(57)【要約】      （修正有）【課題】ＩＬ−１８結合タンパク質、特にはヒトインターロイキン−１８（ｈＩＬ−１８）に結合する抗体を提供する。【解決手段】完全にヒト抗体である抗体。好ましい抗体は、ｈＩＬ−１８に対して高い親和性を有し、ないしはインビトロおよびインビボでｈＩＬ−１８活性を中和する。本抗体は、全長抗体またはそれの抗原結合部分であることができる。本抗体の製造方法およびそれの使用方法。本抗体または抗体部分は、ｈＩＬ−１８の検出および例えばｈＩＬ−１８活性が有害である障害を患うヒト被験者でのｈＩＬ−１８活性阻害において有用である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗原結合ドメインが、
ＣＤＲ−Ｈ１：Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７（配列番号４２）
［上記配列において、
Ｘ１はＳ、Ｎ、Ｈ、ＲまたはＹであり；
Ｘ２はＹ、Ｇ、Ｒ、ＳまたはＣであり；
Ｘ３はＷ、Ｇ、Ｙ、Ｄ、Ｓ、ＶまたはＩであり；
Ｘ４はＩ、Ｈ、Ｗ、Ｙ、Ｍ、ＬまたはＤであり；
Ｘ５はＧ、Ｙ、Ｓ、ＮまたはＨであり；
Ｘ６はＷであるか非存在であり；
Ｘ７はＴ、Ｓ、Ｇであるか非存在である。］；
ＣＤＲ−Ｈ２：Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｘ１７（配列番号４３）
［上記配列において、
Ｘ１はＦ、Ｙ、Ｈ、ＳまたはＶであり；
Ｘ２はＩまたはＦであり；
Ｘ３はＹ、ＳまたはＷであり；
Ｘ４はＰ、ＹまたはＳであり；
Ｘ５はＧ、Ｓ、ＲまたはＤであり；
Ｘ６はＤまたはＧであり；
Ｘ７はＳ、Ｔ、ＧまたはＲであり；
Ｘ８はＥ、Ｔ，ＩまたはＮであり；
Ｘ９はＴ、Ｙ、Ｎ，Ｉ、ＫまたはＨであり；
Ｘ１０はＲ、ＹまたはＳであり；
Ｘ１１はＹ、ＮまたはＳであり；
Ｘ１２はＳ、Ｐ、ＡまたはＶであり；
Ｘ１３はＰ、ＳまたはＤであり；
Ｘ１４はＴ、ＬまたはＳであり；
Ｘ１５はＦ、ＫまたはＶであり；
Ｘ１６はＱ、ＳまたはＫであり；
Ｘ１７はＧであるか非存在である。］；
ＣＤＲ−Ｈ３：Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｘ１７−Ｘ１８（配列番号４４）
［上記配列において、
Ｘ１はＶ、Ｄ、Ｅ、ＳまたはＣであり；
Ｘ２はＧ、Ｒ、Ｄ、Ｓ、Ｋ、Ｌ、ＹまたはＡであり；
Ｘ３はＳ、Ｇ、ＹまたはＲであり；
Ｘ４はＧ、Ｓ、Ｙ、Ｎ、ＴまたはＤであり；
Ｘ５はＷ、Ｓ、Ａ、Ｇ、ＹまたはＴであり；
Ｘ６はＹ、Ｇ、Ｓ、Ｆ、ＷまたはＮであり；
Ｘ７はＰ、Ｓ、Ｆ、Ｙ、Ｖ、Ｇ、ＷまたはＶであり；
Ｘ８はＹ、Ｆ、Ｄ、Ｐ、Ｍ、ＩまたはＮであり；
Ｘ９はＴ、Ｗ、Ｄ、Ｌ、Ｙ、Ｅ、Ｐ、ＦまたはＧであり；
Ｘ１０はＦ、Ｄ、Ｙ、Ｈ、Ｖ、Ｙであるか非存在であり；
Ｘ１１はＤ、Ｙ、Ｆ、Ｌであるか非存在であり；
Ｘ１２はＩ、Ｄ、Ｙであるか非存在であり；
Ｘ１３はＹであるか非存在であり；
Ｘ１４はＹであるか非存在であり；
Ｘ１５はＧであるか非存在であり；
Ｘ１６はＭであるか非存在であり；
Ｘ１７はＤであるか非存在であり；
Ｘ１８はＶであるか非存在である。］；
ＣＤＲ−Ｌ１：Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｘ１７（配列番号４５）
［上記配列において、
Ｘ１はＲまたはＫであり；
Ｘ２はＡ、ＧまたはＳであり；
Ｘ３はＳであり；
Ｘ４はＥ、Ｒ、ＱまたはＨであり；
Ｘ５はＳ、Ｉ、ＴまたはＮであり；
Ｘ６はＩ、Ｖ、ＬまたはＦであり；
Ｘ７はＳ、Ｇ、Ｌ、ＮまたはＲであり；
Ｘ８はＳ、Ｇ、Ｙ、Ｒ、Ｎ、ＨまたはＤであり；
Ｘ９はＮ、Ｇ、Ｙ、ＲまたはＳであり；
Ｘ１０はＬ、Ｙ、ＳまたはＤであり；
Ｘ１１はＡ、Ｌ、Ｎ、Ｖ、ＧまたはＤであり；
Ｘ１２はＡ、Ｎ、Ｅ、Ｋ、Ｇであるか非存在であり；
Ｘ１３はＫ、Ｔ、Ｎであるか非存在であり；
Ｘ１４はＮ、Ｙ、Ｔであるか非存在であり；
Ｘ１５はＹ、Ｌであるか非存在であり；
Ｘ１６はＬ、Ｃ、Ｙであるか非存在であり；
Ｘ１７はＡ、Ｄであるか非存在である。］；
ＣＤＲ−Ｌ２：Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７（配列番号４６）
［上記配列において、
Ｘ１はＴ、Ｇ、Ｓ、ＷまたはＥであり；
Ｘ２はＡ、Ｖ、Ｔ、ＩまたはＬであり；
Ｘ３はＳまたはＦであり；
Ｘ４はＴ、Ｉ、Ｎ、Ｓ、ＲまたはＹであり；
Ｘ５はＲまたはＬであり；
Ｘ６はＡ、Ｑ、ＥまたはＦであり；
Ｘ７はＴまたはＳである。］；
ＣＤＲ−Ｌ３：Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０（配列番号４７）
［上記式において
Ｘ１はＱまたはＭであり；
Ｘ２はＱ、ＨまたはＹであり；
Ｘ３はＹ、Ｎ、Ｇ、ＳまたはＲであり；
Ｘ４はＮ、Ｈ、Ｙ、Ｄ、Ｇ、Ｖ、ＬまたはＩであり；
Ｘ５はＮ、Ｇ、Ｉ、Ｙ、Ｓ、Ｑ、ＦまたはＥであり；
Ｘ６はＷ、Ｓ、Ｔ、Ｌ、ＩまたはＦであり；
Ｘ７はＰ、Ｌ、Ｔ、ＤまたはＩであり；
Ｘ８はＳ、Ｌ、Ｐ、Ｃ、Ｗ、ＩまたはＦであり；
Ｘ９はＩ、Ｔ、Ｓであるか非存在であり；
Ｘ１０はＴであるか非存在である。］
からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１個のＣＤＲを有する、ヒトＩＬ−１８への結合能を有する抗原結合ドメインを有する結合タンパク質。
【請求項２】
前記少なくとも１個のＣＤＲが、
配列番号６の残基３１〜３５；配列番号６の残基５０〜６６；配列番号６の残基９９〜１１０；
配列番号７の残基２４〜３４；配列番号７の残基５０〜５６；配列番号７の残基８９〜９８；
配列番号８の残基３１〜３７；配列番号８の残基５２〜６７；配列番号８の残基１００〜１１０；
配列番号９の残基２４〜３５；配列番号９の残基２１〜２７；配列番号９の残基９０〜９８；
配列番号１０の残基３１〜３５；配列番号１０の残基５０〜６５；配列番号１０の残基９８〜１０７；
配列番号１１の残基２４〜３４；配列番号１１の残基５０〜５６；配列番号１１の残基８９〜９７；
配列番号１２の残基３１〜３７；配列番号１２の残基５２〜６７；配列番号１２の残基１００〜１０８；
配列番号１３の残基２４〜３５；配列番号１３の残基５１〜５７；配列番号１３の残基９０〜９８；
配列番号１４の残基３１〜３５；配列番号１４の残基５０〜６６；配列番号１４の残基９９〜１１１；
配列番号１５の残基２４〜４０；配列番号１５の残基５６〜６２；配列番号１５の残基９５〜１０３；
配列番号１６の残基３１〜３７；配列番号１６の残基５２〜６７；配列番号１６の残基１００〜１０９；
配列番号１７の残基２４〜３５；配列番号１７の残基５１〜５７；配列番号１７の残基９０〜９８；
配列番号１８の残基３１〜３５；配列番号１８の残基２０〜３６；配列番号１８の残基９９〜１０８；
配列番号１９の残基２４〜３４；配列番号１９の残基５０〜５６；配列番号１９の残基８９〜９７；
配列番号２０の残基３１〜３５；配列番号２０の残基５２〜６７；配列番号２０の残基１００〜１０８；
配列番号２１の残基２４〜３５；配列番号２１の残基５１〜５７；配列番号２１の残基９０〜９８；
配列番号２２の残基３１〜３５；配列番号２２の残基５０〜６６；配列番号２２の残基９９〜１１６；
配列番号２３の残基２４〜３９；配列番号２３の残基５５〜６１；配列番号２３の残基９４〜１０２；
配列番号２４の残基３１〜３７；配列番号２４の残基５２〜６７；配列番号２４の残基１００〜１０９；
配列番号２５の残基２４〜３５；配列番号２５の残基５１〜５７；配列番号２５の残基９０〜９８；
配列番号２６の残基３１〜３７；配列番号２６の残基５２〜６７；配列番号２６の残基１００〜１０９；
配列番号２７の残基２４〜３５；配列番号２７の残基５１〜５７；配列番号２７の残基９０〜９８；
配列番号２８の残基３１〜３７；配列番号２８の残基５２〜６７；配列番号２８の残基１００〜１０８；
配列番号２９の残基２４〜３５；配列番号２９の残基５１〜５７；配列番号２９の残基９０〜９８；
配列番号３０の残基３１〜３７；配列番号３０の残基５２〜６７；配列番号３０の残基９９〜１０９；
配列番号３１の残基２４〜３５；配列番号３１の残基５１〜５７；配列番号３１の残基９０〜９８；
配列番号３２の残基３１〜３７；配列番号３２の残基５２〜６７；配列番号３２の残基１００〜１０９；
配列番号３３の残基２４〜３５；配列番号３３の残基５１〜５７；配列番号３３の残基９０〜９８；
配列番号３４の残基３１〜３７；配列番号３４の残基５２〜６７；配列番号３４の残基１００〜１０８；
配列番号３５の残基２４〜３５；配列番号３５の残基５１〜５７；配列番号３５の残基９０〜９８；
配列番号３６の残基３１〜３５；配列番号３６の残基５０〜６６；配列番号３６の残基９９〜１１６；
配列番号３７の残基２４〜３９；配列番号３７の残基５５〜６１；配列番号３７の残基９４〜１０２；
配列番号３８の残基３１〜３５；配列番号３８の残基５０〜６６；配列番号３８の残基９９〜１０８；
配列番号３９の残基２４〜３５；配列番号３９の残基５１〜５７；配列番号３９の残基９０〜９８；
配列番号４０の残基３１〜３７；配列番号４０の残基５２〜６７；配列番号４０の残基９７〜１０９；
配列番号４１の残基２４〜４０；配列番号４１の残基５６〜６２；配列番号４１の残基９５〜１０３
からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項３】
前記結合タンパク質が少なくとも３個のＣＤＲを有する請求項２に記載の結合タンパク質。
【請求項４】
前記抗原結合ドメインがＶＨを有する請求項２に記載の結合タンパク質。
【請求項５】
前記ＶＨが、配列番号６；配列番号８；配列番号１０；配列番号１２；配列番号１４；配列番号１６；配列番号１８；配列番号２０；配列番号２２；配列番号２４；配列番号２６；配列番号２８；配列番号３０；配列番号３２；配列番号３４；配列番号３６；配列番号３８；および配列番号４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する請求項４に記載の結合タンパク質。
【請求項６】
前記抗原結合ドメインがＶＬを有する請求項２に記載の結合タンパク質。
【請求項７】
前記ＶＬが、配列番号７；配列番号９；配列番号１１；配列番号１３；配列番号１５；配列番号１７；配列番号１９；配列番号２１；配列番号２３；配列番号２５；配列番号２７；配列番号２９；配列番号３１；配列番号３３；配列番号３５；配列番号３７；配列番号３９；および配列番号４１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する請求項６に記載の結合タンパク質。
【請求項８】
前記抗原結合ドメインがＶＨおよびＶＬを有する請求項２に記載の結合タンパク質。
【請求項９】
ＶＨが配列番号６；配列番号８；配列番号１０；配列番号１２；配列番号１４；配列番号１６；配列番号１８；配列番号２０；配列番号２２；配列番号２４；配列番号２６；配列番号２８；配列番号３０；配列番号３２；配列番号３４；配列番号３６；配列番号３８；および配列番号４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、ＶＨをさらに有する請求項７に記載の結合タンパク質。
【請求項１０】
前記ＶＬが配列番号７のアミノ酸配列を有し、前記ＶＨが配列番号６のアミノ酸配列を有する請求項８に記載の結合タンパク質。
【請求項１１】
ヒトＩｇＭ定常ドメイン；ヒトＩｇＧ１定常ドメイン；ヒトＩｇＧ２定常ドメイン；ヒトＩｇＧ３定常ドメイン；ヒトＩｇＧ４定常ドメイン；ヒトＩｇＥ定常ドメインおよびヒトＩｇＡ定常ドメインからなる群から選択される重鎖免疫グロブリン定常ドメインをさらに有する請求項２に記載の結合タンパク質。
【請求項１２】
前記重鎖免疫グロブリン定常領域ドメインがヒトＩｇＧ１定常ドメインである請求項１１に記載の結合タンパク質。
【請求項１３】
前記ヒトＩｇＧ１定常ドメインが、配列番号２および配列番号３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する請求項１２に記載の結合タンパク質。
【請求項１４】
ヒトＩｇカッパ定常ドメインおよびヒトＩｇラムダ定常ドメインからなる群から選択される軽鎖免疫グロブリン定常ドメインをさらに有する請求項２に記載の結合タンパク質。
【請求項１５】
前記軽鎖免疫グロブリン定常領域ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列を有するヒトＩｇカッパ定常ドメインである請求項１４に記載の結合タンパク質。
【請求項１６】
前記軽鎖免疫グロブリン定常領域ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列を有するヒトＩｇラムダ定常ドメインである請求項１４に記載の結合タンパク質。
【請求項１７】
前記結合タンパク質が、免疫グロブリン分子；ｓｃＦｖ；モノクローナル抗体；ヒト抗体；キメラ抗体；ヒト化抗体；単一ドメイン抗体；Ｆａｂ断片；Ｆａｂ′断片；Ｆ（ａｂ′）２；Ｆｖ；およびジスルフィド連結Ｆｖからなる群から選択される請求項２に記載の結合タンパク質。
【請求項１８】
前記結合タンパク質がヒト抗体である請求項１７に記載の結合タンパク質。
【請求項１９】
結合タンパク質が、
配列番号２および配列番号３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＩｇ定常重領域；
配列番号４および配列番号５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＩＧ定常軽領域；
配列番号６のアミノ酸配列を有するＩｇ可変重領域；および
配列番号７のアミノ酸配列を有するＩｇ可変軽領域
を有する、ヒトＩＬ−１８への結合能を有する結合タンパク質。
【請求項２０】
配列番号３のアミノ酸配列を有するＩｇ定常重領域；
配列番号４のアミノ酸配列を有するＩＧ定常軽領域；
配列番号６のアミノ酸配列を有するＩｇ可変重領域；および
配列番号７のアミノ酸配列を有するＩｇ可変軽領域
を有する、ヒトＩＬ−１８への結合能を有する結合タンパク質。
【請求項２１】
中和結合タンパク質が請求項１ないし２０のいずれかに記載の結合タンパク質を有し、中和結合タンパク質がＩＬ−１８を中和する能力を有する中和結合タンパク質。
【請求項２２】
前記ＩＬ−１８が、プロ−ヒトＩＬ−１８；成熟−ヒトＩＬ−１８および切断形ヒトＩＬ−１８からなる群から選択される請求項２１に記載の中和結合タンパク質。
【請求項２３】
前記中和結合タンパク質が、ＩＬ−１８がその受容体に結合する能力を弱める請求項２１に記載の中和結合タンパク質。
【請求項２４】
前記中和結合タンパク質が、プロ−ヒトＩＬ−１８、成熟−ヒトＩＬ−１８または切断形ヒトＩＬ−１８がその受容体に結合する能力を弱める請求項２３に記載の中和結合タンパク質。
【請求項２５】
前記中和結合タンパク質が、Ｔｈ１調節；Ｔｈ２調節；Ｎｋ調節；好中球調節；単球−マクロファージ系統調節；好中球調節；好酸球調節；Ｂ−細胞調節；サイトカイン調節；ケモカイン調節；接着分子調節；および細胞動員調節からなる群から選択される１以上のＩＬ−１８生理活性を低下させる能力を有する請求項２１に記載の中和結合タンパク質。
【請求項２６】
前記中和結合タンパク質が、最大で約１０−７Ｍ；最大で約１０−８Ｍ；最大で約１０−９Ｍ；最大で約１０−１０Ｍ；最大で約１０−１１Ｍ；最大で約１０−１２Ｍ；および最大で１０−１３Ｍからなる群から選択される解離定数（ＫＤ）を有する請求項２１に記載の中和結合タンパク質。
【請求項２７】
前記中和結合タンパク質が、少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１；および少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１からなる群から選択されるオン速度を有する請求項２１に記載の中和結合タンパク質。
【請求項２８】
前記中和結合タンパク質が、最大で約１０−３ｓ−１；最大で約１０−４ｓ−１；最大で約１０−５ｓ−１；および最大で約１０−６ｓ−１からなる群から選択されるオフ速度を有する請求項２１に記載の中和結合タンパク質。
【請求項２９】
結合タンパク質が検出可能な標識とコンジュゲート形成している、請求項１ないし２０のいずれかに記載の結合タンパク質を含む標識結合タンパク質。
【請求項３０】
前記検出可能な標識が、放射能標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生体発光標識、磁気標識およびビオチンからなる群から選択される請求項２９に記載の標識結合タンパク質。
【請求項３１】
前記標識が、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍからなる群から選択される放射能標識である請求項３０に記載の標識結合タンパク質。
【請求項３２】
結合タンパク質が治療薬または細胞傷害薬とコンジュゲート形成している、請求項１ないし２０のいずれかに記載の結合タンパク質を含む複合結合タンパク質。
【請求項３３】
前記治療薬または細胞傷害薬が、代謝拮抗薬、アルキル化剤、抗生物質、成長因子、サイトカイン、血管新生阻害剤、有糸分裂阻害剤、サントラサイクリン、毒物およびアポトーシス剤からなる群から選択される請求項３２に記載の複合結合タンパク質。
【請求項３４】
請求項１ないし２０のいずれかに記載の結合タンパク質アミノ酸配列をコードする単離核酸。
【請求項３５】
請求項３４に記載の単離核酸を有するベクター。
【請求項３６】
前記ベクターがｐｃＤＮＡ、ｐＴＴ、ｐＴＴ３、ｐＥＦＢＯＳ、ｐＢＶ、ｐＪＶおよびｐＢＪからなる群から選択される請求項３５に記載のベクター。
【請求項３７】
請求項３５または３６に記載のベクターを有する宿主細胞。
【請求項３８】
前記宿主細胞が原核細胞である請求項３７に記載の宿主細胞。
【請求項３９】
前記宿主細胞が大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）である請求項３８に記載の宿主細胞。
【請求項４０】
前記宿主細胞が真核細胞である請求項３７に記載の宿主細胞。
【請求項４１】
前記真核細胞が原生生物細胞、動物細胞、植物細胞および真菌細胞からなる群から選択される請求項４０に記載の宿主細胞。
【請求項４２】
前記真核細胞が、哺乳動物細胞、トリ細胞および昆虫細胞からなる群から選択される動物細胞である請求項４１に記載の宿主細胞。
【請求項４３】
前記動物細胞がＣＨＯ細胞である請求項４２に記載の宿主細胞。
【請求項４４】
前記宿主細胞がＣＯＳである請求項４２に記載の宿主細胞。
【請求項４５】
前記真核細胞がサッカロミセス・セレヴィシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）である請求項４１に記載の宿主細胞。
【請求項４６】
前記動物細胞が昆虫Ｓｆ９細胞である請求項４２に記載の宿主細胞。
【請求項４７】
ヒトＩＬ−１８に結合する結合タンパク質を生産する上で十分な条件下で培地にて請求項３７ないし４６のいずれかに記載の宿主細胞を培養する段階を有する、ヒトＩＬ−１８に結合する結合タンパク質の生産方法。
【請求項４８】
請求項４７に記載の方法に従って生産される結合タンパク質。
【請求項４９】
前記結合タンパク質が結晶として存在する請求項１ないし２８のいずれかに記載の結合タンパク質を有する結晶化結合タンパク質。
【請求項５０】
前記結晶が担体を含まない医薬徐放性結晶である請求項４９に記載の結晶化結合タンパク質。
【請求項５１】
前記結合タンパク質が、前記結合タンパク質の可溶性対応物よりインビボで長い半減期を有する請求項４９に記載の結晶化結合タンパク質。
【請求項５２】
前記結合タンパク質が生理活性を保持している請求項４９に記載の結晶化結合タンパク質。
【請求項５３】
組成物が、
（ａ）請求項４９ないし５２のいずれかに記載の結晶化結合タンパク質および成分を含む製剤ならびに
（ｂ）少なくとも１種類のポリマー担体
を含む結合タンパク質の放出用の組成物。
【請求項５４】
前記ポリマー担体が、ポリ（アクリル酸）、ポリ（シアノアクリレート）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（無水物）、ポリ（デプシペプチド）、ポリ（エステル）、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）またはＰＬＧＡ、ポリ（ｂ−ヒドロキシブチレート）、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ジオキサノン）；ポリ（エチレングリコール）、ポリ（（ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ［（有機）ホスファゼン］、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、無水マレイン酸−アルキルビニルエーテルコポリマー、プルロニックポリオール、アルブミン、アルギン酸化合物、セルロースおよびセルロース誘導体、コラーゲン、フィブリン、ゼラチン、ヒアルロン酸、オリゴ糖類、グリカミノグリカン類、硫酸化多糖類、混合物およびこれらのコポリマーからなる群の１以上から選択されるポリマーである請求項５３に記載の組成物。
【請求項５５】
前記成分が、アルブミン、ショ糖、トレハロース、ラクチトール、ゼラチン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メトキシポリエチレングリコールおよびポリエチレングリコールからなる群から選択される請求項５３に記載の組成物。
【請求項５６】
哺乳動物に対して、有効量の請求項５３に記載の化合物を投与する段階を有する、哺乳動物の治療方法。
【請求項５７】
（ａ）ＩＬ−１８調節剤を提供する段階および
（ｂ）前記調節剤を細胞に接触させる段階
を有し；
前記対象遺伝子が、ジーンバンク識別番号：ＮＭ＿０００３８９、ＮＭ＿００２１９８、ＮＭ＿００２１６３、ＮＭ＿００６１４４、ＮＭ＿００６５１５、ＮＭ＿００７１８５、ＮＭ＿００２２８８、ＮＭ＿００３６６１、ＮＭ＿０２１９５８、ＮＭ＿００１３３５、Ｈｓ．３８２００６、ＮＭ＿０２０１２５、ＮＭ＿００７２１０、ＮＭ＿０２１７９８、ＮＭ＿０１３３２４、Ｍ１１３１３、Ｄ８８１５２、ＮＭ＿００１１０３、Ｕ３７５１９、ＮＭ＿０００６９７、Ｊ０３６００、ＮＭ＿０１４５７８、Ｓ６６７９３、Ｕ４７０５４、Ｌ１９８７１、Ｍ８１１８１、ＮＭ＿００１１８８、Ｕ１５４６０、ＮＭ＿０１４４１７、Ｚ２３１１５、ＮＭ＿００１７１３、Ｕ４５８７８、Ｕ３７５４６、Ｕ７２６４９、Ｕ４９１８７、Ｊ０３５０７、Ｕ５０３６０、ＸＭ＿０７１８６６、ＮＭ＿００５６２３、Ｚ３２７６５、Ｚ１１６９７、ＸＭ＿０７１８６６、Ｕ５１０９６、Ｍ８３６６７、Ｄ８７４６９、Ｌ０７７６５、Ｕ６６４６８、Ｘ１４８３０、Ｌ２９２１７、Ｘ１５８８０、ＮＭ＿００１８５１、Ｍ２７６９１、Ｍ３７４３５、Ｘ１３５８９、Ｘ１６８６６、Ｘ５９１３１、ＮＭ＿００４３９３、Ｕ７３３２８、Ｌ１９２６７、Ｕ５３４４５、Ｘ６８２７７、Ｕ４８８０７、ＮＭ＿００１９５０、Ｕ８７２６９、Ｍ５７７３０、Ｘ５２５４１、Ｊ０４０７６、Ｘ６３７４１、Ｌ０７０７７、Ｍ６２８３１、Ｍ６０８３０、Ｕ５３７８６、ＮＭ＿００１９８８、ＮＭ＿０００１４１、Ｍ２３６６８、Ｕ６００６２、ＮＭ＿０００１４１、Ｕ４９９７３、Ｕ８９９９５、Ｕ２７３２６、Ａ２８１０２、Ｍ２５６６７、Ｌ３４３５７、Ｕ１９５２３、Ｌ０１４０６、Ｕ０３４８６、Ｘ６８２８５、Ｚ１８８５９、Ｄ４９９５８、Ｄ４３７７２、ＡＣ００００９９、Ｍ５７７３１、Ｘ５３８００、Ｍ９１０３６、Ｄ１６５８３、Ｘ６４８７７、Ｘ５８４３１、Ｍ１６９３７、ＮＭ＿０１４４６８、Ｘ９２８１４、Ｌ１９３１４、Ｍ２６６６５、Ｄ１０９９５、Ｌ４１１４７、Ｍ２４２８３、Ｓ８１９１４、Ｊ０３１７１、Ｊ００２１９、ＮＭ＿０００６１９、ＮＭ＿０００５８５、Ｕ３１６２８、Ｘ０４５００、Ｍ２７４９２、Ｘ０１０５７、Ｍ２６０６２、Ｙ０００８１、Ｙ００７８７、Ｚ３１６９５、Ｘ０６２５６、Ｘ５７２０６、Ｕ２０７３４、ＮＭ＿０１４８７９、Ｄ３１７６２、Ｄ４２０３８、ＮＭ＿００５５５１、ＮＭ＿０１４８４６、Ｘ０６１８２、ＮＭ＿００５５５１、Ｘ００７７３０、Ｍ１３９５５、Ｍ５７７１０、Ｓ８３３６２、ＮＭ＿００２３１４、ＮＭ＿００５５６９、Ｕ４９９５７、Ｕ８９９２２、Ｘ１４００８、Ｕ５９９１４、Ｄ１４４９７、Ｘ５９７２７、ＮＭ＿０００４２９、Ｕ４３９４４、Ｘ７２７５５、ＮＭ＿０２１２３０、ＮＭ＿００５９５１、Ｘ７８７１０、Ｘ７０９９１、Ｍ３２０１１、Ｓ７７７６３、Ｍ５８６０３、Ｓ７６６３８、Ｍ６９０４３、Ｕ９１６１６、Ｄ８６４２５、Ｌ１３７４０、Ｕ４４８４８、Ｕ７９２５１、Ｍ２７２８８、ＡＦ０００２３４、Ｄ５０６４０、Ｌ２０９７１、Ｌ１０３４３、Ｕ７７７３５、ＮＭ＿００３５７９、Ｕ１７０３４、ＡＢ０００５８４、Ｘ６３１３１、Ｄ１１４２８、ＮＭ＿０３２９４０、ＮＭ＿００５０３５、ＮＭ＿００３５７９、Ｍ１８２５５、Ｌ０１０８７、Ｄ３８１２８、Ｙ１０３７５、Ｄ１５０４９、Ｍ３１１６６、Ｕ５９８７７、ＮＭ＿００３５７９、Ｕ６４６７５、Ｓ５７１５３、ＮＭ＿００２９０３、ＮＧ＿００００１３、Ｘ７５０４２、Ｍ８３２２１、ＮＭ＿０００５３７、Ｕ２２３１４、Ｓ５９０４９、Ｕ７０４２６、Ｕ２２３７７、Ｕ３８４８０、Ｌ１０３３８、Ｍ２３１７８、Ｍ６９２０３、ＮＭ＿００５４０９、Ｄ７９２０６、ＮＭ＿００５０６５、ＮＭ＿００４１８６、Ｊ０３７６４、ＮＭ＿００６８０２、Ｄ８９０７７、ＮＭ＿００３０３７、Ｍ９１４６３、Ｄ８２３２６、Ｌ０５５６８、Ｕ９６０９４、Ｘ８３３０１、Ｄ２１２６７、Ｌ３１５２９、Ｍ６２８００、ＮＭ＿０２１０１４、Ｚ３５０９３、ＮＭ＿００５８１６、Ｌ２５４４４、Ｍ９５７８７、ＮＭ＿００５４２１、Ｌ４７３４５、Ｍ５７７３２、ＮＭ＿００３２０５、Ｍ９６９５６、Ｕ１９８７８、Ｍ９２３５７、Ｍ５９４６５、Ｘ８３４９０、Ｕ３７５１８、ＮＭ＿００３２９４、Ｕ１９２６１、Ｕ７８７９８、Ｓ６９７９０、Ｕ５３４７６、Ｌ１５３０９、Ｕ７８７２２、Ｘ５７８０９、Ｕ７９２４９、ＡＢ０００４６４、Ｘ７７７４４、Ｕ７９２４８、ＡＩ４２０１２９、ＨＧ２９８１−ＨＴ３１２７、ＨＧ３５４８−ＨＴ３７４９、ＨＧ８７０−ＨＴ８７０、ＨＧ４３３３−ＨＴ４６０３、ＨＧ３１１１−ＨＴ３２８７、ＨＧ４５９３−ＨＴ４９９８、ＨＧ９６１−ＨＴ９６１、ＨＧ１８７７−ＨＴ１９１７、ＨＧ３１１５−ＨＴ３２９１、ＨＧ４１１５−ＨＴ４３８５およびＨＧ３９２５−ＨＴ４１９５からなる群から選択される、対象遺伝子の遺伝子発現を調節する方法。
【請求項５８】
前記調節剤が拮抗薬である請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記調節剤がＩＬ−１８である請求項５７に記載の方法。
【請求項６０】
前記調節剤が、請求項１から２８のいずれか一項に記載の結合タンパク質からなる群から選択される請求項５７に記載の方法。
【請求項６１】
請求項１から２８のいずれか一項に記載の結合タンパク質および製薬上許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項６２】
ＩＬ−１８活性が有害である障害の治療用の少なくとも１種類の別の治療薬をさらに含む請求項６１に記載の医薬組成物。
【請求項６３】
前記別の薬剤が、血管新生阻害薬；キナーゼ阻害薬；同時刺激分子遮断薬；接着分子遮断薬；抗サイトカイン抗体またはそれの機能性断片；メトトレキセート；コルチコステロイド類；シクロスポリン；ラパマイシン；ＦＫ５０６；および非ステロイド系抗炎症剤からなる群から選択される請求項６２に記載の医薬組成物。
【請求項６４】
ヒトＩＬ−１８を請求項１から２８のいずれか一項に記載の結合タンパク質と接触させることで、ヒトＩＬ−１８活性を低下させるようにする段階を有する、ヒトＩＬ−１８活性の低減方法。
【請求項６５】
ヒト被験者に対して、請求項１から２８のいずれか一項に記載の結合タンパク質を投与して、前記ヒト被験者でのヒトＩＬ−１８活性を低下させる段階を有する、ｈＩＬ−１８活性が有害である障害を患うヒト被験者でのヒトＩＬ−１８活性の低下方法。
【請求項６６】
被験者に対して請求項１から２８のいずれか一項に記載の結合タンパク質を投与して治療を達成する、ｈＩＬ−１８活性が有害である疾患または障害の被験者の治療方法。
【請求項６７】
前記障害が、関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎および敗血症性関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー疾患、乾癬、強皮性皮膚炎、対宿主性移植片病、臓器移植拒絶反応、臓器移植に伴う急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム硬化症、汎発性血管内凝固症候群、川崎病、グレーヴズ病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ヴェーゲナー肉芽腫症、ヘーノホ−シェーンライン紫斑病、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、トキシックショク症候群、敗血症症候群、悪液質、感染症、寄生虫病、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンティングトン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、発作、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性疾患、心不全、心筋梗塞、アジソン病、散発性疾患、Ｉ型多分泌腺機能低下およびＩＩ型多分泌腺機能低下、シュミット症候群、成人（急性）呼吸促進症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清陰性関節症、関節症、ライター病、乾癬性関節症、潰瘍性丘関節症、腸性滑膜炎、クラミジア、エルジニアおよびサルモネラに関連する関節症、脊椎関節症、アテローム性疾患／動脈硬化症、アトピー、自己免疫性水泡性疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ疾患、自己免疫性溶血性貧血、クーン陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋肉痛脳炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、原因不明の自己免疫性肝炎、後天性免疫不全疾患症候群、後天性免疫不全に関連する疾病、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全（分類不能型低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性の不妊症、卵巣不全、早発性卵巣不全、線維性肺疾患、原因不明の線維化肺胞炎、ポスト炎症性間隙性肺疾患、間隙性肺炎、結合組織病に伴う間隙性肺疾患、混合結合組織病に伴う肺疾患、全身性硬化症に伴う間隙性肺疾患、慢性関節リウマチに伴う間隙性肺疾患、全身性エリテマトーデスに伴う肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎に伴う肺疾患、シェーグレン病に伴う肺疾患、強直性脊椎炎に伴う肺疾患、脈管性びまん性肺疾患、ヘモジデリン沈着症に伴う肺疾患、薬物誘発性の間隙性肺疾患、放射線線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間隙性肺疾患、通風性関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的な自己免疫性またはルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫媒介型低血糖症、黒色表皮症を伴うＢ型インスリン抵抗性、上皮小体低下症、臓器移植に伴う急性免疫疾患、臓器移植に伴う慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎疾患ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的脈管炎、ライム病、ジスコイドエリテマトーデス、特発性またはＮＯＳの男性不妊症、精子自己免疫、多発性硬化症（全てのサブタイプ）、交感性眼炎、結合組織疾患の二次的な肺高血症、グッドパスチャー症候群、結節性多発性動脈炎の肺発現、急性リウマチ熱、リウマチ様脊椎炎、スティル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状疾患、甲状腺機能亢進、甲状腺腫自己免疫性甲状腺機能亢進（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性脈管炎、白斑、急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発肝臓損傷、胆汁鬱帯、特異体質性肝臓疾患、薬物誘発肝炎、非アルコール性脂肪肝炎、アレルギーおよび喘息、Ｂ群溶連菌（ＧＢＳ）感染、精神障害（例：抑鬱および統合失調症）、Ｔｈ２型およびＴｈ１型介在疾患、急性および慢性疼痛ならびに癌からなる群から選択される請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
第２の薬剤の投与の前、同時または後に請求項１から２８のいずれか一項に記載の結合タンパク質を投与する段階を有し；前記第２の薬剤がヒトＩＬ−１２への結合能を有する抗体またはその断片、メトトレキセート；ヒトＴＮＦへの結合能を有する抗体またはその断片；コルチコステロイド類、シクロスポリン、ラパマイシン、ＦＫ５０６および非ステロイド系抗炎症剤からなる群から選択される、ＩＬ−１８が有害である障害を患う患者の治療方法。
【請求項６９】
中和結合タンパク質が成熟ヒトＩＬ−１８への結合能を有するが、プロ−ヒトＩＬ−１８には特異的に結合せず；中和結合タンパク質がヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体およびＣＤＲ移植抗体からなる群から選択される中和結合タンパク質。
【請求項７０】
前記結合タンパク質が成熟ヒトＩＬ−１８への結合能を有するが、プロ−ヒトＩＬ−１８には特異的に結合しない請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項７１】
中和結合タンパク質がヒトＩＬ−１８との結合に関して１２５−２Ｈ抗体と競合する能力を有し；中和結合タンパク質がヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体およびＣＤＲ移植抗体からなる群から選択される中和結合タンパク質。
【請求項７２】
前記結合タンパク質が、ヒトＩＬ−１８への結合に関して１２５−２Ｈ抗体と競合する能力を有する請求項１に記載の結合タンパク質、
【請求項７３】
中和結合タンパク質がヒトＩＬ−１８への結合に関して１２５−２Ｈ抗体と競合する能力を持たず；中和結合タンパク質がヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体およびＣＤＲ移植抗体からなる群から選択される中和結合タンパク質。
【請求項７４】
前記結合タンパク質がヒトＩＬ−１８への結合に関して１２５−２Ｈ抗体と競合する能力を持たない請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項７５】
中和結合タンパク質がヒトＩＬ−１８への結合に関して２．５（Ｅ）ｍｇ１抗体およびＩＬ−１８ＢＰからなる群から選択される結合タンパク質と競合する能力を持たず；中和結合タンパク質がヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体およびＣＤＲ移植抗体からなる群から選択される中和結合タンパク質。
【請求項７６】
前記結合タンパク質が、ヒトＩＬ−１８への結合に関して２．５（Ｅ）ｍｇ１抗体およびＩＬ−１８ＢＰからなる群から選択される結合タンパク質と競合する能力を持たない請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項７７】
前記ＶＬが配列番号９のアミノ酸配列を有し、前記ＶＨが配列番号８のアミノ酸配列を有する請求項８に記載の結合タンパク質。
【請求項７８】
結合タンパク質が、
配列番号２および配列番号３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＩｇ定常重領域；
配列番号４および配列番号５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＩＧ定常軽領域；
配列番号８のアミノ酸配列を有するＩｇ可変重領域、および
配列番号９のアミノ酸配列を有するＩｇ可変軽領域
を有する、ヒトＩＬ−１８への結合能を有する結合タンパク質。
【請求項７９】
配列番号３のアミノ酸配列を有するＩｇ定常重領域、
配列番号４のアミノ酸配列を有するＩＧ定常軽領域、
配列番号８のアミノ酸配列を有するＩｇ可変重領域、および
配列番号９のアミノ酸配列を有するＩｇ可変軽領域
を有する、ヒトＩＬ−１８への結合能を有する結合タンパク質。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）結合タンパク質に関するものであり、具体的には急性および慢性炎症疾患の予防および／または治療におけるそれの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
