(57)【要約】【課題】腫瘍細胞の増殖を阻害するための組成物の提供【解決手段】腫瘍壊死因子受容体とそのリガンド、例えば、可溶性受容体又は抗―受容体抗体との結合を妨げる分子が、基本的研究において及び治療剤として、両者において有用であることを証明した。本発明は、２種の腫瘍壊死因子受容体ファミリーメンバー、すなわちトランスメンブラン活性化因子及びカルシウムモジュレーター及びシクロフィリンリガンド−相互作用体（TACI）受容体、及びB−細胞成熟（BCMA）受容体を結合する抗体を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍細胞の増殖を阻害するための組成物の製造のための、B−細胞成熟抗原（BCMA）、及びトランスメンブラン活性化因子及びカルシウム−モジュレーター及びシクロフィリンリガンド−相互作用体（TACI）の両者を結合する抗体成分の使用。
【請求項２】
前記組成物が、インビトロで培養された細胞に投与される請求項１記載の使用。
【請求項３】
前記組成物が医薬組成物であり、そして前記医薬組成物が腫瘍を有する哺乳類対象に投与される請求項１記載の使用。
【請求項４】
前記組成物が、裸のBCMA−TACI抗体である抗−BCMA−TACI抗体成分を含んで成る請求項１記載の使用。
【請求項５】
前記組成物が、裸のBCMA−TACI抗体フラグメントである抗−BCMA−TACI抗体成分を含んで成る請求項１記載の使用。
【請求項６】
前記組成物が、抗−BCMA−TACI抗体成分及び治療剤を含んで成る免疫接合体を含んで成る請求項１記載の使用。
【請求項７】
前記治療剤が、化学療法薬物、細胞毒素、イムノモジュレーター、キレート化剤、硼素化合物、光活性剤、光活性色素及び放射性同位体から成る群から選択される請求項６記載の使用。
【請求項８】
前記組成物が、抗−BCMA−TACI抗体成分及び細胞毒性ポリペプチドを含んで成る抗体融合タンパク質を含んで成る請求項１記載の使用。
【請求項９】
配列番号４のアミノ酸残基105〜116から成るポリペプチド内のエピトープに結合する抗体成分を含んで成る組成物を投与することをさらに含んで成る請求項１記載の使用。
【請求項１０】
前記抗体成分が、配列番号４のアミノ酸残基110〜118から成るポリペプチドに結合する請求項９記載の使用。
【請求項１１】
哺乳類におけるZTNF4活性を阻害するための組成物の製造のためへの抗−BCMA−TACI抗体成分の使用。
【請求項１２】
前記ZTNF4活性が、高められた内因性抗体生成に関する請求項11記載の使用。
【請求項１３】
前記ZTNF4活性が、新生物、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、移植後リンパ増殖疾患及びL鎖ガンモパシーから成る群から選択された障害に関連する請求項11記載の使用。
【請求項１４】
前記ZTNF4活性が炎症に関連し、そして前記組成物の投与が炎症を低める請求項11記載の使用。
【請求項１５】
腫瘍細胞の増殖を阻害するための医薬組成物の製造のための多特異的抗体組成物の使用であって、前記多特異的抗体組成物が、
（ａ）B−細胞成熟抗原（BCMA）の細胞外ドメインを結合する抗体成分、及び
（ｂ）トランスメンブラン活性因子及びカルシウム−モジュレーター及びシクロフィリンリガンド−相互作用体（TACT）の細胞外ドメインを結合する抗体成分、
を含んで成り、ここで前記多特異的抗体組成物の投与が前記腫瘍細胞の増殖を阻害することを特徴する使用。
【請求項１６】
前記多特異的抗体組成物が、インビトロで増殖した細胞に投与される請求項15記載の使用。
【請求項１７】
前記多特異的抗体組成物が医薬組成物であり、そして前記医薬組成物が腫瘍を有する哺乳類対象に投与される請求項15記載の使用。
【請求項１８】
前記多特異的抗体組成物が、抗−BCMA裸抗体成分及び抗−TACI裸抗体成分を含んで成る請求項15記載の使用。
【請求項１９】
前記多特異的抗体組成物が、BCMA及びTACIを結合する二特異的抗体を含んで成る請求項15記載の使用。
【請求項２０】
少なくとも１つの前記抗体成分がさらに、治療剤を含んで成る請求項15記載の使用。
【請求項２１】
前記治療剤が、化学療法薬物、細胞毒素、イムノモジュレーター、キレート化剤、硼素化合物、光活性剤、光活性色素及び放射性同位体から成る群から選択される請求項20記載の使用。
【請求項２２】
前記多特異的抗体組成物が、（ａ）細胞毒性ポリペプチドを含んで成る抗体融合タンパク質、及び（ｂ）少なくとも１つの抗−BCMA抗体成分又は抗−TACI抗体成分を含んで成る請求項15記載の使用。
【請求項２３】
前記腫瘍細胞が、リンパ腫細胞である請求項15記載の使用。
【請求項２４】
B−細胞成熟抗原（BCMA）、及びトランスメンブラン活性化因子及びカルシウム−モジュレーター及びシクロフィリンリガンド−相互作用体（TACI）の両者と特異的に結合する抗体成分。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は一般的に、腫瘍壊死因子受容体ファミリーの２種の別個のメンバーを結合できる新規抗体に関する。特に、本発明は、B−細胞成熟抗原（B-cell maturation antigen)（BCMA）及びトランスメンブラン活性化因子（transmembrane activator）(TACI）タンパク質の両者を結合する抗体、及びそのような抗体の生成方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景：
サイトカインは、多くの細胞型の増殖及び分化の調節を包含する種々の生物学的効果を仲介する可溶性の小さなタンパク質である（例えば、Araiなど., Annu. Rev. Biochem. 56: 783 (1990); Mosmann, Curr. Opin. Immunol. 3:311 (1991); Paul and Seder, Cell 76: 241 (1994) を参照のこと）。サイトカイングループを構成するタンパク質は、インターロイキン、インターフェロン、コロニー刺激因子、腫瘍壊死因子及び他の調節分子を包含する。例えば、ヒトインターロイキン−17は、インターロイキン−６、細胞内付着分子１、インターロイキン−８、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子の発現、及びプロスタグランジンE2発現を刺激し、そしてCD34+造血前駆体（hematopoietic precursor）の好中球への選択的成熟において役割を演じるサイトカインである。（Yaoなど., J. Immunol. 155: 5483 (1995); Fossiez など., J. Exp. Med. 183: 2593 (1996)）。
【０００３】
サイトカインを結合する受容体は典型的には、高い親和性でサイトカインを結合し、そしてこの結合現象を、一定の受容体サブユニットの細胞質部分を通して細胞にトランスダクションする１又は複数の膜内在性タンパク質から構成される。サイトカイン受容体は、それらの細胞外リガンド結合ドメインにおける類似性に基づいて、いくつかのクラスに分類されている。例えば、インターフェロンの結合及び/又はその効果のトランスダクションを担当する受容体鎖は、特徴的な200個の残基の細胞外ドメインに基づいて、タイプIIサイトカイン受容体ファミリーのメンバーである。
【０００４】
免疫応答の間に生じる細胞相互作用（cellulor interaction）は、いくつかの細胞表面受容体ファミリー、例えば腫瘍壊死因子受容体（TNFR）ファミリーのメンバーにより調節される。TNFRファミリーは、多くの膜内在性糖タンパク質から成り、それらの多くは、それらのそれぞれのリガンドと共に、異なった造血細胞系間での相互作用を調節する（例えば、Cosman, Stem Cells 12: 440 (1994); Wajantなど., Cytokine Cytokine Growth Factor Rev. 10:15 (1999); Yehなど., Immunol. Rev. 169: 283 (1999); Idriss and Naismith, Microsc. Res. Tech. 50: 184 (2000)を参照のこと）。
【０００５】
１つのそのような受容体は、TACI、トランスメンブラン活性化因子及びCAML相互作用体（interactor）である（von Bulow and Bram. Science 228: 138 (1997); PCT公開WO98/39361号）。TACIは、２種のシステインに富んでいる擬似反復体を含む細胞外ドメイン、トランスメンブランドメイン及びCAML（カルシウムモジュレーター及びシクロフィリンリガンド）と相互作用する細胞質ドメインを有する膜結合受容体、すなわちJurkat細胞において過剰発現される場合、NF−AT活性化の同時インジューサーである、細胞内小胞に位置する膜内在性タンパク質である。TACIは、B細胞、及びT細胞のサブセットにより会合される。TACI及びその対応するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列は、配列番号３及び４として、本明細書において提供される。
【０００６】
TACI受容体は、ZTNF4, “BAFF”、“ニュートロキン−α”、“BlyS”、“TALL−1”及び“THANK”と称する、多くのメンバーの腫瘍壊死因子（TNF）リガンドファミリーを結合する（Yuなど., 国際出願番号WO98/18921号（1998）、Mooreなど., Science 285: 269 (1999); Mukhopadhyay など., J. Biol. Chem. 274: 15978 (1999); Schneiderなど., J. Exp. Med. 189: 1747 (1999); Shuなど., J. Leukoc. Biol. 65: 680 (1999)）。ZTNF4のアミノ酸配列は、配列番号５として提供される。ZTNF4はまた、B−細胞成熟抗原（BCMA）によっても結合される（Grossなど., Nature 404: 995 (2000)）。
【０００７】
腫瘍壊死因子ファミリーのメンバーと、それらの同起源リガンド、例えば可溶性受容体及び抗−受容体抗体との間の結合を妨げる分子が、治療剤として価値があることがわかっている（例えば、Franklin, Semin, Arthritis Rheum. 29: 172 (1999); Bendeleなど., Arthritis Rheum. 43: 2648 (2000); Kjaergaardなど., Cancer Res. 60: 5514 (2000) を参照のこと）。腫瘍壊死因子受容体を結合する抗体の実証されたインビボ活性は、他のそのような抗体の臨床学的可能性、及びその必要性を例証している。
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、腫瘍壊死因子受容体ファミリーの２種のメンバーを結合し、そしてそれらの受容体、例えば受容体BCMA及びMACIへのリガンド結合を妨げる抗体を提供する。より一般的には、本発明は、腫瘍壊死因子ファミリーのリガンド（例えば、ZTNF4及びAPRIL）を結合する受容体のためのアゴニストであるか、又は腫瘍壊死因子ファミリーのリガンドを結合する受容体のアンタゴニストである抗体を提供する。本発明はまた、ZTNF4又は腫瘍壊死因子ファミリーのリガンドの作用を阻害するためへのそのような抗体の使用方法も提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は、ヒトリンパ腫細胞を注射された重症複合免疫不全（ID）マウスの生存率を示す。マウスは、RITUXAN（キメラマウス/ヒト抗−CD20抗体）、BCMAネズミモノクローナル抗体（“255.7”）、TACIネズミモノクローナル抗体（“248.24”）、BCMAモノクローナル抗体255.7及びTACIモノクローナル抗体248.24の組合せ、及び負の対照のネズミモノクローナル抗体（238.12）により処理された。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
１．概観：
ネズミモノクローナル抗体が、BCMA細胞外ドメインのフラグメントを表すポリペプチドに対して調製された。BCMAをコードするヌクレオチド配列及びその対応するアミノ酸配列は、配列番号１及び２として本明細書において提供される。初期研究においては、BCMA又はTACIのいずれかを発現する細胞に関しての蛍光−活性化された細胞分類分析は、特定のモノクローナルが両受容体タンパク質を結合したことを示した。これは、それらの２種の受容体の細胞外ドメインにより共有される低レベルのアミノ酸配列同一性の観点から予測できない結果である。BCMA又はTACIのいずれかを発現する細胞の酵素連結された免疫吸着アッセイ分析は、それらの結果を確かにした。さらに、抗体と共に、TACI又はBCMAのいずれかを発現する細胞のプレインキュベーションが、受容体とのZTNF4の続く結合を妨げたことが見出された。従って、それらの研究は、１つの抗体がBCMA又はTACIのいずれかへのZTNF4の結合を阻止することができたことを示した。
【００１１】
モノクローナル抗体において結合されるエピトープは、標準の質量分光測定アプローチを用いて試験されている（例えば、Parkerなど., J. Immunol. 157:198 (1996) を参照のこと）。それらの研究は、抗体が配列番号２のアミノ酸残基１〜48により表されるBCMAの細胞外ドメインのフラグメント、及びより特定には、配列番号２のアミノ酸残基13〜27から成る領域を結合することを示した。抗体は、配列番号４のアミノ酸残基30〜67、及び68〜154により表されるTACI細胞外ドメインの２種のフラグメントを結合する。従って、前記抗体は、BCMA及びTACIタンパク質のシステインに富んでいる領域内の構造を認識すると思われる。従って、抗原としてそれらの細胞ドメインフラグメントを用いて、BCMA及びTACIの両者のリガンド−受容体相互作用を破壊する抗体を生成することが可能である。そのような抗体は、TACI又はBCMAのいずれか、又は両受容体を発現する細胞の混合された集団を標的化するために有用である。
【００１２】
下記に記載されるように、本発明は、BCMA及びTACI受容体の両者を特異的に結合する抗体成分を提供する。そのような抗−BCMA−TACI抗体成分は、配列番号２のアミノ酸残基１〜48のアミノ酸配列又は配列番号２のアミノ酸残基13〜27のアミノ酸配列を有するポリペプチド、及び少なくとも１つの配列番号４のアミノ酸残基30〜67のアミノ酸配列を有するポリペプチド及び配列番号４のアミノ酸残基68〜154のアミノ酸配列を有するポリペプチドを結合する。
【００１３】
一定の抗−BCMA−TACI抗体成分は、（１）配列番号２のアミノ酸残基１〜48のアミノ酸配列を有するポリペプチド、又は配列番号２のアミノ酸残基13〜27のアミノ酸配列を有するポリペプチド、（２）配列番号４のアミノ酸残基30〜67のアミノ酸配列を有するポリペプチド、及び（３）配列番号４のアミノ酸残基68〜154のアミノ酸配列を有するポリペプチドを結合することができる。さらに、一定の抗−BCMA−TACI抗体成分は、少なくとも１つの配列番号４のアミノ酸残基39〜50のアミノ酸配列を有するポリペプチド、及び配列番号４のアミノ配列残基78〜91のアミノ酸配列を有するポリペプチドを結合することができる。
【００１４】
典型的な抗体成分は、ポリクローナル抗体、ネズミモノクローナル抗体、ネズミモノクローナル抗体に由来するヒト型化抗体、キメラ抗体、ヒトモノクローナル抗体、及び同様のものを包含する。抗体成分は、完全な抗体又は抗体フラグメントであり得る。例示的な抗体フラグメントは、F(ab’)2, F(ab)2, Fab’, Fab, Fv, scFv及び最小の認識単位を包含する。
特定の抗−BCMA−TACI又は抗−TACI抗体成分は、TACI受容体を通してのシグナルを包含することができる。
【００１５】
本発明は、抗体成分、例えば裸抗体及び裸抗体フラグメントを包含する。さらに、免疫接合体は、抗−BCMA−TACI抗体成分及び治療剤を含んで成ることができる。例示的な治療剤は、化学療法薬剤、細胞毒素、免疫モジュレーター、キレート化剤、硼素化合物、光活性剤、光活性色素及び放射性同位体を包含する。
抗体融合タンパク質は、抗−BCMA−TACI抗体成分及び治療剤、例えば免疫モジュレーター又は細胞毒性ポリペプチドを含んで成ることができる。
【００１６】
本発明はまた、そのような抗体又は抗体フラグメントを特異的に結合する、抗−イディオタイプ抗体又は抗−イディオタイプ抗体フラグメントも企画する。
本発明はさらに、BCMA及びTACIの細胞外ドメインと特異的に結合する抗体成分を含んで成る組成物を、哺乳類に投与することを含んで成る、ZTNF4及び腫瘍壊死因子ファミリーのリガンドの活性を哺乳類において阻害するための方法を包含する。例示のように、そのようなZTNF4活性は、Bリンパ球、活性化されたBリンパ球、又は静止Bリンパ球と関連している。
【００１７】
一定の方法においては、ZTNF4活性は、高められた内因性抗体生成に関連する。関連する方法内においては、高められた抗体生成は、自己免疫疾患に関連している。自己免疫疾患の例は、全身性エリマトーデス、重症筋無力症、多発性硬化症、インスリン依存性糖尿病及びリウマチ様関節炎を包含する。そのような疾病は、本明細書に記載される抗−受容体抗体により処理され得る。
【００１８】
他の方法においては、ZTNF4活性は、ぜん息、気管支炎及び気腫に関連する。
さらに他の方法においては、ZTNF4活性は、最終段階腎不全又は腎疾患に関連する。例示的な腎疾患は、糸球体腎炎、脈管炎、腎炎、アミロイドーシス及び腎盂腎炎を包含する。ZTNF4及び他の腫瘍壊死因子ファミリーのリガンド（例えば、APRIL）の活性は他方では、新生物、例えば慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、非ホドキンリンパ腫、癌又はL鎖ガンモパシーに関連している。
【００１９】
本発明はまた、T細胞に関連するZTNF4活性を阻害するための方法を包含する。関連する方法においては、ZTNF4活性は、免疫応答の調節に関連する。もう１つの方法においては、ZTNF4活性は、免疫抑制に関連する。さらにもう１つの方法においては、ZTNF4活性は、移植片拒絶、対宿主性移植片病又は炎症に関連する。さらにもう１つの方法においては、ZTNF4は、自己免疫疾患に関連している。例示として、自己免疫疾患は、インスリン依存性糖尿病又はクローン病であり得る。さらに他の方法においては、ZTNF4活性は、炎症に関連している。そのような炎症は、例えば関節痛、腫瘍、貧血又は敗血性ショックに関連している。
【００２０】
本発明は、少なくとも１つのBCMA及びTACIを結合し、そしてTACI又はBCMAにより形質導入されたシグナルを開始するモノクローナル抗体による腫瘍細胞増殖の阻害方法を包含する。一定のモノクローナル抗体は、BCMA及びTACIの両者を結合し、そしてTACI又はBCMAにより形質導入されたシグナルを開始し、そして他のモノクローナル抗体はTACI及びBCMAの両者を結合し、そしてTACI及びBCMAの両者により形質導入されたシグナルを開始する。少なくとも１つのBCMA又はTACIを結合し、そしてシグナルを送る抗体は、アポプトシス、活性化−誘発された細胞死、細胞周期阻止、又は他の殺細胞機能を誘発することができる。
【００２１】
本発明はまた、抗−BCMA−TACI抗体成分を含んで成る組成物を腫瘍細胞に投与することを含んで成る、腫瘍細胞の増殖を阻害するための方法を包含する。そのような処理は、腫瘍細胞を殺害することにより、又は細胞増殖を低めることにより、インビトロ又はインビボで、腫瘍細胞グループの増殖を阻害することができる。例えば、組成物は、インビトロ培養された細胞に投与され得る。１つの例示として、組成物は、骨髄移植片と共に、エクスビボで培養された細胞に投与され得る。インビボアプローチにおいては、組成物は、腫瘍を有する対象に、治療的有効量で投与され得る医薬組成物である。そのようなインビボ投与は、低められた数の腫瘍細胞、低められた転移、腫瘍細胞の低められた増殖（すなわち、細胞増殖抑制性）、縮小されたサイズの固形腫瘍及び腫瘍の高められた壊死から成る群から選択された少なくとも1つの生理学的効果を提供することができる。
【００２２】
本発明はさらに、抗−BCMA−TACI抗体成分を含んで成る、治療的有効量の医薬組成物を対象に投与することを含んで成る、対象におけるリンパ増殖障害を処理するための方法を包含する。例示的なリンパ増殖障害は、B−細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病、移植後リンパ増殖疾患及び急性リンパ性白血病を包含する。
本発明はまた、TACI受容体の茎状部分内の抗原性エピトープに結合する抗体成分を提供する。例えば、そのような抗体成分は、配列番号４のアミノ酸残基105〜166から成るポリペプチド、又は配列番号４のアミノ酸残基110〜118から成るポリペプチドを結合することができる。それらの抗体成分は、単独で、又は抗―BCMA−TACI抗体成分と共に投与され得る。
【００２３】
本発明は、さらに、多特異的抗体組成物を腫瘍細胞に投与することを含んで成る、腫瘍細胞の増殖の阻害方法を提供し、ここで前記多特異的抗体組成物は、（ａ）BCMAの細胞外ドメインを結合する抗体成分、及び（ｂ）TACIの細胞外ドメインを結合する抗体成分を含んで成り、前記抗−TACI抗体成分はBCMAの細胞外ドメインを結合せず、前記多特異的抗体組成物の投与が腫瘍細胞の増殖を阻害する。例えば、多特異的抗体組成物は、リンパ腫細胞の増殖を阻害するために使用され得る。
【００２４】
一定の方法においては、多特異的抗体組成物は、インビトロで培養された細胞に投与される。他の方法においては、多特異的抗体組成物は、腫瘍を有する対象に投与される医薬組成物である。
多特異的抗体組成物は、抗−BCMA裸抗体成分及び抗−TACI裸抗体成分、BCMA及びTACIを結合する二特異的抗体及び同様のものを含んで成ることができる。そのような組成物は、治療剤をさらに含んで成る、少なくとも１つの抗体成分を含んで成ることができる。さらに、多特異的抗体組成物は、（ａ）免疫モジュレーター又は細胞毒性ポリペプチドのいずれかを含んで成る抗体融合タンパク質、及び（ｂ）少なくとも１つの抗−BCMA抗体成分又は抗−TACI抗体成分を含んで成ることができる。
本発明のそれらの及び他の観点は、次の詳細な記載から明らかに成るであろう。さらに、種々の引例が下記において同定される。
【００２５】
２．定義：
次の記載においては、多くの用語が広範囲に使用される。次の定義は、本発明の理解を促進するために提供される。
【００２６】
本明細書において使用される場合、“核酸”又は“核酸分子”とは、ポリヌクレオチド、例えばデオキシリボ核酸（DNA）又はリボ核酸（RNA）、オリゴヌクレオチド、ポリメラーゼ鎖反応（PCR）により生成されるフラグメント、及び連結、切断、エンドヌクレアーゼ作用及びエキソヌクレアーゼ作用のいずれかにより生成されるフラグメントを言及する。核酸分子は、天然に存在するヌクレオチド（例えばDNA及びRNA）、又は天然に存在するヌクレオチドの類似体（例えば天然に存在するヌクレオチドのα−鏡像異性体形）、又は両者の組み合わせであるモノマーから構成され得る。
【００２７】
