(57)【要約】【課題】眼の急性もしくは慢性の変性状態または変性疾患から生じる網膜外縁部の障害を処置すること。【解決手段】５−ＨＴ１Ａアゴニスト活性を有する化合物を用いて、網膜外縁部の障害を処置するための組成物および方法が開示される。本発明は、網膜外縁部の障害の処置、特に：ＡＭＤ；ＲＰおよび遺伝性変性網膜疾患の他の形態；網膜剥離および涙液；黄斑の皺；網膜外縁部に影響する虚血；糖尿病網膜症；光治療（ＰＤＴ）を含むレーザー治療関連の傷害（格子、焦点、および網膜全体）；傷害；外科的（網膜転移、中隔網膜手術、または硝子体切除）網膜症または光誘導性網膜症；ならびに網膜移植物の保存に有用であることが発見された５−ＨＴ１Ａアゴニストに関連する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、眼の急性もしくは慢性の変性状態または変性疾患から生じる網膜外縁部（ｏｕｔｅｒ  ｒｅｔｉｎａ）の障害を処置するために有用な５−ＨＴ１Ａアゴニスト活性を有する化合物に関連する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
年齢に関連した黄斑変性（ＡＭＤ）は、初老の失明を引起す原因であり、発生率は６５歳の成人で約２０％、７５歳以上の個体で３７％まで増加する。非滲出性ＡＤＭは、網膜外縁部、網膜色素上皮（ＲＰＥ）、Ｂｒｕｃｈの膜および脈絡毛細管におけるドルーゼ蓄積および杆体および錐体光受容体の萎縮によって特徴付けられる；一方、滲出性ＡＭＤは、脈絡膜の新血管形成を引起す（ＧｒｅｅｎおよびＥｎｇｅｒ、Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ、１００：１５１９〜３５、１９９３；Ｇｒｅｅｎら、Ｏｐｈｔａｏｍｏｌ、９２：６１５〜２７、１９８５；ＧｒｅｅｎおよびＫｅｙ、Ｔｒａｎｓ  Ａｍ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ、Ｓｏｃ、７５：１８０〜２５４、１９７７；Ｂｒｅｓｓｌｅｒら、Ｒｅｔｉｎａ、１：１３０〜４２、１９９４；Ｓｃｈｅｉｄｅｒら、Ｒｅｔｉｎａ、１８：２４２〜５０、１９９８；ＧｒｅｅｎおよびＫｕｃｈｌｅ（１９９７）：Ｙａｎｎｕｚｚｉ、Ｌ．Ａ．、Ｆｌｏｗｅｒ，Ｒ．Ｗ．、Ｓｌａｋｔｅｒ，Ｊ．Ｓ．（編）Ｉｎｄｏｃｙａｎｉｎｅ  ｇｒｅｅｎ  ａｎｇｉｏｇｒａｐｈｙ．Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ：Ｍｏｓｂｙ、１５１〜６頁）。網膜色素変性（ＲＰ）は、錐体光受容体および下層色素上皮の二次的な萎縮を伴なう杆体の変性によって特徴付けられる遺伝性のジストロフィーのグループを示す。（Ｐｒｕｅｔｔ、Ｔｒａｎｓ  Ａｍ  Ｏｐｈｔａｌｍｏｌ  Ｓｏｃ、８１：６９３〜７３５、１９８３；Ｈｅｃｋｅｎｌｉｖｅｌｙ、Ｔｒａｎｓ  Ａｍ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｓｏｃ、８５：４３８〜４７０；Ｐａｇｏｎ、Ｓｕｒ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ、３３：１３７〜１７７、１９８８；Ｂｅｒｓｏｎ、Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ、３４：１６５９〜１６７６、１９９３；ＮｉｃｋｅｌｌｓおよびＺａｃｋ、Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  Ｇｅｎｅｔ、１７：１４５〜６５、１９９６）。ＡＭＤおよびＲＰのような網膜変性疾患の病因は、多面的であり、そして正常個体または遺伝的な素因のある個体において環境因子またはによって引起され得る。現在までに、種々の網膜外縁部変性に関連し得る１００を超える遺伝子が、マッピングまたはクローン化されている。
【０００３】
光への暴露が、ＡＭＤのような網膜変性障害の進行に寄与する因子として同定されている環境因子である（Ｙｏｎｇ、Ｓｕｒ  Ｏｐｈｔａｌ、３２：２５２〜２６９、１９８８；Ｔａｙｌｏｒら、Ａｒｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌ、１１０：９９〜１０４、１９９２；Ｃｒｕｉｃｋｓｈａｎｋら、Ａｒｃｈ  Ｏｐｈｔａｌ、１１１：５１４〜５１８、１９９３）。網膜細胞への光損傷を引起す光酸化ストレスが、以下の理由で網膜変性疾患を研究するための有用なモデルであることが示されている：損傷が、主に網膜外縁部の光受容体および網膜色素上皮（ＲＰＥ）であり、遺伝性変性疾患において影響される細胞と同一である（Ｎｏｅｌｌら、Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ、５、４５０〜４７２、１９６６；Ｂｒｉｓｓｌｅｒら、Ｓｕｒ  Ｏｐｈｔｈａｌ、３２、３７５〜４１３、１９８８；Ｃｕｒｃｉｏら、Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ、３７、１２３６〜１２４９、１９９６）；アポトーシスは、細胞死メカニズムであり、それによってＡＭＤおよびＲＰにおける光受容体細胞およびＲＰＥ細胞が失われ、そして光酸化誘発細胞傷害がそれに引き続く（Ｇｅ−Ｚｈｉら、Ｔｒａｎｓ  ＡＭ  Ｏｐｈｔｈａｌ  Ｓｏｃ，９４、４１１〜４３０、１９９６；Ａｂｌｅｒら、Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  