１９８９年当初において、インターロイキン  １８（ＩＬ−１８）は、インターフェロン−γ誘発因子（ＩＧＩＦ）と言われていたが、現在では、インターフェロン−γを誘発する能力以外にも各種機能を有するプロ炎症性サイトカインである。これらの生物学的特性には、ＮＦ−κｂの活性化、Ｆａｓリガンドの発現、ＣＣおよびＣＸＣケモカインの両方の誘発、コンピテントヒト免疫不全ウイルスの産生増加などがある。ＩＬ−１８は、Ｔ細胞およびマクロファージ内でインターフェロン−γ産生を誘発する能力を有することから、Ｔｈ１型の免疫応答において重要な役割を果たし、先天性免疫および後天性免疫の両方に関与する。ＩＬ−１８は、構造および機能の両方の点でＩＬ−１ファミリーに関係するものである。ＩＬ−１８の構造、機能および生理活性については総覧が出されている（例えば、Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９９８）  Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．６３：６５８−６５４；Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ，Ｃ．Ａ．（１９９９）  Ｍｅｔｈｏｄｓ１９：１２１−１３２；およびＤｉｎａｒｅｌｌｏ，Ｃ．Ａ．（１９９９）  Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０３：１１−２４；（ＭｃＩｎｎｅｓ．Ｂ．ｅｔ．ａｌ．（２０００）  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ２１：３１２−３１５；Ｎａｋａｎｉｓｈｉ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ（２００１）  Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９：４２３−４７４参照）。
【０００３】
細胞内プロ−ＩＬ−１８は、カスパーゼ１によってエンドトキシン刺激細胞で（Ｇｈａｙｕｒ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）  Ｎａｔｕｒｅ  ３８６：６１９−６２３；Ｇｕ，ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７５：２０６−２０９）、およびカスパーゼ４、５および６によってＦａｓ−Ｌもしくは細菌ＤＮＡ刺激細胞で（Ｔｓｕｔｓｕｉ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １１：３５９−６７；Ｇｈａｙｕｒ，Ｔ．，未発表所見）、タンパク質分解的に処理されて１８ｋＤａの活性型となる。プロ−ＩＬ−１８はまた、好中球プロテイナーゼ３（Ｓｕｇａｗａｒａ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，（２００１）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６７，６５６８−６５７５）、カスパーゼ３（Ａｋｉｔａ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２，２６５９５−２６６０３）およびセリンプロテアーゼであるエラスターゼおよびカテプシン（Ｇｒａｃｉｅ  Ｊ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，（２００３）  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ７３，２１３−２２４）などの他のプロテアーゼによってもタンパク質分解的に処理される。ヒトおよびマウスの両方のＩＬ−１８とも従来のリーダー配列を持たず、細胞による成熟ＩＬ−１８放出の機序については十分に解明されていない。
【０００４】
ＩＬ−１８の生理活性には、α−サブユニット（ＩＬ−１Ｒ−関連タンパク質−１またはＩＬ−１Ｒｒｐ１とも称されるＩＬ−１Ｒファミリーの１構成員）およびβ−サブユニット（ＩＬ−１８Ｒ付属タンパク質、ＩＬ−１８ＡＰまたはＡｃＰＬとも称される）という２つのサブユニットからなるヘテロ二量体ＩＬ−１８  受容体（ＩＬ−１８Ｒ）へのＩＬ−１８の結合が介在している。ＩＬ−１８ＲαサブユニットはＩＬ−１８に直接結合するが、シグナル伝達することはできない。β−サブユニットはそれ自体ではＩＬ−１８に結合しないが、α−サブユニットと共同で、シグナル伝達に必要な高親和性受容体（ＫＤ＝約０．３ｎＭ）を形成する（Ｓｉｍｓ，Ｊ．Ｅ．，（２００２）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：１１７−１２２）。ＩＬ−１８Ｒαβ複合体を介したＩＬ−１８シグナル伝達  は、ＩＬ−１Ｒおよびトール様受容体（ＴＬＲ）系と類似している。ＩＬ−１８Ｒ信号伝達は、ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ、ＴＲＡＦ６などのシグナル伝達分子を使用し、ＩＬ−１の場合と同様の応答を生じる（例：ＮＩＫ、ＩｋＢキナーゼ、ＮＦ−ｋＢ、ＪＮＫおよびｐ３８ＭＡＰキナーゼの活性化）。ＩＬ−１８生理活性介在においてＩＬ−１８Ｒαおよびシグナル伝達分子が必要であることは、それぞれＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｈｏｓｈｉｎｏ  Ｋ．，ｅｔ  ａｌ（１９９９）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：５０４１−５０４４）、ＭｙＤ８８（Ａｄａｃｈｉ  Ｏ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９８）  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ９：１４３−１５０）またはＩＲＡＫ（Ｋａｎａｋａｒａｊ  Ｐ．，（１９９９）  Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８９：１１２９−１１３８）ノックアウトを用いて確認されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９９８）  Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．６３：６５８−６５４
【非特許文献２】Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ，Ｃ．Ａ．（１９９９）  Ｍｅｔｈｏｄｓ１９：１２１−１３２
【非特許文献３】Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ，Ｃ．Ａ．（１９９９）  Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０３：１１−２４
【非特許文献４】ＭｃＩｎｎｅｓ．Ｂ．ｅｔ．ａｌ．（２０００）  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ２１：３１２−３１５
【非特許文献５】Ｎａｋａｎｉｓｈｉ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ（２００１）  Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９：４２３−４７４
【非特許文献６】Ｇｈａｙｕｒ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）  Ｎａｔｕｒｅ  ３８６：６１９−６２３
【非特許文献７】Ｇｕ，ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７５：２０６−２０９
【非特許文献８】Ｔｓｕｔｓｕｉ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １１：３５９−６７
【非特許文献９】Ｓｕｇａｗａｒａ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，（２００１）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６７，６５６８−６５７５
【非特許文献１０】Ａｋｉｔａ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２，２６５９５−２６６０３
【非特許文献１１】Ｇｒａｃｉｅ  Ｊ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，（２００３）  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ７３，２１３−２２４
【非特許文献１２】Ｓｉｍｓ，Ｊ．Ｅ．，（２００２）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：１１７−１２２
【非特許文献１３】Ｈｏｓｈｉｎｏ  Ｋ．，ｅｔ  ａｌ（１９９９）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：５０４１−５０４４
【非特許文献１４】Ａｄａｃｈｉ  Ｏ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９８）  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ９：１４３−１５０
【非特許文献１５】Ｋａｎａｋａｒａｊ  Ｐ．，（１９９９）  Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８９：１１２９−１１３８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ＩＬ−１８に結合する抗体は当業界で知られている。ＩＬ−１８を中和することができるマウス抗体が、ＥＰ０９７４６００に開示されている。ＩＬ−１８に対するヒト抗体が、ＰＣＴ公開ＷＯ  ０１５８９５６に開示されており、これらは参照によって本明細書に組み込まれる。本発明は、ＩＬ−１８に結合する能力を有し、高親和性で結合し、ＩＬ−１８に結合してそこれを中和することができる、結合タンパク質の新規ファミリー、ヒト抗体およびその断片を提供する。
【０００７】
本発明は、ＩＬ−１８結合タンパク質、特にはヒトＩＬ−１８に対する抗体、ならびにそのような結合タンパク質の作製および使用方法に関する。本発明の１態様は、ＩＬ−１８の調節剤を用いる遺伝子発現の調節方法に関する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の１態様は、ヒトＩＬ−１８への結合能を有する抗原結合ドメインを有する結合タンパク質に関する。１実施形態において、前記抗原結合ドメインは、
ＣＤＲ−Ｈ１：Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７（配列番号４２）
［上記配列において、
Ｘ１はＳ、Ｎ、Ｈ、ＲまたはＹであり；
Ｘ２はＹ、Ｇ、Ｒ、ＳまたはＣであり；
Ｘ３はＷ、Ｇ、Ｙ、Ｄ、Ｓ、ＶまたはＩであり；
Ｘ４はＩ、Ｈ、Ｗ、Ｙ、Ｍ、ＬまたはＤであり；
Ｘ５はＧ、Ｙ、Ｓ、ＮまたはＨであり；
Ｘ６はＷであるか非存在であり；
Ｘ７はＴ、Ｓ、Ｇであるか非存在である。］；
ＣＤＲ−Ｈ２：Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｘ１７（配列番号４３）
［上記配列において、
Ｘ１はＦ、Ｙ、Ｈ、ＳまたはＶであり；
Ｘ２はＩまたはＦであり；
Ｘ３はＹ、ＳまたはＷであり；
Ｘ４はＰ、ＹまたはＳであり；
Ｘ５はＧ、Ｓ、ＲまたはＤであり；
Ｘ６はＤまたはＧであり；
Ｘ７はＳ、Ｔ、ＧまたはＲであり；
Ｘ８はＥ、Ｔ，ＩまたはＮであり；
Ｘ９はＴ、Ｙ、Ｎ，Ｉ、ＫまたはＨであり；
Ｘ１０はＲ、ＹまたはＳであり；
Ｘ１１はＹ、ＮまたはＳであり；
Ｘ１２はＳ、Ｐ、ＡまたはＶであり；
Ｘ１３はＰ、ＳまたはＤであり；
Ｘ１４はＴ、ＬまたはＳであり；
Ｘ１５はＦ、ＫまたはＶであり；
Ｘ１６はＱ、ＳまたはＫであり；
Ｘ１７はＧであるか非存在である。］；
ＣＤＲ−Ｈ３：Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｘ１７−Ｘ１８（配列番号４４）
［上記配列において、
Ｘ１はＶ、Ｄ、Ｅ、ＳまたはＣであり；
Ｘ２はＧ、Ｒ、Ｄ、Ｓ、Ｋ、Ｌ、ＹまたはＡであり；
Ｘ３はＳ、Ｇ、ＹまたはＲであり；
Ｘ４はＧ、Ｓ、Ｙ、Ｎ、ＴまたはＤであり；
Ｘ５はＷ、Ｓ、Ａ、Ｇ、ＹまたはＴであり；
Ｘ６はＹ、Ｇ、Ｓ、Ｆ、ＷまたはＮであり；
Ｘ７はＰ、Ｓ、Ｆ、Ｙ、Ｖ、Ｇ、ＷまたはＶであり；
Ｘ８はＹ、Ｆ、Ｄ、Ｐ、Ｍ、ＩまたはＮであり；
Ｘ９はＴ、Ｗ、Ｄ、Ｌ、Ｙ、Ｅ、Ｐ、ＦまたはＧであり；
Ｘ１０はＦ、Ｄ、Ｙ、Ｈ、Ｖ、Ｙであるか非存在であり；
Ｘ１１はＤ、Ｙ、Ｆ、Ｌであるか非存在であり；
Ｘ１２はＩ、Ｄ、Ｙであるか非存在であり；
Ｘ１３はＹであるか非存在であり；
Ｘ１４はＹであるか非存在であり；
Ｘ１５はＧであるか非存在であり；
Ｘ１６はＭであるか非存在であり；
Ｘ１７はＤであるか非存在であり；
Ｘ１８はＶであるか非存在である。］；
ＣＤＲ−Ｌ１：Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｘ１７（配列番号４５）
［上記配列において、
Ｘ１はＲまたはＫであり；
Ｘ２はＡ、ＧまたはＳであり；
Ｘ３はＳであり；
Ｘ４はＥ、Ｒ、ＱまたはＨであり；
Ｘ５はＳ、Ｉ、ＴまたはＮであり；
Ｘ６はＩ、Ｖ、ＬまたはＦであり；
Ｘ７はＳ、Ｇ、Ｌ、ＮまたはＲであり；
Ｘ８はＳ、Ｇ、Ｙ、Ｒ、Ｎ、ＨまたはＤであり；
Ｘ９はＮ、Ｇ、Ｙ、ＲまたはＳであり；
Ｘ１０はＬ、Ｙ、ＳまたはＤであり；
Ｘ１１はＡ、Ｌ、Ｎ、Ｖ、ＧまたはＤであり；
Ｘ１２はＡ、Ｎ、Ｅ、Ｋ、Ｇであるか非存在であり；
Ｘ１３はＫ、Ｔ、Ｎであるか非存在であり；
Ｘ１４はＮ、Ｙ、Ｔであるか非存在であり；
Ｘ１５はＹ、Ｌであるか非存在であり；
Ｘ１６はＬ、Ｃ、Ｙであるか非存在であり；
Ｘ１７はＡ、Ｄであるか非存在である。］；
ＣＤＲ−Ｌ２：Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７（配列番号４６）
［上記配列において、
Ｘ１はＴ、Ｇ、Ｓ、ＷまたはＥであり；
Ｘ２はＡ、Ｖ、Ｔ、ＩまたはＬであり；
Ｘ３はＳまたはＦであり；
Ｘ４はＴ、Ｉ、Ｎ、Ｓ、ＲまたはＹであり；
Ｘ５はＲまたはＬであり；
Ｘ６はＡ、Ｑ、ＥまたはＦであり；
Ｘ７はＴまたはＳである。］；
ＣＤＲ−Ｌ３：Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０（配列番号４７）
［上記式において
Ｘ１はＱまたはＭであり；
Ｘ２はＱ、ＨまたはＹであり；
Ｘ３はＹ、Ｎ、Ｇ、ＳまたはＲであり；
Ｘ４はＮ、Ｈ、Ｙ、Ｄ、Ｇ、Ｖ、ＬまたはＩであり；
Ｘ５はＮ、Ｇ、Ｉ、Ｙ、Ｓ、Ｑ、ＦまたはＥであり；
Ｘ６はＷ、Ｓ、Ｔ、Ｌ、ＩまたはＦであり；
Ｘ７はＰ、Ｌ、Ｔ、ＤまたはＩであり；
Ｘ８はＳ、Ｌ、Ｐ、Ｃ、Ｗ、ＩまたはＦであり；
Ｘ９はＩ、Ｔ、Ｓであるか非存在であり；
Ｘ１０はＴであるか非存在である。］
からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１個のＣＤＲを有する。
【０００９】
好ましくは前記抗原結合ドメインは、配列番号６の残基３１〜３５；配列番号６の残基５０〜６６；配列番号６の残基９９〜１１０；配列番号７の残基２４〜３４；配列番号７の残基５０〜５６；配列番号７の残基８９〜９８；配列番号８の残基３１〜３７；配列番号８の残基５２〜６７；配列番号８の残基１００〜１１０；配列番号９の残基２４〜３５；配列番号９の残基２１〜２７；配列番号９の残基９０〜９８；配列番号１０の残基３１〜３５；配列番号１０の残基５０〜６５；配列番号１０の残基９８〜１０７；配列番号１１の残基２４〜３４；配列番号１１の残基５０〜５６；配列番号１１の残基８９〜９７；配列番号１２の残基３１〜３７；配列番号１２の残基５２〜６７；配列番号１２の残基１００〜１０８；配列番号１３の残基２４〜３５；配列番号１３の残基５１〜５７；配列番号１３の残基９０〜９８；配列番号１４の残基３１〜３５；配列番号１４の残基５０〜６６；配列番号１４の残基９９〜１１１；配列番号１５の残基２４〜４０；配列番号１５の残基５６〜６２；配列番号１５の残基９５〜１０３；配列番号１６の残基３１〜３７；配列番号１６の残基５２〜６７；配列番号１６の残基１００〜１０９；配列番号１７の残基２４〜３５；配列番号１７の残基５１〜５７；配列番号１７の残基９０〜９８；配列番号１８の残基３１〜３５；配列番号１８の残基２０〜３６；配列番号１８の残基９９〜１０８；配列番号１９の残基２４〜３４；配列番号１９の残基５０〜５６；配列番号１９の残基８９〜９７；配列番号２０の残基３１〜３５；配列番号２０の残基５２〜６７；配列番号２０の残基１００〜１０８；配列番号２１の残基２４〜３５；配列番号２１の残基５１〜５７；配列番号２１の残基９０〜９８；配列番号２２の残基３１〜３５；配列番号２２の残基５０〜６６；配列番号２２の残基９９〜１１６；配列番号２３の残基２４〜３９；配列番号２３の残基５５〜６１；配列番号２３の残基９４〜１０２；配列番号２４の残基３１〜３７；配列番号２４の残基５２〜６７；配列番号２４の残基１００〜１０９；配列番号２５の残基２４〜３５；配列番号２５の残基５１〜５７；配列番号２５の残基９０〜９８；配列番号２６の残基３１〜３７；配列番号２６の残基５２〜６７；配列番号２６の残基１００〜１０９；配列番号２７の残基２４〜３５；配列番号２７の残基５１〜５７；配列番号２７の残基９０〜９８；配列番号２８の残基３１〜３７；配列番号２８の残基５２〜６７；配列番号２８の残基１００〜１０８；配列番号２９の残基２４〜３５；配列番号２９の残基５１〜５７；配列番号２９の残基９０〜９８；配列番号３０の残基３１〜３７；配列番号３０の残基５２〜６７；配列番号３０の残基９９〜１０９；配列番号３１の残基２４〜３５；配列番号３１の残基５１〜５７；配列番号３１の残基９０〜９８；配列番号３２の残基３１〜３７；配列番号３２の残基５２〜６７；配列番号３２の残基１００〜１０９；配列番号３３の残基２４〜３５；配列番号３３の残基５１〜５７；配列番号３３の残基９０〜９８；配列番号３４の残基３１〜３７；配列番号３４の残基５２〜６７；配列番号３４の残基１００〜１０８；配列番号３５の残基２４〜３５；配列番号３５の残基５１〜５７；配列番号３５の残基９０〜９８；配列番号３６の残基３１〜３５；配列番号３６の残基５０〜６６；配列番号３６の残基９９〜１１６；配列番号３７の残基２４〜３９；配列番号３７の残基５５〜６１；配列番号３７の残基９４〜１０２；配列番号３８の残基３１〜３５；配列番号３８の残基５０〜６６；配列番号３８の残基９９〜１０８；配列番号３９の残基２４〜３５；配列番号３９の残基５１〜５７；配列番号３９の残基９０〜９８；配列番号４０の残基３１〜３７；配列番号４０の残基５２〜６７；配列番号４０の残基９７〜１０９；配列番号４１の残基２４〜４０；配列番号４１の残基５６〜６２；配列番号４１の残基９５〜１０３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１個のＣＤＲを有する。好ましくは前記結合タンパク質は少なくとも３個のＣＤＲを有する。
【００１０】
別の好ましい実施形態において前記結合タンパク質は、ＶＨドメインを有する。好ましくは前記ＶＨドメインは、配列番号６；配列番号８；配列番号１０；配列番号１２；配列番号１４；配列番号１６；配列番号１８；配列番号２０；配列番号２２；配列番号２４；配列番号２６；配列番号２８；配列番号３０；配列番号３２；配列番号３４；配列番号３６；配列番号３８；および配列番号４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。別の実施形態において前記結合タンパク質は、ＶＬドメインを有する。好ましくは前記ＶＬドメインは、配列番号７；配列番号９；配列番号１１；配列番号１３；配列番号１５；配列番号１７；配列番号１９；配列番号２１；配列番号２３；配列番号２５；配列番号２７；配列番号２９；配列番号３１；配列番号３３；配列番号３５；配列番号３７；配列番号３９；および配列番号４１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
【００１１】
ある好ましい実施形態では前記結合タンパク質は、ＶＨおよびＶＬドメインを有する。より好ましくは前記結合タンパク質は、配列番号６；配列番号８；配列番号１０；配列番号１２；配列番号１４；配列番号１６；配列番号１８；配列番号２０；配列番号２２；配列番号２４；配列番号２６；配列番号２８；配列番号３０；配列番号３２；配列番号３４；配列番号３６；配列番号３８および配列番号４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨドメインならびに配列番号７；配列番号９；配列番号１１；配列番号１３；配列番号１５；配列番号１７；配列番号１９；配列番号２１；配列番号２３；配列番号２５；配列番号２７；配列番号２９；配列番号３１；配列番号３３；配列番号３５；配列番号３７；配列番号３９および配列番号４１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬドメインを有する。最も好ましくは前記結合タンパク質は、配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＬドメインおよび配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨドメインを有する。
【００１２】
別の実施形態において前記結合タンパク質は、ヒトＩｇＭ定常ドメイン；ヒトＩｇＧ１定常ドメイン；ヒトＩｇＧ２定常ドメイン；ヒトＩｇＧ３定常ドメイン；ヒトＩｇＧ４定常ドメイン；ヒトＩｇＥ定常ドメインおよびヒトＩｇＡ定常ドメインからなる群から選択される重鎖免疫グロブリン定常ドメインをさらに有する。好ましくは前記重鎖免疫グロブリン定常領域ドメインは、ヒトＩｇＧ１定常ドメインである。好ましくは、前記重鎖定常領域ドメインで、少なくとも１個のアミノ酸残基が置き換わっていることで、前記抗体のエフェクター機能が変化している。より好ましくは前記ヒトＩｇＧ１定常ドメインは、配列番号２および配列番号３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
【００１３】
別の実施形態では前記結合タンパク質は、ヒトＩｇカッパ定常ドメインおよびヒトＩｇラムダ定常ドメインからなる群から選択される軽鎖免疫グロブリン定常ドメインをさらに有する。好ましくは前記ヒトＩｇカッパ定常ドメインは配列番号４のアミノ酸配列を有し、前記ヒトＩｇラムダ定常ドメインは配列番号５のアミノ酸配列を有する。
【００１４】
別の実施形態において前記結合タンパク質は、配列番号２および配列番号３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＩｇ定常重領域；配列番号４および配列番号５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＩｇ定常軽領域；配列番号６のアミノ酸配列を有するＩｇ可変重領域；および配列番号７のアミノ酸配列を有するＩｇ可変軽領域を有する。
【００１５】
別の実施形態において前記結合タンパク質は、配列番号３のアミノ酸配列を有するＩｇ定常重領域；配列番号４のアミノ酸配列を有するＩｇ定常軽領域；配列番号６のアミノ酸配列を有するＩｇ可変重領域；および配列番号７のアミノ酸配列を有するＩｇ可変軽領域を有する。
【００１６】
別の実施形態において前記結合は、免疫グロブリン分子または当業界で公知のその機能的変異体からなる群から選択され、この変異体は前記結合タンパク質の特徴的な結合特性を保持している。特異的免疫グロブリンの実施形態の例には、ｓｃＦｖ；モノクローナル抗体；ヒト抗体；キメラ抗体；ヒト化抗体；単一ドメイン抗体；Ｆａｂ断片；Ｆａｂ′断片；Ｆ（ａｂ′）２；Ｆｖ；ジスルフィド連結Ｆｖおよび二重特異性または二重特異的抗体などがあるが、これらに限定されるものではない。最も好ましくは、前記結合タンパク質はヒト抗体である。
【００１７】
本発明の別の態様は、上記で開示の結合タンパク質のいずれかを有する中和結合タンパク質であって、前記中和結合タンパク質がＩＬ−１８を中和する能力を有する中和結合タンパク質を提供する。好ましくは前記中和結合タンパク質は、プロ−ヒトＩＬ−１８；成熟−ヒトＩＬ−１８または切断−ヒトＩＬ−１８のうちのいずれかを中和する能力を有する。別の実施形態において前記中和結合タンパク質は、ＩＬ−１８がその受容体に結合する能力を低下させる。好ましくは前記中和結合タンパク質は、プロ−ヒトＩＬ−１８；成熟−ヒトＩＬ−１８または切断−ヒトＩＬ−１８がその受容体に結合する能力を低下させる。
【００１８】
別の実施形態において前記中和結合タンパク質は、Ｔｈ１調節；Ｔｈ２調節（Ｎａｋａｎｉｓｈｉ  Ｋ．，ｅｔ  ａｌ  （２００１）  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ａｎｄ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖ．１２：５３−７２）；Ｎｋ調節；好中球調節；単球−マクロファージ系統調節；好中球調節；好酸球調節；Ｂ−細胞調節；サイトカイン調節；ケモカイン調節；接着分子調節；および細胞動員調節からなる群から選択される１以上のＩＬ−１８生理活性を阻害する能力を有する。
【００１９】
好ましい実施形態において前記中和結合タンパク質は、最大で約１０−７Ｍ；最大で約１０−８Ｍ；最大で約１０−９Ｍ；最大で約１０−１０Ｍ；最大で約１０−１１Ｍ；最大で約１０−１２Ｍ；および最大で１０−１３Ｍからなる群から選択される解離定数（ＫＤ）を有する。
【００２０】
別の実施形態において前記中和結合タンパク質は、少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１；および少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１からなる群から選択されるオン速度を有する。
【００２１】
さらに別の実施形態において前記中和結合タンパク質は、最大で約１０−３ｓ−１；最大で約１０−４ｓ−１；最大で約１０−５ｓ−１；および最大で約１０−６ｓ−１からなる群から選択されるオフ速度を有する。
【００２２】
本発明の別の態様は、上記で開示の前記結合タンパク質のいずれかを含む標識結合タンパク質であって、前記結合タンパク質が検出可能な標識とコンジュゲート形成している標識結合タンパク質を提供する。好ましくは前記検出可能な標識は、放射能標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生体発光標識、磁気標識およびビオチンからなる群から選択される。より好ましくは前記放射能標識は、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍである。
【００２３】
本発明の別の態様は、上記で開示の結合タンパク質のいずれかを有する複合タンパク質であって、前記結合タンパク質が治療薬または細胞傷害薬とコンジュゲート形成している複合タンパク質を提供する。好ましくは前記治療薬または細胞傷害薬は、代謝拮抗薬；アルキル化剤；抗生物質；成長因子；サイトカイン；血管新生阻害剤；有糸分裂阻害剤；サントラサイクリン；毒物；およびアポトーシス剤からなる群から選択される。
【００２４】
１実施形態は、上記で開示の結合タンパク質のうちのいずれかをコードする単離核酸に関するものである。さらに別の実施形態は、上記で開示の単離核酸を有するベクターであって、前記ベクターがｐｃＤＮＡ；ｐＴＴ（Ｄｕｒｏｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００２，Ｖｏｌ  ３０，Ｎｏ．２）；ｐＴＴ３（別の多重クローニング部位を有するｐＴＴ）；ｐＥＦＢＯＳ（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ，Ｓ．ａｎｄ  Ｎａｇａｔａ，Ｓ．，（１９９０）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｖｏｌ  １８，Ｎｏ．１７）；ｐＢＶ；ｐＪＶ；およびｐＢＪからなる群から選択されるベクターを提供する。
【００２５】
別の実施形態では、宿主細胞を前記ベクターで形質転換する。好ましくは前記宿主細胞は原核細胞である。より好ましくは前記宿主細胞は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）である。関係する実施形態では前記宿主細胞は、真核細胞である。好ましくは前記真核細胞は、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞および真菌細胞からなる群から選択される。より好ましくは前記宿主細胞は、ＣＨＯおよびＣＯＳなど（これらに限定されるものではない）の哺乳動物細胞；またはサッカロミセス・セレヴィシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）などの真菌細胞；またはＳｆ９などの昆虫細胞である。
【００２６】
本発明の別の態様は、ヒトＩＬ−１８に結合する結合タンパク質の生産方法であって、ヒトＩＬ−１８に結合する結合タンパク質を生産する上で十分な条件下で培地にて上記で開示の宿主細胞のいずれかを培養する段階を有する方法を提供する。別の実施形態は、上記で開示の方法に従って生産される結合タンパク質を提供する。
【００２７】
本発明の別の態様は、上記で開示の結合タンパク質のいずれかを有する結晶化結合タンパク質であって、前記結合タンパク質が結晶として存在する結晶化結合タンパク質を提供する。好ましくは前記結晶は、担体を含まない医薬徐放性結晶である。１実施形態では、結晶として存在する前記結合タンパク質は、前記結合タンパク質の可溶性の相手よりインビボで長い半減期を有する。別の実施形態では、前記結合タンパク質は、結晶化後にそれの生理活性を保持する。
【００２８】
１実施形態は、結合タンパク質の放出用の組成物であって、前記組成物が、上記で開示の結晶化結合タンパク質および成分を含む製剤ならびに少なくとも１種類のポリマー担体を有する組成物を提供する。好ましくは前記ポリマー担体は、ポリ（アクリル酸）、ポリ（シアノアクリレート）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（無水物）、ポリ（デプシペプチド）、ポリ（エステル）、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）またはＰＬＧＡ、ポリ（ｂ−ヒドロキシブチレート）、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ジオキサノン）；ポリ（エチレングリコール）、ポリ（（ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ［（有機）ホスファゼン］、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、無水マレイン酸−アルキルビニルエーテルコポリマー、プルロニックポリオール、アルブミン、アルギン酸化合物、セルロースおよびセルロース誘導体、コラーゲン、フィブリン、ゼラチン、ヒアルロン酸、オリゴ糖類、グリカミノグリカン類、硫酸化多糖類、混合物およびこれらのコポリマーからなる群の１以上から選択されるポリマーである。好ましくは前記成分は、アルブミン、ショ糖、トレハロース、ラクチトール、ゼラチン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メトキシポリエチレングリコールおよびポリエチレングリコールからなる群から選択される。別の実施形態は、哺乳動物の治療方法であって、この哺乳動物に対して、有効量の上記で開示の化合物を投与する段階を有する方法を提供する。
【００２９】
本発明の別の態様は、対象遺伝子の遺伝子発現を調節する方法であって、ＩＬ−１８ポリペプチドまたはＩＬ−１８調節剤を提供する段階および前記ポリペプチドまたは調節剤を細胞に接触させる段階を有し；前記対象遺伝子が、ジーンバンク（Ｇｅｎｅｂａｎｋ）識別番号：
【００３０】
【化１】
2011097947.tif 000002
によって識別される遺伝子からなる群から選択される方法を提供する。
【００３１】
好ましくは前記調節剤は、拮抗薬である。より好ましくは前記調節剤は、結合タンパク質または中和結合タンパク質である。
【００３２】
本発明はまた、上記で開示の結合タンパク質または中和結合タンパク質ならびに製薬上許容される担体を含む医薬組成物を提供する。別の実施形態において前記医薬組成物は、ＩＬ−１８活性が有害である疾患を治療するための少なくとも１種類の別の治療薬を含む。好ましくは前記別の薬剤は、血管新生阻害薬（抗ＶＥＧＦ抗体またはＶＥＧＦ−トラップなど（これらに限定されるものではない。））；キナーゼ阻害薬（ＫＤＲおよびＴＩＥ−２阻害薬など（これらに限定されるものではない。））；同時刺激分子遮断薬（抗Ｂ７．１、抗Ｂ７．２、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、抗ＣＤ２０など（これらに限定されるものではない。））；接着分子遮断薬（抗ＬＦＡ−１Ａｂｓ、抗Ｅ／ＬセレクチンＡｂｓ、小分子阻害薬など（これらに限定されるものではない。））；抗サイトカイン抗体またはこの機能性断片（抗ＩＬ−１２、抗ＴＮＦ、抗受容体抗体など（これらに限定されるものではない。））；メトトレキセート；コルチコステロイド類；シクロスポリン；ラパマイシン；ＦＫ５０６；および非ステロイド系抗炎症剤からなる群から選択される。
【００３３】
別の態様において本発明は、ヒトＩＬ−１８活性の阻害方法であって、ヒトＩＬ−１８を上記で開示の結合タンパク質と接触させることで、ヒトＩＬ−１８活性を阻害するようにする段階を有する方法を提供する。関係する態様では本発明は、ＩＬ−１８活性が有害である障害を患うヒト被験者でのヒトＩＬ−１８活性の阻害方法であって、このヒト被験者に対して、上記で開示の結合タンパク質を投与することで、ヒト被験者でのヒトＩＬ−１８活性を阻害し、治療を達成する段階を有する方法を提供する。好ましくは前記障害は、関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎および敗血症性関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー疾患、乾癬、強皮性皮膚炎、対宿主性移植片病、臓器移植拒絶反応（骨髄および固形臓器拒絶などがあるが、これらに限定されるものではない。）、臓器移植に伴う急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム硬化症、汎発性血管内凝固症候群、川崎病、グレーヴズ病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ヴェーゲナー肉芽腫症、ヘーノホ−シェーンライン紫斑病、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、トキシックショク症候群、敗血症症候群、悪液質、感染症、寄生虫病、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンティングトン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、発作、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性疾患、心不全、心筋梗塞、アジソン病、散発性疾患、Ｉ型多分泌腺機能低下およびＩＩ型多分泌腺機能低下、シュミット症候群、成人（急性）呼吸促進症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清陰性関節症、関節症、ライター病、乾癬性関節症、潰瘍性丘関節症、腸性滑膜炎、クラミジア、エルジニアおよびサルモネラに関連する関節症、脊椎関節症、アテローム性疾患／動脈硬化症、アトピー、自己免疫性水泡性疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ疾患、自己免疫性溶血性貧血、クーン陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋肉痛脳炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、原因不明の自己免疫性肝炎、後天性免疫不全疾患症候群、後天性免疫不全に関連する疾病、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全（分類不能型低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性の不妊症、卵巣不全、早発性卵巣不全、線維性肺疾患、原因不明の線維化肺胞炎、ポスト炎症性間隙性肺疾患、間隙性肺炎、結合組織病に伴う間隙性肺疾患、混合結合組織病に伴う肺疾患、全身性硬化症に伴う間隙性肺疾患、慢性関節リウマチに伴う間隙性肺疾患、全身性エリテマトーデスに伴う肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎に伴う肺疾患、シェーグレン病に伴う肺疾患、強直性脊椎炎に伴う肺疾患、脈管性びまん性肺疾患、ヘモジデリン沈着症に伴う肺疾患、薬物誘発性の間隙性肺疾患、放射線線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間隙性肺疾患、通風性関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的な自己免疫性またはルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫媒介型低血糖症、黒色表皮症を伴うＢ型インスリン抵抗性、上皮小体低下症、臓器移植に伴う急性免疫疾患、臓器移植に伴う慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎疾患ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的脈管炎、ライム病、ジスコイドエリテマトーデス、特発性またはＮＯＳの男性不妊症、精子自己免疫、多発性硬化症（全てのサブタイプ）、交感性眼炎、結合組織疾患の二次的な肺高血症、グッドパスチャー症候群、結節性多発性動脈炎の肺発現、急性リウマチ熱、リウマチ様脊椎炎、スティル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状疾患、甲状腺機能亢進、甲状腺腫自己免疫性甲状腺機能亢進（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性脈管炎、白斑、急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発肝臓損傷、胆汁鬱帯、特異体質性肝臓疾患、薬物誘発肝炎、非アルコール性脂肪肝炎、アレルギーおよび喘息、Ｂ群溶連菌（ＧＢＳ）感染、精神障害（例：抑鬱および統合失調症）、Ｔｈ２型およびＴｈ１型介在疾患ならびに肺癌、乳房癌、胃癌、膀胱癌、結腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌および直腸癌などの癌および造血器悪性腫瘍（白血病およびリンパ腫）を含む群から選択される。