修飾されたヌクレオチドは、糖成分において、及び/又はピリミジン又はプリン塩基成分において変更を有することができる。糖修飾は、ハロゲン、アルキル基、アミン及びアジド基による１又は複数のヒドロキシル基の置換を包含し、又は糖はエーテル又はエステルとして機能され得る。さらに、全糖成分は、立体的に及び電子的に類似する構造体、例えばアザ−糖及びカルボン酸糖類似体により置換さえ得る。塩基成分における修飾の例は、アルキル化されたプリン及びピリミジン、アシル化されたプリン又はピリミジン、又は他の良く知られている複素環式置換基を包含する。
【００２８】
核酸モノマーは、ホスホジエステル結合又はそのような結合の類似体により結合さえ得る。ホスホジエステル結合の類似体は、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホラニリデート、ホスホラミデート、及び同様のものを包含する。用語“核酸分子”とはまた、いわゆる、ポリアミド主鎖に結合される天然に存在するか又は修飾された核酸塩基を含んで成る“ペプチド核酸”も包含する。核酸は一本鎖又は二本鎖のいずれかであり得る。
【００２９】
用語“核酸分子の相補体”とは、相補的ヌクレオチド配列、及び対照ヌクレオチド配列に比較して逆の配向を有する核酸分子である。
用語“contig ”とは、他の核酸分子に対する一連の連続した同一の又は相補的な配列を有する核酸分子を示す。連続した配列とは、核酸分子の全体において、又はその一部に沿って、一定の長さの核酸分子を“オーバーラップ”すると言われる。
【００３０】
用語“縮重ヌクレオチド配列”とは、１又は複数の縮重コドンを含むヌクレオチドの配列（ポリペプチドをコードする対照ポリヌクレオチドに比較して）を示す。縮重コドンは、ヌクレオチドの異なったトリプレットを含むが、しかし同じアミノ酸残基をコードする（すなわち、GAU及びGACトリプレットはそれぞれAspをコードする）。
用語“構造遺伝子”とは、特定のポリペプチドの特徴のアミノ酸の配列に翻訳されるメッセンジャーRNA（mRNC）に転写される核酸分子を言及する。
【００３１】
“単離された核酸分子”とは、生物のゲノムDNAに組み込まれない核酸分子である。例えば、細胞のゲノムDNAから分離された成長因子をコードするDNA分子が、単離されたDNA分子である。単離された核酸分子のもう１つの例は、生物のゲノムに組み込まれない、化学的に合成された核酸分子である。特定の種から単離された核酸分子は、その種からの染色体の完全なDNA分子よりも小さい。
【００３２】
“核酸分子構造体”とは、天然においては存在しない配置で組み合わされ、そして並置された核酸のセグメントを含むようヒト介在を通して修飾された−本鎖又は二本鎖の核酸分子である。
“線状DNA”とは、遊離5’及び3’及び末端を有する非環状DNA分子を示す。線状DNAは、閉環DNA分子、例えばプラスミドから、酵素消化又は物理的な破壊により調製され得る。
【００３３】
“相補的DNA（cDNA）”とは、逆転写酵素によりmRNA鋳型から形成される一本鎖DNA分子である。典型的には、mRNAの一部に対して相補的なプライマーは、逆転写の開始のために使用される。当業者はまた、そのような一本鎖DNA分子及びその相補的DNA鎖から成る二本鎖DNA分子を言及するために用語“cDNA”を用いる。用語“cDNA”はまた、RNA鋳型から生成されたcDNA分子のクローンも言及する。
【００３４】
“プロモーター”とは、構造遺伝子の転写を方向づけるヌクレオチド配列である。典型的には、プロモーターは、構造遺伝子の転写開始部位に最も近い、遺伝子の5’非コードに領域位置する。転写の開始において機能するプロモーター内の配列要素は、しばしば、コンセンサスヌクレオチド配列により特徴づけられる。
【００３５】
それらのプロモーター要素は、RNAポリメラーゼ結合部位、TATA配列、CAAT配列、分化−特異的要素（DSE：McGeheeなど., Mol. Endocrinol. 7: 511 (1993)）、サイクリックのAMP応答要素（CRE）、血清応答要素（SRE：Treisman, Seminars in Cancer Biol. 1: 47 (1990)）、グルココルチコイド応答要素（GRE）及び他の転写因子のための結合部位、例えばCRE/ATF（O’Reillyなど., J. Biol. Chem. 267: 19938 (1992)）、AP2 (Yeなど., J. Biol. Chem. 269: 25728 (1994)), SP1, cAMP応答要素結合タンパク質（CREB；Loeken, Gene Expr. 3: 253 (1993)）、及びオクタマー因子（一般的には、Watsonなど., eds., Molecular Biology of the Gene, 4th ed. (The Benjamin Kummings Publishing Company, Inc. 1987), and Lemaigre and Rousseau, Biochem. J. 303: 1 (1994)）を包含する。プロモーターが誘発プロモーターである場合、転写の速度は誘発剤に応答して上昇する。対照的に、転写の速度は、プロモーターが構成プロモーターである場合、誘発剤により調節されない。抑制できるプロモーターはまた知られている。
【００３６】
“コアプロモーター”は、TATAボックス及び転写の開始を包含するプロモーター機能のための必須ヌクレオチド配列を含む。この定義によれば、コアプロモーターは、活性を増強し又は組織特異的活性を付与することができる特定の配列の不在下で検出できる活性を有しても又は有さなくても良い。
【００３７】
“調節要素”は、コアプロモーターの活性を調節するヌクレオチド配列である。例えば、調節要素は、特定の細胞、組織又はオルガネラにおいて独占的に又は選択的に転写を可能にする細胞因子と結合するヌクレオチド配列を含むことができる。それらのタイプの調節要素は通常、“細胞−特異的”、“組織−特異的”、又は“オルガネラ−特異的”態様で発現される遺伝子に結合されている。
“エンハンサー”は、転写の開始部位に対してエンハンサーの距離又は配向に関係なく、転写の効率を高めることができるタイプの調節要素である。
【００３８】
“異種DNA”とは、所定の宿主細胞内に天然において存在しない、DNA分子又はDNA分子の集団を言及する。特定宿主細胞に対して異種であるDNA分子は、宿主DNAが非宿主DNA（すなわち、外来性DNA）と組み合わされる限り、宿主細胞種（すなわち、内因性DNA）に由来するDNAを含むことができる。例えば、転写プロモーターを含んで成る宿主DNAセグメントに作用可能に連結されるポリペプチドをコードする非宿主DNAセグメントを含むDNA分子は、異種DNA分子であると思われる。逆に言えば、異種DNA分子は、外来プロモーターと作用可能に連結される内因性遺伝子を含むことができる。もう１つの例として、野生型細胞に由来する遺伝子を含んで成るDNA分子は、そのDNA分子が野生型遺伝子を欠いている突然変異細胞中に導入される場合、異種DNAであると思われる。
【００３９】
“ポリペプチド”とは、天然又は合成的に生成されても、ペプチド結合により連結されるアミノ酸残基のポリマーである。約10個よりも少ないアミノ酸残基のポリペプチドは通常、“ペプチド”として言及される。
“タンパク質”は、1又は複数のポリペプチド鎖を含んで成る高分子である。タンパク質はまた、非ペプチド成分、例えば炭水化物基を含むことができる。炭水化物及び他の非ペプチド置換基は、タンパク質が生成される細胞により付加され、そして細胞型により変化するであろう。タンパク質は、それらのアミノ酸主鎖により本明細書において定義され；置換基、例えば炭水化物基は一般的に、特定されないが、しかしそれにもかかわらず、存在することができる。
【００４０】
非宿主DNA分子によりコードされるペプチド又はポリペプチドは“異種”ペプチド又はポリペプチドである。
“組み込まれた遺伝子要素”とは、その要素がヒト操作を通して細胞中に導入された後、宿主細胞の染色体中に組み込まれているDNAのセグメントである。本発明においては、組み込まれた遺伝子要素は通常、エレクトロポレーション又は他の技法により細胞中に導入される線状化されたプラスミドに由来する。組み込まれた遺伝子要素は、元の宿主細胞からその子孫に通過される。
【００４１】
“クローニングベクター”は、宿主細胞において自律的に複製する能力を有する、核酸分子、例えばプラスミド、コスミド、又はバクテリオファージである。クローニングベクターは典型的には、ベクターの必須の生物学的機能を失わないで、決定できる態様で核酸分子の挿入を可能にする１又は少数の制限エンドヌクレアーゼ認識部位、及びクローニングベクターにより形質転換された細胞の同定及び選択への使用のために適切であるマーカー遺伝子をコードするヌクレオチド配列を含む。マーカー遺伝子は典型的には、テトラサイクリン耐性又はアンピシリン耐性を付与する遺伝子を含む。
【００４２】
“発現ベクター”は、宿主細胞において発現される遺伝子をコードする核酸分子である。典型的には、発現ベクターは、転写プロモーター、遺伝子及び転写ターミネーターを含む。遺伝子発現は通常、プロモーターの制御下に配置され、そしてそのような遺伝子はプロモーターに“作用可能に結合される”と言われる。同様に、調節要素及びコアプロモーターは、調節要素がコアプロモーターの活性を調節する場合、作用可能に連結される。
【００４３】
“組換え宿主”とは、異種核酸分子、例えばクローニングベクター又は発現ベクターを含む細胞である。本明細書においては、組換え宿主の例は、発現ベクターからBCMA又はTACIポリペプチドを生成する細胞である。対照的に、BCMA又はTACIポリペプチドは、BCMA又はTAC受容体の“天然源”である。
“インテグレイティブ組換え体”は、異種DNAが細胞ゲノムDNA中に組み込まれるようになる組換え宿主細胞である。
【００４４】
用語“受容体”とは、“リガンド”と称する生物活性分子に結合する、細胞結合されたタンパク質を示す。この相互作用は、細胞に対するリガンドの効果を介在する。  BCMA又はTACI受容体においては、用語“特異的に結合する”、又は“特異的結合”とは、受容体と競争して結合するリガンドの能力を言及する。例えば、ZTNF4はBCMA又はTACI受容体と特異的に結合し、そしてこれは、検出可能的にラベルされたZTNF4とラベルされていないZTNFとの間でのBCMA又はTACI受容体についての競争を観察することによって示され得る。
【００４５】
受容体は、膜結合されたシトソール又は核；モノマー（例えば、胸腺刺激性ホルモン受容体、β−アドレナリン作用受容体）又はマルチマー（例えば、PDGF受容体、成長ホルモン受容体IL−３受容体、顆粒球マクロファージ−コロニー刺激因子（GM−CSF）受容体、顆粒球−コロニー刺激因子（G−CSF）受容体、エリトロポエチン受容体及びIL−６受容体）であり得る。膜結合された受容体は、細胞外リガンド−結合ドメイン、及び典型的には、シグナルトランスダクションに関与する細胞内エフェクタードメインを含んで成る多−ドメイン構造により特徴づけられる。一定の膜結合された受容体においては、細胞外リガンド−結合ドメイン及び細胞内エフェクタードメインは、完全な機能的受容体を含んで成る別々のポリペプチドに位置する。
【００４６】
一般的に、受容体へのリガンドの結合は、細胞の代謝における変更を導く、細胞におけるエフェクタードメインと他の分子との間の相互作用を引き起こす受容体のコンホメーション変化をもたらす。受容体−リガンド相互作用にしばしば連結される代謝現象は、遺伝子転写、リン酸化、脱リン酸化、サイクリックAMPを生成の上昇、細胞カルシウムの代謝、膜脂質の代謝、細胞付着、イノシトール脂質の加水分解及びリン脂質の加水分解を包含する。
【００４７】
用語“分泌シグナル配列”とは、それが合成される細胞の分泌路を通してより大きなポリペプチドを、より大きなポリペプチドの成分として方向づけるペプチド（“分泌ペプチド”）をコードするDNA配列を示す。前記のより大きなポリペプチドは、分泌路を通しての移動の間、分泌ペプチドを除去するために通常分解される。
【００４８】
“単離されたポリペプチド”は、汚染性細胞成分、例えば炭水化物、脂質又は天然においてポリペプチドに関連している他のタンパク質性不純物を実質的に含まないポリペプチドである。典型的には、単離されたポリペプチドの調製物は、高く精製された形で、すなわち少なくとも約80％の純度、少なくとも約90％の純度、少なくとも約95％の純度、95％以上の純度、又は99％以上の純度でポリペプチドを含む。特定のタンパク質調製物が単離されたポリペプチドを含むことを示すための1つの手段は、タンパク質調製物のドデシル硫酸ナトリウム（SDS）−ポリアクリルアミドゲル電気泳動及びゲルのクーマシーブルー染色によるシングルバンドの出現によるものである。しかしながら、用語“単離された”とは、他の物理形、例えばダイマー又は他のグリコシル化された又は誘導体化された形での同じポリペプチドの存在を排除しない。
【００４９】
用語“アミノ−末端”及び“カルボキシル−末端”とは、ポリペプチド内の位置を示すために本明細書において使用される。その情況が可能である場合、それらの用語は、接近性又は相対的位置を示すためにポリペプチドの特定の配列又は一部に関して使用される。例えば、ポリペプチド内の対象配列のカルボキシル末端側に位置する一定の配列は、その対照配列のカルボキシル末端に隣接して位置するが、しかし完全なポリペプチドのカルボキシル末端では必ずしも必要ではない。
用語“発現”とは、遺伝子生成物の生合成を言及する。例えば、構造遺伝子においては、発現はmRNAへの構造遺伝子の転写及び１又は複数のポリペプチドへのmRNAの翻訳を包含する。
【００５０】
“親和性標識”とは、第２ポリペプチドの精製又は検出を提供し、又は基質への第２ポリペプチドの結合のための部位を供給するために、第2ポリペプチドに結合され得るポリペプチドセグメントを示すために本明細書において使用される。主に、抗体又は、他の特異的結合剤が利用できるいずれかのペプチド又はタンパク質が親和性標識として使用され得る。
【００５１】
親和性標識は、ポリ−ヒスチジン系、すなわちプロテインA (Nilsson など.,  EMBO J. 4: 1075, 1985; Nilsson など.,  Methods  Enzymol. 198: 3, 1991), グルタチオンＳ  トランスフェラーゼ（Smits and Johnson, Gene 67; 31, 1988）, Glu-Glu親和性標識 （Grussenmeyerなど.,  Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 7952-4, 1985）, 物質Ｐ、すなわちFlagTM ペプチド（Hoppなど.,  Biotechnology 6: 1204-1210, 1988）、ストレプタビジン結合ペプチド、又は他の抗原性エピトープ又は結合ドメインを包含する。一般的に、Ford など., Protein  Expression  and  Purification 2:95-107, 1991を参照のこと。親和性標識をコードする核酸分子は、商品供給者（例えばPharmacia Biotech, Piscataway, NJ; Eastman Kodak, New Heven, CT; New England Biolabs, Beverly, MA）から入手できる。
【００５２】
抗体は、その抗体が次の３種の性質の少なくとも１つを示す場合、特異的に結合すると思われる：（１）抗体が限界レベルの結合活性を伴って、標的タンパク質に結合し、（２）抗体が標的タンパク質に関連するポリペプチドと有意に交差反応せず、（３）抗体が、標的タンパク質を細胞外発現する細胞に結合するが、しかしその抗体は標的タンパク質を細胞外発現しない細胞に結合しない場合。第３の場合の例は受容体の細胞外ドメインと結合する抗体である。抗−受容体抗体の細胞−特異的結合は、酵素−結合された免疫吸着アッセイ（ELISA）、流動細胞計測法及び同様の方法により検出され得る。関連するアプローチにおいては、受容体のリガンド結合ドメインと特異的に結合する抗体は、受容体への抗体の結合がリガンドにより受容体を前処理することによって阻止され得ることを示すことによって同定され得る。
【００５３】
第１の特徴に関しては、抗体は、それらが、106M-1又はそれ以上、好ましくは107M-1又はそれ以上、より好ましくは108M-1又はそれ以上、及び最も好ましくは109M-1又はそれ以上の結合親和性（Ka）を伴なって、BCMA−TACIポリペプチド、ペプチド又はエピトープに結合する場合、特異的に結合する。抗体の結合親和性は、Scatchard 分析（Scatchard, Ann. NY Acad. Sci. 51: 660 (1949)）により、当業者により容易に決定され得る。第２の特徴に関しては、抗体は、それらが、標準のウェスターンブロット分析を用いて、BCMA又はTACIタンパク質を検出するが、しかし現在知られているポリペプチドを検出しない場合、関連するポリペプチドと有意に交差反応しない。もう１つの例として、BCMA又はTACI受容体と特異的に結合する抗体は、他の腫瘍壊死因子受容体と有意に交差反応しない。
【００５４】
“免疫原性エピトープ”とは、ポリペプチドが免疫原として使用される場合、抗体応答を誘発するポリペプチドの一部である。対照的に、“抗原性エピトープ”は、抗体が特異的に結合できるポリペプチドの領域である。アミノ酸残基の隣接する配列により形成される抗原性エピトープは“線状決定基”であり、そして“コンホメーション決定基”は、隣接した配列において存在しないが、しかし折りたたまれたポリペプチドにおいて空間的に並列されるようになる。
【００５５】
“抗体フラグメント”は、抗体の一部、例えばF(ab’)2, F(ab)2, Fab’, Aab及び同様のものである。構造に関係なく、抗体フラグメントは、損なわれていない抗体により認識される同じ抗原と結合する。例えば、抗−BCMA−TACI抗体モノクローナル抗体フラグメントは、BCMA−TACIの抗原性エピトープと結合する。
【００５６】
用語“抗体フラグメント”はまた、特定の抗原に結合する、合成の又は遺伝的に構築されたポリペプチド、例えばL鎖可変領域から成るポリペプチド、H及びL鎖の可変領域から成る“Fv”フラグメント、L及びH鎖可変領域がペプチドリンガーにより連結されている組換え一本鎖ポリペプチド分子（“svFvタンパク質”）、及び超可変領域を模倣するアミノ酸残基から成る最少認識単位を包含する。
【００５７】
“裸の抗体”は、治療剤により接合されない完全な抗体である。裸の抗体は、ポリクローナル及びモノクローナル抗体、並びに一定の組換え抗体、例えばキメラ性及びヒト型化抗体を包含する。同様に、“裸の抗体フラグメント”は、治療剤により接合されない抗体フラグメントである。
本明細書において使用される場合、用語“抗体成分”とは、完全な抗体及び抗体フラグメントの両者を包含する。
【００５８】
“抗−BCMA−TACI抗体”とは、BCMA及びTACIタンパク質の両者を特異的に結合する抗体である。そのような抗体は、それが２種の抗原を結合するので、“二重反応性”抗体として考慮される。
“キメラ抗体”は、囓歯動物抗体に由来する可変ドメイン及び相補的決定領域を含む組換えタンパク質であるが、ところが抗体分子の残りはヒト抗体に由来する。
“ヒト型化抗体”は、ネズミモノクローナル抗体の相補的決定領域がヒトモノクローナル抗体可変ドメインのH及びL可変鎖可変領域に移行されている組換えタンパク質である。
【００５９】
“二特異的抗体”とは、単一抗体分子内に２種の異なった抗原のための結合部位を有する。
“多特異的抗体組成物”とは、２種の異なった抗体のための結合部位を有する抗体成分を含んで成る。例えば、多特異的抗体組成物は二特異的抗体成分を含んで成ることができ、又は多特異的抗体組成物は、異なった抗原と結合する少なくとも２種の抗体成分を含んで成ることができる。
【００６０】
本明細書において使用される場合、“治療剤”は、治療のために有用である接合体を生成するために抗体成分に接合される分子又は原子である。治療剤の例は、薬剤、毒素、イムノモジュレーター、キレート化剤、硼素化合物、光活性剤又は染料、及び放射生同位体を包含する。
“検出できるラベル”は、診断のために有用な分子を生成するために抗体成分に接合され得る分子又は原子である。検出できるラベルの例は、キレート化剤、光活性剤、放射性同位体、蛍光剤、常磁性イオン又は他のマーカー成分を包含する。
【００６１】
“免疫接合体”は、治療剤又は検出できるラベルと抗体成分との接合体である。
本明細書に使用される場合、“免疫モジュレーター”とは、サイトカイン、幹細胞成長因子、リンフォトキシン、同時刺激分子、造血因子及び同様のもの、並びにそれらの分子の合成類似体を包含する。
“融合タンパク質”は、少なくとも２つの遺伝子のヌクレオチド配列を含んで成る核酸分子により発現されるハイブリッドタンパク質である。  例えば、用語“抗体融合タンパク質”とは、抗体成分及び非抗体治療剤を含んで成る組換え分子を言及する。そのような融合タンパク質のために適切な治療剤の例は、免疫モジュレーター（“抗体−免疫モジュレーター融合タンパク質”）及びトキシン（“抗体−トキシン融合タンパク質”）を包含する。
【００６２】
“抗原性ペプチド”は、T細胞により認識されるMHC−ペプチド複合体を形成するために、主要組織適合複合体分子を結合し、それにより、T細胞への提供に基づいて応答を誘発するペプチドである。従って、抗原性ペプチドは、適切な主要組織適合性複合体分子に結合し、そしてT細胞応答、例えば細胞溶解又は特異的サイトカイン開放を誘発することができる。抗原性ペプチドは、抗原提供細胞又は標的細胞上に、クラスI又はクラスII主要組織適合性複合体分子に関して結合され得る。
標準分析法の不正確さのために、ポリマーの分子量及び長さは、おおよその値であることが理解される。そのような値が“約”X又は“およそ”Xとして表される場合、Xの言及された値は、±10％で正確であると理解されるであろう。
【００６３】
３．抗−BCMA−TACI抗体の生成：
当業者は、本明細書に提供される情報により、種々の抗−BCMA−TACI、すなわち“二重反応性”抗体を生成することができる。例えば、モノクローナル又はポリクローナル抗体は、BCMA又はTACIのいずれかのシステムに富んでいる領域を含んで成る少なくとも１つのポリペプチド、又はその免疫原性フラグメントを用いて生成され得る。BCMAに由来する適切なポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸残基１〜54、配列番号２のアミノ酸残基１〜48、配列番号２のアミノ酸残基８〜41、及び配列番号2のアミノ酸残基13〜27を包含する。
【００６４】
TACI由来の適切なポリペプチドは、配列番号４の次のアミノ酸残基を包含する：アミノ酸残基30〜67、68〜154、30〜154、34〜66及び71〜104。しかしながら、“抗−BCMA−TACI抗体”として考慮されるためには、そのようなポリペプチドから生成される抗体は、BCMA及びTACIの両者を結合できるべきである。特に、抗体は、配列番号２のアミノ酸残基１〜54、配列番号２のアミノ酸残基１〜48、又は配列番号２のアミノ酸残基13〜27により表される領域内のBCMAを結合すべきであり、そして前記抗体は、配列番号４のアミノ酸残基30〜67又は配列番号４のアミノ酸残基68〜154のいずれかにより表される領域内のTACIを結合すべきである。
【００６５】