Ｍｏｌ  Ｐａｔｈｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、９２、１７７〜１８９、１９９６；ＮｉｃｋｅｌｌｓおよびＺａｃｋ、Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  Ｇｅｎｅｔ、１７：１４５〜６５、１９９６）；光は、ＡＭＤおよびＲＰの進行についての環境的な危険因子として関係付けられてきた（Ｔａｙｌｏｒら、Ａｒｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ、１１０、９９〜１０４、１９９２；Ｎａａｓｈら、Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ、３７、７７５〜７８９、１９９６）；ならびに光酸化傷害を阻害する治療的介入はまた、遺伝的変性網膜疾患の動物モデルにおいて効果的であることが示されている（ＬａＶａｉｌら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ、８９、１１２４９〜１１２５３、１９９２；Ｆａｋｆｏｒｏｖｉｃｈら、Ｎａｔｕｒｅ、３４７、８３〜８６、１９９０；Ｆｒａｓｓｏｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．５、１１８３〜１１８７、１９９０）。
【０００４】
網膜の光酸化傷害を最小化する多数の異なる化合物のクラスが、種々の動物モデルにおいて同定されている。これらとして以下が挙げられる：アスコルビン酸のような抗酸化剤（Ｏｒｇａｎｉｓｃｉａｋら、Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ、２６：１５８９〜１５９８、１９８５）、ジメチルチオウレア（Ｏｒｇａｎｉｓｃｉａｋら、Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ、３３：１５９９〜１６０９、１９９２；Ｌａｍら、Ａｒｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌ、１０８：１７５１〜１７５２。１９９０）、α―トコフェロール（Ｋｏｚａｋｉら、Ｎｉｐｐｏｎ  Ｇａｎｋａ  Ｇａｋｋａｉ  Ｚａｓｓｉ、９８：９４８〜９５４、１９９４）およびβカロチン（Ｒａｐｐら、Ｃｕｒ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ、１５：２１９〜２３２、１９９５）；フルナリジンのようなカルシウムアンタゴニスト（Ｌｉら、Ｅｘｐ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ、５６：７１〜７８、１９９３；Ｅｄｗａｒｄら、Ａｒｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌ、１０９、５５４〜６２２、１９９２；Ｃｏｌｌｉｅｒら、Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ、３６：Ｓ５１６）；塩基性繊維芽細胞成長因子のような成長因子、脳由来の神経因子、毛様体神経栄養因子、およびインターロイキン−１−β（ＬａＶａｉｌら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ、８９、１１２４９〜１１２５３、１９９２）；メチルプレドニゾロンのようなグルココルチコイド（Ｌａｍら、Ｇｒａｅｆｅｓ  Ａｒｃｈ  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｏｐｈｔｈａｌ、２３１、７２９〜７３６、１９９３）およびデキサメタゾン（Ｆｕら、Ｅｘｐ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ、５４、５８３〜５９４、１９９２）；デスフェリオキサミンのようなイオンキレート剤（Ｌｉら、Ｃｕｒ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ、２、１３３〜１４４、１９９１）；エリプロジルおよびＭＫ−８０１のようなＮＭＤＡアンタゴニスト（Ｃｏｌｌｉｅｒら、Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ、４０：Ｓ１５９、１９９９）。
【０００５】
セロトニン作働性の５−ＨＴ１Ａ（すなわち、ブスピロン、ジプラシドン、ウラピジル）は、心配性、高血圧、統合失調症、精神病または双極性うつ病の処置について承認されているか、または販売されているかのいずれかである。５−ＨＴ１Ａアゴニストは、種々の動物モデルにおいて神経保護的であることが示されており、そして脳虚血、頭部損傷、アルツハイマー病、多発性硬化症および筋萎縮性側索硬化症を処置するために臨床において評価されている。５−ＨＴ１Ａアゴニスト、８−ＯＨ−ＤＰＡＴ（８−ヒドロキシ−２−（ジ−ｎ−プロピルアミノ）テトラリン）およびイプサピロンは、ラット巨細胞の核基底におけるＮＭＤＡ誘導興奮毒性神経障害を阻害することが示された（Ｏｏｓｔｅｒｉｎｋら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、３５８：１４７〜５２、１９９８）、Ｂａｙ−ｘ−３７０２と共に投薬すると、ラットの急性皮下血腫モデルにおける虚血性損傷を有意に減少する（Ａｌｅｓｓａｎｄｒｉら、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ、８４５：２３２〜５、１９９９）。