【００３４】
別の態様において本発明は、ＩＬ−１８が有害である障害を患う患者の治療方法であって、上記で開示の結合タンパク質のいずれかを、上記で記載の第２の薬剤の前、同時または後に投与する段階を有する方法を提供する。
【００３５】
本発明の別の態様は、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体およびＣＤＲ移植抗体からなる群から選択される中和結合タンパク質であって、前記中和結合タンパク質が成熟−ヒトＩＬ−１８に結合する能力を有するが、プロ−ヒトＩＬ−１８に特異的に結合しない中和結合タンパク質を提供する。
【００３６】
本発明の別の態様は、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体およびＣＤＲ移植抗体からなる群から選択される中和結合タンパク質であって、前記中和結合タンパク質がヒトＩＬ−１８への結合に関して１２５−２Ｈ抗体と競合する能力を有する中和結合タンパク質を提供する。
【００３７】
本発明の別の態様は、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体およびＣＤＲ移植抗体からなる群から選択される中和結合タンパク質であって、前記中和結合タンパク質がヒトＩＬ−１８との結合に関して１２５−２Ｈ抗体と競合する能力を持たない中和結合タンパク質を提供する。
【００３８】
本発明の別の態様は、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体およびＣＤＲ移植抗体からなる群から選択される中和結合タンパク質であって、前記中和結合タンパク質がヒトＩＬ−１８との結合に関して２．５（Ｅ）ｍｇ１抗体およびＩＬ−１８ＢＰからなる群から選択される結合タンパク質と競合する能力を持たない中和結合タンパク質を提供する。
【００３９】
好ましい実施形態において前記結合タンパク質は、成熟−ヒトＩＬ−１８に結合する能力を有するが、プロ−ヒトＩＬ−１８に特異的に結合しない。さらに別の実施形態では前記結合タンパク質は、ヒトＩＬ−１８との結合に関して１２５−２Ｈ抗体と競合する能力を有する。別の実施形態では前記結合タンパク質は、ヒトＩＬ−１８との結合に関して１２５−２Ｈ抗体と競合する能力を持たない。さらに別の実施形態では前記結合タンパク質は、ヒトＩＬ−１８との結合に関して２．５（Ｅ）ｍｇ１抗体およびＩＬ−１８ＢＰからなる群から選択される結合タンパク質と競合する能力を持たない。
【００４０】
好ましい実施形態では前記結合タンパク質は、配列番号９のアミノ酸配列を有するＶＬドメインおよび配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＨドメインを有する。
【００４１】
別の実施形態において前記結合タンパク質は、配列番号２および配列番号３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＩｇ定常重領域；配列番号４および配列番号５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＩＧ定常軽領域；配列番号８のアミノ酸配列を有するＩｇ可変重領域；および配列番号９のアミノ酸配列を有するＩｇ可変軽領域を有する。
【００４２】
別の実施形態において前記結合タンパク質は、配列番号３のアミノ酸配列を有するＩｇ定常重領域；配列番号４のアミノ酸配列を有するＩＧ定常軽領域；配列番号８のアミノ酸配列を有するＩｇ可変重領域；および配列番号９のアミノ酸配列を有するＩｇ可変軽領域を有する。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
本発明は、ＩＬ−１８結合タンパク質、特には抗−ＩＬ−１８抗体またはそれに結合するそれの抗原結合部分に関するものである。本発明の各種態様は、抗体および抗体断片およびそれらの医薬組成物、ならびにこのような抗体および断片を製造するための核酸、組換え発現ベクターおよび宿主細胞に関するものである。ヒトＩＬ−１８の検出、インビトロまたはインビボでのヒトＩＬ−１８活性の阻害および遺伝子発現の調節を行うための本発明の抗体の使用方法も本発明に包含される。本発明はまた、切断ＩＬ−１８に関するものでもある。関係する態様において本発明は、切断ＩＬ−１８を製造するための核酸、組換え発現ベクターおよび宿主細胞に関するものでもある。
【００４４】
本明細書において別段の定義がない限り、本発明との関連で使用される科学用語および技術用語は、当業者が共通に理解する意味を有するものとする。さらに、文脈によって別段の必要がない限り、単数の用語は複数を含むものとし、複数の用語は単数を含むものとする。本願においては、別段の断りがない限り、「または」の使用は「および／または」を意味する。さらに、「包含する」という用語ならびに「含む」および「含まれる」などの他の形態の使用は限定的ではない。さらに、「要素」または「構成要素」などの用語は、別段の具体的な断りがない限り、１単位を有する要素および構成要素ならびに複数のサブユニットを有する要素および構成要素の両方を包含するものである。
【００４５】
本明細書に記載の細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学およびタンパク質および核酸化学およびハイブリダイゼーションの方法および技術に関連して使用される命名法は、当業界において公知で、一般に使用されるものである。本発明の方法および技術は、別段の断りがない限り、当業界において公知であり、本明細書を通じて引用および議論される各種の一般的文献およびより具体的な文献に記載の従来法に従って行われる。酵素反応および精製技術は、製造者の仕様書に従って、当業界で一般に行われる方法に従って、あるいは本明細書に記載の方法に従って行われる。本明細書に記載の分析化学、合成有機化学ならびに医化学および製薬化学に関連して使用される命名法ならびにそれらの実験質的な手順および技術は、当業界で公知であり、一般に使用される。化学合成、化学分析、医薬製造、製剤および投与ならびに患者治療については、標準的な技術を用いる。
【００４６】
本発明についての理解を深めるため、特定の用語について下記のように定義する。
【００４７】
本明細書で使用される「ポリペプチド」という用語は、アミノ酸のポリマー鎖を指す。「ペプチド」および「タンパク質」という用語は、ポリペプチドという用語と互換的に使用され、やはりアミノ酸のポリマー鎖を指す。「ポリペプチド」という用語は、天然または人工のタンパク質、タンパク質断片およびタンパク質配列のポリペプチド類縁体を包含する。ポリペプチドはモノマー性またはポリマー性であることができる。
【００４８】
「単離タンパク質」または「分離ポリペプチド」という用語は、それの起源または誘導源のために、天然の状態ではそれに伴っている天然関連成分と関連しておらず；同じ生物種からの他のタンパク質を実質的に含まず；異なる生物種からの細胞によって発現され；あるいは天然には生じないタンパク質またはポリペプチドである。従って、化学的に合成された、あるいは天然起源の細胞とは異なる細胞系で合成されたポリペプチドは、その天然関連成分から「単離」されている。タンパク質は、当業界で公知のタンパク質精製技術を用いた単離によって、天然関連成分を実質的に含まないものとすることもできる。
【００４９】
本明細書で使用される「回収」という用語は、ポリペプチドなどの化学種を、例えば当業界では公知のタンパク質精製技術を用いる単離によって、天然関連成分を実質的に含まないようにするプロセスを指す。
【００５０】
本明細書で使用される「ＩＬ−１８」という用語は、インターフェロンγの誘発能力以外に各種機能を示す炎症誘発性サイトカインであるインターフェロン−γ誘発因子（ＩＧＩＦ）とも称されるサイトカインを指す。「ｈＩＬ−１８」という用語と互換的に使用される「ヒトＩＬ−１８」という用語は、配列番号１のポリペプチドおよびそれの断片を包含し、これにはプロ−ヒトＩＬ−１８、成熟ヒトＩＬ−１８および本明細書に記載のＩＬ−１８の生理活性を保持する切断形ヒトＩＬ−１８などがあるが、これらに限定されるものではない。本明細書で使用される「プロ−ヒトＩＬ−１８」という用語は、配列番号１のポリペプチドを指す。本明細書で使用される「成熟ヒトＩＬ−１８」という用語は配列番号１の残基３７〜１９３を指し、本明細書で使用される「切断形ヒトＩＬ−１８」という用語は、配列番号１の残基５９〜１９３を指す。好ましくは前記ＩＬ−１８およびそれの断片は生理活性である。本明細書で使用される「組換えヒトＩＬ−１８」または「ｈＩＬ−１８」という用語は、組換えＤＮＡ技術を用いてインビトロで形成されるヒトＩＬ−１８を指す。
【００５１】
本明細書で使用される「ＩＬ−１８の生理活性」は、サイトカインＩＬ−１８の全ての固有の生理的特性を指す。ＩＬ−１８の生理的特性には、ＩＬ−１８受容体への結合；Ｔｈ１およびＴｃ１細胞の成熟および活性化の促進；いくつかの細胞種によるＴＮＦ、ＩＦＮγおよびＩＬ−１βなどのサイトカイン類産生の促進；マクロファージによるＴＮＦおよびＩＦＮγなどのサイトカイン類放出、ＮＯ産生の促進；ＦａｓＬ発現、細胞傷害性およびＮＫ細胞からのサイトカイン放出（ＩＦＮγ）の促進；好中球でのサイトカイン／ケモカイン放出、呼吸バースト、顆粒放出、接着分子発現の促進；内皮細胞の移動の促進と、それによる血管新生の促進；軟骨細胞でのＧＡＧ放出、ＭＭＰおよびＮＯ産生の促進；一部細胞でのＣＯＸ２発現の促進；および一部細胞での細胞増殖低減などがあるが、これらに限定されるものではない。
【００５２】
抗体、タンパク質または  ペプチドの第２の化学種との相互作用に関して本明細書で使用される「特異的結合」または「特異的に結合」という用語は、その相互作用が、その化学種上の特定の構造（例：抗原決定基またはエピトープ）の存在に依存することを意味する。例えば抗体は、タンパク質ではなく、特定のタンパク質構造を認識し、それに結合する。抗体がエピトープ「Ａ」に対して特異的である場合、標識「Ａ」および抗体を含む反応においてエピトープＡを含む分子（または遊離の未標識Ａ）が存在すると、抗体に結合する標識Ａの量が減る。
【００５３】
本明細書で使用される「抗体」という用語は広義には、４つのポリペプチド鎖、すなわち２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖またはＩｇ分子の本質的なエピトープ結合特徴を保持したその機能性断片、突然変異体、変異体または誘導体からなる免疫グロブリン（Ｉｇ）分子を指す。このような突然変異体、変異体または誘導抗体フォーマットは、当業界では公知である。それの実施形態については下記で議論するが、それらに限定されるものではない。
【００５４】
全長抗体において各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶＨと略記される。）および重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は３つのドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）から構成される。各軽鎖は軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶＬと略記される。）および軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は１つのドメイン（ＣＬ）から構成される。ＶＨ領域およびＶＬ領域はさらに、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域に分割することができ、超可変領域には、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が点在している。それぞれのＶＨおよびＶＬは３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成され、これらはアミノ末端からカルボキシ末端にＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順で配置されている。
【００５５】
本明細書で使用される抗体  の「抗原結合部分」（または単に「抗体  部分」）という用語は、抗原（例：ｈＩＬ−１８）と特異的に結合する能力を保持している抗体の１以上の断片を示す。抗体の抗原結合機能が全長抗体の断片によって発揮され得ることが示されている。そのような抗体の実施形態は、２特異的、二重特異的または複数特異的フォーマットであることもでき、具体的には２以上の異なる抗原に結合する。抗体の「抗原結合部分」という用語に包含される結合断片の例には、（ｉ）Ｆａｂ断片、すなわち、ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、ＣＬドメインおよびＣＨ１ドメインからなる一価の断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ′）２断片、すなわち、ヒンジ領域におけるジスルフィド結合によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価の断片；（ｉｉｉ）ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体  の単一アームのＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；（ｖ）単一可変領域を有するｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ  ｅｔ  （１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）；および（ｖｉ）分離相補性決定領域（ＣＤＲ）などがある。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン（ＶＬおよびＶＨ）は、別個の遺伝子によってコードされるが、組換え法を使用して、これらが単一のタンパク質鎖として作製されることを可能にする合成リンカーによって連結させることができ、この場合、単一のタンパク質鎖において、ＶＬ領域およびＶＨ領域は対形成して、（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる。）一価の分子を形成する（例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；およびＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３参照）。このような単鎖抗体もまた、抗体の「抗原結合部分」という用語に包含されるものである。ジアボディーなどの他の形態の単鎖抗体もまた包含される。ジアボディーは、ＶＨドメインおよびＶＬドメインが単一のポリペプチド鎖で発現される二価の二重特異的抗体であるが、同じ鎖における２つのドメインの間での対形成ができない短いリンカーが使用され、これにより、このドメインが他の鎖の相補的なドメインと対形成させられ、そして２つの抗原結合部位が生じている、二価の二重特異的抗体である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．，ｅｔ（１９９３）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４−６４４８；Ｐｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９４）  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３参照）。このような抗体結合タンパク質は、当業界で公知である（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ  ｅｄｓ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  （２００１）  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ．７９０  ｐｐ．（ＩＳＢＮ  ３−５４０−４１３５４−５）参照）。
【００５６】
なおさらに、抗体またはその抗原結合部分は、抗体または抗体部分が１以上の他のタンパク質またはペプチドと共有結合的または非共有結合的に結合することによって形成されるより大きい免疫接着分子の一部であり得る。このような免疫接着分子の例には、四量体のｓｃＦＶ分子を作製するためのストレプトアビジンコア領域の使用（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９５）  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ６：９３−１０１）、ならびに二価のビオチン化ｓｃＦｖ分子を作製するためのシステイン残基、マーカーペプチドおよびＣ末端ポリヒスチジン標識の使用（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９４）  Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：１０４７−１０５８）などがある。Ｆａｂ断片およびＦ（ａｂ′）２断片などの抗体部分はそれぞれ、完全な抗体のパパイン消化またはペプシン消化などの従来技術を使用して完全な抗体から得ることができる。さらに、抗体、抗体部分および免疫接着分子は、本明細書に記載の標準的な組換えＤＮＡ技術を使用して得ることができる。
【００５７】
本明細書で使用される「単離抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を示すものである（例えば、ｈＩＬ−１８に特異的に結合する単離抗体は、ｈＩＬ−１８以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかしながら、ｈＩＬ−１８に特異的に結合する単離抗体は、他の生物種からのＩＬ−１８分子などの他の抗体に対して交差反応性を有し得る。さらに、単離抗体は他の細胞物質および／または化学物質を実質的に含まない場合がある。
【００５８】
本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変および定常領域を有する抗体を含むものである。本発明のヒト抗体は、例えばＣＤＲ類、特にはＣＤＲ３でのヒト生殖系列免疫グロブリン配列（例：インビボでのランダムまたは部位特異的な変異誘発またはインビボでの体細胞変異誘発によって導入される変異）によってコードされていないアミノ酸残基を含み得る。しかしながら、本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖系列由来のＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列上に移植された抗体を包含するものではない。
【００５９】
本明細書で使用される「組換えヒト抗体」という用語は、宿主細胞にトランスフェクションされた組換え発現ベクターを用いて発現される抗体（さらに下記のセクションＩＩＣにも記載）、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリから単離される抗体（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  Ｈ．Ｒ．，（１９９７）  ＴＩＢ  Ｔｅｃｈ．１５：６２−７０；Ａｚｚａｚｙ  Ｈ．，ａｎｄ  Ｈｉｇｈｓｍｉｔｈ  Ｗ．Ｅ．，（２００２）  Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３５：４２５−４４５；Ｇａｖｉｌｏｎｄｏ  Ｊ．Ｖ．，ａｎｄ  Ｌａｒｒｉｃｋ  Ｊ．Ｗ．（２００２）  ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２９：１２８−１４５；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  Ｈ．，ａｎｄ  Ｃｈａｍｅｓ  Ｐ．（２０００）  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ２１：３７１−３７８）、ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例：マウス）から単離される抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０：６２８７−６２９５；Ｋｅｌｌｅｒｍａｎｎ  Ｓ−Ａ．，ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎ  Ｌ．Ｌ．（２００２）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １３：５９３−５９７；Ｌｉｔｔｌｅ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ２１：３６４−３７０参照）などの組換え手段によって取得、発現、形成または単離される全てのヒト抗体、またはヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングが関与する他の手段によって取得、発現、形成または単離される抗体を含む。このような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変領域および定常領域を有する。しかしながら、ある実施形態では、このような組換えヒト抗体がインビトロでの変異誘発（あるいは、ヒトＩｇ配列に対してトランスジェニックである動物を用いる場合は、インビボでの体細胞変異誘発）に付され、かくして組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列由来でり、これら配列に関係するが、天然にはインビボでのヒト抗体生殖系列レパートリー内には存在し得ない配列である。
【００６０】
「キメラ抗体」という用語は、ある動物種由来の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列と、別の動物種由来の定常領域配列とを含む抗体を示し、例えば、マウスの重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列がヒトの定常領域に連結されている抗体をいう。
【００６１】
「ＣＤＲグラフト化抗体」という用語は、ある動物種由来の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列を含むが、ＶＨおよび／またはＶＬのＣＤＲ領域の１以上の配列が別の動物種のＣＤＲ配列で置換されている抗体を示し、例えば、マウスの重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列を有し、１以上のマウスＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ３）がヒトＣＤＲ配列で置換されている抗体をいう。
【００６２】
「ヒト化抗体」という用語は、ヒト以外の動物種（例えば、マウス）に由来の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列を含むが、ＶＨ配列および／またはＶＬ配列の少なくとも一部が、より「ヒト様」であるように、すなわち、ヒトの生殖系列の可変配列により類似するように変化している抗体をいう。ある種類のヒト化抗体には、ヒトＣＤＲ配列が、対応する非ヒトＣＤＲ配列を置換するために非ヒトのＶＨ配列およびＶＬ配列に導入されているＣＤＲグラフト化抗体がある。
【００６３】
本明細書で使用される場合、「ｈＩＬ−１８中和結合タンパク質」という用語は、ｈＩＬ−１８に特異的に結合して、ｈＩＬ−１８の生理活性を中和するタンパク質を指す。好ましくは中和結合タンパク質は、ｈＩＬ−１８への結合がｈＩＬ−１８の生理活性の阻害を生じる中和抗体である。好ましくは、中和結合タンパク質はｈＩＬ−１８に結合し、ＩＬ−１８の生理活性を少なくとも約２０％、４０％、６０％、８０％、８５％またはそれ以上低下させる。中和結合タンパク質によるｈＩＬ−１８生理活性の阻害は、ｈＩＬ−１８生理活性の一つ以上の指標を測定することで評価することができる。ｈＩＬ−１８生理活性のこれらの指標は、当業界で公知のいくつかの標準的なインビトロまたはインビボアッセイの一つ以上によって評価することができる。
【００６４】
「エピトープ」という用語は、免疫グロブリンまたはＴ−細胞受容体に対する特異的結合を行うことができるポリペプチド決定基を含む。ある種の実施形態では、エピトープ決定基には、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホニルなどの分子の化学的に活性な表面基などがあり、ある種の実施形態では、特定の三次元構造特性および／または特定の帯電特性を有し得る。エピトープは、抗体によって結合した抗原の１領域である。ある種の実施形態では抗体は、それがタンパク質および／または巨大分子の複合体混合物においてそれの標的抗原を優先的に識別する場合に、特異的に結合すると言われる。
【００６５】
本明細書で使用される「表面プラズモン共鳴」という用語は、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ  ａｎｄ  Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用して、バイオセンサーマトリックス内でのタンパク質濃度の変化を検出することによってリアルタイムでの生物特異的な相互作用の分析を可能にする光学的現象をいう。詳細については、文献を参照する（Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９３）  Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．５１：１９−２６；Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １１：６２０−６２７；Ｊｏｈｎｓｓｏｎ，Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９５）  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．８：１２５−１３１；およびＪｏｈｎｎｓｏｎ，Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）  Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８：２６８−２７７）。
【００６６】
本明細書で使用される「Ｋｏｎ」という用語は、当業界で公知である抗原への抗体の会合による抗体／抗原複合体形成に関するオン速度定数を指すものである。
【００６７】
本明細書で使用される「Ｋｏｆｆ」という用語は、当業界で公知である抗体／抗原複合体からの抗体の解離に関するオフ速度定数を指すものである。
【００６８】
本明細書で使用される「Ｋｄ」という用語は、当業界で公知である特定の抗体−抗原相互作用の解離定数を指すものである。
【００６９】
本明細書で使用される「標識結合タンパク質」という用語は、結合タンパク質の確認を提供する組み込み標識を有するタンパク質を指す。好ましくは、その標識は検出可能なマーカーであり、例えば放射能標識アミノ酸の組み込み、あるいは標識アビジン（例：光学的または比色的方法によって検出可能な蛍光マーカーまたは酵素活性を含むストレプトアビジン）によって検出可能なビオチン部分のポリペプチドへの付着などがある。ポリペプチド用の標識の例としては、放射性同位体または放射性核種（例：３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍ）；蛍光標識（例：ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド系蛍光体）、酵素標識（例：西洋わさびペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）；化学発光マーカー；ビオチニル基；二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例：ロイシンジッパー対配列、二次抗体用の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）；ならびにガドリニウムキレートなどの磁気剤などがあるが、これらに限定されるものではない。
【００７０】
「コンジュゲート形成結合タンパク質」という用語は、治療薬または細胞傷害薬などの第２の化学部分に化学的に連結された結合タンパク質を指す。本明細書において「薬剤」という用語は、化合物、化合物の混合物、生体巨大分子または生体材料からの抽出物を指すのに用いられる。好ましくは治療薬または細胞傷害薬には、百日咳毒素、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、糖質コルチコイド類、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロールおよびピューロマイシンならびにこれらの類縁体または同族体などがあるが、これらに限定されるものではない。
【００７１】
本明細書で使用される「結晶化結合タンパク質」という用語は、結晶の形態で存在するポリペプチドを指す。結晶は、非晶質固体状態や液晶状態などの他の形態とは異なる物質の固体状態の１形態である。結晶は、原子、イオン、分子（例：抗体などのタンパク質）または分子集合体（例：抗原／抗体複合体）の規則的で反復性の三次元配列からなる。これらの三次元配列は、当業界では良く知られている特定の数学的関係に従って並んでいる。結晶において繰り返される基本的な単位または構成ブロックは、非対称単位と称される。所定の明確な結晶学的対称性に一致する配置での非対称単位の繰り返しは、結晶の「単位セル」を提供する。３つの次元全てでの規則的な転位による単位セルの繰り返しが結晶を与える（Ｇｉｅｇｅ，Ｒ．ａｎｄ  Ｄｕｃｒｕｉｘ，Ａ．Ｂａｒｒｅｔｔ，Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，２ｎｄ  ｅａ．，ｐｐ．２０  １−１６，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，（１９９９）参照）。
【００７２】
本明細書で言及される「ポリヌクレオチド」という用語は、リボヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドのいずれかであるポリマー形態の２種類以上のヌクレオチドあるいはいずれかの種類のヌクレオチドの修飾型を意味する。この用語には、一本鎖型および二本鎖型のＤＮＡが含まれるが、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。
【００７３】
本明細書で使用される「単離ポリヌクレオチド」という用語は、その起源のために「単離ポリヌクレオチド」がこの「単離ポリヌクレオチド」が天然において認められるポリヌクレオチドの全体または一部を伴っておらず、天然において連結されていないポリヌクレオチドに機能可能に連結されており；または天然ではより大きな配列の一部として生じない、ポリヌクレオチド（例えば、ゲノム、ｃＤＮＡまたは合成起源のもの、またはこれらの何らかの組み合わせ）を意味するものとする。
【００７４】
本明細書で使用される「ベクター」という用語は、連結されている別の核酸を輸送する能力を有する核酸分子を指す。ある種のベクターは「プラスミド」であり、これは別のＤＮＡ断片が連結されていても良い環状二本鎖ＤＮＡループを指す。別の種類のベクターはウィルスベクターであり、ここでは別のＤＮＡ断片がウィルスゲノムに連結されていても良い。ある種のベクターは、これらが導入される宿主細胞で自己複製を行うことができる（例：細菌起源の複製を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例：非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに組み入れられることができ、それによって宿主ゲノムに従って複製される。さらに、ある種のベクターは、機能可能に連結されている遺伝子の発現を有効にすることができる。このようなベクターは本明細書において、「組換え発現ベクター」（または簡単に「発現ベクター」）と称する。通常、組換えＤＮＡ技術で利用される発現ベクターは、プラスミドの形態である場合が多い。本明細書においては、プラスミドがベクターの最も一般的に使用される形態であることから、「プラスミド」および「ベクター」は互換的に使用しても良い。しかしながら本発明は、同等の機能を果たすウィルスベクター（例：複製欠損アデノウイルス、アデノウィルスおよびアデノ随伴ウイルス）などの他の形態の発現ベクターをも包含するものである。
【００７５】
「機能可能に連結」という用語は、記載の構成要素がそれの意図する形態で機能できる関係にある並置状態を指す。コード配列に「機能可能に連結」された制御配列は、制御配列に適合する条件下でコード配列の発現が行われるように連結されている。「機能可能に連結された」配列には、対象の遺伝子と近接している発現制御配列およびトランスで作用してまたは離れて作用して対象遺伝子を制御する発現制御配列の両方が含まれる。
【００７６】
本明細書で使用される「発現制御配列」という用語は、連結しているコード配列の発現およびプロセシングを行う上で必要なポリヌクレオチド配列を指す。発現制御配列には、適切な転写開始、終止、プロモーターおよびエンハンサー配列；スプライシングおよびポリアデニル化シグナルなどの効率的なＲＮＡプロセシングシグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化させる配列；翻訳効率を高める配列（すなわち、コザク（Ｋｏｚａｋ）コンセンサス配列）；タンパク質安定性を高める配列；および所望の場合にはタンパク質分泌を高める配列などがある。このような制御配列の性質は、宿主生物に応じて異なる。原核生物では、このような制御配列にはプロモーター、リボソーム結合部位および転写終止配列などがあり、真核生物では、このような制御配列には、プロモーターおよび転写終止配列などがある。「制御配列」は、存在が発現およびプロセシングに必須である成分を含むものであり、存在が有利である別の成分をも含み、これには例えばリーダー配列および融合パートナー配列がある。
【００７７】
本明細書で定義される「形質転換」は、外来ＤＮＡが宿主細胞に進入するいずれかのプロセスを指す。形質転換は、当業界では公知の各種方法を用いて、自然または人工的な条件下で起こすことができる。形質転換は、外来核酸配列の原核または真核宿主細胞への挿入のための公知の方法のいずれかに依存し得る。この方法は、形質転換を受ける宿主細胞に基づいて選択され、ウィルス感染、エレクトロポレーション、リポフェクションおよび粒子衝突などがあり得るが、これらに限定されるものではない。このような「形質転換（された）」細胞には、挿入ＤＮＡが自律的に複製するプラスミドとしてまたは宿主染色体の一部として複製する能力を有する安定に形質転換された細胞などがある。これらには、限られた期間にわたり、挿入ＤＮＡまたはＲＮＡを一時的に発現する細胞も含まれる。