一定の抗−BCMA−TACI抗体は、次の３種のポリペプチドのすべてを結合する：配列番号２のアミノ酸残基１〜48、配列番号４のアミノ酸残基30〜67、及び配列番号４のアミノ酸残基68〜154。他の抗−BCMA−TACI抗体は、次の３種のポリペプチドのすべてを結合する：配列番号２のアミノ酸残基13〜27、配列番号４のアミノ酸残基30〜67、及び配列番号４のアミノ酸残基68〜154。さらに、一定の抗−BCMA−TACI抗体成分は、次の少なくとも１つを結合することができる：配列番号４のアミノ酸残基39〜50のアミノ酸配列を有するポリペプチド、及び配列番号４のアミノ酸残基78〜91のアミノ酸配列を有するポリペプチド。
【００６６】
得られる抗体は、標準の技法、例えば酵素連結された免疫吸着アッセイを用いて、BCMA及びTACIの両者を結合する能力についてスクリーンされ得る。抗原性エピトープを同定し、そして免疫原性エピトープを含んで成るアミノ酸配列から抗体を生成するための標準の方法は、例えば次の文献に記載されている：Mole, “Epitope Mapping, “ in Methods in Molecular Biology, Vol. 10, Manson (ed.), Pages 105-116 (The Humana Press, Inc. 1992), Price, “Production and Characterization of Synthetic Peptide-Derived Antibodies,” in Monoclonal Antibodies: Production, Engineering, and Clinical Application, Ritter and Ladyman (eds.), pages 60-84 (Cambridge University Press 1995), Morris (Ed.), Epitope Mapping Protocols (Humana Press, Inc. 1996), 及びColigan など. (eds.), Current Protocols in Immunology, pages 9.3.1-9.3.5 and pages 9.4.1-9.4.11 (John Wiley & Sons 1997)。
【００６７】
抗体はまた、例えば、ビオチニル化されたリガンド及び流動細胞計測法を用いて、リガンド阻止活性についてスクリーニングされ得る。ZTNF4によりシグナルトランスダクションを阻止する抗体は、腫瘍細胞系上のBCMA又はTACIへのビオチン−ZTNF4結合のそれらの阻害により同定され得る。ZTNF4を結合する受容体に結合することによりシグナルを誘発する抗体は、転写レポーター要素、及びTACI又はBCMAのいずれかを含む適切なレポーター細胞系を用いて同定され得る。抗体をシグナル化することによるTACI又はBAMAの架橋は、レポーター遺伝子の生成物の転写及び翻訳を導くことができる。蛍光基質、例えばルシフェリンが、レポーター遺伝子発現を検出するために使用され得る。
【００６８】
A．受容体ポリペプチドの生成：
抗体を生成するために有用なTACI又はBCMAポリペプチドは、従来の技法及び本明細書に開示される受容体配列に従って、組換え宿主細胞において生成され得る。ポリペプチド−コードのヌクレオチド配列を発現するためには、ポリペプチドをコードする核酸分子が、発現ペプチドにおいて転写発現を制御し、そして次に、宿主細胞中に導入される調節配列に作用可能に連結されるべきである。転写調節配列、例えばプロモーター及びエンハンサーの他に、発現ベクターは、翻訳調節配列、及び発現ベクターを担持する細胞の選択のために適切なマーカー遺伝子を包含することができる。
【００６９】
真核細胞において外来性タンパク質の生成のために適切である発現ベクターは、典型的には、（１）細胞宿主における発現ベクターの増殖及び選択を提供するための細菌複製起点及び抗生物質耐性マーカーをコードする真核DNA要素；（２）転写の開始を制御する真核DNA要素、例えばプロモーター；及び（３）転写体のプロセッシングを制御するDNA要素、例えば転写終結/ポリアデニル化配列を含む。上記で論じられたように、発現ベクターはまた、異種ポリペプチドを、宿主細胞の分泌経路中に方向づける分泌配列コードするヌクレオチド配列を包含する。
【００７０】
本発明のポリペプチドは、哺乳類細胞において発現され得る。適切な哺乳類宿主細胞の例は、アフリカミドリザル腎細胞（Vero; ATCC  CRL1587）、ヒト胚腎細胞（293−HEK; ATCC CRL1573）、子供のハムスター腎細胞（BHK−21, BHK−570；ATCC CRL8544, ATCC CRL10314）、イヌ腎細胞（MDCK；ATCC CCL34）、チャイニーズハムスター卵巣細胞（CHO−K1; ATCC CCL61; CHO DG44 [Chasinなど., Som. Cell. Molec. Genet. 12: 555 (1986)]、ラット下垂体細胞（CH1；ATCC CCL82）、HeLa S3細胞（ATCC CCL2.2）、ラット肝癌細胞（H−４−II−E；ATCC CRL1548）、SV40−形質転換されたモンキー腎細胞（COS−１；ATCC CRL1650）及びネズミ胚細胞（NIH−3T3；ATCC CRL1658）を包含する。
【００７１】
哺乳類宿主に関しては、転写及び翻訳シグナルは、ウィルス源、例えばアデノウィルス、ウシ乳頭腫ウィルス、サルウィルス又は同様のものに由来することができ、ここで調節するシグナルは、高レベルの発現を有する特定の遺伝子に関連している。適切な転写及び翻訳調節配列はまた、哺乳類遺伝子、例えばアクチン、コラーゲン、ミコシン及びメタロチオネイン遺伝子から得られる。
【００７２】
転写調節配列は、RNA合成の開始を方向づけるために十分なプロモーター領域を含む。適切な真核プロモーターは、マウスメタロチオネインI遺伝子のプロモーター（Hamerなど., J. Molec. Appl. Genet. 1: 273 (1982)）、ヘルペスウィルスのTKプロモーター（Mcknight, Cell 31 : 355 (1982)）、SV40初期プロモーター（Benoistなど., Nature 290: 304 (1981)）、Rous肉腫ウィルスプロモーター（Gormanなど., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 79: 6777 (1982)）、サイトメガロウィルスプロモーター（Foeckingなど., Gene 45: 101 (1980)）及びマウス乳腫瘍ウィルスプロモーター（一般的には、Etcheverry, “Expression of Engineered Protein in Mammalian Cell Culture”, in Protein Engineering: Principles and Practice, Cleland など., (eds.), p. 163-181 (John Wiley & Sons, Inc. 1996)を参照のこと）を包含する。
【００７３】
他方では、原核プロモーター、例えばバクテリオファージT3 RNAポリメラーゼプロモーターは、その原核プロモーターが真核プロモーターにより調節される場合、哺乳類細胞における遺伝子発現を制御するために使用され得る（Zhouなど., Mol. Cell. Biol. 10: 4529 (1990), 及びKaukamanなど., Nucl. Acids Res. 19: 4485 (1991) を参照のこと）。
【００７４】
発現ベクターは、種々の標準の技法、例えばリン酸カルシウムトランスフェクション、リポソーム−介在性トランスフェクション、マイクロプロジェクト−介在性供給、エレクトロポレーション及び同様のものを用いて、宿主細胞中に導入され得る。好ましくは、トランスフェクトされた細胞が選択され、そして増殖され、宿主細胞ゲノムに安定して組み込まれる発現ベクターを含んで成る組換え宿主細胞が供給される。真核細胞中にベクターを導入するための技法、及び優性選択マーカーを用いてのそのような安定した形質転換体を選択するための技法は、例えばAusubel (1995) 及びMurray (ed.), Gene Transfer and Expression Protocols (Humana Press 1991) により記載される。
【００７５】
例えば、1つの適切な選択マーカーは、抗生物質ネオマイシンに対する耐性を付与する遺伝子である。この場合、選択は、ネオマイシン型薬物、例えばG−418又は同様のもの存在下で実施される。“増幅”として言及される方法である選択システムは、興味ある遺伝子の発現レベルを高めるためにも使用される。増幅は、低レベルの選択剤の存在下でトランスフェクタントを培養し、そして次に、導入された遺伝子の生成物を高レベルで生成する細胞を選択するために選択剤の量を高めることによって実施される。
【００７６】
好ましい増幅可能選択マーカーは、メトトレキセートに対する耐性を付与するジヒドロ葉酸レダクターゼである。他の耐薬物性遺伝子(例えば、ヒグロマイシン耐性、複数薬物耐性、ピューロマイシン  アセチルトランスフェラーゼ)もまた、使用され得る。変更された表現型を導入する他のマーカー、例えば緑色蛍光タンパク質、又は細胞表面タンパク質、例えばCD4,  CD8,クラスI  MHC、胎盤アルカリホスファターゼが、FACS分類又は磁気ビース分離技法のような手段により、トランスフェクトされていない細胞とトランスフェクトされた細胞とを分類するために使用され得る。
【００７７】
受容体ポリペプチドはまた、ウィルス供給システムを用いて、培養された哺乳類細胞により生成され得る。この目的のための典型的なウィルスは、アデノウィルス、ヘルペスウィルス、レトロウィルス、ワクシニアウィルス及びアデノ関連ウィルス（AAV）を包含する。アデノウィルス、すなわち二本鎖DNAウィルスは現在、異種核酸の供給のための最も研究されている遺伝子トランスファーベクターである（Becker など., Meth. Cell Bio. 43: 161−89, 1994; 及びJ. T. Douglas and D.T. Curiel, Science & Medicine 4: 44−53, 1997 を参照のこと）。アデノウィルスシステムの利点は、比較的大きなDNA挿入体の収容、高い力価に増殖する能力、広範囲の哺乳類細胞型を感染する能力、及び異なったプロモーターを含む多数の入手できるベクターとの使用を可能にする柔軟性を包含する。
【００７８】
受容体ポリペプチドはまた、他の高等真核細胞、例えば鳥類、菌類、昆虫、酵母、又は植物細胞においても発現され得る。バキュロウィルスシステムは、昆虫細胞中に、受容体ポリペプチドをコードする核酸分子を導入するための効果的な手段を提供する。適切な発現ベクターは、オートグラファ・カリホルニカ（Autographa californica） 核多角体病ウィルス（AcMNPV）に基づかれており、そして良く知られているプロモーター、例えばショウジョウバエ熱ショックタンパク質（hsp）70プロモーター、オートグラファ・カルホルニカ核多角体病ウィルス即時−初期遺伝子プロモーター（ie-I）及び遅延された初期39K プロモーター、バキュロウィルスp10プロモーター及びジョウジョウバエメタロチオネインプロモーターを含む。
【００７９】
組換えバキュロウィルスを製造するための第２の方法は、Luckow ( Luckow, VA, など., J. Virol 67: 4566−79, 1993 ) により記載されるトランスポゾンに基づくシステムを利用する。トランスファーベクターを利用するこのシステムは、Bac−to−BacTMキット（Life  Technologies, Rockville,  MD）として市販されている。このシステムは、“bacmid”  と呼ばれる大きなプラスミドとして、E.コリに維持されるバキュロウィルスゲノム中に、受容体ポリペプチドをコードするDNAを移動せしめるために、Tn7トランスポゾンを含むトランスファーベクター、pFastBacI TM (Life Technologies )を利用する。
【００８０】
Hill−Perkins, M.S. and Possee, R.D., J. Gen. Virol. 71: 971−6, 1990; Bonning, B.C. など., J. Gen. Virol. 75: 1551−6, 1994; 及びChazenbalk, G. D., and  Rapoport, B., J. Biol Chem. 270: 1543−9,1995 を参照のこと。当業界において知られている技法を用いて、受容体ポリペプチド−コードの配列を含むトランスファーベクターにより、E.コリが形質転換され、そして組換えバキュロウィルスの表示である断続的lacZ遺伝子を含むbacmida についてスクリーンされる。組換えバキュロウィルスゲノムを含むbacmid DNA が、通常の技法を用いて単離される。
【００８１】
例示的なPFASTBACベクターは、相当の程度まで修飾され得る。例えば、前記ポリヒドリンプロモーターは、除去され、そしてバキュロウィルス感染において早めに発現され、そして分泌されたタンパク質を発現するために好都合であることが知られているバキュロウィルス塩基性タンパク質プロモーター（また、Pcor, p6.9又はMPプロモーターとしても知られている）により置換され得る。Hill−Perkins, M.S. and Possee, R.D., J. Gen. Virol. 71: 971−6, 1990; Bonning, B.C. など., J. Gen. Virol. 75: 1551−6, 1994; 及びChazenbalk, G. D., and  Rapoport, B., J. Biol Chem. 270: 1543−9,1995 を参照のこと。そのようなトランスファーベクター構造体においては、塩基性タンパク質プロモーターの短いか又は長いバージョンが使用され得る。
【００８２】
組換えウィルス又はbacmidは、宿主細胞をトランスフェクトするために使用される。適切な昆虫宿主細胞は、IPLB−Sf−21に由来する細胞系、スポドプテラフルギペルダ（Spodoptera frugiperda）さなぎ卵巣細胞系、例えばSf9 (ATCC CRL 1711)、Sf21AE及びSf21（Invitrogen Corporation; San Diego, CA）、及びショウジョウバエSchneider−２細胞、並びにトリコプルシア・ニ（Trichoplusia ni）に由来するHIGH FIVEO 細胞系（Invitrogen）を包含する（アメリカ特許第5,300,435号）。市販の血清フリー培地が、細胞の増殖及び維持のために使用され得る。
【００８３】
バキュロウィルスでの組換えタンパク質を生成するための確立された技法は、Baileyなど., “Manipulation of Baculovirus Vectors”, in Methods in Molecular Biology, Volume 7: Gene Transfer and Expression Protocols, Murray (ed.), P. 147-168 (The Humana Press, (nc. 1991) により、Patel など., “The buculovirus expression system”, in DNA Cloing2: Expression Systems, 2nd Edition, Glover など., (eds.) p.205-244 (Oxford University Press 1995) により、Ausubel (1995) p.16-37〜16-57により、Richardson (ed.), Baculovirus Expression Proteocols (The Humana Press, Inc. 1995) により、及びLucknow, “Insect Cell Expression Technology”, in Protein Engineering: Principles and Practice. Cleland など. (eds.), p.183-218 (John Wiley & Sons, Inc. 1996) により提供される。
【００８４】
菌類細胞、例えば酵母細胞はまた、本明細書に開示される遺伝子を発現するためにも使用され得る。これに関して、特に興味ある酵母種は、サッカロミセス・セレビシアエ（Saccharomyces cerevisiae）, ピチア・パストリス（Pichia pastoris）及びピチア・メタノリカ(pichia methanolica) を包含する。酵母における発現のための適切なプロモーターは、GAL1（ガラクトース）、PGK（ホスホグリセリンキナーゼ）、ADH（アルコールデヒドロゲナーゼ）、AOX1（アルコールオキシダーゼ）、HIS4（ヒスチジノールデヒドロゲナーゼ）及び同様のものからのプロモーターを包含する。
【００８５】
外因性DNAによりS.  セレビシアエ細胞を形質転換し、そしてそれから組換えポリペプチドを生成するための方法は、例えばKawasaki, アメリカ特許第4,599,311号；Kawasaki など., アメリカ特許第4,931,373号；Brake, アメリカ特許第4,870,008号；Welchなど., アメリカ特許第5,037,743号；及びMurray など., アメリカ特許第4,845,075号により開示される。形質転換された細胞は、選択マーカー、通常、耐薬物性、又は、特定の栄養物（例えばロイシン）の不在下で増殖する能力により決定される表現型により選択される。
【００８６】
サッカロミセス・セレビシアエへの使用のための好ましいベクターシステムは、グルコース含有培地における増殖により形質転換された細胞の選択を可能にする、Kawasaki など. (アメリカ特許第4,931,373号)により開示されるPOT１ベクターシステムである。酵母への使用のための適切なプロモーター及びターミネーターは、解糖酵素遺伝子（例えば、Kawasaki, アメリカ特許第4,599,311号；Kingsmanなど., アメリカ特許第4,615,974号；及びBitter, アメリカ特許第4,977,092 号を参照のこと）及びアルコール  デヒドロゲナーゼ遺伝子からのものを包含する。また、アメリカ特許第4,990,446 号；第5,063,154号；第5,139,936 号；及び第4,661,454号を参照のこと。
【００８７】
他の酵母、例えばハンセヌラ・ポリモルファ（Hansenula polymorpha）、シゾサッカロミセス・ポンベ（ Schizosaccharomyces pombe ）、クルイベリミセス・ラクチス（ Kluyveromyces lactis ）、クルイベリミセス・フラギリス（Kluyveromyces  fragilis ）、ウスチラゴ・マイジス（Ustilago maydis ）、ピチア・パストリス（ Pichia pastoris ）、ピチア・メタノリカ（Pichia methanolica）、ピチア・グイレルモンジ（ Pichia guillermondii ）、及びカンジタ・マルトサ（Candida maltosa ）のための形質転換システムは、当業界において知られている。例えば、Gleeson など., J. Gen. Microbiol. 132: 3459−3465, 1986 及びCregg, アメリカ特許第4,882,279 号を参照のこと。
【００８８】
アスペルギラス細胞は、Mcknight など.,アメリカ特許第4,935,349号の方法に従って使用され得る。アクレモニウム・クリソゲナム（Acremonium chrysogenum）を形質転換するための方法は、Sumino ., アメリカ特許第5,162,228号により開示される。ニューロスポラ（Neurospora）を形質転換するための方法は、Lambowitz, アメリカ特許第4,486,533号により開示される。例えば、組換えタンパク質の生成のための宿主としてのピチア・メタノリカの使用は、Raymond、アメリカ特許第5,716,808号、Raymond、アメリカ特許第5,736,383号、Raymondなど.,Yeast 14: 11-23 (1998)、及びWIPO公開WO97／17450, WO97／17451、WO98／02536及びWO98／02565に開示される。
【００８９】
発現ベクターはまた、植物プロトプラスト、損なわれていない植物組織又は単離された植物細胞中にも導入され得る。植物組織中に発現ベクターを導入するための方法は、アグロバクテリウム・ツメファシエンス（Agrobacterium tumefaciens）、マイクロプロジェクティル−介在性供給、DNA注射、エレクトロポレーション及び同様のものによる植物組織の直接的な感染又はそれらと共にs植物細胞の同時培養を包含する。例えば、Horschなど., Science 227：1229 (1995)、Kleinなど., Biotechnology 10: 268 (1992) 及びMikiなど., “Procedures for Intoducing Foreign DNA into Plants”, in Methods in Plant Molecular Biology and Biotechnology, Glick など. (eds.), P.67-88 (CRC Press, 1993) を参照のこと。
【００９０】
他方では、受容体ポリペプチド−コードの配列は、原核宿主細胞において発現され得る。原核細胞において前記ポリペプチドを発現するために使用され得る適切なプロモーターは、当業者に良く知られており、そしてT4, T3, Sp6及びT7ポリメラーゼを認識できるプロモーター、バクテリオファージλのPR及びPLプロモーター、E.コリのtrp, recA, 熱ショック、lacUV5, tac, lpp-lacSpr, phoA及びlacZプロモーター、B.スブチリスのプロモーター、バチルスのバクテリオファージのプロモーター、ストレプトミセスプロモーター、バクテリオファージλのintプロモーター、pBR322のblaプロモーター及びクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ遺伝子のCATプロモーターを包含する。原核プロモーターは、Glick, J. Ind. Microbiol. 1: 277 (1987), Watsonなど., molecular Biology of the Gene, 4th Ed. (Benjamin Cummins 1987), 及びAusubelなど. (1995) により再考されている。
【００９１】
適切な原核宿主は、E.コリ及びバチルス・スブチリス（Bacillus subtilis）を包含する。E.コリの適切な株は、BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLysS, BL21 (DE3)pLysE, DH1, DH4, DH5, DH51, DH51F, DH51MCR, DH 10B, DH10B/p3, DH11S, C600, HB101, JM101, JM105, JM109, JM110, K38, RR1, Y1088, Y1089, CSH18, ER1451及びER1647を包含する（例えば、Brown (ed.), Molecular Biology Labfax (Academic Press 1991) を参照のこと）。バチルス・スブチリスの適切な株は、BR151、YB886、MI119、MI120及びBI70を包含する（例えば、Hardy, “Bacillus Cloning Methods”, in DNA Cloning: A Practical Approach, Clover (ed.) (IRL Press 1985) を参照のこと。