一方、８−ＯＨ−ＤＰＡＴ、Ｂａｙ−ｘ−３７０２、ウラピジル、ジェピロンおよびＣＭ  ５７４９３は、中大脳動脈の閉塞後のラット（ＢｉｅｌｅｎｂｅｒｇおよびＢｕｒｋｈａｒｄｔ、Ｓｔｒｏｋｅ、２１（補遺）：ＩＶ１６１−３；Ｓｅｍｋｏｖａら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、３５９：２５１〜６０、１９９８；Ｐｅｒｕｃｈｅら、Ｊ  Ｎｅｕｒａｌ  Ｔｒａｎｓｍ−Ｐａｒｋ  Ｄｉｓ  Ｄｅｍｅｎｔ  Ｓｅｃｔ、８：７３〜８３、１９９４）およびマウス（Ｐｒｅｈｎら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、２０３：２１３〜２２、１９９１；Ｐｒｅｈｎら、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ、６３０：１０〜２０、１９９３）における皮質性梗塞体積を有意に減少する。さらに、ＳＲ  ５７７４６Ａ（強力な５−ＨＴ１Ａアゴニスト）を用いたラットの処置は、第４脈管の一過性全虚血、硫酸ビンクリスチン誘導性の中隔海馬損傷、アクリルアミド誘導性の末梢性ニューロパシー、および坐骨神経挫滅後に神経保護的であることが示され（Ｆｏｕｒｎｉｅｒら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、５５：６２９〜４１、１９９３）、そしてｐｍｎマウスにおける運動ニューロンの進行を遅延することが示されている（Ｆｏｕｒｎｉｒｅら、Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、１２４：８１１〜７、１９９８）。
【０００６】
このクラスの化合物は、緑内障の処置（ＩＯＰを低下および制御する）について開示されている（例えば、特許文献１（ＤｅＳａｎｔｉｓら）および特許文献２（Ｍａｎｏら）を参照のこと）。Ｏｓｂｏｒｎら（Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｉｃａ、第２１０巻：３０８〜３１４、１９９６）は、８−ヒドロキシジプロピルアミノテトラリン（８−ＯＨ−ＤＰＡＴ）（５−ＨＴ１Ａアゴニスト）が、ウサギにおけるＩＯＰを減少することを教示する。Ｗａｎｇら（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、第１６（８）巻：７６９〜７７５、１９９７年８月、およびＩＶＯＳ、第３９（４）巻、Ｓ４８８、１９９８年３月）は、５−メチルウラピジル（α１Ａアンタゴニストおよび５−ＨＴ１Ａアゴニスト）が、サルにおいてＩＯＰを低下するが、そのα１Ａレセプターの活性に起因することを開示する。また、５−ＨＴ１Ａアンタゴニスは、緑内障（亢進されたＩＯＰ）の処置に有用であることを開示される（例えば、特許文献３、ＭｃＬｅｅｓ）。さらに、ＤｅＳａｉら（特許文献４）およびＭａｃｏｒら（特許文献５）は、５−ＨＴ１および５−ＨＴ１様アゴニストの緑内障（ＩＯＰが上昇）の処置についての使用を開示する。これらの抗片頭痛化合物は、５−ＨＴ１Ｂ，Ｄ、Ｅ、Ｆアゴニスト（例えば、スマトリプタンおよびナラトリプタンならびに関連化合物）である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第９８／１８４５８号
【特許文献２】欧州特許出願公開第０７７１５６３Ａ２号明細書
【特許文献３】国際公開第９２／０３３８号
【特許文献４】国際公開第９７／３５５７９号
【特許文献５】米国特許第５，５７８，６１２号明細書
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（発明の要旨）
本発明は、網膜外縁部の障害の処置、特に：ＡＭＤ；ＲＰおよび遺伝性変性網膜疾患の他の形態；網膜剥離および涙液；黄斑の皺（ｍａｃｕｌａｒ  ｐｕｋｅｒ）；網膜外縁部に影響する虚血；糖尿病網膜症；光治療（ＰＤＴ）を含むレーザー治療関連の傷害（格子、焦点、および網膜全体（ｐａｎｒｅｔｉｎａｌ）；傷害；外科的（網膜転移、中隔網膜手術、または硝子体切除）網膜症または光誘導性網膜症；ならびに網膜移植物の保存に有用であることが発見された５−ＨＴ１Ａアゴニストに関連する。
【０００９】
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）  網膜外縁部の障害を処置するための方法であって、５−ＨＴ１Ａアゴニスト活性を有する化合物の薬学的に有効な量を投与する工程を包含する、方法。
（項目２）  項目１に記載の方法であって、ここで前記化合物が、タンドスピロン、ウラピジル、ジプラシドン、レピノタン塩酸塩、キサリプロデン塩酸塩（ＳＲ−５７７４６Ａ）、ブスピロン、フレシノキサン、ＥＭＤ−６８８４３、ＤＵ−１２７０９０、ジェピロン、アルネスピロン、ＰＮＵ−９５６６６、ＡＰ−５２１、フリバンセリン、ＭＫＣ−２４２、レソピトロン、サリゾタン塩酸塩、Ｅ−５８４２、ＳＵＮ−Ｎ４０５７、Ｏｒｇ−１３０１１、Ｏｒｇ−１２９６６および８−ＯＨ−ＤＰＡＴからなる群より選択される、方法。
