(57)【要約】 【課題】  アミノ酸配列がSer−Ser−Ser−Argで表されるペプチド（ＳＳＳＲ）若しくはその医薬として許容される塩類とアミノ酸配列がPhe−Gly−Leu−Met−NH2で表されるペプチド（ＦＧＬＭ）若しくはその医薬として許容される塩類を含有する点眼剤の薬効を最大化し、副作用の発生を最小化し、点眼剤の保存安定性を改善すること。【解決手段】  ＳＳＳＲ若しくはその医薬として許容される塩類とＦＧＬＭ若しくはその医薬として許容される塩類の配合濃度比を１／５〜１／５０とし、ＳＳＳＲ若しくはその医薬として許容される塩類の配合濃度を０．００１〜０．３％（w／ｖ）とし、ＦＧＬＭ若しくはその医薬として許容される塩類の配合濃度を０．０１５〜１．５％（w／ｖ）とし、さらに点眼剤のｐＨ範囲を２．５〜６．５に保つことにより、上記課題を達成できる。【選択図】        なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミノ酸配列がSer−Ser−Ser−Argで表されるペプチド若しくはその医薬として許容される塩類とアミノ酸配列がPhe−Gly−Leu−Met−NH2で表されるペプチド若しくはその医薬として許容される塩類を含有する点眼剤であって、
１）        アミノ酸配列がSer−Ser−Ser−Argで表されるペプチド若しくはその医薬として許容される塩類とアミノ酸配列がPhe−Gly−Leu−Met−NH2で表されるペプチド若しくはその医薬として許容される塩類の配合濃度比が１／５〜１／５０であり、
２）        アミノ酸配列がSer−Ser−Ser−Argで表されるペプチド若しくはその医薬として許容される塩類の配合濃度が０．００１〜０．３％（w／ｖ）であり、
３）        アミノ酸配列がPhe−Gly−Leu−Met−NH2で表されるペプチド若しくはその医薬として許容される塩類の配合濃度が０．０１５〜１．５％（w／ｖ）であり、
４）        該点眼剤のｐＨが２．５〜６．５の範囲である、
点眼剤。
【請求項２】
アミノ酸配列がSer−Ser−Ser−Argで表されるペプチドの酢酸塩とアミノ酸配列がPhe−Gly−Leu−Met−NH2で表されるペプチドの塩酸塩を含有する点眼剤であって、
１）アミノ酸配列がSer−Ser−Ser−Argで表されるペプチドの酢酸塩とアミノ酸配列がPhe−Gly−Leu−Met−NH2で表されるペプチドの塩酸塩の配合濃度比が１／１０〜１／３０であり    、
２）アミノ酸配列がSer−Ser−Ser−Argで表されるペプチドの酢酸塩の配合濃度が０．００５〜０．１％（w／ｖ）であり、
３）アミノ酸配列がPhe−Gly−Leu−Met−NH2で表されるペプチドの塩酸塩の配合濃度が０．１〜１％（w／ｖ）であり、
４）該点眼剤のｐＨが３．０〜６．０の範囲である、
点眼剤。
【請求項３】
アミノ酸配列がSer−Ser−Ser−Argで表されるペプチド若しくはその医薬として許容される塩類とアミノ酸配列がPhe−Gly−Leu−Met−NH2で表されるペプチド若しくはその医薬として許容される塩類を含有する点眼液において、
１）          アミノ酸配列がSer−Ser−Ser−Argで表されるペプチド若しくはその医薬として許容される塩類とアミノ酸配列がPhe−Gly−Leu−Met−NH2で表されるペプチド若しくはその医薬として許容される塩類の配合濃度比を１／５〜１／５０とし、
２）          アミノ酸配列がSer−Ser−Ser−Argで表されるペプチド若しくはその医薬として許容される塩類の配合濃度を０．００１〜０．３％（w／ｖ）とし、
３）          アミノ酸配列がPhe−Gly−Leu−Met−NH2で表されるペプチド若しくはその医薬として許容される塩類の配合濃度を０．０１５〜１．５％（w／ｖ）とし、
４）          該点眼液のｐＨを２．５〜６．５の範囲とする、
角膜障害の治癒促進効果に優れた点眼剤の安定化方法。
【請求項４】
アミノ酸配列がSer−Ser−Ser−Argで表されるペプチドの酢酸塩とアミノ酸配列がPhe−Gly−Leu−Met−NH2で表されるペプチドの塩酸塩を含有する点眼剤において、
１）    アミノ酸配列がSer−Ser−Ser−Argで表されるペプチドの酢酸塩とアミノ酸配列がPhe−Gly−Leu−Met−NH2で表されるペプチドの塩酸塩の配合濃度比を１／１０〜１／３０とし、
２）    アミノ酸配列がSer−Ser−Ser−Argで表されるペプチドの酢酸塩の配合濃度を０．００５〜０．１％（w／ｖ）とし、
