(57)【要約】【課題】有効成分が単体であり保存安定性が高く、皮膚の乾燥に伴う肌荒れや保湿、肌のはりの向上、肌のバリア機能の低下の予防又は改善などの作用に関与するアクアポリン３の産生を促進する優れたアクアポリン３産生促進剤の提供。【解決手段】グリチルリチン酸ジカリウムを有効成分として含有するアクアポリン３産生促進剤である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
グリチルリチン酸ジカリウムを有効成分として含有することを特徴とするアクアポリン３産生促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アクアポリン３産生促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚細胞では、水チャンネルとして知られるアクアポリン（ａｑｕａｐｏｒｉｎ：ＡＱＰ）が細胞膜上に発現して、細胞間隙の水をはじめとする低分子物質を細胞内へ取り込む役割を担っていることが知られている。ヒトでは、１３種類のアクアポリン（ＡＱＰ０〜ＡＱＰ１２）の存在が知られている。表皮細胞においては、主としてＡＱＰ３が存在しており、水に加えて、水分保持作用に関与するグリセロールや尿素等の低分子化合物をも取り込む役割を担っていると考えられている。
【０００３】
ＡＱＰ３遺伝子欠損マウスの皮膚では、角層水分量、皮膚粘弾性、バリア機能回復の低下が認められ、アクアポリン３が皮膚物性及び皮膚生理機能に深く関与していることが示されている（非特許文献１参照）。したがって、アクアポリンの産生を促進することにより、皮膚の乾燥を抑え、はりを整え、バリア機能を強化することが期待できる。
【０００４】
しかし、アクアポリン３は加齢とともに減少し、このことが水分保持機能の低下の一因であることが示唆されていることから、アクアポリン３の発現を促進することにより、加齢による水分保持能やバリア機能等を制御することが可能であると考えられる（非特許文献２参照）。
【０００５】
このような考えに基づき、アクアポリン３発現促進作用を有するものとして、例えば、ノウゼンハレン科植物、金不換、ヒメハギ、小花遠志、アスパラサスリネアリス、コガネバナ、カンゾウ、ドクダミ、チョウジ、マロニエ、マチルスオドラチシマ、ヘチマ、アヤメ科クロッカス属サフラン、バラ科のイチゴ属などの植物抽出物が知られている（特許文献１〜５参照）。
【０００６】
しかし、これらの植物抽出物のアクアポリン３の産生促進作用は十分満足できるものではない点で問題であった。
また、植物抽出物には特有のにおいや色があり、化粧料への添加には不向きであった。更に抽出物は混合物の状態であるため、抽出物中の種々の成分が反応することがあり保存安定性が悪い点でも問題であった。
【０００７】
したがって、有効成分が単体であり保存安定性が高く、皮膚の乾燥に伴う肌荒れや保湿、肌のはりの向上、肌のバリア機能の低下の予防又は改善などの作用に関与するアクアポリン３の産生を促進する優れたアクアポリン３産生促進剤の提供が望まれているのが現状である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００４−１６８７３２号公報
【特許文献２】特開２００９−４６４６５号公報
【特許文献３】特開２００９−２５６２７１号公報
【特許文献４】特開２００５−３４３８８２号公報
【特許文献５】特開２００９−２９８７６５号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｈａｒａ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，  ２００２，  ２７７（４８），  ４６６１６−２１
【非特許文献２】「フレグランスジャーナル」，  ２００６，  Ｖｏｌ．３４，  Ｎｏ．１０，  ｐ．１９−２３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、従来における前記諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、有効成分が単体であり保存安定性が高く、皮膚の乾燥に伴う肌荒れや保湿、肌のはりの向上、肌のバリア機能の低下の予防又は改善などの作用に関与するアクアポリン３の産生を促進する優れたアクアポリン３産生促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞  グリチルリチン酸ジカリウムを有効成分として含有することを特徴とするアクアポリン３産生促進剤である。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、有効成分が単体であり保存安定性が高く、皮膚の乾燥に伴う肌荒れや保湿、肌のはりの向上、肌のバリア機能の低下の予防又は改善などの作用に関与するアクアポリン３の産生を促進する優れたアクアポリン３産生促進剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
（アクアポリン３産生促進剤）
本発明のアクアポリン３産生促進剤は、グリチルリチン酸ジカリウムを有効成分として含有し、必要に応じて更にその他の成分を含有する。
【００１４】
＜グリチルリチン酸ジカリウム＞
グリチルリチン酸ジカリウムは、Ｃ４２Ｈ６０Ｋ２Ｏ１６で表される分子量８９９．１の化合物である。
グリチルリチン酸ジカリウムを入手する方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、グリチルリチン酸と、水酸化カリウム（ＫＯＨ）などとを反応させて得る方法、市販品を用いる方法などが挙げられる。
【００１５】
前記グリチルリチン酸を入手する方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、市販品を用いる方法、グリチルリチン酸を含有する植物抽出物から単離及び精製の少なくともいずれかの方法により得る方法などが挙げられる。
前記グリチルリチン酸を含有する植物抽出物は、グリチルリチン酸を含有する植物を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれであってもよい。