（項目３）  項目１に記載の方法であって、ここで前記障害が、ＡＭＤ；ＲＰおよび遺伝的変性網膜疾患の他の形態；網膜剥離および涙液；黄斑の皺；網膜外縁部に影響する虚血；糖尿病網膜症；光力学的治療（ＰＤＴ）を含むレーザー治療（格子、焦点および網膜全体）に関連する傷害；外傷；外科的（網膜転移、網膜下手術、または硝子体切除）または光誘導性医原性網膜症；ならびに網膜移植物の保存からなる群より選択される、方法。
（項目４）  前記障害がＡＭＤである、項目３に記載の方法。
（項目５）  項目３に記載の方法であって、ここで前記化合物が、タンドスピロン、ウラピジル、ジプラシドン、レピノタン塩酸塩、キサリプロデン塩酸塩（ＳＲ−５７７４６Ａ）、ブスピロン、フレシノキサン、ＥＭＤ−６８８４３、ＤＵ−１２７０９０、ジェピロン、アルネスピロン、ＰＮＵ−９５６６６、ＡＰ−５２１、フリバンセリン、ＭＫＣ−２４２、レソピトロン、サリゾタン塩酸塩、Ｅ−５８４２、ＳＵＮ−Ｎ４０５７、Ｏｒｇ−１３０１１、Ｏｒｇ−１２９６６および８−ＯＨ−ＤＰＡＴからなる群より選択される、方法。
（項目６）  項目５に記載の方法であって、ここで前記障害が、ＡＭＤ、ＲＰ、および糖尿病網膜症からなる郡より選択される、方法。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１Ａ】図１Ａは、８−ＯＨ−ＤＰＡＴを全身に投与され、そして過酷な光酸化侵襲に曝露されたラットにおけるＥＲＧ  ａ波機能およびｂ波機能の保存を示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、８−ＯＨ−ＤＰＡＴを全身に投与され、そして過酷な光酸化侵襲に曝露されたラットにおけるＥＲＧ  ａ波機能およびｂ波機能の保存を示す。
【図２】図２は、８−ＯＨ−ＤＰＡＴを全身に投与され、そして過酷な光酸化侵襲に曝露されたラットにおける網膜の形態（受容体およびＲＰＥ）の保護を示す。
【図３】図３は、ブスピロンを全身に投与され、そして過酷な光酸化侵襲に曝露されたラットにおける網膜ＤＮＡの保護、網膜細胞数（Ａ）の測定、および網膜形態（光受容体）の完全な保護を示す。
【図４Ａ】図４Ａは、ＳＲ−５７７４６を全身に投与され、そして過酷な光酸化侵襲に曝露されたラットにおけるＥＲＧ  ａ波機能およびｂ波機能の保存を示す。
【図４Ｂ】図４Ｂは、ＳＲ−５７７４６を全身に投与され、そして過酷な光酸化侵襲に曝露されたラットにおけるＥＲＧ  ａ波機能およびｂ波機能の保存を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
（好ましい実施形態の詳細）
セロトニン作動性５−ＨＴ１Ａアゴニストは、中枢神経系への種々の侵襲の後の潜在的な神経保護剤であることが示されてきた。予想外にも、発明者らは、８−ＯＨ−ＤＰＡＴ（８−ヒドロキシ−２−（ジ−ｎ−プロピルアミノ）テトラリン）、ブスピロン、およびＳＲ−５７７４６Ａが、網膜において強力な神経保護活性を示し、そして光受容体およびＲＰＥ細胞の光誘導性アポトーシス細胞死を阻害を示すことを実証した。発明者らは、ブスピロンが、光酸化誘導性網膜症を完全に阻害し得、そして網膜のＤＮＡおよびＯＮＬの脆弱化を有意に減少し得ることを見出した。これらの化合物のいくつかの安全上の利点は、それらを急性および慢性の治療の両方について特に望ましいものとしている。このような薬剤は、種々の網膜外縁部変性疾患の処置において利用性を有する。
【００１２】
光損傷の実例において、抗酸化剤は、効果がない（αトコフェロール）かまたは高い用量でわずかに効果がある（アスコルビン酸、ビタミンＥアナログ）かのいずれかであった。同様に、いくつかのカルシウムアンタゴニスト（フルナリジン、ニカルジピン）は、中程度に効果があったが、その他（ニフェジピン、ニモジピン、ベラパミル）は、光誘導性機能変化または光誘導性形態変化を阻害するという効果はなかった。しかし、５−ＨＴ１Ａアゴニストが、これらの光損傷の実例において１００倍以上強力であり、従って、網膜外縁部の疾患を処置するために有用であることが発見された。
【００１３】
本発明は、網膜外縁部の障害を処置するための任意の薬学的に受容可能な５−ＨＴ１Ａアゴニスト（薬学的に受容可能な塩を含む）（化合物）の使用を意図する。「薬学的に受容可能な」は、網膜外縁部の疾患の処置のために安全に使用され得る化合物を意味する。本明細書中で使用される場合、網膜外縁部は、ＲＰＥ、光受容体、ミュラー細胞（これらのプロセスが網膜外縁部まで延長される範囲まで）、および外縁部網状層を含む。これらの化合物は、全身性送達または局所眼送達のために処方される。
【００１４】
網膜外縁部の疾患は、正常または遺伝的に素因の有る個体における光受容体およびＲＰＥ細胞の急性および慢性の環境的に誘導された（外傷、虚血、光酸化ストレス）変性状態を含む。これには、ＡＭＤ、ＲＰおよび遺伝的変性網膜疾患の他の形態、網膜剥離、涙液、黄斑の皺、網膜外縁部に影響する虚血、糖尿病網膜症、光線力治療法（ＰＤＴ）を含むレーザー治療関連の傷害（格子、焦点および網膜全体）、温熱療法もしくは寒冷療法、外傷、外科手術（網膜転移、網膜下外科手術、もしくは硝子体切除）または光誘導された医原性網膜症ならびに網膜移植物の保存が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１５】