【００９２】
原核宿主においてタンパク質を発現するための方法は、当業者に良く知られている（例えば、Williamsなど., “Expression of foreign protein in E.coli using plasmid vectors and purification of specific polyclonal antibodies” in DNA Cloning 2: Expression Systems, 2nd Edition, Glover など. (eds.), P.15 (Oxford University Press 1995), Ward など., “Genetic Manipulation and Expression of Antibodies” in Monoclonal Antibodies: Principles and Applications, p. 137 (Wiley-Liss, Inc. 1995), 及びGeorgiou, “Expression of Proteins in Bacteria”, in Protein Engineering: Principles and Practice; Cleland など. (eds.), p101 (John Wiley & Sons, Inc. 1996) を参照のこと）。
【００９３】
細菌、酵母、昆虫及び植物細胞中に発現ベクターを導入するための標準方法は、Ausubel (1995) により提供される。
【００９４】
哺乳類細胞系により生成される外来性タンパク質を発現し、そして回収するための一般的方法は、例えばEtcheverry, “Expression of Engineered Proteins in Mammalian Cell Culture “in Protein Englineering: Principles and Practice, Cleland など. (eds.), p163 (Wiley-Liss, Inc. 1996) により提供される。細菌系により生成されるタンパク質を回収するための標準技法は、例えばGrisshammer など., “Purification of Over-Produced proteins from E.coli cells “in DNA Cloning 2: Expression Systems, 2nd Edition, Glover など. (eds.), p.59-92 (Oxford University Press 1995) により提供される。バキュロウィルス系から組換えタンパク質を単離するための確立された方法は、Richardson (ed.), Baculovirus Expression Protocols (The Humana Press, Inc. 1995) により記載される。
【００９５】
他方では、本発明のポリペプチドは、独占的固相合成、部分固相方法、フラグメント縮合又は従来の溶液合成により合成され得る。それらの合成方法は、当業者に良く知られている（例えば、Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 85: 2149 (1963), Stewart et al., “Solid Phase Peptide Synthesis” (2nd Edition), (Pierce Chemical Co. 1984), Bayer and Rapp, Chem. Pept. 3.3 (1986). Atherton など., Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach (IRL Press 1989). Fields and Colowick, “Solid-Phase Peptide Synthesis.” Methods in Enzymology Volume 289 (Academic Press 1997), 及び  Lloyd-Williams など., Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins (CRC Press, Inc. 1997)を参照のこと）。
【００９６】
全体的な化学合成方法、例えば“生来の化学的連結”及び“発現されたタンパク質連結”における変動性もまた標準である（例えば、Dawsonなど., Science 266: 776 (1994), Hackengなど., Proc. Natl. Acad. Sci. USA94: 7845 (1997), Dawson, Methods Enzymol. 287: 34 (1997), Muir など., proc. Natl. Acad. Sci. USA95: 6705 (1998), Severinov and Muir, J. Biol. Chem. 273: 16205 (1998),及びKochendoerfer and Kent, Curr. Opin. Chem. Biol. 3: 665(1999)を参照のこと）。
【００９７】
B. ポリクローナル抗体の抗体：
ポリクローナル抗体は、当業者に良く知られている方法を用いて調製され得る。例えば、Green など., “Production of polyclonal Antisera,” in Immunochemical Protecols (Manson, ed.), pages 1-5 (Humana Press 1992), 及びWilliams など., “Expression of foreign proteins in E. coli using plasmid vectors and purification of specific polyclonal antibodies,” in DNA Cloning 2: Expression Systems, 2nd Edition, Glover など., (eds.), page 15 (Oxford University press 1995)を参照のこと。
【００９８】
BCMA及びTACIポリペプチドの免疫原性は、アジュバント、例えばみょうばん（水酸化アルミニウム）又はフロイント完全又は不完全アジュバントの使用を通して高められ得る。免疫化のために有用なポリペプチドはまた、融合ポリペプチド、例えば免疫グロブリンポリペプチド又はマルトース結合タンパク質とBCMA及びTACIポリペプチドの融合体を包含する。ポリペプチド免疫原は、十分な長さの分子又はその一部であり得る。ポリペプチド部分が“ハプテン−様”である場合、そのような部分は好都合には、免疫化のために高分子キャリヤー（例えば、カサガイヘモシアニン（KLH）、ウシ血清アルブミン（BSA）又は破傷風トキソイド）に結合されるか又は連結され得る。
【００９９】
ポリクローナル抗体は典型的には、動物、例えば馬、牛、犬、鶏、ラット、マウス、ウサギ、テンジュクネズミ、ヤギ又は羊において生ぜしめられるが、本発明の抗−受容体ポリペプチド抗体はまた、ヒトに近い霊長類抗体から誘導され得る。ヒヒにおいて診断的に及び治療的に有用な抗体を生ぜしめるための一般的な技法は、例えばGoldenbergなど., 国際特許出願番号WO91/11465号及びLosmanなど., Int. J. Cancer 46: 310, 1990に見出され得る。
【０１００】
C．モノクローナル抗体の生成：
好ましくは、BCMA又はTACIに対するモノクローナル抗体が生成され得る。特定抗原に対する囓歯動物モノクローナル抗体は、当業者に知られている方法により得られる（例えば、Kohler など., Nature 256: 495 (1975), Harlow and Lane(eds.), Antibodies: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press 1988, Coliga など., (eds.), Current Protocols in Immunology, Vol. 1, page 2.5.1-2.6.7 (John Wiley & Sons 1991), Picksley など., “Production of monoclonal antibodies against proteins expressed in E. coli,” in DNA Cloning 2: Expression Systems, 2nd Edition, Glover など. (eds.), page 93 (Oxford University Press 1995，及びGoging, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice (Academic Press 1996)を参照のこと)。
【０１０１】
手短には、モノクローナル抗体は、BCMA又はTACIポリペプチドを含んで成る組成物をマウスに注射し、血清サンプルを除去することにより抗体生成の存在を確かめ、B−リンパ球を得るために脾臓を除去し、ハイブリドーマを生成するために前記リンパ球を骨髄腫細胞により融合し、ハイブリドーマをクローニングし、抗原に対する抗体を生成する陽性クローンを選択し、抗原に対する抗体を生成するクローンを培養し、そしてハイブリドーマ培養物から抗体を単離することに得られる。ハイブリドーマをクローニングする前、ハイブリドーマは、標準の技法、例えばBCMA、TACI又はBCMA又はTACI についての捕獲ELISAを用いてスクリーンされ得る。
【０１０２】
このアプローチの変法においては、抗−BCMA−TACIモノクローナル抗体は、本明細書に記載されるBCMA及びTACIアミノ酸配列の１つ又は両者をコードするcDNAにより安定してトランスフェクトされたネズミプレ−B細胞系により免疫化されたマウスからの脾臓細胞と骨髄腫細胞とを融合することによって得られる。この一般的な方策は、例えばTedderなど., アメリカ特許第5,484,892号（1996）により記載されている。
【０１０３】
抗−BCMA−TACI抗体はまた、ヒトモノクローナル抗体から誘導され得る。例えば、ヒトモノクローナル抗体は、抗原攻撃に応答して特定のヒト抗体を生成するよう構築されたトランスジェニックマウスから得られる。この技法においては、ヒトH鎖及びL鎖遺伝子座の要素が、内因性H鎖及びL鎖遺伝子座の標的化された破壊を含む胚幹細胞系に由来するマウス株中に導入される。トランスジェニックマウスは、ヒト抗原に対して特異的なヒト抗体を合成することができ、そして前記マウスはヒト抗体−分泌性ハイブリドーマを生成するために使用され得る。トランスジェニックマウスからヒト抗体を得るための方法は、Greenなど., Nat. Genet. 7: 13, 1994, Lonberg など., Nature 368: 856, 1994, 及びTaylorなど., Inc. Immun. 6: 576, 1994により記載される。
【０１０４】
モノクローナル抗体は、種々の十分に確立された技法により、ハイブリドーマ培養物から単離され、そして精製され得る。そのような単離技法は、プロテイン−Aセファロースによる親和性クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー及びイオン交換クロマトグラフィーを包含する（例えば、Coligan, page 2.7.1-2.7.12及びpage 2.9.1^2.9.3; Bainesなど.,” Purification of Imunoglobulin G (IgG)”, Methods in Molecular Biology, vol, 10, p. 79-104 (The Humana Press, Inc. 1992) を参照のこと）。
【０１０５】
BCMA及びTACIを通してシグナルを開始する抗−BCMA−TACIモノクローナル抗体は、レポーター細胞系に関してのインビトロ試験により同定され得る。TACI又はBCMA、及び転写レポーター遺伝子を発現する構築された哺乳類細胞系（例えば、Jurkat）は、レポーター遺伝子（例えば、ルシフェラーゼ、又は核因子−κBレポーター、例えばNF−κBシス−レポーティングシステム（STRATAGENE；La Jolla, CA））の転写を刺激するそれらの能力について、BCMA−TACIモノクローナル抗体を試験するために使用され得る。
【０１０６】
D．抗体フラグメント及び組換え抗体の生成：
特定の用途に関しては、抗−BCMA又は抗−TACI抗体のフラグメントを調製することが所望される。そのような抗体フラグメントは、例えば抗体のタンパク質加水分解により得られる。抗体フラグメントは、従来の方法による完全な抗体のペプシン又はパパイン消化により得られる。例示のように、抗体フラグメントは、F(ab’)2として示される５Sフラグメントを供給するためにペプシンによる抗体の酵素分解により生成され得る。このフラグメントはさらに、3.5S Fab’ 単価フラグメントを生成するためにチオール還元剤を用いて分解され得る。
【０１０７】
任意には、その分解反応は、ジスルフィド結合の分解に起因するスルフヒドリル基に関するブロッキング基を用いて行われ得る。他の手段としては、ペプシンを用いての酸素分解が２種の単位Fabフラグメント及びFcフラグメントを直接的に生成する。それらの方法は、例えば、Goldenberg, アメリカ特許第4,331,647号、Nisonoff など., Arcg Biochem. Biophys. 89: 230, 1960, Porter, Biochem. J. 73: 119, 1959, Edelman など., in Methods in Enzymology vol. 1, p. 422 (Academic Press 1967), 及びColigan, p. 2.8.1-2.8.10及び2.10-2.10.4により記載される。
【０１０８】
抗体を分解する他の方法、例えば単価L−H鎖フラグメントを形成するためへのH鎖の分解、フラグメントの追加の分解、又は他の酵素的、化学的又は遺伝的技法がまた、そのフラグメントが損なわれていない抗体により認識される抗原に結合する限り、使用され得る。
【０１０９】
例えば、Fvフラグメントは、VH及びVL鎖の会合を含んで成る。この会合は、Inbar など., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 69: 2659, 1972により記載のように、非共有的であり得る。他方では、可変鎖は、分子間ジスルフィド結合により連結され、又は化学物質、例えばグルテルアルデヒドにより交差結合され得る（例えば、Sandhu, Crit. Rew. Biotech. 12: 437, 1992を参照のこと）。
【０１１０】
Fvフラグメントは、ペプチドリンカーにより連結されるVH及びVL鎖を含んで成る。それらの一本鎖抗原結合タンパク質（scFv）は、オリゴヌクレオチドにより連結されるVH及びVLドメインをコードするDNA配列を含んで成る構造遺伝子を構成することによって調製される。構造遺伝子が、続いて、宿主細胞、例えばE.コリ中に導入される発現ベクター中に挿入される。組換え宿主細胞は、２種のVドメインを架橋するリンカーペプチドを有する単鎖ポリペプチドを合成する。ScFvを生成するための方法は、例えばWhitlow など., Methods: A Companion to Metheds in Enzymology 2:97, 1991により記載される。Bird など., Science 242:423, 1988, Ladner など., アメリカ特許第4,946,778号、Packなど., Bio/Technology 11: 1271, 1993及びSandhu,Crit. Rev. Biotech. 12: 437 (1992)も参照のこと。
【０１１１】
例示のように、scFvは、インビトロで、TACI又はBCMAポリペプチドにリンパ球を暴露し、そしてファージ又は類似するベクターにおける抗体表示ライブラリーを選択すること（例えば、固定された又はラベルされたTACI又はBCMAタンパク質又はペプチドの作用を通して）によって得られる。可能性あるTACI又はBCMAポリペプチド結合ドメインを有するポリペプチドをコードする遺伝子は、ファージ（ファージ表示）又は細菌、例えばＥ．コリ上に表示されるランダムペプチドライブラリーをスクリーニングすることによって得られる。前記ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、多くの手段、例えばランダム突然変異誘発及びランダムポリヌクレオチド合成を通して得られる。
【０１１２】
それらのランダムペプチド表示ライブラリーは、タンパク質又はポリペプチドであり得る既知の標的物、例えばリガンド又は受容体、生物学的又は合成高分子、又は有機又は無機物質と相互作用するペプチドについてスクリーンするために使用され得る。そのようなランダム  ペプチド表示ライブラリーを創造し、そしてスクリーニングするための技法は、当業界において知られている（Ladner など., アメリカ特許第5,223,409 号; Ladner など., アメリカ特許第4,946,778 号；Ladner など., アメリカ特許第5,403,484 号及びLadner など., アメリカ特許第5,571,698 号、Kayなど., Phage Display of Peputides and Proteins (Academic Press, Inc. 1996)及びJohns, “Phage Display Technology”, in Diagnostic and Therapeutic Antibodies, George and Urch(Eds.), pages 53-62 (Humana press, inc. 2000）。
【０１１３】
ランダムペプチド表示ライブラリー及びそのようなライブラリーをスクリーニングするためのキットは、例えばClontech (Palo Alto, CA), Invitrogen Inc. (San Diego, CA), New England Biolabs, Inc. (Beverly, MA) 及びAmersham Pharmacia Biotech, Inc. (Piccataway, MJ) から市販されている。ランダムペプチド表示ライブラリーは、BCMA又はTACIに結合するタンパク質を同定するために、本明細書に開示される受容体配列を用いてスクリーニングされ得る。
【０１１４】
抗体フラグメントのもう１つの形は、単一の相補性−決定領域（CDR）をコードするペプチドである。CDRペプチド（“最小認識単位”）は、興味ある抗体のDCRをコードする遺伝子を構成することによって得られる。そのような遺伝子は、例えば抗体−生成細胞のRNAから可変領域を合成するためにポリメラーゼ鎖反応を用いることによって調製される（例えば、Larrick など., Methods: A Companion to Methods in Enzymology 2:106, (1991), Courtenay-Luck, “Genetic Manipulation of Monoclonal Antibodies,” in Monoclonal Antibodies: Production, Engineering and Clinical Application, Ritter など., (eds.), page 166 (Cambridge University Press 1995), 及びWard など., “Genetic Manipulation and Expression of Antibodies,” in Monoclonal Antibodies: Principles and Applications, Birch など., (eds.), page 137 (Wiley-Liss, Inc. 1995)を参照のこと）。
【０１１５】
もう１つの有用な抗−受容体抗体はキメラ抗体である。キメラ抗体は、可変ドメイン、及び囓歯動物抗体に由来する相補的な決定領域を含んで成り、そして抗体分子の残りはヒト抗体に由来する。例えば、Verma and Boleti, “Engineering Antibody Molecules”, in Diagnostic and Therapeutic Antibodies, George and Urch (Eds.), Pages 35-52 (Humana Press, Inc. 2000) を参照のこと。
【０１１６】
他方では、抗−受容体抗体は、“ヒト型化”モノクローナル抗体から誘導され得る。ヒト型化モノクローナル抗体は、マウス免疫グロブリンH及びL可変鎖からのマウス相補的決定領域を、ヒト可変ドメイン中に移行することにより生成される。次に、ヒト抗体の典型的な残基がネズミ相対物の骨格領域において置換される。ヒト型化モノクローナル抗体に由来する抗体成分の使用は、ネズミ不変領域の免疫原性に関連する可能性ある問題を回避する。ネズミ免疫グロブリン可変ドメインをクローン化するための一般的な技法は、例えば、Orlandiなど., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 3833, 1989により記載される。
【０１１７】
ヒト型化モノクローナル抗体を生成するための技法は、例えば、Jones など., Nature 321:522, 1986, Carter など., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 4285, 1992, Sandhu, Crit. Rey. Biotech. 12: 437, 1992, Singer など., J. Tmmun. 150: 2844, 1993, Sudhir (ed.), Antibody Engineering Protocols (Humana Press, Inc. 1995), Kelley, “Engineering Therapeutic Antibodies,” in Protein Engineering: Principles and Practice, Cleland など. (eds.), pages 399-434 (John Wiley & Sons, Inc. 1996), 及びQueen など., アメリカ特許第5,693,762号（1997）により記載される。
【０１１８】
E.  二特異的抗体の生成：
例１に示されるように、抗−BCMA及び抗−TACI抗体の組合せは、リンパ腫の処理において好都合であり得る。本発明は、BCMA細胞外領域を結合する抗体成分、及びTACI細胞外領域を結合する抗体成分を含んで成る組織物の使用を包含する。例えば、そのような“多特異的抗体組成物”は、上記に記載される二重反応性抗―BCMA−TACI抗体成分、異種抗体混合物（すなわち、異なった結合特異性をそれぞれ有する、少なくとも２つの抗体成分の凝集体）、二特異的抗体（すなわち、２つの異なった結合部位を有する抗体成分）、単鎖二特異的ポリペプチド、及び同様のものを含んで成ることができる。
【０１１９】