【００１６】
前記グリチルリチン酸を含有する植物抽出物は、植物の抽出に一般に用いられている方法によって得ることができる。グリチルリチン酸を含有する植物としては、例えば、甘草などが挙げられる。
前記甘草としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ  ｇｌａｂｒａ、Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ  ｉｎｆｌａｔａ、Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ  ｕｒａｌｅｎｓｉｓなどが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよく、２種以上を併用しもよい
【００１７】
前記抽出原料として使用し得る植物の構成部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、根部が好ましい。
前記抽出原料の大きさとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、採取したそのままの大きさ、切断した所望の大きさ、微粉（パウダー）化された大きさなどが挙げられる。
前記抽出原料として使用する植物の状態としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、採取したそのままの状態、乾燥した状態などが挙げられる。これらの中でも、乾燥した状態が好ましい。
前記乾燥した状態にする方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、天日で乾燥する方法、通常使用される乾燥機を用いて乾燥する方法などが挙げられる。
【００１８】
前記グリチルリチン酸を含有する植物抽出物は、抽出原料を乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することが好ましい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、植物の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００１９】
抽出溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、水、親水性有機溶媒等の極性溶媒が好ましい。これらは、１種単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。
前記抽出時の温度としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、室温又は溶媒の沸点以下の温度で行うことが好ましい。
【００２０】
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水などが挙げられる。また、これらの水に各種処理を施したものを用いてもよい。
水に施す処理としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化などが挙げられる。
したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水などが含まれる。
【００２１】
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられる。
【００２２】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族アルコール１容量部〜９０容量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族ケトン１容量部〜４０容量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して多価アルコール１０容量部〜９０容量部を混合することが好ましい。
【００２３】
抽出処理方法としては、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り、特に制限はなく、常法の中から目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出原料の５倍量〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液から溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られ、この濃縮物を更に乾燥すると乾燥物が得られる。
【００２４】
前記植物抽出物からグリチルリチン酸を単離及び精製のいずれかを行う方法としては、特に制限はなく、常法の中から目的に応じて適宜選択することができ、例えば、植物抽出物を、シリカゲルやアルミナ等の多孔質物質、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体やポリメタクリレート等の多孔性樹脂等を用いたカラムクロマトグラフィーに付して、水、アルコールの順で溶出させ、アルコールで溶出される画分としてグリチルリチン酸を得る方法などが挙げられる。
【００２５】
カラムクロマトグラフィーにて溶出液として使用し得るアルコールとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール又はそれらの水溶液などが挙げられる。
【００２６】
更に、カラムクロマトグラフィーにより得られたアルコール画分を、ＯＤＳを用いた逆相シリカゲルクロマトグラフィー、再結晶、液−液向流抽出、イオン交換樹脂を用いたカラムクロマトグラフィー等の任意の有機化合物精製手段を用いて精製してもよい。
【００２７】
このようにして得られるグリチルリチン酸を、常法により水酸化カリウム（ＫＯＨ）などと反応させることで、グリチルリチン酸ジカリウムを得ることができる。
【００２８】
前記アクアポリン３の産生促進剤におけるグリチルリチン酸ジカリウムの含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。また、前記アクアポリン３の産生促進剤は、グリチルリチン酸ジカリウムそのものであってもよい。