本発明の化合物は、約５００ｎＭ（好ましくは１００ｎＭ未満）までのＩＣ５０を有する５−ＨＴ１Ａレセプターについての強力な親和性を有する。これらの化合物はまた、約１μＭ（好ましくは５００ｎＭ未満）までのＩＣ５０を有する完全なアゴニストまたは部分的なアゴニストのいずれかである。本発明に従う有用な、代表的な５−ＨＴ１Ａアゴニストとして以下が挙げられるが、これらに限定されない：タンドスピロン、ウラピジル、ジプラシドン、レピノタン（ｒｅｐｉｎｏｔａｎ）塩酸塩、キサリプロデン塩酸塩（ＳＲ−５７７４６Ａ）、ブスピロン、フレシノキサン、ＥＭＤ−６８８４３、ＤＵ−１２７０９０、ジェピロン、アルネスピロン、ＰＮＵ−９５６６６、ＡＰ−５２１、フリバンセリン、ＭＫＣ−２４２、レソピトロン、サリゾタン塩酸塩、Ｏｒｇ−１３０１１、Ｏｒｇ−１２９６６、Ｅ−５８４２、ＳＵＮ−Ｎ４０５７、および８−ＯＨ−ＤＰＡＴ。
【００１６】
本発明に従うレセプター結合およびアゴニスト活性は、以下の方法を使用して決定され得る。
【００１７】
（方法１）
（５−ＨＴ１Ａレセプター結合アッセイ）
５−ＨＴ１Ａ結合の研究を、（３Ｈ）８−ＯＨ  ＤＰＡＴをリガンドとして使用してチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞中で発現されたヒトクローン化レセプターを用いて行った。クローン化した５−ＨＴ１Ａレセプター（Ｂｉｏｓｉｇｎａｌ，Ｉｎｃ．、Ｍｏｎｔｒｅａｌ，ＣａｎａｄａによるＭＥＮについて製造された）を発現するチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）由来の膜を、約４０容量の５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）に５秒間ホモジェナイズした。薬物の希釈物をＢｅｃｋｍａｎ  Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００ロボット（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，ＣＡ）を使用して作製した。膜調製物、試験化合物、および０．２５ｎＭ  （３Ｈ）８−ＯＨ−ＤＰＡＴ（ＭＥＮ、Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）を共に同一の緩衝液中で２７℃、１時間インキュベーションを行った。アッセイを、０．３％のポリエチレンイミンに予め浸漬したＷｈａｔｏｍａｎ  ＧＦ／Ｂグラスファイバーでの急速吸引濾過によって終結した。結合した放射活性を、液体シンチレーションスペクトロメトリーを使用して測定した。データを非直線性曲線適合プログラム（Ｓｈａｒｉｆら、Ｊ
Ｐｈａｒｍａｃ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、５１：６８５〜６９４、１９９９）を使用して解析した。
【００１８】
リガンド結合研究をまた、子ウシの脳およびラットの脳（局所的供給源）ならびにヒト皮質膜由来の膜調製物を使用して実施し得る。特定の脳領域を、切開し、１０容量の０．３２Ｍ  スクロースにホモジェナイズし、そして７００×ｇで１０分間、遠心分離した。生じた上清を、４３、５００×ｇで１０分間遠心分離し、ペレットを、１０秒間のポリトロン処理を使用して、５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．７、２５℃）に再懸濁した。アリコートを−１４０℃で保存した。外因性のセロトニンを除去するために、調製物を実験前に１０分間３７℃でインキュベートした。アッセイインキュベーションを、Ｂｒａｎｄｅｌ細胞回収器を使用してＷｈａｔｍａｎ  ＧＦ／Ｃフィルターでの急速吸引により終結した。Ｋｉ値をＣｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆの式（Ｄｅ  Ｖｒｙら、Ｊ  Ｐｈａｒｍ
Ｅｘｐｅｒ  Ｔｈｅｒ、２８４：１０８２〜１０９４、１９９８）を使用して計算した。
【００１９】
（方法２）
（５−ＨＴ１Ａ機能アッセイ）
本発明の化合物の機能を、５−ＨＴ１Ａアゴニストの機能的活性を評価するための種々の方法を使用して決定し得た。このようなアッセイの１つを、雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット由来の海馬スライスを使用して実施し、フォルスコリン刺激アデニル化シクラーゼの阻害を測定する（Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ、４２：３６、１９９９；Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ、５６：１１１４、１９９１；Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｅｘｐｅｒ  Ｔｈｅｒ、２８４：１０８２、１９９８）。ラット海馬の膜を、２５倍容量の０．３Ｍ  スクロース（１ｍＭ  ＥＧＴＡ、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、５ｍＭ  ジチオスレイトール、および２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌを含有する）、ｐＨ７．４に２５℃でホモジェナイズした。ホモジネートを１，０００×ｇで１０分間、遠心分離した。上清を引続き３９，０００×ｇで１０分間遠心分離した。生じたペレットを、タンパク質濃度が約１ｍｇ／ｍｌのホモジェナイズ用緩衝液中に再懸濁し、そしてアリコートを−１４０℃で保存した。使用の前に、膜をＰｏｔｔｅｒ−Ｅｌｖｅｈｊｅｍホモジェナイザーで再度ホモジェナイズした。