３）    アミノ酸配列がPhe−Gly−Leu−Met−NH2で表されるペプチドの塩酸塩の配合濃度を０．１〜１％（w／ｖ）とし、
４）    該点眼剤のｐＨを３．０〜６．０の範囲とする、
角膜障害の治癒促進効果に優れた点眼剤の安定化方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アミノ酸配列がSer−Ser−Ser−Argで表されるペプチド（以下、「ＳＳＳＲ」とする）若しくはその医薬として許容される塩類とアミノ酸配列がPhe−Gly−Leu−Met−NH2で表されるペプチド（以下、「ＦＧＬＭ」とする）若しくはその医薬として許容される塩類を含有する点眼剤であって、ＳＳＳＲ若しくはその医薬として許容される塩類とＦＧＬＭ若しくはその医薬として許容される塩類の配合濃度比、ＳＳＳＲ若しくはその医薬として許容される塩類とＦＧＬＭ若しくはその医薬として許容される塩類それぞれの配合濃度、および該点眼剤のｐＨ範囲を特定することによって得られる、角膜障害の治癒促進効果および点眼剤中の有効成分の安定性が改善された点眼剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＳＳＳＲは、インシュリン様成長因子−Ｉ（以下、「ＩＧＦ−Ｉ」とする）の部分ペプチドであり、また、ＦＧＬＭは、サブスタンスＰのＣ末端側のテトラペプチドである（特許文献１、特許文献２）。
【０００３】
特許文献１において、創傷治癒促進作用に関してＳＳＳＲがＩＧＦ−Ｉの最小活性発現単位であることが見い出され、また、ＳＳＳＲなどのＩＧＦ−Ｉの部分ペプチドとＦＧＬＭ又はサブスタンスＰを併用すれば、角膜の障害治癒および皮膚の創傷治癒を促進する効果を有することが開示されている。
【０００４】
そして、特許文献１は、ＩＧＦ−Ｉの部分ペプチドであるＳＳＳＲなどの新規物質、およびＳＳＳＲなどのＩＧＦ−Ｉの部分ペプチドとＦＧＬＭ又はサブスタンスＰを併用した医薬用途に関する発明であるが、ＳＳＳＲとＦＧＬＭを併用する点眼剤の配合処方については十分検討されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００３−２３１６９５号
【特許文献２】特開平１０−１７４８９号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、ＳＳＳＲとＦＧＬＭの二剤を併用する点眼剤の配合処方において、ＳＳＳＲおよびＦＧＬＭの各化学的特性を詳細に検討した上で配合剤の配合濃度比、各薬物の配合濃度等を決定して配合剤の薬効を最大化すると共に副作用の発生を最小化すること、さらに、点眼剤の流通過程や点眼剤の使用態様のバリエーションを考慮して点眼剤の保存安定性を改善することは興味深い課題である。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者等は鋭意研究を行なった結果、ＳＳＳＲ若しくはその医薬として許容される塩類とＦＧＬＭ若しくはその医薬として許容される塩類を含有する点眼剤において、
１）ＳＳＳＲ若しくはその医薬として許容される塩類とＦＧＬＭ若しくはその医薬として許容される塩類の配合濃度比を１／５〜１／５０とし、
２）ＳＳＳＲ若しくはその医薬として許容される塩類の配合濃度を０．００１〜０．３％（w／ｖ）とし、
３）ＦＧＬＭ若しくはその医薬として許容される塩類の配合濃度を０．０１５〜１．５％（w／ｖ）とし、
４）該点眼剤のｐＨを２．５〜６．５の範囲とすれば、
薬効である角膜障害の治癒促進効果を最大化できること、および点眼剤を長期間安定に保存できることなどを見い出し本発明に至った。
【０００８】
すなわち、本発明は、ＳＳＳＲ若しくはその医薬として許容される塩類とＦＧＬＭ若しくはその医薬として許容される塩類を含有する点眼剤において、ＳＳＳＲ若しくはその医薬として許容される塩類とＦＧＬＭ若しくはその医薬として許容される塩類の配合濃度比を検討することによって配合剤の薬効を最大化し、また、ＳＳＳＲ若しくはその医薬として許容される塩類とＦＧＬＭ若しくはその医薬として許容される塩類それぞれの配合濃度を低減化することによって薬物による副作用の発生をなくし、さらに該点眼剤のｐＨによる影響を検討することによって点眼剤を長期間安定に保存することを可能にしたものである。
【０００９】
