウスの赤血球におけるこの欠乏を緩和をもたらすかどうかを確認した。まず、脂肪酸充足(ＲＤ)マウスの対照データを表６に示す。
【００８５】
【表６】
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【００８６】
ＡＲＡまたはＤＨＡのいずれかのサプリメントの添加が他のＰＵＦＡのレベルを低下させることが判明した。対照的に、複合サプリメントは、脂肪酸充足マウスにおいても、ＰＵＦＡ状態の強化を可能にした。用いたサプリメントは、ＡＲＡ状態をわずかに低下させ、ＥＦＡバランス指数を上昇させた。これは選択された比率、すなわちＤＨＡ：ＡＲＡ＝約２：１によるものであり得る。驚くべきことに、これらのマウスが明らかに脂肪酸欠乏でなくても、ＥＦＡ充足指数もサプリメントにより強化された。
【００８７】
次いで、ＰＵＦＡ補給がＥＦＡＤ供給動物の血液細胞中における必須脂肪酸状態を向上させるかどうかを調べた。
【００８８】
【表７】
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【００８９】
表７は、ＥＦＡＤマウスがＰＵＦＡサプリメントに対して、特にそれらのＤＨＡ状態において、極めて強く応答したことを示している。ＡＲＡ補給がＤＨＡ状態を低下させる徴候は存在しないが、逆は明らかに真である：ＤＨＡサプリメントの添加はＡＲＡ状態を明らかに低下させた。また、ＰＵＦＡの添加が特異的にＰＵＦＡレベルを回復させることは明らかであるが、Ｃ１８脂肪酸のレベルはそれほど影響を受けない。興味深いことに、複合補給はＥＦＡ充足指数を完全に回復させた唯一のものであった。
【００９０】
最後に、母親の血液中におけるＰＵＦＡ状態の強化が胎児の状態を向上させるかどうかを調べた。この目的のために、胎児の頭部を最も関連のある部分として選択した：脳(および他の神経組織)の成長はＰＵＦＡの供給に依存する定量的に最も重要な過程である。
【００９１】
ＲＤ供給した母親の胎児に関するデータを表８に示す。
【００９２】
【表８】
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【００９３】
これらのデータは、サプリメントがＲＤ供給したマウスの胎児の頭部におけるＰＵＦＡの濃度を適度に変化させたことを示している。驚くべきことに、複合サプリメントの場合には、単独サプリメントとは逆に、ＥＦＡ充足指数が著しく向上した。加えて、両方のＤＨＡ含有サプリメントは、ＥＦＡバランス指数を有意に上昇させた。
【００９４】
【表９】
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【００９５】
胎児の脂肪酸欠乏は、母親の脂肪酸欠乏よりさらに重篤であった。ＰＵＦＡサプリメントは、ＥＦＡ充足指数を著しく向上させ、ほとんどＲＤレベルに回復させた。これは、ＥＦＡバランス指数がＲＤ供給した母親の胎児よりさらに高いことから、おそらくサプリメント中におけるアラキドン酸の用量が比較的低いことによるものであった。このことは、ＰＵＦＡが胎児の頭部に十分に導入されることを意味する。実際、サプリメントにアラキドン酸を含めると、その濃度が上昇するが、ＲＤレベルまで上昇しない。このことは、補給をバランスさせる必要性を強調している。それゆえ、適当なバランスを実験的に評価することができる。
【外国語明細書】
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