膜懸濁液の５０μｌ（５０μｇのタンパク質）を、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  酢酸マグネシウム、０．２ｍＭ  ＡＴＰ、１ｍＭ  ｃＡＭＰ、０．０１ｍＭ  ＧＴＰ、０．０１ｍＭ  フォルスコリン、８０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、５ｍＭ  リン酸クレアチン、０．８Ｕ／μｌのクレアチンホスホキナーゼ、０．１ｍＭ  ＩＢＭＸ、１〜２μＣｉ  α−［３２Ｐ］ＡＴＰを含有するインキュベーション用緩衝液に添加した。試験化合物とのインキュベーション（３０℃で１０分間）を、膜溶液のインキュベーション混合物（３０℃で５分間、予備加温）への添加によって開始した。［３２Ｐ］ｃＡＭＰをＳａｌｏｍｏｎの方法（Ａｄｖ  Ｃｙｃｌｉｃ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｒｅｓ、１０：３５〜５５、１９７９）に従って、測定した。タンパク質をＢｒａｄｆｏｒｄ（Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ、７２：２４８〜２５４、１９７６）アッセイを使用して測定した。
【００２０】
機能的活性はまた、Ｓｃｈｏｅｆｆｔｅｒらの方法（Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍ、３６：４２９〜４３７、１９９７）に従って組換えヒトレセプターで決定し得る。組換えヒト５−ＨＴ１Ａレセプターで感染したＨｅＬａ細胞を、２４ウェルのプレートでコンフルーエンスになるまで増殖させた。細胞を、Ｈｅｐｅｓ緩衝化生理食塩水（ＮａＣｌ  １３０ｍＭ、ＫＣｌ  ５．４ｍＭ、ＣａＣｌ２  １．８ｍＭ、ＭｇＳＯ４  ０．８ｍＭ、ＮａＨ２ＰＯ４  ０．９ｍＭ、グルコース  ２５ｍＭ、Ｈｅｐｅｓ  ２０ｍＭ）、ｐＨ７．４およびフェノールレッド  ５ｍｇ／ｌでリンスした。細胞を、０．５ｍＬの生理食塩水中の６μＣｉ／ｍｌの［３Ｈ］アデニン（２３Ｃｉ／ｍｍｏｌ，Ａｍｅｒｓｈａｍ、Ｒａｈｎ  ＡＧ、Ｚｕｒｉｃｈ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を用いて３７℃で２時間標識した。プレートを引続いて１ｍＭのイソブチルメチルキサンチンを含有する緩衝化生理食塩水で２回リンスした。細胞を、１０μＭ  フォルスコリンおよび試験化合物の存在または非存在下で、この溶液の１ｍｌ（３７℃）中で１５分間インキュベートした。次いで、緩衝液を除去し、そして１ｍｌの５％  トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）（０．１ｍＭ  ｃＡＭＰおよび０．１ｍＭ  ＡＴＰを含有する）をサンプルを抽出するために加えた。４℃で３０分後、ＴＣＡ抽出物を、Ｄｏｗｅｘ  ＡＧ  ５０Ｗ−Ｘ４およびアルミナカラムでクロマトグラフィー分離に供した（Ｓａｌｍｏｎ、Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ、１９５：２２〜２８、１９９１）。サイクリックＡＭＰ産生を、［３Ｈ］ｃＡＭＰ／［３Ｈ］ｃＡＭＰ＋［３Ｈ］ＡＴＰの比として計算した。
【００２１】
方法１および２に開示された上記手順を使用して、以下のデータを作成した。
【００２２】
（表１：５−ＨＴ１Ａレセプター結合および機能アッセイデータ）
【００２３】
【表１】
2011037901.tif 000002
【００２４】
一般的に、変性疾患について、本発明の５−ＨＴ１Ａアゴニストは、経口的に投与され、そしてこれらの化合物の１日の投薬量は、約０．００１〜約５００ｍｇの間の範囲である。好ましい１日の全用量は、約１〜約１００ｍｇの間の範囲である。非経口投与（例えば、硝子体内、局所的眼、経皮パッチ、皮内、非経口、眼内、結膜下、もしくは視蓋延髄（すなわちテノン内注射）、強膜貫通（イオン泳動を含む）、または徐放性生物崩壊性ポリマー（すなわちリポソーム））は、化合物の治療的に有効な量を提供するために必要な１日の全用量の調整を必要とし得る。５−ＨＴ１Ａアゴニストはまた、眼の洗浄溶液で送達され得る。濃度は、約０．００１μＭ〜約１００μＭ、好ましくは約０．０１μＭ〜約５μＭの範囲であるべきである。
【００２５】
５−ＨＴ１Ａアゴニストは、眼への送達のための種々の型の眼科的処方物に組込まれ得る（例えば、局所的、房内に、または移植物を介して）。これらは、眼科学的に受容可能な、保存剤、界面活性剤、粘度増強剤、ゲル化剤、浸透性増強剤、緩衝液、塩化ナトリウム、および水性の滅菌眼科用懸濁液もしくは溶液を形成するための水、または予備形成されたゲルもしくはインサイチュで形成されるゲルと組み合わせられ得る。眼科的溶液処方物は、生理学的に受容可能な等張性の水性緩衝液に化合物を溶解することによって調製され得る。さらに、眼科的溶液は、化合物の溶解を補助するための眼科的に受容可能な界面活性剤を含み得る。眼科的溶液は、粘性増強剤（例えば、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドンなど）を結膜嚢における処方物の保持を改善するために含み得る。滅菌眼科用軟膏処方物を調製するために、活性成分を、適切なビヒクル（例えば、鉱油、液体ラノリン、または白色ペトロラタム）中の保存剤と組合わせる。滅菌眼科用ゲル処方物を、例えば、類似する眼科用調製物について公開された処方に従って、カルボポル−９４０などとの組合せから調製された親水性塩基中に活性成分を懸濁することによって調製し得る；保存剤および張性剤を組込み得る。