【００７８】
本明細書で使用される「組換え宿主細胞」（または単に「宿主細胞」）という用語は、外来ＤＮＡが導入された細胞を指す。このような用語は、特定の対象細胞だけでなく、このような細胞の子孫も指すと理解されるべきである。突然変異または環境的影響のために、後継世代で一定の修飾が起こりえることから、このような子孫は実際には、親細胞と同一ではない可能性があるが、それでもなお、本明細書で使用される「宿主細胞」という用語の範囲に含まれる。好ましくは宿主細胞には、いずれかの生物界から選択される原核および真核細胞が含まれる。好ましい真核細胞には、原生生物、真菌、植物細胞および動物細胞などがある。最も好ましくは宿主細胞には、原核細胞系である大腸菌；哺乳動物細胞系であるＣＨＯおよびＣＯＳ；昆虫細胞系であるＳｆ９；および真菌細胞であるサッカロマイセス・セレヴィシエなどがあるが、これらに限定されるものではない。
【００７９】
組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成および組織培養および形質転換には、標準的な技術を用いることができる（例：電気穿孔法、リポフェクション）。酵素反応および精製技術は、製造者の説明書に従って、または当業界で一般に行われている方法に従って、または本明細書に記載の方法に従って行うことができる。前記の技術および手順は、
当業界で公知の従来法に従って、ならびに本明細書を通じて引用および議論されている各種の一般的参考文献およびより具体的な参考文献に記載の方法に従って行うことができる（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  （２ｎｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））；あらゆる目的において、参照によって本明細書に組み込まれる）。
【００８０】
当業界で知られ、本明細書で使用される「トランスジェニック生物」は、導入遺伝子を含む細胞を有する生物であって、その生物（またはその成分の先祖）に導入された導入遺伝子が、その生物で天然に発現されないポリペプチドを発現する生物を指す。「導入遺伝子」とは、トランスジェニック生物が発育する細胞のゲノムに安定かつ機能可能に組み込まれて、トランスジェニック生物の１以上の細胞種または組織におけるコード遺伝子産物の発現を有効化するＤＮＡ構築物である。
【００８１】
「調節」および「調整」という用語は、互換的に用いられ、本明細書で使用される場合、対象分子の活性（例：ｈＩＬ−１８の生理活性）における変化および変動を指す。調節は、対象分子のある種の活性または機能の強さにおける上昇または低下となり得る。分子の活性および機能の例には、結合特性、酵素活性、細胞受容体活性化およびシグナル伝達などがあるが、これらに限定されるものではない。
【００８２】
したがって、本明細書で使用される「調節剤」という用語は、対象分子の活性または機能（例：ｈＩＬ−１８の生理活性）を変化または変動させることができる化合物である。例えば調節剤は、調節剤がない場合に認められる活性または機能の大きさと比較して、分子のある種の活性または機能の大きさを上昇または低下させることができる。ある種の実施形態では調節剤は、分子の少なくとも１種類の活性または機能の大きさを低下させる阻害剤である。阻害薬の例には、タンパク質、ペプチド、抗体、ペプチボディ（ｐｅｐｔｉｂｏｄｉｅｓ）、炭水化物または小有機分子などがあるが、これらに限定されるものではない。ぺプチボディについては、例えばＷＯ  ０１／８３５２５に記載されている。
【００８３】
本明細書で使用される「作働薬」という用語は、作働薬不在下で認められる活性または機能の強さと比較して、分子のある種の活性または機能の強さを上昇させる調節剤を指す。対象となる特定の作働薬には、ＩＬ−１８ポリペプチドまたはポリペプチド、核酸、炭水化物またはｈＩＬ−１８に結合する他の分子などがあり得るが、これらに限定されるものではない。
【００８４】
本明細書で使用される「拮抗薬」または「阻害薬」という用語は、拮抗薬不在下で認められる活性または機能の強さと比較して、分子のある種の活性または機能の強さを低下させる調節剤を指す。対象となる特定の拮抗薬には、ｈＩＬ−１８の生理活性または免疫活性を遮断または調節するものなどがある。ｈＩＬ−１８の拮抗薬および阻害薬には、タンパク質、核酸、炭水化物またはｈＩＬ−１８に結合する他の分子などがあり得るが、これらに限定されるものではない。
【００８５】
本明細書で使用される「検体」という用語は、最も広い意味で用いられる。本明細書で使用される「生物検体」には、生物または以前に生物であったものからのいずれかの量の物質などがあるが、これに限定されるものではない。そのような生物には、ヒト、マウス、ラット、サル、イヌ、ウサギおよび他の動物などがあるが、これらに限定されるものではない。そのような物質には、血液、血清、尿、滑液、細胞、臓器、組織、骨髄、リンパ節および脾臓などがあるが、これらに限定されるものではない。
【００８６】
本明細書で使用され、当業者によって一般に公知で使用される「競合する」という用語は、一つの結合タンパク質が、第２の結合タンパク質の両結合タンパク質に共通するリガンド（例：ＩＬ−１８）への結合を妨害しまたは障害する能力を指す。結合タンパク質の競合特性を測定する上で有用なアッセイは、当業界で公知である。好ましい競合アッセイについて、本明細書で説明する。
【００８７】
Ｉ．ヒトＩＬ−１８に結合するヒト抗体
本発明の１態様は、高親和性、低オフ速度および高中和能でＩＬ−１８に結合する単離ヒト抗体またはこの抗原結合部分を提供する。好ましくはこの抗体またはこの部分は、単離抗体である。好ましくは、本発明のヒト抗体は、中和ヒト抗−ＩＬ−１８抗体である。
【００８８】
Ａ．抗ＩＬ−１８抗体の形成方法
本発明の抗体は、当業界で公知の多くの技術のいずれかによって形成することができる。本発明の抗−ＩＬ−１８抗体の特に好ましい形成方法には、ゼノマウストランスジェニックマウスの使用および抗体製造において当業界で公知のハイブリドーマおよびＳＬＡＭ細胞操作技術の使用（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）、ならびに実施例３．２に記載のＩＬ−１８ペプチド、すなわち、配列番号１のアミノ酸配列およびこの断片を有するヒトＩＬ−１８を含む抗原の使用などがある。
【００８９】
本発明の１実施形態においてヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン座の一部または全てを有する非ヒト動物をＩＬ−１８抗原で免疫化することで形成される。好ましい実施形態では、前記非ヒト動物は、ゼノマウストランスジェニックマウス、すなわちヒト免疫グロブリン座の大きい断片を有してマウス抗体産生欠乏の改変マウス系統である（例えば、Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ７：１３−２１（１９９４）および米国特許第５９１６７７１号、５９３９５９８号、５９８５６１５号、５９９８２０９号、６０７５１８１号、６０９１００１号、６１１４５９８号および６１３０３６４号参照。さらに、１９９１年７月２５日公開のＷＯ９１／１０７４１、１９９４年２月３日公開のＷＯ９４／０２６０２、いずれも１９９６年１０月３１日公開のＷＯ９６／３４０９６およびＷＯ９６／３３７３５、１９９８年４月２３日公開のＷＯ９８／１６６５４、１９９８年６月１１日公開のＷＯ９８／２４８９３、１９９８年１１月１２日公開のＷＯ９８／５０４３３、１９９９年９月１０日公開のＷＯ９９／４５０３１、１９９９年１０月２１日公開のＷＯ９９／５３０４９、２０００年２月２４日公開のＷＯ０００９５６０、および２０００年６月２９日公開のＷＯ００／０３７５０４も参照）。ゼノマウストランスジェニックマウスは、完全にヒトの抗体の成人様ヒトレパートリーを産生し、抗原特異的ヒトＭａｂを形成する。ゼノマウストランスジェニックマウスは、ヒト重鎖座およびｘ軽鎖座のメガ塩基対の大きさの生殖系列配置ＹＡＣ断片の導入により、ヒト抗体レパートリーの約８０％を含む（Ｍｅｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６−１５６（１９９７），Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８８：４８３−４９５（１９９８）参照；これらの開示内容は、参照によって本明細書に組み込まれる。）。
【００９０】
本発明はまた、ヒト免疫グロブリン座を有する非ヒトトランスジェニック動物を免疫化することで、非ヒト非マウス動物から抗−ＩＬ−１８抗体を形成する方法も提供する。直前に記載の方法を用いて、そのような動物を作ることができる。これらの特許に開示の方法には、米国特許第５９９４６１９号に記載の方法に従って変更を加えることができる。好ましい実施形態では、前記非ヒト動物は、ラット、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシまたはウマであることができる。
【００９１】
別の実施形態では、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を有する非ヒト動物は、ヒト免疫グロブリンの「ミニ座（ｍｉｎｉｌｏｃｕｓ）」を有する動物である。ミニ座アプローチでは、Ｉｇ座からの個々の遺伝子を含めることによって、外来Ｉｇ座を模倣する。従って、１以上のＶＨ遺伝子、１以上のＤＨ遺伝子、１以上のＪＨ遺伝子、ミュー定常領域および第２の定常領域（好ましくはγ定常領域）が、動物への挿入のための構築物へと形成される。この手法については、特に米国特許第５５４５８０７号、５５４５８０６号、５６２５８２５号、５６２５１２６号、５６３３４２５号、５６６１０１６号、５７７０４２９号、５７８９６５０号、５８１４３１８号、５５９１６６９号、５６１２２０５号、５７２１３６７号、５７８９２１５号および５６４３７６３号（参照によって本明細書に組み込まれる。）に記載されている。
【００９２】
ミニ座手法の利点は、Ｉｇ座の部分を含む構築物を迅速に形成し、動物に導入できるという点である。しかしながら、ミニ座手法の欠点となり得るものとしては、完全なＢ細胞発達を支援するだけの免疫グロブリンの多様性がないために、抗体産生が相対的に低くなり得るというものである。
【００９３】
ヒト抗−ＩＬ−１８抗体を産生するため、ヒト免疫グロブリン座の一部または全てを有する非ヒト動物をＩＬ−１８抗原で免疫化し、抗体または抗体産生性細胞を動物から単離する。ＩＬ−１８抗原は、単離および／または精製ＩＬ−１８であることができ、好ましくはヒトＩＬ−１８である。別の実施形態ではＩＬ−１８抗原は、ＩＬ−１８の断片、好ましくは成熟ＩＬ−１８の断片である。別の実施形態ではＩＬ−１８抗原は、ＩＬ−１８の少なくとも１個のエピトープを有する断片である。
【００９４】
動物の免疫化は、当業界で公知の方法によって行うことができる（例えばＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，１９９０参照）。マウス、ラット、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウシおよびウマなどの非ヒト動物の免疫化方法は、当業界で公知である（例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅおよび米国特許第５９９４６１９号参照）。好ましい実施形態ではＩＬ−１８抗原は、免疫応答を刺激するためのアジュバントとともに投与される。このようなアジュバントには、完全または不完全フロイントアジュバント、ＲＩＢＩ（ムラミルジペプチド類）またはＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）などがある。このようなアジュバントは、局所への沈着で隔離することによりポリペプチドを急速な分散から保護することができ、または宿主を刺激して、マクロファージおよび免疫系の他の構成要素に関して走化性である因子を分泌させる物質を含むことができる。好ましくは、ポリペプチドを投与するのであれば、免疫化スケジュールでは、数週間の期間で分けて、ポリペプチドを２回以上投与することになる。
【００９５】
実施例２．２．Ａでは、リン酸緩衝生理食塩水中でのヒトＩＬ−１８によるゼノマウストランスジェニックマウスの免疫化プロトコールを提供する。
【００９６】
Ｂ．抗体の産生および抗体産生細胞系
ＩＬ−１８抗原で動物を免疫化した後、抗体および／または抗体産生細胞をその動物から得ることができる。動物の放血または屠殺によって、抗−ＩＬ−１８抗体含有血清を動物から得る。動物から血清を得たままでその血清を用いることができ、免疫グロブリン画分を血清から得ることができるか、または抗−ＩＬ−１８抗体を血清から精製することができる。このようにして得られる血清または免疫グロブリンはポリクローナルであることから、異種性の一連の特性を有する。
【００９７】
別の実施形態では、抗体産生性不死化ハイブリドーマを免疫動物から得ることができる。免疫化後、動物を屠殺し、当業界で公知の方法に従って、脾臓Ｂ細胞を不死化骨髄腫細胞に融合させる（例えば、上記のＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ参照）。好ましい実施形態では、骨髄腫細胞は免疫グロブリンポリペプチドを分泌しない（非分泌細胞系）。融合および抗生物質選択後、ＩＬ−１８もしくはその一部またはＩＬ−１８を発現する細胞を用いてハイブリドーマをスクリーニングする。好ましい実施形態では、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）または放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）を用いて、好ましくはＥＬＩＳＡを用いて、初期スクリーニングを行う。ＥＬＩＳＡスクリーニングの例については、ＷＯ００／３７５０４（参照によって本明細書に組み込まれる。）に記載がある。
【００９８】
下記でさらに説明する方法に従って、抗ＩＬ−１８抗体産生ハイブリドーマを選択し、クローニングし、旺盛なハイブリドーマの成長、高抗体産生および所望の抗体特性などの望ましい特性に関してさらにスクリーニングする。ハイブリドーマは、同系動物でインビボで、免疫系がない動物（例：ヌードマウス）で、またはインビトロでの細胞培養で培養しおよび増殖させることができる。ハイブリドーマの選択、クローニングおよび増殖の方法については、当業者には公知である。
【００９９】
好ましくは免疫化動物は、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する非ヒト動物であり、脾臓Ｂ細胞を、その非ヒト動物と同じ動物種由来の骨髄腫に融合させる。より好ましくは、免疫化動物はゼノマウストランスジェニックマウスであり、骨髄腫細胞系は非分泌性マウス骨髄腫であり、例えばその骨髄腫細胞系はＰ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３である（例えば、実施例２．２．Ｂ参照）。
【０１００】
１態様において本発明は、ヒト抗ＩＬ−１８抗体を産生するハイブリドーマを提供する。好ましい実施形態ではこのハイブリドーマは、前述のマウスハイブリドーマである。別の好ましい実施形態ではこのハイブリドーマは、ラット、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシまたはウマなどの非ヒト非マウス動物で産生される。別の実施形態においてこのハイブリドーマは、ヒト非分泌性骨髄腫を抗ＩＬ−１８抗体を発現するヒト細胞と融合させたヒトハイブリドーマである。
【０１０１】
本発明の別の態様では組換え抗体は、米国特許第５６２７０５２号、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０２５５１およびバブコックらの報告（Ｂａｂｃｏｃｋ，Ｊ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：７８４３−７８４８）に記載の特定リンパ球抗体法（ＳＬＡＭ）と当業界で称される手順を用いて、単一種の単離リンパ球から形成される。この方法においては、対象抗体を分泌する単一種細胞（例えばセクションＩ（Ａ）に記載の免疫動物のいずれか由来のリンパ球）を、抗原特異的溶血プラークアッセイを用いてスクリーニングする。このアッセイでは抗原ＩＬ−１８またはその断片を、ビオチンなどのリンカーを用いてヒツジ赤血球に結合させ、これを用いてＩＬ−１８に対する特異性を有する抗体を分泌する単一種細胞を特定する。対象の抗体分泌細胞を特定した後、重鎖および軽鎖可変領域ｃＤＮＡを逆転写酵素−ＰＣＲによって細胞からレスキューし、次にＣＯＳまたはＣＨＯ細胞などの哺乳動物宿主細胞での適切な免疫グロブリン定常領域（例：ヒト定常領域）の背景で、これらの可変領域を発現させることができる。次に、インビボの特定リンパ球由来の増幅免疫グロブリン配列でトランスフェクションした宿主細胞について、例えばトランスフェクション細胞をパニングしてＩＬ−１８に対する抗体を発現する細胞を単離することで、さらなる分析およびインビトロでの選択を行うことができる。増幅免疫グロブリン配列についてはさらに、例えばＰＣＴ公開ＷＯ９７／２９１３１およびＰＣＴ公開ＷＯ００／５６７７２に記載の方法などのインビトロ親和性成熟法によって、インビトロでの処理を行うことができる。
【０１０２】
さらに、抗体ライブラリをスクリーニングして、所望の結合特異性を有する抗体を特定するインビトロ法を用いて、本発明の抗体を形成することができる。組換え抗体ライブラリのそのようなスクリーニング方法は当業界で公知であり、例えばラドナーら（Ｌａｄｎｅｒ）の米国特許第５２２３４０９号；カン（Ｋａｎｇ）らのＰＣＴ公開ＷＯ９２／１８６１９；ダウアー（Ｄｏｗｅｒ）らのＰＣＴ公開ＷＯ９１／１７２７１；ウィンター（Ｗｉｎｔｅｒ）らのＰＣＴ公開ＷＯ９２／２０７９１；マークランド（Ｍａｒｋｌａｎｄ）らのＰＣＴ公開ＷＯ９２／１５６７９；ブライントリング（Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇ）らのＰＣＴ公開ＷＯ９３／０１２８８；マカファーティ（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ）らのＰＣＴ公開ＷＯ９２／０１０４７；ギャラード（Ｇａｒｒａｒｄ）らのＰＣＴ公開ＷＯ９２／０９６９０；フックス（Ｆｕｃｈｓ）らの報告（Ｆｕｃｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）  Ｂｉｏｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７０−１３７２）；ヘイらの報告（Ｈａｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  Ｈｕｍ  Ａｎｔｉｂｏｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ３：８１−８５）；ヒューズらの報告（Ｈｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１）；マカファーティらの報告（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  （１９９０）  ３４８；５５２−５５４）；グリフィスらの報告（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）  ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：７２５−７３４）；ホーキンスらの報告（Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２６：８８９−８９６）；クラクソンらの報告（Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）  Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８）；グラムらの報告（Ｇｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  ＰＮＡＳ  ８９：３５７６−３５８０）；ギャラードらの報告（Ｇａｒｒａｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７３−１３７７）；ホーゲンブームらの報告（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）  Ｎｕｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ  １９：４１３３−４１３７）；およびバルバスらの報告（Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）  ＰＮＡＳ  ８８：７９７８−７９８２）、米国特許出願公開２００３０１８６３７４およびＰＣＴ公開ＷＯ９７／２９１３１（これらの各引例の内容は、参照によって本明細書に組み込まれる）に記載の方法などがある。
【０１０３】
組換え抗体ライブラリは、ＩＬ−１８またはＩＬ−１８の一部で免役化した被験者からのものであることができる。または組換え抗体ライブラリは、無傷被験者、すなわちヒトＩＬ−１８で免役化されたことがないヒト被験者からのヒト抗体ライブラリなどのＩＬ−１８で免役化されたことがない被験者からのものであることができる。本発明の抗体は、ヒトＩＬ−１８を含むペプチド（例：ｈＩＬ−１８の一部に相当するペプチド）で組換え抗体ライブラリをスクリーニングすることでＩＬ−１８を識別する抗体を選択することによって選択される。このようなスクリーニングおよび選択を行う方法は、前記の段落での引例に記載のものなど、当業界では公知である。特定のｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１８から解離するものなどのｈＩＬ−１８に対して特定の結合アフィニティを有する本発明の抗体を選択するためには、当業界で公知の表面プラズモン共鳴方法を用いて、所望のｋｏｆｆ速度定数を有する抗体を選択することができる。特定のＩＣ５０を有するものなどのｈＩＬ−１８についての特定の中和活性を有する本発明の抗体を選択するには、ｈＩＬ−１８活性阻害を評価する当業界で公知の標準的な方法を用いることができる。
【０１０４】
１態様において本発明は、ヒトＩＬ−１８に結合する単離抗体またはその抗原結合部分に関するものである。好ましくはこの抗体は、中和抗体である。好ましくはこの抗体は、ヒト抗体である。各種実施形態において、前記抗体は組換え抗体またはモノクローナル抗体である。最も好ましい本発明の中和抗体は、本明細書において２．５（Ｅ）と称し、配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＬおよび配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨを有する。最も好ましくは、前記２．５（Ｅ）抗体は、５×１０１０Ｍ未満のＫｄでヒトＩＬ−１８に結合する（実施例２．２．Ｆ参照）。
【０１０５】
好ましくは、前記２．５（Ｅ）抗体および関連する抗体などの本発明の抗−ＩＬ−１８抗体は、例えば当業界で公知のいくつかのインビトロおよびインビボアッセイのいずれかによって評価されるＩＬ−１８活性を低下または中和する能力を示す（例えば、実施例３．２．Ｆ参照）。例えばこれらの抗体は、少なくとも約１０−８Ｍ、約１０−９Ｍまたは約１０−１０Ｍの範囲のＩＣ５０値で、ＫＧ−１細胞でのヒトインターフェロンγのＩＬ−１８誘発産生を中和する。さらにこれらの抗体は、また少なくとも約１０−８Ｍ、約１０−９Ｍまたは約１０−１０Ｍの範囲のＩＣ５０値で、全血球でのヒトインターフェロンγのＩＬ−１８誘発産生を中和する。
【０１０６】
特に好ましい実施形態では、前記抗−ＩＬ−１８抗体２．５（Ｅ）は、プロ−ＩＬ−１８、成熟ＩＬ−１８および切断形ＩＬ−１８などの各種形態でヒトＩＬ−１８に結合する。抗体２．５（Ｅ）は、ＩＬ−２、ＩＬ−３，ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２１、ＴＮＦ、ＬＴ（リンホトキシン）、ＬＴα１β２およびＬＴα２β１などの他のサイトカインには特異的に結合しない。しかしながら抗体２．５（Ｅ）は、他の動物からのＩＬ−１８に対して交差反応性を示す。例えばこの抗体は、カニクイザルからのＩＬ−１８の活性を中和する（カニクイザルＩＬ−１８についてのＩＣ５０＝９．１Ｅ×１０−１１；実施例２．２．Ｊ１参照）。
【０１０７】
１態様において本発明は、低い解離速度および高い中和能を有するＩＬ−１８に対する高親和性結合などの、２．５（Ｅ）と同等の特性を有する２．５（Ｅ）抗体および機能性抗体部分、２．５（Ｅ）関連抗体および機能性抗体部分ならびに他のヒト抗体および機能性抗体部分に関する。好ましい実施形態では、単離抗体またはその抗原結合部分がヒトＩＬ−１８に結合し、この場合に抗体またはその抗原結合部分が、表面プラズモン共鳴による測定で約０．１ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１８から解離し、または約１×１０−６Ｍ以下のＩＣ５０でヒトＩＬ−１８活性を阻害する。あるいは、前記抗体またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴による測定で約１１０−２ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１８から解離することができ、または約１×１０−７Ｍ以下のＩＣ５０でヒトＩＬ−１８活性を阻害することができる。あるいは、前記抗体またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴による測定で約１×１０−３ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１８から解離することができ、または約１×１０−７Ｍ以下のＩＣ５０でヒトＩＬ−１８活性を阻害することができる。あるいは、前記抗体またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴による測定で約１×１０−４ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１８から解離することができ、または約１×１０−９Ｍ以下のＩＣ５０でヒトＩＬ−１８活性を阻害することができる。あるいは、前記抗体またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴による測定で約１×１０−５ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１８から解離することができ、または約１×１０−１０Ｍ以下のＩＣ５０でヒトＩＬ−１８活性を阻害することができる。あるいは、前記抗体またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴による測定で約１×１０−５ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１８から解離することができ、または約１×１０−１１Ｍ以下のＩＣ５０でヒトＩＬ−１８活性を阻害することができる。
【０１０８】
さらに別の実施形態において本発明は、配列番号７；配列番号９；配列番号１１；配列番号１３；配列番号１５；配列番号１７；配列番号１９；配列番号２１；配列番号２３；配列番号２５；配列番号２７；配列番号２９；配列番号３１；配列番号３３；配列番号３５；配列番号３７；配列番号３９；または配列番号４１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）および配列番号６；配列番号８；配列番号１０；配列番号１２；配列番号１４；配列番号１６；配列番号１８；配列番号２０；配列番号２２；配列番号２４；配列番号２６；配列番号２８；配列番号３０；配列番号３２；配列番号３４；配列番号３６；配列番号３８；または配列番号４０のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を持つ単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を提供する。
【０１０９】
ある種の実施形態では前記抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＤ定常領域などの重鎖定常領域を有する。好ましくは前記重鎖定常領域は、ＩｇＧ１重鎖定常領域またはＩｇＧ４重鎖定常領域である。さらに前記抗体は、カッパ軽鎖定常領域またはラムダ軽鎖定常領域のいずれかである軽鎖定常領域を有することができる。好ましくは前記抗体は、カッパ軽鎖定常領域を有する。あるいは前記抗体部分は、例えばＦａｂ断片または一本鎖Ｆｖ断片であることができる。
【０１１０】
Ｆｃ部分におけるアミノ酸残基を置き換えて抗体エフェクター機能を変える技術は、当業界で公知である（ウィンター（Ｗｉｎｔｅｒ）らの米国特許第５６４８２６０号；５６２４８２１号）。抗体のＦｃ部分は、サイトカイン誘発、ＡＤＣＣ、食作用、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）ならびに抗体および抗原−抗体複合体の半減期／クリアランス速度などのいくつかの重要なエフェクター機能に介在する。場合によっては、これらのエフェクター機能は治療抗体には望ましいものであるが、治療目的によって、他の場合には不必要であったり、有害である場合もあろう。ある種のヒトＩｇＧアイソタイプ、特にＩｇＧ１およびＩｇＧ３は、それぞれＦｃγＲ類および補体Ｃ１ｑへの結合を介してＡＤＣＣおよびＣＤＣに介在する。新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）は、抗体の循環半減期を決定する必須の成分である。さらに別の実施形態では、少なくとも一つのアミノ酸残基が、抗体の定常領域、例えば抗体のＦｃ領域で置き換わっていることで、抗体のエフェクター機能が変化する。
【０１１１】
１実施形態は、本発明の抗体または抗体部分が誘導体化されているまたは別の機能性分子（例：別のペプチドまたはタンパク質）に連結されている標識結合タンパク質を提供する。例えば、本発明の標識結合タンパク質は、別の抗体（例：二重特異性抗体またはジアボディー）、検出可能な薬剤、細胞傷害薬、医薬および／または抗体または抗体部分の別の分子（ストレプトアビジン核領域またはポリヒスチジンタグなど）との会合に介在し得るタンパク質またはペプチドなどの１以上の他の分子種に本発明の抗体または抗体部分を機能的に連結させることで（化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合的会合その他によって）、誘導することができる。
【０１１２】
本発明の抗体または抗体部分を誘導体化することができる有用な検出可能な薬剤には、蛍光化合物などがある。蛍光性の検出可能薬剤の例には、フルオレセイン、イソチオシアン酸フルオレセイン、ローダミン、５−ジメチルアミン−１−ナフタレンスルホニルクロライド、フィコエリトリンなどがある。抗体は、アルカリホスファターゼ、西洋わさびペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼなどの検出可能な構成で誘導体化することもできる。抗体を検出可能酵素で誘導体化する場合、この抗体は、その酵素が検出可能な反応産物を生成するのに使用する別の試薬を加えて、検出する。例えば、検出可能薬剤である西洋わさびペルオキシダーゼが存在する場合、過酸化水素およびジアミノベンジジンを加えることで、検出可能な着色反応生成物が生じる。抗体はまた、ビオチンで誘導体化し、アビジンまたはストレプトアビジン結合を間接的に測定することで検出することもできる。
【０１１３】
本発明の別の実施形態は、結晶化結合タンパク質を提供する。好ましくは本発明は、本明細書に開示の全抗−ＩＬ−１８抗体およびその断片の結晶ならびにこのような結晶を含む製剤および組成物に関する。１実施形態において前記結晶化結合タンパク質は、結合タンパク質の可溶性のものよりインビボでの半減期が長い。別の実施形態では、前記結合タンパク質は結晶化後に生理活性を保持する。
【０１１４】
本発明の結晶化結合タンパク質は、当業界で公知であって、ＷＯ０２０７２６３６（参照によって本明細書に組み込まれる）に開示の方法に従って製造することができる（実施例２．２．Ｍも参照）。
【０１１５】
本発明の別の実施形態は、前記抗体またはその抗原結合部分が１以上の炭水化物残基を有するグリコシル化結合タンパク質を提供する。新生インビボタンパク質産生は、翻訳後修飾と称されるさらなる処理が行われ得る。特に、糖（グリコール）残基を、グリコシル化と称されるプロセスで酵素的に付加させることができる。得られた共有結合連結されたオリゴ糖側鎖を有するタンパク質は、グリコシル化タンパク質または糖タンパク質と称される。タンパク質グリコシル化は、対象タンパク質のアミノ酸配列、ならびにそのタンパク質が発現される宿主細胞によって決まる。異なる生物は、異なるグリコシル化酵素（例：糖転移酵素類およびグリコシダーゼ類）を産生し、利用可能な基質（ヌクレオチド糖類）が異なる場合がある。このような要素のため、タンパク質グリコシル化パターンおよびグリコシル残基の組成は、特定のタンパク質が発現される宿主系に応じて異なり得る。本発明で有用なグリコシル残基には、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、ｎ−アセチルグルコサミンおよびシアル酸などがあり得るが、これらに限定されるものではない。好ましくはグリコシル化結合タンパク質は、グリコシル残基を有することで、グリコシル化パターンがヒトのものである。
【０１１６】
タンパク質グリコシル化が変わると、タンパク質特性が変わり得ることは、当業者には公知である。例えば、酵母などの微生物宿主で産生され、酵母内在経路を利用してグリコシル化される治療タンパク質の効力を、ＣＨＯ細胞系などの哺乳動物細胞で発現される同じタンパク質の場合と比較して低下させることができる。そのような糖タンパク質も、ヒトにおいて免役原性であり、投与後にインビボで短い半減期を示し得る。ヒトおよび他の動物での特異的受容体は、特異的なグリコシル残基を識別し、血流からのそのタンパク質の迅速なクリアランスを促進することができる。他の有害効果には、タンパク質折り畳み、溶解性、プロテアーゼに対する感受性、輸送、運搬、区画化、分泌、他のタンパク質または因子による認識、抗原性またはアレルゲン性における変化などがあり得る。従って担当者は、グリコシル化の特異的組成およびパターン、例えばヒト細胞または所期の被験者動物の種特異的細胞で産生されるものと同じまたは少なくとも類似したグリコシル化組成およびパターンを有する治療タンパク質を好み得る。
【０１１７】
宿主細胞のものと異なるグリコシル化タンパク質の発現は、宿主細胞を遺伝子組換えすることで異種グリコシル化酵素を発現させることによって行うことができる。担当者は、当業界で公知の技術を用いて、ヒトタンパク質グリコシル化を示す抗体またはそれの抗原結合部分を形成することができる。例えば、酵母株を遺伝子組換えして非天然グリコシル化酵素を発現させることで、これらの酵母株で産生されるグリコシル化タンパク質（糖タンパク質）は、動物細胞、特にはヒト細胞の場合と同等のタンパク質グリコシル化を示している（米国特許出願２００４００１８５９０および２００２０１３７１３４）。
【０１１８】
さらに、各種グリコシル化酵素を発現するよう遺伝子操作された宿主細胞のライブラリを用いて対象のタンパク質を発現させて、このライブラリの構成員の宿主細胞が変異体グリコシル化パターンを有する対象タンパク質を産生するようにすることが可能であることが、当業者には明らかであろう。次に担当者は、特定の新規なグリコシル化パターンを有する対象タンパク質を選択および単離することができる。好ましくは、特に選択された新規なグリコシル化パターンを有するタンパク質は、改善または変化した生理的特性を示す。
【０１１９】
Ｃ．組換えＩＬ−１８抗体の製造
本発明の抗体は、当業界で公知の多くの技術によって製造することができる。例えば、重鎖および軽鎖をコードする発現ベクターを標準的な技術によって宿主細胞にトランスフェクションする、宿主細胞からの発現などがある。「トランスフェクション」という用語の各種形態は、例えば電気穿孔法、カルシウム−リン酸沈澱、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどの原核または真核宿主細胞への外来ＤＮＡの導入に一般に用いられる非常に多様な技術を包含するものである。原核または真核宿主細胞で本発明の抗体を発現させることが可能であるが、真核細胞での抗体の発現が好ましく、哺乳動物宿主細胞での発現が最も好ましい。何故ならば、そのような真核細胞（特には哺乳動物細胞）は、原核細胞よりも、適切に折り畳まれた免役的に活性な抗体を構築および分泌しやすいためである。
【０１２０】