二特異的抗体は、種々の従来の方法により製造され得る。例示としては、二特異的抗体は、異なった抗体の還元性切断に起因するFab’フラグメントの酸化切断により調製されて来た。例えば、Winterなど., Nature 349: 293 (1991) を参照のこと。これは、２種の異なった抗体のペプシン消化、Fab’フラグメントの混合を形成するための還元性切断、続いて、元のエピトープの個々に対して特異的なFab’部分を含むニ特異的抗体を包含するF(ab’)2フラグメントの混合物を生成するためにジスルフィド結合の酸化再形成により生成される２種の異なったF(ab’)2フラグメントを混合することによって行われ得る。そのような二特異的抗体の調製のための一般的技法は、例えばNisonhoffなど., Arch Biochem. Biophys. 93: 470 (1961), Hammerling など., J. Exp. Med. 128: 1461 (1968) 及びアメリカ特許第4,331,647号に見出され得る。
【０１２０】
他方では、結合は、異種二官能価リンカー、例えばマレイミド−ヒドロキシスクシンイミドエステルを用いることによって達成され得る。抗体又はフラグメントと前記エステルとの反応は前記抗体又はフラグメント上のアミン基を誘導体化し、そして次に、その誘導体は遊離スルヒドリル基を有する抗体Fabフラグメント（又は、例えばTrautの試薬によりそれに付加されるスルフヒドリル基を有する大フラグメント又は損なわれていない抗体）と反応せしめられ得る。そのようなリンカーは、同じ抗体における基をたぶんほとんど架橋せず、そして結合の選択性を改良する。
【０１２１】
もう１つの例示として、二特異的F(ab’)2抗体は、二官能価架橋剤o−フェニレンジマレイミドを用いて、それらのヒンジ領域SH基を通して２種のFab’フラグメントを連結することによって生成され得る。例えば、Tso, “F(ab’)2 Fusion Proteins and Bispecific F(ab’)2” in Chamow and Ashkenazi (Eds.), Antibody Fusion Proteins, Pages 127-150 (Wiley-Liss, Inc. 1999), and french, “How to Make Bispecific Antibodies”, in George and Urch (Eds.), Diagnostic and Therapeutic Antibodies, pages 333-339 (Humana Press, Inc. 2000) を参照のこと。
【０１２２】
抗原結合部位から遠く離れた部位で抗体又はフラグメントを結合することは好都合である。これは、例えば、上記に示されるように、切断された鎖間スルフヒドリル基への連結により達成され得る。もう１つの方法は、酸化された炭水化物部分を有する抗体と、少なくとも１つの遊離アミン機能を有するもう１つの抗体とを反応せしめることを包含する。これは、例えば最終複合体を形成するために、硼水素化合物還元による第二アミンへの還元により安定化され得る初期シッフ塩基（イミン）結合をもたらす。そのような部位特異的結合は、小さな分子に関しては、アメリカ特許第4,671,958号に開示され、そして大きな付加物に関しては、アメリカ特許第4,699,784号に開示されている。
【０１２３】
他方では、二特異的抗体は、２種のハイブリドーマ細胞系（１つの細胞系は抗−BCMAモノクローナル抗体を生成し、そしてもう1つの細胞系は抗−TACIモノクローナル抗体を生成する）を融合することによって生成され得る。テトラドーマを生成するための技法は、例えばMilsteinなど., Nature 305: 538 (1983) 及びPohlなど., Inc. J. Cancer 54: 418 (1993) により記載される。
【０１２４】
二特異的抗体はまた、遺伝子工学により生成され得る。例えば、抗−BCMAモノクローナル抗体の可変ドメインをコードするDNAを含むベクターが、抗−TACI抗体を分泌するハイブリドーマ中に導入され得る。その得られる形質転換体は、BCMA及びTACIを結合する二特異的抗体を生成する。他方では、抗−BCMA及び抗−TACI結合ドメインの両者をコードするキメラ遺伝子が企画され得る。二特異的抗体を生成するための種々の遺伝的方法が当業者に入手できる。１つのアプローチにおいては、例えば二特異的F(ab’)2がロイシンジッパーを用いて生成され得る。
【０１２５】
例えばTso, “F(ab’)2 Fusion Proteins and Bispecific F(ab’)2” in Chamow and Ashkenazi (Eds.), Antibody Fusion Proteins, pages 127-150 (Wiley-Liss, Inc. 1999) を参照のこと。遺伝子工学により二特異的抗体を生成するための一般的技法は、例えばSongsivilaiなど., Biochem. Biophys. Res. Commun. 164: 271 (1989), Trauneckerなど., EMBO J. 10: 3655 (1991) 及びWeinerなど., J. Immunol. 147: 4035 (1991) により記載される。
【０１２６】
本発明の二特異的分子はまた、一本鎖二特異的分子、例えば一本鎖二特異的抗体、一本鎖抗体及び結合決定基を含んで成る一本鎖二特異的分子、又は２種の結合決定基を含んで成る一本鎖二特異的分子であり得る。
二特異的抗体は、標準技法、例えば二特異的ELISAを用いてスクリーンされ得る。
【０１２７】
４．受容体タンパク質を検出するためへの抗−BCMA−TACI抗体の使用：
本発明は、BCMA及びTACIタンパク質の存在についてインビトロで生物学的サンプルをスクリーンするためへの抗−BCMA−TACI抗体の使用を企画する。1つのタイプのインビトロアッセイにおいては、抗体が液相において使用される。例えば、生物学的サンプルにおけるBCMA又はTACIの存在は、生物学的サンプルと、微量のラベルされたBCMA又はTACI及び抗体とを、前記抗体とBCMA又はTACIとの間の結合を促進する条件下で混合することによって試験され得る。
【０１２８】
サンプルにおける抗体及びBCMA又はTACIの複合体が、前記複合体を、抗体、例えばFc抗体又はスタフィロコーカスタンパク質Aと結合する同定されたタンパク質とを接触することによって、反応混合物から分離され得る。生物学的サンプルにおけるBCMA又はTACIの濃度は、抗体に結合されるラベルされたBCMA又はTACIの量に反比例し、そして遊離ラベルにされたBCMA又はTACIの量に直接的に関連する。例示的な試験サンプルは、血液、尿、唾液、組織生検及び検死材料を包含する。
他方では、抗体が固相キャリヤーに結合されるインビトロアッセイが行われ得る。例えば、抗体が、不溶性支持体、例えばポリマー−被覆されたビーズ、プレート又は管に抗体を結合するために、ポリマー、例えばアミノデキストランに結合され得る。他の適切なインビトロアッセイは、当業者に明らかであろう。
【０１２９】
もう１つのアプローチにおいては、抗体が、生検検体から調製された組織切片においてBCMA又はTACIを検出するために使用され得る。そのような免疫化学的検出が、比較的多くのBCMA又はTACIを決定するために、及び試験される組織におけるBCMA又はTACIの分布を決定するために使用され得る。一般的な免疫化学的技法は、十分に確立されている（例えば、Ponder, “Cell Marking Techniques and Their Application.”in Mammalian Development: A Practical Approach, Monk (ed.), pages 115-38 (IRL Press 1987), Coligan at pages 5.8.1-5.8.8, Ausubel (1995) at pages 14.6.1 to 14.6.13 (Wiley interscience 1990), and Manson (ed.), Methods In Molecular Biology. Vol. 10: Immunochemical Proteocols (The Humana Press. Inc. 1992) を参照のこと）。
【０１３０】
免疫化学的検出は、生物学的サンプルと抗体とを接触し、そして次に、前記生物学的サンプルと、抗体に結合する検出できるラベルされた分子とを接触せしめることによって行われ得る。例えば、前記検出できるラベルされた分子は、抗−BCMA−TACI抗体に結合する抗体成分を含んで成る。他方では、抗体は、アビジン/ストレプタビジン（又はビオチン）により接合され、そして検出できるラベルされた分子はビオチン（又はアビジン/ストレプタビジン）を含むことができる。この基本的技法の多くの変法は、当業者に良く知られている。
【０１３１】
他方では、抗体が、免疫接合体を形成するために、検出できるラベルにより接合され得る。適切な検出できるラベルは、例えば放射生同位体、蛍光ラベル、化学ルミネセンスラベル、酵素ラベル、生物ルミネセンスラベル又はコロイド状金を包含する。そのような検出できるラベルされた免疫接合体の製造及び検出方法は、当業者に良く知られており、そして下記により詳細に記載される。
検出できるラベルは、オートラジオグラフィーにより検出される放射性同位体であり得る。本発明のために特に有用である同位体は、3H, 125I, 131I, 35S及び14Cである。
【０１３２】
免疫接合体はまた、蛍光化合物によりラベルされ得る。蛍光ラブルされた抗体の存在は、適切な波長の光に免疫接合体を暴露し、そして得られる蛍光を検出することによって決定される。蛍光ラベル化合物は、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、o−フタルアルデヒド及びフルオレサミンを包含する。
【０１３３】
他方では、免疫接合体は、化合物ルミネセンス化合物に抗体化合物を接合することによって、検出的にラベルされ得る。化学ルミネセンス−標識された免疫接合体の存在は、化学反応の間に生じるルミネセンスの存在を検出することによって決定される。化学ルミネセンスラベリング化合物の例は、ルミノール、イソルミノール、芳香族アクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジニウム塩及びオキサレートエステルを包含する。
【０１３４】
同様に、化学ルミネセンス化合物は、本発明の免疫接合体をラベルするために使用され得る。生物発光は、触媒タンパク質が化学ルミネセンス反応の効率を高める生物学的システムに見出されるタイプの化学ルミネセンスである。生物ルミネセンスタンパク質の存在は、ルミネセンスの存在を検出することによって決定される。ラベリングのために有用である生物ルミネセンス化合物は、ルシフェリン、ルシフェラーゼ及びエクオリンを包含する。
【０１３５】
他方では、免疫接合体は、酵素に抗−BCMA−TACI抗体化合物を接合することによって検出できるようラベルされ得る。抗体−酵素接合体が適切な基質の存在下でインキュベートされる場合、酵素成分は、分光光度、蛍光又は可視手段により検出され得る化学成分を生成するために基質と反応する。多くの特異的免疫接合体を検出できるようにラベルするために使用され得る酵素の例は、β−ガラクトシダーゼ、グルコオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ及びアルカリホスファターゼを包含する。
【０１３６】
当業者は、本発明に従って使用され得る他の適切なラベルを知っているであろう。抗体へのマーカー成分の結合は、当業界において知られている標準技法を用いて達成され得る。これに関しての典型的な方法論は、Kennedyなど., Clin. Chim. Acta 70:1 (1976), Schursなど., Clim. Acta 81:1 (1977), Shihなど., Int’l. J. Cancer 46:1101 (1990), steinなど., Cancer  Res. 50:1330 (1990), 及びColigan、前記により記載される。
【０１３７】
さらに、免疫化学的検出の便利さ及び多様性は、アビジン、ストレプタビジン及びビオチンにより接合された抗体を用いることによって増強され得る（例えば、Wilchek. など., (eds.), “Avidin-Biotin Technology,” Methods In Enzymology, Vol. 184 (Academic Press 1990), and Bayerなど., “Immunochemical Applications of Avidin-Biotin Technology,” in Methods In Molecular Biology, Vol. 10, Manson (ed.) pages 149-162 (The Humana Press. Inc. 1992) を参照のこと）。
【０１３８】
イムノアッセイを行うための方法は十分に確立されている。例えば、Cook and Self, “Monoclonal Antibodies in Diagonostic Immunoassays,” in Monoclonal Antibodies: Production, Engineering, and Clinical Application, Ritter and Ladyman (eds.), Pages 180-208. (Cambridg University Press, 1995), Perry, “The Role of Monoclonal antibodies in the Advancement of Immunoassay Technoogy”, in Monoclonal Antibodies; Principles and applications, Birch and Lennox (eds.), pages 107-120 (Wiley-Liss, Inc. 1995), and Diamandis, Immunoassay (Academic Press, Inc. 1996 を参照のこと。
【０１３９】
本発明は、本明細書に記載される抗体成分を含んで成る組成物を企画する。そのような組成物はさらに、キャリヤーを含むことができる。キャリヤーは、従来の有機又は無機キャリヤーであり得る。キャリヤーの例は、水、緩衝溶液、アルコール、プロピレングリコール、マクロゲル、ゴマ油、トウモロコシ油及び同様のものを包含する。
【０１４０】
本発明はまた、BCMA又はTACI遺伝子発現についての免疫学的診断アッセイを行うためのキットも企画する。そのようなキットは、抗−BCMA又はTACI抗体又は抗体フラグメントを含んで成る少なくとも１つの容器を含んで成る。キットはまた、BCMA又はTACI抗体又は抗体フラグメントの存在を示すことができる１又は複数の試薬を含んで成る第２容器を含むことができる。そのようなインジケーター試薬の例は、検出できるラベル、例えば放射性ラベル、蛍光ラベル、化学ルミネセンスラベル、酵素ラベル、生物ルミネセンスラベル、コロイド状金及び同様のものを包含する。キットはまた、BCMA又はTACI抗体又は抗体フラグメントが、BCMA又はTACIタンパク質を検出するために使用される、使用者に伝達するための手段を含んで成る。例えば、文書の説明書は、封入される抗体又は抗体フラグメントが、BCMA又はTACIを検出するために使用され得ることを言及する。文書の材料は容器に直接的に適用され、又は文書の材料は、パッケージング挿入体の形で提供され得る。
【０１４１】
５．免疫接合体及び融合タンパク質の調製：
本発明は、裸抗−BCMA−TACI抗体（又はその裸抗体フラグメント）の使用、及び種々の疾病、例えばB−細胞悪性疾患の処理をもたらすためへの免疫接合体の使用に関する。免疫接合体は、標準技法を用いて調製され得る。例えば、免疫接合体は、抗体成分に治療剤を間接的に接合することによって生成され得る（例えば、Shihなど., Int. J. Cancer41: 832-839 (1988); Shihなど., Int. J. Cancer 46: 1101-1106 (1990); 及びShihなど., アメリカ特許第5,057,313号を参照のこと。
【０１４２】
手短には、１つの標準アプローチは、酸化された炭水化物部分を有する抗体成分と、少なくとも１つの遊離アミン機能を有し、そして多くの薬剤、トキシン、キレート化剤、硼素付加物又は他の治療材を負荷されているキャリヤーポリマーとを反応せしめることを包含する。この反応は、最終接合体を形成するために第二アミンへの還元により安定化され得る初期シェフ塩基（イミン）連結をもたらす。
【０１４３】
前記キャリヤーポリマーは、他の実質的に同等のポリマーキャリヤーがまた使用され得るが、少なくとも50個のアミノ酸残基のアミノデキストラン又はポリペプチドであり得る。好ましくは、最終免疫接合体は、投与の容易性及び治療への使用のためへの効果的標的化のために、水溶液、及び哺乳類血清に可溶性である。従って、キャリヤーポリマー上の安定化官能基は、最終免疫接合体の血清溶解を増強するであろう。
【０１４４】
ポリペプチド治療剤を含んで成る免疫接合体を生成するための他のアプローチにおいては、治療剤は、グルタアルデヒド縮合により、又はポリペプチド上の活性化されたカルボキシ基とアミノデキストラン上のアミンとの反応によりアミノデキストランに結合される。キレート化剤は、放射性金属又は磁気共鳴エンハンサーを含んで成る免疫接合を調製するために抗体成分に結合され得る。例示的キレート化剤は、エチレンジアミン四酢酸及びジエチレントリアミン五酢酸の誘導体を包含する。硼素付加物、例えばカルボランは従来の方法により抗体成分に結合され得る。
【０１４５】
免疫接合体はまた、治療剤と抗体成分とを直接的に接合することによって調製され得る。その一般的方法は、間接的接合方法に類似し、但し治療剤は酸化された抗体成分に直接的に結合されている。
【０１４６】
さらなる例示として、治療剤は、ジスルフィド結合形成を通して、還元された抗体分分のヒンジ領域で結合され得る。例えば、テタヌストキシンペプチドは、抗体成分にペプチドを結合するために使用される単一のシステイン残基により構成され得る。他の手段として、そのようなペプチドは、ヘテロ二官能価架橋剤、例えばN−スクシニル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオーネートを用いて、抗体成分に結合され得る。そのような接合についての一般的技法は、当業界において知られている。
【０１４７】
例えば、Wong, Chemistry of Protein Conjugation and Cross-Linking (CRC Press 1991); Upeslacisなど., “ Modification of Antibodies by Chemical Methods” in Monoclonal Antibodies; Principles and Applications, Birchなど. (eds.), pages187-230 (Wiley-Liss, Inc. 1995); Price, “Production and Characterization of Synthetic Peptide-Derived Antibodies” in Monoclonal Antibodies: Production, Engineering and Clinical Application, Ritterなど., (eds.), Pages 60-84 (Cambridge University Press 1995) を参照のこと。
【０１４８】
上記のように、抗体のFc領域における炭水化物成分は、治療剤を接合するために使用され得る。しかしながら、Fc領域は、抗体フラグメントが免疫接合体の抗体成分として使用され得る場合、不在である。それにもかかわらず、抗体又は抗体フラグメントのL鎖可変領域中に炭水化物成分を導入することが可能である。例えば、Leungなど., J. Immunol. 154: 5919 (1996); Hansen など., アメリカ特許第5,443,953号（1995）を参照のこと。次に、構築された炭水化物成分が、治療剤を結合するために使用される。
【０１４９】
さらに、当業者は、接合方法の多くの可能性ある変法を認識するであろう。例えば、炭水化物成分は、血液、リンパ又は他の細胞外流体における損なわれていない抗体又はその抗原−結合フラグメントの半減期を拡張するために、ポリエチレングリコールを結合するために使用され得る。さらに、炭水化物成分又は遊離スルフヒドリル基に治療剤を結合することによって、二価の免疫接合体を構成することが可能である。そのような遊離スルフヒドリル基は、抗体成分のヒンジ領域に位置することができる。
【０１５０】
１つのタイプの免疫接合体は抗体成分及びポリペプチド細胞毒素を含んで成る。適切なポリペプチド細胞毒素の例は、リボソーム不活性化タンパク質である。I型リボソーム不活性化タンパク質は一本鎖タンパク質であり、そしてII型リボソーム不活性化タンパク質は、ジスルフィド結合により連結される非同一のサブユニット（A及びB鎖）から成る（再考のためには、Soriaなど., Targeted Diagn. Ther. 7: 193 (1992) を参照のこと）。有用なI型リボソーム不活性化タンパク質は、次のものを包含する：
【０１５１】
サポナリア・オフィシナリス（Saponaria officinalis）(例えば、サポリン−１、サポリン−２、サポリン−３、サポリン−６)、モモルジカ・カランチア（Momordica charantia）(例えば、モモルジン)、ビロニア・ジオイカ（Byronia dioica）(例えば、ブリオジン、ブリオジン−２)、トリコサンテス・キリロウイ（Trichosanthes kirilowii）(例えば、トリコサンチン、トリコキリン)、ゲロニウム・ムルチフロラム（Gelonium multiflorum）(例えば、ゲロニン)、フィトロカ・アメリカナ（Phytolacca americana）(例えば、ヤマゴボウ抗ウィルスタンパク質、アマゴボウ抗ウィルスタンパク質−II、抗ウィルスタンパク質)、及び同様のものからのポリペプチド。リボソーム不活性化タンパク質は、例えばアメリカ特許5,635,386号（Walshなど.,）により記載される。
【０１５２】
適切なII型リボソーム不活性タンパク質は、リシナス・コムニス（Ricinus communis）(例えば、リシン)、アブラス・プレカトリウム（Abrus precatorius）(例えば、アブリン)、アデニア・ディジタタ（Adenia digitata）（例えば、モデシン）、及び同様のものからのポリペプチドを包含する。II型リボソーム不活性化タンパク質は、ガラクトシドを結合するB鎖、及びアデンソインを浄化する毒性A鎖を包含するので、II型リボソーム不活性化タンパク質接合体はA鎖を包含するべきである。
【０１５３】
追加の有用なリボソーム不活性化タンパク質は、ボウガニン（bouganin）、クラビン、トウモロコシリボソーム不活性化タンパク質、バカリア・ピラミダタ（Vaccaria pyramidata）リボソーム不活性化タンパク質、ニグリンb, 塩基性ニグリン１、エブリン、ラセモシンｂ、ルフィン−ａ、ルフィン−ｂ、ルフィン−S及び当業者に知られている他のリボソーム不活性化タンパク質を包含する。例えば、Bolognesi and Stripeによる国際公開番号WO98/55623号、Colnaghiなどによる国際出願番号WO97/49726号、Heyなどによるアメリカ特許第5,635,384号、Bolognesi and Stripeによる国際公開番号WO95/07297号、Ariasなどによる国際公開番号WO94/20540号、Watanabeなど., J. Biochem. 106: 6977 (1989); Islam など., Agric. Biol. Chem. 55: 229 (1991), 及びGaoなど., FEBS Lett. 347: 257 (1994) を参照のこと。