【００２６】
局所的に投薬される場合、５−ＨＴ１Ａアゴニストは好ましくは、約４〜８のｐＨの局所的な眼科用懸濁液または溶液として処方される。通常、５−ＨＴ１Ａアゴニストは、０．００１重量％〜５重量％でこれらの処方物に含まれるが、好ましくは、０．０１重量％〜２重量％の量である。従って、局所的な症状について、これらの処方物の１〜２滴が、熟練した臨床医の裁量に従って１日当たり１〜４回、眼の表面に送達される。
【００２７】
以下の局所的な眼科用処方物が、本発明に従って有用であり、熟練した臨床医の裁量に従って１日あたり１〜４回投与される。
【実施例】
【００２８】
（実施例１）
【００２９】
【表２】
2011037901.tif 000003
【００３０】
（実施例２）
【００３１】
【表３】
2011037901.tif 000004
【００３２】
（実施例３）
【００３３】
【表４】
2011037901.tif 000005
【００３４】
（実施例４）
【００３５】
【表５】
2011037901.tif 000006
【００３６】
（実施例５）
【００３７】
【表６】
2011037901.tif 000007
【００３８】
（実施例６）
【００３９】
【表７】
2011037901.tif 000008
【００４０】
（方法３）
（ラットの光酸化誘導性網膜症モデルにおける神経保護効果）
これらの５−ＨＴ１Ａアゴニストの網膜保護効果を、発明者らの光酸化誘導性網膜症の実例において評価した。
【００４１】
（光化学的損傷の誘導）光化学的損傷を、暗順応させたラット（２４時間）において、青色光（２２０ｆｃ）（半振幅帯域＝４３５〜４７５ｎｍ）に６時間、曝露することによって誘導した。動物を、５日間暗所で回復させた後に、網膜機能の電気的診断評価を行った。ラットを、この光曝露の間、清潔なポリカーボネートケージに１匹で入れた。
【００４２】
（電気的診断評価）電気的網膜造影（ＥＲＧ）を、２４時間の暗順応期間後の麻酔したラットから記録した。ラットを、ケタミン−ＨＣｌ（７５ｍｇ／Ｋｇ）およびキシラジン（６ｍｇ／Ｋｇ）を有するＩＰ注射によって麻酔した。角膜に配置されたプラチナ−イリジウムワイヤーループ電極から記録されたフラッシュＥＲＧを全体野を観察することによって、引き出した。強度が漸増する一連の光のフラッシュに対する電気的応答をデジタル化し、波形および応答電圧−対数強度（ＶｌｏｇＩ）相関の一時的な特性を解析した。ＥＲＧのａ波における変化は、光受容体および網膜色素上皮損傷に関連し、一方、内側網膜に対する損傷は、ＥＲＧ  ｂ波における変化において反映される。
【００４３】
（網膜形態の評価）眼組織を、コントロールならびに薬物投与されたラットおよびビヒクル投与されたラットから得、そして２％のパラホルムアルデヒドおよび２％のグルタルアルデヒドの混合物に浸漬することによって固定した。固定された眼球を、連続して漸増するエタノール中で脱水し、ＪＢ−４プラスチック樹脂に包埋し、そして１〜１．５ミクロンの薄層切片を顕微鏡に接続した定性的コンピュータ画像解析を使用して解析した。網膜層の厚さ（網膜色素上皮、ＲＰＥ；外側核層の厚み、ＯＮＬ；内側核層の厚み、ＩＮＬ；ならびに光受容体の内側および外側セグメント、ＩＳ＋ＯＳ）を測定した。
【００４４】
（ＤＮＡ変化の評価）アルビノラットを、ＣＯ２吸引によって安楽死させ、そして個々の網膜を別々の試験管中で冷凍した。各網膜を、０．８ｍｌ（２．０Ｍ
ＮａＣｌ、５０ｍＭ  ＮａＰＯ４、ｐＨ７．４、２ｍＭ  ＥＤＴＡ）中で超音波破砕し、均一なホモジネートを得、そして凍結保存した。各サンプルのアリコート（０．１ｍｌ）を、２．０Ｍ  ＮａＣｌ、５０ｍＭ  ＮａＰＯ４（ｐＨ７．４）、２ｍＭ  ＥＤＴＡ（１．１μｇ／ｍｌビスベンズイミダゾール（Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３２５８）を含有する）で１０倍希釈した。標準曲線を、同じ緩衝液中の０〜２５μｇ／ｍｌの子ウシ胸腺ＤＮＡを使用して作成した。各網膜サンプルおよび標準の０．２ｍｌの３つのアリコートを、Ｃｙｔｏｆｌｕｏｒ  ＩＩにおける蛍光測定のために９６ウェルプレートにピペットで移した。励起波長は３６０ｎｍであり、そして放射波長は４６０ｎｍであった。
【００４５】
（被験体および投薬）雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットを、薬物実験グループおよびビヒクル実験グループにランダムに分けた。コントロールラットを、正常周期の光の曝露下でこれらのホームケージに入れた。すべてのラットを、６時間の青色光の曝露の４８、２４および０時間前に投薬した。投与は以下のとおりであった。
【００４６】
１．）８−ＯＨ−ＤＰＡＴ（８−ヒドロキシ−２−（ジ−ｎ−プロピルアミノ）テトラリン）：ビヒクル（Ｎ＝１０）または８−ＯＨ−ＤＰＡＴ（０．５ｍｇ／ｋｇ（Ｎ＝５）または１．０ｍｇ／ｋｇ（Ｎ＝１０））のいずれかを受けたラットに３回の皮内注射を与えた後、光曝露した。５匹のラットをコントロールとして使用した。網膜保護を、ＥＰＧ応答を解析することおよび網膜形態における変化を測定することにより評価した。
【００４７】