本発明の組換え抗体の発現に好ましい哺乳動物宿主細胞には、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えばカウフマンらの報告（Ｒ．Ｊ．Ｋａｕｆｍａｎ  ａｎｄ  Ｐ．Ａ．Ｓｈａｒｐ  （１９８２）  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１−６２１）に記載のＤＨＦＲ  ｓｅｌｅｃｔａｂｌｅ  ｍａｒｋｅｒとともに用いられるウルラウブらの報告（Ｕｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ，（１９８０）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６−４２２０）に記載のｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞など）、ＮＳＯ骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞およびＳＰ２細胞などがある。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターを哺乳動物宿主細胞に導入する場合、その抗体は、宿主細胞での抗体の発現、あるいはより好ましくは宿主細胞が増殖する培地への抗体の分泌を可能とするだけの期間にわたって宿主細胞を培養することで産生される。抗体は、標準的なタンパク質精製方法を用いて培地から回収することができる。
【０１２１】
宿主細胞を用いて、Ｆａｂ断片またはｓｃＦｖ分子などの機能性抗体断片を産生することもできる。上記手順の変法が本発明の範囲に含まれることは明らかであろう。例えば、本発明の抗体の軽鎖および／または重鎖の機能性断片をコードするＤＮＡで宿主細胞をトランスフェクションすることが望ましい場合がある。組換えＤＮＡ技術を用いて、対象の抗原に結合する上で必要ない軽鎖および重鎖のいずれかまたはその両方をコードするＤＮＡの一部または全てを除去することもできる。このような切断形ＤＮＡ分子から発現される分子も、本発明の抗体に包含される。さらに、標準的な化学的架橋方法によって第２の抗体に本発明の抗体を架橋させることで、一方の重鎖および一方の軽鎖が本発明の抗体であり、他方の重鎖および軽鎖が対象の抗原以外の抗原に対して特異的である二機能性抗体を製造することが可能である。
【０１２２】
本発明の抗体またはその抗原結合部分の組換え発現に好ましい系においては、抗体重鎖および抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターを、リン酸カルシウム介在トランスフェクションによってｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞に導入する。この組換え発現ベクター内では、抗体重鎖および軽鎖遺伝子がそれぞれ、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節要素に機能可能に連結されていることで、これら遺伝子の高レベルの転写を推進する。この組換え発現ベクターは、メトトレキセート選択／増幅を用いてベクターでトランスフェクションされたＣＨＯ細胞の選択を可能とするＤＨＦＲ遺伝子も有する。選択された形質転換体宿主細胞を培養して、抗体の重鎖および軽鎖の発現を可能とし、無傷の抗体を培地から回収する。標準的な分子生物学技術を用いて、組換え発現ベクターを得て、宿主細胞をトランスフェクションし、形質転換体についての選択を行い、宿主細胞を培養し、培地から抗体を回収する。さらに本発明は、本発明の組換え抗体が合成されるまで好適な培地で本発明の宿主細胞を培養することで、本発明の組換え抗体を合成する方法を提供する。この方法はさらに、培地から組換え抗体を単離する段階を有することができる。
【０１２３】
表１は、本発明の好ましい抗ｈＩＬ−１８抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列のリストである。ＶＨ領域では、アミノ末端（Ｎ末端）の１位における天然アミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）またはグルタミン（Ｑ）のいずれかである。しかしながら、ＶＨ領域を有するタンパク質の大量製造時に均一なＮ末端を有する組換えタンパク質を形成するには、Ｎ末端の１位にはグルタミン酸（Ｅ）が好ましい。
【０１２４】
【表１】
2011097947.tif 000003
2011097947.tif 000004
2011097947.tif 000005
2011097947.tif 000006
2011097947.tif 000007
2011097947.tif 000008
2011097947.tif 000009
2011097947.tif 000010
【０１２５】
前記の単離抗ＩＬ−１８抗体ＣＤＲ配列は、本発明に従って単離され、下記の表２に挙げたＣＤＲ配列を含むポリペプチドを有するＩＬ−１８結合タンパク質の新規なファミリーを確立するものである。好ましいＩＬ−１８結合および／または中和活性を有する本発明のＣＤＲを形成および選択するため、本明細書に具体的に記載のものなど（これらに限定されるものではない）の本発明の結合タンパク質の形成およびこれら結合タンパク質のＩＬ−１８結合および／または中和特性の評価に関して当業界で公知の標準的な方法を用いることができる。
【０１２６】
【表２】
2011097947.tif 000011
【０１２７】
Ｄ．抗ＩＬ−１８抗体の使用
ヒトＩＬ−１８に結合する能力を考慮すると、本発明の抗ヒトＩＬ−１８抗体またはその部分を用い、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）または組織免疫組織化学分析などの従来の免役アッセイによってヒトＩＬ−１８（例えば、血清また血漿などの生体検体中）を検出することができる。本発明は、生体検体中のヒトＩＬ−１８を検出する方法であって、生体検体を本発明の抗体または抗体部分に接触させること、およびヒトＩＬ−１８に結合された抗体（または抗体部分）または結合されていない抗体（または抗体部分）を検出することを含む方法を提供し、これによって、生体検体中のヒトＩＬ−１８が検出される。抗体は、結合されまたは結合されていない抗体の検出を容易にするために、検出可能な物質で直接または間接的に標識される。適切な、検出可能な物質には、各種酵素、補欠分子団、蛍光物質、発光材料および放射性物質などがある。適切な酵素の例には、西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼなどがあり；適切な補欠分子団複合体の例には、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンなどがあり；適切な蛍光物質の例には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、イソチオシアン酸フルオレセイン、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロライドまたはフェイコエリトリンなどがあり；発光材料の例にはルミノールなどがあり；適切な放射性物質の例には、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍなどがある。
【０１２８】
抗体を標識する代わりに、検出可能な物質で標識ｒｈＩＬ−１８標準および未標識抗ヒトＩＬ−１８抗体を利用する競合免疫アッセイによって、生体液中でヒトＩＬ−１８のアッセイを行うことができる。このアッセイでは、生体検体、標識ｒｈＩＬ−１８標準および抗ヒトＩＬ−１８抗体を組み合わせて、未標識抗体に結合された標識ｒｈＩＬ−１８標準の量を求める。生体検体中のヒトＩＬ−１８の量は、抗ＩＬ−１８抗体に結合された標識ｒｈＩＬ−１８の量に反比例する。
【０１２９】
本発明の抗体および抗体部分は、インビトロとインビボの両方で、ヒトＩＬ−１８活性を中和することができることが好ましい。従って、本発明の抗体および抗体部分を使用してｈＩＬ−１８活性を阻害することができ、これは例えば、ｈＩＬ−１８を含有する細胞培養物において、また、ヒト被験者あるいはその他哺乳動物被験者であってＩＬ−１８を有するものにおいて行われ、そこで本発明の抗体との交差反応が行われる。１実施形態では、本発明は、ＩＬ−１８活性を阻害する方法であって、ＩＬ−１８活性が阻害されるように本発明の抗体または抗体部分とＩＬ−１８とを接触させる段階を有する方法を提供する。ＩＬ−１８はヒトＩＬ−１８であることが好ましい。例えば、ｈＩＬ−１８を含有または含有すると考えられる細胞培養物においては、本発明の抗体または抗体部分を培地に添加して培養物のｈＩＬ−１８活性を阻害することができる。
【０１３０】
別の実施形態において本発明は、ＩＬ−１８活性が有害である疾患または障害を患う被験者においてＩＬ−１８活性を低下させる方法を提供する。本発明は、疾患または障害を患う被験者でのＩＬ−１８活性の低下方法であって、被験者のＩＬ−１８活性が低下されるように本発明の抗体または抗体部分をその被験者に投与する段階を有する方法を提供する。ＩＬ−１８はヒトＩＬ−１８であり、被験者はヒト被験者であることが好ましい。あるいは、被験者は、本発明の抗体が結合できるＩＬ−１８を発現する哺乳類であることができる。さらに、被験者は、ｈＩＬ−１８が導入された（例えば、ｈＩＬ−１８の投与によって、またはｈＩＬ−１８導入遺伝子の発現によって）哺乳類であることができる。本発明の抗体は、治療を目的としてヒト被験者に投与することができる。さらに、獣医学的な目的で、あるいはヒト疾患の動物モデルとして、抗体が結合できるＩＬ−１８を発現する非ヒト哺乳動物に本発明の抗体を投与することができる。後者に関して、そのような動物モデルは、本発明の抗体の治療効力を評価する上で有用であろう（例えば、用量試験および投与の時間経過）。
【０１３１】
本明細書で使用される「ＩＬ−１８活性が有害である疾患」という用語は、その疾患を患う被験者がＩＬ−１８を有していることがその疾患の病態生理の原因であるか、あるいはその疾患を悪化させる一因である、ということが示されまたはそうであると考えられる疾患および他の障害を含む。従って、ＩＬ−１８活性が有害である疾患は、ＩＬ―１８活性の低下が、その疾患の症状および／または進行を緩和すると予想される疾患である。このような障害は、例えば上述の抗ＩＬ−１８抗体を使用して検出することが可能な、その障害を患う被験者の生体液中のＩＬ−１８の濃度を高める（例えば、被験者の血清や血漿、滑液中のＩＬ−１８の濃度を高める）ことによって確認することができる。本発明の抗体で治療可能な障害の例には、本発明の抗体の医薬組成物に関して下記で論じる障害などがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１３２】
Ｄ．医薬組成物
本発明は、本発明の抗体またはその抗原結合部分および製薬上許容される担体を含む医薬組成物も提供する。１実施形態において、医薬組成物はさらに、ＩＬ−１８活性が有害である障害を治療するための少なくとも１種の他の治療薬を含む。
【０１３３】
本発明の抗体および抗体部分は、被験者への投与に適する医薬組成物に組み込むことができる。代表的には、医薬組成物は、本発明の抗体または抗体部分と製薬上許容される担体を含む。本明細書で使用される「製薬上許容される担体」には、生理的に適合性である全ての溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤または抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが含まれる。製薬上許容される担体の例には、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセリン、エタノールなどのうちの１種類以上ならびにこれらの組合せなどがある。多くの場合、等張剤、例えば糖や、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、または塩化ナトリウムを組成物中に含むことが好ましい。製薬上許容される担体には、さらに、湿潤剤や乳化剤、防腐剤、緩衝剤など、抗体または抗体部分の貯蔵寿命または有効性を高める少量の補助物質を含めることができる。
【０１３４】
本発明の抗体および抗体部分は、非経口投与に適する医薬組成物に組み込むことができる。抗体または抗体部分は、０．１〜２５０ｍｇ／ｍＬの抗体を含有する注射液剤として調製することが好ましい。注射液剤は、液体製剤または凍結乾燥製剤を、フリントまたはアンバーバイアル、アンプルまたは予備充填注射器に入れたもので構成することができる。緩衝剤は、ｐＨ５．０〜７．０（最適な場合、ｐＨ６．０）のＬ−ヒスチジン（１〜５０ｍＭ）、最適には５〜１０ｍＭのＬ−ヒスチジンとすることができる。その他の適切な緩衝剤には、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、またはリン酸カリウムなどがあるが、これらに限定されるものではない。濃度０〜３００ｍＭの溶液（液体製剤に関しては、最適には１５０ｍＭ）の毒性を変えるために、塩化ナトリウムを使用することができる。凍結乾燥製剤には、凍結保護剤、主として０〜１０％（最適な場合、０．５〜１．０％）のショ糖を含めることができる。その他の適切な凍結保護剤にはトレハロースおよびラクトースなどがある。凍結乾燥製剤には、増量剤、主として１〜１０％のマンニトール（最適な場合、２〜４％）を含有させることができる。液体製剤および凍結乾燥製剤のいずれも、安定剤、主として１〜５０ｍＭ（最適には５〜１０ｍＭ）のＬ−メチオニンを使用することができる。その他の適切な増量剤にはグリシン、アルギニンなどがあり、０〜０．０５％（最適には０．００５〜０．０１％）のポリソルベート８０として含有させることができる。他の界面活性剤には、ポリソルベート２０およびＢＲＩＪ界面活性剤などがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１３５】
本発明の組成物は、各種形態のものであることができる。そのような組成物には、例えば、液剤（例えば注射液剤または注入液剤）や分散液、懸濁液、錠剤、丸薬、粉剤、リポソーム、坐剤などの液体、半固体、固体の製剤などがある。好ましい形態は、所期の投与形態および治療用途によって決まる。一般に好ましい組成物は、他の抗体でヒトを受動免疫化するのに使用されるものと同様の組成物など、注射液剤または注入液剤の形態のものである。好ましい投与形態は、非経口投与（例えば、静脈投与、皮下投与、腹腔内投与、筋肉投与）である。好ましい実施形態では抗体は、静脈注入または静脈注射によって投与される。別の好ましい実施形態では抗体は、筋肉注射または皮下注射によって投与される。
【０１３６】
治療組成物は代表的には、製造および貯蔵の条件下で無菌かつ安定でなければならない。この組成物は、液剤、微細乳濁液、分散液、リポソームまたは高薬剤濃度に適した他の秩序的構造として製剤することができる。無菌注射液剤は、必要量の活性化合物（すなわち抗体または抗体部分）を、必要な場合には上記成分のうちの１種類または組合せと共に適切な溶媒中で混合し、次に濾過滅菌を行うことによって調製することができる。一般に、活性化合物を、基本的な分散媒および上記で挙げたものから必要とされる他の成分を含有する無菌媒体に混ぜることによって分散液を調製する。無菌注射液剤を調製するための無菌凍結乾燥粉末の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥および噴霧乾燥であり、それによって活性成分粉末と前記滅菌濾過溶液からの他の所望成分が得られる。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング剤を使用することによって、分散液の場合には必要とされる粒径を維持することによって、および、界面活性剤を使用することによって維持することができる。注射組成物の長期吸収は、その組成物中に、吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸塩やゼラチンを含有させることによって行うことができる。
【０１３７】
本発明の抗体および抗体部分は、当技術分野で知られている各種方法によって投与することができるが、多くの治療用途での好ましい投与経路／形態は皮下注射、静脈注射または注入である。当業者には明らかなように、投与経路／形態は、所望の結果に応じて変わる。ある種の実施形態では、活性化合物は、インプラント、経皮貼付剤およびマイクロカプセル投与系などの徐放製剤など、その化合物が急速に放出されないようにする担体を用いて調製することができる。酢酸エチレンビニルやポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリ乳酸など、生分解性で生体適合性のポリマーを使用することができる。このような製剤を調製するための多くの方法には特許が付与され、または当業者に一般に知られている（例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８参照）。
【０１３８】
ある種の実施形態では、本発明の抗体または抗体部分を、例えば不活性希釈剤または吸収性の食用担体と共に経口投与することができる。化合物（および望ましい場合は他の成分）は、硬質または軟質シェルのゼラチンカプセルに封入し、圧縮して錠剤とし、あるいは被験者の食物に直接混ぜることもできる。経口治療投与の場合、化合物を賦形剤に混ぜることができ、経口摂取可能な錠剤、口腔錠、トローチ、カプセル、エリキシル剤、懸濁液、シロップ、ウェハなどの形で使用することができる。非経口投与以外で本発明の化合物を投与するには、その化合物の失活を防止する材料でその化合物を被覆し、またはその化合物の失活を防止する材料と同時にその化合物を投与する必要があると考えられる。
【０１３９】
組成物には、補助的な活性化合物も組み入れることができる。ある種の実施形態では、本発明の抗体または抗体部分は、ＩＬ−１８が原因となる障害を治療するのに有用な１種類以上の他の治療薬とともに製剤し、ないしはそのような他治療薬と同時に投与する。例えば、本発明の抗ｈＩＬ−１８抗体または抗体部分は、他の標的に結合する１種類以上の他の抗体（例えば、他のサイトカインに結合する抗体、または細胞表面分子に結合する抗体）とともに処方し、ないしはそのような他の抗体と同時に投与することができる。さらに、本発明の１種類以上の抗体を、前述の治療薬のうち２種類以上のものと併用することができる。そのような併用療法は、比較的低用量の投与治療薬を有利に用いることができることから、各種単独療法に関連して起こり得る毒性または合併症が回避される。
【０１４０】
ある種の実施形態において、ＩＬ−１８に対する抗体またはその断片を、当業界で公知の半減期延長媒体に連結させる。そのような媒体には、Ｆｃドメイン、ポリエチレングリコールおよびデキストランなどがある。このような媒体については、例えば米国特許出願０９／４２８０８２および公開ＰＣＴ出願ＷＯ９９／２５０４４（これらは、あらゆる目的において参照によって本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０１４１】
インターロイキン１８は、免疫および炎症性の要素に関わる各種疾患に関連する病理で非常に重要な役割を果たす。これらの疾病には、関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー疾患、乾癬、強皮性皮膚炎、対宿主性移植片病、臓器移植拒絶反応、臓器移植に伴う急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム硬化症、汎発性血管内凝固症候群、川崎病、グレーヴズ病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ヴェーゲナー肉芽腫症、ヘーノホ−シェーンライン紫斑病、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、トキシックショク症候群、敗血症症候群、悪液質、感染症、寄生虫病、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンティングトン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、発作、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性疾患、心不全、心筋梗塞、アジソン病、散発性疾患、Ｉ型多分泌腺機能低下およびＩＩ型多分泌腺機能低下、シュミット症候群、成人（急性）呼吸促進症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清陰性関節症、関節症、ライター病、乾癬性関節症、潰瘍性丘関節症、腸性滑膜炎、クラミジア、エルジニアおよびサルモネラに関連する関節症、脊椎関節症、アテローム性疾患／動脈硬化症、アトピー、自己免疫性水泡性疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ疾患、自己免疫性溶血性貧血、クーン陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋肉痛脳炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、原因不明の自己免疫性肝炎、後天性免疫不全疾患症候群、後天性免疫不全に関連する疾病、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全（分類不能型低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性の不妊症、卵巣不全、早発性卵巣不全、線維性肺疾患、原因不明の線維化肺胞炎、炎症後間隙性肺疾患、間隙性肺炎、結合組織病関連の間隙性肺疾患、混合結合組織病関連の肺疾患、全身性硬化症関連の間隙性肺疾患、慢性関節リウマチ関連の間隙性肺疾患、全身性エリテマトーデス関連の肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎関連の肺疾患、シェーグレン病関連の肺疾患、強直性脊椎炎関連の肺疾患、脈管性びまん性肺疾患、ヘモジデリン沈着症関連の肺疾患、薬物誘発性の間隙性肺疾患、線維症、放射線線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間隙性肺疾患、通風性関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的な自己免疫性またはルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫媒介型低血糖症、黒色表皮症を伴うＢ型インスリン抵抗性、上皮小体低下症、臓器移植に伴う急性免疫疾患、臓器移植に伴う慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎疾患ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的脈管炎、ライム病、ジスコイドエリテマトーデス、特発性またはＮＯＳの男性不妊症、精子自己免疫、多発性硬化症（全てのサブタイプ）、交感性眼炎、結合組織疾患の二次的な肺高血症、グッドパスチャー症候群、結節性多発性動脈炎の肺発現、急性リウマチ熱、リウマチ様脊椎炎、スティル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状疾患、甲状腺機能亢進、甲状腺腫自己免疫性甲状腺機能亢進（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性脈管炎、白斑、急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発肝臓損傷、胆汁鬱帯、特異体質性肝臓疾患、薬物誘発肝炎、非アルコール性脂肪肝炎、アレルギーおよび喘息、Ｂ群溶連菌（ＧＢＳ）感染、精神障害（例：抑鬱および統合失調症）、Ｔｈ２型およびＴｈ１型介在疾患、急性および慢性疼痛（各種形態の疼痛）ならびに肺癌、乳房癌、胃癌、膀胱癌、結腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌および直腸癌などの癌および造血器悪性腫瘍（白血病およびリンパ腫）などがあるが、これらに限定されるものではない。ヒト抗体、および本発明の抗体部分は、自己免疫疾患、特にはリウマチ様脊椎炎、アレルギー、自己免疫性糖尿病、自己免疫性ブドウ膜炎などの炎症関連のものに用いることができる。
【０１４２】
好ましくは本発明の抗体またはその抗原結合部分は、関節リウマチ、クローン病、多発性硬化症、インスリン依存性糖尿病、真性糖尿病および乾癬の治療に使用する。
【０１４３】
本発明の抗体または抗体部分は、自己免疫および炎症疾患の治療に有用な１種類以上の他の治療薬と併用投与することもできる。
【０１４４】
本発明の抗体またはその抗原結合部分は、疾患を治療するため単独で、または併用で使用することができる。理解しておくべき点として、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、単独で、または他の薬剤、例えば治療薬との併用で使用することができ、前記他薬剤はその所期の目的のため当業者によって選択されるものである。例えば、他薬剤は、本発明の抗体により治療される疾患または状態を治療するのに有用であることが当技術分野で理解されている治療薬であることができる。他薬剤は、治療組成物に有益な性質を与える薬剤、例えば組成物に粘性をもたらす薬剤であってもよい。
【０１４５】
さらに理解すべき点として、本発明に含まれることになる組合せは、その所期の目的に有用な組合せのものである。以下に述べる薬剤は例示を目的とするものであり、これらに限定するものではない。本発明の一部であるその組合せは、本発明の抗体と、下記のリストから選択された少なくとも１種類の薬剤とすることができる。組合せは、複数の他薬剤を含むこともでき、例えば、形成される組成物がその所期の機能を発揮できるような組合せである場合には２種または３種の他薬剤を含むことができる。
【０１４６】
好ましい組合せは、イブプロフェンのような薬剤を含むＮＳＡＩＤＳとも呼ばれる非ステロイド系抗炎症薬である。その他の好ましい組合せは、プレドニソロンを含むコルチコステロイドであり、本発明の抗ＩＬ−１８抗体と組み合せて患者を治療する場合、必要とされるステロイドの用量を徐々に減少させることによって、ステロイド使用による既知の副作用を低減することができ、または無くすことさえできる。関節リウマチ用治療薬であって、本発明の抗体または抗体部分と組み合せることができる治療薬の例には、以下のものなどがあるが、これに限定されるものではない。すなわち、サイトカイン抑制性抗炎症薬（ＣＳＡＩＤ）と、他のヒトサイトカインまたは成長因子に対する抗体または拮抗薬であって、例えばＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、インターフェロン類、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦおよびＰＤＧＦである。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０、ＣＴＬＡまたはＣＤ１５４を含むこれらのリガンド（ｇｐ３９またはＣＤ４０Ｌ）などの細胞表面分子に対する抗体と組み合せることができる。
【０１４７】
治療薬の好ましい組合せは、自己免疫および後続の炎症カスケードにおける異なる点で干渉し得る。好ましい例には、キメラ様のＴＮＦ拮抗薬、ヒト化またはヒトＴＮＦ抗体、Ｄ２Ｆ７（ＰＣＴ公開番号ＷＯ９７／２９１３１）、ＣＡ２（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（商標名））、ＣＤＰ５７１、および可溶性ｐ５５またはｐ７５  ＴＮＦ受容体、その誘導体（ｐ７５ＴＮＦＲ１ｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（商標名））またはｐ５５ＴＮＦＲ１ｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ）、およびＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）が含まれ、同様に、ＩＬ−１阻害剤（インターロイキン１変換酵素阻害剤、ＩＬ−１ＲＡなど）を同様の理由で効果的に用いることができる。その他の好ましい組合せには、インターロイキン１１が含まれる。さらに別の好ましい組合せは、ＩＬ−１８の機能に並行して、依存して、または協働して作用することが可能な自己免疫応答のその他の主要な役割を果すものであり、特に好ましいものは、ＩＬ−１２抗体または可溶性ＩＬ−１２受容体を含むＩＬ−１２拮抗薬、またはＩＬ−１２結合タンパク質である。ＩＬ−１２およびＩＬ−１８が一部重複するが明確に異なる機能を有し、これら両者に対する拮抗薬の組合せが最も有効となり得ることが明らかになっている。さらに別の好ましい組合せは、非枯渇性抗ＣＤ４阻害剤である。さらに好ましい組合せには、抗体、可溶性受容体または拮抗性リガンドを含む同時刺激経路ＣＤ８０（Ｂ７．１）またはＣＤ８６（Ｂ７．２）の拮抗薬などがある。
【０１４８】
本発明の抗体またはその抗原結合部分は、メトトレキサート、６−ＭＰ、アザチオプリンスルファサラジン、メサラジン、オルサラジンクロロキニン／ヒドロキシクロロキン、ペンシルアミン、金チオマレート（筋肉内および経口）、アザチオプリン、コチシン、コルチコステロイド（経口、吸入、および局所注射）、β２アドレナリン作用性受容体作動薬（サルブタモール、テルブタリン、サルメテラル）、キサンチン（テオフィリン、アミノフィリン）、クロモグリケート、ネドクロミル、ケトチフェン、イプラトロピウムおよびオキシトロピウム、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、例えばイブプロフェンなどのＮＳＡＩＤ、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシン作動薬、抗血栓薬、補体阻害剤、アドレナリン作用性の薬剤、ＴＮＦαやＩＬ−１など、炎症誘発性サイトカインからのシグナルを妨げる薬剤（例えばＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびその誘導体（例えば可溶性ｐ５５またはｐ７５  ＴＮＦ受容体および誘導体ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（商標名）およびｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ））、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）、および抗炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３およびＴＧＦβ）、セレコキシブ、葉酸、硫酸ヒドロキシクロロキン、ロフェコキシブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、ナプロキセン、バルデコキシブ、スルファサラジン、メチルプレドニゾロン、メロキシカム、酢酸メチルプレドニゾロン、チオリンゴ酸金ナトリウム、アスピリン、トリアムシノロンアセトニド、プロポキシフェンナプシレート／ａｐａｐ、葉酸塩、ナブメトン、ジクロフェナク、ピロキシカム、エトドラク、ジクロフェナクナトリウム、オキサプロジン、オキシコドン塩酸塩、酒石酸水素ヒドロコドン／ａｐａｐ、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、フェンタニル、アナキンラ、ヒト組換え体、トラマドール塩酸塩、サルサラート、スリンダク、シアノコバラミン／ｆａ／ピリドキシン、アセトアミノフェン、アレンドロン酸ナトリウム、プレドニゾロン、硫酸モルヒネ、塩酸リドカイン、インドメタシン、硫酸グルコサミン／コンドロイチン、アミトリプチリン塩酸塩、スルファジアジン、オキシコドン塩酸塩／アセトアミノフェン、オロパタジン塩酸塩、ミソプロストール、ナプロキセンナトリウム、オメプラゾール、シクロホスファミド、リツキシマブ、ＩＬ−１ＴＲＡＰ、ＭＲＡ、ＣＴＬＡ４−ＩＧ、ＩＬ−１８ＢＰ、抗−ＩＬ−１２、抗−ＩＬ１５、ＢＩＲＢ−７９６、ＳＣＩＯ−４６９、ＶＸ−７０２、ＡＭＧ−５４８、ＶＸ−  ７４０、ロフルミラスト、ＩＣ−４８５、ＣＤＣ−８０１およびメソプラムなどの薬剤と組み合せることもできる。好ましい組合せには、メトトレキサート���たはレフルノミドなどがあり、中等度または重度の関節リウマチの場合にはシクロスポリンなどがある。
【０１４９】
本発明の抗体または抗体部分を組み合せることができる炎症性腸疾患用治療薬の例には、ブデソニド；表皮成長因子；コルチコステロイド；シクロスポリン、スルファサラジン；アミノサリチレート；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼ阻害剤；メサラミン；オルサラジン；バルサラジン；抗酸化薬；トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体拮抗薬；抗ＩＬ−βモノクローナル抗体；抗ＩＬ−６モノクローナル抗体；成長因子；エラスターゼ阻害剤；ピリジニル−イミダゾール化合物；その他のヒトサイトカインまたは成長因子に対する抗体または拮抗薬、例えばＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦおよびＰＤＧＦなどがあるが、それらに限定されるものではない。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０またはそれらのリガンドなどの細胞表面分子に対する抗体と組み合せることができる。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、マイコフェノラートモフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ（例えばイブプロフェン）、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシン作動薬、抗血栓薬、補体阻害剤、アドレナリン作用性の薬剤、ＴＮＦαやＩＬ−１など、炎症誘発性サイトカインからのシグナルを妨げる薬剤（例えばＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８、またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびその誘導体（例えば可溶性ｐ５５またはｐ７５  ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）、および抗炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３およびＴＧＦβ）などの薬剤と組み合せることもできる。
【０１５０】
抗体または抗原結合部分を組み合せることができるクローン病用治療薬好ましい例には、以下のものなどがある。すなわち、ＴＮＦ拮抗薬、例えば、抗ＴＮＦ抗体、Ｄ２Ｆ７（ＰＣＴ公開番号ＷＯ９７／２９１３１；フミラ（ＨＵＭＩＲＡ））、ＣＡ２（レミケード）、ＣＤＰ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構造体、（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（エンブレル）またはｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（レネルセプト））阻害剤およびＰＤＥ４阻害剤である。本発明の抗体または抗原結合部分は、コルチコステロイド、例えばブデソニドやデキサメタゾンと組み合せることができる。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、スルファサァジン、５−アミノサリチル酸、オルサラジンなどの薬剤、ＩＬ−１などのプロ炎症性サイトカイン、例えばＩＬ−１β変換酵素阻害剤、およびＩＬ−１ｒａの合成または作用を妨げる薬剤と組み合せることもできる。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、Ｔ細胞シグナル阻害剤、例えばチロシンキナーゼ阻害剤６−メルカプトプリンと共に使用することもできる。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、ＩＬ−１１と組み合せることができる。本発明の抗体またはそれの抗原結合部分は、メサラミン、プレドニゾン、アザチオプリン、メルカプトプリン、インフリキシマブ、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、ジフェノキシレート／アトロプ硫酸塩、ロペラミド塩酸塩、メトトレキセート、オメプラゾール、葉酸塩、シプロフロキサシン／デキストロース−水、酒石酸水素ヒドロコドン／ａｐａｐ、テトラサイクリン塩酸塩、フルオシノニド、メトロニダゾール、チメロアール／ホウ酸、コレスチラミン／ショ糖、シプロフロキサシン塩酸塩、ヒヨスチアミン硫酸塩、メペリジン塩酸塩、ミダゾラム塩酸塩、オキシコドン塩酸塩／アセトアミノフェン、プロメタジン塩酸塩、リン酸ナトリウム、スルファメトキサゾール／トリメトプリム、セレコキシブ、ポリカルボフィル、ナプシル酸プロポキシフェン、ヒドロコルチゾン、総合ビタミン剤、バルサラジド・２ナトリウム、リン酸コデイン／ａｐａｐ、コレセベラム塩酸塩、シアノコバラミン、葉酸、レボフロキサシン、メチルプレドニゾロン、ナタリズマブおよびインターフェロン−γと組み合わせることができる。