【０１５４】
天然に存在するリボソーム不活性化タンパク質はまた、本明細書に記載される標的化組成物のためにも適切であり、そしてそのようなタンパク質は当業者に知られている。リボソーム不活性化タンパク質は、公的に入手できるアミノ酸及びヌクレオチド配列を用いて生成され得る。例示のように、サポリン−６をコードするヌクレオチド配列は、Lorenzettiなど., アメリカ特許第5,529,932号により開示され、そしてWalshなど., アメリカ特許第5,635,384号は、トウモロコシ及び大麦リボソーム不活性化タンパク質ヌクレオチド及びアミノ酸配列を記載する。さらに、リボソーム不活性化タンパク質はまた市販されている。
【０１５５】
追加のポリペプチド細胞毒素は、リボヌクレアーゼ、DNアーゼI、ブドウ球菌エンテロトキシン−A、ジフテリア毒素、シュードモナスエキソトキシン及びシュードモナスエンドトキシンを包含する。例えば、Pastanなど., Cell 47: 641 (1986), 及びGoldenberg, CA A Cancer Journal for Clinicians 44: 43 (1994) を参照のこと。他の適切なトキシンは、当業者に知られている。
【０１５６】
もう１つの一般的なタイプの有用な細胞毒素は、チロシンキナーゼインヒビターである。チロシンキナーゼによる増殖の活性化は腫瘍の進行及び経過において役割を演じることが示されているので、この活性化は、チロシンキナーゼインヒビターを供給するBCMA−TACI抗体成分により阻害され得る。適切なチロシンキナーゼインヒビターは、イソフラボン、例えばゲニステイン（5, 7, 4’−トリヒドロキシイソフラボン）、ダイゼン（7, 4’−ジヒドロキシイソフラボン）及びビオカニンA（４−メトキシゲニステイン）及び同様のものを包含する。成長因子にチロシンインヒビターを接合する方法は、例えばアメリカ特許第5,911,995号（Uckun）により記載される。
【０１５７】
もう１つのグループの有用なポリペプチド細胞毒素は、免疫モジュレーターを包含する。本明細書に使用される場合、“免疫モジュレーター”とは、サイトカイン、幹細胞成長因子、リンフォトキシン、同時刺激分子、造血因子及び同様のもの、並びにそれらの分子の合成類似体を包含する。免疫モジュレーターの例は、壊死因子、インターロイキン（例えば、インターロイキン−１（IL−１）、IL−２〜IL−21）、コロニー刺激因子（例えば、顆粒球−コロニー刺激因子及び顆粒球マクロファージ−コロニー刺激因子）、インターフェロン（例えば、インターフェロン−α、−β、−γ、−ω及び−τ）、“S１因子”と称する幹細胞成長因子、エリトロポエチン及びトロンボポエチンを包含する。例示的な免疫モジュレーター成分は、IL−２、IL−６、IL−10、インターフェロン−γ、TNF−α及び同様のものを包含する。
【０１５８】
免疫モジュレーターを含む免疫接合体は、免疫モジュレーターを標的細胞に供給するための手段を提供し、そして腫瘍細胞に対して特に有用である。免疫モジュレーターの細胞毒性効果は、当業者に良く知られている。例えば、Klegermanなど、“Lymphokines and Monokines”, in Biotechnology and pharmacy, Pessutoなど. (eds.), pages 53-70 (Chapman & Hall 1993) を参照のこと。例示のように、インターフェロンは、種々の細胞の表面上でのクラスI組織適合性抗原の高められた発現を誘発することによって細胞増殖を阻害し、そして従って、細胞毒性Tリンパ球による細胞の破壊速度を増強する。さらに、腫瘍壊死因子、例えば腫瘍壊死因子−αは、DNA断片化を誘発することによって、細胞毒性効果を生成すると思われる。
【０１５９】
本発明はまた、細胞毒素をコードする核酸分子を含んで成る免疫接合体を包含する。このアプローチの例として、Hogansonなど., Human Gene Ther. 9: 2565 (1998) は、サポリン遺伝子を含んで成る発現ベクターにより縮合されたFGF−２−ポリリシン接合体を生成することによって、サポリン遺伝子のFGF−２介在性供給を記載する。
他の適切な毒素は、当業者に知られている。
【０１６０】
細胞毒性ポリペプチド及び抗体成分の接合体は、ポリペプチドを接合するための標準の技法を用いて調製され得る。例えば、Lam and Kelleher, アメリカ特許第5,055,291号は、ジフテリア毒素フラグメントA又はリシン毒素のいずれかにより接合される抗体の生成を記載する。一般的なアプローチはまた、Lappiなど., Biochem. Biophys. Res. Commun. 160: 917 (1989), Soria など., Targeted Diagn. Ther. 7: 193 (1992), Buechlerなど., Eur. J. Biochem. 234: 706 (1995), Behar-Cohenなど., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 36: 2434 (1995), Lappi and Baird, アメリカ特許第5,191,067号、Calabresiなど.,アメリカ特許第5,478,804号、及びLappi and Baird, アメリカ特許第5,576,288号により記載されるように、サポリンによる線維芽細胞成長因子の接合方法により例示される。
【０１６１】
また、Ghetie and Vitteta, “Chemical Construction of Immunotoxin”, in Drug Targetting: Strategies, Principles, and Applications, Francis and Delgado (Eds.), pages 1-26 (Humana Press, Inc. 2000), Hall (Ed.), Immunotoxin Methods and Protocols (Humana Press, Inc. 2000), 及びNewton and Rybak, “Construction of Ribonuclease-Antibody Conjugates for Selective Cytotoxicity”, in Drug Targeting: Strategies, principles and Applications, Francis and Delgade (Eds.), pages 27-35 (Humana Press, Inc. 2000) を参照のこと。
【０１６２】
一方では、抗体成分及び細胞毒素ポリペプチドを含んで成る融合タンパク質は、標準の方法を用いて生成され得る。細胞毒素ポリペプチド成分を含んで成る融合タンパク質を調製するための方法は、抗体−毒素融合タンパク質生成の業界において良く知られている。例えば、インターロイキン−２成分を含んで成る抗体融合タンパク質は、Boletiなど., Ann. Oncol. 6: 945 (1995), Nicoletなど., Cancer Gene Ther. 2: 161 (1995), Beckerなど., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 7826 (1996), Hankなど., Clin. Cancer Res. 2: 1951 (1996), 及びHuなど., Cancer Res. 56: 4998 (1996) により記載されている。さらに、Yangなど., Hum. Antibodies Hybridomas 6: 129 (1995) は、F(ab’)2 フラグメント及び腫瘍壊死因子−α成分を含む融合タンパク質を記載する。
【０１６３】
抗体−シュ−ドモナスエキソトキシンA融合タンパク質は、Chaudharyなど., Nature 339：394（1989）、Brinkmannなど., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 8616 (1991), Batraなど., proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 5867 (1992), Friedmanなど., J. Immunol. 150: 3054 (1993), Wels など., Int. J. Can. 60: 137 (1995), Fominayaなど., J. Biol. Chem. 271: 10560 (1996), Kuan など., Biochemistry 35: 2872 (1996), 及びSchmidtなど., Int. J. Can. 65: 538 (1996) により記載されている。
【０１６４】
ジフテリア毒素成分を含む抗体−毒素融合タンパク質は、Kreitmanなど., keukemia 7: 553 (1993), Michollsなど., J. Biol. Chem. 268: 5302 (1993), Thompsonなど., J. Biol. Chem. 270: 28038 (1995), 及びValleraなど., Blood 88: 2342 (1996) により記載されている。Deonarainなど., Tumor Targetting 1: 177 (1995) はRNアーゼ成分を有する抗体−毒素融合タンパク質を記載しており、そしてLinardouなど., Cell Biophys. 24-25: 243 (1994) は、DNアーゼI成分を含んで成る抗体−毒素融合タンパク質を生成した。
【０１６５】
ゲロニンは、Betterなど., J. Biol. Chem. 270: 14951 (1995) の抗体−毒素融合タンパク質における毒素成分として使用された。さらなる例として、Dohlstenなど., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91: 8945 (1994) は、ブドウ球菌エンテロトキシン−Aを含んで成る抗体−毒素融合タンパク質を報告している。また、Newton and Rybak, “Preparation of Recombinant Rnase Sigle-Chain Antibody Fusion Proteins”, in Drug Targeting: Strategies, Principles, and Applications, Francis and Delgado (Eds.), pages 77-95 (Humana press, Inc. 2000) を参照のこと。
【０１６６】
ポリペプチド細胞毒性に代わるものとして、免疫接合体は、細胞毒素成分として放射性同位体を含むことができる。例えば、免疫接合体は、抗−BCMA−TACI成分及びα−放射性同位体、β−放射性同位体、γ−放射性同位体、Auger電子エミッター、α−粒子を放射する中性子捕獲剤、及び電子保護により崩壊する放射性同位体を含むことができる。適切な放射性同位体は次のものを包含する：198Au, 199Au, 32P, 33P, 125I, 131I, 123I, 90Y, 186Re, 188Re, 67Cu, 211At, 47Sc, 103Pb, 109Pd, 212Pb, 71Ge, 77As, 105Rh, 113Ag, 119Sb, 121Sn, 131Cs, 143Pr, 161Tb, 177Lu, 191Os, 193MPt, 197Hg及び同様のもの。
【０１６７】
放射性同位体は、抗体成分に、キレート化剤を通して直接的に、又は間接的に接合され得る。例えば、β−粒子及びγ−線を供給する放射性同位体であると思われる67Cuは、キレート化剤、すなわちp−ブロモアセトアミド−ベンジル−テトラエチルアミノ四酢酸を用いて、抗体成分に接合され得る。（Chase and Shapiro, “Medical Applications of Radioisotopes”, in gennaro (ed.), Remington’s Pharmaceutical Sciences, 19th Edition, p. 943-865 (Mack Publishing Company 1995)）。他のものとして、エネルギッシュなβ−粒子を放射する90Yはジエチレントリアミン五酢酸を用いて、抗体成分に結合され得る。さらに、131Iによる抗体成分の直接的な放射性ラベリングのための典型的な適切な方法は、Steinなど., Antibody Immunoconj. Radiopharm. 4: 703 (1991) により記載される。他方では、硼素添加物、例えばカルボランが、標準技法を用いて、抗体成分に結合され得る。
【０１６８】
免疫接合体の調製のためのもう１つの型の適切な細胞毒素は、化学療法薬物である。例示的な化学療法薬物は、窒素マスタード、アルキルスルホネート、ニトロソウレア、トリアゼン、葉酸類似体、ピリミジン類似体、プリン類似体、抗生物質、エピポドフィロトキシン、白金配位錯体、及び同様のものを包含する。化学療法薬物の特定の例は、メトトレキサート、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シトシンアラビノシド、シス−プラチン、ビンデシン、マイトマイシン、ブレオマイシン、メルファラン、クロラムブシル、マイタンシノイド、カリケアマイシン、タキサノール及び同様のものを包含する。適切な化学療法剤は、Remington’s Pharmaceutical Sciences, 19th Ed. (Mark Publishing Co. 1995), 及びGoodman and gilman’s The Pharmacological basis of Therapeutics, 7th Ed. (MacMillan Publishing Co. 1985) に記載される。他の適切な化学治療剤は、当業者に知られている。
【０１６９】
もう１つのアプローチにおいては、免疫接合体は、抗体成分に光活性剤又は色素を接合することにより調製される。蛍光及び他の色原体、又は例えば可視光に対して敏感なポルフィリンは、病変に対して適切な光を向けることによって、病変を検出し、そして処理するために使用されて来た。このタイプの“光放射線”、“光治療”又は“光力学”療法は、例えばMewなど., J. Immunol. 130; 1473 (1983), Joriなど. (eds.), Photodynamic Therapy of Tumors and Other Diseases (Libreria Progetto 1985), oseroffなど., proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 8744 (1986), van den Bergh, Chem. Britain 22: 430 (1988), Hasanなど., prog. Clin. Biol. Res. 288: 471(1989), Tatsutaなど., Lasers Surg. Med. 9: 422 (1989), 及びPelegrinなど., Cancer 67: 2529 (1991) により記載される。
上記に記載されるアプローチは、免疫接合体を含んで成る多特異的抗体組成物を調製するためにも使用され得る。
【０１７０】
６．抗−BCMA−TACI抗体の治療的使用：
抗−BCMA−TACI抗体及び多特異的抗体組成物は、内因性BCMA及びTACI受容体とのZTNF4の結合を妨げることによって、免疫系を調節するために使用され得る。そのような抗体は、処理の必要ないずれかの対象に投与され得、そして本発明は、家畜及びヒト両者の治療使用を企画する。例示的な対象は、哺乳類対象、例えば農業用動物、家畜及びヒト患者を包含する。
【０１７１】
BCMA及びTACIの両者を結合する多特異的抗体組成物及び二重反応性抗体は、自己免疫疾患、B細胞癌、免疫調節、及び他の病理学（例えば、ITCP、T細胞−介在性疾患、牧畜主病、自己免疫疾患、脊髄形成異常症候群、及び同様のもの）、腎疾患、移植変拒絶及び対宿主性移植片病の処理のために使用され得る。本発明の抗体は、免疫応答の間、B細胞応答を特異的に調節するよう標的化され得る。さらに、本発明の抗体は、B細胞成長、B細胞による抗原表示、抗体生成及びサイトカイン生成を調節するために使用され得る。
【０１７２】
拮抗性抗−BCMA−TACI抗体は、ZTNF4ポリペプチドの上昇が関連するか、又はZTNF4が生存因子又は成長因子である場合、B細胞リンパ腫及び白血病、慢性又は急性リンパ性白血病、骨髄腫、例えば多発性骨髄腫、血漿細胞腫、及びリンパ腫、例えば非ホジキンリンパ腫を処理するためのZTNF4の効果を中和するために有用である。抗−BCMA−TACI抗体はまた、免疫無防備状態にされた患者（例えば、AIDS又は器官移植片）において発生するEpstein Barrウィルス関連リンパ腫を処理するためにも使用され得る。
【０１７３】
多発性骨髄腫、すなわち成熟血漿細胞形態を有するB−細胞悪性疾患は、血漿細胞の単一クローンの新形成性形質転換により特徴づけられる。それらの血漿細胞は骨髄において増殖し、そして隣接する骨に侵入する。多発性骨髄腫の変異形は、明白な多発性骨髄腫、内攻性多発性骨髄腫、血漿細胞白血病、非分泌性骨髄腫、IgD骨髄腫、骨硬化性骨髄腫、骨の孤立性プラスマ細胞腫、及び骨髄外プラスマ細胞腫を包含する（例えば、Braunwald, など. (eds), Harrison’s Principles of Internal Medicine, 15th Edition (McGraw-Hill 2001) を参照のこと）。例１に記載されるように、抗−BCMA−TACI抗体による処理は、ネズミモデルにおいて、多発性骨髄腫の生存性を延長せしめる。従って、本発明は、多発性骨髄腫及びその変異形、例えば血漿細胞白血病を処理するためへの抗−BCMA−TACI抗体の使用を包含する。より一般的には、抗−BCMA−TACI抗体は、成熟B細胞により特徴づけられる障害を標的化するために有用である。
【０１７４】
BCMA又はTACIとの結合によりシグナルを誘発する抗−BCMA−TACI抗体は、増殖阻害、細胞周期阻止、アポプトシス、又は腫瘍細胞死に導くシグナルの誘発を通して直接的に、リンパ腫及び白血病細胞の増殖を阻害することができる。シグナルを開始するBCMA−TACI抗体は、癌細胞を直接的に阻害するか又は殺害するための好ましい抗体である。さらに、作用性抗−BCMA−TACIモノクローナル抗体は、正常なB細胞を活性化し、そして抗癌性免疫応答を促進することができる。抗−BCMA−TACI抗体は、白血病、リンパ腫及び多発性骨髄腫の増殖を直接的に阻害することができ、そして免疫エフェクター機能に従事する。抗−BCMA−TACIモノクローナル抗体は、抗体−依存性細胞毒性、補体依存性細胞毒性及びファゴサイトーシスを可能にすることができる。
【０１７５】
ZTNF4は、好中球、単球、樹状突起細胞、及び活性化された単球において発現される。一定の自己免疫疾患（例えば、重症筋無力症、及びリウマチ様関節炎）においては、B細胞は、ZTNF4による活性化の後、自己免疫性を悪化する。B−リンパ球の作用を選択的に阻止する免疫抑制リンパ質が、疾病の処理に使用される。自己抗体生成は、いくつかの自己免疫疾患に共通し、そして疾病の組織破壊及び悪化に寄与する。自己抗体はまた、免疫複合体沈着合併症の発生を導き、そして全身性エリテマトーデス、例えば腎不全、神経痛症状及び死の多くの症状を導く。
【０１７６】
細胞応答に無関係な調節抗体生成はまた、多くの疾病状態において有益である。B細胞はまた、リウマチ様関節炎における関節炎原性（arthritogenic）免疫グロブリンの分泌において役割を演じることが示されている。ZTNF4抗体生成の阻害は、自己免疫疾患、例えば重症筋無力症及びリウマチ様関節炎の処理において有益である。免疫抑制剤、例えばB−リンパ球の作用を選択的に阻止するか又は中和する抗−BCMA−TACI抗体は、そのような目的のために有用である。
【０１７７】
本発明は、自己免疫疾患に関連するか又は関連しない、最終段階腎臓疾患に関連するB−細胞の作用を選択的に阻止するか又は中和するために抗−BCMA−TACI抗体、又は多特異的抗体組成物を使用する方法を提供する。そのような方法はまた、免疫学的腎疾患のためにも有用である。そのような方法は、疾病、例えば膜ネフロパシー、IgAネフロパシー又はBerger’s病に関連する糸球体腎炎、IgMネフロパシー、Goodpasture’s病、後−感染性糸球体腎炎、糸球体間質増殖性疾患、慢性リンパ性白血病、微少変化ネフローゼ症候群を処理するために有用である。
【０１７８】
そのような方法はまた、狼瘡、多発性動脈炎、Henoch-Schonlein, 硬皮症、HIV−関連疾患、アミロイド症、又は溶血性尿毒症候群のような疾病に関連する二次糸球体腎炎又は処理するための治療用途として作用する。本発明の方法はまた、慢性腎盂腎炎に関連する介在性腎炎又は腎盂腎炎、無痛性乱用、腎石炭、他の剤により引き起こされるネフロパシー、腎石症又は慢性又は急性介在性腎炎を処理するための治療用途の一部としても有用である。
【０１７９】
本発明はまた、腎又は泌尿器新生物、多発性骨髄腫、リンパ腫、白血病、L鎖ニューロパシー又はアミロイドーシスの処理のための方法を提供する。
本発明はまた、ぜん息及び他の慢性気道疾患、例えば気管支炎及び気腫の処理のために、抗−BCMA−TACI抗体、又は多特異的抗体組成物を用いて、活性化されたB細胞を阻止し、又は阻害するための方法を提供する。
【０１８０】
免疫抑制への使用のために、特に対宿主性移植片病及び移植片拒絶に関してのそのような治療使用のために、抗−BCMA−TACI抗体、又は多特異的抗体組成物を用いて、エフェクターT細胞応答を阻害するか又は応答を阻害するか又は中和するための方法もまた提供される。さらに、抗−BCMA−TACI抗体、又は多特異的抗体組成物は、そのような自己免疫疾患、例えばインスリン依存性真性糖尿病（IDDM）、多発性硬化症、炎症性腸疾患（IBD）、及びクローン病の処理のための治療プロトコールにおいて有用である。本発明の方法は、慢性炎症性疾患を処理するために、特に関節痛、腫張、貧血及び他の関連する症状を低めるために、及び敗血性ショックを処理するために追加の治療価値を有する。
【０１８１】
B細胞応答は、感染性疾患、例えば細菌、ウィルス、原生動物及び寄生体感染の攻撃において重要である。感染性微生物に対する抗体は、抗原への結合、続く補体介在性溶菌又は細胞介在性攻撃により病原体を固定することができる。作用性又はシグナル化抗−BCMA−TACI抗体は、体液性応答を高めるよう作用することができ、そして感染性疾病のための危険下での個人のための、又はワクチン接種への補助物として、有用な治療剤であろう。
【０１８２】
十分に確立された動物モデルが、一定の疾病状態において、本発明の抗−BCMA−TACI抗体又は多特異的抗体組成物のインビボ効能を試験するために利用できる。例示として、抗−BCMA−TACI抗体は、自己免疫疾患の多くの動物モデル、例えば全身性エリテマトーデスのモデルとして作用するMRL−lprllpr又はNZB×NZW F1近交系マウス株においてインビボ試験され得る。そのような動物モデルは当業界において知られている。