２．）ブスピロン：ＤＮＡ定量化のために、処置群あたり６匹のラットを、光曝露前にビヒクルまたはブスピロン（０．５および１ｍｇ／ｋｇ）を用いてＩＰ投薬した。７匹の正常ラットからの網膜を、コントロールとして使用した。網膜形態の変化を評価するために、ラットに、ビヒクル（Ｎ＝８）またはブスピロン（１．０ｍｇ／ｋｇ（Ｎ＝９））のいずれかを投薬（ＩＰ）した。６匹のラットをコントロールとして使用した。網膜保護を、網膜ＤＮＡにおける変化を定量することおよび網膜形態学における変化を測定することによって評価した。
【００４８】
３．）ＳＲ−５７７４６Ａ：ラットを、ビヒクル（Ｎ＝１５）またはＳＲ−５７７４６Ａ（０．５ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇ（Ｎ＝１５））で投薬（ＩＰ）した。１１匹のラットをコントロールとして使用した。ＥＲＧを５日間の回復後に解析し、その後網膜保護を評価した。
【００４９】
（８−ＯＨ−ＤＰＡＴ  評価結果）６時間の青色光曝露は、５日間の回復期の後に測定した場合に、正常と比較してＥＲＧ応答振幅（ＡＮＯＶＡ、ｐ＜０．００１；Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ  ｔ−検定、ｐ＜０．０５）の有意な減少を生じた（図１ＡおよびＢ）。青色光曝露は、コントロールと比較してビヒクル投与されたラットにおいて最大ａ波およびｂ波で７５％の減少を生じた。さらに、閾値応答はより低くそしてより明るいフラッシュ強度で励起した。
【００５０】
８−ＯＨ−ＤＰＡＴで投薬されたラットは、外縁部および内側網膜機能のこの光酸化誘導性網膜症に対する用量依存性保護を示した（図１ＡおよびＢ）。８−ＯＨ−ＤＰＡＴ（０．５ｍｇ／ｋｇ）を投薬されたラットにおける最大ａ波およびＢ波応答の振幅は、ビヒクル投薬されたラットと代わらず、そしてコントロールの振幅の約２７％であった。しかし、８−ＯＨ−ＤＰＡＴ（１．０ｍｇ／ｋｇ）を投薬されたラットからの最大ａ波およびｂ波応答の振幅は、それぞれ正常の約５３％および６１％であり、そしてビヒクル投薬ラットで測定された応答よりも有意に高かった（図１Ａおよび１Ｂ）。
【００５１】
これらのＥＲＧの変化に一致して、３週間の回復後のこれらの網膜の形態的解析は、受容体細胞の有意な（ＡＮＯＶＡ、ｐ＜０．０１）損失、光受容体内側＋外側セグメント長の短縮化、およびビヒクル投薬動物におけるＲＰＥの平坦化を実証した。ＩＮＬの厚みにおける有意な変化は検出されなかった。コントロールと比較してＯＮＬの厚みは７３％減少し、内側＋外側セグメント長は８２％減少し、そしてＲＰＥの厚みは、５９％減少した（図２）。８−ＯＨ−ＤＰＡＴ（０．５ｍｇ／ｋｇ）を投薬されたラットにおいて観察される損傷は、ビヒクル投薬されたラットで測定された損傷と有意に異ならなかった。一方、ＥＲＧは、約６３％減少し、ＯＮＬの厚みは５３％まで減少し、光受容体セグメント長は、６０％減少し、そしてＲＰＥの厚みは３４％減少した。しかし、８−ＯＨ−ＤＰＡＴ（１．０ｍｇ／ｋｇ）を投薬されたラットにおいて観察された光損傷は、ビヒクル投薬されたラットとは有意に異なった。一方、ビヒクル投薬されたラットと比較して、ＥＲＧ応答振幅は、正常よりも５０％大きく、ＯＮＬの厚みは２．４倍厚く、光受容体セグメント長は、２．９倍長く、そしてＲＰＥの厚みは１．９倍厚かった。
【００５２】
（ブスピロン評価結果）図３Ａに見られるように、ビヒクル投薬された網膜ＤＮＡレベルは、コントロールレベルから約３０％、有意に（ＡＮＯＶＡ。ｐ＝０．０１７）減少した。有意な差異は、ビヒクルまたは０．１ｍｇ／ｋｇのブスピロンで投薬されたグループ間で測定されなかった。網膜保護は、ブスピロン（１ｍｇ／ｋｇ）を投薬されたラットで測定された。網膜ＤＮＡレベルは、ビヒクル投薬ラットで測定されたよりも顕著に高かったが、コントロールとは有意な差異がなかった。
【００５３】
６時間の青色光への曝露は、光受容体の数において顕著な減少を生じた（ＡＮＯＶＡ、ｐ＜０．０５）。４週間の回復期後のこれらの網膜の形態学的解析は、コントロールと比較してビヒクル投薬されたラットにおいて、外側の明瞭でない層の５４％の薄弱化を示した（図３Ｂ）。しかし、ＯＮＬの厚みにおける有意な差異は、正常ラットおよびブスピロン処置したラット間で測定されなかった。ブスピロン（１ｍｇ／ｋｇ）を投薬されたラットにおいて、ＯＮＬの厚みは、正常ラットの３０．４μと比較して２８．３μであった。
【００５４】
（ＳＲ−５７７４６Ａ評価結果）網膜機能の有意な保護が、光に曝露されたラット（ＳＲ−５７７４６Ａ（０．５および１．０ｍｇ／ｋｇ）を投薬された）において測定された。コントロールと比較して、最大ａ波およびｂ波応答の振幅は、ビヒクル投薬されたラットにおいて５０％まで減少した（図４ＡおよびＢ）。最大応答はＳＲ−５７７４６Ａ（０．５ｍｇ／ｋｇ）を投薬されたラットにおけるコントロールラットの８２％であり、１ｍｇ／ｋｇを投与されたラットにおける正常ラットの７０％であった。
【００５５】
（結論）これらの５−ＨＴ１Ａアゴニスト（８−ＯＨ−ＤＰＡＴ、ブスピロンおよびＳＲ−５７７４６Ａ）は、網膜変性疾患のこの酸化モデルにおける良好な能力および有効性を示した。機能的保護および構造的保護が、１ｍｇ／ｋｇという低い用量を３日間連続して投薬されたラットにおいて達成された。
【図１Ａ】
2011037901.tif 000009
【図１Ｂ】
2011037901.tif 000010
【図２】
2011037901.tif 000011
【図３】
2011037901.tif 000012
【図４Ａ】
2011037901.tif 000013
【図４Ｂ】
2011037901.tif 000014