【０１５１】
本発明の抗体または抗体部分と組み合せることができる多発性硬化症用治療薬の例には、コルチコステロイド；プレドニゾロン；メチルプレドニゾロン；アザチオプリン；シクロホスファミド；シクロスポリン；メトトレキサート；４−アミノピリジン；チザニジン；インターフェロンβ１ａ（アボネックス；Ｂｉｏｇｅｎ）；インターフェロンβ１ｂ（ベタセロン；Ｃｈｉｒｏｎ／Ｂｅｒｌｅｘ）；インターフェロンβ１Ａ−ＩＦ（Ｓｅｒｏｎｏ／Ｉｎｈａｌｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、Ｐｅｇインターフェロンα２ｂ（Ｅｎｚｏｎ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）、コポリマー１（Ｃｏｐ−１；コパキソン；Ｔｅｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）；高圧酸素；静脈免疫グロブリン；クラブリビン；その他のヒトサイトカインまたは成長因子およびこれらの受容体に対する抗体または拮抗薬、例えばＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦおよびＰＤＧＦなどがあるが、これらに限定されるものではない。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０またはこれらのリガンドなどの細胞表面分子に対する抗体と組み合せることができる。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、マイコフェノラートモフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ（例えばイブプロフェン）、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシン作動薬、抗血栓薬、補体阻害剤、アドレナリン作用性の薬剤、ＴＮＦαやＩＬ−１など、炎症誘発性サイトカインからのシグナルを妨げる薬剤（例えばＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＡＣＥ阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびその誘導体（例えば可溶性ｐ５５またはｐ７５  ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）および抗炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３およびＴＧＦβ）などの薬剤と組み合せることもできる。
【０１５２】
抗体またはその抗原結合部分を組み合わせることができる多発性硬化症用治療薬の好ましい例には、インターフェロンβ、例えばＩＦＮβ１ａおよびＩＦＮβ１ｂ；コパクソン、コルチコステロイド、カスパーゼ阻害薬（例えば、カスパーゼ−１阻害薬）、ＩＬ−１阻害剤、ＴＮＦ阻害剤およびＣＤ４０リガンドおよびＣＤ８０に対する抗体などがある。
【０１５３】
本発明の抗体またはその抗原結合部分は、アレムツヅマブ、ドロナビノール、ユニメド（Ｕｎｉｍｅｄ）、ダクリツマブ、ミトキサントロン、キサリプロデン塩酸塩、ファムプリジン、酢酸グラチラマー、ナタリツマブ、シンナビドール（ｓｉｎｎａｂｉｄｏｌ）、ａ−イムノカイン（ａ−ｉｍｍｕｎｏｋｉｎｅ）ＮＮＳ０３、ＡＢＲ−２１５０６２、アレルギ（Ａｎｅｒｇｉ）Ｘ．ＭＳ、ケモカイン受容体拮抗薬、ＢＢＲ−２７７８、カラグアリン（ｃａｌａｇｕａｌｉｎｅ）、ＣＰＩ−１１８９、ＬＥＭ（リポソーム封入ミトキサントロン）、ＴＨＣ．ＣＢＤ（カンナビノイド作働薬）ＭＢＰ−８２９８、メソプラム（ＰＤＥ４阻害薬）、ＭＮＡ−７１５、抗−ＩＬ−６受容体抗体、ニューロバクス（ｎｅｕｒｏｖａｘ）、パーフェミドン・アロトラップ（ａｌｌｏｔｒａｐ）１２５８（ＲＤＰ−１２５８）、ｓＴＮＦ−Ｒ１、タラミパネル（ｔａｌａｍｐａｎｅｌ）、テリフルノミド（ｔｅｒｉｆｌｕｎｏｍｉｄｅ）、ＴＧＦ−β２、チプリモチド（ｔｉｐｌｉｍｏｔｉｄｅ）、ＶＬＡ−４拮抗薬（例えば、ＴＲ−１４０３５、ＶＬＡ４ウルトラヘイラー（Ｕｌｔｒａｈａｌｅｒ）、アンテグラン（Ａｎｔｅｇｒａｎ）−ＥＬＡＮ／バイオゲン（Ｂｉｏｇｅｎ）、インターフェロンγ拮抗薬、ＩＬ−４作働薬などの薬剤と組み合わせることもできる。
【０１５４】
本発明の抗体または抗体部分を組み合わせることができる狭心症の治療薬の例としては、アスピリン、ニトログリセリン、１硝酸イソソルビド、コハク酸メトプロロール、アテノロール、酒石酸メトプロロール、ベシル酸アムロジピン、ジルチアゼム塩酸塩、２硝酸イソソルビド、重硫酸クロピドグレル、ニフェジピン、アトルバスタチンカルシウム、塩化カリウム、フロセミド、シンバスタチン、ベラパミル塩酸塩、ジゴキシン、プロプラノロール塩酸塩、カルベジロール、リシノプリル、スピロノラクトン、ヒドロクロロチアジド、マレイン酸エナラプリル、ナドロール、ラミプリル、エノキサパリンナトリウム、ヘパリンナトリウム、バルサルタン、塩酸ソタロール、フェノフィブラート、エゼチミベ、ブメタニド、ロサルタンカリウム、リシノプリル／ヒドロクロロチアジド、フェロジピン、カプトプリル、フマル酸ビソプロロールなどがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１５５】
本発明の抗体または抗体部分を組み合わせることができる強直性脊椎炎の治療薬の例としては、イブプロフェン、ジクロフェナクおよびミソプロストール、ナプロキセン、メロキシカム、インドメタシン、ジクロフェナク、セレコキシブ、ロフェコキシブ、スルファサラジン、メトトレキセート、アザチオプリン、ミノサイクリン、プレドニゾン、エタネルセプト、インフリキシマブなどがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１５６】
本発明の抗体または抗体部分を組み合わせることができる喘息の治療薬の例としては、アルブテロール、サルメテロール／フルチカゾン、モンテルカストナトリウム、プロピオン酸フルチカゾン、ブデゾニド、プレドニゾン、キシナホ酸サルメテロール、レボ−アルブテロール塩酸塩、硫酸アルブテロール／イプラトロピウム、リン酸プレドニゾロンナトリウム、トリアムシノロンアセトニド、２プロピオン酸ベクロメタゾン、イプラトロピウムブロマイド、アジスロマイシン、酢酸ピルブテロール、プレドニゾロン、無水テオフィリン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、クラリスロマイシン、ザフィルルカスト、フマル酸フォルモテロール、インフルエンザウイルスワクチン、メチルプレドニソロン、アモキシシリン・３水和物、フルニソリド、アレルギー注射、クロモリンナトリウム、塩酸フェキソフェナジン、フルニソリド／メントール、アモキシシリン／クラブラン酸塩、レボフロキサシン、吸入支援機器、グアイフェネシン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、モキシフロキサシン塩酸塩、ドキシサイクリンヒクラート、グアイフェネシン／ｄ−メトルファン、ｐ−エフェドリン／ｃｏｄ／クロルフェニル、ガチフロキサシン、塩酸セチリジン、フロ酸モメタゾン、キシナホ酸サルメテロール、ベンゾナテート、セファレキシン、ｐｅ／ヒドロコドン／クロルフェニル、セチリジン塩酸塩／プソイドエフェド（ｐｓｅｕｄｏｅｐｈｅｄ）、フェニレフリン／ｃｏｄ／プロメタジン、コデイン／プロメタジン、セフプロジル、デクサメタゾン、グアイフェネシン／プソイドエフェドリン、クロルフェニラミン／ヒドロコドン、ネドクロミルナトリウム、硫酸テルブタリン、エピネフリン、メチルプレドニゾロン、硫酸メタプロテレノールなどがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１５７】
本発明の抗体または抗体部分を組み合わせることができるＣＯＰＤの治療薬の例としては、硫酸アルブテロール／イプラトロピウム、イプラトロピウムブロマイド、サルメテロール／フルチカゾン、アルブテロール、キシナホ酸サルメテロール、プロピオン酸フルチカゾン、プレドニゾン、無水テオフィリン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、モンテルカストナトリウム、ブデゾニド、フマル酸フォルモテロール、トリアムシノロンアセトニド、レボフロキサシン、グアイフェネシン、アジスロマイシン、２プロピオン酸ベクロメタゾン、レボアルブテロール塩酸塩、フルニソリド、セフトリアキソンナトリウム、アモキシシリン・３水和物、ガチフロキサシン、ザフィルルカスト、アモキシシリン／クラブラン酸塩、フルニソリド／メントール、クロルフェニラミン／ヒドロコドン、硫酸メタプロテレノール、メチルプレドニゾロン、フロ酸モメタゾン、ｐ−エフェドリン／ｃｏｄ／クロルフェニル、酢酸ピルブテロール、ｐ−エフェドリン／ロラタジン、硫酸テルブタリン、チオトロピウムブロマイド、（Ｒ，Ｒ）−フォルモテロール、ＴｇＡＡＴ、シロミラスト、ロフルミラストなどがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１５８】
本発明の抗体または抗体部分を組み合わせることができるＨＣＶの治療薬の例としては、インターフェロン−α−２ａ、インターフェロン−α−２ｂ、インターフェロン−αｃｏｎ１、インターフェロン−α−ｎ１、ＰＥＧ化インターフェロン−α−２ａ、ＰＥＧ化インターフェロン−α−２ｂ、リバビリン、ＰＥＧインターフェロンα−２ｂ＋リバビリン、ウルソデオキシコール酸、グリチルリジン酸、チマルファシン、マキサミン（Ｍａｘａｍｉｎｅ）、ＶＸ−４９７およびＨＣＶポリメラーゼ、ＨＣＶプロテアーゼ、ＨＣＶヘリカーゼ、ＨＣＶ  ＩＲＥＳ（内部リボソーム侵入部位）という標的に介入することでＨＣＶを治療するのに用いられる化合物などがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１５９】
本発明の抗体または抗体部分を組み合わせることができる特発性肺線維症の治療薬の例としては、プレドニゾン、アザチオプリン、アルブテロール、コルヒチン、硫酸アルブテロール、ジゴキシン、γ−インターフェロン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、ロラゼパム、フロセミド、リシノプリル、ニトログリセリン、スピロノラクトン、シクロホスファミド、イプラトロピウムブロマイド、アクチノマイシンｄ、アルテプラーゼ、プロピオン酸フルチカゾン、レボフロキサシン、硫酸メタプロテレノール、硫酸モルヒネ、オキシコドン塩酸塩、塩化カリウム、トリアムシノロンアセトニド、無水タクロリムス、カルシウム、インターフェロン−α、メトトレキセート、ミコフェノール酸モフェチル、インターフェロン−γ−１βなどがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１６０】
本発明の抗体または抗体部分を組み合わせることができる心筋梗塞の治療薬の例としては、アスピリン、ニトログリセリン、酒石酸メトプロロール、エノキサパリンナトリウム、ヘパリンナトリウム、重硫酸クロピドグレル、カルベジロール、アテノロール、硫酸モルヒネ、コハク酸メトプロロール、ワーファリンナトリウム、リシノプリル、１硝酸イソソルビド、ジゴキシン、フロセミド、シンバスタチン、ラミプリル、テネクテプラーゼ、マレイン酸エナラプリル、トルセミド、レタバーゼ（ｒｅｔａｖａｓｅ）、ロサルタンカリウム、キナプリル塩酸塩／マグカルブ（ｍａｇ  ｃａｒｂ）、ブメタニド、アルテプラーゼ、エナラプリラート、アミオダロン塩酸塩、チロフィバン塩酸塩ｍ−水和物、ジルチアゼム塩酸塩、カプトプリル、イルベサルタン、バルサルタン、プロプラノロール塩酸塩、フォシノプリルナトリウム、リドカイン塩酸塩、エプチフィバチド、セファゾリンナトリウム、硫酸アトロピン、アミノカプロン酸、スピロノラクトン、インターフェロン、ソタロール塩酸塩、塩化カリウム、ドキュセートナトリウム、ドブタミン塩酸塩、アルプラゾラム、プラバスタチンナトリウム、アトルバスタチンカルシウム、ミダゾラム塩酸塩、メペリジン塩酸塩、２硝酸イソソルビド、エピネフリン、ドーパミン塩酸塩、ビバリルジン、ロスバスタチン，エゼチミベ／シンバスタチン、アバシミベ（ａｖａｓｉｍｉｂｅ）、カリポリドなどがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１６１】
本発明の抗体または抗体部分を組み合わせることができる乾癬の治療薬の例としては、カルシポトリエン、プロピオン酸クロベタゾール、トリアムシノロンアセトニド、プロピオン酸ハロベタゾール、タザロテン、メトトレキセート、フルオシノニド、ベタメタゾン・２プロピオン酸塩増量（ａｕｇｍｅｎｔｅｄ）、フルオシノロンアセトニド、アシトレチン、タールシャンプー、吉草酸ベタメタゾン、フロ酸モメタゾン、ケトコナゾール、プラモキシン／フルオシノロン、吉草酸ヒドロコルチゾン、フルランドレノリド、尿素、ベタメタゾン、プロピオン酸クロベタゾール／エモル（ｅｍｏｌｌ）、プロピオン酸フルチカゾン、アジスロマイシン、ヒドロコルチゾン、保湿製剤、葉酸、デソニド（ｄｅｓｏｎｉｄｅ）、ピメクロリムス、コールタール、２酢酸ジフロラゾン、葉酸エタネルセプト、乳酸、メトキサレン、ｈｃ／次没食子酸ビスマス／ｚｎｏｘ／ｒｅｓｏｒ、酢酸メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、日焼け止め、ハルシノニド、サリチル酸、アントラリン、ピバリン酸クロコルトロン、石炭抽出物、コールタール／サリチル酸、コールタール／サリチル酸／硫黄、デソキシメタゾン、ジアゼパム、緩和薬、フルオシノニド／緩和薬、鉱油／ヒマシ油／乳酸ナトリウム（ｎａｌａｃｔ）、鉱油／落花生油、石油／ミリスチン酸イソプロピル、ソラレン、サリチル酸、石鹸／トリブロンサラン、チメロサール／ホウ酸、セレコキシブ、インフリキシマブ、シクロスポリン、アレファセプト、エファリズマブ、タクロリムス、ピメクロリムス、ＰＵＶＡ、ＷＢ、スルファサラジンなどがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１６２】
本発明の抗体または抗体部分を組み合わせることができる乾癬性関節炎の治療薬の例としては、メトトレキセート、エタネルセプト、ロフェコキシブ、セレコキシブ、葉酸、スルファサラジン、ナプロキセン、レフルノミド、酢酸メチルプレドニゾロン、インドメタシン、硫酸ヒドロキシクロロキン、プレドニゾン、スリンダク、ベタメタゾン・２プロピオン酸塩増量（ａｕｇｍｅｎｔｅｄ）、インフリキシマブ、メトトレキセート、葉酸塩、トリアムシノロンアセトニド、ジクロフェナク、ジメチルスルホキシド、ピロキシカム、ジクロフェナクナトリウム、ケトプロフェン、メロキシカム、メチルプレドニゾロン、ナブメトン、トルメチンナトリウム、カルシポトリエン、シクロスポリン、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、フルオシノニド、硫酸グルコサミン、チオリンゴ酸金ナトリウム、酒石酸水素ヒドロコドン／ａｐａｐ、イブプロフェン、リセドロン酸ナトリウム、スルファジアジン、チオグアニン、バルデコキシブ、アレファセプト、エファリズマブなどがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１６３】
本発明の抗体または抗体部分を組み合わせることができる再狭窄の治療薬の例としては、シロリムス、パクリタキセル、エベロリムス、タクロリムス、ＡＢＴ−５７８、アセトアミノフェンなどがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１６４】
本発明の抗体または抗体部分を組み合わせることができる坐骨神経痛の治療薬の例としては、酒石酸水素ヒドロコドン／ａｐａｐ、ロフェコキシブ、シクロベンザプリン塩酸塩、メチルプレドニゾロン、ナプロキセン、イブプロフェン、オキシコドン塩酸塩／アセトアミノフェン、セレコキシブ、バルデコキシブ、酢酸メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、リン酸コデイン／ａｐａｐ、トラマドール塩酸塩／アセトアミノフェン、メタキサロン、メロキシカム、メトカルバモール、リドカイン塩酸塩、ジクロフェナクナトリウム、ガバペンチン、デクサメタゾン、カリソプロドール、ケトロラクトロメタミン、インドメタシン、アセトアミノフェン、ジアゼパム、ナブメトン、オキシコドン塩酸塩、チザニジン塩酸塩、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、ナプシル酸プロポキシフェン／ａｐａｐ、ａｓａ／オキシコドン／オキシコドンｔｅｒ、イブプロフェン／ヒドロコドンｂｉｔ、トラマドール塩酸塩、エトドラク、プロポキシフェン塩酸塩、アミトリプチリン塩酸塩、カリソプロドール／リン酸コデイン／ａｓａ、硫酸モルヒネ、総合ビタミン剤、ナプロキセンナトリウムまたはクエン酸フェナドリン、テマゼパムなどがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１６５】
抗体または抗原結合部分を組み合わせることができるＳＬＥ（狼瘡）の治療薬の好ましい例としては、ジクロフェナク、ナプロキセン、イブプロフェン、ピロキシカム、インドメタシンなどのＮＳＡＩＤ類；セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブなどのＣＯＸ２阻害薬；ヒドロキシクロロキンなどの抗マラリア剤；プレドニゾン、プレドニゾロン、ブデソニド（ｂｕｄｅｎｏｓｉｄｅ）、デクサメタゾンなどのステロイド類；アザチオプリン、シクロホスファミド、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキセートなどの細胞傷害剤；セルセプトなどのＰＤＥ４の阻害薬またはプリン合成阻害薬などがある。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、スルファサラジン、５−アミノサリチル酸、オルサラジン、イムランおよびＩＬ−１などの炎症誘発性サイトカインの合成、産生または作用を妨害する薬剤（例えば、ＩＬ−１β変換酵素阻害薬およびＩＬ−１ｒａなどのカスパーゼ阻害薬）のような薬剤と組み合わせることもできる。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、例えばチロシンキナーゼ阻害薬などのＴ細胞信号伝達阻害薬；あるいは例えばＣＴＬＡ−４−ＩｇＧまたは抗Ｂ７ファミリー抗体、抗ＰＤ−１ファミリー抗体などのＴ細胞活性化分子を標的とする分子とともに用いることもできる。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、ｈＩＬ−１１または例えばフォノトリズマブ（ｆｏｎｏｔｏｌｉｚｕｍａｂ）（抗ＩＦＮｇ抗体）などの抗サイトカイン抗体、または例えば抗ＩＬ−６受容体抗体およびＢ細胞表面分子に対する抗体などの抗−受容体受容体抗体と組み合わせることができる。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、ＬＪＰ３９４（アベチムス（ａｂｅｔｉｍｕｓ））、例えばリツキシマブ（抗ＣＤ２０抗体）、リンフォスタット（ｌｙｍｐｈｏｓｔａｔ）−Ｂ（抗ＢｌｙＳ抗体）などのＢ細胞を枯渇または失活させる薬剤、例えば抗ＴＮＦ抗体、Ｄ２Ｆ７（ＰＣＴ公開番号ＷＯ９７／２９１３１；フミラ（ＨＵＭＩＲＡ））、ＣＡ２（レミケード）、ＣＤＰ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構造体、（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（エンブレル）またはｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（レネルセプト））などのＴＮＦ拮抗薬とともに用いることもできる。
【０１６６】
本発明の医薬組成物は、本発明の抗体または抗体部分を、「治療上有効量」または「予防上有効量」含むことができる。「治療上有効量」は、必要とされる用量および期間で、所望の治療結果を実現するのに有効な量を指す。抗体または抗体の治療上有効量は当業者が決定することができ、個体の疾患状態や年齢、性別、体重などの要素と、抗体または抗体部分がその個体において所望の反応を引き起こす能力に応じて変動し得る。また治療上有効量とは、抗体または抗体部分の毒作用または有害効果より治療上有益な作用のほうが大きいものである。「予防上有効量」は、必要とされる用量および期間で、所望の予防結果を実現するのに有効な量を指す。一般に、疾患の早期段階の前または早期段階で予防用量を被験者に対して使用するので、予防上有効量は、治療上有効量よりも少なくなる。
【０１６７】
投薬計画は、最適な所望の応答（例えば治療応答または予防応答）が得られるように調整することができる。例えば、単一の薬剤塊を投与することができ、用量を数回に分けて時間をかけて投与することができ、またはその用量を、治療状況に必要な条件に示されるように比例的に減少または増加させることができる。投与を容易にし用量を均一にするため、非経口組成物を単位製剤に処方することが、特に有利である。本明細書で使用される単位製剤は、治療を受ける哺乳動物被験者に単一用量を与えるのに適した、物理的に分離された単位を指し、各単位は、必要とされる医薬担体と共同して所望の治療効果を発揮するよう計算された所定量の活性化合物を含有する。本発明の単位製剤に関する仕様は、（ａ）活性化合物の固有の特徴および達成すべき特定の治療または予防効果と、（ｂ）個体における感受性治療を目的としたそのような活性化合物の配合の技術分野に固有の制限によって決定され、およびこれらに直接依存する。
【０１６８】
本発明の抗体または抗体部分の治療上または予防上有効量の範囲の例としては、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇであり、より好ましくは１〜１０ｍｇ／ｋｇであるが、これに限定されるものではない。留意すべき点として、用量値は、改善すべき状態の種類および重度に応じて変動し得る。さらに理解すべき点として、特定の被験者に関しては、個体のニーズ、そして組成物の投与を管理または監督する担当者の専門的判断に従って、具体的な投薬計画を経時的に調整すべきであり、そして本明細書に記載の用量範囲は例示にすぎず、特許請求の範囲に記載される組成物の範囲または実務を制限するものではない。
【０１６９】
ＩＩ．ＩＬ−１８応答遺伝子
ＩＬ−１８は、マクロファージ、樹状細胞、星細胞、小膠細胞、上皮細胞、角化細胞、腸上皮細胞、軟骨細胞、滑膜線維芽細胞および骨芽細胞で発現され、さらには副腎皮質および下垂体内で発現される。ヒト単球および樹状細胞などの一部の細胞では発現は構成的であるが、他の細胞ではそれはデノボで誘発しなければならない。インターフェロンγ発現は別として、ＩＬ−１８単独または他のサイトカインと共同で誘発される他の遺伝子についてはほとんど解明されていない。
【０１７０】
本発明の１実施形態は、対象遺伝子の遺伝子発現の調節方法であって、ＩＬ−１８またはＩＬ−１８調節剤を提供する段階；およびＩＬ−１８または前記調節剤を細胞に接触させる段階を有し、前記対象遺伝子が下記の表に示した遺伝子からなる群から選択される方法を提供する。
【０１７１】
【表３】
2011097947.tif 000012
2011097947.tif 000013
2011097947.tif 000014
2011097947.tif 000015
2011097947.tif 000016
2011097947.tif 000017
【０１７２】
ＩＬ−１８によって調節される遺伝子の確認方法を実施例３に開示している。これらの試験から、ＩＬ−１８が真の炎症誘発性サイトカインであり、他の炎症誘発性介在物質をコードするいくつかの遺伝子の発現を直接調節し得ることが明らかになった。ヒト血液検体を用いた試験では、ＩＬ−１８に対する多くの応答が広くヒト群で起こることが明らかになり、ＩＬ−１８の生化学的マーカーとしての有用性と結果的に抗−ＩＬ１８機能が示される。
【０１７３】
ＩＬ−１８の調節剤は、作働薬および拮抗薬であることができる。好ましくはその調節剤は、結合タンパク質または中和結合タンパク質である。
【０１７４】
ＩＬ−１８阻害薬の例には、ＩＬ−１８に結合する抗体およびそれの断片；ＩＬ−１８Ｒに結合する抗体；ＩＬ−１８ＲＡｃＰに結合する抗体；ＩＬ−１８ｂｐ；ＩＬ−１８Ｒ断片（例：ＩＬ−１８受容体の可溶化細胞外ドメイン）；ＩＬ−１８に結合し、ＩＬ−１８Ｒとのそれの相互作用を低減または防止するペプチド；ＩＬ−１８Ｒに結合し、ＩＬ−１８またはＩＬ−１８ＲＡｃＰとのそれの相互作用を低減または防止するペプチド；ＩＬ−１８ＲＡｃＰに結合し、ＩＬ−１８Ｒとのそれの相互作用を低減または防止するペプチド；およびＩＬ−１８産生またはＩＬ−１８、ＩＬ−１８ＲおよびＩＬ−１８ＲＡｃＰのいずれかの間の相互作用を低減または防止する小分子などがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１７５】
ある種のＩＬ−１８阻害薬が、例えば１９９４年７月１４日発行の米国特許第５９１２３２４号；１９９９年１２月８日公開のＥＰ０９６２５３１；１９９４年１１月１５日公開のＥＰ７１２９３１；１９９４年７月１４日発行の米国特許第５９１４２５３号；１９９７年７月１０日公開のＷＯ９７／２４４４１；２０００年５月９日発行の米国特許第６０６０２８３号；１９９６年１２月２６日公開のＥＰ８５０９５２；１９９８年９月１６日公開のＥＰ８６４５８５；１９９８年９月２４日公開のＷＯ９８／４１２３２；２０００年４月２５日発行の米国特許第６０５４４８７号；１９９７年８月１４日公開のＷＯ９９／０９０６３；１９９７年１１月３日公開のＷＯ９９／２２７６０；１９９８年１月２３日公開のＷＯ９９／３７７７２；１９９８年３月２０日公開のＷＯ９９／３７７７３；２０００年１月２６日公開のＥＰ０９７４６００；２０００年３月９日公開のＷＯ００１１２５５５；１９９７年１０月３１日公開の日本特許出願ＪＰ１１１３９９１９４；１９９８年２月８日公開のイスラエル特許出願ＩＬ１２１５５４Ａ０（これらはいかなる目的においても参照によって本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０１７６】
本明細書に記載の本発明の方法の他の好適な変更および調整は自明であり、本発明の範囲または本明細書に開示の実施形態を逸脱しない限りにおいて、好適な均等物を用いてそれらを行うことが可能であることは、当業者には容易に理解できよう。以上、本発明について詳細に説明したが、下記の実施例を参照することで本発明についての理解がさらに深まるであろう。そしてこれら実施例は、例示のみを目的として含めたものであり、本発明を限定するものではない。
【実施例】
【０１７７】
実施例１：組換えＩＬ−１８の産生および特性決定
実施例１．１：ＩＬ−１８の生理活性を求めるアッセイ
実施例１および実施例２を通じて、別段の断りがない限り、下記のアッセイを用いて、ＩＬ−１８の生理活性を測定した。
【０１７８】
実施例１．１．Ａ：ＫＧ−１バイオアッセイ
ＫＧ−１（ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ−２４６）は、低レベルの機能性ＩＬ−１８受容体を構成的に発現するヒト骨髄単核細胞系である。ＴＮＦで処理することで、これらの細胞上の機能性ＩＬ−１８受容体のＩＬ−１８Ｒαおよびβサブユニットの両方が上昇する。ＴＮＦ処理ＫＧ−１細胞を組換えヒトＩＬ−１８（ｒｈｕ−ＩＬ−１８）とともにインキュベートし、ＥＬＩＳＡによってＩＬ−１８誘発ヒトＩＦＮγ産生のレベルを測定することで、ＫＧ−１バイオアッセイを行った（Ｋｏｎｉｓｈｉ，Ｋ．，ｅｔ  ａｌ  （１９９７）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０９：１８７−１９１）。ＫＧ−１バイオアッセイを用いて、ＩＬ−１８拮抗薬の中和能力を測定した。例えば、抗ＩＬ−１８抗体を各種濃度のｒｈｕ−ＩＬ−１８とともにインキュベートし、次に９６ウェルプレートで３７℃にて１６〜１８時間にわたってＴＮＦ処理ＫＧ−１細胞とともにインキュベートした。上清を回収し、ＥＬＩＳＡによってヒトＩＦＮγレベルについてのアッセイを行った。このアッセイは、ＩＬ−１８拮抗薬のＩＣ５０値を４×１０−１１〜６×１０−１１Ｍまで測定することができる。
【０１７９】
実施例１．１．Ｂ：ヒト全血アッセイ
簡潔に言えば、ヒト全血アッセイ（ＷＢＡ）によって、生理的状況での天然ＩＬ−１８に対するＩＬ−１８拮抗薬の中和力を測定する。このアッセイでは、読み取りは内因性ＩＬ−１８依存性ヒトＩＦＮγ産生の阻害とした。ＩＬ−１８拮抗薬の存在下または非存在下に３７℃で、ＬＰＳ（１μｇ／ｍＬ）＋ＩＬ−１２（５０ｐｇ／ｍＬ）で全血を刺激した。ＬＰＳ＋ＩＬ−１２刺激後１８〜２４時間にわたり、ヒトＩＦＮγ濃度をＥＬＩＳＡによって測定した。
【０１８０】
実施例１．１．Ｃ：受容体結合アッセイ
簡潔に言えば、受容体結合アッセイ（ＲＢＡ）では、１２５Ｉ標識ｒｈｕ−ＩＬ−１８を用いて、ＩＬ−１８のＩＬ−１８受容体への結合を測定した。１２５Ｉ−ｒｈｕ−ＩＬ−１８は、ＴＮＦ処理ＫＧ−１細胞上のＩＬ−１８Ｒαβに特異的に結合する（約７０００部位／細胞）。１２５Ｉ−ｒｈｕ−ＩＬ−１８は、未標識ＩＬ−１８と同じ特異的活性を有し、未標識ＩＬ−１８と競合し得る。
【０１８１】
２つの阻害モードＡおよびＢを定義した。中和モードＡでは、ＩＬ−１８の高親和性ＩＬ−１８受容体（ＩＬ−１８Ｒαβ）への結合は行わず、ＩＬ−１８介在シグナル伝達（すなわち、ＩＦＮγ産生）を遮断した。中和モードＢでは、ＩＬ−１８のＩＬ−１８Ｒαβへの結合を遮断することで、その後の受容体介在信号伝達は起こらなかった。
【０１８２】
実施例１．２：組換えＩＬ−１８の産生
実施例１．２．Ａ：ヒトプロＩＬ−１８のプラスミド構築、発現および精製
ＳＦ−９昆虫細胞においてＩＬ−１８の前駆体を発現することで、組換えヒトＩＬ−１８を形成した。当業界で公知の標準的な分子生物学的方法により、発表されている配列（Ｕｓｈｉｏ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９６）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５６：４２７４−４２７９）に基づく特異的ＰＣＲプライマーを用いて全長ヒトプロ−ＩＬ−１８ｃＤＮＡを形成し、次にバキュロウィルス（ＢＶ）転移ベクターｐＶＬ１３９３にクローニングした（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ；Ｃａｔ＃５１−２１２０１Ｐ）。全長ヒトプロ−ＩＬ−１８ｃＤＮＡを形成するのに用いた５′ＰＣＲプライマーは、６−ヒスチジン領域をコードする配列を有することで、プロＩＬ−１８のＮ末端が６−ＨＩＳ−タグを有するようになった。ＳＦ９昆虫細胞を、ＩＬ−１８ｃＤＮＡを含むｐＶＬ１３９３ベクターを持ったバキュロウィルスで感染させた。感染ＳＦ９細胞を溶解させ、溶解物をニッケルカラムに流して、組換えＨＩＳ標識プロＩＬ−１８（ｒｈｕプロＩＬ−１８）を精製した（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ；Ｃａｔ＃５５４８０２）。組換えＨＩＳ標識プロＩＬ−１８を、ヒトカスパーゼ−１で消化することでさらに処理して、生理活性ＩＬ−１８（成熟ＩＬ−１８）を形成した（Ｇｈａｙｕｒ  Ｔ．，（１９９７）  Ｎａｔｕｒｅ  ３８６：６１９−６２３）。
【０１８３】
実施例１．２．Ｂ：ＩＬ−１８のＮＥＭ処理
林原生物化学研究所（日本）から得た組換えヒトＩＬ−１８は、特異的活性およびＩＬ−１８結合親和性におけるバッチ間の変動を示した。ＩＬ−１８は、成熟ＩＬ−１８における４つのシステインの各種ペア間にジスルフィド結合を有していた。これらが、バッチ間での構造的および機能的不均一性および変動の原因となっていた。ＩＬ−１ｂ配位を用いるヒトＩＬ−１８の相同性モデリングで、成熟ヒトＩＬ−１８の３８位および６８位でのシステイン残基が露出しているために反応性であることが明らかになった。
【０１８４】
実施例１．２．Ａからの組換えヒトＩＬ−１８を、Ｎ−エチルマレイミド（ＮＥＭ）で処理して、システインを酸化から保護した。ＮＥＭ−ＩＬ−１８はモノマーであり、凝集体を形成せず、安定で、時間が経っても高い特異的活性を保持した。抗−ｈｕＩＬ−１８中和抗体がＮＥＭ−ＩＬ−１８に結合し、これを中和したことから、ＮＥＭ−ＩＬ−１８は中和エピトープを保持していた。ＩＬ−１８をＮＥＭで処理したにも拘わらず、抗−ＩＬ−１８抗体は、ヒトＷＢＡにおいてＮＥＭ−ＩＬ−１８および天然ヒトＩＬ−１８の両方の生理活性を中和する能力による測定により、ＮＥＭ−ＩＬ−１８上の中和エピトープを保存していた。ＮＥＭ−ＩＬ−１８を用いて、アッセイの至適化および選択ならびに完全ヒト抗−ヒト−ＩＬ−１８ｍＡｂｓの初期特性決定を行った。
【０１８５】
実施例１．２．Ｃ：ＩＬ−１８の４Ｃ／Ａ変異体の形成および特性決定
成熟ＩＬ−１８中の前記４つのシステイン残基をアラニンに変異させることで、ＩＬ−１８の４Ｃ／Ａ変異体を形成した（「４Ｃ／Ａ−ｈｕＬ−１８」）。下記の表４にまとめたように、ＩＬ−１８の４Ｃ／Ａ変異体をＮＥＭ−ｈｕＩＬ−１８と比較したところ、生理特性および生化学的特性において２つのタンパク質が識別できないことがわかった。ＩＬ−１８の４Ｃ／Ａ変異体およびＮＥＭ−ｈｕＩＬ−１８の両方とも、動的光散乱（ＤＬＳ）および粒径排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）分析によってモノマーであり、円偏光二色性分析によって配座および物理的安定性は類似していた。ＩＬ−１８の４Ｃ／Ａ変異体およびＮＥＭ−ｈｕＩＬ−１８の生理活性は、ＫＧ−１アッセイにおいて類似していて、いずれの形態のＩＬ−１８も類似の親和性でＩＬ−１８ＢＰおよび抗ＩＬ−１８抗体に結合した。４Ｃ／Ａ−ｈｕＬ−１８は酸化的不安定性がなく、大腸菌において高レベルで容易に発現された。
【０１８６】
【表４】
2011097947.tif 000018
【０１８７】
実施例１．２．Ｄ：ビオチン化ｒｈｕＩＬ−１８（ビオト−ＩＬ−１８）の形成および特性決定
当業界で公知の標準的な技術を用いて、リジン残基上で実施例１．２．ＢからのＮＥＭ−ＩＬ−１８のビオチン化を行い（スルホ−ＮＨＳ−ＬＣ−ビオチン（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）；カタログ番号２１３３５）、得られたビオチン化ｒｈｕ−ＩＬ−１８（ビオト−ＩＬ−１８）は、ｈｕＩＬ−１８当たり１、２、３または４個のビオチンを有するものを含む不均一混合物であった。さらに、ｈｕＩＬ−１８当たり２または３個のビオチンを有するものが、ビオト−ＩＬ−１８において主要物であった。ビオト−ＩＬ−１８は生理的に活性であり、ＥＬＩＳＡによる測定で抗−ＩＬ−１８抗体に結合しており、調べた全ての中和抗−ｈｕＩＬ−１８抗体によって中和された。ビオト−ＩＬ−１８は、高親和性で表面にＩＬ−１８Ｒαβを発現するＫＧ−１細胞に結合し、ＫＧ−１細胞の表面上のビオト−ＩＬ−１８を、抗ビオチン抗体（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ；カタログ番号Ｂ３６４０）を用いるＦＡＣＳ分析によって検出した。このように、ビオチン化は受容体結合を妨害せず、ｒｈｕＩＬ−１８の中和エピトープを遮蔽しない。
【０１８８】
実施例１．２．Ｅ：１２５Ｉ標識ｒｈｕＩＬ−１８の形成および特性決定
実施例１．２．ＢからのＮＥＭ−ＩＬ−１８上のリジン残基を、アマシャム指定の条件を用いて１２５Ｉで標識した（Ａｍｅｒｓｈａｍ；Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ；カタログ番号ＩＭ５８６１）。１２５１−標識ＩＬ−１８はその特異的活性を保持しており、未修飾ＩＬ−１８と競合し、ＫＧ−１細胞上のＩＬ−１８Ｒに特異的に結合した。１２５Ｉ−標識ＩＬ−１８のＩＬ−１８受容体への結合を、中和抗ｈｕＩＬ−１８モノクローナル抗体によって遮断した。このように、ヨウ素化はＩＬ−１８の受容体結合に影響せず、ＩＬ−１８上の中和エピトープを遮蔽しなかった。１２５Ｉ−標識ＩＬ−１８を用いて、中和モードおよび受容体結合アッセイでの抗ＩＬ−１８抗体の効力を求めた。
【０１８９】
実施例２：抗ＩＬ−１８抗体の形成および単離
実施例２．１：抗ＩＬ−１８抗体を単離するためのアッセイ
実施例３を通じて、別段の断りがない限り、下記のアッセイを用いて抗ＩＬ−１８抗体の同定および特性決定を行った。
【０１９０】
実施例２．１．Ａ：ＥＬＩＳＡ
あるＥＬＩＳＡが、ヒトＩＬ−１８に結合する抗体をスクリーニングするために開発された。このＥＬＩＳＡにおいては、ヤギ抗ビオチン化ＩｇＧによって、またはストレプトアビジンでコーティングしたプレート上に、ビオチン化ＮＥＭ−ｈｕＩＬ−１８（実施例１．２．Ｂ参照）を捕捉した。ハイブリドーマまたはＢ細胞上清を加え、当業界で公知の標準的なＥＬＩＳＡプロトコールに従い、ＨＲＰ接合抗−ヒトＩｇＧを用いて、ＩＬ−１８に結合した抗体を検出した。