【０１８３】
New Zealand Black (NZB) マウスとNew Zealand White (NZW) マウスとの間の交配による子孫は、ヒトにおける全身性エリテマトーデスに密接に類似する自発形の全身性エリテマトーデスを進行せしめる。NZBWとして知られているこの子孫マウスは、生後１ヶ月で、T−細胞に対してIgM自己抗体を進行し始め、そして生後５〜７ヶ月までに、Ig抗−DNA自己抗体が優性免疫グロブリンになる。ポリクローナルB−細胞機能亢進は、自己抗体の過剰生成を導く。それらの自己抗体、特に一本鎖DNAに対して向けられた自己抗体の沈積は、タンパク質尿、窒素血症、及び腎不全からの死として臨床学的に明白である糸球体腎炎の進行と関連している。
【０１８４】
腎不全は、自発的全身性エリテマトーデスにより影響されたマウスにおける死の主要原因であり、そしてNZBW株においては、この工程は慢性的且つ閉塞性である。この疾病は、雄よりも雌において、より急速且つ重度であり、そしてその平均生存日は、雄についての406日に比較して、わずか245日である。雌マウスの多くは生後７〜９ヶ月までに徴候的（タンパク質尿）であるが、いくらかは、それらが徴候を進行せしめる場合よりも若いか又は年をとっている。NZBWマウスに見出される致命的な免疫腎炎は、ヒト全身性エリテマトーデスに見出される糸球体腎炎に非常に類似し、可能性ある全身性エリテマトーデス治療剤の試験のためにこの自発的ネズミモデルを有用にする。
【０１８５】
実験用アレルギー性脳脊髄炎のネズミモデルが、免疫−介在性疾病の機構、及び可能性ある治療剤介入方法の両者を研究するための手段として使用されてきた。前記モデルはヒト多発生硬化症に類似し、そして神経タンパク質、例えばミエリン基本タンパク質又はタンパク脂質タンパク質に対するT−細胞活性化の結果として脱髄を生成する。抗原による接種は、CD4+、クラスII MHC−制限されたT−細胞の誘発を導く。実験的なアレルギー性脳脊髄炎についてのプロトコールの変更は、モデルの急性、慢性−再発性、又は受動性−トランスファー変異体を生成することができる。
【０１８６】
コラーゲン誘発性関節炎モデルにおいては、マウスは、ヒトリウマチ様関節炎に密接に類似する慢性炎症性関節炎を進行せしめる。コラーゲン誘発性関節炎はリウマチ様関節炎と類似する免疫学的及び病理学的特徴を共有するので、これは、可能性あるヒト抗炎症化合物のスクリーニングのための理想的モデルにする。コラーゲン誘発性関節炎モデルの使用におけるもう１つの利点は、病因の機構が知られていることである。タイプIIコラーゲン上のT及びB細胞エピトープは同定されており、そして免疫介入性関節炎に関連する種々の免疫学的（遅延型過敏症及び抗−コラーゲン抗体）及び炎症性（サイトカイン、ケモカイン及びマトリックス−分解性酵素）パラメーターは、決定されており、そしてモデルにおける試験化合物の効能を評価するために使用され得る。
【０１８７】
重症筋無力症は、ネズミモデルが利用できるもう1つの自己免疫疾患である。重症筋無力症は、神経筋肉伝達、例えばニコチン性アセチルコリン受容体に対して向けられた自己抗体の生成の障害である。重症筋無力症は、後天性であるか、又は臨床学的特徴、例えば運動に対する異常な弱さ及び疲労を伴なっての遺伝性である。重症筋無力症のマウスモデルは確立されている。実験的な自己免疫重症筋無力症は、アセチルコリン受容体に対する抗体の存在により特徴づけられる、抗体介在性疾病である。それらの抗体は、欠陥性神経筋肉電気インパルスを導く受容体を破壊し、筋肉弱体化をもたらす。重症筋無力症の臨床学的徴候は、二次免疫化の後、明らかに弱くなる。実験的な自己免疫重症筋無力症は、いくつかの方法、例えばラジオイムノアッセイによりアセチルコリン受容体抗体の血清レベルを測定し、筋肉アセチルコリン受容体を測定することにより、又は筋電図記録法により評価される。
【０１８８】
一般的に、投与される抗−BCMA−TACI抗体、又は多特異的抗体組成物の用量は、患者の年齢、体重、身長、性別、一般的な医学的状態及びこれまでの医学的歴史のような要因に依存して変化するであろう。例示のように、抗−BCMA−TACI抗体、又は多特異的抗体組成物は、低いタンパク質用量、例えば用量当たり20〜100mgのタンパク質で、一度、又は反復して、投与され得る。他方では、抗−BCMA−TACI抗体、又は多特異的抗体組成物は、用量当たり30〜90mgのタンパク質、又は用量当たり40〜80mgのタンパク質の用量で投与され得るが、但しそれよりも低いか、又は高い投与量がまた、環境が指図するように、投与され得る。
【０１８９】
抗体成分の対象への投与は、局部カテーテルを通しての灌流によるか又は直接的な病変内注入による、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、胸膜内、鞘内投与であり得る。注射により治療用タンパク質を投与する場合、投与は連続的注入によるか、又は一回又は複数回のボーラスによることができる。投与の追加経路は、経口、粘膜、肺及び経皮を包含する。
【０１９０】
抗−BCMA−TACI抗体、又は多特異的抗体成分を含んで成る医薬組成物は、医薬的に有用な組成物を調製する既知の方法に従って配合され得、それによれば、治療用タンパク質が医薬的に許容できるキャリヤーと共に混合される。組成物は、その投与が受容体患者により許容され得る場合、“医薬的に許容できるキャリヤー”であると言われる。無菌リン酸緩衝溶液は、医薬的に許容できるキャリヤーの1つの例である。他の適切なキャリヤーは、当業者に良く知られている。例えば、Gennaro (ed.), Remington’s Pharmaceutical Sciences, 19th Edition (Mack Publishing Company 1995) を参照のこと。
【０１９１】
治療のためには、抗−BCMA−TACI抗体、又は多特異的抗体成分及び医薬的に許容できるキャリヤーが、治療的に有効な量で患者に投与される。抗−BCMA−TACI抗体、又は多特異的抗体成分、及び医薬的に許容できキャリヤーの組み合わせは、  その投与される量が生理学的に有意である場合、“治療的に有効な量”で投与されると言われる。剤は、その存在が受容体患者の生理学において検出される変化をもたらす場合、生理学的に有意である。例えば、炎症を処理するために使用される剤は、その存在が炎症応答を緩和する場合、生理学的に有意である。もう１つの例として、腫瘍細胞の増殖を阻害するために使用される剤は、その剤の投与が腫瘍細胞の数の低下、低められた転位、固形腫瘍のサイズの低下、又は腫瘍の高められた壊死をもたらす場合、生理学的に有意である。
【０１９２】
抗−BCMA−TACI抗体、又は多特異的抗体成分を含んで成る医薬組成物は、液体形、エーロゾル、又は固体形で維持され得る。液体形は、注射用溶液及び経口懸濁液により例示される。典型的な固体形は、カプセル、錠剤及び調節された開放形を包含する。後者の形は、ミニ浸透ポンプ及び移植体により例示される（Bremer など., Pharm. Biotechnol. 10:239 (1997): Ranade. “Implants in Drug Delivery,” in Drug Delivery Systems, Ranade and Hollinger (eds.), pages 95-123 (CRC Press 1995); Bremer など., “Protein Delivery with Infusion Pum-s,” in Protein Delivery: Physical Systems, Sanders and Hendren (eds.), Pages 239-254 (Plenum Press 1997); Yewey など., “Delivery of Proteins from a Controlled Release Injectable Implant,” in Protein Delivery: Physical Systems, Sanders and Hendren (eds.), Pages 93-117 (Plenum Press 1997)）。
【０１９３】
当業者は標準技法を用いて種々の医薬組成物を考案することができる。例えば次の文献を参照のこと：Liebermanなど., (Eds.), Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Vol. 1, 2nd Edition (Marcel Dekker, Inc. 1989), Lieberman など., (Eds.), Pharmaceutical Dosage Forms; Tablets, Vol. 2, 2nd Editiion (Marcel Dekker, Inc. 1990), Lieberman など., (Eds.), Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Vol. 3, 2nd Edition (Marcel Dekker, Inc. 1990), Lieberman など., (Eds.), Pharmaceutical Dosage forms: Disperse Systems, Vol. 1, 2nd Edition (Marcel Dekker, Inc. 1996), Lieberman など., (Eds.), Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Vol. 2, 2nd Edition (Marcel Dekker, Inc. 1996), Lieberman など., (Eds.), Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Vol. 3, 2nd Edition (Marcel Dekker, Inc. 1998), Avis など., (Eds.), Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Vol. 1, 2nd Edition (Marcel Dekker, Inc. 1991), Lieberman など., (Eds.), Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Vol. 2, 2nd Edition (Marcel Dekker, Inc. 1992), and Avis など., (Eds.), Pharmaceutical Dosage Forms: Pareneral Medications, Vol. 3, 2nd Edition (Marcel Dekker, Inc. 1993)。
【０１９４】
もう１つの例として、リポソームは、抗−BCMA−TACI抗体又はニ特異的抗体成分を、患者に、静脈内、腹膜内、鞘内、筋肉内、皮下、又は経口、吸入又は鼻腔内供給するための１つの手段を提供する。リポソームは、水性区画を取り組む１又は複数の脂質二層から成る微小ビークルである（一般的には、Bakker Woudenberg など., Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 12 (Suppl. 1): S61 (1993), Kim Drugs 46:618 (1993), and Ranade, “Site-Specific Drug Delivery Using Liposomes as Carriers,” in Drug Delivery Systems, Ranade and組生Hollinger (eds.), pages 3-24 (CRC Press 1995)を参照のこと）。
【０１９５】
リポソームは、組成において細胞膜に類似し、そして結果として、リポソームは安全に投与され、そして生分解性である。調製方法に依存して、リポソームは、単層又は多層性であり得、そしてリポソームは0.02μm〜10μm以上の範囲の直径でサイズ的に変化することができる。種々の剤がリポソームに封入され得る：疎水性剤は二層に分割され、そして親水性剤は内部水性空間内に封入される（例えば、Macky など., Liposomes In Cell Biology and Pharmacology (John Libbey 1987), 及びOstroなど., American J. Hosp. Pharm. 46: 1576 (1989) を参照のこと）。さらに、リポソームサイズ、二層の数、脂質組成、及びリポソームの電荷及び表面性質を変えることにより、封入される剤の治療利用性を調節することが可能である。
【０１９６】
リポソームは、実質的にいずれかのタイプの細胞に吸着することができ、そして次に、封入された剤をゆっくりと開放する。他方では、吸収されたリポソームは、食細胞性である細胞によりエンドサイト−シス化され得る。エンドサイト−シスに続いて、リポソーム脂質のリソソーム内分解が伴ない、そして封入された剤が開放される（Scherphof など., Ann. N.Y. Acad. Sci. 446: 368 (1985)）。静脈内投与の後、小さなリポソーム（0.1〜1.0μm）は、典型的には、肝臓及び脾臓に主として位置する網内細胞系の細胞により摂取されるが、ところが3.0μmよりも大きなリポソームは肺に沈着される。網内細胞系の細胞による小さなリポソームのこの好ましい摂取は、マクロファージ及び肝臓の腫瘍に化学治療剤を供給するために使用されて来た。
【０１９７】
網内細胞系は、いくつかの方法、例えば多量のリポソーム粒子による飽和、又は薬理学的手段による選択的マクロファージ不活性化により回避され得る（Claassenなど., Biochim. Biophys. Acta 802: 428 (1984)）。さらに、リポソーム膜中への糖脂質−又はポリエチレングリコール−誘導されたリン脂質の組み込みは、網内細胞系による有意に低められた摂取をもたらすことが示されている（Allen など., Biochim. Biophys. Acta 1068:133 (1991); Allen など., Biochim. Biophys. Acta 1150: 9 (1993)）。
【０１９８】
抗−BCMA−TACI抗体成分を含んで成るリポソームを投与する他の手段として、標的細胞は、標的細胞により発現されるリガンドに対して特異的な、ビオチニル化された抗−BCMA−TACI抗体によりプレラベルされる。遊離抗体の血漿排除の後、ストレプタビジン−接合されたリポソームが投与される。この一般的なアプローチは、例えばHarasymなど., Adv. Drug. Deliv. Rev. 32: 99 (1998)により記載される。そのようなアプローチはまた、多特異的抗体組成物を調製するために使用され得る。
【０１９９】
抗−BCMA−TACI抗体又はニ特異的抗体成分を含んで成るポリペプチドは、タンパク質のマイクロカプセル封入の標準技法を用いて、リポソーム内に封入され得るか、又はリポソームの外部に結合され得る（例えばAndersonなど., Infect. Immun. 31: 1099 (1981), Wassef など., Meth. Enzymol. 149: 124 (1987)、Andersonなど., Cancer Res. 50: 1853 (1990), Cobenなど., Biochim. Biophys. Acta 1063:95 (1991), Alving など., “Preparation and Use of Liposomes in Immunological Studies,” in Liposome Technology, 2nd Edition, Vol. III, Gregoriadis (ed.), page 317 (CRC Press 1993), 及びAnsellなど., “Antibody Conjugation Methods for Active targeting of Liposomes”, in Drug Targeting, Strategies, Principles, and Applications, Francis and Delgado(Ed.), page51-68 (Humana Press, Inc. 2000を参照のこと）。
【０２００】
上記に示されるように、治療的に有用なリポソームは、種々の成分を含むことができる。例えば、リポソームは、ポリ（エチレングリコール）の脂質誘導体を含むことができる（Allenなど., Biochim. Biophys. Acta 1150: 9 (1993)）。Wassef など., Meth. Enzymol. 149: 124 (1987)。
【０２０１】
分解性ポリマー微小球が、治療用タンパク質の高い全身レベルを維持するため企画された。微小球は、分解性ポリマー、例えばポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（PLG）、ポリ無水物、ポリ（オルトエステル）、モノ生分解性エチルビニルアセテートポリマー（タンパク質がポリマー封入される）から調製されるGombotz and Pettit, Bioconugate Chem. 6:332 (1995); Ranade, “Role of Polymers in Drug Delivery.” In Drug Delivery Systems, Ranade and Hollinger (eds.), pages 51-93 (CRC Press 1995); Roskos and Maskiewicz, “Degradable Controlled Release Systems Useful for Protein Delivery,” in Protein Delivery: Physical Systems, Sanders and Hendren (eds.), pages 45-92 (Plenum Press 1997); Bartus など., Science 281:1161 (1998); Putney and Burke, Nature Biotechnology 16:153 (1998); Putney, Curr. Opin. Chem. Biol. 2:548 (1998))。ポリエチレングリコール（PEG）被覆された超微小球はまた、治療用タンパク質の静脈内投与のためのキャリヤーを提供することができる（例えば、Grefなど., Pharm. Biotechnol. 10:167 (1997) を参照のこと）。
【０２０２】
本発明はまた抗体成分がポリマーにより連結される、化学的に修飾された抗体成分を企画する。典型的には、前記ポリマーは、抗体成分が水性環境、例えば生理学的環境において沈殿しないよう水溶性である。適切なポリマーの例は、単一の反応基、例えばアシル化のための活性エステル、又はアルキル化のためのアルデヒドを有する修飾されている１つのポリマーである。この場合、重合化の程度は調節され得る。反応性アルデヒドの例は、ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒド、又はモノ−（C1−C10）アルコキシ、又はそれらのアリールオキシ誘導体である（例えば、Harrisなど., アメリカ特許第5,252,714号を参照のこと）。ポリマーは枝分かれ鎖であっても、又は枝分かれ鎖でなくても良い。さらに、ポリマーの混合物が抗体成分を生成するために使用され得る。
【０２０３】
適切な水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコール（PEG）、モノメトキシ−PEG、モノ−（C1−C10）アルコキシ−PEG、アリールオキシ−PEG、ポリ−（N−ビニルピロリドン）PEG、トレシルモノメトキシPEG、PEGプロピオンアルデヒド、ビス−スクシンイミジルカーボネートPEG、プロピレングリコールホモポリマー、酸化ポリプロピレン/酸化エチレンコポリマー、ポリオキシエチル化されたポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、デキストラン、セルロース又は他の炭水化物基材のポリマーを包含する。適切なPEGは、約600〜約60,000、例えば5,000、12,000及び25,000の分子量を有することができる。抗体成分はまた、そのような水溶性ポリマーの混合物も含むことができる。
【０２０４】
例示のように、酸化ポリアルキル成分は、抗体成分のN−末端に結合される。PEGは、１つの適切な酸化ポリアルキルである。例えば、抗体成分は、PEG、すなわち“PEG化”として知られている方法により修飾され得る。抗体成分のPEG化は、当業界において知られているPEG化反応のいずれかにより行われ得る（例えば、ヨーロッパ特許第0154316号、Delgadoなど., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 9: 249 (1992), Duncan and Spreafico, Clin. Pharmacokinet. 27: 290 (1994) 及びFrancis など., Int, J. Hematol. 68: 1 (1998) を参照のこと）。
【０２０５】
例えば、PEG化は反応性ポリエチレングリコール分子によるアシル化反応又はアルキル化反応により行われ得る。他のアプローチにおいては、抗体成分接合体は、PEGの末端ヒドロキシ又はアミノ基が活性化されたリンカーにより置換されている活性化されたPEGを縮合することによって形成される（例えば、Karasiewiczなど., アメリカ特許第5,382,657号を参照のこと）。
【０２０６】
アシル化によるPEG化は典型的には、抗体成分とPEGの活性エステル誘導体との反応を必要とする。活性化されたPEGエステルの例は、N−ヒドロキシスクシンイミドにエステル化されたPEGである。本明細書において使用される場合、用語“アシル化”とは、抗体成分と水溶性ポリマー間のタイプの結合を包含する：アミド、カルバメート、ウレタン及び同様のもの。アシル化によるPEG化されたBCMA−TACI抗体成分の調製方法は、典型的には、（ａ）抗体成分とPEG（例えば、PEGのアルデヒド誘導体の反応性エステル）とを、１又は複数のPEG基が抗体成分に結合する条件下で反応せしめ、そして（ｂ）その反応生成物を得る段階を含んで成る。一般的に、アシル化反応のための最適な反応条件は、既知のパラメーター及び所望する結果に基づいて決定されるであろう。例えば、PEG：抗体成分の比が高いほど、ポリPEG化された抗体成分生成物の％が高くなる。
【０２０７】
アシル化によるPEG化の生成物は典型的には、リシンε−アミノ基がアシル結合を通してPEG化されるポリPEG化された抗体成分生成物である。典型的には、その得られる抗体成分は、少なくとも95％、モノ−、ジ−又はトリ−ペルギレートされるが、但し高い程度のPEG化を有するいくつかの種は、その反応条件に依存して形成され得る。PEG化された種は、標準の精製方法、例えば透析、限外濾過、イオン交換クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー及び同様のものを用いて、接合されていない抗体成分から分離され得る。
アルキル化によるPEG化は一般的に、還元剤の存在下で抗体成分と、PEGの末端アルデヒド誘導体との反応を包含する。PEG基は好ましくは、−CH2−NH基を通してポリペプチドに結合される。