本発明において、医薬として許容される塩類としては、例えば塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、乳酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、ギ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、シュウ酸塩、メタンスルホン酸塩、パラトルエンスルホン酸塩等が挙げられるが、ＳＳＳＲについては酢酸塩がより好ましく、ＦＧＬＭについては塩酸塩がより好ましい。
【００１０】
本発明の点眼剤において、ＳＳＳＲ若しくはその医薬として許容される塩類とＦＧＬＭ若しくはその医薬として許容される塩類の配合濃度比は、１／５〜１／５０であり、より好ましい配合濃度比は、１／１０〜１／３５０であり、さらに好ましい配合濃度は１／１５〜１／２０である。
【００１１】
後述する薬理効果試験の結果より、本発明の点眼剤におけるＳＳＳＲ若しくはその医薬として許容される塩類とＦＧＬＭ若しくはその医薬として許容される塩類を併用した配合剤の薬効は配合濃度比１／５〜１／５０の範囲で最大化する。
【００１２】
本発明の点眼剤におけるＳＳＳＲ若しくはその医薬として許容される塩類の配合濃度は０．００１〜０．３％（w／ｖ）であり、より好ましくは０．００５〜０．１％（w／ｖ）である。
【００１３】
また、本発明の点眼剤におけるＦＧＬＭ若しくはその医薬として許容される塩類の配合濃度は０．０１５〜１．５％（w／ｖ）であり、より好ましくは０．１〜１％（w／ｖ）である。
【００１４】
後述する安定性試験の結果より、本発明の点眼剤におけるＳＳＳＲ酢酸塩およびＦＧＬＭ塩酸塩の配合濃度がそれぞれ、０．００１％（w／ｖ）以上および０．０１５％（w／ｖ）以上であれば配合剤として優れた薬効を発揮するが、一般に薬物濃度が高くなれば副作用が発生することがあるので、薬物濃度はなるべく低く設定することが好ましい。
【００１５】
本発明の点眼剤のｐＨは２．５〜６．５の範囲であり、より好ましくは３．０〜６．０の範囲であり、さらに好ましくは３．５〜５．５の範囲である。後述する安定性試験の結果より、ＳＳＳＲ酢酸塩を含有する水溶液はｐＨ６．５以下（２．５〜６．５の範囲）で安定であり、また、ＦＧＬＭ塩酸塩を含有する水溶液はｐＨ２．５以上（２．５〜７．０の範囲）で安定であるので、本発明のＳＳＳＲ若しくはその医薬として許容される塩類とＦＧＬＭ若しくはその医薬として許容される塩類を含有する点眼剤は、ｐＨが２．５〜６．５の範囲で長期間安定に保存することができる。
【００１６】
本発明の点眼液は汎用されている方法によって調製することができ、必要に応じて等張化剤、ｐＨ調節剤等を添加することができる。
【００１７】
等張化剤としては、例えば濃グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、トリハロース、シュクロース、ソルビトール、マンニトール、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム等を挙げることができ、より好ましくは塩化ナトリウム、濃グリセリンである。
【００１８】
ｐＨ調節剤としては、例えば塩酸、クエン酸、クエン酸ナトリウム、リン酸、リン酸一水素ナトリウム、リン酸ニ水素ナトリウム、リン酸ニ水素カリウム、氷酢酸、酢酸、酢酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、ホウ酸、ホウ砂、モノエタノールアミン、硫酸、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム等を挙げることができる。
【００１９】
本発明の点眼剤は、角膜障害の治療剤として使用され、角膜障害としては例えば角膜潰瘍、角膜上皮欠損、角膜炎、ドライアイ等を挙げることができる。
【００２０】
本発明の点眼剤の点眼回数は症状、年齢、剤型等によって適宜選択されるが、１回量１〜数滴を１日１〜数回（例えば、１〜６回）点眼すればよい。
【発明の効果】
【００２１】
後述する試験の項で詳述するが、本発明の点眼剤は、ＳＳＳＲ酢酸塩とＦＧＬＭ塩酸塩の配合濃度比を１／５〜１／５０とすれば配合剤の薬効を最大化することができ、また、ＳＳＳＲ酢酸塩の配合濃度を０．００１％（w／ｖ）以上とし、ＦＧＬＭ塩酸塩の配合濃度を０．０１５％（w／ｖ）以上とすれば優れた薬効を発揮することができ、さらに、本発明の点眼剤のｐＨを２．５〜６．５の範囲に保持すればＳＳＳＲ酢酸塩およびＦＧＬＭ塩酸塩を長期間安定に保存することができる。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