【０１９１】
実施例２．１．Ｂ：ビアコア技術を用いる親和性測定
ビアコアアッセイ（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）は、オン速度定数、オフ速度定数の動力学的測定によって抗体の親和性を測定するものである。共有結合的に連結された二次抗体（例：ヤギ抗ヒトＩｇＧまたは抗マウスＩｇＧ）によってバイオセンサーチップ上に抗体を捕捉し、各種濃度の組換えＩＬ−１８を加える。結合を時間の関数として記録し、動力学的速度定数を計算する。このアッセイでは、１０６Ｍ−１ｓ−１という高いオン速度および１０−６ｓ−１という低いオフ速度を測定することができる。
【０１９２】
実施例２．１．Ｃ：エピトープマッピング
ビアコア技術を用いて、抗ＩＬ−１８抗体などのＩＬ−１８拮抗薬によって認識されるエピトープをマッピングした。すなわち、一つのＩＬ−１８拮抗薬をビアコアチップ上に捕捉し、ｒｈｕＩＬ−１８を固定化試薬に結合させた。次に、別の抗ＩＬ−１８拮抗薬のこの複合体への結合を調べた。２つが試薬の同時に結合することにより、これらの２つの試薬は異なるエピトープを認識することを示す。
【０１９３】
実施例２．２：ゼノマウスを用いる抗ＩＬ−１８ＨｕＭＡｂの形成
ゼノマウストランスジェニックマウス技術（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）を用いて、完全ヒト抗ヒトＩＬ−１８モノクローナル抗体（ＨｕＭＡｂ）を得た。この技術は、ＶＨ、ＤＨおよびＪＨを有するヒト可変重鎖座、Ｃｍｕ、Ｃデルタおよび単一ヒトＩｇＧ定常重鎖座ならびに軽鎖遺伝子座を有するトランスジェニックマウスからなる。対象抗原で免役化すると、これらのマウスは抗原に対する完全ヒト抗体を形成する。
【０１９４】
実施例２．２．Ａ：ＩＬ−１８抗原によるゼノマウスの免役化
ゼノマウス動物を、全ての注射について足蹠経路で免役化した。各注射の総容量は、マウス当たり５０μＬ、足蹠当たり２５μＬとした。最初の免役化注射には、マウス１匹当たり、タイターマックス・ゴールド（ＴｉｔｅｒＭａｘ  Ｇｏｌｄ）と１：１（体積比）混合した発熱物質を含まないＤＰＢＳ中にヒトＩＬ−１８（ＮＥＭ−ｒｈｕＩＬ−１８）４０μｇを含有させた。以後の追加免疫は、６回にわたってマウス１匹当たりアジュホス（Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓ）（リン酸アルミニウムゲル）２５μｇと混合した発熱物質を含まないＤＰＢＳ中でのヒトＩＬ−１８  ４０μＬによって行い、最終追加免疫はマウス１匹当たりアジュバントを含まず発熱物質を含まないＤＰＢＳ中のヒトＩＬ−１８  ４０μｇで行った。このプロトコールでは、動物を第０、４、８、１１、１７、２１、２５および３５日に免疫化した。第３９日に融合を行った。上記の免疫化後、マウスを屠殺し、鼠径リンパ節および腰リンパ節を回収した。
【０１９５】
実施例２．２．Ｂ：ハイブリドーマの形成
組織破砕機を用い、実施例２．２．Ａに従って得た鼠径リンパ節および腰リンパ節の機械的撹乱によってリンパ球を放出させ、ＣＤ９０陰性選択によってＴ細胞枯渇とした。洗浄した豊富化Ｂ細胞およびＡＴＣＣから購入した非分泌性骨髄腫Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３細胞（カタログ番号ＣＲＬ１５８０；Ｋｅａｒｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２３，１９７９，１５４８−１５５０）を１：１の比率で混合することで、ハイブリドーマ融合を行った。細胞混合物について、８００ｇでの遠心によって温和なペレット化を行った。上清を完全に除去した後、細胞を、２分以内にてプロナーゼ溶液（ＣａｌＢｉｏｃｈｅｍ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；カタログ番号５３７０２；０．５ｍｇ／ｍＬのＰＢＳ溶液）２〜４ｍＬで処理した。次に、ＦＢＳ  ３〜５ｍＬを加えて酵素活性を停止し、電気細胞融合溶液ＥＣＦＳ（０．３Ｍショ糖、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ、カタログ番号Ｓ７９０３、０．１ｍＭ酢酸マグネシウム、Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｍ２５４５、０．１ｍＭ酢酸カルシウム、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ、カタログ番号Ｃ４７０５）を用いて、得られた懸濁液を総容量４０ｍＬに調節した。遠心後に上清を除去し、細胞をＥＣＦＳ  ４０ｍＬに再懸濁させた。この洗浄段階を繰り返し、細胞を再度、細胞２×１０６個／ｍＬの濃度までＥＣＦＳに再懸濁させた。融合発生装置ＥＣＭ２００１型（Ｇｅｎｅｔｒｏｎｉｃ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いて、電気細胞融合を行った。使用した融合チャンバの大きさは２．０ｍＬであり、用いた装置設定は、アラインメント条件：電圧：５０Ｖ、時間：５０秒；膜破壊：電圧：３０００Ｖ、時間：３０秒；融合後保持時間：３秒であった。
【０１９６】
融合後、細胞を、ハイブリドーマ融合培地：０．５ＸＨＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ；カタログ番号Ａ９６６６）を含み、Ｌ−グルタミン、ペニシリン／ストレプトマイシン、ＯＰＩ（オキサロ酢酸、ピルビン酸、ウシインシュリン）（いずれもＳｉｇｍａ）およびＩＬ−６（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を補充したＤＭＥＭ（ＪＲＨ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、１５％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）に再懸濁させて、３７℃および１０％ＣＯ２／空気で培養した。細胞を、細胞４×１０４個／ウェルで平底９６ウェル組織培養プレートにて平板培養した。培養をハイブリドーマ融合培地に２週間維持してから、ハイブリドーマ培地：ＤＭＥＭ（ＪＲＨ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｌｅｎｅｘａ，ＫＳ）、１５％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ，Ｌｏｇａｎ，Ｕｔａｈ）に移し、Ｌ−グルタミン、ペニシリン／ストレプトマイシン、ＯＰＩ（オキサロ酢酸、ピルビン酸、ウシインシュリン）（いずれもＳｉｇｍａ）およびＩＬ−６（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を補充した。０．５ＸＨＡハイブリドーマ融合培地での生存によってハイブリドーマを選択し、ハイブリドーマを含むウェルからの上清について、ＥＬＩＳＡによって抗原反応性のスクリーニングを行った。このＥＬＩＳＡ様式では、抗原コーティングプレート（ヒトＩＬ−１８コーティングプレート）上での上清のインキュベーションおよび西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識マウス抗−ヒトＩｇＧを用いたヒト抗ヒトＩＬ−１８結合抗体の検出を行い、次に抗原コーティングプレート（ヒトＩＬ−１８コーティングプレート）上での上清のインキュベーションおよび西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識マウス抗−ヒトγおよびκ鎖を用いたヒト抗ヒトＩＬ−１８結合抗体の検出を行う並行した２組のＥＬＩＳＡによって全ての陽性サンプルを確認した。
【０１９７】
クローニングは、限定希釈平板培養を用いて、選択された抗原陽性ウェルで行った。単一コロニー成長の存在に関してプレートを肉眼で調べ、次に上記の抗原特異的ＥＬＩＳＡによって単一コロニーウェルからの上清のスクリーニングを行った。ルミネックス（Ｌｕｍｉｎｅｘ）装置を用いる多重ＥＬＩＳＡによって、高反応性クローンのアッセイを行って、ヒトγおよびκ鎖の純度を検証した。
【０１９８】
実施例２．２．Ｃ：ゼノマックス技術
別法として、実施例２．２．Ｂで得られたリンパ球について、ゼノマックス抗体選択技術を規定する選択的リンパ球抗体形成法（ＳＬＡＭ）を行った（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）。単一Ｂ細胞を、９６ウェルプレートで平板培養し、所望の抗原（ヒトＩＬ−１８）に対するヒトモノクローナル抗体を産生するＢ細胞を、プラーク形成細胞アッセイ（Ｂａｂｃｏｏｋ，Ｊ．Ｓ．，Ｌｅｓｌｉｅ，Ｋ．Ｂ．，Ｏｌｓｅｎ，Ｏ．Ａ．，Ｓａｌｍｏｎ，Ｒ．Ａ．，ａｎｄ  Ｓｃｈｒａｄｅｒ，Ｊ．Ｗ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｇｅｎｅｓ  ｆｒｏｍ  ｓｉｎｇｌｅ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｏｆ  ｄｅｆｉｎｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９３：７８４３−７８４８，１９９６）によって確認し、ＶＨおよびＶｋリーダー配列の５′プライマーおよびヒトＣγおよびＣκに特異的な３′プライマーを用いる単離Ｂ細胞の単一細胞ＲＴ−ＰＣＲによってＩｇＧ遺伝子をクローニングした。得られた組換えＩｇＧ遺伝子を、実施例２．２．Ｅおよび２．２．Ｇに記載の方法に従って、哺乳動物細胞で発現させた。
【０１９９】
実施例２．２．Ｄ：抗ＩＬ−１８抗体の確認
実施例２．２．Ｂおよび２．２．Ｃに従って形成したＩＬ−１８に結合した抗体を産生するハイブリドーマおよびＢ細胞を、ビオチン化ＩＬ−１８ＥＬＩＳＡを用いて特定した（実施例２．１．Ａ参照）。次いで、ＩＬ−１８に結合した抗体を含むハイブリドーマおよびＢ細胞上清について、実施例１．１．Ａに従って行うＫＧ−１バイオアッセイで、ＩＬ−１８中和能力について調べた。中和抗ＩＬ−１８抗体（ハイブリドーマおよびＳＬＡＭ手法から）を哺乳動物発現ベクターにサブクローニングし、ＣＯＳ細胞で発現させ、精製し、ＫＧ−１バイオアッセイで再度調べた（表５参照）。
【０２００】
【表５】
2011097947.tif 000019
2011097947.tif 000020
表５中の抗体の可変領域は表１に記載してある。
【０２０１】
実施例２．２．Ｅ：中和抗ＩＬ−１８ＨｕＭＡｂ類の哺乳動物発現ベクターへのサブクローニング
製造者の指示に従って、ＣＭＶプロモーターの制御下に、抗体の重鎖および軽鎖の遺伝子をｐＣＤＮＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，Ｃａ）ベクターにクローニングした。ヒトゲノムγ−２配列およびκ配列を有するこれらのプラスミドを用いて、当業界で公知の標準的な条件を用いて各クローンに相当する重鎖および軽鎖での電気穿孔法によって、ＣＯＳ細胞を同時トランスフェクションした。
【０２０２】
グルタミンを補充した血清を含まないＤＭＥＭ中で７２時間にわたり、細胞を回収、増殖および抗体分泌させた。培養上清を回収し、遠心および濾過によって清澄化し、タンパク質Ａ樹脂上に乗せた。カラムをＰＢＳで洗浄し、抗体を低ｐＨ緩衝液で溶出し、１Ｍ  Ｔｒｉｓ溶液で直ちに中和した。抗体調製物をアミコン（Ａｍｉｃｏｎ）−３０スピンフィルター上でＰＢＳで緩衝液交換した。抗体の濃度および純度を、ＯＤ２８０でのスペクトル測定およびＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析してから、ＩＬ−１８中和能力について調べた。
【０２０３】
ＣＯＳ細胞中でヒト抗体の発現レベルを高めるため、一部の抗体の重鎖および軽鎖を伸長因子プロモーターの制御下にベクターｐＥＦ−ＢＯＳ（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ，Ｓ．ａｎｄ  Ｎａｇａｔａ，Ｓ．（１９９０）  Ｎｕｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｖｏｌ  １８，１７）にサブクローニングした。
【０２０４】
簡単に述べると、重鎖可変領域のＰＣＲプライマーを、これらがＩｇＧシグナルペプチドおよびヒトＩｇＧ１定常領域の配列［野生型（配列番号２）または不活性突然変異体（配列番号３）］を含むカセットｐＥＦ−ＢＯＳプラスミドに挿入できるような形で設計した。正ＶＨＰＣＲプライマーは、シグナルペプチドのヌクレオチド配列の場合と同様に、制限部位ＮｒｕＩを含んでいた。逆ＶＨＰＣＲプライマーは、やはり操作されてγ−１Ｆｃ配列の５′末端となったＳａｌＩ制限部位を含んでいた。ＶＨＰＣＲ断片をＮｒｕＩ／ＳｓａｌＩで消化させ、ｐＥＦ−ＢＯＳヒトＩｇＧ１野生型またはｐＥＦ−ＢＯＳヒトＩｇＧ１突然変異体構築物にクローニングした。全軽鎖遺伝子を、ＨｉｎｄＩＩＩ制限消化、突出部分のＴ４ポリメラーゼ充填、それに続くＮｏｔＩ消化によってｐＣＤＮＡベクターから既存のκフォーマット中のｐＥＦ−ＢＯＳベクターに移動させた。これらの平滑／ＮｏｔＩ軽鎖断片を、Ｓｒｆ１／ＮｏｔＩ消化ｐＥＦ−ＢＯＳベクターにクローニングした。
【０２０５】
抗体のＶＨおよびＶＬ領域を、最初のハイブリドーマ系からクローニングした。ＲＮＡを抗体産生細胞から得て、上記の方法で設計したプライマー、すなわちＶＨのＮｒｕＩ／ＳａｌＩプライマーおよびＶＬのＮｒｕＩ／ＢｓｉＷＩプライマーを用いてＲＴ−ＰＣＲを行った。全長ＩｇＧ１およびκ鎖を集合させてカセットベクターとした。
【０２０６】
選択された抗体をさらに修飾した。天然抗体は、重鎖および／または軽鎖ＮＨ２末端としてグルタミン（Ｑ）またはグルタミン酸（Ｅ）のいずれかを有する。ＮＨ２末端としてＱを有する抗体の産生によって、グルタミン残基のグルタミン酸への環化によるＮＨ２末端不均一化が生じる。従って、一部の抗体におけるＮＨ２末端でのグルタミン残基が突然変異を起こしてグルタミン酸となった。Ｆｃ部分のヒンジ領域における２つの残基、すなわちロイシン２３４およびロイシン２３５も突然変異を起こして、抗体のエフェクター機能を防止した。すなわち、ロイシン２３４およびロイシン２３５をそれぞれ、標準的な分子生物学的技術を用いてアラニン残基に置き換えた（Ｌｕｎｄ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  （１９９１）  １４７：２６５７−２６６２；ウィンター（Ｗｉｎｔｅｒ）らの米国特許第５６４８２６０号；５６２４８２１号；５６２４８２１号）。これらのＦｃ変異抗体は（ｍｇ１）と称した。これらの突然変異体については、下記の実施例２．２．Ｊ６でさらに特性決定する。
【０２０７】
実施例２．２．Ｆ：特定の中和抗ＩＬ−１８抗体の特性決定
異なる生殖系列配列を有するいくつかの組換え抗ヒトＩＬ−１８抗体を哺乳動物細胞で産生させ、精製し、各種アッセイで機能的に特性決定した（表６参照）。
【０２０８】
【表６】
2011097947.tif 000021
【０２０９】
ＮＥＭ−ｃｙｓ保護ｒｈｕＩＬ−１８を用いた。
【０２１０】
括弧内の数字は、生殖系列配列に最も近い（ｃｌｏｓｅｔ）クローンからのアミノ酸における差を示す。
【０２１１】
実施例２．２．Ｇ：２．５（Ｅ）ｍｇ１を産生するＣＨＯ細胞系の形成
２．５（Ｅ）ｍｇ１抗体を発現する安定なＣＨＯ細胞系を、下記に記載の手順に従って形成した。
【０２１２】
実施例２．２．Ｇ１：発現ベクターの構築
プラスミドｐＡ５１０を、哺乳動物細胞系での抗体の高レベル発現用に構築した。このｐＵＣ１９由来プラスミドは、複製の大腸菌ＣｏｌＥ１起源およびアンピシリン抵抗性のβ−ラクタマーゼ遺伝子を含んでいた。
【０２１３】
すなわち、２．５（Ｅ）ｍｇ１抗体のＶＨおよびＶＬ領域に相当するｃＤＮＡを、標準的な分子生物学的技術を用いてクローニングし、それぞれ突然変異ヒトγ−１およびカッパ定常領域遺伝子に融合させて、天然全ヒトＩｇＧ１／カッパ抗体をコードするＤＮＡが産生されるようにした。これらのＤＮＡを発現構築物ｐＡ５１０に導入した。得られたプラスミドは、５′−ＣＭＶエンハンサー、アデノウィルス主要後期プロモーター、ヒト免疫グロブリンシグナルペプチド、２．５（Ｅ）ｍｇ１重鎖免疫グロブリン可変領域、ヒトγ−１免疫グロブリン定常領域、ＳＶ４０ポリアデニル化配列、ヒトガストリン転写終止配列、複製のＳＶ４０起源（ＳＶ４０プロモーター／エンハンサー）、マウスジヒドロ葉酸レダクターゼ配列、単純疱疹ウィルスからのチミジンキナーゼポリアデニル化配列、ＣＭＶエンハンサー、アデノウィルス主要後期プロモーター、ヒト免疫グロブリンシグナルペプチド、２．５（Ｅ）ｍｇ１軽鎖免疫グロブリン可変領域、ヒト免疫グロブリンカッパ定常領域およびＳＶ４０ポリアデニル化配列−３′という遺伝子またはその順序での調節要素の配列（ｐＵＣ１９を除く）を含んでいた。このコード領域を、抗体遺伝子転写を促進する強力なウィルスプロモーターから下流に挿入した。このベクターは、マウスＤＨＦＲ遺伝子の発現もコードしており、これはヌクレオシド非存在下での培養で成長する能力を有することで、形質転換細胞の選択が可能となった。
【０２１４】
実施例２．２．Ｇ２：発現ベクターの親細胞系へのトランスフェクション
ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子の発現が欠損している細胞系ＣＨＯＤＵＸＢ１１．（Ｕｒｌａｕｂ，Ｇ．ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ  Ｌ．Ａ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７７：４２１６−４２２０  （１９８０））を用いて、実施例２．２．Ｇ１に記載の発現ベクターのトランスフェクションを行った。ＣＨＯＤＵＸＢ１１細胞を、下記の変更を加えた当業者に公知のリン酸カルシウム沈澱法を用いてベクターでトランスフェクションした（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｖ．，Ｂｒｅｎｔ，Ｒ．，Ｍｏｏｒｅ，Ｄ．Ｍ．，Ｋｉｎｇｓｔｏｎ，Ｒ．Ｅ．，Ｓｅｉｄｍａｎ，Ｊ．Ｇ．，Ｓｍｉｔｈ，Ｊ．Ａ．，ａｎｄ  Ｋ．Ｓｔｒｕｈｌ  ｅｄｓ；Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，Ｎ．Ｙ．（１９９０））。プレートを吸引し、Ｆ１２培地９ｍＬを各プレートに加えた。プレートを３７℃で２時間インキュベートした。５０ｍＬ円錐管中、ＤＮＡ  １５０μｇを、水２．７ｍＬに溶かした。２．５Ｍ  ＣａＣｌ２  ３００μＬを加え、そのＤＮＡ混合物を１回１滴で、５０ｍＬ円錐管に入った２×Ｈｅｐｅｓ緩衝生理食塩水（ＨｅＢＳ）３ｍＬに加えた。
【０２１５】
得られた混合物を５秒間渦攪拌し、室温で２０分間インキュベートした。各プレートに１ｍＬを均等に分配し（やはりＦ１２中）、プレートを３７℃で４時間インキュベートした。インキュベーション後、プレートを吸引し、１０％ＤＭＳＯのＦ１２溶液２ｍＬを各プレートに加えた。ＤＭＳＯショックを１分間続けてから、各プレートにリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）５ｍＬを加えることでＤＭＳＯを希釈した。プレートを吸引し、ＰＢＳでさらに２回洗浄した。ヌクレオシドを含むギブコ（Ｇｉｂｃｏ）アルファＭＥＭ１０ｍＬを加え、プレートを３７℃で終夜インキュベートした。翌日、培地を５％透析ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含むぬ呉市度を含まないギブコアルファＭＥＭに変え、６時間後に細胞を下記のように９６ウェルプレートに接種した。１０ｃｍプレートからの細胞をトリプシン消化を用いて回収し、５％血清を含みヌクレオシドを含まないギブコアルファＭＥＭ総量３００ｍＬに再懸濁させた。２０個の９６ウェルプレートを、１０ｍＬ／プレート、１００Ｌ／ウェルで接種した。同じ培地１００ｍＬを残った細胞１００ｍＬに加え、さらに２０個の９６ウェルプレートを上記の方法で接種した（これは２回目の希釈であった）。９６ウェルプレートで１週間後に培地を変え、それから１週間後にも再度変えた。ヌクレオシドを含まないアルファＭＥＭ培地を用いて、ＤＨＦＲを発現する細胞、従って発現ベクターを選択した。
【０２１６】
実施例２．２．Ｇ３：２．５（Ｅ）ｍｇ１産生細胞の選択
トランスフェクションＣＨＯ細胞からの培養上清について、ヒトＩｇＧに特異的なＥＬＩＳＡを用いて分泌抗体２．５（Ｅ）ｍｇ１の存在を調べた。１組のＣＨＯトランスフェクタントについてヒト抗体の発現をスクリーニングし終わったら、追加の選択を用いて、ＣＨＯゲノムに組み込まれた発現ベクターのコピー数が増幅された細胞を単離した。増幅系の選択には、薬剤メトトレキセート（ＭＴＸ）を用いた。ＭＴＸ存在下に増殖させた培養物について、免疫グロブリンの産生能を調べた。ＭＴＸ感受性の祖先より多くの抗体を発現したＭＴＸ抵抗性系を、より高濃度のＭＴＸでの別の選択サイクルで取り、免疫グロブリン産生を調べた。ＣＨＯ細胞を発現する２．５（Ｅ）ｍｇ１を１リットルまたは１．５リットルのバイオリアクタで培養し、抗体の収量を２週間の試験で約１．０ｇ／リットルと測定した。
【０２１７】
実施例２．２．Ｈ：ＣＨＯ細胞由来２．５（Ｅ）ｍｇ１の物理化学的特性決定
ＣＨＯ由来２．５（Ｅ）ｍｇ１の予備的な物理的・化学的特性決定を行った。Ｔｈｅ２．５（Ｅ）ｍｇ１の実験的に測定した分子量は、約１４９ｋＤａであり、理論上の分子量と良好な一致があった。ペプチドマッピング技術（Ｋ  Ｂｉｅｍａｎｎ  Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９９２  ６１  ９７７−１０１０；Ｄ  Ａ．Ｌｅｗｉｓ  Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ  Ａｒｔｉｃｌｅｓ，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．１９９４，６６，５８５−５９５）を用いて、２．５（Ｅ）ｍｇ１が軽鎖および重鎖の両方に正しいＮ末端を有していることを確認した。２．５（Ｅ）ｍｇ１分子の９９％が重鎖カルボキシ末端でリジンを持たないことから、重鎖Ｃ末端の変動性は非常に小さかった。各２．５（Ｅ）ｍｇ１重鎖は、オリゴマンノースおよび複合体を有する単一のＮ連結グリコキシル化部位、０、１または２個の末端ガラクトース残基を有するフコシル化ビナテナリ（ｂｉｎａｔｅｎｎａｒｙ）構造を有していた。
【０２１８】
実施例２．２．Ｉ：ＣＨＯ細胞由来２．５（Ｅ）ｍｇ１の溶解性および安定性
精製２．５（Ｅ）ｍｇ１は、最低４週間にわたり、ｐＨ５、６および７緩衝液中にて少なくとも６２ｍｇ／ｍＬまで可溶であった。これらの緩衝液中３７℃での２．５（Ｅ）ｍｇ１を用いた加速安定性試験を行って、安定性を示すアッセイおよび至適な長期保管ｐＨを確認した。粒径排除ＨＰＬＣおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥによる分析用にサンプルを週１回の間隔で取って、凝集および断片化、Ｓ−Ｓ結合検出用のＬＣ−ＭＳ／ＭＳペプチドマッピング、抗原−ＥＬＩＳＡおよび／または活性測定のための細胞に基づくバイオアッセイおよびカチオン交換ＨＰＬＣおよび電荷不均一性測定のためのイソ−Ａｓｐ定量の試験を行った。ＳＥＣ（粒径排除クロマトグラフィー）、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびカチオン交換クロマトグラフィーによるサンプルの予備分析で、これら３つのアッセイのいずれも安定性を示すことが明らかになったことから、２．５（Ｅ）ｍｇ１は約ｐＨ６で比較的安定である。
【０２１９】
実施例２．２．Ｊ：ＣＨＯ細胞由来抗ＩＬ−１８ＨｕＭＡｂ、２．５（Ｅ）ｍｇ１の特性決定
実施例２．２．Ｊ１：ＩＬ−１８動物特異性
２．５（Ｅ）ｍｇ１がヒト、カニクイザル、マウス、ラットおよびイヌからのＩＬ−１８に結合および／または中和する能力を評価した。製造者の指示に従ったビアコアアッセイ（実施例２．１．Ｂ参照）を用いて、２．５（Ｅ）ｍｇ１が成熟ヒトＩＬ−１８に結合するが、マウスＩＬ−１８には結合しないことが明らかになった。さらに、免役沈澱データから、２．５（Ｅ）ｍｇ１がカニクイザルＩＬ−１８に結合するが（ｃｙｎｏＩＬ−１８のＩＣ５０＝９．１Ｅ×１０−１１）、イヌおよびラットのＩＬ−１８には結合しないことが明らかになった。２．５（Ｅ）ｍｇ１は、ヒトおよびカニクイザルＩＬ−１８生理活性を同様に機能的に中和したが、イヌ、ラットおよびマウスＩＬ−１８の阻害は全く認められなかった。
【０２２０】
実施例２．２．Ｊ２：ヒトサイトカイン特異性
２．５（Ｅ）ｍｇ１のＩＬ−１８に対する特異性を、製造者の指示に従ったビアコアアッセイを用いて評価した（実施例２．１．Ｂ参照）。２．５（Ｅ）ｍｇ１抗体をバイオセンサーチップで捕捉し、これが、溶液における一連の公知ヒトサイトカインに結合する能力を測定した。表７に示したように、２．５（Ｅ）ｍｇ１は組換えヒト成熟ＩＬ−１８およびプロ−ＩＬ−１８に結合した。これとは対照的に、２．５（Ｅ）ｍｇ１は、ＩＬ−１ファミリーの構成員であるＩＬ−１αおよびＩＬ−１βなどの他の調べた２３種類のヒトサイトカインのいずれにも結合しなかった。
【０２２１】
【表７】
2011097947.tif 000022
【０２２２】
ａ結合について調べた別のサイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２１、ＴＮＦ、ＬＴ、ＬＴα１β２およびＬＴα２β１などであった。
【０２２３】
２．５（Ｅ）ｍｇｌは、これらのサイトカインのいずれにも結合しなかった。
【０２２４】
システイン＞アラニン突然変異体ＢＶ由来組換えヒトＩＬ−１８
実施例２．２．Ｊ３：親和性測定
表８に、製造者の指示によるビアコアアッセイを用いて測定した２．５（Ｅ）ｍｇ１のｉｎ  ｖｉｔｒｏＩＬ−１８結合特性を示してある。２．５（Ｅ）ｍｇ１抗体は高いオン速度、低いオフ速度を有し、全体の親和性は０．１９６ｎＭであった。２つの基準ＩＬ−１８拮抗薬（１２５−２ＨおよびＩＬ−１８結合タンパク質）の動力学的速度パラメータを比較のために示している。
【０２２５】
【表８】
2011097947.tif 000023
【０２２６】
実施例２．２．Ｊ４：ｉｎ  ｖｉｔｒｏＩＬ−１８中和能力
ＫＧ−１バイオアッセイ、受容体結合アッセイ（ＲＢＡ）およびヒトＷＢＡで、２．５（Ｅ）ｍｇ１のインビトロ中和能力を求めた（実施例１．１．Ａ〜１．１．Ｃ参照）。表８に示したように、２．５（Ｅ）ｍｇ１抗体は、組換え（ＫＧ−１およびＲＢＡ）および天然ＩＬ−１８（ＷＢＡ）の両方を中和し（ＩＣ５０はＫＧ−１で＜０．５ｎＭ、ＲＢＡで＜２ｎＭおよびＷＢＡで＜５ｎＭ）、ＩＬ−１８結合親和性と一致している。
【０２２７】
【表９】
2011097947.tif 000024
【０２２８】
４〜６名の個人供血者でのヒト全血アッセイ。平均値を示している。
【０２２９】
１２５−２Ｈは、受容体結合そ阻害しないにも拘わらず、ＩＬ−１８生理活性を中和する。
【０２３０】
実施例２．２．Ｊ５：２．５（Ｅ）ｍｇ１のインビトロ中和能力
２．５（Ｅ）ｍｇ１がインビボでの炎症環境で天然ヒトＩＬ−１８誘発ＩＦＮγを中和する能力を評価するため、ヒトＰＢＭＣをマウスに注射し、細胞をインビボで刺激してヒトＩＬ−１８を産生させた重度複合免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスモデルを用いた（ＨｕＰＢＭＣ−ＳＣＩＤモデル）。結果（表９）から、２．５（Ｅ）ｍｇ１が、いずれの投与経路によっても、明瞭な用量−応答で、インビボにてヒトＩＬ−１８依存性ヒトＩＦＮγ産生を阻害することがわかった。２．５（Ｅ）ｍｇ１のＥＤ５０は、腹腔内投与または静脈投与により、それぞれ約１μｇまたは０．１μｇ／マウス（＝０．０５ｍｇ／ｋｇまたは０．００５ｍｇ／ｋｇ）であった。
【０２３１】
【表１０】
2011097947.tif 000025
【０２３２】
【表１１】
2011097947.tif 000026
【０２３３】
実施例２．２．Ｊ６：エフェクター機能
抗体のＦｃ部分は、サイトカイン誘発、抗体依存性細胞介在細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、食作用、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）ならびに抗体および抗原−抗体複合体の半減期／クリアランス速度などのいくつかの重要なエフェクター機能に介在する。場合によっては、これらのエフェクター機能は治療抗体には望ましいものであるが、治療目的によっては他の場合には不必要であったり、有害である場合もあると考えられる。ある種のヒトＩｇＧアイソタイプ、特にはＩｇＧ１およびＩｇＧ３は、それぞれＦｃγＲ類および補体Ｃ１ｑへの結合を介してＡＤＣＣおよびＣＤＣに介在する。新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）が、抗体の循環半減期を決定する必須の成分である。
【０２３４】
２．５（Ｅ）ｍｇ１でのＬ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ突然変異は、２．５（Ｅ）ｗｔｇ１と比較して２．５（Ｅ）ｍｇ１ＨｕＭＡｂの全体的な親和性や中和能力には影響しなかった（表１０）。しかしながら予想通り、これらの突然変異は、ＦｃγＲおよびＣ１ｑへの結合を消滅させた。
【０２３５】
【表１２】
2011097947.tif 000027
【０２３６】
実施例２．２．Ｊ６．１：ＦｃγＲＩ結合
ヒトＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）は、ＩｇＧ１免疫複合体（ＫＤ１Ｅ−８−１Ｅ−９Ｍ）に対して比較的高い親和性を有する。これは、単球およびマクロファージならびにＵ９３７などの多くの骨髄細胞系上で発現される。２．５（Ｅ）ｗｔｇ１および２．５（Ｅ）ｍｇ１のＵ９３７細胞への結合を、蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）によって測定した（ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ．Ｖｏｌ  （１）  ５．３．１，Ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ．ａｌ．，Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ｂｙ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，２００２）。得られたデータ（表１１参照）は、２．５（Ｅ）ｗｔｇ１がＵ９３７細胞に結合するが、予想通り、２．５（Ｅ）ｍｇ１は結合しないことを示していた。この結合にＦｃγＲＩが介在していることを確認するため、マウス抗ｈＦｃγＲＩ阻止抗体（１０．１）を用いて、競争実験を行った。得られた結果は、抗体１０．１が下記の試験濃度で用量依存的に２．５（Ｅ）ｗｔｇ１のＵ９３７細胞への結合を遮断することから、２．５（Ｅ）ｗｔｇ１がＵ９３７細胞上のＦｃγＲＩに結合することを示していた。
【０２３７】
【表１３】
2011097947.tif 000028
【０２３８】
実施例２．２．Ｊ６．２：ＦｃγＲＩＩ結合
ヒトＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）は、ＩｇＧ１免疫複合体（ＫＤ１Ｅ−５−１Ｅ−７Ｍ）に対して比較的低い結合親和性を有する。生理的条件下では、これは活性化に多重免疫複合体の形成を必要とする。ＦｃγＲＩ、ＩＩもしくはＩＩＩに特異的なフルオレセインイソチオチアネート（ＦＩＴＣ）標識抗体およびフローサイトメトリーによる検出を用いて、本発明者らは、Ｋ５６２細胞上のＦｃγＲＩＩの発現を検証し、この細胞系をＦｃγＲＩＩ結合アッセイに用いた。モノマー２．５（Ｅ）ｗｔｇ１のＫ５６２細胞への結合は非常に弱いものであった。従って、抗カッパ鎖抗体を用いてＩｇＧ１分子を予備架橋することで多重免疫複合体を模倣させ、Ｋ５６２細胞上のＦｃγＲＩＩに対するこれらの結合を調べた。架橋後、２．５（Ｅ）ｗｔｇ１はＫ５６２細胞に結合したが、架橋後であっても２．５（Ｅ）ｍｇ１が示す結合は、存在してもごくわずかであった（表１２）。抗ＦｃγＲＩＩ抗体、クローンＩＶ３は、２．５（Ｅ）ｗｔｇ１の結合を遮断したことから、２．５（Ｅ）ｗｔｇ１のＫ５６２への結合にはＦｃγＲＩＩが介在していた。
【０２３９】
【表１４】
2011097947.tif 000029
【０２４０】
実施例２．２．Ｊ６．３：Ｃ１ｑ結合
従来の経路による補体活性化および細胞溶解は、ＩｇＧ分子のＦｃ部分へのＣ１ｑの結合を介して活性化される。Ｃ１ｑの２．５（Ｅ）ｗｔｇ１および２．５（Ｅ）ｍｇ１への結合を、当業界で公知の標準的なＥＬＩＳＡ技術を用いて測定した（Ｈｅｚａｒｅｈ，Ｍ．，ｅｔ．ａｌ．，（２００１）  Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，７５  （２４）：１２１６１−１２１６８）。２．５（Ｅ）ｗｔｇ１および２．５（Ｅ）ｍｇ１ＨｕＭＡｂを、プラスチックプレート上にコーティングし、次にヒトＣ１ｑとともにインキュベートした。結合したＣ１ｑ分子を、ヤギ抗ヒトＣ１ｑおよびウサギ抗ヤギＩｇＧアルカリ性リン酸塩接合体の混合物によって検出した。結果から、２．５（Ｅ）ｗｔｇ１がＣ１ｑに結合するが、２．５（Ｅ）ｍｇ１は結合しないことが明らかになった（表１３）。
【０２４１】
【表１５】
2011097947.tif 000030
【０２４２】
実施例２．２．Ｊ６．４：新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）結合
内皮細胞でのＩｇＧと新生児Ｆｃ受容体（ブランブル受容体とも称される）との相互作用が、ＩｇＧ性質制御系およびＩｇＧ類の長い半減期の非常に重要な決定基であることが提案されている［Ｇｈｅｔｉｅ，Ｖ．，ｅｔ  ａｌ  （１９９７）  Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５：６３７−６４０］。飲細胞作用および細胞内空胞中のＦｃＲｎへの良好な結合によって取られたＩｇＧ分子は循環に戻る。ＦｃＲｎに結合しないＩｇＧ分子は分解される。
【０２４３】
ＦｃＲｎ結合におけるヒトＩｇＧの必須の残基は、ＣＨ２−ＣＨ３ドメインの接合部にマッピングされている（Ｋｉｍ  Ｊ．Ｋ．，ｅｔ  ａｌ  （１９９９）  Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９：２８１９−２８２５）。重要な点として、これらのＦｃＲｎ結合残基は、ヒトとマウスの免疫グロブリン間で保存され、ヒト免疫グロブリンがマウスＦｃＲｎに結合して、マウスでの構造活性相関試験が可能となる。
【０２４４】
Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ突然変異のＦｃＲｎ結合に対する効果を調べるため、インビトロでの野生型２．５（Ｅ）ｗｔｇ１および突然変異体２．５（Ｅ）ｍｇ１のＦｃＲｎへの結合を、ＦｃＲｎ発現ＣＨＯ細胞系を用いて測定した。２．５（Ｅ）ｗｔｇ１および２．５（Ｅ）ｍｇ１を、ｐＨ６．５でＦｃＲｎ発現ＣＨＯ細胞とともにインキュベートし、次にＦＩＴＣ接合抗ヒトＩｇＧ（２°Ａｂ）とともにインキュベートした。細胞を洗浄し、ＦＡＣＳによって分析した。
【０２４５】
５００ｎＭ濃度の２．５（Ｅ）ｍｇ１および２．５（Ｅ）ｗｔｇ１は、０．５ｎＭ濃度と比較して、ＦｃＲｎに対する有意な結合を示し、細胞単独でのバックグラウンドと類似していた。
【０２４６】
実施例２．２．Ｋ：マウスでの薬物動態
２．５（Ｅ）ｍｇ１の薬物動態（ＰＫ）をスクリーニングマウス試験で評価して、２．５（Ｅ）ｍｇ１のＦｃγＲおよびＣ１ｑへの結合を防止するために導入されたＦｃ突然変異（Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）が血清ＰＫプロファイルに悪影響を与えたか否かを決定した。マウスＦｃＲｎはマウスおよびヒトＩｇＧと同等に結合したことから、このマウスを、マウスでの構造活性相関試験における妥当な動物として使えた（Ｏｂｅｒ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ  （２００１）  Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：１５５１−１５５９）。マウスでは、２．５（Ｅ）ｍｇ１の末端半減期は１２日間と推算された。同様の試験で、他のヒトモノクローナル抗体の半減期は１０〜１４日間であった。
【０２４７】
０．２ｍｇ（１０ｍｇ／ｋｇの平均と同等）の単回静脈投与後の雌マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ、Ｃ５７ＢＬ／６ｎ）で、２．５（Ｅ）ｍｇ１の薬物動態を評価した。合計２４匹のマウスに投与を行い、３検体を各マウスから採取した。このサンプリング法を７日間に拡大した。２．５（Ｅ）ｍｇ１は、分布相とそれに続く排出相を示した。分布および排出半減期推定値は、２つのコンパートメントオープンモデルに基づいて約１．６時間および１２日間であった（表１４）。