【００２９】
＜その他の成分＞
前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、エタノール、水、デンプン等の薬理学的に許容され得る担体などが挙げられる。
また、皮膚化粧料などに一般に使用される収斂剤、殺菌剤、抗菌剤、紫外線吸収剤、細胞賦活剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料などを含有してもよい。これらは、１種単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。
前記アクアポリン３の産生促進剤における、前記その他の成分の含有量としては、特に制限はなく、本発明の効果を損なわない範囲内で、目的に応じて適宜選択することができる。
【００３０】
＜用途＞
前記アクアポリン３産生促進剤は、有効成分が単体であり保存安定性が高く、皮膚の乾燥に伴う肌荒れや保湿、肌のはりの向上、肌のバリア機能の低下の予防又は改善などの作用に関与するアクアポリン３の産生を促進するため、皮膚などへの適用性が良好であり、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、アストリンゼント等の皮膚化粧料に好適に利用可能である。
【実施例】
【００３１】
以下に本発明の試験例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの試験例に何ら限定されるものではない。
【００３２】
（試験例１〜２）
グリチルリチン酸ジカリウム（丸善製薬株式会社製）を用い、以下の方法でアクアポリン３産生促進作用について試験した。
前記グリチルリチン酸ジカリウムは、正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（Ｅｐｉｌｉｆｅ−ＫＧ２、倉敷紡績株式会社製）により０．６２５μｇ／ｍＬ（試験例１）及び２．５μｇ／ｍＬ（試験例２）に調製した。
【００３３】
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（ｎｏｒｍａｌ  ｈｕｍａｎ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ；ＮＨＥＫ、倉敷紡績株式会社製）を８０ｃｍ２フラスコでＥｐｉｌｉｆｅ−ＫＧ２において、３７℃、５％ＣＯ２の条件下にて前培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。
【００３４】
回収した細胞を３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ社製）に４０×１０４細胞／２ｍＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で、Ｅｐｉｌｉｆｅ−ＫＧ２を用いて一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、Ｅｐｉｌｉｆｅ−ＫＧ２で溶解したグリチルリチン酸ジカリウム溶液（試験例１：０．６２５μｇ／ｍＬ、試験例２：２．５μｇ／ｍＬ）を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、５％ＣＯ２の条件下にて２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（Ｃａｔ．Ｎｏ．３１１−０２５０１、ニッポンジーン株式会社製）にて総ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計（日本分光株式会社製）にて測定し、２００μｇ／ｍＬになるように総ＲＮＡを調製した。
【００３５】
この総ＲＮＡを鋳型として、アクアポリン３及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、ＰＣＲ装置Ｔａｋａｒａ  ＰＣＲ  Ｔｈｅｒｍａｌ  ＣｙｃｌｅｒＭＰ（タカラバイオ株式会社製）及びリアルタイムＰＣＲ装置Ｓｍａｒｔ  Ｃｙｃｌｅｒ（Ｃｅｐｈｅｉｄ社製）を用いて、ＴａＫａＲａ  ＳＹＢＥＲ  Ｐｒｉｍｅ  Ｓｃｒｉｐｔ  ＲＴ−ＰＣＲ  ｋｉｔ（Ｐｅｒｆｅｃｔ  Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ，ｃｏｄｅ  Ｎｏ．  ＲＲ０６３Ａ）によるリアルタイム２  Ｓｔｅｐ  ＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。
アクアポリン３のｍＲＮＡの発現量は、「グリチルリチン酸ジカリウム無添加」及び「グリチルリチン酸ジカリウム添加」でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、更に「グリチルリチン酸ジカリウム無添加」の補正値を１００としたときの「グリチルリチン酸ジカリウム添加」の補正値を算出した。
【００３６】
アクアポリン３  ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
前記式において、Ａは「グリチルリチン酸ジカリウム添加時の補正値」を表し、Ｂは「グリチルリチン酸ジカリウム無添加時の補正値」を表す。
上記試験の結果を表１に示す。
【００３７】
【表１】
2011148732.tif 000002
【００３８】
表１に示すように、グリチルリチン酸ジカリウムは、優れたアクアポリン３産生促進作用を有することが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００３９】
本発明のアクアポリン３産生促進剤は、有効成分が単体であり保存安定性が高く、皮膚の乾燥に伴う肌荒れや保湿、肌のはりの向上、肌のバリア機能の低下の予防又は改善などの作用に関与するアクアポリン３の産生を促進するため、皮膚などへの適用性が良好であり、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、アストリンゼント等の皮膚化粧料に好適に利用可能である。