以下に、各種の試験結果を示すが、これらの例は本発明をよりよく理解するためのものであり、本発明の範囲を限定するものではない。
【００２３】
１．薬理効果試験
以下に示す被験製剤を用いて薬理効果試験を実施した。
【００２４】
１−１  薬物の調製
i)ＳＳＳＲ酢酸塩
C-末端アミノ酸原料としてH-Arg（NO2)-OBzlを使用し、Boc法によりBoc-Ser(OBzl)-OHを用いてペプチド鎖延長を行うことにより、保護テトラペプチド（Z-Ser(OBzl)-Ser(OBzl)-Ser(OBzl)-Arg（NO2)-OBzl）を合成した。この保護テトラペプチドに酢酸の存在下、パラジウムを用いて接触水素化による脱保護を行うことでＳＳＳＲ酢酸塩を得た。
【００２５】
ii)ＦＧＬＭ塩酸塩
アミノ酸誘導体Boc-Phe-OHとH-Gly-OBzl、及びBoc-Leu-OHとH-Met-NH2からそれぞれ縮合剤を用いたペプチド結合を形成することにより、保護ジペプチド（Boc-Phe-Gly-OBzl、及びBoc-Leu-Met-NH2)を合成した。これら保護ジペプチドをパラジウムを用いた接触水素化による脱ベンジル、及びBoc法でのペプチド合成により、保護テトラペプチド(Boc-Phe-Gly-Leu-Met-NH2)に誘導した。この保護テトラペプチドに塩化水素を用いた脱保護を行うことでＦＧＬＭ塩酸塩を得た。
【００２６】
１−２  被験製剤の調製
被験製剤１
ＳＳＳＲ酢酸塩およびＦＧＬＭ塩酸塩をリン酸緩衝生理食塩液に溶解させ、０．０１％（w／ｖ）のＳＳＳＲ酢酸塩および０．００５％（w／ｖ）のＦＧＬＭ塩酸塩を含む被験製剤１（点眼液）を調製した。
【００２７】
被験製剤２〜８
表１に示す各被験製剤の配合濃度、配合濃度比となるように、被験製剤１のＳＳＳＲ酢酸塩の配合量およびＦＧＬＭ塩酸塩の配合量を変化させる以外は被験製剤１と同様の操作を行なって被験製剤２〜８を調製した。
【００２８】
１−３  試験方法及び結果
Naganoらの方法（Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 44, 3810-3815 (2003)）に準じて作製した神経麻痺性角膜症モデルラットを用い、角膜上皮剥離後の角膜上皮創傷治癒に対する影響を検討した。具体的には以下の方法で評価した。角膜上皮剥離後、各被験製剤を１．５時間間隔で１日６回（５μｌ／回）点眼した。創傷面積を測定する際に、フルオレセイン染色を行い角膜の写真を撮影し、フルオレセイン染色面積を、画像解析システムを用いて算出した。
【表１】
2011140482.tif 000002
【００２９】
○：明らかな角膜上皮創傷治癒促進効果あり
△：角膜上皮創傷治癒促進傾向あり
×：角膜上皮創傷治癒促進効果なし
１−４  考察
表１から明らかなように、被験製剤３〜６の配合剤は、ＳＳＳＲ酢酸塩とＦＧＬＭ塩酸塩の併用による薬効が最大化されている。したがって、ＳＳＳＲ酢酸塩とＦＧＬＭ塩酸塩の配合濃度比を１／５〜１／５０とし、ＳＳＳＲ酢酸塩の配合濃度を０．００１％（w／ｖ）以上とし、ＦＧＬＭ塩酸塩の配合濃度を０．０１５％（w／ｖ）以上とすれば、優れた薬効を発揮することが期待できる。
【００３０】
２．点眼液の安定性試験
２−１  試料の作成及び試験方法０．００３％（w／ｖ）のＳＳＳＲ酢酸塩および０．０５％（w／ｖ）のＦＧＬＭ塩酸塩を含むｐＨ２．５〜７．０の各試料１００ｍｌ（点眼液）を調製し、４０℃で保存した。２ヶ月保存後、３ヶ月保存後、６ヵ月保存後のＳＳＳＲ濃度およびＦＧＬＭ濃度をＨＰＬＣ法で測定し、ＳＳＳＲおよびＦＧＬＭの各残存率を求めた。
【００３１】
２−２  試験結果
表２にＳＳＳＲの残存率を、また、表３にＦＧＬＭの残存率を示す。
【表２】
2011140482.tif 000003
【表３】
2011140482.tif 000004
【００３２】
２−３  考察
表２より、ＳＳＳＲについては４０℃で６ヵ月間保存してもｐＨ２．５〜６．５の範囲では５０％以上が残存し、また、表３より、ＦＧＬＭについてもｐＨ２．５〜７．０の範囲で５０％以上が残存することが明らかとなった。したがって、本発明のＳＳＳＲ酢酸塩とＦＧＬＭ塩酸塩を含有する点眼剤は、ｐＨを２．５〜６．５の範囲に保持すればＳＳＳＲ酢酸塩およびＦＧＬＭ塩酸塩のいずれをも長期間安定に保存することができる。
【００３３】
３．製剤例
表４および表５に示す通り、汎用される方法を用いて点眼剤１〜８を調製した（各１００ｍｌ）。
【表４】
2011140482.tif 000005
【表５】
2011140482.tif 000006