【０２０８】
モノPEG化された生成物を生成するためへの還元性アルキル化を通しての誘導体化は、誘導体化のために利用できる異なったタイプの第１アミノ基の示差反応性を利用する。典型的には、前記反応は、リシン残基のε−アミノ基とタンパク質のN−末端残基のα−アミノ基との間のpKa差異の利用を可能にするpHで行われる。そのような選択的誘導体化により、反応性基、例えばアルデヒドを含む水溶性ポリマーのタンパク質への結合が調節される。ポリマーとの接合は、他の反応性基、例えばリシン側鎖アミノ基の有意な修飾を伴なわないで、タンパク質のN−末端で優先的に生じる。
【０２０９】
モノポリマー抗体成分接合体分子の実質的に均質な集団を生成するための還元性アルキル化は、（ａ）抗体成分のアミノ末端でのα−アミノ基選択的修飾を可能にするために適切なpHでの還元性アルキル化条件下で反応性PEGとン抗体成分とを反応せしめ、そして（ｂ）反応生成物を得る段階を含んで成る。還元性アルキル化のために使用される還元剤は、水溶液において安定性であり、そして好ましくは、還元性アルキル化の初期工程において形成されるSchiff塩基のみを還元できるべきである。好ましくは還元剤は、硼水素化ナトリウム、シアノ硼水素化ナトリウム、ジメチルアミンボラン、トリメチルアミンボラン及びビリジンボランを包含する。
【０２１０】
モノポリマー抗体成分接合体の実質的に均質な集団に関しては、還元性アルキル化反応条件は、抗体成分のN−末端への水溶性ポリマーの成分の結合を可能にするそれらの条件である。そのような反応条件に、N−末端でのα−アミノ基とリシンアミノ基との間のpKa差異を提供する。pHはまた、使用されるポリマー：タンパク質の比にも影響を及ぼす。一般的に、pHが低い場合、タンパク質よりも過剰量のポリマーが、N−末端α−基が反応性であるほど、より多くのポリマーが最適な条件を達成するために、必要とされるので、所望される。pHが高い場合、ポリマー：抗体成分は、より多くの反応性基が利用できるので、高くある必要はない。典型的には、pHは、３〜９又は３〜６の範囲内であろう。
【０２１１】
ポリペプチド及び水溶性ポリマーを含んで成る接合体を生成するための一般的な方法は、当業界において知られている。例えば、Karasiewiczなど., アメリカ特許第5,382,657号、Greenwaldなど., アメリカ特許第5,738,846号、Nieforthなど., Clin. Pharmacol. Ther. 59: 636(1996), Monkarshなど., Anal. Biochem. 247: 434(1997)を参照のこと）。
ポリペプチド細胞毒素はまた、抗体成分への接合の前又は後、上記方法を用いて、適切なポリマーにより接合され得る。可溶性ポリマーはまた、抗体融合タンパク質により接合され得る。
【０２１２】
裸抗−BCMA−TACI抗体又は抗体フラグメントは、免疫接合体又は抗体融合タンパク質投与により補充され得る。１つの変法においては、裸抗−BCMA−TACI抗体（又は裸抗体フラグメント）は、低用量の放射性ラベルされた抗−BCMA−TACI抗体又は抗体フラグメントと共に投与される。第２の変法として、裸抗−BCMA−TACI抗体（又は抗体フラグメント）は、低用量の放射性ラベルされた抗−BCMA−TACI抗体−サイトカイン免疫接合体と共に投与される。第３の変法として、裸抗−BCMA−TACI抗体（又は抗体フラグメント）は、放射性ラベルされていない抗−BCMA−TACI−サイトカイン免疫接合体と共に投与される。“低用量”の131I−ラベルされた免疫接合体に関しては、好ましい用量は、15〜40mCiであり、そして最も好ましい範囲は20〜30mCiである。対照的に、好ましい用量の90Y−ラベルされた免疫接合体は10〜30mCiであり、そして最も好ましい範囲は10〜20mCiである。同様に、二特異的抗体成分は、免疫接合体又は抗体融合タンパク質投与により補充される。
【０２１３】
熱中性子活性化治療のための硼素添加された−負荷キャリヤーを有する免疫接合体は通常、類似する手段でもたらされるであろう。しかしながら、中性子照射が行われる前、標的化されていない免疫接合体がクリアランスになるまで待つことが好都合である。クリアランスは、免疫接合体に結合する抗体を用いて促進され得る。この一般的原理の記載については、アメリカ特許第4,624,846号を参照のこと。
【０２１４】
本発明はまた、免疫モジュレーターが、正常細胞及び特に造血細胞の放射線−誘発された、又は薬剤−誘発された毒性を妨げるか、移動せしめるか又は逆転するために投与される処理方法にも関する。付加的免疫モジュレーター療法は、受容体哺乳類の高められた耐性のために、より高い用量の細胞毒性剤の投与を可能にする。さらに、付加的免疫モジュレーター療法は、用量制限の骨髄毒性を妨げるか、軽減するか又は逆転することができる。付加的療法のための適切な免疫モジュレーターの例は、顆粒球−コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージ−コロニー刺激因子、トロンボポイエチン、IL−１、IL−３、IL−12及び同様のものを包含する。付加的免疫モジュレーター治療方法は、アメリカ特許第5,120,525号（Goldenberg）により開示される。
【０２１５】
抗−BCMA−TACI抗体療法の効能は、本明細書に記載される免疫接合体及び他の形の補充療法により裸抗体成分を補充することによって増強され得る。そのような多様レジメにおいては、補充治療組成物は、裸抗−BCMA−TACI抗体の投与の前、それと同様に又はその後、投与され得る。本発明の多様性療法はさらに、抗−BCMA−TACI免疫接合体の投与により補充される補抗−BCMA−TACI抗体成分による免疫治療を包含する。もう１つの形の多様性治療においては、対象は、裸抗−BCMA−TACI抗体及び標準の癌化学療法を受ける。
【０２１６】
本明細書に記載される、抗体、免疫接合体及び抗体融合タンパク質はまた、好都合には、第２のシステインに富んでいる領域とトランスメンブランドメインとの間に存在する、TACI受容体のいわゆる“軸領域（stalk region）”を結合する抗体成分（例えば、裸抗体、裸抗体フラグメント、免疫接合体、抗体融合タンパク質、等）により補充され得る。研究によれば、TACIタンパク質はある程度まで、細胞により分解され、そして分離され、細胞表面上に小さな細胞外ペプチド又は軸が残される。
【０２１７】
ネズミモノクローナル抗体は、リンパ腫ネズミモデルにおいて治療的に有用であることが見出された。エピトープマッピングは、抗体が、配列番号４のアミノ酸残基110−118により表されるTACI細胞外ドメインのフラグメントと結合することを示す。抗体は、第２のシステインに富んでいるドメインとトランスメンブランドメインとの間の領域を表すポリペプチド（配列番号4のアミノ酸残基105−116）、又はそのフラグメント（配列番号４のアミノ酸残基110−118）に対して生成され得る。そのような抗体は、TACI−担持の腫瘍細胞、例えばB−リンパ腫細胞、骨髄腫細胞及び同様のものの処理のために特に有用である。
【０２１８】
本発明の抗体及び抗体フラグメントは、上記の種々の障害及び疾病を処理するためにワクチンとして使用され得る。例として、二重反応性BCMA−TACIモノクローナル抗体の抗体成分は、ワクチンのための適切な基材を提供することができる。BCMA及びTACI受容体のシステインに富んでいる領域はまた、ワクチンのための有用な成分を提供することができる。例えば、ワクチンは、次のポリペプチドの少なくとも１つを含んで成る：配列番号２のアミノ酸残基８−41を含んで成るポリペプチド、配列番号４のアミノ酸残基34−66を含んで成るポリペプチド、及び配列番号４のアミノ酸残基71−104を含んで成るポリペプチド。
【０２１９】
ワクチンとしての抗体成分の効能は、免疫原性キャリヤータンパク質に抗体成分を接合することによって増強され得る。適切なキャリヤータンパク質は、破傷風毒素/トキソイド、NTHi高分子量タンパク質、ジフテリア毒素/トキソイド、解毒されたP.アエルギノサ毒素A、コレラ毒素/トキソイド、百日咳毒素/トキソイド、クロストリジウム・ペルフリゲンス外毒素/トキソイド、B型肝炎表面抗原、B型肝炎コアー抗原、ロタウィルスVP7タンパク質、呼吸シンシチウムウィルスF及びGタンパク質、及び同様のものを包含する。接合されたワクチンを調製するための方法は、当業者に知られている。
【０２２０】
例えば、Cruse and Lewis (Eds.), Conjugate Vaccines (S. Karger Publishing 1989), O’Hagan (Ed.), Vaccine Adjuvants (Humana Press, Inc. 2000) を参照のこと。ワクチン組成物はまた、アジュバントを含むことができる。適切なアジュバントの例は、水酸化アルミニウム及び脂質を包含する。ワクチン組成物を生成する方法は、当業者に良く知られている。例えば、Rola, “Immunizing Agents and Diagnostic Skin Antigens”, in Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 19th Edition, Gennaro (Ed.), page 1417-1433 (Mack Publishing Company 1995) を参照のこと。
【０２２１】
医薬組成物は、抗−BCMA−TACI抗体成分又は二特異的抗体成分を含んで成る容器を含んで成るキットとして供給され得る。治療分子は、単一又は複数回用量のための注射用溶液の形で、又は注射の前、再構成される無菌粉末として提供され得る。他方では、そのようなキットは、抗−BCMA−TACI抗体成分の投与のための乾燥−粉末分散器、液体エアロゾル発生器又はネブライザーを包含することができる。そのようなキットはさらに、医薬組成物の表示及び使用法についての文章情報を含んで成る。さらに、そのような情報は、前記組成物が外因性抗体に対して既知の過敏性を有する患者において禁忌を示される言明を包含することができる。
【０２２２】
一般的に記載されて来た本発明は、次ぎの例により容易に理解されるであろう。但し、それらの例は、本発明を制限するものではない。
【実施例】
【０２２３】
例１．異種移植リンパ腫及び多発性骨髄腫モデルにおける抗体処理
SCIDマウス（C.B.−17；Taconic; Germantown, NY）に、106個のIM−９ヒトリンパ腫細胞を注射し（i.v.）、リンパ腫の散在性モデルを生成し、そしてマウスを、24時間後、モノクローナル抗体により処理した。モノクローナル抗体を、1mg/kgの用量で4日ごとに、合計５回、投与した。マウスを、体重の低下、後足の麻痺、及び罹病率についてモニターした。６匹のマウスのグループを次の抗体により処理した：二重反応性BCMA−TACIモノクローナル抗体255.7, TACIネズミモノクローナル抗体248.24、二重反応性BCMA−TACIモノクローナル抗体255.7及びTACIネズミモノクローナル抗体248.24の組合せ（それぞれ1mg/kg）、RITUXAN（キメラ性マウス/ヒト抗−CD20抗体）、及び負の対照のネズミモノクローナル抗体（238.12）。
【０２２４】
図１に示されるように、BCMA及びTACIモノクローナル抗体の組合せは、いずれか他のモノクローナル抗体処理よりも生存性の延長においてより効果的であった。両抗体により処理されたすべてのマウスは46日以上存在し、ところが他のモノクローナル抗体処理は、46日での存在率の67％〜０％をもらした。前記データは、TACI及びBCMAの両者の同時の標的化が抗−BCMA又は抗−TACIのいずれかのみによる治療よりも卓越することを示唆する。
【０２２５】
もう1つの研究においては、SCIDマウスを、RPMI8226ヒト多発性骨髄腫細胞系により注射し（i.v.）、多発性骨髄腫の散在モデルを生成し、そしてマウスを、モノクローナル抗体により処理した。その結果は、二重反応性BCMA−TACIモノクローナル抗体255.7が多発性骨髄腫のこのネズミモデルにおいて生存性を延長することを示唆する。
【０２２６】
例２．リンパ腫及び骨髄腫細胞系のインビトロでの抗体処理
ヒトBurkitt’sリンパ腫細胞系、すなわちHS Sultan, 及びヒト多発性骨髄腫細胞系、すなわちRPMI8226を、BCMAモノクローナル抗体、TACIモノクローナル抗体、及びBCMA及びTACIモノクローナル抗体の組合せと共にインビトロでインキュベートした。腫瘍細胞系を、0.375μg/ml〜6μg/mlで存在するモノクローナル抗体と共に2.5日間、培養し、そして次に、増殖を、トリチウム化されたチミジン組込みを測定することによって評価した。この研究においては、モノクローナル抗体は次のものであった：（１）BCMA−TACI抗体（255.7）、（２）BCMA抗体（255.4）、（３）TACI抗体（248.24）、（４）BCMA−TACI抗体（255.7）＋TACI抗体（248.24）、（５）CD20抗体（１F5）、及び（６）負の対照ネズミIgG2a。
【０２２７】
抗−CD20モノクローナル抗体はこの研究において最も効果的処理であることが見出されているが、HS Sultan細胞の増殖を、抗−TACI＋抗−BCMAモノクローナル抗体の組合せにより、及び二重反応性BCMA−TACIモノクローナル抗体255.7により有意に阻害した。対照的に、骨髄腫細胞系、すなわちRPMI8226は、抗−CD20モノクローナル抗体により阻害されず、ところがTACIモノクローナル抗体248.24及び二重反応性BCMA−TACIは非常に効果的であった。抗−TACI及び抗−BCMAモノクローナル抗体の組合せは、リンパ腫及び骨髄腫細胞の増殖を直接的に阻害するか又は妨げることにおいて効果的であると思われる。抗−TACI＋抗−BCMAモノクローナル抗体による処理は、しばしばCD20が不在であるか又は低レベルで存在する多発性骨髄腫のために特に有用である。
【０２２８】
例３．TACI受容体を通しての抗体シグナル化
Jurkat細胞系を、ヒトTACIをコードするプラスミド、及びレポーター構造体を含むプラスミドによりトランスフェクトした。レポーター構造体は、ルシフェラーゼをコードする遺伝子により作用可能に連結される、核因子−κB及びAP1転写因子をコードするヌクレオチド配列を含んだ。トランスフェクトされたJurkat細胞系の１つは、用量依存性態様でZTNF4に対して応答性であることが見出された。このJurkat細胞を用いて、TACI及びBCMAモノクローナル抗体を、負の対照のモノクローナル抗体に関するルシフェラーゼを誘発する能力について試験した。すべてのモノクローナル抗体を、培養皿上に被覆された抗−マウスIgGによる捕獲により固定化した。
【０２２９】
【表１】
2011037895.tif 000002
【０２３０】
表１は、それらの研究結果を提供する。示される刺激指数は、存在するモノクローナル抗体を伴なわないでのルシフェラーゼ活性に対する、試験モノクローナル抗体を伴ってのルシフェラーゼ活性の比率である。最も高いシグナル化活性は、BCMA−TACIモノクローナル抗体255.7及びTACIモノクローナル抗体248.24により示される。比較のために、ZTNF4（100ng/ml）は、10よりも高い指数を有するシグナルを誘発した。
【０２３１】
他のTACIモノクローナル抗体及びBCMAモノクローナル抗体（255.4）は、このアッセイにおいては、不活性であった。それらの結果は、抗体がこのアッセイにおいてTACIを通してシグナル化すべきであるので、BCMA−TACIモノクローナル抗体255.7の二重反応性質を再確認する。TACIモノクローナル抗体248.24により示されるシグナル化活性は、インビボでのその抗−腫瘍活性、すなわち他のものにより観察された相互関係と相関する。例えば、Graftonなど., Cell Immun. 182: 45 (1997), 及びTuttなど., J. Imm. 161: 3176 (1998) を参照のこと。
【０２３２】
例４．多発生骨髄腫細胞系の免疫接合体処理
種々の細胞系を、TACI、BCMA及びCD20の存在を検出するために、抗体により、及びラベルされたZTNF4リガンドにより試験した。図２に示されるように、多発性骨髄腫細胞系は、比較的高レベルのBCMAを発現した。それにもかかわらず、これは、比較的低いレベルのZTNF4結合であった。従って、BCMAは、多発生骨髄腫細胞を標的化するための適切なマーカーを提供する。
【０２３３】
【表２】
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【０２３４】
抗−受容体抗体を、細胞毒性ポリペプチドにより骨髄腫細胞を標的化する能力について試験した。この研究においては、抗体は、96−ウェルマイクロタイタープレートにおける標準のRPMI培地に希釈された。Mabzap（G−α−mIgG−サポリン：Advanced Targeting Systems; San Diego, CA）、すなわち親和性精製されたヤギ抗−マウスIgGに接合されたサポリンを、ウェル当たり50ngの濃度で添加し、そして室温で10分間インキュベートした。次に、多発生骨髄腫細胞を、ウェル当たり2，500個の細胞の最終濃度で添加した。細胞を37℃で48時間インキュベートし、ウェル当たり１μCiの3チミジンにより一晩パルスし、そして次の日、フィルターマット上に収穫した。
【０２３５】
この研究においては、増殖の阻害は、免疫接合体の内在化に依存した。表３に示されるように、抗−BCMA−TACI免疫接合は、多発性骨髄腫及び血漿細胞白血病細胞の増殖を阻害した。より高い用量の抗−BCMA−TACI免疫接合体が、抗−CD40免疫接合体の用量に比較して、NCIH929細胞の増殖を阻害するために必要とされ、このことは、抗−BCMA−TACI免疫接合体についての比較的低い内在化速度を示す。低い内在化速度は、抗体−依存性細胞毒性及び補体−介入殺害を促進することができる。
【０２３６】
【表３】
2011037895.tif 000004
【図１】
2011037895.tif 000005
【配列表】
2011037895000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成22年11月22日(2010.11.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号：２のアミノ酸残基13-27、及び配列番号：４のアミノ酸残基30−67又は68−154に結合する二重反応性BCMA−TACIモノクローナル抗体255.7を含んで成る腫瘍細胞の増殖を阻害するための組成物。
【請求項２】
インビトロで培養された細胞に投与するための請求項１記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物が医薬組成物であり、そして前記医薬組成物が腫瘍を有する哺乳類対象に投与するための請求項１記載の組成物。
【請求項４】
配列番号：２のアミノ酸残基13-27、及び配列番号：４のアミノ酸残基30−67又は68−154に結合する二重反応性BCMA−TACIモノクローナル抗体255.7、及び治療剤を含んで成る免疫接合体を含んで成る、腫瘍細胞の増殖を阻害するための組成物。
【請求項５】
前記治療剤が、化学療法薬物、細胞毒素、イムノモジュレーター、キレート化剤、硼素化合物、光活性剤、光活性色素及び放射性同位体から成る群から選択される請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
配列番号：２のアミノ酸残基13-27、及び配列番号：４のアミノ酸残基30−67又は68−154に結合する二重反応性BCMA−TACIモノクローナル抗体255.7と細胞毒性ポリペプチドを含んで成る抗体融合タンパク質を含んで成る、腫瘍細胞の増殖を阻害するための組成物。
【請求項７】
配列番号４のアミノ酸残基105〜116から成るポリペプチド内のエピトープに結合する抗体成分と組み合わせて使用するための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記抗体成分が、配列番号４のアミノ酸残基110〜118から成るポリペプチドに結合する請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
配列番号：２のアミノ酸残基13-27、及び配列番号：４のアミノ酸残基30−67又は68−154に結合する二重反応性BCMA−TACIモノクローナル抗体255.7を含んでなる、哺乳類におけるZTNF4活性を阻害するための組成物。
【請求項１０】
前記ZTNF4活性が、高められた内因性抗体生成に関する請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ZTNF4活性が、新生物、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、移植後リンパ増殖疾患及びL鎖ガンモパシーから成る群から選択された障害に関連する請求項９に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ZTNF4活性が炎症に関連し、そして前記組成物の投与が炎症を低める請求項９に記載の組成物。
【請求項１３】
腫瘍細胞の増殖を阻害するための医薬組成物であって、
（ａ）配列番号：２のアミノ酸残基13-27、及び配列番号：４のアミノ酸残基30−67又は68−154に結合する二重反応性BCMA−TACIモノクローナル抗体255.7、及び
（ｂ）トランスメンブラン活性因子及びカルシウム−モジュレーター及びシクロフィリンリガンド−相互作用体（TACI）の細胞外ドメインに結合する抗体成分、ここで、当該抗−TACI抗体成分はBCMAの細胞外ドメインには結合しない、
を含む多特異的抗体組成物を含んでなる医薬組成物。
【請求項１４】
インビトロで増殖した細胞に投与するための、請求項13に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
腫瘍を有する哺乳類対象に投与するための、請求項13に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
少なことも１つの前記抗体又は抗体成分がさらに、治療剤を含んで成る請求項1３に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記治療剤が、化学療法薬物、細胞毒素、イムノモジュレーター、キレート化剤、硼素化合物、光活性剤、光活性色素及び放射性同位体から成る群から選択される請求項16に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記多特異的抗体組成物が、（ａ）細胞毒性ポリペプチドを含んで成る抗体融合タンパク質、及び（ｂ）少なくとも１つの抗−BCMA抗体成分又は抗−TACI抗体成分を含んで成る請求項13に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記腫瘍細胞が、リンパ腫細胞である請求項13に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
配列番号：２のアミノ酸残基13-27、及び配列番号：４のアミノ酸残基30−67又は68−154に結合する二重反応性BCMA−TACIモノクローナル抗体255.7。
【外国語明細書】
2011037895000001.pdf