【０２４８】
【表１６】
2011097947.tif 000031
【０２４９】
疾患モデル
実施例２．２．Ｌ：疾患モデルでの抗ＩＬ−１８抗体の効果
実施例２．２．Ｌ．１：抗ｍｕＩＬ−１８ｍＡｂによるＬＰＳ誘発ＩＦＮｇ産生の阻害
ＬＰＳ誘発ＩＦＮγ産生は、ＩＬ−１８発現に依存している（Ｇｈａｙｕｒ，Ｔ．，ｅｔ  ａｌ，１９９７．Ｎａｔｕｒｅ  ３８６：６１９−６２３）。ＬＰＳ誘発ＩＦＮγ産生アッセイを用いて、９３−１０Ｃがｉｎ  ｖｉｖｏでＩＬ−１８依存性ＬＰＳ誘発ＩＦＮγ産生を阻害する効力を測定した。マウスに対して、単回静脈投与の９３−１０Ｃ（５０μｇ）を投与した。３０分後、マウスにＬＰＳを負荷し（２０ｍｇ／ｋｇ）、４時間後に放血した。血清ＩＦＮγ力価をＥＬＩＳＡによって測定した。表１５に示したように、９３−１０ＣはＬＰＳ誘発ＩＦＮγ産生を約７０％阻害した。
【０２５０】
【表１７】
2011097947.tif 000032
【０２５１】
実施例２．２．Ｌ．２：カラギーナン誘発足浮腫の阻害
ＩＬ−１８は、炎症部位への好中球招集に関与している。カラギーナン誘発足蹠浮腫は、単球および好中球依存性の炎症モデルである。このモデルでの浮腫は、ＩＬ−１８の生理活性を中和することで大きく阻害することができる（Ｌｅｕｎｇ，Ｂ．Ｐ．，ｅｔ  ａｌ  （２００１）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：２８７９−２８８６）。マウスに１Ｃ５（４００μｇ）（林原研究所、日本）または９３−１０Ｃ（１００μｇ）（Ｍｅｄｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  （ＭＢＬ）  Ｃｏ．，Ｗａｔｅｒｔｏｗｎ，ＭＡ）または対照抗体を投与し（腹腔内投与）、次に後足の足蹠にカラギーナン（皮下注射）を注射した。カラギーナン誘発浮腫を、１日１回で２４〜９６時間にわたって測定した。１Ｃ５および９３−１０Ｃは、負荷後２４時間〜９６時間でカラギーナン誘発浮腫を有意に抑制した（約５０％阻害）（表１６）。好中球浸潤の遮断に加えて、９３−１０Ｃは、このモデルでの炎症部位でＴＮＦ発現も遮断する（Ｌｅｕｎｇ，Ｂ．Ｐ．，ｅｔ  ａｌ  （２００１）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：２８７９−２８８６）。
【０２５２】
【表１８】
2011097947.tif 000033
【０２５３】
実施例２．２．Ｌ．３：コラーゲン誘発関節炎
関節リウマチ（ＲＡ）は、関節の慢性炎症ならびに骨および関節軟骨の損失を特徴とする。ＲＡは自己免疫疾患と考えられているが、関与する自己抗原は特定されておらず、疾患の正確な病因は不明である。コラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）は、広く使用されるＲＡモデルであり、ヒト疾患と同様の組織病理的特徴を有する（Ｂｅｎｄｅｌｅ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ  （１９９９）  Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐａｔｈｏｌ．２７：１３４−１４２；Ｔｒｅｎｔｈａｍ，Ｄ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ  （１９７７）  Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１４６：８５７−８６８）。このモデルでは、遺伝的に感受性のマウスまたはラットを、完全フロイントアジュバント中、ＩＩ型コラーゲン（ＣＩＩ）で免疫化する。得られた多発性関節炎は、軟骨の破壊、骨吸収、滑膜炎および関節周囲炎を特徴とする（Ｂｅｎｄｅｌｅ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ  （１９９９）  Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐａｔｈｏｌ．２７：１３４−１４２）。ＤＢＡ／１バックグラウンド上のＩＬ−１８ＫＯマウスは、野生型マウスと比較して、ＣＩＡの発生率および重度の低下を示した（Ｗｅｉ，Ｘ．Ｑ．，ｅｔ  ａｌ  （２０００）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：５１７−５２１）。
【０２５４】
ＣＩＡの病原における内因性ＩＬ−１８の役割を調べるため、マウスＩＬ−１８を中和するウサギポリクローナルＩｇＧ（ＢＡ７７）でマウスを処理した。初回刺激時から１４日間投与した場合、ＢＡ７７は疾患の発症を遅延させ、疾患の重度に有意な低下を生じた。ＢＡ７７はまた、ＩｇＧ２ａ抗コラーゲン抗体の産生を有意に阻害した。これらの結果はＩＬ−１８ＫＯマウスについて報告のものと類似しており、初期ＣＩＡでの重要な炎症誘発性サイトカインとしてのＩＬ−１８の役割を確認するものである。
【０２５５】
ＩＬ−１８ＫＯマウスおよび抗ＩＬ−１８ＩｇＧ処理野生型マウスからのデータは、ＩＬ−１８がＣＩＩ誘発一次Ｔ細胞活性化時に重要な炎症誘発の役割を果たすことを示している。ＣＩＡ発症時のＩＬ−１８の役割についての理解を深めるため、マウスをＣＩＩで免疫化し、ラットＩｇＧまたは９３−１０Ｃによる処理を、約１４日目に起こる疾患発症の直前に開始した。９３−１０Ｃによる処理で、対照ラットＩｇＧと比較して、疾患の発症および重度に有意な遅延／低下が生じた（表１７）。これらのデータは、ＩＬ−１８がＴ細胞初回刺激だけでなく、ＣＩＩ特異的Ｔ細胞活性化後の関節炎発症応答の促進においても重要な因子であることを示している。
【０２５６】
【表１９】
2011097947.tif 000034
【０２５７】
実施例２．２．Ｌ．４：敗血症性関節炎
ＩＬ−１８は、敗血症性関節炎のマウスモデルの病因における重要な因子である。これは、ＲＡのモデルとは考えられておらず、ＲＡに関係する一部の炎症要素および病因を共有するものと考えられている。このモデルでは、生存グループＢ連鎖球菌（ＧＢＳ）を膝関節に注射することで疾患を誘発する。それに続く関節炎の重度は、ＩＬ−１０およびＩＬ−６の全身レベルおよび局所レベルの両方に相関するが、ＴＮＦには相関しない（Ｔｉｓｓｉ  Ｌ．，ｅｔ  ａｌ  （１９９９）  Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６７：４５４５−５０）。血清型ＩＶ（ＧＢＳ）注射から１２時間後という早期に関節で有意なＩＬ−１８レベルが検出され、その後５日後にピークＩＬ−１８産生となった（１Ｃ５処理で約５５０ｐｇ／ｍＬ、これに対してＩｇＧ対照で約３０ｐｇ／ｍＬ）。注射後第５日までに、血清で高ＩＬ−１８レベルが検出された（１Ｃ５処理で約１８０ｐｇ／ｍＬ、これに対してＩｇＧ対照で約２０ｐｇ／ｍＬ）。
【０２５８】
１Ｃ５をＧＢＳ投与の１時間前に注射した場合、第２日から第１０日にかけて関節病変の頻度に顕著な阻害があった（関節炎指数：１Ｃ５処理で１．０、それに対してＩｇＧで２．５）。さらに、１Ｃ５処理によって、ＩＬ−６およびＩＬ−１βなどの関節でのサイトカインレベルに有意な低下も生じた（データは示していない。）。
【０２５９】
実施例２．２．Ｌ．５：ＳＬＥ
狼瘡の最も研究されているモデルでは、重度の糸球体腎炎、自己抗体産生（抗ＤＮＡ、抗ＲＮＰなど）、脾腫、リンパ節腫脹およびある程度の関節炎および血管炎を伴う狼瘡様症候群を自然に発症するマウスの系統（ＭＲＬ／ｌｐｒおよびＮＺＢ／ＮＺＷＦ１）を用いる。腎臓の関与が通常は３〜５月齢で認められ、急速に進行し、６〜１０ヶ月までに致死的となる。両方のマウス系統について広範囲に調べられて、臨床的疾患についての知見が得られている。
【０２６０】
ＮＺＢ／ＮＺＷＦ１（Ｂ／Ｗ）マウスモデル（Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｍａｉｎｅ，ＵＳＡ）を、狼瘡様疾患進行に対する外来ＩＬ−１８の効果を評価する上での最も妥当なモデルとして選択した。Ｂ／Ｗマウスでの疾患進行の開始は、通常は７〜９月齢で認められ、腎不全の結果、１２〜１４ヶ月までに致死的となる。狼瘡の病因におけるＩＬ−１８の役割を調べるため、７月齢から開始して、Ｂ／Ｗマウスをｒ−ｍｕＩＬ−１８または媒体対照で１日１回処理した。タンパク尿の程度を測定することで、腎機能を評価した。Ｂ／Ｗマウスを５０μｇ／ｋｇのＩＬ−１８で１日１回処理することで、ＰＢＳ媒体処理群と比較して、重度タンパク尿の発症が加速された。ＩＬ−１８処理Ｂ／Ｗマウスは、死亡の加速も示した。これらの所見は、ＭＲＬ／ｌｐｒマウスについての前述の所見と一致しており、自己免疫疾患でのＩＬ−１８についての炎症誘発の役割を強調するものである。
【０２６１】
ＳＬＥのマウスモデルでのＩＬ−１８遮断の治療効果を調べるため、狼瘡性腎炎の臨床療法を再現するＢ／Ｗマウスでの誘発−維持処置プロトコールを確立した。この試験では、重度腎炎のＢ／Ｗマウスに、サイトキサンの週１回で５回の投与（誘発相）を行い、次に慢性１Ｃ５またはマウスＩｇＧ１対照（１２５−２Ｈ）処理（維持相）を行った。
【０２６２】
結果は、その後の維持処置１３０日間において、対照のＩｇＧ１１２５−２Ｈと比較して１Ｃ５がＢＷマウスの生存を有意に延長したことを示している。１２５−２Ｈは、ｍｕＩＬ−１８を認識しないマウスＩｇＧ１ｍＡｂである（Ｐ＜０．０５）。生存延長に加えて、１Ｃ５処理ＢＷマウスにおいて重度タンパク尿の発症が遅延され、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ１抗ｄｓＤＮＡの低下があった。１Ｃ５処理による抗ｄｓＤＮＡの低下は一時的であり、統計的に有意ではない。１Ｃ５に対する抗体（マウス抗マウス抗体［ＭＡＭＡ］）が検出され、その後第１３０日後に、生存の急峻な低下によって示される効力喪失ならびに抗ｄｓＤＮＡ力価低下およびタンパク尿における効果喪失があった。結論として、１Ｃ５に対する抗体応答が存在するにも拘わらず、１Ｃ５によるＩＬ−１８遮断が、Ｂ／Ｗマウスにおいて生存を延長し、重度タンパク尿の発症を遅延させ、抗ｄｓＤＮＡ力価を低下させた。これらのデータは、炎症応答促進による腎機能喪失および最終的に致死におけるＩＬ−１８の役割を示すものである。
【０２６３】
実施例２．２．Ｌ．６：多発性硬化症
実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ；ＭＳのマウスモデル）の病因に対するＩＬ−１８の寄与を調べた。再発性−緩解性ＥＡＥは、同様の疾患経過、臨床徴候およびＣＮＳ病理によるヒト疾患の妥当なモデルであると考えられている。これらの試験では、その疾患をＩＬ−１８ＫＯマウスおよびＷＴＣ５７／Ｂ１６マウスで誘発した。ＩＬ−１８ＫＯマウスは、ＷＴマウスと比較して疾患症状の発症にわずかな遅延を示し、後の時点において重度が有意に低い疾患を発症した（表１８）。免疫化後第０日から第１４にかけて、ＷＴマウスをＢＡ７７（抗マウスＩＬ−１８ＩｇＧ（２５０ｍｇ、２回／週）で処理することで、疾患症状の発症が遅延され、後の時点において疾患重度が有意に制限された（表１８）。抗ＩＬ−１８ＩｇＧの保護効果は、処置中止後であっても後の時点で認めることができた。
【０２６４】
【表２０】
2011097947.tif 000035
【０２６５】
実施例２．２．Ｌ．７：肝臓損傷
コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）誘発肝臓炎症／損傷は、Ｔ細胞介在肝臓疾患の動物モデルである。ＣｏｎＡによる肝臓内Ｔ細胞の活性化によって、炎症介在物質（例：ＩＦＮγおよびＦａｓリガンド）の局所産生が生じる。Ｆａｓ−Ｆａｓリガンド相互作用によって、ＩＬ−１８の産生が生じ、これがさらにＩＦＮγ、ＦａｓリガンドおよびＴＮＦの産生を誘発する。このように、正フィードバックループが確立され、これによって肝臓の損傷が生じ、死んでいく細胞からのＡＬＴおよびＡＳＴなどの肝臓酵素の過剰産生が生じる。１Ｃ５または９３−１０ＣｍＡｂを注射（腹腔内注射）し、１時間後にＣｏｎＡ  １５０μｇを静脈投与した。ＣｏｎＡ注射から２４時間後にマウスを放血し、肝臓酵素（ＡＬＴおよびＡＳＴ）の血清力価を測定した。１Ｃ５および９３−１０Ｃのいずれも、肝臓酵素のＬＰＳ誘発上昇を遮断したが、９３−１０Ｃの方が相対的に低用量で有効であった（表１９）。
【０２６６】
【表２１】
2011097947.tif 000036
【０２６７】
実施例２．２．Ｌ．８：敗血症
エンドトキシンショックの重要な介在物質として、ＩＬ−１８が登場してきた。ＩＬ−１８は、エンドトキシン誘発の肺、肝臓および多臓器の不全の非常に重要な介在物質である可能性がある（Ｎｅｅｔａ，Ｍ．Ｇ．，ｅｔ  ａｌ  （２０００）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：２６４４−２６４９）。ＩＬ−１８のこの効果は、ＩＬ−１８の細胞傷害性介在物質の産生を調節する能力、ならびに生来の免疫応答を活性化し好中球を局所炎症部位に招集する能力によって決まり得る。さらに、ＬＰＳ負荷によって、ＩＦＮγ、ＴＮＦおよびＩＬ−１の血清レベル上昇が誘発され、これらのサイトカインはＬＰＳ誘発の致死に寄与する可能性がある。ＬＰＳを負荷させたＩＬ−１８ノックアウトマウスはＬＰＳ誘発ＩＦＮγ欠乏であり、ＷＴマウスと比較してＴＮＦおよびＩＬ−１の産生が有意に低い（Ｔａｋｅｄａ，Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９８）  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ８：３８３−３９０）。
【０２６８】
ＬＰＳ誘発致死実験を、下記の方法に従って実施した。動物を第０日に秤量し、投与すべき適切な用量を決定した。Ｔ＝−１時間で、動物に０．９％生理食塩水（５００μＬ）溶液で抗−ＩＬ−１８抗体または対照抗体を腹腔内投与（ＩＰ）で注射した。Ｔ＝０で、動物に０．９％生理食塩水１００μＬ中２０ｍｇ／ｋｇのリポ多糖（ＬＰＳ）（大腸菌血清型０１１１：Ｂ４、シグマ（Ｓｉｇｍａ）カタログ番号：Ｌ−４１３０、ロット番号：７１Ｋ４１１０）を静脈投与（ＩＶ）で注射した。４時間後、心臓穿刺によって動物から採血を行った。血清ｍｕＩＦＮγ力価を、ｍｕＩＦＮγＥＬＩＳＡによって測定した（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）。
【０２６９】
抗ｍｕＩＬ−１８ｍＡｂ、１Ｃ５または９３−１０Ｃで処理したＷＴマウスは、ＬＰＳ誘発致死から保護された（表２０）（１２５−２Ｈは１Ｃ５と同じ不活性アイソタイプを有するが、対照として用いられるｍｕＩＬ−１８には結合しない）。さらに、抗ＩＬ−１８ＩｇＧ処理マウスは、ＬＰＳ負荷後の肺および肝臓損傷を低下させることが報告されており、これは好中球蓄積の低下と相関していた（Ｎｅｅｔａ，Ｍ．Ｇ．，ｅｔ  ａｌ  （２０００）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：２６４４−２６４９）。
【０２７０】
【表２２】
2011097947.tif 000037
【０２７１】
実施例２．２．Ｍ：２．５（Ｅ）Ｆａｂ断片の結晶化
本発明の抗体が結晶化し得ることで、結晶化抗体を含む製剤および組成物を得ることが可能であることを示すため、下記の実験を行った。
【０２７２】
実施例２．２．Ｍ．１：２．５（Ｅ）抗体Ｆａｂ断片の取得および精製
２．５（Ｅ）ヒトＩｇＧを、ＳＲ−２８６培地にてＣＨＯ細胞で発現させた。溶解後の上清を０．５ミクロンフィルターで濾過し、タンパク質Ａ緩衝液Ａ（１×ＰＢＳ）で平衡としておいたタンパク質Ａカラムに乗せた。次に、ＩｇＧをタンパク質Ａ緩衝液Ｂ（０．１Ｍ  酢酸Ｎａ（ｐＨ３．５）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ）で溶離した。蓄積したＩｇＧを２０ｍｇ／ｍＬまで濃縮し、５０％パパインゲルスラリーと混和し、高攪拌下に３７℃で２４時間インキュベートした。得られた抗体／スラリー混合物を、４℃で終夜にわたり、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ７．０）に対して透析して、緩衝液からシステインを除去した。２５ｍＬタンパク質Ａセファロース４ファストフロー（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ４  Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗ）アフィニティカラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を、緩衝液Ａ（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  （ｐＨ７．０））１００ｍＬで洗浄することで準備した。透析上清を、そのアフィニティカラムに流した（流量２ｍＬ／分）。２．５（Ｅ）Ｆａｂ分画（２８０ｎｍでのＵＶ吸光度によってモニタリング）をフロースルー（ｆｌｏｗ−ｔｈｒｕ）で回収した。２．５（Ｅ）Ｆａｂ濃度が０．３ｍｇ／ｍＬより高い（２８０ｎｍでのＵＶ吸光度によって測定）分画を集め、ウルトラフリー−１５バイオマックス（Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ−１５  Ｂｉｏｍａｘ）１０ｋＤａ分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）遠心フィルター装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて濃縮して約２０ｍｇ／ｍＬとし、−８０℃で冷凍した。その濃縮サンプルを、下記の結晶学実験で用いた。サンプル純度をＳＤＳ−ＰＡＧＥで評価した。
【０２７３】
実施例２．２．Ｍ．２：２．５（Ｅ）Ｆａｂ断片の結晶化
凍結２．５（Ｅ）Ｆａｂ原液（約２０ｍｇ／ｍＬ）を氷上で解凍した。Ｆａｂ（２μＬ）を２５〜３０％ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）４００、１００ｍＭ  ＣＡＰＳ（ｐＨ１０．５）からなる貯留液２μＬと混合し、約４℃でシリコン処理カバーグラス片の下側にある貯留部上に懸濁させた。棒状結晶が１日以内に現れた。その棒状結晶は、２．５（Ｅ）Ｆａｂ断片結晶であることを確認した（データは示していない）。
【０２７４】
実施例３：ＩＬ−１８応答遺伝子
実施例３．１：材料および方法
実施例４を通じて、別段の断りがない限り、下記の材料および方法を用いる。
【０２７５】
実施例３．１．Ａ：細胞処理およびＲＮＡ取得
実施例３．１．Ａ．１：ＫＧ−１細胞
約３．０×１０７のＫＧ１細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−２４６）を、４つの処理群での各実験条件に用いた。第１の群では、１０ｍｇ／ｍＬのシクロヘキシミドとともに３０分間の前インキュベーションを行った場合と行わない場合で、５０ｎｇ／ｍＬの組み換えＩＬ１８で細胞を処理した。３０分後または２時間後に、細胞についてＲＮＡの回収を行った。第２の群では、１０ｍｇ／ｍＬのシクロヘキシミドとともに３０分間の前インキュベーションを行った場合と行わない場合で、０、０．５、２．０、１０または５０ｎｇ／ｍＬの組換えＩＬ１８で細胞を処理した。２時間後に、細胞についてＲＮＡの回収を行った。第３の群では、０または１０ｎｇ／ｍＬのＴＮＦで細胞を処理した。終夜インキュベーション後、１０ｍｇ／ｍＬのシクロヘキシミドとともに３０分間の前インキュベーションを行った場合と行わない場合で、０、０．５、２．０、１０または５０ｎｇ／ｍＬの組換えＩＬ１８で細胞を処理した。２時間後に、細胞についてＲＮＡの回収を行った。最後の処理群では、１０ｍｇ／ｍＬのシクロヘキシミドとともに３０分間の前インキュベーションを行った場合と行わない場合で、０または１０ｎｇ／ｍＬのＴＮＦおよび０もしくは２．０ｎｇ／ｍＬの組換えＩＬ１８で細胞を同時に処理した。２時間後に、細胞についてＲＮＡの回収を行った。
【０２７６】
総ＲＮＡを、ＴＲＩＺＯＬ試薬（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を用いて得た。製造者のプロトコールに従って初期相分離を行い、次に半容量のフェノール：クロロホルム：イソアミルアルコール（２５：２４：１、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅｍ，ＭＤ）を用いてさらに抽出した。ＲＮＡ沈澱および洗浄を、製造者のＴＲＩＺＯＬプロトコール説明書に従って行った。ＲＮＡ約３μｇを、１．０％アガロース／ホルムアルデヒド変性ゲル上で電気泳動して、品質を評価した。
【０２７７】
ＴＮＦ前インキュベーションを必要とする実験の場合、ＫＧ−１細胞を２ｎｇ／ｍＬのＴＮＨＦとともに１２時間インキュベーションしてから、２、１０または４０ｎｇ／ｍＬのＩＬ１８による刺激を行った。ＲＮＡは上記の方法に従って得た。
【０２７８】
実施例３．１．Ａ．２：ヒト全血アッセイ
ヒト全血２．５ｍＬを１５ｍＬ円錐管に小分けして入れ、ＩＬ１８、ＩＬ１２、ＩＬ１８＋ＩＬ１２、ＩＬ１８＋ＩＬ１２＋抗ＩＬ１８またはＩＬ１８＋１Ｌ１２、ＩＬ１８＋１Ｌ１２＋対照抗体で処理した。最終濃度は、ＩＬ１２（５００ｐｇ／ｍＬ）、ＩＬ１８（ＹＫ２７−１）（５０ｎｇ／ｍＬ）、ｍＩｇＧ（５μｇ／ｍＬ）、抗ＩＬ１８１２５２Ｈ（５μｇ／ｍＬ）および抗ＩＬ１８２．５（４μｇ／ｍＬ）であった。間歇的な反転を温和に行いながら、混合物を３７℃で４時間インキュベートした。インキュベーション後、１×溶解緩衝液（Ｄｅｐｃで１：１０希釈したファーム・ライス（Ｐｈａｒｍ  Ｌｙｓｅ）塩化アンモニウム溶解試薬）５ｍＬを加えることで、塩化アンモニウムを用いて赤血球を除去した。氷上で５分後、混合物を１２００ｒｐｍで５分間遠心した。その手順を１回繰り返して、血液白血球の白色ペレットを得た。次に、上記のトリゾール（Ｔｒｉｚｏｌ）手順を用いて、ＲＮＡを単離した。微量アッセイ分析のため、全てのサンプル容量を４倍に増やした。
【０２７９】
実施例３．１．Ｂ：プローブの準備および標的ハイブリダイゼーション
総ＲＮＡ  １０μｇおよびｃＤＮＡ合成用スーパースクリプト（ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ）選択システム（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を用いて、二本鎖ｃＤＮＡを合成した。この合成はアフィメトリクス（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ，Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｌａ，ＣＡ）のプロトコールに従って行い、このプロトコールではキットを設けたオリゴ（ｄＴ）またはランダムプライマーに代えてＴ７−（ｄＴ）２４オリゴマープライマー（ＧＥＮＳＥＴ）と、温度調節および最初の鎖合成段階時に４２℃でのインキュベーションが必要である。得られたｃＤＮＡを、フェーズロックゲルライト（Ｐｈａｓｅ  Ｌｏｃｋ  Ｇｅｌ  Ｌｉｇｈｔ）２ｍＬ管（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  ＡＧ，Ｈａｍｂｕｒｇ，ＤＥ）で清浄化し、ペレットをＤＥＰＣ−Ｈ２Ｏ  １２μＬに懸濁させた。このｃＤＮＡ  ５μＬを、バイオアレー（ＢｉｏＡｒｒａｙ）高収量ＲＮＡ転写標識キット（Ｅｎｚｏ，Ｆａｒｍｉｎｇｄａｌｅ，ＮＹ）とともに用いて、Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼプロモーターからのｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写（ＩＶＴ）によってビオチン標識ｃＲＮＡ標的を得た。遊離ヌクレオチドを、ＲＮｅａｓｙミニカラム（ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｃｏｌｕｍｎ；Ｑｉａｇｅｎ，Ｈｉｌｄｅｎ，ＤＥ）を用いてＵＶＴ反応液から除去した。ビオチン標識ｃＲＮＡ  １５μｇを、アフィメトリクスプロトコールに従って断片化した。全断片化サンプルを、対照オリゴヌクレオチドＢ２（アフィメトリクス）５μＬ、２０×真核ハイブリダイゼーション対照（アフィメトリクス）１５μＬ、超音波処理サケ精子ＤＮＡ（１０ｍｇ／ｍＬ、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）３μＬ、アセチル化ＢＳＡ（５０ｍｇ／ｍＬ、Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）３μＬ、２×ＭＥＳハイブリダイゼーション緩衝液１５０μＬおよび最終容量３００μＬまでの水と合わせた。アフィメトリクスプロトコールに従って、ジーンチップ（Ｇｅｎｅｃｈｉｐ）ＨｕＧｅｎｅＦＬアレイ（アフィメトリクス）を１×ＭＥＳで予め湿らせた。次に、ハイブリダイゼーションカクテルを加熱および遠心し、２００μＬをチップ上に乗せた。そのチップを４５℃のローティッセリー（ｒｏｔｉｓｓｅｒｉｅ）オーブン中で１６時間遠心した。
【０２８０】
実施例３．１．Ｃ：プローブアレイの洗浄、染色および走査
ハイブリダイゼーションカクテルをチップから除去し、非ストリンジェント洗浄緩衝液と置き換えた。製造者の説明（アフィメトリクス）に従ったジーンチップ・フリュイディクス・ステーション（ＧｅｎｅＣｈｉｐ  Ｆｌｕｉｄｉｃｓ  Ｓｔａｔｉｏｎ）４００に関するＥｕＫＧＥ−ＷＳ２プロトコール；ストレプトアビジン・フィコエリトリン（ＳＡＰＥ）染色溶液および抗体溶液の両方でチップの染色を行うプロトコールを用いて、チップを洗浄および染色した。全ての必要な洗浄緩衝液および染色液は、アフィメトリクスのプロトコールに従って調製した。ジーンアレイ走査装置（ＧｅｎｅＡｒｒａｙ  Ｓｃａｎｎｅｒ）（Ａｇｉｌｅｎｔ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を、ジーンチップ（ＧｅｎｅＣｈｉｐ）ソフトウェア（アフィメトリクス）とともに用いて、染色アレイの走査を行った。
【０２８１】
実施例３．１．Ｄ：データ解析
ジーンチップデータを、アフィメトリクスＭＡＳ４からマイクロソフトエクセルに送り、スポットファイア・デシジョンサイト（Ｓｐｏｔｆｉｒｅ  Ｄｅｃｉｓｉｏｎｓｉｔｅ）７．０にアップロードした。
【０２８２】
実施例３．２：ＩＬ−１８によって調節される遺伝子発現
実施例３．２．１：ＩＬ１８単独でのＫＧ１細胞における遺伝子コホートの直接調節
ＩＬ１８によって直接調節される転写物を確認するため、タンパク質合成阻害薬であるシクロヘキシミドの存在下および非存在下にＫＧ１細胞を用いて、サイトカイン力価測定実験を行った。表１には、シクロヘキシミドの存在下および非存在下における少なくとも一つの条件下に０．０５未満のｐ値で（スチュデントのｔ検定を用いて）２倍以上調節されていることが認められた６７の異なるプローブ集合（チップ上の重複性による）によって代表される６２種類の転写物のリストを示してある。これらの遺伝子は、転写因子、キナーゼおよび分泌タンパク質などの各種機能カテゴリーを有していた。これらの遺伝子はデノボタンパク質合成なしに調節されることから、それら遺伝子はＩＬ１８誘発信号伝達に直接応答する。１２の遺伝子が分泌タンパク質をコードし、１３が表面分子をコードしている（それらを使用可能な抗体標的とする）。残りの遺伝子は、核および細胞質タンパク質をコードする（表２１参照）。
【０２８３】
【表２３】
2011097947.tif 000038
2011097947.tif 000039
【０２８４】
実施例３．２．２：サイトカイン曝露履歴のＩＬ−１８に対するＫＧ−１細胞応答への影響
サイトカイン類は代表的には免疫応答時に順次現れることから、ｈＩＬ１８での処理に先だってＴＮＦとともにＫＧ−１細胞を前インキュベートする効果を調べた。この実験では、細胞のサイトカイン曝露履歴が、その後のサイトカイン曝露に対するそれの応答に影響し得るという仮説も調べた。細胞をＴＮＦ１２  ２ｎｇで処理してから、１２時間後にＩＬ１８を加え、４時間後に回収した。
【０２８５】
ＩＬ１８は、これらの条件下で約１２５種類の遺伝子の発現を調節した（表２）。この遺伝子集合を得るのに用いたふるい分け基準は、１０ｎｇ／ｍＬおよび４０ｎｇ／ｍＬでのＴＮＦによる５０％未満の変化ならびにＩＬ１８による２倍以上の変化とした。これらの遺伝子は、転写因子、キナーゼ類および分泌タンパク質などの多様な機能カテゴリーを有していた（表２２）。ここで調べた他の条件とは対照的に、本発明者らは、ＴＮＦへの曝露後にＩＬ１８によってインターフェロンγｍＲＮＡおよびタンパク質が誘発されることを認めている。
【０２８６】
【表２４】
2011097947.tif 000040
2011097947.tif 000041
2011097947.tif 000042
【０２８７】
実施例３．２．３：ＩＬ１８に対するヒト白血球応答
ＩＬ１８単独またはＩＬ１２との組み合わせに対して応答するヒト白血球（単離白血球泳動）の応答を調べた。抗ＩＬ１８モノクローナル抗体が転写応答を阻害する能力も調べた。細胞を実施例４．１に記載の方法に従って処理した。ＲＮＡを単離し、それを用いて、アフィメトリクス・ジーンチップ（Ｈｕｇｅｎｅ，ＦＬ）のプロービングを行った。結果を表２３に示してあり、その表にはＩＬ１８＋ＩＬ１２によって誘発され、抗ＩＬ１８抗体によって逆転される４９種類の転写物を挙げてある。いくつかの遺伝子が、免疫系に関連している。これら遺伝子の多くが、ＫＧ−１細胞においてＩＬ１８によっても誘発された。
【０２８８】
【表２５】
2011097947.tif 000043
【０２８９】
実施例３．２．４：ＩＬ１８に対するヒト全血応答
ヒト全血がＩＬ１８単独またはＩＬ１２との組み合わせに対して応答する応答を調べた。抗ＩＬ１８モノクローナル抗体が転写応答を阻害する能力も調べた。正常供血者血液検体を、実施例４．１に記載の方法に従って処理した。ＲＮＡを単離し、それを用いてアフィメトリクス・ジーンチップ（Ｈｕｇｅｎｅ  ＦＬ）のプロービングを行った。結果を表２４にしめしてあり、その表には、２名の健常供血者から単離した全血献体で、ＩＬ１８＋ＩＬ１２によって有意に調節され、抗ＩＬ１８抗体によって逆転された１６種類の転写物を挙げてある。いくつかの遺伝子が免疫系に関連していた。本発明者らは続いて、定量的ＰＣＲを用いて、１０名の正常供血者群でのこれら遺伝子のうちの３種類の応答も調べた。このヒト変動性試験の結果を、インターフェロンγについて表２５に、ＣＸＣＬ９について表２６に、ＣＣＬ８について表２７に示してある。この変動性試験の結果は、ヒト血液でのＩＬ１８によるこれら転写物の調節が、ヒトの間で一般的なものである可能性が高いことを示していた。
【０２９０】
【表２６】
2011097947.tif 000044
【０２９１】
【表２７】
2011097947.tif 000045
【０２９２】
【表２８】
2011097947.tif 000046
【０２９３】
【表２９】
2011097947.tif 000047
【０２９４】
実施例４：抗ＩＬ−１８ＨｕＭＡｂ、２．１３（Ｅ）ｍｇ１の特性決定
実施例４．１：ヒトサイトカイン特異性
ヒトＩＬ−１８に対する２．１３（Ｅ）ｍｇ１の特異性を、製造者の説明に従ってビアコアアッセイを用いて評価した（実施例２．１．Ｂ参照）。２．１３（Ｅ）ｍｇ１をバイオセンサーチップ上に捕捉し、それが溶液での既知のヒトサイトカイン群に結合する能力を測定した。表２８に示したように、２．１３（Ｅ）ｍｇ１は組換え成熟ヒトＩＬ−１８に結合した。しかしながら、２．１３（Ｅ）ｍｇ１はヒトプロＩＬ−１８には結合せず、さらにはＩＬ−１ファミリー構成員であるＩＬ−１αおよびＩＬ−１βなどの調べた他の２３種類のヒトサイトカインのいずれにも結合しなかった。
【０２９５】
【表３０】
2011097947.tif 000048
【０２９６】
実施例４．２：ヒトＩＬ−１８に結合する他の抗体との競合
いくつかの抗ＩＬ−１８抗体がヒトＩＬ−１８への結合について２．１３（Ｅ）ｍｇ１と競合する能力を、製造者の説明に従ってビアコアアッセイを用いて評価した（実施例２．１．Ｂ参照）。すなわち、ポリクローナル抗ヒトまたは抗マウス抗体をバイオセンサーチップ上に捕捉した。その後、抗ＩＬ−１８抗体を導入し、上記のバイオセンサーチップ上に固定化したポリクローナル抗ヒトまたは抗マウス（１２５−２Ｈの場合のみ）抗体（一次固定化抗体）によって捕捉した。次に、組換えヒトＩＬ−１８を導入し、この一次固定化抗体によって捕捉した。最後に、二次可溶性抗ＩＬ−１８抗体を導入した。このアッセイによって、二次可溶性抗ＩＬ−１８が組換えＩＬ−１８に結合し、一次抗体と競合する能力を測定した。２．１３（Ｅ）ｍｇ１は２．５（Ｅ）ｍｇ１およびＩＬ−１８ＢＰのいずれとも競合しなかった。マウス抗ｈｕＩＬ−１８モノクローナル抗体１２５−２Ｈは、ヒトＩＬ−１８に対する結合について２．１３（Ｅ）ｍｇ１と競合した。
【０２９７】
【表３１】
2011097947.tif 000049
【０２９８】
本発明は参照により、分子生物学の分野で公知の技術全体を組み込むものである。これらの技術には、下記の刊行物に記載の技術などがあるが、これらに限定されるものではない。
Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（４ｔｈ  Ｅｄ．１９９９）  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ．（ＩＳＢＮ  ０−４７１−３２９３８−Ｘ）。
Ｌｕ  ａｎｄ  Ｗｅｉｎｅｒ  ｅｄｓ．，Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（２００１）  ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  Ｐｒｅｓｓ．Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ．２９８  ｐｐ．（ＩＳＢＮ  １−８８１２９９−２１−Ｘ）。
Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ  ｅｄｓ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（２００１）  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ．７９０  ｐｐ．（ＩＳＢＮ３−５４０−４１３５４−５）。
Ｏｌｄ，Ｒ．Ｗ．＆  Ｓ．Ｂ．Ｐｒｉｍｒｏｓｅ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ：Ａｎ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｏ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（３ｄ  Ｅｄ．１９８５）  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｂｏｓｔｏｎ．Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ；Ｖ．２：４０９  ｐｐ．（ＩＳＢＮ  ０−６３２−０１３１８−４）。
Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｄ  Ｅｄ．１９８９）  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ．Ｖｏｌｓ．１−３．（ＩＳＢＮ  ０−８７９６９−３０９−６）。
Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，Ｅ．Ｌ．Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  Ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ：Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｏ  Ｇｅｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９８７）  ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，ＮＹ  （ｔｒａｎｓｌａｔｅｄ  ｂｙ  ＨｏｒｓｔＩｂｅｌｇａｕｆｔｓ）．６３４  ｐｐ．（ＩＳＢＮ０−８９５７３−６１４−４）。
【０２９９】
【表３２】
2011097947.tif 000050
2011097947.tif 000051
2011097947.tif 000052
【０３００】
以上、多くの実施形態および特徴について説明したが、本開示内容および添付の特許請求の範囲で定義される本発明から逸脱しない限りにおいて、上記で説明した実施形態および特徴の修正および変更を行うことが可能であることは、当業者には明らかであろう。本明細書で言及した各刊行物は、参照によって本明細書に組み込まれるものとする。
【配列表】
2011097947000001.app
【外国語明細書】
2011097947000001.pdf